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▶ アイ－エムエービー バイオファーマ カンパニー リミテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-02-05
(54)【発明の名称】抗ＣＤ７３抗体の製剤
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20240129BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240129BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240129BHJP
A61K 47/18 20170101ALI20240129BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20240129BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20240129BHJP
C07K 16/30 20060101ALN20240129BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20240129BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 T
A61P35/00
A61P35/02
A61K47/18
A61K47/26
A61K9/08
C07K16/30 ZNA
C12N15/13
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023540516
(86)(22)【出願日】2021-05-08
(85)【翻訳文提出日】2023-08-08
(86)【国際出願番号】 CN2021092485
(87)【国際公開番号】W WO2022142053
(87)【国際公開日】2022-07-07
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2020/141601
(32)【優先日】2020-12-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520035034
【氏名又は名称】アイ－エムエービー バイオファーマ カンパニー リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】ジュー， ジン
(72)【発明者】
【氏名】ジャン， ジェルー
(72)【発明者】
【氏名】ジュー， シャンピン
(72)【発明者】
【氏名】ユー， ヤーリー
【テーマコード（参考）】
4C076
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA11
4C076CC27
4C076DD47
4C076DD51
4C076DD67
4C085AA14
4C085BB31
4C085CC22
4C085DD61
4C085EE01
4C085GG01
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
4H045DA76
4H045EA28
4H045FA74
(57)【要約】
抗ＣＤ７３抗体の安定な製剤が提供され、それは、５ｍＭ～５０ｍＭのヒスチジン、２％（質量／体積）～２０％（質量／体積）のトレハロース、および０．０１５％（質量／体積）～０．０５％（質量／体積）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）をｐＨ５．６～ｐＨ６．４にて含む。その水性製剤を凍結乾燥することによって得られ得る凍結乾燥組成物、および疾患を処置するための方法もまた、提供される。一部の実施形態において、その組成物は、１０ｍＭ～３０ｍＭのヒスチジン、５％（質量／体積）～１５％（質量／体積）のトレハロース、および０．０１５％（質量／体積）～０．０３５％（質量／体積）のＰＳ８０をｐＨ５．８～ｐＨ６．２にて含む。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗ＣＤ７３抗体と５ｍＭ～５０ｍＭのヒスチジンと２％（質量／体積）～２０％（質量／体積）のトレハロースと０．０１５％（質量／体積）～０．０５％（質量／体積）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）とをｐＨ５．６～ｐＨ６．４にて含む組成物であって、前記抗体は、ＣＤＲ１とＣＤＲ２とＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、ＣＤＲ１とＣＤＲ２とＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、前記ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１～配列番号６のアミノ酸配列を含む、組成物。
【請求項2】
１０ｍＭ～３０ｍＭのヒスチジンを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
５％（質量／体積）～１５％（質量／体積）のトレハロース二水和物を含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項4】
０．０１５％（質量／体積）～０．０３５％（質量／体積）のＰＳ８０を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項5】
１０ｍＭ～３０ｍＭのヒスチジン、５％（質量／体積）～１５％（質量／体積）のトレハロース、および０．０１５％（質量／体積）～０．０３５％（質量／体積）のＰＳ８０をｐＨ５．８～ｐＨ６．２にて含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項6】
１５ｍＭ～２５ｍＭのヒスチジン、６％（質量／体積）～１０％（質量／体積）のトレハロース、０．０１５％（質量／体積）～０．０２５％（質量／体積）のＰＳ８０をｐＨ５．９～ｐＨ６．１にて含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項7】
５ｍｇ／ｍＬ～１５０ｍｇ／ｍＬの前記抗体を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項8】
前記ＶＨが配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項9】
前記抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項10】
請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物を凍結乾燥することによって得られる、凍結乾燥組成物。
【請求項11】
請求項１０に記載の凍結乾燥組成物を溶媒に溶解することによって得られる、溶液。
【請求項12】
前記溶媒が水である、請求項１１に記載の溶液。
【請求項13】
がんを処置するための医薬の調製のための、請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項14】
それを必要とする患者におけるがんを処置するための方法であって、前記患者に請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物を投与する工程を含む、方法。
【請求項15】
前記がんが、膀胱がん、乳がん、大腸がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、腎がん、白血病、肝がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、膵がん、前立腺がん、および甲状腺がんからなる群より選択される、請求項１３に記載の使用または請求項１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【0001】
（背景）
抗ＣＤ７３抗体は、種々の増殖性疾患および炎症性疾患を処置するために開発されている。ＣＤ７３（分化抗原群７３）は、ＡＭＰをアデノシンに変換するのに役立つ酵素である。ＣＤ７３は、免疫抑制腫瘍環境に寄与する細胞外アデノシンの形成を触媒する。ＣＤ７３は、間質細胞および複数の型の腫瘍細胞において、ならびにＴｒｅｇ、Ｍ２ Ｍφおよび骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）において、過剰発現される。
抗ＣＤ７３抗体は、種々の増殖性疾患および炎症性疾患を処置するために開発されている。ＣＤ７３（分化抗原群７３）は、ＡＭＰをアデノシンに変換するのに役立つ酵素である。ＣＤ７３は、免疫抑制腫瘍環境に寄与する細胞外アデノシンの形成を触媒する。ＣＤ７３は、間質細胞および複数の型の腫瘍細胞において、ならびにＴｒｅｇ、Ｍ２ Ｍφおよび骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）において、過剰発現される。
【0002】
ＣＤ７３阻害は、アデノシン媒介性リンパ球抑制を防止し、ＣＤ８＋エフェクター細胞の活性を増加し、ＭＤＳＣおよびＴｒｅｇの両方を減少した。可能性のある抗がん薬として開発されている少数の抗ＣＤ７３抗体が存在するが、どれも臨床用途のために認可されてはいない。
【0003】
注射による送達が、一般的に、抗体または抗原結合フラグメントによるがん処置のために選択される送達経路である。しかし、生物学的障害、化学的障害、および物理的障害（例えば、乏しい長期貯蔵性、乏しい重量モル浸透圧濃度、乏しい溶解度、および乏しい安定性）により、注射による哺乳動物への生物活性剤の送達は問題のあるものとなる。したがって、安定で溶解性がある、抗体の改善された注射可能調製物についての必要性が、存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0004】
（概要）
本開示は、抗ＣＤ７３抗体と５ｍＭ～５０ｍＭのヒスチジンと２％（質量／体積）～２０％（質量／体積）のトレハロースと０．０１５％（質量／体積）～０．０５％（質量／体積）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）とをｐＨ５．６～ｐＨ６．４，にて含む組成物を提供し、その抗体は、ＣＤＲ１とＣＤＲ２とＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、ＣＤＲ１とＣＤＲ２とＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、そのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１～配列番号６のアミノ酸配列を含む。
本開示は、抗ＣＤ７３抗体と５ｍＭ～５０ｍＭのヒスチジンと２％（質量／体積）～２０％（質量／体積）のトレハロースと０．０１５％（質量／体積）～０．０５％（質量／体積）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）とをｐＨ５．６～ｐＨ６．４，にて含む組成物を提供し、その抗体は、ＣＤＲ１とＣＤＲ２とＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、ＣＤＲ１とＣＤＲ２とＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、そのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１～配列番号６のアミノ酸配列を含む。
【0005】
一部の実施形態において、その組成物は、１０ｍＭ～３０ｍＭのヒスチジン、５％（質量／体積）～１５％（質量／体積）のトレハロース、および０．０１５％（質量／体積）～０．０３５％（質量／体積）のＰＳ８０をｐＨ５．８～ｐＨ６．２にて含む。一部の実施形態において、その組成物は、１５ｍＭ～２５ｍＭのヒスチジン、６％（質量／体積）～１０％（質量／体積）のトレハロース、０．０１５％（質量／体積）～０．０２５％（質量／体積）のＰＳ８０をｐＨ５．９～ｐＨ６．１にて含む。一部の実施形態において、その組成物は、５ｍｇ／ｍＬ～１５０ｍｇ／ｍＬの上記抗体を含む。
【0006】
一部の実施形態において、そのＶＨは配列番号７のアミノ酸配列を含み、そのＶＬは配列番号８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、その抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【0007】
一実施形態において、本開示の組成物を凍結乾燥することによって得られる凍結乾燥組成物もまた、提供される。その凍結乾燥組成物を溶解することによって得られる溶液（例えば、水）もまた、提供される。
【0008】
がん（例えば、膀胱がん、乳がん、大腸がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、腎がん、白血病、肝がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、膵がん、前立腺がん、および甲状腺がん）を処置するための組成物を使用する使用および方法もまた、提供される。
【発明を実施するための形態】
【0009】
（詳細な説明）
（Ｉ．定義）
範囲を含む、すべての数的指定（例えば、ｐＨ、温度、時間、濃度、および分子量）は、０．１％または１０％の増分で変化（＋）もしくは（－）される概数である。常には明示的に記載されるわけではないが、すべての数的指定の前には用語「約」があることが、理解されるべきである。常には明示的に記載されるわけではないが、本明細書において記載される試薬は単なる例示に過ぎないこと、およびそのようなものの等価物が当該分野において公知であるもまた、理解されるべきである。
（Ｉ．定義）
範囲を含む、すべての数的指定（例えば、ｐＨ、温度、時間、濃度、および分子量）は、０．１％または１０％の増分で変化（＋）もしくは（－）される概数である。常には明示的に記載されるわけではないが、すべての数的指定の前には用語「約」があることが、理解されるべきである。常には明示的に記載されるわけではないが、本明細書において記載される試薬は単なる例示に過ぎないこと、およびそのようなものの等価物が当該分野において公知であるもまた、理解されるべきである。
【0010】
「組成物」は、活性薬剤と、別の不活性な化合物または組成物（例えば、検出可能な薬剤もしくは標識）あるいは活性化合物または組成物（例えば、アジュバント）との組み合わせ物を意味することが意図される。
【0011】
「薬学的組成物」は、その組成物がインビトロ、インビボまたはエクスビボでの診断的用途もしくは治療的用途のために適切になる、活性薬剤と、不活性キャリアまたは活性キャリアとの組み合わせ物を含むことが意図される。
【0012】
（ＩＩ．抗体製剤）
治療抗体のために適切な構成の開発は、代表的には、例えば、タンパク質の溶解度、安定性、および重量モル浸透圧濃度からの矛盾する要件を有する。したがって、許容できる構成を生じるようにそのような要件が釣り合わされ得るか否かは、難問であり予測不能である。例えば、実施例２において示されるとおり、種々の緩衝液を本開示の抗ＣＤ７３抗体とともに試験した場合、リン酸緩衝液が、他の緩衝液よりも多くの抗体断片化が生じることを許容したようであった（例えば、表４を参照のこと）。それはまた、より顕著な純度の減少をもたらした（表５）。これらのデータはまた、高ｐＨ（ｐＨ７．０）条件および低ｐＨ（ｐＨ４．５）条件もまたタンパク質純度にとって有害であり得ることを示唆する（表６もまた参照のこと）。
治療抗体のために適切な構成の開発は、代表的には、例えば、タンパク質の溶解度、安定性、および重量モル浸透圧濃度からの矛盾する要件を有する。したがって、許容できる構成を生じるようにそのような要件が釣り合わされ得るか否かは、難問であり予測不能である。例えば、実施例２において示されるとおり、種々の緩衝液を本開示の抗ＣＤ７３抗体とともに試験した場合、リン酸緩衝液が、他の緩衝液よりも多くの抗体断片化が生じることを許容したようであった（例えば、表４を参照のこと）。それはまた、より顕著な純度の減少をもたらした（表５）。これらのデータはまた、高ｐＨ（ｐＨ７．０）条件および低ｐＨ（ｐＨ４．５）条件もまたタンパク質純度にとって有害であり得ることを示唆する（表６もまた参照のこと）。
【0013】
試験したこれらすべての緩衝液および条件のうち、２０ｎＭヒスチジンをｐＨ６．０にて含む製剤Ｆ５が、タンパク質の安定性を支持することが可能であるようであった。驚くべきことに、この緩衝液条件はタンパク質の高い溶解度、少なくとも８０ｍｇ／ｍＬおよび１５０ｍｇ／ｍＬもまた可能にした（表７）。
【0014】
多数の候補賦形剤を実施例３において試験し、それには、スクロース、トレハロース、ソルビトール、マンニトール、およびアルギニンを含んだ。驚くべきことに、目に見える粒子が、凍結乾燥試験後に、ＰＳ８０（ポリソルベート８０）（凍結融解サイクル中にタンパク質を安定化するために重要であると同定されている賦形剤）の存在下でさえ、マンニトール（タンパク質製剤のために最も一般的に使用される賦形剤の１つ）を含む製剤において検出された（表１１～表１３）。また、スクロースを含む製剤は、最も多い断片化を受けた（表１７）。別の賦形剤であるアルギニンの使用もまた、タンパク質純度の比較的大きな（１％）減少をもたらした（表１８）。なお別の賦形剤であるソルビトールは、１０サイクルの凍結融解中にタンパク質安定性を十分に支持することに失敗した（表２３）。
【0015】
興味深いことに、候補賦形剤のうちの１つであるトレハロースは、これらすべての試験条件を通じてタンパク質を十分に安定のまま維持可能であった。また、トレハロースを含む製剤は、抗体の抗原結合効力を維持した（表２４）。その後、実施例５において、製剤の熱力学的安定性を試験し、その試験手順中にタンパク質を安定のまま維持するためには少なくとも０．０２％のＰＳ８０が必要であることが見出された。したがって、試行錯誤を通じて、本発明者らは、ヒスチジンとトレハロースとＰＳ８０とを約ｐＨ６．０にて含む、抗ＣＤ７３抗体にとって適切な製剤を同定することができた。
【0016】
本開示の一実施形態にしたがって、本開示の抗ＣＤ７３抗体または抗原結合フラグメントと、ヒスチジンとトレハロースとポリソルベート８０とを含む組成物が、提供される。一部の実施形態において、その組成物は水溶液であり、その溶液のｐＨは５．５～６．５である。
【0017】
一部の実施形態において、ヒスチジン（例えば、ヒスチジン塩酸塩）は、濃度約５ｍＭ～約５０ｍＭで存在する。一部の実施形態において、ヒスチジンの濃度は、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約６ｍＭ、少なくとも約７ｍＭ、少なくとも約８ｍＭ、少なくとも約９ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１１ｍＭ、少なくとも約１２ｍＭ、少なくとも約１３ｍＭ、少なくとも約１４ｍＭ、少なくとも約１５ｍＭ、少なくとも約１６ｍＭ、少なくとも約１７ｍＭ、少なくとも約１８ｍＭ、少なくとも約１９ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約３５ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、または少なくとも約４５ｍＭである。一部の実施形態において、ヒスチジンの濃度は、約１００ｍＭ以下、約９０ｍＭ以下、約８０ｍＭ以下、約７０ｍＭ以下、約６０ｍＭ以下、約５０ｍＭ以下、約４５ｍＭ以下、約４０ｍＭ以下、約３５ｍＭ以下、約３０ｍＭ以下、約２９ｍＭ以下、約２８ｍＭ以下、約２７ｍＭ以下、約２６ｍＭ以下、約２５ｍＭ以下、約２４ｍＭ以下、約２３ｍＭ以下、約２２ｍＭ以下、約２１ｍＭ以下、約２０ｍＭ以下、約１９ｍＭ以下、約１８ｍＭ以下、約１７ｍＭ以下、約１６ｍＭ以下、または約１５ｍＭ以下である。一部の実施形態において、ヒスチジンの濃度は、約５ｍＭ～約４０ｍＭ、約５ｍＭ～約３５ｍＭ、約５ｍＭ～約３０ｍＭ、約５ｍＭ～約２５ｍＭ、約５ｍＭ～約２０ｍＭ、約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約１０ｍＭ～約４５ｍＭ、約１０ｍＭ～約４０ｍＭ、約１０ｍＭ～約３５ｍＭ、約１０ｍＭｍＭ～約３０ｍＭ、約１０ｍＭ～約２５ｍＭ、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１５ｍＭ～約５０ｍＭ、約１５ｍＭ～約４５ｍＭ、約１５ｍＭ～約４０ｍＭ、約１５ｍＭ～約３５ｍＭ、約１５ｍＭ～約３０ｍＭ、約１５ｍＭ～約２５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２０ｍＭ、約２０ｍＭ～約５０ｍＭ、約２０ｍＭ～約４５ｍＭ、約２０ｍＭ～約４０ｍＭ、約２０ｍＭ～約３５ｍＭ、約２０ｍＭ～約３０ｍＭ、または約２０ｍＭ～約２５ｍＭである。
【0018】
一部の実施形態において、トレハロース（例えば、トレハロース二水和物）は、濃度約２％（質量／体積）～約２０％（質量／体積）で存在する。一部の実施形態において、トレハロースの濃度は、少なくとも約２％（質量／体積）、少なくとも約３％（質量／体積）、少なくとも約４％（質量／体積）、少なくとも約５％（質量／体積）、少なくとも約６％（質量／体積）、少なくとも約７％（質量／体積）、少なくとも約８％（質量／体積）、少なくとも約９％（質量／体積）、少なくとも約１０％（質量／体積）、少なくとも約１１％（質量／体積）、少なくとも約１２％（質量／体積）、少なくとも約１５％（質量／体積）、少なくとも約１７％（質量／体積）または少なくとも約１８％（質量／体積）である。一部の実施形態において、トレハロースの濃度は、約２０％（質量／体積）以下、約１９％（質量／体積）以下、約１８％（質量／体積）以下、約１７％（質量／体積）以下、約１６％（質量／体積）以下、約１５％（質量／体積）以下、約１４％（質量／体積）以下、約１３％（質量／体積）以下、約１２％（質量／体積）以下、約１１％（質量／体積）以下、約１０％（質量／体積）以下、約９％（質量／体積）以下、約８％（質量／体積）以下、約７％（質量／体積）以下、約６％（質量／体積）以下、約５％（質量／体積）以下、約４％（質量／体積）以下、または約３％（質量／体積）以下である。一部の実施形態において、トレハロースの濃度は、約２％（質量／体積）～約２０％（質量／体積）、約２％（質量／体積）～約１９％（質量／体積）、約２％（質量／体積）～約１８％（質量／体積）、約２％（質量／体積）～約１７％（質量／体積）、約２％（質量／体積）～約１６％（質量／体積）、約２％（質量／体積）～約１５％（質量／体積）、約２％（質量／体積）～約１４％（質量／体積）、約２％（質量／体積）～約１３％（質量／体積）、約２％（質量／体積）～約１２％（質量／体積）、約２％（質量／体積）～約１１％（質量／体積）、約２％（質量／体積）～約１０％（質量／体積）、約２％（質量／体積）～約９％（質量／体積）、約２％（質量／体積）～約８％（質量／体積）、約３％（質量／体積）～約２０％（質量／体積）、約３％（質量／体積）～約１９％（質量／体積）、約３％（質量／体積）～約１８％（質量／体積）、約３％（質量／体積）～約１７％（質量／体積）、約３％（質量／体積）～約１６％（質量／体積）、約３％（質量／体積）～約１５％（質量／体積）、約３％（質量／体積）～約１４％（質量／体積）、約３％（質量／体積）～約１３％（質量／体積）、約３％（質量／体積）～約１３％（質量／体積）、約３％（質量／体積）～約１１％（質量／体積）、約３％（質量／体積）～約１０％（質量／体積）、約３％（質量／体積）～約９％（質量／体積）、約３％（質量／体積）～約８％（質量／体積）、約４％（質量／体積）～約２０％（質量／体積）、約４％（質量／体積）～約１９％（質量／体積）、約４％（質量／体積）～約１８％（質量／体積）、約４％（質量／体積）～約１７％（質量／体積）、約４％（質量／体積）～約１６％（質量／体積）、約４％（質量／体積）～約１５％（質量／体積）、約４％（質量／体積）～約１４％（質量／体積）、約４％（質量／体積）～約１３％（質量／体積）、約４％（質量／体積）～約１４％（質量／体積）、約４％（質量／体積）～約１１％（質量／体積）、約４％（質量／体積）～約１０％（質量／体積）、約４％（質量／体積）～約９％（質量／体積）、約４％（質量／体積）～約８％（質量／体積）、約５％（質量／体積）～約２０％（質量／体積）、約５％（質量／体積）～約１９％（質量／体積）、約５％（質量／体積）～約１８％（質量／体積）、約５％（質量／体積）～約１７％（質量／体積）、約５％（質量／体積）～約１６％（質量／体積）、約５％（質量／体積）～約１５％（質量／体積）、約５％（質量／体積）～約１４％（質量／体積）、約５％（質量／体積）～約１３％（質量／体積）、約５％（質量／体積）～約１５％（質量／体積）、約５％（質量／体積）～約１１％（質量／体積）、約５％（質量／体積）～約１０％（質量／体積）、約５％（質量／体積）～約９％（質量／体積）、約５％（質量／体積）～約８％（質量／体積）、約６％（質量／体積）～約２０％（質量／体積）、約６％（質量／体積）～約１９％（質量／体積）、約６％（質量／体積）～約１８％（質量／体積）、約６％（質量／体積）～約１７％（質量／体積）、約６％（質量／体積）～約１６％（質量／体積）、約６％（質量／体積）～約１６％（質量／体積）、約６％（質量／体積）～約１４％（質量／体積）、約６％（質量／体積）～約１３％（質量／体積）、約６％（質量／体積）～約１６％（質量／体積）、約６％（質量／体積）～約１１％（質量／体積）、約６％（質量／体積）～約１０％（質量／体積）、約６％（質量／体積）～約９％（質量／体積）、約６％（質量／体積）～約８％（質量／体積）、約７％（質量／体積）～約２０％（質量／体積）、約７％（質量／体積）～約１９％（質量／体積）、約７％（質量／体積）～約１８％（質量／体積）、約７％（質量／体積）～約１７％（質量／体積）、約７％（質量／体積）～約１７％（質量／体積）、約７％（質量／体積）～約１７％（質量／体積）、約７％（質量／体積）～約１４％（質量／体積）、約７％（質量／体積）～約１３％（質量／体積）、約７％（質量／体積）～約１７％（質量／体積）、約７％（質量／体積）～約１１％（質量／体積）、約７％（質量／体積）～約１０％（質量／体積）、約７％（質量／体積）～約９％（質量／体積）、約７％（質量／体積）～約８％（質量／体積）、約８％（質量／体積）～約２０％（質量／体積）、約８％（質量／体積）～約１９％（質量／体積）、約８％（質量／体積）～約１８％（質量／体積）、約８％（質量／体積）～約１８％（質量／体積）、約８％（質量／体積）～約１８％（質量／体積）、約８％（質量／体積）～約１８％（質量／体積）、約８％（質量／体積）～約１４％（質量／体積）、約８％（質量／体積）～約１３％（質量／体積）、約８％（質量／体積）～約１８％（質量／体積）、約８％（質量／体積）～約１１％（質量／体積）、約８％（質量／体積）～約１０％（質量／体積）、約８％（質量／体積）～約９％（質量／体積）、約９％（質量／体積）～約２０％（質量／体積）、約９％（質量／体積）～約１９％（質量／体積）、約９％（質量／体積）～約１８％（質量／体積）、約９％（質量／体積）～約１９％（質量／体積）、約９％（質量／体積）～約１９％（質量／体積）、約９％（質量／体積）～約１９％（質量／体積）、約９％（質量／体積）～約１４％（質量／体積）、約９％（質量／体積）～約１３％（質量／体積）、約９％（質量／体積）～約１９％（質量／体積）、約９％（質量／体積）～約１１％（質量／体積）、約９％（質量／体積）～約１０％（質量／体積）、約１０％（質量／体積）～約２０％（質量／体積）、約１０％（質量／体積）～約１９％（質量／体積）、約１０％（質量／体積）～約１８％（質量／体積）、約１０％（質量／体積）～約１１０％（質量／体積）、約１０％（質量／体積）～約１１０％（質量／体積）、約１０％（質量／体積）～約１１０％（質量／体積）、約１０％（質量／体積）～約１４％（質量／体積）、約１０％（質量／体積）～約１３％（質量／体積）、約１０％（質量／体積）～約１１０％（質量／体積）、または約１０％（質量／体積）～約１１％（質量／体積）である。
【0019】
一部の実施形態において、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）は、濃度約０．０１５％（質量／体積）～約０．０５％（質量／体積）で存在する。一部の実施形態において、ＰＳ８０は、濃度少なくとも約０．０１５％（質量／体積）、少なくとも約０．０１６％（質量／体積）、少なくとも約０．０１７％（質量／体積）、少なくとも約０．０１８％（質量／体積）、少なくとも約０．０１９％（質量／体積）、少なくとも約０．０２％（質量／体積）、少なくとも約０．０２１％（質量／体積）、少なくとも約０．０２２％（質量／体積）、少なくとも約０．０２３％（質量／体積）、少なくとも約０．０２４％（質量／体積）、少なくとも約０．０２５％（質量／体積）、少なくとも約０．０２６％（質量／体積）、少なくとも約０．０２７％（質量／体積）、少なくとも約０．０２８％（質量／体積）、少なくとも約０．０２９％（質量／体積）、または少なくとも約０．０３％（質量／体積）で存在する。一部の実施形態において、ＰＳ８０は、濃度０．０５％（質量／体積）以下、０．０４９％（質量／体積）以下、０．０４８％（質量／体積）以下、０．０４７％（質量／体積）以下、０．０４６％（質量／体積）以下、０．０４５％（質量／体積）以下、０．０４４％（質量／体積）以下、０．０４３％（質量／体積）以下、０．０４２％（質量／体積）以下、０．０４１％（質量／体積）以下、０．０４％（質量／体積）以下、０．０３９％（質量／体積）以下、０．０３８％（質量／体積）以下、０．０３７％（質量／体積）以下、０．０３６％（質量／体積）以下、０．０３５％（質量／体積）以下、０．０３４％（質量／体積）以下、０．０３３％（質量／体積）以下、０．０３２％（質量／体積）以下、０．０３１％（質量／体積）以下、０．０３％（質量／体積）以下、０．０２９％（質量／体積）以下、０．０２８％（質量／体積）以下、０．０２７％（質量／体積）以下、０．０２６％（質量／体積）以下、０．０２５％（質量／体積）以下、０．０２４％（質量／体積）以下、０．０２３％（質量／体積）以下、０．０２２％（質量／体積）以下、０．０２１％（質量／体積）以下、または０．０２％（質量／体積）以下で存在する。
【0020】
一部の実施形態において、組成物は、ｐＨ５．６～ｐＨ６．４を有する。一部の実施形態において、そのｐＨは、５．６以上、５．７以上、５．８以上、５．８５以上、５．９以上、５．９５以上、６以上、６．０５以上、６．１以上、６．１５以上、または６．２以上である。一部の実施形態において、そのｐＨは、６．４以下、６．３以下、６．２以下、６．１５以下、６．１以下、６．０５以下、６以下、５．９５以下、５．９以下、５．８５以下、または５．８以下である。一部の実施形態において、そのｐＨは、約５．７～約６．３、約５．８～約６．２、約５．８５～約６．１５、約５．９～約６．１、約５．９５～約６．０５、または約５．９、約５．９５、約６、約６．０５、もしくは約６．１である。
【0021】
一部の実施形態において、組成物は、１種または複数種の増量剤をさらに含む。本明細書において使用される場合、用語「増量剤（ｂｕｌｋｉｎｇ ａｇｅｎｔ）」とは、凍結乾燥製剤に嵩を提供する成分を指す。増量剤の例としては、マンニトール、トレハロース、ラクトース、スクロース、ポリビニルピロリドン、スクロース、グルコース、グリシン、シクロデキストリン、デキストラン、固体ＰＥＧならびにそれらの誘導体および混合物が挙げられるが、それらに限定はされない。一実施形態において、本開示の製剤は、増量剤を必要に応じて含む。
【0022】
一部の実施形態において、組成物は、１種または複数種の等張化剤をさらに含む。本明細書において使用される用語「等張化剤」とは、製剤の張度を調節するために使用される薬学的に受容可能な薬剤を示す。等張性とは、ある溶液と比較した（通常はヒト血清の浸透圧と比較した）浸透圧を一般的には指す。製剤は、低張性、等張性、または高張性であり得る。一局面において、製剤は等張性である。等張性製剤は、液体であるか、または固体形態から（例えば、凍結乾燥形態から）再構成された液体であり、それが比較されるある種の他の溶液（例えば、生理食塩水溶液および血清）と同じ張度を有する溶液を示す。適切な等張化剤としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、および本明細書において規定されるアミノ酸の群に由来する任意成分、糖の群に由来する任意成分、ならびにそれらの組合せが挙げられるが、それらに限定はされない。
【0023】
一部の実施形態において、組成物は、１種または複数種の界面活性剤をさらに含む。本明細書において使用される場合、用語「界面活性剤」とは、両親媒性構造を有する薬学的に受容可能な有機物質を指し、すなわち、それは、対立する溶解度傾向の基、代表的には、脂溶性炭化水素鎖および水溶性イオン基から構成される。界面活性剤は、その界面活性部分の電荷に依存して、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤および非イオン性界面活性剤に分類され得る。界面活性剤は、種々の薬学的組成物および生物物質調製物のための湿潤剤、乳化剤、可溶化剤、および分散剤としてしばしば使用される。本明細書において記載される薬学的製剤の一部の実施形態において、界面活性剤の量は、質量／体積パーセント（質量／体積％）で表されるパーセンテージとして記載される。適切な薬学的に受容可能な界面活性剤としては、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Ｔｗｅｅｎ（登録商標））、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（Ｂｒｉｊ（登録商標））、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテル（Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）－Ｘ）、ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレンコポリマー（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）、またはドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の群が挙げられるが、それらに限定はされない。ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルとしては、ポリソルベート２０（商標Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ２０（商標）として販売されている）およびポリソルベート８０（商標Ｔｗｅｅｎ（登録商標） ８０（商標）として販売されている）が挙げられる。ポリエチレン－ポリプロピレンコポリマーとしては、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８またはＰｏｌｏｘａｍｅｒ １８８（商標）の名称で販売されているものが挙げられる、ポリオキシエチレンアルキルエーテルとしては、商標Ｂｒｉｊ（登録商標）として販売されているものが挙げられる。アルキルフェノールポリオキシエチレンエーテルとしては、商標Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）－Ｘとして販売されているものが挙げられる。
【0024】
一部の実施形態において、組成物は、１種または複数種の凍結保護剤をさらに含む。「凍結保護剤」とは、凍結乾燥（高真空における急速な凍結および乾燥のプロセス）中でタンパク質を安定化する薬学的に受容可能な物質を指す。凍結保護剤の例としては、スクロース、トレハロースまたはマンニトールが挙げられるが、それらに限定はされない。
【0025】
一部の実施形態において、組成物は、１種または複数種の抗酸化剤をさらに含む。「抗酸化剤」とは、他の分子の酸化を遅延または防止することが可能な分子を指す。酸化とは、ある物質から酸化剤へと電子を移動する化学反応である。酸化反応は、フリーラジカルを生じ得、そのフリーラジカルは、タンパク質治療剤を不安定化させる連鎖反応を開始し、最終的にはその製品の活性に影響を与える。抗酸化剤は、フリーラジカル中間体を除去することによってこれらの連鎖反応を終結させ、抗酸化剤自体が酸化されることによって他の酸化反応を阻害する。結果として、抗酸化剤はしばしば、還元剤、キレート化剤、および脱酸素剤（例えば、クエン酸塩、ＥＤＴＡ、ＤＰＴＡ、チオール、アスコルビン酸またはポリフェノール）である。抗酸化剤の非限定的例としては、アスコルビン酸（ＡＡ、Ｅ３００）、チオ硫酸塩、メチオニン、トコフェロール（Ｅ３０６）、没食子酸プロピル（ＰＧ、Ｅ３１０）、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロキノン（ＴＢＨＱ）、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ、Ｅ３２０）およびブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ、Ｅ３２１）が挙げられる。
【0026】
一部の実施形態において、組成物は、１種または複数種の保存剤をさらに含む。「保存剤」は、微生物増殖によるかまたは望ましくない化学変化による分解を防ぐために、食物、医薬品、塗料、生物学的サンプル、木などの製品に添加される、天然化学物質または合成化学物質である。保存添加剤は、単独で、または他の保存方法と組み合わせて、使用され得る。保存剤は、抗菌保存剤（これは、細菌および真菌の増殖を阻害する）、または抗酸化剤（これは、構成成分の酸化を阻害する）（例えば、酸素吸収剤）であり得る。一般的な抗菌保存剤としては、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、クロルヘキシジン、グリセリン、フェノール、ソルビン酸カリウム、チメロサール、亜硫酸塩（二酸化硫黄、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸水素カリウムなど）およびＥＤＴＡ二ナトリウム塩が挙げられる。他の保存剤としては、非経口（ｐａｔｅｎｔｅｒａｌ）タンパク質において一般的に使用される保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノール、ｍ－クレゾール、クロロブタノールまたはメチルパラベン）が挙げられる。
【0027】
本明細書において開示される抗ＣＤ７３抗体は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を有する。そのＶＨは、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含み、そのＶＬもまた３つのＣＤＲであるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。そのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２およびＶＨ ＣＤＲ３ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２およびＶＬ ＣＤＲ３は、それぞれ、アミノ酸配列である配列番号１～配列番号６を含む。例示のＶＨ配列およびＶＬ配列は、それぞれ、配列番号７および配列番号８を含む。その抗体はまた、重鎖定常領域および軽鎖定常領域を含み得る。例示の重鎖配列および軽鎖配列は、それぞれ配列番号９および配列番号１０を含む。
【0028】
一部の実施形態において、組成物は、５ｍｇ／ｍＬ～１５０ｍｇ／ｍＬの本開示の抗ＣＤ７３抗体または抗原結合フラグメント、５ｍＭ～５０ｍＭのヒスチジン、２％（質量／体積）～２０％（質量／体積）のトレハロース、０．０１５％～０．０５％（質量／体積）のＰＳ８０を、ｐＨ５．６～ｐＨ６．４にて含む。
【0029】
一部の実施形態において、組成物は、１０ｍｇ／ｍＬ～１２０ｍｇ／ｍＬの本開示の抗ＣＤ７３抗体または抗原結合フラグメント、１０ｍＭ～３０ｍＭのヒスチジン、５％（質量／体積）～１５％（質量／体積）のトレハロース、０．０１５％（質量／体積）～０．０３５％（質量／体積）のＰＳ８０をｐＨ５．８～ｐＨ６．２にて含む。
【0030】
一部の実施形態において、組成物は、１０ｍｇ／ｍＬ～１２０ｍｇ／ｍＬの本開示の抗ＣＤ７３抗体または抗原結合フラグメント、１５ｍＭ～２５ｍＭのヒスチジン、６％（質量／体積）～１０％（質量／体積）のトレハロース、０．０１５％（質量／体積）～０．０２５％（質量／体積）のＰＳ８０をｐＨ５．９～ｐＨ６．１にて含む。
【0031】
一部の実施形態において、本明細書において開示される水溶液を凍結乾燥することによって調製され得る凍結乾燥組成物もまた、提供される。一部の実施形態において、その凍結乾燥組成物を溶媒（例えば、水）に溶解することによって調製され得る溶液もまた、提供される。
【0032】
（ＩＩＩ．製剤を使用する方法）
本明細書において記載されるとおり、本開示の組成物は、特定の処置方法および診断方法において使用され得る。本開示はさらに、本明細書において記載される障害または状態のうちの１つまたは複数を処置するために本開示の組成物を患者（例えば、動物、哺乳動物、およびヒト）に投与する工程を含む、抗体ベースの治療に関する。
本明細書において記載されるとおり、本開示の組成物は、特定の処置方法および診断方法において使用され得る。本開示はさらに、本明細書において記載される障害または状態のうちの１つまたは複数を処置するために本開示の組成物を患者（例えば、動物、哺乳動物、およびヒト）に投与する工程を含む、抗体ベースの治療に関する。
【0033】
本開示の組成物はまた、がんを処置または阻害するために使用され得る。上記で提供されたとおり、ＣＤ７３は、腫瘍細胞において過剰発現され得る。腫瘍由来のＣＤ７３は、細胞外アデノシンを生成するためのエクト酵素（ｅｃｔｏ－ｅｎｚｙｍｅ）として機能し得、細胞外アデノシンは、アデノシンレセプターシグナル伝達を介して抗腫瘍Ｔ細胞免疫を制限することによって、腫瘍増殖を促進する。マウス腫瘍モデルにおけるＣＤ７３を標的とする低分子インヒビターまたはモノクローナル抗体を用いた結果は、標的化ＣＤ７３治療が腫瘍増殖の有効な制御への重要な代替的で現実的なアプローチであることを示す。特に、それは、適応免疫応答機構を増強することによってＴ細胞ベースの治療を助け、このことは、腫瘍浸潤Ｔリンパ球の機能を増加し得、がん患者生存の改善をもたらし得る。
【0034】
したがって、一部の実施形態において、それを必要とする患者におけるがんを処置するための方法が、提供される。その方法は、一実施形態において、その患者に有効量の本開示の組成物を投与する工程を伴う。一部の実施形態において、その患者におけるがん細胞（例えば、間質細胞）のうちの少なくとも１つは、ＣＤ７３を過剰発現する。
【0035】
がんの非限定的例としては、膀胱がん、乳がん、大腸がん、子宮内膜がん、食道がん、頭頸部がん、腎がん、白血病、肝がん、肺がん、リンパ腫、黒色腫、膵がん、前立腺がん、および甲状腺がんが挙げられる。
【0036】
本開示の抗体またはその改変体もしくは誘導体を用いて処置、予防、診断および／あるいは予後判定し得る、細胞生存の増加に関連するさらなる疾患または状態としては、白血病（急性白血病（例えば、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、および赤白血病が挙げられる））ならびに慢性白血病（例えば、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病および慢性リンパ性白血病）が挙げられる）、真性多血症、リンパ腫（例えば、ホジキン病および非ホジキン病）、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖病、および固形腫瘍（肉腫および癌腫、例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、大腸癌、膵がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫瘍、乏突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、黒色腫、神経芽細胞腫および網膜芽細胞腫が挙げられるが、それらに限定はされない）などの、悪性疾患および関連障害の進行ならびに転移が挙げられるが、それらに限定はされない。
【0037】
何らかの特定の患者のための特定の投与量および処置レジメンは、種々の要因に依存し、それらの要因としては、使用される特定の抗体、その改変体または誘導体、患者の年齢、患者の体重、患者の健康全般、患者の性別、および患者の食事、ならびに投与回数、排出率、薬物の組合せ、および処置される特定の重症度が挙げられる。医療従事者によるそのような要因の判断は、当業者の範囲内にある。その量はまた、処置される個別の患者、投与経路、製剤の種類、使用される化合物の特徴、疾患の重症度、および望まれる効果に依存する。使用される量は、当該分野において周知である薬理学的原則および薬物動態学的原則によって決定され得る。
【0038】
組成物の投与方法としては、皮内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、静脈内経路、および皮下経路が挙げられるが、それらに限定はされない。その組成物は、任意の都合の良い経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮層または粘膜皮膚層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など）を通る吸収によって、投与され得、他の生物活性薬剤とともに投与され得る。したがって、本開示の抗原結合ポリペプチドを含む薬学的組成物は、非経口的に、大槽内に（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）、腟内に、腹腔内に、局所に（粉末、軟膏、点滴薬もしくは経皮パッチとして）、頬側（ｂｕｃａｌｌｙ）に、または口腔スプレーもしくは点鼻スプレーとして、投与され得る。
【0039】
本明細書において使用される用語「非経口」とは、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内（ｉｎｔｒａｓｔｅｒｎａｌ）、皮下、および関節内の注入ならびに注射を含む、投与様式を指す。
【0040】
投与は、全身投与であっても、局所投与であってもよい。さらに、任意の適切な経路（脳室内注射および髄腔内注射が挙げられる）によって本開示の抗体を中枢神経系に導入することが、望ましいものであり得る；脳室内注射は、例えばリザーバー（Ｏｍｍａｙａリザーバーなど）に取り付けられた脳室内カテーテルによって、促進され得る。肺投与もまた、例えば、吸入器または噴霧器、およびエアロゾル化剤を含む製剤の使用によって、使用され得る。
【0041】
炎症性、免疫性もしくは悪性の疾患、障害または状態の処置、阻害および予防において有効である本開示の抗体の量は、標準的な臨床技術によって決定され得る。さらに、インビトロアッセイが、最適な投与量範囲を同定するのを助けるために、必要に応じて使用され得る。製剤において使用されるべき正確な用量もまた、投与経路、および疾患、障害または状態の重症度に依存し、それは特定の各々の患者の状況の判断にしたがって決定されるべきである。有効な用量は、インビトロ試験システムまたは動物モデル試験システムに由来する用量反応曲線から推定され得る。
【0042】
一般的な提案として、患者に投与される本開示の抗原結合ポリペプチドの投与量は、代表的には、患者の体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇ～１００ｍｇ、患者の体重１ｋｇ当たり０．１ｍｇと２０ｍｇとの間、または患者の体重１ｋｇ当たり１ｍｇ～１０ｍｇである。一般的には、ヒト抗体は、外来ポリペプチドに対する免疫応答が原因で、他の種に由来する抗体よりも長い半減期をヒトの体内で有する。したがって、より少ない投与量のヒト抗体およびより少ない頻度の投与が、しばしば可能である。さらに、本開示の抗体の投与量および投与頻度は、その抗体の取込みおよび組織（例えば、脳への）浸透を、例えば、脂質化などの修飾によって増強することによって、減少され得る。
【0043】
本開示の組成物の投与を含む、感染性もしくは悪性の疾患、状態または障害を処置するための方法は、代表的には、ヒトにおける使用の前に、望ましい治療活性または予防活性のために、インビトロで試験され、その後、受容可能な動物モデルにおいてインビボで試験される。適切な動物モデル（トランスフェニック動物が挙げられる）は、当業者にとって周知である。例えば、本明細書において記載される抗原結合ポリペプチドの治療的有用性を示すためのインビトロアッセイは、細胞株または患者組織サンプルに対する抗原結合ポリペプチドの効果を含む。その細胞株および／または組織サンプルに対する抗原結合ポリペプチドの効果は、当業者にとって公知である技術（例えば、本明細書中の他の箇所で開示されるアッセイ）を使用して、決定され得る。本開示にしたがって、特定の抗原結合ポリペプチドの投与が示されるか否かを決定するために使用され得るインビトロアッセイとしては、インビトロ細胞培養アッセイが挙げられ、そのアッセイにおいて、患者組織サンプルが培養中で増殖され、化合物に曝露されるかまたは他の方法で化合物を投与され、その組織サンプルに対するそのような化合物の効果が観察される。
【0044】
さらなる実施形態において、本開示の組成物は、抗悪性腫瘍薬、抗ウイルス薬、抗菌薬もしくは抗生物質または抗真菌薬と組み合わせて、投与される。当該分野において公知であるこれらの薬剤のいずれもが、本開示の組成物中で投与され得る。
【0045】
別の実施形態において、本開示の組成物は、化学療法剤と組み合わせて投与される。本開示の組成物とともに投与され得る化学療法剤としては、抗生物質誘導体（例えば、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、およびダクチノマイシン）；抗エストロゲン剤（例えば、タモキシフェン）；代謝拮抗薬（例えば、フルオロウラシル、５－ＦＵ、メトトレキサート、フロクスウリジン、インターフェロンα－２ｂ、グルタミン酸、プリカマイシン、メルカプトプリン、および６－チオグアニン）；細胞傷害性薬物（例えば、カルムスチン、ＢＣＮＵ、ロムスチン、ＣＣＮＵ、シトシンアラビノシド、シクロホスファミド、エストラムスチン、ヒドロキシ尿素、プロカルバジン、マイトマイシン、ブスルファン、シスプラチン、およびビンクリスチン硫酸塩）；ホルモン（例えば、メドロキシプロゲステロン、エストラムスチンリン酸エステルナトリウム、エチニルエストラジオール、エストラジオール、酢酸メゲストロール、メチルテストステロン、ジエチルスチルベストロール二リン酸、クロロトリアニセン、およびテストラクトン）；ナイトロジェンマスタード誘導体（例えば、メルファラン（ｍｅｐｈａｌｅｎ）、クロラムブシル（ｃｈｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）およびチオテパ）；ステロイドならびに組合せ（例えば、ベタメタゾン（ｂｅｔｈａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）リン酸エステルナトリウム）；ならびに他の化学療法剤（例えば、ダカルバジン（ｄｉｃａｒｂａｚｉｎｅ）、アスパラギナーゼ、ミトタン、ビンクリスチン硫酸塩、ビンブラスチン硫酸塩、およびエトポシド）が挙げられるが、それらに限定はされない。
【0046】
さらなる実施形態において、本開示の組成物は、サイトカインと組み合わせて投与される。本開示の組成物とともに投与され得るサイトカインとしては、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、抗ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、およびＴＮＦ－αが挙げられるが、それらに限定はされない。
【0047】
さらなる実施形態において、本開示の組成物は、他の治療レジメンまたは予防レジメン（例えば、放射線治療など）と組み合わせて投与される。
【実施例】
【0048】
（実施例）
本開示は、以下の実施例を参照することによってさらに理解され、それらの実施例は、単に本開示の例示であることが意図される。本開示は、例示される実施形態によって範囲を限定されず、それらの実施形態は、本開示の個々の局面の例示としてのみ意図される。機能的に等価なあらゆる方法が、本開示の範囲内にある。本明細書において開示される改変に加えて本開示の種々の改変が、上記の説明および添付の図面から当業者にとって明らかになる。そのような改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内にある。
本開示は、以下の実施例を参照することによってさらに理解され、それらの実施例は、単に本開示の例示であることが意図される。本開示は、例示される実施形態によって範囲を限定されず、それらの実施形態は、本開示の個々の局面の例示としてのみ意図される。機能的に等価なあらゆる方法が、本開示の範囲内にある。本明細書において開示される改変に加えて本開示の種々の改変が、上記の説明および添付の図面から当業者にとって明らかになる。そのような改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内にある。
【0049】
（実施例１．抗ＣＤ７３抗体ＩＭ００５の開発）
ヒトＣＤ７３タンパク質に結合しその酵素活性を阻害することにおいて強い活性を示したヒト化抗ＣＤ７３抗体（ＩＭ００５）を、開発した。さらに、ＷＯ２０１８１３７５９８において示されたとおり、この抗体は、細胞表面ＣＤ７３の内部移行を効果的に誘導する。この抗体はまた、ＡＭＰおよびＣＤ４＋ Ｔ細胞応答およびＣＤ８＋ Ｔ細胞応答の腫瘍細胞により媒介される抑制を完全に逆転させ得、腫瘍由来のＣＤ７３の活性の抑制において有効であり、腫瘍増殖の阻害をもたらす。
ヒトＣＤ７３タンパク質に結合しその酵素活性を阻害することにおいて強い活性を示したヒト化抗ＣＤ７３抗体（ＩＭ００５）を、開発した。さらに、ＷＯ２０１８１３７５９８において示されたとおり、この抗体は、細胞表面ＣＤ７３の内部移行を効果的に誘導する。この抗体はまた、ＡＭＰおよびＣＤ４＋ Ｔ細胞応答およびＣＤ８＋ Ｔ細胞応答の腫瘍細胞により媒介される抑制を完全に逆転させ得、腫瘍由来のＣＤ７３の活性の抑制において有効であり、腫瘍増殖の阻害をもたらす。
【0050】
結合分析は、ＩＭ００５がＣＤ７３タンパク質のＣ末端ドメインに結合することを示した。これは、そのＮ末端ドメインに結合する既知の抗ＣＤ－７３抗体とは異なる。ＩＭ００５の独特の結合特性は、既知の抗体と比較して優れたそのＣＤ７３阻害プロファイルの一因である。例えば、ＭＥＤＩ－９４４７（Ｏｌｅｃｌｕｍａｂ）は、膵がんおよび大腸がんならびに他のがんの処置のために現在臨床開発中である、ヒト抗ＣＤ７３モノクローナル抗体である。ＭＥＤＩ－９４４７によるＣＤ７３の阻害は、完全ＭＥＤＩ－９４４７抗体がＣＤ７３に結合する両方の結合部位を必要とするが、Ｈｕ１０１－２８による一価結合は十分である。したがって、ＭＥＤＩ－９４４７は、可溶性ＣＤ７３、または比較的低レベルのＣＤ７３を発現する細胞上で阻害不能である。対照的に、ＩＭ００５は、表面に種々のレベルのＣＤ７３を発現する細胞および可溶性ＣＤ７３におけるＣＤ７３活性の完全な阻害を達成し得る。
【0051】
ＩＭ００５は、以下のＶＨ／ＶＬ配列およびＣＤＲ配列を有する。
表１．抗ＣＤ７３ＣＤＲ
表１．抗ＣＤ７３ＣＤＲ
【表1-1-1】
【表1-1-2】
【0052】
ＩＭ００５抗体を調製するために、ＶＨ遺伝子およびＶＫ遺伝子を合成により作製し、その後、それぞれ、ヒトγ１定常ドメインおよびヒトκ定常ドメインを含むベクター中に、クローン化した。
【0053】
（実施例２．緩衝液およびｐＨの選択）
この実施例は、上記タンパク質を最も安定化した最適なｐＨ／緩衝液の条件についてスクリーニングして、その後のＩＭ００５製剤開発を支援するタンパク質溶解度を研究した。
この実施例は、上記タンパク質を最も安定化した最適なｐＨ／緩衝液の条件についてスクリーニングして、その後のＩＭ００５製剤開発を支援するタンパク質溶解度を研究した。
【0054】
（方法）
（タンパク質濃度）
タンパク質濃度を、Ｔｈｅｒｍｏ ＵＶ分光光度計によって決定した。ｐＨおよび緩衝液の評価研究において使用した吸光係数は１．６６０ＡＵ・ｍＬ・ｍｇ－１・ｃｍ－１であり、これをすべての製剤開発研究において適用した。すべての測定は、各回で２．５μＬサンプルを用いて２回繰り返し、平均を採用した。
（タンパク質濃度）
タンパク質濃度を、Ｔｈｅｒｍｏ ＵＶ分光光度計によって決定した。ｐＨおよび緩衝液の評価研究において使用した吸光係数は１．６６０ＡＵ・ｍＬ・ｍｇ－１・ｃｍ－１であり、これをすべての製剤開発研究において適用した。すべての測定は、各回で２．５μＬサンプルを用いて２回繰り返し、平均を採用した。
【0055】
（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）
ＴＳＫＧｅｌ Ｇ３０００ＳＷＸＬカラム（３００ｍｍ×７．８ｍｍ、５μｍ）を備えたＡｇｉｌｅｎｔ ＨＰＬＣシステム使用して、サイズ排除クロマトグラフィーを実施した。その移動相は５０ｍＭ ＰＢ、３００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．８±０．２であり、その流量は１．０ｍＬ／分として設定した。各サンプルについて１００μｇのタンパク質を注入し、検出器の波長を２８０ｎｍに設定した。
ＴＳＫＧｅｌ Ｇ３０００ＳＷＸＬカラム（３００ｍｍ×７．８ｍｍ、５μｍ）を備えたＡｇｉｌｅｎｔ ＨＰＬＣシステム使用して、サイズ排除クロマトグラフィーを実施した。その移動相は５０ｍＭ ＰＢ、３００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．８±０．２であり、その流量は１．０ｍＬ／分として設定した。各サンプルについて１００μｇのタンパク質を注入し、検出器の波長を２８０ｎｍに設定した。
【0056】
（ｃＩＥＦ）
ＦＣ被覆型ｃＩＥＦカートリッジを備えたＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ ｉＣＥ分析器にて、ｃＩＥＦを実施した。このｃＩＥＦ方法を使用して、ＩＭ００５サンプルの等電点（ｐＩ）およびチャージバリアントを分析した。そのローディング混合物は、濃度１．０ｍｇ／ｍＬの２０μＬサンプル、３５μＬの１％メチルセルロース、１μＬのＰｈａｒｍａｌｙｔｅ ３－１０および３μＬのＰｈａｒｍａｌｙｔｅ ８－１０．５両性担体、０．５μＬの低ｐＩマーカー６．６１または低ｐＩマーカー６．１４、０．５μＬの高ｐＩマーカー９．４６または高ｐＩマーカー９．７７、２５μＬの８モル／Ｌ尿素、およびそのローディングサンプルの体積を最終的に１００μＬにするための１５μＬの精製水を含んだ。オートサンプラーの温度は５℃であり、サンプル注入時間は９０秒間であった。フォーカシングを以下の２つの段階で実施した：１５００Ｖ下で１分間のプレフォーカシング、それに続く、３０００Ｖにて８分間のフォーカシング。全カラム画像化検出技術を用いて、２８０ｎＭにてシグナルを検出した。Ｃｈｒｏｍｐｅｒｆｅｃｔ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して、データを分析した。
ＦＣ被覆型ｃＩＥＦカートリッジを備えたＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ ｉＣＥ分析器にて、ｃＩＥＦを実施した。このｃＩＥＦ方法を使用して、ＩＭ００５サンプルの等電点（ｐＩ）およびチャージバリアントを分析した。そのローディング混合物は、濃度１．０ｍｇ／ｍＬの２０μＬサンプル、３５μＬの１％メチルセルロース、１μＬのＰｈａｒｍａｌｙｔｅ ３－１０および３μＬのＰｈａｒｍａｌｙｔｅ ８－１０．５両性担体、０．５μＬの低ｐＩマーカー６．６１または低ｐＩマーカー６．１４、０．５μＬの高ｐＩマーカー９．４６または高ｐＩマーカー９．７７、２５μＬの８モル／Ｌ尿素、およびそのローディングサンプルの体積を最終的に１００μＬにするための１５μＬの精製水を含んだ。オートサンプラーの温度は５℃であり、サンプル注入時間は９０秒間であった。フォーカシングを以下の２つの段階で実施した：１５００Ｖ下で１分間のプレフォーカシング、それに続く、３０００Ｖにて８分間のフォーカシング。全カラム画像化検出技術を用いて、２８０ｎＭにてシグナルを検出した。Ｃｈｒｏｍｐｅｒｆｅｃｔ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して、データを分析した。
【0057】
（濁度（ＵＶ３５０））
濁度を分光光度計（Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ）によって実施した。１５０μＬサンプルを９６ウェルプレートのウェルに添加し、１５０μＬの個別の緩衝液もまた、対応するウェルに参照として添加した。その後、それらの緩衝液およびサンプルの吸光度を、３５０ｎｍにて試験した。そのタンパク質のＵＶ３５０値を、対応する緩衝液を減算することによって得た。
濁度を分光光度計（Ｓｐｅｃｔｒａ Ｍａｘ）によって実施した。１５０μＬサンプルを９６ウェルプレートのウェルに添加し、１５０μＬの個別の緩衝液もまた、対応するウェルに参照として添加した。その後、それらの緩衝液およびサンプルの吸光度を、３５０ｎｍにて試験した。そのタンパク質のＵＶ３５０値を、対応する緩衝液を減算することによって得た。
【0058】
（Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（還元型および非還元型））
Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳをＣａｌｉｐｅｒによって実施した－これはマイクロチップベースのアッセイであった。非還元型：その変性溶液は、サンプル緩衝液（キット由来）、１０％のＳＤＳおよび１００ｍＭのＮ－エチルマレイミドを２０：１：０．７の体積比で混合することによって調製した。２μＬのサンプルと７μＬの変性溶液とを十分に混合し、７０℃にて１０分間インキュベートし、遠心沈殿した。Ｈ２Ｏ（３５μＬ）をそのサンプルに添加し、その後、４２μＬのその混合物を９６ウェルプレートに移し、４０００ｒｐｍにて２０分間遠心分離して気泡を除去した。そのプレートを上記機器のプレートホルダーに載せた後、脱色ゲルと蛍光色素とマーカーとを充填したＭｉｃｒｏｃｈｉｐにおいて、サンプルを移動させ（ｓｉｐ）、染色し、分離させ、検出した。データをＬａｂＣｈｉｐ ＧＸ Ｒｅｖｉｅｗｅｒで分析した。
Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳをＣａｌｉｐｅｒによって実施した－これはマイクロチップベースのアッセイであった。非還元型：その変性溶液は、サンプル緩衝液（キット由来）、１０％のＳＤＳおよび１００ｍＭのＮ－エチルマレイミドを２０：１：０．７の体積比で混合することによって調製した。２μＬのサンプルと７μＬの変性溶液とを十分に混合し、７０℃にて１０分間インキュベートし、遠心沈殿した。Ｈ２Ｏ（３５μＬ）をそのサンプルに添加し、その後、４２μＬのその混合物を９６ウェルプレートに移し、４０００ｒｐｍにて２０分間遠心分離して気泡を除去した。そのプレートを上記機器のプレートホルダーに載せた後、脱色ゲルと蛍光色素とマーカーとを充填したＭｉｃｒｏｃｈｉｐにおいて、サンプルを移動させ（ｓｉｐ）、染色し、分離させ、検出した。データをＬａｂＣｈｉｐ ＧＸ Ｒｅｖｉｅｗｅｒで分析した。
【0059】
還元型：その変性溶液は、サンプル緩衝液（キット由来）、１０％のＳＤＳおよび１Ｍジチオスレイトールを２０：１：０．７の体積比で混合することによって調製し、一方、参照標準物またはサンプルはＭＱ Ｈ２Ｏで１ｍｇ／ｍＬに希釈した。２μＬのサンプルと７μＬの変性溶液とを十分に混合し、７０℃にて１０分間インキュベートし、遠心沈殿した。
【0060】
Ｈ２Ｏ（３５μＬ）をそのサンプルに添加し、その後、４２μＬのその混合物を９６ウェルプレートに移し、４０００ｒｐｍにて２０分間遠心分離して気泡を除去した。そのプレートを上記機器のプレートホルダーに載せた後、脱色ゲルと蛍光色素とマーカーとを充填したＭｉｃｒｏｃｈｉｐにおいて、サンプルを移動させ（ｓｉｐ）、染色し、分離させ、検出した。データをＬａｂＣｈｉｐ ＧＸ Ｒｅｖｉｅｗｅｒで分析した。
【0061】
（ＤＳＣ）
ＤＳＣ分析を、ＧＥ ＤＳＣ Ｓｙｓｔｅｍを用いて実施した。サンプルを参照緩衝液で１ｍｇ／ｍＬに希釈した。４００μＬの個別の参照緩衝液を９６ウェルプレートの奇数番号のウェルに添加し、４００μＬのサンプルをそのサンプルプレートの偶数番号のウェルに添加した。スキャン温度が速度２００℃／時間で１０℃～１１０℃の勾配であるように、実験パラメータを設定した。サーモグラムの分析をＭｉｃｒｏＣａｌ ＶＰ－Ｃａｐｉｌｌａｒｙ ＤＳＣソフトウェアで実施した。
ＤＳＣ分析を、ＧＥ ＤＳＣ Ｓｙｓｔｅｍを用いて実施した。サンプルを参照緩衝液で１ｍｇ／ｍＬに希釈した。４００μＬの個別の参照緩衝液を９６ウェルプレートの奇数番号のウェルに添加し、４００μＬのサンプルをそのサンプルプレートの偶数番号のウェルに添加した。スキャン温度が速度２００℃／時間で１０℃～１１０℃の勾配であるように、実験パラメータを設定した。サーモグラムの分析をＭｉｃｒｏＣａｌ ＶＰ－Ｃａｐｉｌｌａｒｙ ＤＳＣソフトウェアで実施した。
【0062】
（粘度）
粘度を、ＢＲＯＯＫＦＩＥＬＤ粘度計を使用して評価し、そのコーンの型はＣＰＡ－４０Ｚであった。試験温度は２５℃であり、０．５ｍＬのサンプルが必要であった。
粘度を、ＢＲＯＯＫＦＩＥＬＤ粘度計を使用して評価し、そのコーンの型はＣＰＡ－４０Ｚであった。試験温度は２５℃であり、０．５ｍＬのサンプルが必要であった。
【0063】
（結果）
ＩＭ００５（２０．４ｍｇ／ｍＬ）を最初に、表１に示される９種の異なる緩衝液に交換した。そのタンパク質濃度を１０ｍｇ／ｍＬに調整した。
表１．緩衝液条件
ＩＭ００５（２０．４ｍｇ／ｍＬ）を最初に、表１に示される９種の異なる緩衝液に交換した。そのタンパク質濃度を１０ｍｇ／ｍＬに調整した。
表１．緩衝液条件
【表1-2】
【0064】
４個の２ｍＬガラスバイアルに、各製剤について１ｍＬの濾過済み製品を充填した。充填直後に、それらのバイアルに栓をして圧着した。圧着を除けば、すべての手順はバイオセーフティフード（ｂｉｏ－ｓａｆｅｔｙ ｈｏｏｄ）中で実施した。それらのバイアルを４０℃インキュベーター中に配置し、種々の時点で分析のためにバイアルを４０℃条件から取り出した。
【0065】
（ＤＳＣ）
各製剤の熱力学的安定性を、ＤＳＣを使用して調べた。タンパク質の熱誘導性アンフォールディングの融解温度（Ｔｍ）は、その立体構造的安定性の指標であると考えられる。
各製剤の熱力学的安定性を、ＤＳＣを使用して調べた。タンパク質の熱誘導性アンフォールディングの融解温度（Ｔｍ）は、その立体構造的安定性の指標であると考えられる。
【0066】
表２において示されるとおり、転移の開始温度は、４６．１８℃（Ｆ１：酢酸塩 ｐＨ４．５）～５７．２５℃（Ｆ７：ＰＢ ｐＨ６．０）の範囲であった。Ｔｍ１は、５４．５３℃（Ｆ１：酢酸塩 ｐＨ４．５）～７６．５７℃（Ｆ３：酢酸塩 ｐＨ５．５）の範囲であった。Ｔｍ２は、７７．２７ ℃（Ｆ５：ヒスチジン ｐＨ６．０）～８６．５４℃（Ｆ９：ＰＢ ｐＨ７．０）の範囲である（Ｆ３：酢酸塩 ｐＨ５．５、Ｆ６：ヒスチジン ｐＨ６．５およびＦ７：ＰＢ ｐＨ６．０を除く）。これらの異なる転移温度が、９種の製剤のプロファイルにおいて観察された。
表２．ｐＨ／緩衝液スクリーニング研究のＤＳＣの結果
表２．ｐＨ／緩衝液スクリーニング研究のＤＳＣの結果
【表2-1】
【表2-2】
【0067】
（外観）
外観評価の結果を表３に示す。４０℃条件にて、目に見える粒子が、２週間後にＦ６（ヒスチジン ｐＨ６．５）、Ｆ７（ＰＢ ｐＨ６．０）、Ｆ８（ＰＢ ｐＨ６．５）およびＦ９（ＰＢｐＨ７．０）において観察された。目に見える粒子が、４週間後にＦ３（酢酸塩 ｐＨ５．５）、Ｆ６（ヒスチジン ｐＨ６．５）、Ｆ７（ＰＢ ｐＨ６．０）、Ｆ８（ＰＢ ｐＨ６．５）およびＦ９（ＰＢ ｐＨ７．０）において観察された。目に見える粒子は何も、４０℃でのインキュベーションの後にＦ１（酢酸塩 ｐＨ４．５）、Ｆ２（酢酸塩 ｐＨ５．０）、Ｆ４（ヒスチジン ｐＨ５．５）およびＦ５（ヒスチジン ｐＨ６．０）においては観察されなかった。
外観評価の結果を表３に示す。４０℃条件にて、目に見える粒子が、２週間後にＦ６（ヒスチジン ｐＨ６．５）、Ｆ７（ＰＢ ｐＨ６．０）、Ｆ８（ＰＢ ｐＨ６．５）およびＦ９（ＰＢｐＨ７．０）において観察された。目に見える粒子が、４週間後にＦ３（酢酸塩 ｐＨ５．５）、Ｆ６（ヒスチジン ｐＨ６．５）、Ｆ７（ＰＢ ｐＨ６．０）、Ｆ８（ＰＢ ｐＨ６．５）およびＦ９（ＰＢ ｐＨ７．０）において観察された。目に見える粒子は何も、４０℃でのインキュベーションの後にＦ１（酢酸塩 ｐＨ４．５）、Ｆ２（酢酸塩 ｐＨ５．０）、Ｆ４（ヒスチジン ｐＨ５．５）およびＦ５（ヒスチジン ｐＨ６．０）においては観察されなかった。
【0068】
（ｐＨ）
すべての製剤のｐＨ値を、すべてのサンプリング時点で測定した。結果は、４０℃でのインキュベーションの後には、ｐＨ値の何の実質的変化も存在しなかったことを示した。
すべての製剤のｐＨ値を、すべてのサンプリング時点で測定した。結果は、４０℃でのインキュベーションの後には、ｐＨ値の何の実質的変化も存在しなかったことを示した。
【0069】
（タンパク質濃度）
すべての製剤のタンパク質濃度を、ＵＶ２８０法であるｎａｎｏｄｒｏｐ２０００を使用して、すべてのサンプリング時点で測定した。その結果が示すとおり、４０℃条件でのインキュベーションの後には、タンパク質濃度の約１０％減少がＦ９（ＰＢ ｐＨ７．０）において観察され、Ｆ１～Ｆ８においてはタンパク質濃度の何の実質的変化も観察されなかった。
表３．ｐＨ／緩衝液スクリーニング（４０℃）の外観、ｐＨ、ＵＶ２８０の結果
すべての製剤のタンパク質濃度を、ＵＶ２８０法であるｎａｎｏｄｒｏｐ２０００を使用して、すべてのサンプリング時点で測定した。その結果が示すとおり、４０℃条件でのインキュベーションの後には、タンパク質濃度の約１０％減少がＦ９（ＰＢ ｐＨ７．０）において観察され、Ｆ１～Ｆ８においてはタンパク質濃度の何の実質的変化も観察されなかった。
表３．ｐＨ／緩衝液スクリーニング（４０℃）の外観、ｐＨ、ＵＶ２８０の結果
【表3-1】
【表3-2】
【0070】
（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）
４０℃でのＳＥＣの結果を表４に示す。凝集がすべての製剤で観察され、断片化が一部の緩衝液で観察された。９種すべての製剤からのメインピーク％は、増加する熱処理時間にともなって減少した。より大幅な減少が、Ｆ１（酢酸塩 ｐＨ４．５）サンプル、Ｆ７（ＰＢ ｐＨ６．０）サンプル、Ｆ８（ＰＢ ｐＨ６．５）サンプル、およびＦ９（ＰＢ ｐＨ７．０）サンプルで観察された。これらの結果は、ＬＭＷ％およびＨＭＷ％の種と一致している。
４０℃でのＳＥＣの結果を表４に示す。凝集がすべての製剤で観察され、断片化が一部の緩衝液で観察された。９種すべての製剤からのメインピーク％は、増加する熱処理時間にともなって減少した。より大幅な減少が、Ｆ１（酢酸塩 ｐＨ４．５）サンプル、Ｆ７（ＰＢ ｐＨ６．０）サンプル、Ｆ８（ＰＢ ｐＨ６．５）サンプル、およびＦ９（ＰＢ ｐＨ７．０）サンプルで観察された。これらの結果は、ＬＭＷ％およびＨＭＷ％の種と一致している。
【0071】
このＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果に基づいて、Ｆ２～Ｆ６を製剤候補として選択し得る。
表４．ｐＨ／緩衝液スクリーニング（４０℃）のＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果
表４．ｐＨ／緩衝液スクリーニング（４０℃）のＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果
【表4】
【0072】
（Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（還元型および非還元型））
Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳは、ＣＥベースのハイスループット分析であり、高感度でモノクローナル抗体の断片化を検出可能である。Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ実験において、より大幅な純度％の減少が、表５におけるＦ１（酢酸塩 ｐＨ４．５）、Ｆ７（ＰＢ ｐＨ６．０）、Ｆ８（ＰＢ ｐＨ６．５）、およびＦ９（ＰＢ ｐＨ７．０）の非還元型サンプルで観察された。さらに、（ＬＣ＋ＨＣ）％の減少が、Ｆ１サンプル、Ｆ７サンプル、Ｆ８サンプル、およびＦ９サンプルにおいて、より急速であった。これらの結果は、上記のＳＥＣの結果と一致している。
表５．ｐＨ／緩衝液スクリーニング（４０℃）のＣａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（還元型および非還元型）の結果
Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳは、ＣＥベースのハイスループット分析であり、高感度でモノクローナル抗体の断片化を検出可能である。Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ実験において、より大幅な純度％の減少が、表５におけるＦ１（酢酸塩 ｐＨ４．５）、Ｆ７（ＰＢ ｐＨ６．０）、Ｆ８（ＰＢ ｐＨ６．５）、およびＦ９（ＰＢ ｐＨ７．０）の非還元型サンプルで観察された。さらに、（ＬＣ＋ＨＣ）％の減少が、Ｆ１サンプル、Ｆ７サンプル、Ｆ８サンプル、およびＦ９サンプルにおいて、より急速であった。これらの結果は、上記のＳＥＣの結果と一致している。
表５．ｐＨ／緩衝液スクリーニング（４０℃）のＣａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（還元型および非還元型）の結果
【表5-1】
【表5-2】
【0073】
Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳの結果は、低ｐＨ（ｐＨ４．５）条件および高ｐＨ（ｐＨ７．０）条件における方が純度が減少した他のアッセイの結果と同様の傾向を示した。
【0074】
（ｃＩＥＦ）
４０℃での４週間のインキュベーションの後、ｃＩＥＦデータを得た。これを表６に示す。その結果は、ＳＥＣ－ＨＰＬＣと同様の傾向を示し、メインピーク％の減少は、Ｆ１（酢酸塩 ｐＨ４．５）サンプル、Ｆ７（ＰＢ ｐＨ６．０）サンプル、Ｆ８（ＰＢ ｐＨ６．５）サンプル、およびＦ９（ＰＢ ｐＨ７．０）サンプルにおける方が大幅であった。各緩衝液型において、塩基性ピーク％はｐＨ増加とともに減少したが、酸性ピーク％はｐＨ増加とともに増加した。
表６．ｐＨ／緩衝液スクリーニング（４０℃）のｃＩＥＦの結果
４０℃での４週間のインキュベーションの後、ｃＩＥＦデータを得た。これを表６に示す。その結果は、ＳＥＣ－ＨＰＬＣと同様の傾向を示し、メインピーク％の減少は、Ｆ１（酢酸塩 ｐＨ４．５）サンプル、Ｆ７（ＰＢ ｐＨ６．０）サンプル、Ｆ８（ＰＢ ｐＨ６．５）サンプル、およびＦ９（ＰＢ ｐＨ７．０）サンプルにおける方が大幅であった。各緩衝液型において、塩基性ピーク％はｐＨ増加とともに減少したが、酸性ピーク％はｐＨ増加とともに増加した。
表６．ｐＨ／緩衝液スクリーニング（４０℃）のｃＩＥＦの結果
【表6-1】
【表6-2】
【0075】
これらの結果は、最大のチャージバリアントの変化がＦ９（ＰＢ ｐＨ７．０）で観察され、最小のチャージバリアントの変化がＦ５（ヒスチジン ｐＨ６．０）で観察されたことを示す。
【0076】
要約すると、このｐＨ／緩衝液スクリーニング研究において、目に見える粒子が、４０℃でのインキュベーションの後にＦ３（酢酸塩 ｐＨ５．５）、Ｆ６（ヒスチジン ｐＨ６．５）、Ｆ７（ＰＢ ｐＨ６．０）、Ｆ８（ＰＢ ｐＨ６．５）およびＦ９（ＰＢ ｐＨ７．０）で観察された。４０℃にて、Ｆ１（酢酸塩、ｐＨ４．５）およびＦ７、Ｆ８、Ｆ９（リン酸緩衝液）は、最も顕著な純度減少をＣａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（還元型および非還元型）ならびにＳＥＣの結果で示しただけでなく、最大のチャージバリアントの変化をｃＩＥＦで証明した。濃度の１０％減少が、４０℃でのインキュベーションの後にＦ９で観察された。
【0077】
したがって、これらの結果は、ＩＭ００５がリン酸緩衝液における方が安定性が低かったことおよびこのタンパク質は緩衝液のｐＨが低すぎる場合には不安定であり得ることを示す。Ｆ２、Ｆ４およびＦ５について、４０℃にて４週間のインキュベーションの後に、Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ還元型の結果において実質的な変化は何も観察されなかった一方で、Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ非還元型の純度％の減少が観察された。Ｆ５は、Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ非還元型およびＳＥＣの両方の純度の結果において、他よりも少なくしか減少しない。したがって、Ｆ５（２０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６．０緩衝液）を、さらなる開発のために選択した。
【0078】
（実施例３．溶解度研究）
この実施例は、選択した緩衝系におけるＩＭ００５の溶解度を評価した。
この実施例は、選択した緩衝系におけるＩＭ００５の溶解度を評価した。
【0079】
ＩＭ００５を２０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６．０緩衝液に交換し、その濃度を８０ｍｇ／ｍＬおよび１５０ｍｇ／ｍＬに調整した。それらのサンプルを０．２２μｍ ＰＶＤＦメンブレンフィルターで無菌濾過した。各濃度について、３個の２ｍＬガラスバイアルに１ｍＬのＤＳを、バイオセーフティフード中で充填した。充填直後に、それらのバイアルに栓をして圧着した。
【0080】
合計６個のバイアルを異なるインキュベーター（２℃～８℃および２５℃）中に配置し、１個のバイアルを分析のために各条件から取り出した。
【0081】
外観、濃度（ＵＶ２８０）および濁度（ＵＶ３５０）を、すべてのサンプリング時点で測定した（表７中の結果）。それらの結果は、２℃～８℃および２５℃にて４８時間のインキュベーションの後に、実質的な変化が何も存在しなかったことを示した。
表７．溶解度研究（２℃～８℃および２５℃）の外観、濃度および濁度の結果
表７．溶解度研究（２℃～８℃および２５℃）の外観、濃度および濁度の結果
【表7】
【0082】
ＩＭ００５を、２０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６．０緩衝液において標的濃度の８０ｍｇ／ｍＬおよび１５０ｍｇ／ｍＬへと首尾良く濃縮した。その短期安定性の結果は、２℃～８℃および２５℃にて４８時間の貯蔵の後で、実質的な変化は何も観察されなかったことを示した。それは、ＩＭ００５が、２０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６．０緩衝液中で８０ｍｇ／ｍＬまたは１５０ｍｇ／ｍＬでの短期貯蔵後に安定であったことを示した。
【0083】
このｐＨ／緩衝液スクリーニング研究は、ストレス条件（４０℃）下で９種のｐＨ／緩衝液の型を調査し、その結果は、ＩＭ００５の安定性がｐＨおよび緩衝液の両方の型と密接に関連することを示した。乏しいタンパク質安定性を低ｐＨ条件、高ｐＨ条件、およびリン酸緩衝液下で観察した。選択した緩衝液は、２０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６．０緩衝液（Ｆ５）であった。
【0084】
溶解度研究において、２℃～８℃および２５℃にて４８時間で明らかな変化は何も観察されず、このことは、ＩＭ００５が８０ｍｇ／ｍＬおよび１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で短期間は安定であったことを示した。これらのｐＨ／緩衝液スクリーニング研究および溶解度研究からの結果に基づいて、２０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６．０緩衝液を、この製品についての以下の製剤開発研究において使用する。
【0085】
（実施例４．賦形剤のスクリーニング）
この実施例は、２０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６．０緩衝系においてＩＭ００５タンパク質を安定化し得る候補賦形剤を調べた。
この実施例は、２０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６．０緩衝系においてＩＭ００５タンパク質を安定化し得る候補賦形剤を調べた。
【0086】
ＩＭ００５抗体ストック溶液を２０ｍＭのヒスチジンｐＨ６．０緩衝系に交換した。その後、表８に列挙した賦形剤を、それぞれこの溶液に添加した。そのタンパク質濃度を５０ｍｇ／ｍＬに調整した。
表８．製剤処方の候補
表８．製剤処方の候補
【表8】
【0087】
すべての製剤サンプルを、バイオセーフティフード中で最終的に０．２２μｍＰＶＤＦメンブレンフィルターで濾過し、２ｍＬガラスバイアル（１ｍＬ／バイアル）に充填し、栓をして密封した。それらのバイアルを、Ｔ０サンプル以外は２５℃インキュベーター、４０℃インキュベーターおよび－４０℃冷蔵庫中に配置し、分析のためにバイアルをこれらの条件から取り出した。
【0088】
Ａｄｖａｎｃｅｄ ２０２０ Ｍｕｌｔｉ－Ｓａｍｐｌｅ浸透圧計を、６種の製剤の重量モル浸透圧濃度測定のために使用した。それらの結果を表９に示す。
表９．賦形剤スクリーニング研究（Ｔ０）の重量モル浸透圧濃度の結果
表９．賦形剤スクリーニング研究（Ｔ０）の重量モル浸透圧濃度の結果
【表9】
【0089】
（ＤＳＣ）
各製剤の熱力学的安定性を、ＤＳＣを使用して調べた。その融解温度（Ｔｍ）は、タンパク質のアンフォールディング開始温度を誘導し、その立体構造的安定性の指標であると考えられる。
各製剤の熱力学的安定性を、ＤＳＣを使用して調べた。その融解温度（Ｔｍ）は、タンパク質のアンフォールディング開始温度を誘導し、その立体構造的安定性の指標であると考えられる。
【0090】
表１０に示すとおり、転移の開始温度は、５０．９℃（Ｆ５：アルギニン塩酸塩、ｐＨ６．０）～５８．６℃（Ｆ２：トレハロース、ｐＨ６．０）の範囲であった。そのＴｍ１は、５９．３℃（Ｆ５：アルギニン塩酸塩、ｐＨ６．０）～６５．２℃（Ｆ１：スクロース、ｐＨ６．０）の範囲であった。Ｔｍ２は、７６．７℃（Ｆ５：アルギニン塩酸塩、ｐＨ６．０）～７８．５℃（Ｆ１：スクロース、ｐＨ６．０）の範囲である。６種の製剤間でのＴｍ開始、Ｔｍ１およびＴｍ２の最大の差の値は、それぞれ７．７℃、５．８℃および１．９℃である。
表１０．賦形剤スクリーニング研究のＤＳＣの結果
表１０．賦形剤スクリーニング研究のＤＳＣの結果
【表10】
【0091】
（外観）
表１１～表１３に示すとおり、４０℃にて２週間および４週間のインキュベーションの後に、目に見える粒子は、Ｆ６（ＰＳ８０を含まない）以外のすべての製剤において何も観察されなかった。２５℃にて４週間のインキュベーションの後に、目に見える粒子は６種すべての製剤で何も観察されなかった。その凍結融解（－４０℃～室温）条件下で、目に見える粒子は、１０サイクルの凍結融解後にＦ４（マンニトール、ｐＨ６．０）で観察されたが、他の５種の製剤では観察されなかった。
表１１～表１３に示すとおり、４０℃にて２週間および４週間のインキュベーションの後に、目に見える粒子は、Ｆ６（ＰＳ８０を含まない）以外のすべての製剤において何も観察されなかった。２５℃にて４週間のインキュベーションの後に、目に見える粒子は６種すべての製剤で何も観察されなかった。その凍結融解（－４０℃～室温）条件下で、目に見える粒子は、１０サイクルの凍結融解後にＦ４（マンニトール、ｐＨ６．０）で観察されたが、他の５種の製剤では観察されなかった。
【0092】
（ｐＨ）
６種の製剤のｐＨ値を、表１１～表１３に示すすべてのサンプリング時点で測定した。結果は、２５℃、４０℃にて４週間のインキュベーションの後、または５サイクル／１０サイクルの反復凍結融解の後に、ｐＨ値の実質的な変化は何も存在しなかったことを示した。
６種の製剤のｐＨ値を、表１１～表１３に示すすべてのサンプリング時点で測定した。結果は、２５℃、４０℃にて４週間のインキュベーションの後、または５サイクル／１０サイクルの反復凍結融解の後に、ｐＨ値の実質的な変化は何も存在しなかったことを示した。
【0093】
（タンパク質濃度（Ａ２８０））
６種の製剤のタンパク質濃度を、表１１～表１３に示すすべてのサンプリング時点で、ＵＶ２８０法であるｎａｎｏｄｒｏｐ２０００を使用して測定した。それらの結果が示したとおり、２５℃、４０℃にて４週間のインキュベーションの後、または５サイクル／１０サイクルの反復凍結融解の後に、タンパク質濃度の実質的な変化は何も存在しなかった。
表１１．賦形剤スクリーニング研究（４０℃）の外観、ｐＨ、ＵＶ２８０の結果
表１２．賦形剤スクリーニング研究（２５℃）の外観、ｐＨ、ＵＶ２８０の結果
表1３．賦形剤スクリーニング研究（凍結乾燥）の外観、ｐＨ、ＵＶ２８０の結果
６種の製剤のタンパク質濃度を、表１１～表１３に示すすべてのサンプリング時点で、ＵＶ２８０法であるｎａｎｏｄｒｏｐ２０００を使用して測定した。それらの結果が示したとおり、２５℃、４０℃にて４週間のインキュベーションの後、または５サイクル／１０サイクルの反復凍結融解の後に、タンパク質濃度の実質的な変化は何も存在しなかった。
表１１．賦形剤スクリーニング研究（４０℃）の外観、ｐＨ、ＵＶ２８０の結果
【表11】
【表12-1】
【表12-2】
【表13】
【0094】
（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）
４０℃でのＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果を表１４に示す。Ｆ１からＦ６まで、メインピーク％が、それぞれ、３．３％、３．２％、３．４％、２．８％、２．７％および２．２％減少した。％ＨＭＷが、それぞれ、２．３％、２．２％、２．５％、１．８％、１．７％および１．３％増加した。一方で、％ＬＭＷは、それぞれ、１．０％、０．９％、０．９％、１．０％、１．０％および１．０％増加した。
表１４．賦形剤スクリーニング研究（４０℃）のＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果
４０℃でのＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果を表１４に示す。Ｆ１からＦ６まで、メインピーク％が、それぞれ、３．３％、３．２％、３．４％、２．８％、２．７％および２．２％減少した。％ＨＭＷが、それぞれ、２．３％、２．２％、２．５％、１．８％、１．７％および１．３％増加した。一方で、％ＬＭＷは、それぞれ、１．０％、０．９％、０．９％、１．０％、１．０％および１．０％増加した。
表１４．賦形剤スクリーニング研究（４０℃）のＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果
【表14-1】
【表14-2】
【0095】
２５℃でのＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果を表１５に示す。これらの結果は、２５℃で４週間のインキュベーションの後に、メインピーク％の実質的な減少は何も存在しなかったことを示した。
表１５．賦形剤スクリーニング研究（２５℃）のＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果
表１５．賦形剤スクリーニング研究（２５℃）のＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果
【表15】
【0096】
凍結融解（－４０℃～室温）条件下でのＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果を表１６に示す。これらの結果は、１０サイクルの凍結融解の後で、Ｆ４（マンニトール、ｐＨ６．０）以外は、これらの製剤で顕著な変化が何も存在しなかったことを示す。Ｆ４のメインピーク％は４．４％減少した一方で、％ＨＭＷは４．４％増加した。
表１６．賦形剤スクリーニング研究（凍結融解）のＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果
表１６．賦形剤スクリーニング研究（凍結融解）のＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果
【表16】
【0097】
（Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（ｎｒ））
Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳは、ＣＥベースのハイスループット分析法であり、これを使用して、高感度でモノクローナル抗体の断片化を検出する。４０℃でのＣａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（ｎｒ）の結果を表１７に示す。純度％の減少が、６種すべての製剤で観察された。Ｆ１からＦ６まで、純度％が、それぞれ５．８％、３．７％、４．４％、４．９％、４．８％および４．６％減少した。それらうちで、Ｆ２（トレハロース二水和物、ｐＨ６．０）が、最も小さい純度％減少を示した。
表１７．賦形剤スクリーニング研究（４０℃）のＣａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（非還元型（ｎｒ））の結果
Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳは、ＣＥベースのハイスループット分析法であり、これを使用して、高感度でモノクローナル抗体の断片化を検出する。４０℃でのＣａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（ｎｒ）の結果を表１７に示す。純度％の減少が、６種すべての製剤で観察された。Ｆ１からＦ６まで、純度％が、それぞれ５．８％、３．７％、４．４％、４．９％、４．８％および４．６％減少した。それらうちで、Ｆ２（トレハロース二水和物、ｐＨ６．０）が、最も小さい純度％減少を示した。
表１７．賦形剤スクリーニング研究（４０℃）のＣａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（非還元型（ｎｒ））の結果
【表17-1】
【表17-2】
【0098】
２５℃でのＣａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（ｎｒ）の結果を表１８に示す。それらの結果は、２５℃にて４週間のインキュベーションの後で、Ｆ５（アルギニン塩酸塩、ｐＨ６．０）以外は、これらの製剤で顕著な変化は何も存在しなかったことを示した。Ｆ５の純度％は１％減少した。
表１８．賦形剤スクリーニング研究（２５℃）のＣａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（非還元型（ｎｒ））の結果
表１８．賦形剤スクリーニング研究（２５℃）のＣａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（非還元型（ｎｒ））の結果
【表18】
【0099】
凍結融解（－４０℃～室温）条件下でのＣａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（ｎｒ）の結果を表１９に示す。それらの結果は、１０サイクルの凍結融解の後で６種すべての製剤の純度％の顕著な変化は何も存在しなかったことを示した。
表１９．賦形剤スクリーニング研究（凍結融解）のＣａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（非還元型（ｎｒ））の結果
表１９．賦形剤スクリーニング研究（凍結融解）のＣａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（非還元型（ｎｒ））の結果
【表19】
【0100】
（ｃＩＥＦ）
４０℃でのｃＩＥＦの結果を表２０に示す。酸性ピークの増加およびメインピークの減少が、６種すべての製剤で観察された。Ｆ１からＦ６まで、メインピーク％は、それぞれ２３．２％、２２．２％、１９．４％、２１．６％、１６．０％および１９．８％減少した。酸性ピーク％は、それぞれ２４．８％、２１．６％、１８．６％、２１．０％、１８．０％および１８．０％増加した。塩基性ピーク％に明らかな変化が何も存在しなかったことは、注目に値する。
表２０．賦形剤スクリーニング研究（４０℃）のｃＩＥＦの結果
４０℃でのｃＩＥＦの結果を表２０に示す。酸性ピークの増加およびメインピークの減少が、６種すべての製剤で観察された。Ｆ１からＦ６まで、メインピーク％は、それぞれ２３．２％、２２．２％、１９．４％、２１．６％、１６．０％および１９．８％減少した。酸性ピーク％は、それぞれ２４．８％、２１．６％、１８．６％、２１．０％、１８．０％および１８．０％増加した。塩基性ピーク％に明らかな変化が何も存在しなかったことは、注目に値する。
表２０．賦形剤スクリーニング研究（４０℃）のｃＩＥＦの結果
【表20-1】
【表20-2】
【0101】
２５℃にて４週間のインキュベーションの後における、ｃＩＥＦの結果を表２１に示す。６種の製剤の酸性ピーク％は、メインピーク％の減少にともなって増加した。Ｆ１からＦ６まで、メインピーク％は、それぞれ５．８％、５．４％、７．５％、５．４％、５．２％および４．３％減少し、一方で、酸性ピーク％は、それぞれ６．８％、４．２％、７．３％、４．５％、５．８％および２．９％増加した。
表２１．賦形剤スクリーニング研究（２５℃）のｃＩＥＦの結果
表２１．賦形剤スクリーニング研究（２５℃）のｃＩＥＦの結果
【表21】
【0102】
表２２は、凍結融解実験のｃＩＥＦの結果を示す。それらの結果は、１０サイクルの凍結融解の後で、６種の製剤の電荷が顕著には変化しなかったことを示した。
表２２．賦形剤スクリーニング研究（凍結融解）のｃＩＥＦの結果
表２２．賦形剤スクリーニング研究（凍結融解）のｃＩＥＦの結果
【表22】
【0103】
（ＭＦＩ）
各製剤のサブビジブル（ｓｕｂ－ｖｉｓｉｂｌｅ）粒子を、ＭＦＩ５２００ Ｆｌｏｗ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅを使用して表２３に示すとおりに検出した。ＭＦＩの結果は、Ｆ１からＦ５まで、Ｔ０での粒子（粒径≧２μｍ）の数が同じレベルであったことを示した。しかし、Ｆ６（ＰＳ８０を含まない）で試験した粒子（粒径≧２μｍおよび粒径≧１０μｍ）の数は、他の５種の製剤における数と比較して、かなり多かった。
各製剤のサブビジブル（ｓｕｂ－ｖｉｓｉｂｌｅ）粒子を、ＭＦＩ５２００ Ｆｌｏｗ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅを使用して表２３に示すとおりに検出した。ＭＦＩの結果は、Ｆ１からＦ５まで、Ｔ０での粒子（粒径≧２μｍ）の数が同じレベルであったことを示した。しかし、Ｆ６（ＰＳ８０を含まない）で試験した粒子（粒径≧２μｍおよび粒径≧１０μｍ）の数は、他の５種の製剤における数と比較して、かなり多かった。
【0104】
１０サイクルの凍結融解の後で、Ｆ３（ソルビトール、ｐＨ６．０）においてそれぞれ、粒子（粒径≧２μｍ）の数が１０４３／ｍＬから２８４２８／ｍＬに増加し、粒子（粒径≧１０μｍ）の数が６１／ｍＬから６７２／ｍＬに増加した。この他に、他の製剤サンプルでは顕著な変化は何も観察されなかった。
表２３．賦形剤スクリーニング研究（凍結融解）のＭＦＩの結果
表２３．賦形剤スクリーニング研究（凍結融解）のＭＦＩの結果
【表23】
【0105】
（結合抗原）
結合抗原法は、モノクローナル抗体結合活性を検出するために使用されるＥＬＩＳＡベースの方法である。それらの結果を表２４に示す。２５℃および４０℃での４週間のインキュベーションの後で、Ｆ２（トレハロース二水和物、ｐＨ６．０）の結合抗原活性において明らかな減少は何も存在しなかった。
表２４．Ｆ２の賦形剤スクリーニング研究の結合抗原の結果
結合抗原法は、モノクローナル抗体結合活性を検出するために使用されるＥＬＩＳＡベースの方法である。それらの結果を表２４に示す。２５℃および４０℃での４週間のインキュベーションの後で、Ｆ２（トレハロース二水和物、ｐＨ６．０）の結合抗原活性において明らかな減少は何も存在しなかった。
表２４．Ｆ２の賦形剤スクリーニング研究の結合抗原の結果
【表24】
【0106】
４０℃、２５℃および凍結融解（－４０℃～室温）条件下での６種の製剤の安定性を、この賦形剤スクリーニング研究で調査した。４０℃での４週間のインキュベーションの後で、目に見える粒子がＦ６（ＰＳ８０を含まない）で観察された。そのほかに、Ｔ０におけるＦ６で試験したサブビジブル粒子の数が、他の製剤における数よりもかなり多かった。このことは、ＰＳ８０が粒子の凝集を阻害することにおいて重要な役割を果たしたことを示した。ＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果は、Ｆ３（ソルビトール、ｐＨ６．０）が最大の純度％減少を示したことを示した。さらに、ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（非還元型）の結果は、Ｆ１（スクロース、ｐＨ６．０）が最大の純度％減少を示した一方で、Ｆ２（トレハロース、ｐＨ６．０）が最小の純度％減少を示したことを示した。ｃＩＥＦの結果で示されたとおり、最大の変化が、 Ｆ１（スクロース、ｐＨ６．０）で観察された。
【0107】
２５℃で４週間のインキュベーションの後で、目に見える粒子は６種すべての製剤で何も観察されなかった。ＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果は、６種の製剤で明らかな純度減少が何も存在しなかったことを示した。Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（非還元型）の結果は、ＦＳ（アルギニン塩酸塩、ｐＨ６．０）以外のこれらの製剤で顕著な変化が何も存在しなかったことを示した。ｃＩＥＦの結果は、Ｆ３（ソルビトール、ｐＨ６．０）の電荷が最も大きく変化したことを示した。
【0108】
凍結融解（－４０℃～室温）の実験において、１０サイクルの凍結融解の後で、多数の目に見える粒子がＦ４（マンニトール、ｐＨ６．０）で観察され、ＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果は、この製剤のメインピークが４．４％減少したことを示した。これらの６種すべての製剤において、Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（非還元型）およびｃｌＥＦの結果で顕著な変化は何も存在しなかった。ＭＦＩの結果は、１０サイクルの凍結融解の後で、Ｆ３（ソルビトール、ｐＨ６．０）のサブビジブル粒子の数が増加したことを示した。
【0109】
上記の結果に基づいて、Ｆ１（スクロース、ｐＨ６．０）、Ｆ３（ソルビトール、ｐＨ６．０）およびＦ４（マンニトール、ｐＨ６．０）は、乏しい性能を示した。Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（非還元型）の結果は、２５℃で４週間のインキュベーションの後で、Ｆ５（アルギニン塩酸塩、ｐＨ６．０）の純度％が減少したことを示した。ＤＳＣの結果は、Ｆ５のＴｍ開始（℃）値が他の製剤のＴｍ開始（℃）値よりも少なくとも５℃低かったことを示した。結論として、Ｆ２（トレハロース二水和物、ｐＨ６．０）は、他の製剤よりも良い性能であった。したがって、Ｆ２（トレハロース二水和物、ｐＨ６．０）を、後の界面活性剤スクリーニング研究で使用した。
【0110】
（実施例５．界面活性剤スクリーニング）
この実施例は、ＩＭ００５タンパク質を安定化するためのＰＳ８０の最適濃度についてスクリーニングした。
この実施例は、ＩＭ００５タンパク質を安定化するためのＰＳ８０の最適濃度についてスクリーニングした。
【0111】
ＩＭ００５抗体（２０．４ｍｇ／ｍＬ）を２０ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６．０緩衝液に交換した。トレハロース二水和物の濃度を、そのストック溶液を用いて８％に調整した。その後、ＰＳ８０の１０％ストック溶液を添加して、表２５に記載するとおり、それぞれ最終ＰＳ８０濃度０、０．０１％、０．０２％および０．０３％を作製した。タンパク質濃度を５０ｍｇ／ｍＬに調整した。
表２５．界面活性剤スクリーニングのための製剤
表２５．界面活性剤スクリーニングのための製剤
【表25】
【0112】
調製した製剤を０．２２μｍ ＰＶＤＦメンブレンフィルターで無菌濾過した。各製剤について、１ｍＬのサンプルを２ｍＬのガラスバイアルに充填した。充填直後に、それらのバイアルに栓をして圧着した。すべての手順は、圧着操作以外はバイオセーフティフード中で実行した。
【0113】
その後、バイアルを撹拌条件（３００ｒｐｍおよび２５℃）に配置した。それらのサンプルを、特定の時点で分析した。
【0114】
（重量モル浸透圧濃度）
Ｔ０でのＦ１～Ｆ４の重量モル浸透圧濃度を、浸透圧計（Ａｄｖａｎｃｅｄ ２０２０ Ｍｕｌｔｉ－Ｓａｍｐｌｅ）を使用して決定した。重量モル浸透圧濃度のデータを表２６に示す。
表２６．界面活性剤スクリーニング研究のＴ０での重量モル浸透圧濃度の結果
Ｔ０でのＦ１～Ｆ４の重量モル浸透圧濃度を、浸透圧計（Ａｄｖａｎｃｅｄ ２０２０ Ｍｕｌｔｉ－Ｓａｍｐｌｅ）を使用して決定した。重量モル浸透圧濃度のデータを表２６に示す。
表２６．界面活性剤スクリーニング研究のＴ０での重量モル浸透圧濃度の結果
【表26】
【0115】
（示差走査熱量測定（ＤＳＣ））
Ｔ０での各製剤（Ｆ１～Ｆ４）の熱力学的安定性を、ＤＳＣを使用して調べた。表２７に示すとおり、すべての製剤の開始転移温度は、５６．３０℃～５７．３９℃の範囲であった。そのＴｍ１値は、６４．３９℃～６５．２３℃の範囲であり、Ｔｍ２値は７８．６０℃～７８．９０℃の範囲にあった。これらの４種の製剤間で、熱力学的転移プロファイルに顕著な差は何も存在しなかった。
表２７．界面活性剤スクリーニング研究のＤＳＣの結果
Ｔ０での各製剤（Ｆ１～Ｆ４）の熱力学的安定性を、ＤＳＣを使用して調べた。表２７に示すとおり、すべての製剤の開始転移温度は、５６．３０℃～５７．３９℃の範囲であった。そのＴｍ１値は、６４．３９℃～６５．２３℃の範囲であり、Ｔｍ２値は７８．６０℃～７８．９０℃の範囲にあった。これらの４種の製剤間で、熱力学的転移プロファイルに顕著な差は何も存在しなかった。
表２７．界面活性剤スクリーニング研究のＤＳＣの結果
【表27-1】
【表27-2】
【0116】
（外観、ｐＨ、タンパク質濃度）
目視検査の結果を表２８に示す。多量の目に見える粒子が、１日間および３日間の撹拌（３００ｒｐｍ、２５℃）の後にＦ１（ＰＳ８０を含まない）で観察された。対照的に、同じ撹拌条件下で、目に見える粒子はＦ２（０．０１％のＰＳ８０）、Ｆ３（０．０２％のＰＳ８０）およびＦ４（０．０３％のＰＳ８０）では何も観察されなかった。
目視検査の結果を表２８に示す。多量の目に見える粒子が、１日間および３日間の撹拌（３００ｒｐｍ、２５℃）の後にＦ１（ＰＳ８０を含まない）で観察された。対照的に、同じ撹拌条件下で、目に見える粒子はＦ２（０．０１％のＰＳ８０）、Ｆ３（０．０２％のＰＳ８０）およびＦ４（０．０３％のＰＳ８０）では何も観察されなかった。
【0117】
Ｆ１～Ｆ４のｐＨ値を、すべてのサンプリング時点で調べた。表２８に示すとおり、２５℃で３日間の撹拌の後でｐＨ値の顕著な変化は何も存在しなかった。
【0118】
Ｆ１～Ｆ４のタンパク質濃度を、すべてのサンプリング時点でｎａｎｏｄｒｏｐ２０００（ＵＶ２８０法）を使用して測定した。表２８に示すとおり、タンパク質濃度の実質的な変化は、２５℃で３日間の撹拌の後で何も検出されなかった。
表２８．界面活性剤スクリーニング研究（撹拌）の外観、ｐＨおよび濃度の結果
表２８．界面活性剤スクリーニング研究（撹拌）の外観、ｐＨおよび濃度の結果
【表28-1】
【表28-2】
【0119】
（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）
ＳＥＣ－ＨＰＬＣのデータを表２９に示す。Ｆ１～Ｆ４について、メインピーク％の実質的な変化は、２５℃で３日間の撹拌の後に何も観察されなかった。
表２９．界面活性剤スクリーニング研究（撹拌）のＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果
ＳＥＣ－ＨＰＬＣのデータを表２９に示す。Ｆ１～Ｆ４について、メインピーク％の実質的な変化は、２５℃で３日間の撹拌の後に何も観察されなかった。
表２９．界面活性剤スクリーニング研究（撹拌）のＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果
【表29】
【0120】
（Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（ｎｒ））
Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳは、マイクロチップおよびＣＥベースのハイスループット分析法であり、これは、高感度でモノクローナル抗体断片を検出可能である。Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（ｎｒ）の結果を表３０に示す。すべての製剤（Ｆ１～Ｆ４）について、実質的な純度％減少は、２５℃にて３日間の撹拌の後で何も観察されなかった。
表３０．界面活性剤スクリーニング研究（撹拌）のＣａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（非還元型（ｎｒ））の結果
Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳは、マイクロチップおよびＣＥベースのハイスループット分析法であり、これは、高感度でモノクローナル抗体断片を検出可能である。Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（ｎｒ）の結果を表３０に示す。すべての製剤（Ｆ１～Ｆ４）について、実質的な純度％減少は、２５℃にて３日間の撹拌の後で何も観察されなかった。
表３０．界面活性剤スクリーニング研究（撹拌）のＣａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（非還元型（ｎｒ））の結果
【表30-1】
【表30-2】
【0121】
（ｃＩＥＦ）
ｃＩＥＦのデータを表３１に示す。すべての製剤について、チャージバリアントの顕著な変化は、２５℃にて３日間の撹拌の後で何も観察されなかった。
表３１．界面活性剤スクリーニング研究（撹拌）のｃＩＥＦの結果
ｃＩＥＦのデータを表３１に示す。すべての製剤について、チャージバリアントの顕著な変化は、２５℃にて３日間の撹拌の後で何も観察されなかった。
表３１．界面活性剤スクリーニング研究（撹拌）のｃＩＥＦの結果
【表31】
【0122】
（ＭＦＩ）
サブビジブル粒子の検出を、ＭｉｃｒｏＦｌｏｗ Ｉｍａｇｅ（ＭＦＩ５２００）を使用して実施した。ＭＦＩのデータを表２９に示す。サンプリング時点Ｔ０にて、粒径≧２５μｍである粒子の数は、Ｆ１～Ｆ４について同じレベルであった。しかし、Ｆｌ（ＰＳ８０を含まない）における粒径≧１０μｍである粒子の数および粒径≧２５μｍである粒子の数は、他の製剤（Ｆ２、Ｆ３およびＦ４）よりもかなり多かった。
サブビジブル粒子の検出を、ＭｉｃｒｏＦｌｏｗ Ｉｍａｇｅ（ＭＦＩ５２００）を使用して実施した。ＭＦＩのデータを表２９に示す。サンプリング時点Ｔ０にて、粒径≧２５μｍである粒子の数は、Ｆ１～Ｆ４について同じレベルであった。しかし、Ｆｌ（ＰＳ８０を含まない）における粒径≧１０μｍである粒子の数および粒径≧２５μｍである粒子の数は、他の製剤（Ｆ２、Ｆ３およびＦ４）よりもかなり多かった。
【0123】
２５℃にて３日間の撹拌の後で、Ｆ１（ＰＳ８０を含まない）について、それぞれ粒径≧２μｍである粒子の数が７１５粒子／ｍＬから２５８５粒子／ｍＬに増加し、粒径≧１０μｍである粒子の数が５３粒子／ｍＬから５７９粒子／ｍＬに増加し、粒径≧２５μｍである粒子の数が４粒子／ｍＬから３９２粒子／ｍＬに増加した。３日間の撹拌の後に、Ｆ３（０．０２％のＰＳ８０）およびＦ４（０．０３％のＰＳ８０）で顕著な差は何も観察されなかった。Ｆ２における粒径≧２μｍである粒子の数が１１２粒子／ｍＬから１２６６粒子／ｍＬに増加した一方で、粒径≧１０μである粒子の数および粒径≧２５μｍである粒子の数は顕著には変化しなかった。
表３２．界面活性剤スクリーニング研究（撹拌）のＭＦＩの結果．
表３２．界面活性剤スクリーニング研究（撹拌）のＭＦＩの結果．
【表32】
【0124】
すべての製剤候補（Ｆ１～Ｆ４）について、３００ｒｐｍおよび２５℃での撹拌の後で、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ、Ｃａｌｉｐｅｒ－ＳＤＳ（非還元型）およびｃＩＥＦのデータから顕著な変化は何も観察されなかった。しかし、１日間および３日間の撹拌の後で、目に見える粒子が目視検査によってＦ１（ＰＳ８０を含まない）で観察された一方で、Ｆ２～Ｆ４（種々の濃度でＰＳ８０を含む）では目に見える粒子は何も観察されなかった。ＭＦＩの結果に示したとおり、Ｆ１（ＰＳ８０を含まない）におけるサブビジブル粒子の数が顕著に増加し、Ｆ２（０．０１％のＰＳ８０）における粒径≧２μｍであるサブビジブル粒子の数もまた増加した一方で、Ｆ３（０．０２％のＰＳ８０）およびＦ４（０．０３％のＰＳ８０）では明らかな変化は何も観察されなかった。
【0125】
したがって、これらの結果は、ＰＳ８０が撹拌条件下で粒子生成を阻害することにおいて重要な役割を果たしたことを示した。しかし、ＰＳ８０は、長期貯蔵中に分解する可能性があり、このことは、タンパク質製品の安定性を減少し得る。したがって、より低いＰＳ８０濃度が、ＰＳ８０のタンパク質保護能力が保証される場合には、推奨される。まとめると、０．０２％が、ＩＭ００５にとって最終的に選択されたＰＳ８０濃度であった。
【0126】
界面活性剤スクリーニング研究は、ＰＳ８０が粒子生成を阻害することにおいて重要な役割を果たしたことを示した。０．０２％のＰＳ８０を最終的に選択した。賦形剤スクリーニング研究および界面活性剤スクリーニング研究の両方の結果に基づいて、２０ｍＭのヒスチジン、８％のトレハロース二水和物、０．０２％のＰＳ８０をｐＨ６．０にて含む製剤を、最終製剤確認研究で使用した。
【0127】
賦形剤スクリーニング研究を、５種類の賦形剤を４０℃、２５℃および凍結融解条件下でそれぞれ調査することによって実行した。トレハロース二水和物を含む製剤が、他の４種の賦形剤と比較して最良の性能であり、したがって、後の界面活性剤スクリーニング研究のためにそれを選択した。
【0128】
（実施例６．製剤確認）
この研究を実行して、実施例４において決定したＩＭ００５についてのリード製剤を確認した。そのリード製剤は、２０ｍＭのヒスチジン緩衝液、８％（質量／体積）のトレハロース二水和物、０．０２％（質量／体積）のＰＳ８０をｐＨ６．０にて含んだ。
この研究を実行して、実施例４において決定したＩＭ００５についてのリード製剤を確認した。そのリード製剤は、２０ｍＭのヒスチジン緩衝液、８％（質量／体積）のトレハロース二水和物、０．０２％（質量／体積）のＰＳ８０をｐＨ６．０にて含んだ。
【0129】
ＩＭ００５サンプル（５１．７ｍｇ／ｍＬ）を、バイオセーフティフード中で０．２２μｍフィルターで濾過し、バイアル１個当たり３．３ｍＬのＩＭ００５を含む８ｍＬガラスバイアルに無菌的に充填し、栓をして密封した。
【0130】
（外観）
ほとんどのサンプルの外観を表３３に要約する。すべてのサンプルは、目に見える粒子を含まない、わずかに黄色でわずかに乳白色の液体であった。４０℃－２週間サンプルにおいてのみ、１つの粒子が観察されたが、４０℃－４週間サンプルにおいては目に見える粒子は何も観察されなかった。
表３３．製剤確認の外観評価
ＳＯ＝わずかに乳白色
ほとんどのサンプルの外観を表３３に要約する。すべてのサンプルは、目に見える粒子を含まない、わずかに黄色でわずかに乳白色の液体であった。４０℃－２週間サンプルにおいてのみ、１つの粒子が観察されたが、４０℃－４週間サンプルにおいては目に見える粒子は何も観察されなかった。
表３３．製剤確認の外観評価
【表33-1】
【表33-2】
【0131】
（サブビジブル（ｓｕｂ－ｖｉｓｉｂｌｅ）粒子（ＭＦＩ））
各サンプル中のサブビジブル粒子数を表３４に要約した。サブビジブル粒子は、すべてのサンプルにおいて制御下にあった。また、Ｔ０サンプルと比較して、サブビジブル粒子数の明らかな変化は存在しない。
表３４．製剤確認のサブビジブル粒子の結果
単位＝数／ｍＬ
各サンプル中のサブビジブル粒子数を表３４に要約した。サブビジブル粒子は、すべてのサンプルにおいて制御下にあった。また、Ｔ０サンプルと比較して、サブビジブル粒子数の明らかな変化は存在しない。
表３４．製剤確認のサブビジブル粒子の結果
【表34】
【0132】
（ｐＨおよびタンパク質濃度）
ｐＨおよびタンパク質濃度の結果を表３５～表３６に要約する。すべてのサンプルのｐＨおよびタンパク質濃度は安定であった。
表３５．製剤確認のｐＨの結果
表３６．製剤確認のタンパク質濃度の結果
ｐＨおよびタンパク質濃度の結果を表３５～表３６に要約する。すべてのサンプルのｐＨおよびタンパク質濃度は安定であった。
表３５．製剤確認のｐＨの結果
【表35】
【表36-1】
【表36-2】
【0133】
（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）
ＳＥＣの結果を表３７に要約する。２℃～８℃サンプルのメインピークの明らかな減少は、何も存在しなかった。２５℃サンプルについて、Ｔ０と比較して、２５℃－８週間のメインピークが１．０％減少し、高分子量が０．８％増加した。４０℃サンプルについて、Ｔ０と比較して、４０℃－４週間のメインピークが４．０％減少し、高分子量％が３．５％減少した。この傾向は、以前の製剤スクリーニング研究の結果と一致する。
表３７．製剤確認のＳＥＣの結果
ＳＥＣの結果を表３７に要約する。２℃～８℃サンプルのメインピークの明らかな減少は、何も存在しなかった。２５℃サンプルについて、Ｔ０と比較して、２５℃－８週間のメインピークが１．０％減少し、高分子量が０．８％増加した。４０℃サンプルについて、Ｔ０と比較して、４０℃－４週間のメインピークが４．０％減少し、高分子量％が３．５％減少した。この傾向は、以前の製剤スクリーニング研究の結果と一致する。
表３７．製剤確認のＳＥＣの結果
【表37】
【0134】
（ＣＥ－ＳＤＳ（ｒおよびｎｒ））
ＣＥ－ＳＤＳ還元型およびＣＥ－ＳＤＳ非還元型の結果を表３８～表３９に要約した。ＣＥ－ＳＤＳ還元型の結果について、２℃～８℃サンプルの純度の明らかな減少は、何も存在しなかった。２５℃サンプルについて、Ｔ０と比較して、２５℃－８週間の純度が０．６％減少した。４０℃サンプルについて、Ｔ０と比較して、４０℃－４週間の純度が２．３％減少した。ＣＥ－ＳＤＳ非還元型の結果について、２℃～８℃サンプルの純度の明らかな減少は何も存在しなかった。２５℃サンプルについて、Ｔ０と比較して、２５℃－８週間の純度が２．３％減少した。４０℃サンプルについて、Ｔ０と比較して、４０℃－４週間の純度が５．６％減少した。この傾向は、以前の製剤スクリーニング研究の結果と一致する。
表３８．製剤確認のＣＥ－ＳＤＳ（還元型）の結果
表３９．製剤確認のＣＥ－ＳＤＳ（非還元型）の結果
ＣＥ－ＳＤＳ還元型およびＣＥ－ＳＤＳ非還元型の結果を表３８～表３９に要約した。ＣＥ－ＳＤＳ還元型の結果について、２℃～８℃サンプルの純度の明らかな減少は、何も存在しなかった。２５℃サンプルについて、Ｔ０と比較して、２５℃－８週間の純度が０．６％減少した。４０℃サンプルについて、Ｔ０と比較して、４０℃－４週間の純度が２．３％減少した。ＣＥ－ＳＤＳ非還元型の結果について、２℃～８℃サンプルの純度の明らかな減少は何も存在しなかった。２５℃サンプルについて、Ｔ０と比較して、２５℃－８週間の純度が２．３％減少した。４０℃サンプルについて、Ｔ０と比較して、４０℃－４週間の純度が５．６％減少した。この傾向は、以前の製剤スクリーニング研究の結果と一致する。
表３８．製剤確認のＣＥ－ＳＤＳ（還元型）の結果
【表38】
【表39】
【0135】
（ｃＩＥＦ）
ｃＩＥＦの結果を表４０に要約する。２℃～８℃サンプルのメインピークの明らかな減少は、何も存在しなかった。２５℃サンプルについて、Ｔ０と比較して、２５℃－８週間のメインピークが６．４％減少し、酸性ピークが５．５％増加した。４０℃サンプルについて、Ｔ０と比較して、４０℃－４週間のメインピークが２２．５％減少し、酸性ピークが１６．４％増加した。この傾向は、以前の製剤スクリーニング研究の結果と一致する。
表４０．製剤確認のｃＩＥＦの結果
ｃＩＥＦの結果を表４０に要約する。２℃～８℃サンプルのメインピークの明らかな減少は、何も存在しなかった。２５℃サンプルについて、Ｔ０と比較して、２５℃－８週間のメインピークが６．４％減少し、酸性ピークが５．５％増加した。４０℃サンプルについて、Ｔ０と比較して、４０℃－４週間のメインピークが２２．５％減少し、酸性ピークが１６．４％増加した。この傾向は、以前の製剤スクリーニング研究の結果と一致する。
表４０．製剤確認のｃＩＥＦの結果
【表40-1】
【表40-2】
【0136】
（効力（細胞ベースのアッセイ））
細胞ベースのアッセイによって試験した効力の結果を表４１に要約する。製剤確認中に、試験したすべてのサンプルの効力（細胞ベースのアッセイ）の明らかな変化は、何も存在しなかった。２５℃サンプルおよび４０℃サンプルの酸性ピークの増加は、その効力に影響を与えなかった。
表４１．製剤確認の効力の結果
細胞ベースのアッセイによって試験した効力の結果を表４１に要約する。製剤確認中に、試験したすべてのサンプルの効力（細胞ベースのアッセイ）の明らかな変化は、何も存在しなかった。２５℃サンプルおよび４０℃サンプルの酸性ピークの増加は、その効力に影響を与えなかった。
表４１．製剤確認の効力の結果
【表41】
【0137】
すべての試験項目において、２℃～８℃サンプルのいずれでも明らかな変化は何も見出されなかった。加速条件である２５℃およびストレス条件である４０℃について、サンプルの外観、サブビジブル粒子、ｐＨおよびタンパク質濃度は、一貫性および安定性を維持し得る。これらのサンプルのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）－ＨＰＬＣ、ＣＥ－ＳＤＳ（還元型（ｒ）および非還元型（ｎｒ））ならびにｃＩＥＦの純度はある程度減少したが、減少の傾向は、以前の製剤開発研究の減少傾向と一致する。
【0138】
したがって、ｐＨ６．０で２０ｍＭのヒスチジン緩衝液、８％（質量／体積）のトレハロース二水和物、０．０２％（質量／体積）のＰＳ８０の製剤が、確認されている。
【0139】
本開示は、本開示の個別の局面の個々の例示として意図される記載された具体的な実施形態によって範囲が限定されるべきではなく、機能的に等価であるあらゆる組成物または方法が本開示の範囲内にある。種々の改変および変形が、本開示の趣旨からも範囲からも逸脱することなく、本開示の方法および組成物において実施され得ることが、当業者にとって明らかである。したがって、本開示は、本開示の改変および変形が添付の特許請求の範囲およびその等価物の範囲内にあるという条件で、それらの本開示の改変および変形を含むことが、意図される。
【0140】
本明細書において言及されたすべての公開物および特許出願は、あたかも個々の公開物または特許出願が参照によって援用されると具体的で個別に示された場合と同じ程度に、本明細書において参照によって援用される。
【配列表】
【国際調査報告】