特表 2024-506747 アフリカ豚コレラ（Ａｓｆ）ウイルスワクチン

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-02-14

(54)【発明の名称】アフリカ豚コレラ（Ａｓｆ）ウイルスワクチン

(51)【国際特許分類】

   C12P 21/02 20060101AFI20240206BHJP

   C07K 14/01 20060101ALI20240206BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240206BHJP

   A61K 39/12 20060101ALI20240206BHJP

   A61K 39/39 20060101ALI20240206BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240206BHJP

   A61P 31/12 20060101ALI20240206BHJP

   C12N 15/34 20060101ALN20240206BHJP

【ＦＩ】

C12P21/02 C

C07K14/01 ZNA

C07K19/00

A61K39/12

A61K39/39

A61P37/04

A61P31/12 171

C12N15/34

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023562637

(86)(22)【出願日】2021-12-21

(85)【翻訳文提出日】2023-08-18

(86)【国際出願番号】 US2021064580

(87)【国際公開番号】W WO2022140364

(87)【国際公開日】2022-06-30

(31)【優先権主張番号】63/128,318

(32)【優先日】2020-12-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】523237349

【氏名又は名称】ブイエスティー エルエルシー ディービーエー メジン ラボ

【氏名又は名称原語表記】ＶＳＴ ＬＬＣ ＤＢＡ ＭＥＤＧＥＮＥ ＬＡＢＳ

【住所又は居所原語表記】１００６ ３２ｎｄ Ａｖｅｎｕｅ， Ｂｒｏｏｋｉｎｇｓ， Ｓｏｕｔｈ Ｄａｋｏｔａ ５７００６ Ｕ．Ｓ．Ａ．

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100138210

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 達則

(74)【代理人】

【識別番号】100197169

【弁理士】

【氏名又は名称】柴田 潤二

(72)【発明者】

【氏名】ヤング アラン

【テーマコード（参考）】

4B064

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG32

4B064CA19

4B064CC24

4B064CE10

4B064CE12

4B064DA01

4C085AA03

4C085AA38

4C085BA51

4C085DD86

4C085EE06

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA86

4H045EA31

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】

本発明は、アフリカ豚熱（ＡＳＦ）ウイルスの免疫原性ポリペプチドを含有する免疫原性組成物であって、ＡＳＦウイルス抗原以外の抗原を含有する免疫原性組成物を含み、下痢性疾患を引き起こす病原体に対する免疫化に使用され得る抗原を含む、免疫原性組成物を記載する。開示される免疫原性組成物を用いて免疫応答を誘発する方法、およびＡＳＦ感染を治療する方法もまた記載される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

アフリカ豚熱（ＡＳＦ）ウイルス由来の免疫原性ポリペプチドおよび／またはペプチドを製造する方法であって、任意に、前記免疫原性ポリペプチドおよび／またはペプチドを、１種以上のアジュバントと混合または共発現させる、方法。

【請求項2】

核酸で形質転換された宿主細胞を、前記ポリペプチドおよび／またはペプチドの発現を誘導する条件下で培養することを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記免疫原性ポリペプチドおよび／またはペプチドが組換えサブユニットワクチンを含み、そしてこのような発現ポリペプチドおよび／またはペプチドがバキュロウイルス／昆虫細胞方法論を使用して生成される、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記ポリペプチドおよび／またはペプチドが、配列番号６、８、１０、１２、１７またはそれらの組み合わせに記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記ＡＳＦウイルス由来の免疫原性ポリペプチドおよび／またはペプチドをコードする前記核酸が化学合成により調製される、請求項２に記載の方法。

【請求項6】

前記ＡＳＦ由来の免疫原性ポリペプチドおよび／またはペプチドをコードする前記核酸が、プライマーベースの増幅法を用いて生成される、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

前記プライマーベースの増幅法がＰＣＲである、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

配列番号６、８、１０、１２、１７またはそれらの組み合わせに記載のポリペプチドを含む、免疫原性組成物。

【請求項9】

請求項８に記載の組成物を投与することを含む、対象において免疫学的応答を誘発する方法。

【請求項10】

アジュバントを投与することをさらに含む、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記対象への前記免疫原性組成物の投与が、局所投与、非経口投与または粘膜投与を介して行われる、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記投与が複数回の投与によるものである、請求項９に記載の方法。

【請求項13】

第１の免疫原性組成物および第２の免疫原性組成物が同一である、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

第１の免疫原性組成物および第２の免疫原性組成物とが異なる、請求項１２に記載の方法。

【請求項15】

請求項８に記載の免疫原性組成物の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、アフリカ豚熱ウイルスによる感染を治療するための方法。

【請求項16】

前記組成物がＡＳＦウイルスｐ３０／ｐ５４融合タンパク質を含む、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記組成物がＡＳＦウイルスヘマグルチニンタンパク質を含む、請求項１５に記載の方法。

【請求項18】

前記組成物が、ＡＳＦウイルスｐ３０／ｐ５４融合タンパク質およびＡＳＦウイルスヘマグルチニンタンパク質を含む組成物を投与することを含む、請求項１５に記載の方法。

【請求項19】

前記対象がブタである、請求項１５に記載の方法。

【請求項20】

前記タンパク質が実質的に同時または逐次的に投与される、請求項１８に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、一般に、アフリカ豚熱（ＡＳＦ）ウイルスに対する免疫応答を誘発する組成物に関する。特に、本発明は、ＡＳＦウイルスの免疫原性ポリペプチドを含む免疫原性組成物（例えば、ワクチン）に関する。免疫原性組成物は、さらに、ＡＳＦウイルス抗原以外の抗原を含み得る。本明細書中に開示される免疫原性組成物を用いて免疫応答を誘発する方法、およびＡＳＦ感染を治療する方法もまた記載される。

【背景技術】

【0002】

アフリカ豚熱（ＡＳＦ）は豚のウイルス性疾患であり、家畜豚に高死亡率をもたらす一方、自然イノシシ科宿主（ｎａｔｕｒａｌ ｓｕｉｄ ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ ｈｏｓｔ）では無症状である。この病気は、有効なワクチンがない場合には避けられない重要な経済的損失を引き起こし、病気を制御する利用可能な方法は、罹患地域の隔離と感染動物の屠殺である。ＡＳＦは、複雑な分子構造を持つ二本鎖ＤＮＡウイルスであるＡＳＦウイルス（ＡＳＦＶ）によって引き起こされる。Ａｓｆａｒｖｉｒｉｄａｅ科に属する唯一のウイルスで、節足動物であるＯｒｎｉｔｈｏｄｏｒｏｓ属の軟性マダニが媒介する唯一のＤＮＡウイルスである。アフリカでは軟性マダニ（Ｏｒｎｉｔｈｏｄｏｒｏｓ ｍｏｕｂａｔａ）が、ヨーロッパではＯ． ｅｒｒａｔｉｃｕｓがウイルスのシルバティック感染サイクルに関与している。ヨーロッパでは、家畜のブタと同様の急性疾患を患うイノシシが感染サイクルに関与しているようである。

【0003】

このウイルスによって引き起こされる病気は、１９２０年代にケニアで初めて確認された。その後、アフリカに限定されていたが、前世紀半ばにヨーロッパに広がり、その後、南米とカリブ海諸国に広がった。この病気は１９９０年代にヨーロッパ（サルデーニャを除く）から徹底的な防除と根絶プログラムによって根絶された。しかし、２００７年にはアフリカからコーカサス地方、特にグルジアに再び広がり、２０１４年にはＥＵの東部にまで到達した。最新の報告では、ＥＵ加盟国、ポーランド、バルト三国、そしてごく最近ではモルドバでの感染が増加している。予防効果のあるワクチンがないため、ＡＳＦはすべての欧州諸国にとって深刻な脅威となっている。
ＡＳＦの疫学的複雑性は、アフリカ東部および南部で明確に示されており、主要キャプシドタンパク質ｐ７２をコードするＢ６４６Ｌ遺伝子のＣ末端領域の配列変異に基づくＡＳＦＶの遺伝的特徴付けにより、２２の遺伝子型の存在が明らかになった。最近、東アフリカ諸国およびコンゴ共和国で流通している分離株を含む遺伝子型ＩＸおよびＸと共通の祖先を持つ新しい遺伝子型ＸＸＩＩＩが報告された。この総説では、ＡＳＦＶに関する知識の現状についてまとめている。

【0004】

ＡＳＦＶは、正２０面体の形態を持ち、平均直径が２００ｎｍの大型のエンベロープウイルスである。ウイルスゲノムは、直鎖の共有結合で閉じた二本鎖ＤＮＡの一分子からなる。分離株によってゲノムの長さは１７０～１９０Ｋｂｐの間で異なり、１５１～１６７のオープンリーディングフレームをコードしている。ＡＳＦＶの複製サイクルは主に細胞質だが、初期には核もウイルスＤＮＡ合成の場となる。ウイルスゲノムが複製を開始する場所の近くでラミナネットワークが分解され、いくつかの核内タンパク質が再分布されることから、ウイルス感染時に核内機構を制御する高度なメカニズムの存在が示唆される。

【0005】

ウイルス遺伝子の転写は強く制御されている。即時型、初期型、中間型、および後期型転写物を含む、４つのクラスのｍＲＮＡが、その特徴的な蓄積動態によって同定されている。即時型遺伝子と初期型遺伝子はＤＮＡ複製の開始前に発現し、中間型遺伝子と後期型遺伝子はその後に発現する。中間遺伝子の存在は、ＡＳＦＶ遺伝子発現制御のカスケードモデルを示唆している。ＤＮＡ複製に必要な酵素は、部分的にコーティングされていないコア粒子からウイルスが細胞質に侵入した直後に発現し、ウイルス粒子にパッケージされた酵素やその他の因子を用いて発現する。ウイルスの形態形成は、ＤＮＡ複製の主要な後期段階も起こるウイルス工場で行われる。

【0006】

ＡＳＦＶ粒子は、いくつかの同心円状のドメインからなる正２０面体の形態を有している：中心ゲノムによって形成される内部コアにはヌクレオイドが含まれ、このヌクレオイドはコアシェルと呼ばれる厚いタンパク質層で覆われている；コアを取り囲む内側の脂質エンベロープ；そして最後に、細胞内ビリオンの最外層であるカプシドである。細胞外ビリオンはさらに外側のエンベロープを持ち、これはウイルスが細胞膜から芽を出すときに得られる。しかし、このエンベロープの重要性は不明である。

【0007】

ＡＳＦワクチンに対する現在のアプローチは、大きく２つの「陣営」に分かれている。ＵＳＤＡとＤＨＳによる現在のアプローチは、細胞内でのウイルスの複製が防御反応を起こすために絶対に必要であると考え、改良型生ワクチンに重点を置いている。しかし、このカテゴリーに分類される最先端のプロトタイプワクチンは、最近「認可から使用まで少なくとも８年はかかる」と発表され、安全性に多くの懸念がある。最近の研究では、非常に効果的な遺伝子欠失型ＡＳＦ変異体ワクチンがブタでは弱く複製されるが、ワクチン接種動物では致死的暴露から防御されることが実証された。

【0008】

有望ではあるが、米国のワクチンに弱毒生株を使用することには問題があり、ワクチンウイルスの培養には現在、初代マクロファージを使用する必要がある。中国がこのワクチンの複製を試みたが、結果は否定的であったという俗説があるが、まだ確認されていない。

【0009】

英国のピルブライト研究所で開発された２番目のワクチンもまた、ＡＳＦ感染の致死的な結果からは保護するが、ウイルスの複製は制限しないという有望なものであった。簡単に説明すると、この２回接種ワクチンは、８種類のユニークなＡＳＦタンパク質を発現する８種類の組換えアデノウイルスを１つのワクチンに組み込んで開発された。このワクチンを投与すると、より少ないタンパク質を用いた先行研究と同様の結果が得られるようである。

【0010】

サブユニットワクチンは、生ワクチンを使用するのとは対照的に、殺傷された産物である。保護タンパク質の標的を明確化すること、および複数の株に対して広範に保護的なワクチンを生成することに関連する困難さのために、これらのワクチンはほとんど無視されてきた。

【0011】

したがって、ＡＳＦウイルス感染に関連する臨床症状を呈する対象を治療するための改善された治療法および感染の拡大を防止するための方法が依然として必要とされている。

【発明の概要】

【0012】

本発明は、特にサブユニットワクチンの一部として、アフリカ豚熱（ＡＳＦ）ウイルス抗原を含む免疫原性組成物を提供する。

【0013】

実施形態において、ＡＳＦウイルス由来の免疫原性ポリペプチドおよび／またはペプチドをアジュバントと混合または共発現させて産生する方法が開示される。免疫原性組成物は、本明細書に記載の１つ以上のポリペプチドおよび／またはアジュバントを含み得る。例えば、免疫原性組成物は、非ＡＳＦウイルス病原体由来の抗原など、他の疾患を引き起こす病原体に対する免疫化において使用され得る他の抗原を含んでもよい。

【0014】

実施形態において、本明細書に記載の核酸で形質転換された宿主細胞を、ポリペプチド発現を誘導する条件下で培養する工程を含む、ポリペプチドを産生するためのプロセスが開示される。関連する態様において、ＡＳＦウイルスタンパク質は、組換え技術によって発現され得、そして組換え抗原性サブユニットを含む免疫原性組成物を開発するために使用され得、ここで、このような発現ポリペプチドは、バキュロウイルス／昆虫細胞方法論を使用して生成される。

【0015】

１つの態様において、核酸を産生するためのプロセスが開示され、ここで、ＡＳＦウイルス由来のタンパク質またはポリペプチドをコードする核酸は、化学合成によって（少なくとも部分的に）調製される。関連する態様において、このプロセスは、プライマーベースの増幅法（例えば、ＰＣＲ）を使用して核酸を増幅することを含む。

【0016】

別の態様において、ＡＳＦウイルス由来ポリペプチドまたはそのフラグメントを対象に投与することを含む、タンパク質複合体を産生するためのプロセスが開示される。関連する態様において、このプロセスは、ＡＳＦウイルス由来ポリペプチドを医薬的に許容可能な担体または希釈剤と混合することを含む。さらなる関連する態様において、組成物は、配列番号６（ｐ３０／ｐ５４融合タンパク質）、８（ｐ７２タンパク質）、１０（ｐ３０タンパク質）、１２（ｐ５４タンパク質）、１７（ヘマグルチニンタンパク質）に記載のポリペプチドを含み得る。さらに関連する態様において、ポリペプチド組成物は、配列番号６および１７を含む。

【0017】

実施形態において、本開示の組成物を投与することを含む、対象において免疫学的応答を誘発する方法が開示される。関連する態様において、本方法は、アジュバントを投与することをさらに含む。さらなる関連する態様において、本方法は、局所、非経口または粘膜経路を介して免疫原性組成物を対象に投与することを含む。

【0018】

１つの態様において、投与は複数回であってもよく、ここで、第１の免疫原性組成物および第２の免疫原性組成物は同一である。別の態様において、第１の免疫原性組成物および第２の免疫原性組成物は異なる。

【0019】

１つの態様において、投与は２回以上行われる。

【0020】

実施形態において、ＡＳＦウイルスによる感染を治療するための方法は、本明細書に記載の免疫原性組成物の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含むことが、開示される。

【0021】

１つの態様において、複数の治療上有効な用量の免疫原性組成物が対象に投与される。

【0022】

関連する態様において、本方法は、１つまたは複数のＡＳＦウイルス抗原を含む治療上有効な量の第１の免疫原性組成物を粘膜投与すること、および１つまたは複数のＡＳＦウイルス抗原を含む治療上有効な量の第２の免疫原性組成物を局所的または非経口的に投与することを含む。

【0023】

１つの態様において、複数の治療上有効な用量の免疫原性組成物が対象に投与される。別の態様において、免疫原性組成物は、別個の非ＡＳＦウイルス抗原を含む。

【0024】

１つの態様において、組成物はＡＳＦウイルスｐ３０／ｐ５４融合タンパク質を含む。

【0025】

関連する態様において、組成物はＡＳＦウイルスヘマグルチニンタンパク質を含む。さらなる関連する態様において、組成物は、ＡＳＦウイルスｐ３０／ｐ５４融合タンパク質およびＡＳＦウイルスヘマグルチニンタンパク質を含む組成物を投与することを含む。

【0026】

１つの態様において、対象はブタである。関連する態様において、タンパク質は実質的に同時または逐次的に投与される。

【0027】

開示された本主題のこれらおよび他の実施形態は、本開示の観点から当業者に容易に想起されるであろう。

発明の詳細な説明

【発明を実施するための形態】

【0028】

本発明の組成物、方法、および方法論を説明する前に、本発明は、記載された特定の組成物、方法、および実験条件に限定されないことを理解されたい。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明するためだけのものであり、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲においてのみ限定されるため、限定を意図するものではないことを理解されたい。

【0029】

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上明らかにそうでないことが指示されない限り、複数の参照を含む。従って、例えば、「核酸（ａ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）」への言及は、１つ以上の核酸、および／または本開示等を読めば当業者に明らかになるであろう本明細書に記載されるタイプの組成物を含む。

【0030】

別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野における通常の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されたものと類似または同等の方法および材料は、本発明の実施または試験において使用することができ、改変および変形は、即時開示の精神および範囲内に包含されることが理解されるであろう。

【0031】

本明細書で使用される場合、「約（ａｂｏｕｔ）」、「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」、「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」および「有意に（ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ）」は、当業者によって理解され、それらが使用される文脈に応じてある程度変化する。用語が使用される文脈を考慮すると当業者には明確でない用語の使用がある場合、「約（ａｂｏｕｔ）」および「約（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、特定の用語のプラスマイナス１０％未満を意味し、「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」および「有意に（ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ）」は、特定の用語のプラスマイナス１０％超を意味する。実施形態において、組成物は、特定の成分または成分群を「含む（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」ことがあるが、当業者であれば、後者は、請求の範囲が、請求される発明の「基本的かつ新規な特性（複数可）に重大な影響を及ぼさない」指定された材料または工程に限定されることを意味すると理解するであろう。

【0032】

本明細書で使用される場合、用語「ＡＳＦ」は、アフリカのＡｓｆａｒｖｉｒｉｄａｅ科のＡｓｆｉｖｉｒｕｓ属のメンバーを指す。豚熱ウイルスである。ＡＳＦという用語は、ウイルスのすべての遺伝子群の株を含む。現在、ＡＳＦ株はｐ７２／Ｂ６４６Ｌ遺伝子の塩基配列に基づいて２４の遺伝子群（Ｇｘ－Ｇｘｎ）に分類されている。また、ＡＳＦという用語には、出願時には特徴づけられていない分離株も含まれる。

【0033】

「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指し、生成物の最小の長さに限定されない。従って、ペプチド、オリゴペプチド、二量体、多量体などが定義内に含まれる。全長タンパク質もそのフラグメントも定義に包含される。用語はまた、そのポリペプチドの発現後の修飾体、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化なども含む。さらに、本開示の目的上、「ポリペプチド」とは、タンパク質が所望の活性を維持する限り、ネイティブ配列に対する欠失、付加、置換などの修飾（一般に本質的に保存的）を含むタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的突然変異誘発によるような意図的なものであってもよいし、タンパク質を産生する宿主の突然変異やＰＣＲ増幅によるエラーのような偶発的なものであってもよい。

【0034】

「実質的に精製された」とは、一般に、物質（化合物、ポリヌクレオチド、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチド組成物）を、その物質が存在する試料の大部分を構成するように単離することを指す。典型的には、試料において、実質的に精製された成分は、試料の約５０％、約８０％～８５％、または約９０～９５％を含む。目的のポリヌクレオチドやポリペプチドを精製する技術は当技術分野でよく知られており、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、密度による沈降などがある。

【0035】

「単離された」とは、ポリペプチドに言及する場合、示された分子が、その分子が自然界で見出される生物全体または細胞全体から分離して別個であるか、または同じ型の他の生物学的巨大分子の実質的な不在下で存在することを意味する。ポリヌクレオチドに関して「単離された」という用語は、自然界で通常関連する配列の全部または一部がない核酸分子、または自然界に存在する配列であるが、それに関連する異種配列を有する配列、または染色体から切り離された分子である。

【0036】

本明細書で使用する場合、「標識」および「検出可能な標識」という用語は、検出可能な分子を指し、放射性同位体、蛍光体、化学発光体、酵素、酵素基質、酵素補因子、酵素阻害剤、発色団、色素、金属イオン、金属ゾル、リガンド（例えば、ビオチンまたはハプテン）などが挙げられるが、これらに限定されない。「蛍光体」という用語は、検出可能な範囲で蛍光を示すことができる物質またはその一部を指す。使用できる標識の具体例としては、フルオレセイン、ローダミン、ダンシル、ウンベリフェロン、テキサスレッド、ルミノール、アクラジムエステル、ＮＡＤＰＨ、α－β－ガラクトシダーゼなどが挙げられる。

【0037】

「相同性」とは、２つのポリヌクレオチドまたは２つのポリペプチド部分間の同一性のパーセンテージを指す。２つの核酸配列、または２つのポリペプチド配列が、分子の規定された長さにわたって、少なくとも約５０％の配列同一性、少なくとも約７５％の配列同一性、少なくとも約８０％～８５％の配列同一性、少なくとも約９０％の配列同一性、および少なくとも約９５％～９８％の配列同一性を示す場合、互いに「実質的に相同」である。本明細書において、実質的に相同とは、特定の配列と完全な同一性を示す配列も指す。

【0038】

一般に、「同一性」とは、２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の、それぞれヌクレオチド対ヌクレオチド、またはアミノ酸対アミノ酸の正確な対応を指す。同一性パーセントは、配列を整列させ、整列した２つの配列間の正確な一致数を数え、短い方の配列の長さで割り、その結果に１００を乗じることにより、２分子間の配列情報を直接比較して決定することができる。容易に入手可能なコンピュータープログラムを用いて解析を補助することができる。例えば、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌ． Ｍａｔｈ． ２：４８２－４８９， １９８１をペプチド解析に適応させた、ＡＬＩＧＮ， Ｄａｙｈｏｆｆ， Ｍ． Ｏ． ｉｎ Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｍ． Ｏ． Ｄａｙｈｏｆｆ， ｅｄ．， ５ Ｓｕｐｐｌ． ３：３５３－３５８， Ｎａｔｉｏｎａｌ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ， Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ， Ｄ．Ｃ．など。ヌクレオチド配列の同一性を決定するプログラムは、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ， Ｖｅｒｓｉｏｎ ８ （Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ， Ｍａｄｉｓｏｎ， Ｗｉｓ．から入手可能）で入手可能であり、例えば、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＧＡＰプログラムがあり、これらもＳｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムに依存している。これらのプログラムは、メーカーが推奨し、上記で言及したＷｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅに記載されているデフォルトパラメータで容易に利用できる。例えば、参照配列に対する特定のヌクレオチド配列の同一性のパーセンテージは、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎの相同性アルゴリズムを用いて、デフォルトのスコアリングテーブルおよび６ヌクレオチド位置のギャップペナルティを用いて決定することができる。

【0039】

本開示の文脈においてパーセント同一性を確立する別の方法は、エジンバラ大学が著作権を有し、Ｊｏｈｎ Ｆ． ＣｏｌｌｉｎｓおよびＳｈａｎｅ Ｓ． Ｓｔｕｒｒｏｋによって開発され、ＩｎｔｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ， Ｉｎｃ． （Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ， ＣＡ）によって配布されているプログラムのＭＰＳＲＣＨパッケージを使用することである。このパッケージ群からＳｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを採用することができ、スコアリングテーブルにはデフォルトのパラメータが使用される（例えば、ギャップオープンペナルティ１２、ギャップエクステンションペナルティ１、ギャップ６）。生成されたデータからの「Ｍａｔｃｈ」値は「配列同一性」を反映する。配列間の同一性または類似性のパーセントを計算するための他の適切なプログラムは、一般に当技術分野で知られており、例えば、別のアラインメントプログラムは、デフォルトパラメータで使用されるＢＬＡＳＴである。例えば、ＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰは、以下のデフォルトパラメーターを使用して使用され得る：ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｏｄｅ＝ｓｔａｎｄａｒｄ； ｆｉｌｔｅｒ＝ｎｏｎｅ； ｓｔｒａｎｄ＝ｂｏｔｈ； ｃｕｔｏｆｆ＝６０； ｅｘｐｅｃｔ＝１０； Ｍａｔｒｉｘ＝ＢＬＯＳＵＭ６２； Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓ＝５０ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ； ｓｏｒｔ ｂｙ＝ＨＩＧＨ ＳＣＯＲＥ； Ｄａｔａｂａｓｅｓ＝ｎｏｎ－ｒｅｄｕｎｄａｎｔ， ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ ＣＤＳ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ＋Ｓｗｉｓｓ ｐｒｏｔｅｉｎ＋Ｓｐｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲ。これらのプログラムの詳細は容易に入手できる。

【0040】

あるいは、相同性は、相同領域間で安定な二重鎖を形成する条件下でのポリヌクレオチドのハイブリダイゼーション、次いで一本鎖特異的ヌクレアーゼによる消化、および消化フラグメントのサイズ決定によって決定され得る。実質的に相同なＤＮＡ配列は、例えば、その特定の系について定義されるようなストリンジェントな条件下でのサザンハイブリダイゼーション実験において同定することができる。適切なハイブリダイゼーション条件を定義することは当業者の技術範囲内である。

【0041】

本明細書において核酸分子を説明するために使用される「組換え体」とは、ゲノム、ｃＤＮＡ、ウイルス、半合成、または合成起源のポリヌクレオチドであって、その起源または操作により、それが自然界で会合しているポリヌクレオチドの全部または一部と会合していないポリヌクレオチドを意味する。タンパク質またはポリペプチドに関して使用される「組換え体」という用語は、組換えポリヌクレオチドの発現によって産生されるポリペプチドを意味する。一般に、目的の遺伝子はクローン化され、以下にさらに記載するように、形質転換生物で発現される。宿主生物は外来遺伝子を発現し、発現条件下でタンパク質を産生する。

【0042】

「形質転換」という用語は、宿主細胞への外来性ポリヌクレオチドの挿入を意味し、その挿入に使用される方法は問わない。例えば、直接取り込み、形質導入またはｆ－交配（ｆ－ｍａｔｉｎｇ）が含まれる。外来性ポリヌクレオチドは、非組み込まれ（ｎｏｎ－ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ）ベクター、例えばプラスミドとして維持されてもよいし、あるいは宿主ゲノムに組み込まれてもよい。

【0043】

「組換え宿主細胞」、「宿主細胞」、「細胞」、「細胞株」、「細胞培養物」、および単細胞体として培養された微生物または高等真核細胞株を示す他のこのような用語は、組換えベクターまたは他の導入ＤＮＡのレシピエントとして使用され得るか、または使用されてきた細胞を指し、トランスフェクトされた元の細胞の子孫を含む。

【0044】

「コード配列」または選択されたポリペプチドを「コードする」配列は、適切な調節配列（または「制御エレメント」）の制御下に置かれたときに、転写され（ＤＮＡの場合）、インビボでポリペプチドに翻訳される（ｍＲＮＡの場合）核酸分子である。コード配列の境界は、５’（アミノ）末端の開始コドンおよび３’（カルボキシ）末端の翻訳停止コドンによって決定され得る。コード配列には、ウイルス、原核生物または真核生物のｍＲＮＡからのｃＤＮＡ、ウイルスまたは原核生物のＤＮＡからのゲノムＤＮＡ配列、さらには合成ＤＮＡ配列が含まれるが、これらに限定されない。転写終結配列は、コード配列の３’に位置してもよい。

【0045】

典型的な「制御エレメント」には、転写プロモーター、転写エンハンサーエレメント、転写終結シグナル、ポリアデニル化配列（翻訳停止コドンの３’に位置する）、翻訳開始を最適化するための配列（コード配列の５’に位置する）、および翻訳終結配列が含まれるが、これらに限定されない。

【0046】

「核酸」という用語は、ＤＮＡおよびＲＮＡ、ならびに修飾されたバックボーン（例えば、ホスホロチオエートなど）を含むものなどのそれらのアナログ、ならびにペプチド核酸（ＰＮＡ）などを含む。本開示は、上記のものと相補的な配列を含む核酸（例えば、アンチセンスまたはプロービング目的のためのもの）を提供する。

【0047】

「作動可能に連結された」とは、そのように記載された構成要素が通常の機能を果たすように構成されたエレメントの配置を指す。従って、コード配列に作動可能に連結された所定のプロモーターは、適切な酵素が存在する場合、コード配列の発現をもたらすことができる。プロモーターは、その発現を指示するように機能する限り、コード配列と連続している必要はない。従って、例えば、プロモーター配列とコード配列との間に、まだ転写されていない介在配列が存在しても、プロモーター配列はコード配列に「作動可能に連結している」と考えられる。

【0048】

「コードされる」とは、ポリペプチド配列をコードする核酸配列をいい、ポリペプチド配列またはその一部は、核酸配列によってコードされるポリペプチドから少なくとも３～５個のアミノ酸、少なくとも８～１０個のアミノ酸、および少なくとも１５～２０個のアミノ酸のアミノ酸配列を含む。

【0049】

「発現カセット」または「発現構築物」は、目的の配列（単数または複数）または遺伝子（単数または複数）の発現を指示することができるアセンブリを指す。発現カセットは、一般に、目的の配列（単数または複数）または遺伝子（単数または複数）に（転写を指示するように）作動可能に連結されるプロモーターなどの、上記のような制御エレメントを含み、しばしば、ポリアデニル化配列も含む。実施形態において、本明細書に記載の発現カセットは、プラスミド構築物内に含まれ得る。発現カセットの構成要素に加えて、プラスミド構築物はまた、１つ以上の選択可能マーカー、プラスミド構築物が一本鎖ＤＮＡとして存在することを可能にするシグナル（例えば、Ｍ１３複製起点）、少なくとも１つの多重クローニング部位、および「哺乳動物」複製起点（例えば、ＳＶ４０またはアデノウイルス複製起点）を含み得る。

【0050】

「精製ポリヌクレオチド」とは、本質的に遊離の、例えば、ポリヌクレオチドが天然に会合しているタンパク質の約５０％未満、約７０％未満、および少なくとも約９０％未満を含む、目的のポリヌクレオチドまたはそのフラグメントを指す。目的のポリヌクレオチドを精製する技術は当技術分野でよく知られており、例えば、カオトロピック剤によるポリヌクレオチドを含む細胞の破壊、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、密度による沈降によるポリヌクレオチドとタンパク質の分離が含まれる。

【0051】

「トランスフェクション」という用語は、細胞による外来ＤＮＡの取り込みを意味する。外来ＤＮＡが細胞膜の内側に導入されると、細胞は「トランスフェクション」されたことになる。多くのトランスフェクション技術が当技術分野で一般的に知られている。このような技術は、適切な宿主細胞に１つ以上の外来ＤＮＡを導入するために使用される。この用語は、遺伝物質の安定な取り込みと一過性の取り込みの両方を指し、ペプチドまたは抗体結合ＤＮＡの取り込みを含む。

【0052】

「ベクター」は、核酸配列を標的細胞に導入することができる（例えば、ウイルスベクター、非ウイルスベクター、微粒子キャリア、およびリポソーム）。典型的には、「ベクター構築物」、「発現ベクター」、および「遺伝子導入ベクター」は、目的の核酸の発現を誘導することができ、標的細胞に核酸配列を導入することができる任意の核酸構築物を意味する。したがって、この用語には、クローニングおよび発現ベヒクル、ならびにウイルスベクターが含まれる。

【0053】

「フラグメント」とは、インタクトな全長配列および構造の一部のみからなる分子を意図する。ポリペプチドのフラグメントは、ネイティブポリペプチドのＣ末端欠失、Ｎ末端欠失、および／または内部欠失を含み得る。ポリペプチドのフラグメントは、一般に、全長分子の少なくとも約５～１０個の連続したアミノ酸残基、全長分子の少なくとも約１５～２５個の連続したアミノ酸残基、および全長分子の少なくとも約２０～５０個以上の連続したアミノ酸残基、または５個のアミノ酸と全長配列のアミノ酸数との間の任意の整数を含むが、当該フラグメントが所望の生物学的応答を惹起する能力を保持することを条件とする。核酸フラグメントは、核酸の５’－欠失、３’－欠失、および／または内部欠失を含み得る。核酸フラグメントは一般に、全長分子の少なくとも約５～１０００個の連続ヌクレオチド塩基を含み、全長分子の少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７５、１００、１５０、２５０もしくは少なくとも５００個の連続ヌクレオチド、または５ヌクレオチドと全長配列のヌクレオチド数との間の任意の整数を含み得る。このようなフラグメントは、ハイブリダイゼーション、増幅、免疫原性フラグメントの産生、または核酸免疫に有用である。

【0054】

「免疫原性フラグメント」とは、１つ以上のエピトープを含む免疫原のフラグメントであって、免疫応答を調節し得るか、または共投与抗原のアジュバントとして作用し得るフラグメントを意味する。このようなフラグメントは、当分野でよく知られているエピトープマッピング技術を用いて同定することができる。例えば、線状エピトープは、固体支持体上で多数のペプチドを同時に合成し（そのペプチドは、タンパク質分子の一部に対応している）、ペプチドが支持体に付着している間に抗体と反応させることによって決定することができる。このような技術は当技術分野で知られており、例えば、米国特許第４，７０８，８８６号明細書に記載されている。第４，７０８，８７１号に記載されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。同様に、コンフォメーション・エピトープは、例えばＸ線結晶学や２次元核磁気共鳴法などでアミノ酸の空間的コンフォメーションを決定することにより、容易に同定される。

【0055】

本開示の目的上、免疫原性フラグメントは、通常、少なくとも約２アミノ酸の長さ、約５アミノ酸の長さ、および少なくとも約１０～約１５アミノ酸の長さであろう。フラグメントの長さに決定的な上限はなく、タンパク質配列のほぼ全長、あるいは２つ以上のエピトープを含む融合タンパク質を含む可能性さえある。

【0056】

本明細書において、「エピトープ」という用語は、一般に、Ｔ細胞受容体および／または抗体によって認識される抗原上の部位を指す。実施形態では、タンパク質抗原に由来する、またはその一部である短いペプチドである。しかし、この用語は、糖ペプチドや炭水化物エピトープを有するペプチドも含むことを意図している。複数の異なるエピトープが単一の抗原分子によって担持されることもある。「エピトープ」という用語には、生物全体を認識する反応を刺激するアミノ酸や糖鎖の修飾配列も含まれる。選択されたエピトープが、感染症の原因となる感染因子のエピトープであると有利である。

【0057】

エピトープは、ペプチドまたはポリペプチドのアミノ酸配列および対応するＤＮＡ配列の知識、ならびに特定のアミノ酸の性質（例えば、サイズ、電荷など）およびコドン辞書から、過度な実験を行うことなく、生成することができる。タンパク質が反応を刺激するかどうかを決定する際のガイドラインには、以下のようなものがある：ペプチドの長さ－ペプチドは、ＭＨＣクラスＩ複合体に適合するには約８または９アミノ酸の長さであり、クラスＩＩ ＭＨＣ複合体に適合するには約１３～２５アミノ酸の長さである。この長さはペプチドがＭＨＣ複合体に結合するための最小値である。ある態様では、細胞はペプチドを切断する可能性があるので、ペプチドはこれらの長さより長くてもよい。ペプチドは適切なアンカーモチーフを含んでいて、免疫反応を起こすのに十分な高い特異性をもって、さまざまなクラスＩまたはクラスＩＩ分子に結合することができる。これは、過度な実験をすることなく、目的のタンパク質の配列を、ＭＨＣ分子に関連するペプチドの公表されている構造と比較することによって行うことができる。したがって、当業者は、タンパク質の配列をタンパク質データベースに記載されている配列と比較することにより、目的のエピトープを確認することができる。

【0058】

本明細書で使用される場合、用語「Ｔ細胞エピトープ」は、一般に、Ｔ細胞応答を誘導することができるペプチド構造の特徴を指し、「Ｂ細胞エピトープ」は、一般に、Ｂ細胞応答を誘導することができるペプチド構造の特徴を指す。

【0059】

抗原または組成物に対する「免疫学的応答」とは、対象において、目的の組成物中に存在する抗原に対する体液性免疫応答および／または細胞性免疫応答が発現することである。本開示において、「体液性免疫応答」とは、抗体分子によって媒介される免疫応答をいい、一方、「細胞性免疫応答」とは、Ｔリンパ球および／または他の白血球によって媒介される免疫応答をいう。細胞性免疫の重要な側面のひとつに、細胞溶解性Ｔ細胞（ＣＴＬ）による抗原特異的反応がある。ＣＴＬは、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）によってコードされ、細胞表面に発現しているタンパク質と結合して提示されるペプチド抗原に対する特異性を持っている。ＣＴＬは、細胞内微生物の破壊や、そのような微生物に感染した細胞の溶解を誘導・促進するのに役立つ。細胞性免疫のもう一つの側面は、ヘルパーＴ細胞による抗原特異的反応である。ヘルパーＴ細胞は、表面にＭＨＣ分子と結合したペプチド抗原を持つ細胞に対する非特異的エフェクター細胞の機能を刺激し、その活性を集中させる働きをする。細胞性免疫反応」とは、以下のような産生も指す。「細胞性免疫応答」とは、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞由来のものを含む、活性化Ｔ細胞および／または他の白血球によって産生されるサイトカイン、ケモカインおよび他のそのような分子の産生も指す。

【0060】

細胞性免疫応答を誘発する組成物またはワクチンは、細胞表面で ＭＨＣ分子と結合して抗原を提示することにより、脊椎動物の対象を感作する役割を果たす。細胞媒介免疫応答は、細胞表面に抗原を提示する細胞、またはその近傍に向けられる。さらに、免疫された宿主を将来的に保護するために、抗原特異的Ｔリンパ球が生成されることもある。

【0061】

細胞媒介免疫学的応答を刺激する特定の抗原の能力は、リンパ球増殖（リンパ球活性化）アッセイ、ＣＴＬ細胞傷害性細胞アッセイによる多くのアッセイや、感作された対象における抗原に特異的なＴリンパ球についての評価することによって決定することができる。このようなアッセイは当技術分野でよく知られている。最近の細胞介在性免疫応答の測定法には、Ｔ細胞集団による細胞内サイトカインまたはサイトカイン分泌の測定、あるいはエピトープ特異的Ｔ細胞の測定が含まれる。

【0062】

このように、本明細書で使用する免疫学的応答とは、抗体（例えば、細菌の毒素や、細胞に侵入して複製するウイルスなどの病原体に結合して、ブロックする中和抗体であり、典型的には細胞を感染や破壊から保護する）の産生を刺激するものであってもよい。目的の抗原はまた、ＣＴＬの産生を誘発することもある。従って、免疫学的応答には、Ｂ細胞による抗体の産生；並びに／あるいは、目的の組成物またはワクチンに存在する抗原もしくは抗原（複数）に特異的に指向するサプレッサーＴ細胞および／またはメモリー／エフェクターＴ細胞の活性化；のうちの１つ以上の作用が含まれてもよい。これらの応答は、感染性を中和し、および／または抗体－補体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）もしくは抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介し、免疫された宿主に防御を提供する。このような応答は、当該技術分野で周知の標準的な免疫測定法および中和アッセイ法を用いて決定することができる。哺乳類の自然免疫系はまた、免疫細胞上のＴｏｌｌ様受容体および類似の受容体分子の活性化を通じて、病原性生物の分子的特徴を認識し、それに応答する。自然免疫系が活性化されると、様々な非適応性免疫応答細胞が活性化され、例えば様々なサイトカイン、リンパカイン、ケモカインを産生する。自然免疫応答によって活性化される細胞には、単球系および扁平上皮系（ＭＤＣ、ＰＤＣ）の未熟および成熟樹状細胞、ならびにγ、δ、αおよびβＴ細胞、Ｂ細胞などが含まれる。したがって、本開示は、免疫応答が生得的応答（ｉｎｎａｔｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）と適応応答の両方を含む免疫応答も企図する。

【0063】

「免疫原性組成物」とは、抗原性分子を含有する組成物であって、該組成物を対象に投与することにより、該対象において、目的の抗原性分子に対する体液性免疫応答および／または細胞性免疫応答が発現する組成物である。

【0064】

「免疫原性」タンパク質またはポリペプチドという用語は、上記のような免疫学的応答を誘発するアミノ酸配列を指す。「免疫原性」タンパク質またはポリペプチドは、本明細書中で使用される場合、前駆体および成熟体、それらのアナログ、またはそれらの免疫原性フラグメントを含む、問題のタンパク質の全長配列を含む。

【0065】

「遺伝子導入（Ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ）」または「遺伝子導入（ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」とは、目的のＤＮＡまたはＲＮＡを宿主細胞に確実に挿入するための方法またはシステムを指す。このような方法は、導入された非組み込みＤＮＡの一過性の発現、導入されたレプリコン（例えば、エピソーム）の染色体外複製および発現、または宿主細胞のゲノムＤＮＡへの導入された遺伝物質の組み込みをもたらす可能性がある。遺伝子導入発現ベクターとしては、細菌プラスミドベクター、ウイルスベクター、非ウイルスベクター、アルファウイルス、ポックスウイルス、およびワクシニアウイルス由来のベクターが挙げられるが、これらに限定されるものではない。免疫に使用される場合、このような遺伝子導入発現ベクターはワクチンまたはワクチンベクターと呼ばれることがある。

【0066】

本明細書において、「由来する」という用語は、分子の元の供給源を特定するために使用されるが、例えば化学合成または組換え手段によって分子を製造する方法を限定することを意味するものではない。

【0067】

一般に、ウイルスポリペプチドは、（ｉ）そのウイルスのポリヌクレオチド（ウイルスポリヌクレオチド）のオープンリーディングフレームによってコードされるか、または（ｉｉ）上記のようにそのウイルスのポリペプチドと配列同一性を示す場合、ウイルスの特定のポリペプチド（ウイルスポリペプチド）に「由来する」。

【0068】

指定配列に「由来する」ポリヌクレオチドとは、指定されたヌクレオチド配列の領域に対応する、すなわち同一であるか相補的である、およそ少なくとも約６ヌクレオチド、少なくとも約８ヌクレオチド、少なくとも約１０～１２ヌクレオチド、および少なくとも約１５～２０ヌクレオチドの連続配列を含むポリヌクレオチド配列を指す。由来するポリヌクレオチドは、必ずしも目的のヌクレオチド配列から物理的に由来しているとは限らず、ポリヌクレオチドが由来する領域（単数または複数）の塩基配列によって提供される情報に基づいて、化学合成、複製、逆転写または転写を含むがこれらに限定されない任意の方法で生成され得る。このように、ポリヌクレオチドは、元のポリヌクレオチドのセンスまたはアンチセンスのいずれかの配向を示してもよい。

【0069】

上記で定義したＡＳＦポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、核酸、タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドは、限定されるわけではないが、ＡＳＦウイルスの種々の単離株のいずれかを含む、ＡＳＦウイルス由来の分子である。この分子は、問題となっている特定の単離株から物理的に由来している必要はなく、合成的または組換え的に産生されたものであってもよい。

【0070】

ゲノムＤＮＡは１６８のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）から構成されている。これらのタンパク質のいくつかは、前駆体タンパク質の翻訳後修飾によって生じる、より大きな前駆体に由来する。特に、ＡＳＦウイルスＯＲＦによってコードされるｐ３０、ｐ５４、ｐ７２およびヘマグルチニンポリペプチド、ならびにそれらの変異体、それらの免疫原性フラグメント、およびそのようなポリペプチド、変異体または免疫原性フラグメントをコードする核酸は、開示される主題の実施において使用されてもよい。

【0071】

多くのＡＳＦウイルス単離株について目的の核酸およびタンパク質配列もまた公知である。代表的なｐ３０、ｐ５４、ｐ７２およびヘマグルチニンの核酸配列は、配列番号ｌ（ｐ３０／ｐ５４融合体）、７（ｐ７２）、９（ｐ３０）、１１（ｐ５４）、１３（ヘマグルチニン）および１４（ヘマグルチニン）に示される。代表的なｐ３０、ｐ５４、ｐ７２、およびヘマグルチニンのアミノ酸配列は、配列番号６（ｐ３０／ｐ５４融合体）、８（ｐ７２）、１０（ｐ３０）、１２（ｐ５４）、および１７（ヘマグルチニン）に示される。ＡＳＦウイルスの配列、およびＡＳＦウイルス単離株からのそれらのコードされたポリペプチドを含む追加の代表的な配列は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）データベースに記載されている。例えば、これらに限定されないが、ＧｅｎＢａｎｋエントリーを参照のこと：ＣＢｗ４６７５９．１； ＡＣＪ６１５７５．１； ＭＨ７３５１４０．１； ＭＨ６０１４１９．１； ＭＨ７２７１０２．１； ＫＦ８３４１９４．１； ＬＣ３２２０１５．１； ＭＨ７３５１４２； ＭＨ６８１４１９．１； ＫＭ６０９３４２．１； ＦＲ６８２４６８．１； ＫＪ３８０９１０．１； ＦＲ６８２４６８．１；［００７１］ ＭＨ７２２３５７； ＭＨ６８４１９．１； ＭＨ７１３６１２．１； ＬＣ３２２０１６．１； ＫＦ８３４１９３．１（これらの配列（本出願の出願日までに入力されたもの）はすべて、参照により本明細書に組み込まれる。）

【0072】

本明細書で使用する場合、ＡＦＳウイルスポリペプチドに関する「ｐ３０」「ｐ５４」「ｐ７２」または「ヘマグルチニン」という用語は、ＡＳＦウイルスの「ｐ３０」「ｐ５４」「ｐ７２」または「ヘマグルチニン」ポリペプチドと相同または同一の配列を含むポリペプチドを指し、少なくとも約８０～１００％の配列同一性を示す配列を含み、これらの範囲内の任意の同一性パーセント、例えばそれと８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％の配列同一性を含む。カプシドポリペプチドは、ＡＳＦウイルスの同一株またはＡＳＦウイルスの異なる株のいずれかによってコードされるものであってもよい。

【0073】

本明細書で使用する場合、「ｐ３０／ｐ５４融合タンパク質」という用語は、ＡＳＦウイルス由来のｐ３０ ＡＳＦウイルスコード化ｐ３０タンパク質およびｐ５４タンパク質と相同または同一の配列を含むタンパク質を指し、少なくともそれと約８０～１００％の配列同一性を示す配列を含み、これらの範囲内の任意のパーセント同一性を含み、例えば、それと８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％の配列同一性を示す配列を含む。

【0074】

「抗原」とは、宿主の免疫系を刺激して体液性および／または細胞性の抗原特異的応答を起こさせる、１つまたは複数のエピトープ（直鎖状、コンフォメーション状、またはその両方）を含む分子を指す。この用語は、「免疫原」という用語と互換的に使用される。通常、Ｂ細胞エピトープは少なくとも約５個のアミノ酸を含むが、３～４個のアミノ酸であってもよい。ＣＴＬエピトープなどのＴ細胞エピトープは少なくとも約７～９個のアミノ酸を含み、ヘルパーＴ細胞エピトープは少なくとも約１２～２０個のアミノ酸を含む。通常、エピトープは約７～１５個のアミノ酸、例えば９、１０、１２または１５個のアミノ酸を含む。「抗原」という用語は、サブユニット抗原（すなわち、抗原が自然界で会合している生物全体から分離及び独立した抗原）、ならびに死滅、弱毒化または不活化した細菌、ウイルス、真菌、寄生虫またはその他の微生物の両方を示す。抗原または抗原決定基を模倣する抗イディオタイプ抗体またはそのフラグメント、合成ペプチドミモトープなどの抗体も、本明細書で用いる抗原の定義に含まれる。同様に、遺伝子治療やＤＮＡ免疫の適用のように、インビボで抗原または抗原決定基を発現するオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドも、本明細書における抗原の定義に含まれる。

【0075】

「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体製剤およびモノクローナル抗体製剤、ならびにハイブリッド抗体、改変抗体、キメラ抗体およびヒト化抗体を含む製剤、ならびにハイブリッド（キメラ）抗体分子およびそのような分子から得られる任意の機能的フラグメントを包含し、そのようなフラグメントは親抗体分子の特異的結合特性を保持する。

【0076】

「ハイブリダイズ」および「ハイブリダイゼーション」という用語は、ワトソン－クリック塩基対形成を介して複合体を形成するのに十分な相補性を有するヌクレオチド配列間の複合体の形成を意味する。プライマーがターゲット（鋳型）と「ハイブリダイズ」する場合、そのような複合体（またはハイブリッド）は、例えばＤＮＡ合成を開始するためにＤＮＡポリメラーゼによって必要とされるプライミング機能を果たすのに十分安定である。

【0077】

本明細書で使用される場合、「生物学的試料」とは、対象から単離された組織または液体の試料を指し、例えば、血液、血漿、血清、糞便、尿、骨髄、胆汁、髄液、リンパ液、皮膚の試料、皮膚、呼吸器管、腸管、および泌尿生殖器管の外部分泌物、涙、唾液、乳汁、血液細胞、臓器、生検、および、培養培地中での細胞や組織の増殖から生じるコンディショニング培地、例えば組換え細胞、細胞成分などを含むが、これらに限定されないインビトロ細胞培養成分の試料も含む。特に、ＡＳＦウイルスは、血液、血清、脾臓、肝臓、肺、リンパ節、扁桃腺、腎臓を含むがこれらに限定されない生物学的試料から得てもよい。

【0078】

「対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）」とは、限定されるものではないが、ブタ（ｓｕｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）を含む、イノシシ科（ｆａｍｉｌｙ ｓｕｉｄａｅ）のあらゆるメンバーを意味する。この用語は、特定の年齢を示すものではない。従って、成体および新生児の個体の両方を対象とすることが意図される。

【0079】

「変異体」、「アナログ」および「ムテイン（ｍｕｔｅｉｎ）」という用語は、ＡＳＦに対する免疫応答を誘導する抗原活性などの所望の活性を保持する参照分子の生物学的に活性な誘導体を指す。一般に、「変異体」および「アナログ」という用語は、修飾が生物学的活性を破壊しない限り、ネイティブ分子に対して１つ以上のアミノ酸の付加、置換（一般に性質が保存的）および／または欠失を有するネイティブポリペプチド配列および構造を有し、以下に定義されるように参照分子と「実質的に相同」である化合物を指す。一般に、このようなアナログのアミノ酸配列は、参照配列に対して高度な配列相同性を有し、例えば、２つの配列が整列された場合、５０％以上、一般に６０％～７０％以上、さらに特に８０％～８５％以上、例えば少なくとも９０％～９５％以上のアミノ酸配列相同性を有する。多くの場合、アナログは同じ数のアミノ酸を含むが、本明細書で説明するように置換を含む。用語「ムテイン」は、さらに、アミノおよび／またはイミノ分子のみを含む化合物、アミノ酸の１つ以上のアナログ（例えば、非天然アミノ酸などを含む）を含むポリペプチド、置換された連結を有するポリペプチド、ならびに天然に存在するおよび非天然に存在する（例えば、合成）、環化された、分岐した分子などの当技術分野で公知の他の修飾を含むがこれらに限定されない、１つ以上のアミノ酸様分子を有するポリペプチドを含む。この用語はまた、１つ以上のＮ－置換グリシン残基（「ペプトイド」）および他の合成アミノ酸またはペプチドを含む分子を含む。（例えば、米国特許第５，８３１，００５号；同第５，８７７，２７８号；および同第５，９７７，３０１号を参照のこと）。実施形態において、アナログまたはムテインは、ネイティブ分子と少なくとも同じ抗原活性を有する。ポリペプチドアナログおよびムテインを作製するための方法は、当該分野で公知であり、そして以下にさらに記載される。

【0080】

上記で説明したように、アナログは一般に、本質的に保存的な置換、すなわち、側鎖が関連しているアミノ酸のファミリー内で起こる置換を含む。具体的には、アミノ酸は一般に４つのファミリーに分けられる：（１）酸性－アスパラギン酸およびグルタミン酸；（２）塩基性－リジン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性－アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；および（４）非荷電極性－グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリンスレオニン、チロシン。フェニルアラニン、トリプトファン、チロシンは芳香族アミノ酸に分類されることもある。例えば、ロイシンをイソロイシンまたはバリンで、アスパラギン酸をグルタミン酸で、スレオニンをセリンで、あるいはアミノ酸を構造的に関連するアミノ酸で同様の保存的置換をしても、生物学的活性に大きな影響を与えないことは合理的に予測できる。例えば、目的のポリペプチドは、分子の所望の機能がインタクトのままである限り、約５～１０個までの保存的または非保存的アミノ酸置換、あるいは約１５～２５個までの保存的または非保存的アミノ酸置換、あるいは５～２５の間の任意の整数を含むことができる。当業者であれば、当技術分野でよく知られているＨｏｐｐ／ＷｏｏｄｓプロットやＫｙｔｅ－Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅプロットを参照して、変化を許容しうる目的の分子の領域を容易に決定することができる。

【0081】

本明細書で使用する「多重エピトープ融合抗原」または「多重エピトープ融合タンパク質」という用語は、複数のＡＳＦウイルス抗原がアミノ酸の単一の連続した鎖の一部であるポリペプチドを意味し、この鎖は自然界には存在しない。ＡＳＦウイルス抗原は、ペプチド結合によって互いに直接連結されていてもよいし、介在するアミノ酸配列によって分離されていてもよい。融合抗原は、ｐ３０／ｐ５４ ＡＳＦウイルスコード化ポリペプチドまたはそのフラグメントを含んでもよい。融合抗原はまた、ＡＳＦウイルスに外来性の配列を含んでいてもよい。さらに、存在する配列は、ＡＳＦウイルスの複数の遺伝子型および／または単離株由来のものであってもよい。

【0082】

免疫原性組成物の文脈における「治療上有効な量」とは、抗体産生のため、またはＡＳＦ感染の治療もしくは予防のために、免疫学的応答を誘導する免疫原（例えば、免疫原性ポリペプチド、融合タンパク質、ポリタンパク質、または抗原をコードする核酸）の量を意味する。このような応答は、一般に、対象において、組成物に対する抗体媒介性免疫応答および／または分泌性免疫応答もしくは細胞性免疫応答の発現をもたらす。通常、このような応答には、免疫グロブリンＡ、Ｄ、Ｅ、ＧまたはＭのような免疫学的クラスのいずれかからの抗体の産生；ＢおよびＴリンパ球の増殖；免疫学的細胞への活性化、増殖および分化シグナルの供給；ヘルパーＴ細胞、サプレッサーＴ細胞、および／または細胞傷害性Ｔ細胞および／またはγ、δ－Ｔ細胞集団の増殖；のうちの１つまたは複数の作用が含まれるが、これらに限定されない。

【0083】

本開示の目的上、アジュバントの「有効量」とは、共投与された抗原または抗原をコードする核酸に対する免疫学的応答を増強する量である。

【0084】

本明細書において「治療」とは、（ｉ）従来のワクチンにおけるような感染または再感染の予防、（ｉｉ）症状の軽減または除去、および（ｉｉｉ）問題の病原体の実質的または完全な除去のいずれかを指す。治療は予防的（感染前）に効果があってもよく、治療的（感染後）に効果があってもよい。

【0085】

本開示を詳細に説明する前に、本開示の実施は、特に断らない限り、ウイルス学、微生物学、分子生物学、組換えＤＮＡ技術および免疫学の従来法を採用することを理解されたい。このような技術は文献で十分に説明されている。本明細書に記載されたものと類似または同等の多くの方法および材料が、請求された本発明の実施において使用され得るが、材料および方法は本明細書に記載される。

【0086】

本開示は、ＡＳＦ感染に対して対象を免疫化するための組成物および方法を含む。本開示は、ＡＳＦウイルスの１つ以上の株由来のカプシドタンパク質および／または他の免疫原性ポリペプチドをコードする核酸を含む免疫原性組成物、ＡＳＦウイルスの１つ以上の株由来の免疫原性ポリペプチドを含む組成物を提供する。本主題の実施において使用される免疫原性ポリペプチドは、多重エピトープ融合抗原を含むＡＳＦウイルス由来のポリペプチドを含んでもよい。さらに、免疫原性組成物は、１つ以上のアジュバントまたはアジュバントをコードする核酸を含んでもよく、ここで免疫原性ポリペプチドは、アジュバントと混合または共発現される。免疫原性組成物はまた、下痢性疾患を引き起こす病原体に対する免疫化において使用されてもよい抗原などのＡＳＦウイルス抗原以外の付加的な抗原を含んでもよい。

【0087】

開示される主題の理解を深めるために、免疫原性組成物において使用するための核酸およびポリペプチドの産生、ならびにＡＳＦ感染の治療または予防においてそのような組成物を使用する方法に関して、より詳細な考察を以下に提供する。

構造ポリペプチド、非構造ポリペプチド、ポリタンパク質

【0088】

本明細書に記載の免疫原性組成物は、ＡＳＦウイルスの１つ以上の遺伝子型および／または単離株由来の１つ以上のポリペプチドを含んでもよい。本明細書に開示される主題の実施において使用され得るポリペプチドには、構造タンパク質、非構造タンパク質、およびポリタンパク質が含まれる。このようなポリペプチドは、ＡＳＦウイルスに対する免疫応答を誘発することができる全長タンパク質またはその変異体またはその免疫原性フラグメントであり得る。

【0089】

免疫原性組成物中のポリペプチドは、ＡＳＦウイルスゲノムの任意の領域によってコードされ得る。複数のポリペプチドは、免疫原性組成物に含まれてもよい。このような組成物は、広範なＡＳＦウイルス遺伝子型に対するより高い防御を提供するために、同じＡＳＦウイルス単離株由来のポリペプチド、または様々なＡＳＦウイルス遺伝子型のいずれかを有する単離株を含む、異なる株および単離株由来のポリペプチドを含んでもよい。ＡＳＦウイルスの複数のウイルス株が知られており、これらの株のいずれかに由来するエピトープを含む複数のポリペプチドを免疫原性組成物に使用することができる。

【0090】

本開示の免疫原性組成物において使用される抗原は、個々の別個のポリペプチドとして組成物中に存在してもよい。一般に、本開示の組換えタンパク質は、ＧＳＴ融合タンパク質および／またはＨｉｓタグ融合タンパク質として発現される。

マルチエピトープ融合タンパク質

【0091】

本明細書に記載の免疫原性組成物はまた、複数のエピトープ融合タンパク質を含んでもよい。このような融合タンパク質は、ＡＳＦウイルスの１つ以上の遺伝子型および／または単離株の２つ以上のウイルスポリペプチド由来の複数のエピトープを含む。多重エピトープ融合タンパク質は、２つの主要な利点を提供する：第１に、それ自体では不安定または発現不良である可能性があるポリペプチドは、問題を克服する適切なハイブリッドパートナーを添加することによって補助されてもよく；第２に、抗原的に有用な２つのポリペプチドを産生するために、１つの発現および精製のみを行うだけでよいので、商業的製造が単純化される。

【0092】

融合タンパク質中のポリペプチドは、広範なウイルス遺伝子型に対するより高い防御を提供するために、同じＡＳＦウイルス単離株由来であってもよいし、または様々なＡＳＦウイルス遺伝子型のいずれかを有する単離株を含む異なる株および単離株由来であってもよい。ＡＳＦウイルスの複数のウイルス株が知られており、これらの株のいずれかに由来するエピトープを融合タンパク質に使用してもよい。

【0093】

任意の所与の生物種が、個々の生物によって異なり、さらにウイルスのような所与の生物が多数の異なる株を有し得ることは周知である。例えば、上記で説明したように、ＡＳＦウイルスには少なくとも２４の遺伝子グループがある。一般に、抗原決定基はアミノ酸配列の点で高い相同性を有することがあり、その相同性の程度は、整列させた場合、一般に３０％以上、４０％以上である。融合タンパク質はまた、エピトープの複数のコピーを含んでいてもよく、融合タンパク質の１つ以上のポリペプチドは、同じエピトープの正確なコピーを含む配列を含んでいる。さらに、ポリペプチドは、融合体を含むワクチン組成物が使用される特定の地理的地域で流行している特定のウイルスクレードに基づいて選択されてもよい。主題の融合体が、多種多様な状況において感染を治療する有効な手段を提供することは、容易に明らかである。

【0094】

複数のエピトープ融合抗原は、式ＮＨ_２－Ａ－｛－Ｘ－Ｌ－｝_ｎ－Ｂ－－ＣＯＯＨ［ここでＸは、ＡＳＦウイルス抗原またはそのフラグメントのアミノ酸配列であり；Ｌは、任意のリンカーアミノ酸配列であり；Ａは、任意のＮ末端アミノ酸配列であり；Ｂは、任意のＣ末端アミノ酸配列であり；そしてｎは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５である］で表され得る。

【0095】

－－Ｘ－－部分が、その野生型においてリーダーペプチド配列を有する場合、これは多重エピトープ融合抗原に含まれてもよいし、省略されてもよい。いくつかの実施形態では、ハイブリッドタンパク質のＮ末端に位置する－－Ｘ－－部分のそれ以外の、ーダーペプチドは欠失される、すなわち、Ｘ_１のリーダーペプチドは保持されるが、Ｘ_２．．．．Ｘ_ｎは省略される。これは、すべてのリーダーペプチドを削除し、Ｘ_１のリーダーペプチドを部位－Ａ－として使用することと等価である。

【0096】

（－－Ｘ－Ｌ－）の各ｎの例について、リンカーアミノ酸配列－Ｌ－は存在しても存在しなくてもよい。例えば、ｎ＝２の場合、ハイブリッドは、ＮＨ_２－－Ｘ_１－Ｌ_１－Ｘ_２－Ｌ_２－ＣＯＯＨ、ＮＨ_２－－Ｘ_１－－Ｘ_２－－ＣＯＯＨ、ＮＨ_２－－Ｘ_１－Ｌ_１－Ｘ_２－－ＣＯＯＨ、ＮＨ_２－－Ｘ_１－－Ｘ_２－Ｌ_２－ＣＯＯＨなどであってもよい。リンカーアミノ酸配列（単数または複数）－Ｌ－は、典型的には、短く、例えば、２０またはそれ以下のアミノ酸（すなわち、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１）であろう。例えば、クローニングを容易にする短いペプチド配列、ポリグリシンリンカー（Ｇｌｙ、ここでｎ＝２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上）、およびヒスチジンタグ（Ｈｉｓ_ｎ［ここでｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上］）が挙げられる。他の適切なリンカーアミノ酸配列は当業者に明らかであろう。有用なリンカーはＧＳＧＧＧＧであり、Ｇｌｙ－Ｓｅｒジペプチドはクローニングと操作を助けるＢａｍＨＩ制限部位から形成され、（Ｇｌｙ）_４テトラペプチドは典型的なポリグリシンリンカーである。さらに、プロテアーゼ基質配列を付加してもよい（例えば、ＴＥＶプロテアーゼ：ＥＮＬＹＦＱＧ）。

【0097】

－Ａ－は、任意のＮ末端アミノ酸配列である。これは、典型的には、短い、例えば、４０個以下のアミノ酸（すなわち、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１）であろう。例えば、タンパク質の輸送を指示するためのリーダー配列や、クローニングや精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグＨｉｓ_ｎ［ここでｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上］）が挙げられる。他の適切なＮ末端アミノ酸配列は当業者に明らかであろう。Ｘ_１がそれ自身のＮ末端メチオニンを欠く場合、－Ａ－は、Ｎ末端メチオニンを提供するオリゴペプチド（例えば、１、２、３、４、５、６、７または８個のアミノ酸を有する）である。

【0098】

－－Ｂ－－は、任意のＣ末端アミノ酸配列である。これは、典型的には、短く、例えば、４０またはそれ以下のアミノ酸（すなわち、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１）であろう。例えば、タンパク質の輸送を指示する配列、クローニングまたは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、Ｈｉｓ_ｎ［ここでｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上］）、またはタンパク質の安定性を増強する配列が挙げられる。他の適切なＣ末端アミノ酸配列は、ＴＥＶプロテアーゼ基質配列がそれに先行する場合、そのようなＨｉｓ_ｎ配列が除去され得ることを含めて、当業者には明らかであろう（例えば、ＥＮＬＹＦＱＧＨｉｓ_ｎ）。

【0099】

多重エピトープ融合抗原内の免疫原性組成物の個々の抗原（個々の－－Ｘ－－部分）は、１つまたはそれ以上の株または１つまたはそれ以上のＭ型からのものであってよい。ｎ＝２である場合、例えば、Ｘ_２はＸ_１と同じ株または型由来であってもよいし、異なる株または型由来であってもよい。ｎ＝３の場合、株は、（ｉ）Ｘ_１＝Ｘ_２＝Ｘ_３、（ｉｉ）Ｘ_１＝Ｘ_２≠Ｘ_３、（ｉｉｉ）Ｘ_１≠Ｘ_２＝Ｘ_３、（ｉｖ）Ｘ_１≠Ｘ_２≠Ｘ_３、または（ｖ）Ｘ_１＝Ｘ_３≠Ｘ_２、などである可能性がある。

【0100】

複数のエピトープ融合抗原が使用される場合、融合タンパク質内の個々の抗原（すなわち、個々の－－Ｘ－－部分）は、１つまたは複数の株由来のものであってもよい。ｎ＝２である場合、例えば、Ｘ_２はＸ_１と同じ株のものでも、異なる株のものでもよい。ｎ＝３の場合、株は、（ｉ）Ｘ_１＝Ｘ_２＝Ｘ_３、（ｉｉ）Ｘ_１＝Ｘ_２≠Ｘ_３、（ｉｉｉ）Ｘ_１≠Ｘ_２＝Ｘ_３、（ｉｖ）Ｘ_１≠Ｘ_２≠Ｘ_３、または（ｖ）Ｘ_１＝Ｘ_３≠Ｘ_２、などである可能性がある。

【0101】

従って、実施形態において、異なるＡＳＦウイルス株由来の抗原決定基が存在してもよい。ＡＳＦウイルス単離株由来のポリペプチドを含む、本開示において使用するための代表的なマルチエピトープ融合タンパク質を、以下に議論する。しかしながら、ＡＳＦウイルスゲノム由来の他のエピトープを含むマルチエピトープ融合タンパク質、または異なる配置のエピトープを含むマルチエピトープ融合タンパク質もまた、開示されるような免疫原性組成物において使用を見出されることを理解されたい。

【0102】

特定の実施形態において、融合タンパク質は、ＡＳＦウイルスの１つ以上の単離株由来の１つ以上のカプシドおよび／またはマイナー構造ポリペプチドを含む。

【0103】

別の実施形態では、融合タンパク質は、２つ以上のウイルス株由来のＡＳＦウイルスポリペプチドを含む。

【0104】

本明細書に記載されるすべての融合において、ウイルス領域は、それらが天然に発生する順序である必要はない。さらに、各領域は、同一または異なるＡＳＦウイルス単離株由来であってもよい。上記の様々な融合体中に存在する様々なＡＳＦウイルスポリペプチドは、全長ポリペプチドであってもその一部であってもよい。

【0105】

必要であれば、融合タンパク質、またはこれらのタンパク質の個々の成分は、アミノ酸リンカーやシグナル配列などの他のアミノ酸配列や、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼやスタフィロコッカルタンパク質Ａなどのタンパク質精製に有用なリガンドも含むものであってもよい。

核酸

【0106】

本明細書で開示するように使用するための核酸は、例えばポリペプチド生産において、ＡＳＦウイルスゲノムの種々の領域のいずれかに由来するものであってもよい。

【0107】

ＡＳＦウイルスの代表的な配列は知られており、配列番号１、７、９、１１、１３および１４を含む。

【0108】

これらの配列のいずれか、ならびにＡＳＦウイルスに対する免疫応答を誘発するための核酸免疫化において使用され得るそのフラグメントおよび変異体は、本方法において使用を見出すであろう。従って、本開示は、それらに８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００％配列同一性など、これらの範囲内の任意のパーセント同一性を含む、少なくとも約８０～１００％の配列同一性を示す上記配列の変異体を提供する。本開示はまた、上記の配列のいずれかまたはその変異体由来のＡＳＦウイルスポリペプチドの免疫原性フラグメントをコードするポリヌクレオチドを提供する。ポリヌクレオチドはまた、天然に存在するポリペプチドのコード配列を含むか、または天然には存在しない人工配列であってもよい。

【0109】

ポリヌクレオチドは、ＡＳＦウイルスゲノム全体よりも少ない塩基配列を含んでいてもよいし、あるいはウイルスゲノムＤＮＡ全体の塩基配列を含んでいてもよい。

【0110】

実施形態において、ポリヌクレオチドは、ＡＳＦウイルスの１つ以上の単離株のｐ３０、ｐ５４、ｐ７２および／またはヘマグルチニンタンパク質をコードする１つ以上のＡＳＦウイルス配列を含む。

【0111】

実施形態において、本開示は、本明細書に記載のマルチエピトープ融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供する。マルチエピトープ融合タンパク質は、ＡＳＦウイルスの１つ以上の遺伝子型および／または単離株由来の配列を含んでもよい。

【0112】

本開示による核酸は、多くの方法（例えば、化学合成によって、ゲノムまたはｃＤＮＡライブラリーから、生物自体からなど）で調製されてもよく、そして種々の形態（例えば、一本鎖、二本鎖、ベクター、プローブなど）を取ってもよい。実施形態において、核酸は実質的に純粋な形態（すなわち、他の宿主細胞または非宿主細胞の核酸を実質的に含まない）で調製される。

【0113】

例えば、核酸は、ウイルスに感染した細胞からｃＤＮＡおよび／またはゲノムライブラリーをスクリーニングすることによって、またはそれを含むことが知られているベクターから遺伝子を誘導することによって得てもよい。例えば、目的のポリヌクレオチドは、例えば感染個体からの毛髪または血液サンプル中に存在するウイルスＤＮＡ由来のゲノムライブラリーから単離されてもよい。あるいは、ＡＳＦウイルス核酸は、感染哺乳動物または感染個体から採取した生物学的サンプルから単離されてもよい。それをコードするＡＳＦウイルスゲノムＤＮＡのいずれかからポリヌクレオチドを増幅するために、ＰＣＲのような増幅法を使用してもよい。あるいは、ポリヌクレオチドは、例えば自動合成機を用いて実験室で合成してもよい。ヌクレオチド配列は、所望の特定のアミノ酸配列に対して適切なコドンで設計されてもよい。一般的には、その配列が発現される宿主に適したコドンを選択する。目的のポリヌクレオチドの完全な配列は、標準的な方法によって調製された重複オリゴヌクレオチドから組み立てられ、完全なコード配列に組み立てられてもよい。ポリヌクレオチドは、ＲＮＡまたは一本鎖もしくは二本鎖ＤＮＡであってもよい。実施形態において、ポリヌクレオチドは、タンパク質および脂質などの他の成分を含まない状態で単離される。

【0114】

したがって、特定のヌクレオチド配列は、所望の配列を保有するベクターから得るか、または適切な場合には部位特異的変異誘発およびポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術のような、当技術分野で公知の種々のオリゴヌクレオチド合成技術を使用して完全にまたは部分的に合成されてもよい。特に、所望の配列をコードするヌクレオチド配列を得る１つの方法は、従来の自動ポリヌクレオチドシンセサイザーで製造された重なり合う合成オリゴヌクレオチドの相補的セットをアニーリングし、次いで適切なＤＮＡリガーゼでライゲーションし、ライゲーションされたヌクレオチド配列をＰＣＲで増幅することによるものである。プライマー配列は、配列番号２、３、４、５、１５および１６を含み得るが、これらに限定されない。

免疫原性ポリペプチドの生産

【0115】

本明細書に記載のポリペプチドは、任意の適切な方法（例えば、組換え発現、細胞培養からの精製、化学合成など）および種々の形態（例えば、ネイティブ、融合体、非グリコシル化、脂質化など）で調製されてもよい。このようなポリペプチドには、天然に存在するポリペプチド、組換え的に産生されたポリペプチド、合成的に産生されたポリペプチド、またはこれらの方法の組み合わせによって産生されたポリペプチドが含まれる。このようなポリペプチドを調製する手段は、当技術分野でよく理解されている。ポリペプチドは、実質的に純粋な形態（すなわち、他の宿主細胞タンパク質または非宿主細胞タンパク質を実質的に含まない）で調製される。

【0116】

ポリペプチドは、ペプチド技術の当業者に知られているいくつかの技術のいずれかによって、化学的に従来法で合成されてもよい。一般に、これらの方法は、成長するペプチド鎖に１つ以上のアミノ酸を順次付加することを用いる。通常、最初のアミノ酸のアミノ基またはカルボキシル基は適当な保護基で保護される。保護または誘導体化されたアミノ酸は、次いで、不活性固体支持体に結合させるか、またはアミド結合の形成を可能にする条件下で、適切に保護された相補的（アミノ基またはカルボキシル基）基を有する配列中の次のアミノ酸を添加することにより、溶液中で利用することができる。次いで、新たに付加したアミノ酸残基から保護基を除去し、次のアミノ酸（適切に保護されている）を付加し、同じように続く。所望のアミノ酸が適切な順序で連結された後、残っている保護基（固相合成技術を使用する場合は固体支持体も）を順次または同時に除去し、最終的なポリペプチドを得る。この一般的な手順を簡単に変更することで、例えば、保護されたトリペプチドを適切に保護されたジペプチドとカップリング（キラル中心がラセミ化しない条件下）して、脱保護後、ペンタペプチドを形成することで、成長する鎖に一度に複数のアミノ酸を付加することができる。

【0117】

代表的な保護基としては、ｔ－ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、９－フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）；ｐ－トルエンスルホニル（Ｔｘ）；２，４－ジニトロフェニル；ベンジル（Ｂｚｌ）；ビフェニルイソプロピルオキシカルボニル、ｔ－アミルオキシカルボニル、イソボミルオキシカルボニル、ｏ－ブロモベンジルオキシカルボニル、シクロヘキシル、イソプロピル、アセチル、ｏ－ニトロフェニルスルホニルなどが挙げられる。典型的な固体支持体は架橋ポリマー支持体である。これらには、ジビニルベンゼン架橋－スチレン系ポリマー、例えば、ジビニルベンゼン－ヒドロキシメチルスチレンコポリマー、ジビニルベンゼン－クロロメチルスチレンコポリマーおよびジビニルベンゼン－ベンズヒドリルアミノポリスチレンコポリマーが含まれ得る。

【0118】

本開示のポリペプチドはまた、同時多重ペプチド合成法などの他の方法によって化学的に調製することもできる。

【0119】

あるいは、上記の免疫原性ポリペプチド、ポリタンパク質、およびマルチエピトープ融合タンパク質は、組換え的に産生されてもよい。所望のタンパク質のコード配列が単離されるかまたは合成されると、それらは発現のために任意の適切なベクターまたはレプリコンにクローニングされ得る。多数のクローニングベクターが当業者に知られており、適切なクローニングベクターの選択は選択の問題である。様々な細菌、酵母、植物、哺乳動物および昆虫の発現系が当技術分野で利用可能であり、任意のそのような発現系が使用されてもよい。任意に、これらのタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、無細胞翻訳系で翻訳されてもよい。このような方法は当技術分野で周知である。

【0120】

クローニングのための組換えＤＮＡベクターおよびそれらが形質転換してもよい宿主細胞の例としては、バクテリオファージλ（大腸菌）、ｐＢＲ３２２（大腸菌）、ｐＡＣＹＣ１７７（大腸菌）、ｐＫＴ２３０（グラム陰性細菌）、ｐＧＶ１１０６（グラム陰性細菌）、ｐＬＡＦＲＩ（グラム陰性細菌）、ｐＭＥ２９０（非大腸菌グラム陰性細菌）、ｐＨＶ１４（大腸菌および枯草菌）、ｐＢＤ９（枯草菌）、ｐＩＪ６１（酵母類（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ））、ｐＵＣ６（酵母類（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ））、ＹＩｐ５（酵母類（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ））、ＹＣｐｌ９（酵母類（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ））およびウシ乳頭腫ウイルス（哺乳動物細胞）。

【0121】

バキュロウイルス系のような昆虫細胞発現系もまた使用されてもよく、当業者に公知であり、例えば、Ｓｕｍｍｅｒｓ及びＳｍｉｔｈ、Ｔｅｘａｓ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ Ｓｔａｔｉｏｎ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ Ｎｏ．１５５５（１９８７）に記載されている。バキュロウイルス／昆虫細胞発現系の材料および方法は、特に、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡからキット（「ＭａｘＢａｃ」キット）の形態で市販されている。

【0122】

植物発現系もまた、免疫原性タンパク質を産生するために使用されてもよい。一般に、このようなシステムは、異種遺伝子を植物細胞にトランスフェクトするためにウイルスベースのベクターを使用する。

【0123】

ワクシニアに基づく感染／トランスフェクション系のようなウイルス系も、本明細書に開示されるような主題と共に使用される。この系では、まず細胞を、バクテリオファージＴ７ ＲＮＡポリメラーゼをコードするワクシニアウイルス組換え体でｉｎ ｖｉｔｒｏトランスフェクトする。このポリメラーゼは、Ｔ７プロモーターを持つ鋳型のみを転写するという絶妙な特異性を示す。感染後、細胞はＴ７プロモーターによって駆動される目的のＤＮＡでトランスフェクトされる。ワクシニアウイルス組換え体から細胞質に発現されたポリメラーゼは、トランスフェクトされたＤＮＡをＲＮＡに転写し、次いで宿主の翻訳機構によってタンパク質に翻訳される。この方法は、大量のＲＮＡとその翻訳産物の高レベル、一過性の細胞質生産を提供する。

【0124】

遺伝子は、所望の免疫原性ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列が、この発現構築物を含むベクターによって形質転換された宿主細胞においてＲＮＡに転写されるように、プロモーター、リボソーム結合部位（細菌発現の場合）、および任意にオペレーター（本明細書では、集合的に「制御（コントロール）」エレメントと呼ぶ）の制御下に置かれてもよい。コード配列はシグナルペプチドまたはリーダー配列を含んでも含まなくてもよい。本明細書で開示される本発明の主題では、天然に存在するシグナルペプチドまたは異種配列の両方を使用されてもよい。リーダー配列は、翻訳後プロセッシングにおいて宿主によって除去されてもよい。例えば、米国特許第４，４３１，７３９号；第４，４２５，４３７号；第４，３３８，３９７号を参照されたい（各内容は、参照することによりその全体が本書に組み込まれる。）。このような配列には、ｔｐａリーダー、ミツバチメリチン（ｍｅｌｌｉｔｉｎ）シグナル配列が含まれるが、これらに限定されない。

【0125】

宿主細胞の増殖に対するタンパク質配列の発現の調節を可能にする他の調節配列もまた望ましくあり得る。このような調節配列は当業者に知られており、その例としては、調節化合物の存在を含む化学的または物理的刺激に応答して遺伝子の発現をオンまたはオフにさせるものが挙げられる。他のタイプの調節エレメントも、例えばエンハンサー配列のように、ベクター中に存在してもよい。

【0126】

制御配列および他の調節配列は、ベクターに挿入する前にコード配列にライゲーションしてもよい。あるいは、コード配列は、制御配列および適切な制限部位をすでに含む発現ベクターに直接クローニングしてもよい。

【0127】

実施形態において、コード配列が適切な配向でコントロール配列に結合され得るように；すなわち、適切なリーディングフレームを維持するように、コード配列を改変することが必要であり得る。また、免疫原性ポリペプチドの変異体またはアナログを作製することが望ましい場合もある。変異体またはアナログは、タンパク質をコードする配列の一部の欠失、配列の挿入、および／または配列内の１つ以上のヌクレオチドの置換によって調製してもよい。部位特異的突然変異誘発のようなヌクレオチド配列を改変する技術は、当業者に周知である。

【0128】

次いで、発現ベクターを用いて適切な宿主細胞を形質転換する。多数の哺乳動物細胞株が当技術分野で公知であり、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、ならびにその他の細胞など、これらに限定されないが、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な不死化細胞株が挙げられる。同様に、大腸菌、枯草菌、および連鎖球菌のような細菌宿主も、本発明の発現構築物と共に使用されるであろう。開示されたような主題で有用な酵母宿主には、特に、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｌｔｏｓａ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｇｕｉｌｌｅｒｉｍｏｎｄｉｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅおよびＹａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａが挙げられる。バキュロウイルス発現ベクターと共に使用する昆虫細胞としては、特に、Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ、Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ、およびＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉが挙げられる。

【0129】

選択された発現系および宿主に依存して、本明細書に開示されるタンパク質は、目的のタンパク質が発現される条件下で、上記の発現ベクターにより形質転換された宿主細胞を増殖させることにより産生される。適切な増殖条件の選択は当業者の技術範囲内である。次いで、ＡＳＦウイルス免疫原性ポリペプチドを実質的に無傷のまま維持しながら細胞を溶解する化学的、物理的または機械的手段を用いて細胞を破壊する。細胞内タンパク質はまた、免疫原性ポリペプチドの漏出が起こるように、例えば界面活性剤または有機溶媒を使用して、細胞壁または膜から成分を除去することによって得られてもよい。

【0130】

例えば、本明細書に開示されるような主題と共に使用するための細胞を破壊する方法としては、超音波処理または超音波照射；撹拌；液体または固体の押し出し；熱処理；凍結融解；乾燥；爆発的減圧；浸透圧ショック；トリプシン、ノイラミニダーゼおよびリゾチームなどのプロテアーゼを含む溶解酵素による処理；アルカリ処理；ならびに胆汁酸塩、ドデシル硫酸ナトリウム、Ｔｒｉｔｏｎ、ＮＰ４０、ＣＨＡＰＳなどの界面活性剤や溶媒の使用が挙げられるが、これらに限定されない。細胞を破砕するために用いる特定の技術は、選択の問題であり、ポリペプチドが発現している用いられる細胞の種類、培養条件および前処理に依存するであろう。

【0131】

細胞を破壊した後、細胞残屑を、一般に遠心分離によって除去し、そして細胞内に産生されたＡＳＦウイルス免疫原性ポリペプチドを、カラムクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、電気泳動、ＨＰＬＣ、免疫吸着技術、アフィニティークロマトグラフィー、免疫沈降などのような標準的な精製技術を使用して、さらに精製する。

【0132】

例えば、本明細書で開示する細胞内ＡＳＦウイルス免疫原性ポリペプチドを得るための１つの方法は、特異的抗体を用いるイムノアフィニティークロマトグラフィーなどによるアフィニティー精製を含む。適切なアフィニティー樹脂の選択は当業者の技術範囲内である。アフィニティー精製後、免疫原性ポリペプチドは、当技術分野で周知の従来の技術、例えば、上記の技術のいずれかによってさらに精製されてもよい。

【0133】

複数のポリペプチド（例えば、ポリペプチドアジュバントと組み合わせた１つ以上のウイルス株またはウイルスポリペプチドからの構造タンパク質および／または非構造タンパク質）を同時に産生することが望ましい場合がある。２つ以上の異なるポリペプチドの生産は、例えば、異なるポリペプチドをコードする構築物を宿主細胞に共にトランスフェクトすることによって容易に達成されてもよい。共にトランスフェクすることはトランスでもシスでも、すなわち別々のベクターを用いても、ポリペプチドをコードする単一のベクターを用いて達成してもよい。単一のベクターが使用される場合、ポリペプチドの発現は、単一の制御エレメントのセットによって駆動されるか、あるいは、ポリペプチドをコードする配列は、個々の制御エレメントによって制御される個々の発現カセットにおいてベクター上に存在するものであってもよい。

【0134】

本明細書に記載されるポリペプチドは、固体支持体に結合されてもよい。本明細書に開示される主題と共に実施において使用され得る固体支持体としては、ニトロセルロース（例えば、膜またはマイクロタイターウェル形態）；ポリ塩化ビニル（例えば、シートまたはマイクロタイターウェル）；ポリスチレンラテックス（例えば、ビーズまたはマイクロタイタープレート）；ポリフッ化ビニリデン；ジアゾ化紙；ナイロン膜；活性化ビーズ、磁気応答性ビーズなどの基材が挙げられる。

【0135】

典型的には、まず、固相成分（例えば、１つ以上のＡＳＦウイルス抗原）を適切な結合条件下で固相成分と反応させ、その構成成分が支持体に十分に固定化されるようにする。時には、抗原をより優れた結合特性を持つタンパク質と最初に結合させることにより、抗原の支持体への固定化が促進されてもよい。適切なカップリングタンパク質としては、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、免疫グロブリン分子、サイログロブリン、オバルブミン、および当業者に周知の他のタンパク質のような高分子が挙げられるが、これらに限定されない。抗原を支持体に結合させるために使用できる他の分子としては、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、高分子アミノ酸、アミノ酸コポリマーなどがある。このような分子およびこれらの分子を抗原に結合させる方法は、当業者によく知られている。

【0136】

望む場合、ポリペプチドは従来の技術を用いて標識することができる。好適な標識としては、フルオロフォア、クロモフォア、放射性原子（特に、^３２Ｐおよび^１２５Ｉ）、電子密度の高い試薬、酵素、および特定の結合パートナーを有するリガンドが挙げられる。酵素は通常、その活性によって検出される。例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼは通常、３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を青色色素に変換する能力によって検出され、分光光度計で定量可能である。「特異的結合パートナー」とは、例えば抗原とそれに特異的なモノクローナル抗体のように、高い特異性でリガンド分子を結合できるタンパク質を指す。他の特異的結合パートナーには、ビオチンとアビジンまたはストレプトアビジン、ＩｇＧとプロテインＡ、および当技術分野で知られている多数の受容体とリガンドのカップルが含まれる。本明細書に開示されたように、単一の標識または標識の組み合わせを使用することができる。

【0137】

一旦製剤化されると、本明細書に開示されるような組成物は、（例えば、上記のように）対象に直接投与され得るか、または代替的に、上記のような方法を使用して、対象由来の細胞に、生体外（ｅｘ ｖｉｖｏ）で送達され得る。

免疫原性組成物

【0138】

本開示はまた、本明細書に記載の免疫原性ポリペプチドおよび／またはポリタンパク質マルチエピトープ融合タンパク質の１つ以上を含む組成物を提供する。異なるポリペプチド、ポリタンパク質、およびマルチエピトープ融合タンパク質は、単一の製剤中で一緒に混合されてもよい。このような組み合わせの中で、免疫原性組成物の抗原は、複数のポリペプチド、またはマルチエピトープポリペプチド、またはポリタンパク質中に存在してもよい。

【0139】

免疫原性組成物はポリペプチドの混合物から構成されてもよく、これらのポリペプチドは順に、同じまたは異なるビヒクルを使用して送達されてもよい。抗原は、例えば、予防的（すなわち、感染を予防するため）または治療的（感染を治療するため）免疫原性組成物において、個々にまたは組み合わせて投与されてもよい。免疫原性組成物は、所望の効果を達成するために複数回投与してもよい（例えば、「プライム」投与に続いて１回以上の「ブースト」投与）。同じ組成物を、１回以上のプライミングと１回以上のブースティングの段階で投与してもよい。あるいは、プライミングとブースティングに異なる組成物を用いてもよい。

【0140】

免疫原性組成物は、一般に、水、生理食塩水、グリセロール、エタノールなどのような１つ以上の「医薬的に許容される賦形剤またはビヒクル」を含む。さらに、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝物質などの補助物質が、このようなビヒクル中に存在してもよい。

【0141】

免疫原性組成物は、典型的には、上記の成分に加えて、１つ以上「医薬的に許容される担体」を含む。これらには、それ自体が組成物を受ける個体に有害な抗体の産生を誘導しない任意の担体が含まれる。適切な担体は、典型的には、タンパク質、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、高分子アミノ酸、アミノ酸コポリマー、および脂質凝集体（油滴またはリポソームなど）のような、大きく、ゆっくりと代謝される高分子である。このような担体は当業者に周知である。組成物はまた、水、生理食塩水、グリセロールなどの希釈剤を含んでもよい。さらに、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝化物質などのような補助物質が存在してもよい。医薬的に許容される成分に関する徹底的な議論は、Ｇｅｎｎａｒｏ （２０００） Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ． ２０ｔｈ ｅｄ．， ＩＳＢＮ： ０６８３３０６４７２において入手可能である。

【0142】

医薬的に許容される塩もまた、本明細書に開示されるような組成物において使用されてもよく、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、または硫酸塩のような無機塩、ならびに酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、または安息香酸塩のような有機酸塩が挙げられる。特に有用なタンパク質基質は、血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、免疫グロブリン分子、サイログロブリン、オバルブミン、破傷風トキソイド、および当業者に周知の他のタンパク質である。開示されるような組成物はまた、水、生理食塩水、グリセロール、デキストロース、エタノールなどの液体または賦形剤、ならびに湿潤剤、乳化剤、またはｐＨ緩衝剤などの物質を単独または組み合わせて含んでもよい。抗原はまた、リポソームやＰＬＧのような粒子状担体に吸着されたり、その中に封入されたり、あるいは他の方法で結合されたりしてもよい。

【0143】

免疫原性を高めるために、抗原をキャリアタンパク質に結合させてもよい。これは、糖または炭水化物抗原が使用される組成物において特に有用である。

【0144】

キャリアタンパク質としては、細菌毒素またはトキソイド、例えばジフテリアトキソイドまたは破傷風トキソイドが挙げられるが、これらに限定されない。ＣＲＭ１９７ジフテリアトキソイドが使用されてもよい。他のキャリアポリペプチドとしては、Ｎ． ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質（欧州特許出願公開ＥＰ－Ａ－０３７２５０１）、合成ペプチド（欧州特許出願公開ＥＰ－Ａ－０３７８８８１およびＥＰ－Ａ－０４２７３４７）、熱ショックタンパク質（国際公開第ＷＯ９３／１７７１２およびＷＯ９４／０３２０８）、百日咳タンパク質（国際公開第ＷＯ ９８／５８６６８および欧州特許出願公開ＥＰ－Ａ－０４７１１７７）、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のタンパク質Ｄ（国際公開第ＷＯ ００／５６３６０）、サイトカイン（国際公開第ＷＯ ９１／０１１４６）、リンホカイン、ホルモン、成長因子、Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素ＡまたはＢ（国際公開第ＷＯ ００／６１７６１）、トランスフェリンなどの鉄取り込みタンパク質（国際公開第ＷＯ ０１／７２３３７）などが挙げられる。混合物がセリグラフＡおよびＣの両方からの莢膜サッカリドを含む場合、ＭｅｎＡサッカリド：ＭｅｎＣサッカリドの比（ｗ／ｗ）が１より大きい（例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１またはそれ以上）ことがあり得る。異なるサッカライドは、同じまたは異なるタイプのキャリアタンパク質にコンジュゲートされてもよい。任意の適切なコンジュゲーション反応が使用され、必要に応じて任意の適切なリンカーが使用され得る。

【0145】

開示されたワクチンを含む免疫原性組成物は、他の免疫調節剤と併用して投与されてもよい。例えば、本明細書に開示されるようなワクチンは、アジュバントを含んでもよい。アジュバントには、以下に記載するアジュバントの１種または２種以上が含まれるが、これらに限定されない。

ミネラル含有組成物

【0146】

本明細書に開示されるアジュバントとして使用するのに適したミネラル含有組成物には、アルミニウム塩およびカルシウム塩などのミネラル塩が含まれる。本明細書に開示される塩には、水酸化物（例えば、オキシ水酸化物）、リン酸塩（例えば、ヒドロキシリン酸塩、オルトリン酸塩）、硫酸塩などのミネラル塩、または異なるミネラル化合物の混合物（例えば、リン酸塩と水酸化物アジュバントの混合物（任意に過剰のリン酸塩を含む）など）が含まれ、化合物は任意の適切な形態（例えば、ゲル、結晶、非晶質など）をとる。ミネラル含有組成物はまた、金属塩の粒子として配合されてもよい（国際公開第ＷＯ００／２３１０５号）。

【0147】

アルミニウム塩は、Ａｌ^３＋ の用量が１用量あたり０．２～１．０ｍｇとなるようにワクチンに含まれてもよい。

【0148】

実施形態において、開示されるように使用するためのアルミニウムベースのアジュバントは、ミョウバン（硫酸アルミニウムカリウム（ＡｌＫ（ＳＯ_４）_２））、またはリン酸緩衝液中の抗原をミョウバンと混合し、次いで水酸化アンモニウムまたは水酸化ナトリウムのような塩基で滴定および沈殿させることによってｉｎ－ｓｉｔｕで形成されるようなミョウバン誘導体である。

【0149】

本発明のワクチン製剤に使用するための別のアルミニウムベースのアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバント（Ａｌ（ＯＨ）_３）または結晶性オキシ水酸化アルミニウム（ＡｌＯＯＨ）であり、これは優れた吸着剤であり、約５００ｍ^２ ／ｇの表面積を有する。あるいは、水酸化アルミニウムアジュバントのヒドロキシル基の一部または全部の代わりにリン酸基を含むリン酸アルミニウムアジュバント（ＡｌＰＯ_４）またはヒドロキシリン酸アルミニウムが提供される。実施形態において、本明細書で提供されるリン酸アルミニウムアジュバントは、非晶質であり、酸性、塩基性、および中性媒体に可溶性である。

【0150】

実施形態において、本明細書に開示されるアジュバントは、リン酸アルミニウムおよび水酸化アルミニウムの両方を含む。１つの態様において、アジュバントは、水酸化アルミニウムよりも多い量のリン酸アルミニウムを有し、例えば、水酸化アルミニウムに対するリン酸アルミニウムの重量比は、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１またはそれ以上である。より詳細には、ワクチン中のアルミニウム塩は、ワクチン１用量あたり０．４～１．０ｍｇ、またはワクチン１用量あたり０．４～０．８ｍｇ、またはワクチン１用量あたり０．５～０．７ｍｇ、またはワクチン１用量あたり約０．６ｍｇ存在する。

【0151】

一般に、アルミニウムベースのアジュバント（単数又は複数）、または水酸化アルミニウムに対するリン酸アルミニウムなどの複数のアルミニウムベースのアジュバントの比率は、抗原が所望のｐＨでアジュバントと反対の電荷を持つように、分子間の静電引力の最適化によって選択される。例えば、リン酸アルミニウムアジュバント（ｉｅｐ＝４）はｐＨ７．４ではリゾチームを吸着するが、アルブミンを吸着しない。アルブミンがターゲットであれば、水酸化アルミニウムアジュバントが選択されるであろう（すなわち、１１．４）。あるいは、水酸化アルミニウムをリン酸塩で前処理すると等電点が下がり、より塩基性の高い抗原に好ましいアジュバントになる。

オイル－エマルジョン

【0152】

アジュバントとして使用するのに適したオイル－エマルション組成物としては、ＭＦ５９（５％のスクアレン、０．５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）８０、および０．５％のＳＰＡＮ（登録商標）８５を、マイクロフルイダイザーを用いてサブミクロン粒子に製剤化したもの）などのスクアレン－水エマルションを挙げることができる。国際公開第ＷＯ９０／１４８３７号参照。ＭＦ５９は、ＦＬＵＡＤＴＭ（登録商標）インフルエンザウイルス３価サブユニットワクチンのアジュバントとして使用されている。

【0153】

組成物に使用するための特にアジュバントは、サブミクロン水中油型エマルション（ｓｕｂｍｉｃｒｏｎ ｏｉｌ－ｉｎ－ｗａｔｅｒ ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ）である。本明細書で使用するためのサブミクロン水中油型エマルションは、任意選択で様々な量のＭＴＰ－ＰＥを含むスクアレン／水エマルションでってもよく、例えば、水中油型エマルションは、４～５％ｗ／ｖのスクアレン、０．２５～１．０％ｗ／ｖのＴＷＥＥＮ（登録商標）８０（ポリオキシエルチレンソルビタンモノオレエート）、および／または０．２５～１．０％のＳＰＡＮ（登録商標）８５（ソルビタントリオレエート）、および任意でＮ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミニル－Ｌ－アラニン－２－（．β．－２’－ジパルミト－イル－ｓｎ－グリセロ－３－ヒドロキシホスホリルオキシ）－エチルアミン（Ｎ－ａｃｅｔｙｌｍｕｒａｍｙｌ－Ｌ－ａｌａｎｙｌ－Ｄ－ｉｓｏｇｌｕａｔｍｉｎｙｌ－Ｌ－ａｌａｎｉｎｅ－２－（．ｂｅｔａ．－２’－ｄｉｐａｌｍｉｔｏ－ ｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｈｕｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｏｘｙ）－ｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）（ＭＴＰ－ＰＥ）を含んでもよく、例えば、「ＭＦ５９」として知られるサブミクロン水中油型エマルション（国際公開第ＷＯ９０／１４８３７号；米国特許第６，２９９，８８４および６，４５１，３２５）が挙げられる。ＭＦ５９は、４～５％ｗ／ｖのスクアレン（例えば、４．３％）、０．２５～０．５％ｗ／ｖのＴＷＥＥＮ（登録商標）８０、および０．５％ ｗ／ｖのＳＰＡＮ（登録商標）８５を含み、任意で、モデル１１０Ｙマイクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ， Ｎｅｗｔｏｎ， Ｍａｓｓ．）などのマイクロフルイダイザーを使用してサブミクロン粒子に製剤化された様々な量のＭＴＰ－ＰＥを含む。例えば、ＭＴＰ－ＰＥは、約０～５００μｇ／用量、０～２５０μｇ／用量および０～１００μｇ／用量の量で存在し得る。本明細書中で使用される場合、用語「ＭＦ５９－０」は、ＭＴＰ－ＰＥを欠く上記サブミクロン水中油型エマルジョンを指し、一方、用語ＭＦ５９－ＭＴＰは、ＭＴＰ－ＰＥを含む製剤を示す。例えば、「ＭＦ５９－１００」は、１用量あたり１００．ｍｕ．ｇのＭＴＰ－ＰＥを含むなどである。本明細書で使用するための別のサブミクロン水中油型エマルションであるＭＦ６９は、４．３％ ｗ／ｖのスクアレン、０．２５％ ｗ／ｖのＴＷＥＥＮ（登録商標）８０、および０．７５％ ｗ／ｖのＳＰＡＮ（登録商標）８５、および任意にＭＴＰ－ＰＥを含有する。さらに別のサブミクロン水中油型エマルションとして、１０％のスクアレン、０．４％のＴＷＥＥＮ（登録商標）８０、５％のプルロニック（登録商標）ブロックポリマーＬ１２１、ｔｈｒ－ＭＤＰを含む、ＳＡＦとしても知られるＭＦ７５があり、これもマイクロ流体化してサブミクロンエマルションにしたものである。ＭＦ７５－ＭＴＰは、ＭＴＰを含むＭＦ７５製剤を示し、例えば、１用量あたり１００～４００ μｇのＭＴＰ－ＰＥが含まれる。

【0154】

本組成物中で使用するためのサブミクロン水中油型エマルション、その製造方法、およびムラミルペプチドなどの免疫刺激剤は、国際公開第ＷＯ９０／１４８３７号および米国特許第６，２９９，８８４号および第６，４５１，３２５号に詳細に記載されている。

【0155】

完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）もアジュバントとして使用してもよい。

サポニン製剤

【0156】

サポニン製剤もまた、アジュバントとして使用されてもよい。サポニンは、広範な植物種の樹皮、葉、茎、根、さらには花にさえ見出されるステロール配糖体およびトリテルペノイド配糖体の異種グループである。Ｑｕｉｌｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａの樹皮から単離されたサポニンは、アジュバントとして広く研究されている。サポニンはＳｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ（サルサパリラ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ））、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（ブライダルベール（ｂｒｉｄｅｓ ｖｅｉｌ））、およびＳａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ）（カスミソウ（ｓｏａｐ ｒｏｏｔ））からも商業的に入手できる。サポニンアジュバント製剤には、ＱＳ２１のような精製製剤のほか、ＩＳＣＯＭなどの脂質製剤が含まれる。

【0157】

サポニン組成物は、高速薄層クロマトグラフィー（ＨＰ－ＴＬＣ）および逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）を使用して精製されている。これらの技術を用いた特定の精製画分は、ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ－Ａ、ＱＨ－ＢおよびＱＨ－Ｃを含むことが同定されている。実施形態において、サポニンはＱＳ２１である。ＱＳ２１の製造方法は、米国特許第５，０５７，５４０号に開示されている。サポニン製剤はまた、コレステロールなどのステロールを含んでもよい（国際公開第ＷＯ９６／３３７３９号参照）。

【0158】

サポニンとコレステロールの組み合わせは、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれるユニークな粒子を形成するために使用されてもよい。ＩＳＣＯＭは通常、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンなどのリン脂質も含む。あらゆる公知のサポニンは、ＩＳＣＯＭ中で使用されてもよい。実施形態において、ＩＳＣＯＭは、Ｑｕｉｌ Ａ、ＱＨＡおよびＱＨＣのうちの１つ以上を含む。ＩＳＣＯＭは、欧州特許出願公開第ＥＰ０１０９９４２、国際公開第ＷＯ９６／１１７１１号および国際公開第ＷＯ９６／３３７３９号にさらに記載されている。任意選択で、ＩＳＣＯＭＳは（追加の）洗浄剤（単数又は複数）を含まなくてもよい。国際公開ＷＯ００／０７６２１号を参照のこと。

細菌または微生物誘導体

【0159】

本明細書に開示されるように使用するのに適したアジュバントには、以下のような細菌または微生物誘導体が含まれる：

【0160】

（１）腸内細菌リポ多糖（ＬＰ）の非毒性誘導体

【0161】

このような誘導体には、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）および３－Ｏ－脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が含まれる。３ｄＭＰＬは、４、５または６個のアシル化鎖を有する３脱－Ｏ－アシル化モノホスホリルリピドＡの混合物である。３ Ｄｅ－Ｏ－アシル化モノホスホリルリピドＡの１つの「小粒子」形態が欧州特許出願第ＥＰ ０ ６８９ ４５４に開示されている。このような３ｄＭＰＬの「小粒子」は、０．２２ミクロンの膜で無菌濾過できるほど小さい（欧州特許出願公開ＥＰ ０ ６８９ ４５４参照）。他の非毒性ＬＰＳ誘導体には、モノホスホリルリピドＡ模倣体、例えばアミノアルキルグルコサミニドホスフェート誘導体、例えばＲＣ－５２９などが含まれる。

【0162】

（２）リピドＡ誘導体

【0163】

リピドＡ誘導体には、ＯＭ－１７４のような大腸菌由来のリピドＡの誘導体が含まれる。

【0164】

（３）免疫刺激性オリゴヌクレオチド

【0165】

アジュバントとして使用するのに適した免疫刺激性オリゴヌクレオチドには、ＣｐＧモチーフ（メチル化されていないシトシンの後にグアノシンが続き、リン酸結合で連結された配列を含む）を含むヌクレオチド配列が含まれ得る。回文配列またはポリ（ｄＧ）配列を含む細菌の二本鎖ＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドも免疫刺激性であることが示されている。

【0166】

ＣｐＧは、ホスホロチオエート修飾などのヌクレオチド修飾／アナログを含んでいてもよく、二本鎖であっても一本鎖であってもよい。オプションとして、グアノシンは２’－デオキシ－７－デアザグアノシンのようなアナログで置換されていてもよい。

【0167】

ＣｐＧ配列は、モチーフＧＴＣＧＴＴまたはＴＴＣＧＴＴなどのＴＬＲ９に向けられていてもよい。ＣｐＧ配列は、ＣｐＧ－Ａ ＯＤＮのようにＴｈｌ免疫応答を誘導するために特異的であってもよいし、ＣｐＧ－Ｂ ＯＤＮのようにＢ細胞応答を誘導するために特異的であってもよい。実施形態では、ＣｐＧはＣｐＧ－Ａ ＯＤＮである。

【0168】

実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’末端が受容体認識のためにアクセス可能であるように構築されてもよい。任意選択で、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列は、それらの３’末端で結合して「イムノマー」を形成してもよい。

【0169】

（４）ＡＤＰリボシル化毒素およびその無毒化誘導体

【0170】

細菌ＡＤＰリボシル化毒素およびその無毒化誘導体は、アジュバントとして使用されてもよい。実施形態において、タンパク質は、大腸菌（すなわち、大腸菌熱不安定性エンテロトキシン「ＬＴ」）、コレラ（「ＣＴ」）、または百日咳（「ＰＴ」）由来であってもよい。解毒されたＡＤＰリボシル化毒素の粘膜アジュバントとしての使用は、国際公開第ＷＯ９５／１７２１１に記載されており、そして非経口アジュバントとしては国際公開第ＷＯ９８／４２３７５に記載されている。実施形態において、アジュバントは、ＬＴ－Ｋ６３、ＬＴ－Ｒ７２、およびＬＴＲ１９２Ｇなどの無毒化ＬＴ変異体である。

生体接着剤と粘膜接着剤（Ｂｉｏａｄｈｅｓｉｖｅｓ ａｎｄ Ｍｕｃｏａｄｈｅｓｉｖｅｓ）

【0171】

生体接着剤や粘膜粘接着剤もアジュバントとして使用されてもよい。適切な生体接着剤には、エステル化ヒアルロン酸ミクロスフェアーや、ポリアクリル酸、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖類、及びカルボキシメチルセルロースの架橋誘導体などの粘接着剤がある。キトサンおよびその誘導体もアジュバントとして使用できる。例えば、国際公開第ＷＯ９９／２７９６０号。

ムラミルペプチド

【0172】

アジュバントとして使用するのに適したムラミルペプチドの例としては、Ｎ－アセチル－ムラミル－Ｌ－スレオニル－Ｄ－イソグルタミン（ｔｈｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチル－ノルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン（ｎｏｒ－ＭＤＰ）、およびＮ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミニル－Ｌ－アラニン－２－（ｌ’－２’－ジパルミトイル－ｓ－ｎ－グリセロ－３－ヒドロキシホスホリルオキシ）－エチルアミンＭＴＰ－ＰＥ）を含む。

イミダゾキノリン化合物

【0173】

アジュバントとして使用するのに適したイミダゾキノリン化合物の例としては、イミキモドおよびその類似体が挙げられる（例えば、米国特許第４，６８９，３３８号、第５，３８９，６４０号、第５，２６８，３７６号、第４，９２９，６２４号、第５，２６６，５７５号、第５，３５２，７８４号、第５，４９４，９１６号、第５，４８２，９３６号、第５，３４６，９０５号、第５，３９５，９３７号、第５，２３８，９４４号、および第５，５２５，６１２号を参照のこと）。

チオセミカルバゾン化合物

【0174】

アジュバントとして使用するのに適したチオセミカルバゾン化合物、ならびに化合物の製剤化方法、製造方法、およびスクリーニング方法の例は、すべて国際公開第Ｗ００４／６０３０８号に記載されているものが含まれる。チオセミカルバゾンは、ＴＮＦ－αなどのサイトカイン産生のためのヒト末梢血単核細胞の刺激に特に有効である。

トリプタントリン化合物

【0175】

本明細書で開示するアジュバントとして使用するのに適したトリプタントリン化合物の例、ならびに化合物の製剤化方法、製造方法、およびスクリーニング方法には、すべて国際公開第ＷＯ０４／６４７５９号に記載されているものが含まれる。トリプタントリン化合物は、ＴＮＦ－αなどのサイトカイン産生のためのヒト末梢血単核球の刺激に特に有効である。

【0176】

上記で同定されたアジュバントの１つまたは複数の側面の組合せを、本明細書に開示されるような組成物に適用されてもよい。例えば、以下のアジュバント組成物を使用することを使用してもよい：

【0177】

（１）サポニンと水中油型エマルジョン（ＷＯ９９／１１２４１）；（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性のＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）（ＷＯ９４／００１５３を参照のこと）；（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；（４）サポニン（例えば、、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ－１２（任意に＋ステロール）（ＷＯ９８／５７６５９）；（５）３ｄＭＰＬと、例えばＱＳ２１および／または水中油型エマルションとの組み合わせ（欧州特許出願０８３５３１８、０７３５８９８および０７６１２３１を参照のこと）；（６）１０％スクアラン（Ｓｑｕａｌａｎｅ）、０．４％ ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０、５％プルロニック（登録商標）ブロックポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ－ＭＤＰを含むＳＡＦであり、マイクロ流体でサブミクロンエマルジョンにするか、ボルテックスで大きな粒子径のエマルジョンにする。（７）２％ スクアレン（Ｓｑｕａｌｅｎｅ）、０．２％ ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０、および、モノホスホリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤＥＴＯＸ（商標））からなる群からの１種以上の細菌細胞壁成分を含む、ＲＩＢＩ（商標）アジュバントシステム（ＲＡＳ）、（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）；および（８）１種以上のミネラル塩（アルミニウム塩など）＋ＬＰＳの非毒性誘導体（３ｄＰＭＬなど）。（９）１種以上のミネラル塩（例えばアルミニウム塩など）＋１種以上の免疫刺激性オリゴヌクレオチド（例えばＣｐＧモチーフを含むヌクレオチド配列など）＋１種以上の無毒化ＡＤＰリボシル化毒素（例えばＬＴ－Ｋ６３およびＬＴ－Ｒ７２など）、（１０）イヌリンおよび酢酸イヌリン製剤（例えば、国際公開第ＷＯ ２０１３／１１００５０を参照のこと（その全体が本明細書に組み込まれる））。

その他の抗原

【0178】

本明細書に開示される組成物は、任意に、ＡＳＦウイルスタンパク質に由来しない１つまたは複数の追加のポリペプチド抗原を含んでもよい。このような抗原には、細菌、ウイルス、または寄生虫抗原が含まれる。

【0179】

いくつかの実施形態では、ＡＳＦウイルス抗原は、オルソミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよびムンプス）、モービリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、および水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）、化膿レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群レンサ球菌）、モラクセラ・カタラリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、クロストリジウム・テタニ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）（破傷風）、コリネアクテリウム・ジフテリア（Ｃｏｒｎｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）（ジフテリア）、ヘモフィルス・インフルエンザ菌Ｂ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ）（Ｈｉｂ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、ストレプトコッカス・アガラクティエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群レンサ球菌）および大腸菌などの細菌またはウイルス由来の抗原（これらに限定されない）を含む１つまたは複数の抗原と組み合わされる。

【0180】

他の実施形態では、ＡＳＦウイルス抗原を、これらに限定されないが、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）、化膿レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群レンサ球菌）、モラクセラ・カタラリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ）、クロストリジウム・テタニ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）（破傷風）、コリネアクテリウム・ジフテリア（Ｃｏｒｎｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）（ジフテリア）、ヘモフィルス・インフルエンザ菌Ｂ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ）（Ｈｉｂ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、肺炎桿菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、ストレプトコッカス・アガラクティエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群レンサ球菌）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）、肺炎クラミジア（Ｃｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、オルソミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよびムンプス）、モービリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）を含む１つまたは複数の抗原と組み合わされる。

【0181】

他の実施形態では、ＡＳＦウイルス抗原は、下痢性疾患を引き起こす病原体から個人を保護するように設計されたワクチンに有用な１つ以上の抗原と組み合わされる。このような抗原としては、ロタウイルス、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｐｐ．）、腸管毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）、およびカンピロバクター・ジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ）抗原が挙げられるが、これらに限定されない。実施形態において、１つ以上のノロウイルス抗原は、Ｎｏｒｗａｌｋウイルス、スノーマウンテンウイルス（Ｓｎｏｗ Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｒｕｓ）、および／またはハワイウイルス（Ｈａｗａｉｉ Ｖｉｒｕｓ）に由来し得、免疫原性組成物においてロタウイルス抗原と組み合わされる。

【0182】

本組成物と共に使用を見出すことができる抗原としては、以下に規定する１つ以上の抗原、または以下に規定する１つ以上の病原体に由来する抗原が挙げられるが、これらに限定されない：

細菌抗原

【0183】

本明細書に開示される好適な細菌抗原には、タンパク質、多糖類、リポ多糖類、および外膜小胞が含まれ、これらは単離され、精製され、または細菌に由来するものであってもよい。さらに、細菌抗原には、細菌溶解物および不活化細菌製剤を含んでもよい。細菌抗原は、組換え発現によって産生されてもよい。細菌抗原は、そのライフサイクルの少なくとも一つのステージにおいて細菌の表面に露出し得るエピトープを含む。細菌抗原は、複数の血清型にわたって保存されている場合がある。細菌抗原には、以下に特定される特異的抗原の例と同様に、以下に規定される細菌の１つ以上に由来する抗原が含まれる。

【0184】

髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）：髄膜炎抗原は、Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙ、および／またはＢなどのＮ． ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ血清群から精製または由来するタンパク質（参考文献１～７で同定されたものなど）、サッカライド類（ポリサッカライト、オリゴサッカライドまたはリポサッカライドを含む）、または外膜小胞を含んでもよい。髄膜炎タンパク質抗原は、接着、自己輸送体、毒素、鉄獲得タンパク質、および膜関連タンパク質（例えば、インテグラル外膜タンパク質）から選択されてもよい。

【0185】

肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）：肺炎球菌抗原は、肺炎球菌由来の糖（ポリサッカライトまたはオリゴサッカライドを含む）および／またはタンパク質を含んでもよい。糖抗原は、血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆから選択されてもよい。タンパク質抗原は、国際公開第ＷＯ９８／１８９３１号、国際公開第ＷＯ９８／１８９３０号、米国特許第６，６９９，７０３号、米国特許第６，８００，７４４号、国際公開第ＷＯ９７／４３３０３号、および国際公開第ＷＯ９７／３７０２６号で同定されたタンパク質から選択されてもよい。肺炎球菌のタンパク質は、ポリヒスチジントリアドファミリー（ＰｈｔＸ）、コリン結合タンパク質ファミリー（ＣｂｐＸ）、ＣｂｐＸ切断体、ＬｙｔＸファミリー、ＬｙｔＸ切断体、ＣｂｐＸ切断体－ＬｙｔＸ切断体キメラタンパク質、ニューモリシン（Ｐｌｙ）、ＰｓｐＡ、ＰｓａＡ、Ｓｐｌ２８、ＳｐｌＯｌ、Ｓｐｌ３０、Ｓｐｌ２５またはＳｐｌ３３から選択されてもよい。

【0186】

化膿レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群レンサ球菌）：Ａ群レンサ球菌抗原は、国際公開第ＷＯ ０２／３４７７１号または国際公開第ＷＯ ２００５／０３２５８２号で同定されたタンパク質（ＧＡＳ ４０を含む）、ＧＡＳ Ｍタンパク質のフラグメントの融合体（国際公開第ＷＯ ０２／０９４８５１号に記載されたものを含む）、フィブロネクチン結合タンパク質（Ｓｆｂｌ）、レンサ球菌ヘム関連タンパク質（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ ｈｅｍｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ）（Ｓｈｐ）、およびストレプトライシンＳ（ＳａｇＡ）を含んでもよい。

【0187】

モラクセラ・カタラリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）：モラクセラ抗原には、国際公開第ＷＯ ０２／１８５９５号および国際公開第ＷＯ ９９／５８５６２号で同定された抗原、外膜タンパク質抗原（ＨＭＷ－ＯＭＰ）、Ｃ－抗原、および／またはＬＰＳが含まれる。

【0188】

百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）：百日咳抗原には、百日咳菌由来のペチュシスホロトキシン（ｐｅｔｕｓｓｉｓ ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ）（ＰＴ）および糸状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）が含まれ、任意にペルタクチンおよび／またはアグルチノゲン２および３抗原との組み合わせも含まれる。

【0189】

黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）：黄色ブドウ球菌抗原には、黄色ブドウ球菌５型および８型莢膜多糖が含まれ、任意に、無毒性の組換え緑膿菌エキソトキシンＡ（例えばＳＴＡＰＨＶＡＸ（商標））、又は表面タンパク質、インベーシン（ロイコシジン、キナーゼ、ヒアルロニダーゼ）、食細胞のかみ込みを阻害する表面因子（カプセル、プロテインＡ）、カロテノイド、カタラーゼ産生、プロテインＡ、コアグラーゼ、凝固因子、および／または真核細胞膜を溶解する膜障害性毒素（任意に無毒化）（ヘモリシン、ロイコトキシン、ロイコシジン）に由来する抗原と任意に結合している。

【0190】

表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ）：表皮ブドウ球菌抗原にはスライム関連抗原（ＳＡＡ）が含まれる。

【0191】

クロストリジウム・テタニ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）（破傷風）：破傷風抗原は、破傷風トキソイド（ＴＴ）を含み、本開示の組成物と組み合わせて／コンジュゲートして、キャリアタンパク質として使用されてもよい。

【0192】

コリネアクテリウム・ジフテリア（Ｃｏｒｎｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）（ジフテリア）：ジフテリア抗原には、ＣＲＭ_１９７などの無毒化されたものを含むジフテリア毒素が含まれる。さらに、ＡＤＰリボシル化を調節、阻害または関連させることができる抗原は、本開示の組成物との併用／共投与／コンジュゲーションに企図される。ジフテリアトキソイドは、キャリアタンパク質として使用されてもよい。

【0193】

インフルエンザ菌Ｂ型（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ）（Ｈｉｂ）：Ｈｉｂ抗原にはＨｉｂサッカライド抗原（Ｈｉｂ ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ａｎｔｉｇｅｎ）が含まれる。

【0194】

緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）：緑膿菌抗原には、エンドトキシンＡ、Ｗｚｚタンパク質、緑膿菌ＬＰＳ、より詳細にはＰＡＯ１（Ｏ５血清型）から単離されたＬＰＳ、および／または外膜タンパク質（外膜タンパク質Ｆ（ＯｐｒＦ）を含む）が含まれる。

【0195】

レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）。細菌抗原はレジオネラ・ニューモフィラ由来であってもよい。

【0196】

ストレプトコッカス・アガラクティエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群レンサ球菌）：Ｂ群レンサ球菌抗原には、国際公開第ＷＯ ０２／３４７７１号、国際公開第ＷＯ ０３／０９３３０６号、国際公開第ＷＯ ０４／０４１１５７号、または国際公開第ＷＯ ２００５／００２６１９号で同定されたタンパク質または糖鎖抗原が含まれる（タンパク質ＧＢＳ ８０、ＧＢＳ １０４、ＧＢＳ ２７６およびＧＢＳ ３２２を含み、血清型ｌａ、ｌｂ、ｌａ／ｃ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩおよびＶＩＩＩ由来の糖鎖抗原を含む）。

【0197】

淋菌（Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）：淋菌抗原には、ＰｏｒＢなどのＰｏｒ（またはポリン）タンパク質、ＴｂｐＡおよびＴｂｐＢなどの転移結合タンパク質、オパシティタンパク質（Ｏｐａなど）、還元修飾可能タンパク質（Ｒｍｐ）、および外膜小胞（ＯＭＶ）調製物が含まれる（例えば、国際公開第ＷＯ９９／２４５７８号、国際公開第ＷＯ９９／３６５４４号、国際公開第ＷＯ９９／５７２８０号、国際公開第ＷＯ０２／０７９２４３号を参照のこと）。

【0198】

クラミジア・トラコマティス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）：クラミジア・トラコマティス抗原には、血清型Ａ、Ｂ、ＢａおよびＣ（失明の原因であるトラコーマの病原体）、血清型Ｌ１、Ｌ２およびＬ３（鼠径リンパ肉芽腫と関連する）、ならびに血清型Ｄ－Ｋに由来する抗原が含まれる。クラミジア・トラコマ抗原はまた、国際公開第ＷＯ ００／３７４９４、国際公開第ＷＯ ０３／０４９７６２、国際公開第ＷＯ ０３／０６８８１１、または国際公開第ＷＯ ０５／００２６１９で同定された抗原を含むものであってよく、ＰｅｐＡ（ＣＴ０４５）、ＬｃｒＥ（ＣＴ０８９）、ＡｒｔＪ（ＣＴ３８１）、ＤｎａＫ（ＣＴ３９６）、ＣＴ３９８、ＯｍｐＨ－ｌｉｋｅ（ＣＴ２４２）、Ｌ７／Ｌ１２（ＣＴ３１６）、ＯｍｃＡ（ＣＴ４４４）、ＡｔｏｓＳ（ＣＴ４６７）、ＣＴ５４７、Ｅｎｏ（ＣＴ５８７）、ＨｒｔＡ（ＣＴ８２３）、およびＭｕｒＧ（ＣＴ７６１）を含む。

【0199】

トレポレーナ・パリダム（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ）（梅毒）：梅毒抗原にはＴｍｐＡ抗原が含まれる。

【0200】

軟性下疳菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ）（下疳の原因）：デュクレイ抗原は外膜タンパク質（ＤｓｒＡ）を含む。

【0201】

エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）またはエンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）：抗原には、米国特許第６，７５６，３６１号に提供されているトリサッカライドリピートまたは他のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ由来の抗原が含まれる。

【0202】

ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）：Ｈ．ピロリ抗原には、Ｃａｇ、Ｖａｃ、Ｎａｐ、ＨｏｐＸ、ＨｏｐＹおよび／またはウレアーゼ抗原が含まれる。

【0203】

スタフィロコッカス・サプロフィチカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ）：抗原には、Ｓ． サプロフィチカス抗原の１６０ｋＤａヘマグルチニンが含まれる。

【0204】

エルシニア・エンテロコリチカ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）抗原には、ＬＰＳが含まれる。

【0205】

大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）：大腸菌抗原は、腸管毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）、腸管凝集性大腸菌（ＥＡｇｇＥＣ）、びまん性付着性大腸菌（ｄｉｆｆｕｓｅｌｙ ａｄｈｅｒｉｎｇ Ｅ． ｃｏｌｉ）（ＤＡＥＣ）、腸管病原性大腸菌（ＥＰＥＣ）、および／または腸管出血性大腸菌（ＥＨＥＣ）に由来するものであってもよい。

【0206】

バチルス・アントラシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）（炭疽菌）：Ｂ．アントラシス抗原は、任意に無毒化され、Ａ成分（致死因子（ＬＦ）および浮腫因子（ＥＦ））から選択されてもよく、これらの両方は、防御抗原（ＰＡ）として知られる共通のＢ成分を共有してもよい。

【0207】

エルシニア・ペスチス（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ）（ペスト）：ペスト抗原にはＦｌ莢膜抗原が含まれる。

【0208】

結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）：結核菌抗原には、リポタンパク質、ＬＰＳ、ＢＣＧ抗原、任意にカチオン性脂質ベシクルに製剤化された抗原８５Ｂ（Ａｇ８５Ｂ）および／またはＥＳＡＴ－６の融合タンパク質、結核菌（Ｍｔｂ）イソクエン酸デヒドロゲナーゼ関連抗原、および／またはＭＰＴ５１抗原が含まれる。

【0209】

リケッチア：抗原には、外膜タンパク質Ａおよび／またはＢ（ＯｍｐＢ）を含む外膜タンパク質が含まれる。

【0210】

リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）。細菌抗原はリステリア菌由来であってもよい。

【0211】

クラミジア・ニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）：抗原には、国際公開第ＷＯ ０２／０２６０６号で同定されたものが含まれる。

【0212】

コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ）：抗原としては、プロテイナーゼ抗原、ＬＰＳ、特にビブリオコレラＩＩのリポ多糖、０１イナバＯ特異的多糖、Ｖ．コレラ０１３９、ＩＥＭ１０８ワクチンの抗原、および／またはＺｏｎｕｌａ ｏｃｃｌｕｄｅｎｓ毒素（Ｚｏｔ）が挙げられる。

【0213】

チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ）（腸チフス）：抗原には、結合体（Ｖｉ、すなわちｖａｘ－ＴｙＶｉ）を含む莢膜多糖が含まれる。

【0214】

ボレリア・バーグドルフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）（ライム病）：抗原には、リポ蛋白質（ＯｓｐＡ、ＯｓｐＢ、Ｏｓｐ ＣおよびＯｓｐ Ｄなど）、ＯｓｐＥ関連蛋白質（Ｅｒｐｓ）などの他の表面蛋白質、デコリン結合蛋白質（ＤｂｐＡなど）、およびＰ３９およびＰ１３ ＶｌｓＥ抗原変異蛋白質に関連する抗原などの抗原変異ＶＩ蛋白質が含まれる。

【0215】

ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）：抗原にはＰ． ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ外膜タンパク質（ＯＭＰ）が含まれる。

【0216】

クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）：抗原には、ＯＭＰ Ａを含むＯＭＰ、または任意に破傷風トキソイドと結合した多糖が含まれる。

【0217】

本開示のさらなる細菌抗原は、上記のいずれかの莢膜抗原、多糖類抗原またはタンパク質抗原であり得る。さらなる細菌抗原はまた、外膜小胞（ＯＭＶ）製剤を含むものであってもよい。さらに、抗原は、前述の細菌のいずれかの生、弱毒化、および／または精製バージョンを含む。本開示の抗原は、グラム陰性細菌またはグラム陽性細菌に由来するものであってもよい。本開示の抗原は、好気性細菌または嫌気性細菌に由来するものであってもよい。

【0218】

さらに、上記の細菌由来のサッカライド（ポリサッカライド、ＬＰＳ、ＬＯＳまたはオリゴサッカライド）のいずれかを、担体タンパク質（例えばＣＲＭ_１９７）などの別の薬剤または抗原に結合させてもよい。このようなコンジュゲーションは、米国特許第５，３６０，８９７号に記載されているように、サッカライド上のカルボニル部分とタンパク質上のアミノ基との還元的アミノ化によって直接コンジュゲーションしてもよい。あるいは、サッカライドは、例えば、スクシンアミドまたは他の連結を有するリンカーを介してコンジュゲートされてもよい。

ウイルス抗原

【0219】

開示されるような組成物において使用するのに適したウイルス抗原には、サブユニット製剤、ウイルスから精製、単離もしくはそれに由来し得るウイルスタンパク質、およびウイルス様粒子（ＶＬＰ）が含まれる。ウイルス抗原は、細胞培養または他の基質上で増殖したウイルスに由来してもよい。あるいは、ウイルス抗原は組換え発現されてもよい。ウイルス抗原は、そのライフサイクルの少なくとも一つのステージにおいてウイルス表面に露出するエピトープを含む。ウイルス抗原は、複数の血清型または単離株にわたって保存されている場合がある。ウイルス抗原には、以下に特定される特異的抗原例と同様に、以下に規定されるウイルスの１つ以上に由来する抗原が含まれる。

【0220】

オルソミクソウイルス：オルソミクソウイルス抗原は、インフルエンザＡ、Ｂ及びＣなどのオルソミクソウイルスに由来するものであってもよい。オルソミクソウイルス抗原は、ヘマグルチニン（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、核タンパク質（ＮＰ）、マトリックスタンパク質（Ｍ１）、膜タンパク質（Ｍ２）、転写酵素成分（ＰＢ１、ＰＢ２およびＰＡ）のうちの１つまたは複数を含むウイルスタンパク質のうちの１つまたは複数から選択されてもよい。実施形態において、抗原はＨＡおよびＮＡを含む。

【0221】

インフルエンザ抗原は、流行期間（一年）のインフルエンザ株に由来してもよい。あるいは、インフルエンザ抗原は、パンデミックを引き起こす可能性のある株（すなわち、現在流通している株のヘマグルチニンと比較して新しいヘマグルチニンを有するインフルエンザ株、または鳥類で病原性を有し、ヒト集団で水平感染する可能性のあるインフルエンザ株、またはヒトに対して病原性を有するインフルエンザ株）に由来してもよい。

【0222】

パラミクソウイルス科ウイルス：ウイルス抗原は、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ）およびモービリウイルス（麻疹）などのパラミクソウイルス科ウイルスに由来してもよい。

【0223】

ニューモウイルス：ウイルス抗原は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ウシ呼吸器合胞体ウイルス、マウスの肺炎ウイルス、およびトルコ鼻気管炎ウイルスなどのニューモウイルスに由来してもよい。実施形態において、ニューモウイルスはＲＳＶである。ニューモウイルス抗原は、以下のタンパク質：表面タンパク質融合体（Ｆ）、糖タンパク質（Ｇ）および小疎水性タンパク質（ＳＨ）、マトリックスタンパク質ＭおよびＭ２、ヌクレオカプシドタンパク質Ｎ、ＰおよびＬ、ならびに非構造タンパク質ＮＳ１およびＮＳ２を含む、の１つ以上から選択され得る。ニューモウイルス抗原は、Ｆ、ＧおよびＭを含み得る。ニューモウイルス抗原はまた、キメラウイルスに配合されるか、またはキメラウイルスに由来してもよい。例えば、キメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶとＰＩＶの両方の構成要素を含んでいてもよい。

【0224】

パラミクソウイルス：ウイルス抗原は、パラインフルエンザウイルス１～４型（ＰＩＶ）、ムンプス（Ｍｕｍｐｓ）、センダイウイルス、シミアンウイルス５、ウシパラインフルエンザウイルスおよびニューカッスル病ウイルスなどのパラミクソウイルスに由来してもよい。実施形態において、パラミクソウイルスはＰＩＶまたはムンプスである。パラミクソウイルス抗原は、以下のタンパク質：ヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）、融合タンパク質ＦｌおよびＦ２、核タンパク質（ＮＰ）、リンタンパク質（Ｐ）、ラージタンパク質（Ｌ）、およびマトリックスタンパク質（Ｍ）のうちの１つ以上から選択されてもよい。パラミクソウイルスタンパク質は、ＨＮ、ＦｌおよびＦ２を含み得る。パラミクソウイルス抗原はまた、キメラウイルスに配合されるか、またはキメラウイルスに由来し得る。例えば、キメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶとＰＩＶの両方の構成要素を含んでいてもよい。市販のムンプスワクチンには、弱毒生ムンプスウイルスが含まれ、一価または麻疹・風疹ワクチン（ＭＭＲ）と併用される。

【0225】

モービリウイルス：ウイルス抗原は、麻疹のようなモービリウイルスに由来してもよい。モービリウイルス抗原は、以下のタンパク質：ヘマグルチニン（Ｈ）、糖タンパク質（Ｇ）、融合因子（Ｆ）、ラージタンパク質（Ｌ）、核タンパク質（ＮＰ）、ポリメラーゼホスホタンパク質（Ｐ）、およびマトリックス（Ｍ）の１つ以上から選択されてもよい。商業的に入手可能な麻疹ワクチンには、弱毒生麻疹ウイルスが含まれ、通常、ムンプスおよび風疹（ＭＭＲ）と併用される。

【0226】

ピコルナウイルス：ウイルス抗原は、ピコルナウイルス、例えば、エンテロウイルス、ライノウイルス、ヘパルナウイルス（Ｈｅｐａｒｎａｖｉｒｕｓ）、カルジオウイルスおよびアフタウイルス（Ａｐｈｔｈｏｖｉｒｕｓｅｓ）に由来していてもよい。ポリオウイルスなどのエンテロウイルス由来の抗原を用いてもよい。

【0227】

エンテロウイルス：ウイルス抗原は、ポリオウイルス１型、２型または３型、コクサッキーＡウイルス１型～２２型および２４型、コクサッキーＢウイルス１型～６型、エコーウイルス（ＥＣＨＯ）ウイルス１型～９型、１１型～２７型および２９型～３４型ならびにエンテロウイルス６８型～７１型などのエンテロウイルスに由来してもよい。実施形態において、エンテロウイルスはポリオウイルスであってもよい。エンテロウイルス抗原は、以下のカプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３およびＶＰ４のうちの１つ以上を含み得る。市販のポリオワクチンには、不活化ポリオワクチン（ＩＰＶ）および経口ポリオウイルスワクチン（ＯＰＶ）が含まれる。

【0228】

ヘパルナウイルス（Ｈｅｐａｒｎａｖｉｒｕｓ）：ウイルス抗原は、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）などのヘパルナウイルス由来であってもよい。市販のＨＡＶワクチンには不活化ＨＡＶワクチンを含む。

【0229】

トガウイルス：ウイルス抗原は、ルビウイルス、アルファウイルス、またはアルテリウイルスなどのトガウイルスに由来してもよい。風疹ウイルスのようなルビウイルス由来の抗原を用いてもよい。トガウイルス抗原は、Ｅｌ、Ｅ２、Ｅ３、Ｃ、ＮＳＰ－１、ＮＳＰＯ－２、ＮＳＰ－３またはＮＳＰ－４から選択され得る。トガウイルス抗原には、Ｅｌ、Ｅ２またはＥ３が含まれる。商業的に入手可能な風疹ワクチンには、生きた低温適応性ウイルス（ｃｏｌｄ－ａｄａｐｔｅｄ ｖｉｒｕｓ）が含まれ、典型的には、ムンプスおよび麻疹ワクチン（ＭＭＲ）と併用される。

【0230】

フラビウイルス：ウイルス抗原は、フラビウイルス、例えばダニ媒介性脳炎（ＴＢＥ）、デング熱（１型、２型、３型または４型）、黄熱、日本脳炎、西ナイル脳炎、セントルイス脳炎、ロシア春夏脳炎、ポワッサン脳炎に由来していてもよい。フラビウイルス抗原は、ＰｒＭ、Ｍ、Ｃ、Ｅ、ＮＳ－１、ＮＳ－２ａ、ＮＳ２ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４ｂ、およびＮＳ５から選択されてもよい。フラビウイルス抗原は、ＰｒＭ、ＭおよびＥを含んでもよい。市販のＴＢＥワクチンには、不活化ウイルスワクチンが含まれる。

【0231】

ペスティウイルス：ウイルス抗原は、ペスチウイルス、例えばウシウイルス性下痢症（ＢＶＤＶ）、古典的豚熱（ＣＳＦＶ）またはボーダー病（ＢＤＶ）に由来してもよい。

【0232】

ヘパドナウイルス（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｕｓ）：ウイルス抗原は、Ｂ型肝炎ウイルスなどのヘパドナウイルスに由来してもよい。ヘパドナウイルス抗原は、表面抗原（Ｌ、ＭおよびＳ）、コア抗原（ＨＢｃ、ＨＢｅ）から選択されてもよい。市販のＨＢＶワクチンには、表面抗原Ｓタンパク質を含むサブユニットワクチンが含まれる。

【0233】

Ｃ型肝炎ウイルス：ウイルス抗原は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）由来であってもよい。ＨＣＶ抗原は、Ｅｌ、Ｅ２、Ｅ１／Ｅ２、ＮＳ３４５ポリタンパク質、ＮＳ３４５－コアポリタンパク質、コア、および／または非構造領域からのペプチドの１つ以上から選択されてもよい。

【0234】

ラブドウイルス：ウイルス抗原は、リッサウイルス（狂犬病ウイルス）およびベシクロウイルス（ＶＳＶ）などのラブドウイルスに由来してもよい。ラブドウイルス抗原は、糖タンパク質（Ｇ）、核タンパク質（Ｎ）、ラージタンパク質（Ｌ）、非構造タンパク質（ＮＳ）から選択され得る。市販の狂犬病ウイルスワクチンは、ヒト二倍体細胞またはアカゲザル胎児肺細胞で増殖させた殺ウイルスを含む。

【0235】

カリシウイルス科（Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ）；ウイルス抗原は、ノーウォークウイルスや、ハワイウイルスやスノーマウンテンウイルスなどのノーウォーク様ウイルスなどのカリシウイルス科（Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ）に由来してもよい。

【0236】

コロナウイルス：ウイルス抗原は、コロナウイルス、ＳＡＲＳ、ヒト呼吸器コロナウイルス、鳥伝染性気管支炎（ＩＢＶ）、マウス肝炎ウイルス（ＭＨＶ）、および豚伝染性胃腸炎ウイルス（ＴＧＥＶ）に由来してもよい。コロナウイルス抗原は、スパイク（Ｓ）、エンベロープ（Ｅ）、マトリックス（Ｍ）、ヌクレオカプシド（Ｎ）、およびヘマグルチニン－エステラーゼ糖タンパク質（ＨＥ）から選択され得る。実施形態において、コロナウイルス抗原はＳＡＲＳウイルス由来である。ＳＡＲＳウイルス抗原は、国際公開第ＷＯ ０４／９２３６０号；に記載されている。

【0237】

レトロウイルス：ウイルス抗原は、オンコウイルス、レンチウイルスまたはスプーマウイルスなどのレトロウイルスに由来してもよい。オンコウイルス抗原は、ＨＴＬＶ－１、ＨＴＬＶ－２またはＨＴＬＶ－５に由来し得る。レンチウイルス抗原は、ＨＩＶ－１またはＨＩＶ－２に由来し得る。レトロウイルス抗原は、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、ｔａｘ、ｔａｔ、ｒｅｘ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、ｖｐｕ、およびｖｐｒから選択され得る。ＨＩＶ抗原は、ｇａｇ（ｐ２４ｇａｇおよびｐ５５ｇａｇ）、ｅｎｖ（ｇｐｌ６０およびｇｐ４１）、ｐｏｌ、ｔａｔ、ｎｅｆ、ｒｅｖ、ｖｐｕ、ミニタンパク質、（例えば、ｐ５５ｇａｇおよびｇｐｌ４０ｖ削除）から選択されてもよい。ＨＩＶ抗原は、以下の株の１つ以上に由来してもよい：ＨｌＶ_ＩＩＩｂ、ＨＩＶ_ＳＦ２、ＨＩＶ_ＬＡＶ、ＨＩＶ_ＬＡＩ、ＨＩＶ_ＭＮ、ＨＩＶ－１_{ＣＭ２３５}、ＨＩＶ－１_ＵＳ４。

【0238】

レオウイルス：ウイルス抗原は、オルソレオウイルス、ロタウイルス、オービウイルス、またはコルチウイルスなどのレオウイルスに由来してもよい。レオウイルス抗原は、構造タンパク質λ１、λ２、λ３、μ１、μ２、σ１、σ２、もしくはσ３、または非構造タンパク質σＮＳ、μＮＳもしくはσ１から選択されてもよい。レオウイルス抗原は、ロタウイルス由来であってもよい。ロタウイルス抗原は、ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４（または切断産物ＶＰ５およびＶＰ８）、ＮＳＰ１、ＶＰ６、ＮＳＰ３、ＮＳＰ２、ＶＰ７、ＮＳＰ４、またはＮＳＰ５から選択されてもよい。ロタウイルス抗原は、ＶＰ４（または切断産物ＶＰ５およびＶＰ８）、およびＶＰ７を含んでもよい。例えば、国際公開第ＷＯ ２００５／０２１０３３号、国際公開第ＷＯ ２００３／０７２７１６号、国際公開第ＷＯ ２００２／１１５４０号、国際公開第ＷＯ ２００１／１２７９７号、国際公開第ＷＯ ０１／０８４９５号、国際公開第ＷＯ ００／２６３８０号、国際公開第ＷＯ ０２／０３６１７２号を参照されたい（その全体が参照により本書に組み込まれる）。

【0239】

パルボウイルス：ウイルス抗原は、パルボウイルスＢｌ９などのパルボウイルスに由来してもよい。パルボウイルス抗原は、ＶＰ－１、ＶＰ－２、ＶＰ－３、ＮＳ－１およびＮＳ－２から選択され得る。実施形態において、パルボウイルス抗原は、カプシドタンパク質ＶＰ－２である。

【0240】

デルタ肝炎ウイルス（ＨＤＶ）：ウイルス抗原は、ＨＤＶ由来、特にＨＤＶ由来のデルタ抗原であってもよい（例えば、米国特許第５，３７８，８１４号参照）。

【0241】

Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）：ウイルス抗原はＨＥＶ由来であってもよい。

【0242】

Ｇ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）：ウイルス抗原は、ＨＧＶに由来してもよい。

【0243】

ヒトヘルペスウイルス：ウイルス抗原は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ６）、ヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ７）、およびヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ８）などのヒトヘルペスウイルスに由来してもよい。ヒトヘルペスウイルス抗原は、即時型初期タンパク質（α）、初期タンパク質（β）、および後期タンパク質（γ）から選択されてもよい。ＨＳＶ抗原は、ＨＳＶ－１株またはＨＳＶ－２株に由来し得る。ＨＳＶ抗原は、糖タンパク質ｇＢ、ｇＣ、ｇＤおよびｇＨ、融合タンパク質（ｇＢ）、または免疫逃避タンパク質（ｇＣ、ｇＥ、またはｇｌ）から選択されてもよい。ＶＺＶ抗原は、コア、ヌクレオカプシド、テグメント、またはエンベロープタンパク質から選択されてもよい。弱毒ＶＺＶワクチンは市販されている。ＥＢＶ抗原は、初期抗原（ＥＡ）タンパク質、ウイルスカプシド抗原（ＶＣＡ）、および膜抗原（ＭＡ）の糖タンパク質から選択されてもよい。ＣＭＶ抗原は、カプシドタンパク質、エンベロープ糖タンパク質（例えばｇＢおよびｇＨなど）、およびテグメントタンパク質から選択されてもよい。

【0244】

パポバウイルス：抗原は、パピローマウイルスおよびポリオマウイルスなどのパポバウイルスに由来してもよい。パピローマウイルスには、ＨＰＶ血清型１、２、４、５、６、８、１１、１３、１６、１８、３１、３３、３５、３９、４１、４２、４７、５１、５７、５８、６３および６５が含まれる。実施形態において、ＨＰＶ抗原は血清型６、１１、１６または１８に由来する。ＨＰＶ抗原は、カプシドタンパク質（ＬＩ）および（Ｌ２）、またはＥ１～Ｅ７、またはそれらの融合体を含んでもよい。ポリオーマウイルス（Ｐｏｌｙｏｍｙａｖｉｒｕｓ）は、ＢＫウイルスおよびＪＫウイルスが含まれる。ポリオーマウイルス抗原は、ＶＰ１、ＶＰ２またはＶＰ３から選択されてもよい。

【0245】

サーコウイルス（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ）：抗原は、ブタサーコウイルス（Ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ）（ＰＣＶ） １、ＰＣＶ ２、ＰＣＶ ３、およびＰＣＶ ４などのサーコウイルスに由来してもよい。

真菌抗原

【0246】

好適な真菌抗原は、以下に示す真菌の１つまたは複数に由来するものであってよい。

【0247】

真菌抗原は、以下を含む皮膚糸状菌（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈｙｔｒｅｓ）に由来してもよく、以下：エピデルモフィトン・フロックスム（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ ｆｌｏｃｃｕｓｕｍ）、ミクロスポルム・オードウイニ（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ａｕｄｏｕｉｎｉ）、ミクロスポルム・カニス（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｃａｎｉｓ）、ミクロスポルム・ディストートゥム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｄｉｓｔｏｒｔｕｍ）、ミクロスポルム・エクイヌム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｅｑｕｉｎｕｍ）、ミクロスポルム・ジプサム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｇｙｐｓｕｍ）、ミクロスポルム・ナヌム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｎｕｍ）、トリコフィトン・コンセントリクム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒｉｃｕｍ）、トリコフィトン・エクイヌム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｅｑｕｉｎｕｍ）、トリコフィトン・ガリナエ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｇａｌｌｉｎａｅ）、トリコフィトン・ジプセウム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｇｙｐｓｅｕｍ）、トリコフィトン・メグニニ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｇｎｉｎｉ）、トリコフィトン・メンタグロフィテス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ）、トリコフィトン・クインクケアヌム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｑｕｉｎｃｋｅａｎｕｍ）、トリコフィトン・ルブルム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｒｕｂｒｕｍ）、トリコフィトン・ショエンェイニ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｓｃｈｏｅｎｌｅｉｎｉ）、トリコフィトン・トンスランス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｔｏｎｓｕｒａｎｓ）、トリコフィトン・バールコスム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ）、Ｔ・バールコスム バー・アルバム（Ｔ． ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ ｖａｒ． ａｌｂｕｍ）、バー・ディスコイデス（ｖａｒ． ｄｉｓｃｏｉｄｅｓ）、バー・オクラセウム（ｖａｒ． ｏｃｈｒａｃｅｕｍ）、トリコフィトン・ビオラセウム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｖｉｏｌａｃｅｕｍ）、および／またはトリコフィトン・ファビフォーメ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｆａｖｉｆｏｒｍｅ）を含む。
。

【0248】

真菌病原体は、アスペルギルス・フミガータス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルス・フラバス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ）、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・テレウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ）、アスペルギルス・シドウイ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉ）、アスペルギルス・フラバタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖａｔｕｓ）、アスペルギルス・グラウカス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｌａｕｃｕｓ）、ブラストシゾマイセス・キャピタトゥス（Ｂｌａｓｔｏｓｃｈｉｚｏｍｙｃｅｓ ｃａｐｉｔａｔｕｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・エノラーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ ｅｎｏｌａｓｅ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、カンジダ・グラブラータ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ）、カンジダ・パラプシローシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、カンジダ・ステラトイデア（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ）、カンジダ・クセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｕｓｅｉ）、カンジダ・パラクウセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｋｗｓｅｉ）、カンジダ・ルシタニアエ（Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）、カンジダ・シュードトロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、カンジダ・ギリアモンディ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉ）、クラドスポリウム・カリオーニ（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃａｒｒｉｏｎｉｉ）、コクシジオイデス・イムミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、ブラストマイセス・デルマチディス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｄｉｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ジオトリカム・クラバタム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃｌａｖａｔｕｍ）、ヒストプラズマ・カプスラタム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、ニューモシスティス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ）、ピシウム・インシディオスム（Ｐｙｔｈｉｕｍｎ ｉｎｓｉｄｉｏｓｕｍ）、ピティロスポラム・オーバル（Ｐｉｔｙｒｏｓｐｏｒｕｍ ｏｖａｌｅ）、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓａｅ）、サッカロマイセス・ボウラディ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）、サッカロマイセス・ポンベ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）、セドスポリウム・アピオスペルム（Ｓｃｅｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ａｐｉｏｓｐｅｒｕｍ）、スポロスリクス・シェンキイ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ）、トリコスポロン・ベイゲリィ（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｂｅｉｇｅｌｉｉ）、トキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、ペニシリウム・マルネッフェイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）、マラッセジア属（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｓｐｐ．）、フォンセカエア属（Ｆｏｎｓｅｃａｅａ ｓｐｐ．）、ワンジーラ属（Ｗａｎｇｉｅｌｌａ ｓｐｐ．）、スポロスリクス属（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｐｐ．）、バシディオボルス属（Ｂａｓｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｓｐｐ．）、コニディオボルス属（Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｓｐｐ．）、リゾプス属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｓｐｐ．）、ムコール属（Ｍｕｃｏｒ ｓｐｐ．）、アブシディア属（Ａｂｓｉｄｉａ ｓｐｐ．）、モルティエレラ属（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｓｐｐ．）、クンニングハメラ属（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ ｓｐｐ．）、サクセナエア属（Ｓａｋｓｅｎａｅａ ｓｐｐ．）、アルタナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐｐ．）、カーブラリア属（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｓｐｐ．）、ハルミンソスポリウム属（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｐｐ．）、房リウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｐ．）、アスペルギルム属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、ペニシリウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐｐ．）、モノリニア属（Ｍｏｎｏｌｉｎｉａ ｓｐｐ．）、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｐｐ．）、ピーシロマイセス属（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）、ピソマイセス属（Ｐｉｔｈｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）及びクラドスポリウム属（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｐｐ．）に由来するものであってもよい。

【0249】

真菌抗原を製造するためのプロセスは、当該技術分野において周知である（米国特許第６，３３３，１６４号参照）。１つの方法において、細胞壁が実質的に除去されたかまたは少なくとも部分的に除去された真菌細胞から得られる不溶性画分から抽出および分離された可溶化画分は、以下の工程を含むことを特徴とする：生きている真菌細胞を得る工程；細胞壁が実質的に除去されたかまたは少なくとも部分的に除去された真菌細胞を得る工程；細胞壁が実質的に除去されたかまたは少なくとも部分的に除去された前記真菌細胞を破裂させる工程；不溶性画分を得る工程；並びに、前記不溶性画分から可溶化画分を抽出および分離する工程。

呼吸器抗原（Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ａｎｔｉｇｅｎｓ）

【0250】

本明細書に開示されるような組成物は、呼吸器疾患を引き起こす病原体に由来する１つ以上の抗原を含んでもよい。例えば、呼吸器抗原は、オルソミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ）、モービリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、ＶＺＶ、およびコロナウイルス（ＳＡＲＳ）などの呼吸器ウイルスに由来するものであってよい。呼吸器抗原は、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、肺炎クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、およびモラクセラ・カタラリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）などの呼吸器疾患を引き起こす細菌に由来するものであってもよい。これらの病原体に由来する特異的抗原の例は前述の通りである。

【0251】

本明細書に開示する免疫原性組成物は、種々の形態で調製されてもよい。例えば、組成物は、注射可能とする、液体溶液または懸濁液として、調製されてもよい。注射前の液体ビヒクル中への溶液または懸濁液に適した固体形態もまた調製されてもよい（例えば、凍結乾燥組成物または噴霧凍結乾燥組成物）。組成物は、例えば、軟膏、クリームまたは粉末として、局所投与用に調製されてもよい。組成物は、経口投与のために、例えば、錠剤もしくはカプセルとして、またはスプレーとして調製されてもよい。組成物は、例えば吸入器として、微粉末またはスプレーを用いて、肺投与用に調製されてもよい。組成物は、座薬またはペッサリーとして調製されてもよい。組成物は、鼻腔、耳、または眼への投与のために、例えば、滴剤として調製されてもよい。このような医薬組成物の調製は、当業者の一般的な技術の範囲内である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．， １８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， １９９０．を参照のこと。

【0252】

組成物は、組み合わされた組成物が患者に投与される直前に再構成されるように設計された、キットの形態であってもよい。このようなキットは、液体形態において、１つ以上の抗原またはそのような抗原をコードする核酸、および本明細書に記載されるようないずれかの追加の抗原およびアジュバントを含んでもよい。

【0253】

開示されたポリペプチド抗原を含む免疫原性組成物は、ワクチン組成物である。このような組成物のｐＨは６～８、約７であり、ｐＨは緩衝液の使用により維持されてもよい。組成物は無菌および／またはパイロジェンフリーであってもよい。組成物は、対象に対して等張であってもよい。本開示によるワクチンは、予防的または治療的に使用されてもよいが、典型的には予防的であり、動物（農耕、狩猟（ｇａｍｅ）、伴侶および実験哺乳動物を含む）を治療するために使用されてもよい。

【0254】

ワクチンとして使用される免疫原性組成物は、免疫学的に有効な量の抗原（単数又は複数）および／または抗原（単数又は複数）をコードする核酸、ならびに必要に応じてその他の成分を含む。「免疫学的に有効な量」とは、単回投与または連続投与のいずれかにおいて、その量を個体に投与することが治療または予防に有効であることを意味する。この量は、治療される個体の健康状態および身体状態、年齢、治療される個体の分類群（例えば、豚、牛など）、抗体を合成する個体の免疫系の能力、望まれる防御の程度、ワクチンの処方（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）、治療する獣医師の医学的状況の評価、およびその他の関連要因によって異なる。その量は、日常的な試験によって決定される比較的広い範囲に収まることが期待される。

投与

【0255】

本明細書に開示される組成物は、一般に、対象に直接投与される。直接送達は、非経口注射（例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、または組織の間質空間への注射）、または粘膜、例えば、直腸、経口（例えば、錠剤、スプレー）、膣、局所、経皮（例えば、国際公開第ＷＯ９９／２７９６１号を参照のこと）または経皮（例えば、国際公開第ＷＯ０２／０７４２４４号および国際公開第Ｗ００２／０６４１６２号を参照のこと）、経鼻（例えば、国際公開第Ｗ００３／０２８７６０号を参照のこと）、眼、耳、肺または他の粘膜投与などによって投与される。免疫原性組成物はまた、皮膚表面への直接移行によって局所投与されてもよい。局所投与は、器具を使用せずに、または包帯もしくは包帯様器具を使用して免疫原性組成物を裸の皮膚に接触させることによって達成されてもよい（例えば、米国特許第６，３４８，４５０号を参照のこと）。

【0256】

実施形態において、投与様式は、非経口、粘膜、または粘膜免疫と非経口免疫の組み合わせであってもよい。１つの態様において、投与様式は、１～３週間の間隔で合計１～２回のワクチン接種における非経口、粘膜、または粘膜免疫と非経口免疫の組み合わせである。一態様において、投与経路は、経口投与、筋肉内投与、および経口投与と筋肉内投与の組み合わせを含むが、これらに限定されない。

【0257】

ヘリコバクター・ピロリ抗原などの抗原に対する粘膜および全身性免疫応答が、粘膜プライミングに続いて全身性ブースティング免疫によって増強され得ることが、既に実証されている。実施形態において、ＡＳＦウイルスによる感染を治療するための方法は、１つ以上のＡＳＦウイルス抗原を含む第１の免疫原性組成物を、それを必要とする対象に粘膜投与し、続いて、１つ以上のＡＳＦウイルス抗原を含む治療有効量の第２の免疫原性組成物を非経口投与することを含む。

【0258】

免疫原性組成物は、全身性免疫および／または粘膜免疫を誘発するために、増強された全身性免疫および／または粘膜免疫を誘発するために使用されてもよい。

【0259】

実施形態において、免疫応答は、血清ＩｇＧ及び／又は腸管ＩｇＡ免疫応答の誘導によって特徴付けられる。

【0260】

上述のように、プライムブースト法は、１つ以上の遺伝子導入ベクターおよび／またはポリペプチド抗原が「プライミング」ステップで送達され、続いて１つ以上の第２の遺伝子導入ベクターおよび／またはポリペプチド抗原が「ブースティング」ステップで送達される場合に採用されてもよい。特定の実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の遺伝子導入ベクターまたはポリペプチド抗原によるプライミングおよびブースティングに続いて、１つ以上のポリペプチド含有組成物（例えば、ＡＳＦウイルス抗原を含むポリペプチド）による追加のブースティングが行われる。

【0261】

共投与を含む任意の方法において、種々の組成物は任意の順序で送達されてもよい。従って、複数の異なる組成物または分子の送達を含む実施形態において、核酸は、ポリペプチドの前に全て送達される必要はない。例えば、プライミングステップは、１つ以上のポリペプチドの送達を含んでもよく、ブースティングは、１つ以上の核酸および／または１つ以上のポリペプチドの送達を含む。複数のポリペプチド投与に続いて複数の核酸投与を行ってもよいし、ポリペプチドおよび核酸投与を任意の順序で行ってもよい。従って、本明細書に記載の１つ以上の遺伝子導入ベクターおよび本明細書に記載の１つ以上のポリペプチドは、任意の順序および任意の投与経路で共投与することができる。したがって、本明細書に記載のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの任意の組み合わせを免疫反応を惹起するために使用されてもよい。

用量レジーム（Ｄｏｓａｇｅ Ｒｅｇｉｍｅ）

【0262】

投与処置（Ｄｏｓａｇｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）は、単回投与スケジュールまたは複数回投与スケジュールに従うことができる。複数回投与は、一次免疫スケジュールおよび／またはブースター免疫スケジュールにおいて使用されてもよい。複数回投与スケジュールでは、様々な用量は、例えば、非経口プライムおよび粘膜ブースト、粘膜プライムおよび非経口ブーストなどのように、同じまたは異なる経路で投与してもよい。

【0263】

実施形態において、投与レジーム（ｄｏｓａｇｅ ｒｅｇｉｍｅ）は、中和特性を有する抗体をもたらす抗体応答の活性を増強する。インビトロ中和アッセイは、中和抗体について試験するために使用されてもよい。

【0264】

血清抗体レベルとＡＳＦウイルスによる疾病からの防御との間には、強い相関関係がある。

免疫反応の有効性を判定する試験

【0265】

治療的処置の有効性を評価する１つの方法は、開示されたとおりの組成物の投与後に感染をモニターすることを含む。予防的治療の有効性を評価する１つの方法は、組成物の投与後に、開示されたとおりの組成物中の抗原に対する免疫応答をモニタリングすることを含む。

【0266】

本開示の免疫原性組成物の構成タンパク質の免疫原性を評価するもう１つの方法は、タンパク質を組換え発現させ、イムノブロットによって患者の血清または粘膜分泌物をスクリーニングすることである。タンパク質と患者血清との反応が陽性であることは、患者が問題のタンパク質に対して以前に免疫応答を起こしたこと、すなわち、タンパク質が免疫原であることを示す。この方法は、免疫優性タンパク質および／またはエピトープを同定するためにも使用されてもよい。

【0267】

治療的処置の有効性を確認するもう１つの方法は、本開示の組成物の投与後に感染をモニタリングすることを含む。予防的治療の有効性を確認する１つの方法は、組成物の投与後に、本開示の組成物中の抗原に対する全身的（ＩｇＧｌおよびＩｇＧ２ａ産生レベルのモニタリングなど）および粘膜的（ＩｇＡ産生レベルのモニタリングなど）の両方の免疫応答をモニタリングすることを含む。典型的には、血清特異的抗体応答は、免疫後であるが曝露前に決定されるのに対し、粘膜特異的抗体体応答は、免疫後および曝露後に決定される。

【0268】

本開示の免疫原性組成物は、宿主の前に、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ動物モデルにおいて評価されてもよい。特に有用なマウスモデルには、腹腔内免疫化に続いて腹腔内曝露（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）または鼻腔内曝露（ｉｎｔｒａｎａｓａｌ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）が行われるものが含まれる。

【0269】

本開示の免疫原性組成物の効力はまた、免疫原性組成物を用いて、感染モデル動物、例えばモルモットまたはマウスまたはアカゲザルに曝露することによってインビボで決定されてもよい。免疫原性組成物は、曝露株と同じ株に由来してもしなくてもよい。実施形態において、免疫原性組成物は、曝露株と同じ株に由来し得る。

【0270】

Ｉｎ ｖｉｖｏ有効性モデルには、以下が含まれるが、これらに限定されない：（ｉ）ヒト株を用いたマウス感染モデル、（ｉｉ）マウスで特に病原性の高い株など、マウスに適応した株を用いたマウス疾患モデル、（ｉｉｉ）ヒト単離株を用いた霊長類モデル。ＮＩＨおよび疾病管理センター（ＣＤＣ）の支援を受けたヒトチャレンジモデルも利用可能である。

【0271】

免疫応答は、ＴＨ１免疫応答及びＴＨ２免疫応答の一方又は両方であってもよい。免疫応答は、改善された免疫応答、増強された、または変化した免疫応答であってもよい。免疫応答は、全身性免疫応答及び粘膜免疫応答の一方又は両方であってもよい。実施形態において、免疫応答は、増強された全身性および／または粘膜応答である。

【0272】

増強された全身性免疫及び／又は粘膜免疫は、増強されたＴＨ１免疫応答及び／又はＴＨ２免疫応答に反映される。実施形態において、増強された免疫応答は、ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２ａおよび／またはＩｇＡの産生の増加を含む。実施形態において、粘膜免疫応答はＴＨ２免疫応答である。一態様において、粘膜免疫応答は、ＩｇＡの産生の増加を含む。

【0273】

活性化されたＴＨ２細胞は抗体産生を増強するので、細胞外感染に応答する上で価値がある。活性化ＴＨ２細胞は、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、およびＩＬ－１０のうちの１つ以上を分泌する可能性がある。ＴＨ２免疫応答は、将来の防御のために、ＩｇＧｌ、ＩｇＥ、ＩｇＡおよびメモリーＢ細胞の産生をもたらす可能性がある。

【0274】

ＴＨ２免疫応答は、ＴＨ２免疫応答に関連するサイトカイン（ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６及びＩＬ－１０など）の１つ以上の増加、又はＩｇＧｌ、ＩｇＥ、ＩｇＡ及びメモリーＢ細胞の産生の増加の１つ以上を含み得る。実施形態において、増強されたＴＨ２免疫応答は、ＩｇＧｌ産生の増加を含む。

【0275】

ＴＨ１免疫応答は、ＣＴＬの増加、ＴＨ１免疫応答に関連するサイトカイン（ＩＬ－２、ＩＦＮγ、及びＴＮＦβなど）の１つ以上の増加、活性化マクロファージの増加、ＮＫ活性の増加、又はＩｇＧ２ａの産生の増加のうちの１つ以上を含み得る。実施形態において、増強されたＴＨ１免疫応答は、ＩｇＧ２ａ産生の増加を含む。

【0276】

本開示の免疫原性組成物、特に、本開示の１つまたは複数の抗原を含む免疫原性組成物は、単独で、または任意選択でＴｈｌ応答および／またはＴｈ２応答を誘発することができる免疫調節剤とともに他の抗原と組み合わせて使用されてもよい。

【0277】

本開示の免疫原性組成物はまた、アルミニウム塩などのミネラル塩およびＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドなどの１つ以上の免疫調節剤を含んでもよい。実施形態において、免疫原性組成物は、アルミニウム塩およびＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドの両方を含む。あるいは、免疫原性組成物は、無毒化ＡＤＰリボシル化毒素などのＡＤＰリボシル化毒素およびＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドを含む。一態様において、１つ以上の免疫調節剤はアジュバントを含む。アジュバントは、さらに上述したＴＨ１アジュバントおよびＴＨ２アジュバントからなる群の１つ以上から選択されてもよい。

【0278】

本組成物の免疫原性組成物は、感染に効果的に対処するために、体液性免疫応答と同様に細胞媒介免疫応答の両方を誘発し得る。この免疫応答は、長期間持続する（例えば、中和）抗体、および１つ以上の感染性抗原に曝露された際に迅速に応答し得る細胞媒介性免疫を誘導し得る。一例として、対象の血液試料中の中和抗体の証拠は、結核菌感染症におけるウイルス排除には中和抗体の形成が決定的に重要であるため、防御の代用パラメータとして考慮される。

免疫原性組成物の医薬品としての使用

【0279】

本開示はまた、医薬品として使用するための組成物を提供する。医薬は、哺乳動物において免疫応答を上昇させることができ（すなわち、免疫原性組成物であり）、ワクチンであってもよい。本開示はまた、哺乳動物において免疫応答を上昇させるための医薬の製造における本組成物の使用を提供する。医薬は、ワクチンであってもよい。実施形態において、ワクチンは、急性胃腸炎を含む胃腸炎などの腸感染症を予防および／または治療するために使用される。胃腸炎は、水のような下痢および／または腸の蠕動および／または運動（嘔吐）の両方をもたらすイオンおよび／または水の移動の不均衡から生じる可能性がある。

【0280】

本開示は、上記の組成物を使用して免疫応答を誘導または増大させる方法を提供する。免疫応答は、防御的であり得、抗体および／または細胞媒介免疫（全身性免疫および粘膜免疫を含む）を誘導し得る。免疫応答は、ブースター応答を含む。

【0281】

本開示はまた、本開示の組成物の有効量を投与する工程を含む、哺乳動物において免疫応答を上昇させるための方法を提供する。免疫応答は、防御的であり得、抗体および／または細胞媒介免疫を含み得る。実施形態において、免疫応答は、ＴＨ１免疫応答およびＴＨ２免疫応答の一方または両方を含む。本方法は、ブースター応答を上昇させてもよい。

キット

【0282】

本開示はまた、本明細書に記載の組成物の１つ以上の容器を含むキットを提供する。組成物は、個々の抗原と同様に、液体形態であってもよいし、凍結乾燥されていてもよい。組成物のための適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、および試験管が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックを含む種々の材料から形成され得る。容器は、無菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、皮下注射針で刺通可能なストッパーを有する静脈溶液バッグまたはバイアルであってもよい）。

【0283】

キットはさらに、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、またはブドウ糖液などの医薬的に許容される緩衝液を含む第２の容器を含んでいてもよい。また、緩衝液などの他の医薬的に許容される製剤溶液、希釈剤、フィルター、針およびシリンジまたは他の送達デバイスを含む、エンドユーザーに有用な他の材料を含んでもよい。キットは、アジュバントを含む第３の構成要素をさらに含んでもよい。

【0284】

キットはまた、免疫を誘導する方法または感染症を治療する方法の説明書を含む添付文書を含んでいてもよい。添付文書は、未承認の添付文書草案であってもよいし、食品医薬品局（ＦＤＡ）または他の規制機関によって承認された添付文書であってもよい。

【0285】

実施形態において、送達デバイスは、本明細書に開示される免疫原性組成物で予め充填される。

ＡＳＦウイルス特異的抗体の作製法

【0286】

本明細書に記載のＡＳＦウイルスポリペプチドは、それぞれＡＳＦウイルス抗原に特異的に結合する／ＡＳＦウイルス抗原に対して選択的なＡＳＦウイルス特異的ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を産生するために使用することができる。ポリクローナル抗体は、ＡＳＦウイルスポリペプチドをマウス、ウサギ、ヤギ、ウマなどの哺乳動物に投与することにより産生され得る。免疫した動物の血清を採取し、例えば硫酸アンモニウムで沈殿させた後、アフィニティークロマトグラフィーを含むクロマトグラフィーによって血漿から抗体を精製する。ポリクローナル抗血清を製造し、処理する技術は当技術分野で知られている。

【0287】

ポリペプチドに存在するＡＳＦウイルス特異的エピトープに対するモノクローナル抗体もまた、容易に産生することができる。ＡＳＦウイルスポリペプチドで免疫したマウスなどの哺乳動物由来の正常Ｂ細胞を、例えばＨＡＴ感受性マウス骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマを産生することができる。ＡＳＦウイルス特異的抗体を産生するハイブリドーマは、ＲＩＡまたはＥＬＩＳＡを用いて同定し、半固形寒天中でのクローニングまたは限界希釈によって単離されてもよい。ＡＳＦウイルス特異的抗体を産生するクローンは、再度スクリーニングを行って単離する。

【0288】

ＡＳＦウイルスエピトープに対する抗体、すなわちモノクローナルおよびポリクローナル血清からの抗体（ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ）は、ＡＳＦウイルスに感染した対象からの血清試料などの試料中のＡＳＦウイルス抗原の存在を検出するために特に有用である。ＡＳＦウイルス抗原のイムノアッセイは、１つの抗体を利用することも、複数の抗体を利用することもできる。ＡＳＦウイルス抗原のイムノアッセイは、例えば、ＡＳＦウイルスエピトープを指向するモノクローナル抗体、１つのＡＳＦウイルスポリペプチドのエピトープ（複数）を指向するモノクローナル抗体（複数）の組合せ、異なるＡＳＦウイルスポリペプチドのエピトープ（複数）を指向するモノクローナル抗体（複数）、同じＡＳＦウイルス抗原を指向するポリクローナル抗体、異なるＡＳＦウイルス抗原を指向するポリクローナル抗体、またはモノクローナル抗体とポリクローナル抗体の組み合わせを使用してもよい。イムノアッセイのプロトコールは、例えば、標識抗体を用いて競合法、直接反応法、またはサンドイッチ法などに基づくものであってもよい。標識は、例えば、蛍光性、化学発光性、放射性である。

【0289】

ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体はさらに、イムノアフィニティーカラムによってＡＳＦウイルス粒子または抗原を単離するために使用されてもよい。抗体は、抗体が免疫選択活性を保持するように、例えば吸着または共有結合によって固体支持体に固定されてもよい。任意選択で、抗体の抗原結合部位がアクセス可能なままとなるように、スペーサー基が含まれてもよい。固定化された抗体は、血液や血漿などの生体試料からＡＳＦウイルス粒子または抗原を結合させるために使用されてもよい。結合したＡＳＦウイルス粒子または抗原は、例えばｐＨの変化によりカラムマトリックスから回収される。

【0290】

本開示において引用されるすべての特許文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【実施例】

【0291】

実施例１．バキュロウイルスタンパク質サブユニットの生産
組換えバキュロウイルスタンパク質発現系は、標的ＡＳＦウイルスタンパク質の核酸配列に基づいていた。最終配列は、適切な制限エンドヌクレアーゼ部位が配列の終端に存在することを確実にするために、インハウスのスポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ）昆虫細胞（Ｓｆ９）での発現のために最適化された。

【0292】

標的配列を含むプラスミドベクターを調製するために、ｐＢａｃＰＡＫ８クローニングベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉｎｃ． 、マウンテンビュー、ＣＡ）を使用した。このプラスミドベクターは、直鎖ＢｅｓｔＢａｃ ２．０バキュロウイルスベクター（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ、デービス、ＣＡ）と相同なフランキング配列を含んでおり、ＡＳＦウイルスｐ３０、ｐ３０／ｐ５４、ｐ７２および／またはヘマグルチニン挿入体インサートを含むこのプラスミドを、直鎖ＢｅｓｔＢａｃ ２．０ウイルスバキュロウイルスバックボーンとＳｆ９細胞に共導入した場合、相同組換えによりＨ３インサートがバキュロウイルスのポリヘドリン遺伝子と交換される。その結果ポリヘドリン・プロモーターの制御下で発現するＡＳＦウイルス配列を含むバキュロウイルスが得られた。細胞およびウイルスは、動物由来成分を含まないように調製されたＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ由来の培地（Ｍｅｄｉａ ＥＳ ９９－３００）で培養した。ゲンタマイシン溶液は、購入したストック溶液（Ｇｉｂｃｏ Ｃａｔ ＃１５７１０）から最終濃度１０μｇ／ｍｌになるように添加した。最終収穫時、感染培養を遠心分離して細胞を除去し、上清を回収した。上清は０．２ミクロンの滅菌使い捨てフィルターで処理した。プレマスター培養液は、最終濃度を決定するためにタイトリングした。

【0293】

Ｓｆ９細胞は、ガラスまたは滅菌済み使い捨てプラスチック容器を用いて、生産量までスケールアップされる。生産に必要な最終細胞培養量に達すると、細胞の最終継代が調製されたのと同じ容器内でウイルス感染が起こる。培養の混合は、容器を振ったり揺すったりするか、低せん断タイプのインペラーを利用することで達成される。攪拌速度と攪拌強度は、細胞破砕の原因となる過剰なせん断や発泡を起こさず、細胞を懸濁状態に維持するように調整される。

【0294】

ウイルス液は、最終濃度０．２～０．３％のβ－プロピオラクトン（ＢＰＬ）で不活化する。不活化の前に、２～１０Ｎ ＮａＯＨを塩基として、または１０～３８％ＨＣ１もしくは１０％硝酸を酸として用いて、破壊された流体のｐＨを７．５～８．０に調整する。ＢＰＬを添加する前に、破砕液を１～１８時間、室温まで温める。ＢＰＬは攪拌しながら、上記の濃度で添加する。ＢＰＬの添加後、すべての液体がＢＰＬと接触したことを確認するため、「下から下へ」の移し替えプロセスでウイルス液を不活化容器に移し替える。破壊された液体は、攪拌しながら１７～２７℃で１８～４８時間培養される。不活化プロセスが完了した後、上記のように酸または塩基でｐＨを７．０～７．５に調整する。不活化ウイルス液は、さらに処理するまで２～８℃で保存する。抗原は水／油／水（ＷＯＷ）アジュバントで調製される。

【0295】

実施例２．ＡＳＦ抗原ベースのワクチンのフィールド評価
抗原は上記のように製造した（すなわち、ヘマグルチニン、配列番号１７およびｐ３０／ｐ５４融合タンパク質、配列番号６）。

【0296】

この研究に登録するために、８つの商業農場が選ばれた。この農場で使用された家畜は、ＡＳＦに感染していない他の農場から来たものである。

実験デザイン

【0297】

対象、除外および中止基準

【0298】

この試験で使用されたすべての動物は、試験開始時に明らかに健康であった。病気、病気の倹約（ｉｌｌ ｔｈｒｉｆｔ）、重大な外傷、または跛行を患っている豚は、通常の管理方法に従って除外された。

【0299】

ランダム化

【0300】

包含基準をすべて満たし、除外基準のいずれにも当てはまらなかった豚を、２つの治療群またはプラセボ群のいずれかに無作為に割り付けた。各処置群から同数の豚と２５％のプラセボを各ペンに割り当てた。

【0301】

病気の取り扱い

【0302】

病気の動物は農場の標準作業手順または治療プロトコールに従って治療された。あらゆる原因の病的状態を記録した。

【0303】

ＡＳＦが疑われる動物（重度の嗜眠、四肢の変色など）および死んだ動物から血液を採取し、迅速試験キットを用いてＡＳＦ抗原の存在について初期スクリーニングを行い、その後、同じ血液試料を確認試験に供した。

治療グループ：

【表1】

【0304】

個々の動物を実験単位とした。各ブタにはダブルタグ（両耳に１つずつ）が付けられ、各囲い内で異なるワクチン接種群および対照群の同数のブタと混合された。使用した囲いは１つの建物内にあった。

ワクチン接種

【0305】

ワクチン接種群の動物は、２つのワクチンのうちの１つを受け、投与間隔を３週間あけてＩｍＬを２回投与された。

血清学的検査のための採血：

【表2】

収集データと結果

【0306】

動物を、０日目に開始し、２回目のワクチン接種後２１日まで、有害事象について毎日モニターした。すべての有害事象を記録した。特に、注射部位の腫脹／炎症、疼痛、発赤、膿瘍、しこり、病変、および温感に注意を払った。その他、跛行、倹約の欠如、食欲不振、一般的な正常行動の欠如などが記録されたが、これらに限定されるものではない。

【0307】

すべての血清試料を、Ｂｉｏｃｈｅｋ Ａｆｒｉｃａｎ Ｓｗｉｎｅ Ｆｅｖｅｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｓｔ Ｋｉｔを用いて、ＡＳＦ ｐ５４抗原に対する抗体の存在について試験した。この試験は、ワクチン製剤中のｐ３０／ｐ５４融合タンパク質のｐ５４部分に対する免疫応答を試験することにより、実験ワクチンに対するセロコンバージョンを決定するためのものであった。

【0308】

すべての試料を、Ｉｎｇｅｎｚａ ＰＰＡ ＣＲＯＭを用いて、ＡＳＦ ｐ７２抗原に対する抗体の存在について試験した。これは、実験動物がＡＳＦウイルスに暴露されたかどうかを検出するためのスクリーニング試験として機能した。

【0309】

すべての試料を、ＩＤ Ｓｃｒｅｅｎ ＡＳＦ Ｉｎｄｉｒｅｃｔ ＥＬＩＳＡを用いて、ＡＳＦ ｐ３０（３２）、ｐ６２、およびｐ７２抗原に対する抗体の存在について試験した。この試験は、ワクチン製剤中のｐ３０／ｐ５４融合タンパク質のｐ３０部分に対する免疫応答を試験することにより、実験ワクチンに対するセロコンバージョンを決定するためのものであった。

【0310】

試験期間中に採取した試料に対して実施した３つのアッセイのうち、２つはワクチン接種に対する動物の免疫学的応答を評価するためのもので、ＢｉｏｃｈｅｃｋおよびＩＤ Ｓｃｒｅｅｎであった。これらの試験のそれぞれは、ワクチン製剤中のｐ３０／ｐ５４融合タンパク質の異なる割合を測定した。ｐ３０（３２）抗原を測定するＩＤ Ｓｃｒｅｅｎアッセイは、ワクチン接種と観察期間中に免疫反応を示した。

結論

【0311】

免疫反応

【0312】

ｐ３０／ｐ５４融合タンパク質を含む試験ワクチンを投与された動物の免疫学的応答を評価すると、処置群１と２の両方において、ワクチン接種により、ＩＤ Ｓｃｒｅｅｎ Ｉｎｄｉｒｅｃｔキットで試験したｐ３０（３２）抗原に対する免疫応答が誘発されたと結論づけることができる。抗体濃度の増加は、処置群１では試験２１日目ごろからナイーブファームで検出され、試験４２日目の採血では両治療群間で非常に類似していた。

【0313】

これらの結果から、本製剤はＡＳＦ抗原に対する免疫応答を誘導する。

【0314】

上記の実施例を参照して本発明を説明したが、本発明の精神および範囲内に修正および変形が包含されることは理解されるであろう。従って、本発明は以下の特許請求の範囲によってのみ限定される。

【配列表】

2024506747000001.app

【国際調査報告】