特表 2024-506584 発作性疾患を治療するための組み合わせ療法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-02-14

(54)【発明の名称】発作性疾患を治療するための組み合わせ療法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/472 20060101AFI20240206BHJP

   A61P 25/08 20060101ALI20240206BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240206BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240206BHJP

   A61K 31/19 20060101ALI20240206BHJP

   A61K 31/4166 20060101ALI20240206BHJP

   A61K 31/16 20060101ALI20240206BHJP

   A61K 31/395 20060101ALI20240206BHJP

   A61K 31/4015 20060101ALI20240206BHJP

【ＦＩ】

A61K31/472

A61P25/08

A61P43/00 121

A61P43/00 111

A61K45/00

A61K31/19

A61K31/4166

A61K31/16

A61K31/395

A61K31/4015

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023547335

(86)(22)【出願日】2022-02-09

(85)【翻訳文提出日】2023-09-29

(86)【国際出願番号】 US2022015851

(87)【国際公開番号】W WO2022173853

(87)【国際公開日】2022-08-18

(31)【優先権主張番号】63/147,736

(32)【優先日】2021-02-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

２．ＳＰＡＮ

(71)【出願人】

【識別番号】506030826

【氏名又は名称】ゼノン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】ＸＥＮＯＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ ＩＮＣ．

(74)【代理人】

【識別番号】100120891

【弁理士】

【氏名又は名称】林 一好

(74)【代理人】

【識別番号】100165157

【弁理士】

【氏名又は名称】芝 哲央

(74)【代理人】

【識別番号】100205659

【弁理士】

【氏名又は名称】齋藤 拓也

(74)【代理人】

【識別番号】100126000

【弁理士】

【氏名又は名称】岩池 満

(74)【代理人】

【識別番号】100185269

【弁理士】

【氏名又は名称】小菅 一弘

(72)【発明者】

【氏名】ジョンソン ジェイアール ジェームズ フィリップ

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

4C206

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084MA02

4C084MA52

4C084NA05

4C084ZA061

4C084ZA062

4C084ZC751

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC08

4C086BC30

4C086BC38

4C086BC62

4C086GA16

4C086MA02

4C086MA03

4C086MA04

4C086MA05

4C086NA05

4C086ZA06

4C086ZC41

4C086ZC75

4C206AA01

4C206AA02

4C206DA03

4C206GA01

4C206GA28

4C206MA02

4C206MA03

4C206MA04

4C206MA05

4C206NA05

4C206ZA06

4C206ZC75

(57)【要約】

特定の実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療するための方法及び使用であって、そのヒトに、Ｎ－［４－（６－フルオロ－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル）－２，６－ジメチルフェニル］－３，３－ジメチルブタンアミド（化合物Ａ）及び抗けいれん薬（ＡＳＭ）を、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて投与することを含む方法及び使用に向けられる。本開示はさらに、療法及び化合物Ａの投与の様々な改善された方法に向けられる。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療することにおいて使用するための化合物Ａであって、前記治療は、前記ヒトに、化合物Ａ及び抗けいれん薬（ＡＳＭ）を、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて投与することを含み、
化合物Ａは、Ｎ－［４－（６－フルオロ－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル）－２，６－ジメチルフェニル］－３，３－ジメチルブタンアミドである、使用するための化合物Ａ。

【請求項2】

発作性疾患に罹患しているヒトにおける治療有効性に必要とされる抗けいれん薬（ＡＳＭ）の量を低減することにおいて使用するための化合物Ａであって、前記低減は、前記ヒトに、前記ＡＳＭと組み合わせて、前記ＡＳＭとともに投与されるときにそのような低減を達成するのに有効な量の化合物Ａを投与することを含み、
化合物Ａは、Ｎ－［４－（６－フルオロ－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル）－２，６－ジメチルフェニル］－３，３－ジメチルブタンアミドである、使用するための化合物Ａ。

【請求項3】

発作性疾患に罹患しているヒトにおける治療有効性に必要とされる化合物Ａの量を低減することにおいて使用するための化合物Ａであって、前記低減は、前記ヒトに、化合物Ａと組み合わせて、化合物Ａとともに投与されたときにそのような低減を達成するのに有効な量の抗けいれん薬（ＡＳＭ）を投与することを含み、
化合物Ａは、Ｎ－［４－（６－フルオロ－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル）－２，６－ジメチルフェニル］－３，３－ジメチルブタンアミドである、使用するための化合物Ａ。

【請求項4】

前記ヒトにおいてＫｖ７カリウムチャネルの開口を増強することを含む請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項5】

ヒトにおいてＫｖ７カリウムチャネルの開口を増強することにおいて使用するための化合物Ａであって、前記増強は、前記ヒトに、化合物Ａ及び抗けいれん薬（ＡＳＭ）を、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて投与することを含み、
化合物Ａは、Ｎ－［４－（６－フルオロ－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル）－２，６－ジメチルフェニル］－３，３－ジメチルブタンアミドであり、
前記ヒトは発作性疾患を有する、使用するための化合物Ａ。

【請求項6】

前記Ｋｖ７カリウムチャネルは、Ｋｖ７．２、Ｋｖ７．３、Ｋｖ７．４、又はＫｖ７．５のうちの１つ以上である請求項４又は請求項５に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項7】

Ｋｖ７．１よりもＫｖ７．２、Ｋｖ７．３、Ｋｖ７．４、又はＫｖ７．５のうちの１つ以上の開口を増強するために選択的である請求項６に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項8】

Ｋｖ７．２／Ｋｖ７．３（ＫＣＮＱ２／３）カリウムチャネルの開口を含む請求項４又は請求項５に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項9】

前記ＡＳＭは、ベンゾジアゼピン、カルバマゼピン、セノバメート、フェルバメート、ガバペンチン、ラコサミド、ラモトリギン、レベチラセタム、オクスカルバゼピン、フェノバルビタール、フェニトイン、プレガバリン、ルフィナミド、チアガビン、トピラマート、バルプロ酸、ビガバトリン、ゾニサミド、又はこれらの組み合わせである請求項１から請求項８のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項10】

前記ＡＳＭは、バルプロ酸、レベチラセタム、フェニトイン、ラコサミド、又はセノバメートである請求項１から請求項９のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項11】

前記ＡＳＭは、前記ヒトにおいてＫｖ７カリウムチャネルの開口を増強しない請求項１から請求項１０のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項12】

前記ＡＳＭは、前記ヒトにおいて神経細胞の興奮を減少させる請求項１から請求項１１のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項13】

前記ＡＳＭは、前記ヒトにおいてナトリウムチャネルを遮断することによって神経細胞の興奮を減少させる請求項１２に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項14】

前記ＡＳＭは、前記ヒトにおいてカルシウムチャネルを遮断することによって神経細胞の興奮を減少させる請求項１２に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項15】

前記ＡＳＭは、前記ヒトにおいてシナプス小胞糖タンパク質２Ａ（ＳＶ２Ａ）に結合することによって神経細胞の興奮を減少させる請求項１２に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項16】

前記ＡＳＭは、前記ヒトにおいて神経細胞阻害を増加させる請求項１から請求項１１のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項17】

前記ＡＳＭはグルタミン酸作動薬である請求項１から請求項１１のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項18】

前記ＡＳＭはＧＡＢＡ作動薬である請求項１から請求項１１のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項19】

前記発作性疾患はＫｖ７カリウムチャネル機能不全と関連する請求項１から請求項１８のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項20】

前記発作性疾患は焦点起始てんかんである請求項１から請求項１９のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項21】

化合物Ａは前記ヒトに経口投与される請求項１から請求項２０のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項22】

前記ＡＳＭは前記ヒトに経口投与される請求項１から請求項２１のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項23】

化合物Ａは、前記ヒトに１～２００ｍｇの用量で投与される請求項１から請求項２２のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項24】

化合物Ａは、前記ヒトに２～１００ｍｇの用量で投与される請求項１から請求項２３のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項25】

化合物Ａは、前記ヒトに５～５０ｍｇの用量で投与される請求項１から請求項２４のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項26】

化合物Ａは、前記ヒトに５、１０、１５、２０、又は２５ｍｇの用量で投与される請求項１から請求項２５のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項27】

化合物Ａは、前記ヒトに２０ｍｇの用量で投与される請求項１から請求項２６のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項28】

化合物Ａは、前記ヒトに少なくとも１０ｍｇの用量で投与される請求項１から請求項２２のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項29】

化合物Ａは、前記ヒトに少なくとも２０ｍｇの用量で投与される請求項２８に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項30】

化合物Ａは、前記ヒトに少なくとも５０ｍｇの用量で投与される請求項２８に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項31】

化合物Ａは、前記ヒトに１日あたり５～１０００ｍｇの用量で投与される請求項１から請求項２２のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項32】

化合物Ａは、前記ヒトに１日あたり５～５００ｍｇの用量で投与される請求項３１に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項33】

化合物Ａは、前記ヒトに１日あたり５～２５０ｍｇの用量で投与される請求項３１に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項34】

化合物Ａは、前記ヒトに１日あたり２０～１５０ｍｇの用量で投与される請求項３１に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項35】

化合物Ａは、前記ヒトに１日あたり１００ｍｇの用量で投与される請求項３１に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項36】

化合物Ａは、前記ヒトに０．０１～２．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される請求項１から請求項２２のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項37】

化合物Ａは、前記ヒトに０．０３～１．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される請求項３６に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項38】

化合物Ａは、前記ヒトに０．０５～０．５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される請求項３６に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項39】

化合物Ａは、前記ヒトに食事摂取の約３０分前から食事摂取の約２時間後の間に経口投与される請求項１から請求項３８のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項40】

化合物Ａは、前記ヒトに食事中又は食事摂取の後１５分以内に経口投与される請求項３９に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項41】

前記ＡＳＭはバルプロ酸である請求項１から請求項４０のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項42】

前記バルプロ酸は、前記ヒトに２～１６ｍｇ／ｋｇの用量で投与される請求項４１に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項43】

前記バルプロ酸は、前記ヒトに４～１２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される請求項４１に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項44】

前記ＡＳＭはフェニトインである請求項１から請求項４０のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項45】

前記フェニトインは、前記ヒトに０．０５～５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される請求項４４に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項46】

前記フェニトインは、前記ヒトに０．１～１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される請求項４４に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項47】

前記ＡＳＭはラコサミドである請求項１から請求項４０のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項48】

前記ラコサミドは、前記ヒトに０．１～５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される請求項４７に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項49】

前記ラコサミドは、前記ヒトに０．５～１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される請求項４７に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項50】

前記ＡＳＭはセノバメートである請求項１から請求項４０のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項51】

前記セノバメートは、前記ヒトに０．０５～５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される請求項５０に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項52】

前記セノバメートは、前記ヒトに０．１～１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される請求項５０に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項53】

化合物Ａ及び前記ＡＳＭの組み合わせ投与は、単独の化合物Ａ又は前記ＡＳＭの個々の投与と比較して、改善された有効性を提供する請求項１から請求項５２のいずれか１項に記載の使用するための化合物Ａ。

【請求項54】

化合物Ａと、抗けいれん薬（ＡＳＭ）と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物であって、
化合物Ａは、Ｎ－［４－（６－フルオロ－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル）－２，６－ジメチルフェニル］－３，３－ジメチルブタンアミドである、医薬組成物。

【請求項55】

前記ＡＳＭは、ベンゾジアゼピン、カルバマゼピン、セノバメート、フェルバメート、ガバペンチン、ラコサミド、ラモトリギン、レベチラセタム、オクスカルバゼピン、フェノバルビタール、フェニトイン、プレガバリン、ルフィナミド、チアガビン、トピラマート、バルプロ酸、ビガバトリン、ゾニサミド、又はこれらの組み合わせである請求項５４に記載の医薬組成物。

【請求項56】

前記ＡＳＭはバルプロ酸、フェニトイン、レベチラセタム、ラコサミド、又はセノバメートである請求項５５に記載の医薬組成物。

【請求項57】

前記ＡＳＭはバルプロ酸である請求項５６に記載の医薬組成物。

【請求項58】

前記ＡＳＭはフェニトインである請求項５６に記載の医薬組成物。

【請求項59】

前記ＡＳＭはレベチラセタムである請求項５６に記載の医薬組成物。

【請求項60】

前記ＡＳＭはラコサミドである請求項５６に記載の医薬組成物。

【請求項61】

前記ＡＳＭはセノバメートである請求項５６に記載の医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

特定の実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療するための方法及び使用であって、そのヒトに、Ｎ－［４－（６－フルオロ－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル）－２，６－ジメチルフェニル］－３，３－ジメチルブタンアミド（化合物Ａ）及び抗けいれん薬（ＡＳＭ）を、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて投与することを含む方法及び使用に向けられる。本開示はさらに、療法及び化合物Ａの投与の様々な改善された方法に向けられる。

【背景技術】

【0002】

てんかんは、全世界の推定罹患率が人口の０．７％（すなわち、約５，０００万人）とされる一般的な神経障害である（Ｈｉｒｔｚ，Ｄ．ら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ（２００７）、６８：３２６－３３７を参照）。てんかんは、発作につながる脳の異常な電気活性を特徴とする。疫学的な目的で、その定義は、あらゆるタイプの複数の非誘発性発作を必要とする。

【0003】

てんかんを抱える患者は、主にその疾患の病因に起因して、一般集団と比べて上昇した死亡リスクを有する。しかしながら、制御できないてんかんを抱える患者においては、最大の発作関連の死亡リスクは、てんかんにおける予期せぬ突然死（ＳＵＤＥＰ）に起因する（Ｈｉｔｉｒｉｓ，Ｎ．ら、Ｅｐｉｌｅｐｓｙ ａｎｄ Ｂｅｈａｖｉｏｒ（２００７）、１０：３６３－３７６を参照）。治験的な抗けいれん（抗発作、抗てんかん）薬（ＡＳＭ）の臨床試験に参加する患者は、一般に１０年を超えててんかんを抱えており、複数のＡＳＭ療法において不首尾である。

【0004】

てんかんのほとんどの形態の病態生理学はあまりよく理解されていないままであるが、てんかん発作は、一群の神経細胞の過剰に同期した持続性の発火から生じるということが知られている。神経細胞の興奮性の持続的な増大は、すべてのてんかん症候群に共通する。てんかんを治療する上での治療戦略は、種々の機構経路を通して神経細胞の興奮性を低下させることを伴う。異なる作用機序を標的指向化することにより治療スペクトルを拡大するために、及びリスク／有益性プロファイルを向上させるために、過去２０年にわたって、いくつかの新しいＡＳＭが開発され、販売された。現在利用可能なＡＳＭは、シナプス小胞糖タンパク質の阻害、阻害性のＧＡＢＡ作動性神経伝達の強化、グルタミン酸介在性の興奮性神経伝達の低下、又は電位依存性のナトリウムチャネル若しくはカルシウムチャネルの阻害によって作用すると考えられる。これにもかかわらず、３０％以下の患者は、従来の治療で効果がないままであり、制御されない発作を抱え続けている（Ｂｒｏｗｎ，Ｄ．Ａ．ら、Ｎａｔｕｒｅ（１９８０）、２８３：６７３－６７６、及びＥｌｇｅｒ，Ｃ．Ｅ．ら、Ｅｐｉｌｅｐｓｙ Ｂｅｈａｖ．（２００８）、１２：５０１－５３９を参照）。難治性の患者における生活の質は低く、患者は自動車の運転ができず、患者は独立して働くこと又は生活することが困難である。加えて、多くの患者は、自身の発作性疾患の続発症として行動障害、神経障害、及び／又は知的障害を抱える。カリウム依存性チャネルが神経細胞の興奮性の制御において主要な役割を有するという事実にもかかわらず、現在の薬剤は、神経細胞のカリウム依存性チャネルに対してほとんど効果がない。それゆえ、治療に抵抗性を示すてんかんを抱える患者における発作制御に対する重要なまだ満たされていない臨床ニーズに対処するために、新規な作用機序を有する医薬、又は既に販売されているＡＳＭを改良する医薬が必要である。

【0005】

電位依存性カリウムチャネルＫｖ７．２及びＫｖ７．３（Ｋｖ７．２／Ｋｖ７．３）は、神経細胞の興奮性の制御において重要である。Ｋｖ７．２／Ｋｖ７．３は、初期の特性解析に従って名付けられた神経細胞の「Ｍ電流」の基礎をなす。というのも、神経細胞電流は、ムスカリン／コリン作動薬に応答して減少するからである（Ｂｒｏｗｎ，Ｄ．Ａ．ら、Ｎａｔｕｒｅ（１９８０）、２８３：６７３－６７６参照）。Ｍ電流は、神経細胞の興奮性亢進に対するブレーキとして作用することが知られている不活性化しない、過分極性の電流である。結果として、例えば遺伝的な機能喪失を通してのＫｖ７．２介在性Ｍ電流の減少は、神経細胞の脱分極並びに膜及び神経細胞の興奮性の上昇を引き起こす可能性があり、これは、てんかん発作として顕在化する活動電位バーストにつながる可能性がある。対照的に、Ｋｖ７．２介在性Ｍ電流の上昇は、細胞膜を過分極させ、これにより神経細胞の興奮性を低下させ、活動電位バーストの開始及び伝播、並びにその結果生じる発作を防止することができる。神経細胞においてＫｖ７．２／Ｋｖ７．３チャネルの開いた状態を増強することは、過分極した安静状態に有利であり、これは急速な活動電位スパイク（すなわち、バースト発火）を低下させる。このような増強は、易興奮性の、特に過興奮性の、神経細胞に対する安定化効果を提供することができ、それゆえ所定の発作性疾患を治療することにおいて有用である可能性がある。この増強は、Ｋｖ７．２／Ｋｖ７．３開口薬として知られるレチガビン（エゾガビン）を用いたてんかんを抱える成人における部分初発発作等の発作性疾患の治療について、効果的であることが臨床的に証明されている。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】Ｈｉｒｔｚ，Ｄ．ら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ（２００７）、６８：３２６－３３７

【非特許文献2】Ｈｉｔｉｒｉｓ，Ｎ．ら、Ｅｐｉｌｅｐｓｙ ａｎｄ Ｂｅｈａｖｉｏｒ（２００７）、１０：３６３－３７６

【非特許文献3】Ｂｒｏｗｎ，Ｄ．Ａ．ら、Ｎａｔｕｒｅ（１９８０）、２８３：６７３－６７６

【非特許文献4】Ｅｌｇｅｒ，Ｃ．Ｅ．ら、Ｅｐｉｌｅｐｓｙ Ｂｅｈａｖ．（２００８）、１２：５０１－５３９

【非特許文献5】Ｋｕｐｆｅｒｂｅｒｇ，Ｈ．、Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ（１９８９）、３０（Ｓｕｐｐｌ．１）：Ｓ５１－Ｓ５６

【非特許文献6】２０１４年１２月５～９日の６８ｔｈ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｅｐｉｌｅｐｓｙ Ｓｏｃｉｅｔｙ（ＡＥＳ）、シアトル、ワシントン州、米国で提示されたＰｒｅｓｃｏｔｔ，Ｊ．Ｓ．及びＥｖａｎｓ，Ｃ．Ａ．、「Ｐｉｇｍｅｎｔａｒｙ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ（ｄｉｓｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ） ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｅｚｏｇａｂｉｎｅ／ｒｅｔｉｇａｂｉｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ：ｎｏｎｃｌｉｎｉｃａｌ ａｓｐｅｃｔｓ」、ポスター２．３２４

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

この分野で、特に以下に定義される化合物Ａ及び発作性疾患を治療することにおけるその使用に関して著しい進展がなされているが、発作性疾患を治療するためのさらなる選択肢を患者に提供するという実質的なニーズが依然としてある。

【課題を解決するための手段】

【0008】

本開示は、小分子Ｎ－［４－（６－フルオロ－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル）－２，６－ジメチルフェニル］－３，３－ジメチルブタンアミド（本明細書では「化合物Ａ」と呼ぶ）の特定の方法及び使用を記載する。

【0009】

１つの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに化合物Ａ及びＡＳＭを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて投与する工程を含む方法に向けられる。同様に、いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおける発作性疾患の治療における、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量の化合物Ａ及びＡＳＭの使用に向けられる。

【0010】

別の実施形態では、本開示は、発作性疾患に罹患しているヒトにおける治療有効性に必要とされるＡＳＭの量を低減する方法であって、そのヒトに、ＡＳＭと組み合わせて、ＡＳＭとともに投与されるときにそのような低減を達成するのに有効な量の化合物Ａを投与する工程を含む方法に向けられる。同様に、いくつかの実施形態では、本開示は、発作性疾患に罹患しているヒトにおける治療有効性に必要とされるＡＳＭの量を低減することにおける化合物Ａの使用であって、例えば、この低減は、そのヒトに、ＡＳＭとともに投与されるときにそのような低減を達成するのに有効な量の化合物ＡをＡＳＭと組み合わせて投与することによる使用に向けられる。これらの実施形態の特定の例では、ＡＳＭは、バルプロ酸、レベチラセタム、フェニトイン、ラコサミド、セノバメート（ｃｅｎｏｂａｍａｔｅ）、又はこれらの組み合わせ、特にバルプロ酸である。

【0011】

１つの実施形態では、本開示は、発作性疾患に罹患しているヒトにおける治療有効性に必要とされる化合物Ａの量を低減する方法であって、そのヒトに、化合物Ａと組み合わせて、化合物Ａとともに投与されるときにそのような低減を達成するのに有効な量のＡＳＭを投与する工程を含む方法に向けられる。同様に、いくつかの実施形態では、本開示は、発作性疾患に罹患しているヒトにおける治療有効性に必要とされる化合物Ａの量を低減することにおけるＡＳＭの使用であって、例えばこの低減は、そのヒトに、化合物Ａとともに投与されるときにそのような低減を達成するのに有効な量のＡＳＭを化合物Ａと組み合わせて投与することによる使用に向けられる。これらの実施形態の特定の例では、ＡＳＭは、バルプロ酸、レベチラセタム、フェニトイン、ラコサミド、セノバメート、又はこれらの組み合わせ、特にフェニトインである。

【0012】

いくつかの態様では、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する、治療有効性に必要とされるＡＳＭの量を低減する、治療有効性に必要とされる化合物Ａの量を低減する、又は発作性疾患有効に治療しながらヒトにおいて投与された量の化合物Ａの血漿若しくは脳への吸収を低減する、本明細書に記載される方法及び使用は、ヒトにおいてＫｖ７カリウムチャネルの開口を増強することを含む。

【0013】

１つの実施形態では、本開示は、ヒトにおいてＫｖ７カリウムチャネルの開口を増強する方法であって、そのヒトに化合物Ａ及びＡＳＭを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて投与する工程を含み、例えば、上記ヒトは発作性疾患を有する方法に向けられる。同様に、いくつかの実施形態では、本開示は、ヒトにおいてＫｖ７カリウムチャネルの開口を増強することにおける、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量の化合物Ａ及びＡＳＭの使用であって、例えば、そのヒトは発作性疾患を有する使用に向けられる。

【0014】

いくつかの態様では、Ｋｖ７カリウムチャネルは、Ｋｖ７．２、Ｋｖ７．３、Ｋｖ７．４、又はＫｖ７．５のうちの１つ以上である。特定の例では、Ｋｖ７．２、Ｋｖ７．３、Ｋｖ７．４、又はＫｖ７．５カリウムチャネルのうちの１つ以上の開口又は開口の増強は、Ｋｖ７．１よりも選択的である。他の例では、当該方法は、Ｋｖ７．２／Ｋｖ７．３（ＫＣＮＱ２／３）カリウムチャネルの開口又は開口の増強を含む。

【0015】

当該方法及び使用のいくつかの態様では、ＡＳＭは、ベンゾジアゼピン、カルバマゼピン、セノバメート、フェルバメート、ガバペンチン、ラコサミド、ラモトリギン、レベチラセタム、オクスカルバゼピン、フェノバルビタール、フェニトイン、プレガバリン、ルフィナミド、チアガビン、トピラマート、バルプロ酸、ビガバトリン、ゾニサミド、又はこれらの組み合わせである。特定の態様では、抗けいれん薬は、バルプロ酸、レベチラセタム、フェニトイン、ラコサミド、セノバメート、又はこれらの組み合わせである。特定の例では、抗けいれん薬は、ヒトにおいてＫｖ７カリウムチャネルの開口を増強しない。

【0016】

いくつかの実施形態では、ＡＳＭは、ヒトにおいてナトリウムチャネルを遮断することによって神経細胞の興奮を減少させるか、ヒトにおいてカルシウムチャネルを遮断することによって神経細胞の興奮を減少させるか、ヒトにおいてシナプス小胞糖タンパク質２Ａ（ＳＶ２Ａ）に結合することによって神経細胞の興奮を減少させるか、又はヒトにおいて神経細胞の阻害を増加させる。

【0017】

いくつかの態様では、ＡＳＭはグルタミン酸作動薬である。他の態様では、ＡＳＭはＧＡＢＡ作動薬である。

【0018】

いくつかの例では、当該方法によって治療されるか又は当該方法と関連する発作性疾患は、Ｋｖ７カリウムチャネル機能不全と関連する。他の例では、発作性疾患は、焦点起始てんかん（焦点性初発てんかん、ｆｏｃａｌ ｏｎｓｅｔ ｅｐｉｌｅｐｓｙ）である。

【0019】

当該方法及び使用のいくつかの実施形態では、化合物Ａはヒトに経口投与される。当該方法及び使用の特定の実施形態では、ＡＳＭはヒトに経口投与される。当該方法及び使用のさらなる実施形態では、化合物Ａ及びＡＳＭの両方がヒトに経口投与される。

【0020】

当該方法及び使用のいくつかの態様では、化合物Ａは、ヒトに対して１～２００ｍｇの化合物Ａの用量で、ヒトに対して２～１００ｍｇの化合物Ａの用量で、ヒトに対して５～５０ｍｇの化合物Ａの用量で、ヒトに対して５、１０、１５、２０、若しくは２５ｍｇの化合物Ａの用量で、又はヒトに対して２０ｍｇの化合物Ａの用量で、ＡＳＭと組み合わせて、例えば経口で投与される。他の態様では、化合物Ａは、ヒトに対して少なくとも１０ｍｇの化合物Ａの用量で、ヒトに対して少なくとも２０ｍｇの化合物Ａの用量で、又はヒトに対して少なくとも５０ｍｇの化合物Ａの用量で、ＡＳＭと組み合わせて、例えば経口で投与される。他の態様では、化合物Ａは、ヒトに対して１日あたり５～１０００ｍｇの化合物Ａの用量で、ヒトに対して１日あたり５～５００ｍｇの化合物Ａの用量で、ヒトに対して１日あたり５～２５０ｍｇの化合物Ａの用量で、ヒトに対して１日あたり２０～１５０ｍｇの化合物Ａの用量で、又はヒトに対して１日あたり１００ｍｇの化合物Ａの用量で、ＡＳＭと組み合わせて、例えば経口で投与される。他の例では、化合物Ａは、ヒトに対して０．０１～２．０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの用量で、ヒトに対して０．０３～１．０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの用量で、又はヒトに対して０．０５～０．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの用量で、ＡＳＭと組み合わせて、例えば経口で投与される。

【0021】

当該方法及び使用のいくつかの実施形態では、化合物Ａは、食事摂取の約３０分前から食事摂取の約２時間後の間にヒトに経口投与され、例えば、化合物Ａは、食事中又は食事摂取の後１５分以内にヒトに経口投与されてもよい。

【0022】

当該方法及び使用の別の実施形態では、ＡＳＭはバルプロ酸である。いくつかの態様では、バルプロ酸は、ヒトに対して２～１６ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸の用量で化合物Ａと組み合わせて投与され、例えば、バルプロ酸は、ヒトに対して４～１２ｍｇ／ｋｇの用量で投与されてもよい。

【0023】

当該方法及び使用の別の実施形態では、ＡＳＭはフェニトインである。いくつかの態様では、フェニトインは、ヒトに対して０．０５～５ｍｇ／ｋｇのフェニトインの用量で化合物Ａと組み合わせて投与され、例えば、フェニトインは、ヒトに対して０．１～１ｍｇ／ｋｇの用量で投与されてもよい。

【0024】

当該方法及び使用の別の実施形態では、ＡＳＭはラコサミドである。いくつかの態様では、ラコサミドは、ヒトに対して０．１～５ｍｇ／ｋｇのラコサミドの用量で化合物Ａと組み合わせて投与され、例えば、ラコサミドは、ヒトに対して０．５～１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

【0025】

当該方法及び使用の別の実施形態では、ＡＳＭはセノバメートである。いくつかの態様では、セノバメートは、ヒトに対して０．０５～５ｍｇ／ｋｇの用量のセノバメートで化合物Ａと組み合わせて投与され、例えば、セノバメートは、ヒトに対して０．１～１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

【0026】

当該方法及び使用の特定の実施形態では、化合物Ａ及びＡＳＭ（例えば、バルプロ酸、フェニトイン、レベチラセタム、ラコサミド、セノバメート、又はこれらの組み合わせ）の組み合わせ投与は、単独の化合物Ａ又はＡＳＭの個々の投与と比較して、改善された有効性を提供する（例えば、ヒトにおける発作（てんかん）エピソードの数の減少又は発作エピソードの重症度の低減を増加させる）。特定のこのような実施形態では、この組み合わせ投与は相加効果を提供し、相加効果は、化合物Ａ及びＡＳＭの投与の個々の効果の和（合計）を指す。いくつかの実施形態では、上記組み合わせ投与は相乗効果を提供し、相乗効果は、化合物Ａ及びＡＳＭを投与することの個々の効果の和より大きい効果を指す。

【0027】

他の実施形態では、本開示は、化合物Ａと、抗けいれん薬（ＡＳＭ）と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を提供する。医薬組成物のいくつかの態様では、ＡＳＭは、ベンゾジアゼピン、カルバマゼピン、セノバメート、フェルバメート、ガバペンチン、ラコサミド、ラモトリギン、レベチラセタム、オクスカルバゼピン、フェノバルビタール、フェニトイン、プレガバリン、ルフィナミド、チアガビン、トピラマート、バルプロ酸、ビガバトリン、ゾニサミド、又はこれらの組み合わせである。

【0028】

化合物Ａは、発作性疾患の治療のために現在開発されている小分子であり、カリウムチャネルモジュレーターとしてのその使用は、米国特許第８，２９３，９１１号明細書及び米国特許第８，９９３，５９３号明細書並びに米国特許出願第１６／４０９，６８４号及び米国特許出願第１６／４１０，８５１号に開示されており、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0029】

本開示のこれらの態様及び他の態様は、以下の詳細な説明を参照すると明らかとなる。この目的のために、特定の背景情報及び手順をより詳細に記載する種々の参考文献が本明細書中に示され、それらは、各々、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【図面の簡単な説明】

【0030】

【図1】図１は、ＣＦ－１マウス（一群あたりｎ＝７）におけるアッセイの２時間前の１、２、４、８ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ又はビヒクルのＰＯ投与の結果を示す。上のグラフ：ＭＥＳ試験中に後肢強直性伸筋成分を示すマウスの割合。各バーは平均応答±Ｓ．Ｅ．Ｍ．を示す。下のグラフ：強直性発作から保護されたマウスの百分率。この図及び他のすべての図における単独のアスタリスクは０．０１＜ｐ＜０．０５を示す。この図及び他のすべての図の中の列挙される「ｍｐｋ」はｍｇ／ｋｇである。

【図2】図２は、ＣＦ－１マウス（用量群あたりｎ＝７、ビヒクル単独についてはｎ＝５）におけるアッセイの０．５時間前の１、２、４、８ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ又はビヒクルのＰＯ投与の結果を示す。上のグラフ：動物あたりの強直性発作中の後肢強直性伸筋成分の存在又は不存在。下のグラフ：保護されたマウスの百分率。

【図3】図３は、マウスＭＥＳアッセイにおける化合物Ａの薬物動態（ＰＫ）及び薬力学（ＰＤ）特性を示す。水平エラーバーは、血漿濃度又は脳濃度のＳ．Ｅ．Ｍ．を示す。見えない場合は、平均値を示す記号よりもＳ．Ｅ．Ｍ．が小さいためである。投与の２時間（ｈｒ）後に収集されたデータの各セットを通る実線の曲線は、濃度反応曲線に対する最良のフィッティングである。脳濃度及び血漿濃度に基づくＩＣ_５０は、それぞれ２７５ｎＭ及び１５４ｎＭであった。投与の０．５時間後に測定された有効性は、投与の２時間後に決定されたＰＫ－ＰＤの関係と一致した。

【図4】図４は、ＣＦ－１マウス（単独投与群：ｎ＝１５ １ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、ｎ＝１５ １００ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸、ｎ＝７ ３０及び５６ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸；併用投与群：ｎ＝１５ 化合物Ａ＋バルプロ酸１００ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８ 化合物Ａ＋バルプロ酸３０及び５６ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝１５ ビヒクル）における、アッセイの２時間前の１ｍｇ／ｋｇの化合物ＡのＰＯ投与及びアッセイの０．５時間前の３０、５６又は１００ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸のＩＰ投与の結果を示す。上のグラフ：動物あたりの強直性発作中の後肢強直性伸筋成分の存在又は不存在。下のグラフ：化合物Ａ及びバルプロ酸の単独投与又は併用投与の比較。４つのアスタリスクは、ｐ＜０．０００１を示す。

【図5】図５は、マウスＭＥＳアッセイにおける、１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを伴う及び伴わないバルプロ酸のＰＫ／ＰＤを示す。実線の曲線は、１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを伴う及び伴わないバルプロ酸の濃度反応曲線への最良のフィッティングを示す。この用量での化合物Ａ単独の有効性を反映するために、バルプロ酸単独について１００％発作及び１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａありの７３．３％の最大値で曲線をフィッティングした。化合物Ａとの共投与の効果は、バルプロ酸のＩＣ_５０を１４４０μＭから６０８μＭに低下させることであった。

【図6】図６は、マウスにおけるアッセイの２時間前の１又は１．５ｍｇ／ｋｇの化合物ＡのＰＯ投与及びアッセイの２時間前の１２０又は１５０ｍｇ／ｋｇのレベチラセタムのＩＰ投与の結果を示す。上のグラフ：動物あたりの強直性発作中の後肢強直性伸筋成分の存在又は不存在。下のグラフ：化合物Ａ及びレベチラセタムの単独投与又は併用投与の比較。

【図7】図７は、アッセイの２時間前の０．２５、０．７５、１、１．５又は２．５ｍｇ／ｋｇの化合物ＡのＰＯ投与及びアッセイの２時間前の２ｍｇ／ｋｇのフェニトインのＩＰ投与の結果を示す。単独投与：化合物Ａ、用量あたりｎ＝８、フェニトイン２ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝２４；併用投与：一群あたりｎ＝８、ｎ＝２４ ビヒクル。上のグラフ：動物あたりの強直性発作中の後肢強直性伸筋成分の存在又は不存在。下のグラフ：化合物Ａ及びフェニトインの単独投与又は併用投与の比較。２つのアスタリスクは０．００１＜ｐ＜０．０１を示す。

【図8】図８は、マウスＭＥＳアッセイにおける２ｍｇ／ｋｇのフェニトインを伴う及び伴わない化合物ＡのＰＫ／ＰＤを示す。実線の曲線は、２ｍｇ／ｋｇのフェニトインを伴う及び伴わない化合物Ａの濃度反応曲線への最良のフィッティングを示す。２ｍｇ／ｋｇでのフェニトイン単独の有効性を反映するために、化合物Ａ単独について９４．１％の発作及び２ｍｇ／ｋｇのフェニトインありの７５％の最大値で曲線をフィッティングした。これらの最大値は水平破線によって示されている。化合物Ａと共投与するフェニトインの効果は、化合物ＡのＩＣ_５０を１４７ｎＭから３９．７ｎＭに低下させることである。

【図9】図９は、化合物Ａの種々の用量に対するマウスの発作の割合を示し、化合物ＡがマウスＡＣ－ＭＥＳアッセイにおいて用量依存的有効性を提供することを示す（Ａ、Ｂ、及びＣ）。化合物Ａは、ＣＦ－１マウス（群：ｎ＝８ １ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、ｎ＝８ ３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、ｎ＝１６ ５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、ｎ＝７ ７．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、ｎ＝１７ １０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ；ｎ＝２４ ビヒクル）におけるアッセイの０．５時間前に１、３、５、７．５、及び１０ｍｇ／ｋｇでＰＯ投与された。結果は、任意の所与の用量群における動物の発作の割合として表されている。化合物Ａ処置群における動物の発作の割合は、３つの研究すべてにおいてビヒクル処置群と有意に異なった（それぞれのｐ値は図９Ａ～Ｃに示される）。ヒル・ラングミュア（Ｈｉｌｌ Ｌａｎｇｍｕｉｒ）式に基づく化合物Ａの血漿（Ｄ）及び脳組織（Ｅ）の濃度反応曲線は、有効性が濃度依存的であることを示す。化合物Ａの濃度反応曲線分析は、血漿について０．３０μＭのＥＣ_５０及び脳組織について０．４７μＭのＥＣ_５０を示した。最終の血漿試料及び脳試料は、化合物Ａの投与の０．５時間後に得られた。Ｄ及びＥにおける各データ点は、各用量群についての平均濃度レベルでの動物の発作の割合を表す。

【図10】図１０は、ラコサミドがマウスＡＣ－ＭＥＳアッセイにおいて用量依存的有効性を提供することを示す（Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤ）。ラコサミドは、ＣＦ－１マウス（群：ｎ＝１６ ６ｍｇ／ｋｇのラコサミド；ｎ＝８ ８ｍｇ／ｋｇのラコサミド；ｎ＝１６ １０ｍｇ／ｋｇのラコサミド；ｎ＝８ ２０ｍｇ／ｋｇのラコサミド；ｎ＝３２ ビヒクル）におけるアッセイの２時間前に６、８、１０、及び２０ｍｇ／ｋｇでＰＯ投与された。結果は、任意の所与の用量群（ｎ＝８）における動物の発作の割合として表されている。研究２Ｄでは、２０ｍｇ／ｋｇのラコサミド処置群における動物の発作の割合は、ビヒクル処置群と有意に異なった（ｐ値は図１０Ａに示される）。ヒル・ラングミュア式に基づくラコサミドの血漿（Ｅ）及び脳組織（Ｆ）の濃度反応曲線は、有効性が濃度依存的であることを示す。ラコサミドの濃度反応曲線分析は、血漿について２１．６μＭのＥＣ_５０及び脳組織について２２．２μＭのＥＣ_５０を示した。最終の血漿試料及び脳試料は、ラコサミドの投与の２時間後に得られた。Ｅ及びＦにおける各データ点は、各用量群（ｎ＝８）についての平均濃度レベルでの動物の発作の割合を表す。

【図11】図１１は、マウスＡＣ－ＭＥＳアッセイにおける化合物Ａ及びラコサミドの組み合わせからの結果を示す（Ａ）。ＣＦ－１マウス（単独投与群：ｎ＝８ ３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、ｎ＝８ １０ｍｇ／ｋｇのラコサミド；併用投与群：ｎ＝８ ３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ＋１０ｍｇ／ｋｇのラコサミド；ｎ＝８ ビヒクル）において、化合物Ａは、アッセイの０．５時間前に３ｍｇ／ｋｇでＰＯ投与され、ラコサミドは、アッセイの２時間前に１０ｍｇ／ｋｇでＰＯ投与された。結果は、任意の所与の用量群（ｎ＝８）における動物の発作の割合として表されている。ラコサミド処置群と併用群との差は統計的に有意であった（ｐ値は図１１Ａに示される）。マウスＡＣ－ＭＥＳアッセイにおける１０ｍｇ／ｋｇのラコサミドを伴う及び伴わない化合物Ａの薬物動態－薬力学的関係（ＰＫ／ＰＤ）並びに３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを伴う及び伴わないラコサミドのＰＫ／ＰＤをＢ及びＣに示す。Ｂ及びＣにおける各データ点は、単独の動物から得られた個々の濃度及び動物において強直性発作が観察されたかどうかを表す。最終の血漿試料及び脳試料は、化合物ＡのＰＯ投与の０．５時間後及びラコサミドのＰＯ投与の２時間後に得られた。

【図12】図１２は、単回経口投与の１時間後のマウス６Ｈｚ精神運動アッセイにおける化合物Ａの用量反応を示す。発作アッセイの１時間前の化合物ＡのＰＯ投与は、用量依存的有効性を示し（Ａ）、８ｍｇ／ｋｇの用量で有意な効果に達した（^＊＊ｐ＝０．００８１対ビヒクル）。ラングミュア・ヒル式に基づく用量反応曲線（Ｂ）は、ｎ＝－３．０９のヒル（Ｈｉｌｌ）係数で６．４８ｍｇ／ｋｇのＥＤ_５０及び４．１３ｍｇ／ｋｇのＥＤ_２０を予測する。

【図13】図１３は、単回経口投与の１時間後のマウス６Ｈｚ精神運動アッセイにおける化合物Ａの濃度反応を示す。化合物Ａの単回ＰＯ投与の１時間後の個々の動物の血漿（Ａ）及び脳（Ｂ）の曝露は、化合物Ａ組織濃度と６Ｈｚ発作アッセイにおける有効性との明確な関係を実証する。振戦を経験し、触れると冷たい動物は、最も高い曝露を有し、円でマークされている。ヒル・ラングミュア式に基づく血漿（Ｃ）及び脳（Ｄ）の濃度反応曲線は、ｎ＝－１．９５のヒル係数で０．３５μＭの血漿ＥＣ_５０、及びｎ＝－２．１７のヒル係数で０．５４μＭの脳ＥＣ_５０を予測する。

【図14】図１４は、投与の１時間後の６Ｈｚ精神運動発作アッセイにおける化合物Ａ及びレベチラセタムの単独及び組み合わせの有効性を示す。（Ａ）化合物Ａ（経口投与）及びレベチラセタム（腹腔内投与）単独は、２つの研究のそれぞれにおいて異なるレベルの有効性を示した（研究３Ｂにおける保護なし、及び研究３Ｃにおける最大２５％の保護）。各研究において、化合物Ａ及びレベチラセタムの組み合わせは、いずれの化合物の単独と比較して、及びビヒクルと比較して、発作からの有意に増加した保護をもたらした（^＊ｐ＝０．０３４；^＊＊ｐ＜０．０１；^＊＊＊ｐ＝０．０００２）。（Ｂ）両方の研究を組み合わせると、いずれかの化合物単独で最大の有効性はレベチラセタムで達し、１４／１６の発作であったが、両方の化合物の組み合わせは５／１５の動物の発作をもたらした。従って、化合物Ａとレベチラセタムとの組み合わせは、６６．７％の動物を発作から保護し、これは、ビヒクル（^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１）及びいずれかの化合物単独（^＊＊＊ｐ＜０．００１）と有意に異なった。

【図15】図１５は、ＣＤ－１マウスにおける投与の１時間後の化合物Ａ及びレベチラセタムの単独及び組み合わせの薬物動態を示す。（Ａ）すべての実験群にわたる化合物Ａ（経口投与）及びレベチラセタム（腹腔内投与）の血漿濃度の比較は、研究３Ｂと比較して、化合物Ａの１２倍高い血漿濃度が、研究３Ｃにおいて投与の１時間後に到達されたことを明らかにする。レベチラセタムの血漿濃度は、２つの研究の間で同等であった。化合物Ａ及びレベチラセタムの組み合わせ（Ｃｏｍｂｏ）の投与は、いずれの化合物の曝露も有意には変化させなかった。研究３Ｃの併用群の１匹の動物は、血漿中に測定可能な濃度のレベチラセタムを有さず、除外された（図示せず）。（Ｂ）すべての実験群にわたる化合物Ａ（経口投与）及びレベチラセタム（腹腔内投与）の脳濃度の比較は、研究３Ｂと比較して、化合物Ａの１１倍高い脳濃度が、研究３Ｃにおいて投与の１時間後に到達されたことを明らかにする。レベチラセタムの脳濃度は、２つの研究の間で同等であった。化合物Ａ及びレベチラセタムの組み合わせ（Ｃｏｍｂｏ）の投与は、いずれの化合物の曝露も有意には変化させなかった。研究３Ｃの併用群の１匹の動物は、脳内に測定可能な濃度のレベチラセタムを有さず、除外された（図示せず）。

【図16】図１６は、併用投与後の化合物Ａ及びレベチラセタムの有効性における薬物動態－薬力学的シフトを示す。ＬＥＶ：レベチラセタム。化合物Ａ（経口投与）がレベチラセタム（腹腔内投与；白丸）と組み合わせて投与されると、動物の発作の割合は単独で投与された化合物Ａ（黒丸）と比較して減少するが、両群は血漿（Ａ）及び脳（Ｂ）において同様の濃度の化合物Ａを有する。同様に、併用投与群（白抜きの正方形）では、レベチラセタム単独の投与（黒塗りの正方形）と比較して動物の発作の割合が減少するが、両方の群は、血漿（Ｃ）及び脳（Ｄ）において同様の濃度のレベチラセタムを有する。

【図17】図１７は、マウスＡＣ－ＭＥＳアッセイにおける単回経口投与後の化合物Ａの用量及び濃度反応を示す。化合物Ａ及びビヒクル群のデータは、表示された研究から示される。化合物Ａは、マウスＡＣ－ＭＥＳアッセイにおいて用量依存的有効性を示す（Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤ）。化合物Ａは、ＣＦ－１マウス（群：ｎ＝８ １ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、ｎ＝８ ２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、ｎ＝８ ３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、ｎ＝１６ ５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、ｎ＝７ ７．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、ｎ＝１７ １０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ；ｎ＝２４ ビヒクル）におけるアッセイの０．５時間前に１、２、３、５、７．５、及び１０ｍｇ／ｋｇでＰＯ投与された。結果は、任意の所与の用量群における動物の発作の割合として表されている。化合物Ａ処置群における動物の発作の割合は、４つの研究のうち３つにおいてビヒクル処置群とは有意に異なった（それぞれのｐ値が示されている）。ヒル・ラングミュア式に基づく化合物Ａの血漿（Ｅ）及び脳組織（Ｆ）の濃度反応曲線は、有効性が濃度依存的であったことを示す。化合物Ａの濃度反応曲線分析は、血漿について０．２９６μＭのＥＣ_５０及び脳組織について０．４７１μＭのＥＣ_５０を示した。最終の血漿試料及び脳試料は、化合物Ａの投与の０．５時間後に得られた。Ｅ及びＦにおける各データ点は、各用量群についての平均濃度レベルでの動物の発作の割合を表す。

【図18】図１８は、マウスＡＣ－ＭＥＳアッセイにおける単回経口投与後のセノバメートの用量及び濃度反応を示す。セノバメート及びビヒクル群のデータは、表示された研究から示される。セノバメートは、マウスＡＣ－ＭＥＳアッセイにおいて用量依存的有効性を示す（Ａ、Ｂ、及びＣ）。セノバメートは、ＣＦ－１マウス（群：ｎ＝１５ ３ｍｇ／ｋｇのセノバメート；ｎ＝１５ ５ｍｇ／ｋｇのセノバメート；ｎ＝８ ７．５ｍｇ／ｋｇのセノバメート；ｎ＝８ １０ｍｇ／ｋｇのセノバメート；ｎ＝８ ３０ｍｇ／ｋｇのセノバメート；ｎ＝２４ ビヒクル）におけるアッセイの２時間前に、３、５、７．５、１０、及び３０ｍｇ／ｋｇでＰＯ投与された。結果は、任意の所与の用量群における動物の発作の割合として表されている。セノバメート処置群における動物の発作の割合は、３つの研究のうち２つにおいてビヒクル処置群とは有意に異なった（ｐ値が示されている）。ヒル・ラングミュア式に基づくセノバメートの血漿（Ｄ）及び脳組織（Ｅ）の濃度反応曲線は、有効性が濃度依存的であることを示す。セノバメートの濃度反応曲線分析は、血漿について７０．５μＭのＥＣ_５０及び脳組織について２５．２μＭのＥＣ_５０を示した。最終の血漿試料及び脳試料は、セノバメートの投与の２時間後に得られた。Ｄ及びＥにおける各データ点は、各用量群についての平均濃度レベルでの動物の発作の割合を表す。

【図19】図１９は、マウスＡＣ－ＭＥＳアッセイにおける組み合わせた化合物Ａ及びセノバメートの抗けいれん効果を示す。マウスＡＣ－ＭＥＳアッセイにおける化合物Ａ及びセノバメートの組み合わせ（Ａ及びＢ）。化合物Ａは、ＣＦ－１マウス（単独投与群：ｎ＝８ ２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、ｎ＝８ ５ｍｇ／ｋｇのセノバメート；併用投与群：ｎ＝８ ２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ＋５ｍｇ／ｋｇのセノバメート；ｎ＝８ １ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ＋５ｍｇ／ｋｇのセノバメート；ｎ＝８ ０．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ＋５ｍｇ／ｋｇのセノバメート；ｎ＝８ ビヒクル）におけるアッセイの０．５時間前に０．５、１、及び２ｍｇ／ｋｇでＰＯ投与され、セノバメートは、アッセイの２時間前に５ｍｇ／ｋｇでＰＯ投与された。結果は、任意の所与の用量群における動物の発作の割合として表されている。研究４Ｆでは、セノバメート処置群と併用群との差は統計的に有意であったが、化合物Ａ処置群と併用群との差は統計的に有意ではなかった。研究４Ｇでは、ビヒクル群と併用群との差は統計的に有意であった。Ｐ値が示されている。血漿濃度及び脳濃度による、セノバメートを伴う及び伴わない化合物Ａの薬物動態－薬力学的関係（ＰＫ／ＰＤ）がＣ及びＤに示されている。Ｃ及びＤにおける各データ点は、各用量群についての平均濃度レベルでの動物の発作の割合を表す。最終の血漿試料及び脳試料は、化合物ＡのＰＯ投与の０．５時間後及びセノバメートのＰＯ投与の２時間後に得られた。

【発明を実施するための形態】

【0031】

本開示は、とりわけ、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療するための新規かつ改善された方法及び使用であって、経口投与によることを含む、ヒトへ化合物Ａ及び抗けいれん薬（ＡＳＭ）を組み合わせて投与する工程を含む方法及び使用に関する。

【0032】

以下の開示では、種々の実施形態の十分な理解を提供するために特定の具体的な詳細が示される。しかしながら、当業者は、本明細書に記載される方法及び使用がこれらの詳細なしに実施されてもよいということを理解するであろう。他の例では、実施形態の記載を不必要に曖昧にすることを回避するために、周知の構造は詳細には示されておらず記載もされていない。文脈と矛盾する場合を除いて、本明細書及び添付の特許請求の範囲の全体にわたって、語句「ｃｏｍｐｒｉｓｅ（含む）」及びその派生語、例えば「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ（含む）」及び「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」は、開放型の、包含的な意味で、つまり「…を含むが、これらに限定されない」として解釈されるべきである。さらに、本明細書に提示される小見出しは、便宜のためだけのものであり、請求項に係る発明の範囲又は意味を解釈しない。

【0033】

本明細書全体にわたって「１つの実施形態」又は「一実施形態」に言及することは、その実施形態に関連して記載される特定の特徴、構造、又は特性が少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。従って、本明細書全体にわたって種々の場所で語句「１つの実施形態では」又は「一実施形態では」が現れることは、必ずしも、すべて同じ実施形態を指しているわけではない。さらには、特定の特徴、構造、又は特性は、１つ以上の実施形態においていずれの好適なやり方で組み合わされてもよい。また、本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ（ある、１つの）、「ａｎ（ある、１つの）」及び「ｔｈｅ（その、上記）」は、文脈と明らかに矛盾する場合を除いて、複数の指示対象を含む。用語「又は」、「若しくは」は、文脈と明らかに矛盾する場合を除いて、一般に、「及び／又は」を含む意味で用いられることにも留意するべきである。

【0034】

１． 定義
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、否定する特段の記載がない限り、以下の用語及び略語は示された意味を有する。

【0035】

「化合物Ａ」は下記式を有し、Ｎ－［４－（６－フルオロ－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル）－２，６－ジメチルフェニル］－３，３－ジメチルブタンアミドの化合物名を有する化合物を指す。

【化1】

化合物Ａの調製及びＫｖ７．２／Ｋｖ７．３（ＫＣＮＱ２／３）開口薬としてのその使用は、米国特許第８，２９３，９１１号明細書及び米国特許第８，９９３，５９３号明細書、並びに米国特許出願第１６／４０９，６８４号及び米国特許出願第１６／４１０，８５１号に開示されている。化合物Ａは電位依存性カリウムチャネルＫｖ７．２及びＫｖ７．３（Ｋｖ７．２／Ｋｖ７．３）の開口を強化又は増強する点で、化合物Ａは、ほとんどの公知の抗けいれん薬とは異なり、この電位依存性カリウムチャネルＫｖ７．２及びＫｖ７．３（Ｋｖ７．２／Ｋｖ７．３）の開口の強化又は増強は、神経細胞の興奮性を制御する上で重要である。化合物Ａは、本明細書に記載される方法及び使用において使用される。本開示において言及される化合物Ａ又はＡＳＭのいずれかへのあらゆる言及は、その薬学的に許容できる塩をも含む（例えば、バルプロ酸は、バルプロ酸ナトリウム又はバルプロ酸半ナトリウム形態であってもよい）ことが理解されるであろう。

【0036】

「組み合わせて投与する」は、本明細書において、第１の投与された治療用化合物が体内で依然として有効である間に、第２の投与される化合物が投与される（例えば、２種の化合物は、患者において同時に有効であり、これは、２種の化合物の相加効果又は相乗効果を含んでもよい）ような、２つ以上の異なる治療用化合物の任意の投与形態を指す。例えば、本明細書に開示される化合物Ａ及び抗けいれん薬は、同じ製剤又は別個の製剤のいずれかで、同時に又は連続的に投与することができる。特定の実施形態では、本明細書に開示される化合物Ａ及び抗けいれん薬は、互いの１時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、７２時間、又は１週間以内に投与することができる。従って、そのような治療を受ける個体は、異なる治療用化合物の併用効果から利益を得ることができる。

【0037】

本明細書で使用される「神経細胞の興奮の低下」若しくは「低下した神経細胞の興奮」又は「神経細胞の興奮性の低下」若しくは「低下した神経細胞の興奮性」は、患者における発作性疾患の不存在下で観察される正常な生理学的状態に向かってある程度低下されている神経細胞活性のレベルを指す。神経細胞の興奮性を低下させる特定の薬剤としては、神経細胞上で発現されるチャネル及び受容体に作用して、神経細胞の興奮性のレベルを直接低下させる薬剤が挙げられる。逆に、薬剤は、下流効果として低下した神経細胞の興奮性をもたらす細胞事象のカスケードを開始することによって、神経細胞の興奮性のレベルを低下させるように間接的に作用してもよい。神経細胞の興奮性を低下させて、神経細胞の活性の生理学的レベルを回復させる特定の抗けいれん薬が本明細書に記載される。

【0038】

本明細書で使用される「神経細胞阻害の増加」又は「増加した神経細胞阻害」は、患者における発作性疾患の不存在下で観察される正常な生理学的状態に向かってある程度高められている神経細胞阻害のレベルを指す。神経阻害を増加させて神経細胞の活性の生理学的レベルを回復させる、ＧＡＢＡ作動薬等の特定の抗けいれん薬が本明細書に記載される。

【0039】

「発作性疾患」は、部分初発（焦点性）発作、光過敏性てんかん（光過敏性発作）、自己誘発失神、難治性てんかん、アンジェルマン症候群、良性のローランドてんかん、ＣＤＫＬ５障害、小児欠神てんかん及び若年性欠神てんかん、ドラベ（Ｄｒａｖｅｔ）症候群、前頭葉てんかん、Ｇｌｕｔ１欠損症、視床下部過誤腫、点頭てんかん／ウエスト（Ｗｅｓｔ）症候群、若年性ミオクロニーてんかん、ランドウ・クレフナー（Ｌａｎｄａｕ－Ｋｌｅｆｆｎｅｒ）症候群、レノックス・ガストー（Ｌｅｎｎｏｘ－Ｇａｓｔａｕｔ）症候群（ＬＧＳ）、ミオクロニー欠神てんかん、大田原症候群、パナエトポラス（Ｐａｎａｙｉｏｔｏｐｏｕｌｏｓ）症候群、ＰＣＤＨ１９てんかん、進行性ミオクローヌスてんかん、ラスムッセン（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ）症候群、環状２０番染色体症候群、反射てんかん、側頭葉てんかん、ラフォラ（Ｌａｆｏｒａ）進行性ミオクローヌスてんかん、神経皮膚症候群、結節性硬化症、早期乳児てんかん性脳症、早期発症型てんかん性脳症、全般てんかん熱性けいれんプラス、レット（Ｒｅｔｔ）症候群、多発性硬化症、アルツハイマー病、自閉症、運動失調症、筋緊張低下及び発作性ジスキネジア等の発作及び発作と関連する障害を指す。特定の実施形態では、用語「発作性疾患」は、部分初発（焦点性）てんかんとしても知られる焦点性初発てんかんを指す。

【0040】

本明細書で使用する場合の「治療有効量」は、ヒト対象において、記載された疾患、障害又は状態を治療するため、又はその疾患、障害若しくは状態若しくはその疾患、障害若しくは状態の根底にある１つ以上の機構に対する所望の記載された効果を得るために十分な化合物Ａの量、ＡＳＭの量、又は化合物Ａの量及びＡＳＭの量の両方を指す。特定の実施形態では、発作性疾患の治療のために化合物ＡがＡＳＭと組み合わせて投与される場合、治療有効量は、ヒトへの組み合わせ投与によって、そのヒトにおいて発作性疾患を治療若しくは改善するか、又は発作性疾患を抱えるそのヒトにおいて検出可能な治療効果若しくは予防効果をもたらす化合物Ａの量及びＡＳＭの量の両方を指す。この効果は、例えば発作エピソードの数の減少又は発作エピソードの重症度の低減によって検出することができる。

【0041】

本明細書で使用する場合の「治療」は、ヒト対象において、示された疾患、障害若しくは状態若しくは根底にある機構のうちの１つ以上の進行を緩慢化すること又は停止することを含めてその示された疾患、障害若しくは状態若しくはその疾患、障害若しくは状態の１つ以上の根底にある機構を改善予防する、化合物ＡとＡＳＭとの組み合わせ投与に伴う治療的応用を指す。特定の実施形態では、発作性疾患の治療のために化合物Ａ及びＡＳＭが組み合わせて投与される場合、治療は、発作性疾患の進行を緩慢化若しくは停止するための治療的応用、及び／又は発作性疾患の逆転を指す。発作性疾患の逆転は、逆転させる方法を用いると、発作性疾患の進行が停止するだけでなく、発作性疾患の不存在下で観察されるはずの正常な状態に向かっていくらかでも細胞挙動が動かされるという点で、発作性疾患を緩慢化又は停止する治療的応用とは異なる。いくつかの実施形態では、化合物ＡとＡＳＭとの組み合わせ投与を含む発作性疾患の治療は、１種以上のＫｖ７カリウムチャネル（例えば、Ｋｖ７．２、Ｋｖ７．３、Ｋｖ７．４、及び／又はＫｖ７．５、特にＫｖ７．２及び／又はＫｖ７．３、任意選択でＫｖ７．１に優先する）の細胞活性が、発作性疾患の不存在下でなら観察されるはずの正常レベルへと変化することを伴う。

【0042】

「摂食条件下」は、有効量（例えば、上記治療上有効な用量範囲内）の化合物Ａの経口投与の約４時間前から化合物Ａの投与の約４時間後までの期間の間の食物を摂取した状態を指す。食物は、胃の中で迅速に溶解吸収されない程度に十分なかさ及び脂肪含量を有していれば、固形であってもよいし、液体であってもよいし、又は固形と液体の食物の混合物であってもよい。いくつかの例では、この食物は、朝食、昼食、夕食等の食事であるか、あるいは、ベビーフード（例えば、配合物又は母乳）である。治療上有効量の化合物Ａは、例えば食事摂取の約３０分前から食事摂取の約２時間後の間に対象に経口投与されてもよく、最も有利には、化合物Ａの投薬単位は、食事中又は食事摂取の後１５分以内に経口投与される。

【0043】

「絶食条件下」は、治療上有効量の化合物Ａの経口投与の少なくとも４時間前から化合物Ａの投与の約４時間後までの期間の間の食物を摂取していない状態を指す。

【0044】

２． 実施形態
いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに化合物Ａ及び抗けいれん薬（ＡＳＭ）を、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。同様に、いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおける発作性疾患の治療における、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量の化合物Ａ及びＡＳＭの使用に向けられる。組み合わせ投与は、化合物ＡをＡＳＭの投与と同時に、その前に、又はその後に投与することができるということを企図する。特定の例では、化合物Ａ及びＡＳＭの組み合わせ投与を含む治療が施される発作性疾患は、焦点起始てんかんである。

【0045】

さらなる実施形態では、発作性疾患が本発明で治療される場合、発作性疾患は、焦点起始てんかん、光過敏性てんかん、自己誘発失神、難治性てんかん、アンジェルマン症候群、良性のローランドてんかん、ＣＤＫＬ５障害、小児欠神てんかん及び若年性欠神てんかん、ドラベ症候群、前頭葉てんかん、Ｇｌｕｔ１欠損症、視床下部過誤腫、点頭てんかん／ウエスト（Ｗｅｓｔ）症候群、若年性ミオクロニーてんかん、ランドウ・クレフナー症候群、レノックス・ガストー症候群（ＬＧＳ）、ミオクロニー欠神てんかん、大田原症候群、パナエトポラス症候群、ＰＣＤＨ１９てんかん、進行性ミオクローヌスてんかん、ラスムッセン症候群、環状２０番染色体症候群、反射てんかん、側頭葉てんかん、ラフォラ進行性ミオクローヌスてんかん、神経皮膚症候群、結節性硬化症、早期乳児てんかん性脳症、早期発症型てんかん性脳症、全般てんかん熱性けいれんプラス、レット症候群、多発性硬化症、アルツハイマー病、自閉症、運動失調症、筋緊張低下及び発作性ジスキネジアから選択される。特定の実施形態では、発作性疾患は、部分初発（焦点性）てんかんとしても知られる焦点性初発てんかんである。

【0046】

いくつかの実施形態では、本開示は、発作性疾患に罹患しているヒトにおける治療有効性に必要とされるＡＳＭの量を低減する方法であって、そのヒトに、ＡＳＭとともに投与されるときにそのような低減を達成するのに有効な量の化合物ＡをＡＳＭと組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。同様に、いくつかの実施形態では、本開示は、発作性疾患に罹患しているヒトにおける治療有効性に必要とされるＡＳＭの量を低減することにおける化合物Ａの使用であって、例えば、この低減は、そのヒトに、ＡＳＭとともに投与されるときにそのような低減を達成するのに有効な量の化合物ＡをＡＳＭと組み合わせて投与することによる使用に向けられる。例えば、いくつかの実施形態では、本開示は、必要とする対象（例えば、ヒト）において発作性疾患を治療する方法であって、化合物Ａ及びＡＳＭを組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含み、投与されるＡＳＭの量は、化合物Ａを投与することがない場合に同じ又は同様の発作エピソードの数の減少又は発作エピソードの重症度の低減を達成するために必要になるＡＳＭの量よりも少ない方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＳＭは、バルプロ酸、レベチラセタム、フェニトイン、ラコサミド、セノバメート又はこれらの組み合わせ、特にバルプロ酸である。

【0047】

いくつかの実施形態では、本開示は、発作性疾患に罹患しているヒトにおける治療有効性に必要とされる化合物Ａの量を低減する方法であって、そのヒトに、化合物Ａとともに投与されたときにそのような低減を達成するのに有効な量のＡＳＭを化合物Ａと組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。同様に、いくつかの実施形態では、本開示は、発作性疾患に罹患しているヒトにおける治療有効性に必要とされる化合物Ａの量を低減することにおけるＡＳＭの使用であって、例えばこの低減は、そのヒトに、化合物Ａとともに投与されるときにそのような低減を達成するのに有効な量のＡＳＭを化合物Ａと組み合わせて投与することによる使用に向けられる。例えば、いくつかの実施形態では、本開示は、必要とする対象（例えば、ヒト）において発作性疾患を治療する方法であって、化合物Ａ及びＡＳＭを組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含み、投与される化合物Ａの量は、ＡＳＭを投与することがない場合に同じ又は同様の発作エピソードの数の減少又は発作エピソードの重症度の低減を達成するために必要になる化合物Ａの量よりも少ない方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＳＭは、バルプロ酸、レベチラセタム、フェニトイン、ラコサミド、セノバメート又はこれらの組み合わせ、特にフェニトインである。

【0048】

いくつかの実施形態では、必要とするヒトにおいて発作を治療する、治療有効性に必要なＡＳＭの量を低減する、又は治療有効性に必要な化合物Ａの量を低減する本明細書に記載される方法及び使用は、ヒトにおいてＫｖ７カリウムチャネルの開口を増強することを含む。

【0049】

特定の実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいてＫｖ７カリウムチャネル、例えばＫｖ７．２、Ｋｖ７．３、Ｋｖ７．４、及び／若しくはＫｖ７．５カリウムチャネル、特にＫｖ７．２／Ｋｖ７．３（ＫＣＮＱ２／３）カリウムチャネルを開口するか又はそれらの開口を増強することを含む方法又は使用であって、有効量の化合物ＡをＡＳＭと組み合わせて投与することによる方法又は使用を提供する。いくつかのこのような実施形態では、ヒトは、本明細書に記載されるもの等の発作性疾患を有する。

【0050】

特定の例では、本明細書に記載される方法は、Ｋｖ７．１よりもＫｖ７．２、Ｋｖ７．３、Ｋｖ７．４、若しくはＫｖ７．５のうちの１つ以上等のＫｖ７カリウムチャネルを選択的に開口するか又はそれらの開口を選択的に増強することを含む。いくつかの実施形態では、当該方法又は使用は、Ｋｖ７．１よりもＫｖ７．２のために選択的である。他の実施形態では、当該方法又は使用は、Ｋｖ７．１よりもＫｖ７．３のために選択的である。なお他の実施形態では、当該方法又は使用は、Ｋｖ７．１よりもＫｖ７．４のために選択的である。なおさらなる他の実施形態では、当該方法又は使用は、Ｋｖ７．１よりもＫｖ７．５のために選択的である。特定の実施形態では、当該方法又は使用は、Ｋｖ７．１よりもＫｖ７．２及びＫｖ７．３のために選択的である。特定の実施形態では、当該方法又は使用は、他のＫｖ７カリウムチャネルよりもＫｖ７．２及びＫｖ７．３のために選択的である。特定の実施形態では、当該方法又は使用は、Ｋｖ７．４及びＫｖ７．５よりもＫｖ７．２及びＫｖ７．３のために選択的である。

【0051】

１つの実施形態では、本明細書に記載される方法及び使用、例えば、必要とするヒトにおける発作性疾患の治療方法又は治療における使用は、ある量の化合物Ａ、例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２．０ｍｇ／ｋｇの化合物ＡをＡＳＭと組み合わせて（例えば、経口で）投与することによって達成される。化合物Ａのより具体的な代表的な量としては、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．２０ｍｇ／ｋｇ、０．３０ｍｇ／ｋｇ、０．４０ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８０ｍｇ／ｋｇ、０．９０ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．１ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．３ｍｇ／ｋｇ、１．４ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．６ｍｇ／ｋｇ、１．７ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、１．９ｍｇ／ｋｇ及び２．０ｍｇ／ｋｇ、又は上述の量のうちの２つを端点として使用することによって作り出される任意の範囲の量が挙げられる。いくつかの態様では、上記又は使用方法は、０．０３～１．０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを、開示された量のＡＳＭと組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む。いくつかの態様では、当該方法は、０．０５～０．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを、開示された量のＡＳＭと組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む。

【0052】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法及び使用、例えば、必要とするヒトにおける発作性疾患の治療方法又は治療における使用は、ある量の化合物Ａ、例えば２～２００ｍｇの化合物Ａを単回用量又は分割用量で、ＡＳＭと組み合わせて（例えば、経口で）投与することによって達成される。例えば、当該方法は、単回用量若しくは分割用量で、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ、約４１ｍｇ、約４２ｍｇ、約４３ｍｇ、約４４ｍｇ、約４５ｍｇ、約４６ｍｇ、約４７ｍｇ、約４８ｍｇ、約４９ｍｇ、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、約６０ｍｇ、約６１ｍｇ、約６２ｍｇ、約６３ｍｇ、約６４ｍｇ、約６５ｍｇ、約６６ｍｇ、約６７ｍｇ、約６８ｍｇ、約６９ｍｇ、約７０ｍｇ、約７１ｍｇ、約７２ｍｇ、約７３ｍｇ、約７４ｍｇ、約７５ｍｇ、約７６ｍｇ、約７７ｍｇ、約７８ｍｇ、約７９ｍｇ、約８０ｍｇ、約８１ｍｇ、約８２ｍｇ、約８３ｍｇ、約８４ｍｇ、約８５ｍｇ、約８６ｍｇ、約８７ｍｇ、約８８ｍｇ、約８９ｍｇ、約９０ｍｇ、約９１ｍｇ、約９２ｍｇ、約９３ｍｇ、約９４ｍｇ、約９５ｍｇ、約９６ｍｇ、約９７ｍｇ、約９８ｍｇ、約９９ｍｇ、約１００ｍｇ、約１０１ｍｇ、約１０２ｍｇ、約１０３ｍｇ、約１０４ｍｇ、約１０５ｍｇ、約１０６ｍｇ、約１０７ｍｇ、約１０８ｍｇ、約１０９ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１１１ｍｇ、約１１２ｍｇ、約１１３ｍｇ、約１１４ｍｇ、約１１５ｍｇ、約１１６ｍｇ、約１１７ｍｇ、約１１８ｍｇ、約１１９ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１２１ｍｇ、約１２２ｍｇ、約１２３ｍｇ、約１２４ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１２６ｍｇ、約１２７ｍｇ、約１２９ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１３１ｍｇ、約１３２ｍｇ、約１３３ｍｇ、約１３４ｍｇ、約１３５ｍｇ、約１３６ｍｇ、約１３７ｍｇ、約１３８ｍｇ、約１３９ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１４１ｍｇ、約１４２ｍｇ、約１４３ｍｇ、約１４４ｍｇ、約１４５ｍｇ、約１４６ｍｇ、約１４７ｍｇ、約１４８ｍｇ、約１４９ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１５１ｍｇ、約１５２ｍｇ、約１５３ｍｇ、約１５４ｍｇ、約１５５ｍｇ、約１５６ｍｇ、約１５７ｍｇ、約１５８ｍｇ、約１５９ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１６１ｍｇ、約１６２ｍｇ、約１６３ｍｇ、約１６４ｍｇ、約１６５ｍｇ、約１６６ｍｇ、約１６７ｍｇ、約１６８ｍｇ、約１６９ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１７１ｍｇ、約１７２ｍｇ、約１７３ｍｇ、約１７４ｍｇ、約１７５ｍｇ、約１７６ｍｇ、約１７７ｍｇ、約１７８ｍｇ、約１７９ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１８１ｍｇ、約１８２ｍｇ、約１８３ｍｇ、約１８４ｍｇ、約１８５ｍｇ、約１８６ｍｇ、約１８７ｍｇ、約１８８ｍｇ、約１８９ｍｇ、約１９０ｍｇ、約１９１ｍｇ、約１９２ｍｇ、約１９３ｍｇ、約１９４ｍｇ、約１９５ｍｇ、約１９６ｍｇ、約１９７ｍｇ、約１９８ｍｇ、約１９９ｍｇ、若しくは約２００ｍｇの化合物Ａを（例えば、経口で）投与すること、又は上述の量のうちの２つを端点として使用することによって作り出される任意の範囲の量を（例えば、経口で）投与することを含むことができる。いくつかの態様では、当該方法又は使用は、開示される量のＡＳＭと組み合わせた、単回用量又は分割用量での２～１００又は５～５０ｍｇの化合物Ａの経口投与を含む。いくつかの態様では、方法又は使用は、開示される量のＡＳＭと組み合わせた、単回用量又は分割用量での５、１０、１５、２０、又は２５ｍｇの化合物Ａの経口投与を含む。いくつかの態様では、当該方法又は使用は、開示される量のＡＳＭと組み合わせた単回用量又は分割用量での２０ｍｇの化合物Ａの経口投与を含む。

【0053】

いくつかの態様では、本明細書に記載される方法及び使用、例えば、必要とするヒトにおける発作性疾患の治療方法又は治療における使用は、少なくとも１０ｍｇの化合物Ａ、例えば、少なくとも２０、３０、４０、５０、７５、又は１００ｍｇの化合物Ａを、開示される量のＡＳＭと組み合わせて（例えば、経口で）投与することによって達成される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法及び使用、例えば、必要とするヒトにおける発作性疾患の治療方法又は治療における使用は、少なくとも５０ｍｇの化合物Ａ、例えば少なくとも７５、１００、１２５、１５０、１７５、又は２００ｍｇの化合物Ａを、開示される量のＡＳＭと組み合わせて（例えば、経口で）投与することによって達成される。

【0054】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法及び使用、例えば、必要とするヒトにおける発作性疾患の治療方法又は治療における使用は、１日あたりある量の化合物Ａ、例えば、１日あたり５～１０００ｍｇの化合物Ａ、例えば、１日あたり５～５００ｍｇ又は５～２５０ｍｇの化合物ＡをＡＳＭと組み合わせて（例えば、経口で）投与することによって達成される。例えば、当該方法又は使用は、１日あたり約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１０５ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１１５ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１３５ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１４５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１５５ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１６５ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１８５ｍｇ、約１９０ｍｇ、約１９５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２０５ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２１５ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２２５ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２３５ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２４５ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２５５ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２６５ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２７５ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２８５ｍｇ、約２９０ｍｇ、約２９５ｍｇ、約３００ｍｇ、約３０５ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３１５ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３２５ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３３５ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３４５ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３５５ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３６５ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３７５ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３８５ｍｇ、約３９０ｍｇ、約３９５ｍｇ、約４００ｍｇ、約４０５ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４１５ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４２５ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４３５ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４４５ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４５５ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４６５ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４７５ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４８５ｍｇ、約４９０ｍｇ、約４９５ｍｇ、約５００ｍｇ、若しくは約１０００ｍｇの化合物Ａを（例えば、経口で）投与すること、又は１日あたり、上述の量のうちの２つを端点として使用することによって作り出される範囲の量を（例えば、経口で）投与することを含むことができる。いくつかの態様では、当該方法又は使用は、１日あたり５～２５０ｍｇの化合物Ａ、例えば１日あたり１０、１５、２０、２５、３０、３５、又は４０ｍｇ～７５、１００、１２５、１５０、１７５、又は２００ｍｇ、例えば１日あたり２０～１５０ｍｇの化合物Ａを、開示される量のＡＳＭと組み合わせて経口投与することを含む。いくつかの態様では、この経口投与は、１日あたり５０、７５、１００、又は１２５ｍｇ、例えば１日あたり１００ｍｇの化合物Ａを、開示される量のＡＳＭと組み合わせて含む。

【0055】

特定の例では、上記の化合物Ａの１日用量は、１日あたり複数回用量として、例えば１日あたり２回、３回、４回、又は５回の用量で（例えば、経口で）投与される。例えば、１００ｍｇの１日用量は、１日を通して５回の２０ｍｇ、４回の２５ｍｇ、３回の３３．３ｍｇ、又は２回の５０ｍｇの用量で、開示される量のＡＳＭと組み合わせて投与されてもよい。

【0056】

いくつかの実施形態では、上記の１日用量の化合物Ａは、単回用量の化合物Ａとして、又は単回用量のＡＳＭと組み合わせて単回用量の化合物Ａとして（例えば、経口で）投与される。例えば、１日あたり約５、１０、１５、２０、２５、又は３０ｍｇ～約５０、６５、７５、１００、１２５、又は１５０ｍｇの化合物Ａを単回用量として経口投与することができ、これは、単回用量として１日あたり１０～２５ｍｇ、１０～３０ｍｇ、及び１０～４０ｍｇ、例えば、単回用量として１日あたり１０～２５ｍｇを含む。関連して、これまでの段落で論じた化合物Ａの用量のいずれかが単位剤形に含められてもよい。

【0057】

いくつかの実施形態では、上記の化合物Ａの用量は、週あたり複数回の用量、例えば週あたり２回、３回、４回、５回、１０回、１５回、又は２０回の用量として（例えば、経口で）投与される。例えば、１００ｍｇの週用量は、週を通して５回の２０ｍｇ、４回の２５ｍｇ、又は２回の５０ｍｇの用量で、開示される量のＡＳＭと組み合わせて投与されてもよい。

【0058】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法及び使用は、本明細書に開示される毎日の投薬を使用する場合、６～９日以内、例えば約１週間以内に化合物Ａの定常状態を達成する。

【0059】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法及び使用、例えば、必要とするヒトにおける発作性疾患の治療方法又は治療における使用は、ある量のＡＳＭ、例えば約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２．０ｍｇ／ｋｇのＡＳＭを化合物Ａと組み合わせて（例えば、経口で）投与することによって達成される。ＡＳＭのより具体的な代表的な量としては、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．２０ｍｇ／ｋｇ、０．３０ｍｇ／ｋｇ、０．４０ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８０ｍｇ／ｋｇ、０．９０ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．１ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．３ｍｇ／ｋｇ、１．４ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．６ｍｇ／ｋｇ、１．７ｍｇ／ｋｇ、１．８ｍｇ／ｋｇ、１．９ｍｇ／ｋｇ及び２．０ｍｇ／ｋｇ、又は上述の量のうちの２つを端点として使用することによって作り出される任意の範囲の量が挙げられる。いくつかの態様では、当該方法又は使用は、０．０３～１．０ｍｇ／ｋｇのＡＳＭを化合物Ａと組み合わせて（例えば、経口で）投与することを含む。いくつかの態様では、当該方法は、０．０５～０．５ｍｇ／ｋｇのＡＳＭを化合物Ａと組み合わせて（例えば、経口で）投与することを含む。

【0060】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法及び使用、例えば、必要とするヒトにおける発作性疾患の治療方法又は治療における使用は、ある量のＡＳＭ、例えば２～２００ｍｇのＡＳＭを単回用量又は分割用量で、化合物Ａと組み合わせて（例えば、経口で）投与することによって達成される。例えば、当該方法は、単回用量若しくは分割用量で、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ、約４１ｍｇ、約４２ｍｇ、約４３ｍｇ、約４４ｍｇ、約４５ｍｇ、約４６ｍｇ、約４７ｍｇ、約４８ｍｇ、約４９ｍｇ、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、約６０ｍｇ、約６１ｍｇ、約６２ｍｇ、約６３ｍｇ、約６４ｍｇ、約６５ｍｇ、約６６ｍｇ、約６７ｍｇ、約６８ｍｇ、約６９ｍｇ、約７０ｍｇ、約７１ｍｇ、約７２ｍｇ、約７３ｍｇ、約７４ｍｇ、約７５ｍｇ、約７６ｍｇ、約７７ｍｇ、約７８ｍｇ、約７９ｍｇ、約８０ｍｇ、約８１ｍｇ、約８２ｍｇ、約８３ｍｇ、約８４ｍｇ、約８５ｍｇ、約８６ｍｇ、約８７ｍｇ、約８８ｍｇ、約８９ｍｇ、約９０ｍｇ、約９１ｍｇ、約９２ｍｇ、約９３ｍｇ、約９４ｍｇ、約９５ｍｇ、約９６ｍｇ、約９７ｍｇ、約９８ｍｇ、約９９ｍｇ、約１００ｍｇ、約１０１ｍｇ、約１０２ｍｇ、約１０３ｍｇ、約１０４ｍｇ、約１０５ｍｇ、約１０６ｍｇ、約１０７ｍｇ、約１０８ｍｇ、約１０９ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１１１ｍｇ、約１１２ｍｇ、約１１３ｍｇ、約１１４ｍｇ、約１１５ｍｇ、約１１６ｍｇ、約１１７ｍｇ、約１１８ｍｇ、約１１９ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１２１ｍｇ、約１２２ｍｇ、約１２３ｍｇ、約１２４ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１２６ｍｇ、約１２７ｍｇ、約１２９ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１３１ｍｇ、約１３２ｍｇ、約１３３ｍｇ、約１３４ｍｇ、約１３５ｍｇ、約１３６ｍｇ、約１３７ｍｇ、約１３８ｍｇ、約１３９ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１４１ｍｇ、約１４２ｍｇ、約１４３ｍｇ、約１４４ｍｇ、約１４５ｍｇ、約１４６ｍｇ、約１４７ｍｇ、約１４８ｍｇ、約１４９ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１５１ｍｇ、約１５２ｍｇ、約１５３ｍｇ、約１５４ｍｇ、約１５５ｍｇ、約１５６ｍｇ、約１５７ｍｇ、約１５８ｍｇ、約１５９ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１６１ｍｇ、約１６２ｍｇ、約１６３ｍｇ、約１６４ｍｇ、約１６５ｍｇ、約１６６ｍｇ、約１６７ｍｇ、約１６８ｍｇ、約１６９ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１７１ｍｇ、約１７２ｍｇ、約１７３ｍｇ、約１７４ｍｇ、約１７５ｍｇ、約１７６ｍｇ、約１７７ｍｇ、約１７８ｍｇ、約１７９ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１８１ｍｇ、約１８２ｍｇ、約１８３ｍｇ、約１８４ｍｇ、約１８５ｍｇ、約１８６ｍｇ、約１８７ｍｇ、約１８８ｍｇ、約１８９ｍｇ、約１９０ｍｇ、約１９１ｍｇ、約１９２ｍｇ、約１９３ｍｇ、約１９４ｍｇ、約１９５ｍｇ、約１９６ｍｇ、約１９７ｍｇ、約１９８ｍｇ、約１９９ｍｇ、若しくは約２００ｍｇのＡＳＭを（例えば、経口で）投与すること、又は上述の量のうちの２つを端点として使用することによって作り出される任意の範囲の量を（例えば、経口で）投与することを含むことができる。いくつかの態様では、当該方法又は使用は、化合物Ａと組み合わせた化合物Ａ、単回用量又は分割用量での２～１００又は５～５０ｍｇのＡＳＭの経口投与を含む。いくつかの態様では、方法又は使用は、化合物Ａと組み合わせた、単回用量又は分割用量での５、１０、１５、２０、又は２５ｍｇのＡＳＭの経口投与を含む。いくつかの態様では、当該方法又は使用は、開示される量の化合物Ａと組み合わせた単回用量又は分割用量での２０ｍｇのＡＳＭの経口投与を含む。

【0061】

いくつかの態様では、本明細書に記載される方法及び使用、例えば、必要とするヒトにおける発作性疾患の治療方法又は治療における使用は、少なくとも１０ｍｇのＡＳＭ、例えば、少なくとも２０、３０、４０、５０、７５、又は１００ｍｇのＡＳＭを化合物Ａと組み合わせて（例えば、経口で）投与することによって達成される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法及び使用、例えば、必要とするヒトにおける発作性疾患の治療方法又は治療における使用は、少なくとも５０ｍｇのＡＳＭ、例えば少なくとも７５、１００、１２５、１５０、１７５、又は２００ｍｇのＡＳＭを化合物Ａと組み合わせて（例えば、経口で）投与することによって達成される。

【0062】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法及び使用、例えば、必要とするヒトにおける発作性疾患の治療方法又は治療における使用は、１日あたりある量のＡＳＭ、例えば、１日あたり５～１０００ｍｇのＡＳＭ、例えば、１日あたり５～５００ｍｇ又は５～２５０ｍｇのＡＳＭを化合物Ａと組み合わせて（例えば、経口で）投与することによって達成される。例えば、当該方法又は使用は、１日あたり約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１０５ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１１５ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１３５ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１４５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１５５ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１６５ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１８５ｍｇ、約１９０ｍｇ、約１９５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２０５ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２１５ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２２５ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２３５ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２４５ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２５５ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２６５ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２７５ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２８５ｍｇ、約２９０ｍｇ、約２９５ｍｇ、約３００ｍｇ、約３０５ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３１５ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３２５ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３３５ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３４５ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３５５ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３６５ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３７５ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３８５ｍｇ、約３９０ｍｇ、約３９５ｍｇ、約４００ｍｇ、約４０５ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４１５ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４２５ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４３５ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４４５ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４５５ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４６５ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４７５ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４８５ｍｇ、約４９０ｍｇ、約４９５ｍｇ、約５００ｍｇ、若しくは約１０００ｍｇのＡＳＭを（例えば、経口で）投与すること、又は１日あたり、上述の量のうちの２つを端点として使用することによって作り出される範囲の量を（例えば、経口で）投与することを含むことができる。いくつかの態様では、当該方法又は使用は、１日あたり５～２５０ｍｇのＡＳＭ、例えば１日あたり１０、１５、２０、２５、３０、３５、又は４０ｍｇ～７５、１００、１２５、１５０、１７５、又は２００ｍｇのＡＳＭ、例えば１日あたり２０～１５０ｍｇを、化合物Ａと組み合わせて経口投与することを含む。いくつかの態様では、この経口投与は、１日あたり５０、７５、１００、又は１２５ｍｇ、例えば１日あたり１００ｍｇのＡＳＭを、化合物Ａと組み合わせて含む。

【0063】

特定の例では、上記のＡＳＭの１日用量は、１日あたり複数回用量として、例えば１日あたり２回、３回、４回、又は５回の用量で（例えば、経口で）投与される。例えば、１００ｍｇの１日用量は、１日を通して５回の２０ｍｇ、４回の２５ｍｇ、３回の３３．３ｍｇ、又は２回の５０ｍｇの用量で、化合物Ａと組み合わせて投与されてもよい。

【0064】

いくつかの実施形態では、上記の１日用量のＡＳＭは、単回用量として、化合物Ａと組み合わせて（例えば、経口で）投与される。例えば、１日あたり約５、１０、１５、２０、２５、又は３０ｍｇ～約５０、６５、７５、１００、１２５、又は１５０ｍｇのＡＳＭを単回用量として経口投与することができ、これは、単回用量として１日あたり１０～２５ｍｇ、１０～３０ｍｇ、及び１０～４０ｍｇ、例えば、単独投与として１日あたり１０～２５ｍｇを化合物Ａと組み合わせて含む。関連して、これまでの段落で論じたＡＳＭの用量のいずれかが単位剤形に含められてもよい。

【0065】

本明細書に記載される当該方法及び使用のいくつかの実施形態では、化合物Ａと組み合わせて投与されるＡＳＭは、１種以上のベンゾジアゼピン類（例えば、クロラゼプ酸、クロバザム、クロナゼパム、ジアゼパム、ロラゼパム、ニトラゼパムなど）、カルバマゼピン、セノバメート、フェルバメート、ガバペンチン、ラコサミド、ラモトリギン、レベチラセタム、オクスカルバゼピン、フェノバルビタール、フェニトイン、プレガバリン、ルフィナミド、チアガビン、トピラマート、バルプロ酸、ビガバトリン、又はゾニサミドである。いくつかの実施形態では、化合物Ａと組み合わせて投与されるＡＳＭは、バルプロ酸、レベチラセタム、フェニトイン、ラコサミド、セノバメート又はこれらの組み合わせである。

【0066】

本明細書に記載される当該方法及び使用のいくつかの実施形態では、ＡＳＭは、ヒトにおいてＫｖ７カリウムチャネルの開口を増強しないことによって、患者において発作性疾患を治療する（例えば、化合物Ａとは異なる機構によって患者において発作性疾患を治療する）。いくつかの実施形態では、ＡＳＭは、ヒトにおいてナトリウムチャネルを遮断することによって神経細胞の興奮を減少させる。ナトリウムチャネル遮断薬であることが公知であるＡＳＭとしては、例えば、カルバマゼピン、ラコサミド、ラモトリギン、オクスカルバゼピン、フェニトイン、ルフィナミド、トピラマート、及びゾニサミドが挙げられる。いくつかの実施形態では、ナトリウムチャネル遮断薬は、不活性化を促進し、軸索起始部（ＡＩＳ）及び軸索自体における電気的活性への寄与を低減することによって、神経細胞の活動電位発火及び伝達を阻害する。

【0067】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びカルバマゼピンを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0068】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びラコサミドを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0069】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びラモトリギンを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0070】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びオクスカルバゼピンを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0071】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、Ａ及びフェニトインを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0072】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びルフィナミドを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0073】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びトピラマートを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0074】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びゾニサミドを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0075】

本明細書に記載される当該方法及び使用のいくつかの実施形態では、ＡＳＭは、ヒトにおいてカルシウムチャネルを遮断することによって神経細胞の興奮を減少させる。カルシウムチャネル遮断薬であることが公知であるＡＳＭとしては、例えば、ガバペンチン、フェノバルビタール、プレガバリン、及びゾニサミドが挙げられる。いくつかの実施形態では、カルシウムチャネル遮断薬は、カルシウム依存性プロセスであるシナプス前神経伝達物質放出を低減することによって興奮性伝達を低減する。

【0076】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びガバペンチンを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0077】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びフェノバルビタールを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0078】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びプレガバリンを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0079】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びガバペンチンを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0080】

本明細書に記載される当該方法及び使用のいくつかの実施形態では、ＡＳＭは、ヒトにおいてシナプス小胞糖タンパク質２Ａ（ＳＶ２Ａ）に結合することによって神経細胞の興奮を減少させる。ＳＶ２Ａに結合することが公知であるＡＳＭとしては、例えば、レベチラセタムが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＳＶ２Ａ結合剤は、シナプス前神経伝達物質放出を低減することによって興奮性伝達を低減する。

【0081】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びレベチラセタムを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0082】

本明細書に記載される当該方法及び使用のいくつかの実施形態では、ＡＳＭは、ヒトにおいて神経細胞阻害を増加させる。神経細胞阻害を増加させることが公知であるＡＳＭとしては、例えば、ベンゾジアゼピン（例えば、クロラゼプ酸、クロバザム、クロナゼパム、ジアゼパム、ロラゼパム、ニトラゼパム等）、フェルバメート、フェノバルビタール、チアガビン、トピラマート、バルプロ酸、及びビガバトリンが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＡＳＭはグルタミン酸作動薬である。いくつかの態様では、グルタミン酸作動薬は、シナプス後膜上のＡＭＰＡ受容体又はＮＭＤＡ受容体に対するこの神経伝達物質の効果を低減する。いくつかの実施形態では、グルタミン酸作動薬は、カルバマゼピン、フェルバメート、ラモトリギン、プレガバリン、フェニトイン、プレガバリン、チアガビン、又はトピラマートである。他の実施形態では、ＡＳＭはＧＡＢＡ作動薬である。いくつかの態様では、ＧＡＢＡ作動薬は、ベンゾジアゼピン（例えば、クロラゼプ酸、クロバザム、クロナゼパム、ジアゼパム、ロラゼパム、ニトラゼパム等）、フェルバメート、フェノバルビタール、チアガビン、トピラマート、バルプロ酸、又はビガバトリンである。いくつかの例では、ＧＡＢＡ作動薬は、ＧＡＢＡ受容体活性の直接の正のアロステリック調節によってＧＡＢＡ受容体に影響を及ぼしてもよい（例えば、ベンゾジアゼピン）。他の例では、ＧＡＢＡ作動薬は、ＧＡＢＡトランスアミナーゼ（例えば、ビガバトリン）又はＧＡＢＡトランスポーター－１（ＧＡＴ１、例えば、チアガビン）の阻害を介してＧＡＢＡのレベルを間接的に増加させることによってＧＡＢＡ受容体に影響を及ぼしてもよい。

【0083】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びベンゾジアゼピン（例えば、クロラゼプ酸、クロバザム、クロナゼパム、ジアゼパム、ロラゼパム、ニトラゼパム等）を、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0084】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びフェルバメートを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0085】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びフェノバルビタールを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0086】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びチアガビンを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0087】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びトピラマートを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0088】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びバルプロ酸を、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0089】

いくつかの実施形態では、本開示は、必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、そのヒトに、化合物Ａ及びビガバトリンを、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて（例えば、経口で）投与する工程を含む方法に向けられる。

【0090】

当該方法及び使用のいくつかの実施形態では、化合物Ａと組み合わせて投与されるＡＳＭはバルプロ酸である。いくつかの態様では、バルプロ酸は、上の段落で論じられたＡＳＭの用量のいずれかで、化合物Ａと組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、バルプロ酸は、ヒトに、２～１６ｍｇ／ｋｇの用量で化合物Ａと組み合わせて投与され、例えば、バルプロ酸は、ヒトに、４～１２ｍｇ／ｋｇの用量で投与されてもよい。

【0091】

当該方法及び使用のいくつかの実施形態では、化合物Ａと組み合わせて投与されるＡＳＭはフェニトインである。いくつかの態様では、フェニトインは、上の段落で論じられたＡＳＭの用量のいずれかで、化合物Ａと組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、フェニトインは、ヒトに、０．０５～５ｍｇ／ｋｇの用量で化合物Ａと組み合わせて投与され、例えば、フェニトインは、ヒトに、０．１～１ｍｇ／ｋｇの用量で（例えば、経口で）投与されてもよい。

【0092】

当該方法及び使用のいくつかの実施形態では、化合物Ａと組み合わせて投与されるＡＳＭはラコサミドである。いくつかの態様では、ラコサミドは、上の段落で論じられたＡＳＭの用量のいずれかで、化合物Ａと組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、ラコサミドは、ヒトに、０．１～５ｍｇ／ｋｇの用量で化合物Ａと組み合わせて投与され、例えば、ラコサミドは、ヒトに、０．５～１ｍｇ／ｋｇの用量で（例えば、経口で）投与される。

【0093】

当該方法及び使用の別の実施形態では、化合物Ａと組み合わせて投与されるＡＳＭはセノバメートである。いくつかの態様では、セノバメートは、上の段落で論じられたＡＳＭの用量のいずれかで、化合物Ａと組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、セノバメートは、ヒトに、０．０５～５ｍｇ／ｋｇの用量で化合物Ａと組み合わせて投与され、例えば、セノバメートは、ヒトに、０．１～１ｍｇ／ｋｇの用量で（例えば、経口で）投与される。

【0094】

当該方法及び使用の特定の実施形態では、化合物Ａ及びＡＳＭ（例えば、バルプロ酸、フェニトイン、レベチラセタム、ラコサミド、又はセノバメート）の組み合わせ投与は、単独の化合物Ａ又はＡＳＭの個々の投与と比較して、改善された有効性を提供する（例えば、ヒトにおける発作エピソードの数の減少又は発作エピソードの重症度の低減を増加させる）。特定のこのような実施形態では、この組み合わせ投与は相加効果を提供し、相加効果は、化合物Ａを投与すること及び１種以上のＡＳＭを投与することの個々の効果の和を指す。いくつかの実施形態では、上記組み合わせ投与は相乗効果を提供し、相乗効果は、化合物Ａを投与すること及び１種以上のＡＳＭを投与することの個々の効果の和よりも大きい効果を指す。

【0095】

追加の実施形態では、化合物Ａを（例えば、経口で）投与することによって発作性疾患を治療する上記の方法及び使用は、摂食条件下でヒトに化合物Ａを経口投与することを含む。いくつかの実施形態では、摂食条件下（すなわち、食物を伴うか又は食物の摂取に時間的に近接する）でのヒトへの化合物Ａの経口投与は、絶食条件下（すなわち、食物を伴わないか又は食物の摂取に時間的に近接しない）でのヒトへの化合物Ａの経口投与と比較して、化合物Ａのバイオアベイラビリティ及び曝露を顕著に増強する。いくつかの実施形態では、摂食条件下でのヒトへの化合物Ａの経口投与は、同じ量の化合物Ａが絶食条件下でヒトに経口投与される場合と比較して、化合物Ａの１つ以上の薬物動態パラメータ（例えば、Ｃ_ｍａｘ、ＡＵＣ_ｉｎｆ、Ｔ_ｍａｘ、ｔ_{１／２λｚ}等）を増加させる。

【0096】

特定の実施形態では、本明細書に記載される方法及び使用は、化合物Ａ、ＡＳＭ、又は化合物Ａ及びＡＳＭの両方を、場合によって化合物Ａ、ＡＳＭ、又は化合物Ａ及びＡＳＭの両方と、１種以上の薬学的に許容できる担体又は賦形剤とを含む薬学的に許容できる経口組成物の形態で投与する。これらの組成物に含まれる化合物Ａ、ＡＳＭ、又は化合物Ａ及びＡＳＭの両方の量は、本明細書に記載される量のうちの１つ以上に対応してもよい。いくつかの実施形態では、この組成物は単位用量である。

【0097】

化合物Ａ、ＡＳＭ、又は化合物Ａ及びＡＳＭの両方を含む薬学的に許容できる経口組成物の例としては、固体製剤（錠剤、カプセル剤、トローチ剤、糖衣錠、顆粒剤、散剤、粉剤（スプリンクル剤）、ウエハース、多粒子剤、及びフィルム剤等）、液体製剤（水溶液、エリキシル剤、チンキ剤、トニック剤（強壮剤）、スラリー、懸濁液、及び分散剤等）、並びにエアロゾル化製剤（ミスト及びスプレー等）が挙げられる。１つの実施形態では、化合物Ａの薬学的に許容できる経口組成物は、小児用懸濁液又は顆粒を含む。化合物Ａ、ＡＳＭ、又は化合物Ａ及びＡＳＭの両方のすべての上記の量が、そのような製剤に含まれてもよく、例えば、５、１０、１５、１０、２５、３０、若しくは３５ｍｇの化合物Ａを含むカプセル、５、１０、１５、１０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７５、８５、９０、９５、若しくは１００ｍｇのＡＳＭを含むカプセル、又は５、１０、１５、１０、２５、３０、若しくは３５ｍｇの化合物Ａ及び５、１０、１５、１０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７５、８５、９０、９５、若しくは１００ｍｇのＡＳＭを含むカプセルが挙げられる。

【0098】

本明細書に記載される方法及び使用に係る化合物Ａ、ＡＳＭ、又は化合物Ａ及びＡＳＭの両方の投与に適した他の投与経路としては、舌下及び口腔内（例えば、舌下若しくは頬の内側の口内で溶解するフィルム又は他の組成物を用いる）、眼内（例えば、点眼剤）、耳内（例えば、点耳剤による）、経口吸入若しくは鼻吸入（例えば、吹送若しくは噴霧による）、皮膚若しくは局所（例えば、クリーム若しくはローションによる）、又は経皮（例えば、皮膚パッチによる）が挙げられる。経口投与以外に、他の経腸投与経路を、化合物Ａ、ＡＳＭ、又は化合物Ａ及びＡＳＭの両方に使用することができ、これには膣内及び直腸内（例えば、軟膏剤、坐剤、浣腸による）が含まれる。

【0099】

化合物Ａ、ＡＳＭ、又は化合物Ａ及びＡＳＭの両方の非経口投与に適した組成物の例としては、水性又は油性の調製物、特に水性調製物を含む、滅菌した注射用の溶液、懸濁液、又は分散液が挙げられる。いくつかの実施形態では、化合物Ａ、ＡＳＭ、又は化合物Ａ及びＡＳＭの両方は、水、リンゲル液、等張性塩化ナトリウム溶液、緩衝水溶液、及び１，３－ブタンジオール等の混和性アルコールを含有する水溶液等の、非経口的に許容できる希釈剤又は溶媒を含む注射用の滅菌水性製剤において、本明細書に記載される方法又は使用に従って投与される。化合物Ａ、ＡＳＭ、又は化合物Ａ及びＡＳＭの両方の非経口製剤のためのさらなる適切な賦形剤としては、モノグリセリド又はジグリセリド；脂肪酸、例えばオレイン酸及びそのグリセリド誘導体；天然の薬学的に許容できる油、例えば、オリーブ油又はヒマシ油（それらのポリオキシエチル化バージョンを含む）；長鎖アルコール希釈剤又は分散剤、例えばカルボキシメチルセルロースを含むアルキルセルロース；並びに界面活性剤、例えばＴｗｅｅｎ、Ｓｐａｎ及び他の乳化剤又はバイオアベイラビリティ増強剤が挙げられる。

【0100】

別の実施形態では、経口投与によるうつ病性障害の治療のための化合物ＡとＡＳＭとの組み合わせ経口投与のためのキットが提供される。このようなキットは、化合物Ａ、ＡＳＭ、又は化合物Ａ及びＡＳＭの両方の複数の経口投与単位形態を、化合物Ａ及びＡＳＭを組み合わせて経口投与するための説明書に加えて含む。

【0101】

本開示のさらなる実施形態及び例が本明細書に記載される。これらの実施形態及び例は例示的なものであり、請求項に係る発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。

【0102】

３． 番号付けされた実施形態
実施形態１。必要とするヒトにおいて発作性疾患を治療する方法であって、上記ヒトに、化合物Ａ及び抗けいれん薬（ＡＳＭ）を、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて投与する工程を含み、化合物Ａは、Ｎ－［４－（６－フルオロ－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル）－２，６－ジメチルフェニル］－３，３－ジメチルブタンアミドである、方法。

【0103】

実施形態２。発作性疾患に罹患しているヒトにおける治療有効性に必要とされる抗けいれん薬（ＡＳＭ）の量を低減する方法であって、上記ヒトに、上記ＡＳＭと組み合わせて、上記ＡＳＭとともに投与されるときにそのような低減を達成するのに有効な量の化合物Ａを投与する工程を含み、化合物Ａは、Ｎ－［４－（６－フルオロ－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル）－２，６－ジメチルフェニル］－３，３－ジメチルブタンアミドである、方法。

【0104】

実施形態３。発作性疾患に罹患しているヒトにおける治療有効性に必要とされる化合物Ａの量を低減する方法であって、上記ヒトに、化合物Ａと組み合わせて、化合物Ａとともに投与されたときにそのような低減を達成するのに有効な量の抗けいれん薬（ＡＳＭ）を投与する工程を含み、化合物Ａは、Ｎ－［４－（６－フルオロ－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル）－２，６－ジメチルフェニル］－３，３－ジメチルブタンアミドである、方法。

【0105】

実施形態４。上記方法は、上記ヒトにおいてＫｖ７カリウムチャネルの開口を増強することを含む実施形態１から実施形態３のいずれか１つに記載の方法。

【0106】

実施形態５。ヒトにおいてＫｖ７カリウムチャネルの開口を増強する方法であって、上記ヒトに、化合物Ａ及び抗けいれん薬（ＡＳＭ）を、組み合わせて投与されたときに治療上有効な量で組み合わせて投与する工程を含み、化合物Ａは、Ｎ－［４－（６－フルオロ－３，４－ジヒドロ－１Ｈ－イソキノリン－２－イル）－２，６－ジメチルフェニル］－３，３－ジメチルブタンアミドであり、上記ヒトは発作性疾患を有する、方法。

【0107】

実施形態６。上記Ｋｖ７カリウムチャネルは、Ｋｖ７．２、Ｋｖ７．３、Ｋｖ７．４、又はＫｖ７．５のうちの１つ以上である実施形態４又は実施形態５に記載の方法。

【0108】

実施形態７。上記方法は、Ｋｖ７．１よりもＫｖ７．２、Ｋｖ７．３、Ｋｖ７．４、又はＫｖ７．５のうちの１つ以上の開口を増強するために選択的である実施形態６に記載の方法。

【0109】

実施形態８。上記方法は、Ｋｖ７．２／Ｋｖ７．３（ＫＣＮＱ２／３）カリウムチャネルの開口を含む実施形態４又は実施形態５に記載の方法。

【0110】

実施形態９。上記ＡＳＭは、ベンゾジアゼピン、カルバマゼピン、セノバメート、フェルバメート、ガバペンチン、ラコサミド、ラモトリギン、レベチラセタム、オクスカルバゼピン、フェノバルビタール、フェニトイン、プレガバリン、ルフィナミド、チアガビン、トピラマート、バルプロ酸、ビガバトリン、ゾニサミド、又はこれらの組み合わせである実施形態１から実施形態８のいずれか１つに記載の方法。

【0111】

実施形態１０。上記ＡＳＭは、バルプロ酸、レベチラセタム、フェニトイン、ラコサミド、又はセノバメートである実施形態１から実施形態９のいずれか１つに記載の方法。

【0112】

実施形態１１。上記ＡＳＭは、上記ヒトにおいてＫｖ７カリウムチャネルの開口を増強しない実施形態１から実施形態１０のいずれか１つに記載の方法。

【0113】

実施形態１２。上記ＡＳＭは、上記ヒトにおいて神経細胞の興奮を減少させる実施形態１から実施形態１１のいずれか１つに記載の方法。

【0114】

実施形態１３。上記ＡＳＭは、上記ヒトにおいてナトリウムチャネルを遮断することによって神経細胞の興奮を減少させる実施形態１２に記載の方法。

【0115】

実施形態１４。上記ＡＳＭは、上記ヒトにおいてカルシウムチャネルを遮断することによって神経細胞の興奮を減少させる実施形態１２に記載の方法。

【0116】

実施形態１５。上記ＡＳＭは、上記ヒトにおいてシナプス小胞糖タンパク質２Ａ（ＳＶ２Ａ）に結合することによって神経細胞の興奮を減少させる実施形態１２に記載の方法。

【0117】

実施形態１６。上記ＡＳＭは、上記ヒトにおいて神経細胞阻害を増加させる実施形態１から実施形態１１のいずれか１つに記載の方法。

【0118】

実施形態１７。上記ＡＳＭはグルタミン酸作動薬である実施形態１から実施形態１１のいずれか１つに記載の方法。

【0119】

実施形態１８。上記ＡＳＭはＧＡＢＡ作動薬である実施形態１から実施形態１１のいずれか１つに記載の方法。

【0120】

実施形態１９。上記発作性疾患は、Ｋｖ７カリウムチャネル機能不全に関連する実施形態１から実施形態１８のいずれか１つに記載の方法。

【0121】

実施形態２０。上記発作性疾患は焦点起始てんかんである実施形態１から実施形態１９のいずれか１つに記載の方法。

【0122】

実施形態２１。化合物Ａは上記ヒトに経口投与される実施形態１から実施形態２０のいずれか１つに記載の方法。

【0123】

実施形態２２。上記ＡＳＭは上記ヒトに経口投与される実施形態１から実施形態２１のいずれか１つに記載の方法。

【0124】

実施形態２３。化合物Ａは、上記ヒトに１～２００ｍｇの用量で投与される実施形態１から実施形態２２のいずれか１つに記載の方法。

【0125】

実施形態２４。化合物Ａは、上記ヒトに２～１００ｍｇの用量で投与される実施形態１から実施形態２３のいずれか１つに記載の方法。

【0126】

実施形態２５。化合物Ａは、上記ヒトに５～５０ｍｇの用量で投与される実施形態１から実施形態２４のいずれか１つに記載の方法。

【0127】

実施形態２６。化合物Ａは、上記ヒトに５、１０、１５、２０、又は２５ｍｇの用量で投与される実施形態１から実施形態２５のいずれか１つに記載の方法。

【0128】

実施形態２７。化合物Ａは、上記ヒトに２０ｍｇの用量で投与される実施形態１から実施形態２６のいずれか１つに記載の方法。

【0129】

実施形態２８。化合物Ａは、上記ヒトに少なくとも１０ｍｇの用量で投与される実施形態１から実施形態２２のいずれか１つに記載の方法。

【0130】

実施形態２９。化合物Ａは、上記ヒトに少なくとも２０ｍｇの用量で投与される実施形態２８に記載の方法。

【0131】

実施形態３０。化合物Ａは、上記ヒトに少なくとも５０ｍｇの用量で投与される実施形態２８に記載の方法。

【0132】

実施形態３１。化合物Ａは、上記ヒトに１日あたり５～１０００ｍｇの用量で投与される実施形態１から実施形態２２のいずれか１つに記載の方法。

【0133】

実施形態３２。化合物Ａは、上記ヒトに１日あたり５～５００ｍｇの用量で投与される実施形態３１に記載の方法。

【0134】

実施形態３３。化合物Ａは、上記ヒトに１日あたり５～２５０ｍｇの用量で投与される実施形態３１に記載の方法。

【0135】

実施形態３４。化合物Ａは、上記ヒトに１日あたり２０～１５０ｍｇの用量で投与される実施形態３１に記載の方法。

【0136】

実施形態３５。化合物Ａは、上記ヒトに１日あたり１００ｍｇの用量で投与される実施形態３１に記載の方法。

【0137】

実施形態３６。化合物Ａは、上記ヒトに０．０１～２．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される実施形態１から実施形態２２のいずれか１つに記載の方法。

【0138】

実施形態３７。化合物Ａは、上記ヒトに０．０３～１．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される実施形態３６に記載の方法。

【0139】

実施形態３８。化合物Ａは、上記ヒトに０．０５～０．５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される実施形態３６に記載の方法。

【0140】

実施形態３９。化合物Ａは、上記ヒトに食事摂取の約３０分前から食事摂取の約２時間後の間に経口投与される実施形態１から実施形態３８のいずれか１つに記載の方法。

【0141】

実施形態４０。化合物Ａは、上記ヒトに食事中又は食事摂取の後１５分以内に経口投与される実施形態３９に記載の方法。

【0142】

実施形態４１。上記ＡＳＭはバルプロ酸である実施形態１から実施形態４０のいずれか１つに記載の方法。

【0143】

実施形態４２。上記バルプロ酸は、上記ヒトに２～１６ｍｇ／ｋｇの用量で投与される実施形態４１に記載の方法。

【0144】

実施形態４３。上記バルプロ酸は、上記ヒトに４～１２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される実施形態４１に記載の方法。

【0145】

実施形態４４。上記ＡＳＭはフェニトインである実施形態１から実施形態４０のいずれか１つに記載の方法。

【0146】

実施形態４５。上記フェニトインは、上記ヒトに０．０５～５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される実施形態４４に記載の方法。

【0147】

実施形態４６。上記フェニトインは、上記ヒトに０．１～１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される実施形態４４に記載の方法。

【0148】

実施形態４７。上記ＡＳＭはラコサミドである実施形態１から実施形態４０のいずれか１つに記載の方法。

【0149】

実施形態４８。上記ラコサミドは、上記ヒトに０．１～５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される実施形態４７に記載の方法。

【0150】

実施形態４９。上記ラコサミドは、上記ヒトに０．５～１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される実施形態４７に記載の方法。

【0151】

実施形態５０。上記ＡＳＭはセノバメートである実施形態１から実施形態４０のいずれか１つに記載の方法。

【0152】

実施形態５１。上記セノバメートは、上記ヒトに０．０５～５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される実施形態５０に記載の方法。

【0153】

実施形態５２。上記セノバメートは、上記ヒトに０．１～１ｍｇ／ｋｇの用量で投与される実施形態５０に記載の方法。

【0154】

実施形態５３。化合物Ａ及び上記ＡＳＭの組み合わせ投与は、単独の化合物Ａ又は上記ＡＳＭの個々の投与と比較して、改善された有効性を提供する実施形態１から実施形態５２のいずれか１つに記載の方法。

【実施例】

【0155】

化合物Ａと他のＡＳＭとの効果を判定するために研究を行った。
１． 実施例１。単独の化合物Ａ、及び一般的なＡＳＭと組み合わせた化合物Ａの抗けいれん効果
化合物Ａと他のＡＳＭとの相互作用を、マウス最大電撃（ＭＥＳ）アッセイにおいて経口投与後に評価して、いくつかの組み合わせが好ましいか好ましくないかを判定した。角膜刺激後に強直性後肢発作を有する動物の割合を計算することによって有効性を定量化（数値化）した。

【0156】

１．１ 化合物Ａ
単独で投与した場合、化合物Ａ（１、２、４、又は８ｍｇ／ｋｇ）は、経口投与の０．５時間後及び２時間後の両方でＭＥＳアッセイにおいて強直性発作の発生を減少させた。濃度反応関係を結合アイソサーム（等温線）にフィッティングし、１５４ｎＭの血漿濃度のＩＣ_５０及び２７５ｎＭの脳濃度のＩＣ_５０（用量あたり、時間点あたりｎ＝７）を得た。

【0157】

化合物の調製：化合物Ａを最初にＤＭＳＯに可溶化した。次いで、この溶液を０．５％メチルセルロース溶液に加え、より均一で凝集の少ない化合物懸濁液を作製した。最高濃度の化合物Ａを含むチューブから連続希釈物を調製し、化合物懸濁液をさらにボルテックス処理した後、動物に投与した。ＤＭＳＯの最終濃度は５％であり、ＭＥＳアッセイにおいて明らかな毒性又は神経保護を有さない量であった。フェニトイン及びバルプロ酸は１００％生理食塩水に可溶化した（０．９％）。レベチラセタムは、脱イオン水中の０．５％メチルセルロース及び０．２％Ｔｗｅｅｎ８０に可溶化した。

【0158】

動物：Ｈａｒｌａｎ（ハーラン）－Ｅｎｖｉｇｏ（エンヴィーゴ）から購入した成体雄ＣＦ－１アルビノマウス（２５～３５ｇ）を使用した。マウスを１ケージにつき４匹収容し、実験全体を通して濾過水及び飼料を自由に摂取させた。

【0159】

ＭＥＳアッセイ：化合物は、特段の記載がない限り、試験前に胃管栄養法によって経口投与した。ＭＥＳ試験中、６０Ｈｚの交流電流（５０ｍＡ）を０．２秒間、角膜電極を通してマウスに送達した。０．５％Ａｌｃａｉｎｅ（アルカイン）溶液の液滴を、電流送達の前に眼に置いた。その後、電極を動物の（両）眼の上に穏やかに配置し、足踏み式アクチベーターを通して引き金を引くことによって電撃を開始した。動物を手で拘束し、ショックが送達されて発作が始まると穏やかに解放した。動物を、この試験の終点として後肢の強直性伸展について監視した。

【0160】

統計分析：すべての統計値は、Ｐｒｉｓｍバージョン７ソフトウェア（Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（グラフパッド・ソフトウェア））を使用して計算した。各実験に使用した方法を結果の項に示す。濃度反応曲線を、下式に対する最良フィッティングとして計算した。
Ｙ＝最小値＋（最大値－最小値）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０－Ｘ）×ヒル勾配））
上記式中、Ｘは血漿濃度の対数である。特段の記載がない限り、最小値は０であるように制約した。最大値は、ビヒクル対照測定によって実験的に決定された値であるように制約した。

【0161】

化合物Ａの用量反応：１、２、４、又は８ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの経口投与後の用量反応を、マウスＭＥＳアッセイにおいて２つの異なる時間点で評価した：経口投与の０．５及び２時間後（図１及び図２）。動物をビヒクル（２時間でｎ＝７、０．５時間でｎ＝５）又は異なる用量群（１用量、１時点あたりｎ＝７）に無作為に割り当て、ＭＥＳアッセイを、処置条件を盲検化した実験者によって行った。

【0162】

２時間の時点で、化合物Ａは、後肢伸展によって評価される強直性発作の数の用量依存的減少を示した。８ｍｇ／ｋｇの用量は、ビヒクル処置マウスと比較して有意な保護を提供した（強直性発作を有するマウスの数／試験した総数：１ｍｇ／ｋｇ：５／７（ｐ＝０．９３９）、２ｍｇ／ｋｇ：４／７（ｐ＝０．５９８）、４ｍｇ／ｋｇ：２／７（ｐ＝０．０８５）、８ｍｇ／ｋｇ：１／７（ｐ＝０．０２３）、ビヒクル：６／７（ｐ値はダネット（Ｄｕｎｎｅｔｔ）の多重比較検定を使用する一元配置ＡＮＯＶＡ（分散分析）によって計算した）。同じデータを使用して、後肢強直性伸展から保護されたマウスのパーセンテージを計算した（１ｍｇ／ｋｇ：２８．６％（ｐ＞０．９９９）、２ｍｇ／ｋｇ：４２．９％（ｐ＞０．９９９）、４ｍｇ／ｋｇ：７１．４％（ｐ＝０．１０３）、８ｍｇ／ｋｇ：８５．７％（ｐ＝０．０２９）、ビヒクル：１４．３％；ｐ値はフィッシャー（Ｆｉｓｈｅｒ）の正確確率検定によって計算した）。有効性試験の直後にマウスから脳及び血漿試料を採取し、ＵＨＰＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳを使用して分析した（表１）。

【0163】

【表1】

【0164】

脳及び血漿中の総濃度、それぞれ、１ｍｇ／ｋｇ：０．１９μＭ（７０．２ｎｇ／ｇ）及び０．１μＭ（３５．８ｎｇ／ｍＬ）、２ｍｇ／ｋｇ：０．２１μＭ（７５．８ｎｇ／ｇ）及び０．１３μＭ（４６．７ｎｇ／ｍＬ）、４ｍｇ／ｋｇ：０．３６μＭ（１３１．３ｎｇ／ｇ）及び０．２３μＭ（８３ｎｇ／ｍＬ）、８ｍｇ／ｋｇ：０．５６μＭ（２０７．７ｎｇ／ｇ）及び０．４３μＭ（１５７．８ｎｇ／ｍＬ）。

【0165】

０．５時間の時点で、１、２及び４ｍｇ／ｋｇの用量は、後肢の伸展を伴う強直性発作の数の用量依存的減少を示し、４ｍｇ／ｋｇは、ビヒクル処置マウスと比較して有意な保護を提供した（１ｍｇ／ｋｇ：４／７（ｐ＝０．４４９）、２ｍｇ／ｋｇ：２／７（ｐ＝０．０８８）、４ｍｇ／ｋｇ：１／７（ｐ＝０．０３２）、８ｍｇ／ｋｇ：３／７（ｐ＝０．２１５）、ビヒクル：５／５；一元配置ＡＮＯＶＡはダネットの多重比較検定を使用して計算した）。８ｍｇ／ｋｇで、１／７の動物は、刺激後に後肢伸展を伴う２回の強直性発作を有し、他の用量群又はビヒクル処置マウスでは見られなかった発生であった。同様の用量依存的有効性が、強直性発作の後肢強直性伸筋成分から保護されたマウスについて観察された（１ｍｇ／ｋｇ：４２．９％（ｐ＞０．２０５）、２ｍｇ／ｋｇ：７１．４％（ｐ＝０．０２８）、４ｍｇ／ｋｇ：８５．７％（ｐ＝０．０１５）、８ｍｇ／ｋｇ：７１．４％（ｐ＝０．０２８）、ビヒクル：０％；フィッシャーの正確確率検定を使用して計算した）。有効性試験の直後にマウスから脳及び血漿試料を採取し、ＵＨＰＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳを使用して分析した（表２）。

【0166】

【表2】

【0167】

各用量群の平均の脳及び血漿中の総濃度は以下の通りであった：それぞれ、１ｍｇ／ｋｇ：０．２７μＭ（９７．９ｎｇ／ｇ）及び０．１３μＭ（４８．９ｎｇ／ｍＬ）、２ｍｇ／ｋｇ：０．３６μＭ（１３２ｎｇ／ｇ）及び０．２２μＭ（８０．７ｎｇ／ｍＬ）、４ｍｇ／ｋｇ：０．６４μＭ（２３４．７ｎｇ／ｇ）及び０．４２μＭ（１５４．４ｎｇ／ｍＬ）、８ｍｇ／ｋｇ：１．０９μＭ（４０２ｎｇ／ｇ）及び０．７１μＭ（２６１．３ｎｇ／ｍＬ）。

【0168】

図３は、ＭＥＳアッセイにおける化合物ＡのＰＫ－ＰＤデータのすべてを要約する濃度－反応関係を示す。上のパネルは、血漿濃度の関数としての強直性発作の阻害を示し、下のパネルは、脳濃度の関数としての阻害を示す。２時間の前処置時間と比較して、より高い脳及び血漿曝露が０．５時間で観察されたが、各曝露レベルで観察された有効性は、投与後の時間にかかわらず、脳濃度又は血漿濃度を反映した（図３）。化合物Ａの２時間前処置による明確な用量反応に起因して、この時間点をさらなる研究のために選択した。投与の２時間後に収集したデータを濃度反応曲線にフィッティングし、ＩＣ_５０及びヒル係数のみを最適フィッティングのために変動させた。水平破線は、ビヒクルにおける強直性発作の発生率を示す：９４．１±０．０３％（平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．、ｎ＝８５）。この値を曲線の最大値とし、最小値を０（完全阻害）に制約した。脳濃度及び血漿濃度に基づくＩＣ_５０推定値は、それぞれ２７５ｎＭ及び１５４ｎＭであった。

【0169】

１．２ 化合物Ａとバルプロ酸との組み合わせ
化合物Ａについて２時間の前処置を伴う１ｍｇ／ｋｇのＰＯ及びバルプロ酸について０．５時間の前処置を伴う１００ｍｇ／ｋｇのＩＰの用量を、最初の併用研究のために選択した。化合物Ａ（１ｍｇ／ｋｇ ＰＯ）によってもたらされるさらなる有効性の程度を定量化するために、第２の実験を実施して、第１の研究の知見を繰り返し、バルプロ酸のさらなる用量（３０及び５６ｍｇ／ｋｇ ＩＰ）を試験した。これらの２つの実験を組み合わせた結果を以下で論じる。

【0170】

動物を無作為に割り当て、有効性試験の２時間前に化合物Ａ又はビヒクルを経口投与し、続いて有効性試験の０．５時間前にバルプロ酸又はビヒクルをＩＰ投与した。この実験計画に基づいて、単独投与対照群又はビヒクル対照群の動物も、それぞれ２回の用量を受けた：（化合物Ａ＋ビヒクル、ビヒクル＋バルプロ酸、化合物Ａ＋バルプロ酸、又はビヒクル＋ビヒクル）。

【0171】

化合物Ａ及び１００ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸の共投与は、化合物Ａの単独投与で処置したマウスと比較して、後肢の伸展を伴う強直性発作を伴わないマウスの数の有意な増加をもたらした（化合物Ａ＋１００ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸：１０／１５対１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ＋ビヒクル：４／１５（ｐ＝０．０２１）、及びビヒクル＋１００ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸：５／１５（ｐ＝０．０５９）；ｐ値は、二元配置ＡＮＯＶＡとそれに続くダネット多重比較検定によって計算した）。化合物Ａと５６ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸との併用投与では、強直性発作に対する保護の増加の傾向が認められたが、化合物Ａと３０ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸：化合物Ａ＋５６ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸：４／８対１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ＋ビヒクル：４／１５（ｐ＝０．３９６）及び対ビヒクル＋５６ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸：１／７（ｐ＝０．２２６）；化合物Ａ＋３０ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸：２／８対１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ＋ビヒクル：４／１５（ｐ＝０．９９５）及び対ビヒクル＋５６ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸：０／８（ｐ＝０．４６３）との併用では差異は認められなかった（図４）。

【0172】

化合物Ａ（１ｍｇ／ｋｇ）＋５６及び１００ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸の両併用投与群は、ビヒクル処置動物と比較して有意な保護をもたらした：化合物Ａ＋１００ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸：１０／１５（ｐ＝０．０００１）及び化合物Ａ＋５６ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸：４／８（ｐ＝０．０３８１）対ビヒクル＋ビヒクル：０／１５；ｐ値は、一元配置ＡＮＯＶＡとそれに続くダネット多重比較検定によって計算した。

【0173】

有効性試験の直後にマウスから血漿試料及び脳試料を採取し、ＵＨＰＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳを使用して分析した（表３）。

【0174】

【表3】

【0175】

単独で投与した場合又はバルプロ酸と共投与した場合、化合物Ａの血漿濃度又は脳濃度に有意差はなかった。単独で投与した場合の１ｍｇ／ｋｇでの化合物Ａの平均総血漿及び脳濃度：０．０６６μＭ（２４ｎｇ／ｍＬ）及び０．１６μＭ（５９ｎｇ／ｇ）、バルプロ酸（３０ｍｇ／ｋｇ）と投与した場合：０．０３８μＭ（１４ｎｇ／ｍＬ）及び０．０７５μＭ（２８ｎｇ／ｇ）、バルプロ酸（５６ｍｇ／ｋｇ）と投与した場合：０．０５０μＭ（１８ｎｇ／ｍＬ）及び０．１１７μＭ（４３ｎｇ／ｇ）、並びにバルプロ酸（１００ｍｇ／ｋｇ）と投与した場合：０．０４２μＭ（１５ｎｇ／ｍＬ）及び０．０９７μＭ（３６ｎｇ／ｇ）。同様に、化合物Ａと組み合わせた場合、試験した３つの用量でバルプロ酸の血漿濃度又は脳濃度に有意な変化はなかった。

【0176】

化合物ＡとＶＡとの共投与実験も、ＶＡによる強直性発作の阻害についてのＩＣ_５０に対する効果を定量化するために、ＶＡの濃度－反応関係に対する化合物Ａの効果として分析した（図５）。

【0177】

１．３ 化合物Ａとレベチラセタムとの組み合わせ
レベチラセタムはＭＥＳアッセイでは不活性である（ＥＤ_５０＞５００ｍｇ／ｋｇ）が、６Ｈｚ、３２ｍＡｍｐアッセイではＥＤ_５０＝１９．４ｍｇ／ｋｇで活性であることが報告されている（Ｂａｒｔｏｎら、Ｅｐｉｌｅｐｓｙ Ｒｅｓ． ２００１、４７：２１７－２２７）。生物学的活性を有することが公知である高用量のレベチラセタムを選択した。

【0178】

レベチラセタムを、１２０及び１５０ｍｇ／ｋｇのＩＰ投与によってＭＥＳアッセイにおいて評価した。これらの用量は、それぞれ１００１μＭ（１７０．３μｇ／ｍＬ）及び１１５４μＭ（１９６．４μｇ／ｍＬ）の血漿濃度並びに５８３μＭ（９９．２μｇ／ｇ）及び５４０μＭ（９１．９μｇ／ｇ）の脳濃度をもたらした（表４）。

【0179】

【表4】

【0180】

いずれの用量も、ビヒクル処置マウスと比較して、強直性発作のないマウスの割合に有意な増加をもたらさなかった：１２０ｍｇ／ｋｇ：０／６（ｐ＝０．９８）、１５０ｍｇ／ｋｇ ２／８（ｐ＝０．９３）、ビヒクル：２／１８；ｐ値は、ダネット多重比較検定による一元配置ＡＮＯＶＡによって計算した（図６）。

【0181】

１又は１．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａとの共投与は、レベチラセタムの血漿又は脳のレベルに影響を及ぼさなかった：９５７μＭ（１６３μｇ／ｍＬ）血漿及び５５４μＭ（９４３μｇ／ｇ）脳（ＬＥＶ １２０ｍｇ／ｋｇ＋１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ）；１２３５μＭ（２１０μｇ／ｍＬ）血漿及び５３１μＭ（９０．４μｇ／ｇ）脳（ＬＥＶ １５０ｍｇ／ｋｇ＋１．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ）。１ｍｇ／ｋｇ単独の化合物Ａ又は１２０ｍｇ／ｋｇのレベチラセタムと共投与した化合物Ａの曝露値は、それぞれ、血漿中０．０３μＭ（１１．１ｎｇ／ｍＬ）及び０．０３μＭ（１１．１ｎｇ／ｍＬ）、並びに脳中０．０６μＭ（２０．９ｎｇ／ｇ）及び０．０５μＭ（２０．０ｎｇ／ｇ）であった。１．５ｍｇ／ｋｇ単独の化合物Ａ又は１５０ｍｇ／ｋｇのレベチラセタムと共投与した化合物Ａの曝露値は、それぞれ、血漿中０．０４μＭ（１５ｎｇ／ｍＬ）及び０．０７μＭ（２５ｎｇ／ｍＬ）、並びに脳中０．０８μＭ（３１ｎｇ／ｇ）及び０．１４μＭ（５２ｎｇ／ｇ）であった。

【0182】

いずれの用量の組み合わせにおいても、強直性発作のないマウスの割合の増加は、化合物Ａ単独の効果よりも有意に大きくはなかった：１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ：２／１１対化合物Ａ（１ｍｇ／ｋｇ）＋ＬＥＶ（１２０ｍｇ／ｋｇ）：２／５、ｐ＝０．５７８；及び１．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ：３／８対化合物Ａ（１．５ｍｇ／ｋｇ）＋ＬＥＶ（１５０ｍｇ／ｋｇ）：４／８、ｐ＝０．８０５；ｐ値は、ダネット多重比較検定による二元配置ＡＮＯＶＡによって計算した（図６）。

【0183】

１．４ 化合物Ａとフェニトインとの組み合わせ
Ｋ_Ｖ７チャネルは、軸索起始部においてＮａ_Ｖ１．６及びＮａ_Ｖ１．２チャネルと共局在する。化合物ＡはＫ_Ｖ７チャネルを活性化し、フェニトインは電位依存性ナトリウムチャネルを阻害するので、好ましい相互作用が予想されたが、その大きさは不明であった。

【0184】

２時間の前処置時間でＰＯ投与した化合物Ａ（０．２５、０．７５、１、１．５、及び２．５ｍｇ／ｋｇ）の用量反応を、ＭＥＳアッセイにおいて、所定の一定用量のフェニトイン（２ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、２時間の前処置）の存在下又は不存在下で試験した。

【0185】

ビヒクル処置動物と比較して、化合物Ａの単独投与は、強直性発作のない動物の割合の用量依存的増加をもたらした：０．２５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ：０／８（ｐ＝０．９９９）、０．７５ｍｇ／ｋｇ：２／８（ｐ＝０．９４８）、１ｍｇ／ｋｇ：２／８（ｐ＝０．９４８）、１．５ｍｇ／ｋｇ：２／８（ｐ＝０．９４８）、２．５ｍｇ／ｋｇ：４／８（ｐ＝０．１２）；２ｍｇ／ｋｇのフェニトイン：６／２４（ｐ＝０．７２）；ビヒクル ２／２４。フェニトインと共投与した場合、０．７５、１、１．５及び２．５ｍｇ／ｋｇの用量の化合物Ａは、ビヒクル処置動物と比較して、強直性発作のない動物の割合の有意な増加をもたらした：化合物Ａ０．２５ｍｇ／ｋｇ＋フェニトイン２ｍｇ／ｋｇ：３／８（ｐ＝０．４８）、化合物Ａ０．７５ｍｇ／ｋｇ＋フェニトイン２ｍｇ／ｋｇ：５／８（ｐ＝０．０１８）、化合物Ａ１ｍｇ／ｋｇ＋フェニトイン２ｍｇ／ｋｇ：６／８（ｐ＝０．００２）、化合物Ａ１．５ｍｇ／ｋｇ＋フェニトイン２ｍｇ／ｋｇ：６／８（ｐ＝０．００２）、化合物Ａ２．５ｍｇ／ｋｇ＋フェニトイン２ｍｇ／ｋｇ：７／８（ｐ＝０．０００１）；ｐ値は、一元配置ＡＮＯＶＡ及びダネット多重比較検定によって計算した（図７）。

【0186】

単独投与の化合物Ａを投与した動物と、化合物Ａ及びフェニトインの両方を共投与した群との比較により、１及び１．５ｍｇ／ｋｇの用量での共投与群において、強直性発作のない動物の割合の有意な増加が示された。フェニトインの単独投与を共投与群と比較した場合、同様の傾向が観察され、化合物Ａの１、１．５及び２．５ｍｇ／ｋｇで有意な発作からの解放が認められた：化合物Ａ０．２５＋フェニトイン２ｍｇ／ｋｇ併用：３／８対単独投与化合物Ａ（０．２５ｍｇ／ｋｇ）：０／８（ｐ＝０．１６５）及び６／２４ フェニトイン（２ｍｇ／ｋｇ；ｐ＝０．７１５）、化合物Ａ０．７５＋フェニトイン２ｍｇ／ｋｇ併用：５／８対単独投与化合物Ａ（０．７５ｍｇ／ｋｇ）：２／８（ｐ＝０．１６５）及び６／２４ フェニトイン（２ｍｇ／ｋｇ；ｐ＝０．０７４）、化合物Ａ１＋フェニトイン２ｍｇ／ｋｇの併用：６／８対単独投与化合物Ａ（１ｍｇ／ｋｇ）：２／８（ｐ＝０．０４８）及び６／２４ フェニトイン（２ｍｇ／ｋｇ；ｐ＝０．０１２）、化合物Ａ１．５＋フェニトイン２ｍｇ／ｋｇ併用：６／８対単独投与化合物Ａ（１．５ｍｇ／ｋｇ）：２／８（ｐ＝０．０４８）及び６／２４（２ｍｇ／ｋｇのフェニトイン；ｐ＝０．０１２）、化合物Ａ２．５＋フェニトイン２ｍｇ／ｋｇ併用：７／８対単独投与化合物Ａ（２．５ｍｇ／ｋｇ）：４／８（ｐ＝０．１６５）及び６／２４フェニトイン（２ｍｇ／ｋｇ； ｐ＝０．００１）；ｐ値は、二元配置ＡＮＯＶＡとそれに続くダネット多重比較検定によって計算した（図７）。

【0187】

血漿濃度又は脳濃度の有意な変化は、化合物Ａを伴って投与した場合でも伴わずに投与した場合でも、フェニトインについて認められなかった（表４）。

【0188】

【表5】

【0189】

血漿及び脳曝露はそれぞれ、フェニトイン２ｍｇ／ｋｇの単独投与４．１μＭ（１０１９ｎｇ／ｍＬ）及び４．２μＭ（１０５２ｎｇ／ｇ）：０．２５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａと併用した場合４．０μＭ（１０１４ｎｇ／ｍＬ）及び４．２μＭ（１０５５ｎｇ／ｇ）：０．７５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａと併用した場合４．１μＭ（１０２５ｎｇ／ｍＬ）及び２．９μＭ（１０７０ｎｇ／ｇ）：１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａと併用した場合３．９μＭ（９８９ｎｇ／ｍＬ）及び５．０μＭ（１２６３ｎｇ／ｇ）：１．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａと併用した場合４．８μＭ（１２１０ｎｇ／ｍＬ）及び４．８μＭ（１１９６ｎｇ／ｇ）、並びに２．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａと併用した場合３．９μＭ（９７１ｎｇ／ｍＬ）及び２．９μＭ（１０５１ｎｇ／ｇ）。

【0190】

同様に、単独で投与した場合でもフェニトインと組み合わせて投与した場合でも、化合物Ａの血漿濃度及び脳濃度に有意な変化はない（表５）。

【0191】

【表6】

【0192】

血漿及び脳は、それぞれ、０．２５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの単独投与対フェニトイン（２ｍｇ／ｋｇ）との併用：０．０１μＭ（４．３ｎｇ／ｍＬ）及び０．０４μＭ（１４．８ｎｇ／ｇ）対０．０２μＭ（５．６ｎｇ／ｍＬ）及び０．０５μＭ（１８．４ｎｇ／ｇ）、０．７５ｍｇ／ｋｇ単独投与対併用：０．０３μＭ（１１．７ｎｇ／ｍＬ）及び０．１２μＭ（４３．８ｎｇ／ｇ）対０．０４μＭ（１６．０ｎｇ／ｍＬ）及び０．１５μＭ（５６．７ｎｇ／ｇ）、１ｍｇ／ｋｇ単独投与対併用：０．０５μＭ（１７．０ｎｇ／ｍＬ）及び０．１０μＭ（３５．０ｎｇ／ｇ）対０．０５μＭ（１９．０ｎｇ／ｍＬ）及び０．１０μＭ（３７．０ｎｇ／ｇ）、１．５ｍｇ／ｋｇ単独投与対併用：０．０５μＭ（１９．５ｎｇ／ｍＬ）及び０．０８μＭ（３０．８ｎｇ／ｇ）対０．０６μＭ（２３．４ｎｇ／ｍＬ）及び０．１１μＭ（４２ｎｇ／ｇ）、２．５ｍｇ／ｋｇ単独投与対併用：０．１２μＭ（４５．１ｎｇ／ｍＬ）及び０．３９μＭ（１４４．１ｎｇ／ｇ）対０．１６μＭ（５８．４ｎｇ／ｍＬ）及び０．５１μＭ（１８６．５ｎｇ／ｇ）。

【0193】

化合物Ａによる強直性発作の阻害についてのＩＣ_５０に対する効果を定量化するために、化合物Ａの濃度－反応関係に対するフェニトインの効果として、化合物Ａ及びフェニトインによる共投与実験も分析した（図８）。

【0194】

１．５ 結び
化合物Ａは、マウスＭＥＳアッセイにおいて、血漿及び脳曝露値とよく相関する用量依存的有効性を示した。化合物Ａ及び１００ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸又は２ｍｇ／ｋｇのフェニトインの組み合わせは、ＭＥＳアッセイにおいて、いずれかの化合物単独で観察されるよりも高い有効性が観察されることをもたらした。化合物Ａとレベチラセタムとの共投与は、化合物Ａ単独と比較した場合、ＭＥＳアッセイにおいて有効性の有意な改善を提供しなかった。

【0195】

バルプロ酸（３０、５６又は１００ｍｇ／ｋｇのＩＰ、ＭＥＳの０．５時間前に投与）：化合物Ａ（１ｍｇ／ｋｇ ＰＯ、ＭＥＳの２時間前）を１００ｍｇ／ｋｇで投与したバルプロ酸（ＶＡ）と組み合わせると、化合物Ａを単独で投与した場合よりも大きい阻害が生じた（１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ＋１００ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸：１０／１５対１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ＋ビヒクル：４／１５（ｐ＝０．０２１））（単独投与群：ｎ＝１５ １ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、ｎ＝１５ １００ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸、ｎ＝７ ３０及び５６ｍｇ／ｋｇのバルプロ酸；併用投与群：ｎ＝１５ 化合物Ａ１ｍｇ／ｋｇ＋バルプロ酸１００ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８ 化合物Ａ＋バルプロ酸３０及び５６ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝１５ ビヒクル）。１ｍｇ／ｋｇで投与された化合物Ａは、ＭＥＳアッセイにおいて強直性発作に対する保護に必要なバルプロ酸の血漿レベルを減少させた。バルプロ酸単独のＩＣ_５０は１４４０μＭであった。１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａと組み合わせた場合、バルプロ酸のＩＣ_５０は６０８μＭであり、２．３７倍の減少であった。単独で投与した場合の１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの平均総血漿濃度：０．０７μＭ（２４．２ｎｇ／ｍＬ）及びバルプロ酸（３０ｍｇ／ｋｇ）とともに投与した場合：０．０４μＭ（１４．０ｎｇ／ｍＬ）、バルプロ酸（５６ｍｇ／ｋｇ）とともに投与した場合：０．０３μＭ（１２．０ｎｇ／ｍＬ）、及びバルプロ酸（１００ｍｇ／ｋｇ）とともに投与した場合：０．０４μＭ（１５．０ｎｇ／ｍＬ）。

【0196】

レベチラセタム（１２０及び１５０ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、ＭＥＳの２時間前に投与）：１ｍｇ／ｋｇの用量の化合物Ａは、６６±１４ｎＭ（平均±ＳＥＭ、ｎ＝１５）の血漿濃度を生じ、強直性発作を有する割合を２６．７％減少させた。化合物Ａとレベチラセタム（ＬＥＶ）との共投与は、化合物Ａ単独と比較した場合、強直性発作に対する保護の改善を提供しなかった：１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ：２／１１対化合物Ａ（１ｍｇ／ｋｇ）＋ＬＥＶ（１２０ｍｇ／ｋｇ）：２／５、ｐ＝０．５７８；１．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ：３／８対化合物Ａ（１．５ｍｇ／ｋｇ）＋ＬＥＶ（１５０ｍｇ／ｋｇ）：４／８、ｐ＝０．８０５。１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ単独又は１２０ｍｇ／ｋｇのＬＥＶと共投与した化合物Ａの血漿濃度は、０．０３μＭ（１１．１ｎｇ／ｍＬ）及び０．０３μＭ（１１．１ｎｇ／ｍＬ）であり、１．５ｍｇ／ｋｇ化合物Ａ単独又は１５０ｍｇ／ｋｇのＬＥＶと共投与した化合物Ａでは、それぞれ０．０４１μＭ（１５ｎｇ／ｍＬ）及び０．０６８μＭ（２５ｎｇ／ｍＬ）であった。

【0197】

フェニトイン（２ｍｇ／ｋｇ ＩＰ、ＭＥＳの２時間前に投与）：化合物Ａを２ｍｇ／ｋｇで投与したフェニトインと組み合わせると、化合物Ａを単独で投与した場合よりも大きい阻害が生じた。ＭＥＳの２時間前にフェニトインと共投与した場合、０．７５、１、１．５及び２．５ｍｇ／ｋｇの経口用量の化合物Ａは、ビヒクル処置動物と比較して、強直性発作のないマウスの割合の有意な増加をもたらした：化合物Ａ０．２５ｍｇ／ｋｇ＋フェニトイン２ｍｇ／ｋｇ：３／８（ｐ＝０．４８）、化合物Ａ０．７５ｍｇ／ｋｇ＋フェニトイン２ｍｇ／ｋｇ：５／８（ｐ＝０．０１３）、化合物Ａ１ｍｇ／ｋｇ＋フェニトイン２ｍｇ／ｋｇ：６／８（ｐ＝０．００２）、化合物Ａ１．５ｍｇ／ｋｇ＋フェニトイン２ｍｇ／ｋｇ：６／８（ｐ＝０．００２）、化合物Ａ２．５ｍｇ／ｋｇ＋フェニトイン２ｍｇ／ｋｇ：７／８（ｐ＝０．０００１）。化合物Ａ単独のＩＣ_５０は１４７ｎＭであった。２ｍｇ／ｋｇのフェニトインと組み合わせた場合、化合物ＡのＩＣ_５０は３９．７ｎＭであった。単独で投与した場合でもフェニトインと組み合わせて投与した場合でも、化合物Ａの血漿濃度に有意な変化はなかった：化合物Ａの０．２５ｍｇ／ｋｇの単独投与対フェニトイン（２ｍｇ／ｋｇ）との併用：０．０１μＭ（４．３ｎｇ／ｍＬ）対０．０２μＭ（５．６ｎｇ／ｍＬ）、０．７５ｍｇ／ｋｇ単独投与対併用：０．０３μＭ（１１．７ｎｇ／ｍＬ）対０．０４μＭ（１６ｎｇ／ｍＬ）、１ｍｇ／ｋｇ単独投与対併用：０．０５μＭ（１７ｎｇ／ｍＬ）対０．０５μＭ（１９ｎｇ／ｍＬ）、１．５ｍｇ／ｋｇ単独投与対併用：０．０５μＭ（１９．５ｎｇ／ｍＬ）対０．０６μＭ（２３．４ｎｇ／ｍＬ）、２．５ｍｇ／ｋｇ単独投与対併用：０．１２μＭ（４５．１ｎｇ／ｍＬ）対０．１６μＭ（５８．４ｎｇ／ｍＬ）。

【0198】

２． 実施例２。単独の化合物Ａ及びラコサミドと組み合わせた化合物Ａの抗けいれん効果
化合物Ａの有効性及びそのラコサミドとの薬理学的相互作用を、マウス最大電撃けいれん（ＡＣ－ＭＥＳ）アッセイにおいて経口投与後に評価した。

【0199】

これらの研究の目的は、化合物Ａの単回経口投与後のマウスにおけるＡＣ－ＭＥＳアッセイにおける化合物Ａの用量依存性抗けいれん活性及びラコサミドとのその薬理学的相互作用を特徴付けることであった。ＡＣ－ＭＥＳアッセイは、典型的には、非選択的ナトリウムチャネル遮断薬及びカリウムチャネル開口薬に応答し、部分てんかん発作（部分発作起始）の翻訳動物モデルとして使用されている。ＭＥＳアッセイは、新規な抗発作化合物のスクリーニング及び特徴付けのために広く使用されている（Ｌｏｅｓｃｈｅｒら、Ｅｐｉｌｅｐｓｙ Ｒｅｓ． １９９１、８（２）：７９－９４；Ｐｉｒｅｄｄａら、Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ． １９８５、２３２（３）：７４１－７４５；及びＷｈｉｔｅら、Ｉｔａｌ Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｓｃｉ． １９９５、１６（１－２）：７３－７７）。充分に高い電流での電撃刺激後、マウス及びラットは強直性伸展を示し、その後、後肢のクローヌスが続く。試験化合物が強直性伸展を妨げることができれば、その試験化合物を保護的であるとみなした。

【0200】

化合物Ａ及びラコサミドの抗けいれん効力、並びに化合物Ａをラコサミドと組み合わせることの効果を、単回ＰＯ投与後の雄ＣＦ－１マウスにおけるＡＣ－ＭＥＳアッセイにおいて試験した。薬物濃度と有効性との関係を理解するために、血漿試料及び脳試料を得た。

【0201】

２．１ 材料及び方法
試験化合物 － 化合物Ａ

【表7】

【0202】

試験化合物 － ラコサミド

【表8】

【0203】

ビヒクルＦ１：脱イオン（ＤＩ）水中の０．５％メチルセルロース及び０．２％Ｔｗｅｅｎ－８０。０．８ＬのＤＩ水を７０℃～８０℃に加熱した。５グラムのメチルセルロースを秤量し、加熱したＤＩ水に少量ずつゆっくりと添加した。この混合物を、均質な乳状懸濁液を形成するまで撹拌した。懸濁液を冷室に移し、終夜撹拌して透明な溶液を得た。２ｍＬのＴｗｅｅｎ－８０をこの透明な溶液に加え、ＤＩ水で１Ｌまで希釈した。このビヒクル溶液を２℃～８℃で保存した。

【0204】

ビヒクルＦ２：５％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）及びＦ１。５％ＤＭＳＯをＦ１ビヒクルに加えた。

【0205】

投与製剤：化合物Ａ及びラコサミドを別々のバイアルに秤量した。化合物ＡをＦ２ビヒクル中で製剤化し、ラコサミドをＦ１ビヒクル中で製剤化した。適切な量のビヒクルを化合物Ａ及びラコサミド粉末に添加し、次いでＩＫＡ Ｔ－１８ Ｕｌｔｒａ－Ｔｕｒｒａｘホモジナイザーで混合して、所望の濃度の均一な懸濁液を作製した。次いで、バイアルをアルミホイルで包んで光から保護し、投与時まで撹拌プレート上に置いた。

【0206】

試験系

【表9】

【0207】

実験設計：動物を、表６、表７、表８、及び表９に示すように処置群に割り当てた。

【0208】

化合物Ａを用いて３つの研究を行い、ラコサミドを用いて４つの研究を行った。それぞれの研究日を表６～表９に示す。

【0209】

【表10】

ＰＯ：ｐｅｒ ｏｓ、経口。

【0210】

【表11】

ＰＯ：ｐｅｒ ｏｓ、経口。

【0211】

【表12】

ＰＯ：ｐｅｒ ｏｓ、経口。

【0212】

【表13】

ＰＯ：ｐｅｒ ｏｓ、経口。

【0213】

盲検化及び無作為化：化合物を投与する実験者は、各動物を無作為に処置群に割り当てた。処置群の割り当てを知らない異なる実験者が試験を実施した。加えて、化合物投与及びＭＥＳ試験を異なる部屋で行って、試験を行う実験者が処置に対して完全に盲検であることを確実にした。所与の実験で試験したすべての動物は、いずれの処置群に割り当てられる可能性も同等であった。

【0214】

臨床観察：すべての動物を、化合物Ａ及びラコサミドの投与後１０分間、動物に投与した実験者によって、及び再び刺激時に１０分間、動物を試験した実験者によって、異常行動について観察した。正常行動からの定性的変化があればそれを記録した。

【0215】

ＡＣ－ＭＥＳアッセイ：ＭＥＳ試験は、抗けいれん物質の探索に広く使用されている（Ｐｉｒｅｄｄａら、Ｌｏｅｓｃｈｅｒら、及びＷｈｉｔｅら）。ＭＥＳ試験は、全般強直間代（ＧＴＣ）発作のモデルと考えられ、化合物が発作拡散を予防する能力の指標を提供する。ＡＣ－ＭＥＳモデルでは、交流電流（６０Ｈｚ、４０ｍＡ）の電撃を、角膜電極（ＨＳＥ－ＨＡ Ｒｏｄｅｎｔ Ｓｈｏｃｋｅｒ、Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ（ハーバード・アパレイタス）、モデル番号：７３－０１０５）によって０．２秒間送達した。ＣＦ－１マウスに、電撃アッセイの０．５時間前にビヒクル又は化合物ＡをＰＯ投与した（標準操作手順Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ（ＳＯＰ）ＴＥＣＨ－００６による）。電撃刺激の直前に、動物の眼を０．５％Ａｌｃａｉｎｅ溶液（塩酸プロパラカイン、１滴／眼）の局所適用で麻酔した。次いで、マウスを拘束し、角膜電極を取り付け、ショックを投与した。ナイーブ動物では、発作は、後肢強直性伸筋成分による初期の全般強直性発作を特徴とする。動物は、発作の後肢強直性伸筋成分の消失時にＭＥＳ誘発性発作から保護されたとみなされ、その場合は「０」とスコア付けされる。マウスが強直性後肢伸展を示す場合、スコアは「１」である。血漿及び脳の採取のために、電撃後の初期発作スコア評価の直後にマウスを安楽死させた。

【0216】

試料の収集及び調製：マウスが麻酔の手術面に到達するまで、マウスをイソフルラン吸入によって麻酔した（ＳＯＰ ＴＥＣＨ－０１８による）。次いで、シリンジ（２２ゲージ針付き１ｍＬシリンジ）を胸骨下から心臓に挿入した（ＳＯＰ ＴＥＣＨ－０３１による）。約０．５ｍＬの血液を回収し、Ｋ_２ＥＤＴＡチューブに入れ、氷上で保存した。次いで、頸部脱臼によって動物を安楽死させた。脳を取り出し、予め秤量したバイアルに入れ、ドライアイス上で急速凍結した。試料収集の終わりに、血液を４℃で１０分間４０００ｒｐｍで遠心分離し、血漿をピペットで標識チューブに移した。すべての試料を、生物分析の時点まで－８０℃の冷凍庫に保存した。

【0217】

血漿試料：血漿試料の抽出は、アセトニトリルを用いたタンパク質沈殿によって行った。希釈した血漿試料（５０μＬ）を、１：１ アセトニトリル：水（ｖ：ｖ）中の５０μＬの内部標準（ＩＳ）溶液と混合し、続いて２００μＬのアセトニトリルを添加した。試料を３０秒間ボルテックス混合し、１３，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、９６ウェルプレートにデカントし、さらに４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。以下の生物分析手順に記載するように、超高速液体クロマトグラフィーエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析（ＵＨＰＬＣ－ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳ）によって試料を分析した。

【0218】

脳試料：抽出前に、予め秤量した全脳を、ＩＫＡ Ｔ１８ Ｕｌｔｒａ－Ｔｕｒｒａｘホモジナイザーを用いて４の設定で約１分間、１：１ アセトニトリル：水（ｖ：ｖ）（マウス脳あたり２ｍＬ）中でホモジナイズした。ホモジネートを１３，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、５０μＬの上清を血漿試料について上記に記載したのとまったく同じように処理した。

【0219】

生物分析手順：血漿及び脳ホモジネート抽出物（Ｋ_２ＥＤＴＡマウス血漿中で調製した較正標準及び品質管理（ＱＣ）試料を含む）を含むすべての試料をタンパク質沈殿によって抽出した。試料の各５０μＬアリコートに、５０μＬのＩＳ溶液（水：アセトニトリル（１：１）中の２５００ｎｇ／ｍＬのラコサミド）及び５０μＬの６％（ｖ：ｖ）リン酸水溶液を添加し、次いで２００μＬのアセトニトリルを添加した。１．７ｍＬチューブ中の試料をボルテックス混合し、次いで１３，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。１５マイクロリットルの上清を９６ウェルプレート中で１５０μＬの水：アセトニトリル（１：１）と混合し、混合後４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。次いで、試料をＵＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析に供した。

【0220】

下記の条件を使用して、研究グレードのＵＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法により、化合物Ａについて試料を分析した。

【0221】

【表14】

【0222】

下記の条件を使用して、研究グレードのＵＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法により、ラコサミドについて試料を分析した。

【0223】

【表15】

【0224】

試料濃度は、標準試料中の分析物対ＩＳピーク面積比のそれらのそれぞれの濃度への回帰によって生成された、線形又は二次の較正関数（１／ｘで重み付け）のいずれかの最良フィッティングモデルを使用して決定した。分析実行の許容基準は、許容基準が±２５％である最低標準又は定量下限（ＬＬＯＱ）を除いて、標準及びＱＣ試料の逆算値がそれらの公称値の±２０％以内に入ることを必要とした。１２の標準点のうちの少なくとも６つは、許容できる較正のための公称濃度の±２０％以内の逆算値を示す必要があった。各濃度で１つである少なくとも３つのＱＣ試料は、試料バッチ全体が有効であるために、公称濃度の±２０％以内の逆算値を示す必要があった。

【0225】

データ処理及び分析：すべての統計値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン８ソフトウェアを使用して計算した。濃度反応曲線は、ヒル・ラングミュア（Ｈｉｌｌ Ｌａｎｇｍｕｉｒ）式を使用して作成した。
式１
Ｙ＝Ｂ＋（Ｔ－Ｂ）×ｘ^ｎ／（ＩＣ_５０ ^ｎ＋ｘ^ｎ）
上記式１中、
・Ｂ＝最低値であり、０と設定し、
・Ｔ＝最大値であり、１と設定し、
・ｎ＝ヒル係数であり、ゼロ未満に制約し、
・ＩＣ_５０＝インビトロでの５０％阻害に必要な化合物の濃度
である。

【0226】

すべての群データを平均として表す。クラスカル・ウォリス（Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ）、続いてダン（Ｄｕｎｎ）の多重比較検定を用いて群間の差異を分析した。統計的有意性は、ｐ＜０．０５の値で達成された。

【0227】

生物分析：すべてのシステム適合性試験（ＳＳＴ）、ＱＣ、マトリクス、及び溶媒ブランクは、ＳＯＰ ＭＴＤ－０６６に記載される許容基準を満たした。化合物Ａ及びラコサミドのＬＬＯＱは、研究２Ｃでは２．３４ｎｇ／ｍＬであり、研究２Ｄ及び２Ａでは両方の化合物について４．６９ｎｇ／ｍＬであり、研究２Ｂではラコサミド及び化合物Ａについてそれぞれ２．３４ｎｇ／ｍＬ及び４．６９ｎｇ／ｍＬであった。定量上限（ＵＬＯＱ）は、すべての研究において両方の化合物について４８００ｎｇ／ｍＬであった。

【0228】

ＡＣ－ＭＥＳアッセイにおける有効性：マウスにおけるＡＣ－ＭＥＳ誘導発作研究の結果を表１０、表１１、表１２、及び表１３、並びに図９、図１０、及び図１１に示す。

【0229】

化合物Ａの用量及び濃度反応：化合物Ａの用量及び濃度反応を図９に示す。３つの有効性研究（２Ａ、２Ｂ、及び２Ｃ）すべてにおいて、ビヒクル処置ＣＦ－１マウスの１００％が、後肢の伸展を伴う強直性発作を示した。研究２Ａでは、化合物Ａを投与した動物のうちＡＣ－ＭＥＳ刺激に対する強直性発作応答を示したものの割合は、１ｍｇ／ｋｇで８／８から、５ｍｇ／ｋｇで７／８に、１０ｍｇ／ｋｇで３／８に減少し、有効性の用量依存的増加を示唆した。研究２Ｂでは、５ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇの用量は、それぞれ０／８及び１／９の動物の発作を示して、研究２Ａにおいてよりも大きい有効性を示し、これは、研究２Ａ（平均血漿濃度：５ｍｇ／ｋｇで０．２７６μＭ及び１０ｍｇ／ｋｇで０．３６６μＭ）よりも研究２Ｂ（平均血漿濃度：５ｍｇ／ｋｇで０．４７０μＭ及び１０ｍｇ／ｋｇで０．５５３μＭ）において達成されたより高い血漿濃度から生じた可能性がある。加えて、研究２Ａ及び２Ｂは、互いから１週間隔てて実施され、これも、有効性における差を説明してもよい。研究２Ｃでは、３ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ａは、２／８の動物の発作を示し、平均血漿濃度は０．２８４μＭであった。３つの研究（２Ａ、２Ｂ及び２Ｃ）すべてにおいて、化合物Ａ処置群とビヒクル投与群との差は統計的有意性に達した（ｐ値は図９に示されている）。

【0230】

研究２Ａにおける１０ｍｇ／ｋｇ群からの１匹のマウス並びに研究２Ｂにおける３匹のマウス（１０ｍｇ／ｋｇ群からの２匹のマウス及び７．５ｍｇ／ｋｇ群からの１匹のマウス）は、行動徴候（振戦、活動の低下及び後肢の広がり）を示した（血漿濃度：２Ａ：０．３９１μＭ；２Ｂ：１０ｍｇ／ｋｇ：０．６０８及び０．５１６μＭ、７．５ｍｇ／ｋｇ：０．７４６μＭ）。脳組織及び血漿において到達した化合物Ａの濃度は、用量に対して線形であった（図９）。

【0231】

３つの研究からの化合物Ａの統合濃度反応曲線は、血漿について０．３００μＭのＥＣ_５０及び脳組織について０．４７１μＭのＥＣ_５０を示した（図９）。

【0232】

２．２ 結果
ＡＣ－ＭＥＳモデルにおいて化合物Ａをラコサミドと組み合わせて試験する前に、ラコサミドを別々の試験（２Ｄ）において異なる用量で試験し、上記の化合物Ａについて要約した研究内のマウスの別々の群に試験して、完全な用量反応を確立した。これらの４つの研究からのラコサミドの統合の反応用量及び濃度反応を図１０に示す。ラコサミドは、ＡＣ－ＭＥＳ誘発性強直性発作に対して用量依存的及び濃度依存的効果を示し、２０ｍｇ／ｋｇで最大効果を示し、３／８動物しか発作を起こさなかった（平均血漿濃度２３．９μＭ）。２０ｍｇ／ｋｇのラコサミド処置群における動物の発作の割合は、ビヒクル処置群と有意に異なった（ｐ値＝０．００５２）。ラコサミドの濃度反応曲線分析は、血漿について２１．６μＭのＥＣ_５０及び脳組織について２２．２μＭのＥＣ_５０を示した。化合物Ａ＋ラコサミドの併用研究である研究２Ｃについては、１０ｍｇ／ｋｇのラコサミド及び３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの用量を選択したが、これらは両方とも、ＡＣ－ＭＥＳモデルにおいて単独で投与した場合に最小限の有効性しか示さなかった。

【0233】

化合物Ａ（３ｍｇ／ｋｇをＡＣ－ＭＥＳの０．５時間前にＰＯ投与した）をラコサミド（１０ｍｇ／ｋｇをＡＣ－ＭＥＳの２時間前にＰＯ投与した）と組み合わせると、強直性発作が消失した（表１２）。ラコサミド処置群（１０ｍｇ／ｋｇのラコサミド単独、６／８（８匹中６匹）の動物の発作）と併用群（化合物Ａ＋ラコサミド、０／８の動物の発作）との差は統計的に有意であったが（ｐ値＝０．０１８９）、化合物Ａ処置群（３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ単独、２／８の動物の発作）と併用群との差は統計的に有意ではなかった。化合物Ａ（３ｍｇ／ｋｇで投与）及びラコサミド（１０ｍｇ／ｋｇで投与）の血漿濃度は、単独で投与しても組み合わせて投与しても同様であり、これは、併用群で観察されたより大きい有効性は、いずれかの化合物のより高い曝露の結果ではないことを示唆した。達成された平均血漿濃度は以下の通りであった：３ｍｇ／ｋｇで単独で投与した場合の化合物Ａについて０．２８４μＭ；ラコサミドと組み合わせて３ｍｇ／ｋｇで投与した場合の化合物Ａについて０．２７９μＭ；１０ｍｇ／ｋｇで単独で投与した場合のラコサミドについて１７．１μＭ；化合物Ａと組み合わせて１０ｍｇ／ｋｇで投与した場合のラコサミドについて１５．５μＭ。

【0234】

【表16】

Ｂ／Ｐ：脳対血漿比；ｎ／ａ：適用なし。

【0235】

【表17】

Ｂ／Ｐ：脳対血漿比；ｎ／ａ：適用なし。

【0236】

【表18】

Ｂ／Ｐ：脳対血漿比；ｎ／ａ：適用なし。

【0237】

【表19】

Ｂ／Ｐ：脳対血漿比；ｎ／ａ：適用なし。

【0238】

２．１ 結び
化合物Ａ及びラコサミドは、ＣＦ－１マウスＡＣ－ＭＥＳアッセイにおいて濃度依存的な有効性を示した。濃度反応曲線分析から予測される血漿及び脳の化合物ＡのＥＣ_５０値は、それぞれ０．３０μＭ及び０．４７μＭであった。３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ及び１０ｍｇ／ｋｇのラコサミドの組み合わせは、マウスＡＣ－ＭＥＳアッセイにおいて化合物Ａ又はラコサミドを単独で投与した場合の部分的抑制と比較して、強直性発作の完全な抑制をもたらした。

【0239】

化合物Ａの５つの経口（ＰＯ）用量を、ＡＣ－ＭＥＳモデルにおいてそれぞれ試験した。１ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）、３ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）、５ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝１６）、７．５ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）、及び１０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝１７）の化合物Ａを経口強制投与により雄ＣＦ－１マウス（体重２８．２～４３．８ｇ）に投与した３０分後、これらのマウスに６０Ｈｚの角膜電気刺激（０．２秒の継続時間、４０ｍＡ）を与えた。この刺激は、すべてのビヒクル投与動物において強直性後肢伸展を誘発した。電気刺激に応答した後肢伸展を示さなかったいずれの動物も、保護されたとみなした。また、観察神経学的評価（定性試験）も、認容性スクリーニングとして試験時に行った。化合物Ａ濃度のレベルを取得し、有効性と薬物濃度との関係を理解するために、最終の血漿試料及び脳試料をすべての動物から収集した。

【0240】

単回経口投与後、化合物Ａは、ＡＣ－ＭＥＳ誘発性強直性発作に対して濃度依存性効果を示し、０／８動物の発作という最大効果は、０．４７μＭの血漿濃度で得られた（５ｍｇ／ｋｇの研究２Ｂから）。研究２Ａ（１ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８；５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８；及び１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８；研究日２０１９年３月２８日）では、化合物Ａによる３０分の前処置後にＡＣ－ＭＥＳ刺激に対して強直性発作応答を示した動物の割合は、８／８（０．０８１５μＭの平均血漿濃度；１ｍｇ／ｋｇ）、７／８（０．２８μＭの平均血漿濃度；５ｍｇ／ｋｇ）、及び３／８（０．３７μＭの平均血漿濃度；１０ｍｇ／ｋｇ）に減少した。研究２Ｂ（５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８；７．５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝７及び１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝９；研究日２０１９年６月５日）では、５ｍｇ／ｋｇ（０．４７μＭの平均血漿濃度）及び１０ｍｇ／ｋｇ（０．５５μＭの平均血漿濃度）用量の化合物Ａが強い有効性を示した（それぞれ０／８及び１／９の動物の発作）。研究２Ｃ（３ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８；研究日２０１９年６月１１日）では、３ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ａは、２／８の動物の発作を示し、血漿濃度は０．２８μＭであった。３つの有効性研究（２Ａ、２Ｂ、及び２Ｃ）すべてにおいて、化合物Ａ処置群とビヒクル投与群との差は、統計的有意性に達した。３つの研究すべてからのデータを、単独で投与した場合の化合物Ａの濃度反応曲線分析のために組み合わせた。化合物Ａの濃度反応曲線は、血漿について０．３０μＭの半値影響濃度（ｈａｌｆ－ｍａｘｉｍｕｍ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）（ＥＣ_５０）及び脳組織について０．４７μＭのＥＣ_５０を示した。

【0241】

研究２Ａにおける１０ｍｇ／ｋｇ群から１匹のマウス並びに研究２Ｂにおける３匹のマウス（１０ｍｇ／ｋｇ群からの２匹のマウス及び７．５ｍｇ／ｋｇ群からの１匹のマウス）は、行動徴候（振戦、活動の低下及び後肢の広がり）を示した（血漿濃度：２Ａ：０．３９μＭ；２Ｂ：１０ｍｇ／ｋｇ：０．６１及び０．５２μＭ、７．５ｍｇ／ｋｇ：０．７５μＭ）。

【0242】

ＡＣ－ＭＥＳモデルにおいて化合物Ａをラコサミドと組み合わせて試験する（研究２Ｃ）前に、ラコサミドを単独で異なる用量で試験し、完全な用量反応を確立した。ラコサミドの４つのＰＯ用量をそれぞれ、ＡＣ－ＭＥＳモデルにおいて別々に（研究２Ｄ：６ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇ、一群あたりｎ＝８、研究日２０１９年３月１４日；研究２Ａ：６ｍｇ／ｋｇ及び８ｍｇ／ｋｇ、一群あたりｎ＝８、研究日２０１９年５月２８日；研究２Ｂ：１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８、研究日２０１９年６月５日；並びに研究２Ｃ：１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８、研究日２０１９年６月１１日）、かつ研究の一部として試験した。６ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝１６）、８ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）、１０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝１６）、及び２０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）のラコサミドを強制経口投与により雄ＣＦ－１マウス（体重２８．２～４３．８ｇ）に投与した２時間後、これらのマウスにＡＣ－ＭＥＳ刺激を与えた。ラコサミドは、ＡＣ－ＭＥＳ誘発性強直性発作に対して用量依存的及び濃度依存的効果を示し、２０ｍｇ／ｋｇで３／８の動物の発作（２３．９μＭの平均血漿濃度）という最大効果を示し、６、８、及び１０ｍｇ／ｋｇのより低い用量で最小効果を示した。４つの研究（２Ａ、２Ｂ、２Ｃ、及び２Ｄ）すべてからのデータを、単独で投与した場合のラコサミドの濃度反応曲線分析のために組み合わせた。ラコサミドの濃度反応曲線は、血漿について２１．６μＭのＥＣ_５０及び脳組織について２２．２μＭのＥＣ_５０を示した。用量反応研究に基づいて、単独で投与した場合に最小限の有効性しか示さなかった１０ｍｇ／ｋｇのラコサミド及び３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの用量を、ＡＣ－ＭＥＳモデルにおける併用試験のために選択した。

【0243】

雄ＣＦ－１マウスにおいて化合物Ａ（３ｍｇ／ｋｇ ＰＯ、ＡＣ－ＭＥＳの０．５時間前）をラコサミド（１０ｍｇ／ｋｇ ＰＯ、ＡＣ－ＭＥＳの２時間前）と組み合わせると、化合物Ａ又はラコサミドを単独で投与した場合の部分的抑制と比較して、強直性発作が完全に抑制された（３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ単独：２／８動物の発作；１０ｍｇ／ｋｇのラコサミド単独：６／８動物の発作；化合物Ａ＋ラコサミド：０／８動物の発作；ビヒクル：８／８動物の発作）。化合物Ａ（３ｍｇ／ｋｇ）及びラコサミド（１０ｍｇ／ｋｇ）の血漿濃度は、単独で投与しても組み合わせて投与しても同様であり、これは、併用群において観察された最大有効性は、いずれかの化合物のより高い曝露の結果ではないことを示唆した。達成された平均総血漿濃度は以下の通りであった：３ｍｇ／ｋｇで単独で投与した場合の化合物Ａ：０．２８３μＭ；３ｍｇ／ｋｇで組み合わせて投与した場合の化合物Ａ：０．２７９μＭ；１０ｍｇ／ｋｇで単独で投与した場合のラコサミド：１７．１μＭ；１０ｍｇ／ｋｇで組み合わせて投与した場合のラコサミド：１５．５μＭ。

【0244】

３． 実施例３。６Ｈｚ精神運動発作アッセイにおける単独の化合物Ａ及びレベチラセタムと組み合わせた化合物Ａ
この研究の目的は、各化合物に感受性の発作のマウスモデル、６Ｈｚ精神運動発作アッセイ（Ｂａｒｔｏｎら、Ｅｐｉｌｅｐｓｙ Ｒｅｓ． ２００１；４７（３）：２１７－２２７）、における化合物Ａとレベチラセタムとの相互作用を評価することであった。化合物Ａ及びレベチラセタムを単独で又は組み合わせて、それぞれ単独で最大未満の有効性をもたらす用量で投与することによって、両方の化合物の組み合わせが有効性に好ましいか又は好ましくないかを評価した。化合物Ａ及びレベチラセタムはそれぞれ、６Ｈｚアッセイにおいて単独で最大未満の有効性をもたらす用量で投与し、これらの化合物を組み合わせたときのいずれの方向の有効性の変化の検出も可能にした。化合物Ａ及びレベチラセタムの組み合わせが薬物動態及び薬力学にどのように影響を及ぼし得るかについて理解するために、血漿試料及び脳試料を分析した。

【0245】

３．１ 材料及び方法
試験化合物 － 化合物Ａ

【表20】

【0246】

参照化合物 － レベチラセタム

【表21】

【0247】

ビヒクル：化合物Ａ製剤Ｆ２：脱イオン（ＤＩ）水中の５％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、０．５％メチルセルロース。レベチラセタム製剤Ｆ１：ＤＩ水中０．５％ｗ：ｗメチルセルロース、０．２％ｖ：ｖ Ｔｗｅｅｎ８０。

【0248】

投与製剤：適切な量の化合物Ａ（純度の補正なし）を秤量し、意図した最終濃度の２０倍でＤＭＳＯに溶解した。化合物Ａのこの２０×ＤＭＳＯストック溶液をＤＩ水中の０．５％メチルセルロースで２０倍希釈して、最終の所望濃度を達成した。得られた化合物Ａ懸濁液を撹拌又はボルテックス混合して均質な懸濁液を得た。製剤を室温に保ち、各用量投与の前に連続的に撹拌するか、又はボルテックス混合した。

【0249】

レベチラセタムについては、ＤＩ水（０．８Ｌ）を７０℃～８０℃まで加熱した。５グラムのメチルセルロースを秤量し、加熱したＤＩ水に少量ずつゆっくりと添加した。この混合物を、均質な乳状懸濁液を形成するまで撹拌した。懸濁液を冷室に移し、終夜撹拌して透明な溶液を得た。２ｍＬのＴｗｅｅｎ８０をこの透明な溶液に加え、ＤＩ水で１Ｌまで希釈した。このビヒクル溶液を２℃～８℃で保存した。

【0250】

レベチラセタム粉末を秤量してバイアルに入れた。適切な量のビヒクルをこの粉末に加え、次いでＩＫＡ－Ｔ１８ ＵＬＴＲＡ ＴＵＲＲＡＸホモジナイザーで混合して、所望の濃度の均一な懸濁液を作製した。次いで、バイアルをアルミホイルで包んで光から保護し、投与時まで撹拌プレート上に置いた。

【0251】

試験系

【表22】

【0252】

実験設計：動物を、表１４に示すように処置群に割り当てた。すべてのマウスに、発作誘導の１時間前に、ＰＯ胃管栄養法（標準操作手順Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ（ＳＯＰ）ＴＥＣＨ－００６）を介してビヒクル又は化合物Ａのいずれか、及びＩＰ注射（ＴＥＣＨ－００４）によってビヒクル又はレベチラセタムのいずれかを投与した。化合物ＡのＥＤ_２０（４ｍｇ／ｋｇ）を併用実験のために選択した（用量反応実験、研究３Ａに基づく）。３００ｍｇ／ｋｇのレベチラセタムの用量を、この用量で平均３５％の有効性をもたらした以前の実験に基づいて選択した。

【0253】

【表23】

Ａｄｍｉｎ：投与；Ｃｏｎｃ．：濃度；Ｃｐｍｄ．：化合物；ＩＰ：腹腔内；Ｌｅｖ：レベチラセタム；ｎ／ａ：適用なし；ＰＯ：ｐｅｒ ｏｓ、経口。

【0254】

無作為化及び盲検化：化合物を投与する実験者は、各動物を無作為に処置群に割り当てた。処置群の割り当てを知らない異なる実験者が試験を実施した。所与の実験で試験したすべての動物は、いずれの処置群に割り当てられる可能性も同等であった。

【0255】

臨床徴候の観察：化合物を投与したすべての動物を、投与後１０分間、動物に投与した実験者によって、及び再び刺激時に１０分間、動物を試験した実験者によって、異常行動について観察した。正常行動からの定性的変化があればそれを記録した。

【0256】

６Ｈｚ精神運動発作アッセイ：すべての動物を、電気刺激の少なくとも１時間前に実験室に入れた。アッセイの直前に、Ａｌｃａｉｎｅ（塩酸プロパラカイン、０．５％）の液滴をマウスの眼の各々に与えた。次いで、動物をしっかりと拘束し、一対の電極を眼に装着した（Ｅｌｅｃｔｒｏ Ｃｏｎｖｕｌｓｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｕｎｉｔ ５７８００、Ｕｇｏ Ｂａｓｉｌｅ（ウーゴ・バジーレ））。フットペダルを用いて３４ミリアンペア、６Ｈｚ、及び０．２ミリ秒のパルス幅で３秒の刺激を誘発した。刺激の完了直後に、動物をＰｌｅｘｉｇｌａｓ（プレキシガラス）シリンダーに入れ、発作行動（顎クローヌス、前肢クローヌス、及びストラウブ挙尾）を記録した（ＴＥＣＨ ０３６による）。対照動物においてこの刺激プロトコルによって誘導された３つの典型的な精神運動発作行動（顎クローヌス、前肢クローヌス、ストラウブ挙尾）のいずれも示さなかった場合、動物を発作から保護したとみなした。

【0257】

試料の収集及び調製：マウスが麻酔の手術面に到達するまで、マウスをイソフルラン吸入によって麻酔した（ＴＥＣＨ－０１８）。次いで、シリンジ（２２ゲージ針付き１ｍＬシリンジ）を胸骨下から心臓に挿入した（ＴＥＣＨ－０３１）。約０．５ｍＬの血液を回収し、Ｋ_２ＥＤＴＡチューブに入れ、氷上で保存した。次いで、頸部脱臼によって動物を安楽死させた（ＴＥＣＨ－０１８）。脳を取り出し、予め秤量したバイアルに入れ、ドライアイス上で急速凍結した。試料収集の終わりに、血液を４℃で１０分間４０００ｒｐｍで遠心分離し、血漿をピペットで標識チューブに移した。すべての試料を、生物分析（研究３Ａ及び３Ｂについては試料収集の８日後；研究３Ｃについては試料収集の２０日後）まで－８０℃の冷凍庫に保存した。

【0258】

血漿試料及び組織試料の分析：秤量した脳組織を含むビーズミルポリプロピレンチューブを室温で解凍し、３ｍＬの均質化溶媒（水：アセトニトリル（１：１、ｖ：ｖ））を添加した。チューブをビーズミルホモジナイザー（Ｂｅａｄ Ｒｕｐｔｏｒ Ｅｌｉｔｅ Ｍｏｄｅｌ、Ｏｍｎｉ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（オムニ・インターナショナル））に入れ、３．７０ｍ／ｓの速度で３０秒間続く１回のサイクルで振盪した。ホモジナイズしたチューブを４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、上清を１．５ｍＬのエッペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）チューブに移し、分析まで－８０℃で凍結保存した。血漿及び脳ホモジネート抽出物を含むすべての試料（Ｋ_２ＥＤＴＡラット血漿中で調製した較正及び品質管理（ＱＣ）試料を含む）をタンパク質沈殿によって抽出した。試料の各５０μＬアリコートに、５０μＬの内部標準溶液（水／アセトニトリル（１：１）中の、化合物Ａ及びレベチラセタムに対する、それぞれ、２５００ｎｇ／ｍＬの（Ｓ）－５－クロロ－４－（（１－（５－クロロ－２－フルオロフェニル）エチル）アミノ）－２－フルオロ－Ｎ－（ピラジン－２－イル）ベンゼンスルホンアミド及び４－（（２－（（７－アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン－７－イル）メチル）－６－フルオロベンジル）アミノ）－２，６－ジフルオロ－Ｎ－（イソチアゾール－３－イル）ベンゼンスルホンアミド）、５０μＬの６％（ｖ／ｖ）リン酸水溶液、次いで２００μＬのアセトニトリルを添加した。１．５ｍＬチューブ中の試料をボルテックス混合し、次いで１３，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。１５マイクロリットルの上清を９６ウェルプレート中で１５０μＬの水／アセトニトリル（１：１）と混合し、混合後４０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、次いで液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）による分析の準備を整えた。

【0259】

試料は、以下のように研究グレードのＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法により分析した。

【表24(1)】

【表24(2)】

【0260】

データ処理及び分析：統計データ分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（バージョン８．２．１）を使用して行った。クラスカル・ウォリス検定、続いてダンの多重比較を用いて用量反応データを分析した。ｐ値＜０．０５を有意とみなした。ヒル・ラングミュア式を使用して用量反応曲線及び濃度反応曲線を作成した。
式１
Ｙ＝Ｂ＋（Ｔ－Ｂ）×ｘ^ｎ／（ＩＣ_５０ ^ｎ＋ｘ^ｎ）
上記式１中、
・Ｂ＝最低値であり、０と設定し、
・Ｔ＝最大値であり、１と設定し、
・ｎ＝ヒル係数であり、ゼロ未満に制約し、
・ＩＣ_５０＝インビトロでの５０％阻害に必要な化合物の濃度
である。

【0261】

特段の記載がない限り、すべてのデータは３つの有効数字で報告し、すべての群データを平均±ＳＤとして報告する。

【0262】

３．２ 結果
生物分析：すべてのシステム適合性試験、ＱＣ試料、マトリクス、及び溶媒ブランクは、許容基準を満たした。分析パラメータを表１５にまとめる。各濃度のＱＣ試料を三重に分析した。

【0263】

【表25】

Ｌｅｖ：レベチラセタム；ＬＬＯＱ：定量下限；ｎ／ａ：適用なし；ＵＬＯＱ：定量上限。

【0264】

臨床観察：８ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを投与した１匹の動物（血漿：１．１６μＭ；脳：１．６５μＭ）は振戦を示し、試験時に触れると冷たかった。

【0265】

６Ｈｚ精神運動発作アッセイ（研究３Ａ）における化合物Ａの用量反応：角膜刺激の１時間前にＰＯ投与した化合物Ａは用量依存性の有効性を示し、１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇで８／８動物の発作、５ｍｇ／ｋｇで５／８動物の発作、８ｍｇ／ｋｇで３／８動物の発作となった。発作保護は、８ｍｇ／ｋｇの化合物Ａでビヒクルとは有意に異なっていた（ｐ＝０．００８１；図１２Ａ）。用量反応曲線は、ｎ＝－３．０９のヒル係数で６．４８ｍｇ／ｋｇのＥＤ_５０及び４．１３ｍｇ／ｋｇのＥＤ_２０を予測する（図１２Ｂ）。

【0266】

個々の動物の血漿及び脳の薬物動態－薬力学的関係を、それぞれ図１２Ａ及び図１２Ｂに示す。群による結果及び曝露を表１６にまとめる。化合物Ａの有効性は濃度依存的であり、血漿ＥＣ_５０は０．３５μＭであり、脳ＥＣ_５０は０．５４μＭであり、ヒル係数はそれぞれｎ＝－１．９５及びｎ＝－２．１７であった（図１２Ｃ及び図１２Ｄ）。

【0267】

【表26】

ｎ／ａ：適用なし。

【0268】

６Ｈｚ精神運動発作アッセイにおける化合物Ａ及びレベチラセタムの組み合わせ（研究３Ｂ及び３Ｃ）：化合物Ａとレベチラセタムとの組み合わせが６Ｈｚ精神運動発作アッセイにおける有効性にとって好ましいか又は好ましくないかを評価するために、各化合物について最大未満の用量を選択した。化合物ＡのＥＤ_２０は、上記の用量反応実験において４ｍｇ／ｋｇであると決定された。以前の研究では、３００ｍｇ／ｋｇのレベチラセタムで平均３５％の有効性が達成され、研究間でかなりのばらつきがあった。２つの同じように設計した実験（研究３Ｂ及び３Ｃ、上記及び表１４を参照）において、４ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ及び３００ｍｇ／ｋｇのレベチラセタムの組み合わせは、６Ｈｚ精神運動発作アッセイにおいて、いずれかの化合物単独よりも有意に有効であった（表１６）。

【0269】

研究３Ｂ：研究３Ｂでは、単独で投与した化合物Ａ又はレベチラセタムは、発作からの保護をもたらさなかった（化合物Ａの血漿濃度及び脳濃度は、予想よりもはるかに低かった）が、両方の化合物を組み合わせると、３／８の動物が発作から保護された（図１４Ａ、表１２）。併用投与の利益は、ビヒクルと比較して、及び単独で投与されたいずれの化合物と比較して有意であった（ｐ＝０．０３４）。血漿（化合物Ａ：０．０１４±０．００９μＭ；レベチラセタム：１５００±３２０μＭ）及び脳（化合物Ａ：０．０３±０．０２μＭ；レベチラセタム：８６１±１２０μＭ）において到達した化合物Ａ及びレベチラセタムの濃度は、単独投与群と併用投与群との間で同等であった（図１４、表１７）。従って、化合物Ａ及びレベチラセタムの組み合わせの有益な効果は、いずれかの化合物の曝露の増加によっては説明できない（図１５）。

【0270】

研究３Ｃ：研究３Ｃでは、研究３Ｂの設計を繰り返した。今回は、同じ用量の４ｍｇ／ｋｇの化合物Ａは、研究３Ｂにおけるよりも血漿（０．１７±０．０９μＭ対０．０１±０．０１μＭ）及び脳（０．４１±０．２３μＭ対０．０３±０．０２μＭ）において１０倍超高い濃度の化合物Ａをもたらした（図１５、表１７）。レベチラセタムの濃度も、研究３Ｂよりもわずかに高かった（脳：１１３０±１３０μＭ対８６１±１２０μＭ、血漿：１７７０±２８７μＭ対１５００±３２０μＭ；図１５、表１７）。曝露の増加は、研究３Ｂと比較して、単独で投与したいずれの化合物の有効性の増加につながった：４ｍｇ／ｋｇの化合物Ａは、１／７の動物を保護し、３００ｍｇ／ｋｇのレベチラセタムは、２／８の動物を発作から保護した（図１４Ａ、表１７）。化合物Ａ及びレベチラセタムの組み合わせは、この研究で試験したすべての動物を保護した（図１４Ａ、表１７；ｎ＝７；１匹の動物は、血漿又は脳において測定可能なレベルのレベチラセタムを有しなかったので除外した）。化合物Ａ及びレベチラセタムの併用投与後に完全な有効性に達したので、有効性に対する効果は、ビヒクル（ｐ＝０．０００２）だけでなく、単独で投与したいずれの化合物（ｐ＜０．０１）とも有意に異なっていた。研究３Ｂと同様に、血漿及び脳において到達した化合物Ａ及びレベチラセタムの濃度は、単独投与群と併用投与群との間で同等であった（図１５、表１７）。従って、化合物Ａ及びレベチラセタムの組み合わせの有益な効果は、いずれかの化合物の曝露の増加によっては説明できない（図１６）。

【0271】

研究３Ｂ及び３Ｃの組み合わせ：両方の実験の用量反応を組み合わせると、化合物Ａ又はレベチラセタムを単独で投与した場合の最大有効性は、１４／１６の発作でレベチラセタムで達成されたが、両方の化合物の組み合わせは、５／１５の動物の発作をもたらした。従って、化合物Ａとレベチラセタムとの組み合わせは、６６．７％の動物を発作から保護し、これは、ビヒクル（ｐ＜０．０００１）及びいずれの化合物単独（ｐ＜０．００１、図１４Ｂ、表１７）と有意に異なった。

【0272】

【表27】

【0273】

３．３ 結び
化合物Ａは、マウス６Ｈｚ精神運動アッセイにおいて用量依存的有効性を示し、ＥＤ_５０は６．４８ｍｇ／ｋｇであった。有効性は、０．３５μＭの血漿ＥＣ_５０及び０．５４μＭの脳ＥＣ_５０を有する化合物Ａの血漿濃度及び脳濃度とよく相関した。

【0274】

４ｍｇ／ｋｇの化合物Ａと３００ｍｇ／ｋｇのレベチラセタムとの組み合わせは、このアッセイにおいて、２つの別々の同じように設計した実験においていずれかの化合物単独で観察されたものよりも有意に高い有効性をもたらした（研究３Ｂ：ｐ＝０．０３４；研究３Ｃ：ｐ＜０．０１）。併用投与は、いずれの化合物の血漿又は脳の曝露にも有意な影響を及ぼさなかった。同等の脳濃度のレベチラセタム（１１３０±１３０μＭ対１１００±２６５μＭ；研究３Ｃ）において、レベチラセタムへの化合物Ａの添加は、有効性を２５％（レベチラセタム単独）から１００％（化合物Ａ＋レベチラセタム）に増加させた。

【0275】

まず、６Ｈｚ精神運動アッセイにおいて化合物Ａについて用量反応研究（３Ａ）を実施して、２０％の動物が発作から保護される用量（ＥＤ_２０）を決定した。化合物Ａを強制経口投与により雄ＣＦ－１マウス（体重：３２．７～４６．０ｇ）に、１、３、５、８ｍｇ／ｋｇで、一群あたり８匹の動物に投与し、その１時間後に、３４ミリアンペア（６Ｈｚ、０．２ミリ秒のパルス幅）で３秒の角膜刺激を介して精神運動性発作を誘導した。このアッセイにおける有効性は、８匹の各群における、６Ｈｚ刺激後に発作行動（顎クローヌス、前肢クローヌス、又はストラウブ挙尾）から保護された動物の割合を計算することによって定量化した。血漿試料及び脳試料を分析して、濃度－反応関係を評価した。

【0276】

１ｍｇ／ｋｇ及び３ｍｇ／ｋｇの化合物Ａは発作からの保護をもたらさなかったが、動物の発作の割合は、５ｍｇ／ｋｇを投与された動物では５／８に減少し、８ｍｇ／ｋｇ群では３／８に減少した。８ｍｇ／ｋｇ（血漿：０．４７±０．２９μＭ；脳：０．７０±０．４１μＭ；平均±ＳＤ）で、化合物Ａは、ビヒクル群（８／８の発作）と比較して有意な保護を示した（ｐ＝０．００８１）。化合物Ａの用量及び濃度反応曲線は、動物の５０％が発作から保護される用量（ＥＤ_５０）が６．４８ｍｇ／ｋｇ、動物の５０％が発作から保護される血漿濃度（ＥＣ_５０）が０．３５μＭ、及び脳ＥＣ_５０が０．５４μＭであることを予測する。このアッセイにおける化合物ＡのＥＤ_２０は、４．１３ｍｇ／ｋｇであると計算された。

【0277】

８ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを投与した１匹の動物は振戦を示し、触れると冷たかった。１．１６μＭの血漿濃度及び１．６５μＭの脳濃度で、この動物は、この実験におけるすべての動物の中で化合物Ａの最高曝露を有していた。

【0278】

最大未満の有効性をもたらす用量での化合物Ａとレベチラセタムとの組み合わせを、２つの別々の、同じように設計した実験（研究３Ｂ及び３Ｃ）において評価した。以前の実験は、刺激の１時間前の３００ｍｇ／ｋｇのレベチラセタムの腹腔内（ＩＰ）注射が、３４ミリアンペアの６Ｈｚ刺激で３５％の有効性をもたらすことを確立した。化合物Ａを用いた用量反応実験（研究３Ａ）は、刺激の１時間前に化合物Ａを経口（ＰＯ）投与した場合、４ｍｇ／ｋｇのＥＤ_２０を予測した。次いで、以下の実験群（ｎ＝８）を、２つの同じように設計した実験の各々において評価した：１． ビヒクル対照（ＰＯ及びＩＰ）；２． ４ｍｇ／ｋｇ ＰＯの化合物Ａ及びビヒクルＩＰ；３． ３００ｍｇ／ｋｇ ＩＰのレベチラセタム及びビヒクルＰＯ；４． ４ｍｇ／ｋｇ ＰＯの化合物Ａ及び３００ｍｇ／ｋｇ ＩＰのレベチラセタム。３４ミリアンペア（６Ｈｚ、０．２ミリ秒パルス幅）での３秒角膜刺激を、化合物投与の１時間後に投与した。発作行動（顎クローヌス、前肢クローヌス、又はストラウブ挙尾）から保護された動物の割合に基づいて有効性を評価した。

【0279】

研究３Ｂにおいて、雄ＣＦ－１マウス（体重：２９．０～３７．３ｇ）に単独で投与した化合物はいずれも発作からの保護をもたらさなかったが、両方の化合物の組み合わせは３／８動物を発作から保護した（ｐ＝０．０３４）。血漿（化合物Ａ：０．０１４±０．００９μＭ；レベチラセタム：１５００±３２０μＭ）及び脳（化合物Ａ：０．０３±０．０２μＭ；レベチラセタム：８６１±１２０μＭ）において到達した化合物Ａ及びレベチラセタムの濃度は、単独投与群と併用投与群との間で同等であったが、全体的には、４ｍｇ／ｋｇ用量について予想されるよりもはるかに低かった。

【0280】

雄ＣＦ－１マウス（体重：３１．０～４０．０ｇ）で行った研究３Ｃでは、４ｍｇ／ｋｇの化合物Ａは、研究３Ｂよりも血漿（０．１６７±０．０８９７μＭ対０．０１４±０．００９μＭ）及び脳（０．４１±０．２３μＭ対０．０３±０．０２μＭ）において１０倍超高い濃度の化合物Ａをもたらした。レベチラセタムの濃度も３Ｂよりもわずかに高かった（脳：１１３０±１３０μＭ対８６１±１２０μＭ；血漿：１７７０±２８７μＭ対１５００±３２０μＭ）。曝露の増加は、単独で投与されたいずれの化合物の増加した有効性につながった：４ｍｇ／ｋｇの化合物Ａは、１／７の動物を保護し、３００ｍｇ／ｋｇのレベチラセタムは、２／８の動物を発作から保護した。化合物Ａ及びレベチラセタムの組み合わせは、いずれの化合物単独と比較して、この群において試験したすべての動物を保護した（７／７保護；ｐ＜０．０１）。同等の脳濃度のレベチラセタム（１１３０±１３０μＭ対１１００±２６５μＭ、研究３Ｃ）において、レベチラセタムへの化合物Ａの添加は、有効性を２５％（レベチラセタム単独）から１００％（化合物Ａ＋レベチラセタム）に増加させた。

【0281】

４． 実施例４。ＣＦ－１マウスにおけるＡＣ－ＭＥＳアッセイにおける単独の化合物Ａ及びセノバメートと組み合わせた化合物Ａの抗けいれん効果
化合物Ａの有効性及びそのセノバメートとの薬理学的相互作用を、マウス交流最大電撃けいれん（ＡＣ－ＭＥＳ）アッセイ（実施例２参照）において経口投与後に評価した。

【0282】

この研究の目的は、化合物の単回経口投与後のマウスにおけるＡＣ－ＭＥＳアッセイにおける化合物Ａの用量依存的抗けいれん活性及びそのセノバメートとの薬理学的相互作用を特徴付けることであった。化合物Ａ及びセノバメートの抗けいれん効力、並びに化合物Ａをセノバメートと組み合わせる効果を、単回ＰＯ投与後の雄ＣＦ－１マウスにおけるＡＣ－ＭＥＳアッセイにおいて試験した。薬物濃度と有効性との関係を理解するために、血漿試料及び脳試料を得た。

【0283】

４．１ 材料及び方法
実施例４で使用した化合物Ａ、ビヒクル、投与製剤、及び試験系は、ラコサミドをセノバメートで置き換えて実施例２で使用したものと同じであった。

【0284】

試験化合物 － セノバメート

【表28】

【0285】

実験設計：動物を、表１８～表１９に示すように処置群に割り当てた。４つの研究を、それぞれ化合物Ａ及びセノバメートを用いて行った。それぞれの研究日を表１８～表１９に示す。

【0286】

【表29】

ＰＯ：ｐｅｒ ｏｓ、経口。

【0287】

【表30】

ＰＯ：ｐｅｒ ｏｓ、経口。

【0288】

【表31】

ＰＯ：ｐｅｒ ｏｓ、経口。

【0289】

【表32】

ＰＯ：ｐｅｒ ｏｓ、経口。

【0290】

【表33】

ＰＯ：ｐｅｒ ｏｓ、経口。

【0291】

【表34】

ＰＯ：ｐｅｒ ｏｓ、経口。

【0292】

【表35】

ＰＯ：ｐｅｒ ｏｓ、経口。

【0293】

実施例４における盲検化及び無作為化、臨床観察、ＡＣ－ＭＥＳアッセイ、試料の収集及び調製、血漿試料及び脳試料の分析、並びに生物分析手順は、実施例２で使用したものと同じであった。

【0294】

下記の条件を使用して、研究グレードのＵＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法により、化合物Ａについて試料を分析した。

【表36】

【0295】

下記の条件を使用して、研究グレードのＵＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法により、セノバメートについて試料を分析した。

【表37】

【0296】

実施例４における試料濃度の決定並びにデータ処理及び分析は、実施例２と同じであった。

【0297】

４．２ 結果
生物分析：すべてのシステム適合性試験（ＳＳＴ）、ＱＣ、マトリクス、及び溶媒ブランクは、ＳＯＰ ＭＴＤ－０６６に記載される許容基準を満たした。化合物Ａ及びセノバメートについての定量下限（ＬＬＯＱ）及び定量上限（ＵＬＯＱ）を表２５に示す。

【0298】

【表38】

ＬＬＯＱ：定量下限。ＵＬＯＱ：定量上限

【0299】

ＡＣ－ＭＥＳアッセイにおける有効性：マウスにおけるＡＣ－ＭＥＳ誘導発作研究の結果を表２６～表３２並びに図１７、図１８及び図１９に示す。

【0300】

化合物Ａ単独：化合物Ａの用量及び濃度反応からのデータを、図１７、表２６、表２７及び表２８に要約する。３つの有効性研究（４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、及び４Ｆ）すべてにおいて、ビヒクル処置ＣＦ－１マウスの１００％が、後肢の伸展を伴う強直性発作を示した。研究４Ａ（１ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８；５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８；及び１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８）では、化合物Ａによる３０分の前処置後にＡＣ－ＭＥＳ刺激に対して強直性発作応答を示した動物の割合は、８／８（０．０８μＭの平均血漿濃度；１ｍｇ／ｋｇ）から、７／８（０．２８μＭの平均血漿濃度；５ｍｇ／ｋｇ）、及び３／８（０．３７μＭの平均血漿濃度；１０ｍｇ／ｋｇ）に減少した。研究４Ｂ（５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８；７．５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝７及び１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝９）では、５ｍｇ／ｋｇ（０．４７μＭの平均血漿濃度）及び１０ｍｇ／ｋｇ（０．５５μＭの平均血漿濃度）用量の化合物Ａが強い有効性を示した（それぞれ０／８及び１／９の動物の発作）。研究４Ｃ（３ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８）では、３ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ａは２／８の動物の発作を示し、血漿濃度は０．２８μＭであった。研究４Ｆ（２ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８）では、２ｍｇ／ｋｇの用量は、５／８の動物の発作を示し、血漿濃度は０．１１μＭであった。４Ｆを除くすべての有効性研究において、化合物Ａ処置群とビヒクル投与群との差は統計的有意性に達した（ｐ値を図１７に示す）。

【0301】

研究４Ａにおける１０ｍｇ／ｋｇ群から１匹のマウス並びに研究４Ｂにおける３匹のマウス（１０ｍｇ／ｋｇ群から２匹のマウス及び７．５ｍｇ／ｋｇ群から１匹のマウス）は、行動徴候（振戦、活動の低下及び後肢の広がり）を示した（血漿濃度：４Ａ：０．３９μＭ；４Ｂ：１０ｍｇ／ｋｇ：０．６１及び０．５２μＭ、７．５ｍｇ／ｋｇ：０．７５μＭ）。

【0302】

３つの研究からの化合物Ａの統合濃度反応曲線は、血漿について０．３０μＭのＥＣ_５０及び脳組織について０．４７μＭのＥＣ_５０を示した（図１７）。脳組織及び血漿において到達した化合物Ａの濃度は、用量に対して線形であった（図１７）。

【0303】

セノバメート単独：ＡＣ－ＭＥＳモデルにおいて化合物Ａをセノバメートと組み合わせて試験する（研究４Ｆ及び４Ｇ）前に、本発明者らは、異なる用量でセノバメートのみを試験し、完全な用量反応を確立した。セノバメートの用量及び濃度反応からのデータを、図１８、表２９、及び表３０に要約する。セノバメートの７つのＰＯ用量をそれぞれ、ＡＣ－ＭＥＳモデルにおいて別々に（研究４Ｄ：３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び３０ｍｇ／ｋｇ、一群あたりｎ＝８；研究４Ｅ：３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、及び７．５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８；並びに研究４Ｆ：５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８）並びに本研究の一部として試験した。３ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝１５）、５ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）、７．５ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）、１０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）、及び３０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）のセノバメートを経口強制投与により雄ＣＦ－１マウスに投与した２時間後、これらのマウスにＡＣ－ＭＥＳ刺激を与えた。セノバメートは、ＡＣ－ＭＥＳ誘発性強直性発作に対して用量依存的及び濃度依存的効果を示し、７．５ｍｇ／ｋｇでは３／７の動物の発作（７８．１μＭの平均血漿濃度）、１０ｍｇ／ｋｇでは１／８の動物の発作（８７μＭの平均血漿濃度）、３０ｍｇ／ｋｇでは０／８の動物の発作（２４μＭの平均血漿濃度）を示し、３及び５ｍｇ／ｋｇのより低い用量で最小限の効果を示した。３つの研究（４Ｄ、４Ｅ、及び４Ｆ）すべてからのデータを、単独で投与した場合のセノバメートの濃度反応曲線分析のために組み合わせた（図１８）。セノバメートの濃度反応曲線は、血漿について７０．５μＭのＥＣ_５０及び脳組織について２５．２μＭのＥＣ_５０を示した。

【0304】

化合物Ａとセノバメートとの組み合わせ：用量反応研究に基づいて、単独で投与した場合に最小限の有効性しか示さなかった、５ｍｇ／ｋｇのセノバメートの用量、並びに０．５、１、及び２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの用量を、ＡＣ－ＭＥＳモデルにおける併用研究のために選択した。

【0305】

併用研究からのデータを、図１９、表３１、及び表３２に要約する。本発明者らは、４Ｆ（２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを５ｍｇ／ｋｇのセノバメートと組み合わせた）及び４Ｇ（０．５及び１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを５ｍｇ／ｋｇのセノバメートと組み合わせた）の２つの併用研究を実施した。雄ＣＦ－１マウスにおいて化合物Ａ（０．５、１、及び２ｍｇ／ｋｇ ＰＯ、ＡＣ－ＭＥＳの０．５時間前）をセノバメート（５ｍｇ／ｋｇ ＰＯ、ＡＣ－ＭＥＳの２時間前）と組み合わせることは、化合物Ａ（化合物Ａを２ｍｇ／ｋｇで単独で投与した場合、５／８の動物の発作）又はセノバメート（セノバメートを５ｍｇ／ｋｇで単独で投与した場合、８／８の動物の発作）を単独で投与した場合の部分的効果又は無効果と比較して、０．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａで２／８の動物の発作、１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａで１／８の動物の発作、２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａで０／８の動物の発作を示した。研究４Ｆでは、化合物Ａの血漿濃度（２ｍｇ／ｋｇにおける平均血漿濃度：単独で投与した場合は０．１１μＭ、組み合わせて投与した場合は０．２９μＭ）及びセノバメートの血漿濃度（５ｍｇ／ｋｇにおける平均血漿濃度：単独で投与した場合は３１．３μＭ、組み合わせて投与した場合は３８．９μＭ）は、単独で投与した場合と比較して、組み合わせて投与した場合にわずかに高かった。研究４Ｇでは、達成された平均総血漿濃度は以下の通りであった：０．５ｍｇ／ｋｇで組み合わせて投与した化合物Ａ：０．０３μＭ；１ｍｇ／ｋｇで組み合わせて投与した化合物Ａ：０．１１μＭ；５ｍｇ／ｋｇで組み合わせて（＋０．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ）投与したセノバメート：４１．１μＭ；５ｍｇ／ｋｇで組み合わせて（＋１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ）投与したセノバメート：３９．７μＭ。組み合わせて投与した化合物Ａ及びセノバメートの濃度反応曲線は、化合物Ａにつき、血漿について０．０１μＭ及び脳組織について０．０３μＭの外挿ＥＣ_５０を示した。

【0306】

【表39】

Ｂ／Ｐ：脳対血漿比；ｎ／ａ：適用なし。

【0307】

【表40】

Ｂ／Ｐ：脳対血漿比；ｎ／ａ：適用なし。

【0308】

【表41】

Ｂ／Ｐ：脳対血漿比；ｎ／ａ：適用なし。

【0309】

【表42】

Ｂ／Ｐ：脳対血漿比；ｎ／ａ：適用なし。

【0310】

【表43】

Ｂ／Ｐ：脳対血漿比；ｎ／ａ：適用なし。

【0311】

【表44】

Ｂ／Ｐ：脳対血漿比；ｎ／ａ：適用なし。

【0312】

【表45】

【0313】

４．３ 結び
化合物Ａ及びセノバメートは、ＣＦ－１マウスＡＣ－ＭＥＳアッセイにおいて濃度依存的有効性を示した。濃度反応曲線分析から予測される血漿及び脳の化合物ＡのＥＣ_５０値は、それぞれ０．３０μＭ及び０．４７μＭであった。組み合わせて投与された化合物Ａ及びセノバメートの統合濃度反応曲線は、化合物Ａにつき、血漿について０．０１μＭのＥＣ_５０及び脳組織について０．０３μＭのＥＣ_５０を予測した。これらの結果は、セノバメートと組み合わせて投与した場合、血漿及び脳組織についてそれぞれ３３．３倍及び１４．２倍の化合物Ａの効力の増加を予測する。

【0314】

化合物Ａの６つの経口（ＰＯ）用量を、ＡＣ－ＭＥＳアッセイにおいてそれぞれ試験した。１ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）、２ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）、３ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）、５ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝１６）、７．５ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）、及び１０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝１７）の化合物Ａを経口強制投与により雄ＣＦ－１マウスに投与した３０分後、これらのマウスに６０Ｈｚの角膜電気刺激（０．２秒の継続時間、４０ｍＡ）を与えた。この刺激は、すべてのビヒクル投与動物において強直性後肢伸展を誘発した。電気刺激に応答した後肢伸展を示さなかったいずれの動物も、保護されたとみなした。また、観察神経学的評価（定性試験）も、認容性スクリーニングとして試験時に行った。化合物Ａ及びセノバメートの濃度のレベルを取得し、有効性と薬物濃度との関係を理解するために、最終の血漿試料及び脳試料をすべての動物から収集した。

【0315】

単回経口投与後、化合物Ａは、ＡＣ－ＭＥＳ誘発性強直性発作に対して濃度依存性効果を示し、０／８動物の発作という最大効果は、０．４７０μＭの血漿濃度で得られた（５ｍｇ／ｋｇの研究４Ｂから）。研究４Ａ（１ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８；５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８；及び１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８）では、化合物Ａによる３０分の前処置後にＡＣ－ＭＥＳ刺激に対して強直性発作応答を示した動物の割合は、８／８（０．０８μＭの平均血漿濃度；１ｍｇ／ｋｇ）から、７／８（０．２８μＭの平均血漿濃度；５ｍｇ／ｋｇ）、及び３／８（０．３７μＭの平均血漿濃度；１０ｍｇ／ｋｇ）に減少した。研究４Ｂ（５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８；７．５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝７及び１０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝９）では、５ｍｇ／ｋｇ（０．４７μＭの平均血漿濃度）及び１０ｍｇ／ｋｇ（０．５５μＭの平均血漿濃度）用量の化合物Ａが強い有効性を示した（それぞれ０／８及び１／９の動物の発作）。研究４Ｃ（３ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８）では、３ｍｇ／ｋｇ用量の化合物Ａは、２／８の動物の発作を示し、血漿濃度は０．２８μＭであった。研究４Ｆ（２ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８）では、２ｍｇ／ｋｇの用量は、５／８の動物の発作を示し、血漿濃度は０．１１μＭであった。４Ｆを除くすべての有効性研究において、化合物Ａ処置群とビヒクル投与群との差は、統計的有意性に達した（ｐ値を図１７に示す）。４つの研究すべてからのデータを、単独で投与した場合の化合物Ａの濃度反応曲線分析のために組み合わせた。化合物Ａの濃度反応曲線は、血漿について０．３０μＭの半値影響濃度（ＥＣ_５０）及び脳組織について０．４７μＭのＥＣ_５０を示した。

【0316】

研究４Ａにおける１０ｍｇ／ｋｇ群から１匹のマウス並びに研究４Ｂにおける３匹のマウス（１０ｍｇ／ｋｇ群からの２匹のマウス及び７．５ｍｇ／ｋｇ群からの１匹のマウス）は、行動徴候（振戦、活動の低下及び後肢の広がり）を示した（血漿濃度：４Ａ：０．３９μＭ；４Ｂ：１０ｍｇ／ｋｇ：０．６１及び０．５２μＭ、７．５ｍｇ／ｋｇ：０．７５μＭ）。

【0317】

ＡＣ－ＭＥＳモデルにおいて化合物Ａをセノバメートと組み合わせて試験する前に、セノバメートを単独で異なる用量で試験し、完全な用量反応を確立した。セノバメートの７つのＰＯ用量をそれぞれ、ＡＣ－ＭＥＳモデルにおいて別々に（研究４Ｄ：３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、及び３０ｍｇ／ｋｇ、一群あたりｎ＝８；研究４Ｅ：３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、及び７．５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８；並びに研究４Ｆ：５ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝８）、かつ研究の一部として試験した。３ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝１５）、５ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）、７．５ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）、１０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）、及び３０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）のセノバメートを経口強制投与により雄ＣＦ－１マウスに投与した２時間後、これらのマウスにＡＣ－ＭＥＳ刺激を与えた。セノバメートは、ＡＣ－ＭＥＳ誘発性強直性発作に対して用量依存的及び濃度依存的有効性を示し、７．５ｍｇ／ｋｇで３／７の動物の発作（７８．１μＭの平均血漿濃度）、１０ｍｇ／ｋｇで１／８の動物の発作（８７μＭの平均血漿濃度）、３０ｍｇ／ｋｇで０／８の動物の発作（２３７μＭの平均血漿濃度）を示した。３及び５ｍｇ／ｋｇのより低い用量は最小限の効果を有し、７／８の動物の発作を示した。セノバメート処置群における動物の発作の割合は、ビヒクル処置群とは３つの研究のうち２つで有意に異なった（ｐ値を図１８に示す）。３つの研究（４Ｄ、４Ｅ、及び４Ｆ）すべてからのデータを、単独で投与した場合のセノバメートの濃度反応曲線分析のために組み合わせた。セノバメートの濃度反応曲線は、血漿について７０．５μＭのＥＣ_５０及び脳組織について２５．２μＭのＥＣ_５０を示した。

【0318】

用量反応研究に基づいて、単独で投与した場合に最小限の有効性しか示さなかった、５ｍｇ／ｋｇのセノバメート並びに０．５、１、及び２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの用量をＡＣ－ＭＥＳモデルにおける併用試験のために選択した。

【0319】

４Ｆ（２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを５ｍｇ／ｋｇのセノバメートと組み合わせた）及び４Ｇ（０．５及び１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを５ｍｇ／ｋｇのセノバメートと組み合わせた）の２つの併用研究を実施した。雄ＣＦ－１マウスにおいて化合物Ａ（０．５、１、及び２ｍｇ／ｋｇ ＰＯ、ＡＣ－ＭＥＳの０．５時間前）をセノバメート（５ｍｇ／ｋｇ ＰＯ、ＡＣ－ＭＥＳの２時間前）と組み合わせることは、化合物Ａを２ｍｇ／ｋｇで単独で投与した場合、５／８の動物の発作、セノバメートを５ｍｇ／ｋｇで単独で投与した場合の８／８の動物の発作と比較して、０．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａで２／８の動物の発作、１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａで１／８の動物の発作、２ｍｇ／ｋｇの化合物Ａで０／８の動物の発作を示した。研究４Ｆでは、セノバメート処置群と併用群との差は統計的に有意であったが、化合物Ａ処置群と併用群との差は統計的に有意ではなかった。研究４Ｇでは、ビヒクル群と併用群との差は統計的に有意であった（注：ビヒクル対照群及び化合物Ａ及びセノバメートの単独投与対照群はこの研究に使用しなかった；ｐ値を図１９に示す）。研究４Ｆでは、化合物Ａの血漿濃度（２ｍｇ／ｋｇにおける平均血漿濃度：単独で投与した場合は０．１１μＭ、組み合わせて投与した場合は０．２９μＭ）及びセノバメートの血漿濃度（５ｍｇ／ｋｇにおける平均血漿濃度：単独で投与した場合は３１．３μＭ、組み合わせて投与した場合は３８．９μＭ）は、単独で投与した場合と比較して、組み合わせて投与した場合にわずかに高かった。研究４Ｇでは、達成された平均総血漿濃度は以下の通りであった：０．５ｍｇ／ｋｇで組み合わせて投与した場合の化合物Ａ：０．０３μＭ；１ｍｇ／ｋｇで組み合わせて投与した場合の化合物Ａ：０．１１μＭ；５ｍｇ／ｋｇで組み合わせて（０．５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ）投与した場合のセノバメート：４１．１μＭ；５ｍｇ／ｋｇで組み合わせて（１ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ）投与した場合のセノバメート：３９．７μＭ。

【0320】

組み合わせて投与した化合物Ａ及びセノバメートの統合濃度反応曲線は、化合物Ａにつき、血漿について０．０１μＭ及び脳組織について０．０３μＭの外挿ＥＣ_５０を示した。これらの結果は、セノバメートと組み合わせて投与した場合、血漿及び脳組織についてそれぞれ３３．３倍及び１４．２倍の化合物Ａの効力の増加を示す。

【0321】

２０２１年２月９日出願の米国仮出願第６３／１４７，７３６号を含めて本明細書で言及される米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願、及び非特許刊行物はすべて、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

【0322】

上述の組成物、方法、及び使用は、理解を容易にするためにある程度詳細に記載されているが、添付の特許請求の範囲の射程内で特定の変更及び改変が実施されてもよいことは明らかであろう。従って、説明された実施形態は、限定的ではなく例示的であると見なされるべきであり、請求項に係る発明は、本明細書に与えられる詳細に限定されず、添付の特許請求の範囲の射程内及び均等物内で改変されてもよい。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【国際調査報告】