特表 2024-506145 半減期延長部分及びその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-02-09

(54)【発明の名称】半減期延長部分及びその使用方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 19/00 20060101AFI20240202BHJP

   C07K 14/00 20060101ALI20240202BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240202BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20240202BHJP

   A61K 38/18 20060101ALI20240202BHJP

   A61K 38/20 20060101ALI20240202BHJP

   A61K 38/22 20060101ALI20240202BHJP

   C12N 15/09 20060101ALN20240202BHJP

【ＦＩ】

C07K19/00

C07K14/00

A61K47/68

A61K38/17

A61K38/18

A61K38/20

A61K38/22

C12N15/09 Z ZNA

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023546450

(86)(22)【出願日】2022-02-01

(85)【翻訳文提出日】2023-09-19

(86)【国際出願番号】 US2022014728

(87)【国際公開番号】W WO2022169757

(87)【国際公開日】2022-08-11

(31)【優先権主張番号】63/144,696

(32)【優先日】2021-02-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】594197872

【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100162684

【弁理士】

【氏名又は名称】呉 英燦

(74)【代理人】

【識別番号】100126778

【弁理士】

【氏名又は名称】品川 永敏

(72)【発明者】

【氏名】フェランテ，アンドレア

(72)【発明者】

【氏名】ヒューアー，ジョゼフ ジョージ

(72)【発明者】

【氏名】リー，ステイシー リン

(72)【発明者】

【氏名】ヴェルディーノ，ペトラ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC50

4C076EE59

4C084AA02

4C084AA07

4C084BA02

4C084BA41

4C084CA53

4C084DA12

4C084DB01

4C084DB21

4C084DB34

4C084DB35

4C084DB52

4C084DB59

4C084MA17

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZA011

4C084ZA361

4C084ZA591

4C084ZA811

4C084ZB071

4C084ZB261

4C084ZC211

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA09

4H045BA10

4H045BA41

4H045DA02

4H045DA04

4H045DA30

4H045DA31

4H045DA37

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA15

4H045GA21

(57)【要約】

本開示は、概して、生物学及び医薬に関し、より具体的には、治療薬とともに使用するための、特に生物系治療薬（すなわち、生物治療薬又は生物製剤）のｔ１／２を改善するための、半減期（ｔ１／２）延長部分として作用する化合物に関する。本開示は更に、ｔ１／２延長部分として作用する化合物のうちの１つ以上を含む融合体及び複合体、並びにそれを含む医薬組成物、及び様々な状態、疾患、又は障害の治療におけるそれらの使用に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

配列番号１～３７及び１２４～１２６からなる群から選択されるアミノ酸配列又は前記配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有する配列を含む、化合物。

【請求項2】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項4】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号３）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項5】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号４）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項6】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＶＳＳＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＴＡＧＩＧＧＳＶＤＩＴＹＹＬＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＴＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＶＲＰＧＲＰＬＩＴＳＲＤＡＮＬＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号５）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項7】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＶＳＳＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＳＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＶＲＰＧＲＰＬＩＴＳＲＤＡＮＬＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項8】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＳＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＲＶＡＮＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項9】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＹＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項10】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＡＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項11】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＥＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項12】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＱＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１１）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項13】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項14】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶ３ＤＩＴＥＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項15】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＱＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項16】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項17】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＴＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項18】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＫＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項19】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＱＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１８）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項20】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＳＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項21】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＥＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２０）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項22】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＱＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項23】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＳＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２２）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項24】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＥＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２３）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項25】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＧＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２４）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項26】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＱＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２５）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項27】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＴＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２６）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項28】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＥＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項29】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２８）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項30】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＱＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２９）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項31】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＲＱＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３０）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項32】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＱＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項33】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＱＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項34】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＥＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３３）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項35】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＳＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３４）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項36】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＱＡＥＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３５）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項37】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＱＡＳＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３６）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項38】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＣ（配列番号３７）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項39】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＧＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＣ（配列番号１２４）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項40】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＧＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号１２５）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項41】

前記アミノ酸配列が、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＧＴＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号１２６）であるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の化合物。

【請求項42】

以下の構造：
Ｍ－Ｘ_１、
Ｘ_１－Ｍ、
Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_１、
Ｘ_１－Ｌ_１－Ｍ、
Ｘ_１－Ｍ－Ｘ_２、
Ｘ_２－Ｍ－Ｘ_１、
Ｘ_１－Ｌ_１－Ｍ－Ｘ_２、
Ｘ_２－Ｌ_１－Ｍ－Ｘ_１、
Ｘ_１－Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_２、
Ｘ_２－Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_１、
Ｘ_１－Ｌ_１－Ｍ－Ｌ_２－Ｘ_２、
Ｘ_２－Ｌ_１－Ｍ－Ｌ_２－Ｘ_１、
Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_１－Ｌ_２－Ｘ_２、
Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_２－Ｌ_２－Ｘ_１、
Ｘ_１－Ｌ_２－Ｘ_２－Ｌ_１－Ｍ、又は
Ｘ_２－Ｌ_２－Ｘ_１－Ｌ_１－Ｍ
［式中、
Ｍは、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、１２４、１２５、及び１２６からなる群から選択されるアミノ酸配列又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性を有し、
Ｘ_１は、第１の生物治療薬であり、
Ｘ_２（存在する場合）は、第２の生物治療薬であり、
Ｌ_１（存在する場合）は、（ＧＧＧＧＱ）_ｎ（配列番号３８）、（ＧＧＧＱ）_ｎ（配列番号３９）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号４０）、（ＰＧＰＱ）_ｎ（配列番号４１）、（ＰＧＰＡ）_ｎ（配列番号４２）、（ＧＧＧＧ（ＡＰ）_ｎＧＧＧＧ）（配列番号４３）、（ＧＧＥ）_ｎ（配列番号４４）、（ＧＧＧＧＧＥ）_ｎ（配列番号４５）、（ＧＧＫ）_ｎ（配列番号４６）、（ＧＧＧＧＫ）_ｎ（配列番号４７）、（ＧＧＧＧ（ＥＰ）_ｎＧＧＧＧ）（配列番号４８）、（ＧＧＧＧ（ＫＰ）_ｎＧＧＧＧ）（配列番号４９）、（ＰＧＰＥ）_ｎ（配列番号５０）、及び（ＰＧＰＫ）_ｎ（配列番号５１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する第１のリンカーであって、ｎは、１～１０であり得、
Ｌ_２（存在する場合）は、配列番号６４及び６５からなる群から選択されるアミノ酸配列であるか、又は前記配列に対して少なくとも９０％の配列類似性を有する第２のリンカーである］
を含む、化合物。

【請求項43】

前記第１の生物治療薬が、ペプチド、タンパク質、又はオリゴマーである、請求項４２に記載の化合物。

【請求項44】

前記第２の生物治療薬が、ペプチド、タンパク質、又はオリゴマーである、請求項４２又は４３に記載の化合物。

【請求項45】

前記第１の生物治療薬と前記第２の生物治療薬とが互いに異なる、請求項４２～４４のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項46】

Ｌ_１が、配列番号５２～６３からなる群から選択されるアミノ酸配列であるか、又は前記配列に対して少なくとも約９０％の配列類似性を有する、請求項４２～４５のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項47】

前記第１の生物治療薬及び／又は前記第２の生物治療薬が、ペプチド又はタンパク質、例えば、抗体（Ａｂ）若しくはその断片、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、成長／分化因子１５（ＧＤＦ１５）、インクレチン（ＩＮＣ）、インスリン（ＩＮＳ）、インターロイキン（ＩＬ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、ニューレグリン（ＮＲＧ）、又はリラキシン（ＲＬＮ）である、請求項４２～４６のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項48】

前記ペプチド又はタンパク質が、ＩＮＣである、請求項４７に記載の化合物。

【請求項49】

前記ＩＮＣが、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）、グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）、及びＧＩＰ／ＧＬＰ－１からなる群から選択される、請求項４８に記載の化合物。

【請求項50】

前記ペプチド又はタンパク質が、ＩＬであり、前記ＩＬが、ＩＬ－２である、請求項４７に記載の化合物。

【請求項51】

前記ペプチド又はタンパク質が、ＮＲＧであり、前記ＮＲＧが、ニューレグリン１（ＮＲＧ１）又はニューレグリン４（ＮＲＧ４）である、請求項４７に記載の化合物。

【請求項52】

前記ペプチド又はタンパク質が、ＲＬＮであり、前記ＲＬＮが、リラキシン２（ＲＬＮ２）である、請求項４７に記載の化合物。

【請求項53】

請求項４２～５２のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容される緩衝液とを含む、医薬組成物。

【請求項54】

追加の治療薬を更に含む、請求項５３に記載の医薬組成物。

【請求項55】

個体を治療する方法であって、
前記個体に、有効量の請求項４２～５２のいずれか一項に記載の化合物又は請求項５３若しくは５４に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。

【請求項56】

生物治療薬のｔ１／２を延長することに使用するための、請求項１～４１のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項57】

療法に使用するための、請求項４２～５２のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項58】

心臓血管、神経、免疫、代謝、腫瘍、精神、肺、及び／又は腎臓の状態、疾患、及び／又は障害を治療することに使用するための、請求項４２～５２のいずれか一項に記載の化合物。

【請求項59】

医薬品を製造するための、請求項４２～５２のいずれか一項に記載の化合物の使用。

【請求項60】

配列番号１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、若しくは１１８のいずれか１つであるか、又は前記配列と少なくとも約９０％の配列類似性の配列を含む、化合物。

【請求項61】

請求項６０に記載の化合物と、薬学的に許容される緩衝液とを含む、医薬組成物。

【請求項62】

追加の治療薬を更に含む、請求項６１に記載の医薬組成物。

【請求項63】

個体を治療する方法であって、
前記個体に、有効量の請求項６０に記載の化合物又は請求項６１若しくは６２に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。

【請求項64】

療法に使用するための、請求項６０に記載の化合物。

【請求項65】

心臓血管、神経、免疫、代謝、腫瘍、精神、肺、及び／又は腎臓の状態、疾患、及び／又は障害を治療することに使用するための、請求項６０に記載の化合物。

【請求項66】

医薬を製造するための、請求項６０に記載の化合物の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、概して、生物学及び医薬に関し、より具体的には、治療薬とともに使用するための、特に生物系治療薬（すなわち、生物治療薬又は生物製剤）のｔ１／２を改善するための、半減期（ｔ１／２）延長部分として作用するように操作／修飾された重鎖のみ抗体（ＶＨＨ）の可変ドメインとして知られる単一ドメイン抗体に関する。本開示は更に、ＶＨＨベースのｔ１／２延長部分及び治療薬のうちの１つ以上を含む融合体及び複合体、並びにそれを含む医薬組成物、及び様々な状態、疾患、又は障害の治療におけるそれらの使用に関する。

【背景技術】

【0002】

生物治療薬は、生理学的経路の天然の又は修飾された成分であり、選択性、有効性、及び安全性が高い傾向がある。しかしながら、これらにはいくつかの制限が伴う。１つの制限は、いくつかの例外を除いて、生物治療薬を経口投与できないことである。別の制限は、多くの生物治療薬が臨床現場で使用される場合、ｔ１／２が比較的短いことである。

【0003】

生物治療薬のｔ１／２を延長するためのいくつかの戦略が存在し、これらは、薬物動態（ＰＫ）及び／又は薬力学（ＰＤ）プロファイルを改善することができる。このような戦略では、典型的には、バルキング部分又は新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）を介したリサイクルが使用される。このようにして、抗体（Ａｂ）又はその断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆｃなど）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、及びヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）などのポリマー、脂肪酸及びその他の脂質、Ｎ－又はＯ－グリコシル化、並びに血清アルブミン又は他の血漿タンパク質（トランスフェリンなど）が、一定の生物治療薬に共有結合及び／又は非共有結合して、そのｔ１／２を延長し得る。例えば、Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－４４８、Ｈａｒｍｓｅｎ ＆ Ｈａａｒｄ（２００７）Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７７：１３－２２、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ（２０１６）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６：９０３－９１５、Ｍｕｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１２）ＭＡｂｓ ４：６７３－６８５、Ｐｏｄｕｓｔ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２６：７４３－７５３、Ｓｔｒｏｈｌ（２０１５）ＢｉｏＤｒｕｇｓ ２９：２１５－２３９、及びＷｅｒｌｅ Ｕ Ｂｅｒｎｋｏｐ－Ｓｃｈｎｕｒｃｈ（２００６）Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ ３０：３５１－３６７を参照されたい。

【0004】

膨大な数のｔ１／２延長戦略をよそに、生物治療薬のｔ１／２などのＰＫ特性を延長又は改善するためのさらなる仕組みが必要とされている。

【発明の概要】

【0005】

この必要性に対処するために、本開示はまず、生物治療薬のｔ１／２延長部分として使用することができる化合物について説明する。一例では、配列番号１～３７及び１２４～１２６のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む化合物が提供される。

【0006】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号１に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0007】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号２に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0008】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号３）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号３に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0009】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号４）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号４に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0010】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＶＳＳＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＴＡＧＩＧＧＳＶＤＩＴＹＹＬＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＴＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＶＲＰＧＲＰＬＩＴＳＲＤＡＮＬＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ（配列番号５）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号５に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0011】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＶＳＳＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＳＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＶＲＰＧＲＰＬＩＴＳＲＤＡＮＬＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号６に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0012】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＳＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＲＶＡＮＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号７に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0013】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＹＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号８に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0014】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＡＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号９に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0015】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＥＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号１０に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0016】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＱＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１１）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0017】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号１２に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0018】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＥＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号１３に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0019】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＱＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号１４に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0020】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号１５に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0021】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＴＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１６）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号１６に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0022】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＫＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号１７に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0023】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＱＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１８）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号１８に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0024】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＳＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１９）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号１９に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0025】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＥＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２０）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号２０に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0026】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＱＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号２１に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0027】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＳＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２２）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号２２に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0028】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＥＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２３）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号２３に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0029】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＧＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２４）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号２４に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0030】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＱＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２５）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号２５に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0031】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＴＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２６）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号２６に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0032】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＥＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号２７に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0033】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２８）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号２８に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0034】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＱＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２９）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号２９に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0035】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＲＱＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３０）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号３０に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0036】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＱＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号３１に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0037】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＱＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号３２に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0038】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＥＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３３）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号３３に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0039】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＳＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３４）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号３４に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0040】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＱＡＥＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３５）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号３５に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0041】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＱＡＳＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３６）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号３６に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0042】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＣ（配列番号３７）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号３７に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0043】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＧＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＣ（配列番号１２４）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号１２４に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0044】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＧＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号１２５）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号１２５に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0045】

別の例では、アミノ酸配列：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＧＴＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号１２６）を含む化合物が提供される。あるいは、本化合物は、配列番号１２６に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【0046】

第２に、本開示は、本明細書に記載のＶＨＨベースのｔ１／２延長部分及び生物治療薬のうちの少なくとも１つを含む化合物を記載する。いくつかの例では、本化合物は、以下のアミノ末端（Ｎ末端）からカルボキシ末端（Ｃ末端）までの構造を含むことができ、
Ｍ－Ｘ_１、
Ｘ_１－Ｍ、
Ｍ－Ｘ_２、
Ｘ_２－Ｍ、
Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_１、
Ｍ－Ｌ_２－Ｘ_１、
Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_２、
Ｍ－Ｌ_２－Ｘ_２、
Ｘ_１－Ｌ_１－Ｍ、
Ｘ_１－Ｌ_２－Ｍ、
Ｘ_２－Ｌ_１－Ｍ、
Ｘ_２－Ｌ_２－Ｍ、
Ｘ_１－Ｍ－Ｘ_２、
Ｘ_２－Ｍ－Ｘ_１、
Ｘ_１－Ｌ_１－Ｍ－Ｘ_２、
Ｘ_２－Ｌ_１－Ｍ－Ｘ_１、
Ｘ_１－Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_２、
Ｘ_２－Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_１、
Ｘ_１－Ｌ_１－Ｍ－Ｌ_２－Ｘ_２、
Ｘ_２－Ｌ_１－Ｍ－Ｌ_２－Ｘ_１、
Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_１－Ｌ_２－Ｘ_２、
Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_２－Ｌ_２－Ｘ_１、
Ｘ_１－Ｌ_２－Ｘ_２－Ｌ_１－Ｍ、
Ｘ_２－Ｌ_２－Ｘ_１－Ｌ_１－Ｍ、又は
Ｍ－Ｌ_２－Ｘ_２と組み合わさった（すなわち、非共有的に会合した）Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_１
式中、Ｍは、ｔ１／２延長部分として作用し、配列番号１～３７及び１２４～１２６から選択されるアミノ酸配列を有するか、又は前記配列と少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有する化合物であり、Ｌ_１（存在する場合）は、第１のリンカーであり、Ｌ_２（存在する場合）は、第２のリンカーであり、Ｘ_１は、生物治療用のタンパク質、ペプチド、又はオリゴマーであり、Ｘ_２は、Ｘ_１と同じであっても異なっていてもよい生物治療用のタンパク質、ペプチド、又はオリゴマーである（例えば、生物治療薬がホモ二量体である場合又は生物治療薬がヘテロ二量体である場合は、Ｘ_１は一方の鎖（α鎖）であることができ、Ｘ_２は、その他方の鎖（β鎖）であることができる）。Ｘ_１とＸ_２とはまた、互いに完全に異なることもできる。いくつかの例では、Ｌ_１は、（ＧＧＧＧＱ）_ｎ（配列番号３８）、（ＧＧＧＱ）_ｎ（配列番号３９）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号４０）、（ＰＧＰＱ）_ｎ（配列番号４１）、（ＰＧＰＡ）_ｎ（配列番号４２）、ＧＧＧＧ（ＡＰ）_ｎＧＧＧＧ（配列番号４３）、（ＧＧＥ）_ｎ（配列番号４４）、（ＧＧＧＧＥ）_ｎ（配列番号４５）、（ＧＧＫ）_ｎ（配列番号４６）、（ＧＧＧＧＫ）_ｎ（配列番号４７）、ＧＧＧＧ（ＥＰ）_ｎＧＧＧＧ（配列番号４８）、ＧＧＧＧ（ＫＰ）_ｎＧＧＧＧ、（配列番号４９）、（ＰＧＰＥ）_ｎ（配列番号５０）、又は（ＰＧＰＫ）_ｎ（配列番号５１）のアミノ酸配列を有することができ、ここで、ｎは、１～１５、特に、約５～約１０であることもできる。他の例では、Ｌ_１は、配列番号５２～６３から選択されるアミノ酸配列を有し得る。更に他の例では、Ｌ_１は、Ｌ_１が配列番号５２～６３のうちのいずれか１つに対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有するように、１つ以上の付加、欠失、挿入、又は置換を有し得る。

【0047】

いくつかの例では、Ｌ_２は、配列番号６４～６５から選択されるアミノ酸配列を有し得る。更に他の例では、Ｌ_２は、Ｌ_２が配列番号６４～６５のうちのいずれか１つに対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有するように、１つ以上の付加、欠失、挿入、又は置換を有し得る。

【0048】

更に他の例では、Ｌ_１又はＬ_２は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、特に（ＰＥＧ）_ｎなどのポリマーであることができ、ｎは、１～２０であることもできる。

【0049】

いくつかの例では、Ｘ_１、Ｘ_２、又はＸ_１／Ｘ_２は、ペプチド又はタンパク質（及び更にはオリゴマー、例えば、共有的に連結している場合もしていない場合もあるホモ二量体又はヘテロ二量体）である。このようなペプチド又はタンパク質の例としては、抗体（Ａｂ）、抗体断片（例えば、異なる特異性のＦａｂ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ－Ｆａｂ、ＶＨ、ＶＬ、又はＶＨＨ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、成長／分化因子１５（ＧＤＦ１５）、インクレチン（ＩＮＣ）、インターロイキン（ＩＬ）、ニューレグリン（ＮＲＧ）、又はホルモンが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の例では、ＩＮＣは、インスリン（ＩＮＳ）、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）、グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）、ＧＩＰ／ＧＬＰ－１、又は更には三重受容体活性（すなわち、グルカゴン－ＧＩＰ－ＧＬＰ－１受容体活性）を有するＩＮＣであり得る。ある特定の例では、ＩＬは、インターロイキン－２（ＩＬ－２）である。ある特定の例では、ＮＲＧは、ニューレグリン１（ＮＲＧ１）又はニューレグリン４（ＮＲＧ４）である。ある特定の例では、ホルモンは、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）又はリラキシン－２（ＲＬＮ－２）である。ある特定の例では、Ｆａｂは、ＧＩＴＲに結合し、いくつかの例では、Ｆａｂは、ＧＩＴＲに結合し、ＧＩＴＲアンタゴニストになる。

【0050】

特定の例では、本化合物は、配列番号１００～１１８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有し得る。あるいは、本化合物は、配列番号１００～１１８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有し得る。

【0051】

第３に、本開示は、少なくとも１つの本明細書の化合物と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を記載する。

【0052】

第４に、本開示は、本化合物及び医薬組成物を、医薬品のために、及び生物治療薬のｔ１／２を延長するために使用する方法を記載する。

【0053】

第５に、本開示は、医薬品の製造における、及び生物治療薬のｔ１／２を延長することにおける本明細書の化合物の使用を記載する。

【0054】

ｔ１／２延長部分及びそれを含む化合物の利点は、それらを一本鎖ポリペプチド（すなわち、単量体）として化学的に又は組換えにより合成することができるため、生物学的活性のために細胞内タンパク質分解処理を必要としないことである。しかしながら、いくつかの例では、ｔ１／２延長部分として作用する化合物は、一本鎖ペプチド及びタンパク質だけでなく、２つ以上の鎖を持つペプチド、例えば、二本鎖ペプチド、多鎖ペプチド、及びタンパク質にも同様に融合し得ることが企図される。ｔ１／２延長部分として作用する化合物では、これは、Ｎ末端及びＣ末端だけでなく、ｔ１／２延長部分のいずれの表面露出アミノ酸にも化学的に抱合し得る（ただし、そのような抱合によりアルブミン結合が完全に無効になるわけではない）。

【0055】

ｔ１／２延長部分として作用する化合物及びそれを含む化合物の利点は、ｔ１／２延長部分により、ヒトなどの哺乳動物において作用持続時間が延長されてｔ１／２が約２０日～約３０日となることで、天然のペプチド及びタンパク質と比較した場合、投与を少なくとも毎週又は隔週にすることができ、これにより、特に生涯にわたる治療が必要な慢性疾患の場合に、コンプライアンスを改善することができ、また生活の質を改善することができることである。

【0056】

本明細書のｔ１／２延長部分として作用する化合物の利点は、それらが、ｔ１／２延長部分のアルブミン親和性を変化させることによって達成される調整可能な薬物動態を有することである。

【0057】

本明細書においてｔ１／２延長部分として作用する化合物の利点は、それらが、酵母、哺乳動物、又は原核生物などの標準的な生産生物において組換え発現を可能にし得ることである。

【0058】

更に、本明細書のｔ１／２延長部分として作用する化合物の利点は、それらが、ヒト血清アルブミンだけでなく、サル、マウス、ラット、イヌ、及びブタの血清アルブミンにも類似の結合を有することであり、これにより、薬力学的、薬物動態学的、及び毒物学的研究を、これらの種からヒトへとより容易に移すことが可能になることである。故に、本明細書のｔ１／２延長部分は、ヒトの治療だけでなく動物の治療にも使用することができる。

【発明を実施するための形態】

【0059】

別段に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似又は同等の任意の方法及び材料を、類似体、医薬組成物、及び方法の実施又は試験に使用することができるが、好ましい方法及び材料は、本明細書に記載されている。

【0060】

更に、不定冠詞「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」による要素への言及は、文脈が１つ及び１つのみの要素があることを明確に要求しない限り、複数の要素が存在する可能性を排除しない。このため、不定冠詞の「ａ」又は「ａｎ」は、通常、「少なくとも１つ」を意味する。

【0061】

定義
本明細書で使用される場合、「約」は、例えば、明記された濃度、長さ、分子量、ｐＨ、配列同一性、時間枠、温度、体積などの値（単数又は複数）の統計学的に意味のある範囲内を意味する。このような値又は範囲は、所与の値又は範囲の典型的には２０％以内、より典型的には１０％以内、更により典型的には５％以内の大きさの範囲内であり得る。「約」によって包含される許容される変動は、研究下の特定のシステムに依存し、当業者によって容易に理解され得る。

【0062】

本明細書で使用する場合、受容体のうちの１つ以上に関して、「活性」、「活性化する」、「活性化すること」などは、以下に記載されるインビトロアッセイなどの当該技術分野で既知であるアッセイを使用して測定して、本明細書の融合体などの化合物が受容体に結合し、そこで応答を誘導する能力を意味する。

【0063】

本明細書で使用する場合、「副腎皮質刺激ホルモン」又は「ＡＣＴＨ」は、哺乳動物種、特にヒトなどの任意の種から得られた、又はそれに由来するＡＣＴＨを意味する。ＡＣＴＨには、天然ＡＣＴＨ（すなわち、全長）とその変形（すなわち、天然ＡＣＴＨの付加、欠失、挿入、及び／又は置換）との両方が含まれる。ＡＣＴＨの１つの配列は、配列番号９５（ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｐ０１１８９）に示されている。ヒトでは、ＡＣＴＨは、ＡＣＴＨ受容体（ＡＣＴＨＲ、メラノコルチン受容体２又はＭＣ２Ｒとしても知られる）に結合し、ＡＣＴＨＲの１つの配列は、配列番号９６（ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｑ０１７１８）に示されている。ＡＣＴＨＲは、外部細胞原形質膜に位置するＧタンパク質共役受容体で、Ｇαにカップリングされ、アデニリルシクラーゼを活性化することによりｃＡＭＰのレベルを上方調節する。

【0064】

本明細書で使用する場合、「アミノ酸」は、化学的観点から、１つ以上のアミン基及び１つ以上のカルボン酸基の存在を特徴とし、他の官能基を含んでもよい分子を意味する。当該技術分野で既知であるように、標準アミノ酸として指定され、あらゆる生物によって産生されるペプチド／タンパク質の大部分の構成要素として使用され得る２０個のアミノ酸のセットが存在する。本開示のアミノ酸配列は、２０個の天然に存在するアミノ酸の標準的な１文字又は３文字のコードを含む。

【0065】

本明細書で使用する場合、「類似体」は、標的受容体を活性化し、その受容体の天然アゴニストによって誘発される少なくとも１つのインビボ又はインビトロ効果を誘発する、合成ペプチド又はポリペプチドなどの化合物を意味する。

【0066】

本明細書で使用する場合、「生物治療薬」などは、少なくとも１つの治療活性／適用性を有する、抗体、凝固因子（ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）、凝固因子（ｃｌｏｔｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）、サイトカイン、酵素、成長因子、ホルモン、及びそれらの断片などのアミノ酸又は核酸ベースの化合物、並びに治療用のＤＮＡ及び／又はＲＮＡ分子を意味する。

【0067】

本明細書で使用する場合、「ＣＮＴＦ」又は「毛様体神経栄養因子」は、哺乳動物種、特にヒトなどの任意の種から得られた、又はそれに由来するＣＮＴＦを意味する。ＣＮＴＦには、天然ＣＮＴＦ（すなわち、全長）とその変形（すなわち、天然ＣＮＴＦの付加、欠失、挿入、及び／又は置換）との両方が含まれる。ＣＮＴＦの１つの配列は、配列番号９７（ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｐ２６４４１）に示されている。ヒトでは、ＣＮＴＦは、ＣＮＴＦα受容体（ＣＮＴＦＲα）に結合し、ＣＮＴＦＲαの１つの配列は、配列番号９８（ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｐ２６９９２）に記載されている。ＣＮＴＦＲαはまた、ＬＩＦＲβ及びｇｐ１３０という２つのシグナル伝達膜貫通サブユニットを使用し、これらが一緒になって、Ｊａｋ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路を活性化する。Ｓｔａｈｌ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６３：９２－９５及びＳｔａｈｌ＆Ｙａｎｃｏｐｏｕｌｏｓ（１９９４）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２５：１４５４－１４６６を参照されたい。

【0068】

本明細書で使用する場合、「保存的置換」は、参照分子と、そのアミノ酸配列に１つ以上の保存的アミノ酸置換を有することを除いて同一である、参照ペプチド又はポリペプチドの変異体を意味する。概して、保存的に修飾された変異体は、参照アミノ酸配列と、少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む。より具体的には、保存的置換は、特性（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、骨格構造、及び剛性など）が類似しており、得られる置換されたペプチド又はポリペプチドの生物学的活性への影響が最小限であるアミノ酸によるアミノ酸の置換を指す。機能的に類似したアミノ酸の保存的置換は当該技術分野で周知であるため、本明細書で徹底的に説明する必要はない。

【0069】

本明細書で使用する場合、「有効量」は、本明細書の１つ以上の化合物、又はその薬学的に許容される塩の量又は用量であって、それを必要とする個体への単回又は複数回投与時に、診断又は治療中のそのような個体において所望の効果（すなわち、例えば、例えば、血管新生の増加、血管コンプライアンスの増加、心血流の増加、肝血流の増加、肺血流の増加、腎血液の増加、糸球体濾過率の増加、血圧の低下、炎症の減少（又は予防）、及び／又は心臓、腎臓、肝臓、若しくは肺の線維症の減少（又は予防）などの個体の状態における臨床的に測定可能な差異を生じさせ得るもの）を提供する、量又は用量を意味する。有効量は、既知の技法の使用によって、及び同様の状況下で得られた結果を観察することによって、当業者であれば容易に決定することができる。個体についての有効量を決定する際には、哺乳動物の種、その大きさ、年齢、及び全体的な健康状態、関与する特定の疾患又は障害、疾患又は障害の程度又は関与度又は重症度、個体の応答、投与される特定の化合物、投与の様式、投与される調製物の生物学的利用能の特徴、選択される用法、併用薬の使用、並びに他の関連する状況を含むが、これらに限定されない、多数の因子が考慮される。

【0070】

本明細書で使用する場合、「長期間の作用」は、本明細書の少なくとも１つの化合物及び本明細書の生物治療薬を含む融合体の結合親和性及び活性が、天然の生物治療薬よりも長い期間継続することで、少なくとも、１日１回又は更には週３回、週２回、若しくは週１回程度の頻度で投薬することが可能になることを意味する。時間作用プロファイルは、以下の実施例で利用されるものなどの既知の薬物動態試験方法を使用して測定され得る。

【0071】

本明細書で使用する場合、「グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質」又は「ＧＩＴＲ」は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１８（ＴＮＦＲＳＦ１８）としても知られ、哺乳動物種、特にヒトなどの任意の種から得られた、又はそれに由来するＧＩＴＲを意味する。ＧＩＴＲには、天然ＧＩＴＲ（すなわち、全長）とその変形（すなわち、天然ＧＩＴＲの付加、欠失、挿入、及び／又は置換）との両方が含まれる。ヒトＧＩＴＲ全長（ただしシグナルペプチドを含まない）の１つの配列は、配列番号１２２（ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｑ９Ｙ５Ｕ５も参照）に示されている。ヒトＧＩＴＲ ＥＣＤの１つの配列（ただしシグナルペプチドを含まない）は、配列番号１２３に示されている。

【0072】

本明細書で使用する場合、「グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド」、「胃抑制ペプチド」、又は「ＧＩＰ」は、哺乳動物種、特にヒトなどの任意の種から得られる、又はそれに由来するＧＩＰを意味する。ＧＩＰには、天然ＧＩＰ（すなわち、全長）とその変形（すなわち、天然ＧＩＰの付加、欠失、挿入、及び／又は置換）との両方が含まれる。ＧＩＰは、前駆体であるｐｒｏＧＩＰからプロセシングされる。ｐｒｏＧＩＰの１つの配列は、配列番号６７（ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｐ０９６８１も参照）に示され、ＧＩＰの１つの配列は、配列番号６８に示されている。代替のＧＩＰは、ＧＩＰ_１－３０である（Ｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１７３：８２６－８３８を参照）。ヒトでは、Ｇタンパク質共役受容体として作用する１つのＧＩＰ受容体（ＧＩＰＲ；配列番号６９；ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｐ４８５４６も参照）が存在する。Ｙａｑｕｂ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７７：５４７－５５８を参照されたい。

【0073】

本明細書で使用する場合、「グルカゴン様ペプチド－１」又は「ＧＬＰ－１」は、哺乳動物種、特にヒトなどの任意の種から得られた、又はそれに由来するＧＬＰ－１を意味する。ＧＬＰ－１には、天然ＧＬＰ－１（すなわち、全長）とその変形（すなわち、天然ＧＬＰ－１の付加、欠失、挿入、及び／又は置換）との両方が含まれる。ＧＬＰ－１は、前駆体であるプログルカゴン（ｐｒｏＧＣＧ）からプロセシングされる。ｐｒｏＧＣＧの１つの配列は、配列番号７０（ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｐ０１２７５も参照）に示され、ＧＬＰ－１の１つの配列は、配列番号７１に示されている。２つの活性な生理学的バリアントが知られており、これらは配列番号７２及び７３に示されている。ヒトでは、Ｇタンパク質共役受容体として作用する１つのＧＬＰ－１受容体（ＧＬＰ－１Ｒ；配列番号７４；ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｐ４３２２０も参照）が存在する。Ｄｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１３３：１９０７－１９１０、Ｇｒａｚｉａｎｏ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９６：１４１－１４６、及びＴｈｏｒｅｎｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４２：１６７８－１６８２を参照されたい。

【0074】

本明細書で使用する場合、「成長／分化因子１５」又は「ＧＤＦ１５」は、哺乳動物種、特にヒトなどの任意の種から得られるか、又はそれに由来するＧＤＦ１５を意味する。ＧＤＦ１５には、天然ＧＤＦ１５（すなわち、全長）とその変形（すなわち、天然ＧＤＦ１５の付加、欠失、挿入、及び／又は置換）との両方が含まれる。ＧＤＦ１５は、前駆体ｐｒｏＧＤＦ１５からプロセシングされたホモ二量体ペプチドである。前駆体の１つの配列は、配列番号７５に示され、ＧＤＦ１５の１つの配列は、配列番号７６（ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｑ９９９８８も参照）に示されている。ヒトでは、ＲＥＴ受容体チロシンキナーゼとして作用する１つのＧＤＦ１５受容体（ＧＦＲＡＬ；配列番号７７；ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｑ６ＵＸＶ０も参照）が存在する。Ｅｍｍｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｎａｔ Ｍｅｄ．２３：１２１５－１２１９、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２３：１１５８－１１６６、及びＢａｅｋ＆Ｅｌｉｎｇ（２０１９）Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．１９８：４６－５８を参照されたい。

【0075】

本明細書で使用する場合、「半減期」又は「ｔ１／２」は、本明細書に記載の融合体などの化合物の量の半分が、生物学的プロセスにより、個体の血清又は血漿などの流体又は他の生理学的空間から除去されるのにかかる時間を意味する。あるいは、ｔ１／２は、そのような融合体の量が、その薬理学的、生理学的、又は放射線学的活性の半分を失うのにかかる時間を意味することもある。

【0076】

本明細書で使用する場合、「５０％効果濃度」又は「ＥＣ_５０」は、用量反応曲線（例えば、ＣＮＴＦ：Ｊａｋ、ＳＴＡＴ、Ｒａｓ、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、及びＭＡＰＫ／ＥＲＫ；ＮＲＧ：ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ、Ｊａｋ、ＳＴＡＴ、Ｒａｓ、及びＰＬＣγ；ＧＤＦ１５：ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ及びＭＡＰＫ／ＥＲＫ及びＳｍａｄ；ＩＬ－２：ＪＡＫ－ＳＴＡＴ、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ及びＭＡＰＫ／ＥＲＫ；ＧＬＰ１：ｃＡＭＰ、ＰＩ３Ｋ、ＭＡＰＫ／ＥＲＫ、ＰＫＣδ；ＴＮＦ：ＴＲＡＦ、ＭＫＫ、ＩＫＫ、及びＮＦｋＢ；ＡＣＴＨ：ｃＡＭＰ及びＰＫＡ）などのアッセイエンドポイントの５０％の活性化／刺激をもたらす化合物の濃度を意味する。

【0077】

本明細書で使用する場合、「と組み合わせて」は、本明細書の融合体のうちの少なくとも１つを、１つ以上の追加の治療薬と同時に、連続して、又はそれらとの単一の複合製剤で投与することを意味する。

【0078】

本明細書で使用する場合、「それを必要とする個体」は、例えば、本明細書に列挙されるものを含む、治療又は療法を必要とする状態、疾患、障害、又は症状を有する、ヒトなどの哺乳動物を意味する。特に、治療される好ましい個体は、ヒトである。

【0079】

本明細書で使用する場合、「インクレチン」又は「ＩＮＣ」は、摂食後にインスリン分泌を増加させることができる、腸内分泌細胞から分泌されるペプチドを意味する。ＩＮＣは、哺乳動物種、特にヒトなどの任意の種から得られる、又はそれに由来するインクレチンであり得る。ヒトでは、ＩＮＣには、上で考察したＩＮＳ、ＧＩＰ、及びＧＬＰ－１が含まれる。

【0080】

本明細書で使用する場合、「インスリン」又は「ＩＮＳ」は、任意の種、例えば、哺乳動物種、特にヒトから得られる、又はそれに由来するインスリンを意味し、天然型は、２つのジスルフィド結合により接続された２つのペプチド鎖（例えば、Ａ鎖及びＢ鎖）を有するヘテロ二量体ペプチドであり、Ａ鎖は単一の分子内ジスルフィド結合を更に有する。ヒトでは、ＩＮＳプロセシングは、プレプロインスリン（ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｐ０１３０８参照）で始まり、このプレプロインスリンは、プロインスリン（Ａ鎖、Ｂ鎖、及びＣペプチドを含む；天然ＩＮＳはＢ－Ｃ－Ａの構造を有する；配列番号７８参照；ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔデータベース受託番号Ｐ０１３０８も参照）にプロセシングされる。プロインスリンは、Ｃペプチドが切断されてＩＮＳに到達する更なるプロセシングを受ける（天然のヒトＩＮＳのＡ鎖については配列番号７９、天然のヒトＩＮＳのＢ鎖については配列番号８０を参照、またＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｐ０１３０８を参照）。

【0081】

本明細書で使用する場合、「インターロイキン」又は「ＩＬ」は、哺乳動物種、特にヒトなどの任意の種から得られた、又はそれに由来するインターロイキンを意味する。ＩＬには、天然ＩＬ（すなわち、全長）とその変形（すなわち、天然ＩＬの付加、欠失、挿入、及び／又は置換）との両方が含まれる。ヒトでは、ある数の天然のＩＬアイソフォームが存在するが、ここでの関心はＩＬ－２である。ＩＬ－２は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ、及びＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路を含む３つの異なるシグナル伝達経路を介してシグナルを伝達できるサイトカインである。ヒトＩＬ－２の１つの配列は、配列番号８３（ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｐ６０５６８も参照）に示されている。ヒトでは、α、β、及びγサブユニットを含む１つのＩＬ－２受容体が存在する（ＩＬ－２Ｒ；配列番号８４～８６；ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｐ０１５８９、Ｐ１４７８４、及びＰ３１７８５も参照）。Ｌｉａｏ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：５９８－６０４、及びＭａｌｅｋ＆Ｃａｓｔｒｏ（２０１０）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３３：１５３－１６５を参照されたい。

【0082】

本明細書で使用する場合、「長時間作用型」は、本明細書の組成物の結合親和性及び活性が、天然のペプチド又はタンパク質よりも長い期間継続することで、少なくとも、１日１回又は更には週３回、週２回、週１回、若しくは月１回程度の頻度で投薬することが可能になることを意味する。本明細書の化合物の時間作用プロファイルは、以下の実施例で記載されるものなどの既知の薬物動態試験方法を使用して測定され得る。

【0083】

本明細書で使用する場合、「ニューレグリン」又は「ＮＲＧ」は、哺乳動物種、特にヒトなどの任意の種から得られた、又はそれに由来するニューレグリンを意味する。ＮＲＧには、天然ＮＲＧ（すなわち、全長）とその変形（すなわち、天然ＮＲＧの付加、欠失、挿入、及び／又は置換）との両方が含まれる。ヒトでは、ある数の天然のＮＲＧファミリーメンバーが存在するが、ここでの関心はＮＲＧ１である。すべてのＮＲＧと同様に、ＮＲＧ１は、より大きな前駆体からプロセシングされる。前駆体の１つの配列は、配列番号８７に示され、ＮＲＧ１の１つの配列は、配列番号８８（ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｑ０２２９７も参照）に示されている。ヒトでは、ＥｒｂＢ３（配列番号８９；ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｐ２１８６０も参照）及びＥｒｂＢ４（配列番号９０；ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｑ１５３０３も参照）という２つのＮＲＧ１受容体が存在する。Ｍｅｉ＆Ｘｉｏｎｇ（２００８）を参照されたい。

【0084】

本明細書で使用する場合、「非標準アミノ酸」は、細胞内で自然に発生し得るが、ペプチド合成には関与しないアミノ酸を意味する。非標準アミノ酸はペプチドの構成要素である可能性があり、多くの場合、ペプチド内の標準アミノ酸の修飾によって（すなわち、翻訳後修飾を介して）生成される。非標準アミノ酸には、上記の標準アミノ酸とは反対の絶対キラリティーを有するＤ－アミノ酸が含まれ得る。

【0085】

本明細書で使用する場合、「オリゴマー」は、より小さい分子のコピーに由来し得る、いくつかの類似又は同一の繰り返し単位を有する分子、そのモノマーを意味する。これらのモノマーは、強い又は弱い、共有結合又は非共有結合（例えば、分子内）のいずれかである結合によって接合し得る。

【0086】

本明細書で使用する場合、「患者」、「対象」、及び「個体」は、本明細書では互換的に使用され、動物、特にヒトを意味する。ある特定の例では、個体は、本明細書の化合物又は組成物を投与することから利益を得る状態、疾患、障害、又は症状を更に特徴とする。

【0087】

本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される緩衝液」は、当業者に既知である標準的な薬学的緩衝液のうちのいずれかを意味する。

【0088】

本明細書で使用する場合、「リラキシン－２」又は「ＲＬＮ－２」は、哺乳動物種、特にヒトなどの任意の種から得られるか、又はそれに由来するリラキシンを意味し、ここで、天然型は、２つのペプチド鎖（例えば、Ａ鎖及びＢ鎖）が２つのジスルフィド結合を介して接続しており、Ａ鎖が単一の分子内ジスルフィド結合を更に有する、ヘテロ二量体ペプチドである。ヒトでは、ＲＬＮ－２プロセシングは、プレプロリラキシン（ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｐ０４０９０参照）で始まり、このプレプロリラキシンは、プロリラキシン（Ａ鎖、Ｂ鎖、及びＣペプチドを含む；天然ＲＬＮはＢ－Ｃ－Ａの構造を有数；配列番号９１参照；ＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｐ０４０９０も参照）にプロセシングされる。プロリラキシンは、Ｃペプチドが切断されてＲＬＮ－２に到達する更なるプロセシングを受ける（ＲＬＮ－２のＡ鎖については配列番号９２、ＲＮＬ－２のＢ鎖については配列番号９３を参照、またＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース受託番号Ｐ０４０９０を参照）。

【0089】

本明細書で使用する場合、「配列類似性」は、例えば、２つ以上の配列の全長又は比較ウィンドウにわたる一致など、生物学的化合物の２つ以上の核酸配列又はアミノ酸配列の定量的特性を意味する。配列類似性は、（１）同一性パーセント又は（２）類似性パーセントにより測定することができる。同一性パーセントは、２つの生物学的化合物間で同一の残基のパーセンテージを最短配列の長さで割ったものを測定し、一方、類似性パーセントは、同一性を測定し、加えて、評価に配列ギャップ及び残基類似性を含む。配列類似性を決定するための方法及びアルゴリズムは当該技術分野で周知であるため、本明細書で徹底的に説明する必要はない。同一のヌクレオチド又はアミノ酸位置の特定のパーセンテージは、少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれ以上である。

【0090】

本明細書で使用する場合、「治療すること（「ｔｒｅａｔｉｎｇ」又は「ｔｏ ｔｒｅａｔ」）」は、状態、疾患、障害、又は症状の進行又はその重症度を軽減する、抑制する、逆転させる、減速させる、又は停止させる目的で本明細書の化合物の投与が指示される状態、疾患、障害、又は症状を有する個体を管理又は看護することを意味する。治療することには、本明細書の化合物又は本明細書の化合物を含む組成物を個体に投与して、症状若しくは合併症の発症を予防する、症状若しくは合併症を緩和する、又は状態、疾患、障害、若しくは症状を排除することが含まれる。治療することには、本明細書の化合物又は本明細書の化合物を含む組成物を個体に投与して、例えば、血管新生の増加、血管コンプライアンスの増加、心血流の増加、肝血流の増加、肺血流の増加、腎血液の増加、糸球体濾過率の増加、血圧の低下、炎症の減少（又は予防）、及び／又は心臓、腎臓、肝臓、若しくは肺の線維症の減少（又は予防）などを生じさせることが含まれる。治療される個体は、哺乳動物、特にヒトである。

【0091】

本明細書で使用する場合、「ＶＨＨ」又は「ＶＨＨ部分」は、単一ドメイン抗体の形態、特に、サイズが約１５ｋＤａであってもよい、重鎖のみ抗体（ＨｃＡｂ）の単一の単量体可変領域を含む抗体断片を意味する。操作／修飾されたＶＨＨベースの化合物を薬物動態エンハンサーとして使用して、生物治療薬の作用期間を延長し、かつ／又はそのｔ１／２を改善できることが、ここに見出された。本ＶＨＨベースの化合物は血清アルブミンに結合するが、このＶＨＨベースの化合物は、ＩｇＧ（Ｆｃドメインを含む）、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）、又は他の長期持続性血清タンパク質に結合するために使用することができる。したがって、本ＶＨＨベースの化合物は、ペプチド又はタンパク質などの化合物、又は更には、例えば小分子などの他の分子のｔ１／２を改善するために使用することができる。

【0092】

ある特定の略語を次のように定義する。「ＡＣＲ」は尿中アルブミン／尿中クレアチニン比を指し、「ＡＵＣ」は曲線下面積を指し、「ｃＡＭＰ」は環状アデノシン一リン酸を指し、「ＣＭＶ」はサイトメガロウイルスを指し、「ＤＮＡ」はデオキシリボ核酸を指し、「ＥＣＤ」は外部ドメインを指し、「ＥＤＣ」は１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を指し、「ＥＴＡ」はエタノールアミンを指し、「ＧＳ」はグルタミンシンテターゼを指し、「ＨＣ」は重鎖を指し、「ＨＩＣ」は疎水性相互作用クロマトグラフィーを指し、「ｈｒ」は時間（単数又は複数）を指し、「ＩＶ」は静脈内を指し、「ｋＤａ」はキロダルトンを指し、「ＬＣ」は軽鎖を指し、「ＬＣ／ＭＳ」は液体クロマトグラフィー質量分析を指し、「ｍｉｎ」は分（単数又は複数）を指し、「ＭＳ」は質量分析を指し、「ＭＳＸ」はメチオニンスルホキシミンを指し、「ＮＨＳ」はＮ－ヒドロキシスクシンイミドを指し、「ＯｔＢｕ」はＯ－ｔｅｒｔ－ブチルを指し、「ＰＥＩ」はポリエチレンイミンを指し、「ＲＰ－ＨＰＬＣ」は逆相高速液体クロマトグラフィーを指し、「ｓｅｃ」は秒（単数又は複数）を指し、「ＮａＯＡｃ」は酢酸ナトリウムを指し、「ｒｃｆ」は相対遠心力を意味し、「ＲＴ」は室温を意味し、「ＲＵ」は共鳴単位を意味し、「ＳＱ」は皮下を指し、「ＳＥＣ」はサイズ排除クロマトグラフィーを指し、「ＳＥＭ」は平均の標準誤差を指し、「ＳＰＲ」は表面プラズモン共鳴を意味し、「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸を指し、「Ｔｒｔ」はトリチルを指す。

【0093】

半減期延長物質として作用するＶＨＨベースの化合物及びそれを含む融合体又は抱合化合物
端的には、本明細書の化合物は、以下の構造のうちの１つを有するＮ末端からＣ末端へのアミノ酸配列を含むことができ、
Ｍ－Ｘ_１、
Ｘ_１－Ｍ、
Ｍ－Ｘ_２、
Ｘ_２－Ｍ、
Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_１、
Ｍ－Ｌ_２－Ｘ_１、
Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_２、
Ｍ－Ｌ_２－Ｘ_２、
Ｘ_１－Ｌ_１－Ｍ、
Ｘ_１－Ｌ_２－Ｍ、
Ｘ_２－Ｌ_１－Ｍ、
Ｘ_２－Ｌ_２－Ｍ、
Ｘ_１－Ｍ－Ｘ_２、
Ｘ_２－Ｍ－Ｘ_１、
Ｘ_１－Ｌ_１－Ｍ－Ｘ_２、
Ｘ_２－Ｌ_１－Ｍ－Ｘ_１、
Ｘ_１－Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_２、
Ｘ_２－Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_１、
Ｘ_１－Ｌ_１－Ｍ－Ｌ_２－Ｘ_２、
Ｘ_２－Ｌ_１－Ｍ－Ｌ_２－Ｘ_１、
Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_１－Ｌ_２－Ｘ_２、
Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_２－Ｌ_２－Ｘ_１、
Ｘ_１－Ｌ_２－Ｘ_２－Ｌ_１－Ｍ、
Ｘ_２－Ｌ_２－Ｘ_１－Ｌ_１－Ｍ、又は
Ｍ－Ｌ_２－Ｘ_２と組み合わさった（すなわち、非共有的に会合した）Ｍ－Ｌ_１－Ｘ_１
式中、Ｍは、ｔ１／２延長部分として作用し、配列番号１～３７及び１２４～１２６から選択されるアミノ酸配列を有するか、又は前記配列と少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有するＶＨＨベースの化合物であり、Ｌ_１（存在する場合）は、第１のリンカーであり、Ｌ_２（存在する場合）は、第２のリンカーであり、Ｘ_１（存在する場合）は、生物治療用のタンパク質、ペプチド、又はオリゴマーであり、Ｘ_２（存在する場合）は、同様に、Ｘ_１と同じであっても異なっていてもよい生物治療用のタンパク質、ペプチド、又はオリゴマーである（例えば、生物治療薬がホモ二量体である場合又は生物治療薬がヘテロ二量体である場合は、Ｘ_１は一方の鎖（α鎖）であることができ、Ｘ_２は、その他方の鎖（β鎖）であることができる）。Ｘ_１とＸ_２とはまた、互いに完全に異なることもできる。

【0094】

いくつかの例では、Ｌ_１は、（ＧＧＧＧＱ）_ｎ（配列番号３８）、（ＧＧＧＱ）_ｎ（配列番号３９）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号４０）、（ＰＧＰＱ）_ｎ（配列番号４０）、（ＰＧＰＡ）_ｎ（配列番号４２）、ＧＧＧＧ（ＡＰ）_ｎＧＧＧＧ（配列番号４３）、（ＧＧＥ）_ｎ（配列番号４４）、（ＧＧＧＧＥ）_ｎ（配列番号４５）、（ＧＧＫ）_ｎ（配列番号４６）、（ＧＧＧＧＫ）_ｎ（配列番号４７）、ＧＧＧＧ（ＥＰ）_ｎＧＧＧＧ（配列番号４８）、ＧＧＧＧ（ＫＰ）_ｎＧＧＧＧ（配列番号４９）、（ＰＧＰＥ）_ｎ（配列番号５０）、又は（ＰＧＰＫ）_ｎ（配列番号５１）のアミノ酸配列を有することができ、ここでｎは、１～１５、特に約５～約１０であることもできる。他の例では、Ｌ_１は、配列番号５２～６３のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し得る。更に他の例では、Ｌ_１は、Ｌ_１が配列番号５２～６３のうちのいずれか１つに対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有するように、１つ以上の付加、欠失、挿入、又は置換を有し得る。

【0095】

いくつかの例では、Ｌ_２は、配列番号６４～６５のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有し得る。更に他の例では、Ｌ_２は、Ｌ_２が配列番号６４～６５のうちのいずれか１つに対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有するアミノ酸配列を有するように、１つ以上の付加、欠失、挿入、又は置換を有し得る。

【0096】

更に他の例では、Ｌ_１又はＬ_２は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、特にマレイミド－（ＰＥＧ）_１２などのポリマーであることができる。

【0097】

まとめると、例示的な融合体は以下のとおりである。

【0098】

ＣＮＴＦ、（Ｇ_４Ｑ）_５リンカー（斜体）、及びｔ１／２延長部分として作用するＶＨＨベースの化合物（下線）を含むＶＨＨ－ＣＮＴＦ融合体である化合物１は、以下のアミノ酸配列を有する。

【化1】

【0099】

ｔ１／２延長部分として作用するＶＨＨベースの化合物（下線）、（Ｇ_４Ｑ）_５リンカー（斜体）、及びＣＮＴＦを含むＶＨＨ－ＣＮＴＦ融合体である化合物２は、以下のアミノ酸配列を有する。

【化2】

【0100】

ＮＲＧ１、（Ｇ_４Ｑ）_５リンカー（斜体）、及びｔ１／２延長部分として作用するＶＨＨベースの化合物（下線）を含むＶＨＨ－ＮＲＧ１融合体である化合物３は、以下のアミノ酸配列を有する。

【化3】

【0101】

ｔ１／２延長部分として作用するＶＨＨベースの化合物（下線）、（Ｇ_４Ｑ）_５リンカー（斜体）、及びＮＲＧ１を含むＶＨＨ－ＮＲＧ１融合体である化合物４は、以下のアミノ酸配列を有する。

【化4】

【0102】

ｔ１／２延長部分として作用するＶＨＨベースの化合物（下線）、（Ｇ_４Ｑ）_５リンカー（斜体）、及びＧＤＦ１５を含むＶＨＨ－ＧＤＦ１５融合体である化合物５は、以下のアミノ酸配列を有する。

【化5】

【0103】

ＩＬ－２、（Ｇ_４Ｑ）_５リンカー（斜体）、及びｔ１／２延長部分として作用するＶＨＨベースの化合物（下線）を含むＶＨＨ－ＩＬ－２融合体である化合物６は、以下のアミノ酸配列を有する。

【化6】

【0104】

ｔ１／２延長部分として作用するＶＨＨベースの化合物（下線）、（Ｇ_４Ｑ）_５リンカー（斜体）、及びＩＬ－２を含むＶＨＨ－ＩＬ－２融合体である化合物７は、以下のアミノ酸配列を有する。

【化7】

【0105】

ＧＬＰ－１、（Ｇ_４Ｑ）_５リンカー（斜体）、及びｔ１／２延長部分として作用するＶＨＨベースの化合物（下線）を含むＶＨＨ－ＧＬＰ－１融合体である化合物８は、以下のアミノ酸配列を有する。

【化8】

【0106】

ＨＣ、（Ｇ_４Ｑ）_５リンカー（斜体）、及びｔ１／２延長部分として作用するＶＨＨベースの化合物（下線）を含むＶＨＨ－Ｆａｂ融合体である化合物９は、以下のアミノ酸配列を有する。

【化9】

【0107】

化合物９は、以下のアミノ酸配列を有するＬＣを更に含む。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＲＹＮＲＡＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１０９）

【0108】

ＬＣ、（Ｇ_４Ｑ）_５リンカー（斜体）、及びｔ１／２延長部分として作用するＶＨＨベースの化合物（下線）を含むＶＨＨ－Ｆａｂ融合体である化合物１０は、以下のアミノ酸配列を有する。

【化10】

【0109】

化合物１０は、以下のアミノ酸配列を有するＨＣを更に含む。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＴＷＮＳＧＨＩＤＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＶＳＹＬＳＴＡＳＳＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤ（配列番号１１０）

【0110】

ｔ１／２延長部分として作用するＶＨＨベースの化合物（下線）、（Ｇ_４Ｑ）_５リンカー（斜体）、及びＨＣを含むＶＨＨ－Ｆａｂ融合体である化合物１１は、以下のアミノ酸配列を有する。

【化11】

【0111】

化合物１１は、以下のアミノ酸配列を有するＬＣを更に含む。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＲＹＮＲＡＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１１３）

【0112】

ｔ１／２延長部分として作用するＶＨＨベースの化合物（下線）、（Ｇ_４Ｑ）_５リンカー（斜体）、及びＬＣを含むＶＨＨ－Ｆａｂ融合体である化合物１２は、以下のアミノ酸配列を有する。

【化12】

【0113】

化合物１２は、以下のアミノ酸配列を有するＨＣを更に含む。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＴＷＮＳＧＨＩＤＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＶＳＹＬＳＴＡＳＳＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤ（配列番号１１４）

【0114】

ＧＬＰ－１、（Ｇ_４Ｑ）_５リンカー（斜体）、ｔ１／２延長部分として作用するＶＨＨベースの化合物（下線）、及びＣ末端のＣｙｓを含むＶＨＨ－ＧＬＰ－１融合体である化合物１３は、以下のアミノ酸配列を有する。

【化13】

【0115】

ＧＬＰ－１、（Ｇ_４Ｑ）_５リンカー（斜体）、ｔ１／２延長部分として作用するＶＨＨベースの化合物（下線）、Ｃ末端のＣｙｓ、及びＣ末端からＮ末端への配向でマレイミド（ＰＥＧ）_１２リンカーを介して接続したＡＣＴＨを含むＶＨＨ－ＧＬＰ－１／ＡＣＴＨ融合体コンジュゲートである化合物１４は、以下のアミノ酸配列を有する。

【化14】

【0116】

ｔ１／２延長部分として作用するＶＨＨベースの化合物（下線）、Ｃ末端のＣｙｓ、及びＣ末端からＮ末端への配向でマレイミド（ＰＥＧ）_１２リンカーを介して接続したＡＣＴＨを含むＶＨＨ－ＡＣＴＨ融合体コンジュゲートである化合物１５は、以下のアミノ酸配列を有する。

【化15】

【0117】

医薬組成物及びキット
本明細書の化合物を（すなわち、例えば上記の化合物１～１５など、ＶＨＨベースの融合体又はＶＨＨベースのコンジュゲート）は、非経口経路によって（例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、又は経皮的に）投与することができる医薬組成物として製剤化することができる。そのような医薬組成物及びそれを調製するための技法は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，「Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」（Ｄ．Ｂ．Ｔｒｏｙ ｅｄ．，２１^ｓｔ Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００６）を参照されたい。特定の場合、本組成物は、ＳＱ又はＩＶで投与される。しかしながら、代替的に、本組成物は、例えば、錠剤又は経口投与のための他の固体；徐放性カプセル；及びクリーム、ローション、吸入剤などを含む現在使用されている任意のその他の形態などの他の薬学的に許容される経路のための形態で製剤化され得る。

【0118】

上述のように、それらのインビボ適合性及び有効性を改善するため、本明細書のＶＨＨベースの融合体又はＶＨＨベースのコンジュゲートは、任意の数の無機及び有機酸／塩基と反応して、薬学的に許容される酸／塩基付加塩を形成し得る。薬学的に許容される塩及びそれらを調製するための一般的な技法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｓｔａｈｌ ｅｔ ａｌ．，「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ」（２^ｎｄ Ｒｅｖｉｓｅｄ Ｅｄ．Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２０１１））。本明細書における使用のための薬学的に許容される塩としては、ナトリウム塩、トリフルオロ酢酸塩、塩酸塩、及び／又は酢酸塩が挙げられる。

【0119】

本明細書の化合物は、医師によって投与されても、注射を使用して自己投与されてもよい。ゲージサイズ及び注入量は、当業者によって容易に決定され得ることが理解される。しかしながら、注入量は、約２ｍＬ以下、又は更には約１ｍＬ以下であり、ニードルゲージは、約２７Ｇ以上、又は更には約２９Ｇ以上であり得る。

【0120】

本開示はまた、本明細書の化合物、又はその薬学的に許容される塩を合成するために有用な新規な中間体及び方法を提供し、したがってこれらを包含する。本中間体及び化合物は、当該技術分野で周知の様々な技法によって調製することができる。例えば、組換え合成を使用する方法を以下の実施例で例解する。記載される技法の各々についての具体的なステップは、本化合物を調製するため、様々なように組み合わせることができる。試薬及び出発材料は、当業者であれば容易に入手可能である。

【0121】

本明細書の化合物は、概して、広い投与量範囲にわたって有効である。本化合物又はそれを含む医薬組成物の例示的な用量は、個体１キログラム（ｋｇ）当たりのミリグラム（ｍｇ）又はマイクログラム（μｇ）、ナノグラム（ｎｇ）、又はピコグラム（ｐｇ）量であり得る。このようにして、１日用量は約１μｇ～約１００ｍｇとなり得る。

【0122】

ここで、医薬組成物中の本化合物の有効量は、約０．２５ｍｇ～約５．０ｍｇの用量であり得る。しかしながら、当業者であれば、いくつかの例では、有効量（すなわち、用量／投薬量）が前述の範囲の下限を下回っても十分すぎる可能性があること、一方で他の事例では、有効量がより多くの用量となってもよく、許容できる副作用を伴って用いられてもよいことを理解する。

【0123】

本明細書の化合物に加えて、本医薬組成物は、例えば、特定の状態、疾患、及び障害（例えば、心臓血管、神経、免疫、代謝、腫瘍、精神、肺、及び／又は腎臓の状態、疾患、又は障害）の標準治療として典型的に使用される治療薬などの少なくとも１つの追加の治療薬も含むことができる。

【0124】

このように、医薬組成物は、有効量の１つ以上の本明細書の化合物と、薬学的に許容される担体と、任意選択で少なくとも１つの追加の治療薬とを含み得る。例えば、本医薬組成物は、有効量の配列番号１００と薬学的に許容される担体、有効量の配列番号１０１の化合物と薬学的に許容される担体、有効量の配列番号１０２の化合物と薬学的に許容される担体、有効量の配列番号１０３の化合物と薬学的に許容される担体、有効量の配列番号１０４の化合物と薬学的に許容される担体、有効量の配列番号１０５の化合物と薬学的に許容される担体、有効量の配列番号１０６の化合物と薬学的に許容される担体、有効量の配列番号１０７の化合物と薬学的に許容される担体、有効量の配列番号１０８及び１０９の化合物と薬学的に許容される担体、有効量の配列番号１１０及び１１１の化合物と薬学的に許容される担体、有効量の配列番号１１２及び１１３の化合物と薬学的に許容される担体、有効量の配列番号１１４及び１１５の化合物と薬学的に許容される担体、有効量の配列番号１１６の化合物と薬学的に許容される担体、有効量の配列番号１１７の化合物及び薬学的に許容される担体、並びに有効量の配列番号１１８の化合物と薬学的に許容される担体と、を含み得る。

【0125】

あるいは、本明細書の化合物は、キットの一部として提供され得る。いくつかの例では、キットは、少なくとも１つの化合物（及び任意選択で少なくとも１つの追加の治療薬）を個体に投与するためのデバイスを含む。ある特定の例では、キットは、本明細書の少なくとも１つの化合物（及び任意選択で少なくとも１つの追加の治療薬）を投与するための注射器及び針を含む。特定の場合には、本化合物（及び任意選択で少なくとも１つの追加の治療薬）は、注射器内の水溶液中に予め製剤化される。

【0126】

半減期延長物質として作用するＶＨＨベースの化合物又はその融合体及びコンジュゲートを作製及び使用する方法
本明細書の化合物は、当該技術分野で既知の任意の数の標準的な組換えＤＮＡ法又は標準的な化学ペプチド合成法を介して作製することができる。組換えＤＮＡ法に関しては、標準的な組換え技法を使用して、化合物（すなわち、融合ペプチド又は融合コンジュゲート）のアミノ酸配列をコードする核酸配列を有するポリヌクレオチドを構築し、そのポリヌクレオチドを組換え発現ベクターに組み込み、ベクターを、細菌、酵母、及び哺乳動物細胞などの宿主細胞に導入して、本化合物を産生させることができる。例えば、Ｇｒｅｅｎ ＆ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，４^ｔｈ ｅｄ．２０１２）を参照されたい。

【0127】

組換えＤＮＡ法に関して、本明細書の化合物は、組換えＤＮＡ技術を使用してタンパク質又は前駆体タンパク質分子を産生させることにより調製することができる。ｃＤＮＡ及び合成ＤＮＡを含むＤＮＡは、二本鎖であっても一本鎖であってもよく、本明細書の化合物をコードするその中のコード配列は、遺伝暗号の冗長性又は縮退の結果として変化してもよい。端的には、本明細書の化合物をコードするＤＮＡ配列を宿主細胞に導入して、本化合物又はその前駆体を生成する。宿主細胞は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉのＫ１２株又はＢ株などの細菌細胞、酵母細胞などの真菌細胞、又はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの哺乳動物細胞であり得る。

【0128】

本発明の化合物又はその前駆体を産生するために、適切な宿主細胞を、発現ベクターなどの発現系で一過性又は安定にトランスフェクト又は形質転換する。発現ベクターは、典型的には、エピソーム、又は宿主染色体ＤＮＡの一体化した部分のいずれかとして、宿主生物中で複製可能である。一般に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換された細胞の検出を可能にするために、選択マーカー、例えば、テトラサイクリン、ネオマイシン、Ｇ４１８、及びジヒドロ葉酸レダクターゼを含有する。

【0129】

本発明の化合物を調製するために、本明細書に記載されるステップの各々のための特定の生合成ステップ又は合成ステップを使用してもよいし、使用しなくてもよいし、異なる方法で組み合わせてもよい。

【0130】

化学ペプチド合成法に関しては、標準的な手動又は自動の固相合成手順を使用することができる。例えば、自動ペプチド合成装置は、例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）及びＰｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．（Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）から市販されている。固相合成用の試薬は、商用供給業者から容易に入手可能である。干渉基のブロック、反応中のアミノ酸の保護、カップリング、脱保護、及び未反応のアミノ酸のキャッピングのために、固相合成装置を製造業者の指示に従って使用することができる。

【0131】

本明細書の化合物の１つの使用は、心臓血管、神経、免疫、代謝、腫瘍、精神、肺、及び／又は腎臓の状態、疾患、又は障害を治療することにある。

【0132】

本方法には、本明細書に記載のステップが含まれてもよく、これらは、必ずではないが記載の順序で実行されてもよい。しかしながら、他の順序も考えられる。更に、個々の又は複数のステップは、時間的に並行して及び／若しくは重複して、並びに／又は個別に、又は複数回繰り返されるステップで実行されてもよい。更に、本方法には、追加の不特定のステップが含まれてもよい。

【0133】

したがって、そのような方法には、例えば、神経の状態、疾患、若しくは障害を有するか、又はそれに罹患しやすい個人を選択することが含まれ得る。あるいは、本方法には、代謝の状態、疾患、若しくは障害を有するか、又はそれに罹患しやすい個人を選択することが含まれ得る。あるいは、本方法には、心臓血管の状態、疾患、若しくは障害を有するか、又はそれに罹患しやすい個人を選択することが含まれ得る。あるいは、本方法には、腫瘍の状態、疾患、若しくは障害を有するか、又はそれに罹患しやすい個人を選択することが含まれ得る。あるいは、本方法には、精神の状態、疾患、若しくは障害を有するか、又はそれに罹患しやすい個人を選択することが含まれ得る。あるいは、本方法には、肺の状態、疾患、若しくは障害を有するか、又はそれに罹患しやすい個人を選択することが含まれ得る。あるいは、本方法には、腎臓の状態、疾患、若しくは障害を有するか、又はそれに罹患しやすい個人を選択することが含まれ得る。あるいは、本方法には、自己免疫の状態、疾患、若しくは障害を有するか、又はそれに罹患しやすい個人を選択することが含まれ得る。

【0134】

本方法にはまた、本明細書に記載されるような医薬組成物の形態であってもよい、本明細書の少なくとも１つの化合物の有効量を個体に投与することが含まれ得る。いくつかの例では、本化合物／医薬組成物は、追加の治療薬を含み得る。

【0135】

本化合物及び任意選択の追加の治療薬の濃度／用量／投薬は、本明細書の他箇所で考察されている。

【0136】

投与経路に関して、本化合物又はそれを含む医薬組成物は、例えば、経口、注射（すなわち、動脈内、静脈内、腹腔内、脳内、脳室内、筋肉内、眼内、門脈内、又は病変内）、徐放性系、又は埋め込みデバイスなどによる既知の方法に従って投与され得る。ある特定の場合には、本化合物又はそれを含む医薬組成物は、ボーラス注射によって又は連続的にＳＱ投与され得る。

【0137】

投薬頻度に関して、本化合物又はそれを含む医薬組成物は、毎日、隔日、週３回、週２回、週１回（すなわち、毎週）、隔週（すなわち、１週間おきに）、又は毎月投与され得る。ある特定の場合には、本化合物又はそれを含む医薬組成物は、ＳＱで１日おきに、ＳＱで週３回、ＳＱで週２回、ＳＱで週１回、ＳＱで１週間おきに、又はＳＱで毎月投与される。特定の場合には、本化合物又はそれを含む医薬組成物は、週１回ＳＱ投与（ＱＷ）される。

【0138】

あるいは、またＩＶ投与される場合、本化合物又はそれを含む医薬組成物は、ＩＶで隔日に、ＩＶで週３回、ＩＶで週２回、ＩＶで週１回、ＩＶで１週間おきに、又はＩＶで毎月投与され得る。特定の場合には、本化合物又はそれを含む医薬組成物は、週１回ＩＶ投与（ＩＷ）される。

【0139】

本化合物又はそれを含む医薬組成物が有効量の少なくとも１つの追加の治療薬と組み合わせて投与される場合に関して、この追加の治療薬は、本化合物又はそれを含む医薬組成物と同時に、別々に、又は連続して投与され得る。

【0140】

更に、追加の治療薬は、本化合物又はそれを含む医薬組成物と同じ頻度で（すなわち、隔日、週２回、又は更には毎週）投与され得る。あるいは、追加の治療薬は、本化合物又はそれを含む医薬組成物とは異なる頻度で投与され得る。他の場合には、追加の治療薬は、ＳＱで投与され得る。他の場合には、追加の治療薬は、ＩＶで投与され得る。更に他の場合には、追加の治療薬は、経口で投与され得る。

【0141】

これらの方法は、食餌療法及び運動と組み合わせてもよく、かつ／又は上で考察したもの以外の追加の治療薬と組み合わせてもよいことが更に企図される。

【実施例】

【0142】

以下の非限定的な実施例は、限定ではなく例示の目的で提供される。

【0143】

ポリペプチドの発現、精製、及び抱合
実施例１：ＶＨＨベースの融合体１の組換え発現及び精製
実施例１は、以下のアミノ酸配列を有するＣＮＴＦ－ＶＨＨ融合体である。
ＭＡＦＴＥＨＳＰＬＴＰＨＲＲＤＬＡＳＲＳＩＷＬＡＲＫＩＲＳＤＬＴＡＬＴＥＳＹＶＫＨＱＧＬＮＫＮＩＮＬＤＳＡＤＧＭＰＶＡＳＴＤＲＷＳＥＬＴＥＡＥＲＬＱＥＮＬＱＡＹＲＴＦＨＶＬＬＡＲＬＬＥＤＱＱＶＨＦＴＰＴＥＧＤＦＨＱＡＩＨＴＬＬＬＱＶＡＡＦＡＹＱＩＥＥＬＭＩＬＬＥＹＫＩＰＲＮＥＡＤＧＭＰＩＮＶＧＤＧＧＬＦＥＫＫＬＷＧＬＫＶＬＱＥＬＳＱＷＴＶＲＳＩＨＤＬＲＦＩＳＳＨＱＴＧＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号１００）

【0144】

ここでは、配列番号１００のＶＨＨ融合体を、ＣＨＯＫ１細胞誘導体を使用して哺乳動物細胞発現系において生成する。配列番号１００をコードするｃＤＮＡ配列を、ＧＳを含む発現プラスミド骨格（ｐＥＥ１２．４ベースのプラスミド）にサブクローニングする。ｃＤＮＡ配列を、シグナルペプチド配列ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ（配列番号６６）のコード配列とインフレームで融合させて、組織培養培地へのＶＨＨ融合体の分泌を増強する。発現をウイルス性ＣＭＶプロモーターにより駆動する。

【0145】

一過性トランスフェクションを介してＶＨＨ融合体を生成するために、ＰＥＩベースの方法を使用して、ＣＨＯＫ１細胞を組換え発現プラスミドでトランスフェクトする。端的には、密度４×１０^６細胞／ｍＬの適切な体積のＣＨＯＫ１の懸濁細胞を振盪フラスコに移し、ＰＥＩ及び組換えプラスミドＤＮＡの両方を細胞に加える。細胞を浮遊培養において３２℃で６日間インキュベートする。インキュベーション期間の終了時に、細胞を低速遠心分離によって除去し、ＶＨＨ融合体を馴化培地から精製する。

【0146】

あるいは、またＶＨＨ融合体を安定なトランスフェクションを介して生成するために、ＣＨＯＫ１細胞を、エレクトロポレーション及び適切な量の組換え発現プラスミドを使用して安定にトランスフェクトし、トランスフェクトされた細胞を適正な細胞密度で浮遊培養中に維持する。トランスフェクトされた細胞の選択を、２５μＭのＭＳＸ含有無血清培地中で増殖させることにより達成し、約３７℃及び約６％ＣＯ_２でインキュベートする。

【0147】

ＣＨＯ細胞から培地に分泌されたＶＨＨ融合体を、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、続いてイオン交換、疎水性相互作用、又はサイズ排除クロマトグラフィーによって精製する。具体的には、採取した培地からのＶＨＨ融合体を、Ｍａｂ Ｓｅｌｅｃｔタンパク質Ａ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に捕捉する。次に、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ；ｐＨ７．４）などの泳動用緩衝液又はトリスを含む泳動用緩衝液で樹脂を簡単に洗浄して、非特異的に結合した物質を除去する。ＶＨＨ融合体を、ｐＨ３の１０ｍＭクエン酸などの低ｐＨ溶液で樹脂から溶出させる。ＶＨＨ融合体を含有する画分を低ｐＨでプールし、可能性のあるウイルスを不活化することができる。ｐＨ８．０の１Ｍトリスなどの塩基を加えることで、ｐＨを中性化してもよい。ＶＨＨ融合体を、Ｐｏｒｏｓ ５０ ＨＳ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）などの樹脂を使用するイオン交換クロマトグラフィーにより更に精製してもよい。１５カラム体積にわたるｐＨ５．０の２０ｍＭ ＮａＯＡｃ中での０ｍＭから５００ｍＭへのＮａＣｌ勾配を使用して、ＶＨＨ融合体をカラムから溶出させる。

【0148】

ＶＨＨ融合体を、Ｃａｐｔｏ Ｐｈｅｎｙｌ ＩｍｐＲｅｓ ＨＩＣ Ｃｏｌｕｍｎ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用することで、疎水性相互作用クロマトグラフィーにより更に精製してもよい。精製は、カラム充填溶液を約０．５Ｍ硫酸ナトリウムに調整し、ｐＨ８の２０ｍＭトリス溶液中の硫酸ナトリウム０．５Ｍから０Ｍへの１０カラム体積（ＣＶ）勾配を使用して溶出させることにより行う。ＨＩＣの後、ＶＨＨ融合体を、ｐＨ７．４のＰＢＳ中又はｐＨ６．０の２０ｍＭヒスチジン、５０ｍＭ ＮａＣｌ中でのアイソクラティック溶出を用いて、濃縮されたＣａｐｔｏ Ｐｈｅｎｙｌ ＩｍｐＲｅｓプールをＳｕｐｅｒｄｅｘ２００又はＳｕｐｅｒｄｅｘ７５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にローディングして、ＳＥＣにより、なお更に精製してもよい。

【0149】

精製されたＶＨＨ融合体を、Ｐｌａｎｏｖａ ２０Ｎ（Ａｓａｈｉ Ｋａｓｅｉ Ｍｅｄｉｃａｌ）などのウイルス保持フィルターに通した後、再生セルロース膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）上の接線流限外濾過を使用して、ｐＨ６の２０ｍＭヒスチジン、２０ｍＭ ＮａＣｌに濃縮／透析濾過する。

【0150】

したがって、ＶＨＨ融合体は、この様式で、又は当業者によって容易に決定される類似の様式で、調製される。

【0151】

実施例２：ＶＨＨベースの融合体２の組換え発現及び精製
実施例２は、以下のアミノ酸配列を有するＶＨＨ－ＣＮＴＦ融合体である。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＭＡＦＴＥＨＳＰＬＴＰＨＲＲＤＬＡＳＲＳＩＷＬＡＲＫＩＲＳＤＬＴＡＬＴＥＳＹＶＫＨＱＧＬＮＫＮＩＮＬＤＳＡＤＧＭＰＶＡＳＴＤＲＷＳＥＬＴＥＡＥＲＬＱＥＮＬＱＡＹＲＴＦＨＶＬＬＡＲＬＬＥＤＱＱＶＨＦＴＰＴＥＧＤＦＨＱＡＩＨＴＬＬＬＱＶＡＡＦＡＹＱＩＥＥＬＭＩＬＬＥＹＫＩＰＲＮＥＡＤＧＭＰＩＮＶＧＤＧＧＬＦＥＫＫＬＷＧＬＫＶＬＱＥＬＳＱＷＴＶＲＳＩＨＤＬＲＦＩＳＳＨＱＴＧ（配列番号１０１）

【0152】

ここでは、配列番号１０１のＶＨＨ融合体を、配列番号１０１をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。

【0153】

実施例３：ＶＨＨベースの融合体３の組換え発現及び精製
実施例３は、以下のアミノ酸配列を有するＮＲＧ１－ＶＨＨ融合体である。
ＳＨＬＶＫＣＡＥＫＥＫＴＦＣＶＮＧＧＥＣＦＭＶＫＤＬＳＮＰＳＲＹＬＣＫＣＰＮＥＦＴＧＤＲＣＱＮＹＶＭＡＳＦＹＫＨＬＧＩＥＦＭＥＡＥＥＬＹＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号１０２）

【0154】

ここでは、配列番号１０２のＶＨＨ融合体を、配列番号１０２をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。

【0155】

実施例４：ＶＨＨベースの融合体４の組換え発現及び精製
実施例４は、以下のアミノ酸配列を有するＶＨＨ－ＮＲＧ１融合体である。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＳＨＬＶＫＣＡＥＫＥＫＴＦＣＶＮＧＧＥＣＦＭＶＫＤＬＳＮＰＳＲＹＬＣＫＣＰＮＥＦＴＧＤＲＣＱＮＹＶＭＡＳＦＹＫＨＬＧＩＥＦＭＥＡＥＥＬＹＱ（配列番号１０３）

【0156】

ここでは、配列番号１０３のＶＨＨ融合体を、配列番号１０３をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。

【0157】

実施例５：ＶＨＨベースの融合体５の組換え発現及び精製
実施例５は、以下のアミノ酸配列を有するＶＨＨ－ＧＤＦ１５融合体である。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＭＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＭＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ（配列番号１０４）

【0158】

ここでは、配列番号１０４のＶＨＨ融合体を、配列番号１０４をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。

【0159】

実施例６：ＶＨＨベースの融合体６の組換え発現及び精製
実施例６は、以下のアミノ酸配列を有するＩＬ－２－ＶＨＨ融合体である。
ＡＰＱＳＳＳＴＱＱＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＲＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号１０５）

【0160】

ここでは、配列番号１０５のＶＨＨ融合体を、配列番号１０５をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。

【0161】

実施例７：ＶＨＨベースの融合体７の組換え発現及び精製
実施例７は、以下のアミノ酸配列を有するＶＨＨ－ＩＬ－２融合体である。
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＡＰＱＳＳＳＴＱＱＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＲＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ配列番号１０６）

【0162】

ここでは、配列番号１０６のＶＨＨ融合体を、配列番号１０６をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。

【0163】

実施例８：ＶＨＨベースの融合体８の組換え発現及び精製
実施例８は、以下のアミノ酸配列を有するＧＬＰ－１－ＶＨＨ融合体である。
ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＧＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号１０７）

【0164】

ここでは、配列番号１０７のＶＨＨ融合体を、配列番号１０７をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。

【0165】

実施例９：ＶＨＨベースの融合体９の組換え発現及び精製
実施例９は、ＨＣ－ＶＨＨ及びＬＣを含むＦａｂ－ＶＨＨ融合体であり、ＨＣ－ＶＨＨアミノ酸配列は以下のとおりであり、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＴＷＮＳＧＨＩＤＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＶＳＹＬＳＴＡＳＳＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号１０８）

【0166】

ＬＣアミノ酸配列は以下のとおりである：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＲＹＮＲＡＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１０９）。

【0167】

ここでは、配列番号１０８及び１０９のＶＨＨ融合体を、配列番号１０８及び１０９をコードするｃＤＮＡ配列を２つの発現プラスミドにクローニングし、その後、両方のプラスミドの１：１のミックスをトランフェクションに使用することを除いて、本質的に実施例１について説明したように生成する。

【0168】

実施例１０：ＶＨＨベースの融合体１０の組換え発現及び精製
実施例１０は、ＨＣ及びＬＣ－ＶＨＨを含むＦａｂ－ＶＨＨ融合体であり、ＨＣアミノ酸配列は以下のとおりであり、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＴＷＮＳＧＨＩＤＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＶＳＹＬＳＴＡＳＳＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤ（配列１１０）

【0169】

ＬＣ－ＶＨＨアミノ酸配列は以下のとおりである：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＲＹＮＲＡＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ（配列番号１１１）。

【0170】

ここでは、配列番号１１０及び１１１のＶＨＨ融合類似体を、配列番号１１０及び１１１をコードするｃＤＮＡ配列を２つの発現プラスミドにクローニングし、その後、両方のプラスミドの１：１のミックスをトランフェクションに使用することを除いて、本質的に実施例１について説明したように生成する。

【0171】

実施例１１：ＶＨＨベースの融合体１１の組換え発現及び精製
実施例１１は、ＶＨＨ－ＨＣ及びＬＣを含むＦａｂ－ＶＨＨ融合体であり、ＶＨＨ－ＨＣアミノ酸配列は以下のとおりであり、
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＴＷＮＳＧＨＩＤＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＶＳＹＬＳＴＡＳＳＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤ（配列番号１１２）

【0172】

ＬＣアミノ酸配列は以下のとおりである：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＲＹＮＲＡＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１１３）。

【0173】

ここでは、配列番号１１２及び１１３のＶＨＨ融合体を、配列番号１１２及び１１３をコードするｃＤＮＡ配列を２つの発現プラスミドにクローニングし、その後、両方のプラスミドの１：１のミックスをトランフェクションに使用することを除いて、本質的に実施例１について説明したように生成する。

【0174】

実施例１２：ＶＨＨベースの融合体１２の組換え発現及び精製
実施例１２は、ＨＣ及びＶＨＨ－ＬＣを含むＶＨＨ－Ｆａｂであり、ＨＣアミノ酸配列は以下のとおりであり、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＴＷＮＳＧＨＩＤＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＶＳＹＬＳＴＡＳＳＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤ（配列番号１１４）

【0175】

ＶＨＨ－ＬＣアミノ酸配列は以下のとおりである：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＲＹＮＲＡＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１１５）。

【0176】

ここでは、配列番号１１４及び１１５のＶＨＨ融合類似体を、配列番号１１４及び１１５をコードするｃＤＮＡ配列を２つの発現プラスミドにクローニングし、その後、両方のプラスミドの１：１のミックスをトランフェクションに使用することを除いて、本質的に実施例１について説明したように生成する。

【0177】

実施例１３：対照Ｆａｂの組換え発現及び精製
実施例１３は、ＨＣ及びＬＣを含むＦａｂであり、ＨＣアミノ酸配列は以下のとおりであり、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＴＷＮＳＧＨＩＤＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＶＳＹＬＳＴＡＳＳＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤ（配列番号１２０）

【0178】

ＬＣアミノ酸配列は以下のとおりである：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＲＹＮＲＡＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１２１）。

【0179】

ここでは、配列番号１２０及び１２１のＦａｂを、配列番号１２０及び１２１をコードするｃＤＮＡ配列を２つの発現プラスミドにクローニングし、その後、両方のプラスミドの１：１のミックスをトランフェクションに使用することを除いて、本質的に実施例１について説明したように生成する。

【0180】

実施例１４：ＶＨＨベースの融合体１３の組換え発現及び精製
実施例１４は、以下のアミノ酸配列を有するＧＬＰ－１－ＶＨＨ融合体である。
ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＧＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＣ（配列番号１１６）

【0181】

ここでは、配列番号１１６のＶＨＨ融合体を、配列番号１１６をコードするｃＤＮＡ配列を発現プラスミド中で使用することを除いて本質的に実施例１について説明したように生成する。

【0182】

実施例１５：ＶＨＨベースのコンジュゲート１の産生
実施例１５は、以下の化学構造を有するＧＬＰ－１／ＡＣＴＨ－ＶＨＨコンジュゲートである：
ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＧＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＣ－マレイミド－（ＰＥＧ）_１２－ＡＣＴＨ（Ｃ末端からＮ末端への配向；配列番号１１７）。配列番号１１７のＶＨＨコンジュゲートは、以下のとおりに生成する。１ｍｇの実施例１４のＶＨＨ融合体（配列番号１１６）を、１０ｍｇ／ｍｇストック溶液をｐＨ７．２のＰＢＳで１０倍希釈することによって、１ｍｇ／ｍＬ（約５０μＭ）で調製する。ｐＨ７．２のＰＢＳ中の４当量のトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）を加え、４時間室温でインキュベートする。均質なモノマーへの還元が成功したことを、質量分析を介して確認する。

【0183】

反応混合物を、２ｍＬの７Ｋ ＭＷ Ｃｕｔｏｆｆ ＺＥＢＡ脱塩カラムを使用して脱塩する。１０００ｒｃｆで１分間回転させることによってカラム保存緩衝液を除去する。ｐＨ７．２の２ｍＬのＰＢＳを加え、１０００ｒｃｆで１分間回転させることによってカラムを洗浄する。反応混合物をＺＥＢＡカラムにロードし、１０００ｒｃｆで１分間回転させて清潔な１５ｍＬ円錐バイアルに入れることによって脱塩する。脱塩試料を、３Ｋ ＭＷ ｃｕｔｏｆｆ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ回転カラムを使用して約７００μＭ（約１００μＬ）に濃縮する。

【0184】

ＡＣＴＨ－（ＰＥＧ）_１２－マレイミド－ＮＨ_２（配列番号１１９）を、ｐＨ７．２のＰＢＳ中２０ｍｇ／ｍＬ（５．２ｍＭ）で調製する。２化学量論当量に相当する２０μＬのＡＣＴＨ－（ＰＥＧ）_１２－マレイミド－ＮＨ_２を、実施例１４のＶＨＨ融合体（配列番号１１６）の脱塩濃縮溶液に加える。すぐに白色の沈殿物が形成する。反応を１０分間継続させ、溶液を、溶液が透明になるまで０．１Ｍ ＨＣｌをゆっくりと加えることでｐＨを５．５に下げることにより可溶化する。抱合が成功したことを、質量分析’を介して確認する。

【0185】

所望の生成物を、ｐＨ７．２のＰＢＳのローディング緩衝液及びｐＨ３の２０ｍＭクエン酸塩の溶出緩衝液を有する５ｍＬ ＭａｂＳｅｌｅｃｔタンパク質Ａ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）カラムを使用するＡＫＴＡ精製システムで精製する。試料をカラムにロードし、未反応のＡＣＴＨ－（ＰＥＧ）_１２－マレイミド－ＮＨ_２のピークがカラムを通過するまでローディング緩衝液相を保持する。シグナルがベースラインに戻ったら、緩衝液をｐＨ３の２０ｍＭクエン酸塩に切り替えて、所望の生成物をカラムから溶出させる。溶出時に１ｍＬ画分を収集し、プールし、ｐＨ８のトリスＨＣｌを使用してｐＨを７に調整する。

【0186】

マレイミド環を開くため、０．１Ｍ ＮａＯＨを加えてｐＨを８に調整し、一晩室温で放置する。部分的な開環を完了させるために、ｐＨを８．５に調整し、更に２４時間室温でインキュベートする。開環の完了を質量分析によって確認し、０．１Ｎ ＨＣｌを加えて、約７．２への最終ｐＨ調整を行う。その後、実施例１５のＶＨＨコンジュゲートを４℃で保存する。

【0187】

実施例１６：ＶＨＨベースのコンジュゲート２の産生
実施例１６は、以下の化学構造を有するＡＣＴＨ－ＶＨＨ複合体である：
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＣ－マレイミド－（ＰＥＧ）_１２－（ＡＣＴＨ）（Ｃ末端からＮ末端への配向；配列番号１１８）。

【0188】

配列番号１１８のＶＨＨコンジュゲートは、以下のとおりに生成する。１ｍｇの対照ＶＨＨ（配列番号３７）を、１０ｍｇ／ｍｇストック溶液をｐＨ７．２のＰＢＳで１０倍希釈することによって、１ｍｇ／ｍＬ（約７０μＭ）で調製する。ｐＨ７．２のＰＢＳ中の４当量のＴＣＥＰを加え、４時間室温でインキュベートする。均質なモノマーへの還元が成功したことを、質量分析を介して確認する。

【0189】

反応混合物を、２ｍＬの７Ｋ ＭＷ Ｃｕｔｏｆｆ ＺＥＢＡ脱塩カラムを使用して脱塩する。１０００ｒｃｆで１分間回転させることによってカラム保存緩衝液を除去する。ｐＨ７．２の２ｍＬのＰＢＳを加え、１０００ｒｃｆで１分間回転させることによってカラムを洗浄する。反応混合物をＺＥＢＡカラムにロードし、１０００ｒｃｆで１分間回転させて清潔な１５ｍＬ円錐バイアルに入れることによって脱塩する。脱塩試料を、３Ｋ ＭＷ ｃｕｔｏｆｆ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ回転カラムを使用して約７００μＭ（約１００μＬ）に濃縮する。

【0190】

ＡＣＴＨ－（ＰＥＧ）_１２－マレイミド－ＮＨ_２（配列番号１１９）を調製し、実施例１５に記載のようにＶＨＨに抱合させた。

【0191】

インビトロ機能－アルブミン結合
実施例１７：ＶＨＨ部分のＳＰＲを介したアルブミン結合研究
ヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、及びウシの血清アルブミン（ＳＡ）への様々なＶＨＨ部分のインビトロ結合を、ＳＰＲによって決定する。特に、これらの種のＳＡへの本明細書のＶＨＨ部分の結合を以下表１において要約する。様々なＳＡへの配列番号３及び８～２８のＶＨＨ部分の結合を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器で行う。

【0192】

Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ ＣＭ５表面へのＳＡの固定化を、製造業者の指示（アミンカップリングキットＢＲ－１０００－５０）に従って実行する。端的には、センサチップ表面（フローセル１及び２）のカルボキシル基を、７５ｍｇ／ｍＬの１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及び１１．５ｍｇ／ｍＬのＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を含む混合物７０μＬを１０μＬ／分で注入することにより活性化する。ヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、及びウシのＳＡを、ｐＨ４．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ＢＲ－１００３－４９）で、１、１、３、１、１、１、及び１μｇ／ｍＬに希釈し、次に活性化したチップ表面（フローセル２、チャネル１～８）に１０μＬ／分で９０秒間注入した。ヒトのＳＡは、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ、カタログ番号Ａ８７６３）から入手する。カニクイザルのＳＡは、Ａｔｈｅｎｓ Ｒ＆Ｔ（Ａｔｈｅｎｓ，ＧＡ、カタログ番号１６－１６－０１１２０２－ＣＭ）から入手する。マウスのＳＡは、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ａ３５５９）から入手する。ラットのＳＡは、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ａ４５３８）から入手する。ブタのＳＡは、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ａ４４１４）から入手する。イヌのＳＡは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ（Ｎｏｖｉ，ＭＩ、カタログ番号ＤＳＡ－１２１３ ＮＣ０７３９１５３）から入手する。ウシのＳＡは、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ａ７０３０）から入手する。様々なＳＡを、平均およそ７７（５８～９８）ＲＵの表面密度を目標にして、カルボキシメチルデキストランでコーティングしたセンサチップＣＭ５に遊離アミンを介して共有結合により固定化する。表面（フローセル１及び２）上の過剰な反応性基は、ｐＨ８．５の７０μＬの１Ｍエタノールアミン塩酸塩－ＮａＯＨを１０μＬ／分で注入することによって非活性化する。

【0193】

ＶＨＨ部分を、ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．６、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、及び０．０５％ポリソルベート２０）で３００ｎＭの濃度に希釈する。１５０μＬの試料を固定化ＳＡ表面全体に個別に連続して注入し、６００秒間、５０μＬ／分の流速で、２５℃で解離させる。ｐＨ１．５の１０ｍＭグリシン－ＨＣｌ（ＢＲ－１００３－５４）を５０μＬ／分で１００秒間注入して、表面を再生する。得られたセンサグラムを、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ Ｉｎｓｉｇｈｔ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（バージョン２．０．１５．１２９３３）を使用して分析し、解離速度（ｋｄ）を計算する。

【表1】

【0194】

実施例１８：ＳＰＲを介したＶＨＨベースの融合アルブミン結合研究
ヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、ウシ、及びウサギのＳＡへのＶＨＨベースの融合体のインビトロ結合を、ＳＰＲによって２５℃で決定する。特に、これらの種のＳＡに対する実施例１～９のＶＨＨ融合体の親和性を以下で表２～１０に要約する。

【0195】

様々なＳＡへの実施例１～９のＶＨＨベースの融合体の結合を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器で行う。Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ ＣＭ５（ＢＲ－１００６－６８）表面への様々なＳＡの固定化を、製造業者の指示（アミンカップリングキットＢＲ－１０００－５０）に従って実行する。端的には、センサチップ表面（フローセル１及び２）のカルボキシル基を、７５ｍｇ／ｍＬの１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及び１１．５ｍｇ／ｍＬのＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を含む混合物７０μＬを１０μＬ／分で注入することにより活性化する。ヒト、カニクイザル、ラット、マウス、イヌ、ブタ、ウシ、及びウサギのＳＡを、ｐＨ４．０の１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ＢＲ－１００３－４９）で、１及び０．８μｇ／ｍｌ、１及び０．８μｇ／ｍｌ、１．５及び０．８μｇ／ｍｌ、４及び２．５μｇ／ｍｌ、１及び０．８μｇ／ｍｌ、１及び１μｇ／ｍｌ、１及び１μｇ／ｍｌ、並びに１及び１．５μｇ／ｍｌに希釈し、次に活性化したチップ表面（フローセル２、チャネル１～８）に１０μＬ／分で１００秒間注入する。ヒトのＳＡは、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ａ８７６３）から入手する。カニクイザルのＳＡは、Ａｔｈｅｎｓ Ｒ＆Ｔ（カタログ番号１６－１６－０１１２０２－ＣＭ）から入手する。マウスのＳＡは、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ａ３１３９）から入手する。ラットのＳＡは、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ａ４５３８）から入手する。ブタのＳＡは、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ａ４４１４）から入手する。イヌのＳＡは、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ（Ｎｏｖｉ，ＭＩ、カタログ番号ＤＳＡ－１２１３ ＮＣ０７３９１５３）から入手する。ウシのＳＡは、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ａ７０３０）から入手する。ウサギのＳＡは、Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（Ａｃｔｏｎ，ＭＡ、カタログ番号３０Ｒ－３３０３）から入手する。ＳＡを、ヒト、カニクイザル、ラット、マウス、イヌ、ブタ、及びウシのＳＡについては２５～７８共鳴単位（ＲＵ）の表面密度、及びウサギのＳＡについては１１８～３７２共鳴単位（ＲＵ）の表面密度で、カルボキシメチルデキストランでコーティングされたセンサチップＣＭ５に、遊離アミンを介して共有結合で固定化させる。表面（フローセル１及び２）上の過剰な反応性基は、ｐＨ８．５の７０μｌの１Ｍエタノールアミン塩酸塩－ＮａＯＨを注入することによって非活性化する。

【0196】

ＶＨＨ融合体を、ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．６、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％ポリソルベート２０）で、１０００、３３３．３、１１１．１、３７．０４、１２．３５、４．１２、１．３７、０．４５７、０．１５２、０．０５１、及び０．０１７ｎＭの濃度に希釈する。１８０μｌの試料を、チップの表面の固定化されたＳＡ全体に個別に連続して注入し、６００秒間、６０μＬ／分の流量で、２５℃で解離させる。ｐＨ１．５の１０ｍＭグリシン－ＨＣｌ（ＢＲ－１００３－５４）を６０μＬ／分で１００秒間注入して、表面を再生する。得られたセンサグラムを、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ Ｉｎｓｉｇｈｔ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（バージョン３．０．１１．１５４２３）の１：１結合反応速度モデルフィッティングを使用して分析し、結合速度パラメータの会合速度（ｋａ）、解離速度（ｋｄ）、及び平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を計算する。

【表2】

【0197】

実施例１のＶＨＨベースの融合体を用いたヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、及びウシのＳＡ結合についてのＫ_Ｄは、それぞれ、３．２、１３、１００、８３、１９０、４０、及び８２０ｎＭと決定される。

【表3】

【0198】

実施例２のＶＨＨベースの融合体を用いたヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、及びウシのＳＡ結合についてのＫＤは、それぞれ、０．５８、１．２、８．８、６．１、１９、３．７、及び１１０ｎＭと決定される。

【表4】

【0199】

実施例３のＶＨＨベースの融合体を用いたヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、及びウシのＳＡ結合についてのＫＤは、それぞれ、１．９、６．１、６２、５２、１３０、１９、及び４７０ｎＭと決定される。

【表5】

【0200】

実施例４のＶＨＨベースの融合体を用いたヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、及びウシのＳＡ結合についてのＫＤは、それぞれ、０．１９、０．９４、６．４、３．１、１５、２．２、及び１００ｎＭと決定される。

【表6】

【0201】

実施例５のＶＨＨベースの融合体を用いたヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、及びウシのＳＡ結合についてのＫＤは、それぞれ、０．２、０．４５、０．８６、０．７４、３．３、０．６、及び２８ｎＭと決定される。

【表7】

【0202】

実施例６のＶＨＨベースの融合体を用いたヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、及びウシのＳＡ結合についてのＫＤは、それぞれ、１．５、５．０、５０、３４、１００、１９、及び３８０ｎＭと決定される。

【表8】

【0203】

実施例７のＶＨＨベースの融合体を用いたヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、及びウシのＳＡ結合についてのＫＤは、それぞれ、０．２３、０．３９、３．９、３．０、１３、１．８、及び７８ｎＭと決定される。

【表9】

【0204】

実施例８のＶＨＨベースの融合体を用いたヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、及びウシのＳＡ結合についてのＫＤは、それぞれ、０．１５、０．９６、１８、１１、２７、５．４、及び１２０ｎＭと決定される。

【表10】

【0205】

実施例９のＶＨＨベースの融合体を用いたヒト、カニクイザル、マウス、ラット、ブタ、イヌ、及びウシのＳＡ結合についてのＫＤは、それぞれ、１．３、４．３、４３、３３、８３、１５、及び３４０ｎＭと決定される。

【0206】

インビトロ機能－ペイロードの特定の活性
実施例１９：実施例１及び２のＶＨＨベースの融合体のインビトロ効力
ヒトＣＮＴＦＲ ｐＳＴＡＴ３アッセイ：ヒトＣＮＴＦＲ、ＬＩＦＲ、及びｇｐ１３０を内因的に発現するＩＭＲ－３２細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＣＬ－１２７）を、最終１０％ ＦＢＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、及び１倍Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ－Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１５２４００６２）を補充したＲＰＭＩ－１６４０（ＡＴＣＣ、カタログ番号３０－２００１）培地中、３７℃、５％ＣＯ_２、湿度９０％で培養する。－１日目（ｐＳＴＡＴ３アッセイの前日）に、細胞を１倍ＰＢＳで１回洗浄し、細胞解離緩衝液（Ｇｉｂｃｏ、１３１５１）を用いてフラスコから取り出し、上述の培養培地に再懸濁させる。細胞を、９６ウェルのポリＤリジンでコーティングされたプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号３５４６４０）に、１５０，０００細胞／０．１ｍＬ／ウェルでプレーティングする。細胞を、３７℃、５％ＣＯ_２、湿度９０％で一晩培養する。１日目（ｐＳＴＡＴ３アッセイの当日）、培地を吸引除去し、１００μＬのＥＭＥＭ（ＡＴＣＣ、カタログ番号３０－２００３）と交換する。細胞を、３７℃、５％ＣＯ_２、湿度９０％で４時間血清飢餓状態にした後、０．３％ ＩｇＧ不含ＢＳＡ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、カタログ番号００１－０００－１６２）で３倍連続希釈した５０μＬのヒトＣＮＴＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号２５７－ＮＴ－０１０）、実施例１又は実施例２を加える。ＥＭＥＭを最終濃度が１倍になるように加える。細胞を、これらの連続希釈したタンパク質とともに、３７℃、５％ＣＯ_２、湿度９０％で更に１０分間インキュベートする。インキュベーション期間が完了したら、内容物をプレートから取り出す。細胞を溶解させ、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ Ｓｕｒｅｆｉｒｅ Ｕｌｔｒａ ｐ－ＳＴＡＴ３（Ｔｙｒ７０５）Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、ＡＬＳＵ－ＰＳＴ３）及び接着細胞用のその２プレートアッセイプロトコールを使用して、ｐＳＴＡＴ３を検出する。プレートをＥｎｖｉｓｉｏｎ ２１０２機器（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で読み取る。

【0207】

データの統計分析：データを、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ ２１０２機器リーダからＥｘｃｅｌ（登録商標）（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ）にインポートする。最大（１ｎＭ）ヒトＣＮＴＦ刺激ｐＳＴＡＴ３シグナルの％を、試験したタンパク質の各濃度について計算する。ＥＣ_５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（登録商標）ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，ＬＬＣ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ、バージョン８．４．３）を使用する可変勾配－４パラメータ用量応答曲線により、これらの計算から生成する。アッセイの結果を以下で表１１に提示する。

【表11】

【0208】

実施例２０：実施例３及び４のＶＨＨベースの融合体のインビトロ効力
ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ／ｅｕｒｏｆｉｎｓの細胞ベースの二量体化バイオアッセイ（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ ｅＸｐｒｅｓｓ ＥｒｂＢ４／ＥｒｂＢ４ Ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ、カタログ番号９３－０９６１Ｅ３）を実行して、ヒトＥｂ４受容体（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿００１０３６０６４．１）における実施例３及び４のＶＨＨ融合体の効力を試験する。このアッセイは、受容体－二量体対の２つのサブユニットのリガンド誘導された二量化を検出するものであり、効力を評定するように設計される。試験を、製造業者が提供するプロトコルに従って実行する。端的には、細胞を解凍し、提供された９６ウェルプレートにウェル当たり１００μＬでプレーティングする。５％ＣＯ_２中、３７℃で２４時間インキュベートした後、１０μＬの１１倍の実施例３、実施例４、及び対照アゴニストであるｒｈＮＲＧ－１（ｅｕｒｏｆｉｎｓ、カタログ番号９２－１０９１）を、１１点連続希釈曲線（１：３）で、適切なウェルに２連で加える。プレートを３７℃で６時間インキュベートする。６時間のインキュベーション後、１１０μＬの検出試薬を各ウェルに加える。プレートを室温の暗所で更に１時間インキュベートする。化学発光シグナルを、０．５秒の積分時間を使用するプレートリーダ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ＤｅｖｉｃｅｓのＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ｉ３ｘプレートリーダ）で読み取る。生データの統計分析を、ＧｒａｐｈＰａｄ ＰＲＩＳＭバージョン９．０ を用いて実行する。平均バックグラウンド読み取り値をすべての値から差し引き、生データを変換し、非線形回帰分析（対数（アゴニスト）対応答－可変勾配（４パラメータ））を実行して、ＥＣ_５０値を取得し、適合度を決定する（すべてのデータについてｎ＝２）。

【表12】

【0209】

実施例２１：実施例５のＶＨＨベースの融合体のインビトロ効力
ＨＥＫ２９３ヒトＧＦＲＡＬ及びヒトＲＥＴ発現細胞株の生成：ＨＥＫ２９３細胞（ＡＴＣＣ）を、１０％ ＦＢＳ及び２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１倍抗生物質を含むＤＭＥＭ中で培養し、ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｇｉｂｃｏ）で３～４日ごとに１：１６に分割する。細胞を、製造業者の指示に従って、ヒトＧＦＲＡＬ（ＧＤＮＦ受容体アルファ様、ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿９９７２９３．２）、ヒトＲＥＴ（プロトオンコジーンチロシン－タンパク質キナーゼ受容体ＲＥＴ、ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０６６１２４．１）、及び Ｆｕｇｅｎｅ ６（Ｐｒｏｍｅｇａ）のプラスミドＤＮＡでトランスフェクトする。トランスフェクトした細胞を、ジェネティシン（Ｇｉｂｃｏ、１ｍｇ／ｍｌ）及びピューロマイシン（Ｇｉｂｃｏ、０．１ｍｇ／ｍｌ）を用いて３～４週間選択する。クローン株を、９６ウェルプレートへの限定希釈クローニングにより得て、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ ＳｕｒｅＦｉｒｅ Ｕｌｔｒａ ｐ－ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）により、ＧＤＦ１５応答で確認する。クローンを増殖させ、回収し、凍結培地に再懸濁させ、クライオバイアルに分注し、長期保存のために液体窒素中で保持する。ＧＤＦ１５応答が最良である（シグナル対バックグラウンド比）上位応答物のクローン株＃７を選択する。

【0210】

ヒトＧＦＲＡＬ及びＲＥＴ受容体ＡｌｐｈａＬＩＳＡ ＳｕｒｅＦｉｒｅ Ｕｌｔｒａ ｐ－ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）アッセイ：ヒトＧＦＲＡＬ及びヒトＲＥＴを発現するＨＥＫ２９３細胞株を、選択培地（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１倍抗生物質、１μｇ／ｍＬピューロマイシン、１ｍｇ／ｍＬジェネティシンを含む、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ）とともに培養する。３日目（細胞プレーティングの当日）に、細胞をＰＢＳで１回洗浄し、ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓを用いてフラスコから取り出し、プレーティング培地（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１倍抗生物質、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ）に再懸濁させる。細胞を、９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ番号３５６４６１）に２０，０００細胞／０．１ｍＬ／ウェルでプレーティングする。細胞を、３７℃、５％ＣＯ_２で７２時間培養する。１日目（アッセイの当日）、培地を除去し、５０μＬの無血清培地（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１倍抗生物質を含むＤＭＥＭ）と交換する。プレートを３７℃で４時間インキュベートした後、５０μＬの２倍リガンドを加える（ＧＤＦ１５、最終１倍）。プレートを更に１０分間３７℃でインキュベートする。インキュベーション期間が完了した後、培地を、デカントして白色の実用ワイプに吸い取ることによってプレートから除去する。次に、５０μＬの１倍ＡｌｐｈａＬＩＳＡ ＳｕｒｅＦｉｒｅ Ｕｌｔｒａ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒを各ウェルに加え、プレートをプレートシェーカー上、３５０ｒｐｍ、室温で１０分間インキュベートする。続いて、接着細胞用２プレート／１インキュベーションプロトコルのための製造業者の指示（ＡｌｐｈａＬＩＳＡ ＳｕｒｅＦｉｒｅ Ｕｌｔｒａ ｐ－ＥＲＫ（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒカタログ番号ＡＬＳＵ－ｐＥＲＫ－Ａ１０Ｋ）に従って、１０μＬ細胞溶解物、５μＬ Ａｃｃｅｐｔｏｒ Ｍｉｘ、及び５μＬ Ｄｏｎｏｒ Ｍｉｘを、ＯｐｔｉＰｌａｔｅ（商標）－３８４プレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒカタログ番号６００７２９０）に加える。プレートを密封し、ホイルで包み、室温で２５０ｒｐｍのプレートシェーカー上で１分間インキュベートし、室温の暗所で８時間インキュベートした後、ＥｎＶｉｓｉｏｎ Ｍａｎａｇｅｒソフトウェア（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を備えたＥｎＶｉｓｉｏｎ ２１０２ Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ Ｒｅａｄｅｒで読み取る。

【0211】

データの統計分析：データを、ＥｎＶｉｓｉｏｎ ２１０２ Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ ＲｅａｄｅｒからＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（登録商標）ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，ＬＬＣ；Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ；バージョン８）にインポートする。ＥＣ_５０値を、可変勾配－４パラメータ用量応答曲線により生成する。

【表13】

【0212】

実施例２２：実施例６及び７のＶＨＨベースの融合体のインビトロ効力
ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ製の細胞ベースの二量体化バイオアッセイであるＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ ＩＬ－２ ＢｉｏＡｓｓａｙ Ｋｉｔ（ｅｕｒｏｆｉｎｓ／ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ部品番号９３－１００３Ｙ３－０００９１）を使用して、実施例６及び７のＶＨＨベースの融合体の効力を評価する。このアッセイは、ＩＬ－２受容体－二量体対の２つのサブユニットのＩＬ－２誘導された二量化を検出するものであり、効力を評定するように設計される。アッセイを、製造業者のプロトコルに従って実行する。端的には、細胞を解凍し、提供された９６ウェルプレートにウェル当たり８０μＬでプレーティングする。５％ＣＯ２中、３７℃で２０時間インキュベートした後、実施例６及び７の５倍ストック濃縮液２０μＬ及び提供されたＩＬ－２参照標準を、１１点連続希釈曲線（１：３）で、適切なウェルを２連で加える。プレートを３７℃で６時間インキュベートする。実施例６及び７並びに参照標準とともに６時間インキュベートした後、１０μＬの検出試薬１を各ウェルに加える。３５０ｒｐｍのプレートシェーカー上、１分間で混合を達成し、プレートを室温の暗所で１５分間インキュベートする。次に、４０μＬの検出試薬２を各ウェルに加え、室温の暗所で更に１時間インキュベートする。化学発光シグナルを、１秒の積分時間を使用するプレートリーダ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ＤｅｖｉｃｅｓのＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ｉ３ｘプレートリーダ）で読み取る。生データの統計分析を、ＧｒａｐｈＰａｄ ＰＲＩＳＭバージョン８．４．３を用いて実行する。生データを変換し、非線形回帰分析（対数（アゴニスト）対応答－可変勾配（４パラメータ））を実行して、ＥＣ_５０値を取得し、適合度を決定する。（すべてのデータについてｎ＝２）。

【表14】

【0213】

実施例２３：実施例９及び１３のＶＨＨベースの融合体のインビトロ効力
Ｌ９２９細胞ベースの細胞毒性アッセイを使用して、可溶性ヒトＴＮＦα、可溶性カニクイザルＴＮＦα、又は膜結合ヒトＴＮＦαの実施例９及び１３のインビトロ中和能を評価する。

【0214】

ヒトＴＮＦα受容体を内因的に発現するＬ９２９細胞（ＡＴＣＣ）を、１０％熱不活化ＦＢＳ、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、１倍非必須アミノ酸、１倍ピルビン酸ナトリウム、１倍抗生物質を含むＤＭＥＭ高グルコース培地で培養し、ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｇｉｂｃｏ）を用いて３～４日ごとに１：２０に分割する。

【0215】

可溶性ヒトＴＮＦαタンパク質は、Ｓｙｎｇｅｎｅ（Ｂａｎｇａｌｏｒｅ，Ｉｎｄｉａ）によるカスタムの合成から入手する。可溶性カニクイザルＴＮＦαタンパク質は、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ、カタログ番号１０７０－ＲＭ／ＣＦ）から入手する。

【0216】

安定したＭＴ１０４ Ｈ２ ＣＨＯ膜ヒトＴＮＦα発現細胞株は、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）で生成する。細胞を、３～４日ごとに１：１０に分割した８ｍＭ Ｌ－グルタミン及び選択剤Ｇ４１８（５００μｇ／ｍＬ）を含むＬｉｌｌｙ培地ＬＭ７３００中で培養する。

【0217】

Ｌ９２９細胞毒性アッセイ：１日目に、Ｌ９２９細胞を、５ｍＬ ＴｒｙｐＬＥ（商標）（Ｇｉｂｃｏ＃１２６０５０３６）でトリプシン処理し、完全培地を加え（１：３体積）、１０００ｒｐｍで５分間、室温で遠心分離させる。上清を穏やかに吸引し、細胞を１５ｍＬの完全培地（１０％熱不活化ＦＢＳ、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、１倍非必須アミノ酸、１倍ピルビン酸ナトリウム、１倍抗生物質を含むＤＭＥＭ高グルコース培地）に再懸濁させ、細胞のアリコートを、Ｖｉａｃｅｌｌ計数器を使用して計数する。細胞を、１０，０００細胞／０．１ｍＬ／ウェルで９６ウェルのポリＤリジンでコーティングされたプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ＃３５４４９６）にプレーティングし、３７℃、５％ＣＯ_２で一晩培養する。２日目に、実施例９及び１３を、固定量の抗原：アクチノマイシンＤ（６．２５μｇ／ｍＬ）を含むＤＭＥＭ＋ＦＢＳ中の可溶性ヒトＴＮＦα（２００ｐｇ／ｍＬ）又は可溶性カニクイザルＴＮＦα（７５０ｐｇ／ｍＬ）又は膜ヒトＴＮＦα発現細胞（５０００細胞／ｍＬ）で滴定する。開始濃度は、可溶性ヒトＴＮＦ、可溶性カニクイザルＴＮＦ、及び膜ヒトＴＮＦ中和について、それぞれ、１．５μｇ／ｍＬ、３μｇ／ｍＬ、及び１０μｇ／ｍＬであり、８点下降（８ ｐｏｉｎｔｓ ｄｏｗｎ）の３倍連続希釈によって滴定する。培地を除去した後、滴定した化合物－抗原複合体を、Ｌ９２９細胞を含む９６ウェルプレートに加え、プレートを、３７℃、５％ＣＯ_２で一晩インキュベートする。刺激した陰性対照のウェルには、Ｌ９２９細胞＋アクチノマイシンＤ＋ＴＮＦα抗原を含め、一方で、刺激していない対照ウェルには、Ｌ９２９細胞＋アクチノマイシンＤのみを含める。

【0218】

３日目に、培地を９６ウェルプレートから除去し、１２０μＬのＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ ＡＱｕｅｏｕｓ ＯＮＥ基質溶液（ＤＭＥＭ培地＋ＦＢＳで１：６希釈）をすべてのプレートの各ウェルに加える。２時間後、Ｓｏｆｔｍａｘ ４．７ソフトウェアを使用するＳｐｅｃｔｒａ ｍａｘプレートリーダ上ＯＤ４９０ｎｍでプレートを読み取る。

【0219】

データ分析：ＯＤ読み取り値対濃度を、Ｅｘｃｅｌ（登録商標）（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ、Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）でグラフ化する。ＥＣ_５０の計算及び統計分析は、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ統計ソフトウェアツール（Ｇｌｏｂａｌ Ｓｔａｔｓ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｅａｍ、Ｌｉｌｌｙ）を使用して行う。

【表15】

【表16】

【表17】

【表18】

【0220】

実施例２４：実施例１５及び１６の多重特異性のＶＨＨベースの融合体及びコンジュゲートのインビトロ活性
ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ（ｅｕｒｏｆｉｎｓ）から購入した細胞ベースの環状ＡＭＰアッセイキットを使用して、ＧＬＰ１Ｒ及びＭＣ３Ｒにおける実施例１５及び１６のＶＨＨベースのコンジュゲートの活性を評価する。ｃＡＭＰについては、Ｈｕｎｔｅｒ ｅＸｐｒｅｓｓ ＧＬＰ１Ｒ ＣＨＯ－Ｋ１ ＧＰＣＲアッセイ（カタログ番号９５－００６２Ｅ２）を使用し、内部ＧＬＰ－１標準（配列番号９９）を陽性対照として使用する。ｃＡＭＰについては、Ｈｕｎｔｅｒ ｅＸｐｒｅｓｓ ＭＣ３Ｒ ＣＨＯ－Ｋ１ ＧＰＣＲアッセイ（カタログ番号９５－００４５Ｅ２）を使用し、α－ＭＳＨを陽性対照として使用する。アッセイを、製造業者が提供するＧＰＣＲアッセイプロトコルに従って実行する。端的には、細胞を解凍し、９６ウェルプレートにウェル当たり１００μＬでプレーティングする。５％ＣＯ_２中、３７℃で２４時間インキュベートした後、１５μＬの３倍アゴニスト（ＶＨＨコンジュゲート／融合体及び対照）及びｃＡＭＰ標準を適切なウェルに２連で加える。プレートを３７℃で３０分間インキュベートする。ｃＡＭＰ作動検出溶液を作製し、光から保護して室温で保つ。ＶＨＨ融合体又はコンジュゲートとともに３０分間インキュベートした後、１５μＬのｃＡＭＰ抗体試薬を各ウェルに加える。抗体試薬を加えた直後に、６０μＬのｃＡＭＰ作動検出溶液を加え、これはインキュベーション期間中に作製しておく。プレートを室温の暗所で１時間インキュベートした後、６０μＬのｃＡＭＰ溶液Ａを各ウェルに加え、プレートを室温の暗所で３～１８時間インキュベートする。化学発光シグナルをプレートリーダ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ＤｅｖｉｃｅｓのＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ｉ３ｘプレートリーダ）で読み取る。生データの統計分析を、ＧｒａｐｈＰａｄ ＰＲＩＳＭバージョン８を用いて実行する。生データを変換し、非線形回帰分析を実行して（対数（アゴニスト）対応答－可変勾配（４パラメータ））、ＥＣ_５０値を取得し、適合度を決定する（すべてのデータについてｎ＝２）。

【表19】

【表20】

【0221】

インビボ機能－各ペイロードについての長時間作用型の特定のＰＤ
実施例２５：実施例１及び２のＶＨＨベースの融合体のインビボ活性（健康なマウスにおける体重減少）
この研究は、Ｔａｃｏｎｉｃから供給された４８匹の雄のＤＩＯ Ｃ５７ＢＬ６マウスを用いて実行する。マウスは研究開始時に１５週齢である。動物を、自動化された家庭用水（２～５ｐｐｍの塩素）及び高脂肪食（ＴＤ９５２１７）を自由に摂取できるマイクロアイソレーターケージ内に単独で収容する。Ｌｉｌｌｙの統計学者がインビボ群無作為化のために開発したブロック無作為化割当てツールを使用して、マウスを体重に基づいて８つの群（ｎ＝６）に無作為化する。可能性のあるストレス関連の研究への影響を低減するために、研究開始前の少なくとも３日間、すべての動物を毎日の取り扱いに慣れさせる。体重及び食物重量を、研究開始前の２日間、その後は研究中毎日、記録する。治療を、０．５ｍＬの２８Ｇインスリン注射器（ＢＤカタログ番号３２９４６１）を使用して、研究の経過中（ＱＤ投薬スケジュール）、肩甲骨間領域に皮下投与する。天然ＣＮＴＦ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、組換えヒトＣＮＴＦカタログ番号２５７－ＮＴ／ＣＦ、ロット番号ＧＬ４０２１０１Ａ）、実施例１、及び実施例２を、投与後３０分以内にｐＨ７．２の滅菌ＰＢＳ中で適切な濃度に希釈する。天然ＣＮＴＦは０．２５ｍｐｋで投薬する。実施例１及び実施例２は、０．２５ｍｐｋ又は０．１ｍｐｋのいずれかで投薬する。希釈率は、前日の群平均体重に基づいて毎日各治療ごとに計算する。２００μＬのＰＢＳをビヒクル対照群の動物に投与する。体重変化を、Ｌｉｌｌｙの統計学者がインビボＰＤ研究のために開発した厳密モデルベースのアプローチを用いる内部統計ツールを使用して分析する。動物は、２０％の体重減少に達した時点で、投薬日に関係なく研究から除外する。

【表21】

【表22】

【0222】

表２１及び２２に示すように、すべての治療群は、試験３日目までにビヒクル群と比較して有意な体重減少を示す。０．１ｍｐｋで投薬した実施例１及び実施例２は両方とも、０．２５ｍｐｋで投薬したｒｈＣＮＴＦと同等の体重減少を示す。０．２５ｍｐｋで実施例１を与えた動物は、０．２５ｍｐｋでのｒｈＣＮＴＦと比較した場合、研究２日目までに有意により大きな体重減少を示す。０．２５ｍｐｋで実施例１を与えた動物は、０．２５ｍｐｋでのｒｈＣＮＴＦと比較した場合、研究３日目までに有意により大きな体重減少を示す。実施例１及び２両方の０．２５ｍｐｋ用量を与えた群の動物は、脱水の臨床徴候及び／又は２０％ＢＷＬの達成を理由に、５日目又は６日目には投薬しない。

【0223】

実施例２６：実施例３及び４のＶＨＨベースの融合体のインビボ活性（健康なマウスの血液化学分析）
この研究は、６週齢のＥｎｖｉｇｏから供給された４８匹の雌のＣ５７ＢＬ６マウスを用いて実行する。動物を、自動化された家庭用水（２～５ｐｐｍの塩素）及び標準飼料（Ｔｅｋｌａｄ ２０１４齧歯類維持食）を自由に摂取できるマイクロアイソレーターケージ内に対で収容する。Ｌｉｌｌｙの統計学者がインビボ群無作為化のために開発したブロック無作為化割当てツールを使用して、マウスを体重に基づいて６つの群（ｎ＝８）に無作為化する。可能性のあるストレス関連の研究への影響を低減するために、研究開始前の少なくとも３日間、すべての動物を毎日の取り扱いに慣れさせる。体重及び食物重量を、研究開始前の２日間記録し、その後は研究中毎日モニタリング及び記録する。動物は初回投薬時点で８週齢である。治療を、０．５ｍＬの２８Ｇインスリン注射器（ＢＤカタログ番号３２９４６１）を使用して、合計３用量で、７日間隔日で（Ｑ２Ｄ投薬スケジュール）、肩甲骨間領域に皮下投与する。天然ＮＲＧ－１（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、組換えヒトＮＲＧ１－ベータ１ ＥＧＦドメイン、ＣＦ、カタログ番号３９６－ＨＢ／ＣＦ、バッチ番号ＡＣＤ１８２１０１Ａ）、実施例３、及び実施例４を、投与後３０分以内にｐＨ７．２の滅菌ＰＢＳ中で適切な濃度に希釈する。天然ＮＲＧ－１は１ｍｐｋで投薬する。実施例３及び実施例４は、１及び０．３ｍｐｋで投薬する。各治療ごとの希釈率は、前日の群平均体重に基づいて毎日計算する。ビヒクル対照群の動物には、２００μＬのＰＢＳ ＳＣを与える。治療は、研究１日目、３日目、及び５日目の午前中に施す。研究７日目に、すべての動物を、手術面へのイソフルオラン（４％）で麻酔し、動物の管理及び使用プロトコルに従って後眼窩採血を介して放血させる。血液を血清分離チューブ（ＢＤカタログ番号３６５９６７）に収集し、室温で最大９０分間保つ。血液を１０分間１０，０００ＲＰＭで遠心分離させる。血清を各チューブから収集し、Ｃｈｅｍ １８分析用に等分する。血清をＲｏｃｈｅ Ｃｏｂａｓ ８０００ Ｍｏｄｕｌａｒ化学分析装置で分析する。Ｃｈｅｍ １８分析のためのすべての試薬は、Ｆｕｊｉｆｉｌｍ ＷＡＫＯ試薬を使用するトリグリセリド試験を除き、Ｒｏｃｈｅから供給される。血液化学値の統計分析には、ダネット法を使用したグループ別のＪＭＰソフトウェア一元配置ＣＩ分析を使用する。

【表23】

【0224】

表２３に示すように、実施例３及び４のＶＨＨ融合体は、ビヒクル対照と比較して、血液化学に対する顕著な影響を示す。血清クレアチニンの減少がすべての治療群にわたって観察され、実施例４及び天然ｒｈＮＲＧ１対照の両方の用量レベルで、統計的に有意な低下が生じた。ベースラインからのＡＬＰの有意な減少は、実施例３及び４の両方について、天然ｒｈＮＲＧ１対照を投薬した動物及び１ｍｐｋ投薬群で生じる。実施例３の両方の用量レベルについて、実施例４の１ｍｐｋ用量で、及び天然ｒｈＮＲＧ１対照群において、コレステロールレベルが増加する。天然ｒｈＮＲＧ１対照及び実施例４の０．３ｍｐｋ用量群も、ＢＵＮを有意に減少させる。

【0225】

実施例２７：実施例５のＶＨＨベースの融合体のインビボ活性（健康なマウスにおける体重減少）
２４匹の雄のＤＩＯ Ｃ５７ＢＬ６マウスを１２週齢でＴａｃｏｎｉｃから調達する。動物を、自動化された家庭用水（２～５ｐｐｍの塩素）及び高脂肪食（ＴＤ９５２１７）を自由に摂取できるマイクロアイソレーターケージ内に単独で収容する。Ｌｉｌｌｙの統計学者がインビボ群無作為化のために開発したブロック無作為化割当てツールを使用して、マウスを体重に基づいて４つの群（ｎ＝６）に無作為化する。可能性のあるストレス関連の研究への影響を低減するために、研究開始前の少なくとも３日間、すべての動物を毎日の取り扱いに慣れさせる。体重及び食物重量を、研究開始前の２日間記録し、その後は研究中毎日モニタリング及び記録する。各治療の５用量を、０．５ｍＬの２８Ｇインスリン注射器（ＢＤカタログ番号３２９４６１）を使用して、研究の経過中（Ｑ３Ｄ投薬スケジュール）、肩甲骨間領域に皮下投与する。実施例５の天然ＧＤＦ－１５（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、組換え、カタログ番号９５７－ＧＤ／ＣＦ、バッチＥＨＦ２３２１０１Ａ）及びＶＨＨ融合タンパク質を、投与後３０分以内にｐＨ７．２の滅菌ＰＢＳ中で適切な濃度に希釈する。天然ＧＤＦ－１５は０．１ｍｐｋで投薬し、実施例５のＶＨＨ融合タンパク質は、前日の群平均体重に基づいて１ｍｐｋ又は０．１ｍｐｋのいずれかで投薬する。ビヒクル対照群の動物には、２００μＬのＰＢＳを与える。体重変化を、Ｌｉｌｌｙの統計学者がインビボＰＤ研究のために開発した厳密モデルベースのアプローチを用いる内部統計ツールを使用して分析する。

【表24】

【表25】

【0226】

表２４及び２５に示すように、ビヒクル対照と比較して、３日目までに０．１ｍｐｋ又は１ｍｐｋのいずれかで実施例５のＶＨＨ融合タンパク質で処理した両群において、有意な体重減少が生じる。天然ＧＤＦ－１５処置群における体重減少は、９日目までに有意性に達する。実施例５のＶＨＨ融合タンパク質の１ｍｐｋ用量群と０．１ｍｐｋ用量群との間では、どの時点でも体重減少に差はない。実施例５の１ｍｐｋ又は０．１ｍｐｋのＶＨＨ融合タンパク質を与えた動物は、天然ＧＤＦ１５で処置した動物と比較して、研究６日目までに有意により大きく体重が減少した。この有意性は研究の残りの部分でも持続する。

【0227】

実施例２８：実施例１５のＶＨＨベースのコンジュゲートのインビボ活性（健康なマウスにおけるコルチコステロン誘導及び体重減少）
健康な６週齢の雌のＣ５７ＢＬ６マウスをＥｎｖｉｇｏから購入し、マイクロアイソレーターケージに群で収容し（ケージ当たり３匹のマウス）、ボトルに家庭用濾過水を入れ、標準飼料食（２０１４ Ｔｅｋｌａｄグローバル齧歯類維持食）を給餌した。マウスを受け取り後、少なくとも７２時間順応させる。投薬の１日前にマウスの体重を測定する。０．１、０．３、１、若しくは３ｎｍｏｌ／ｋｇの実施例１５のＶＨＨ融合体コンジュゲート、又はビヒクル（ＤＰＢＳ）の単回皮下用量を１日目に投与する。群当たりｎ＝３。コルチコステロンレベル分析のための乾燥血液スポット（ＤＢＳ）試料を収集するためのテールスティックを、投薬直前（Ｔ０）、及び投薬後２、６、２４、３０、４８、及び７２時間で実行する。各動物の尾から約２０～３０μＬの血液を、Ｗｈａｔｍａｎ ＤＭＰＫカード（ＷＢ１２９２４３）に収集する。ＤＢＳカードを、コルチコステロンレベル分析のために社内のＬＣ－ＭＳ専門家に提供する。動物の体重も研究全体をとおして毎日記録する。すべてのインビボ実験手順は、ＩＡＣＵＣ規格に準拠し、承認された動物使用プロトコル（１９－０３３）に従って実施する。データは、平均コルチコステロンレベル（ｎｇ／ｍＬ）又は０日目に記録された体重からの平均変化パーセントとして、それぞれ、表２６及び２７に報告する。

【表26】

【0228】

表２６に示すように、実施例１５のＶＨＨベースのコンジュゲートによる処理により、すべての用量レベルにおいて、投薬後２時間及び６時間で、ビヒクル対照と比較してコルチコステロンレベルの有意な誘導が得られる。３ｍｐｋ投薬群の動物の場合、コルチコステロンレベルの増加は、投与後３０時間までビヒクル対照群よりも有意に高いままである。

【表27】

【0229】

表２７に示すように、実施例１５のＶＨＨベースのコンジュゲートでの処理により、研究期間中、１ｎｍｏｌ／ｋｇ及び３ｎｍｏｌ／ｋｇ治療群において体重増加の防止が得られる。ビヒクル対照と比較した場合、３日目までのこれら２つの治療群の体重増加パーセントの差は有意である。ｐ値は、ＧｒａｐｈＰａｄ ＰＲＩＳＭソフトウェアで治療群対ビヒクルの対応のないＴ検定を使用して計算される。

【0230】

インビボ機能－ＰＫ
実施例２９：雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおける実施例４のＶＨＨベースの融合体のＰＫ
雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットに、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中で製剤化した、実施例４について１０６．８ｎｍｏｌ／ｋｇの単回静脈内（ＩＶ）又は皮下（ＳＣ）用量を２．６ｍＬ／ｋｇの用量体積で投与する。ＩＶ経路の場合、投薬後１、６、１２、２４、４８、９６、１４４、１６８、及び２４０時間で、ＳＣ経路の場合、投薬後６、１２、２４、４８、９６、１４４、１６８、及び２４０時間で、ＰＫ特性評価のために血液を採取する。

【0231】

実施例４のＶＨＨベースの融合体の血漿濃度を、Ｑ／Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｐｌｕｓ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用して、Ａｌｔａｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｌａｖａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ）の正規のＬＣ／ＭＳアッセイによって決定する。実施例４のＶＨＨ融合体及び内部標準を、抗ＶＨＨ－抗体－ビオチンコンジュゲート及びストレプトアビジンでコーティングされた磁性ビーズを用いた免疫沈降を介して、Ｋ３ＥＤＴＡラット血漿から単離する。干渉する内因性タンパク質を除去するための洗浄ステップの後、実施例４の単離されたＶＨＨ融合体を、還元し、アルキル化し、トリプシンで消化させ、トリプシンペプチドを、無傷の融合体の代理測定としてＬＣ／ＭＳによって分析する。実施例４のＶＨＨ融合体の血漿濃度を使用して、表２８に示すＰＫパラメータを計算する。

【表28】

【0232】

表２８に示すように、実施例４のＶＨＨ融合体は、非融合タンパク質（データ割愛）と比べて、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおいて拡張されたＰＫプロファイルを示す。

【0233】

実施例３０：雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおける実施例５、６、及び７のＶＨＨベースの融合体のＰＫ
雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットに、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中で製剤化した、実施例５については５０ｎｍｏｌ／ｋｇ、実施例６又は７については２５ｎｍｏｌ／ｋｇの単回静脈内（ＩＶ）又は皮下（ＳＱ）用量を４ｍＬ／ｋｇの用量体積で投与する。ＩＶ経路の場合、投薬後１、６、１２、２４、４８、９６、１４４、１６８、及び２４０時間で、ＳＱ経路の場合、投薬後６、１２、２４、４８、９６、１４４、１６８、及び２４０時間で、ＰＫ特性評価のために血液を採取する。

【0234】

実施例５～７のＶＨＨベースの融合体の血漿濃度を、Ｑ／Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｐｌｕｓ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用して、Ｃｏｖａｎｃｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ，ＩＮ）の正規ＬＣ／ＭＳアッセイによって決定する。実施例５～７のＶＨＨ融合体及び内部標準を、抗ＶＨＨ－抗体－ビオチンコンジュゲート及びストレプトアビジンでコーティングされた磁性ビーズを用いた免疫沈降を介して、Ｋ３ＥＤＴＡラット血漿から単離する。干渉する内因性タンパク質を除去するための洗浄ステップの後、実施例５～７の単離されたＶＨＨ融合体を、還元し、アルキル化し、トリプシンで消化させ、トリプシンペプチドを、無傷の融合体の代理測定としてＬＣ／ＭＳによって分析する。実施例５～７のＶＨＨ融合体の血漿濃度を使用して、表２９に示すＰＫパラメータを計算する。

【表29】

【0235】

表２９に示すように、実施例５、６、及び７のＶＨＨ融合体は、非融合タンパク質（データ割愛）と比べて、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおいて拡張されたＰＫプロファイルを示す。

【0236】

実施例３１：雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおける実施例９のＦａｂ－ＶＨＨ融合体及び対応する非融合Ｆａｂ（実施例１３）のＰＫ
雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットに、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中で製剤化した、実施例９については６３．４ｎｍｏｌ／ｋｇ、実施例１３については７８．９ｎｍｏｌ／ｋｇの単回静脈内（ＩＶ）又は皮下（ＳＣ）用量を４ｍＬ／ｋｇの用量体積で投与する。ＩＶ経路の場合、投薬後１、６、１２、２４、４８、９６、１４４、１６８、及び２４０時間で、ＳＣ経路の場合、投薬後６、１２、２４、４８、９６、１４４、１６８、及び２４０時間で、ＰＫ特性評価のために血液を採取する。

【0237】

実施例９のＦａｂ－ＶＨＨ融合体及び実施例１３の対応する非融合Ｆａｂの血漿濃度を、Ｑ／Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｐｌｕｓ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用して、Ａｌｔａｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｌａｖａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ）の正規のＬＣ／ＭＳアッセイによって決定する。実施例９のＦａｂ－ＶＨＨ融合体及び実施例１３のＦａｂ及び内部標準を、抗ヒトカッパ軽鎖－ビオチンコンジュゲート及びストレプトアビジンでコーティングされた磁性ビーズ、又は抗ＶＨＨ－抗体－ビオチンコンジュゲート及びストレプトアビジンでコーティングされた磁性ビーズを用いた免疫沈降を介して、Ｋ３ＥＤＴＡラット血漿から単離する。干渉する内因性タンパク質を除去するための洗浄ステップの後、実施例９及び１３の単離されたタンパク質を、還元し、アルキル化し、トリプシンで消化させ、トリプシンペプチドを、無傷の融合体の代理測定としてＬＣ／ＭＳによって分析する。実施例９のＦａｂ－ＶＨＨの血漿濃度（表３０）を使用して、表３１に示すＰＫパラメータを計算する。実施例１３の非融合Ｆａｂの血漿濃度は、ＰＫパラメータを計算することができないほど低い。

【表30】

【0238】

表３０に示すように、実施例９のＦａｂ－ＶＨＨ融合体は、対応する非融合Ｆａｂ（実施例１３）と比べて、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおいて有意に高い平均血漿濃度を示す。

【表31】

【0239】

表３１に示すように、実施例９のＦａｂ－ＶＨＨ融合体は、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおける拡張されたＰＫプロファイルを示すが、対応する非融合Ｆａｂ（実施例１３）の平均血漿濃度は、ＰＫパラメータを計算することさえできないほど低い。

【0240】

配列
以下の核酸配列及び／又はアミノ酸配列が本開示で言及され、参照のために以下に提供される。

【0241】

配列番号１－ＶＨＨ部分１（ＭＣ６．１Ｃ２２）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0242】

配列番号２－ＶＨＨ部分２（ＭＣ６．１Ｃ８０）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0243】

配列番号３－ＶＨＨ部分３（ＭＣ６．１Ｃ２２．４３）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ

【0244】

配列番号４－ＶＨＨ部分４（ＭＣ６．１Ｃ８０．４３）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ

【0245】

配列番号５－ＶＨＨ部分５（ＭＣ６）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＡＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＶＳＳＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＴＡＧＩＧＧＳＶＤＩＴＹＹＬＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＫＤＮＴＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＫＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＶＲＰＧＲＰＬＩＴＳＲＤＡＮＬＹＤＹＷＧＱＧＴＱＶＴＶＳＳ

【0246】

配列番号６－ＶＨＨ部分６（ＭＣ６．１）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＴＶＳＳＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＳＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＶＲＰＧＲＰＬＩＴＳＲＤＡＮＬＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0247】

配列番号７－ＶＨＨ部分７（ＭＣ６．１Ｃ６）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＳＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＲＶＡＮＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0248】

配列番号８－ＶＨＨ部分８（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｇ２６Ｙ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＹＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0249】

配列番号９－ＶＨＨ部分９（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｒ２７Ａ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＡＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0250】

配列番号１０－ＶＨＨ部分１０（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｉ５７Ｅ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＥＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0251】

配列番号１１－ＶＨＨ部分１１（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｉ５７Ｑ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＱＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0252】

配列番号１２－ＶＨＨ部分１２（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｙ５９Ａ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0253】

配列番号１３－ＶＨＨ部分１３（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｙ５９Ｅ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＥＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0254】

配列番号１４－ＶＨＨ部分１４（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｙ５９Ｑ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＱＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0255】

配列番号１５－ＶＨＨ部分１５（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｙ５９Ｓ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0256】

配列番号１６－ＶＨＨ部分１６（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｙ５９Ｔ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＴＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0257】

配列番号１７－ＶＨＨ部分１７（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｒ１０２Ｋ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＫＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0258】

配列番号１８－ＶＨＨ部分１８（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｒ１０２Ｑ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＱＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0259】

配列番号１９－ＶＨＨ部分１９（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｒ１０２Ｓ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＳＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0260】

配列番号２０－ＶＨＨ部分２０（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｐ１０３）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＥＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0261】

配列番号２１－ＶＨＨ部分２１（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｐ１０３Ｑ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＱＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0262】

配列番号２２－ＶＨＨ部分２２（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｐ１０３Ｓ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＳＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0263】

配列番号２３－ＶＨＨ部分２３（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｌ１０４Ｅ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＥＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0264】

配列番号２４－ＶＨＨ部分２４（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｌ１０４Ｇ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＧＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0265】

配列番号２５－ＶＨＨ部分２５（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｌ１０４Ｑ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＱＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0266】

配列番号２６－ＶＨＨ部分２６（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｌ１０４Ｔ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＴＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0267】

配列番号２７－ＶＨＨ部分２７（ＭＣ６．１Ｃ２２－Ｓ１０７Ｅ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＥＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0268】

配列番号２８－ＶＨＨ部分２８（ＭＣ６．１Ｃ８０－Ａ９８Ｔ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0269】

配列番号２９－ＶＨＨ部分２９（ＭＣ６．１Ｃ８０－Ｐ１００Ｑ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＱＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0270】

配列番号３０－ＶＨＨ部分３０（ＭＣ６．１Ｃ８０－Ａ９８Ｔ、Ｐ１００Ｑ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＲＱＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0271】

配列番号３１－ＶＨＨ部分３１（ＭＣ６．１Ｃ８０－Ｋ１０８Ｑ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＱＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0272】

配列番号３２－ＶＨＨ部分３２（ＭＣ６．１Ｃ８０－Ｖ１０９Ｑ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＱＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0273】

配列番号３３－ＶＨＨ部分３３（ＭＣ６．１Ｃ８０－Ｄ１１１Ｅ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＥＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0274】

配列番号３４－ＶＨＨ部分３４（ＭＣ６．１Ｃ８０－Ｄ１１１Ｓ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＳＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0275】

配列番号３５－ＶＨＨ部分３５（ＭＣ６．１Ｃ８０－Ｖ１０９Ｑ、Ｄ１１１Ｅ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＱＡＥＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0276】

配列番号３６－ＶＨＨ部分３６（ＭＣ６．１Ｃ８０－Ｖ１０９Ｑ、Ｄ１１１Ｓ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＱＡＳＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0277】

配列番号３７－ＶＨＨ部分３７（ＭＣ６．１Ｃ８０Ｃｙｓ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＣ

【0278】

配列番号３８－Ｌ_１（（ＧＧＧＧＱ）_ｎの塩基性配列）
ＧＧＧＧＱ

【0279】

配列番号３９－Ｌ_１（（ＧＧＧＱ）_ｎの塩基性配列）
ＧＧＧＱ

【0280】

配列番号４０－Ｌ_１（（ＧＧＧＧＳ）_ｎの塩基性配列）
ＧＧＧＧＳ

【0281】

配列番号４１－Ｌ_１（（ＰＧＰＱ）_ｎの塩基性配列）
ＰＧＰＱ

【0282】

配列番号４２－Ｌ_１（（ＰＧＰＡ）_ｎの塩基性配列）
ＰＧＰＡ

【0283】

配列番号４３－Ｌ_１（ＧＧＧＧ（ＡＰ）_ｎＧＧＧＧの塩基性配列）
ＧＧＧＧ－ＡＰ－ＧＧＧＧ

【0284】

配列番号４４－Ｌ_１（（ＧＧＥ）_ｎの塩基性配列）
ＧＧＥ

【0285】

配列番号４５－Ｌ_１（（ＧＧＧＧＥ）_ｎの塩基性配列）
ＧＧＧＧＥ

【0286】

配列番号４６－Ｌ_１（（ＧＧＫ）_ｎの塩基性配列）
ＧＧＫ

【0287】

配列番号４７－Ｌ_１（（ＧＧＧＧＫ）_ｎの塩基性配列）
ＧＧＧＧＫ

【0288】

配列番号４８－Ｌ_１（ＧＧＧＧ（ＥＰ）_ｎＧＧＧＧの塩基性配列）
ＧＧＧＧ－ＥＰ－ＧＧＧＧ

【0289】

配列番号４９－Ｌ_１（ＧＧＧＧ（ＫＰ）_ｎＧＧＧＧの塩基性配列）
ＧＧＧＧ－ＫＰ－ＧＧＧＧ

【0290】

配列番号５０－Ｌ_１（（ＰＧＰＥ）_ｎの塩基性配列）
ＰＧＰＥ

【0291】

配列番号５１－Ｌ_１（（ＰＧＰＫ）_ｎの塩基性配列）
ＰＧＰＫ

【0292】

配列番号５２－Ｌ_１ １（ＧＧＧＧＱ）_５
ＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱ

【0293】

配列番号５３－Ｌ_１ ２（ＰＧＰＱ）_８
ＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱＰＧＰＱ

【0294】

配列番号５４－Ｌ_１ ３（ＰＧＰＡ）_８
ＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡＰＧＰＡ

【0295】

配列番号５５－Ｌ_１ ４（（ＧＧＥ）_８）
ＧＧＥＧＧＥＧＧＥＧＧＥＧＧＥＧＧＥＧＧＥＧＧＥ

【0296】

配列番号５６－Ｌ_１ ５（（ＧＧＧＧＥ）_５）
ＧＧＧＧＥＧＧＧＧＥＧＧＧＧＥＧＧＧＧＥＧＧＧＧＥ

【0297】

配列番号５７－Ｌ_１ ６（（ＧＧＫ）_８）
ＧＧＫＧＧＫＧＧＫＧＧＫＧＧＫＧＧＫＧＧＫＧＧＫ

【0298】

配列番号５８－Ｌ_１ ７（（ＧＧＧＧＫ）_５）
ＧＧＧＧＫＧＧＧＧＫＧＧＧＧＫＧＧＧＧＫＧＧＧＧＫ

【0299】

配列番号５９－Ｌ_１ ８（（ＧＧＧＧ（ＡＰ）_１０ＧＧＧＧ））
ＧＧＧＧＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＧＧＧＧ

【0300】

配列番号６０－Ｌ_１ ９（（ＧＧＧＧ（ＥＰ）_１０ＧＧＧＧ））
ＧＧＧＧＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＥＰＧＧＧＧ

【0301】

配列番号６１－Ｌ_１ １０（（ＧＧＧＧ（ＫＰ）_１０ＧＧＧＧ））
ＧＧＧＧＫＰＫＰＫＰＫＰＫＰＫＰＫＰＫＰＫＰＫＰＧＧＧＧ

【0302】

配列番号６２－Ｌ_１ １１（（ＰＧＰＥ）_８）
ＰＧＰＥＰＧＰＥＰＧＰＥＰＧＰＥＰＧＰＥＰＧＰＥＰＧＰＥＰＧＰＥ

【0303】

配列番号６３－Ｌ_１ １２（（ＰＧＰＫ）_８）
ＰＧＰＫＰＧＰＫＰＧＰＫＰＧＰＫＰＧＰＫＰＧＰＫＰＧＰＫＰＧＰＫ

【0304】

配列番号６４－Ｌ_２ １
ＧＧＧＳＧＧＳＧＧＧ

【0305】

配列番号６５－Ｌ_２ ２
ＧＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＧ

【0306】

配列番号６６－シグナルペプチド
ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ

【0307】

配列番号６７－ヒトｐｒｏＧＩＰ
ＭＶＡＴＫＴＦＡＬＬＬＬＳＬＦＬＡＶＧＬＧＥＫＫＥＧＨＦＳＡＬＰＳＬＰＶＧＳＨＡＫＶＳＳＰＱＰＲＧＰＲＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱＲＥＡＲＡＬＥＬＡＳＱＡＮＲＫＥＥＥＡＶＥＰＱＳＳＰＡ ＫＮＰＳＤＥＤＬＬＲ ＤＬＬＩＱＥＬＬＡＣＬＬＤＱＴＮＬＣＲＬＲＳＲ

【0308】

配列番号６８－ヒトＧＩＰ
ＹＡＥＧＴＦＩＳＤＹＳＩＡＭＤＫＩＨＱＱＤＦＶＮＷＬＬＡＱＫＧＫＫＮＤＷＫＨＮＩＴＱ

【0309】

配列番号６９－ヒトＧＩＰ受容体
ＲＡＥＴＧＳＫＧＱＴＡＧＥＬＹＱＲＷＥＲＹＲＲＥＣＱＥＴＬＡＡＡＥＰＰＳＧＬＡＣＮＧＳＦＤＭＹＶＣＷＤＹＡＡＰＮＡＴＡＲＡＳＣＰＷＹＬＰＷＨＨＨＶＡＡＧＦＶＬＲＱＣＧＳＤＧＱＷＧＬＷＲＤＨＴＱＣＥＮＰＥＫＮＥＡＦＬＤＱＲＬＩＬＥＲＬＱＶＭＹＴＶＧＹＳＬＳＬＡＴＬＬＬＡＬＬＩＬＳＬＦＲＲＬＨＣＴＲＮＹＩＨＩＮＬＦＴＳＦＭＬＲＡＡＡＩＬＳＲＤＲＬＬＰＲＰＧＰＹＬＧＤＱＡＬＡＬＷＮＱＡＬＡＡＣＲＴＡＱＩＶＴＱＹＣＶＧＡＮＹＴＷＬＬＶＥＧＶＹＬＨＳＬＬＶＬＶＧＧＳＥＥＧＨＦＲＹＹＬＬＬＧＷＧＡＰＡＬＦＶＩＰＷＶＩＶＲＹＬＹＥＮＴＱＣＷＥＲＮＥＶＫＡＩＷＷＩＩＲＴＰＩＬＭＴＩＬＩＮＦＬＩＦＩＲＩＬＧＩＬＬＳＫＬＲＴＲＱＭＲＣＲＤＹＲＬＲＬＡＲＳＴＬＴＬＶＰＬＬＧＶＨＥＶＶＦＡＰＶＴＥＥＱＡＲＧＡＬＲＦＡＫＬＧＦＥＩＦＬＳＳＦＱＧＦＬＶＳＶＬＹＣＦＩＮＫＥＶＱＳＥＩＲＲＧＷＨＨＣＲＬＲＲＳＬＧＥＥＱＲＱＬＰＥＲＡＦＲＡＬＰＳＧＳＧＰＧＥＶＰＴＳＲＧＬＳＳＧＴＬＰＧＰＧＮＥＡＳＲＥＬＥＳＹＣ

【0310】

配列番号７０－ヒトプログルカゴン
ＭＫＳＩＹＦＶＡＧＬＦＶＭＬＶＱＧＳＷＱＲＳＬＱＤＴＥＥＫＳＲＳＦＳＡＳＱＡＤＰＬＳＤＰＤＱＭＮＥＤＫＲＨＳＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＳＲＲＡＱＤＦＶＱＷＬＭＮＴＫＲＮＲＮＮＩＡＫＲＨＤＥＦＥＲＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲＧＲＲＤＦＰＥＥＶＡＩＶＥＥＬＧＲＲＨＡＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＩＬＤＮＬＡＡＲＤＦＩＮＷＬＩＱＴＫＩＴＤＲＫ

【0311】

配列番号７１－ヒトＧＬＰ－１
ＨＤＥＦＥＲＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲＧ

【0312】

配列番号７２－ヒトＧＬＰ－１_７－３７
ＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲＧ

【0313】

配列番号７３－ヒトＧＬＰ－１_７－３６
ＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲ

【0314】

配列番号７４－ヒトＧＬＰ－１受容体
ＲＰＱＧＡＴＶＳＬＷＥＴＶＱＫＷＲＥＹＲＲＱＣＱＲＳＬＴＥＤＰＰＰＡＴＤＬＦＣＮＲＴＦＤＥＹＡＣＷＰＤＧＥＰＧＳＦＶＮＶＳＣＰＷＹＬＰＷＡＳＳＶＰＱＧＨＶＹＲＦＣＴＡＥＧＬＷＬＱＫＤＮＳＳＬＰＷＲＤＬＳＥＣＥＥＳＫＲＧＥＲＳＳＰＥＥＱＬＬＦＬＹＩＩＹＴＶＧＹＡＬＳＦＳＡＬＶＩＡＳＡＩＬＬＧＦＲＨＬＨＣＴＲＮＹＩＨＬＮＬＦＡＳＦＩＬＲＡＬＳＶＦＩＫＤＡＡＬＫＷＭＹＳＴＡＡＱＱＨＱＷＤＧＬＬＳＹＱＤＳＬＳＣＲＬＶＦＬＬＭＱＹＣＶＡＡＮＹＹＷＬＬＶＥＧＶＹＬＹＴＬＬＡＦＳＶＬＳＥＱＷＩＦＲＬＹＶＳＩＧＷＧＶＰＬＬＦＶＶＰＷＧＩＶＫＹＬＹＥＤＥＧＣＷＴＲＮＳＮＭＮＹＷＬＩＩＲＬＰＩＬＦＡＩＧＶＮＦＬＩＦＶＲＶＩＣＩＶＶＳＫＬＫＡＮＬＭＣＫＴＤＩＫＣＲＬＡＫＳＴＬＴＬＩＰＬＬＧＴＨＥＶＩＦＡＦＶＭＤＥＨＡＲＧＴＬＲＦＩＫＬＦＴＥＬＳＦＴＳＦＱＧＬＭＶＡＩＬＹＣＦＶＮＮＥＶＱＬＥＦＲＫＳＷＥＲＷＲＬＥＨＬＨＩＱＲＤＳＳＭＫＰＬＫＣＰＴＳＳＬＳＳＧＡＴＡＧＳＳＭＹＴＡＴＣＱＡＳＣＳ

【0315】

配列番号７５－ヒトｐｒｏＧＤＦ１５
ＭＰＧＱＥＬＲＴＶＮＧＳＱＭＬＬＶＬＬＶＬＳＷＬＰＨＧＧＡＬＳＬＡＥＡＳＲＡＳＦＰＧＰＳＥＬＨＳＥＤＳＲＦＲＥＬＲＫＲＹＥＤＬＬＴＲＬＲＡＮＱＳＷＥＤＳＮＴＤＬＶＰＡＰＡＶＲＩＬＴＰＥＶＲＬＧＳＧＧＨＬＨＬＲＩＳＲＡＡＬＰＥＧＬＰＥＡＳＲＬＨＲＡＬＦＲＬＳＰＴＡＳＲＳＷＤＶＴＲＰＬＲＲＱＬＳＬＡＲＰＱＡＰＡＬＨＬＲＬＳＰＰＰＳＱＳＤＱＬＬＡＥＳＳＳＡＲＰＱＬＥＬＨＬＲＰＱＡＡＲＧＲＲＲＡＲＡＲＮＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＭＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＭＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ

【0316】

配列番号７６－ヒトＧＤＦ１５
ＡＲＮＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＭＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＭＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ

【0317】

配列番号７７－ヒトＧＤＦ１５（ＧＦＲＡＬ）受容体
ＭＩＶＦＩＦＬＡＭＧＬＳＬＥＮＥＹＴＳＱＴＮＮＣＴＹＬＲＥＱＣＬＲＤＡＮＧＣＫＨＡＷＲＶＭＥＤＡＣＮＤＳＤＰＧＤＰＣＫＭＲＮＳＳＹＣＮＬＳＩＱＹＬＶＥＳＮＦＱＦＫＥＣＬＣＴＤＤＦＹＣＴＶＮＫＬＬＧＫＫＣＩＮＫＳＤＮＶＫＥＤＫＦＫＷＮＬＴＴＲＳＨＨＧＦＫＧＭＷＳＣＬＥＶＡＥＡＣＶＧＤＶＶＣＮＡＱＬＡＳＹＬＫＡＣＳＡＮＧＮＰＣＤＬＫＱＣＱＡＡＩＲＦＦＹＱＮＩＰＦＮＩＡＱＭＬＡＦＣＤＣＡＱＳＤＩＰＣＱＱＳＫＥＡＬＨＳＫＴＣＡＶＮＭＶＰＰＰＴＣＬＳＶＩＲＳＣＱＮＤＥＬＣＲＲＨＹＲＴＦＱＳＫＣＷＱＲＶＴＲＫＣＨＥＤＥＮＣＩＳＴＬＳＫＱＤＬＴＣＳＧＳＤＤＣＫＡＡＹＩＤＩＬＧＴＶＬＱＶＱＣＴＣＲＴＩＴＱＳＥＥＳＬＣＫＩＦＱＨＭＬＨＲＫＳＣＦＮＹＰＴＬＳＮＶＫＧＭＡＬＹＴＲＫＨＡＮＫＩＴＬＴＧＦＨＳＰＦＮＧＥＶＩＹＡＡＭＣＭＴＶＴＣＧＩＬＬＬＶＭＶＫＬＲＴＳＲＩＳＳＫＡＲＤＰＳＳＩＱＩＰＧＥＬ

【0318】

配列番号７８－ヒトｐｒｏＩＮＳ
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＰＫＴＲＲＥＡＥＤＬＱＶＧＱＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬＥＧＳＬＱＫＲＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ

【0319】

配列番号７９－ヒトＩＮＳ Ａ鎖
ＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ

【0320】

配列番号８０－ヒトＩＮＳ Ｂ鎖
ＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＰＫＴ

【0321】

配列番号８１－ヒトＩＮＳ受容体α－サブユニット
ＨＬＹＰＧＥＶＣＰＧＭＤＩＲＮＮＬＴＲＬＨＥＬＥＮＣＳＶＩＥＧＨＬＱＩＬＬＭＦＫＴＲＰＥＤＦＲＤＬＳＦＰＫＬＩＭＩＴＤＹＬＬＬＦＲＶＹＧＬＥＳＬＫＤＬＦＰＮＬＴＶＩＲＧＳＲＬＦＦＮＹＡＬＶＩＦＥＭＶＨＬＫＥＬＧＬＹＮＬＭＮＩＴＲＧＳＶＲＩＥＫＮＮＥＬＣＹＬＡＴＩＤＷＳＲＩＬＤＳＶＥＤＮＹＩＶＬＮＫＤＤＮＥＥＣＧＤＩＣＰＧＴＡＫＧＫＴＮＣＰＡＴＶＩＮＧＱＦＶＥＲＣＷＴＨＳＨＣＱＫＶＣＰＴＩＣＫＳＨＧＣＴＡＥＧＬＣＣＨＳＥＣＬＧＮＣＳＱＰＤＤＰＴＫＣＶＡＣＲＮＦＹＬＤＧＲＣＶＥＴＣＰＰＰＹＹＨＦＱＤＷＲＣＶＮＦＳＦＣＱＤＬＨＨＫＣＫＮＳＲＲＱＧＣＨＱＹＶＩＨＮＮＫＣＩＰＥＣＰＳＧＹＴＭＮＳＳＮＬＬＣＴＰＣＬＧＰＣＰＫＶＣＨＬＬＥＧＥＫＴＩＤＳＶＴＳＡＱＥＬＲＧＣＴＶＩＮＧＳＬＩＩＮＩＲＧＧＮＮＬＡＡＥＬＥＡＮＬＧＬＩＥＥＩＳＧＹＬＫＩＲＲＳＹＡＬＶＳＬＳＦＦＲＫＬＲＬＩＲＧＥＴＬＥＩＧＮＹＳＦＹＡＬＤＮＱＮＬＲＱＬＷＤＷＳＫＨＮＬＴＩＴＱＧＫＬＦＦＨＹＮＰＫＬＣＬＳＥＩＨＫＭＥＥＶＳＧＴＫＧＲＱＥＲＮＤＩＡＬＫＴＮＧＤＱＡＳＣＥＮＥＬＬＫＦＳＹＩＲＴＳＦＤＫＩＬＬＲＷＥＰＹＷＰＰＤＦＲＤＬＬＧＦＭＬＦＹＫＥＡＰＹＱＮＶＴＥＦＤＧＱＤＡＣＧＳＮＳＷＴＶＶＤＩＤＰＰＬＲＳＮＤＰＫＳＱＮＨＰＧＷＬＭＲＧＬＫＰＷＴＱＹＡＩＦＶＫＴＬＶＴＦＳＤＥＲＲＴＹＧＡＫＳＤＩＩＹＶＱＴＤＡＴＮＰＳＶＰＬＤＰＩＳＶＳＮＳＳＳＱＩＩＬＫＷＫＰＰＳＤＰＮＧＮＩＴＨＹＬＶＦＷＥＲＱＡＥＤＳＥＬＦＥＬＤＹＣＬＫＧＬＫＬＰＳＲＴＷＳＰＰＦＥＳＥＤＳＱＫＨＮＱＳＥＹＥＤＳＡＧＥＣＣＳＣＰＫＴＤＳＱＩＬＫＥＬＥＥＳＳＦＲＫＴＦＥＤＹＬＨＮＶＶＦＶＰＲＫＴＳＳＧＴＧＡＥＤＰＲＰＳ

【0322】

配列番号８２－ヒトＩＮＳ受容体β－サブユニット
ＳＬＧＤＶＧＮＶＴＶＡＶＰＴＶＡＡＦＰＮＴＳＳＴＳＶＰＴＳＰＥＥＨＲＰＦＥＫＶＶＮＫＥＳＬＶＩＳＧＬＲＨＦＴＧＹＲＩＥＬＱＡＣＮＱＤＴＰＥＥＲＣＳＶＡＡＹＶＳＡＲＴＭＰＥＡＫＡＤＤＩＶＧＰＶＴＨＥＩＦＥＮＮＶＶＨＬＭＷＱＥＰＫＥＰＮＧＬＩＶＬＹＥＶＳＹＲＲＹＧＤＥＥＬＨＬＣＶＳＲＫＨＦＡＬＥＲＧＣＲＬＲＧＬＳＰＧＮＹＳＶＲＩＲＡＴＳＬＡＧＮＧＳＷＴＥＰＴＹＦＹＶＴＤＹＬＤＶＰＳＮＩＡＫＩＩＩＧＰＬＩＦＶＦＬＦＳＶＶＩＧＳＩＹＬＦＬＲＫＲＱＰＤＧＰＬＧＰＬＹＡＳＳＮＰＥＹＬＳＡＳＤＶＦＰＣＳＶＹＶＰＤＥＷＥＶＳＲＥＫＩＴＬＬＲＥＬＧＱＧＳＦＧＭＶＹＥＧＮＡＲＤＩＩＫＧＥＡＥＴＲＶＡＶＫＴＶＮＥＳＡＳＬＲＥＲＩＥＦＬＮＥＡＳＶＭＫＧＦＴＣＨＨＶＶＲＬＬＧＶＶＳＫＧＱＰＴＬＶＶＭＥＬＭＡＨＧＤＬＫＳＹＬＲＳＬＲＰＥＡＥＮＮＰＧＲＰＰＰＴＬＱＥＭＩＱＭＡＡＥＩＡＤＧＭＡＹＬＮＡＫＫＦＶＨＲＤＬＡＡＲＮＣＭＶＡＨＤＦＴＶＫＩＧＤＦＧＭＴＲＤＩＹＥＴＤＹＹＲＫＧＧＫＧＬＬＰＶＲＷＭＡＰＥＳＬＫＤＧＶＦＴＴＳＳＤＭＷＳＦＧＶＶＬＷＥＩＴＳＬＡＥＱＰＹＱＧＬＳＮＥＱＶＬＫＦＶＭＤＧＧＹＬＤＱＰＤＮＣＰＥＲＶＴＤＬＭＲＭＣＷＱＦＮＰＫＭＲＰＴＦＬＥＩＶＮＬＬＫＤＤＬＨＰＳＦＰＥＶＳＦＦＨＳＥＥＮＫＡＰＥＳＥＥＬＥＭＥＦＥＤＭＥＮＶＰＬＤＲＳＳＨＣＱＲＥＥＡＧＧＲＤＧＧＳＳＬＧＦＫＲＳＹＥＥＨＩＰＹＴＨＭＮＧＧＫＫＮＧＲＩＬＴＬＰＲＳＮＰＳ

【0323】

配列番号８３－ヒトＩＬ－２
ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ

【0324】

配列番号８４－ヒトＩＬ－２受容体α－サブユニット
ＥＬＣＤＤＤＰＰＥＩＰＨＡＴＦＫＡＭＡＹＫＥＧＴＭＬＮＣＥＣＫＲＧＦＲＲＩＫＳＧＳＬＹＭＬＣＴＧＮＳＳＨＳＳＷＤＮＱＣＱＣＴＳＳＡＴＲＮＴＴＫＱＶＴＰＱＰＥＥＱＫＥＲＫＴＴＥＭＱＳＰＭＱＰＶＤＱＡＳＬＰＧＨＣＲＥＰＰＰＷＥＮＥＡＴＥＲＩＹＨＦＶＶＧＱＭＶＹＹＱＣＶＱＧＹＲＡＬＨＲＧＰＡＥＳＶＣＫＭＴＨＧＫＴＲＷＴＱＰＱＬＩＣＴＧＥＭＥＴＳＱＦＰＧＥＥＫＰＱＡＳＰＥＧＲＰＥＳＥＴＳＣＬＶＴＴＴＤＦＱＩＱＴＥＭＡＡＴＭＥＴＳＩＦＴＴＥＹＱＶＡＶＡＧＣＶＦＬＬＩＳＶＬＬＬＳＧＬＴＷＱＲＲＱＲＫＳＲＲＴＩ

【0325】

配列番号８５－ヒトＩＬ－２受容体β－サブユニット
ＡＶＮＧＴＳＱＦＴＣＦＹＮＳＲＡＮＩＳＣＶＷＳＱＤＧＡＬＱＤＴＳＣＱＶＨＡＷＰＤＲＲＲＷＮＱＴＣＥＬＬＰＶＳＱＡＳＷＡＣＮＬＩＬＧＡＰＤＳＱＫＬＴＴＶＤＩＶＴＬＲＶＬＣＲＥＧＶＲＷＲＶＭＡＩＱＤＦＫＰＦＥＮＬＲＬＭＡＰＩＳＬＱＶＶＨＶＥＴＨＲＣＮＩＳＷＥＩＳＱＡＳＨＹＦＥＲＨＬＥＦＥＡＲＴＬＳＰＧＨＴＷＥＥＡＰＬＬＴＬＫＱＫＱＥＷＩＣＬＥＴＬＴＰＤＴＱＹＥＦＱＶＲＶＫＰＬＱＧＥＦＴＴＷＳＰＷＳＱＰＬＡＦＲＴＫＰＡＡＬＧＫＤＴＩＰＷＬＧＨＬＬＶＧＬＳＧＡＦＧＦＩＩＬＶＹＬＬＩＮＣＲＮＴＧＰＷＬＫＫＶＬＫＣＮＴＰＤＰＳＫＦＦＳＱＬＳＳＥＨＧＧＤＶＱＫＷＬＳＳＰＦＰＳＳＳＦＳＰＧＧＬＡＰＥＩＳＰＬＥＶＬＥＲＤＫＶＴＱＬＬＬＱＱＤＫＶＰＥＰＡＳＬＳＳＮＨＳＬＴＳＣＦＴＮＱＧＹＦＦＦＨＬＰＤＡＬＥＩＥＡＣＱＶＹＦＴＹＤＰＹＳＥＥＤＰＤＥＧＶＡＧＡＰＴＧＳＳＰＱＰＬＱＰＬＳＧＥＤＤＡＹＣＴＦＰＳＲＤＤＬＬＬＦＳＰＳＬＬＧＧＰＳＰＰＳＴＡＰＧＧＳＧＡＧＥＥＲＭＰＰＳＬＱＥＲＶＰＲＤＷＤＰＱＰＬＧＰＰＴＰＧＶＰＤＬＶＤＦＱＰＰＰＥＬＶＬＲＥＡＧＥＥＶＰＤＡＧＰＲＥＧＶＳＦＰＷＳＲＰＰＧＱＧＥＦＲＡＬＮＡＲＬＰＬＮＴＤＡＹＬＳＬＱＥＬＱＧＱＤＰＴＨＬＶ

【0326】

配列番号８６－ヒトＩＬ－２受容体γ－サブユニット
ＬＮＴＴＩＬＴＰＮＧＮＥＤＴＴＡＤＦＦＬＴＴＭＰＴＤＳＬＳＶＳＴＬＰＬＰＥＶＱＣＦＶＦＮＶＥＹＭＮＣＴＷＮＳＳＳＥＰＱＰＴＮＬＴＬＨＹＷＹＫＮＳＤＮＤＫＶＱＫＣＳＨＹＬＦＳＥＥＩＴＳＧＣＱＬＱＫＫＥＩＨＬＹＱＴＦＶＶＱＬＱＤＰＲＥＰＲＲＱＡＴＱＭＬＫＬＱＮＬＶＩＰＷＡＰＥＮＬＴＬＨＫＬＳＥＳＱＬＥＬＮＷＮＮＲＦＬＮＨＣＬＥＨＬＶＱＹＲＴＤＷＤＨＳＷＴＥＱＳＶＤＹＲＨＫＦＳＬＰＳＶＤＧＱＫＲＹＴＦＲＶＲＳＲＦＮＰＬＣＧＳＡＱＨＷＳＥＷＳＨＰＩＨＷＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰＰＣＹＴＬＫＰＥＴ

【0327】

配列番号８７－ヒトｐｒｏＮＲＧ１
ＭＳＥＲＫＥＧＲＧＫＧＫＧＫＫＫＥＲＧＳＧＫＫＰＥＳＡＡＧＳＱＳＰＡＬＰＰＲＬＫＥＭＫＳＱＥＳＡＡＧＳＫＬＶＬＲＣＥＴＳＳＥＹＳＳＬＲＦＫＷＦＫＮＧＮＥＬＮＲＫＮＫＰＱＮＩＫＩＱＫＫＰＧＫＳＥＬＲＩＮＫＡＳＬＡＤＳＧＥＹＭＣＫＶＩＳＫＬＧＮＤＳＡＳＡＮＩＴＩＶＥＳＮＥＩＩＴＧＭＰＡＳＴＥＧＡＹＶＳＳＥＳＰＩＲＩＳＶＳＴＥＧＡＮＴＳＳＳＴＳＴＳＴＴＧＴＳＨＬＶＫＣＡＥＫＥＫＴＦＣＶＮＧＧＥＣＦＭＶＫＤＬＳＮＰＳＲＹＬＣＫＣＱＰＧＦＴＧＡＲＣＴＥＮＶＰＭＫＶＱＮＱＥＫＡＥＥＬＹＱＫＲＶＬＴＩＴＧＩＣＩＡＬＬＶＶＧＩＭＣＶＶＡＹＣＫＴＫＫＱＲＫＫＬＨＤＲＬＲＱＳＬＲＳＥＲＮＮＭＭＮＩＡＮＧＰＨＨＰＮＰＰＰＥＮＶＱＬＶＮＱＹＶＳＫＮＶＩＳＳＥＨＩＶＥＲＥＡＥＴＳＦＳＴＳＨＹＴＳＴＡＨＨＳＴＴＶＴＱＴＰＳＨＳＷＳＮＧＨＴＥＳＩＬＳＥＳＨＳＶＩＶＭＳＳＶＥＮＳＲＨＳＳＰＴＧＧＰＲＧＲＬＮＧＴＧＧＰＲＥＣＮＳＦＬＲＨＡＲＥＴＰＤＳＹＲＤＳＰＨＳＥＲＹＶＳＡＭＴＴＰＡＲＭＳＰＶＤＦＨＴＰＳＳＰＫＳＰＰＳＥＭＳＰＰＶＳＳＭＴＶＳＭＰＳＭＡＶＳＰＦＭＥＥＥＲＰＬＬＬＶＴＰＰＲＬＲＥＫＫＦＤＨＨＰＱＱＦＳＳＦＨＨＮＰＡＨＤＳＮＳＬＰＡＳＰＬＲＩＶＥＤＥＥＹＥＴＴＱＥＹＥＰＡＱＥＰＶＫＫＬＡＮＳＲＲＡＫＲＴＫＰＮＧＨＩＡＮＲＬＥＶＤＳＮＴＳＳＱＳＳＮＳＥＳＥＴＥＤＥＲＶＧＥＤＴＰＦＬＧＩＱＮＰＬＡＡＳＬＥＡＴＰＡＦＲＬＡＤＳＲＴＮＰＡＧＲＦＳＴＱＥＥＩＱＡＲＬＳＳＶＩＡＮＱＤＰＩＡＶ

【0328】

配列番号８８－ヒトＮＲＧ１
ＳＧＫＫＰＥＳＡＡＧＳＱＳＰＡＬＰＰＲＬＫＥＭＫＳＱＥＳＡＡＧＳＫＬＶＬＲＣＥＴＳＳＥＹＳＳＬＲＦＫＷＦＫＮＧＮＥＬＮＲＫＮＫＰＱＮＩＫＩＱＫＫＰＧＫＳＥＬＲＩＮＫＡＳＬＡＤＳＧＥＹＭＣＫＶＩＳＫＬＧＮＤＳＡＳＡＮＩＴＩＶＥＳＮＥＩＩＴＧＭＰＡＳＴＥＧＡＹＶＳＳＥＳＰＩＲＩＳＶＳＴＥＧＡＮＴＳＳＳＴＳＴＳＴＴＧＴＳＨＬＶＫＣＡＥＫＥＫＴＦＣＶＮＧＧＥＣＦＭＶＫＤＬＳＮＰＳＲＹＬＣＫＣＱＰＧＦＴＧＡＲＣＴＥＮＶＰＭＫＶＱＮＱＥＫＡＥＥＬＹＱＫ

【0329】

配列番号８９－ヒトＮＲＧ１受容体ＥｒｂＢ３
ＭＲＡＮＤＡＬＱＶＬＧＬＬＦＳＬＡＲＧＳＥＶＧＮＳＱＡＶＣＰＧＴＬＮＧＬＳＶＴＧＤＡＥＮＱＹＱＴＬＹＫＬＹＥＲＣＥＶＶＭＧＮＬＥＩＶＬＴＧＨＮＡＤＬＳＦＬＱＷＩＲＥＶＴＧＹＶＬＶＡＭＮＥＦＳＴＬＰＬＰＮＬＲＶＶＲＧＴＱＶＹＤＧＫＦＡＩＦＶＭＬＮＹＮＴＮＳＳＨＡＬＲＱＬＲＬＴＱＬＴＥＩＬＳＧＧＶＹＩＥＫＮＤＫＬＣＨＭＤＴＩＤＷＲＤＩＶＲＤＲＤＡＥＩＶＶＫＤＮＧＲＳＣＰＰＣＨＥＶＣＫＧＲＣＷＧＰＧＳＥＤＣＱＴＬＴＫＴＩＣＡＰＱＣＮＧＨＣＦＧＰＮＰＮＱＣＣＨＤＥＣＡＧＧＣＳＧＰＱＤＴＤＣＦＡＣＲＨＦＮＤＳＧＡＣＶＰＲＣＰＱＰＬＶＹＮＫＬＴＦＱＬＥＰＮＰＨＴＫＹＱＹＧＧＶＣＶＡＳＣＰＨＮＦＶＶＤＱＴＳＣＶＲＡＣＰＰＤＫＭＥＶＤＫＮＧＬＫＭＣＥＰＣＧＧＬＣＰＫＡＣＥＧＴＧＳＧＳＲＦＱＴＶＤＳＳＮＩＤＧＦＶＮＣＴＫＩＬＧＮＬＤＦＬＩＴＧＬＮＧＤＰＷＨＫＩＰＡＬＤＰＥＫＬＮＶＦＲＴＶＲＥＩＴＧＹＬＮＩＱＳＷＰＰＨＭＨＮＦＳＶＦＳＮＬＴＴＩＧＧＲＳＬＹＮＲＧＦＳＬＬＩＭＫＮＬＮＶＴＳＬＧＦＲＳＬＫＥＩＳＡＧＲＩＹＩＳＡＮＲＱＬＣＹＨＨＳＬＮＷＴＫＶＬＲＧＰＴＥＥＲＬＤＩＫＨＮＲＰＲＲＤＣＶＡＥＧＫＶＣＤＰＬＣＳＳＧＧＣＷＧＰＧＰＧＱＣＬＳＣＲＮＹＳＲＧＧＶＣＶＴＨＣＮＦＬＮＧＥＰＲＥＦＡＨＥＡＥＣＦＳＣＨＰＥＣＱＰＭＥＧＴＡＴＣＮＧＳＧＳＤＴＣＡＱＣＡＨＦＲＤＧＰＨＣＶＳＳＣＰＨＧＶＬＧＡＫＧＰＩＹＫＹＰＤＶＱＮＥＣＲＰＣＨＥＮＣＴＱＧＣＫＧＰＥＬＱＤＣＬＧＱＴＬＶＬＩＧＫＴＨＬＴＭＡＬＴＶＩＡＧＬＶＶＩＦＭＭＬＧＧＴＦＬＹＷＲＧＲＲＩＱＮＫＲＡＭＲＲＹＬＥＲＧＥＳＩＥＰＬＤＰＳＥＫＡＮＫＶＬＡＲＩＦＫＥＴＥＬＲＫＬＫＶＬＧＳＧＶＦＧＴＶＨＫＧＶＷＩＰＥＧＥＳＩＫＩＰＶＣＩＫＶＩＥＤＫＳＧＲＱＳＦＱＡＶＴＤＨＭＬＡＩＧＳＬＤＨＡＨＩＶＲＬＬＧＬＣＰＧＳＳＬＱＬＶＴＱＹＬＰＬＧＳＬＬＤＨＶＲＱＨＲＧＡＬＧＰＱＬＬＬＮＷＧＶＱＩＡＫＧＭＹＹＬＥＥＨＧＭＶＨＲＮＬＡＡＲＮＶＬＬＫＳＰＳＱＶＱＶＡＤＦＧＶＡＤＬＬＰＰＤＤＫＱＬＬＹＳＥＡＫＴＰＩＫＷＭＡＬＥＳＩＨＦＧＫＹＴＨＱＳＤＶＷＳＹＧＶＴＶＷＥＬＭＴＦＧＡＥＰＹＡＧＬＲＬＡＥＶＰＤＬＬＥＫＧＥＲＬＡＱＰＱＩＣＴＩＤＶＹＭＶＭＶＫＣＷＭＩＤＥＮＩＲＰＴＦＫＥＬＡＮＥＦＴＲＭＡＲＤＰＰＲＹＬＶＩＫＲＥＳＧＰＧＩＡＰＧＰＥＰＨＧＬＴＮＫＫＬＥＥＶＥＬＥＰＥＬＤＬＤＬＤＬＥＡＥＥＤＮＬＡＴＴＴＬＧＳＡＬＳＬＰＶＧＴＬＮＲＰＲＧＳＱＳＬＬＳＰＳＳＧＹＭＰＭＮＱＧＮＬＧＥＳＣＱＥＳＡＶＳＧＳＳＥＲＣＰＲＰＶＳＬＨＰＭＰＲＧＣＬＡＳＥＳＳＥＧＨＶＴＧＳＥＡＥＬＱＥＫＶＳＭＣＲＳＲＳＲＳＲＳＰＲＰＲＧＤＳＡＹＨＳＱＲＨＳＬＬＴＰＶＴＰＬＳＰＰＧＬＥＥＥＤＶＮＧＹＶＭＰＤＴＨＬＫＧＴＰＳＳＲＥＧＴＬＳＳＶＧＬＳＳＶＬＧＴＥＥＥＤＥＤＥＥＹＥＹＭＮＲＲＲＲＨＳＰＰＨＰＰＲＰＳＳＬＥＥＬＧＹＥＹＭＤＶＧＳＤＬＳＡＳＬＧＳＴＱＳＣＰＬＨＰＶＰＩＭＰＴＡＧＴＴＰＤＥＤＹＥＹＭＮＲＱＲＤＧＧＧＰＧＧＤＹＡＡＭＧＡＣＰＡＳＥＱＧＹＥＥＭＲＡＦＱＧＰＧＨＱＡＰＨＶＨＹＡＲＬＫＴＬＲＳＬＥＡＴＤＳＡＦＤＮＰＤＹＷＨＳＲＬＦＰＫＡＮＡＱＲＴ

【0330】

配列番号９０－ヒトＮＲＧ１受容体ＥｒｂＢ４
ＭＫＰＡＴＧＬＷＶＷＶＳＬＬＶＡＡＧＴＶＱＰＳＤＳＱＳＶＣＡＧＴＥＮＫＬＳＳＬＳＤＬＥＱＱＹＲＡＬＲＫＹＹＥＮＣＥＶＶＭＧＮＬＥＩＴＳＩＥＨＮＲＤＬＳＦＬＲＳＶＲＥＶＴＧＹＶＬＶＡＬＮＱＦＲＹＬＰＬＥＮＬＲＩＩＲＧＴＫＬＹＥＤＲＹＡＬＡＩＦＬＮＹＲＫＤＧＮＦＧＬＱＥＬＧＬＫＮＬＴＥＩＬＮＧＧＶＹＶＤＱＮＫＦＬＣＹＡＤＴＩＨＷＱＤＩＶＲＮＰＷＰＳＮＬＴＬＶＳＴＮＧＳＳＧＣＧＲＣＨＫＳＣＴＧＲＣＷＧＰＴＥＮＨＣＱＴＬＴＲＴＶＣＡＥＱＣＤＧＲＣＹＧＰＹＶＳＤＣＣＨＲＥＣＡＧＧＣＳＧＰＫＤＴＤＣＦＡＣＭＮＦＮＤＳＧＡＣＶＴＱＣＰＱＴＦＶＹＮＰＴＴＦＱＬＥＨＮＦＮＡＫＹＴＹＧＡＦＣＶＫＫＣＰＨＮＦＶＶＤＳＳＳＣＶＲＡＣＰＳＳＫＭＥＶＥＥＮＧＩＫＭＣＫＰＣＴＤＩＣＰＫＡＣＤＧＩＧＴＧＳＬＭＳＡＱＴＶＤＳＳＮＩＤＫＦＩＮＣＴＫＩＮＧＮＬＩＦＬＶＴＧＩＨＧＤＰＹＮＡＩＥＡＩＤＰＥＫＬＮＶＦＲＴＶＲＥＩＴＧＦＬＮＩＱＳＷＰＰＮＭＴＤＦＳＶＦＳＮＬＶＴＩＧＧＲＶＬＹＳＧＬＳＬＬＩＬＫＱＱＧＩＴＳＬＱＦＱＳＬＫＥＩＳＡＧＮＩＹＩＴＤＮＳＮＬＣＹＹＨＴＩＮＷＴＴＬＦＳＴＩＮＱＲＩＶＩＲＤＮＲＫＡＥＮＣＴＡＥＧＭＶＣＮＨＬＣＳＳＤＧＣＷＧＰＧＰＤＱＣＬＳＣＲＲＦＳＲＧＲＩＣＩＥＳＣＮＬＹＤＧＥＦＲＥＦＥＮＧＳＩＣＶＥＣＤＰＱＣＥＫＭＥＤＧＬＬＴＣＨＧＰＧＰＤＮＣＴＫＣＳＨＦＫＤＧＰＮＣＶＥＫＣＰＤＧＬＱＧＡＮＳＦＩＦＫＹＡＤＰＤＲＥＣＨＰＣＨＰＮＣＴＱＧＣＮＧＰＴＳＨＤＣＩＹＹＰＷＴＧＨＳＴＬＰＱＨＡＲＴＰＬＩＡＡＧＶＩＧＧＬＦＩＬＶＩＶＧＬＴＦＡＶＹＶＲＲＫＳＩＫＫＫＲＡＬＲＲＦＬＥＴＥＬＶＥＰＬＴＰＳＧＴＡＰＮＱＡＱＬＲＩＬＫＥＴＥＬＫＲＶＫＶＬＧＳＧＡＦＧＴＶＹＫＧＩＷＶＰＥＧＥＴＶＫＩＰＶＡＩＫＩＬＮＥＴＴＧＰＫＡＮＶＥＦＭＤＥＡＬＩＭＡＳＭＤＨＰＨＬＶＲＬＬＧＶＣＬＳＰＴＩＱＬＶＴＱＬＭＰＨＧＣＬＬＥＹＶＨＥＨＫＤＮＩＧＳＱＬＬＬＮＷＣＶＱＩＡＫＧＭＭＹＬＥＥＲＲＬＶＨＲＤＬＡＡＲＮＶＬＶＫＳＰＮＨＶＫＩＴＤＦＧＬＡＲＬＬＥＧＤＥＫＥＹＮＡＤＧＧＫＭＰＩＫＷＭＡＬＥＣＩＨＹＲＫＦＴＨＱＳＤＶＷＳＹＧＶＴＩＷＥＬＭＴＦＧＧＫＰＹＤＧＩＰＴＲＥＩＰＤＬＬＥＫＧＥＲＬＰＱＰＰＩＣＴＩＤＶＹＭＶＭＶＫＣＷＭＩＤＡＤＳＲＰＫＦＫＥＬＡＡＥＦＳＲＭＡＲＤＰＱＲＹＬＶＩＱＧＤＤＲＭＫＬＰＳＰＮＤＳＫＦＦＱＮＬＬＤＥＥＤＬＥＤＭＭＤＡＥＥＹＬＶＰＱＡＦＮＩＰＰＰＩＹＴＳＲＡＲＩＤＳＮＲＳＥＩＧＨＳＰＰＰＡＹＴＰＭＳＧＮＱＦＶＹＲＤＧＧＦＡＡＥＱＧＶＳＶＰＹＲＡＰＴＳＴＩＰＥＡＰＶＡＱＧＡＴＡＥＩＦＤＤＳＣＣＮＧＴＬＲＫＰＶＡＰＨＶＱＥＤＳＳＴＱＲＹＳＡＤＰＴＶＦＡＰＥＲＳＰＲＧＥＬＤＥＥＧＹＭＴＰＭＲＤＫＰＫＱＥＹＬＮＰＶＥＥＮＰＦＶＳＲＲＫＮＧＤＬＱＡＬＤＮＰＥＹＨＮＡＳＮＧＰＰＫＡＥＤＥＹＶＮＥＰＬＹＬＮＴＦＡＮＴＬＧＫＡＥＹＬＫＮＮＩＬＳＭＰＥＫＡＫＫＡＦＤＮＰＤＹＷＮＨＳＬＰＰＲＳＴＬＱＨＰＤＹＬＱＥＹＳＴＫＹＦＹＫＱＮＧＲＩＲＰＩＶＡＥＮＰＥＹＬＳＥＦＳＬＫＰＧＴＶＬＰＰＰＰＹＲＨＲＮＴＶＶ

【0331】

配列番号９１－ヒトｐｒｏＲＬＮ２
ＭＰＲＬＦＦＦＨＬＬＧＶＣＬＬＬＮＱＦＳＲＡＶＡＤＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳＫＲＳＬＳＱＥＤＡＰＱＴＰＲＰＶＡＥＩＶＰＳＦＩＮＫＤＴＥＴＩＮＭＭＳＥＦＶＡＮＬＰＱＥＬＫＬＴＬＳＥＭＱＰＡＬＰＱＬＱＱＨＶＰＶＬＫＤＳＳＬＬＦＥＥＦＫＫＬＩＲＮＲＱＳＥＡＡＤＳＳＰＳＥＬＫＹＬＧＬＤＴＨＳＲＫＫＲＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ

【0332】

配列番号９２－ヒトＲＬＮ２ Ａ鎖
ＱＬＹＳＡＬＡＮＫＣＣＨＶＧＣＴＫＲＳＬＡＲＦＣ

【0333】

配列番号９３－ヒトＲＬＮ２ Ｂ鎖
ＤＳＷＭＥＥＶＩＫＬＣＧＲＥＬＶＲＡＱＩＡＩＣＧＭＳＴＷＳ

【0334】

配列番号９４－ヒトＲＸＦＰ１受容体
ＭＴＳＧＳＶＦＦＹＩＬＩＦＧＫＹＦＳＨＧＧＧＱＤＶＫＣＳＬＧＹＦＰＣＧＮＩＴＫＣＬＰＱＬＬＨＣＮＧＶＤＤＣＧＮＱＡＤＥＤＮＣＧＤＮＮＧＷＳＬＱＦＤＫＹＦＡＳＹＹＫＭＴＳＱＹＰＦＥＡＥＴＰＥＣＬＶＧＳＶＰＶＱＣＬＣＱＧＬＥＬＤＣＤＥＴＮＬＲＡＶＰＳＶＳＳＮＶＴＡＭＳＬＱＷＮＬＩＲＫＬＰＰＤＣＦＫＮＹＨＤＬＱＫＬＹＬＱＮＮＫＩＴＳＩＳＩＹＡＦＲＧＬＮＳＬＴＫＬＹＬＳＨＮＲＩＴＦＬＫＰＧＶＦＥＤＬＨＲＬＥＷＬＩＩＥＤＮＨＬＳＲＩＳＰＰＴＦＹＧＬＮＳＬＩＬＬＶＬＭＮＮＶＬＴＲＬＰＤＫＰＬＣＱＨＭＰＲＬＨＷＬＤＬＥＧＮＨＩＨＮＬＲＮＬＴＦＩＳＣＳＮＬＴＶＬＶＭＲＫＮＫＩＮＨＬＮＥＮＴＦＡＰＬＱＫＬＤＥＬＤＬＧＳＮＫＩＥＮＬＰＰＬＩＦＫＤＬＫＥＬＳＱＬＮＬＳＹＮＰＩＱＫＩＱＡＮＱＦＤＹＬＶＫＬＫＳＬＳＬＥＧＩＥＩＳＮＩＱＱＲＭＦＲＰＬＭＮＬＳＨＩＹＦＫＫＦＱＹＣＧＹＡＰＨＶＲＳＣＫＰＮＴＤＧＩＳＳＬＥＮＬＬＡＳＩＩＱＲＶＦＶＷＶＶＳＡＶＴＣＦＧＮＩＦＶＩＣＭＲＰＹＩＲＳＥＮＫＬＹＡＭＳＩＩＳＬＣＣＡＤＣＬＭＧＩＹＬＦＶＩＧＧＦＤＬＫＦＲＧＥＹＮＫＨＡＱＬＷＭＥＳＴＨＣＱＬＶＧＳＬＡＩＬＳＴＥＶＳＶＬＬＬＴＦＬＴＬＥＫＹＩＣＩＶＹＰＦＲＣＶＲＰＧＫＣＲＴＩＴＶＬＩＬＩＷＩＴＧＦＩＶＡＦＩＰＬＳＮＫＥＦＦＫＮＹＹＧＴＮＧＶＣＦＰＬＨＳＥＤＴＥＳＩＧＡＱＩＹＳＶＡＩＦＬＧＩＮＬＡＡＦＩＩＩＶＦＳＹＧＳＭＦＹＳＶＨＱＳＡＩＴＡＴＥＩＲＮＱＶＫＫＥＭＩＬＡＫＲＦＦＦＩＶＦＴＤＡＬＣＷＩＰＩＦＶＶＫＦＬＳＬＬＱＶＥＩＰＧＴＩＴＳＷＶＶＩＦＩＬＰＩＮＳＡＬＮＰＩＬＹＴＬＴＴＲＰＦＫＥＭＩＨＲＦＷＹＮＹＲＱＲＫＳＭＤＳＫＧＱＫＴＹＡＰＳＦＩＷＶＥＭＷＰＬＱＥＭＰＰＥＬＭＫＰＤＬＦＴＹＰＣＥＭＳＬＩＳＱＳＴＲＬＮＳＹＳ

【0335】

配列番号９５－ヒトＡＣＴＨ
ＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶＧＫＫＲＲＰＶＫＶＹＰＮＧＡＥＤＥＳＡＥＡＦＰＬＥＦ

【0336】

配列番号９６－ヒトＡＣＴＨ受容体（ＡＣＴＨＲ、ＭＣ２Ｒ）
ＭＫＨＩＩＮＳＹＥＮＩＮＮＴＡＲＮＮＳＤＣＰＲＶＶＬＰＥＥＩＦＦＴＩＳＩＶＧＶＬＥＮＬＩＶＬＬＡＶＦＫＮＫＮＬＱＡＰＭＹＦＦＩＣＳＬＡＩＳＤＭＬＧＳＬＹＫＩＬＥＮＩＬＩＩＬＲＮＭＧＹＬＫＰＲＧＳＦＥＴＴＡＤＤＩＩＤＳＬＦＶＬＳＬＬＧＳＩＦＳＬＳＶＩＡＡＤＲＹＩＴＩＦＨＡＬＲＹＨＳＩＶＴＭＲＲＴＶＶＶＬＴＶＩＷＴＦＣＴＧＴＧＩＴＭＶＩＦＳＨＨＶＰＴＶＩＴＦＴＳＬＦＰＬＭＬＶＦＩＬＣＬＹＶＨＭＦＬＬＡＲＳＨＴＲＫＩＳＴＬＰＲＡＮＭＫＧＡＩＴＬＴＩＬＬＧＶＦＩＦＣＷＡＰＦＶＬＨＶＬＬＭＴＦＣＰＳＮＰＹＣＡＣＹＭＳＬＦＱＶＮＧＭＬＩＭＣＮＡＶＩＤＰＦＩＹＡＦＲＳＰＥＬＲＤＡＦＫＫＭＩＦＣＳＲＹＷ

【0337】

配列番号９７－ヒトＣＮＴＦ
ＭＡＦＴＥＨＳＰＬＴＰＨＲＲＤＬＣＳＲＳＩＷＬＡＲＫＩＲＳＤＬＴＡＬＴＥＳＹＶＫＨＱＧＬＮＫＮＩＮＬＤＳＡＤＧＭＰＶＡＳＴＤＱＷＳＥＬＴＥＡＥＲＬＱＥＮＬＱＡＹＲＴＦＨＶＬＬＡＲＬＬＥＤＱＱＶＨＦＴＰＴＥＧＤＦＨＱＡＩＨＴＬＬＬＱＶＡＡＦＡＹＱＩＥＥＬＭＩＬＬＥＹＫＩＰＲＮＥＡＤＧＭＰＩＮＶＧＤＧＧＬＦＥＫＫＬＷＧＬＫＶＬＱＥＬＳＱＷＴＶＲＳＩＨＤＬＲＦＩＳＳＨＱＴＧＩＰＡＲＧＳＨＹＩＡＮＮＫＫＭ

【0338】

配列番号９８－ヒトＣＮＴＦ受容体アルファ
ＱＲＨＳＰＱＥＡＰＨＶＱＹＥＲＬＧＳＤＶＴＬＰＣＧＴＡＮＷＤＡＡＶＴＷＲＶＮＧＴＤＬＡＰＤＬＬＮＧＳＱＬＶＬＨＧＬＥＬＧＨＳＧＬＹＡＣＦＨＲＤＳＷＨＬＲＨＱＶＬＬＨＶＧＬＰＰＲＥＰＶＬＳＣＲＳＮＴＹＰＫＧＦＹＣＳＷＨＬＰＴＰＴＹＩＰＮＴＦＮＶＴＶＬＨＧＳＫＩＭＶＣＥＫＤＰＡＬＫＮＲＣＨＩＲＹＭＨＬＦＳＴＩＫＹＫＶＳＩＳＶＳＮＡＬＧＨＮＡＴＡＩＴＦＤＥＦＴＩＶＫＰＤＰＰＥＮＶＶＡＲＰＶＰＳＮＰＲＲＬＥＶＴＷＱＴＰＳＴＷＰＤＰＥＳＦＰＬＫＦＦＬＲＹＲＰＬＩＬＤＱＷＱＨＶＥＬＳＤＧＴＡＨＴＩＴＤＡＹＡＧＫＥＹＩＩＱＶＡＡＫＤＮＥＩＧＴＷＳＤＷＳＶＡＡＨＡＴＰＷＴＥＥＰＲＨＬＴＴＥＡＱＡＡＥＴＴＴＳＴＴＳＳＬＡＰＰＰＴＴＫＩＣＤＰＧＥＬＧＳ

【0339】

配列番号９９－ＧＬＰ１－標準
ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ

【0340】

配列番号１００－ＶＨＨ融合１（ＣＮＴＦ－（Ｇ_４Ｑ）_５－ＭＣ６．１Ｃ２２．４３）
ＭＡＦＴＥＨＳＰＬＴＰＨＲＲＤＬＡＳＲＳＩＷＬＡＲＫＩＲＳＤＬＴＡＬＴＥＳＹＶＫＨＱＧＬＮＫＮＩＮＬＤＳＡＤＧＭＰＶＡＳＴＤＲＷＳＥＬＴＥＡＥＲＬＱＥＮＬＱＡＹＲＴＦＨＶＬＬＡＲＬＬＥＤＱＱＶＨＦＴＰＴＥＧＤＦＨＱＡＩＨＴＬＬＬＱＶＡＡＦＡＹＱＩＥＥＬＭＩＬＬＥＹＫＩＰＲＮＥＡＤＧＭＰＩＮＶＧＤＧＧＬＦＥＫＫＬＷＧＬＫＶＬＱＥＬＳＱＷＴＶＲＳＩＨＤＬＲＦＩＳＳＨＱＴＧＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ

【0341】

配列番号１０１－ＶＨＨ融合２（ＭＣ６．１Ｃ２２－（Ｇ_４Ｑ）_５－ＣＮＴＦ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＭＡＦＴＥＨＳＰＬＴＰＨＲＲＤＬＡＳＲＳＩＷＬＡＲＫＩＲＳＤＬＴＡＬＴＥＳＹＶＫＨＱＧＬＮＫＮＩＮＬＤＳＡＤＧＭＰＶＡＳＴＤＲＷＳＥＬＴＥＡＥＲＬＱＥＮＬＱＡＹＲＴＦＨＶＬＬＡＲＬＬＥＤＱＱＶＨＦＴＰＴＥＧＤＦＨＱＡＩＨＴＬＬＬＱＶＡＡＦＡＹＱＩＥＥＬＭＩＬＬＥＹＫＩＰＲＮＥＡＤＧＭＰＩＮＶＧＤＧＧＬＦＥＫＫＬＷＧＬＫＶＬＱＥＬＳＱＷＴＶＲＳＩＨＤＬＲＦＩＳＳＨＱＴＧ

【0342】

配列番号１０２－ＶＨＨ融合３（ＮＲＧ１－（Ｇ_４Ｑ）_５－ＭＣ６．１Ｃ２２．４３）
ＳＨＬＶＫＣＡＥＫＥＫＴＦＣＶＮＧＧＥＣＦＭＶＫＤＬＳＮＰＳＲＹＬＣＫＣＰＮＥＦＴＧＤＲＣＱＮＹＶＭＡＳＦＹＫＨＬＧＩＥＦＭＥＡＥＥＬＹＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ

【0343】

配列番号１０３－ＶＨＨ融合４（ＭＣ６．１Ｃ２２－（Ｇ_４Ｑ）_５－ＮＲＧ１）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＳＨＬＶＫＣＡＥＫＥＫＴＦＣＶＮＧＧＥＣＦＭＶＫＤＬＳＮＰＳＲＹＬＣＫＣＰＮＥＦＴＧＤＲＣＱＮＹＶＭＡＳＦＹＫＨＬＧＩＥＦＭＥＡＥＥＬＹＱ

【0344】

配列番号１０４－ＶＨＨ融合５（ＭＣ６．１Ｃ２２－（Ｇ_４Ｑ）_５－ＧＤＦ１５）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＤＨＣＰＬＧＰＧＲＣＣＲＬＨＴＶＲＡＳＬＥＤＬＧＷＡＤＷＶＬＳＰＲＥＶＱＶＴＭＣＩＧＡＣＰＳＱＦＲＡＡＮＭＨＡＱＩＫＴＳＬＨＲＬＫＰＤＴＶＰＡＰＣＣＶＰＡＳＹＮＰＭＶＬＩＱＫＴＤＴＧＶＳＬＱＴＹＤＤＬＬＡＫＤＣＨＣＩ

【0345】

配列番号１０５－ＶＨＨ融合６（ＩＬ２－（Ｇ_４Ｑ）_５－ＭＣ６．１Ｃ２２．４３）
ＡＰＱＳＳＳＴＱＱＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＲＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ

【0346】

配列番号１０６－ＶＨＨ融合７（ＭＣ６．１Ｃ２２－（Ｇ_４Ｑ）_５－ＩＬ２）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＡＰＱＳＳＳＴＱＱＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＲＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ

【0347】

配列番号１０７－ＶＨＨ融合８（ＧＬＰ１－（Ｇ_４Ｑ）_５－ＭＣ６．１Ｃ２２．４３）
ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＧＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ

【0348】

配列番号１０８－ＨＣ－ＶＨＨ（ＡｄａＦａｂＶＨＣＨ_１－（Ｇ_４Ｑ）_５－ＭＣ６．１Ｃ２２．４３）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＴＷＮＳＧＨＩＤＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＶＳＹＬＳＴＡＳＳＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ

【0349】

配列番号１０９－ＬＣ（ＡｄａＦａｂＶＬＣＬ）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＲＹＮＲＡＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

【0350】

配列番号１１０－ＨＣ（ＡｄａＦａｂＶＨＣＨ_１）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＴＷＮＳＧＨＩＤＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＶＳＹＬＳＴＡＳＳＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤ

【0351】

配列番号１１１－ＬＣ－ＶＨＨ（ＡｄａＦａｂＶＬＣＬ－（Ｇ_４Ｑ）_５－ＭＣ６．１Ｃ２２．４３）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＲＹＮＲＡＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ

【0352】

配列番号１１２－ＶＨＨ－ＨＣ（ＭＣ６．１Ｃ２２－（Ｇ_４Ｑ）_５－ＡｄａＦａｂＶＨＣＨ_１）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＴＷＮＳＧＨＩＤＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＶＳＹＬＳＴＡＳＳＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤ

【0353】

配列番号１１３－ＬＣ（ＡｄａＦａｂＶＬＣＬ）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＲＹＮＲＡＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

【0354】

配列番号１１４－ＨＣ（ＡｄａＦａｂＶＨＣＨ_１）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＴＷＮＳＧＨＩＤＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＶＳＹＬＳＴＡＳＳＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤ

【0355】

配列番号１１５－ＶＨＨ－ＬＣ（ＭＣ６．１Ｃ２２－（Ｇ_４Ｑ）_５－ＡｄａＦａｂＶＬＣＬ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＥＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＲＹＮＲＡＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

【0356】

配列番号１１６－ＶＨＨ融合１３（ＧＬＰ１－ＭＣ６．１Ｃ８０Ｃｙｓ）
ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＧＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＣ

【0357】

配列番号１１７－ＶＨＨ融合コンジュゲート１（ＧＬＰ１－Ｃ８０Ｃｙｓ－ＡＣＴＨコンジュゲート）
ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＧＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＧＧＧＧＱＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＣ－マレイミド－（ＰＥＧ）_１２－ＡＣＴＨ（Ｃ末端からＮ末端への配向）

【化16】

【0358】

配列番号１１８－ＶＨＨ融合コンジュゲート２（ＭＣ６．１Ｃ８０Ｃｙｓ－ＡＣＴＨコンジュゲート）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＣ－マレイミド－（ＰＥＧ）_１２－ＡＣＴＨ（Ｃ末端からＮ末端への配向）

【化17】

【0359】

配列番号１１９－中間体１（ＡＣＴＨ－（ＰＥＧ）_１２－マレイミドコンジュゲート）
ＳＹＳＭＥＨＦＲＷＧＫＰＶＧＫＫＲＲＰＶＫＶＹＰＫ－（ＰＥＧ）_１２－マレイミド－ＮＨ_２

【化18】

【0360】

配列番号１２０－Ｆａｂ ＨＣ（ＡｄａＦａｂＶＨＣＨ_１）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＴＷＮＳＧＨＩＤＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＶＳＹＬＳＴＡＳＳＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤ

【0361】

配列番号１２１－Ｆａｂ ＬＣ（ＡｄａＦａｂＶＬＣＬ）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＹＣＱＲＹＮＲＡＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

【0362】

配列番号１２２－ヒトＧＩＴＲ全長（シグナルペプチドなし）
ＱＲＰＴＧＧＰＧＣＧＰＧＲＬＬＬＧＴＧＴＤＡＲＣＣＲＶＨＴＴＲＣＣＲＤＹＰＧＥＥＣＣＳＥＷＤＣＭＣＶＱＰＥＦＨＣＧＤＰＣＣＴＴＣＲＨＨＰＣＰＰＧＱＧＶＱＳＱＧＫＦＳＦＧＦＱＣＩＤＣＡＳＧＴＦＳＧＧＨＥＧＨＣＫＰＷＴＤＣＴＱＦＧＦＬＴＶＦＰＧＮＫＴＨＮＡＶＣＶＰＧＳＰＰＡＥＰＬＧＷＬＴＶＶＬＬＡＶＡＡＣＶＬＬＬＴＳＡＱＬＧＬＨＩＷＱＬＲＳＱＣＭＷＰＲＥＴＱＬＬＬＥＶＰＰＳＴＥＤＡＲＳＣＱＦＰＥＥＥＲＧＥＲＳＡＥＥＫＧＲＬＧＤＬＷＶ

【0363】

配列番号１２３－ヒトＧＩＴＲ ＥＣＤ（シグナルペプチドなし）
ＱＲＰＴＧＧＰＧＣＧＰＧＲＬＬＬＧＴＧＴＤＡＲＣＣＲＶＨＴＴＲＣＣＲＤＹＰＧＥＥＣＣＳＥＷＤＣＭＣＶＱＰＥＦＨＣＧＤＰＣＣＴＴＣＲＨＨＰＣＰＰＧＱＧＶＱＳＱＧＫＦＳＦＧＦＱＣＩＤＣＡＳＧＴＦＳＧＧＨＥＧＨＣＫＰＷＴＤＣＴＱＦＧＦＬＴＶＦＰＧＮＫＴＨＮＡＶＣＶＰＧＳＰＰＡＥ

【0364】

配列番号１２４－ＶＨＨ部分３８（ＭＣ６．１Ｃ９０Ｃｙｓ）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＧＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＣ

【0365】

配列番号１２５－ＶＨＨ部分３９（ＭＣ６．１Ｃ９０．４３）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＧＡＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ

【0366】

配列番号１２６－ＶＨＨ部分４０（ＭＣ６．１Ｃ９５．４３）
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＲＹＩＤＥＴＡＶＡＷＦＲＱＡＰＧＫＧＲＥＦＶＡＧＩＧＧＧＶＤＩＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＧＴＲＰＧＲＰＬＩＴＳＫＶＡＤＬＹＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＰＰ

【配列表】

2024506145000001.app

【国際調査報告】