特表 2024-505601 がん療法に使用するための二重ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫ阻害剤並びに免疫療法剤の組み合わせ

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-02-06

(54)【発明の名称】がん療法に使用するための二重ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫ阻害剤並びに免疫療法剤の組み合わせ

(51)【国際特許分類】

   C07D 471/10 20060101AFI20240130BHJP

   A61K 31/4747 20060101ALI20240130BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240130BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240130BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240130BHJP

【ＦＩ】

C07D471/10 101

C07D471/10 CSP

A61K31/4747

A61K39/395 T

A61P35/00

A61P43/00 121

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023571245

(86)(22)【出願日】2022-02-02

(85)【翻訳文提出日】2023-08-29

(86)【国際出願番号】 US2022014900

(87)【国際公開番号】W WO2022169840

(87)【国際公開日】2022-08-11

(31)【優先権主張番号】63/145,321

(32)【優先日】2021-02-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/277,672

(32)【優先日】2021-11-10

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】523293286

【氏名又は名称】エックスラッド セラピューティクス，インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】ギルマー，トナ

(72)【発明者】

【氏名】カスタン，マイケル

(72)【発明者】

【氏名】キルシュ，デヴィッド

【テーマコード（参考）】

4C065

4C085

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C065AA17

4C065AA18

4C065BB05

4C065CC09

4C065DD02

4C065EE02

4C065HH01

4C065JJ01

4C065KK09

4C065LL04

4C065PP08

4C065PP12

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB11

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG02

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086CB05

4C086GA13

4C086GA14

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA52

4C086NA14

4C086ZB26

4C086ZC20

4C086ZC41

4C086ZC75

(57)【要約】

式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩、免疫チェックポイント阻害剤、及び任意選択的に、放射線療法を含む、併用がん療法。
【選択図】図１０

【特許請求の範囲】

【請求項1】

がんを治療するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量の式（Ｉ）の化合物、

【化1】

又はその薬学的に許容される塩を投与することを含み、
式中、
Ｒ^５が、Ｈ又はハロゲンであり、
Ｙが、ＣＨＲ^６又はＮＲ^７であり、
Ｌが、－ＯＲ^８－又は－Ｎ（Ｒ^８）_２－であり、各Ｒ^８が、独立して、Ｈ若しくはＣ_１－３アルキルであるか、又はＲ^８置換基の両方が、Ｎと一緒になって、ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^６、及びＲ^７が、各々独立して、Ｈ又はＣ_１－３アルキルであり、
前記対象が、抗腫瘍免疫チェックポイント阻害剤、放射線療法、又はこれらの組み合わせを受けたことがあるか、又は受けている、方法。

【請求項2】

がんを治療するための方法であって、それを必要とする対象に、（ａ）有効量の抗腫瘍免疫チェックポイント阻害剤、放射線療法、又はこれらの組み合わせ、及び（ｂ）有効量の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含み、

【化2】

式中、
Ｒ^５が、Ｈ又はハロゲンであり、
Ｙが、ＣＨＲ^６又はＮＲ^７であり、
Ｌが、－ＯＲ^８－又は－Ｎ（Ｒ^８）_２－であり、各Ｒ^８が、独立して、Ｈ若しくはＣ_１－３アルキルであるか、又はＲ^８置換基の両方が、Ｎと一緒になって、ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^６、及びＲ^７が、各々独立して、Ｈ又はＣ_１－３アルキルである、方法。

【請求項3】

前記対象が、前記放射線療法を受けたことがあるか、又は受けている、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項4】

前記対象が、前記抗腫瘍免疫チェックポイント阻害剤を受けたことがあるか、又は受けている、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

ステップ（ａ）において、前記対象に、前記放射線療法を実施することを含む、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項6】

ステップ（ａ）において、前記対象に、前記抗腫瘍免疫チェックポイント阻害剤を投与することを含む、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

前記化合物が、式（Ｉａ）の化合物、

【化3】

又はその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ^１～Ｒ^４が、請求項１で定義されるとおりである、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記化合物が、式（Ｉａ－１）の化合物、

【化4】

又はその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ^１が、Ｃ_１－３アルキルである、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

前記式（Ｉａ－１）の化合物が、

【化5】

であるか、又はその薬学的に許容される塩である、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

前記化合物が、式（Ｉｂ）の化合物、

【化6】

又はその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒ^１～Ｒ^４が、請求項１で定義されるとおりである、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記薬学的塩が、前記式（Ｉ）の化合物のメシル酸塩である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記式（Ｉ）の化合物が、経口投与される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記式（Ｉ）の化合物が、１日１回又は２回投与される、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

前記チェックポイント阻害剤が、任意選択的に、表１に列挙されるＰＤ－１アンタゴニストから選択されるＰＤ－１アンタゴニストである、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記ＰＤ－１アンタゴニストが、任意選択的に、表１に列挙される抗ＰＤ－１抗体から選択される抗ＰＤ－１抗体である、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記ＰＤ－１アンタゴニストが、任意選択的に、表１に列挙される抗ＰＤ－Ｌ１抗体から選択される抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記チェックポイント阻害剤が、静脈内注入によって、又は経口で投与される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記対象が、ヒトがん患者である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記ヒトがん患者が、結腸がん、黒色腫、乳がん、肺がん、又は頭頸部がんを有する、請求項１６に記載の方法。

【請求項20】

式（Ｉ）の化合物のメシル酸塩であって、

【化7】

式中、
Ｒ^５が、Ｈ又はハロゲンであり、
Ｙが、ＣＨＲ^６又はＮＲ^７であり、
Ｌが、－ＯＲ^８－又は－Ｎ（Ｒ^８）_２－であり、各Ｒ^８が、独立して、Ｈ若しくはＣ_１－３アルキルであるか、又はＲ^８置換基の両方が、Ｎと一緒になって、ヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^６、及びＲ^７が、各々独立して、Ｈ又はＣ_１－３アルキルである、メシル酸塩。

【請求項21】

前記化合物が、式（Ｉａ）の化合物であり、

【化8】

式中、Ｒ^１～Ｒ^４が、請求項２０で定義されるとおりである、請求項２０に記載のメシル酸塩。

【請求項22】

前記化合物が、式（Ｉａ－１）の化合物であり、

【化9】

式中、Ｒ^１が、Ｃ_１－３アルキルである、請求項２１に記載のメシル酸塩。

【請求項23】

以下の構造

【化10】

を有する、請求項２２に記載のメシル酸塩。

【請求項24】

前記化合物が、式（Ｉｂ）の化合物であり、

【化11】

式中、Ｒ^１～Ｒ^４が、請求項１で定義されるとおりである、請求項２０に記載のメシル酸塩。

【請求項25】

請求項２０～２４のいずれか一項に記載のメシル酸塩を含む、薬学的組成物。

【請求項26】

がんを治療するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量の請求項２０～２４のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物のメシル酸塩、又は請求項２５に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年２月３日に出願された米国特許出願第６２／１４５，３２１号、及び２０２１年１１月１０日に出願された米国特許出願第６３／２７７，６７２号の利益を主張し、それらの各々の内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

セリントレオニンキナーゼのＰＩＫＫ（ＰＩ－３Ｋ様キナーゼ）ファミリーのいくつかのメンバーは、ＤＮＡ損傷シグナル伝達の既知のメディエーターである。

【0003】

放射線療法（ＲＴ）は、疾患中のある時点で、全てのがん患者の５０％超を治療するために使用される。かなりの努力にもかかわらず、臨床放射線増感剤を開発するための以前のアプローチは、主に、放射線に対する細胞反応の直接的な調節因子ではない非特異的経路を標的とする結果として、極めて効果的ではなかった。

【0004】

免疫療法は、免疫系を調節することによる疾患の治療を指す。近年、免疫療法は、様々な形態のがんの治療において陽性結果を示している。しかしながら、ヒトからヒトへの免疫系の複雑さ及び変動を考慮すると、問題を引き起こす可能性がある。

【0005】

腫瘍学的疾患のための新しい治療法が必要である。

【発明の概要】

【0006】

本開示は、少なくとも部分的に、ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫキナーゼの選択的二重阻害剤の開発、並びにがん治療における免疫チェックポイント阻害剤とのそれらの併用に基づいている。

【0007】

いくつかの態様では、本開示は、がんを治療するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量の式（Ｉ）の化合物、

【化1】

又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を特徴とする。式（Ｉ）において、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^６、及びＲ^７が、各々独立して、Ｈ又はＣ_１－３アルキルであり得、
Ｒ^５が、Ｈ又はハロゲン（例えば、フルロリン）であり得、Ｙが、ＣＨＲ^６又はＮＲ^７であり得、かつ／あるいは
Ｌが、－ＯＲ^８－又は－Ｎ（Ｒ^８）_２－であり得、式中、
各Ｒ^８が、独立して、Ｈ若しくはＣ_１－３アルキルであり得るか、又はＲ^８基の両方が、Ｎと一緒になって、ヘテロシクリル環を形成し得る。いくつかの実施形態では、対象は、抗腫瘍免疫チェックポイント阻害剤を受けたことがあるか、又は受けている。

【0008】

他の態様では、本開示は、がんを治療するための方法であって、それを必要とする対象に、（ａ）有効量の抗腫瘍免疫チェックポイント阻害剤、及び（ｂ）有効量の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を特徴とする。

【0009】

本明細書に開示される方法のうちのいずれかにおいて、対象は、放射線療法を受けたことがあるか、又は受けている。代替的に、本方法は、対象に、放射線療法を実施することを更に含み得る。

【0010】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法のうちのいずれかにおいて使用される化合物は、式（Ｉａ）の化合物であり得、

【化2】

、式中、Ｙ及びＲ^１～Ｒ^４が、本明細書に記載されるとおりである。

【0011】

いくつかの実施例では、式（Ｉａ）の化合物は、以下のとおりであるか、

【化3】

、又はその薬学的に許容される塩である。いくつかの場合において、Ｒ^１は、Ｃ_１－３アルキルであり得る。

【0012】

いくつかの実施例では、式（Ｉａ－１）の化合物は、

【化4】

であるか、又はその薬学的に許容される塩である。

【0013】

いくつかの実施例では、本明細書に開示される方法のうちのいずれかにおいて使用される化合物は、式（Ｉｂ）の化合物であり得、

【化5】

Ｙ及びＲ^１～４は、本明細書で定義されるとおりである。

【0014】

いくつかの実施例では、式（Ｉ）の化合物のメシル酸塩は、本明細書に開示される方法のうちのいずれかにおいて使用され得る。

【0015】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、経口投与される。例えば、式（Ｉ）の化合物は、１日１回又は２回投与される。

【0016】

いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、任意選択的選択的に、表１に列挙されるＰＤ－１アンタゴニストから選択されるＰＤ－１アンタゴニストである。いくつかの実施例では、ＰＤ－１アンタゴニストは、任意選択的に、表１に列挙される抗ＰＤ－１抗体から選択される抗ＰＤ－１抗体である。いくつかの実施例では、ＰＤ－１アンタゴニストは、任意選択的に、表１に列挙される抗ＰＤ－Ｌ１抗体から選択される抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。本明細書に開示されるチェックポイント阻害剤のうちのいずれも、静脈内注入によって投与され得る。代替的に、チェックポイント阻害剤は、経口投与され得る。

【0017】

本明細書に開示される方法のうちのいずれかにおいて、対象は、ヒトがん患者であり得る。例えば、ヒトがん患者は、結腸がん、黒色腫、乳がん、肺がん、又は頭頸部がん（例えば、下咽頭がん）を有する。

【0018】

他の態様では、式（Ｉ）の化合物のメシル酸塩が、本明細書で提供される。

【化6】

【0019】

式（Ｉ）において、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^６、及びＲ^７の各々は、独立して、Ｈであり得るか、又はＣ_１－３アルキルＲ^５は、Ｈ又はハロゲンであり得、Ｙは、ＣＨＲ^６又はＮＲ^７であり得、かつ／あるいは
Ｌは、－ＯＲ^８－又は－Ｎ（Ｒ^８）_２－であり得、各Ｒ^８は、独立して、Ｈ又はＣ_１－３アルキルであり得る。代替的に、Ｒ^８置換基の両方が、Ｎと一緒になって、ヘテロシクリル環を形成する。

【0020】

いくつかの実施形態では、メシル酸塩は、式（Ｉａ）の化合物のメシル酸塩であり得る。

【化7】

Ｙ及びＲ^１～Ｒ^４は、本明細書で定義されるとおりである。

【0021】

いくつかの実施例では、メシル酸塩は、式（Ｉａ－１）の化合物のメシル酸塩であり得る。

【化8】

いくつかの場合において、
Ｒ^１は、Ｃ_１－３アルキルであり得る。例えば、メシル酸塩は、以下の構造を有する。

【化9】

【0022】

他の実施例では、メシル酸塩は、式（Ｉｂ）の化合物のメシル酸塩であり得る。

【化10】

Ｙ及びＲ^１～４は、本明細書で定義されるとおりである。

【0023】

更に、本開示は、本明細書に開示される式（Ｉ）の化合物のうちのいずれかのメシル酸塩を含む、薬学的組成物を提供する。加えて、本開示は、がんを治療するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量の本明細書に開示されるメシル酸塩、又はそのようなものを含む薬学的組成物を投与することを含む、方法を提供する。

【0024】

また、本明細書に開示されるものとしての標的がんの治療における使用のために、任意選択的に、放射線療法とともに、式（Ｉ）の化合物（例えば、メシル酸塩の形態で）及び免疫チェックポイント阻害剤のうちのいずれかの共使用、又は標的がんの治療における使用のための医薬の製造のためのそのような治療剤の共使用が、本開示の範囲内である。加えて、本開示は、標的がんの治療における使用のために、及び標的がんの治療における使用のための医薬を製造するためのかかるメシル酸塩の使用のために、本明細書に開示されるメシル酸塩のうちのいずれかを含む、薬学的組成物を提供する。

【0025】

本発明の１つ以上の実施形態の詳細は、以下の説明に記載される。本発明の他の特徴又は利点は、以下の図面及びいくつかの実施形態の詳細な説明、並びに添付の特許請求の範囲からも明らかであろう。

【図面の簡単な説明】

【0026】

以下の図面は、本明細書の一部を形成し、本開示のある特定の態様を更に実証するために含まれ、これらは、本明細書に提示される特定の実施形態の詳細な説明と組み合わせて、図面を参照することによってよりよく理解することができる。

【0027】

【図1】放射線療法の有無にかかわらず、ＭＣＦ７細胞に対する化合物５６９の効果を評価する代表的な実験からの免疫ブロットの画像である。

【図2A-2B】クローン原性アッセイにおいて、化合物５６９が細胞生存率を改善したことを示すグラフを含む。図２Ａ：放射線療法の有無にかかわらず、ビヒクル（ＤＭＳＯ）又は化合物５６９に曝露した後のＭＣＦ７細胞生存率を調べるクローン原性生存アッセイの結果を示すグラフ。図２Ｂ：放射線療法の有無にかかわらず、ビヒクル（ＤＭＳＯ）又は化合物５６９に曝露した後のＡ５４９細胞生存率を調べるクローン原性生存アッセイの結果を示すグラフ。

【図3】野生型ｐ５３を発現するＨＣＴ１１６細胞又はｐ５３発現が陰性であったＨＣＴ１１６細胞における、化合物５６９によるＴＢＫ１のリン酸化の誘導、選択的ＡＴＭ阻害剤（ＡＴＭｉ）、選択的ＤＮＡ－ＰＫ阻害剤（ＤＮＡ－ＰＫｉ）、及び選択的ＡＴＭ阻害剤と選択的ＤＮＡ－ＰＫ阻害剤（Ａｉ＋Ｄｉ）との組み合わせを示す免疫ブロットの画像である。図３において、ｐ．ＡＴＭ、ｐ．ＤＮＡ－ＰＫ、ｐ．ＴＢＫ１、及びｐ．ＳＴＩＮＧは、それぞれ、ＡＴＭ、ＤＮＡ－ＰＫ、ＴＢＫ１、及びＳＴＩＮＧのリン酸化形態を示す。

【図4】ＦＡＤＵ頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ）ヒト腫瘍異種移植片における化合物５６９による、ＤＮＡ－ＰＫキナーゼの放射誘導性自己リン酸化の阻害及びＡＴＭ基質であるＫＡＰ１の放射誘導性リン酸化を示す免疫ブロットである。ｐＤＮＡ－ＰＫ及びｐＫＡＰ１は、それぞれ、ＤＮＡ－ＰＫ及びＫＡＰ１のリン酸化形態を示す。

【図5】ＭＤＡ－ＭＢ－２３１乳がんヒト腫瘍異種移植片における化合物５６９による、ＤＮＡ－ＰＫキナーゼの放射誘導性自己リン酸化の阻害及びＡＴＭ基質であるＫＡＰ１の放射誘導性リン酸化を示す免疫ブロットである。ｐＤＮＡ－ＰＫ及びｐＫＡＰ１は、それぞれ、ＤＮＡ－ＰＫ及びＫＡＰ１のリン酸化形態を示す。

【図6】化合物５６９及び／又はＩＲ、ｑｄ×３を有するＦＡＤＵ皮下ヒト異種移植片マウスモデルの投与を示すダイアグラムである。研究における各群の経時的な相対腫瘍体積の中央値を示す。「５６９」は化合物５６９を意味し、「Ｖｅｈ．」はビヒクルを意味し、「Ｒａｄ．」は放射線療法を意味する。

【図7】化合物５６９及び／又はＩＲ、ｑｄ×３を有するＦＡＤＵ皮下ヒト異種移植片マウスモデルにおいて投与された各群のカプランマイヤー無５倍生存率を表すプロットである。「５６９」は化合物５６９を意味し、「Ｖｅｈ．」はビヒクルを意味し、「Ｒａｄ．」は放射線療法を意味する。

【図8】化合物５６９及び／又はＩＲ、ｑｄ×３を有するＭＤＡ－ＭＢ－２３１皮下ヒト異種移植片マウスモデルの投与を示すダイアグラムである。研究における各群の経時的な相対腫瘍体積の中央値を示す。図８において、「５６９」は化合物５６９を意味し、「Ｖｅｈ．」はビヒクルを意味し、「Ｒａｄ．」は放射線療法を意味する。

【図9】化合物５６９及び／又はＩＲ、ｑｄ×３を有するＭＤＡ－ＭＢ－２３１皮下ヒト異種移植片マウスモデルにおいて投与された各群のカプランマイヤー無５倍生存率を表すプロットである。図９において、「５６９」は化合物５６９を意味し、「Ｖｅｈ．」はビヒクルを意味し、「Ｒａｄ．」は放射線療法を意味する。

【図10】１）ビヒクル＋アイソタイプ対照；２）抗ｍＰＤ－１；３）放射線＋アイソタイプ対照；４）放射線＋抗ｍＰＤ－１；５）化合物５６９＋放射線；６）化合物５６９＋抗ｍＰＤ－１；７）化合物５６９＋放射線＋抗ｍＰＤ－１を有するＭＣ３８同系マウスモデルに投与された各群（ｎ＝１０）の腫瘍成長を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0028】

定義
本明細書で使用される用語が特定の実施形態を記載する目的のためであり、制限することを意図するものではないことは理解されるであろう。更に、本明細書に記載されるものと同様又は同等の任意の方法、デバイス、及び材料は、本発明の実施又は試験で使用することができるが、好ましい方法、デバイス、及び材料が、ここに記載される。上記に加えて、本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるように、別途指定がない限り、以下の用語は、示される意味を有する。
「アミノ」は、－ＮＨ_２ラジカルを指す。
「シアノ」は、－ＣＮラジカルを指す。
「ヒドロキシル」は、－ＯＨラジカルを指す。
「イミノ」は、＝ＮＨ置換基を指す。
「ニトロ」は、－ＮＯ_２ラジカルを指す。
「オキソ」は、＝Ｏ置換基を指す。
「チオキソ」は、＝Ｓ置換基を指す。
「トリフルオロメチル」は、－ＣＦ_３ラジカルを指す。

【0029】

「アルキル」は、１～１２個の炭素原子、好ましくは１～８個の炭素原子又は１～６個の炭素原子を有し、単結合、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、１－メチルエチル（イソ－プロピル）、ｎ－ブチル、ｎ－ペンチル、１，１－ジメチルエチル（ｔ－ブチル）、３－メチルヘキシル、２－メチルヘキシルなどによって分子の残りの部分に結合する、直鎖、飽和、非環式、一価の炭化水素ラジカル又は分岐鎖、飽和、非環式、一価の炭化水素ラジカルを指す。任意選択的に置換されたアルキルラジカルは、ハロ、シアノ、ニトロ、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、オキソ、トリメチルシラニル、－ＯＲ^１４、－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ^１４、－Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^１５、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１４、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１６、－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ^１６、－Ｎ（Ｒ^１４）Ｓ（Ｏ）_ｔＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｓ（Ｏ）_ｔＯＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｓ（Ｏ）_ｐＲ^１６（式中、ｐが、０、１、又は２である）、及び－Ｓ（Ｏ）_ｔＮ（Ｒ^１４）_２（式中、ｔが、１又は２である）からなる群から独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの置換基によって、原子価が許す限り、任意選択的に置換されたアルキルラジカルであり、各Ｒ^１４が、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり、各Ｒ^１５が、独立して、水素、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり、各Ｒ^１６が、独立して、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールである。

【0030】

「アルケニル」は、２～１２個の炭素原子、好ましくは２～８個の炭素原子を有し、単結合、例えば、エテニル、プロプ－１－エニル、ブタ－１－エニル、ペント－１－エニル、ペンタ－１，４－ジエニルなどによって分子の残りに結合する、１個、２個、又は３個の炭素－炭素二重結合を含有する、直鎖、非環式、一価の炭化水素ラジカル又は分岐鎖、非環式、一価の炭化水素ラジカルを指す。任意選択的に置換されたアルケニルラジカルは、ハロ、シアノ、ニトロ、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、オキソ、トリメチルシラニル、－ＯＲ^１４、－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ^１４、－Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^１５、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１４、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１６、－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ^１６、－Ｎ（Ｒ^１４）Ｓ（Ｏ）_ｔＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｓ（Ｏ）_ｔＯＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｓ（Ｏ）_ｐＲ^１６（式中、ｐが、０、１、又は２である）、及び－Ｓ（Ｏ）_ｔＮ（Ｒ^１４）_２（式中、ｔが、１又は２である）からなる群から独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの置換基によって、原子価が許す限り、任意選択的に置換されたアルケニルラジカルであり、各Ｒ^１４が、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり、各Ｒ^１５が、独立して、水素、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり、各Ｒ^１６が、独立して、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールである。

【0031】

「アルキニル」は、１個又は２個の炭素－炭素三重結合、及び任意選択的に、１個、２個、又は３個の炭素－炭素二重結合を含有し、２～１２個の炭素原子、好ましくは２～８個の炭素原子を有し、単結合、例えば、エチニル、プロプ－１－エニル、ブタ－１－エニル、ペンタ－１－エニル、ペンタ－１－エン－４－エニルなどによって分子の残りに結合する、直鎖、非環式、一価の炭化水素ラジカル又は分岐鎖、非環式、一価の炭化水素ラジカルを指す。任意選択的に置換されたアルキニルラジカルは、ハロ、シアノ、ニトロ、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、オキソ、トリメチルシラニル、－ＯＲ^１４、－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ^１４、－Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^１５、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１４、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１６、－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ^１６、－Ｎ（Ｒ^１４）Ｓ（Ｏ）_ｔＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｓ（Ｏ）_ｔＯＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｓ（Ｏ）_ｐＲ^１６（式中、ｐが、０、１、又は２である）、及び－Ｓ（Ｏ）_ｔＮ（Ｒ^１４）_２（式中、ｔが、１又は２である）からなる群から独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの置換基によって任意選択的に置換されたアルキニルラジカルであり、各Ｒ^１４が、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり、各Ｒ^１５が、独立して、水素、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり、各Ｒ^１６が、独立して、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールである。

【0032】

「アルキレン」又は「アルキレン鎖」は、１～１２個の炭素原子、例えば、メチレン、エチレン、プロピレン、ｎ－ブチレンなどを有する、直鎖、非環式、飽和、二価の炭化水素鎖又は分岐鎖、非環式、飽和、二価の炭化水素鎖を指す。アルキレン鎖は、単結合によって結合される。アルキレン鎖の結合点は、アルキレン鎖内で同じ炭素原子上にあっても、異なる炭素原子上にあってもよい。任意選択的に置換されたアルキレンラジカルは、ハロ、シアノ、ニトロ、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、オキソ、トリメチルシラニル、－ＯＲ^１４、－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ^１４、－Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^１５、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１４、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１６、－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ^１６、－Ｎ（Ｒ^１４）Ｓ（Ｏ）_ｔＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｓ（Ｏ）_ｔＯＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｓ（Ｏ）_ｐＲ^１６（式中、ｐが、０、１、又は２である）、及び－Ｓ（Ｏ）_ｔＮ（Ｒ^１４）_２（式中、ｔが、１又は２である）からなる群から独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの置換基によって、原子価が許す限り、任意選択的に置換されたアルキレンラジカルであり、各Ｒ^１４が、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり、各Ｒ^１５が、独立して、水素、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり、各Ｒ^１６が、独立して、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、アルキレンは、エチレンである。

【0033】

「アルケニレン」又は「アルケニレン鎖」は、１個、２個、又は３個の炭素－炭素二重結合を含有し、２～１２個の炭素原子、例えば、エテニレン、プロペニレン、ｎ－ブテニレンなどを有する、直鎖、非環式、二価の炭化水素鎖又は分岐鎖、非環式、二価の炭化水素鎖を指す。アルケニレン鎖は、単結合によって結合される。アルケニレン鎖の結合点は、アルケニレン鎖内で同じ炭素原子上にあっても、異なる炭素原子上にあってもよい。任意選択的に置換されたアルケニレンラジカルは、ハロ、シアノ、ニトロ、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、オキソ、トリメチルシラニル、－ＯＲ^１４、－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ^１４、－Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^１５、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１４、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１６、－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ^１６、－Ｎ（Ｒ^１４）Ｓ（Ｏ）_ｔＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｓ（Ｏ）_ｔＯＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｓ（Ｏ）_ｐＲ^１６（式中、ｐが、０、１、又は２である）、及び－Ｓ（Ｏ）_ｔＮ（Ｒ^１４）_２（式中、ｔが、１又は２である）からなる群から独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの置換基によって、原子価が許す限り、任意選択的に置換されたアルケニレンラジカルであり、各Ｒ^１４が、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり、各Ｒ^１５が、独立して、水素、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり、各Ｒ^１６が、独立して、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールである。

【0034】

「アルキニレン」又は「アルキニレン鎖」は、１個又は２個の炭素－炭素三重結合、及び任意選択的に、１個、２個、又は３個の炭素－炭素二重結合を含有し、２～１２個の炭素原子、例えば、プロピニレン、ｎ－ブテニレンなどを有する、直鎖、非環式、二価の炭化水素鎖又は分岐鎖、非環式、二価の炭化水素鎖を指す。アルキニレン鎖は、単結合によって結合される。アルキニレンの結合点は、アルキニレン鎖内で同じ炭素原子上にあっても、異なる炭素原子上にあってもよい。任意選択的に置換されたアルキニレン鎖は、ハロ、シアノ、ニトロ、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、オキソ、トリメチルシラニル、－ＯＲ^１４、－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ^１４、－Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^１５、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１４、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１６、－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ^１６、－Ｎ（Ｒ^１４）Ｓ（Ｏ）_ｔＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｓ（Ｏ）_ｔＯＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｓ（Ｏ）_ｐＲ^１６（式中、ｐが、０、１、又は２である）、及び－Ｓ（Ｏ）_ｔＮ（Ｒ^１４）_２（式中、ｔが、１～２である）からなる群から独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの置換基によって任意選択的に置換されたアルキネレン鎖であり、各Ｒ^１４が、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり、各Ｒ^１５が、独立して、水素、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり、各Ｒ^１６が、独立して、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールである。

【0035】

「アルコキシ」は、式－ＯＲ_ａのラジカルを指し、式中、Ｒ_ａは、１～１２個の炭素原子を含有する上記で定義されるアルキルラジカルである。任意選択的に置換されたアルコキシラジカルのアルキル部分は、アルキルラジカルについて上記で定義されるように、任意選択的に置換される。

【0036】

「アルコキシアルキル」は、式－Ｒ_ａ－Ｏ－Ｒ_ｂのラジカルを指し、式中、Ｒ_ａは、アルキレンであり、Ｒ_ｂは、上記で定義されるアルキルである。任意選択的に置換されたアルコキシアルキルラジカルのアルキル部分及びアルキレン部分は、それぞれ、アルキルラジカル及びアルキレン鎖について上記で定義されるように、任意選択的に置換される。

【0037】

「アラルキル」は、式－Ｒ_ａ－Ｒ_ｂのラジカルを指し、式中、Ｒ_ａは、アルキレンであり、Ｒ_ｂは、本明細書に記載されるアリールである。任意選択的に置換されたアラルキルのアルキレン部分及びアリール部分は、それぞれ、アルキレン及びアリールについて本明細書に記載されるように、任意選択的に置換される。

【0038】

「アリール」は、６～１８個の炭素原子を含有する芳香族単環式又は多環式炭化水素環系ラジカルを指し、多環式アリール環系は、二環式、三環式、又は四環式環系である。アリールラジカルとしては、フルオレニル、フェニル、及びナフチルなどの基が挙げられるが、これらに限定されない。任意選択的に置換されたアリールは、アルキル、アケニル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、シアノ、ニトロ、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、－Ｒ^１５－ＯＲ^１４、－Ｒ^１５－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ^１４、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｒ^１５－Ｃ（Ｏ）Ｒ^１４、－Ｒ^１５－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１４、－Ｒ^１５－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１６、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ^１６、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）Ｓ（Ｏ）_ｔＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｒ^１５－Ｓ（Ｏ）_ｔＯＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｒ^１５－Ｓ（Ｏ）_ｐＲ^１６（式中、ｐが、０、１、又は２である）、及び－Ｒ^１５－Ｓ（Ｏ）_ｔＮ（Ｒ^１４）_２（式中、ｔが、１又は２である）からなる群から独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの置換基によって任意選択的に置換されたアリールラジカルであり、各Ｒ^１４が、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり、各Ｒ^１５が、独立して、直接結合又は直鎖若しくは分岐鎖アルキレン若しくはアルケニン鎖であり、各Ｒ^１６が、独立して、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールである。

【0039】

「アリールアルコキシ」は、式－Ｏ－Ｒの基を指し、式中、Ｒは、アラルキルである。任意選択的に置換されたアリールアルコキシは、アラルキルについて本明細書に記載されるように任意選択的に置換されるアリールアルコキシである。いくつかの実施形態では、アリールアルコキシは、ベンジルオキシである。

【0040】

「シクロアルキル」は、３～１５個の炭素原子を有し、好ましくは３～１０個の炭素原子を有し、飽和又は不飽和であり、単結合によって分子の残りの部分に結合する、安定した非芳香族単環式又は多環式炭化水素ラジカルを指す。多環式炭化水素ラジカルは、二環式、三環式、又は四環式環系である。不飽和シクロアルキルは、１個、２個、若しくは３個の炭素－炭素二重結合、及び／又は１個の炭素－炭素三重結合を含有する。単環式シクロアルキルラジカルとしては、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルが挙げられる。多環式シクロアルキルラジカルとしては、例えば、アダマンチル、ノルボルニル、デカリニルなどが挙げられる。任意選択的に置換されたシクロアリールは、アルキル、アケニル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、シアノ、ニトロ、オキソ、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－Ｒ^１５－ＯＲ^１４、－Ｒ^１５－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ^１４、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｒ^１５－Ｃ（Ｏ）Ｒ^１４、－Ｒ^１５－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１４、－Ｒ^１５－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１６、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ^１６、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）Ｓ（Ｏ）_ｔＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｒ^１５－Ｓ（Ｏ）_ｔＯＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｒ^１５－Ｓ（Ｏ）_ｐＲ^１６（式中、ｐが、０、１、又は２である）、及び－Ｒ^１５－Ｓ（Ｏ）_ｔＮ（Ｒ^１４）_２（式中、ｔが、１又は２である）からなる群から独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの置換基によって任意選択的に置換されたシクロアルキルラジカルであり、各Ｒ^１４が、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり、各Ｒ^１５が、独立して、直接結合又は直鎖若しくは分岐鎖アルキレン若しくはアルケニレン鎖であり、各Ｒ^１６が、独立して、アルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールである。

【0041】

「縮合した」とは、本発明の化合物中の既存の環構造に縮合した、本明細書に記載される任意の環系を指す。縮合環系が、ヘテロシクリル又はヘテロアリールである場合、縮合環系の一部になる既存の環構造上の任意の炭素原子は、窒素原子に置き換えられ得る。

【0042】

「ハロ」は、ハロゲン置換基：ブロモ、クロロ、フルオロ、及びヨードを指す。

【0043】

「ハロアルキル」は、上記で定義されるように、１つ以上のハロゲン置換基によって更に置換されるアルキルラジカルを指す。ハロアルキルに含まれるハロ置換基の数は、１個からハロ置換基（例えば、ペルフルオロアルキル）との置換に利用可能な水素原子の総数までである。ハロアルキルの非限定的な例としては、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリクロロメチル、２，２，２－トリフルオロエチル、１－フルオロメチル－２－フルオロエチル、３－ブロモ－２－フルオロプロピル、１－ブロモメチル－２－ブロモエチルなどが挙げられる。任意選択的に置換されたハロアルキルについて、ハロアルキルラジカルのアルキル部分の炭素原子に結合した水素原子は、任意選択的に置換されたアルキルについて上記で定義される置換基で任意選択的に置換され得る。

【0044】

「ハロアルケニル」は、上記で定義されるように、１つ以上のハロ置換基によって更に置換されるアルケニルラジカルを指す。ハロアルケニルに含まれるハロ置換基の数は、１個からハロ置換基（例えば、ペルフルオロアルケニル）との置換に利用可能な水素原子の総数までである。ハロアルケニルの非限定的な例としては、２，２－ジフルオロエテニル、３－クロロプロプ－１－エニルなどが挙げられる。任意選択的に置換されたハロアルケニルについて、ハロアルケニルラジカルのアルケニル部分の炭素原子に結合した水素原子は、任意選択的に置換されたアルケニル基について上記で定義される置換基で任意選択的に置換され得る。

【0045】

「ハロアルキニル」は、上記で定義されるように、１つ以上のハロ置換基によって更に置換されるアルキニルラジカルを指す。ハロアルキニルに含まれるハロ置換基の数は、１個からハロ置換基（例えば、ペルフルオロアルキニル）との置換に利用可能な水素原子の総数までである。ハロアルキニルの非限定的な例としては、３－クロロプロプ－１－エニルなどが挙げられる。ハロアルキニルラジカルのアルキニル部分は、加えて、アルキニル基について上記で定義されるように、任意選択的に置換され得る。

【0046】

「ヘテロアリールアルキル」は、式－Ｒ_ａ－Ｒ_ｂのラジカルを指し、式中、Ｒ_ａは、アルキレンであり、Ｒ_ｂは、本明細書に記載されるヘテロアリールである。任意選択的に置換されたヘテロアリールアルキルのアルキレン部分及びヘテロアリール部分は、それぞれ、アルキレン及びヘテロアリールについて本明細書に記載されるように、任意選択的に置換される。

【0047】

「ヘテロシクリル」は、炭素数が２～１２を有し、窒素、酸素、リン、及び硫黄からなる群から独立して選択される合計１～６個のヘテロ原子を含有する、安定した３～１８員の非芳香族環系ラジカルを指す。ヘテロシクリルラジカルは、単環式、二環式、三環式、又は四環式環系である。二環式、三環式、又は四環式ヘテロシクリルは、縮合、スピロ、及び／又は架橋環系である。ヘテロシクリルラジカルは、飽和又は不飽和であり得る。不飽和ヘテロシクリルは、１個、２個、若しくは３個の炭素－炭素二重結合、及び／又は１個の炭素－炭素三重結合を含有する。任意選択的に置換されたヘテロシクリルは、アルキル、アケニル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、シアノ、オキソ、チオキソ、ニトロ、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－Ｒ^１５－ＯＲ^１４、－Ｒ^１５－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ^１４、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｒ^１５－Ｃ（Ｏ）Ｒ^１４、－Ｒ^１５－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１４、－Ｒ^１５－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１６、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ^１６、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）Ｓ（Ｏ）_ｔＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｒ^１５－Ｓ（Ｏ）_ｔＯＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｒ^１５－Ｓ（Ｏ）_ｐＲ^１６（式中、ｐが、０、１、又は２である）、及び－Ｒ^１５－Ｓ（Ｏ）_ｔＮ（Ｒ^１４）_２（式中、ｔが、１又は２である）からなる群から独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの置換基によって任意選択的に置換されたヘテロシクリルラジカルであり、各Ｒ^１４が、独立して、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり、各Ｒ^１５が、独立して、直接結合又は直鎖若しくは分岐鎖アルキレン若しくはアルケニレン鎖であり、各Ｒ^１６が、独立して、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールである。ヘテロシクリルラジカル中の窒素、炭素、又は硫黄原子は、任意選択的に酸化されてもよく（置換基がオキソであり、ヘテロ原子上に存在する場合）、窒素原子は、任意選択的に四級化されてもよい（置換基が、アルキル、アルケニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－Ｒ^１５－ＯＲ^１４、－Ｒ^１５－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ^１４、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｒ^１５－Ｃ（Ｏ）Ｒ^１４、－Ｒ^１５－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１４、－Ｒ^１５－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１６、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ^１６、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）Ｓ（Ｏ）_ｔＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｒ^１５－Ｓ（Ｏ）_ｔＯＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｒ^１５－Ｓ（Ｏ）_ｐＲ^１６（式中、ｐが、０、１、又は２である）、及び－Ｒ^１５－Ｓ（Ｏ）_ｔＮ（Ｒ^１４）_２（式中、ｔが、１又は２である）、Ｒ^１５が、直鎖若しくは分岐鎖アルキレン若しくはアルケニレン鎖であり、Ｒ^１４及びＲ^１６は、上記で定義されるとおりである）。任意選択的に置換されたヘテロシクリルラジカルの例としては、アゼチジニル、ジオキソラニル、チエニル［１，３］ジチアニル、デカヒドロイソキノリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、２－オキソピペラジニル、２－オキソピペリジニル、２－オキソピロリジニル、オキサゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、４－ピペリドニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロフリル、トリチアニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、チアモルホリニル、１－オキソ－チオモルホリニル、及び１，１－ジオキソ－チオモルホリニルが挙げられるが、これらに限定されない。

【0048】

「ヘテロシクリレン」は、１個の水素原子が原子価で置き換えられたヘテロシクリルを指す。任意選択的に置換されたヘテロシクリレンは、ヘテロシクリルについて本明細書に記載されるように任意選択的に置換される。

【0049】

「ヘテロアリール」は、少なくとも１つの芳香族環を含有し、１～１７の炭素数の炭素原子を有し、窒素、酸素、及び硫黄からなる群から独立して選択される合計１～１０個のヘテロ原子を含有する、５～１８員環系ラジカルを指す。ヘテロアリールラジカルは、単環式、二環式、三環式、又は四環式環系である。二環式、三環式、又は四環式ヘテロアリールラジカルは、縮合及び／又は架橋環系である。任意選択的に置換されたヘテロアリールは、アルキル、アケニル、アルコキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、シアノ、オキソ、チオキソ、ニトロ、オキソ、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、又はヘテロアリールアルキル、－Ｒ^１５－ＯＲ^１４、－Ｒ^１５－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ^１４、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｒ^１５－Ｃ（Ｏ）Ｒ^１４、－Ｒ^１５－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１４、－Ｒ^１５－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１６、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ^１６、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）Ｓ（Ｏ）_ｔＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｒ^１５－Ｓ（Ｏ）_ｔＯＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｒ^１５－Ｓ（Ｏ）_ｔＲ^１６（式中、ｐが、０、１、又は２である）、及び－Ｒ^１５－Ｓ（Ｏ）_ｔＮ（Ｒ^１４）_２（式中、ｔが、１又は２である）からなる群から独立して選択される１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つの置換基によって任意選択的に置換されたヘテロアリールラジカルであり、各Ｒ^１４が、独立して、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールであり、各Ｒ^１５が、独立して、直接結合又は直鎖若しくは分岐鎖アルキレン若しくはアルケニレン鎖であり、各Ｒ^１６が、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクリル、又はヘテロアリールである。ヘテロシクリルラジカル中の窒素、炭素、又は硫黄原子は、任意選択的に酸化されてもよいが（置換基がオキソであり、ヘテロ原子上に存在する場合）、但し、ヘテロアリール中の少なくとも１つの環が芳香族を維持するものとし、窒素原子は、任意選択的に四級化されてもよいが（置換基が、アルキル、アルケニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、－Ｒ^１５－ＯＲ^１４、－Ｒ^１５－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ^１４、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｒ^１５－Ｃ（Ｏ）Ｒ^１４、－Ｒ^１５－Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１４、－Ｒ^１５－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^１４）_２、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）ＯＲ^１６、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）Ｃ（Ｏ）Ｒ^１６、－Ｒ^１５－Ｎ（Ｒ^１４）Ｓ（Ｏ）_ｔＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｒ^１５－Ｓ（Ｏ）_ｔＯＲ^１６（式中、ｔが、１又は２である）、－Ｒ^１５－Ｓ（Ｏ）_ｐＲ^１６（式中、ｐが、０、１、又は２である）、及び－Ｒ^１５－Ｓ（Ｏ）_ｔＮ（Ｒ^１４）_２（式中、ｔが、１又は２である）であり、Ｒ^１５が、直鎖若しくは分岐鎖アルキレン若しくはアルケニレン鎖であり、Ｒ^１４及びＲ^１６は、上記で定義されるとおりである）、但し、ヘテロアリール中の少なくとも１つの環が芳香族を維持するものとする。任意選択的に置換されたヘテロアリールラジカルの例としては、アゼピニル、アクリジニル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリル、ベンズインドリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾフラニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキセピニル、１，４－ベンゾジオキサニル、ベンゾナフトフラニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾジオキシニル、ベンゾピラニル、ベンゾピラノニル、ベンゾフラニル、ベンゾフラノニル、ベンゾチエニル（ベンゾチオフェニル）、ベンゾトリアゾリル、ベンゾ［４，６］イミダゾ［１，２－ａ］ピリジニル、カルバゾリル、シンノリニル、ジベンゾフラニル、ジベンゾチオフェニル、フラニル、フラノニル、イソチアゾリル、イミダゾリル、インダゾリル、インドリル、インダゾリル、イソインドリル、インドリニル、イソインドリニル、イソキノリル、インドリジニル、イソオキサゾリル、ナフチル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、２－オキソアゼピニル、オキサゾリル、オキシラニル、１－フェニル－１Ｈ－ピロリル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、フタラジニル、プテリジニル、プリニル、ピロリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピロリル、キナゾリニル、キノキサリニル、キノリニル、キヌクリジニル、イソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、チアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、トリアジニル、及びチオフェニル（すなわち、チエニル）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0050】

Ｉ．がん治療
特に、ＡＴＭ（運動失調症－毛細血管拡張症、変異型）及びＤＮＡ－ＰＫキナーゼは、ＤＮＡ切断に対する細胞反応の重要なモジュレーターであり、これらの分子のいずれかの阻害は、電離放射線に対する細胞の感受性を著しく増加させる。運動失調症 毛細血管拡張症、変異型（ＡＴＭ）キナーゼ及びＤＮＡ依存性プロテインキナーゼ（ＤＮＡ－ＰＫ）をそれぞれコードするＡＴＭ又はＰＲＫＤＣ遺伝子に機能喪失変異を有するヒト及びマウスは、電離放射線に対して過敏である。ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫキナーゼを一緒に阻害することは、放射線療法又はＤＮＡ損傷剤（例えば、抗腫瘍剤）に対する腫瘍細胞の感作に有効であり得る。ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫキナーゼの二重阻害の有効性は、いずれかのキナーゼ自体の阻害よりも優れ得る。

【0051】

免疫療法は、患者自身の免疫系を調節することによるがん治療の一種であり、抗がん細胞免疫反応の増強をもたらす。免疫療法は、がん患者における無増悪生存期間及び全生存率の延長における成功を示した。一方、免疫療法は、過剰に活動する免疫系に起因する重篤な有害事象を引き起こし得る。

【0052】

本開示は、（ａ）１つ以上の式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩（例えば、化合物５６８、５６９、５７０、若しくは５７４、又はメシル酸塩若しくはＨＣｌ塩などのその薬学的に許容される塩）、（ｂ）ＰＤ１アンタゴニストなどの１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤、及び任意選択的に（ｃ）放射線療法を含む、併用がん療法を提供する。本明細書に報告されるように、式（Ｉ）の化合物は、ＡＴＭ（運動失調性毛細血管拡張症、変異型）及びＤＮＡ－ＰＫキナーゼの選択的二重阻害剤であるが、ｍＴＯＲ、及び／若しくはＰＩ３Ｋα／δを阻害するようなキナーゼに対する阻害活性が低い若しくはない、及び／若しくはｈＥＲＧに対する阻害活性が低い若しくはない。したがって、本明細書に開示される式（Ｉ）の化合物は、放射線療法の有無にかかわらず、ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫの作用の有効な阻害剤であり得る。更に、式（Ｉ）の化合物及び免疫療法（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）の組み合わせは、例えば、抗腫瘍免疫シグナル伝達経路の活性化に関与する経路を刺激することによって、優れた抗腫瘍効果を達成することが期待され得る。理論に拘束されることなく、併用療法は、場合によっては、腫瘍細胞特異的Ｔ細胞を活性化すること（例えば、腫瘍微小環境内のサイトカインプロファイルの変化、免疫原性細胞死の促進、新抗原の提示の刺激、又はそれらの組み合わせを介して）によって、意図された治療効果を達成し得る。加えて、式（Ｉ）の化合物及び免疫療法と放射線療法との組み合わせは、同様の又は他の複数の機序によってその反応を増強することができる。

【0053】

Ａ．治療剤
本明細書に開示される併用療法は、本明細書に開示される式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩（例えば、化合物５６８、５６９、５７０、若しくは５７４、又はその薬学的に許容される塩）、１つ以上の免疫療法剤（例えば、ＰＤ１アンタゴニストなどの免疫チェックポイント阻害剤、及び任意選択的に放射線療法）のうちの１つ以上を含む。本明細書に開示される化合物は、任意の立体異性体、鏡像異性体、互変異性体、又はそれらの混合物を包含する。

【0054】

（ｉ）式（Ｉ）の化合物
いくつかの態様では、式（Ｉ）として示される構造を有する二重ＡＴＭ／ＤＮＡ－ＰＫ阻害化合物、

【化11】

又はその薬学的に許容される塩が、本明細書に提供される。式（Ｉ）では、Ｒ^５は、Ｈ又はハロゲン（例えば、フルオロ）であり得、Ｙは、ＣＨＲ^６又はＮＲ^７であり得、Ｌは、－ＯＲ^８－又は－Ｎ（Ｒ^８）_２－であり得る。各Ｒ^８は、独立して、Ｈ又はＣ_１－３アルキルであり得る。いくつかの場合において、Ｒ^８置換基の両方が、Ｎと一緒に、ヘテロシクリル環を形成し、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^６、及びＲ^７は、各々独立して、Ｈ、又はＣ_１－３アルキル（置換又は非置換）である。いくつかの実施例では、Ｃ_１－３アルキルは、メチル、エチル、プロピル、又はイソプロピルであり得る。

【0055】

いくつかの実施形態では、Ｌは、－ＯＲ^８－であり、式中、Ｒ^８は、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｌは、－ＯＲ^８－であり、式中、Ｒ^８又はＣ_１－３アルキルである。

【0056】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のＹは、ＣＨＲ^５であり得る。いくつかの実施例では、Ｒ^５は、Ｈであり得る。他の実施例では、Ｒ^５は、Ｃ_１－３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、又はイソプロピルなどの非置換Ｃ_１－３アルキル）であり得る。代替的に、又は加えて、Ｒ^２、Ｒ^３、及びＲ^４の各々は、Ｈであり得る。他の例では、Ｒ^２、Ｒ^３、及びＲ^４の各々は、Ｃ_１－３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、又はイソプロピルなどの非置換Ｃ_１－３アルキル）であり得る。代替的に、又は加えて、Ｒ^１は、メチルであり得る。他の実施例では、Ｒ^１は、エチルであり得る。更に他の実施例では、Ｒ^１は、イソプロピルであり得る。

【0057】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）のＹは、ＮＲ^６であり得る。いくつかの実施例では、Ｒ^６は、Ｈであり得る。他の実施例では、Ｒ^６は、Ｃ_１－３アルキル（例えば、メチル、エチル、又はプロピルなどの非置換Ｃ_１－３アルキル）であり得る。代替的に、又は加えて、Ｒ^２、Ｒ^３、及びＲ^４の各々は、Ｈであり得る。他の例では、Ｒ^２、Ｒ^３、及びＲ^４の各々は、Ｃ_１－３アルキル（例えば、メチル、エチル、又はプロピルなどの非置換Ｃ_１－３アルキル）であり得る。代替的に、又は加えて、Ｒ^１は、メチルであり得る。他の実施例では、Ｒ^１は、エチルであり得る。更に他の実施例では、Ｒ^１は、イソプロピルであり得る。

【0058】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される二重ＡＴＭ／ＤＮＡ－ＰＫ阻害化合物は、式（Ｉａ）の構造、

【化12】

を有し得、式中、Ｙ及びＲ^１～Ｒ^４は、本明細書で定義されるとおりである。いくつかの実施例では、二重ＡＴＭ／ＤＮＡ－ＰＫ阻害化合物は、式（Ｉａ－１）の化合物、

【化13】

であり得、式中、Ｒ^１は、本明細書で定義されるとおりである。

【0059】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される二重ＡＴＭ／ＤＮＡ－ＰＫ阻害化合物は、式（Ｉｂ）の構造、

【化14】

を有し得、式中、Ｙ及びＲ^１～４は、本明細書で定義されるとおりである。

【0060】

本明細書に開示される式（Ｉ）の化合物は、ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫキナーゼの二重阻害剤であり得る。例えば、本明細書に開示される式（Ｉ）の化合物は、ＡＴＭ≦５ｎＭに対するＩＣ_５０値及び／又はＤＮＡ－ＰＫ≦１．１ｎＭ（例えば、≦１．０ｎＭ）に対するＩＣ_５０値（例えば、化合物５６８、５６９、５７０、若しくは５７４）を有し得る。いくつかの場合において、本明細書に開示される式（Ｉ）の化合物は、ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫに対する選択的阻害剤である。このような選択的阻害剤は、ｍＴＯＲ、ＰＩ３Ｋ－α／δ、及び／又はｈＥＲＧなどの他の標的酵素に対する阻害活性が著しく低下している（又は低下していない）。例えば、本明細書に開示する式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物５６８、５６９、５７０、又は５７４）は、ＡＴＭ ＩＣ_５０又はＤＮＡ－ＰＫ ＩＣ_５０よりも少なくとも１０倍（例えば、少なくとも２０倍）大きいｍＴＯＲ ＩＣ_５０を有し得る。他の例では、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物５６８、５６９、５７０、又は５７４）は、１０ｎＭ以上（例えば、＞１００ｎＭ）のｍＴＯＲ ＩＣ_５０を有し得る。追加的又は代替的に、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物５６８、５６９、５７０、又は５７４）は、同じ化合物濃度で測定した場合、ＡＴＭ ＩＣ_５０又はＤＮＡ－ＰＫ ＩＣ_５０よりも少なくとも１００倍（例えば、少なくとも５００倍、少なくとも１０００倍、又は少なくとも３０００倍）大きいｈＥＲＧ ＩＣ_５０を有し得る。例えば、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物５６８、５６９、５７０、又は５７４）は、３μＭ以上（例えば、１０μＭ以上）のｈＥＲＧ ＩＣ_５０を有し得る。

【0061】

本明細書に開示される式（Ｉ）の化合物のうちのいずれかは、本明細書に開示される併用がん療法において使用され得る。使用するための式（Ｉ）の例示的な化合物としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
・トランス－Ｎ－（５－（３－エチル－７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド
・Ｎ－（５－（７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）プロパン－２－スルホンアミド
・Ｎ－（５－（７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド塩酸塩
・Ｎ－（５－（７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）エタンスルホンアミド塩酸塩
・Ｎ－（５－（７’－フルオロ－１－イソプロピル－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［アゼチジン－３，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド
・シス－Ｎ－（５－（３－エチル－７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド
・Ｎ－（２－（３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル）－５－（３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド塩酸塩

【0062】

具体的な例では、併用療法で使用するための式（Ｉ）の化合物は、化合物５６８である。他の実施例では、式（Ｉ）の化合物は、化合物５６９である。更に他の実施例では、式（Ｉ）の化合物は、化合物５７０である。他の実施例では、式（Ｉ）の化合物は、化合物５７４である。

【0063】

いくつかの場合において、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩は、本明細書に開示される併用がん療法に使用することができる。「薬学的に許容される塩」は、本明細書で使用される場合、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などなしでヒト及び動物の組織と接触して使用するのに好適であり、妥当な利益／リスク比に見合ったものである塩を表す。薬学的に許容される塩は、当該技術分野で周知である。例えば、薬学的に許容される塩は、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ６６：１－１９，１９７７及びＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ，（Ｅｄｓ．Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ），Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２００８に記載されている。薬学的に許容される塩としては、酸及び塩基添加塩が挙げられる。

【0064】

「薬学的に許容される酸付加塩」は、遊離塩基の生物学的有効性及び特性を保持し、生物学的に又は他の方法で望ましくないものではなく、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などであるが、これらに限定されない無機酸、並びに酢酸、２，２－ジクロロ酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４－アセトアミド安息香酸、樟脳酸、樟脳－１０－スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、炭酸、桂皮酸、クエン酸、シクラミン酸、ドデシルスルホン酸、エタン－１，２－ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチシン酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、２－オキソ－グルタル酸、グリセロリン酸、グリコール酸、馬尿酸、イソ酪酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムク酸、ナフタレン－１，５－ジスルホン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、１－ヒドロキシ－２－ナフチン酸、ニコチン酸、オレイン酸、オロチン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、プロピオン酸、ピログルタミン酸、ピルビン酸、サリチル酸、４－アミノサリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、酒石酸、チオシアン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、ウンデシレン酸などであるが、これらに限定されない有機酸で形成される塩を指す。」

【0065】

薬学的に許容される塩基付加塩」は、遊離酸の生物学的有効性及び特性を保持し、生物学的でない又はさもなければ望ましくない塩を指す。これらの塩は、遊離酸への無機塩基又は有機塩基の付加から調製される。無機塩基に由来する塩としては、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩などが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい無機塩は、アンモニウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、及びマグネシウム塩である。有機塩基に由来する塩としては、一級、二級、及び三級アミンの塩、天然に存在する置換アミンを含む置換アミンの塩、環状アミンの塩、並びに塩基性イオン交換樹脂、例えば、アンモニア、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、ジエタノールアミン、エタノールアミン、デアノール、２－ジメチルアミノエタノール、２－ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、ベネタミン、ベンザチン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ－エチルピペリジン、ポリアミン樹脂などが挙げられるが、これらに限定されない。特に好ましい有機塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、コリン、及びカフェインである。

【0066】

いくつかの実施例では、式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物５６８、５６９、５７０、又は５７４）のメシル酸塩は、本明細書に開示される併用療法に使用することができる。１つの特定の例を、以下に提供する：

【化15】

（化合物５６９のメシル酸塩）。

【0067】

本明細書に開示される式（Ｉ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩は、１つ以上の不斉中心を含み得、したがって、アミノ酸について（Ｒ）－若しくは（Ｓ）－又は（Ｄ）－若しくは（Ｌ）－として、絶対立体化学の観点から定義され得る鏡像異性体、ジアステレオマー、及び他の立体異性体形態を生じ得る。本発明は、そのような可能性のある全ての異性体、並びにそれらのラセミ形態及び光学的に純粋な形態を含むことを意図している。光学的に活性な（＋）及び（）、（Ｒ）－及び（Ｓ）、又は（Ｄ）－及び（Ｌ）－異性体は、キラルシンソン又はキラル試薬を使用して調製され得るか、又は従来の技術、例えば、クロマトグラフィー及び分割結晶化を使用して分解され得る。個々の鏡像異性体の調製／単離のための従来の技術には、例えば、キラル高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用した、好適な光学的に純粋な前駆体からのキラル合成又はラセミ体（又は塩若しくは誘導体のラセミ体）の分割が含まれる。本明細書に記載される化合物がオレフィン二重結合又は他の幾何学的非対称性中心を含有する場合、特に指定されない限り、化合物は、Ｅ及びＺ幾何学的異性体の両方を含むことが意図される。同様に、全ての互変異性形態も含まれることが意図される。

【0068】

「立体異性体」は、同じ結合によって結合された同じ原子からなるが、互換性がない異なる三次元構造を有する化合物を指す。本発明は、様々な立体異性体及びそれらの混合物を企図し、分子が互いに重ね合わせできない鏡像である２つの立体異性体を指す「鏡像異性体」を含む。

【0069】

「互変異性体は、ある分子の１つの原子から同じ分子の別の原子へのプロトン移動を指す。本明細書に開示される任意の式（Ｉ）の化合物の互変異性体は、本開示の範囲内である。

【0070】

また、本開示の範囲内には、式（Ｉ）の中間化合物、並びに前述の種の全ての多形体、並びにそれらの晶癖も含まれる。

【0071】

式（Ｉ）の化合物の調製
本明細書に開示される式（Ｉ）の化合物は、当該技術分野で既知の方法及び技法を使用して、又は本明細書に提供される開示に従って調製することができる（例えば、以下の実施例を参照されたい）。これらの化合物を合成するための好適なプロセスは、実施例に提供される。一般に、式（Ｉ）の化合物は、以下に記載されるスキームに従い調製され得る。これらの反応の出発物質の情報源も記載されている。

【0072】

保護基は、当業者に既知であり、本明細書に記載される標準的な技術に従って、本発明の化合物の調製において付加又は除去され得る。保護基の使用は、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（２００６），４^ｔｈ Ｅｄ．，Ｗｉｌｅｙに詳述されている。保護基はまた、Ｗａｎｇ樹脂又は２－クロロトリチル－クロリド樹脂などのポリマー樹脂であってもよい。

【0073】

本発明の化合物のそのような保護された誘導体は、そのような薬理学的活性を有し得ないが、それらは、哺乳動物に投与され、その後、体内で代謝されて、薬理学的に活性である本発明の化合物を形成し得ることも、当業者によって理解されるであろう。

【0074】

遊離塩基又は酸形態で存在し得る、調製されるように以下に記載される化合物の全ては、適切な無機又は有機塩基又は酸で処理することによって、それらの薬学的に許容される塩に変換され得る。以下に調製される化合物の塩は、標準的な技術によってそれらの遊離塩基又は酸形態に変換され得る。本発明の化合物の全ての多形、非晶質形態、無水物、水和物、溶媒和物、及び塩は、本発明の範囲内であることが意図されることが理解される。更に、酸又はエステル基を含有する本発明の全ての化合物は、それぞれ、当業者に既知の方法又は本明細書に記載の方法によって、対応するエステル又は酸に変換することができる。

【0075】

これらの化合物の多くの調製の一般的な表現は、スキーム１に以下に示される。化合物は、分子の様々な成分のカップリング：ハロ置換化合物３（又は２’）とボロン酸又はボレート化合物２（又は３’）との鈴木カップリングによって調製される。更なる反応は、本発明の化合物の合成を提供するために必要であっても必要でなくてもよい。本発明の特定の化合物の調製物を、以下のスキームに示す。

【化16】

【0076】

アリールアリールカップリング反応では、ハロゲンは、ヨード、ブロモ、又はクロロ、好ましくはブロモ又はヨードであり得る。この方法では、ハロゲン置換は、鈴木カップリング反応条件を使用してアリール置換に変換され得る。この方法の条件は、Ａ．ＳｕｚｕｋｉがＭｏｄｅｒｎ Ａｒｅｎｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００２，５３－１０６の「Ｔｈｅ Ｓｕｚｕｋｉ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａｒｙｌｂｏｒｏｎ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｉｎ ａｒｅｎｅ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」と題する論文でレビューした多くの出版物に開示されている。この反応を実施する際に、鈴木反応において従来の好適な条件のうちのいずれかを利用することができる。一般に、鈴木カップリング反応は、この反応のために任意の従来の有機溶媒を利用するパラジウム触媒及び弱い無機又は有機塩基などの遷移金属触媒の存在下で行われる。好ましい有機溶媒の中には、極性非プロトン性溶媒がある。任意の従来の極性非プロトン性溶媒を、本発明の化合物の調製に利用することができる。好適な溶媒は、通常、特に高沸点溶媒、例えば、ジメトキシエタンである。弱い無機塩基は、炭酸カリウム又は炭酸セシウムなどの炭酸塩又は炭酸水素塩であり得る。有機塩基は、トリエチルアミンなどのアミンであり得る。

【化17】

【0077】

具体的には、他のスピロオキシンドール中間体７は、スキーム２に示されるように合成される。シクリル又はヘテロシクリル置換エステル５は、ジイソプロピルアミドリチウムなどであるが、これらに限定されない強塩基で、無水溶媒、例えば、テトラヒドロフランなどであるが、これらに限定されない低温で処理され、出発物質４と反応し、出発物質４は、市販されているか、又は中間体６を提供するための文献に記載された方法に従って当業者によって調製される。中間体６は、鉄などであるが、これらに限定されない還元試薬によって還元され、オキシンドール化合物７を原位置で提供するために環化する対応するアミノ中間体を得る。したがって、化合物７は、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド又はテトラヒドロフランなどの極性溶媒中で、炭酸カリウム又は水素化ナトリウムなどであるが、これらに限定されない塩基の存在下で、アルキル化試薬でＮ－アルキル化されて、スピロオキシンドール中間体８を生成する。

【化18】

【0078】

具体的には、本発明における式（Ｉ）の化合物は、スキーム３に示されるように合成することができる。市販の５－ブロモ－２－クロロ－３－ニトロ－ピリジン（９）は、水素化ナトリウムなどであるが、これらに限定されない強力な塩基の存在下で、求核剤ＸＨ（１０）と反応して、中間体１１を得る。パラジウム触媒条件下では、ホウ酸塩１２を調製することができ、次いで、スピロ中間体８と反応させて、クロスカップリング生成物１３を得る。化合物１３のニトロ基は、鉄などであるが、これらに限定されない還元試薬を使用してアミノ基に還元され、中間体１４を得る。異なる塩化スルホニル（１５）との１４の反応は、式（Ｉ）の化合物の合成をもたらす。

【化19】

【0079】

具体的には、本発明における式（Ｉ）の化合物も、スキーム４に示されるように合成することができる。化合物１１のニトロ基は、鉄などであるが、これらに限定されない還元試薬を使用してアミノ基に還元され、中間体１６を得る。１６と異なる塩化スルホニル（１５）との反応は、パラジウム触媒作用下で対応するホウ酸塩１８に変換されるスルホンアミド中間体１７を得る。ホウ酸塩１８は、鈴木反応条件下でハロ化合物８と結合して、式（Ｉ）の化合物を得ることができる。

【0080】

スキーム３及びスキーム４では、クロスカップリング化合物は、例えば、スキーム５に示されるように、ハロゲン及びボロネート／ボロン酸置換パターンを逆転させた成分との鈴木カップリング化学を使用しても合成可能である。

【化20】

【0081】

具体的には、本発明における式（Ｉ）の化合物も、スキーム５に示されるように合成することができる。ハロ化合物８は、パラジウム触媒作用下で対応するホウ酸塩１９に変換することができる。ホウ酸塩１９は、鈴木反応条件下でハロ化合物１７と結合して、式（Ｉ）の化合物を得ることができる。

【0082】

（ｉｉ）免疫チェックポイント阻害剤
本明細書に開示される併用がん療法は、１つ以上の免疫療法剤を更に含む。いくつかの実施形態では、免疫療法剤は、免疫チェックポイント阻害剤である。免疫チェックポイントは、自己免疫又は過剰な免疫反応を最小限に抑えるために免疫反応を下方制御する免疫系の調節因子である。例示的な阻害免疫チェックポイントとしては、Ａ２ＡＲ受容体、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ３）、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸ＮＡＤＰＨオキシダーゼアイソフォーム２（ＮＯＸ２）、プログラミング死－１受容体（ＰＤ－１）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）、シアル酸結合免疫グロブリン型レクチン７（ＳＩＧＬＥＣ７）、及びシアル酸結合免疫グロブリン型レクチン９（ＳＩＧＬＥＣ９）が挙げられる。阻害チェックポイント分子（例えば、本明細書に開示されるもの）をブロックする薬剤は、免疫チェックポイント阻害剤として知られている。そのような薬剤は、免疫細胞機能（例えば、Ｔ細胞活性）をブロック又は低下させるシグナルを抑制することができ、それによって、がん細胞などの疾患細胞に対する免疫反応を増強する。

【0083】

本明細書に開示される併用がん療法に使用するための免疫チェックポイント阻害剤は、本明細書に開示される阻害性チェックポイント分子のうちのいずれかをブロックする薬剤であり得る。チェックポイント阻害剤は、抗体、阻害性チェックポイント受容体の可溶性リガンド、又は小分子阻害剤であり得る。例示的なチェックポイント阻害剤を、下の表１に提供する。

【表1】

【0084】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、例えば、ＣＴＬＡ－４に特異的な抗体（抗ＣＴＬＡ－４抗体）を標的とする。

【0085】

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用によって媒介されるシグナル伝達経路を阻害する任意の薬剤であり得るＰＤ１アンタゴニストである。いくつかの実施例では、ＰＤ１アンタゴニストは、抗ＰＤ１抗体であり得る。他の実施例では、ＰＤ１アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体であり得る。

【0086】

抗体（複数の形態で互換的に使用される）は、免疫グロブリン分子の可変領域に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的に特異的に結合することができる免疫グロブリン分子である。本明細書で使用する「抗体」、例えば、抗ＰＤ１又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体という用語は、無傷（例えば、完全長）のポリクローナル又はモノクローナル抗体だけでなく、その抗原結合断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、ダイアボディ、単一ドメイン抗体（例えば、ナノボディ）、単一ドメイン抗体（例えば、Ｖ_Ｈのみの抗体）、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び必要な特異性の抗原認識部位を含む免疫グリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアント、及び共有結合修飾抗体を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾構成も包含する。抗体、例えば、抗ガレクチン－９抗体は、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、又はＩｇＭ（又はそのサブクラス）などの任意のクラスの抗体を含み、抗体は、任意の特定のクラスである必要はない。その重鎖の定常ドメインの抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスに割り当てられ得る。免疫グロブリンには５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に更に分割され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元構成は、周知である。

【0087】

典型的な抗体分子は、通常、抗原結合に関与する重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）及び軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む。Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域は、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）としても知られている超可変性の領域に更に細分化することができ、「フレームワーク領域」（「ＦＲ」）として知られているより保存されている領域が散在する。各Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、典型的には、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される。フレームワーク領域及びＣＤＲの範囲は、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ定義、及び／又は接触の定義により、当該技術分野において既知の方法論を使用して正確に特定することができるが、これらは全て、当該技術分野において周知である。例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７、Ａｌ－ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－９４８、及びＡｌｍａｇｒｏ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．１７：１３２－１４３（２００４）を参照されたい。ｈｇｍｐ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ ａｎｄ ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓも参照のこと）。

【0088】

いくつかの実施形態では、併用療法で使用するための免疫チェックポイント阻害剤は、上の表１に列挙される抗ＰＤ－１抗体（例えば、セミプリマブ若しくはペムブロリズマブ）、又はその機能的バリアントであり得る。他の実施形態では、併用療法で使用するための免疫チェックポイント阻害剤は、上の表１に列挙される抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、ＲＥＧＮ３５０４若しくはアテゾリズマブ）又はその機能的バリアントであり得る。そのような機能的バリアントは、構造的にも機能的にも、参照抗体（例えば、上の表１に列挙されているもの）と実質的に類似している。機能的バリアントは、参照抗体と実質的に同じＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ ＣＤＲを含む。例えば、それは、抗体の全ＣＤＲ領域において最大８個（例えば、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、又は１個）のアミノ酸残基変異のみを含み得、実質的に同様の親和性（例えば、同じ順序でＫ_Ｄ値を有する）でチェックポイント分子（例えば、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、又はＰＤ－Ｌ１）の同じエピトープに結合する。いくつかの場合において、機能的バリアントは、参照抗体と同じ重鎖ＣＤＲ３、及び任意選択的に、例示的な抗体と同じ軽鎖ＣＤＲ３を有し得る。代替的又は追加的に、機能的バリアントは、参照抗体と同じ重鎖ＣＤＲ２を有し得る。かかる機能的バリアントは、参照抗体のＶ_Ｈと比較して、重鎖ＣＤＲ１のみにＣＤＲアミノ酸残基の変異を有するＶ_Ｈ断片を含み得る。いくつかの実施例では、抗体は、参照抗体と同じＶ_Ｌ ＣＤＲ３、及び任意選択的に同じＶ_Ｌ ＣＤＲ１又はＶＬ ＣＤＲ_２を有するＶ_Ｌ断片を更に含み得る。

【0089】

代替的又は追加的に、アミノ酸残基変異は、保存的アミノ酸残基置換であり得る。本明細書で使用される場合、「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸置換が行われるタンパク質の相対電荷又はサイズ特性を変化させないアミノ酸置換を指す。バリアントは、当業者に既知のポリペプチド配列を改変するための方法、例えば、かかる方法をコンパイルする参考文献に見出される方法、例えば、分子クローニング：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９又はＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋの現行のプロファイルに従って調製され得る。アミノ酸の保存的置換には、（ａ）Ｍ、Ｉ、Ｌ、Ｖ；（ｂ）Ｆ、Ｙ、Ｗ；（ｃ）Ｋ、Ｒ、Ｈ；（ｄ）Ａ、Ｇ；（ｅ）Ｓ、Ｔ；（ｆ）Ｑ、Ｎ；及び（ｇ）Ｅ、Ｄ内のアミノ酸間で行われる置換が含まれる。

【0090】

（ｉｉｉ）放射線療法
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される併用がん療法のうちのいずれかは、放射線療法を含み得る。放射線療法（ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ）（放射線療法（ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ）とも呼ばれる）は、イオン化放射線を使用してがん細胞を制御する又は死滅させる療法である。

【0091】

放射線療法は、例えば、放射性核種（例えば、β発光放射性核種、α発光放射性核種、又はγ線発光放射性核種）、電子捕捉放射性核種、抗体放射性核種コンジュゲート、又は別の標的放射性核種コンジュゲートとの外部、内部、近接照射療法、又は全身曝露を含み得る。

【0092】

例示的なβ発光放射性核種としては、^３２リン、^６７銅、^７７臭素、^８９ストロンチウム、^９０イットリウム、^１０５ロジウム、^１３１ヨウ素、^１３７セシウム、^１４９プロメテウム、^１５３サマリウム、^１６６ホルミウム、^１７７ルテチウム、^１８６レニウム、^１８８レニウム、又は^１９９ゴールドが挙げられるが、これらに限定されない。例示的なα発光放射性核種としては、^２１１アスタチン、^２１３ビスマス、^２２３ラジウム、^２２５アクチニウム、又は^２２７トリウムが挙げられるが、これらに限定されない。例示的なγ線放射性核種としては、^１９２イリジウムが挙げられる。

【0093】

例示的な電子捕捉放射性核種としては、^６７ガリウム、^１０３パラジウム、又は^１２５ヨウ素が挙げられるが、これらに限定されない。

【0094】

例示的な抗体放射性核種コンジュゲートとしては、^９０Ｙ－イブリツモマブチウセタン、^１３１Ｉ－トシツモマブ、^２２５Ａｃ－リンツズマブサテトラキセタン、^２２７Ｔｈ－アネツマブコリキセタン、^９０Ｙ－エピツモマブシツキセタン、^９０Ｙ－クリバツズマブテトラキセタン、^１７７Ｌｕ－リロトマブサテトラキセタン、^９０Ｙ－ロソパタマブテトラキセタン、^９０Ｙ－タバツキシマブバルズキセタン、又は^９０Ｙ－タカツズマブテトラキセタンが挙げられるが、これらに限定されない。追加の標的化放射性核種コンジュゲートとしては、^１３１Ｉ－ＰＳＭＡ、^９０Ｙ－ＰＳＭＡ、^１７７Ｌｕ－ＰＳＭＡ、又は^１７７Ｌｕ－サトレオチドテトラキセタンが挙げられる。いくつかの場合において、抗体放射性核種コンジュゲートは、併用がん療法に使用することができる。

【0095】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される放射線療法は、Ｘ線（光子）、^６０コバルト又は他の放射性同位体からのガンマ線、中性子、電子、陽子、炭素イオン、ヘリウムイオン、及び他の荷電粒子による外部ビーム放射線療法を含み得る。放射線療法には、ガンマ線、アルファ粒子、ベータ粒子、オージェ電子、又は^３２リン、^６７銅、^７７臭素、^８９ストロンチウム、^９０イットリウム、^１０５ロジウム、^１３１ヨウ素、^１３７セシウム、^１４９プロメテウム、^１５３サマリウム、^１６６ホルミウム、^１７７ルテチウム、^１８６レニウム、^１８８レニウム、^１９９ゴールド、^２１１アスタチン、^２１３ビスム、^２２３ラジウム、^２２５アクチニウム、若しくは^２２７トリウム、^１９２イリジウム、^６７ガリウム、^１０３パラジウム、^１２５ヨウ素、及び他の放射性同位体（例えば、^１９２イリジウム、^１２５ヨウ素、^１３７セシウム、^１０３パラジウム、^３２リン、^９０イットリウム、^６７ガリウム、^２１１アスタチン、若しくは^２２３ラジウム）を含む同位体からの他の種類の放射性粒子を放出する近接照射療法及び放射線医薬も含まれる。放射線療法には、^１３１ヨウ素、^９０イットリウム、^２２５アクチニウム、^２１１アスタチン、^６７ガリウム、^１７７ルテチウム、^２２７トリウム、及び他の放射性同位体を含む放射性同位体にコンジュゲートされた抗体又は小分子を用いた放射免疫療法（ＲＩＴ）も含まれる。

【0096】

Ｂ．併用がん療法
本明細書に開示される併用がん療法は、本明細書に開示される式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物（例えば、化合物５６８、５６９、５７０、若しくは５７４）、又はその薬学的に許容される塩（例えば、メシル酸塩）、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤、及び任意選択的に放射線療法を含む。いくつかの場合において、治療剤のうちの少なくとも２つ（例えば、３つの治療剤の全て）を、連続した方法で対象に投与することができる。いくつかの場合において、治療剤のうちの少なくとも２つ（例えば、３つの治療剤の全て）を、同時に対象に投与され得る。いくつかの実施例では、式（Ｉ）の化合物及び放射線療法は、同じ日に対象に与えられ得、チェックポイント阻害剤は、化合物及び放射線療法の投与から少なくとも１日後に対象に与えられ得る。

【0097】

（ｉ）薬学的組成物
本明細書に開示されるがん療法を実施するために、式（Ｉ）の化合物、免疫チェックポイント阻害剤、又は放射線治療薬のうちのいずれかも、薬学的組成物中に製剤化することができる。「薬学的組成物」は、本明細書に開示される治療剤のうちのいずれかの製剤、及び治療剤を哺乳動物、例えばヒトに送達するために当該技術分野で一般的に許容される培地を指す。そのような培地は、そのための全ての薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤を含む。「許容される」とは、担体が、組成物の活性成分と適合しなければならず（好ましくは、活性成分を安定させることができる）、治療される対象に有害でないことを意味する。緩衝液を含む薬学的に許容される賦形剤（担体）は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ Ｅｄ．（２０００）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｅｄ．Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒを参照されたい。

【0098】

本明細書に開示される併用がん療法において使用される薬学的組成物は、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態の薬学的に許容される担体、賦形剤、又は安定剤を含むことができる。（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ Ｅｄ．（２０００）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｅｄ．Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ）。許容される担体、賦形剤、又は安定剤は、使用される用量及び濃度でレシピエントに対して無毒であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝液、アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤、保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール、メチル若しくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びｍ－クレゾール）、低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギニン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリシンなどのアミノ酸、及びグルコース、マンノース、若しくはデキストランを含む他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトールなどの糖類、ナトリウムなどの塩形成対イオン、金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）、並びに／又はＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、若しくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含み得る。

【0099】

いくつかの実施例では、本明細書に記載される薬学的組成物は、本明細書に開示される治療剤（例えば、式（Ｉ）の化合物、又は本明細書に開示される抗体若しくはコード核酸）を含有するリポソームを含み、これは、Ｅｐｓｔｅｉｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：３６８８（１９８５）、Ｈｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４０３０（１９８０）、並びに米国特許第４，４８５，０４５号及び同第４，５４４，５４５号に記載されるような当該技術分野に既知の方法によって調製され得る。循環時間が増大したリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、及びＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた逆相蒸着法によって生成することができる。リポソームを、定義された孔径のフィルターを通して押し出して、所望の直径を有するリポソームを得る。

【0100】

治療剤（例えば、式（Ｉ）の化合物、チェックポイント阻害抗体のうちのいずれか、又はコード核酸）はまた、例えば、コアセルベーション技法によって、又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン－マイクロカプセル、及びポリ－（メチルメタシレート）マイクロカプセル、それぞれ、コロイド薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、及びナノカプセル）、又はマクロエマルションに捕捉され得る。そのような技法は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ Ｅｄ．Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００）を参照されたい。

【0101】

他の実施例では、本明細書に記載される薬学的組成物は、持続放出形式で製剤化され得る。持続放出調製物の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスを含み、このマトリックスは、成形物品、例えば、フィルム、又はマイクロカプセルの形態である。持続放出マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ－グルタミン酸及び７エチル－Ｌ－グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン－ビニルアセテート、分解性乳酸－グリコール酸コポリマー、例えば、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸－グリコール酸コポリマー及び酢酸ロイプロリドからなる注射用微粒子）、スクロースアセテートイソブチレート、及びポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸が挙げられる。

【0102】

インビボ投与に使用される薬学的組成物は、無菌でなければならない。これは、例えば、無菌濾過膜を介した濾過によって容易に達成される。治療抗体組成物は、一般に、無菌アクセスポート、例えば、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルを有する容器に入れられる。

【0103】

本明細書に記載される薬学的組成物は、経口、非経口、若しくは直腸投与、又は吸入若しくは吹き込みによる投与のための、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、顆粒、溶液若しくは懸濁液、又は坐剤などの単位剤形であり得る。

【0104】

錠剤などの固体組成物を調製するために、主な活性成分を、薬学的担体、例えば、トウモロコシデンプン、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム又はゴムなどの従来の錠剤成分、及び他の薬学的希釈剤、例えば、水と混合して、本発明の化合物の均一な混合物、又はその非毒性の薬学的に許容される塩を含有する固体予備製剤組成物を形成することができる。これらの予備製剤組成物を均一なものとして言及する場合、活性成分が組成物全体に均一に分散され、組成物が、錠剤、丸薬、及びカプセルなどの等しく有効な単位剤形に容易に細分化され得ることを意味する。次いで、この固体予備製剤組成物は、本発明の活性成分を０．１～約５００ｍｇ含有する上記のタイプの単位剤形に細分化される。新規の組成物の錠剤又は丸薬は、コーティングされるか、又はそうでなければ複合されて、長期作用の利点を提供する剤形を提供することができる。例えば、錠剤又は丸薬は、内部投与量及び外部投与量成分を含み得、後者は、前者を覆うエンベロープの形態である。これら２つの成分は、胃の中での崩壊に耐え、内部成分が十二指腸へ通過するか又はその放出を遅延させることができるように作用する腸溶性層によって分離され得る。様々な材料は、このような腸溶性層又はコーティングに使用することができ、このような材料は、多数のポリマー酸、及びセラック、セチルアルコール、及び酢酸セルロースなどの材料とのポリマー酸の混合物を含む。

【0105】

好適な表面活性剤としては、特に、ポリオキシエチレンソルビタン（例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標）２０、４０、６０、８０、又は８５）及び他のソルビタン（例えば、Ｓｐａｎ（商標）２０、４０、６０、８０、又は８５）などの非イオン性剤が挙げられる。表面活性剤を有する組成物は、０．０５～５％の表面活性剤を好都合に含み、０．１～２．５％であり得る。必要に応じて、他の成分、例えば、マンニトール又は他の薬学的に許容されるビヒクルを添加し得ることが理解されるであろう。

【0106】

好適なエマルションは、市販の脂肪エマルション、例えば、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（商標）、Ｉｎｆｏｎｕｔｒｏｌ（商標）、Ｌｉｐｏｆｕｎｄｉｎ（商標）、及びＬｉｐｉｐｈｙｓａｎ（商標）を使用して調製してもよい。活性成分は、予め混合されたエマルション組成物中に溶解されてもよく、又は代替的に、油（例えば、大豆油、紅花油、綿実油、ゴマ油、トウモロコシ油、又はアーモンド油）並びにリン脂質（例えば、卵リン脂質、大豆リン脂質、又は大豆レシチン）及び水と混合したときに形成されたエマルション中に溶解されてもよい。例えば、グリセロール又はグルコースの他の成分を添加して、エマルションの張度を調節することができることが理解されるであろう。好適なエマルションは、典型的には、最大２０％、例えば、５～２０％の油を含む。脂肪エマルションは、０．１～１．０μｍ、特に０．１～０．５μｍの脂肪液滴を含み得、５．５～８．０の範囲のｐＨを有する。

【0107】

吸入又は吹き入れのための薬学的組成物としては、薬学的に許容される水溶液若しくは有機溶媒、又はこれらの混合物、及び粉末中の溶液及び懸濁液が挙げられる。液体又は固体組成物は、上記に記載されるような好適な薬学的に許容される賦形剤を含有してもよい。いくつかの実施形態では、組成物は、局所的又は全身的な効果のために、経口又は経鼻呼吸器経路によって投与される。

【0108】

好ましくは、無菌の薬学的に許容される溶媒中の組成物は、ガスの使用によって噴霧され得る。噴霧された溶液は、噴霧装置から直接呼吸されてもよく、又は噴霧装置は、フェイスマスク、テント、又は断続的な陽圧呼吸器に取り付けられ得る。溶液、懸濁液、又は粉末組成物は、好ましくは経口的又は経鼻的に、製剤を適切な方法で送達するデバイスから投与され得る。

【0109】

（ｉｉ）がん療法
いくつかの実施形態では、１つ以上の式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物５６８、５６９、５７０、若しくは５７４）又はその薬学的に許容される塩（例えば、メシル酸塩）、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体若しくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体などのＰＤ１アンタゴニスト）、及び任意選択的に、本明細書に開示されるものとして１つ以上の放射線剤を含む、併用がん治療方法が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、１つ以上の式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物５６８、５６９、５７０、若しくは５７４）又はその薬学的に許容される塩（例えば、メシル酸塩）、本明細書に開示されるものとしての１つ以上の放射線剤、及び任意選択的に１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体若しくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体などのＰＤ１アンタゴニスト）を含む、併用がん治療方法が、本明細書で提供される。具体的な例では、本明細書に開示される併用がん治療は、１つ以上の式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物５６８、５６９、５７０、若しくは５７４）又はその薬学的に許容される塩（例えば、メシル酸塩）、１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体若しくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体などのＰＤ１アンタゴニスト）、及び本明細書に開示するものとしての１つ以上の放射線剤を含む。

【0110】

式（Ｉ）の化合物は、併用療法のうちのいずれかにおいて使用される場合、チェックポイント阻害剤及び任意選択的に放射線療法の有効性を増加させ得る。いくつかの場合において、他の薬物療法に関連する有害事象の頻度及び／又は重症度を低減させ得る、他の治療の用量を低減させることを可能にする。例えば、放射線療法（例えば、経口又は胃腸粘膜炎、皮膚炎、肺炎、又は疲労）の副作用は、本発明の化合物を含まない標準的な全用量放射線療法を受けている患者と比較して、本発明の化合物を含む併用療法及び低用量放射線療法を受けている患者において低減させ得る（例えば、有害事象の発生率は、少なくとも１％、５％、１０％、又は２０％低減させ得る）。更に、本発明の化合物を含まない標準的な全用量放射線療法を受けている患者と比較して、本発明の化合物及び低用量放射線療法を含む併用療法を受けている患者において低減され得る（例えば、有害事象の発生率は、少なくとも１％、５％、１０％、又は２０％低減させ得る）他の有害事象は、放射線療法の晩期影響、例えば、放射線誘発性肺線維症、心臓損傷、腸閉塞、神経損傷、血管損傷、リンパ浮腫、脳壊死、又は放射線誘発性がんであり得る。同様に、本化合物が別の抗がん薬（例えば、本明細書に記載されるもの）との併用療法で投与される場合、併用療法は、他の抗がん薬の用量が低下しても、同じ又は更には増加した腫瘍細胞死を引き起こし得る。したがって、他の抗がん剤の低減した投与量は、他の抗がん剤によって引き起こされる有害事象の重症度を低減させ得る。

【0111】

式（Ｉ）の化合物を含む治療は、免疫チェックポイント阻害剤を含む治療の前に、対象に実施され得る。代替的に、式（Ｉ）の化合物を含む治療は、免疫チェックポイント阻害剤を含む治療の後に、対象に実施され得る。他の場合において、式（Ｉ）の化合物を含む治療は、免疫チェックポイント阻害剤を含む治療と同時に対象に実施され得る。

【0112】

併用がん療法が放射線療法を更に含む場合、放射線療法は、式（Ｉ）の化合物を含む治療及び／又は免疫チェックポイント阻害剤を含む治療の前、後、又は同時に実施され得る。

【0113】

したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に開示される治療方法は、治療を必要とする対象に、有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含み、対象は、免疫チェックポイント阻害剤で治療されているか、又は現在、免疫チェックポイント阻害剤を含む抗腫瘍治療を受けている。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される治療方法は、治療を必要とする対象に、有効量の免疫チェックポイント阻害剤を投与することを含み、その対象は、式（Ｉ）の化合物で治療されているか、又は現在、式（Ｉ）の化合物を含む抗腫瘍治療を受けている。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される治療方法は、治療を必要とする対象に、（ｉ）有効量の式（Ｉ）の化合物、及び（ｉｉ）有効量の免疫チェックポイント阻害剤を投与することを含む。本明細書に開示される方法のうちのいずれかは、対象に、有効量の放射線剤を投与することを更に含み得る。

【0114】

本明細書で使用される場合、「有効量」は、単独で、又は１つ以上の他の活性剤と組み合わせて、対象に、治療効果を与えるために必要な各活性剤の量を指す。治療効果を達成した抗体の量の決定は、当業者には明らかであろう。有効量は、当業者によって認識されるように、治療される特定の状態、状態の重症度、年齢、身体状態、サイズ、性別、及び体重を含む個々の患者パラメータ、治療の期間、同時治療の性質（もしあれば）、特定の投与経路、及び医療従事者の知識及び専門知識内の同様の因子に応じて変化する。これらの因子は、当業者に周知であり、日常的な実験以外で対処することはできない。一般に、個々の成分又はそれらの組み合わせの最大用量、すなわち、健全な医学的判断による最高安全用量が使用されることが好ましい。

【0115】

半減期などの経験的考慮事項は、一般に、投与量の決定に寄与する。例えば、ヒト化抗体又は完全ヒト抗体などのヒト免疫系に適合する抗体は、抗体の半減期を延長し、抗体が宿主の免疫系によって攻撃されるのを防ぐために使用され得る。投与頻度は、治療過程にわたって決定及び調整され得、一般的に、必ずしもではないが、標的疾患／障害の治療及び／又は抑制及び／又は改善及び／又は遅延に基づいている。代替的に、抗体の持続的連続放出製剤は、適切であり得る。持続放出を達成するための様々な製剤及びデバイスは、当該技術分野において既知である。

【0116】

一実施例では、本明細書に記載される式（Ｉ）の化合物、免疫チェックポイント阻害剤、又は放射線剤の投与量は、治療剤の１つ以上の投与を受けた個体において経験的に決定され得る。個体には、アゴニストの増分投与量が与えられる。アゴニストの有効性を評価するために、疾患／障害の指標を、追跡することができる。

【0117】

いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、１日１回又は１日２回、対象に、経口投与され得る。市販のチェックポイント阻害剤（例えば、上の表１に列挙されているもの）、及び任意選択的に市販の放射線剤を、式（Ｉ）の化合物と併用する場合、投与量及び投与スケジュールは、通常の業務に従い得る。いくつかの場合において、併用療法で使用される各治療剤の用量は、単剤療法の投与量よりも低くてもよい。

【0118】

本開示の目的のために、本明細書に記載される治療剤の適切な投与量は、使用される特定の薬剤（又はその組成物）、疾患／障害のタイプ及び重症度、薬剤が予防目的又は治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の臨床歴及びアゴニストに対する反応、並びに主治医の裁量に応じて異なる。典型的には、臨床医は、所望の結果を達成する投与量に達するまで、抗体を投与する。いくつかの実施形態では、所望の結果は、腫瘍微小環境における抗腫瘍免疫反応の増加である。投与量が所望の結果をもたらしたかどうかを決定する方法は、当業者には明らかであろう。１つ以上の治療剤の投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与の目的が治療的であるか予防的であるか、及び当業者に既知の他の因子に応じて、連続的又は断続的であり得る。抗体の投与は、予め選択された期間にわたって本質的に連続的であってもよく、又は一連の間隔を置いた用量であってもよく、例えば、標的疾患又は障害の発症前、発症中、又は発症後のいずれかであってもよい。

【0119】

本明細書で使用される場合、「治療すること」という用語は、標的疾患若しくは障害、疾患／障害の症状、又は疾患／障害に向かう素因を有する対象に、障害、疾患の症状、又は疾患若しくは障害に向かう素因を治癒する（ｃｕｒｅ）、治癒する（ｈｅａｌ）、緩和する（ａｌｌｅｖｉａｔｅ）、緩和する（ｒｅｌｉｅｖｅ）、変化させる（ａｌｔｅｒ）、修復する、改善する（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）、改善する（ｉｍｐｒｏｖｅ）、又は影響を与える目的で、１つ以上の活性剤を含む組成物を適用又は投与することを指す。

【0120】

標的疾患／障害を緩和することは、疾患の発達若しくは進行を遅らせること、又は疾患の重症度を低下させること、又は生存期間を延長することを含む。疾患の緩和又は生存期間の延長は、必ずしも治癒結果を必要としない。本明細書に使用される場合、標的疾患又は障害の発症を「遅延させる」とは、疾患の進行を延期する、妨害する、遅延する（ｓｌｏｗ）、遅延する（ｒｅｔａｒｄ）、安定化する、及び／又は延期することを意味する。この遅延は、疾患の病歴及び／又は治療されている個体に応じて、様々な長さの時間であり得る。疾患の発症を「遅延させる」若しくは緩和する、又は疾患の発症を遅延させる方法は、方法を使用しない場合と比較して、所与の時間枠内で疾患の１つ以上の症状を発症する確率を低減させ、かつ／又は所与の時間枠内で症状の程度を低減させる方法である。そのような比較は、典型的には、統計的に有意な結果を与えるのに十分な数の多くの対象を使用して、臨床研究に基づいている。

【0121】

疾患の「発症」又は「進行」は、疾患の初期兆候及び／又はそれに続く進行を意味する。疾患の発症は、当該技術分野で周知の標準的な臨床技術を使用して検出可能であり、評価することができる。しかしながら、発症はまた、検出不可能であり得る進行を指す。本開示の目的のため、発症又は進行は、症状の生物学的経過を指す。「発症」には、発生、再発、及び発病が含まれる。本明細書で使用される場合、標的疾患又は障害の「発病」又は「発生」は、初期発病及び／又は再発を含む。

【0122】

本明細書に記載される方法によって治療される対象は、哺乳動物、より好ましくはヒトであり得る。哺乳動物としては、農場動物、スポーツ動物、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウス、及びラットが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に開示される方法によって治療される対象は、腫瘍学的疾患（がん）、例えば、前悪性腫瘍又は悪性腫瘍を有するか、有する疑いがあるか、又はその危険性があるヒト患者であり得る。いくつかの場合において、ヒト患者は、固形腫瘍又は血液がんを有し得る。

【0123】

いくつかの実施形態では、治療用のがんは、血液がん、例えば、白血病及びリンパ腫である。がんの非限定的な例としては、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性巨核性白血病、前骨髄性白血病、赤血球性白血病、リンパ芽球性Ｔ細胞白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、毛様細胞白血病、慢性好中球性白血病、形質細胞腫、免疫芽球性大細胞白血病、マントル細胞白血病、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ芽球性Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、及び濾胞性リンパ腫が挙げられる。

【0124】

いくつかの実施形態では、治療用のがんは、固形腫瘍である。固形腫瘍の非限定的な例としては、脳腫瘍（例えば、星状細胞腫、神経膠腫、グリア芽腫、髄芽腫、又は上皮腫）、膀胱がん、乳がん、中枢神経系がん、子宮頸がん、結腸がん、子宮内膜がん、食道がん、消化管間質腫瘍、胃がん、頭頸部がん、口腔がん、口のがん、肝細胞がん、肺がん、黒色腫、メルケル細胞がん、中皮腫、上咽頭がん、神経芽細胞腫、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、腎がん、唾液腺がん、肉腫、精巣がん、尿路上皮がん、外陰がん、及びウィルム腫瘍が挙げられる。好ましくは、本発明の方法は、肺がん、頭頸部がん、膵臓がん、直腸がん、グリア芽腫、肝細胞がん、胆管がん、転移性肝病変、黒色腫、骨肉腫、軟部肉腫、子宮内膜がん、子宮頸がん、前立腺がん、又はメルケル細胞がんの治療に使用される。

【0125】

なお更なる実施形態では、本明細書に開示される方法を使用して治療されるがんの例は、転移及び転移性がんに限定されない。例えば、がんを治療するための本明細書に開示される方法及び使用は、原発腫瘍及び転移の両方の治療を伴ってもよい。

【0126】

標的がんを有する対象は、日常的な診察、例えば、臨床検査、臓器機能検査、ＣＴスキャン、又は超音波検査によって同定することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法によって治療される対象は、抗がん療法、例えば、化学療法、放射線療法、免疫療法、又は手術を受けた、又は受けているヒトがん患者であり得る。

【0127】

そのような標的疾患／障害のうちのいずれかを有することが疑われる対象は、疾患／障害の１つ以上の症状を示し得る。疾患／障害のリスクがある対象は、その疾患／障害のリスク因子のうちの１つ以上を有する対象であり得る。

【0128】

医学分野の当業者に既知の従来の方法は、治療される疾患のタイプ又は疾患の部位に応じて、対象に、式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩、免疫チェックポイント阻害剤、及び任意選択的に放射線剤を投与するために使用することができる。これらの治療剤のうちのいずれも、他の従来の経路を介して投与され、例えば、経口的に、非経口的に、吸入スプレーによって、局所的に、直腸的に、経鼻的に、口腔的に、膣的に、又は移植されたリザーバを介して投与され得る。本明細書で使用される場合、「非経口」という用語は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑膜内、胸骨内、くも膜下腔内、病変内、及び頭蓋内の注射又は注入技術を含む。加えて、それは、例えば、１、３、若しくは６カ月のデポ注射可能な又は生分解可能な材料及び方法を使用して、注射可能なデポ投与経路から、対象に投与され得る。いくつかの実施例では、薬学的組成物は、眼内又は硝子体内に投与される。

【0129】

注射可能な組成物は、様々な担体、例えば、植物油、ジメチルアクトアミド（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｃｔａｍｉｄｅ）、ジメチホルムアミド（ｄｉｍｅｔｈｙｆｏｒｍａｍｉｄｅ）、乳酸エチル、炭酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、エタノール、及びポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）を含有してもよい。静脈内注射の場合、水溶性抗体は、滴加方法によって投与され得、それにより、抗体及び生理学的に許容される賦形剤を含有する薬学的製剤が、注入される。生理学的に許容される賦形剤は、例えば、５％デキストロース、０．９％生理食塩水、リンガー溶液、又は他の好適な賦形剤を含み得る。筋肉内製剤、例えば、抗体の好適な可溶性塩形態の無菌製剤は、注射用水、０．９％生理食塩水、又は５％グルコース溶液などの薬学的賦形剤に溶解して、投与することができる。

【0130】

一実施形態では、治療剤のうちのいずれかを、部位特異的又は標的化局所送達技術を介して投与することができる。部位特異的又は標的局所送達技術の例としては、抗体又は局所送達カテーテルの様々な移植可能なデポ供給源、例えば、注入カテーテル、留置カテーテル、又は針カテーテル、合成移植片、外膜ラップ、シャント及びステント、又は他の移植可能デバイス、部位特異的担体、直接注射、又は直接適用が挙げられる。例えば、ＰＣＴ公開第００／５３２１１号及び米国特許第５，９８１，５６８号を参照されたい。

【0131】

本明細書に記載される方法で使用される特定の投与量レジメン、すなわち、用量、タイミング、及び反復は、特定の対象及びその対象の病歴に応じて異なる。

【0132】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される併用療法は、対象（例えば、ヒト患者）の腫瘍サイズを少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％縮小してもよく、又は（例えば、治療開始時の腫瘍サイズに対して、又は本発明の化合物の代わりにプラセボを受ける参照対象に対して）腫瘍を除去してもよい。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、対象の腫瘍負荷を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％減少させてもよく、又は（例えば、治療開始時の腫瘍負荷に対して、又は本発明の化合物の代わりにプラセボを受ける参照対象に対して）腫瘍を除去してもよい。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、対象の平均生存時間を、例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、又は２００％（例えば、本発明の化合物の代わりにプラセボを受ける参照対象と比較して）増加させてもよい。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、対象の疼痛又は他の症状をより長い平均時間、例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、又は２００％（例えば、本発明の化合物の代わりにプラセボを受ける参照対象と比較して）緩和する放射線療法又は薬物療法の能力を増加させてもよい。

【0133】

標的疾患／障害に対する治療有効性は、当該技術分野において周知の方法によって評価することができる。

【0134】

ＩＩ．治療用途のためのキット
本開示はまた、本明細書に記載されるような血液がん又は固形腫瘍などの標的がんを治療又は緩和するために使用するためのキットも提供する。そのようなキットは、本明細書に開示される１つ以上の式（Ｉ）の化合物（例えば、化合物５６８、５６９、５７０、若しくは５７４）又はその薬学的に許容される塩（例えば、メシル酸塩）を含む１つ以上の容器と、ＰＤ１アンタゴニスト（例えば、上の表１に列挙されるもの）などの１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤を含む１つ以上の容器と、を含むことができる。任意選択的に、キットは、放射線剤を含む容器を更に含み得る。

【0135】

いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載される方法のうちのいずれかに従って使用するための説明書を含むことができる。含まれる説明書は、本明細書に記載されるような標的がんを治療し、発病を遅らせ、又は緩和するための、式（Ｉ）の化合物及び免疫チェックポイント阻害剤、並びに任意選択的に放射線剤の投与の説明を含むことができる。キットは、その個体が標的がんを有するかどうかを特定することに基づいて、治療に好適な個体を選択すること、例えば、当該技術分野で既知の診断方法を適用することの説明を更に含み得る。更に他の実施形態では、説明書は、標的がんのリスクがある個体に治療剤を投与することの説明を含む。

【0136】

式（Ｉ）の化合物、免疫チェックポイント阻害剤、及び任意選択的に放射線剤の使用に関する説明書は、概して、意図される治療のための投与量、投与スケジュール、及び投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）又はサブユニット用量であり得る。本発明のキットに供給される説明書は、典型的には、ラベル又は添付文書（例えば、キットに含まれる紙シート）に書かれた説明書であるが、機械可読の説明書（例えば、磁気又は光学記憶ディスクに運ばれる説明書）も許容される。

【0137】

ラベル又は添付文書は、組成物が、がん又は免疫障害（例えば、自己免疫疾患）などの疾患を治療し、発病を遅らせ、及び／又は軽減するために使用されることを示す。本明細書に記載される方法のうちのいずれかを実践するための説明書が、提供されてもよい。

【0138】

本明細書に開示されるキットは、好適な包装である。好適な包装としては、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性包装（例えば、密閉されたＭｙｌａｒ又はビニール袋）などが挙げられるが、これらに限定されない。吸入器、鼻腔内投与デバイス（例えば、アトマイザー）又はミニポンプなどの注入デバイスなどの特定のデバイスと組み合わせて使用するための包装もまた、企図されている。キットは、無菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってもよい）。容器はまた、無菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本明細書に記載されるような抗ＣＤ１９抗体である。

【0139】

キットは、任意選択的に、バッファー及び解釈情報などの追加の構成要素を提供してもよい。通常、キットは、容器と、容器上の又は容器に不随したラベル又は添付文書と、を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、上記のキットの内容物を含む製造物品を提供する。

【0140】

一般的な技術
本開示の実施は、別段の指示がない限り、（組換え技術を含む）分子生物学、微生物学、細胞生物学、生化学、及び免疫学の従来の技術を利用し、それは、当該技術分野の技能の範囲内にある。そのような技術は、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．１９８４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，１９８９）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．１９８７）、Ｉｎｔｒｏｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．１９９３－８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）：Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．１９８７）、ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．１９９４）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９９）、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ａｎｄ Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃｅ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８８－１９８９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）、Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９９）、Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ ａｎｄＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ，ｅｄｓ．Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）、ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ ｅｄ．１９８５）、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｄｓ．（１９８５

【数1】

、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４

【数2】

、Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．（１９８６

【数3】

、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ｌＲＬ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６

【数4】

、及びＢ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）、Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）などの文献において完全に説明されている。

【0141】

更に詳述することなく、当業者は、上記の説明に基づいて、本発明を最大限に利用できると考えられる。したがって、以下の特定の実施形態は、単なる例示として解釈されるものであり、本開示の残りの部分を何ら限定するものではない。本明細書で引用される全ての刊行物は、本明細書で引用される目的又は主題に関して、参照により組み込まれる。

【0142】

実施例１：例示的な式（Ｉ）の化合物の調製及び特徴付け
例示的な式（Ｉ）の化合物５６８、５６９、５７０、又は５７４を、以下のように合成した。本明細書に提供される合成スキームも参照されたい。

【0143】

メチル１－（６－ブロモ－７－フルオロ－３－ニトロキノリン－４－イル）シクロブタン－１－カルボキシレート：
この中間体を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した。

【化21】

【0144】

テトラヒドロフラン（５．００ｍＬ）中のメチルシクロブタンカルボキシレート（０．７３ｇ、６．３８ｍｍｏｌ）の溶液を、－７８℃で、窒素雰囲気下で、テトラヒドロフラン（４５．０ｍＬ）中の新たに調製したジイソプロピルアミドリチウム（６．３８ｍｍｏｌ）で１時間処理し、続いて２分間にわたって６－ブロモ－４－クロロ－７－フルオロ－３－ニトロキノリン（１．５０ｇ、４．９１ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加した。周囲温度で更に１時間撹拌した後、反応物を飽和塩化アンモニウム水溶液（６０．０ｍＬ）でクエンチし、水（１２０ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を、酢酸エチル（３×６０．０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を、ブライン（２×５０．０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中の１％～２％の酢酸エチルで溶出して、無色固体として表題化合物（２４０ｍｇ、１３％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ９．１４（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｄ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝８．８ Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．１２－２．９９（ｍ，１Ｈ），２．５８－２．４８（ｍ，３Ｈ），１．９１－１．８３（ｍ，１Ｈ），１．４５－１．２７（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］^＋＝３８３．１７，３８５．１７。

【0145】

８’－ブロモ－７’－フルオロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２’（３’Ｈ）－オン：
この中間体を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した。

【化22】

【0146】

酢酸（１０．０ｍＬ）中のメチル１－（６－ブロモ－７－フルオロ－３－ニトロキノリン－４－イル）シクロブタン－１－カルボキシレート（２４０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）及び鉄粉末（３５０ｍｇ、６．２６ｍｍｏｌ）の混合物を、周囲温度で１８時間撹拌した。得られた混合物を濾過し、濾過ケーキを酢酸エチル（５×１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の１％～２％のメタノールで溶出し、淡黄色固体として表題化合物（１００ｍｇ、５０％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ １０．７５（ｓ，１Ｈ），８．６８（ｓ，１Ｈ），８．５２（ｄ，Ｊ＝７．５ Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝１０．１ Ｈｚ，１Ｈ），２．９０－２．７５（ｍ，２Ｈ），２．５０－２．３７（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］^＋＝３２１．１５，３２３．１５。

【0147】

８’－ブロモ－７’－フルオロ－３’－メチルスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２’（３’Ｈ）－オン：
この中間体を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した。

【化23】

【0148】

Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１０．０ｍＬ）中の８－ブロモ－７－フルオロ－２，３－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２－オン（１００ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素雰囲気下で、０℃で３０分間、水素化ナトリウム（１９．９ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ、鉱油中に６０％分散）で処理し、続いてヨードメタン（６６．３ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度で、更に４０分間撹拌した後、反応物を、飽和塩化アンモニウム水溶液（１０．０ｍＬ）によってクエンチした。得られた混合物を、水（１００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×３０．０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を、ブライン（２×２０．０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１、ｖ：ｖ）によって精製して、無色固体として表題化合物（１０２ｍｇ、９８％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ ８．７８（ｓ，１Ｈ），８．６１（ｄ，Ｊ＝７．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝９．８ Ｈｚ，１Ｈ），３．３６（ｓ，３Ｈ），２．９４－２．８５（ｍ，２Ｈ），２．７２－２．６１（ｍ，３Ｈ），２．５６－２．４８（ｍ，１Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］^＋＝３３５．００，３３７．００。

【0149】

ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）カルバメート：
この中間体を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した。

【化24】

【0150】

メタノール（３００ｍＬ）中の２－［（プロパン－２－イル）アミノ］エタン－１－オール（４０．０ｇ、３８８ｍｍｏｌ）の溶液に、ジ－ｔｅｒｔ－ブチルジカーボネート（１２７ｇ、５８６ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。得られた混合物を、周囲温度で２時間撹拌し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中の０％～４％酢酸エチルで溶出した。所望の画分を回収し、減圧下で濃縮して、無色油として表題化合物（６５．０ｇ、８２％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ４．１７（ｓ，１Ｈ），３．７１（ｔ，Ｊ＝５．４ Ｈｚ，２Ｈ），３．３０（ｔ，Ｊ＝５．４ Ｈｚ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），１．１２（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，６Ｈ）。

【0151】

ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［（５－ブロモ－３－ニトロピリジン－２－イル）オキシ］エチル］－Ｎ－（プロパン－２－イル）カルバメート：
この中間体を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した。

【化25】

【0152】

無水テトラヒドロフラン（２５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチルＮ－（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ－（プロパン－２－イル）カルバメート（１５．４ｇ、７５．８ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素雰囲気下で、０℃で１時間、水素化ナトリウム（３．３０ｇ、８２．１ｍｍｏｌ、鉱油中に６０％ｗ／ｗ分散）で処理し、続いて、０℃で２分間、５－ブロモ－２－クロロ－３－ニトロピリジン（１５．０ｇ、６３．２ｍｍｏｌ）を添加した。２５℃で更に２時間後、反応物を、飽和塩化アンモニウム水溶液（５０．０ｍＬ）でクエンチし、水（５００ｍＬ）で希釈した。水層を、酢酸エチル（３×１５０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を、ブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中の１％～１８％酢酸エチルで溶出した。所望の画分を回収し、減圧下で濃縮して、淡黄色油として表題化合物（１８．０ｇ、７１％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ８．４２（ｄ，Ｊ＝２．４ Ｈｚ，１Ｈ），８．３７（ｄ，Ｊ＝２．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．５７（ｔ，Ｊ＝６．３ Ｈｚ，２Ｈ），４．３２（ｓ，１Ｈ），３．５１（ｔ，Ｊ＝６．３ Ｈｚ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），１．１５（ｄ，Ｊ＝６．９ Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］^＋＝４０４．００，４０６．００。

【0153】

ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［（３－アミノ－５－ブロモピリジン－２－イル）オキシ］エチル］－Ｎ－（プロパン－２－イル）カルバメート：
この中間体を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した。

【化26】

【0154】

酢酸（１５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［（５－ブロモ－３－ニトロピリジン－２－イル）オキシ］エチル］－Ｎ－（プロパン－２－イル）カルバメート（１５．０ｇ、３７．１ｍｍｏｌ）の溶液に、周囲温度で、鉄粉末（２０．７ｇ、３７１ｍｍｏｌ）を添加した。周囲温度で、更に１時間撹拌した後、得られた混合物を濾過し、濾過したケーキを、テトラヒドロフラン（４×１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中の２０％酢酸エチルで溶出した。所望の画分を回収し、減圧下で濃縮して、無色固体として表題化合物（１２．０ｇ、８６％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ ７．４０（ｄ，Ｊ＝２．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝２．２ Ｈｚ，１Ｈ），４．４０（ｔ，Ｊ＝６．３ Ｈｚ，２Ｈ），４．２５－３．９９（ｍ，１Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝６．３ Ｈｚ，２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．１７（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］^＋＝３７４．１０，３７６．１０。

【0155】

ｔｅｒｔ－ブチル（２－（（５－ブロモ－３－（メチルスルホンアミド）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）（イソプロピル）カルバメート：
この中間体を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した。

【化27】

【0156】

ピリジン（４００ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［（３－アミノ－５－ブロモピリジン－２－イル）オキシ］エチル］－Ｎ－（プロパン－２－イル）カルバメート（１８．８ｇ、５０．３ｍｍｏｌ）の溶液に、周囲温度で、塩化メタンスルホニル（８．６３ｇ、７５．４ｍｍｏｌ）を滴加した。周囲温度で６時間撹拌した後、得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中の３％～２５％酢酸エチルで溶出した。所望の画分を回収し、減圧下で濃縮し、オフカラーレス（ｏｆｆ－ｃｏｌｏｒｌｅｓｓ）固体として表題化合物（１６．３ｇ、７２％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ ９．４１（ｓ，１Ｈ），８．０５（ｄ，Ｊ＝２．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝２．２ Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｔ，Ｊ＝６．３ Ｈｚ，２Ｈ），４．１５（ｓ，１Ｈ），３．４３（ｔ，Ｊ＝６．３ Ｈｚ，２Ｈ），３．１１（ｓ，３Ｈ），１．３９（ｓ，９Ｈ），１．０９（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］^＋＝４５２．００，４５４．００。

【0157】

ｔｅｒｔ－ブチル（２－（（５－ブロモ－３－（エチルスルホンアミド）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）（イソプロピル）カルバメート：
この中間体を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した。

【化28】

【0158】

ピリジン（１２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２－（（３－アミノ－５－ブロモピリジン－２－イル）オキシ）エチル）（イソプロピル）カルバメート（５．００ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、エタンスルホニルクロリド（５．１５ｇ、４０．１ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下で、周囲温度で滴加した。窒素雰囲気下で、周囲温度で６時間撹拌した後、得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中の３％～２５％酢酸エチルで溶出した。所望の画分を回収し、減圧下で濃縮して、淡黄色固体として表題化合物（３．７８ｇ、６１％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ７．９２（ｓ，１Ｈ），７．８７（ｓ，１Ｈ），４．４８（ｔ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，２Ｈ），４．２５－４．２０（ｍ，１Ｈ），３．５４（ｔ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，２Ｈ），３．１３（ｔ，Ｊ＝７．３ Ｈｚ，２Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ），１．３５（ｔ，Ｊ＝７．４ Ｈｚ，３Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］^＋＝４６６．１０，４６８．１０。

【0159】

ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［（５－ブロモ－３－ヨードピリジン－２－イル）オキシ］エチル］－Ｎ－イソプロピルカルバメート：
この中間体を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した。

【化29】

【0160】

無水テトラヒドロフラン（３００ｍＬ）中の５－ブロモ－３－ヨードピリジン－２－オール（１０．０ｇ、３３．３ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフェニルホスフィン（１１．４ｇ、４３．３ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ－イソプロピルカルバメート（８．８０ｇ、４３．３ｍｍｏｌ）、及びジイソプロピルアゾジホルメート（８．８０ｇ、４３．４ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。得られた混合物を、窒素雰囲気下で、周囲温度で更に１６時間撹拌した。得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中の２％～１０％酢酸エチルで溶出した。所望の画分を回収し、減圧下で濃縮し、無色油として表題化合物（１４．０ｇ、８７％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ８．１４（ｓ，２Ｈ），４．４３（ｔ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，２Ｈ），４．３８－３．９６（ｍ，１Ｈ），３．５０（ｔ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，２Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］^＋＝４８４．９５，４８６．９５。

【0161】

ｔｅｒｔ－ブチル（２－（（５－ブロモ－３－（（１－メチルエチル）スルホンアミド）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）（イソプロピル）カルバメート：
この中間体を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した。

【化30】

【0162】

トルエン（１２５ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２－（（５－ブロモ－３－ヨードピリジン－２－イル）オキシ）エチル）（イソプロピル）カルバメート（５．００ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）、４，５－ビス（ジフェニルホスフィノ）－９，９－ジメチルキサンテン（１．８０ｇ、３．１０ｍｍｏｌ）及びプロパン－２－スルホンアミド（１．５０ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）の混合物に、周囲温度で、リン酸三カリウム（１０．９ｇ、５１．５ｍｍｏｌ）及びトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム－クロロホルム付加物（１．１０ｇ、１．１０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を、アルゴン雰囲気下で、１００℃で４８時間撹拌した。周囲温度に冷却した後、得られた混合物を濾過した。濾過ケーキを、酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で洗浄した。濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中の１％～２０％酢酸エチルで溶出した。所望の画分を回収し、減圧下で濃縮して、無色固体として表題化合物（１．９０ｇ、３９％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．９４（ｄ，Ｊ＝２．１ Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝２．２ Ｈｚ，１Ｈ），４．４４（ｔ，Ｊ＝６．３ Ｈｚ，２Ｈ），４．１１（ｓ，１Ｈ），３．４８（ｔ，Ｊ＝６．３ Ｈｚ，２Ｈ），３．２４－３．３０（ｍ，１Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），１．４１（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，６Ｈ），１．１４（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］^＋＝４８０．２０，４８２．２０。

【0163】

Ｎ－（５－ブロモ－２－［２－［（プロパン－２－イル）アミノ］エトキシ］ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド：
この中間体を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した。

【化31】

【0164】

ジクロロメタン（５．００ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［（５－ブロモ－３－メタンスルホンアミドピリジン－２－イル）オキシ］エチル］－Ｎ－（プロパン－２－イル）カルバメート（３．００ｇ、６．６３ｍｍｏｌ）の溶液に、周囲温度で、塩化水素（２０．０ｍＬ、１，４－ジオキサン中に４Ｍ）で４０分間処理した。得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３０．０ｍＬ）でｐＨ＝８に塩基性化した。得られた混合物を、酢酸エチル（６×２００ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の１％～１０％メタノールで溶出した。所望の画分を回収し、減圧下で濃縮し、無色固体として表題化合物（１．２０ｇ、５０％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ ７．６８（ｄ，Ｊ＝２．３ Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝２．３ Ｈｚ，１Ｈ），５．７５（ｓ，１Ｈ），４．３６（ｔ，Ｊ＝５．２ Ｈｚ，２Ｈ），３．１９－３．１２（ｍ，１Ｈ），３．０７（ｔ，Ｊ＝５．１ Ｈｚ，２Ｈ），２．８４（ｓ，３Ｈ），１．１５（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］^＋＝３５２．１０，３５４．１０。

【0165】

Ｎ－（５－（７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）プロパン－２－スルホンアミド（化合物５６８）：
化合物５６８を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した：

【化32】

【0166】

１，４－ジオキサン（５０．０ｍＬ）中のＮ－［５－ブロモ－２－［２－（イソプロピルアミノ）エトキシ］ピリジン－３－イル］プロパン－２－スルホンアミド（２．００ｇ、５．２６ｍｍｏｌ）の溶液に、ビス（ピナコラート）ジボロン（４．０１ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（２．０６ｇ、２１．１ｍｍｏｌ）、及びビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加物（０．３４ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を周囲温度で添加した。得られた混合物を、窒素雰囲気下で、９０℃で３時間撹拌した。得られた混合物を周囲温度まで冷却し、続いて８－ブロモ－７－フルオロ－３－メチルスピロ［シクロブタン－１，１－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２－オン（１．２６ｇ、３．７６ｍｍｏｌ）、水（１２．５ｍＬ）、炭酸ナトリウム（０．８０ｇ、７．５５ｍｍｏｌ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．４３ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を、窒素雰囲気下で、８５℃で６時間撹拌した。周囲温度に冷却した後、得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、以下の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーによって精製した：カラム：球状Ｃ１８、２０～４０μｍ、１２０ｇ；移動相Ａ：水（＋１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３）；移動相Ｂ：アセトニトリル；流速：４５ｍＬ／分；勾配（Ｂ％）：５％、２分；５％～２５％、８分；２５％～３９％、９分；３９％、１０分；３９％～９５％；３分；９５％、２分；検出器：ＵＶ ２５４ｎｍ；Ｒｔ：２１分。所望の生成物を含有する画分を回収し、減圧下で濃縮し、無色固体として表題化合物（１．６６ｇ、８０％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ８．８８（ｓ，１Ｈ），８．３５－８．３１（ｍ，２Ｈ），８．０７（ｓ，１Ｈ），７．９９（ｓ，１Ｈ），７．９６（ｓ，１Ｈ），４．５５（ｂｒ，１Ｈ），４．４４（ｔ，Ｊ＝５．２ Ｈｚ，２Ｈ），３．３５－３．３０（ｍ，４Ｈ），２．９３－２．７９（ｍ，５Ｈ），２．５５－２．３８（ｍ，４Ｈ），１．２９（ｄ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，６Ｈ），１．０２（ｄ，Ｊ＝６．０ Ｈｚ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］^＋＝５５６．３０。

【0167】

Ｎ－（５－（７’－フルオロ－３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）－２－（２－（イソプロピルアミノ）エトキシ）ピリジン－３－イル）プロパン－２－スルホンアミド塩化水素：
化合物５６８の塩酸塩を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した：

【化33】

【0168】

希釈した塩酸水溶液（３９２ｍＬ、３．１４ｍｍｏｌ、０．００８Ｍ）及びアセトニトリル（７９．０ｍＬ）中のＮ－（５－［７－フルオロ－３－メチル－２－オキソスピロ［シクロブタン－１，１－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８－イル］－２－［２－（イソプロピルアミノ）エトキシ］ピリジン－３－イル）プロパン－２－スルホンアミド（１．６６ｇ、２．９９ｍｍｏｌ）の溶液を凍結乾燥させ、黄色の固体として表題化合物（１．７６ｇ、１００％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ９．４５（ｓ，１Ｈ），９．０２（ｂｒ，２Ｈ），８．９０（ｓ，１Ｈ），８．４０（ｓ，１Ｈ），８．３２（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．６５（ｔ，Ｊ＝４．４ Ｈｚ，２Ｈ），３．５４－３．４０（ｍ，３Ｈ），３．３１（ｓ，３Ｈ），２．９１（ｔ，Ｊ＝１１．２ Ｈｚ，２Ｈ），２．５５－２．４５（ｍ，５Ｈ），１．３４－１．３０（ｍ，１２Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］^＋＝５５６．３０。

【0169】

同様の方法で、又はパラジウム（ＩＩ）カップルを、中間体ＣＣ１０８及びＣＣ１１０で影響し、以下の化合物実施例５６９及び実施例５７０を得た。下の表２を参照されたい。

【表2-1】

【表2-2】

【表2-3】

【0170】

例示的な式（Ｉ）の化合物５７４を、以下のように合成した。本明細書に提供される合成スキームも参照されたい。そのＭＳ：［（Ｍ＋１）］＋及び１Ｈ ＮＭＲ特徴も、上の表２に提供される。

【0171】

１－（５－ブロモ－３－ニトロピリジン－２－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルアゼチジン－３－アミン：
この中間体を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した。

【化34】

【0172】

テトラヒドロフラン（４０．０ｍＬ）中のＮ，Ｎ－ジメチルアゼチジン－３－アミン塩酸塩（０．２７ｇ、２．０８ｍｍｏｌ）及び５－ブロモ－２－クロロ－３－ニトロピリジン（０．４９ｇ、２．０８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（０．６７ｇ、５．１９ｍｍｏｌ）を周囲温度で添加した。得られた混合物を、３時間撹拌し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、石油エーテル中の３％～９％酢酸エチルで溶出した。所望の画分を回収し、減圧下で濃縮し、黄色固体として表題化合物（０．５０ｇ、５９％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ８．３７（ｄ，Ｊ＝２．２ Ｈｚ，１Ｈ），８．２９（ｄ，Ｊ＝２．２ Ｈｚ，１Ｈ），４．２０（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．０，７．０，１．２ Ｈｚ，２Ｈ），３．９３（ｄｄｄ，Ｊ＝９．９，５．１，１．２ Ｈｚ，２Ｈ），３．１６（ｔｔ，Ｊ＝７．０，５．１ Ｈｚ，１Ｈ），２．２０（ｓ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］^＋＝３０１．００，３０３．００。

【0173】

１－（５－ブロモ－３－ニトロピリジン－２－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルアゼチジン－３－アミン：
この中間体を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した。

【化35】

【0174】

１－（５－ブロモ－３－ニトロピリジン－２－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチルピペリジン－４－アミン（６．２０ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）の酢酸溶液（９０．０ｍＬ）に、鉄粉末（１１．５ｇ、２０６ｍｍｏｌ）を周囲温度で添加した。得られた混合物を、周囲温度で２時間撹拌した。得られた混合物を濾過し、濾過ケーキを、テトラヒドロフラン（３×１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、飽和炭酸ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で取り込み、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を、ブライン（３×１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾過後、濾液を、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の２％～４％メタノールで溶出し、灰色固体として表題化合物（５．２０ｇ、９２％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ７．７４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１９－４．０４（ｍ，２Ｈ），３．９３－３．８８（ｍ，２Ｈ），３．２１－３．１４（ｍ，１Ｈ），２．２４（ｓ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］^＋＝２７１．００，２７３．００。

【0175】

Ｎ－（５－ブロモ－２－（３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド：
この中間体を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した。

【化36】

【0176】

ピリジン（７０．０ｍＬ）中の５－ブロモ－２－［３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル］ピリジン－３－アミン（２．１０ｇ、７．７７ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－４－ジメチルアミノピリジン（７７．０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、塩化メタンスルホニル（１．７７ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）を周囲温度で滴加した。窒素雰囲気下で、周囲温度で３時間撹拌した後、得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、以下の条件で逆相フラッシュクロマトグラフィーによって精製した：カラム：球状Ｃ１８、２０～４０μｍ、３３０ｇ；移動相Ａ：水（＋１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３）；移動相Ｂ：アセトニトリル；流速：６５ｍＬ／分；勾配（Ｂ％）：５％～２０％、８分；２０％～４０％、２０分；４０％～９５％、２分；９５％、５分；検出器：ＵＶ ２５４ｎｍ。所望の画分を１９分で回収し、減圧下で濃縮し、無色固体として表題化合物（１．４０ｇ、５２％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）δ７．９２（ｄ，Ｊ＝２．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝２．２ Ｈｚ，１Ｈ），４．２７（ｄｄ，Ｊ＝８．８，７．２ Ｈｚ，２Ｈ），３．９６（ｄｄ，Ｊ＝９．０，５．６ Ｈｚ，２Ｈ），３．２４－３．１６（ｍ，１Ｈ），３．００（ｓ，３Ｈ），２．２０（ｓ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］^＋＝３４９．００，３５１．００。

【0177】

Ｎ－（２－（３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル）－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド：
この中間体を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した。

【化37】

【0178】

１，４－ジオキサン（３０．０ｍＬ）中のＮ－［５－ブロモ－２－［３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル］ピリジン－３－イル］メタンスルホンアミド（１．００ｇ、２．８６ｍｍｏｌ）及び４ビス（ピナコラート）ジボロン（２．１８ｇ、８．５９ｍｍｏｌ）の溶液に、酢酸カリウム（１．１２ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）、及びビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）ジクロロメタン付加物（３５１ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を周囲温度で添加した。得られた混合物を、窒素雰囲気下で、８５℃で２時間撹拌した。得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、以下の条件で逆フラッシュクロマトグラフィーによって精製した：カラム：球状Ｃ１８、２０～４０μｍ、３３０ｇ；移動相Ａ：水（＋１０ｍＭ ＮＨ_４ＨＣＯ_３）；移動相Ｂ：アセトニトリル；流速：６５ｍＬ／分；勾配（Ｂ％）：５％～２０％、７分；２０％～４０％、１２分；４０％～９５％、２分；９５％、５分；検出器：ＵＶ ２５４ｎｍ。所望の画分を２０分で収集し、減圧下で濃縮して、黄色固体として表題化合物（８００ｍｇ、７１％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ８．７８（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝１．５ Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝１．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．１９（ｔ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，２Ｈ），３．９３（ｄｄ，Ｊ＝８．９，５．０ Ｈｚ，２Ｈ），３．１２－３．０４（ｍ，１Ｈ），２．９９（ｓ，３Ｈ），２．０９（ｓ，６Ｈ），１．２７（ｓ，１２Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］^＋＝３９７．２０。

【0179】

Ｎ－（２－（ ３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル）－５－（３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド：
この中間体を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した。

【化38】

【0180】

１，４－ジオキサン（１３．０ｍＬ）及び水（２．００ｍＬ）中の８－ブロモ－３－メチル－２，３－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－２－オン（３２０ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）及びＮ－［２－［３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル］－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン－３－イル］メタンスルホンアミド（６００ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸ナトリウム（１６０ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）、及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１７５ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を添加した。窒素雰囲気下で、８５℃で２時間撹拌した後、得られた混合物を、減圧下で濃縮した。残渣を、分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝８／１、ｖ／ｖ）によって精製して、淡黄色固体として表題化合物（３５０ｍｇ、６９％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ９．０７（ｓ，１Ｈ），８．８０（ｓ，１Ｈ），８．５８（ｓ，１Ｈ），８．３３（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｄ，Ｊ＝８．９ Ｈｚ，１Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝９．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝２．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．２８－４．２１（ｍ，２Ｈ），４．０２－３．９５（ｍ，２Ｈ），３．３０（ｓ，３Ｈ），３．１４（ｓ，４Ｈ），２．９８－２．９０（ｍ，２Ｈ），２．６０－２．５２（ｍ，４Ｈ），２．１３（ｓ，６Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］^＋＝５０７．２０。

【0181】

Ｎ－（２－（３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル）－５－（３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド塩酸塩（化合物５７４）：
化合物５７４を、以下の合成スキームに従って、下記のように合成した：

【化39】

【0182】

希釈した塩酸水溶液（１１５ｍＬ、０．６９ｍｍｏｌ、０．００６Ｍ）及びアセトニトリル（２０．０ｍＬ）中のＮ－（２－（３－（ジメチルアミノ）アゼチジン－１－イル）－５－（３’－メチル－２’－オキソ－２’，３’－ジヒドロスピロ［シクロブタン－１，１’－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン］－８’－イル）ピリジン－３－イル）メタンスルホンアミド（３５０ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）の溶液を、直接凍結乾燥させ、オレンジ色固体として表題化合物（３７５ｍｇ、１００％）を得た：^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１０．７７（ｓ，１Ｈ），９．２４（ｓ，１Ｈ），８．８３（ｓ，１Ｈ），８．６４（ｄ，Ｊ＝２．１ Ｈｚ，１Ｈ），８．３５（ｓ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝８．９ Ｈｚ，１Ｈ），８．０２－７．９４（ｍ，２Ｈ），４．５０－４．４１（ｍ，２Ｈ），４．３９－４．３２（ｍ，２Ｈ），４．２７－４．１６（ｍ，１Ｈ），３．３１（ｓ，３Ｈ），３．１８（ｓ，３Ｈ），２．９９－２．８８（ｍ，２Ｈ），２．８２（ｄ，Ｊ＝４．１ Ｈｚ，６Ｈ），２．６３－２．５２（ｍ，４Ｈ）；ＭＳ：［（Ｍ＋１）］^＋＝５０７．２０。

【0183】

実施例２：例示的な式（Ｉ）の化合物の標的及びオフ標的阻害活性
例示的な式（Ｉ）の化合物（５６８、５６９、５７０、及び５７４）を、以下に記載される条件に従って、標的酵素（ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫ）並びにオフ標的酵素（ｍＴＯＲ、ＰＩ３Ｋα／δ、及びｈＥＲＧ）に対する阻害活性について試験した。

【0184】

方法
ＡＴＭ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｗｅｓｔｅｒｎアッセイ：
ＭＣＦ－７乳がん細胞を、１０，０００細胞／ウェル（Ｃｏｒｎｉｎｇ、＃３５６６６３）の密度で、ウェル当たり２５μＬの細胞を３８４ウェルプレートに配置した。翌日、ピンツール（Ｅｃｈｏ ５５０）を使用して、３倍の連続希釈（合計１０用量）によって１μＭの最終濃度まで化合物をプレートに添加した。次いで、エトポシド（Ｓｉｇｍａ、＃Ｅ１３８３）を、１００μＭの最終濃度に添加した。プレートを、３７℃で１時間インキュベートし、細胞を、２５μＬの固定溶液（８％パラホルムアルデヒド）を周囲温度で２０分間添加することによって固定した。細胞を、０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含有する１×ＰＢＳ（リン酸塩緩衝生理食塩水）で５回洗浄することによって透過させた。各洗浄は、５分の長さであった。細胞を、周囲温度で振盪しながら、３８４ウェルプレート中に５０μＬのＯｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファー（ＬＩ－ＣＯＲ、＃９２７－４００００）を１．５時間添加することによってブロックした。次いで、ブロックバッファーを除去し、２０μＬの抗ｐＫＡＰ１抗体（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、＃Ａ３００－７６７Ａ）（１／２０００）溶液を３８４ウェルプレートの各ウェルに添加した。プレートを４℃で一晩インキュベートし、次いで、１×ＰＢＳＴ（０．１％ Ｔｗｅｅｎ－２０を含有する１×ＰＢＳ）で５回洗浄した。ＤＮＡ染色ＤＲＡＱ５（ＣＳＴ、＃４０８４Ｌ）（１／５，０００）を含有する二次抗体（ＩＲＤｙｅ ８００ＣＷ ヤギ抗ウサギＩｇＧ、ＬＩ－ＣＯＲ、＃９２６－３２２１１）（１／５，０００）溶液（２０μＬ）を、プレート内の各ウェルに添加し、暗闇で穏やかに振盪しながら、プレートを１時間インキュベートした。細胞を、暗闇で穏やかに振盪しながら、周囲温度で１×ＰＢＳＴ（０．１％ Ｔｗｅｅｎ－２０を含有する１×ＰＢＳ）で５回洗浄した。最後の洗浄の後、洗浄液を除去し、プレートを薄いペーパータオル上に逆さまにし、１０００ｒｐｍで１分間遠心分離して、全ての洗浄バッファーを吸収した。プレートの底部を、湿った糸くずの出ない紙で洗浄した。プレートを、ＯＤＹＳＳＥＹ ＣＬｘ（ＬＩ－ＣＯＲ）を使用して直ちにスキャンした。

【0185】

ＤＮＡ－ＰＫ酵素結合免疫吸着アッセイ：
１日目に、９６ウェルプレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、カタログ番号：４４２４０４）を、０．１ＭのＮａ_２ＣＯ_３／ＮａＨＣＯ_３（ｐＨ９．６）で各ウェル中の３μｇのＧＳＴ－ｐ５３を希釈することによって、ＧＳＴ－ｐ５３（１－１０１）ペプチド（Ｐｈａｒｍａｒｏｎ、ＢＣＳ部門によって精製）でコーティングした。プレートを４℃で一晩インキュベートした。２日目に、コーティングバッファーを除去し、プレートをＰＢＳＴ（０．１％ Ｔｗｅｅｎ－２０を含有する１×ＰＢＳ）で２回洗浄した。次いで、ＤＮＡ－ＰＫ酵素溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃ＰＲ９１０７Ａ；最終ＤＮＡ－ＰＫ濃度：０．１μｇ／ｍＬ）を添加した。化合物を、最終最大濃度が１００ｎＭ（３倍連続希釈、合計１０用量）になるまで連続希釈し、ＡＴＰ溶液（最終ＡＴＰ濃度：２０μＭ）をプレートに添加した。プレートを２５℃で１時間インキュベートする。プレートをＰＢＳＴ（０．１％ Ｔｗｅｅｎ－２０を含有する１×ＰＢＳ）で３回洗浄し、ＰＢＳＴ及び１％ ＢＳＡの溶液で４℃で一晩ブロックした。３日目に、プレートをＰＢＳＴ（０．１％ Ｔｗｅｅｎ－２０を含有する１×ＰＢＳ）で４回洗浄した。抗リン－ｐ５３一次抗体（細胞シグナル伝達技術、＃９２８６、リン－ｐ５３（Ｓｅｒ１５）（１６Ｇ８）マウスｍＡｂ）（１／１０００）を、各ウェルに添加した。プレートを密封し、３７℃で１時間インキュベートし、ＰＢＳＴ（０．１％Ｔｗｅｅｎ－２０を含有する１×ＰＢＳ）で４回洗浄した。ＨＲＰ結合二次抗体（細胞シグナル伝達技術、＃７０７６、抗マウスＩｇＧ、ＨＲＰ結合抗体）（１／１０００）（１００μＬ）を、各ウェルに添加した。プレートをテープで密封し、３７℃で３０分間インキュベートし、ＰＢＳＴ（０．１％Ｔｗｅｅｎ－２０を含有する１×ＰＢＳ）で４回洗浄した。この時、１００μＬのＴＭＢ（細胞シグナル伝達技術、＃７００４）基質を、各ウェルに添加した。プレートをテープで密封し、プレートを３７℃で１０分間インキュベートした。停止液（細胞シグナル伝達技術、＃７００２）（１００μＬ）を、各ウェルに添加し、プレートを４５０ｎｍで吸収検出した。

【0186】

ｍＴＯＲ生化学アッセイ：
ｍＴＯＲキナーゼ反応を、低体積３８４ウェルプレートにおいて１０μＬの体積で実施した。典型的には、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒモデル６００８２６０プレートを使用した。１×キナーゼ反応バッファーの組成は、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５、０．０１％ Ｔｗｅｅｎ２０、１ｍＭのＥＧＴＡ、１０ｍＭのＭｎＣｌ_２、及び２ｍＭのＤＴＴであった。ｍＴＯＲ酵素の溶液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、＃ＰＲ８６８３Ｂ；最終ｍＴＯＲ濃度：０．５μｇ／ｍＬ）を添加し、化合物を、最終最大濃度が１００ｎＭ（３倍連続希釈、合計１０用量）になるまで連続希釈した。ＧＦＰ－４Ｅ－ＢＰ１（最終濃度：０．４μＭ）及びＡＴＰ溶液（最終ＡＴＰ濃度：３μＭ）を、３８４ウェルプレートに添加した。プレートを２５℃で１時間インキュベートし、ＴＲ－ＦＲＥＴ希釈バッファー中の１０μＬのＥＤＴＡ溶液（２０ｍＭ）及びＴｂ標識抗ｐ４Ｅ－ＢＰ１抗体（４ｎＭ）を各ウェルに添加した。プレートを密封し、２５℃で３０分間インキュベートし、ＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）ＴＲＦＲＥＴ用に構成されたプレートリーダーで読み取った。

【0187】

ＰＩ３Ｋα及びＰＩ３Ｋδ生化学アッセイ：
ＰＩ３Ｋα及びＰＩ３Ｋδキナーゼ反応を、低体積３８４ウェルプレートにおいて５μＬの体積で実施した。典型的には、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒモデル６００８２８０プレートを使用した。１×キナーゼ反応バッファーは、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５、３ｍＭのＭｇＣｌ_２、０．０３％のＣＨＡＰＳ、１ｍＭのＥＧＴＡ、１００ｍＭのＮａＣｌ、及び２ｍＭのＤＴＴからなった。ＰＩ３Ｋα（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、＃ＰＶ４７８８、最終ＰＩ３Ｋα濃度：１２０ｎｇ／ｍＬ）又はＰＩ３Ｋδ酵素溶液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、＃ＰＶ６４５１、最終ＰＩ３Ｋδ濃度：２５０ｎｇ／ｍＬ）をプレートに添加し、化合物を、最終最大濃度が１００ｎＭ（３倍連続希釈、合計１０用量）になるまで連続希釈し、ＰＩＰ２：３ＰＳ（最終濃度：１０μｇ／ｍＬ）及びＡＴＰ溶液（最終ＡＴＰ濃度：１０μＭ）を３８４ウェルプレートに添加した。プレートを２５℃で１時間インキュベートした。ＡＤＰ－Ｇｌｏ試薬バッファー（５μＬ）を各ウェルに添加した。プレートを密封し、２５℃で４０分間インキュベートした。ＡＤＰ－Ｇｌｏ検出緩衝液（１０μＬ）を各ウェルに添加し、プレートを２５℃で４０分間インキュベートし、発光用に構成されたプレートリーダー上で読み取った。

【0188】

インビトロｈＥＲＧ阻害アッセイ：
ｈＥＲＧ－Ｔ－ＲＥｘ（商標）ＨＥＫ２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｋ１２３６）は、Ｔｅｔ調節発現ベクターｐＴ－Ｒｅｘ－ＤＥＳＴ３０内のｈＥＲＧコード配列を、Ｔｅｔリプレッサーを発現する細胞（Ｔ－Ｒｅｘ（商標）ＨＥＫ２９３）にトランスフェクトすることによって産生され、それによって、高レベルのｈＥＲＧチャネルを発現するように誘導され得る細胞を産生した。細胞を、８５％のＤＭＥＭ、１０％の透析ＦＢＳ、０．１ｍＭのＮＥＡＡ、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン、５μｇ／ｍＬのブラストサイジン、及び４００μｇ／ｍＬのゲネチシンを含有する培地中で培養した。週に約３回、ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｇｉｂｃｏ、１２６０４）を使用して細胞を分割し、約４０％～約８０％のコンフルエンス間で維持した。アッセイの前に、細胞を１μｇ／ｍＬのドキシサイクリン（Ｓｉｇｍａ、Ｄ９８９１）で４８時間誘導した。実験日に、誘導細胞を再懸濁し、使用前に６ｃｍの細胞培養皿当たり５×１０^５細胞でカバースリップにプレートした。ｈＥＲＧチャネル媒介電流は、増幅器（ＨＥＫＡ、ＥＰＣ１０及び分子デバイス、マルチクランプ７００Ｂ）及び逆位相コントラスト顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ、ＩＸ５１／７１／７３）を備えた手動パッチクランプ記録システムによって取得した。ガラスピペットは、マイクロピペットプラー（Ｓｕｔｔｅｒ、Ｐ９７及びＮａｒｉｓｈｉｇｅ、ＰＣ－１０）によって調製され、２～４ＭＯｈｍの範囲のピペット抵抗によって適合された。内部ピペット溶液は、１４０ｍＭのＫＣｌ、２ｍＭのＭｇＣｌ_２、１０ｍＭのＥＧＴＡ、５ｍＭのＭｇＡＴＰ、及び１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ＫＯＨを用いて７．３５に調節されたｐＨ）であり、外部緩衝液は、１３２ｍＭのＮａＣｌ、４ｍＭのＫＣｌ、３ｍＭのＣａＣｌ_２、０．５ｍＭのＭｇＣｌ_２、１１．１ｍＭのグルコース、及び１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ＮａＯＨを用いて７．３５に調節されたｐＨ）であった。全細胞構成を、アクセス抵抗を連続的にモニタリングしながら維持した（＜１５ＭＯｈｍｓ）。ｈＥＲＧ電流は、膜を＋３０ｍＶに４．８秒間脱分極し、電圧を－５０ｍＶに５．２秒間戻して不活性化を取り除き、不活性化のテール電流を測定した。テール電流サイズの最大量を、ｈＥＲＧ電流振幅を決定するために使用した。ｈＥＲＧ阻害を評価するために、空ビヒクル及び被験物質を、液体灌流システム（ＡＬＡ、ＶＭ８重力流送達システム）を介して全細胞記録構成下で細胞に灌流した。用量反応アッセイでは、被験物質を低濃度から高濃度まで累積的に細胞に適用した。陽性対照（ドフェチリド）を、方法確認の主要部分として、細胞及び操作の性能を確保するために、実験に使用した。用量濃度に対してｈＥＲＧ電流阻害率を適合させて、用量反応曲線を構築し、ＩＣ_５０を決定した。

【0189】

結果
この実施例では、化合物５６８、５６９、５７０、及び５７４を調査した。結果を、以下の表３に示す。

【表3-1】

【表3-2】

【0190】

結果は、例示的な式（Ｉ）がＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫを選択的に阻害するが、ｍＴＯＲ、ＰＩ３Ｋα／δ、及びｈＥＲＧに対する阻害活性が低いか、又は全く示さないことを示す。

【0191】

実施例３：クローン原性及びインビボ有効性アッセイ
化合物５６９は、この実施例では、クローン原性活性及びインビボ有効性を測定するための例示的な式（Ｉ）の化合物として使用された。

【0192】

方法
ヒトがん細胞培養
ＭＣＦ－７ヒト乳がん細胞株及びＡ５４９ヒト肺がん細胞株、並びにＨＣＴ１１６ ｐ５３野生型及びＨＣＴ１１６ ｐ５３－／－細胞株を含むヒトがん細胞株は、ＡＴＣＣから得られた。ＭＣＦ７及びＨＣＴ１１６細胞を、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ＃１１９９５－０６５）で培養した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ヒトトリプル陰性乳がん細胞株及びＦＡＤＵ（ヒト頭頸部扁平上皮がん細胞株）は、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｍｏｒｒｉｓｖｉｌｌｅ，ＮＣ）から得られた。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１及びＡ５４９細胞を、ＲＰＭＩ１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ、１１８７５－０９３）で培養した。ＦＡＤＵ細胞を、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ、１１３６０－０７０）、１×ＭＥＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ、１１１４０－０５０）を補充した最小必須培地α（ＭＥＭ α）（Ｇｉｂｃｏ、１２５７１－０６３）で培養した。全ての細胞株を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Ｃｏｒｎｉｎｇ、３５－０１０－ＣＶ）及び１×抗生物質－抗真菌剤（Ｇｉｂｃｏ ＃１５２４０－０６２）で補充し、５％ ＣＯ２中で３７℃で増殖させた。全ての細胞株を、短いタンデム反復プロファイリングによって認証し、マイコプラズマについて陰性であることを試験した。

【0193】

ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫｃの抗体
リン酸化／活性化ＡＴＭ（Ｓ１９８１、＃ａｂ８１２９２）及びＤＮＡ－ＰＫｃｓ（Ｓ２０５６、＃ａｂ１８１９２）を認識する抗体を、Ａｂｃａｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）から購入した。ＡＴＭに対する抗体（＃Ａ１１０６）及びＤＮＡ－ＰＫｃｓに対する抗体（＃ａｂ１８３２）は、それぞれ、Ｓｉｇｍａ及びＡｂｃａｍからのものであった。リン－ＫＡＰ１（Ｓ８２４、＃Ａ３００－７６７Ａ）及びＫＡＰ１（Ａ７００－０１４）抗体は、Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｓ（Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，ＴＸ）からのものであった。リン－ＴＢＫ１（＃５４８３）、ｃＧＡＳ（＃１５１０２）、及びｐＳＴＩＮＧ（Ｓ３６６、＃１９７８１Ｓ）抗体は、細胞シグナル伝達技術（ＣＳＴ）（Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）からのものであった。ＳＴＩＮＧ（ＰＡ５－２３３８１）抗体は、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）からのものであり、アクチン（＃Ａ５３１６）抗体は、Ｓｉｇｍａからのものであった。１×ＴＢＳＴ（１×ＴＢＳ－１０×ＴＢＳ、（Ｃｏｒｎｉｎｇ、４６－０１２－ＣＭ）、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０（Ｐ７９４９）Ｓｉｇｍａ及び１％ ＢＳＡ中でアクチンを１：３０００に希釈したことを除き、全ての抗体を１：１０００に希釈した。使用した二次抗体は、（ａ）Ｌｉ－Ｃｏｒ法－ヤギ抗ウサギ（９２６－３２２１）及びヤギ抗マウス（９２６－６８０２０）Ｌｉ－Ｃｏｒ（ｂ）ＥＣＬ法：抗ウサギＩｇＧ、ＨＲＰ結合型（＃７０７４Ｓ）、ＣＳＴであった。

【0194】

免疫ブロット試験
細胞を、２０、１００、５００、又は１０００ｎＭの化合物５６９又はＤＭＳＯで３０分間前処理し、次いで、図１に示すように、０又は１０Ｇｙ（ＸＲＡＤ １６０、精密Ｘ線）で照射した。図３では、細胞を、１μＭの化合物５６９、１μＭのＡＴＭｉ（ＡＺＤ０１５６）、単剤としての１μＭのＤＮＡ－ＰＫｉ（ペポセルチブ）又はＤＭＳＯ、又はＡＴＭｉ及びＤＮＡ－ＰＫｉを各々、０．５ミクロモル又は各々１ミクロモルで３０分間組み合わせて前処理し、次いで、図１に示すように０又は１０Ｇｙ（ＸＲＡＤ１６０、精密Ｘ線）で照射した。ＩＲの１時間後、細胞を、ＲＩＰＡバッファー（５０ｎＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１％ＳＤＳ、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、１％ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＡ－６３０（Ｓｉｇｍａ、Ｉ８８９６））中、プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ、＃０４６９３１５９００１及び＃０４９０６８３７００１）の存在下で、４℃で２０分間溶解した。細胞溶解物を、４℃で１０分間、１３，２００ｇで遠心分離し、ＢＣＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ（商標）ＢＣＡタンパク質アッセイキット、カタログ番号２３２２７、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ ０２４５１）を使用して上清をタンパク質含有量について分析し、その後の免疫ブロット分析のために等量のタンパク質／レーンを使用した。２．５％の最終濃度でβ－メルカプトエタノールを含有するＮｕＰＡＧＥ ＬＳＤ試料バッファー［４Ｘ］（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＮＰ０００７）を添加することによってタンパク質を変性させ、試料を５分間沸騰させた。試料を、ＮｕＰＡＧＥ ３～８％のトリス－酢酸タンパク質ゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＥＡ０３７８５ＢＯＸ）に充填し、１×Ｔｒｉｓ－酢酸ＳＤＳランニングバッファー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＬＡ００４１）で電気泳動させたか、又はＮｕＰＡＧＥ ４～１２％のビス－トリスタンパク質ゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＮＰ０３３６ＢＯＸ）に充填し、１×ＭＯＰＳ ＳＤＳ泳動バッファー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＮＰ０００１）で電気泳動させた。

【0195】

タンパク質を、ニトロセルロース膜（Ａｍｅｒｓｈａｍ、１０６００００３）に一晩移した。膜を、１×ＴＢＳＴ中の５％非脂肪乾燥乳で１時間ブロックし、４℃で一次抗体とともに一晩インキュベートした。膜を、室温で１×ＴＢＳＴで４×１０分洗浄し、次いで、二次抗体で、室温で１時間インキュベートし、続いて室温で１×ＴＢＳＴで３×１０分洗浄した。膜は、ＯＤＹＳＳＥＹ ＣＬＸシステム、又はＥＣＬ（ＥＣＬブロット基質、Ｐｉｅｒｃｅ、３２２０９、３４０７５、３４０９５）を用いて可視化した。

【0196】

クローン原性生存アッセイ
このアッセイを、例示的な式（Ｉ）の化合物として化合物５６９を用いて行った。細胞を、ＩＲ対照なしの場合は２５０個の細胞、２ＧｙのＩＲの場合は５０００個の細胞、４ＧｙのＩＲの場合は１００００個の細胞の異なる密度で６ウェルプレートにプレートし、一晩培養した。翌日、ＭＣＦ７細胞を、漸増用量のＩＲ（０、２、又は４Ｇｙ）に曝露する前に、１００、２５０、５００、又は１０００ｎＭの化合物５６９又はＤＭＳＯを用いて３０分間プレインキュベートした。Ａ５４９細胞を、漸増用量のＩＲ（０、２、又は４Ｇｙ）に曝露する前に、化合物５６９を用いて５００又は１０００ｎＭで、又はＤＭＳＯと３０分間インキュベートした。ＩＲの後、細胞を、ＤＭＳＯ又は化合物５６９を用いて５時間連続的にインキュベートした後、培養培地を取り除き、細胞をＰＢＳで洗浄した。細胞を、阻害剤の不在下で、完全培地中で９日間培養した。次いで、細胞を、（ＰＢＳ、０．００３７％ｖ／ｖホルムアルデヒド、０．１％クリスタルバイオレット）で染色し、水ですすぎ、乾燥させた。

【0197】

マウスモデルにおける腫瘍研究
雌ＮＣｒ ｎｕ／ｎｕマウス（Ｃｒｌ：ＮＵ（ＮＣｒ）－Ｆｏｘｎ１ｎｕ、株４９０）は、５～６週齢でＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒから得られた。

【0198】

ＦＡＤＵ又はＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を、インビボ移植のために、対数相成長中に採取した。再懸濁された細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で３回洗浄した後、ＰＢＳ中の作動希釈を調製した。ＦＡＤＵ細胞を、１×１０^７細胞／ｍＬに希釈し、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を、５×１０^７細胞／ｍＬに希釈した。各マウスに、１００μＬの細胞懸濁液を右側脇腹に皮下注射した。腫瘍が少なくとも１００ｍｍ^３の標的体積に達するまで、腫瘍成長をモニタリングし、この時点で、マウスを４つの処置群に無作為に層別化した。

【0199】

腫瘍細胞株の移植後、マウスを、腫瘍発生を毎週１回モニタリングした。検出時に、腫瘍は、デジタルキャリパーを使用して２次元で測定された。腫瘍は、少なくとも１００ｍｍ^３に達した後に処置され、処置群のうちの１つに登録した後、週に２～３回測定された。研究エンドポイントは、処理時の体積から腫瘍が５倍になることとして定義した。

【0200】

この研究で使用したビヒクルは、０．５％（ヒドロキシプロピル）メチルセルロース（ＨＰＭＣ）であり、０．２％ Ｔｗｅｅｎ８０を脱イオン水に溶解した。ビヒクルのｐＨを、７．０～８．０になるまで調整し、ビヒクルを４℃で保存した。インビボ処理の各日に、試験化合物の適切な質量を、室温でビヒクルに添加した。混合物を、必要に応じてボルテックスして、１．６ｍｇ／ｍＬの最終濃度を生成した。

【0201】

薬力学（ＰＤ）アッセイ
腫瘍研究は、以下のように行った。ＦＡＤＵ又はＭＤＡ－２３１腫瘍を有するマウスに、ビヒクル単独又は化合物５６９単独を３、６、及び１０ｍｇ／ｋｇで予め投与した。次いで、腫瘍を、ビヒクル又は化合物５６９の投与の４５分後に１０Ｇｙで照射するか、又は非照射のままにした（ビヒクル及び化合物５６９を１０ｍｇ／ｋｇで）。腫瘍は、放射線療法から１時間後に採取した。

【0202】

薬力学分析のための組織ホモジネートを回収し、以下のように処理した。ＦＡＤＵ又はＭＤＡ－ＭＢ－２３１腫瘍由来の腫瘍組織を、液体窒素中で急速凍結させ、組織粉砕機を使用してドライアイス上で粉砕した。腫瘍粉末の一部をマイクロチューブに移し、続いて５００μＬのＲＩＰＡバッファー［５０ｎＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１％ ＳＤＳ、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、１％ ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＡ－６３０（Ｓｉｇｍａ、Ｉ８８９６）］を添加した。１０ｍｌのＲＩＰＡバッファーに、プロテアーゼ阻害剤及びホスファターゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ、＃０４６９３１５９００１及び＃０４９０６８３７００１）の各々２錠、２００μＬの０．１ＭのＰＭＳＦ及び１６０μＬのアプロチニン（Ｓｉｇｍａ、Ａ６２７９）を添加した。懸濁液を、ペレット乳棒モーター（ＫＯＮＴＥＳ）を用いて氷上で均質化し、氷上で３０分間インキュベートした。細胞溶解物を、１３，２００ｒｐｍで４℃で１５分間遠心分離し、上清を新しいチューブに移し、ＢＣＡキット（Ｐｉｅｒｃｅ、２３２２７）を用いてタンパク質濃度について分析し、続いて免疫ブロット法を行った。

【0203】

インビボ腫瘍増殖遅延研究を、以下のように行った。腫瘍細胞株の移植後、マウスを、腫瘍発生を毎週１回モニタリングした。少なくとも１００ｍｍ^３を測定する腫瘍の発生時に、１群当たり５匹のマウスを利用して、腫瘍を有するマウスを４つの群のうちの１つに層別化した。腫瘍体積は、１００～５００ｍｍ^３であった。ビヒクル又は化合物５６９（１０ｍｇ／ｋｇ）を、単独で、又は焦点放射線と組み合わせて、１日１回、３日間連続して（ｑｄ×３）強制経口投与した。ビヒクル又は化合物５６９の送達体積を、個々の動物の体重に基づいて調整した。放射線療法群に層別化されたマウスは、ビヒクル又は化合物５６９の投与から４５分後に、３日間連続して（ｑｄ×３）、１日に３Ｇｙを投与された。マウスを、Ｘ－ＲＡＤ ２２５Ｃｘ小動物画像誘導照射器（精密Ｘ線）を用いて実施した放射線処置中にイソフルランで麻酔した。４０ｍｍ×４０ｍｍの照射野は、蛍光透視法を介して腫瘍を有する脚を中心とした。マウスを、０．３ｍｍのＣｕフィルターを使用して、２２５ｋＶｐ、１３ｍＡの平行対向前後電界で、３００ｃＧｙ／分の平均用量速度で照射した。

【0204】

群１のマウスに、ビヒクルｑｄ×３を投与した。

【0205】

群２マウスに、１０ｍｇ／ｋｇの化合物５６９ ｑｄ×３を投与した。

【0206】

群３マウスに、３Ｇｙの焦点照射ｑｄ×３の４５分前にビヒクルを投与した。

【0207】

群４マウスに、３Ｇｙの焦点照射ｑｄ×３の４５分前に、１０ｍｇ／ｋｇの化合物５６９を投与した。

【0208】

インビボデータの統計的及び画像分析
ＰＲＩＳＭ（ＧｒａｐｈＰａｄ）を、図的提示のために使用した。ＳＡＳ９．４及びＲ３．６．１を、統計的分析のために使用した。４つの処置群間の腫瘍成長率を比較した。処置の開始時の異なる腫瘍サイズを調整するために、相対腫瘍体積を、各時間点での腫瘍体積をベースラインでの体積で除算することによって計算した。線形プロットを使用して、経時的な相対腫瘍体積の中央値を示した（図６及び８）。腫瘍５倍化のために動物が研究を終了したとき、動物について記録された最終腫瘍体積を、その後の時点で体積の中央値を計算するために使用されるデータとともに含めた。カプランマイヤープロットを使用して、経時的に研究に残っている各処置群におけるマウスの割合を示した（図７及び９）。５倍化するエンドポイントに到達する前に死亡していることが判明したマウスを、右側打ち切りに供した。４つの処置群間の無５倍生存率の差を対数ランク検定で評価した。０．０５未満のＰ値は、統計的に有意であるとみなされた。

【0209】

結果
図１は、放射線療法の有無にかかわらず、ＭＣＦ７細胞に対する化合物５６９の効果を評価するインビトロ実験からの免疫ブロットの画像を示す。免疫ブロットは、腫瘍細胞における化合物５６９による、ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫキナーゼの放射線誘導性自己リン酸化の阻害、並びにＡＴＭ基質であるＫＡＰ１の放射線誘導性リン酸化を示す。ヒト乳がん細胞株であるＭＣＦ７を、２０、１００、５００、及び１０００ｎＭの濃度で、化合物５６９で３０分間前処理した。ＤＭＳＯを、陰性対照として使用した。次いで、細胞を、０又は１０Ｇｙのイオン化放射線（ＩＲ）に曝露し、１時間後に、細胞を免疫ブロット分析のために採取した。化合物５６９は、Ｓｅｒ２０５６でのＤＮＡ－ＰＫｃｓの放射線誘導性リン酸化及びＳｅｒ１９８１でのＡＴＭの強力な用量依存的阻害（両方の自己リン酸化事象）を示し、ＡＴＭ基質ＫＡＰ１（ｓｅｒ８２４）は、化合物５６９が細胞内のＤＮＡ－ＰＫ及びＡＴＭキナーゼの両方を阻害したことを実証した。

【0210】

図２Ａ及び図２Ｂは、インビトロでのクローン原性生存アッセイにおける化合物５６９の放射線増感特性を示す。ＭＣＦ７細胞を、ビヒクル又は化合物５６９を用いて、１００、２５０、５００、及び１０００ｎＭで３０分間前処理した後、漸増用量のＩＲ（０、２、及び４Ｇｙ）で照射した。５時間後、培地を除去し、阻害剤を含まない新たな培地を細胞に添加し、９日間培養してから、固定し、染色し、コロニーを数えた。化合物５６９への細胞の５時間の曝露は、ＭＣＦ７細胞におけるＩＲの不在下で、細胞毒性の証拠なしに、有意な程度の放射線増感を誘導した（図２Ａ、表４Ａ）。

【0211】

図２Ａは、インビトロでのクローン原性生存アッセイにおける化合物５６９の放射線増感特性を示す。Ａ５４９細胞を、ビヒクル又は化合物５６９を用いて、５００ｎＭ及び１０００ｎＭで３０分間前処理した後、漸増用量のＩＲ（０、２、及び４Ｇｙ）で照射した。５時間後、培地を除去し、阻害剤を含まない新たな培地を細胞に添加し、９日間培養してから、固定し、染色し、コロニーを数えた。化合物５６９への細胞の５時間の曝露は、Ａ５４９細胞におけるＩＲの不在下で、細胞毒性の証拠なしに、有意な程度の放射線増感を誘導した（図２Ｂ、表４Ｂ）。

【0212】

図３は、野生型ｐ５３を発現するＨＣＴ１１６細胞又はｐ５３発現が陰性であったＨＣＴ１１６細胞における、化合物５６９、ＡＺＤ０１５６（選択的ＡＴＭ阻害剤；ＡＴＭｉ）、ペポセルチブ（選択的ＤＮＡ－ＰＫ阻害剤；ＤＮＡ－ＰＫｉ）、及びＡＺＤ０１５６とペポセルチブ（Ａｉ＋Ｄｉ）の組み合わせによる、ＴＢＫ１のリン酸化の誘導を示す免疫ブロットである。ＴＢＫ１のリン酸化は、Ｉ型インターフェロン反応の活性化のマーカーであり、免疫チェックポイント遮断療法に対する腫瘍反応の増強に関連している。２つの選択的化学阻害剤（ＡＺＤ０１５６及びペポセルチブ）を一緒に組み合わせることによるＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫｃｓの二重阻害は、選択的阻害剤単独のいずれかよりもＴＢＫ１のより深い活性化をもたらした。同様に、ＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫｃｓの二重阻害剤である化合物５６９への細胞の曝露は、単一標的キナーゼ阻害剤のいずれかよりもＴＢＫ１リン酸化のより強力な活性化剤であり、ｐ５３状態とは無関係であった。化合物５６９によるＴＢＫ１の活性化及びＡＴＭ及びＤＮＡ－ＰＫｃｓの二重阻害は、ｃＧＡＳ及びリン－ＳＴＩＮＧ誘導とは独立しているように見えた。

【化40】

【0213】

インビボで化合物５６９の薬力学的活性を評価するために、ＦＡＤＵ細胞及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を、ヌードマウスにおける腫瘍異種移植片として増殖させた。ビヒクル又は化合物５６９は、単独で、又は焦点放射線と組み合わせて、強制経口投与した。マウスに、ビヒクル又は化合物５６９を３、６、及び１０ｍｇ／ｋｇで投与した。次いで、腫瘍は、４５分後に１０Ｇｙの焦点照射を受けたか、又は非照射のまま放置した（０Ｇｙ、ビヒクル及び０Ｇｙ＋化合物５６９、１０ｍｇ／ｋｇ）。腫瘍は、放射線療法から１時間後に採取した。これらの腫瘍からの溶解物の免疫ブロットは、ｐＤＮＡ－ＰＫの放射線誘導性自己リン酸化、及びＡＴＭの下流標的であるＫＡＰ１の放射線誘導性リン酸化、並びに放射線＋化合物５６９で処置したＦＡＤＵ及びＭＤＡ２３１腫瘍におけるこれらのリン酸化事象の用量依存的阻害を示す。ＤＮＡ－ＰＫの放射線誘導性自己リン酸化及びＫＡＰ１の放射線誘導性リン酸化の腫瘍レベルは、それぞれ、１０ｍｇ／ｋｇで約５５％及び８０％超の有意に阻害された（図４及び５、表６～８）。ＤＮＡ－ＰＫの基底リン酸化もまた、腫瘍における化合物５６９によって阻害された。

【表4】

【表5】

【表6】

【表7】

【表8】

【表9】

【0214】

ＦＡＤＵ腫瘍への影響
群１のマウスに、ビヒクルｑｄ×３を投与した。この群における凝集腫瘍成長は、進行性であった。エンドポイントまでの中央値の時間は、１４日間であり、範囲は１１～１４日間であった（図６及び７）。群２のマウスに、１０ｍｇ／ｋｇ、ｑｄ×３の用量で化合物５６９を投与した。エンドポイントまでの中央値の時間は、１４日であり、範囲は１１～１７日間であった。群２の動物の腫瘍成長曲線及び無５倍生存率は、群１のものとほぼ同一である（図６及び７）。群３のマウスは、ビヒクル及び３Ｇｙの焦点放射線量を受け、これは、ビヒクルの投与の４５分後に送達された。ビヒクルと放射線療法の両方が、ｑｄ×３であった。原因不明のため、１６日目に１匹の動物が死亡したことが判明した。エンドポイントまでの中央値の時間は、２１日であり、範囲は１９～２５日間であった。全生存率は、群１及び群２と比較して有意に改善した（Ｐ＜０．０１、ｌｏｇｒａｎｋ）。群１及び群２に対する群３の凝集腫瘍成長の遅延及び無５倍生存率の増加を、図６及び７に示す。群４のマウスは、化合物５６９及び３Ｇｙの焦点放射線量を受け、これは、化合物の投与の４５分後に送達された。化合物５６９及び放射線の両方が、ｑｄ×３で投与された。エンドポイントまでの中央値の時間は、４２日であり、範囲は３１～５１日間であった。全生存率は、群１、群２、及び群３と比較して有意に改善した（Ｐ＜０．０１、ｌｏｇｒａｎｋ）。全ての他の群に対する群４の凝集腫瘍成長の遅延及び無５倍生存率の増加を、図６及び７に示す。全ての処置は、良好な耐容性を示した。

【0215】

ＭＤＡ－ＭＢ－２３１腫瘍への影響
群１のマウスに、ビヒクルｑｄ×３を投与した。エンドポイントまでの中央値の時間は、１２日であり、範囲は１２～１７日間であった。群２のマウスに、１０ｍｇ／ｋｇ、ｑｄ×３の用量で化合物５６９を投与した。エンドポイントまでの中央値の時間は、１７日であり、範囲は１２～２２日間であった。群２の動物の腫瘍成長曲線及び無５倍生存率は、群１のものとほぼ同一である（図８及び９）。群３のマウスは、ビヒクル及び３Ｇｙの焦点放射線量を受け、これは、ビヒクルの投与の４５分後に送達された。ビヒクルと放射線療法の両方が、ｑｄ×３であった。エンドポイントまでの中央値の時間は、２２日であり、範囲は１６～２２日間であった。全生存率は、ビヒクル単独で処置された群１の動物と比較して有意に改善された（Ｐ＜０．０１、ｌｏｇｒａｎｋ）。群１及び群２に対する群３の無５倍生存率の増加を、図９に示す。群４のマウスは、１０ｍｇ／ｋｇの化合物５６９及び３Ｇｙの焦点放射線量を受け、これは、化合物の投与の４５分後に送達された。化合物５６９及び放射線の両方が、ｑｄ×３で投与された。原因不明のため、３５日目に１匹の動物が死亡したことが判明した。エンドポイントまでの中央値の時間は、４３日であり、範囲は３７～５８日間であった。全生存率は、群１、群２、及び群３と比較して有意に改善した（Ｐ＜０．０１、ｌｏｇｒａｎｋ）。全ての他の群に対する群４の凝集腫瘍成長の遅延及び無５倍生存率の増加を、図８及び９に示す。全ての処置は、良好な耐容性を示した。

【0216】

実施例４．マウスモデルにおける化合物５６９の耐容性研究。
マウスモデルを使用して、以下の手順に従って化合物５６９の耐容性を試験する。
マウスを２つの群に分け、１つを９ｍｇ／ｋｇの化合物５６９（群１；メシル酸塩）で処置し、１つを１０ｍｇ／ｋｇの化合物５６９（群２；メシル酸塩）で処置する。群及び処置条件を、下の表９に提供する。

【表10】

【0217】

化合物５６９のビヒクルは、脱イオン水中の０．５％ ＨＰＭＣ及び０．１％ Ｔｗｅｅｎ８０である。化合物５６９は、毎日調製されるメシル酸塩として使用される。投薬量は１０ｍｌ／ｋｇで、体重に合わせて調整される。日常のモニタリングのために、全ての研究動物は、可動性、食物及び水の消費（ゲージ側からの確認のみ）、体重（ＢＷ）、眼／毛の艶のなさ、並びに任意に他の異常な影響などの挙動についてモニタリングされる。任意の死亡及び／又は異常な臨床徴候は、毎日記録され、伝達される。全ての動物の体重は、研究を通して毎日測定され、記録される。

【0218】

実施例５．マウスモデルにおける化合物５６９を単独で、及び抗ＰＤ１抗体と組み合わせて有効性を判定するための研究。
この実施例は、単独で、又は免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて（一例として抗ＰＤ１抗体を使用して）、マウスモデルにおける化合物５６９（例示的な式（Ｉ）の化合物として；メシル酸塩）の抗腫瘍有効性を調べる。

【0219】

８～１２週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスに、０％マトリゲルｓｃの０．１ｍｌ／マウス中の５×１０^５個のＭＣ３８腫瘍細胞を脇腹に注射する。腫瘍が約８０～１２０ｍｍ^３に達すると、腫瘍サイズに基づいてマウスを対にする。無作為化は１日目に行い、ＢＩＤ投薬スケジュールをサポートするために、投薬は２日目に開始する。体重は、６日間毎日測定され、その後、研究の終了まで隔週で測定される。腫瘍サイズは、研究を通して隔週でキャリパーによって測定される。動物は、腫瘍体積が１５００ｍｍ^３又は４５日に達するまで、いずれか早い方まで個別にモニタリングされるが、反応する動物は、より長く測定され得る。

【0220】

表１０に示すように、各マウス群の投薬レジメンが、選択される。化合物５６９を抗ＰＤ１抗体とともに投与する日に、化合物５６９を最初に投与する。用量は、脱イオン水中の０．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース及び０．１％ Ｔｗｅｅｎ８０の水溶液中に溶解した化合物５６９のメシル酸塩形態から調製される。抗ＰＤ１ ＲＭＰ１－１４抗体用量は、リン酸緩衝生理食塩水中で調製される。ＲＭＰ１－１４のクローンは、ＲＭＰ１－１４ ＩＣＨＯＲ ＳＫＵ：ＩＨＣ１１３２である。ラットＩｇＧ２ａは、リン酸緩衝生理食塩水中で調製される。ラットＩｇＧ２ａのクローンは、２Ａ３ラットＩｇＧ２ａアイソタイプ対照：ＢｉｏＸｃｅｌｌ カタログ番号ＢＥ００８９である。

【表11】

【0221】

実施例６．ＭＣ３８マウスモデルにおける抗ＰＤ１抗体、放射線療法、又はその両方と組み合わせた化合物５６９の有効性を判定するための研究。
この研究は、抗ＰＤ１抗体及び／又は放射線療法と組み合わせた化合物５６９の抗腫瘍効果を調査する。

【0222】

方法
同系マウス腫瘍モデル
マウス結腸腺がん細胞株、ＭＣ３８－ＮＣＩ．ＴＤ１（ＭＣ３８）を、５％ ＣＯ２中の３７℃で、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、２５μｇ／ｍｌのゲンタマイシン、２ｍＭのＬ－グルタミン、１％ペニシリン／ストレプトマイシン／Ｌ－グルタミン中で培養した。細胞を、ハンクスの平衡塩溶液中の０．２５％トリプシン／２．２１ｍＭのエチレンジアミン四酢酸中で解離させ、ＤＭＥＭ中で５×１０^６細胞／２００μＬの密度にした。腫瘍は、雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）の右腋窩に細胞懸濁液を皮下注射することによって開始した。全てのマウスを、腫瘍負荷のキャリパー推定に基づいて７つの研究群（ｎ＝１０）に分類した。全ての群の平均腫瘍負荷が、研究集団の全平均腫瘍負荷（９０ｍｍ^３）の１０％以内であることを確実にするようにマウスを分布させた。マウスを臨床徴候について毎日モニタリングし、体重を量り、週に３回測定した。研究エンドポイントは、病期分類から３０日後、又は腫瘍負荷が２０００ｍｍ^３超であった場合であった。

【0223】

製剤及び投与
化合物５６９のビヒクルは、脱イオン水に溶解した０．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）及び０．１％ Ｔｗｅｅｎ８０であった。化合物５６９のビヒクル及び化合物５６９（１２ｍｇ／ｋｇ）を、焦点放射線と組み合わせて、１日１回、病期分類の日から開始して２日間連続して（ｑｄ×２）強制経口投与した。放射線療法群に層別化されたマウスは、ビヒクル又は化合物５６９の投与から６０分後に、２日連続して（ｑｄ×２）、１日に５Ｇｙを投与された。マウスを、放射線処置中にイソフルランで麻酔し、Ｘｓｔｒａｈｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ小動物放射線研究プラットフォーム（Ｘｓｔｒａｈｌ，Ｉｎｃ．）を用いて実施した。マウスを、２．５Ｇｙ／分の平均用量速度で照射した。

【0224】

アイソタイプ対照（クローン２Ａ３）抗マウスＰＤ－１（抗ｍＰＤ－１；Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ）及び抗ｍＰＤ－１（クローンＲＭＰ１－１４；Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ）のビヒクルは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）であった。アイソタイプ対照抗ｍＰＤ－１（１０ｍｇ／ｋｇ）及び抗ｍＰＤ－１（１０ｍｇ／ｋｇ）を、病期分類後２日目から開始して２週間、毎週２回腹腔内投与した。様々な群の動物の処置スケジュールを、下に要約する：
・群１のマウスは、ビヒクルｑｄ×２＋１０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照（ｑ３ｄ×２、３日オフ）×２を投与し、病期分類から２日後に開始した。
・群２のマウスは、１０ｍｇ／ｋｇの抗ｍＰＤ－１（ｑ３ｄ×２、３日オフ）×２を投与し、病期分類から２日後に開始した。
・群３のマウスは、焦点照射５Ｇｙ ｑｄ×２＋１０ｍｇ／ｋｇのアイソタイプ対照（ｑ３ｄ×２、３日オフ）×２を投与し、病期分類から２日後に開始した。
・群４のマウスは、焦点照射５Ｇｙ ｑｄ×２＋１０ｍｇ／ｋｇの抗ｍＰＤ－１（ｑ３ｄ×２、３日オフ）×２を投与し、病期分類から２日後に開始した。
・群５のマウスは、１２ｍｇ／ｋｇの化合物５６９をｑｄ×２（焦点照射の１時間前）＋５Ｇｙ ｑｄ×２を投与した。
・群６のマウスは、１２ｍｇ／ｋｇの化合物５６９ ｑｄ×２＋１０ｍｇ／ｋｇの抗ｍＰＤ－１（ｑ３ｄ×２、３日オフ）×２を投与し、病期分類から２日後に開始した。
・群７のマウスは、１２ｍｇ／ｋｇの化合物５６９ ｑｄ×２（焦点照射の１時間前）＋５Ｇｙ ｑｄ×２＋１０ｍｇ／ｋｇの抗ｍＰＤ－１（ｑ３ｄ×２、３日オフ）×２を投与し、病期分類から２日後に開始した。

【0225】

データ分析
・ΔＣ及びΔＴ－以下のように、各マウスについて計算される個々のマウスエンドポイントである：
ΔＴ＝Ｔ_ｔ－Ｔ_０及びΔＣ＝Ｃ_ｔ－Ｃ_０、
式中、Ｔ_ｔ及びＴ_０は、それぞれ、時間ｔ又は投与開始時の処置マウスの腫瘍負荷である。ΔＣは、対照マウスについての同様の計算を反映する。
・中央値ΔＴ／ΔＣ－群エンドポイントである。これは、治療の各日に次のように計算される：

【数5】

結果は、％として提示される。中央値ΔＴ／ΔＣが陰性である（中央値処置された腫瘍負荷が退縮している）場合、中央値ΔＴ／ΔＣは報告されず、代わりに中央値％退縮が報告される。
・％退縮－群エンドポイントである。これは、ベースラインからの中央値腫瘍体積の減少率を示す。以下のように計算される：

【数6】

【0226】

病期分類後２０日目は、腫瘍負荷による殺処分の前に全ての動物が試験に参加していた最終日であったため、ΔＴ／ΔＣについて選択された。
・完全退縮（ＣＲ）－動物は、その腫瘍負荷が、最初の処置後の任意の時点で測定不可能な体積に低減された場合、完全退縮とみなされる。ＣＲを少なくとも２回連続して測定するために維持する必要がある。
・無腫瘍生存者（ＴＦＳ）－ＴＦＳは、研究終了まで生存し、研究終了時に疾患の信頼できる測定可能な証拠を有さない任意の動物である。

【0227】

統計的分析は、一元配置分散分析、続いてＤｕｎｎの多重比較検定を使用して実施した。

【0228】

結果
アイソタイプ対照（群１）と組み合わせたビヒクルによる処置は、全体的な研究対照として使用された。単剤としての抗ｍＰＤ－１（群２）による処置は、対照よりわずかに良好であり、結果として、２０日目の中央値ΔＴ／ΔＣ値は、８３％（ｐ＞０．０５）であった。図１０を参照されたい。抗ｍＰＤ－１と組み合わせた化合物５６９（群６）の添加は、単剤抗ｍＰＤ－１処置と比較して有効性の限られた増加を示し（２０日目の中央値ΔＴ／ΔＣ値は６４％、ｐ＞０．０５）、化合物５６９と抗ｍＰＤ－１抗体との組み合わせは、対照群と比較して有効性の増加を示した。

【0229】

アイソタイプ対照（群３）と組み合わせた放射線療法による処置は、２０日目の中央値ΔＴ／ΔＣ値が２０％（ｐ＞０．０５）の抗がん活性を生じたが、有意な腫瘍退縮をもたらさなかった。

【0230】

二重放射線併用処置群のマウスは、様々な程度の抗腫瘍活性を示した。放射線療法と組み合わせた抗ｍＰＤ－１（群４）又は５６９（群５）の添加により、抗腫瘍活性の有意な増強が見られ、２０日目の退縮値は、それぞれ、６４％（ｐ＜０．０５）及び２２％（ｐ＜０．０５）であった。群４における処置は、完全退縮（ＣＲ）及び無腫瘍生存者（ＴＦＳ）の５０％の発生率をもたらした。群５における処置は、ＣＲの５０％の発生率及びＴＦＳの３０％の発生率をもたらした。

【0231】

抗ｍＰＤ１、５６９、及び放射線（群７）によるトリプル併用処置は、最も実質的な抗腫瘍活性をもたらし、全ての他の単剤又は二剤処置と比較して有効性の増加を示した。処置により、９９％（ｐ＜０．０５）の２０日目の回帰値が得られた。群７におけるマウスも、ＣＲ及びＴＦＳの９０％の発生率を示した。

【0232】

全ての処置は、最小限の体重減少をもたらした。対照群（群１）及び化合物５６９及び抗ｍＰＤ－１併用処置群（群６）の両方とも、１匹の死亡（１０％の発生率）を示した。

【0233】

要約すると、化合物５６９、抗ＰＤ１抗体、及び放射線療法の組み合わせは、抗ＰＤ１抗体又は放射線療法のいずれかと組み合わせた化合物５６９と比較して、動物モデルにおいて優れた抗腫瘍活性を示した。

【0234】

その他の実施形態
本明細書に開示される特徴の全ては、任意の組み合わせで組み合わせることができる。本明細書に開示される各特徴は、同じ、同等、又は同様の目的を果たす代替的特徴によって置き換えることができる。したがって、特に明記しない限り、開示される各特徴は、同等又は同様の特徴の一般的シリーズのほんの一例である。

【0235】

上記の説明から当業者は、本発明の本質的な特徴を容易に確認することができ、その精神及び範囲から逸脱することなく、本発明の様々な変更及び修正を行い、それを様々な使用及び条件に適用させることができる。したがって、他の実施形態も特許請求の範囲内である。

【0236】

等価物
いくつかの本発明の実施形態が本明細書に記載され、例示されているが、当業者は、機能を実行するための及び／又は本明細書に記載される結果及び／又は利点のうちの１つ以上を得るための様々な他の手段及び／又は構造を容易に想定され、かかる変形及び／又は修正の各々は、本明細書に記載される本発明の実施形態の範囲内であるとみなされる。より一般的には、当業者は、本明細書に記載される全てのパラメータ、寸法、材料、及び構成が、例示的であることを意味すること、並びに実際のパラメータ、寸法、材料、及び／又は構成が、本発明の教示が使用される具体的な用途に依存することを容易に理解するであろう。当業者は、日常的な実験を超えないものを用いて、本明細書に記載される具体的な本発明の実施形態の多くの等価物を認識し、あるいは確認することができるであろう。したがって、前述の実施形態は、ほんの一例として提示されていること、添付の特許請求の範囲及びその等価物の範囲内で、本発明の実施形態は、具体的に記載されかつ特許請求されるものとは異なるように実施されてよいことが理解されるべきである。本開示の本発明の実施形態は、本明細書に記載される各々の個々の特徴、システム、物品、材料、キット、及び／又は方法を対象とする。加えて、２つ以上のそのような特徴、システム、物品、材料、キット、及び／又は方法の任意の組み合わせは、そのような特徴、システム、物品、材料、キット、及び／又は方法が相互に矛盾しない場合、本開示の本発明の範囲内に含まれる。

【0237】

本明細書で定義及び使用される全ての定義は、辞書の定義、参照により組み込まれる文書の定義、及び／又は定義された用語の通常の意味を制御すると理解されたい。

【0238】

本明細書に開示される全ての参考文献、特許、及び特許出願は、各々が引用されている主題に関して参照により組み込まれ、いくつかの場合において、本明細書の全体を包含し得る。

【0239】

本明細書及び特許請求の範囲において使用される場合、不定冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、明確に反対の意味を示さない限り、「少なくとも１つ」を意味すると理解されるべきである。

【0240】

本明細書及び特許請求の範囲において使用される場合、「及び／又は」という語句は、そのように結合された要素の「一方又は両方」、すなわち、いくつかの場合においては結合的に存在し、他の場合においては分離して存在する要素を意味すると理解されるべきである。「及び／又は」で列挙される複数の要素は、同じように、すなわち、そのように結合された要素の「１つ以上」で解釈されるべきである。他の要素は、具体的に識別される要素に関連するか否かにかかわらず、「及び／又は」という語句によって具体的に識別される要素以外に任意選択的に存在し得る。したがって、非限定的な例として、「Ａ及び／又はＢ」への言及は、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの限定のない言語と組み合わせて使用される場合、一実施形態では、Ａのみ（任意選択的にＢ以外の要素を含む）、別の実施形態では、Ｂのみ（任意選択的にＡ以外の要素を含む）、更に別の実施形態では、Ａ及びＢの両方（任意選択的に他の要素を含む）などを指すことができる。

【0241】

本明細書及び特許請求の範囲において使用される場合、「又は」は、上記で定義される「及び／又は」と同じ意味を持つと理解されるべきである。例えば、リストの項目を区切るとき、「又は」又は「及び／又は」は、包括的であると解釈され、すなわち、複数の要素又はリストの要素のうち、少なくとも１つを含むが、１つ以上も含み、並びに任意選択的に、リストにない追加項目を含むと解釈されるべきである。「１つのみの（ｏｎｌｙ ｏｎｅ ｏｆ）」又は「正確に１つの（ｅｘａｃｔｌｙ ｏｎｅ ｏｆ）」、又は特許請求の範囲において使用される場合、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」など、反対の意味を持つことが明確に示される用語のみが、複数の要素又はリストの要素のうちの正確に１つの要素を含むことを指す。一般に、本明細書で使用される場合、「又は」という用語は、「いずれか（ｅｉｔｈｅｒ）」、「１つの（ｏｎｅ ｏｆ）」、「１つのみの（ｏｎｌｙ ｏｎｅ ｏｆ）」、又は「正確に１つの（ｅｘａｃｔｌｙ ｏｎｅ ｏｆ）」などの排他的な用語が先行する場合、排他的な代替物（すなわち、「一方又は他方であって両方ではない（ｏｎｅ ｏｒ ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｂｕｔ ｎｏｔ ｂｏｔｈ）」）を示すものとしてのみ解釈されるものとする。「から本質的になる（Ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、特許請求の範囲において使用される場合、特許法の分野において使用される通常の意味を有するものとする。

【0242】

本明細書及び特許請求の範囲において本明細書で使用される場合、１つ以上の要素のリストを参照して、「少なくとも１つの（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」という語句は、要素のリスト内の任意の１つ以上の要素から選択された少なくとも１つの要素を意味するが、必ずしも要素のリスト内に具体的に列挙された各要素及び全ての要素の少なくとも１つを含み、要素のリスト内の要素の任意の組み合わせを除外しないと理解されるべきである。この定義は、「少なくとも１つの（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」という語句が言及する要素のリストの中に、具体的に識別される要素以外の要素が、具体的に識別される要素に関連するか否かにかかわらず、任意選択的に存在し得ることを可能にする。したがって、非限定的な例として、「Ａ及びＢのうちの少なくとも１つ」（又は、等価的に、「Ａ又はＢのうちの少なくとも１つ」、又は、等価的に「Ａ及び／又はＢのうちの少なくとも１つ」）は、一実施形態では、Ｂが存在せず（及び任意選択的にＢ以外の要素を含む）、複数のＡを任意選択的に含む少なくとも１つを指すことができ、別の実施形態では、Ａが存在せず（及び任意選択的にＡ以外の要素を含む）、複数のＢを任意選択的に含む少なくとも１つを指すことができ、更に別の実施形態では、複数のＡを任意選択的に含む少なくとも１つを指すことができ、並びに複数のＢを任意選択的に含む少なくとも１つを指すことができる（及び任意選択的に他の要素を含む）などを指すことができる。

【0243】

明確に反対の意味を示さない限り、２つ以上のステップ又は行為を含む本明細書に特許請求される任意の方法において、本方法のステップ又は行為の順序は、本方法のステップ又は行為が列挙される順序に必ずしも限定されないことを理解されるべきである。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【国際調査報告】