特表 2024-507828 Ｂ群髄膜炎菌組換えワクチン

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-02-21

(54)【発明の名称】Ｂ群髄膜炎菌組換えワクチン

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/095 20060101AFI20240214BHJP

   A61P 31/04 20060101ALI20240214BHJP

   C07K 14/22 20060101ALI20240214BHJP

【ＦＩ】

A61K39/095 ZNA

A61P31/04

C07K14/22

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023550019

(86)(22)【出願日】2022-02-18

(85)【翻訳文提出日】2023-08-18

(86)【国際出願番号】 US2022016894

(87)【国際公開番号】W WO2022178196

(87)【国際公開日】2022-08-25

(31)【優先権主張番号】21305211.1

(32)【優先日】2021-02-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】63/172,885

(32)【優先日】2021-04-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．プルロニック

２．ＳＰＡＮ

(71)【出願人】

【識別番号】517055195

【氏名又は名称】サノフィ パスツール インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100127926

【弁理士】

【氏名又は名称】結田 純次

(74)【代理人】

【識別番号】100140132

【弁理士】

【氏名又は名称】竹林 則幸

(74)【代理人】

【識別番号】100216105

【弁理士】

【氏名又は名称】守安 智

(72)【発明者】

【氏名】ナデージュ・アルノー－バルベ

(72)【発明者】

【氏名】ヴィノッド・バルハラ

(72)【発明者】

【氏名】ラファエラ・イアントマージ

(72)【発明者】

【氏名】マリー－ピエール・カゼック－デュレ

(72)【発明者】

【氏名】ジャクリーヌ・マクラスキー

(72)【発明者】

【氏名】ロランス・ケミナー

(72)【発明者】

【氏名】バチュラ・ロクビ

(72)【発明者】

【氏名】ジョン・シバー

【テーマコード（参考）】

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C085AA03

4C085BA16

4C085BB11

4C085CC21

4C085EE03

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA11

4H045DA86

4H045EA20

4H045EA31

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】

本開示は、少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ａタンパク質、少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂタンパク質、少なくとも１つのナイセリア属アドヘシンＡ（ＮａｄＡ）タンパク質、および少なくとも１つの界面活性剤抽出外膜小胞（ｄＯＭＶ）を含む髄膜炎菌抗原の組合せを含む免疫原性組成物に関する。髄膜炎菌抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂに由来し得る。抗原の組合せは、細菌株の広範囲のカバー範囲をもたらした。さらに、本開示は、免疫応答を誘発するための方法における免疫原性組成物の使用にも関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂ抗原の組合せを含む免疫原性組成物であって、前記組合せは、少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ａタンパク質、少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂタンパク質、少なくとも１つのナイセリア属アドヘシンＡ（ＮａｄＡ）タンパク質、および少なくとも１つの界面活性剤抽出外膜小胞（ｄＯＭＶ）を含む、組成物。

【請求項2】

ｆＨＢＰ Ａタンパク質および／またはｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、脂質化されていない、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号１と少なくとも約８５％の同一性を含む変異タンパク質であり、および／または、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号３と少なくとも約８５％の同一性を含む変異タンパク質である、請求項１または２に記載の組成物。

【請求項4】

ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく：ａ）アミノ酸１１５のアスパラギン（Ｎ１１５）のアミノ酸置換；ｂ）アミノ酸１２１のアスパラギン酸（Ｄ１２１）のアミノ酸置換；ｃ）アミノ酸１２８のセリン（Ｓ１２８）のアミノ酸置換；ｄ）アミノ酸１３０のロイシン（Ｌ１３０）のアミノ酸置換；ｅ）１３１位のバリン（Ｖ１３１）のアミノ酸置換；ｆ）１３３位のグリシン（Ｇ１３３）のアミノ酸置換；ｇ）２１９位のリジン（Ｋ２１９）のアミノ酸置換；およびｈ）２２０位のグリシン（Ｇ２２０）のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つから選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むか、もしくは配列番号２を含むかもしくはそれからなり、ならびに／または、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく：ａ）アミノ酸３８のグルタミン（Ｑ３８）のアミノ酸置換；ｂ）アミノ酸９２のグルタミン酸（Ｅ９２）のアミノ酸置換；ｃ）アミノ酸１３０のアルギニン（Ｒ１３０）のアミノ酸置換；ｄ）アミノ酸２２３のセリン（Ｓ２２３）のアミノ酸置換；およびｅ）アミノ酸２４８のヒスチジン（Ｈ２４８）のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つから選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むか、もしくは配列番号４を含むかもしくはそれからなる、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項5】

ｆＨＢＰ Ａタンパク質および／またはｆＨＢＰ Ｂは、約２０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約４０μｇ／用量～約１４０μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約１２０μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量、または約１００μｇ／用量の範囲の量で存在する、請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項6】

ＮａｄＡタンパク質は、ＮａｄＡ１タンパク質であるか、または配列番号５と少なくとも約８５％の同一性を含むか、または配列番号５を含むかもしくはそれからなる、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項7】

ＮａｄＡタンパク質は、約２０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約４０μｇ／用量～約１４０μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約１２０μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１００μｇ／用量、または約５０μｇ／用量の範囲の量で存在する、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項8】

ｄＯＭＶは、ポーリンＡ（ＰｏｒＡ）を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項9】

ｄＯＭＶは、約５μｇ／用量～約４００μｇ／用量、または約１０μｇ／用量～約３００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約２５０μｇ／用量、または約３５μｇ／用量～約２２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約１００μｇ／用量～約１５０μｇ／用量、または約１１０μｇ／用量～約１２５μｇ／用量、または約２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量、または約１２５μｇ／用量の範囲の量で存在する、請求項１～８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項10】

アジュバント、特にアルミニウムベースのアジュバント、特に水酸化アルミニウムアジュバント、リン酸アルミニウムアジュバント、硫酸アルミニウム塩アジュバント、硫酸ヒドロキシリン酸アルミニウムアジュバント、硫酸アルミニウムカリウムアジュバント、ヒドロキシ炭酸アルミニウム、水酸化アルミニウムと水酸化マグネシウムの組合せ、およびそれらの混合物を含む群において選択されるアルミニウムベースのアジュバントをさらに含み、特にリン酸アルミニウムアジュバントである、請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項11】

配列番号２からなる２５～１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる２５～１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなる２５～１００μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の２０～１５０μｇ／用量のｄＯＭＶ、１００～６００μｇ／用量のリン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはそれらからなる、請求項１～１０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項12】

髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹのうちの１つまたはそれ以上に由来するコンジュゲートされた莢膜糖を少なくともさらに含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項13】

請求項１～１２のいずれか一項に記載の組成物を含むワクチン。

【請求項14】

髄膜炎菌感染症に対する防御に使用するための、または髄膜炎菌に対する免疫応答の誘導に使用するための、請求項１～１２のいずれか一項に記載の組成物または請求項１３に記載のワクチン。

【請求項15】

配列番号２に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むｆＨＢＰ Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡ、配列番号４に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むｆＨＢＰ Ｂタンパク質をコードするｍＲＮＡ、配列番号５に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むＮａｄＡタンパク質をコードするｍＲＮＡ、およびＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ由来のｄＯＭＶを含むか、またはそれらからなる組成物。

【請求項16】

髄膜炎菌血清群Ｂ抗原の組合せを含む免疫原性組成物であって、前記組合せは、配列番号１と少なくとも約８５％の同一性を含む少なくとも１つの非脂質化Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ａタンパク質を含み、配列番号６の番号付けに基づく少なくともアミノ酸置換Ｇ２２０Ｓ、少なくとも１つの非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、少なくとも１つのナイセリア属アドヘシンＡ（ＮａｄＡ）タンパク質、および少なくとも１つの界面活性剤抽出外膜小胞（ｄＯＭＶ）を含む、組成物。

【請求項17】

非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号３と少なくとも約８５％の同一性を含む変異タンパク質である、請求項１６に記載の組成物。

【請求項18】

非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づくアミノ酸置換Ｈ２４８Ｌを含む、請求項１７に記載の組成物。

【請求項19】

非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号４を含むかまたはそれからなる、請求項１８に記載の組成物。

【請求項20】

非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づくアミノ酸置換Ｌ１３０ＲおよびＧ１３３Ｄをさらに含む、請求項１６に記載の組成物。

【請求項21】

非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号２を含むかまたはそれからなる、請求項２０に記載の組成物。

【請求項22】

ＮａｄＡタンパク質は、ＮａｄＡ１タンパク質であるか、または配列番号５と少なくとも約８５％の同一性を含むか、または配列番号５を含むかもしくはそれからなる、請求項１６に記載の組成物。

【請求項23】

ｄＯＭＶは、ＰｏｒＡ ＶＲ２サブタイプを含む、請求項１６に記載の組成物。

【請求項24】

ｄＯＭＶは、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を含む、請求項２３に記載の組成物。

【請求項25】

アジュバント、特にアルミニウムベースのアジュバント、特に水酸化アルミニウムアジュバント、リン酸アルミニウムアジュバント、硫酸アルミニウム塩アジュバント、硫酸ヒドロキシリン酸アルミニウムアジュバント、硫酸アルミニウムカリウムアジュバント、ヒドロキシ炭酸アルミニウム、水酸化アルミニウムと水酸化マグネシウムの組合せ、およびそれらの混合物を含む群において選択されるアルミニウムベースのアジュバントをさらに含み、特にリン酸アルミニウムアジュバントである、請求項１６に記載の組成物。

【請求項26】

ｆＨＢＰ Ａタンパク質および／もしくはｆＨＢＰ Ｂは、約２０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約４０μｇ／用量～約１４０μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約１２０μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量、または約１００μｇ／用量の範囲の量で存在し、ＮａｄＡタンパク質は、約２０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約４０μｇ／用量～約１４０μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約１２０μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１００μｇ／用量、または約５０μｇ／用量の範囲の量で存在し、およびｄＯＭＶは、約５μｇ／用量～約４００μｇ／用量、または約１０μｇ／用量～約３００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約２５０μｇ／用量、または約３５μｇ／用量～約２２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約１００μｇ／用量～約１５０μｇ／用量、または約１１０μｇ／用量～約１２５μｇ／用量、または約２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量、または約１２５μｇ／用量の範囲の量で存在する、請求項１６に記載の組成物。

【請求項27】

配列番号２からなる２５～１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる２５～１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなる２５～１００μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の２０～１５０μｇ／用量のｄＯＭＶ、１００～６００μｇ／用量のリン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはそれらからなる、請求項１６に記載の組成物。

【請求項28】

髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹのうちの１つまたはそれ以上に由来するコンジュゲートされた莢膜糖を少なくともさらに含む、請求項１６に記載の組成物。

【請求項29】

請求項１６に記載の組成物を含むワクチン。

【請求項30】

請求項２７に記載の組成物を含むワクチン。

【請求項31】

髄膜炎菌感染症に対する防御のための、または髄膜炎菌に対する免疫応答を誘導するための処置の方法であって、それを必要とする個体に、配列番号２に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むｆＨＢＰ Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡ、配列番号４に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むｆＨＢＰ Ｂタンパク質をコードするｍＲＮＡ、配列番号５に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むＮａｄＡタンパク質をコードするｍＲＮＡ、およびＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ由来のｄＯＭＶを含むか、またはそれらからなる組成物を投与することを含む方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
本出願は、２０２１年２月１９日に出願された欧州特許出願第２１３０５２１１．１号、および２０２１年４月９日に出願された米国仮特許出願第６３／１７２，８８５号の優先権を主張するものであり、これらの開示の全体は、参照により本明細書に組み入れられる。

【0002】

技術分野
本開示は、ワクチン分野に関する。本開示は、髄膜炎菌感染、例えば、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓまたはＮｍ）血清群Ｂ（ＭｅｎＢ）感染を予防するための免疫原性組成物およびワクチンに関する。

【背景技術】

【0003】

髄膜炎菌は、ヒトを唯一の既知の自然宿主とするグラム陰性双球菌である。髄膜炎菌は、ヒトの鼻咽頭および口腔咽頭に頻繁に定着するが、身体の他の領域、例えば、肛門粘膜、結膜および尿生殖路にも見出される（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３）。

【0004】

少なくとも１２種類の髄膜炎菌血清群が、莢膜多糖（ＰＳ）の免疫化学的性質に基づいて分類されている。一部の株は他の株よりも感染を引き起こす可能性が高い。世界的に見て、髄膜炎菌性疾患のほとんどの症例は、血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ、Ｘ、およびＹによって引き起こされる。血清群Ｂは、地方病および一部のアウトブレイクの原因である（非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８）。

【0005】

髄膜炎菌血清群Ｂは、環境中では生存できない呼吸器伝播細菌であり（飛沫を介する）、効果的な伝播のためには、密接かつ長期の接触、または直接的な物理的接触（例えば、キス）を必要とする。５歳未満の小児の２％未満、ならびに青年および若年成人の２０～２５％に存在する無症候性キャリアーが、流行期であっても、自然界での病原体伝播経路およびその維持において主要な要素である（非特許文献９；非特許文献３）。

【0006】

一般に、保菌率が最も高い年齢層は青年および若年成人であり、保菌および侵襲性髄膜炎菌性疾患（ＩＭＤ）の最終的な出現の危険因子として認識されている行動にかかわる傾向がある（非特許文献９；非特許文献２；非特許文献１０；非特許文献１１；非特許文献１２）。したがって、これらの年齢層のワクチン接種は、他の年齢層におけるＩＭＤの発生率に影響を及ぼす可能性があり、このことは、血清群Ｃコンジュゲートワクチンによるワクチン接種キャンペーンが、ワクチン接種を受けていない年齢層における集団保護につながっているいくつかのヨーロッパ諸国で実証されている（非特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５）。

【0007】

侵襲性髄膜炎菌性疾患（ＩＭＤ）は、髄膜炎菌（髄膜炎菌血清群Ｂを含む）によって引き起こされる重篤な疾患であり、症状には、激しい頭痛、発熱、悪心、嘔吐、羞明、項部硬直、嗜眠、筋肉痛、特徴的な点状皮疹が含まれる（非特許文献４）。ＩＭＤは、髄膜炎菌性髄膜脳炎および髄膜炎菌血症を引き起こす可能性がある。髄膜炎菌血症はおそらく、ヒトにとって最も急速に致死的な感染症であり、死亡の約９０％が入院後最初の２日間以内に報告されている。炎症性症候群はＩＭＤ患者の６～１５％に発生することがあり、これは主に莢膜多糖、特異的免疫グロブリンおよび補体画分Ｃ３からなる抗原抗体複合体の沈着によるものである。これらの反応は一般に発症４～１２日後に起こり、ほとんどが単関節性（患者の７～１４％）である関節炎、皮膚血管炎、虹彩炎、上強膜炎、胸膜炎および心膜炎が含まれる。同時に、発熱、白血球増多および血清Ｃ反応性タンパク質の増加が起こることがある。ＩＭＤ患者に起こりうる他の合併症には、単純ヘルペス感染の活性化、対称性遠位壊死、血管炎トポグラフィー上の広範な潰瘍形成、消化管出血、硬膜下滲出液、心筋炎、横紋筋融解症、成人呼吸促迫症候群、酸塩基および水電解質異常、脳梗塞ならびに頭蓋内化膿が含まれる。

【0008】

ＩＭＤ生存者には続発症が発生することがある。神経学的続発症の発生リスクは７～１２％（肺炎球菌性髄膜炎よりも低い）であり、主に乳児に発生する。難聴（持続性または一過性）は最も一般的な合併症であり、症例の約４％に発生する。他の続発症には、視覚障害、水頭症、運動失調、失語症、運動障害、発達遅滞、関節症、痙性、痙攣、腎不全、骨壊死、萎縮性瘢痕、四肢の一部の喪失、学習障害、および行動障害が含まれる（非特許文献３；非特許文献１６；非特許文献１７；非特許文献１８）。

【0009】

血清群Ｂは、地方病の重要な原因であり、キューバ（非特許文献１９）、ノルウェー（非特許文献２０）およびニュージーランド（非特許文献２１；非特許文献２２）を含むいくつかの先進国で複数の長期流行の原因となっている（非特許文献２３）。単一株によるより小規模なアウトブレイクは、フランス（２０００～２００３年）（非特許文献２４；非特許文献２５）および米国（２０１３～２０１７年）のような他の国でも報告されており、その一部は大学と関連している（非特許文献２６；非特許文献２７）。

【0010】

髄膜炎菌Ｂ群を標的とする防御範囲の広い２種類のタンパク質ベースのワクチンが最近認可された：１）４成分ＭｅｎＢタンパク質ワクチン（４ ＣＭｅＮＢ；ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ社［ＧＳＫ］のＢＥＸＳＥＲＯ（登録商標）ワクチン）は、米国（ＵＳ）では１０～２５歳の個人に対して２回投与スケジュールとして認可され、ヨーロッパ、オーストラリア、カナダおよび南米の一部の国では生後２か月から５０歳までの個人への使用が認可されている；２）二価組換えｆＨＢＰタンパク質ベース（ｒＬＰ２０８６）ワクチン（Ｐｆｉｚｅｒ社のＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）ワクチン）は、米国およびヨーロッパで１０～２５歳の個人に対して２回または３回投与スケジュールとして認可されている。

【0011】

これらの両方の認可ワクチンを用いた臨床試験で、発熱が小児集団にとって特に懸念される有害事象であることが明らかになった。３８℃を超える発熱が、通常のワクチンとともにＢＥＸＳＥＲＯワクチンを投与された乳児の最大７０％で報告され（６～１２％に３９℃を超える発熱）、ＢＥＸＳＥＲＯワクチンの接種時（および接種後２４時間以内）にパラセタモールの予防的使用を推奨することにつながった。小児集団におけるＴＲＵＭＥＮＢＡワクチンの第Ｉ／ＩＩｂ相試験では、２０μｇまたは６０μｇのｒＬＰ２０８６を投与された参加者のそれぞれ６４％および９０％で発熱（ほとんどが３９．０℃未満）が報告され、試験は早期に中止された（非特許文献２８）。

【0012】

これらのワクチンによる免疫接種を受けたヒトは、補体媒介性血清殺菌抗体（ＳＢＡ）反応を生じる。しかし、ＴＲＵＭＥＮＢＡおよびＢＥＸＳＥＲＯワクチンについては、いくつかのＭｅｎＢ株に対して、特に幼児および乳児において、ｆＨＢＰ関連のＳＢＡ活性およびカバー範囲が低下することが示された（非特許文献２９；非特許文献３０）。ワクチン抗原への宿主分子の結合が、重要なエピトープを覆うこと、またはワクチンの取込みを減少させることによって免疫原性を低下させ、それが抗原のプロセシングと提示の低下につながることが示された（非特許文献３１）。前臨床試験で、野生型組換えｆＨＢＰ抗原へのＨ因子（ｆＨ）の結合により、ヒトｆＨトランスジェニックマウスおよび乳児アカゲザルにおける防御的な血清抗ｆＨＢＰ抗体反応が障害されることが示されている（非特許文献３２；非特許文献３３）。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0013】

【非特許文献1】Ｒｏｕｐｈａｅｌら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１２年；７９９：１～２０頁

【非特許文献2】Ｓｔｅｐｈｅｎｓ、Ｖａｃｃｉｎｅ．２００９年；２７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｂ７１～７頁

【非特許文献3】Ｂａｔｉｓｔａら、Ａｓｉａｎ Ｐａｃ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ．２０１７年；１０（１１）：１０１９～２９頁

【非特許文献4】Ｈａｒｒｉｓｏｎら、［編］Ｏｒｅｎｓｔｅｉｎ ＷＡ，Ｏｆｆｉｔ ＰＡ，Ｅｄｗａｒｄｓ ＫＭ Ｐｌｏｔｋｉｎ ＳＡ、「Ｖａｃｃｉｎｅｓ．７」、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（ＰＡ）：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ；２０１８年、６１９～４３頁

【非特許文献5】Ｂｏｒｒｏｗら、Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ．２０１７年；１６（４）：３１３～２８頁

【非特許文献6】Ｈａｒｒｉｓｏｎら、Ｅｍｅｒｇ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２０１３年；１９（４）：５６６～７３頁

【非特許文献7】Ｐｏｌｌａｒｄ、Ｐｅｄｉａｔｒ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｊ．２００４年；２３（１２ Ｓｕｐｐｌ）：Ｓ２７４～９頁

【非特許文献8】Ｋｖａｌｓｖｉｇら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．２００３年；５６（６）：４１７～２２頁

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【非特許文献10】Ｂｒｕｃｅら、ＪＡＭＡ．２００１年；２８６（６）：６８８～９３頁

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【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0014】

したがって、細菌株に関してカバー範囲の大きい、髄膜炎菌、例えば、ＭｅｎＢに対する免疫原性組成物、例えば、ワクチンに対しては、依然として需要があると思われる。

【0015】

ＢＥＸＳＥＲＯまたはＴＲＵＭＥＮＢＡよりも広範囲のＭｅｎＢ株をカバー範囲とする免疫原性組成物に対しても需要がある。

【0016】

また、良好な反応原性プロファイルを有する免疫原性組成物に対しても需要がある。

【0017】

幼児および小児での使用に関して良好な反応原性および安全性プロファイルを有する免疫原性組成物に対しては需要がある。

【0018】

さらに、ＴＲＵＭＥＮＢＡと比較して改善された反応性プロファイルを有する免疫原性組成物に対しても需要がある。

【0019】

ＢＥＸＳＥＲＯと比較して改善された反応性プロファイルを有する免疫原性組成物に対しても需要がある。

【0020】

また、他の抗原と容易に組み合わせることができるＭｅｎＢに対する免疫原性組成物、例えば、髄膜炎菌ＡＣＷＹ抗原、例えば、ＡＣＷＹ多糖をジフテリアまたは破傷風トキソイドとコンジュゲートさせたものに対しても需要がある。

【0021】

本開示は、これらの需要のすべてまたは一部に応えることを意図している。

【課題を解決するための手段】

【0022】

一態様では、少なくとも４つの抗原を含み、髄膜炎菌感染症、例えば、ＭｅｎＢによって引き起こされる侵襲的髄膜炎菌性疾患（ＩＭＤ）に対して広範囲の防御を提供することを目的とし、乳児適応に関して許容可能な安全性プロファイルを有する、多成分髄膜炎菌免疫原性組成物が開示される。これは、髄膜炎菌の病態形成における重要な働き、ならびに同種および異種ＭｅｎＢ株に対する血清中殺菌抗体（ＳＢＡ）を誘導する力に基づいて選択された３つの主要な表面露出組換えナイセリア属タンパク質（Ｐｉｚｚａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０００；２８７（５４５９）：１８１６－２０）、すなわち、ＡおよびＢサブファミリー由来の２つの非脂質化Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）ならびにナイセリア属アドヘシンＡ（ＮａｄＡ）タンパク質で構成される。多成分ＭｅｎＢワクチンの免疫原性および潜在的な株カバー範囲を改善するために、界面活性剤抽出によって得られた外膜小胞（ＯＭＶ）（界面活性剤抽出ＯＭＶ、ｄＯＭＶ、外膜タンパク質複合体（ＯＭＰＣ）とも呼ばれる）を製剤に添加した。ｄＯＭＶは、ＭｅｎＢ株、例えば、ＰｏｒＡタンパク質、例えば、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現する株に由来した。ｄＯＭＶの効能は、細菌の表面に非常に豊富に存在する同種ＰｏｒＡを主な対象とする殺菌抗体に関連している。

【0023】

予想外のことに、本発明者らは、本明細書に開示される免疫原性組成物におけるＭｅｎＢ抗原の組合せが、免疫応答を誘発し得るＭｅｎＢ株に対する幅広いカバー範囲を組成物に付与する一方で、これが誘導する反応原性および炎症誘発効果は低いことを観察した。

【0024】

実際に、実施例の項に示すように、本開示の免疫原性組成物、例えば、ワクチンは、ＴＲＵＭＥＮＢＡまたはＢＸＳＥＲＯよりも幅広いＭｅｎＢ株のカバー範囲に到達することを可能にした。注目すべきことに、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ＢＸＳＥＲＯによってはカバーされない６つのＭｅｎＢ株に対して防御免疫応答を誘発した。

【0025】

有利なことに、本明細書に開示される免疫原性組成物の抗原は、流行性ＩＭＤ起因性ＭｅｎＢ株の間に交差防御をもたらす。

【0026】

有利なことに、本明細書に開示される免疫原性組成物は、２つの非脂質化ｆＨＢＰ組換え抗原、Ａ０５（Ｐｆｉｚｅｒ社の分類による、Ｎｏｖａｒｔｉｓ社の命名法による別名はバリアント３．４５、またはＰｕｂＭＬＳＴの命名法によればペプチドＩＤ４５）およびＢ０１（Ｐｆｉｚｅｒ社の分類による、Ｎｏｖａｒｔｉｓ社の命名法による別名はバリアント１．５５、またはＰｕｂＭＬＳＴの命名法によればペプチドＩＤ５５）を含み、これらはｆＨＢＰの２つの遺伝的および免疫学的に多様なサブファミリーのそれぞれに由来する１つのバリアント抗原であり、すべてのＭｅｎＢ株に対する幅広い防御を確実にし、生後６週以後の乳児への適応を可能にする。

【0027】

さらなる利点として、本明細書に開示される免疫原性組成物は、同種ＰｏｒＡを発現する株、例えば、ＰｏｒＡ ＶＲ２株、および例えば、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２株に対する特異的防御応答、ならびに異種株に対する防御的交差反応性を誘導し得るｄＯＭＶを含む。

【0028】

本明細書に開示される免疫原性組成物のさらなる利点は、それらが、ＳＴ－４１／４４、ＳＴ－３２、ＳＴ－２６９、ＳＴ－２１３、ＳＴ－３５、ＳＴ－４６１、ＳＴ－１１およびＳＴ－４６１クローナルコンプレックス由来のＭｅｎＢ株に対する免疫応答を誘導することである。別の利点は、本明細書に開示される免疫原性組成物が、新興の高毒性クローナルコンプレックスであるＳＴ－１１クローナルコンプレックスに対する免疫応答を誘導することである。

【0029】

さらに、実施例の項に示すように、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ＴＲＵＭＥＮＢＡと比較して改善されている（すなわち、反応原性がより少ない）ＢＥＸＳＥＲＯのものに匹敵し、全体的には反応原性がより少ない反応原性プロファイルを示す。注目すべきことに、開示される免疫原性組成物は、ＴＲＵＭＥＮＢＡよりも弱い炎症誘発性サイトカイン応答を示す。さらに、それらは、細胞生存率に対してごくわずかな影響しか及ぼさない。

【0030】

その態様の１つによれば、本開示は、髄膜炎菌抗原の組合せを含む免疫原性組成物であって、少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ａタンパク質、少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂタンパク質、少なくとも１つのナイセリア属アドヘシンＡ（ＮａｄＡ）タンパク質、および少なくとも１つの界面活性剤抽出外膜小胞（ｄＯＭＶ）を含む前記組合せに関する。抗原は、免疫学的有効量で存在する。

【0031】

一実施形態では、髄膜炎菌抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ由来であり得る。

【0032】

その態様の別のものによれば、本開示は、少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ａタンパク質、少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂタンパク質、少なくとも１つのナイセリア属アドヘシンＡ（ＮａｄＡ）タンパク質、および少なくとも１つの界面活性剤抽出外膜小胞（ｄＯＭＶ）を含む髄膜炎菌血清群Ｂ抗原の組合せを含む免疫原性組成物に関する。ｆＨＢＰ Ａタンパク質および／またはｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、脂質化されていない。

【0033】

別の実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、脂質化または非脂質化タンパク質であってよく、例えば、非脂質化タンパク質である。

【0034】

別の実施形態では、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、脂質化または非脂質化タンパク質であってよく、例えば、非脂質化タンパク質である。

【0035】

別の実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質および／またはｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、脂質化されていない。一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質およびｆＨＢＰ Ｂタンパク質の両方が、脂質化されていない。

【0036】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、天然に存在しないｆＨＢＰであり得る。

【0037】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、天然に存在しないｆＨＢＰであり得る。

【0038】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａおよび／またはｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、天然に存在しないｆＨＢＰであり得る。

【0039】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａおよび／またはｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、変異ｆＨＢＰであり得る。一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａおよび／またはｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、変異した非脂質化ｆＨＢＰであり得る。

【0040】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号１と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％の同一性を含む変異タンパク質であり得る。

【0041】

別の実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく：ａ）アミノ酸１１５のアスパラギン（Ｎ１１５）のアミノ酸置換；ｂ）アミノ酸１２１のアスパラギン酸（Ｄ１２１）のアミノ酸置換；ｃ）アミノ酸１２８のセリン（Ｓ１２８）のアミノ酸置換；ｄ）アミノ酸１３０のロイシン（Ｌ１３０）のアミノ酸置換；ｅ）１３１位のバリン（Ｖ１３１）のアミノ酸置換；ｆ）１３３位のグリシン（Ｇ１３３）のアミノ酸置換；ｇ）２１９位のリジン（Ｋ２１９）のアミノ酸置換；およびｈ）２２０位のグリシン（Ｇ２２０）のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つから選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含み得る。

【0042】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号１と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％の同一性を含み、かつ、配列番号６の番号付けに基づく：ａ）アミノ酸１１５のアスパラギン（Ｎ１１５）のアミノ酸置換；ｂ）アミノ酸１２１のアスパラギン酸（Ｄ１２１）のアミノ酸置換；ｃ）アミノ酸１２８のセリン（Ｓ１２８）のアミノ酸置換；ｄ）アミノ酸１３０のロイシン（Ｌ１３０）のアミノ酸置換；ｅ）１３１位のバリン（Ｖ１３１）のアミノ酸置換；ｆ）１３３位のグリシン（Ｇ１３３）のアミノ酸置換；ｇ）２１９位のリジン（Ｋ２１９）のアミノ酸置換；およびｈ）２２０位のグリシン（Ｇ２２０）のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つから選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む変異タンパク質であり得る。

【0043】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づくアミノ酸置換Ｇ２２０Ｓを少なくとも含み得る。ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号１と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％の同一性を含み、かつ、配列番号６の番号付けに基づくアミノ酸置換Ｇ２２０Ｓを少なくとも含む非脂質化タンパク質であり得る。

【0044】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、Ｇ２２０Ｓ、Ｌ１３０Ｒ、およびＧ１３３Ｄからなる群において選択される少なくとも３つのアミノ酸置換を含み得る。別の実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、Ｇ２２０Ｓ、Ｌ１３０Ｒ、およびＧ１３３Ｄの３つのアミノ酸置換のみを含み得る。ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号１と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％の同一性を含み、かつ、配列番号６の番号付けに基づく、Ｇ２２０Ｓ、Ｌ１３０Ｒ、およびＧ１３３Ｄからなる群において選択される少なくとも３つのアミノ酸置換、またはそれらのみを含む変異タンパク質であり得る。

【0045】

別の実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号２を含むか、またはそれからなることができる。

【0046】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号３と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％の同一性を含む変異タンパク質であり得る。

【0047】

別の実施形態では、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、ａ）アミノ酸３８のグルタミン（Ｑ３８）のアミノ酸置換、ｂ）アミノ酸９２のグルタミン酸（Ｅ９２）のアミノ酸置換、ｃ）アミノ酸１３０のアルギニン（Ｒ１３０）のアミノ酸置換、ｄ）アミノ酸２２３のセリン（Ｓ２２３）のアミノ酸置換、およびｅ）アミノ酸２４８でのヒスチジン（Ｈ２４８）のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つから選択される、少なくとも１つのアミノ酸置換を含み得る。

【0048】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号３と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％の同一性を含み、かつ、配列番号６の番号付けに基づく、ａ）アミノ酸３８のグルタミン（Ｑ３８）のアミノ酸置換；ｂ）アミノ酸９２のグルタミン酸（Ｅ９２）のアミノ酸置換；ｃ）アミノ酸１３０のアルギニン（Ｒ１３０）のアミノ酸置換；ｄ）アミノ酸２２３のセリン（Ｓ２２３）のアミノ酸置換；およびｅ）アミノ酸２４８のヒスチジン（Ｈ２４８）のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つから選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む変異タンパク質であり得る。

【0049】

別の実施形態では、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づくアミノ酸置換Ｈ２４８Ｌを少なくとも含み得る。別の実施形態では、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づくアミノ酸置換Ｈ２４８Ｌのみを含み得る。ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号３と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％の同一性を含み、かつ、配列番号６の番号付けに基づく、少なくともアミノ酸置換Ｈ２４８Ｌ、またはそれのみを含む変異タンパク質であり得る。

【0050】

別の実施形態では、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号４を含むか、またはそれからなることができる。

【0051】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質および／またはｆＨＢＰ Ｂは、約２０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約４０μｇ／用量～約１４０μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約１２０μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量、または約１００μｇ／用量の範囲の量で存在し得る。

【0052】

本明細書中で使用される場合、「用量」という用語は、個体に投与される組成物の総量または総容量を指す。用量は、約０．１ｍｌ～約１ｍｌ、例えば、約０．２ｍｌ～約０．８ｍｌ、約０．４ｍｌ～約０．６ｍｌの範囲であり得るか、または約０．５ｍｌであり得る。

【0053】

一実施形態では、ＮａｄＡタンパク質は、ＮａｄＡ１タンパク質であり得る。

【0054】

別の実施形態では、ＮａｄＡタンパク質は、配列番号５と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％の同一性を含み得る。別の実施形態では、ＮａｄＡタンパク質は、配列番号５を含むか、またはそれからなることができる。

【0055】

一実施形態では、ＮａｄＡタンパク質は、約２０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約４０μｇ／用量～約１４０μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約１２０μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量、または約１００μｇ／用量の範囲の量で存在し得る。一実施形態では、ＮａｄＡタンパク質は、約５０μｇ／用量の量で存在し得る。

【0056】

一実施形態では、ｄＯＭＶは、外膜タンパク質ポーリンＡ（ＰｏｒＡ）を含み得る。一実施形態では、ｄＯＭＶは、外膜タンパク質ポーリンＢ（ＰｏｒＢ）を含み得る。別の実施形態では、ｄＯＭＶは、外膜タンパク質ポーリンＡ（ＰｏｒＡ）および外膜タンパク質ポーリンＢ（ＰｏｒＢ）を含み得る。

【0057】

別の実施形態では、ｄＯＭＶは、外膜タンパク質ポーリンＡ（ＰｏｒＡ）および／または外膜タンパク質ポーリンＢ（ＰｏｒＢ）を含み得る。ｄＯＭＶは、ポーリンＡ（血清型ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２）、ポーリンＢ（血清型ＰｏｒＢ Ｐ２．２ａ）、および場合により、免疫型ＬＯＳ Ｌ３，７を含み得る。ＰｏｒＡおよびＰｏｒＢは、ｄＯＭＶのタンパク質の約５０％に相当し得る。

【0058】

ＰｏｒＡは、前記ｄＯＭＶ中に存在する総タンパク質に比して約３％～約１５％の範囲の量、または約５％～約９％もしくは約１０％の量で存在し得る。ＰｏｒＢは、ｄＯＭＶ中に存在する総タンパク質に比して約３０％～約７０％、または約３５％～約６５％、または約３８％～約５８％の範囲の量で存在し得る。

【0059】

一実施形態では、ｄＯＭＶは、ポーリンＡ（ＰｏｒＡ）を含み得る。一実施形態では、ＰｏｒＡは、ＶＲ２ファミリーのＰｏｒＡであり得る。一実施形態では、ｄＯＭＶは、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２サブタイプを含み得る。

【0060】

一実施形態では、ｄＯＭＶは、ＰｏｒＡ ＶＲ２、Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株９９Ｍから得ることができる。

【0061】

一実施形態では、ｄＯＭＶは、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２およびＰｏｒＢ Ｐ２．２ａを含み得る。

【0062】

一実施形態では、ｄＯＭＶは、少なくともデオキシコール酸処理の工程を使用する界面活性剤抽出法によって得ることができる。

【0063】

一実施形態では、ｄＯＭＶは、約５μｇ／用量～約４００μｇ／用量、または約１０μｇ／用量～約３００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約２５０μｇ／用量、または約３５μｇ／用量～約２２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約１００μｇ／用量～約１５０μｇ／用量、または約１１０μｇ／用量～約１２５μｇ／用量、または約２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量、または約１２５μｇ／用量の範囲の量で存在し得る。

【0064】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、アジュバントをさらに含み得る。一実施形態では、アジュバントは、アルミニウムベースのアジュバントであり得る。一実施形態では、アルミニウムベースのアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバント、リン酸アルミニウムアジュバント、硫酸アルミニウム塩アジュバント、硫酸ヒドロキシリン酸アルミニウムアジュバント、硫酸アルミニウムカリウムアジュバント、ヒドロキシ炭酸アルミニウム、水酸化アルミニウムと水酸化マグネシウムの組合せ、およびそれらの混合物を含む群において選択されるアルミニウムベースのアジュバントであり得る。一実施形態では、アジュバントは、リン酸アルミニウムアジュバントであり得る。

【0065】

別の実施形態では、本明細書に開示する組成物は、薬学的に許容される賦形剤をさらに含み得る。

【0066】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、緩衝液をさらに含み得る。一実施形態では、緩衝液は、Ｔｒｉｓ緩衝液、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、またはヒスチジン緩衝液を含む群において選択される。一実施形態では、緩衝液は、酢酸緩衝液であり得る。一実施形態では、酢酸緩衝液は、酢酸ナトリウム緩衝液であり得る。一実施形態では、酢酸ナトリウム緩衝液は、約１０ｍＭ～約３００ｍＭの範囲、もしくは約１０ｍＭ～約２５０ｍＭの範囲、もしくは約２０ｍＭ～約２５０ｍＭの範囲、もしくは約２０ｍＭ～約１５０ｍＭの範囲、もしくは約２０ｍＭ～約１３０ｍＭ、もしくは約３０ｍＭ～約１２０ｍＭ、もしくは約４０ｍＭ～約１００ｍＭ、もしくは約５０ｍＭ～約８０ｍＭ、もしくは約５０ｍＭ～約６０ｍＭの濃度で、または例えば、約５０ｍＭの濃度で存在し得る。

【0067】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、塩、例えば、ナトリウム塩、カルシウム塩、またはマグネシウム塩をさらに含み得る。ナトリウム塩は、例えば、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウムを含む群において選択されるナトリウム塩であり得る。一実施形態では、ナトリウム塩は、塩化ナトリウムであり得る。カルシウム塩は、塩化カルシウム塩であり得る。マグネシウム塩は、塩化マグネシウム塩であり得る。一実施形態では、ナトリウム塩は、約１０ｍＭ～約３００ｍＭ、もしくは約３０ｍＭ～約２８０ｍＭ、もしくは約５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、もしくは約６０ｍＭ～約２２０ｍＭ、もしくは約８０ｍＭ～約２００ｍＭ、もしくは約１００ｍＭ～約１８０ｍＭ、もしくは約１２０ｍＭ～約１６０ｍＭの範囲の濃度で存在することができ、または例えば、約１５０ｍＭの濃度で存在し得る。カルシウム塩またはマグネシウム塩は、約１ｍＭ～約１５ｍＭ、または約５ｍＭ～約１０ｍＭの範囲の量で存在し得る。

【0068】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約４．０～約９．０の範囲のｐＨを有し得る。一実施形態では、本明細書に開示される組成物のｐＨは、約４．５～約８．５、もしくは約４．８～約８．２、もしくは約５．０～約８．０、もしくは約５．２～約７．５、もしくは約５．４～約７．０、もしくは約５．５～約６．８、もしくは約５．７～約６．５、もしくは約５．８～約６．２の範囲であり得るか、または約６．０であり得る。別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２を含むかまたはそれからなる非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４を含むかまたはそれからなる非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、ＮａｄＡタンパク質、およびＰｏｒＡタンパク質を発現するＭｅｎＢ由来のｄＯＭＶを含むか、またはそれらからなることができる。組成物において、ＮａｄＡはＮａｄＡ１であってもよく、もしくは配列番号５と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、もしくは約１００％のアミノ酸配列同一性を含んでもよく、もしくは配列番号５からなってもよく、ならびに／またはｄＯＭＶは、ＰｏｒＡ ＶＲ２サブタイプもしくはＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２、および必要に応じてＰｏｒＢ Ｐ２．２ａを含んでもよく、もしくはＭｅｎＢ株９９Ｍから得ることもできる。本明細書に開示される組成物は、リン酸アルミニウムアジュバントを含み得る。本明細書に開示される組成物は、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含み得る。

【0069】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号１と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％の同一性を含む非脂質化変異ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号３と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも９９％、または少なくとも約９９．５％の同一性を含む非脂質化変異ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、ＰｏｒＡタンパク質を発現するＭｅｎＢ由来のＮａｄＡタンパク質、およびｄＯＭＶを含むか、またはそれらからなることができる。組成物において、ＮａｄＡは、ＮａｄＡ１であってもよく、もしくは配列番号５と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、もしくは約１００％のアミノ酸配列同一性を含んでもよく、または配列番号５からなってもよく、ならびに／またはｄＯＭＶは、ＰｏｒＡ ＶＲ２サブタイプもしくはＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２、および必要に応じてＰｏｒＢ Ｐ２．２ａを含んでもよく、もしくはＭｅｎＢ株９９Ｍから得ることもできる。本明細書に開示される組成物は、リン酸アルミニウムアジュバントを含み得る。本明細書に開示される組成物は、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含み得る。

【0070】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号１と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％の同一性を含み、かつ、配列番号６の番号付けに基づく：ａ）アミノ酸１１５のアスパラギン（Ｎ１１５）のアミノ酸置換；ｂ）アミノ酸１２１のアスパラギン酸（Ｄ１２１）のアミノ酸置換；ｃ）アミノ酸１２８のセリン（Ｓ１２８）のアミノ酸置換；ｄ）アミノ酸１３０のロイシン（Ｌ１３０）のアミノ酸置換；ｅ）１３１位のバリン（Ｖ１３１）のアミノ酸置換；ｆ）１３３位のグリシン（Ｇ１３３）のアミノ酸置換；ｇ）２１９位のリジン（Ｋ２１９）のアミノ酸置換；およびｈ）２２０位のグリシン（Ｇ２２０）のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つから選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む非脂質化変異ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号３と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％の同一性を含み、かつ、配列番号６の番号付けに基づく：ａ）アミノ酸３８のグルタミン（Ｑ３８）のアミノ酸置換；ｂ）アミノ酸９２のグルタミン酸（Ｅ９２）のアミノ酸置換；ｃ）アミノ酸１３０のアルギニン（Ｒ１３０）のアミノ酸置換；ｄ）アミノ酸２２３のセリン（Ｓ２２３）のアミノ酸置換；およびｅ）２４８位のヒスチジン（Ｈ２４８）のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つから選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む非脂質化変異ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、ＮａｄＡタンパク質、ならびにＰｏｒＡタンパク質を発現するＭｅｎＢ由来のｄＯＭＶを含み得る。組成物において、ＮａｄＡは、ＮａｄＡ１であってもよく、もしくは配列番号５と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含んでもよく、もしくは配列番号５からなってもよく、ならびに／またはｄＯＭＶは、ＰｏｒＡ ＶＲ２サブタイプもしくはＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２、および必要に応じてＰｏｒＢ Ｐ２．２ａを含んでもよく、もしくはＭｅｎＢ株９９Ｍから得ることもできる。本明細書に開示される組成物は、リン酸アルミニウムアジュバントを含み得る。本明細書に開示される組成物は、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはそれらからなることができる。

【0071】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号１と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％の同一性を含み、かつ、配列番号６の番号付けに基づく、Ｇ２２０Ｓ、Ｌ１３０Ｒ、およびＧ１３３Ｄからなる群において選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む非脂質化変異ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号３と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％の同一性を含み、かつ、配列番号６の番号付けに基づく、アミノ酸置換Ｈ２４８Ｌを少なくとも含む非脂質化変異ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、ＮａｄＡタンパク質、ならびにＰｏｒＡタンパク質を発現するＭｅｎＢ由来のｄＯＭＶを含むか、またはそれらからなることができる。組成物において、ＮａｄＡは、ＮａｄＡ１であってもよく、もしくは配列番号５と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、もしくは約１００％のアミノ酸配列同一性を含んでもよく、もしくは配列番号５からなってもよく、ならびに／またはｄＯＭＶは、ＰｏｒＡ ＶＲ２サブタイプもしくはＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２、および必要に応じてＰｏｒＢ Ｐ２．２ａを含んでもよく、もしくはＭｅｎＢ株９９Ｍから得ることもできる。本明細書に開示される組成物は、リン酸アルミニウムアジュバントを含み得る。本明細書に開示される組成物は、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含み得る。

【0072】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号１と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％の同一性を含み、かつ、配列番号６の番号付けに基づく、Ｇ２２０Ｓ、Ｌ１３０Ｒ、およびＧ１３３Ｄからなる群において選択される少なくとも３つのアミノ酸置換を含む非脂質化変異ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号３と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％の同一性を含み、かつ、配列番号６の番号付けに基づく、少なくともアミノ酸置換Ｈ２４８Ｌを含む非脂質化変異ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、ＮａｄＡタンパク質、ならびにＰｏｒＡタンパク質を発現するＭｅｎＢ由来のｄＯＭＶを含むか、またはそれらからなることができる。組成物において、ＮａｄＡは、ＮａｄＡ１であってもよく、もしくは配列番号５と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、もしくは約１００％のアミノ酸配列同一性を含んでもよく、もしくは配列番号５からなってもよく、ならびに／またはｄＯＭＶは、ＰｏｒＡ ＶＲ２サブタイプもしくはＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２、および必要に応じてＰｏｒＢ Ｐ２．２ａを含んでもよく、もしくはＭｅｎＢ株９９Ｍから得ることもできる。本明細書に開示される組成物は、リン酸アルミニウムアジュバントを含み得る。本明細書に開示される組成物は、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含み得る。

【0073】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号１と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％の同一性を含み、かつ、配列番号６の番号付けに基づく、Ｇ２２０Ｓ、Ｌ１３０Ｒ、およびＧ１３３Ｄからなる群において選択される３つのアミノ酸置換のみを含む非脂質化変異ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号３と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％の同一性を含み、かつ、配列番号６の番号付けに基づく、アミノ酸置換Ｈ２４８Ｌのみを含む非脂質化変異ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、ＮａｄＡタンパク質、ならびにＰｏｒＡタンパク質を発現するＭｅｎＢ由来のｄＯＭＶを含むか、またはそれらからなることができる。組成物において、ＮａｄＡは、ＮａｄＡ１であってもよく、もしくは配列番号５と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも９９％、少なくとも約９９．５％、もしくは約１００％のアミノ酸配列同一性を含んでもよく、もしくは配列番号５からなってもよく、ならびに／またはｄＯＭＶは、ＰｏｒＡ ＶＲ２サブタイプもしくはＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２、および必要に応じてＰｏｒＢ Ｐ２．２ａを含んでもよく、もしくはＭｅｎＢ株９９Ｍから得ることもできる。本明細書に開示される組成物は、リン酸アルミニウムアジュバントを含み得る。本明細書に開示される組成物は、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含み得る。

【0074】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２を含むかまたはそれからなる非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４を含むかまたはそれからなる非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５を含むかまたはそれからなるＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２および必要に応じてＰｏｒＢ Ｐ２．２ａを発現するＭｅｎＢ由来の、またはＭｅｎＢ株９９Ｍから得られるｄＯＭＶを含むか、またはそれらからなることができる。本明細書に開示される組成物は、リン酸アルミニウムアジュバントを含み得る。本明細書に開示される組成物は、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含み得る。

【0075】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２からなる非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなるＮａｄＡタンパク質、ならびにＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２および必要に応じてＰｏｒＢ Ｐ２．２ａを発現するＭｅｎＢ由来の、またはＭｅｎＢ株９９Ｍから得られるｄＯＭＶを含むか、またはそれらからなることができる。本明細書に開示される組成物は、リン酸アルミニウムアジュバントを含み得る。

【0076】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２からなる非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなるＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２および必要に応じてＰｏｒＢ Ｐ２．２ａを発現するＭｅｎＢ由来の、またはＭｅｎＢ株９９Ｍから得られるｄＯＭＶ、リン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはそれらからなることができる。

【0077】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むｆＨＢＰ Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡ、配列番号４と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むｆＨＢＰ Ｂタンパク質をコードするｍＲＮＡ、配列番号５と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むＮａｄＡタンパク質をコードするｍＲＮＡ、およびＰｏｒＡを発現するＭｅｎＢ由来のｄＯＭＶを含むか、またはそれらからなることができる。ＰｏｒＡは、ＰｏｒＡ ＶＲ２サブタイプもしくはＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２であり得る。

【0078】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２を含む約２５～約１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４を含む約２５～約１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５を含む約２５～約１００μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の約２０～約１５０μｇ／用量のｄＯＭＶ、約１００～約６００μｇ／用量のリン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはこれらからなることができる。

【0079】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２からなる約２５～約１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる約２５～約１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなる約２５～約１００μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の約２０～約１５０μｇ／用量のｄＯＭＶ、約１００～約６００μｇ／用量のリン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはこれらからなることができる。

【0080】

別の態様では、本開示は、本明細書に開示される組成物を含むワクチンに関する。

【0081】

別の態様では、本開示は、医薬品として、特にワクチンとして、本明細書に開示される組成物に関する。

【0082】

別の態様では、本開示は、髄膜炎菌感染症に対する、および例示的な一実施形態では髄膜炎菌血清群Ｂ感染症に対する防御に使用するための、本明細書に開示される組成物に関する。

【0083】

別の態様では、本開示は、髄膜炎菌に対する、および例示的な一実施形態では髄膜炎菌血清群Ｂ細菌に対する免疫応答の誘導に使用するための、本明細書に開示される組成物に関する。

【0084】

別の態様では、本開示は、ＳＴ－４１／４４、ＳＴ－３２、ＳＴ－２６９、ＳＴ－２１３、ＳＴ－３５、ＳＴ－４６１、ＳＴ－１１および／またはＳＴ－４６１クローナルコンプレックス由来の髄膜炎菌血清群Ｂ細菌に対する免疫応答の誘導に使用するための、本明細書に開示される組成物に関する。

【0085】

別の態様では、本開示は、ＳＴ－１１クローナルコンプレックス由来の髄膜炎菌血清群Ｂ細菌に対する免疫応答の誘導に使用するための、本明細書に開示される組成物に関する。

【0086】

別の態様では、本開示は、髄膜炎菌感染症に対して、および例示的な一実施形態では髄膜炎菌血清群Ｂ感染症に対して個体を防御するための方法であって、本明細書に開示される免疫原性組成物、または本明細書に開示されるワクチンを個体に投与する工程を少なくとも含む方法に関する。

【0087】

別の態様では、本開示は、個体における髄膜炎菌感染症、および例示的な一実施形態では髄膜炎菌血清群Ｂ感染によって引き起こされる侵襲性髄膜炎菌性疾患の発生のリスクを低下させる方法であって、本明細書に開示される免疫原性組成物、または本明細書に開示されるワクチンを個体に投与する工程を少なくとも含む方法に関する。

【0088】

別の態様では、本開示は、個体において髄膜炎菌に対する、および例示的な一実施形態では髄膜炎菌血清群Ｂ細菌に対する免疫応答を誘発させるための方法であって、本明細書に開示される免疫原性組成物、または本明細書に開示されるワクチンを個体に投与する工程を少なくとも含む方法に関する。

【0089】

別の態様では、本開示は、ＳＴ－４１／４４、ＳＴ－３２、ＳＴ－２６９、ＳＴ－２１３、ＳＴ－３５、ＳＴ－４６１、ＳＴ－１１および／またはＳＴ－４６１クローナルコンプレックス由来の髄膜炎菌血清群Ｂ細菌に対する免疫応答を誘発させるための方法であって、本明細書に開示される免疫原性組成物、または本明細書に開示されるワクチンを個体に投与する工程を少なくとも含む方法に関する。

【0090】

別の態様では、本開示は、ＳＴ－１１クローナルコンプレックス由来の髄膜炎菌血清群Ｂ細菌に対する免疫応答を誘発させるための方法であって、本明細書に開示される免疫原性組成物、または本明細書に開示されるワクチンを個体に投与する工程を少なくとも含む方法に関する。

【0091】

別の態様では、本開示は、本明細書に開示される免疫原性組成物または本明細書に開示されるワクチンを調製するための方法であって、髄膜炎菌抗原と、必要に応じてアルミニウム塩とを混合する工程を少なくとも含み、該抗原は、少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ａタンパク質、少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂタンパク質、少なくとも１つのナイセリア属アドヘシンＡ（ＮａｄＡ）タンパク質、および少なくとも１つの界面活性剤抽出外膜小胞（ｄＯＭＶ）を含む、方法に関する。

【0092】

一実施形態では、混合の工程は、場合によりＡｌＰＯ_４上に吸着された少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ａタンパク質の、および場合によりＡｌＰＯ_４塩上に吸着された少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂタンパク質の第１の混合物を、場合によりＡｌＰＯ_４上に吸着された少なくとも１つのＮａｄＡタンパク質の、およびｄＯＭＶの第２の混合物と混ぜ合わせることを含み得る。

【0093】

一実施形態では、混合の工程は、ＡｌＰＯ_４上に吸着された少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ａタンパク質の、およびＡｌＰＯ_４塩上に吸着された少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂタンパク質の第１の混合物を、ＡｌＰＯ_４上に吸着された少なくとも１つのＮａｄＡタンパク質の、およびｄＯＭＶの第２の混合物と混ぜ合わせることを含み得る。

【0094】

別の実施形態では、本明細書に開示される調製のための方法に使用するための抗原およびアルミニウム塩は、緩衝液中にあってよい。

【0095】

別の態様では、本開示は、複数の容器を含む部品キットであって、容器の各々が、少なくとも１つの髄膜炎菌抗原または少なくとも２つの髄膜炎菌抗原の組合せを含み、前記抗原が、ｆＨＢＰ Ａタンパク質、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、ＮａｄＡタンパク質、および界面活性剤抽出外膜小胞（ｄＯＭＶ）を含む群から選択される、部品キットに関する。

【0096】

一実施形態では、部品キットの抗原の少なくとも１つは、乾燥形態であり得る。一実施形態では、抗原の少なくとも１つは、凍結乾燥形態または乾燥マイクロペレット形態であり得る。一実施形態では、キットは、生理学的に注射可能なビヒクルを含む容器を、場合により含み得る。

【図面の簡単な説明】

【0097】

【図1A】０日目、２８日目および５６日目にＴＲＵＭＥＮＢＡまたは製剤Ｆ１～Ｆ６またはＭＥＮＱＵＡＤＦＩと同時投与されたＦ１を用いて免疫化されたウサギから０日目（白抜き／白色記号）および４２日目（塗りつぶされた／黒色記号）に採取された血清における、ＥＬＩＳＡによって測定された特定の抗Ａ０５ｔｍＮ（図１Ａ）または抗Ｂ０１ｓｍＮ（図１Ｂ）ＩｇＧ力価を示す図である（ＬＬＯＱは定量下限を意味する）。

【図1B】０日目、２８日目および５６日目にＴＲＵＭＥＮＢＡまたは製剤Ｆ１～Ｆ６またはＭＥＮＱＵＡＤＦＩと同時投与されたＦ１を用いて免疫化されたウサギから０日目（白抜き／白色記号）および４２日目（塗りつぶされた／黒色記号）に採取された血清における、ＥＬＩＳＡによって測定された特定の抗Ａ０５ｔｍＮ（図１Ａ）または抗Ｂ０１ｓｍＮ（図１Ｂ）ＩｇＧ力価を示す図である（ＬＬＯＱは定量下限を意味する）。

【図2A】０日目および２８日目にＢＥＸＳＥＲＯまたは製剤Ｆ１～Ｆ５およびＭＥＮＱＵＡＤＦＩと同時投与されたＦ１を用いて免疫化されたウサギから０日目（白抜き／白色記号）および４２日目（塗りつぶされた／黒色記号）に採取された血清における、ＥＬＩＳＡによって測定された特定の抗ＮａｄＡ ＩｇＧ力価を示す図である。

【図2B】０日目、２８日目および５６日目に製剤Ｆ１～Ｆ５およびＭＥＮＱＵＡＤＦＩと同時投与されたＦ１を用いて免疫化されたウサギから０日目および４２日目に採取された血清における、ＥＬＩＳＡによって測定された特定の抗ｄＯＭＶ ＩｇＧを示す図である。

【図3】０日目、２８日目および５６日目にＴＲＵＭＥＮＢＡ、ＢＥＸＳＥＲＯまたは製剤Ｆ１～Ｆ６またはＭＥＮＱＵＡＤＦＩと同時投与されたＦ１を用いて免疫化されたウサギからの０日目（白抜き／白色記号）および４２日目（塗りつぶされた／黒色記号）の精製ＩｇＧにおける、近縁ＭｅｎＢ Ｂ４４株（株番号３）に対して測定されたｈＳＢＡを示す図である。

【図4】０日目、２８日目および５６日目にＴＲＵＭＥＮＢＡ、ＢＥＸＳＥＲＯまたは製剤Ｆ１～Ｆ６またはＭＥＮＱＵＡＤＦＩと同時投与されたＦ１を用いて免疫化されたウサギからの０日目（白抜き／白色記号）および４２日目（塗りつぶされた／黒色記号）の精製ＩｇＧにおける、異種ＭｅｎＢ Ｂ２４株（株番号４）に対して測定されたｈＳＢＡを示す図である。

【図5】０日目、２８日目および５６日目にＴＲＵＭＥＮＢＡ、ＢＥＸＳＥＲＯまたは製剤Ｆ１～Ｆ６またはＭＥＮＱＵＡＤＦＩと同時投与されたＦ１を用いて免疫化されたウサギからの０日目（白抜き／白色記号）および４２日目（塗りつぶされた／黒色記号）の精製ＩｇＧにおける、異種ＭｅｎＢ Ｂ２４株（株番号１８）に対して測定されたｈＳＢＡを示す図である。

【図6】０日目、２８日目および５６日目にＴＲＵＭＥＮＢＡ、ＢＥＸＳＥＲＯまたは製剤Ｆ１～Ｆ６またはＭＥＮＱＵＡＤＦＩと同時投与されたＦ１を用いて免疫化されたウサギからの０日目（白抜き／白色記号）および４２日目（塗りつぶされた／黒色記号）の精製ＩｇＧにおける、近縁ＭｅｎＢ Ａ５６株（株番号１）に対して測定されたｈＳＢＡを示す図である。

【図7】０日目、２８日目および５６日目にＴＲＵＭＥＮＢＡ、ＢＥＸＳＥＲＯまたは製剤Ｆ１～Ｆ６またはＭＥＮＱＵＡＤＦＩと同時投与されたＦ１を用いて免疫化されたウサギからの０日目（白抜き／白色記号）および４２日目（塗りつぶされた／黒色記号）の精製ＩｇＧにおける、異種ＭｅｎＢ Ａ２２株（株番号２）に対して測定されたｈＳＢＡを示す図である。

【図8】０日目、２８日目および５６日目にＴＲＵＭＥＮＢＡ、ＢＥＸＳＥＲＯまたは製剤Ｆ１～Ｆ６またはＭＥＮＱＵＡＤＦＩと同時投与されたＦ１を用いて免疫化されたウサギからの０日目（白抜き／白色記号）および４２日目（塗りつぶされた／黒色記号）の精製ＩｇＧにおける、ＭｅｎＢ ＮａｄＡ１株（株番号６）に対して測定されたｈＳＢＡを示す図である。

【図9】０日目、２８日目および５６日目にＴＲＵＭＥＮＢＡ、ＢＥＸＳＥＲＯまたは製剤Ｆ１～Ｆ６またはＭＥＮＱＵＡＤＦＩと同時投与されたＦ１を用いて免疫化されたウサギからの０日目（白抜き／白色記号）および４２日目（塗りつぶされた／黒色記号）の精製ＩｇＧにおける、ＭｅｎＢ ＯＭＶ ＰｏｒＡ １．２株（株番号５）に対して測定されたｈＳＢＡを示す図である。

【図10】異なる用量のＢＥＸＳＥＲＯおよびＴＲＵＭＥＮＢＡで処置された成人ＰＴＥ由来樹状細胞（ＤＣ）のサイトカイン産生（ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＭＩＰ－１βおよびＩＬ－１ｂ）を示す図である：ＰＴＥからの培養上清は、処置４８時間後に回収され、マルチプレックスアレイを使用してサイトカイン分泌について評価された。グラフは、樹状細胞（ＤＣ）におけるＩＬ－６、ＴＮＦα、ＩＬ－１β、およびＭＩＰ－１βのサイトカイン産生の幾何平均値（ＧＭＶ）を示す。ヒト用量（ｎ＝２０ドナー）の１０倍希釈液での処置であった。Ｎ／Ａは、抗原なしのｍｏｃｋ対照である。

【図11】異なる用量のＢＥＸＳＥＲＯおよびＴＲＵＭＥＮＢＡで処置された新生児ＰＴＥ由来ＤＣのサイトカイン産生（ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＭＩＰ－１βおよびＩＬ－１β）を示す図である：ＰＴＥからの培養上清は、処置４８時間後に回収され、マルチプレックスアレイを使用してサイトカイン分泌について評価された。グラフは、ＤＣにおけるＩＬ－６、ＴＮＦα、ＩＬ－１β、およびＭＩＰ－１βのサイトカイン産生のＧＭＶを示す。ヒト用量（ｎ＝２０ドナー）の１０倍希釈液での処置であった。

【図12A】１：１００００の希釈でＴＲＵＭＥＮＢＡと比べた、成人および新生児ＰＴＥにおいてＢＥＸＳＥＲＯによって引き起こされたサイトカイン分泌の９５％信頼区間での幾何平均値の比のフォレストプロットを示す図である。点線は１の値に設定され、１より下の値および区間の信頼度は、ＢＥＸＳＥＲＯがＴＲＵＭＥＮＢＡより劣っていることを意味し、値および区間が１より上ならば、ＢＥＸＳＥＲＯはＴＲＵＭＥＮＢＡより優れている。

【図12B】１：１００００の希釈でＴＲＵＭＥＮＢＡと比べた、成人および新生児ＰＴＥにおいてＢＥＸＳＥＲＯによって引き起こされたサイトカイン分泌の９５％信頼区間での幾何平均値の比のフォレストプロットを示す図である。点線は１の値に設定され、１より下の値および区間の信頼度は、ＢＥＸＳＥＲＯがＴＲＵＭＥＮＢＡより劣っていることを意味し、値および区間が１より上ならば、ＢＥＸＳＥＲＯはＴＲＵＭＥＮＢＡより優れている。

【図13-1】成人ＰＴＥモジュールでＦ１～Ｆ５製剤によって誘導されたサイトカイン（ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＭＩＰ－１βおよびＩＬ－１β）分泌を示す図である。ＭＩＭＩＣ成人ＰＴＥは、異なる用量のＦ１～Ｆ５製剤および対照（ＢＥＸＳＥＲＯ）で処置された。その後、培養上清が採取され、マルチプレックスアレイによりサイトカインの分泌について評価された。ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＩＬ－１β、およびＭＩＰ－１βの平均値±９５％ＣＩ；ｎ＝１６～２４。

【図13-2】図１３－１の続き。

【図13-3】図１３－２の続き。

【図13-4】図１３－３の続き。

【図14】図１４Ａ、１４Ｂおよび１４Ｃは、１：１００００の希釈の成人ＰＴＥにおける製剤Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４、およびＦ５と比べた、ＢＥＸＳＥＲＯによって誘導されたサイトカイン分泌の９５％信頼区間での幾何平均の比のフォレストプロットを示す図である。点線は１の値に設定され、１より下の値および区間の信頼度は、ＢＥＸＳＥＲＯが処置より劣っていることを意味し、値および区間が１より上ならば、ＢＥＸＳＥＲＯは処置より優れている。図１４Ａは、Ｆ２およびＦ３製剤で得られた結果を示し、図１４Ｂおよび図１４Ｃは、Ｆ１、Ｆ４およびＦ５製剤で得られた結果を示す。

【図15】成人ＭＩＭＩＣ ＰＴＥにおけるＦ１～Ｆ５製剤、およびＢＥＸＳＥＲＯで処置後の免疫細胞傷害性（すなわち処置後の生細胞のパーセンテージ）を示す図である。

【図16-1】新生児ＰＴＥモジュールでＢＥＸＳＥＲＯと比較したＦ１～Ｆ５製剤のサイトカイン（ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＭＩＰ－１βおよびＩＬ－１β）分泌レベルの増加を示す図である。ＭＩＭＩＣ新生児ＰＴＥは、異なる用量のＦ１～Ｆ５製剤および対照（ＢＥＸＳＥＲＯ）で処置された。その後、培養上清が採取され、マルチプレックスアレイによりサイトカインの分泌について評価された。ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＩＬ－１β、およびＭＩＰ－１β（ｎ＝１６～２４）の平均±９５％ＣＩ。Ｎ／Ａは、抗原なしのｍｏｃｋ対照である。

【図16-2】図１６－１の続き。

【図16-3】図１６－２の続き。

【図16-4】図１６－３の続き。

【図17】図１７Ａおよび１７Ｂは、１：１００００の希釈の新生児ＰＴＥにおける製剤Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４、およびＦ５と比べた、ＢＥＸＳＥＲＯによって誘導されたサイトカイン分泌の９５％信頼区間での幾何平均の比のフォレストプロットを示す図である。点線は１の値に設定され、１より下の値および区間の信頼度は、Ｂｅｘｓｅｒｏ（登録商標）が処置より劣っていることを意味し、値および区間がより上ならば、Ｂｅｘｓｅｒｏ（登録商標）は処置より優れている。図１７Ａは、Ｆ２およびＦ３製剤で得られた結果を示し、図１７Ｂは、Ｆ１、Ｆ４およびＦ５製剤で得られた結果を示す。

【図18】新生児ＭＩＭＩＣ ＰＴＥにおけるＦ１～Ｆ５製剤、およびＢＥＸＳＥＲＯで処置後の免疫細胞傷害性（すなわち処置後の生細胞のパーセンテージ）を示す図である。

【図19】種々のクローナルコンプレックス由来の１８種類のＭｅｎＢ株においてテストした種々の製剤：Ｆ３、ＴＲＵＭＥＮＢＡおよびＢＥＸＳＥＲＯによってカバーされるまたはカバーされない種々のクローナルコンプレックスを例示するｈＳＢＡ結果の概要を示す図である。黒い円弧：ＢＥＸＳＥＲＯ。点々の円弧：ＴＲＵＭＥＮＢＡ。グレーの円弧：Ｆ３製剤。円弧内の数字は、１クローナルコンプレックスあたりのテストしたＭｅｎＢ株の合計数のうち、製剤によってカバーされるＭｅｎＢ株の数を示す。

【発明を実施するための形態】

【0098】

配列の説明
配列番号１は、脂質化の原因となるシグナルペプチドを有しないｆＨＢＰ Ａ０５野生型配列を表す。

【0099】

CSSGSGSGGGGVAADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSISQNGTLTLSAQGAEKTFKVGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDGQTITLASGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPSGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELASAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIREKVHEIGIAGKQ

【0100】

配列番号２は、脂質化の原因となるシグナルペプチドを有さず、変異Ｇ２２０Ｓ、Ｌ１３０Ｒ、Ｇ１３３Ｄを有する変異ｆＨＢＰ Ａ０５配列を表す（番号付けは、配列番号６（ｆＨＢＰ Ｂ２４）を基準にして決定される）。

【0101】

CSSGSGSGGGGVAADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSISQNGTLTLSAQGAEKTFKVGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDGQTITLASGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFRVSDLGGEHTAFNQLPSGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELASAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKSTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIREKVHEIGIAGKQ

【0102】

配列番号３は、脂質化の原因となるシグナルペプチドを有しないｆＨＢＰ Ｂ０１野生型配列を表す。

【0103】

CSSGGGGSGGGGVTADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSISQNGTLTLSAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTALQTEQEQDPEHSEKMVAKRRFRIGDIAGEHTSFDKLPKDVMATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKSPELNVDLAVAYIKPDEKHHAVISGSVLYNQDEKGSYSLGIFGEKAQEVAGSAEVETANGIHHIGLAAKQ

【0104】

配列番号４は、脂質化の原因となるシグナルペプチドを有さず、変異Ｈ２４８Ｌを有する変異ｆＨＢＰ Ｂ０１配列を表す（番号付けは、配列番号６（ｆＨＢＰ Ｂ２４）を基準にして決定される）。

【0105】

CSSGGGGSGGGGVTADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSISQNGTLTLSAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTALQTEQEQDPEHSEKMVAKRRFRIGDIAGEHTSFDKLPKDVMATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKSPELNVDLAVAYIKPDEKHHAVISGSVLYNQDEKGSYSLGIFGEKAQEVAGSAEVETANGIHLIGLAAKQ

【0106】

配列番号５は、Ｎ末端のシグナルペプチドの２３アミノ酸およびＣ末端の最後の５５アミノ酸が欠失しているＭｅｎＢ ＭＣ５８株由来のＮａｄＡ１配列を表す。

【0107】

MTSDDDVKKAATVAIVAAYNNGQEINGFKAGETIYDIGEDGTITQKDATAADVEADDFKGLGLKKVVTNLTKTVNENKQNVDAKVKAAESEIEKLTTKLADTDAALADTDAALDETTNALNKLGENITTFAEETKTNIVKIDEKLEAVADTVDKHAEAFNDIADSLDETNTKADEAVKTANEAKQTAEETKQNVDAKVKAAETAAGKAEAAAGTANTAADKAEAVAAKVTDIKADIATNKADIAKNSARIDSLDKNVANLRKETRQGLAEQAALSGLFQPYNVG

【0108】

配列番号６は、ｆＨＢＰ Ｂ２４野生型配列を表し、Ａ０５およびＢ０１における変異の位置の番号付けはこれに基づいて決定される。

【0109】

CSSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ

【0110】

配列番号７は、ＭｅｎＢ ＭＣ５８株由来の野生型ＮａｄＡ１配列を表す。

【0111】

MKHFPSKVLTTAILATFCSGALAATSDDDVKKAATVAIVAAYNNGQEINGFKAGETIYDIGEDGTITQKDATAADVEADDFKGLGLKKVVTNLTKTVNENKQNVDAKVKAAESEIEKLTTKLADTDAALADTDAALDETTNALNKLGENITTFAEETKTNIVKIDEKLEAVADTVDKHAEAFNDIADSLDETNTKADEAVKTANEAKQTAEETKQNVDAKVKAAETAAGKAEAAAGTANTAADKAEAVAAKVTDIKADIATNKADIAKNSARIDSLDKNVANLRKETRQGLAEQAALSGLFQPYNVGRFNVTAAVGGYKSESAVAIGTGFRFTENFAAKAGVAVGTSSGSSAAYHVGVNYEW

【0112】

定義
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明確に別段の指示をしない限り、複数の指示対象を含むことに留意しなければならない。したがって、例えば、「１つの抗原」への言及は、複数のそのような抗原を含み、「そのタンパク質」への言及は、１つまたはそれ以上のタンパク質への言及を含み、そのほかも同様である。

【0113】

本明細書で使用される「約」または「およそ」という用語は、この技術分野の当業者に容易に知られている各々の値に対する通常の誤差範囲を指す。本明細書における値またはパラメーターの「約」への言及は、その値またはパラメーター自体を対象とする実施形態を含む（および説明する）。一部の実施形態では、「約」という用語は、所与の値の±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±４％、±３％、±２％、±１％を指す。しかし、当該の値が、分割不可能な物体、例えば、ひとたび細分されるとその実体を失う分子または他の物体を指す場合には常に、「約」は、分割不可能な物体の±１を指す。

【0114】

「抗原」という用語は、免疫応答を誘発させる、および／または免疫応答の対象となる少なくとも１つのエピトープを含む、任意の分子、例えば、ペプチド、タンパク質、多糖、または複合糖質を含む。例えば、抗原は、場合によりプロセシング後に、免疫応答を誘発させる分子であり、この免疫応答は、例えば、抗原または抗原を発現する細胞に対して特異的である。プロセシングの後に、抗原は、ＭＨＣ分子によって提示されて、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）と特異的に反応することができる。したがって、抗原またはその断片は、Ｔ細胞受容体によって認識可能でなければならず、適切な共刺激シグナルの存在下で、その抗原または断片を特異的に認識するＴ細胞受容体を保有するＴ細胞のクローン増殖を誘導して、その結果、抗原または抗原を発現する細胞に対する免疫応答をもたらさなければならない。本開示によれば、免疫応答の候補となる任意の好適な抗原を想定することができる。抗原は、天然に存在する抗原に対応してもよく、またはそれに由来してもよい。

【0115】

本明細書に記載される本開示の態様および実施形態は、「有する」、「含む」、「からなる」、および「から本質的になる」態様および実施形態を含むことが理解されよう。「有する」および「含む」という語、または変形物、例えば、「有する」、「有する」、「からなる」、もしくは「からなる」は、記載された要素（例えば、物質の組成物または方法工程）を含むものの、他の任意の要素の除外を意味しないことが理解されよう。「からなる」という用語は、記載された要素を含み、追加の要素を除外することを意味する。「から本質的になる」という用語は、記載された要素を含み、他の要素が開示の基本的かつ新規な特徴に実質的に影響を及ぼさない場合には、他の要素も含み得ることを意味する。「からなる」という用語または同等物を使用する本開示のさまざまな実施形態は、この用語が「からなる」または「から本質的になる」に置き換えられる実施形態を適用範囲に含むことが理解されよう。

【0116】

「髄膜炎菌の株によって引き起こされる疾患」という語句は、髄膜炎菌によるヒトの感染に存在するあらゆる臨床症状または臨床症状の組合せを範囲に含む。これらの症状としては、上気道（例えば、鼻咽頭および扁桃腺の粘膜）への髄膜炎菌の病原性株の定着、粘膜および粘膜下血管床への細菌の浸透、敗血症、敗血症性ショック、炎症、出血性皮膚病変、線維素溶解および血液凝固の活性化、臓器機能不全、例えば、腎臓、肺、および心不全、副腎出血および筋肉梗塞、毛細血管漏出、浮腫、末梢肢虚血、呼吸窮迫症候群、心膜炎ならびに髄膜炎が挙げられるが、これらに限定されない。

【0117】

本明細書で使用される場合、「個体」または「対象」または「患者」という用語は、互換的に使用され、哺乳動物を指すことを意図する。哺乳動物としては、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、およびウマ）、霊長類（例えば、ヒトおよび非ヒト霊長類、例えば、サル）、ウサギ、および齧歯類（例えば、マウスおよびラット）が挙げられるが、これらに限定されない。一部の例示的な実施形態では、個体または対象は、ヒトである。

【0118】

本開示の文脈において、「薬学的に許容される担体」という表現は、本明細書に開示される免疫原性組成物の生理的活性、すなわち、低い反応原作用で免疫応答を誘発させるその能力を保ちながら、哺乳動物、例えば、ヒトへの投与について生理的に許容される担体またはビヒクルを指す。

【0119】

本明細書中で使用される場合、疾患または障害に関して、「予防する」、「予防する」または「進行を遅延させる」という用語（およびそれら文法上の変形物）は、例えば、疾患を有することが疑われる個体、または疾患を発症するリスクがある個体における、疾患または障害の予防的処置に関する。予防には、疾患の発症もしくは進行を予防もしくは遅延させること、および／または疾患もしくは障害の１つもしくはそれ以上の症状を所望のレベルまたは病的には至らないレベルで維持することが含まれるが、これらに限定されない。「予防する」という用語は、事象の発生の可能性または見込みの１００％の排除を必要としない。そうではなくて、それは、事象の発生の可能性が本明細書中に記載される組成物または方法の存在下で低下したことを示す。

【0120】

「防御免疫」という用語は、哺乳動物に投与されるワクチンまたは免疫処置スケジュールが、髄膜炎菌によって引き起こされる疾患を予防するか、その発症を遅延させるか、もしくはその重症度を低下させるか、またはその疾患の症状を弱めるか、もしくは完全に消失させる免疫応答を誘導することを意味する。防御免疫は、殺菌抗体の産生を伴うことがある。髄膜炎菌に対する殺菌抗体の産生は、ヒトにおけるワクチンの防御効果を予測させるものとして当技術分野で認められていることに留意すべきである（Ｇｏｌｄｓｃｈｎｅｉｄｅｒら（１９６９年）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１２９：１３０７頁）。

【0121】

本開示において、変化に関して使用される「有意に」という用語は、観察された変化が顕著であること、および／またはそれが統計的な意味を有することを意味することを意図する。

【0122】

本開示において、本開示の特徴に関連して使用される「実質的に」という用語は、この特徴に概ね類似しているが、完全には類似していない、この特徴に関連する実施形態のセットを規定することを意図している。所与の特徴に関連する実施形態のセットと所与の特徴との間の差異は、その実施形態のセットにおいて、所与の特徴の性質および機能が実質的に影響を受けないようなものである。

【0123】

抗原または抗原とアジュバントの組合せに関して使用される「免疫応答を誘発するのに十分な量で」または「免疫学的有効量」という語句は、対象に投与された場合に、抗原に対する免疫応答を誘発するのに有効な量を指すことを意図する。この量は、さまざまな因子、例えば、対象の健康または身体的状態、その年齢、抗体を産生する対象の免疫系の能力、所望の防御の程度、抗原を含有する組成物の処方、処置を行う医師による医学的状況の評価に依存して異なり得る。この量は、当業者に公知の慣行的な方法によって決定することができる。免疫応答の指標には、アッセイ、例えば、酵素結合免疫アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、殺菌アッセイ、フローサイトメトリー、免疫沈降、オクタロニー免疫拡散；例えば、スポット、ウェスタンブロットまたは抗原アレイの結合検出アッセイ；細胞傷害性アッセイなどによって検出される抗体の力価または特異性が含まれるが、これらに限定されない。

【0124】

本明細書で使用される場合、免疫応答誘発の文脈において、「処置する」、「処置」、「療法」などの用語は、疾患または障害、状態の症状を治癒する、癒す、軽減する、緩和する、変更する、治療する、回復させる、改善する、もしくは影響を与える目的で、または症状、合併症の発症を予防もしくは遅延させる目的で、または別様に、統計的に有意な様式で障害のさらなる進行を停止させるかもしくは阻害する目的での、本明細書に開示される組成物の投与または消費を指す。また、本明細書で使用される場合、本開示の文脈において、「処置する」、「処置」などの用語は、髄膜炎菌感染によって媒介される病理学的プロセスの軽減または緩和を指す。本開示の文脈において、本明細書中に記載される他の状態のいずれかに関する限り、用語「処置する」、「処置」などは、そのような状態に関連する１つまたはそれ以上の症状を緩和または軽減することを指す。

【0125】

本明細書で使用される場合、「ワクチン」という用語は、病原体によって引き起こされる疾患から対象を防御または処置することを意図して、免疫応答を誘発させるために対象に投与される、病原体を対象とする免疫原性組成物を意味することを意図する。本明細書に開示されるワクチンは、初期（および／または再発性）感染を予防するか、またはその発生の見込みを低下させることを意図して、感染の前に対象に投与するための予防的（予防処置的）ワクチンとしての使用が意図される。

【0126】

本明細書で使用される場合、「メッセンジャーＲＮＡ」または「ｍＲＮＡ」という用語は、少なくとも１つのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを指す。本明細書で使用される場合、ｍＲＮＡは、修飾ＲＮＡおよび非修飾ＲＮＡの両方を範囲に含む。ｍＲＮＡは、１つまたはそれ以上のコード領域および非コード領域を含み得る。コード領域は、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）とも代替的に呼ばれる。ｍＲＮＡにおける非コード領域には、５’キャップ、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、およびポリ（Ａ）尾部が含まれる。ｍＲＮＡは、天然の供給源から精製して、組換え発現系（例えば、インビトロ転写）を使用して産生させて、場合により精製することができ、または化学合成することができる。

【0127】

本明細書に開示されるｍＲＮＡは、修飾性でも非修飾性でもよい。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、少なくとも１つの化学修飾を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるｍＲＮＡは、典型的にはＲＮＡ安定性を強化する１つまたはそれ以上の修飾を含み得る。例示的な修飾には、骨格修飾、糖修飾、または塩基修飾が含まれる。一部の実施形態では、開示されるｍＲＮＡは、プリン（アデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ））またはピリミジン（チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、およびウラシル（Ｕ））を含むがこれらに限定されない、天然に存在するヌクレオチドおよび／またはヌクレオチド類似体（修飾ヌクレオチド）から合成することができる。一部の実施形態では、開示されるｍＲＮＡは、プリンおよびピリミジンの修飾されたヌクレオチド類似体または誘導体、例えば、１－メチル－アデニン、２－メチル－アデニン、２－メチルチオ－Ｎ－６－イソペンテニル－アデニン、Ｎ６－メチル－アデニン、Ｎ６－イソペンテニル－アデニン、２－チオ－シトシン、３－メチル－シトシン、４－アセチル－シトシン、５－メチル－シトシン、２，６－ジアミノプリン、１－メチル－グアニン、２－メチル－グアニン、２，２－ジメチル－グアニン、７－メチル－グアニン、イノシン、１－メチル－イノシン、プソイドウラシル（５－ウラシル）、ジヒドロ－ウラシル、２－チオ－ウラシル、４－チオ－ウラシル、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオ－ウラシル、５－（カルボキシヒドロキシメチル）－ウラシル、５－フルオロ－ウラシル、５－ブロモ－ウラシル、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウラシル、５－メチル－２－チオ－ウラシル、５－メチル－ウラシル、Ｎ－ウラシル－５－オキシ酢酸メチルエステル、５－メチルアミノメチル－ウラシル、５－メトキシアミノメチル－２－チオ－ウラシル、５’－メトキシカルボニルメチル－ウラシル、５－メトキシ－ウラシル、ウラシル－５－オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル－５－オキシ酢酸（ｖ）、１－メチル－プソイドウラシル、キューオシン、β－Ｄ－マンノシル－キューオシン、ホスホルアミデート、ホスホロチオエート、ペプチドヌクレオチド、メチルホスホネート、７－デアザグアノシン、５－メチルシトシン、およびイノシンから合成することができる。

【0128】

一部の実施形態では、開示されるｍＲＮＡは、プソイドウリジン、Ｎ１－メチルプソイドウリジン、２－チオウリジン、４’－チオウリジン、５－メチルシトシン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、２－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ジヒドロプソイドウリジン、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－プソイドウリジン、４－メトキシ－２－チオ－プソイドウリジン、４－メトキシ－プソイドウリジン、４－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、４－チオ－プソイドウリジン、５－アザ－ウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、５－メチルウリジン、５－メチルウリジン、５－メトキシウリジン、および２’－Ｏ－メチルウリジンを含むがこれらに限定されない、少なくとも１つの化学修飾を含み得る。

【0129】

明確にするために別々の実施形態の文脈で記載されている本発明のある特定の特徴を、単一の実施形態において組み合わせて提供することもできることは理解されよう。逆に、簡潔にするために単一の実施形態の文脈で記載されている本発明のさまざまな特徴を、別々にまたは任意の適切なサブコンビネーションで提供することもできる。

【0130】

別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。ただし、本明細書に記載されたものと類似または同等の任意の方法および材料も、本発明の実施または試験において使用することができる。本明細書に記載されたすべての刊行物は、その刊行物が引用される方法および／または材料を開示および説明するために、参照により本明細書に組み入れられる。

【0131】

以下に記載される供給源、成分、および構成要素のリストは、それらの組合せおよび混合物も想定されていて、本明細書の範囲内にあるように列挙される。

【0132】

本明細書を通じて与えられるすべての最大数値限定は、そのようなより低い数値限定が本明細書に明示的に記載されているかのように、すべてのより低い数値限定を含むことが理解されるべきである。本明細書を通じて与えられるすべての最小数値限定は、そのようなより高い数値限定が本明細書に明示的に記載されているかのように、すべてのより高い数値限定を含む。本明細書を通じて与えられるすべての数値範囲は、そのようなより狭い数値範囲がすべて本明細書に明示的に記載されているかのように、そのようなより広い数値範囲内に入るすべてのより狭い数値範囲を含む。

【0133】

例えば、成分のリストのような項目のすべてのリストは、マーカッシュ群として解釈されることが意図され、そう解釈されるべきである。したがって、すべてのリストは、項目のリスト「ならびにそれらの組合せおよび混合物」「からなる群から選択される」項目として読まれて、解釈される。

【0134】

本明細書において参照されるのは、本開示で利用されるさまざまな成分を含む構成要素の商標名であり得る。本発明者らは、本明細書において、任意の特定の商標名の材料によって限定されることを意図しない。商標名によって参照されるものと同等の材料（例えば、異なる名称または参照番号の異なる供給源から得られるもの）が、本明細書の説明において代用し、利用することができる。

【0135】

抗原
本明細書に開示される免疫原性組成物は、髄膜炎菌抗原の少なくとも１つの組合せを含む。抗原の組合せは、少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ａタンパク質、少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂタンパク質、少なくとも１つのナイセリア属アドヘシンＡ（ＮａｄＡ）タンパク質、および少なくとも１つの界面活性剤抽出外膜小胞（ｄＯＭＶ）を含み得る。

【0136】

一実施形態では、髄膜炎菌抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂに由来し得る。

【0137】

ｆＨＢＰ
当技術分野においてリポタンパク質２０８６（ＬＰ２０８６）、ＯＲＦ２０８６、ゲノム由来ナイセリア属抗原（ＧＮＡ）１８７０、または「７４１」とも称される髄膜炎菌ｆＨＢＰは、ほぼすべての侵入性髄膜炎菌分離株の細菌表面で発現されるリポタンパク質である。ｆＨＢＰは、補体第二経路の負の調節因子であるヒト補体Ｈ因子（ｆＨ）に結合することから、重要な病原性因子である（Ｓｅｉｂら、Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ．２０１５年；１４（６）：８４１～５９頁）。ｆＨＢＰのヒトｆＨへの結合により、病原体が宿主の自然免疫系による補体第二経路媒介性死滅から逃れて、ヒトの血清および血液中で生存することが可能になる。

【0138】

３つの主要な遺伝的および免疫学的ｆＨＢＰバリアントが記載されている：サブファミリーＢに対応するバリアント１、ならびにサブファミリーＡに分類されるバリアント２および３である（Ｓｅｉｂら、Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ．２０１５年；１４（６）：８４１～５９頁）。Ｐｆｉｚｅｒ社（ｆＨＢＰ ＡおよびＢ）およびＮｏｖａｒｔｉｓ社（バリアント１、２および３）によって提供される命名法に加えて、ｆＨＢＰはＰｕｂＭＬＳＴデータベースにおいて固有のＩＤ番号で同定される。ｆＨＢＰサブファミリーＡとＢの間には顕著な抗原多様性があるものの、サブファミリー内のタンパク質配列は高度に保存されており、異なる株の間の配列同一性は８６％を上回る。髄膜炎菌に見出されるそれぞれの固有のｆＨＢＰは、ｎｅｉｓｓｅｒｉａ．ｏｒｇまたはｐｕｂｍｌｓｔ．ｏｒｇ／ｎｅｉｓｓｅｒｉａ／ｆＨＢＰ／ｗｅｂｓｉｔｅに従ってｆＨＢＰペプチドＩＤも割り当てられている。バリアント２（ｖ．２）ｆＨＢＰタンパク質（８０４７株由来、ｆＨＢＰ ＩＤ ７７）およびバリアント３（ｖ．３）ｆＨＢＰ（Ｍ１２３９株由来、ｆＨＢＰ ＩＤ ２８）の長さには、ＭＣ５８（ｆＨＢＰ ＩＤ １）の長さとそれぞれ－１および＋７アミノ酸残基の違いがあるため、ｖ．２およびｖ．３ ｆＨＢＰタンパク質の残基を参照するために使用される番号付けは、これらのタンパク質の実際のアミノ酸配列に基づく番号付けとは異なる。したがって、例えば、ｖ．２またはｖ．３ ｆＨＢＰ配列の１６６位のロイシン残基（Ｌ）への参照は、ｖ．２タンパク質の１６５位およびｖ．３タンパク質の１７３位の残基を参照している。バリアント１、２および３のメンバーは、侵襲性疾患を引き起こすＭｅｎＢ臨床分離株のそれぞれ約６５％、２５％および１０％に存在する。ＭｅｎＢ株の全世界の集団において頻度の高いｆＨＢＰのバリアント上位１０を合計すると、米国およびヨーロッパにおける侵襲性疾患起因菌株のおよそ８０％に相当する（Ｂａｍｂｉｎｉら、Ｖａｃｃｉｎｅ．２００９年；２７（２１）：２７９４～８０３頁；Ｃｈａｎｇ、Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ ２０１９年；Ｓ０１６３－４４５３（１９）：３０２７２～５頁；Ｌｕｃｉｄａｒｍｅ、Ｃｌｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１０；１７（６）：９１９～２９頁；およびＭｕｒｐｈｙら、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅｓ．２００９年；２００（３）：３７９～８９頁；Ｗａｎｇら、Ｖａｃｃｉｎｅ．２０１１年；２９（２９－３０）：４７３９～４４頁）。

【0139】

本開示に従って使用されるｆＨＢＰは、野生型（または天然に存在する）ポリペプチドであってもよく、またはアミノ酸置換、挿入、もしくは欠失（天然には存在しない）によって改変されてもよいが、ただし、そのポリペプチドが免疫応答を誘発し得ることを条件とする。

【0140】

本開示に従って使用されるｆＨＢＰは、脂質化ｆＨＢＰまたは非脂質化ｆＨＢＰであり得る。脂質化タンパク質は、通常、そのＮ末端配列中に、脂質化のための特異的ペプチド配列を含む。この配列は、タンパク質の成熟段階の間に切断される。これらの脂質化シグナルペプチドは、それぞれの種類のタンパク質およびタンパク質を産生する宿主の細胞に対して特異的である。

【0141】

ＯＲＦ２０８６ポリペプチドは、髄膜炎菌において、リポタンパク質シグナルモチーフを有する前駆体タンパク質として発現される。プロセシングの間にモチーフは切断されてＮ末端システイン残基が残り、これはタンパク質をナイセリア属外膜に係留する脂質アンカーによって共翻訳的に修飾される（ＭｃＮｅｉｌら、（２０１３年）ＭＭＢＲ ７７（２）：２３４～２５２頁）。

【0142】

組換えタンパク質の脂質化を回避するために、当技術分野で公知の種々の技術を使用することができる。例えば、脂質化ペプチドシグナルを欠失させるか、または脂質化ペプチドシグナルを、タンパク質が産生される細胞によっては認識されない別のペプチドシグナルに置き換えることが可能である。米国特許第１０，３００，１２２ Ｂ２号は、ＯＲＦ ２０８６に対するこの手法の使用を記載している。

【0143】

Ｎ末端システインをコードするコドンを別のアミノ酸をコードするコドンに置き換えるか、またはＮ末端システインをコードするコドンを除去することも可能である。例えば、ｆＨＢＰに関して、米国特許第１０，３００，１２２ Ｂ２号は、成熟ポリペプチドをコードするＯＲＦ２０８６の第２の５’末端コドンにＡＴＧ（メチオニン）コドンを直接融合させ、システイン脂質化部位の欠失をもたらす（またはシステインをメチオニンによって置き換える）ことを記載している。また、例えば、米国特許第９，７２４，４０２ Ｂ２号または米国特許第１１，０７７，１８０ Ｂ２号は、Ｎ末端ＣｙｓがＣｙｓ残基ではないアミノ酸で置換された非脂質化ｆＨＢＰを得ることを開示している。

【0144】

本開示に従って使用されるｆＨＢＰは、天然に存在するタンパク質であってもよく、または天然に存在しないタンパク質であってもよい。天然に存在しないタンパク質は、「人工タンパク質」を指し、天然に存在するタンパク質とは反対に、天然には見出されない異種成分を有するｆＨＢＰを含む。天然に存在しないタンパク質は、キメラタンパク質または変異タンパク質であり得る。本開示の文脈における「キメラタンパク質」は、それぞれが異なるｆＨＢＰ（例えば、バリアント１、２、または３）に由来する２つまたはそれ以上の異なる構成要素を含むタンパク質を指すことを意図する。変異タンパク質における変異は、アミノ酸置換、挿入、または欠失を含み得る。一実施形態では、変異はアミノ酸置換である。

【0145】

本明細書に開示される免疫原性組成物に好適な天然に存在しないｆＨＢＰは、依然としてｆＨＢＰに対する免疫応答を誘発させることができる。一実施形態では、本開示に従って使用される天然に存在しないｆＨＢＰは、変異ｆＨＢＰであり得る。変異、例えば、アミノ酸置換を、個体の血液中に通常存在する凝固Ｈ因子（ｆＨ）へのｆＨＢＰ抗原の結合を減少させるかまたは抑制するために導入することもできる。このため、本開示の免疫原性組成物中に使用されるｆＨＢＰ抗原へのｆＨの結合の防止により、免疫系に到達可能な抗原の量を増加させて、これらの抗原に対する免疫応答の効能および効率を改善することができる。有利なことに、変異ｆＨＢＰは、ｆＨ結合部位内のｆＨＢＰエピトープを対象とする抗ｆＨＢＰ抗体レパートリーを誘導することができ、その結果、ｆＨ結合部位の外側のｆＨＢＰエピトープを標的とする野生型（ＷＴ）ｆＨＢＰ抗原によって誘発される抗体よりも大きな防御的補体沈着活性をもたらした。

【0146】

本明細書に開示される免疫原性組成物について考慮される天然に存在しないｆＨＢＰは、対応する天然に存在するｆＨＢＰと比較して、ｆＨに対する低下した親和性、または改善された熱安定性を示すことができる。ｆＨタンパク質に対する親和性および熱安定性は、ＷＯ ２０１６／０１４７１９ Ａ１に開示されるように（本文書の実施例１または３におけるように）測定することができる。

【0147】

便宜および明確さのために、特に断りのない限り、配列番号６のｆＨＢＰ Ｂ２４（または髄膜炎菌株ＭＣ５８のｆＨＢＰ ＩＤ １もしくはｖ．１ ｆＨＢＰ）のネイティブ性のまたは天然に存在するアミノ酸配列を、本明細書におけるすべての天然に存在するおよび天然に存在しないｆＨＢＰアミノ酸配列についての参照配列として選択する。したがって、ｆＨＢＰ中のアミノ酸残基位置を参照する場合、本明細書で使用される位置番号は、配列番号６（ｆＨＢＰ Ｂ２４）のアミノ酸残基番号に対応する。その結果として、位置番号１は、配列番号６に示される最初のアミノ酸残基であり、これはシステインである。これは、このシステインの前に、配列番号６のＮ末端にさらなるアミノ酸が付加される場合にも成り立つ。

【0148】

一実施形態では、本開示において使用されるｆＨＢＰ ＡまたはＢ抗原に導入される変異、例えば、アミノ酸置換は、ＷＯ ２０１１／１２６８６３ Ａ１、ＷＯ ２０１５／０１７８１７ Ａ１、またはＷＯ ２０１６／０１４７１９ Ａ１に開示されている通りであり得る。

【0149】

本明細書に開示される免疫原性組成物は、野生型髄膜炎菌ｆＨＢＰとのアミノ酸配列の違いが、１～１０アミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸）、１０アミノ酸～１５アミノ酸、１５アミノ酸～２０アミノ酸、２０アミノ酸～３０アミノ酸、３０アミノ酸～４０アミノ酸、または４０アミノ酸～５０アミノ酸である、天然に存在しないｆＨＢＰを含み得る。

【0150】

一部の実施形態では、ｆＨＢＰは、参照ｆＨＢＰ配列に対して少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。

【0151】

同一性（例えば、パーセント相同性）は、さまざまな公知の配列比較ツール、例えば、米国国立バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）（ＮＣＢＩ）のＢｌａｓｔソフトウェアを含む、ペアワイズ配列アラインメントを計算する任意の相同性比較ソフトウェアを使用して、例えば、デフォルトパラメーターを使用することによって決定することができる。この同一性は、グローバル同一性、すなわち、アミノ酸配列または核酸配列の一部分ではなく全体にわたる同一性である。ペアワイズグローバルアラインメントは、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、１９７０年、４４３～５３頁、第４８巻によって定義されている。例えば、ポリペプチド配列から出発して、他のポリペプチド配列と比較する場合、ＥＭＢＯＳＳ－６．０．１ Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（ｈｔｔｐ：／／ｅｍｂｏｓｓ．ｓｏｕｒｃｅｆｏｒｇｅ．ｎｅｔ／ａｐｐｓ／ｃｖｓ／ｅｍｂｏｓｓ／ａｐｐｓ／ｎｅｅｄｌｅ．ｈｔｍｌ）から入手可能）を使用して、２つの配列の全長に沿った最適なアラインメント（「グローバルアラインメント」）を見出すことができる。

【0152】

本明細書に開示される免疫原性組成物において使用されるｆＨＢＰ抗原は、ＷＯ ２０１６／０１４７１９ Ａ１に開示されている通りに入手可能である。ｆＨＢＰは、産生のために宿主細胞、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株にトランスフェクトされた組換え発現ベクター（または構築物）からの組換えタンパク質として入手することができる。ｆＨＢＰをコードする核酸を移入および発現するために好適なベクターは、組成がさまざまであり得る。組込みベクターは、条件的複製プラスミドまたは自殺プラスミド、バクテリオファージなどであり得る。

【0153】

構築物は、例えば、プロモーター、選択用遺伝子マーカー（例えば、抗生物質（例えば、カナマイシン、エリスロマイシン、クロラムフェニコール、またはゲンタマイシン）に対する耐性を付与する遺伝子）、複製起点（宿主細胞、例えば、細菌宿主細胞における複製を促進するため）などを含む、種々のエレメントを含み得る。ベクターの選択は、種々の因子、例えば、増殖が所望される細胞のタイプおよび増殖の目的に依存すると考えられる。ある特定のベクターは、所望のＤＮＡ配列を増幅し、大量に作製するために有用である。他のベクターは、培養中の細胞における発現に好適である。適切なベクターの選択は、十分に当業者の技能の範囲内にある。多くのそのようなベクターが市販されている。

【0154】

１つの例では、ベクターは、異なる宿主細胞（例えば、大腸菌および髄膜炎菌の両方）における自律複製をもたらす選択用薬物耐性マーカーおよびエレメントを含むエピソームプラスミドに基づく発現ベクターであり得る。そのような「シャトルベクター」の一例は、プラスミドｐＦＰＩＯである（Ｐａｇｏｔｔｏら（２０００年）Ｇｅｎｅ ２４４：１３～１９頁）。ベクターは、宿主細胞における染色体外維持をもたらすことができ、または宿主細胞ゲノムへの組込みをもたらすことができる。ベクターは、例えば、「Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」（１９９９年）、Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓを含む、当業者に周知の多数の刊行物に十分に記載されている。ベクターは、対象ｆＨＢＰをコードする核酸の発現をもたらしてもよく、対象核酸の増殖をもたらしてもよく、またはその両方をもたらしてもよい。

【0155】

使用可能であるベクターの例には、組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡまたはコスミドＤＮＡに由来するものが含まれるが、これらに限定されない。例えば、プラスミドベクター、例えば、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ １９／１８、ｐＵＣ １１８、１１９およびＭ１３ ｍｐシリーズのベクターを使用することができる。ｐＥＴ２１も、使用し得る発現ベクターである。バクテリオファージベクターには、λｇｔｌ０、λｇｔｌ、λｇｔｌ８－２３、λｚＡｐ／ＲおよびＥＭＢＬシリーズのバクテリオファージベクターが含まれる。利用可能なさらなるベクターには、ｐＪＢ８、ｐＣＶ １０３、ｐＣＶ １０７、ｐＣＶ １０８、ｐＴＭ、ｐＭＣＳ、ｐＮＮＬ、ｐＨＳＧ２７４、ＣＯＳ２０２、ＣＯＳ２０３、ｐＷＥ１５、ｐＷＥ１６およびｃｈａｒｏｍｉｄ ９シリーズのベクターが含まれるが、これらに限定されない。

【0156】

組換え発現ベクターは、転写制御エレメント、例えば、プロモーターに作動可能に連結されたｆＨＢＰをコードするヌクレオチド配列を含み得る。プロモーターは、恒常的または誘導性であり得る。プロモーターは、原核生物宿主細胞または真核生物宿主細胞における使用のために適合させることができる。

【0157】

発現ベクターは、転写および翻訳調節配列をもたらし、誘導性または恒常的発現をもたらすことができ、ここでコード領域は、転写開始領域ならびに転写および翻訳終結領域の転写制御下で作動可能に連結されている。これらの調節領域は、対象ｆＨＢＰが由来するｆＨＢＰに対してネイティブ性であってもよく、または外因性供給源に由来してもよい。一般に、転写および翻訳調節配列には、プロモーター配列、リボソーム結合部位、転写開始および停止配列、翻訳開始および停止配列、ならびにエンハンサーまたはアクチベーター配列が含まれるが、これらに限定されない。プロモーターは、恒常的または誘導性のいずれかであることができ、強力な恒常的プロモーター（例えば、Ｔ７など）であり得る。

【0158】

発現ベクターは、一般に、目的のタンパク質をコードする核酸配列の挿入をもたらすために、プロモーター配列の近くに位置する好都合な制限部位を有する。構築物（組換えベクター）は、例えば、目的のポリヌクレオチドを、構築物の骨格内に、典型的には、ベクター中の切断された制限酵素部位へのＤＮＡリガーゼ結び付けによって挿入することによって調製することができる。あるいは、所望のヌクレオチド配列を、相同組換えまたは部位特異的組換えによって挿入することもできる。典型的には、相同組換えは、所望のヌクレオチド配列の側面にあるベクターに相同領域を結び付けることによって達成することができ、一方、部位特異的組換えは、部位特異的組換えを促進する配列（例えば、ｃｒｅ－ｌｏｘ、ａｔｔ部位など）の使用を通じて達成することができる。そのような配列を含む核酸は、例えば、オリゴヌクレオチドの連結によって、または相同領域および所望のヌクレオチド配列の一部の両方を含むプライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応によって付加することができる。

【0159】

さらに、発現構築物は、さらなるエレメントを含み得る。例えば、発現ベクターは、１つまたは２つの複製系を有することができ、そうすることで、発現のために、例えば、哺乳動物細胞または昆虫細胞において、ならびにクローニングおよび増幅のために原核生物宿主において、生物中で維持されることが可能になる。さらに、発現構築物は、形質転換された宿主細胞の選択を可能にするために、選択マーカー遺伝子を含み得る。選択遺伝子は当技術分野において周知であり、使用される宿主細胞によってさまざまである。

【0160】

アミノ酸置換は、当技術分野で公知の任意の技術によって、ｆＨＢＰヌクレオチド配列に導入することができる。例えば、アミノ酸置換を、ＷＯ ２０１１／１２６８６３ Ａ１、ＷＯ ２０１５／０１７８１７ Ａ１、またはＷＯ ２０１６／０１４７１９ Ａ１に開示されている通りに得ることができる。他の例示的実施形態では、アミノ酸置換は、ＷＯ ２０１５／１２８４８０、ＷＯ ２０１０／０４６７１５、ＷＯ ２０１６／００８９６０、ＷＯ ２０２０／０３０７８２、またはＷＯ ２０１１／０５１８９３に開示されている通りに得ることができる。

【0161】

組換えｆＨＢＰは、例えば、実施例の項に記載されているように、当技術分野で公知の任意の精製方法によって、培養物から精製形態で得ることができる。

【0162】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質および／またはｆＨＢＰ Ｂは、本明細書に開示される免疫原性組成物中に、約２０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約４０μｇ／用量～約１４０μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約１２０μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１００μｇ／用量の量で存在し得る。一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質および／またはｆＨＢＰ Ｂは、約２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量、または約１００μｇ／用量の量で存在し得る。

【0163】

ｆＨＢＰ Ａ
一実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、少なくとも１つのｆＨＢＰ Ａバリアント抗原を含み得る。少なくとも１つのｆＨＢＰ Ａタンパク質は、脂質化タンパク質または非脂質化タンパク質であり得る。例示的な一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、非脂質化タンパク質であり得る。

【0164】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、天然に存在するｆＨＢＰであってもよく、または天然に存在しないｆＨＢＰであってもよい。一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、天然に存在するｆＨＢＰであり得る。別の実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、天然に存在しないｆＨＢＰであり得る。

【0165】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号１に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むタンパク質であり得る。少なくとも１つのｆＨＢＰ Ａタンパク質は、脂質化もしくは非脂質化タンパク質であってよく、および／または天然に存在するかもしくは天然に存在しないｆＨＢＰであってよい（天然に存在しないｆＨＢＰ Ａ０５タンパク質は、ｆＨＢＰ Ａ０５または配列番号１に対して１００％同一ではない）。

【0166】

天然に存在しないｆＨＢＰ Ａタンパク質は、ＷＯ ２０１１／１２６８６３ Ａ１もしくはＷＯ ２０１５／０１７８１７ Ａ１に開示されている通りのキメラタンパク質、またはＷＯ ２０１６／０１４７１９ Ａ１、ＷＯ ２０１１／０５１８９３、ＷＯ ２０１６／００８９６０もしくはＷＯ ２０１５／１２８４８０に開示されている通りの変異ｆＨＢＰ Ａタンパク質であり得る。例示的な一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、変異タンパク質であり得る。

【0167】

例示的な一実施形態では、天然に存在しないｆＨＢＰ Ａタンパク質は、変異タンパク質であり得る。天然に存在しないｆＨＢＰ Ａタンパク質は、非脂質化タンパク質であり得る。例示的な一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、天然に存在しない、例えば、変異した非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質であり得る。

【0168】

一実施形態では、天然に存在しないｆＨＢＰ Ａタンパク質は、野生型髄膜炎菌ｆＨＢＰ Ａタンパク質、例えば、ｆＨＢＰ Ａ０５とのアミノ酸配列の違いが、１～１０アミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸）、１０アミノ酸～１５アミノ酸、１５アミノ酸～２０アミノ酸、２０アミノ酸～３０アミノ酸、３０アミノ酸～４０アミノ酸、または４０アミノ酸～５０アミノ酸であり得る。

【0169】

一実施形態では、非天然ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号１に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％のアミノ酸配列同一性を含む変異タンパク質であり得る。非天然ｆＨＢＰ Ａ０５タンパク質は、ｆＨＢＰ Ａ０５または配列番号１に対して１００％同一ではない。

【0170】

別の実施形態では、天然に存在しない、または変異したｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく：ａ）アミノ酸１１５のアスパラギン（Ｎ１１５）のアミノ酸置換；ｂ）アミノ酸１２１のアスパラギン酸（Ｄ１２１）のアミノ酸置換；ｃ）アミノ酸１２８のセリン（Ｓ１２８）のアミノ酸置換；ｄ）アミノ酸１３０のロイシン（Ｌ１３０）のアミノ酸置換；ｅ）１３１位のバリン（Ｖ１３１）のアミノ酸置換；ｆ）１３３位のグリシン（Ｇ１３３）のアミノ酸置換；ｇ）２１９位のリジン（Ｋ２１９）のアミノ酸置換；およびｈ）２２０位のグリシン（Ｇ２２０）のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つから選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含み得る。

【0171】

別の実施形態では、天然に存在しない、またはした変異ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、ＷＯ ２０１１／０５１８９３（ｆＨＢＰ Ａ１９の成熟リポタンパク質形態）において配列番号５として同定されるｆＨＢＰ配列の番号付けに関してＷＯ ２０１１／０５１８９３に開示されている以下の位置のいずれか１つに、少なくとも１つのアミノ酸の欠失または置換を含み得る：Ｄ３７、Ｋ４５、Ｔ５６、Ｅ８３、Ｅ９５、Ｅ１１２、Ｓ１２２、Ｉ１２４、Ｒ１２７、Ｔ１３９、Ｆ１４１、Ｎ１４２、Ｑ１４３、Ｌ１９７、Ｄ２１０、Ｒ２１２、Ｋ２１８、Ｎ４３、Ｎ１１６、Ｋ１１９、Ｔ２２０および／または２４０。一実施形態では、アミノ酸の欠失または置換は、ＷＯ ２０１１／０５１８９３に開示されているとおりである。

【0172】

別の実施形態では、天然に存在しないか、または変異したｆＨＢＰ Ａタンパク質は、ＷＯ ２０１６／００８９６０において配列番号１７として同定されているｆＨＢＰ配列（Ａ１２４またはバリアント３．２８またはＩＤ２８）の番号付けに関してＷＯ ２０１６／００８９６０に開示されているように、以下の位置のいずれか１つに少なくとも１つのアミノ酸の欠失または置換を含み得る：Ｓ３２、Ｌ１２６および／またはＥ２４３。１つ、２つまたは３つの残基が欠失してもよい。あるいは、それらを異なるアミノ酸によって置換してもよい。例えば、Ｌｅｕ－１２６を、他の１９種の天然に存在するアミノ酸のいずれかによって置換してもよい。置換が行われる場合、一部の実施形態における置換アミノ酸は、単純なアミノ酸、例えば、グリシンまたはアラニンであり得る。他の実施形態では、置換アミノ酸は保存的置換であり、例えば、以下の４つのグループ内で行われる：（１）酸性、すなわち、アスパラギン酸、グルタミン酸；（２）塩基性、すなわち、リジン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性、すなわち、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；および（４）非荷電極性、すなわち、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン。他の実施形態では、置換は非保存的である。一実施形態では、特定の残基における置換は、以下の通りである：Ｓ３２Ｖ；Ｌ１２６Ｒ；および／またはＥ２４３Ａ。

【0173】

別の実施形態では、天然に存在しない、または変異したｆＨＢＰ Ａタンパク質は、ＷＯ ２０１６／００８９６０において配列番号５として同定されているｆＨＢＰ配列（成熟リポタンパク質形態）の番号付けに関してＷＯ ２０１６／００８９６０に開示されているように、以下の位置のいずれか１つに、少なくとも１つのアミノ酸の欠失または置換を含み得る：Ｓ３２、Ｌ１２３および／またはＥ２４０。１つ、２つまたは３つの残基が欠失してもよい。あるいは、それらを異なるアミノ酸によって置換してもよい。例えば、Ｌｅｕ－１２３を、他の１９種の天然に存在するアミノ酸のいずれかによって置換してもよい。置換が行われる場合、一部の実施形態における置換アミノ酸は、単純なアミノ酸、例えば、グリシンまたはアラニンであり得る。他の例では、置換アミノ酸は保存的置換であり、例えば、以下の４つのグループ内で行われる：（１）酸性、すなわち、アスパラギン酸、グルタミン酸；（２）塩基性、すなわち、リジン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性、すなわち、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；および（４）非荷電極性、すなわち、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン。他の実施形態では、置換は非保存的である。一実施形態では、特定の残基における置換は、以下の通りであり得る：Ｓ３２Ｖ；Ｌ１２３Ｒ；および／またはＥ２４０Ａ。

【0174】

別の実施形態では、天然に存在しない、または変異したｆＨＢＰ Ａタンパク質は、ＷＯ ２０１５／１２８４８０において配列番号５として同定されているｆＨＢＰ配列（ｆＨＢＰ Ａ１９またはｖ２．１６またはＩＤ１６）の番号付けに関してＷＯ ２０１５／１２８４８０に開示されているように、以下の位置のいずれか１つに、少なくとも１つのアミノ酸の欠失または置換を含み得る：Ｓ３２、Ｖ３３、Ｌ３９、Ｌ４１、Ｆ６９、Ｖ１００、１１１３、Ｆ１２２、Ｌ１２３、Ｖ１２４、Ｓ１２５、Ｇ１２６、Ｌ１２７、Ｇ１２８、Ｓ１５１、Ｈ２３９、および／またはＥ２４０。一実施形態では、変異のための残基は、Ｓ３２、Ｖ１００、Ｌ１２３、Ｖ１２４、Ｓ１２５、Ｇ１２６、Ｌ１２７、Ｇ１２８、Ｈ２３９、および／またはＥ２４０であり得る。これらの残基での変異は、野生型ｆＨＢＰ Ａと比較して良好な安定性を有するタンパク質を生じさせる。一実施形態では、変異のための残基は、Ｓ３２、Ｌ１２３、Ｖ１２４、Ｓ１２５、Ｇ１２６、Ｌ１２７、および／またはＧ１２８であり得る。一実施形態では、変異のための残基は、Ｓ３２、Ｌ１２３、Ｖ１２４、Ｓ１２５、Ｇ１２６、Ｌ１２７、および／またはＧ１２８であり得る。別の実施形態では、残基Ｓ３２および／またはＬ１２３が変異してもよく、例えば、Ｓ３２Ｖおよび／またはＬ１２３であってもよい。Ｖ１００、Ｓ１２５、および／またはＧ１２６のうちの１つまたはそれ以上が変異している場合、この３つ組の外側の残基に変異を導入してもよい。

【0175】

指定された残基が欠失してもよいが、好ましくは、それは異なるアミノ酸によって置換される。例えば、Ｓｅｒ－３２を、他の１９種の天然に存在するアミノ酸のいずれかによって置換してもよい。置換が行われる場合、一部の実施形態における置換アミノ酸は、単純なアミノ酸、例えば、グリシンまたはアラニンであり得る。他の実施形態では、置換アミノ酸は保存的置換であり、例えば、それは以下の４つのグループ内で行われる：（１）酸性、すなわち、アスパラギン酸、グルタミン酸；（２）塩基性、すなわち、リジン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性、すなわち、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；および（４）非荷電極性、すなわち、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン。他の実施形態では、置換は非保存的である。一部の実施形態では、置換にはアラニンを使用しない。

【0176】

例えば、指定された残基での置換は、以下の通りであり得る：Ｓ３２Ｖ；Ｖ３３Ｃ；Ｌ３９Ｃ；Ｌ４１Ｃ；Ｆ６９Ｃ；Ｖ１００Ｔ；Ｉ１１３Ｓ；Ｆ１２２Ｃ；Ｌ１２３Ｒ；Ｖ１２４Ｉ；Ｓ１２５ＧまたはＳ１２５Ｔ；Ｇ１２６Ｄ；Ｌ１２７Ｉ；Ｇ１２８Ａ；Ｓ１５１Ｃ；Ｈ２３９Ｒ；またはＥ２４０Ｈ。

【0177】

別の実施形態では、天然に存在しない、または変異したｆＨＢＰ Ａタンパク質は、ＷＯ ２０１５／１２８４８０において配列番号１７として同定されているｆＨＢＰ配列（Ａ１２４またはバリアント３．２８またはＩＤ２８）の番号付けに関してＷＯ ２０１５／１２８４８０に開示されているように、以下の位置のいずれか１つに、少なくとも１つのアミノ酸の欠失または置換を含み得る：Ｓ３２、Ｖ３３、Ｌ３９、Ｌ４１、Ｆ７２、Ｖ１０３、Ｔ１１６、Ｆ１２５、Ｌ１２６、Ｖ１２７、Ｓ１２８、Ｇ１２９、Ｌ１３０、Ｇ１３１、Ｓ１５４、Ｈ２４２、および／またはＥ２４３。一実施形態では、変異のための残基は、Ｓ３２、Ｖ１０３、Ｌ１２６、Ｖ１２７、Ｓ１２８、Ｇ１２９、Ｌ１３０、Ｇ１３１、Ｈ２４２、および／またはＥ２４３であり得る。一実施形態では、変異のための残基は、Ｓ３２、Ｌ１２６、Ｖ１２７、Ｓ１２８、Ｇ１２９、Ｌ１３０、および／またはＧ１３１であり得る。別の実施形態では、残基Ｓ３２、Ｌ１２６、Ｖ１２７、Ｓ１２８、Ｇ１２９、Ｌ１３０、および／またはＧ１３１、例えば、残基Ｓ３２および／またはＬ１２６を、例えば、Ｓ３２Ｖおよび／またはＬ１２６Ｒに変異させることができる。

【0178】

指定された残基が欠失してもよいが、好ましくは、それは異なるアミノ酸によって置換される。例えば、Ｓｅｒ－３２を、他の１９種の天然に存在するアミノ酸のいずれかによって置換してもよい。置換が行われる場合、一部の実施形態における置換アミノ酸は、グリシンまたはアラニンのような単純なアミノ酸であり得る。他の実施形態では、置換アミノ酸は保存的置換であり、例えば、それは以下の４つのグループ内で行われる：（１）酸性、すなわち、アスパラギン酸、グルタミン酸；（２）塩基性、すなわち、リジン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性、すなわち、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；および（４）非荷電極性、すなわち、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン。他の実施形態では、置換は非保存的である。一部の実施形態では、置換にはアラニンを使用しない。

【0179】

例えば、特定された残基での置換は、以下の通りであり得る：Ｓ３２Ｖ；Ｉ３３Ｃ；Ｌ３９Ｃ；Ｌ４１Ｃ；Ｆ７２Ｃ；Ｖ１０３Ｔ；Ｔ１１６Ｓ；Ｆ１２５Ｃ；Ｌ１２６Ｒ；Ｖ１２７Ｉ；Ｓ１２８ＧまたはＳ１２８Ｔ；Ｇ１２９Ｄ；Ｌ１３０Ｉ；Ｇ１３１Ａ；Ｓ１５４Ｃ；Ｈ２４２Ｒ；Ｅ２４３Ｈ。

【0180】

アミノ酸１１５のアスパラギン（Ｎ１１５）のアミノ酸置換は、Ｎ１１５Ｉ置換（Ｉ：イソロイシン）であり得る。非極性の、正荷電の、または芳香族側鎖を有する他のアミノ酸、例えば、バリン、ロイシン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンもまた、この位置で置換可能である。したがって、場合によっては、ｆＨＢＰは、Ｎ１１５Ｖ置換、Ｎ１１５Ｌ置換、Ｎ１１５Ｋ置換、Ｎ１１５Ｒ置換、Ｎ１１５Ｈ置換、Ｎ１１５Ｆ置換、Ｎ１１５Ｙ置換、またはＮ１１５Ｗ置換を含み得る。

【0181】

アミノ酸１２１のアスパラギン酸（Ｄ１２１）のアミノ酸置換は、Ｄ１２１Ｇ置換（Ｇ：グリシン）であり得る。非極性の、正荷電の、または芳香族側鎖を有する他のアミノ酸、例えば、ロイシン、イソロイシン、バリン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンもまた、この位置で置換可能である。したがって、例えば、場合によっては、ｆＨＢＰバリアントは、Ｄ１２１Ｌ置換、Ｄ１２１Ｉ置換、Ｄ１２１Ｖ置換、Ｄ１２１Ｋ置換、Ｄ１２１Ｒ置換、Ｄ１２１Ｈ置換、Ｄ１２１Ｆ置換、Ｄ１２１Ｙ置換、またはＤ１２１Ｗ置換を含み得る。

【0182】

アミノ酸１２８のセリン（Ｓ１２８）のアミノ酸置換は、Ｓ１２８Ｔ置換（Ｔ：トレオニン）であり得る。極性の、荷電性の、または芳香族側鎖を有する他のアミノ酸、例えば、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンもまた、この位置で置換可能である。したがって、例えば、場合によっては、ｆＨＢＰバリアントは、Ｓ１２８Ｍ置換、Ｓ１２８Ｎ置換、Ｓ１２８Ｄ置換、Ｓ１２８Ｅ置換、Ｓ１２８Ｋ置換、Ｓ１２８Ｒ置換、Ｓ１２８Ｈ置換、Ｓ１２８Ｆ置換、Ｓ１２８Ｙ置換、またはＳ１２８Ｗ置換を含み得る。

【0183】

ｆＨＢＰ Ａは、アミノ酸１３０のロイシン（Ｌ１３０）のアミノ酸置換を含み得る。アミノ酸１３０でのロイシン（Ｌ１３０）のアミノ酸置換は、Ｌ１３０Ｒ置換（Ｒ：アルギニン）であり得る。

【0184】

ｆＨＢＰ Ａは、アミノ酸１３１のバリン（Ｖ１３１）のアミノ酸置換を含み得る。荷電性の、または芳香族側鎖を有する他のアミノ酸、例えば、グルタミン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンもまた、この位置で置換可能である。したがって、例えば、場合によっては、ｆＨＢＰは、Ｖ１３１Ｅ置換、Ｖ１３１Ｋ置換、Ｖ１３１Ｒ置換、Ｖ１３１Ｈ置換、Ｖ１３１Ｆ置換、Ｖ１３１Ｙ置換、またはＶ１３１Ｗ置換を含み得る。

【0185】

ｆＨＢＰ Ａは、アミノ酸１３３のグリシン（Ｇ１３３）のアミノ酸置換を含み得る。アミノ酸１３３のグリシン（Ｇ１３３）のアミノ酸置換は、Ｇ１３３Ｄ置換（Ｄ：アスパラギン酸）であり得る。

【0186】

ｆＨＢＰ Ａは、２１９位のリジン（Ｋ２１９）のアミノ酸置換を含み得る。極性の、負荷電の、または芳香族側鎖を有する他のアミノ酸、例えば、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンもまた、この位置で置換可能である。したがって、例えば、場合によっては、ｆＨＢＰは、Ｋ２１９Ｑ置換、Ｋ２１９Ｄ置換、Ｋ２１９Ｅ置換、Ｋ２１９Ｆ置換、Ｋ２１９Ｙ置換、またはＫ２１９Ｗ置換を含み得る。

【0187】

アミノ酸２２０のグリシン酸（Ｇ２２０）のアミノ酸置換は、Ｇ２２０Ｓ置換（Ｓ：セリン）であり得る。極性の、荷電性の、または芳香族側鎖を有する他のアミノ酸、例えば、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンもまた、この位置で置換可能である。したがって、例えば、場合によっては、ｆＨＢＰは、Ｇ２２０Ｎ置換、Ｇ２２０Ｑ置換、Ｇ２２０Ｄ置換、Ｇ２２０Ｅ置換、Ｇ２２０Ｋ置換、Ｇ２２０Ｒ置換、Ｇ２２０Ｈ置換、Ｇ２２０Ｆ置換、Ｇ２２０Ｙ置換、またはＧ２２０Ｗ置換を含み得る。

【0188】

例示的な一実施形態では、アミノ酸１３０のロイシン（Ｌ１３０）のアミノ酸置換は、Ｌ１３０Ｒ置換（Ｒ：アルギニン）であり得る。

【0189】

例示的な一実施形態では、アミノ酸１３３のグリシン（Ｇ１３３）のアミノ酸置換は、Ｇ１３３Ｄ置換（Ｄ：アスパラギン酸）であり得る。

【0190】

例示的な一実施形態では、２２０位のグリシン（Ｇ２２０）のアミノ酸置換は、Ｇ２２０Ｓ置換（Ｓ：セリン）であり得る。

【0191】

別の実施形態では、天然に存在しないか、または変異したｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、Ｇ２２０Ｓ、Ｌ１３０Ｒ、およびＧ１３３Ｄからなる群において選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含み得る。別の実施形態では、天然に存在しないｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、Ｇ２２０Ｓ、Ｌ１３０Ｒ、およびＧ１３３Ｄからなる群において選択される少なくとも３つのアミノ酸置換を含み得る。別の実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、Ｇ２２０Ｓ、Ｌ１３０Ｒ、およびＧ１３３Ｄの３つのアミノ酸置換のみを含み得る。

【0192】

一実施形態では、天然に存在しない（または変異した）ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、ａ）アミノ酸１１５のアスパラギン（Ｎ１１５）のアミノ酸置換；ｂ）アミノ酸１２１のアスパラギン酸（Ｄ１２１）のアミノ酸置換；ｃ）アミノ酸１２８のセリン（Ｓ１２８）のアミノ酸置換；ｄ）アミノ酸１３０のロイシン（Ｌ１３０）のアミノ酸置換；ｅ）１３１位のバリン（Ｖ１３１）のアミノ酸置換；ｆ）１３３位のグリシン（Ｇ１３３）のアミノ酸置換；ｇ）２１９位のリジン（Ｋ２１９）のアミノ酸置換；およびｈ）２２０位のグリシン（Ｇ２２０）のアミノ酸置換からなる群において選択されるアミノ酸置換のうちの少なくとも１つを含む、非脂質化変異ｆＨＢＰ Ａタンパク質であり得る。

【0193】

別の実施形態では、天然に存在しない（または変異した）ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、Ｎ１１５Ｉ置換、Ｎ１１５Ｖ置換、Ｎ１１５Ｌ置換、Ｎ１１５Ｋ置換、Ｎ１１５Ｒ置換、Ｎ１１５Ｈ置換、Ｎ１１５Ｆ置換、Ｎ１１５Ｙ置換、Ｎ１１５Ｗ置換、Ｄ１２１Ｇ置換、Ｄ１２１Ｌ置換、Ｄ１２１Ｉ置換、Ｄ１２１Ｖ置換、Ｄ１２１Ｋ置換、Ｄ１２１Ｒ置換、Ｄ１２１Ｈ置換、Ｄ１２１Ｆ置換、Ｄ１２１Ｙ置換、Ｄ１２１Ｗ置換、Ｓ１２８Ｔ置換、Ｓ１２８Ｍ置換、Ｓ１２８Ｎ置換、Ｓ１２８Ｄ置換、Ｓ１２８Ｅ置換、Ｓ１２８Ｋ置換、Ｓ１２８Ｒ置換、Ｓ１２８Ｈ置換、Ｓ１２８Ｆ置換、Ｓ１２８Ｙ置換、Ｓ１２８Ｗ置換、Ｌ１３０Ｒ置換、Ｖ１３１Ｅ置換、Ｖ１３１Ｋ置換、Ｖ１３１Ｒ置換、Ｖ１３１Ｈ置換、Ｖ１３１Ｆ置換、Ｖ１３１Ｙ置換、Ｖ１３１Ｗ置換、Ｇ１３３Ｄ置換、Ｋ２１９Ｑ置換、Ｋ２１９Ｄ置換、Ｋ２１９Ｅ置換、Ｋ２１９Ｆ置換、Ｋ２１９Ｙ置換、Ｋ２１９Ｗ置換、Ｇ２２０Ｓ置換、Ｇ２２０Ｎ置換、Ｇ２２０Ｑ置換、Ｇ２２０Ｄ置換、Ｇ２２０Ｅ置換、Ｇ２２０Ｋ置換、Ｇ２２０Ｒ置換、Ｇ２２０Ｈ置換、Ｇ２２０Ｆ置換、Ｇ２２０Ｙ置換、またはＧ２２０Ｗ置換からなる群において選択されるアミノ酸置換のうちの少なくとも１つを含む、非脂質化変異ｆＨＢＰ Ａタンパク質であり得る。

【0194】

例示的な一実施形態では、天然に存在しない（または変異した）ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、Ｇ２２０Ｓ、Ｌ１３０Ｒ、およびＧ１３３Ｄからなる群において選択されるアミノ酸置換のうちの少なくとも１つを含む、非脂質化変異ｆＨＢＰ Ａタンパク質であり得る。別の実施形態では、天然に存在しない、または変異した非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、Ｇ２２０Ｓ、Ｌ１３０Ｒ、およびＧ１３３Ｄからなる群において選択される少なくとも３つのアミノ酸置換を含み得る。別の例示的実施形態では、非脂質化変異ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、Ｇ２２０Ｓ、Ｌ１３０Ｒ、およびＧ１３３Ｄの３つのアミノ酸置換のみを含み得る。

【0195】

例示的な一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号１に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％のアミノ酸配列同一性を含み、かつ、配列番号６の番号付けに基づく、Ｇ２２０Ｓ、Ｌ１３０Ｒ、およびＧ１３３Ｄからなる群において選択されるアミノ酸置換のうちの少なくとも１つを含む、非脂質化変異タンパク質であり得る。変異した非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、Ｇ２２０Ｓ、Ｌ１３０Ｒ、およびＧ１３３Ｄからなる群において選択される少なくとも３つのアミノ酸置換を含み得る。別の例示的な実施形態では、非脂質化変異ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、３つのアミノ酸置換Ｇ２２０Ｓ、Ｌ１３０Ｒ、およびＧ１３３Ｄのみを含み得る。

【0196】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号２に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％のアミノ酸配列同一性を含み得る。

【0197】

別の実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号２を含むか、またはそれからなることができる。

【0198】

別の実施形態は、配列番号２に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％のアミノ酸配列同一性を含むｆＨＢＰ Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡを対象とする。ｍＲＮＡは、配列番号１を含むかもしくはそれからなるｆＨＢＰ Ａタンパク質をコードするか、または配列番号２を含むかもしくはそれからなるｆＨＢＰ Ａタンパク質をコードすることができる。

【0199】

アミノ酸置換は、当技術分野で公知の任意の手法によってｆＨＢＰ Ａヌクレオチド配列に導入することができる。例えば、アミノ酸置換を、ＷＯ ２０１６／０１４７１９ Ａ１に開示されている通りに得ることができる。

【0200】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、本明細書に開示される免疫原性組成物中に、約２０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約４０μｇ／用量～約１４０μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約１２０μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１００μｇ／用量の量で存在し得る。一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質および／またはｆＨＢＰ Ｂは、約２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量、または約１００μｇ／用量の量で存在し得る。

【0201】

ｆＨＢＰ Ｂ
一実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂバリアント抗原を含み得る。少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、脂質化タンパク質または非脂質化タンパク質であり得る。例示的な一実施形態では、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、非脂質化タンパク質であり得る。

【0202】

一実施形態では、ｆＨＢＰ ＡおよびｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、脂質化していてもよい。一実施形態では、ｆＨＢＰ ＡおよびｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、脂質化していなくてもよい。あるいは、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は脂質化していて、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は脂質化していなくてもよい。さらにまた、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は脂質化しておらず、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は脂質化していてもよい。

【0203】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、天然に存在するｆＨＢＰであってもよく、または天然に存在しないｆＨＢＰであってもよい。一実施形態では、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、天然に存在するｆＨＢＰであり得る。別の実施形態では、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、天然に存在しないｆＨＢＰであり得る。

【0204】

一実施形態では、ｆＨＢＰ ＡおよびｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、天然に存在するｆＨＢＰであり得る。一実施形態では、ｆＨＢＰ ＡおよびｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、天然に存在しないｆＨＢＰであり得る。あるいは、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は天然に存在するｆＨＢＰであって、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は天然に存在しないｆＨＢＰであってもよい。さらにまた、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は天然に存在しないｆＨＢＰであって、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は天然に存在するｆＨＢＰであってもよい。

【0205】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号３に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むタンパク質であり得る。少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、脂質化もしくは非脂質化タンパク質であってよく、および／または天然に存在するかもしくは天然に存在しないｆＨＢＰであってよい（天然に存在しないｆＨＢＰ Ｂ０１タンパク質は、ｆＨＢＰ Ｂ０１または配列番号３に対して１００％同一ではない）。

【0206】

天然に存在しないｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、ＷＯ ２０１１／１２６８６３ Ａ１もしくはＷＯ ２０１５／０１７８１７ Ａ１に開示されている通りのキメラタンパク質であってもよく、またはＷＯ ２０１６／０１４７１９ Ａ１、ＷＯ ２０１１／０５１８９３、もしくはＷＯ ２０２０／０３０７８２に開示されている通りの変異ｆＨＢＰ Ｂタンパク質であってもよい。例示的な一実施形態では、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、変異タンパク質であり得る。

【0207】

例示的な一実施形態では、天然に存在しないｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、変異タンパク質であり得る。天然に存在しないｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、非脂質化タンパク質であり得る。例示的な一実施形態では、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、天然に存在しない、例えば、変異した非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質であり得る。

【0208】

一実施形態では、天然に存在しないｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、野生型髄膜炎菌ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、例えば、ｆＨＢＰ Ｂ０１とのアミノ酸配列の違いが、１～１０アミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸）、１０アミノ酸～１５アミノ酸、１５アミノ酸～２０アミノ酸、２０アミノ酸～３０アミノ酸、３０アミノ酸～４０アミノ酸、または４０アミノ酸～５０アミノ酸であり得る。

【0209】

一実施形態では、天然に存在しないｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号３に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％のアミノ酸配列同一性を含む変異タンパク質であり得る。天然に存在しないｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、ｆＨＢＰ Ｂ０１または配列番号３に対して１００％同一ではない。

【0210】

別の実施形態では、天然に存在しない、または変異したｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、ａ）アミノ酸３８のグルタミン（Ｑ３８）のアミノ酸置換、ｂ）アミノ酸９２のグルタミン酸（Ｅ９２）のアミノ酸置換、ｃ）アミノ酸１３０のアルギニン（Ｒ１３０）のアミノ酸置換、ｄ）アミノ酸２２３のセリン（Ｓ２２３）のアミノ酸置換、およびｅ）アミノ酸２４８のヒスチジン（Ｈ２４８）のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つから選択される、少なくとも１つのアミノ酸置換を含み得る。

【0211】

別の実施形態では、天然に存在しない、または変異したｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、ＷＯ ２０１１／０５１８９３において配列番号４として同定されているｆＨＢＰ配列（ｆＨＢＰ Ｂ２４の成熟リポタンパク質形態）の番号付けに関してＷＯ ２０１１／０５１８９３に開示されている以下の位置のいずれか１つに、少なくとも１つのアミノ酸の欠失または置換を含み得る：Ｄ３７、Ｋ４５、Ｔ５６、Ｅ８３、Ｅ９５、Ｅ１１２、Ｋ１２２、Ｖ１２４、Ｒ１２７、Ｔ１３９、Ｆ１４１、Ｄ１４２、Ｋ１４３、Ｉ１９８、Ｓ２１１、Ｌ２１３、Ｋ２１９、Ｎ４３、Ｄ１１６、Ｈ１１９、Ｓ２２１およびＫ２４１。

【0212】

別の実施形態では、天然に存在しない、または変異したｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、ＷＯ ２０２０／０３０７８２において配列番号２として同定されているｆＨＢＰ配列（ｆＨＢＰ Ｂ０９の成熟リポタンパク質形態）の番号付けに関してＷＯ ２０２０／０３０７８２に開示されている通りに、以下の位置のいずれか１つに、少なくとも１つのアミノ酸置換を含み得る：Ｅ２１１、Ｓ２１６またはＥ２３２。

【0213】

別の実施形態では、天然に存在しない、または変異したｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、ＷＯ ２０２０／０３０７８２において配列番号２として同定されているｆＨＢＰ配列（ｆＨＢＰ Ｂ０９の成熟リポタンパク質形態）の番号付けに関してＷＯ ２０２０／０３０７８２に開示されている通りに、以下の位置のいずれか１つに、以下のアミノ酸置換の少なくとも１つを含み得る：Ｅ２１１Ａ、Ｓ２１６ＲまたはＥ２３２Ａ。

【0214】

別の実施形態では、天然に存在しない、または変異したｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、ＷＯ ２０２０／０３０７８２において配列番号６として同定されているｆＨＢＰ配列（成熟リポタンパク質形態のｆＨＢＰ Ｂ４４）の番号付けに関してＷＯ ２０２０／０３０７８２に開示されている通りに、以下の位置のいずれか１つに、少なくとも１つのアミノ酸置換を含み得る：Ｅ２１４、Ｓ２１９またはＥ２３５。

【0215】

別の実施形態では、天然に存在しない、または変異したｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、ＷＯ ２０２０／０３０７８２において配列番号２として同定されているｆＨＢＰ配列（ｆＨＢＰ Ｂ４４の成熟リポタンパク質形態）の番号付けに関してＷＯ ２０２０／０３０７８２に開示されている通りに、以下の位置のいずれか１つに、以下のアミノ酸置換の少なくとも１つを含み得る：Ｅ２１４Ａ、Ｓ２１９ＲまたはＥ２３５Ａ。

【0216】

別の実施形態では、天然に存在しない、または変異したｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、ＷＯ２０１００４６７１５において配列番号１として同定されているｆＨＢＰ配列（ｆＨＢＰ２４の成熟リポタンパク質形態）の番号付けに関してＷＯ２０１００４６７１５に開示されている通りに、以下の位置のいずれか１つに、以下のアミノ酸置換の少なくとも１つを含み得る：、１０３、１０６、１０７、１０８、１０９、１４５、１４７、１４９、１５０、１５４、１５６、１５７、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１９１、１９３、１９４、１９５、１９６、１９９、２６２、２６４、２６６、２６７、２６８、２７２、２７４、２８３、２８５、２８６、２８８、２８９、３０２、３０４、３０６、３１１および３１３。一実施形態では、Ｈ因子結合タンパク質において変化し得る１つまたはそれ以上のアミノ酸は、ＷＯ２０１００４６７１５において配列番号１として同定されているｆＨＢＰ配列の番号付けに関して、アミノ酸番号１０３、１０６、１０７、１０８、１８０、１８１、１８３、１８４、１８５、１９１、１９３、１９５、２６２、２６４、２６６、２７２、２７４、２８３、２８６、３０４および３０６を含む群から選択することができる。

【0217】

アミノ酸３８のグルタミン（Ｑ３８）のアミノ酸置換は、Ｑ３８Ｒ置換（Ｒ：アルギニン）であり得る。正荷電の、または芳香族側鎖を有する他のアミノ酸、例えば、リジン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンもまた、この位置で置換可能である。したがって、場合によっては、ｆＨＢＰは、Ｑ３８Ｋ置換、Ｑ３８Ｈ置換、Ｑ３８Ｆ置換、Ｑ３８Ｙ置換、またはＱ３８Ｗ置換を含み得る。

【0218】

アミノ酸９２のグルタミン酸（Ｅ９２）のアミノ酸置換は、Ｅ９２Ｋ置換であり得る。正荷電の、または芳香族側鎖を有する他のアミノ酸、例えば、アルギニン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンもまた、この位置で置換可能である。したがって、例えば、場合によっては、ｆＨＢＰバリアントは、Ｅ９２Ｒ置換、Ｅ９２Ｈ置換、Ｅ９２Ｆ置換、Ｅ９２Ｙ置換、またはＥ９２Ｗ置換を含み得る。

【0219】

アミノ酸１３０のアルギニン（Ｒ１３０）のアミノ酸置換は、Ｒ１３０Ｇ置換（Ｇ：グリシン）であり得る。負荷電の、または芳香族側鎖を有する他のアミノ酸、例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、チロシン、またはトリプトファンもまた、Ｒ１３０で置換可能である。したがって、例えば、場合によっては、ｆＨＢＰバリアントは、Ｒ１３０Ｄ置換、Ｒ１３０Ｅ置換、Ｒ１３０Ｆ置換、Ｒ１３０Ｙ置換、またはＲ１３０Ｗ置換を含み得る。

【0220】

アミノ酸２２３のセリン（Ｓ２２３）のアミノ酸置換は、Ｓ２２３Ｒ置換（Ｒ：アルギニン）であり得る。正荷電の、または芳香族側鎖を有する他のアミノ酸、例えば、リジン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンもまた、この位置で置換可能である。したがって、例えば、場合によっては、ｆＨｂｐバリアントは、Ｓ２２３Ｋ置換、Ｓ２２３Ｈ置換、Ｓ２２３Ｆ置換、Ｓ２２３Ｙ置換、またはＳ２２３Ｗ置換を含む。

【0221】

例示的な一実施形態では、アミノ酸２４８のヒスチジン（Ｈ２４８）のアミノ酸置換は、Ｈ２４８Ｌ置換（Ｌ：ロイシン）であり得る。非極性の、負荷電の、または芳香族の側鎖を有する他のアミノ酸、例えば、イソロイシン、バリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、チロシンまたはトリプトファンもまた、Ｈ２４８で置換可能である。したがって、例えば、場合によっては、ｆＨＢＰは、Ｈ２４８Ｉ置換、Ｈ２４８Ｖ置換、Ｈ２４８Ｄ置換、Ｈ２４８Ｅ置換、Ｈ２４８Ｆ置換、Ｈ２４８Ｙ置換、またはＨ２４８Ｗ置換を含み得る。

【0222】

別の実施形態では、天然に存在しない、または変異したｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、少なくともＨ２４８Ｌのアミノ酸置換を含み得る。別の実施形態では、天然に存在しないｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、Ｈ２４８Ｌのアミノ酸置換のみを含み得る。

【0223】

一実施形態では、天然に存在しない（または変異した）ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、ａ）アミノ酸３８のグルタミン（Ｑ３８）のアミノ酸置換；ｂ）アミノ酸９２のグルタミン酸（Ｅ９２）のアミノ酸置換；ｃ）アミノ酸１３０のアルギニン（Ｒ１３０）のアミノ酸置換；ｄ）アミノ酸２２３のセリン（Ｓ２２３）のアミノ酸置換；およびｅ）アミノ酸２４８のヒスチジン（Ｈ２４８）のアミノ酸置換からなる群において選択されるアミノ酸置換のうちの少なくとも１つを含む、非脂質化変異ｆＨＢＰ Ｂタンパク質であり得る。

【0224】

別の実施形態では、天然に存在しない（または変異した）ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、Ｑ３８Ｒ置換、Ｑ３８Ｋ置換、Ｑ３８Ｈ置換、Ｑ３８Ｆ置換、Ｑ３８Ｙ置換、Ｑ３８Ｗ置換、Ｅ９２Ｋ置換、Ｅ９２Ｒ置換、Ｅ９２Ｈ置換、Ｅ９２Ｆ置換、Ｅ９２Ｙ置換、Ｅ９２Ｗ置換、Ｒ１３０Ｇ置換、Ｒ１３０Ｄ置換、Ｒ１３０Ｅ置換、Ｒ１３０Ｆ置換、Ｒ１３０Ｙ置換、Ｒ１３０Ｗ置換、Ｓ２２３Ｒ置換、Ｓ２２３Ｋ置換、Ｓ２２３Ｈ置換、Ｓ２２３Ｆ置換、Ｓ２２３Ｙ置換、Ｓ２２３Ｗ置換、Ｈ２４８Ｌ置換、Ｈ２４８Ｉ置換、Ｈ２４８Ｖ置換、Ｈ２４８Ｄ置換、Ｈ２４８Ｅ置換、Ｈ２４８Ｆ置換、Ｈ２４８Ｙ置換、またはＨ２４８Ｗ置換からなる群において選択されるアミノ酸置換の少なくとも１つを含む、非脂質化変異ｆＨＢＰ Ｂタンパク質であり得る。

【0225】

別の例示的実施形態では、天然に存在しない、または変異したｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、少なくともアミノ酸置換Ｈ２４８Ｌを含む非脂質化変異ｆＨＢＰ Ｂタンパク質であり得る。別の例示的実施形態では、非脂質化変異ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、アミノ酸置換Ｈ２４８Ｌのみを含む非脂質化変異ｆＨＢＰ Ｂタンパク質であり得る。

【0226】

例示的な一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号３に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％のアミノ酸配列同一性を含み、かつ、配列番号６の番号付けに基づく、少なくともアミノ酸置換Ｈ２４８Ｌを含む、非脂質化変異タンパク質であり得る。非脂質化変異ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく、アミノ酸置換Ｈ２４８Ｌのみを含み得る。

【0227】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号４に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％のアミノ酸配列同一性を含み得る。

【0228】

別の実施形態では、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号４を含むか、またはそれからなることができる。

【0229】

別の実施形態は、配列番号４に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％のアミノ酸配列同一性を含むｆＨＢＰ Ｂタンパク質をコードするｍＲＮＡを対象とする。ｍＲＮＡは、配列番号３を含むかもしくはそれからなるｆＨＢＰ Ｂタンパク質をコードするか、または配列番号４を含むかもしくはそれからなるｆＨＢＰ Ａタンパク質をコードすることができる。

【0230】

アミノ酸置換は、当技術分野で公知の任意の手法によってｆＨＢＰ Ｂヌクレオチド配列に導入することができる。例えば、アミノ酸置換を、ＷＯ ２０１６／０１４７１９ Ａ１に開示されている通りに得ることができる。

【0231】

一実施形態では、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、本明細書に開示される免疫原性組成物中に、約２０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約４０μｇ／用量～約１４０μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約１２０μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１００μｇ／用量の量で存在し得る。一実施形態では、ｆＨＢＰ Ａタンパク質および／またはｆＨＢＰ Ｂは、約２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量、または約１００μｇ／用量の量で存在し得る。

【0232】

ＮａｄＡ
ナイセリア属アドヘシンＡ（ＮａｄＡ、以前はＧＮＡ１９９４として知られた）は、膜貫通ドメインを介して外膜に係留されたオリゴマーを形成する表面露出三量体タンパク質であり、上皮細胞への接着および浸潤に重要な役割を果たす（Ｃａｐｅｃｃｈｉら、Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００５年；５５：（６８７～９８頁））。多くの株由来のＮａｄＡ抗原の配列が公開されており、ナイセリア属アドヘシンとしてのタンパク質の活性が十分に立証されている。ＮａｄＡ遺伝子は髄膜炎菌分離株の約５０％に存在する。ＮａｄＡは増殖期依存性の発現を示し、定常増殖期に最高レベルを示す。

【0233】

ＮａｄＡ抗原は、遺伝子ＮＭＢ１９９４（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：７２２７２５６）として、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８の公開ゲノム配列に含められた。

【0234】

本開示に従って使用するためのＮａｄＡポリペプチドは、野生型ポリペプチドであってもよく、またはアミノ酸置換、挿入、もしくは欠失によって改変されてもよいが、ただし、そのポリペプチドがＮａｄＡに対する免疫応答を誘発し得ることを条件とする。

【0235】

一部の実施形態では、使用されるＮａｄＡタンパク質は、例えば、参照文献ＷＯ ０１／６４９２０；ＷＯ ０１／６４９２２；またはＷＯ ０３／０２０７５６に開示されている通りにアミノ酸欠失または挿入を含む、Ｎ末端および／またはＣ末端が切断されたＮａｄＡまたはＮａｄＡタンパク質であり得る。

【0236】

一実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物において使用される組換えＮａｄＡタンパク質は、ＮａｄＡ１バリアントであり得る。実施例に示されるように、ＮａｄＡ１は強いｈＳＢＡ応答を誘導することが示された。

【0237】

ＮａｄＡ１は、ＭｅｎＢ ＭＣ５８株のＮａｄＡ配列から得ることができる。

【0238】

一実施形態では、ＮａｄＡタンパク質は、配列配列番号７を含むか、またはそれからなることができる。

【0239】

一部の実施形態では、ＮａｄＡタンパク質は、配列番号７からの少なくとも１９０個の連続したアミノ酸、例えば、配列番号７からの２００個もしくはそれ以上、２１０個もしくはそれ以上、２２０個もしくはそれ以上、２３０個もしくはそれ以上、２４０個もしくはそれ以上、２５０個もしくはそれ以上の連続したアミノ酸、例えば、配列番号７からの２６０個もしくはそれ以上、２７０個もしくはそれ以上、２８０個もしくはそれ以上、２９０個もしくはそれ以上、３００個もしくはそれ以上、３１０個もしくはそれ以上、３２０個もしくはそれ以上、３３０個もしくはそれ以上、３４０個もしくはそれ以上、３５０個もしくはそれ以上、または３６０個もしくはそれ以上のアミノ酸を含み得る。

【0240】

一部の実施形態では、ＮａｄＡタンパク質は、例えば、配列番号７のＣ末端および／またはＮ末端から、５～１０アミノ酸、または１０～１５アミノ酸、または１５～２０アミノ酸、または２５、または３０、または３５、または４０、または４５、または５０、または５５アミノ酸を欠いてもよい。Ｎ末端残基が欠失している場合、そのような欠失は、ヒト上皮細胞に付着するＮａｄＡの能力を除去すべきではない。

【0241】

一実施形態では、ＮａｄＡタンパク質は、Ｎ末端にシグナルペプチドを欠いてもよい。例えば、ＮａｄＡタンパク質は、例えば、配列番号７のＮ末端の２３アミノ酸を欠いてもよい。

【0242】

一実施形態では、ＮａｄＡタンパク質は、Ｃ末端に膜アンカーペプチドを欠いてもよく、例えば、ＮａｄＡタンパク質は、例えば、配列番号７のＣ末端の５５アミノ酸を欠いてもよい。

【0243】

ＮａｄＡは、単量体またはオリゴマーの形態、例えば、三量体の形態で使用することができる。

【0244】

例えば、ＮａｄＡタンパク質は、そのＣ末端膜アンカーを有していなくてもよく（例えば、ＭＣ５８株（配列番号７）について残基３０８～３６２の欠失）、大腸菌におけるその膜アンカードメインを有しないＮａｄＡの発現は、２３アミノ酸のシグナルペプチドの同時除去（例えば、配列番号７の残基２～２４が欠失して、２８４アミノ酸のタンパク質－配列番号５が残る）を伴う、培養上清へのタンパク質の分泌をもたらし得る。

【0245】

一実施形態では、ＮａｄＡタンパク質は、配列番号５に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％のアミノ酸配列同一性を含み得る。別の実施形態では、ＮａｄＡタンパク質は、配列番号５を含むか、またはそれからなることができる。

【0246】

別の実施形態は、配列番号５に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または少なくとも約９９．５％のアミノ酸配列同一性を含むＮａｄＡタンパク質をコードするｍＲＮＡを対象とする。ｍＲＮＡは、配列番号５を含むかまたはそれからなるＮａｄＡタンパク質をコードすることができる。

【0247】

本明細書に開示される免疫原性組成物において使用されるＮａｄＡタンパク質は、例えば、一般に上記に開示されているような、当技術分野で公知の任意の組換え手法に従って得ることができる。ＮａｄＡタンパク質は、産生のために宿主細胞、例えば、大腸菌株にトランスフェクトされた組換え発現ベクター（または構築物）からの組換えタンパク質として入手することができる。組換えＮａｄＡは、例えば、実施例の項に記載されているように、当技術分野で公知の任意の精製方法によって、培養物から精製形態で得ることができる。

【0248】

一実施形態では、ＮａｄＡタンパク質は、約２０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約４０μｇ／用量～約１４０μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約１２０μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１００μｇ／用量の範囲の量で存在し得る。一実施形態では、ＮａｄＡタンパク質は、約５０μｇ／用量の量で存在し得る。

【0249】

ｄＯＭＶ
本明細書に開示される免疫原性組成物は、外膜タンパク質複合体（ＯＭＰＣ）とも称される、界面活性剤抽出外膜小胞（ｄＯＭＶ）を含む。通常、界面活性剤抽出外膜小胞は、抗原として使用される場合、ｄＯＭＶまたはＯＭＶと称される。タンパク質担体として使用される場合、それらはＯＭＰＣと称される。

【0250】

ＯＭＰＣは、ポリリボシルリビトールリン酸（ＰＲＰ）結合型ワクチンＰｅｄｖａｘＨＩＢ（インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型ワクチン）（Ｅｉｎｈｏｒｎら、Ｌａｎｃｅｔ（Ｌｏｎｄｏｎ、Ｅｎｇｌａｎｄ）．１９８６年；２（８５０２）：２９９～３０２頁；Ｍｏｒｏら、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ．２０１５年；１６６（４）：９９２～７頁）およびＶＡＸＥＬＩＳ（ジフテリア、破傷風、百日咳、ポリオ、Ｂ型肝炎およびインフルエンザ菌ｂ型ワクチン）（Ｓｙｅｄ、Ｐａｅｄｉａｔｒｉｃ ｄｒｕｇｓ．２０１７年；１９（１）：６９～８０頁）の担体タンパク質プラットフォームとして使用された。

【0251】

ｄＯＭＶは、細菌の外膜に見られる外膜内在タンパク質と残留リポオリゴ糖（ＬＯＳ）とを含む大きなプロテオリピド小胞である（Ｈｅｌｔｉｎｇ、Ａｃｔａ Ｐａｔｈｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｓｃａｎｄ Ｃ、１９８１年；８９（２）：６９～７８頁）。３００種を上回るタンパク質がｄＯＭＶ中に同定される可能性がある。ｄＯＭＶの総タンパク質含有量の７５％は、存在量の多い１０種のタンパク質によって占められ、これには、総タンパク質の最大５０％を占める外膜タンパク質であるポーリンＡ（ＰｏｒＡ）およびポーリンＢ（ＰｏｒＢ）が含まれる。

【0252】

髄膜炎菌ポーリンタンパク質（Ｐｏｒ）は、血清型判定の抗原決定基である。ポーリンの２つのクラスであるＰｏｒＡおよびＰｏｒＢ、ならびに表面に露出したループをコードするｐｏｒ遺伝子可変領域（ＶＲ）における配列多様性から生じる各クラス内の抗原性の異なるバリアントが同定されている。

【0253】

本明細書に開示される免疫原性組成物のために好適なｄＯＭＶは、さまざまなＭｅｎＢ株から得ることができる。ｄＯＭＶを、ＭｅｎＢ株の界面活性剤抽出物から単離してもよい。好適なＭｅｎＢ株は、野生型ＭｅｎＢ株、または、ポーリンタンパク質、例えば、ＰｏｒＡもしくはＰｏｒＢタンパク質、例えば、ＰｏｒＡタンパク質を過剰発現するように操作されたＭｅｎＢ株であり得る。

【0254】

一実施形態では、ｄＯＭＶは、ＰｏｒＡタンパク質を発現するＭｅｎＢ株から得ることができる。

【0255】

一実施形態では、ｄＯＭＶは、ＰｏｒＡ ＶＲ２サブタイプを発現するＭｅｎＢ株から得ることができる。ＰｏｒＡ ＶＲ２サブタイプは、ＰｏｒＡ ＶＲ２型Ｐ１．２、Ｐ１．４、Ｐ１．７、Ｐ１．１０、またはＰ１．１３タンパク質であり得る。

【0256】

一実施形態では、ｄＯＭＶは、ＰｏｒＡ ＶＲ２型Ｐ１．２タンパク質を発現するＭｅｎＢ株から得ることができる。

【0257】

一実施形態では、ｄＯＭＶは、ＰｏｒＡ ＶＲ２サブタイプおよびＰｏｒＢ Ｐ２．２ａを発現するＭｅｎＢ株から得ることができる。ｄＯＭＶは、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２およびＰｏｒＢ Ｐ２．２ａを発現するＭｅｎＢ株から得ることができる。

【0258】

一実施形態では、ｄＯＭＶは、ＰｏｒＡ ＶＲ２サブタイプおよびＰｏｒＢ Ｐ２．２ａを含み得る。ｄＯＭＶは、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２およびＰｏｒＢ Ｐ２．２ａを含み得る。

【0259】

別の実施形態では、ｄＯＭＶは、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２およびＰｏｒＢ Ｐ２．２ａならびに免疫型ＬＯＳ Ｌ３，７を含み得る。ＰｏｒＡおよびＰｏｒＢは、ｄＯＭＶのタンパク質の約５０％を占め得る。

【0260】

一部の実施形態では、ｄＯＭＶは、単一のＭｅｎＢ株から、または複数の異なるＭｅｎＢ株から得ることができる。後者の場合、ＭｅｎＢ株は、ＰｏｒＡタンパク質の同じサブタイプ、または異なるＰｏｒＡタンパク質サブタイプ、または異なるタイプのＰｏｒタンパク質、例えば、ＰｏｒＡおよびＰｏｒＢタンパク質を発現することができる。

【0261】

求めるポーリンタンパク質を提示するｄＯＭＶの由来となる使用可能なＭｅｎＢ株は、例えば、ＰｕｂＭＬＳＴデータベース（ｈｔｔｐｓ：／／ｐｕｂｍｌｓｔ．ｏｒｇ／）から同定することができる。例えば、好適なＭｅｎＢ株は、流行アウトブレイク由来のＭｅｎＢ株をそのようなデータベース中で選択し、続いてそのようなサブセット内で、目的のポーリンタンパク質、例えば、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２タンパク質をコードする遺伝子を有するＭｅｎＢ株を選択することによって得ることができる。続いて、選択された株が目的のポーリンタンパク質を効果的に発現するかどうかを、当技術分野で公知の手法を用いて評価することができる。

【0262】

本発明に従ってｄＯＭＶを得るために好適なＭｅｎＢ株の例としては、以下のものを挙げることができる：ＮＧ Ｈ３６、ＢＺ ２３２、ＤＫ ３５３、Ｂ６１１６／７７、ＢＺ １６３、００８５／００、ＮＧ Ｐ２０、００４６／０２、Ｍ１１ ４０１２３、Ｍ１２ ２４００６９、Ｎ５／９９、９９Ｍ、またはＭ０７ ２４０６７７。

【0263】

例示的な一実施形態では、ＭｅｎＢ株は、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２タンパク質サブタイプを発現するＭｅｎＢ株９９Ｍであり得る。

【0264】

一実施形態では、ｄＯＭＶは、ポーリンＡ（ＰｏｒＡ）ＶＲ２サブタイプＰ１．２を含み得る。

【0265】

別の実施形態では、ｄＯＭＶは、外膜タンパク質ポーリンＡ（ＰｏｒＡ）および／または外膜タンパク質ポーリンＢ（ＰｏｒＢ）を含み得る。ＰｏｒＡは、前記ｄＯＭＶ中に存在する総タンパク質に比して、約３％～約１５％の範囲の量で、もしくは約５％～約９％または１０％の量で存在し得る。ＰｏｒＢは、ｄＯＭＶ中に存在する総タンパク質に比して、約３０％～約７０％、または約３５％～約６５％、または約３８％～約５８％の範囲の量で存在し得る。

【0266】

一実施形態では、ｄＯＭＶは、少なくともデオキシコール酸処理の工程を使用する界面活性剤抽出法によって得ることができる。

【0267】

ｄＯＭＶを得るための好適な方法は、Ｈｅｌｔｉｎｇら（Ａｃｔａ Ｐａｔｈｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｓｃａｎｄ Ｃ．１９８１年４月；８９（２）：６９～７８頁）または米国特許第４，６９５，６２４号の実施例２に開示されている通りのものであり得る。例えば、細菌培養物を遠心分離してペレットを得て、続いてそれを界面活性剤、例えば、デオキシコール酸またはドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を用いて、加熱下、例えば、約５０℃～約６０℃、または約５６℃で、約１０分間～約２０分間の範囲の時間、または約１５分間かけて抽出することができる。続いて、得られた材料を遠心分離し、当技術分野で公知の任意の方法に従ってペレットをさらに懸濁させて精製することができる。

【0268】

一実施形態では、ｄＯＭＶは、約５μｇ／用量～約４００μｇ／用量、または約１０μｇ／用量～約３００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約２５０μｇ／用量、または約３５μｇ／用量～約２２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約１００μｇ／用量～約１５０μｇ／用量、または約１１０μｇ／用量～約１２５μｇ／用量の範囲の量で存在し得る。一実施形態では、ｄＯＭＶは、約２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量、または約１２５μｇ／用量の量で存在し得る。

【0269】

さらなる抗原
一実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、本明細書に開示される髄膜炎菌抗原の組合せに比べて、少なくとも１つのさらなる抗原を含み得る。

【0270】

例示的な一実施形態では、さらなる抗原は、担体タンパク質にコンジュゲートされた髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙおよび／またはＸ由来の糖質抗原であり得る。一実施形態では、さらなる抗原は、ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ－１３５およびＭｅｎＹ莢膜多糖の担体タンパク質へのコンジュゲートの組合せであり得る。

【0271】

例示的な一実施形態では、さらなる抗原は、担体タンパク質にコンジュゲートされた髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、および／またはＹ由来の糖質抗原であり得る。一実施形態では、さらなる抗原は、ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ－１３５、およびＭｅｎＹ莢膜多糖の担体タンパク質へのコンジュゲートの組合せであり得る。

【0272】

異なる莢膜多糖に対する担体タンパク質は、異なってもよく、または同じでもよい。担体タンパク質としては、不活化細菌毒素、例えば、ジフテリアトキソイド、ＣＲＭ１９７、破傷風トキソイド、百日咳トキソイド、大腸菌ＬＴ、大腸菌ＳＴ、および緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来の外毒素Ａを挙げることができる。細菌外膜タンパク質、例えば、ポーリン、トランスフェリン結合タンパク質、ニューモリシン（ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｉｓ）、肺炎球菌表面タンパク質Ａ（ＰｓｐＡ）、または肺炎球菌アドヘシンタンパク質（ＰｓａＡ）も使用可能である。他のタンパク質、例えば、オボアルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）または精製ツベルクリン（ＰＰＤ）も、担体タンパク質として使用することができる。担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７タンパク質、破傷風トキソイドまたはジフテリアトキソイドであり得る。一実施形態では、担体タンパク質は破傷風トキソイドである。

【0273】

コンジュゲートは、７００ｋＤａ～１４００ｋＤａまたは８００ｋＤａ～１３００ｋＤａの範囲の分子量を有する分子を含む集団であり得る。

【0274】

各用量内で、個々の糖類抗原の量は、糖類の質量としての測定で１～５０μｇであり得る。例えば、１回の用量当たり合計４０μｇの糖類を投与することができる。例えば、１０μｇの各多糖類およびおよそ５５μｇの担体タンパク質、例えば、破傷風トキソイドタンパク質を投与することができる。

【0275】

一実施形態では、さらなる抗原は、それぞれが破傷風トキソイド担体タンパク質にコンジュゲートされたＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ－１３５およびＭｅｎＹ莢膜多糖の組合せであってよく、ここでＭｅｎＡ多糖は、アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーを介して破傷風トキソイド担体にコンジュゲートされており、一方、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ－１３５およびＭｅｎＹ多糖はそれぞれ破傷風トキソイド担体（ＴＴ）に直接コンジュゲートされている。

【0276】

一実施形態では、さらなる抗原は、ＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ－１３５およびＭｅｎＹ莢膜多糖の破傷風トキソイド担体タンパク質へのコンジュゲートの組合せであり得る。例示的な一実施形態では、髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹ由来のコンジュゲートされた糖質抗原は、ＷＯ ２０１８／０４５２８６ Ａ１またはＷＯ ２００２／０５８７３７ Ａ２に開示される通りであり得る。

【0277】

一実施形態では、さらなる抗原は、市販のＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合型ワクチンＭＥＮＱＵＡＤＦＩ（登録商標）のものである。

【0278】

アジュバント
一実施形態では、本明細書に開示される組成物は、アジュバントをさらに含み得る。

【0279】

一実施形態では、アジュバントは、アルミニウムベースのアジュバント（またはアルミニウム塩）であり得る。アルミニウムベースのアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバント（例えば、アルミニウムオキシヒドロキシド－ＡｌＯＯＨ）、リン酸アルミニウムアジュバント（例えば、ヒドロキシリン酸アルミニウム－Ａｌ（ＯＨ）ＰＯ_４－またはオルトリン酸アルミニウム－ＡｌＰＯ_４）、硫酸アルミニウム塩アジュバント、硫酸ヒドロキシリン酸アルミニウムアジュバント、硫酸アルミニウムカリウムアジュバント、ヒドロキシ炭酸アルミニウム、水酸化アルミニウムと水酸化マグネシウムの組合せ（Ｉｍｊｅｃｔ（登録商標）Ａｌｕｍとして市販されている）、またはそれらの混合物であり得る。一実施形態では、アルミニウムベースのアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバント（例えば、アルミニウムオキシヒドロキシド－ＡｌＯＯＨ）、リン酸アルミニウムアジュバント（例えば、ヒドロキシリン酸アルミニウム－Ａｌ（ＯＨ）ＰＯ_４－またはオルトリン酸アルミニウム－ＡｌＰＯ_４）、またはそれらの混合物であり得る。一実施形態では、アルミニウムベースのアジュバントは、リン酸アルミニウムアジュバント（例えば、ヒドロキシリン酸アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）ＰＯ_４）またはオルトリン酸アルミニウム－（ＡｌＰＯ_４））であり得る。アジュバントは、任意の適切な形態、例えば、ゲル、結晶、非晶質をとり得る。一実施形態では、アルミニウムベースのアジュバントは、非晶質ヒドロキシリン酸アルミニウム塩であり得る。一実施形態では、アルミニウムベースのアジュバントは、オルトリン酸アルミニウム塩であり得る。別の実施形態では、アルミニウムベースのアジュバントは、結晶性アルミニウムオキシヒドロキシド塩（ベーマイト）であり得る。

【0280】

ヒドロキシリン酸アルミニウムアジュバントまたはオルトリン酸アルミニウムアジュバントは、リン酸の存在下におけるアルミニウムオキシヒドロキシドの沈殿によって得ることができる。沈殿反応中の反応条件および反応物濃度は、塩におけるリン酸のヒドロキシルへの置換の程度に影響を及ぼす。

【0281】

ヒドロキシリン酸アルミニウムアジュバントまたはオルトリン酸アルミニウムアジュバントは、０．３～０．９９のＰＯ／Ａｌモル比、例えば、０．８～０．９５の比（例えば、０．８８＋０．０５）を有し得る。

【0282】

ヒドロキシリン酸アルミニウム［［Ａｌ（ＯＨ）ｘ（ＰＯ_４）ｙ］アジュバント、式中、各アニオンの原子価とそのモル分率の合計は－３である］は、ヒドロキシル基の存在によってＡｌＰＯ_４と区別することができる。例えば、３１４６ｃｍ^－１のＩＲスペクトルバンド（例えば、２００℃に加熱された場合）は、構造的ヒドロキシルの存在を示す。

【0283】

アルミニウムオキシヒドロキシド［ＡＩＯ（ＯＨ）］は、ＩＲ分光法、特に１０７０ ｃｍ^－１の吸収帯および３０９０～３１００ｃｍ^－１における強力なショルダーの存在によって、Ａｌ（ＯＨ）３と区別することができる。

【0284】

異なるアルミニウムベースのアジュバントの混合物も使用することができる。

【0285】

一実施形態では、アジュバントは、リン酸アルミニウムアジュバントであり得る。

【0286】

例示的な実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、単一のアルミニウムベースのアジュバントを含んでもよく、すなわち、組成物中に存在するアルミニウムアジュバントが９０％超、９９％超、またはさらに９９．９％超を占めてもよい。アルミニウムベースのアジュバントは、Ａｌ^３＋の濃度が約０．５ｍｇ／ｍＬ～約１．５ｍｇ／ｍＬのＡｌ^３＋、または約０．８～約１．２ｍｇ／ｍＬのＡｌ^３＋、または約１．００ｍｇ／ｍＬのＡｌ^３＋となるように存在し得る。

【0287】

アルミニウムベースのアジュバント、例えば、リン酸アルミニウムアジュバントは、本明細書に開示される組成物中に、約１００μｇ／用量～約１０００μｇ／用量、または約１５０μｇ／用量～約９００μｇ／用量、または約２００μｇ／用量～約８００μｇ／用量、または約２５０μｇ／用量～約７００μｇ／用量、または約３００μｇ／用量～約６００μｇ／用量、または約３５０μｇ／用量～約５５０μｇ／用量、または約４００μｇ／用量～約５００μｇ／用量、または約４００μｇ／用量～約８００μｇ／用量、または約４００μｇ／用量、または約８００μｇ／用量の範囲の量で存在し得る。

【0288】

組成物は、アルミニウムベースのアジュバントに加えて（またはその代わりに）他のアジュバントを含み得る。

【0289】

好適なアジュバントとしては、リン酸カルシウムアジュバント、ＭＦ５９（４．３％ ｗ／ｖスクアレン、０．５％ ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ８０（商標）、０．５％ ｗ／ｖ Ｓｐａｎ ８５）、ＣｐＧ含有核酸（シトシンはメチル化されていない）、ＱＳ２１、ＭＰＬ、３ＤＭＰＬ、Ａｑｕｉｌｌａからの抽出物、ＩＳＣＯＭＳ、ＬＴ／ＣＴ変異体、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧ）微粒子、Ｑｕｉｌ Ａ、インターロイキンなどが挙げられるが、これらに限定されない。実験動物については、フロイントアジュバント（不完全フロイントアジュバント；完全フロイントアジュバント）、Ｎ－アセチル－ムラミル－Ｌ－トレオニル－Ｄ－イソグルタミン（ｔｈｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチル－ノル－ムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン（ＣＧＰ １１６３７、ノル－ＭＤＰと称される）、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミニル－Ｌ－アラニン－２－（１’－２’－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ヒドロキシホスホリロキシ）－エチルアミン（ＣＧＰ １９８３５Ａ、ＭＴＰ－ＰＥと称される）、およびＲＩＢＩを使用することができ、このうちＲＩＢＩは、細菌から抽出された３つの成分、モノホスホリルリピドＡ、トレハロースジミコレートおよび細胞壁骨格（ＭＰＬ＋ＴＤＭ＋ＣＷＳ）を、２％スクアレン／Ｔｗｅｅｎ ８０エマルジョン中に含む。アジュバントの有効性は、免疫原性抗原またはその抗原エピトープを対象とする抗体の量を測定することによって決定し得る。

【0290】

組成物の有効性を強化するためのさらなる例示的アジュバントとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（１）水中油型エマルジョン製剤（他の特異的免疫刺激剤、例えば、ムラミルペプチド（以下を参照）または細菌細胞壁の構成要素を伴うかまたは伴わない）、例えば、（ａ）５％スクアレン、０．５％ Ｔｗｅｅｎ ８０、および０．５％ ＳＰＡＮ ８５（場合によりＭＴＰ－ＰＥを含む）を含み、マイクロフルイダイザーを使用してミクロン以下の粒子に製剤化されたＭＦ５９（ＷＯ ９０／１４８３７）、（ｂ）１０％スクアラン、０．４％ Ｔｗｅｅｎ ８０、５％プルロニックブロックドポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ－ＭＤＰを含み、マイクロフルイダイズ処理によってミクロン以下のエマルジョンとなるか、またはボルテックス処理によってより大きな粒径のエマルジョンを生じたＳＡＦ、ならびに（ｃ）２％スクアレン、０．２％ Ｔｗｅｅｎ ８０、および１つまたはそれ以上の細菌細胞壁成分、例えば、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）、例えば、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（商標））を含む、ＲＩＢＩアジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｍｏｎｔ．）、（２）サポニンアジュバント、例えば、ＱＳ２１またはＳｔｉｍｕｌｏｎ（商標）（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，Ｍａｓｓ．）を使用してもよく、またはそれらから生成された粒子、例えば、ＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）、ＩＳＣＯＭはさらなる界面活性剤を欠いてもよい、例えば、ＷＯ ００／０７６２１；（３）完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）または不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）；（４）サイトカイン、例えば、インターロイキン（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１２（Ｗ０９９／４４６３６）など）、インターフェロン（例えば、γインターフェロン）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）など；（５）モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）または３－Ｏ－脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）、例えば、ＧＢ－２２２０２２１、ＥＰ－Ａ－０６８９４５４、場合により肺炎球菌サッカリドとともに使用される場合には実質的にミョウバンの非存在下で、例えば、ＷＯ ００／５６３５８；（６）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／または水中油型エマルジョンとの組合せ、例えば、ＥＰ－Ａ－０８３５３１８、ＥＰ－Ａ－０７３５８９８、ＥＰ－Ａ－０７６１２３１；（７）ＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチド（例えば、ＷＯ ９８／５２５８１を参照）、例えば、シトシンがメチル化されていない少なくとも１つのＣＧジヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド；（８）ポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシエチレンエステル（例えば、ＷＯ ９９／５２５４９を参照）；（９）オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（ＷＯ ０１／２１２０７）または少なくとも１つのさらなる非イオン性界面活性剤、例えば、オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルもしくはエステル界面活性剤（ＷＯ ０１／２１１５２）；（１０）サポニンおよび免疫刺激オリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）（ＷＯ ００／６２８００）；（１１）免疫刺激剤および金属塩の微粒子、例えば、ＷＯ ００／２３１０５；（１２）サポニンおよび水中油型エマルジョン、例えば、ＷＯ ９９／１１２４１；（１３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＭ２（場合により＋ステロール）、例えば、ＷＯ ９８／５７６５９；（１４）組成物の効能を強化する免疫刺激剤として作用する他の物質。ムラミルペプチドには、Ｎ－アセチル－ムラミル－Ｌ－トレオニル－Ｄ－イソグルタミン（ｔｈｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－２５アセチル－ノルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン（ｎｏｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタリニル－Ｌ－アラニン－２－（１’－２’－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ヒドロキシホスホリルオキシ）－エチルアミンＭＴＰ－ＰＥなどが含まれる。

【0291】

ヒトへの投与に好適なアジュバントは、アルミニウム塩アジュバント（例えば、リン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム）であり得る。

【0292】

免疫原性組成物
本明細書に開示される免疫原性組成物は、髄膜炎菌抗原の組合せであって、少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ａタンパク質、少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂタンパク質、少なくとも１つのナイセリア属アドヘシンＡ（ＮａｄＡ）タンパク質、および少なくとも１つの界面活性剤抽出外膜小胞（ｄＯＭＶ）を含む前記組合せを含み得る。

【0293】

本明細書に開示される免疫原性組成物は、髄膜炎菌血清群Ｂ抗原の組合せであって、少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ａタンパク質、少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂタンパク質、少なくとも１つのナイセリア属アドヘシンＡ（ＮａｄＡ）タンパク質、および少なくとも１つの界面活性剤抽出外膜小胞（ｄＯＭＶ）を含む前記組合せを含み得る。ｆＨＢＰ Ａタンパク質および／またはｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、脂質化されていない。

【0294】

ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号１と少なくとも約８５％の同一性を含む変異タンパク質であってよく、および／またはｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号３と少なくとも約８５％の同一性を含む変異タンパク質であってよい。

【0295】

ｆＨＢＰ Ａタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく：ａ）アミノ酸１１５のアスパラギン（Ｎ１１５）のアミノ酸置換；ｂ）アミノ酸１２１のアスパラギン酸（Ｄ１２１）のアミノ酸置換；ｃ）アミノ酸１２８のセリン（Ｓ１２８）のアミノ酸置換；ｄ）アミノ酸１３０のロイシン（Ｌ１３０）のアミノ酸置換；ｅ）１３１位のバリン（Ｖ１３１）のアミノ酸置換；ｆ）１３３位のグリシン（Ｇ１３３）のアミノ酸置換；ｇ）２１９位のリジン（Ｋ２１９）のアミノ酸置換；およびｈ）２２０位のグリシン（Ｇ２２０）のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つから選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むことができ、もしくは配列番号２を含むかもしくはそれからなり、ならびに／またはｆＨＢＰ Ｂタンパク質は、配列番号６の番号付けに基づく：ａ）アミノ酸３８のグルタミン（Ｑ３８）のアミノ酸置換；ｂ）アミノ酸９２のグルタミン酸（Ｅ９２）のアミノ酸置換；ｃ）アミノ酸１３０のアルギニン（Ｒ１３０）のアミノ酸置換；ｄ）アミノ酸２２３のセリン（Ｓ２２３）のアミノ酸置換；およびｅ）アミノ酸２４８のヒスチジン（Ｈ２４８）のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つから選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むことができ、もしくは配列番号４を含むかもしくはそれからなる。

【0296】

ｆＨＢＰ Ａタンパク質および／またはｆＨＢＰ Ｂは、約２０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約４０μｇ／用量～約１４０μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約１２０μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量、または約１００μｇ／用量の範囲の量で存在し得る。

【0297】

ＮａｄＡタンパク質は、ＮａｄＡ１タンパク質であってよく、または配列番号５と少なくとも約８５％の同一性を含んでもよく、または配列番号５を含むかもしくはそれからなる。

【0298】

ＮａｄＡタンパク質は、約２０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約４０μｇ／用量～約１４０μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約１２０μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１００μｇ／用量、または約５０μｇ／用量の範囲の量で存在し得る。

【0299】

ｄＯＭＶは、ポーリンＡ（ＰｏｒＡ）を含み得る。

【0300】

ｄＯＭＶは、約５μｇ／用量～約４００μｇ／用量、または約１０μｇ／用量～約３００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約２５０μｇ／用量、または約３５μｇ／用量～約２２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約１００μｇ／用量～約１５０μｇ／用量、または約１１０μｇ／用量～約１２５μｇ／用量、または約２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量、または約１２５μｇ／用量の範囲の量で存在し得る。

【0301】

組成物は、アジュバント、例えば、アルミニウムベースのアジュバント、例えば、水酸化アルミニウムアジュバント、リン酸アルミニウムアジュバント、硫酸アルミニウム塩アジュバント、硫酸ヒドロキシリン酸アルミニウムアジュバント、硫酸アルミニウムカリウムアジュバント、ヒドロキシ炭酸アルミニウム、水酸化アルミニウムと水酸化マグネシウムの組合せ、およびそれらの混合物を含む群において選択されるアルミニウムベースのアジュバントを含んでもよく、それは例えば、リン酸アルミニウムアジュバントである。

【0302】

組成物は、配列番号２を含むかまたはそれからなる約２５～約１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４を含むかまたはそれからなる約２５～約１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５を含むかまたはそれからなる約２５～約１００μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の約２０～約１５０μｇ／用量のｄＯＭＶ、約１００～約６００μｇ／用量のリン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはそれらからなることができる。

【0303】

組成物はさらに、髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹのうちの１つまたはそれ以上に由来する結合莢膜糖を少なくとも含み得る。

【0304】

本明細書に記載される組成物を含むワクチンも開示される。

【0305】

本明細書に開示される組成物またはワクチンは、髄膜炎菌感染症に対する防御における使用のためであってもよく、または髄膜炎菌に対する免疫応答の誘導における使用のためであってもよい。

【0306】

配列番号２に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むｆＨＢＰ Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡ、配列番号４に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むｆＨＢＰ Ｂタンパク質をコードするｍＲＮＡ、配列番号５に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むＮａｄＡタンパク質をコードするｍＲＮＡ、およびＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ由来のｄＯＭＶを含むか、またはそれらからなる組成物が、さらに開示される。

【0307】

製剤
別の態様では、本開示は、本明細書に開示される組成物を含むワクチンに関する。

【0308】

本明細書に開示される免疫原性組成物またはワクチン組成物は、固体、半固体、液体の形態にある調製物、例えば、錠剤、カプセル、粉末、エアロゾル、溶液、懸濁液、またはエマルジョンとして製剤化することができる。そのような組成物を投与する典型的な経路には、経口、局所、経皮、吸入、非経口、舌下、頬側、鼻腔内が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、非経口という用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、皮内、胸骨内注射または注入の手法を含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるワクチン組成物は、経皮、皮下、皮内または筋肉内経路によって投与することができる。本開示の組成物は、送達の様式に基づいて製剤化され、これには例えば、非経口的送達、例えば、筋肉内、皮内、または皮下注射を介した送達のために製剤化された組成物が含まれる。

【0309】

本明細書に開示される免疫原性組成物は、任意の適切な経路、例えば、粘膜投与（例えば、鼻腔内または舌下）、非経口投与（例えば、筋肉内、皮下、経皮、または皮内経路）、または経口投与を介して投与することができる。当業者には理解されるであろうが、免疫原性組成物は、意図した投与経路に適合するように好適に製剤化することができる。一実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、筋肉内経路、皮内経路、または皮下経路を介して投与されるように製剤化することができる。一実施形態では、免疫原性組成物は、筋肉内経路を介して投与されるように製剤化することができる。

【0310】

本明細書に開示される組成物は、組成物を対象に投与した場合に、その中に含まれる活性成分が生物学的に利用可能であるように製剤化される。

【0311】

そのような投薬形態を調製する実際の方法は、当業者に公知であるか、または明らかである；例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」、第２０版（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００年）を参照のこと。

【0312】

本明細書に開示される免疫原性組成物は、任意の薬学的に許容される賦形剤とともに製剤化することができる。組成物は、少なくとも１つの不活性な希釈剤または担体を含み得る。１つの例示的な薬学的に許容されるビヒクルは、生理食塩水緩衝液である。他の生理学的に許容されるビヒクルは、当業者に公知であり、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」（第１８版）、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、１９９０年、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａに記載されている。本明細書に記載される免疫原性組成物は、場合により、生理的条件に近づけるために必要とされる薬学的に許容される補助物質、例えば、ｐＨ調整剤および緩衝剤、張性調整剤、湿潤剤など、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、ソルビタンモノラウレート、オレイン酸トリエタノールアミン、ヒト血清アルブミン、必須アミノ酸、非必須アミノ酸、Ｌ－アルギニン塩酸塩、サッカロース、Ｄ－トレハロース脱水物、ソルビトール、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンおよび／または尿素を含み得る。さらに、ワクチン組成物は、場合により、薬学的に許容される添加剤、例えば、希釈剤、結合剤、安定剤、および防腐剤を含み得る。

【0313】

一実施形態では、組成物は、液体の形態、例えば、溶液、エマルジョンまたは懸濁液であり得る。液体は、注射による送達のためであり得る。注射によって投与されることを意図した組成物は、界面活性剤、防腐剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、緩衝液、安定剤および等張剤のうちの少なくとも１つを含み得る。本明細書に開示される液体組成物は、滅菌希釈剤、例えば、注射用蒸留水、食塩液、例えば、生理食塩水、リンゲル液、等張塩化ナトリウム、固定油、例えば、溶媒または懸濁媒体として機能し得る合成モノまたはジグリセリド、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；緩衝剤、たとえば、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩、および張性の調整のための薬剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース；凍結防御剤として作用する薬剤、例えば、スクロースまたはトレハロースのうちの少なくとも１つを含み得る。

【0314】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約４．０～約９．０の範囲のｐＨを有し得る。

【0315】

本明細書に開示される免疫原性組成物のｐＨは、約４．５～約８．５、または約４．８～約８．２、または約５．０～約８．０、または約５．２～約７．５、または約５．４～約７．０、または約５．５～約６．８、または約５．７～約６．５、または約５．８～約６．２の範囲であり得る。一実施形態では、本明細書に開示される組成物のｐＨは、約６．０であり得る。安定なｐＨは、緩衝液の使用によって維持され得る。

【0316】

一実施形態では、本明細書に開示される組成物は、緩衝液をさらに含み得る。可能性のある使用可能な緩衝液としては、Ｔｒｉｓ緩衝液、酢酸塩緩衝液、クエン酸塩緩衝液、リン酸塩緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、またはヒスチジン緩衝液を挙げることができる。

【0317】

例示的な一実施形態では、本明細書に開示される組成物は、酢酸ナトリウム緩衝液を含み得る。酢酸ナトリウム緩衝液は、約１０ｍＭ～約３００ｍＭの範囲、または約１０ｍＭ～約２５０ｍＭの範囲、または約２０ｍＭ～約２５０ｍＭの範囲、または約２０ｍＭ～約１５０ｍＭの範囲、または約２０ｍＭ～約１３０ｍＭの範囲、または約３０ｍＭ～約１２０ｍＭの範囲、または約４０ｍＭ～約１００ｍＭの範囲、または約５０ｍＭ～約８０ｍＭの範囲、または約５０ｍＭ～約６０ｍＭの範囲の濃度、または例えば、約５０ｍＭの濃度で存在し得る。

【0318】

免疫原性組成物は、哺乳動物、例えば、ヒトに対して等張であり得る。

【0319】

免疫原性組成物はまた、１つまたは複数のさらなる塩、例えば、ナトリウム塩、カルシウム塩、またはマグネシウム塩も含み得る。一実施形態では、ナトリウム塩は、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウムを含む群において選択することができる。一実施形態では、ナトリウム塩は、塩化ナトリウムであり得る。カルシウム塩は、塩化カルシウム塩であり得る。マグネシウム塩は、塩化マグネシウム塩であり得る。一実施形態では、ナトリウム塩は、約１０ｍＭ～約３００ｍＭ、もしくは約３０ｍＭ～約２８０ｍＭ、もしくは約５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、もしくは約６０ｍＭ～約２２０ｍＭ、もしくは約８０ｍＭ～約２００ｍＭ、もしくは約１００ｍＭ～約１８０ｍＭ、もしくは約１２０ｍＭ～約１６０ｍＭの範囲の濃度で存在し得るか、または例えば、約１５０ｍＭの濃度で存在し得る。カルシウムまたはマグネシウムは、約１ｍＭ～約１５ｍＭ、または約５ｍＭ～約１０ｍＭの範囲の量で存在し得る。

【0320】

非経口製剤は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ、または複数回投与バイアルに封入することができる。注射可能な組成物は、例えば、無菌性である。

【0321】

本明細書に開示される免疫原性組成物は、従来の滅菌手法によって、例えば、ＵＶまたはγ線を用いて滅菌してもよく、または滅菌濾過してもよい。本明細書に開示される液体免疫原性組成物の滅菌濾過の結果として得られる組成物は、液体形態でパッケージ化および保存してもよく、または凍結乾燥してもよい。凍結乾燥された組成物は、投与前に無菌の水性担体で再構成することができる。乾燥組成物は、安定剤、例えば、マンニトール、スクロース、またはドデシルマルトシド、ならびにそれらの混合物、例えば、ラクトース／スクロース混合物、スクロース／マンニトール混合物などを含み得る。

【0322】

本明細書に開示される組成物は、治療有効量で投与され、これは、使用される特定の治療剤の活性；治療剤の代謝安定性および作用の長さ；患者の年齢、体重、全身健康状態、性別、および食事；投与の様式および時間；排泄の速度；薬物の組合せ；特定の障害または状態の重症度；ならびに療法を受ける対象を含む種々の因子に応じて異なると考えられる。

【0323】

一実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２を含むかまたはそれからなる非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４を含むかまたはそれからなる非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５を含むかまたはそれからなるＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ由来のｄＯＭＶを含むか、またはそれらからなることができる。組成物は、リン酸アルミニウムアジュバントを含み得る。組成物は、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含み得る。

【0324】

一実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２からなる非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなるＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ由来のｄＯＭＶ、リン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはそれらからなることができる。

【0325】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２からなる約２５～約１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる約２５～約１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなる約２５～約１００μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の約２０～約１５０μｇ／用量のｄＯＭＶ、約１００～約８００μｇ／用量のリン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはそれらからなることができる。

【0326】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２からなる約２５μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる約２５μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなる約２５μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の約２５μｇ／用量のｄＯＭＶ、約１００μｇ／用量のリン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはそれらからなることができる。

【0327】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２からなる約２５μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる約２５μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなる約５０μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の約５０μｇ／用量のｄＯＭＶ、約４００μｇ／用量のリン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはそれらからなることができる。

【0328】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２からなる約５０μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる約５０μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなる約５０μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の約２５μｇ／用量のｄＯＭＶ、約４００μｇ／用量のリン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはそれらからなることができる。

【0329】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２からなる約５０μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる約５０μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなる約５０μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の約５０μｇ／用量のｄＯＭＶ、約４００μｇ／用量のリン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはそれらからなることができる。

【0330】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２からなる約５０μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる約５０μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなる約５０μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の約１２５μｇ／用量のｄＯＭＶ、約４００μｇ／用量のリン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはそれらからなることができる。

【0331】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２からなる約５０μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる約５０μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなる約５０μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の約５０μｇ／用量のｄＯＭＶ、約２００μｇ／用量のリン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはそれらからなることができる。

【0332】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２からなる約７５μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる約７５μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなる約７５μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の約７５μｇ／用量のｄＯＭＶ、約３００μｇ／用量のリン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはそれらからなることができる。

【0333】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２からなる約１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる約１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなる約１００μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の約１２５μｇ／用量のｄＯＭＶ、約４００μｇ／用量のリン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはそれらからなることができる。

【0334】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２からなる約１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる約１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなる約５０μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の約５０μｇ／用量のｄＯＭＶ、約４００μｇ／用量のリン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはそれらからなることができる。

【0335】

別の実施形態では、本明細書に開示される組成物は、配列番号２からなる約１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる約１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなる約５０μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の約５０μｇ／用量のｄＯＭＶ、リン酸アルミニウムアジュバント約８００μｇ／用量、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはそれらからなることができる。

【0336】

一実施形態では、本開示は、本明細書に開示される組成物を含む容器に関する。容器は、髄膜炎菌抗原の組合せを含む免疫原性組成物であって、少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ａタンパク質、少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂタンパク質、少なくとも１つのナイセリア属アドヘシンＡ（ＮａｄＡ）タンパク質、および少なくとも１つの界面活性剤抽出外膜小胞（ｄＯＭＶ）を含む前記組合せを含み得る。

【0337】

さらに、容器は、配列番号２からなる約２５～１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる約２５～１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなる約２５～１００μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の約２０～１５０μｇ／用量のｄＯＭＶ、約１００～８００μｇ／用量のリン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ ６．０を含むか、またはそれらからなる組成物を含み得る。

【0338】

容器はバイアルであり得る。バイアルは、複数回投与用バイアルまたは単回投与用バイアルであり得る。適切なバイアルは、最適な栓およびシールで密封された小さなガラス製またはプラスチック製容器であり得る。

【0339】

あるいは、容器は、プレフィルドシリンジであり得る。プレフィルドシリンジは、本明細書に開示される液体組成物を貯蔵するシリンジバレルを含み得る。ガスケットおよびプランジャーがシリンジバレルに挿入される。ガスケットは、液体薬物の漏出を防止するためにシリンジバレルを液密に封止し、プランジャーはガスケットをスライドさせる。例えば、米国特許第１０，６２５，０２５号またはＷＯ ２０１３／０４６８５５に記載されているように、さまざまなタイプのプレフィルドシリンジが当技術分野で公知である。

【0340】

本明細書に開示される組成物が、別のワクチン組成物、例えば、四価のＭｅｎＡＣＷＹコンジュゲート組成物と混合されて注射される場合、両方の組成物は、単一のバイアルもしくはプレフィルドシリンジである容器内に、または二重チャンバーシリンジ内にパッケージ化することができる。連続シリンジまたはバイパスシリンジとしても知られる二重チャンバーシリンジは、隔膜によって近位および遠位の２つの区画に分離された単一のバレルを含み得る。シリンジのプランジャーの押し下げにより、遠位区画内の２つのワクチン組成物の混合が強制される。例えば、米国特許第１０，６９５，５０５号に記載されているように、さまざまなタイプの二重チャンバーシリンジが当技術分野で公知である。二重チャンバーシリンジは、ワクチン組成物が凍結乾燥形態のような乾燥形態で製剤化され、再構成のために液体ビヒクルとともに保存される場合にも使用することができる。そのような場合、乾燥ワクチンは１つのチャンバー内に貯蔵され、再構成および注射のための液体は第２のチャンバー内に貯蔵される。

【0341】

製造方法
本明細書に開示される組成物は、薬学分野において周知の方法によって調製することができる。

【0342】

一実施形態では、本開示は、本明細書に開示される免疫原性組成物または本明細書に開示されるワクチンを調製するための方法であって、髄膜炎菌抗原と、場合によりアルミニウム塩とを混合する少なくとも１つの工程を含み、前記抗原が、少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ａタンパク質、少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂタンパク質、少なくとも１つのナイセリア属アドヘシンＡ（ＮａｄＡ）タンパク質、および少なくとも１つの界面活性剤抽出外膜小胞（ｄＯＭＶ）を含む、方法に関する。

【0343】

一実施形態では、混合の工程は、場合によりＡｌＰＯ_４上に吸着された少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ａタンパク質の、および場合によりＡｌＰＯ_４塩上に吸着された少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂタンパク質の第１の混合物を、場合によりＡｌＰＯ_４上に吸着された少なくとも１つのＮａｄＡタンパク質の、および少なくとも１つのｄＯＭＶの第２の混合物と混ぜ合わせることを含み得る。

【0344】

一実施形態では、混合の工程は、ＡｌＰＯ_４上に吸着された少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ａタンパク質の、およびＡｌＰＯ_４塩上に吸着された少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂタンパク質の第１の混合物を、ＡｌＰＯ_４上に吸着された少なくとも１つのＮａｄＡタンパク質の、および少なくとも１つのｄＯＭＶの第２の混合物と混ぜ合わせることを含み得る。

【0345】

抗原ｆＨＢＰ ＡおよびＢならびにＮａｄＡを、まずアルミニウムベースのアジュバント、例えば、ＡｌＰＯ_４に吸着させて、続いて一緒にｄＯＭＶと混合することができる。混合は任意の順序で行うことができる。あるいは、アルミニウムベースのアジュバント上に吸着されたｆＨＢＰ ＡおよびＢを、適切な緩衝液中で一緒に混合することもできる。アルミニウムベースのアジュバント上に吸着されたＮａｄＡとｄＯＭＶとを、適切な緩衝液中で一緒に混合することができる。続いて、２つの混合物を混ぜ合わせて、本明細書に開示される免疫原性組成物を得ることができる。

【0346】

続いて、さらなる抗原、例えば、コンジュゲートされたＭｅｎＡＣＷＹ多糖組成物を、本明細書に開示される組成物と混合することができる。さらなる抗原組成物、例えば、コンジュゲートされたＭｅｎＡＣＷＹ多糖組成物を、患者への投与の直前に、場合により、投与の前に２つの組成物を一緒に混合する二重チャンバーシリンジを介して、本明細書に開示される免疫原性組成物と一緒に混ぜ合わせることができる。

【0347】

別の実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物またはワクチンを、コンジュゲートされたＭｅｎＡＣＷＹ多糖体免疫原性組成物またはワクチンと共投与する。本明細書に開示される免疫原性組成物またはワクチンと共投与することができるコンジュゲートされたＭｅｎＡＣＷＹ多糖体免疫原性組成物またはワクチンは、それぞれが破傷風トキソイド担体タンパク質にコンジュゲートされたＭｅｎＡ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ－１３５およびＭｅｎＹ莢膜多糖体であってよく、場合によりＭｅｎＡ多糖体はアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーを介して破傷風トキソイド担体にコンジュゲートされ、ＭｅｎＣ、ＭｅｎＷ－１３５およびＭｅｎＹ多糖体はそれぞれ破傷風トキソイド担体に直接コンジュゲートされる。共投与されるコンジュゲートされたＭｅｎＡＣＷＹ多糖体免疫原性組成物またはワクチンは、ＷＯ ２０１８／０４５２８６ Ａ１またはＷＯ ２００２／０５８７３７ Ａ２に開示されている通りのものであり得る。共投与されるコンジュゲートされたＭｅｎＡＣＷＹ多糖体免疫原性組成物またはワクチンは、市販のＭｅｎＡＣＹＷ－ＴＴ結合ワクチンＭＥＮＱＵＡＤＦＩ（登録商標）であり得る。

【0348】

別の実施形態では、本明細書に開示される調製方法において使用するための抗原およびアルミニウム塩は、緩衝液中にあってもよい。

【0349】

本明細書に開示される組成物は、液体または固体、例えば、凍結乾燥された形態で製造することができる。

【0350】

一実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、乾燥形態、例えば、凍結乾燥組成物で、またはＷＯ ２００９／１０９５５０に記載されているようなプリリングプロセスを介して得られたマイクロペレットとして、パッケージ化および貯蔵することができる。一実施形態では、組成物の異なる成分、例えば、ＭｅｎＢ抗原、およびおそらくさらなる抗原が、すべて同一のマイクロペレット中に存在し得る。別の実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物の構成要素は、それぞれ別個のマイクロペレット中にあってもよく、すなわち、マイクロペレット当たり１つの構成要素であってもよく、またはすべての構成要素もしくはそれらの一部であってもよく、その場合、他の１つまたは複数の構成要素は、それぞれ別個のマイクロペレット中にあってもよく、同じマイクロペレット内で二つ組または三つ組（二価または三価の製剤）として組み合わせてもよい（ｆＨＢＰ Ａ＋ＢおよびＮａｄＡ＋ｄＯＭＶ、ｆＨＢＰ Ａ＋ＮａｄＡおよびｆＨＢＰ Ｂ＋ｄＯＭＶ、ｆＨＢＰ Ｂ＋ＮａｄＡおよびｆＨＢＰ Ａ＋ｄＯＭＶ、ｆＨＢＰ Ａ＋ＮａｄＡ＋ｆＨＢＰ ＢおよびｄＯＭＶ、またはｆＨＢＰ Ａ＋ｄＯＭＶ＋ｆＨＢＰ ＢおよびＮａｄＡなど）。そのような実施形態では、別個に異なる成分を含む、または異なる成分の少なくとも２つの任意の組合せを含む異なるマイクロペレットを、対象への投与の前に混合することができる。一実施形態では、それらを、液体担体中での再構成の前に混合することができる。別の実施形態では、それらを、１容量の液体担体中に添加することによって、液体担体中での再構成の時点で混合してもよい。別の実施形態では、それらをまず、それぞれ別個の容量の液体担体に別々に添加し、次いで、異なる容量の液体担体を一緒に混合して、対象に投与される最終液体組成物を得ることができる。

【0351】

一実施形態では、４つの抗原およびＡｌＰＯ_４は、同じ容器内にある。

【0352】

別の実施形態では、アジュバントおよび抗原を、少なくとも２つの別個の組成物中に調製することができる。続いて、別個の組成物を、患者への投与の直前に、場合により、投与の前に２つの組成物を一緒に混合する二重チャンバーシリンジを介して、一緒に混ぜ合わせることができる。別の実施形態では、別個の組成物を、別々に投与することができ、すなわち、同時に（実際には、数秒間または数分間、例えば、５分間未満を隔てて）投与されるが、少なくとも２つの別個の投与部位、例えば、少なくとも２つの別個の注射部位を介して投与される。別の実施形態では、別個の組成物は、逐次的に、すなわち、少なくとも２つの別個の時点、例えば、少なくとも５分間隔、または数時間もしくは１日もしくは２日間隔で投与することができる。そのような実施形態では、別個の組成物は、同じ投与部位、例えば、同じ注射部位に、または異なる投与部位、例えば、異なる注射部位に投与することができる。そのような実施形態では、本明細書に開示される組成物の異なる成分のうちの少なくとも１つは、部品キットとして別々に提供することができる。

【0353】

部品キット
一実施形態では、本開示は、複数の容器を含む部品キットであって、容器のそれぞれが、少なくとも１つまたは少なくとも２つの髄膜炎菌抗原の組合せを含み、前記抗原が、ｆＨＢＰ Ａタンパク質、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、ＮａｄＡタンパク質、および界面活性剤抽出外膜小胞（ｄＯＭＶ）を含む群から選択される、部品キットに関する。

【0354】

一実施形態では、部品キットの抗原の少なくとも１つは、乾燥形態であり得る。一実施形態では、抗原の少なくとも１つは、凍結乾燥または乾燥マイクロペレット形態であり得る。一実施形態では、キットは、場合により、生理的に注射可能なビヒクルを含む容器を含み得る。

【0355】

一実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物の異なる抗原を、別々の容器またはバイアルに調製して貯蔵することができる。続いて、それらを、個体への投与時に混合することができる。

【0356】

一実施形態では、抗原ｆＨＢＰ Ａ、ｆＨＢＰ Ｂ、ＮａｄＡおよびｄＯＭＶのそれぞれを、１つの容器に貯蔵することができる。別の実施形態では、抗原は、対またはトリプレット（二価または三価の製剤）によって組合せることができる。ｆＨＢＰ Ａ＋ＢおよびＮａｄＡ＋ｄＯＭＶ、ｆＨＢＰ Ａ＋ＮａｄＡおよびｆＨＢＰ Ｂ＋ｄＯＭＶ、ｆＨＢＰ Ａ＋ＮａｄＡおよびｆＨＢＰ Ａ＋ｄＯＭＶ、ｆＨＢＰ Ａ＋ＮａｄＡ＋ｆＨＢＰ ＢおよびｄＯＭＶ、またはｆＨＢＰ Ａ＋ｄＯＭＶ＋ｆＨＢＰ ＢおよびＮａｄＡなど、あらゆる種類の組合せを想定し得る。

【0357】

一実施形態では、ｆＨＢＰ ＡおよびＢ抗原を第１の容器に貯蔵し、ＮａｄＡ抗原を第２の容器に貯蔵し、ｄＯＭＶ抗原を第３の容器に貯蔵することができる。別の実施形態では、ｆＨＢＰ ＡおよびＢ抗原を第１の容器に貯蔵し、ＮａｄＡ抗原およびｄＯＭＶ抗原の両方を第２の容器に貯蔵することができる。

【0358】

抗原は、液体製剤または乾燥形態で貯蔵することができる。乾燥形態で製剤化される場合、補助容器に、異なる抗原を再懸濁および混合するために使用される注射可能な液体担体を添加して含有させることができる。好適な注射可能な液体担体は、緩衝液を含み得る。さらに、それは上記のようなアジュバントを含み得る。アジュバントは、アルミニウムベースのアジュバント、例えば、ＡｌＰＯ_４であり得る。

【0359】

場合により、部品キットは、少なくとも１つのさらなる抗原または複数のさらなる抗原について、少なくとも１つのさらなる容器または複数のさらなる容器を含み得る。一実施形態では、さらなる抗原は、コンジュゲートされたＭｅｎＡＣＷＹ多糖であり得る。

【0360】

一実施形態では、部品キットは、本明細書に開示される免疫原性組成物を含む第１の容器、およびコンジュゲートされたＭｅｎＡＣＷＹ多糖類を含む第２の容器を含み得る。

【0361】

使用および処置の方法
１つの実施形態では、本開示は、医薬品として、特にワクチンとして使用するための本明細書に開示の組成物に関する。

【0362】

別の態様では、本開示は、髄膜炎菌感染症に対する、および１つの例示的な実施形態では髄膜炎菌血清群Ｂ感染症に対する防御に使用するための本明細書に開示の組成物に関する。

【0363】

別の態様では、本開示は、髄膜炎菌に対する、および１つの例示的な実施形態では髄膜炎菌血清群Ｂ細菌に対する免疫応答の誘導に使用するための本明細書に開示の組成物に関する。

【0364】

別の態様では、本開示は、ＳＴ－４１／４４、ＳＴ－３２、ＳＴ－２６９、ＳＴ－２１３、ＳＴ－３５、ＳＴ－４６１、ＳＴ－１１および／またはＳＴ－４６１クローナルコンプレックス由来の髄膜炎菌血清群Ｂ細菌に対する免疫応答の誘導に使用するための本明細書に開示の組成物に関する。

【0365】

別の態様では、本開示は、ＳＴ－１１クローナルコンプレックス由来の髄膜炎菌血清群Ｂ細菌に対する免疫応答の誘導に使用するための本明細書に開示の組成物に関する。

【0366】

別の態様では、本開示は、髄膜炎菌感染症に対して、および１つの例示的な実施形態では髄膜炎菌血清群Ｂ感染症に対して個体を防御するための方法であって、本明細書に開示の免疫原性組成物、または本明細書に開示のワクチンを個体に投与する工程を少なくとも含む、方法に関する。

【0367】

別の態様では、本開示は、個体における髄膜炎菌感染症に起因する、および１つの例示的な実施形態では髄膜炎菌血清群Ｂ感染症に起因する侵襲性髄膜炎菌性疾患の発生リスクを低減する方法であって、本明細書に開示の免疫原性組成物、または本明細書に開示のワクチンを個体に投与する工程を少なくとも含む、方法に関する。

【0368】

別の態様では、本開示は、個体における髄膜炎菌に対する、および１つの例示的な実施形態では髄膜炎菌血清群Ｂ細菌に対する免疫応答を誘発する方法であって、本明細書に開示の免疫原性組成物、または本明細書に開示のワクチンを個体に投与する工程を少なくとも含む、方法に関する。

【0369】

別の態様では、本開示は、ＳＴ－４１／４４、ＳＴ－３２、ＳＴ－２６９、ＳＴ－２１３、ＳＴ－３５、ＳＴ－４６１、ＳＴ－１１および／またはＳＴ－４６１クローナルコンプレックス由来の髄膜炎菌血清群Ｂ細菌に対する免疫応答を誘発する方法であって、本明細書に開示の免疫原性組成物、または本明細書に開示のワクチンを個体に投与する工程を少なくとも含む、方法に関する。

【0370】

別の態様では、本開示は、ＳＴ－１１クローナルコンプレックス由来の髄膜炎菌血清群Ｂ細菌に対する免疫応答を誘発する方法であって、本明細書に開示の免疫原性組成物、または本明細書に開示のワクチンを個体に投与する工程を少なくとも含む、方法に関する。

【0371】

１つの実施形態では、本明細書に開示の免疫原性組成物は、髄膜炎菌血清群Ｂに対する免疫応答を個体において誘発するのに使用するためであってもよい。該当する個体は、哺乳動物、例えばヒト、例えば乳児、幼児、小児、ティーンエイジャー、若年成人、成人、および高齢者であってもよい。１つの実施形態では、個体は、生後６週間もしくはそれ以上、生後２カ月もしくはそれ以上、または１０歳もしくはそれ以上であってもよい。例示的な実施形態として、個体は、生後６週間～５５歳もしくはそれ以上、例えば生後２カ月～５５歳もしくはそれ以上、または例えば１０～５５歳もしくはそれ以上であってもよい。

【0372】

方法は一般的に、それを必要とする個体に対象免疫原性組成物の有効量を投与することを含む。治療的使用に有効な量は、例えば、抗原性組成物、投与方法、患者の体重および健康の全般的状態、ならびに処方する医師の判断に依存するであろう。抗原性組成物の単回または複数回投与は、患者に必要とされ、許容される投与量および頻度、ならびに投与経路に応じて投与される。

【0373】

本明細書に開示の免疫原性組成物は、２、３、２＋１、または３＋１回投与レジメンで投与される。

【0374】

１つの実施形態では、本明細書に開示された免疫原性組成物は、２回または３回で投与される。その後の投与は、前回の投与から約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、約７カ月、約８カ月、約９カ月、約１０カ月、約１１カ月、約１２カ月、約１３カ月、約１４カ月、約１５カ月、約１６カ月、約１７カ月、約１８カ月、約１９カ月または約２０カ月離して投与される。１つの実施形態では、その後の投与は、前回の投与から約１カ月、約２カ月、約５カ月、約６カ月、約８カ月、約１０カ月、約１２カ月、約１４カ月または約１６カ月離して投与される。１つの実施形態では、その後の投与は、前回の投与から約１カ月、約２カ月、約５カ月、約６カ月、または約８カ月離して投与される。１つの実施形態では、その後の投与は、前回の投与から約３０日、約６０日、または約１８０日離して投与される。

【0375】

２回投与レジメンでは、第２回投与は第１回投与の約１カ月後、または第１回投与の約２カ月後、または第１回投与の約６カ月後に投与される。あるいは、２回投与レジメンでは、第２回投与は第１回投与の約３０日後、または第１回投与の約６０日後、または第１回投与の約１８０日後に投与される。そのような２回投与レジメンは、成人および／または青少年にとって適している場合がある。

【0376】

２回投与レジメンでは、第２回投与は第１回投与の約２カ月後に投与される。あるいは、２回投与レジメンでは、第２回投与は第１回投与の約６０日後に投与される。そのような２回投与レジメンは、幼児にとって適している場合がある。

【0377】

３回投与レジメンでは、第２回投与は第１回投与の約１カ月後に投与され、第３回投与は第１回投与の約６カ月後に投与される。あるいは、３回投与レジメンでは、第２回投与は第１回投与の約３０日後に投与され、第３回投与は第１回投与の約１８０日後に投与される。そのような３回投与レジメンは、成人および／または青少年にとって適している場合がある。

【0378】

３回投与レジメンでは、第２回投与は第１回投与の約２カ月後に投与され、第３回投与は第１回投与の約１０カ月後に投与される。あるいは、３回投与レジメンでは、第２回投与は第１回投与の約６０日後に投与され、第３回投与は生後約１２カ月時点で投与される。そのような３回投与レジメンは、乳児にとって適している場合がある。

【0379】

１つの実施形態では、２回または３回投与に加えて、第３回または第４回が投与される。このその後の投与は、２回または３回投与の最後の回の少なくとも１年後、例えば最後の回の１６カ月後に投与される。そのようなレジメンでは、最初の２回または３回投与はプライム投与として適しており、その後の１回（＋１回）投与はブースト投与として適している。

【0380】

１つの実施形態では、例えば生後６週間または生後２カ月～２歳の乳児および幼児は、２＋１または３＋１回投与レジメンを受けてもよい。別の実施形態では、例えば２～１０歳の小児は、２回投与レジメンを受けもよい。別の実施形態では、例えば１０～５５歳のティーンエイジャーおよび成人は、２＋１回投与レジメンを受けてもよい。

【0381】

本明細書に開示の免疫原性組成物は、任意の適切な経路によって投与される。例えば、筋肉内経路による投与が考えられる。

【0382】

本発明は、以下の項および実施形態によりさらに記載される。

【0383】

実施形態１によれば、本発明は、髄膜炎菌血清群Ｂ抗原の組合せを含む免疫原性組成物であって、前記組合せが、少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ａタンパク質、少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂタンパク質、少なくとも１つのナイセリア属アドヘシンＡ（ＮａｄＡ）タンパク質、および少なくとも１つの界面活性剤抽出外膜小胞（ｄＯＭＶ）を含む、組成物に関する。

【0384】

実施形態２によれば、本発明は、ｆＨＢＰ Ａタンパク質および／またはｆＨＢＰ Ｂタンパク質が脂質化されていない実施形態１に記載の組成物に関する。

【0385】

実施形態３によれば、本発明は、ｆＨＢＰ Ａタンパク質が、配列番号１と少なくとも約８５％の同一性を含む変異タンパク質であり、および／またはｆＨＢＰ Ｂタンパク質が、配列番号３と少なくとも約８５％の同一性を含む変異タンパク質である、実施形態１または２に記載の組成物に関する。

【0386】

実施形態４によれば、本発明は、ｆＨＢＰ Ａタンパク質が、配列番号６の番号付けに基づく：ａ）アミノ酸１１５のアスパラギン（Ν１１５）のアミノ酸置換；ｂ）アミノ酸１２１のアスパラギン酸（Ｄ１２１）のアミノ酸置換；ｃ）アミノ酸１２８のセリン（Ｓ１２８）のアミノ酸置換；ｄ）アミノ酸１３０のロイシンのアミノ酸置換（Ｌ１３０）；ｅ）１３１位のバリン（Ｖ１３１）のアミノ酸置換；ｆ）１３３位のグリシン（Ｇ１３３）のアミノ酸置換；ｇ）２１９位のリジン（Ｋ２１９）のアミノ酸置換；およびｈ）２２０位のグリシン（Ｇ２２０）のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つから選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むか、もしくは配列番号２を含むかもしくはそれからなり、ならびに／または、ｆＨＢＰ Ｂタンパク質が、配列番号６の番号付けに基づく：ａ）アミノ酸３８のグルタミン（Ｑ３８）のアミノ酸置換；ｂ）アミノ酸９２のグルタミン酸（Ｅ９２）のアミノ酸置換；ｃ）アミノ酸１３０のアルギニン（Ｒ１３０）のアミノ酸置換；ｄ）アミノ酸２２３のセリン（Ｓ２２３）のアミノ酸置換；およびｅ）アミノ酸２４８のヒスチジン（Ｈ２４８）のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つから選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含むか、もしくは配列番号４を含むかもしくはそれからなる、実施形態１～３のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0387】

実施形態５によれば、本発明は、ｆＨＢＰ Ａタンパク質および／またはｆＨＢＰ Ｂが、約２０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約４０μｇ／用量～約１４０μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約１２０μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量、または約１００μｇ／用量の量で存在する、実施形態１～４のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0388】

実施形態６によれば、本発明は、ＮａｄＡタンパク質が、ＮａｄＡ１タンパク質であるか、または配列番号５と少なくとも約８５％の同一性を含むか、または配列番号５を含むかもしくはそれからなる、実施形態１～５のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0389】

実施形態７によれば、本発明は、ＮａｄＡタンパク質が、約２０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約４０μｇ／用量～約１４０μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約１２０μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１００μｇ／用量、または約５０μｇ／用量の量で存在する、実施形態１～６のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0390】

実施形態８によれば、本発明は、ｄＯＭＶがポーリンＡ（ＰｏｒＡ）を含む、実施形態１～７のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0391】

実施形態９によれば、本発明は、ｄＯＭＶが、約５μｍｇ／用量～約４００μｇ／用量、または約１０μｇ／用量～約３００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約２５０μｇ／用量、または約３５μｇ／用量～約２２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約１００μｇ／用量～約１５０μｇ／用量、または約１１０μｇ／用量～約１２５μｇ／用量、または約２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量、または約１２５μｇ／用量の量で存在する、実施形態１～８のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0392】

実施形態１０によれば、本発明は、アジュバント、場合により、水酸化アルミニウムアジュバント、リン酸アルミニウムアジュバント、硫酸アルミニウム塩アジュバント、硫酸ヒドロキシリン酸アルミニウムアジュバント、硫酸アルミニウムカリウムアジュバント、ヒドロキシ炭酸アルミニウム、水酸化アルミニウムと水酸化マグネシウムの組合せ、およびそれらの混合物からなる群から場合により選択されるアルミニウムベースのアジュバントをさらに含む、実施形態１～９のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0393】

実施形態１１によれば、本発明は、配列番号２からなる２５～１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる２５～１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなる２５～１００μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の２０～１５０μｇ／用量のｄＯＭＶ、１００～６００μｇ／用量のリン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ６．０を含むか、またはそれらからなる、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0394】

実施形態１２によれば、本発明は、髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹのうちの１つまたはそれ以上に由来するコンジュゲートされた莢膜糖を少なくともさらに含む、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0395】

実施形態１３によれば、本発明は、実施形態１～１３のいずれか１つに記載の組成物を含むワクチンに関する。

【0396】

実施形態１４によれば、本発明は、髄膜炎菌感染症に対する防御に使用するための、または髄膜炎菌に対する免疫応答の誘導に使用するための実施形態１～１２のいずれか１つに記載の組成物または実施形態１２に記載のワクチンに関する。

【0397】

実施形態１５によれば、本発明は、配列番号２に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むｆＨＢＰ Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡ、配列番号４に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むｆＨＢＰ Ｂタンパク質をコードするｍＲＮＡ、配列番号５に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むＮａｄＡタンパク質をコードするｍＲＮＡ、およびＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ由来のｄＯＭＶを含むか、またはそれらからなる組成物に関する。

【0398】

実施形態１６によれば、本発明は、髄膜炎菌血清群Ｂ抗原の組合せを含む免疫原性組成物であって、前記組合せは、配列番号１と少なくとも約８５％の同一性を含む少なくとも１つの非脂質化Ｈ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ａタンパク質を含み、配列番号６の番号付けに基づく少なくともアミノ酸置換 Ｇ２２０Ｓ、少なくとも１つの非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、少なくとも１つのナイセリア属アドヘシンＡ（ＮａｄＡ）タンパク質、および少なくとも１つの界面活性剤抽出外膜小胞（ｄＯＭＶ）を含む、組成物に関する。

【0399】

実施形態１７によれば、本発明は、非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質が、配列番号３と少なくとも約８５％の同一性を含む変異タンパク質である、実施形態１６に記載の組成物に関する。

【0400】

実施形態１８によれば、本発明は、非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質が、配列番号６の番号付けに基づくアミノ酸置換Ｈ２４８Ｌを含む、実施形態１６または１７に記載の組成物に関する。

【0401】

実施形態１９によれば、本発明は、非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質が、配列番号４を含むかまたはそれからなる、実施形態１６～１８のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0402】

実施形態２０によれば、本発明は、非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質が、配列番号６の番号付けに基づくアミノ酸置換Ｌ１３０ＲおよびＧ１３３Ｄをさらに含む、実施形態１６～１９のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0403】

実施形態２１によれば、本発明は、非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質が、配列番号２を含むかまたはそれからなる、実施形態１６～２０のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0404】

実施形態２２によれば、本発明は、ＮａｄＡタンパク質が、ＮａｄＡ１タンパク質であるか、または配列番号５と少なくとも約８５％の同一性を含むか、または配列番号５を含むかもしくはそれからなる、実施形態１６～２１のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0405】

実施形態２３によれば、本発明は、ｄＯＭＶがＰｏｒＡ ＶＲ２サブタイプを含む、実施形態１６～２２のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0406】

実施形態２４によれば、本発明は、ｄＯＭＶがＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を含む、実施形態１６～２３のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0407】

実施形態２５によれば、本発明は、アジュバント、場合により、水酸化アルミニウムアジュバント、リン酸アルミニウムアジュバント、硫酸アルミニウム塩アジュバント、硫酸ヒドロキシリン酸アルミニウムアジュバント、硫酸アルミニウムカリウムアジュバント、ヒドロキシ炭酸アルミニウム、水酸化アルミニウムと水酸化マグネシウムの組合せ、およびそれらの混合物からなる群から場合により選択されるアルミニウムベースのアジュバントをさらに含む、実施形態１６～２４のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0408】

実施形態２６によれば、本発明は、ｆＨＢＰ Ａタンパク質および／またはｆＨＢＰ Ｂが、約２０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約４０μｇ／用量～約１４０μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約１２０μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量、または約１００μｇ／用量の量で存在し、ＮａｄＡタンパク質が、約２０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約４０μｇ／用量～約１４０μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約１２０μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１００μｇ／用量、または約５０μｇ／用量の量で存在し、ｄＯＭＶが、約５μｇ／用量～約４００μｇ／用量、または約１０μｇ／用量～約３００μｇ／用量、または約２５μｇ／用量～約２５０μｇ／用量、または約３５μｇ／用量～約２２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量～約２００μｇ／用量、または約７５μｇ／用量～約１８０μｇ／用量、または約１００μｇ／用量～約１５０μｇ／用量、または約１１０μｇ／用量～約１２５μｇ／用量、または約２５μｇ／用量、または約５０μｇ／用量、または約１２５μｇ／用量の量で存在する、実施形態１６～２５のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0409】

実施形態２７によれば、本発明は、配列番号２からなる２５～１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４からなる２５～１００μｇ／用量の非脂質化ｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５からなる２５～１００μｇ／用量のＮａｄＡタンパク質、ＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ株由来の２０～１５０μｇ／用量のｄＯＭＶ、１００～６００μｇ／用量のリン酸アルミニウムアジュバント、５０ｍＭ酢酸緩衝液およびｐＨ６．０を含むか、またはそれらからなる、実施形態１６～２６のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0410】

実施形態２８によれば、本発明は、１つまたはそれ以上の髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５および／またはＹのうちの１つまたはそれ以上に由来するコンジュゲートされた莢膜糖を少なくともさらに含む、実施形態１６～２７のいずれか１つに記載の組成物に関する。

【0411】

実施形態２９によれば、本発明は、実施形態１６～２８のいずれか１つに記載の組成物を含むワクチンに関する。

【0412】

実施形態３０によれば、本発明は、髄膜炎菌感染症を処置する、または髄膜炎菌に対する免疫応答を誘導する方法であって、それを必要とする個体に、配列番号２に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むｆＨＢＰ Ａタンパク質、配列番号４に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むｆＨＢＰ Ｂタンパク質、配列番号５に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％のアミノ酸配列同一性を含むＮａｄＡタンパク質、およびＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現するＭｅｎＢ由来のｄＯＭＶを含むか、またはそれらからなる組成物を投与することを含む方法に関する。

【0413】

列挙されたクレームの少なくとも１つからの少なくとも１つの限定、構成要素、項の記述用語等は、特に指示のない限り、または矛盾または不一致が生じることが当業者に明らかでない限り、同じ基本クレーム（または、関連する場合、任意の他のクレーム）に依存して別のクレームに導入される変形、組合せ、および並べ換えの全てを、本開示は包含すると理解されるべきである。構成要素が、例えば、マーカッシュ群または同様の形式でリストとして提示される場合、構成要素の各下位群もまた開示されており、いずれの構成要素も群から取り除くことができると理解されるべきである。一般に、本開示、または本開示の態様が、特定の構成要素、機能等を含むといわれる場合、それらは、そのような構成要素からなる、または本質的になる実施形態も包含すると理解されるべきである。簡潔にする目的で、それらの実施形態は、本明細書ではあらゆる場合においてはっきりと具体的に記載されていない。特定の排除が本明細書に記載されているかどうかに関わらず、本開示のいずれの実施形態または態様もクレームから明示的に排除できることも理解されるべきである。本開示の背景を説明するために、およびその実施に関する追加の詳細を提供するために本明細書で参照された刊行物および他の参照資料は、参照によって本明細書に組み入れる。

【0414】

本明細書に開示された配列は参照としての役目を果たす。同じ配列は、特許事項の目的のための標準的な要件に従ってフォーマットされた配列表にも示されている。いずれかの配列が標準的な配列表と食い違う場合、本明細書に記載された配列を参照配列とする。

【実施例】

【0415】

本開示を限定することなく、本開示の多くの実施形態が例示の目的で以下に記載される。

【実施例1】

【0416】

抗原製造および免疫原性組成物
１．ＭｅｎＢ抗原の製造および精製
１．非脂質化変異ｆＨＢＰ Ａ０５（Ａ０５ｔｍＮ）
非脂質化Ａ０５ｔｍＮを製造するために、３点変異（Ｇ２２０Ｓ、Ｌ１３０ＲおよびＧ１３３Ｄ、配列番号６に関する番号付け） を野生型ｆＨＢＰ Ａ０５配列に導入し、非脂質化タンパク質を得るために、Ｎ末端で脂質部分を固定する第１のシステイン残基をメチオニン（非脂質化Ａ０５ｔｍＮ：配列番号２）に置き換えた。Ａ０５ｔｍＮのＤＮＡ配列を合成し、次いでプラスミド構築物を製造するのに使用した。手短に言えば、Ｘｂａ１およびＸｈｏ１部位のＤＮＡ配列をＡ０５ｔｍＮ配列の両末端に付加した。発現プラスミドを作出するために、Ｘｂａ１／Ｘｈｏ１含有プラスミドを消化し、得られたＤＮＡ断片をＸｂａ１／Ｘｈｏ１消化ｐＥＴ２８ａ（＋）にライゲートし、Ｔｏｐ１０コンピテント細胞に形質転換した。陽性クローンをＸｂａ Ｉ／Ｘｈｏ Ｉ消化によって確認した。Ａ０５ｔｍＮプラスミドを大腸菌に形質転換し、３回のコロニー精製後に細胞バンクを製造した。

【0417】

Ａ０５ｔｍＮで形質転換した大腸菌株を３７℃で攪拌下、半合成培地で増幅した（ｐＨ６．８－溶存酸素：２０％）。抗原の発現を、イソプロピルβ－Ｄ－１－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を添加して誘導した。

【0418】

培養物を未処理バルクとして回収し、細菌バイオマスを遠心分離により培地から分離した。得られた細胞ペレットを緩衝液（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ８．５）に再懸濁した。再懸濁したペレットをホモジナイザーにより処理して細胞ホモジネートを作製した。その後、ホモジネートを遠心分離してペレット画分を採取した。ホモジネートペレットを緩衝液（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ８．５）に再懸濁し、ｐＨショック処置に供した（ｐＨ１２、室温で１時間、混合しながら）。ｐＨを８５％リン酸で８．５に戻した。ｐＨショック材料の上清画分を遠心分離後に採取し、次いで濾過して濾過上清を得た。

【0419】

上清をｐＨ８．５および＜５．０ｍＳ／ｃｍ電気伝導度に調整し、捕捉カラム、ＧｉｇａＣａｐ Ｑ－６５０Ｍに充填した。溶出プールを０．９Ｍ硫酸アンモニウム（ＡｍＳ）に調整し、次いで中圧クロマトグラフィー、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ Ｐｈｅｎｙｌ ６００Ｍでさらに精製した。疎水性相互作用クロマトグラフィー後、溶出プールをｐＨ８．５および＜８．０ｍＳ／ｃｍ電気伝導度に調整し、Ｎｕｖｉａ ａＰｒｉｍｅ ４Ａクロマトグラフィーによりさらに精製した。この後、５ｋＤａ再生セルロース接線流濾過（ＴＦＦ）膜を使用した最終限外濾過および透析濾過、ならびに０．２μｍ濾過を行った。

【0420】

Ａ０５ｔｍＮを、酢酸緩衝液（５０ｍＭ酢酸ナトリウム、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．０）中ＡｌＰＯ４ １．００ｍｇ Ａｌ／ｍＬに規定したＡｌＰＯ_４に吸着させた。

【0421】

２．非脂質化変異ｆＨＢＰ Ｂ０１（Ｂ０１ｓｍＮ）
非脂質化Ｂ０１ｓｍＮを製造するために、単一点変異を野生型ｆＨＢＰ Ｂ０１配列に導入し、非脂質化タンパク質を得るために、Ｎ末端で脂質部分を固定する第１のシステイン残基をメチオニン（非脂質化Ｂ０１ｓｍＮ：配列番号４）に置き換えた。Ｂ０１ｓｍＮの ＤＮＡ配列を合成し、次いでプラスミド構築物を製造するのに使用した。手短に言えば、Ｘｂａ１およびＸｈｏ１部位のＤＮＡ配列をＢ０１ｓｍＮ配列の両末端に付加した。発現プラスミドを作出するために、Ｘｂａ１／Ｘｈｏ１含有プラスミドを消化し、得られたＤＮＡ断片をＸｂａ１／Ｘｈｏ１消化ｐＥＴ２８ａ（＋）にライゲートし、Ｔｏｐ１０コンピテント細胞に形質転換した。陽性クローンをＸｂａ Ｉ／Ｘｈｏ Ｉ消化によって確認した。Ｂ０１ｓｍＮプラスミドを大腸菌に形質転換し、３回のコロニー精製後に細胞バンクを製造した。

【0422】

Ｂ０１ｓｍＮで形質転換した大腸菌株を３７℃で攪拌下、半合成培地で増幅した（ｐＨ６．８－溶存酸素：２０％）。抗原の発現を、イソプロピルβ－Ｄ－１－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を添加して誘導した。

【0423】

培養物を未処理バルクとして回収し、細菌バイオマスを遠心分離により培地から分離した。得られた細胞ペレットを緩衝液（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ８．５）に再懸濁した。再懸濁したペレットをホモジナイザーにより処理して細胞ホモジネートを作製した。その後、ホモジネートを遠心分離して上清画分を採取した。次いで、上清画分を濾過した。

【0424】

濾過した上清をｐＨ８．５および＜５．０ｍＳ／ｃｍ電気伝導度に調整し、クロマトグラフィーＣａｐｔｏＱ ＩｍｐＲｅｓに充填し、結合および溶出モードで精製した。次いで、第２のクロマトグラフィー、Ｐｈｅｎｙｌ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＨＰに充填するために、ＣａｐｔｏＱ ＩｍｐＲｅｓ溶出プールを１．８Ｍ ＡｍＳに調整した。溶出後、材料を濃縮し、５ｋＤａ Ｕｌｔｒａｃｅｌ ＴＦＦ膜を使用して酢酸緩衝液（５０ｍＭ酢酸ナトリウム、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．０）に透析濾過し、次いで０．２μｍ濾過した。

【0425】

Ｂ０１ｓｍＮを、酢酸緩衝液（５０ｍＭ酢酸ナトリウム、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．０）中ＡｌＰＯ４ １．００ｍｇ Ａｌ／ｍＬに規定したＡｌＰＯ_４に吸着させた。

【0426】

３．ＮａｄＡ
切断型のＮａｄＡをＮａｄＡ＿ＭＣ５８から製造した。切断型ＮａｄＡは、除去したＮａｄＡ＿ＭＣ５８のリーダー配列（残基１～２３）およびアンカードメイン（残基３０８～３６２）を有した（切断型ＮａｄＡ：配列番号５）。ＮａｄＡ＿ＭＣ５８の切断配列では、リーダー配列後の最初のアミノ酸はアラニンであり、アラニンはメチオニンに置き換えられた。ＮａｄＡのＤＮＡ配列を合成し、次いでプラスミド構築物を製造するのに使用した。Ｘｂａ１およびＸｈｏ１部位のＤＮＡ配列をＮａｄＡ配列の両末端に付加した。発現プラスミドを作出するために、Ｘｂａ１／Ｘｈｏ１含有プラスミドを消化し、得られたＤＮＡ断片をＸｂａ１／Ｘｈｏ１消化ｐＥＴ２８ａ（＋）にライゲートし、Ｔｏｐ１０コンピテント細胞に形質転換した。陽性クローンをＸｂａ Ｉ／Ｘｈｏ Ｉ消化によって確認した。ＮａｄＡプラスミドを大腸菌に形質転換し、３回のコロニー精製後に細胞バンクを製造した。

【0427】

ＮａｄＡ１で形質転換した大腸菌株を３７℃で攪拌下、半合成培地で増幅した（ｐＨ６．８－溶存酸素：２０％）。抗原の発現を、イソプロピルβ－Ｄ－１－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を添加して誘導した。

【0428】

培養物を未処理バルクとして回収し、細菌バイオマスを遠心分離により培地から分離した。得られた細胞ペレットを緩衝液（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ８．５）に再懸濁した。再懸濁したペレットをホモジナイザーにより処理して細胞ホモジネートを作製した。その後、ホモジネートを遠心分離して上清画分を採取した。次いで、上清画分を濾過した。

【0429】

上清画分をＣａｐｔｏ ＤＥＡＥカラムに充填した。Ｃａｐｔｏ ＤＥＡＥ溶出画分を、５００ｍＭ ＡｍＳの濃度が得られるまでＡｍＳ末で調整した。調整したＣａｐｔｏ ＤＥＡＥ溶出画分をＴｏｙｏｐｅａｒｌ Ｂｕｔｙｌ－６５０Ｍカラムに充填した。Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ Ｂｕｔｙｌ－６５０Ｍ溶出画分をＣＨＴ Ｔｙｐｅ Ｉ ４０μｍカラムに充填し、３０ｋＤａ再生セルロースＴＦＦ膜を使用してＣＨＴ溶出画分を濃縮し、その後、５０ｍＭ酢酸ナトリウム、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．０に透析濾過した。ＴＦＦ後、産物を０．２μｍ濾過してＮａｄＡ抗原を作製した。

【0430】

ＮａｄＡを、酢酸緩衝液（５０ｍＭ酢酸ナトリウム、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．０）中ＡｌＰＯ４ １．００ｍｇ Ａｌ／ｍＬに規定したＡｌＰＯ_４に吸着させた。

【0431】

４．ｄＯＭＶ
ｄＯＭＶを、Ｗａｌｔｅｒ Ｒｅｅｄ Ａｒｍｙ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＷＲＡＩＲ）によって提供された野生型髄膜炎菌血清型Ｂ、株９９Ｍから精製した。

【0432】

Ｎｍ Ｂ ９９Ｍを、１ｇ／Ｌの酵母エキス、およびＨｅｐｅｓ １Ｍの存在下、３７℃、ＣＯ_２ ５％でＦｕら（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｎ Ｙ）．１９９５年２月；１３（２）：１７０～４頁）およびＵＳ ５，４９４，８０８に記載された合成培地で培養した。

【0433】

湿潤細菌ペレットを回収するために、熱処理懸濁液（５５℃、２時間）の低速遠心分離を使用して培養物回収を実行した。界面活性剤（デオキシコール酸ナトリウム）からなる抽出緩衝液を用いて２連続界面活性剤媒介抽出工程（５６℃、１５分間）を行って、細菌外膜からｄＯＭＶを抽出し、リポオリゴ糖を枯渇させた（Ｈｅｌｔｉｎｇら、Ａｃｔａ Ｐａｔｈｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｓｃａｎｄ Ｃ．１９８１ Ａｐｒ；８９（２）：６９～７８頁に記載されているように）。デオキシコール酸ナトリウムおよびＥＤＴＡは細菌外膜を可溶化し、次いで細菌外膜は自身をｄＯＭＶ（小胞および微粒子）に再編成する。再懸濁は、抽出緩衝液に懸濁したペレットをＵｌｔｒａ－Ｔｕｒｒａｘ（ローター－ステーター装置）を使用してホモジナイズすることによって完了した。ｄＯＭＶ上清をプールし、その後、ＭｇＣｌ２の存在下でベンゾナーゼ処置を行った（３７℃、１５分間）。

【0434】

ｄＯＭＶ抽出後、３００ｋＤａの修飾ポリエーテルスルホン（ｍＰＥＳ）の中空糸を使用してｄＯＭＶの濃縮を行った。いくつかの超遠心分離工程を使用して、核酸、細胞質タンパク質、抽出したリポ多糖または緩衝液成分などの「可溶性」内容物からｄＯＭＶを分離した。次いで、得られたペレットを、Ｕｌｔｒａ－Ｔｕｒｒａｘ（ローター－ステーター装置）を最低速度で数秒間使用して抽出緩衝液に再懸濁した。最初の再懸濁後、高圧ホモジナイズを使用してｄＯＭＶを抽出緩衝液に完全に再懸濁し、ｄＯＭＶ表面への界面活性剤の接近しやすさを増大させた。

【0435】

次いで、遠心分離を行った後、上清を０．４５／０．２μｍ酢酸セルロースフィルターで最終濾過した。

【0436】

５．抗原の組合せ
多成分免疫原性組成物中のＭｅｎＢ抗原は、精製された非脂質化変異Ａ０５ ｆＨＢＰ（Ａ０５ｔｍＮ）、非脂質化変異ｆＨＢＰ（Ｂ０１ｓｍＮ）、ＮａｄＡおよびｄＯＭＶである。Ａ０５ｔｍＮ、Ｂ０１ｓｍＮおよびＮａｄＡ抗原をリン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ_４）に吸着させた。

【0437】

溶媒は酢酸緩衝液（５０ｍＭ酢酸ナトリウム、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．０）およびＡｌＰＯ_４（１．００ｍｇ ＡＬ^３＋／ｍＬ）からなった。

【0438】

最終免疫原性組成物を製剤化するために、製剤、ＡｌＰＯ_４、ＡｌＰＯ_４に吸着されたＢ０１ｓｍＮ、ＡｌＰＯ_４に吸着されたＡ０５ｔｍＮ、および酢酸緩衝液（５０ｍＭ酢酸ナトリウム、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．０）を混ぜ合わせて、標的抗原およびアルミニウム濃縮液を得た（Ｂ０１ｓｍＮについては２５０μｇ／ｍＬ、Ａ０５ｔｍＮについては２５０μｇ／ｍＬ、およびＡｌＰＯ_４ １．００ｍｇ Ａｌ／ｍＬ）。ｄＯＭＶを酢酸緩衝液（５０ｍＭ酢酸ナトリウム、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．０）およびＡｌＰＯ_４に吸着されたＮａｄＡと混合して、以下のテストした種々の製剤の抗原の種々の濃縮液（Ｆ１～Ｆ５）を得ることによって、種々のＮａｄＡ－ｄＯＭＶ組成物を製剤化した。ｆＨＢＰのみの製剤を担体で希釈して製剤Ｆ６を得た。

【0439】

２．ＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）
ＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）は、１０ｍＭヒスチジン緩衝液ｐＨ６．０、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、およびリン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ_４）としての０．５ｍｇ／ｍＬアルミニウム中６０μｇ／ｍＬ／サブファミリーで製剤化されたｆＨＢＰサブファミリーＡ（Ａ０５）およびＢ（Ｂ０１）タンパク質、ならびにポリソルベート８０（ＰＳ８０）からなる滅菌液体懸濁液のＭｅｎＢ二価組換え脂質化ｆＨＢＰ（ｒＬＰ２０８６）組成物である。

【0440】

３．ＢＥＸＳＥＲＯ（登録商標）
ＢＥＸＳＥＲＯ（登録商標）は、ヒスチジン０．７７６ｍｇ／０．５ｍＬ用量、３．１２５μｇ／０．５ｍＬ用量の塩化ナトリウム、スクロース１０ｍｇ／０．５ｍＬ用量、および水を含む緩衝液に３つの組換えタンパク質：５０μｇ／０．５ｍＬ用量のｒｐ２８７－９５３（ＮＨＢＡキメラ）、ｒｐ９３６－７４１（非脂質化Ｂ２４とのｆＨＢＰキメラ、５０μｇ／０．５ｍＬ用量）、および５０μｇ／０．５ｍＬ用量のｒｐ９６１ｃ（ＮａｄＡ）；２５μｇ／０．５ｍＬ用量のｄＯＭＶ、および１．５ｍｇ／０．５ｍＬ用量のＡｌＯＯＨ（例えば、Ａｌ ０．５ｍｇ）を含有する。

【0441】

４．ＭＥＮＱＵＡＤＦＩ（登録商標）
ＭＥＮＱＵＡＤＦＩ（登録商標）は、ＷＯ ２０１８／０４５２８６ Ａ１に開示の、得られたＡＣＷＹ多糖体抗原を含み、破傷風トキソイド（ＴＴ）にコンジュゲートされた市販のワクチンである。製剤は、破傷風トキソイドタンパク質に別々にコンジュゲートされた、血清群Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷ１３５由来の髄膜炎菌莢膜糖を含む。標的活性成分濃度は、０．５ｍＬ用量あたり、各多糖体１０μｇおよび破傷風トキソイドタンパク質約５５μｇである。抗原を、３０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（１．２３ｍｇ／用量）および塩化ナトリウム（０．６７％、３．３５ｍｇ／用量）を含有する滅菌水溶液で製剤化した。

【0442】

５．テスト組成物
以下の試験では、本明細書に開示のＭｅｎＢ多成分ワクチンの６つの製剤（Ｆ１～Ｆ５、およびＭＥＮＱＵＡＤＦＩと同時投与されたＦ１）をテストし、基準組成物ＢＥＸＳＥＲＯ、ＴＲＵＭＥＮＢＡおよび比較二価（ｆＨＢＰ ＡおよびｆＨＢＰ Ｂ）組成物（Ｆ６）と比較した。テスト組成物の異なる量の種々の抗原を、下の表１にまとめる。Ｆ１、Ｆ２、Ｆ４－Ｆ６およびＭＥＮＱＵＡＤＦＩと同時投与されたＦ１は、用量あたり０．４ｍｇ ＡｌＰＯ_４を含み、一方Ｆ３は用量あたり０．８ｍｇ ＡｌＰＯ_４を含んだ。

【0443】

【表1】

【0444】

実施例２の投与には、１製剤あたり以下の容量を使用した：

【0445】

Ｆ１：４００μＬ

【0446】

Ｆ２：４００μＬ

【0447】

Ｆ３：８００μＬ

【0448】

Ｆ４：４００μＬ

【0449】

Ｆ５：４００μＬ

【0450】

Ｆ６：４００μＬ

【0451】

Ｆ１＋ＭＥＮＱＵＡＤＦＩ：動物は、０日目、２８日目および５６日目にＦ１ ４００μＬを受けた。０日目に動物は反対の大腿にＭＥＮＱＵＡＤＦＩ ５００μｌも受けた。

【0452】

ＴＲＵＭＥＮＢＡ：５００μＬ

【0453】

ＢＥＸＳＥＲＯ：５００μＬ

【実施例2】

【0454】

ＭｅｎＢワクチン免疫原性の前臨床評価：ウサギ免疫原性試験
１．材料および方法
１．試験デザイン
７匹のウサギ（Ｎｅｗ－Ｚｅａｌａｎｄ ＫＢＬ－メス－８週齢）の９つの群は、０日目、２８日目および５６日目にＩＭ経路によって与えられる７つの製剤－実施例１の表１でＦ１～Ｆ６およびＦ１＋ＭＥＮＱＵＡＤＦＩと称される－、または認可を受けた基準ワクチンＴＲＵＭＥＮＢＡおよびＢＥＸＳＥＲＯ（実施例１参照）のそれぞれ１つの３回の免疫化を受けた。製剤Ｆ１は、ＭＥＮＱＵＡＤＦＩとの同時投与でもテストした。初回注射は右大腿、第２回注射は左大腿、最後の注射は右大腿に、ＩＭ経路により組成物を投与した。Ｆ１＋ＭＥＮＱＵＡＤＦＩを受ける群については、動物に、０日目にＩＭ経路によって与えられるＭＥＮＱＵＡＤＦＩを反対の大腿に同時投与した。

【0455】

臨床徴候および体温を、免疫化４、２４および４８時間後に測定した。血液サンプルを、０日目および第２回免疫化の２週間後（４２日目）、および６３日目に凝固活性剤および血清分離剤を含有するチューブ（ＢＤ Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ ＳＳＴ ＩＩ ８．５ｍＬ、参照番号３６６４６８Ａ）に採取した。血液細胞から血清を分離するために、チューブを３５００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。血清を４．５ｍＬ ＮＵＮＣチューブに移し、＋５６℃で３０分間熱不活性化した。血清は、ＥＬＩＳＡ、精製および殺菌アッセイに使用するまで－２０℃で保存した。

【0456】

第２回投与後、抗体応答のプラトーに既に達しており、そのため免疫原性は第２回投与後に分析した。

【0457】

テスト組成物の免疫原性は、ＥＬＩＳＡによって測定された抗原（Ａｇ）特異的ＩｇＧ応答、および７種類または１８種類のＭｅｎＢ株のパネルに対する機能的血清殺菌抗体活性（ｈＳＢＡ）を評価して、４２日目に測定した。応答者は、０日目から４２日目の間にｈＳＢＡの少なくとも４倍の増加を示した。

【0458】

陽性応答の陽性閾値は、次のように定義した：

【0459】

前（０日目）：ｈＳＢＡ＜８－後（４２日目）：ｈＳＢＡが＞８ならば、血清は陽性である

【0460】

前（０日目）：ｈＳＢＡ≧８－後（４２日目）：０日目と比べてｈＳＢＡが≧４倍の増加ならば、血清は陽性である。

【0461】

血清が特異的ｈＳＢＡを誘導できた免疫化動物の数は、観察された応答者の７０％を超えていた（すなわち、１製剤あたり５／７匹）。

【0462】

２．ＥＬＩＳＡによるＩｇＧ抗体価の決定
各抗原に対して産生された特異的ＩｇＧ応答を、０日目および４２日目にウサギ血清から測定した。ＥＬＩＳＡ分析を、各免疫化群から採取した個々の血清から行った。

【0463】

簡単には、９６ウェルマイクロプレートを、炭酸緩衝液コーティング溶液中、１ウェルあたり１００μＬの特異的抗原１μｇ／ｍＬでコーティングし、一晩、＋４℃で維持した。プレートを反転してコーティング溶液を除去し、その後ペーパータオル上でプレートを軽く叩いた。不含部位を緩衝液１（ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０５％／脱脂乳１％）１５０μＬでブロックし、＋３７℃で６０分のインキュベーション期間後、プレートを空にした。血清を、マイクロプレート中１００μＬの容量（１２回）で緩衝液１に段階希釈した。プレートを＋３７℃で９０分間インキュベートし、次いで緩衝液２（ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０ ０．０５％）で洗浄した。次いで、希釈した抗ウサギＩｇＧ １００μＬを各ウェルに添加した。＋３７℃で９０分インキュベーション後、プレートを緩衝液２で洗浄した。テトラメチルベンジジン基質溶液１００μＬを各ウェルに添加して反応を展開した。室温で３０分後、ＨＣｌ（１Ｎ）を用いて反応を化学的に停止し、分光光度計（Ｖｅｒｓａｍａｘリーダーｐ２４８、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）で４５０～６５０ｎｍの吸光度を測定した。結果は、ロボットＥＬＩＳＡのＣＯＤＵＮＩＴプログラムを使用して、ＯＤ＝１に対応する希釈の逆数による任意ＥＬＩＳＡ単位／ｍＬで表した。

【0464】

３．ｈＳＢＡ検査用のウサギ血清のＩｇＧ精製
０日目、４２日目にウサギ血清によって誘導される非特異的殺菌を避けるために、ＩｇＧの精製が必要であった。ウサギ血清の精製は、ＲＰＲＯＴＥＩＮ Ａ ＧＲＡＶＴＩＴＲＡＰ（商標）カラム（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＧＥ２８－９８５２－５４）およびＡｂ緩衝液キット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｙｃａｒｅ 参照番号２８－９０３０－５９）を使用して行った。結合緩衝液（リン酸ナトリウム２０ｍＭ ｐＨ＝７）によるカラムの平衡化の最初の工程後、結合緩衝液（Ｖ／Ｖ）で中性ｐＨに調整した血清（２ｍＬ）をカラムに添加してＩｇＧ結合を行なった。カラムを結合緩衝液で洗浄し、溶出緩衝液（グリシンＨＣｌ ０．１Ｍ ｐＨ２．７）で溶出してＩｇＧを採取した。ＩｇＧの活性を保存するために、中和緩衝液（Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ １Ｍ、ｐＨ９．０）を溶出画分に添加してほぼ中性の最終ｐＨを得た。各サンプルの透析を、Ｓｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｓｅｒ Ｇ２透析カセット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ８７７３０）を使用して行って、ＰＢＳ緩衝液中のサンプルを交換した。ＩｇＧ濃度の定量化をＮＡＮＯＤＲＯＰによって行なった。

【0465】

４．ｈＳＢＡ検査
補体源としてヒト補体を使用する血清殺菌性抗体の測定は、髄膜炎菌性疾患に対する防御の代理マーカーとして広く受け入れられている（Ｂｏｒｒｏｗら、Ｖａｃｃｉｎｅ．２００５；２３（１７－１８）：２２２２～７頁；Ｂｏｒｒｏｗら、Ｖａｃｃｉｎｅ．２００６；２４（２４）：５０９３～１０７頁；Ｆｒａｓｃｈら、Ｖａｃｃｉｎｅ．２００９；２７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｂ１１２～６頁；Ｇｏｌｄｓｃｈｎｅｉｄｅｒら、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１９６９；１２９（６）：１３０７～２６頁）。

【0466】

ＳＢＡアッセイは、補体の存在下で細菌を溶解し、死滅させる抗体の能力を意味する。補体の供給源は、ヒト補体であった（Ｐｅｌ Ｆｒｅｅｚ ＩｇＧ／ＩｇＭ枯渇バッチ ＃１３４４１）。簡単には、血清を＋５６℃で３０分熱不活性化し、次いでＩｇＧ精製を行った。その後、精製ＩｇＧを、９６ウェルマイクロプレートでＣａ＋＋およびＭｇ＋＋）＋０．２％ゼラチンを含有するダルベッコＰＢＳ緩衝液（希釈緩衝液）に段階的に２倍希釈した（９回）。

【0467】

細菌の前培養を、ミュラーヒントン寒天（ペトリ皿）で＋３７℃、５％ＣＯ_２、１８時間行ってコンフルエントな細菌増殖を得た。その後、細菌を、ＢＨＩ懸濁液でλ６００ｎｍ、約０．２０の初期ＯＤで＋３７℃、２時間３０分振盪しながら（１００ｒｐｍ）増殖させた。インキュベーション後、細菌を５倍希釈して１．４．１０４ＣＦＵ／ｍＬを得た。作業細菌懸濁液２５μＬ、前希釈血清５０μＬ、および希釈したヒト補体２５μＬ（１５％最終濃度）を９６ウェルマイクロプレートに沈着させ、＋３７℃で１時間、振盪しながら（１００ｒｐｍ）インキュベートした。Ｚｅｐｈｙｒロボットアプリケーションは、ミュラーヒントン寒天を含む角皿（４０×４０）上の各ウェル４０μＬを自動的に沈着させた。寒天プレートを＋３７℃、５％ＣＯ２で１０～１２時間インキュベートした。インキュベーション後、１ウェルあたりのコロニー数をＭｉｃｒｏｖｉｓｉｏｎ社製のＣｙｂｅｌｅ Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用してカウントした。

【0468】

殺菌力価は、補体対照ウェルと比較して、細菌１ｍＬあたりのコロニー形成単位（ＣＦＵ）の５０％減少をもたらす血清希釈として定義した。ＳＢＡ力価は、プレート計画に適合するユーザー定義プロトコールにより、４パラメーター曲線をＳｏｆｔ Ｍａｘ Ｐｒｏ ｖ６．５．１ ＧｘＰでモデル化して計算した。モデル化が４パラメーター曲線に適合しない場合、次いでＫ５０前後のトレンド機能および手動読み取りを適用した；殺菌力価は、少なくとも５０％の減少をもたらす最終逆数血清希釈として定義した。

【0469】

陽性応答の陽性閾値は、次のように定義した：

【0470】

前（０日目）：ｈＳＢＡ＜８－後（４２日目）：ｈＳＢＡが＞８ならば、血清は陽性である

【0471】

前（０日目）：ｈＳＢＡ≧８－後（４２日目）：０日目と比べてｈＳＢＡが≧４倍の増加ならば、血清は陽性である。

【0472】

血清が特異的ｈＳＢＡを誘導できた免疫化動物の数は、観察された応答者の７０％を超えていた（すなわち、１製剤あたり５／７匹）。

【0473】

５．ＭｅｎＢ株
異なる単離日に、地理的に異なる場所から単離され、多様なＭＬＳＴクローナルコンプレックスを代表する、１８種類の野生型血清群Ｂ髄膜炎菌分離株（大部分は最近の臨床分離株）のセットを選択した。免疫原性組成物の各成分の免疫原性を評価し、カバー範囲の幅を評価するためにＭｅｎＢ株を選択した。組成物の他の抗原のいずれともマッチしないが、組成物の抗原のうちの１つに対する抗体によって選択的に認識されるＭｅｎＢ株を使用して、免疫原性をＳＢＡにより測定した。さらに、いくつかの選択株が、ＡおよびＢサブファミリーの両方の十分に記載されているｆＨＢＰ配列の多様性および分布を確実に代表するように選択を行った。クローナルコンプレックス（ＣＣ）分布、地理的起源、抗原出現率および多様性などの疫学的特徴を代表するＭｅｎＢ株を使用して、カバー範囲の幅を評価した。

【0474】

選択された株の主な特徴を表２にリストする。

【0475】

【表2】

【0476】

クローナルコンプレックス分布、クローナルコンプレックスの出現率および高毒性、地理的起源、抗原出現率ならびに多様性などの疫学的特徴に基づき１８株を選択し、抗原分布に関して次のように特徴付けた：

【0477】

－１１株はｆＨＢＰサブファミリーＡを発現し（ｆＨＢＰ Ａ０５抗原に近い２株－番号１および８－ならびにｆＨＢＰ Ａ０５抗原から離れた９株－番号２、５、７、９、１０、１１、１２、１３、１４）、

【0478】

－７株はｆＨＢＰサブファミリーＢを発現する（ｆＨＢＰ Ｂ０１抗原に近い１株－番号３－およびｆＨＢＰ Ｂ０１抗原から離れた６株－番号４、６、１５、１６、１７、１８）。

【0479】

－１４株はＮａｄＡを発現せず（遺伝子が欠如しているかまたはフレームシフトＮａｄＡ４／５オフ）、４株は同種ＮａｄＡ１バリアント（３株）かまたは異種ＮａｄＡ２／３バリアント（１株）のいずれかを発現し；

【0480】

－２株は、低レベルのｆＨＢＰ Ａを発現する、一致するｄＯＭＶのＰｏｒＡ ＶＲ２ Ｐ１．２を発現する（１株はＮａｄＡタンパク質を発現せず（番号５）、１株は異種ＮａｄＡタンパク質を発現する（番号１３））。

【0481】

２．結果
１．ＥＬＩＳＡ結果
全ＩｇＧ抗体を、様々な製剤（Ｆ）、ＴＲＵＭＥＮＢＡまたはＢＥＸＳＥＲＯで免疫化したウサギから採取したプール血清から０日目（グレー）、および個々の血清から４２日目（青）にＥＬＩＳＡによって定量化した。

【0482】

どのようなＥＬＩＳＡ応答であれ、結果は群内で均一であった（全ｐ値≧０．０６１）。外れ値の動物は検出されなかった。

【0483】

ｆＨＢＰ特異的ＩｇＧ応答については図１Ａおよび１Ｂ、ならびにＮａｄＡ特異的ＩｇＧ応答およびｄＯＭＶ特異的ＩｇＧ応答については図２Ａおよび２Ｂに示すように、ＥＬＩＳＡ結果は、Ｆ１～Ｆ５製剤およびＭＥＮＱＵＡＤＦＩと同時投与されたＦ１製剤の全てが、４．０５～４．９９ Ｌｏｇ１０のＡｇ特異的ＩｇＧ力価の抗体応答を誘発したことを示している。

【0484】

さらに、図１ＡおよびＢならびに図２Ａおよび２Ｂに示すように、どんな製剤が使用されようと、ＡｌＰＯ_４と組み合わせて製剤化した４つのＭｅｎＢ抗原のそれぞれの注射は、ｆＨＢＰ Ａ０５ ｔｍＮ、ｆＨＢＰ Ｂ０１ ｓｍＮ、ＮａｄＡタンパク質およびｄＯＭＶに対する中程度～高力価の抗体の産生を１００％の動物で可能にした。Ａ０５ｔｍＮおよびＢ０１ｓｍＮ ｆＨＢＰ Ａｇ ５０μｇを用いて製造した製剤（Ｆ１＋／－ＭＥＮＱＵＡＤＦＩ、Ｆ４、Ｆ５およびＦ６）は、それぞれ４．２８ Ｌｏｇ１０～４．５９ Ｌｏｇ１０および４．０５ Ｌｏｇ１０～４．５２ Ｌｏｇ１０の平均力価のｆＨＢＰ特異的ＩｇＧ応答を誘導した。ＮａｄＡ５０μｇを用いて製造した製剤（Ｆ１～Ｆ５）は、４．４２ Ｌｏｇ１０～４．８１ Ｌｏｇ１０の平均力価のＮａｄＡ特異的ＩｇＧ応答を誘導した。ｄＯＭＶ ５０μｇを用いて製造した製剤（Ｆ１～Ｆ３）は、４．７７ Ｌｏｇ１０～４．９９ Ｌｏｇ１０の平均力価のｄＯＭＶ特異的ＩｇＧ応答を誘導した。最後に、様々な用量のｆＨＢＰタンパク質（Ｆ２、２５μｇおよびＦ３、１００μｇ）またはｄＯＭＶ（Ｆ４、２５μｇおよびＦ５、１２５μｇ）に関して、同様の平均力価が全て投与量で測定された。

【0485】

ＴＲＵＭＥＮＢＡは、ｆＨＢＰ Ａ０５ ｔｍＮ抗原、ｆＨＢＰ Ｂ０１ ｓｍＮ抗原に対して、それぞれ５．１６および５．１５ Ｌｏｇ１０の平均力価の特異的ＩｇＧを誘導することができた。

【0486】

ＢＥＸＳＥＲＯは、ＮａｄＡバリアント１抗原に対して、４．３４ Ｌｏｇ１０の平均力価の特異的ＩｇＧを誘導することができた。

【0487】

２．７種類のＭｅｎＢ株（番号１～６および１８）に対する種々の組成物Ｆ１～Ｆ６またはＦ１＋ＭＥＮＱＵＡＤＦＩ、ＴＲＵＭＥＮＢＡおよびＢＥＸＳＥＲＯで得られたｈＳＢＡ結果
実験の第１セットでは、種々の組成物Ｆ１～Ｆ６またはＦ１＋ＭＥＮＱＵＡＤＦＩ、ＴＲＵＭＥＮＢＡおよびＢＥＸＳＥＲＯを７種類のＭｅｎＢ株（番号１～６および１８）に対してアッセイした。

【0488】

ｈＳＢＡ結果は、６つの製剤Ｆ１～Ｆ５およびＭＥＮＱＵＡＤＦＩと同時投与されたＦ１が、ウサギにおいて免疫原性であったことを示している。応答者のパーセンテージは、血清を免疫化後対免疫化前に基づき測定し、ｈＳＢＡ ＧＭＴの４倍の増加を示した動物のパーセンテージであり、防御の代用を実証するものである。

【0489】

図３に示すように、どんな免疫化用量が使用されようと（２５μｇ Ｆ２、５０μｇ Ｆ１、Ｆ４、Ｆ５、Ｆ６および１００μｇ Ｆ３）、変異非脂質化ｆＨＢＰ Ａ０５ ｔｍＮ＋ＮａｄＡ＋ｄＯＭＶと組み合わせた変異非脂質化ｆＨＢＰ Ｂ０１ ｓｍＮは、近縁ｆＨＢＰ Ｂ４４バリアント株に対して４２日目に１００％の動物で殺菌活性を誘導することができ、ＧＭＴは４４３～１１４７であった。

【0490】

ＴＲＵＭＥＮＢＡおよびＢＥＸＳＥＲＯは、近縁ｆＨＢＰ Ｂ４４バリアントを発現するＭｅｎＢ株に対して１００％の動物で殺菌活性を誘導することができ、ＧＭＴはそれぞれ、５７７３および６４６であった。

【0491】

図４および５に示すように、変異非脂質化ｆＨＢＰ Ａ０５ｔｍＮ＋ＮａｄＡ＋ｄＯＭＶと組み合わせた変異非脂質化ｆＨＢＰ Ｂ０１ ｓｍＮは、異なるｆＨＢＰ Ｂ２４バリアントを発現する第１のＭｅｎＢ株に対して４３～８６％の動物で（図４）、およびテストした第２の異なるｆＨＢＰＢ２４バリアント株に対して８６～１００％の動物で（図５）殺菌活性を誘導することができ、ＧＭＴはそれぞれ、５～１８および２８～２１９であった。

【0492】

興味深いことに、第１の異種Ｂ２４バリアント株に対して、製剤Ｆ３中の変異非脂質化ｆＨＢＰ Ｂ０１ｓｍＮのみがｈＳＢＡ応答を８６％の動物で誘導し、ＧＭＴは１８であった。

【0493】

ＴＲＵＭＥＮＢＡは、２種類のＢ２４株に対して１００％の動物で殺菌活性を誘導することができ、ＧＭＴはそれぞれ、４４および１４３であった。ＢＥＸＳＥＲＯは、２種類のＢ２４株に対して１００％の動物で殺菌活性を誘導することができ、ＧＭＴはそれぞれ、２２７４および２５８７であった。

【0494】

さらに、２５～１００μｇ Ｂ０１ ｓｍＮ ｆＨＢＰ用量に有意な用量効果は示されなかった（全ｐ値≧０．０５６）。

【0495】

最後に、ＭＥＮＱＵＡＤＦＩを製剤Ｆ１と同時投与した場合、変異非脂質化Ｂ０１ ｓｍＮ応答に有意差は示されなかった（全ＭｅｎＢ Ａｇ、５０μｇ、全ｐ値≧０．３３９）。

【0496】

図６および７に示すように、どんな免疫化用量が使用されようと（２５μｇ Ｆ２、５０μｇ Ｆ１、Ｆ４、Ｆ５、Ｆ６および１００ μｇ Ｆ３）、変異非脂質化ｆＨＢＰ Ｂ０１ｓｍＮ＋ＮａｄＡ＋ｄＯＭＶと組み合わせた変異非脂質化ｆＨＢＰ Ａ０５ ｔｍＮは、近縁ｆＨＢＰ Ａ５６バリアント発現株（図６）および異なるｆＨＢＰ Ａ２２バリアント発現株（図７）に対して、１００％の動物で殺菌活性を誘導することができ、幾何平均力価（ＧＭＴ）はそれぞれ、２２６～３８２および４５～１０８であった。

【0497】

ＴＲＵＭＥＮＢＡは、ｆＨＢＰ Ａ５６およびｆＨＢＰ Ａ２２バリアント発現株に対して１００％の動物で殺菌活性を誘導することができ、ＧＭＴはそれぞれ、２０５８および４６３であった。ＢＥＸＳＥＲＯは、ｆＨＢＰ Ａ５６バリアント発現株に対しては５７％の動物で、およびｆＨＢＰ Ａ２２バリアント発現株に対しては１００％の動物で殺菌活性を誘導することができ、ＧＭＴはそれぞれ、７および３３１であった。

【0498】

さらに、２５～１００μｇの変異非脂質化Ａ０５ ｔｍＮ ｆＨＢＰ用量に有意な用量効果は示されなかった（全ｐ値≧０．０６６）。

【0499】

最後に、ＭＥＮＱＵＡＤＦＩを製剤Ｆ１と同時投与した場合、Ａ５６株に対する変異非脂質化Ａ０５ ｔｍＮ応答に有意差は示されなかった（ｐ値＝０．２８１）。ｆＨＢＰ Ａ２２発現株に対するｈＳＢＡに関して、Ｆ１＋ＭＥＮＱＵＡＤＦＩで得られた力価は、Ｆ１単独で得られた力価より有意に低かった（ｐ＝０．０２０）が、生物学的関連性を持たない２．４倍の減少を示した。

【0500】

図８に示すように、ＮａｄＡ ５０μｇを用いて製造した製剤（Ｆ１～Ｆ５）は、同種ＮａｄＡバリアント１株に対して１００％の動物で殺菌活性を誘導することができ、ＧＭＴは２１７～６９６であった。

【0501】

ＴＲＵＭＥＮＢＡおよびＢＥＸＳＥＲＯは、同種ＮａｄＡバリアント１株に対して８６％および１００％の動物で殺菌活性を誘導することができ、ＧＭＴはそれぞれ、１１８および１１９１であった。

【0502】

最後に、ＭＥＮＱＵＡＤＦＩを多成分ＭｅｎＢワクチンと同時投与した場合、ＮａｄＡ応答に有意差は示されなかった（ｐ値＝０．６８８）。

【0503】

図９に示すように、ｄＯＭＶを用いて製造した製剤（２５μｇ Ｆ４、５０μｇ Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３および１２５μｇ Ｆ５）が何であれ、同種ＰｏｒＡ＿１．２株に対して１００％の動物で殺菌活性を誘導することができ、ＧＭＴは３５０～１３２４であった。

【0504】

ＴＲＵＭＥＮＢＡおよびＢＥＸＳＥＲＯは、このｄＯＭＶ株に対する殺菌活性を誘導することはできなかった。

【0505】

さらに、有意なｄＯＭＶの用量効果は示されなかった（全ｐ値≧０．６３７）。

【0506】

ｆＨＢＰ ＡまたはＢ応答に対するＮａｄＡおよびｄＯＭＶ抗原の有意な影響は観察されなかった（全ｐ値≧０．２０８）。

【0507】

ＮａｄＡ／ｄＯＭＶ抗原と組み合わせたｆＨＢＰ抗原の用量の唯一の有意な影響は、Ｆ１（５０μｇ）とＦ３（１００μｇ）製剤の間のＮａｄＡ特異的ｈＳＢＡ応答に関してであった。図８Ａに示すように、Ｆ３製剤で得られた力価は、Ｆ１製剤で得られた力価より高かった（ｐ＝０．００４、３．２倍の増加）。ｐｏｒＡ／ｄＯＭＶ特異的ｈＳＢＡ応答に関して、全ての製剤間で有意差は示されなかった。

【0508】

この試験は、ＡｌＰＯ_４を用いて製剤化した４つの選択された各ＭｅｎＢ抗原、変異非脂質化ｆＨＢＰｓ Ａ０５ ｔｍＬおよびＢ０１ ｓｍＬ、ＮａｄＡおよびｄＯＭＶの組合せによる免疫原性を実証した。

【0509】

新たなワクチン製剤に含まれる全ての抗原は、Ａｇ特異的ＭｅｎＢ株に対するｈＳＢＡにより測定したＡｇ特異的殺菌抗体応答を高めることができた。ウサギモデルでは、ｆＨＢＰに関して有意な用量効果は観察されなかった。同様に、ｄＯＭＶに関して有意な用量効果は観察されず、最低用量（２５μｇ）のｄＯＭＶは、強力なｈＳＢＡ応答をもたらした。興味深いことに、製剤Ｆ３（すなわち、１００μｇ／用量のｆＨＢＰ、５μｇ／用量のＮａｄＡおよび５０μｇ／用量のｄＯＭＶを含有する）は、テストした全ての株に対して最も高いｈＳＢＡ応答をもたらし、７１％を超える動物で陽性応答を誘導する傾向があった。さらに、ＭｅｎＢ特異的ｈＳＢＡ応答に対するＭｅｎＱｕａｄｆｉ同時投与の影響は観察されなかった。全てのテスト製剤中のｆＨＢＰ Ａ０５ｔｍＮワクチンＡｇは、近縁Ａ５６バリアント株および異種Ａ２２バリアント株に対して１００％の動物でｈＳＢＡ応答を誘導し、幾何平均力価（ＧＭＴ）はそれぞれ、２２６～３８２および４５～１０８であった。全てのテスト製剤中のｆＨＢＰ Ｂ０１ｓｍＮワクチンＡｇは、近縁Ｂ４４バリアント株に対して１００％の動物でｈＳＢＡ応答を誘導し、ＧＭＴは４４３～１１４７であった。第１の異種Ｈ４４／７６ Ｂ２４バリアント株に対するｈＳＢＡ応答をテストすると、製剤Ｆ３中のｆＨＢＰ Ｂ０１ｓｍＮのみが、８６％の動物で陽性ｈＳＢＡ応答を誘導し、ＧＭＴは１８であったのに対し、全ての他のテスト製剤は、わずか２９～５７％の動物でｈＳＢＡ応答を誘導し、ＧＭＴは５～１０であった。対照的に、第２の異種Ｂ２４株である株０３Ｓ－０２９１を使用した場合、全てのテスト製剤中のｆＨＢＰ Ｂ０１ｓｍＮは、８６～１００％の動物でｈＳＢＡを誘導し、ＧＭＴは２８～２１９であった。

【0510】

テストした全ての製剤中のＮａｄＡワクチンＡｇは、ＮａｄＡ１バリアント株に対して１００％の動物でｈＳＢＡを誘導し、ＧＭＴは２１７～６９６であった。

【0511】

テストした全ての製剤中のｄＯＭＶは、ＰｏｒＡサブタイプＶＲ２ Ｐ１．２株に対して１００％の動物でｈＳＢＡを誘導し、ＧＭＴは３５０～１３２４であった。

【0512】

全体として、免疫原性結果は、本明細書に開示された免疫原性組成物の６つの製剤がウサギにおいて免疫原性であったことを示している。新たなワクチンに含まれる全ての抗原は、Ａｇ特異的ＭｅｎＢ株に対するｈＳＢＡにより測定したＡｇ特異的殺菌抗体応答を高めることができた。ウサギモデルでは、ｆＨＢＰ １００μｇを用いて製造した製剤は最も高いｈＳＢＡ応答をもたらす傾向があり、また、テストした全ての株に対して７０％を超える動物で応答を誘導したとしても、ｆＨＢＰに関して有意な用量効果は観察されなかった。同様に、ｄＯＭＶに関して有意な用量効果は観察されず、最も低いｄＯＭＶ用量（２５μｇ）は強力なｈＳＢＡ応答を誘導するのに十分であった。興味深いことに、ＭｅｎＢ特異的ｈＳＢＡ応答に対するＭＥＮＱＵＡＤＦＩ同時投与の影響は観察されなかった。

【0513】

注目すべきことに、体温上昇も主要な初見（紅斑…などの）も動物では試験を通して観察されなかった。

【0514】

結論として、免疫原性結果は、開示された免疫原性組成物の６つの製剤が、ウサギにおいて免疫原性であったことを示している。ＭｅｎＢ多成分ワクチンに含まれる全ての抗原は、Ａｇ特異的ＭｅｎＢ株に対するｈＳＢＡにより測定したＡｇ特異的殺菌抗体応答を高めることができた。

【0515】

３．１７種類のＭｅｎＢ株（番号１～１７）に対する組成物Ｆ１、Ｆ３、ＴＲＵＭＥＮＢＡおよびＢＥＸＳＥＲＯで得られたｈＳＢＡ結果
実験の第２のセットでは、先行する実験で組成物Ｆ１、Ｆ３、ＴＲＵＭＥＮＢＡおよびＢＥＸＳＥＲＯによる免疫化後に得られた血清を、１１種類の追加のＭｅｎＢ株に対して（上でテストした６種類の株を含む、合計１７種類のＭｅｎＢ株に関して）アッセイした。

【0516】

全体的な結果を、選択されたＭｅｎＢ株のパネルに対する種々のテスト組成物の効能を示す下の表３にまとめる。

【0517】

【表3】

【0518】

結果は、株番号４および５がＴＲＵＭＥＮＢＡによってほとんどカバーされない（＜７１％応答者）か、またはカバーされない（０％応答者）ことを示した。一方、これらの株は、Ｆ１およびＦ３製剤によって大部分または完全にカバーされた。

【0519】

また、結果は、株番号１、５、７、８、９、および１１はＢＥＸＳＥＲＯによってほとんどカバーされないか、またはカバーされないが、それらはＦ１およびＦ３製剤によって十分にまたは完全にカバーされる傾向があることを示した。

【0520】

注目すべきことに、株番号５は、ＴＲＵＭＥＮＢＡまたはＢＥＸＳＥＲＯによって全くカバーされない。

【0521】

表３は、ＭｅｎＢ株の１７種類のうち１６種類、および１７種類のうち１７種類がＦ１およびＦ３組成物によってカバーされたことを示している。対照的に、ＴＲＵＭＥＮＢＡは、ＭｅｎＢ株の１７種類のうち１５種類をカバーするようであり、ＢＥＸＳＥＲＯはＭｅｎＢ株の１７種類のうち１１種類しかカバーしないようであった。

【0522】

図１９に示すように、テスト製剤Ｆ３は、種々のクローナルコンプレックス、ＳＴ－４１／４４、ＳＴ－３２、ＳＴ－２６９、ＳＴ－２１３、ＳＴ－３５、ＳＴ－４６１、ＳＴ－１１およびＳＴ－４６１由来の種々のＭｅｎＢ株全てに対する防御を誘導することができた。対照的に、ＴＲＵＭＥＮＢＡおよびＢＥＸＳＥＲＯによって誘導されるカバー範囲はいくつかの空白を呈する。

【0523】

データの結論として、本開示のＭｅｎＢ多成分免疫原性組成物が、ｆＨＢＰ低発現体および異なる株に対してさえ優れた株カバー範囲を提供することは注目される。Ｆ３製剤は、１７／１７ ＭｅｎＢ株を＞７１％応答者でカバーし、Ｆ１製剤は、１６／１７ ＭｅｎＢ株を＞７１％応答者でカバーした。

【0524】

ＴＲＵＭＥＮＢＡは、１５／１７ ＭｅｎＢ株をカバーした。カバーされない株（０％応答者）は、ｆＨＢＰ Ａ１０発現についてはゼロであり、ＳＴ－１１クローナルコンプレックスに属した。ほとんどカバーされない株（７１％応答者）は、Ｂ２４発現株であった。

【0525】

ＢＥＸＳＥＲＯは、１１／１７ ＭｅｎＢ株をカバーした。ほとんどカバーされないかまたはカバーされない６種類の株（０～５７％応答者）は、ｆＨＢＰ Ａバリアントを発現した。それらは、循環ＭｅｎＢ株の最大２９％に相当する場合があり、よく見られるまたは高毒性のクローナルコンプレックス：ＳＴ－２１３；ＳＴ－１１；ＳＴ－３５；およびＳＴ－４６１に属した。

【0526】

新たに開発されたワクチン組成物は、現在のＭｅｎＢ分子疫学を代表する１８種類の株；すなわち、最もよく見られ、高毒性のクローナルコンプレックス（ＣＣ）由来の株、および最もよく見られる抗原バリアント由来の株に対する防御の幅の増大を示す。

【実施例3】

【0527】

ＭＩＭＩＣ ＰＴＥアッセイ
１．材料および方法
１．テスト組成物および実験デザイン
第１の試験では、市販のワクチンＢＥＸＳＥＲＯおよびＴＲＵＭＥＮＢＡを、それぞれ２０名のドナーを使用してＭＩＭＩＣ成人および新生児末梢組織等価物（Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ）（ＰＴＥ）培養物（以下参照）で比較した。ＴＲＵＭＥＮＢＡおよびＢＥＸＳＥＲＯワクチン組成物は、実施例１に開示されている通りであった。

【0528】

第２の試験では、ＭＩＭＩＣ ＰＴＥ培養物（以下参照）を、ヒト用量の１０倍希釈に基づく１：１００～１：１００００００の用量範囲曲線において、５つのワクチン候補製剤－Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３；Ｆ４およびＦ５（製剤は、実施例１の表１に示されている通りであった）－で処置した。Ｆ１は、５０μｇ／用量の各成分および標準的な用量（０．４ｍｇ／用量）のＡｌＰＯ４を含有することから、標準的な製剤とみなされた；Ｆ２製剤は、０．４ｍｇ／用量ＡｌＰＯ_４中、低用量ｆＨＢＰ（２５μｇ／用量）および標準的な用量のＮａｄＡおよびｄＯＭＶ（５０μｇ／用量）の組合せであった；Ｆ３製剤は、高用量ｆＨＢＰ（１００μｇ／用量）、標準的な用量のＮａｄＡおよびｄＯＭＶ（５０μｇ／用量）、ならびに高用のＡｌＰＯ４（０．８ｍｇ／用量）の組合せであった；Ｆ４製剤は、標準的な用量のｆＨＢＰおよびＮａｄＡ（各５０μｇ／用量）、低用量のｄＯＭＶ（２５μｇ／用量）、ならびに標準的な用量のＡｌＰＯ４を組み合わせた；ならびにＦ５製剤は、標準的な用量のｆＨＢＰおよびＮａｄＡ（５０μｇ／用量）、高用量のｄＯＭＶ（１２５μｇ／用量）、ならびに標準的な用量のＡｌＰＯ_４の組合せを含んだ。この試験では、ｄＯＭＶベースのＭｅｎＢワクチン、ＢＥＸＳＥＲＯを、基準参照対照として使用した。

【0529】

ｍｏｃｋまたは対照組成物は、無血清培養培地のみを含有する無処置対照であった。

【0530】

２．成人および新生児ＭＩＭＩＣ ＰＴＥアッセイ
ＭＩＭＩＣ ＰＴＥ構築物（Ｈｉｇｂｅｅら、Ａｌｔｅｒｎ Ｌａｂ Ａｎｉｍ．２００９年９月；３７ Ｓｕｐｐｌ １：１９～２７頁）は、Ｍａら（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２０１０、１３０：３７４～８７頁）に教示された方法を使用してロボットラインで構築した。

【0531】

簡単には、内皮細胞をコラーゲン基質（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｂｉｏｍａｔｒｉｘ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）上でコンフルエンスまで増殖させた。その後、凍結ストックから製造したドナーＰＢＭＣ（成人ＭＩＭＩＣ ＰＴＥ）またはドナー臍帯血（新生児ＭＩＭＩＣ ＰＴＥ） をアッセイウェルに適用した。９０分（成人バージョン）または３時間（臍帯血バージョン）のインキュベーション後、非遊走細胞を洗い流した後、最終インキュベーション工程で様々な処置（実施例１の表１）を４８時間添加した。１００ｎｇ／ｍＬ ＬＰＳ（緑膿菌由来、カタログ番号Ｌ８６４３、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ、Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）および１０μｇ／ｍＬ Ｒ８４８（カタログ番号ＴＬＲＬ－Ｒ８４８、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）の混合物を、これらのアッセイの陽性対照（アッセイ対照）として使用した。逆遊走細胞（Ｒｅｖｅｒｓｅ－ｍｉｇｒａｔｅｄ ｃｅｌｌ）を４８時間の処置期間後に回収し、フローサイトメトリーを使用して細胞生存率のための表現型を決定する一方、同じ時点で回収した培養上清をマルチプレックスアッセイによりサイトカイン／ケモカインについて分析した。

【0532】

実験の第１シリーズでは、ＢＥＸＳＥＲＯおよびＴＲＵＭＥＮＢＡを一緒に比較した。実験の第２のシリーズでは、本開示の免疫原性組成物Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４およびＦ５を本開示と比較した。

【0533】

４８時間の処置期間後に培養物上清を回収し、マルチプレックスアッセイによりサイトカイン／ケモカインについて分析した。同時に回収した細胞を、フローサイトメトリーを使用して細胞生存率のための表現型を決定した。

【0534】

３．サイトカイン／ケモカイン分析
ＭＩＭＩＣ培養上清を、Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘヒト１２－プレックスマルチ－サイトカイン検出システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して分析した。キットにはＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＭＩＰ－１βおよびＴＮＦαが含まれた。分析物濃度を、適切な検量線に基づきＢｉｏ－Ｐｌｅｘマネージャーソフトウェア（Ｌｕｎａら ＰｌｏＳ Ｏｎｅ ｖｏｌ．１３，６ ｅ０１９７４７８．２０１８年６月６日）を使用して算出した。

【0535】

ランの判定基準に関して、各分析物の定量下限（ＬＬＯＱ）および定量上限（ＵＬＯＱ）を、基準値の５パラメーターロジスティック（５ＰＬ）曲線フィットに対する各時点の回収率（観察値／推定値×１００）に基づき確立した。８０％～１２０％の範囲に入る値が検量線の下限および上限を規定するように、８０％～１２０％の回収率を許容可能とみなした。生データファイルをビーズ数について検討した；１領域あたり最少３５ビーズがカウントされた場合、データ点を妥当とみなした。

【0536】

４．フローサイトメトリー
ＭＩＭＩＣ（登録商標）ＰＴＥ由来細胞をＰＢＳで洗浄し、氷上でＬｉｖｅ－Ｄｅａｄ Ａｑｕａ（ＩｎｖｉｔｒｏＧｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を用いて２０分間染色して、細胞生存率を評価した。データ分析は、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ、Ａｓｈｌａｎｄ、ＯＲ）を使用して行った。フローゲーティングにはシングレットと、それに続いて生細胞を選択した。

【0537】

５．データ分析およびグラフプロット
グラフ作成のために、データをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）にエクスポートした。サイトカインデータは、エクセルデータベースにエクスポートした。範囲外高（＞ＯＯＲ）値（曲線の最上部より高い値）はＵＬＯＱに置き換えた；範囲外低（＜ＯＯＲ）値はＬＬＯＱ（定量下限）１／２に置き換えた。

【0538】

６．統計解析
統計解析は、非劣性モデルを使用して行った。細胞生存率、ＣＤ８６、ＩＬ－６、ＩＬ－１ｂ、ＴＮＦ－ａ、およびＭＩＰ－１ｂを含むパラメーターをこの解析の評価項目として使用した。種々の抗原製剤ｖｓ Ｂｅｘｓｅｒｏ（登録商標）ワクチンの幾何平均（ＧＭ）を比較し、δ＝２／３を非劣性の尺度として使用した。本明細書に記載された解析はＳＡ手順、ＰＲＯＣ ＴＴＥＳＴを使用して行い、既刊文献で推奨されているＧＭおよび９５％ＣＩ範囲を示すドットプロットグラフで表した。

【0539】

２．結果
１．成人および新生児ＭＩＭＩＣ ＰＴＥにおけるＢＥＸＳＥＲＯおよびＴＲＵＭＥＮＢＡ
未処置および処置成人および新生児ＭＩＭＩＣ ＰＴＥ培養物からの培養上清を４８時間後に回収し、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカスタムマルチプレックスアレイを使用してサイトカイン／ケモカイン分泌について分析した。生来のケモカイン／サイトカインＩＬ－６、ＴＮＦα、ＭＩＰ－１βおよびＩＬ－１βは自然免疫活性に極め重要であり、免疫－細胞傷害性も駆動することができるため、それらをこの分析に含めた。

【0540】

得られた結果（図１０）は、ＴＲＵＭＥＮＢＡが成人ＭＩＭＩＣ ＰＴＥにおいてＢＥＸＳＥＲＯより強い炎症誘発性サイトカインプロファイルを示すことを示した。また、ＴＲＵＭＥＮＢＡは、新生児ＭＩＭＩＣ ＰＴＥにおいてもＢＥＸＳＥＲＯより強い炎症誘発性サイトカインプロファイルを示した（図１１）。

【0541】

図１２に提示される統計解析は、ほとんどのサイトカインに関して、ＴＲＵＭＥＮＢＡは成人および新生児プラットフォームでＢＥＸＳＥＲＯより強い応答を生成するという観察を裏付けた。実際、ＴＲＵＭＥＮＢＡと比べた、成人および新生児ＰＴＥにおいてＢＥＸＳＥＲＯによって引き起こされたサイトカイン分泌の９５％信頼区間での幾何平均の比のフォレストプロットによって示されるように、ＢＥＸＳＥＲＯはＴＲＵＭＥＮＢＡより劣っている。

【0542】

２．成人および新生児ＭＩＭＩＣ ＰＴＥにおけるＦ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４、Ｆ５およびＢＥＸＳＥＲＯ
未処置および処置成人および新生児ＭＩＭＩＣ ＰＴＥ培養物からの培養上清を４８時間後に回収し、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカスタムマルチプレックスアレイを使用してサイトカイン／ケモカイン分泌について分析した。生来のケモカイン／サイトカインＩＬ－６、ＴＮＦα、ＭＩＰ－１βおよびＩＬ－１βは自然免疫活性に極め重要であり、免疫－細胞傷害性も駆動することができるため、それらをこの分析に含めた。

【0543】

成人ＭＩＭＩＣ ＰＴＥ系（図１３参照）では、テスト製剤は全て、最も高い処置用量（１：１００、１：１０００、１：１００００）でｍｏｃｋ対照（すなわち、抗原のない）より約１ｌｏｇ高いサイトカイン分泌をもたらした。ほぼ全てのケースで製剤は、ＢＥＸＳＥＲＯに等しいかまたはＢＥＸＳＥＲＯよりわずかに低い結果をたどった。

【0544】

図１４Ａ、１４Ｂおよび１４Ｃにおいて統計解析は、成人ＭＩＭＩＣ ＰＴＥではＦ１、Ｆ２、Ｆ４、およびＦ５製剤が、報告されたサイトカインの全てに関してＢＥＸＳＥＲＯより少ない炎症性応答を生成することを示した。Ｆ３製剤は、成人ＭＩＭＩＣ ＰＴＥ系においてＢｅｘｓｅｒｏと同様の（ＴＮＦ－αまたはＩＬ－１β）またはＢｅｘｓｅｒｏより少ない（ＩＬ６またはＭＩＰ－１ｂ）炎症誘発性サイトカインの分泌を誘導した。

【0545】

さらに、成人ＰＴＥモデルでは全ての製剤が、用量依存的におよびＢＥＸＳＥＲＯと同様の範囲の免疫細胞傷害性を示した。実際、図１５に示したように、いくつかのテスト条件において細胞生存率は、最も低い処置用量（１：１０００００および１：０００００希釈）ではほとんど影響を受けず、最も高用量（１：１００希釈）で最大約５０％低下した。

【0546】

また、新生児ＭＩＭＩＣ ＰＴＥでは、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４、およびＦ５製剤は、ＢＥＸＳＥＲＯと一致した炎症誘発性サイトカインプロファイルを示した（図１６）。全ての製剤は、ｍｏｃｋ条件と比べて約４倍～１ｌｏｇ高いサイトカイン分泌をもたらした。Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、およびＦ４製剤は、ＢＥＸＳＥＲＯと同様かまたはＢＥＸＳＥＲＯより少ないＩＬ－６およびＴＮＦ－α分泌を誘導した。Ｆ５製剤は、ＢＥＸＳＥＲＯよりわずかに高い炎症誘発性サイトカイン分泌を誘導した。

【0547】

図１７Ａおよび１７Ｂにおいて統計解析は、全体として、Ｆ１、Ｆ２およびＦ３製剤が、新生児ＭＩＭＩＣ ＰＴＥにおけるＢＥＸＳＥＲＯに匹敵する炎症性応答を生成することを示した。Ｆ５製剤は、新生児ＭＩＭＩＣ ＰＴＥにおいてＢＥＸＳＥＲＯよりわずかに高い炎症性応答を生成する傾向があったが、Ｆ４製剤は、新生児ＭＩＭＩＣ ＰＴＥにおいてＢＥＸＳＥＲＯより弱い応答を生成する傾向があった。

【0548】

成人ＭＩＭＩＣ ＰＴＥ系と同様に、全ての製剤がＢＥＸＳＥＲＯと同様の免疫細胞傷害性プロファイルを示した。実際、図１８に示すように、ＭＩＭＩＣ新生児ＰＴＥのいくつかのテスト条件において細胞生存率は、最も低い処置用量（１：１０００００および１００００００希釈）ではほとんど影響を受けず、最も高用量（１：１００希釈）で最大約５０％低下した。

【0549】

３．結論
ＴＲＵＭＥＮＢＡは、ＭＩＭＩＣ ＰＴＥの成人および新生児バージョンの両方でＢＥＸＳＥＲＯより強い炎症誘発性サイトカイン応答を誘導した。

【0550】

Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４、およびＦ５製剤は、成人ＭＩＭＩＣ ＰＴＥ構築物においてＢＥＸＳＥＲＯと同様かまたはＢＥＸＳＥＲＯより少ない炎症誘発性サイトカインの分泌を生成した。

【0551】

全体として、Ｆ５製剤は、新生児ＭＩＭＩＣ ＰＴＥにおいてＢＥＸＳＥＲＯより多くの炎症誘発性サイトカインを誘導したが、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３およびＦ４製剤は、同様かまたはより低いサイトカイン応答を誘導した。

【0552】

Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４およびＦ５製剤は、細胞生存率に対する効果が最小であり（いくつかの製剤が細胞生存率の約４０％の低下を誘導した１：１００の希釈を除いて）、ＢＥＸＳＥＲＯと同様の傾向を示した。

【実施例4】

【0553】

一般的結論
上に示した結果から、少なくとも１つのＨ因子結合タンパク質（ｆＨＢＰ）Ａタンパク質、少なくとも１つのｆＨＢＰ Ｂタンパク質、少なくとも１つのナイセリア属アドヘシンＡ（ＮａｄＡ）タンパク質、および少なくとも１つの界面活性剤抽出外膜小胞（ｄＯＭＶ）を含む髄膜炎菌抗原の組合せを含む開示された免疫原性組成物は、ｈＳＢＡ結果によって証明されるように免疫原性防御応答を誘導できると結論することができる。これは、ワクチンとしておよび髄膜炎菌感染症に対する免疫原性防御応答を誘導するための、それらの組成物の有用性を裏付けるものである。

【0554】

さらに、データは、よく見られるおよび高毒性のＭｅｎＢ株カバー範囲の幅が、ＴＲＵＭＥＮＢＡおよびＢＥＸＳＥＲＯのカバー範囲の幅より大きいこと、ならびにそれら２つのワクチンによって残されたいくつかの空白を埋められるようにすることを示している。

【0555】

最後に、データは、それらの組成物が、優れた安全性プロファイルを呈し、ＴＲＵＭＥＮＢＡより既に少ない反応原性のＢＥＸＳＥＲＯと同様かまたはＢＥＸＳＥＲＯより少ない反応原性プロファイルを呈することを示している。

【0556】

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【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図13-1】

【図13-2】

【図13-3】

【図13-4】

【図14】

【図15】

【図16-1】

【図16-2】

【図16-3】

【図16-4】

【図17】

【図18】

【図19】

【配列表】

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【国際調査報告】