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▶ アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-02-15
(54)【発明の名称】アルカリホスファターゼポリペプチド及びその使用方法
(51)【国際特許分類】
A61K 38/16 20060101AFI20240207BHJP
A61K 47/04 20060101ALI20240207BHJP
A61K 47/22 20060101ALI20240207BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20240207BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20240207BHJP
A61P 19/08 20060101ALI20240207BHJP
A61P 19/10 20060101ALI20240207BHJP
A61P 3/00 20060101ALI20240207BHJP
A61K 38/17 20060101ALI20240207BHJP
C12N 9/16 20060101ALN20240207BHJP
【ＦＩ】
A61K38/16
A61K47/04
A61K47/22
A61K47/26
A61K9/08
A61P19/08
A61P19/10
A61P3/00
A61K38/17
C12N9/16 B ZNA
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023548692
(86)(22)【出願日】2022-02-10
(85)【翻訳文提出日】2023-09-08
(86)【国際出願番号】 US2022016031
(87)【国際公開番号】W WO2022173987
(87)【国際公開日】2022-08-18
(31)【優先権主張番号】63/149,090
(32)【優先日】2021-02-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】503102674
【氏名又は名称】アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】ヴォエトリ， ウォルター シー．
(72)【発明者】
【氏名】ウー， ユーホン
(72)【発明者】
【氏名】モンテレオーネ， ジョナサン
(72)【発明者】
【氏名】メジェボフスキー， タチアナ
(72)【発明者】
【氏名】ファルコーネ， エリック
(72)【発明者】
【氏名】グオ， ヤン
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
【Ｆターム（参考）】
4C076AA12
4C076BB11
4C076BB13
4C076BB15
4C076BB16
4C076CC09
4C076DD26
4C076DD51
4C076DD60
4C076DD67
4C076EE23
4C084AA02
4C084AA03
4C084BA22
4C084BA34
4C084CA53
4C084MA17
4C084MA66
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZA961
4C084ZA962
4C084ZC211
4C084ZC212
(57)【要約】
低ホスファターゼ症（ＨＰＰ）などの骨石灰化障害、及びその症状を治療するための可溶性アルカリホスファターゼを含む医薬組成物が特徴とされる。ポリペプチドは、天然に存在するアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）に由来する可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ）またはその断片を含む。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
配列番号５に対して少なくとも８０％の配列同一性及び配列番号１に比べてＥ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑから選択される少なくとも１つの変異を有するポリペプチド、ならびにリン酸塩、プロリン、及びショ糖のうち１つ以上を含む薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項2】
前記ポリペプチドは、配列番号５に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性を有する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項3】
前記ポリペプチドは、配列番号５の配列を含むか、またはそれで構成される、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項4】
前記ポリペプチドは、配列番号１に比べて２つまたは３つの変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑを含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項5】
前記組成物は、約１ｍＭ～約１００ｍＭのリン酸塩を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項6】
前記組成物は、約５ｍＭ～約２０ｍＭのリン酸塩を含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項7】
前記組成物は、約１０ｍＭのリン酸塩を含む、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項8】
前記リン酸塩は、リン酸ナトリウムである、請求項１～７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項9】
前記組成物は、約１ｍＭ～約５００ｍＭのプロリンを含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項10】
前記組成物は、約５０ｍＭ～約２００ｍＭのプロリンを含む、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項11】
前記組成物は、約１４０ｍＭのプロリンを含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項12】
前記組成物は、約１ｍＭ～約５００ｍＭのショ糖を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項13】
前記組成物は、約５０ｍＭ～約２００ｍＭのショ糖を含む、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項14】
前記組成物は、約１４０ｍＭのショ糖を含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項15】
前記組成物は、約１０ｍＭのリン酸塩、約１４０ｍＭのプロリン、及び約１４０ｍＭのショ糖を含む、請求項６～１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項16】
前記組成物は、約０．０１％～約０．５％のポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸ソルビタンを含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項17】
前記組成物は、約０．０１％～約０．１％のポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸ソルビタンを含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項18】
前記組成物は、約０．０５％のポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸ソルビタンを含む、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項19】
前記組成物は、約１４０ｍＭのプロリン、約１４０ｍＭのショ糖、及び約０．０５％のポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸ソルビタンを含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項20】
前記ポリペプチドは、約１．０ｍｏｌ／ｍｏｌ～約６．０ｍｏｌ／ｍｏｌの総シアル酸含量（ＴＳＡＣ）を含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項21】
前記ＴＳＡＣは、約３．０ｍｏｌ／ｍｏｌ～約６．０ｍｏｌ／ｍｏｌである、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項22】
前記ＴＳＡＣは、約３．２ｍｏｌ／ｍｏｌ、５．０ｍｏｌ／ｍｏｌ、または約５．９ｍｏｌ／ｍｏｌである、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項23】
前記組成物は、約７．３のｐＨを含む、請求項１～２２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項24】
前記組成物は、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬの濃度で調製される、請求項１～２３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項25】
前記組成物は、約０．１ｍＬ～約５０ｍＬの容量で調製される、請求項１～２４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項26】
前記組成物は、約１ｍＬの容量中約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で調製される、請求項２４または２５に記載の医薬組成物。
【請求項27】
請求項１～２３のいずれか１項に記載の医薬組成物を含むバイアル。
【請求項28】
前記組成物は、約０．１ｍＬ～約５０ｍＬの容量で調製される、請求項２７に記載のバイアル。
【請求項29】
前記組成物は、約１０ｍＬの容量で調製される、請求項２８に記載のバイアル。
【請求項30】
前記組成物は、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬの濃度で調製される、請求項２７～２９のいずれか１項に記載のバイアル。
【請求項31】
前記組成物は、約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で調製される、請求項３０に記載のバイアル。
【請求項32】
前記組成物は、約１ｍＬの容量中約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で調製される、請求項２７～３１のいずれか１項に記載のバイアル。
【請求項33】
骨石灰化障害を治療することを、それを必要とする患者に対して行う方法であって、請求項１～２６のいずれか１項に記載の医薬組成物の用量を前記患者に投与することを含む、前記方法。
【請求項34】
前記骨石灰化障害は、低ホスファターゼ症（ＨＰＰ）、骨折、骨粗鬆症、硬結性骨化症、軟骨石灰化症、筋緊張低下、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、気管気管支軟化症、発作、神経線維腫症、及び頭蓋骨早期癒合症から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項35】
前記ポリペプチドは、前記骨石灰化障害を治療するのに十分な量及び期間で投与される、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項36】
前記治療することは、前記患者の骨形成を促進する、請求項３３～３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項37】
前記ポリペプチドは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される、請求項３３～３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項38】
前記ポリペプチドは、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される、請求項３７に記載の方法。
【請求項39】
前記ポリペプチドは、１日、１週、１ヶ月、または１年に１回投与される、請求項３３～３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項40】
週あたり前記ポリペプチドの約１０～約１００ｍｇが、投与される、請求項３３～３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項41】
週あたり約１５～約９０ｍｇのポリペプチドが投与される、請求項４０に記載の方法。
【請求項42】
週あたり約１５ｍｇ、約３０ｍｇ、約４５ｍｇ、または約９０ｍｇのポリペプチドが、投与される、請求項４１に記載の方法。
【請求項43】
前記ポリペプチドは、少なくとも１日間、１週間、１ヶ月間、１年間、またはそれ以上にわたって投与される、請求項３３～４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項44】
前記組成物は、皮下、静脈内、筋肉内、舌下、くも膜下腔内、または皮内投与される、請求項３３～４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項45】
前記組成物は、皮下または静脈内投与される、請求項４４に記載の方法。
【請求項46】
前記患者は、ヒトである、請求項３３～４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項47】
前記ヒトは、新生児、小児、青年、または成人である、請求項４６に記載の方法。
【請求項48】
前記方法により、前記患者の血液中で約５０μｇ×時間／ｍＬ～約４０００μｇ×時間／ｍＬのＡＵＣ０－１６８ｈが生じる、請求項３３～４７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項49】
前記方法により、前記患者の血液中で約１０００μｇ×時間／ｍＬ～約３０００μｇ×時間／ｍＬのＡＵＣ０－１６８ｈが生じる、請求項４８に記載の方法。
【請求項50】
前記方法により、患者の血液中で約０．５μｇ／ｍＬ～約２５μｇ／ｍＬのＣｍａｘが生じる、請求項３３～４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項51】
前記方法により、患者の血液中で約０．６μｇ／ｍＬ～約２０μｇ／ｍＬのＣｍａｘが生じる、請求項４９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２２年２月４日に作成された上記ＡＳＣＩＩコピーの名前は、５０６９４－０９４ＷＯ２＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿２＿４＿２２＿ＳＴ２５であり、サイズは２７，７５３バイトである。
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２２年２月４日に作成された上記ＡＳＣＩＩコピーの名前は、５０６９４－０９４ＷＯ２＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿２＿４＿２２＿ＳＴ２５であり、サイズは２７，７５３バイトである。
【背景技術】
【0002】
低ホスファターゼ症（ＨＰＰ）は、最も重篤な形態の疾患の場合、発症率が１００，０００出生児あたり１例の稀な遺伝性骨格疾患である。この障害は、通常、組織非特異アルカリホスファターゼ（ＴＮＳＡＬＰ）をコードする遺伝子の機能喪失型変異によって引き起こされる。ＨＰＰは、早期の歯牙喪失から子宮内での骨石灰化のほぼ完全な欠如に至るまで、非常に幅広い症状及び重症度を呈する。ＨＰＰの症状は、患者によって著しく異なり、患者の年齢によっても著しく異なる。多くのＨＰＰ患者が、骨格の変化、低身長、慢性疼痛、下肢の痛み、歩行障害、及び早期の非外傷性歯牙喪失を示す。
ＴＮＳＡＬＰの可溶性断片を含む、組換えにより製造された酵素補充療法（ＥＲＴ）であるアスホターゼアルファ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（登録商標）、Ａｌｅｘｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）が、ＨＰＰ患者が利用できる最初のＥＲＴである。アスホターゼアルファは、骨石灰化及び密度に加えて、呼吸機能及び運動機能、認知発達、ならびに筋力の改善によって証明されているように、ＨＰＰの最も重篤な形態に対して革新的な効果をこれまでに示している（Ｗｈｙｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６６：９０４－９１３，２０１２）。
ＴＮＳＡＬＰの可溶性断片を含む、組換えにより製造された酵素補充療法（ＥＲＴ）であるアスホターゼアルファ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（登録商標）、Ａｌｅｘｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）が、ＨＰＰ患者が利用できる最初のＥＲＴである。アスホターゼアルファは、骨石灰化及び密度に加えて、呼吸機能及び運動機能、認知発達、ならびに筋力の改善によって証明されているように、ＨＰＰの最も重篤な形態に対して革新的な効果をこれまでに示している（Ｗｈｙｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６６：９０４－９１３，２０１２）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0003】
【非特許文献1】Ｗｈｙｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６６：９０４－９１３，２０１２
【発明の概要】
【0004】
第１の態様は、配列番号５に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％）の配列同一性を有するアルカリホスファターゼポリペプチド、及び薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物を特徴とする。ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に比べて、Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑから選択される少なくとも１つの変異を含み得る（例えば、ポリペプチドは、これらの変異のうち２つまたは３つの全てを含み得る）。例えば、ポリペプチドは、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％）の配列同一性を有し、かつＥ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑから選択される変異のうち少なくとも１つ、２つ、または３つの全てを含む。薬学的に許容される担体は、リン酸塩、プロリン、及びショ糖のうち１つ以上を含み得る。例えば、ポリペプチドは、配列番号５のアミノ酸配列を含むか、またはそれで構成され得る。
【0005】
いくつかの実施形態では、ポリペプチドのアルカリホスファターゼ部分は、配列番号３に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％）の配列同一性を有する。このポリペプチドは、さらにＦｃ領域（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４Ｆｃ領域）及び／またはポリアスパラギン酸領域に連結され得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＩｇＧ２／４Ｆｃ領域を含み、例えば、配列番号４に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％）の同一性を有する。ポリアスパラギン酸は、例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のアスパラギン酸残基を含み得る。いくつかの実施形態では、ポリアスパラギン酸は、１０個のアスパラギン酸残基（Ｄ１０）を含む。
【0006】
組成物は、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ（例えば、約１、１０、２０、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、または２００ｍｇ／ｍＬ）の投与量のアルカリホスファターゼポリペプチドを含有するように調製され得る。組成物は、約０．１ｍＬ～約５０ｍＬ（例えば、約０．１～約１０ｍＬ、例えば、約０．１ｍＬ、０．２ｍＬ、０．３ｍＬ、０．４ｍＬ、０．５ｍＬ、０．６ｍＬ、０．７ｍＬ、０．８ｍＬ、０．９ｍＬ、または１．０ｍＬ、例えば、約１ｍＬ～約１０ｍＬ、例えば、約２ｍＬ、３ｍＬ、４ｍＬ、５ｍＬ、６ｍＬ、７ｍＬ、８ｍＬ、９ｍＬ、または１０ｍＬ）の容量で調製され得る。いくつかの実施形態では、組成物は、約１ｍＬで調製される。例えば、組成物は、配列番号５に対して、少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％）の配列同一性、またはその配列を有する１００ｍｇ／ｍＬのアルカリホスファターゼポリペプチド（例えば、ポリペプチドは、配列番号５のＥ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑから選択される変異のうち少なくとも１つ、２つ、または３つの全てを含む）、及び薬学的に許容される担体を含有する場合がある。
【0007】
組成物は、リン酸塩（例えば、リン酸ナトリウム）を、例えば、約１ｍＭ～約１００ｍＭ、または約５ｍＭ～約２０ｍＭ、例えば、約２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、または１００ｍＭ、例えば、約１０ｍＭの濃度で含み得る。組成物は、さらにプロリン及び／またはショ糖を含み得る。組成物は、さらにプロリンを含み得る。組成物は、さらにショ糖を含み得る。例えば、組成物は、約１ｍＭ～約５００ｍＭのプロリン、例えば、約７０ｍＭ～約２８０ｍｍ、例えば、約５０ｍＭ～約２００ｍＭ、例えば、約２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１２０ｍＭ、１３０ｍＭ、１４０ｍＭ、１５０ｍＭ、１６０ｍＭ、１７０ｍＭ、１８０ｍＭ、１９０ｍＭ、２００ｍＭ、３００ｍＭ、４００ｍＭ、または５００ｍＭ、例えば、約１４０ｍＭのプロリン、及び／または約１ｍＭ～約５００ｍＭのショ糖、例えば、約７０ｍＭ～約２８０ｍｍ、例えば、約５０ｍＭ～約２００ｍＭ、例えば、約２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１２０ｍＭ、１３０ｍＭ、１４０ｍＭ、１５０ｍＭ、１６０ｍＭ、１７０ｍＭ、１８０ｍＭ、１９０ｍＭ、２００ｍＭ、２１０、ｍＭ、２２０ｍＭ、２３０ｍＭ、２４０ｍＭ、２５０ｍＭ、２６０ｍＭ、２７０ｍＭ、２８０ｍＭ、２９０ｍＭ、３００ｍＭ、３５０ｍＭ、４００ｍＭ、４５０ｍＭ、または５００ｍＭ、例えば、約１４０ｍＭのショ糖、または約２１０ｍＭのショ糖を含み得る。いくつかの実施形態では、組成物は、約１：０～約１：３、例えば、約１：１のプロリン：ショ糖のモル比を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１ｍＭ～約５００ｍＭのプロリン（例えば、約５０ｍＭ～約２００ｍＭのプロリン、例えば、約１４０ｍＭのプロリン）、及び約１ｍＭ～約５００ｍＭのショ糖（例えば、約４０ｍＭ～約２８０ｍＭ、例えば、約５０ｍＭ～約２００ｍＭのショ糖、例えば、約１４０ｍＭまたは約２１０ｍＭのショ糖）を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１４０ｍＭのプロリンを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１４０ｍＭのショ糖を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２１０ｍＭのショ糖を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２１０ｍＭのショ糖を含むが、プロリンは含まない。いくつかの実施形態では、製剤は、約１４０ｍＭのプロリン、及び約１４０ｍＭのショ糖を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１４０ｍＭのプロリン、及び約１４０ｍＭのショ糖、及び約１０ｍＭのリン酸塩（例えば、リン酸ナトリウム）を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２１０ｍＭのショ糖、及び約１０ｍＭのリン酸塩（例えば、リン酸ナトリウム）を含む。製剤は、さらに約０．０１％～約０．５％のポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸ソルビタン、例えば、約０．０１％～約０．１％のポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸ソルビタン、例えば、約０．０５％のポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸ソルビタンなどを含み得る。ポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸ソルビタンは、例えば、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）であってもよい。いくつかの実施形態では、組成物は、ｐＨ約７．０～ｐＨ約７．６（例えば、ｐＨ約７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、または７．６、例えば、ｐＨ約７．３）のｐＨで調製され得る。いくつかの実施形態では、組成物は、ｐＨ約７．３で、約１０ｍＭのリン酸塩、約１４０ｍＭのプロリン、約１４０ｍＭのショ糖、及び約０．０５％のポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸ソルビタン（例えば、ＰＳ８０）を含む。
【0008】
組成物は、ポリペプチド（例えば、配列番号５のポリペプチド、及びそれに対して少なくとも約８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、ポリペプチドは、配列番号５のＥ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑから選択される変異のうち１つ、２つ、または３つの全てを含むものである））を含有する溶液として調製された医薬組成物であり得る。医薬組成物は、ポリペプチドを、例えば、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ、例えば、約１００ｍｇ／ｍＬの量で含有し得る。医薬組成物は、皮下投与用に、例えば、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬのポリペプチドの投与量で調製され得る。組成物は、約０．１ｍＬ～約５０ｍＬ（例えば、約０．１～約１０ｍＬ、例えば、約０．１ｍＬ、０．２ｍＬ、０．３ｍＬ、０．４ｍＬ、０．５ｍＬ、０．６ｍＬ、０．７ｍＬ、０．８ｍＬ、０．９ｍＬ、または１．０ｍＬ、例えば、約１ｍＬ～約１０ｍＬ、例えば、約２ｍＬ、３ｍＬ、４ｍＬ、５ｍＬ、６ｍＬ、７ｍＬ、８ｍＬ、９ｍＬ、または１０ｍＬ）の容量の溶液で調製され得る。いくつかの実施形態では、組成物は、約１ｍＬで調製される。溶液は、ｐＨ約７．３で、約１０ｍＭのリン酸塩、約１４０ｍＭのプロリン、約１４０ｍＭのショ糖、及び約０．０５％のポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸ソルビタン（例えば、ＰＳ８０）を含有し得る。
【0009】
また、本明細書に記載の医薬組成物を含有するバイアルも特徴とする。バイアルは、ポリペプチド（例えば、約０．１ｍｇ～約１．０ｇ（例えば、約１０ｍｇ～約２００ｍｇ）の量で）を含有する溶液（例えば、ｐＨ約７．３で、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１４０ｍＭのプロリン、約１４０ｍＭのショ糖、及び約０．０５％のポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸ソルビタン（例えば、ＰＳ８０））を、例えば、約０．１ｍＬ～約１０ｍＬ（例えば、約１ｍＬ）の容量で、含有し得る。バイアルは、ポリペプチドを、例えば、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約５００ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ～約１５０ｍｇ／ｍＬ、または約１００ｍｇ／ｍＬの量で含有し得る。ポリペプチドは、配列番号５のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体を有してよい（例えば、ポリペプチドは、配列番号５のＥ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑから選択される変異のうち１つ、２つ、または３つの全てを含むものである）。
【0010】
第２の態様は、患者（例えば、ヒト患者）における骨石灰化障害または骨疾患の症状（例えば、低ホスファターゼ症（ＨＰＰ）、骨折、骨粗鬆症、硬結性骨化症、軟骨石灰化症、筋緊張低下、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、気管気管支軟化症、発作、神経線維腫症（例えば、ＮＦ－１）及び頭蓋骨早期癒合症からなる群から選択される疾患、またはそれらの１つ以上の症状）を、第１の態様の医薬組成物をそれを必要とする患者に投与することによって治療する方法を特徴とする。組成物は、疾患を治療するか、またはその１つ以上の症状を緩和するのに十分な量及び期間で投与されてよい。本治療法は、患者における骨形成を促進する可能性がある。本ポリペプチドは、筋力低下を治療するために使用することができる。
【0011】
ポリペプチドまたはそれを含有する医薬組成物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約６０ｍｇ／ｋｇの投与量（例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ、または、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ）で投与されてよい。ポリペプチドは、１日、１週、１ヶ月、または１年に１回（例えば、１週に１回）投与されてよい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３１日ごとに１回以上投与される。ポリペプチドは、１週に１回、２週に１回、３週に１回、４週間以上に１回、投与されてよい。ポリペプチドは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／週～約５０ｍｇ／ｋｇ／週（例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／週～約４０ｍｇ／ｋｇ／週、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ／週～約２０ｍｇ／ｋｇ／週、または、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ／週～約１０ｍｇ／ｋｇ／週）の投与量で投与されてよい。ポリペプチドは、少なくとも１日間、１週間、１ヶ月間、１年間、またはそれ以上にわたって（例えば、患者の生涯にわたって）投与されてよい。
【0012】
ポリペプチドまたはそれを含有する医薬組成物は、皮下、静脈内、筋肉内、舌下、くも膜下腔内、または皮内投与されてよい。特に、ポリペプチドまたは該ポリペプチドを含有する組成物は、皮下投与または静脈内投与によって投与されてよい。
【0013】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、皮下投与（例えば、腹部または大腿部に）される。例えば、約１０ｍｇ～約１００ｍｇ（例えば、約１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、または１００ｍｇ、例えば、約１５ｍｇ、４５ｍｇ、または９０ｍｇ、例えば約１５ｍｇ、４５ｍｇ、または９０ｍｇ）が、１週に１回または２回、例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０週間、もしくはそれ以上にわたって、またはそれよりも長い期間にわたって（例えば、患者の生涯にわたって）患者に皮下投与されてよい。組成物は、例えば、約５ｍＬ以下の容量（例えば、４．０ｍＬ、３．０ｍＬ、２．０ｍＬ、１．０ｍＬ、０．９ｍＬ、０．８ｍＬ、０．７ｍＬ、０．６ｍＬ、０．５ｍＬ、０．４ｍＬ、０．３ｍＬ、０．２ｍＬ、もしくは０．１ｍＬ、または約５ｍＬ～約０．１ｍＬの範囲の容量）で投与されてよい。
【0014】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与（ＩＶ）される。例えば、約１０ｍｇ～約１００ｍｇ（例えば、約１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、または１００ｍｇ、例えば、約１５ｍｇ、４５ｍｇ、または９０ｍｇ）が、１週に１回または２回、例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０週間、またはそれ以上にわたって（例えば、３週間にわたって）、またはそれよりも長い期間にわたって（例えば、患者の生涯にわたって）患者に静脈内投与されてよい。例えば、医薬組成物は、約５ｍＬ以下の容量（例えば、４．０ｍＬ、３．０ｍＬ、２．０ｍＬ、１．０ｍＬ、０．９ｍＬ、０．８ｍＬ、０．７ｍＬ、０．６ｍＬ、０．５ｍＬ、０．４ｍＬ、０．３ｍＬ、０．２ｍＬ、もしくは０．１ｍＬ、または約５ｍＬ～約０．１ｍＬの範囲の容量）でＩＶによって投与される。
【0015】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与及び皮下投与（例えば、腹部または大腿部に）される。例えば、医薬組成物は、静脈内投与と皮下（例えば、腹部または大腿部への）投与とを組み合わせた治療レジメンで投与される。例えば、組成物は、まず、約１０ｍｇ～約１００ｍｇ（例えば、約１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、または１００ｍｇ、例えば、約１５ｍｇ、４５ｍｇ、または９０ｍｇ）の量で、単回投与で患者に静脈内投与され、その後、経時的に１回以上の投与で患者に皮下投与（例えば、腹部または大腿部に）されてよい。例えば、皮下投与量は、約１０ｍｇ～約１００ｍｇ（例えば、約１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、または１００ｍｇ、例えば、約１５ｍｇ、４５ｍｇ、または９０ｍｇ、例えば約１５ｍｇ、４５ｍｇ、または９０ｍｇ）であってよい。皮下投与量は、例えば、１週に１回もしくは２回、２週に１回、３週に１回、または４週に１回、例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、または５０週間以上にわたって、またはそれよりも長い期間にわたって（例えば、１～１０年間にわたって、または患者の生涯にわたって）投与されてよい。静脈内投与量及び皮下投与量は、例えば、約５ｍＬ以下の容量（例えば、４．０ｍＬ、３．０ｍＬ、２．０ｍＬ、１．０ｍＬ、０．９ｍＬ、０．８ｍＬ、０．７ｍＬ、０．６ｍＬ、０．５ｍＬ、０．４ｍＬ、０．３ｍＬ、０．２ｍＬ、もしくは０．１ｍＬ、または約５ｍＬ～約０．１ｍＬの範囲の容量）で投与されてよい。
【0016】
患者は、新生児、乳児、小児、青年、または成人など、ヒト対象であってよい。
【0017】
いくつかの実施形態では、組換えアルカリホスファターゼポリペプチドのＴＳＡＣは、約１．０ｍｏｌ／ｍｏｌ～約６．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約１．２ｍｏｌ／ｍｏｌ～約６．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約１．５ｍｏｌ／ｍｏｌ～約６．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約３．０ｍｏｌ／ｍｏｌ～約６．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約３．２ｍｏｌ／ｍｏｌ～約５．９ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約０．９ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．０ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．１ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．２ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．３ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．４ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．５ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．６ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．７ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．８ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．９ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．０ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．１ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．２ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．３ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．４ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．５ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．６ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．７ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．８ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．９ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．０ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．１ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．２ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．３ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．４ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．５ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．６ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．７ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．８ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．９ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．０ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．１ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．２ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．３ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．４ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．５ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．６ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．７ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．８ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．９ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．０ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．１ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．２ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．３ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．４ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．５ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．６ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．７ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．８ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．９ｍｏｌ／ｍｏｌ、または約６．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約３．２ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約５．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約５．９ｍｏｌ／ｍｏｌである。
【0018】
いくつかの実施形態では、組成物は、ｐＨ約７．３で、約１０ｍＭのリン酸塩、約１４０ｍＭのプロリン、約１４０ｍＭのショ糖、約０．０５％のポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸ソルビタン（例えば、ＰＳ８０）を含み、かつＴＳＡＣ値が約３．０ｍｏｌ／ｍｏｌ～約６．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。
【0019】
いくつかの実施形態では、本方法により、患者の血液中で約５０μｇ×時間／ｍＬ～約４０００μｇ×時間／ｍＬのＡＵＣ０－１６８ｈが生じる。例えば、本方法により、患者の血液中で約１０００μｇ×時間／ｍＬ～約３０００μｇ×時間／ｍＬのＡＵＣ０－１６８ｈが生じ得る。いくつかの実施形態では、本方法により、患者の血液中で約０．５μｇ／ｍＬ～約２５μｇ／ｍＬのＣｍａｘが生じる。例えば、本方法により、患者の血液中で約０．６μｇ／ｍＬ～約２０μｇ／ｍＬのＣｍａｘが生じ得る。
【0020】
定義
用語「約」とは、列挙する値の±１０％を意味する。本明細書で報告する全ての測定値は、明示的に別段の記載がない限り、明示的に使用されるかどうかにかかわらず、用語「約」によって修飾されるものと理解されるべきである。
用語「約」とは、列挙する値の±１０％を意味する。本明細書で報告する全ての測定値は、明示的に別段の記載がない限り、明示的に使用されるかどうかにかかわらず、用語「約」によって修飾されるものと理解されるべきである。
【0021】
用語「骨標的化部分」とは、骨標的化部分が単独で骨基質に対して少なくとも約１×１０－５Ｍ以上、例えば、約１０－６Ｍ、約１０－７Ｍ、約１０－８Ｍ、約１０－９Ｍ、またはそれを超えるインビボ結合親和性を有するように、骨基質に対して十分な親和性のある、長さが少なくとも３アミノ酸残基のアミノ酸配列を意味する。
【0022】
用語「触媒的能力のある」とは、本明細書で使用される場合、骨石灰化阻害因子である無機ピロリン酸（ＰＰｉ）を加水分解して、無機リン酸（Ｐｉ）を生成し、それによってＰＰｉの細胞外濃度が低下するようなｓＡＬＰを指す。したがって、触媒的能力のあるｓＡＬＰは、ＰＰｉの濃度を調節することによって骨格石灰化を改善する。
【0023】
用語「Ｆｃ」とは、免疫グロブリン重鎖のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む免疫グロブリンの断片結晶化領域、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４を意味する。また、Ｆｃは、Ｆａｂ領域とＦｃ領域とを連結するヒンジ領域の任意の部分を含む場合がある。Ｆｃは、ヒトを含む哺乳動物に由来するものであり得、かつ、翻訳後修飾される（例えば、グリコシル化またはシアリル化によって）場合がある。非限定的実施例では、Ｆｃは、配列番号４のヒトＩｇＧ２／４の断片結晶化領域であり得る。
【0024】
「断片」とは、好ましくは、参照核酸分子またはポリペプチドの全長の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上を含む、ポリペプチドまたは核酸分子の一部を意味する。断片は、例えば、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１，０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、２１００個、もしくはそれ以上のヌクレオチドを含み、最大で核酸分子の全長に及ぶか、または１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、４００、５００、６００、７００個、もしくはそれ以上のアミノ酸残基を含み、最大でポリペプチドの全長に及ぶ場合がある。
【0025】
用語「低ホスファターゼ症」及び「ＨＰＰ」とは、本明細書で使用される場合、例えば、組織非特異アルカリホスファターゼ（ＴＮＳＡＬＰ）をコードする、ＡＬＰＬ（アルカリホスファターゼ、肝臓／骨／腎臓）遺伝子における１つ以上の機能喪失型変異が原因の稀な遺伝性骨格障害を指す。ＨＰＰは、さらに乳児性ＨＰＰ、小児性ＨＰＰ、出生時ＨＰＰ（例えば、良性出生時ＨＰＰまたは致死性出生時ＨＰＰ）、歯牙ＨＰＰ、青年期ＨＰＰ、または成人性ＨＰＰを特徴とする場合がある。例えば、「小児性ＨＰＰ」は、年齢が約５歳～約１２歳のＨＰＰ患者を表し、「青年期ＨＰＰ」は、年齢が約１３歳～約１７歳のＨＰＰ患者を表し、かつ「成人性ＨＰＰ」は、年齢が約１８歳以上のＨＰＰ患者を表す。用語「成人性ＨＰＰ」とは、本明細書で使用される場合、無機ピロリン酸（ＰＰｉ）の血中レベル及び／または尿中レベルの上昇、低石灰化、高カルシウム尿症、１つ以上の骨格変形、筋緊張低下、筋力低下、リウマチ合併症、あひる歩行、歩行困難、骨痛、疼痛、骨折、ピロリン酸カルシウム二水和物結晶沈着、偽痛風、関節炎、ピロリン酸塩関節症、軟骨石灰化症、石灰沈着性関節周囲炎、及び偽骨折の症状のうち１つ以上の存在を特徴とする病態または表現型を指す。用語「青年期ＨＰＰ」とは、本明細書で使用される場合、ＰＰｉ、ＰＥＡ、またはＰＬＰの血中レベルまたは尿中レベルの上昇；骨軟化症、１つ以上の骨格変形、筋緊張低下、筋力低下、リウマチ合併症、関節炎、偽痛風、あひる歩行、歩行困難、骨痛、疼痛、歯の早期喪失、低石灰化、肺低形成、呼吸機能不全、発作、高カルシウム尿症、低身長、及び成長遅延の症状のうち１つ以上の存在を特徴とする病態または表現型を指す。用語「小児性ＨＰＰ」とは、本明細書で使用される場合、ＰＰｉ、ＰＥＡ、またはＰＬＰの血中レベルまたは尿中レベルの上昇；くる病、くる病肋骨、１つ以上の骨格変形、筋緊張低下、筋力低下、リウマチ合併症、関節炎、偽痛風、あひる歩行、歩行困難、骨痛、疼痛、歯の早期喪失、低石灰化、運動発達遅滞、発作、高カルシウム尿症、低身長、骨折、偽骨折、及び成長遅延の症状のうち１つ以上の存在を特徴とする病態または表現型を指す。
【0026】
用語「核酸」または「核酸分子」とは、２つ以上の共有結合した天然に存在するヌクレオチドまたは修飾されたヌクレオチドの配列を有する高分子、例えば、ＲＮＡまたはＤＮＡを意味する。核酸分子は、例えば、一本鎖または二本鎖である場合があり、かつ、修飾ヌクレオチドもしくは未修飾ヌクレオチド、またはそれらの混合物もしくは組み合わせを含み得る。核酸分子の様々な塩、混合塩、及び遊離酸の形態も含まれる。
【0027】
「治療すること」、「治療する」、及び「治療」とは、例えば、医薬組成物（例えば、本明細書に記載のｓＡＬＰ）を投与することによる、ＨＰＰ（例えば、小児性、青年期、または成人性ＨＰＰ）、またはその１つ以上の症状などの病状の治療、緩和、安定化、病状の可能性の低減、または病状の防止を目的とした患者の医学的管理、及び／またはＨＰＰなどの病状を示すか、病状を有する可能性のある患者の管理を意味する。治療すること（及び本明細書で使用される他の形態）には、積極的治療、すなわち、疾患、病理学的状態、障害または事象の改善を特に目的とするか、またはその治癒に関連する治療が含まれ、かつ、原因療法、すなわち、関連する疾患、病理学的状態、障害、または事象の原因を取り除くことを目的とする治療も含まれる。加えて、この用語には、緩和的治療、すなわち、疾患、病理学的状態、障害、または事象を治癒する代わりに、少なくとも１つの症状の軽減または改善のために設計された治療；対症療法、すなわち、関連する疾患、病理学的状態、障害、または事象の全身症状を対象とする治療；予防的治療、すなわち、例えば、まだ病気ではないが、特定の疾患、病理学的状態、障害、または事象に罹患しやすいか、またはそのリスクのある患者における、関連する疾患、病理学的状態、障害、または事象の発症を最小限に抑えるか、部分的にまたは完全に阻害することを目的とする治療；及び、支持療法、すなわち、関連する疾患、病理学的状態、障害、または事象の改善を目的とする別の特定の治療法を補足するために利用される治療も含まれる。
【0028】
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」は同じ意味で用いられ、かつ、本明細書に記載するように、翻訳後修飾（例えば、グリコシル化、シアリル化、またはリン酸化）に関係なく、天然に存在するまたは天然に存在しないポリペプチドまたはペプチドの全て、または一部を構成する、２つ以上の天然または非天然のアミノ酸残基の任意の鎖を指す。
【0029】
用語「ｓＡＬＰ」、「可溶性アルカリホスファターゼ」、及び「アルカリホスファターゼの細胞外ドメイン」は同じ意味で用いられ（文脈で別段の指示がない限り）、可溶性の非膜結合アルカリホスファターゼ、または生物学的に活性なその断片もしくはその多様体を意味する。ｓＡＬＰには、例えば、アルカリホスファターゼ活性、例えば、ＰＰｉまたは他の天然もしくは人工の基質（複数可）を加水分解する能力を保持する、Ｃ末端ＧＰＩシグナル配列を欠くアルカリホスファターゼ、ならびに追加の多様体及び類似体が含まれる。これには、特に明記しない限り、ＴＮＳＡＬＰ、ＰＡＬＰ、ＧＬＡＬＰ、及びＩＡＬＰの細胞外ドメインに対応する可溶性断片、ならびに生物学的に活性な断片またはその多様体が含まれる。成熟したｓＡＬＰは、ＧＰＩ膜アンカー及びシグナルペプチドを欠いており、プロセシング中に切断される。
【0030】
用語「ＡＬＰ」及び「アルカリホスファターゼ」とは、ＰＰｉまたは他の天然もしくは人工の基質を加水分解することができる、ＴＮＳＡＬＰ、ＰＡＬＰ、ＧＬＡＬＰ、及びＩＡＬＰなどの天然に存在するアルカリホスファターゼを指す。
【0031】
用語「薬学的に許容される担体」または「薬学的に許容される賦形剤」とは、共に投与される化合物の治療的性質を保持しながら、治療される患者に対して生理学的に許容される担体または賦形剤を意味する。１つの例示的な薬学的に許容される担体物質は、生理的食塩水である。その他の生理学的に許容される担体及びそれらの処方は、当業者に周知であり、かつ、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ Ｅｄ．，Ａｌｌｅｎ，Ｅｄ．２０１２）に記載されている。
【0032】
用語「医薬組成物」とは、薬学的に許容される賦形剤と共に調製された本明細書に記載のポリペプチドまたは核酸分子を含有する組成物を意味し、かつ患者における疾患または事象を治療または予防するための治療レジメンの一部として、政府規制機関の承認を得て製造または販売されるものが含まれる。医薬組成物は、例えば、皮下投与用（例えば、腹部または大腿部への）、静脈内投与用（例えば、微粒子塞栓非含有の無菌溶液として、及び静脈内使用に適した溶剤系中で）、経口投与用（例えば、錠剤、カプセル、カプレット、ジェルキャップ、またはシロップ）に、または本明細書に記載の任意の他の製剤形態、例えば、単位投薬形態で、調製することができる。
【0033】
用語「患者」は、ヒト哺乳動物、またはウシ、ウマ、イヌ、ヒツジ、もしくはネコなどの非ヒト哺乳動物を含むがこれらに限定されない哺乳動物を意味する。
【0034】
用語「治療有効量」とは、本明細書に記載の疾患または病態の任意の症状、特にＨＰＰを、実質的に治療、予防、遅延、抑制、または抑止するのに十分な、本明細書に記載のポリペプチドまたは核酸分子の量を意味する。本明細書に記載の組成物の治療有効量は、治療対象の障害の重症度、ならびに患者の病態、体重、及び全身状態に依存する場合があり、かつ、そのような要因を考慮して当業者によって決定され得る。本明細書に記載の組成物の治療有効量は、単回投与で、または一定の期間にわたって投与する反復投与で、患者に投与されてよい。
【0035】
用語「総シアル酸含量」または「ＴＳＡＣ」とは、本明細書で使用される場合、特定のタンパク質分子上のシアル酸（炭水化物）の量を指す。これは、タンパク質１モルあたりに組み込まれるシアル酸のモル数、すなわち「ｍｏｌ／ｍｏｌ」と表される。ＴＳＡＣ濃度は、精製プロセス中に測定される。例えば、ＴＳＡＣ定量化の１つの方法では、酸加水分解を用いてＴＳＡＣをアルカリホスファターゼから放出させて、その後、放出したＴＳＡＣを、パルス電流測定検出技術（「ＨＰＡＥ－ＰＡＤ」）を用いる高速アニオン交換クロマトグラフィーを使用する電気化学的検出を介して検出する。
【0036】
用語「シアル酸」とは、一般に、炭素数９の主鎖を有する単糖類である、ノイラミン酸のＮ置換誘導体またはＯ置換誘導体を指す。シアル酸はまた、特に化合物Ｎ－アセチルノイラミン酸を指し、かつＮｅｕ５ＡｃまたはＮＡＮＡと略記されることがある。シアル酸の存在は、吸収、血清半減期、及び糖タンパク質の血清からのクリアランス、加えて糖タンパク質の物理的、化学的、及び免疫原性特性に影響を及ぼすことがある。本開示のいくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼ、例えば、ＡＬＰ２０１に関連するシアル酸は、生理的条件での分子のインビボ曝露量及び半減期に影響を与える。いくつかの実施形態では、アルカリホスファターゼの総シアル酸含量（ＴＳＡＣ）の正確かつ予測可能な制御は、品質管理属性として機能する。
【0037】
本明細書で使用される場合、ポリペプチドまたは核酸配列が参照配列と「少なくともＸ％の配列同一性」を有すると言及される場合、配列が最適にアラインメントされている場合に、ポリペプチドまたは核酸における少なくともＸパーセントのアミノ酸残基またはヌクレオチドが、参照配列のものと同一であることを意味する。配列の最適なアラインメントは、当技術分野の範囲の種々の方法、例えば、Ｓｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアラインメントアルゴリズム（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９５－７，１９８１）及びＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ；Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０，１９９０）で決定することができる。これらの及び他のアラインメントアルゴリズム、例えば、ＧＥＮＥＭＡＴＣＨＥＲ ＰＬＵＳ（商標）（Ｓｃｈｗａｒｚ ａｎｄ Ｄａｙｈｏｆ，Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．，Ｅｄ．，ｐｐ ３５３－３５８，１９７９）に組み込まれているような「Ｂｅｓｔ Ｆｉｔ」（Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ，４８２－４８９，１９８１）、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＢＬＡＳＴ－Ｐ、ＢＬＡＳＴ－Ｎ、ＢＬＡＳＴ－Ｘ、ＷＵ－ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２、ＣＬＵＳＴＡＬ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）などの、一般に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用してアクセス可能である。加えて、当業者は、比較される配列の長さにわたる最適のアラインメントを得るために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するために適切なパラメータを決定することができる。
【0038】
単語「好ましい」及び「好ましくは」とは、特定の状況下で特定の利益をもたらす可能性がある、開示される化合物、組成物、及び方法の実施形態を指す。しかし、他の実施形態もまた、同じまたはその他の状況下で好ましい場合もある。さらに、１つ以上の好ましい実施形態の記述は、他の実施形態が有用ではないことを意味するものではなく、かつ、この用語の使用は、本開示の範囲から他の実施形態を除外することを意図するものではない。
【0039】
個々の工程を含む本明細書にて開示する任意の方法では、工程は、実行可能な任意の順序で実行することができ、また、必要に応じて２つ以上の工程の任意の組み合わせが同時に行われてもよい。
【0040】
上記概要は、開示される各実施形態、または開示される化合物、組成物、及び方法の全ての実装形態を説明することを意図したものではない。以下の説明では、例示的な実施形態をより具体的に例示する。本願全体にわたるいくつかの箇所で、例のリストを通してガイダンスを提示する場合があり、これらの例は、種々の組み合わせで使用することができる。それぞれの事例において、列挙したリストは、代表的群としてのみ機能し、排他的なリストとして解釈されるべきではない。
【0041】
全ての見出しは、読み手の利便性を目的としており、特に指定がない限り、見出しに続く文章の意味を限定するために用いられるものではない。
【図面の簡単な説明】
【0042】
【図1】ＡＬＰ２０１（配列番号５；左）及びアスホターゼアルファ（配列番号６；右）の、ＰＰｉ加水分解の速度に伴って増加するＰＰｉレベルの関係性を示す、１組の飽和曲線である。
【図2】ＡＬＰ２０１（左）及びアスホターゼアルファ（右）の、ＰＬＰ加水分解の速度に伴って増加するＰＬＰレベルの関係性を示す、１組の飽和曲線である。
【図3】投与群ごとの試験終了時のＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウス血漿中の活性アルカリホスファターゼ酵素濃度を示すグラフである。略語：ｑ１ｗ＝１週に１回；ｑ２ｄ＝２日に１回；ｑｄ＝１日１回。
【図4】３６／３７日目の試験終了時のマウス大腿骨組織のアルカリホスファターゼ活性レベルを示すグラフである。略語：ｑ２ｄ＝２日に１回；ｑｄ＝１日１回。
【図5】３６日間の有効性試験におけるＡＬＰ２０１及びアスホターゼアルファで治療されたＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスの１組の代表的生存曲線である。略語：ＭＥＤ＝最小有効用量；ＰＢＳ＝リン酸緩衝生理食塩水；ｑ１ｗ＝１週に１回；ｑ２ｄ＝２日に１回；ｑｄ＝１日１回。
【図6】ＡＬＰ２０１とアスホターゼアルファとの用量反応モデリング結果の比較を示すグラフである。略語：ＡＬＰ＝アルカリホスファターゼ；Ｄ－Ｒ＝用量反応；ＭＥＤ＝最小有効用量；ＰＯＣ＝概念実証。
【図7】ファースト・イン・ヒューマン（ＦＩＨ）コホートごとのシミュレートしたヒトＡＬＰ２０１の濃度－時間プロファイルを示すグラフである。灰色の領域は、９０％の予測期間、すなわち、５％～９５％の範囲を表しており、黒色の実線は、シミュレートした濃度－時間プロファイルの中央値であり；ＬＬＯＱは、ＰＫアッセイの水平破線であり、略語：ＬＬＯＱ＝定量化の下限（０．１５μｇ／ｍＬ）である。
【図8】Ａ及びＢは、雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスへの静脈内投与（Ａ）及び皮下投与（Ｂ）後の平均（ＳＤ）ＡＬＰ２０１活性血漿中の濃度対時間プロファイルを示すグラフである。
【図9】Ａ及びＢは、雄Ｃ５７Ｂｌ／６マウスへの静脈内投与（Ａ）及び皮下投与（Ｂ）後のＡＬＰ２０１（ＴＳＡＣ＝５．９のロット）の平均（ＳＤ）ＡＬＰ２０１活性血漿中の濃度対時間プロファイルを示すグラフである。
【図10】Ａ及びＢは、雄Ｃ５７Ｂｌ／６マウスへの静脈内投与（Ａ）及び皮下投与（Ｂ）後のＡＬＰ２０１（ＴＳＡＣ＝５．０のロット）の平均（ＳＤ）ＡＬＰ２０１活性血漿中の濃度対時間プロファイルを示すグラフである。
【図11】Ａ及びＢは、雄Ｃ５７Ｂｌ／６マウスへの静脈内投与（Ａ）及び皮下投与（Ｂ）後のＡＬＰ２０１（ＴＳＡＣ＝３．２のロット）の平均（ＳＤ）ＡＬＰ２０１活性血漿中の濃度対時間プロファイルを示すグラフである。
【図12】雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスへの静脈内投与後のＡＬＰ２０１ ＴＳＡＣ値（３．２、５．０、及び５．９）の平均（ＳＤ）ＡＬＰ２０１活性血漿中の濃度対時間プロファイルを示すグラフである。
【図13】雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスへの皮下投与後のＡＬＰ２０１ ＴＳＡＣ値の平均（ＳＤ）ＡＬＰ２０１活性血漿中の濃度対時間プロファイルを示すグラフである。
【図14】ラットにおける単回のＩＶ及びＳＣ投与後のＡＬＰ２０１とアスホターゼアルファとの平均（±ＳＤ）血漿中の濃度対時間プロファイルの比較を示すグラフである。略語：ＩＶ静脈内；ＳＣ＝皮下、ＳＤ＝標準偏差。アスホターゼアルファのソースデータ：プールされた性別、３ｍｇ／ｋｇでのＩＶ、及びＳＣ。
【図15】サルにおける単回のＩＶ及びＳＣ投与後のＡＬＰ２０１とアスホターゼアルファとの平均（±ＳＤ）血漿中の濃度対時間プロファイルの比較を示すグラフである。
【図16】ＡＬＰ２０１とアスホターゼアルファ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（登録商標））との用量反応モデリングの比較を示すグラフである。略語：ＡＬＰ＝アルカリホスファターゼ；Ｄ－Ｒ＝用量反応；ＭＥＤ＝最小有効用量；ＰＯＣ＝概念実証。
【発明を実施するための形態】
【0043】
可溶性アルカリホスファターゼポリペプチド（例えば、配列番号５の配列を有するもの、及びそれに対して最大８０％以上の配列同一性を有するその多様体であって、ここで、該ポリペプチドは、配列番号５のＥ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑから選択される変異のうち１つ、２つ、または３つを含む）、その断片、及びその融合タンパク質、それをコードする核酸分子、ならびに、骨石灰化障害、例えば、低ホスファターゼ症（ＨＰＰ）などの疾患、またはそれらの１つ以上の症状を治療するために、該ポリペプチド及び核酸分子を使用する方法を特徴とする。ポリペプチドは、天然に存在するアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）に由来する可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ）またはその断片を含む。アルカリホスファターゼは、異なる組織で異なって発現する種々のアイソザイムを含む。４つの主要なＡＬＰアイソザイムとしては、組織非特異アルカリホスファターゼ（ＴＮＳＡＬＰ）、胎盤アルカリホスファターゼ（ＰＡＬＰ）、生殖細胞系アルカリホスファターゼ（ＧＬＡＬＰ）、及び腸アルカリホスファターゼ（ＩＡＬＰ）が挙げられる。したがって、これらのＡＬＰアイソザイムに由来するタンパク質も特徴とされる。
【0044】
本明細書に記載のポリペプチドは、例えば、リン酸塩、プロリン、及びショ糖のうち１つ以上を含有する医薬組成物中に調製される。これらの成分は、製剤中の安定性の向上、凝集の減少、切断型タンパク質産物の減少、及び所望のタンパク質産物の純度の上昇などの、有益な特徴をポリペプチドに付与する。
【0045】
ＨＰＰは、最も重篤な形態の疾患の場合、発症率が１００，０００出生児あたり１例の稀な遺伝性骨格疾患である。この障害は、通常、ＴＮＳＡＬＰをコードする遺伝子の機能喪失型変異によって引き起こされる。ＨＰＰは、早期の歯牙喪失から子宮内での骨石灰化のほぼ完全な欠如に至るまで、非常に幅広い症状及び重症度を呈する。ＨＰＰの症状は、患者によって著しく異なり、患者の年齢によっても著しく異なる。多くのＨＰＰ患者が、骨格の変化、低身長、慢性疼痛、下肢の痛み、歩行障害、及び早期の非外傷性歯牙喪失を示す。内因性ＴＮＳＡＬＰの機能喪失型変異が原因で、ＨＰＰ患者には、天然のＡＬＰ活性を回復し、正常な骨基質石灰化をもたらすために、本明細書に記載のポリペプチドの機能的ＡＬＰ活性が必要である。
【0046】
可溶性アルカリホスファターゼポリペプチド
本明細書に記載のポリペプチドは、変異型の組織非特異アルカリホスファターゼ（ＴＮＳＡＬＰ）またはその断片などの可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ）を含む。ｓＡＬＰは、Ｆｃ領域及び配列ｎ（「Ｄｎ」、ｎは、例えば、３～２０に等しい）のポリアスパラギン酸に融合され得る（ｓＡＬＰ－Ｆｃ－Ｄｎ）。ポリペプチドは、ヒトＴＮＳＡＬＰの可溶性断片（例えば、配列番号１の残基１～４９１または１～４８５）などのヒトＴＮＳＡＬＰを含み得る。ポリペプチドは、配列番号１に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及び／またはＮ２８６Ｑのうち１つ、２つ、または３つを含み得る。例えば、ｓＡＬＰは、配列番号２または３と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％）の同一性を有してよい。Ｆｃ領域は、ＩｇＧ２／４Ｆｃ領域であってよい。例えば、Ｆｃ領域は、配列番号４に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％）の同一性を有してよい。ポリアスパラギン酸は、例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のアスパラギン酸残基を含み得る。いくつかの実施形態では、ポリアスパラギン酸は、１０個のアスパラギン酸残基（Ｄ１０）を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号５に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％）の同一性を有する。例えば、ポリペプチドは、配列番号５のポリペプチドを含むか、またはそれで構成され得る。ポリペプチドは、配列番号５で構成され得る。
本明細書に記載のポリペプチドは、変異型の組織非特異アルカリホスファターゼ（ＴＮＳＡＬＰ）またはその断片などの可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ）を含む。ｓＡＬＰは、Ｆｃ領域及び配列ｎ（「Ｄｎ」、ｎは、例えば、３～２０に等しい）のポリアスパラギン酸に融合され得る（ｓＡＬＰ－Ｆｃ－Ｄｎ）。ポリペプチドは、ヒトＴＮＳＡＬＰの可溶性断片（例えば、配列番号１の残基１～４９１または１～４８５）などのヒトＴＮＳＡＬＰを含み得る。ポリペプチドは、配列番号１に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及び／またはＮ２８６Ｑのうち１つ、２つ、または３つを含み得る。例えば、ｓＡＬＰは、配列番号２または３と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％）の同一性を有してよい。Ｆｃ領域は、ＩｇＧ２／４Ｆｃ領域であってよい。例えば、Ｆｃ領域は、配列番号４に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％）の同一性を有してよい。ポリアスパラギン酸は、例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のアスパラギン酸残基を含み得る。いくつかの実施形態では、ポリアスパラギン酸は、１０個のアスパラギン酸残基（Ｄ１０）を含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号５に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％）の同一性を有する。例えば、ポリペプチドは、配列番号５のポリペプチドを含むか、またはそれで構成され得る。ポリペプチドは、配列番号５で構成され得る。
【0047】
いくつかの実施形態では、ポリペプチドのアルカリホスファターゼ部分は、配列番号３に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％）の配列同一性を有する。このポリペプチドは、さらにＦｃ領域（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４Ｆｃ領域）及び／またはポリアスパラギン酸領域に連結され得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ＩｇＧ２／４Ｆｃ領域を含み、例えば、配列番号４に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％）の同一性を有する。ポリアスパラギン酸は、例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のアスパラギン酸残基を含み得る。いくつかの実施形態では、ポリアスパラギン酸は、１０個のアスパラギン酸残基（Ｄ１０）を含む。
【0048】
配列番号１－シグナルペプチドを欠くヒトＴＮＳＡＬＰ（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ０５１８６．４）
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配列番号２－ヒトＴＮＳＡＬＰ（１－４８５；Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、Ｎ２８６Ｑ）
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配列番号３－ヒトＴＮＳＡＬＰ（１－４９１；Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、Ｎ２８６Ｑ）
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配列番号４－ＩｇＧ２／４Ｆｃ
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配列番号５－ＡＬＰ２０１
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配列番号６－アスホターゼアルファ
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配列番号２－ヒトＴＮＳＡＬＰ（１－４８５；Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、Ｎ２８６Ｑ）
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配列番号３－ヒトＴＮＳＡＬＰ（１－４９１；Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、Ｎ２８６Ｑ）
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配列番号４－ＩｇＧ２／４Ｆｃ
ＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号５－ＡＬＰ２０１
ＬＶＰＥＫＥＫＤＰＫＹＷＲＤＱＡＱＥＴＬＫＹＡＬＥＬＱＫＬＮＴＮＶＡＫＮＶＩＭＦＬＧＤＧＭＧＶＳＴＶＴＡＡＲＩＬＫＧＱＬＨＨＮＰＧＥＥＴＲＬＥＭＤＫＦＰＦＶＡＬＳＫＴＹＮＴＮＡＱＶＰＤＳＡＧＴＡＴＡＹＬＣＧＶＫＡＮＭＧＴＶＧＶＳＡＡＴＥＲＳＲＣＮＴＴＱＧＮＥＶＴＳＩＬＲＷＡＫＤＡＧＫＳＶＧＩＶＴＴＴＲＶＮＨＡＴＰＳＡＡＹＡＨＳＡＤＲＤＷＹＳＤＮＥＭＰＰＥＡＬＳＱＧＣＫＤＩＡＹＱＬＭＨＮＩＲＤＩＤＶＩＭＧＧＧＲＫＹＭＹＰＫＱＫＴＤＶＥＹＥＳＤＥＫＡＲＧＴＲＬＤＧＬＤＬＶＤＴＷＫＳＦＫＰＲＹＫＨＳＨＦＩＷＮＲＴＥＬＬＴＬＤＰＨＮＶＤＹＬＬＧＬＦＥＰＧＤＭＱＹＥＬＮＲＮＱＶＴＤＰＳＬＳＥＭＶＶＶＡＩＱＩＬＲＫＮＰＫＧＦＦＬＬＶＥＧＧＲＩＤＨＧＨＨＥＧＫＡＫＱＡＬＨＥＡＶＥＭＤＲＡＩＧＱＡＧＳＬＴＳＳＥＤＴＬＴＶＶＴＡＤＨＳＨＶＦＴＦＧＧＹＴＰＲＧＮＳＩＦＧＬＡＰＭＬＳＤＴＤＫＫＰＦＴＡＩＬＹＧＮＧＰＧＹＫＶＶＧＧＥＲＥＮＶＳＭＶＤＹＡＨＮＮＹＱＡＱＳＡＶＰＬＲＨＥＴＨＧＧＥＤＶＡＶＦＳＫＧＰＭＡＨＬＬＨＧＶＨＥＱＮＹＶＰＨＶＭＡＹＡＡＣＩＧＡＮＬＧＨＣＡＰＡＳＳＡＧＳＬＡＡＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫＤＤＤＤＤＤＤＤＤＤ
配列番号６－アスホターゼアルファ
ＬＶＰＥＫＥＫＤＰＫＹＷＲＤＱＡＱＥＴＬＫＹＡＬＥＬＱＫＬＮＴＮＶＡＫＮＶＩＭＦＬＧＤＧＭＧＶＳＴＶＴＡＡＲＩＬＫＧＱＬＨＨＮＰＧＥＥＴＲＬＥＭＤＫＦＰＦＶＡＬＳＫＴＹＮＴＮＡＱＶＰＤＳＡＧＴＡＴＡＹＬＣＧＶＫＡＮＥＧＴＶＧＶＳＡＡＴＥＲＳＲＣＮＴＴＱＧＮＥＶＴＳＩＬＲＷＡＫＤＡＧＫＳＶＧＩＶＴＴＴＲＶＮＨＡＴＰＳＡＡＹＡＨＳＡＤＲＤＷＹＳＤＮＥＭＰＰＥＡＬＳＱＧＣＫＤＩＡＹＱＬＭＨＮＩＲＤＩＤＶＩＭＧＧＧＲＫＹＭＹＰＫＮＫＴＤＶＥＹＥＳＤＥＫＡＲＧＴＲＬＤＧＬＤＬＶＤＴＷＫＳＦＫＰＲＹＫＨＳＨＦＩＷＮＲＴＥＬＬＴＬＤＰＨＮＶＤＹＬＬＧＬＦＥＰＧＤＭＱＹＥＬＮＲＮＮＶＴＤＰＳＬＳＥＭＶＶＶＡＩＱＩＬＲＫＮＰＫＧＦＦＬＬＶＥＧＧＲＩＤＨＧＨＨＥＧＫＡＫＱＡＬＨＥＡＶＥＭＤＲＡＩＧＱＡＧＳＬＴＳＳＥＤＴＬＴＶＶＴＡＤＨＳＨＶＦＴＦＧＧＹＴＰＲＧＮＳＩＦＧＬＡＰＭＬＳＤＴＤＫＫＰＦＴＡＩＬＹＧＮＧＰＧＹＫＶＶＧＧＥＲＥＮＶＳＭＶＤＹＡＨＮＮＹＱＡＱＳＡＶＰＬＲＨＥＴＨＧＧＥＤＶＡＶＦＳＫＧＰＭＡＨＬＬＨＧＶＨＥＱＮＹＶＰＨＶＭＡＹＡＡＣＩＧＡＮＬＧＨＣ
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【0049】
総シアル酸含量
本明細書に記載するように、ＴＳＡＣは、生理的条件において、組換えアルカリホスファターゼの半減期に影響を与える可能性がある。したがって、ＴＳＡＣレベルは、組換えにより製造されたアルカリホスファターゼ、例えば、ＡＬＰ２０１などに関する品質属性として機能する場合がある。ポリペプチドの製造中のＴＳＡＣ範囲の制御により、バッチ間の再現性を向上させることでき、かつ作製したポリペプチドにおける不均質性を低減することができる。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約０．８ｍｏｌ／ｍｏｌ～約８．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約０．９ｍｏｌ／ｍｏｌ～約７．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約１．０ｍｏｌ／ｍｏｌ～約６．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約１．２ｍｏｌ／ｍｏｌ～約６．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約１．５ｍｏｌ／ｍｏｌ～約６．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約２．０ｍｏｌ／ｍｏｌ～約６．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約３．２ｍｏｌ／ｍｏｌ～約５．９ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約０．９ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．０ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．１ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．２ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．３ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．４ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．５ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．６ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．７ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．８ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．９ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．０ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．１ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．２ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．３ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．４ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．５ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．６ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．７ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．８ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．９ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．０ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．１ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．２ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．３ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．４ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．５ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．６ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．７ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．８ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．９ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．０ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．１ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．２ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．３ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．４ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．５ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．６ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．７ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．８ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．９ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．０ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．１ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．２ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．３ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．４ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．５ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．６ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．７ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．８ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．９ｍｏｌ／ｍｏｌ、または約６．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約３．２ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約５．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約５．９ｍｏｌ／ｍｏｌである。
本明細書に記載するように、ＴＳＡＣは、生理的条件において、組換えアルカリホスファターゼの半減期に影響を与える可能性がある。したがって、ＴＳＡＣレベルは、組換えにより製造されたアルカリホスファターゼ、例えば、ＡＬＰ２０１などに関する品質属性として機能する場合がある。ポリペプチドの製造中のＴＳＡＣ範囲の制御により、バッチ間の再現性を向上させることでき、かつ作製したポリペプチドにおける不均質性を低減することができる。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約０．８ｍｏｌ／ｍｏｌ～約８．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約０．９ｍｏｌ／ｍｏｌ～約７．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約１．０ｍｏｌ／ｍｏｌ～約６．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約１．２ｍｏｌ／ｍｏｌ～約６．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約１．５ｍｏｌ／ｍｏｌ～約６．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約２．０ｍｏｌ／ｍｏｌ～約６．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約３．２ｍｏｌ／ｍｏｌ～約５．９ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約０．９ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．０ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．１ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．２ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．３ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．４ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．５ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．６ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．７ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．８ｍｏｌ／ｍｏｌ、約１．９ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．０ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．１ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．２ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．３ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．４ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．５ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．６ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．７ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．８ｍｏｌ／ｍｏｌ、約２．９ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．０ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．１ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．２ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．３ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．４ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．５ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．６ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．７ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．８ｍｏｌ／ｍｏｌ、約３．９ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．０ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．１ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．２ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．３ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．４ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．５ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．６ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．７ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．８ｍｏｌ／ｍｏｌ、約４．９ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．０ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．１ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．２ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．３ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．４ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．５ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．６ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．７ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．８ｍｏｌ／ｍｏｌ、約５．９ｍｏｌ／ｍｏｌ、または約６．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約３．２ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約５．０ｍｏｌ／ｍｏｌである。いくつかの実施形態では、ＴＳＡＣは、組換えアルカリホスファターゼに対して約５．９ｍｏｌ／ｍｏｌである。
【0050】
医薬組成物
本明細書に記載のポリペプチド（例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））は、当技術分野において知られている種々の方法によって医薬組成物として調製され得る。
本明細書に記載のポリペプチド（例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））は、当技術分野において知られている種々の方法によって医薬組成物として調製され得る。
【0051】
組成物は、リン酸塩、プロリン、及びショ糖のうち１つ以上またはその全てを含み得る。組成物は、例えば、リン酸塩及びショ糖を含み得る。例えば、組成物は、リン酸塩（例えば、リン酸ナトリウム）を、例えば、約１ｍＭ～約１００ｍＭ、または約５ｍＭ～約２０ｍＭリン酸塩、例えば、約２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、または１００ｍＭ、例えば、約１０ｍＭの濃度で含み得る。組成物は、さらにプロリン及び／またはショ糖を含み得る。組成物は、さらにプロリンを含み得る。組成物は、さらにショ糖を含み得る。例えば、組成物は、約１ｍＭ～約５００ｍＭのプロリン、例えば、約７０ｍＭ～約２８０ｍＭ、例えば、約５０ｍＭ～約２００ｍＭ、例えば、約２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１２０ｍＭ、１３０ｍＭ、１４０ｍＭ、１５０ｍＭ、１６０ｍＭ、１７０ｍＭ、１８０ｍＭ、１９０ｍＭ、２００ｍＭ、３００ｍＭ、４００ｍＭ、または５００ｍＭ、例えば、約１４０ｍＭのプロリン、及び／または約１ｍＭ～約５００ｍＭのショ糖、例えば、約７０ｍＭ～約２８０ｍＭ、例えば、約５０ｍＭ～約２００ｍＭ、例えば、約２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１２０ｍＭ、１３０ｍＭ、１４０ｍＭ、１５０ｍＭ、１６０ｍＭ、１７０ｍＭ、１８０ｍＭ、１９０ｍＭ、２００ｍＭ、２１０、ｍＭ、２２０ｍＭ、２３０ｍＭ、２４０ｍＭ、２５０ｍＭ、２６０ｍＭ、２７０ｍＭ、２８０ｍＭ、２９０ｍＭ、３００ｍＭ、３５０ｍＭ、４００ｍＭ、４５０ｍＭ、または５００ｍＭ、例えば、約１４０ｍＭのショ糖、または約２１０ｍＭのショ糖を含み得る。いくつかの実施形態では、組成物は、約１：０～約１：３、例えば、約１：１のプロリン：ショ糖のモル比を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約１４０ｍＭのプロリンを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約１４０ｍＭのショ糖を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２１０ｍＭのショ糖を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約２１０ｍＭのショ糖を含むが、プロリンは含まない。いくつかの実施形態では、組成物は、約２１０ｍＭのショ糖、及び約１０ｍＭのリン酸塩（例えば、リン酸ナトリウム）を含む。製剤は、さらに約０．０１％～約０．５％、例えば、約０．０１％～約０．１％、例えば、約０．０５％のポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸ソルビタン（例えば、ポリソルベート８０（ＰＳ８０））などを含み得る。いくつかの実施形態では、組成物は、ｐＨ約７．０～ｐＨ約７．６（例えば、ｐＨ約７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、または７．６、例えば、約７．３）のｐＨで調製される。いくつかの実施形態では、組成物は、ｐＨ約７．３で、約１０ｍＭのリン酸塩、約１４０ｍＭのプロリン、約１４０ｍＭのショ糖、及び約０．０５％のポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸ソルビタン（例えば、ＰＳ８０）を含む。
【0052】
組成物は、例えば、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ、例えば、約１００ｍｇ／ｍＬの量で、ポリペプチドを含有する溶液として調製され得る。組成物は、静脈内投与または皮下投与用に、例えば、約０．１ｍｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬのポリペプチドの投与量で調製され得る。組成物は、約０．１ｍＬ～約５０ｍＬ（例えば、約０．１～約１０ｍＬ、例えば、約０．１ｍＬ、０．２ｍＬ、０．３ｍＬ、０．４ｍＬ、０．５ｍＬ、０．６ｍＬ、０．７ｍＬ、０．８ｍＬ、０．９ｍＬ、または１．０ｍＬ、例えば、約１ｍＬ～約１０ｍＬ、例えば、約２ｍＬ、３ｍＬ、４ｍＬ、５ｍＬ、６ｍＬ、７ｍＬ、８ｍＬ、９ｍＬ、または１０ｍＬ）の容量の溶液で調製され得る。いくつかの実施形態では、組成物は、約１ｍＬで調製される。
【0053】
本開示はまた、本明細書に記載のような医薬組成物を含有するバイアルも特徴とする。バイアルは、例えば、約０．１ｍＬ～約１０ｍＬ（例えば、約１ｍＬ）の容量で溶液を含有し得る。バイアルは、ポリペプチドを、例えば、ポリペプチド（例えば、配列番号５のポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する多様体）の約０．１ｍｇ／ｍＬ～約５００ｍｇ／ｍＬ、例えば、約１ｍｇ／ｍＬ～約２００ｍｇ／ｍＬ、例えば、約５０ｍｇ／ｍＬ～約１５０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約１００ｍｇ／ｍＬの量で含有し得る。
【0054】
例えば、バイアルは、配列番号５のポリペプチドを約５０～約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で含有する、約０．２５ｍＬ、約０．５ｍＬ、約０．７５ｍＬ、または約１．０ｍＬの容量の溶液を含有していてもよく、ここで、該溶液は、約７．３のｐＨで、約１０ｍＭのリン酸塩、約１４０ｍＭのプロリン、約１４０ｍＭのショ糖、及び約０．０５％のポリオキシエチレン（２０）モノオレイン酸ソルビタン（例えば、ＰＳ８０）を含有する。
【0055】
製剤
ｓＡＬＰ及びｓＡＬＰ融合ポリペプチド（例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））を含む組成物は、標準的な方法に従って調製され得る。例えば、ｓＡＬＰ組成物は、例えば、好適な濃度で、２～８℃（例えば、４℃）での保管に好適な緩衝溶液として調製され得る。ｓＡＬＰ組成物はまた、０℃を下回る（例えば、－２０℃または－８０℃）の温度での保管向けに調製され得る。ｓＡＬＰ組成物は、さらに最大２年間（例えば、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９が月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年、１年半、または２年）にわたる、２～８℃（例えば、４℃）での保管向けに調製され得る。したがって、本明細書に記載の組成物は、少なくとも１年間にわたる、２～８℃（例えば、４℃）での保管において安定であるように調製され得る。組成物は、好適な容量、例えば、約０．１ｍＬ～約１０ｍＬの容量で調製され得る。
ｓＡＬＰ及びｓＡＬＰ融合ポリペプチド（例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））を含む組成物は、標準的な方法に従って調製され得る。例えば、ｓＡＬＰ組成物は、例えば、好適な濃度で、２～８℃（例えば、４℃）での保管に好適な緩衝溶液として調製され得る。ｓＡＬＰ組成物はまた、０℃を下回る（例えば、－２０℃または－８０℃）の温度での保管向けに調製され得る。ｓＡＬＰ組成物は、さらに最大２年間（例えば、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９が月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年、１年半、または２年）にわたる、２～８℃（例えば、４℃）での保管向けに調製され得る。したがって、本明細書に記載の組成物は、少なくとも１年間にわたる、２～８℃（例えば、４℃）での保管において安定であるように調製され得る。組成物は、好適な容量、例えば、約０．１ｍＬ～約１０ｍＬの容量で調製され得る。
【0056】
ｓＡＬＰ及びｓＡＬＰ融合ポリペプチド（例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））を含む組成物は、液体形態とすることができる。
【0057】
例えば、全身送達または局所送達を目的とした組成物は、注射用溶液または不融性溶液の形態とすることができる。したがって、ｓＡＬＰ組成物（例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド）を含有する組成物）は、非経口様式（例えば、皮下、静脈内、腹腔内、または筋肉内注射）による投与向けに調製され得る。「非経口投与」、「非経口的に投与する」、及び他の文法的に等しい語句は、本明細書で使用される場合、経腸及び局所投与以外の投与様式を指し、通常、注射によるものであり、限定されないが、皮下、皮内、静脈内、鼻腔内、眼内、肺、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、肺内、腹腔内、経気管、表皮下、関節腔内、被膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外、脳内、頭蓋内、頸動脈内、及び胸骨内注射及び点滴を含む。特定の投与経路は、静脈内投与及び皮下投与を含む。
【0058】
組成物は、凍結乾燥された組成物として調製することができる。組成物は、投与前に溶液（例えば、本明細書に記載されるような）を用いて再水和することができる。
【0059】
投与量
本明細書に記載のｓＡＬＰポリペプチド（例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））は、ＨＰＰなどの骨石灰化障害を患うか、またはその傾向のある患者に、例えば、０．０１ｍｇ／ｋｇ～５００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０５ｍｇ／ｋｇ～５００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～６０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ～５００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ～２５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、もしくは２．０ｍｇ／ｋｇ～３．０ｍｇ／ｋｇ）、または１μｇ／ｋｇ～１，０００μｇ／ｋｇ（例えば、５μｇ／ｋｇ～１、０００μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～７５０μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ～７５０μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～７５０μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～５００μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ～５００μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～５００μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～１００μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ～１００μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～１００μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～５０μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ～５０μｇ／ｋｇ、もしくは１０μｇ／ｋｇ～５０μｇ／ｋｇ）の範囲の個別の用量で、投与することができる。
本明細書に記載のｓＡＬＰポリペプチド（例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））は、ＨＰＰなどの骨石灰化障害を患うか、またはその傾向のある患者に、例えば、０．０１ｍｇ／ｋｇ～５００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０５ｍｇ／ｋｇ～５００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～６０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ～５００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ～２５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、もしくは２．０ｍｇ／ｋｇ～３．０ｍｇ／ｋｇ）、または１μｇ／ｋｇ～１，０００μｇ／ｋｇ（例えば、５μｇ／ｋｇ～１、０００μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～７５０μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ～７５０μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～７５０μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～５００μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ～５００μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～５００μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～１００μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ～１００μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ～１００μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ～５０μｇ／ｋｇ、５μｇ／ｋｇ～５０μｇ／ｋｇ、もしくは１０μｇ／ｋｇ～５０μｇ／ｋｇ）の範囲の個別の用量で、投与することができる。
【0060】
ｓＡＬＰの例示的用量としては、例えば、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、２、２．５、５、１０、２０、２５、５０、１００、１２５、１５０、２００、２５０、もしくは５００ｍｇ／ｋｇ；または１、２、２．５、５、１０、２０、２５、５０、１００、１２５、１５０、２００、２５０、５００、７５０、９００、もしくは１，０００μｇ／ｋｇが挙げられる。本明細書に列挙する全ての用量または範囲に対して、列挙した値または範囲の端点の±１０％でこれらの用量を修飾するために用語「約」が使用される場合がある。特に、本開示による組成物（例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日～約５００ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～約１００ｍｇ／ｋｇ／日、または約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日～約２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量で、患者に投与することができる。例えば、ｓＡＬＰ組成物（例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））は、例えば、約０．５ｍｇ／ｋｇ／週～約１４０ｍｇ／ｋｇ／週、例えば、約０．８ｍｇ／ｋｇ／週～約５０ｍｇ／ｋｇ／週、または約１ｍｇ／ｋｇ／週～約１０ｍｇ／ｋｇ／週（例えば、約６～約９ｍｇ／ｋｇ／週）の範囲の１週あたりの投与量で、患者に投与することができる。特に、ｓＡＬＰは、１週に１回以上（例えば、１週あたり１、２、３、４、５、６、７回、もしくはそれ以上）、隔週に１回以上、または１ヶ月に１回以上（例えば、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、もしくは３０日ごとに１回）投与することができる。いくつかの実施形態では、製剤は、１週に１回投与される。いくつかの実施形態では、製剤は、２週に１回投与される。
【0061】
特に、ｓＡＬＰ（例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））は、１週に３回２ｍｇ／ｋｇ（総用量６ｍｇ／ｋｇ／週）、１週に６回１ｍｇ／ｋｇ（総用量６ｍｇ／ｋｇ／週）、１週に３回３ｍｇ／ｋｇ（総用量９ｍｇ／ｋｇ／週）、１週に３回０．５ｍｇ／ｋｇ（総用量１．５ｍｇ／ｋｇ／週）、または１週に３回９．３ｍｇ／ｋｇ（総用量２８ｍｇ／ｋｇ／週）の投与量で投与することができる。投与量は、ＨＰＰなどの骨石灰化障害を患うか、またはその傾向のある患者の、疾患の程度及び異なるパラメータなどの従来の要因に基づいて臨床医によって調整されてよい。あるいは、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約９ｍｇ／ｋｇ）が、１週に１回、または２週に１回投与されてよい。ｓＡＬＰ組成物はまた、１週または２週に１～１０回（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０回）、１回あたり１～９０ｍｇの投与量（例えば、０．１ｍＬ～１００ｍＬの容量）で投与することができる。いくつかの実施形態では、ｓＡＬＰ組成物は、１週に１回投与される。いくつかの実施形態では、ｓＡＬＰ組成物は、２週に１回投与される。
【0062】
ｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド（例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））を含有する組成物は、単回投与レジメンで、または反復投与レジメンで患者に投与することができる。各用量は、例えば、１時間に１回、隔時間に１回、１日１回、隔日に１回、１週に２回、１週に３回、１週に４回、１週に５回、１週に６回、１週に１回、隔週に１回、１月に１回、隔月に１回、または１年に１回投与することができる。あるいは、各用量は、例えば、１日、１週、または１ヶ月に２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、または１２回投与することができる。特に、投与レジメンは、１週に１回、２回、または３回である。投与レジメンの期間は、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０日（複数可）、週（複数可）、または月（複数可）、あるいはＨＰＰなどの骨石灰化障害を患うか、またはその傾向のある患者の寿命が続く間とすることができる。量、頻度、及び投与の期間は、ＨＰＰなどの骨石灰化障害を患うか、またはその傾向のある患者の、疾患の程度及び異なるパラメータなどの従来の要因に基づいて臨床医によって調整することができる。
【0063】
例えば、ｓＡＬＰまたはｓＡＬＰ融合ポリペプチド（例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））の投与量は、体重あたり約０．１ｍｇ／ｋｇ～体重あたり約１０ｍｇ／ｋｇで、１週に１回以上（例えば、２、３、４、５、６、または７回）皮下または静脈内投与されてよい。
【0064】
いくつかの特定の実施形態では、ポリペプチド（例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））またはそれを含有する医薬組成物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約６０ｍｇ／ｋｇの投与量（例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ）で投与されてよい。ポリペプチドは、１日、１週、１ヶ月、または１年に１回（例えば、１週に１回）投与されてよい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３１日ごとに１回以上投与される。ポリペプチドは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／週～約５０ｍｇ／ｋｇ／週（例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／週～約４０ｍｇ／ｋｇ／週、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ／週～約２０ｍｇ／ｋｇ／週、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ／週～約１０ｍｇ／ｋｇ／週）の投与量で投与されてよい。ポリペプチドは、少なくとも１日間、１週間、１ヶ月間、１年間、またはそれ以上にわたって（例えば、１～５年間にわたって、または患者の生涯にわたって）投与されてよい。
【0065】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、皮下投与される。例えば、約１０ｍｇ～約１００ｍｇ（例えば、約１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、または１００ｍｇ、例えば、約１５ｍｇ、４５ｍｇ、または９０ｍｇ）が、例えば、１週に１回または２回、例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０週間、またはそれ以上にわたって患者に皮下投与されてよい。
【0066】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与される。例えば、約１０ｍｇ～約１００ｍｇ（例えば、約１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、または１００ｍｇ、例えば、約１５ｍｇ、４５ｍｇ、または９０ｍｇ）が、例えば、１週に１回または２回、例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０週間、またはそれ以上にわたって患者に静脈内投与されてよい。
【0067】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内及び皮下投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、同時に、静脈内及び皮下投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内投与され、その後皮下投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、皮下投与され、その後静脈内投与される。例えば、医薬組成物は、例えば、負荷用量として、１回以上の用量で（例えば、単回投与で）で患者に静脈内投与され、その後に、例えば、維持用量（例えば、治療期間にわたって約１週に１回投与される各用量）で、１回以上患者に皮下投与されてよい。
【0068】
治療方法
ＨＰＰなどの骨石灰化障害患者の少なくとも１つの症状を治療または緩和するための方法を本明細書で提供する。骨折、骨粗鬆症、硬結性骨化症、軟骨石灰化症、筋緊張低下、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、気管気管支軟化症、発作、神経線維腫症１（ＮＦ－１）、及び頭蓋骨早期癒合症などのその他の疾患または障害も、本明細書に記載の組成物及び方法によって治療することができる。患者は、筋力低下を患っている場合がある。患者は、ピロリン酸カルシウム沈着（ＣＰＰＤ）または家族性低リン酸血症などの筋力低下疾患を患っている場合がある。このような治療は、アルカリホスファターゼ（例えば、アルカリホスファターゼを含有する医薬組成物）またはアルカリホスファターゼ活性のあるポリペプチドを、そのような患者における上昇したＰＰｉ濃度を低下させるために投与することを含み得る。例えば、可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ、例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））は、新生児、乳児、小児、青年または成人に投与されてよい。
ＨＰＰなどの骨石灰化障害患者の少なくとも１つの症状を治療または緩和するための方法を本明細書で提供する。骨折、骨粗鬆症、硬結性骨化症、軟骨石灰化症、筋緊張低下、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、気管気管支軟化症、発作、神経線維腫症１（ＮＦ－１）、及び頭蓋骨早期癒合症などのその他の疾患または障害も、本明細書に記載の組成物及び方法によって治療することができる。患者は、筋力低下を患っている場合がある。患者は、ピロリン酸カルシウム沈着（ＣＰＰＤ）または家族性低リン酸血症などの筋力低下疾患を患っている場合がある。このような治療は、アルカリホスファターゼ（例えば、アルカリホスファターゼを含有する医薬組成物）またはアルカリホスファターゼ活性のあるポリペプチドを、そのような患者における上昇したＰＰｉ濃度を低下させるために投与することを含み得る。例えば、可溶性アルカリホスファターゼ（ｓＡＬＰ、例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））は、新生児、乳児、小児、青年または成人に投与されてよい。
【0069】
患者は、アルカリホスファターゼまたはアルカリホスファターゼ活性のあるポリペプチド（例えば、ｓＡＬＰ、例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））の投与の前に、骨石灰化障害（例えば、ＨＰＰ）であると診断されている場合がある。加えて、ＨＰＰなどの骨石灰化障害を患うか、またはその傾向のある患者は、それ以前にｓＡＬＰ（例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））による治療を受けたことのない未治療の患者であり得る。
【0070】
疾患の１つ以上の症状が、患者の新生児、乳児、または小児期に初めて現れる場合がある。その他の実施形態では、疾患の１つ以上の症状が、患者の成人期に初めて現れる場合がある。いくつかの実施形態では、成人になる前に、疾患の検出可能な症状が患者に現れない。いくつかの実施形態では、成人になる前に、疾患の検出可能な症状が患者に現れるが、疾患状態が成人になるまで未診断のままである。
【0071】
方法は、アルカリホスファターゼまたはアルカリホスファターゼ活性のあるポリペプチド（例えば、ｓＡＬＰ、例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））を、ＨＰＰなどの骨石灰化障害を患うか、またはその傾向のある患者に、単回投与で、または一定の期間にわたる反復投与で投与することを含む。特に、配列番号５の配列を有するポリペプチドなどのｓＡＬＰは、無機ピロリン酸（ＰＰｉ）濃度が上昇しているか、またはＨＰＰ症状（例えば、筋力低下）に対する少なくとも１つの所定のバイオマーカー／スコア、例えば、１０未満の平均ＢＯＴ－２筋力スコア、５未満の平均ＢＯＴ－２走行速度スコア及び敏捷性スコア、約０．８超の平均ＣＨＡＱ指数スコア、及び／または約４０未満の平均ＰＯＤＣＩスコア、予測される６ＭＷＴ値の約８０％未満の平均６ＭＷＴ、５未満の筋力グレード、及び／または、例えば、予測されるＨＨＤ値の約８０％未満の平均ＨＨＤ値（例えば、平均ＨＨＤ筋力値または握力値）を有するとこれまでに判定された患者に投与することができる。例えば、ｓＡＬＰは、サンプル（例えば、血漿サンプル）中のＰＰｉの濃度が、乳児または小児（例えば、年齢が約１２歳以下の患者）の場合、約５．７１μＭ超である；青年（例えば、年齢が約１３歳～約１８歳の患者）の場合、約４．７８μＭ超である；または成人（例えば、年齢が約１８歳を超える患者）の場合、約５．８２μＭ超であると、これまでに判定された患者に投与することができる。その他の実施形態では、本明細書に記載のＨＰＰなどの骨石灰化障害は、少なくとも１つのアルカリホスファターゼ基質（例えば、ＰＰｉ、ＰＬＰ、ＰＥＡなど）の濃度の上昇が原因である。あるいは、アルカリホスファターゼまたはアルカリホスファターゼ活性のあるポリペプチド（例えば、ｓＡＬＰ、例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））は、ＨＰＰなどの骨石灰化障害を患うか、またはその傾向のある患者に、筋力低下スコア（例えば、ＢＯＴ－２筋力スコア、ＢＯＴ－２走行速度スコア及び敏捷性スコア、ＣＨＡＱ指数スコア、ＢＳＩＤ－ＩＩＩスケールスコア、ＰＤＭＳ－２標準スコア、筋力スコア、６ＭＷＴ値、及び／またはＨＨＤ値を用いる）の判定に先立って、投与することができる。本明細書に記載の方法に従ったＡＬＰによる治療は、例えば、ＡＤＬの活性の増加、疼痛の軽減、及び／または運動発達の向上を促進する。
【0072】
加えて、本明細書に記載のＨＰＰなどの骨石灰化障害を患うか、またはその傾向のある患者の記載されるスコアのそれぞれ（例えば、ＢＯＴ－２筋力スコア、ＢＯＴ－２走行速度スコア及び敏捷性スコア、ＣＨＡＱ指数スコア、ＢＳＩＤ－ＩＩＩスケールスコア、ＰＤＭＳ－２標準スコア、６ＭＷＴ、１２－ＰＯＭＡ－Ｇ、改変された移動能力指向型評価（ｍＰＯＭＡ－Ｇ、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ｅｔ ａｌ．２０１５ Ｂｏｎｅ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ ４：Ｐ１３６に例示されているもの）、またはＨＨＤ値）を単独で、または任意の組み合わせで使用して、ｓＡＬＰ（例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））を用いた治療の有効性を評価することができ、この際、特定のテストスコアと比較した改善により、ｓＡＬＰがＨＰＰなどの骨石灰化障害の治療に対して有効であることが実証される。
【0073】
例えば、アルカリホスファターゼまたはアルカリホスファターゼ活性のあるポリペプチド（例えば、ｓＡＬＰ、例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））が、ＨＰＰなどの骨石灰化障害を患うか、またはその傾向のある患者に投与されて、結果としてＢＯＴ－２筋力スコアが平均で約１０または約１０超に増加し、この際、患者の平均ＢＯＴ－２筋力スコアが以前は約１０未満であった場合、アルカリホスファターゼまたはアルカリホスファターゼ活性のあるポリペプチドによる治療は、例えば、ＨＰＰなどの骨石灰化障害に関連する身体的機能障害の治療において有効である。あるいは、ｓＡＬＰの投与により、結果としてＢＯＴ－２筋力スコアが平均で約１０または約１０超に増加しない場合、アルカリホスファターゼまたはアルカリホスファターゼ活性のあるポリペプチドの投与の投与量及び／または頻度を変更して（例えば、無期限または短期間にわたって（例えば、１～６ヶ月、または最大１年以上にわたって）増加させて）、患者に対するアルカリホスファターゼまたはアルカリホスファターゼ活性のあるポリペプチドの有効量を判定することができる。例えば、ｓＡＬＰ（例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））の投与量は、例えば、約０．１～１ｍｇ／ｋｇ／週を約１～２ｍ／ｋｇ／週に、約０．５～３ｍｇ／ｋｇ／週を約３～６ｍｇ／ｋｇ／週に、または約３～６ｍｇ／ｋｇ／週を約６～９ｍｇ／ｋｇ／週に増加させることができる。同様に、投与頻度も、例えば、約３週に１回を約２週に１回に、または約２週に１回を約１週に１回に増やすことができる。あるいは、本明細書に記載の測定基準のうち１つの改善が実現する場合、投与量及び／または投与頻度は、そのまま継続するか、または、例えば、約６～９ｍｇ／ｋｇ／週を約３～６ｍｇ／ｋｇ／週に、約３～６ｍｇ／ｋｇ／週を約０．５～３ｍｇ／ｋｇ／週に、または約０．５～３ｍｇ／ｋｇ／週を約０．１～１ｍｇ／ｋｇ／週に減らすことができる。同様に、投与頻度も、約１週に１回を約２週に１回に、または約２週に１回を約３週に１回に減らすこともできる。
【0074】
加えて、アルカリホスファターゼまたはアルカリホスファターゼ活性のあるポリペプチド（例えば、ｓＡＬＰ、例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））が、ＨＰＰなどの骨石灰化障害を患うか、またはその傾向のある患者に投与されて、結果として１つ以上の患者の筋力グレード分類の改善（例えば、以前の低い筋力グレードから１、２、３、４、または５の筋力グレードの改善）がもたらされ、この際、患者の平均筋力グレードが以前は約５未満であった場合、アルカリホスファターゼまたはアルカリホスファターゼ活性のあるポリペプチドによる治療は、例えば、ＨＰＰなどの骨石灰化障害に関連する身体的機能障害の治療において有効である。あるいは、ｓＡＬＰの投与により、結果として１つ以上の患者の筋力グレード分類が以前の低い筋力グレードから改善しない場合、アルカリホスファターゼまたはアルカリホスファターゼ活性のあるポリペプチドの投与の投与量及び／または頻度を変更して（例えば、増加させて）、患者に対するアルカリホスファターゼまたはアルカリホスファターゼ活性のあるポリペプチドの有効量を判定することができる。例えば、ｓＡＬＰ（例えば、配列番号５の配列を有するポリペプチド、またはそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するその多様体（例えば、配列番号１または配列番号５に比べて、変異Ｅ１０８Ｍ、Ｎ２１３Ｑ、及びＮ２８６Ｑのうち１つ以上またはその全てを含むポリペプチド））の投与量は、例えば、約０．１～１ｍｇ／ｋｇ／週を約１～２ｍ／ｋｇ／週に、約０．５～３ｍｇ／ｋｇ／週を約３～６ｍｇ／ｋｇ／週に、または約３～６ｍｇ／ｋｇ／週を約６～９ｍｇ／ｋｇ／週に増加させることができる。同様に、投与頻度も、例えば、約３週に１回を約２週に１回に、または約２週に１回を約１週に１回に増やすことができる。あるいは、本明細書に記載の測定基準のうち１つの改善が実現する場合、投与量及び／または投与頻度は、そのまま継続するか、または、例えば、約６～９ｍｇ／ｋｇ／週を約３～６ｍｇ／ｋｇ／週に、約３～６ｍｇ／ｋｇ／週を約０．５～３ｍｇ／ｋｇ／週に、または約０．５～３ｍｇ／ｋｇ／週を約０．１～１ｍｇ／ｋｇ／週に減らすことができる。同様に、投与頻度も、約１週に１回を約２週に１回に、または約２週に１回を約３週に１回に減らすこともできる。
【0075】
薬物動態（ＰＫ）パラメータ
いくつかの実施形態では、本治療法により、患者の血液中で約５０μｇ×時間／ｍＬ～約４０００μｇ×時間／ｍＬのＡＵＣ０－１６８ｈが生じる。例えば、本方法により、患者の血液中で約１０００μｇ×時間／ｍＬ～約３０００μｇ×時間／ｍＬのＡＵＣ０－１６８ｈが生じ得る。いくつかの実施形態では、本治療法により、患者の血液中で約０．５μｇ／ｍＬ～約２５μｇ／ｍＬのＣｍａｘが生じる。例えば、本治療法により、患者の血液中で約０．６μｇ／ｍＬ～約２０μｇ／ｍＬのＣｍａｘが生じ得る。
いくつかの実施形態では、本治療法により、患者の血液中で約５０μｇ×時間／ｍＬ～約４０００μｇ×時間／ｍＬのＡＵＣ０－１６８ｈが生じる。例えば、本方法により、患者の血液中で約１０００μｇ×時間／ｍＬ～約３０００μｇ×時間／ｍＬのＡＵＣ０－１６８ｈが生じ得る。いくつかの実施形態では、本治療法により、患者の血液中で約０．５μｇ／ｍＬ～約２５μｇ／ｍＬのＣｍａｘが生じる。例えば、本治療法により、患者の血液中で約０．６μｇ／ｍＬ～約２０μｇ／ｍＬのＣｍａｘが生じ得る。
【実施例】
【0076】
本開示は、以下の非限定的実施例によって説明される。特定の例、物質、量、及び処置が、本明細書に記載する開示の範囲及び趣旨に従って広く解釈されることを理解すべきである。
【0077】
実施例１
ＡＬＰ２０１は、ヒト組換えＴＮＳＡＬＰ－Ｆｃ－デカアスパラギン酸融合タンパク質である。これは、ヒトＴＮＳＡＬＰの触媒ドメイン（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ，Ｐ０５１８６）、ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇ２／４Ｆｃドメイン（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ，Ｐ０１８５９，Ｐ０１８６１）（精製及び半減期延長のための）、及びデカアスパラギン酸ペプチド（骨を標的とするための）から作製された、７２４個のアミノ酸の２つのポリペプチド鎖で構成される可溶性糖タンパク質である。
ＡＬＰ２０１は、ヒト組換えＴＮＳＡＬＰ－Ｆｃ－デカアスパラギン酸融合タンパク質である。これは、ヒトＴＮＳＡＬＰの触媒ドメイン（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ，Ｐ０５１８６）、ヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇ２／４Ｆｃドメイン（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ，Ｐ０１８５９，Ｐ０１８６１）（精製及び半減期延長のための）、及びデカアスパラギン酸ペプチド（骨を標的とするための）から作製された、７２４個のアミノ酸の２つのポリペプチド鎖で構成される可溶性糖タンパク質である。
【0078】
ＡＬＰ２０１は、欠陥のあるアルカリホスファターゼ酵素を置き換えることによって、ＨＰＰなどの骨石灰化障害の根本的な原因に対処するためのＥＲＴである。ＡＬＰ２０１は、小児発症ＨＰＰ患者に対して唯一承認されている治療剤（商標名ＳＴＲＥＮＳＩＱ（登録商標）で市販されている）である、同じくＴＮＳＡＬＰ－Ｆｃ－デカアスパラギン酸融合タンパク質ＥＲＴであるアスホターゼアルファと一部の構造が類似している。
【0079】
ＡＬＰ２０１は、アスホターゼアルファと等価の効力を有し、かつアスホターゼアルファと比較して活性が改善された次世代ＨＰＰ療法である。また、ＡＬＰ２０１により、半減期が長くなり、α相クリアランスが減少し、かつバイオアベイラビリティが増加するため、曝露量が増加する。これらの改善された特性は、アスホターゼアルファに比べて、ＡＬＰ２０１のより低い用量及びより長い投与間隔を裏付けている。患者の経験は、注射量及び投与頻度を減らすことにより向上すると予想され、これは、注射部位反応の低減にもつながる可能性がある。
【0080】
ＡＬＰ２０１
物理的及び化学的特性
ＡＬＰ２０１は、分子量が約１６０ｋＤａの可溶性Ｆｃ融合タンパク質であり、かつ２つのジスルフィド結合によって共有結合した２つのポリペプチド鎖で構成される。ポリペプチド鎖のそれぞれは、７２４個のアミノ酸を含んでおり、かつ、３つのセグメントで構成される。
・ ポリペプチドのＮ末端領域であるアミノ酸Ｌ１－Ａ４９１は、ヒト組織非特異アルカリホスファターゼ酵素の可溶性部分であり、触媒機能を有する酵素ＴＮＳＡＬＰを含む。それぞれのポリペプチド鎖の酵素領域内に、酵素活性を向上させるために単一の点変異（Ｅ１０８Ｍ）を導入し、プロセス改善のために２つのＮ結合型グリコシル化部位（Ｎ２１３Ｑ及びＮ２８６Ｑ）を除去した。
・ ポリペプチドの第２の部分であるアミノ酸Ｖ４９２－Ｋ７１４は、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含むヒト免疫グロブリンガンマ２／４（ＩｇＧ２／４）のＦｃ部分を含む。
・ ポリペプチドのＣ末端領域であるアミノ酸Ｄ７１５－Ｄ７２４は、１０個のアスパラギン酸を含む。このペプチド配列は、ＡＬＰ２０１の骨の鉱物相への結合を促進する。
物理的及び化学的特性
ＡＬＰ２０１は、分子量が約１６０ｋＤａの可溶性Ｆｃ融合タンパク質であり、かつ２つのジスルフィド結合によって共有結合した２つのポリペプチド鎖で構成される。ポリペプチド鎖のそれぞれは、７２４個のアミノ酸を含んでおり、かつ、３つのセグメントで構成される。
・ ポリペプチドのＮ末端領域であるアミノ酸Ｌ１－Ａ４９１は、ヒト組織非特異アルカリホスファターゼ酵素の可溶性部分であり、触媒機能を有する酵素ＴＮＳＡＬＰを含む。それぞれのポリペプチド鎖の酵素領域内に、酵素活性を向上させるために単一の点変異（Ｅ１０８Ｍ）を導入し、プロセス改善のために２つのＮ結合型グリコシル化部位（Ｎ２１３Ｑ及びＮ２８６Ｑ）を除去した。
・ ポリペプチドの第２の部分であるアミノ酸Ｖ４９２－Ｋ７１４は、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含むヒト免疫グロブリンガンマ２／４（ＩｇＧ２／４）のＦｃ部分を含む。
・ ポリペプチドのＣ末端領域であるアミノ酸Ｄ７１５－Ｄ７２４は、１０個のアスパラギン酸を含む。このペプチド配列は、ＡＬＰ２０１の骨の鉱物相への結合を促進する。
【0081】
ＡＬＰ２０１のそれぞれのポリペプチド鎖は、４つのグリコシル化部位（Ｎ１２３、Ｎ２５４、Ｎ４１３、及びＮ５６４）、ならびに１１個のシステイン（Ｃｙｓ）残基を含む。Ｃｙｓ１０２は、遊離システインとして存在する。それぞれのポリペプチド鎖は、Ｃｙｓ１２２からＣｙｓ１８４の間、Ｃｙｓ４７２からＣｙｓ４８０の間、Ｃｙｓ５２８からＣｙｓ５８８の間、及びＣｙｓ６３４からＣｙｓ６９２の間に４つの鎖内ジスルフィド結合を含む。２つのポリペプチド鎖は、Ｃｙｓ４９４とＣｙｓ４９４との間、及びＣｙｓ４９７とＣｙｓ４９７との間の２つの鎖間ジスルフィド結合によって連結している。これらの共有結合構造的特徴に加えて、哺乳動物アルカリホスファターゼは、一般に、それぞれのポリペプチド鎖に４つの金属結合部位（亜鉛に対する２つの部位、マグネシウムに対する１つの部位、及びカルシウムに対する１つの部位）を有している。
【0082】
ＡＬＰ２０１の一般特性
ＡＬＰ２０１の一般特性を表１に列挙する。理論上の化学式及び理論上の平均分子量を、２つのシステイン残基を除く全てがジスルフィド結合していると仮定して計算した。
ＡＬＰ２０１の一般特性を表１に列挙する。理論上の化学式及び理論上の平均分子量を、２つのシステイン残基を除く全てがジスルフィド結合していると仮定して計算した。
【表1】
【0083】
医薬品
ＡＬＰ２０１ １００ｍｇ／ｍＬバイアル
ＡＬＰ２０１医薬品（１００ｍｇ／ｍＬ）は、単回投与用２ｍＬバイアルに入れられた、ＡＬＰ２０１及び賦形剤を含む無菌の保存剤非含有の製剤液体溶液である。医薬品は、動物またはヒト由来のいずれの新規賦形剤（複数可）も含んでいない。各２ｍＬバイアルは、通常、バイアルあたり１００ｍｇのＡＬＰ２０１を送達するために１．２ｍＬ（過量充填）の医薬品を含有する。医薬品は、アルミニウムシール付きの１３ｍｍクロロブチル栓を備えた２ｍＬのＩ型透明ガラスバイアルに充填される。ＡＬＰ２０１医薬品の定量的組成物を表２に提示する。
ＡＬＰ２０１ １００ｍｇ／ｍＬバイアル
ＡＬＰ２０１医薬品（１００ｍｇ／ｍＬ）は、単回投与用２ｍＬバイアルに入れられた、ＡＬＰ２０１及び賦形剤を含む無菌の保存剤非含有の製剤液体溶液である。医薬品は、動物またはヒト由来のいずれの新規賦形剤（複数可）も含んでいない。各２ｍＬバイアルは、通常、バイアルあたり１００ｍｇのＡＬＰ２０１を送達するために１．２ｍＬ（過量充填）の医薬品を含有する。医薬品は、アルミニウムシール付きの１３ｍｍクロロブチル栓を備えた２ｍＬのＩ型透明ガラスバイアルに充填される。ＡＬＰ２０１医薬品の定量的組成物を表２に提示する。
【表2】
【0084】
インビボ試験
薬理学的特性、ＰＫ／毒物動態（ＴＫ）、局所忍容性、及び潜在的な全身毒性の特性を明らかにするために、インビボ試験を使用してＡＬＰ２０１を評価した。実施した薬理試験には、ＡＬＰ２０１の最小有効用量を特定するために、ＨＰＰマウス（Ａｋｐ２ＧＷ（－／－）マウス）での反復投与試験を含めた。ＡＬＰ２０１のＰＫ特性を理解するために、マウス、ラット、及びサルで単回投与ＰＫ試験を実施した。毒性試験で、ラット及びサルへのＳＣ ＡＬＰ２０１の投与による全身毒性を評価し、これらの試験には、安全性薬理評価項目（サルの試験では心臓血管、呼吸器、及びラットの試験では神経系機能）、ＴＫ評価、及び治療に関連した影響の可逆性を評価するための回復期間を含めた。
薬理学的特性、ＰＫ／毒物動態（ＴＫ）、局所忍容性、及び潜在的な全身毒性の特性を明らかにするために、インビボ試験を使用してＡＬＰ２０１を評価した。実施した薬理試験には、ＡＬＰ２０１の最小有効用量を特定するために、ＨＰＰマウス（Ａｋｐ２ＧＷ（－／－）マウス）での反復投与試験を含めた。ＡＬＰ２０１のＰＫ特性を理解するために、マウス、ラット、及びサルで単回投与ＰＫ試験を実施した。毒性試験で、ラット及びサルへのＳＣ ＡＬＰ２０１の投与による全身毒性を評価し、これらの試験には、安全性薬理評価項目（サルの試験では心臓血管、呼吸器、及びラットの試験では神経系機能）、ＴＫ評価、及び治療に関連した影響の可逆性を評価するための回復期間を含めた。
【0085】
ヒトでのその使用を裏付ける、ＡＬＰ２０１を用いて実施したインビボ試験の概要を表３に提示する。
【表3-1】
【表3-2】
【表3-3】
【表3-4】
【0086】
インビトロ薬理学的特性
ピロリン酸（ＰＰｉ）は、ＴＮＳＡＬＰの重要な天然基質であり、ＨＰＰ患者においてＴＮＳＡＬＰレベルが低いと、循環ＰＰｉ血中レベルが上昇する。上昇したピロリン酸レベルは、適切な骨石灰化を妨げ、ＨＰＰ患者で観察される骨の異常な症状を引き起こす。したがって、ＰＰｉを、操作した第二世代アスホターゼアルファ分子によって、より高い酵素活性レベルで標的とする天然基質と見なした。
ピロリン酸（ＰＰｉ）は、ＴＮＳＡＬＰの重要な天然基質であり、ＨＰＰ患者においてＴＮＳＡＬＰレベルが低いと、循環ＰＰｉ血中レベルが上昇する。上昇したピロリン酸レベルは、適切な骨石灰化を妨げ、ＨＰＰ患者で観察される骨の異常な症状を引き起こす。したがって、ＰＰｉを、操作した第二世代アスホターゼアルファ分子によって、より高い酵素活性レベルで標的とする天然基質と見なした。
【0087】
ＡＬＰ２０１及びアスホターゼアルファによるピロリン酸加水分解の基質飽和曲線を図１に示す。ＡＬＰ２０１は、ピロリン酸に対して、アスホターゼアルファのＫｍ値（５３ｍＭ）と類似のＫｍ値（４７ｍＭ）を保持するが、ＡＬＰ２０１は、極めて高い代謝回転数で機能する（ＡＬＰ２０１はｋｃａｔ＝１１，６１９ｍｉｎ－１、それに対しアスホターゼアルファは６，７１４ｍｉｎ－１）。ＡＬＰ２０１及びアスホターゼアルファの野生型ＴＮＳＡＬＰ触媒ドメインの類似のＫｍ値は、ＡＬＰ２０１が同等の血清アルカリホスファターゼ活性レベルで存在する場合、アスホターゼアルファよりも循環ＰＰｉレベルを危険なほど低下させる可能性は高くないことを示唆している。
【0088】
ピリドキシル－５‘－リン酸は、ＨＰＰと臨床的に関連するＴＮＳＡＬＰの第２の天然基質である。ＴＮＳＡＬＰは、ＰＬＰを切断して、組織に最も容易に取り込まれるＢ６ビタマーであるピリドキサールを形成する。血清アルカリホスファターゼレベルが非常に低い場合、全身ビタミンＢ６代謝が損なわれる可能性がある。ＨＰＰでは、脳におけるＰＬＰ欠乏症は発作として現れ、またＴＮＳＡＬＰによるＰＬＰ加水分解の全身欠乏は、一部のＨＰＰ患者が経験する、疼痛、筋力低下、及び筋緊張低下の一因となる可能性がある。したがって、ＨＰＰの治療のためにＥＲＴを使用することで、十分なＰＬＰ加水分解活性を得ることができる。
【0089】
ＡＬＰ２０１及びアスホターゼアルファによるＰＬＰ加水分解の基質飽和曲線を図２に示す。ＡＬＰ２０１は、ＰＬＰに対するＫｍ値がアスホターゼアルファ（１．７１ｍＭ）と比べて、わずかに弱い（２．７６ｍＭ）が、ＡＬＰ２０１は、極めて高い代謝回転数で機能し（ＡＬＰ２０１はｋｃａｔ＝３，３２４ｍｉｎ－１、それに対しアスホターゼアルファは２，６２３ｍｉｎ－１）、結果として、２つの分子のＰＬＰ活性飽和曲線は非常に類似するものとなる。基質反応速度パラメータを表４に示す。
【表4】
【0090】
インビボ薬理学的特性
ヒトＨＰＰの動物モデルであるＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスを使用して、ＡＬＰ２０１に対する前臨床有効性研試験を実施した。Ａｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスは、アスホターゼアルファの前臨床評価で先に使用したＡｋｐ２（－／－）マウスで使用のものと同じＨＰＰ誘導ＴＮＳＡＬＰ変異を有している。Ａｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスの開発中にＡｌｅｘｉｏｎで行われた自然経過試験により、ホモ接合体ＴＮＳＡＬＰ活性ノックアウトＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスは、Ａｋｐ２（－／－）マウスとほぼ同一の骨石灰化及び生存表現型を呈することが明らかとなっている（Ａｋｐ２ＧＷ－ＮＨ－０１－０２）。
ヒトＨＰＰの動物モデルであるＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスを使用して、ＡＬＰ２０１に対する前臨床有効性研試験を実施した。Ａｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスは、アスホターゼアルファの前臨床評価で先に使用したＡｋｐ２（－／－）マウスで使用のものと同じＨＰＰ誘導ＴＮＳＡＬＰ変異を有している。Ａｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスの開発中にＡｌｅｘｉｏｎで行われた自然経過試験により、ホモ接合体ＴＮＳＡＬＰ活性ノックアウトＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスは、Ａｋｐ２（－／－）マウスとほぼ同一の骨石灰化及び生存表現型を呈することが明らかとなっている（Ａｋｐ２ＧＷ－ＮＨ－０１－０２）。
【0091】
Ａｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスモデルを使用したＡＬＰ２０１の有効性を評価するのに使用した有効性試験では、生後１日目から３５日目まで被験物質を皮下投与した。全ての試験で報告した結果には、全生存期間、体重増加率、３６日目（または試験終了［ＥＯＳ］前の場合は死亡時）の後肢の骨の骨石灰化、及びＥＯＳトラフ血漿中酵素活性レベルを含めた（１日１回［ｑｄ］及び１週に１回［ｑ１ｗ］投与群では３６日目、及び２日に１回［ｑ２ｄ］投与群では３７日目に記録した）。一部の試験では、ＥＯＳの大腿骨及び脛骨の長さ、ならびにマウスの大腿骨のアルカリホスファターゼ活性を決定した。
【0092】
Ａｋｐ２（－／－）マウスを使用した以前の試験では、アスホターゼアルファは、被験物質の特異的活性に応じて、アスホターゼアルファの活性調製物に対して７～１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で、骨石灰化及び全生存期間試験評価項目の両方で有効性を示した。アスホターゼアルファの推定最小有効用量（ＭＥＤ）を、試験の終了までに、または試験の終了の前に死亡した場合は死亡時に、群内の測定可能なマウスの８５％が正常な骨石灰化スコアを得る結果となった用量として定義した。有効性データの分析では、被験物質の特異的活性に応じて、この値はおよそ２．０～２．５ｍｇ／ｋｇ／日であった。
【0093】
ＨＰＰのマウスモデルにおけるＡＬＰ２０１の有効性を、Ａｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスで、２つの反復投与試験で、様々なＳＣ用量及び投与間隔でテストした。これらの試験では、ＡＬＰ２０１の有効性を、アスホターゼアルファのＳＣ投与を毎日行った陽性対照群で観察された有効性と比較した。
【0094】
以前の試験では、ｑｄ投与スケジュールで９．８ｍｇ／ｋｇ／日の最大有効用量で、ＳＣ投与によってアスホターゼアルファを投与した。ＡＬＰ２０１の等価の４－ＭＵＰ活性用量をＰＢＳ中で、ｑｄ、ｑ２ｄ、及びｑ１ｗ投与間隔でＳＣ投与によって投与した。１つの投与群では、２５日目のマウスの離乳後、ＡＬＰ２０１の用量を対数的に半分まで減少させた。ｑｄのスケジュールでのＰＢＳの皮下投与を、陰性対照として使用した。これらの投与群の一覧は、表５で確認することができる。
【0095】
ＨＰＰ－ＭＥＤ－０１の試験では、ｑｄ投与スケジュールで２．５ｍｇ／ｋｇ／日の最小有効用量で、ＳＣ投与によってアスホターゼアルファを投与した。ＡＬＰ２０１を、ｑ２ｄの投与スケジュールで、２．０、０．８、０．３、及び０．１５ｍｇ／ｋｇの用量で、ＰＢＳ中で皮下投与した。ｑ２ｄのスケジュールでのＰＢＳの皮下投与を、陰性対照として使用した。これらの投与群の一覧は、表５で確認することができる。
【表5】
【0096】
骨石灰化の結果
治療したＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスの後肢のＸ線分析によって、３６／３７日目の骨石灰化の結果を決定した。後肢の骨石灰化のＸ線可視化物を、４つの分類カテゴリー、すなわち、影響なし、軽度の欠損、中程度の欠損、及び重度の欠損を例示する３６日目の基準Ｘ線画像と比較した。これらの分類の詳細な説明は、表６で確認することができる。盲検化された個人がマウスごとの画像にスコアを割り当て、完了後、個々の投与群内でスコアを集計した。
投与群ごとの観察されたＥＯＳの後肢の骨石灰化指標スコアの分布は、表７で確認することができる。
治療したＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスの後肢のＸ線分析によって、３６／３７日目の骨石灰化の結果を決定した。後肢の骨石灰化のＸ線可視化物を、４つの分類カテゴリー、すなわち、影響なし、軽度の欠損、中程度の欠損、及び重度の欠損を例示する３６日目の基準Ｘ線画像と比較した。これらの分類の詳細な説明は、表６で確認することができる。盲検化された個人がマウスごとの画像にスコアを割り当て、完了後、個々の投与群内でスコアを集計した。
【表6】
投与群ごとの観察されたＥＯＳの後肢の骨石灰化指標スコアの分布は、表７で確認することができる。
【表7】
【0097】
ＡＬＰ２０１によるＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスの治療は、Ｑ２Ｄの投与間隔でＡＬＰ２０１用量が増加するにつれて無影響の後肢の骨石灰化を有するマウスの割合が増加するといった用量反応を示した。全てのＡＬＰ２０１投与群は、ＰＢＳ治療Ａｋｐ２ＧＷ（－／－）対照と比較して、統計的に有意な改善を示した（１元配置ＡＮＯＶＡ分析でｐ＜０．００１）。これらのデータを使用して、モデルベースの分析を通知し、ヒト用量見込みを予測した。
【0098】
試験終了時のトラフ血漿中活性酵素濃度の結果
トラフ血漿中活性ＴＮＳＡＬＰ酵素濃度を、３６／３７日目の血漿サンプル中のＴＮＳＡＬＰ活性レベルを測定することによって決定した。測定したＴＮＳＡＬＰ活性を、既知の酵素活性及び濃度の標準曲線に適合させて、血漿の単位容積あたりの活性酵素レベルを定量化した。ＥＯＳトラフ血漿中活性酵素濃度の分布を図３に示す。投与群ごとの平均ＥＯＳトラフ血漿中活性酵素濃度の一覧の概要を表８に示す。
トラフ血漿中活性ＴＮＳＡＬＰ酵素濃度を、３６／３７日目の血漿サンプル中のＴＮＳＡＬＰ活性レベルを測定することによって決定した。測定したＴＮＳＡＬＰ活性を、既知の酵素活性及び濃度の標準曲線に適合させて、血漿の単位容積あたりの活性酵素レベルを定量化した。ＥＯＳトラフ血漿中活性酵素濃度の分布を図３に示す。投与群ごとの平均ＥＯＳトラフ血漿中活性酵素濃度の一覧の概要を表８に示す。
【表8-1】
【表8-2】
【0099】
治療したＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスにおける反復投与後のＥＯＳトラフ血漿中活性酵素及び対応する酵素活性レベルの分析は、アスホターゼアルファと比較すると、ＡＬＰ２０１の絶対蓄積及び用量正規化した蓄積がより大きいことを明確に示しており、これはおそらくＳＣ投与後のＡＬＰ２０１の優れたＰＫプロファイルによるものである。
【0100】
３６／３７日目の治療したＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスの試験終了時の骨酵素活性レベル
治療したＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウス大腿骨組織におけるアルカリホスファターゼ活性レベルを、４－ＭＵＰを基質として使用してＨＰＰ－ＭＥＤ－０１試験終了時にエクスビボアッセイで決定した。このアッセイでは、依然として高レベルのＡＬＰ２０１またはアスホターゼアルファを保持している可能性のある血液または血流量の多い組織による潜在的な汚染を避けるために、活性について、大腿骨の石灰化した部分のみをアッセイした。治療したＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウス大腿骨に付随する酵素活性レベルの分布を図４に示す。ここで、データは、石灰化した大腿骨組織１ｍｇあたりの４－ＭＵＰ加水分解活性をマイクロ単位で示している。
治療したＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウス大腿骨組織におけるアルカリホスファターゼ活性レベルを、４－ＭＵＰを基質として使用してＨＰＰ－ＭＥＤ－０１試験終了時にエクスビボアッセイで決定した。このアッセイでは、依然として高レベルのＡＬＰ２０１またはアスホターゼアルファを保持している可能性のある血液または血流量の多い組織による潜在的な汚染を避けるために、活性について、大腿骨の石灰化した部分のみをアッセイした。治療したＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウス大腿骨に付随する酵素活性レベルの分布を図４に示す。ここで、データは、石灰化した大腿骨組織１ｍｇあたりの４－ＭＵＰ加水分解活性をマイクロ単位で示している。
【表9】
【0101】
骨活性データは、ＡＬＰ２０１用量が増加するにつれてＥＯＳ骨組織活性レベルが増加するといった用量反応を示した。試験終了時、ＡＬＰ２０１の０．１５ｍｇ／ｋｇのｑ２ｄ群のマウスは、野生型アルカリホスファターゼ活性が２２．６％回復したのに対し、アスホターゼアルファの２．５ｍｇ／ｋｇのｑｄ群では２６．９％であった。０．３、０．８、及び２．０ｍｇ／ｋｇのｑ２ｄのＡＬＰ２０１投与により、野生型活性がそれぞれ３４．４％、３７．６％、及び４４．９％回復した。０．８及び２．０ｍｇ／ｋｇのｑ２ｄのＡＬＰ２０１用量間における試験終了時の骨活性レベルの差は、アスホターゼアルファの２．５ｍｇ／ｋｇのｑ２ｄ群と比較して、１元配置ＡＮＯＶＡで分析した場合に、調整されたｐ値がそれぞれ０．００４８及び＜０．０００１で統計的に有意であった。
【0102】
治療したＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスの生存結果
ＰＢＳで治療した全てのＡｋｐ２ＧＷ（－／－）は、試験の２６日目またはその前に死亡し、生存時間の中央値は２０日であった。Ａｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスへのＡＬＰ２０１による治療は、ＰＢＳ溶媒対照と比較して、全ての投与群において３６日の生存率が有意に改善した（図５及び表１０）。全てのＡＬＰ２０１投与群は、ＥＯＳ生存率が少なくとも６９％に達し、用量が０．１５ｍｇ／ｋｇ／日を超える全てのｑｄ及びｑ２ｄ間隔投与群で全生存率が８８％以上であった。ＡＬＰ２０１の４．８ｍｇ／ｋｇのｑ１ｗ群及びアスホターゼアルファの９．８ｍｇ／ｋｇのｑｄ群の生存曲線は、非常に類似する結果を示した。
ＰＢＳで治療した全てのＡｋｐ２ＧＷ（－／－）は、試験の２６日目またはその前に死亡し、生存時間の中央値は２０日であった。Ａｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスへのＡＬＰ２０１による治療は、ＰＢＳ溶媒対照と比較して、全ての投与群において３６日の生存率が有意に改善した（図５及び表１０）。全てのＡＬＰ２０１投与群は、ＥＯＳ生存率が少なくとも６９％に達し、用量が０．１５ｍｇ／ｋｇ／日を超える全てのｑｄ及びｑ２ｄ間隔投与群で全生存率が８８％以上であった。ＡＬＰ２０１の４．８ｍｇ／ｋｇのｑ１ｗ群及びアスホターゼアルファの９．８ｍｇ／ｋｇのｑｄ群の生存曲線は、非常に類似する結果を示した。
【表10】
【0103】
体重の結果
ＡＬＰ２０１及びアスホターゼアルファで治療したＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスの平均体重は、全ての群において、ＰＢＳで治療したその野生型同腹仔の平均体重よりも一貫して低かった。全てのＡＬＰ２０１投与群の試験終了時の体重は、アスホターゼアルファ投与群と統計的な差はなかった。
ＡＬＰ２０１及びアスホターゼアルファで治療したＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウスの平均体重は、全ての群において、ＰＢＳで治療したその野生型同腹仔の平均体重よりも一貫して低かった。全てのＡＬＰ２０１投与群の試験終了時の体重は、アスホターゼアルファ投与群と統計的な差はなかった。
【0104】
安全性薬理学的特性
ＡＬＰ２０１に対して、独立した安全性薬理学的特性試験は実施しなかった。しかし、心臓血管、呼吸器、及び血圧の評価項目を、中心的なＧＬＰに準拠したサル毒性試験の一部として測定し、神経系機能評価項目を、ラットＧＬＰ毒性試験の一部として評価した。ＡＬＰ２０１治療により低用量群でのみ心拍数が上がる結果（対照群と比較して２８％）となり、それに伴い、ＲＲ、ＰＲ、ＱＴ間隔が減少したが、ＱＲＳ期間の目立った変化はなかった。中用量及び高用量群では、生物学的に意味のある変化は観察されなかった。したがって、心拍数のわずかな増加とＡＬＰ２０１用量との間には用量－応答関係はなかった。心拍数の増加の程度はわずかであったため、これらの所見は有害でないと考えられる。さらに、本試験で評価した最高濃度の２０ｍｇ／ｋｇまで、３日に１回２８日間のＳＣ投与後、サルで評価したＥＣＧ、血圧、または呼吸器パラメータにＡＬＰ２０１に関連する所見は見られなかった。ＡＬＰ２０１は、本試験で評価した最高濃度の３０ｍｇ／ｋｇまで、３日に１回２８日間のＳＣ投与後、ラットにおいて行動指標または運動活性に影響を及ぼさなかった。
ＡＬＰ２０１に対して、独立した安全性薬理学的特性試験は実施しなかった。しかし、心臓血管、呼吸器、及び血圧の評価項目を、中心的なＧＬＰに準拠したサル毒性試験の一部として測定し、神経系機能評価項目を、ラットＧＬＰ毒性試験の一部として評価した。ＡＬＰ２０１治療により低用量群でのみ心拍数が上がる結果（対照群と比較して２８％）となり、それに伴い、ＲＲ、ＰＲ、ＱＴ間隔が減少したが、ＱＲＳ期間の目立った変化はなかった。中用量及び高用量群では、生物学的に意味のある変化は観察されなかった。したがって、心拍数のわずかな増加とＡＬＰ２０１用量との間には用量－応答関係はなかった。心拍数の増加の程度はわずかであったため、これらの所見は有害でないと考えられる。さらに、本試験で評価した最高濃度の２０ｍｇ／ｋｇまで、３日に１回２８日間のＳＣ投与後、サルで評価したＥＣＧ、血圧、または呼吸器パラメータにＡＬＰ２０１に関連する所見は見られなかった。ＡＬＰ２０１は、本試験で評価した最高濃度の３０ｍｇ／ｋｇまで、３日に１回２８日間のＳＣ投与後、ラットにおいて行動指標または運動活性に影響を及ぼさなかった。
【0105】
動物における薬物動態及び薬物代謝
マウス、ラット、及びサルで単回投与ＰＫ試験を実施した。これらの試験からのデータを使用して、前臨床種におけるＡＬＰ２０１の動態（吸収、分布、及び排出）を評価した。
マウス、ラット、及びサルで単回投与ＰＫ試験を実施した。これらの試験からのデータを使用して、前臨床種におけるＡＬＰ２０１の動態（吸収、分布、及び排出）を評価した。
【0106】
吸収
ＡＬＰ２０１のＰＫをＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラット及びカニクイザルで評価した。ＡＬＰ２０１の単回用量投与及び反復用量投与後の非ＧＬＰ及びＧＬＰ試験の概要を、本明細書に提示する。
ＡＬＰ２０１のＰＫをＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラット及びカニクイザルで評価した。ＡＬＰ２０１の単回用量投与及び反復用量投与後の非ＧＬＰ及びＧＬＰ試験の概要を、本明細書に提示する。
【0107】
平均バイオアベイラビリティは、マウス、ラット、及びサルで、それぞれ９６％、５８％、及び７８％であった。最高濃度に到達するまでの時間（ｔｍａｘ）は、投与後１７～４８時間の範囲であり、これは、ＳＣ注射部位からのＡＬＰ２０１の吸収が遅いことを示唆している。
【0108】
分布
マウス、ラット、及びサルへの単回静脈内投与後、ＡＬＰ２０１の見かけの分布容積は、０．０８～０．１５Ｌ／ｋｇの範囲であった。この値は、これらの種における血漿量よりもはるかに大きく（＞２倍）、これはＡＬＰ２０１が血管内区画を超えて分布することを示唆している。
マウス、ラット、及びサルへの単回静脈内投与後、ＡＬＰ２０１の見かけの分布容積は、０．０８～０．１５Ｌ／ｋｇの範囲であった。この値は、これらの種における血漿量よりもはるかに大きく（＞２倍）、これはＡＬＰ２０１が血管内区画を超えて分布することを示唆している。
【0109】
単回投与試験における薬物動態
雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける単回投与によるＰＫ（試験ＨＰＰ－ＰＫ－０１）
雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスへの単回用量ＩＶまたはＳＣ投与後、ＡＬＰ２０１のＰＫを評価した。４ｍｇ／ｋｇの用量でＡＬＰ２０１の単回ＩＶまたはＳＣ投与を１６匹の動物に行った。投与経路ごとに、マウスをそれぞれ４匹ずつの４つのサンプル採取コホートにランダムに細分した。半連続サンプル採取デザインを使用して、投与後最長２０日まで血液サンプルを採取した。ＡＬＰ２０１のＰＫパラメータの概要を表１１に示す。
雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける単回投与によるＰＫ（試験ＨＰＰ－ＰＫ－０１）
雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスへの単回用量ＩＶまたはＳＣ投与後、ＡＬＰ２０１のＰＫを評価した。４ｍｇ／ｋｇの用量でＡＬＰ２０１の単回ＩＶまたはＳＣ投与を１６匹の動物に行った。投与経路ごとに、マウスをそれぞれ４匹ずつの４つのサンプル採取コホートにランダムに細分した。半連続サンプル採取デザインを使用して、投与後最長２０日まで血液サンプルを採取した。ＡＬＰ２０１のＰＫパラメータの概要を表１１に示す。
【表11】
【0110】
ＩＶ投与後、濃度－時間プロファイルは、多次指数関数的に減少した。ＣＬは、０．００１９Ｌ／ｈ／ｋｇであり、見かけの終末相ｔ１／２は、４８時間であった（表１１）。Ｖｄは、０．１３Ｌ／ｋｇであり、これは、血管内空間を超えたＡＬＰ２０１分布を示すマウスの血漿量よりも大きい。ＳＣ投与後、最高濃度に到達するまでの時間（ｔｍａｘ）は、投与後４８時間であった。これは、ＳＣ注射部位からの吸収が比較的遅いことを示唆している。ＳＣ投与後の絶対バイオアベイラビリティは９６％であった。
【0111】
ラットにおける単回投与ＰＫ試験
ラットへの単回ＩＶまたはＳＣ投与後、ＡＬＰ２０１のＰＫを評価した。ＡＬＰ２０１の単回ＩＶまたはＳＣ漸増投与（１、３、９、もしくは２７ｍｇ／ｋｇの用量でのＩＶボーラス、または２もしくは２７ｍｇ／ｋｇの用量でのＳＣ）を４匹の動物（性別／用量あたり２匹）に行った。ＡＬＰ２０１血漿中濃度は、投与後最大２８日間にわたって定量可能であった。ＡＬＰ２０１のＰＫパラメータでは明らかな性特異的差は観察されなかったため、プールした性別値を提示する。ＡＬＰ２０１のＰＫパラメータの記述統計を、プールした性別群ごとに表１２に要約する。ＡＬＰ２０１平均血漿中濃度対時間プロファイルを図１４に示す。比較できるように、アスホターゼアルファの背景データが追加されていることに留意されたい。
ラットへの単回ＩＶまたはＳＣ投与後、ＡＬＰ２０１のＰＫを評価した。ＡＬＰ２０１の単回ＩＶまたはＳＣ漸増投与（１、３、９、もしくは２７ｍｇ／ｋｇの用量でのＩＶボーラス、または２もしくは２７ｍｇ／ｋｇの用量でのＳＣ）を４匹の動物（性別／用量あたり２匹）に行った。ＡＬＰ２０１血漿中濃度は、投与後最大２８日間にわたって定量可能であった。ＡＬＰ２０１のＰＫパラメータでは明らかな性特異的差は観察されなかったため、プールした性別値を提示する。ＡＬＰ２０１のＰＫパラメータの記述統計を、プールした性別群ごとに表１２に要約する。ＡＬＰ２０１平均血漿中濃度対時間プロファイルを図１４に示す。比較できるように、アスホターゼアルファの背景データが追加されていることに留意されたい。
【表12】
【0112】
ＩＶ投与の場合、ＡＬＰ２０１のＰＫ曝露量（Ｃｍａｘ及びＡＵＣ∞）は、試験用量範囲の１ｍｇ／ｋｇ～２７ｍｇ／ｋｇで、用量比よりもわずかに下回る形で増加した。ＡＬＰ２０１の平均ＣＬ及びＶｄは、用量全体にわたって一貫したままであった。平均ＣＬ値は、０．００１２～０．００１９Ｌ／ｈ／ｋｇの範囲であり、平均Ｖｄ値は、０．１２～０．１５Ｌ／ｋｇの範囲であった。同様に、ＩＶ用量全体にわたって比較的類似したままのＡＬＰ２０１のｔ１／２は、平均して約２日であった。ＳＣ投与の場合、ＣＬ／Ｆ、Ｖｄ／Ｆ、及びｔ１／２値は、異常値と思われる２７ｍｇ／ｋｇのＳＣ投与群を除いて、ＩＶ投与から推定したものと同様であった。平均ｔｍａｘは、投与後３０～４８時間の範囲であった。これは、ＳＣ注射部位からの吸収が比較的遅いことを示唆している。ＳＣ投与後の絶対バイオアベイラビリティは、２及び２７ｍｇ／ｋｇ用量でそれぞれ６１％及び５４％であった。
【0113】
サルにおける単回投与ＰＫ試験
サルへの単回ＩＶまたはＳＣ投与後、ＡＬＰ２０１のＰＫを評価した。ＡＬＰ２０１の単回ＩＶまたはＳＣ漸増投与（２、６、もしくは２０ｍｇ／ｋｇの用量でのＩＶボーラス、または２もしくは２０ｍｇ／ｋｇの用量でのＳＣ）を３匹の雄サルに行った。ＡＬＰ２０１血漿中濃度は、投与後最大２８日間にわたって定量可能であった。ＡＬＰ２０１のＰＫパラメータの記述統計を、表１３に要約する。ＡＬＰ２０１平均血漿中濃度対時間プロファイルを図１５に示す。比較できるように、アスホターゼアルファの背景データが追加されていることに留意されたい。
サルへの単回ＩＶまたはＳＣ投与後、ＡＬＰ２０１のＰＫを評価した。ＡＬＰ２０１の単回ＩＶまたはＳＣ漸増投与（２、６、もしくは２０ｍｇ／ｋｇの用量でのＩＶボーラス、または２もしくは２０ｍｇ／ｋｇの用量でのＳＣ）を３匹の雄サルに行った。ＡＬＰ２０１血漿中濃度は、投与後最大２８日間にわたって定量可能であった。ＡＬＰ２０１のＰＫパラメータの記述統計を、表１３に要約する。ＡＬＰ２０１平均血漿中濃度対時間プロファイルを図１５に示す。比較できるように、アスホターゼアルファの背景データが追加されていることに留意されたい。
【表13】
【0114】
ＩＶ投与の場合、Ｃｍａｘ及びＡＵＣ∞値の上昇は、試験用量範囲の２ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇで、用量比に近かった。ＡＬＰ２０１のＣＬ及びＶｄは、用量全体にわたって一貫したままであり、平均ＣＬ値は０．０００８～０．００１１Ｌ／ｈ／ｋｇの範囲であり、平均Ｖｄ値は、０．０８～０．１０Ｌ／ｋｇの範囲であった。同様に、用量全体にわたって比較的類似したままのＡＬＰ２０１のｔ１／２は、平均して約３日であった。ＳＣ投与の場合、平均ＣＬ／Ｆ、Ｖｄ／Ｆ、及びｔ１／２値は、ＩＶ投与後に推定したものと一致するものであった。平均ｔｍａｘは、投与後１７～１９時間の範囲であった。これは、ＳＣ注射部位からの吸収が比較的遅いことを示唆している。絶対バイオアベイラビリティは、２ｍｇ／ｋｇ及び２０ｍｇ／ｋｇ用量でそれぞれ６９．６％及び８６．９％であった。
【0115】
ＡＬＰ２０１を用いた反復投与毒物動態試験
ラットへの４週間のＳＣ投与（１７２７－２２７）：２、１０、または３０ｍｇ／ｋｇ／用量で、３日に１回で４週間ＡＬＰ２０１をラットにＳＣ投与した。加えて、ＩＶ及びＳＣ経路バイオアベイラビリティを比較するために、１０ｍｇ／ｋｇの単回投与でＡＬＰ２０１をラットに静脈内投与した。ノンコンパートメント解析を使用して、０日目及び２４日目の投与後のＡＬＰ２０１複合血漿中濃度に基づいて計算した薬物動態パラメータを、表１４に示す。
ラットへの４週間のＳＣ投与（１７２７－２２７）：２、１０、または３０ｍｇ／ｋｇ／用量で、３日に１回で４週間ＡＬＰ２０１をラットにＳＣ投与した。加えて、ＩＶ及びＳＣ経路バイオアベイラビリティを比較するために、１０ｍｇ／ｋｇの単回投与でＡＬＰ２０１をラットに静脈内投与した。ノンコンパートメント解析を使用して、０日目及び２４日目の投与後のＡＬＰ２０１複合血漿中濃度に基づいて計算した薬物動態パラメータを、表１４に示す。
【0116】
ＡＬＰ２０１の全身曝露量は、０日目及び２４日目におけるＡＬＰ２０１のＳＣ投与後、ならびに０日目におけるＡＬＰ２０１の単回ＩＶボーラス注射後、性別とは無関係であるように見えた。３日に１回のＡＬＰ２０１のＳＣ投与後、０日目及び２４日目におけるＡＬＰ２０１のＣｍａｘ及びＡＵＣ０－７２ｈ値は、用量比よりもわずかに下回る形で用量の増加に伴い増加した。ＡＬＰ２０１の全身曝露量（ＡＵＣ０－７２ｈ）は、反復ＳＣ投与後、減少するように見えた。曝露量の減少は用量に依存するように見え、３０ｍｇ／ｋｇのＡＬＰ２０１の反復ＳＣ投与後の最大減少は最大２倍であった。ＡＬＰ２０１の皮下バイオアベイラビリティ（１０ｍｇ／ｋｇでのＡＵＣ０－７２ｈ値に基づく）は、およそ４４．２％であった。
【表14-1】
【表14-2】
【0117】
サルへの４週間のＳＣ投与：１、５、または２０ｍｇ／ｋｇ／用量で、３日に１回４週間、ＡＬＰ２０１をサルにＳＣ投与した。１日目及び２４日目の投与後のＡＬＰ２０１血漿中濃度に基づいてノンコンパートメント解析を使用して計算したＰＫパラメータを、表１５に示す。
【表15】
【0118】
ＡＬＰ２０１の全身曝露量は、０日目及び２４日目におけるＡＬＰ２０１のＳＣ投与後、性別とは無関係であるように見えた。３日に１回のＡＬＰ２０１の皮下投与後、０日目及び２４日目におけるＡＬＰ２０１のＣｍａｘ及びＡＵＣ０－７２ｈ値は、ほぼ用量比で用量の増加に伴い増加した。ＡＬＰ２０１の全身曝露量（ＡＵＣ０－７２ｈ値）は、２４日目のＡＬＰ２０１の反復皮下投与後、増加するように見えた。
【0119】
反復投与試験における薬物動態、薬力学的動態、及び免疫原性
２８日間の回復期間を伴うラットでの２８日間毒性試験
雄及び雌ラットで、ＡＬＰ２０１のＴＫ／ＡＤＡを、３日に１回で４週間（合計１０回の投与）の２、１０、または３０ｍｇ／ｋｇのＳＣ投与（１０／性別／投与群、５／性別／時点）、及び１０ｍｇ／ｋｇの単回ＩＶ投与（合計１回の投与）後に評価した。ＴＫ分析用の血液サンプルを０日目及び２４日目に開始して７２時間にわたって全ての動物から採取した。ＡＬＰ２０１のＰＫパラメータの概要を表１６に示す。
２８日間の回復期間を伴うラットでの２８日間毒性試験
雄及び雌ラットで、ＡＬＰ２０１のＴＫ／ＡＤＡを、３日に１回で４週間（合計１０回の投与）の２、１０、または３０ｍｇ／ｋｇのＳＣ投与（１０／性別／投与群、５／性別／時点）、及び１０ｍｇ／ｋｇの単回ＩＶ投与（合計１回の投与）後に評価した。ＴＫ分析用の血液サンプルを０日目及び２４日目に開始して７２時間にわたって全ての動物から採取した。ＡＬＰ２０１のＰＫパラメータの概要を表１６に示す。
【表16】
【0120】
ＡＬＰ２０１の全身曝露量は、ＡＬＰ２０１の反復ＳＣ投与後、及びＡＬＰ２０１の単回ＩＶボーラス注射後、性別とは無関係であるように見えた。したがって、表１６には、プールした性別の結果を含めた。３日に１回（ｑ３ｄ）のＡＬＰ２０１のＳＣ投与後、０日目及び２４日目におけるＡＬＰ２０１曝露量（Ｃｍａｘ及びＡＵＣ７２ｈ）は、用量比よりもわずかに下回る形で用量の増加に伴い増加した。２４日目の全身曝露量（Ｃｍａｘ及びＡＵＣ７２ｈ）は、反復ＳＣ投与後、減少するように見えた。曝露量の減少は用量に依存するように見え、３０ｍｇ／ｋｇのＡＬＰ２０１の反復ＳＣ投与後の最大減少は最大６０％であった。ＡＬＰ２０１の皮下バイオアベイラビリティは、およそ４４．２％であった。
【0121】
ＡＤＡ応答は、全ての投与前サンプルで陰性であった。ＡＤＡの発生率は、Ｄ２８及びＤ５６の投与後ＡＤＡサンプルに対して、それぞれ５８％及び９０％であった。３０ｍｇ／ｋｇの投与の２４日目における曝露量の減少（６０％）は、免疫原性応答によるものであったと考えられる。
【0122】
２８日間の回復期間を伴うサルでの２８日間毒性試験
雄及び雌サルで、ＡＬＰ２０１のＴＫ／ＡＤＡを、３日に１回で４週間（合計１０回の投与）、１、５、または２０ｍｇ／ｋｇでＳＣ投与後（５／性別／投与群）、評価した。ＴＫ分析の血液サンプルを０日目及び２４日目に採取した。ＡＬＰ２０１のＰＫパラメータの記述統計を、表１７に要約する。
雄及び雌サルで、ＡＬＰ２０１のＴＫ／ＡＤＡを、３日に１回で４週間（合計１０回の投与）、１、５、または２０ｍｇ／ｋｇでＳＣ投与後（５／性別／投与群）、評価した。ＴＫ分析の血液サンプルを０日目及び２４日目に採取した。ＡＬＰ２０１のＰＫパラメータの記述統計を、表１７に要約する。
【表17】
【0123】
０日目及び２４日目におけるＡＬＰ２０１の全身曝露量の性差はなかった。したがって、表１７には、プールした性別の結果を含めた。３日に１回のＡＬＰ２０１の皮下投与後、０日目及び２４日目におけるＡＬＰ２０１（Ｃｍａｘ及びＡＵＣ７２ｈ）は、ほぼ用量比で用量の増加に伴い増加した。ＡＬＰ２０１の全身曝露量（ＡＵＣ７２ｈ値）は、２４日目のＡＬＰ２０１の反復皮下投与後、増加するように見え、平均蓄積ＡＵＣ７２ｈ率は、１、５、及び２０ｍｇ／ｋｇで、それぞれ２．１２、１．８３、及び２．１５であった。
【0124】
ＡＤＡ応答は投与前サンプルでは陰性であった。ＡＤＡの発生率は、Ｄ２８及びＤ５６の投与後ＡＤＡサンプルに対して、それぞれ２３％及び９２％であった。反復投与後、ＡＤＡサンプルをＴＫ採取日にサンプル採取しなかったため、陽性ＡＤＡ応答と全身曝露の濃度－時間プロファイルとの間に直接的な相関関係が起こることはなかったが、≦５ｍｇ／ｋｇでの一部の動物における異常な濃度－時間プロファイルは、抗ＡＬＰ２０１抗体による影響を受けたように見えた。
【0125】
モデルベース分析及び予測されるヒト用量レジメン
ＡＬＰ２０１モデリング
母集団薬物動態（Ｐｏｐ－ＰＫ）モデル
マウス用量－応答結果からヒトにおけるＡＬＰ２０１曝露量を予測するために、体重ベースの相対成長スケーリングを使用し、かつマウス、ラット、及びサルＰＫデータをプーリングして、ヒトＰＫパラメータ推定を予測するＰｏｐ－ＰＫモデルを開発した。マウスＰＫデータには、単回投与野生型マウス試験（ＨＰＰ－ＰＫ－０１）及び２回の反復投与Ａｋｐ２ＧＷ（－／－）マウス有効性試験（ＨＰＰ－ＰｏＣ－０１及びＨＰＰ－ＭＥＤ－０１）による単一のＣトラフ測定値（Ｄ３６／Ｄ３７）を含めた。ラット及びサルについては、単回投与、ラット及びカニクイザルでの用量範囲決定試験、ならびにラット及びカニクイザルでの反復投与による４週間のＧＬＰ毒性試験も含めた。
ＡＬＰ２０１モデリング
母集団薬物動態（Ｐｏｐ－ＰＫ）モデル
マウス用量－応答結果からヒトにおけるＡＬＰ２０１曝露量を予測するために、体重ベースの相対成長スケーリングを使用し、かつマウス、ラット、及びサルＰＫデータをプーリングして、ヒトＰＫパラメータ推定を予測するＰｏｐ－ＰＫモデルを開発した。マウスＰＫデータには、単回投与野生型マウス試験（ＨＰＰ－ＰＫ－０１）及び２回の反復投与Ａｋｐ２ＧＷ（－／－）マウス有効性試験（ＨＰＰ－ＰｏＣ－０１及びＨＰＰ－ＭＥＤ－０１）による単一のＣトラフ測定値（Ｄ３６／Ｄ３７）を含めた。ラット及びサルについては、単回投与、ラット及びカニクイザルでの用量範囲決定試験、ならびにラット及びカニクイザルでの反復投与による４週間のＧＬＰ毒性試験も含めた。
【0126】
相対成長原理を用いて体重差を考慮して、３種の動物種からＩＶ及びＳＣのＰＫデータを同時に分析するＮＯＮＭＥＭソフトウエアプログラム、バージョン７．２（ＩＣＯＮ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）を使用して、現在のＰｏｐ－ＰＫモデルを開発した。ここで、動物の体重は、７０ｋｇを中心とし、相対成長指数は、クリアランスパラメータに対しては０．７５、分布容積パラメータに対しては、１．０に固定した。ＰＫに対するＡＤＡの影響を、４週間のＴＫに基づいてＣＬで評価し、ラット、及び程度は低いがサルでは、ＡＤＡ＋動物のＡＬＰ２０１濃度が低下するように見えた。現在の最良のＰｏｐ－ＰＫモデルは、線形性の消失を伴う２コンパートメントモデルである。ＡＬＰ２０１濃度に対するＡＤＡ＋の影響のテストは不確定であった。ヒトにおける推定バイオアベイラビリティは、約７５％であり、ヒトに対して計算した有効半減期は、７～９日であった。ヒトＰＫシミュレーションでは、ヒトアスホターゼアルファＰｏｐ－ＰＫモデルから推定した変動性、及びＨＰＰに対する治療法としてアスホターゼアルファを評価する臨床試験に参加したＨＰＰ患者の平均（及び標準偏差）成人ベースライン体重を使用した。
【0127】
用量－応答モデル
Ｅｍａｘファミリーのモデルをテストすることによって、開発用量－応答モデルを選択した。ほとんどの用量－応答関係は、Ｅｍａｘモデルパラメータ化の１つによって説明することができる。現在の最良の用量－応答特性評価は、Ｅｍａｘ＋Ｅ０（ベースライン）モデルを使用するものである。有効性評価項目である骨石灰化は、Ｘ線撮影による評価であり、これは、非臨床用量－応答評価で使用されるアスホターゼアルファの有効性の臨床的定義と同じであるため、選択した。２つの有効性試験（ＨＰＰ－ＰｏＣ－０１及びＨＰＰ－ＭＥＤ－０１）に基づくアスホターゼアルファまたはＡＬＰ２０１による治療後の骨石灰化を、用量に対してプロットした（図６）。以前の有効性試験からのアスホターゼアルファデータを、比較のために含めた。ｙ軸は、骨石灰化スコアが４の投与群におけるマウスの割合として定義された正常値％を表している。ｘ軸は、ｍｇ／ｋｇ／日に正規化した用量を表している。治療済み母集団（ＥＤ８５）の８５％に正常な石灰化をもたらす用量を、目標有効用量として選択した。
Ｅｍａｘファミリーのモデルをテストすることによって、開発用量－応答モデルを選択した。ほとんどの用量－応答関係は、Ｅｍａｘモデルパラメータ化の１つによって説明することができる。現在の最良の用量－応答特性評価は、Ｅｍａｘ＋Ｅ０（ベースライン）モデルを使用するものである。有効性評価項目である骨石灰化は、Ｘ線撮影による評価であり、これは、非臨床用量－応答評価で使用されるアスホターゼアルファの有効性の臨床的定義と同じであるため、選択した。２つの有効性試験（ＨＰＰ－ＰｏＣ－０１及びＨＰＰ－ＭＥＤ－０１）に基づくアスホターゼアルファまたはＡＬＰ２０１による治療後の骨石灰化を、用量に対してプロットした（図６）。以前の有効性試験からのアスホターゼアルファデータを、比較のために含めた。ｙ軸は、骨石灰化スコアが４の投与群におけるマウスの割合として定義された正常値％を表している。ｘ軸は、ｍｇ／ｋｇ／日に正規化した用量を表している。治療済み母集団（ＥＤ８５）の８５％に正常な石灰化をもたらす用量を、目標有効用量として選択した。
【0128】
マウスからヒトへの用量換算及びヒトの開始用量の提案
相対成長スケーリングをマウスの目標有効用量（ＥＤ８５）に適用して、ヒトへの用量を決定した。マウスＥＤ８５からヒト等価用量（ＨＥＤ、ｍｇ／ｋｇ／日）を予測するために使用した式は、ＥＤ８５×（０．０２５ｋｇマウス／７０ｋｇヒト）０．２５であった。ＨＥＤを換算すると、４５ｍｇ／週の毎週の一定用量であった。これを、ＦＩＨ試験コホート２（ＩＶ及びＳＣの両方）に対する用量として使用する。コホート３（ＩＶ及びＳＣ）には、９０ｍｇ／週を使用する。コホート１には、１５ｍｇ／週のＮＯＡＥＬベースの開始用量を（ＩＶ及びＳＣの両方で）使用する。
相対成長スケーリングをマウスの目標有効用量（ＥＤ８５）に適用して、ヒトへの用量を決定した。マウスＥＤ８５からヒト等価用量（ＨＥＤ、ｍｇ／ｋｇ／日）を予測するために使用した式は、ＥＤ８５×（０．０２５ｋｇマウス／７０ｋｇヒト）０．２５であった。ＨＥＤを換算すると、４５ｍｇ／週の毎週の一定用量であった。これを、ＦＩＨ試験コホート２（ＩＶ及びＳＣの両方）に対する用量として使用する。コホート３（ＩＶ及びＳＣ）には、９０ｍｇ／週を使用する。コホート１には、１５ｍｇ／週のＮＯＡＥＬベースの開始用量を（ＩＶ及びＳＣの両方で）使用する。
【0129】
ＡＬＰ２０１の予測ヒト曝露量及びＰＫ安全域
Ｐｏｐ－ＰＫモデルを使用して、ヒトに対して、相対成長に基づいて調整した用量に基づいて詳細なＰＫプロファイルをシミュレートした（図７）。シミュレートしたＰＫデータを使用して、曝露量測定基準Ｃｍａｘ及びＡＵＣを計算した。
Ｐｏｐ－ＰＫモデルを使用して、ヒトに対して、相対成長に基づいて調整した用量に基づいて詳細なＰＫプロファイルをシミュレートした（図７）。シミュレートしたＰＫデータを使用して、曝露量測定基準Ｃｍａｘ及びＡＵＣを計算した。
【0130】
提案するＦＩＨ ＡＬＰ２０１用量に対する予測ヒト曝露量（Ｃｍａｘ及びＡＵＣ１６８ｈ）及び予想ＰＫ安全域を表１８に示す。提案するＦＩＨ ＡＬＰ２０１用量に対するＰＫ安全域は、予測ヒト曝露量及び４週間のＧＬＰサル毒性試験からの観察ＮＯＡＥＬ曝露量（２０ｍｇ／ｋｇ／Ｑ３ＤのＳＣ投与でのＮＯＡＥＬ用量）を使用して計算した。
【表18】
【0131】
毒性試験
非臨床安全性試験をラット及びサルで実施して、最大２８日間にわたるＡＬＰ２０１のＳＣ投与後の、局所忍容性、全身毒性、及び安全性薬理パラメータを評価した。また、ＳＣ ＡＬＰ２０１のバイオアベイラビリティの特性を明らかにするために、ＡＬＰ２０１の単回投与ＩＶ投与の非臨床安全性評価もラットの２８日間毒性試験で評価した。
非臨床安全性試験をラット及びサルで実施して、最大２８日間にわたるＡＬＰ２０１のＳＣ投与後の、局所忍容性、全身毒性、及び安全性薬理パラメータを評価した。また、ＳＣ ＡＬＰ２０１のバイオアベイラビリティの特性を明らかにするために、ＡＬＰ２０１の単回投与ＩＶ投与の非臨床安全性評価もラットの２８日間毒性試験で評価した。
【0132】
単回投与毒性試験
ＡＬＰ２０１に対する独立した単回投与忍容性試験は実施しなかった。しかし、ラット及びサルにおけるＡＬＰ２０１忍容性を、単回投与ＰＫ試験の一部として評価した。ＡＬＰ２０１の忍容性を、注射部位反応及び臨床病理学データを含む臨床観察によって評価した。ラットまたはサル単回投与ＰＫ試験では、注目すべきＡＬＰ２０１に関連する注射部位反応、臨床観察結果、及び臨床病理学的観察結果は見られなかった。要約すると、ＡＬＰ２０１の単回投与は、ラットに最大２７ｍｇ／ｋｇ、及びサルに最大２０ｍｇ／ｋｇをＩＶまたはＳＣを介して投与した場合、忍容性が良好であった。ＡＬＰ２０１反復用量確定（ＧＬＰ）毒性試験の用量を、得られた忍容性及び臨床病理学データに基づいて選択した。
ＡＬＰ２０１に対する独立した単回投与忍容性試験は実施しなかった。しかし、ラット及びサルにおけるＡＬＰ２０１忍容性を、単回投与ＰＫ試験の一部として評価した。ＡＬＰ２０１の忍容性を、注射部位反応及び臨床病理学データを含む臨床観察によって評価した。ラットまたはサル単回投与ＰＫ試験では、注目すべきＡＬＰ２０１に関連する注射部位反応、臨床観察結果、及び臨床病理学的観察結果は見られなかった。要約すると、ＡＬＰ２０１の単回投与は、ラットに最大２７ｍｇ／ｋｇ、及びサルに最大２０ｍｇ／ｋｇをＩＶまたはＳＣを介して投与した場合、忍容性が良好であった。ＡＬＰ２０１反復用量確定（ＧＬＰ）毒性試験の用量を、得られた忍容性及び臨床病理学データに基づいて選択した。
【0133】
反復投与毒性試験
確定的またはＧＬＰに準拠した２８日間毒性試験を、Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラット及びカニクイザルで実施した。ラットの２８日間毒性試験では、雄及び雌ＣＤ（登録商標）ラットへの３日に１回２８日間（１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、及び２８日目）合計１０回の投与の皮下注射を介したＡＬＰ２０１の投与は、本試験で評価した最高ＳＣ用量である３０ｍｇ／ｋｇ／用量まで忍容性が良好であった。加えて、１０ｍｇ／ｋｇのＡＬＰ２０１のＩＶ投与もまた、単回注射後、忍容性が良好であった。臨床観察、体重、体重増加量、定量的食物摂取量、眼科的検査、機能観察総合評価、血液学的検査、尿検査、肉眼所見、及び臓器重量においてＡＬＰ２０１に関連する変化は見られなかった。投与段階の終了時に、≧２ｍｇ／ｋｇ／用量のＡＬＰ２０１のＳＣで、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性に用量関連増加（予想薬理学効果）が見られたが、２８日間の回復期間後、完全に回復した。非有害な微視的変化は、流入領域リンパ節の反応性変化を伴う注射治療に関連するものであった。注射部位または流入領域リンパ節で、発症率、重症度、または変化の微視的特徴の認識可能なＡＬＰ２０１に関連する変化は見られなかった。回復群の動物ではそれほど顕著ではなかったが、回復動物の注射部位及び流入領域リンパ節の微視的変化は、終末時剖検動物で示されたものと類似していた。結論として、皮下投与では、３０ｍｇ／ｋｇ／用量の用量レベルが、無毒性量（ＮＯＡＥＬ）であると考えられ、これは、２４日目の雄及び雌を組み合わせた、４３．９μｇ／ｍＬのＣｍａｘ値、及び２１２０ｈｒ＊μｇ／ｍＬのＡＵＣ０－７２ｈｒ値に相当する。
確定的またはＧＬＰに準拠した２８日間毒性試験を、Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラット及びカニクイザルで実施した。ラットの２８日間毒性試験では、雄及び雌ＣＤ（登録商標）ラットへの３日に１回２８日間（１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、及び２８日目）合計１０回の投与の皮下注射を介したＡＬＰ２０１の投与は、本試験で評価した最高ＳＣ用量である３０ｍｇ／ｋｇ／用量まで忍容性が良好であった。加えて、１０ｍｇ／ｋｇのＡＬＰ２０１のＩＶ投与もまた、単回注射後、忍容性が良好であった。臨床観察、体重、体重増加量、定量的食物摂取量、眼科的検査、機能観察総合評価、血液学的検査、尿検査、肉眼所見、及び臓器重量においてＡＬＰ２０１に関連する変化は見られなかった。投与段階の終了時に、≧２ｍｇ／ｋｇ／用量のＡＬＰ２０１のＳＣで、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性に用量関連増加（予想薬理学効果）が見られたが、２８日間の回復期間後、完全に回復した。非有害な微視的変化は、流入領域リンパ節の反応性変化を伴う注射治療に関連するものであった。注射部位または流入領域リンパ節で、発症率、重症度、または変化の微視的特徴の認識可能なＡＬＰ２０１に関連する変化は見られなかった。回復群の動物ではそれほど顕著ではなかったが、回復動物の注射部位及び流入領域リンパ節の微視的変化は、終末時剖検動物で示されたものと類似していた。結論として、皮下投与では、３０ｍｇ／ｋｇ／用量の用量レベルが、無毒性量（ＮＯＡＥＬ）であると考えられ、これは、２４日目の雄及び雌を組み合わせた、４３．９μｇ／ｍＬのＣｍａｘ値、及び２１２０ｈｒ＊μｇ／ｍＬのＡＵＣ０－７２ｈｒ値に相当する。
【0134】
ラットへの１０ｍｇ／ｋｇのＡＬＰ２－１の単回ＩＶボーラス注射後、ＡＵＣ０－７２ｈｒは、３６９０ｈ＊μｇ／ｍＬであった。ラットにおけるＡＬＰ２０１のＳＣバイオアベイラビリティ（１０ｍｇ／ｋｇ／用量でのＳＣのＡＵＣ０－７２ｈｒ値に基づく）は、およそ４４．２％であった。
【0135】
サルの２８日間毒性試験では、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇの用量での雄及び雌カニクイザルへの３日に１回２８日間（１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、及び２８日目、合計１０回）のＳＣ注射を介したＡＬＰ２０１の投与は、本試験で評価した最高用量である２０ｍｇ／ｋｇ／用量まで忍容性が良好であった。注射部位反応（皮膚スコアリング）、体重、体重増加量、定性的食物摂取、眼科的検査、用手呼吸率、間接血圧、定性的心電図検査、血液学的検査、尿検査、肉眼所見、及び臓器重量においてＡＬＰ２０１に関連する変化は見られなかった。投与段階の終了時に、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性に用量関連増加（予想薬理学効果）が見られたが、２８日間の回復期間後、完全に（１ｍｇ／ｋｇ／用量の場合）、またはほぼ（≧５ｍｇ／ｋｇ／用量の場合）回復した。非有害なＡＬＰ２０１に関連する微視的変化は、注射部位に限られ、軽微ないし軽度の変性／壊死、石灰化、及び混合細胞炎症／浸潤が見られた。注射部位（複数可）の変性／壊死の部分的な回復及び混合細胞炎症／浸潤が、回復群で観察されたが、軽微ないし軽度の石灰化が、回復雄では≧１ｍｇ／ｋｇ／用量で、かつ雌では２０ｍｇ／ｋｇ／用量で見られた。全ての動物で１ｍｇ／ｋｇ／用量で、かつ一部の動物では≧５ｍｇ／ｋｇ／用量で心拍数の増加が観察された。これらの心拍数の増加は、全身曝露量データの不一致に加え、心拍数及びＥＣＧ値がこの年齢のサルの生物学的変動の正常範囲内に留まっていたため、有害ではないと考えられる。結論として、２０ｍｇ／ｋｇ／用量の用量レベルが、無毒性量（ＮＯＡＥＬ）であると考えられ、これは、２４日目の雄及び雌を組み合わせた、それぞれ、２５４μｇ／ｍＬのＣｍａｘ値、及び１５４００ｈｒ＊μｇ／ｍＬの平均ＡＵＣ０－７２ｈｒ値に相当する。
【0136】
局所忍容性試験
局所忍容性を評価するために、独立した非臨床試験は実施しなかった。ただし、注射部位の評価は、ラット及びサルの一般毒性試験でのＳＣ ＡＬＰ２０１、及びラットの一般毒性試験でのＩＶ ＡＬＰ２０１で実施した。ＡＬＰ２０１の皮下及びＩＶ投与では、注射部位で観察される有害な所見は見られず、サルでは局所的に忍容性が良好であった。
局所忍容性を評価するために、独立した非臨床試験は実施しなかった。ただし、注射部位の評価は、ラット及びサルの一般毒性試験でのＳＣ ＡＬＰ２０１、及びラットの一般毒性試験でのＩＶ ＡＬＰ２０１で実施した。ＡＬＰ２０１の皮下及びＩＶ投与では、注射部位で観察される有害な所見は見られず、サルでは局所的に忍容性が良好であった。
【0137】
ＡＬＰ２０１の臨床試験に関連する非臨床観察結果の概要
安全性評価
臨床観察、体重、体重増加量、定量的食物摂取量、眼科的検査、機能観察総合評価（ＣＮＳ）観察結果、心臓血管評価項目、呼吸器評価項目、血液学的検査、尿検査、肉眼所見、及び臓器重量２８日間毒性試験においてＡＬＰ２０１に関連する変化は見られなかった。投与段階の終了時に、ラットまたはサルで、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性に、予想薬理学効果である有意な用量関連増加が見られた。対応する試験で評価したいずれの用量においても、ラットまたはサルで、注目すべき全身臓器毒性は観察されなかった。
安全性評価
臨床観察、体重、体重増加量、定量的食物摂取量、眼科的検査、機能観察総合評価（ＣＮＳ）観察結果、心臓血管評価項目、呼吸器評価項目、血液学的検査、尿検査、肉眼所見、及び臓器重量２８日間毒性試験においてＡＬＰ２０１に関連する変化は見られなかった。投与段階の終了時に、ラットまたはサルで、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性に、予想薬理学効果である有意な用量関連増加が見られた。対応する試験で評価したいずれの用量においても、ラットまたはサルで、注目すべき全身臓器毒性は観察されなかった。
【0138】
ラット及びサルへのＳＣ投与後、ＡＬＰ２０１は、局所的に忍容性が良好であった。サル試験における非有害なＡＬＰ２０１に関連する微視的変化は、注射部位に限られ、雄及び雌で軽微ないし軽度の変性／壊死が見られた。注射部位（複数可）の変性／壊死及び混合細胞炎症／浸潤は、回復群では発症率及び重症度が低かったか、慢性化（石灰化）の特徴があり、部分的な回復を示した。ラット試験における非有害な微視的変化は、流入領域リンパ節の反応性変化を伴う注射治療に限ったものであった。注射部位または流入領域リンパ節で、発症率、重症度、または変化の微視的特徴の認識可能なＡＬＰ２０１に関連する変化は見られなかった。回復群の動物ではそれほど顕著ではなかったが、回復動物の注射部位及び流入領域リンパ節の微視的変化は、終末時剖検動物で示されたものと類似していた。
【0139】
ＧＬＰ ＳＣサル毒性試験に基づく２０ｍｇ／ｋｇ／用量でのＮＯＡＥＬの観察された曝露量は、１５ｍｇのＩＶの提案したヒト開始単回投与または１５ｍｇのｑｗ×３ＳＣの予測ＡＵＣ曝露量よりもおよそ１１３倍（ＩＶの場合）、及び８３倍（ＳＣの場合）高かった（表１８）。ＡＬＰ２０１を用いた２８日間ラット及びサル毒性試験での、安全域、及び全身毒性の欠如、もしくは局所忍容性所見を考えると、１５ｍｇの開始用量に対するヒトへの安全性リスクは非常に低いものである。
【0140】
免疫原性
ＡＬＰ２０１の免疫原性の可能性を、ＧＬＰラット及びサルの２８日間毒性試験から採取した血清におけるＡＬＰ２０１抗薬物抗体（ＡＤＡ）を測定することによって評価した。
ＡＬＰ２０１の免疫原性の可能性を、ＧＬＰラット及びサルの２８日間毒性試験から採取した血清におけるＡＬＰ２０１抗薬物抗体（ＡＤＡ）を測定することによって評価した。
【0141】
ラット毒性試験において、ＰＫ２８日目に、対照群の動物２０匹中９匹（雄６匹、雌３匹）、２ｍｇ／ｋｇ／用量での動物１９匹中１０匹（雄６匹、雌４匹）、１０ｍｇ／ｋｇ／用量での動物２０匹中１２匹（雄７匹、雌５匹）、３０ｍｇ／ｋｇ／用量での動物２０匹中１２匹（雄６匹、雌６匹）で、ＳＣ投与によるＡＤＡ応答が陽性であった。さらに、ＰＫ２８日目に、動物２０匹中１４匹（雄８匹；雌６匹）において、１０ｍｇ／ｋｇの単回投与ＩＶ ＡＬＰ２０１投与で、ＡＤＡ応答が陽性であった。２４日目の３０ｍｇ／ｋｇ／用量の全身曝露量の明らかな減少にＡＤＡが寄与した可能性があるが、陽性ＡＤＡ応答は、２４日目に、２及び１０ｍｇ／ｋｇ／用量ＳＣ投与群の複合血漿中濃度－時間プロファイルに一貫して影響を与えないように見えた。実施した調査によれば、対照動物での陽性ＡＤＡ応答は、ＡＬＰ２０１の誤用量が原因である可能性は低い。ＡＬＰ２０１の予想薬理学的効果であるＡＬＰの用量依存的な増加が、終末時剖検前に≧２ｍｇ／ｋｇＳＣ投与群で観察されたが、これは回復期剖検時に回復した。対照群の動物のＡＬＰ結果は、終末時剖検前及び回復期剖検前の両方で類似していた。さらに、投与及び回復段階でのＡＬＰ２０１に関連する生存中の所見はなかった。したがって、総合すると、ＰＫ２８及び５６日目（試験日の２９日目及び５７日目）に対照動物で観察されたＡＤＡ陽性応答は、主に採血時の汚染が原因である可能性が高く、試験に影響を与ないと考えられる。
【0142】
サルの毒性試験では、抗ＡＬＰ２０１抗体応答は、０日目の全ての投与前サンプルで陰性であった。ＡＤＡ応答は、２８日目に、１ｍｇ／ｋｇ／用量での動物１０匹中４匹、５ｍｇ／ｋｇ／用量での動物１０匹中６匹、及び２０ｍｇ／ｋｇ／用量での動物１０匹中５匹で陽性であった。反復投与後、ＡＤＡサンプルをＴＫ採取日にサンプル採取しなかったため、陽性ＡＤＡ応答と全身曝露の濃度－時間プロファイルとの間に直接的な相関関係が起こることはなかったが、≦５ｍｇ／ｋｇでの一部の動物の濃度－時間プロファイルは、抗ＡＬＰ２０１抗体による影響を受けたように見えた。抗ＡＬＰ２０１抗体によって影響を受けた動物は、１ｍｇ／ｋｇ／用量で動物３匹（雄２匹及び雌１匹）、及び５ｍｇ／ｋｇ／用量で動物３匹（雌３匹）であり、これらの動物に関して、濃度－時間プロファイルに影響を与えた日は、１８日目～の２４日目の範囲であった。
【0143】
実施例２
複数の種におけるアスホターゼアルファの薬物動態プロファイルは、絶対バイオアベイラビリティ及び半減期の低下の組み合わせにより、頻繁な投与が必要であることを示唆している。ヒトＴＮＳＡＬＰの触媒ドメインは、高度にグリコシル化した分子である。非シアル化グリカンの存在により、肝臓でアシアロ糖タンパク受容体（ＡＳＧＰＲ）を介したクリアランスが起こる。
複数の種におけるアスホターゼアルファの薬物動態プロファイルは、絶対バイオアベイラビリティ及び半減期の低下の組み合わせにより、頻繁な投与が必要であることを示唆している。ヒトＴＮＳＡＬＰの触媒ドメインは、高度にグリコシル化した分子である。非シアル化グリカンの存在により、肝臓でアシアロ糖タンパク受容体（ＡＳＧＰＲ）を介したクリアランスが起こる。
【0144】
これらの考慮事項を念頭に置いて、ＡＬＰ２０１を次世代アルカリホスファターゼＥＲＴとして開発した。ＡＬＰ２０１は、アスホターゼアルファで使用されているＴＮＳＡＬＰ－ＩｇＧ－Ｆｃ－Ｄ１０構造を保持し、かつ２つの非必須のＮ結合型グリカンの除去、ヒトＦｃアイソタイプのＩｇＧ２／４への変更、及び分子の発現における多数のプロセスの改善を組み込んでおり、それにより、より高いＴＳＡＣの取り込み量がもたらされる。この報告では、静脈内及び皮下投与による雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスの単回投与試験で判定したＡＬＰ２０１の薬物動態パラメータを提示する。また、どのＰＫパラメータが非シアル化グリカンのクリアランスによって最も強く影響を受けたかを決定するのを助けるために、様々なレベルのＴＳＡＣの取り込み量で発現させて、精製したＡＬＰ２０１の複数のロットのＰＫパラメータについても報告する。
【0145】
材料及び方法
動物系統
これらの試験と、アスホターゼアルファに対して実施した以前の薬物動態試験との一貫性を維持するために、本試験は、投与時に約１１～１２週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスを使用して実施した。テスト分子の情報を表１９に示す。
動物系統
これらの試験と、アスホターゼアルファに対して実施した以前の薬物動態試験との一貫性を維持するために、本試験は、投与時に約１１～１２週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスを使用して実施した。テスト分子の情報を表１９に示す。
【表19】
【0146】
動物への投与及び血液サンプル採取
１１～１２週齢の動物を、体重によってランダム化し、４つの群に割り当てた。ＡＬＰ２０１の４ｍｇ／ｋｇの用量を、０日目に静脈内送達（ＩＶ）（群１）または皮下（ＳＣ）（群２）によって１６匹のマウス／群に投与した。当量調整した容積のＰＢＳを、０日目に、ＩＶ（群３）またはＳＣ（群４）によって４匹のマウス／群に投与した。尾静脈を介してＩＶ投与を行った。肩上部の肩甲部にＳＣボーラス投与を行った。
１１～１２週齢の動物を、体重によってランダム化し、４つの群に割り当てた。ＡＬＰ２０１の４ｍｇ／ｋｇの用量を、０日目に静脈内送達（ＩＶ）（群１）または皮下（ＳＣ）（群２）によって１６匹のマウス／群に投与した。当量調整した容積のＰＢＳを、０日目に、ＩＶ（群３）またはＳＣ（群４）によって４匹のマウス／群に投与した。尾静脈を介してＩＶ投与を行った。肩上部の肩甲部にＳＣボーラス投与を行った。
【0147】
グループごとに４つのコホート、コホートごとにｎ＝４、さらに群ごとに１匹の追加のマウスの半連続サンプル採取デザインを使用した。Ａｌｅｘｉｏｎで行った試験では、マウスごとに終末時採血を含めて３回採血した。コホートごとの時点（投与後時間）を表２０に示す。
【0148】
非終末時採血の場合、１００ｍＬの全血を顎下採取によって、事前にコーティングされたリチウムヘパリン加チューブに採取して、各動物で各時点に少なくとも５０μＬの血漿を採取した。終末時採血時に、心臓穿刺して可能な限りなるべく多くの血液をリチウムヘパリン加採取チューブに採取した。血液を４℃に維持し、採取後、可能な限り早く遠心分離によって血漿を処理した。各血漿サンプルを、２つの等容積アリコートに分け、その後、ＣＯ２／エタノール中で急速冷凍し、－８０℃で保存した。
【表20】
【表21】
【表22】
【0149】
ロット２、３、及び４では、３２匹のマウスの群を、投与経路ごとに４匹の動物／時点の８つのコホートにした。ＩＶ投与群では、投与後およそ０．５、１、３、８、１２、２１、２６、３２、４５、４９、７２、９６、１２０、１９２、２６４、及び３３６時間で、各コホートから２回採血した（初回の時点は生存採取、２回目は終末時）。ＳＣ投与群では、投与後およそ１、３、６、８、１２、２１、２６、３２、４５、４９、７２、９６、１２０、１９２、２６４、及び３３６時間で、各コホートから２回採血した（初回は生存採取、２回目は終末時）。
【0150】
血漿中の活性ＡＬＰ２０１濃度の決定
人工基質であるリン酸４－メチルウンベリフェリル（４－ＭＵＰ）を使用してアルカリホスファターゼ活性に関して血漿サンプルをアッセイした。４－ＭＵＰのリン酸エステル結合の加水分解により、蛍光光度計で容易に検出できる蛍光性化合物４－メチルウンベリフェロン（４－ＭＵ）が放出される。酵素活性標準曲線を介して活性の定量化を行った。
人工基質であるリン酸４－メチルウンベリフェリル（４－ＭＵＰ）を使用してアルカリホスファターゼ活性に関して血漿サンプルをアッセイした。４－ＭＵＰのリン酸エステル結合の加水分解により、蛍光光度計で容易に検出できる蛍光性化合物４－メチルウンベリフェロン（４－ＭＵ）が放出される。酵素活性標準曲線を介して活性の定量化を行った。
【0151】
社内ＰＫ試験のサンプル分析
４－ＭＵＰアッセイにおいて同じプレート上での活性が既知のアスホターゼアルファタンパク質参照標準の階段希釈を用いて作成した酵素活性標準曲線を介して活性の定量化を行った。解凍した血漿サンプルをアッセイ緩衝液（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４、及び１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ）中に１００倍～２，０００倍に希釈して、アッセイし、活性ＡＬＰ２０１酵素濃度を決定した。各プレートの最終タンパク質標準範囲は、４～８０ｎｇ／ｍＬであった。
４－ＭＵＰアッセイにおいて同じプレート上での活性が既知のアスホターゼアルファタンパク質参照標準の階段希釈を用いて作成した酵素活性標準曲線を介して活性の定量化を行った。解凍した血漿サンプルをアッセイ緩衝液（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４、及び１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ）中に１００倍～２，０００倍に希釈して、アッセイし、活性ＡＬＰ２０１酵素濃度を決定した。各プレートの最終タンパク質標準範囲は、４～８０ｎｇ／ｍＬであった。
【0152】
希釈したサンプルを以下のように定量化した。４－ＭＵＰをタンパク質サンプルに加えることによって希釈した全てのサンプルをアッセイの反応開始前に３７℃にし、最終濃度、１０ｍＭ ４－ＭＵＰを得た。３６０ｎｍの励起波長及び４６５ｎｍの発光波長で４－ＭＵの生成を測定した。３７℃で維持したプレートリーダーでデータを収集した。この際、４０秒ごと合計２０分間プレートを読み取った。血漿及び標準サンプルの反応速度を、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌを用いて、１分あたりの相対蛍光単位（ＲＦＵ）の単位で反応勾配の線形回帰によって計算した。標準サンプルの反応速度を使用して、ＲＦＵ／分／Ｕの単位で線形標準曲線を作成した。血漿サンプルで測定した反応速度の比較を、標準曲線と比較して、Ｕ／ｍＬでＡＬＰ２０１の血漿中活性を決定した。単位／ｍＬのサンプル活性を、サンプル活性をテストしたタンパク質サンプルの特異的活性（単位Ｕ／ｍｇ）で割ることによってｍｇ／Ｌの質量単位に換算した。独立したサンプル採取ポイントごとにデータをまとめるために、サンプルを２つ組で２回実行した。
【0153】
ＰＫ試験のサンプル分析
同じ４－ＭＵＰ加水分解アッセイを実施した。アッセイ当日、標準物質、品質対照（ＱＣ）、希釈対照（ＤＣ）、及びブランクをアッセイ緩衝液で２５０倍に希釈した。さらに、標準物質、ＱＣ、ＤＣ、及びブランクを、合計５００倍の最小必要希釈（ＭＲＤ）となるように、基質であるリン酸４－メチルウンベリフェリル（４－ＭＵＰ）で２倍に希釈した。ＭＲＤを実施する前に、ＤＣをマウス血漿で２００倍に希釈した。アッセイで使用した４－ＭＵＰ基質の加水分解からもたらされる蛍光生成物メチルウンベリフェロンに基づいてＡＬＰ２０１を定量化した。プレートをプレートリーダーに置き、３７℃で２５分間、３６０ｎｍ（励起）、４５５ｎｍ（カットオフ）、及び４６５ｎｍ（発光）の動力学的蛍光設定で６０秒に１回読み取りを行った。酵素活性は、基質反応速度と直接的に比例していた。データを通して最も適合する直線から、Ｖｍａｘ（蛍光強度／ｍｉｎの速度）を決定した。ブランクは曲線適合に含めなかった。結果はｍｇ／Ｌで報告した。値を、被験物質とタンパク質活性標準物質との間の特異的活性の差について補正した。
同じ４－ＭＵＰ加水分解アッセイを実施した。アッセイ当日、標準物質、品質対照（ＱＣ）、希釈対照（ＤＣ）、及びブランクをアッセイ緩衝液で２５０倍に希釈した。さらに、標準物質、ＱＣ、ＤＣ、及びブランクを、合計５００倍の最小必要希釈（ＭＲＤ）となるように、基質であるリン酸４－メチルウンベリフェリル（４－ＭＵＰ）で２倍に希釈した。ＭＲＤを実施する前に、ＤＣをマウス血漿で２００倍に希釈した。アッセイで使用した４－ＭＵＰ基質の加水分解からもたらされる蛍光生成物メチルウンベリフェロンに基づいてＡＬＰ２０１を定量化した。プレートをプレートリーダーに置き、３７℃で２５分間、３６０ｎｍ（励起）、４５５ｎｍ（カットオフ）、及び４６５ｎｍ（発光）の動力学的蛍光設定で６０秒に１回読み取りを行った。酵素活性は、基質反応速度と直接的に比例していた。データを通して最も適合する直線から、Ｖｍａｘ（蛍光強度／ｍｉｎの速度）を決定した。ブランクは曲線適合に含めなかった。結果はｍｇ／Ｌで報告した。値を、被験物質とタンパク質活性標準物質との間の特異的活性の差について補正した。
【0154】
薬物動態分析
Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ ｖ８．０（Ｃｅｒｔａｒａ）を使用してＰＫ分析を実施した。ノンコンパートメント解析を使用して薬物動態パラメータを計算した。
Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ ｖ８．０（Ｃｅｒｔａｒａ）を使用してＰＫ分析を実施した。ノンコンパートメント解析を使用して薬物動態パラメータを計算した。
【0155】
以下のノンコンパートメントＰＫパラメータを計算した。時間０（投与）から最終検出可能濃度までの濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣｔ）、時間０（投与）から最終検出可能濃度までの用量正規化した濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣｔ／用量）、時間０（投与）か無限まで外挿した濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣｉｎｆ）、時間０（投与）か無限まで外挿した用量正規化した濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣｉｎｆ／用量）、観察された最高血漿中濃度（Ｃｍａｘ）、用量正規化した観察された最高血漿中濃度（Ｃｍａｘ／用量）、観察された最高血漿中濃度の時間（Ｔｍａｘ）、終末期消失半減期（ｔ１／２）、総クリアランス（ＣＬ）、見かけの分布容積（Ｖｄ）、及びバイオアベイラビリティ（Ｆ）。実際のサンプル収集時間を使用して、ＰＫパラメータを計算した。実際の用量を使用して、用量正規化したＰＫパラメータを計算した。
【0156】
結果及び考察
マウスにおけるＩＶ及びＳＣ投与後のＡＬＰ２０１の薬物動態パラメータ
雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスへの単回ＩＶまたはＳＣ投与後、ＡＬＰ２０１のＰＫを評価した。群あたり１６匹のマウスに投与し、かつ群あたり４匹のマウスに細分類したコホートから、投与後０．２５、１、６、２４、４８、７２、９６、１２０、１９２、２６４、３３６、及び４８０時間の時点で血液を採取した。
マウスにおけるＩＶ及びＳＣ投与後のＡＬＰ２０１の薬物動態パラメータ
雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスへの単回ＩＶまたはＳＣ投与後、ＡＬＰ２０１のＰＫを評価した。群あたり１６匹のマウスに投与し、かつ群あたり４匹のマウスに細分類したコホートから、投与後０．２５、１、６、２４、４８、７２、９６、１２０、１９２、２６４、３３６、及び４８０時間の時点で血液を採取した。
【0157】
ＡＬＰ２０１のアルカリホスファターゼ触媒活性を測定する酵素活性アッセイを使用して血漿中のＡＬＰ２０１濃度を測定した。次に、ＡＬＰ２０１の酵素活性を報告向けに質量単位（ｍｇ／Ｌ）に換算した。
【0158】
ＩＶ及びＳＣ投与後の平均活性ＡＬＰ２０１血漿中の濃度対時間プロファイルを、図８Ａ及び８Ｂに片対数スケールで提示する。ＡＬＰ２０１のＰＫパラメータの概要は、前述の表７及び１１に示している。
【0159】
ＩＶ群の一部のマウスの個々のマウスの血漿中活性プロファイルは、用量の一部が皮下に送達された可能性があることを示唆していると思われ、これは、ＩＶ投与プロファイルの初期の時点で観察された比較的高い変動の原因である可能性がある。これが起こった場合、ＩＶ投与群に対して計算したＣｍａｘの値もまた、人為的に低くなる可能性がある。ＩＶ投与後、濃度－時間プロファイルは、多次指数関数的に減少した（図８Ａ及び８Ｂ）。ＣＬは、０．００１９Ｌ／ｈ／ｋｇであり、見かけの終末相ｔ１／２は、４８時間であった。ＳＣ投与後、最高濃度に到達するまでの時間（ｔｍａｘ）は、投与後４８時間であった。これは、ＳＣ注射部位からの吸収が比較的遅いことを示唆している。ＳＣ投与後の絶対バイオアベイラビリティは９６％であった。
【0160】
マウスにおける様々な総シアル酸含量値を有するＡＬＰ２０１ロットの薬物動態パラメータ
測定したＴＳＡＣ値、すなわち、タンパク質単量体１ｍｏｌあたり５．９、５．０、及び３．２モルのシアル酸で精製したＡＬＰ２０１の３つの別々のロットを、３２匹のマウスにＩＶ及びＳＣ投与によって投与した。投与群あたり４匹のマウスに細分類したコホートから、ＩＶ投与の場合、投与後０．５、１、３、８、１２、２１、２６、３２、４５、４９、７２、９６、１２０、１９２、２６４、及び３３６時間；及びＳＣ投与の場合、投与後１、３、６、８、１２、２１、２６、３２、４５、４９、７２、９６、１２０、１９２、２６４、及び３３６時間の時点で血液を採取し、この際、各マウスから２回採血した。
測定したＴＳＡＣ値、すなわち、タンパク質単量体１ｍｏｌあたり５．９、５．０、及び３．２モルのシアル酸で精製したＡＬＰ２０１の３つの別々のロットを、３２匹のマウスにＩＶ及びＳＣ投与によって投与した。投与群あたり４匹のマウスに細分類したコホートから、ＩＶ投与の場合、投与後０．５、１、３、８、１２、２１、２６、３２、４５、４９、７２、９６、１２０、１９２、２６４、及び３３６時間；及びＳＣ投与の場合、投与後１、３、６、８、１２、２１、２６、３２、４５、４９、７２、９６、１２０、１９２、２６４、及び３３６時間の時点で血液を採取し、この際、各マウスから２回採血した。
【0161】
ＡＬＰ２０１のアルカリホスファターゼ触媒活性を測定するアッセイを使用して血漿中のＡＬＰ２０１濃度を測定した。ＡＬＰ２０１の酵素活性は、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒによって質量単位（ｍｇ／Ｌ）で報告した。
【0162】
タンパク質ロットごとのＩＶ及びＳＣ投与後の平均活性ＡＬＰ２０１血漿中の濃度対時間プロファイルを、図９Ａ及び９Ｂ、１０Ａ及び１０Ｂ、ならびに１１Ａ及び１１Ｂに片対数スケールで提示する。種々のＴＳＡＣ値でのＩＶ投与の血漿中の濃度対時間プロファイルの収集を図１２に示す。ＳＣ投与の血漿中の濃度対時間プロファイルの収集を図１３に示す。ＩＶ及びＳＣ投与後の平均ＰＫパラメータ及び平均用量正規化したＰＫパラメータの概要を表にしたものは、それぞれ、表２１及び２２で確認することができる。
【表23】
【表24】
【0163】
ＴＳＡＣ値が５．９、５．０、及び３．２ｍｏｌ／ｍｏｌのＡＬＰ２０１タンパク質ロットは、共通Ｎ結合型グリカン部位あたり１．４８、１．２５、及び０．８０モルのシアル酸に相当し、かつ全てのロット（ＩＶ及びＳＣ投与の両方の）のＰＫプロファイルは、形状が類似しており、Ｔｍａｘ及びｔ１／２値も類似していた。
【0164】
ＴＳＡＣ値を増加させると、クリアランスがわずかに減少し、ＩＶ及びＳＣ経路の両方によるＣｍａｘ及びＡＵＣが増加し、かつ分布容積が減少した。これらの変化の全ては、ＴＳＡＣ値が低いほど、未成熟なＮ結合型グリカンのレベルが高くなるという考えと一致し、この未成熟なＮ結合型グリカンは、ＡＳＧＰＲのような細胞受容体によって素早く除去され得、かつタンパク質サンプルのクリアランスが高くなり、Ｃｍａｘが低下し、ＡＵＣが低下する。これらのパラメータの変化は比較的小さく、最大で２倍の違いがある。
【0165】
マウスにおけるＡＬＰ２０１のＰＫパラメータとマウスにおけるアスホターゼアルファのＰＫパラメータとの比較
第二世代アルカリホスファターゼＥＲＴとして、雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスを用いたマウスＰＫ試験で以前にテストしたアスホターゼアルファのＰＫパラメータに基づいて改善するようにＡＬＰ２０１を設計した。アスホターゼアルファのＰＫパラメータの概要を表２５に示す。
第二世代アルカリホスファターゼＥＲＴとして、雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスを用いたマウスＰＫ試験で以前にテストしたアスホターゼアルファのＰＫパラメータに基づいて改善するようにＡＬＰ２０１を設計した。アスホターゼアルファのＰＫパラメータの概要を表２５に示す。
【表25】
【0166】
雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＡＬＰ２０１に関して収集した全てのＰＫデータセットでは、ＡＬＰ２０１は、優れたインビボ半減期（ｔ１／２によって測定した場合）、インビボ曝露量（Ｃｍａｘ及びＡＵＣによって測定した場合）、及びバイオアベイラビリティを示した。また、全てのテストしたサンプルで、ＡＬＰ２０１は、マウスにおいてアスホターゼアルファよりもてクリアランスが大幅に低いことも示した。
【0167】
アスホターゼアルファの放出規格では、分子のＴＳＡＣ値が１．２～３．０ｍｏｌ／ｍｏｌに制限されており、かつ分子は、単量体あたり６つのＮ結合型グリコシル化部位を有しているため、アスホターゼアルファのシアル酸の取り込み量は、グリカンあたりわずか０．２０～０．５０モルのシアル酸である。これは、アスホターゼアルファ上の多くのグリカンがシアル酸部位を含有しておらず、ＡＳＰＧＲクリアランスに対する効果的な基質である可能性があることを示している。これは、ＡＬＰ２０１に比べてアスホターゼアルファではクリアランスが高く、用量正規化したＣｍａｘ及びＡＵＣが低いことの説明となり得る。
【0168】
ＡＬＰ２０１のこれらのサンプルの全ては、アスホターゼアルファよりもバイオアベイラビリティがはるかに高く、ＡＬＰ２０１の最小の生体利用可能なサンプルは、アスホターゼアルファの観察されたバイオアベイラビリティのおよそ２倍である（７２．１％対３８．８％）。２つの構築物間のヒトＩｇＧ Ｆｃドメインアイソタイプの違いは、この観察の原因である可能性がある。本発明者らは、ＡＬＰ２０１のＩｇＧ２／４ Ｆｃドメインは、共通のＦｃｇ受容体のパネルと結合しないが、アスホターゼアルファのＩｇＧ１ Ｆｃドメインは、それらのうち少なくとも２つに強く結合することを以前に明らかにしている（出典：Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｒｅｐｏｒｔ ０３６）。これらのＦｃｇ受容体が、皮下空間に存在する場合、アスホターゼアルファは体循環に入る前に既に除去され、それによりバイオアベイラビリティ及び曝露量が低下する可能性がある。
【0169】
結論
これらの試験の所見は、ＡＬＰ２０１は、より高いバイオアベイラビリティ、用量正規化したＣｍａｘ及び用量正規化した曝露量を伴って、ＩＶまたはＳＣ投与後アスホターゼアルファに比べてマウスにおいて用量補正した薬物動態プロファイルを大幅に改善することを示している。種々のレベルのＴＳＡＣ取り込み量を有するＡＬＰ２０１サンプルを使用した追加のＰＫ試験は、ＴＳＡＣレベルが増加するにつれてＣｍａｘ及びインビボ曝露量がわずかに増加することを示した。消失半減期、Ｔｍａｘ、及びバイオアベイラビリティは、ＴＳＡＣ値の変化によって比較的影響を受けないように見えた。
これらの試験の所見は、ＡＬＰ２０１は、より高いバイオアベイラビリティ、用量正規化したＣｍａｘ及び用量正規化した曝露量を伴って、ＩＶまたはＳＣ投与後アスホターゼアルファに比べてマウスにおいて用量補正した薬物動態プロファイルを大幅に改善することを示している。種々のレベルのＴＳＡＣ取り込み量を有するＡＬＰ２０１サンプルを使用した追加のＰＫ試験は、ＴＳＡＣレベルが増加するにつれてＣｍａｘ及びインビボ曝露量がわずかに増加することを示した。消失半減期、Ｔｍａｘ、及びバイオアベイラビリティは、ＴＳＡＣ値の変化によって比較的影響を受けないように見えた。
【0170】
実施例３
ＡＬＰ２０１を用いた単回投与ＰＫ試験の概要
アスホターゼアルファ非臨床開発プログラムの一環として、それぞれＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラット及びカニクイザルでの２つの単回投与ＰＫ試験を実施した（表２６）。ＡＬＰ２０１単回投与試験は、これらの試験によって裏付けられた。
ＡＬＰ２０１を用いた単回投与ＰＫ試験の概要
アスホターゼアルファ非臨床開発プログラムの一環として、それぞれＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラット及びカニクイザルでの２つの単回投与ＰＫ試験を実施した（表２６）。ＡＬＰ２０１単回投与試験は、これらの試験によって裏付けられた。
【表26】
【0171】
単回投与ＩＶ投与後、アスホターゼアルファの全身クリアランス（ＣＬ）は、０．０１９３～０．０４９２Ｌ／ｈ／ｋｇの範囲であり、見かけの半減期は、２７～３４時間の範囲であった。定常状態での分布容積（Ｖｓｓ）は、０．４３２～１．３９Ｌ／ｋｇの範囲であった。ラット及びサルへの単回ＳＣ投与後、最高濃度に到達するまでの時間（ｔｍａｘ）は、投与後１０～３２時間であり、これは、ＳＣ注射部位からのアスホターゼアルファの吸収が遅いことを示唆している。ＳＣ投与経路の推定バイオアベイラビリティは、ラット及びサルにおいて２６％～３５％の範囲であった。
【0172】
単回投与ＰＫ試験に基づく結論
ＡＬＰ２０１は、有効性／活性、全身曝露量、絶対バイオアベイラビリティ、及び半減期の改善を伴って、承認済みの製品であるアスホターゼアルファの特性に基づいて改善するように設計した。ＡＬＰ２０１におけるＩｇ Ｆｃドメインアイソタイプは、アスホターゼアルファ中に存在するＩｇＧ１ Ｆｃドメインの代わりにＧ２／４である。この改変は、全身ＰＫ曝露量、半減期、及びバイオアベイラビリティを含むＡＬＰ２０１の薬物動態特性を改善するように設計した。
ＡＬＰ２０１は、有効性／活性、全身曝露量、絶対バイオアベイラビリティ、及び半減期の改善を伴って、承認済みの製品であるアスホターゼアルファの特性に基づいて改善するように設計した。ＡＬＰ２０１におけるＩｇ Ｆｃドメインアイソタイプは、アスホターゼアルファ中に存在するＩｇＧ１ Ｆｃドメインの代わりにＧ２／４である。この改変は、全身ＰＫ曝露量、半減期、及びバイオアベイラビリティを含むＡＬＰ２０１の薬物動態特性を改善するように設計した。
【0173】
３種の動物種（マウス、ラット、及びサル）からの前臨床データは、これらの目的が達成したエビデンスを裏付けている。アスホターゼアルファとの比較では、ＡＬＰ２０１は、３種の動物種で、ＩＶ／ＳＣ投与後、ＰＫ曝露量（＞１０倍）、絶対バイオアベイラビリティ（２倍）、及び半減期（２倍）の大幅な改善を示した。前臨床母集団ＰＫモデリングでも、ＡＬＰ２０１のＰＫ特性の改善がヒトにも当てはめられることが期待され、これにより、注射量の低減、投与頻度の低減、及び年間総量の低減により患者の治療が容易になり、それにより、患者の治療負担が軽減されることが予測される。
【0174】
非臨床安全性試験
ファースト・イン・ヒューマン試験を裏付ける毒性試験の概要
ＡＬＰ２０１に対する独立した単回投与毒性／忍容性試験は実施しなかった。反復用量確定（ＧＬＰ）毒性試験でのＡＬＰ２０１用量は、ラット及びサルにおけるＡＬＰ２０１単回投与ＩＶ及びＳＣのＰＫ試験から得られたデータに基づいて選択した。ＡＬＰ２０１の忍容性を、ラット及びサルにおける単回投与ＩＶ及びＳＣのＰＫ試験で、注射部位反応及び臨床病理学データを含む臨床観察によって評価した。要約すると、ＡＬＰ２０１は、ラットに最大２７ｍｇ／ｋｇ、及びサルに最大２０ｍｇ／ｋｇをＩＶまたはＳＣを介して単回投与した場合、忍容性が良好であった。
ファースト・イン・ヒューマン試験を裏付ける毒性試験の概要
ＡＬＰ２０１に対する独立した単回投与毒性／忍容性試験は実施しなかった。反復用量確定（ＧＬＰ）毒性試験でのＡＬＰ２０１用量は、ラット及びサルにおけるＡＬＰ２０１単回投与ＩＶ及びＳＣのＰＫ試験から得られたデータに基づいて選択した。ＡＬＰ２０１の忍容性を、ラット及びサルにおける単回投与ＩＶ及びＳＣのＰＫ試験で、注射部位反応及び臨床病理学データを含む臨床観察によって評価した。要約すると、ＡＬＰ２０１は、ラットに最大２７ｍｇ／ｋｇ、及びサルに最大２０ｍｇ／ｋｇをＩＶまたはＳＣを介して単回投与した場合、忍容性が良好であった。
【0175】
カニクイザル及びＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットにおける確定的なＧＬＰに準拠したＡＬＰ２０１の２８日間毒性試験は進行中である。ラット及びサル試験の回復期を含む生存中部分は、完了しており、報告書が準備されている。これらの試験の監査済みの報告書草案は入手可能ではないが、ＡＤＡデータを除く両方の試験からの全てのデータは、入手可能であり、その所見の概要を表２７に示す。要約すると、ラット及びサルにおけるＡＬＰ２０１の２８日間毒性試験からの結果は、ＡＬＰ２０１治療が、安全性薬理評価項目を含む試験の両方で評価された毒性評価項目のいずれかからも、いずれの注目すべき／生物学的に意味のある治療に関連した有害な影響をもたらさなかったことを示している。
【表27-1】
【表27-2】
【0176】
後期臨床開発ＡＬＰ２０１の非臨床安全性戦略
ＡＬＰ２０１は、Ａｌｅｘｉｏｎから販売されているＥＲＴ製品アスホターゼアルファ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（登録商標））と比較して改善されたＥＲＴである。ＡＬＰ２０１のヒトＴＮＳＡＬＰ触媒ドメインは、より高い酵素活性を付与するために３つの位置に合理的に設計された変化を含む。ＡＬＰ２０１のＦｃ部分は、ヒト免疫グロブリンガンマ２／４（ＩｇＧ２／４）であるが、その一方で、アスホターゼアルファのＦｃ部分は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ１である。骨を標的とするＡＬＰ２０１及びアスホターゼアルファのＣ末端領域は、同一である。
ＡＬＰ２０１は、Ａｌｅｘｉｏｎから販売されているＥＲＴ製品アスホターゼアルファ（ＳＴＲＥＮＳＩＱ（登録商標））と比較して改善されたＥＲＴである。ＡＬＰ２０１のヒトＴＮＳＡＬＰ触媒ドメインは、より高い酵素活性を付与するために３つの位置に合理的に設計された変化を含む。ＡＬＰ２０１のＦｃ部分は、ヒト免疫グロブリンガンマ２／４（ＩｇＧ２／４）であるが、その一方で、アスホターゼアルファのＦｃ部分は、ヒト免疫グロブリンＩｇＧ１である。骨を標的とするＡＬＰ２０１及びアスホターゼアルファのＣ末端領域は、同一である。
【0177】
ＡＬＰ２０１及び選択したアスホターゼアルファ試験から得られる所見は以下の通りである。
１．ラット及びサルにおけるＡＬＰ２０１のＧＬＰ２８日間毒性試験による毒性所見は、非常に類似している（表３１）
２．サル及びラットにおける同じ期間のＡＬＰ２０１及びアスホターゼアルファの毒性試験（４週間／２８日間）による毒性所見は、非常に類似している（それぞれ表３２及び表３３）
３．アスホターゼアルファの完全な非臨床安全性パッケージによる毒性所見は、ラットにおける一過性の局所忍容性所見に限られ、その他の注目すべき有害なアスホターゼアルファ治療に関連した所見はない。
１．ラット及びサルにおけるＡＬＰ２０１のＧＬＰ２８日間毒性試験による毒性所見は、非常に類似している（表３１）
２．サル及びラットにおける同じ期間のＡＬＰ２０１及びアスホターゼアルファの毒性試験（４週間／２８日間）による毒性所見は、非常に類似している（それぞれ表３２及び表３３）
３．アスホターゼアルファの完全な非臨床安全性パッケージによる毒性所見は、ラットにおける一過性の局所忍容性所見に限られ、その他の注目すべき有害なアスホターゼアルファ治療に関連した所見はない。
【0178】
ＡＬＰ２０１の長期／６ヶ月一般毒性試験戦略
単一種の長期毒性試験戦略は、以下の観察結果により裏付けられる。
４．ラット及びサル２８日間ＧＬＰ毒性試験において、３日に１回（Ｑ３Ｄ）のＳＣによるＡＬＰ２０１の１０回の反復投与後、注目すべき全身毒性及び／または局所忍容性所見は観察されなかったが、ＡＬＰ２０１の全身曝露量は、アスホターゼアルファと比べて極めて高かった。全身曝露量の概要を表３１及び３２に示す。
５．ＡＬＰ２０１ラット及びサル２８日間ＧＬＰ毒性試験による毒性所見は、非常に類似していた。これらの試験による所見の概要を表２８に示す。
６．短期間の一般毒性試験による毒物学的所見は類似している場合、通常、１種での長期間の一般毒性試験で十分である。
７．ラットは、ＡＬＰ２０１を用いた長期毒性試験用の好ましい種である。加えて、長期間の一般毒性試験を実施するのに１種のみを使用する場合、ラットは好ましい種である。
単一種の長期毒性試験戦略は、以下の観察結果により裏付けられる。
４．ラット及びサル２８日間ＧＬＰ毒性試験において、３日に１回（Ｑ３Ｄ）のＳＣによるＡＬＰ２０１の１０回の反復投与後、注目すべき全身毒性及び／または局所忍容性所見は観察されなかったが、ＡＬＰ２０１の全身曝露量は、アスホターゼアルファと比べて極めて高かった。全身曝露量の概要を表３１及び３２に示す。
５．ＡＬＰ２０１ラット及びサル２８日間ＧＬＰ毒性試験による毒性所見は、非常に類似していた。これらの試験による所見の概要を表２８に示す。
６．短期間の一般毒性試験による毒物学的所見は類似している場合、通常、１種での長期間の一般毒性試験で十分である。
７．ラットは、ＡＬＰ２０１を用いた長期毒性試験用の好ましい種である。加えて、長期間の一般毒性試験を実施するのに１種のみを使用する場合、ラットは好ましい種である。
【表28-1】
【表28-2】
【表28-3】
【表29-1】
【表29-2】
【表29-3】
【0179】
モデルベース分析及び予測されるヒト用量レジメン
ＡＬＰ２０１モデリング
現在のモデルで使用したデータ
マウス（疾患モデル種）からヒトへの用量外挿を行うために、相対成長に基づいて調整した用量からヒト曝露量をシミュレートする十分なＰＫ分析が必要である。限られたマウスＰＫデータ、単回投与野生型マウス試験（ＨＰＰ－ＰＫ－０１）及び２回の反復投与Ａｋｐ２ＧＷ（－／－）マウス有効性試験（ＨＰＰ－ＰｏＣ－０１及びＨＰＰ－ＭＥＤ－０１）による単一のＣトラフ測定値（Ｄ３６／Ｄ３７）が利用可能であった。ＡＬＰ２０１の確実なＰＫ特性評価を作成するために、ラット及びカニクイザルにおける用量範囲決定試験からのＰＫデータでマウスデータを強化した。表３０は、母集団薬物動態（Ｐｏｐ－ＰＫ）モデリング手法を使用してこれまでに分析したデータ（４７匹の動物及び３８７個のＰＫ濃度）を示す。用量－応答モデリングには、２つのＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウス有効性試験（ＨＰＰ－ＰｏＣ－０１及びＨＰＰ－ＭＥＤ－０１）からの有効性（骨石灰化）データを使用した。
ＡＬＰ２０１モデリング
現在のモデルで使用したデータ
マウス（疾患モデル種）からヒトへの用量外挿を行うために、相対成長に基づいて調整した用量からヒト曝露量をシミュレートする十分なＰＫ分析が必要である。限られたマウスＰＫデータ、単回投与野生型マウス試験（ＨＰＰ－ＰＫ－０１）及び２回の反復投与Ａｋｐ２ＧＷ（－／－）マウス有効性試験（ＨＰＰ－ＰｏＣ－０１及びＨＰＰ－ＭＥＤ－０１）による単一のＣトラフ測定値（Ｄ３６／Ｄ３７）が利用可能であった。ＡＬＰ２０１の確実なＰＫ特性評価を作成するために、ラット及びカニクイザルにおける用量範囲決定試験からのＰＫデータでマウスデータを強化した。表３０は、母集団薬物動態（Ｐｏｐ－ＰＫ）モデリング手法を使用してこれまでに分析したデータ（４７匹の動物及び３８７個のＰＫ濃度）を示す。用量－応答モデリングには、２つのＡｋｐ２ＧＷ（－／－）マウス有効性試験（ＨＰＰ－ＰｏＣ－０１及びＨＰＰ－ＭＥＤ－０１）からの有効性（骨石灰化）データを使用した。
【表30】
【0180】
現在のＰｏｐ－ＰＫモデル
相対成長原理に基づく体重によるＰＫ動態における種の差異を考慮して、３種の動物種からＰＫデータを同時に分析するＮＯＮＭＥＭソフトウエアプログラム、バージョン７．２（ＩＣＯＮ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）を使用して、現在のＰｏｐ－ＰＫモデルを開発した。ここで、動物の体重は、７０ｋｇを中心とし、相対成長指数は、クリアランスパラメータに対しては０．７５、分布容積パラメータに対しては、１．０に固定した。血管外パラメータ、例えば、ＳＣ注射後の絶対バイオアベイラビリティを推定するために、ＩＶ及びＳＣデータもまた同時に適合した。現在のモデルは、線形性の消失を伴う２コンパートメントモデルであり、モデルパラメータ推定値を表３１に示す。
相対成長原理に基づく体重によるＰＫ動態における種の差異を考慮して、３種の動物種からＰＫデータを同時に分析するＮＯＮＭＥＭソフトウエアプログラム、バージョン７．２（ＩＣＯＮ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）を使用して、現在のＰｏｐ－ＰＫモデルを開発した。ここで、動物の体重は、７０ｋｇを中心とし、相対成長指数は、クリアランスパラメータに対しては０．７５、分布容積パラメータに対しては、１．０に固定した。血管外パラメータ、例えば、ＳＣ注射後の絶対バイオアベイラビリティを推定するために、ＩＶ及びＳＣデータもまた同時に適合した。現在のモデルは、線形性の消失を伴う２コンパートメントモデルであり、モデルパラメータ推定値を表３１に示す。
【表31】
【0181】
ＰＫパラメータの標準値または平均パラメータ推定値を十分に推定した。ＣＬの変動性（ＢＳＶ）は、許容範囲内であり、良好に推定したが、Ｋａ及びＦの変動性は大きく（それぞれ８６％及び７６％）良好に推定されなかった。収縮は、ＰＫパラメータの推定値をデータがどのように通知したかを評価したものであり、値が＜３０％であれば良好である。Ｋａ及びＦの高い収縮値（それぞれ４０％及び５９％）を考慮すると、４週間ＧＬＰ毒性試験からの追加のデータにより、Ｋａ及びＦパラメータの推定値は改善されるはずである。全体として、現在のＰｏｐ－ＰＫモデルは、良好な平均パラメータ推定値を考慮すると、合理的な用量シミュレーションを提供するはずである。ただし、変動領域が過度に幅広い可能性がある。
【0182】
現在の用量－応答モデル
Ｅｍａｘファミリーのモデルをテストすることによって、開発用量－応答モデルを選択した。ほとんどの用量－応答関係は、Ｅｍａｘモデルパラメータ化の１つによって説明することができる。現在の最良の用量－応答特性評価は、Ｅｍａｘ＋Ｅ０（ベースライン）モデルを使用するものである。有効性評価項目である骨石灰化は、Ｘ線撮影による評価であり、かつ非臨床用量－応答評価で使用されているアスホターゼアルファの有効性の臨床的定義と同じであるために選択した。２つの有効性試験（ＨＰＰ－ＰｏＣ－０１及びＨＰＰ－ＭＥＤ－０１）に基づくアスホターゼアルファまたはＡＬＰ２０１による治療後の骨石灰化を、用量に対してプロットした（図１６）。以前の有効性試験ＡＬＰ－ＰＴ－１２からのアスホターゼアルファデータを、比較のために含めた。ｙ軸は、骨石灰化スコアが４の投与群におけるマウスの割合として定義された正常値％を表している。ｘ軸は、ｍｇ／ｋｇ／日に正規化した用量を表している。治療済み母集団（ＥＤ８５）の８５％に正常な石灰化をもたらす用量を、目標有効用量として選択した。
Ｅｍａｘファミリーのモデルをテストすることによって、開発用量－応答モデルを選択した。ほとんどの用量－応答関係は、Ｅｍａｘモデルパラメータ化の１つによって説明することができる。現在の最良の用量－応答特性評価は、Ｅｍａｘ＋Ｅ０（ベースライン）モデルを使用するものである。有効性評価項目である骨石灰化は、Ｘ線撮影による評価であり、かつ非臨床用量－応答評価で使用されているアスホターゼアルファの有効性の臨床的定義と同じであるために選択した。２つの有効性試験（ＨＰＰ－ＰｏＣ－０１及びＨＰＰ－ＭＥＤ－０１）に基づくアスホターゼアルファまたはＡＬＰ２０１による治療後の骨石灰化を、用量に対してプロットした（図１６）。以前の有効性試験ＡＬＰ－ＰＴ－１２からのアスホターゼアルファデータを、比較のために含めた。ｙ軸は、骨石灰化スコアが４の投与群におけるマウスの割合として定義された正常値％を表している。ｘ軸は、ｍｇ／ｋｇ／日に正規化した用量を表している。治療済み母集団（ＥＤ８５）の８５％に正常な石灰化をもたらす用量を、目標有効用量として選択した。
【0183】
マウスからヒトへの用量換算及びヒトの開始用量の提案
相対成長スケーリングをマウスの目標有効用量（ＥＤ８５）に適用して、ヒトへの用量を決定した。マウスＥＤ８５からヒト等価用量（ＨＥＤ、ｍｇ／ｋｇ／日）を予測するための式は、ＥＤ８５×（０．０２５ｋｇマウス／７０ｋｇヒト）０．２５であった。ＨＥＤを換算すると、４５ｍｇ／週の毎週の一定用量であり、これを、ＦＩＨ試験のＭＡＤアームの開始用量として使用する。ＮＯＡＥＬ及びＭＡＢＥＬ法からの結果を考慮した後、ＳＡＤアームに対する最大推奨開始用量（ＭＲＳＤ）を選択した。最小オンターゲット薬理学的応答をもたらす試験用量を選択し、一定のヒト用量（５ｍｇ）に換算することを決定した。
相対成長スケーリングをマウスの目標有効用量（ＥＤ８５）に適用して、ヒトへの用量を決定した。マウスＥＤ８５からヒト等価用量（ＨＥＤ、ｍｇ／ｋｇ／日）を予測するための式は、ＥＤ８５×（０．０２５ｋｇマウス／７０ｋｇヒト）０．２５であった。ＨＥＤを換算すると、４５ｍｇ／週の毎週の一定用量であり、これを、ＦＩＨ試験のＭＡＤアームの開始用量として使用する。ＮＯＡＥＬ及びＭＡＢＥＬ法からの結果を考慮した後、ＳＡＤアームに対する最大推奨開始用量（ＭＲＳＤ）を選択した。最小オンターゲット薬理学的応答をもたらす試験用量を選択し、一定のヒト用量（５ｍｇ）に換算することを決定した。
【0184】
その他の実施形態
前述の発明を実施するための形態及び実施例は、理解を明確にするためのみに提示したものである。不必要な制限が、そこから理解されるべきではない。本開示は、図示し、説明した詳細に厳密に限定するものではなく、当業者にとって明らかな変形形態は、特許請求の範囲によって定義付けられる範囲内に含まれるものとする。
前述の発明を実施するための形態及び実施例は、理解を明確にするためのみに提示したものである。不必要な制限が、そこから理解されるべきではない。本開示は、図示し、説明した詳細に厳密に限定するものではなく、当業者にとって明らかな変形形態は、特許請求の範囲によって定義付けられる範囲内に含まれるものとする。
【0185】
特に記載がない限り、本明細書及び特許請求の範囲で使用される成分の量、分子量などを表す全ての数字は、全ての場合において、用語「約」によって修飾されるものとして理解されるべきである。したがって、特にそれとは反対の記載がない限り、本明細書及び特許請求の範囲に記載されている数値パラメータは、得ようとする所望の特性に応じて変化し得る近似値である。最低限において、また特許請求の範囲と同等である均等の原則を限定する試みとしてではなく、各数値パラメータは少なくとも、通常の丸め技術を適用することによって、報告される有効桁数を考慮して解釈されるべきである。
【0186】
本開示の広い範囲を示す数字範囲及びパラメータは近似値であるにもかかわらず、特定の実施例中に示される数値は可能な限り正確に報告される。しかし、全ての数値は、それらの対応するテスト計測値で見られる標準偏差から必然的に生じるある特定の範囲を本質的に含有する。
【0187】
本明細書に記載する全ての特許、仮特許出願を含む特許出願、特許公報及び非特許公報を含む刊行物、ならびに電子的に入手可能な資料（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ及びＲｅｆＳｅｑにおけるヌクレオチド配列の提出物、及び、例えば、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ、ＰＩＲ、ＰＲＦ、ＰＤＢにおけるアミノ酸配列の提出物、及び、ＧｅｎＢａｎｋ及びＲｅｆＳｅｑの注釈付きコード領域からの翻訳物を含む）の完全な開示は、参照として援用される。前述の発明を実施するための形態及び実施例は、理解を明確にするためのみに提示したものである。不必要な制限が、そこから理解されるべきではない。本開示は、図示し、説明した詳細に厳密に限定するものではなく、当業者にとって明らかな変形形態は、特許請求の範囲によって定義付けられる実施形態の範囲内に含まれるものとする。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【配列表】
【国際調査報告】