特表 2024-505248 小分子によって調節される細胞シグナル伝達発現システム

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-02-05

(54)【発明の名称】小分子によって調節される細胞シグナル伝達発現システム

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20240129BHJP

   C12N 15/11 20060101ALI20240129BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240129BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240129BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240129BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20240129BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240129BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240129BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240129BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20240129BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20240129BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALN20240129BHJP

   C12N 5/0789 20100101ALN20240129BHJP

   C07K 16/18 20060101ALN20240129BHJP

   C07K 14/705 20060101ALN20240129BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z ZNA

C12N15/11 Z

C12N15/63 Z

C12N5/10

C07K19/00

A61K38/17

A61K39/395 N

A61P35/00

A61P37/04

C12N15/13

C12N15/12

C12N5/0783

C12N5/0789

C07K16/18

C07K14/705

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023546208

(86)(22)【出願日】2022-01-31

(85)【翻訳文提出日】2023-09-20

(86)【国際出願番号】 US2022014624

(87)【国際公開番号】W WO2022165378

(87)【国際公開日】2022-08-04

(31)【優先権主張番号】63/143,725

(32)【優先日】2021-01-29

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523271181

【氏名又は名称】アウトペース バイオ インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100188433

【弁理士】

【氏名又は名称】梅村 幸輔

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100214396

【弁理士】

【氏名又は名称】塩田 真紀

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(74)【代理人】

【識別番号】100221741

【弁理士】

【氏名又は名称】酒井 直子

(74)【代理人】

【識別番号】100114926

【弁理士】

【氏名又は名称】枝松 義恵

(72)【発明者】

【氏名】フォイト グレナ

(72)【発明者】

【氏名】ボイケン スコット

(72)【発明者】

【氏名】ラジョイ マーク

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4C084AA02

4C084AA07

4C084BA41

4C084BA44

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB092

4C084ZB261

4C085AA13

4C085AA14

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG01

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、キメラポリペプチド（例えば、キメラ抗原受容体）及び二量体化ドメインを含む第１の融合タンパク質、並びにシグナル伝達ドメイン及び二量体化ドメインを含む第２の融合タンパク質を提供し、ここでこれらの二量体化ドメインは、二量体を形成することができ、かつ該二量体の状態は、ＣＡＲの活性を変化させるように、小分子調節剤（例えば、誘導剤及び阻害剤）によって変化させることができる。小分子調節剤、本開示の融合タンパク質を発現する細胞、並びに、本開示のタンパク質、小分子、及び細胞を含む組成物が提供される。対象における疾患又は障害を、本開示の組成物を提供することによって治療又は予防する方法が記載される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

二量体化ドメインに作動可能に連結されたキメラポリペプチドを含む、融合タンパク質であって、前記キメラポリペプチドが、抗原感知ドメインを含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、かつ前記キメラポリペプチドが、細胞内で前記二量体化ドメインに作動可能に連結されている、融合タンパク質。

【請求項2】

前記キメラポリペプチドが、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、又はキメラ受容体を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。

【請求項3】

前記抗原感知ドメインが、
重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のセット、
重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のセット及び軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のセット、
フィブロネクチンタンパク質ベースの足場
のうちの１つ以上を含み、
前記抗原感知領域が、標的抗原に特異的に結合する、
請求項１又は２に記載の融合タンパク質。

【請求項4】

前記抗原感知領域が、哺乳動物配列から単離された又はそれに由来する１つ以上の配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項5】

前記抗原感知領域が、ヒト配列から単離された又はそれに由来する１つ以上の配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項6】

前記抗原感知領域が、ヒト化又は完全ヒト抗体を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項7】

前記抗原感知領域が、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項8】

前記細胞外ドメインが、ヒンジ領域、スペーサー配列、又は安全スイッチのうちの１つ以上を更に含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項9】

前記ヒンジ領域が、ＣＤ４（分化抗原群４）ポリペプチド、ＣＤ８（分化抗原群８）ポリペプチド、又はＣＤ２８（分化抗原群２８）ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項８に記載の融合タンパク質。

【請求項10】

前記ヒンジ領域が、ヒト配列から単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項９に記載の融合タンパク質。

【請求項11】

前記スペーサー配列が、ＣＤ４ポリペプチド、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項８に記載の融合タンパク質。

【請求項12】

前記スペーサー配列が、ヒト配列から単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項１１に記載の融合タンパク質。

【請求項13】

前記安全スイッチが、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項８に記載の融合タンパク質。

【請求項14】

前記安全スイッチが、切断型ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔ）ポリペプチドを含む、請求項１３に記載の融合タンパク質。

【請求項15】

前記安全スイッチが、ヒト配列から単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項１３又は１４に記載の融合タンパク質。

【請求項16】

前記膜貫通ドメインが、ＣＤ４ポリペプチド、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項17】

前記膜貫通ドメインが、ヒト配列から単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項１６に記載の融合タンパク質。

【請求項18】

前記細胞内ドメインが、１つ以上の共刺激ドメインを含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項19】

前記１つ以上の共刺激ドメインが、ＣＤ３ζ（分化抗原群３ゼータ）ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項１８に記載の融合タンパク質。

【請求項20】

前記１つ以上の共刺激ドメインが、ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢ（分化抗原群１３７）ポリペプチド、ＩＣＯＳ（誘導性Ｔ細胞共刺激因子）ポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、又はＣＤ２７（分化抗原群２７）ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項１８又は１９に記載の融合タンパク質。

【請求項21】

前記１つ以上の共刺激ドメインが、
（ａ）ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、又はＩＣＯＳポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む第１の共刺激ドメインと、
（ｂ）４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、又はＣＤ２７ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む第２の共刺激ドメインと
を含む、請求項１８又は１９に記載の融合タンパク質。

【請求項22】

前記１つ以上の共刺激ドメインが、ヒト配列から単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項１８～２１のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項23】

前記キメラポリペプチドが、誘導性サイトカインドメインを更に含む細胞内ドメインを含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項24】

前記誘導性サイトカインドメインが、ＩＬ－１２サイトカインの発現を誘導することができる活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）ポリペプチドを含む、請求項２３に記載の融合タンパク質。

【請求項25】

前記キメラポリペプチドが、サイトカイン受容体の細胞内ドメインを更に含む細胞内ドメインを含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項26】

サイトカイン受容体の前記細胞内ドメインが、ＩＬ－２受容体ベータ（ＩＬ－２Ｒβ）鎖断片を含む、請求項２５に記載の融合タンパク質。

【請求項27】

前記キメラポリペプチドが、シグナル伝達及び転写活性化因子（ＳＴＡＴ３／５）結合モチーフを更に含む細胞内ドメインを含む、請求項２５又は２６に記載の融合タンパク質。

【請求項28】

前記キメラポリペプチドが、少なくとも１つの免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）配列を更に含む細胞内ドメインを含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項29】

アミノ末端からカルボキシ末端へと、前記キメラポリペプチド、リンカー、及び前記二量体化ドメインを含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項30】

前記リンカーが、ＤＮＡ配列、ＲＮＡ配列、アミノ酸配列、及びポリマーのうちの１つ以上を含む、請求項２９に記載の融合タンパク質。

【請求項31】

前記リンカーが、
ＧＧＧＧＳの配列を含むか、又は
２～２０アミノ酸長を含むか、又は
グリシン（Ｇ）及びセリン（Ｓ）を含む配列を含む、
請求項２９又は３０に記載の融合タンパク質。

【請求項32】

前記リンカーが、オリゴマー化ドメインを含む、請求項２９又は３０に記載の融合タンパク質。

【請求項33】

前記オリゴマー化ドメインが、

の配列を含む、請求項３２に記載の融合タンパク質。

【請求項34】

前記二量体化ドメインが、ＮＳ３ａポリペプチドを含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項35】

前記ＮＳ３ａポリペプチドが、
（ａ）

、又は
（ｂ）

、又は
（ｃ）

の配列を含む、請求項３４に記載の融合タンパク質。

【請求項36】

前記二量体化ドメインが、ＤＮＣＲポリペプチドを含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項37】

前記ＤＮＣＲポリペプチドが、

の配列を含む、請求項３６に記載の融合タンパク質。

【請求項38】

前記二量体化ドメインが、ＧＮＣＲポリペプチドを含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項39】

前記ＧＮＣＲポリペプチドが、

の配列を含む、請求項３８に記載の融合タンパク質。

【請求項40】

前記二量体化ドメインが、アポＮＳ３ａリーダー（ＡＮＲ）ポリペプチドを含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項41】

前記ＡＮＲポリペプチドが、ＧＥＬＤＥＬＶＹＬＬＤＧＰＧＹＤＰＩＨＳＤＶＶＴＲＧＧＳＨＬＦＮＦの配列を含む、請求項４０に記載の融合タンパク質。

【請求項42】

殺傷ドメインを更に含む、請求項１～４１のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項43】

前記殺傷ドメインが、
カスパーゼ－９（Ｃａｓ９）ポリペプチド、カスパーゼ－１（Ｃａｓ１ポリペプチド）、カスパーゼ－４（Ｃａｓ４）ポリペプチド、受容体相互作用セリン／トレオニンキナーゼ１（ＲＩＰＫ１）、受容体相互作用セリン／トレオニンキナーゼ３（ＲＩＰＫ３）ポリペプチド、又はこれらの触媒ドメイン
から単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項４２に記載の融合タンパク質。

【請求項44】

切断可能なペプチドを更に含む、請求項１～４３のいずれか一項に記載の融合タンパク質。

【請求項45】

前記切断可能なペプチドが、Ｐ２Ａ配列又はＴ２Ａ配列を含む、請求項４４に記載の融合タンパク質。

【請求項46】

前記Ｐ２Ａ配列が、ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰの配列を含む、請求項４５に記載の融合タンパク質。

【請求項47】

前記Ｔ２Ａ配列が、ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧの配列を含む、請求項４５に記載の融合タンパク質。

【請求項48】

請求項１～４７のいずれか一項に記載の融合タンパク質をコードする、核酸。

【請求項49】

内部リボソーム進入配列（ＩＲＥＳ）を更に含む、請求項４８に記載の核酸。

【請求項50】

前記ＩＲＥＳが、

の配列を含む、請求項４９に記載の核酸。

【請求項51】

プロモーター、エンハンサー、イントロン、エクソン、非翻訳領域（ＵＴＲ）、及び翻訳後調節要素（ＰＲＥ）のうちの１つ以上を更に含む、請求項４８～５０のいずれか一項に記載の核酸。

【請求項52】

前記プロモーターが、誘導性プロモーターを含む、請求項５１に記載の核酸。

【請求項53】

前記誘導性プロモーターが、ＹＢ＿ＴＡＴＡプロモーター、ヒトベータグロビンプロモーター（ｈｕＢＧ）、ｍｉｎＩＬ２プロモーター、最小ＣＭＶ（ｍｉｎＣＭＶ）プロモーター、及びＴＲＥ３Ｇプロモーターから単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項５２に記載の核酸。

【請求項54】

前記プロモーターが、構成的プロモーターを含む、請求項５１に記載の核酸。

【請求項55】

前記構成的プロモーターが、ＭＮＤプロモーター、ｈＰＧＫプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ＳＦＦＶプロモーター、ＥＦ１アルファプロモーター、ＵＢＣプロモーター、及びＣＤ４３プロモーターから単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項５４に記載の核酸。

【請求項56】

請求項４８～５５のいずれか一項に記載の核酸を含む、ベクター。

【請求項57】

哺乳動物細胞内で前記核酸の発現を引き起こすことができる発現ベクターを含む、請求項５６に記載のベクター。

【請求項58】

前記発現ベクターが、プラスミドを含む、請求項５７に記載のベクター。

【請求項59】

前記核酸を哺乳動物細胞に導入することができる送達ベクターを含む、請求項５６に記載のベクター。

【請求項60】

前記送達ベクターが、ウイルスベクター、非ウイルスベクター、リポソーム、ミセル、ポリマーソーム、及びナノ粒子のうちの１つ以上を含む、請求項５６に記載のベクター。

【請求項61】

前記ウイルスベクターが、ウイルスゲノムから単離された又はそれに由来する１つ以上の配列を含む、請求項６０に記載のベクター。

【請求項62】

請求項１～４７のいずれか一項に記載の融合タンパク質、請求項４８～５５のいずれか一項に記載の核酸、又は請求項５６～６１のいずれか一項に記載のベクターを含む、細胞。

【請求項63】

哺乳動物細胞である、請求項６２に記載の細胞。

【請求項64】

ヒト細胞である、請求項６２に記載の細胞。

【請求項65】

体細胞である、請求項６２～６４のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項66】

幹細胞である、請求項６２～６４のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項67】

ヒト胚性幹細胞ではない、請求項６６に記載の細胞。

【請求項68】

エクスビボ又はインビトロにある、請求項６２～６７のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項69】

インビボにある、請求項６２～６７のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項70】

免疫細胞である、請求項６０～６７のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項71】

Ｔ細胞又はその前駆体である、請求項７０に記載の細胞。

【請求項72】

前記前駆体が造血幹細胞（ＨＳＣ）である、請求項７１に記載の細胞。

【請求項73】

請求項１～４７のいずれか一項に記載の融合タンパク質、請求項４８～５５のいずれか一項に記載の核酸、請求項５６～６１のいずれか一項に記載のベクター、又は請求項６２～７２のいずれか一項に記載の細胞を含む、組成物。

【請求項74】

請求項７２に記載の組成物と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。

【請求項75】

二量体化ドメインに作動可能に連結されたシグナル伝達ドメインを含む、第２の融合タンパク質であって、
（ａ）前記二量体化ドメインが、小分子誘導剤の存在下で、請求項１～４７のいずれか一項に記載の第１の融合タンパク質の二量体化ドメインと二量体を形成することができる、又は
（ｂ）第２の融合タンパク質の前記二量体化ドメインと第１の融合タンパク質の二量体化ドメインとを含む二量体が、阻害剤の存在下で破壊され得る、
第２の融合タンパク質。

【請求項76】

アダプター配列、膜貫通ドメイン、及び共刺激ドメインのうちの１つ以上を更に含む、請求項７５に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項77】

前記アダプター配列が、ＤＡＰ１０ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項７６に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項78】

前記膜貫通ドメインが、ＣＤ４ポリペプチド、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項７６又は７７に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項79】

前記膜貫通ドメインが、ヒト配列から単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項７８に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項80】

前記共刺激ドメインが、ＣＤ３ζ（分化抗原群３ゼータ）ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項７５～７９のいずれか一項に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項81】

前記共刺激ドメインが、ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、又はＣＤ２７ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項７５～８０のいずれか一項に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項82】

前記共刺激ドメインが、ヒト配列から単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項８０又は８１に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項83】

アミノ末端からカルボキシ末端へと、前記二量体化ドメイン、リンカー、及び調節ドメインを含む、請求項７５～８２のいずれか一項に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項84】

前記リンカーが、ＤＮＡ配列、ＲＮＡ配列、アミノ酸配列、及びポリマーのうちの１つ以上を含む、請求項８３に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項85】

前記リンカーが、
ＧＧＧＧＳの配列を含むか、又は
２～２０アミノ酸長を含むか、又は
グリシン（Ｇ）及びセリン（Ｓ）を含む配列を含む、
請求項８３又は８４に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項86】

前記リンカーが、オリゴマー化ドメインを含む、請求項８４又は８５に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項87】

前記オリゴマー化ドメインが、

の配列を含む、請求項８６に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項88】

前記二量体化ドメインが、ＮＳ３ａポリペプチドを含む、請求項７５～８７のいずれか一項に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項89】

前記ＮＳ３ａポリペプチドが、
（ａ）

、又は
（ｂ）

、又は
（ｃ）

の配列を含む、請求項８８に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項90】

前記第１の融合タンパク質が、ＤＮＣＲポリペプチド、ＧＮＣＲポリペプチド、又はＡＮＲポリペプチドを含む二量体化ドメインを含む、請求項８８又は８９に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項91】

前記二量体化ドメインが、ＤＮＣＲポリペプチドを含む、請求項７５～８７のいずれか一項に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項92】

前記ＤＮＣＲポリペプチドが、

の配列を含む、請求項９１に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項93】

前記二量体化ドメインが、ＧＮＣＲポリペプチドを含む、請求項７５～８７のいずれか一項に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項94】

前記ＧＮＣＲポリペプチドが、

の配列を含む、請求項９３に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項95】

前記二量体化ドメインが、アポＮＳ３ａリーダー（ＡＮＲ）ポリペプチドを含む、請求項７５～８７のいずれか一項に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項96】

前記ＡＮＲポリペプチドが、ＧＥＬＤＥＬＶＹＬＬＤＧＰＧＹＤＰＩＨＳＤＶＶＴＲＧＧＳＨＬＦＮＦの配列を含む、請求項９５に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項97】

前記第１の融合タンパク質が、ＮＳ３ａポリペプチドを含む二量体化ドメインを含む、請求項９１～９６のいずれか一項に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項98】

殺傷ドメインを更に含む、請求項７５～９７のいずれか一項に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項99】

前記殺傷ドメインが、
Ｃａｓ９ポリペプチド、Ｃａｓ１ポリペプチド、Ｃａｓ４ポリペプチド、ＲＩＰＫ１ポリペプチド、ＲＩＰＫ３ポリペプチド、又はこれらの触媒ドメイン
から単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項９８に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項100】

切断可能なペプチドを更に含む、請求項７５～９９のいずれか一項に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項101】

前記切断可能なペプチドが、Ｐ２Ａ配列又はＴ２Ａ配列を含む、請求項１００に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項102】

前記Ｐ２Ａ配列が、ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰの配列を含む、請求項１０１に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項103】

前記Ｔ２Ａ配列が、ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧの配列を含む、請求項１０２に記載の第２の融合タンパク質。

【請求項104】

請求項７５～１０３のいずれか一項に記載の第２の融合タンパク質をコードする、核酸。

【請求項105】

内部リボソーム進入配列（ＩＲＥＳ）を更に含む、請求項１０４に記載の核酸。

【請求項106】

前記ＩＲＥＳが、

の配列を含む、請求項１０５に記載の核酸。

【請求項107】

プロモーター、エンハンサー、イントロン、エクソン、非翻訳領域（ＵＴＲ）、及び翻訳後調節要素（ＰＲＥ）のうちの１つ以上を更に含む、請求項１０４～１０６のいずれか一項に記載の核酸。

【請求項108】

前記プロモーターが、誘導性プロモーターを含む、請求項１０７に記載の核酸。

【請求項109】

前記誘導性プロモーターが、ＹＢ＿ＴＡＴＡプロモーター、ヒトベータグロビンプロモーター（ｈｕＢＧ）、ｍｉｎＩＬ２プロモーター、最小ＣＭＶ（ｍｉｎＣＭＶ）プロモーター、及びＴＲＥ３Ｇプロモーターから単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項１０８に記載の核酸。

【請求項110】

前記プロモーターが、構成的プロモーターを含む、請求項１０７に記載の核酸。

【請求項111】

前記構成的プロモーターが、ＭＮＤプロモーター、ｈＰＧＫプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ＳＦＦＶプロモーター、ＥＦ１アルファプロモーター、ＵＢＣプロモーター、及びＣＤ４３プロモーターから単離された又はそれに由来する配列を含む、請求項１１０に記載の核酸。

【請求項112】

請求項１０４～１１１のいずれか一項に記載の核酸を含む、ベクター。

【請求項113】

哺乳動物細胞内で前記核酸の発現を引き起こすことができる発現ベクターを含む、請求項１１２に記載のベクター。

【請求項114】

前記発現ベクターが、プラスミドを含む、請求項１１３に記載のベクター。

【請求項115】

前記核酸を哺乳動物細胞に導入することができる送達ベクターを含む、請求項１１２に記載のベクター。

【請求項116】

前記送達ベクターが、ウイルスベクター、非ウイルスベクター、リポソーム、ミセル、ポリマーソーム、及びナノ粒子のうちの１つ以上を含む、請求項１１２に記載のベクター。

【請求項117】

前記ウイルスベクターが、ウイルスゲノムから単離された又はそれに由来する１つ以上の配列を含む、請求項１１５に記載のベクター。

【請求項118】

請求項７５～１０３のいずれか一項に記載の融合タンパク質、請求項１０４～１１１のいずれか一項に記載の核酸、又は請求項１１２～１１７のいずれか一項に記載のベクターを含む、細胞。

【請求項119】

小分子誘導剤を更に含む、請求項１１８に記載の細胞。

【請求項120】

前記小分子誘導剤がダノプレビルを含む、請求項１１９に記載の細胞。

【請求項121】

前記第１の融合タンパク質又は前記第２の融合タンパク質のいずれかの前記二量体化ドメインが、ＤＮＣＲポリペプチドを含む、請求項１２０に記載の細胞。

【請求項122】

前記小分子誘導剤がグラゾプレビルを含む、請求項１１９に記載の細胞。

【請求項123】

前記第１の融合タンパク質又は前記第２の融合タンパク質のいずれかの前記二量体化ドメインが、ＧＮＣＲポリペプチドを含む、請求項１２２に記載の細胞。

【請求項124】

阻害剤を更に含む、請求項１１８に記載の細胞。

【請求項125】

前記阻害剤がＮＳ３ａ阻害剤を含む、請求項１２４に記載の細胞。

【請求項126】

前記阻害剤が小分子を含む、請求項１２４又は１２５に記載の細胞。

【請求項127】

（ａ）前記第１の融合タンパク質が、ＮＳ３ａポリペプチドを含む二量体化ドメインを含み、及び前記第２の融合タンパク質が、ＡＮＲポリペプチドを含む二量体化ドメインを含み、又は
（ｂ）前記第１の融合タンパク質が、ＡＮＲポリペプチドを含む二量体化ドメインを含み、及び前記第２の融合タンパク質が、ＮＳ３ａポリペプチドを含む二量体化ドメインを含み、並びに
前記阻害剤がダノプレビル若しくはグラゾプレビルを含む、
請求項１２４～１２６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項128】

哺乳動物細胞である、請求項１１８～１２７のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項129】

ヒト細胞である、請求項１２８に記載の細胞。

【請求項130】

体細胞である、請求項１１８～１２９のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項131】

幹細胞である、請求項１１８～１２９のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項132】

ヒト胚性幹細胞ではない、請求項１３１に記載の細胞。

【請求項133】

エクスビボ又はインビトロにある、請求項１１８～１３２のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項134】

インビボにある、請求項１１８～１３２のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項135】

免疫細胞である、請求項１１８～１３４のいずれか一項に記載の細胞。

【請求項136】

Ｔ細胞又はその前駆体である、請求項１３５に記載の細胞。

【請求項137】

前記前駆体が造血幹細胞（ＨＳＣ）である、請求項１３６に記載の細胞。

【請求項138】

請求項７５～１０３のいずれか一項に記載の融合タンパク質、請求項１０４～１１１のいずれか一項に記載の核酸、請求項１１２～１１７のいずれか一項に記載のベクター、又は請求項１１８～１３７のいずれか一項に記載の細胞を含む、組成物。

【請求項139】

小分子誘導剤を更に含む、請求項１３８に記載の組成物。

【請求項140】

前記小分子誘導剤がダノプレビルを含む、請求項１３９に記載の組成物。

【請求項141】

前記第１の融合タンパク質又は前記第２の融合タンパク質のいずれかの前記二量体化ドメインが、ＤＮＣＲポリペプチドを含む、請求項１４０に記載の組成物。

【請求項142】

前記小分子誘導剤がグラゾプレビルを含む、請求項１３９に記載の組成物。

【請求項143】

前記第１の融合タンパク質又は前記第２の融合タンパク質のいずれかの前記二量体化ドメインが、ＧＮＣＲポリペプチドを含む、請求項１４２に記載の組成物。

【請求項144】

阻害剤を更に含む、請求項１３８に記載の組成物。

【請求項145】

前記阻害剤がＮＳ３ａ阻害剤を含む、請求項１４４に記載の組成物。

【請求項146】

前記阻害剤が小分子を含む、請求項１４４又は１４５に記載の組成物。

【請求項147】

（ｃ）前記第１の融合タンパク質が、ＮＳ３ａポリペプチドを含む二量体化ドメインを含み、及び前記第２の融合タンパク質が、ＡＮＲポリペプチドを含む二量体化ドメインを含み、又は
（ｄ）前記第１の融合タンパク質が、ＡＮＲポリペプチドを含む二量体化ドメインを含み、及び前記第２の融合タンパク質が、ＮＳ３ａポリペプチドを含む二量体化ドメインを含み、並びに
前記阻害剤がダノプレビル若しくはグラゾプレビルを含む、
請求項１４４～１４６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項148】

請求項１３８～１４７のいずれか一項に記載の組成物と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。

【請求項149】

疾患又は障害の治療のための薬剤の製造における、請求項１～４７若しくは７５～１０３のいずれか一項に記載の融合タンパク質、請求項４８～５５若しくは１０４～１１１のいずれか一項に記載の核酸、請求項５６～６１若しくは１１２～１１７のいずれか一項に記載のベクター、請求項６２～７２若しくは１１８～１３７のいずれか一項に記載の細胞、請求項７３若しくは１３８～１４７のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項７４若しくは１４８に記載の医薬組成物の、使用。

【請求項150】

疾患又は障害の治療のための、請求項１～４７若しくは７５～１０３のいずれか一項に記載の融合タンパク質、請求項４８～５５若しくは１０４～１１１のいずれか一項に記載の核酸、請求項５６～６１若しくは１１２～１１７のいずれか一項に記載のベクター、請求項６２～７２若しくは１１８～１３７のいずれか一項に記載の細胞、請求項７３若しくは１３８～１４７のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項７４若しくは１４８に記載の医薬組成物の、使用。

【請求項151】

前記疾患又は障害が、自己免疫疾患又は障害、炎症性疾患又は障害、免疫不全疾患又は障害、虚血性疾患又は障害、血液疾患又は障害、骨疾患又は障害、神経疾患又は障害、心疾患又は障害、血管疾患又は障害、代謝疾患又は障害、皮膚疾患又は障害、消化器疾患又は障害、ミトコンドリア疾患又は障害、筋肉疾患又は障害、肝臓疾患又は障害、腎臓疾患又は障害、聴覚疾患又は障害、眼疾患又は障害、及び増殖性疾患又は障害のうちの１つ以上を含む、請求項１４９又は１５０に記載の使用。

【請求項152】

前記疾患又は障害が、がんを含む、請求項１４９又は１５０に記載の使用。

【請求項153】

前記疾患又は障害が、感染症を含む、又は感染性疾患に起因する疾患若しくは障害を含む、請求項１４９～１５２のいずれか一項に記載の使用。

【請求項154】

前記疾患又は障害が、遺伝子疾患又は障害を含む、請求項１４９～１５２のいずれか一項に記載の使用。

【請求項155】

有効量の請求項１～４７若しくは７５～１０３のいずれか一項に記載の融合タンパク質、請求項４８～５５若しくは１０４～１１１のいずれか一項に記載の核酸、請求項５６～６１若しくは１１２～１１７のいずれか一項に記載のベクター、請求項６２～７２若しくは１１８～１３７のいずれか一項に記載の細胞、請求項７３若しくは１３８～１４７のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項７４若しくは１４８に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、疾患又は障害を治療する方法であって、前記疾患又は障害の徴候又は症状の重症度が低下し、それにより、前記疾患又は障害を治療する、方法。

【請求項156】

有効量の請求項１～４７若しくは７５～１０３のいずれか一項に記載の融合タンパク質、請求項４８～５５若しくは１０４～１１１のいずれか一項に記載の核酸、請求項５６～６１若しくは１１２～１１７のいずれか一項に記載のベクター、請求項６２～７２若しくは１１８～１３７のいずれか一項に記載の細胞、請求項７３若しくは１３８～１４７のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項７４若しくは１４８に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、疾患又は障害を予防する方法であって、前記疾患又は障害の徴候又は症状の発症又は再発が遅延又は抑制され、それにより、前記疾患又は障害を予防する、方法。

【請求項157】

前記疾患又は障害が、自己免疫疾患又は障害、炎症性疾患又は障害、免疫不全疾患又は障害、虚血性疾患又は障害、血液疾患又は障害、骨疾患又は障害、神経疾患又は障害、心疾患又は障害、血管疾患又は障害、代謝疾患又は障害、皮膚疾患又は障害、消化器疾患又は障害、ミトコンドリア疾患又は障害、筋肉疾患又は障害、肝臓疾患又は障害、腎臓疾患又は障害、聴覚疾患又は障害、眼疾患又は障害、及び増殖性疾患又は障害のうちの１つ以上を含む、請求項１５５又は１５６に記載の方法。

【請求項158】

前記疾患又は障害が、がんを含む、請求項１５５又は１５６に記載の方法。

【請求項159】

前記疾患又は障害が、感染症を含む、又は前記感染性疾患に起因する疾患若しくは障害を含む、請求項１５５～１５８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項160】

前記疾患又は障害が、遺伝子疾患又は障害を含む、請求項１５５～１５８のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
本出願は、２０２１年１月２９日に出願された米国仮出願第６３／１４３，７２５号の優先権を主張する。本仮出願の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表の組み込み
本出願は、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩ形式で提出されており、かつ参照により全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０２２年１月３１日に作成された本ＡＳＣＩＩファイルは、０１６－ＴＮＰ０２４ＰＣＴ＿ＳｅｑＬｉｓｔ．ｔｘｔと命名され、約５４キロバイトのサイズである。

【0003】

開示の分野
本開示は、小分子化学、分子生物学、遺伝子療法、細胞療法、免疫学、及び免疫細胞シグナル伝達の分野における、小分子によって調節される細胞シグナル伝達発現システムに関する。本開示の発現システムは、モジュール設計及び可変ドメインを使用して、細胞表面抗原を標的とし、受容体－リガンド相互作用時にシグナル伝達カスケードを指示し、それにより、細胞機能を引き起こす。

【背景技術】

【0004】

背景
二量体化又はプロテアーゼ活性を制御する小分子薬物を使用して細胞及び遺伝子療法の活性を制御して、有効性及び安全性を改善することができる。有効かつ安全ながんに対する免疫療法アプローチを含む次世代細胞及び遺伝子療法を開発するために、一連の細胞表面抗原を標的とし、かつ受容体－リガンド相互作用時にシグナル伝達カスケードを指示することができる、ＣＡＲのモジュール設計及び可変ドメインを利用する技術に対するニーズが高まっている。

【発明の概要】

【0005】

概要
本開示は、二量体化ドメインに作動可能に連結されたキメラポリペプチドを含む、融合タンパク質であって、キメラポリペプチドが、抗原感知ドメインを含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、かつキメラポリペプチドが、細胞内で二量体化ドメインに作動可能に連結されている、融合タンパク質を提供する。

【0006】

本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、キメラポリペプチドは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、又はキメラ受容体を含む。

【0007】

本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、抗原感知ドメインは、（ａ）重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のセット、（ｂ）重鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のセット及び軽鎖可変領域の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のセット、（ｃ）フィブロネクチンタンパク質ベースの足場のうちの１つ以上を含み、ここで、抗原感知領域が、標的抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、フィブロネクチンタンパク質ベースの足場は、センチリンを含む。いくつかの実施形態では、フィブロネクチンタンパク質ベースの足場は、フィブロネクチンＩＩＩ型（ＦＮ３）ドメインを含む。

【0008】

本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、抗原感知領域は、哺乳動物配列から単離された又はそれに由来する１つ以上の配列を含む。いくつかの実施形態では、抗原感知領域は、ヒト配列から単離された又はそれに由来する１つ以上の配列を含む。

【0009】

本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、抗原感知領域は、ヒト化又は完全ヒト抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗原感知領域は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態では、抗原感知領域は、抗体模倣体を含む。いくつかの実施形態では、抗原感知領域は、モノボディを含む。

【0010】

本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、ヒンジ領域、スペーサー配列、又は安全スイッチのうちの１つ以上を更に含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ４（分化抗原群４）ポリペプチド、ＣＤ８（分化抗原群８）ポリペプチド、又はＣＤ２８（分化抗原群２８）ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ヒト配列から単離された又はそれに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域及びスペーサー配列は、同じドメインである。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域及びスペーサー配列は、同じドメインではない。

【0011】

本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、ヒンジ領域、スペーサー配列、又は安全スイッチのうちの１つ以上を更に含む。いくつかの実施形態では、スペーサー配列は、ＣＤ４ポリペプチド、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、スペーサー配列は、ヒト配列から単離された又はそれに由来する配列を含む。

【0012】

本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、ヒンジ領域、スペーサー配列、又は安全スイッチのうちの１つ以上を更に含む。いくつかの実施形態では、安全スイッチは、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、安全スイッチは、切断型ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔ）ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲｔがリツキシマブに結合すると、この組み合わせは細胞死をもたらす。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲｔは、ＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥの配列を含む。いくつかの実施形態では、安全スイッチは、ヒト配列から単離された又はそれに由来する配列を含む。

【0013】

本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ４ポリペプチド、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ヒト配列から単離された又はそれに由来する配列を含む。

【0014】

本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ４ポリペプチド、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、１つ以上の共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の共刺激ドメインは、ＣＤ３ζ（分化抗原群３ゼータ）ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の共刺激ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢ（分化抗原群１３７）ポリペプチド、ＩＣＯＳ（誘導性Ｔ細胞共刺激因子）ポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、又はＣＤ２７（分化抗原群２７）ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の共刺激ドメインは、（ａ）ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、又はＩＣＯＳポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む第１の共刺激ドメイン、及び（ｂ）４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、又はＣＤ２７ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む第２の共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の共刺激ドメインは、ヒト配列から単離された又はそれに由来する配列を含む。

【0015】

本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、キメラポリペプチドは、誘導性サイトカインドメインを更に含む細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、誘導性サイトカインドメインは、ＩＬ－１２サイトカインの発現を誘導することができる活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）ポリペプチドを含む。

【0016】

本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、キメラポリペプチドは、サイトカイン受容体の細胞内ドメインを更に含む細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、サイトカイン受容体の細胞内ドメインは、ＩＬ－２受容体ベータ（ＩＬ－２Ｒβ）鎖断片を含む。いくつかの実施形態では、キメラポリペプチドは、シグナル伝達及び転写活性化因子（ＳＴＡＴ３／５）結合モチーフを更に含む細胞内ドメインを含む。

【0017】

本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、キメラポリペプチドは、少なくとも１つの免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）配列を更に含む細胞内ドメインを含む。

【0018】

本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、融合タンパク質は、アミノ末端からカルボキシ末端へと、キメラポリペプチド、リンカー、及び二量体化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＤＮＡ配列、ＲＮＡ配列、アミノ酸配列、及びポリマーのうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳの配列を含むか、又は２～２０アミノ酸長を含むか、又はグリシン（Ｇ）及びセリン（Ｓ）を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、オリゴマー化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、オリゴマー化ドメインは、ＳＥＹＥＩＲＫＡＬＥＥＬＫＡＳＴＡＥＬＫＲＡＴＡＳＬＲＡＳＴＥＥＬＫＫＮＰＳＥＤＡＬＶＥＮＮＲＬＩＶＥＨＮＡＩＩＶＥＮＮＲＩＩＡＡＶＬＥＬＩＶＲＡＩＫ（三量体）、ＴＲＴＥＩＩＲＥＬＥＲＳＬＲＥＱＥＥＬＡＫＲＬＫＥＬＬＲＥＬＥＲＬＱＲＥＧＳＳＤＥＤＶＲＥＬＬＲＥＩＫＥＬＶＥＥＩＥＫＬＡＲＥＱＫＹＬＶＥＥＬＫＲＱＤ（二量体）、ＴＲＲＫＱＥＭＫＲＬＫＫＥＭＥＫＩＲＥＥＴＥＥＶＫＫＥＩＥＥＳＫＫＲＰＱＳＥＳＡＫＮＬＩＬＩＭＱＬＬＩＮＱＩＲＬＬＡＬＱＩＲＭＬＡＬＱＬＱＥ（五量体）、又はＴＥＤＥＩＲＫＬＲＫＬＬＥＥＡＥＫＫＬＫＫＬＥＤＫＴＲＲＳＥＥＩＳＫＴＤＤＤＰＫＡＱＳＬＱＬＩＡＥＳＬＭＬＩＡＥＳＬＬＩＩＡＩＳＬＬＬＳＳＲＮＧ（六量体）の配列を含む。

【0019】

キメラポリペプチドを含む融合タンパク質を含む本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、ＮＳ３ａポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＮＳ３ａポリペプチドは、（ａ）ＭＡＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＬＧＣＩＩＴＳＡＴＧＲＤＫＮＱＶＤＧＥＶＱＶＬＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＣＶＮＧＶＣＷＴＶＹＨＧＡＧＳＫＴＬＡＧＰＫＧＰＩＴＱＭＹＴＮＶＤＱＤＬＶＧＷＰＡＰＰＧＡＲＳＭＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＶＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＳＧＨＶＶＧＩＦＲＡＡＶＣＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＭＥＴＴＭＲＳＰ、又は（ｂ）ＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＶＶＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰ、又は（ｃ）ＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＡＱＱＴＲＧＥＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＩＶＳＴＡＴＱＴＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰの配列を含む。

【0020】

キメラポリペプチドを含む融合タンパク質を含む本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、ＤＮＣＲポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＤＮＣＲポリペプチドは、ＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨの配列を含む。

【0021】

キメラポリペプチドを含む融合タンパク質を含む本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、ＧＮＣＲポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＧＮＣＲポリペプチドは、ＤＩＥＫＬＣＫＫＡＥＥＥＡＫＥＡＱＥＫＡＤＥＬＲＱＲＨＰＤＳＱＡＡＥＤＡＥＤＬＡＮＬＡＶＡＡＶＬＴＡＣＬＬＡＱＥＨＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＲＡＶＩＬＡＩＭＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＥＡＶＥＲＡＩＷＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＫＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＥＡＳＫＡＡＥＥＡＱＲＨＰＤＳＱＫＡＲＤＥＩＫＥＡＳＱＫＡＥＥＶＫＥＲＣＫＳの配列を含む。

【0022】

キメラポリペプチドを含む融合タンパク質のいくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、アポＮＳ３ａリーダー（ＡＮＲ）ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡＮＲポリペプチドは、ＧＥＬＤＥＬＶＹＬＬＤＧＰＧＹＤＰＩＨＳＤＶＶＴＲＧＧＳＨＬＦＮＦの配列を含む。

【0023】

キメラポリペプチドを含む融合タンパク質を含む本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、融合タンパク質は、殺傷ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、殺傷ドメインは、カスパーゼ－９（Ｃａｓ９）ポリペプチド、カスパーゼ－１（Ｃａｓ１ポリペプチド）、カスパーゼ－４（Ｃａｓ４）ポリペプチド、受容体相互作用セリン／トレオニンキナーゼ１（ＲＩＰＫ１）、受容体相互作用セリン／トレオニンキナーゼ３（ＲＩＰＫ３）ポリペプチド、又はこれらの触媒ドメインから単離された又はそれに由来する配列を含む。

【0024】

キメラポリペプチドを含む融合タンパク質を含む本開示の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、融合タンパク質は、切断可能なペプチドを更に含む。いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、Ｐ２Ａ配列又はＴ２Ａ配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ２Ａ配列は、ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰの配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ２Ａ配列は、ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧの配列を含む。

【0025】

本開示は、二量体化ドメインに作動可能に連結されたシグナル伝達ドメインを含む第２の融合タンパク質であって、（ａ）二量体化ドメインが、小分子誘導剤の存在下で、本開示の第１の融合タンパク質の二量体化ドメインと二量体を形成することができる、又は（ｂ）第２の融合タンパク質の二量体化ドメインと第１の融合タンパク質の二量体化ドメインとを含む二量体が、阻害剤の存在下で破壊され得る、第２の融合タンパク質を提供する。

【0026】

本開示のいくつかの実施形態では、第２の融合タンパク質は、アダプター配列、膜貫通ドメイン、及び共刺激ドメインのうちの１つ以上を更に含む。いくつかの実施形態では、アダプター配列は、ＤＡＰ１０ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＤＡＰ１０ポリペプチドは、ＭＩＨＬＧＨＩＬＦＬＬＬＬＰＶＡＡＡＱＴＴＰＧＥＲＳＳＬＰＡＦＹＰＧＴＳＧＳＣＳＧＣＧＳＬＳＬＰＬＬＡＧＬＶＡＡＤＡＶＡＳＬＬＩＶＧＡＶＦＬＣＡＲＰＲＲＳＰＡＱＥＤＧＫＶＹＩＮＭＰＧＲＧの配列又はそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、アダプター配列は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、安全スイッチは、切断型ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｔ）ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲｔがリツキシマブに結合すると、この組み合わせは細胞死をもたらす。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲｔは、ＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥの配列を含む。いくつかの実施形態では、アダプター配列は、ヒト配列から単離された又はそれに由来する配列を含む。

【0027】

本開示のいくつかの実施形態では、第２の融合タンパク質は、アダプター配列、膜貫通ドメイン、及び共刺激ドメインのうちの１つ以上を更に含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ４ポリペプチド、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ヒト配列から単離された又はそれに由来する配列を含む。

【0028】

本開示のいくつかの実施形態では、第２の融合タンパク質は、アダプター配列、膜貫通ドメイン、及び共刺激ドメインのうちの１つ以上を更に含む。いくつかの実施形態では、共刺激ドメインは、ＣＤ３ζ（分化抗原群３ゼータ）ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、共刺激ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、又はＣＤ２７ポリペプチドから単離された又はそれに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、共刺激ドメインは、ヒト配列から単離された又はそれに由来する配列を含む。

【0029】

本開示のいくつかの実施形態では、第２の融合タンパク質は、アミノ末端からカルボキシ末端へと、二量体化ドメイン、リンカー、及び調節ドメインを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＤＮＡ配列、ＲＮＡ配列、アミノ酸配列、及びポリマーのうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳの配列を含むか、又は２～２０アミノ酸長を含むか、又はグリシン（Ｇ）及びセリン（Ｓ）を含む配列を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、オリゴマー化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、オリゴマー化ドメインは、ＳＥＹＥＩＲＫＡＬＥＥＬＫＡＳＴＡＥＬＫＲＡＴＡＳＬＲＡＳＴＥＥＬＫＫＮＰＳＥＤＡＬＶＥＮＮＲＬＩＶＥＨＮＡＩＩＶＥＮＮＲＩＩＡＡＶＬＥＬＩＶＲＡＩＫ（三量体）、ＴＲＴＥＩＩＲＥＬＥＲＳＬＲＥＱＥＥＬＡＫＲＬＫＥＬＬＲＥＬＥＲＬＱＲＥＧＳＳＤＥＤＶＲＥＬＬＲＥＩＫＥＬＶＥＥＩＥＫＬＡＲＥＱＫＹＬＶＥＥＬＫＲＱＤ（二量体）、ＴＲＲＫＱＥＭＫＲＬＫＫＥＭＥＫＩＲＥＥＴＥＥＶＫＫＥＩＥＥＳＫＫＲＰＱＳＥＳＡＫＮＬＩＬＩＭＱＬＬＩＮＱＩＲＬＬＡＬＱＩＲＭＬＡＬＱＬＱＥ（五量体）、又はＴＥＤＥＩＲＫＬＲＫＬＬＥＥＡＥＫＫＬＫＫＬＥＤＫＴＲＲＳＥＥＩＳＫＴＤＤＤＰＫＡＱＳＬＱＬＩＡＥＳＬＭＬＩＡＥＳＬＬＩＩＡＩＳＬＬＬＳＳＲＮＧ（六量体）の配列を含む。

【0030】

本開示の第２の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、ＮＳ３ａポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＮＳ３ａポリペプチドは、（ａ）ＭＡＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＬＧＣＩＩＴＳＡＴＧＲＤＫＮＱＶＤＧＥＶＱＶＬＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＣＶＮＧＶＣＷＴＶＹＨＧＡＧＳＫＴＬＡＧＰＫＧＰＩＴＱＭＹＴＮＶＤＱＤＬＶＧＷＰＡＰＰＧＡＲＳＭＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＶＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＳＧＨＶＶＧＩＦＲＡＡＶＣＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＭＥＴＴＭＲＳＰ、又は（ｂ）ＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＶＶＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰ、又は（ｃ）ＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＡＱＱＴＲＧＥＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＩＶＳＴＡＴＱＴＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰの配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の融合タンパク質は、ＤＮＣＲポリペプチド、ＧＮＣＲポリペプチド、又はＡＮＲポリペプチドを含む二量体化ドメインを含む。

【0031】

本開示の第２の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、ＤＮＣＲポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＤＮＣＲポリペプチドは、ＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨの配列を含む。

【0032】

本開示の第２の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、ＧＮＣＲポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＧＮＣＲポリペプチドは、ＤＩＥＫＬＣＫＫＡＥＥＥＡＫＥＡＱＥＫＡＤＥＬＲＱＲＨＰＤＳＱＡＡＥＤＡＥＤＬＡＮＬＡＶＡＡＶＬＴＡＣＬＬＡＱＥＨＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＲＡＶＩＬＡＩＭＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＥＡＶＥＲＡＩＷＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＫＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＥＡＳＫＡＡＥＥＡＱＲＨＰＤＳＱＫＡＲＤＥＩＫＥＡＳＱＫＡＥＥＶＫＥＲＣＫＳの配列を含む。

【0033】

本開示の第２の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、アポＮＳ３ａリーダー（ＡＮＲ）ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡＮＲポリペプチドは、ＧＥＬＤＥＬＶＹＬＬＤＧＰＧＹＤＰＩＨＳＤＶＶＴＲＧＧＳＨＬＦＮＦの配列を含む。

【0034】

二量体化ドメインが、ＤＮＣＲポリペプチド、ＧＮＣＲポリペプチド、又はＡＮＲポリペプチドを含む融合タンパク質を含む、本開示の第２の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、第１の融合タンパク質は、ＮＳ３ａポリペプチドを含む二量体化ドメインを含む。

【0035】

本開示の第２の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、第２の融合タンパク質は、殺傷ドメインを更に含む。いくつかの実施形態では、殺傷ドメインは、Ｃａｓ９ポリペプチド、Ｃａｓ１ポリペプチド、Ｃａｓ４ポリペプチド、ＲＩＰＫ１ポリペプチド、ＲＩＰＫ３ポリペプチド、又はこれらの触媒ドメインから単離された又はそれに由来する配列を含む。

【0036】

本開示の第２の融合タンパク質のいくつかの実施形態では、第２の融合タンパク質は、切断可能なペプチドを更に含む。いくつかの実施形態では、切断可能なペプチドは、Ｐ２Ａ配列又はＴ２Ａ配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｐ２Ａ配列は、ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰの配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ２Ａ配列は、ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧの配列を含む。

【0037】

本開示は、本開示の融合タンパク質をコードする核酸を提供する。いくつかの実施形態では、核酸は、本開示の第１の融合タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、核酸は、本開示の第２の融合タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、核酸は、本開示の第１の融合タンパク質及び第２の融合タンパク質をコードする。

【0038】

本開示の核酸のいくつかの実施形態では、核酸は、内部リボソーム進入配列（ＩＲＥＳ）を更に含む。いくつかの実施形態では、ＩＲＥＳは、ＣＣＴＣＴＣＣＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＴＡＡＣＧＴＴＡＣＴＧＧＣＣＧＡＡＧＣＣＧＣＴＴＧＧＡＡＴＡＡＧＧＣＣＧＧＴＧＴＧＣＧＴＴＴＧＴＣＴＡＴＡＴＧＴＧＡＴＴＴＴＣＣＡＣＣＡＴＡＴＴＧＣＣＧＴＣＴＴＴＴＧＧＣＡＡＴＧＴＧＡＧＧＧＣＣＣＧＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＣＴＧＴＣＴＴＣＴＴＧＡＣＧＡＧＣＡＴＴＣＣＴＡＧＧＧＧＴＣＴＴＴＣＣＣＣＴＣＴＣＧＣＣＡＡＡＧＧＡＡＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＧＴＴＧＡＡＴＧＴＣＧＴＧＡＡＧＧＡＡＧＣＡＧＴＴＣＣＴＣＴＧＧＡＡＧＣＴＴＣＴＴＧＡＡＧＡＣＡＡＡＣＡＡＣＧＴＣＴＧＴＡＧＣＧＡＣＣＣＴＴＴＧＣＡＧＧＣＡＧＣＧＧＡＡＣＣＣＣＣＣＡＣＣＴＧＧＣＧＡＣＡＧＧＴＧＣＣＴＣＴＧＣＧＧＣＣＡＡＡＡＧＣＣＡＣＧＴＧＴＡＴＡＡＧＡＴＡＣＡＣＣＴＧＣＡＡＡＧＧＣＧＧＣＡＣＡＡＣＣＣＣＡＧＴＧＣＣＡＣＧＴＴＧＴＧＡＧＴＴＧＧＡＴＡＧＴＴＧＴＧＧＡＡＡＧＡＧＴＣＡＡＡＴＧＧＣＴＣＴＣＣＴＣＡＡＧＣＧＴＡＴＴＣＡＡＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＡＡＧＧＡＴＧＣＣＣＡＧＡＡＧＧＴＡＣＣＣＣＡＴＴＧＴＡＴＧＧＧＡＴＣＴＧＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＴＣＧＧＴＧＣＡＣＡＴＧＣＴＴＴＡＣＡＴＧＴＧＴＴＴＡＧＴＣＧＡＧＧＴＴＡＡＡＡＡＡＡＣＧＴＣＴＡＧＧＣＣＣＣＣＣＧＡＡＣＣＡＣＧＧＧＧＡＣＧＴＧＧＴＴＴＴＣＣＴＴＴＧＡＡＡＡＡＣＡＣＧＡＴＧＡＴＡＡＧＣＴＴＧＣＣＡＣＡＡＣＣＣの配列を含む。

【0039】

本開示の核酸のいくつかの実施形態では、核酸は、プロモーター、エンハンサー、イントロン、エクソン、非翻訳領域（ＵＴＲ）、及び翻訳後調節要素（ＰＲＥ）のうちの１つ以上を更に含む。いくつかの実施形態では、プロモーターは、誘導性プロモーターを含む。いくつかの実施形態では、誘導性プロモーターは、ＹＢ＿ＴＡＴＡプロモーター、ヒトベータグロビンプロモーター（ｈｕＢＧ）、ｍｉｎＩＬ２プロモーター、最小ＣＭＶ（ｍｉｎＣＭＶ）プロモーター、及びＴＲＥ３Ｇプロモーターから単離された又はそれに由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、プロモーターは、構成的プロモーターを含む。いくつかの実施形態では、構成的プロモーターは、ＭＮＤプロモーター、ｈＰＧＫプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ＳＦＦＶプロモーター、ＥＦ１アルファプロモーター、ＵＢＣプロモーター、及びＣＤ４３プロモーターから単離された又はそれに由来する配列を含む。

【0040】

本開示は、本開示の核酸を含むベクターを提供する。いくつかの実施形態では、核酸は、本開示の融合タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、核酸は、本開示の第１の融合タンパク質及び第２の融合タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ベクターは、本開示の第１の融合タンパク質をコードする第１の核酸及び本開示の第２の核酸をコードする第２の核酸を含む。いくつかの実施形態では、第１のベクターが本開示の第１の融合タンパク質をコードする核酸を含み、第２のベクターが本開示の第２の融合タンパク質を含む。

【0041】

本開示のベクターのいくつかの実施形態では、ベクターは、哺乳動物細胞内で核酸の発現を引き起こすことができる発現ベクターを含む。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、プラスミドを含む。いくつかの実施形態では、発現ベクターは、クローニングベクターである。

【0042】

本開示のベクターのいくつかの実施形態では、ベクターは、核酸を哺乳動物細胞に導入することができる送達ベクターを含む。いくつかの実施形態では、送達ベクターは、ウイルスベクター、非ウイルスベクター、リポソーム、ミセル、ポリマーソーム、及びナノ粒子のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、ウイルスゲノムから単離された又はそれに由来する１つ以上の配列を含む。

【0043】

本開示は、本開示の融合タンパク質、本開示の核酸、又は本開示のベクターを含む細胞を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ヒト細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、体細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、幹細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ヒト胚性幹細胞ではない。いくつかの実施形態では、細胞は、エクスビボ又はインビトロにある。いくつかの実施形態では、細胞は、インビボにある。いくつかの実施形態では、細胞は、免疫細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｔ細胞又はその前駆体である。いくつかの実施形態では、前駆体は、造血幹細胞（ＨＳＣ）である。

【0044】

本開示の第１の融合タンパク質及び本開示の第２の融合タンパク質を発現する細胞を含む、本開示の細胞のいくつかの実施形態では、細胞は、小分子誘導剤を更に含む。いくつかの実施形態では、小分子誘導剤は、ダノプレビルを含む。小分子誘導剤がダノプレビルを含む実施形態を含む、いくつかの実施形態では、第１の融合タンパク質又は第２の融合タンパク質のいずれかの二量体化ドメインは、ＤＮＣＲポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、小分子誘導剤は、グラゾプレビルを含む。小分子誘導剤がグラゾプレビルを含む実施形態を含む、いくつかの実施形態では、第１の融合タンパク質又は第２の融合タンパク質のいずれかの二量体化ドメインは、ＧＮＣＲポリペプチドを含む。

【0045】

本開示の第１の融合タンパク質及び本開示の第２の融合タンパク質を発現する細胞を含む、本開示の細胞のいくつかの実施形態では、細胞は、阻害剤を更に含む。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＮＳ３ａ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、阻害剤は、小分子を含む。いくつかの実施形態では、（ａ）第１の融合タンパク質がＮＳ３ａポリペプチドを含む二量体化ドメインを含み、及び第２の融合タンパク質がＡＮＲポリペプチドを含む二量体化ドメインを含み、又は（ｂ）第１の融合タンパク質がＡＮＲポリペプチドを含む二量体化ドメインを含み、及び第２の融合タンパク質がＮＳ３ａポリペプチドを含む二量体化ドメインを含み、並びに阻害剤は、ダノプレビル若しくはグラゾプレビルを含む。

【0046】

本開示は、本開示の融合タンパク質、本開示の核酸、本開示のベクター、又は本開示の細胞を含む組成物を提供する。

【0047】

本開示の第１の融合タンパク質及び本開示の第２の融合タンパク質を含む組成物を含む、本開示の組成物のいくつかの実施形態では、組成物は、小分子誘導剤を更に含む。いくつかの実施形態では、小分子誘導剤は、ダノプレビルを含む。小分子誘導剤がダノプレビルを含む実施形態を含む、いくつかの実施形態では、第１の融合タンパク質又は第２の融合タンパク質のいずれかの二量体化ドメインは、ＤＮＣＲポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、小分子誘導剤は、グラゾプレビルを含む。小分子誘導剤がグラゾプレビルを含む実施形態を含む、いくつかの実施形態では、第１の融合タンパク質又は第２の融合タンパク質のいずれかの二量体化ドメインは、ＧＮＣＲポリペプチドを含む。

【0048】

本開示の第１の融合タンパク質及び本開示の第２の融合タンパク質を発現する組成物を含む、本開示の組成物のいくつかの実施形態では、組成物は、阻害剤を更に含む。いくつかの実施形態では、阻害剤は、ＮＳ３ａ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、阻害剤は、小分子を含む。いくつかの実施形態では、（ａ）第１の融合タンパク質がＮＳ３ａポリペプチドを含む二量体化ドメインを含み、及び第２の融合タンパク質がＡＮＲポリペプチドを含む二量体化ドメインを含み、又は（ｂ）第１の融合タンパク質がＡＮＲポリペプチドを含む二量体化ドメインを含み、及び第２の融合タンパク質がＮＳ３ａポリペプチドを含む二量体化ドメインを含み、並びに阻害剤は、ダノプレビル若しくはグラゾプレビルを含む。

【0049】

本開示は、本開示の組成物と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。

【0050】

本開示は、疾患又は障害の治療のための薬剤の製造における、本開示の融合タンパク質、本開示の核酸、本開示のベクター、本開示の細胞、本開示の組成物、又は本開示の医薬組成物の使用を提供する。いくつかの実施形態では、疾患又は障害は、自己免疫疾患又は障害、炎症性疾患又は障害、免疫不全疾患又は障害、及び増殖性疾患又は障害のうちの１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、疾患又は障害は、がんを含む。いくつかの実施形態では、疾患又は障害は、感染症を含む、又は感染性疾患に起因する疾患若しくは障害を含む。いくつかの実施形態では、疾患又は障害は、遺伝子疾患又は障害を含む。

【0051】

本開示は、疾患又は障害の治療のための、本開示の融合タンパク質、本開示の核酸、本開示のベクター、本開示の細胞、本開示の組成物、又は本開示の医薬組成物の使用を提供する。

【0052】

本開示の使用のいくつかの実施形態では、疾患又は障害は、自己免疫疾患又は障害、炎症性疾患又は障害、免疫不全疾患又は障害、虚血性疾患又は障害、血液疾患又は障害、骨疾患又は障害、神経疾患又は障害、心疾患又は障害、血管疾患又は障害、代謝疾患又は障害、皮膚疾患又は障害、消化器疾患又は障害、ミトコンドリア疾患又は障害、筋肉疾患又は障害、肝臓疾患又は障害、腎臓疾患又は障害、聴覚疾患又は障害、眼疾患又は障害、及び増殖性疾患又は障害のうちの１つ以上を含む。

【0053】

本開示の使用のいくつかの実施形態では、疾患又は障害は、がんを含む。いくつかの実施形態では、がんは、成人における急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、成人における急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、副腎がん、肛門がん、基底及び扁平上皮細胞皮膚がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、成人における脳及び脊髄腫瘍、小児における脳及び脊髄腫瘍、乳がん、男性における乳がん、青年におけるがん、小児におけるがん、若年成人におけるがん、原発不明がん、子宮頸がん、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、結腸直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、ユーイングファミリー腫瘍、眼がん（眼内黒色腫）、胆嚢がん、消化管神経内分泌（カルチノイド）腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、頭頸部がん、ホジキンリンパ腫、カポジ肉腫、腎臓がん、喉頭及び下咽頭がん、白血病、小児における白血病、肝臓がん、肺がん、肺カルチノイド腫瘍、リンパ腫、皮膚リンパ腫、悪性中皮腫、黒色腫皮膚がん、メルケル細胞皮膚がん、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔及び副鼻腔がん、上咽頭がん、神経芽腫、非ホジキンリンパ腫、小児における非ホジキンリンパ腫、口腔（口）及び中咽頭（喉）がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、膵神経内分泌腫瘍（ＮＥＴ）、陰茎がん、下垂体腫瘍、前立腺がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、皮膚がん、小腸がん、軟部組織肉腫、胃がん、精巣がん、胸腺がん、甲状腺がん、子宮肉腫、膣がん、外陰がん、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、並びにウィルムス腫瘍のうちの１つ以上を含む。

【0054】

本開示の使用のいくつかの実施形態では、疾患又は障害は、感染症を含む、又は感染性疾患に起因する疾患若しくは障害を含む。

【0055】

本開示の使用のいくつかの実施形態では、疾患又は障害は、遺伝子疾患又は障害を含む。

【0056】

本開示は、有効量の本開示の融合タンパク質、本開示の核酸、本開示のベクター、本開示の細胞、本開示の組成物、又は本開示の医薬組成物を対象に投与することを含む、疾患又は障害を治療する方法であって、疾患又は障害の徴候又は症状の重症度が低下し、それにより、疾患又は障害を治療する、方法を提供する。

【0057】

本開示は、有効量の本開示の融合タンパク質、本開示の核酸、本開示のベクター、本開示の細胞、本開示の組成物、又は本開示の医薬組成物、又は本開示の医薬組成物を対象に投与することを含む、疾患又は障害を予防する方法であって、疾患又は障害の徴候又は症状の発症又は再発が遅延又は抑制され、それにより、疾患又は障害を予防する、方法を提供する。

【0058】

本開示の方法のいくつかの実施形態では、疾患又は障害は、自己免疫疾患又は障害、炎症性疾患又は障害、免疫不全疾患又は障害、虚血性疾患又は障害、血液疾患又は障害、骨疾患又は障害、神経疾患又は障害、心疾患又は障害、血管疾患又は障害、代謝疾患又は障害、皮膚疾患又は障害、消化器疾患又は障害、ミトコンドリア疾患又は障害、筋肉疾患又は障害、肝臓疾患又は障害、腎臓疾患又は障害、聴覚疾患又は障害、眼疾患又は障害、及び増殖性疾患又は障害のうちの１つ以上を含む。

【0059】

本開示の方法のいくつかの実施形態では、疾患又は障害は、がんを含む。いくつかの実施形態では、がんは、成人における急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、成人における急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、副腎がん、肛門がん、基底及び扁平上皮細胞皮膚がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、成人における脳及び脊髄腫瘍、小児における脳及び脊髄腫瘍、乳がん、男性における乳がん、青年におけるがん、小児におけるがん、若年成人におけるがん、原発不明がん、子宮頸がん、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、結腸直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、ユーイングファミリー腫瘍、眼がん（眼内黒色腫）、胆嚢がん、消化管神経内分泌（カルチノイド）腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、頭頸部がん、ホジキンリンパ腫、カポジ肉腫、腎臓がん、喉頭及び下咽頭がん、白血病、小児における白血病、肝臓がん、肺がん、肺カルチノイド腫瘍、リンパ腫、皮膚リンパ腫、悪性中皮腫、黒色腫皮膚がん、メルケル細胞皮膚がん、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、鼻腔及び副鼻腔がん、上咽頭がん、神経芽腫、非ホジキンリンパ腫、小児における非ホジキンリンパ腫、口腔（口）及び中咽頭（喉）がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、膵神経内分泌腫瘍（ＮＥＴ）、陰茎がん、下垂体腫瘍、前立腺がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、皮膚がん、小腸がん、軟部組織肉腫、胃がん、精巣がん、胸腺がん、甲状腺がん、子宮肉腫、膣がん、外陰がん、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、並びにウィルムス腫瘍のうちの１つ以上を含む。

【0060】

本開示の方法のいくつかの実施形態では、疾患又は障害は、感染症を含む、又は感染性疾患に起因する疾患若しくは障害を含む。

【0061】

本開示の方法のいくつかの実施形態では、疾患又は障害は、遺伝子疾患又は障害を含む。

【0062】

本開示は、有効量の本開示の融合タンパク質、本開示の核酸、本開示のベクター、本開示の細胞、本開示の組成物、又は本開示の医薬組成物、又は本開示の医薬組成物を対象に投与することを含む、疾患又は障害を予防する方法であって、疾患又は障害の徴候又は症状の発症又は再発が遅延又は抑制され、それにより、疾患又は障害を予防する、方法を提供する。

【0063】

本開示は、（ａ）第１の二量体化ポリペプチドに連結された第１のシグナル伝達ドメインを含む第１の融合タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドと、（ｂ）第２の二量体化ポリペプチドに連結された第２のシグナル伝達ドメイン又はオリゴマー化ドメインを含む第２の融合タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドとを含む、１つ以上のベクターを含むポリヌクレオチドセットであって、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの相互作用が小分子の存在によって媒介されるように第１の二量体化ポリペプチド及び第２の二量体化ポリペプチドが選択される、ポリヌクレオチドセットを提供する。

【0064】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、細胞内のシグナル伝達機能は、小分子の細胞への投与に対して誘導性である。

【0065】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、小分子は、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの結合を媒介する。

【0066】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、小分子は、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの結合を破壊する。

【0067】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、小分子は、ダノプレビル及びグラゾプレビルからなる群から選択される。

【0068】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、（ａ）第１の小分子が第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの結合を媒介し、（ｂ）第２の小分子が第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの結合を破壊し、（ｃ）第２の小分子が第３の二量体化ポリペプチドの第１の二量体化ポリペプチドへの結合を媒介することができ、（ｄ）第３の二量体化ポリペプチドがシグナル伝達ドメインに連結されている。

【0069】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、第２の小分子は、第１の小分子を打ち負かすことによって第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの結合を破壊する。

【0070】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、（ａ）第１の小分子がグラゾプレビル又はその類似体若しくは誘導体であり、（ｂ）第２の小分子がダノプレビル又はその類似体若しくは誘導体である。

【0071】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、第１の融合タンパク質及び第２の融合タンパク質の一方又は両方が細胞質タンパク質である。

【0072】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、第１の融合タンパク質及び第２の融合タンパク質の一方又は両方が膜貫通タンパク質である。

【0073】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、第１の融合タンパク質及び第２の融合タンパク質の一方又は両方が膜貫通ドメインを含む。

【0074】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、（ａ）第１の融合タンパク質及び第２の融合タンパク質の一方が膜貫通タンパク質であり、（ｂ）第１の融合タンパク質及び第２の融合タンパク質の一方が細胞質タンパク質である。

【0075】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドセットは、第１の二量体化ポリペプチド又は第２の二量体化ポリペプチドに連結された複数のシグナル伝達ドメインを含む。

【0076】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドセットは、第１の二量体化ポリペプチド又は第２の二量体化ポリペプチドに連結された１つ又は複数のタンパク質ドメインを有する膜貫通受容体を含む。

【0077】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、第１の二量体化ポリペプチドに連結されたシグナル伝達ドメインは、第２の二量体化ポリペプチドに連結されたシグナル伝達ドメインと同一であるか、又は実質的に同一である。

【0078】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、第１の二量体化ポリペプチドに連結されたシグナル伝達ドメインは、第２の二量体化ポリペプチドに連結されたシグナル伝達ドメインとは異なるか、又は実質的に異なる。

【0079】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドセットは、（ａ）第１の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクター、及び（ｂ）第２の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む少なくとも２つのベクターを含む。

【0080】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、ベクター骨格は、ポリヌクレオチドセットを含む。いくつかの実施形態では、ベクター骨格は、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、エプスタインバーウイルスベクター、パポバウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、レトロウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、及びトランスポゾンベクターの骨格からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ベクター骨格は、相同性指向性修復ベクターを含む。

【0081】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、染色体がポリヌクレオチドセットを含む。

【0082】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、第１の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド及び第２の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、第１の融合タンパク質と第２の融合タンパク質との融合を防止するポリヌクレオチド配列を含む分離要素によって分離されている。いくつかの実施形態では、分離要素は、リボソームスキッピング配列を含むポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、分離要素は、少なくとも２つのリボソームスキッピング配列を含むポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、分離要素は、Ｐ２ａ及び／又はＴ２ａを含むポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、分離要素は、Ｐ２ａ、Ｔ２ａ、Ｔ２ａ－ＲＦＰ－Ｐ２ａ、Ｐ２ａ－Ｔ２ａ、Ｔ２ａ－Ｐ２ａ、及びＩＲＥＳからなる群から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、分離要素は、構成的プロモーターを含むポリヌクレオチド配列を含む。

【0083】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、（ａ）二量体化ポリペプチドに連結されたシグナル伝達ドメインがキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の一部であり、（ｂ）小分子の投与がＴ細胞シグナル伝達機能を調節する。

【0084】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、（ａ）第１の融合タンパク質が、ＣＤ３ζドメインを欠く膜貫通ＣＡＲの細胞質末端に連結されたＮＳ３ａを含み、（ｂ）第２の融合タンパク質が、ＣＤ３ζドメインに連結されたＡＮＲペプチドを含み、小分子がＣＡＲ Ｔ細胞シグナル伝達を下方制御する。

【0085】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、（ａ）第１の融合タンパク質が、ＣＤ３ζドメインを欠く膜貫通ＣＡＲの細胞質末端に連結されたＮＳ３ａを含み、（ｂ）第２の融合タンパク質が、ＣＤ３ζドメインに連結されたＤＮＣＲ２（若しくはＤＮＣＲ２＿１～ＤＮＣＲ２＿３４及びＤＮＣＲ２－３ｒｅｐを含むが、これらに限定されないその設計バリアント）又はＧＮＣＲ１（若しくはＧＮＣＲ１－３ｒｅｐ、Ｇ３３、及びＧ３８を含むが、これらに限定されないその設計バリアント）を含み、小分子の投与がＣＡＲ Ｔ細胞シグナル伝達を活性化する。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、膜貫通ドメイン及び／又は共刺激ドメインを更に含む。

【0086】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、（ａ）第１のシグナル伝達ドメイン及び第２のシグナル伝達ドメインが殺傷ドメインを含み、（ｂ）小分子の投与が細胞死を誘導する。

【0087】

本開示のポリヌクレオチドセットのいくつかの実施形態では、第１のシグナル伝達ドメイン及び第２のシグナル伝達ドメインのいずれか又は両方が、カスパーゼ－９、カスパーゼ－１、カスパーゼ－４、ＲＩＰＫ１、又はＲＩＰＫ３、それらの変異バリアント、及び前述のうちのいずれかの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第１のシグナル伝達ドメイン及び第２のシグナル伝達ドメインのいずれか又は両方が、カスパーゼ－９又はそのバリアントの触媒ドメインを含む。いくつかの実施形態では、（ａ）第１のシグナル伝達ドメインがカスパーゼ－９又はそのバリアントの触媒ドメインを含み、（ｂ）第２のシグナル伝達ドメインがカスパーゼ－９又はそのバリアントの触媒ドメインを含む。いくつかの実施形態では、（ａ）第１のシグナル伝達ドメインがカスパーゼ－９又はそのバリアントの触媒ドメインを含み、（ｂ）第２の二量体化ポリペプチドがホモオリゴマー化ドメインに連結されている。いくつかの実施形態では、（ａ）第１の二量体化ポリペプチドが、殺傷ドメインに連結されたＤＮＣＲ２（若しくはＤＮＣＲ２＿１～ＤＮＣＲ２＿３４及びＤＮＣＲ２－３ｒｅｐを含むが、これらに限定されないその設計バリアント）又はＧＮＣＲ１（若しくはＧＮＣＲ１－３ｒｅｐ、Ｇ３３、及びＧ３８を含むが、これらに限定されないそのバリアント）の群から選択され、（ｂ）第２の二量体化ポリペプチドが、ＮＳ３ａであり、二量体－ＮＳ３ａＨ１、三量体－ＮＳ３ａＨ１、五量体－ＮＳ３ａＨ１、六量体－ＮＳ３ａ、又はそれらのバリアントからなる群から選択されるホモオリゴマー化ドメインに連結されている。いくつかの実施形態では、（ａ）第１の二量体化ポリペプチドが、ＤＮＣＲ２（若しくはＤＮＣＲ２＿１～ＤＮＣＲ２＿３４及びＤＮＣＲ２－３ｒｅｐを含むが、これらに限定されないその設計バリアント）又はＧＮＣＲ１（若しくはＧＮＣＲ１－３ｒｅｐ、Ｇ３３、及びＧ３８を含むが、これらに限定されないそのバリアント）からなる群から選択され、（ｂ）第２の二量体化ポリペプチドが、ＣＡＲ又は他のホモオリゴマー受容体に連結されたＮＳ３ａである。

【0088】

本開示は、本開示のポリヌクレオチドセットを含む細胞を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は、原核細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、酵母細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ヒト細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、インビボにおけるヒト細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、エクスビボにおけるヒト細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、幹細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、多能性幹細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、人工多能性幹細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、造血幹細胞である。

【0089】

本開示は、本開示のポリヌクレオチドセットのポリペプチドセットを使用して幹細胞を改変することを含む、幹細胞分化をもたらす方法を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は、がん細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、がんと診断されたヒト対象由来の非がん細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、免疫細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、白血球、リンパ球、Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、エフェクターＴ細胞、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞、メモリーＴ細胞、自己反応性Ｔ細胞、疲弊Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、及びマクロファージからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、細胞は、心細胞、肺細胞、筋細胞、上皮細胞、膵細胞、皮膚細胞、ＣＮＳ細胞、ニューロン、ミオサイト、骨格筋細胞、平滑筋細胞、肝細胞、腎細胞、及びグリア細胞からなる群から選択される。

【0090】

本開示は、本開示のポリヌクレオチドを含む、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変された細胞を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、又はＩＬＣ細胞である。

【0091】

本開示は、産生細胞株であって、その細胞株の細胞が本開示のポリヌクレオチドセットを含む、産生細胞株を提供する。

【0092】

本開示は、目的とする遺伝子から目的とするポリペプチド産物を産生する方法であって、（ａ）請求項１～３８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドセットを使用して細胞株を改変して、産生細胞株を産出することと、（ｂ）産生細胞株を培養して、目的とする産物を産生することとを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、目的とするポリペプチド産物は、治療用タンパク質又はペプチドを含む。いくつかの実施形態では、目的とするポリペプチド産物は、ウイルスを含む。いくつかの実施形態では、ウイルスは、アデノウイルス、レンチウイルス、バキュロウイルス、エプスタインバーウイルス、パポバウイルス、ワクシニアウイルス、ヘルペスウイルス、単純ヘルペスウイルス、レトロウイルス、及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）からなる群から選択される。

【0093】

本開示は、産生細胞株であって、その細胞株の細胞が本開示のポリヌクレオチドセットを産生する、産生細胞株を提供する。

【0094】

本開示は、産生細胞株であって、その細胞株の細胞がウイルスカプシドにパッケージングされた本開示のポリヌクレオチドセットを産生する、産生細胞株を提供する。いくつかの実施形態では、ウイルスカプシドは、アデノウイルス、レンチウイルス、バキュロウイルス、エプスタインバーウイルス、パポバウイルス、ワクシニアウイルス、ヘルペスウイルス、単純ヘルペスウイルス、レトロウイルス、及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）のカプシドからなる群から選択される。

【0095】

本開示は、本開示のポリヌクレオチドセットのポリヌクレオチドセットを含むウイルスカプシドを提供する。いくつかの実施形態では、ウイルスカプシドは、アデノウイルス、レンチウイルス、バキュロウイルス、エプスタインバーウイルス、パポバウイルス、ワクシニアウイルス、ヘルペスウイルス、単純ヘルペスウイルス、レトロウイルス、及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）のカプシドからなる群から選択される。

【0096】

本開示は、本開示のウイルスカプシドを産生する細胞を提供する。いくつかの実施形態では、ウイルスカプシドは、アデノウイルス、レンチウイルス、バキュロウイルス、エプスタインバーウイルス、パポバウイルス、ワクシニアウイルス、ヘルペスウイルス、単純ヘルペスウイルス、レトロウイルス、及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）のカプシドからなる群から選択される。

【0097】

本開示は、本開示のポリヌクレオチドセットを含む組成物を提供する。

【0098】

本開示は、ＣＡＲ療法を必要とする対象を治療するための本開示の組成物の使用を提供する。

【0099】

本開示は、本開示のポリヌクレオチドセットを含むキットを提供する。

【0100】

本開示は、操作された細胞を作製する方法であって、本開示のいずれかのポリヌクレオチドセットのポリヌクレオチドを細胞にトランスフェクトすることを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、キメラポリペプチドは、細胞内で発現される。いくつかの実施形態では、本方法は、その必要がある対象に細胞を投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、対象に小分子を投与することを更に含む。

【0101】

本開示は、その必要がある対象においてＴ細胞媒介性免疫応答を制御する方法であって、有効量の本開示の細胞の細胞を対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、自己Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、本方法は、対象に、本開示の小分子を投与することを更に含む。

【0102】

本開示は、対象において標的細胞集団又は組織に対するＴ細胞媒介性免疫反応を刺激する方法であって、有効量の本開示の細胞の本開示の細胞を対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、自己Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、本方法は、対象に、本開示の小分子を投与することを更に含む。

【0103】

本開示は、その必要がある対象に抗腫瘍免疫を提供する方法であって、有効量の本開示の細胞の本開示の細胞を対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、自己Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、本方法は、対象に、本開示の小分子を投与することを更に含む。

【0104】

本開示は、その必要がある対象においてがんを治療する方法であって、有効量の本開示の細胞の本開示の細胞を対象に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、自己Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、本方法は、対象に、本開示の小分子を投与することを更に含む。

【図面の簡単な説明】

【0105】

【図1】図１Ａは、小分子薬物によって調節されて細胞シグナル伝達活性を破壊又は誘導することができる、分割キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の一般化アーキテクチャの概略図である。図１Ｂは、オフスイッチＡＮＲ ＣＡＲ、オンスイッチＤＮＣＲ ＣＡＲ、及びオンスイッチＧＮＣＲ ＣＡＲの概略図である。

【図2】小分子薬物に応答して殺傷ドメイン（例えば、カスパーゼ－９）のホモオリゴマー化を誘導する設計の概略図である。

【図3】Ｊｅｋｏ１細胞又はＪｅｋｏ１－ＲＯＲ１－ＫＯ細胞と共培養したＣＡＲ発現Ｊｕｒｋａｔ細胞におけるＣＤ６９発現の小分子薬物調節誘導を示すプロットである。

【図4A】調節可能ＣＡＲによる、その同族誘導剤又は破壊剤小分子薬物の存在下又は不在下での標的細胞殺傷を示すプロットのパネルである。

【図4B】図４Ａの、それぞれ、Ｂｃｌ－ｘＬ／Ｂａｄ、ＮＳ３ａ／ＡＮＲ、ＮＳ３ａ／ＧＮＣＲ１、又はＮＳ３ａ／ＤＮＣＲ２を発現するＴ細胞からのサイトカインＩＦＮγ及びＩＬ－２の産生を示すプロットのパネルである。

【図5】図５Ａは、二重機能オンスイッチ／安全スイッチ調節可能Ｔ細胞ＣＡＲの概略図である。図５Ｂは、グラゾプレビル又はダノプレビルの存在下及び不在下でのＪｕｒｋａｔ ＣＤ３ζシグナル伝達レポーター株における、それぞれ、ＣＡＲシグナル伝達及び殺傷パーセントを示す一対のプロットである。

【図6】図６Ａは、グラゾプレビル又はダノプレビルの存在下及び不在下でのＪｕｒｋａｔ ＣＤ３ζシグナル伝達レポーター株における、それぞれ、ＣＡＲシグナル伝達及び薬物誘導細胞死を示す一対のプロットである。図６Ｂは、グラゾプレビル処理からダノプレビル処理に切り替えたＪｕｒｋａｔ ＣＤ３ζシグナル伝達レポーター細胞における、それぞれ、ＣＡＲシグナル伝達及び薬物誘導細胞死を示す一対のプロットである。

【図7】図７Ａは、カスパーゼ－９殺傷ドメインを有する二本鎖直接二量体化設計ＮＣＤＣの概略図である。図７Ｂは、二本鎖直接二量体化設計ＮＣＤＣの薬物濃度の関数として殺傷パーセントを示すプロットである。

【図8A】ＣＡＲ－ＮＳ３ａ－ｃａｓｐ９及びホモオリゴマーヘリックス束－ＮＳ３ａカスパーゼ－９殺傷スイッチの概略図である。

【図8B】図８Ａの鋳型二量体化設計の殺傷活性パーセントを示すプロットである。

【図9】図９Ａは、最小化されたＤＮＣＲ２バージョンＤ１及びＤ９のモデルの概略図である。図９Ｂは、図９Ａの小型化設計の殺傷活性パーセントを示すプロットである。

【図10】一連の形質導入レベルでＦＫＢＰ（Ｆ３６Ｖ）融合殺傷ドメインを発現する、それぞれ、Ｊｕｒｋａｔ細胞及び初代Ｔ細胞における、殺傷パーセントを示す一対のプロットである。

【発明を実施するための形態】

【0106】

詳細な説明
核酸及び関連用語
いくつかの実施形態では、「核酸」、「核酸分子」、「ヌクレオチド」、「ヌクレオチド配列」、「ポリヌクレオチド」という用語、及びそれらの文法的変形は、互換的に使用されてもよく、リボヌクレオシド（アデノシン、グアノシン、ウリジン、若しくはシチジン；「ＲＮＡ分子」）若しくはデオキシリボヌクレオシド（デオキシアデノシン、デオキシグアノシン、デオキシチミジン、若しくはデオキシシチジン；「ＤＮＡ分子」）のリン酸エステルポリマー形態、又はそれらの任意のホスホエステル類似体、例えば、一本鎖形態若しくは二本鎖ヘリックスのいずれかのホスホロチオエート及びチオエステルを指し得る。一本鎖核酸配列は、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）又は一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）を指す。二本鎖ＤＮＡ－ＤＮＡヘリックス、ＤＮＡ－ＲＮＡヘリックス、及びＲＮＡ－ＲＮＡヘリックスが可能である。

【0107】

いくつかの実施形態では、「核酸」、特にＤＮＡ又はＲＮＡ分子は、その分子の一次構造及び二次構造のみを指してもよく、いずれの特定の三次形態にも限定しない。したがって、この用語には、とりわけ、線形又は円形ＤＮＡ分子（例えば、制限断片）、プラスミド、スーパーコイルＤＮＡ及び染色体に見られる二本鎖ＤＮＡが含まれる。特定の二本鎖ＤＮＡ分子の構造を考察する際に、ＤＮＡの非転写鎖（すなわち、メッセンジャーＲＮＡ又はｍＲＮＡに相同な配列を有する鎖）に沿って、５’から３’の方向に左から右に配列を記述する通常の慣習に従って配列が提供される。別段の指示がない限り、全ての核酸配列及びヌクレオチド配列は、５’から３’の配向で左から右に記述される。

【0108】

ヌクレオチドは、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨される、それらの一般に知られている１文字記号で言及される。したがって、「Ａ」はアデニンを表し、「Ｃ」はシトシンを表し、「Ｇ」はグアニンを表し、「Ｔ」はチミンを表し、「Ｕ」はウラシルを表す。

【0109】

いくつかの実施形態では、「ポリヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、それらの類似体、又はそれらの混合物を含む、任意の長さ又はタイプのヌクレオチドのポリマーを指す。この用語は、分子の一次構造を指す。したがって、この用語には、三本鎖、二本鎖、及び一本鎖デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）及びリボ核酸（ＲＮＡ）が含まれる。この用語には、ポリヌクレオチドの、例えば、アルキル化及び／又はキャッピングによる修飾形態、並びに非修飾形態も含まれる。より具体的には、「ポリヌクレオチド」には、スプライスされているかスプライスされていないかにかかわらず、ｍＲＮＡを含む、ポリデオキシリボヌクレオチド（２－デオキシ－Ｄ－リボースを含む）及びポリリボヌクレオチド（Ｄ－リボースを含む）、プリン塩基又はピリミジン塩基のＮ－グリコシド又はＣ－グリコシドである任意の他のタイプのポリヌクレオチド、並びにヌクレオチド骨格を含む他のポリマー、例えば、ポリアミド（例えば、ペプチド核酸「ＰＮＡ」）及びポリモルホリノポリマー、並びに他の合成配列特異的核酸ポリマー（但し、ポリマーがＤＮＡ及びＲＮＡに見られるような塩基対合及び塩基スタッキングを可能にする立体配置で核酸塩基を含むことを条件とする）が含まれる。

【0110】

いくつかの実施形態では、本開示のベクターは、本開示の核酸配列及び骨格配列を含む。

【0111】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＤＮＡ、例えば、ベクターに挿入されたＤＮＡを含む。他の態様では、ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡを含む。いくつかの態様では、ｍＲＮＡは、合成ｍＲＮＡである。いくつかの実施形態では、合成ｍＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む。いくつかの実施形態では、ある特定のクラスの全ての核酸塩基が非天然核酸塩基で置き換えられている（例えば、ポリヌクレオチド中の全てのウリジンを非天然核酸塩基、例えば、５－メトキシウリジンで置き換えることができる）。

【0112】

いくつかの実施形態では、「発現」という用語は、プロモーターによって引き起こされる特定のヌクレオチド配列の転写及び／又は翻訳を指す。

【0113】

いくつかの実施形態では、「発現ベクター」という用語は、細胞内のポリペプチド発現のために設計されたプラスミド、ウイルス、又は他の核酸を指す。ベクター又は構築物は、遺伝子を宿主細胞に導入するために使用され、それにより、ベクターが細胞内のポリメラーゼと相互作用して、ベクター／構築物内でコードされたタンパク質を発現する。発現ベクターは、染色体外で細胞内に存在し得るか、又は染色体に組み込まれ得る。発現ベクターは、ベクターを、原核生物、真核生物、又は好ましくはそれらの両方（例えば、シャトルベクター）における複製及び統合に好適なものにする追加の配列を含み得る。本開示のポリヌクレオチドは、発現ベクターの構成要素として提供され得る。

【0114】

いくつかの実施形態では、「クローニングベクター」という用語は、ポリヌクレオチドのコピーを産生するために設計されたプラスミド、ウイルス、又は他の核酸を指す。クローニングベクターは、転写及び翻訳開始配列、転写及び翻訳終結配列、並びにポリアデニル化シグナルを含み得る。かかる構築物は、典型的には、５’ＬＴＲ、ｔＲＮＡ結合部位、パッケージングシグナル、第二鎖ＤＮＡ合成起点、及び３’ＬＴＲ、又はそれらの一部を含む。本開示のポリヌクレオチドは、クローニングベクターの構成要素として提供され得、これを使用して、本開示のポリヌクレオチドを産生することができる。

【0115】

いくつかの実施形態では、「プロモーター」とは、遺伝子の転写がどこで開始され、転写がどの方向に継続するかを示すヌクレオチド配列を指す。

【0116】

いくつかの実施形態では、「コードする」とは、定義されたヌクレオチド配列（例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、及びｍＲＮＡ）又は定義されたアミノ酸配列のいずれかを有する生物学的プロセスにおける他のポリマー及び高分子の合成のための鋳型として機能するポリヌクレオチド中の特定のヌクレオチド配列（例えば、遺伝子、ｃＤＮＡ、又はｍＲＮＡ）の能力を指す。したがって、遺伝子、ｃＤＮＡ、又はＲＮＡは、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳が細胞又は他の生物系内でタンパク質を産生する場合、タンパク質をコードする。ヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一であり、かつ通常は配列表に提供されるコード鎖、及び遺伝子又はｃＤＮＡの転写の鋳型として使用される非コード鎖の両方を、その遺伝子又はｃＤＮＡのタンパク質又は他の産物をコードするとみなすことができる。

【0117】

別段の指定がない限り、「アミノ酸配列をコードする」ヌクレオチド配列（本開示のキメラポリペプチドを「コードする」ポリヌクレオチドを含む）は、互いの縮重バージョンであり、かつ同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列を含む。

【0118】

ポリペプチド及び関連用語
アミノ酸は、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨される、それらの一般に知られている３文字記号又は１文字記号のいずれかで言及される。アミノ酸残基は、以下のように省略され、略語が括弧内に示されている：アラニン（Ａｌａ；Ａ）、アスパラギン（Ａｓｎ；Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ；Ｄ）、アルギニン（Ａｒｇ；Ｒ）、システイン（Ｃｙｓ；Ｃ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ；Ｅ）、グルタミン（Ｇｌｎ；Ｑ）、グリシン（Ｇｌｙ；Ｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ；Ｈ）、イソロイシン（Ｉｌｅ；Ｉ）、ロイシン（Ｌｅｕ；Ｌ）、リジン（Ｌｙｓ；Ｋ）、メチオニン（Ｍｅｔ；Ｍ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ；Ｆ）、プロリン（Ｐｒｏ；Ｐ）、セリン（Ｓｅｒ；Ｓ）、スレオニン（Ｔｈｒ；Ｔ）、トリプトファン（Ｔｒｐ；Ｗ）、チロシン（Ｔｙｒ；Ｙ）、及びバリン（Ｖａｌ；Ｖ）。

【0119】

アミノ酸配列は、アミノからカルボキシの配向で左から右に記述される。

【0120】

いくつかの実施形態では、「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸サブユニットの配列を指す。いくつかの実施形態では、「ペプチド」とは、最大５０個のアミノ酸を含み得る。いくつかの実施形態では、ペプチドは、約５個、１０個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、又は５０個のアミノ酸を含み得る。「ポリペプチド」という用語は、任意の長さ、サイズ、構造、又は機能のタンパク質、ポリペプチド、及びペプチドを指し得る。「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、互換的に使用され得る。

【0121】

いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、天然又は合成的に作製若しくは修飾されたアミノ酸、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は任意の他の操作又は修飾、例えば、標識成分とのコンジュゲーションを含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、１つ以上のアミノ酸残基を含み、これらのアミノ酸残基は、対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学類似体（例えば、ホモシステイン、オルニチン、ｐ－アセチルフェニルアラニン、Ｄ－アミノ酸、及びクレアチンなどの合成アミノ酸を含む）、並びに当該技術分野で既知の他の修飾である。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、遺伝子産物、ホモログ、オルソログ、パラログ、断片、並びに前述の他の等価物、バリアント、及び類似体を含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、単一のポリペプチドを含むか、又は二量体、三量体、若しくは四量体などの多分子複合体とすることができる。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、一本鎖ポリペプチド又は多鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、多鎖ポリペプチドに見られ得るジスルフィド結合を含む。

【0122】

いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、Ｌ－アミノ酸＋グリシン、Ｄ－アミノ酸＋グリシン（インビボでＬ－アミノ酸特異的プロテアーゼに耐性を示す）、又はＤ－アミノ酸＋グリシンとＬ－アミノ酸＋グリシンの組み合わせを含む。本開示のポリペプチドは、化学的に合成され得るか、又は組換えで発現され得る。

【0123】

本開示のポリペプチドは、Ｎ末端、Ｃ末端、ポリペプチド内部、又はそれらの組み合わせに追加の残基を含み得る。これらの追加の残基は、参照ポリペプチドに対する本開示のポリペプチドの同一性パーセントを決定する際に含まれない。かかる残基は、タグを含むが、これに限定されない、使用目的に好適な任意の残基であり得る。

【0124】

いくつかの実施形態では、「タグ」という用語は、蛍光タンパク質、抗体エピトープタグ、精製タグ、ヒスチジンタグ、又はリンカーを含むが、これらに限定されない、検出可能な部分を指す。いくつかの実施形態では、本開示のタグ付けされた治療薬又は本開示のタグ付けされたリガンドは、精製目的、ポリペプチドの局在化を引き起こすことと、ポリペプチドへ機能性を追加することに好適な検出可能な部分を含む。

【0125】

いくつかの実施形態では、「キメラポリペプチド」とは、第２の源に由来する第２のアミノ酸配列に共有結合又は非共有結合で作動可能に連結された、第１の源に由来する第１のアミノ酸配列を含む任意のポリペプチドを指し、ここで、第１の源と第２の源は同じではない（２つの別個の源）。同じではない第１の源及び第２の源は、２つの異なる生物学的実体、又は同一の生物学的実体由来の２つの異なるタンパク質、又は生物学的実体及び非生物学的実体を含み得る。本開示のキメラタンパク質は、少なくとも２つの異なる生物学的源に由来するタンパク質を含み得る。生物学的源は、任意の非合成的に産生された核酸又はアミノ酸配列（例えば、ゲノム若しくはｃＤＮＡ配列、プラスミド若しくはウイルスベクター、天然ビリオン、又は上記のうちのいずれかの変異体若しくは類似体）を含み得る。合成源は、生物系（例えば、アミノ酸配列の固相合成）によってではなく、化学的に産生されたタンパク質又は核酸配列を含み得る。本開示のキメラタンパク質は、少なくとも２つの異なる合成源に由来するタンパク質、又は少なくとも１つの生物学的源及び少なくとも１つの合成源に由来するタンパク質を含み得る。本開示のキメラタンパク質は、任意の源に由来する、核酸に共有結合又は非共有結合で連結された第１の源に由来する第１のアミノ酸配列、又は任意の源に由来する小有機分子若しくは小無機分子を含み得る。キメラタンパク質は、第１のアミノ酸配列と第２のアミノ酸配列との間、又は第１のアミノ酸配列と核酸との間、又は第１のアミノ酸配列と小有機分子若しくは小無機分子との間にリンカー分子を含むことができる。

【0126】

いくつかの実施形態では、ポリペプチドの「断片」又は「切断型ポリペプチド」とは、参照配列よりも短いポリペプチドのアミノ酸配列を指し得る。いくつかの実施形態では、参照配列は、天然に存在する配列を含む又はそれからなる。参照配列と比較して、断片は、Ｎ末端又はＣ末端欠失（任意選択で切断と称される）を含み得る。あるいは、又は加えて、参照配列と比較して、断片は、ポリペプチドの任意の１つ以上のアミノ酸位置に内部欠失を含み得る。本開示のポリペプチドは、参照ポリペプチドの断片又は切断型バージョンとして提供され得る。更に、本開示のポリペプチドの全ての可能な断片及び切断型バリアントが、本開示で提供される実施形態で企図されている。

【0127】

いくつかの実施形態では、「機能的断片」という用語は、ポリペプチドの機能を保持するポリペプチド断片を指す。したがって、いくつかの実施形態では、酵素などの生理活性ペプチドの機能的断片が酵素の触媒ドメインを含むため、その機能的断片は、生物学的作用を触媒する能力を保持する。本開示のポリペプチドは、参照ポリペプチドの断片又は切断型バージョンとして提供され得る。更に、本開示のポリペプチドの全ての可能な断片及び切断型バリアントが、本開示で提供される実施形態で企図されている。いくつかの実施形態では、本開示の機能的断片は、完全長ポリペプチドと比較して機能的断片の活性又は機能的断片の有効性が修飾されたとしても、ポリペプチドの機能的を保持する。いくつかの実施形態では、本開示の機能的断片は、完全長ポリペプチドと比較して機能的断片の活性又は機能的断片の有効性が低下したとしても、ポリペプチドの機能的を保持する。

【0128】

いくつかの実施形態では、「機能的バリアント」という用語は、ポリペプチドの機能を維持する、ポリペプチド、断片、又はポリペプチドのクラスのメンバーの修飾された形態を指す。いくつかの実施形態では、本開示の機能的バリアントは、非修飾ポリペプチドと比較して機能的バリアントの活性又は機能的バリアントの有効性が修飾されたとしても、ポリペプチドの機能を保持する。いくつかの実施形態では、本開示の機能的バリアントは、非修飾ポリペプチドと比較して機能的バリアントの活性又は機能的バリアントの有効性が低下したとしても、ポリペプチドの機能を保持する。

【0129】

いくつかの実施形態では、「アミノ酸置換」という用語は、親又は参照配列（例えば、野生型配列）中に存在するアミノ酸残基を別のアミノ酸残基で置き換えることを指す。アミノ酸は、例えば、化学ペプチド合成により又は当該技術分野で既知の組み換え法により置換され得る。例えば、アミノ酸残基を代替のアミノ酸残基で置換することは、第１のアミノ酸をコードするコドンを第２のアミノ酸をコードするコドンで置換することによって行われる。本開示の様々なポリペプチド構成要素に、アミノ酸置換が提供され得る。

【0130】

いくつかの実施形態では、「保存的アミノ酸置換」とは、１つのアミノ酸残基が、化学的に類似した側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるアミノ酸置換である。酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む、類似した側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野で定義されている。したがって、ポリペプチド中のアミノ酸が、同じ側鎖ファミリー由来の別のアミノ酸で置き換えられる場合、この置換は保存的であるとみなされる。別の態様では、アミノ酸の鎖を、側鎖ファミリーメンバーの順番及び／又は組成が異なる化学的に類似した鎖で保存的に置き換えることができる。本開示の様々なポリペプチド構成要素に、保存的アミノ酸置換が提供され得る。

【0131】

いくつかの実施形態では、「非保存的アミノ酸置換」という用語は、（ｉ）正電荷側鎖を有する残基（例えば、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、若しくはＬｙｓ）が負電荷残基（例えば、Ｇｌｕ若しくはＡｓｐ）に対して若しくはそれによって置換される置換、（ｉｉ）親水性残基（例えば、Ｓｅｒ若しくはＴｈｒ）が疎水性残基（例えば、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、若しくはＶａｌ）に対して若しくはそれによって置換される置換、（ｉｉｉ）システイン若しくはプロリンが任意の他の残基に対して若しくはそれによって置換される置換、又は（ｉｖ）巨大な疎水性若しくは芳香族側鎖を有する残基（例えば、Ｖａｌ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、若しくはＴｒｐ）がより小さい側鎖を有する残基（例えば、Ａｌａ若しくはＳｅｒ）若しくは側鎖を有しない残基（例えば、Ｇｌｙ）に対して若しくはそれによって置換される置換を指し得る。本開示の様々なポリペプチド構成要素に、非保存的アミノ酸置換が提供され得る。前述の非保存的置換のうちの１つがタンパク質の機能的特性を変化させることができる可能性は、タンパク質の機能的に重要な領域に対する置換の位置にも相関し、それ故に、いくつかの非保存的置換は、生物学的特性にほとんど又は全く影響を及ぼさない可能性がある。本開示の様々なポリペプチド構成要素に、変化した構成要素の機能性を著しく変化させない非保存的アミノ酸置換が提供され得る。

【0132】

いくつかの実施形態では、「膜貫通要素」又は「膜貫通ドメイン」という用語は、細胞外要素と細胞内要素との間のポリペプチド要素を指し得る。膜貫通要素の一部分は、細胞膜内に存在する。本開示のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、膜貫通要素を含む。

【0133】

いくつかの実施形態では、「細胞内要素」又は「細胞内ドメイン」という用語は、細胞の細胞質膜の細胞質側に存在し、かつ真核細胞にシグナルを伝達するポリペプチド要素を指し得る。本開示のＣＡＲは、細胞内要素を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、真核細胞である。

【0134】

いくつかの実施形態では、「細胞内シグナル伝達要素」又は「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを形質導入し、その後、細胞を指示して特殊化機能を実行する細胞内要素の一部分を指す。いくつかの実施形態では、細胞は、真核細胞である。

【0135】

いくつかの実施形態では、「細胞外要素（Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｅｌｅｍｅｎｔ）」又は「細胞外要素（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｅｌｅｍｅｎｔ）」という用語は、細胞の細胞質膜の外側に存在するポリペプチド要素を指し得る。ＣＡＲ発現細胞内で、細胞外要素は、ＣＡＲの抗原結合要素を含み得る。いくつかの実施形態では、細胞は、真核細胞である。

【0136】

配列同一性及び関連用語
いくつかの実施形態では、２つ以上の配列は、それらが互いに１００％同一である場合、「同一」であると言われる。

【0137】

いくつかの実施形態では、「同一性」とは、ポリマー分子間の、例えば、ポリペプチド分子又はポリヌクレオチド分子間の全単量体保存を指す。例えば、タンパク質Ａがタンパク質Ｂと同一であるなど、いずれの追加の限定子を有しない「同一」とは、配列が１００％同一（１００％の配列同一性）であることを意味する。２つの配列を、例えば「７０％同一」と述べることは、例えば「７０％の配列同一性」を有すると述べることと同等である。

【0138】

いくつかの実施形態では、第１の配列中の位置が第２の配列中の対応する位置と同じアミノ酸によって占有されている場合、それらの分子は、その位置で同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップの数、及び２つの配列の最適アライメントのために導入される必要がある各ギャップの長さを考慮して、配列によって共有される同一の位置の数の関数である。配列の比較及び２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学アルゴリズムを使用して達成することができる。

【0139】

ある特定の態様では、第２のアミノ酸（又は核酸）配列に対する第１のアミノ酸（又は核酸）配列の同一性パーセンテージ（ＩＤ％）は、ＩＤ％＝１００（Ｙ／Ｚ）として計算され、式中、Ｙは、第１の配列と第２の配列を整列させた（目視検査又は特定の配列アライメントプログラムによって整列させた）際に同一の一致としてスコア化されたアミノ酸（又は核酸塩基）残基の数であり、Ｚは、第２の配列中の残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列よりも長い場合、第１の配列の第２の配列に対する同一性パーセントは、第２の配列の第１の配列に対する同一性パーセントよりも高い。

【0140】

いくつかの実施形態では、２つのポリペプチド配列の同一性パーセントの計算は、例えば、最適比較目的のために２つの配列を整列させることによって行うことができる。例えば、最適アライメントのためにギャップを第１のポリペプチド配列及び第２のポリペプチド配列の一方又は両方に導入することができ、非同一配列を比較目的のために無視することができる。ある特定の態様では、比較目的のために整列させた配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％である。次いで、対応するアミノ酸位置のアミノ酸が比較される。

【0141】

いくつかの実施形態では、配列同一性パーセントの計算のための配列アライメントの生成は、一次配列データによってのみ推進されるバイナリ配列間比較に限定されない。配列データを、構造データ（例えば、結晶性タンパク質構造）、機能データ（例えば、変異の位置）、又は系統発生データなどの異種源からのデータと統合することによって配列アライメントを生成することができることも理解されるであろう。異種データを統合して多重配列アライメントを生成する好適なプログラムは、ｗｗｗ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇで入手可能なＴ－Ｃｏｆｆｅｅであるか、あるいは、例えば、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）のウェブサイトｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａで入手可能である。配列同一性パーセントを計算するために使用される最終アラインメントを自動又は手動で精選することができることも理解されるであろう。

【0142】

好適なソフトウェアプログラムは、様々なソースから、タンパク質配列とヌクレオチド配列の両方のアライメントのために利用可能である。配列同一性パーセントを決定するための好適なプログラムの１つは、米国政府のＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なＢＬＡＳＴプログラムスイートの一部であるｂｌ２ｓｅｑである。Ｂ１２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮアルゴリズム又はＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して、２つの配列間の比較を行う。ＢＬＡＳＴＮが核酸配列を比較するために使用される一方で、ＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列を比較するために使用される。他の好適なプログラムは、例えば、ＥＭＢＯＳＳバイオインフォマティクスプログラムスイートの一部であり、かつ同様にＥＢＩから入手可能なＮｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、又はＭａｔｃｈｅｒである。配列アライメントは、ＭＡＦＦＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ（ＣｌｕｓｔａｌＷ、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ、又はＣｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａ）、ＭＵＳＣＬＥなどの当該技術分野に既知の方法を使用して行うことができる。ポリヌクレオチド又はポリペプチド参照配列と整列する単一のポリヌクレオチド又はポリペプチド標的配列内の異なる領域は各々、独自の配列同一性パーセントを有し得る。配列同一性パーセント値が小数第２位で四捨五入されることに留意されたい。例えば、８０．１１～８０．１４の値は８０．１に切り捨てられ、８０．１５～８０．１９の値は８０．２に切り上げられる。長さ値が常に整数になることにも留意されたい。

【0143】

いくつかの実施形態では、「類似性」とは、ポリマー分子間の、例えば、ポリヌクレオチド分子間及び／又はポリペプチド分子間の全関連性を指す。ポリマー分子の互いに対する類似性パーセントの計算は、類似性パーセントの計算が当該技術分野で理解されるように保存的置換を考慮に入れることを除いて、同一性パーセントの計算と同じ様式で行うことができる。類似性パーセンテージが、使用される比較規模、例えば、アミノ酸が、例えば、それらの進化的近接性、電荷、体積、柔軟性、極性、疎水性、芳香族性、等電点、抗原性、又はそれらの組み合わせに従って比較されるかに依存することが理解される。

【0144】

いくつかの実施形態では、「連結された」という用語は、Ｃ末端又はＮ末端における第１の部分の第２の部分への融合を指し得る。いくつかの実施形態では、「連結された」という用語は、第１の部分（又は第２の部分）全体を、第２の部分（又は第１の部分それぞれ）内のいずれか２つの点、例えば、アミノ酸に挿入することを指し得る。いくつかの態様では、第１の部分は、ペプチド結合又はリンカーによって第２の部分に連結される。第１の部分は、ホスホジエステル結合又はリンカーによって第２の部分に連結することができる。リンカーは、ペプチド、ポリペプチド、ヌクレオチド、ヌクレオチド鎖、又は任意の化学部分とすることができる。

【0145】

いくつかの実施形態では、「作動可能に連結された」という用語は、配列内で機能的に連結された２つ以上の要素を指し得る。いくつかの実施形態では、２つの要素は、直鎖配列に対して連続していない折り畳まれたタンパク質中で機能的に連結され得る。いくつかの実施形態では、２つの要素は、マルチシストロン性配列からの発現後に機能的に連結され得る。いくつかの実施形態では、２つの要素は、１つの要素が直接又は間接的に別の要素の発現又は機能を誘導又は阻害することができるため、機能的に連結され得る。

【0146】

いくつかの実施形態では、「天然に存在しない」という用語は、自然界に存在しないポリペプチド又はポリヌクレオチド配列を指し得る。いくつかの実施形態では、天然に存在しない配列が天然に存在する配列と比較して改変されるため、天然に存在しない配列は自然界に存在しない。いくつかの実施形態では、天然に存在しない配列が自然界では一緒に発生しない２つの天然に存在する配列の組み合わせ（例えば、キメラポリペプチド）であるため、天然に存在しない配列は自然界に存在しない。いくつかの実施形態では、天然に存在しないポリペプチドは、キメラポリペプチドである。いくつかの実施形態では、配列が自然界では見つけることができない部分（例えば、断片）を含む、すなわち、新規配列であるため、ポリペプチド又はポリヌクレオチドは天然に存在しない。本明細書に記載のポリヌクレオチドのいずれも、例えば、天然配列と比較して改変された配列を有する、天然に存在しない配列として提供され得るか、又は自然界に存在しない様式で他のポリヌクレオチドに連結されたポリヌクレオチドとして提供され得る。本明細書に記載のポリペプチドのいずれも、例えば、天然配列と比較して改変された配列を有する、天然に存在しない配列として提供され得るか、又は自然界に存在しない様式で他のポリペプチドに連結されたポリペプチドとして提供され得る。

【0147】

抗体及び関連用語
いくつかの実施形態では、「抗体」という用語は、所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、及び抗体断片を含むが、これらに限定されない、それら様々な抗体構造を指し得る。

【0148】

いくつかの実施形態では、「抗体断片」という用語は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部分を含むインタクトな抗体以外の分子を指し得る。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２、及びＦｖ断片、ｓｃＦｖ抗体断片、直鎖抗体、単一ドメイン抗体、例えば、ｓｄＡｂ（ＶＬ又はＶＨのいずれか）、ラクダ類ＶＨＨドメイン、並びに抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。本開示の目的とする遺伝子は、例えば、抗体断片を含み得る。

【0149】

いくつかの実施形態では、「一本鎖抗体」（ｓｃＦｖ）という用語は、可動性ペプチドリンカーによって連結された重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の可変領域を含む抗体断片を指し得る。

【0150】

いくつかの実施形態では、「抗原結合分子」という用語は、抗原決定基に特異的に結合する分子を指し得る。本開示の目的とする遺伝子は、例えば、抗原結合分子を含み得る。

【0151】

いくつかの実施形態では、「抗原」という用語は、免疫応答を誘発する分子を指し得る。

【0152】

いくつかの実施形態では、「キメラ抗原受容体」又は「ＣＡＲ」という用語は、抗原認識部分及び細胞活性化要素を含む融合タンパク質を指し得る。本開示のポリヌクレオチドは、ＣＡＲを産生する目的とする遺伝子を含み得る。

【0153】

いくつかの実施形態では、「ＣＡＲ Ｔ細胞」又は「ＣＡＲ Ｔリンパ球」という用語は、ＣＡＲポリペプチドを産生する能力を有するＴ細胞を指し得る。例えば、ＣＡＲを発現することができる細胞は、細胞内でのＣＡＲの発現のための核酸配列を含むＴ細胞である。本開示の細胞は、ＣＡＲ Ｔ細胞であり得る。

【0154】

いくつかの実施形態では、「共刺激要素」又は「共刺激シグナル伝達ドメイン」又は「共刺激ポリペプチド」という用語は、共刺激ポリペプチドの細胞内部分を指し得る。いくつかの実施形態では、共刺激ドメインを含むＣＡＲは、Ｔ細胞内で発現された場合、共刺激ドメインを欠くＣＡＲと比較して増加した又は増強されたＴ細胞増殖、機能、持続性、及び抗腫瘍活性を示す。ＣＤ２８又は４－１ＢＢなどの１つ以上のＴ細胞共刺激分子由来の細胞内シグナル伝達ドメインを組み込むことによって、共刺激ドメインが本開示のＣＡＲに提供され得る。

【0155】

いくつかの実施形態では、共刺激ポリペプチドは、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、及び活性化ナチュラルキラー細胞受容体のうちの１つ以上から単離された又はそれらに由来する配列を含み得る。いくつかの実施形態では、共刺激ポリペプチドは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７－Ｈ３、及びＭｙＤ８８のうちの１つ以上から単離された又はそれらに由来する配列を含み得る。

【0156】

治療有効及び関連技術
いくつかの実施形態では、「治療有効」という用語は、レシピエントに対する有益な効果の提供、例えば、対象における臨床症状のいくらかの軽減、緩和、若しくは減退、又は対象の臨床状態の改善の提供を指し得る。治療効果は、いくらかの利益が対象に提供される限り、完全又は治癒的である必要はない。

【0157】

いくつかの実施形態では、「治療有効量」という用語は、レシピエントに治療有効利益を付与するのに十分な用量を指し得る。例えば、本開示の融合タンパク質、核酸、ベクター、細胞、組成物、又は医薬組成物は、治療有効量で投与され得る。本開示の融合タンパク質、核酸、ベクター、細胞、組成物、又は医薬組成物を投与された対象は、その後、治療有効量の本開示の小分子を投与されて、本開示の融合タンパク質の二量体形成を誘導又は破壊して所望の細胞転帰をもたらすことができる。

【0158】

細胞用語
いくつかの実施形態では、「幹細胞」という用語は、様々な細胞型に分化し、かつ無期限に増殖して、より多くの同じ幹細胞を産生することができる、未分化又は部分的に分化した細胞を指し得る。

【0159】

いくつかの実施形態では、「多能性幹細胞」（ＰＳＣ）という用語は、未分化状態を無期限に維持することができ、かつ身体の全てではなくとも大部分の細胞に分化することができる細胞を指し得る。

【0160】

いくつかの実施形態では、「人工多能性幹細胞」（ｉＰＳ又はｉＰＳＣ）という用語は、体細胞から直接生成することができる多能性幹細胞を指し得る。これには、成人に由来する皮膚細胞又は血液細胞などの特殊化細胞が含まれるが、これらに限定されない。

【0161】

いくつかの実施形態では、「多分化能性」という用語は、２つ以上の細胞型に発達することができるが、多能性細胞よりも限定される細胞を指し得る。例えば、成体幹細胞及び臍帯血幹細胞は、多分化能性とみなされ得る。

【0162】

いくつかの実施形態では、「造血細胞」という用語は、造血幹細胞から生じる細胞を指し得る。これには、骨髄前駆細胞、リンパ系前駆細胞、巨核球、赤血球、マスト細胞、骨髄芽球、好塩基球、好中球、好酸球、マクロファージ、血小板、単球、ナチュラルキラー細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、及び形質細胞が含まれるが、これらに限定されない。

【0163】

いくつかの実施形態では、「Ｔリンパ球」又は「Ｔ細胞」という用語は、通常は胸腺内で発達する造血細胞を指し得る。Ｔリンパ球又はＴ細胞には、ナチュラルキラーＴ細胞、制御性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、ガンマデルタＴ細胞、及び粘膜インバリアントＴ細胞が含まれるが、これらに限定されない。

【0164】

いくつかの実施形態では、「間葉」という用語は、タンパク質及び流体のメッシュ、すなわち、細胞外マトリックスに埋め込まれた疎性細胞を含む動物組織型を指し得る。間葉は、骨、軟骨、リンパ系、及び循環系を含む身体の結合組織の大部分を生じさせる。

【0165】

いくつかの実施形態では、「間葉系細胞」という用語は、間葉組織に由来する細胞を指し得る。いくつかの事例では、本開示の細胞は、間葉系細胞であり得る。

【0166】

いくつかの実施形態では、「間葉系間質細胞」（ＭＳＣ）という用語は、インビトロで多能性分化能を有する、骨髄、脂肪、及び他の組織源から単離された紡錘形状のプラスチック接着細胞を指し得る。例えば、間葉系間質細胞は、骨芽細胞（骨細胞）、軟骨細胞（ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅ）（軟骨細胞（ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｃｅｌｌ））、ミオサイト（筋細胞）、及び脂肪細胞（ａｄｉｐｏｃｙｔｅ）（骨髄脂肪組織を生じさせる脂肪細胞（ｆａｔ ｃｅｌｌ））に分化することができる。間葉系間質細胞という用語は、科学文献において「間葉系幹細胞」という用語を置き換えることが示唆されている。いくつかの事例では、本開示の細胞は、間葉系間質細胞であり得る。

【0167】

本開示のいくつかの実施形態では、「自己細胞」とは、療法として投与され得る同じ個体から得られた細胞である（この細胞は、対象に対して自己である）。本開示の自己細胞には、造血細胞及び造血幹細胞などの幹細胞が含まれるが、これらに限定されない。

【0168】

本開示のいくつかの実施形態では、同種細胞は、療法として細胞の意図されたレシピエントではない個体から得られた細胞である（この細胞は、対象に対して同種である）。本開示の同種細胞は、本開示の方法の対象に関して免疫学的に適合性のあるドナーから選択され得る。本開示の同種細胞は、意図的ではない免疫原性を伴わずにいずれの対象への投与にも好適な「普遍的な」同種細胞を産生するように改変され得る。本開示の同種細胞には、造血細胞及び造血幹細胞などの幹細胞が含まれるが、これらに限定されない。

【0169】

いくつかの実施形態では、「トランスフェクトする」又は「形質転換する」又は「形質導入する」という用語は、外因性核酸が細胞又は宿主細胞に移送又は導入されるプロセスを指し得る。「トランスフェクトされた」又は「形質転換された」又は「形質導入された」細胞とは、外因性核酸をトランスフェクトされた、それによって形質転換された、又はそれを形質導入された細胞又はその細胞の子孫である。

【0170】

いくつかの実施形態では、「細胞療法」という用語は、治療目的のために細胞（複数可）をレシピエントに送達することを指し得る。

【0171】

小分子用語
いくつかの実施形態では、「類似体」という用語は、本明細書に記載されるように化合物又はクラスの結合特性を維持する、化合物又は化合物のクラスのメンバーの化学的に修飾された形態を指し得る。例えば、ダノプレビルの類似体は、本明細書に記載されるようにＤＮＣＲ２及びＮＳ３ａに結合する能力を保持するダノプレビルの化学的に修飾された形態を含む。

【0172】

いくつかの実施形態では、「プロドラッグ」という用語は、かかるプロドラッグが患者に投与されたときにインビボで本開示の小分子を放出する任意の共有結合担体を含み得る。本開示のプロドラッグは、修飾が日常的な操作又はインビボのいずれかで切断されて親化合物をもたらすような方法で化合物中に存在する官能基を修飾することによって調製され得る。インビボでの形質転換は、例えば、カルボン酸エステル、リン酸エステル、若しくは硫酸エステルの化学的又は酵素的加水分解、又は感受性官能基の還元若しくは酸化などの何らかの代謝プロセスの結果であり得る。本開示の範囲内のプロドラッグには、ヒドロキシ基、アミノ基、又はスルフヒドリル基が、本開示のプロドラッグが哺乳動物対象に投与されたときに切断して、それぞれ、遊離ヒドロキシル基、遊離アミノ基、又は遊離スルフヒドリル基を形成する任意の基に結合される化合物が含まれる。代謝切断によって急速に転換され得る官能基は、インビボで、本開示の化合物のカルボキシル基と反応性の基のクラスを形成する。それらには、アルカノイル（例えば、アセチル、プロピオニル、ブチリルなど）、非置換及び置換アロイル（例えば、ベンゾイル及び置換ベンゾイルなど）、アルコキシカルボニル（例えば、エトキシカルボニルなど）、トリアルキルシリル（トリメチルシリル及びトリエチシリルなど）、ジカルボン酸と形成されるモノエステル（スクシニルなど）などの基が含まれるが、これらに限定されない。本開示の小分子は、プロドラッグとして投与され得る。本開示の小分子は、プロドラッグとして対象に投与され得る。治療有効量の本開示のかかるプロドラッグが投与され得る。プロドラッグは、本開示のポリヌクレオチド、遺伝子療法ベクター、若しくは細胞の投与と同時に投与され得るか、又は本開示のポリヌクレオチド、遺伝子療法ベクター、若しくは細胞の投与後に投与され得る。

【0173】

製剤及び関連技術
いくつかの実施形態では、「薬学的に許容される」という用語は、合理的な利益／リスク比に見合った、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、又は他の問題又は合併症を伴わない、正しい医学的判断の範囲内でヒト及び動物の組織と接触させて使用するのに好適な化合物、材料、組成物、及び／又は剤形を指し得る。例えば、本開示の小分子、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、遺伝子療法ベクター、又は細胞は、組成物の一部として、薬学的に許容される担体を含む他の薬学的に許容される成分と一緒に投与され得る。

【0174】

いくつかの実施形態では、「薬学的に許容される塩」という用語は、指定された化合物がその酸又は塩基塩に変換される、本開示の小分子の誘導体を指し得る。かかる薬学的に許容される塩には、アミンなどの塩基性残基の鉱酸塩又は有機酸塩、カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩又は有機塩などが含まれるが、これらに限定されない。薬学的に許容される塩には、例えば、非毒性無機酸又は有機酸から形成される親化合物の従来の非毒性塩又は四級アンモニウム塩が含まれる。例えば、かかる従来の非毒性塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などの無機酸に由来する塩、及び酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２－アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸などの有機酸から調製された塩が含まれる。例えば、本開示の小分子は、薬学的に許容される塩として提供され得る。

【0175】

いくつかの実施形態では、「制御放出」という用語は、長時間にわたって（すなわち、１時間超にわたって）１つ以上の活性薬剤を放出することができる剤形の一部又は全てを指し得る。制御放出（ＣＲ）の特徴は、徐放（ＳＲ）、持続放出（ＰＲ）、又は長時間放出（ＥＲ）とも称され得る。本明細書で論じられる溶解プロファイルに関連して使用される場合、「制御放出」という用語は、１時間超にわたって活性薬剤を送達する本開示による剤形の部分を指す。例えば、本開示の小分子は、制御放出組成物中で投与され得る。

【0176】

いくつかの実施形態では、「即時放出」という用語は、胃液と接触すると実質的に直ちに活性薬剤を放出し、かつ約１時間以内に実質的に完全な溶解をもたらす剤形の一部又は全てを指し得る。即時放出（ＩＲ）の特徴は、瞬時放出（ＩＲ）とも称され得る。本明細書で論じられる溶解プロファイルに関連して使用される場合、「即時放出」という用語は、１時間未満にわたって活性薬剤を送達する本開示による剤形の部分を指す。本開示の小分子は、即時放出組成物中で投与され得る。

【0177】

いくつかの実施形態では、「賦形剤」という用語は、体内で活性ではない薬理学的に不活性な成分を指し得る。例えば、Ｈａｎｃｏｃｋ，Ｂ．Ｃ．，Ｍｏｓｓ，Ｇ．Ｐ．，＆ａｍｐ；Ｇｏｌｄｆａｒｂ，Ｄ．Ｊ．（２０２０）．Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ．Ｌｏｎｄｏｎ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓを参照されたく、その全開示は、参照により本明細書に組み込まれる。本開示の小分子は、投与方法及び剤形の性質に応じて、薬学的に許容される担体、希釈剤、アジュバント、賦形剤、又はビヒクル、例えば、保存剤、充填剤、ポリマー、崩壊剤、滑剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、甘味剤、香味剤、芳香剤、滑沢剤、酸性化剤、及び分注剤と混合され得る。経口剤形を製剤化するために使用され得る薬学的に許容される担体及び賦形剤を含む、かかる成分。薬学的に許容される担体には、水、エタノール、ポリオール、植物油、脂肪、ゲル形成ポリマー及び非ゲル形成ポリマーを含むワックスポリマー、並びにそれらの好適な混合物が含まれる。賦形剤の例としては、デンプン、アルファ化デンプン、Ａｖｉｃｅｌ、ラクトース、乳糖、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸二カルシウム、及びレイクブレンドが挙げられる。崩壊剤の例としては、デンプン、アルギニン酸、及びある特定の複合ケイ酸塩が挙げられる。滑沢剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、並びに高分子量ポリエチレングリコールが挙げられる。例えば、本開示の小分子、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、遺伝子療法ベクター、又は細胞は、薬学的に許容される賦形剤を含む組成物中で提供され、投与され得る。

【0178】

一般用語
本開示を通して使用される場合、「対象」という用語は、ヒトを含むが、これに限定されない任意の哺乳動物を含む。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、新生児、乳児、幼児、小児、十代の若者、成人、高齢者、１００歳以上の者である。いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも１、２、又は３つのＸ染色体を有する。いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも１つ又は２つのＹ染色体を有する。いくつかの実施形態では、対象は、本開示の疾患若しくは障害と診断されるか、又はさもなければ本開示の治療を必要とする。いくつかの実施形態では、対象は、本開示の疾患若しくは障害を発症するリスクがあるか、又はさもなければ本開示の疾患若しくは障害の予防を必要とする。

【0179】

いくつかの実施形態では、対象は、非ヒト霊長類である。いくつかの実施形態では、対象は、家畜、ウマ、イヌ、ネコ、ブタ、ウサギ、モルモット、げっ歯類、ラット、スナネズミ、及びマウスを含むが、これらに限定されない哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象は非霊長類哺乳動物であり、対象は遺伝子改変される。

【0180】

文脈上別段の明確な指示がない限り、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、それらの複数形を含む。

【0181】

「及び」は、別段の明示的な記載がない限り、「又は」と互換的に使用される。

【0182】

「及び／又は」は、２つの指定された特徴又は構成要素の各々の、他方を伴うか又は伴わない具体的な開示として解釈されるべきである。したがって、「及び／又は」は、「Ａ及び／又はＢ」などの語句で使用される場合、「Ａ及びＢ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ」（単独）、並びに「Ｂ」（単独）を含む。同様に、「及び／又は」は、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」などの語句で使用される場合、以下の態様：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；並びにＣ（単独）の各々を包含するよう意図されている。

【0183】

いくつかの実施形態では、「約」という用語は、の領域のおよそ、大体、ほぼ、又は辺りを意味する。「約」が数値範囲とともに使用される場合、これは、記載の数値の上及び下の境界を延長することによってその範囲を修正し得る。

【0184】

いくつかの実施形態では、数値範囲は、範囲を定義する数値を含む。値の範囲が記載される場合、その範囲の列挙された上限と下限との間に介在する各整数値及びその各分数も、かかる値間の各部分範囲として具体的に開示される。任意の範囲の上限及び下限を、独立して、その範囲に含めることもその範囲から除外することもでき、いずれかの限界が含まれるか、いずれの限界も含まれないか、又は両方の限界が含まれる各範囲も、本開示に包含される。したがって、範囲は、列挙された終点を含む、範囲内の値の全ての省略表現であることが理解される。例えば、１～１０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０からなる群から選択される任意の数、数の組み合わせ、又は部分範囲を含むことが理解される。

【0185】

値が明示的に記載される場合、記載された値とほぼ同じ数量又は量である値も、本開示の範囲内であることを理解されたい。組み合わせが開示される場合、その組み合わせの要素の各部分組み合わせも具体的に開示され、本開示の範囲内である。逆に、異なる要素又は要素の群が個別に開示される場合、それらの組み合わせも開示される。開示の任意の要素が複数の代替物を有すると開示される場合、各代替物が単独で又は他の代替物との任意の組み合わせで除外されるその開示の例も本明細書に開示され、開示の２つ以上の要素がかかる除外を有することができ、かかる除外を有する要素の全ての組み合わせが本明細書に開示される。

【0186】

文脈上別段の解釈が要求されない限り、発明を実施するための形態及び特許請求の範囲を通して、「含む」、「含むこと」などの単語は、排他的又は網羅的な意味ではなく包括的な意味で、すなわち、「を含むが、これらに限定されない」の意味で解釈されるべきである。

【0187】

単数形又は複数形の単語は、それぞれ、複数及び単数も含む。したがって、例えば、本明細書が、目的とする遺伝子を記載する場合、本開示は、目的とする単一の遺伝子を有するポリヌクレオチド又は目的とする複数の遺伝子を有するポリヌクレオチドを含む。

【0188】

「上記」及び「下記」、並びに類似の趣旨の単語は、本出願の任意の特定の部分ではなく、本出願を全体として指す。

【0189】

「セット」は、１つ以上の要素又は物体のセットを含む。

【0190】

単位、接頭辞、及び記号は、それらのＳｙｓｔｅｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ Ｕｎｉｔｅｓ（ＳＩ）によって認められている形態で示される。

【0191】

参照のために、かつ様々な節を見つけるのを助けるために、見出しが本明細書に含まれている。これらの見出しは、見出しに関して記載される概念の範囲を限定するようには意図されていない。かかる概念は、本明細書を通して適用可能であり得る。

【0192】

本開示が明確さ及び理解の目的のために例証及び実施例によりある程度詳細に記載されているが、ある特定の変更及び修正を加えることができることは当業者には明らかであろう。「本開示」などへの言及は、本開示の多種多様な実施形態又は態様のうちのいずれかへの言及として意図されており、本開示を単一の実施形態又は態様に限定するものではない。本開示を通して使用される場合、「態様」及び「実施形態」という用語は、互換的である。本開示の「ある特定の」、「いくつかの」、又は「他の」態様又は実施形態との関連で論じられる特徴は、本開示の任意の実施形態で見つけられ得るが、これらの事例では、特徴は、これらの強調された実施形態において好ましい特徴とみなされ得る。

【0193】

発明を実施するための形態及び実施例は、本開示の範囲を本明細書に記載の実施形態及び実施例に限定するものとして解釈されるべきではなく、むしろ、本開示の真の範囲及び趣旨に含まれる全ての修正及び代替を包含するものとして解釈されるべきである。

【0194】

小分子によって調節される細胞シグナル伝達発現システム
本開示は、受容体媒介性細胞活性化及びシグナル伝達を制御するための、小分子によって調節される細胞シグナル伝達発現システムを提供する。本システムは、概して、第１のシグナル伝達ドメイン及び第１の二量体化ポリペプチドを含む第１の融合タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドと、第２のシグナル伝達ドメイン及び第２の二量体化ポリペプチドを含む第２の融合タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドとを含む、ポリヌクレオチドセットであって、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの相互作用が小分子の存在によって媒介される、ポリヌクレオチドセットを含む。

【0195】

いくつかの実施形態では、小分子は、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの結合を媒介する。

【0196】

いくつかの実施形態では、小分子は、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの結合を破壊する。

【0197】

いくつかの実施形態では、第１の小分子は、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの結合を媒介し、第２の小分子は、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの結合を破壊し、第２の小分子は、第３の二量体化ポリペプチドの第１の二量体化ポリペプチドへの結合を媒介することができ、第３の二量体化ポリペプチドは第３のシグナル伝達ドメインに連結されている。

【0198】

いくつかの実施形態では、本システムは、二量体化ポリペプチドに連結されたシグナル伝達ドメインがキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の一部であり、かつ小分子の投与がＴ細胞シグナル伝達機能を調節するポリヌクレオチドセットを含む。

【0199】

いくつかの実施形態では、本システムは、ＣＤ３ζドメインを欠く膜貫通ＣＡＲの細胞質末端に連結された第１の二量体化ポリペプチドを含む第１の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドセットを含み、第２の融合タンパク質は、ＣＤ３ζドメインに連結された第２の二量体化ポリペプチドを含み、小分子の投与がＣＡＲ Ｔ細胞シグナル伝達を媒介する。

【0200】

いくつかの実施形態では、本システムは、ＣＤ３ζドメインを欠く膜貫通ＣＡＲの細胞質末端に連結されたＮＳ３ａを含む第１の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドセットを含み、第２の融合タンパク質は、ＣＤ３ζドメインに連結されたＡＮＲを含み、小分子の投与がＣＡＲ Ｔ細胞シグナル伝達を下方制御する。

【0201】

いくつかの実施形態では、本システムは、ＣＤ３ζドメインを欠く膜貫通ＣＡＲの細胞質末端に連結されたＮＳ３ａを含む第１の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドセットを含み、第２の融合タンパク質は、ＣＤ３ζドメインに連結されたＤＮＣＲ２（若しくはその設計バリアント）又はＧＮＣＲ１（若しくはその設計バリアント）を含み、小分子の投与がＣＡＲ Ｔ細胞シグナル伝達を活性化する。

【0202】

いくつかの実施形態では、本システムは、第１のシグナル伝達ドメイン及び第２のシグナル伝達ドメインが殺傷ドメインであり、かつ小分子の投与が細胞死を誘導するポリヌクレオチドセットを含む。

【0203】

本開示の小分子によって調節される細胞シグナル伝達システムは、治療用途などの様々な合成生物学用途における広範な標的分子（例えば、シグナル伝達タンパク質）の活性を調節するのに有用である。

【0204】

一実施形態では、本開示の小分子によって調節される細胞シグナル伝達システムは、細胞療法用途に使用されて、細胞集団をプログラムして治療機能を実行する及び／又は調節することができる。

【0205】

一態様では、本開示の小分子によって調節される細胞シグナル伝達システムは、がん療法で使用されるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）及び／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）細胞を調節するために使用され得る。より具体的には、本開示の小分子によって調節される細胞シグナル伝達システムを使用して、ＣＡＲ及び／又はＴＣＲを下方制御し、多くの既存のＴ細胞療法で観察される望ましくない疲弊表現型をもたらし得る過剰なＣＡＲ／ＴＣＲシグナル伝達を阻害することができる。

【0206】

一実施形態では、本開示の小分子によって調節される細胞シグナル伝達システムは、遺伝子療法用途に使用され得る。

【0207】

小分子によって調節される二量体
本開示は、小分子によって調節されるポリペプチド二量体を利用して、シグナル伝達ドメインを共局在させ、それにより、シグナル伝達機能を調節する。例えば、二量体は、細胞外シグナル伝達ドメインと細胞質（細胞内）シグナル伝達ドメインを共局在させ、それにより、目的とするシグナル伝達分子の活性を調節することができる。二量体化ポリペプチドの相互作用による二量体化複合体の形成は、小分子の存在によって調節することができる。

【0208】

二量体を使用して、膜貫通受容体のシグナル伝達ドメインを共局在させることができる。例えば、二量体を使用して、
（ｉ）細胞質シグナル伝達ドメインを欠く細胞外シグナル伝達ドメインに連結された第１の二量体化ポリペプチドを含む第１の融合タンパク質と、
（ｉｉ）対応する細胞質シグナル伝達ドメインに連結された第２の二量体化ポリペプチドを含む第２の融合タンパク質と
を含む膜貫通ＣＡＲのシグナル伝達ドメインを、共局在させることができ、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの相互作用が小分子の存在によって媒介される。

【0209】

第１の二量体化ポリペプチド及び第２の二量体化ポリペプチドは、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの相互作用が小分子の存在によって媒介されるように選択され得る。いくつかの事例では、小分子は、二量体の構築を媒介し得る。他の事例では、小分子は、二量体の分解を媒介し得る。更に他の事例では、第１の小分子が二量体の構築を媒介し得る一方で、第２の小分子が第１の小分子を移動させ、それにより、二量体の分解を媒介し得る。なお他の事例では、第１の小分子が二量体の構築を媒介し得る一方で、第２の小分子が第１の小分子を打ち負かし、二量体化のために第３の二量体化ポリペプチドを動員し得る。

【0210】

小分子によって調節されるポリペプチド二量体は、Ｃ型肝炎ウイルスプロテアーゼＮＳ３ａ／４ａタンパク質（以下、ＮＳ３ａと称される）又はその修飾体を第１の二量体化ポリペプチドとして、かつ「リーダー」タンパク質を第２の二量体化ポリペプチドとして含み得る。リーダータンパク質は、例えば、ＮＳ３ａタンパク質の特定の薬物結合状態を認識するように選択され得る。ＮＳ３ａタンパク質及びＮＳ３ａリーダータンパク質は、参照により全体が本明細書に組み込まれる、２０２０年６月１１日に公開されたＢａｋｅｒらの国際特許公開第ＷＯ２０２０１１７７７８号、表題「Ｒｅａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ」に記載されている。

【0211】

ＮＳ３ａは、複数の薬物インプットを組み込み、異なる操作されたリーダータンパク質を二量体化パートナーとして使用して、薬物インプットを多様なアウトプットに変換することができる。ダノプレビル／ＮＳ３ａ複合体リーダー、グラゾプレビル／ＮＳ３ａ複合体リーダー、及びＡＮＲ／ＮＳ３ａ複合体リーダーからのＮＳ３ａタンパク質及び多面応答アウトプットは、参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｆｏｉｇｈｔ，Ｇ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２０１９）３７：１２０９－１２１６、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ－Ｂｒｙａｎｔ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ（２０１９）１４１：３３５２－３３５５、及びＫｕｇｌｅｒ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０１２）２８７：３９２２４－３９２３２に記載されている。

【0212】

一例では、二量体を使用して、
（ｉ）ＮＳ３ａポリペプチド及び細胞質シグナル伝達ドメインを欠く細胞外シグナル伝達ドメインを含む第１の融合タンパク質と、
（ｉｉ）リーダーポリペプチド及び対応する細胞質シグナル伝達ドメインを含む第２の融合タンパク質と
を含む膜貫通ＣＡＲのシグナル伝達ドメインを、共局在させることができ、ＮＳ３ａとリーダー結合パートナーとの間の相互作用が小分子薬物の存在によって制御され得る。

【0213】

いくつかの実施形態では、二量体のために選択されたリーダーは、小分子薬物ダノプレビルの存在下でＮＳ３ａを認識して結合し、それにより、薬物誘導（「オンスイッチ」）システムを提供するように設計された、ダノプレビル／ＮＳ３複合体リーダー（ＤＮＣＲ）ポリペプチド（又はその最小化／修飾バリアント）である。一例では、ＤＮＣＲポリペプチドは、ＤＮＣＲ２である。Ｆｏｉｇｈｔ，Ｇ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２０１９）３７：１２０９－１２１６を参照されたい。

【0214】

いくつかの実施形態では、二量体のために選択されたリーダーは、小分子薬物グラゾプレビルの存在下でＮＳ３ａを認識して結合し、それにより、薬物誘導（「オンスイッチ」）システムを提供するように設計された、グラゾプレビル／ＮＳ３複合体リーダー（ＧＮＣＲ）ポリペプチド（又はその最小化／修飾バリアント）である。一例では、ＧＮＣＲタンパク質は、ＧＮＣＲ１である。Ｆｏｉｇｈｔ，Ｇ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２０１９）３７：１２０９－１２１６を参照されたい。

【0215】

いくつかの実施形態では、二量体のために選択されたリーダーは、アポＮＳ３ａ複合体リーダー（ＡＮＲ）ペプチド（又はその最小化／修飾バリアント）である。ＡＮＲは、ＮＳ３ａと基本複合体を形成し、これがＮＳ３ａ標的薬物によって破壊され、それにより、薬物破壊可能システムが提供される。Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ－Ｂｒｙａｎｔ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ（２０１９）１４１：３３５２－３３５５、Ｋｕｇｌｅｒ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０１２）２８７：３９２２４－３９２３２、及びＦｏｉｇｈｔ，Ｇ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２０１９）３７：１２０９－１２１６を参照されたい。

【0216】

キメラ抗原受容体
目的とするシグナル伝達分子は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含み得る。ＣＡＲは、抗原結合要素である細胞外要素、受容体を細胞膜に固定する膜貫通要素、及び少なくとも１つの細胞内要素を含む融合タンパク質とすることができる。これらのＣＡＲ要素は、当該技術分野で既知であり、例えば、参照により全体が組み込まれる、２０１４年８月２８日に公開された米国特許出願第２０１４／０２４２７０１号、表題「Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ」に記載されている。ＣＡＲは、少なくとも細胞外抗原結合要素、膜貫通要素、及び刺激分子に由来する機能的シグナル伝達要素を含む細胞内（細胞質）シグナル伝達要素を含むポリヌクレオチドから発現された組換えポリペプチドとすることができる。

【0217】

刺激分子は、例えば、Ｔ細胞受容体複合体と会合したゼータ鎖であり得る。

【0218】

細胞質シグナル伝達要素は、例えば、少なくとも１つの共刺激分子に由来する１つ以上の機能的シグナル伝達要素を含み得る。

【0219】

共刺激分子は、例えば、４－１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）、ＣＤ２７、及び／又はＣＤ２８から選択され得る。

【0220】

ＣＡＲは、細胞外抗原結合要素、膜貫通要素、及び刺激分子に由来する機能的シグナル伝達要素を含む細胞内シグナル伝達要素を含むキメラ融合タンパク質であり得る。

【0221】

ＣＡＲは、細胞外抗原結合要素、膜貫通要素、並びに共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達要素及び刺激分子に由来する機能的シグナル伝達要素を含む細胞内シグナル伝達要素を含むキメラ融合タンパク質を含み得る。

【0222】

ＣＡＲは、細胞外抗原結合要素、膜貫通要素、並びに１つ以上の共刺激分子に由来する２つの機能的シグナル伝達要素及び刺激分子に由来する機能的シグナル伝達要素を含む細胞内シグナル伝達要素を含むキメラ融合タンパク質であり得る。

【0223】

ＣＡＲは、細胞外抗原結合要素、膜貫通要素、並びに１つ以上の共刺激分子に由来する少なくとも２つの機能的シグナル伝達要素及び刺激分子に由来する機能的シグナル伝達要素を含む細胞内シグナル伝達要素を含むキメラ融合タンパク質を含み得る。

【0224】

ＣＡＲは、ＣＡＲ融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ末端）に任意選択のリーダー配列を含み得る。ＣＡＲは、細胞外抗原結合要素のＮ末端にリーダー配列を更に含み得、この場合、リーダー配列は、任意選択で、細胞プロセシング及びＣＡＲの細胞膜への局在化の最中に抗原認識要素（例えば、ｓｃＦｖ）から切断される。

【0225】

図１Ａは、小分子薬物によって調節されて細胞シグナル伝達活性を破壊又は誘導することができる、分割キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の一般化アーキテクチャの概略図である。この図は、第１の融合タンパク質が、第１の二量体化ポリペプチドに融合された抗原結合ドメイン又は「抗原感知」ドメインである細胞外要素を含み（「二量体半分１」）、第２の融合タンパク質が、第２の二量体化ポリペプチドに融合された細胞質シグナル伝達ドメインを含む（「二量体半分２」）、本システムの発現された構成要素１１０を示す。第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの相互作用は、シグナル伝達活性を破壊する（すなわち、オフにする）又は誘導する（すなわち、オンにする）小分子薬物によって調節することができる。

【0226】

いくつかの実施形態では、小分子によって調節されるＣＡＲ発現システムは、「オフスイッチ」ＣＡＲであり得る。ペプチドアポ－ＮＳ３ａリーダー（ＡＮＲ）及びＮＳ３ａによって形成された化学的に破壊可能な二量体について説明されている。参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ－Ｂｒｙａｎｔ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ（２０１９）１４１：３３５２－３３５５を参照されたい。

【0227】

いくつかの実施形態では、小分子によって調節されるＣＡＲ発現システムは、「オンスイッチ」ＣＡＲであり得る。設計された化学的に誘導された二量体ダノプレビル－ＮＳ３ａ複合体リーダー（ＤＮＣＲ）／ダノプレビル／ＮＳ３ａ及びグラゾプレビル－ＮＳ３ａ複合体リーダーＧＮＣＲ１／グラゾプレビル／ＮＳ３ａを使用した２つの「オンスイッチ」ＣＡＲについて説明されている。参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｆｏｉｇｈｔ，Ｇ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２０１９）３７：１２０９－１２１２を参照されたい。

【0228】

図１Ｂは、オフスイッチＡＮＲ ＣＡＲ、オンスイッチＤＮＣＲ ＣＡＲ、及びオンスイッチＧＮＣＲ ＣＡＲの概略図１２０である。この図は、ＡＮＲ ＣＡＲ １２５、ＤＮＣＲ ＣＡＲ １３０、及びＧＮＣＲ ＣＡＲ １３５の発現された構成要素を示す。ＡＮＲ ＣＡＲ １２５は初期設定でオンになっており、ダノプレビル又はグラゾプレビルを含む任意のＮＳ３ａ阻害剤によってオフにすることができる。ＤＮＣＲ ＣＡＲ １３０及びＧＮＣＲ ＣＡＲ １３５は初期設定でオフになっており、それぞれ、ダノプレビル又はグラゾプレビルの添加によってオンにすることができる。

【0229】

殺傷ドメイン
目的とするシグナル伝達分子は、細胞死につながるシグナル伝達カスケードを開始することができる死又は殺傷ドメインを含み得る。細胞療法及び遺伝子療法の有用性は、患者における有害反応の場合に治療用細胞における細胞死の特異的誘導を可能にする安全機構によって増強され得る。安全機構として細胞死を使用するこの概念は、ＡＰ１９０３（リミデュシド）によって二量体化される小分子誘導性ホモ二量体ＦＫＢＰ－Ｆ３６Ｖ（ｉＣａｓｐ９）に融合されたカスパーゼ－９を用いたアポトーシスの誘導によって以前に実証されている（参照により全体が本明細書に組み込まれる、ｄｉ Ｓｔａｉｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１１）３６５：１６７３－１６８３）。化学的に誘導可能なヘテロ二量体は、ＦＫＢＰ／ラパマイシン／ＦＲＢ二量体（ｒａｐａＣａｓｐ９）で実証されているように、カスパーゼ－９のオリゴマー化を開始するために使用することもできる（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｓｔａｖｒｏｕ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１８）２６：１２６６－１２７６）。

【0230】

本開示は、小分子によって調節される二量体システムＤＮＣＲ／ダノプレビル／ＮＳ３ａ及びＧＮＣＲ／グラゾプレビル／ＮＳ３ａを利用して、殺傷ドメインの薬物誘導ホモオリゴマー化によって細胞死を活性化する。小分子によって調節される二量体システムであるＤＮＣＲ／ダノプレビル／ＮＳ３ａシステム及びＧＮＣＲ／グラゾプレビル／ＮＳ３ａシステムを使用して、ホモオリゴマー化（例えば、カスパーゼ－９、カスパーゼ－１、カスパーゼ－４、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３）によって活性化される任意の殺傷ドメインを調節することができる。

【0231】

図２は、小分子薬物に応答して殺傷ドメイン（例えば、カスパーゼ－９）のホモオリゴマー化を誘導する設計の概略図２００である。この図は、二本鎖ヘテロ二量体安全スイッチ２１０、一本鎖ヘテロ二量体安全スイッチ２１５、並びにホモオリゴマーＮＳ３ａ足場安全スイッチ２２０ａ及び２２０ｂの発現された構成要素を示す。二本鎖ヘテロ二量体安全スイッチ２１０は、殺傷ドメインに融合された小分子誘導二量体の各半分、ＮＳ３ａ及びＤＮＣＲ又はＧＮＣＲを含む。一例では、ＮＳ３ａ殺傷ドメインは、小分子薬物ダノプレビルの存在下でのみ、ＤＮＣＲ殺傷ドメインに結合する。一本鎖ヘテロ二量体安全スイッチ２１５は、小分子薬物の添加が多量体化、すなわち、鋳型ホモオリゴマー化を誘導するように、殺傷ドメインと単一の構築物で連結された小分子誘導二量体の両半分を含む。ホモオリゴマーＮＳ３ａ足場安全スイッチ２２０ａ及び２２０ｂは、ＣＡＲ（安全スイッチ２２０ａ）又はホモオリゴマーヘリックス束（安全スイッチ２２０ｂ）などのホモ二量体受容体に連結されたＮＳ３ａ二量体化ポリペプチド及び殺傷ドメインに融合された他の二量体化ポリペプチドを含み、これにより、小分子薬物の添加が殺傷ドメインのオリゴマー化を媒介するようになる。タンパク質ホモオリゴマーヘリックス束の設計は、参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｂｏｙｋｅｎ，Ｄ．Ｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０１６）３５２：６８０－６８７に記載されている。

【0232】

１．１．１．ポリヌクレオチド
本開示のシステムは、概して、第１の融合タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド及び第２の融合タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドセットを含む。

【0233】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドセットは、
（ｉ）第１のシグナル伝達ドメイン及び第１の二量体化ポリペプチドを含む第１の融合タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチド、
（ｉｉ）第２のシグナル伝達ドメイン及び第２の二量体化ポリペプチドを含む第２の融合タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）第１のポリヌクレオチド及び／又は第２のポリヌクレオチドに作動可能に連結された１つ以上のプロモーター配列、
（ｉｖ）第１の融合タンパク質と第２の融合タンパク質との融合を防止するポリヌクレオチド配列を含む任意選択の分離要素、並びに
（ｖ）１つ以上の任意選択の調節配列
を含み得るポリヌクレオチド構成要素を含み、
第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチド、プロモーター配列、並びに任意選択の分離要素及び調節要素は、目的とするシグナル伝達機能を発現する及び調節制御するように構成されている。

【0234】

第１の融合タンパク質及び第２の融合タンパク質、プロモーター配列、並びに任意選択の分離要素及び調節配列をコードするポリヌクレオチドは、目的とするシグナル伝達機能を発現する及び調節制御するようにベクター骨格内に構成されていてもよい。

【0235】

様々な実施形態では、融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド構成要素は、融合タンパク質を分離する分離要素をコードするポリヌクレオチド配列を含み得る。

【0236】

いくつかの実施形態では、分離要素は、Ｐ２ａ及びＴ２ａからなる群から選択されるリボソームスキッピング配列を含み得る。

【0237】

いくつかの実施形態では、分離要素は、Ｔ２ａ－ＲＦＰ－Ｐ２ａ、Ｐ２ａ－Ｔ２ａ、及びＴ２ａ－Ｐ２ａからなる群から選択される少なくとも２つのリボソームスキッピング配列を含むポリヌクレオチド配列を含み得る。

【0238】

いくつかの実施形態では、分離要素は、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含み得る。

【0239】

いくつかの実施形態では、分離要素は、構成的プロモーター配列を含み得る。

【0240】

いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド構成要素は、第１のポリヌクレオチド及び／又は第２のポリヌクレオチドに作動可能に連結された１つ以上の構成的プロモーター配列をコードする。

【0241】

様々な実施形態では、構成的プロモーター配列は、ＭＮＤ、ｈＰＧＫ、ＣＭＶ、ＣＡＧ、ＳＦＦＶ、ＥＦ１アルファ、ＵＢＣ、及びＣＤ４３からなる群から選択される構成的プロモーター配列を含み得る。

【0242】

いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチド及び／又は第２のポリヌクレオチドは、ポリＡからなる群から選択される１つ以上の任意選択の調節配列をコードし得る。

【0243】

いくつかの実施形態では、第１の融合タンパク質及び／又は第２の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、シグナル伝達ドメインポリペプチドと二量体化ポリペプチドを分離する可動性リンカー配列を更に含む。

【0244】

いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチド又は第２のポリヌクレオチドがＮＳ３ａ二量体化ポリペプチド（又はその設計バリアント）をコードし、第１のポリヌクレオチド又は第２のポリヌクレオチドの他方が、ＤＮＣＲ２（若しくはＤＮＣＲ２＿１～ＤＮＣＲ２＿３４及びＤＮＣＲ２－３ｒｅｐを含むが、これらに限定されないその設計バリアント）又はＧＮＣＲ１（若しくはＧＮＣＲ１－３ｒｅｐ、Ｇ３３、及びＧ３８を含むが、これらに限定されないその設計バリアント）からなる群から選択される対応するリーダー二量体化ポリペプチドをコードする。

【0245】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドセットは、ＣＤ３ζドメインを欠く膜貫通ＣＡＲの細胞質末端に連結されたＮＳ３ａ二量体化ポリペプチドを含む第１の融合タンパク質と、及びＣＤ３ζドメインに連結されたＡＮＲ二量体化ポリペプチドを含む第２の融合タンパク質とをコードし、小分子がＣＡＲ Ｔ細胞シグナル伝達を下方制御する。

【0246】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドセットは、ＣＤ３ζドメインを欠く膜貫通ＣＡＲの細胞質末端に連結されたＮＳ３ａ二量体化ポリペプチドを含む第１の融合タンパク質と、ＣＤ３ζドメインに連結されたＤＮＣＲ２（若しくはその設計バリアント）又はＧＮＣＲ１（若しくはその設計バリアント）を含む第２の融合タンパク質とをコードし、小分子がＣＡＲ Ｔ細胞シグナル伝達を活性化する。

【0247】

いくつかの実施形態では、第１の融合タンパク質及び／又は第２の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、膜貫通ドメイン及び／又は共刺激ドメインを更にコードする。

【0248】

いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドは、殺傷ドメインを含むシグナル伝達ドメインをコードし、小分子の投与が細胞死を誘導する。

【0249】

いくつかの実施形態では、第１の融合タンパク質及び／又は第２の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、カスパーゼ－９、カスパーゼ－１、カスパーゼ－４、ＲＩＰＫ１、若しくはＲＩＰＫ３、又はそれらのバリアントからなる群から選択される殺傷ドメインを含む。

【0250】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドセットは、カスパーゼ－９（又はそのバリアント）の触媒ドメインを含む第１のシグナル伝達ドメインと、カプターゼ－９（又はそのバリアント）の触媒ドメインを含む第２のシグナル伝達ドメインとをコードする。

【0251】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドセットは、カスパーゼ－９（又はそのバリアント）の触媒ドメインを含むシグナル伝達ドメインに連結された第１の二量体化ポリペプチドをコードし、第２の二量体化ポリペプチドは、ホモオリゴマー化ドメインに連結されている。

【0252】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドセットは、殺傷ドメインに連結されたＤＮＣＲ２（若しくはＤＮＣＲ２＿１～ＤＮＣＲ２＿３４及びＤＮＣＲ２－３ｒｅｐを含むが、これらに限定されないその設計バリアント）又はＧＮＣＲ１（若しくはＧＮＣＲ１－３ｒｅｐ、Ｇ３３、及びＧ３８を含むが、これらに限定されないそのバリアント）からなる群から選択される第１の二量体化ポリペプチドをコードし、第２の二量体化ポリペプチドは、ＮＳ３ａであり、二量体－ＮＳ３ａＨ１（配列番号４２）、三量体－ＮＳ３ａＨ１（配列番号４５）、五量体－ＮＳ３ａＨ１（配列番号４４）、六量体－ＮＳ３ａ（配列番号４３）、又はそれらのバリアントからなる群から選択されるホモオリゴマー化ドメインに連結されている。

【0253】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドセットは、殺傷ドメインに連結されたＤＮＣＲ２（若しくはＤＮＣＲ２＿１～ＤＮＣＲ２＿３４及びＤＮＣＲ２－３ｒｅｐを含むが、これらに限定されないその設計バリアント）又はＧＮＣＲ１（若しくはＧＮＣＲ１－３ｒｅｐ、Ｇ３３、及びＧ３８を含むが、これらに限定されないそのバリアント）からなる群から選択される第１の二量体化ポリペプチドをコードし、第２の二量体化ポリペプチドは、ＮＳ３ａであり、ＣＡＲ又は他のホモオリゴマー受容体に連結されている。

【0254】

ベクター及びベクター構成
本開示のポリヌクレオチドは、ベクターの一部として提供され得る。好適なベクターの例としては、発現ベクター、ウイルスベクター、及びプラスミドベクターが挙げられる。発現ベクターには、プラスミド、ファージミド、ウイルス、及びそれらの誘導体が含まれ得る。

【0255】

いくつかの態様では、ウイルスベクターは、遺伝子編集技法の実装に有用なポリペプチドなどの遺伝子編集ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み得る。かかる遺伝子編集技法の例としては、ＲＮＡ／ＤＮＡ誘導型エンドヌクレアーゼ（例えば、ＣＲＩＳＰＲ（クラスター化された規則的に間隔が空けられた短い回文リピート））、ＴＡＬＥＮ（転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ）、ＺＦＮ（ジンクフィンガーヌクレアーゼ）、リコンビナーゼ、メガヌクレアーゼ、又はウイルス組み込みが挙げられる。

【0256】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチドは、相同性指向性修復（ＨＤＲ）ベクターの一部として提供され得る。相同性指向性修復機構を使用して、ポリヌクレオチドセットを染色体に組み込むことができる。ポリヌクレオチドセットを染色体に組み込むために使用され得る機構の例としては、配列特異的ヌクレアーゼ、例えば、トランスポサーゼ、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ＺＦヌクレアーゼ、ＴＡＬＥヌクレアーゼ、リコンビナーゼ、及び当該技術分野で既知の他の相同組換え標的ベクターが挙げられる。

【0257】

ベクター構成要素としては、概して、シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサー要素、プロモーター、及び転写終結配列のうちの１つ以上が含まれるが、これらに限定されない。真核宿主細胞で使用するためのベクターは、目的とする成熟タンパク質若しくはポリペプチドのＮ末端に特異的切断部位を有するシグナル配列又は他のポリペプチドをコードすることもできる。選択されたシグナル配列は、好ましくは、宿主細胞によって認識及び処理される（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される）ものである。哺乳動物細胞発現では、哺乳動物シグナル配列に加えて、ウイルス分泌リーダーも使用され得る。真核宿主細胞で使用される発現ベクターは、典型的には、転写の終結及びｍＲＮＡの安定化に必要な配列も含む。かかる配列は、真核又はウイルスＤＮＡ又はｃＤＮＡの５’非翻訳領域から一般に入手可能であり、時折、３’非翻訳領域からも入手可能である。１つの有用な転写終結構成要素は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。

【0258】

発現ベクター及びクローニングベクターは、選択マーカーとも呼ばれる選択遺伝子を含み得る。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質若しくは他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート、若しくはテトラサイクリンに対する耐性を付与するタンパク質、（ｂ）関連性のある場合、栄養要求性欠損を補完するタンパク質、又は（ｃ）複合培地から入手不能な重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。

【0259】

本開示のポリヌクレオチドは、いくつかの事例では、単一のベクターの一部として提供され得る。本開示のポリヌクレオチドは、少なくとも２つのベクター、すなわち、第１のポリヌクレオチドを含む第１のベクター及び第２のポリヌクレオチドを含む第２のベクターのセットの一部として提供され得る。いくつかの事例では、本開示のポリヌクレオチドは、３つのベクター、すなわち、第１のポリヌクレオチドを含む第１のベクター、第２のポリヌクレオチドを含む第２のベクター、及び第３のポリヌクレオチドを含む第３のベクターのセットとして提供され得る。

【0260】

本開示のポリヌクレオチドとの使用に好適なベクターの例としては、アデノウイルスベクター、レトロウイルスベクター、例えば、レンチウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、エプスタインバーウイルスベクター、パポバウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、及びトランスポゾンベクターが挙げられる。本開示のポリヌクレオチドは、相同性指向性修復ベクターの一部として提供され得る。

【0261】

ある特定のウイルスベクターは、非必須遺伝子が目的とする遺伝子で置き換えられている非細胞変性真核ウイルスに基づく。非細胞変性ウイルスには、レトロウイルスが含まれ、そのライフサイクルは、ゲノムウイルスＲＮＡのＤＮＡへの逆転写を伴い、その後、プロウイルスが宿主細胞ＤＮＡに組み込まれる。レトロウイルスは、ヒト遺伝子療法試験に承認されている。複製欠損の（すなわち、所望のタンパク質の合成を指向することができるが、感染性粒子を製造することができない）レトロウイルスが最も有用である。かかる遺伝子改変レトロウイルス発現ベクターは、インビボでの遺伝子の高効率形質導入に一般的な有用性がある。複製欠損レトロウイルスを産生するための標準プロトコル（外因性遺伝物質をプラスミドに組み込むステップ、パッケージング細胞株にプラスミドをトランスフェクションするステップ、パッケージング細胞株によって組換えレトロウイルスを産生するステップ、ウイルス粒子を組織培養培地から収集するステップ、及び標的細胞にウイルス粒子を感染させるステップを含む）は、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｍ．，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９０）及びＭｕｒｒｙ，Ｅ．Ｉ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ． ７，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｃｌｉｆｆｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．（１９９１）に提供されている。

【0262】

いくつかの態様では、ウイルスは、アデノ随伴ウイルス、二本鎖ＤＮＡウイルスである。アデノ随伴ウイルスは、複製欠損であるように操作することができ、幅広い細胞型及び種に感染することができる。これは、熱及び脂質溶媒安定性、造血細胞を含む多様な系統の細胞における高い形質導入頻度、並びに重複感染抑制の欠如などの利点を更に有し、それにより、複数の一連の形質導入が可能になる。報告によれば、アデノ随伴ウイルスは、部位特異的様式でヒト細胞ＤＮＡに組み込み、それにより、挿入変異誘発の可能性及びレトロウイルス感染に特徴的な挿入遺伝子発現の変動性を最小限に抑えることができる。加えて、野生型アデノ随伴ウイルス感染は、選択圧の不在下で１００継代超にわたって組織培養で追跡されており、アデノ随伴ウイルスのゲノム組み込みが比較的安定した事象であることを示唆している。アデノ随伴ウイルスは、染色体外様式で機能することもできる。

【0263】

他のベクターには、プラスミドベクターが含まれる。プラスミドベクターは、当該技術分野で広範に説明されており、当業者に周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９を参照されたい。プラスミドベクターは宿主ゲノム内で複製して宿主ゲノム内に組み込むことができないため、インビボで遺伝子を細胞に送達するのにプラスミドベクターが特に有利であることが、過去数年間で見出されている。しかしながら、宿主細胞と適合性のあるプロモーターを有するこれらのプラスミドは、プラスミド内で作動可能にコードされた遺伝子からペプチドを発現することができる。商業的供給業者から入手可能ないくつかの一般に使用されているプラスミドには、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、様々なｐｃＤＮＡプラスミド、ｐＲＣ／ＣＭＶ、様々なｐＣＭＶプラスミド、ｐＳＶ４０、及びｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔが含まれる。特定のプラスミドの追加の例としては、ｐｃＤＮＡ３．１、カタログ番号Ｖ７９０２０；ｐｃＤＮＡ３．１／ｈｙｇｒｏ、カタログ番号Ｖ８７０２０；ｐｃＤＮＡ４／ｍｙｃ－Ｈｉｓ、カタログ番号Ｖ８６３２０；及びｐＢｕｄＣＥ４．１、カタログ番号Ｖ５３２２０が挙げられ、全てＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ．）製である。いくつかの一般に使用されているトランスポゾンシステムには、ｐｉｇｇｙＢＡＣ（商標）、Ｔｏｌ２、及びＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙ（商標）（例えば、Ｂａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ ｅｔ ａｌ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｔｒａｎｓｐｏｓｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈｌｙ ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＣＨＯ ｃｅｌｌ ｐｏｏｌｓ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２０１５）１１３，ｐｌ２３４－１２４３を参照されたい）が含まれる。他のプラスミドは、当業者に周知である。加えて、プラスミドは、ＤＮＡの特定の断片を除去及び／又は付加するための標準の分子生物学技法を使用してカスタム設計され得る。

【0264】

本開示は、１つ以上のベクターの一部として、
（ｉ）第１の二量体化ポリペプチドを含む第１の融合タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドと、
（ｉｉ）第２の対応する二量体化ポリペプチドを含む第２の融合タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドと
を含むポリヌクレオチドセットであって、
（ｉｉｉ）第１の融合タンパク質又は第２の融合タンパク質が、第１のシグナル伝達ドメインを更に含み、
（ｉｖ）第１の融合タンパク質又は第２の融合タンパク質の他方が、第２のシグナル伝達ドメインを更に含み、
（ｖ）小分子調節剤に応答した第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの相互作用が、シグナル伝達機能を効果的に調節する、
ポリヌクレオチドセットを提供する。

【0265】

いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上のベクターの一部として、
（ｉ）第１の二量体化ポリペプチドを含む第１の融合タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドと、
（ｉｉ）対応する第２の二量体化ポリペプチドを含む第２の融合タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドと
を含むポリヌクレオチドセットであって、
（ｉｉｉ）第１の融合タンパク質又は第２の融合タンパク質が、細胞外シグナル伝達ドメインを更に含み、
（ｉｖ）第１の融合タンパク質又は第２の融合タンパク質の他方が、細胞質シグナル伝達ドメインを更に含み、
（ｖ）小分子調節剤に応答した第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの相互作用が、シグナル伝達機能を効果的に調節する、
ポリヌクレオチドセットを提供する。

【0266】

いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上のベクターの一部として、
（ｉ）ＮＳ３ａ二量体化ポリペプチド及び第１のシグナル伝達ドメインを含む第１の融合タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドと、
（ｉｉ）リーダー二量体化ポリペプチド及び第２のシグナル伝達ドメインを含む第２の融合タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドと
を含むポリヌクレオチドセットであって、小分子調節剤に応答したＮＳ３ａとリーダー二量体化ポリペプチドとの相互作用がシグナル伝達機能を効果的に調節する、ポリヌクレオチドセットを提供する。

【0267】

いくつかの実施形態では、本開示は、１つ以上のベクターの一部として、
（ｉ）第１の二量体化ポリペプチド及び第１のシグナル伝達ドメインを含む第１の融合タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドと、
（ｉｉ）第２の二量体化ポリペプチドを含む第２の融合タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドであって、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの相互作用が第１の小分子調節剤によって媒介される、第２のポリヌクレオチドと、
（ｉｉｉ）第３の二量体化ドメイン及び第３のシグナル伝達ドメインを含む第３の融合タンパク質をコードする第３のポリヌクレオチドであって、第２の小分子調節剤が、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの結合を破壊し、第３の二量体化ポリペプチドの第１の二量体化ポリペプチドへの結合を媒介し、それにより、第２のシグナル伝達機能を効果的に調節する、第３のポリヌクレオチドと
を含むポリヌクレオチドセットを提供する。

【0268】

ベクターを含む組成物
本開示のポリヌクレオチドセットは、ベクターの一部として提供され得る。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドセットの第１のポリヌクレオチド構成要素及び第２のポリヌクレオチド構成要素は、単一のベクターの一部として提供され得る。

【0269】

本開示は、
（ｉ）第１の二量体化ポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチド構成要素と、
（ｉｉ）第２の二量体化ポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド構成要素と
を含む単一のベクターを含む組成物であって、第１のポリヌクレオチド構成要素又は第２のポリヌクレオチド構成要素のいずれかが第１のシグナル伝達ドメインを更にコードし、第１のポリヌクレオチド構成要素又は第２のポリヌクレオチド構成要素の他方が第２のシグナル伝達ドメインを更にコードし、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの相互作用がシグナル伝達機能を調節する、組成物を提供する。

【0270】

いくつかの実施形態では、本開示は、
（ｉ）第１の二量体化ポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチド構成要素と、
（ｉｉ）第２の二量体化ポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド構成要素と
を含む単一のベクターを含む組成物であって、第１のポリヌクレオチド構成要素又は第２のポリヌクレオチド構成要素のいずれかが細胞外シグナル伝達ドメインを更にコードし、第１のポリヌクレオチド構成要素又は第２のポリヌクレオチド構成要素の他方が細胞質（細胞内）シグナル伝達ドメインを更にコードし、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの相互作用がシグナル伝達機能を調節する、組成物を提供する。

【0271】

いくつかの態様では、本組成物は、療法を必要とする対象を治療するために使用され得る。本開示は、
（ｉ）第１の二量体化ドメインをコードする第１のポリヌクレオチド構成要素及び第２の二量体化ドメインをコードする第２のポリヌクレオチド構成要素を含む単一のベクターであって、第１のポリヌクレオチド構成要素又は第２のポリヌクレオチド構成要素のいずれかが第１のシグナル伝達ドメインを更にコードし、第１のポリヌクレオチド構成要素又は第２のポリヌクレオチド構成要素の他方が第２のシグナル伝達ドメインを更にコードする、単一のベクターと、
（ｉｉ）薬学的に許容される担体、賦形剤、及び／又は安定剤と
を含む医薬組成物を提供する。

【0272】

いくつかの態様では、本開示は、
（ｉ）第１の二量体化ドメインをコードする第１のポリヌクレオチド構成要素及び第２の二量体化ドメインをコードする第２のポリヌクレオチド構成要素を含む単一のベクターであって、第１のポリヌクレオチド構成要素又は第２のポリヌクレオチド構成要素のいずれかが細胞外シグナル伝達ドメインを更にコードし、第１のポリヌクレオチド構成要素又は第２のポリヌクレオチド構成要素の他方が細胞質シグナル伝達ドメインを更にコードする、単一のベクターと、
（ｉｉ）薬学的に許容される担体、賦形剤、及び／又は安定剤と
を含む医薬組成物を提供する。

【0273】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドセットの第１のポリヌクレオチド構成要素及び第２のポリヌクレオチド構成要素は、少なくとも２つのベクターのセットの一部として提供され得、例えば、第１のベクターが第１のポリヌクレオチド構成要素を含み、第２のベクターが第２のポリヌクレオチド構成要素を含む。

【0274】

本開示は、
（ｉ）第１の二量体化ポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチド構成要素を含む第１のベクターと、
（ｉｉ）第２の二量体化ポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド構成要素を含む第２のベクターと
を含む組成物であって、第１のポリヌクレオチド構成要素又は第２のポリヌクレオチド構成要素のいずれかが第１のシグナル伝達ドメインを更にコードし、第１のポリヌクレオチド構成要素又は第２のポリヌクレオチド構成要素の他方が第２のシグナル伝達ドメインを更にコードし、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの相互作用がシグナル伝達機能を調節する、組成物を提供する。

【0275】

いくつかの態様では、本組成物は、療法を必要とする対象を治療するために使用され得る。本開示は、
（ｉ）第１の二量体化ポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチド構成要素を含む第１のベクターと、
（ｉｉ）第２の二量体化ポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド構成要素を含む第２のベクターであって、第１のポリヌクレオチド構成要素又は第２のポリヌクレオチド構成要素のいずれかが第１のシグナル伝達ドメインを更にコードし、第１のポリヌクレオチド構成要素又は第２のポリヌクレオチド構成要素の他方が第２のシグナル伝達ドメインを更にコードする、第２のベクターと、
（ｉｉｉ）薬学的に許容される担体、賦形剤、及び／又は安定剤と
を含む医薬組成物を提供する。

【0276】

いくつかの態様では、本開示は、
（ｉ）第１の二量体化ドメインをコードする第１のポリヌクレオチド構成要素を含む第１のベクターと、
（ｉｉ）第２の二量体化ドメインをコードする第２のポリヌクレオチド構成要素を含む第２のベクターであって、第１のポリヌクレオチド構成要素又は第２のポリヌクレオチド構成要素のいずれかが細胞外シグナル伝達ドメインを更にコードし、第１のポリヌクレオチド構成要素又は第２のポリヌクレオチド構成要素の他方が細胞質シグナル伝達ドメインを更にコードする、第２のベクターと、
（ｉｉｉ）薬学的に許容される担体、賦形剤、及び／又は安定剤と
を含む医薬組成物を提供する。

【0277】

いくつかの態様では、本開示は、
（ｉ）第１の二量体化ポリペプチド及び第１のシグナル伝達ドメインを含む第１の融合タンパク質をコードする第１のベクターと、
（ｉｉ）第２の二量体化ポリペプチドを含む第２の融合タンパク質をコードする第２のベクターであって、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの相互作用が第１の小分子調節剤によって媒介される、第２のベクターと、
（ｉｉｉ）第３の二量体化ドメイン及び第３のシグナル伝達ドメインを含む第３の融合タンパク質をコードする第３のベクターであって、第２の小分子調節剤が、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの結合を破壊し、第３の二量体化ポリペプチドの第１の二量体化ポリペプチドへの結合を媒介する、第３のベクターと
を含むポリヌクレオチドセットを提供する。

【0278】

いくつかの態様では、本組成物は、療法を必要とする対象を治療するために使用され得る。本開示は、
（ｉ）第１の二量体化ポリペプチド及び第１のシグナル伝達ドメインを含む第１の融合タンパク質をコードする第１のベクターと、
（ｉｉ）第２の二量体化ポリペプチドを含む第２の融合タンパク質をコードする第２のベクターであって、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの相互作用が第１の小分子調節剤によって媒介される、第２のベクターと、
（ｉｉｉ）第３の二量体化ドメイン及び第３のシグナル伝達ドメインを含む第３の融合タンパク質をコードする第３のベクターであって、第２の小分子調節剤が、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの結合を破壊し、第３の二量体化ポリペプチドの第１の二量体化ポリペプチドへの結合を媒介する、第３のベクターと、
（ｉｖ）薬学的に許容される担体、賦形剤、及び／又は安定剤と
を含む医薬組成物を提供する。

【0279】

宿主細胞
発現システムは、細胞、例えば、本明細書に開示される核酸又は本明細書に開示される発現システムを含むインビトロ、インビボ、若しくはエクスビボ細胞に用いられ得る。

【0280】

いくつかの態様では、細胞は、原核細胞を含む。いくつかの態様では、細胞は、酵母細胞を含む。いくつかの態様では、細胞は、哺乳動物細胞を含む。いくつかの態様では、哺乳動物細胞は、ＨＥＫ２９３Ｔ、Ｊｕｒｋａｔ、Ｊｅｋｏ１、ＣＨＯ、Ｃｏｓ、ＨｅＬａ、ＨＫＢ１１、又はＢＨＫ細胞を含む。

【0281】

いくつかの態様では、細胞（例えば、インビトロ、インビボ、若しくはエクスビボ細胞、又は任意の宿主細胞）は、ヒト細胞である。いくつかの態様では、細胞は、患者に存在するか、又は患者に由来する。いくつかの態様では、患者由来の細胞は、腫瘍細胞、がん細胞、免疫細胞、白血球、リンパ球、Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、エフェクターＴ細胞、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞、メモリーＴ細胞、自己反応性Ｔ細胞、疲弊Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、自然リンパ系細胞（ＩＬＣ）、心細胞、肺細胞、筋細胞、上皮細胞、膵細胞、皮膚細胞、ＣＮＳ細胞、ニューロン、ミオサイト、骨格筋細胞、平滑筋細胞、肝細胞、腎細胞、幹細胞、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、胚性幹細胞（ＥＳＣ）、及び／又は造血幹細胞（ＨＳＣ）である。いくつかの態様では、細胞は、免疫細胞を含む。いくつかの態様では、細胞は、Ｔ細胞を含む。いくつかの態様では、細胞は、制御性Ｔ細胞を含む。いくつかの態様では、細胞は、ナチュラルキラーＴ細胞を含む。いくつかの態様では、細胞は、ＮＫ細胞を含む。いくつかの態様では、細胞は、エフェクターＴ細胞、例えば、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞及び／又はＣＤ８＋エフェクターＴ細胞を含む。

【0282】

いくつかの態様では、ヒト細胞は、同種ドナーに由来する。いくつかの態様では、同種細胞は、腫瘍細胞、がん細胞、免疫細胞、白血球、リンパ球、Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、エフェクターＴ細胞、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞、メモリーＴ細胞、自己反応性Ｔ細胞、疲弊Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、心細胞、肺細胞、筋細胞、上皮細胞、膵細胞、皮膚細胞、ＣＮＳ細胞、ニューロン、ミオサイト、骨格筋細胞、平滑筋細胞、肝細胞、腎細胞、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、胚性幹細胞（ＥＳＣ）、及び／又は造血幹細胞（ＨＳＣ）である。

【0283】

いくつかの態様では、ヒト細胞は、自己ドナーに由来する。いくつかの態様では、自己細胞は、腫瘍細胞、がん細胞、免疫細胞、白血球、リンパ球、Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、エフェクターＴ細胞、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞、メモリーＴ細胞、自己反応性Ｔ細胞、疲弊Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、心細胞、肺細胞、筋細胞、上皮細胞、膵細胞、皮膚細胞、ＣＮＳ細胞、ニューロン、ミオサイト、骨格筋細胞、平滑筋細胞、肝細胞、腎細胞、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、胚性幹細胞（ＥＳＣ）、及び／又は造血幹細胞（ＨＳＣ）である。

【0284】

いくつかの態様では、細胞は、本明細書に記載のポリヌクレオチドをコードする１つ以上の核酸を含むように、又は本明細書に記載のポリペプチドを発現するように操作される。いくつかの態様では、本開示は、本明細書に開示される核酸又は本明細書に開示される発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。いくつかの態様では、核酸又は発現ベクターは、宿主細胞染色体に組み込まれる。いくつかの態様では、核酸又は発現ベクターは、エピソームである。

【0285】

宿主細胞を含む組成物
本開示のポリヌクレオチドセットは、宿主細胞中に提供され得る。細胞は、本開示のポリヌクレオチドセットを組み込むように一過性に又は安定して操作することができる。本開示は、第１の二量体化ポリペプチドに連結された第１のシグナル伝達ドメインを含む第１の融合タンパク質をコードする第１のポリヌクレオチドと、第２の二量体化ポリペプチドに連結された第２のシグナル伝達ドメインを含む第２の融合タンパク質をコードする第２のポリヌクレオチドとを含む、ポリヌクレオチドセットを含む、細胞であって、第１の二量体化ポリペプチドと第２の二量体化ポリペプチドとの相互作用がシグナル伝達機能を制御する、細胞を提供する。

【0286】

本開示は、ポリヌクレオチドセットを発現するように改変された細胞を含む組成物を提供する。いくつかの態様では、本細胞組成物は、目的とするポリペプチド産物を産生するために使用され得る。発現されたポリペプチドは、無細胞抽出物から回収され得るか、又は培養培地から回収され得る。

【0287】

いくつかの態様では、本組成物は、療法を必要とする対象を治療するために使用され得る。本開示は、（ｉ）ポリヌクレオチドセットを発現するように改変された細胞と、（ｉｉ）薬学的に許容される担体、賦形剤、又は安定剤とを含む、医薬組成物を提供する。

【0288】

細胞は、治療的利益を提供する目的とする遺伝子を発現する本開示のポリヌクレオチドを含み得る。目的とする遺伝子の発現は、細胞に腫瘍細胞を攻撃する能力を付与し得る。目的とする遺伝子は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、例えば、腫瘍細胞を標的とするキメラ抗原受容体であり得る。目的とする遺伝子は、膜貫通領域に連結されたヒンジに連結された一本鎖抗体断片を発現し得る。膜貫通領域は、細胞内シグナル伝達ドメインに連結され得る。膜貫通領域は、共刺激ドメインに連結され得る。

【0289】

本組成物の細胞は、例えば、Ｔ細胞であり得る。本組成物の細胞は、例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞であり得る。

【0290】

いくつかの実施形態では、本開示は、免疫細胞、例えば、ＣＡＲを発現する免疫細胞の集団における疲弊及び／又は機能不全を軽減する、改善する、又は抑制するための手段を含む細胞組成物を提供する。いくつかの態様では、手段は、ポリヌクレオチドセット中の目的とする遺伝子としてＣＡＲを発現することを含む。

【0291】

小分子の作製方法
本開示の小分子は、既知の技法を使用して合成され得る。ダノプレビル（（２Ｒ，６Ｓ，１２Ｚ，１３ａＳ，１４ａＲ，１６ａＳ）－１４ａ－［（シクロプロピルスルホニル）カルバモイル］－６－（｛［（２－メチル－２－プロパニル）オキシ］カルボニル｝アミノ）－５，１６－ジオキソ－１，２，３，５，６，７，８，９，１０，１１，１３ａ，１４，１４ａ，１５，１６，１６ａ－ヘキサデカヒドロシクロプロパ［ｅ］ピロロ［１，２－ａ］［１，４］ジアザシクロペンタデシンン－２－イル４フルオロ－１，３－ジヒドロ－２Ｈ－イソインドール－２－カルボキシレート）は、既知の技法を使用して合成され得る。例えば、Ｃａｒｒｅｉｒａ，Ｅｒｉｃｋ Ｍｏｒａｎ，Ｈｉｓａｓｈｉ Ｙａｍａｍｏｔｏ，ａｎｄ Ｎ．Ｋ． Ｙｅｅ． “Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．” Ｉｎ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ ９，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，２０１２． Ｓｅｃｔｉｏｎ ９．１９．６，Ｄａｎｏｐｒｅｖｉｒを参照されたく、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。

【0292】

ポリヌクレオチドの作製
本開示は、本開示のポリヌクレオチド、例えば、本開示のＤＮＡベクター及びそれらの部分構成要素、並びに本開示のパッケージングベクター及びプラスミドを産生する方法を提供する。標準の分子生物学技法を使用して、本開示のポリヌクレオチドを構築することができる。ポリヌクレオチドは、化学的に合成され得る。

【0293】

パッケージングされたウイルスカプシドの作製
本開示は、本開示のポリヌクレオチドを含むウイルスカプシドを作製する方法を含む。概して、本開示のウイルスカプシドは、細胞に本開示のパッケージングポリヌクレオチドを供給することによって産生され得る。パッケージングポリヌクレオチドは、プラスミドとしてパッケージング細胞に供給され得る。パッケージング細胞は、本開示のポリヌクレオチドを含むウイルスカプシドを産生するために培養され得る。好ましくは、パッケージングされたウイルスカプシドは、複製不全である。

【0294】

様々な市販のキットが本開示のパッケージングされたウイルスカプシドの産生に好適である。例としては、ＭＩＳＳＩＯＮ（登録商標）Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ Ｐａｃｋａｇｉｎｇ Ｍｉｘ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａから入手可能）、ＬＶ－Ｍａｘ Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ Ｐａｃｋａｇｉｎｇ Ｍｉｘ（ａｖａｉｌａｂｌｅ ｆｒｏｍ ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手可能）が挙げられる。

【0295】

パッケージング細胞によって産生されるウイルスカプシドは、ポリペプチドの産生に使用するための細胞への送達、細胞ベースの療法に使用するための細胞への送達、又は遺伝子療法の方法のための対象への送達などの下流方法に使用するために精製され得る。精製は、宿主細胞又は培養培地から混入物を除去するための処理を含み得る。精製ステップは、プラスミドの物理的及び／又は化学的特徴に基づくステップを含み得る。化学的特徴としては、例えば、親水性－疎水性が挙げられ得る。物理的特性としては、例えば、サイズが挙げられ得る。粒径に基づく精製戦略の例としては、密度勾配超遠心分離、限外濾過、沈殿、二相抽出システム、及びサイズ排除クロマトグラフィーが挙げられる。いくつかの事例では、沈殿は、遠心分離と一緒に、例えば、ポリエチレングリコール、硫酸アンモニウム、又はリン酸カルシウムを使用して用いられ得る。いくつかの事例では、ＰＥＧ、デキストラン、又はポリビニルアルコールを有する水性二相分離システムが使用され得る。いくつかの事例では、膜ベースの接線流濾過技法が使用され、例としては、限外濾過、透析濾過、及び精密濾過が挙げられる。他の実施形態では、クロマトグラフィー手段がウイルスカプシドの精製に使用され得る。なお他の実施形態では、免疫親和性方法が、関連するカプシドに対する特異性を有するモノクローナル抗体を使用してカプシドを捕捉するために使用され得る。全開示が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｏｒｅｎｗｅｉｓｅｒ，Ｒ．，“Ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｏｆ ｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｖａｃｃｉｎｅｓ，”Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２００５）１２，Ｓ１０３－Ｓ１１０（２００５）を参照されたい。

【0296】

好適なウイルスカプシドの例としては、アデノウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、センダイウイルスベクター、バキュロウイルス、エプスタインバーウイルス、パポバウイルス、ワクシニアウイルス、単純ヘルペスウイルス、及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0297】

１．１．２．細胞の作製
本開示は、目的とするポリペプチド産物を発現するように改変された細胞を作製する方法を提供する。

【0298】

ある特定の実施形態では、本開示は、細胞療法を必要とする対象の治療に使用するためのポリヌクレオチドセットを発現する治療用細胞を作製する方法を提供する。一態様では、本開示は、単一のベクターに組み込まれたポリヌクレオチドセットから目的とするポリペプチド産物を発現する治療用細胞を生成する又は調製する方法を提供する。一態様では、本開示は、２つ（又はそれ以上）のベクターに組み込まれたポリヌクレオチドセットから目的とするポリペプチド産物を発現する治療用細胞を生成する又は調製する方法を提供する。

【0299】

ある特定の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、宿主細胞中の染色体外ポリヌクレオチドとして維持される。ある特定の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、宿主細胞中のベクター（例えば、発現ベクター）中に存在する。ある特定の実施形態では、本開示のポリヌクレオチド又はそのサブセット若しくは部分構成要素は、宿主細胞の染色体に組み込まれる。

【0300】

様々な方法を使用して、本開示のポリヌクレオチドをコードする発現ベクターを細胞に導入して、本開示の細胞を産生することができる。例えば、Ｇｒｅｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（２０１４）を参照されたい。

【0301】

目的とする遺伝子に核酸修飾を導入する方法は、当該技術分野で周知である。例としては、標的相同組換え（例えば、「ヒットアンドラン」、「二重置換」）、部位特異的リコンビナーゼ（例えば、Ｃｒｅリコンビナーゼ及びＦｌｐリコンビナーゼ）、ＰＢトランスポサーゼ（例えば、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙ、ｐｉｇｇｙＢａｃ、Ｔｏ１２、又はＦｒｏｇ Ｐｒｉｎｃｅ）、操作されたヌクレアーゼによるゲノム編集（例えば、メガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、及びＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステム）、並びに組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）プラットフォームを使用したゲノム編集が挙げられる。目的とする遺伝子に核酸修飾を導入するための薬物は、公的に入手可能な供給源を使用して設計され得るか、又はＴｒａｎｓｐｏｓａｇｅｎ、Ａｄｄｇｅｎｅ、及びＳａｎｇａｍｏ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから商業的に得られ得る。本開示のベクターは、これらの方法を利用して、本開示のポリヌクレオチドを宿主ゲノムに組み込むことができる。本開示のポリヌクレオチド及びベクターは、本開示のポリヌクレオチドを宿主ゲノムに組み込むためのこれらの方法の実施に必要なポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み得る。

【0302】

ランダム組み込み又は部位特異的組み込み（例えば、「ランディングパッド」アプローチ）を含む、ポリヌクレオチドの宿主細胞ゲノムへの組み込みに好適な様々なアプローチが当該技術分野で既知であり、例えば、Ｚｈａｏ，Ｍ．ｅｌ ａｌ．（２０１８）Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０２：６１０５－６１１７、Ｌｅｅ，Ｊ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．５：８５７２、及びＧａｉｄｕｋｏｖ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．４６：４０７２－４０８６を参照されたい。本開示のベクターは、これらの方法を利用して、本開示のポリヌクレオチドを宿主ゲノムに組み込むことができる。本開示のベクターは、本開示のポリヌクレオチドを宿主ゲノムに組み込むためのこれらの方法の実施に必要なポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み得る。

【0303】

宿主細胞は、当該技術分野で既知の方法及び組成物を使用して培養され得る。本開示の宿主細胞の培養に好適な市販の培地の例としては、ハムＦ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰ ＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）、及びダルベッコ改変イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）が挙げられる。

【0304】

培養培地には、必要に応じて、ホルモン及び／又は他の成長因子（インスリン、トランスフェリン、又は上皮成長因子など）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、及びリン酸など）、緩衝液（ＨＥＰＥＳなど）、ヌクレオチド（アデノシン及びチミジンなど）、抗生物質（ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬物など）、微量元素（通常マイクロモル範囲の最終濃度で存在する無機化合物として定義される）、及びグルコース、又は等価エネルギー源が補充され得る。任意の他の必要な補充物も、当業者に既知であろう適切な濃度で含まれ得る。温度及びｐＨなどの培養条件は、当業者に明らかになるであろう。

【0305】

１．１．３．ポリペプチド及び細胞産物の作製
本開示は、ポリペプチドを産生する方法を提供する。本方法は、本開示の小分子で処理された本開示の細胞を利用し得る。

【0306】

本開示は、ポリヌクレオチドセットを含むベクターを産生し、ベクターを細胞に（例えば、インビボ、インビボ、又はエクスビボで）送達し、ポリヌクレオチドセットを発現させて、細胞機能を提供及び／又は制御する方法を提供する。発現は、本開示の小分子によって調節され得る。

【0307】

一実施形態では、本方法は、（ａ）目的とするポリペプチド産物をコードするポリヌクレオチドセットを使用して細胞を改変して、産生細胞株をもたらすステップと、（ｂ）ポリペプチド産物の発現を助長する条件下で産生細胞株を培養するステップと、（ｃ）本開示の小分子を細胞株に送達することによってポリペプチド産物の産生を調節するステップと、（ｄ）任意選択で、発現されたポリペプチドを回収するステップとを含む。

【0308】

一実施形態では、本方法は、（ａ）目的とするポリペプチド産物をコードするポリヌクレオチドセットを使用して細胞を改変して、産生細胞株をもたらすステップと、（ｂ）ポリペプチド産物の発現を助長する条件下で産生細胞株を培養するステップと、（ｃ）目的とするポリペプチドを測定するステップと、（ｄ）本開示の小分子を細胞株に送達することによってポリペプチド産物の産生を調節するステップと、（ｅ）任意選択で、発現されたポリペプチドを回収するステップとを含む。

【0309】

発現されたポリペプチドは、例えば、無細胞抽出物から回収され得るか、又は培養培地から回収され得る。

【0310】

一例では、目的とするポリペプチド産物は、治療用タンパク質又はペプチドである。

【0311】

別の実施例では、目的とするポリペプチド産物は、アデノウイルス、レンチウイルス、バキュロウイルス、エプスタインバーウイルス、パポバウイルス、ワクシニアウイルス、ヘルペスウイルス、単純ヘルペスウイルス、レトロウイルス、及びアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）からなる群から選択されるウイルス又はウイルスカプシドである。

【0312】

目的とするポリペプチド産物は、細胞内で産生され得るか、又は培地中に直接分泌され得る。ポリペプチドが細胞内で産生される場合、細胞は溶解され得る。粒子状破片は、例えば、遠心分離又は限外濾過によって除去され得る。ポリペプチドが培地中に分泌される場合、かかる発現システム由来の上清は、任意選択で、例えば、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、Ａｍｉ ｃｏｎ又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して濃縮され得る。タンパク質分解を阻害するためにＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤が前述のステップのうちのいずれかに含まれ得、外来性混入物の増殖を防止するために抗生物質が含まれ得る。

【0313】

ポリペプチドは、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、及び親和性クロマトグラフィー、イオン交換カラム上での分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上でのクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）上でのクロマトグラフィー、アニオン又はカチオン交換樹脂（ポリアスパラギン酸カラムなど）上でのクロマトグラフィー、低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、硫酸アンモニウム沈殿、免疫親和性カラム又はイオン交換カラム上での分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ又はＤＥＡＥなどのカチオン交換樹脂上でのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、硫酸アンモニウム沈殿、並びにゲル濾過を使用して精製され得る。

【0314】

目的とするポリペプチド産物を精製して、更なるアッセイ及び使用のために実質的に均質な調製物を得ることができる。目的とするポリペプチド産物を精製して、薬学的使用のために十分に均質な調製物を得ることができる。

【0315】

細胞療法の方法
本開示は、細胞療法を必要とする対象を治療する方法を提供する。本方法は、（ａ）対象に、目的とするポリペプチド産物をコードする治療用細胞を含む有効量の医薬組成物を投与するステップと、（ｂ）対象に、治療有効量の小分子を投与するステップとを含む。

【0316】

ある特定の実施形態では、本方法は、
（ｉ）対象に、目的とする治療用ポリペプチド産物（例えば、ＣＡＲ）をコードする治療用細胞と、薬学的に許容される担体とを含む、有効量の医薬組成物を投与するステップと、
（ｉｉ）対象に、治療有効量の小分子調節剤を投与するステップと、
（ｉｉｉ）治療用ポリペプチド産物のレベルを監視するステップと、
（ｉｖ）任意選択で、小分子調節剤の投与量を調整して、対象における治療用ポリペプチド産物のレベルを所望のレベルに調整するステップと
を含む。

【0317】

ある特定の実施形態では、本方法は、
（ｉ）対象に、目的とする治療用ポリペプチド産物（例えば、ＣＡＲ）をコードする治療用細胞と、薬学的に許容される担体とを含む有効量の医薬組成物を投与するステップと、
（ｉｉ）対象に、治療有効量の小分子調節剤を投与するステップと、
（ｉｉｉ）治療用ポリペプチド産物のレベルを監視するステップと、
（ｉｖ）任意選択で、治療有効量の第２の小分子調節剤を投与して、細胞療法を終了するステップと
を含む。

【0318】

一態様では、本開示は、がん、例えば、その必要がある対象においてがん、例えば、腫瘍を治療するための方法を提供する。本明細書に開示される医薬組成物を使用して治療することができるがんの例としては、黒色腫、リンパ腫、肉腫、並びに結腸がん、腎臓がん、胃がん、膀胱がん、脳がん（例えば、神経膠腫、神経膠芽腫、星細胞腫、髄芽腫）、前立腺がん、膀胱がん、直腸がん、食道がん、膵臓がん、肝臓がん、肺がん、乳がん、子宮がん、子宮頸がん、卵巣がん、血液がん（例えば、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、バーキットリンパ腫、ＥＢＶ誘発性Ｂ細胞リンパ腫）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0319】

いくつかの事例では、対象を治療するために使用される細胞は、自己細胞であり得る。いくつかの事例では、対象を治療するために使用される細胞は、同種細胞であり得る。

【0320】

一態様では、本開示は、その必要がある対象においてＴ細胞媒介性免疫応答を制御する方法を提供する。

【0321】

一態様では、本開示は、対象における標的細胞集団又は組織に対するＴ細胞媒介性免疫応答を刺激する方法を提供する。

【0322】

一態様では、本開示は、対象に抗腫瘍免疫を提供する方法を提供する。

【0323】

一態様では、本開示は、その必要がある対象においてＴ細胞媒介性シグナル伝達活性を制御する方法を提供する。

【0324】

一態様では、本開示は、その必要がある対象においてＴ細胞媒介性シグナル伝達活性を休止させる方法を提供する。

【0325】

一態様では、本開示は、その必要がある対象においてＴ細胞媒介性シグナル伝達療法を終了する方法を提供する。

【0326】

遺伝子療法の方法
本開示は、本開示のポリヌクレオチドセットを対象に送達することによって、その必要がある対象を治療する方法を提供する。本開示のポリヌクレオチドセットは、対象の細胞に送達され得る。本方法は、対象に、医薬有効量のポリヌクレオチドセットを投与することを含み得る。投与は、本開示の１つ以上のポリヌクレオチドを含むウイルス粒子の投与を介し得る。投与は、本開示の１つ以上のポリヌクレオチドを含む医薬組成物の投与を介し得る。

【0327】

ある特定の実施形態では、本方法は、
（ｉ）対象に、目的とする治療用ポリペプチド産物（例えば、ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドセットと、薬学的に許容される担体とを含む有効量の医薬組成物を投与するステップと、
（ｉｉ）対象に、治療有効量の小分子調節剤を投与するステップと、
（ｉｉｉ）治療用ポリペプチド産物のレベルを監視するステップと、
（ｉｖ）任意選択で、小分子調節剤の投与量を調整して、対象における治療用ポリペプチド産物のレベルを所望のレベルに調整するステップと
を含む。

【0328】

対象は、哺乳動物対象であり得る。対象は、ヒト対象であり得る。

【0329】

以下は、本明細書に開示される遺伝子療法態様が有用であり得る疾患の例である。
●血液細胞障害
・鎌状赤血球貧血（Ｈｂ ＳＳ）５，０００人に１人超、アフリカ系アメリカ人４００人に１人
・鎌状赤血球疾患（Ｈｂ Ｓ／Ｃ）２５，０００人に１人超
・Ｈｂ Ｓ／ベータ－サラセミア（Ｈｂ Ｓ／Ｔｈ）５０，０００人に１人超
・バリアントヘモグロビン異常症（Ｈｂ Ｅを含む）
・グルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ欠損症（Ｇ６ＰＤ）
●先天性アミノ酸代謝異常
・チロシン血症Ｉ（ＴＹＲ Ｉ）１００，０００人に１人未満
・アルギニノコハク酸尿症（ＡＳＡ）１００，０００人に１人未満
・シトルリン血症（ＣＩＴ）１００，０００人に１人未満
・フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）２５，０００人に１人超
・メープルシロップ尿症（ＭＳＵＤ）１００，０００人に１人未満
・ホモシスチン尿症（ＨＣＹ）１００，０００人に１人未満
・チロシン血症ＩＩ
・アルギニン血症
・良性高フェニルアラニン血症
・ビオプテリン補因子生合成障害
・ビオプテリン補因子再生障害
・チロシン血症ＩＩＩ
・高メチオニン血症
・シトルリン血症ＩＩ型
●先天性有機酸代謝異常
・グルタル酸血症Ｉ型（ＧＡ Ｉ）７５，０００人に１人超
・ヒドロキシメチルグルタリルリアーゼ欠損症（ＨＭＧ）１００，０００人に１人未満
・イソ吉草酸血症（ＩＶＡ）１００，０００人に１人未満
・３－メチルクロトニル－ＣｏＡカルボキシラーゼ欠損症（３ＭＣＣ）７５，０００人に１人超
・メチルマロニル－ＣｏＡムターゼ欠損症（ＭＵＴ）７５，０００人に１人超
・メチルマロン酸尿症、ｃｂｌＡ型及びｃｂｌＢ型（ＭＭＡ、Ｃｂｌ Ａ、Ｃｂｌ Ｂ）１００，０００人に１人未満
・ベータ－ケトチオラーゼ欠損症（ＢＫＴ）１００，０００人に１人未満
・プロピオン酸血症（ＰＲＯＰ）７５，０００人に１人超
・複合ＣｏＡカルボキシラーゼ欠損症（ＭＣＤ）１００，０００人に１人未満
・メチルマロン酸血症（Ｃｂｌ Ｃ、Ｃｂｌ Ｄ）
・マロン酸血症
・２－メチル３－ヒドロキシブチル酸尿症
・イソブチリル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症
・２－メチルブチリル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症
・３－メチルグルタコニル－ＣｏＡヒドラターゼ欠損症
・グルタミン酸血症ＩＩ型
・ＨＨＨ症候群（高アンモニア血症、高オルニチン血症、ホモシトルリン尿症症候群）
・ベータ－メチルクロトニルカルボキシラーゼ欠損症
・アデノシルコバラミン合成異常
●先天性脂肪酸代謝異常
・長鎖ヒドロキシアシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症（ＬＣＨＡＤ）７５，０００人に１人超
・中鎖アシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症（ＭＣＡＤ）２５，０００人に１人超
・超長鎖アシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症（ＶＬＣＡＤ）７５，０００人に１人超
・三機能タンパク質欠損症（ＴＦＰ）１００，０００人に１人未満
・カルニチン取り込み障害（ＣＵＤ）１００，０００人に１人未満
・中鎖／短鎖Ｌ－３－ヒドロキシアシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症
・中鎖ケトアシル－ＣｏＡチオラーゼ欠損症
・ジエノイル－ＣｏＡレダクターゼ欠損症
・グルタミン酸血症ＩＩ型
・カルニチンパルミチルトランスフェラーゼ欠損症１型
・カルニチンパルミチルトランスフェラーゼ欠損症２型
・短鎖アシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症（ＳＣＡＤ）
・カルニチン／アシルカルニチントランスロカーゼ欠損症（トランスロカーゼ）
・短鎖ヒドロキシアシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症（ＳＣＨＡＤ）
・長鎖アシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症（ＬＣＡＤ）
・多発性アシル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損症（ＭＡＤＤ）
●種々の多系統疾患
・嚢胞性線維症（ＣＦ）５，０００人に１人超
・先天性甲状腺機能低下症（ＣＨ）５，０００人に１人超
・ビオチニダーゼ欠損症（ＢＩＯＴ）７５，０００人に１人超
・先天性副腎過形成（ＣＡＨ）２５，０００人に１人超
・古典的ガラクトース血症（ＧＡＬＴ）５０，０００人に１人超
・ガラクトキナーゼ欠損症
・ガラクトースエピメラーゼ欠損症
●その他
・重症複合型免疫不全（ＳＣＩＤ）－２００９年に追加
・致命的な先天性心臓欠陥（パルスオキシメトリーを使用してスクリーニング）－２０１０年に追加
・ポンペ病－２０１３年に追加
・ムコ多糖症Ｉ型－２０１５年に追加
・Ｘ連鎖性副腎白質ジストロフィー－２０１８年に追加

【0330】

（表Ａ）配列
＞ｈＩｇＫＳＰ－（ｓｃＦＶ－ヒンジ）－ＣＤ２８ｔｍ－４－１ＢＢ－ＦＫＢＰ－Ｐ２Ａ－Ｄａｐ１０－ＣＤ２８ｔｍ－４１ＢＢ－ＦＲＢ（Ｔ２０９８Ｌ）－ｔａｇＢＦＰ
ＭＶＬＱＴＱＶＦＩＳＬＬＬＷＩＳＧＡＹＧ（ｓｃＦＶ＿ヒンジ）ＣＰＰＣＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＭＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＦＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＩＨＬＧＨＩＬＦＬＬＬＬＰＶＡＡＡＱＴＴＰＧＥＲＳＳＬＰＡＦＹＰＧＴＳＧＳＣＳＧＣＧＳＬＳＬＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＧＳＩＬＷＨＥＭＷＨＥＧＬＥＥＡＳＲＬＹＦＧＥＲＮＶＫＧＭＦＥＶＬＥＰＬＨＡＭＭＥＲＧＰＱＴＬＫＥＴＳＦＮＱＡＹＧＲＤＬＭＥＡＱＥＷＣＲＫＹＭＫＳＧＮＶＫＤＬＬＱＡＷＤＬＹＹＨＶＦＲＲＩＳＫＧＳＡＳＧＳＡＳＡＧＶＳＫＧＥＥＬＩＫＥＮＭＨＭＫＬＹＭＥＧＴＶＤＮＨＨＦＫＣＴＳＥＧＥＧＫＰＹＥＧＴＱＴＭＲＩＫＶＶＥＧＧＰＬＰＦＡＦＤＩＬＡＴＳＦＬＹＧＳＫＴＦＩＮＨＴＱＧＩＰＤＦＦＫＱＳＦＰＥＧＦＴＷＥＲＶＴＴＹＥＤＧＧＶＬＴＡＴＱＤＴＳＬＱＤＧＣＬＩＹＮＶＫＩＲＧＶＮＦＴＳＮＧＰＶＭＱＫＫＴＬＧＷＥＡＦＴＥＴＬＹＰＡＤＧＧＬＥＧＲＮＤＭＡＬＫＬＶＧＧＳＨＬＩＡＮＡＫＴＴＹＲＳＫＫＰＡＫＮＬＫＭＰＧＶＹＹＶＤＹＲＬＥＲＩＫＥＡＮＮＥＴＹＶＥＱＨＥＶＡＶＡＲＹＣＤＬＰＳＫＬＧＨＫＬＮ 配列番号１

＞ｈＩｇＫＳＰ－（ｓｃＦＶ－ヒンジ）－ＣＤ２８ｔｍ－４－１ＢＢ－ＦＫＢＰ－Ｐ２Ａ－Ｄａｐ１０－ＣＤ２８ｔｍ－４１ＢＢ－ＦＲＢ（Ｔ２０９８Ｌ）－ＣＤ３ｚ－ｔａｇＢＦＰ
ＭＶＬＱＴＱＶＦＩＳＬＬＬＷＩＳＧＡＹＧ（ｓｃＦＶ＿ヒンジ）ＣＰＰＣＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＭＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＦＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＩＨＬＧＨＩＬＦＬＬＬＬＰＶＡＡＡＱＴＴＰＧＥＲＳＳＬＰＡＦＹＰＧＴＳＧＳＣＳＧＣＧＳＬＳＬＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＧＳＩＬＷＨＥＭＷＨＥＧＬＥＥＡＳＲＬＹＦＧＥＲＮＶＫＧＭＦＥＶＬＥＰＬＨＡＭＭＥＲＧＰＱＴＬＫＥＴＳＦＮＱＡＹＧＲＤＬＭＥＡＱＥＷＣＲＫＹＭＫＳＧＮＶＫＤＬＬＱＡＷＤＬＹＹＨＶＦＲＲＩＳＫＧＳＡＳＧＳＡＳＡＧＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＶＳＫＧＥＥＬＩＫＥＮＭＨＭＫＬＹＭＥＧＴＶＤＮＨＨＦＫＣＴＳＥＧＥＧＫＰＹＥＧＴＱＴＭＲＩＫＶＶＥＧＧＰＬＰＦＡＦＤＩＬＡＴＳＦＬＹＧＳＫＴＦＩＮＨＴＱＧＩＰＤＦＦＫＱＳＦＰＥＧＦＴＷＥＲＶＴＴＹＥＤＧＧＶＬＴＡＴＱＤＴＳＬＱＤＧＣＬＩＹＮＶＫＩＲＧＶＮＦＴＳＮＧＰＶＭＱＫＫＴＬＧＷＥＡＦＴＥＴＬＹＰＡＤＧＧＬＥＧＲＮＤＭＡＬＫＬＶＧＧＳＨＬＩＡＮＡＫＴＴＹＲＳＫＫＰＡＫＮＬＫＭＰＧＶＹＹＶＤＹＲＬＥＲＩＫＥＡＮＮＥＴＹＶＥＱＨＥＶＡＶＡＲＹＣＤＬＰＳＫＬＧＨＫＬＮ 配列番号２

＞ｈＩｇＫＳＰ－（ｓｃＦＶ－ヒンジ）－ＣＤ２８ｔｍ－４－１ＢＢ－ＮＳ３ａＨ１－Ｐ２Ａ－Ｄａｐ１０－ＣＤ２８ｔｍ－４１ＢＢ－ＧＮＣＲ１－ＣＤ３ｚ－ｔａｇＢＦＰ
ＭＶＬＱＴＱＶＦＩＳＬＬＬＷＩＳＧＡＹＧ（ｓｃＦＶ＿ヒンジ）ＣＰＰＣＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＶＶＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＩＨＬＧＨＩＬＦＬＬＬＬＰＶＡＡＡＱＴＴＰＧＥＲＳＳＬＰＡＦＹＰＧＴＳＧＳＣＳＧＣＧＳＬＳＬＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＧＳＤＩＥＫＬＣＫＫＡＥＥＥＡＫＥＡＱＥＫＡＤＥＬＲＱＲＨＰＤＳＱＡＡＥＤＡＥＤＬＡＮＬＡＶＡＡＶＬＴＡＣＬＬＡＱＥＨＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＲＡＶＩＬＡＩＭＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＥＡＶＥＲＡＩＷＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＫＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＥＡＳＫＡＡＥＥＡＱＲＨＰＤＳＱＫＡＲＤＥＩＫＥＡＳＱＫＡＥＥＶＫＥＲＣＫＳＧＳＡＳＧＳＡＳＡＧＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＶＳＫＧＥＥＬＩＫＥＮＭＨＭＫＬＹＭＥＧＴＶＤＮＨＨＦＫＣＴＳＥＧＥＧＫＰＹＥＧＴＱＴＭＲＩＫＶＶＥＧＧＰＬＰＦＡＦＤＩＬＡＴＳＦＬＹＧＳＫＴＦＩＮＨＴＱＧＩＰＤＦＦＫＱＳＦＰＥＧＦＴＷＥＲＶＴＴＹＥＤＧＧＶＬＴＡＴＱＤＴＳＬＱＤＧＣＬＩＹＮＶＫＩＲＧＶＮＦＴＳＮＧＰＶＭＱＫＫＴＬＧＷＥＡＦＴＥＴＬＹＰＡＤＧＧＬＥＧＲＮＤＭＡＬＫＬＶＧＧＳＨＬＩＡＮＡＫＴＴＹＲＳＫＫＰＡＫＮＬＫＭＰＧＶＹＹＶＤＹＲＬＥＲＩＫＥＡＮＮＥＴＹＶＥＱＨＥＶＡＶＡＲＹＣＤＬＰＳＫＬＧＨＫＬＮ 配列番号３

＞ｈＩｇＫＳＰ－（ｓｃＦＶ－ヒンジ）－ＣＤ２８ｔｍ－４－１ＢＢ－ＮＳ３ａＨ１－Ｐ２Ａ－Ｄａｐ１０－ＣＤ２８ｔｍ－４１ＢＢ－ＤＮＣＲ２－ＣＤ３ｚ－ｔａｇＢＦＰ
ＭＶＬＱＴＱＶＦＩＳＬＬＬＷＩＳＧＡＹＧ（ｓｃＦＶ＿ヒンジ）ＣＰＰＣＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＶＶＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＩＨＬＧＨＩＬＦＬＬＬＬＰＶＡＡＡＱＴＴＰＧＥＲＳＳＬＰＡＦＹＰＧＴＳＧＳＣＳＧＣＧＳＬＳＬＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＧＳＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨＧＳＡＳＧＳＡＳＡＧＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＶＳＫＧＥＥＬＩＫＥＮＭＨＭＫＬＹＭＥＧＴＶＤＮＨＨＦＫＣＴＳＥＧＥＧＫＰＹＥＧＴＱＴＭＲＩＫＶＶＥＧＧＰＬＰＦＡＦＤＩＬＡＴＳＦＬＹＧＳＫＴＦＩＮＨＴＱＧＩＰＤＦＦＫＱＳＦＰＥＧＦＴＷＥＲＶＴＴＹＥＤＧＧＶＬＴＡＴＱＤＴＳＬＱＤＧＣＬＩＹＮＶＫＩＲＧＶＮＦＴＳＮＧＰＶＭＱＫＫＴＬＧＷＥＡＦＴＥＴＬＹＰＡＤＧＧＬＥＧＲＮＤＭＡＬＫＬＶＧＧＳＨＬＩＡＮＡＫＴＴＹＲＳＫＫＰＡＫＮＬＫＭＰＧＶＹＹＶＤＹＲＬＥＲＩＫＥＡＮＮＥＴＹＶＥＱＨＥＶＡＶＡＲＹＣＤＬＰＳＫＬＧＨＫＬＮ 配列番号４

＞ｈＩｇＫＳＰ－（ｓｃＦＶ－ヒンジ）－ＣＤ２８ｔｍ－４－１ＢＢ－ＮＳ３ａＨ１－Ｐ２Ａ－Ｄａｐ１０－ＣＤ２８ｔｍ－４１ＢＢ－ＡＮＲ－ＣＤ３ｚ－ｔａｇＢＦＰ
ＭＶＬＱＴＱＶＦＩＳＬＬＬＷＩＳＧＡＹＧ（ｓｃＦＶ＿ヒンジ）ＣＰＰＣＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＶＶＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＩＨＬＧＨＩＬＦＬＬＬＬＰＶＡＡＡＱＴＴＰＧＥＲＳＳＬＰＡＦＹＰＧＴＳＧＳＣＳＧＣＧＳＬＳＬＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＧＳＧＥＬＤＥＬＶＹＬＬＤＧＰＧＹＤＰＩＨＳＤＶＶＴＲＧＧＳＨＬＦＮＦＧＳＡＳＧＳＡＳＡＧＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＶＳＫＧＥＥＬＩＫＥＮＭＨＭＫＬＹＭＥＧＴＶＤＮＨＨＦＫＣＴＳＥＧＥＧＫＰＹＥＧＴＱＴＭＲＩＫＶＶＥＧＧＰＬＰＦＡＦＤＩＬＡＴＳＦＬＹＧＳＫＴＦＩＮＨＴＱＧＩＰＤＦＦＫＱＳＦＰＥＧＦＴＷＥＲＶＴＴＹＥＤＧＧＶＬＴＡＴＱＤＴＳＬＱＤＧＣＬＩＹＮＶＫＩＲＧＶＮＦＴＳＮＧＰＶＭＱＫＫＴＬＧＷＥＡＦＴＥＴＬＹＰＡＤＧＧＬＥＧＲＮＤＭＡＬＫＬＶＧＧＳＨＬＩＡＮＡＫＴＴＹＲＳＫＫＰＡＫＮＬＫＭＰＧＶＹＹＶＤＹＲＬＥＲＩＫＥＡＮＮＥＴＹＶＥＱＨＥＶＡＶＡＲＹＣＤＬＰＳＫＬＧＨＫＬＮ 配列番号５

＞ｈＩｇＫＳＰ－（ｓｃＦＶ－ヒンジ）－ＣＤ２８ｔｍ－４－１ＢＢ－ＢｃｌｘＬ－Ｐ２Ａ－Ｄａｐ１０－ＣＤ２８ｔｍ－４１ＢＢ－ＢａｄＢＨ３－ＣＤ３ｚ－ｔａｇＢＦＰ
ＭＶＬＱＴＱＶＦＩＳＬＬＬＷＩＳＧＡＹＧ（ｓｃＦＶ＿ヒンジ）ＣＰＰＣＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＭＳＱＳＮＲＥＬＶＶＤＦＬＳＹＫＬＳＱＫＧＹＳＷＳＱＦＳＤＶＥＥＮＲＴＥＡＰＥＧＴＥＳＥＭＥＴＰＳＡＩＮＧＮＰＳＷＨＬＡＤＳＰＡＶＮＧＡＴＧＨＳＳＳＬＤＡＲＥＶＩＰＭＡＡＶＫＱＡＬＲＥＡＧＤＥＦＥＬＲＹＲＲＡＦＳＤＬＴＳＱＬＨＩＴＰＧＴＡＹＱＳＦＥＱＶＶＮＥＬＦＲＤＧＶＮＷＧＲＩＶＡＦＦＳＦＧＧＡＬＣＶＥＳＶＤＫＥＭＱＶＬＶＳＲＩＡＡＷＭＡＴＹＬＮＤＨＬＥＰＷＩＱＥＮＧＧＷＤＴＦＶＥＬＹＧＮＮＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＩＨＬＧＨＩＬＦＬＬＬＬＰＶＡＡＡＱＴＴＰＧＥＲＳＳＬＰＡＦＹＰＧＴＳＧＳＣＳＧＣＧＳＬＳＬＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＧＳＡＰＰＮＬＷＡＡＱＲＹＧＲＥＬＲＲＭＳＤＥＦＥＧＳＦＫＧＳＡＳＧＳＡＳＡＧＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＶＳＫＧＥＥＬＩＫＥＮＭＨＭＫＬＹＭＥＧＴＶＤＮＨＨＦＫＣＴＳＥＧＥＧＫＰＹＥＧＴＱＴＭＲＩＫＶＶＥＧＧＰＬＰＦＡＦＤＩＬＡＴＳＦＬＹＧＳＫＴＦＩＮＨＴＱＧＩＰＤＦＦＫＱＳＦＰＥＧＦＴＷＥＲＶＴＴＹＥＤＧＧＶＬＴＡＴＱＤＴＳＬＱＤＧＣＬＩＹＮＶＫＩＲＧＶＮＦＴＳＮＧＰＶＭＱＫＫＴＬＧＷＥＡＦＴＥＴＬＹＰＡＤＧＧＬＥＧＲＮＤＭＡＬＫＬＶＧＧＳＨＬＩＡＮＡＫＴＴＹＲＳＫＫＰＡＫＮＬＫＭＰＧＶＹＹＶＤＹＲＬＥＲＩＫＥＡＮＮＥＴＹＶＥＱＨＥＶＡＶＡＲＹＣＤＬＰＳＫＬＧＨＫＬＮ 配列番号６

＞ｈＩｇＫＳＰ－（ｓｃＦＶ－ヒンジ）－ＣＤ２８ｔｍ－４－１ＢＢ－ＣＤ３ｚ
ＭＶＬＱＴＱＶＦＩＳＬＬＬＷＩＳＧＡＹＧ（ｓｃＦＶ＿ヒンジ）ＣＰＰＣＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ 配列番号７

＞Ｄａｐ１０－ＣＤ２８ｔｍ－４１ＢＢ－ＢａｄＢＨ３－ＣＤ３ｚ－Ｐ２ａ－ＥＧＦＲｔ
ＭＩＨＬＧＨＩＬＦＬＬＬＬＰＶＡＡＡＱＴＴＰＧＥＲＳＳＬＰＡＦＹＰＧＴＳＧＳＣＳＧＣＧＳＬＳＬＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＧＳＡＰＰＮＬＷＡＡＱＲＹＧＲＥＬＲＲＭＳＤＥＦＥＧＳＦＫＧＳＡＳＧＳＡＳＡＧＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥＦＫＤＳＬＳＩＮＡＴＮＩＫＨＦＫＮＣＴＳＩＳＧＤＬＨＩＬＰＶＡＦＲＧＤＳＦＴＨＴＰＰＬＤＰＱＥＬＤＩＬＫＴＶＫＥＩＴＧＦＬＬＩＱＡＷＰＥＮＲＴＤＬＨＡＦＥＮＬＥＩＩＲＧＲＴＫＱＨＧＱＦＳＬＡＶＶＳＬＮＩＴＳＬＧＬＲＳＬＫＥＩＳＤＧＤＶＩＩＳＧＮＫＮＬＣＹＡＮＴＩＮＷＫＫＬＦＧＴＳＧＱＫＴＫＩＩＳＮＲＧＥＮＳＣＫＡＴＧＱＶＣＨＡＬＣＳＰＥＧＣＷＧＰＥＰＲＤＣＶＳＣＲＮＶＳＲＧＲＥＣＶＤＫＣＮＬＬＥＧＥＰＲＥＦＶＥＮＳＥＣＩＱＣＨＰＥＣＬＰＱＡＭＮＩＴＣＴＧＲＧＰＤＮＣＩＱＣＡＨＹＩＤＧＰＨＣＶＫＴＣＰＡＧＶＭＧＥＮＮＴＬＶＷＫＹＡＤＡＧＨＶＣＨＬＣＨＰＮＣＴＹＧＣＴＧＰＧＬＥＧＣＰＴＮＧＰＫＩＰＳＩＡＴＧＭＶＧＡＬＬＬＬＬＶＶＡＬＧＩＧＬＦＭ 配列番号８

＞Ｄａｐ１０－ＣＤ２８ｔｍ－４１ＢＢ－ＡＮＲ－ＣＤ３ｚ－Ｐ２ａ－ＥＧＦＲｔ
ＭＩＨＬＧＨＩＬＦＬＬＬＬＰＶＡＡＡＱＴＴＰＧＥＲＳＳＬＰＡＦＹＰＧＴＳＧＳＣＳＧＣＧＳＬＳＬＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＧＳＧＥＬＤＥＬＶＹＬＬＤＧＰＧＹＤＰＩＨＳＤＶＶＴＲＧＧＳＨＬＦＮＦＧＳＡＳＧＳＡＳＡＧＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥＦＫＤＳＬＳＩＮＡＴＮＩＫＨＦＫＮＣＴＳＩＳＧＤＬＨＩＬＰＶＡＦＲＧＤＳＦＴＨＴＰＰＬＤＰＱＥＬＤＩＬＫＴＶＫＥＩＴＧＦＬＬＩＱＡＷＰＥＮＲＴＤＬＨＡＦＥＮＬＥＩＩＲＧＲＴＫＱＨＧＱＦＳＬＡＶＶＳＬＮＩＴＳＬＧＬＲＳＬＫＥＩＳＤＧＤＶＩＩＳＧＮＫＮＬＣＹＡＮＴＩＮＷＫＫＬＦＧＴＳＧＱＫＴＫＩＩＳＮＲＧＥＮＳＣＫＡＴＧＱＶＣＨＡＬＣＳＰＥＧＣＷＧＰＥＰＲＤＣＶＳＣＲＮＶＳＲＧＲＥＣＶＤＫＣＮＬＬＥＧＥＰＲＥＦＶＥＮＳＥＣＩＱＣＨＰＥＣＬＰＱＡＭＮＩＴＣＴＧＲＧＰＤＮＣＩＱＣＡＨＹＩＤＧＰＨＣＶＫＴＣＰＡＧＶＭＧＥＮＮＴＬＶＷＫＹＡＤＡＧＨＶＣＨＬＣＨＰＮＣＴＹＧＣＴＧＰＧＬＥＧＣＰＴＮＧＰＫＩＰＳＩＡＴＧＭＶＧＡＬＬＬＬＬＶＶＡＬＧＩＧＬＦＭ 配列番号９

＞Ｄａｐ１０－ＣＤ２８ｔｍ－４１ＢＢ－ＤＮＣＲ２－ＣＤ３ｚ－Ｐ２ａ－ＥＧＦＲｔ
ＭＩＨＬＧＨＩＬＦＬＬＬＬＰＶＡＡＡＱＴＴＰＧＥＲＳＳＬＰＡＦＹＰＧＴＳＧＳＣＳＧＣＧＳＬＳＬＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＧＳＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨＧＳＡＳＧＳＡＳＡＧＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥＦＫＤＳＬＳＩＮＡＴＮＩＫＨＦＫＮＣＴＳＩＳＧＤＬＨＩＬＰＶＡＦＲＧＤＳＦＴＨＴＰＰＬＤＰＱＥＬＤＩＬＫＴＶＫＥＩＴＧＦＬＬＩＱＡＷＰＥＮＲＴＤＬＨＡＦＥＮＬＥＩＩＲＧＲＴＫＱＨＧＱＦＳＬＡＶＶＳＬＮＩＴＳＬＧＬＲＳＬＫＥＩＳＤＧＤＶＩＩＳＧＮＫＮＬＣＹＡＮＴＩＮＷＫＫＬＦＧＴＳＧＱＫＴＫＩＩＳＮＲＧＥＮＳＣＫＡＴＧＱＶＣＨＡＬＣＳＰＥＧＣＷＧＰＥＰＲＤＣＶＳＣＲＮＶＳＲＧＲＥＣＶＤＫＣＮＬＬＥＧＥＰＲＥＦＶＥＮＳＥＣＩＱＣＨＰＥＣＬＰＱＡＭＮＩＴＣＴＧＲＧＰＤＮＣＩＱＣＡＨＹＩＤＧＰＨＣＶＫＴＣＰＡＧＶＭＧＥＮＮＴＬＶＷＫＹＡＤＡＧＨＶＣＨＬＣＨＰＮＣＴＹＧＣＴＧＰＧＬＥＧＣＰＴＮＧＰＫＩＰＳＩＡＴＧＭＶＧＡＬＬＬＬＬＶＶＡＬＧＩＧＬＦＭ 配列番号１０

＞Ｄａｐ１０－ＣＤ２８ｔｍ－４１ＢＢ－ＧＮＣＲ１－ＣＤ３ｚ－Ｐ２ａ－ＥＧＦＲｔ
ＭＩＨＬＧＨＩＬＦＬＬＬＬＰＶＡＡＡＱＴＴＰＧＥＲＳＳＬＰＡＦＹＰＧＴＳＧＳＣＳＧＣＧＳＬＳＬＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＧＳＧＳＤＩＥＫＬＣＫＫＡＥＥＥＡＫＥＡＱＥＫＡＤＥＬＲＱＲＨＰＤＳＱＡＡＥＤＡＥＤＬＡＮＬＡＶＡＡＶＬＴＡＣＬＬＡＱＥＨＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＲＡＶＩＬＡＩＭＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＥＡＶＥＲＡＩＷＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＫＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＥＡＳＫＡＡＥＥＡＱＲＨＰＤＳＱＫＡＲＤＥＩＫＥＡＳＱＫＡＥＥＶＫＥＲＣＫＳＧＳＡＳＧＳＡＳＡＧＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥＦＫＤＳＬＳＩＮＡＴＮＩＫＨＦＫＮＣＴＳＩＳＧＤＬＨＩＬＰＶＡＦＲＧＤＳＦＴＨＴＰＰＬＤＰＱＥＬＤＩＬＫＴＶＫＥＩＴＧＦＬＬＩＱＡＷＰＥＮＲＴＤＬＨＡＦＥＮＬＥＩＩＲＧＲＴＫＱＨＧＱＦＳＬＡＶＶＳＬＮＩＴＳＬＧＬＲＳＬＫＥＩＳＤＧＤＶＩＩＳＧＮＫＮＬＣＹＡＮＴＩＮＷＫＫＬＦＧＴＳＧＱＫＴＫＩＩＳＮＲＧＥＮＳＣＫＡＴＧＱＶＣＨＡＬＣＳＰＥＧＣＷＧＰＥＰＲＤＣＶＳＣＲＮＶＳＲＧＲＥＣＶＤＫＣＮＬＬＥＧＥＰＲＥＦＶＥＮＳＥＣＩＱＣＨＰＥＣＬＰＱＡＭＮＩＴＣＴＧＲＧＰＤＮＣＩＱＣＡＨＹＩＤＧＰＨＣＶＫＴＣＰＡＧＶＭＧＥＮＮＴＬＶＷＫＹＡＤＡＧＨＶＣＨＬＣＨＰＮＣＴＹＧＣＴＧＰＧＬＥＧＣＰＴＮＧＰＫＩＰＳＩＡＴＧＭＶＧＡＬＬＬＬＬＶＶＡＬＧＩＧＬＦＭ 配列番号１１

＞ｈＩｇＫＳＰ－（ｓｃＦＶ－ヒンジ）－ＣＤ２８ｔｍ－４－１ＢＢ－ＣＤ３ｚ－Ｐ２ａ－ＥＧＦＲｔ
ＭＶＬＱＴＱＶＦＩＳＬＬＬＷＩＳＧＡＹＧ（ｓｃＦＶ＿ヒンジ）ＣＰＰＣＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥＦＫＤＳＬＳＩＮＡＴＮＩＫＨＦＫＮＣＴＳＩＳＧＤＬＨＩＬＰＶＡＦＲＧＤＳＦＴＨＴＰＰＬＤＰＱＥＬＤＩＬＫＴＶＫＥＩＴＧＦＬＬＩＱＡＷＰＥＮＲＴＤＬＨＡＦＥＮＬＥＩＩＲＧＲＴＫＱＨＧＱＦＳＬＡＶＶＳＬＮＩＴＳＬＧＬＲＳＬＫＥＩＳＤＧＤＶＩＩＳＧＮＫＮＬＣＹＡＮＴＩＮＷＫＫＬＦＧＴＳＧＱＫＴＫＩＩＳＮＲＧＥＮＳＣＫＡＴＧＱＶＣＨＡＬＣＳＰＥＧＣＷＧＰＥＰＲＤＣＶＳＣＲＮＶＳＲＧＲＥＣＶＤＫＣＮＬＬＥＧＥＰＲＥＦＶＥＮＳＥＣＩＱＣＨＰＥＣＬＰＱＡＭＮＩＴＣＴＧＲＧＰＤＮＣＩＱＣＡＨＹＩＤＧＰＨＣＶＫＴＣＰＡＧＶＭＧＥＮＮＴＬＶＷＫＹＡＤＡＧＨＶＣＨＬＣＨＰＮＣＴＹＧＣＴＧＰＧＬＥＧＣＰＴＮＧＰＫＩＰＳＩＡＴＧＭＶＧＡＬＬＬＬＬＶＶＡＬＧＩＧＬＦＭ 配列番号１２

＞ｈＩｇＫＳＰ－（ｓｃＦＶ－ヒンジ）－ＣＤ２８ｔｍ－４－１ＢＢ－ＢｃｌｘＬ
ＭＶＬＱＴＱＶＦＩＳＬＬＬＷＩＳＧＡＹＧ（ｓｃＦＶ＿ヒンジ）ＣＰＰＣＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＭＳＱＳＮＲＥＬＶＶＤＦＬＳＹＫＬＳＱＫＧＹＳＷＳＱＦＳＤＶＥＥＮＲＴＥＡＰＥＧＴＥＳＥＭＥＴＰＳＡＩＮＧＮＰＳＷＨＬＡＤＳＰＡＶＮＧＡＴＧＨＳＳＳＬＤＡＲＥＶＩＰＭＡＡＶＫＱＡＬＲＥＡＧＤＥＦＥＬＲＹＲＲＡＦＳＤＬＴＳＱＬＨＩＴＰＧＴＡＹＱＳＦＥＱＶＶＮＥＬＦＲＤＧＶＮＷＧＲＩＶＡＦＦＳＦＧＧＡＬＣＶＥＳＶＤＫＥＭＱＶＬＶＳＲＩＡＡＷＭＡＴＹＬＮＤＨＬＥＰＷＩＱＥＮＧＧＷＤＴＦＶＥＬＹＧＮＮ 配列番号１３

＞ｈＩｇＫＳＰ－（ｓｃＦＶ－ヒンジ）－ＣＤ２８ｔｍ－４－１ＢＢ－ＮＳ３ａＨ１ｇｓ
ＭＶＬＱＴＱＶＦＩＳＬＬＬＷＩＳＧＡＹＧ（ｓｃＦＶ＿ヒンジ）ＣＰＰＣＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＶＶＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰ 配列番号１４

＞ＤＮＣＲ２－Ｃａｓｐ９ｇｓＤ３３０Ａ－Ｐ２ａ－ＥＧＦＰ－ＮＬＳ
ＭＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨＳＧＳＡＳＧＳＧＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＡＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＶＳＫＧＥＥＬＦＴＧＶＶＰＩＬＶＥＬＤＧＤＶＮＧＨＫＦＳＶＳＧＥＧＥＧＤＡＴＹＧＫＬＴＬＫＦＩＣＴＴＧＫＬＰＶＰＷＰＴＬＶＴＴＬＴＹＧＶＱＣＦＳＲＹＰＤＨＭＫＱＨＤＦＦＫＳＡＭＰＥＧＹＶＱＥＲＴＩＦＦＫＤＤＧＮＹＫＴＲＡＥＶＫＦＥＧＤＴＬＶＮＲＩＥＬＫＧＩＤＦＫＥＤＧＮＩＬＧＨＫＬＥＹＮＹＮＳＨＮＶＹＩＭＡＤＫＱＫＮＧＩＫＶＮＦＫＩＲＨＮＩＥＤＧＳＶＱＬＡＤＨＹＱＱＮＴＰＩＧＤＧＰＶＬＬＰＤＮＨＹＬＳＴＱＳＡＬＳＫＤＰＮＥＫＲＤＨＭＶＬＬＥＦＶＴＡＡＧＩＴＬＧＭＤＥＬＹＫ 配列番号１５

＞ｉＣａｓｐ－９ （ＦＫＢＰ－Ｆ３６Ｖ－ｃａｓｐ－９）
ＭＬＥＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＳＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号１６

＞ｉＣａｓｐ－９－Ｄ３３０Ａ （ＦＫＢＰ－Ｆ３６Ｖ－ｃａｓｐ－９）
ＭＬＥＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＳＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＡＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴ 配列番号１７

＞ｒａｐａＣａｓｐ－９ （ＦＲＢ－ＦＫＢＰ－ｃａｓｐ－９）
ＭＡＳＲＩＬＷＨＥＭＷＨＥＧＬＥＥＡＳＲＬＹＦＧＥＲＮＶＫＧＭＦＥＶＬＥＰＬＨＡＭＭＥＲＧＰＱＴＬＫＥＴＳＦＮＱＡＹＧＲＤＬＭＥＡＱＥＷＣＲＫＹＭＫＳＧＮＶＫＤＬＬＱＡＷＤＬＹＹＨＶＦＲＲＩＳＫＬＥＹＳＧＧＧＳＬＥＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＦＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号１８

＞ＮＳ３ａ－Ｃａｓｐ９－Ｔ２ａ－ＤＮＣＲ２－Ｃａｓｐ９
ＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＡＱＱＴＲＧＥＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＩＶＳＴＡＴＱＴＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＳＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨＳＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号１９

＞ＮＳ３ａ－Ｃａｓｐ９－Ｔ２ａ－ＧＮＣＲ１－Ｃａｓｐ９
ＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＡＱＱＴＲＧＥＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＩＶＳＴＡＴＱＴＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＳＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰＤＩＥＫＬＣＫＫＡＥＥＥＡＫＥＡＱＥＫＡＤＥＬＲＱＲＨＰＤＳＱＡＡＥＤＡＥＤＬＡＮＬＡＶＡＡＶＬＴＡＣＬＬＡＱＥＨＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＲＡＶＩＬＡＩＭＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＥＡＶＥＲＡＩＷＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＫＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＥＡＳＫＡＡＥＥＡＱＲＨＰＤＳＱＫＡＲＤＥＩＫＥＡＳＱＫＡＥＥＶＫＥＲＣＫＳＳＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号２０

＞ＮＳ３ａ－ＤＮＣＲ２－Ｃａｓｐ９
ＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＡＱＱＴＲＧＥＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＩＶＳＴＡＴＱＴＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＳＧＧＧＳＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号２１

＞ＮＳ３ａ－ＧＮＣＲ１－Ｃａｓｐ９
ＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＡＱＱＴＲＧＥＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＩＶＳＴＡＴＱＴＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＳＧＧＧＳＤＩＥＫＬＣＫＫＡＥＥＥＡＫＥＡＱＥＫＡＤＥＬＲＱＲＨＰＤＳＱＡＡＥＤＡＥＤＬＡＮＬＡＶＡＡＶＬＴＡＣＬＬＡＱＥＨＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＲＡＶＩＬＡＩＭＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＥＡＶＥＲＡＩＷＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＫＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＥＡＳＫＡＡＥＥＡＱＲＨＰＤＳＱＫＡＲＤＥＩＫＥＡＳＱＫＡＥＥＶＫＥＲＣＫＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号２２

＞ＤＮＣＲ２－８ｌｉｎｋ－ＮＳ３ａ－Ｃａｓｐ９
ＭＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨＳＧＧＳＧＳＧＳＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＡＱＱＴＲＧＥＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＩＶＳＴＡＴＱＴＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号２３

＞ＤＮＣＲ２－５ｌｉｎｋ－ＮＳ３ａ－Ｃａｓｐ９
ＭＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨＳＧＧＧＳＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＡＱＱＴＲＧＥＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＩＶＳＴＡＴＱＴＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号２４

＞ＤＮＣＲ２－３ｌｉｎｋ－ＮＳ３ａ－Ｃａｓｐ９
ＭＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨＳＧＳＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＡＱＱＴＲＧＥＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＩＶＳＴＡＴＱＴＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号２５

＞ＤＮＣＲ２－ｎｏＬｉｎｋ－ＮＳ３ａ－Ｃａｓｐ９
ＭＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＡＱＱＴＲＧＥＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＩＶＳＴＡＴＱＴＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号２６

＞Ｄ１－ｎｏＬｉｎｋ－ＮＳ３ａ－Ｃａｓｐ９
ＭＤＤＮＥＡＥＫＬＩＲＥＡＥＥＡＡＫＤＡＥＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＫＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＶＶＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＳＧＳＧＧＳＧＳＡＳＧＳＧＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＡＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号２７

＞Ｄ９－ＮＳ３ａ－Ｃａｓｐ９
ＭＥＬＥＥＶＬＫＤＬＥＥＡＬＥＲＬＲＮＥＥＬＲＲＬＩＥＥＩＡＥＬＬＲＲＲＤＤＨＳＩＩＹＭＩＥＡＬＩＦＶＩＥＡＶＥＲＴＧＤＥＲＩＥＫＬＬＥＥＬＩＫＲＩＲＮＧＤＤＤＳＡＩＭＲＩＶＬＡＶＹＬＩＥＥＮＬＲＥＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＶＶＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＳＧＳＧＧＳＧＳＡＳＧＳＧＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＡＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号２８

＞Ｄ２０－ＮＳ３ａ－Ｃａｓｐ９
ＭＹＡＫＥＡＡＥＦＡＲＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＥＲＬＡＲＲＧＳＳＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＶＶＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＳＧＳＧＧＳＧＳＡＳＧＳＧＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＡＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号２９

－ＧＮＣＲ１－８ｌｉｎｋ－ＮＳ３ａ－Ｃａｓｐ９
ＭＤＩＥＫＬＣＫＫＡＥＥＥＡＫＥＡＱＥＫＡＤＥＬＲＱＲＨＰＤＳＱＡＡＥＤＡＥＤＬＡＮＬＡＶＡＡＶＬＴＡＣＬＬＡＱＥＨＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＲＡＶＩＬＡＩＭＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＥＡＶＥＲＡＩＷＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＫＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＥＡＳＫＡＡＥＥＡＱＲＨＰＤＳＱＫＡＲＤＥＩＫＥＡＳＱＫＡＥＥＶＫＥＲＣＫＳＳＧＧＳＧＳＧＳＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＡＱＱＴＲＧＥＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＩＶＳＴＡＴＱＴＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号３０

－ＧＮＣＲ１－５ｌｉｎｋ－ＮＳ３ａ－Ｃａｓｐ９
ＭＤＩＥＫＬＣＫＫＡＥＥＥＡＫＥＡＱＥＫＡＤＥＬＲＱＲＨＰＤＳＱＡＡＥＤＡＥＤＬＡＮＬＡＶＡＡＶＬＴＡＣＬＬＡＱＥＨＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＲＡＶＩＬＡＩＭＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＥＡＶＥＲＡＩＷＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＫＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＥＡＳＫＡＡＥＥＡＱＲＨＰＤＳＱＫＡＲＤＥＩＫＥＡＳＱＫＡＥＥＶＫＥＲＣＫＳＳＧＧＧＳＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＡＱＱＴＲＧＥＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＩＶＳＴＡＴＱＴＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号３１

＞ＧＮＣＲ１－３ｌｉｎｋ－ＮＳ３ａ－Ｃａｓｐ９
ＭＤＩＥＫＬＣＫＫＡＥＥＥＡＫＥＡＱＥＫＡＤＥＬＲＱＲＨＰＤＳＱＡＡＥＤＡＥＤＬＡＮＬＡＶＡＡＶＬＴＡＣＬＬＡＱＥＨＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＲＡＶＩＬＡＩＭＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＥＡＶＥＲＡＩＷＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＫＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＥＡＳＫＡＡＥＥＡＱＲＨＰＤＳＱＫＡＲＤＥＩＫＥＡＳＱＫＡＥＥＶＫＥＲＣＫＳＳＧＳＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＡＱＱＴＲＧＥＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＩＶＳＴＡＴＱＴＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号３２

＞ＧＮＣＲ１－ｎｏＬｉｎｋ－ＮＳ３ａ－Ｃａｓｐ９
ＭＤＩＥＫＬＣＫＫＡＥＥＥＡＫＥＡＱＥＫＡＤＥＬＲＱＲＨＰＤＳＱＡＡＥＤＡＥＤＬＡＮＬＡＶＡＡＶＬＴＡＣＬＬＡＱＥＨＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＲＡＶＩＬＡＩＭＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＥＡＶＥＲＡＩＷＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＫＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＥＡＳＫＡＡＥＥＡＱＲＨＰＤＳＱＫＡＲＤＥＩＫＥＡＳＱＫＡＥＥＶＫＥＲＣＫＳＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＡＱＱＴＲＧＥＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＩＶＳＴＡＴＱＴＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号３３

＞ＤＮＣＲ２－Ｃａｓｐ９Ｄ３３０Ａ
ＭＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨＳＧＳＡＳＧＳＧＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＡＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号３４

＞ＤＮＣＲ２－Ｃａｓｐ９
ＭＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨＳＧＳＡＳＧＳＧＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号３５

＞Ｄ１－Ｃａｓｐ９Ｄ３３０Ａ
ＭＤＤＮＥＡＥＫＬＩＲＥＡＥＥＡＡＫＤＡＥＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＫＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＳＧＳＡＳＧＳＧＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＡＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号３６

＞Ｄ９－Ｃａｓｐ９Ｄ３３０Ａ
ＭＥＬＥＥＶＬＫＤＬＥＥＡＬＥＲＬＲＮＥＥＬＲＲＬＩＥＥＩＡＥＬＬＲＲＲＤＤＨＳＩＩＹＭＩＥＡＬＩＦＶＩＥＡＶＥＲＴＧＤＥＲＩＥＫＬＬＥＥＬＩＫＲＩＲＮＧＤＤＤＳＡＩＭＲＩＶＬＡＶＹＬＩＥＥＮＬＲＥＳＧＳＡＳＧＳＧＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＡＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号３７

＞Ｄ２０－Ｃａｓｐ９Ｄ３３０Ａ
ＭＹＡＫＥＡＡＥＦＡＲＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＥＲＬＡＲＲＧＳＳＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＳＧＳＡＳＧＳＧＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＡＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号３８

＞ＧＮＣＲ１－Ｃａｓｐ９Ｄ３３０Ａ
ＭＤＩＥＫＬＣＫＫＡＥＥＥＡＫＥＡＱＥＫＡＤＥＬＲＱＲＨＰＤＳＱＡＡＥＤＡＥＤＬＡＮＬＡＶＡＡＶＬＴＡＣＬＬＡＱＥＨＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＲＡＶＩＬＡＩＭＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＥＡＶＥＲＡＩＷＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＫＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＥＡＳＫＡＡＥＥＡＱＲＨＰＤＳＱＫＡＲＤＥＩＫＥＡＳＱＫＡＥＥＶＫＥＲＣＫＳＧＳＡＳＧＳＧＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＡＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号３９

＞ＧＮＣＲ１－Ｃａｓｐ９
ＭＤＩＥＫＬＣＫＫＡＥＥＥＡＫＥＡＱＥＫＡＤＥＬＲＱＲＨＰＤＳＱＡＡＥＤＡＥＤＬＡＮＬＡＶＡＡＶＬＴＡＣＬＬＡＱＥＨＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＲＡＶＩＬＡＩＭＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＥＡＶＥＲＡＩＷＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＫＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＥＡＳＫＡＡＥＥＡＱＲＨＰＤＳＱＫＡＲＤＥＩＫＥＡＳＱＫＡＥＥＶＫＥＲＣＫＳＧＳＡＳＧＳＧＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳ 配列番号４０

＞ｈＩｇＫＳＰ－（ｓｃＦＶ－ヒンジ）－ＣＤ２８ｔｍ－４－１ＢＢ－ＮＳ３ａＨ１
ＭＶＬＱＴＱＶＦＩＳＬＬＬＷＩＳＧＡＹＧ（ｓｃＦＶ＿ヒンジ）ＣＰＰＣＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＶＶＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰ 配列番号４１

＞二量体－ＮＳ３ａＨ１
ＭＴＲＴＥＩＩＲＥＬＥＲＳＬＲＥＱＥＥＬＡＫＲＬＫＥＬＬＲＥＬＥＲＬＱＲＥＧＳＳＤＥＤＶＲＥＬＬＲＥＩＫＥＬＶＥＥＩＥＫＬＡＲＥＱＫＹＬＶＥＥＬＫＲＱＤＧＳＡＳＧＳＡＳＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＶＶＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰ 配列番号４２

＞六量体－ＮＳ３ａ
ＭＴＥＤＥＩＲＫＬＲＫＬＬＥＥＡＥＫＫＬＫＫＬＥＤＫＴＲＲＳＥＥＩＳＫＴＤＤＤＰＫＡＱＳＬＱＬＩＡＥＳＬＭＬＩＡＥＳＬＬＩＩＡＩＳＬＬＬＳＳＲＮＧＳＡＳＧＳＡＳＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＶＶＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰ 配列番号４３

＞五量体－ＮＳ３ａＨ１
ＭＴＲＲＫＱＥＭＫＲＬＫＫＥＭＥＫＩＲＥＥＴＥＥＶＫＫＥＩＥＥＳＫＫＲＰＱＳＥＳＡＫＮＬＩＬＩＭＱＬＬＩＮＱＩＲＬＬＡＬＱＩＲＭＬＡＬＱＬＱＥＧＳＡＳＧＳＡＳＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＶＶＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰ 配列番号４４

＞三量体－ＮＳ３ａＨ１
ＭＳＥＹＥＩＲＫＡＬＥＥＬＫＡＳＴＡＥＬＫＲＡＴＡＳＬＲＡＳＴＥＥＬＫＫＮＰＳＥＤＡＬＶＥＮＮＲＬＩＶＥＨＮＡＩＩＶＥＮＮＲＩＩＡＡＶＬＥＬＩＶＲＡＩＫＧＳＡＳＧＳＡＳＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＶＶＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰ 配列番号４５

＞ｈＩｇＫＳＰ－（ｓｃＦＶ－ヒンジ）－ＣＤ２８ｔｍ－４－１ＢＢ－ＮＳ３ａＨ１－ＮＳ３ａＨ１
ＭＶＬＱＴＱＶＦＩＳＬＬＬＷＩＳＧＡＹＧ（ｓｃＦＶ＿ヒンジ）ＣＰＰＣＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＡＳＧＳＡＳＧＳＡＳＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＶＶＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＧＳＳＧＳＳＧＳＳＧＧＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＶＶＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰ 配列番号４６

＞ＦＫＢＰ（Ｆ３６Ｖ）－Ｃａｓｐ－１
ＭＬＥＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＳＧＧＧＳＧＳＧＮＰＡＭＰＴＳＳＧＳＥＧＮＶＫＬＣＳＬＥＥＡＱＲＩＷＫＱＫＳＡＥＩＹＰＩＭＤＫＳＳＲＴＲＬＡＬＩＩＣＮＥＥＦＤＳＩＰＲＲＴＧＡＥＶＤＩＴＧＭＴＭＬＬＱＮＬＧＹＳＶＤＶＫＫＮＬＴＡＳＤＭＴＴＥＬＥＡＦＡＨＲＰＥＨＫＴＳＤＳＴＦＬＶＦＭＳＨＧＩＲＥＧＩＣＧＫＫＨＳＥＱＶＰＤＩＬＱＬＮＡＩＦＮＭＬＮＴＫＮＣＰＳＬＫＤＫＰＫＶＩＩＩＱＡＣＲＧＤＳＰＧＶＶＷＦＫＤＳＶＧＶＳＧＮＬＳＬＰＴＴＥＥＦＥＤＤＡＩＫＫＡＨＩＥＫＤＦＩＡＦＣＳＳＴＰＤＮＶＳＷＲＨＰＴＭＧＳＶＦＩＧＲＬＩＥＨＭＱＥＹＡＣＳＣＤＶＥＥＩＦＲＫＶＲＦＳＦＥＱＰＤＧＲＡＱＭＰＴＴＥＲＶＴＬＴＲＣＦＹＬＦＰＧＨ 配列番号４７

＞ＦＫＢＰ（Ｆ３６Ｖ）－Ｃａｓｐ－４
ＭＬＥＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＳＧＧＧＳＧＳＧＥＡＧＰＰＥＳＧＥＳＴＤＡＬＫＬＣＰＨＥＥＦＬＲＬＣＫＥＲＡＥＥＩＹＰＩＫＥＲＮＮＲＴＲＬＡＬＩＩＣＮＴＥＦＤＨＬＰＰＲＮＧＡＤＦＤＩＴＧＭＫＥＬＬＥＧＬＤＹＳＶＤＶＥＥＮＬＴＡＲＤＭＥＳＡＬＲＡＦＡＴＲＰＥＨＫＳＳＤＳＴＦＬＶＬＭＳＨＧＩＬＥＧＩＣＧＴＶＨＤＥＫＫＰＤＶＬＬＹＤＴＩＦＱＩＦＮＮＲＮＣＬＳＬＫＤＫＰＫＶＩＩＶＱＡＣＲＧＡＮＲＧＥＬＷＶＲＤＳＰＡＳＬＥＶＡＳＳＱＳＳＥＮＬＥＥＤＡＶＹＫＴＨＶＥＫＤＦＩＡＦＣＳＳＴＰＨＮＶＳＷＲＤＳＴＭＧＳＩＦＩＴＱＬＩＴＣＦＱＫＹＳＷＣＣＨＬＥＥＶＦＲＫＶＱＱＳＦＥＴＰＲＡＫＡＱＭＰＴＩＥＲＬＳＭＴＲＹＦＹＬＦＰＧＮ 配列番号４８

＞ＦＫＢＰ（Ｆ３６Ｖ）－Ｃａｓｐ－３
ＭＬＥＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＳＧＧＧＳＧＭＥＮＴＥＮＳＶＤＳＫＳＩＫＮＬＥＰＫＩＩＨＧＳＥＳＭＤＳＧＩＳＬＤＮＳＹＫＭＤＹＰＥＭＧＬＣＩＩＩＮＮＫＮＦＨＫＳＴＧＭＴＳＲＳＧＴＤＶＤＡＡＮＬＲＥＴＦＲＮＬＫＹＥＶＲＮＫＮＤＬＴＲＥＥＩＶＥＬＭＲＤＶＳＫＥＤＨＳＫＲＳＳＦＶＣＶＬＬＳＨＧＥＥＧＩＩＦＧＴＮＧＰＶＤＬＫＫＩＴＮＦＦＲＧＤＲＣＲＳＬＴＧＫＰＫＬＦＩＩＱＡＣＲＧＴＥＬＤＣＧＩＥＴＤＳＧＶＤＤＤＭＡＣＨＫＩＰＶＥＡＤＦＬＹＡＹＳＴＡＰＧＹＹＳＷＲＮＳＫＤＧＳＷＦＩＱＳＬＣＡＭＬＫＱＹＡＤＫＬＥＦＭＨＩＬＴＲＶＮＲＫＶＡＴＥＦＥＳＦＳＦＤＡＴＦＨＡＫＫＱＩＰＣＩＶＳＭＬＴＫＥＬＹＦＹＨ 配列番号４９

＞ＦＫＢＰ（Ｆ３６Ｖ）－Ｃａｓｐ－３－Ｃａｓｐ－９界面
ＭＬＥＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＳＧＧＧＳＧＭＥＮＴＥＮＳＶＤＳＫＳＩＫＮＬＥＰＫＩＩＨＧＳＥＳＭＤＳＧＩＳＬＤＮＳＹＫＭＤＹＰＥＭＧＬＣＩＩＩＮＮＫＮＦＨＫＳＴＧＭＴＳＲＳＧＴＤＶＤＡＡＮＬＲＥＴＦＲＮＬＫＹＥＶＲＮＫＮＤＬＴＲＥＥＩＶＥＬＭＲＤＶＳＫＥＤＨＳＫＲＳＳＦＶＣＶＬＬＳＨＧＥＥＧＩＩＦＧＴＮＧＰＶＤＬＫＫＩＴＮＦＦＲＧＤＲＣＲＳＬＴＧＫＰＫＬＦＩＩＱＡＣＲＧＴＥＬＤＣＧＩＥＴＤＳＧＶＤＤＤＭＡＣＨＫＩＰＶＥＡＤＦＬＹＡＹＳＴＡＰＧＹＹＳＷＲＮＳＫＤＧＳＷＦＩＱＳＬＣＡＭＬＫＱＹＡＤＫＬＥＦＭＨＩＬＴＲＶＮＲＫＶＡＴＥＦＥＳＦＳＦＤＡＴＦＨＡＫＫＱＩＰＧＣＦＮＦＬＴＫＥＬＹＦＹＨ 配列番号５０

＞ＲＩＰＫ３－ＦＫＢＰ（Ｆ３６Ｖ）－ＦＫＢＰ－Ｆ３６Ｖ）
ＭＳＣＶＫＬＷＰＳＧＡＰＡＰＬＶＳＩＥＥＬＥＮＱＥＬＶＧＫＧＧＦＧＴＶＦＲＡＱＨＲＫＷＧＹＤＶＡＶＫＩＶＮＳＫＡＩＳＲＥＶＫＡＭＡＳＬＤＮＥＦＶＬＲＬＥＧＶＩＥＫＶＮＷＤＱＤＰＫＰＡＬＶＴＫＦＭＥＮＧＳＬＳＧＬＬＱＳＱＣＰＲＰＷＰＬＬＣＲＬＬＫＥＶＶＬＧＭＦＹＬＨＤＱＮＰＶＬＬＨＲＤＬＫＰＳＮＶＬＬＤＰＥＬＨＶＫＬＡＤＦＧＬＳＴＦＱＧＧＳＱＳＧＴＧＳＧＥＰＧＧＴＬＧＹＬＡＰＥＬＦＶＮＶＮＲＫＡＳＴＡＳＤＶＹＳＦＧＩＬＭＷＡＶＬＡＧＲＥＶＥＬＰＴＥＰＳＬＶＹＥＡＶＣＮＲＱＮＲＰＳＬＡＥＬＰＱＡＧＰＥＴＰＧＬＥＧＬＫＥＬＭＱＬＣＷＳＳＥＰＫＤＲＰＳＦＱＥＣＬＰＫＴＤＥＶＦＱＭＶＥＮＮＭＮＡＡＶＳＴＶＫＤＦＬＳＱＬＲＳＳＮＲＲＦＳＩＰＥＳＧＱＧＧＴＥＭＤＧＦＲＲＴＩＥＮＱＨＳＲＮＤＶＭＶＳＥＷＬＮＫＬＮＬＥＥＰＰＳＳＶＰＫＫＣＰＳＬＴＫＲＳＲＡＱＥＥＱＶＰＱＡＷＴＡＧＴＳＳＤＳＭＡＱＰＰＱＴＰＥＴＳＴＦＲＮＱＭＰＳＰＴＳＴＧＴＰＳＰＧＰＲＧＮＱＧＡＥＲＱＧＭＮＷＳＣＲＴＰＥＰＮＰＶＴＧＲＰＬＶＮＩＹＮＭＬＥＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＧＧＳＧＲＬＥＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥ 配列番号５１

＞ＭＬＫＬ－ＦＫＢＰ（Ｆ３６Ｖ）－ＦＫＢＰ－Ｆ３６Ｖ）
ＭＥＮＬＫＨＩＩＴＬＧＱＶＩＨＫＲＣＥＥＭＫＹＣＫＫＱＣＲＲＬＧＨＲＶＬＧＬＩＫＰＬＥＭＬＱＤＱＧＫＲＳＶＰＳＥＫＬＴＴＡＭＮＲＦＫＡＡＬＥＥＡＮＧＥＩＥＫＦＳＮＲＳＮＩＣＲＦＬＴＡＳＱＤＫＩＬＦＫＤＶＮＲＫＬＳＤＶＷＫＥＬＳＬＬＬＱＶＥＱＲＭＰＶＳＰＩＳＱＧＡＳＷＡＱＥＤＱＱＤＡＤＥＤＲＲＡＦＱＭＬＲＲＤＮＥＫＩＥＡＳＬＲＲＬＥＩＮＭＫＥＩＫＥＴＬＲＱＹＬＰＰＫＣＭＱＥＩＰＱＥＱＩＫＥＩＫＫＥＱＬＳＧＳＰＷＩＬＬＲＥＮＥＶＳＴＬＹＫＧＥＹＨＲＡＰＶＡＩＫＶＦＫＫＬＱＡＧＳＩＡＩＶＲＱＴＦＮＫＥＩＫＴＭＫＫＦＥＳＰＮＩＬＲＩＦＧＩＣＩＤＥＴＶＴＰＰＱＦＳＩＶＭＥＹＣＥＬＧＴＬＲＥＬＬＤＲＥＫＤＬＴＬＧＫＲＭＶＬＶＬＧＡＡＲＧＬＹＲＬＨＨＳＥＡＰＥＬＨＧＫＩＲＳＳＮＦＬＶＴＱＧＹＱＶＫＬＡＧＦＥＬＲＫＴＱＴＳＭＳＬＧＴＴＲＥＫＴＤＲＶＫＳＴＡＹＬＳＰＱＥＬＥＤＶＦＹＱＹＤＶＫＳＥＩＹＳＦＧＩＶＬＷＥＩＡＴＧＤＩＰＦＱＧＣＮＳＥＫＩＲＫＬＶＡＶＫＲＱＱＥＰＬＧＥＤＣＰＳＥＬＲＥＩＩＤＥＣＲＡＨＤＰＳＶＲＰＳＶＤＥＩＬＫＫＬＳＴＦＳＫＧＳＭＬＥＧＶＱＶＥＴＩＳＰＥＧＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＴＧＳＧＭＬＥＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥ 配列番号５２

＞ＡＰＡＦ１－ＦＫＢＰ（Ｆ３６Ｖ）－ＦＫＢＰ－Ｆ３６Ｖ）
ＭＤＡＫＡＲＮＣＬＬＱＨＲＥＡＬＥＫＤＩＫＴＳＹＩＭＤＨＭＩＳＤＧＦＬＴＩＳＥＥＥＫＶＲＮＥＰＴＱＱＱＲＡＡＭＬＩＫＭＩＬＫＫＤＮＤＳＹＶＳＦＹＮＡＬＬＨＥＧＹＫＤＬＡＡＬＬＨＤＧＩＰＶＶＳＳＳＳＧＫＤＳＶＳＧＩＴＳＧＳＭＬＥＧＶＱＶＥＴＩＳＰＥＧＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＴＧＳＧＭＬＥＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥ 配列番号５３

＞ＤＮＣＲ２－Ｃａｓｐ－１
ＭＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨＴＧＳＧＧＧＳＧＮＰＡＭＰＴＳＳＧＳＥＧＮＶＫＬＣＳＬＥＥＡＱＲＩＷＫＱＫＳＡＥＩＹＰＩＭＤＫＳＳＲＴＲＬＡＬＩＩＣＮＥＥＦＤＳＩＰＲＲＴＧＡＥＶＤＩＴＧＭＴＭＬＬＱＮＬＧＹＳＶＤＶＫＫＮＬＴＡＳＤＭＴＴＥＬＥＡＦＡＨＲＰＥＨＫＴＳＤＳＴＦＬＶＦＭＳＨＧＩＲＥＧＩＣＧＫＫＨＳＥＱＶＰＤＩＬＱＬＮＡＩＦＮＭＬＮＴＫＮＣＰＳＬＫＤＫＰＫＶＩＩＩＱＡＣＲＧＤＳＰＧＶＶＷＦＫＤＳＶＧＶＳＧＮＬＳＬＰＴＴＥＥＦＥＤＤＡＩＫＫＡＨＩＥＫＤＦＩＡＦＣＳＳＴＰＤＮＶＳＷＲＨＰＴＭＧＳＶＦＩＧＲＬＩＥＨＭＱＥＹＡＣＳＣＤＶＥＥＩＦＲＫＶＲＦＳＦＥＱＰＤＧＲＡＱＭＰＴＴＥＲＶＴＬＴＲＣＦＹＬＦＰＧＨ 配列番号５４

＞ＤＮＣＲ２－Ｃａｓｐ－４
ＭＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨＴＧＳＧＧＧＳＧＥＡＧＰＰＥＳＧＥＳＴＤＡＬＫＬＣＰＨＥＥＦＬＲＬＣＫＥＲＡＥＥＩＹＰＩＫＥＲＮＮＲＴＲＬＡＬＩＩＣＮＴＥＦＤＨＬＰＰＲＮＧＡＤＦＤＩＴＧＭＫＥＬＬＥＧＬＤＹＳＶＤＶＥＥＮＬＴＡＲＤＭＥＳＡＬＲＡＦＡＴＲＰＥＨＫＳＳＤＳＴＦＬＶＬＭＳＨＧＩＬＥＧＩＣＧＴＶＨＤＥＫＫＰＤＶＬＬＹＤＴＩＦＱＩＦＮＮＲＮＣＬＳＬＫＤＫＰＫＶＩＩＶＱＡＣＲＧＡＮＲＧＥＬＷＶＲＤＳＰＡＳＬＥＶＡＳＳＱＳＳＥＮＬＥＥＤＡＶＹＫＴＨＶＥＫＤＦＩＡＦＣＳＳＴＰＨＮＶＳＷＲＤＳＴＭＧＳＩＦＩＴＱＬＩＴＣＦＱＫＹＳＷＣＣＨＬＥＥＶＦＲＫＶＱＱＳＦＥＴＰＲＡＫＡＱＭＰＴＩＥＲＬＳＭＴＲＹＦＹＬＦＰＧＮ 配列番号５５

＞ＤＮＣＲ２－Ｃａｓｐ－３
ＭＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨＴＧＳＧＧＧＳＧＭＥＮＴＥＮＳＶＤＳＫＳＩＫＮＬＥＰＫＩＩＨＧＳＥＳＭＤＳＧＩＳＬＤＮＳＹＫＭＤＹＰＥＭＧＬＣＩＩＩＮＮＫＮＦＨＫＳＴＧＭＴＳＲＳＧＴＤＶＤＡＡＮＬＲＥＴＦＲＮＬＫＹＥＶＲＮＫＮＤＬＴＲＥＥＩＶＥＬＭＲＤＶＳＫＥＤＨＳＫＲＳＳＦＶＣＶＬＬＳＨＧＥＥＧＩＩＦＧＴＮＧＰＶＤＬＫＫＩＴＮＦＦＲＧＤＲＣＲＳＬＴＧＫＰＫＬＦＩＩＱＡＣＲＧＴＥＬＤＣＧＩＥＴＤＳＧＶＤＤＤＭＡＣＨＫＩＰＶＥＡＤＦＬＹＡＹＳＴＡＰＧＹＹＳＷＲＮＳＫＤＧＳＷＦＩＱＳＬＣＡＭＬＫＱＹＡＤＫＬＥＦＭＨＩＬＴＲＶＮＲＫＶＡＴＥＦＥＳＦＳＦＤＡＴＦＨＡＫＫＱＩＰＣＩＶＳＭＬＴＫＥＬＹＦＹＨ 配列番号５６

＞ＤＮＣＲ２－Ｃａｓｐ－３－Ｃａｓｐ９界面
ＭＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨＴＧＳＧＧＧＳＧＭＥＮＴＥＮＳＶＤＳＫＳＩＫＮＬＥＰＫＩＩＨＧＳＥＳＭＤＳＧＩＳＬＤＮＳＹＫＭＤＹＰＥＭＧＬＣＩＩＩＮＮＫＮＦＨＫＳＴＧＭＴＳＲＳＧＴＤＶＤＡＡＮＬＲＥＴＦＲＮＬＫＹＥＶＲＮＫＮＤＬＴＲＥＥＩＶＥＬＭＲＤＶＳＫＥＤＨＳＫＲＳＳＦＶＣＶＬＬＳＨＧＥＥＧＩＩＦＧＴＮＧＰＶＤＬＫＫＩＴＮＦＦＲＧＤＲＣＲＳＬＴＧＫＰＫＬＦＩＩＱＡＣＲＧＴＥＬＤＣＧＩＥＴＤＳＧＶＤＤＤＭＡＣＨＫＩＰＶＥＡＤＦＬＹＡＹＳＴＡＰＧＹＹＳＷＲＮＳＫＤＧＳＷＦＩＱＳＬＣＡＭＬＫＱＹＡＤＫＬＥＦＭＨＩＬＴＲＶＮＲＫＶＡＴＥＦＥＳＦＳＦＤＡＴＦＨＡＫＫＱＩＰＧＣＦＮＦＬＴＫＥＬＹＦＹＨ 配列番号５７

＞ＲＩＰＫ３－ＤＮＣＲ２
ＭＳＣＶＫＬＷＰＳＧＡＰＡＰＬＶＳＩＥＥＬＥＮＱＥＬＶＧＫＧＧＦＧＴＶＦＲＡＱＨＲＫＷＧＹＤＶＡＶＫＩＶＮＳＫＡＩＳＲＥＶＫＡＭＡＳＬＤＮＥＦＶＬＲＬＥＧＶＩＥＫＶＮＷＤＱＤＰＫＰＡＬＶＴＫＦＭＥＮＧＳＬＳＧＬＬＱＳＱＣＰＲＰＷＰＬＬＣＲＬＬＫＥＶＶＬＧＭＦＹＬＨＤＱＮＰＶＬＬＨＲＤＬＫＰＳＮＶＬＬＤＰＥＬＨＶＫＬＡＤＦＧＬＳＴＦＱＧＧＳＱＳＧＴＧＳＧＥＰＧＧＴＬＧＹＬＡＰＥＬＦＶＮＶＮＲＫＡＳＴＡＳＤＶＹＳＦＧＩＬＭＷＡＶＬＡＧＲＥＶＥＬＰＴＥＰＳＬＶＹＥＡＶＣＮＲＱＮＲＰＳＬＡＥＬＰＱＡＧＰＥＴＰＧＬＥＧＬＫＥＬＭＱＬＣＷＳＳＥＰＫＤＲＰＳＦＱＥＣＬＰＫＴＤＥＶＦＱＭＶＥＮＮＭＮＡＡＶＳＴＶＫＤＦＬＳＱＬＲＳＳＮＲＲＦＳＩＰＥＳＧＱＧＧＴＥＭＤＧＦＲＲＴＩＥＮＱＨＳＲＮＤＶＭＶＳＥＷＬＮＫＬＮＬＥＥＰＰＳＳＶＰＫＫＣＰＳＬＴＫＲＳＲＡＱＥＥＱＶＰＱＡＷＴＡＧＴＳＳＤＳＭＡＱＰＰＱＴＰＥＴＳＴＦＲＮＱＭＰＳＰＴＳＴＧＴＰＳＰＧＰＲＧＮＱＧＡＥＲＱＧＭＮＷＳＣＲＴＰＥＰＮＰＶＴＧＲＰＬＶＮＩＹＮＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨ 配列番号５８

＞ＭＬＫＬ－ＤＮＣＲ２
ＭＥＮＬＫＨＩＩＴＬＧＱＶＩＨＫＲＣＥＥＭＫＹＣＫＫＱＣＲＲＬＧＨＲＶＬＧＬＩＫＰＬＥＭＬＱＤＱＧＫＲＳＶＰＳＥＫＬＴＴＡＭＮＲＦＫＡＡＬＥＥＡＮＧＥＩＥＫＦＳＮＲＳＮＩＣＲＦＬＴＡＳＱＤＫＩＬＦＫＤＶＮＲＫＬＳＤＶＷＫＥＬＳＬＬＬＱＶＥＱＲＭＰＶＳＰＩＳＱＧＡＳＷＡＱＥＤＱＱＤＡＤＥＤＲＲＡＦＱＭＬＲＲＤＮＥＫＩＥＡＳＬＲＲＬＥＩＮＭＫＥＩＫＥＴＬＲＱＹＬＰＰＫＣＭＱＥＩＰＱＥＱＩＫＥＩＫＫＥＱＬＳＧＳＰＷＩＬＬＲＥＮＥＶＳＴＬＹＫＧＥＹＨＲＡＰＶＡＩＫＶＦＫＫＬＱＡＧＳＩＡＩＶＲＱＴＦＮＫＥＩＫＴＭＫＫＦＥＳＰＮＩＬＲＩＦＧＩＣＩＤＥＴＶＴＰＰＱＦＳＩＶＭＥＹＣＥＬＧＴＬＲＥＬＬＤＲＥＫＤＬＴＬＧＫＲＭＶＬＶＬＧＡＡＲＧＬＹＲＬＨＨＳＥＡＰＥＬＨＧＫＩＲＳＳＮＦＬＶＴＱＧＹＱＶＫＬＡＧＦＥＬＲＫＴＱＴＳＭＳＬＧＴＴＲＥＫＴＤＲＶＫＳＴＡＹＬＳＰＱＥＬＥＤＶＦＹＱＹＤＶＫＳＥＩＹＳＦＧＩＶＬＷＥＩＡＴＧＤＩＰＦＱＧＣＮＳＥＫＩＲＫＬＶＡＶＫＲＱＱＥＰＬＧＥＤＣＰＳＥＬＲＥＩＩＤＥＣＲＡＨＤＰＳＶＲＰＳＶＤＥＩＬＫＫＬＳＴＦＳＫＧＳＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨ 配列番号５９

＞ＡＰＡＦ１－ＤＮＣＲ２
ＭＤＡＫＡＲＮＣＬＬＱＨＲＥＡＬＥＫＤＩＫＴＳＹＩＭＤＨＭＩＳＤＧＦＬＴＩＳＥＥＥＫＶＲＮＥＰＴＱＱＱＲＡＡＭＬＩＫＭＩＬＫＫＤＮＤＳＹＶＳＦＹＮＡＬＬＨＥＧＹＫＤＬＡＡＬＬＨＤＧＩＰＶＶＳＳＳＳＧＫＤＳＶＳＧＩＴＳＧＳＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨ 配列番号６０

＞ＡＰＡＦ１－ＮＳ３ａ－ＤＮＣＲ２
ＭＤＡＫＡＲＮＣＬＬＱＨＲＥＡＬＥＫＤＩＫＴＳＹＩＭＤＨＭＩＳＤＧＦＬＴＩＳＥＥＥＫＶＲＮＥＰＴＱＱＱＲＡＡＭＬＩＫＭＩＬＫＫＤＮＤＳＹＶＳＦＹＮＡＬＬＨＥＧＹＫＤＬＡＡＬＬＨＤＧＩＰＶＶＳＳＳＳＧＫＤＳＶＳＧＩＴＳＧＳＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＡＱＱＴＲＧＥＥＧＣＱＥＭＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＩＶＳＴＡＴＱＴＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＴＧＳＧＧＧＳＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨ 配列番号６１

＞ＲＩＰＫ３－ＮＳ３ａ－Ｐ２ａ－ＲＩＰＫ３－ＤＮＣＲ２
ＭＳＣＶＫＬＷＰＳＧＡＰＡＰＬＶＳＩＥＥＬＥＮＱＥＬＶＧＫＧＧＦＧＴＶＦＲＡＱＨＲＫＷＧＹＤＶＡＶＫＩＶＮＳＫＡＩＳＲＥＶＫＡＭＡＳＬＤＮＥＦＶＬＲＬＥＧＶＩＥＫＶＮＷＤＱＤＰＫＰＡＬＶＴＫＦＭＥＮＧＳＬＳＧＬＬＱＳＱＣＰＲＰＷＰＬＬＣＲＬＬＫＥＶＶＬＧＭＦＹＬＨＤＱＮＰＶＬＬＨＲＤＬＫＰＳＮＶＬＬＤＰＥＬＨＶＫＬＡＤＦＧＬＳＴＦＱＧＧＳＱＳＧＴＧＳＧＥＰＧＧＴＬＧＹＬＡＰＥＬＦＶＮＶＮＲＫＡＳＴＡＳＤＶＹＳＦＧＩＬＭＷＡＶＬＡＧＲＥＶＥＬＰＴＥＰＳＬＶＹＥＡＶＣＮＲＱＮＲＰＳＬＡＥＬＰＱＡＧＰＥＴＰＧＬＥＧＬＫＥＬＭＱＬＣＷＳＳＥＰＫＤＲＰＳＦＱＥＣＬＰＫＴＤＥＶＦＱＭＶＥＮＮＭＮＡＡＶＳＴＶＫＤＦＬＳＱＬＲＳＳＮＲＲＦＳＩＰＥＳＧＱＧＧＴＥＭＤＧＦＲＲＴＩＥＮＱＨＳＲＮＤＶＭＶＳＥＷＬＮＫＬＮＬＥＥＰＰＳＳＶＰＫＫＣＰＳＬＴＫＲＳＲＡＱＥＥＱＶＰＱＡＷＴＡＧＴＳＳＤＳＭＡＱＰＰＱＴＰＥＴＳＴＦＲＮＱＭＰＳＰＴＳＴＧＴＰＳＰＧＰＲＧＮＱＧＡＥＲＱＧＭＮＷＳＣＲＴＰＥＰＮＰＶＴＧＲＰＬＶＮＩＹＮＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＡＱＱＴＲＧＥＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＩＶＳＴＡＴＱＴＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＳＣＶＫＬＷＰＳＧＡＰＡＰＬＶＳＩＥＥＬＥＮＱＥＬＶＧＫＧＧＦＧＴＶＦＲＡＱＨＲＫＷＧＹＤＶＡＶＫＩＶＮＳＫＡＩＳＲＥＶＫＡＭＡＳＬＤＮＥＦＶＬＲＬＥＧＶＩＥＫＶＮＷＤＱＤＰＫＰＡＬＶＴＫＦＭＥＮＧＳＬＳＧＬＬＱＳＱＣＰＲＰＷＰＬＬＣＲＬＬＫＥＶＶＬＧＭＦＹＬＨＤＱＮＰＶＬＬＨＲＤＬＫＰＳＮＶＬＬＤＰＥＬＨＶＫＬＡＤＦＧＬＳＴＦＱＧＧＳＱＳＧＴＧＳＧＥＰＧＧＴＬＧＹＬＡＰＥＬＦＶＮＶＮＲＫＡＳＴＡＳＤＶＹＳＦＧＩＬＭＷＡＶＬＡＧＲＥＶＥＬＰＴＥＰＳＬＶＹＥＡＶＣＮＲＱＮＲＰＳＬＡＥＬＰＱＡＧＰＥＴＰＧＬＥＧＬＫＥＬＭＱＬＣＷＳＳＥＰＫＤＲＰＳＦＱＥＣＬＰＫＴＤＥＶＦＱＭＶＥＮＮＭＮＡＡＶＳＴＶＫＤＦＬＳＱＬＲＳＳＮＲＲＦＳＩＰＥＳＧＱＧＧＴＥＭＤＧＦＲＲＴＩＥＮＱＨＳＲＮＤＶＭＶＳＥＷＬＮＫＬＮＬＥＥＰＰＳＳＶＰＫＫＣＰＳＬＴＫＲＳＲＡＱＥＥＱＶＰＱＡＷＴＡＧＴＳＳＤＳＭＡＱＰＰＱＴＰＥＴＳＴＦＲＮＱＭＰＳＰＴＳＴＧＴＰＳＰＧＰＲＧＮＱＧＡＥＲＱＧＭＮＷＳＣＲＴＰＥＰＮＰＶＴＧＲＰＬＶＮＩＹＮＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨ 配列番号６２

【0331】

（表Ｂ）配列

【0332】

（表Ｃ）配列
＞ロイシンジッパー－ＧＣＮ４（二量体）
ＱＲＭＫＱＬＥＤＫＶＥＥＬＬＳＫＮＹＨＬＥＮＥＶＡＲＬＫＫＬＶＧＤＡＡＲ

＞ｐＲＯ２．５（三量体）
ＳＥＹＥＩＲＫＡＬＥＥＬＫＡＳＴＡＥＬＫＲＡＴＡＳＬＲＡＳＴＥＥＬＫＫＮＰＳＥＤＡＬＶＥＮＮＲＬＩＶＥＨＮＡＩＩＶＥＮＮＲＩＩＡＡＶＬＥＬＩＶＲＡＩＫ

＞２Ｌ４ＨＣ２＿２３（二量体）
ＴＲＴＥＩＩＲＥＬＥＲＳＬＲＥＱＥＥＬＡＫＲＬＫＥＬＬＲＥＬＥＲＬＱＲＥＧＳＳＤＥＤＶＲＥＬＬＲＥＩＫＥＬＶＥＥＩＥＫＬＡＲＥＱＫＹＬＶＥＥＬＫＲＱＤ

＞５Ｈ２ＬＤ＿＿１０＿Ａ（五量体）
ＴＲＲＫＱＥＭＫＲＬＫＫＥＭＥＫＩＲＥＥＴＥＥＶＫＫＥＩＥＥＳＫＫＲＰＱＳＥＳＡＫＮＬＩＬＩＭＱＬＬＩＮＱＩＲＬＬＡＬＱＩＲＭＬＡＬＱＬＱＥ

＞６Ｈ２ＬＤ＿＿８＿Ａ（六量体）
ＴＥＤＥＩＲＫＬＲＫＬＬＥＥＡＥＫＫＬＫＫＬＥＤＫＴＲＲＳＥＥＩＳＫＴＤＤＤＰＫＡＱＳＬＱＬＩＡＥＳＬＭＬＩＡＥＳＬＬＩＩＡＩＳＬＬＬＳＳＲＮＧ

＞ＡＮＲ
ＧＥＬＤＥＬＶＹＬＬＤＧＰＧＹＤＰＩＨＳＤＶＶＴＲＧＧＳＨＬＦＮＦ

＞ＤＮＣＲ２
ＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＲＡＫＥＡＡＥＲＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＲＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＫＲＤＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＫＬＩＶＥＡＩＥＡＡＶＤＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨ

＞ＤＮＣＲ２＿１
ＤＤＮＥＡＥＫＬＩＲＥＡＥＥＡＡＫＤＡＥＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＫＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿２
ＥＥＲＥＬＡＲＥＬＥＲＬＡＫＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＥＹＡＲＥＡＡＥＦＡＲＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿３
ＤＥＮＥＡＥＨＳＲＲＹＡＫＥＡＡＥＦＡＲＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＥＲＬＡＲＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿４
ＤＥＮＥＬＥＨＩＲＲＹＬＫＥＩＬＥＦＶＲＥＶＶＥＲＴＧＤＥＨＩＲＲＬＬＥＥＬＥＲＬＶＫＫＶＩＥＥＬＫＲＲＰＤＬＨＨＮＥＨＡＦＭＲＬＶＬＡＶＹＬＡＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿５
ＤＥＮＥＬＥＨＩＲＲＹＬＫＥＶＬＥＦＶＲＥＩＬＥＲＴＧＤＥＥＶＫＫＬＩＥＥＬＥＲＬＶＫＫＩＥＥＥＬＫＲＤＰＲＲＨＨＮＥＨＡＶＭＲＬＶＬＡＶＹＬＬＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿６
ＤＥＥＥＬＨＫＲＶＥＥＬＷＫＥＬＨＥＬＶＲＲＨＳＨＤＳＤＬＮＥＬＬＨＩＩＥＹＬＲＥＶＬＥＦＶＲＥＶＬＥＲＴＧＤＥＨＩＫＲＬＬＨＥＬＶＫＲＩＶＥＴＩＥＥＬＫＲＮＳＨＨＳＮＮＥＨＡＶＭＲＩＶＬＡＶＹＬＡＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿７
ＤＥＥＥＬＥＲＲＬＥＥＬＷＲＲＩＫＥＲＶＥＲＨＳＨＤＳＤＬＮＥＬＬＨＩＩＥＹＬＲＥＶＶＥＦＶＲＥＶＶＥＲＴＧＤＥＨＩＫＲＬＬＬＥＬＩＲＥＩＶＥＶＩＥＫＬＥＲＮＬＨＤＳＮＮＥＨＡＶＭＲＩＶＬＡＶＹＬＡＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿８
ＥＶＥＥＶＬＫＤＬＥＥＡＩＥＲＬＨＤＨＥＩＮＲＬＡＫＥＶＬＫＩＬＲＫＲＤＤＨＳＩＩＹＡＶＥＶＭＩＦＶＩＥＶＬＥＲＴＧＤＥＫＶＲＥＬＩＲＥＬＡＥＩＩＲＲＫＧＧＴＤＧＡＶＭＲＬＶＬＡＩＹＬＬＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿９
ＥＬＥＥＶＬＫＤＬＥＥＡＬＥＲＬＲＮＥＥＬＲＲＬＩＥＥＩＡＥＬＬＲＲＲＤＤＨＳＩＩＹＭＩＥＡＬＩＦＶＩＥＡＶＥＲＴＧＤＥＲＩＥＫＬＬＥＥＬＩＫＲＩＲＮＧＤＤＤＳＡＩＭＲＩＶＬＡＶＹＬＩＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿１０
ＥＡＥＥＡＡＫＤＡＥＥＡＡＥＲＬＨＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＫＥＴＴＨＥＤＧＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＲＮＧＤＨＳＧＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿１１
ＥＡＥＥＡＡＫＤＡＥＥＡＡＥＲＬＨＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＫＥＲＤＤＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＲＥＧＤＨＳＳＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿１２
ＤＤＮＥＡＥＫＬＩＲＥＡＥＥＶＬＫＤＩＥＥＩＬＥＲＬＨＤＥＥＩＩＲＬＶＥＥＶＱＫＩＬＫＥＬＬＥＲＶＨＫＨＰＨＤＳＤＬＮＥＬＬＨＩＩＦＹＭＭＥＶＬＩＦＶＬＥＶＬＥＲＴＧＤＥＥＩＲＫＬＶＷＨＩＶＲＩＩＬＥＩＬＥＥＬＲＲＮＰＫＨＳＮＮＥＨＡＬＭＲＬＬＬＡＩＹＬＬＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿１３
ＥＡＥＥＡＡＫＤＡＥＥＡＡＥＲＬＨＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＫＥＶＤＤＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿１４
ＥＦＥＥＶＬＫＤＬＥＥＶＶＥＲＬＨＮＥＥＩＲＲＬＬＥＲＬＩＥＬＬＲＲＶＲＤＨＳＦＩＹＬＶＥＡＶＩＦＶＬＥＶＬＥＲＴＧＤＨＲＶＥＥＬＬＥＫＬＶＲＬＶＩＥＶＬＥＥＬＥＲＨＰＨＫＥＮＮＥＨＡＡＭＲＦＶＬＡＶＹＬＩＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿１５
ＥＷＥＥＶＬＫＤＬＥＥＡＬＥＲＬＨＤＥＥＩＲＲＬＬＥＲＶＶＥＬＬＲＥＤＴＤＨＳＩＶＹＬＩＥＡＬＩＦＶＩＥＡＶＥＲＴＧＤＥＲＩＨＲＬＬＥＥＬＶＲＲＩＩＫＶＩＥＥＬＨＲＨＰＨＫＥＮＮＥＨＡＡＭＲＦＶＬＡＶＹＬＩＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿１６
ＥＥＲＥＬＡＲＥＬＥＲＬＡＲＥＲＲＤＨＳＩＥＹＡＲＥＡＡＥＦＡＲＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＲＮＧＳＤＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿１７
ＥＥＲＥＬＡＲＥＬＥＲＬＡＫＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＥＹＡＲＥＡＡＥＦＡＲＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＲＮＧＳＤＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿１８
ＤＥＥＥＩＲＫＲＩＥＥＱＷＲＲＤＴＤＨＳＷＥＹＬＲＥＶＡＥＦＡＲＥＩＬＥＲＴＧＤＥＲＩＫＥＬＶＬＲＩＬＥＬＩＥＮＧＴＤＤＨＡＩＭＲＬＶＬＡＬＹＬＩＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿１９
ＤＥＥＥＬＲＥＥＶＥＨＬＷＲＥＤＴＤＨＳＷＥＹＬＲＥＡＬＥＦＬＲＥＩＶＥＲＴＧＤＥＲＬＲＥＬＬＫＫＡＬＥＬＶＲＨＧＴＤＧＨＡＩＭＲＬＶＬＡＡＹＬＬＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿２０
ＹＡＫＥＡＡＥＦＡＲＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＥＲＬＡＲＲＧＳＳＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿２１
ＹＡＫＥＶＡＥＦＶＲＥＶＷＥＲＴＧＤＥＲＶＥＥＬＬＫＫＬＥＥＬＲＲＮＧＳＤＥＨＡＬＭＲＬＶＬＡＶＹＬＩＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿２２
ＹＷＫＥＶＡＥＦＬＲＥＶＬＥＲＴＧＤＥＥＶＫＫＬＬＥＥＦＥＥＬＲＲＲＧＳＤＥＨＡＬＭＲＬＶＬＡＶＹＬＩＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿２３
ＤＥＥＥＬＥＲＫＩＥＥＱＶＲＫＬＲＥＥＶＥＲＲＳＨＤＳＤＬＮＥＡＬＨＳＭＥＹＬＲＥＩＡＥＦＡＲＥＩＶＥＲＴＧＤＥＥＬＲＫＬＬＫＥＩＬＲＬＩＨＥＮＰＥＤＶＧＨＡＩＭＲＬＩＬＡＬＹＬＬＥＥＮＬＲＥ

＞ＤＮＣＲ２＿２４
ＤＤＮＥＡＥＫＬＩＲＥＡＥＥＡＡＫＤＡＥＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＫＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤ

＞ＤＮＣＲ２＿２５
ＥＥＲＥＬＡＲＥＬＥＲＬＡＫＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＥＹＡＲＥＡＡＥＦＡＲＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤ

＞ＤＮＣＲ２＿２６
ＤＥＮＥＡＥＨＳＲＲＹＡＫＥＡＡＥＦＡＲＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＥＲＬＡＲＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤ

＞ＤＮＣＲ２＿２７
ＤＥＮＥＬＥＨＩＲＲＹＬＫＥＩＬＥＦＶＲＥＶＶＥＲＴＧＤＥＨＩＲＲＬＬＥＥＬＥＲＬＶＫＫＶＩＥＥＬＫＲＲＰＤＬＨＨＮＥＨＡＦＭＲＬＶＬＡＶＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤ

＞ＤＮＣＲ２＿２８
ＤＥＮＥＬＥＨＩＲＲＹＬＫＥＶＬＥＦＶＲＥＩＬＥＲＴＧＤＥＥＶＫＫＬＩＥＥＬＥＲＬＶＫＫＩＥＥＥＬＫＲＤＰＲＲＨＨＮＥＨＡＶＭＲＬＶＬＡＶＹＬＬＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤ

＞ＤＮＣＲ２＿２９
ＤＥＥＥＬＨＫＲＶＥＥＬＷＫＥＬＨＥＬＶＲＲＨＳＨＤＳＤＬＮＥＬＬＨＩＩＥＹＬＲＥＶＬＥＦＶＲＥＶＬＥＲＴＧＤＥＨＩＫＲＬＬＨＥＬＶＫＲＩＶＥＴＩＥＥＬＫＲＮＳＨＨＳＮＮＥＨＡＶＭＲＩＶＬＡＶＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤ

＞ＤＮＣＲ２＿３０
ＤＥＥＥＬＥＲＲＬＥＥＬＷＲＲＩＫＥＲＶＥＲＨＳＨＤＳＤＬＮＥＬＬＨＩＩＥＹＬＲＥＶＶＥＦＶＲＥＶＶＥＲＴＧＤＥＨＩＫＲＬＬＬＥＬＩＲＥＩＶＥＶＩＥＫＬＥＲＮＬＨＤＳＮＮＥＨＡＶＭＲＩＶＬＡＶＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤ

＞ＤＮＣＲ２＿３１
ＤＤＮＥＡＥＫＬＩＲＥＡＥＥＶＬＫＤＩＥＥＩＬＥＲＬＨＤＥＥＩＩＲＬＶＥＥＶＱＫＩＬＫＥＬＬＥＲＶＨＫＨＰＨＤＳＤＬＮＥＬＬＨＩＩＦＹＭＭＥＶＬＩＦＶＬＥＶＬＥＲＴＧＤＥＥＩＲＫＬＶＷＨＩＶＲＩＩＬＥＩＬＥＥＬＲＲＮＰＫＨＳＮＮＥＨＡＬＭＲＬＬＬＡＩＹＬＬＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤ

＞ＤＮＣＲ２＿３２
ＥＡＥＥＡＡＫＤＡＥＥＡＡＥＲＬＨＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＫＥＶＤＤＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤ

＞ＤＮＣＲ２＿３３
ＥＦＥＥＶＬＫＤＬＥＥＶＶＥＲＬＨＮＥＥＩＲＲＬＬＥＲＬＩＥＬＬＲＲＶＲＤＨＳＦＩＹＬＶＥＡＶＩＦＶＬＥＶＬＥＲＴＧＤＨＲＶＥＥＬＬＥＫＬＶＲＬＶＩＥＶＬＥＥＬＥＲＨＰＨＫＥＮＮＥＨＡＡＭＲＦＶＬＡＶＹＬＩＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤ

＞ＤＮＣＲ２＿３４
ＥＷＥＥＶＬＫＤＬＥＥＡＬＥＲＬＨＤＥＥＩＲＲＬＬＥＲＶＶＥＬＬＲＥＤＴＤＨＳＩＶＹＬＩＥＡＬＩＦＶＩＥＡＶＥＲＴＧＤＥＲＩＨＲＬＬＥＥＬＶＲＲＩＩＫＶＩＥＥＬＨＲＨＰＨＫＥＮＮＥＨＡＡＭＲＦＶＬＡＶＹＬＩＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤ

＞ＤＮＣＲ２－３ｒｅｐ
ＴＳＳＤＥＥＥＡＲＥＬＩＥＥＡＫＥＡＡＥＤＡＱＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＫＲＬＡＱＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＳＤＶＮＥＡＬＨＳＩＶＹＡＩＥＡＡＩＦＡＬＥＡＡＥＲＴＧＤＰＥＶＲＥＬＡＲＥＬＶＲＬＡＶＥＡＡＥＥＶＱＲＮＰＳＳＲＮＶＥＨＡＬＭＲＩＶＬＡＩＹＬＡＥＥＮＬＲＥＡＥＥＳＧＤＰＥＫＲＥＫＡＲＥＲＶＲＥＡＶＥＲＡＥＥＶＱＲＤＰＳＧＷＬＮＨ

＞ＧＮＣＲ１
ＤＩＥＫＬＣＫＫＡＥＥＥＡＫＥＡＱＥＫＡＤＥＬＲＱＲＨＰＤＳＱＡＡＥＤＡＥＤＬＡＮＬＡＶＡＡＶＬＴＡＣＬＬＡＱＥＨＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＲＡＶＩＬＡＩＭＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＥＡＶＥＲＡＩＷＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＫＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＥＡＳＫＡＡＥＥＡＱＲＨＰＤＳＱＫＡＲＤＥＩＫＥＡＳＱＫＡＥＥＶＫＥＲＣＫＳ

＞ＧＮＣＲ１－３ｒｅｐ
ＤＩＥＫＬＣＫＫＡＥＥＥＡＫＥＡＱＥＫＡＤＥＬＲＱＲＨＰＤＳＱＡＡＥＤＡＥＤＬＡＮＬＡＶＡＡＶＬＴＡＣＬＬＡＱＥＨＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＡＡＳＫＡＡＥＬＡＱＲＨＰＤＳＱＡＡＲＤＡＩＫＬＡＳＱＡＡＲＡＶＩＬＡＩＭＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＫＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＥＡＳＫＡＡＥＥＡＱＲＨＰＤＳＱＫＡＲＤＥＩＫＥＡＳＱＫＡＥＥＶＥＲＲＣＷＲＡＡＥＮ

＞Ｇ３３
ＤＩＥＫＬＣＫＫＡＥＥＥＡＫＥＥＧＮＥＬＡＶＡＡＶＬＴＡＣＬＬＡＱＥＷＰＮＳＨＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＲＧＤＳＱＡＡＲＡＶＩＬＡＩＭＬＡＡＥＮＰＮＮＥＨＡＥＥＣＩＲＬＡＭＥＡＡＲＤＧＴＳＥＨＡＥＲＶＥＲＥＣＷＫＨＭＥ

＞Ｇ３８
ＤＩＥＫＬＣＫＫＡＥＥＥＡＫＥＶＧＤＮＬＡＶＡＡＶＬＴＡＣＬＬＡＱＥＨＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＳＧＤＫＱＡＡＲＡＶＩＬＡＩＭＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＬＣＩＫＡＡＳＥＡＡＥＧＳＫＨＧＷＳＱＡＡＥＡＶＥＲＡＩＷＬＡＡＥＮＰＮＡＤＩＡＫＫＣＩＫＡＡＳＥＡＡＲＥＧＮＳＱＫＡＥＥＶＫＥＲＣＫＳ

＞Ｐ２ａ
ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ

＞Ｔ２ａ
ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧ

＞Ｔ２ａ－ＲＦＰ－Ｐ２ａ
ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＶＳＫＧＥＥＤＮＭＡＩＩＫＥＦＭＲＦＫＶＨＭＥＧＳＶＮＧＨＥＦＥＩＥＧＥＧＥＧＲＰＹＥＧＴＱＴＡＫＬＫＶＴＫＧＧＰＬＰＦＡＷＤＩＬＳＰＱＦＭＹＧＳＫＡＹＶＫＨＰＡＤＩＰＤＹＬＫＬＳＦＰＥＧＦＫＷＥＲＶＭＮＦＥＤＧＧＶＶＴＶＴＱＤＳＳＬＱＤＧＥＦＩＹＫＶＫＬＲＧＴＮＦＰＳＤＧＰＶＭＱＫＫＴＭＧＷＥＡＳＳＥＲＭＹＰＥＤＧＡＬＫＧＥＩＫＱＲＬＫＬＫＤＧＧＨＹＤＡＥＶＫＴＴＹＫＡＫＫＰＶＱＬＰＧＡＹＮＶＮＩＫＬＤＩＴＳＨＮＥＤＹＴＩＶＥＱＹＥＲＡＥＧＲＨＳＴＧＧＭＤＥＬＹＫＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ

＞ＹＢ＿ＴＡＴＡ
ＴＣＴＡＧＡＧＧＧＴＡＴＡＴＡＡＴＧＧＧＧＧＣＣＡ

＞ヒトベータグロビン（ｈｕＢＧ）
ＧＡＡＴＴＣＡＧＧＧＣＴＧＧＧＣＡＴＡＡＡＡＧＴＣＡＧＧＧＣＡＧＡＧＣＣＡＴＣＴＡＴＴＧＣＴＴＡＣＡＴＴＴＧＣＴＴＣＴＧＡＣＡＣＡＡＣＴＧＴＧＴＴＣＡＣＴＡＧＣＡＡＣＣＴＣＡＡＡＣＡＧＡＣＡＣＣ

＞ｍｉｎＩＬ２
ＴＣＧＡＧＧＡＣＡＴＴＴＴＧＡＣＡＣＣＣＣＣＡＴＡＡＴＡＴＴＴＴＴＣＣＡＧＡＡＴＴＡＡＣＡＧＴＡＴＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＴＣＴＴＧＴＴＣＡＡＧＡＧＴＴＣＣＣＴＡＴＣＡＣＴＣＴＣＴＴＴＡＡＴＣＡＣＴＡＣＴＣＡＣＡＧＴＡＡＣＣＴＣＡＡＣＴＣＣＴＧ

＞最小ＣＭＶ（ｍｉｎＣＭＶ）
ＧＡＧＧＴＡＧＧＣＧＴＧＴＡＣＧＧＴＧＧＧＣＧＣＣＴＡＴＡＡＡＡＧＣＡＧＡＧＣＴＣＧＴＴＴＡＧＴＧＡＡＣＣＧＴＣＡＧＡＴＣＧＣＣＴＧＧＡ

＞ＴＲＥ３Ｇ
ＡＣＧＴＡＴＡＡＧＣＴＴＴＧＣＴＴＡＴＧＴＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＧＣＣＴＡＴＡＡＡＡＧＡＧＴＧＣＴＧＡＴＴＴＴＴＴＧＡＧＴＡＡＡＣＴＴＣＡＡＴＴＣＣＡＣＡＡＣＡＣＴＴＴＴＧＴＣＴＴＡＴＡＣＣＡＡＣＴＴＴＣＣＧＴＡＣＣＡＣＴＴＣＣＴＡＣＣＣＴＣＧＴＡＡＡ

＞ＭＮＤ
ＴＧＡＡＡＧＡＣＣＣＣＡＣＣＴＧＴＡＧＧＴＴＴＧＧＣＡＡＧＣＴＡＧＧＡＴＣＡＡＧＧＴＴＡＧＧＡＡＣＡＧＡＧＡＧＡＣＡＧＣＡＧＡＡＴＡＴＧＧＧＣＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＧＴＧＧＴＡＡＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＴＴＧＧＡＡＣＡＧＣＡＧＡＡＴＡＴＧＧＧＣＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＧＴＧＧＴＡＡＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧＴＣＣＣＣＡＧＡＴＧＣＧＧＴＣＣＣＧＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＴＴＴＣＴＡＧＡＧＡＡＣＣＡＴＣＡＧＡＴＧＴＴＴＣＣＡＧＧＧＴＧＣＣＣＣＡＡＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＴＧＡＣＣＣＴＧＴＧＣＣＴＴＡＴＴＴＧＡＡＣＴＡＡＣＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＧＣＴＴＣＴＣＧＣＴＴＣＴＧＴＴＣＧＣＧＣＧＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＣＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＡＡＡＡＧＡＧＣＣＣＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＡＣＴＣＧＧＣ

＞ｈＰＧＫ
ＧＧＧＧＴＴＧＧＧＧＴＴＧＣＧＣＣＴＴＴＴＣＣＡＡＧＧＣＡＧＣＣＣＴＧＧＧＴＴＴＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＣＴＧＧＧＣＧＴＧＧＴＴＣＣＧＧＧＡＡＡＣＧＣＡＧＣＧＧＣＧＣＣＧＡＣＣＣＴＧＧＧＴＣＴＣＧＣＡＣＡＴＴＣＴＴＣＡＣＧＴＣＣＧＴＴＣＧＣＡＧＣＧＴＣＡＣＣＣＧＧＡＴＣＴＴＣＧＣＣＧＣＴＡＣＣＣＴＴＧＴＧＧＧＣＣＣＣＣＣＧＧＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＴＧＣＴＣＣＧＣＣＣＣＴＡＡＧＴＣＧＧＧＡＡＧＧＴＴＣＣＴＴＧＣＧＧＴＴＣＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＧＧＡＣＧＴＧＡＣＡＡＡＣＧＧＡＡＧＣＣＧＣＡＣＧＴＣＴＣＡＣＴＡＧＴＡＣＣＣＴＣＧＣＡＧＡＣＧＧＡＣＡＧＣＧＣＣＡＧＧＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＡＧＣＧＣＧＣＣＧＡＣＣＧＣＧＡＴＧＧＧＣＴＧＴＧＧＣＣＡＡＴＡＧＣＧＧＣＴＧＣＴＣＡＧＣＡＧＧＧＣＧＣＧＣＣＧＡＧＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＧＧＴＧＣＧＧＧＡＧＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＧＣＧＧＴＡＧＴＧＴＧＧＧＣＣＣＴＧＴＴＣＣＴＧＣＣＣＧＣＧＣＧＧＴＧＴＴＣＣＧＣＡＴＴＣＴＧＣＡＡＧＣＣＴＣＣＧＧＡＧＣＧＣＡＣＧＴＣＧＧＣＡＧＴＣＧＧＣＴＣＣＣＴＣＧＴＴＧＡＣＣＧＡＡＴＣＡＣＣＧＡＣＣＴＣＴＣＴＣＣＣＣＡＧ

＞ＮＳ３ａ１ｂ
ＭＡＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＬＧＣＩＩＴＳＡＴＧＲＤＫＮＱＶＤＧＥＶＱＶＬＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＣＶＮＧＶＣＷＴＶＹＨＧＡＧＳＫＴＬＡＧＰＫＧＰＩＴＱＭＹＴＮＶＤＱＤＬＶＧＷＰＡＰＰＧＡＲＳＭＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＶＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＳＧＨＶＶＧＩＦＲＡＡＶＣＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＭＥＴＴＭＲＳＰ

＞ＮＳ３ａＨ１
ＭＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＶＶＳＴＡＴＱＳＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰ

＞ＮＳ３ａｏｐｔＳ１３９Ａ
ＫＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＮＬＳＧＤＴＡＹＡＱＱＴＲＧＥＥＧＣＱＥＴＳＱＴＧＲＤＫＮＱＶＥＧＥＶＱＩＶＳＴＡＴＱＴＦＬＡＴＳＩＮＧＶＬＷＴＶＹＨＧＡＧＴＲＴＩＡＳＰＫＧＰＶＴＱＭＹＴＮＶＤＫＤＬＶＧＷＱＡＰＱＧＳＲＳＬＴＰＣＴＣＧＳＳＤＬＹＬＶＴＲＨＡＤＶＩＰＶＲＲＲＧＤＳＲＧＳＬＬＳＰＲＰＩＳＹＬＫＧＳＡＧＧＰＬＬＣＰＡＧＨＡＶＧＩＦＲＡＡＶＳＴＲＧＶＡＫＡＶＤＦＩＰＶＥＳＬＥＴＴＭＲＳＰ

＞Ｐ２ａ－Ｔ２ａ
ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ

＞Ｔ２ａ－Ｐ２ａ
ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ

＞ＣＭＶ
ＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＧＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＣＴＧＡＴＧＣＧＧＴＴＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＴＧＧＧＣＧＴＧＧＡＴＡＧＣＧＧＴＴＴＧＡＣＴＣＡＣＧＧＧＧＡＴＴＴＣＣＡＡＧＴＣＴＣＣＡＣＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＡＧＴＴＴＧＴＴＴＴＧＧＣＡＣＣＡＡＡＡＴＣＡＡＣＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＡＡＡＴＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＣＴＣＣＧＣＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＣＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＴＡＧＧＣＧＴＧＴＡＣＧＧＴＧＧＧＡＧＧＴＣＴＡＴＡＴＡＡＧＣＡＧＡＧＣＴＧＧＴＴＴＡＧＴＧＡＡＣＣＧＴＣＡＧＡＴ

＞ＣＡＧ
ＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＧＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＡＴＣＧＡＴＴ

＞ＳＦＦＶ
ＧＴＡＡＣＧＣＣＡＴＴＴＴＧＣＡＡＧＧＣＡＴＧＧＡＡＡＡＡＴＡＣＣＡＡＡＣＣＡＡＧＡＡＴＡＧＡＧＡＡＧＴＴＣＡＧＡＴＣＡＡＧＧＧＣＧＧＧＴＡＣＡＴＧＡＡＡＡＴＡＧＣＴＡＡＣＧＴＴＧＧＧＣＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＧＣＧＧＴＧＡＧＣＡＧＴＴＴＣＧＧＣＣＣＣＧＧＣＣＣＧＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧＴＣＡＣＣＧＣＡＧＴＴＴＣＧＧＣＣＣＣＧＧＣＣＣＧＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧＴＣＣＣＣＡＧＡＴＡＴＧＧＣＣＣＡＡＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＴＴＴＣＴＴＡＡＧＡＣＣＣＡＴＣＡＧＡＴＧＴＴＴＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＣＣＡＡＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＴＧＡＣＣＣＴＧＣＧＣＣＴＴＡＴＴＴＧＡＡＴＴＡＡＣＣＡＡＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＴＣＴＣＧＣＴＴＣＴＧＴＴＣＧＣＧＣＧＣＴＴＣＴＧＣＴＴＣＣＣＧＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＡＡＧＡＧＣＴＣＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＡＣＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＡＧＴＣＣＴＣＣＧＡＣＡＧＡＣＴＧＡＧＴＣＧＣＣＣＧＧＧ

＞ＥＦ１アルファ
ＧＧＧＣＡＧＡＧＣＧＣＡＣＡＴＣＧＣＣＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＧＡＧＡＡＧＴＴＧＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＴＣＧＧＣＡＡＴＴＧＡＡＣＣＧＧＴＧＣＣＴＡＧＡＧＡＡＧＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＴＡＡＡＣＴＧＧＧＡＡＡＧＴＧＡＴＧＴＣＧＴＧＴＡＣＴＧＧＣＴＣＣＧＣＣＴＴＴＴＴＣＣＣＧＡＧＧＧＴＧＧＧＧＧＡＧＡＡＣＣＧＴＡＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＧＴＡＧＴＣＧＣＣＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＴＴＴＴＴＣＧＣＡＡＣＧＧＧＴＴＴＧＣＣＧＣＣＡＧＡＡＣＡＣＡＧ

＞ＵＢＣ
ＧＧＣＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＧＧＴＴＴＴＧＧＣＧＣＣＴＣＣＣＧＣＧＧＧＣＧＣＣＣＣＣＣＴＣＣＴＣＡＣＧＧＣＧＡＧＣＧＣＴＧＣＣＡＣＧＴＣＡＧＡＣＧＡＡＧＧＧＣＧＣＡＧＣＧＡＧＣＧＴＣＣＴＧＡＴＣＣＴＴＣＣＧＣＣＣＧＧＡＣＧＣＴＣＡＧＧＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＧＣＴＧＣＴＣＡＴＡＡＧＡＣＴＣＧＧＣＣＴＴＡＧＡＡＣＣＣＣＡＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＧＡＣＡＴＴＴＴＡＧＧＡＣＧＧＧＡＣＴＴＧＧＧＴＧＡＣＴＣＴＡＧＧＧＣＡＣＴＧＧＴＴＴＴＣＴＴＴＣＣＡＧＡＧＡＧＣＧＧＡＡＣＡＧＧＣＧＡＧＧＡＡＡＡＧＴＡＧＴＣＣＣＴＴＣＴＣＧＧＣＧＡＴＴＣＴＧＣＧＧＡＧＧＧＡＴＣＴＣＣＧＴＧＧＧＧＣＧＧＴＧＡＡＣＧＣＣＧＡＴＧＡＴＴＡＴＡＴＡＡＧＧＡＣＧＣＧＣＣＧＧＧＴＧＴＧＧＣＡＣＡＧＣＴＡＧＴＴＣＣＧＴＣＧＣＡＧＣＣＧＧＧＡＴＴＴＧＧＧＴＣＧＣＧＧＴＴＣＴＴＧＴＴＴＧＴＧＧＡＴＣＧＣＴＧＴＧＡＴＣＧＴＣＡＣＴＴＧＧＴＧＡＧＴＡＧＣＧＧＧＣＴＧＣＴＧＧＧＣＴＧＧＣＣＧＧＧＧＣＴＴＴＣＧＴＧＧＣＣＧＣＣＧＧＧＣＣＧＣＴＣＧＧＴＧＧＧＡＣＧＧＡＡＧＣＧＴＧＴＧＧＡＧＡＧＡＣＣＧＣＣＡＡＧＧＧＣＴＧＴＡＧＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＧＡＧＣＡＡＧＧＴＴＧＣＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＧＧＧＴＴＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧＣＡＧＣＡＡＡＡＴＧＧＣＧＧＣＴＧＴＴＣＣＣＧＡＧＴＣＴＴＧＡＡＴＧＧＡＡＧＡＣＧＣＴＴＧＴＧＡＧＧＣＧＧＧＣＴＧＴＧＡＧＧＴＣＧＴＴＧＡＡＡＣＡＡＧＧＴＧＧＧＧＧＧＣＡＴＧＧＴＧＧＧＣＧＧＣＡＡＧＡＡＣＣＣＡＡＧＧＴＣＴＴＧＡＧＧＣＣＴＴＣＧＣＴＡＡＴＧＣＧＧＧＡＡＡＧＣＴＣＴＴＡＴＴＣＧＧＧＴＧＡＧＡＴＧＧＧＣＴＧＧＧＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＣＧＴＧＡＡＧＴＴＴＧＴＣＡＣＴＧＡＣＴＧＧＡＧＡＡＣＴＣＧＧＴＴＴＧＴＣＧＴＣＴＧＴＴＧＣＧＧＧＧＧＣＧＧＣＡＧＴＴＡＴＧＧＣＧＧＴＧＣＣＧＴＴＧＧＧＣＡＧＴＧＣＡＣＣＣＧＴＡＣＣＴＴＴＧＧＧＡＧＣＧＣＧＣＧＣＣＣＴＣＧＴＣＧＴＧＴＣＧＴＧＡＣＧＴＣＡＣＣＣＧＴＴＣＴＧＴＴＧＧＣＴＴＡＴＡＡＴＧＣＡＧＧＧＴＧＧＧＧＣＣＡＣＣＴＧＣＣＧＧＴＡＧＧＴＧＴＧＣＧＧＴＡＧＧＣＴＴＴＴＣＴＣＣＧＴＣＧＣＡＧＧＡＣＧＣＡＧＧＧＴＴＣＧＧＧＣＣＴＡＧＧＧＴＡＧＧＣＴＣＴＣＣＴＧＡＡＴＣＧＡＣＡＧＧＣＧＣＣＧＧＡＣＣＴＣＴＧＧＴＧＡＧＧＧＧＡＧＧＧＡＴＡＡＧＴＧＡＧＧＣＧＴＣＡＧＴＴＴＣＴＴＴＧＧＴＣＧＧＴＴＴＴＡＴＧＴＡＣＣＴＡＴＣＴＴＣＴＴＡＡＧＴＡＧＣＴＧＡＡＧＣＴＣＣＧＧＴＴＴＴＧＡＡＣＴＡＴＧＣＧＣＴＣＧＧＧＧＴＴＧＧＣＧＡＧＴＧＴＧＴＴＴＴＧＴＧＡＡＧＴＴＴＴＴＴＡＧＧＣＡＣＣＴＴＴＴＧＡＡＡＴＧＴＡＡＴＣＡＴＴＴＧＧＧＴＣＡＡＴＡＴＧＴＡＡＴＴＴＴＣＡＧＴＧＴＴＡＧＡＣＴＡＧＴＡＡＡＴＴＧＴＣＣＧＣＴＡＡＡＴＴＣＴＧＧＣＣＧＴＴＴＴＴＧＧＣＴＴＴＴＴＴＧＴＴＡＧＡＣＡＴＣＧＡＴＴ

【0333】

（表１）

【0334】

キット
本開示は、本開示のポリヌクレオチドと、ポリヌクレオチドを細胞に送達するための調製物とを含む、キット又は製造物品を提供する。ポリヌクレオチドは、ベクターの一部として提供され得る。いくつかの実施形態では、本キット又は製造物品は、細胞を形質転換して、目的とする遺伝子を発現させて目的とするポリペプチドを産生するためのポリヌクレオチドのセットの使用に関する指示を更に含む。

【0335】

いくつかの事例では、本キットは、本開示の小分子も含み得る。

【実施例】

【0336】

方法
ＮＳ３ａベースの調節ＣＡＲを、Ｔ細胞のレンチウイルス形質導入及びフローサイトメトリー分析を使用して評価した。評価したＣＡＲは、標的細胞株Ｊｅｋｏ１上で発現されたＲＯＲ１抗原に特異的である。Ｊｕｒｋａｔ細胞株及びＪｅｋｏ１細胞株を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手し、１０％ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ）を含むＧｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）を含むＲＰＭＩ１６４０培地中で維持した。レンチウイルス形質導入の場合、Ｊｕｒｋａｔ細胞を、製造業者が推奨する濃度でＬｅｎｔｉＢＯＯＳＴ（Ｓｉｒｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を加えた完全培地中でレンチウイルスとインキュベートした。トランスフェクションの１８時間後、レンチウイルス及びＬｅｎｔｉＢＯＯＳＴを、１体積の新鮮培地の添加によって希釈した。

【0337】

正常ドナー由来の事前に選択されて凍結保存された初代ヒトＣＤ４ Ｔ細胞を、Ｂｌｏｏｄｗｏｒｋｓ（Ｓｅａｔｔｌｅ ＷＡ）から入手した。ヒトＴ細胞を、免疫細胞血清代替物（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、２ｍＭのＬ－グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）、２ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）、２００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）、１２０ＩＵ／ｍｌのＩＬ－７（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）、及び２０ＩＵ／ｍｌのＩＬ－１５（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）を補充したＯｐＴｍｉｚｅｒ培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）中で培養した。

【0338】

レンチウイルスを、ＨＥＫ２９３Ｔ懸濁株中で標準プロトコルを使用して産生した。ウイルス上清を、Ｌｅｎｔｉ－Ｘ（Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ）を製造業者のプロトコルに従って使用して１０倍に濃縮した。

【0339】

レンチウイルス形質導入の場合、Ｔ細胞を１：１００希釈のＴ細胞ＴｒａｎｓＡｃｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）で３０時間刺激した。その後、ウイルスをＴ細胞に１８～２４時間にわたって添加した。その後、刺激及びウイルス感染を、ＴｒａｎｓＡｃｔなしの７体積の新鮮培地の添加により終了させ、細胞を更に３～７日間培養した後、分析した。

【0340】

ヒトＩｇ Ｆｃに連結された精製された組換えＲｏｒ１を社内で産生し、検出のためにＡｌｅｘａ ６４７色素にコンジュゲートし、フローサイトメトリー試薬として使用して、ＲＯＲ１ ＣＡＲを検出した。

【0341】

殺傷スイッチ陽性細胞（１ｅ５個）を誘導剤薬物と２４～４８時間培養した後、染色し、死について分析した。非形質導入Ｊｕｒｋａｔ細胞又は初代Ｔ細胞を添加することによって条件を、約５０％の形質導入陽性（＋）細胞を含むように正規化して、死に関する正確な統計を得た。

【0342】

フローサイトメトリーをＺｅ５サイトメーター（Ｂｉｏｒａｄ）で行った。マーカーの発現を決定するために、合計１×１０^５～２×１０^５個の細胞をＵ底９６ウェル培養ディッシュ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に移した。細胞を細胞染色緩衝液（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）で２回洗浄し、その後、ＲＯＲ１特異的ＣＡＲ構築物についてＺｏｍｂｉｅ Ｖｉｏｌｅｔ（１：１０００、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）及びＲＯＲ１－ＦＣで染色した（室温で２０分間）。細胞を細胞染色緩衝液で２回洗浄し、その後、１倍アネキシンＶ結合緩衝液（ＢＤ）中アネキシンＶ－ＰＥ（ＢＤ）で、室温で１５分間染色した。染色後、細胞をアネキシンＶ結合緩衝液で１回洗浄し、ＡｎｎｅｉｎＶ結合緩衝液中に再懸濁し、直ちに分析した。

【0343】

フローサイトメトリーデータを、ＦｌｏｗＪｏ １０（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）を使用して分析した。殺傷パーセントを生細胞上でゲーティングすることによって計算し、その後、１００×（（ＧＦＰ陽性ＤＭＳＯ条件パーセント）－（ＧＦＰ陽性薬物条件パーセント））／（ＧＦＰ陽性ＤＭＳＯ条件パーセント）を計算した。

【0344】

ＣＤ６９発現の誘導のフロー分析の場合、Ｊｕｒｋａｔ細胞をＪｅｋｏ１細胞又はＪｅｋｏ１－ＲＯＲ１－ＫＯ細胞と１：１で混合した。薬物を添加して最終濃度５００ｎＭにした。培養物を薬物と２４時間インキュベートした後、表面マーカーのフロー分析を行った。

【0345】

初代Ｔ細胞によるＪｅｋｏ１殺傷のＩｎｃｕＣｙｔｅ分析の場合、５ｅ４個のＪｅｋｏ１－ＮｕｃＬｉｇｈｔ Ｒｅｄ標的細胞を９６ウェル平底プレート中で５ｅ４個のＣＡＲ陽性Ｔ細胞と混合した。ゼロ時点で薬物を添加して適切な最終濃度にし、プレートをＪｅｋｏ１細胞からのＮｕｃＬｉｇｈｔ Ｒｅｄシグナルについて６時間毎に撮像した。サイトカイン放出のＭＳＤ分析のための上清を、共培養セットアップ後２４時間時点で採取した。ＩＬ－２及びＩＦＮγを、Ｖ－Ｐｌｅｘカスタムヒトサイトカインキット（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｋ１５１Ａ０Ｈ－４）を製造業者のプロトコルに従って用いて測定した。

【0346】

ＣＡＲ及びＤＮＣＲ２－ｃａｓｐ－９殺傷スイッチ（ＥＧＦＰ形質導入マーカーを含む）を用いたＣＤ３ζシグナル伝達ｔｄＴｏｍａｔｏレポーター株のＩｎｃｕＣｙｔｅ分析の場合、５ｅ４個のＪｅｋｏ１細胞を以前に播種したポリ－Ｄ－Ｌｙｓコーティングプレート中に、１ウェル当たり５ｅ４個のＣＡＲ＋細胞をプレーティングした。薬物（例えば、グラゾプレビル、ダノプレビル）を添加して所与の最終濃度にし、細胞を、２０倍、８００ミリ秒露出、４画像／ウェルで、ｔｄＴｏｍａｔｏ及びＥＧＦＰシグナルについて３時間毎に撮像した。薬物条件を変更した際に、４８時間時点でＰＢＳ中で２回洗浄することにより、細胞をＩｎｃｕｃｙｔｅプレートから除去してＶ底プレートに移した。

【0347】

ＣＡＲ／殺傷スイッチ構築物のフロー分析のための共培養を、分析の２４時間前にセットアップした。ＣＡＲ陽性細胞（１ｅ５個の細胞、パートＩ及びパートＩＩ陽性、すなわち、ＲＯＲ１＋及びＥＧＦＲｔ＋（パートＩＩマーカー））を１ｅ５個のＪｅｋｏ１細胞及び薬物と混合した。細胞を、本明細書に記載されるように、ＲＯＲ１、ＥＧＦＲｔ（ＭＬＬＬＶＴＳＬＬＬＣＥＬＰＨＰＡＦＬＬＩＰＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥ）、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ＥＧＦＰ、及び生存率について分析した。

【0348】

殺傷パーセントを生細胞上でゲーティングすることによって計算し、その後、１００×（（ＧＦＰ陽性ＤＭＳＯ条件パーセント）－（ＧＦＰ陽性薬物条件パーセント））／（ＧＦＰ陽性ＤＭＳＯ条件パーセント）を計算した。

【0349】

ＣＡＲ実験のフローサイトメトリーをＺｅ５サイトメーター（Ｂｉｏｒａｄ）で行った。ヒトＩｇ Ｆｃに連結された精製された組換えＲｏｒ１を社内で産生し、検出のためにＡｌｅｘａ ６４７色素にコンジュゲートし、フローサイトメトリー試薬として使用して、ＲＯＲ１ ＣＡＲを検出した。マーカーの発現を決定するために、合計１×１０^５～２×１０^５個の細胞をＵ底９６ウェル培養ディッシュ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に移した。細胞を細胞染色緩衝液（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）で２回洗浄し、その後、全体積２５μＬのＢｒｉｌｌｉａｎｔ染色緩衝液（ＢＤ）中関連する試薬で、氷上で３０分間染色した（ＣＤ６９実験のため）。あるいは、細胞を細胞染色緩衝液中、１：１０００希釈で、Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ＤｙｅのｅＦｌｕｏｒ ７８０（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で染色した。染色後、細胞を細胞染色緩衝液で２回洗浄し、任意選択で、ＦｌｕｏｒｏＦｉｘ緩衝液（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）中で固定し、分析まで４℃で暗所に保管した。フローサイトメトリーデータを、ＦｌｏｗＪｏ １０（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）を使用して分析した。

【0350】

以下の実施例で使用した薬物及びそれらの標的タンパク質を表２に示す。検出に使用したＴ細胞マーカー及び蛍光色素を表３に示す。

【0351】

（表２）使用した薬物及びそれらの標的タンパク質

【0352】

（表３）検出に使用したＴ細胞マーカー及び蛍光色素

【0353】

ＣＡＲ活性の時間的制御
図１Ｂを参照して本明細書の上記に記載の３つのＮＳ３ａベースの調節ＣＡＲをＪｕｒｋａｔ細胞株において評価した。ＣＡＲは、標的細胞株Ｊｅｋｏ１上で発現されたＲＯＲ１抗原に特異的である。この実施例では、調節可能ＣＡＲの２つのポリペプチド鎖がＰ２ａによって分離された単一のレンチウイルスから発現された。我々は、３つのＮＳ３ａベースのＣＡＲの性能を、化学的に誘導可能な（「オンスイッチ」）二量体ＦＫＢＰ／ＡＰ２１９６７／ＦＲＢ（Ｔ２０９８Ｌ）システム及び化学的に破壊可能な（「オフスイッチ」）二量体Ｂｃｌ－ｘＬ／Ａ－１１５５４６３／Ｂａｄと比較した。簡潔に述べると、設計された小分子調節可能ＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ細胞を、５００ｎＭの同族小分子薬物の不在下又は存在下で、Ｊｅｋｏ１標的細胞と１：１で混合した。同じＪｕｒｋａｔ細胞を、陰性対照としてＲＯＲ１を欠くＪｅｋｏ１ノックアウト（ＫＯ）細胞と１：１で混合した。非形質導入Ｊｕｒｋａｔ細胞、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有しないオンスイッチＣＡＲを発現する細胞、及び従来の一本鎖ＲＯＲ１－ＣＡＲを対照として使用した。Ｔ細胞活性化マーカーであるＣＤ６９発現をフローサイトメトリーによって検出し、生ＣＤ３＋／ＲＯＲ１＋細胞上でゲーティングした。

【0354】

図３は、Ｊｅｋｏ１細胞又はＪｅｋｏ１－ＲＯＲ１－ＫＯ細胞と共培養したＣＡＲ発現Ｊｕｒｋａｔ細胞におけるＣＤ６９発現の小分子薬物調節誘導を示すプロットである。調節可能ＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ細胞を、５００ｎＭの同族小分子薬物の不在下（黒色バー）又は存在下（薄灰色バー）で、Ｊｅｋｏ１標的細胞と１：１で混合した。同じＪｕｒｋａｔ細胞を、陰性対照としてＲＯＲ１を欠くＪｅｋｏ１ノックアウト（ＫＯ）細胞と共培養した（濃灰色バー）。データは、調節可能ＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ細胞をＪｅｋｏ１標的細胞と１：１で共培養した場合、Ｊｕｒｋａｔ表面マーカー染色のフローサイトメトリー分析によって示されるように、ＣＤ６９発現がＣＡＲシグナル伝達に応答してＪｕｒｋａｔ細胞上で活性化されたことを示す。３つのオンスイッチＣＡＲ（「ＯＮ ＣＡＲ」ＦＫＢＰ／ＦＲＢ、ＮＳ３ａ／ＧＮＣＲ１、及びＮＳ３ａ／ＤＮＣＲ２）が全て、それらの同族誘導剤小分子薬物の不在下よりも小分子薬物の存在下でＣＤ６９を発現した細胞が多かった。ＡＮＲオフスイッチＣＡＲ（グラゾプレビルによって破壊される）は、後に破壊剤の存在下でＣＤ６９発現の減少をほとんど示さなかったため、Ｂｃｌ－ｘＬ／ＢａｄオフスイッチＣＡＲよりも良好な性能を示した。非形質導入Ｊｕｒｋａｔ細胞又はＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有しないオンスイッチＣＡＲ（ＦＫＢＰ／ＦＲＢΔＣＤ３ζ）を形質導入したＪｕｒｋａｔ細胞は、ＣＤ６９発現の活性化を示さなかった。従来の一本鎖ＲＯＲ１－ＣＡＲ（「従来のＣＡＲ」）は、５００ｎＭのダノプレビルに応答した有意な調節を示さなかった。ＲＯＲ１抗原ノックアウト（ＲＯＲ１ ＫＯ）を有する標的Ｊｅｋｏ１細胞に応答した調節可能ＣＡＲのオフ状態（オンスイッチＣＡＲには薬物なし、オフスイッチＣＡＲには薬物あり）とＣＤ６９活性化との比較により、これらのＣＡＲがいずれも完全なオフ状態を達成しないことが示される。

【0355】

次に、我々は、ＣＤ４＋初代ヒトＴ細胞とＣＤ８＋初代ヒトＴ細胞の１：１の混合時の調節可能ＣＡＲを評価した。この実施例では、我々は、２つの別個のレンチウイルスベクター由来の２つのポリペプチド鎖を発現させて、図３を参照して記載の単一ベクター構築物中のＰ２ａ要素の不完全なスキッピングから生じた可能性のあるバックグラウンドを減少させた。簡潔に述べると、調節可能ＣＡＲの両部分を発現するＴ細胞を、５００ｎＭの誘導剤又は破壊剤薬物の存在下又は不在下での標的細胞増殖を追跡するためのＮｕｃＬｉｇｈｔ Ｒｅｄマーカーを含むＪｅｋｏ１標的細胞と１：１で混合した。使用した薬物は、Ｂｃｌ－ｘＬ／Ｂａｄ二量体の場合、Ａ－１１５５４６３であり、ＮＳ３ａ／ＡＮＲ二量体の場合、グラゾプレビルであり、ＮＳ３ａ／ＧＮＣＲ１二量体の場合、グラゾプレビルであり、ＮＳ３ａ／ＤＮＣＲ２二量体の場合、ダノプレビルであった。非形質導入細胞及び従来の一本鎖ＲＯＲ１－ＣＡＲを発現する細胞を対照として使用した。細胞増殖を、ＩｎｃｕＣｙｔｅ殺傷アッセイを使用して追跡した。ＣＡＲ Ｔ細胞からのサイトカイン産生を、上清を２４時間時点で採取し、かつカスタムＶ－ｐｌｅｘキット（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，ＭＳＤ）を使用して測定した。

【0356】

図４Ａは、調節可能ＣＡＲによる、その同族誘導剤又は破壊剤小分子薬物の存在下又は不在下での標的細胞殺傷を示す、プロット４００、４１０、４１５、及び４２０のパネルである。データは、オンスイッチＣＡＲ、ＧＮＣＲ１－ＣＡＲ（プロット４１５）、及びＤＮＣＲ２－ＣＡＲ（プロット４２０）が、オフ状態でほんのわずかしか活性を有さず（薬物を欠く「ビヒクル」対照）、非形質導入Ｔ細胞と同等に標的細胞殺傷を欠く。しかしながら、それぞれの誘導剤小分子薬物の存在下では、オンスイッチＣＡＲは、従来のＲＯＲ１ ＣＡＲよりもＪｅｋｏ１増殖の制御が低いことを示す。オフスイッチＣＡＲ、Ｂｃｌ－ｘＬ／ＢＡＤ（プロット４００）及びＮＳ３ａ／ＡＮＲ（プロット４１０）は、従来のＣＡＲに近い標的細胞増殖の制御を示すが、オフ状態ではより多くのリークを示し、非形質導入Ｔ細胞よりも標的細胞の殺傷が多い。

【0357】

図４Ｂは、図４Ａの、それぞれ、Ｂｃｌ－ｘＬ／Ｂａｄ、ＮＳ３ａ／ＡＮＲ、ＮＳ３ａ／ＧＮＣＲ１、又はＮＳ３ａ／ＤＮＣＲ２を発現するＴ細胞からのサイトカインＩＦＮγ及びＩＬ－２の産生を示すプロット４２５、４３０、４３５、及び４４０のパネルである。このデータは、各々の調節可能ＣＡＲのサイトカイン産生の傾向のほとんどが調節の正しい方向にあることを示しているが、調節可能ＣＡＲのサイトカイン産生は従来のＣＡＲよりも全体に低かった。

【0358】

我々のＮＳ３ａベースの二量体化システムは、ＤＮＣＲ２の場合のダノプレビルとＧＮＣＲ１の場合のグラゾプレビルの２つの異なる誘導剤薬物に応答することができるため、これらの２つの薬物インプットを使用して、２つの異なるシグナル伝達アウトプットを制御することができる。一例では、二重機能ＣＡＲシステムは、ＣＡＲシグナル伝達を活性化するための活性化又はオンスイッチ構成要素と、アポトーシスを誘導するための安全スイッチ構成要素とを含む。

【0359】

図５Ａは、二重機能オンスイッチ／安全スイッチ調節可能Ｔ細胞ＣＡＲの概略図である。この図は、小分子誘導剤グラゾプレビルの存在下で相互作用するシステムの発現されたオンスイッチ構成要素５１０（ＮＳ３ａ／ＣＡＲ及びＧＮＣＲ１－ＣＤ３ζ）を示している。ＣＡＲの活性化により、受容体二量体化が誘導される。小分子のダノプレビルが添加されると、グラゾプレビルを打ち負かし、安全スイッチ構成要素５１５（ＤＮＣＲ２－カスパーゼ－９）を、ＮＳ３ａに融合されたホモ二量体ＣＡＲに動員する。ホモ二量体化ＮＳ３ａは、二量体化及びカスパーゼ－９の活性化をもたらし、Ｔ細胞死を引き起こす。

【0360】

２つの異なるシグナル伝達アウトプットを制御するための２つの薬物インプットの使用を評価するために、我々は、赤色蛍光タンパク質ｔｄＴｏｍａｔｏを発現するＪｕｒｋａｔ細胞ＣＤ３ζシグナル伝達レポーター株を使用してＣＡＲシグナル伝達を追跡し、ＤＮＣＲ２－カスパーゼ－９構築物の形質導入マーカー（ＥＧＦＰ）の損失を使用してＪｕｒｋａｔ細胞死を追跡した。

【0361】

図５Ｂは、グラゾプレビル又はダノプレビルの存在下及び不在下でのＪｕｒｋａｔ ＣＤ３ζシグナル伝達レポーター株における、それぞれ、ＣＡＲシグナル伝達及び殺傷パーセントを示す一対のプロット５２０及び５２５である。ここでプロット５２０を参照すると、データは、二重機能ＣＡＲが、ｔｄＴｏｍａｔｏ ｇＭＦＩによって測定されるように、５００ｎＭのグラゾプレビル（「グラゾ」）によって活性化されるが、５００ｎＭのダノプレビル（「ダノ」）によって活性化されないことを示す。ここでプロット５２５を参照すると、データは、ＧＮＣＲ１－ＣＡＲ／ＤＮＣＲ２－ｃａｓｐ－９システムの安全スイッチが、殺傷パーセントの増加によって示されるように、５００ｎｍのダノプレビル（「ダノ」）によってトリガされるが、５００ｎＭのグラゾプレビル（「グラゾ」）によってトリガされないことを示す。この実施例では、Ｊｕｒｋａｔ細胞の殺傷パーセントを、ＤＭＳＯ処理対照と比較した薬物処理集団における形質導入マーカーＥＧＦＰ陽性集団の損失によって測定した。グラゾプレビル及びダノプレビルは、ＤＮＣＲ２－ｃａｓｐ－９を有する従来のＣＡＲを発現するＪｕｒｋａｔ細胞に影響を及ぼさなかった。

【0362】

我々は、ＩｎｃｕＣｙｔｅアッセイにおいて、ＣＡＲシグナル伝達とアポトーシス誘導を経時的に切り替える能力を試験した。簡潔に述べると、二重機能ＧＮＣＲ１－ＣＡＲ／ＤＮＣＲ２－ｃａｓｐ９を発現するＣＤ３ζシグナル伝達レポーター株をＪｅｋｏ１細胞と１：１で混合し、５００ｎＭのグラゾプレビル若しくはダノプレビル、又はＤＭＳＯで処理した。４８時間にわたって、ＣＡＲシグナル伝達をｔｄＴｏｍａｔｏ強度によって追跡し、薬物誘導細胞死（すなわち、安全スイッチの活性化）を、形質導入マーカーＥＧＦＰ強度を追跡することによって監視した。

【0363】

図６Ａは、グラゾプレビル又はダノプレビルの存在下及び不在下でのＪｕｒｋａｔ ＣＤ３ζシグナル伝達レポーター株における、それぞれ、ＣＡＲシグナル伝達及び薬物誘導細胞死を示す一対のプロット６００及び６１０である。データは、４８時間にわたって、ＣＡＲシグナル伝達（プロット６００）が、設計したとおり、グラゾプレビルによってのみ活性化され、ダノプレビルのみでの処理が、ＥＧＦＰ強度の損失（プロット６１０）によって示されるように、細胞生存率の低下をもたらしたことを示す。

【0364】

次いで、我々は、グラゾプレビルを用いたＣＡＲシグナル伝達の誘導からダノプレビルを用いたアポトーシスの誘導に切り替える能力を試験した。簡潔に述べると、ＣＡＲシグナル伝達は、ゼロ時点でグラゾプレビル処理によって活性化された。４８時間後、細胞を洗浄し、ダノプレビルで処理した。ＣＡＲシグナル伝達（ｔｄＴｏｍａｔｏ強度）及び細胞生存率（ＥＧＦＰ強度）を、更に７２時間にわたって追跡した。

【0365】

図６Ｂは、グラゾプレビル処理からダノプレビル処理に切り替えたＪｕｒｋａｔ ＣＤ３ζシグナル伝達レポーター細胞における、それぞれ、ＣＡＲシグナル伝達及び薬物誘導細胞死を示す一対のプロット６１５及び６２０である。グラゾプレビル処理をゼロ時点で加え（実線）、対照としてグラゾプレビル処理は加えなかった（黒色破線）。４８時間時点で（矢印で示す）、細胞を洗浄し、ダノプレビルで処理した（黒色実線）か、又は処理しなかった（灰色線）。データは、ＣＡＲシグナル伝達（プロット６１５）が、グラゾプレビル処理後に増加し、ダノプレビル処理後に減少することを示す。データは、細胞生存率が４８時間時点でダノプリビルで処理するまで一定したままであり、この時点で、グラゾプレビルで以前に処理した細胞（黒色実線）及びグラゾプレビルで処理しなかった細胞（黒色破線）のいずれのＥＧＦＰシグナルも減少し始めたことを示す。

【0366】

ここで図６Ａ及び図６Ｂを参照すると、データは、２つの異なるシグナル伝達アウトプットの制御を時間的に切り替える能力を実証する。ＣＡＲシグナル伝達の小分子調節が、ＣＡＲ－Ｔ細胞活性を休止させるための安全スイッチとしての役目を果たし得る一方で、誘導可能なカスパーゼ－９スイッチは、Ｔ細胞療法を破壊するための末端安全スイッチとしての役目を果たす。

【0367】

１．１．４． 小分子薬物誘導細胞死
細胞療法及び遺伝子療法の有用性は、患者における有害反応の場合に治療用細胞における細胞死の特異的誘導を可能にする安全機構によって増強され得る。我々は、図２を参照して本明細書の上記に記載の殺傷ドメインの小分子薬物誘導ホモオリゴマー化による細胞死を活性化するためのいくつかの異なる戦略を設計した。これらの戦略には、誘導性ヘテロ二量体による直接二量体化、又はホモオリゴマー足場（例えば、ＣＡＲ）若しくはホモオリゴマーヘリックス束への融合による誘導性ヘテロ二量体の半分のホモオリゴマー化が含まれた。

【0368】

我々は、最初に、ＮＳ３ａとＤＮＣＲ２をカスパーゼ－９の触媒ドメインに別々に融合すること（ＮＣＤＣ）により、Ｊｕｒｋａｔ細胞の薬物誘導死を試験した。ＡＰ１９０３（リミデュシド）によって二量体化された小分子誘導性ホモ二量体ＦＫＢＰ－Ｆ３６Ｖ（ｉＣａｓｐ９）及び誘導性ヘテロ二量体ＦＫＢＰ／ラパマイシン／ＦＲＢ二量体（ｒａｐａＣａｓｐ９）を対照として使用した。簡潔に述べると、ＮＣＤＣ、ｉＣａｓｐ９、又はｒａｐａＣａｓｐ９を発現するＪｕｒｋａｔ細胞を、それぞれ、ダノプレビル、リミデュシド、又はラパマイシンに２４時間曝露し、ゲーティングセットを用いてフローサイトメトリーにより分析して、最も多くの量のＧＦＰ殺傷スイッチ形質導入マーカーを発現する上位約１０％の細胞における殺傷を測定した。

【0369】

図７Ａは、カスパーゼ－９殺傷ドメインを有する二本鎖直接二量体化設計ＮＣＤＣの概略図である。図７Ｂは、二本鎖直接二量体化設計ＮＣＤＣの薬物濃度の関数として殺傷パーセントを示すプロットである。このデータは、二量体化薬物ダノプレビルの滴定が、最も高度に発現するＪｕｒｋａｔ細胞の中程度の殺傷をもたらしたことを示す。比較すると、ｉＣａｓｐ９又はｒａｐａＣａｓｐ９は、それぞれ、リミデュシド又はラパマイシンに応答して、この高度に発現する集団の約８０～１００％を殺傷した。

【0370】

ＮＳ３ａ－ｃａｓｐ－９／ＤＮＣＲ２－ｃａｓｐ－９殺傷スイッチ構築物においてカスパーゼ－９ドメインを２回コードすることにより生じる大きな遺伝的カーゴを縮小するために、我々は、ＮＳ３ａの鋳型ホモオリゴマー化を含む戦略を試みた。図８Ａは、ＣＡＲ－ＮＳ３ａ－ｃａｓｐ９及びホモオリゴマーヘリックス束－ＮＳ３ａカスパーゼ－９殺傷スイッチの概略図である。ＮＳ３ａを、ＣＡＲ構築物のＣ末端（ＣＡＲ－ＮＳ３ａ）、又は二量体、三量体、五量体、及び六量体を含む、設計されたホモオリゴマーヘリックス束のＣ末端に融合させた。両方の殺傷スイッチの場合、カスパーゼ－９をＤＮＣＲ２又はＧＮＣＲ１に融合させた。

【0371】

図８Ａの殺傷スイッチ設計を評価するために、構築物を、５００ｎＭのダノプレビル（ＤＮＣＲ２－ｃａｓｐ－９）又は５００ｎＭのグラゾプレビル（ＧＮＣＲ１－ｃａｓｐ－９）で処理したＪｕｒｋａｔ細胞内で発現させ、細胞死を本明細書の上記に記載のように殺傷パーセントによって測定した。

【0372】

図８Ｂは、図８Ａの鋳型二量体化設計の殺傷活性パーセントを示すプロットである。データは、Ｊｕｒｋａｔ細胞内で発現させた場合、５００ｎＭのダノプレビル（ＤＮＣＲ２－ｃａｓｐ－９）又は５００ｎＭのグラゾプレビル（ＧＮＣＲ１－ｃａｓｐ－９）での処理により、Ｊｕｒｋａｔ死が様々な程度に誘導されたことを示す。ＮＳ３ａの全てのホモオリゴマー足場がＤＮＣＲ２－ｃａｓｐ－９を用いた場合に頑強な死を誘導したが、ＣＡＲ－ＮＳ３ａ及び六量体－ＮＳ３ａのみがＧＮＣＲ１－ｃａｓｐ－９を用いた場合に中程度の死を誘導した。これは、ダノプレビル／ＮＳ３ａ複合体に対するＤＮＣＲ２の高い親和性と比較してグラゾプレビル／ＮＳ３ａ複合体に対するＧＮＣＲ１の親和性が低いことに起因し得る（Ｆｏｉｇｈｔ，Ｇ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２０１９）３７：１２０９－１２１６を参照されたい）。ＤＮＣＲ２－ｃａｓｐ－９を用いた場合の最良の２つの足場、ＣＡＲ－ＮＳ３ａ及び二量体－ＮＳ３ａは、ｉＣａｓｐ９と同等の殺傷を誘導した。ＤＮＣＲ２－ｃａｓｐ－９及びＧＮＣＲ１－ｃａｓｐ－９は、ダノプレビル処理又はグラゾプレビル処理を用いた場合であっても、足場ＮＳ３ａの不在下では、Ｊｕｒｋａｔ死を誘導しなかった。

【0373】

ＣＡＲ構築物のサイズを更に縮小するために、我々は、長さ及びヘリックス数をトリミングすることによってＤＮＣＲ２の最小化バージョンを設計するためのロゼッタタンパク質設計を使用した。図９Ａは、最小化されたＤＮＣＲ２バージョンＤ１及びＤ９のモデルの概略図である。Ｄ１及びＤ２のモデルを、完全長ＤＮＣＲ２／ダノプレビル／ＮＳ３ａの隣にダノプレビル／ＮＳ３ａと複合体形成した状態で示している。

【0374】

ＤＮＣＲ２、Ｄ１、及びＤ９の小型化バージョンをカスパーゼ－９に融合させ、Ｊｕｒｋａｔ細胞内でホモオリゴマー化ＮＳ３ａ足場と共発現させた。我々は、ＮＳ３ａ（ＣＡＲ－２ｘＮＳ３ａ）の追加のコピーを含むＣＡＲ構築物も評価した。本来のＤＮＣＲ２－ｃａｓｐ－９を対照として使用した。ＣＡＲ－ＮＳ３ａ、ＣＡＲ－ＮＳ３ａ－ＮＳ３ａ、又は二量体－ＮＳ３ａとともにカスパーゼ－９に融合された異なるＤＮＣＲ２バリアントを発現するＪｕｒｋａｔ細胞を５００ｎＭのダノプレビルで処理し、細胞死を本明細書の上記に記載のように殺傷パーセントによって測定した。

【0375】

図９Ｂは、図９Ａの小型化設計の殺傷活性パーセントを示すプロットである。データは、カスパーゼ－９に融合され、かつホモオリゴマー化ＮＳ３ａ足場と共発現された場合、最小化ＤＮＣＲ２バージョンＤ１及びＤ９が本来のＤＮＣＲ２－ｃａｓｐ－９と同等のＪｕｒｋａｔ死を誘導したことを示す。我々は、ＮＳ３ａの追加のコピーをＣＡＲ構築物（ＣＡＲ－２ｘＮＳ３ａ）に融合させることによって、殺傷を更に増加させた。

【0376】

我々は、Ｊｕｒｋａｔ細胞及び初代ヒトＴ細胞において細胞死を誘導する他のヒト殺傷ドメインの能力を探索した。我々は、ＦＫＢＰ－Ｆ３６Ｖを、カスパーゼ－９ Ｄ３３０Ａ、カスパーゼ－９、カスパーゼ－１、カスパーゼ－４、及びネクロプトーシス誘導タンパク質ＲＩＰＫ３を含む殺傷ドメインのパネルに融合させた。簡潔に述べると、ＦＫＢＰ（Ｆ３６Ｖ）融合殺傷ドメインを発現するＪｕｒｋａｔ細胞及び初代ヒトＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞を１０ｎＭのリミデュシドで処理し、細胞死を本明細書の上記に記載のように殺傷パーセントによって測定した。

【0377】

図１０は、一連の形質導入レベルでＦＫＢＰ（Ｆ３６Ｖ）融合殺傷ドメインを発現する、それぞれ、Ｊｕｒｋａｔ細胞及び初代Ｔ細胞における、殺傷パーセントを示す一対のプロットである。ＥＧＦＰパーセント（ＥＧＦＰ％）は、殺傷ドメインの異なる形質導入レベルを示す。データは、両細胞型において、類似の殺傷が、カスパーゼ－１、カスパーゼ－４、カスパーゼ－９、及びカスパーゼ－９、Ｄ３３０Ａの低基礎活性変異体によって誘導されたことを示す。この殺傷は、ＥＧＦＰ形質導入マーカーが陽性であった細胞のパーセントによって測定されるように、殺傷スイッチを発現するレンチウイルス構築物を用いた細胞の形質導入レベルに比例した。ネクロプトーシス誘導タンパク質であるＲＩＰＫ３は、このアッセイでは細胞死を誘導することができなかった。転じて、カスパーゼ－１及びカスパーゼ－４は、カスパーゼ－９と同様に機能し、我々のＤＮＣＲ／ＮＳ３ａ二量体システムを用いた場合に細胞死を誘導する可能性が高い。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図9】

【図10】

【手続補正書】

【提出日】2023-10-03

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】配列表

【補正方法】追加

【補正の内容】

【配列表】

2024505248000001.app

【国際調査報告】