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▶ インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-02-21
(54)【発明の名称】グルカゴン様ペプチド－１受容体アンタゴニスト
(51)【国際特許分類】
C07K 14/605 20060101AFI20240214BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240214BHJP
A61P 3/08 20060101ALI20240214BHJP
A61K 38/22 20060101ALI20240214BHJP
A61K 47/65 20170101ALI20240214BHJP
【ＦＩ】
C07K14/605 ZNA
A61K45/00
A61P3/08
A61K38/22
A61K47/65
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023549044
(86)(22)【出願日】2022-02-15
(85)【翻訳文提出日】2023-10-13
(86)【国際出願番号】 US2022016406
(87)【国際公開番号】W WO2022177878
(87)【国際公開日】2022-08-25
(31)【優先権主張番号】63/149,852
(32)【優先日】2021-02-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】507277642
【氏名又は名称】インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーション
【氏名又は名称原語表記】ＩＮＤＩＡＮＡ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＡＮＤ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100163784
【弁理士】
【氏名又は名称】武田 健志
(72)【発明者】
【氏名】ディマルキ，リチャード
(72)【発明者】
【氏名】ムロツ，ピオトル・アンジェイ
(72)【発明者】
【氏名】タルリ，キショール
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076CC41
4C076CC42
4C076EE41
4C076EE59
4C076FF70
4C084AA02
4C084AA03
4C084AA07
4C084BA01
4C084BA08
4C084BA19
4C084BA23
4C084BA31
4C084DB01
4C084DB35
4C084NA14
4C084ZC35
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA18
4H045BA19
4H045BA55
4H045BA57
4H045CA40
4H045DA30
4H045EA20
4H045FA10
(57)【要約】
低血糖の処置のためのＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドおよび医薬組成物が本明細書で提供される。さらに、肥満手術後に高インスリン血症になる者を含む、高インスリン血症になった患者における非定型低血糖を処置する方法が本明細書で提供される。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストであって、Ｒ１０－ＤＶＸ１１Ｘ１２ＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＸ１９Ｘ２０ＥＦＸ２３Ｘ２４ＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－Ｒ２０ 配列番号９７）（ここで、Ｒ１０は、ＮＨ２または１個もしくは２個のアミノ酸のＮ末端伸長であり、Ｎ末端伸長のアミノ酸の１個は、場合によりスペーサーを介してＣ１４～Ｃ２０脂肪酸または二酸でアシル化され、場合により、Ｒ１０は、構造：Ｘ７Ｘ８のジペプチドであり、Ｘ７はアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓまたはアシル化ｄＬｙｓであり、Ｘ８はＧｌｙまたはＣ１～Ｃ４ Ｎ－アルキル化Ｇｌｙであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇ、Ｓｅｒまたはアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｇｌｕ、ｄＧｌｕ、Ａｓｐ、ホモグルタミン酸またはホモシステイン酸であり；
Ｘ１９は、Ｖａｌ、シクロプロパン、シクロペンタン、シクロヘキサンまたはフェニルグリシンであり；
Ｘ２０は、Ａｒｇ、ホモリジンまたはシトルリンであり；
Ｘ２３は、Ｉｌｅ、またはｄＩｌｅであり；
Ｘ２４は、Ｇｌｕ、またはＡｌａであり；および
Ｘ４０は、結合またはアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；ならびに
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含み、場合により、Ｘ１０またはＸ１１の一方がＴｒｐまたはｄＴｒｐである場合、他方はＴｒｐまたはｄＴｒｐではなく、Ｒ１０およびＸ１２は両方ともアシル化アミノ酸を含むことができないという条件で、７位、１０位、１３位、または１６位から選択される１、２または３個のアミノ酸がＴｒｐまたはｄＴｒｐで置換され；場合により、１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、または２８位のいずれかにおける１、２または３個のアミノ酸がＡｉｂで置換されている、上記アンタゴニスト。
【請求項2】
Ｒ１０－ＤＶＸ１１Ｘ１２ＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＸ１９Ｘ２０ＥＦＸ２３ＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－Ｒ２０ 配列番号２３）（ここで、Ｒ１０は、ＮＨ２またはＸ７Ｘ８であり、Ｘ７は、場合によりスペーサーを介してＣ１４～Ｃ２０脂肪酸または二酸でアシル化されたアミノ酸であり、Ｘ８はＧｌｙまたはＣ１～Ｃ４ Ｎ－アルキル化Ｇｌｙであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇ、Ｓｅｒまたはアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｇｌｕ、ｄＧｌｕ、Ａｓｐ、ホモグルタミン酸またはホモシステイン酸であり；
Ｘ１９は、Ｖａｌ、シクロプロパン、シクロペンタン、シクロヘキサンまたはフェニルグリシンであり；
Ｘ２０は、Ａｒｇ、ホモリジンまたはシトルリンであり；
Ｘ２３は、Ｉｌｅ、またはｄＩｌｅであり；および
Ｘ４０は、アシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；ならびに
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含み、場合により、１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、または２８位のいずれかにおける１、２または３個のアミノ酸がＡｉｂで置換されている、請求項１に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項3】
ＧＬＰ－１アンタゴニストの各アシル化アミノ酸がアシル化Ｌｙｓである、請求項１に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項4】
Ｘ７がアシル化Ｌｙｓであり、Ｘ１２がＡｒｇである、請求項１～３のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項5】
Ｒ１０がＮＨ２であり、Ｘ１２がアシル化Ｌｙｓである、請求項１～３のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項6】
Ｘ７がＮＨ２であり、Ｘ１２がＡｒｇである、請求項１～３のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項7】
配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、および配列番号４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項8】
ＧＬＰ－１アンタゴニストのアシル化アミノ酸が、独立して、Ｌｙｓ側鎖に直接連結された、または場合によりｉ）ガンマグルタミン酸、
ｉｉ）ミニペグポリマー：－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］－（ここで、ｋは２、４、６または８である）、
ｉｉｉ）または任意の複数のｉ）もしくはｉｉ）またはｉ）もしくはｉｉ）の組み合わせ
を含むスペーサーを介して、Ｃ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸でアシル化されたＬｙｓ残基である、請求項１～７のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項9】
ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストであって、ＤＸ１０Ｘ１１Ｘ１２ＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＶＲＥＦＸ２３Ｘ２４ＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号９８）
（ここで
Ｘ１０は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＶａｌであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇ、ＬｙｓまたはＳｅｒであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐ、ｄＧｌｕまたはＧｌｕであり；
Ｘ２３は、ＩｌｅまたはｄＩｌｅであり；
Ｘ２４は、ＡｌａまたはＧｌｕである）のアミノ酸配列を含み；
該ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストが、高親和性で血清アルブミンに結合するのに十分なサイズの脂肪酸基または脂肪二酸基でアシル化され、場合により、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストのアミノ酸が、Ｃ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸でアシル化されている、上記アンタゴニスト。
【請求項10】
ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストであって、ＤＸ１０Ｘ１１ＲＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＶＲＥＦＸ２３ＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０（配列番号５）（ここで、
Ｘ１０は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＶａｌであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐ、ｄＧｌｕまたはＧｌｕであり；
Ｘ２３は、ＩｌｅまたはｄＩｌｅであり；
Ｘ４０は、アシル化アミノ酸であり；および
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含み、場合により、ペプチドが、１６位、１８位、１９位、２４位、２６位もしくは２８位のいずれかにおけるＡｉｂの１つもしくは複数の置換、または場合により１２位におけるアシル化Ｌｙｓの置換を含み、前記位置番号が、天然のエキセンジン４アミノ酸配列と比較した番号である、上記アンタゴニスト。
【請求項11】
Ｘ１１が、ＴｒｐまたはｄＴｒｐである、請求項１０に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項12】
１６位、１８位、１９位、２４位、２６位または２８位のアミノ酸がＡｉｂで置換されている、請求項９、１０または１１に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項13】
１２位のアミノ酸がアシル化Ｌｙｓで置換されている、請求項１０または１１に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項14】
Ｘ１５が、ｄＧｌｕであり；Ｘ１６が、Ｇｌｕであり；および
Ｘ２３が、Ｉｌｅである、
請求項９～１３のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項15】
Ｘ１５が、Ｇｌｕであり；Ｘ１６が、Ｇｌｕであり；および
Ｘ２３が、Ｉｌｅである、
請求項９～１３のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項16】
Ｘ４０が、場合によりスペーサーを介してアミノ酸の側鎖に連結されたアシル基を有するアミノ酸である、請求項１０～１５のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項17】
Ｘ４０が、式Ｉ（場合により、Ｌｙｓ）、式ＩＩ（場合により、Ｃｙｓ）、または式ＩＩＩ（場合により、Ｓｅｒ）の構造を含むアミノ酸であり、式Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩの各々が：【化1】
【請求項18】
Ｘ４０がアシル化リジンである、請求項１５または１６に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項19】
アシル化アミノ酸のアシル基が、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ－ＣＯ（ＣＨ２）１４～２０ＣＨ３、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ－［スペーサー］－ＣＯ（ＣＨ２）１４～２０ＣＨ３、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ－ＣＯ（ＣＨ２）１４～２０ＣＯＯＨ、または（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ－［スペーサー］－ＣＯ（ＣＨ２）１４～２０ＣＯＯＨから選択される、請求項１０～１８のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項20】
アシル化アミノ酸のアシル基が、スペーサーを介してアシル化アミノ酸のアミノ酸側鎖に共有結合されている、請求項１０～１９のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項21】
スペーサーがアミノ酸またはジペプチドである、請求項１６～２０のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項22】
スペーサーが、ｉ）ガンマグルタミン酸、
ｉｉ）ミニペグポリマー：－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］－（ここで、ｋは２、４、６または８である）、
ｉｉｉ）または任意の複数のｉ）および／もしくはｉｉ）またはｉ）および／もしくはｉｉ）の組み合わせ
を含む、請求項１６～２０のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項23】
アシル化アミノ酸が、Ｃ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸に連結され、場合により、前記酸または二酸が、構造：－（ガンマグルタミン酸）ｐ－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｎ－または
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｍ－
（ここで、ｋは、２、４または８から選択される整数であり、ｍおよびｎは、独立して０、１または２から選択される整数であり、ｐおよびｑは、独立して１、２、４または８から選択される整数である）
を含むスペーサーを介して連結されている、請求項１０～２２のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項24】
アシル化アミノ酸が、構造：－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－
（ここで、ｋは２であり、ｐおよびｑは、独立して１または２から選択される整数である）
を含むスペーサーを介してリジン側鎖に連結されたＣ１６～Ｃ１８脂肪酸を有するＬｙｓである、請求項２３に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項25】
Ｘ１１が、ＴｒｐまたはｄＴｒｐであり；Ｘ１５が、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６が、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ２３が、ＩｌｅまたはｄＩｌｅであり；および
Ｘ４０が、Ｃ１６またはＣ１８二酸でアシル化されたＬｙｓであり、場合により、二酸が、構造：
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－
（ここで、ｋは２であり、ｐおよびｑは、独立して１または２から選択される整数である）
を含むスペーサーを介して連結されている、請求項１０に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項26】
Ｒ２０がＣＯＮＨ２である、請求項１０～２０のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト。
【請求項27】
アミド結合を通じてＧＬＰ－１アンタゴニストに連結されたジペプチドＡ－Ｂ：【化2】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ８は、独立してＨ、Ｃ１～Ｃ１８アルキル、Ｃ２～Ｃ１８アルケニル、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＳＨ、（Ｃ２～Ｃ３アルキル）ＳＣＨ３、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ２ ＋）ＮＨ２、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ２～Ｃ５複素環）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ６～Ｃ１０アリール）Ｒ７、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ９ヘテロアリール）、およびＣ１～Ｃ１２アルキル（Ｗ１）Ｃ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、Ｗ１は、Ｎ、ＳおよびＯからなる群から選択されるヘテロ原子であり；
Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ１８アルキル、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＳＨ、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ２～Ｃ５複素環）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ６～Ｃ１０アリール）Ｒ７、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ９ヘテロアリール）からなる群から選択されるか、またはＲ４およびＲ３は、これらが結合する原子と一緒にピロリジン環を形成し；
Ｒ５は、ＮＨＲ６またはＯＨであり；
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ８アルキルであり；ならびに
Ｒ７は、ＨおよびＯＨからなる群から選択される）
をさらに含み、該ＧＬＰ－１アンタゴニストからのＡ－Ｂの化学的切断半減期（ｔ１／２）が、生理的条件下、ＰＢＳ中で少なくとも約１時間～約１週間である、請求項９～２６のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１アンタゴニストの誘導体。
【請求項28】
ジペプチドＡ－Ｂが、ＧＬＰ－１アンタゴニストアミノ酸配列のＮ末端アルファアミンに共有結合されている、請求項２７に記載の誘導体。
【請求項29】
Ｒ１およびＲ８が、独立してＨまたはＣ１～Ｃ８アルキルであり；Ｒ２およびＲ４が、独立してＨ、Ｃ１～Ｃ８アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＳＨ、（Ｃ２～Ｃ３アルキル）ＳＣＨ３、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ６アリール）Ｒ７からなる群から選択され；
Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５が、ＮＨ２であり；ならびに
Ｒ７が、水素、およびＯＨからなる群から選択される、
請求項２７または２８に記載の誘導体。
【請求項30】
Ｒ１が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＳＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２からなる群から選択される側鎖を含み、場合により、Ｃ１６～Ｃ３０脂肪酸またはＣ１６～Ｃ３０二酸が、ガンマグルタミン酸、ガンマグルタミン酸－ガンマグルタミン酸ジペプチド、およびガンマグルタミン酸－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－ガンマグルタミン酸（ここで、ｋは、１～８の範囲から選択される整数であり；および
ｑは、１～８の範囲から選択される整数であり、場合により、ｋは２であり、ｑは１～８の範囲から選択される）からなる群から選択されるスペーサーを場合により介して該側鎖に共有結合され；
Ｒ２、Ｒ４およびＲ８が、独立してＨ、またはＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ６アルキルであり；ならびに
Ｒ５が、ＮＨ２である、
請求項２７または２８に記載の誘導体。
【請求項31】
Ｒ１が、Ｈ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨまたは（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２であり；Ｒ２が、Ｈであり、
Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ４が、Ｈ、またはＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ５が、ＮＨ２であり；および
Ｒ８が、水素である、
請求項２７または２８に記載の誘導体。
【請求項32】
ジペプチドＡ－Ｂがアシル化Ｌｙｓ残基およびＮ－アルキル化Ｇｌｙ残基を含み、ＬｙｓおよびＮ－アルキル化Ｇｌｙ残基がペプチド結合を介して連結され、場合により、Ｌｙｓ残基がＤ－立体構造である、請求項２７または２８に記載の誘導体。
【請求項33】
Ｒ１が、（Ｃ４アルキル）ＮＨ２または（Ｃ４アルキル）ＮＨ（ｍＰｅｇ－γＥ－二酸）－Ｃ１８であり；Ｒ２、Ｒ４およびＲ８が、それぞれＨであり；
Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり；ならびに
Ｒ５が、ＮＨ２であり；
Ｒ５が、アミンである、
請求項２７または２８に記載の誘導体。
【請求項34】
請求項１～２６のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１アンタゴニスト、または請求項２７～３３のいずれか一項に記載の誘導体、および薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項35】
非定型低血糖を患っている患者を処置する方法であって、請求項３４の医薬組成物を、血糖値を上昇させるのに有効な量で、それを必要とする患者に投与するステップを含む方法。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年２月１６日に出願された米国仮特許出願第６３／１４９，８５２号の優先権を主張するものであり、その開示は明示的に本明細書に援用される。
電子的に提出された資料の参照による援用
本明細書と同時に提出され、次のように識別されるコンピュータ可読ヌクレオチド／アミノ酸配列表：２０２２年２月１４日に作成された、「３３３１４２ｓｅｑｌｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」という名前の５９キロバイトのアスキー（テキスト）ファイルは、その全体が参照により援用される。
本出願は、２０２１年２月１６日に出願された米国仮特許出願第６３／１４９，８５２号の優先権を主張するものであり、その開示は明示的に本明細書に援用される。
電子的に提出された資料の参照による援用
本明細書と同時に提出され、次のように識別されるコンピュータ可読ヌクレオチド／アミノ酸配列表：２０２２年２月１４日に作成された、「３３３１４２ｓｅｑｌｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」という名前の５９キロバイトのアスキー（テキスト）ファイルは、その全体が参照により援用される。
【背景技術】
【0002】
グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）は、ヒトの血糖値の調節において重要な役割を果たす。その作用としては、インスリン合成および分泌の刺激、グルカゴン分泌の阻害、ならびに食物摂取の阻害が挙げられる。通常、身体は、血液中のグルコースの濃度を１デシリットルあたり約７０～１１０ミリグラム（ｍｇ／ｄＬ）、または１リットルあたり３．９～６．１ミリモル（ｍｍｏｌ／Ｌ）の範囲内で維持する。しかし、グルコースレベルが低くなり過ぎ、低血糖に至る状況も起こり得る。低血糖は、糖尿病をコントロールするために摂取される薬物に起因する場合が最も多い。低血糖のはるかに少ない一般的な原因は、本明細書では「非定型低血糖（ａｔｙｐｉｃａｌ ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉａ）」と呼ばれ、外因性インスリン投与と無関係に生じ得る。
【0003】
アルコールは肝臓におけるグルコースの形成をブロックし得るため、非定型低血糖は食べずに大酒を飲む人に生じ得る。さらに、ウイルス性肝炎、肝硬変、または肝臓がんなどの肝臓疾患が進行した人は、十分なグルコースを貯蔵し、産生することができない可能性がある。非定型低血糖は、高インスリン血症になる先天性変異を有する乳児および小児が生まれる結果にもなり得る。
【0004】
より最近では、この１０年の間に、非定型低血糖は、極端な形態の肥満を元に戻す目的で行われた外科手術の後に生じ得る合併症であるという認識が高まってきている。ルーワイ胃バイパス（ＲＹＧＢ）術を受けた一部の患者（１０％未満）は、その後高インスリン血症性低血糖を発症し、血中グルコース濃度は、発作、精神状態の変化、意識喪失、認知機能障害、身体障害、および死を引き起こすほどに低くなる（２０～４０ｍｇ／ｄＬ）場合がある。
【0005】
高インスリン血症誘導性低血糖を処置する１つのアプローチは、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストを投与することである。そのようなペプチドアンタゴニストは、不適切に高い濃度の血漿ＧＬＰ－１のインスリン分泌を刺激する能力をブロックし、非定型低血糖を経験する患者の血漿グルコースを正常化し、認知障害、血管性疾患および突然死の可能性のリスクを低減するように機能する。
【0006】
エキセンジン－４（配列番号１）は、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）受容体の３９アミノ酸アゴニストである。エキセンジン－４は、アメリカドクトカゲ、ヘロデルマ・サスペクタム（Ｈｅｌｏｄｅｒｍａ ｓｕｓｐｅｃｔｕｍ）の唾液中に存在する。Ｅｘ－４（９－３９）ａ（配列番号２）は、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストとして機能することが知られるエキセンジン－４のＮ末端切断型誘導体である。しかし、Ｅｘ－４（９－３９）ａは、慢性非定型低血糖を処置するためのその使用可能性に関して、２つの顕著な制約：その非ヒトアミノ酸配列、およびその比較的短いインビボ作用持続時間を抱えている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0007】
本開示の１つの実施形態によれば、肥満外科手術後に生じるかまたは先天性変異に起因する高インスリン血症誘導性低血糖を含む非定型低血糖の処置における薬物候補として使用するための、一連の新規の最適化ＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0008】
本明細書に開示されているように、非定型低血糖を経験する患者を処置するための、およびより具体的には１つの実施形態では、高インスリン血症誘導性低血糖を経験する患者を処置するための組成物および方法が提供される。１つの実施形態によれば、肥満手術後に生じる高インスリン血症誘導性低血糖を処置するための組成物および方法が提供される。１つの実施形態では、方法は、血糖値を上昇させ、関連急性症状および低血糖と関連する慢性転帰を軽減するのに有効な量のグルカゴン様ペプチド－１受容体アンタゴニスト（ＧＬＰ１ＲＡ）の投与を含む。
【0009】
１つの実施形態によれば、アミノ酸配列
ＤＸ１０Ｘ１１ＲＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＶＲＥＦＸ２３ＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０（配列番号５）（ここで
Ｘ１０は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＶａｌであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐ、ｄＧｌｕまたはＧｌｕであり；
Ｘ２３は、ＩｌｅまたはｄＩｌｅであり；
Ｘ４０は、アシル化アミノ酸であり、
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）を含むＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドが提供され、場合によりペプチドは、場合により、Ｘ１０またはＸ１１の一方がＴｒｐまたはｄＴｒｐである場合、他方はＴｒｐまたはｄＴｒｐではないという条件で、天然のエキセンジン４配列（配列番号１）と比較して１６位、１８位、１９位、２４位、２６位もしくは２８位のいずれかにＡｉｂの１つもしくは複数の置換を含むか、または場合により、天然のエキセンジン４配列（配列番号１）と比較して１２位にＬｙｓの置換を含む。
ＤＸ１０Ｘ１１ＲＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＶＲＥＦＸ２３ＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０（配列番号５）（ここで
Ｘ１０は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＶａｌであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐ、ｄＧｌｕまたはＧｌｕであり；
Ｘ２３は、ＩｌｅまたはｄＩｌｅであり；
Ｘ４０は、アシル化アミノ酸であり、
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）を含むＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドが提供され、場合によりペプチドは、場合により、Ｘ１０またはＸ１１の一方がＴｒｐまたはｄＴｒｐである場合、他方はＴｒｐまたはｄＴｒｐではないという条件で、天然のエキセンジン４配列（配列番号１）と比較して１６位、１８位、１９位、２４位、２６位もしくは２８位のいずれかにＡｉｂの１つもしくは複数の置換を含むか、または場合により、天然のエキセンジン４配列（配列番号１）と比較して１２位にＬｙｓの置換を含む。
【0010】
１つの実施形態によれば、
ＤＶＷＲＹＬＸ１５ＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０（配列番号９６）（ここで、
Ｘ１５は、ｄＧｌｕであり；
Ｘ４０は、アシル化Ｌｙｓであり、Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２であり、アシル化Ｌｙｓのアシル基は、スペーサーを介してＬｙｓ側鎖に場合により連結されているＣ１６～Ｃ１８酸または二酸である）のアミノ酸配列を有するＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドが提供される。１つの実施形態では、スペーサーは、ミニペグ（ｍｉｎｉｐｅｇ）もしくはガンマグルタミン酸サブユニット、または任意の複数のそのようなミニペグもしくはガンマＧｌｕ分子またはそのようなミニペグもしくはガンマＧｌｕ分子の組み合わせを含む。１つの実施形態では、配列番号９６のペプチドは、例えば、配列番号１の天然のエキセンジン４配列と比較して１６位、１８位、１９位、２４位、２６位もしくは２８位の１つもしくは複数におけるアミノイソ酪酸（Ａｉｂ）による置換；または１２位におけるＬｙｓの置換を含む、１、２または３個のアミノ酸置換により修飾されている。
ＤＶＷＲＹＬＸ１５ＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０（配列番号９６）（ここで、
Ｘ１５は、ｄＧｌｕであり；
Ｘ４０は、アシル化Ｌｙｓであり、Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２であり、アシル化Ｌｙｓのアシル基は、スペーサーを介してＬｙｓ側鎖に場合により連結されているＣ１６～Ｃ１８酸または二酸である）のアミノ酸配列を有するＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドが提供される。１つの実施形態では、スペーサーは、ミニペグ（ｍｉｎｉｐｅｇ）もしくはガンマグルタミン酸サブユニット、または任意の複数のそのようなミニペグもしくはガンマＧｌｕ分子またはそのようなミニペグもしくはガンマＧｌｕ分子の組み合わせを含む。１つの実施形態では、配列番号９６のペプチドは、例えば、配列番号１の天然のエキセンジン４配列と比較して１６位、１８位、１９位、２４位、２６位もしくは２８位の１つもしくは複数におけるアミノイソ酪酸（Ａｉｂ）による置換；または１２位におけるＬｙｓの置換を含む、１、２または３個のアミノ酸置換により修飾されている。
【0011】
１つの実施形態によれば、アミノ酸配列
ＤＸ１０Ｘ１１ＲＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＶＲＥＦＸ２３ＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０（配列番号５）（ここで
Ｘ１０は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＶａｌであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐ、ｄＧｌｕまたはＧｌｕであり；
Ｘ２３は、ＩｌｅまたはｄＩｌｅであり；
Ｘ４０は、アシル化アミノ酸であり、Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）を含むＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドが提供され、場合によりペプチドは、場合により、Ｘ１０またはＸ１１の一方がＴｒｐまたはｄＴｒｐである場合、他方はＴｒｐまたはｄＴｒｐではないという条件で、天然のエキセンジン４配列（配列番号１）と比較して１６位、１８位、１９位、２４位、２６位もしくは２８位のいずれかにＡｉｂの１つもしくは複数の置換を含むか、または場合により、Ｘ７Ｘ８による配列番号５のペプチドのＮ末端伸長を含み、天然のエキセンジン４配列（配列番号１）と比較した位置番号付けで、Ｘ７はアシル化アミノ酸（例えば、Ｌｙｓ）であり、Ｘ８はＧｌｙまたはＣ１～Ｃ３ Ｎ－アルキルＧｌｙである。
ＤＸ１０Ｘ１１ＲＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＶＲＥＦＸ２３ＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０（配列番号５）（ここで
Ｘ１０は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＶａｌであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐ、ｄＧｌｕまたはＧｌｕであり；
Ｘ２３は、ＩｌｅまたはｄＩｌｅであり；
Ｘ４０は、アシル化アミノ酸であり、Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）を含むＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドが提供され、場合によりペプチドは、場合により、Ｘ１０またはＸ１１の一方がＴｒｐまたはｄＴｒｐである場合、他方はＴｒｐまたはｄＴｒｐではないという条件で、天然のエキセンジン４配列（配列番号１）と比較して１６位、１８位、１９位、２４位、２６位もしくは２８位のいずれかにＡｉｂの１つもしくは複数の置換を含むか、または場合により、Ｘ７Ｘ８による配列番号５のペプチドのＮ末端伸長を含み、天然のエキセンジン４配列（配列番号１）と比較した位置番号付けで、Ｘ７はアシル化アミノ酸（例えば、Ｌｙｓ）であり、Ｘ８はＧｌｙまたはＣ１～Ｃ３ Ｎ－アルキルＧｌｙである。
【0012】
１つの実施形態によれば、
ＤＶＷＲＹＬＸ１５ＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０（配列番号９６）（ここで
Ｘ１５は、ｄＧｌｕであり；
Ｘ４０は、アシル化Ｌｙｓであり、Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２であり、アシル化Ｌｙｓのアシル基は、スペーサーを介してＬｙｓ側鎖に場合により連結されているＣ１６～Ｃ１８酸または二酸である）のアミノ酸配列を有するＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドが提供される。１つの実施形態では、スペーサーは、ミニペグもしくはガンマグルタミン酸サブユニット、または任意の複数のそのようなミニペグもしくはガンマＧｌｕ分子またはそのようなミニペグもしくはガンマＧｌｕ分子の組み合わせを含む。１つの実施形態では、配列番号９６のペプチドは、例えば、配列番号１の天然のエキセンジン４配列と比較して１６位、１８位、１９位、２４位、２６位もしくは２８位の１つもしくは複数におけるアミノイソ酪酸（Ａｉｂ）による置換を含む、１、２もしくは３個のアミノ酸置換により修飾されているか；または配列番号９６のＮ末端へのジペプチドＸ７Ｘ８（ここで、天然のエキセンジン４配列（配列番号１）と比較した位置番号付けで、Ｘ７はアシル化アミノ酸（例えば、Ｌｙｓ）であり、Ｘ８はＧｌｙまたはＣ１～Ｃ３ Ｎ－アルキルＧｌｙである）の付加によって修飾されている。
ＤＶＷＲＹＬＸ１５ＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０（配列番号９６）（ここで
Ｘ１５は、ｄＧｌｕであり；
Ｘ４０は、アシル化Ｌｙｓであり、Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２であり、アシル化Ｌｙｓのアシル基は、スペーサーを介してＬｙｓ側鎖に場合により連結されているＣ１６～Ｃ１８酸または二酸である）のアミノ酸配列を有するＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドが提供される。１つの実施形態では、スペーサーは、ミニペグもしくはガンマグルタミン酸サブユニット、または任意の複数のそのようなミニペグもしくはガンマＧｌｕ分子またはそのようなミニペグもしくはガンマＧｌｕ分子の組み合わせを含む。１つの実施形態では、配列番号９６のペプチドは、例えば、配列番号１の天然のエキセンジン４配列と比較して１６位、１８位、１９位、２４位、２６位もしくは２８位の１つもしくは複数におけるアミノイソ酪酸（Ａｉｂ）による置換を含む、１、２もしくは３個のアミノ酸置換により修飾されているか；または配列番号９６のＮ末端へのジペプチドＸ７Ｘ８（ここで、天然のエキセンジン４配列（配列番号１）と比較した位置番号付けで、Ｘ７はアシル化アミノ酸（例えば、Ｌｙｓ）であり、Ｘ８はＧｌｙまたはＣ１～Ｃ３ Ｎ－アルキルＧｌｙである）の付加によって修飾されている。
【0013】
１つの実施形態では、１～３個のアミノ酸は、配列番号５のペプチドまたはその類似体のＮ末端に付加される。１つの実施形態では、Ｎ末端伸長を含むアミノ酸の１つはアシル化アミノ酸である。１つの実施形態では、Ｎ末端伸長はジペプチド、Ｘ７Ｘ８である（ここで、Ｘ７はアシル化リジンであり、場合によりリジンはＤ立体構造であり、Ｘ８は任意のアミノ酸である）。１つの実施形態では、Ｎ末端伸長は、９－２９エキセンジン４類似体（例えば、配列番号５のペプチド）のＮ末端アルファアミンに連結されて、本開示の任意のＧＬＰ－１アンタゴニストのプロドラッグを形成する自己切断ジペプチドである。ＧＬＰ－１アンタゴニストのプロドラッグ誘導体を使用する１つの利点は、そのようなアプローチが、ＧＬＰ－１受容体によるプロドラッグの認識を阻害する戦略に基づきペプチドの生物学的半減期を延長することである。１つの実施形態では、プロドラッグ誘導体は、ＧＬＰ－１アンタゴニストに共有結合された自己切断ジペプチド（Ａ－Ｂ）を含み、ジペプチドは、生理的条件下および酵素活性の非存在下で切断されて、ＧＬＰ－１アンタゴニストに完全な活性を戻す。１つの実施形態では、ＧＬＰ－１アンタゴニストは、ＧＬＰ－１アンタゴニストのアミンへの１つまたは複数のジペプチド（Ａ－Ｂ）（ここで、Ａは、アミノ酸またはヒドロキシ酸であり、Ｂは、Ｂのカルボキシル部分とＧＬＰ－１アンタゴニストのアミンの間のアミド結合を通じてＧＬＰ－１アンタゴニストに連結されているＮ－アルキル化アミノ酸である）の共有結合によって修飾されている。１つの実施形態では、Ａ－Ｂは、Ａ－ＢのカルボキシルとＧＬＰ－１アンタゴニストのアミンの間のアミド結合を通じてＧＬＰ－１アンタゴニストに連結された構造：
【0014】
【化1】
【0015】
（ここで
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ８は、独立してＨ、Ｃ１～Ｃ１８アルキル、Ｃ２～Ｃ１８アルケニル、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＳＨ、（Ｃ２～Ｃ３アルキル）ＳＣＨ３、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ２ ＋）ＮＨ２、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ２～Ｃ５複素環）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ６～Ｃ１０アリール）Ｒ７、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ９ヘテロアリール）、およびＣ１～Ｃ１２アルキル（Ｗ１）Ｃ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、Ｗ１は、Ｎ、ＳおよびＯからなる群から選択されるヘテロ原子であり；
Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ１８アルキル、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＳＨ、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ２～Ｃ５複素環）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ６～Ｃ１０アリール）Ｒ７、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ９ヘテロアリール）からなる群から選択されるか、またはＲ４およびＲ３は、これらが結合する原子と一緒にピロリジン環を形成し；
Ｒ５は、ＮＨＲ６またはＯＨであり；
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ８アルキルであり；ならびに
Ｒ７は、ＨおよびＯＨからなる群から選択される）を含み、前記ＧＬＰ－１アンタゴニストからのＡ－Ｂの化学的切断半減期（ｔ１／２）は、生理的条件下、ＰＢＳ中で少なくとも約１時間～約１週間である。１つの実施形態では、ジペプチドＡ－Ｂは、ＧＬＰ－１アンタゴニストアミノ酸配列のＮ末端アルファアミンに共有結合されている。Ｒ１が、Ｈ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨまたは（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２であり；Ｒ２はＨである１つの実施形態では、Ｒ３はＣ１～Ｃ６アルキルであり；Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、または（ＣＨ２）（Ｃ６アリール）Ｒ７であり；Ｒ５はＮＨ２であり；Ｒ７はＨまたはＯＨであり、Ｒ８は水素である。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ８は、独立してＨ、Ｃ１～Ｃ１８アルキル、Ｃ２～Ｃ１８アルケニル、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＳＨ、（Ｃ２～Ｃ３アルキル）ＳＣＨ３、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ２ ＋）ＮＨ２、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ２～Ｃ５複素環）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ６～Ｃ１０アリール）Ｒ７、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ９ヘテロアリール）、およびＣ１～Ｃ１２アルキル（Ｗ１）Ｃ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、Ｗ１は、Ｎ、ＳおよびＯからなる群から選択されるヘテロ原子であり；
Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ１８アルキル、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＳＨ、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ２～Ｃ５複素環）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ６～Ｃ１０アリール）Ｒ７、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ９ヘテロアリール）からなる群から選択されるか、またはＲ４およびＲ３は、これらが結合する原子と一緒にピロリジン環を形成し；
Ｒ５は、ＮＨＲ６またはＯＨであり；
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ８アルキルであり；ならびに
Ｒ７は、ＨおよびＯＨからなる群から選択される）を含み、前記ＧＬＰ－１アンタゴニストからのＡ－Ｂの化学的切断半減期（ｔ１／２）は、生理的条件下、ＰＢＳ中で少なくとも約１時間～約１週間である。１つの実施形態では、ジペプチドＡ－Ｂは、ＧＬＰ－１アンタゴニストアミノ酸配列のＮ末端アルファアミンに共有結合されている。Ｒ１が、Ｈ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨまたは（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２であり；Ｒ２はＨである１つの実施形態では、Ｒ３はＣ１～Ｃ６アルキルであり；Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、または（ＣＨ２）（Ｃ６アリール）Ｒ７であり；Ｒ５はＮＨ２であり；Ｒ７はＨまたはＯＨであり、Ｒ８は水素である。
【0016】
本開示はさらに、本明細書に記載されたＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドおよび変異体ペプチドのいずれか、および薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。１つの実施形態では、非定型低血糖を患っている患者を処置する方法であって、本明細書に記載されたＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドまたは変異体ペプチドを含む医薬組成物を、血糖値を上昇させるのに有効な量で、それを必要とする患者に投与するステップを含む方法が提供される。
【0017】
１つの実施形態によれば、非定型低血糖を処置する方法であって、
ＤＶＸ１１ＲＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＶＲＥＦＸ２３ＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫ（配列番号１１）（ここで、Ｘ１１は、Ｔｒｐ、またはｄＴｒｐであり；Ｘ１５は、Ｇｌｕ、またはｄＧｌｕであり；Ｘ１６は、Ｇｌｕ、またはｄＧｌｕであり；およびＸ２３は、Ｉｌｅ、またはｄＩｌｅである）のアミノ酸配列を有するＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドを、血糖値を上げるために治療的に有効な量で投与するステップを含む方法が提供される。１つの実施形態では、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストは、高親和性で血清アルブミンに結合するのに十分なサイズの脂肪酸基または脂肪二酸基でアシル化されている。
ＤＶＸ１１ＲＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＶＲＥＦＸ２３ＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫ（配列番号１１）（ここで、Ｘ１１は、Ｔｒｐ、またはｄＴｒｐであり；Ｘ１５は、Ｇｌｕ、またはｄＧｌｕであり；Ｘ１６は、Ｇｌｕ、またはｄＧｌｕであり；およびＸ２３は、Ｉｌｅ、またはｄＩｌｅである）のアミノ酸配列を有するＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドを、血糖値を上げるために治療的に有効な量で投与するステップを含む方法が提供される。１つの実施形態では、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストは、高親和性で血清アルブミンに結合するのに十分なサイズの脂肪酸基または脂肪二酸基でアシル化されている。
【0018】
１つの実施形態では、
ＤＸ１０Ｘ１１Ｘ１２ＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＶＲＥＦＸ２３Ｘ２４ＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号９８）；
（ここで
Ｘ１０は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＶａｌであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇ、ＬｙｓまたはＳｅｒであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐ、ｄＧｌｕまたはＧｌｕであり；
Ｘ２３は、ＩｌｅまたはｄＩｌｅであり；
Ｘ２４は、ＡｌａまたはＧｌｕである）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－１受容体アンタゴニストが提供され；
前記ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストは、高親和性で血清アルブミンに結合するのに十分なサイズの脂肪酸基または脂肪二酸基でアシル化され、場合により、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストのアミノ酸は、場合によりＸ１０、Ｘ１１またはＸ１６の１つのみがＴｒｐまたはｄＴｒｐであるという条件で、Ｃ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸でアシル化されている。
ＤＸ１０Ｘ１１Ｘ１２ＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＶＲＥＦＸ２３Ｘ２４ＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号９８）；
（ここで
Ｘ１０は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＶａｌであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇ、ＬｙｓまたはＳｅｒであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐ、ｄＧｌｕまたはＧｌｕであり；
Ｘ２３は、ＩｌｅまたはｄＩｌｅであり；
Ｘ２４は、ＡｌａまたはＧｌｕである）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－１受容体アンタゴニストが提供され；
前記ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストは、高親和性で血清アルブミンに結合するのに十分なサイズの脂肪酸基または脂肪二酸基でアシル化され、場合により、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストのアミノ酸は、場合によりＸ１０、Ｘ１１またはＸ１６の１つのみがＴｒｐまたはｄＴｒｐであるという条件で、Ｃ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸でアシル化されている。
【0019】
１つの実施形態では、
ＤＸ１０Ｘ１１Ｘ１２ＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＶＲＥＦＸ２３Ｘ２４ＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号９８）；
（ここで
Ｘ１０は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＶａｌであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇ、ＬｙｓまたはＳｅｒであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐ、ｄＧｌｕまたはＧｌｕであり；
Ｘ２３は、ＩｌｅまたはｄＩｌｅであり；
Ｘ２４は、ＡｌａまたはＧｌｕである）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－１受容体アンタゴニストが提供され、さらに、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストは、高親和性で血清アルブミンに結合するのに十分なサイズの脂肪酸基または脂肪二酸基でアシル化され、場合により、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストのアミノ酸は、Ｃ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸でアシル化されている。さらなる実施形態では、Ｘ１０がＶａｌであり、Ｘ１１がＴｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり、Ｘ１２がＡｒｇであり、Ｘ１５がＧｌｕまたはｄＧｌｕであり、Ｘ１６がｄＧｌｕまたはＧｌｕであり、Ｘ２３がＩｌｅまたはｄＩｌｅであり、Ｘ２４がＡｌａまたはＧｌｕであり、場合により、Ｘ１０がＶａｌであり、Ｘ１１がＳｅｒであり、Ｘ１２がＡｒｇであり、Ｘ１５がＧｌｕまたはｄＧｌｕであり、Ｘ１６がｄＧｌｕまたはＧｌｕであり、Ｘ２３がＩｌｅであり、Ｘ２４がＡｌａであり、場合により、Ｘ１０がＶａｌであり、Ｘ１１がＳｅｒであり、Ｘ１２がＡｒｇであり、Ｘ１５がＧｌｕであり、Ｘ１６がＧｌｕであり、Ｘ２３がＩｌｅであり、Ｘ２４がＡｌａである、配列番号９８のペプチドが提供される。
ＤＸ１０Ｘ１１Ｘ１２ＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＶＲＥＦＸ２３Ｘ２４ＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（配列番号９８）；
（ここで
Ｘ１０は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＶａｌであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇ、ＬｙｓまたはＳｅｒであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐ、ｄＧｌｕまたはＧｌｕであり；
Ｘ２３は、ＩｌｅまたはｄＩｌｅであり；
Ｘ２４は、ＡｌａまたはＧｌｕである）のアミノ酸配列を含むＧＬＰ－１受容体アンタゴニストが提供され、さらに、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストは、高親和性で血清アルブミンに結合するのに十分なサイズの脂肪酸基または脂肪二酸基でアシル化され、場合により、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストのアミノ酸は、Ｃ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸でアシル化されている。さらなる実施形態では、Ｘ１０がＶａｌであり、Ｘ１１がＴｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり、Ｘ１２がＡｒｇであり、Ｘ１５がＧｌｕまたはｄＧｌｕであり、Ｘ１６がｄＧｌｕまたはＧｌｕであり、Ｘ２３がＩｌｅまたはｄＩｌｅであり、Ｘ２４がＡｌａまたはＧｌｕであり、場合により、Ｘ１０がＶａｌであり、Ｘ１１がＳｅｒであり、Ｘ１２がＡｒｇであり、Ｘ１５がＧｌｕまたはｄＧｌｕであり、Ｘ１６がｄＧｌｕまたはＧｌｕであり、Ｘ２３がＩｌｅであり、Ｘ２４がＡｌａであり、場合により、Ｘ１０がＶａｌであり、Ｘ１１がＳｅｒであり、Ｘ１２がＡｒｇであり、Ｘ１５がＧｌｕであり、Ｘ１６がＧｌｕであり、Ｘ２３がＩｌｅであり、Ｘ２４がＡｌａである、配列番号９８のペプチドが提供される。
【0020】
１つの実施形態では、本開示のＧＬＰ－１受容体アンタゴニストは、高親和性で血清アルブミンに結合するのに十分なサイズの脂肪酸基または脂肪二酸基でアシル化され、場合により、アシル化アミノ酸はＣ末端アミノ酸であり、場合により、アミド結合を介した自己切断ジペプチドの結合によってさらに修飾され、ジペプチドのアミノ酸は、高親和性で血清アルブミンに結合するのに十分なサイズの脂肪アシル基で場合によりアシル化されている。１つの実施形態では、アシル化アミノ酸は、４０位で配列番号１１のＣ末端に付加され、場合により、付加されたアシル化アミノ酸は、本明細書に開示されたスペーサーのいずれかを介してアミノ酸側鎖に場合により連結されているＣ１４～Ｃ２０脂肪酸または脂肪二酸でアシル化されたＬｙｓである。
【0021】
１つの実施形態では、非定型低血糖を処置するための医薬組成物は、低血糖の処置に有用な任意の既存の治療薬と組み合わせて、本明細書に開示されたＧＬＰ－１受容体アンタゴニストのいずれかを含む。例えば、医薬組成物は、本発明のＧＬＰ－１受容体アンタゴニストおよび以下のうちの１つまたは複数を含んでもよい：グルコースサプリメント（例えば、デキストロース）；グルカゴンおよびグルカゴン類似体などのグルコース上昇剤ならびにインスリン分泌阻害剤（例えば、ジアゾキシド、オクトレオチド）。
【図面の簡単な説明】
【0022】
【図1】図１は、溶媒対照、Ｅｘ－４（配列番号１のアミノ酸配列を有するＧＬＰ－１アゴニスト）、またはＧＬＰ－１アンタゴニストペプチド（ＤＶＳＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫ４０［ｍＰＥＧ－γＥ－Ｃ１６］酸；配列番号１６）のマウスへの皮下投与と、それに続くグルコース（体重１ｋｇあたり１．５ｇグルコース）の腹腔内投与後の経時的な血糖値の用量依存的変化を示すグラフである。グルコースは、ＧＬＰ－１アンタゴニストの４時間後に皮下投与される。
【図2A】図２Ａおよび２Ｂは、マウスがＧＬＰ－１アンタゴニストを皮下投与され、その４時間後にグルコース（体重１ｋｇあたり１．５ｇグルコース）を腹腔内投与されるグルコース負荷試験からのデータを示す。結果は、配列番号１６のＧＬＰ－１アンタゴニスト（図２Ａ）が完全アンタゴニストであり、ＧＬＰ－１アンタゴニストＥｘ－９－４０（ＤＶＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ；配列番号２；図２Ｂ）よりはるかに高い効力を有することを実証している。
【図2B】図２Ａおよび２Ｂは、マウスがＧＬＰ－１アンタゴニストを皮下投与され、その４時間後にグルコース（体重１ｋｇあたり１．５ｇグルコース）を腹腔内投与されるグルコース負荷試験からのデータを示す。結果は、配列番号１６のＧＬＰ－１アンタゴニスト（図２Ａ）が完全アンタゴニストであり、ＧＬＰ－１アンタゴニストＥｘ－９－４０（ＤＶＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ；配列番号２；図２Ｂ）よりはるかに高い効力を有することを実証している。
【図3】図３は、ＧＬＰ－１アンタゴニストの有効性に対するＡｉｂ置換の効果を調べるグルコース負荷試験からのデータを示す。マウスはＧＬＰ－１アンタゴニストを皮下投与され、その４時間後にグルコース（体重１ｋｇあたり１．５ｇグルコース）を腹腔内投与される。図３は、（配列番号４７）の配列を含む９－４０Ｊａｎｔ４－Ｋ４０（ＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫ；配列番号３）のＧＬＰ－１アンタゴニストペプチド類似体、ならびに配列番号４３（２０位のＡｉｂ）、配列番号４４（１８位のＡｉｂ）、および、配列番号４５（１１位のＡｉｂ）、配列番号４６（１０位のＡｉｂ）の一連のＡｉｂ置換を含むその誘導体の活性を実証している。
【図4】図４は、ＧＬＰ－１アンタゴニストの有効性に対するＤ－アミノ酸置換の効果を調べるグルコース負荷試験からのデータを示す。マウスはＧＬＰ－１アンタゴニストを皮下投与され、その４時間後にグルコース（体重１ｋｇあたり１．５ｇグルコース）を腹腔内投与される。溶媒対照ならびに、Ｘ４０がＣ１６でアシル化されたＬｙｓであり、次のようなＤ体の対応するアミノ酸：配列番号４９（ｄ－Ｇｌｕ１５）、配列番号５０（ｄ－Ｖａｌ１９）、配列番号５１（ｄ－Ｉｌｅ２３）を有するＣ末端アミドである置換を含む変異体と比較した、（ｍｉｎｉＰＥＧ）２－γＥ－Ｃ１６アシル化９－４０Ｊａｎｔ４－Ｋ４０（ＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０（配列番号１２））ペプチド配列番号４８（ここで、Ｘ４０は、（ｍｉｎｉＰＥＧ）２－ガンマＧｌｕ－Ｃ１６でアシル化されたＬｙｓであり、Ｃ末端アミドを有する）のＧＬＰ－１アンタゴニスト活性。
【図5A】図５Ａ～５Ｄは、本発明のＧＬＰ－１受容体アンタゴニストのプロドラッグ誘導体に関するデータを提供する。図５Ａは、３７℃、ＰＢＳ中でインキュベートされたプロドラッグｄＫ７（ｍＰｅｇ－γＥ－二酸Ｃ１８）Ｎ－Ｍｅ－Ｇｌｙ８ペプチド配列番号１９の経時的な質量分光光度計データを示す。図５Ｂ～５Ｄは、ＤＶＳＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０；配列番号１８のジペプチドプロドラッグのＧＬＰ－１アンタゴニスト活性を示すグラフであり、ペプチドは、グルコース負荷がアンタゴニストの投与２４時間後（図５Ｂ）、４８時間後（図５Ｃ）または１２０時間後（図５Ｄ）に施行されるグルコース負荷試験において、共有結合ｄＫ７（ｍＰｅｇ－γＥ－二酸Ｃ１８）Ｎ－ｉＰｒ－Ｇｌｙ８ジペプチドで修飾されている。
【図5B】図５Ａ～５Ｄは、本発明のＧＬＰ－１受容体アンタゴニストのプロドラッグ誘導体に関するデータを提供する。図５Ａは、３７℃、ＰＢＳ中でインキュベートされたプロドラッグｄＫ７（ｍＰｅｇ－γＥ－二酸Ｃ１８）Ｎ－Ｍｅ－Ｇｌｙ８ペプチド配列番号１９の経時的な質量分光光度計データを示す。図５Ｂ～５Ｄは、ＤＶＳＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０；配列番号１８のジペプチドプロドラッグのＧＬＰ－１アンタゴニスト活性を示すグラフであり、ペプチドは、グルコース負荷がアンタゴニストの投与２４時間後（図５Ｂ）、４８時間後（図５Ｃ）または１２０時間後（図５Ｄ）に施行されるグルコース負荷試験において、共有結合ｄＫ７（ｍＰｅｇ－γＥ－二酸Ｃ１８）Ｎ－ｉＰｒ－Ｇｌｙ８ジペプチドで修飾されている。
【図5C】図５Ａ～５Ｄは、本発明のＧＬＰ－１受容体アンタゴニストのプロドラッグ誘導体に関するデータを提供する。図５Ａは、３７℃、ＰＢＳ中でインキュベートされたプロドラッグｄＫ７（ｍＰｅｇ－γＥ－二酸Ｃ１８）Ｎ－Ｍｅ－Ｇｌｙ８ペプチド配列番号１９の経時的な質量分光光度計データを示す。図５Ｂ～５Ｄは、ＤＶＳＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０；配列番号１８のジペプチドプロドラッグのＧＬＰ－１アンタゴニスト活性を示すグラフであり、ペプチドは、グルコース負荷がアンタゴニストの投与２４時間後（図５Ｂ）、４８時間後（図５Ｃ）または１２０時間後（図５Ｄ）に施行されるグルコース負荷試験において、共有結合ｄＫ７（ｍＰｅｇ－γＥ－二酸Ｃ１８）Ｎ－ｉＰｒ－Ｇｌｙ８ジペプチドで修飾されている。
【図5D】図５Ａ～５Ｄは、本発明のＧＬＰ－１受容体アンタゴニストのプロドラッグ誘導体に関するデータを提供する。図５Ａは、３７℃、ＰＢＳ中でインキュベートされたプロドラッグｄＫ７（ｍＰｅｇ－γＥ－二酸Ｃ１８）Ｎ－Ｍｅ－Ｇｌｙ８ペプチド配列番号１９の経時的な質量分光光度計データを示す。図５Ｂ～５Ｄは、ＤＶＳＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０；配列番号１８のジペプチドプロドラッグのＧＬＰ－１アンタゴニスト活性を示すグラフであり、ペプチドは、グルコース負荷がアンタゴニストの投与２４時間後（図５Ｂ）、４８時間後（図５Ｃ）または１２０時間後（図５Ｄ）に施行されるグルコース負荷試験において、共有結合ｄＫ７（ｍＰｅｇ－γＥ－二酸Ｃ１８）Ｎ－ｉＰｒ－Ｇｌｙ８ジペプチドで修飾されている。
【図6A】図６Ａおよび６Ｂは、２つのアシル化アミノ酸を含む本発明のＧＬＰ－１受容体アンタゴニストの誘導体に関するデータを提供する。図６Ａおよび６Ｂは、グルコース負荷がアンタゴニストの投与２４時間後（図６Ａ）または４８時間後（図６Ｂ）に施行されるグルコース負荷試験の結果を示すグラフであり、配列番号１６は、Ｒ１２、Ｅ２４、Ｒ２８、Ｋ４０［ｍＰＥＧ－γＥ－Ｃ１６］－（Ｊａｎｔ４、９－４０）酸（配列番号１６）であり；配列番号１７は、ｄＫ７（ｍＰｅｇ－γＥ（Ｃ１８二酸）Ｇ８、Ｒ１２、Ｅ２４、Ｒ２８、Ｋ４０［ｍＰＥＧ－γＥ－Ｃ１６］－（Ｊａｎｔ４、９－４０）酸（配列番号１７）であり；配列番号１８は、ｄＫ７（ｍＰｅｇ－γＥ（Ｃ１８二酸）ｉ－Ｐｒ、Ｇ８、Ｒ１２、Ｅ２４、Ｒ２８、Ｋ４０［ｍＰＥＧ－γＥ－Ｃ１６］－（Ｊａｎｔ４、９－４０）酸（配列番号１８）であり；配列番号１９ ｄＫ７（ｍＰｅｇ－γＥ（Ｃ１８二酸）Ｎ－Ｍｅ、Ｇ８、Ｒ１２、Ｅ２４、Ｒ２８、Ｋ４０［ｍＰＥＧ－γＥ－Ｃ１６］－（Ｊａｎｔ４、９－４０）酸（配列番号１９）であり；配列番号２０ ｄＫ７（Ｋ（ｍＰｅｇ－γＥ－Ｃ１８二酸）２ Ｇ８、Ｒ１２、Ｅ２４、Ｒ２８、Ｋ４０［ｍＰＥＧ－γＥ－Ｃ１８二酸］（Ｊａｎｔ４、９－４０）アミド（配列番号２０）であり；配列番号２１ ｄＫ７（Ｋ（ｍＰｅｇ－γＥ－Ｃ１８二酸）２ Ｇ８、Ｒ１２、Ｅ２４、Ｒ２８、Ｋ４０［ｍＰＥＧ－γＥ－Ｃ１６］（Ｊａｎｔ４、９－４０）アミド（配列番号２１）であり；配列番号２２ ｄＫ７（Ｋ（ｍＰｅｇ－γＥ－Ｃ１８二酸）２ Ｎ－Ｍｅ、Ｇ８、Ｒ１２、Ｅ２４、Ｒ２８、Ｋ４０［ｍＰＥＧ－γＥ－Ｃ１６］（Ｊａｎｔ４、９－４０）アミド（配列番号２２）である。
【図6B】図６Ａおよび６Ｂは、２つのアシル化アミノ酸を含む本発明のＧＬＰ－１受容体アンタゴニストの誘導体に関するデータを提供する。図６Ａおよび６Ｂは、グルコース負荷がアンタゴニストの投与２４時間後（図６Ａ）または４８時間後（図６Ｂ）に施行されるグルコース負荷試験の結果を示すグラフであり、配列番号１６は、Ｒ１２、Ｅ２４、Ｒ２８、Ｋ４０［ｍＰＥＧ－γＥ－Ｃ１６］－（Ｊａｎｔ４、９－４０）酸（配列番号１６）であり；配列番号１７は、ｄＫ７（ｍＰｅｇ－γＥ（Ｃ１８二酸）Ｇ８、Ｒ１２、Ｅ２４、Ｒ２８、Ｋ４０［ｍＰＥＧ－γＥ－Ｃ１６］－（Ｊａｎｔ４、９－４０）酸（配列番号１７）であり；配列番号１８は、ｄＫ７（ｍＰｅｇ－γＥ（Ｃ１８二酸）ｉ－Ｐｒ、Ｇ８、Ｒ１２、Ｅ２４、Ｒ２８、Ｋ４０［ｍＰＥＧ－γＥ－Ｃ１６］－（Ｊａｎｔ４、９－４０）酸（配列番号１８）であり；配列番号１９ ｄＫ７（ｍＰｅｇ－γＥ（Ｃ１８二酸）Ｎ－Ｍｅ、Ｇ８、Ｒ１２、Ｅ２４、Ｒ２８、Ｋ４０［ｍＰＥＧ－γＥ－Ｃ１６］－（Ｊａｎｔ４、９－４０）酸（配列番号１９）であり；配列番号２０ ｄＫ７（Ｋ（ｍＰｅｇ－γＥ－Ｃ１８二酸）２ Ｇ８、Ｒ１２、Ｅ２４、Ｒ２８、Ｋ４０［ｍＰＥＧ－γＥ－Ｃ１８二酸］（Ｊａｎｔ４、９－４０）アミド（配列番号２０）であり；配列番号２１ ｄＫ７（Ｋ（ｍＰｅｇ－γＥ－Ｃ１８二酸）２ Ｇ８、Ｒ１２、Ｅ２４、Ｒ２８、Ｋ４０［ｍＰＥＧ－γＥ－Ｃ１６］（Ｊａｎｔ４、９－４０）アミド（配列番号２１）であり；配列番号２２ ｄＫ７（Ｋ（ｍＰｅｇ－γＥ－Ｃ１８二酸）２ Ｎ－Ｍｅ、Ｇ８、Ｒ１２、Ｅ２４、Ｒ２８、Ｋ４０［ｍＰＥＧ－γＥ－Ｃ１６］（Ｊａｎｔ４、９－４０）アミド（配列番号２２）である。
【発明を実施するための形態】
【0023】
定義
本発明を記載し、請求する上で、以下に記載された定義に従って以下の用語が使用される。
本発明を記載し、請求する上で、以下に記載された定義に従って以下の用語が使用される。
【0024】
用語「約」は本明細書で使用される場合、述べられた値または値の範囲より１０パーセント多いまたは少ないことを意味するが、任意の値または値の範囲をこのより広い定義のみに指定するものではない。用語「約」に先行される各値または値の範囲も、述べられた絶対的な値または値の範囲の実施形態を包含することが意図される。
【0025】
本明細書で使用される場合、用語「アミノ酸」は、アミノ基およびカルボン酸基が同じ炭素（アルファ炭素）に結合されている、アミノ官能基およびカルボキシル官能基の両方を含有する任意の分子を包含する。アルファ炭素は、場合により１個または２個のさらなる有機置換基を有してもよい。アミノ酸は、その３文字表記、１文字表記によって、または一部の場合にはその側鎖の名前によって指定され得る。例えば、アルファ炭素に結合されたシクロヘキサン基を含む非標準アミノ酸は、「シクロヘキサン」または「シクロヘキシル」と呼ばれる。本開示の目的のために、その立体化学を特定しないアミノ酸の指定は、アミノ酸のＬ型もしくはＤ型のいずれか、またはラセミ混合物を包含することが意図される。しかし、アミノ酸がその３文字表記（すなわち、Ｌｙｓ）によって指定される例では、そのような指定はアミノ酸の天然のＬ型を特定することが意図されるのに対し、Ｄ型は３文字表記または１文字表記の前に小文字のｄを含めること（すなわち、ｄＬｙｓまたはｄＫ）によって特定される。
【0026】
本明細書で使用される場合、用語「ヒドロキシル酸」とは、アルファ炭素アミノ基をヒドロキシル基と置き換えるように修飾されているアミノ酸を指す。
本明細書で使用される場合、用語「非コードアミノ酸」は、以下の２０個のアミノ酸：Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、ＴｙｒのうちのいずれかのＬ異性体ではない任意のアミノ酸を包含する。
本明細書で使用される場合、用語「非コードアミノ酸」は、以下の２０個のアミノ酸：Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、ＴｙｒのうちのいずれかのＬ異性体ではない任意のアミノ酸を包含する。
【0027】
「生理活性ポリペプチド」とは、インビトロおよび／またはインビボで生物学的効果を発揮することができるポリペプチドを指す。
本明細書で使用される場合、ペプチドへの一般的な言及は、修飾されたアミノ末端およびカルボキシ末端を有するペプチドを包含することが意図される。例えば、標準的なアミノ酸を指定するアミノ酸配列は、Ｎ末端およびＣ末端の標準的なアミノ酸、ならびにＮ末端の対応するヒドロキシル酸および／または末端カルボン酸の代わりにアミド基を含むように修飾された対応するＣ末端アミノ酸を包含することが意図される。
本明細書で使用される場合、ペプチドへの一般的な言及は、修飾されたアミノ末端およびカルボキシ末端を有するペプチドを包含することが意図される。例えば、標準的なアミノ酸を指定するアミノ酸配列は、Ｎ末端およびＣ末端の標準的なアミノ酸、ならびにＮ末端の対応するヒドロキシル酸および／または末端カルボン酸の代わりにアミド基を含むように修飾された対応するＣ末端アミノ酸を包含することが意図される。
【0028】
本明細書で使用される場合、「アシル化」アミノ酸は、それが生成される手段に関係なく、天然に存在するアミノ酸に対して非天然であるアシル基を含むアミノ酸である。アシル化アミノ酸およびアシル化ペプチドを生成する例示的な方法は当技術分野で公知であり、ペプチドに含める前のアミノ酸のアシル化、またはペプチド合成とそれに続くペプチドの化学的アシル化を含む。いくつかの実施形態では、アシル基は、（ｉ）循環中の半減期の延長、（ｉｉ）作用の発現の遅延、（ｉｉｉ）作用持続時間の延長、（ｉｖ）プロテアーゼに対する耐性の改善、および（ｖ）ＧＬＰ－１受容体における効力の向上のうちの１つまたは複数をペプチドに持たせる。
【0029】
本明細書で使用される場合、「アルキル化」アミノ酸は、それが生成される手段に関係なく、天然に存在するアミノ酸に対して非天然であるアルキル基を含むアミノ酸である。アルキル化アミノ酸およびアルキル化ペプチドを生成する例示的な方法は当技術分野で公知であり、ペプチドに含める前のアミノ酸のアルキル化、またはペプチド合成とそれに続くペプチドの化学的アルキル化を含む。任意の特定の理論に拘束されるものではないが、ペプチドのアルキル化は、ペプチドのアシル化と同じではないにしても、類似した効果、例えば、循環中の半減期の延長、作用の発現の遅延、作用持続時間の延長、プロテアーゼに対する耐性の改善を達成すると考えられる。
【0030】
本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される担体」は、リン酸緩衝生理食塩水溶液、水、エマルジョン、例えば油／水または水／油エマルジョン、および様々なタイプの湿潤剤などの標準的な医薬担体のいずれかを含む。該用語は、ヒトを含む動物における使用に関して米国連邦政府の規制機関によって承認された、または米国薬局方に収載された薬剤のいずれかも包含する。
【0031】
本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される塩」とは、親化合物の生物活性を保持し、生物学的にまたはその他の点で望ましくなくはない化合物の塩を指す。本明細書に開示された化合物の多くは、アミノ基および／もしくはカルボキシル基またはそれに類似した基の存在により酸性および／または塩基性塩を形成することができる。
【0032】
本明細書で使用される場合、用語「親水性部分」とは、易水溶性であるかまたは容易に水を吸収し、毒性作用なしに哺乳動物種によってインビボで許容される（すなわち生体適合性である）任意の化合物を指す。親水性部分の例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸－ポリグリコール酸コポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリメトキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシエチルメタクリレート、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ならびに誘導体化セルロース、例えばヒドロキシメチルセルロースまたはヒドロキシエチルセルロースおよびそれらのコポリマー、ならびに例えば、アルブミン、ヘパリンおよびデキストランを含む天然のポリマーが挙げられる。
【0033】
本明細書で使用される場合、用語「処置（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、特定の障害もしくは状態に関連する症状の軽減および／または前記症状の予防もしくは排除を含む。例えば、本明細書で使用される場合、用語「低血糖の処置」は、一般に、血糖値を正常に近いレベルに維持するかまたは上げることを指す。
【0034】
本明細書で使用される場合、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストの「有効」量または「治療有効量」とは、所望の効果をもたらすためのＧＬＰ－１アンタゴニストの非毒性であるが十分な量を指す。例えば、１つの所望の効果は、低血糖の予防または処置となろう。「有効」である量は、個体の年齢および全身状態、投与方法等に応じて対象ごとに異なる。故に、正確な「有効量」を常に特定できるとは限らない。しかし、任意の個体例における適当な「有効」量は、日常の実験を使用して当業者によって決定され得る。
【0035】
用語「非経口」は、消化管を通じてではなく、鼻腔内、吸引、皮下、筋肉内、脊髄内、または静脈内などのいくつかの他の経路によることを意味する。
本明細書で使用される場合、用語「誘導体」は、例えば、ポリペプチドの１つもしくは複数の位置の側鎖に基（例えば、チロシン残基にニトロ基、またはチロシン残基にヨウ素）を導入すること、またはエステル基もしくはアミド基への遊離カルボキシル基の変換、またはアシル化によるアミドへのアミノ基の変換、またはヒドロキシ基をエステルにするアシル化、または１級アミンを２級アミンにするアルキル化、またはアミノ酸側鎖への親水性部分の結合による、インビトロでの化学修飾を含む、化合物（例えば、アミノ酸）に対する化学修飾を包含することが意図される。他の誘導体は、ポリペプチドにおけるアミノ酸残基の側鎖の酸化または還元によって得られる。
本明細書で使用される場合、用語「誘導体」は、例えば、ポリペプチドの１つもしくは複数の位置の側鎖に基（例えば、チロシン残基にニトロ基、またはチロシン残基にヨウ素）を導入すること、またはエステル基もしくはアミド基への遊離カルボキシル基の変換、またはアシル化によるアミドへのアミノ基の変換、またはヒドロキシ基をエステルにするアシル化、または１級アミンを２級アミンにするアルキル化、またはアミノ酸側鎖への親水性部分の結合による、インビトロでの化学修飾を含む、化合物（例えば、アミノ酸）に対する化学修飾を包含することが意図される。他の誘導体は、ポリペプチドにおけるアミノ酸残基の側鎖の酸化または還元によって得られる。
【0036】
用語「同一性」は本明細書で使用される場合、２つ以上の配列間の類似性に関する。同一性は、同一の残基の数を残基の総数で割り、結果に１００を掛けて百分率を得ることによって測定される。故に、全く同じ配列の２つのコピーが１００％同一性を有するのに対し、互いと比較してアミノ酸欠失、付加、または置換を有する２つの配列は同一性の程度がより低い。当業者は、いくつかのコンピュータープログラム、例えばＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３～４１０頁）などのアルゴリズムを使用するものが配列同一性を決定するのに利用可能であることが分かるであろう。
【0037】
本明細書で使用される場合、第２の受容体と比較した第１の受容体に関する分子の「選択性」という用語は、以下の比：第１の受容体における分子のＥＣ５０で割った第２の受容体における分子のＥＣ５０を指す。例えば、第１の受容体で１ｎＭのＥＣ５０を有し、第２の受容体で１００ｎＭのＥＣ５０を有する分子は、第２の受容体と比較した第１の受容体に関して１００倍の選択性を有する。
【0038】
本明細書で使用される場合、アミノ酸「修飾」とは、アミノ酸への／からの化学基の付加および／または除去によるアミノ酸の置換、またはアミノ酸の誘導を指し、ヒトタンパク質に一般的に見出される２０個のアミノ酸、および非定型または天然に存在しないアミノ酸のいずれかによる置換を含む。非定型アミノ酸の商業的供給源としては、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（ミルウォーキー、ＷＩ）、ＣｈｅｍＰｅｐ Ｉｎｃ．（マイアミ、ＦＬ）、およびＧｅｎｚｙｍｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（ケンブリッジ、ＭＡ）が挙げられる。非定型アミノ酸は、商業的供給者から購入されてもよく、新規合成されてもよく、または天然に存在するアミノ酸から化学修飾もしくは誘導体化されてもよい。
【0039】
本明細書で使用される場合、アミノ酸「置換」とは、異なるアミノ酸残基による１個のアミノ酸残基の置き換えを指す。
本明細書で使用される場合、用語「保存的アミノ酸置換」は、以下の５つの群の１つの中での交換として本明細書において定義される：
Ｉ．小さな脂肪族の非極性またはやや極性残基：
Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ；
ＩＩ．極性の負に荷電した残基およびそれらのアミド：
Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、システイン酸およびホモシステイン酸；
ＩＩＩ．極性の正に荷電した残基：
Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ；オルニチン（Ｏｒｎ）
ＩＶ．大きな脂肪族の非極性残基：
Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、ホモシステイン
Ｖ．大きな芳香族残基：
Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、アセチルフェニルアラニン
本出願全体を通じて、数による特定のアミノ酸位置（例えば、２８位）への全ての言及は、天然のエキセンジン４（配列番号１）におけるその位置または任意のその類似体における対応するアミノ酸位置のアミノ酸を指す。例えば、本明細書における「２８位」への言及は、配列番号１の第１のアミノ酸が欠失されているエキセンジン４の類似体の対応する２７位を意味することになる。したがって、９－３９エキセンジン４は、最初の８個のアミノ酸が欠失されているＮ末端切断エキセンジン４ペプチドを表す。さらに、３９より大きい位置への言及（天然のエキセンジン４は３９個のアミノ酸のみを有する）は、配列番号１の対応する３９位の後にＣ末端アミノ酸伸長を有する類似体におけるアミノ酸位置を指すことが意図される。
本明細書で使用される場合、用語「保存的アミノ酸置換」は、以下の５つの群の１つの中での交換として本明細書において定義される：
Ｉ．小さな脂肪族の非極性またはやや極性残基：
Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ；
ＩＩ．極性の負に荷電した残基およびそれらのアミド：
Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、システイン酸およびホモシステイン酸；
ＩＩＩ．極性の正に荷電した残基：
Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ；オルニチン（Ｏｒｎ）
ＩＶ．大きな脂肪族の非極性残基：
Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、ホモシステイン
Ｖ．大きな芳香族残基：
Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、アセチルフェニルアラニン
本出願全体を通じて、数による特定のアミノ酸位置（例えば、２８位）への全ての言及は、天然のエキセンジン４（配列番号１）におけるその位置または任意のその類似体における対応するアミノ酸位置のアミノ酸を指す。例えば、本明細書における「２８位」への言及は、配列番号１の第１のアミノ酸が欠失されているエキセンジン４の類似体の対応する２７位を意味することになる。したがって、９－３９エキセンジン４は、最初の８個のアミノ酸が欠失されているＮ末端切断エキセンジン４ペプチドを表す。さらに、３９より大きい位置への言及（天然のエキセンジン４は３９個のアミノ酸のみを有する）は、配列番号１の対応する３９位の後にＣ末端アミノ酸伸長を有する類似体におけるアミノ酸位置を指すことが意図される。
【0040】
本明細書で使用される場合、一般用語「ポリエチレングリコール鎖」または「ＰＥＧ鎖」とは、一般式Ｈ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨ（式中、ｎは少なくとも２である）によって表される、分岐鎖または直鎖のエチレンオキシドおよび水の縮合ポリマーの混合物をさす。「ポリエチレングリコール鎖」または「ＰＥＧ鎖」は、そのおおよその平均分子量を示すために数字の添え字と組み合わせて使用される。例えば、ＰＥＧ－５，０００は、約５，０００ダルトンの総分子量平均を有するポリエチレングリコール鎖を指す。
【0041】
本明細書で使用される場合、用語「ペグ化」および同様の用語は、ポリエチレングリコール鎖を化合物に連結することによってその天然の状態から修飾されている化合物を指す。「ペグ化ポリペプチド」は、ポリペプチドにＰＥＧ鎖が共有結合したポリペプチドである。
【0042】
本明細書で使用される場合、用語「ｍｉｎｉＰＥＧ」または「ＯＥＧ」は、構造：
【0043】
【化2】
【0044】
を含む官能基化ポリエチレン化合物を定義する。
本明細書で使用される場合、「リンカー」または「スペーサー」は、２つの別個の実体を互いに結び付ける結合、分子または分子群である。リンカーは、２つの実体の最適な間隔を提供することができ、またはさらに２つの実体を互いに分離できるようにする不安定結合を供給することができる。不安定結合としては、光切断可能な基、酸不安定部分、塩基不安定部分、および酵素切断可能な基が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「リンカー」または「スペーサー」は、２つの別個の実体を互いに結び付ける結合、分子または分子群である。リンカーは、２つの実体の最適な間隔を提供することができ、またはさらに２つの実体を互いに分離できるようにする不安定結合を供給することができる。不安定結合としては、光切断可能な基、酸不安定部分、塩基不安定部分、および酵素切断可能な基が挙げられる。
【0045】
本明細書で使用される場合、「二量体」は、リンカーを介して互いに共有結合した２つのサブユニットを含む複合体である。二量体という用語は、限定する用語が何もなく使用される場合、ホモ二量体およびヘテロ二量体の両方を包含する。ホモ二量体は２つの同一のサブユニットを含むのに対し、ヘテロ二量体は異なる２つのサブユニットを含むが、２つのサブユニットは互いと実質的に類似している。
【0046】
本明細書で使用される場合、用語Ｃ１６～Ｃ２０脂肪酸は、構造：－ＣＯ（ＣＨ２）１４～２０ＣＨ３を指定し、用語Ｃ１６～Ｃ２０二酸は、構造：－ＣＯ（ＣＨ２）１４～２０ＣＯＯＨを指定し、接頭辞「Ｃ１６～Ｃ２０」は、指定によって包含される化合物中の炭素の可変的総数を指定する。例えば、Ｃ１８二酸は、構造：－ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯＯＨを表す。本明細書で使用される場合、アシル化アミノ酸への一般的な言及は、脂肪酸でアシル化されたその側鎖を有するアミノ酸および二酸でアシル化されたその側鎖を有するアミノ酸の両方を包含する。
【0047】
本明細書に開示の生理的条件は、温度約３５～４０℃およびｐＨ約７．０～約７．４を含む、より典型的には、ｐＨ７．２～７．４および温度３６～３８℃を含むことが意図される。生理的ｐＨおよび温度は、高度に定義された範囲内でヒトにおいて厳密に調節されるため、ジペプチド／薬物複合体（プロドラッグ）から薬物への変換速度は、高い患者内および患者間再現性を示す。
【0048】
用語「Ｃ１～Ｃｎアルキル」（ｎは１～６であり得る）は、本明細書で使用される場合、１～特定された数の炭素原子を有する分岐鎖または直鎖アルキル基を表す。典型的なＣ１～Ｃ６アルキル基としては、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソ－プロピル、ブチル、イソ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、ヘキシル等が挙げられるが、これらに限定されない。
【0049】
用語「Ｃ２～Ｃｎアルケニル」（ｎは２～６であり得る）は、本明細書で使用される場合、２～特定された数の炭素原子および少なくとも１つの二重結合を有するオレフィン性不飽和分岐鎖基または直鎖基を表す。そのような基の例としては、１－プロペニル、２－プロペニル（－ＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ２）、１，３－ブタジエニル、（－ＣＨ＝ＣＨＣＨ＝ＣＨ２）、１－ブテニル（－ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３）、ヘキセニル、ペンテニル等が挙げられるが、これらに限定されない。
【0050】
用語「Ｃ２～Ｃｎアルキニル」（ｎは２～６であり得る）とは、２～ｎ個の炭素原子および少なくとも１つの三重結合を有する不飽和分岐鎖基または直鎖基を指す。そのような基の例としては、１－プロピニル、２－プロピニル、１－ブチニル、２－ブチニル、１－ペンチニル等が挙げられるが、これらに限定されない。
【0051】
本明細書で使用される場合、用語「アリール」とは、１つまたは２つの芳香環を有する単環式または二環式炭素環系を指し、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、インデニル等を含むが、これらに限定されない。アリール環のサイズおよび置換基または結合基の存在は、存在する炭素の数を指定することによって示される。例えば、用語「（Ｃ１～Ｃ３アルキル）（Ｃ６～Ｃ１０アリール）」は、１～３員アルキル鎖を介して親部分に結合した５～１０員アリールを指す。
【0052】
用語「ヘテロアリール」とは、本明細書で使用される場合、１つまたは２つの芳香環を含有し、芳香環中に少なくとも１個の窒素、酸素、または硫黄原子を含有する単環式または二環式環系を指す。ヘテロアリール環のサイズおよび置換基または結合基の存在は、存在する炭素の数を指定することによって示される。例えば、用語「（Ｃ１～Ｃｎアルキル）（Ｃ５～Ｃ６ヘテロアリール）」は、１～「ｎ」員アルキル鎖を介して親部分に結合した５～６員ヘテロアリールを指す。
【0053】
本明細書で使用される場合、用語「ハロ」とは、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素からなる群の１つまたは複数のメンバーを指す。
本明細書で使用される場合、さらなる指定がない用語「患者」は、任意の温血脊椎飼育動物（例えば、家畜、ウマ、ネコ、イヌおよび他のペットを含むが、これらに限定されない）およびヒトを包含することが意図され、医者に直接かかっている個体に限定されない。
本明細書で使用される場合、さらなる指定がない用語「患者」は、任意の温血脊椎飼育動物（例えば、家畜、ウマ、ネコ、イヌおよび他のペットを含むが、これらに限定されない）およびヒトを包含することが意図され、医者に直接かかっている個体に限定されない。
【0054】
用語「単離された」は本明細書で使用される場合、その天然の環境から取り除かれていることを意味する。
用語「精製された」とは本明細書で使用される場合、天然または自然な環境で通常分子または化合物に関連する混入物を実質的に含まない形態での分子または化合物の単離を指し、元の組成物の他の成分から分離された結果、純度が上がっていることを意味する。用語「精製ペプチド」は、核酸分子、脂質および炭水化物を含むがこれらに限定されない他の化合物から分離されたペプチドを記載するのに本明細書において使用される。
用語「精製された」とは本明細書で使用される場合、天然または自然な環境で通常分子または化合物に関連する混入物を実質的に含まない形態での分子または化合物の単離を指し、元の組成物の他の成分から分離された結果、純度が上がっていることを意味する。用語「精製ペプチド」は、核酸分子、脂質および炭水化物を含むがこれらに限定されない他の化合物から分離されたペプチドを記載するのに本明細書において使用される。
【0055】
本明細書で使用される場合、用語「ペプチド」は、２個以上のアミノ酸および典型的には５０個未満のアミノ酸の配列を包含し、アミノ酸は、天然に存在するもしくはコードアミノ酸、または天然に存在しないもしくは非コードアミノ酸である。天然に存在しないアミノ酸とは、インビボで天然に存在しないが、それにもかかわらず、本明細書に記載されたペプチド構造に組み込むことができるアミノ酸を指す。「非コード」とは本明細書で使用される場合、以下の２０個のアミノ酸：Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｙｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、Ｔｒｐ、ＴｙｒのうちのいずれかのＬ異性体ではないアミノ酸を指す。
【0056】
本明細書で使用される場合、「部分的に非ペプチド性の」とは、分子の一部が、生物活性を有しアミノ酸の配列を含まない化合物または置換基である分子を指す。
「ペプチドミメティック」とは、既存のペプチドの一般構造とは異なる構造を有するが、例えばそのペプチドの生物活性を模倣することによって、既存のペプチドに類似した様式で機能する化合物を指す。ペプチドミメティックは典型的には、天然に存在するアミノ酸および／または非天然アミノ酸を含むが、ペプチド骨格に対する修飾を含むこともできる。例えば、ペプチドミメティックは、非ペプチド部分、例えばレトロインベルソ断片（ｒｅｔｒｏｉｎｖｅｒｓｏ ｆｒａｇｍｅｎｔ）の挿入もしくは置換、またはアザペプチド結合（ＮＨによって置換されたＣＯ）もしくはシュードペプチド結合（例えば、ＣＨ２で置換されたＮＨ）などの非ペプチド結合、もしくはエステル結合（例えば、１つまたは複数のアミド（－ＣＯＮＨＲ－）結合がエステル（ＣＯＯＲ）結合によって置き換えられるデプシペプチド）の組み込みを有する天然に存在するアミノ酸の配列を含んでもよい。あるいは、ペプチドミメティックは、任意の天然に存在するアミノ酸を欠いてもよい。
「ペプチドミメティック」とは、既存のペプチドの一般構造とは異なる構造を有するが、例えばそのペプチドの生物活性を模倣することによって、既存のペプチドに類似した様式で機能する化合物を指す。ペプチドミメティックは典型的には、天然に存在するアミノ酸および／または非天然アミノ酸を含むが、ペプチド骨格に対する修飾を含むこともできる。例えば、ペプチドミメティックは、非ペプチド部分、例えばレトロインベルソ断片（ｒｅｔｒｏｉｎｖｅｒｓｏ ｆｒａｇｍｅｎｔ）の挿入もしくは置換、またはアザペプチド結合（ＮＨによって置換されたＣＯ）もしくはシュードペプチド結合（例えば、ＣＨ２で置換されたＮＨ）などの非ペプチド結合、もしくはエステル結合（例えば、１つまたは複数のアミド（－ＣＯＮＨＲ－）結合がエステル（ＣＯＯＲ）結合によって置き換えられるデプシペプチド）の組み込みを有する天然に存在するアミノ酸の配列を含んでもよい。あるいは、ペプチドミメティックは、任意の天然に存在するアミノ酸を欠いてもよい。
【0057】
本明細書で使用される場合、用語「荷電アミノ酸」または「荷電残基」とは、水溶液中、生理的ｐＨで負に荷電（すなわち、脱プロトン化）または正に荷電（すなわち、プロトン化）した側鎖を含むアミノ酸を指す。例えば、負に荷電したアミノ酸としては、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン酸、ホモシステイン酸、およびホモグルタミン酸が挙げられるのに対し、正に荷電したアミノ酸としては、アルギニン、リジンおよびヒスチジンが挙げられる。荷電アミノ酸は、ヒトタンパク質に一般的に見出される２０個のアミノ酸のうちの荷電アミノ酸、および異型または天然に存在しないアミノ酸を含む。
【0058】
本明細書で使用される場合、用語「酸性アミノ酸」とは、例えば、側鎖カルボン酸基またはスルホン酸基を含む第２の酸性部分（アミノ酸のアルファカルボン酸以外）を含むアミノ酸を指す。
【0059】
本明細書で使用される場合、用語「プロドラッグ」は、その完全な薬理作用を示す前に化学修飾を受ける任意の化合物として定義される。
本明細書で使用される場合、「ジペプチド」は、α－アミノ酸またはα－ヒドロキシル酸の、ペプチド結合を通じた別のアミノ酸への結合の結果である。
本明細書で使用される場合、「ジペプチド」は、α－アミノ酸またはα－ヒドロキシル酸の、ペプチド結合を通じた別のアミノ酸への結合の結果である。
【0060】
本明細書で使用される場合、いずれのさらなる指定もない用語「化学的切断」は、共有化学結合の切断をもたらす非酵素反応を包含する。
本明細書で使用される場合、用語「非定型低血糖」は、外因性インスリン投与とは無関係に患者に生じる低血糖状態を定義する。
略号：
小文字のｋ＝リジンのＤ異性体
大文字のＫ＝リジンのＬ異性体
γＥ＝ガンマグルタミン酸のＬ異性体
（ｍｉｎｉＰＥＧ）２＝ＣＯＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ
ＣＯＣ１６Ｈ３２ＣＯ２Ｈ＝（Ｃ１８二酸）
（Ｎ－Ｍｅ）Ｇ＝サルコシン
実施形態
本開示の１つの実施形態によれば、外因性インスリン投与とは無関係に生じる低血糖状態（すなわち、非定型低血糖）を患っている患者を処置するための組成物および方法が提供される。本開示によれば、ＧＬＰ－１アンタゴニストを含む組成物は、血糖値を上げならびに／または関連急性症状および低血糖と関連する慢性転帰を軽減するのに十分な量で、非定型低血糖を患っている患者に投与される。１つの実施形態では、非定型低血糖を経験する患者は高インスリン血症の状態も有する。１つの実施形態では、高インスリン血症状態は患者が肥満手術を受けた後で生じる。
本明細書で使用される場合、用語「非定型低血糖」は、外因性インスリン投与とは無関係に患者に生じる低血糖状態を定義する。
略号：
小文字のｋ＝リジンのＤ異性体
大文字のＫ＝リジンのＬ異性体
γＥ＝ガンマグルタミン酸のＬ異性体
（ｍｉｎｉＰＥＧ）２＝ＣＯＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＮＨ
ＣＯＣ１６Ｈ３２ＣＯ２Ｈ＝（Ｃ１８二酸）
（Ｎ－Ｍｅ）Ｇ＝サルコシン
実施形態
本開示の１つの実施形態によれば、外因性インスリン投与とは無関係に生じる低血糖状態（すなわち、非定型低血糖）を患っている患者を処置するための組成物および方法が提供される。本開示によれば、ＧＬＰ－１アンタゴニストを含む組成物は、血糖値を上げならびに／または関連急性症状および低血糖と関連する慢性転帰を軽減するのに十分な量で、非定型低血糖を患っている患者に投与される。１つの実施形態では、非定型低血糖を経験する患者は高インスリン血症の状態も有する。１つの実施形態では、高インスリン血症状態は患者が肥満手術を受けた後で生じる。
【0061】
１つの実施形態によれば、ペプチドＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫ（配列番号３）の類似体であるＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドであって、配列番号３と１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸修飾が異なり、修飾が、限定されるものではないがＣ末端アミノ酸のアシル化および／またはアミド化を含むアミノ酸置換、付加またはアミノ酸構造に対する修飾から選択される、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドが提供される。１つの実施形態では、アミノ酸修飾は、該ペプチドの１２位、１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、２７位および２８位の１つもしくは複数におけるアミノ酸置換、ならびに／または１５位、１６位、１７位、１９位、２０位、２１位および２３位（天然のエキセンジン４（配列番号１）と比較した番号）の１つもしくは複数におけるＤ異性体による置換である。１つの実施形態では、配列番号３の類似体は、場合によりスペーサーを介してＣ１６～Ｃ１８脂肪酸または二酸によるＣ末端アミノ酸側鎖のアシル化によってさらに修飾されている。
【0062】
１つの実施形態によれば、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストであって、ＤＶＳＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むか、またはＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドが配列番号３の配列を含まないという条件で、配列番号４と１、２、３、４または５個のアミノ酸置換が異なるが、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニスト活性を保持するアミノ酸配列を含む、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストが提供される。１つの実施形態では、配列番号４のペプチドと以下のうちの１つまたは複数が異なるペプチドが提供される：
ｉ）ＴｒｐまたはｄＴｒｐによる７位、１０位、１１位、１３位または１６位のいずれかにおける１、２または３個のアミノ酸の置換；
ｉｉ）Ｄ立体構造の対応するアミノ酸による１５位、１６位または２３位のいずれかにおける１、２または３個のアミノ酸の置換；
ｉｉｉ）Ａｉｂによる１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、または２８位のいずれかにおける１、２または３個のアミノ酸の置換；
ｉｖ）アシル化アミノ酸、場合によりアシル化リジンによる１２位における置換；
ｖ）ｄＧｌｕ、Ａｓｐ、ホモグルタミン酸またはホモシステイン酸による１６位における置換；
ｖｉ）シクロプロパン、シクロペンタン、シクロヘキサンまたはフェニルグリシンによる、１９位における置換；
ｖｉｉ）ｄＡｒｇ、ホモリジンまたはシトルリンによる２０位における置換；
ｖｉｉｉ）アミドによる天然のＣ末端カルボキシル基の置換；
ｉｘ）場合によりＮ末端伸長アミノ酸の１個がアシル化されている、１～３個のアミノ酸のＮ末端伸長の付加；
ｘ）アシル化アミノ酸によるＣ末端アミノ酸の置換；
ｘｉ）ｉ）～ｘ）の任意の組み合わせ。
ｉ）ＴｒｐまたはｄＴｒｐによる７位、１０位、１１位、１３位または１６位のいずれかにおける１、２または３個のアミノ酸の置換；
ｉｉ）Ｄ立体構造の対応するアミノ酸による１５位、１６位または２３位のいずれかにおける１、２または３個のアミノ酸の置換；
ｉｉｉ）Ａｉｂによる１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、または２８位のいずれかにおける１、２または３個のアミノ酸の置換；
ｉｖ）アシル化アミノ酸、場合によりアシル化リジンによる１２位における置換；
ｖ）ｄＧｌｕ、Ａｓｐ、ホモグルタミン酸またはホモシステイン酸による１６位における置換；
ｖｉ）シクロプロパン、シクロペンタン、シクロヘキサンまたはフェニルグリシンによる、１９位における置換；
ｖｉｉ）ｄＡｒｇ、ホモリジンまたはシトルリンによる２０位における置換；
ｖｉｉｉ）アミドによる天然のＣ末端カルボキシル基の置換；
ｉｘ）場合によりＮ末端伸長アミノ酸の１個がアシル化されている、１～３個のアミノ酸のＮ末端伸長の付加；
ｘ）アシル化アミノ酸によるＣ末端アミノ酸の置換；
ｘｉ）ｉ）～ｘ）の任意の組み合わせ。
【0063】
１つの実施形態によれば、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストであって、
Ｒ１０－ＤＶＸ１１Ｘ１２ＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＸ１９Ｘ２０ＥＦＸ２３ＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－Ｒ２０（配列番号２３）（ここで、
Ｒ１０は、ＮＨ２または１、２もしくは３個のアミノ酸のＮ末端伸長であり、Ｎ末端伸長のアミノ酸の１個は、場合によりスペーサーを介してＣ１６～Ｃ１８脂肪酸または二酸でアシル化され、場合によりＲ１０は、構造：Ｘ７Ｘ８のジペプチドであり、Ｘ７はアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓまたはアシル化ｄＬｙｓであり、Ｘ８はＧｌｙまたはＣ１～Ｃ４ Ｎ－アルキル化Ｇｌｙであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇまたはアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｇｌｕ、ｄＧｌｕ、Ａｓｐ、ホモグルタミン酸またはホモシステイン酸であり；
Ｘ１９は、Ｖａｌ、シクロプロパン、シクロペンタン、シクロヘキサンまたはフェニルグリシンであり；
Ｘ２０は、Ａｒｇ、ホモリジンまたはシトルリンであり；
Ｘ２３は、Ｉｌｅ、またはｄＩｌｅであり；
Ｘ４０は、アシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；ならびに
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含み、場合により、１０位および１１位が両方ともＴｒｐまたはｄＴｒｐではないという任意選択の条件で；Ｒ１０およびＸ１２が両方ともアシル化アミノ酸を含むことができないというさらなる任意選択の条件で、７位、１０位、１３位、または１６位から選択される１、２または３個のアミノ酸がＴｒｐまたはｄＴｒｐで置換され；場合により、１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、または２８位のいずれかにおける１、２または３個のアミノ酸がＡｉｂで置換されている、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストが提供される。
Ｒ１０－ＤＶＸ１１Ｘ１２ＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＸ１９Ｘ２０ＥＦＸ２３ＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－Ｒ２０（配列番号２３）（ここで、
Ｒ１０は、ＮＨ２または１、２もしくは３個のアミノ酸のＮ末端伸長であり、Ｎ末端伸長のアミノ酸の１個は、場合によりスペーサーを介してＣ１６～Ｃ１８脂肪酸または二酸でアシル化され、場合によりＲ１０は、構造：Ｘ７Ｘ８のジペプチドであり、Ｘ７はアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓまたはアシル化ｄＬｙｓであり、Ｘ８はＧｌｙまたはＣ１～Ｃ４ Ｎ－アルキル化Ｇｌｙであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇまたはアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｇｌｕ、ｄＧｌｕ、Ａｓｐ、ホモグルタミン酸またはホモシステイン酸であり；
Ｘ１９は、Ｖａｌ、シクロプロパン、シクロペンタン、シクロヘキサンまたはフェニルグリシンであり；
Ｘ２０は、Ａｒｇ、ホモリジンまたはシトルリンであり；
Ｘ２３は、Ｉｌｅ、またはｄＩｌｅであり；
Ｘ４０は、アシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；ならびに
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含み、場合により、１０位および１１位が両方ともＴｒｐまたはｄＴｒｐではないという任意選択の条件で；Ｒ１０およびＸ１２が両方ともアシル化アミノ酸を含むことができないというさらなる任意選択の条件で、７位、１０位、１３位、または１６位から選択される１、２または３個のアミノ酸がＴｒｐまたはｄＴｒｐで置換され；場合により、１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、または２８位のいずれかにおける１、２または３個のアミノ酸がＡｉｂで置換されている、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストが提供される。
【0064】
１つの実施形態では、配列番号２３のペプチドの７位、１２位および４０位の１つのみがアシル化アミノ酸を含む。１つの実施形態では、配列番号２３のペプチドの７位、１２位および４０位の２つがアシル化アミノ酸を含む。１つの実施形態では、７位、１２位および４０位のアシル化アミノ酸は、独立して式Ｉ（場合により、Ｌｙｓ）、または式ＩＩ（場合により、Ｓｅｒ）の構造を含むアミノ酸であり、式Ｉ、およびＩＩの各々は：
【0065】
【化3】
【0066】
１つの実施形態では、Ｒ１０がＸ７Ｘ８（ここで、Ｘ７はアシル化Ｌｙｓまたはアシル化ｄＬｙｓである）であり、Ｘ１２がＡｒｇであり、Ｘ４０がアシル化Ｌｙｓである、配列番号２３のペプチドが提供される。１つの実施形態では、Ｒ１０がＮＨ２であり、Ｘ１２がアシル化Ｌｙｓであり、Ｘ４０がアシル化Ｌｙｓである、配列番号２３のペプチドが提供される。１つの実施形態では、Ｒ１０がＮＨ２であり、Ｘ１２がＡｒｇであり、Ｘ４０がアシル化Ｌｙｓである、配列番号２３のペプチドが提供される。１つの実施形態では、配列番号２３のペプチドのアシル化アミノ酸は、アシル化Ｌｙｓ残基であり、場合により、アシル化Ｌｙｓ残基は、独立してＣ１４～Ｃ２４脂肪酸もしくは脂肪二酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪酸もしくは脂肪二酸でアシル化され、場合により、脂肪酸または脂肪二酸は、本明細書に開示されたスペーサー分子のいずれかを介してＬｙｓ残基の側鎖に連結されている。
【0067】
１つの実施形態によれば、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストであって、
Ｒ１０－ＤＶＸ１１Ｘ１２ＹＬＥＸ１６ＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－Ｒ２０（配列番号２４）（ここで、
Ｒ１０は、ＮＨ２または構造：Ｘ７Ｘ８のジペプチドであり、Ｘ７はアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓまたはアシル化ｄＬｙｓであり、Ｘ８はＧｌｙまたはＣ１～Ｃ４ Ｎ－アルキル化Ｇｌｙであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇまたはアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；
Ｘ１６は、ＧｌｕまたはＡｓｐであり；
Ｘ４０は、アシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；および
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含み、場合により、１６位、１７位、１８位、２０位もしくは２１位から選択される１、２または３個のアミノ酸が、Ｄ立体構造の対応するアミノ酸で置換され、および／または１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、または２８位のいずれかにおける１、２もしくは３個のアミノ酸がＡｉｂで置換されている、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストが提供される。
Ｒ１０－ＤＶＸ１１Ｘ１２ＹＬＥＸ１６ＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－Ｒ２０（配列番号２４）（ここで、
Ｒ１０は、ＮＨ２または構造：Ｘ７Ｘ８のジペプチドであり、Ｘ７はアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓまたはアシル化ｄＬｙｓであり、Ｘ８はＧｌｙまたはＣ１～Ｃ４ Ｎ－アルキル化Ｇｌｙであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇまたはアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；
Ｘ１６は、ＧｌｕまたはＡｓｐであり；
Ｘ４０は、アシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；および
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含み、場合により、１６位、１７位、１８位、２０位もしくは２１位から選択される１、２または３個のアミノ酸が、Ｄ立体構造の対応するアミノ酸で置換され、および／または１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、または２８位のいずれかにおける１、２もしくは３個のアミノ酸がＡｉｂで置換されている、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストが提供される。
【0068】
１つの実施形態によれば、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストであって、
Ｒ１０－ＤＶＸ１１Ｘ１２ＹＬＥＸ１６ＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－Ｒ２０（配列番号２４）（ここで、
Ｒ１０は、構造：Ｘ７Ｘ８のジペプチドであり、Ｘ７はアシル化Ｌｙｓまたはアシル化ｄＬｙｓであり、Ｘ８はＧｌｙまたはサルコシンであり；
Ｘ１１は、ＴｒｐまたはｄＴｒｐであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇであり；
Ｘ１６は、Ｇｌｕであり；
Ｘ４０は、アシル化Ｌｙｓであり；および
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含み、ペプチドの前記アシル化Ｌｙｓ残基が、独立して、本明細書に開示のスペーサーを場合により介してＣ１６～Ｃ１８脂肪酸または脂肪二酸でアシル化され、場合により、１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、または２８位のいずれかにおける１、２または３個のアミノ酸がＡｉｂで置換されている、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストが提供される。
Ｒ１０－ＤＶＸ１１Ｘ１２ＹＬＥＸ１６ＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－Ｒ２０（配列番号２４）（ここで、
Ｒ１０は、構造：Ｘ７Ｘ８のジペプチドであり、Ｘ７はアシル化Ｌｙｓまたはアシル化ｄＬｙｓであり、Ｘ８はＧｌｙまたはサルコシンであり；
Ｘ１１は、ＴｒｐまたはｄＴｒｐであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇであり；
Ｘ１６は、Ｇｌｕであり；
Ｘ４０は、アシル化Ｌｙｓであり；および
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含み、ペプチドの前記アシル化Ｌｙｓ残基が、独立して、本明細書に開示のスペーサーを場合により介してＣ１６～Ｃ１８脂肪酸または脂肪二酸でアシル化され、場合により、１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、または２８位のいずれかにおける１、２または３個のアミノ酸がＡｉｂで置換されている、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストが提供される。
【0069】
１つの実施形態によれば、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストであって、
Ｒ１０－ＤＶＸ１１Ｘ１２ＹＬＥＸ１６ＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－Ｒ２０ 配列番号９７）（ここで、
Ｒ１０は、構造：Ｘ７Ｘ８のジペプチドであり、Ｘ７はアシル化Ｌｙｓまたはアシル化ｄＬｙｓであり、Ｘ８はＧｌｙまたはサルコシンであり；
Ｘ１１は、Ｓｅｒ、ＴｒｐまたはｄＴｒｐであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇであり；
Ｘ１６は、Ｇｌｕであり；
および
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含み、前記アシル化Ｌｙｓ残基が、本明細書に開示のスペーサーを場合により介してＣ１６～Ｃ１８脂肪酸または脂肪二酸でアシル化され、場合により、１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、または２８位のいずれかにおける１、２または３個のアミノ酸がＡｉｂで置換されている、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストが提供される。
Ｒ１０－ＤＶＸ１１Ｘ１２ＹＬＥＸ１６ＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－Ｒ２０ 配列番号９７）（ここで、
Ｒ１０は、構造：Ｘ７Ｘ８のジペプチドであり、Ｘ７はアシル化Ｌｙｓまたはアシル化ｄＬｙｓであり、Ｘ８はＧｌｙまたはサルコシンであり；
Ｘ１１は、Ｓｅｒ、ＴｒｐまたはｄＴｒｐであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇであり；
Ｘ１６は、Ｇｌｕであり；
および
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含み、前記アシル化Ｌｙｓ残基が、本明細書に開示のスペーサーを場合により介してＣ１６～Ｃ１８脂肪酸または脂肪二酸でアシル化され、場合により、１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、または２８位のいずれかにおける１、２または３個のアミノ酸がＡｉｂで置換されている、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストが提供される。
【0070】
１つの実施形態では、ＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドは、ＤＶＸ１１ＲＹＬＱＸ１５Ｘ１６ＡＶＲＥＦＸ２３ＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－Ｒ２０（配列番号２５）（ここで、
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ２３は、Ｉｌｅ、またはｄＩｌｅであり；
Ｘ４０は、アシル化アミノ酸、場合により、スペーサーを場合により介してＣ１６～Ｃ１８脂肪酸または二酸でアシル化されたＬｙｓであり；および
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含む。場合により、配列番号２５のＧＬＰ－１アンタゴニストは、配列番号１の天然のエキセンジン４配列の番号付けと比較して１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、もしくは２８位のいずれかにおける１つもしくは複数のＡｉｂ置換、または場合により１２位におけるアシル化Ｌｙｓの置換によってさらに修飾されている。１つの実施形態では、１２位におけるアシル化Ｌｙｓの置換および２７位におけるＡｉｂの任意選択の置換をさらに含む、配列番号２５のペプチドが提供される。
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ２３は、Ｉｌｅ、またはｄＩｌｅであり；
Ｘ４０は、アシル化アミノ酸、場合により、スペーサーを場合により介してＣ１６～Ｃ１８脂肪酸または二酸でアシル化されたＬｙｓであり；および
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含む。場合により、配列番号２５のＧＬＰ－１アンタゴニストは、配列番号１の天然のエキセンジン４配列の番号付けと比較して１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、もしくは２８位のいずれかにおける１つもしくは複数のＡｉｂ置換、または場合により１２位におけるアシル化Ｌｙｓの置換によってさらに修飾されている。１つの実施形態では、１２位におけるアシル化Ｌｙｓの置換および２７位におけるＡｉｂの任意選択の置換をさらに含む、配列番号２５のペプチドが提供される。
【0071】
１つの実施形態では、ＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドは、
ＤＶＸ１１ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２（配列番号６）または
Ｘ７Ｘ８ＤＶＸ１１ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０（配列番号２６）（ここで、Ｘ７はアシル化Ｌｙｓまたはアシル化ｄＬｙｓであり、Ｘ８はＧｌｙまたはサルコシンであり、Ｘ１１はＴｒｐまたはｄＴｒｐであり、Ｘ４０はアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり、アシル化Ｌｙｓ残基は、場合によりスペーサーを介してＬｙｓ側鎖に共有結合されたＣ１６～Ｃ１８脂肪酸または二酸を含み、Ｒ２０はＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含む。場合により、配列番号６および配列番号２６のペプチドは、天然のエキセンジン４（配列番号１）の番号付けに基づく１６位、１８位、１９位、２４位、２６位もしくは２８位のいずれかにおける位置のいずれか１つにおけるＡｉｂ置換でさらに修飾されていてもよく、または配列番号６のペプチドは、１２位のアシル化Ｌｙｓで場合により置換されている。
ＤＶＸ１１ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２（配列番号６）または
Ｘ７Ｘ８ＤＶＸ１１ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０（配列番号２６）（ここで、Ｘ７はアシル化Ｌｙｓまたはアシル化ｄＬｙｓであり、Ｘ８はＧｌｙまたはサルコシンであり、Ｘ１１はＴｒｐまたはｄＴｒｐであり、Ｘ４０はアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり、アシル化Ｌｙｓ残基は、場合によりスペーサーを介してＬｙｓ側鎖に共有結合されたＣ１６～Ｃ１８脂肪酸または二酸を含み、Ｒ２０はＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含む。場合により、配列番号６および配列番号２６のペプチドは、天然のエキセンジン４（配列番号１）の番号付けに基づく１６位、１８位、１９位、２４位、２６位もしくは２８位のいずれかにおける位置のいずれか１つにおけるＡｉｂ置換でさらに修飾されていてもよく、または配列番号６のペプチドは、１２位のアシル化Ｌｙｓで場合により置換されている。
【0072】
１つの実施形態では、ＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドは、ＤＶＸ１１ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０ 配列番号６）もしくはＤＶＷＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０（配列番号７）（ここで、Ｘ１１は、ＴｒｐまたはｄＴｒｐであり、Ｘ４０は、アミノ酸の側鎖に連結されている、高親和性で血清アルブミンに結合するのに十分なサイズのアシル基を有するアミノ酸であり、場合により、アシル基はスペーサーを介して連結され、Ｒ２０は、天然のエキセンジン４（配列番号１）の番号付けと比較して１６位、１８位、１９位、２４位、２６位もしくは２８位のいずれか１つにＡｉｂ置換を場合により有するＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２であり、場合により、Ｃ末端アミノ酸のカルボキシ基はアミドで置換されている（すなわち、Ｒ２０はＣＯＮＨ２である））のアミノ酸配列、または配列番号６もしくは配列番号７と１個もしくは２個のアミノ酸置換が異なるアミノ酸を含む。１つの実施形態では、Ｘ４０は、式Ｉ（場合により、Ｌｙｓ）、式ＩＩ（場合により、Ｓｅｒ）、または式ＩＩＩ（場合により、Ｃｙｓ）の構造を含むアミノ酸である（ここで、式Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩの各々は：
【0073】
【化4】
【0074】
である）。
１つの実施形態では、ＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドは、
ＤＶＸ１１ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－ＣＯＯＨ（配列番号９）または
ＤＶＸ１１ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－ＮＨ２（配列番号１０）（ここで、Ｘ１１は、ＴｒｐまたはｄＴｒｐであり、Ｘ４０は、場合によりスペーサーを介してアミノ酸の側鎖に連結されたアシル基を有するアミノ酸である）のアミノ酸配列を含む。１つの実施形態では、Ｘ４０は、アシル化Ｌｙｓである。
１つの実施形態では、ＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドは、
ＤＶＸ１１ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－ＣＯＯＨ（配列番号９）または
ＤＶＸ１１ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－ＮＨ２（配列番号１０）（ここで、Ｘ１１は、ＴｒｐまたはｄＴｒｐであり、Ｘ４０は、場合によりスペーサーを介してアミノ酸の側鎖に連結されたアシル基を有するアミノ酸である）のアミノ酸配列を含む。１つの実施形態では、Ｘ４０は、アシル化Ｌｙｓである。
【0075】
１つの実施形態によれば、
ＤＶＷＸ１２ＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－ＮＨ２（配列番号８）（ここで、
Ｘ１２は、アシル化Ｌｙｓであり；および
Ｘ４０は、Ｃ末端カルボン酸に対するアミド置換を有するアシル化Ｌｙｓであり、アシル化Ｌｙｓのアシル基は、スペーサーを介してＬｙｓ側鎖に場合により連結されているＣ１６～Ｃ１８酸または二酸である）のアミノ酸配列を有するＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドが提供される。
ＤＶＷＸ１２ＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－ＮＨ２（配列番号８）（ここで、
Ｘ１２は、アシル化Ｌｙｓであり；および
Ｘ４０は、Ｃ末端カルボン酸に対するアミド置換を有するアシル化Ｌｙｓであり、アシル化Ｌｙｓのアシル基は、スペーサーを介してＬｙｓ側鎖に場合により連結されているＣ１６～Ｃ１８酸または二酸である）のアミノ酸配列を有するＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドが提供される。
【0076】
さらに別の態様では、本明細書に開示されたＧＬＰ－１受容体アンタゴニストのいずれかのうちの１位のアミノ酸は、ペプチドのプロテアーゼ分解を阻害するように修飾されている。１つの実施形態では、プロテアーゼの阻害は：
ｉ）Ｎ末端アミノ酸の側鎖のアシル化；
ｉｉ）Ｎ末端アミノ酸とそのＤ立体異性体との置換；
ｉｉｉ）例えば、アセチル基をアルファアミンに共有結合すること、もしくはアルファアミン基を除去することを含む、Ｎ末端アルファアミンの修飾；または
ｉｖ）ｉ）～ｉｉｉ）の任意の組み合わせ
によって達成される。
ｉ）Ｎ末端アミノ酸の側鎖のアシル化；
ｉｉ）Ｎ末端アミノ酸とそのＤ立体異性体との置換；
ｉｉｉ）例えば、アセチル基をアルファアミンに共有結合すること、もしくはアルファアミン基を除去することを含む、Ｎ末端アルファアミンの修飾；または
ｉｖ）ｉ）～ｉｉｉ）の任意の組み合わせ
によって達成される。
【0077】
１つの実施形態では、ＤＶＸ１１ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２（配列番号６）（ここで、Ｘ１１は、ＴｒｐまたはｄＴｒｐであり、Ｘ４０は、アシル化アミノ酸であり、Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）の配列を含むペプチドであって、配列番号６と比較して最大３つのアミノ酸修飾を有し、ヒトＧＬＰ－１においてアンタゴニスト活性を示す、ペプチドが提供される。
【0078】
１つの実施形態では、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストは、
ＤＶ（ｄＷ）ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号２７）
ＤＶＷＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号２８）
ＤＶ（ｄＷ）ＲＹＬＥ（Ａｉｂ）ＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号２９）
ＤＶＷＲＹＬＥ（Ａｉｂ）ＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３０）
ＤＶ（ｄＷ）ＲＹＬＥＥＱ（Ａｉｂ）ＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３１）
ＤＶＷＲＹＬＥＥＱ（Ａｉｂ）ＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３２）
ＤＶ（ｄＷ）ＲＹＬＥＥＱＡ（Ａｉｂ）ＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３３）
ＤＶＷＲＹＬＥＥＱＡ（Ａｉｂ）ＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３４）
ＤＶ（ｄＷ）ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩ（Ａｉｂ）ＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３５）
ＤＶＷＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩ（Ａｉｂ）ＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３６）
ＤＶ（ｄＷ）ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷ（Ａｉｂ）ＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３７）
ＤＶＷＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷ（Ａｉｂ）ＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３８）
ＤＶ（ｄＷ）ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶ（Ａｉｂ）ＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３９）
ＤＶＷＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶ（Ａｉｂ）ＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号４０）
ＤＶ（ｄＷ）ＲＹＬＥＥＱＡＶ（ｄＲ）ＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号４１）
ＤＶＷＲＹＬＥＥＱＡＶ（ｄＲ）ＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号４２）、
（ここで、Ｘ４０は、アシル化アミノ酸、場合により、Ｃ１６～Ｃ１８脂肪酸または二酸でアシル化されたＬｙｓであり、Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）からなる群から選択されるペプチドを含み、ペプチドは、ヒトＧＬＰ－１においてアンタゴニスト活性を示す。
ＤＶ（ｄＷ）ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号２７）
ＤＶＷＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号２８）
ＤＶ（ｄＷ）ＲＹＬＥ（Ａｉｂ）ＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号２９）
ＤＶＷＲＹＬＥ（Ａｉｂ）ＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３０）
ＤＶ（ｄＷ）ＲＹＬＥＥＱ（Ａｉｂ）ＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３１）
ＤＶＷＲＹＬＥＥＱ（Ａｉｂ）ＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３２）
ＤＶ（ｄＷ）ＲＹＬＥＥＱＡ（Ａｉｂ）ＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３３）
ＤＶＷＲＹＬＥＥＱＡ（Ａｉｂ）ＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３４）
ＤＶ（ｄＷ）ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩ（Ａｉｂ）ＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３５）
ＤＶＷＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩ（Ａｉｂ）ＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３６）
ＤＶ（ｄＷ）ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷ（Ａｉｂ）ＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３７）
ＤＶＷＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷ（Ａｉｂ）ＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３８）
ＤＶ（ｄＷ）ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶ（Ａｉｂ）ＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号３９）
ＤＶＷＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶ（Ａｉｂ）ＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号４０）
ＤＶ（ｄＷ）ＲＹＬＥＥＱＡＶ（ｄＲ）ＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号４１）
ＤＶＷＲＹＬＥＥＱＡＶ（ｄＲ）ＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０ Ｒ２０、（配列番号４２）、
（ここで、Ｘ４０は、アシル化アミノ酸、場合により、Ｃ１６～Ｃ１８脂肪酸または二酸でアシル化されたＬｙｓであり、Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）からなる群から選択されるペプチドを含み、ペプチドは、ヒトＧＬＰ－１においてアンタゴニスト活性を示す。
【0079】
本開示の追加の例示される種としては、表１にリストされたものが挙げられる：
【0080】
【表1-1】
【0081】
【表1-2】
【0082】
【表1-3】
【0083】
【表1-4】
【0084】
【表1-5】
【0085】
【表1-6】
【0086】
１つの実施形態では、ホモもしくはヘテロ多量体またはホモもしくはヘテロ二量体を含む、本開示の２つ以上のＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドを含む二量体および多量体が調製される。２つ以上のＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドは、当業者に公知の標準的な連結剤および手順を使用して結合させることができる。例えば、特にシステイン、リジン、オルニチン、ホモシステインもしくはアセチルフェニルアラニン残基を含むかまたはこれらで置換されたＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドに関して、二量体は、二官能性チオール架橋剤および二官能性アミン架橋剤の使用により２つのペプチド間で形成することができる。二量体は、ホモ二量体であってもよく、またはあるいはヘテロ二量体であってもよい。例示的な実施形態では、２つ（またはそれ以上）の類似体を連結するリンカーは、ＰＥＧ、例えば、５ｋＤａ ＰＥＧ、２０ｋＤａ ＰＥＧである。いくつかの実施形態では、リンカーはジスルフィド結合である。例えば、二量体の各単量体は、Ｃｙｓ残基（例えば、末端Ｃｙｓまたは内部に位置するＣｙｓ）を含んでもよく、各Ｃｙｓ残基の硫黄原子は、ジスルフィド結合の形成に関与する。例示的な態様では、二量体の各単量体はチオエーテル結合を介して連結されている。例示的な態様では、一方の単量体のＬｙｓ残基のイプシロンアミンがＣｙｓ残基に結合され、Ｃｙｓ残基は今度は、化学的部分を介して他方の単量体のＬｙｓ残基のイプシロンアミンに連結されている。
【0087】
いくつかの実施形態では、単量体は、末端アミノ酸を介して（例えば、Ｎ末端またはＣ末端、場合により、アミノ酸は二量体化するようにペプチドの末端に付加される）、内部アミノ酸を介して、または少なくとも１つの単量体の末端アミノ酸および少なくとも１つの他の単量体の内部アミノ酸を介して連結されている。いくつかの実施形態では、多量体の単量体は、「尾－尾（ｔａｉｌ－ｔｏ－ｔａｉｌ）」配向で結合されており、ここで、各単量体のＣ末端アミノ酸が互いに結合されている。あるいは、１つの実施形態では、「頭－頭（ｈｅａｄ－ｔｏ－ｈｅａｄ）」配向で結合されており、ここで、多量体は、各単量体のＮ末端アミノ酸が互いに結合されている。
【0088】
１つの実施形態では、本明細書に開示されたＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドのいずれかのうちのＣ末端アミノ酸は、天然のカルボキシル基をアミドと置き換えるように修飾されていてもよい。１つの実施形態では、本明細書に開示されたＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドのいずれかのうちのＣ末端アミノ酸は、天然のアミノ酸カルボキシル基を含む。
医薬組成物
本開示のＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチド、二量体、多量体、またはコンジュゲート（またはそれらの組み合わせ）のうちのいずれか、および薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物が本開示によってさらに提供される。医薬組成物は、好ましくは滅菌されており、非経口投与に適している。
医薬組成物
本開示のＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチド、二量体、多量体、またはコンジュゲート（またはそれらの組み合わせ）のうちのいずれか、および薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物が本開示によってさらに提供される。医薬組成物は、好ましくは滅菌されており、非経口投与に適している。
【0089】
１つの実施形態によれば、好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の純度レベルの、本明細書に開示された新規のＧＬＰ－１受容体アンタゴニストのいずれか、および薬学的に許容される希釈剤、担体または賦形剤を含む医薬組成物が提供される。そのような組成物は、本明細書に開示のＧＬＰ－１受容体アンタゴニストを少なくとも０．１～１０ｍｇ／ｍｌ、またはそれ以上の濃度で含有し得る。１つの実施形態では、医薬組成物は、滅菌され場合により様々な包装容器内に保管された水溶液を含む。他の実施形態では、医薬組成物は凍結乾燥粉末を含む。医薬組成物は、組成物を患者に投与するための使い捨てデバイスを含むキットの一部としてさらに包装されてもよい。容器またはキットは、周囲の室温または冷蔵温度での貯蔵用に標識されてもよい。１つの実施形態では、医薬組成物および／またはキットは、本明細書に開示されたＧＬＰ－１受容体アンタゴニストのいずれかを、限定されるものではないが、グルコースサプリメント（例えば、デキストロース）；グルカゴンおよびグルカゴン類似体などのグルコース上昇剤ならびにインスリン分泌阻害剤（例えば、ジアゾキシド、オクトレオチド）を含む、低血糖の処置に有用な任意の既存の治療薬と組み合わせて含む。
【0090】
１つの実施形態によれば、本明細書に開示された医薬組成物は、低血糖の状態を処置または予防する方法、より具体的には非定型低血糖、または低血糖に関連する医学的状態を処置もしくは予防する方法で使用するために企図される。
【0091】
本開示の組成物は、任意の標準的な投与経路を使用して投与することができる。非経口投与に適した製剤としては、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、および意図されるレシピエントの血液と製剤を等張性にする溶質を含有し得る水性および非水性、等張性滅菌注射溶液、ならびに懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、および保存料を含み得る水性および非水性滅菌懸濁剤が挙げられる。用語「非経口」は、消化管は通さないが、皮下、筋肉内、脊髄内、または静脈内などのいくつかの他の経路によることを意味する。１つの実施形態では、本開示のＧＬＰ－１受容体アンタゴニストを含む医薬組成物は、皮下投与または静脈内投与用に製剤化される。１つの実施形態では、本開示のＧＬＰ－１受容体アンタゴニストは、単独でまたは他の適切な成分と組み合わせて、吸入により投与されるエアロゾル製剤として調製されてもよい。
【0092】
１つの実施形態では、組成物は、本開示のＧＬＰ－１受容体アンタゴニストと、ペプチドアンタゴニストの吸収を十分に増強することができる吸収促進剤との共製剤による経口送達用に製剤化される。Ｎ－［８－（２－ヒドロキシベンゾイル）アミノ］カプリル酸ナトリウム（ＳＮＡＣ）は、インスリン、ＧＬＰ－１、カルシトニンなどのペプチド、およびヘパリンなどの他の巨大分子を含む、多様なスペクトルの分子の透過性を増大することが報告されている送達剤である。１つの実施形態によれば、本開示のＧＬＰ－１受容体アンタゴニストおよびＳＮＡＣを含み、場合により錠剤として製剤化される医薬組成物が経口送達用に提供される。
アシル化
１つの実施形態によれば、ＧＬＰ－１アンタゴニスト活性を示す本明細書に開示されたペプチド、二量体または多量体のうちのいずれかは、例えばヒト（ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）を含む温血哺乳動物に投与される場合、治療指数が改善し、インビボでの作用時間が延長するようにさらに修飾されていてもよい。より具体的には、１つの実施形態では、本明細書に開示されたペプチドおよび二量体は、高親和性で血清アルブミンに結合するのに十分なサイズのアルキル基またはアシル基の、アンタゴニストペプチドのアミノ酸（場合によりリジン、セリンまたはシステイン）の側鎖への共有結合によって修飾されている。１つの実施形態では、アルキル化またはアシル化アミノ酸は、ＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドまたは二量体のＣ末端に位置する。１つの実施形態では、ＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドは、２つのアシル化アミノ酸を含む。１つの実施形態では、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドのアミノ酸の１つまたは複数は、脂肪酸または脂肪二酸、場合によりＣ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸でアシル化されている。１つの実施形態によれば、本明細書に開示されたＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドまたは二量体の１つまたは複数のリジン残基は、場合によりスペーサーを介したリジンの側鎖へのＣ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸の共有結合によって修飾されている。１つの実施形態では、アシル化リジン残基は、ＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドのＣ末端アミノ酸である。１つの実施形態では、アシル化アミノ酸は、ＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドの４０位、および７位または１２位から選択される２番目の位置に存在する。２つ以上のアシル化アミノ酸を有する実施形態では、アシル化アミノ酸は同じかまたは異なっていてもよく、連結されているアシル基は、アシル基が血清アルブミンに結合するのに十分なサイズであるという条件で同じかまたは異なっていてもよい。１つの実施形態では、アシル化アミノ酸は、側鎖が場合によりスペーサーを介してＣ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸に連結されているリジンである。
アシル化
１つの実施形態によれば、ＧＬＰ－１アンタゴニスト活性を示す本明細書に開示されたペプチド、二量体または多量体のうちのいずれかは、例えばヒト（ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）を含む温血哺乳動物に投与される場合、治療指数が改善し、インビボでの作用時間が延長するようにさらに修飾されていてもよい。より具体的には、１つの実施形態では、本明細書に開示されたペプチドおよび二量体は、高親和性で血清アルブミンに結合するのに十分なサイズのアルキル基またはアシル基の、アンタゴニストペプチドのアミノ酸（場合によりリジン、セリンまたはシステイン）の側鎖への共有結合によって修飾されている。１つの実施形態では、アルキル化またはアシル化アミノ酸は、ＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドまたは二量体のＣ末端に位置する。１つの実施形態では、ＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドは、２つのアシル化アミノ酸を含む。１つの実施形態では、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドのアミノ酸の１つまたは複数は、脂肪酸または脂肪二酸、場合によりＣ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸でアシル化されている。１つの実施形態によれば、本明細書に開示されたＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドまたは二量体の１つまたは複数のリジン残基は、場合によりスペーサーを介したリジンの側鎖へのＣ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸の共有結合によって修飾されている。１つの実施形態では、アシル化リジン残基は、ＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドのＣ末端アミノ酸である。１つの実施形態では、アシル化アミノ酸は、ＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドの４０位、および７位または１２位から選択される２番目の位置に存在する。２つ以上のアシル化アミノ酸を有する実施形態では、アシル化アミノ酸は同じかまたは異なっていてもよく、連結されているアシル基は、アシル基が血清アルブミンに結合するのに十分なサイズであるという条件で同じかまたは異なっていてもよい。１つの実施形態では、アシル化アミノ酸は、側鎖が場合によりスペーサーを介してＣ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸に連結されているリジンである。
【0093】
１つの実施形態では、Ｃ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸は、ｍｉｎｉＰＥＧ、ガンマＧｌｕ、またはｍｉｎｉＰＥＧおよび／もしくはガンマＧｌｕの任意の多量体もしくは組み合わせを含むスペーサーを介して、アミノ酸の側鎖に連結されている。１つの実施形態では、本明細書に開示されたＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドのいずれかは、エキセンジン４の天然の配列に関して場合により７、１２および４０から選択される位置にアシル化アミノ酸を含むように修飾されていてもよい。１つの実施形態では、アシル化アミノ酸は、構造：
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－
（ここで、ｋは、２、４、６または８から選択される整数であり、ｐおよびｑは、独立して１または２から選択される整数である）を含むスペーサーを介してリジン側鎖に連結されたＣ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸を有するリジン残基である。１つの実施形態では、スペーサーは、
－（ガンマグルタミン酸）－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］２－（ガンマグルタミン酸）－、または
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－、または
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］２－（ガンマグルタミン酸）２－、または
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］－（ガンマグルタミン酸）２－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］－、または
－（ガンマグルタミン酸）２－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］２、または
－（ガンマグルタミン酸）－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］－（ガンマグルタミン酸）ｐ－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］－、またはガンマグルタミン酸、またはガンマグルタミン酸－ガンマグルタミン酸ジペプチド、またはガンマグルタミン酸－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］－ガンマグルタミン酸（ここで、
ｋは、１～８の範囲から選択される整数であり；ならびに
ｑおよびｐは、独立して１～８の範囲から選択される整数であり、場合により、ｋは２であり、ｑおよびｐは、独立して１または２である）からなる群から選択される。１つの実施形態では、スペーサーは、
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－（ここで、
ｋは、１～４の範囲から選択される整数であり；ならびに
ｑおよびｐは、独立して１～４の範囲から選択される整数であり、場合により、ｋは２であり、ｑおよびｐは、独立して１または２であり、場合により、ｋは２であり、ｑおよびｐは両方とも１である）である。
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－
（ここで、ｋは、２、４、６または８から選択される整数であり、ｐおよびｑは、独立して１または２から選択される整数である）を含むスペーサーを介してリジン側鎖に連結されたＣ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸を有するリジン残基である。１つの実施形態では、スペーサーは、
－（ガンマグルタミン酸）－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］２－（ガンマグルタミン酸）－、または
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－、または
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］２－（ガンマグルタミン酸）２－、または
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］－（ガンマグルタミン酸）２－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］－、または
－（ガンマグルタミン酸）２－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］２、または
－（ガンマグルタミン酸）－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］－（ガンマグルタミン酸）ｐ－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］－、またはガンマグルタミン酸、またはガンマグルタミン酸－ガンマグルタミン酸ジペプチド、またはガンマグルタミン酸－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］－ガンマグルタミン酸（ここで、
ｋは、１～８の範囲から選択される整数であり；ならびに
ｑおよびｐは、独立して１～８の範囲から選択される整数であり、場合により、ｋは２であり、ｑおよびｐは、独立して１または２である）からなる群から選択される。１つの実施形態では、スペーサーは、
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－（ここで、
ｋは、１～４の範囲から選択される整数であり；ならびに
ｑおよびｐは、独立して１～４の範囲から選択される整数であり、場合により、ｋは２であり、ｑおよびｐは、独立して１または２であり、場合により、ｋは２であり、ｑおよびｐは両方とも１である）である。
【0094】
１つの実施形態では、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドは、場合によりペプチドのＣ末端に位置するアシル化Ｌｙｓを含み、Ｌｙｓの側鎖は、構造：－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－（ここで、
ｋは、１～４の範囲から選択される整数であり；ならびに
ｑおよびｐは、独立して１～４の範囲から選択される整数である、場合により、ｋは２であり、ｑおよびｐは、独立して１または２である、場合により、ｋは２であり、ｑおよびｐは両方とも１である）を含むスペーサーを介してＣ１６～Ｃ１８二酸でアシル化されている。１つの実施形態では、アシル化Ｌｙｓの側鎖は、構造－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－ＣＯＣ１６Ｈ３２ＣＯ２Ｈ（ここで、ｋは２であり、ｐおよびｑは、独立して１または２である）を含む。１つの実施形態では、
ＤＶ（ｄＷ）ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０、（配列番号２７）または
ＤＶＷＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０、（配列番号２８）（ここで、
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２であり、Ｘ４０は、－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－ＣＯＣ１４Ｈ２８ＣＯ２Ｈまたは－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－ＣＯＣ１６Ｈ３２ＣＯ２Ｈでアシル化されたＬｙｓであり、ｋは２であり、ｐおよびｑは、独立して１または２である）の配列を含むＧＬＰ－１受容体アンタゴニストが提供される。
コンジュゲート
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されたＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドのいずれか１つは、免疫グロブリンまたはその部分（例えば、可変領域、ＣＤＲ、またはＦｃ領域）にコンジュゲートされる。免疫グロブリン（Ｉｇ）の既知のタイプとしては、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤまたはＩｇＭが挙げられる。Ｆｃ領域は、再循環（半減期の延長をもたらす）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの活性を実行するＦｃ受容体への結合に関与する、Ｉｇ重鎖のＣ末端領域である。
ｋは、１～４の範囲から選択される整数であり；ならびに
ｑおよびｐは、独立して１～４の範囲から選択される整数である、場合により、ｋは２であり、ｑおよびｐは、独立して１または２である、場合により、ｋは２であり、ｑおよびｐは両方とも１である）を含むスペーサーを介してＣ１６～Ｃ１８二酸でアシル化されている。１つの実施形態では、アシル化Ｌｙｓの側鎖は、構造－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－ＣＯＣ１６Ｈ３２ＣＯ２Ｈ（ここで、ｋは２であり、ｐおよびｑは、独立して１または２である）を含む。１つの実施形態では、
ＤＶ（ｄＷ）ＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０、（配列番号２７）または
ＤＶＷＲＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０、（配列番号２８）（ここで、
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２であり、Ｘ４０は、－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－ＣＯＣ１４Ｈ２８ＣＯ２Ｈまたは－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－ＣＯＣ１６Ｈ３２ＣＯ２Ｈでアシル化されたＬｙｓであり、ｋは２であり、ｐおよびｑは、独立して１または２である）の配列を含むＧＬＰ－１受容体アンタゴニストが提供される。
コンジュゲート
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されたＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドのいずれか１つは、免疫グロブリンまたはその部分（例えば、可変領域、ＣＤＲ、またはＦｃ領域）にコンジュゲートされる。免疫グロブリン（Ｉｇ）の既知のタイプとしては、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤまたはＩｇＭが挙げられる。Ｆｃ領域は、再循環（半減期の延長をもたらす）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの活性を実行するＦｃ受容体への結合に関与する、Ｉｇ重鎖のＣ末端領域である。
【0095】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されたＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドのいずれか１つは、親水性部分にコンジュゲートされる。親水性部分は、タンパク質を活性化ポリマー分子と反応させるのに使用される任意の適切な条件下で、ＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドに共有結合することができる。水溶性ポリマーを１つまたは複数のタンパク質に連結するのに使用され得る活性化基としては、スルホン、マレイミド、スルフヒドリル、チオール、トリフレート、トレシレート（ｔｒｅｓｙｌａｔｅ）、アジリジン、オキシラン、５－ピリジル、およびアルファ－ハロゲン化アシル基（例えば、アルファ－ヨード酢酸、アルファ－ブロモ酢酸、アルファ－クロロ酢酸）が挙げられるが、これらに限定されない。還元的アルキル化によってペプチドに結合されるならば、選択されるポリマーは、重合の程度が制御されるように単一の反応性アルデヒドを有するべきである。例えば、Ｋｉｎｓｔｌｅｒら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．５４：４７７～４８５頁（２００２）；Ｒｏｂｅｒｔｓら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．５４：４５９～４７６頁（２００２）；およびＺａｌｉｐｓｋｙら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１６：１５７～１８２頁（１９９５）を参照のこと。
【0096】
適切な親水性部分としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、ＰＯＧ）、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、ポリオキシエチル化グリセロール（ＰＯＧ）、ポリオキシアルキレン、ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒド、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、モノメトキシ－ポリエチレングリコール、モノ－（Ｃ１～Ｃ１０）アルコキシ－もしくはアリールオキシ－ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロース、ポリアセタール、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリ（ベータ－アミノ酸）（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、ポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー（ＰＰＧ）および他のポリアルキレンオキシド、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、コラン酸または他の多糖ポリマー、フィコールもしくはデキストランならびにそれらの混合物が挙げられる。デキストランは、α１－６結合によって主に連結されているグルコースサブユニットの多糖ポリマーである。デキストランは、多くの分子量範囲、例えば、約１ｋＤ～約１００ｋＤ、または約５、１０、１５もしくは２０ｋＤ～約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０もしくは９０ｋＤで利用可能である。１つの実施形態では、親水性部分、例えば、ポリエチレングリコール鎖は、約５００～約４０，０００ダルトンの範囲から選択される分子量を有する。いくつかの実施形態では、親水性部分は、約５００～約５，０００ダルトン、または約１，０００～約５，０００ダルトンの範囲から選択される分子量を有するポリエチレングリコール鎖である。別の実施形態では、親水性部分、例えば、ポリエチレングリコール鎖は、約１０，０００～約２０，０００ダルトンの分子量を有する。
【0097】
１つの実施形態では、ジペプチドが配列番号５または配列番号２３のペプチドのＮ末端にペプチド結合を介して共有結合され、場合により、ジペプチドのアミノ酸の１つがアシル化アミノ酸である、配列番号５または配列番号２３のペプチドのコンジュゲート誘導体が提供される。１つの実施形態では、ジペプチドは、Ｘ７Ｘ８の構造を有する（ここで、Ｘ７はアシル化アミノ酸であり、Ｘ８は任意のアミノ酸である、場合により、Ｘ７はアシル化ＬｙｓまたはｄＬｙｓであり、Ｘ８はＧｌｙまたはＣ１～Ｃ４ Ｎ－アルキル化Ｇｌｙである、場合により、Ｘ７はＣ１４～Ｃ２０脂肪酸または脂肪二酸でアシル化されたＬｙｓまたはｄＬｙｓであり、Ｘ８はＧｌｙまたはＣ１～Ｃ４ Ｎ－アルキル化Ｇｌｙ（場合によりＧｌｙまたはサルコシン）である、場合により、Ｘ７は、本明細書に開示されたスペーサーのいずれかを介してＣ１４～Ｃ２０脂肪酸または脂肪二酸でアシル化されたＬｙｓであり、Ｘ８はＣ１～Ｃ４ Ｎ－アルキル化Ｇｌｙ（場合によりＧｌｙまたはサルコシン）である）。
【0098】
１つの実施形態によれば、自己切断ジペプチドが、本明細書に開示されたＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドのアミノ酸側鎖アミンまたはＮ末端アルファアミンにアミド結合を介して共有結合されている、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドのいずれかのうちのコンジュゲート誘導体が提供される。１つの実施形態では、自己切断ジペプチドは、ＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドのＮ末端アルファアミンに共有結合されている。
【0099】
例示的な態様では、自己切断ジペプチドは、構造：Ａ－Ｂ（ここで、Ａは、アミノ酸またはヒドロキシ酸であり；Ｂは、Ａ－ＢとＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドのアミンの間のアミド結合を通じてＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドに連結されているＮ－アルキル化アミノ酸である）を含み、場合により、ＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドからのＡ－Ｂの化学的切断半減期（ｔ１／２）は、生理的条件下、ＰＢＳ中で少なくとも約１時間～約１週間である。本明細書で使用される場合、用語「ヒドロキシ酸」とは、アルファ炭素アミノ基をヒドロキシル基と置き換えるように修飾されているアミノ酸を指す。
【0100】
いくつかの実施形態では、自己切断ジペプチドは、
【0101】
【化5】
【0102】
（ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ８は、独立してＨ、Ｃ１～Ｃ１８アルキル、Ｃ２～Ｃ１８アルケニル、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＳＨ、（Ｃ２～Ｃ３アルキル）ＳＣＨ３、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ２ ＋）ＮＨ２、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ２～Ｃ５複素環）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ６～Ｃ１０アリール）Ｒ７、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ９ヘテロアリール）、およびＣ１～Ｃ１２アルキル（Ｗ１）Ｃ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、Ｗ１は、Ｎ、ＳおよびＯからなる群から選択されるヘテロ原子であり；
Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ１８アルキル、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＳＨ、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ２～Ｃ５複素環）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ６～Ｃ１０アリール）Ｒ７、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ９ヘテロアリール）からなる群から選択されるか、またはＲ４およびＲ３は、これらが結合する原子と一緒にピロリジン環を形成し；
Ｒ５は、ＮＨＲ６またはＯＨであり；
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ８アルキルであり；ならびに
Ｒ７は、ＨおよびＯＨからなる群から選択される）の一般構造を有し、
前記ＧＬＰ－１アンタゴニストからのＡ－Ｂの化学的切断半減期（ｔ１／２）は、生理的条件下、ＰＢＳ中で少なくとも約１時間～約１週間である。１つの実施形態では、ジペプチドＡ－Ｂは、ＧＬＰ－１アンタゴニストアミノ酸配列のＮ末端アルファアミンに共有結合されている。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ８は、独立してＨ、Ｃ１～Ｃ１８アルキル、Ｃ２～Ｃ１８アルケニル、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＳＨ、（Ｃ２～Ｃ３アルキル）ＳＣＨ３、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ２ ＋）ＮＨ２、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ２～Ｃ５複素環）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ６～Ｃ１０アリール）Ｒ７、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ９ヘテロアリール）、およびＣ１～Ｃ１２アルキル（Ｗ１）Ｃ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、Ｗ１は、Ｎ、ＳおよびＯからなる群から選択されるヘテロ原子であり；
Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ１８アルキル、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＳＨ、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ２～Ｃ５複素環）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ６～Ｃ１０アリール）Ｒ７、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ９ヘテロアリール）からなる群から選択されるか、またはＲ４およびＲ３は、これらが結合する原子と一緒にピロリジン環を形成し；
Ｒ５は、ＮＨＲ６またはＯＨであり；
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ８アルキルであり；ならびに
Ｒ７は、ＨおよびＯＨからなる群から選択される）の一般構造を有し、
前記ＧＬＰ－１アンタゴニストからのＡ－Ｂの化学的切断半減期（ｔ１／２）は、生理的条件下、ＰＢＳ中で少なくとも約１時間～約１週間である。１つの実施形態では、ジペプチドＡ－Ｂは、ＧＬＰ－１アンタゴニストアミノ酸配列のＮ末端アルファアミンに共有結合されている。
【0103】
１つの実施形態では、自己切断ジペプチドは、
【0104】
【化6】
【0105】
（ここで、
Ｒ１およびＲ８は、独立してＨまたはＣ１～Ｃ８アルキルであり；
Ｒ２およびＲ４は、独立してＨ、Ｃ１～Ｃ８アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＳＨ、（Ｃ２～Ｃ３アルキル）ＳＣＨ３、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ６アリール）Ｒ７からなる群から選択され；
Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５は、ＮＨ２であり；および
Ｒ７は、水素、およびＯＨからなる群から選択される）の一般構造を有する。
Ｒ１およびＲ８は、独立してＨまたはＣ１～Ｃ８アルキルであり；
Ｒ２およびＲ４は、独立してＨ、Ｃ１～Ｃ８アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＳＨ、（Ｃ２～Ｃ３アルキル）ＳＣＨ３、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ６アリール）Ｒ７からなる群から選択され；
Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５は、ＮＨ２であり；および
Ｒ７は、水素、およびＯＨからなる群から選択される）の一般構造を有する。
【0106】
１つの実施形態によれば、本明細書に開示されたＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドおよび二量体のうちのいずれかは、自己切断ジペプチドへの結合によってさらに修飾されていてもよく、ジペプチドのアミノ酸は、高親和性で血清アルブミンに結合するのに十分なサイズの脂肪アシル基でアシル化されている。
【0107】
１つの実施形態では、自己切断ジペプチド「Ａ－Ｂ」のアミノ酸「Ａ」は、Ｃ１６～Ｃ３０脂肪酸またはＣ１６～Ｃ３０二酸でアシル化されたリジン残基である。１つの実施形態では、ＡおよびＢは、生理的条件下、標準的なＰＢＳ溶液中で少なくとも約２４時間～約２４０時間、約４８時間～約１６８時間、または約４８～約１２０時間、または約７０～約１００時間の本明細書に開示されたＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドまたは二量体からのＡ－Ｂの化学的切断半減期（ｔ１／２）を提供するように選択される。
【0108】
１つの実施形態では、自己切断ジペプチドは、
【0109】
【化7】
【0110】
（ここで、
Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ８アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＳＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２からなる群から選択される側鎖を含み、場合により、Ｃ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８二酸は、ガンマグルタミン酸、ガンマグルタミン酸－ガンマグルタミン酸ジペプチド、－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ、およびガンマグルタミン酸－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－ガンマグルタミン酸からなる群から選択されるスペーサーを含む、本明細書に開示されたスペーサーのいずれかを場合により介して前記側鎖に共有結合され、
ｋは、１～８の範囲から選択される整数であり；および
ｑおよびｐは、独立して１～８の範囲から選択される整数であり、場合により、ｋは２であり、ｑおよびｐは、独立して１または２であり；
Ｒ２、Ｒ４およびＲ８は、独立してＨ、またはＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ６アルキルであり；ならびに
Ｒ５は、ＮＨ２である）の一般構造を有する。
Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ８アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＳＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２からなる群から選択される側鎖を含み、場合により、Ｃ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８二酸は、ガンマグルタミン酸、ガンマグルタミン酸－ガンマグルタミン酸ジペプチド、－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ、およびガンマグルタミン酸－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－ガンマグルタミン酸からなる群から選択されるスペーサーを含む、本明細書に開示されたスペーサーのいずれかを場合により介して前記側鎖に共有結合され、
ｋは、１～８の範囲から選択される整数であり；および
ｑおよびｐは、独立して１～８の範囲から選択される整数であり、場合により、ｋは２であり、ｑおよびｐは、独立して１または２であり；
Ｒ２、Ｒ４およびＲ８は、独立してＨ、またはＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ６アルキルであり；ならびに
Ｒ５は、ＮＨ２である）の一般構造を有する。
【0111】
１つの実施形態では、自己切断ジペプチドは、
【0112】
【化8】
【0113】
（ここで、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨまたは（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２であり；
Ｒ２は、Ｈであり、
Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ、またはＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ５は、ＮＨ２であり；および
Ｒ８は、水素である）の一般構造を有する。
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨまたは（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２であり；
Ｒ２は、Ｈであり、
Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ、またはＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ５は、ＮＨ２であり；および
Ｒ８は、水素である）の一般構造を有する。
【0114】
１つの実施形態によれば、自己切断ジペプチドＡ－Ｂは、「Ａ」としてのアシル化アミノ酸残基および「Ｂ」としてのＮ－アルキル化Ｇｌｙ残基を含み、「Ｂ」アミノ酸は、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストペプチドのＮ末端アルファアミンにアミド結合を介して連結され、場合により、前記Ｌｙｓ残基はＤ－立体構造である。１つの実施形態では、Ａ－Ｂジペプチドのアシル化アミノ酸「Ａ」は、
【0115】
【化9】
【0116】
（ここで、ｎは、１～４の範囲から選択される整数であり、Ｒ５０は、ＮＨ－ＣＯ（ＣＨ２）１４～２０ＣＯＯＨ、ＮＨ－［スペーサー］－ＣＯ（ＣＨ２）１４～２０ＣＯＯＨ、Ｓ（ＣＨ２）１４～２０ＣＯＯＨおよびＳ－［スペーサー］－ＣＯ（ＣＨ２）１４～２０ＣＯＯＨからなる群から選択され、［スペーサー］は、本明細書に開示されたスペーサーのいずれかである）の一般構造を有するアミノ酸である。１つの実施形態では、Ａのアシル化アミノ酸は、独立して、リジン、ｄ－リジン、オルニチン、システインまたはホモシステインから選択され、前記アシル化アミノ酸の側鎖は、場合によりアミノ酸またはジペプチドを含むスペーサーを通じて、Ｃ１６～Ｃ２２脂肪酸またはＣ１６～Ｃ２２二酸に共有結合されている。１つの実施形態では、スペーサーは、ガンマグルタミン酸を含む。１つの実施形態では、スペーサーは、ガンマグルタミン酸およびｍｉｎｉＰＥＧポリマーの複数の単位を任意の組み合わせで含む。１つの実施形態では、任意選択のスペーサーは、２つのガンマグルタミン酸を含み、場合により、２つのガンマグルタミン酸は、介在官能基化ｍｉｎｉＰＥＧポリマー、［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＨＮ］ｑ（ここで、ｋおよびｑは、独立してそれぞれ１、２、３、４、５、６、７または８から選択される整数である）を介して互いに連結されている。
【0117】
１つの実施形態では、自己切断ジペプチドは、
【0118】
【化10】
【0119】
（ここで、
Ｒ１は、（Ｃ４アルキル）ＮＨ２または（Ｃ４アルキル）ＮＨ（ｍＰｅｇ－γＥ－二酸）－Ｃ１８であり；
Ｒ２、Ｒ４およびＲ８は、それぞれＨであり；
Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり；ならびに
Ｒ５は、ＮＨ２である）の一般構造を有し、場合により、自己切断ジペプチドの第１のアミノ酸はＤ－立体構造である。
Ｒ１は、（Ｃ４アルキル）ＮＨ２または（Ｃ４アルキル）ＮＨ（ｍＰｅｇ－γＥ－二酸）－Ｃ１８であり；
Ｒ２、Ｒ４およびＲ８は、それぞれＨであり；
Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり；ならびに
Ｒ５は、ＮＨ２である）の一般構造を有し、場合により、自己切断ジペプチドの第１のアミノ酸はＤ－立体構造である。
【0120】
１つの実施形態では、本明細書に開示されたＧＬＰ－１アンタゴニストペプチドおよび二量体は、
【0121】
【化11】
【0122】
（ここで、
Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ１８アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＳＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２からなる群から選択される側鎖であり、場合により、Ｃ１６～Ｃ２０脂肪酸またはＣ１６～Ｃ２０二酸は前記側鎖に共有結合され；
Ｒ２、Ｒ４およびＲ８は、独立してＨ、またはＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ４アルキルか、またはＲ４およびＲ３は、これらが結合する原子と一緒にピロリジン環を形成し；ならびに
Ｒ５は、Ｒ４およびＲ３がそれらが結合する原子と一緒にピロリジン環を形成する場合、Ｒ２はＨではないという条件でＮＨ２である）の構造の自己切断ジペプチドに共有結合されている。
Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ１８アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＳＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２からなる群から選択される側鎖であり、場合により、Ｃ１６～Ｃ２０脂肪酸またはＣ１６～Ｃ２０二酸は前記側鎖に共有結合され；
Ｒ２、Ｒ４およびＲ８は、独立してＨ、またはＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ４アルキルか、またはＲ４およびＲ３は、これらが結合する原子と一緒にピロリジン環を形成し；ならびに
Ｒ５は、Ｒ４およびＲ３がそれらが結合する原子と一緒にピロリジン環を形成する場合、Ｒ２はＨではないという条件でＮＨ２である）の構造の自己切断ジペプチドに共有結合されている。
【0123】
さらなる実施形態では、自己切断ジペプチドは、
【0124】
【化12】
【0125】
（ここで、Ｒ１は、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ－ＣＯ（ＣＨ２）１４～２０ＣＨ３、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ－［スペーサー］－ＣＯ（ＣＨ２）１４～２０ＣＨ３、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ－ＣＯ（ＣＨ２）１４～２０ＣＯＯＨであり；Ｒ２およびＲ８は、それぞれＨであり；Ｒ４は、ＨまたはＣＨ３であり；Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり、Ｒ５は、ＮＨ２である）の構造を有し、場合により、自己切断ジペプチドの第１のアミノ酸はＤ－立体化学的配置のアミノ酸であり、スペーサーは、本明細書に開示されたスペーサーのいずれかから選択される。１つの実施形態では、Ｒ２、Ｒ４およびＲ８はそれぞれＨである。１つの実施形態では、Ｒ１は（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ－ＣＯ（ＣＨ２）１６ＣＯＯＨ、または（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ－［スペーサー］－（ＣＨ２）１６ＣＯＯＨであり、Ｒ２、Ｒ４およびＲ８はそれぞれＨであり、Ｒ３はＣ１～Ｃ４アルキル、場合によりＣＨ３であり、場合により、スペーサーは、構造：
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－
（ここで、ｋは２であり、ｐおよびｑは、独立して１または２から選択される整数である）を含む。
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－
（ここで、ｋは２であり、ｐおよびｑは、独立して１または２から選択される整数である）を含む。
【0126】
１つの実施形態によれば、自己切断ジペプチドは、第１のアミノ酸としてアシル化アミノ酸を含み、アシル化アミノ酸の側鎖は、Ｃ１６～Ｃ２０脂肪酸またはＣ１６～Ｃ２０二酸でアシル化され、場合により、アシル化アミノ酸は、Ｃ１６～Ｃ２０アシル化リジン、Ｃ１６～Ｃ２０アシル化オルニチン、Ｃ１６～Ｃ２０アシル化システインおよびＣ１６～Ｃ２０アシル化ホモシステインから選択され、場合により、ジペプチドのアシル化アミノ酸はＣ１６～Ｃ２０アシル化Ｌｙｓであり、場合により、自己切断ジペプチドの第１のアミノ酸はＤ－立体化学的配置のアミノ酸である。
実施形態
実施形態１によれば、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストであって、
Ｒ１０－ＤＶＸ１１Ｘ１２ＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＸ１９Ｘ２０ＥＦＸ２３ＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－Ｒ２０ 配列番号２３）（ここで、
Ｒ１０は、ＮＨ２または１個もしくは２個のアミノ酸のＮ末端伸長であり、Ｎ末端伸長のアミノ酸の１個は、場合によりスペーサーを介してＣ１４～Ｃ２０脂肪酸または二酸でアシル化され、場合により、Ｒ１０は、構造：Ｘ７Ｘ８のジペプチドであり、Ｘ７はアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓまたはアシル化ｄＬｙｓであり、Ｘ８はＧｌｙまたはＣ１～Ｃ４ Ｎ－アルキル化Ｇｌｙであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇまたはアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｇｌｕ、ｄＧｌｕ、Ａｓｐ、ホモグルタミン酸またはホモシステイン酸であり；
Ｘ１９は、Ｖａｌ、シクロプロパン、シクロペンタン、シクロヘキサンまたはフェニルグリシンであり；
Ｘ２０は、Ａｒｇ、ホモリジンまたはシトルリンであり；
Ｘ２３は、Ｉｌｅ、またはｄＩｌｅであり；および
Ｘ４０は、アシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；ならびに
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含み、場合により、Ｘ１０またはＸ１１の一方がＴｒｐまたはｄＴｒｐである場合、他方はＴｒｐまたはｄＴｒｐではなく、Ｒ１０およびＸ１２は両方ともアシル化アミノ酸を含むことができないという条件で、７位、１０位、１３位、または１６位から選択される１、２または３個のアミノ酸がＴｒｐまたはｄＴｒｐで置換され；場合により、１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、または２８位のいずれかにおける１、２または３個のアミノ酸がＡｉｂで置換されている、前記アンタゴニストが提供される。
実施形態
実施形態１によれば、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストであって、
Ｒ１０－ＤＶＸ１１Ｘ１２ＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＸ１９Ｘ２０ＥＦＸ２３ＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－Ｒ２０ 配列番号２３）（ここで、
Ｒ１０は、ＮＨ２または１個もしくは２個のアミノ酸のＮ末端伸長であり、Ｎ末端伸長のアミノ酸の１個は、場合によりスペーサーを介してＣ１４～Ｃ２０脂肪酸または二酸でアシル化され、場合により、Ｒ１０は、構造：Ｘ７Ｘ８のジペプチドであり、Ｘ７はアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓまたはアシル化ｄＬｙｓであり、Ｘ８はＧｌｙまたはＣ１～Ｃ４ Ｎ－アルキル化Ｇｌｙであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇまたはアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｇｌｕ、ｄＧｌｕ、Ａｓｐ、ホモグルタミン酸またはホモシステイン酸であり；
Ｘ１９は、Ｖａｌ、シクロプロパン、シクロペンタン、シクロヘキサンまたはフェニルグリシンであり；
Ｘ２０は、Ａｒｇ、ホモリジンまたはシトルリンであり；
Ｘ２３は、Ｉｌｅ、またはｄＩｌｅであり；および
Ｘ４０は、アシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；ならびに
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含み、場合により、Ｘ１０またはＸ１１の一方がＴｒｐまたはｄＴｒｐである場合、他方はＴｒｐまたはｄＴｒｐではなく、Ｒ１０およびＸ１２は両方ともアシル化アミノ酸を含むことができないという条件で、７位、１０位、１３位、または１６位から選択される１、２または３個のアミノ酸がＴｒｐまたはｄＴｒｐで置換され；場合により、１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、または２８位のいずれかにおける１、２または３個のアミノ酸がＡｉｂで置換されている、前記アンタゴニストが提供される。
【0127】
実施形態２によれば、
Ｒ１０－ＤＶＸ１１Ｘ１２ＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＸ１９Ｘ２０ＥＦＸ２３ＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－Ｒ２０（配列番号２３）（ここで、
Ｒ１０は、ＮＨ２またはＸ７Ｘ８であり、Ｘ７は、場合によりスペーサーを介してＣ１４～Ｃ２０脂肪酸または二酸でアシル化されているアミノ酸であり、Ｘ８はＧｌｙまたはＣ１～Ｃ４ Ｎ－アルキル化Ｇｌｙであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇまたはアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｇｌｕ、ｄＧｌｕ、Ａｓｐ、ホモグルタミン酸またはホモシステイン酸であり；
Ｘ１９は、Ｖａｌ、シクロプロパン、シクロペンタン、シクロヘキサンまたはフェニルグリシンであり；
Ｘ２０は、Ａｒｇ、ホモリジンまたはシトルリンであり；
Ｘ２３は、Ｉｌｅ、またはｄＩｌｅであり；および
Ｘ４０は、アシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；ならびに
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含み、場合により、１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、または２８位のいずれかにおける１、２または３個のアミノ酸がＡｉｂで置換されている、実施形態１に記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
Ｒ１０－ＤＶＸ１１Ｘ１２ＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＸ１９Ｘ２０ＥＦＸ２３ＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０－Ｒ２０（配列番号２３）（ここで、
Ｒ１０は、ＮＨ２またはＸ７Ｘ８であり、Ｘ７は、場合によりスペーサーを介してＣ１４～Ｃ２０脂肪酸または二酸でアシル化されているアミノ酸であり、Ｘ８はＧｌｙまたはＣ１～Ｃ４ Ｎ－アルキル化Ｇｌｙであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１２は、Ａｒｇまたはアシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｇｌｕ、ｄＧｌｕ、Ａｓｐ、ホモグルタミン酸またはホモシステイン酸であり；
Ｘ１９は、Ｖａｌ、シクロプロパン、シクロペンタン、シクロヘキサンまたはフェニルグリシンであり；
Ｘ２０は、Ａｒｇ、ホモリジンまたはシトルリンであり；
Ｘ２３は、Ｉｌｅ、またはｄＩｌｅであり；および
Ｘ４０は、アシル化アミノ酸、場合によりアシル化Ｌｙｓであり；ならびに
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含み、場合により、１６位、１８位、１９位、２４位、２６位、または２８位のいずれかにおける１、２または３個のアミノ酸がＡｉｂで置換されている、実施形態１に記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0128】
実施形態３によれば、ＧＬＰ－１アンタゴニストの各アシル化アミノ酸がアシル化Ｌｙｓである、実施形態１または２に記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
実施形態４によれば、Ｘ７がアシル化Ｌｙｓであり、Ｘ１２がＡｒｇである、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
実施形態４によれば、Ｘ７がアシル化Ｌｙｓであり、Ｘ１２がＡｒｇである、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0129】
実施形態５によれば、Ｒ１０がＮＨ２であり、Ｘ１２がアシル化Ｌｙｓである、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
実施形態６によれば、Ｘ７がＮＨ２であり、Ｘ１２がＡｒｇである、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
実施形態６によれば、Ｘ７がＮＨ２であり、Ｘ１２がＡｒｇである、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0130】
実施形態７によれば、配列番号５から配列番号９６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列、またはその任意の組み合わせを含む、実施形態１に記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0131】
実施形態８によれば、前記ＧＬＰ－１アンタゴニストのアシル化アミノ酸が、独立して、Ｌｙｓ側鎖に直接連結された、または場合により、
ｉ）ガンマグルタミン酸、
ｉｉ）ミニペグポリマー：－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］－（ここで、ｋは２、４、６または８である）、
ｉｉｉ）または任意の複数のｉ）および／もしくはｉｉ）またはｉ）および／もしくはｉｉ）の組み合わせ
を含むスペーサーを介して、Ｃ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸でアシル化されたＬｙｓ残基である、実施形態１～７のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
ｉ）ガンマグルタミン酸、
ｉｉ）ミニペグポリマー：－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］－（ここで、ｋは２、４、６または８である）、
ｉｉｉ）または任意の複数のｉ）および／もしくはｉｉ）またはｉ）および／もしくはｉｉ）の組み合わせ
を含むスペーサーを介して、Ｃ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸でアシル化されたＬｙｓ残基である、実施形態１～７のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0132】
実施形態９によれば、
ＤＸ１０Ｘ１１ＲＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＶＲＥＦＸ２３ＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０（配列番号５）（ここで、
Ｘ１０は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＶａｌであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐ、ｄＧｌｕまたはＧｌｕであり；
Ｘ２３は、ＩｌｅまたはｄＩｌｅであり；
Ｘ４０は、アシル化アミノ酸であり；および
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含み、場合により、ペプチドが、１６位、１８位、１９位、２４位、２６位もしくは２８位のいずれかにおけるＡｉｂの１つもしくは複数の置換、または場合により１２位におけるアシル化Ｌｙｓの置換を含み、前記位置番号が、天然のエキセンジン４アミノ酸配列と比較した番号である、実施形態１～８のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
ＤＸ１０Ｘ１１ＲＹＬＸ１５Ｘ１６ＱＡＶＲＥＦＸ２３ＥＷＬＶＲＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＸ４０Ｒ２０（配列番号５）（ここで、
Ｘ１０は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＶａｌであり；
Ｘ１１は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐまたはＳｅｒであり；
Ｘ１５は、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６は、Ｔｒｐ、ｄＴｒｐ、ｄＧｌｕまたはＧｌｕであり；
Ｘ２３は、ＩｌｅまたはｄＩｌｅであり；
Ｘ４０は、アシル化アミノ酸であり；および
Ｒ２０は、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２である）のアミノ酸配列を含み、場合により、ペプチドが、１６位、１８位、１９位、２４位、２６位もしくは２８位のいずれかにおけるＡｉｂの１つもしくは複数の置換、または場合により１２位におけるアシル化Ｌｙｓの置換を含み、前記位置番号が、天然のエキセンジン４アミノ酸配列と比較した番号である、実施形態１～８のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0133】
実施形態１０によれば、Ｘ１１がＴｒｐまたはｄＴｒｐである、実施形態１～９のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
実施形態１１によれば、配列番号５の１６位、１８位、１９位、２４位、２６位または２８位のいずれかにおける位置のアミノ酸がＡｉｂで置換され、場合により、Ａｉｂが１８位で置換されている、実施形態１～１０のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
実施形態１１によれば、配列番号５の１６位、１８位、１９位、２４位、２６位または２８位のいずれかにおける位置のアミノ酸がＡｉｂで置換され、場合により、Ａｉｂが１８位で置換されている、実施形態１～１０のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0134】
実施形態１２によれば、１２位のアミノ酸がアシル化Ｌｙｓで置換されている、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
実施形態１３によれば、
Ｘ１５が、ｄＧｌｕであり；
Ｘ１６が、Ｇｌｕであり；および
Ｘ２３が、Ｉｌｅである、
実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
実施形態１３によれば、
Ｘ１５が、ｄＧｌｕであり；
Ｘ１６が、Ｇｌｕであり；および
Ｘ２３が、Ｉｌｅである、
実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0135】
実施形態１４によれば、
Ｘ１５が、Ｇｌｕであり；
Ｘ１６が、Ｇｌｕであり；および
Ｘ２３が、Ｉｌｅである、
実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
Ｘ１５が、Ｇｌｕであり；
Ｘ１６が、Ｇｌｕであり；および
Ｘ２３が、Ｉｌｅである、
実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0136】
実施形態１５によれば、Ｘ４０が、場合によりスペーサーを介してアミノ酸の側鎖に連結されたアシル基を有するアミノ酸である、実施形態１～１４のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0137】
実施形態１６によれば、Ｘ４０が、式Ｉ（場合により、Ｌｙｓ）、式ＩＩ（場合により、Ｃｙｓ）、または式ＩＩＩ（場合により、Ｓｅｒ）の構造を含むアミノ酸であり、式Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩの各々が：
【0138】
【化13】
【0139】
である、実施形態１～１５のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
実施形態１７によれば、Ｘ４０がアシル化リジンである、実施形態１～１６のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
実施形態１７によれば、Ｘ４０がアシル化リジンである、実施形態１～１６のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0140】
実施形態１８によれば、アシル化アミノ酸のアシル基が、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ－ＣＯ（ＣＨ２）１４～２０ＣＨ３、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ－［スペーサー］－ＣＯ（ＣＨ２）１４～２０ＣＨ３、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ－ＣＯ（ＣＨ２）１４～２０ＣＯＯＨ、または（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ－［スペーサー］－ＣＯ（ＣＨ２）１４～２０ＣＯＯＨから選択される、実施形態１～１７のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0141】
実施形態１９によれば、アシル化アミノ酸のアシル基が、スペーサーを介してアシル化アミノ酸のアミノ酸側鎖に共有結合されている、実施形態１～１８のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0142】
実施形態２０によれば、スペーサーがアミノ酸またはジペプチドである、実施形態１～１９のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
実施形態２１によれば、スペーサーが、
ｉ）ガンマグルタミン酸、
ｉｉ）ミニペグポリマー：－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］－（ここで、ｋは２、４、６または８である）、
ｉｉｉ）または任意の複数のｉ）および／もしくはｉｉ）またはｉ）および／もしくはｉｉ）の組み合わせ
を含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
実施形態２１によれば、スペーサーが、
ｉ）ガンマグルタミン酸、
ｉｉ）ミニペグポリマー：－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］－（ここで、ｋは２、４、６または８である）、
ｉｉｉ）または任意の複数のｉ）および／もしくはｉｉ）またはｉ）および／もしくはｉｉ）の組み合わせ
を含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0143】
実施形態２２によれば、アシル化アミノ酸が、Ｃ１６～Ｃ１８脂肪酸またはＣ１６～Ｃ１８脂肪二酸に連結され、場合により、前記酸または二酸が、構造：
－（ガンマグルタミン酸）ｐ－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｎ－または
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｍ－
（ここで、ｋは、２、４または８から選択される整数であり、ｍおよびｎは、独立して０、１または２から選択される整数であり、ｐおよびｑは、独立して１、２、４または８から選択される整数である）
を含むスペーサーを介して連結されている、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
－（ガンマグルタミン酸）ｐ－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｎ－または
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｍ－
（ここで、ｋは、２、４または８から選択される整数であり、ｍおよびｎは、独立して０、１または２から選択される整数であり、ｐおよびｑは、独立して１、２、４または８から選択される整数である）
を含むスペーサーを介して連結されている、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0144】
実施形態２３によれば、アシル化アミノ酸が、構造：
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－
（ここで、ｋは２であり、ｐおよびｑは、独立して１または２から選択される整数である）
を含むスペーサーを介してリジン側鎖に連結されたＣ１６～Ｃ１８脂肪酸を有するＬｙｓである、実施形態１～２２のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－
（ここで、ｋは２であり、ｐおよびｑは、独立して１または２から選択される整数である）
を含むスペーサーを介してリジン側鎖に連結されたＣ１６～Ｃ１８脂肪酸を有するＬｙｓである、実施形態１～２２のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0145】
実施形態２４によれば、
Ｘ１１が、ＴｒｐまたはｄＴｒｐであり；
Ｘ１５が、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６が、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ２３が、ＩｌｅまたはｄＩｌｅであり；および
Ｘ４０が、Ｃ１６またはＣ１８二酸でアシル化されたＬｙｓであり、場合により、前記二酸が、構造：
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－
（ここで、ｋは２であり、ｐおよびｑは、独立して１または２から選択される整数である）
を含むスペーサーを介して連結されている、実施形態１～２３のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
Ｘ１１が、ＴｒｐまたはｄＴｒｐであり；
Ｘ１５が、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ１６が、ＧｌｕまたはｄＧｌｕであり；
Ｘ２３が、ＩｌｅまたはｄＩｌｅであり；および
Ｘ４０が、Ｃ１６またはＣ１８二酸でアシル化されたＬｙｓであり、場合により、前記二酸が、構造：
－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－（ガンマグルタミン酸）ｐ－
（ここで、ｋは２であり、ｐおよびｑは、独立して１または２から選択される整数である）
を含むスペーサーを介して連結されている、実施形態１～２３のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0146】
実施形態２５によれば、Ｒ２０がＣＯＮＨ２である、実施形態１～２４のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
実施形態２６によれば、アミド結合を通じて前記ＧＬＰ－１アンタゴニストに連結されたジペプチドＡ－Ｂ：
実施形態２６によれば、アミド結合を通じて前記ＧＬＰ－１アンタゴニストに連結されたジペプチドＡ－Ｂ：
【0147】
【化14】
【0148】
（ここで、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ８は、独立してＨ、Ｃ１～Ｃ１８アルキル、Ｃ２～Ｃ１８アルケニル、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＳＨ、（Ｃ２～Ｃ３アルキル）ＳＣＨ３、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ２ ＋）ＮＨ２、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ２～Ｃ５複素環）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ６～Ｃ１０アリール）Ｒ７、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ９ヘテロアリール）、およびＣ１～Ｃ１２アルキル（Ｗ１）Ｃ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、Ｗ１は、Ｎ、ＳおよびＯからなる群から選択されるヘテロ原子であり；
Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ１８アルキル、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＳＨ、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ２～Ｃ５複素環）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ６～Ｃ１０アリール）Ｒ７、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ９ヘテロアリール）からなる群から選択されるか、またはＲ４およびＲ３は、これらが結合する原子と一緒にピロリジン環を形成し；
Ｒ５は、ＮＨＲ６またはＯＨであり；
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ８アルキルであり；ならびに
Ｒ７は、ＨおよびＯＨからなる群から選択される）
をさらに含み、前記ＧＬＰ－１アンタゴニストからのＡ－Ｂの化学的切断半減期（ｔ１／２）が、生理的条件下、ＰＢＳ中で少なくとも約１時間～約１週間である、実施形態９～２５のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１アンタゴニストの誘導体が提供される。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ８は、独立してＨ、Ｃ１～Ｃ１８アルキル、Ｃ２～Ｃ１８アルケニル、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＳＨ、（Ｃ２～Ｃ３アルキル）ＳＣＨ３、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ２ ＋）ＮＨ２、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ６シクロアルキル）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ２～Ｃ５複素環）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ６～Ｃ１０アリール）Ｒ７、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ９ヘテロアリール）、およびＣ１～Ｃ１２アルキル（Ｗ１）Ｃ１～Ｃ１２アルキルからなる群から選択され、Ｗ１は、Ｎ、ＳおよびＯからなる群から選択されるヘテロ原子であり；
Ｒ３は、Ｃ１～Ｃ１８アルキル、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ１８アルキル）ＳＨ、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ２～Ｃ５複素環）、（Ｃ０～Ｃ４アルキル）（Ｃ６～Ｃ１０アリール）Ｒ７、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ３～Ｃ９ヘテロアリール）からなる群から選択されるか、またはＲ４およびＲ３は、これらが結合する原子と一緒にピロリジン環を形成し；
Ｒ５は、ＮＨＲ６またはＯＨであり；
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ８アルキルであり；ならびに
Ｒ７は、ＨおよびＯＨからなる群から選択される）
をさらに含み、前記ＧＬＰ－１アンタゴニストからのＡ－Ｂの化学的切断半減期（ｔ１／２）が、生理的条件下、ＰＢＳ中で少なくとも約１時間～約１週間である、実施形態９～２５のいずれか一項に記載のＧＬＰ－１アンタゴニストの誘導体が提供される。
【0149】
実施形態２７によれば、ジペプチドＡ－Ｂが、ＧＬＰ－１アンタゴニストアミノ酸配列のＮ末端アルファアミンに共有結合されている、実施形態２６に記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0150】
実施形態２８によれば、
Ｒ１およびＲ８が、独立してＨまたはＣ１～Ｃ８アルキルであり；
Ｒ２およびＲ４が、独立してＨ、Ｃ１～Ｃ８アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＳＨ、（Ｃ２～Ｃ３アルキル）ＳＣＨ３、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ６アリール）Ｒ７からなる群から選択され；
Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５が、ＮＨ２であり；ならびに
Ｒ７が、水素、およびＯＨからなる群から選択される、
実施形態２６～２７のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
Ｒ１およびＲ８が、独立してＨまたはＣ１～Ｃ８アルキルであり；
Ｒ２およびＲ４が、独立してＨ、Ｃ１～Ｃ８アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＳＨ、（Ｃ２～Ｃ３アルキル）ＳＣＨ３、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＮＨ２、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）（Ｃ６アリール）Ｒ７からなる群から選択され；
Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ６アルキルであり；
Ｒ５が、ＮＨ２であり；ならびに
Ｒ７が、水素、およびＯＨからなる群から選択される、
実施形態２６～２７のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0151】
実施形態２９によれば、
Ｒ１が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＳＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２からなる群から選択される側鎖を含み、場合により、Ｃ１６～Ｃ３０脂肪酸またはＣ１６～Ｃ３０二酸が、ガンマグルタミン酸、ガンマグルタミン酸－ガンマグルタミン酸ジペプチド、およびガンマグルタミン酸－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－ガンマグルタミン酸（ここで、
ｋは、１～８の範囲から選択される整数であり、；および
ｑは、１～８の範囲から選択される整数であり、場合により、ｋは２であり、ｑは１～８の範囲から選択される）からなる群から選択されるスペーサーを場合により介して前記側鎖に共有結合され；
Ｒ２、Ｒ４およびＲ８が、独立してＨ、またはＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ６アルキルであり；ならびに
Ｒ５が、ＮＨ２である、
実施形態２６～２７のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
Ｒ１が、Ｃ１～Ｃ８アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＳＨ、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＣＯＯＨ、および（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２からなる群から選択される側鎖を含み、場合により、Ｃ１６～Ｃ３０脂肪酸またはＣ１６～Ｃ３０二酸が、ガンマグルタミン酸、ガンマグルタミン酸－ガンマグルタミン酸ジペプチド、およびガンマグルタミン酸－［ＣＯＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｋＮＨ］ｑ－ガンマグルタミン酸（ここで、
ｋは、１～８の範囲から選択される整数であり、；および
ｑは、１～８の範囲から選択される整数であり、場合により、ｋは２であり、ｑは１～８の範囲から選択される）からなる群から選択されるスペーサーを場合により介して前記側鎖に共有結合され；
Ｒ２、Ｒ４およびＲ８が、独立してＨ、またはＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ６アルキルであり；ならびに
Ｒ５が、ＮＨ２である、
実施形態２６～２７のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0152】
実施形態３０によれば、
Ｒ１が、Ｈ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨまたは（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２であり；
Ｒ２が、Ｈであり、
Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ４が、Ｈ、またはＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ５が、ＮＨ２であり；および
Ｒ８が、水素である、
実施形態２６～２９のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
Ｒ１が、Ｈ、Ｃ１～Ｃ４アルキル、（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＯＨまたは（Ｃ１～Ｃ４アルキル）ＮＨ２であり；
Ｒ２が、Ｈであり、
Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ４が、Ｈ、またはＣ１～Ｃ４アルキルであり；
Ｒ５が、ＮＨ２であり；および
Ｒ８が、水素である、
実施形態２６～２９のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0153】
実施形態３１によれば、
前記ジペプチドＡ－Ｂがアシル化Ｌｙｓ残基およびＮ－アルキル化Ｇｌｙ残基を含み、前記ＬｙｓおよびＮ－アルキル化Ｇｌｙ残基がペプチド結合を介して連結され、場合により、前記Ｌｙｓ残基がＤ－立体構造である、
実施形態２６～３０のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
前記ジペプチドＡ－Ｂがアシル化Ｌｙｓ残基およびＮ－アルキル化Ｇｌｙ残基を含み、前記ＬｙｓおよびＮ－アルキル化Ｇｌｙ残基がペプチド結合を介して連結され、場合により、前記Ｌｙｓ残基がＤ－立体構造である、
実施形態２６～３０のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0154】
実施形態３２によれば、
Ｒ１が、（Ｃ４アルキル）ＮＨ２または（Ｃ４アルキル）ＮＨ（ｍＰｅｇ－γＥ－二酸）－Ｃ１８であり；
Ｒ２、Ｒ４およびＲ８が、それぞれＨであり；
Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり；ならびに
Ｒ５が、ＮＨ２であり；
Ｒ５が、アミンである、
実施形態２６～３０のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
Ｒ１が、（Ｃ４アルキル）ＮＨ２または（Ｃ４アルキル）ＮＨ（ｍＰｅｇ－γＥ－二酸）－Ｃ１８であり；
Ｒ２、Ｒ４およびＲ８が、それぞれＨであり；
Ｒ３が、Ｃ１～Ｃ４アルキルであり；ならびに
Ｒ５が、ＮＨ２であり；
Ｒ５が、アミンである、
実施形態２６～３０のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストが提供される。
【0155】
実施形態３３によれば、実施形態１～３２のいずれか１つに記載のＧＬＰ－１アンタゴニストまたは誘導体、および薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む医薬組成物が提供される。
【0156】
実施形態３４によれば、非定型低血糖を患っている患者を処置する方法であって、実施形態３３の医薬組成物を、血糖値を上昇させるのに有効な量で、それを必要とする患者に投与するステップを含む方法が提供される。
【0157】
実施例１
Ｅｘ－４（９－３９）ａ（配列番号２）は、ＧＬＰ－１受容体の確立されたアンタゴニストである。しかし、ヒトにおける治療剤としてのその使用は、その非ヒト起源およびその比較的短いインビボでの作用持続時間により限定される。ヒトＧＬＰ－１の同等の末端短縮は受容体活性化作用を減少させるが、高効力のアンタゴニストを提供しない。一連のＧＬＰ－１／Ｅｘ－４ハイブリッドペプチドにより、純粋なＧＬＰ－１ベースのアンタゴニストを生成するのに必要とされる最小限の構造変化がＧｌｕ１６、Ｖａｌ１９、およびＡｒｇ２０として同定され、Ｅｘ－４（９－３９）ａと比べて約３倍大きなインビトロ効力のアンタゴニストをもたらした。ヒトベースのアンタゴニストの部位特異的アシル化は、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストとしての効力が増加した、ＧＩＰ受容体と比較して選択性が１０倍大きいペプチド「９－４０ Ｊａｎｔ４ Ｋ４０［Ｃ１６］」（配列番号３）をもたらした（Ｐａｔｔｅｒｓｏｎら、ＡＣＳ Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１１、６、１３５～１４５頁）。
Ｅｘ－４（９－３９）ａ（配列番号２）は、ＧＬＰ－１受容体の確立されたアンタゴニストである。しかし、ヒトにおける治療剤としてのその使用は、その非ヒト起源およびその比較的短いインビボでの作用持続時間により限定される。ヒトＧＬＰ－１の同等の末端短縮は受容体活性化作用を減少させるが、高効力のアンタゴニストを提供しない。一連のＧＬＰ－１／Ｅｘ－４ハイブリッドペプチドにより、純粋なＧＬＰ－１ベースのアンタゴニストを生成するのに必要とされる最小限の構造変化がＧｌｕ１６、Ｖａｌ１９、およびＡｒｇ２０として同定され、Ｅｘ－４（９－３９）ａと比べて約３倍大きなインビトロ効力のアンタゴニストをもたらした。ヒトベースのアンタゴニストの部位特異的アシル化は、ＧＬＰ－１受容体アンタゴニストとしての効力が増加した、ＧＩＰ受容体と比較して選択性が１０倍大きいペプチド「９－４０ Ｊａｎｔ４ Ｋ４０［Ｃ１６］」（配列番号３）をもたらした（Ｐａｔｔｅｒｓｏｎら、ＡＣＳ Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１１、６、１３５～１４５頁）。
【0158】
本明細書に開示されるように、９－４０ Ｊａｎｔ４－Ｋ４０の変異体は、さらに改善されたＧＬＰ－１受容体アンタゴニストを提供するために調製された。ペプチド９－４０ Ｊａｎｔ４－Ｋ４０は、Ｌｙｓ側鎖へのＣ１６アシル基の直接結合によって４０位でアシル化されている。Ｌｙｓ側鎖とＣ１６アシル基の間にスペーサーを挿入する変異体が調製された。表２は、これらのアシル化変異体のＧＬＰ－１アンタゴニスト活性および可溶性を示す。
【0159】
９－４０Ｊａｎｔ４－Ｋ４０（ＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＶＲＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳＫ；配列番号３）の一次配列に対して様々なアミノ酸置換を行った。これらの変異体のＧＬＰ－１アンタゴニスト活性および可溶性は、表３に提供される。
【0160】
表４は、Ｊａｎｔ４－Ｋ４０（配列番号３）変異体の活性および可溶性に対するＡｉｂ置換の効果に関するデータを提供する。表５は、Ｊａｎｔ４－Ｋ４０（Ｃ１６）（配列番号３）変異体の可溶性に対するｄ－ＡＡ置換の効果に関するデータを提供し、表６は、Ｊａｎｔ４－Ｋ４０（配列番号３）の３位のＴｒｐ置換に関するデータを示す。
材料および方法
Ｆｍｏｃ合成
ペプチドを、Ｗａｎｇ樹脂（ＡＡＰＰｔｅｃ、ルイビル、ＫＹ）および６－Ｃｌ－ＨＯＢｔ／ＤＩＣ活性化により開始するＳｙｍｐｈｏｎｙペプチド合成装置（Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｅｃｈ－ｎｏｌｏｇｙ、ツーソン、ＡＺ）を使用して自動Ｆｍｏｃ／ｔ－Ｂｕ固相法によって調製した。全ての従来型残基はＭｉｄｗｅｓｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ（フィッシャー、ＩＮ）から購入し、６－Ｃｌ－ＨＯＢｔおよびＤＩＣはＡＡＰＰｔｅｃ（ルイビル、ＫＹ）から入手した。ペプチドを樹脂から切断し、２．５％ＴＩＳ、２．５％Ｈ２Ｏ、１．５％メタノール、２．５％フェノール、０．５％ＤＯＤＴおよび０．５％のジメチルスルホキシドを含有するＴＦＡで処理して脱保護した。標準的な手順に従って、濾過したＴＦＡ溶液から低温エチルエーテルでペプチドを沈殿させた。ペプチドの脂肪酸アシル化を、二重カップリングのために繰り返される１０倍過剰なＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ／ＤＥＰＢＴ／ＤＩＥＡと、その後の１０倍過剰なパルミチン酸または別の脂肪酸／ＤＥＰＢＴ／ＤＩＥＡを用いて樹脂で行った。
アンタゴニストアシル化
オルソゴナル固相保護スキームを使用してパルミチン酸を合成アンタゴニストペプチドに導入した。Ｂｏｃ合成をペプチド合成に利用し、Ｌｙｓ４０における塩基感受性側鎖保護Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－ＯＨの選択的導入を可能にした。完全に保護されたペプチドを、ＤＭＦ中２０％ピペリジン（ｖ／ｖ）を用いて樹脂で３０分間処理してＬｙｓ４０側鎖Ｆｍｏｃ基を除去した。過剰な脂肪酸およびＤＭＦ／ＤＩＥＡ（４：１ｖ／ｖ）中５当量のベンゾトリアゾール－１－イル－オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）（Ｆｌｕｋａ）を用いて、アミド結合形成を約１８時間促進した。ニンヒドリン試験を使用して反応の進行を監視し、ペプチド切断後にＥＳＩ質量分析によってアシル化を確認した。
ペプチド精製
ペプチド精製には逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ－ＨＰＬＣ）を使用した。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ精製中、Ｃ１８固定相（Ｖｙｄａｃ ２１８ＴＰ、２５０ｍｍ＿２２ｍｍ、１０μｍ）を、０．１％トリフルオロ酢酸中の直線アセトニトリル勾配で使用した。Ｃ８カラム（Ｚｏｒｂａｘ ３００ＳＢ、４．６ｍｍ×５０ｍｍ、３．５μｍ）を用いるＲＰ－ＨＰＬＣを使用して、分析的解析をピーク画分で行った。ペプチド同一性および純度を、分析用ＲＰ－ＨＰＬＣおよびＥＳＩまたはＭＡＬＤＩ質量分析によって評価した。全てのペプチドは正しい分子量を有することが見出され、約９５％純度であった。凍結乾燥ペプチドを４℃で保管した。
ＧＬＰ－１受容体媒介ｃＡＭＰ誘導
ＧＬＰ－１受容体においてｃＡＭＰ誘導を刺激またはブロックするペプチドの能力を、ルシフェラーゼベースのレポーター遺伝子アッセイによって調べた。ヒトＧＬＰ－１受容体（Ｏｐｅｎ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）およびｃＡＭＰ誘導性（ｃＡＭＰ応答エレメント）ルシフェラーゼ遺伝子によるＨＥＫ２９３細胞のコトランスフェクションは、受容体活性化を測定することができる細胞構築物を構成した。０．２５％ウシ成長血清（ＨｙＣｌｏｎｅ）補充ダルベッコ改変イーグル培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で１６時間細胞を欠乏させ、次いで、適当な濃度範囲にわたるペプチドの段階希釈物を９６ウェルポリ－Ｄ－リジンコーティングプレート（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に添加するバイオアッセイを第１の血清によって行った。受容体活性化作用アッセイのために、希釈ペプチドの後に一定濃度のＧＬＰ－１（０．０５ｎＭ）をアッセイプレートに添加した。インキュベーションを３７℃、５％ＣＯ２で５時間継続し、その後、等容量（１００μＬ）のＬｕｃＬｉｔｅ発光基質試薬（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ）を添加した。プレートを６００ｒｐｍで３分間振とう後、ＭｉｃｒｏＢｅｔａ１４５０液体シンチレーション測定（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ）は発光シグナルをカウント毎秒（ｃｐｓ）で定量化した。Ｏｒｉｇｉｎソフトウェア（ＯｒｉｇｉｎＬａｂ）を使用してデータをプロットし、有効濃度５０（ＥＣ５０）または阻害濃度５０（ＩＣ５０）をシグモイドフィッティングによって決定した。相対ＥＣ５０値またはＩＣ５０値を比較分析して効力を決定した。各実験を少なくとも３回繰り返し、各試料を３重にアッセイした。
動物
Ｃ５７Ｂｌ／６マウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手した。マウスを２２℃、１２：１２時間明暗サイクルで単独または集団飼育し、餌および水は自由に摂取させた。全ての試験は、シンシナティ大学施設内動物管理使用委員会によって承認され、該委員会のガイドラインに従って行われた。
グルコース負荷試験（ＧＴＴ）
耐糖能を決定するために、マウスを６時間絶食させ、グルコースを腹腔内注射した。注射は、体重１ｋｇあたり１．５ｇグルコース（０．９％ｗ／ｖ生理食塩水中２５％ｗ／ｖ Ｄ－グルコース（Ｓｉｇｍａ））からなった。尾部血糖値（ｍｇ ｄＬ－１）は、注射０分前ならびに１５、３０、６０、および１２０分後に小型血糖値測定器（ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ Ｆｒｅｅｄｏｍ Ｌｉｔｅ）を使用して測定した。
急性インビボ試験
マウスは、ジペプチジルペプチダーゼ－ＩＶ保護Ｅｘ－４（０．６５ｎｍｏｌ ｋｇ－１）のＩＰ注射でチャレンジする前に、１、４、８、２４、４８、７２、または１２０時間時点のいずれかに様々な用量でペプチド（ＰＢＳ中）の皮下注射を受けた。ＧＬＰ－１注射の１５分後にＧＴＴを行った。尾部血糖値を上記のように得た。
材料および方法
Ｆｍｏｃ合成
ペプチドを、Ｗａｎｇ樹脂（ＡＡＰＰｔｅｃ、ルイビル、ＫＹ）および６－Ｃｌ－ＨＯＢｔ／ＤＩＣ活性化により開始するＳｙｍｐｈｏｎｙペプチド合成装置（Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｅｃｈ－ｎｏｌｏｇｙ、ツーソン、ＡＺ）を使用して自動Ｆｍｏｃ／ｔ－Ｂｕ固相法によって調製した。全ての従来型残基はＭｉｄｗｅｓｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ（フィッシャー、ＩＮ）から購入し、６－Ｃｌ－ＨＯＢｔおよびＤＩＣはＡＡＰＰｔｅｃ（ルイビル、ＫＹ）から入手した。ペプチドを樹脂から切断し、２．５％ＴＩＳ、２．５％Ｈ２Ｏ、１．５％メタノール、２．５％フェノール、０．５％ＤＯＤＴおよび０．５％のジメチルスルホキシドを含有するＴＦＡで処理して脱保護した。標準的な手順に従って、濾過したＴＦＡ溶液から低温エチルエーテルでペプチドを沈殿させた。ペプチドの脂肪酸アシル化を、二重カップリングのために繰り返される１０倍過剰なＦｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ／ＤＥＰＢＴ／ＤＩＥＡと、その後の１０倍過剰なパルミチン酸または別の脂肪酸／ＤＥＰＢＴ／ＤＩＥＡを用いて樹脂で行った。
アンタゴニストアシル化
オルソゴナル固相保護スキームを使用してパルミチン酸を合成アンタゴニストペプチドに導入した。Ｂｏｃ合成をペプチド合成に利用し、Ｌｙｓ４０における塩基感受性側鎖保護Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）－ＯＨの選択的導入を可能にした。完全に保護されたペプチドを、ＤＭＦ中２０％ピペリジン（ｖ／ｖ）を用いて樹脂で３０分間処理してＬｙｓ４０側鎖Ｆｍｏｃ基を除去した。過剰な脂肪酸およびＤＭＦ／ＤＩＥＡ（４：１ｖ／ｖ）中５当量のベンゾトリアゾール－１－イル－オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）（Ｆｌｕｋａ）を用いて、アミド結合形成を約１８時間促進した。ニンヒドリン試験を使用して反応の進行を監視し、ペプチド切断後にＥＳＩ質量分析によってアシル化を確認した。
ペプチド精製
ペプチド精製には逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ－ＨＰＬＣ）を使用した。分取ＲＰ－ＨＰＬＣ精製中、Ｃ１８固定相（Ｖｙｄａｃ ２１８ＴＰ、２５０ｍｍ＿２２ｍｍ、１０μｍ）を、０．１％トリフルオロ酢酸中の直線アセトニトリル勾配で使用した。Ｃ８カラム（Ｚｏｒｂａｘ ３００ＳＢ、４．６ｍｍ×５０ｍｍ、３．５μｍ）を用いるＲＰ－ＨＰＬＣを使用して、分析的解析をピーク画分で行った。ペプチド同一性および純度を、分析用ＲＰ－ＨＰＬＣおよびＥＳＩまたはＭＡＬＤＩ質量分析によって評価した。全てのペプチドは正しい分子量を有することが見出され、約９５％純度であった。凍結乾燥ペプチドを４℃で保管した。
ＧＬＰ－１受容体媒介ｃＡＭＰ誘導
ＧＬＰ－１受容体においてｃＡＭＰ誘導を刺激またはブロックするペプチドの能力を、ルシフェラーゼベースのレポーター遺伝子アッセイによって調べた。ヒトＧＬＰ－１受容体（Ｏｐｅｎ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）およびｃＡＭＰ誘導性（ｃＡＭＰ応答エレメント）ルシフェラーゼ遺伝子によるＨＥＫ２９３細胞のコトランスフェクションは、受容体活性化を測定することができる細胞構築物を構成した。０．２５％ウシ成長血清（ＨｙＣｌｏｎｅ）補充ダルベッコ改変イーグル培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で１６時間細胞を欠乏させ、次いで、適当な濃度範囲にわたるペプチドの段階希釈物を９６ウェルポリ－Ｄ－リジンコーティングプレート（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に添加するバイオアッセイを第１の血清によって行った。受容体活性化作用アッセイのために、希釈ペプチドの後に一定濃度のＧＬＰ－１（０．０５ｎＭ）をアッセイプレートに添加した。インキュベーションを３７℃、５％ＣＯ２で５時間継続し、その後、等容量（１００μＬ）のＬｕｃＬｉｔｅ発光基質試薬（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ）を添加した。プレートを６００ｒｐｍで３分間振とう後、ＭｉｃｒｏＢｅｔａ１４５０液体シンチレーション測定（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ）は発光シグナルをカウント毎秒（ｃｐｓ）で定量化した。Ｏｒｉｇｉｎソフトウェア（ＯｒｉｇｉｎＬａｂ）を使用してデータをプロットし、有効濃度５０（ＥＣ５０）または阻害濃度５０（ＩＣ５０）をシグモイドフィッティングによって決定した。相対ＥＣ５０値またはＩＣ５０値を比較分析して効力を決定した。各実験を少なくとも３回繰り返し、各試料を３重にアッセイした。
動物
Ｃ５７Ｂｌ／６マウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手した。マウスを２２℃、１２：１２時間明暗サイクルで単独または集団飼育し、餌および水は自由に摂取させた。全ての試験は、シンシナティ大学施設内動物管理使用委員会によって承認され、該委員会のガイドラインに従って行われた。
グルコース負荷試験（ＧＴＴ）
耐糖能を決定するために、マウスを６時間絶食させ、グルコースを腹腔内注射した。注射は、体重１ｋｇあたり１．５ｇグルコース（０．９％ｗ／ｖ生理食塩水中２５％ｗ／ｖ Ｄ－グルコース（Ｓｉｇｍａ））からなった。尾部血糖値（ｍｇ ｄＬ－１）は、注射０分前ならびに１５、３０、６０、および１２０分後に小型血糖値測定器（ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ Ｆｒｅｅｄｏｍ Ｌｉｔｅ）を使用して測定した。
急性インビボ試験
マウスは、ジペプチジルペプチダーゼ－ＩＶ保護Ｅｘ－４（０．６５ｎｍｏｌ ｋｇ－１）のＩＰ注射でチャレンジする前に、１、４、８、２４、４８、７２、または１２０時間時点のいずれかに様々な用量でペプチド（ＰＢＳ中）の皮下注射を受けた。ＧＬＰ－１注射の１５分後にＧＴＴを行った。尾部血糖値を上記のように得た。
【0161】
【表2-1】
【0162】
【表2-2】
【0163】
【表3】
【0164】
【表4】
【0165】
【表5】
【0166】
【表6】
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図3】
【図4】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図5D】
【図6A】
【図6B】
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2023-10-17
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
【国際調査報告】