特表 2024-507397 ＩＬ－６受容体および血管新生因子を標的にする抗体融合タンパク質

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-02-19

(54)【発明の名称】ＩＬ－６受容体および血管新生因子を標的にする抗体融合タンパク質

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20240209BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240209BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20240209BHJP

   C07K 14/715 20060101ALI20240209BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240209BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240209BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20240209BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240209BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240209BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240209BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240209BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240209BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20240209BHJP

   C07K 1/14 20060101ALI20240209BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240209BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20240209BHJP

   A61P 9/14 20060101ALI20240209BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240209BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20240209BHJP

   A61P 27/06 20060101ALI20240209BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z

C07K16/28 ZNA

C07K16/46

C07K14/715

C07K19/00

C12N15/13

C12N15/12

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

C07K1/14

A61K39/395 D

A61K39/395 N

A61P9/00

A61P9/14

A61P29/00

A61P27/02

A61P27/06

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023551991

(86)(22)【出願日】2022-02-17

(85)【翻訳文提出日】2023-10-16

(86)【国際出願番号】 CN2022076673

(87)【国際公開番号】W WO2022179432

(87)【国際公開日】2022-09-01

(31)【優先権主張番号】63/207,444

(32)【優先日】2021-02-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522478640

【氏名又は名称】エルミネックス バイオサイエンシズ（スーチョウ）リミティド

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(72)【発明者】

【氏名】チャン，ジンチョン

(72)【発明者】

【氏名】シェン，ウェイ・ヨン

(72)【発明者】

【氏名】センバ，チャールズ

(72)【発明者】

【氏名】フー，ジョン・ゼンツェ

(72)【発明者】

【氏名】シア，ゼン・チン

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG20

4B064AG27

4B064CA02

4B064CA05

4B064CA06

4B064CA08

4B064CA10

4B064CA19

4B064CC24

4B064CE00

4B064DA01

4B064DA13

4B065AA01X

4B065AA01Y

4B065AA57X

4B065AA57Y

4B065AA72X

4B065AA72Y

4B065AA83X

4B065AA83Y

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA44

4B065CA46

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB11

4C085DD62

4C085EE01

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA09

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA50

4H045FA74

4H045GA00

(57)【要約】

抗体融合タンパク質は、第１のＶＥＧＦ受容体、第２のヒトＶＥＧＦ受容体、および／または第３のヒトＶＥＧＦ受容体の複数のＩｇ様ドメインを含むＶＥＧＦ結合ユニットに連結したＩＬ－６受容体に対する抗体またはその抗原結合性断片を含む。抗体融合タンパク質は、異常血管形成または炎症に原因を有する眼の疾患、状態、または障害の治療または制御において有用である。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＩＬ－６Ｒおよび１つまたは複数のＶＥＧＦファミリーメンバーに実質的に結合することができる抗体融合タンパク質またはそれらの抗原結合性断片もしくはドメイン。

【請求項2】

第１のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメイン、第２のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメイン、第３のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメイン、およびその組合せからなる群から選択されるＩｇ様ドメインを含むＶＥＧＦ結合ユニットに連結されているＩＬ－６Ｒに対する抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインを含む請求項１に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項3】

ＩＬ－６Ｒに対する抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインを含み、（１）軽鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメイン、および（２）重鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインのうちの少なくとも一方が、第１のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメイン、第２のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメイン、第３のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメイン、およびその組合せからなる群から選択される複数のＩｇ様ドメインを含むＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている、請求項１に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項4】

前記ＩＬ－６ＲがヒトＩＬ－６Ｒである、請求項３に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項5】

前記ＶＥＧＦ結合ユニットが、（１）（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２；および（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３；あるいは（２）（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン１および２あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１および２；または（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン２および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン２および３；または（ｃ）ヒトＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン１、２、および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１、２、および３を含む、請求項４に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項6】

ＩＬ－６Ｒ抗体部分の軽鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインならびに重鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインが、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２と；（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３とを含むＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている、請求項４に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項7】

（１）ＩＬ－６Ｒ抗体部分の軽鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインが、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２と；（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３とを含む第１のＶＥＧＦ結合ユニットに連結され、ならびに（２）抗体融合タンパク質の重鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインが、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン１および２あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１および２；または（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン２および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン２および３；または（ｃ）ヒトＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン１、２、および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１、２、および３を含む第２のＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている、請求項４に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項8】

その重鎖が、配列番号５３、５４、および５５の相補性決定領域ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、およびＨＣＣＤＲ３アミノ酸配列を有する、請求項６に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項9】

その軽鎖が、配列番号５６、５７、および５８の相補性決定領域ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２、およびＬＣＣＤＲ３アミノ酸配列を有する、請求項６に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項10】

１対の重鎖および軽鎖が、配列番号３４および３６、配列番号３８および４０、配列番号４２および４４、配列番号４６および４８、配列番号７８および８０、配列番号８２および８４、配列番号８６および８８、配列番号９０および９２、配列番号９４および９６、および配列番号９８および１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項６に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項11】

配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号７４、および配列番号７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項12】

配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号７４、および配列番号７６からなる群から選択されるアミノ酸配列のアミノ酸１７において始まるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項13】

解離定数Ｋ_ｄ≦１０^－９ＭでＩＬ－６ＲおよびＶＥＧＦファミリーメンバーに結合する、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項14】

解離定数Ｋ_ｄ≦１０^－１０ＭでＩＬ－６ＲおよびＶＥＧＦファミリーメンバーに結合する、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項15】

請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体融合タンパク質をコードする単離された核酸分子。

【請求項16】

配列番号１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、５９、６１、６３、６５、７５、または７７においてリストに実質的に示される配列を有する単離された核酸分子。

【請求項17】

請求項１５または１６に記載の核酸分子を含むベクター。

【請求項18】

発現制御配列に作動可能に連結された前記核酸分子を含む、請求項１７に記載のベクター。

【請求項19】

宿主細胞における、請求項１８に記載の発現ベクターを含む宿主－ベクターシステム。

【請求項20】

配列番号１７および１９；配列番号２１および２３；配列番号２５および２７；配列番号２９および３１；配列番号７９および８１；配列番号８３および８５；配列番号８７および８９；配列番号９１および９３；配列番号９５および９７；ならびに配列番号９９および１０１からなる群から選択される１対の核酸配列を含む発現ベクター対を含む宿主－ベクターシステム。

【請求項21】

配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号７５、および配列番号７７からなる群から選択される核酸配列を含む発現ベクターを含む宿主－ベクターシステム。

【請求項22】

実質的に精製された抗体融合タンパク質を製造する方法であって、（ａ）抗体融合タンパク質の製造を可能にする条件下において請求項２０または２１に記載の宿主－ベクターシステムの細胞を増殖させる工程；および（ｂ）回収された抗体融合タンパク質を製造するために抗体融合タンパク質を回収する工程；および（ｃ）実質的に精製された抗体融合タンパク質を製造するために前記回収された抗体融合タンパク質を精製する工程を含む方法。

【請求項23】

少なくとも疾患、状態、または障害を治療または制御することを必要とする対象において、少なくとも疾患、状態、または障害を治療または制御する方法であって、疾患、状態、または障害が、異常な血管形成または炎症に原因を有し、前記方法が、配列番号３４および３６；配列番号３８および４０；配列番号４２および４４；配列番号４６および４８；配列番号７８および８０；配列番号８２および８４；配列番号８６および８８；配列番号９０および９２；配列番号９４および９６；配列番号９８および１００；配列番号６０；配列番号６２；配列番号６４；配列番号６６；配列番号７４；または配列番号７６においてリストに実質的に示されるアミノ酸配列を含む抗体融合タンパク質の組成物のある量を前記対象に投与する工程を含む、方法。

【請求項24】

前記疾患、状態、または障害が、脈絡膜血管新生、新生血管加齢黄斑変性症、ポリープ状脈絡膜血管症、近視性脈絡膜血管新生、血管漏出、黄斑浮腫、非増殖性および増殖性糖尿病性網膜症、角膜血管新生、角膜炎、近視性新生血管形成、および新生血管緑内障からなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

対象が、約２５～４０００マイクログラムの用量の抗体融合タンパク質を投与される、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

組成物が、点眼剤、涙点プラグ、前房内、眼球後、結膜下、眼球周囲、テノン嚢下、強膜近傍、経強膜、硝子体内、網膜下、または脈絡膜上注射として対象に投与される、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

組成物が、眼内に投与される場合に少なくとも１か月の期間において対象に投与される、請求項２５に記載の方法。

【請求項28】

組成物が、眼内に投与される場合に少なくとも１か月に１回の頻度で対象に投与される、請求項２５に記載の方法。

【請求項29】

少なくとも全身性疾患、状態、または障害を治療または制御することを必要とする対象において、少なくとも全身性疾患、状態、または障害を治療または制御する方法であって、全身性疾患、状態、または障害が、異常血管形成または炎症に原因を有し、前記方法が、ＩＬ－６Ｒおよび１つまたは複数のＶＥＧＦファミリーメンバーに実質的に結合することができる抗体融合タンパク質またはその抗原結合性断片の組成物のある量を前記対象に投与する工程を含む、方法。

【請求項30】

少なくとも全身性疾患、状態、または障害を治療または制御することを必要とする対象において、少なくとも全身性疾患、状態、または障害を治療または制御する方法であって、全身性疾患、状態、または障害が、異常血管形成または炎症に原因を有し、前記方法が、配列番号３４および３６；配列番号３８および４０；配列番号４２および４４；配列番号４６および４８；配列番号７８および８０；配列番号８２および８４；配列番号８６および８８；配列番号９０および９２；配列番号９４および９６；配列番号９８および１００；配列番号６０；配列番号６２；配列番号６４；配列番号６６；配列番号７４；および配列番号７６においてリストに実質的に示されるアミノ酸配列を含む抗体融合タンパク質の組成物のある量を前記対象に投与する工程を含む、方法。

【請求項31】

前記全身性疾患、状態、または障害が、腫瘍成長、腫瘍転移、またはその両方を伴う、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記全身性疾患、状態、または障害がアテローム性動脈硬化症である、請求項３０に記載の方法。

【請求項33】

前記全身性疾患、状態、または障害が、乾癬である、請求項３０に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

[0001]本発明は、インターロイキン－６受容体（「ＩＬ－６Ｒ」）および血管新生因子を標的にする抗体融合タンパク質に関する。特に、本発明は、ＩＬ－６Ｒおよび血管内皮増殖因子のファミリーのメンバー（「ＶＥＧＦファミリーメンバー」）を標的にする抗体融合タンパク質に関する。とりわけ、本発明は、そのような融合タンパク質、それらの使用、および製造のためのプロセスに関する。

【0002】

[0002]哺乳動物血管系の主要な細胞成分は、内皮、平滑筋細胞、および周皮細胞である。内皮細胞は、哺乳動物の全ての血管の内部表面の裏打ちを形成し、ならびに血液と組織との間の非血栓形成性界面を構成する。したがって、内皮細胞の増殖は、新しい毛細管および血管の発育のための重要な成分であり、その発育は、哺乳類の組織の成長および／または再生にとって必要なプロセスである。

【0003】

[0003]分泌されたポリペプチドのファミリーは、上皮細胞の増殖および血管形成の促進において非常に重要な役割を果たすことがわかっている。ＶＥＧＦ過剰発現によって生じる制御されていない血管形成の病理学的特徴は、増加する血管透過であり、それは、結果として、周辺組織への体液漏れおよびその膨潤を生じる。哺乳動物において、このファミリーは、高度に保存された受容体結合構造を有する５つの関連増殖因子：血管内皮増殖因子Ａ－Ｄ（「ＶＥＧＦ－Ａ」、「ＶＥＧＦ－Ｂ」、「ＶＥＧＦ－Ｃ」、および「ＶＥＧＦ－Ｄ」）および胎盤増殖因子（「ＰｌＧＦ」）からなる。本開示において、増殖因子のこのファミリーは、ＶＥＧＦファミリーとも呼ばれる。

【0004】

[0004]サイトカインインターロイキン－６（「ＩＬ－６」）は、感染症および損傷などの環境ストレスに対する宿主防御において重要な役割を果たす。生理的条件下において、ＩＬ－６はほとんど検出可能ではないが、そのレベルは、炎症の初期フェーズの間に１００，０００倍以上に増加し得る。しかしながら、ＩＬ－６刺激の全ての発生が有益であるわけではない。ＩＬ－６の無調節な持続的産生は、様々な自己免疫性の慢性炎症性疾患の発症に関係付けられている。炎症を起こしている組織における抑制が利かないＩＬ－６の産生は、ＶＥＧＦ－ＡおよびＶＥＧＦ－Ｃの過剰産生を誘導する証拠があった。

【0005】

[0005]ＶＥＧＦファミリー増殖因子は、血管内皮細胞の表面上にのみ存在する、同種の受容体チロシンキナーゼのファミリーを介して血管の形成を刺激するように作用する：ＶＥＧＦ受容体－１（「ＶＥＧＦＲ－１」、「ｆｌｔ－１」としても知られる）、ＶＥＧＦ受容体－２（「ＶＥＧＦＲ－２」、ヒトにおいては「ＫＤＲ」として、マウスにおいては「ｆｌｋ－１」としても知られる）、ＶＥＧＦ受容体－３（「ＶＥＧＦＲ－３」、「ｆｌｔ－４」としても知られる）。

【0006】

[0006]ＶＥＧＦ－Ａ（場合により、単にＶＥＧＦとも呼ばれる）は、増殖因子のこのファミリーの最も重要なメンバーとして登場した。ヒトＶＥＧＦ－Ａは、複数のホモ二量体形態（モノマーあたり１２１、１４５、１６５、１８３、１８９、および２０６のアミノ酸）として様々な組織において発現され、各形態は、単一ＲＮＡ転写物の択一的スプライシングの結果として生じる。

【0007】

[0007]ＶＥＧＦは、血管内皮細胞増殖および血管形成を促進するため、血管内皮細胞における増殖促進活性が、有益性をもたらすのに重要であるような多数の状態の治療療法、例えば、潰瘍、血管傷害、および心筋梗塞の治療などにおいて有用であり得る。

【0008】

[0008]しかしながら、対照的に、血管内皮増殖は、ある特定の状況下において望ましいが、その一方で、血管内皮増殖および血管形成は、腫瘍の成長および転移、関節リウマチ、乾癬、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性網膜症、水晶体後方線維増殖症、新生血管緑内障、新生血管加齢黄斑変性症、血管腫、移植された角膜組織および他の組織の免疫拒絶、ならびに慢性炎症などの様々な疾患および障害の望ましくない成分でもある。これらの障害のいずれかを患う個人は、ＶＥＧＦの内皮増殖活性を阻害したいかまたは少なくとも実質的に減少させたいであろう。

【0009】

[0009]ｆｌｔ－１、ＫＤＲ、およびｆｌｔ－４チロシンキナーゼ受容体のそれぞれは、リガンドの結合に利用可能な７つの細胞外免疫グロブリン様（「Ｉｇ様」）ドメイン、発現される細胞の表面に受容体を固定する働きをする膜貫通ドメイン、ならびに細胞内触媒作用チロシンキナーゼドメインを有する。Ｆｌｔ－１は、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、およびＰｌＧＦを結合する。ＫＤＲは、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｃ、およびＶＥＧＦ－Ｄを結合する。Ｆｌｔ－４は、ＶＥＧＦ－ＣおよびＶＥＧＦ－Ｄを結合する。

【0010】

[0010]血管内皮増殖および血管形成におけるＶＥＧＦファミリーの増殖因子の役割ならびにこれらのプロセスが多くの異なる疾患および障害において果たす役割を考慮して、これらの増殖因子の制御を標的にする治療が考案されてきた。しかしながら、抗ＶＥＧＦ療法単独では、血管新生疾患の進行を完全に遮断することはできなかった。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0011】

[0011]したがって、その病的状態が異常な血管形成に根差している患者において、これらの増殖因子の生物活性の１つまたは複数をより完全に減少または阻害するための薬理学的手段を有することが望ましい。異常な血管形成に根差している病的状態に対して、改良された治療または制御のための薬理学的手段を有することも望ましい。

【課題を解決するための手段】

【0012】

[0012]本明細書において使用される場合、用語「制御」は、減少、緩和、改善、または予防も包含する。
[0013]概して、本発明は、抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質、製造方法、およびそれらを含む組成物、ならびに患者において、少なくとも病的状態を治療または制御する方法を提供し、その状態は異常な血管形成に原因を有する。本開示において、用語「融合タンパク質」および「キメラタンパク質」は、相互互換的に使用される。

【0013】

[0014]一態様において、本発明は、ＩＬ－６Ｒの膜結合形態または可溶形態のいずれかを含めたＩＬ－６Ｒと１つまたは複数のＶＥＧＦファミリーメンバーとに実質的に結合することができ；それにより、ＩＬ－６およびＶＥＧＦファミリーメンバーの両方のシグナル変換を同時に減少または阻害することができる抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質またはその抗原結合性断片もしくは抗原結合性ドメインを提供する。

【0014】

[0015]別の態様において、本発明の抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質は、第１のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメイン、第２のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメイン、第３のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメイン、およびその組合せからなる群から選択されるＩｇ様ドメインを含むＶＥＧＦ結合ユニットに連結した、Ｌ－６に対する抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインを含む。ＶＥＧＦ結合ユニットは、本明細書に使用される場合、ＶＥＧＦファミリーメンバーに結合するかまたは実質的に結合するポリペプチドを含む。したがって、一態様において、本発明の抗体融合タンパク質は、少なくとも、２つの異なるリガンドに結合することができる二重特異的コンストラクトとして見なされ得る。いくつかの実施形態において、前記ＶＥＧＦ結合ユニットは、１つまたは複数のＶＥＧＦ受容体の複数のＩｇ様ドメインを含む。

【0015】

[0016]さらなる別の態様において、前記ＩＬ－６Ｒは、ヒトＩＬ－６Ｒである。
[0017]さらなる別の態様において、本発明の抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質は、ＩＬ－６Ｒに対する抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインを含み；この場合、（１）軽鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメイン、および（２）重鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインのうちの少なくとも一方は、第１のＶＥＧＦ受容体、第２のＶＥＧＦ受容体、第３のＶＥＧＦ受容体、およびその組合せのＩｇ様ドメインからなる群から選択される複数のＩｇ様ドメインを含むＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている。

【0016】

[0018]さらなる別の態様において、前記ＶＥＧＦ結合ユニットは、（１）（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１（またはｆｌｔ－１）のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２；および（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２（またはＫＤＲ）のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３；あるいは（２）ヒトＶＥＧＦＲ－３（またはｆｌｔ－４）のＩｇ様ドメイン１、２、および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１、２、および３からなる群から選択される少なくともＩｇ様ドメインを含む。

【0017】

[0019]さらなる別の態様において、ＩＬ－６Ｒに対する抗体またはその抗原結合性の、軽鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインならびに重鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインのそれぞれは、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１（またはｆｌｔ－１）のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２と；（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２（またはＫＤＲ）のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３とを含むＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている。

【0018】

[0020]さらなる別の態様において、ＩＬ－６Ｒに対する抗体またはその抗原結合性の、軽鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインのそれぞれは、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１（またはｆｌｔ－１）のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２と；（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２（またはＫＤＲ）のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３とを含む第１のＶＥＧＦ結合ユニットに連結され；ならびに、ＩＬ－６Ｒに対する抗体またはその抗原結合性の、重鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインのそれぞれは、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン１および２あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１および２；または（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン２および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン２および３；あるいはヒトＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン１、２、および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１、２、および３を含む第２のＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている。

【0019】

[0021]さらなる別の態様において、ＩＬ－６Ｒに対する抗体の重鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインは、（１）（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１（またはｆｌｔ－１）のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２と；（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２（またはＫＤＲ）のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３とを含む第１のＶＥＧＦ結合ユニット；（２）ヒトＶＥＧＦＲ－３（またはｆｌｔ－４）のＩｇ様ドメイン１および２あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１および２を含む第２のＶＥＧＦ結合ユニット；ならびに（３）前記第１および第２のＶＥＧＦ結合ユニットの組合せ、からなる群から選択されるＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている。

【0020】

[0022]さらなる別の態様において、本発明は、前記抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質の少なくとも一方をコードする単離された核酸分子を提供する。
[0023]さらなる別の態様において、本発明は、前記核酸分子を含むベクター、例えば、発現制御配列に作動可能に連結された前記核酸分子を含む発現ベクターなどを提供する。本明細書において使用される場合、語句「作動可能に連結された」は、お互いに機能的関係において位置され且つ各成分がその機能を維持するような、コンストラクトの成分を意味する。核酸は、別の核酸配列と機能的関係において位置される場合に「作動可能に連結されている」。例えば、プレ配列または分泌リーダーに対するＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合、ポリペプチドのためにＤＮＡに「作動可能に連結され」；プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写に影響する場合、コード配列に作動可能に連結され；あるいは、リボソーム結合部位は、翻訳を促進するために位置される場合、コード配列に作動可能に連結されている。

【0021】

[0024]さらなる別の態様において、本発明は、好適な宿主細胞における発現ベクターを含む、前記抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質の作製のための宿主－ベクターシステムを提供する。

【0022】

[0025]別の態様において、本発明は、抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質を作製する方法であって、（ａ）抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質の作製を可能にする条件下において宿主－ベクターシステムの細胞を増殖させる工程；および（ｂ）そのように作製された抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質を受け取る工程を含む方法を提供する。

【0023】

[0026]さらなる別の態様において、本発明は、対象において、少なくとも疾患、状態、または障害を治療または制御する方法を提供し、疾患、状態、または障害は、異常な血管形成、炎症、およびその組合せからなる群から選択される状態に原因を有する。

【0024】

[0027]さらなる別の態様において、本発明は、対象において、少なくとも疾患、状態、または障害を治療または制御する方法を提供し、疾患、状態、または障害は、異常な血管形成および／または炎症に原因を有する。ある特定の実施形態では、そのような疾患、状態、または障害は、眼の疾患、状態、または障害である。ある特定の他の実施形態において、そのような疾患、状態、または障害は、腫瘍の成長および転移を伴う。他の実施形態において、そのような疾患、状態、または障害は、関節リウマチ、乾癬、またはアテローム性動脈硬化症である。

【0025】

[0028]本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかとなるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0026】

【図1】[0029]軽鎖および重鎖のそれぞれがＶＥＧＦＲ－１のＩｇ様ドメイン２とＶＥＧＦＲ－２のＩｇ様ドメイン３とを含むＶＥＧＦ結合ユニットにフレキシブルなリンカーを介して連結されている、ヒトＩＬ－６Ｒに対する抗体を含む、本発明の抗体融合タンパク質の第一および第二実施形態の概略図を示す。

【図2】[0030]軽鎖がＶＥＧＦＲ－１のＩｇ様ドメイン２とＶＥＧＦＲ－２のＩｇ様ドメイン３とを含む第１のＶＥＧＦ結合ユニットにフレキシブルなリンカーを介して連結され、ならびに重鎖が、ＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン２および３を含む第２のＶＥＧＦ結合ユニットにフレキシブルなリンカーを介して連結されている、ヒトＩＬ－６Ｒに対する抗体を含む、本発明の抗体融合タンパク質の第三および第四実施形態の概略図を示す。

【図3】[0031]重鎖の各可変ドメインがＦｃドメインに連結され、当該ＦｃドメインがＶＥＧＦＲ－１のＩｇ様ドメイン２とＶＥＧＦＲ－２のＩｇ様ドメイン３とを含むＶＥＧＦ結合ユニットにフレキシブルなリンカーを介して連結された、ヒトＩＬ－６Ｒに対する抗体のｓｃＦｖを含む、本発明の抗体融合タンパク質の第五実施形態の概略図を示す。

【図4】[0032]重鎖の各可変ドメインがＶＥＧＦＲ－１のＩｇ様ドメイン２とＶＥＧＦＲ－２のＩｇ様ドメイン３とを含むＶＥＧＦ結合ユニットにフレキシブルなリンカーを介して連結され、当該ＶＥＧＦＲ－１のＩｇ様ドメイン２およびＶＥＧＦＲ－２のＩｇ様ドメイン３がフレキシブルなリンカーを介してＦｃドメインに連結された、ヒトＩＬ－６Ｒに対する抗体のｓｃＦｖを含む、本発明の抗体融合タンパク質の第六実施形態の概略図を示す。

【図5】[0033]重鎖の各可変ドメインがＶＥＧＦＲ－１のＩｇ様ドメイン２とＶＥＧＦＲ－２のＩｇ様ドメイン３とを含む第１のＶＥＧＦ結合ユニットにフレキシブルなリンカーを介して連結され、当該ＶＥＧＦＲ－１のＩｇ様ドメイン２およびＶＥＧＦＲ－２のＩｇ様ドメイン３がフレキシブルなリンカーを介してＦｃドメインに連結され、当該ＦｃドメインがＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン１および２を含む第２のＶＥＧＦ結合ユニットにフレキシブルなリンカーを介して連結された、ヒトＩＬ－６Ｒに対する抗体のｓｃＦｖを含む、本発明の抗体融合タンパク質の第七実施形態の概略図を示す。

【図6】[0034]重鎖の各可変ドメインがＶＥＧＦＲ－１のＩｇ様ドメイン２とＶＥＧＦＲ－２のＩｇ様ドメイン３とを含む第１のＶＥＧＦ結合ユニット、ならびにＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン１および２を含む第２のＶＥＧＦ結合ユニットにフレキシブルなリンカーを介して連結され、それらがフレキシブルなリンカーを介してＦｃドメインに連結された、ヒトＩＬ－６Ｒに対する抗体のｓｃＦｖを含む、本発明の抗体融合タンパク質の第八実施形態の概略図を示す。

【図7】[0035]図７Ａ～Ｄは、本発明の６つの抗体融合タンパク質（Ｂ７８１４０１～７８１４０６）の分子設計を示す。

【図8】[0036]本発明の融合タンパク質 ＥＢ－ＤＪ１、ＥＢ－ｖｖＡ、ＥＢ－ｖｖＢ、およびＥＢ－ｖｖＣの分子設計を示す。

【図9】[0037]ＨＥＫ２９３細胞において発現されたＢ７８１４０１の精製のためのＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムの例を示す。

【図10】[0038]ＣＨＯ細胞において発現されたＢ７８１４０１の精製のためのＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムの例を示す。

【図11】[0039]酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用した、組換えヒトＶＥＧＦ－Ａ_１６５に対するＢ７８１４０１～７８１４０６とアフリベルセプトの結合親和性の比較を示す。

【図12】[0040]組換えヒトＶＥＧＦ－Ｂ_１６７に対するＢ７８１４０１～７８１４０６とアフリベルセプトのＥＬＩＳＡ結合親和性の比較を示す。

【図13】[0041]組換えヒトＰｌＧＦに対するＢ７８１４０１～７８１４０６とアフリベルセプトのＥＬＩＳＡ結合親和性の比較を示す。

【図14】[0042]組換えヒトＩＬ－６Ｒに対するＢ７８１４０１～７８１４０６とトシリズマブのＥＬＩＳＡ結合親和性の比較を示す。

【図15】[0043]ＶＥＧＦＲ－２－ＮＦＡＴ－ＲＥルシフェラーゼレポーター細胞におけるＶＥＧＦ－Ａ_１６５媒介性ＶＥＧＦＲ－２シグナル伝達の阻害に対するＢ７８１４０１～７８１４０６とアフリベルセプトの効果の比較を示す。

【図16】[0044]図１６Ａ～Ｂは、ＩＬ－６Ｒシグナル伝達の阻害に対するＢ７８１４０１～７８１４０６とトシリズマブの効果の比較を示す。

【図17】[0045]ＩＬ－６Ｒシグナル伝達の阻害に対するＢ７８１４０１～７８１４０６とシルツキシマブおよびトシリズマブの効果の比較を示す。

【図18】[0046]組換えヒトＶＥＧＦ－Ａ_１６５に対するＥＢ－ＤＪ１、ＥＢ－ｖｖＡ、ＥＢ－ｖｖＢ、およびＥＢ－ｖｖＣとアフリベルセプト、Ｂ７８１４０３、およびＢ７８１４０５のＥＬＩＳＡ結合親和性の比較を示す。

【図19】[0047]組換えヒトＶＥＧＦ－Ｂ_１６７に対するＥＢ－ＤＪ１、ＥＢ－ｖｖＡ、ＥＢ－ｖｖＢ、およびＥＢ－ｖｖＣとアフリベルセプト、Ｂ７８１４０２、Ｂ７８１４０３、およびＢ７８１４０５のＥＬＩＳＡ結合親和性の比較を示す。

【図20】[0048]組換えヒトＰｌＧＦに対するＥＢ－ＤＪ１、ＥＢ－ｖｖＡ、ＥＢ－ｖｖＢ、およびＥＢ－ｖｖＣとアフリベルセプト、Ｂ７８１４０３、およびＢ７８１４０５のＥＬＩＳＡ結合親和性の比較を示す。

【図21】[0049]組換えヒトＩＬ－６Ｒに対するＥＢ－ＤＪ１、ＥＢ－ｖｖＡ、ＥＢ－ｖｖＢ、およびＥＢ－ｖｖＣとトシリズマブ、Ｂ７８１４０２、Ｂ７８１４０３、およびＢ７８１４０５のＥＬＩＳＡ結合親和性の比較を示す。

【発明を実施するための形態】

【0027】

[0050]概して、本発明は、ＩＬ－６Ｒと１つまたは複数のＶＥＧＦファミリーメンバーに実質的に結合することができ；それにより、ＩＬ－６およびＶＥＧＦファミリーメンバーの両方のシグナル変換を減少または阻害することができる、抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質またはそれらの抗原結合性断片もしくはドメインを提供する。本開示において、用語「抗体融合タンパク質」は、場合により、「抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質」の代わりに使用される。一態様において、抗体融合タンパク質またはその抗原結合性断片は、ＩＬ－６Ｒと１つまたは複数のＶＥＧＦファミリーメンバーとに実質的に結合することができ；それにより、ＩＬ－６およびＶＥＧＦファミリーメンバーのシグナル変換を減少または阻害することができる。

【0028】

[0051]別の態様において、本発明の抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質は、第１のＶＥＧＦ受容体、第２のＶＥＧＦ受容体、および第３のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメインからなる群から選択される複数のＩｇ様ドメインを含むＶＥＧＦ結合ユニットに連結された、ＩＬ－６Ｒに対する抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインを含む。

【0029】

[0052]本発明の抗体融合タンパク質は、膜結合ＩＬ－６Ｒおよび可溶性ＩＬ－６Ｒの両方に実質的に結合することができ、それにより、それらの作用を阻害することができるにおいて利点を有する。それは、古典的経路、トランスシグナル伝達経路、およびトランス提示経路を含む３つ全てのシグナル伝達経路を阻害することができるが、その一方で、ＩＬ－６抗体を含む抗体融合タンパク質は、ＩＬ－６の遊離形態のみを阻害することができる。

【0030】

[0053]さらなる別の態様において、前記ＩＬ－６Ｒは、ヒトＩＬ－６Ｒである。
[0054]さらなる別の態様において、前記ＶＥＧＦ受容体は、ヒトＶＥＧＦ受容体である。

【0031】

[0055]さらなる別の態様において、本発明の抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質は、ＩＬ－６Ｒに対する抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインを含み、この場合、（１）少なくとも軽鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメイン、および（２）重鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインのうちの一方は、第１のＶＥＧＦ受容体、第２のＶＥＧＦ受容体、および第３のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメインからなる群から選択されるＩｇ様ドメインを含むＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている。ある特定の実施形態では、そのようなＶＥＧＦ結合ユニットは、第１のＶＥＧＦ受容体、第２のＶＥＧＦ受容体、および第３のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメインからなる群から選択される複数のＩｇ様ドメインを含む。一実施形態において、本発明の抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質は、ＩＬ－６Ｒに対する抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインを含み；この場合、軽鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインならびに重鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインのそれぞれは、第１のＶＥＧＦ受容体、第２のＶＥＧＦ受容体、および第３のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメインからなる群から選択される複数のＩｇ様ドメインを含むＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている。

【0032】

[0056]さらなる別の態様において、前記ＶＥＧＦ結合ユニットは、（１）（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１（またはｆｌｔ－１）のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２；および（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２（またはＫＤＲ）のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３；あるいは（２）ＶＥＧＦＲ－３（またはｆｌｔ－４）のＩｇ様ドメイン１、２、３、およびその組合せからなる群、あるいはＶＥＧＦＲ－３の前記Ｉｇ様ドメインと実質的に同じドメインからなる群、から選択される少なくともＩｇ様ドメインを含む。一実施形態において、ＶＥＧＦ結合ユニットは、（ａ）Ｉｇ様ドメイン１および２あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１および２；または（ｂ）Ｉｇ様ドメイン２および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン２および３；または（ｃ）ヒトＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン１、２、および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１、２、および３を含む。

【0033】

[0057]さらなる別の態様において、ＩＬ－６Ｒに対する抗体またはその抗原結合性の、軽鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインならびに重鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインのそれぞれは、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１（またはｆｌｔ－１）のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２と；（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２（またはＫＤＲ）のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３とを含むＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている。

【0034】

[0058]さらなる別の態様において、ＩＬ－６Ｒに対する抗体またはその抗原結合性の、軽鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインは、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１（またはｆｌｔ－１）のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２と；（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２（またはＫＤＲ）のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３とを含む第１のＶＥＧＦ結合ユニットに連結され；ならびにＩＬ－６Ｒに対する抗体またはその抗原結合性の、重鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインは、ヒトＶＥＧＦＲ－３（またはｆｌｔ－４）のＩｇ様ドメイン１および２あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１および２を含む第２のＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている。一実施形態において、ＩＬ－６Ｒに対する抗体またはその抗原結合性の、重鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインは、ヒトＶＥＧＦＲ－３（またはｆｌｔ－４）のＩｇ様ドメイン２および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン２および３を含む第２のＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている。

【0035】

[0059]本明細書において開示される場合、抗体の軽鎖または重鎖の「抗原結合性断片もしくはドメイン」は、そのような抗体の可変ドメインの相補性決定領域（「ＣＤＲ」）を含む、そのような抗体の断片または一部を意味する。一実施形態において、そのような抗体の抗原結合性断片またはドメインは、そのような抗体の軽鎖または重鎖の可変ドメインを含む。重鎖の抗原結合性断片またはドメインは、Ｆｃドメインをさらに含み得る。抗体の断片またはドメインの他の非限定的な例としては、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｄ、ナノボディとしても知られる）、ミニボディ、ダイアボディ、トリボディ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ抗体、（Ｆａｂ’）_２、および当技術分野において既知の他のものが挙げられる。ｓｄＡｂの非限定的な例は、米国特許第１０，６１８，９６４号において開示される、ヒトＩＬ－６Ｒに対するナノボディであり；より詳細には、そのアミノ酸が下記において配列番号７３としてリストに示されるボバリリズマブである。

【0036】

[0060]一態様において、本発明の抗体融合タンパク質は、（１）配列番号３４、３８、４２、４６、７８、８２、８６、９０、９４、および９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖；（１）配列番号３６、４０、４４、４８、８０、８４、８８、９２、９６、および１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。

【0037】

[0061]実施形態５において、本発明の抗体融合タンパク質は、ＩＬ－６Ｒ単一鎖可変断片（「ＩＬ－６Ｒ ｓｃＦｖ」）の対または二量体を含み、当該対または二量体は、それぞれが、ＩｇＧ１のＦｃドメインと、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１（またはｆｌｔ－１）のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２；および（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２（またはＫＤＲ）のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３を含むＶＥＧＦ結合ユニットに連続して連結されている。この実施形態のアミノ酸配列は、配列番号６０においてリストに示される。この実施形態の核酸配列は、配列番号５９においてリストに示される。一態様において、前記ＩｇＧ１は、ヒトＩｇＧ１である。

【0038】

[0062]実施形態６において、本発明の抗体融合タンパク質は、ＩＬ－６Ｒ ｓｃＦｖの対または二量体を含み；この場合、それぞれのＩＬ－６Ｒ ｓｃＦｖのカルボキシ末端（Ｃ末端）は、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１（またはｆｌｔ－１）のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２と；（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２（またはＫＤＲ）のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３とを含むＶＥＧＦ結合ユニットに連結され；ならびにそれぞれのＶＥＧＦ結合ユニットのカルボキシ末端は、ＩｇＧ１のＦｃドメインに連結されている。この実施形態のアミノ酸配列は、配列番号６２においてリストに示される。この実施形態の核酸配列は、配列番号６１においてリストに示される。一態様において、前記ＩｇＧ１は、ヒトＩｇＧ１である。

【0039】

[0063]実施形態７において、本発明の抗体融合タンパク質は、ＩＬ－６Ｒ ｓｃＦｖの対または二量体を含み；この場合、それぞれのＩＬ－６Ｒ ｓｃＦｖのカルボキシ末端は、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１（またはｆｌｔ－１）のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２と；（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２（またはＫＤＲ）のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３とを含む第１のＶＥＧＦ結合ユニットに連結され；それぞれの第１のＶＥＧＦ結合ユニットのカルボキシ末端は、ＩｇＧ１のＦｃドメインに連結され；ならびにＦｃドメインのカルボキシ末端は、ヒトＶＥＧＦＲ－３（またはｆｌｔ－４）のＩｇ様ドメイン１および２あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１および２を含む第２のＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている。この実施形態のアミノ酸配列は、配列番号６４においてリストに示される。この実施形態の核酸配列は、配列番号６３においてリストに示される。

【0040】

[0064]実施形態８において、本発明の抗体融合タンパク質は、ＩＬ－６Ｒ ｓｃＦｖの対または二量体を含み；この場合、それぞれのＩＬ－６Ｒ ｓｃＦｖのカルボキシ末端は、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１（またはｆｌｔ－１）のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２と；（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２（またはＫＤＲ）のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３とを含む第１のＶＥＧＦ結合ユニットに連結され；それぞれの第１のＶＥＧＦ結合ユニットのカルボキシ末端は、ヒトＶＥＧＦＲ－３（またはｆｌｔ－４）のＩｇ様ドメイン１および２あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１および２を含む第２のＶＥＧＦ結合ユニットに連結され；ならびに第２のＶＥＧＦ結合ユニットのカルボキシ末端は、ＩｇＧ１のＦｃドメインに連結されている。この実施形態のアミノ酸配列は、配列番号６６においてリストに示される。この実施形態の核酸配列は、配列番号６５においてリストに示される。

【0041】

[0065]実施形態９は、Ｆｃドメインが異なる長さを有するリンカーによってＶＥＧＦ結合ユニットに連結されていることを除いて、実施形態５と同様である。この実施形態のアミノ酸配列は、配列番号７４においてリストに示される。この実施形態の核酸配列は、配列番号７５においてリストに示される。

【0042】

[0066]実施形態１０において、本発明の抗体融合タンパク質は、ＩＬ－６Ｒ ｓｃＦｖの対または二量体を含み；この場合、それぞれのＩＬ－６Ｒ ｓｃＦｖのアミノ末端（Ｎ末端）は、ＩｇＧ１のＦｃドメインのカルボキシ末端（Ｃ末端）に連結され、そのアミノ末端は、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１（またはｆｌｔ－１）のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２と；（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２（またはＫＤＲ）のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３とを含むＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている。この実施形態のアミノ酸配列は、配列番号７６においてリストに示される。この実施形態の核酸配列は、配列番号７７においてリストに示される。

【0043】

[0067]先述の実施形態のいずれかにおいて、ＶＥＧＦ結合ユニットは、直接的にまたはリンカーを介して、ｓｃＦｖ、Ｆｃドメイン、または別のＶＥＧＦ結合ユニットに連結されていてもよい。ＶＥＧＦ結合ユニットが、リンカーを介して、ｓｃＦｖ、Ｆｃドメイン、または別のＶＥＧＦ結合ユニットに連結されていることは好ましい。

【0044】

[0068]さらなる別の実施形態において、本発明の抗体融合タンパク質は、ＩＬ－６Ｒに対する抗体の（Ｆａｂ’）_２断片を含み、この場合、軽鎖および重鎖のそれぞれは、ＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている。

【0045】

[0069]別の実施形態において、本発明の抗体融合タンパク質は、ＩＬ－６Ｒに対する抗体のミニボディを含み、この場合、軽鎖および重鎖のそれぞれは、ＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている。そのような重鎖は、Ｆｃ領域を含み得る。

【0046】

[0070]一実施形態において、ヒトＩＬ－６Ｒ（「ｈＩＬ－６Ｒ」）に対する前記抗体は、例えば、米国特許第１０，３２３，０９５号；同第７，４７９，５４３号；および同第５，７９５，９６５号において説明される、トシリズマブとして知られる抗体を含む。

【0047】

[0071]一態様において、本発明の抗体融合タンパク質の重鎖は、配列番号５３、５４、および５５においてリストに示される重鎖相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３（「ＨＣＣＤＲ１」、「ＨＣＣＤＲ２」、および「ＨＣＣＤＲ３」）を含む。

【0048】

[0072]別の態様において、本発明の抗体融合タンパク質の軽鎖は、配列番号５６、５７、および５８においてリストに示される軽鎖相補性決定領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３（「ＬＣＣＤＲ１」、「ＬＣＣＤＲ２」、および「ＬＣＣＤＲ３」）を含む。

【0049】

[0073]例えば、米国特許第７，５８２，２９８号において説明されるサリルマブまたは米国特許第８，５６２，９９１号において説明されるサトラリズマブなど、ｈＩＬ－６Ｒに対する他の抗体を、本発明の抗体融合タンパク質において使用してもよい。いくつかの実施形態において、本発明の抗体融合タンパク質は、本明細書において説明されるように、サリルマブ（配列番号４９および５０）またはサトラリズマブ（配列番号５１および５２）の重鎖および軽鎖をＶＥＧＦ結合ユニットに連結させることによっても作製され得る。例えば、サリルマブまたはサトラリズマブの重鎖および軽鎖は、フレキシブルなリンカーを介してＶＥＧＦ結合ユニットに連結されていてもよく、それぞれのＶＥＧＦ結合ユニットは、配列番号６および８のポリペプチドを含む。他の実施形態において、トシリズマブまたはサトラリズマブの重鎖は、配列番号１０のポリペプチドを含むＶＥＧＦ結合ユニットにフレキシブルなリンカーを介して連結され；ならびにサリルマブまたはサトラリズマブの軽鎖は、配列番号６および８のポリペプチドを含むＶＥＧＦ結合ユニットにフレキシブルなリンカーを介して連結されている。

【0050】

[0074]本発明の抗体融合タンパク質に含まれるＶＥＧＦ結合ユニットは、ＶＥＧＦファミリーの少なくとも１つのメンバー（「ＶＥＧＦファミリーメンバー」）に結合することができ；それにより、前記少なくとも１つのＶＥＧＦファミリーメンバーを、内皮細胞上のＶＥＧＦ受容体への結合に対して実質的に利用不可にすることができる。結果として、前記抗体融合タンパク質は、血管形成の促進における前記少なくとも１つのＶＥＧＦファミリーメンバーの生物活性を実質的に阻害し；それにより、異常な血管形成に原因を有する病的状態を制御する。

【0051】

[0075]いくつかの実施形態において、本発明は、共有結合または他の形態の結合によってお互いに連結されているかまたは会合している、本明細書において説明される複数の抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質を含むかまたはそれからなる結合コンストラクトも提供し；この場合、そのような結合コンストラクトの抗体部分は、同じかまたは異なり得る。本発明の結合コンストラクトは、ＩＬ－６Ｒおよび少なくともＶＥＧＦファミリーメンバーもしくはその一部に結合することができ、ならびに高い親和性によってそれを為す。

【0052】

[0076]ＶＥＧＦ結合ユニットは、抗体部分の軽鎖および重鎖のＣ末端（カルボキシ末端）またはＮ末端（アミノ末端）に連結されていてもよい。好ましくは、ＶＥＧＦ結合ユニットは、抗体部分の軽鎖および重鎖のＣ末端に連結されている。より好ましくは、ＶＥＧＦ結合ユニットは、フレキシブルなリンカーを介して抗体部分の軽鎖および重鎖のＣ末端に連結されている。

【0053】

[0077]抗体融合タンパク質の抗体部分の軽鎖または重鎖は、好ましくは、１つのＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている。しかしながら、抗体部分の軽鎖または重鎖は、２つ以上のＶＥＧＦ結合ユニットに連結されていてもよい。この場合、ＶＥＧＦ結合ユニットは、直接的にまたはリンカーを介して互いに接合されていてもよい。抗体融合タンパク質または結合コンストラクトは、さらに、異種ペプチドまたは他の化学部分を含んでもよい。そのような追加は、その特性、例えば、安定性、溶解性、毒性、血中半減期、免疫原生、検出感度、またはその他の特性などを変更し得る。

【0054】

[0078]用語「高い親和性」は、哺乳動物、例えば、実験室試験動物、家畜化された家畜または愛玩動物、あるいはヒトなど、におけるインビボでのＩＬ－６ＲおよびＶＥＧＦファミリーメンバーに対する抗体融合タンパク質の相対的親和性に関係する生理学的な文脈において使用される。本発明においてＩＬ－６Ｒと様々なＶＥＧＦメンバーに結合する抗体融合タンパク質は、典型的にはサブナノモル解離定数（Ｋｄ）の観点から測定される、インビボでのそれらのリガンドに対する特徴的親和性を有する。本発明の目的のために、本発明の抗体融合タンパク質は、天然のＩＬ－６／ＩＬ－６Ｒまたは増殖因子／受容体対のＫ_ｄの約１倍、または約５倍、または約１０倍、または約５０倍、または約１００倍、または約５００倍、または約１０００倍以下のＫ_ｄでＩＬ－６Ｒまたはその標的化されたＶＥＧＦファミリーメンバーに結合することができる。

【0055】

[0079]一態様において、ＶＥＧＦ結合ユニットのＩｇ様ドメインは、直接的または介在性リンカーを介して、順不同に互いに連結されていてもよい。
[0080]別の態様において、標的化されたＶＥＧＦファミリーメンバーは、抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質の１つまたは複数のＶＥＧＦ結合ユニットに結合し得る。

【0056】

[0081]さらなる別の態様において、ＶＥＧＦ結合ユニットは、ＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメインを実質的に含む。
[0082]別の態様において、ＶＥＧＦ結合ユニットは、ヒトＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、およびＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメインからなる群から選択される２つのＩｇ様ドメインを含む。

【0057】

[0083]さらなる別の態様において、本発明の抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質の軽鎖および重鎖のそれぞれは、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１（またはｆｌｔ－１）のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２と；（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２（またはＫＤＲ）のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３とを含むＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている。一実施形態において、そのようなＶＥＧＦ結合ユニットは、抗体部分の軽鎖および重鎖のＣ末端に連結されている。

【0058】

[0084]さらなる別の態様において、本発明の抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質の軽鎖のそれぞれは、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１（またはｆｌｔ－１）のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２と；（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２（またはＫＤＲ）のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３とを含む第１のＶＥＧＦ結合ユニットに連結され；ならびに、抗体融合タンパク質の重鎖のそれぞれは、ＶＥＧＦＲ－３（またはｆｌｔ－４）のＩｇ様ドメイン１および２あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１および２を含む第２のＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている。別の実施形態において、第２のＶＥＧＦ結合ユニットは、ＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン２および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン２および３を含む。さらなる別の実施形態において、第２のＶＥＧＦ結合ユニットは、ＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン１、２、および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１、２、および３からなる群から選択される少なくともＩｇ様ドメインを含む。さらなる別の実施形態において、そのようなＶＥＧＦ結合ユニットは、抗体部分の軽鎖および重鎖のＣ末端に連結されている。

【0059】

[0085]いくつかの実施形態において、２つ以上のＶＥＧＦ結合ユニットは、ＶＥＧＦファミリーの単一リガンド分子を結合するように一緒に作用する（この場合、リガンドは、モノマーまたは二量体を含み得る）。いくつかの他の実施形態において、結合ユニットは、独立して作用し、すなわち、それぞれの結合ユニットは、別々のリガンド分子を結合する。

【0060】

[0086]一実施形態において、ポリペプチドリンカーは、抗体部分の軽鎖または重鎖のＣ末端とＶＥＧＦ結合ユニットとの間に挿入される。ポリペプチドリンカーは、軽鎖および重鎖に対して同じでもまたは異なっていてもよい。

【0061】

[0087]一態様において、本発明の抗体融合タンパク質の様々な部分のアミノ酸配列または実施形態は、表１に一覧される。

【0062】

【表1-1】

【0063】

【表1-2】

【0064】

【表1-3】

【0065】

[0088]別の態様において、本発明の抗体融合タンパク質の様々な一部のアミノ酸配列または実施形態をコードする核酸配列は、表２に一覧される。

【0066】

【表2-1】

【0067】

【表2-2】

【0068】

[0089]さらなる別の態様において、本発明の抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質は、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３２、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号７４、または配列番号７６に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0069】

[0090]さらなる別の態様において、本発明の抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質は、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、または配列番号３２、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号７４、または配列番号７６に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。

【0070】

[0091]さらなる別の態様において、１つまたは複数のアミノ酸の置換は、上記において説明されるアミノ酸配列のいずれにおいても為すことができる。好ましくは、そのような置換は、保存された置換であり、この場合、下記の群の１つにおけるアミノ酸が、同じ群の別のアミノ酸と置換される：（１）Ａ、Ｓ、Ｔ；（２）Ｅ、Ｄ；（３）Ｎ、Ｑ；（４）Ｒ、Ｋ；（５）Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ；および（６）Ｆ、Ｙ、Ｗ；ならびに、そのような置換は、融合ポリペプチドの結合活性を実質的に保存するように選択される。一実施形態において、保存された置換を有する本発明の抗体融合タンパク質は、ＩＬ－６ＲまたはＶＥＧＦリガンドに対して、そのような置換の前の約１２０％未満のＫ_ｄ値を有する。好ましくは、当該Ｋ_ｄ値は、そのような置換の前の約１１０％未満である。より好ましくは、当該Ｋ_ｄ値は、そのような置換の前の約１０５％未満である。

【0071】

[0092]ほとんどの保存された置換は、融合ポリペプチドのＩｇ様ドメインの特性において根本的な変化を生じるとは予想されない。しかしながら、置換を為す前に置換の正確な効果を予測するのが困難な場合、当業者は、常套的スクリーニングアッセイによって効果が評価されるであろうことを理解する。例えば、Ｉｇ様ドメインバリアントは、典型的には無傷の融合ポリペプチドをコードする核酸の部位特異的変異誘発、組換え細胞培養におけるバリアント核酸の発現、当該細胞培養由来のバリアント融合ポリペプチドの精製、およびバリアント融合ポリペプチドがＩＬ－６ＲまたはＶＥＧＦリガンドに特異的に結合する能力の検出によって作製される。Ｉｇ様ドメインにおける特定の置換が、融合ポリペプチドがＩＬ－６ＲまたはＶＥＧＦファミリーメンバーに結合する能力に影響を及ぼすか否か、ならびにその活性を阻害するか否かを特定するために用いることができる例示的結合アッセイは、Ｐａｒｋら， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２６９：２５６４６～２５６５４ （１９９４）による論文において説明される。

【0072】

[0093]融合タンパク質のＶＥＧＦＲ－１－Ｄ２結合ユニットは、高い親和性で遊離ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、および胎盤増殖因子（「ＰｌＧＦ」）を結合することができる（Ｄａｖｉｓ－Ｓｍｙｔｈら， ＥＭＢＯ Ｊ．， １５（１８）：４９１９ （１９９６））。融合タンパク質のＶＥＧＦＲ－２－Ｄ３結合ユニットは、高い親和性で遊離ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｃ、およびＶＥＧＦ－Ｄを結合することができる（Ｓｔｕｔｔｆｅｌｄら， Ｌｉｆｅ， ６１（９）：９１５ （２００９））。融合タンパク質のＶＥＧＦＲ－３－Ｄ１Ｄ２結合ユニットは、高い親和性で遊離ＶＥＧＦ－ＣおよびＶＥＧＦ－Ｄを結合することができる。したがって、本発明の融合タンパク質は、疾患の部位の内皮細胞におけるこれらのＶＥＧＦファミリーメンバーの血管形成活性を実質的に阻害することができる。

【0073】

[0094]さらなる別の態様において、本発明は、前記抗体融合タンパク質の重鎖および軽鎖をコードする単離された核酸分子を提供する。
[0095]さらなる別の態様において、本発明は、前記抗体融合タンパク質をコードする単離された核酸分子を提供し、この場合、前記単離された核酸分子は、：（ａ）ヒトＩＬ－６Ｒに対する抗体（「ｈＩＬ－６Ｒ抗体」）またはその抗原結合性断片もしくはドメインの重鎖をコードする核酸配列；（ｂ）前記ｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの軽鎖をコードする核酸配列；および（ｃ）ｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの前記重鎖をコードする前記核酸配列ならびにｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの前記軽鎖をコードする前記核酸配列のそれぞれに作動可能に連結されたＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメインをコードする核酸配列を含む。

【0074】

[0096]さらなる別の態様において、本発明は、前記抗体融合タンパク質をコードする単離された核酸分子を提供し；この場合、前記単離された核酸分子は、（ａ）ｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの重鎖をコードする核酸配列；（ｂ）前記ｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの軽鎖をコードする核酸配列；および（ｃ）ｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの前記重鎖をコードする前記核酸配列ならびにｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの前記軽鎖をコードする前記核酸配列のそれぞれに作動可能に連結されたＶＥＧＦＲ－１－Ｄ２およびＶＥＧＦＲ－２－Ｄ３をコードする核酸配列を含む。

【0075】

[0097]さらなる別の態様において、本発明は、前記抗体融合タンパク質をコードする単離された核酸分子を提供し；この場合、前記単離された核酸分子は、（ａ）配列番号１においてリストに示される配列を有する、ｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの重鎖をコードする核酸配列；（ｂ）配列番号３においてリストに示される配列を有する、前記ｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの軽鎖をコードする核酸配列；および（ｃ）ｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの前記重鎖をコードする前記核酸配列ならびにｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの前記軽鎖をコードする前記核酸配列のそれぞれに作動可能に連結された、配列番号５および７においてリストに示される配列を有する、ＶＥＧＦＲ－１－Ｄ２およびＶＥＧＦＲ－２－Ｄ３をコードする核酸配列を含む。

【0076】

[0098]さらなる別の態様において、本発明は、前記抗体融合タンパク質をコードする単離された核酸分子を提供し；この場合、前記単離された核酸分子は、（ａ）ｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの重鎖をコードする核酸配列；（ｂ）前記ｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの軽鎖をコードする核酸配列；（ｃ）ｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの前記重鎖をコードする前記核酸配列に作動可能に連結されたＶＥＧＦＲ－３－Ｄ１Ｄ２をコードする核酸配列；および（ｄ）ｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの前記軽鎖をコードする前記核酸配列に作動可能に連結されたＶＥＧＦＲ－１－Ｄ２およびＶＥＧＦＲ－２－Ｄ３をコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＥＧＦＲ－３－Ｄ１Ｄ２をコードする核酸配列は、ＶＥＧＦＲ－３－Ｄ１、ＶＥＧＦＲ－３－Ｄ２、およびＶＥＧＦＲ３－Ｄ３からなる群から選択される少なくともＶＥＧＦＲ－３ Ｉｇ様ドメインをコードする核酸配列で置き換えられる。

【0077】

[0099]さらなる別の態様において、本発明は、前記抗体融合タンパク質をコードする単離された核酸分子を提供し；この場合、前記単離された核酸分子は、（ａ）配列番号１においてリストに示される配列を有する、ｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの重鎖をコードする核酸配列；（ｂ）配列番号３においてリストに示される配列を有する、前記ｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの軽鎖をコードする核酸配列；（ｃ）ｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの前記重鎖をコードする前記核酸配列に作動可能に連結された、配列番号９においてリストに示される配列を有する、ＶＥＧＦＲ－３－Ｄ１Ｄ２をコードする核酸配列；および（ｄ）ｈＩＬ－６Ｒ抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインの前記軽鎖をコードする前記核酸配列に作動可能に連結された、配列番号５および７においてリストに示される配列を有する、ＶＥＧＦＲ－１－Ｄ２およびＶＥＧＦＲ－２－Ｄ３をコードする核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＥＧＦＲ－３－Ｄ１Ｄ２をコードする核酸配列は、ＶＥＧＦＲ－３－Ｄ１、ＶＥＧＦＲ－３－Ｄ２、およびＶＥＧＦＲ３－Ｄ３からなる群から選択される少なくともＶＥＧＦＲ－３ Ｉｇ様ドメインをコードする核酸配列で置き換えられる。

【0078】

[00100]さらなる別の態様において、本発明は、配列番号１７、２１、２５、２９、７９、８３、８７、９１、９５、または９９においてリストに示される配列を有する、前記抗体融合タンパク質の重鎖をコードする単離された核酸分子ならびに配列番号１９、２３、２７、３１、８１、８５、８９、９３、９７、または１０１においてリストに示される配列を有する、前記抗体融合タンパク質の軽鎖をコードする単離された核酸分子を提供する。

【0079】

[00101]さらなる別の態様において、前記単離された核酸分子は、さらに、シグナルポリペプチドをコードする先導核酸配列を含み得る。ＶＥＧＦ結合ユニットが抗体部分の重鎖または軽鎖のＣ末端に連結されているある特定の実施形態において、前記先導核酸配列は、配列番号１および３に先行する。

【0080】

[00102]別の態様において、本発明は、前記抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質をコードする単離された核酸分子を提供し；この場合、前記単離された核酸分子は、遺伝コードの縮重の結果として１つまたは複数のコドンにおいて本開示に一覧される核酸配列とは異なる核酸配列を含む。そのような異なる核酸配列は、本発明の範囲内である。

【0081】

[00103]さらなる別の態様において、本発明は、前記核酸分子のいずれかを含むベクター、例えば、発現制御配列に作動可能に連結された前記核酸分子のいずれかを含む発現ベクターなどを提供する。ベクターの実施形態は、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、配列番号２９、配列番号３１、配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号７５、配列番号７７、配列番号７９、配列番号８１、配列番号８３、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３、配列番号９５、配列番号９７、配列番号９９、および配列番号１０１からなる群から選択される核酸配列を含む。

【0082】

[00104]さらなる別の態様において、本発明は、好適な宿主細胞における発現ベクターを含む前記抗体融合タンパク質またはキメラタンパク質の作製のための宿主－ベクターシステムを提供する。

【0083】

[00105]一態様において、本発明は、本明細書において開示される抗体融合タンパク質の重鎖および軽鎖をコードする核酸分子の構築を提供し、この場合、核酸分子は、適切な宿主細胞に導入された場合に当該抗体融合タンパク質を発現することができるベクターに挿入される。適切な宿主細胞としては、これらに限定されるわけではないが、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞が挙げられる。ベクターへのＤＮＡ断片の挿入のための、当業者に既知の任意の方法は、転写／翻訳制御シグナルの制御下において、キメラポリペプチド分子をコードする発現ベクターを構築するために使用してもよい。これらの方法は、インビトロ組換えＤＮＡおよび合成技術およびインビボ組換え（遺伝的組換え）を含み得る（Ｓａｍｂｒｏｏｋら， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ； Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｅｄｓ． Ａｕｓｕｂｅｌら， Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌ． Ａｓｓｏｃ．， Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ， ＮＹを参照されたい）。

【0084】

[00106]本発明の抗体融合タンパク質をコードする核酸分子の発現は、抗体融合タンパク質が、核酸分子によって形質転換された宿主において発現されるように、第２の核酸配列（プロモーター）によって調整され得る。例えば、本明細書において説明される抗体融合タンパク質の発現は、当技術分野において既知の任意のプロモーター／エンハンサーエレメントによって制御され得る。

【0085】

[00107]概して、宿主細胞に適合する種から得られるレプリコンおよび制御配列を含むプラスミドベクターは、これらの宿主に関連して使用される。ベクターは、通常、複製部位を有し、ならびに、形質転換細胞における表現型選択を提供することができる配列をマークする。例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、典型的には、大腸菌種に由来するプラスミドであるｐＢＲ３２２を使用して形質転換される（例えば、Ｂｏｌｉｖａｒら， Ｇｅｎｅ， ２：９５ （１９７７）を参照されたい）。プラスミドｐＢＲ３２２は、アンピシリンおよびテトラサイクリン耐性のための遺伝子を含み、したがって、形質転換された細胞を識別するための容易な手段を提供する。ｐＢＲ３２２プラスミド、または他の微生物プラズミッドもしくはファージは、タンパク質の発現のために微生物によって使用され得るプロモーターも含まなければならないか、または含むように修飾されなければならない。

【0086】

[00108]組換えＤＮＡ構築において最も一般的に使用されるこれらのプロモーターは、β－ラクタマーゼ（ペニシリナーゼ）およびラクトースプロモーターシステムまたはトリプトファン（ｔｒｐ）プロモーターシステムを含む（Ｇｏｅｄｄｅｌら， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， ８：４０５７ （１９８０））。これらは、最も一般的に使用されるが、他の微生物プロモーターも発見され、利用されている。例えば、ｔａｃプロモーターは、ｔｒｐおよびｌａｃオペロン由来のプロモーターの組合せから作製された、合成的に作製されたＤＮＡプロモーターである（ｄｅ Ｂｏｅｒら， ＰＮＡＳ， （１９８３－０１－８０ （１）：２１～２５ （１９８３））。それは一般的に、大腸菌でのタンパク質産生のために使用される（Ａｍａｎｎら， Ｇｅｎｅ， ２５：１６７ （１９８３））。これらのプロモーターのいずれも、本発明の抗体融合タンパク質を作製する方法に関連して使用され得る。

【0087】

[00109]原核生物に加えて、真核微生物、例えば、酵母培養など、も使用してもよい。サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、または一般的なパン酵母は、真核微生物の中で最も一般的に使用されるが、いくつかの他の菌種も、一般的に利用可能である。サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）における発現の場合、例えば、プラスミドＹＲｐ７が（Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂら， Ｎａｔｕｒｅ， ２８２：３９ （１９７９））、一般的に使用される。他の例示的プラスミドは、米国特許第４，６１５，９７４号；Ｓｔｒｕｈｌら， ＰＮＡＳ，７６（３）：１０３５ （１９７９）において開示される。プラスミドＹＲｐ７は、トリプトファンを用いずに増殖する能力を欠く酵母の変異株に対する選択マーカーを提供するｔｒｐ１遺伝子、例えば、ＡＴＣＣ Ｎｏ．４４，０７６またはＲＨ２１８を含む（Ｊｏｎｅｓ， Ｇｅｎｅｔｉｃｓ， ８５：２３ （１９７７））。酵母宿主細胞ゲノムの特徴としてのｔｒｐ１病巣の存在は、リプトファンの非存在下での増殖によって形質転換を検出するための有効環境を提供する。

【0088】

[00110]酵母ベクターにおける好適なプロモート配列としては、３－ホスホグリセリン酸キナーゼのためのプロモーター（Ｈｉｔｚｅｍａｎら， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２５５：２０７３ （１９８０））または他の糖分解酵素、例えば、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、およびグルコキナーゼなど、が挙げられる（Ｒｏｍａｎｏｓら， Ｙｅａｓｔ， ８：４２３ （１９９２）； Ｗｅｉｎｈａｎｄｌら， Ｍｉｃｒｏｂ． Ｃｅｌｌ ｆａｃｔｏｒｉｅｓ， １３：５ （２０１４））。好適な発現プラスミドの構築において、これらの遺伝子に関連する終止配列も、ｍＲＮＡのポリアデニル化および停止を提供するために、発現されることが望まれる配列の３’において発現ベクターにライゲートされる。増殖条件によって制御される転写の追加の利点を有する他のプロモーター、例えば、アルコール脱水素酵素２に対するプロモーター領域、およびマルトースおよびガラクトース利用の原因となる酵素（Ｒｏｍａｎｏｓら， Ｗｅｉｎｈａｎｄｌら， 上記）。酵母に適合するプロモーター、複製起点および終結配列を含有するプラスミドベクターはいずれも好適である。

【0089】

[00111]微生物に加えて、多細胞生物に由来する細胞の培養物も、宿主として使用され得る。原則として、脊椎動物または無脊椎動物細胞培養物のどちらに由来するかにかかわらず、任意のそのような細胞培養は、実行可能である。しかしながら、はるかに注目されているのは脊椎動物細胞であり、培養（組織培養）における脊椎動物細胞の増殖は、近年においては常套的作業手順となっている（Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｋｒｕｓｅ ａｎｄ Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ， ｅｄｉｔｏｒｓ （１９７３））。そのような有用な宿主細胞系の例は、ベローとＨｅＬａ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系、ならびにＷ１３８、ＢＨＫ、ＣＯＳ－７、２９３、およびＭＤＣＫ細胞系である。そのような細胞に対する発現ベクターは、通常、複製起点、任意の必要なリボソーム結合部位と共に、発現される遺伝子の前に位置されたプロモーター、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、および転写終了配列を含む（必要であれば）。

【0090】

[00112]哺乳動物細胞における使用に対して、発現ベクターに関する制御機能は、しばしば、ウイルス性材料によって提供される。例えば、一般的に使用されるプロモーターは、ポリオーマ、アデノウイルス２、および、最も頻繁にはシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）から得られる。ＳＶ４０ウイルスの早期および後期プロモーターは、両方とも、ＳＶ４０ウイルス複製起点を含む断片としてウイルスから容易に得られるため、特に有用である（Ｆｉｅｒｓら， Ｎａｔｕｒｅ， ２７３：１１３ （１９７８））。より小さいまたはより長いＳＶ４０断片も、ＨｉｎｄＩＩＩ部位からウイルス複製起点に位置されたＢｇｌＩ部位へと延びる約２５０ｂｐの配列を含む限り、使用してもよい。さらに、そのような制御配列が宿主細胞のシステムに適合する限り、通常は所望の遺伝子配列に関連するプロモーターまたは制御配列を利用することも可能であり、しばしば望ましい。

【0091】

[00113]したがって、本発明により、本明細書において説明される抗体融合タンパク質をコードする核酸を含む、細菌宿主、酵母細胞宿主、昆虫細胞宿主、または哺乳動物細胞宿主において複製することができる発現ベクターが、宿主に感染させるために使用され、その結果として、そのような核酸の発現により融合ポリペプチドを産生させ、それらは、次いで、生物学的に活性な形態において回収され得る。本明細書において使用される場合、生物学的に活性な形態は、少なくともＶＥＧＦファミリーメンバーに結合することができる形態を含む。

【0092】

[00114]いくつかの実施形態において、宿主細胞は、大腸菌、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３細胞（単に２９３細胞としても知られる）、またはチャイニーズハムスター卵巣（「ＣＨＯ」）細胞であり得る。好ましくは、宿主細胞は、ＨＥＫ２９３細胞またはＣＨＯ細胞である。
ベクターの構築
[00115]所望のコード配列および制御配列を含む好適なベクターの構築は、標準的ライゲーション技術を用いる。単離されたプラスミドまたはＤＮＡ断片は、切断され、適合され、ならびに必要なプラスミドを形成するために望ましい形態においてライゲートされる。用いた方法は、ＤＮＡ源または意図された宿主に依存しない。切断は、好適な緩衝液において制限酵素（酵素群）によって処理することによって実施される。

【0093】

[00116]ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、またはＶＥＧＲ－３の１つまたは複数のＩｇ様ドメインを実質的にコードする核酸配列は、米国特許第６，８９７，２９４号に開示の方法に従って作製することができる。

【0094】

[00117]一実施形態において、ＶＥＧＦＲ－１のＩｇ様ドメイン２およびＶＥＧＦＲ－２のＩｇ様ドメイン３を実質的にコードする核酸配列は、所望の順序で縦一列にライゲートされる。このコンストラクトは、次いで、ｈＩＬ－６Ｒ抗体の重鎖および軽鎖をコードする核酸配列の３’末端にライゲートされる。別の実施形態において、このコンストラクトは、ｈＩＬ－６Ｒ抗体の軽鎖をコードする核酸配列の３’末端にライゲートされる。ＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン１および２あるいは２および３あるいは１、２、および３を実質的にコードする核酸配列を含む別の核酸コンストラクトは、ｈＩＬ－６Ｒ抗体の重鎖をコードする核酸配列の３’末端にライゲートされる。そのような核酸配列全体は、キメラ核酸配列とも呼ばれる。

【0095】

[00118]キメラ核酸配列全体は、次いで、遺伝子と共にリーディングフレームにプロモーターを含み、提案された宿主細胞に適合するような、ベクターに位置される。いくつかのプラスミド、例えば、米特許第４，４５６，７４８号；同第５，４６０，８１１号；同第５，８８８，８０８号；および同第６，３３３，１４７号に記載されるものなど、は、本発明の抗体融合タンパク質の作製において使用され得る。

【0096】

[00119]一実施形態において、本発明の抗体融合タンパク質のキメラ重鎖およびキメラ軽鎖は、米国特許第７，０７０，９５９号に記載の方法に従って作製される。配列番号１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、５９、６１、６３、６５、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、または１０１のキメラ核酸配列は、ＣＭＶプロモーターを有する発現ベクターｐＥＥ１４．１（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）に挿入される。

【0097】

[00120]一実施形態において、ＣＨＯ Ｋ１細胞は、ｐＥＥ１４．１／配列番号１７およびｐＥＥ１４．１／配列番号１９コンストラクトをトランスフェクトされ、次いで、増殖される。ＣＨＯ細胞から得られた抗体融合タンパク質は、米国特許第７，０７０，９５９号に記載されるように、精製され得、ならびに結合アッセイによってキャラクタリゼーションされ得る。

【0098】

[00121]同様に、ＣＨＯ Ｋ１細胞またはＨＥＫ２９３細胞は、ｐＥＥ１４．１／配列番号２１およびｐＥＥ１４．１／配列番号２３；またはｐＥＥ１４．１／配列番号２５およびｐＥＥ１４．１／配列番号２７；またはｐＥＥ１４．１／配列番号２９およびｐＥＥ１４．１／配列番号３１、またはｐｃＤＮＡ３．４／配列番号７９およびｐｃＤＮＡ３．４／配列番号８１、またはｐｃＤＮＡ３．４／配列番号８３およびｐｃＤＮＡ３．４／配列番号８５、またはｐｃＤＮＡ３．４／配列番号８７およびｐｃＤＮＡ３．４／配列番号８９、またはｐｃＤＮＡ３．４／配列番号９１およびｐｃＤＮＡ３．４／配列番号９３、またはｐｃＤＮＡ３．４／配列番号９５およびｐｃＤＮＡ３．４／配列番号９７、またはｐｃＤＮＡ３．４／配列番号９９およびｐｃＤＮＡ３．４／配列番号１０１の１対のベクターをトランスフェクトされ、構築され、ならびに増殖される。これらのＣＨＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞から得られた抗体融合タンパク質は、同様に精製され得、ならびにキャラクタリゼーションされ得る。

【0099】

[00122]一実施形態において、本発明の抗体融合タンパク質は、Ｋ_ｄ≦１０^－９ＭでｈＩＬ－６ＲおよびＶＥＧＦファミリーメンバーに結合することができる。別の実施形態において、本発明の抗体融合タンパク質は、Ｋ_ｄ≦５×１０^－１０ＭでＶＥＧＦファミリーメンバーに結合することができる。さらなる別の実施形態において、本発明の抗体融合タンパク質は、Ｋ_ｄ≦１０^－１０ＭでＶＥＧＦファミリーメンバーに結合することができる。

【0100】

[00123]一態様において、本発明は、異常な血管形成に原因を有する疾患、状態、または障害を治療または制御するための化合物、組成物、および方法を提供する。
[00124]別の態様において、本発明は、対象において、少なくとも眼の疾患、状態、または障害を治療または制御する方法を提供し、眼の疾患、状態、または障害は、異常な血管形成に原因を有する。当該方法は、そのような治療または制御を必要とする対象に本明細書において開示される抗体融合タンパク質を含む組成物を投与する工程を含む。そのような抗体融合タンパク質は、配列番号１８および２０；または配列番号２２および２４；または配列番号２６および２８；または配列番号３０および３２、または配列番号７８および８０；または配列番号８２および８４；または配列番号８６および８８；または配列番号９０および１００を有する１対の重鎖および軽鎖を含む。一実施形態において、そのような方法において使用される抗体融合タンパク質は、配列番号６０、６２、６４、６６、７４、または７６においてリストに示される配列を有するタンパク質の対または二量体を含み得る。別の実施形態において、そのような方法において使用される抗体融合タンパク質は、配列番号６０、６２、６４、６６、７４、または７６のアミノ酸１７において始まる配列を有するタンパク質の対または二量体を含み得る。

【0101】

[00125]さらなる別の態様において、前記眼の疾患、状態、または障害は、脈絡膜血管新生、新生血管加齢黄斑変性症（滲出型加齢黄斑変性症）、ポリープ状脈絡膜血管症（「ＰＣＶ」）、近視性脈絡膜血管新生、血管漏出、糖尿病による黄斑浮腫、ぶどう膜炎、網膜中心静脈閉塞症および網膜静脈分枝閉塞症、非増殖性および増殖性糖尿病性網膜症、早発網膜症、角膜血管新生、角膜炎、ならびに新生血管緑内障からなる群から選択される。

【0102】

[00126]一実施形態において、対象は、約２５～４０００マイクログラムの用量の融合ペプチドが投与される。別の実施形態において、対象は、約５０～４０００、約１００～４０００、約５００～４０００、約１０００～４０００、約２０００～４０００、約５０～３０００、約５０～２０００、約５０～１０００、または約５０～５００マイクログラムの用量の融合ペプチドが投与される。

【0103】

[00127]さらなる別の態様において、融合ポリペプチドを含む組成物は、点眼剤または眼注射（例えば、硝子体内、前房内、眼窩周囲、テノン嚢下、網膜下、または脈絡膜上注射など）の形態である。そのような組成物は、眼科用組成物を含む。本発明の抗体融合タンパク質は、疾患組織内またはその近傍に埋込み可能な医療装置にも組み込まれ得る。

【0104】

[00128]一実施形態において、本発明は、前区の疾患、状態、または障害、例えば、角膜血管新生、角膜炎、または新生血管緑内障などを治療または制御するための方法または組成物を提供する。融合ポリペプチドを含む組成物は、点眼剤あるいは前房内または結膜下注射の形態であってもよい。別の実施形態において、本発明は、後区の疾患、状態、または障害、例えば、脈絡膜血管新生、新生血管加齢黄斑変性症（滲出型加齢黄斑変性症）、ポリープ状脈絡膜血管症（「ＰＣＶ」）、近視性脈絡膜血管新生、血管漏出、糖尿病による黄斑浮腫、ぶどう膜炎、網膜中心静脈閉塞症および網膜静脈分枝閉塞症、非増殖性および増殖性糖尿病性網膜症、早発網膜症などを治療または制御するための方法または組成物を提供する。この場合、融合ポリペプチドを含む組成物は、硝子体内注射の形態において投与され得る。

【0105】

[00129]さらなる別の態様において、点眼剤は、疾患、状態、または障害が実質的に治療されるかまたは制御されるまで、少なくとも１日１回、少なくとも１週間に１回、または少なくとも１か月に１回、対象に投与される。

【0106】

[00130]さらなる別の態様において、当該組成物は、少なくとも１か月間、少なくとも２か月間、少なくとも３か月間、または少なくとも６か月間にわたって、持続性薬物放出によって対象に投与される。

【0107】

[00131]さらなる別の態様において、硝子体内注射あるいは疾患組織内またはその近傍への注射は、特定の患者に対して医師によって推奨されるレジメンに従って対象に投与される。例えば、注射は、疾患、状態、または障害が実質的に治療されるかまたは制御されるまで、少なくとも１か月に１回、少なくとも２か月毎に１回、少なくとも３か月毎に１回、または少なくとも６か月毎に１回投与され得る。一実施形態において、治療は、開始時においてより頻繁に、次いで、しばらくするとあまり頻繁ではなく、投与され得る。そのような期間は、医師によって決定され得る。

【0108】

[00132]そのような眼科用組成物における本発明の抗体融合タンパク質の濃度は、約０．１ｍｇ／ｍｌ～約２００ｍｇ／ｍｌ（または、択一的に、約０．２５ｍｇ／ｍｌ～約２００ｍｇ／ｍｌ、または約０．２５ｍｇ／ｍｌ～約１６０ｍｇ／ｍｌ、または約０．５ｍｇ／ｍｌ～約１００ｍｇ／ｍｌ、または約０．２５ｍｇ／ｍｌ～約５０ｍｇ／ｍｌ、または約０．５ｍｇ／ｍｌ～約２００ｍｇ／ｍｌ、または約０．５ｍｇ／ｍｌ～約１６０ｍｇ／ｍｌ、または約０．５ｍｇ／ｍｌ～約１００ｍｇ／ｍｌ、または約０．５ｍｇ／ｍｌ～約５０ｍｇ／ｍｌ、または約１ｍｇ／ｍｌ～約２００ｍｇ／ｍｌ、または１ｍｇ／ｍｌ～約１６０ｍｇ／ｍｌ、または約０．５ｍｇ／ｍｌ～約１００ｍｇ／ｍｌ、または約１ｍｇ／ｍｌ～約５０ｍｇ／ｍｌ）の範囲であり得る。

【0109】

[00133]さらなる別の態様において、本発明の組成物を調製する方法は、（ａ）ある量の本発明の抗体融合タンパク質；および（ｂ）生理学的に許容される担体を組み合わせる工程を含む。

【0110】

[00134]一実施形態において、そのような生理学的に許容される担体は、無菌生理食塩水または生理学的に許容される緩衝液であり得る。別の実施形態において、そのような担体は、疎水性媒体、例えば、薬学的に許容される油などを含む。さらなる別の実施形態において、そのような担体は、疎水性材料と水のエマルジョンを含む。さらなる別の実施形態において、本発明の抗体融合タンパク質は、長い循環時間を提供するために、高分子量材料に会合していても、または連結されていてもよい。

【0111】

[00135]生理学的に許容される緩衝液としては、これらに限定されるわけではないが、リン酸緩衝液またはＴｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液（（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンおよびＨＣｌを含む）が挙げられる。例えば、７．４のｐＨを有するＴｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液は、３ｇ／ｌのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンおよび０．７６ｇ／ｌのＨＣｌを含む。さらなる別の態様において、緩衝液は、１０倍のリン酸緩衝液生理食塩水（「ＰＢＳ」）または５倍のＰＢＳ溶液である。生物製剤を含む注射可能の組成物に使用される緩衝液の非限定的な例としては、ホスフェート、クエン酸、酢酸、トロメタミン、ヒスチジン、アルギニン、グルコン酸、乳酸、酒石酸、アスパラギン酸、およびグルタミン酸が挙げられる。

【0112】

[00136]いくつかの状況において好適または望ましい他の緩衝液、例えば、２５℃で７．５のｐＫ_ａおよび約６．８～８．２の範囲のｐＨを有するＨＥＰＥＳ（Ｎ－｛２－ヒドロキシエチル｝ピペラジン－Ｎ’－｛２－エタンスルホン酸｝）；２５℃で７．１のｐＫ_ａおよび約６．４～７．８の範囲のｐＨを有するＢＥＳ（Ｎ，Ｎ－ビス｛２－ヒドロキシエチル｝２－アミノエタンスルホン酸）；２５℃で７．２のｐＫ_ａおよび約６．５～７．９の範囲のｐＨを有するＭＯＰＳ（３－｛Ｎ－モルホリノ｝プロパンスルホン酸）；２５℃で７．４のｐＫ_ａおよび約６．８～８．２の範囲のｐＨを有するＴＥＳ（Ｎ－トリス｛ヒドロキシメチル｝－メチル－２－アミノエタンスルホン酸）；２５℃で７．６のｐＫ_ａおよび約６．９～８．３の範囲のｐＨを有するＭＯＢＳ（４－｛Ｎ－モルホリノ｝ブタンスルホン酸）；２５℃で７．５２のｐＫ_ａおよび約７～８．２の範囲のｐＨを有するＤＩＰＳＯ（３－（Ｎ，Ｎ－ビス｛２－ヒドロキシエチル｝アミノ）－２－ヒドロキシプロパン））；２５℃で７．６１のｐＫ_ａおよび約７～８．２の範囲のｐＨを有するＴＡＰＳＯ（２－ヒドロキシ－３｛トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ｝－１－プロパンスルホン酸））をベースとする緩衝液など、も見出され得る。

【0113】

[00137]ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、酸性ｐＨ、例えば、約４から約６．８、または択一的に、約５から約６．８などを有する緩衝液において製剤化される。そのような実施形態において、組成物の当該緩衝能は、望ましくは、当該組成物が患者に投与された後に急速に生理的ｐＨになることを可能にする。

【0114】

[00138]緩衝液に加えて、本発明の組成物は、界面活性剤、安定化剤、防腐剤、助溶媒、湿潤剤、皮膚軟化剤、キレート化剤、等張化剤、および酸化防止剤からなる群から選択される材料を含み得る。

【0115】

[00139]一態様において、本発明の組成物に使用され得るこれらの材料のいずれも、生理学的に許容される材料である。ある特定の実施形態では、本発明の組成物に使用され得るこれらの材料のいずれも、眼科的に許容される（ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃａｌｌｙ ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ）材料である。

【0116】

[00140]用いられ得る水溶性保存薬としては、第四級アンモニウム化合物、例えば、塩化ベンザルコニウムおよび様々なポリクアテルニウム化合物など、が挙げられる。これらの薬剤は、約０．００１～約２重量％（好ましくは、約０．０１重量％から約０．０５重量％）の個別の量において存在し得る。

【0117】

[00141]界面活性剤の非限定的な例としては、これらに限定されるわけではないが、非イオン性界面活性剤、例えば、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０など）、４－（１，１，３，３－テトラメチルブチル）フェノール／ポリ（オキシエチレン）ポリマー（例えば、商標Ｔｙｌｏｘａｐｏｌにおいて販売されているポリマーなど）、ポリ（オキシエチレン）－ポリ（オキシプロピレン）ブロックコポリマー、脂肪酸のグリコールのエステルなど、ならびにそれらの混合物が挙げられる。

【0118】

[00142]一態様において、組成物のｐＨは、約４から約８の範囲である。あるいは、組成物のｐＨは、約６から約８、または約６．５から約８、または約６．５から約７．５の範囲である。

【0119】

[00143]別の態様において、組成物は、約７のｐＨを有する。あるいは、組成物は、約７から約７．５の範囲のｐＨを有する。
[00144]さらなる別の態様において、組成物は、約７．４のｐＨを有する。

【0120】

[00145]さらなる別の態様において、組成物は、対象への組成物の投与を容易にするように、または対象におけるバイオアベイラビリティを促進するように設計された粘度変更化合物も含み得る。さらなる別の態様において、粘度変更化合物は、組成物が眼の環境に投与された後に容易には分散されないように選択され得る。そのような化合物は、組成物の粘度を高め得、ならびに、そのような化合物としては、これらに限定されるわけではないが、モノマー性ポリオール、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、エチレングリコールなど；ポリマー性ポリオール、例えば、ポリエチレングリコールなど；セルロースファミリーの様々なポリマー、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（「ＨＰＭＣ」）、カルボキシメチルセルロース（「ＣＭＣ」）ナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース（「ＨＰＣ」）など；多糖、例えば、ヒアルロン酸およびその塩、コンドロイチン硫酸塩およびその塩など、デキストラン、例えば、デキストラン７０など、水溶性タンパク質、例えば、ゼラチンなど；ビニルポリマー、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポピドンなど；カルボマー、例えば、カルボマー９３４Ｐ、カルボマー９４１、カルボマー９４０、またはカルボマー９７４Ｐなど；ならびにアクリル酸ポリマーが挙げられる。概して、所望の粘度は、約１～約４００センチポアズ（「ｃｐｓ」）またはｍＰａ．ｓの範囲であり得る。

【0121】

[00146]キレート化剤の非限定的な例としては、エチレンジアミン四酢酸（「ＥＤＴＡ」）、ジエチレントリアミンペンタキス（メチルホスホン酸）、エチドロン酸、エチドロン酸の四ナトリウム塩（「ＨＡＰ」としても知られる）が挙げられる。

【0122】

[00147]緩衝液自体は、特定のイオン濃度およびｐＨにおいて点眼液を広く維持する、「張度調節剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ－ａｄｊｕｓｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）」および「ｐＨ調節剤」であり、溶液の最終張度を調節するために、さらなる「張度調節剤」を加えることができる。そのような張度調節剤は、当業者に周知であり、ならびに、そのような張度調節剤としては、これらに限定されるわけではないが、マンニトール、ソルビトール、デキストロース、スクロース、尿素、プロピレングリコール、およびグリセリンが挙げられる。さらに、一価のカチオンのハロゲン塩（例えば、ＮａＣｌまたはＫＣｌ）を含む様々な塩を用いることができる。典型的には、本発明の製剤の張度は、約２００～４００ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲である。あるいは、本発明の製剤の張度は、約２２０～４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、または約２２０～３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、または約２２０～３００ｍＯｓｍ／ｋｇ、または約２５０～３５０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲である。

【0123】

[00148]抗酸化剤の非限定的な例としては、アスコルビン酸（ビタミンＣ）ならびにその塩およびエステル；トコフェロール（α－トコフェロールなど）およびトコトリエノール（ビタミンＥ）、ならびにその塩およびエステル（例えば、ビタミンＥ ＴＧＰＳ（Ｄ－α－トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート）など）；グルタチオン；リポ酸；尿酸；ブチル化ヒドロキシアニソール（「ＢＨＡ」）；ブチル化ヒドロキシトルエン（「ＢＨＴ」）；第三級ブチルヒドロキノン（「ＴＢＨＱ」）；ならびにポリフェノール抗酸化剤（例えば、没食子酸、桂皮酸、フラボノイド、ならびにそれらの塩、エステル、および誘導体など）が挙げられる。

【0124】

[00149]安定化剤の非限定的な例としては、スクロース、マンニトール、ソルビトール、およびトレハロースが挙げられる。
[00150]下記の実施例における様々な成分または混合物の比率は、適切な状況に対して調節され得ることが理解されるべきである。

【0125】

[00151]別の態様において、本発明の抗体融合タンパク質ならびに適切な量の１つまたは複数の所望の賦形剤が、眼の一部、例えば、前区または後区、あるいは硝子体液など、への局所投与または注射のために製剤に組み入れられる。注射製剤は、望ましくは、有効成分の持続放出、例えば、約１週間より長い期間（または約１、２、３、４、５、または６か月より長い期間）などの放出を提供する担体を含むことができる。ある特定の実施形態において、本発明の抗体融合タンパク質は、長期間、例えば、４、５、６か月間またはそれ以上にわたる有効生物の持続放出のために送達装置に含められる。そのような送達装置の例は、米国特許第８，３９９，００６号および同第９，４１７，２３８号に記載される。

【0126】

[00152]さらなる別の態様において、本発明の抗体融合タンパク質と所望の賦形剤とを含む組成物は、凍結乾燥され、ならびに、対象への投与の実質的に直前に、生理学的に許容される液体担体によって再構成される。

【0127】

[00153]一実施形態において、本発明の化合物または組成物は、例えば２５～３５ゲージなどの微細なゲージの針によって注射することができる。典型的には、約２５～４０００μｇの本発明の抗体融合タンパク質を含む組成物の約２５μｌから約１００μｌの量が、患者に投与される。一実施形態において、抗体融合タンパク質は、配列番号１８および２０；または配列番号２２および２４；または配列番号２６および２８；または配列番号３０および３２、または配列番号７８および８０；または配列番号８２および８４；または配列番号８６および８８；または配列番号９０および１００においてリストに実質的に示される重鎖および軽鎖アミノ酸配列を有する。別の実施形態において、そのような手順において使用される抗体融合タンパク質は、配列番号６０、６２、６４、６６、７４、または７６においてリストに実質的に示される配列を有するタンパク質の対または二量体を含み得る。さらなる別の実施形態において、そのような手順において使用される抗体融合タンパク質は、配列番号６０、６２、６４、６６、７４、または７６においてリストに実質的に示される配列のアミノ酸１７において始まる配列を有するタンパク質の対または二量体を含み得る。さらなる別の実施形態において、抗体融合タンパク質は、配列番号１８および２０；または配列番号２２および２４；または配列番号２６および２８；または配列番号３０および３２、または配列番号７８および８０；または配列番号８２および８４；または配列番号８６および８８；または配列番号９０および１００においてリストに示される重鎖および軽鎖アミノ酸配列を有する。さらなる別の実施形態において、そのような手順において使用される抗体融合タンパク質は、配列番号６０、６２、６４、６６、７４、または７６においてリストに示される配列のアミノ酸１７において始まる配列を有するタンパク質の対または二量体を含み得る。そのような抗体融合タンパク質の濃度は、上記において開示される範囲から選択される。

【0128】

[00154]さらなる別の態様において、本発明の抗体融合タンパク質は、生分解性材料を含む眼科用装置に組み入れられ、当該装置は、長期間（例えば、約１週間より長い、あるいは約１、２、３、４、５、または６か月間より長い）の血管形成疾患、状態、または障害の治療または制御を提供するために、対象の後区組織にインプラントされる。そのような装置は、ベテラン医師によって対象の眼または眼周囲組織にインプラントされ得る。有効成分の持続放出のための眼科用インプラントシステムまたは装置の非限定的な例は、米国特許第５，３７８，４７５号；同第５，７７３，０１９号；同第５，９０２，５９８号；同第６，００１，３８６号；同第６，０５１，５７６号；および同第６，７２６，９１８号において開示される。

【0129】

[00155]さらなる別の態様において、眼の血管形成疾患、状態、または障害を治療または制御する方法は、本発明の抗体融合タンパク質を含む組成物をそれを必要とする対象に投与する工程を含む。

【0130】

[00156]さらなる別の態様において、前記方法において使用される抗体融合タンパク質は、ＩＬ－６Ｒに対する抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインを含み、この場合、（１）軽鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインおよび（２）重鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインのうちの少なくとも一方は、（１）（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２；および（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３；あるいは（２）ヒトＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン１、２、および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１、２、および３からなる群から選択される少なくともＩｇ様ドメインを含むＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている。一実施形態において、ＶＥＧＦ結合ユニットは、（ａ）Ｉｇ様ドメイン１および２あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１および２；または（ｂ）Ｉｇ様ドメイン２および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン２および３；または（ｃ）ヒトＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン１、２、および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１、２、および３を含む。

【0131】

[00157]さらなる別の態様において、眼の血管形成疾患、状態、または障害を治療または制御する方法は、配列番号１８および２０；または配列番号２２および２４；または配列番号２６および２８；配列番号３０および３２；配列番号７８および８０；配列番号８２および８４；配列番号８６および８８；配列番号９０および９２；配列番号９４および９６；または配列番号９８および１００においてリストに示される重鎖および軽鎖アミノ酸配列を有する抗体融合タンパク質；または、配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号７４、または配列番号７６においてリストに示されるアミノ酸配列を有する抗体融合タンパク質を含む組成物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む。さらなる別の態様において、そのような方法において使用される抗体融合タンパク質は、配列番号６０、６２、６４、６６、７４、または７６においてリストに示される配列のアミノ酸１７において始まる配列を有するタンパク質の対または二量体を含み得る。

【0132】

[00158]さらなる別の態様において、眼の後区の異常な血管形成に原因を有する眼の血管形成疾患、状態、または障害を治療または制御する方法は、配列番号１８および２０；または配列番号２２および２４；または配列番号２６および２８；または配列番号３０および３２；配列番号７８および８０；配列番号８２および８４；配列番号８６および８８；配列番号９０および９２；配列番号９４および９６；または配列番号９８および１００においてリストに示される重鎖および軽鎖アミノ酸配列を有する抗体融合タンパク質；または配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号７４、または配列番号７６においてリストに示されるアミノ酸配列を有する抗体融合タンパク質を含む組成物を、それを必要とする対象に硝子体内注射する工程を含む。さらなる別の態様において、そのような方法において使用される抗体融合タンパク質は、配列番号６０、６２、６４、６６、７４、または７６においてリストに示される配列のアミノ酸１７において始まる配列を有するタンパク質の対または二量体を含み得る。

【0133】

[00159]別の実施形態において、そのような疾患、状態、または障害は、脈絡膜血管新生、例えば、新生血管加齢黄斑変性症（滲出型加齢黄斑変性症）、ポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）、および近視性脈絡膜血管新生変性症（ｍｙｏｐｉｃ ｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｎｅｏｖａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）など、血管漏出、糖尿病による黄斑浮腫、ぶどう膜炎、網膜中心静脈閉塞症および網膜静脈分枝閉塞症、非増殖性および増殖性糖尿病性網膜症、早発網膜症、角膜血管新生、角膜炎、ならびに新生血管緑内障からなる群から選択される。

【0134】

[00160]さらなる別の態様において、本発明の組成物は、１週間に１回、１か月に１回、１年に１回、１年に２回、１年に４回、あるいは、前区炎症性の疾患、状態、または障害を治療または制御するために適切であるように決定される好適な頻度において投与される。

【0135】

[00161]さらなる別の態様において、本発明の抗体融合タンパク質は、腫瘍、全身性炎症性疾患または状態、あるいは自己免疫疾患、例えば、関節炎などの治療または制御のためにも使用することができる。そのような治療または制御は、例えば、全身投与によって行われ得る。そのような疾患または状態を治療するための投薬量およびレジメンは、医師によって特定の疾患または状態に対して特定され得るかまたは推奨され得る。

【実施例】

【0136】

実施例１
ＶＥＧＦＲ－１－Ｄ２、ＶＥＧＦＲ－２－Ｄ３、およびＩＬ－６Ｒに対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を含む抗体融合タンパク質
[00162]本発明の６つの抗体融合タンパク質を、本明細書において開示される方法に従って作製し、Ｂ７８１４０１、Ｂ７８１４０２、Ｂ７８１４０３、Ｂ７８１４０４、Ｂ７８１４０５、およびＢ７８１４０６と命名した。

【0137】

[00163]Ｂ７８１４０１は、トシリズマブ（ＩＬ－６Ｒに対するｍＡｂ）の重鎖のアミノ末端に直接連結されたＶＥＧＦＲ－１－Ｄ２－ＶＥＧＦＲ－２－Ｄ３からなるＶＥＧＦ結合ユニットからなる。Ｂ７８１４０１の重鎖は、配列番号７８のアミノ酸配列および配列番号７９の核酸配列を有する。Ｂ７８１４０１の軽鎖は、配列番号８０のアミノ酸配列および配列番号８１の核酸配列を有する。

【0138】

[00164]Ｂ７８１４０２、Ｂ７８１４０３、およびＢ７８１４０４のそれぞれは、トシリズマブの重鎖のアミノ末端にフレキシブルなリンカーを介して連結されたＶＥＧＦＲ－１－Ｄ２－ＶＥＧＦＲ－２－Ｄ３からなるＶＥＧＦ結合ユニットからなる。Ｂ７８１４０２、Ｂ７８１４０３、およびＢ７８１４０４の重鎖は、それぞれ配列番号８２、配列番号８６、および配列番号９０のアミノ酸配列ならびにそれぞれ配列番号８３、配列番号８７、および配列番号９１の核酸配列を有する。Ｂ７８１４０２、Ｂ７８１４０３、およびＢ７８１４０４の軽鎖は、それぞれ配列番号８４、配列番号８８、および配列番号９２のアミノ酸配列ならびにそれぞれ配列番号８５、配列番号８９、および配列番号９３の核酸配列を有する。

【0139】

[00165]Ｂ７８１４０５は、トシリズマブの軽鎖のアミノ末端に直接連結されたＶＥＧＦＲ－１－Ｄ２－ＶＥＧＦＲ－２－Ｄ３からなるＶＥＧＦ結合ユニットからなる。Ｂ７８１４０５の重鎖は、配列番号９４のアミノ酸配列および配列番号９５の核酸配列を有する。Ｂ７８１４０５の軽鎖は、配列番号９６のアミノ酸配列および配列番号９７の核酸配列を有する。

【0140】

[00166]Ｂ７８１４０６は、トシリズマブの軽鎖のアミノ末端にフレキシブルなリンカーを介して連結されたＶＥＧＦＲ－１－Ｄ２－ＶＥＧＦＲ－２－Ｄ３からなるＶＥＧＦ結合ユニットからなる。Ｂ７８１４０６の重鎖は、配列番号９８のアミノ酸配列および配列番号９９の核酸配列を有する。Ｂ７８１４０６の軽鎖は、配列番号１００のアミノ酸配列および配列番号１０１の核酸配列を有する。

【0141】

[00167]Ｂ７８１４０１、Ｂ７８１４０２、Ｂ７８１４０５、およびＢ７８１４０６の重鎖のカルボキシ末端は、グリシンおよびリジンアミノ酸残基を有さない。Ｂ７８１４０４の重鎖のカルボキシ末端は、リジンアミノ酸残基を有さない。Ｂ７８１４０３の重鎖のカルボキシ末端は、グリシンおよびリジンアミノ酸残基を含む。

【0142】

[00168]図７Ａ～Ｄは、抗体融合タンパク質Ｂ７８１４０１～７８１４０６の概略図を示している。
実施例２
ＶＥＧＦＲ－１－Ｄ２－ＶＥＧＦＲ－２－Ｄ３に連結したＩＬ－６Ｒ結合ｓｃＦｖを含む抗体融合タンパク質
[00169]本発明の４つの抗体融合タンパク質を、本明細書において開示される方法に従って作製し、ＥＢ－ＤＪ１、ＥＢ－ｖｖＡ、ＥＢ－ｖｖＢ、ＥＢ－ｖｖＣと命名した。これらの融合タンパク質のそれぞれは、１対のコンストラクトまたはコンストラクトの二量体を含み、そのそれぞれは、ＩＬ－６Ｒ ｓｃＦｖ、ＩｇＧ１のＦｃドメイン、ならびに、ヒトＶＥＧＦＲ－１－Ｄ２とヒトＶＥＧＦＲ－２－Ｄ３とを含むＶＥＧＦ結合ユニットを含む。詳細には、ＥＢ－ＤＪ１およびＥＢ－ｖｖＡのそれぞれは、コンストラクトの二量体からなり、そのそれぞれは、ＩｇＧ１のＦｃドメインに連結したＩＬ－６Ｒ ｓｃＦｖからなる。当該ＩｇＧ１－Ｆｃドメインのカルボキシ末端は、ＶＥＧＦＲ－１－Ｄ２－ＶＥＧＦＲ－２－Ｄ３からなるＶＥＧＦ結合ユニットにフレキシブルなリンカーを介して連結されている。ＥＢ－ＤＪ１のコンストラクトは、配列番号６０のアミノ酸配列および配列番号５９の核酸配列を有する。ＥＢ－ｖｖＡのコンストラクトは、配列番号７４のアミノ酸配列および配列番号７５の核酸配列を有する。

【0143】

[00170]ＥＢ－ｖｖＢは、コンストラクトの二量体からなり、そのそれぞれは、ＶＥＧＦＲ－１－Ｄ２－ＶＥＧＦＲ－２－Ｄ３からなるＶＥＧＦ結合ユニットにフレキシブルなリンカーを介して連結したＩＬ－６Ｒ ｓｃＦｖからなる。当該ＶＥＧＦ結合ユニットのカルボキシ末端は、当該ＩｇＧ１－Ｆｃドメインに直接連結されている。ＥＢ－ｖｖＢのコンストラクトは、配列番号６２のアミノ酸配列および配列番号６１の核酸配列を有する。

【0144】

[00171]ＥＢ－ｖｖＣは、コンストラクトの二量体からなり、そのそれぞれは、ＩｇＧ１－Ｆｃドメインに直接連結されたＶＥＧＦＲ－１－Ｄ２－ＶＥＧＦＲ－２－Ｄ３からなるＶＥＧＦ結合ユニットからなる。当該ＩｇＧ１－Ｆｃドメインのカルボキシ末端は、ＩＬ－６Ｒ ｓｃＦｖにフレキシブルなリンカーを介して連結されている。ＥＢ－ｖｖＣのコンストラクトは、配列番号７６のアミノ酸配列および配列番号７７の核酸配列を有する。

【0145】

実施例２
組換えヒトＶＥＧＦ－Ａ_１６５に対するＥＢ－ＤＪ１、ＥＢ－ｖｖＡ、ＥＢ－ｖｖＢ、およびＥＢ－ｖｖＣとアフリベルセプト、Ｂ７８１４０３、およびＢ７８１４０５のＥＬＩＳＡ結合親和性の比較
[00172]図８は、抗体融合タンパク質ＥＢ－ＤＪ１、ＥＢ－ｖｖＡ、ＥＢ－ｖｖＢ、およびＥＢ－ｖｖＣの概略図を示している。

【0146】

実施例３
Ｂ７８１４０１～７８１４０６の一過性発現および精製
[00173]配列番号７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、および１０１よって示されるＢ７８１４０１～７８１４０６のアミノ酸配列をコードする遺伝子を合成し、当該タンパク質を発現するためのベクターｐｃＤＮＡ３．４をベースとする発現ベクターを構築した。既知組成の培養培地によってＨＥＫ２９３細胞に一過的にトランスフェクトするために、当該発現ベクターを使用した。作製されたタンパク質を、プロテインＡアフィニティーカラムによる限外ろ過によって精製し、次いで、大半の高純度のタンパク質を得るために０．２μｍの無菌ろ過を行った。ＨＥＫ２９３細胞でのＢ７８１４０１～７８１４０６の発現は、ＳＥＣ－ＨＰＬＣによって分析した場合に約１００％の純度を有する約２００ＫＤａのＭＷ（ＳＤＳ－ＰＡＧＥにおいて非還元型）のタンパク質を生じた。Ｂ７８１４０１のＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムが図９に示される。Ｂ７８１４０１～７８１４０６の発現および精製の結果は、表３に示される。

【0147】

【表3】

【0148】

[00174]配列番号７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、および１０１によって示されるＢ７８１４０１～７８１４０６のアミノ酸配列をコードする遺伝子を合成し、当該タンパク質を発現するためのベクターｐｃＤＮＡ３．４をベースとする発現ベクターを構築した。既知組成の培養培地によってＣＨＯ細胞に一過的にトランスフェクトするために、当該発現ベクターを使用した。作製されたタンパク質を、プロテインＡアフィニティーカラムによる限外ろ過によって精製し、次いで、大半の高純度のタンパク質を得るために０．２μｍの無菌ろ過を行った。ＣＨＯ細胞でのＢ７８１４０１～７８１４０６の発現は、ＳＥＣ－ＨＰＬＣによって分析した場合に約９３％の純度を有する約２００ＫＤａのＭＷ（ＳＤＳ－ＰＡＧＥにおいて非還元型）のタンパク質を生じた。Ｂ７８１４０１のＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムが、図１０に示される。Ｂ７８１４０１～７８１４０６の発現および精製の結果は表４に示される。

【0149】

【表4】

【0150】

実施例４
酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用した、組換えヒトＶＥＧＦ－Ａ_１６５に対するＢ７８１４０１～７８１４０６とアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））の結合親和性の比較
[00175]組換えヒトＶＥＧＦ－Ａ_１６５（２μｇ／ｍｌ、１００μｌ／ウェル）でコーティングした９６ウェルプレートを使用して、＋４℃において１６時間、ＥＬＩＳＡアッセイを実施した。１％のＢＳＡを使用した２５℃での１時間の非特異的ブロッキングの後、試験抗体の一連の希釈物を当該コーティングされたウェルに加え、２５℃で１時間インキュベートした。結合したＡｂを、ＨＲＰで標識された二次Ａｂ（ヤギ抗ヒトＩｇＧ１－Ｆｃ）を使用して検出し、その後、ＯＤ_４５０を読み取った。組換えヒトＶＥＧＦ－Ａ_１６５に対するＢ７８１４０１～７８１４０６の結合親和性は、サブナノモルスケールであり、アフリベルセプトに匹敵する。結果は図１１に示される。

【0151】

実施例５
組換えヒトＶＥＧＦ－Ｂ_１６７に対するＢ７８１４０１～７８１４０６とアフリベルセプトのＥＬＩＳＡ結合親和性の比較
[00176]組換えヒトＶＥＧＦ－Ｂ_１６７（２μｇ／ｍｌ、１００μｌ／ウェル）でコーティングした９６ウェルプレートを使用して、＋４℃において１６時間、ＥＬＩＳＡアッセイを実施した。１％のＢＳＡを使用した２５℃での１時間の非特異的ブロッキングの後、試験抗体の一連の希釈物を当該コーティングされたウェルに加え、２５℃で１時間インキュベートした。結合したＡｂを、ＨＲＰで標識された二次Ａｂ（ヤギ抗ヒトＩｇＧ１－Ｆｃ）を使用して検出し、その後、ＯＤ_４５０を読み取った。組換えヒトＶＥＧＦ－Ａ_１６５に対するＢ７８１４０１～７８１４０６の結合親和性は、サブナノモルスケールであり、アフリベルセプトに匹敵する。結果は図１２に示される。

【0152】

実施例６
組換えヒトＰｌＧＦに対するＢ７８１４０１～７８１４０６とアフリベルセプトのＥＬＩＳＡ結合親和性の比較
[00177]組換えヒトＰｌＧＦ（２μｇ／ｍｌ、１００μｌ／ウェル）でコーティングした９６ウェルプレートを使用して、＋４℃において１６時間、ＥＬＩＳＡアッセイを実施した。１％のＢＳＡを使用した２５℃での１時間の非特異的ブロッキングの後、試験抗体の一連の希釈物を当該コーティングされたウェルに加え、２５℃で１時間インキュベートした。結合したＡｂを、ＨＲＰで標識された二次Ａｂ（ヤギ抗ヒトＩｇＧ１－Ｆｃ）を使用して検出し、その後、ＯＤ_４５０を読み取った。組換えヒトＰｌＧＦに対するＢ７８１４０１～７８１４０６の結合親和性は、サブナノモルスケールであり、ならびにアフリベルセプトに匹敵する。結果は図１３に示される。

【0153】

実施例７
組換えヒトＩＬ－６Ｒに対するＢ７８１４０１～７８１４０６とトシリズマブのＥＬＩＳＡ結合親和性の比較
[00178]組換えヒトＩＬ－６Ｒ（２μｇ／ｍｌ、１００μｌ／ウェル）でコーティングした９６ウェルプレートを使用して、＋４℃において１６時間、ＥＬＩＳＡアッセイを実施した。１％のＢＳＡを使用した２５℃での１時間の非特異的ブロッキングの後、試験抗体の一連の希釈物をＩＬ－６Ｒコーティングされたウェルに加え、２５℃で１時間インキュベートした。結合したＡｂを、ＨＲＰで標識された二次Ａｂ（ヤギ抗ヒトＩｇＧ１－Ｆｃ）を使用して検出し、その後、ＯＤ_４５０を読み取った。組換えヒトＩＬ－６Ｒに対するＢ７８１４０１～７８１４０６の結合親和性は、サブナノモルスケールであり、ならびにトシリズマブに匹敵する。結果は図１７に示される。

【0154】

実施例８
ＶＥＧＦＲ２－ＮＦＡＴ－ＲＥルシフェラーゼレポーター細胞におけるＶＥＧＦ－Ａ_１６５媒介性ＶＥＧＦＲ２シグナル伝達の阻害に対するＢ７８１４０１～７８１４０６とアフリベルセプトの効果の比較
[00179]組換えヒトＶＥＧＦ－Ａ_１６５を試験Ａｂの段階希釈と混合し、室温で３０分間インキュベートし、次いで、４×１０^４のＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲ）－ＮＦＡＴ－ＲＥルシフェラーゼレポーター細胞／ウェルを含むウェルに加え、その後に、３７℃で６時間インキュベートした。５０μｌのＢｒｉｇｈｔ－Ｌｉｔｅを加えた後にプレートリーダーによってルシフェラーゼシグナルを検出した。陽性対照としてベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ）を使用したＶＥＧＦＲ２シグナル伝達ルシフェラーゼアッセイの検証（図１５Ａを参照されたい）。ＶＥＧＦ－Ａ_１６５媒介性ＶＥＧＦＲ２シグナル伝達の阻害に対するＢ７８１４０１～７８１４０６の効果は、アフリベルセプトに匹敵する（図１５Ｂを参照されたい）。

【0155】

実施例９
ＩＬ－６Ｒシグナル伝達の阻害に対するＢ７８１４０１～７８１４０６とトシリズマブの効果の比較
[00180]転写３のシグナルトランスデューサーおよびアクティベーター（ＳＴＡＴ３）のリン酸化の測定を、製造元の取扱説明書に従ってＣｉｓｂｉｏ製のホスホ－ＳＴＡＴ３（Ｔｙｒ７０５）細胞キットを使用して、組換えＩＬ－６刺激によって、ＴＦ－１細胞において行った。リン酸化ＳＴＡＴ３の検出は、ドナーまたはアクセプター蛍光体のどちらかで標識された抗総抗体に結合した抗ホスホＳＴＡＴ３抗体を含むサンドイッチイムノアッセイを伴う。ＴＦ－１細胞でのＩＬ－６／ＩＬ－６Ｒシグナル伝達の活性化は、ホモジニアス時間分解蛍光法（Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ Ｔｉｍｅ Ｒｅｓｏｌｖｅｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）（ＨＴＲＦ）シグナルの増加を引き起こし、その一方で、阻害は逆効果を示すであろう。Ｂ７８１４０１、Ｂ７８１４０２、Ｂ７８１４０４、およびＢ７８１４０５は、組換えヒトＩＬ－６リガンドによって刺激されたＴＦ－１細胞におけるＳＴＡＴ３のリン酸化の阻害に対してトシリズマブに匹敵する効果を示した。結果は、図１６に示される。

【0156】

実施例１０
ＩＬ－６Ｒシグナル伝達の阻害に対するＢ７８１４０１～７８１４０６とシルツキシマブおよびトシリズマブの効果の比較
[00181]製造元の取扱説明書に従って、Ｐｒｏｍｅｇａから入手したキットによるＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙを使用して、ＩＬ－６媒介性ＴＦ－１細胞増殖の測定を実施した。ＴＦ－１細胞でのＩＬ－６Ｒシグナル伝達の活性化は、結果として、発光シグナルの増加が反映されるＴＦ－１細胞増殖を生じるが、その一方で、ＩＬ－６Ｒシグナル伝達の阻害は、逆効果を示すであろう。Ｂ７８１４０４、Ｂ７８１４０５、およびＢ７８１４０６は、組換えヒトＩＬ－６リガンドによって刺激されるＴＦ－１細胞増殖の阻害に対して匹敵する効果を示した。シルツキシマブは、ＩＬ－６に対するｍＡｂである。結果は、図１７に示される。

【0157】

[00182]ＨＥＫ２９３細胞およびＣＨＯ細胞における一過性発現、ヒトＶＥＧＦ－Ａ１６５、ＶＥＧＦ－Ｂ１６７、ＰｌＧＦ、およびＩＬ－６Ｒに対するＥＬＩＳＡ結合親和性、ならびに３つの細胞ベースの機能的アッセイにおける阻害に対して、Ｂ７８１４０１～７８１４０６のプロファイルのまとめが表５に示される。

【0158】

【表5】

【0159】

実施例１１
組換えヒトＶＥＧＦ－Ａ_１６５に対するＥＢ－ＤＪ１、ＥＢ－ｖｖＡ、ＥＢ－ｖｖＢ、およびＥＢ－ｖｖＣとアフリベルセプト、Ｂ７８１４０３、およびＢ７８１４０５のＥＬＩＳＡ結合親和性の比較
[00183]組換えヒトＶＥＧＦ－Ａ_１６５（２μｇ／ｍｌ、１００μｌ／ウェル）でコーティングした９６ウェルプレートを使用して、＋４℃において１６時間、ＥＬＩＳＡアッセイを実施した。１％のＢＳＡを使用した２５℃での１時間の非特異的ブロッキングの後、試験抗体の一連の希釈物を当該コーティングされたウェルに加え、２５℃で１時間インキュベートした。結合したＡｂを、ＨＲＰで標識された二次Ａｂ（ヤギ抗ヒトＩｇＧ１－Ｆｃ）を使用して検出し、その後、ＯＤ_４５０を読み取った。組換えヒトＶＥＧＦ－Ａ_１６５に対するＥＢ－ＤＪ１、ＥＢ－ｖｖＡ、ＥＢ－ｖｖＢ、およびＥＢ－ｖｖＣの結合親和性は、サブナノモルスケールであり、ならびにアフリベルセプト、Ｂ７８１４０３、およびＢ７８１４０５に匹敵する。結果は図１８に示される。

【0160】

実施例１２
組換えヒトＶＥＧＦ－Ｂ_１６７に対するＥＢ－ＤＪ１、ＥＢ－ｖｖＡ、ＥＢ－ｖｖＢ、およびＥＢ－ｖｖＣとアフリベルセプト、Ｂ７８１４０２、Ｂ７８１４０３、およびＢ７８１４０５のＥＬＩＳＡ結合親和性の比較
[00184]組換えヒトＶＥＧＦ－Ｂ_１６７（２μｇ／ｍｌ、１００μｌ／ウェル）でコーティングした９６ウェルプレートを使用して、＋４℃において１６時間、ＥＬＩＳＡアッセイを実施した。１％のＢＳＡを使用した２５℃での１時間の非特異的ブロッキングの後、試験抗体の一連の希釈物をＶＥＧＦ－Ｂ_１６７コーティングされたウェルに加え、２５℃で１時間インキュベートした。結合したＡｂを、ＨＲＰで標識された二次Ａｂ（ヤギ抗ヒトＩｇＧ１－Ｆｃ）を使用して検出し、その後、ＯＤ_４５０を読み取った。組換えヒトＶＥＧＦ－Ｂ_１６７に対するＥＢ－ＤＪ１、ＥＢ－ｖｖＡ、ＥＢ－ｖｖＢ、およびＥＢ－ｖｖＣの結合親和性は、サブナノモルスケールであり、ならびにアフリベルセプト、Ｂ７８１４０２、Ｂ７８１４０３、およびＢ７８１４０５に匹敵する。結果は図１９に示される。

【0161】

実施例１３
組換えヒトＰｌＧＦに対するＥＢ－ＤＪ１、ＥＢ－ｖｖＡ、ＥＢ－ｖｖＢ、およびＥＢ－ｖｖＣとアフリベルセプト、Ｂ７８１４０３、およびＢ７８１４０５のＥＬＩＳＡ結合親和性の比較
[00185]組換えヒトＰｌＧＦ（２μｇ／ｍｌ、１００μｌ／ウェル）でコーティングした９６ウェルプレートを使用して、＋４℃において１６時間、ＥＬＩＳＡアッセイを実施した。１％のＢＳＡを使用した２５℃での１時間の非特異的ブロッキングの後、一連の希釈された試験抗体を当該コーティングされたウェルに加え、２５℃で１時間インキュベートした。結合したＡｂを、ＨＲＰで標識された二次Ａｂ（ヤギ抗ヒトＩｇＧ１－Ｆｃ）を使用して検出し、その後、ＯＤ_４５０を読み取った。組換えヒトＰｌＧＦに対するＥＢ－ＤＪ１、ＥＢ－ｖｖＡ、ＥＢ－ｖｖＢ、およびＥＢ－ｖｖＣの結合親和性は、サブナノモルスケールであり、ならびにアフリベルセプト、Ｂ７８１４０３およびＢ７８１４０５に匹敵する。結果は図２０に示される。

【0162】

[00186]
実施例１４
組換えヒトＩＬ－６Ｒに対するＥＢ－ＤＪ１、ＥＢ－ｖｖＡ、ＥＢ－ｖｖＢ、およびＥＢ－ｖｖＣとトシリズマブ、Ｂ７８１４０２、Ｂ７８１４０３、およびＢ７８１４０５のＥＬＩＳＡ結合親和性の比較
[00187]組換えヒトＩＬ－６Ｒ（２μｇ／ｍｌ、１００μｌ／ウェル）でコーティングした９６ウェルプレートを使用して、＋４℃において１６時間、ＥＬＩＳＡアッセイを実施した。１％のＢＳＡを使用した２５℃での１時間の非特異的ブロッキングの後、試験抗体の一連の希釈物をＩＬ－６Ｒコーティングされたウェルに加え、２５℃で１時間インキュベートした。結合したＡｂを、ＨＲＰで標識された二次Ａｂ（ヤギ抗ヒトＩｇＧ１－Ｆｃ）を使用して検出し、その後、ＯＤ_４５０を読み取った。組換えヒトＩＬ－６Ｒに対するＥＢ－ＤＪ１、ＥＢ－ｖｖＡ、ＥＢ－ｖｖＢ、およびＥＢ－ｖｖＣの結合親和性は、サブナノモルスケールであり、ならびにトシリズマブ、Ｂ７８１４０２、Ｂ７８１４０３、およびＢ７８１４０５に匹敵する。結果は図２１に示される。

【0163】

[00188]ヒトＶＥＧＦ－Ａ１６５、ＶＥＧＦ－Ｂ１６７、ＰｌＧＦおよびＩＬ－６Ｒに対する結合親和性におけるＥＢ－ＤＪ１、ＥＢ－ｖｖＡ、ＥＢ－ｖｖＢ、およびＥＢ－ｖｖＣのプロファイルのまとめは、表６に示される。

【0164】

【表6】

【0165】

核酸およびアミノ酸配列リスト
[00189]ＣＡＧ ＧＴＧ ＣＡＧ ＣＴＧ ＣＡＧ ＧＡＡ ＴＣＡ ＧＧＧ ＣＣＴ ＧＧＴ ＴＴＧ ＧＴＧ ＣＧＧ ＣＣＧ ＡＧＴ ＣＡＧ ＡＣＧ ＣＴＣ ＡＧＣ ＴＴＧ ＡＣＴ ＴＧＴ ＡＣＧ ＧＴＧ ＴＣＡ ＧＧＴ ＴＡＣ ＴＣＴ ＡＴＣ ＡＣＴ ＡＧＣ ＧＡＴ ＣＡＴ ＧＣＣ ＴＧＧ ＡＧＣ ＴＧＧ ＧＴＡ ＣＧＡ ＣＡＡ ＣＣＡ ＣＣＧ ＧＧＴ ＣＧＧ ＧＧＴ ＣＴＣ ＧＡＡ ＴＧＧ ＡＴＡ ＧＧＴ ＴＡＣ ＡＴＡ ＡＧＣ ＴＡＣ ＴＣＡ ＧＧＡ ＡＴＣ ＡＣＧ ＡＣＡ ＴＡＣ ＡＡＴ ＣＣＣ ＴＣＣ ＣＴＴ ＡＡＡ ＡＧＴ ＣＧＧ ＧＴＣ ＡＣＣ ＡＴＧ ＣＴＣ ＣＧＡ ＧＡＣ ＡＣＴ ＡＧＴ ＡＡＡ ＡＡＴ ＣＡＧ ＴＴＣ ＴＣＣ ＣＴＧ ＣＧＧ ＴＴＧ ＴＣＣ ＡＧＣ ＧＴＧ ＡＣＴ ＧＣＴ ＧＣＣ ＧＡＣ ＡＣＧ ＧＣＧ ＧＴＣ ＴＡＴ ＴＡＴ ＴＧＣ ＧＣＡ ＡＧＡ ＡＧＴ ＣＴＧ ＧＣＧ ＣＧＧ ＡＣＡ ＡＣＧ ＧＣＡ ＡＴＧ ＧＡＣ ＴＡＣ ＴＧＧ ＧＧＡ ＣＡＡ ＧＧＴ ＴＣＡ ＣＴＧ ＧＴＡ ＡＣＣ ＧＴＴ ＡＧＴ ＴＣＡ ＧＣＡ ＡＧＣ ＡＣＣ ＡＡＧ ＧＧＴ ＣＣＧ ＴＣＴ ＧＴＣ ＴＴＴ ＣＣＡ ＣＴＣ ＧＣＧ ＣＣＴ ＴＣＴ ＡＧＣ ＡＡＧ ＴＣＡ ＡＣＣ ＴＣＡ ＧＧＧ ＧＧＧ ＡＣＴ ＧＣＣ ＧＣＧ ＣＴＴ ＧＧＡ ＴＧＴ ＣＴＧ ＧＴＣ ＡＡＡ ＧＡＴ ＴＡＴ ＴＴＴ ＣＣＴ ＧＡＧ ＣＣＧ ＧＴＡ ＡＣＡ ＧＴＴ ＡＧＣ ＴＧＧ ＡＡＴ ＴＣＡ ＧＧＴ ＧＣＣ ＣＴＣ ＡＣＡ ＴＣＴ ＧＧＧ ＧＴＡ ＣＡＣ ＡＣＧ ＴＴＴ ＣＣＣ ＧＣＣ ＧＴＧ ＣＴＴ ＣＡＧ ＡＧＣ ＴＣＴ ＧＧＣ ＣＴＣ ＴＡＣ ＡＧＴ ＣＴＴ ＴＣＴ ＡＧＣ ＧＴＧ ＧＴＣ ＡＣＣ ＧＴＣ ＣＣＡ ＴＣＴ ＴＣＡ ＴＣＡ ＴＴＧ ＧＧＴ ＡＣＡ ＣＡＡ ＡＣＴ ＴＡＣ ＡＴＴ ＴＧＴ ＡＡＣ ＧＴＴ ＡＡＴ ＣＡＣ ＡＡＡ ＣＣＴ ＡＧＣ ＡＡＣ ＡＣＴ ＡＡＧ ＧＴＧ ＧＡＴ ＡＡＡ ＡＡＡ ＧＴＡ ＧＡＧ ＣＣＡ ＡＡＧ ＴＣＣ ＴＧＣ ＧＡＣ ＡＡＧ ＡＣＴ ＣＡＣ ＡＣＣ ＴＧＴ ＣＣＴ ＣＣＣ ＴＧＴ ＣＣＡ ＧＣＡ ＣＣＣ ＧＡＡ ＣＴＴ ＴＴＧ ＧＧＣ ＧＧＴ ＣＣＴ ＴＣＴ ＧＴＴ ＴＴＣ ＣＴＧ ＴＴＴ ＣＣＴ ＣＣＴ ＡＡＡ ＣＣＣ ＡＡＡ ＧＡＴ ＡＣＡ ＣＴＣ ＡＴＧ ＡＴＣ ＴＣＣ ＡＧＡ ＡＣＣ ＣＣＧ ＧＡＡ ＧＴＡ ＡＣＣ ＴＧＣ ＧＴＡ ＧＴＣ ＧＴＧ ＧＡＣ ＧＴＡ ＴＣＣ ＣＡＴ ＧＡＧ ＧＡＴ ＣＣＣ ＧＡＧ ＧＴＡ ＡＡＡ ＴＴＣ ＡＡＣ ＴＧＧ ＴＡＣ ＧＴＡ ＧＡＣ ＧＧＧ ＧＴＣ ＧＡＧ ＧＴＧ ＣＡＣ ＡＡＴ ＧＣＣ ＡＡＧ ＡＣＴ ＡＡＡ ＣＣＴ ＡＧＧ ＧＡＡ ＧＡＧ ＣＡＡ ＴＡＣ ＡＡＴ ＡＧＴ ＡＣＧ ＴＡＣ ＡＧＧ ＧＴＧ ＧＴＴ ＴＣＣ ＧＴＧ ＣＴＧ ＡＣＣ ＧＴＣ ＣＴＧ ＣＡＴ ＣＡＧ ＧＡＴ ＴＧＧ ＣＴＣ ＡＡＣ ＧＧＧ ＡＡＡ ＧＡＧ ＴＡＴ ＡＡＡ ＴＧＴ ＡＡＧ ＧＴＧ ＴＣＡ ＡＡＣ ＡＡＡ ＧＣＴ ＴＴＧ ＣＣＧ ＧＣＡ ＣＣＡ ＡＴＡ ＧＡＧ ＡＡＡ ＡＣＣ ＡＴＴ ＡＧＴ ＡＡＧ ＧＣＧ ＡＡＡ ＧＧＡ ＣＡＡ ＣＣＣ ＣＧＡ ＧＡＧ ＣＣＡ ＣＡＡ ＧＴＧ ＴＡＴ ＡＣＧ ＴＴＧ ＣＣＴ ＣＣＣ ＡＧＣ ＣＧＣ ＧＡＧ ＧＡＡ ＡＴＧ ＡＣＧ ＡＡＧ ＡＡＴ ＣＡＡ ＧＴＣ ＴＣＴ ＣＴＧ ＡＣＴ ＴＧＴ ＣＴＧ ＧＴＧ ＡＡＧ ＧＧＴ ＴＴＴ ＴＡＣ ＣＣＧ ＴＣＴ ＧＡＴ ＡＴＡ ＧＣＴ ＧＴＣ ＧＡＡ ＴＧＧ ＧＡＧ ＴＣＴ ＡＡＣ ＧＧＣ ＣＡＧ ＣＣＡ ＧＡＧ ＡＡＴ ＡＡＴ ＴＡＣ ＡＡＡ ＡＣＣ ＡＣＴ ＣＣＴ ＣＣＧ ＧＴＣ ＴＴＧ ＧＡＴ ＴＣＴ ＧＡＴ ＧＧＧ ＡＧＣ ＴＴＴ ＴＴＣ ＣＴＧ ＴＡＴ ＴＣＣ ＡＡＡ ＴＴＧ ＡＣＡ ＧＴＴ ＧＡＴ ＡＡＡ ＡＧＴ ＣＧＧ ＴＧＧ ＣＡＧ ＣＡＧ ＧＧＧ ＡＡＣ ＧＴＣ ＴＴＣ ＴＣＣ ＴＧＴ ＡＧＣ ＧＴＣ ＡＴＧ ＣＡＴ ＧＡＡ ＧＣＡ ＣＴＧ ＣＡＴ ＡＡＴ ＣＡＴ ＴＡＴ ＡＣＣ ＣＡＡ ＡＡＡ ＡＧＴ ＴＴＧ ＴＣＣ ＴＴＧ ＡＧＣ ＣＣＴ ＧＧＴ
（配列番号１）
[00190]ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
（配列番号２）
[00191]ＧＡＣ ＡＴＴ ＣＡＡ ＡＴＧ ＡＣＴ ＣＡＧ ＴＣＴ ＣＣＡ ＴＣＣ ＡＧＴ ＣＴＣ ＴＣＣ ＧＣＴ ＴＣＴ ＧＴＧ ＧＧＧ ＧＡＣ ＣＧＡ ＧＴＡ ＡＣＣ ＡＴＡ ＡＣＡ ＴＧＴ ＣＧＧ ＧＣＡ ＴＣＴ ＣＡＧ ＧＡＣ ＡＴＡ ＡＧＣ ＴＣＡ ＴＡＣ ＴＴＧ ＡＡＴ ＴＧＧ ＴＡＴ ＣＡＧ ＣＡＧ ＡＡＡ ＣＣＡ ＧＧＧ ＡＡＧ ＧＣＧ ＣＣＣ ＡＡＧ ＣＴＴ ＣＴＴ ＡＴＣ ＴＡＣ ＴＡＴ ＡＣＡ ＴＣＡ ＡＧＡ ＣＴＴ ＣＡＴ ＡＧＣ ＧＧＧ ＧＴＧ ＣＣＡ ＡＧＣ ＣＧＡ ＴＴＣ ＡＧＴ ＧＧＣ ＡＧＣ ＧＧＴ ＴＣＡ ＧＧＡ ＡＣＡ ＧＡＣ ＴＴＴ ＡＣＧ ＴＴＣ ＡＣＣ ＡＴＴ ＴＣＡ ＴＣＴ ＴＴＧ ＣＡＧ ＣＣＡ ＧＡＡ ＧＡＴ ＡＴＡ ＧＣＴ ＡＣＧ ＴＡＣ ＴＡＣ ＴＧＴ ＣＡＧ ＣＡＡ ＧＧＡ ＡＡＴ ＡＣＧ ＴＴＧ ＣＣＧ ＴＡＣ ＡＣＣ ＴＴＴ ＧＧＣ ＣＡＧ ＧＧＣ ＡＣＡ ＡＡＡ ＧＴＣ ＧＡＡ ＡＴＴ ＡＡＧ ＣＧＡ ＡＣＣ ＧＴＡ ＧＣＡ ＧＣＣ ＣＣＧ ＡＧＴ ＧＴＣ ＴＴＴ ＡＴＣ ＴＴＴ ＣＣＴ ＣＣＣ ＴＣＡ ＧＡＴ ＧＡＧ ＣＡＡ ＣＴＴ ＡＡＡ ＡＧＣ ＧＧＧ ＡＣＡ ＧＣＣ ＴＣＡ ＧＴＡ ＧＴＴ ＴＧＣ ＣＴＣ ＣＴＧ ＡＡＣ ＡＡＴ ＴＴＣ ＴＡＣ ＣＣＡ ＣＧＧ ＧＡＡ ＧＣＣ ＡＡＧ ＧＴＧ ＣＡＧ ＴＧＧ ＡＡＧ ＧＴＧ ＧＡＣ ＡＡＴ ＧＣＴ ＣＴＴ ＣＡＧ ＴＣＣ ＧＧＣ ＡＡＣ ＴＣＴ ＣＡＧ ＧＡＡ ＡＧＴ ＧＴＴ ＡＣＣ ＧＡＧ ＣＡＡ ＧＡＣ ＴＣＴ ＡＡＡ ＧＡＣ ＴＣＡ ＡＣＴ ＴＡＣ ＡＧＣ ＣＴＣ ＡＧＣ ＴＣＣ ＡＣＣ ＣＴＣ ＡＣＴ ＴＴＧ ＴＣＣ ＡＡＧ ＧＣＴ ＧＡＴ ＴＡＣ ＧＡＡ ＡＡＡ ＣＡＴ ＡＡＧ ＧＴＡ ＴＡＴ ＧＣＣ ＴＧＣ ＧＡＡ ＧＴＴ ＡＣＧ ＣＡＣ ＣＡＡ ＧＧＡ ＣＴＴ ＴＣＡ ＴＣＣ ＣＣＧ ＧＴＧ ＡＣＡ ＡＡＧ ＡＧＣ ＴＴＣ ＡＡＣ ＡＧＡ ＧＧＣ ＧＡＡ ＴＧＴ
（配列番号３）
[00192]ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
（配列番号４）
[00193]ＴＣＣ ＧＡＣ ＡＣＡ ＧＧＡ ＣＧＣ ＣＣＣ ＴＴＣ ＧＴＡ ＧＡＡ ＡＴＧ ＴＡＣ ＴＣＴ ＧＡＧ ＡＴＴ ＣＣＧ ＧＡＡ ＡＴＣ ＡＴＣ ＣＡＴ ＡＴＧ ＡＣＴ ＧＡＧ ＧＧＣ ＡＧＡ ＧＡＧ ＴＴＧ ＧＴＣ ＡＴＡ ＣＣＡ ＴＧＣ ＡＧＡ ＧＴＣ ＡＣＴ ＴＣＡ ＣＣＡ ＡＡＴ ＡＴＡ ＡＣＣ ＧＴＧ ＡＣＧ ＴＴＧ ＡＡＧ ＡＡＡ ＴＴＴ ＣＣＣ ＴＴＧ ＧＡＣ ＡＣＧ ＴＴＧ ＡＴＴ ＣＣＣ ＧＡＴ ＧＧＴ ＡＡＧ ＣＧＧ ＡＴＴ ＡＴＡ ＴＧＧ ＧＡＣ ＡＧＣ ＣＧＣ ＡＡＧ ＧＧＣ ＴＴＴ ＡＴＡ ＡＴＡ ＡＧＴ ＡＡＴ ＧＣＡ ＡＣＡ ＴＡＴ ＡＡＧ ＧＡＡ ＡＴＡ ＧＧＴ ＣＴＣ ＣＴＣ ＡＣＡ ＴＧＣ ＧＡＡ ＧＣＴ ＡＣＡ ＧＴＣ ＡＡＣ ＧＧＣ ＣＡＴ ＣＴＣ ＴＡＣ ＡＡＧ ＡＣＡ ＡＡＴ ＴＡＴ ＣＴＴ ＡＣＣ ＣＡＣ ＡＧＧ ＣＡＧ ＡＣＧ ＡＡＣ ＡＣＡ ＡＴＡ ＡＴＴ
（配列番号５）
[00194]ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩ
（配列番号６）
[00195]ＧＡＣ ＧＴＧ ＧＴＴ ＣＴＴ ＴＣＡ ＣＣＣ ＴＣＡ ＣＡＣ ＧＧＴ ＡＴＴ ＧＡＧ ＴＴＧ ＴＣＡ ＧＴＣ ＧＧＴ ＧＡＧ ＡＡＧ ＣＴＧ ＧＴＣ ＴＴＧ ＡＡＣ ＴＧＣ ＡＣＧ ＧＣＣ ＡＧＡ ＡＣＧ ＧＡＡ ＴＴＧ ＡＡＣ ＧＴＣ ＧＧＣ ＡＴＴ ＧＡＴ ＴＴＴ ＡＡＣ ＴＧＧ ＧＡＡ ＴＡＣ ＣＣＧ ＴＣＣ ＴＣＴ ＡＡＡ ＣＡＣ ＣＡＡ ＣＡＣ ＡＡＧ ＡＡＧ ＴＴＧ ＧＴＣ ＡＡＣ ＣＧＣ ＧＡＴ ＣＴＧ ＡＡＧ ＡＣＣ ＣＡＡ ＴＣＣ ＧＧＡ ＡＧＴ ＧＡＡ ＡＴＧ ＡＡＧ ＡＡＡ ＴＴＣ ＴＴＧ ＴＣＴ ＡＣＴ ＴＴＧ ＡＣＣ ＡＴＴ ＧＡＴ ＧＧＣ ＧＴＣ ＡＣＧ ＡＧＡ ＴＣＴ ＧＡＴ ＣＡＡ ＧＧＧ ＣＴＴ ＴＡＣ ＡＣＣ ＴＧＣ ＧＣＣ ＧＣＧ ＡＧＣ ＴＣＴ ＧＧＴ ＣＴＴ ＡＴＧ ＡＣＣ ＡＡＧ ＡＡＧ ＡＡＣ ＡＧＴ ＡＣＡ ＴＴＴ ＧＴＧ ＣＧＧ ＧＴＡ ＣＡＴ ＧＡＡ ＡＡＡ
（配列番号７）
[00196]ＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫ
（配列番号８）
[00197]ＴＡＴ ＴＣＴ ＡＴＧ ＡＣＡ ＣＣＧ ＣＣＧ ＡＣＣ ＴＴＧ ＡＡＣ ＡＴＡ ＡＣＣ ＧＡＧ ＧＡＡ ＴＣＡ ＣＡＴ ＧＴＡ ＡＴＡ ＧＡＣ ＡＣＡ ＧＧＧ ＧＡＣ ＴＣＡ ＣＴＴ ＴＣＡ ＡＴＣ ＡＧＣ ＴＧＴ ＣＧＡ ＧＧＣ ＣＡＧ ＣＡＣ ＣＣＣ ＣＴＧ ＧＡＡ ＴＧＧ ＧＣＴ ＴＧＧ ＣＣＧ ＧＧＧ ＧＣＡ ＣＡＡ ＧＡＡ ＧＣＡ ＣＣＴ ＧＣＴ ＡＣＴ ＧＧＴ ＧＡＣ ＡＡＧ ＧＡＣ ＡＧＣ ＧＡＡ ＧＡＴ ＡＣＧ ＧＧＡ ＧＴＡ ＧＴＴ ＡＧＡ ＧＡＣ ＴＧＴ ＧＡＧ ＧＧＣ ＡＣＡ ＧＡＣ ＧＣＴ ＡＧＡ ＣＣＴ ＴＡＣ ＴＧＣ ＡＡＧ ＧＴＣ ＣＴＧ ＣＴＴ ＴＴＧ ＣＡＴ ＧＡＡ ＧＴＧ ＣＡＣ ＧＣＴ ＡＡＣ ＧＡＣ ＡＣＴ ＧＧＧ ＡＧＣ ＴＡＴ ＧＴＣ ＴＧＣ ＴＡＣ ＴＡＣ ＡＡＧ ＴＡＴ ＡＴＣ ＡＡＡ ＧＣＧ ＣＧＧ ＡＴＡ ＧＡＧ ＧＧＡ ＡＣＧ ＡＣＡ ＧＣＴ ＧＣＧ ＴＣＡ ＡＧＴ ＴＡＴ ＧＴＧ ＴＴＣ ＧＴＣ ＡＧＡ ＧＡＴ ＴＴＴ ＧＡＧ ＣＡＡ ＣＣＧ ＴＴＴ ＡＴＴ ＡＡＴ ＡＡＧ ＣＣＴ ＧＡＣ ＡＣＧ ＣＴＧ ＣＴＴ ＧＴＡ ＡＡＴ ＡＧＡ ＡＡＡ ＧＡＣ ＧＣＣ ＡＴＧ ＴＧＧ ＧＴＡ ＣＣＡ ＴＧＴ ＣＴＧ ＧＴＣ ＡＧＴ ＡＴＡ ＣＣＴ ＧＧＴ ＣＴＣ ＡＡＴ ＧＴＧ ＡＣＴ ＣＴＴ ＣＧＣ ＴＣＴ ＣＡＡ ＡＧＣ ＡＧＣ ＧＴＧ ＣＴＧ ＴＧＧ ＣＣＧ ＧＡＣ ＧＧＣ ＣＡＧ ＧＡＡ ＧＴＧ ＧＴＴ ＴＧＧ ＧＡＴ ＧＡＣ ＡＧＧ ＣＧＧ ＧＧＧ ＡＴＧ ＣＴＴ ＧＴＴ ＴＣＣ ＡＣＴ ＣＣＧ ＣＴＴ ＣＴＣ ＣＡＴ ＧＡＣ ＧＣＣ ＣＴＣ ＴＡＣ ＣＴＧ ＣＡＡ ＴＧＴ ＧＡＡ ＡＣＣ ＡＣＧ ＴＧＧ ＧＧＴ ＧＡＴ ＣＡＡ ＧＡＴ ＴＴＣ ＣＴＧ ＴＣＴ ＡＡＴ ＣＣＣ ＴＴＣ ＴＴＧ ＧＴＡ ＣＡＴ ＡＴＣ ＡＣＣ ＧＧＧ ＡＡＣ ＧＡＡ ＣＴＣ
（配列番号９）
[00198]ＹＳＭＴＰＰＴＬＮＩＴＥＥＳＨＶＩＤＴＧＤＳＬＳＩＳＣＲＧＱＨＰＬＥＷＡＷＰＧＡＱＥＡＰＡＴＧＤＫＤＳＥＤＴＧＶＶＲＤＣＥＧＴＤＡＲＰＹＣＫＶＬＬＬＨＥＶＨＡＮＤＴＧＳＹＶＣＹＹＫＹＩＫＡＲＩＥＧＴＴＡＡＳＳＹＶＦＶＲＤＦＥＱＰＦＩＮＫＰＤＴＬＬＶＮＲＫＤＡＭＷＶＰＣＬＶＳＩＰＧＬＮＶＴＬＲＳＱＳＳＶＬＷＰＤＧＱＥＶＶＷＤＤＲＲＧＭＬＶＳＴＰＬＬＨＤＡＬＹＬＱＣＥＴＴＷＧＤＱＤＦＬＳＮＰＦＬＶＨＩＴＧＮＥＬ
（配列番号１０）
[00199]ＧＧＡ ＧＡＡ ＧＧＴ ＴＣＣ ＧＧＴ ＧＡＴ ＧＧＡ ＧＧＴ ＧＡＧ ＧＧＧ ＡＧＣ ＧＧＧ ＧＡＴ ＧＧＧ ＧＡＡ ＧＧＴ（配列番号１１）
[00200]ＧＥＧＳＧＤＧＧＥ ＧＳＧＤＧＥＧ（配列番号１２）
[00201]ＧＧＡ ＧＧＣ ＴＣＡ ＧＧＴ ＧＧＣ ＧＧＴ ＧＧＴ ＴＣＴ ＧＧＣ ＧＧＡ ＧＧＡ
（配列番号１３）
[00202]ＧＧＳＧＧＧ ＧＳＧＧＧ（配列番号１４）
[00203]ＡＴＧ ＣＣＧ ＴＴＧ ＣＴＧ ＣＴＧ ＣＴＴ ＴＴＧ ＣＣＡ ＣＴＣ ＣＴＴ ＴＧＧ ＧＣＣ ＧＧＧ ＧＣＴ ＴＴＧ ＧＣＡ
（配列番号１５）
[00204]ＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡ（配列番号１６）
[00205]ＡＴＧ ＣＣＴ ＣＴＣ ＣＴＣ ＣＴＣ ＣＴＣ ＴＴＧ ＣＣＣ ＣＴＣ ＣＴＴ ＴＧＧ ＧＣＣ ＧＧＡ ＧＣＣ ＣＴＧ ＧＣＴ ＣＡＧ ＧＴＧ ＣＡＧ ＣＴＧ ＣＡＧ ＧＡＡ ＴＣＡ ＧＧＧ ＣＣＴ ＧＧＴ ＴＴＧ ＧＴＧ ＣＧＧ ＣＣＧ ＡＧＴ ＣＡＧ ＡＣＧ ＣＴＣ ＡＧＣ ＴＴＧ ＡＣＴ ＴＧＴ ＡＣＧ ＧＴＧ ＴＣＡ ＧＧＴ ＴＡＣ ＴＣＴ ＡＴＣ ＡＣＴ ＡＧＣ ＧＡＴ ＣＡＴ ＧＣＣ ＴＧＧ ＡＧＣ ＴＧＧ ＧＴＡ ＣＧＡ ＣＡＡ ＣＣＡ ＣＣＧ ＧＧＴ ＣＧＧ ＧＧＴ ＣＴＣ ＧＡＡ ＴＧＧ ＡＴＡ ＧＧＴ ＴＡＣ ＡＴＡ ＡＧＣ ＴＡＣ ＴＣＡ ＧＧＡ ＡＴＣ ＡＣＧ ＡＣＡ ＴＡＣ ＡＡＴ ＣＣＣ ＴＣＣ ＣＴＴ ＡＡＡ ＡＧＴ ＣＧＧ ＧＴＣ ＡＣＣ ＡＴＧ ＣＴＣ ＣＧＡ ＧＡＣ ＡＣＴ ＡＧＴ ＡＡＡ ＡＡＴ ＣＡＧ ＴＴＣ ＴＣＣ ＣＴＧ ＣＧＧ ＴＴＧ ＴＣＣ ＡＧＣ ＧＴＧ ＡＣＴ ＧＣＴ ＧＣＣ ＧＡＣ ＡＣＧ ＧＣＧ ＧＴＣ ＴＡＴ ＴＡＴ ＴＧＣ ＧＣＡ ＡＧＡ ＡＧＴ ＣＴＧ ＧＣＧ ＣＧＧ ＡＣＡ ＡＣＧ ＧＣＡ ＡＴＧ ＧＡＣ ＴＡＣ ＴＧＧ ＧＧＡ ＣＡＡ ＧＧＴ ＴＣＡ ＣＴＧ ＧＴＡ ＡＣＣ ＧＴＴ ＡＧＴ ＴＣＡ ＧＣＡ ＡＧＣ ＡＣＣ ＡＡＧ ＧＧＴ ＣＣＧ ＴＣＴ ＧＴＣ ＴＴＴ ＣＣＡ ＣＴＣ ＧＣＧ ＣＣＴ ＴＣＴ ＡＧＣ ＡＡＧ ＴＣＡ ＡＣＣ ＴＣＡ ＧＧＧ ＧＧＧ ＡＣＴ ＧＣＣ ＧＣＧ ＣＴＴ ＧＧＡ ＴＧＴ ＣＴＧ ＧＴＣ ＡＡＡ ＧＡＴ ＴＡＴ ＴＴＴ ＣＣＴ ＧＡＧ ＣＣＧ ＧＴＡ ＡＣＡ ＧＴＴ ＡＧＣ ＴＧＧ ＡＡＴ ＴＣＡ ＧＧＴ ＧＣＣ ＣＴＣ ＡＣＡ ＴＣＴ ＧＧＧ ＧＴＡ ＣＡＣ ＡＣＧ ＴＴＴ ＣＣＣ ＧＣＣ ＧＴＧ ＣＴＴ ＣＡＧ ＡＧＣ ＴＣＴ ＧＧＣ ＣＴＣ ＴＡＣ ＡＧＴ ＣＴＴ ＴＣＴ ＡＧＣ ＧＴＧ ＧＴＣ ＡＣＣ ＧＴＣ ＣＣＡ ＴＣＴ ＴＣＡ ＴＣＡ ＴＴＧ ＧＧＴ ＡＣＡ ＣＡＡ ＡＣＴ ＴＡＣ ＡＴＴ ＴＧＴ ＡＡＣ ＧＴＴ ＡＡＴ ＣＡＣ ＡＡＡ ＣＣＴ ＡＧＣ ＡＡＣ ＡＣＴ ＡＡＧ ＧＴＧ ＧＡＴ ＡＡＡ ＡＡＡ ＧＴＡ ＧＡＧ ＣＣＡ ＡＡＧ ＴＣＣ ＴＧＣ ＧＡＣ ＡＡＧ ＡＣＴ ＣＡＣ ＡＣＣ ＴＧＴ ＣＣＴ ＣＣＣ ＴＧＴ ＣＣＡ ＧＣＡ ＣＣＣ ＧＡＡ ＣＴＴ ＴＴＧ ＧＧＣ ＧＧＴ ＣＣＴ ＴＣＴ ＧＴＴ ＴＴＣ ＣＴＧ ＴＴＴ ＣＣＴ ＣＣＴ ＡＡＡ ＣＣＣ ＡＡＡ ＧＡＴ ＡＣＡ ＣＴＣ ＡＴＧ ＡＴＣ ＴＣＣ ＡＧＡ ＡＣＣ ＣＣＧ ＧＡＡ ＧＴＡ ＡＣＣ ＴＧＣ ＧＴＡ ＧＴＣ ＧＴＧ ＧＡＣ ＧＴＡ ＴＣＣ ＣＡＴ ＧＡＧ ＧＡＴ ＣＣＣ ＧＡＧ ＧＴＡ ＡＡＡ ＴＴＣ ＡＡＣ ＴＧＧ ＴＡＣ ＧＴＡ ＧＡＣ ＧＧＧ ＧＴＣ ＧＡＧ ＧＴＧ ＣＡＣ ＡＡＴ ＧＣＣ ＡＡＧ ＡＣＴ ＡＡＡ ＣＣＴ ＡＧＧ ＧＡＡ ＧＡＧ ＣＡＡ ＴＡＣ ＡＡＴ ＡＧＴ ＡＣＧ ＴＡＣ ＡＧＧ ＧＴＧ ＧＴＴ ＴＣＣ ＧＴＧ ＣＴＧ ＡＣＣ ＧＴＣ ＣＴＧ ＣＡＴ ＣＡＧ ＧＡＴ ＴＧＧ ＣＴＣ ＡＡＣ ＧＧＧ ＡＡＡ ＧＡＧ ＴＡＴ ＡＡＡ ＴＧＴ ＡＡＧ ＧＴＧ ＴＣＡ ＡＡＣ ＡＡＡ ＧＣＴ ＴＴＧ ＣＣＧ ＧＣＡ ＣＣＡ ＡＴＡ ＧＡＧ ＡＡＡ ＡＣＣ ＡＴＴ ＡＧＴ ＡＡＧ ＧＣＧ ＡＡＡ ＧＧＡ ＣＡＡ ＣＣＣ ＣＧＡ ＧＡＧ ＣＣＡ ＣＡＡ ＧＴＧ ＴＡＴ ＡＣＧ ＴＴＧ ＣＣＴ ＣＣＣ ＡＧＣ ＣＧＣ ＧＡＧ ＧＡＡ ＡＴＧ ＡＣＧ ＡＡＧ ＡＡＴ ＣＡＡ ＧＴＣ ＴＣＴ ＣＴＧ ＡＣＴ ＴＧＴ ＣＴＧ ＧＴＧ ＡＡＧ ＧＧＴ ＴＴＴ ＴＡＣ ＣＣＧ ＴＣＴ ＧＡＴ ＡＴＡ ＧＣＴ ＧＴＣ ＧＡＡ ＴＧＧ ＧＡＧ ＴＣＴ ＡＡＣ ＧＧＣ ＣＡＧ ＣＣＡ ＧＡＧ ＡＡＴ ＡＡＴ ＴＡＣ ＡＡＡ ＡＣＣ ＡＣＴ ＣＣＴ ＣＣＧ ＧＴＣ ＴＴＧ ＧＡＴ ＴＣＴ ＧＡＴ ＧＧＧ ＡＧＣ ＴＴＴ ＴＴＣ ＣＴＧ ＴＡＴ ＴＣＣ ＡＡＡ ＴＴＧ ＡＣＡ ＧＴＴ ＧＡＴ ＡＡＡ ＡＧＴ ＣＧＧ ＴＧＧ ＣＡＧ ＣＡＧ ＧＧＧ ＡＡＣ ＧＴＣ ＴＴＣ ＴＣＣ ＴＧＴ ＡＧＣ ＧＴＣ ＡＴＧ ＣＡＴ ＧＡＡ ＧＣＡ ＣＴＧ ＣＡＴ ＡＡＴ ＣＡＴ ＴＡＴ ＡＣＣ ＣＡＡ ＡＡＡ ＡＧＴ ＴＴＧ ＴＣＣ ＴＴＧ ＡＧＣ ＣＣＴ ＧＧＴ ＧＧＣ ＧＡＧ ＧＧＴ ＴＣＡ ＧＧＧ ＧＡＴ ＧＧＡ ＧＧＣ ＧＡＧ ＧＧＧ ＴＣＣ ＧＧＧ ＧＡＣ ＧＧＣ ＧＡＡ ＧＧＣ ＴＣＡ ＧＡＴ ＡＣＣ ＧＧＡ ＡＧＡ ＣＣＡ ＴＴＴ ＧＴＧ ＧＡＧ ＡＴＧ ＴＡＴ ＴＣＣ ＧＡＡ ＡＴＡ ＣＣＧ ＧＡＧ ＡＴＡ ＡＴＡ ＣＡＴ ＡＴＧ ＡＣＧ ＧＡＡ ＧＧＴ ＣＧＡ ＧＡＡ ＣＴＣ ＧＴＣ ＡＴＣ ＣＣＡ ＴＧＴ ＣＧＣ ＧＴＡ ＡＣＣ ＴＣＴ ＣＣＡ ＡＡＴ ＡＴＣ ＡＣＣ ＧＴＡ ＡＣＡ ＣＴＣ ＡＡＡ ＡＡＡ ＴＴＣ ＣＣＴ ＣＴＴ ＧＡＣ ＡＣＧ ＴＴＧ ＡＴＡ ＣＣＧ ＧＡＣ ＧＧＣ ＡＡＡ ＡＧＡ ＡＴＡ ＡＴＡ ＴＧＧ ＧＡＴ ＴＣＡ ＡＧＧ ＡＡＡ ＧＧＡ ＴＴＴ ＡＴＡ ＡＴＡ ＡＧＣ ＡＡＣ ＧＣＣ ＡＣＡ ＴＡＣ ＡＡＡ ＧＡＧ ＡＴＴ ＧＧＧ ＣＴＧ ＣＴＣ ＡＣＴ ＴＧＴ ＧＡＡ ＧＣＣ ＡＣＴ ＧＴＴ ＡＡＴ ＧＧＧ ＣＡＣ ＴＴＧ ＴＡＴ ＡＡＧ ＡＣＴ ＡＡＴ ＴＡＴ ＣＴＣ ＡＣＣ ＣＡＣ ＣＧＣ ＣＡＧ ＡＣＧ ＡＡＴ ＡＣＴ ＡＴＡ ＡＴＡ ＧＡＴ ＧＴＣ ＧＴＴ ＣＴＧ ＡＧＣ ＣＣＡ ＡＧＴ ＣＡＴ ＧＧＧ ＡＴＴ ＧＡＡ ＣＴＴ ＴＣＴ ＧＴＴ ＧＧＣ ＧＡＡ ＡＡＧ ＣＴＣ ＧＴＧ ＴＴＧ ＡＡＴ ＴＧＣ ＡＣＴ ＧＣＴ ＡＧＧ ＡＣＧ ＧＡＧ ＣＴＧ ＡＡＴ ＧＴＴ ＧＧＴ ＡＴＡ ＧＡＴ ＴＴＣ ＡＡＴ ＴＧＧ ＧＡＡ ＴＡＴ ＣＣＴ ＡＧＣ ＴＣＴ ＡＡＡ ＣＡＣ ＣＡＧ ＣＡＣ ＡＡＡ ＡＡＡ ＣＴＣ ＧＴＴ ＡＡＴ ＣＧＣ ＧＡＣ ＴＴＧ ＡＡＧ ＡＣＧ ＣＡＧ ＴＣＡ ＧＧＡ ＴＣＡ ＧＡＧ ＡＴＧ ＡＡＡ ＡＡＧ ＴＴＣ ＣＴＣ ＴＣＡ ＡＣＧ ＣＴＧ ＡＣＴ ＡＴＡ ＧＡＴ ＧＧＡ ＧＴＡ ＡＣＧ ＡＧＡ ＴＣＣ ＧＡＣ ＣＡＧ ＧＧＡ ＴＴＧ ＴＡＣ ＡＣＣ ＴＧＣ ＧＣＣ ＧＣＧ ＴＣＴ ＴＣＣ ＧＧＧ ＣＴＣ ＡＴＧ ＡＣＡ ＡＡＡ ＡＡＡ ＡＡＣ ＡＧＣ ＡＣＴ ＴＴＣ ＧＴＡ ＣＧＣ ＧＴＣ ＣＡＴ ＧＡＡ ＡＡＡ ＴＡＧ
（配列番号１７）
[00206]ＭＰＬＬＬＬＬＰＬＬＷＡＧＡＬＡＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＥＧＳＧＤＧＧＥＧＳＧＤＧＥＧＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫ
（配列番号１８）
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（配列番号１９）
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（配列番号２０）
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（配列番号２１）
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（配列番号２３）
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（配列番号２４）
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（配列番号２８）
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（配列番号２９）
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（配列番号３０）
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（配列番号３１）
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（配列番号３２）
[00221]ＣＡＧ ＧＴＧ ＣＡＧ ＣＴＧ ＣＡＧ ＧＡＡＴＣＡ ＧＧＧ ＣＣＴ ＧＧＴ ＴＴＧ ＧＴＧ ＣＧＧ ＣＣＧ ＡＧＴ ＣＡＧ ＡＣＧ ＣＴＣ ＡＧＣ ＴＴＧ ＡＣＴ ＴＧＴ ＡＣＧ ＧＴＧ ＴＣＡ ＧＧＴ ＴＡＣ ＴＣＴＡＴＣ ＡＣＴ ＡＧＣ ＧＡＴ ＣＡＴ ＧＣＣ ＴＧＧ ＡＧＣ ＴＧＧ ＧＴＡ ＣＧＡ ＣＡＡ ＣＣＡ ＣＣＧ ＧＧＴ ＣＧＧ ＧＧＴ ＣＴＣ ＧＡＡ ＴＧＧ ＡＴＡ ＧＧＴ ＴＡＣ ＡＴＡ ＡＧＣ ＴＡＣ ＴＣＡ ＧＧＡ ＡＴＣ ＡＣＧ ＡＣＡ ＴＡＣ ＡＡＴ ＣＣＣ ＴＣＣ ＣＴＴ ＡＡＡ ＡＧＴ ＣＧＧ ＧＴＣ ＡＣＣ ＡＴＧ ＣＴＣ ＣＧＡ ＧＡＣ ＡＣＴ ＡＧＴ ＡＡＡ ＡＡＴ ＣＡＧ ＴＴＣ ＴＣＣ ＣＴＧ ＣＧＧ ＴＴＧ ＴＣＣ ＡＧＣ ＧＴＧ ＡＣＴ ＧＣＴ ＧＣＣ ＧＡＣ ＡＣＧ ＧＣＧ ＧＴＣ ＴＡＴ ＴＡＴ ＴＧＣ ＧＣＡ ＡＧＡ ＡＧＴ ＣＴＧ ＧＣＧ ＣＧＧ ＡＣＡ ＡＣＧ ＧＣＡ ＡＴＧ ＧＡＣ ＴＡＣ ＴＧＧ ＧＧＡ ＣＡＡ ＧＧＴ ＴＣＡ ＣＴＧ ＧＴＡ ＡＣＣ ＧＴＴ ＡＧＴ ＴＣＡ ＧＣＡ ＡＧＣ ＡＣＣ ＡＡＧ ＧＧＴ ＣＣＧ ＴＣＴ ＧＴＣ ＴＴＴ ＣＣＡ ＣＴＣ ＧＣＧ ＣＣＴ ＴＣＴ ＡＧＣ ＡＡＧ ＴＣＡ ＡＣＣ ＴＣＡ ＧＧＧ ＧＧＧ ＡＣＴ ＧＣＣ ＧＣＧ ＣＴＴ ＧＧＡ ＴＧＴ ＣＴＧ ＧＴＣ ＡＡＡ ＧＡＴ ＴＡＴ ＴＴＴ ＣＣＴ ＧＡＧ ＣＣＧ ＧＴＡ ＡＣＡ ＧＴＴ ＡＧＣ ＴＧＧ ＡＡＴ ＴＣＡ ＧＧＴ ＧＣＣ ＣＴＣ ＡＣＡ ＴＣＴ ＧＧＧ ＧＴＡ ＣＡＣ ＡＣＧ ＴＴＴ ＣＣＣ ＧＣＣ ＧＴＧ ＣＴＴ ＣＡＧ ＡＧＣ ＴＣＴ ＧＧＣ ＣＴＣ ＴＡＣ ＡＧＴ ＣＴＴ ＴＣＴ ＡＧＣ ＧＴＧ ＧＴＣ ＡＣＣ ＧＴＣ ＣＣＡ ＴＣＴ ＴＣＡ ＴＣＡ ＴＴＧ ＧＧＴ ＡＣＡ ＣＡＡ ＡＣＴ ＴＡＣ ＡＴＴ ＴＧＴ ＡＡＣ ＧＴＴ ＡＡＴ ＣＡＣ ＡＡＡ ＣＣＴ ＡＧＣ ＡＡＣ ＡＣＴ ＡＡＧ ＧＴＧ ＧＡＴ ＡＡＡ ＡＡＡ ＧＴＡ ＧＡＧ ＣＣＡ ＡＡＧ ＴＣＣ ＴＧＣ ＧＡＣ ＡＡＧ ＡＣＴ ＣＡＣ ＡＣＣ ＴＧＴ ＣＣＴ ＣＣＣ ＴＧＴ ＣＣＡ ＧＣＡ ＣＣＣ ＧＡＡ ＣＴＴ ＴＴＧ ＧＧＣ ＧＧＴ ＣＣＴ ＴＣＴ ＧＴＴ ＴＴＣ ＣＴＧ ＴＴＴ ＣＣＴ ＣＣＴ ＡＡＡ ＣＣＣ ＡＡＡ ＧＡＴ ＡＣＡ ＣＴＣ ＡＴＧ ＡＴＣ ＴＣＣ ＡＧＡ ＡＣＣ ＣＣＧ ＧＡＡ ＧＴＡ ＡＣＣ ＴＧＣ ＧＴＡ ＧＴＣ ＧＴＧ ＧＡＣ ＧＴＡ ＴＣＣ ＣＡＴ ＧＡＧ ＧＡＴ ＣＣＣ ＧＡＧ ＧＴＡ ＡＡＡ ＴＴＣ ＡＡＣ ＴＧＧ ＴＡＣ ＧＴＡ ＧＡＣ ＧＧＧ ＧＴＣ ＧＡＧ ＧＴＧ ＣＡＣ ＡＡＴ ＧＣＣ ＡＡＧ ＡＣＴ ＡＡＡ ＣＣＴ ＡＧＧ ＧＡＡ ＧＡＧ ＣＡＡ ＴＡＣ ＡＡＴ ＡＧＴ ＡＣＧ ＴＡＣ ＡＧＧ ＧＴＧ ＧＴＴ ＴＣＣ ＧＴＧ ＣＴＧ ＡＣＣ ＧＴＣ ＣＴＧ ＣＡＴ ＣＡＧ ＧＡＴ ＴＧＧ ＣＴＣ ＡＡＣ ＧＧＧ ＡＡＡ ＧＡＧ ＴＡＴ ＡＡＡ ＴＧＴ ＡＡＧ ＧＴＧ ＴＣＡ ＡＡＣ ＡＡＡ ＧＣＴ ＴＴＧ ＣＣＧ ＧＣＡ ＣＣＡ ＡＴＡ ＧＡＧ ＡＡＡ ＡＣＣ ＡＴＴ ＡＧＴ ＡＡＧ ＧＣＧ ＡＡＡ ＧＧＡ ＣＡＡ ＣＣＣ ＣＧＡ ＧＡＧ ＣＣＡ ＣＡＡ ＧＴＧ ＴＡＴ ＡＣＧ ＴＴＧ ＣＣＴ ＣＣＣ ＡＧＣ ＣＧＣ ＧＡＧ ＧＡＡ ＡＴＧ ＡＣＧ ＡＡＧ ＡＡＴ ＣＡＡ ＧＴＣ ＴＣＴ ＣＴＧ ＡＣＴ ＴＧＴ ＣＴＧ ＧＴＧ ＡＡＧ ＧＧＴ ＴＴＴ ＴＡＣ ＣＣＧ ＴＣＴ ＧＡＴ ＡＴＡ ＧＣＴ ＧＴＣ ＧＡＡ ＴＧＧ ＧＡＧ ＴＣＴ ＡＡＣ ＧＧＣ ＣＡＧ ＣＣＡ ＧＡＧ ＡＡＴ ＡＡＴ ＴＡＣ ＡＡＡ ＡＣＣ ＡＣＴ ＣＣＴ ＣＣＧ ＧＴＣ ＴＴＧ ＧＡＴ ＴＣＴ ＧＡＴ ＧＧＧ ＡＧＣ ＴＴＴ ＴＴＣ ＣＴＧ ＴＡＴ ＴＣＣ ＡＡＡ ＴＴＧ ＡＣＡ ＧＴＴ ＧＡＴ ＡＡＡ ＡＧＴ ＣＧＧ ＴＧＧ ＣＡＧ ＣＡＧ ＧＧＧ ＡＡＣ ＧＴＣ ＴＴＣ ＴＣＣ ＴＧＴ ＡＧＣ ＧＴＣ ＡＴＧ ＣＡＴ ＧＡＡ ＧＣＡ ＣＴＧ ＣＡＴ ＡＡＴ ＣＡＴ ＴＡＴ ＡＣＣ ＣＡＡ ＡＡＡ ＡＧＴ ＴＴＧ ＴＣＣ ＴＴＧ ＡＧＣ ＣＣＴ ＧＧＴ ＧＧＣ ＧＡＧ ＧＧＴ ＴＣＡ ＧＧＧ ＧＡＴ ＧＧＡ ＧＧＣ ＧＡＧ ＧＧＧ ＴＣＣ ＧＧＧ ＧＡＣ ＧＧＣ ＧＡＡ ＧＧＣ ＴＣＡ ＧＡＴ ＡＣＣ ＧＧＡ ＡＧＡ ＣＣＡ ＴＴＴ ＧＴＧ ＧＡＧ ＡＴＧ ＴＡＴ ＴＣＣ ＧＡＡ ＡＴＡ ＣＣＧ ＧＡＧ ＡＴＡ ＡＴＡ ＣＡＴ ＡＴＧ ＡＣＧ ＧＡＡ ＧＧＴ ＣＧＡ ＧＡＡ ＣＴＣ ＧＴＣ ＡＴＣ ＣＣＡ ＴＧＴ ＣＧＣ ＧＴＡ ＡＣＣ ＴＣＴ ＣＣＡ ＡＡＴ ＡＴＣ ＡＣＣ ＧＴＡ ＡＣＡ ＣＴＣ ＡＡＡ ＡＡＡ ＴＴＣ ＣＣＴ ＣＴＴ ＧＡＣ ＡＣＧ ＴＴＧ ＡＴＡ ＣＣＧ ＧＡＣ ＧＧＣ ＡＡＡ ＡＧＡ ＡＴＡ ＡＴＡ ＴＧＧ ＧＡＴ ＴＣＡ ＡＧＧ ＡＡＡ ＧＧＡ ＴＴＴ ＡＴＡ ＡＴＡ ＡＧＣ ＡＡＣ ＧＣＣ ＡＣＡ ＴＡＣ ＡＡＡ ＧＡＧ ＡＴＴ ＧＧＧ ＣＴＧ ＣＴＣ ＡＣＴ ＴＧＴ ＧＡＡ ＧＣＣ ＡＣＴ ＧＴＴ ＡＡＴ ＧＧＧ ＣＡＣ ＴＴＧ ＴＡＴ ＡＡＧ ＡＣＴ ＡＡＴ ＴＡＴ ＣＴＣ ＡＣＣ ＣＡＣ ＣＧＣ ＣＡＧ ＡＣＧ ＡＡＴ ＡＣＴ ＡＴＡ ＡＴＡ ＧＡＴ ＧＴＣ ＧＴＴ ＣＴＧ ＡＧＣ ＣＣＡ ＡＧＴ ＣＡＴ ＧＧＧ ＡＴＴ ＧＡＡ ＣＴＴ ＴＣＴ ＧＴＴ ＧＧＣ ＧＡＡ ＡＡＧ ＣＴＣ ＧＴＧ ＴＴＧ ＡＡＴ ＴＧＣ ＡＣＴ ＧＣＴ ＡＧＧ ＡＣＧ ＧＡＧ ＣＴＧ ＡＡＴ ＧＴＴ ＧＧＴ ＡＴＡ ＧＡＴ ＴＴＣ ＡＡＴ ＴＧＧ ＧＡＡ ＴＡＴ ＣＣＴ ＡＧＣ ＴＣＴ ＡＡＡ ＣＡＣ ＣＡＧ ＣＡＣ ＡＡＡ ＡＡＡ ＣＴＣ ＧＴＴ ＡＡＴ ＣＧＣ ＧＡＣ ＴＴＧ ＡＡＧ ＡＣＧ ＣＡＧ ＴＣＡ ＧＧＡ ＴＣＡ ＧＡＧ ＡＴＧ ＡＡＡ ＡＡＧ ＴＴＣ ＣＴＣ ＴＣＡ ＡＣＧ ＣＴＧ ＡＣＴ ＡＴＡ ＧＡＴ ＧＧＡ ＧＴＡ ＡＣＧ ＡＧＡ ＴＣＣ ＧＡＣ ＣＡＧ ＧＧＡ ＴＴＧ ＴＡＣ ＡＣＣ ＴＧＣ ＧＣＣ ＧＣＧ ＴＣＴ ＴＣＣ ＧＧＧ ＣＴＣ ＡＴＧ ＡＣＡ ＡＡＡ ＡＡＡ ＡＡＣ ＡＧＣ ＡＣＴ ＴＴＣ ＧＴＡ ＣＧＣ ＧＴＣ ＣＡＴ ＧＡＡ ＡＡＡ ＴＡＧ
（配列番号３３）
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（配列番号３４）
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（配列番号３５）
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（配列番号３６）
[00225]ＣＡＡ ＧＴＡ ＣＡＡ ＣＴＴ ＣＡＡ ＧＡＡ ＴＣＡ ＧＧＴ ＣＣＣ ＧＧＧ ＣＴＣ ＧＴＧ ＣＧＧ ＣＣＴ ＴＣＡ ＣＡＡ ＡＣＡ ＣＴＴ ＡＧＣ ＣＴＣ ＡＣＣ ＴＧＣ ＡＣＴ ＧＴＧ ＴＣＣ ＧＧＧ ＴＡＴ ＡＧＣ ＡＴＡ ＡＣＡ ＡＧＴ ＧＡＣ ＣＡＣ ＧＣＧ ＴＧＧ ＡＧＣ ＴＧＧ ＧＴＧ ＣＧＧ ＣＡＧ ＣＣＴ ＣＣＴ ＧＧＴ ＣＧＣ ＧＧＣ ＣＴＣ ＧＡＧ ＴＧＧ ＡＴＴ ＧＧＡ ＴＡＣ ＡＴＡ ＴＣＣ ＴＡＣ ＴＣＡ ＧＧＡ ＡＴＣ ＡＣＴ ＡＣＡ ＴＡＴ ＡＡＴ ＣＣＡ ＡＧＴ ＴＴＧ ＡＡＡ ＴＣＣ ＣＧＡ ＧＴＴ ＡＣＣ ＡＴＧ ＴＴＧ ＡＧＧ ＧＡＣ ＡＣＧ ＡＧＴ ＡＡＡ ＡＡＴ ＣＡＧ ＴＴＣ ＡＧＴ ＣＴＧ ＡＧＧ ＴＴＧ ＴＣＡ ＡＧＣ ＧＴＡ ＡＣＧ ＧＣＧ ＧＣＴ ＧＡＴ ＡＣＧ ＧＣＴ ＧＴＴ ＴＡＴ ＴＡＣ ＴＧＴ ＧＣＡ ＡＧＡ ＡＧＴ ＴＴＧ ＧＣＡ ＣＧＡ ＡＣＡ ＡＣＣ ＧＣＧ ＡＴＧ ＧＡＣ ＴＡＣ ＴＧＧ ＧＧＴ ＣＡＡ ＧＧＣ ＴＣＡ ＴＴＧ ＧＴＡ ＡＣＴ ＧＴＧ ＡＧＣ ＴＣＴ ＧＣＧ ＴＣＴ ＡＣＣ ＡＡＧ ＧＧＣ ＣＣＴ ＡＧＣ ＧＴＴ ＴＴＴ ＣＣＴ ＣＴＧ ＧＣＣ ＣＣＴ ＴＣＣ ＴＣＣ ＡＡＧ ＴＣＣ ＡＣＧ ＴＣＣ ＧＧＴ ＧＧＡ ＡＣＡ ＧＣＴ ＧＣＴ ＣＴＣ ＧＧＣ ＴＧＴ ＴＴＧ ＧＴＡ ＡＡＡ ＧＡＴ ＴＡＴ ＴＴＣ ＣＣＡ ＧＡＡ ＣＣＣ ＧＴＴ ＡＣＴ ＧＴＧ ＴＣＡ ＴＧＧ ＡＡＣ ＴＣＴ ＧＧＴ ＧＣＴ ＴＴＧ ＡＣＡ ＡＧＴ ＧＧＡ ＧＴＣ ＣＡＴ ＡＣＴ ＴＴＴ ＣＣＴ ＧＣＣ ＧＴＴ ＣＴＧ ＣＡＡ ＴＣＡ ＡＧＴ ＧＧＧ ＣＴＣ ＴＡＴ ＡＧＣ ＴＴＧ ＴＣＣ ＴＣＡ ＧＴＴ ＧＴＣ ＡＣＡ ＧＴＡ ＣＣＡ ＴＣＡ ＴＣＡ ＡＧＣ ＣＴＧ ＧＧＴ ＡＣＡ ＣＡＧ ＡＣＴ ＴＡＴ ＡＴＡ ＴＧＣ ＡＡＴ ＧＴＧ ＡＡＣ ＣＡＣ ＡＡＧ ＣＣＴ ＴＣＣ ＡＡＴ ＡＣＧ ＡＡＡ ＧＴＣ ＧＡＣ ＡＡＧ ＡＡＧ ＧＴＣ ＧＡＧ ＣＣＣ ＡＡＧ ＴＣＡ ＴＧＣ ＧＡＣ ＡＡＧ ＡＣＣ ＣＡＴ ＡＣＣ ＴＧＣ ＣＣＣ ＣＣＡ ＴＧＴ ＣＣＡ ＧＣＣ ＣＣＣ ＧＡＡ ＣＴＧ ＣＴＧ ＧＧＣ ＧＧＡ ＣＣＣ ＴＣＡ ＧＴＣ ＴＴＣ ＣＴＣ ＴＴＴ ＣＣＡ ＣＣＡ ＡＡＧ ＣＣＧ ＡＡＡ ＧＡＴ ＡＣＣ ＣＴＴ ＡＴＧ ＡＴＣ ＴＣＴ ＡＧＧ ＡＣＣ ＣＣＣ ＧＡＧ ＧＴＡ ＡＣＧ ＴＧＣ ＧＴＴ ＧＴＣ ＧＴＣ ＧＡＴ ＧＴＧ ＴＣＴ ＣＡＣ ＧＡＧ ＧＡＣ ＣＣＧ ＧＡＧ ＧＴＣ ＡＡＧ ＴＴＣ ＡＡＴ ＴＧＧ ＴＡＣ ＧＴＣ ＧＡＴ ＧＧＣ ＧＴＣ ＧＡＧ ＧＴＴ ＣＡＴ ＡＡＣ ＧＣＧ ＡＡＧ ＡＣＴ ＡＡＡ ＣＣＧ ＡＧＧ ＧＡＧ ＧＡＡ ＣＡＡ ＴＡＣ ＡＡＣ ＴＣＴ ＡＣＧ ＴＡＣ ＣＧＡ ＧＴＡ ＧＴＧ ＴＣＣ ＧＴＧ ＴＴＧ ＡＣＡ ＧＴＡ ＣＴＧ ＣＡＴ ＣＡＡ ＧＡＴ ＴＧＧ ＣＴＣ ＡＡＴ ＧＧＴ ＡＡＡ ＧＡＡ ＴＡＴ ＡＡＡ ＴＧＣ ＡＡＧ ＧＴＣ ＴＣＴ ＡＡＣ ＡＡＡ ＧＣＧ ＴＴＧ ＣＣＴ ＧＣＧ ＣＣＡ ＡＴＣ ＧＡＡ ＡＡＡ ＡＣＴ ＡＴＴ ＡＧＣ ＡＡＡ ＧＣＴ ＡＡＧ ＧＧＴ ＣＡＡ ＣＣＧ ＣＧＡ ＧＡＧ ＣＣＴ ＣＡＧ ＧＴＡ ＴＡＣ ＡＣＧ ＣＴＴ ＣＣＴ ＣＣＧ ＴＣＣ ＣＧＡ ＧＡＡ ＧＡＧ ＡＴＧ ＡＣＧ ＡＡＡ ＡＡＴ ＣＡＡ ＧＴＣ ＴＣＣ ＣＴＧ ＡＣＡ ＴＧＴ ＣＴＴ ＧＴＴ ＡＡＧ ＧＧＴ ＴＴＴ ＴＡＣ ＣＣＴ ＴＣＴ ＧＡＣ ＡＴＴ ＧＣＴ ＧＴＣ ＧＡＡ ＴＧＧ ＧＡＧ ＴＣＣ ＡＡＴ ＧＧＣ ＣＡＧ ＣＣＣ ＧＡＧ ＡＡＣ ＡＡＣ ＴＡＴ ＡＡＧ ＡＣＧ ＡＣＧ ＣＣＴ ＣＣＣ ＧＴＣ ＴＴＧ ＧＡＴ ＡＧＴ ＧＡＣ ＧＧＡ ＡＧＣ ＴＴＴ ＴＴＣ ＣＴＧ ＴＡＴ ＴＣＴ ＡＡＡ ＴＴＧ ＡＣＣ ＧＴＧ ＧＡＣ ＡＡＧ ＡＧＣ ＣＧＧ ＴＧＧ ＣＡＡ ＣＡＧ ＧＧＴ ＡＡＣ ＧＴＣ ＴＴＴ ＴＣＡ ＴＧＣ ＴＣＣ ＧＴＡ ＡＴＧ ＣＡＣ ＧＡＧ ＧＣＧ ＣＴＴ ＣＡＴ ＡＡＣ ＣＡＣ ＴＡＣ ＡＣＣ ＣＡＡ ＡＡＧ ＡＧＴ ＣＴＣ ＴＣＡ ＴＴＧ ＴＣＴ ＣＣＣ ＧＧＴ ＧＧＣ ＧＧＴ ＴＣＡ ＧＧＴ ＧＧＧ ＧＧＧ ＧＧＡ ＡＧＣ ＧＧＴ ＧＧＴ ＧＧＡ ＴＣＴ ＧＡＣ ＡＣＴ ＧＧＡ ＣＧＧ ＣＣＴ ＴＴＣ ＧＴＴ ＧＡＧ ＡＴＧ ＴＡＣ ＴＣＡ ＧＡＡ ＡＴＴ ＣＣＧ ＧＡＧ ＡＴＣ ＡＴＴ ＣＡＣ ＡＴＧ ＡＣＡ ＧＡＡ ＧＧＧ ＡＧＧ ＧＡＧ ＴＴＧ ＧＴＧ ＡＴＡ ＣＣＴ ＴＧＣ ＣＧＧ ＧＴＴ ＡＣＡ ＴＣＡ ＣＣＡ ＡＡＣ ＡＴＡ ＡＣＴ ＧＴＡ ＡＣＡ ＣＴＣ ＡＡＡ ＡＡＡ ＴＴＣ ＣＣＣ ＣＴＧ ＧＡＴ ＡＣＡ ＣＴＴ ＡＴＣ ＣＣＴ ＧＡＴ ＧＧＡ ＡＡＧ ＣＧＡ ＡＴＡ ＡＴＡ ＴＧＧ ＧＡＣ ＡＧＴ ＡＧＡ ＡＡＡ ＧＧＡ ＴＴＴ ＡＴＣ ＡＴＴ ＡＧＣ ＡＡＣ ＧＣＡ ＡＣＧ ＴＡＴ ＡＡＡ ＧＡＡ ＡＴＣ ＧＧＡ ＴＴＧ ＣＴＴ ＡＣＣ ＴＧＣ ＧＡＡ ＧＣＧ ＡＣＧ ＧＴＧ ＡＡＴ ＧＧＣ ＣＡＴ ＣＴＧ ＴＡＣ ＡＡＡ ＡＣＧ ＡＡＣ ＴＡＣ ＣＴＣ ＡＣＧ ＣＡＣ ＣＧＡ ＣＡＡ ＡＣＧ ＡＡＣ ＡＣＴ ＡＴＣ ＡＴＡ ＧＡＴ ＧＴＡ ＧＴＴ ＴＴＧ ＡＧＴ ＣＣＴ ＡＧＴ ＣＡＣ ＧＧＴ ＡＴＴ ＧＡＧ ＣＴＣ ＡＧＣ ＧＴＣ ＧＧＧ ＧＡＧ ＡＡＡ ＣＴＧ ＧＴＣ ＣＴＴ ＡＡＣ ＴＧＴ ＡＣＴ ＧＣＴ ＡＧＡ ＡＣＧ ＧＡＡ ＣＴＣ ＡＡＣ ＧＴＧ ＧＧＴ ＡＴＡ ＧＡＴ ＴＴＣ ＡＡＣ ＴＧＧ ＧＡＧ ＴＡＣ ＣＣＧ ＴＣＡ ＴＣＣ ＡＡＡ ＣＡＴ ＣＡＡ ＣＡＣ ＡＡＧ ＡＡＡ ＣＴＴ ＧＴＣ ＡＡＣ ＣＧＡ ＧＡＣ ＣＴＧ ＡＡＧ ＡＣＡ ＣＡＡ ＴＣＴ ＧＧＡ ＴＣＡ ＧＡＧ ＡＴＧ ＡＡＧ ＡＡＧ ＴＴＴ ＴＴＧ ＴＣＴ ＡＣＴ ＣＴＴ ＡＣＡ ＡＴＴ ＧＡＴ ＧＧＧ ＧＴＣ ＡＣＴ ＣＧＧ ＴＣＴ ＧＡＴ ＣＡＡ ＧＧＡ ＣＴＧ ＴＡＴ ＡＣＣ ＴＧＣ ＧＣＡ ＧＣＣ ＡＧＴ ＴＣＡ ＧＧＧ ＴＴＧ ＡＴＧ ＡＣＴ ＡＡＡ ＡＡＡ ＡＡＴ ＴＣＣ ＡＣＣ ＴＴＣ ＧＴＡ ＣＧＡ ＧＴＣ ＣＡＣ ＧＡＧ ＡＡＧ ＴＡＧ
（配列番号３７）
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（配列番号３８）
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（配列番号３９）
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（配列番号４０）
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（配列番号４４）
[00233]ＣＡＡ ＧＴＡ ＣＡＡ ＴＴＧ ＣＡＡ ＧＡＧ ＡＧＣ ＧＧＣ ＣＣＡ ＧＧＴ ＣＴＣ ＧＴＡ ＡＧＧ ＣＣＧ ＴＣＣ ＣＡＧ ＡＣＴ ＴＴＧ ＴＣＴ ＣＴＧ ＡＣＡ ＴＧＣ ＡＣＡ ＧＴＡ ＴＣＡ ＧＧＧ ＴＡＴ ＴＣＣ ＡＴＣ ＡＣＴ ＡＧＴ ＧＡＴ ＣＡＣ ＧＣＴ ＴＧＧ ＴＣＣ ＴＧＧ ＧＴＣ ＣＧＡ ＣＡＧ ＣＣＧ ＣＣＴ ＧＧＧ ＡＧＡ ＧＧＣ ＣＴＧ ＧＡＧ ＴＧＧ ＡＴＡ ＧＧＧ ＴＡＣ ＡＴＣ ＴＣＣ ＴＡＣ ＴＣＣ ＧＧＡ ＡＴＡ ＡＣＧ ＡＣＧ ＴＡＣ ＡＡＣ ＣＣＧ ＡＧＴ ＣＴＧ ＡＡＧ ＴＣＴ ＣＧＡ ＧＴＡ ＡＣＣ ＡＴＧ ＣＴＧ ＡＧＧ ＧＡＴ ＡＣＡ ＡＧＣ ＡＡＧ ＡＡＴ ＣＡＧ ＴＴＴ ＴＣＡ ＴＴＧ ＡＧＧ ＣＴＣ ＴＣＡ ＴＣＣ ＧＴＴ ＡＣＡ ＧＣＣ ＧＣＣ ＧＡＣ ＡＣＡ ＧＣＴ ＧＴＣ ＴＡＴ ＴＡＴ ＴＧＣ ＧＣＴ ＣＧＣ ＡＧＴ ＴＴＧ ＧＣＣ ＡＧＡ ＡＣＣ ＡＣＴ ＧＣＡ ＡＴＧ ＧＡＴ ＴＡＣ ＴＧＧ ＧＧＣ ＣＡＡ ＧＧＡ ＴＣＣ ＣＴＧ ＧＴＴ ＡＣＣ ＧＴＣ ＡＧＣ ＴＣＡ ＧＣＴ ＡＧＣ ＡＣＧ ＡＡＡ ＧＧＴ ＣＣＡ ＴＣＴ ＧＴＴ ＴＴＣ ＣＣＡ ＣＴＴ ＧＣＡ ＣＣＧ ＴＣＣ ＡＧＴ ＡＡＧ ＴＣＣ ＡＣＣ ＴＣＡ ＧＧＣ ＧＧＡ ＡＣＣ ＧＣＴ ＧＣＣ ＣＴＴ ＧＧＡ ＴＧＣ ＣＴＧ ＧＴＣ ＡＡＧ ＧＡＴ ＴＡＴ ＴＴＣ ＣＣＣ ＧＡＧ ＣＣＡ ＧＴＣ ＡＣＡ ＧＴＣ ＡＧＣ ＴＧＧ ＡＡＣ ＴＣＴ ＧＧＡ ＧＣＣ ＣＴＣ ＡＣＣ ＡＧＣ ＧＧＡ ＧＴＴ ＣＡＣ ＡＣＧ ＴＴＴ ＣＣＣ ＧＣＴ ＧＴＣ ＴＴＧ ＣＡＡ ＡＧＴ ＴＣＣ ＧＧＧ ＣＴＣ ＴＡＣ ＡＧＴ ＣＴＧ ＡＧＣ ＴＣＴ ＧＴＡ ＧＴＡ ＡＣＣ ＧＴＧ ＣＣＣ ＡＧＴ ＴＣＡ ＡＧＣ ＣＴＴ ＧＧＧ ＡＣＣ ＣＡＡ ＡＣＴ ＴＡＣ ＡＴＡ ＴＧＴ ＡＡＴ ＧＴＡ ＡＡＴ ＣＡＣ ＡＡＧ ＣＣＡ ＡＧＣ ＡＡＣ ＡＣＴ ＡＡＧ ＧＴＧ ＧＡＴ ＡＡＡ ＡＡＡ ＧＴＣ ＧＡＧ ＣＣＧ ＡＡＡ ＴＣＣ ＴＧＣ ＧＡＣ ＡＡＡ ＡＣＡ ＣＡＣ ＡＣＧ ＴＧＴ ＣＣＴ ＣＣＧ ＴＧＴ ＣＣＧ ＧＣＴ ＣＣＣ ＧＡＡ ＴＴＧ ＣＴＴ ＧＧＣ ＧＧＣ ＣＣＣ ＴＣＣ ＧＴＧ ＴＴＴ ＣＴＧ ＴＴＣ ＣＣＡ ＣＣＧ ＡＡＧ ＣＣＡ ＡＡＧ ＧＡＣ ＡＣＴ ＣＴＧ ＡＴＧ ＡＴＣ ＴＣＴ ＣＧＣ ＡＣＧ ＣＣＡ ＧＡＡ ＧＴＧ ＡＣＡ ＴＧＣ ＧＴＣ ＧＴＴ ＧＴＡ ＧＡＣ ＧＴＡ ＴＣＡ ＣＡＣ ＧＡＡ ＧＡＣ ＣＣＣ ＧＡＡ ＧＴＴ ＡＡＧ ＴＴＴ ＡＡＣ ＴＧＧ ＴＡＴ ＧＴＧ ＧＡＴ ＧＧＡ ＧＴＣ ＧＡＡ ＧＴＡ ＣＡＴ ＡＡＴ ＧＣＣ ＡＡＧ ＡＣＧ ＡＡＡ ＣＣＡ ＡＧＧ ＧＡＡ ＧＡＡ ＣＡＡ ＴＡＣ ＡＡＴ ＴＣＴ ＡＣＡ ＴＡＴ ＣＧＧ ＧＴＣ ＧＴＧ ＡＧＴ ＧＴＴ ＣＴＧ ＡＣＧ ＧＴＡ ＴＴＧ ＣＡＴ ＣＡＡ ＧＡＴ ＴＧＧ ＣＴＣ ＡＡＣ ＧＧＴ ＡＡＡ ＧＡＡ ＴＡＣ ＡＡＡ ＴＧＴ ＡＡＧ ＧＴＧ ＡＧＴ ＡＡＴ ＡＡＡ ＧＣＧ ＣＴＴ ＣＣＣ ＧＣＴ ＣＣＡ ＡＴＡ ＧＡＧ ＡＡＧ ＡＣＡ ＡＴＡ ＴＣＣ ＡＡＡ ＧＣＴ ＡＡＡ ＧＧＴ ＣＡＧ ＣＣＡ ＣＧＧ ＧＡＧ ＣＣＧ ＣＡＡ ＧＴＴ ＴＡＴ ＡＣＣ ＴＴＧ ＣＣＧ ＣＣＴ ＴＣＡ ＡＧＡ ＧＡＡ ＧＡＧ ＡＴＧ ＡＣＡ ＡＡＡ ＡＡＣ ＣＡＧ ＧＴＴ ＴＣＣ ＣＴＴ ＡＣＧ ＴＧＣ ＣＴＧ ＧＴＧ ＡＡＧ ＧＧＡ ＴＴＴ ＴＡＣ ＣＣＡ ＡＧＴ ＧＡＴ ＡＴＡ ＧＣＡ ＧＴＴ ＧＡＡ ＴＧＧ ＧＡＧ ＡＧＣ ＡＡＣ ＧＧＴ ＣＡＡ ＣＣＡ ＧＡＡ ＡＡＣ ＡＡＣ ＴＡＣ ＡＡＧ ＡＣＴ ＡＣＴ ＣＣＣ ＣＣＡ ＧＴＴ ＣＴＣ ＧＡＣ ＴＣＴ ＧＡＴ ＧＧＧ ＴＣＴ ＴＴＣ ＴＴＴ ＴＴＧ ＴＡＣ ＴＣＡ ＡＡＡ ＣＴＣ ＡＣＣ ＧＴＴ ＧＡＣ ＡＡＡ ＴＣＡ ＡＧＡ ＴＧＧ ＣＡＧ ＣＡＡ ＧＧＣ ＡＡＣ ＧＴＴ ＴＴＴ ＴＣＡ ＴＧＴ ＡＧＣ ＧＴＣ ＡＴＧ ＣＡＴ ＧＡＧ ＧＣＣ ＴＴＧ ＣＡＣ ＡＡＣ ＣＡＣ ＴＡＣ ＡＣＧ ＣＡＡ ＡＡＡ ＡＧＣ ＣＴＣ ＡＧＴ ＴＴＧ ＡＧＴ ＣＣＣ ＧＧＧ ＧＧＴ ＧＧＴ ＡＧＴ ＧＧＣ ＧＧＴ ＧＧＣ ＧＧＴ ＴＣＣ ＧＧＣ ＧＧＴ ＧＧＧ ＴＡＴ ＴＣＴ ＡＴＧ ＡＣＡ ＣＣＡ ＣＣＣ ＡＣＧ ＣＴＣ ＡＡＴ ＡＴＴ ＡＣＡ ＧＡＧ ＧＡＧ ＡＧＣ ＣＡＣ ＧＴＡ ＡＴＴ ＧＡＴ ＡＣＡ ＧＧＴ ＧＡＴ ＴＣＴ ＣＴＧ ＴＣＣ ＡＴＴ ＡＧＴ ＴＧＣ ＡＧＧ ＧＧＴ ＣＡＡ ＣＡＴ ＣＣＧ ＣＴＧ ＧＡＡ ＴＧＧ ＧＣＣ ＴＧＧ ＣＣＧ ＧＧＴ ＧＣＧ ＣＡＡ ＧＡＡ ＧＣＡ ＣＣＣ ＧＣＡ ＡＣＡ ＧＧＡ ＧＡＴ ＡＡＡ ＧＡＣ ＴＣＣ ＧＡＡ ＧＡＴ ＡＣＧ ＧＧＧ ＧＴＧ ＧＴＣ ＡＧＡ ＧＡＴ ＴＧＴ ＧＡＡ ＧＧＧ ＡＣＡ ＧＡＴ ＧＣＡ ＡＧＧ ＣＣＴ ＴＡＴ ＴＧＴ ＡＡＧ ＧＴＴ ＴＴＧ ＣＴＴ ＣＴＣ ＣＡＣ ＧＡＧ ＧＴＡ ＣＡＴ ＧＣＧ ＡＡＣ ＧＡＴ ＡＣＴ ＧＧＧ ＴＣＴ ＴＡＣ ＧＴＧ ＴＧＴ ＴＡＣ ＴＡＣ ＡＡＧ ＴＡＴ ＡＴＣ ＡＡＡ ＧＣＴ ＡＧＧ ＡＴＣ ＧＡＧ ＧＧＧ ＡＣＴ ＡＣＣ ＧＣＣ ＧＣＧ ＡＧＴ ＴＣＴ ＴＡＴ ＧＴＴ ＴＴＴ ＧＴＣ ＣＧＡ ＧＡＣ ＴＴＣ ＧＡＧ ＣＡＧ ＣＣＧ ＴＴＣ ＡＴＣ ＡＡＴ ＡＡＡ ＣＣＴ ＧＡＣ ＡＣＡ ＣＴＧ ＴＴＧ ＧＴＡ ＡＡＣ ＣＧＧ ＡＡＡ ＧＡＣ ＧＣＣ ＡＴＧ ＴＧＧ ＧＴＧ ＣＣＴ ＴＧＴ ＣＴＴ ＧＴＴ ＴＣＴ ＡＴＣ ＣＣＧ ＧＧＴ ＣＴＧ ＡＡＣ ＧＴＣ ＡＣＴ ＣＴＴ ＡＧＧ ＡＧＴ ＣＡＧ ＴＣＣ ＡＧＣ ＧＴＣ ＣＴＣ ＴＧＧ ＣＣＣ ＧＡＴ ＧＧＣ ＣＡＧ ＧＡＧ ＧＴＣ ＧＴＣ ＴＧＧ ＧＡＴ ＧＡＣ ＡＧＡ ＡＧＧ ＧＧＣ ＡＴＧ ＴＴＧ ＧＴＡ ＴＣＣ ＡＣＴ ＣＣＧ ＣＴＴ ＴＴＧ ＣＡＣ ＧＡＴ ＧＣＧ ＣＴＧ ＴＡＣ ＣＴＴ ＣＡＧ ＴＧＴ ＧＡＧ ＡＣＣ ＡＣＴ ＴＧＧ ＧＧＴ ＧＡＣ ＣＡＡ ＧＡＴ ＴＴＴ ＣＴＣ ＴＣＡ ＡＡＴ ＣＣＣ ＴＴＴ ＣＴＧ ＧＴＣ ＣＡＣ ＡＴＡ ＡＣＣ ＧＧＣ ＡＡＣ ＧＡＧ ＣＴＣ ＴＡＧ
（配列番号４５）
[00234]ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＹＳＭＴＰＰＴＬＮＩＴＥＥＳＨＶＩＤＴＧＤＳＬＳＩＳＣＲＧＱＨＰＬＥＷＡＷＰＧＡＱＥＡＰＡＴＧＤＫＤＳＥＤＴＧＶＶＲＤＣＥＧＴＤＡＲＰＹＣＫＶＬＬＬＨＥＶＨＡＮＤＴＧＳＹＶＣＹＹＫＹＩＫＡＲＩＥＧＴＴＡＡＳＳＹＶＦＶＲＤＦＥＱＰＦＩＮＫＰＤＴＬＬＶＮＲＫＤＡＭＷＶＰＣＬＶＳＩＰＧＬＮＶＴＬＲＳＱＳＳＶＬＷＰＤＧＱＥＶＶＷＤＤＲＲＧＭＬＶＳＴＰＬＬＨＤＡＬＹＬＱＣＥＴＴＷＧＤＱＤＦＬＳＮＰＦＬＶＨＩＴＧＮＥＬ
（配列番号４６）
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（配列番号４７）
[00236]ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫ
（配列番号４８）
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（配列番号４９）
[00238]ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＧＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＳＹＹＣＱＱＡＮＳＦＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
（配列番号５０）
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（配列番号５１）
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（配列番号５２）
[00241]ＳＤＨＡＷＳ（配列番号５３）
[00242]ＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号５４）
[00243]ＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹ（配列番号５５）
[00244]ＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮ（配列番号５６）
[00245]ＹＴＳＲＬＨＳ（配列番号５７）
[00246]ＱＱＧＮＴＬＰＹＴ（配列番号５８）
[00247]ＡＴＧ ＣＣＧ ＣＴＣ ＴＴＧ ＣＴＣ ＣＴＴ ＣＴＴ ＣＣＡ ＴＴＧ ＣＴＣ ＴＧＧ ＧＣＧ ＧＧＣ ＧＣＡ ＣＴＧ ＧＣＣ ＧＡＴ ＡＴＣ ＣＡＡ ＡＴＧ ＡＣＧ ＣＡＡ ＡＧＴ ＣＣＡ ＡＧＴ ＴＣＴ ＣＴＴ ＴＣＡ ＧＣＣ ＡＧＣ ＧＴＣ ＧＧＡ ＧＡＴ ＡＧＡ ＧＴＣ ＡＣＴ ＡＴＡ ＡＣＡ ＴＧＣ ＣＧＣ ＧＣＧ ＡＧＣ ＣＡＧ ＧＡＴ ＡＴＡ ＴＣＡ ＡＧＣ ＴＡＣ ＣＴＴ ＡＡＴ ＴＧＧ ＴＡＴ ＣＡＡ ＣＡＡ ＡＡＡ ＣＣＧ ＧＧＴ ＡＡＡ ＧＣＧ ＣＣＧ ＡＡＡ ＣＴＣ ＴＴＧ ＡＴＴ ＴＡＴ ＴＡＴ ＡＣＣ ＡＧＴ ＡＧＧ ＣＴＣ ＣＡＣ ＴＣＣ ＧＧＴ ＧＴＡ ＣＣＡ ＡＧＴ ＣＧＧ ＴＴＣ ＡＧＴ ＧＧＣ ＴＣＣ ＧＧＧ ＡＧＴ ＧＧＡ ＡＣＣ ＧＡＣ ＴＴＣ ＡＣＡ
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（配列番号５９）
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（配列番号６１）
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（配列番号６２）
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（配列番号６５）
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（配列番号６６）
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（配列番号６７）
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（配列番号６９）
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（配列番号７１）
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（配列番号７３）
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（配列番号７４）
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（配列番号７５）
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（配列番号７６）
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（配列番号７７）
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（配列番号７８）
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（配列番号８０）
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（配列番号８１）
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（配列番号８２）
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（配列番号８３）
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（配列番号８４）
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（配列番号８５）
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（配列番号８６）
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（配列番号８８）
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（配列番号８９）
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（配列番号９０）
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（配列番号９２）
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（配列番号９３）
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（配列番号９４）
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（配列番号９５）
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（配列番号９６）
[00285]ＡＧＣＧＡＣＡＣＣＧＧＣＡＧＡＣＣＣＴＴＣＧＴＧＧＡＧＡＴＧＴＡＣＡＧＣＧＡＧＡＴＣＣＣＣＧＡＧＡＴＣＡＴＣＣＡＣＡＴＧＡＣＣＧＡＧＧＧＣＡＧＡＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＴＣＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＧＣＣＣＣＡＡＣＡＴＣＡＣＣＧＴＧＡＣＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＣＣＣＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧＡＧＡＡＴＣＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＣＡＧＡＡＡＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＣＡＧＣＡＡＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＧＧＡＧＡＴＣＧＧＣＣＴＧＣＴＧＡＣＣＴＧＣＧＡＧＧＣＣＡＣＣＧＴＧＡＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＧＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＣＣＣＡＣＡＧＡＣＡＧＡＣＣＡＡＣＡＣＣＡＴＣＡＴＣＧＡＣＧＴＧＧＴＧＣＴＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＣＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＧＣＴＧＡＧＣＧＴＧＧＧＣＧＡＧＡＡＧＣＴＧＧＴＧＣＴＧＡＡＣＴＧＣＡＣＣＧＣＣＡＧＡＡＣＣＧＡＧＣＴＧＡＡＣＧＴＧＧＧＣＡＴＣＧＡＣＴＴＣＡＡＣＴＧＧＧＡＧＴＡＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＣＡＡＧＡＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＣＡＧＡＧＡＣＣＴＧＡＡＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＡＧＡＴＧＡＡＧＡＡＧＴＴＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＧＡＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＡＧＡＡＧＣＧＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＴＧＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＧＡＡＣＡＧＣＡＣＣＴＴＣＧＴＧＡＧＡＧＴＧＣＡＣＧＡＧＡＡＧＧＡＣＡＴＴＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＧＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＣＡＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＡＣＡＣＣＡＧＴＡＧＡＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＣＴＣＡＧＧＡＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＣＴＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＣＧＡＡＧＡＴＡＴＴＧＣＴＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＴＡＴＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＴＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
（配列番号９７）
[00286]ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰ
（配列番号９８）
[00287]ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＧＣＣＣＣＧＧＡＣＴＧＧＴＧＡＧＧＣＣＴＴＣＣＣＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＡＴＧＣＡＣＡＧＴＧＡＧＣＧＧＣＴＡＣＡＧＣＡＴＣＡＣＡＡＧＣＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＧＧＡＧＣＴＧＧＧＴＧＡＧＡＣＡＧＣＣＣＣＣＣＧＧＡＡＧＡＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＡＴＡＴＡＴＣＴＣＣＴＡＣＴＣＡＧＧＣＡＴＴＡＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＴＣＴＧＡＡＡＡＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＧＣＴＧＡＧＡＧＡＴＡＣＴＡＧＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＴＡＧＣＣＴＧＡＧＡＣＴＧＴＣＴＡＧＣＧＴＧＡＣＴＧＣＣＧＣＣＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＧＡＴＣＣＣＴＧＧＣＣＣＧＧＡＣＣＡＣＡＧＣＣＡＴＧＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＧＣＣＴＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＣＣＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＣＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧ
（配列番号９９）
[00288]ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
（配列番号１００）
[00289]ＡＧＣＧＡＣＡＣＣＧＧＣＡＧＡＣＣＣＴＴＣＧＴＧＧＡＧＡＴＧＴＡＣＡＧＣＧＡＧＡＴＣＣＣＣＧＡＧＡＴＣＡＴＣＣＡＣＡＴＧＡＣＣＧＡＧＧＧＣＡＧＡＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＴＣＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＧＣＣＣＣＡＡＣＡＴＣＡＣＣＧＴＧＡＣＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＣＣＣＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧＡＧＡＡＴＣＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＣＡＧＡＡＡＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＣＡＧＣＡＡＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＧＧＡＧＡＴＣＧＧＣＣＴＧＣＴＧＡＣＣＴＧＣＧＡＧＧＣＣＡＣＣＧＴＧＡＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＧＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＣＣＣＡＣＡＧＡＣＡＧＡＣＣＡＡＣＡＣＣＡＴＣＡＴＣＧＡＣＧＴＧＧＴＧＣＴＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＣＡＣＧＧＣＡＴＣＧＡＧＣＴＧＡＧＣＧＴＧＧＧＣＧＡＧＡＡＧＣＴＧＧＴＧＣＴＧＡＡＣＴＧＣＡＣＣＧＣＣＡＧＡＡＣＣＧＡＧＣＴＧＡＡＣＧＴＧＧＧＣＡＴＣＧＡＣＴＴＣＡＡＣＴＧＧＧＡＧＴＡＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＣＡＡＧＡＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＣＡＧＡＧＡＣＣＴＧＡＡＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＡＧＡＴＧＡＡＧＡＡＧＴＴＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＧＡＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＡＧＡＡＧＣＧＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＴＧＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＧＡＡＣＡＧＣＡＣＣＴＴＣＧＴＧＡＧＡＧＴＧＣＡＣＧＡＧＡＡＧＧＧＡＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＣＧＧＧＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＧＡＧＣＧＧＡＧＧＡＧＧＧＧＧＡＧＡＣＡＴＴＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＧＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＣＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＣＡＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＡＣＡＣＣＡＧＴＡＧＡＣＴＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＣＴＣＡＧＧＡＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＣＴＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＣＧＡＡＧＡＴＡＴＴＧＣＴＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＴＡＴＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＴＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
（配列番号１０１）
[00290]ＹＳＭＴＰＰＴＬＮＩＴＥＥＳＨＶＩＤＴＧＤＳＬＳＩＳＣＲＧＱＨＰＬＥＷＡＷＰＧＡＱＥＡＰＡＴＧＤＫＤＳＥＤＴＧＶＶＲＤＣＥＧＴＤＡＲＰＹＣＫＶＬＬＬＨＥＶＨＡＮＤＴＧＳＹＶＣＹＹＫＹＩＫＡＲＩＥＧＴＴＡＡＳＳＹＶＦＶＲＤＦＥＱＰＦＩＮＫＰＤＴＬＬＶＮＲＫＤＡＭＷＶＰＣＬＶＳＩＰＧＬＮＶＴＬＲＳＱＳＳＶＬＷＰＤＧＱＥＶＶＷＤＤＲＲＧＭＬＶＳＴＰＬＬＨＤＡＬＹＬＱＣＥＴＴＷＧＤＱＤＦＬＳＮＰＦＬＶＨＩＴＧＮＥＬＹＤＩＱＬＬＰＲＫＳＬＥＬＬＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＶＷＡＥＦＮＳＧＶＴＦＤＷＤＹＰＧＫＱＡＥＲＧＫＷＶＰＥＲＲＳＱＱＴＨＴＥＬＳＳＩＬＴＩＨＮＶＳＱＨＤＬＧＳＹＶＣＫＡＮＮＧＩＱＲＦＲＥＳＴＥＶＩＶＨＥＮ
（配列番号１０２）
[00291]ＴＡＣＡＧＣＡＴＧＡＣＣＣＣＴＣＣＴＡＣＣＣＴＧＡＡＣＡＴＣＡＣＣＧＡＧＧＡＧＡＧＣＣＡＣＧＴＧＡＴＣＧＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＡＧＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＴＴＴＡＧＡＧＴＧＧＧＣＣＴＧＧＣＣＣＧＧＣＧＣＣＣＡＧＧＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＣＡＣＣＧＧＣＧＡＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＧＣＧＴＧＧＴＧＡＧＡＧＡＣＴＧＣＧＡＧＧＧＣＡＣＣＧＡＣＧＣＣＡＧＡＣＣＣＴＡＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＡＧＧＴＧＣＡＣＧＣＣＡＡＣＧＡＣＡＣＣＧＧＣＡＧＣＴＡＣＧＴＧＴＧＣＴＡＣＴＡＣＡＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＧＣＣＡＧＡＡＴＣＧＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＣＧＣＣＧＣＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＧＴＧＴＴＣＧＴＧＡＧＡＧＡＣＴＴＣＧＡＧＣＡＧＣＣＣＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＡＧＣＣＣＧＡＣＡＣＣＣＴＧＣＴＧＧＴＧＡＡＣＡＧＡＡＡＧＧＡＣＧＣＣＡＴＧＴＧＧＧＴＧＣＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＧＡＧＣＡＴＣＣＣＣＧＧＣＣＴＧＡＡＣＧＴＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＡＧＣＣＡＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＣＴＧＴＧＧＣＣＣＧＡＣＧＧＣＣＡＧＧＡＧＧＴＧＧＴＧＴＧＧＧＡＣＧＡＣＡＧＡＡＧＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＴＧＡＧＣＡＣＴＣＣＴＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＴＧＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＧＧＧＧＣＧＡＣＣＡＧＧＡＣＴＴＣＣＴＧＡＧＣＡＡＣＣＣＣＴＴＣＣＴＧＧＴＧＣＡＣＡＴＣＡＣＣＧＧＣＡＡＣＧＡＧＣＴＧＴＡＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＡＧＧＡＡＧＡＧＣＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＧＴＧＧＧＣＧＡＧＡＡＧＣＴＧＧＴＧＣＴＧＡＡＣＴＧＣＡＣＣＧＴＧＴＧＧＧＣＣＧＡＧＴＴＣＡＡＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＴＴＴＧＡＣＴＧＧＧＡＣＴＡＣＣＣＣＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＣＣＧＡＡＡＧＧＧＧＡＡＡＡＴＧＧＧＴＧＣＣＣＧＡＡＡＧＡＡＧＡＡＧＴＣＡＧＣＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＡＧＡＡＣＴＧＡＧＣＴＣＣＡＴＣＣＴＧＡＣＡＡＴＣＣＡＣＡＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＧＣＡＣＧＡＣＣＴＧＧＧＣＡＧＣＴＡＴＧＴＧＴＧＣＡＡＡＧＣＴＡＡＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＣＡＧＡＧＡＴＴＣＡＧＡＧＡＧＡＧＣＡＣＣＧＡＧＧＴＧＡＴＣＧＴＧＣＡＣＧＡＡＡＡＴ
（配列番号１０３）
[00292]本発明の特定の実施形態を前述において説明してきたが、添付の特許請求の範囲において定義される本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、それらに対する多くの均等物、修正、代替、および変更が為され得ることは当業者によって理解されるであろう。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【配列表】

2024507397000001.app

【手続補正書】

【提出日】2023-10-27

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＩＬ－６Ｒおよび１つまたは複数のＶＥＧＦファミリーメンバーに実質的に結合することができる抗体融合タンパク質またはそれらの抗原結合性断片もしくはドメイン。

【請求項2】

第１のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメイン、第２のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメイン、第３のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメイン、およびその組合せからなる群から選択されるＩｇ様ドメインを含むＶＥＧＦ結合ユニットに連結されているＩＬ－６Ｒに対する抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインを含む請求項１に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項3】

ＩＬ－６Ｒに対する抗体またはその抗原結合性断片もしくはドメインを含み、（１）軽鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメイン、および（２）重鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインのうちの少なくとも一方が、第１のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメイン、第２のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメイン、第３のＶＥＧＦ受容体のＩｇ様ドメイン、およびその組合せからなる群から選択される複数のＩｇ様ドメインを含むＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている、請求項１に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項4】

前記ＩＬ－６ＲがヒトＩＬ－６Ｒである、請求項３に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項5】

前記ＶＥＧＦ結合ユニットが、（１）（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２；および（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３；あるいは（２）（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン１および２あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１および２；または（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン２および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン２および３；または（ｃ）ヒトＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン１、２、および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１、２、および３を含む、請求項４に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項6】

ＩＬ－６Ｒ抗体部分の軽鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインならびに重鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインが、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２と；（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３とを含むＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている、請求項４に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項7】

（１）ＩＬ－６Ｒ抗体部分の軽鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインが、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－１のＩｇ様ドメイン２または実質的Ｉｇ様ドメイン２と；（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－２のＩｇ様ドメイン３または実質的Ｉｇ様ドメイン３とを含む第１のＶＥＧＦ結合ユニットに連結され、ならびに（２）抗体融合タンパク質の重鎖またはその抗原結合性断片もしくはドメインが、（ａ）ヒトＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン１および２あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１および２；または（ｂ）ヒトＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン２および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン２および３；または（ｃ）ヒトＶＥＧＦＲ－３のＩｇ様ドメイン１、２、および３あるいは実質的Ｉｇ様ドメイン１、２、および３を含む第２のＶＥＧＦ結合ユニットに連結されている、請求項４に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項8】

その重鎖が、配列番号５３、５４、および５５の相補性決定領域ＨＣＣＤＲ１、ＨＣＣＤＲ２、およびＨＣＣＤＲ３アミノ酸配列を有する、請求項６に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項9】

その軽鎖が、配列番号５６、５７、および５８の相補性決定領域ＬＣＣＤＲ１、ＬＣＣＤＲ２、およびＬＣＣＤＲ３アミノ酸配列を有する、請求項６に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項10】

１対の重鎖および軽鎖が、配列番号３４および３６、配列番号３８および４０、配列番号４２および４４、配列番号４６および４８、配列番号７８および８０、配列番号８２および８４、配列番号８６および８８、配列番号９０および９２、配列番号９４および９６、および配列番号９８および１００からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項６に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項11】

配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号７４、および配列番号７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項12】

配列番号６０、配列番号６２、配列番号６４、配列番号６６、配列番号７４、および配列番号７６からなる群から選択されるアミノ酸配列のアミノ酸１７において始まるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項13】

解離定数Ｋ_ｄ≦１０^－９ＭでＩＬ－６ＲおよびＶＥＧＦファミリーメンバーに結合する、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体融合タンパク質。

【請求項14】

請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体融合タンパク質をコードする単離された核酸分子。

【請求項15】

配列番号１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、５９、６１、６３、６５、７５、または７７においてリストに実質的に示される配列を有する単離された核酸分子。

【請求項16】

請求項１４または１５に記載の核酸分子を含むベクター。

【請求項17】

宿主細胞における、請求項１６に記載の発現ベクターを含む宿主－ベクターシステム。

【請求項18】

配列番号１７および１９；配列番号２１および２３；配列番号２５および２７；配列番号２９および３１；配列番号７９および８１；配列番号８３および８５；配列番号８７および８９；配列番号９１および９３；配列番号９５および９７；ならびに配列番号９９および１０１からなる群から選択される１対の核酸配列を含む発現ベクター対を含む宿主－ベクターシステム。

【請求項19】

配列番号５９、配列番号６１、配列番号６３、配列番号６５、配列番号７５、および配列番号７７からなる群から選択される核酸配列を含む発現ベクターを含む宿主－ベクターシステム。

【請求項20】

実質的に精製された抗体融合タンパク質を製造する方法であって、（ａ）抗体融合タンパク質の製造を可能にする条件下において請求項１８または１９に記載の宿主－ベクターシステムの細胞を増殖させる工程；および（ｂ）回収された抗体融合タンパク質を製造するために抗体融合タンパク質を回収する工程；および（ｃ）実質的に精製された抗体融合タンパク質を製造するために前記回収された抗体融合タンパク質を精製する工程を含む方法。

【請求項21】

少なくとも疾患、状態、または障害を治療または制御することを必要とする対象において、少なくとも疾患、状態、または障害を治療または制御するための使用のための医薬組成物であって、疾患、状態、または障害が、異常血管形成または炎症に原因を有し、前記組成物が、ＩＬ－６Ｒおよび１つまたは複数のＶＥＧＦファミリーメンバーに実質的に結合することができる抗体融合タンパク質またはその抗原結合性断片を含む、医薬組成物。

【請求項22】

配列番号３４および３６；配列番号３８および４０；配列番号４２および４４；配列番号４６および４８；配列番号７８および８０；配列番号８２および８４；配列番号８６および８８；配列番号９０および９２；配列番号９４および９６；配列番号９８および１００；配列番号６０；配列番号６２；配列番号６４；配列番号６６；配列番号７４；または配列番号７６においてリストに実質的に示されるアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の医薬組成物。

【請求項23】

前記疾患、状態、または障害が、脈絡膜血管新生、新生血管加齢黄斑変性症、ポリープ状脈絡膜血管症、近視性脈絡膜血管新生、血管漏出、黄斑浮腫、非増殖性および増殖性糖尿病性網膜症、角膜血管新生、角膜炎、近視性新生血管形成、および新生血管緑内障からなる群から選択される、請求項２２に記載の医薬組成物。

【請求項24】

抗体融合タンパク質またはその抗原結合性断片の約２５～４０００マイクログラムの用量において提供される、請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項25】

点眼剤、涙点プラグ、前房内、眼球後、結膜下、眼球周囲、テノン嚢下、強膜近傍、経強膜、硝子体内、網膜下、または脈絡膜上注射として提供される、請求項２４に記載の医薬組成物。

【請求項26】

前記疾患、状態、または障害が、腫瘍成長、腫瘍転移、腫瘍成長および腫瘍転移の組合せ、アテローム性動脈硬化症、ならびに乾癬からなる群から選択される、請求項２２に記載の医薬組成物。

【国際調査報告】