特表 2024-506868 ＰＳＤ９５、シナプトフィジン、及びカスパーゼ－３の発現を調節するためのｍｉＲＮＡ－４８５阻害剤の使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-02-15

(54)【発明の名称】ＰＳＤ９５、シナプトフィジン、及びカスパーゼ－３の発現を調節するためのｍｉＲＮＡ－４８５阻害剤の使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/00 20060101AFI20240207BHJP

   C12N 15/113 20100101ALI20240207BHJP

   A61P 25/08 20060101ALI20240207BHJP

   A61P 25/14 20060101ALI20240207BHJP

   A61P 25/16 20060101ALI20240207BHJP

   A61P 25/18 20060101ALI20240207BHJP

   A61P 25/22 20060101ALI20240207BHJP

   A61P 25/24 20060101ALI20240207BHJP

   A61P 25/30 20060101ALI20240207BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240207BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20240207BHJP

   A61K 9/107 20060101ALI20240207BHJP

   A61K 47/10 20170101ALI20240207BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20240207BHJP

   A61K 47/54 20170101ALI20240207BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20240207BHJP

【ＦＩ】

A61K45/00

C12N15/113 Z ZNA

A61P25/08

A61P25/14

A61P25/16

A61P25/18

A61P25/22

A61P25/24

A61P25/30

A61K48/00

A61K31/7105

A61K9/107

A61K47/10

A61K47/22

A61K47/54

A61K47/18

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023547409

(86)(22)【出願日】2022-02-05

(85)【翻訳文提出日】2023-08-31

(86)【国際出願番号】 IB2022051012

(87)【国際公開番号】W WO2022168008

(87)【国際公開日】2022-08-11

(31)【優先権主張番号】63/146,513

(32)【優先日】2021-02-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521564467

【氏名又は名称】バイオーケストラ カンパニー， リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】リュ， ジン－ヒョブ

(72)【発明者】

【氏名】イ， ヒョ ジン

(72)【発明者】

【氏名】ミン， ヒュン ス

(72)【発明者】

【氏名】リム， ユ ナ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C076AA17

4C076AA95

4C076BB13

4C076BB15

4C076BB16

4C076BB21

4C076BB24

4C076CC01

4C076DD51

4C076DD60

4C076EE23

4C076EE59

4C084AA13

4C084AA17

4C084MA22

4C084MA55

4C084MA58

4C084MA65

4C084NA14

4C084ZA02

4C084ZA12

4C084ZA18

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA03

4C086MA04

4C086MA05

4C086MA22

4C086MA55

4C086MA58

4C086MA65

4C086NA14

4C086ZA02

4C086ZA12

4C086ZA18

(57)【要約】

本開示は、ＰＳＤ９５及び／もしくはシナプトフィジンのレベルの低下、ならびに／またはカスパーゼ３のレベルの増加に関連する疾患または状態（例えば、ジストニア、神経精神疾患、知的障害、及び／または依存症）を治療するためのｍｉＲＮＡ阻害剤の使用を含む。本開示において有用なｍｉＲＮＡ阻害剤は、ｍｉＲ－４８５の発現及び／または活性を阻害することができ、それにより、ＰＳＤ－９５及び／またはシナプトフィジンタンパク質の遺伝子の発現のレベルを増加させることができ、かつカスパーゼ－３タンパク質または遺伝子の発現のレベルを減少させることができる。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ジストニアの治療を必要とする対象のジストニアを治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項2】

前記ジストニアが、眼瞼けいれん、頸部ジストニア（痙性斜頸）、ドーパ反応性ジストニア、薬物誘発性ジストニア（遅発性ジスキネジア）、機能性ジストニア、全身性ジストニア、手のジストニア（書痙）、下肢ジストニア、音楽家ジストニア、ミオクローヌスジストニア、神経疾患または代謝疾患に関連するジストニア、口顎ジストニア（頭蓋ジストニア）、頭頸部ジストニア、上腕ジストニア、発作性ジスキネジア、小児ジストニア、痙攣性発声障害（喉頭ジストニア）、急速発症性ジストニア、パーキンソニズム、毒素誘発性ジストニア、外傷誘発性ジストニア、Ｘ連鎖ジストニア・パーキンソニズム、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

神経精神疾患の治療を必要とする対象の神経精神疾患を治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項4】

前記神経精神疾患が、統合失調症、うつ病、自閉症、発作、注意欠陥／多動性障害、トゥレット障害、認知欠陥障害、麻痺、制御不能な怒り、片頭痛、摂食障害（例えば、神経性食欲不振及び神経性過食症）、うつ病、不安障害（例えば、心的外傷後ストレス障害）、またはそれらの組み合わせを含む、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

知的障害の治療を必要とする対象の知的障害を治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項6】

前記知的障害が、脆弱Ｘ症候群、ダウン症候群、プラダーウィリ症候群（ＰＷＳ）、胎児性アルコールスペクトラム障害（ＦＡＳＤ）、またはそれらの組み合わせを含む、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

依存症の治療を必要とする対象の依存症を治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項8】

前記依存症が、化学物質依存症、行動的依存症、またはその両方を含む、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

前記ジストニア、前記神経精神疾患、前記知的障害、及び／または前記依存症が、ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子の異常なレベルに関連している、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、前記対象のＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子のレベルを増加させる、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記対象における前記ＰＳＤ９５タンパク質及び／または前記ＰＳＤ９５遺伝子のレベルが、前記ＰＳＤ９５タンパク質及び／または前記ＰＳＤ９５遺伝子の参照レベル（例えば、前記投与前の前記対象における対応するレベル及び／または前記投与を受けなかった対応する対象におけるレベル）と比較して、少なくとも約０．５倍、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍以上、増加する、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記ジストニア、前記神経精神疾患、前記知的障害、及び／または前記依存症が、シナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子の異常なレベルに関連している、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項13】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、前記対象のシナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子のレベルを増加させる、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

前記対象における前記シナプトフィジンタンパク質及び／または前記シナプトフィジン遺伝子のレベルが、前記シナプトフィジンタンパク質及び／または前記シナプトフィジン遺伝子の参照レベル（例えば、前記投与前の前記対象における対応するレベル及び／または前記投与を受けなかった対応する対象におけるレベル）と比較して、少なくとも約０．５倍、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍以上、増加する、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記ジストニア、前記神経精神疾患、前記知的障害、及び／または前記依存症が、カスパーゼ－３タンパク質及び／またはカスパーゼ－３遺伝子の異常なレベルに関連している、請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項16】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、前記対象のカスパーゼ－３タンパク質及び／またはカスパーゼ－３遺伝子のレベルを減少させる、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記対象における前記カスパーゼ－３タンパク質及び／または前記カスパーゼ－３遺伝子のレベルが、前記カスパーゼ－３タンパク質及び／または前記カスパーゼ－３遺伝子の参照レベル（例えば、前記投与前の前記対象における対応するレベル及び／または前記投与を受けなかった対応する対象におけるレベル）と比較して、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１００％減少する、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤がｍｉＲ－４８５－３ｐを阻害する、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項19】

前記ｍｉＲ－４８５－３ｐが、５’－ｇｕｃａｕａｃａｃｇｇｃｕｃｕｃｃｕｃｕｃｕ－３’（配列番号１）を含む、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、５’－ＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２）を含むヌクレオチド配列を含み、前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が約６～約３０ヌクレオチドの長さである、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項21】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、前記ヌクレオチド配列の前記５’末端に少なくとも１個のヌクレオチド、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチド、少なくとも６個のヌクレオチド、少なくとも７個のヌクレオチド、少なくとも８個のヌクレオチド、少なくとも９個のヌクレオチド、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１１個のヌクレオチド、少なくとも１２個のヌクレオチド、少なくとも１３個のヌクレオチド、少なくとも１４個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１６個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも１８個のヌクレオチド、少なくとも１９個のヌクレオチド、または少なくとも２０個のヌクレオチドを含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項22】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、前記ヌクレオチド配列の前記３’末端に少なくとも１個のヌクレオチド、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチド、少なくとも６個のヌクレオチド、少なくとも７個のヌクレオチド、少なくとも８個のヌクレオチド、少なくとも９個のヌクレオチド、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１１個のヌクレオチド、少なくとも１２個のヌクレオチド、少なくとも１３個のヌクレオチド、少なくとも１４個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１６個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも１８個のヌクレオチド、少なくとも１９個のヌクレオチド、または少なくとも２０個のヌクレオチドを含む、請求項１～２１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項23】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、５’－ＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号３）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号４）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号５）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号６）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号７）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号８）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号９）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１０）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１１）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１２）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１３）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１４）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１５）；５’－ＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１６）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１７）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１８）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１９）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２０）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２１）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２２）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２３）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２４）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２５）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２６）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２７）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２９）、またはＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ（配列番号３０）からなる群から選択される配列を有する、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項24】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、５’－ＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６２）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６３）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６４）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６５）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６６）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６７）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６８）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６９）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７０）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７１）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７２）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７３）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７４）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７５）、５’－ＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７６）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７７）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７８）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７９）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８０）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８１）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８２）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８３）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８４）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８５）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８６）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８７）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８９）、及び５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）からなる群から選択される配列を有する、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項25】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤の配列が、５’－ ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の配列同一性を有する、請求項１～２４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項26】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）と少なくとも９０％の類似性を有する、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、１個の置換または２個の置換を有するヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）を含む、請求項１～２６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項28】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、ヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）を含む、請求項１～２７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項29】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、ヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）を含む、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、請求項１～２９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項31】

前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチドが、ロックド核酸（ＬＮＡ）、アンロックド核酸（ＵＮＡ）、アラビノ核酸（ＡＢＡ）、架橋核酸（ＢＮＡ）、及び／またはペプチド核酸（ＰＮＡ）である、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が骨格修飾を含む、請求項１～３１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項33】

前記骨格修飾が、ホスホロジアミダイトモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）及び／またはホスホロチオエート（ＰＳ）修飾である、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、送達剤中で送達される、請求項１～３３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項35】

前記送達剤が、ミセル、エクソソーム、リピドイド、リポソーム、リポプレックス、脂質ナノ粒子、細胞外小胞、合成小胞、ポリマー化合物、ペプチド、タンパク質、細胞、ナノ粒子模倣体、ナノチューブ、コンジュゲート、ウイルスベクター、またはそれらの組み合わせを含む、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

前記送達剤が、
［ＷＰ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＡＭ］（式Ｉ）
または
［ＷＰ］－Ｌ１－［ＡＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（式ＩＩ）
（式中、
ＷＰは、水溶性バイオポリマー部分であり、
ＣＣは、カチオン性キャリア部分であり、
ＡＭは、アジュバント部分であり、
Ｌ１及びＬ２は、独立して任意選択のリンカーである）を含むカチオン性キャリアユニットを含む、請求項３４または３５に記載の方法。

【請求項37】

前記カチオン性キャリアユニットと前記単離ポリヌクレオチドとが、互いに混合される際に互いに結合してミセルを形成することができる、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記結合が、共有結合によるものである、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

前記結合が、非共有結合によるものである、請求項３７に記載の方法。

【請求項40】

前記非共有結合が、イオン結合を含む、請求項３９に記載の方法。

【請求項41】

前記水溶性ポリマーが、ポリ（アルキレングリコール）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリグリセロール、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（「ＰＯＺ」）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項３６～４０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

前記水溶性ポリマーが、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリグリセロール、またはポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）を含む、請求項３６～４１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項43】

前記水溶性ポリマーが、下式：

【化13】

（式中、ｎは、１～１０００である）を有する、請求項３６～４２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項44】

前記ｎが、少なくとも約１１０、少なくとも約１１１、少なくとも約１１２、少なくとも約１１３、少なくとも約１１４、少なくとも約１１５、少なくとも約１１６、少なくとも約１１７、少なくとも約１１８、少なくとも約１１９、少なくとも約１２０、少なくとも約１２１、少なくとも約１２２、少なくとも約１２３、少なくとも約１２４、少なくとも約１２５、少なくとも約１２６、少なくとも約１２７、少なくとも約１２８、少なくとも約１２９、少なくとも約１３０、少なくとも約１３１、少なくとも約１３２、少なくとも約１３３、少なくとも約１３４、少なくとも約１３５、少なくとも約１３６、少なくとも約１３７、少なくとも約１３８、少なくとも約１３９、少なくとも約１４０、または少なくとも約１４１である、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

前記ｎが、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１４０～約１５０、またはあるいは、または約１５０～約１６０である、請求項４３に記載の方法。

【請求項46】

前記水溶性ポリマーが、直鎖状、分枝鎖状、または樹枝状である、請求項３６～４５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項47】

前記カチオン性キャリア部分が、１つ以上の塩基性アミノ酸を含む、請求項３６～４６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項48】

前記カチオン性キャリア部分が、少なくとも約３個、少なくとも約４個、少なくとも約５個、少なくとも約６個、少なくとも約７個、少なくとも約８個、少なくとも約９個、少なくとも約１０個、少なくとも約１１個、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、少なくとも約２０個、少なくとも約２１個、少なくとも約２２個、少なくとも約２３個、少なくとも約２４個、少なくとも約２５個、少なくとも約２６個、少なくとも約２７個、少なくとも約２８個、少なくとも約２９個、少なくとも約３０個、少なくとも約３１個、少なくとも約３２個、少なくとも約３３個、少なくとも約３４個、少なくとも約３５個、少なくとも約３６個、少なくとも約３７個、少なくとも約３８個、少なくとも約３９個、少なくとも約４０個、少なくとも約４１個、少なくとも約４２個、少なくとも約４３個、少なくとも約４４個、少なくとも約４５個、少なくとも約４６個、少なくとも約４７個、少なくとも約４８個、少なくとも約４９個、または少なくとも約５０個の塩基性アミノ酸を含む、請求項４７に記載の方法。

【請求項49】

前記カチオン性キャリア部分が、約３０個～約５０個の塩基性アミノ酸を含む、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

前記塩基性アミノ酸が、アルギニン、リシン、ヒスチジン、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項４７～４９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項51】

前記カチオン性キャリア部分が、約４０個のリシンモノマーを含む、請求項３６～５０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項52】

前記アジュバント部分が、免疫反応、炎症反応、及び／または組織を調節することができる、請求項３６～５１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項53】

前記アジュバント部分が、イミダゾール誘導体、アミノ酸、ビタミン、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項３６～５２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項54】

前記アジュバント部分が、下式：

【化14】

（式中、Ｇ１及びＧ２のそれぞれは、Ｈ、芳香環、もしくは１～１０アルキルであるか、またはＧ１とＧ２とはともに芳香環を形成し、ｎは１～１０である）を有する、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

前記アジュバント部分がニトロイミダゾールを含む、請求項５３に記載の方法。

【請求項56】

前記アジュバント部分が、メトロニダゾール、チニダゾール、ニモラゾール、ジメトリダゾール、プレトマニド、オルニダゾール、メガゾール、アザニダゾール、ベンズニダゾール、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項５３に記載の方法。

【請求項57】

前記アジュバント部分が、アミノ酸を含む、請求項３６～５６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項58】

前記アジュバント部分が、下式：

【化15】

（式中、Ａｒは、

【化16】

であり、Ｚ１及びＺ２のそれぞれは、ＨまたはＯＨである）を有する、請求項５７に記載の方法。

【請求項59】

前記アジュバント部分が、ビタミンを含む、請求項３６～５８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項60】

前記ビタミンが、環式環または環式ヘテロ原子環及びカルボキシル基またはヒドロキシル基を含む、請求項５９に記載の方法。

【請求項61】

前記ビタミンが、下式：

【化17】

（式中、Ｙ１及びＹ２のそれぞれは、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはＳであり、ｎは１または２である）を有する、請求項５９または６０に記載の方法。

【請求項62】

前記ビタミンが、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ６、ビタミンＢ７、ビタミンＢ９、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ２、ビタミンＤ３、ビタミンＥ、ビタミンＭ、ビタミンＨ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項５３～６１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項63】

前記ビタミンが、ビタミンＢ３である、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

前記アジュバント部分が、少なくとも約２個、少なくとも約３個、少なくとも約４個、少なくとも約５個、少なくとも約６個、少なくとも約７個、少なくとも約８個、少なくとも約９個、少なくとも約１０個、少なくとも約１１個、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、または少なくとも約２０個のビタミンＢ３を含む、請求項６２または６３に記載の方法。

【請求項65】

前記アジュバント部分が、約１０個のビタミンＢ３を含む、請求項６２～６４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項66】

約１２０個～約１３０個のＰＥＧユニットを有する水溶性バイオポリマー部分と、約３０個～約４０個のリシンを有するポリリシンを含むカチオン性キャリア部分と、約５個～約１０個のビタミンＢ３を有するアジュバント部分と、を含む、請求項６２～６５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項67】

前記カチオン性キャリアユニットが、酵素分解から前記ｍｉＲＮＡ阻害剤を保護することができる、請求項３６～６６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項68】

前記ｍｉＲＮＡ阻害剤が、非経口投与、筋肉内投与、皮下投与、点眼、静脈内投与、腹腔内投与、皮内投与、眼窩内投与、脳内投与、頭蓋内投与、脳室内投与、脊髄内投与、心室内投与、髄腔内投与、大槽内投与、嚢内投与、腫瘍内投与、局所投与、またはそれらの任意の組み合わせで投与される、請求項１～６７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項69】

前記送達剤が、ミセルである、請求項３５に記載の方法。

【請求項70】

前記ミセルが、（ｉ）約１００個～約２００個のＰＥＧユニット、（ｉｉ）それぞれがアミン基を有する約３０個～約４０個のリシン、（ｉｉｉ）それぞれがチオール基を有する約１５個～約２０個のリシン、及び（ｉｖ）それぞれがビタミンＢ３に結合された約３０個～約４０個のリシンを含む、請求項６９に記載の方法。

【請求項71】

前記ミセルが、（ｉ）約１２０個～約１３０個のＰＥＧユニット、（ｉｉ）それぞれがアミン基を有する約３２個のリシン、（ｉｉｉ）それぞれがチオール基を有する約１６個のリシン、及び（ｉｖ）それぞれがビタミンＢ３に結合された約３２個のリシンを含む、請求項７０に記載の方法。

【請求項72】

前記ＰＥＧユニットに標的化部分がさらに結合されている、請求項７０または７１に記載の方法。

【請求項73】

前記標的化部分が、ＬＡＴ１標的化リガンドである、請求項７２に記載の方法。

【請求項74】

前記標的化部分が、フェニルアラニンである、請求項７３に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本ＰＣＴ出願は、２０２１年２月５日出願の米国仮出願第６３／１４６，５１３号の出願日の利益を主張するものであり、本明細書に参照によりその全容を援用するものである。

【0002】

ＥＦＳ－ＷＥＢを介して電子的に提出された配列表の参照
本出願とともにＡＳＣＩＩテキストファイル（ファイル名：４３６６＿０４２ＰＣ０１＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、サイズ：４１，７９８バイト、作成日：２０２２年２月４日）の形で提出される、電子的に提出される配列表の内容の全体を、参照によって本明細書に援用する。

【0003】

本開示は、ＰＳＤ９５、シナプトフィジン、及び／またはカスパーゼ３の異常なレベルに関連した疾患及び障害を治療するためのｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、少なくとも１つのｍｉＲ－４８５結合部位を含むヌクレオチド分子をコードするポリヌクレオチド）の使用を提供するものである。

【背景技術】

【0004】

ＰＳＤ９５、シナプトフィジン、カスパーゼ－３などのタンパク質は、さまざまな生物学的機能において重要な役割を果たしている。例えば、ＰＳＤ９５は、多くの受容体、チャネル、シグナル伝達タンパク質のシナプス局在を調節する足場タンパク質である。シナプトフィジンは、中枢ニューロンにおけるシナプス小胞のエンドサイトーシスの動態を調節する。また、カスパーゼ－３は、多くの重要な細胞タンパク質の特異的切断に関与している。したがって、これらのタンパク質の異常な発現及び／または活性は、さまざまな生物学的障害を引き起こし、ジストニア、神経精神疾患、知的障害、及び／または依存症などの疾患または症状を引き起こす可能性がある。したがって、こうしたタンパク質（及び／またはタンパク質をコードする遺伝子）の活性を調節することによって、これらのタンパク質の異常な発現及び／または活性を伴う疾患または症状を治療できるものと考えられる。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0005】

本明細書では、ジストニアの治療を必要とする対象のジストニアを治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を対象に投与することを含む方法を提供する。いくつかの態様では、ジストニアは、眼瞼けいれん、頸部ジストニア（痙性斜頸）、ドーパ反応性ジストニア、薬物誘発性ジストニア（遅発性ジスキネジア）、機能性ジストニア、全身性ジストニア、手のジストニア（書痙）、下肢ジストニア、音楽家ジストニア、ミオクローヌスジストニア、神経疾患または代謝疾患に関連するジストニア、口顎ジストニア（頭蓋ジストニア）、頭頸部ジストニア、上腕ジストニア、発作性ジスキネジア、小児ジストニア、痙攣性発声障害（喉頭ジストニア）、急速発症性ジストニア、パーキンソニズム、毒素誘発性ジストニア、外傷誘発性ジストニア、Ｘ連鎖ジストニア・パーキンソニズム、またはそれらの組み合わせを含む。

【0006】

本明細書ではまた、神経精神疾患の治療を必要とする対象の神経精神疾患を治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（「ｍｉＲＮＡ阻害剤」）を対象に投与することを含む、方法も提供される。いくつかの態様では、神経精神疾患には、統合失調症、うつ病、自閉症、発作、注意欠陥／多動性障害、トゥレット障害、認知欠陥障害、麻痺、制御不能な怒り、片頭痛、摂食障害（例えば、神経性食欲不振及び神経性過食症）、うつ病、不安障害（例えば、心的外傷後ストレス障害）、またはそれらの組み合わせが含まれる。

【0007】

本開示はさらに、知的障害の治療を必要とする対象の知的障害を治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（「ｍｉＲＮＡ阻害剤」）を対象に投与することを含む、方法も提供する。いくつかの態様では、知的障害は、脆弱Ｘ症候群、ダウン症候群、プラダーウィリ症候群（ＰＷＳ）、胎児性アルコールスペクトラム障害（ＦＡＳＤ）、またはそれらの組み合わせを含む。

【0008】

本明細書では、依存症の治療を必要とする対象の依存症を治療する方法であって、ｍｉＲ－４８５を阻害する化合物（ｍｉＲＮＡ阻害剤）を対象に投与することを含む方法を提供する。いくつかの態様では、依存症は、化学物質依存症、行動的依存症、またはその両方を含む。

【0009】

いくつかの態様では、ジストニア、神経精神疾患、知的障害、及び／または依存症は、ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子の異常なレベルに関連している。特定の実施形態では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、対象におけるＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子のレベルを増加させる。いくつかの態様では、対象におけるＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子のレベルは、ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子の参照レベル（例えば、投与前の対象における対応するレベル及び／または投与を受けなかった対応する対象におけるレベル）と比較して、少なくとも約０．５倍、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍以上、増加する。

【0010】

いくつかの態様では、ジストニア、神経精神疾患、知的障害、及び／または依存症は、シナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子の異常なレベルに関連している。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、対象におけるシナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子のレベルを増加させる。特定の実施形態では、対象におけるシナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子のレベルは、シナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子の参照レベル（例えば、投与前の対象における対応するレベル及び／または投与を受けなかった対応する対象におけるレベル）と比較して、少なくとも約０．５倍、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍以上、増加する。

【0011】

いくつかの態様では、ジストニア、神経精神疾患、知的障害、及び／または依存症は、カスパーゼ－３タンパク質及び／またはカスパーゼ－３遺伝子の異常なレベルに関連している。特定の実施形態では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、対象におけるカスパーゼ－３タンパク質及び／またはカスパーゼ－３遺伝子のレベルを減少させる。特定の態様では、対象におけるカスパーゼ－３タンパク質及び／またはカスパーゼ－３遺伝子のレベルは、カスパーゼ－３タンパク質及び／またはカスパーゼ－３遺伝子の参照レベル（例えば、投与前の対象における対応するレベル及び／または投与を受けなかった対応する対象におけるレベル）と比較して、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１００％減少する。

【0012】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ｍｉＲ４８５－３ｐを阻害する。いくつかの態様では、ｍｉＲ４８５－３ｐは、５’－ＧＵＣＡＵＡＣＡＣＧＧＣＵＣＵＣＣＵＣＵＣＵ－３’（配列番号１）を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２）を含むヌクレオチド配列を含み、ｍｉＲＮＡ阻害剤は約６～約３０ヌクレオチドの長さである。

【0013】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ヌクレオチド配列の５’末端に少なくとも１個のヌクレオチド、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチド、少なくとも６個のヌクレオチド、少なくとも７個のヌクレオチド、少なくとも８個のヌクレオチド、少なくとも９個のヌクレオチド、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１１個のヌクレオチド、少なくとも１２個のヌクレオチド、少なくとも１３個のヌクレオチド、少なくとも１４個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１６個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも１８個のヌクレオチド、少なくとも１９個のヌクレオチド、または少なくとも２０個のヌクレオチドを含む。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ヌクレオチド配列の３’末端に少なくとも１個のヌクレオチド、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチド、少なくとも６個のヌクレオチド、少なくとも７個のヌクレオチド、少なくとも８個のヌクレオチド、少なくとも９個のヌクレオチド、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１１個のヌクレオチド、少なくとも１２個のヌクレオチド、少なくとも１３個のヌクレオチド、少なくとも１４個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１６個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも１８個のヌクレオチド、少なくとも１９個のヌクレオチド、または少なくとも２０個のヌクレオチドを含む。

【0014】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号３）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号４）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号５）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号６）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号７）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号８）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号９）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１０）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１１）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１２）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１３）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１４）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１５）、５’－ＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１６）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１７）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１８）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１９）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２０）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２１）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２２）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２３）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２４）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２５）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２６）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２７）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２９）、及び５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）からなる群から選択される配列を有する。

【0015】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６２）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６３）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６４）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６５）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６６）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６７）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６８）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６９）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７０）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７１）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７２）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７３）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７４）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７５）、５’－ＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７６）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７７）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７８）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７９）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８０）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８１）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８２）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８３）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８４）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８５）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８６）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８７）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８９）、及び５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）からなる群から選択される配列を有する。

【0016】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤の配列は、５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％の配列同一性を有する。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）と少なくとも９０％の類似性を有する配列を有する。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、１個の置換または２個の置換を有するヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）を含む。

【0017】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの態様では、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドは、ロック核酸（ＬＮＡ）、アンロック核酸（ＵＮＡ）、アラビノ核酸（ＡＢＡ）、架橋核酸（ＢＮＡ）、及び／またはペプチド核酸（ＰＮＡ）である。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、骨格修飾を含む。いくつかの態様では、骨格修飾は、ホスホロジアミダイトモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）及び／またはホスホロチオエート（ＰＳ）修飾である。

【0018】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、送達剤中で送達される。いくつかの態様では、送達剤は、ミセル、エクソソーム、リピドイド、リポソーム、リポプレックス、脂質ナノ粒子、細胞外小胞、合成小胞、ポリマー化合物、ペプチド、タンパク質、細胞、ナノ粒子模倣体、ナノチューブ、コンジュゲート、ウイルスベクター、またはそれらの組み合わせを含む。

【0019】

いくつかの態様では、送達剤は、下式：
［ＷＰ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＡＭ］（式Ｉ）
または
［ＷＰ］－Ｌ１－［ＡＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（式ＩＩ）
（式中、
ＷＰは、水溶性バイオポリマー部分であり、
ＣＣは、カチオン性キャリア部分であり、
ＡＭは、アジュバント部分であり、
Ｌ１及びＬ２は、独立して任意選択のリンカーである）を含むカチオン性キャリアユニットを含む。

【0020】

いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットと単離ポリヌクレオチドとは、互いに混合される際に互いに結合してミセルを形成することができる。いくつかの態様では、結合は、共有結合を介する。特定の態様では、結合は、非共有結合を介する。いくつかの態様では、非共有結合はイオン結合を含む。

【0021】

いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、ポリ（アルキレングリコール）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリグリセロール、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（「ＰＯＺ」）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリグリセロール、またはポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）を含む。

【0022】

いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、下式：

【化1】

（式中、ｎは、１～１０００である）を有する。

【0023】

いくつかの態様では、ｎは、少なくとも約１１０、少なくとも約１１１、少なくとも約１１２、少なくとも約１１３、少なくとも約１１４、少なくとも約１１５、少なくとも約１１６、少なくとも約１１７、少なくとも約１１８、少なくとも約１１９、少なくとも約１２０、少なくとも約１２１、少なくとも約１２２、少なくとも約１２３、少なくとも約１２４、少なくとも約１２５、少なくとも約１２６、少なくとも約１２７、少なくとも約１２８、少なくとも約１２９、少なくとも約１３０、少なくとも約１３１、少なくとも約１３２、少なくとも約１３３、少なくとも約１３４、少なくとも約１３５、少なくとも約１３６、少なくとも約１３７、少なくとも約１３８、少なくとも約１３９、少なくとも約１４０、または少なくとも約１４１である。いくつかの態様では、ｎは、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１４０～約１５０、または約１５０～約１６０である。

【0024】

いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、直鎖状、分枝鎖状、または樹枝状である。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、１つ以上の塩基性アミノ酸を含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、少なくとも約３個、少なくとも約４個、少なくとも約５個、少なくとも約６個、少なくとも約７個、少なくとも約８個、少なくとも約９個、少なくとも約１０個、少なくとも約１１個、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、少なくとも約２０個、少なくとも約２１個、少なくとも約２２個、少なくとも約２３個、少なくとも約２４個、少なくとも約２５個、少なくとも約２６個、少なくとも約２７個、少なくとも約２８個、少なくとも約２９個、少なくとも約３０個、少なくとも約３１個、少なくとも約３２個、少なくとも約３３個、少なくとも約３４個、少なくとも約３５個、少なくとも約３６個、少なくとも約３７個、少なくとも約３８個、少なくとも約３９個、少なくとも約４０個、少なくとも約４１個、少なくとも約４２個、少なくとも約４３個、少なくとも約４４個、少なくとも約４５個、少なくとも約４６個、少なくとも約４７個、少なくとも約４８個、少なくとも約４９個、または少なくとも約５０個の塩基性アミノ酸を含む。特定の態様では、カチオン性キャリア部分は、約３０個～約５０個の塩基性アミノ酸を含む。

【0025】

いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は、アルギニン、リシン、ヒスチジン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、約４０個のリシンモノマーを含む。

【0026】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、免疫反応、炎症反応、または組織を調節することができる。特定の態様では、アジュバント部分は、イミダゾール誘導体、アミノ酸、ビタミン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、アジュバント部分は、下式：

【化2】

（式中、Ｇ１及びＧ２のそれぞれは、Ｈ、芳香環、もしくは１～１０アルキルであるか、またはＧ１とＧ２はともに芳香環を形成し、ｎは１～１０である）を有する。

【0027】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、ニトロイミダゾールを含む。いくつかの態様では、アジュバント部分は、メトロニダゾール、チニダゾール、ニモラゾール、ジメトリダゾール、プレトマニド、オルニダゾール、メガゾール、アザニダゾール、ベンズニダゾール、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、アジュバント部分は、アミノ酸を含む。いくつかの態様では、アジュバント部分は、下式：

【化3】

（式中、Ａｒは、

【化4】

であり、Ｚ１及びＺ２のそれぞれは、ＨまたはＯＨである）を有する。

【0028】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、ビタミンを含む。いくつかの態様では、ビタミンは、環式環または環式ヘテロ原子環及びカルボキシル基またはヒドロキシル基を含む。いくつかの態様では、ビタミンは、下式：

【化5】

（式中、Ｙ１及びＹ２のそれぞれは、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはＳであり、ｎは１または２である）を有する。

【0029】

いくつかの態様では、ビタミンは、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ６、ビタミンＢ７、ビタミンＢ９、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ２、ビタミンＤ３、ビタミンＥ、ビタミンＭ、ビタミンＨ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態では、ビタミンは、ビタミンＢ３である。

【0030】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、少なくとも約２個、少なくとも約３個、少なくとも約４個、少なくとも約５個、少なくとも約６個、少なくとも約７個、少なくとも約８個、少なくとも約９個、少なくとも約１０個、少なくとも約１１個、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、または少なくとも約２０個のビタミンＢ３を含む。特定の態様では、アジュバント部分は、約１０個のビタミンＢ３を含む。

【0031】

いくつかの態様では、送達剤は、約１２０個～約１３０個のＰＥＧユニットを有する水溶性バイオポリマー部分と、約３０個～約４０個のリシンを有するポリリシンを含むカチオン性キャリア部分と、約５個～約１０個のビタミンＢ３を有するアジュバント部分と、を含む。

【0032】

いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、酵素分解からｍｉＲＮＡ阻害剤を保護することができる。

【0033】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、非経口投与、筋肉内投与、皮下投与、点眼、静脈内投与、腹腔内投与、皮内投与、眼窩内投与、脳内投与、頭蓋内投与、脳室内投与、脊髄内投与、心室内投与、髄腔内投与、大槽内投与、嚢内投与、腫瘍内投与、局所投与、またはそれらの任意の組み合わせで投与される。

【0034】

いくつかの態様では、送達剤はミセルである。特定の態様では、ミセルは、（ｉ）約１００個～約２００個のＰＥＧユニット、（ｉｉ）それぞれがアミン基を有する約３０個～約４０個のリシン、（ｉｉｉ）それぞれがチオール基を有する約１５個～約２０個のリシン、及び（ｉｖ）それぞれがビタミンＢ３に結合された約３０個～約４０個のリシンを含む。いくつかの態様では、ミセルは、（ｉ）約１２０個～約１３０個のＰＥＧユニット、（ｉｉ）それぞれがアミン基を有する約３２個のリシン、（ｉｉｉ）それぞれがチオール基を有する約１６個のリシン、及び（ｉｖ）それぞれがビタミンＢ３に結合された約３２個のリシンを含む。

【0035】

いくつかの態様では、ＰＥＧユニットに治療部分がさらに結合されている。いくつかの態様では、標的化部分は、ＬＡＴ１標的化リガンドである。いくつかの態様では、標的化部分は、フェニルアラニンである。

【図面の簡単な説明】

【0036】

【図1】本開示のキャリアユニットの例示的な構造を示す。提示される例は、アニオン性ペイロード、例えば、遺伝子を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドなどの核酸、例えば、ｍｉＲＮＡ（ａｎｔｉ－ｍｉＲ）と静電的に相互作用することができるカチオン性キャリア部分を含む。いくつかの態様では、ＡＭは、ＷＰとＣＣとの間に配置することができる。ＣＣ及びＡＭコンポーネントは、簡単のために直線的配置で描かれている。しかしながら、本明細書に述べられるように、いくつかの態様では、ＣＣ及びＡＭは、スキャフォールドの形で配置することもできる。

【0037】

【図2A】マウス初代ニューロン培養、レンチウイルス－ｍｉＲ４８５－３ｐ形質導入、及び細胞回収の概略図を示す。

【図2B】レンチコントロール及びレンチ－ｍｉＲ－４８５－３ｐで処理したニューロンの免疫細胞化学（右のパネル）、ＰＳＤ９５染色（中央のパネル）、及びそれぞれの合成画像（左のパネル）を示す。

【図2C】レンチコントロール及びレンチｍｉＲ－４８５－３ｐで処理したニューロンの免疫細胞化学（右端のパネル）、シナプトフィジン染色（中央のパネル）、及び合成画像（左パネル）を示す。

【図2D】レンチコントロール及びレンチｍｉＲ－４８５－３ｐで処理したニューロンにおける図２Ｂに示されるＰＳＤ９５染色の強調された免疫細胞化学画像を示す。図２Ｄの右側の棒グラフは、免疫組織化学画像で得られた結果の定量的な比較を示す。

【図2E】レンチコントロール及びレンチｍｉＲ－４８５－３ｐで処理したニューロンにおける図２Ｃに示されるシナプトフィジン染色の強調された免疫細胞化学画像を示す。図２Ｅの右側の棒グラフは、免疫組織化学画像で得られた結果の定量的な比較を示す。

【0038】

【図3】レンチコントロール及びレンチ－ｍｉＲ－４８５－３ｐで処理したニューロン（右のパネル）及び切断型カスパーゼ３（中央のパネル）の免疫細胞化学、ならびにそれぞれの合成画像（左のパネル）を示す。

【0039】

【図4A】ミクログリア／アストロサイト培養、レンチウイルス－ｍｉＲ－４８５－３ｐ形質導入及び細胞採取の概略図を示す。出生後のマウスの全脳をアストロサイトとミクログリアに分離して培養し、レンチコントロールまたはレンチ－ｍｉＲ－４８５－３ｐで処理し、免疫細胞化学を行った。

【図4B】レンチコントロール及びレンチｍｉＲ－４８５－３ｐで処理したマウス初代ミクログリア細胞の免疫細胞化学を示す。ｍｉＲ－４８５－３ｐの発現（右のパネル）、ミクログリア細胞特異的マーカーＩｂａ１（中央のパネル）、及びそれぞれの合成画像（左のパネル）を示す。

【図4C】ウイルス発現（右端のパネル）、切断型カスパーゼ３染色（中央のパネル）、及び合成画像（右のパネル）を示す。

【0040】

【図5】（Ａ）レンチコントロール及びレンチ－ｍｉＲ－４８５－３ｐで処理した初代アストロサイト（右のパネル）及びアストロサイト細胞特異的マーカー染色であるＧＦＡＰ（中央のパネル）の免疫組織化学、ならびにそれぞれの合成画像（左のパネル）を示す。（Ｂ）レンチコントロール及びレンチ－ｍｉＲ－４８５－３ｐのウイルス発現（右のパネル）及び切断型カスパーゼ３の染色（中央のパネル）ならびにそれぞれの合成画像（左のパネル）を示す。

【0041】

【図6A】ヒトミクログリア及びヒトアストロサイト細胞培養、レンチウイルス－ｍｉＲ－４８５－３ｐ形質導入及び回収の概略図を示す。

【図6B】レンチコントロール及びレンチ－ｍｉＲ－４８５－３ｐのウイルス発現（右のパネル）及びミクログリアマーカー（Ｉｂａ１）染色（中央のパネル）ならびにそれぞれの合成画像（左のパネル）を示す。

【図6C】ウイルス発現（右のパネル）及び切断型カスパーゼ３の染色（中央のパネル）ならびにそれぞれの合成画像（左のパネル）を示す。

【0042】

【図7】（Ａ）ヒトアストロサイトにおけるレンチコントロール及びレンチ－ｍｉＲ－４８５－３ｐのウイルス発現（右のパネル）及びアストロサイト細胞マーカー（ＧＦＡＰ）（中央のパネル）ならびにそれぞれの合成画像（左のパネル）を示す。（Ｂ）レンチコントロール及びレンチ－ｍｉＲ－４８５－３ｐのウイルス発現（右のパネル）及び切断型カスパーゼ３（中央のパネル）ならびにそれぞれの合成画像（左のパネル）を示す。

【発明を実施するための形態】

【0043】

Ｉ．用語
本開示をより容易に理解できるように、特定の用語を最初に定義する。本出願で使用する場合、本明細書に別段明記されない限り、以下の用語のそれぞれは、下記に記載する意味を有するものとする。追加の定義は、本出願の全体を通じて記載される。

【0044】

「ａ」または「ａｎ」なる用語で示される実体は、その実体の１つ以上を指し、例えば、「ａ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ（ヌクレオチド配列）」は、１つ以上のヌクレオチド配列を表すものとして理解される点に留意されたい。したがって、「ａ」（または「ａｎ」）、ならびに「ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ」（１つ以上の）、及び「ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ」（少なくとも１つの）は、本開示では互換的に用いられる場合がある。各請求項は、あらゆる任意選択的な要素を除外するように起草される場合もある点にも留意されたい。したがって、この記載は、請求項の要素の記載との関連において「～だけの」、「～のみ」などといった除外的な語の使用に対する、または否定による限定の使用に対する先行詞としての役割を有するものとする。

【0045】

さらに、「及び／または」は、本明細書で使用される場合、他方を伴うまたは伴わない２つの特定された特徴または構成要素の各々の特定の開示として解釈されるべきである。したがって、本明細書で「Ａ及び／またはＢ」などの語句で使用される「及び／または」という用語は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、用語「及び／または」は、語句で使用される場合、例えば、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」は、以下の態様の各々：Ａ、Ｂ、及びＣ、Ａ、Ｂ、またはＣ、ＡまたはＣ、ＡまたはＢ、ＢまたはＣ、Ａ及びＣ、Ａ及びＢ、Ｂ及びＣ、Ａ（単独）、Ｂ（単独）、及びＣ（単独）を包含することが意図される。

【0046】

態様が「含む」という言葉を用いて本明細書に記載されている場合はいつでも、「からなる」及び／または「本質的になる」の観点から記載される別の類似する態様も提供されることが理解される。

【0047】

別段の定義がなされないかぎり、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が関連する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有するものとする。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、及びＯｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くについての一般的な辞書を当業者に与えるものである。

【0048】

単位、接頭語、及び記号は、国際単位系（ＳＩ）で認められた形式で記載する。数値範囲は、その範囲を規定する数値を含むものとする。数値の範囲が記載されている場合、その範囲の記載された上限と下限との間にあるそれぞれの介在する整数値、及びそのそれぞれの分数もまた、そのような値の間のそれぞれの部分範囲とともに具体的に開示される点は理解されるべきである。任意の範囲の上限値及び下限値は独立してその範囲に含まれる場合も、その範囲から除外される場合もあるが、どちらかの限界値が含まれるか、どちらの限界値も含まれないか、または両方の限界値が含まれるそれぞれの範囲もまた、本開示に包含される。したがって、本明細書に記載される範囲は、記載される端点を含む、その範囲内のすべての値の簡略的な表記であるものとして理解される。例えば、１～１０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０からなる群からの任意の数、数の組み合わせ、または部分範囲を含むものとして理解される。

【0049】

値が明示的に記載されている場合、記載されている値とほぼ同じ数または量である値もまた、本開示の範囲内に含まれる点を理解されたい。ある組み合わせが開示される場合、その組み合わせの要素の部分的な組み合わせのそれぞれも具体的に開示され、本開示の範囲内に含まれる。逆に、異なる要素または要素群が個別に開示される場合、それらの組み合わせも開示される。開示の任意の要素が複数の代替手段を有するものとして開示される場合、各代替手段が単独でまたは他の代替手段との任意の組み合わせで除外されるその開示の例も本明細書により開示される、開示の複数の要素がそのような除外を有し得、そのような除外を有する要素のすべての組み合わせが本明細書により開示される。

【0050】

ヌクレオチドは、それらの広く認められている１文字の略号で呼称する。特に断らない限り、ヌクレオチド配列は５’から３’の方向に左から右に記載する。本明細書においてヌクレオチドは、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される一般的に公知のヌクレオチドの１文字記号により表記される。したがって、「ａ」はアデニンを表し、「ｃ」はシトシンを表し、「ｇ」はグアニンを表し、「ｔ」はチミンを表し、「ｕ」はウラシルを表す。

【0051】

アミノ酸配列はアミノ末端からカルボキシ末端の方向に左から右に記載する。本明細書においてアミノ酸は、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎにより推奨される、一般的に公知のアミノ酸の３文字記号または１文字記号により表記される。

【0052】

「約」という用語は、本明細書では、およそ、大体、おおよそ、またはその範囲内の意味で使用される。用語「約」が、数値範囲と併せて使用される場合、それは、示された数値の上下に境界を広げることによってその範囲を修飾する。一般に、「約」という用語は、例えば、上または下に１０パーセント（より高いまたはより低い）の変動で、明示される値の上及び下に数値を修正することができる。

【0053】

本明細書で使用する場合、「アデノ随伴ウイルス」（ＡＡＶ）なる用語には、これらに限定されるものではないが、ＡＡＶタイプ１、ＡＡＶタイプ２、ＡＡＶタイプ３（タイプ３Ａ及び３Ｂを含む）、ＡＡＶタイプ４、ＡＡＶタイプ５、ＡＡＶタイプ６、ＡＡＶタイプ７、ＡＡＶタイプ８、ＡＡＶタイプ９、ＡＡＶタイプ１０、ＡＡＶタイプ１１、ＡＡＶタイプ１２、ＡＡＶタイプ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、ヘビＡＡＶ、トリＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、エビＡＡＶ、Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７８：６３８１ （２００４））及びＭｏｒｉｓ ｅｔ ａｌ．（Ｖｉｒｏｌ． ３３：３７５ （２００４））に開示されるＡＡＶ血清型及び系統群、ならびに現在知られているかもしくは今後発見される他の任意のＡＡＶが含まれる（例えば、ＦＩＥＬＤＳ ｅｔ ａｌ． ＶＩＲＯＬＯＧＹ，ｖｏｌｕｍｅ ２，ｃｈａｐｔｅｒ ６９ （４ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）を参照）。いくつかの態様では、「ＡＡＶ」には、既知のＡＡＶの誘導体が含まれる。いくつかの態様では、「ＡＡＶ」には、改変された、または人工ＡＡＶが含まれる。

【0054】

「投与」、「投与すること」なる用語、及びその文法的変化形は、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤などの組成物を、薬学的に許容される経路により対象に導入することを指す。本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤を含むミセルなどの組成物の対象への導入は、腫瘍内、経口、肺、鼻腔内、非経口（静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、もしくは皮下）、直腸、リンパ内、髄腔内、眼周または局所を含む任意の好適な経路によるものである。投与は、自己投与及び他者による投与を含む。適当な投与経路によって、組成物または薬剤はその目的とする機能を実行することができる。例えば、適当な経路が静脈内である場合、組成物は、組成物または薬剤を対象の静脈内に導入することによって投与される。

【0055】

本明細書で使用する場合、「～に関連した」という用語は、２つ以上の実体または性質間の密接な関係性のことを指す。例えば、本開示によって治療することが可能な疾患または状態を記述するために用いられる場合（例えば、ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子の異常なレベルに関連した疾患または状態）、「～に関連した」という用語は、対象がタンパク質及び／または遺伝子の異常な発現を示す場合に対象がその疾患または状態を罹患している可能性が高いことを指す。いくつかの態様では、タンパク質及び／または遺伝子の異常な発現は、疾患または状態を引き起こす。いくつかの態様では、異常な発現は疾患または状態を必ずしも引き起こさないが相関している。対象が、疾患または状態に関連したタンパク質及び／または遺伝子の異常な発現を示すかどうかを判定するために使用することができる適当な方法の非限定的な例を、本開示の他の箇所に示す。

【0056】

本明細書で使用する場合、対象とする１つ以上の値に適用される「およそ」という用語は、記載される参照値と同様の値を指す。ある特定の態様では、「ほぼ」という用語は、特に明記しない限り、または他のことが文脈から明らかでない限り、明示される参照値の両方向に（数を超えるか、またはそれ未満の）１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下の範囲内の値の範囲を指す（かかる数がとり得る値の１００％を超える場合を除く）。

【0057】

本明細書で使用する場合、「保存された」という用語は、比較されている２つ以上の配列の同じ位置において不変に見出されるものである、それぞれポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列のヌクレオチドまたはアミノ酸残基を指す。比較的保存されたヌクレオチドまたはアミノ酸は、配列において他の箇所に現れるヌクレオチドまたはアミノ酸よりも関連した配列間で保存されているものである。

【0058】

いくつかの態様では、２つ以上の配列は、それらが互いに１００％同一である場合、「完全に保存されている」または「同一である」と言われる。いくつかの態様では、２つ以上の配列は、それらが互いに少なくとも７０％同一であるか、少なくとも８０％同一であるか、少なくとも９０％同一であるか、または少なくとも９５％同一である場合、「高度に保存されている」と言われる。いくつかの態様において、２つ以上の配列は、互いに約７０％同一である、約８０％同一である、約９０％同一である、約９５％、約９８％、または約９９％同一である場合、「高度に保存された」と言われる。いくつかの態様では、２つ以上の配列は、それらが互いに少なくとも３０％同一であるか、少なくとも４０％同一であるか、少なくとも５０％同一であるか、少なくとも６０％同一であるか、少なくとも７０％同一であるか、少なくとも８０％同一であるか、少なくとも９０％同一であるか、または少なくとも９５％同一である場合、「保存されている」と言われる。いくつかの態様では、２つ以上の配列は、それらが互いに約３０％同一であるか、約４０％同一であるか、約５０％同一であるか、約６０％同一であるか、約７０％同一であるか、約８０％同一であるか、約９０％同一であるか、約９５％同一であるか、約９８％同一であるか、または約９９％同一である場合、「保存されている」と言われる。配列の保存は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの全長に適用することができ、または部分、領域、もしくはそれらの特徴に適用することができる。

【0059】

本明細書で使用する場合、「由来する」という用語は、特定の分子もしくは生物または情報（例えば、アミノ酸または核酸の配列）を使用して、特定の分子もしくは生物から単離されるか、製造される構成要素を指す。例えば、第２の核酸配列に由来する核酸配列は、第２の核酸配列のヌクレオチド配列と同一であるか、または実質的に類似するヌクレオチド配列を含み得る。ヌクレオチドまたはポリペプチドの場合、派生した種は、例えば、自然に生じる変異誘発、人為的定方向突然変異誘発、または人為的ランダム変異誘発により得られ得る。ヌクレオチドまたはポリペプチドを派生させるために使用される変異誘発は、意図的に定方向、もしくは意図的にランダムであるか、または各々の組み合わせである。最初のものに由来する異なるヌクレオチドまたはポリペプチドを作製するためのヌクレオチドまたはポリペプチドの変異誘発は、ランダム事象（例えば、ポリメラーゼの不忠実さにより引き起こされる）であり得、派生したヌクレオチドまたはポリペプチドの同定は、例えば、本明細書において述べられる適切なスクリーニング法によりなされ得る。一部の態様では、第２のヌクレオチドまたはアミノ酸配列に由来するヌクレオチドまたはアミノ酸配列は、それぞれ第２のヌクレオチドまたはアミノ酸配列に対する少なくとも約５０％、少なくとも約５１％、少なくとも約５２％、少なくとも約５３％、少なくとも約５４％、少なくとも約５５％、少なくとも約５６％、少なくとも約５７％、少なくとも約５８％、少なくとも約５９％、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６２％、少なくとも約６３％、少なくとも約６４％、少なくとも約６５％、少なくとも約６６％、少なくとも約６７％、少なくとも約６８％、少なくとも約６９％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列同一性を有し、ここで、第１のヌクレオチドまたはアミノ酸配列は、第２のヌクレオチドまたはアミノ酸配列の生物活性を保持する。

【0060】

本明細書で使用する場合、「コーディング領域」または「コーディング配列」とは、アミノ酸に翻訳可能なコドンからなるポリヌクレオチドの部分である。「終止コドン」（ＴＡＧ、ＴＧＡ、またはＴＡＡ）は通常はアミノ酸に翻訳されないがコーディング領域の一部とみなすことができる。ただし、すべてのフランキング配列、例えば、プロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロンなどはコーディング領域の一部ではない。コーディング領域の境界は、得られるポリペプチドのアミノ末端をコードする５’末端の開始コドンと、得られるポリペプチドのカルボキシ末端をコードする３’末端の翻訳終止コドンとによって一般的に決定される。

【0061】

「相補的」及び「相補性」という用語は、ワトソン・クリック型塩基対形成則により互いに関連する２つ以上のオリゴマー（すなわち、それぞれが核酸塩基配列を含む）、またはオリゴマーと標的遺伝子との間を指す。例えば、核酸塩基配列「Ｔ－Ｇ－Ａ（５’→３’）」は、核酸塩基配列「Ａ－Ｃ－Ｔ（３’→５’）」に相補的である。相補性は「部分的」であってよく、その場合、所与の核酸塩基配列の核酸塩基のすべてより少ないものが塩基対形成則に従って他の核酸塩基配列と一致している。例えば、いくつかの態様では、所与の核酸塩基配列と他の核酸塩基配列との間の相補性は、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％であり得る。したがって、特定の態様では、「相補性」という用語は、標的核酸配列（例えば、ｍｉＲ－４８５の核酸配列）との少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の一致または相補性を指す。または例のような、「完璧な」または「完全な」（１００％）相補性が、所与の核酸塩基配列と他の核酸塩基配列との間に存在し得る。いくつかの態様では、核酸塩基配列間の相補性の程度は、配列間のハイブリダイゼーションの効率及び強度に顕著な影響を与える。

【0062】

「下流」という用語は、参照ヌクレオチド配列の３’側に存在するヌクレオチド配列を指す。ある特定の態様では、下流ヌクレオチド配列は、転写開始点に続く配列に関する。例えば、遺伝子の翻訳開始コドンは、転写開始部位の下流に存在する。

【0063】

「賦形剤」及び「キャリア」という用語は、互換的に使用され、化合物、例えば本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される不活性物質を指す。

【0064】

本明細書で使用する場合、「発現」という用語は、ポリヌクレオチドが遺伝子産物、例えばＲＮＡまたはポリペプチドを生成するプロセスを指す。発現には、マイクロＲＮＡ結合部位、小分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、または他の任意のＲＮＡ産物へのポリヌクレオチドの転写が限定されることなく含まれる。発現には、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）へのポリヌクレオチドの転写、及びｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳が限定されることなく含まれる。発現によって、「遺伝子産物」が生成される。本明細書で使用する場合、遺伝子産物は、例えば遺伝子の転写によって生成されるＲＮＡなどの核酸であってよい。本明細書で使用する場合、遺伝子産物は、核酸、遺伝子の転写によって生成されるＲＮＡもしくはｍｉＲＮＡ、または転写産物から翻訳されたポリペプチドであってよい。本明細書に記載される遺伝子産物には、例えばポリアデニル化またはスプライシングなどの転写後修飾を有する核酸、または、例えばリン酸化、メチル化、グリコシル化、脂質の付加、他のタンパク質サブユニットとの会合、またはタンパク質分解開裂などの翻訳後修飾を有するポリペプチドがさらに含まれる。

【0065】

本明細書で使用する場合、「相同性」という用語は、ポリマー分子間の、例えば核酸分子間の全体的関連性を指す。一般に、「相同性」という用語は、２つの分子の進化的関係を意味する。したがって、相同な２つの分子は、共通の進化的祖先を有する。本開示との関連で、相同性という用語は、同一性及び類似性の両方を包含する。

【0066】

いくつかの態様では、ポリマー分子は、分子における少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％のモノマーが同一（厳密に同じモノマー）であるか、または類似する（保存的置換）場合、互いに「相同である」とみなされる。「相同である」という用語は、必然的に少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチド配列）間の比較を指す。

【0067】

本開示との関連で、置換（それらがアミノ酸置換と称される場合でも）は、核酸レベルで行われ、すなわち、アミノ酸残基を代替アミノ酸残基で置換することは、第１のアミノ酸をコードするコドンを第２のアミノ酸をコードするコドンで置換することによって行われる。

【0068】

本明細書で使用する場合、「同一性」という用語は、ポリマー分子間の、例えば、ポリヌクレオチド分子間の全体的なモノマー保存性を指す。いかなる追加の修飾語もない「同一である」という用語、例えば、「ポリヌクレオチドＡはポリヌクレオチドＢと同一である」は、ポリヌクレオチド配列同士が１００％同一（１００％の配列同一性）であることを意味する。例えば、「７０％同一である」と２つの配列を表現することは、例えば、「７０％配列同一性」を有するとそれらを表現することに等しい。

【0069】

２つのポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列の同一率（％）の計算は、例えば、最適な比較のために２つの配列をアラインメントすることにより実行され得る（例えば、最適なアラインメントのために第１及び第２のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列の一方または両方にギャップが導入され得、同一でない配列が比較のために無視され得る）。特定の実施形態では、比較目的のためにアラインメントされる配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％である。次いで、対応するアミノ酸位のアミノ酸、またはポリヌクレオチドの場合は塩基が比較される。

【0070】

第１の配列におけるある位置が第２の配列における対応する位置と同じアミノ酸またはヌクレオチドにより占められる場合、分子はその位置で同一である。２つの配列間の同一率（％）は、２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮した、配列により共有される同一の位置の数の関数である。配列の比較及び２つの配列間の同一率（％）の決定は、数学アルゴリズムを使用して達成され得る。

【0071】

異なる配列同士（例えば、ポリヌクレオチド配列）をアラインするために使用することができる適当なソフトウェアプログラムは様々なソースから入手可能である。配列同一率（％）を決定するための適当なプログラムの１つに、米国政府のＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なＢＬＡＳＴパッケージプログラムの一部であるｂｌ２ｓｅｑがある。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して、２個の配列間の比較を行う。ＢＬＡＳＴＮが核酸配列を比較するために使用されるのに対して、ＢＬＡＳＴＰはアミノ酸配列を比較するために使用される。他の適当なプログラムとしては、例えば、バイオインフォマティクスプログラムパッケージＥＭＢＯＳＳの一部であり、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）よりｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａにおいてやはり入手可能なＮｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、またはＭａｔｃｈｅｒがある。

【0072】

配列アライメントは、当該技術分野において公知の方法、例えば、ＭＡＦＦＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ（ＣｌｕｓｔａｌＷ、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ、またはＣｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａ）、ＭＵＳＣＬＥなどを使用して実施され得る。

【0073】

ポリヌクレオチドまたはポリペプチド参照配列と整列する単一のポリヌクレオチドまたはポリペプチド標的配列内の異なる領域は、それぞれ、それら自体の配列同一率（％）を有することができる。配列同一率（％）は、１０分の１の位に四捨五入される点に留意されたい。たとえば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、及び８０．１４は、８０．１に切り捨てられ、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、及び８０．１９は８０．２に切り上げられる。また、長さの値は常に整数である点に留意されたい。

【0074】

所定の態様では、第２のアミノ酸配列（または核酸配列）に対する第１のアミノ酸配列（または核酸配列）の同一百分率（ＩＤ％）は、ＩＤ％＝１００ｘ（Ｙ／Ｚ）（式中、Ｙは、第１及び第２の配列のアライメント（視覚検査または特定の配列アライメントプログラムによってアライメントされる）において同一一致としてスコア化されたアミノ酸残基（または核酸塩基）の数であり、Ｚは、第２の配列における残基の総数である）として計算される。第１の配列の長さが第２の配列を超える場合、第１の配列の第２の配列に対する同一率（％）は、第２の配列の第１の配列に対する同一率（％）より高くなるであろう。

【0075】

当業者であれば、配列同一率（％）を計算するための配列アラインメントの生成が、一次配列データによってのみ行われるバイナリー配列間比較に限定されない点は理解されよう。配列アライメントは、配列データを異種の供給源由来のデータ、例えば、構造データ（例えば、タンパク質結晶構造）、機能データ（例えば、変異の位置）、または系統学的データと統合することにより生成され得ることも理解されよう。異種データを統合してマルチプル配列アラインメントを生成する適当なプログラムとしてｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇで入手できるか、あるいは例えばＥＢＩからも入手できるＴ－Ｃｏｆｆｅｅがある。配列同一率（％）を計算するために使用される最終的なアラインメントは、自動または手動のいずれかで管理され得ることも理解されよう。

【0076】

本明細書で使用する場合、「単離された」、「精製された」、「抽出された」という用語、及びそれらの文法的変化形は、互換的に使用され、１つ以上の精製プロセスを受けた本開示の所望の組成物、例えば、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤の調製状態を指す。いくつかの態様では、本明細書で使用する場合、単離または精製は、夾雑物を含有する試料から本開示の組成物、例えば本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤を取り出す、（例えば、画分を）部分的に取り出すプロセスである。

【0077】

いくつかの態様では、単離された組成物は、検出可能な望ましくない活性を有さないか、または代替的に、望ましくない活性のレベルもしくは量が許容可能なレベルまたは量以下である。他の態様では、単離された組成物は、許容可能な量及び／または濃度及び／または活性以上の量及び／または濃度の本開示の所望の組成物を有する。他の態様では、単離された組成物は、組成物が取得される出発物質と比較して濃縮される。この濃縮は、出発物質と比較して少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．９％、少なくとも約９９．９９％、少なくとも約９９．９９９％、少なくとも約９９．９９９９％、または９９．９９９９％超であり得る。

【0078】

いくつかの態様では、単離された調製物は、残留する生物学的産物を実質的に含まない。いくつかの態様では、単離された調製物は、任意の混入している生物学的物質を１００％、少なくとも約９９％、少なくとも約９８％、少なくとも約９７％、少なくとも約９６％、少なくとも約９５％、少なくとも約９４％、少なくとも約９３％、少なくとも約９２％、少なくとも約９１％、または少なくとも約９０％含まない。残留する生物学的産物は、非生物物質（化学物質を含む）または不要な核酸、タンパク質、脂質、もしくは代謝産物を含み得る。

【0079】

本明細書で使用する場合、「連結された」という用語は、共有結合または非共有結合によりそれぞれ第２のアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列に結合された、第１のアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列を指す。第１のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列は、第２のアミノ酸またはポリヌクレオチド配列に直接的に結合もしくは並列され得るか、または代替的に介在配列が第１の配列から第２の配列までに共有結合により加わり得る。「連結された」という用語は、第１のポリヌクレオチド配列の第２のポリヌクレオチド配列への５’末端または３’末端での融合を意味するだけでなく、第２のポリヌクレオチド配列（または第１のポリヌクレオチド配列）における任意の２つのヌクレオチドへの第１のポリヌクレオチド配列（またはそれぞれ第２のポリヌクレオチド配列）全体の挿入も含む。第１のポリヌクレオチド配列は、ホスホジエステル結合またはリンカーにより第２のポリヌクレオチド配列に連結され得る。リンカーは、例えば、ポリヌクレオチドであり得る。

【0080】

本明細書で使用する場合、「ｍｉＲＮＡ阻害剤」とは、ｍｉＲＮＡの発現、機能、及び／または活性を減少させるか、変化させるか、及び／または調節することができる化合物を指す。ｍｉＲＮＡ阻害剤は、標的ｍｉＲＮＡ核酸配列と少なくとも部分的に相補的であるポリヌクレオチド配列であってよく、それにより、ｍｉＲＮＡ阻害剤は標的ｍｉＲＮＡ配列とハイブリダイズする。例えば、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、標的ｍｉＲ－４８５核酸配列と少なくとも部分的に相補的であるヌクレオチド分子をコードしたヌクレオチド配列を含み、それにより、ｍｉＲ－４８５阻害剤はｍｉＲ－４８５配列とハイブリダイズする。さらなる態様では、ｍｉＲ－４８５配列に対するｍｉＲ－４８５のハイブリダイゼーションは、ｍｉＲ－４８５の発現、機能、及び／または活性を減少させるか、変化させるか、かつ／または調節する（例えば、ハイブリダイゼーションによって、ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子の発現の増大、及び／またはシナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子の発現の増大、及び／またはカスパーゼ３タンパク質及び／またはカスパーゼ３遺伝子の発現の減少がもたらされる）。

【0081】

「ｍｉＲＮＡ」、「ｍｉＲ」、及び「マイクロＲＮＡ」という用語は、互換的に使用され、ＲＮＡによる遺伝子調節に関与する真核生物において見出されるマイクロＲＮＡ分子を指す。この用語は、前駆体からプロセシングされた一本鎖ＲＮＡ分子を指すために使用される。いくつかの態様では、「アンチセンスオリゴマー」という用語は、本開示のマイクロＲＮＡ分子を記述するために使用することもできる。本開示に関連するｍｉＲＮＡの名称及びそれらの配列は、本明細書において提供される。マイクロＲＮＡは、不完全な塩基対形成により標的ｍＲＮＡを認識及びそれに結合し、標的ｍＲＮＡの不安定化または翻訳阻害をもたらし、これにより、標的遺伝子発現を下方調節する。逆に、ｍｉＲＮＡ結合部位を含む分子（一般にｍｉＲＮＡのシード領域に相補的な配列を含む分子）によるｍｉＲＮＡの標的化は、ｍｉＲＮＡにより誘発される翻訳阻害を低減または阻害し得、標的遺伝子の上方調節をもたらす。

【0082】

「ミスマッチ」または「複数のミスマッチ」という用語は、オリゴマー核酸塩基配列（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）における塩基対形成則に従って標的核酸配列（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）と一致しない１つ以上の核酸塩基（連続しているまたは離れているにかかわらず）を指す。多くの場合、完全な相補性が所望されるが、いくつかの態様では、標的核酸配列に対する１つ以上（好ましくは６つ、５つ、４つ、３つ、２つ、または１つ）のミスマッチが生じ得る。オリゴマー内の任意の位置でのバリエーションが含まれる。ある特定の態様では、本開示のアンチセンスオリゴマー（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、末端近くでの核酸塩基配列のバリエーション、内部でのバリエーションを含み、存在する場合、通常、５’及び／または３’末端の約６、５、４、３、２、または１サブユニット以内に存在する。いくつかの態様では、１つ、２つ、または３つの核酸塩基が除去されてもよく、依然としてオンターゲットの結合を与えることができる。

【0083】

本明細書で使用する場合、「調節する」、「修飾する」という用語、及びそれらの文法的変化形は、一般に、特定の濃度、レベル、発現、機能、または行動に適用される場合、例えば、アンタゴニストまたはアゴニストとして作用するために、特定の濃度、レベル、発現、機能、または行動を増加または減少させること、例えば、直接または間接的に、促進すること／刺激すること／上方調節することまたはそれらに干渉すること／それらを阻害すること／それらを下方調節することにより変化させる能力を指す。場合によっては、修飾因子は、ある特定の濃度、レベル、活性、または機能を、コントロールと比較して、または一般に予想される活性の平均レベルと比較して、もしくは活性の対照レベルと比較して増加及び／または減少させ得る。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲＮＡ阻害剤、例えばｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５の発現、機能及び／または活性を調節する（例えば減少させる、変化させる、または失わせる）ことができ、それにより、ＰＳＤ９５、シナプトフィジン、及び／またはカスパーゼ３のタンパク質もしくは遺伝子の発現及び／または活性を調節することができる。

【0084】

「核酸」、「核酸分子」、「ヌクレオチド配列」、「ポリヌクレオチド」、及びそれらの文法的変化形は、互換的に使用され、一本鎖形態または二重螺旋のいずれかでのリン酸エステルポリマー形態のリボヌクレオシド（アデノシン、グアノシン、ウリジン、またはシチジン；「ＲＮＡ分子」）もしくはデオキシリボヌクレオシド（デオキシアデノシン、デオキシグアノシン、チミジン、またはデオキシシチジン；「ＤＮＡ分子」）、またはそれらの任意のホスホエステルアナログ、例えば、ホスホロチオネート及びチオエステルを指す。一本鎖核酸配列は、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）または一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）を指す。二本鎖ＤＮＡ－ＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡ、及びＲＮＡ－ＲＮＡ螺旋が可能である。核酸分子及び特にＤＮＡまたはＲＮＡ分子という用語は、分子の一次及び二次構造のみを指し、任意の特定の三次形態に限定されない。したがって、この用語は、とりわけ線形または環状ＤＮＡ分子（例えば、制限フラグメント）、プラスミド、スーパーコイルＤＮＡ、及び染色体に見出される二本鎖ＤＮＡを含む。特定の二本鎖ＤＮＡ分子の構造について述べる際、配列は、ＤＮＡの非転写鎖（すなわち、ｍＲＮＡに相同な配列を有する鎖）に沿った５’～３’方向での配列のみを提供する通常の慣例に従って本明細書に記載され得る。「組換えＤＮＡ分子」は、分子生物学的操作を受けたＤＮＡ分子である。ＤＮＡとしては、限定されるものではないが、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、合成ＤＮＡ、及び半合成ＤＮＡが挙げられる。本開示の「核酸組成物」は、本明細書に記載されるような１つ以上の核酸を含む。

【0085】

「薬学的に許容されるキャリア」、「薬学的に許容される賦形剤」という用語、及びそれらの文法的変化形は、ヒトを含む動物に使用するための米国連邦政府の規制機関により承認されたか、または米国薬局方に列挙される薬剤のいずれか、ならびに対象への組成物の投与を禁止する程度まで望ましくない生理作用の発生を引き起こさず、投与される化合物の生物活性及び特性を抑制しない任意のキャリアまたは希釈剤を包含する。医薬組成物を調製するのに有用であり、一般に安全で、非毒性であり、望ましい賦形剤及び担体が含まれる。

【0086】

本明細書で使用する場合、「医薬組成物」という用語は、１種以上の他の化学成分、例えば、薬学的に許容されるキャリア及び賦形剤と混合もしくは混ぜ合わされたか、またはそれらの中に懸濁された、例えば、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤などの本明細書に記載される化合物のうちの１種以上を指す。医薬組成物の１つの目的は、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤を含む製剤の対象への投与を促進することである。

【0087】

本明細書で使用する場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、それらのアナログ、またはそれらの混合物が挙げられるヌクレオチドの任意の長さのポリマーを指す。

【0088】

いくつかの態様では、この用語は分子の一次構造を指す。したがって、この用語は、三本鎖、二本鎖、及び一本鎖デオキシリボ核酸（「ＤＮＡ」）、ならびに三本鎖、二本鎖、及び一本鎖リボ核酸（「ＲＮＡ」）を含む。この用語は、例えば、アルキル化及び／またはキャッピングにより修飾されたポリヌクレオチド及び未修飾形態のポリヌクレオチドも含む。

【0089】

いくつかの態様では、「ポリヌクレオチド」という用語は、ポリデオキシリボヌクレオチド（２－デオキシ－Ｄ－リボースを含有する）、スプライシングされたまたはスプライシングされていないにかかわらず、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ及びｍＲＮＡを含む、ポリリボヌクレオチド（Ｄ－リボースを含有する）、プリンまたはピリミジン塩基のＮ－またはＣ－配糖体である任意の他の種類のポリヌクレオチド、ならびに非ヌクレオチド骨格を含有する他のポリマー、例えば、ポリアミド（例えば、ペプチド核酸「ＰＮＡ」）及びポリモルホリノポリマー、ならびにＤＮＡ及びＲＮＡにおいて見出されるような塩基対形成及び塩基スタッキングを可能にする配置で核酸塩基を含有することを条件とする他の配列特異的合成核酸ポリマーを含む。

【0090】

本開示のいくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのオリゴヌクレオチドであってよい。いくつかの態様では、オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡである。いくつかの態様では、ＲＮＡは、合成ＲＮＡである。いくつかの態様では、合成ＲＮＡは、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む。いくつかの態様では、ある特定の種類のすべての核酸塩基が、非天然核酸塩基と置き換えられている（例えば、本明細書において開示されるポリヌクレオチドにおけるすべてのウリジンが、非天然核酸塩基、例えば、５－メトキシウリジンと置き換えられ得る）。

【0091】

「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、例えば、ＰＳＤ９５、シナプトフィジン、及び／またはカスパーゼ３遺伝子によりコードされた、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指して本明細書において互換的に使用される。ポリマーは、修飾アミノ酸を含み得る。これらの用語は、自然に修飾された、または、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分との結合など、他の任意の操作もしくは改変などの介入により修飾されたアミノ酸ポリマーも包含される。例えば、１つ以上のアミノ酸アナログ（例えば、ホモシステイン、オルニチン、ｐ－アセチルフェニルアラニン、Ｄ－アミノ酸、及びクレアチンなどの非天然アミノ酸が挙げられる）、及び当該技術分野において公知の他の修飾を含有するポリペプチドも定義の範囲内に含まれる。本明細書で使用する場合、「ポリペプチド」という用語は、任意のサイズ、構造、または機能のタンパク質、ポリペプチド、及びペプチドを指す。

【0092】

ポリペプチドとしては、遺伝子産物、天然に存在するポリペプチド、合成ポリペプチド、上述のもののホモログ、オーソログ、パラログ、フラグメント及び他の等価物、バリアント、ならびにアナログが挙げられる。

【0093】

ポリペプチドは、単一のポリペプチドであり得るか、またはダイマー、トリマー、もしくはテトラマーなどの多分子複合体であり得る。それらは、一本鎖または多連鎖ポリペプチドも含み得る。最も一般的に、ジスルフィド結合は、多鎖ポリペプチドに見られる。ポリペプチドという用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工的な化学的アナログであるようなアミノ酸ポリマーにも適用され得る。いくつかの態様では、「ペプチド」は、アミノ酸約５０個以下の長さ、例えば、アミノ酸約５個、約１０個、約１５個、約２０個、約２５個、約３０個、約３５個、約４０個、約４５個、または約５０個の長さであり得る。

【0094】

本明細書で使用する場合、「予防する」、「予防すること」という用語、及びそれらの変化形は、疾患、障害、及び／または状態の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状、特徴、または臨床徴候の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状、特徴、または徴候の発症を部分的または完全に遅延させること；特定の疾患、障害、及び／または状態の進行を部分的または完全に遅延させること；及び／または疾患、障害、及び／または状態に関連する病理を生じるリスクを減少させることを指す。いくつかの態様では、転帰の予防は、予防的治療によって実現される。

【0095】

本明細書で使用する場合、「プロモーター」及び「プロモーター配列」という用語は互換可能であり、コーディング配列または機能性ＲＮＡの発現を制御することができるＤＮＡ配列を指す。一般的に、コーディング配列は、プロモーター配列の３’側に位置する。プロモーターは、天然遺伝子にその全体が由来してもよく、または自然界にみられる異なるプロモーターに由来する異なるエレメントで構成されてもよく、またはさらには、合成ＤＮＡセグメントを含んでもよい。異なるプロモーターは、異なる組織または細胞タイプにおいて、または発生の異なる段階において、または異なる環境的もしくは生理学的条件に応じて、遺伝子の発現を誘導することができる点は、当業者には理解されよう。ほとんどの細胞タイプでほとんどの時間に遺伝子を発現させるプロモーターは一般的に「構成的プロモーター」と呼ばれる。特定の細胞タイプにおいて遺伝子を発現させるプロモーターは、一般的に「細胞特異的プロモーター」または「組織特異的プロモーター」と呼ばれる。発生または細胞分化の特定の段階で遺伝子を発現させるプロモーターは、一般的に「発生特異的プロモーター」または「細胞分化特異的プロモーター」と呼ばれる。プロモーターを誘導する薬剤、生物学的分子、化学物質、リガンド、光などによる細胞の曝露または処理後に誘導されて遺伝子を発現させるプロモーターは、一般的に「誘導性プロモーター」または「調節可能なプロモーター」と呼ばれる。多くの場合で調節配列の正確な境界は完全には定義されていないことから、異なる長さのＤＮＡフラグメントが同じプロモーター活性を有し得る点もさらに認識されよう。

【0096】

プロモーター配列の境界はその３’末端では転写開始部位であり、バックグラウンドよりも高い検出可能なレベルで転写を開始するのに必要な最小の数の塩基またはエレメントを含むように上流（５’方向）に延びている。プロモーター配列内には、転写開始部位（例えばヌクレアーゼＳ１によるマッピングによって簡便に定義される）ばかりでなく、ＲＮＡポリメラーゼの結合に関与するタンパク質結合ドメイン（コンセンサス配列）も見出される。いくつかの態様では、本開示とともに使用することができるプロモーターには、組織特異的プロモーターが含まれる。

【0097】

本明細書で使用する場合、「予防」とは、疾患もしくは状態の発症を予防するために、または疾患もしくは状態に関連する症状を予防または遅延させるために使用される治療的行動または行動方針を指す。

【0098】

本明細書で使用する場合、「予防法」は、健康を維持し、疾患または状態の発症を予防もしくは遅延させるために、または疾患もしくは状態に関連する症状を予防もしくは遅延させるために取られる手段を指す。

【0099】

本明細書で使用する場合、「遺伝子調節領域」または「調節領域」という用語は、コーディング領域の上流（５’側のノンコーディング配列）、その内部、またはその下流（３’側のノンコーディング配列）に位置して、転写、ＲＮＡプロセシング、または関連するコーディング領域の翻訳に影響を及ぼすヌクレオチド配列を指す。調節領域には、プロモーター、翻訳リーダー配列、イントロン、ポリアデニル化認識配列、ＲＮＡプロセシング部位、エフェクター結合部位、またはステムループ構造が含まれ得る。コーディング領域が真核細胞内での発現のためのものである場合、ポリアデニル化シグナル及び転写終結配列がコーディング配列の３’側に通常は配置される。

【0100】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、１つ以上のｍｉＲ－４８５結合部位を含むＲＮＡをコードしたポリヌクレオチド）は、１つ以上のコーディング領域と機能的に関連付けられたプロモーター及び／または他の発現（例えば、転写）制御エレメントを含むことができる。機能的関連付けにおいて、遺伝子産物のコーディング領域は、１つ以上の調節領域と、その遺伝子産物の発現が調節領域（複数可）の影響または制御下に置かれるようにして関連付けられる。例えば、コーディング領域とプロモーターとは、プロモーター機能の誘導が、そのコーディング領域によってコードされたｍＲＮＡの転写をもたらし、かつプロモーターとコーディング領域との連結の性質が、プロモーターが遺伝子産物の発現を誘導する能力を妨げず、またはＤＮＡ鋳型が転写される能力も妨げない場合に、「機能的に関連付けられている」。プロモーター以外の他の発現制御エレメント、例えば、エンハンサー、オペレーター、リプレッサー、及び転写終結シグナルを、遺伝子産物の発現を誘導するようにコーディング領域と機能的に関連付けることもできる。

【0101】

本明細書で使用する場合、「類似性」という用語は、ポリマー分子間の、例えば、ポリヌクレオチド分子（例えばｍｉＲＮＡ分子）間の全体的関連性を指す。ポリマー分子同士の互いに対する類似率（％）の計算は、類似率（％）の計算が当該技術分野で理解されるところの保存的置換を考慮している点を除いて、同一率（％）の計算と同様にして行うことができる。類似率（％）は、用いられる比較尺度、すなわち、核酸同士が、例えばそれらの進化的な近さ、電荷、体積、柔軟性、極性、疎水性、芳香族性、等電点、抗原性、またはそれらの組み合わせのどれにしたがって比較されるかによって左右されることが理解される。

【0102】

「対象」、「患者」、「個体」、及び「宿主」なる用語、及びそれらの変化形は、本明細書において互換的に使用され、限定されるものではないが、ヒト、家庭用動物（例えば、イヌ、ネコなど）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマなど）、及び実験動物（例えば、サル、ラット、マウス、ウサギ、モルモットなど）が挙げられる、診断、処置、または治療が所望される任意の哺乳動物対象、特にヒトを指す。本明細書に記載される方法は、ヒトの治療及び獣医学的用途の両方に適用可能である。

【0103】

本明細書で使用する場合、「その必要がある対象」という表現は、例えば、ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子の発現レベルを増大させるため、シナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子の発現レベルを増大させるため、及び／またはカスパーゼ３タンパク質及び／またはカスパーゼ３遺伝子の発現レベルを減少させるためなど、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）の投与から恩恵を受ける哺乳動物対象などの対象を含む。

【0104】

本明細書で使用する場合、「治療有効量」という用語は、所望の治療効果、薬理学的、及び／または生理学的効果をもたらす必要がある対象において所望の治療効果、薬理学的、及び／または生理学的効果をもたらすのに十分な、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤を含む試薬または医薬化合物の量である。治療上有効量は、予防が治療とみなされ得る場合、「予防上有効量」であり得る。

【0105】

本明細書で使用する場合、「処置する」、「処置」、または「処置すること」という用語は、例えば、疾患または状態の重症度の低減、疾患経過の期間の低減、疾患または状態（例えば、糖尿病）に関連する１つ以上の症状の改善または除去、疾患または状態を必ずしも治療しない、疾患または状態を有する対象に対する有益な効果の提供を指す。この用語には、疾患もしくは状態またはその症状の予防または防止も含まれる。

【0106】

「上流」という用語は、参照ヌクレオチド配列の５’側に位置するヌクレオチド配列を指す。

【0107】

「ベクター」とは、宿主細胞内に核酸をクローニング及び／または導入するための任意の担体を指す。ベクターは、結合されたセグメントの複製をもたらすように別の核酸セグメントを結合させることができるレプリコンとすることができる。「レプリコン」とは、インビボで自律的な複製ユニットとして機能する（すなわち、それ自身の制御下で複製することができる）任意の遺伝子エレメント（例えば、プラスミド、ファージ、コスミド、染色体、ウイルス）のことを指す。「ベクター」という用語には、細胞に核酸をインビトロ、エクスビボ、またはインビボで導入するためのウイルス性及び非ウイルス性の担体が含まれる。例えば、プラスミド、改変真核生物ウイルス、または改変細菌ウイルスを含む数多くのベクターが当該技術分野で知られており、使用されている。適当なベクターへのポリヌクレオチドの挿入は、適当なポリヌクレオチドフラグメントを、相補的な粘着末端を有する選択されたベクターにライゲートすることによって行うことができる。

【0108】

ベクターは、ベクターを取り込んだ細胞の選択または特定を可能とする選択マーカーまたはレポーターをコードするように操作することができる。選択マーカーまたはレポーターの発現によって、ベクターに含まれる他のコーディング領域を取り込んで発現する宿主細胞を特定し、及び／または選択することが可能となる。当該技術分野において知られ、使用されている選択マーカーの例としては、アンピシリン、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ヒグロマイシン、ビアラホス除草剤、スルホンアミドなどに対する耐性を与える遺伝子、ならびに表現型マーカーとして用いられる遺伝子、すなわち、アントシアン調節遺伝子、イソペンテニル基転移酵素遺伝子などが挙げられる。当該技術分野において知られ、使用されているレポーターの例としては、ルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、β－ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）、β－グルクロニダーゼ（Ｇｕｓ）などが挙げられる。選択マーカーはレポーターとみなすこともできる。

【0109】

「ジストニア」という用語は、人の筋肉が制御不能に収縮する運動障害またはその症状を指す。収縮により、罹患した身体部分が不随意にねじれ、反復的な動きまたは姿勢の異常が生じ、１つの筋肉、１つ以上の筋肉群、または身体全体を冒しうる。本明細書で言うジストニアには、特発性ジストニア、遺伝的に関連したジストニア、及び／または後天性ジストニアが含まれ得る。本明細書で言うジストニアには、全身性ジストニア（例えば、身体の大部分または全体を冒す）、局所性ジストニア（例えば、身体の特定の部分に局在する）、多巣性ジストニア（例えば、２つ以上の無関係な身体部分が関与する）、部分性ジストニア（例えば、身体の２つ以上の隣接する部分を冒す）、及び／または片側ジストニア（例えば、身体の同じ側の腕及び脚を冒す）が含まれ得る。ジストニアの非限定的な例としては、眼瞼けいれん、頸部ジストニア（痙性斜頸）、ドーパ反応性ジストニア、薬物誘発性ジストニア（遅発性ジスキネジア）、機能性ジストニア、全身性ジストニア、手のジストニア（書痙）、下肢ジストニア、音楽家ジストニア、ミオクローヌスジストニア、神経疾患または代謝疾患に関連するジストニア、口顎ジストニア（頭蓋ジストニア）、頭頸部ジストニア、上腕ジストニア、発作性ジスキネジア、小児ジストニア、痙攣性発声障害（喉頭ジストニア）、急速発症性ジストニア、パーキンソニズム、毒素誘発性ジストニア、外傷誘発性ジストニア、及びＸ連鎖ジストニア・パーキンソニズムが挙げられる。

【0110】

「神経精神疾患」という用語は、気分、認知、行動、思考の変化、感覚の変化（例えば、特に嗅覚の変化）、及び／または睡眠障害に影響する１つ以上の疾患またはその症状を指す。神経精神疾患の非限定的な例としては、統合失調症、うつ病、自閉症、発作、注意欠陥／多動性障害、トゥレット障害、認知欠陥障害、麻痺、制御不能な怒り、片頭痛、摂食障害（例えば、神経性食欲不振及び神経性過食症）、うつ病、不安障害（例えば、心的外傷後ストレス障害）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。その症状の非限定的な例としては、脳機能、感情、気分、集中力及び／または学習能力の障害、悲しみ、過敏性、記憶障害、気分の障害、及び／またはうつ病に影響を及ぼす症状が挙げられる。

【0111】

「知的障害」という用語は、多くの日常の社会的及び実践的スキルが含まれる知的機能と適応行動の両方における重大な制限を特徴とする障害またはその症状を指す。知的機能の重大な制限としては、これらに限定されるものではないが、学習、推論、及び／または問題解決のための一般的な精神機能の低下が含まれる。適応行動における重大な制限としては、これらに限定されるものではないが、概念的スキル（例えば、言語と読み書き能力、お金、時間、数字の概念、自己方向性など）、社会的スキル（例えば、対人スキル、社会的責任、自尊心、だまされやすさ、無邪気さ、社会的問題解決能力、規則／法律に従い、被害を回避する能力）、及び／または実践的なスキル（例えば、日常生活活動、職業スキル、ヘルスケア、スケジュール／日課、安全性）における能力の低下が挙げられる。知的障害の非限定的な例としては、脆弱Ｘ症候群、ダウン症候群、プラダーウィリ症候群（ＰＷＳ）、胎児性アルコールスペクトラム障害（ＦＡＳＤ）、及びそれらの組み合わせが挙げられる。

【0112】

「依存症」という用語は、悪影響があるにもかかわらず、１つ以上の物質を強迫的に使用することを指す。依存症には、脳回路、遺伝、環境、その人の人生経験の間の複雑な相互作用がしばしば関与している。依存症は、薬物乱用や強迫的な行動として現れ、有害な結果にもかかわらずしばしば継続する。依存症には化学的なものと行動的なものがある。最も一般的な中毒性物質としては、これらに限定されるものではないが、アルコール、オピオイド、大麻、ニコチン、アンフェタミン、コカイン、及びメタンフェタミンなどが挙げられる。

【0113】

ＩＩ．使用方法
いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、１つ以上の遺伝子の発現及び／または活性を調節することにより、治療効果（例えば、ジストニア、神経精神疾患、知的障害、及び／または依存症に罹患した対象における）を発揮することができる。本明細書に記載されるように、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＳＤ９５、シナプトフィジン、カスパーゼ－３、またはこれらの組み合わせから選択される遺伝子の発現及び／または活性を調節することができる。

【0114】

ＰＳＤ９５の調節
いくつかの態様では、本開示は、ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子の発現を増加させる必要のある対象においてＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子の発現を増加させる方法であって、ｍｉＲ－４８５活性を阻害する化合物（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を対象に投与することを含む方法を提供する。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５活性を阻害することは、対象におけるＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子の発現を増加させる。

【0115】

シナプス後肥厚タンパク質９５（ＰＳＤ９５）は、ヒトではＤＬＧ４遺伝子（Ｄｉｓｋｓラージホモログ４）によってコードされるタンパク質である。特に断らない限り、「ＰＳＤ９５ 遺伝子」と「ＤＬＧ４ 遺伝子」という用語は、本明細書では互換的に使用される。ＤＬＧ４遺伝子はヒトの第１７番染色体上に位置している（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿００００１７．１１のヌクレオチド７，１８７，１８０～７，２２０，０５０（－鎖の方向））。ＰＳＤ９５遺伝子及びそのコードされたタンパク質の同義語が知られており、「Ｄｉｓｃｓ Ｌａｒｇｅ ＭＡＧＵＫ Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ ４」、「ＤＬＧ４」、「ＭＲＤ６２」、「Ｓｙｎａｐｓｅ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ ９０」、「ＳＡＰ９０」、「ＳＡＰ－９０」、「Ｔａｘ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ １５」、「Ｄｉｓｃｓ Ｌａｒｇｅ Ｈｏｍｏｌｏｇ ４」、「ＰＳＤ－９５」などがある。

【0116】

ヒトＰＳＤ９５（例えば、ＤＬＧ４）タンパク質には、選択的スプライシングから生じる少なくとも３種類の既知のアイソフォームがある。ＰＳＤ９５アイソフォーム１（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｐ７８３５２－１、ＰＳＤ９５－αとしても知られる）は７２４個のアミノ酸からなり、カノニカル配列として選択されている（配列番号１１６）。ＰＳＤ９５アイソフォーム２（ＰＳＤ９５－βとしても知られる （ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号： Ｐ７８３５２－２）は、７６７個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：１～１０：ＭＤＣＬＣＩＶＴＴＫ→ＭＳＱＲＰＲＡＰＲＳＡＬＷＬＬＡＰＰＬＬＲＷＡＰＰＬＬＴＶＬＨＳＤＬＦＱＡＬＬＤＩＬＤＹＹＥＡＳＬＳＥＳＱ（配列番号１１７）。ＰＳＤ９５アイソフォーム３（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｐ７８３５２－３）は、７２１個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：５１～５３：欠失（配列番号１１８）。下記表１に、３つのＰＳＤ９５アイソフォームの配列を示す。

【表1】

【0117】

本明細書で使用する場合、「ＰＳＤ９５」という用語は、細胞によって天然に発現されるＰＳＤ９５のあらゆるバリアントまたはアイソフォームを含む。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＳＤ９５アイソフォーム１の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＳＤ９５アイソフォーム２の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＳＤ９５アイソフォーム３の発現を増加させることができる。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＳＤ９５アイソフォーム１、ＰＳＤ９５アイソフォーム２、及びＰＳＤ９５アイソフォーム３の発現を増加させることができる。特に断らない限り、本明細書では、アイソフォーム１、アイソフォーム２、及びアイソフォーム３をまとめて「ＰＳＤ９５」と呼ぶ。

【0118】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子の発現を、ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子の参照レベル（例えば、投与前の対象における対応するレベル及び／または投与を受けなかった対応する対象におけるレベル）と比較して、少なくとも約０．５倍、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍以上、増加させる。

【0119】

いずれか１つの理論に束縛されるものではないが、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５、例えばｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を低下させることにより、ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子の発現を増加させる。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を低下させることができる。

【0120】

いくつかの態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるｍｉＲ－４８５－３ｐの発現）と比較してｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％減少させる。特定の態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるｍｉＲ－４８５－５ｐの発現）と比較してｍｉＲ－４８５－５ｐの発現及び／または活性を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％減少させる。さらなる態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるｍｉＲ－４８５－３ｐ及びｍｉＲ－４８５－５ｐの発現）と比較してｍｉＲ－４８５－３ｐ及びｍｉＲ－４８５－５ｐの両方の発現及び／または活性を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％減少させる。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５－３ｐ及び／またはｍｉＲ－４８５－５ｐの発現は、ｍｉＲ－４８５阻害剤の投与後に完全に阻害される。

【0121】

本明細書に記載されるように、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、対象に投与された場合にＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本開示は、ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態の治療を必要とする対象において、そのような疾患または状態を治療する方法を提供する。特定の態様において、方法は、ｍｉＲ－４８５の活性を阻害する化合物（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を対象に投与することを含み、ｍｉＲ－４８５阻害剤はＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子のレベルを増加させる。

【0122】

シナプトフィジンの調節
本明細書に提供される開示は、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤が、例えば、本明細書に開示される疾患または障害（例えば、ジストニア、神経精神疾患、知的障害、及び／または依存症を参照）を罹患した対象におけるシナプトフィジンの発現をさらに調節することができることを実証する。したがって、いくつかの態様では、本開示は、シナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子の発現を増加させる必要のある対象においてシナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子の発現を増加させる方法であって、ｍｉＲ－４８５活性を阻害する化合物（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を対象に投与することを含む方法を提供する。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５活性を阻害することは、対象におけるシナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子の発現を増加させる。

【0123】

シナプトフィジンは、ヒトではＳＹＰ遺伝子（本明細書では「シナプトフィジン遺伝子」とも呼ばれる）によってコードされるタンパク質である。ＳＹＰ遺伝子は、ヒトの染色体Ｘ上に位置している（ヌクレオチド４９，１８７，８０４～４９，２００，２５９、マイナス鎖方向）。ＳＹＰ遺伝子及びそのコードされたタンパク質の同義語が知られており、「主要シナプス小胞タンパク質Ｐ３８」、「ＳＹＰＨ」、「ＭＲＸ９６」及び「ＭＲＸＳＹＰ」などが挙げられる。

【0124】

ヒトのシナプトフィジンタンパク質には、選択的スプライシングから生じる少なくとも２種類の既知のアイソフォームがある。シナプトフィジンアイソフォーム１（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｐ０８２４７－１）は３１３個のアミノ酸からなり、カノニカル配列として選択されている（配列番号１１９）。シナプトフィジンアイソフォーム２（ＵｎｉＰｒｏｔ識別番号：Ｐ０８２４７－２）は、１９５個のアミノ酸からなり、以下の点でカノニカル配列と異なる：１～１１８欠失（配列番号１２０）。下記表２に、２つのシナプトフィジンアイソフォームの配列を示す。

【表2】

【0125】

本明細書で使用する場合、「シナプトフィジン」という用語は、細胞によって天然に発現されるシナプトフィジンのあらゆるバリアントまたはアイソフォームを含む。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はシナプトフィジンアイソフォーム１の発現を増加させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はシナプトフィジンアイソフォーム２の発現を増加させることができる。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤はシナプトフィジンアイソフォーム１及びアイソフォーム２の発現を増加させることができる。特に断らない限り、本明細書では、アイソフォーム１及びアイソフォーム２の両方を併せて「シナ」と呼ぶ。

【0126】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、シナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子の発現を、シナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子の参照レベル（例えば、投与前の対象における対応するレベル及び／または投与を受けなかった対応する対象におけるレベル）と比較して、少なくとも約０．５倍、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、少なくとも約５０倍以上、増加させる。

【0127】

いずれか１つの理論に束縛されるものではないが、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５、例えばｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を低下させることにより、シナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子の発現を増加させる。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を低下させることができる。

【0128】

いくつかの態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるｍｉＲ－４８５－３ｐの発現）と比較してｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％減少させる。特定の態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるｍｉＲ－４８５－５ｐの発現）と比較してｍｉＲ－４８５－５ｐの発現及び／または活性を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％減少させる。さらなる態様において、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対応する対象におけるｍｉＲ－４８５－３ｐ及びｍｉＲ－４８５－５ｐの発現）と比較してｍｉＲ－４８５－３ｐ及びｍｉＲ－４８５－５ｐの両方の発現及び／または活性を少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約１００％減少させる。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５－３ｐ及び／またはｍｉＲ－４８５－５ｐの発現は、ｍｉＲ－４８５阻害剤の投与後に完全に阻害される。

【0129】

本明細書に記載されるように、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、対象に投与された場合にシナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子の発現を増加させることができる。したがって、いくつかの態様では、本開示は、シナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態の治療を必要とする対象において、そのような疾患または状態を治療する方法を提供する。特定の態様において、方法は、ｍｉＲ－４８５の活性を阻害する化合物（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を対象に投与することを含み、ｍｉＲ－４８５阻害剤はシナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子のレベルを増加させる。

【0130】

カスパーゼ３の調節
本明細書に提供される開示は、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤が、例えば、本明細書に開示される疾患または障害（例えば、ジストニア、神経精神疾患、知的障害、及び／または依存症を参照）を罹患した対象における切断型カスパーゼ３の発現をさらに調節することができることを実証する。したがって、いくつかの態様では、本開示は、切断型カスパーゼ３タンパク質及び／またはカスパーゼ３遺伝子の発現を減少させる必要のある対象においてカスパーゼ３タンパク質及び／またはカスパーゼ３遺伝子の発現を減少させる方法であって、ｍｉＲ－４８５活性を阻害する化合物（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を対象に投与することを含む方法を提供する。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５活性を阻害することは、対象におけるカスパーゼ３タンパク質（例えば、切断型カスパーゼ３）及び／またはカスパーゼ３遺伝子の発現を減少させる。

【0131】

カスパーゼ３は、ヒトではＣＡＳＰ３遺伝子（本明細書では「カスパーゼ３遺伝子」とも呼ばれる）によってコードされるタンパク質である。ＣＡＳＰ３遺伝子は第４番染色体上に位置している（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＣ＿００００４．１２のヌクレオチド１８４，６２７，６９６～１８４，６４９，５０９（－鎖の方向））。ＣＡＳＰ３遺伝子及びそのコードされたタンパク質の同義語が知られており、「カスパーゼ－３」、「アポパイン」、「ＳＲＥＢＰ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ １」、「システインプロテアーゼＣＰＰ３２」、「ｐｒｏｔｅｉｎ ＹＡＭＡ」、「プロカスパーゼ３」、「ＰＡＲＴ切断プロテアーゼ」、「ＣＰＰ３２」、「ＳＣＡ－１」及び「ＣＰＰ３２Ｂ」が挙げられる。

【0132】

２７７個のアミノ酸からなるヒトカスパーゼ３のアイソフォームが１つ知られている（ＵｎｉＰｒｏｔ識別子：Ｐ４２５７４－１）（配列番号１２１）。下記表３に、カスパーゼ３の配列を示す。

【表3】

【0133】

本明細書で使用する場合、「カスパーゼ３」なる用語は、細胞によって天然に発現されるカスパーゼ３のあらゆる変異体またはアイソフォームを含む（例えば、切断型カスパーゼ－３）。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、カスパーゼ３の発現を減少させることができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、カスパーゼ３の発現を減少させることができ、したがって、切断型カスパーゼ３の量を減少させることができる。

【0134】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、対象におけるカスパーゼ－３タンパク質及び／またはカスパーゼ－３遺伝子のレベルを、カスパーゼ－３タンパク質及び／またはカスパーゼ－３遺伝子の参照レベル（例えば、投与前の対象における対応するレベル及び／または投与を受けなかった対応する対象におけるレベル）と比較して、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約１００％減少させる。

【0135】

いずれか１つの理論に束縛されるものではないが、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５の発現及び／または活性を低下させることにより、カスパーゼ３タンパク質及びまたはカスパーゼ３遺伝子の発現を減少させる。ｍｉＲ－４８５－３ｐ及びｍｉＲ－４８５－５ｐの２つのｍｉＲ－４８５の成熟型が知られている。本明細書で開示されるように、いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－３ｐの発現及び／または活性を低下させることができる。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－５ｐの発現及び／または活性を低下させることができる。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ｍｉＲ－４８５－３ｐ及びｍｉＲ－４８５－５ｐの両方の発現及び／または活性を低下させることができる。

【0136】

本開示から明らかなように、以下のうちの１つ以上のものの異常なレベルに関連する任意の疾患または状態を本開示で治療することができる：ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子、シナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子、またはカスパーゼ－３タンパク質及び／またはカスパーゼ－３遺伝子。本明細書で使用する場合、「異常なレベル」という用語は、本明細書に記載の疾患または状態（例えば、ジストニア、神経精神疾患、知的障害、及び／または依存症）に罹患していない参照対象とは異なる（例えば、増加または減少した）レベル（発現及び／または活性）を指す。いくつかの態様では、異常なレベル（例えば、ＰＳＤ９５またはシナプトフィジン）とは、参照対象（例えば、本明細書に記載の疾患または状態に罹患していない対象）における対応するレベルと比較して、少なくとも約１％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９５％、少なくとも約９５％、または約１００％減少したレベルを指す。いくつかの態様では、異常なレベル（例えば、カスパーゼ－３）とは、参照対象（例えば、本明細書に記載の疾患または状態に罹患していない対象）における対応するレベルと比較して、少なくとも約０．１倍、少なくとも約０．２倍、少なくとも約０．３倍、少なくとも約０．４倍、少なくとも約０．５倍、少なくとも約０．６倍、少なくとも約０．７倍、少なくとも約０．８倍、少なくとも約０．９倍、少なくとも約１倍、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約３０倍、少なくとも約４０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約７５倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約３００倍、少なくとも約４００倍、少なくとも約５００倍、少なくとも約７５０倍、または少なくとも約１，０００倍以上増加したレベルを指す。

【0137】

いくつかの態様では、本開示は、ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態の治療に有用となりうる。いくつかの態様では、本開示は、シナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または状態の治療に有用となりうる。いくつかの態様では、本開示は、カスパーゼ３タンパク質及び／またはカスパーゼ３遺伝子の異常な（例えば、増加した）レベルに関連したあらゆる疾患または条件の治療に有用となり得る。

【0138】

いくつかの態様では、そのようなタンパク質及び／または遺伝子の異常なレベルに関連した疾患または状態には、ジストニア、神経精神疾患、知的障害、及び／または依存症が含まれる。特定の実施態様では、疾患または状態は、ジストニアを含む。いくつかの態様では、ジストニアは、ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子のレベルの低下と関連している。いくつかの態様では、ジストニアは、シナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子のレベルの低下と関連している。いくつかの態様では、ジストニアは、カスパーゼ３タンパク質及び／またはカスパーゼ３遺伝子のレベルの増加と関連している。そのような疾患の非限定的な例としては、眼瞼けいれん、頸部ジストニア（痙性斜頸）、ドーパ反応性ジストニア、薬物誘発性ジストニア（遅発性ジスキネジア）、機能性ジストニア、全身性ジストニア、手のジストニア（書痙）、下肢ジストニア、音楽家ジストニア、ミオクローヌスジストニア、神経疾患または代謝疾患に関連するジストニア、口顎ジストニア（頭蓋ジストニア）、頭頸部ジストニア、上腕ジストニア、発作性ジスキネジア、小児ジストニア、痙攣性発声障害（喉頭ジストニア）、急速発症性ジストニア、パーキンソニズム、毒素誘発性ジストニア、外傷誘発性ジストニア、Ｘ連鎖ジストニア・パーキンソニズムまたはそれらの組み合わせが挙げられる。

【0139】

いくつかの態様では、本開示により治療することができる疾患または状態は、神経精神疾患を含む。特定の態様では、神経精神疾患は、ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子のレベルの低下と関連している。いくつかの態様では、神経精神疾患は、シナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子のレベルの低下と関連している。いくつかの態様では、神経精神疾患は、カスパーゼ３タンパク質及び／またはカスパーゼ３遺伝子のレベルの増加と関連している。そのような疾患または状態の非限定的な例としては、統合失調症、うつ病、自閉症、発作、注意欠陥／多動性障害、トゥレット障害、認知欠陥障害、麻痺、制御不能な怒り、片頭痛、摂食障害（例えば、神経性食欲不振及び神経性過食症）、うつ病、不安障害（例えば、心的外傷後ストレス障害）、またはそれらの組み合わせが挙げられる。

【0140】

いくつかの態様では、本開示により治療することができる疾患または状態は、知的障害を含む。特定の態様では、知的障害は、ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子のレベルの低下と関連している。いくつかの態様では、知的障害は、シナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子のレベルの低下と関連している。いくつかの態様では、知的障害は、カスパーゼ３タンパク質及び／またはカスパーゼ３遺伝子のレベルの増加と関連している。本開示の他の箇所で説明されるように、いくつかの態様では、知的障害は、知的機能及び／または適応行動の両方における障害を含み得る。

【0141】

いくつかの態様では、本開示により治療することができる疾患または状態は、依存症を含む。特定の態様では、依存症は、ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子のレベルの低下と関連している。いくつかの態様では、依存症は、シナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子のレベルの低下と関連している。いくつかの態様では、依存症は、カスパーゼ３タンパク質及び／またはカスパーゼ３遺伝子のレベルの増加と関連している。特定の態様では、依存症は、化学物質依存症（例えば、薬物乱用）を含む。いくつかの態様では、依存症は、行動的依存症を含む。さらなる態様では、依存症は、化学物質依存症及び行動的依存症の両方を含む。

【0142】

したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連する疾患または状態の１つ以上の症状を改善することができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、シナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連する疾患または状態の１つ以上の症状を改善することができる。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、カスパーゼ３タンパク質及び／またはカスパーゼ３遺伝子の異常な（例えば、増加した）レベルに関連する疾患または状態の１つ以上の症状を改善することができる。

【0143】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象におけるジストニアの１つ以上の症状を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％治療する。ジストニアに関連する症状の非限定的な例は本開示の他の箇所に示されている。

【0144】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象における神経精神疾患の１つ以上の症状を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％治療する。神経精神疾患に関連する症状の非限定的な例は本開示の他の箇所に示されている。

【0145】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象における知的障害の１つ以上の症状を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％治療する。知的障害に関連する症状の非限定的な例は本開示の他の箇所に示されている。

【0146】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を投与することは、対象における依存症の１つ以上の症状を、参照（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を投与しなかった対象）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または約１００％治療する。いくつかの態様では、依存症は、化学物質依存症、行動的依存症、またはその両方である。依存症に関連する症状の非限定的な例は本開示の他の箇所に示されている。

【0147】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、当該技術分野では周知の任意の適当な経路で投与することができる。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、補足的投与、筋肉内投与、皮下投与、点眼、静脈内投与、腹腔内投与、皮内投与、眼窩内投与、脳内投与、頭蓋内投与、脳室内投与、脊髄内投与、心室内投与、髄腔内投与、大槽内投与、嚢内投与、腫瘍内投与、またはそれらの任意の組み合わせで投与される。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、脳室内（ＩＣＶ）投与される。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、静脈内投与される。

【0148】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、１つ以上のさらなる治療薬と併用することができる。いくつかの態様では、さらなる治療薬とｍｉＲ－４８５阻害剤とは同時に投与される。特定の態様において、さらなる治療薬とｍｉＲ－４８５阻害剤とは順次投与される。

【0149】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は副作用を生じない。特定の態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、対象に投与される際に体重に悪影響を及ぼさない。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、対象に投与される際に死亡率の増加をもたらさず、病理学的異常も引き起こさない。

【0150】

ＩＩＩ．本開示で有用なｍｉＲ－４８５阻害剤
本開示では、ｍｉＲ－４８５活性を阻害することができる化合物を開示する（ｍｉＲ－４８５阻害剤）。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、少なくとも１つのｍｉＲ－４８５結合部位を含むヌクレオチド分子をコードするヌクレオチド配列を含んでおり、ヌクレオチド分子はタンパク質をコードしていない。本明細書に記載されるように、いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、標的ｍｉＲＮＡ核酸配列（すなわち、ｍｉＲ－４８５）と少なくとも部分的に相補的であるため、ｍｉＲ－４８５阻害剤はｍｉＲ－４８５の核酸配列とハイブリダイズする。

【0151】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ阻害剤のｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５の核酸配列と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列同一性を有する。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５の核酸配列と完全に相補的である。

【0152】

ｍｉＲ－４８５のヘアピン前駆体はｍｉＲ－４８５－５ｐ及びｍｉＲ－４８５－３ｐの両方を生成することができる。本開示との関連で、「ｍｉＲ－４８５」は、特に断らない限り、ｍｉＲ－４８５－５ｐ及びｍｉＲ－４８５－３ｐの両方を包含する。ヒト成熟ｍｉＲ－４８５－３ｐは、配列５’－ ＧＵＣＡＵＡＣＡＣＧＧＣＵＣＵＣＣＵＣＵＣＵ－３’（配列番号１；ｍｉＲＢａｓｅアクセッション番号ＭＩＭＡＴ０００２１７６）を有する。ｍｉＲ－４８５－３ｐの５’－ＵＣＡＵＡＣＡ－３’（配列番号４９）の５’末端配列はシード配列である。ヒト成熟ｍｉＲ－４８５－５ｐは、配列５’－ＡＧＡＧＧＣＵＧＧＣＣＧＵＧＡＵＧＡＡＵＵＣ－３’（配列番号３３；ｍｉＲＢａｓｅアクセッション番号ＭＩＭＡＴ０００２１７５）を有する。ｍｉＲ－４８５－５ｐの５’－ＧＡＧＧＣＵＧ－３’（配列番号５０）の５’末端配列はシード配列である。

【0153】

当業者には明らかであるが、ヒト成熟ｍｉＲ－４８５－３ｐは、他の種のものと相当の配列類似性を有している。例えば、マウス成熟ｍｉＲ－４８５－３ｐは、ヒト成熟ｍｉＲ－４８５－３ｐと、５’末端及び３’末端のそれぞれで１個のアミノ酸が異なっている（すなわち、５’末端に余分な「Ａ」があり、３’末端の「Ｃ」がない）。マウス成熟ｍｉＲ－４８５－３ｐは以下の配列を有する：

【化6】

（配列番号３４；ｍｉＲＢａｓｅアクセッション番号ＭＩＭＡＴ０００３１２９；下線部はヒト成熟ｍｉＲ－４８５－３ｐとの重複部分に相当する）。マウス成熟ｍｉＲ－４８５－５ｐの配列はヒトの配列と同一である：５’－ａｇａｇｇｃｕｇｇｃｃｇｕｇａｕｇａａｕｕｃ－３’（配列番号３３；ｍｉＲＢａｓｅアクセッション番号ＭＩＭＡＴ０００３１２８）。特定の態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、ヒト及びマウスのｍｉＲ－４８５－３ｐ及び／またはｍｉＲ－４８５－５ｐに結合することができる。

【0154】

いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５－３ｐの配列（またはその部分配列）と相補的（例えば、完全に相補的）な一本鎖のポリヌクレオチド配列である。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５－３ｐの部分配列は、シード配列を含む。したがって、特定の態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、配列番号４９に記載される核酸配列と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列相補性を有する。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のミスマッチを除いてｍｉＲ－４８５－３ｐと相補的である。さらなる態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、配列番号１に記載される核酸配列と完全に相補的である。

【0155】

いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５－５ｐの配列（またはその部分配列）と相補的（例えば、完全に相補的）な一本鎖のポリヌクレオチド配列である。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５－５ｐの部分配列は、シード配列を含む。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、配列番号５０に記載される核酸配列と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％の配列相補性を有する。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のミスマッチを除いてｍｉＲ－４８５－５ｐと相補的である。さらなる態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、配列番号３５に記載される核酸配列と完全に相補的である。

【0156】

ｍｉＲＮＡのシード領域は、標的ｍＲＮＡと緊密な二重鎖を形成する。多くのｍｉＲＮＡは、標的ｍＲＮＡの３’非翻訳領域（ＵＴＲ）と不完全に塩基対合し、ｍｉＲＮＡの５’近位の「シード」領域が対合特異性の大部分を与える。いずれの理論にも束縛されるものではないが、最初の９個のｍｉＲＮＡヌクレオチド（シード配列を含む）がより高い特異性を与えるのに対して、この領域の３’側のｍｉＲＮＡヌクレオチドはより低い配列特異性を与え、それにより、より高度のミスマッチした塩基対合を許容し、２～７位が最も重要であると考えられる。したがって、本開示の特定の態様では、ｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５のシード配列の全長にわたって完全に相補的（すなわち、１００％の相補性）な配列を含む。

【0157】

本開示との関連で使用することができるｍｉＲＮＡ配列及びｍｉＲＮＡ結合配列としては、これらに限定されるものではないが、本明細書に示される配列表の配列の全部または一部、ならびにｍｉＲＮＡ前駆体配列、またはこれらのｍｉＲＮＡのうちの１つ以上のものの相補体が挙げられる。その配列が、示されるｍｉＲＮＡの成熟配列またはその相補的配列と少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるようなｍｉＲＮＡまたはその相補的配列を含めるために名前による特定のｍｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ結合部位を含む本開示のあらゆる態様も想到される。

【0158】

特定の態様では、本開示のｍｉＲＮＡ結合配列は、改変された配列がｍｉＲ－４８５に依然として特異的に結合できる限り、本明細書で提供される配列表に示される配列の５’末端、３’末端、または５’末端及び３’末端の両方にさらなるヌクレオチドを含んでもよい。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲＮＡ結合配列は、改変された配列がｍｉＲ－４８５に依然として特異的に結合できる限り、提供される配列表に示される配列に対して、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれ以上のヌクレオチドにおいて異なり得る。

【0159】

ｍｉＲＮＡ結合分子またはｍｉＲＮＡに関して本明細書に記載されるあらゆる方法及び組成物は、合成ｍｉＲＮＡ結合分子に関して実施することができる点も具体的に想到される。本開示のＲＮＡ配列に関連した開示は、対応するＤＮＡ配列に等しく適用できる点も理解されよう。

【0160】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、ヌクレオチド配列の５’末端に少なくとも１個のヌクレオチド、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチド、少なくとも６個のヌクレオチド、少なくとも７個のヌクレオチド、少なくとも８個のヌクレオチド、少なくとも９個のヌクレオチド、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１１個のヌクレオチド、少なくとも１２個のヌクレオチド、少なくとも１３個のヌクレオチド、少なくとも１４個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１６個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも１８個のヌクレオチド、少なくとも１９個のヌクレオチド、または少なくとも２０個のヌクレオチドを含む。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、ヌクレオチド配列の３’末端に少なくとも１個のヌクレオチド、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチド、少なくとも６個のヌクレオチド、少なくとも７個のヌクレオチド、少なくとも８個のヌクレオチド、少なくとも９個のヌクレオチド、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１１個のヌクレオチド、少なくとも１２個のヌクレオチド、少なくとも１３個のヌクレオチド、少なくとも１４個のヌクレオチド、少なくとも１５個のヌクレオチド、少なくとも１６個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも１８個のヌクレオチド、少なくとも１９個のヌクレオチド、または少なくとも２０個のヌクレオチドを含む。

【0161】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、約６～約３０ヌクレオチドの長さである。特定の態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、７ヌクレオチドの長さである。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、８ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、９ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、１０ヌクレオチドの長さである。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、１１ヌクレオチドの長さである。さらなる態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、１２ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、１３ヌクレオチドの長さである。特定の態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、１４ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、１５ヌクレオチドの長さである。さらなる態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、１６ヌクレオチドの長さである。特定の態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、１７ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、１８ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、１９ヌクレオチドの長さである。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、２０ヌクレオチドの長さである。さらなる態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、２１ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、２２ヌクレオチドの長さである。

【0162】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、配列番号２～３０から選択される配列と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一であるヌクレオチド配列を含む。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、配列番号２～３０からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含み、ヌクレオチド配列は１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のミスマッチを場合により含んでもよい。

【0163】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号２）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号３）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号４）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号５）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号６）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号７）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号８）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号９）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１０）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１１）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１２）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１３）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１４）、または５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡ－３’（配列番号１５）を含む。

【0164】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１６）、５’－ＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１７）、５’－ＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１８）、５’－ＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号１９）、５’－ＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２０）、５’－ＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２１）、５’－ＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２２）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２３）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２４）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２５）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２６）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２７）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２８）、または５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２９）を含む。

【0165】

いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６２）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６３）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６４）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６５）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６６）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６７）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６８）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号６９）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７０）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７１）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７２）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７３）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７４）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡ－３’（配列番号７５）、５’－ＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７６）、５’－ＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７７）、５’－ＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７８）、５’－ＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号７９）、５’－ＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８０）、５’－ＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８１）、５’－ＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８２）、５’－ＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８３）、５’－ＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８４）、５’－ＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８５）、５’－ＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８６）、５’－ＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８７）、５’－ＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８８）、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号８９）、及びＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ（配列番号９０）からなる群から選択される配列を有する。

【0166】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲＮＡ阻害剤（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ －３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）と少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）と少なくとも９０％の類似性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、１個の置換または２個の置換を有するヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）または５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＴＧＴＡＴＧＡＣ－３’（配列番号９０）を含む。特定の態様では、ｍｉＲＮＡ阻害剤は、ヌクレオチド配列５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）を含む。

【0167】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、本明細書に開示される配列、例えば、配列番号２～３０のいずれか１つと、Ｎ末端に少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、または少なくとも５個のさらなる核酸、Ｃ末端に少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、または少なくとも５個のさらなる核酸、またはその両方と、を含む。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、本明細書に開示される配列、例えば、配列番号２～３０のいずれか１つと、Ｎ末端に１個のさらなる核酸及び／またはＣ末端に１個のさらなる核酸と、を含む。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、本明細書に開示される配列、例えば、配列番号２～３０のいずれか１つと、Ｎ末端に１個または２個のさらなる核酸及び／またはＣ末端に１個または２個のさらなる核酸と、を含む。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、本明細書に開示される配列、例えば、配列番号２～３０のいずれか１つと、Ｎ末端に１～３個のさらなる核酸及び／またはＣ末端に１～３個のさらなる核酸と、を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、５’－ＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号２９）を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、５’－ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ－３’（配列番号３０）を含む。

【0168】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、１個のｍｉＲ－４８５結合部位を含む。さらなる態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、少なくとも２個のｍｉＲ－４８５結合部位を含む。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、３個のｍｉＲ－４８５結合部位を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、４個のｍｉＲ－４８５結合部位を含む。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、５個のｍｉＲ－４８５結合部位を含む。特定の態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、６個以上のｍｉＲ－４８５結合部位を含む。いくつかの態様では、すべてのｍｉＲ－４８５結合部位は同じである。いくつかの態様では、すべてのｍｉＲ－４８５結合部位は異なる。いくつかの態様では、少なくとも１つのｍｉＲ－４８５結合部位が異なる。いくつかの態様では、すべてのｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５－３ｐ結合部位である。他の態様では、すべてのｍｉＲ－４８５結合部位は、ｍｉＲ－４８５－５ｐ結合部位である。さらなる態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤は、少なくとも１つのｍｉＲ－４８５－３ｐ結合部位と、少なくとも１つのｍｉＲ－４８５－５ｐ結合部位とを含む。

【0169】

ＩＩＩ．ａ．化学修飾されたポリヌクレオチド
いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、少なくとも１つの化学修飾されたヌクレオシド及び／またはヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを含む。本開示のポリヌクレオチドが化学修飾されている場合、ポリヌクレオチドは、「修飾ポリヌクレオチド」と呼ぶことができる。

【0170】

「ヌクレオシド」は、糖分子（例えば、ペントースまたはリボース）またはその誘導体を、有機塩基（例えば、プリンまたはピリミジン）またはその誘導体（本明細書において「核酸塩基」とも称される）とともに含有する化合物を指す。「ヌクレオチド」は、リン酸基を含むヌクレオシドを指す。修飾されたヌクレオチドは、１つ以上の修飾された非天然ヌクレオシドを含むように、任意の有用な方法により、例えば、化学的に、酵素的に、または組換えにより合成され得る。

【0171】

ポリヌクレオチドは、連結されたヌクレオシドの領域または複数の領域を含み得る。かかる領域は、可変的な骨格結合を有し得る。連結は、標準的なホスホジエステル結合であり得、その場合、ポリヌクレオチドはヌクレオチドの領域を含む。

【0172】

本明細書において開示される修飾されたポリヌクレオチドは、様々な異なる修飾を含み得る。いくつかの態様では、修飾されたポリヌクレオチドは、１種、２種、またはそれ以上（任意選択的に異なる）のヌクレオシドまたはヌクレオチド修飾を含有する。いくつかの態様では、修飾されたポリヌクレオチドは、１つ以上の所望の特性、例えば、未修飾ポリヌクレオチドと比較して改善された熱または化学安定性、低減された免疫原性、低減された分解、標的マイクロＲＮＡに対する結合の増加、他のマイクロＲＮＡまたは他の分子に対する低減された非特異的結合を示し得る。

【0173】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、化学修飾されている。本明細書で使用する場合、ポリヌクレオチドに関して、「化学修飾」または必要に応じて「化学修飾された」という用語は、アデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、ウリジン（Ｕ）、チミジン（Ｔ）、またはシチジン（Ｃ）リボヌクレオシドまたはデオキシリボヌクレオシドに対する、限定されるものではないが、それらの核酸塩基、糖、骨格、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるそれらの位置、パターン、パーセント、または集団のうちの１つ以上における修飾を指す。

【0174】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、同じヌクレオシド種類のすべてもしくはいずれかの均一な化学修飾、または同じヌクレオシド種類のすべてもしくはいずれかにおける同じ出発修飾の漸減滴定（ｄｏｗｎｗａｒｄ ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）によって生成される修飾の群、またはランダムな組み込みを伴うことを除いて同じヌクレオシド種類のすべてもしくはいずれかの測定されたパーセントの化学修飾を有し得る。さらなる態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、ポリヌクレオチド全体にわたって同じヌクレオシド種類のうちの２つ、３つ、または４つの均一な化学修飾を有し得る（例えば、すべてのウリジン及びすべてのシトシンなどが、同じように修飾される）。

【0175】

修飾されたヌクレオチドの塩基対形成は、標準的なアデニン－チミン、アデニン－ウラシル、またはグアニン－シトシン塩基対だけでなく、ヌクレオチド及び／または非標準的もしくは修飾塩基を含む修飾ヌクレオチドの間で形成される塩基対も包含し、ここで、水素結合ドナー及び水素結合アクセプターの配置が、非標準的塩基と標準的塩基との間、または２つの相補的な非標準的塩基構造間の水素結合を可能にする。かかる非標準的塩基対形成の１つの例は、修飾された核酸塩基イノシンとアデニン、シトシン、またはウラシルとの間の塩基対形成である。塩基／糖またはリンカーの任意の組み合わせが、本開示のポリヌクレオチドに組み込まれ得る。

【0176】

当業者は、特に注記される場合を除き、本出願に記載されるポリヌクレオチド配列は、代表的なＤＮＡ配列において「Ｔ」を列挙するが、配列がＲＮＡを表す場合、「Ｔ」は「Ｕ」と置換されることを理解するであろう。例えば、本開示のＴＤは、ＲＮＡとして、ＤＮＡとして、またはＲＮＡ及びＤＮＡユニットの両方を含むハイブリッド分子として投与され得る。

【0177】

いくつかの態様では、ポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、少なくとも２つ（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、８つ、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１８、２０以上）の修飾された核酸塩基の組み合わせを含む。

【0178】

いくつかの態様では、ポリヌクレオチドにおける核酸塩基、糖、骨格結合、またはそれらの任意の組み合わせは、少なくとも約５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％修飾される。

【0179】

（ｉ）塩基修飾
特定の態様では、化学修飾は、本開示（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）のポリヌクレオチド内の核酸塩基に存在する。いくつかの態様では、少なくとも１つの化学修飾ヌクレオシドは、修飾されたウリジン（例えば、シュードウリジン（ψ）、２－チオウリジン（ｓ２Ｕ）、１－メチル－シュードウリジン（ｍ１ψ）、１－エチル－シュードウリジン（ｅ１ψ）、または５－メトキシ－ウリジン（ｍｏ５Ｕ））、修飾されたシトシン（例えば、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ））、修飾されたアデノシン（例えば、１－メチル－アデノシン（ｍ１Ａ）、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）、または２－メチル－アデニン（ｍ２Ａ））、修飾されたグアノシン（例えば、７－メチル－グアノシン（ｍ７Ｇ）または１－メチルグアノシン（ｍ１Ｇ））、またはそれらの組み合わせである。

【0180】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、特定の修飾について均一に修飾される（例えば、完全に修飾される、配列全体にわたって修飾される）。例えば、ポリヌクレオチドは、同じ種類の塩基修飾、例えば、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）により均一に修飾され得、これは、ポリヌクレオチド配列におけるすべてのシトシン残基が、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）と置き換えられることを意味する。同様に、ポリヌクレオチドは、配列に存在する任意の種類のヌクレオシド残基について、修飾されたヌクレオシド、例えば、上記に記載されるもののいずれかとの置換により均一に修飾され得る。

【0181】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、少なくとも２つ（例えば、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上）の修飾された核酸塩基の組み合わせを含む。いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）における１種類の核酸塩基の少なくとも約５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％が、修飾された核酸塩基である。

【0182】

（ｉｉ）骨格修飾
いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（すなわちｍｉＲ－４８５阻害剤）は、ヌクレオシド間に任意の有用な結合を含むことができる。本開示の組成物において有用な、骨格修飾を含むそのような結合としては、これらに限定されるものではないが、以下のものが挙げられる：３’－アルキレンホスホネート、３’－アミノホスホロアミダート、アルケン含有骨格、アミノアルキルホスホロアミダート、アミノアルキルホスホトリエステル、ボラノホスフェート、－ＣＨ_２－Ｏ－Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２－Ｎ（ＣＨ_３）－Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２－ＮＨ－ＣＨ_２－、キラルホスホネート、キラルホスホロチオネート、ホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格、メチレン（メチルイミノ）、メチレンホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格、メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ骨格、モルホリノ結合、－Ｎ（ＣＨ_３）－ＣＨ_２－ＣＨ_２－、ヘテロ原子ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオシド、ホスフィナート、ホスホロアミダート、ホスホロジチオエート、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合、ホスホロチオネート、ホスホトリエステル、ＰＮＡ、シロキサン骨格、スルファメート骨格、スルフィド、スルホキシド、及びスルホン骨格、スルホネート及びスルホンアミド骨格、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、ならびにチオノホスホロアミダート。

【化7】

【0183】

いくつかの態様では、上記に開示される骨格結合の存在は、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）の安定性及び分解に対する耐性を増加させる。

【0184】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）における少なくとも約５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の骨格結合が修飾される（例えば、それらのすべてがホスホロチオエートである）。

【0185】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）に含めることができる骨格修飾は、ホスホロジアミダイトモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）及び／またはホスホロチオエート（ＰＳ）修飾を含む。

【0186】

（ｉｉｉ）糖修飾
本開示のポリヌクレオチド（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）に組み込まれ得る修飾されたヌクレオシド及びヌクレオチドは、核酸の糖に対して修飾され得る。いくつかの態様では、糖修飾は、ｍｉＲ－４８５核酸配列に対するｍｉＲ－４８５阻害剤の結合の親和性を増加させる。ＬＮＡまたは２’－置換糖などの親和性改善ヌクレオチド類似体をｍｉＲ－４８５阻害剤に組み込むことによって、ｍｉＲ－４８５阻害剤の長さ及び／またはサイズを小さくすることができる。

【0187】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）における少なくとも約５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％のヌクレオチドが糖修飾（例えば、ＬＮＡ）を含有する。

【0188】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチドにおける１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、または２２ヌクレオチドユニットが糖修飾される（例えば、ＬＮＡ）。

【0189】

一般に、ＲＮＡは、酸素を有する五員環である糖基リボースを含む。非限定的な例示的修飾ヌクレオチドとしては、リボースにおける酸素の（例えば、Ｓ、Ｓｅ、またはアルキレン、例えば、メチレンまたはエチレンとの）置換；二重結合の付加（例えば、リボースのシクロペンテニルまたはシクロヘキセニルとの置換）；リボースの環縮小（例えば、シクロブタンまたはオキセタンの四員環の形成）；リボースの環拡大（例えば、追加の炭素またはヘテロ原子を有し、６または七員環の形成、例えば、アンヒドロヘキシトール、アルトリトール、マンニトール、シクロヘキサニル、シクロヘキセニル、及びホスホロアミダート骨格も有するモルホリノ）；多環式形態（例えば、トリシクロ）；及び「アンロックド」形態、例えば、グリコール核酸（ＧＮＡ）（例えば、Ｒ－ＧＮＡまたはＳ－ＧＮＡ、ここで、リボースは、ホスホジエステル結合に結合されたグリコールユニットと置き換えられる）、トレオース核酸（ＴＮＡ、ここで、リボースは、α－Ｌ－トレオフラノシル－（３’→２’）と置き換えられる）、及びペプチド核酸（ＰＮＡ、ここで、２－アミノ－エチル－グリシン結合が、リボース及びホスホジエステル骨格と置き換わる）が挙げられる。糖基は、リボースにおける対応する炭素と反対の立体化学配置を有する１つ以上の炭素も含有し得る。したがって、ポリヌクレオチド分子は、糖として、例えば、アラビノースを含有するヌクレオチドを含み得る。

【0190】

リボースの２’ヒドロキシ基（ＯＨ）は、いくつかの異なる置換基で修飾または置換され得る。２’－位での例示的な置換としては、限定されるものではないが、Ｈ、ハロ、任意選択的に置換されたＣ_１～６アルキル；任意選択的に置換されたＣ_１～６アルコキシ；任意選択的に置換されたＣ_６～１０アリールオキシ；任意選択的に置換されたＣ_３～８シクロアルキル；任意選択的に置換されたＣ_３～８シクロアルコキシ；任意選択的に置換されたＣ_６～１０アリールオキシ；任意選択的に置換されたＣ_６～１０アリール－Ｃ_１～６アルコキシ、任意選択的に置換されたＣ_１～１２（ヘテロシクリル）オキシ；糖（例えば、リボース、ペントース、または本明細書に記載されるいずれか）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＣＨ_２ＣＨ_２ＯＲ（ここで、Ｒは、Ｈまたは任意選択的に置換されたアルキルであり、ｎは、０～２０（例えば、０～４、０～８、０～１０、０～１６、１～４、１～８、１～１０、１～１６、１～２０、２～４、２～８、２～１０、２～１６、２～２０、４～８、４～１０、４～１６、及び４～２０）の整数である）；「ロックド」核酸（ＬＮＡ）（２’－ヒドロキシが、Ｃ_１～６アルキレンまたはＣ_１～６ヘテロアルキレン架橋により、同じリボース糖の４’－炭素に連結されており、ここで、例示的な架橋としては、メチレン、プロピレン、エーテル、アミノ架橋、アミノアルキル、アミノアルコキシ、アミノ、及びアミノ酸が挙げられる）が挙げられる。

【0191】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）に存在するヌクレオチド類似体は、例えば、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡユニット、２’－ＯＭｅ－ＲＮＡユニット、２’－Ｏ－アルキル－ＳＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡユニット、２’－フルオロ－ＤＮＡユニット、ＬＮＡユニット、アラビノ核酸（ＡＮＡ）ユニット、２’－フルオロ－ＡＮＡユニット、ＨＮＡユニット、ＩＮＡ（インターカレーティング核酸）ユニット、２’ＭＯＥユニット、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、ＬＮＡは、例えば、オキシＬＮＡ（例えば、β－Ｄ－オキシ－ＬＮＡまたはα－Ｌ－オキシ－ＬＮＡ）、アミノＬＮＡ（例えば、β－Ｄ－アミノ－ＬＮＡまたはα－Ｌ－アミノ－ＬＮＡ）、チオＬＮＡ（例えば、β－Ｄ－チオ－ＬＮＡまたはα－Ｌ－チオ－ＬＮＡ）、ＥＮＡ（例えば、β－Ｄ－ＥＮＡまたはα－Ｌ－ＥＮＡ）、またはそれらの任意の組み合わせである。さらなる態様では、本開示のポリヌクレオチド（すなわちｍｉＲ－４８５阻害剤）に含めることができるヌクレオチド類似体は、ロックド核酸（ＬＮＡ）、アンロックド核酸（ＵＮＡ）、アラビノ核酸（ＡＢＡ）、架橋核酸（ＢＮＡ）、及び／またはペプチド核酸（ＰＮＡ）を含む。

【0192】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、修飾されたＲＮＡヌクレオチド類似体（例えば、ＬＮＡ）及びＤＮＡユニットの両方を含み得る。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤はギャップマーである。例えば、米国特許第８，４０４，６４９号、同第８，５８０，７５６号、同第８，１６３，７０８号、同第９，０３４，８３７号（これらのすべてが参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤はマイクロマーである。米国特許公開第ＵＳ２０１８０２０１９２８号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。

【0193】

いくつかの態様では、本開示のポリヌクレオチド（少なくとも、ｍｉＲ－４８５阻害剤）は、エンドヌクレアーゼ及びエキソヌクレアーゼ による速やかな分解を防止するための修飾を含むことができる。修飾としては、これらに限定されるものではないが、例えば、（ａ）末端修飾、例えば、５’末端修飾（リン酸化、脱リン酸化、共役化、反転結合など）、３’末端修飾（共役化、ＤＮＡヌクレオチド、反転結合など）、（ｂ）塩基修飾、例えば、修飾塩基、安定化塩基、不安定化塩基、または広範なパートナーのレパートリーと塩基対合する塩基、または共役化塩基による置換、（ｃ）糖修飾（例えば、２’位または４’位における）または糖の置換、ならびに（ｄ）ホスホジエステル結合の修飾または置換を含む、ヌクレオシド間結合の修飾が挙げられる。

【0194】

ＩＶ．ベクター及び送達システム
いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、例えば、ＰＳＤ９５タンパク質及び／またはＰＳＤ９５遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または条件に罹患した対象に、当該技術分野では周知のあらゆる関連する送達システムを用いて投与することができる。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、例えば、シナプトフィジンタンパク質及び／またはシナプトフィジン遺伝子の異常な（例えば、低下した）レベルに関連した疾患または条件に罹患した対象に、当該技術分野では周知のあらゆる関連する送達システムを用いて投与することができる。いくつかの態様では、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤は、例えば、カスパーゼ－３タンパク質及び／またはカスパーゼ－３遺伝子の異常な（例えば、増加した）レベルに関連した疾患または条件に罹患した対象に、当該技術分野では周知のあらゆる関連する送達システムを用いて投与することができる。特定の態様では、送達システムはベクターである。したがって、いくつかの態様では、本開示は、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を含むベクターを提供する。

【0195】

いくつかの態様では、ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの態様では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクターまたはアデノ随伴ウイルスベクターである。いくつかの態様では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、またはこれらの任意の組み合わせの血清型を有するＡＡＶである。いくつかの態様では、アデノウイルスベクターは、第３世代アデノウイルスベクターである。ＡＤＥＡＳＹ（商標）は、アデノウイルスベクターコンストラクトを作製するうえで圧倒的に最も一般的な方法である。このシステムは、シャトル（または導入）ベクター及びアデノウイルスベクターの２つのタイプのプラスミドで構成される。目的の導入遺伝子をシャトルベクターにクローニングし、検証し、制限酵素ＰｍｅＩで直鎖化する。次いで、このコンストラクトを、ＰＡＤＥＡＳＹ（商標）を含むＢＪ５１８３大腸菌細胞であるＡＤＥＡＳＩＥＲ－１細胞に形質転換する。ＰＡＤＥＡＳＹ（商標）は、ウイルス産生に必要なアデノウイルス遺伝子を含んだ約３３Ｋｂのアデノウイルスプラスミドである。シャトルベクターとアデノウイルスプラスミドとは、アデノウイルスプラスミド内への導入遺伝子の相同組み換えを促進する一致した左右のホモロジーアームを有している。標準的なＢＪ５１８３に、スーパーコイルを形成したＰＡＤＥＡＳＹ（商標）とシャトルベクターを同時形質転換することもできるが、この方法は非組換えアデノウイルスプラスミドの高いバックグラウンドを生じる。次いで、組換えアデノウイルスプラスミドをサイズ及び適当な制限消化パターンについて検証し、導入遺伝子がアデノウイルスプラスミドに挿入され、他のパターンの組み換えが生じていないことを確認する。検証されると、組換えプラスミドは、ＩＴＲによって隣接された線状ｄｓＤＮＡコンストラクトを生成するためにＰａｃＩで線状化される。２９３または９１１細胞は、線状化コンストラクトでトランスフェクションされ、ウイルスは、約７～１０日後に採取され得る。この方法以外にも、本明細書に開示される方法を実施するために、本願が出願された時点で当該技術分野において周知のアデノウイルスベクターコンストラクトを作製するための方法を用いることができる。

【0196】

いくつかの態様では、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、例えばレンチウイルスベクター（例えば第３または第４世代のレンチウイルスベクター）である。レンチウイルスベクターは、１つの細胞株に３つの別々のプラスミド発現システムをトランスフェクトする一過性トランスフェクションシステムで通常は作製される。これらには、導入ベクタープラスミド（ＨＩＶプロウイルスの部分）、パッケージングプラスミドまたはコンストラクト、及び異なるウイルスの異種エンベロープ遺伝子（ｅｎｖ）を含むプラスミドが含まれる。ベクターの３つのプラスミドコンポーネントをパッケージング細胞に入れた後、これをＨＩＶシェル内に挿入する。ベクターのウイルス部分は挿入配列を含んでいるため、ウイルスは細胞系で複製することはできない。現在の第３世代レンチウイルスベクターは、９つのＨＩＶ－１タンパク質のうちの３つのみ（Ｇａｇ、Ｐｏｌ、Ｒｅｖ）をコードしており、これらは組換えによる複製能を有するウイルスの生成を防止するために別々のプラスミドから発現させられる。第４世代レンチウイルスベクターでは、レトロウイルスゲノムはさらに減らされている（例えば、ＴＡＫＡＲＡ（登録商標）ＬＥＮＴＩ－Ｘ（商標）第４世代パッケージングシステムを参照）。

【0197】

当該技術分野では周知の任意のＡＡＶベクターを本明細書に開示される方法で使用することができる。ＡＡＶベクターは既知のベクターを含んでよく、それらの変異体、フラグメント、または融合体を含んでよい。いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶタイプ１（ＡＡＶ１）、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＶＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＶＶ９、ＡＶＶ１０、ＡＶＶ１１、ＡＶＶ１２、ＡＶＶ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、鳥類ＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、ウシＡＡＶ、エビＡＡＶ、ヘビＡＡＶ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

【0198】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＶＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＶＶ９、ＡＶＶ１０、ＡＶＶ１１、ＡＶＶ１２、ＡＶＶ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、鳥類ＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、エビＡＡＶ、ヘビＡＡＶ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されたＡＡＶベクターから誘導される。

【0199】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＶＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＶＶ９、ＡＶＶ１０、ＡＶＶ１１、ＡＶＶ１２、ＡＶＶ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、鳥類ＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、エビＡＡＶ、ヘビＡＡＶ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される少なくとも２つのＡＡＶベクターから誘導されるキメラベクターである。

【0200】

特定の態様では、ＡＡＶベクターは、当該技術分野では周知の少なくとも２つの異なるＡＡＶベクターの領域を含む。

【0201】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、第１のＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＶＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＶＶ９、ＡＶＶ１０、ＡＶＶ１１、ＡＶＶ１２、ＡＶＶ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、鳥類ＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、エビＡＡＶ、ヘビＡＡＶ、またはこれらの任意の組み合わせ）に由来する末端逆位配列と、第２のＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＶＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＶＶ９、ＡＶＶ１０、ＡＶＶ１１、ＡＶＶ１２、ＡＶＶ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、鳥類ＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、エビＡＡＶ、ヘビＡＡＶ、またはこれらの任意の組み合わせ）に由来する第２の末端逆位配列と、を含む。

【0202】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３Ａ、ＡＶＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＶＶ９、ＡＶＶ１０、ＡＶＶ１１、ＡＶＶ１２、ＡＶＶ１３、ＡＡＶｒｈ．７４、鳥類ＡＡＶ、ウシＡＡＶ、イヌＡＡＶ、ウマＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、霊長類ＡＡＶ、非霊長類ＡＡＶ、ヒツジＡＡＶ、エビＡＡＶ、ヘビＡＡＶ、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されたＡＡＶベクターの部分を含む。いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２を含む。

【0203】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、スプライスアクセプター部位を含む。いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、プロモーターを含む。当該技術分野では周知の任意のプロモーターを本開示のＡＡＶベクターで使用することができる。いくつかの実施態様では、プロモーターはＲＮＡ Ｐｏｌ ＩＩＩプロモーターである。いくつかの態様では、ＲＮＡ Ｐｏｌ ＩＩＩプロモーターは、Ｕ６プロモーター、Ｈ１プロモーター、７ＳＫプロモーター、５Ｓプロモーター、アデノウイルス２（Ａｄ２）ＶＡＩプロモーター、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、プロモーターは、サイトメガロウイルス前初期遺伝子（ＣＭＶ）プロモーター、ＥＦ１ａプロモーター、Ｓｖ４０プロモーター、ＰＧＫ１プロモーター、Ｕｂｃプロモーター、ヒトβアクチンプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ＴＲＥプロモーター、ＵＡＳプロモーター、Ａｃ５プロモーター、ポリヘドリンプロモーター、ＣａＭＫＩＩａプロモーター、ＧＡＬ１プロモーター、ＧＡＬ１０プロモーター、ＴＥＦプロモーター、ＧＤＳプロモーター、ＡＤＨ１プロモーター、ＣａＭＶ３５Ｓプロモーター、またはＵｂｉプロモーターである。特定の態様では、プロモーターは、Ｕ６プロモーターを含む。

【0204】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、構成的に活性なプロモーター（構成的プロモーター）を含む。いくつかの態様では、構成的プロモーターは、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、βアクチンプロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、サルウイルス（例えば、ＳＶ４０）、パピローマウイルス、アデノウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ラウス肉腫ウイルス、レトロウイルス末端反復配列（ＬＴＲ）、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）、及び単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーターからなる群から選択される。

【0205】

いくつかの態様では、プロモーターは、誘導性プロモーターである。いくつかの態様では、誘導性プロモーターは、組織特異的プロモーターである。特定の態様では、組織特異的プロモーターは、神経細胞、グリア細胞、または神経細胞及びグリア細胞の両方において、ＡＡＶベクターのコーディング領域の転写を誘導する。

【0206】

いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、１つ以上のエンハンサーを含む。いくつかの態様では、１つ以上のエンハンサーはＡＡＶ内に単独で、または本明細書に開示されるプロモーターとともに存在する。いくつかの態様では、ＡＡＶベクターは、３’ＵＴＲのポリ（Ａ）テール配列を含むいくつかの態様では、３’ＵＴＲのポリ（Ａ）テール配列は、ｂＧＨポリ（Ａ）、アクチンポリ（Ａ）、ヘモグロビンポリ（Ａ）、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、３’ＵＴＲのポリ（Ａ）テール配列はｂＧＨポリ（Ａ）を含む。

【0207】

いくつかの態様では、本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤は、送達剤とともに投与される。使用することができる送達剤の非限定的な例としては、リピドイド、リポソーム、リポプレックス、脂質ナノ粒子、ポリマー化合物、ペプチド、タンパク質、細胞、ナノ粒子模倣体、ナノチューブ、ミセル、またはコンジュゲートが挙げられる。

【0208】

したがって、いくつかの態様では、本開示は、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（すなわちｍｉＲ－４８５阻害剤）と、送達剤と、を含む組成物も提供する。いくつかの態様では、送達剤は、下式：
［ＷＰ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＡＭ］（式Ｉ）
または
［ＷＰ］－Ｌ１－［ＡＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］（式ＩＩ）
（式中、
ＷＰは、水溶性バイオポリマー部分であり、
ＣＣは、正に帯電したキャリア部分であり、
ＡＭは、アジュバント部分であり、
Ｌ１及びＬ２は、独立して、任意選択のリンカーである）を有するカチオン性キャリアユニットを含み、
カチオン性キャリアユニットは、約１：１のイオン比で核酸と混合される場合にミセルを形成する。

【0209】

いくつかの態様では、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を含む組成物は、イオン結合を介してカチオン性キャリアユニットと相互作用する。

【0210】

いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、ポリ（アルキレングリコール）、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリグリセロール、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（「ＰＯＺ」）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリグリセロール、またはポリ（プロピレングリコール）（「ＰＰＧ」）を含む。いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、下式：

【化8】

（式中、ｎは、１～１０００である）を有する。

【0211】

いくつかの態様では、ｎは、少なくとも約１１０、少なくとも約１１１、少なくとも約１１２、少なくとも約１１３、少なくとも約１１４、少なくとも約１１５、少なくとも約１１６、少なくとも約１１７、少なくとも約１１８、少なくとも約１１９、少なくとも約１２０、少なくとも約１２１、少なくとも約１２２、少なくとも約１２３、少なくとも約１２４、少なくとも約１２５、少なくとも約１２６、少なくとも約１２７、少なくとも約１２８、少なくとも約１２９、少なくとも約１３０、少なくとも約１３１、少なくとも約１３２、少なくとも約１３３、少なくとも約１３４、少なくとも約１３５、少なくとも約１３６、少なくとも約１３７、少なくとも約１３８、少なくとも約１３９、少なくとも約１４０、または少なくとも約１４１である。いくつかの態様では、ｎは、約８０～約９０、約９０～約１００、約１００～約１１０、約１１０～約１２０、約１２０～約１３０、約１４０～約１５０、または約１５０～約１６０である。

【0212】

いくつかの態様では、水溶性ポリマーは、直鎖状、分枝鎖状、または樹枝状である。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、１つ以上の塩基性アミノ酸を含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７、少なくとも８つ、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、少なくとも３８、少なくとも３９、少なくとも４０、少なくとも４１、少なくとも４２、少なくとも４３、少なくとも４４、少なくとも４５、少なくとも４６、少なくとも４７、少なくとも４８、少なくとも４９、または少なくとも５０の塩基性アミノ酸を含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、約３０～約５０の塩基性アミノ酸を含む。いくつかの態様では、塩基性アミノ酸は、アルギニン、リシン、ヒスチジン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、カチオン性キャリア部分は、約４０個のリシンモノマーを含む。

【0213】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、免疫反応、炎症反応、及び／または組織微小環境を調節することができる。いくつかの態様では、アジュバント部分は、イミダゾール誘導体、アミノ酸、ビタミン、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、アジュバント部分は、下式：

【化9】

（式中、Ｇ１及びＧ２のそれぞれは、Ｈ、芳香環、もしくは１～１０アルキルであるか、またはＧ１とＧ２はともに芳香環を形成し、ｎは１～１０である）を有する。

【0214】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、ニトロイミダゾールを含む。いくつかの態様では、アジュバント部分は、メトロニダゾール、チニダゾール、ニモラゾール、ジメトリダゾール、プレトマニド、オルニダゾール、メガゾール、アザニダゾール、ベンズニダゾール、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様では、アジュバント部分は、アミノ酸を含む。

【0215】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、下式：

【化10】

（式中、Ａｒは、

【化11】

であり、Ｚ１及びＺ２のそれぞれは、ＨまたはＯＨである）を有する。

【0216】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、ビタミンを含む。いくつかの態様では、ビタミンは、環式環または環式ヘテロ原子環及びカルボキシル基またはヒドロキシル基を含む。いくつかの態様では、ビタミンは、下式：

【化12】

（式中、Ｙ１及びＹ２のそれぞれは、Ｃ、Ｎ、Ｏ、またはＳであり、ｎは１または２である）を有する。

【0217】

いくつかの態様では、ビタミンは、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ６、ビタミンＢ７、ビタミンＢ９、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ２、ビタミンＤ３、ビタミンＥ、ビタミンＭ、ビタミンＨ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、ビタミンは、ビタミンＢ３である。

【0218】

いくつかの態様では、アジュバント部分は、少なくとも約２個、少なくとも約３個、少なくとも約４個、少なくとも約５個、少なくとも約６個、少なくとも約７個、少なくとも約８個、少なくとも約９個、少なくとも約１０個、少なくとも約１１個、少なくとも約１２個、少なくとも約１３個、少なくとも約１４個、少なくとも約１５個、少なくとも約１６個、少なくとも約１７個、少なくとも約１８個、少なくとも約１９個、または少なくとも約２０個のビタミンＢ３を含む。いくつかの態様では、アジュバント部分は、約１０個のビタミンＢ３を含む。

【0219】

いくつかの態様では、組成物は、約１２０個～約１３０個のＰＥＧユニットを有する水溶性バイオポリマー部分と、約３０個～約４０個のリシンを有するポリリシンを含むカチオン性キャリア部分と、約５個～約１０個のビタミンＢ３を有するアジュバント部分と、を含む。

【0220】

いくつかの態様では、組成物は、（ｉ）約１００個～約２００個のＰＥＧユニットを有する水溶性バイオポリマー部分と、（ｉｉ）アミン基を有する約３０個～約４０個のリシン（例えば、約３２個のリシン）と、（ｉｉｉ）それぞれがチオール基を有する約１５個～２０個のリシン（例えば、それぞれがチオール基を有する約１６個のリシン）と、（ｉｖ）ビタミンＢ３に融合された約３０個～４０個のリシン（例えば、それぞれがビタミンＢ３に融合された約３２個のリシン）と、を含む。いくつかの態様では、組成物溶解度、水溶性ポリマーに結合された標的化部分、例えばＬＡＴ１標的化リガンド、例えばフェニルアラニンをさらに含む。いくつかの態様では、組成物中のチオール基は、ジスルフィド結合を形成する。

【0221】

いくつかの態様では、組成物は、（１）（ｉ）約１００個～約２００個のＰＥＧユニットと、（ｉｉ）アミン基を有する約３０個～約４０個のリシン（例えば、約３２個のリシン）と、（ｉｉｉ）それぞれがチオール基を有する約１５個～２０個のリシン（例えば、それぞれがチオール基を有する約１６個のリシン）と、（ｉｖ）ビタミンＢ３に融合された約３０個～４０個のリシン（例えば、それぞれがビタミンＢ３に融合された約３２個のリシン）と、を含むミセルと、（２）ｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、配列番号３０）と、を含み、ｍｉＲ－４８５阻害剤はミセル内に封入される。いくつかの態様では、組成物は、ＰＥＧユニットに結合された標的化部分、例えばＬＡＴ１標的化リガンド、例えばフェニルアラニンをさらに含む。いくつかの態様では、ミセル中のチオール基は、ジスルフィド結合を形成する。

【0222】

本開示は、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（すなわちｍｉＲ－４８５阻害剤、例えば配列番号３０）を含むミセルであって、ｍｉＲＮＡ阻害剤と送達剤とが互いに結合した、ミセルも提供する。

【0223】

いくつかの態様では、結合は、共有結合、非共有結合、またはイオン結合である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分の正電荷は、溶液中で本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤と混合される際にミセルを形成するのに十分であり、溶液中のカチオン性キャリアユニットのカチオン性キャリア部分の正電荷とｍｉＲ－４８５阻害剤（または阻害剤を含むベクター）の負電荷の全体的イオン比は、約１：１である。

【0224】

いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットの正電荷、特にカチオン性キャリア部分の電荷は、溶液中で負に帯電したペイロード（例えば、核酸）と混合される際にミセルを形成するのに十分であり、カチオン性キャリアユニット、特にそのカチオン性キャリア部分と負に荷電したペイロード（例えば、核酸）との全体のイオン比は、約２０：１、約１９：１、約１８：１、約１７：１、約１６：１、約１５：１、約１４：１、約１３：１、約１２：１、約１１：１、約１０：１、約９：１、約８：１、約７：１、約６：１、約５：１、約４：１、約３：１、約２：１、または約１：１である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニット、特にそのカチオン性キャリア部分と負に荷電したペイロード（例えば、核酸）との全体のイオン比は、約１：２０、約１：１９、約１：１８、約１：１７、約１：１６、約１：１５、約１：１４、約１：１３、約１：１２、約１：１１、約１：１０、約１：９、約１：８、約１：７、約１：６、約１：５、約１：４、約１：３、約１：２、または約１；１である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニット、特にそのカチオン性キャリア部分と負に荷電したペイロード（例えば、核酸）との全体のイオン比は、約２：１である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニット、特にそのカチオン性キャリア部分と負に荷電したペイロード（例えば、核酸）との全体のイオン比は、約３：１である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニット、特にそのカチオン性キャリア部分と負に荷電したペイロード（例えば、核酸）との全体のイオン比は、約４：１である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニット、特にそのカチオン性キャリア部分と負に荷電したペイロード（例えば、核酸）との全体のイオン比は、約５：１である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニット、特にそのカチオン性キャリア部分と負に荷電したペイロード（例えば、核酸）との全体のイオン比は、約６：１である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニット、特にそのカチオン性キャリア部分と負に荷電したペイロード（例えば、核酸）との全体のイオン比は、約７：１である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニット、特にそのカチオン性キャリア部分と負に荷電したペイロード（例えば、核酸）との全体のイオン比は、約８：１である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニット、特にそのカチオン性キャリア部分と負に荷電したペイロード（例えば、核酸）との全体のイオン比は、約９：１である。いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニット、特にそのカチオン性キャリア部分と負に荷電したペイロード（例えば、核酸）との全体のイオン比は、約１０：１である。

【0225】

ミセルは、１つ以上の両親媒性分子から構成される水溶性またはコロイド状の構造または集合体である。両親媒性分子は、少なくとも１つの親水性（極性）部分及び少なくとも１つの疎水性（非極性）部分を含有する分子である。「典型的なミセル」は、親水性層または「殻」により囲まれた単一の、中心の、かつ主に疎水性の区画または「核」を有する。水溶液において、ミセルは、両親媒性分子の親水性の「頭部」領域が周囲の溶媒と接触しており、両親媒性分子の疎水性の単一尾部領域をミセル核に隔離している集合体を形成する。ミセルの形状は、ほぼ球状である。他の形状、例えば、楕円体、円柱、桿状構造、またはポリマソームも可能である。開示されるミセルの形状及びサイズ、ならびにしたがって、ローディング容量は、水溶性バイオポリマー（例えば、ＰＥＧ）とカチオン性キャリア（例えば、ポリリシン）との間の比率を変化させることにより修飾され得る。比率に応じて、キャリアユニットは、小粒子、小型ミセル、ミセル、桿状構造、またはポリマソームとして組織化し得る。したがって、「本開示のミセル」という用語は、典型的なミセルだけでなく小粒子、小型ミセル、ミセル、桿状構造、またはポリマソームも包含する。

【0226】

本開示のミセルは、疎水性及び親水性部分を含有する単一の単分子ポリマー、または極性溶液（すなわち、水溶液）中で、臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）以上で形成された多数の両親媒性（すなわち界面活性剤）分子を含有する集合体の混合物のいずれかから構成され得る。ミセルは、１つ以上の両親媒性分子から自己組織化され、ここで、部分は、主に疎水性の内部核及び主に親水性の外側をもたらすように配向される。

【0227】

本開示のミセルは、５～約２０００ナノメートルの範囲のサイズであり得る。いくつかの態様では、ミセルの直径は、約１０ｎｍ～約２００ｎｍである。いくつかの態様では、ミセルの直径は、約１ｎｍ～約１００ｎｍ、約１０ｎｍ～約１００ｎｍ、約１０ｎｍ～約９０ｎｍ、約１０ｎｍ～約８０ｎｍ、約１０ｎｍ～約７０ｎｍ、約２０ｎｍ～約１００ｎｍ、約２０ｎｍ～約９０ｎｍ、約２０ｎｍ～約８０ｎｍ、約２０ｎｍ～約７０ｎｍ、約３０ｎｍ～約１００ｎｍ、約３０ｎｍ～約９０ｎｍ、約３０ｎｍ～約８０ｎｍ、約３０ｎｍ～約７０ｎｍ、約４０ｎｍ～約１００ｎｍ、約４０ｎｍ～約９０ｎｍ、約４０ｎｍ～約８０ｎｍ、または約４０ｎｍ～約７０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約３０ｎｍ～約６０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約１５ｎｍ～約９０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約１５ｎｍ～約８０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約１５ｎｍ～約７０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約１５ｎｍ～約６０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約１５ｎｍ～約５０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約２０ｎｍ～約６０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約２０ｎｍ～約５０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約２０ｎｍ～約４０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約２５ｎｍ～約３５ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約３２ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約１００ｎｍ～約２００ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約４０ｎｍ～約５０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約５０ｎｍ～約６０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約６０ｎｍ～約７０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約７０ｎｍ～約８０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約８０ｎｍ～約９０ｎｍである。いくつかの態様では、本開示のミセルの直径は、約９０ｎｍ～約１００ｎｍである。

【0228】

いくつかの態様では、本開示のミセルは、単一種類のカチオン性キャリアユニットを含む。他の態様では、本開示のミセルは、２種類以上のカチオン性キャリアユニット（例えば、標的細胞表面上の異なる受容体を標的とする）を含む。いくつかの態様では、本開示のミセルは、異なる標的化部分、（例えば、異なるペイロードを収容するための）異なるカチオン性キャリア部分、及び／または異なる疎水性及び／または架橋ユニットを有するカチオン性キャリアユニットを含み得る。

【0229】

ミセルをペイロード（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）とともに形成させるために、異なる種類のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを互いに組み合わせることができる。例えば、血液脳関門を標的とするために、本開示のミセルは、標的化部分に連結されたカチオン性（またはアニオン性）キャリアユニット及び標的化部分に連結されていないカチオン性（またはアニオン性）キャリアユニットを含み得る。いくつかの態様では、ミセルは、約５０～約２００のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。他の態様では、ミセルは、約５０～約１５０、約５０～約１４０、約５０～約１３０、約５０～約１２０、約５０～約１１０、または約５０～約１００のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。いくつかの態様では、ミセルは、約６０～約２００のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。他の態様では、ミセルは、約６０～約１５０、約６０～約１４０、約６０～約１３０、約６０～約１２０、約６０～約１１０、約６０～約１００、約６０～約９０、約６０～約８０、または約６０～約７０のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。いくつかの態様では、ミセルは、約７０～約２００のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。他の態様では、ミセルは、約７０～約１５０、約７０～約１４０、約７０～約１３０、約７０～約１２０、約７０～約１１０、約７０～約１００、約７０～約９０、または約７０～約８０のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。いくつかの態様では、ミセルは、約８０～約２００のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。他の態様では、ミセルは、約８０～約１５０、約８０～約１４０、約８０～約１３０、約８０～約１２０、約８０～約１１０、約８０～約１００、または約８０～約９０のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。いくつかの態様では、ミセルは、約９０～約２００のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。他の態様では、ミセルは、約９０～約１５０、約９０～約１４０、約９０～約１３０、約９０～約１２０、約９０～約１１０、または約９０～約１００のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。いくつかの態様では、ミセルは、約１００～約２００のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。他の態様では、ミセルは、約１００～約１５０、約１００～約１４０、約１００～約１３０、約１００～約１２０、約１００～約１１０、または約１００～約１００のカチオン性またはアニオン性キャリアユニットを含む。

【0230】

本開示は、（ｉ）ヌクレオチド配列（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）、及び（ｉｉ）本明細書に記載されるカチオン性キャリアユニットを含むミセルも含む。いくつかの態様では、本開示は、（ｉ）ヌクレオチド配列（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）、及び（ｉｉ）約８０個～約１２０個（例えば、約８５個～約１１５個、約９０個～約１１０個、約９５個～約１０５個）の本明細書に記載されるカチオン性キャリアユニットを含むミセルに関する。いくつかの態様では、ミセルは、（ｉ）ヌクレオチド配列（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）、及び（ｉｉ）約８０個～約１２０個（例えば、約８０個、約８５個、約９０個、約９５個、約１００個、約１０５個、または約１１０個）の本明細書に記載されるカチオン性キャリアユニットを含む。いくつかの態様では、ミセルは、（ｉ）ヌクレオチド配列（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤）、及び（ｉｉ）約６０個～約１１０個、例えば、約８０個のカチオン性キャリアユニットを含み、（ａ）カチオン性キャリアユニットのうちの約４５個～約９０個、例えば、約８０個は、［ＷＰ］－Ｌ１－［ＣＣ］－Ｌ２－［ＡＭ］を含み、（ｂ）カチオン性キャリアユニットのうちの約４５個～約５５個、例えば、約５０個は、［ＷＰ］－Ｌ１－［ＡＭ］－Ｌ２－［ＣＣ］を含み、ただし、ＷＰは、（ＰＥＧ）_５０００であり、ＣＣは、約４０個～約５０個のリシン、例えば、約４５個、約４６個、約４７個、約４８個、約４９個、または約５０個のリシンであり、リシンのうちの約５個～約１５個、約５個のリシンのそれぞれは、ビタミンＢ３（ニコチンアミド）に融合されている。いくつかの態様では、組成物溶解度、水溶性ポリマー部分［ＷＰ］に結合された標的化部分、例えばＬＡＴ１標的化リガンド、例えばフェニルアラニンをさらに含む。

【0231】

いくつかの態様では、カチオン性キャリアユニットは、酵素分解から本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（すなわち、ｍｉＲ－４８５阻害剤）を保護することができる（本明細書に参照によりその全体を援用する、２０２０年１２月３０日に公開されたＰＣＴ公開第ＷＯ２０２０／２６１２２７号を参照）。

【0232】

Ｖ．医薬組成物
いくつかの態様では、本開示は、対象に投与するのに適した本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、ｍｉＲ－４８５阻害剤を含むポリヌクレオチドまたはベクター）を含む医薬組成物も提供する。医薬組成物は、一般的に、本明細書に記載されるｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、ポリヌクレオチドまたはベクター）と、薬学的に許容される賦形剤またはキャリアとを、対象への投与に適した形態で含む。薬学的に許容される賦形剤またはキャリアは、投与される特定の組成物、及び組成物を投与するために使用される特定の方法により部分的に決定される。

【0233】

したがって、本開示のｍｉＲ－４８５阻害剤を含む医薬組成物の多種多様な適当な製剤が存在する（（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．１８ｔｈ ｅｄ．（１９９０）を参照）。医薬組成物は一般に、無菌状態で、米国食品医薬品局の適正製造基準（ＧＭＰ）規制のすべてに完全に準拠したものとして製剤化される。

【0234】

ＶＩ．キット
本開示は、本開示のｍｉＲＮＡ阻害剤（例えば、本明細書に開示されるポリヌクレオチド、ベクター、または医薬組成物）と、必要に応じて使用説明書、例えば本明細書に開示される方法に従った使用説明書と、を含むキットまたは製品も提供する。いくつかの態様では、キットまたは製品は、ｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、本開示のベクター、例えばＡＡＶベクター、ポリヌクレオチド、または医薬組成物）を１つ以上の容器に含む。いくつかの態様では、キットまたは製品は、ｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、本開示のベクター、例えばＡＡＶベクター、ポリヌクレオチド、または医薬組成物）と、パンフレットと、を含む。本明細書に開示されるｍｉＲ－４８５阻害剤（例えば、本開示のベクター、ポリヌクレオチド、及び医薬組成物、またはこれらの組み合わせ）は、当該技術分野では周知の確立されたキット形式の１つに容易に組み込むことができる点は当業者には容易に認識されよう。

【0235】

以下の実施例は、例示のために示すものであって、限定のために示すものではない。

【実施例】

【0236】

実施例
実施例１：ｍｉＲ－４８５阻害剤の調製
（ａ）アルキン修飾チロシンの合成：本開示のミセルをＢＢＢのＬＡＴ１輸送体に誘導するためのカチオン性キャリアユニットの組織特異的標的化部分（ＴＭ、図１を参照）の合成のための中間体として、アルキン修飾されたチロシンを調製した。

【0237】

アセトニトリル（４．０ｍｌ）中、Ｎ－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－チロシンメチルエステル（Ｂｏｃ－Ｔｙｒ－ＯＭｅ）（０．５ｇ，１．６９ｍｍｏｌ）及びＫ_２ＣＯ_３（１．５当量，２．５４ｍｍｏｌ）の混合物を、臭化プロパルギル（１．２当量，２．０３ｍｍｏｌ）に滴下した。反応混合物を６０℃で一晩加熱した。反応後、反応混合物を、水：酢酸エチル（ＥＡ）を使用して抽出した。次いで、有機層を、ブライン溶液を使用して洗浄した。粗製物を、フラッシュカラム（ヘキサン中、１０％ＥＡ）により精製した。次に、得られた生成物を、１，４－ジオキサン（１．０ｍｌ）及び６．０ＭのＨＣｌ（１．０ｍｌ）中に溶解した。反応混合物を１００ ℃で一晩加熱した。次に、ジオキサンを除去し、ＥＡにより抽出した。水性ＮａＯＨ （０．５ Ｍ）溶液をｐＨ値が７になるまで混合物に加えた。反応物質をエバポレーターで濃縮し、１２０００ｒｐｍで０℃で遠心分離した。沈殿物を脱イオン水で洗浄して凍結乾燥した。

【0238】

（ｂ）ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン）（ＰＥＧ－ＰＬＬ）の合成：この合成ステップにより、本開示のカチオン性キャリアユニットの水溶性バイオポリマー（ＷＰ）及びカチオン性キャリア（ＣＣ）を調製した（図１を参照）。

【0239】

ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン）を、モノメトキシＰＥＧ（ＭｅＯ－ＰＥＧ）を高分子開始剤として用いてＬｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡの開環重合により合成した。要約すると、ＭｅＯ－ＰＥＧ（６００ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）及びＬｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡ（２５７４ｍｇ、９．６ｍｍｏｌ）を、１Ｍのチオ尿素を含有するＤＭＦ及びＤＭＦ（またはＮＭＰ）中に別々に溶解した。Ｌｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡ溶液を、マイクロシリンジによりＭｅＯ－ＰＥＧ溶液に滴下し、反応混合物を３７ ℃で４日間撹拌した。反応ボトルをアルゴン及び真空によりパージした。すべての反応をアルゴン雰囲気下で行った。反応後、混合物を過剰量のジエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿物をメタノールに再溶解し、冷ジエチルエーテル中で再び沈殿させた。次いで、沈殿物を濾過し、減圧下で乾燥後に白色粉末を得た。ＰＥＧ－ＰＬＬ（ＴＦＡ）のＴＦＡ基の脱保護を行うため、次のステップを行った。

【0240】

ＭｅＯ－ＰＥＧ－ＰＬＬ（ＴＦＡ）（５００ｍｇ）をメタノール（６０ｍＬ）に溶解し、１ＮのＮａＯＨ（６ｍＬ）をポリマー溶液に撹拌下で滴下した。混合物を撹拌しながら３７℃で１日維持した。反応混合物を１０ｍＭのＨＥＰＥＳに対して４回及び蒸留水に対して透析した。凍結乾燥後にＰＥＧ－ＰＬＬの白色粉末を得た。

【0241】

（ｂ）アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン）（Ｎ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ）の合成：この合成ステップにより、本開示のカチオン性キャリアユニットの水溶性バイオポリマー（ＷＰ）及びカチオン性キャリア（ＣＣ）を調製した（図１を参照）。

【0242】

アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン）を、アジド－ＰＥＧ（Ｎ_３－ＰＥＧ）を用いてＬｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡの開環重合により合成した。要約すると、Ｎ_３－ＰＥＧ（３００ｍｇ，０．０６ｍｍｏｌ）及びＬｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡ（１２８７ｍｇ，４．８ｍｍｏｌ）を、１Ｍのチオ尿素を含んだＤＭＦ及びＤＭＦ（またはＮＭＰ）に別々に溶解した。Ｌｙｓ（ＴＦＡ）－ＮＣＡ溶液を、マイクロシリンジによりＮ_３－ＰＥＧ溶液に滴下し、反応混合物を３７ ℃で４日間撹拌した。反応ボトルをアルゴン及び真空によりパージした。すべての反応をアルゴン雰囲気下で行った。反応後、混合物を過剰量のジエチルエーテル中で沈殿させた。沈殿物をメタノールに再溶解し、冷ジエチルエーテル中で再び沈殿させた。次いで、沈殿物を濾過し、減圧下で乾燥後に白色粉末を得た。ＰＥＧ－ＰＬＬ（ＴＦＡ）のＴＦＡ基の脱保護を行うため、次のステップを行った。

【0243】

Ｎ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（５００ｍｇ）をメタノール（６０ｍＬ）に溶解し、１ＮのＮａＯＨ（６ｍＬ）を撹拌しながらポリマー溶液に滴下した。混合物を撹拌しながら３７℃で１日維持した。反応混合物を１０ｍＭのＨＥＰＥＳに対して４回及び蒸留水に対して透析した。凍結乾燥後にＮ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬの白色粉末を得た。

【0244】

（ｃ）（メトキシまたは）アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（Ｎ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ））の合成：このステップでは、組織特異的アジュバント部分（ＡＭ、図１を参照）を本開示のカチオン性キャリアユニットのＷＰ－ＣＣコンポーネントに結合させた。カチオン性キャリアユニットに使用した組織特異的アジュバント部分（ＡＭ）は、ニコチンアミド（ビタミンＢ３）とした。このステップにより、図１に示されるカチオン性キャリアユニットのＷＰ－ＣＣ－ＡＭコンポーネントが得られる。

【0245】

アジド－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リジン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド）（Ｎ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ））を、Ｎ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ及びニコチン酸のＥＤＣ／ＮＨＳの存在下での化学修飾により合成した。Ｎ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（３７２ｍｇ，２５．８μｍｏｌ）及びニコチン酸（５５６．７ｍｇ，ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して１．０２当量）を、脱イオン水及びメタノール（１：１）の混合物に別々に溶解した。ＥＤＣ・ＨＣｌ（５５６．７ｍｇ，Ｎ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ_２に対して１．５当量）をニコチン酸溶液に加え、ＮＨＳ（３３４．２ｍｇ，ＰＥＧ－ＰＬＬのＮＨ２に対して１．５当量）を混合物に段階的に加えた。

【0246】

反応混合物をＮ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ溶液に加えた。反応混合物を撹拌しながら３７℃で１６時間維持した。１６時間後、３，３’－ジチオジプロピオン酸（３６．８ｍｇ，０．１当量）をメタノールに溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（４０．３ｍｇ，０．１５当量）、及びＮＨＳ（２４．２ｍｇ，０．１５当量）を脱イオン水にそれぞれ溶解した。次いで、ＮＨＳ及びＥＤＣ・ＨＣｌを、３，３’－ジチオジプロピオン酸溶液に順次加えた。粗製のＮ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ）溶液を加えた後、混合液を３７℃で４時間撹拌した。

【0247】

精製を行うため、混合物をメタノールに対して２時間透析し、ＤＬ－ジチオトレイトール（ＤＴＴ，４０．６ｍｇ，０．１５当量）を加えた後、３０分間活性化した。

【0248】

ＤＴＴを除去するため、混合物を、メタノール、脱イオン水中５０％のメタノール、脱イオン水に対して順次透析した。

【0249】

ｄ）フェニルアラニン－ポリ（エチレングリコール）－ｂ－ポリ（Ｌ－リシン／ニコチンアミド／メルカプトプロパンアミド） （Ｐｈｅ－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ））の合成： このステップでは、組織特異的標的化部分（ＴＭ）を上記のステップで合成したＷＰ－ＣＣ－ＡＭコンポーネントに結合させた。ＴＭコンポーネント（フェニルアラニン）は、ステップ（ａ）で調製した中間体とステップ（ｃ）の生成物との反応によって調製した。

【0250】

血管内の脳の内皮組織を標的化するため、ＬＡＴ１を標的とするアミノ酸としてフェニルアラニンを、銅触媒の存在下でのＮ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ）とアルキン修飾されたチロシンとの間のクリック反応により導入した。要約すると、Ｎ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ）（１３０ｍｇ，６．５μｍｏｌ）及びアルキン修飾されたフェニルアラニン（５．７ｍｇ，４．０当量）を脱イオン水（または５０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液）に溶解した。次いで、ＣｕＳＯ４・Ｈ２Ｏ（０．４ｍｇ，２５ｍｏｌ％）及びＴｒｉｓ（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン（ＴＨＰＴＡ，３．４ｍｇ，１．２当量）を脱イオン水に溶解し、Ｎ_３－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ／ＳＨ）溶液を加えた。次いで、アスコルビン酸ナトリウム（３．２ｍｇ，２．５当量）を混合液に加えた。反応混合物を、室温で１６時間撹拌しながら維持した。反応後、混合物を透析膜（ＭＷＣＯ＝７，０００）に移し、脱イオン水に対して１日間透析した。最終生成物を凍結乾燥後に得た。

【0251】

（Ｅ）ポリイオン複合体（ＰＩＣ）ミセル製剤－上記に記載したようにして本開示のカチオン性キャリアユニットを調製した後、ミセルを作製した。本実施例に記載されるミセルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドペイロードと組み合わされたカチオン性キャリアユニットからなるものである。

【0252】

ＭｅＯ－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ）またはＰｈｅ－ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ）とｍｉＲＮＡを混合することによりナノサイズのＰＩＣミセルを調製した。ＰＥＧ－ＰＬＬ（Ｎｉｃ）を、０．５ｍｇ／ｍＬの濃度でＨＥＰＥＳ緩衝液（１０ｍＭ）に溶解した。次いで、ＲＮＡｓｅ非含有水中のｍｉＲＮＡ溶液（２２．５μＭ）を、ｍｉＲＮＡ阻害剤（配列番号２～３０）（例えば、ＡＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＧＵＧＵＡＵＧＡＣ；配列番号３０）とポリマーとの比が２：１（ｖ／ｖ）となるようにポリマー溶液と混合した。

【0253】

ポリマーと抗ｍｉＲＮＡとの混合比は、ミセル形成条件、すなわち、ポリマー（本開示のキャリア）中のアミンと抗ｍｉＲＮＡ（ペイロード）中のリン酸との比を最適化することにより決定した。ポリマー（キャリア）と抗ｍｉＲＮＡ（ペイロード）との混合物を、マルチボルテックスにより３０００ｒｐｍで９０秒間はげしく混合し、室温で３０分間維持して、ミセルを安定化した。

【0254】

使用に先立ち、ミセル（１０μＭの抗ｍｉＲＮＡ濃度）を４℃で保存した。ＭｅＯ－ミセルまたはＰｈｅ－ミセルを同じ方法を用いて調製し、ミセル調製時に両方のポリマーを混合することにより異なる量のＰｈｅ（２５％～７５％）を含有するミセルも調製した。

【0255】

実施例２．ｍｉＲ－４８５－３ｐの過剰発現はシナプス形成を阻害し、神経細胞死を誘導する
ニューロンのシナプス形成に対するｍｉＲ－４８５－３ｐ発現の影響を理解するため、初代マウスニューロンを胎生期１８．５日目のマウスから培養し、どちらも緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現する、レンチウイルスコントロールベクターまたはレンチ－ｍｉＲ－４８５－３ｐのいずれかに感染させた。初代マウスニューロンを単離するため、動物の皮質及び海馬を摘出し、氷冷したＨＢＳＳ（Ｗｅｌｇｅｎｅ、ＬＢ００３－０２）溶液中でインキュベートし、ａｃｃｕｍａｘ（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号Ａ７０８９）中、３７℃で１５分間、解離させた。培養物をＨＢＳＳ中で２回、洗浄した。マウス神経細胞を、２％Ｂ２７（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１７５０４）、１％ピルビン酸ナトリウム、及び１％ Ｐ／Ｓを含むｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号２１１０３０４９）に再懸濁した。細胞を、７０μＭのセルストレイナー（ＳＰＬ、９３０７０）に通して濾過し、加湿した５％ＣＯ_２インキュベーター内で３７℃に維持した。培地を３日毎に換え、その後インビトロで８日間培養した後、細胞を実験に使用した。ニューロンに感染させるために、ポリブレン（８μｇ／μＬ）、レンチコントロールウイルス、及び／またはレンチ－ｍｉＲ４８５－３ｐウイルスを初代ニューロンに形質導入した。３０時間後、細胞を４％パラホルムアルデヒドで固定した。次に、免疫細胞化学を使用して、ＰＳＤ－９５、シナプトフィジン、及び切断型カスパーゼ－３タンパク質の発現を分析した。

【0256】

図２Ａ（右のパネル）に示されるように、ＧＦＰシグナルに基づけば、ｍｉＲ－４８５－３ｐは、レンチ－ｍｉＲ－４８５－３ｐ感染ニューロンで過剰発現していた。ＰＳＤ９５は、ほとんどニューロンのシナプス後肥厚のみに位置し、シナプスタンパク質の固定に関与しているため、シナプスの代用となる。図２Ａ（中央のパネル）に示されるように、ｍｉＲ－４８５－３ｐを過剰発現するニューロンではＰＳＤ９５染色が減少し、ｍｉＲ－４８５－３ｐの過剰発現がシナプス形成を阻害することを示唆している。図２Ａ（左のパネル）は、合成した画像を示す。

【0257】

同様の結果がシナプトフィジンでも観察された。図２Ｂ（中央パネル）に示されるように、レンチ－ｍｉＲ４８５－３ｐに感染させた初代ニューロンでは、レンチコントロールに感染させたニューロンと比較して、シナプトフィジンの発現が有意に減少した。この結果は、ｍｉＲ－４８５－３ｐの過剰発現もシナプス形成を阻害することを示唆した。

【0258】

ｍｉＲ－４８５－３ｐの過剰発現はシナプス形成を阻害することから、ｍｉＲ－４８５－３ｐの過剰発現と神経細胞死との関係を、切断型カスパーゼ３発現について染色することによって評価した。図３（中央のパネル）に示されるように、切断型カスパーゼ－３は、レンチ－コントロール処理ニューロンに対して、レンチ－ｍｉＲ－４８５－３ｐ処理ニューロンにおいてのみ視覚的に検出された。以上を合わせると、これらの結果は、ニューロンにおけるｍｉＲ－４８５－３ｐの過剰発現はシナプス形成を阻害し、ニューロン細胞死を誘導することを示唆している。

【0259】

実施例３．ｍｉＲ－４８５－３ｐの過剰発現は、マウス及びヒトの初代ミクログリアにおける活性化カスパーゼ－３レベルの増加を引き起こす。
初代ミクログリアにおけるｍｉＲ－４８５－３ｐの過剰発現が活性化カスパーゼ３レベルを増加させるかどうかを調べるため、マウスの脳組織を０日目に採取し、ミクログリアを培養した。１４日目に細胞をレンチ－ｍｉＲ－４８５－３ｐまたはレンチ－コントロールで処理した。１５日目にミクログリアを回収し、免疫細胞化学を行った（図４Ａ）。細胞をＩｂａ１（例えば、活性化ミクログリアマーカー）（図４Ｂ、中央のパネル）及び切断型カスパーゼ－３（図４Ｃ、中央のパネル）について染色した。マウス初代ニューロンで以前に観察されたように、ｍｉＲ－４８５－３ｐの過剰発現はマウス初代ミクログリアにおける活性化カスパーゼ３レベルも増加させた。

【0260】

ｍｉＲ－４８５－３ｐの過剰発現がマウス初代ミクログリアの活性化カスパーゼ３レベルを増加させたことから、ヒト初代ミクログリアも同様の効果について評価した。初代ヒトミクログリア細胞を、０日目に培養を開始し、１日目にレンチ－ｍｉＲ－４８５－３ｐまたはレンチコントロールで処理し、２日目に回収した（図６Ａ）。免疫細胞化学を行ってヒトミクログリアをＩｂａ１及び切断型カスパーゼ－３について染色した（図６Ｂ及び６Ｃ）。ｍｉＲ－４８５－３ｐの過剰発現は、ヒト初代ミクログリアでもレンチコントロールと比較して切断型カスパーゼ３染色を増加させた。

【0261】

上記の結果は、ｍｉＲ－４８５－３ｐの過剰発現はマウスとヒトのミクログリアの両方で細胞死も引き起こす可能性があることを裏付けるものである。

【0262】

実施例４．ｍｉＲ－４８５－３ｐの過剰発現は、マウス及びヒトの アストロサイトにおける活性化カスパーゼ－３レベルの増加を引き起こす。
初代アストロサイトにおけるｍｉＲ－４８５－３ｐの過剰発現が活性化カスパーゼ３レベルを増加させるかどうかを調べるため、マウスの脳を０日目に採取し、アストロサイトを培養した。１４日目に細胞をレンチ－ｍｉＲ－４８５－３ｐまたはレンチ－コントロールで処理した。１５日目にミクログリアを採取し、免疫細胞化学を行った（図５Ａ及び５Ｂ）。細胞を、ＧＦＡＰ（例えば、活性化アストロサイトマーカー）（図５Ａ、中央のパネル）及び切断型カスパーゼ－３（図５Ｂ、中央のパネル）について染色した。ｍｉＲ－４８５－３ｐの過剰発現は、マウス初代アストロサイトの活性化カスパーゼ３レベルを増加させた。

【0263】

ｍｉＲ－４８５－３ｐの過剰発現がマウス初代アストロサイトの活性化カスパーゼ３レベルを増加させたことから、ヒト初代アストロサイトも同様の効果について評価した。初代ヒト星状細胞を、０日目に培養を開始し、１日目にレンチ－ｍｉＲ－４８５－３ｐまたはレンチコントロールで処理し、２日目に回収した（図６Ａ）。免疫細胞化学を行ってヒト星状細胞をＧＦＡＰ及び切断型カスパーゼ－３について染色した（図７Ａ及び７Ｂ）。ｍｉＲ－４８５－３ｐの過剰発現はレンチコントロールと比較して切断型カスパーゼ ３の染色を増加させた。

【0264】

以上を合わせると、実施例２～４に示される結果は、ｍｉＲ－４８５－３ｐがシナプス形成を阻害し、適切なニューロン機能に関与するさまざまな細胞の死を誘導しうることを示すものである。

【0265】

実施例５．ジストニアに対するｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果の分析
本明細書に記載のｍｉＲ－４８５阻害剤がインビボで治療効果を奏し得るかどうかを評価するため、ジストニアの動物モデルを用いる。動物を、ＰＢＳまたはｍｉＲ－４８５阻害剤のいずれかで処置する。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤を、異なる用量、投与間隔、及び／または投与経路で動物に投与する。ｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果は、例えば、さまざまな臨床的徴候について動物のさまざまな属性を測定すること、及び／またはジストニアに関連する病理を測定することによって評価される。いくつかの態様では、ＰＳＤ９５、シナプトフィジン、及び／またはカスパーゼ３のタンパク質及び／または遺伝子の発現が動物で評価される。

【0266】

実施例６．神経精神疾患に対するｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果の分析
本明細書に記載のｍｉＲ－４８５阻害剤がインビボで治療効果を奏し得るかどうかを評価するため、神経精神疾患の動物モデルを用いる。動物を、ＰＢＳまたはｍｉＲ－４８５阻害剤のいずれかで処置する。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤を、異なる用量、投与間隔、及び／または投与経路で動物に投与する。ｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果は、例えば、さまざまな臨床的徴候について動物のさまざまな属性を測定すること、及び／または神経精神疾患に関連する病理を測定することによって評価される。いくつかの態様では、ＰＳＤ９５、シナプトフィジン、及び／またはカスパーゼ３のタンパク質及び／または遺伝子の発現が動物で評価される。

【0267】

実施例７．知的障害に対するｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果の分析
本明細書に記載のｍｉＲ－４８５阻害剤がインビボで治療効果を奏し得るかどうかを評価するため、知的障害の動物モデルを使用する。動物を、ＰＢＳまたはｍｉＲ－４８５阻害剤のいずれかで処置する。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤を、異なる用量、投与間隔、及び／または投与経路で動物に投与する。ｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果は、例えば、さまざまな臨床的徴候について動物のさまざまな属性を測定すること、及び／または知的障害に関連する病理を測定することによって評価される。いくつかの態様では、ＰＳＤ９５、シナプトフィジン、及び／またはカスパーゼ３のタンパク質及び／または遺伝子の発現が動物で評価される。

【0268】

実施例８．依存症に対するｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果の分析
本明細書に記載のｍｉＲ－４８５阻害剤がインビボで治療効果を奏し得るかどうかを評価するため、依存症の動物モデルを用いる。動物を、ＰＢＳまたはｍｉＲ－４８５阻害剤のいずれかで処置する。いくつかの態様では、ｍｉＲ－４８５阻害剤を、異なる用量、投与間隔、及び／または投与経路で動物に投与する。ｍｉＲ－４８５阻害剤の治療効果は、例えば、さまざまな臨床的徴候について動物のさまざまな属性を測定すること、及び／または依存症に関連する病理を測定することによって評価される。いくつかの態様では、ＰＳＤ９５、シナプトフィジン、及び／またはカスパーゼ３のタンパク質及び／または遺伝子の発現が動物で評価される。

【0269】

＊＊＊
特許請求の範囲を解釈するうえで、「発明の概要」及び「要約」のセクションではなく、「発明の詳細な説明」のセクションを用いることが意図されている点は認識されるべきである。発明の概要及び要約セクションは、本発明者（複数可）により意図される１つ以上であるが、すべてではない本開示の例示的態様を示し得、したがって、本開示及び添付の特許請求の範囲を如何様にも限定することを意図しない。

【0270】

本開示は、特定の機能及びそれらの関係の実施を示す機能的構成単位を用いて上記された。これらの機能的要素の境界は、説明の便宜上、本明細書では任意に定義されている。特定の機能及びそれらの関係性が適切に実施されている限り、代替的な境界を定義することもできる。

【0271】

具体的な態様の上記の具体的な説明は本開示の一般的な性質を余すところなく示しているため、他者は、当業者の技能の範囲内の知識を適用することで、不要な実験を行うことなく、本開示の一般的概念から逸脱せずに、かかる具体的な態様を容易に改変し、及び／またはさまざまな用途に適合させることができる。したがって、そのような適合及び改変は、本明細書に示される教示及び助言に基づき、開示される態様の均等物の意味及び範囲内に包含されるものとする。本明細書における語句または用語は、説明を目的としたものであって、限定を目的とするものではなく、本明細書における語句または用語は本明細書の教示及び助言を考慮することで当業者によって理解されるはずである。

【0272】

本開示の幅及び範囲は、上記に記載した例示的な態様のいずれによっても限定されるべきでなく、下記の請求項及びそれらの均等物のみにしたがって定義されるべきものである。

【0273】

本出願全体を通じて引用され得る全ての引用参考文献（参考文献、特許、特許出願、及びウェブサイトを含む）の内容の全体を、あらゆる目的で、参照によって本明細書に明示的に援用し、また、それらに引用される文献も同様に援用する。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図2E】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図7】

【配列表】

2024506868000001.app

【国際調査報告】