特表 2024-507996 リンパ球を標的とするレンチウイルスベクター

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-02-21

(54)【発明の名称】リンパ球を標的とするレンチウイルスベクター

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/867 20060101AFI20240214BHJP

   C12N 7/01 20060101ALI20240214BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20240214BHJP

   C12N 5/0781 20100101ALI20240214BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20240214BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240214BHJP

   C07K 14/145 20060101ALN20240214BHJP

   C12N 15/62 20060101ALN20240214BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20240214BHJP

   C12N 5/10 20060101ALN20240214BHJP

   C12N 1/02 20060101ALN20240214BHJP

【ＦＩ】

C12N15/867 Z ZNA

C12N7/01

C12N5/0783

C12N5/0781

A61K35/76

A61P37/04

C07K14/145

C12N15/62 Z

C12N15/13

C12N5/10

C12N1/02

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023552220

(86)(22)【出願日】2022-02-25

(85)【翻訳文提出日】2023-10-13

(86)【国際出願番号】 US2022018027

(87)【国際公開番号】W WO2022183072

(87)【国際公開日】2022-09-01

(31)【優先権主張番号】63/154,639

(32)【優先日】2021-02-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523324960

【氏名又は名称】ケロニア セラピューティクス， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】パーキンス， モリー アール．

(72)【発明者】

【氏名】フリードマン， ケビン エム．

【テーマコード（参考）】

4B065

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AA94X

4B065AA94Y

4B065AA95X

4B065AA95Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065BD15

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC83

4C087CA12

4C087MA56

4C087MA65

4C087NA13

4C087NA14

4C087ZB09

4H045AA10

4H045AA20

4H045BA41

4H045CA01

4H045CA40

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本明細書に提供するのは、標的タンパク質によって特徴づけられる細胞に送達するため、及び該細胞による発現のための、変異型、異種エンベロープタンパク質、標的タンパク質、及び少なくとも１つの導入遺伝子を含むレンチウイルスベクターである。同様に提供するのは、本明細書に記載のレンチウイルスベクターを産生するための方法及び材料、標的細胞を形質導入する方法、ならびに本開示に従ってレンチウイルスベクターによって形質導入された細胞である。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下を含む、レンチウイルスベクター：
（ａ）異種リンパ球を標的とするタンパク質を含むウイルスエンベロープであって、前記リンパ球を標的とするタンパク質が、
リンパ球を標的とするドメインを含む細胞外ドメイン、及び
膜貫通ドメインを含む前記ウイルスエンベロープ、ならびに
（ｂ）ＬＤＬ－Ｒに対する結合の阻害を示すが、膜融合を媒介する変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質、ならびに
（ｃ）異種導入遺伝子を含む発現カセット。

【請求項2】

前記異種リンパ球を標的とするタンパク質が、Ｔ細胞を標的とするドメインを含む細胞外ドメインを含む異種Ｔ細胞を標的とするタンパク質である、請求項１に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項3】

前記異種リンパ球を標的とするタンパク質が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を標的とするドメインを含む細胞外ドメインを含む異種ＮＫ細胞を標的とするタンパク質である、請求項１に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項4】

前記異種リンパ球を標的とするタンパク質が、Ｂ細胞を標的とするドメインを含む細胞外ドメインを含む異種Ｂ細胞を標的とするタンパク質である、請求項１に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項5】

前記異種リンパ球を標的とするタンパク質が、以下に特異的に結合する異種Ｔ細胞を標的とするタンパク質である、請求項１または２に記載のレンチウイルスベクター：
（ａ）ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ８０、４－１ＢＢ、ＡｈＲ、ＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ４４、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４７、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６９、ＣＤ９４、ＣＤ９５、ＣＤ１２７、ＣＤ１６１、ＣＤ１８３（ＣＸＣＲ３）、ＣＤ１８４（ＣＸＣＲ４）、ＣＤ１８５（ＣＸＣＲ５）、ＣＤ１９３（ＣＣＲ３）、ＣＤ１９４（ＣＣＲ４）、ＣＤ１９５（ＣＣＲ５）、ＣＤ１９６（ＣＣＲ６）、ＣＤ１９７（ＣＣＲ７）、ＣＣＲ１０、ＰＤ－１、ＴＣＲａ／ｂ、ＣＤ５、ＣＤ２７、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ５７、ＣＤ１０３、ＣＤ１２２、Ｐ２ＲＸ７、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、及びＩＬ６ＳＴ、もしくはそれらの任意の組み合わせから選択されるＴ細胞マーカー、
（ｂ）γδＴＣＲ、Ｖデルタ１、Ｖデルタ２、及びＮＫＧ２Ｄ（ＫＬＲＫ１、ＣＤ３１４）から選択されるγδＴ細胞マーカー、
（ｃ）インバリアントＴＣＲ（Ｖａ２４－Ｊａ１８）、ＣＤ１８５（ＣＸＣＲ５）、ＣＸＣＲ６、及びＩＬ－２１Ｒ、もしくはそれらの任意の組み合わせから選択されるＮＫ Ｔ細胞マーカー、または
（ｄ）Ｖａ７．２、Ｊａ３３、ＣＸＣＲ６、ＩＬ－１８Ｒ、ＫＬＲＢ１（ＣＤ１６１）、及びＶＬＡ４（アルファ４ベータ１インテグリン）、もしくはそれらの任意の組み合わせから選択されるＭＡＩＴ細胞マーカー。

【請求項6】

前記異種リンパ球を標的とするタンパク質が、ＣＤ３タンパク質またはＣＤ２８タンパク質に特異的に結合するＴ細胞を標的とするドメインを含む細胞外ドメインを含む異種Ｔ細胞を標的とするタンパク質である、請求項１、２、または５に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項7】

前記異種リンパ球を標的とするタンパク質が、ＣＤ５６、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６、ＫＩＲ（複数可）、ＮＫＧ２タンパク質（例えば、ＮＫＧ２Ｄ（ＫＬＲＫ１、ＣＤ３１４））、ＫＬＲＢ１（ＣＤ１６１）、ＫＬＲＤ１（ｃｄ９４）、ＩＬ２Ｒｂ（ＣＤ１２２）、ＩＬ－２１Ｒ、ＳＬＡＭＦ６（ＣＤ３５２）、ＳＬＡＭＦ７（ＣＤ３１９）、及びＩＬ－１８Ｒ、またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＮＫ細胞マーカーに特異的に結合する異種ＮＫ細胞を標的とするタンパク質である、請求項１または３に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項8】

前記異種リンパ球を標的とするタンパク質が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ７２、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ２６８、ＣＤ２６９、ＣＤ２６７、ＣＤ８６、ＣＤ８０、ＣＤ５２、ＣＤ１３８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２３、ＣＤ８４、ＣＤ２５７、ＣＤ２７０、ＣＤ３７、ＣＤ７４、及びＣＤ２６９、またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＢ細胞マーカーに特異的に結合するＢ細胞を標的とするタンパク質である、請求項１または４に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項9】

前記標的とするタンパク質が、配列番号６に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する細胞外ドメインを含むＣＤ８０タンパク質を含む、請求項１、２、５、及び６のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項10】

前記標的とするタンパク質が、配列番号８に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する膜貫通及び細胞内ドメインを含むＣＤ８０タンパク質を含む、請求項１、２、５、６、及び９のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項11】

前記標的とするタンパク質が、配列番号２を含む、または配列番号４のシグナルペプチドが欠けている配列番号２を含むＣＤ８０タンパク質を含む、請求項１、２、５、６、９、または１０に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項12】

前記標的とするタンパク質が、配列番号１４に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する軽鎖可変領域、及び配列番号１８に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する重鎖可変領域を有する抗ＣＤ３ ｓｃＦｖを含む、請求項１、２、５、及び６のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項13】

前記標的とするタンパク質が、（ｉ）配列番号１０、もしくは配列番号１２のシグナルペプチドが欠けている配列番号１０、または（ｉｉ）配列番号１１７、もしくは配列番号１２のシグナルペプチドが欠けている配列番号１１７を含む抗ＣＤ３標的タンパク質を含む、請求項１２に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項14】

宿主細胞で発現される前記標的とするタンパク質が、シグナル配列を含む、先行請求項のいずれかに記載のレンチウイルスベクター。

【請求項15】

成熟型の標的とするタンパク質が、シグナル配列を含まない、先行請求項のいずれかに記載のレンチウイルスベクター。

【請求項16】

前記成熟型の標的とするタンパク質が、シグナル配列からの少なくとも１つのアミノ酸を含む、請求項１～１４のいずれかに記載のレンチウイルスベクター。

【請求項17】

前記変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質が、以下のうちの１つ以上から選択される変異を含む、先行請求項のいずれかに記載のレンチウイルスベクター：
Ｈ８、Ｎ９、Ｑ１０、Ｋ４７、Ｋ５０、Ａ５１、Ｓ１８３、Ｓ１７９、Ｎ１８０、Ｉ１８２、Ｍ１８４、Ｙ２０９、Ｉ３４７、Ｔ３５０、Ｔ３５２、Ｅ３５３、及びＲ３５４での変異、
Ｎ９とＱ１０の間にＴＴの挿入、Ｈ８とＮ９の間にＧＧＳの挿入、Ｎ９とＱ１０の間にＧＧＳの挿入、Ｎ２０８とＹ２０９の間にＴＴの挿入、Ｐ４６とＫ４７の間にＧＧＳの挿入、及びＮ２０８とＹ２０９の間にＧＧＳの挿入、ならびに
残基１～８の欠失。

【請求項18】

前記変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質が、以下のうちの２つ以上から選択される変異を含む、先行請求項のいずれかに記載のレンチウイルスベクター：
Ｈ８、Ｎ９、Ｑ１０、Ｋ４７、Ｋ５０、Ａ５１、Ｓ１８３、Ｓ１７９、Ｎ１８０、Ｉ１８２、Ｍ１８４、Ｙ２０９、Ｉ３４７、Ｔ３５０、Ｔ３５２、Ｅ３５３、及びＲ３５４での変異、
Ｎ９とＱ１０の間にＴＴの挿入、Ｈ８とＮ９の間にＧＧＳの挿入、Ｎ９とＱ１０の間にＧＧＳの挿入、Ｎ２０８とＹ２０９の間にＴＴの挿入、Ｐ４６とＫ４７の間にＧＧＳの挿入、及びＮ２０８とＹ２０９の間にＧＧＳの挿入、ならびに
残基１～８の欠失。

【請求項19】

前記変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質が、Ｈ８Ａ、Ｎ９Ａ、Ｑ１０Ａ、Ｋ４７Ａ、Ｋ４７Ｑ、Ｎ１８０Ａ、Ｉ１８２Ａ、Ｙ２０９Ａ、Ｔ３５２Ａ、Ｔ３５２Ｗ、Ｅ３５３Ａ、Ｒ３５４Ａ、及びＲ３５４Ｑのうちの１つ以上から選択される変異を含む、先行請求項のいずれかに記載のレンチウイルスベクター。

【請求項20】

前記変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質が、Ｈ８Ａ、Ｋ４７Ａ、Ｋ４７Ｑ、Ｙ２０９Ａ、Ｒ３５４Ａ、及びＲ３５４Ｑのうちの１つ以上から選択される変異を含む、先行請求項のいずれかに記載のレンチウイルスベクター。

【請求項21】

前記変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質が、以下を含む、先行請求項のいずれかに記載のレンチウイルスベクター：
（ａ）Ｋ４７の変異及びＲ３５４の変異、
（ｂ）Ｎ１８０の変異、Ｉ１８２の変異、Ｔ３５２の変異、及びＥ３５３の変異、
（ｃ）Ｔ３５２の変異及びＥ３５３の変異、
（ｄ）Ｎ９の変異、Ｑ１０の変異、及びＮ１８０の変異、または
（ｅ）Ｈ８とＮ９の間にＧＧＳの挿入、及びＮ９とＱ１０の間にＧＧＳの挿入、
（ｆ）Ｎ９とＱ１０の間にＴＴの挿入、もしくは
（ｇ）Ｐ４６とＫ４７の間にＧＧＳの挿入。

【請求項22】

前記変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質が、以下を含む、請求項２１に記載のレンチウイルスベクター：
（ａ）Ｋ４７Ｑの変異及びＲ３５４Ａの変異、
（ｂ）Ｎ１８０Ａの変異、Ｉ１８２Ａの変異、Ｔ３５２Ａの変異、及びＥ３５３Ａの変異、
（ｃ）Ｔ３５２Ｗの変異及びＥ３５３Ａの変異、
（ｄ）Ｎ９Ａの変異、Ｑ１０Ａの変異、及びＮ１８０Ａの変異。

【請求項23】

前記変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質が、配列番号７４、９３、９５、９７、９９及び１０３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項24】

前記異種導入遺伝子が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードし、前記ＣＡＲは、標的分子に特異的に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメイン、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）及び任意に共刺激シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびに前記細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを接続する膜貫通ドメインを含む、先行請求項のいずれかに記載のレンチウイルスベクター。

【請求項25】

前記導入遺伝子によりコードされるＣＡＲが、以下を含む、請求項２４に記載のレンチウイルスベクター：
（ａ）ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、Ａｂインテグリン、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ５２、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＬＴ３、Ｆｒａ、ＧＤ２、ＧＤ３、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ－Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ－Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ－Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ－Ａ１＋ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＨＬＡ－Ａ２＋ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＨＬＡ－Ａ３＋ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＨＬＡＤＲ、ＩＬ－１１Ｒアルファ、ＩＬ－１３Ｒアルファ２、ラムダ、ルイス－Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２ｄリガンド、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、ＶＥＧＦＲ２、ＢＡＦＦ－Ｒ、クローディン１８．２、ＣＤ８６、ＦｃＲＬ５、ＧＰＲＣ５、及びＴＡＣＩのうちの１つ以上に特異的に結合する結合ドメイン、
（ｂ）ＣＤ２８、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ８ａ、ＣＤ５、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９５（Ｆａｓ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ）、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ３００、ＣＤ３５７（ＧＩＴＲ）、Ａ２ａＲ、ＤＡＰ１０、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲγ、Ｆｙｎ、ＧＡＬ９、ＫＩＲ、Ｌｃｋ、ＬＡＴ、ＬＲＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＰＴＣＨ２、ＲＯＲ２、Ｒｙｋ、Ｓｌｐ７６、ＳＩＲＰα、ｐＴα、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＩＭ３、ＴＲＩＭ、ＬＰＡ５、及びＺａｐ７０の膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメイン、
（ｃ）ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦｃＲγ及びＣＤ６６ｄドメインから選択される細胞内シグナル伝達ドメイン、
（ｄ）ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＡＲＤ１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２２６、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＤ２Ｃ、ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、及びＺＡＰ７０ドメインのうちの１つ以上から選択される共刺激ドメイン、ならびに
（ｅ）任意に、前記結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間に、以下から選択される細胞外、非シグナル伝達リンカードメイン：
（ｉ）野生型または改変ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＤのヒンジ領域から選択される免疫グロブリンヒンジ領域、
（ｉｉ）野生型または改変ＣＤ８ａ、ＣＤ４、ＣＤ２８及びＣＤ７ヒンジ領域から選択されるヒンジ領域、
（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインのうちの１つ以上から選択されるＦｃドメインのすべてまたは一部、ならびに
（ｉｖ）ＣＤ２３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ及びＮＫＧ２Ｄの柄領域に由来するＩＩ型Ｃ－レクチンの柄領域。

【請求項26】

前記導入遺伝子によりコードされるＣＡＲが、以下を含む抗ＣＤ１９ＣＡＲである、請求項２４または２５のいずれかに記載のレンチウイルスベクター：
配列番号４６に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する軽鎖可変領域、及び配列番号５０に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１９ｓｃＦｖを含む結合ドメイン、
配列番号５２に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するＣＤ８ａのヒンジ及び膜貫通ドメイン、
配列番号５６に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するＣＤ３ζエフェクタードメイン、及び
配列番号５４に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する４－１ＢＢ共刺激ドメイン。

【請求項27】

前記導入遺伝子によってコードされるＣＡＲが、配列番号４２、または配列番号４４のシグナルペプチドが欠けている配列番号４２を含む、請求項２６に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項28】

前記導入遺伝子によりコードされるＣＡＲが、以下を含む抗ＢＣＭＡ ＣＡＲである、請求項２４または２５のいずれかに記載のレンチウイルスベクター：
配列番号６２に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する軽鎖可変領域、及び配列番号６６に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する重鎖可変領域を含む抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖを含む結合ドメイン、
配列番号５２に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するＣＤ８ａのヒンジ及び膜貫通ドメイン、
配列番号１２２に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するＣＤ３ζエフェクタードメイン、及び
配列番号５４に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する４－１ＢＢ共刺激ドメイン。

【請求項29】

前記導入遺伝子によってコードされる前記ＣＡＲが、配列番号５８、または配列番号６０のシグナルペプチドが欠けている配列番号５８を含む、請求項２６に記載のレンチウイルスベクター。

【請求項30】

先行請求項のいずれか１項に記載のリンパ球を標的とするレンチウイルスベクターを産生する方法であって、以下を含む、前記方法：
（ａ）プロデューサー細胞をＧａｇＰｏｌプラスミド、Ｒｅｖプラスミド、導入遺伝子プラスミド、及びＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドでトランスフェクトすること、ここで、
（ｉ）前記ＧａｇＰｏｌプラスミドは、レンチウイルスｇａｇ遺伝子及びレンチウイルスｐｏｌ遺伝子をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含み、レンチウイルスＧａｇポリタンパク質及びレンチウイルスＰｏｌポリタンパク質を前記プロデューサー細胞内で発現することが可能であり、
（ｉｉ）前記Ｒｅｖプラスミドは、レンチウイルスｒｅｖ遺伝子をコードするポリヌクレオチドを含み、レンチウイルスＲｅｖタンパク質を前記プロデューサー細胞内で発現することが可能であり、
（ｉｉｉ）前記導入遺伝子プラスミドは、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む発現カセットを含み、
（ｉｖ）前記ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドは、タンデム発現カセットを含み、前記タンデム発現カセットは、変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質をコードするポリヌクレオチド及びリンパ球を標的とするタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含み、前記ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドは、前記変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質及び前記リンパ球を標的とするタンパク質を前記プロデューサー細胞内で発現することが可能であること、
（ｂ）前記プロデューサー細胞を培地内で培養すること、ならびに
（ｃ）レンチウイルスベクターを前記培地から採取すること。

【請求項31】

請求項１～２９のいずれか１項に記載のリンパ球を標的とするレンチウイルスベクターを産生する方法であって、以下を含む、前記方法：
（ａ）プロデューサー細胞をＧａｇＰｏｌプラスミド、Ｒｅｖプラスミド、導入遺伝子プラスミド、及びＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドでトランスフェクトすること、ここで、
（ｉ）前記ＧａｇＰｏｌプラスミドは、Ｇａｇポリタンパク質前駆体及びＰｏｌポリタンパク質前駆体ならびにリンパ球を標的とするタンパク質をコードするタンデム発現カセットを含み、前記ＧａｇＰｏｌプラスミドは、レンチウイルスＧａｇポリタンパク質、レンチウイルスＰｏｌポリタンパク質、及び前記リンパ球を標的とするタンパク質を前記プロデューサー細胞内で発現することが可能であり、
（ｉｉ）前記Ｒｅｖプラスミドは、レンチウイルスｒｅｖ遺伝子をコードするポリヌクレオチドを含み、レンチウイルスＲｅｖタンパク質を前記プロデューサー細胞内で発現することが可能であり、
（ｉｉｉ）前記導入遺伝子プラスミドは、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む発現カセットを含み、
（ｉｖ）前記ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドは、変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含み、前記ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドは、前記変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質を前記プロデューサー細胞内で発現することが可能である。
（ｂ）前記プロデューサー細胞を培地内で培養すること、ならびに
（ｃ）レンチウイルスベクターを前記培地から採取すること。

【請求項32】

請求項１～２９のいずれか１項に記載のリンパ球を標的とするレンチウイルスベクターを産生する方法であって、以下を含む、前記方法：
（ａ）プロデューサー細胞をＧａｇＰｏｌプラスミド、Ｒｅｖプラスミド、導入遺伝子プラスミド、及びＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドでトランスフェクトすること、ここで、
（ｉ）前記ＧａｇＰｏｌプラスミドは、レンチウイルスｇａｇ遺伝子及びレンチウイルスｐｏｌ遺伝子をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含み、レンチウイルスＧａｇポリタンパク質及びレンチウイルスＰｏｌポリタンパク質を前記プロデューサー細胞内で発現することが可能であり、
（ｉｉ）前記Ｒｅｖプラスミドは、タンデム発現カセットを含み、前記タンデム発現カセットは、レンチウイルスｒｅｖ遺伝子をコードするポリヌクレオチド及びリンパ球を標的とするタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含み、前記Ｒｅｖプラスミドは、レンチウイルスＲｅｖタンパク質及び前記リンパ球を標的とするタンパク質を前記プロデューサー細胞内で発現することが可能であり、
（ｉｉｉ）前記導入遺伝子プラスミドは、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む発現カセットを含み、
（ｉｖ）前記ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドは、変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含み、前記ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドは、前記変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質を前記プロデューサー細胞内で発現することが可能であること、
（ｂ）前記プロデューサー細胞を培地内で培養すること、ならびに
（ｃ）レンチウイルスベクターを前記培地から採取すること。

【請求項33】

請求項１～２９のいずれか１項に記載のリンパ球を標的とするレンチウイルスベクターを産生する方法であって、以下を含む、前記方法：
（ａ）プロデューサー細胞をＧａｇＰｏｌプラスミド、Ｒｅｖプラスミド、導入遺伝子プラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びリンパ球を標的とするタンパク質プラスミドでトランスフェクトすること、
（ｉ）前記ＧａｇＰｏｌプラスミドは、レンチウイルスｇａｇ遺伝子及びレンチウイルスｐｏｌ遺伝子をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含み、レンチウイルスＧａｇポリタンパク質及びレンチウイルスＰｏｌポリタンパク質を前記プロデューサー細胞内で発現することが可能であり、
（ｉｉ）前記Ｒｅｖプラスミドは、レンチウイルスｒｅｖ遺伝子をコードするポリヌクレオチドを含み、レンチウイルスＲｅｖタンパク質を前記プロデューサー細胞内で発現することが可能であり、
（ｉｉｉ）前記導入遺伝子プラスミドは、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む発現カセットを含み、
（ｉｖ）前記ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドは、変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含み、前記変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質を前記プロデューサー細胞内で発現することが可能であり、
（ｖ）前記リンパ球を標的とするタンパク質プラスミドは、リンパ球を標的とするタンパク質をコードするポリヌクレオチド含み、前記リンパ球を標的とするタンパク質を前記プロデューサー細胞内で発現することが可能であること、
（ｂ）前記プロデューサー細胞を培地内で培養すること、ならびに
（ｃ）レンチウイルスベクターを前記培地から採取すること。

【請求項34】

前記リンパ球を標的とするタンパク質プラスミドによってコードされる前記リンパ球を標的とするタンパク質が、Ｔ細胞を標的とするタンパク質である、請求項３０～３３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項35】

前記リンパ球を標的とするタンパク質プラスミドによってコードされる前記リンパ球を標的とするタンパク質が、ＮＫ細胞を標的とするタンパク質である、請求項３０～３３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項36】

前記リンパ球を標的とするタンパク質プラスミドによってコードされる前記リンパ球を標的とするタンパク質が、Ｂ細胞を標的とするタンパク質である、請求項３０～３３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項37】

前記リンパ球を標的とするタンパク質プラスミドによってコードされる前記リンパ球を標的とするタンパク質が、以下に特異的に結合するＴ細胞を標的とするタンパク質である、請求項３０～３３及び３４のいずれか１項に記載の方法：
（ａ）ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ８０、４－１ＢＢ、ＡｈＲ、ＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ４４、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４７、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６９、ＣＤ９４、ＣＤ９５、ＣＤ１２７、ＣＤ１６１、ＣＤ１８３（ＣＸＣＲ３）、ＣＤ１８４（ＣＸＣＲ４）、ＣＤ１８５（ＣＸＣＲ５）、ＣＤ１９３（ＣＣＲ３）、ＣＤ１９４（ＣＣＲ４）、ＣＤ１９５（ＣＣＲ５）、ＣＤ１９６（ＣＣＲ６）、ＣＤ１９７（ＣＣＲ７）、ＣＣＲ１０、ＰＤ－１、ＴＣＲａ／ｂ、ＣＤ５、ＣＤ２７、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ５７、ＣＤ１０３、ＣＤ１２２、Ｐ２ＲＸ７、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、及びＩＬ６ＳＴ、もしくはそれらの任意の組み合わせから選択されるＴ細胞マーカー、
（ｂ）γδＴＣＲ、Ｖデルタ１、Ｖデルタ２、及びＮＫＧ２Ｄ（ＫＬＲＫ１、ＣＤ３１４）、もしくはそれらの任意の組み合わせから選択されるγδＴ細胞マーカー、
（ｃ）インバリアントＴＣＲ（Ｖａ２４－Ｊａ１８）、ＣＤ１８５（ＣＸＣＲ５）、ＣＸＣＲ６、及びＩＬ－２１Ｒ、もしくはそれらの任意の組み合わせから選択されるＮＫ Ｔ細胞マーカー、または
（ｄ）Ｖａ７．２、Ｊａ３３、ＣＸＣＲ６、ＩＬ－１８Ｒ、ＫＬＲＢ１（ＣＤ１６１）、及びＶＬＡ４（アルファ４ベータ１インテグリン）、もしくはそれらの任意の組み合わせから選択されるＭＡＩＴ細胞マーカー。

【請求項38】

前記標的とするタンパク質が、配列番号６に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する細胞外ドメインを含むＣＤ８０タンパク質を含む、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

前記標的とするタンパク質が、配列番号８に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する膜貫通及び細胞内ドメインを含むＣＤ８０タンパク質を含む、請求項３７及び３８のいずれかに記載の方法。

【請求項40】

前記標的とするタンパク質が、配列番号２を含む、または配列番号４のシグナルペプチドが欠けている配列番号２を含むＣＤ８０タンパク質を含む、請求項３７、３８、及び３９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

前記標的とするタンパク質が、（ｉ）配列番号１４に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する軽鎖可変領域、及び配列番号１８に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する重鎖可変領域を有する抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ、または（ｉｉ）配列番号１１５に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する軽鎖可変領域、及び配列番号１１３に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する重鎖可変領域を有する抗ＣＤ３ ｓｃＦｖを含む、請求項３０～３４及び３７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

前記標的とするタンパク質が、（ｉ）配列番号１０、もしくは配列番号１２のシグナルペプチドが欠けている配列番号１０、または（ｉｉ）配列番号１１７、もしくは配列番号１２のシグナルペプチドが欠けている配列番号１１７を含む抗ＣＤ３標的タンパク質を含む、請求項３０～３４、３７、及び４１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項43】

前記リンパ球を標的とするタンパク質プラスミドによってコードされる前記リンパ球を標的とするタンパク質が、ＣＤ５６、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６、ＫＩＲ（複数可）、ＮＫＧ２タンパク質（例えば、ＮＫＧ２Ｄ（ＫＬＲＫ１、ＣＤ３１４））、ＫＬＲＢ１（ＣＤ１６１）、ＫＬＲＤ１（ｃｄ９４）、ＩＬ２Ｒｂ（ＣＤ１２２）、ＩＬ－２１Ｒ、ＳＬＡＭＦ６（ＣＤ３５２）、ＳＬＡＭＦ７（ＣＤ３１９）、及びＩＬ－１８Ｒ、またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＮＫ細胞マーカーに特異的に結合するＮＫ細胞を標的とするタンパク質である、請求項３０～３３及び３５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項44】

前記リンパ球を標的とするタンパク質プラスミドによってコードされる前記リンパ球を標的とするタンパク質が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ７２、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ２６８、ＣＤ２６９、ＣＤ２６７、ＣＤ８６、ＣＤ８０、ＣＤ５２、ＣＤ１３８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２３、ＣＤ８４、ＣＤ２５７、ＣＤ２７０、ＣＤ３７、ＣＤ７４、及びＣＤ２６９、またはそれらの任意の組み合わせから選択されるＢ細胞マーカーに特異的に結合するＢ細胞を標的とするタンパク質である、請求項３０～３３及び３６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項45】

前記ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドによってコードされる前記変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質が、以下のうちの１つ以上から選択される変異を含む、請求項３０～４４のいずれかに記載の方法：
Ｈ８、Ｎ９、Ｑ１０、Ｋ４７、Ｋ５０、Ａ５１、Ｓ１８３、Ｓ１７９、Ｎ１８０、Ｉ１８２、Ｍ１８４、Ｙ２０９、Ｉ３４７、Ｔ３５０、Ｔ３５２、Ｅ３５３、及びＲ３５４での変異、
Ｎ９とＱ１０の間にＴＴの挿入、Ｈ８とＮ９の間にＧＧＳの挿入、Ｎ９とＱ１０の間にＧＧＳの挿入、Ｎ２０８とＹ２０９の間にＴＴの挿入、Ｐ４６とＫ４７の間にＧＧＳの挿入、及びＮ２０８とＹ２０９の間にＧＧＳの挿入、ならびに
残基１～８の欠失。

【請求項46】

前記ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドによってコードされる前記変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質が、以下のうちの２つ以上から選択される変異を含む、請求項３０～４５のいずれかに記載の方法：
Ｈ８、Ｎ９、Ｑ１０、Ｋ４７、Ｋ５０、Ａ５１、Ｓ１８３、Ｓ１７９、Ｎ１８０、Ｉ１８２、Ｍ１８４、Ｙ２０９、Ｉ３４７、Ｔ３５０、Ｔ３５２、Ｅ３５３、及びＲ３５４での変異、
Ｎ９とＱ１０の間にＴＴの挿入、Ｈ８とＮ９の間にＧＧＳの挿入、Ｎ９とＱ１０の間にＧＧＳの挿入、Ｎ２０８とＹ２０９の間にＴＴの挿入、Ｐ４６とＫ４７の間にＧＧＳの挿入、及びＮ２０８とＹ２０９の間にＧＧＳの挿入、ならびに
残基１～８の欠失。

【請求項47】

前記変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質が、Ｈ８Ａ、Ｎ９Ａ、Ｑ１０Ａ、Ｋ４７Ａ、Ｋ４７Ｑ、Ｎ１８０Ａ、Ｉ１８２Ａ、Ｙ２０９Ａ、Ｔ３５２Ａ、Ｔ３５２Ｗ、Ｅ３５３Ａ、Ｒ３５４Ａ、及びＲ３５４Ｑのうちの１つ以上から選択される変異を含む、請求項３０～４６のいずれかに記載の方法。

【請求項48】

前記ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドによってコードされる前記変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質が、Ｈ８Ａ、Ｋ４７Ａ、Ｋ４７Ｑ、Ｙ２０９Ａ、Ｒ３５４Ａ、及びＲ３５４Ｑのうちの１つ以上から選択される変異を含む、請求項３０～４７のいずれかに記載の方法。

【請求項49】

前記変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質が、以下を含む、請求項３０～４８のいずれかに記載の方法：
（ａ）Ｋ４７の変異及びＲ３５４の変異、
（ｂ）Ｎ１８０の変異、Ｉ１８２の変異、Ｔ３５２の変異、及びＥ３５３の変異、
（ｃ）Ｔ３５２の変異及びＥ３５３の変異、
（ｄ）Ｎ９の変異、Ｑ１０の変異、及びＮ１８０の変異、または
（ｅ）Ｈ８とＮ９の間にＧＧＳの挿入、及びＮ９とＱ１０の間にＧＧＳの挿入、
（ｆ）Ｎ９とＱ１０の間にＴＴの挿入、もしくは
（ｇ）Ｐ４６とＫ４７の間にＧＧＳの挿入。

【請求項50】

前記変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質が、以下を含む、請求項４９に記載の方法：
（ａ）Ｋ４７Ｑの変異及びＲ３５４Ａの変異、
（ｂ）Ｎ１８０Ａの変異、Ｉ１８２Ａの変異、Ｔ３５２Ａの変異、及びＥ３５３Ａの変異、
（ｃ）Ｔ３５２Ｗの変異及びＥ３５３Ａの変異、
（ｄ）Ｎ９Ａの変異、Ｑ１０Ａの変異、及びＮ１８０Ａの変異。

【請求項51】

前記変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質が、配列番号７４、９３、９５、９７、９９及び１０３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項３０～５０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項52】

前記導入遺伝子プラスミドによってコードされる前記ＣＡＲが、標的分子に特異的に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメイン、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）及び任意に共刺激シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびに前記細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを接続する膜貫通ドメインを含む、請求項３０～５１のいずれかに記載の方法。

【請求項53】

前記導入遺伝子プラスミドによってコードされる前記ＣＡＲが、以下を含む、請求項３０～５２のいずれかに記載の方法：
（ａ）ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、Ａｂインテグリン、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ５２、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＬＴ３、Ｆｒａ、ＧＤ２、ＧＤ３、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ－Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ－Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ－Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ－Ａ１＋ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＨＬＡ－Ａ２＋ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＨＬＡ－Ａ３＋ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＨＬＡＤＲ、ＩＬ－１１Ｒアルファ、ＩＬ－１３Ｒアルファ２、ラムダ、ルイス－Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２ｄリガンド、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、ＶＥＧＦＲ２、ＢＡＦＦ－Ｒ、クローディン１８．２、ＣＤ８６、ＦｃＲＬ５、ＧＰＲＣ５、及びＴＡＣＩのうちの１つ以上に特異的に結合する結合ドメイン、
（ｂ）ＣＤ２８、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ８ａ、ＣＤ５、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９５（Ｆａｓ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ）、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ３００、ＣＤ３５７（ＧＩＴＲ）、Ａ２ａＲ、ＤＡＰ１０、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲγ、Ｆｙｎ、ＧＡＬ９、ＫＩＲ、Ｌｃｋ、ＬＡＴ、ＬＲＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＰＴＣＨ２、ＲＯＲ２、Ｒｙｋ、Ｓｌｐ７６、ＳＩＲＰα、ｐＴα、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＩＭ３、ＴＲＩＭ、ＬＰＡ５、及びＺａｐ７０の膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメイン、
（ｃ）ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦｃＲγ及びＣＤ６６ｄドメインから選択される細胞内シグナル伝達ドメイン、
（ｄ）ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＡＲＤ１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２２６、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＤ２Ｃ、ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、及びＺＡＰ７０ドメインのうちの１つ以上から選択される共刺激ドメイン、ならびに
（ｅ）任意に、前記結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間に、以下から選択される細胞外、非シグナル伝達リンカードメイン：
（ｉ）野生型または改変ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＤのヒンジ領域から選択される免疫グロブリンヒンジ領域、
（ｉｉ）野生型または改変ＣＤ８ａ、ＣＤ４、ＣＤ２８及びＣＤ７ヒンジ領域から選択されるヒンジ領域、
（ｉｉｉ）ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインのうちの１つ以上から選択されるＦｃドメインのすべてまたは一部、ならびに
（ｉｖ）ＣＤ２３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ及びＮＫＧ２Ｄの柄領域に由来するＩＩ型Ｃ－レクチンの柄領域。

【請求項54】

前記導入遺伝子プラスミドによりコードされる前記ＣＡＲが、以下を含む抗ＣＤ１９ ＣＡＲである、請求項３０～５３のいずれかに記載の方法：
（ａ）配列番号４６に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する軽鎖可変領域、及び配列番号５０に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する重鎖可変領域を含む抗ＣＤ１９ｓｃＦｖを含む結合ドメイン、
（ｂ）配列番号５２に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するＣＤ８ａのヒンジ及び膜貫通ドメイン、
（ｃ）配列番号５６に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するＣＤ３ζエフェクタードメイン、及び
（ｄ）配列番号５４に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する４－１ＢＢ共刺激ドメイン。

【請求項55】

前記導入遺伝子によってコードされる前記ＣＡＲが、配列番号４２、または配列番号４４のシグナルペプチドが欠けている配列番号４２を含む、請求項５４に記載の方法。

【請求項56】

前記導入遺伝子プラスミドによりコードされる前記ＣＡＲが、以下を含む抗ＢＣＭＡ ＣＡＲである、請求項３０～５３のいずれかに記載の方法：
（ａ）配列番号６２に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する軽鎖可変領域、及び配列番号６６に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する重鎖可変領域を含む抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖを含む結合ドメイン、
（ｂ）配列番号５２に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するＣＤ８ａのヒンジ及び膜貫通ドメイン、
（ｃ）配列番号１２２に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するＣＤ３ζエフェクタードメイン、及び
（ｄ）配列番号５４に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する４－１ＢＢ共刺激ドメイン。

【請求項57】

前記導入遺伝子によってコードされる前記ＣＡＲが、配列番号５８、または配列番号６０のシグナルペプチドが欠けている配列番号５８を含む、請求項５６に記載の方法。

【請求項58】

前記プロデューサー細胞が、規定の比率の導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドで形質導入され、任意に、前記規定の比率の導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、及びＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドが、それぞれ、約１：１：１：１～約５：４：１：１である、請求項３０～５７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項59】

前記プロデューサー細胞が、規定の比率の導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、及びＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミド約４：２：１：１で形質導入される、請求項５８に記載の方法。

【請求項60】

前記プロデューサー細胞が、規定の比率の導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、及びＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミド約３．１２５：３．１２５：２．５：１．２５で形質導入される、請求項５８に記載の方法。

【請求項61】

前記培地からレンチウイルスベクターを採取することが、遠心分離、アニオン交換、クロマトグラフィー、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項３０～６０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項62】

前記培地から採取されたＬＶＶ産物が、濃縮されたＬＶＶ産物において約１ｅ７ＴＵ／ｍＬ～約１ｅ１２ＴＵ／ｍＬのウイルス力価を有する、請求項３０～６１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項63】

異種導入遺伝子を発現するＴ細胞を産生するための方法であって、
前記Ｔ細胞を、請求項１、２、５、６及び９～２９のいずれか１項に記載の１つ以上のＬＶＶで形質導入することを含む、前記方法であり、前記Ｔ細胞の形質導入により、前記Ｔ細胞による前記異種導入遺伝子の発現が生じる、前記方法。

【請求項64】

前記Ｔ細胞が、休止Ｔ細胞である、請求項６３に記載の方法。

【請求項65】

前記Ｔ細胞の形質導入が、インビボまたはエキソビボで行われる、請求項６３または６４に記載の方法。

【請求項66】

前記１つ以上のＬＶＶが、対象に対して、静脈内、腹腔内、腫瘍内、骨内、または節内投与される、請求項６３～６５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項67】

前記Ｔ細胞を形質導入することが、対象から得られた全血または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）内のＴ細胞を、前記１つ以上のＬＶＶと接触させることを含む、請求項６３～６６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項68】

形質導入が、外因性Ｔ細胞刺激剤を使用せずに達成される、請求項６３～６７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項69】

前記外因性Ｔ細胞刺激剤が、抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＣＤ２８抗体もしくはその抗原結合断片、またはその両方を含む、請求項６８に記載の方法。

【請求項70】

ＣＡＲを発現するＴ細胞を産生するための方法であって、
前記Ｔ細胞を、請求項２４～２９のいずれか１項に記載の１つ以上のＬＶＶで形質導入することを含み、前記Ｔ細胞の形質導入により、前記Ｔ細胞による前記ＣＡＲ導入遺伝子の発現が生じる、前記方法。

【請求項71】

前記Ｔ細胞が、休止Ｔ細胞である、請求項７０に記載の方法。

【請求項72】

前記Ｔ細胞の形質導入が、インビボまたはエキソビボで行われる、請求項７０または７１に記載の方法。

【請求項73】

前記１つ以上のＬＶＶが、対象に対して、静脈内、腹腔内、腫瘍内、骨内、または節内投与される、請求項７０～７２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項74】

前記Ｔ細胞を形質導入することが、対象から得られた全血または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）内のＴ細胞を、前記１つ以上のＬＶＶと接触させることを含む、請求項７０～７２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項75】

形質導入が、外因性Ｔ細胞刺激剤を使用せずに達成される、請求項７０～７４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項76】

前記外因性Ｔ細胞刺激剤が、抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＣＤ２８抗体もしくはその抗原結合断片、またはその両方を含む、請求項７５に記載の方法。

【請求項77】

異種導入遺伝子を発現するＮＫ細胞を産生するための方法であって、
前記ＮＫ細胞を、請求項１、３、７、及び１４～２９のいずれか１項に記載の１つ以上のＬＶＶで形質導入することを含み、前記ＮＫ細胞の形質導入により、前記ＮＫ細胞による前記異種導入遺伝子の発現が生じる、前記方法。

【請求項78】

前記ＮＫ細胞が、休止ＮＫ細胞である、請求項７７に記載の方法。

【請求項79】

前記ＮＫ細胞の形質導入が、インビボまたはエキソビボで行われる、請求項７７または７８に記載の方法。

【請求項80】

前記１つ以上のＬＶＶが、対象に対して、静脈内、腹腔内、腫瘍内、骨内、または節内投与される、請求項７７～７９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項81】

前記ＮＫ細胞を形質導入することが、対象から得られた全血または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）内のＮＫ細胞を接触させることを含む、請求項７７～７９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項82】

形質導入が、外因性ＮＫ細胞刺激剤を使用せずに達成される、請求項７７～８１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項83】

ＣＡＲを発現するＮＫ細胞を産生するための方法であって、
前記ＮＫ細胞を、請求項２４～２９のいずれか１項に記載の１つ以上のＬＶＶで形質導入することを含み、前記ＮＫ細胞の形質導入により、前記ＮＫ細胞による前記ＣＡＲ導入遺伝子の発現が生じる、前記方法。

【請求項84】

前記ＮＫ細胞が、休止ＮＫ細胞である、請求項８３に記載の方法。

【請求項85】

前記ＮＫ細胞の形質導入が、インビボまたはエキソビボで行われる、請求項８３または８４に記載の方法。

【請求項86】

前記１つ以上のＬＶＶが、対象に対して、静脈内、腹腔内、腫瘍内、骨内、または節内投与される、請求項８３～８５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項87】

前記ＮＫ細胞を形質導入することが、対象から得られた全血または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）内のＮＫ細胞を、前記１つ以上のＬＶＶと接触させることを含む、請求項８３～８５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項88】

形質導入が、外因性ＮＫ細胞刺激剤を使用せずに達成される、請求項８３～８７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項89】

異種導入遺伝子を発現するＢ細胞を産生するための方法であって、
前記Ｂ細胞を、請求項１、４、８、及び１４～２９のいずれか１項に記載の１つ以上のＬＶＶで形質導入することを含む、前記方法であり、前記Ｂ細胞の形質導入により、前記Ｂ細胞による前記異種導入遺伝子の発現が生じる、前記方法。

【請求項90】

前記Ｂ細胞が、休止Ｂ細胞である、請求項８９に記載の方法。

【請求項91】

前記Ｂ細胞の形質導入が、インビボまたはエキソビボで行われる、請求項８９または９０に記載の方法。

【請求項92】

前記１つ以上のＬＶＶが、対象に対して、静脈内、腹腔内、腫瘍内、骨内、または節内投与される、請求項８９～９１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項93】

前記Ｂ細胞を形質導入することが、対象から得られた全血または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）内のＢ細胞を接触させることを含む、請求項８９～９１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項94】

形質導入が、Ｂ細胞刺激剤を使用せずに達成される、請求項８９～９３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項95】

ＣＡＲを発現するＢ細胞を産生するための方法であって、
前記Ｂ細胞を、請求項２４～２９のいずれか１項に記載の１つ以上のＬＶＶで形質導入することを含む、前記方法であり、前記ＮＫ細胞の形質導入により、前記Ｂ細胞による前記ＣＡＲ導入遺伝子の発現が生じる、前記方法。

【請求項96】

前記Ｂ細胞が、休止Ｂ細胞である、請求項９５に記載の方法。

【請求項97】

前記Ｂ細胞の形質導入が、インビボまたはエキソビボで行われる、請求項９５または９６に記載の方法。

【請求項98】

前記１つ以上のＬＶＶが、対象に対して、静脈内、腹腔内、腫瘍内、骨内、または節内投与される、請求項９５～９７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項99】

前記Ｂ細胞を形質導入することが、対象から得られた全血または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）内のＢ細胞を、前記１つ以上のＬＶＶと接触させることを含む、請求項９５～９７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項100】

形質導入が、外因性Ｂ細胞刺激剤を使用せずに達成される、請求項９５～９９のいずれか１項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

配列表に関する記述
本出願に関連する配列表は、紙媒体の代わりにテキスト形式で提供され、参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名称は、９３０２０７＿４０１ＷＯ＿ＳＥＱＵＥＮＣＥ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔである。該テキストファイルは、１５８ＫＢであり、２０２２年２月２５日に作成され、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子提出された。

【背景技術】

【0002】

レンチウイルスベクターは、遺伝子改変細胞療法、特に、Ｔ細胞療法において重要な役割を果たす。最近承認されたＴ細胞療法は、レトロウイルスベクターに依存して治療分子（例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ））をＴリンパ球に形質導入する。ＣＡＲ Ｔ細胞の産生に関連するリスクは、他の細胞型への導入遺伝子の導入である。広範な細胞指向性を備えた組み込みベクター、例えば、ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質でシュードタイプ化されたレンチウイルスベクターの使用は、まれとはいえ、重大な安全上の懸念となる可能性がある。

【図面の簡単な説明】

【0003】

【図1】第３世代のＬＶＶ産生系での使用に適したヘルパープラスミドの概略図である。

【図2A】ＬＤＬ受容体結合を無効にするための変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープ（Ｔｒｏｐ－００２、Ｔｒｏｐ－０５１、Ｔｒｏｐ－０５２、Ｔｒｏｐ－０５５、及びＴｒｏｐ－０６１）ならびにＴ細胞標的タンパク質ＣＤ８０を有するレンチウイルスベクターによるＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞及びＲａｊｉ Ｂ細胞のオンターゲット及びオフターゲットの侵入を示すグラフを示す。各サンプルの左側のバーがオンターゲットの侵入であり、右側のバーがオフターゲットである。Ｔ細胞標的タンパク質がＴ細胞上のその同族リガンドに結合すると、レンチウイルスベクターが侵入し、その後レポーター緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）の発現が測定される

【図2B】ＬＤＬ受容体結合を無効にするための変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープ（Ｔｒｏｐ－００２、Ｔｒｏｐ－０５１、Ｔｒｏｐ－０５２、Ｔｒｏｐ－０５５、及びＴｒｏｐ－０６１）ならびにＴ細胞標的タンパク質ＣＤ８０を有するレンチウイルスベクターによるＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞及びＲａｊｉ Ｂ細胞のオンターゲット及びオフターゲットの侵入を示すＦＡＣＳプロットを示す。Ｔ細胞標的タンパク質がＴ細胞上のその同族リガンドに結合すると、レンチウイルスベクターが侵入し、その後レポーター緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）の発現が測定される。

【図3A】ＶＳＶ－Ｇパッケージングプラスミドから発現されるＴ細胞標的タンパク質ＣＤ８０が、ＨＥＫ２９３プロデューサー細胞の表面の変異型ＶＳＶ－Ｇとして比較的同等のレベルで発現されることを示す図を示す

【図3B】このアプローチで生成されたＬＶＶが、標的Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を形質導入することができるが、Ｒａｊｉ Ｂ細胞を形質導入しないことを示す図を示す。

【図4】（上段）ＣＤ８０標的タンパク質をＲｅｖパッケージングプラスミドにクローニングすること、または変異型ＶＳＶ－Ｇパッケージングプラスミドにクローニングすることによって生成されたＬＶＶを使用した、ＨＥＫ２９３Ｔプロデューサー細胞の表面のＣＤ８０及び変異型ＶＳＶ－Ｇの発現レベルを示す図、及び（下段）ＣＤ８０標的タンパク質をＲｅｖパッケージングプラスミドまたは変異型ＶＳＶ－Ｇパッケージングプラスミドにクローニングすることによって生成されたＬＶＶが、標的Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を形質導入することを示す図を示す。

【図5】（左）５つのプラスミドパッケージング系を使用したＨＥＫ２９３Ｔプロデューサー細胞の表面でのＣＤ８０標的タンパク質の発現をＣＤ８０プラスミド濃度の関数として示す。（右）５つのプラスミドパッケージング系によって生成されたＬＶＶが、標的Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を形質導入すること及び形質導入効率が、ＣＤ８０パッケージングプラスミドの濃度に関連したことを示す。

【図6A】接着性ＨＥＫ２９３プロデューサー細胞で産生されたリンパ球を標的とするＬＶＶの力価を示す。ＬＶＶは、ＨＥＫ２９３接着細胞培地から遠心分離によって採取された。

【図6B】接着性ＨＥＫ２９３プロデューサー細胞で産生されたリンパ球を標的とするＬＶＶの力価を示す。ＬＶＶは、ＨＥＫ２９３接着細胞培地からアニオン交換クロマトグラフィーに続いてタンジェンシャルフロー濾過によって採取された。

【図6C】浮遊ＨＥＫ２９３プロデューサー細胞で産生されたリンパ球を標的とするＬＶＶの力価を示す。ＬＶＶは、ＨＥＫ２９３浮遊細胞培地からアニオン交換クロマトグラフィーによって採取された。

【図6D】接着性ＨＥＫ２９３または浮遊ＨＥＫ２９３プロデューサー細胞で産生されたリンパ球を標的とするＬＶＶの力価を示す。ＡＥＸ／ＴＦＦによる濃縮は、高レベルの純度及び回収でのＬＶＶの調製につながった。

【図7】健康なヒトドナー由来のＰＢＭＣにおいて、ＢＣＭＡ ＣＡＲ導入遺伝子を含むＬＶＶまたはＢＣＭＡ ＣＡＲ導入遺伝子を含むＴ細胞を標的とするＬＶＶ（抗ＣＤ３及びＣＤ８０）によるＴ細胞形質導入を調べる概略図を示す。右下に示されているグラフは、低ＭＯＩであっても、Ｔ細胞を標的とするＬＶＶが、標準ＬＶＶよりも高いレベルでＴ細胞を形質導入し、Ｔ細胞を標的とするＬＶＶが、標準ＬＶＶとは対照的に、ＩＬ－２及び外因性活性化抗体（抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８）の存在なしでＴ細胞を形質導入することが可能であることを示す。

【図8】３人の異なるドナーから得られ、標準ＬＶＶまたはＴ細胞再指向型ＬＶＶ（抗ＣＤ３及びＣＤ８０）を使用して、外因性活性化抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体の存在下または非存在下で形質導入されたＰＢＭＣからのＴ細胞増殖を示すグラフを示す。

【図9】健康なヒトドナー由来のＰＢＭＣにおいて、ＣＤ１９ ＣＡＲ導入遺伝子を含むＬＶＶまたはＣＤ１９ ＣＡＲ導入遺伝子を含むＴ細胞を標的とするＬＶＶ（抗ＣＤ３及びＣＤ８０）によるＴ細胞形質導入を調べる概略図を示す。右下に示されているグラフは、Ｔ細胞を標的とするＬＶＶが、標準ＬＶＶよりも高いレベルでＴ細胞を形質導入し、Ｔ細胞を標的とするＬＶＶが、標準ＬＶＶとは対照的に、外因性活性化抗体（抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８）の存在なしでＴ細胞を形質導入することが可能であることを示す。

【図10】Ｔ細胞を標的とするＬＶＶを生成するために使用された抗ＣＤ３標的タンパク質（ＶＨ－ＶＬ配向及びＶＬ－ＶＨ配向の１２Ｆ６）によるＴ細胞の形質導入効率及びＴ細胞活性化のレベルを示すグラフを示す。

【図11】ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞が、ＢＣＭＡ陽性細胞株との培養後に、Ｔ細胞エフェクターサイトカイン（ＴＮＦα－左、ＴＮＦα及びＩＦＮγ－右）の発現の増加を示し、これが、標準ＬＶＶによって生成されたものであってもＴ細胞再指向型ＬＶＶ（抗ＣＤ３及びＣＤ８０）によって生成されたものであっても、ＢＣＭＡ陰性細胞株では観察されないことを示すグラフを示す。

【図12A】Ｔ細胞を標的とするＬＶＶを使用した導入遺伝子のインビボ送達を示すグラフを示す。Ｔ細胞を標的とするＬＶＶ（抗ＣＤ３及びＣＤ８０）は、ヒト化マウスモデル（ｎ＝５）において、ヒトＴ細胞（ＣＤ３＋）を特異的に形質導入し、ヒトＢ細胞（ＣＤ２０＋）を形質導入しない

【図12B】Ｔ細胞を標的とするＬＶＶを使用した導入遺伝子のインビボ送達を示すグラフを示す。Ｔ細胞を標的とするＬＶＶは、ＣＤ８＋及びＣＤ８－（ＣＤ４）Ｔ細胞の両方を形質導入するのと比較して、標準ＬＶＶではしなかった。

【図13】ＣＤ８０標的ＬＶＶが、標準ＬＶＶと比較して、ＣＤ４Ｔ細胞の形質導入を高めることを示すグラフを示す。

【図14】Ｔ細胞を標的とする（抗ＣＤ３及びＣＤ８０）ＬＶＶが、標準ＬＶＶと比較して、標的Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を形質導入するが、オフターゲット腫瘍細胞（Ｒａｊｉ、Ｒａｍｏｓ、Ｊｅｋｏ－１、及びＮＡＬＭ－６）を形質導入しないことを示すグラフを示す。

【発明を実施するための形態】

【0004】

操作されたレンチウイルスベクターを本明細書に記載する。該レンチウイルスベクターは、変異型、異種エンベロープタンパク質、標的タンパク質、及び少なくとも１つの導入遺伝子を、該標的タンパク質によって特徴づけられる細胞に送達するため、及び該細胞による発現のために含む。いくつかの実施形態では、該標的タンパク質は、例えば、リンパ球またはＴ細胞を含む免疫細胞を標的とするように選択される。ある特定のかかる実施形態では、本明細書に記載のレンチウイルスベクターは、休止リンパ球、例えば、Ｔ細胞を選択的に標的化すること及び効率的に形質導入することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のレンチウイルスベクターは、外因性Ｔ細胞刺激剤の非存在下でＴ細胞を形質導入すること及び／または活性化することが可能である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のレンチウイルスベクターは、標準レンチウイルスベクターと比較して、ＣＤ４Ｔ細胞の形質導入を高める。

【0005】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の変異型ｅｎｖ及び標的タンパク質を組み込んだレンチウイルスベクターは、別の融合性ｅｎｖタンパク質（例えば、球菌ｅｎｖ、パラミクソウイルスｅｎｖ、切断型ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖ）を組み込む標準ＬＶＶと比較して、高力価のＬＶＶ産物を産生することが可能である。

【0006】

同様に提供するのは、本明細書に記載のレンチウイルスベクターを産生するための方法及び材料、標的細胞を形質導入する方法、ならびに本開示に従うレンチウイルスベクターによって形質導入された細胞である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のレンチウイルスベクター及び／またはかかるベクターによって形質導入された細胞は、該ベクターによって送達される導入遺伝子を発現する細胞の存在に応答する疾患または障害の治療に使用され得る。

【0007】

定義
本開示をより詳細に説明する前に、本明細書で使用されるある特定の用語の定義を提供することがその理解に役立ち得る。

【0008】

本明細書において、任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲、または整数範囲は、特に指定のない限り、列挙される範囲内の任意の整数の値を含み、必要に応じて、その分数（例えば、整数の１／１０及び１／１００）を含むものと理解される。また、任意の物理的特性、例えば、ポリマーのサブユニット、サイズまたは厚さに関する本明細書に列挙される任意の数値範囲は、特に指定のない限り、列挙された範囲内の任意の整数を含むと理解される。本明細書で使用される、「約」という用語は、特に指定のない限り、指示された範囲、値、または構造の±２０％を意味する。本明細書で使用される、「ａ」及び「ａｎ」という用語は、列挙される成分のうちの「１つ以上」を指すことを理解されたい。選択肢（例えば、「または」）の使用は、選択肢の一方、両方またはその任意の組み合わせのいずれかを意味することを理解されたい。本明細書で使用される、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「有する」、及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語は、同義で使用され、これらの用語及びその変形は、非限定的と見なされることが意図される。

【0009】

抗体技術の分野の当業者によって理解される用語には、本明細書で明示的に別段の定義がない限り、各々当技術分野で得られる意味が与えられる。「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体を含む。「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖、ならびに標的分子に結合する能力を有するまたは保持する無傷の抗体の抗原結合部分（または抗原結合ドメイン）を含む無傷の抗体を指し得る。抗体は、免疫グロブリンの天然に存在する、組み換え的に産生された、遺伝子操作された、または改変された形態、例えば、細胞内抗体、ペプチボディ、ナノボディ、単一ドメイン抗体、ＳＭＩＰ、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、タンデムジｓｃＦｖ、タンデムトリｓｃＦｖ、ＡＤＡＰＴＩＲ）であり得る。モノクローナル抗体またはその抗原結合部分は、非ヒト、キメラ、ヒト化、またはヒト、好ましくは、ヒト化またはヒトであり得る。免疫グロブリンの構造及び機能は、例えば、Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｈａｐｔｅｒ １４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，１９８８）で概説されている。無傷の抗体の「抗原結合部分」または「抗原結合ドメイン」とは、「抗体断片」を包含することを意図しており、これは、無傷の抗体の一部を指し、無傷の抗体の抗原決定可変領域または相補性決定領域を指す。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、及びＦｖ断片、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、ダイアボディ、線状抗体、ｓｃＦｖ抗体、ＶＨ、ならびに抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるがこれらに限定されない。「Ｆａｂ」（断片抗原結合）は、抗原に結合する抗体の一部であり、鎖間ジスルフィド結合を介して軽鎖に結合した重鎖の可変領域及びＣＨ１を含む。抗体は、ＩｇＧ及びそのサブクラス（ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４）、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、及びＩｇＤを含めた任意のクラスまたはサブクラスのものであり得る。

【0010】

抗体の文脈での「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体を抗原に結合することに関与する、抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（または領域）（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は一般に、同様の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）参照）。抗原結合特異性を付与するためには、単一のＶＨまたはＶＬドメインで十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体を、該抗原に結合する抗体のＶＨまたはＶＬドメインを使用して単離し、それぞれ、相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリをスクリーニングしてもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０－８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）を参照されたい。

【0011】

「相補性決定領域」及び「ＣＤＲ」という用語は、「超可変領域」または「ＨＶＲ」と同義であり、抗原特異性及び／または結合親和性を付与する抗体可変領域内のアミノ酸の不連続配列を指すことが当技術分野で知られている。一般に、各重鎖可変領域には、３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）があり、各軽鎖可変領域には、３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）がある。

【0012】

本明細書で使用される、「結合ドメイン」、「結合領域」、及び「結合部分」という用語は、標的分子（例えば、腫瘍抗原）と特異的かつ非共有結合的に結合する、会合する、合体する、これを認識する、またはこれと化合する能力を有する分子、例えば、ペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質を指す。結合ドメインとしては、生体分子または目的の他の標的に対する、任意の天然に存在する、合成、半合成、または組み換え的に産生された結合パートナーが挙げられる。いくつかの実施形態では、該結合ドメインは、抗原結合ドメイン、例えば、抗体または機能的結合ドメインもしくはその抗原結合部分である。例示的な結合ドメインとしては、一本鎖抗体可変領域（例えば、ドメイン抗体、ｓＦｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ）、受容体外部領域（例えば、ＴＮＦ－α）、リガンド（例えば、サイトカイン、ケモカイン）、または生体分子への特異的結合能力のために選択される合成ポリペプチドが挙げられる。

【0013】

「主要組織適合抗原分子」（ＭＨＣ分子）は、ペプチド抗原を細胞表面に送達する糖タンパク質を指す。ＭＨＣクラスＩ分子は、膜貫通α鎖（３つのαドメインを含む）及び非共有結合したβ２ミクログロブリンで構成されるヘテロ二量体である。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、２つの膜貫通糖タンパク質、すなわち、α及びβで構成されており、どちらも膜を貫通している。各鎖は、２つのドメインを有する。ＭＨＣクラスＩ分子は、サイトゾルに由来するペプチドを細胞表面に送達し、そこで、ペプチド：ＭＨＣ複合体がＣＤ８^＋Ｔ細胞によって認識される。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、小胞系に由来するペプチドを細胞表面に送達し、そこで、それらはＣＤ４^＋Ｔ細胞によって認識される。ＭＨＣ分子は、ヒト、マウス、ラット、または他の哺乳類を含めた様々な動物種に由来し得る。

【0014】

「キメラ抗原受容体」（ＣＡＲ）は、宿主細胞内で自然には生じず、細胞の表面で発現された際に受容体として機能し得る方法で互いに連結された２つ以上の異なるドメインを含むキメラ融合タンパク質を指す。ＣＡＲは一般に、標的抗原に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメイン、任意の細胞外スペーサドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメイン（例えば、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む）、ならびに任意に細胞内共刺激ドメインで構成される。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞内シグナル伝達ドメイン及び細胞内共刺激ドメイン（例えば、４－１ＢＢ）を含むＩＴＡＭ（例えば、ＣＤ３ζ）を有する。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、単一のポリペプチド鎖として合成されるか、または一本鎖ポリペプチドとして核酸分子によってコードされる。

【0015】

特定の標的に特異的に結合する本開示の結合ドメインを同定するため、ならびに結合ドメインの親和性を特定するための様々なアッセイ、例えば、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、分析用超遠心、分光法、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標））分析、及びＭＨＣ四量体分析が知られている（例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０，１９４９、Ｗｉｌｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９５：２１０３，２００２、Ｗｏｌｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：２５６０，１９９３、Ａｌｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７４：９４－９６，１９９６、及び米国特許第５，２８３，１７３号、第５，４６８，６１４号、または同等物も参照のこと）。本明細書で使用される、「特異的に結合する」とは、結合ドメイン、またはその融合タンパク質が、標的分子に対して、１０^５Ｍ^－１以上の親和性またはＫ_ａ（すなわち、１／Ｍを単位とする特定の結合相互作用の平衡結合定数）で結合または合体すると同時に、サンプル中の任意の他の分子または成分とは有意に結合も合体もしないことを指す。

【0016】

「抗原」及び「Ａｇ」という用語は、免疫応答を誘導することが可能な分子を指す。誘導される免疫応答は、抗体産生、特定の免疫適格細胞の活性化、またはその両方を含み得る。タンパク質、糖タンパク質、及び糖脂質を含めた高分子は、抗原として機能し得る。抗原は、組み換えＤＮＡに由来する場合もゲノムＤＮＡに由来する場合もある。本明細書で企図されるように、抗原は、（ｉ）遺伝子の完全長ヌクレオチド配列によってのみコードされる必要も、（ｉｉ）「遺伝子」によってコードされる必要も全くない。抗原は、生成されても合成されてもよく、または抗原は、生体サンプルから得ることもできる。かかる生体サンプルとしては、組織サンプル、腫瘍サンプル、細胞、または生体液を挙げることができるがこれらに限定されない。

【0017】

「エピトープ」または「抗原エピトープ」という用語は、同種免疫結合分子、例えば、抗体もしくはその断片（例えば、ｓｃＦｖ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、ＣＡＲ、または他の結合分子、ドメインもしくはタンパク質が特異的に結合する抗原内の任意の分子、構造、アミノ酸配列またはタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は通常、化学的に活性な分子の表面分類、例えば、アミノ酸または糖側鎖を含み、特定の３次元構造特性及び特定の電荷特性を有し得る。エピトープは、線状エピトープでも立体構造エピトープでもよい。

【0018】

本明細書で使用される、「エフェクタードメイン」は、適切なシグナルを受信した際に、エフェクタードメインを発現する細胞において生物学的または生理学的応答を直接的または間接的に促進することができる融合タンパク質またはキメラ受容体の細胞内部分である。ある特定の実施形態では、エフェクタードメインは、結合時にシグナルを受け取るタンパク質またはタンパク質複合体の一部である。他の実施形態では、エフェクタードメインは、該エフェクタードメインからのシグナルを誘発する標的分子に直接結合するタンパク質またはタンパク質複合体の一部である。例えば、ＣＡＲの標的分子への結合に応答して、該エフェクタードメインは、宿主細胞の内部にシグナルを伝達し、エフェクター機能を誘発し得る。エフェクタードメインが１つ以上のシグナル伝達ドメインまたはモチーフを含む場合、エフェクタードメインは細胞応答を直接促進し得る。他の実施形態では、エフェクタードメインは、細胞応答を直接促進する１つ以上の他のタンパク質と結合することによって、細胞応答を間接的に促進する。

【0019】

「接合部アミノ酸」または「接合部アミノ酸残基」は、ポリペプチドの２つの隣接するモチーフ、領域またはドメイン間の１つ以上（例えば、約２～２０個）のアミノ酸残基を指す。接合部アミノ酸は、キメラタンパク質の構築設計から生じ得る（例えば、融合タンパク質をコードする核酸分子の構築中の制限酵素部位の使用から生じるアミノ酸残基）。

【0020】

「疾患」は、対象が恒常性を維持できない該対象の健康状態であり、該疾患が改善されない場合、該対象の健康状態は悪化し続ける。対照的に、対象における「障害」または「望ましくない状態」とは、該対象が恒常性を維持することはできるが、該対象の健康状態が、該障害または望ましくない状態が存在しない場合よりもよくない健康状態である。治療せずに放置しても、障害または望ましくない状態は、必ずしも該対象の健康状態のさらなる低下をもたらすわけではない。

【0021】

「核酸分子」及び「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡの形態でも、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡを含むＤＮＡの形態でもよい。核酸分子は、天然に存在するヌクレオチド（例えば、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチド）、天然に存在するヌクレオチドのアナログ（例えば、天然に存在するヌクレオチドのα－エナンチオマー型）、またはその両方の組み合わせで構成され得る。修飾ヌクレオチドは、糖部分、またはピリミジンもしくはプリン塩基部分の修飾または置換を有し得る。核酸モノマーは、ホスホジエステル結合またはかかる結合のアナログによって連結され得る。ホスホジエステル結合のアナログとしては、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏａｎｉｌｏｔｈｉｏａｔｅ）、ホスホロアニリデート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｎｉｌｉｄａｔｅ）、ホスホロアミデート等が挙げられる。核酸分子は、二本鎖であっても一本鎖であってもよく、一本鎖の場合は、コード鎖であっても非コード鎖（アンチセンス鎖）であってもよい。コード分子は、当技術分野で知られているコード配列と同一のコード配列を有する場合もあれば、遺伝コードの冗長性もしくは縮重の結果として、またはスプライシングによって、同じポリペプチドをコードすることができる異なるコード配列を有する場合もある。

【0022】

「コードすること」とは、特定のポリヌクレオチド配列、例えば、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、及びｍＲＮＡ配列が、生物学的プロセスにおける規定のヌクレオチド（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及びｍＲＮＡ）の配列または規定のアミノ酸の配列のいずれか及びそれから生じる生物学的特性を有する他のポリマー及び高分子の合成のための鋳型として機能する固有の特性を指す。したがって、ポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドに対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳が、細胞または他の生体系においてタンパク質を産生する場合、該タンパク質をコードする。コード鎖と非コード鎖の両方が、タンパク質またはポリヌクレオチドの他の産物をコードすると言うことができる。特に指定のない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いの縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードするすべてのヌクレオチド配列を含む。

【0023】

本明細書で使用される、「内因性」または「天然」という用語は、宿主または宿主細胞に通常存在する遺伝子、タンパク質、化合物、分子または活性を指し、該遺伝子、タンパク質、化合物、分子、または活性の天然に存在するバリアントを含む。

【0024】

本明細書で使用される、「同種」または「ホモログ」とは、第二の遺伝子または活性に対して、祖先がつながっている宿主細胞からの、例えば、同じ宿主細胞からの、異なる宿主細胞からの、異なる生物からの、異なる株からの、異なる種からの分子または活性を指す。例えば、異種分子または該分子をコードする異種遺伝子は、それぞれ、天然の宿主細胞分子または該分子をコードする遺伝子と同種であってもよく、任意に、変更された構造、配列、発現レベルまたはそれらの任意の組み合わせを有してもよい。

【0025】

本明細書で使用される、「異種」核酸分子、構築物、または配列とは、宿主細胞にとって天然ではないが、該宿主細胞からの核酸分子または核酸分子の一部に対して同種であることができる核酸分子または核酸分子の一部を指す。該異種核酸分子、構築物、または配列の供給源は、異なる属または種に由来し得る。いくつかの実施形態では、該異種核酸分子は天然に存在しない。ある特定の実施形態では、異種核酸分子は、例えば、コンジュゲーション、形質転換、トランスフェクション、形質導入、エレクトロポレーション等によって宿主細胞または宿主ゲノムに追加され（すなわち、内因性でも天然でもない）、追加された分子は、該宿主細胞のゲノムに組み込まれる場合もあれば、染色体外遺伝物質として（例えば、プラスミドまたは他の形態の自己複製ベクターとして）存在する場合もあり、複数のコピーで存在することができる。さらに、「異種」とは、宿主細胞が同種タンパク質または活性をコードする場合であっても、該宿主細胞に導入された非内因性核酸分子によってコードされる非天然の酵素、タンパク質または他の活性を指す。

【0026】

本明細書で使用される、「操作された」、「組み換え」、「変異体」、「改変された」または「非天然」という用語は、異種核酸分子の導入によって改変された生物、微生物、細胞、核酸分子、もしくはベクターを指すか、または人間の介入によって遺伝子操作された、すなわち、異種核酸分子の導入によって改変された細胞もしくは微生物を指すか、または内因性核酸分子もしくは遺伝子の発現が制御されるように、調節解除されるように、もしくは構成的であるように変更された細胞もしくは微生物を指し、ここで、かかる変更または改変は、遺伝子操作によって導入され得る。人間が生み出す遺伝子変化としては、例えば、１つ以上のタンパク質、キメラ受容体、もしくは酵素をコードする核酸分子（プロモーター等の発現制御要素を含み得る）を導入する改変、または他の核酸分子の追加、削除、置換、もしくは細胞の遺伝物質の他の機能破壊もしくは細胞の遺伝物質への付加を挙げることができる。例示的な改変としては、異種または同種ポリペプチドをコードする領域またはその機能的断片における参照分子または親分子からの改変が挙げられる。追加の例示的な改変としては、例えば、改変によって遺伝子またはオペロンの発現が変化する非コード調節領域における改変が挙げられる。

【0027】

本明細書で使用される、「導入遺伝子」という用語は、その発現が宿主細胞で望まれ、それが遺伝子操作技術によって細胞に導入された、目的のタンパク質（例えば、ＣＡＲ）をコードする遺伝子またはポリヌクレオチドを指す。導入遺伝子は、治療目的のタンパク質のほか、レポーター、タグ、マーカー、自殺タンパク質等のタンパク質をコードし得る。導入遺伝子は、天然源、天然遺伝子の改変、または組み換え分子もしくは合成分子に由来し得る。ある特定の実施形態では、導入遺伝子は、ベクターの成分である。

【0028】

用語「過剰発現した」抗原または抗原の「過剰発現」とは、細胞における異常に高いレベルの抗原発現を指す。過剰発現した抗原または抗原の過剰発現は、多くの場合、病態と、例えば、血液悪性腫瘍及び対象の特定の組織または器官内で固形腫瘍を形成する細胞において、関連している。腫瘍抗原の過剰発現を特徴とする固形腫瘍または血液悪性腫瘍は、当技術分野で知られている標準的なアッセイによって特定され得る。

【0029】

本明細書で使用される、「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語は同義で使用され、ペプチド結合によって共有結合したアミノ酸残基で構成される化合物を指す。タンパク質またはペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸を含む必要があり、タンパク質またはペプチド配列を構成することができるアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドには、ペプチド結合によって互いに結合された２つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチドまたはタンパク質が含まれる。本明細書で使用される該用語は、例えば、当技術分野では一般にペプチド、オリゴペプチド及びオリゴマーとも呼ばれる短鎖、及び当技術分野では一般にタンパク質と呼ばれ、多くのタイプが存在するより長い鎖の両方を指す。「ポリペプチド」としては、例えば、生物学的に活性な断片、実質的に同種のポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドのバリアント、改変ポリペプチド、誘導体、アナログ、融合タンパク質が特に挙げられる。該ポリペプチドとしては、天然ペプチド、組み換えペプチド、合成ペプチド、またはそれらの組み合わせが挙げられる。

【0030】

本明細書で使用される、「成熟型ポリペプチド」または「成熟型タンパク質」という用語は、細胞膜内に、またはある特定の細胞小器官（例えば、小胞体、ゴルジ、またはエンドソーム）の内部に分泌されるまたは局在するタンパク質またはポリペプチドを指し、部分的に切断されたＮ末端シグナル配列（例えば、残っているが全シグナル配列には満たないシグナル配列の１つ以上のアミノ酸）を含むか、またはＮ末端シグナル配列を含まない（すなわち、Ｎ末端シグナル配列が、該タンパク質またはポリペプチドから、例えば、内因性切断プロセスによって完全に除去されている）。

【0031】

「シグナル配列」は、「シグナルペプチド」、「リーダー配列」、「リーダーペプチド」、「局在化シグナル」または「局在配列」とも呼ばれ、原形質膜または分泌経路に向かう新たに合成されるタンパク質のＮ末端に存在する短いペプチド（通常は１３～３６アミノ酸長）である。シグナル配列は通常、Ｎ末端の短い一続きの親水性の正電荷アミノ酸、５～１５残基の中央の疎水性ドメイン、及びシグナル配列の切断部位を備えたＣ末端領域を含む。真核生物では、シグナル配列は、新たに合成されたタンパク質の小胞体への転位を促し、そこでシグナルペプチダーゼによって切断され、成熟型タンパク質が生成され、その後それが適切な目的地に進む。シグナル配列の長さ及びアミノ酸組成の多様性が、切断部位を正確に予測することを困難にする。本明細書において、シグナル配列に言及されるポリペプチド配列の開示の場合、シグナル配列が存在しないポリペプチド配列、または部分的なシグナル配列を有するポリペプチド配列もまた企図される。

【0032】

２つ以上の核酸またはアミノ酸配列間の「同一性パーセント」は、ギャップの数、及び２つ以上の配列のアラインメントを最適化するために導入することが必要な各ギャップの長さを考慮した、該配列によって共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、同一性％＝同一の位置の数／全位置数×１００）。配列の比較及び２つ以上の配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズム、例えば、ＢＬＡＳＴ及びＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムをそのデフォルトパラメータを使用して達成され得る（例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３，１９９０、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴのＢＬＡＳＴＮも参照のこと）。

【0033】

「保存的置換」は、当技術分野において、１つのアミノ酸を同様の特性を有する別のアミノ酸に置換することとして認識されている。例示的な保存的置換は、当技術分野で周知である（例えば、１９９７年３月１３日公開のＷＯ９７／０９４３３、１０ページ、Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．ＮＹ：ＮＹ（１９７５），ｐｐ．７１－７７、Ｌｅｗｉｎ，Ｇｅｎｅｓ ＩＶ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ（１９９０），ｐ．８参照）。

【0034】

「キメラ」という用語は、内因性ではなく、自然界では互いに自然に結合または連結して見出されない、互いに結合または連結した配列の組み合わせを含む、任意の核酸分子またはタンパク質を指す。例えば、キメラ核酸分子は、複数の異なる遺伝子からの様々なドメインをコードする核酸を含み得る。別の例では、キメラ核酸分子は、異なる供給源に由来する調節配列及びコード配列を含む場合もあれば、同じ供給源に由来するが自然界に見られるものとは異なる様式で配置された調節配列及びコード配列を含む場合もある。

【0035】

本明細書で使用される、「プロモーター」という用語は、ポリヌクレオチド配列の特異的転写を開始するのに必要な、細胞の合成機構または導入された合成機構によって認識されるＤＮＡ配列として定義される。

【0036】

本明細書で使用される、「プロモーター／調節配列」という用語は、該プロモーター／調節配列に作動可能に連結された遺伝子産物の発現に必要な核酸配列を意味する。場合によっては、この配列はコアプロモーター配列であり、他の例では、この配列は、エンハンサー配列及び遺伝子産物の発現に必要な他の調節要素を含み得る。該プロモーター／調節配列は、例えば、組織特異的な様式で遺伝子産物を発現するものであり得る。

【0037】

「構成的」プロモーターは、遺伝子産物をコードまたは特定するポリヌクレオチドと作動可能に連結された場合、細胞のほとんどまたはすべての生理学的条件下、該細胞で遺伝子産物を産生させるヌクレオチド配列である。

【0038】

「誘導性」プロモーターは、遺伝子産物をコードまたは特定するポリヌクレオチドと作動可能に連結された場合、該プロモーターに対応するインデューサーが細胞に存在する場合にのみ実質的に、該細胞で遺伝子産物を産生させるヌクレオチド配列である。

【0039】

「組織特異的」プロモーターは、遺伝子によってコードされたまたは特定されたポリヌクレオチドと作動可能に連結された場合、細胞が、該プロモーターに対応する組織型の細胞である場合にのみ実質的に、該細胞で遺伝子産物を産生させるヌクレオチド配列である。

【0040】

本明細書で使用される、「転写制御下にある」または「作動可能に連結された」という表現は、プロモーターが、ＲＮＡポリメラーゼによる転写の開始及びポリヌクレオチドの発現を制御するために、ポリヌクレオチドに関して正しい位置及び配向にあることを意味する。

【0041】

「ベクター」とは、別の核酸を輸送することが可能な核酸分子である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス、またはファージであり得る。該用語は、細胞への核酸の導入を促進する非プラスミド及び非ウイルス化合物も含むものとも解釈されるべきである。「発現ベクター」は、それが適切な環境に存在する場合、該ベクターが担持する１つ以上の導入遺伝子によってコードされるタンパク質の発現を指示することが可能なベクターである。本明細書に記載のベクターによって発現される１つ以上の導入遺伝子は、発現カセットにコードされる。

【0042】

「レンチウイルスベクター」は、レンチウイルスに由来するベクターであり、１つ以上のレンチウイルスパッケージングタンパク質、及び／または該ベクターが担持する１つ以上の遺伝子の発現に必要な１つ以上のレンチウイルスタンパク質を含む。略語「ＬＶＶ」は、本明細書では、レンチウイルスベクター（単数形）及び複数のレンチウイルスベクター（複数形）を指すために使用される。

【0043】

「レンチウイルス」とは、分裂細胞及び非分裂細胞に感染することが可能なレトロウイルス属を指す。レンチウイルスの例としては、ＨＩＶ（ＨＩＶ １型及びＨＩＶ ２型を含めたヒト免疫不全ウイルス、ウマ感染性貧血ウイルス、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、及びサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が挙げられるがこれらに限定されない。

【0044】

「レトロウイルス」が指すのは、一本鎖プラス・センスＲＮＡ分子のＲＮＡウイルスである。レトロウイルスは、逆転写酵素及びインテグラーゼ酵素を含む。レトロウイルスは、標的細胞に侵入すると、逆転写酵素を利用して、それらのＲＮＡ分子をＤＮＡ分子に転写する。続いて、該インテグラーゼ酵素が使用され、該ＤＮＡ分子が宿主細胞のゲノムに組み込まれる。該宿主細胞のゲノムに組み込まれた後、レトロウイルス由来の配列は、プロウイルス（例えば、プロウイルス配列またはｐｒｏｖｉｍｓ配列）と呼ばれる。

【0045】

本明細書で使用される、「発現カセット」という用語は、宿主細胞において少なくとも１つの導入遺伝子及びその発現を制御する調節配列（例えば、プロモーター、３’ＵＴＲ）を含むベクター核酸の特有の成分を指す。タンデム発現カセットとは、少なくとも２つの導入遺伝子のタンデム発現のための同じセットの調節配列の制御下にある少なくとも２つの導入遺伝子を含むベクター核酸の成分を指す。ある特定の実施形態では、該タンデム発現カセットは、同じプロモーターの制御下にある少なくとも２つの導入遺伝子を含む。ある特定の実施形態では、該第一の導入遺伝子と第二の導入遺伝子は、単一のｍＲＮＡからの２つのタンパク質の共発現を可能にするために、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、フューリン切断部位、または自己開裂ウイルス２Ａペプチドによって分離されている。

【0046】

「免疫系細胞」または「免疫細胞」という用語は、骨髄内の造血幹細胞に由来する免疫系の任意の細胞を意味する。造血幹細胞は、２つの主要な系統、すなわち、骨髄系前駆細胞（単球、マクロファージ、樹状細胞、巨核球及び顆粒球等の骨髄細胞を生じさせる）及びリンパ球前駆細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞等のリンパ系細胞を生じさせる）を生じさせる。免疫系細胞の例としては、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４－ＣＤ８－ダブルネガティブＴ細胞、γδＴ細胞、制御性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、及び樹状細胞が挙げられる。マクロファージ及び樹状細胞は、「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」とも呼ばれることもあり、これらは、ペプチドと複合体を形成したＡＰＣ表面の主要組織適合抗原（ＭＨＣ）受容体がＴ細胞表面のＴＣＲと相互作用する際にＴ細胞を活性化することができる特殊な細胞である。

【0047】

「リンパ球」という用語は、リンパ球由来の免疫細胞を指し、これらは、赤血球系または骨髄系の細胞から該細胞を区別する、リンパ球またはその前駆体（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）もしくは前駆体（ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ）に特徴的な少なくとも１つの表現型を示す細胞である。「リンパ球」という用語は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を包含する。

【0048】

「Ｔ細胞」という用語は、Ｔ細胞系統の細胞を指す。「Ｔ細胞系統の細胞」とは、他のリンパ系細胞由来の細胞、及び赤血球または骨髄系統の細胞から該細胞を区別する、Ｔ細胞またはその前駆体（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）もしくは前駆体（ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ）に特徴的な少なくとも１つの表現型を示す細胞を指す。かかる表現型の特徴としては、Ｔ細胞に特異的な１つ以上のタンパク質（例えば、ＣＤ３^＋、ＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋）の発現、またはＴ細胞に特異的な生理学的、形態学的、機能的、もしくは免疫学的特徴を挙げることができる。例えば、Ｔ細胞系統の細胞は、Ｔ細胞系統に入れられる前駆（ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ）もしくは前駆（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）細胞、ＣＤ２５^＋未熟及び不活化Ｔ細胞、ＣＤ４もしくはＣＤ８系統関与を受けた細胞、ＣＤ４^＋ＣＤ８^＋二重陽性である胸腺細胞前駆細胞、単一陽性のＣＤ４^＋もしくはＣＤ８^＋、ＴＣＲαβもしくはＴＣＲγδ、または成熟型の機能的もしくは活性化Ｔ細胞であり得る。「Ｔ細胞」という用語は、ナイーブＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ４５ＲＯ－）、セントラルメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－、ＣＤ４５ＲＯ^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋）、エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＣＲ７－、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ２７－）、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、γδＴ細胞、Ｔｒｅｇ、ナチュラルキラーＴ細胞、及び組織常在性Ｔ細胞を包含する。

【0049】

「ナチュラルキラー細胞」または「ＮＫ細胞」という用語は、大顆粒リンパ球（ＬＧＬ）を指し、共通のリンパ球前駆体を生成するＢ及びＴリンパ球から分化した第三の種類の細胞を構成する。ＮＫ細胞は、骨髄、リンパ節、脾臓、扁桃腺、及び胸腺で分化して成熟し、そこで循環に入ることが知られている。ＮＫ細胞は、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）とは表現型、起源、及びそれぞれのエフェクター機能が異なり、多くの場合、ＮＫＴ細胞の活性は、ＩＦＮγを分泌することによってＮＫ細胞の活性を促進する。ＮＫＴ細胞とは対照的に、ＮＫ細胞は、Ｔ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）、汎ＴマーカーＣＤ３または表面免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｂ細胞受容体を発現しないが、ヒトでは通常、表面マーカーＣＤ１６（ＦｃγＲＩＩＩ）及びＣＤ５６を発現し、Ｃ５７ＢＬ／６マウスでは、ＮＫ１．１またはＮＫ１．２を発現する。ヒトＮＫ細胞の最大８０％は、ＣＤ８も発現する。

【0050】

「Ｂ細胞」という用語は、Ｂ細胞系統の細胞を指す。「Ｂ細胞系統の細胞」とは、他のリンパ系細胞由来の細胞、及び赤血球または骨髄系統の細胞から該細胞を区別する、Ｂ細胞またはその前駆体（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）もしくは前駆体（ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ）に特徴的な少なくとも１つの表現型を示す細胞を指す。かかる表現型の特徴としては、Ｂ細胞に特異的な１つ以上のタンパク質（例えば、ＣＤ１９＋、ＣＤ７２＋、ＣＤ２４＋、ＣＤ２０＋、ＣＤ２１＋、ＣＤ２２＋、ＣＤ３８＋、ＣＤ４０＋、ＣＤ７２＋、ＣＤ３２ｂ＋、ＣＤ２６８＋、ＣＤ２６９＋、ＣＤ２６７＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ８０＋、ＣＤ４０＋、ＣＤ５２＋、ＣＤ１３８＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ２１＋、ＣＤ２３＋、ＣＤ８４＋、ＣＤ２５７＋、ＣＤ２７０＋、ＣＤ３７＋、及びＣＤ７４＋のうちの１つ以上が陽性の細胞）の発現、またはＢ細胞に特異的な生理学的、形態学的、機能的、または免疫学的特徴を挙げることができる。例えば、Ｂ細胞系統の細胞は、Ｂ細胞系統に入れられる前駆（ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ）もしくは前駆（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）細胞（例えば、プレプロＢ細胞、プロＢ細胞、及びプレＢ細胞）、未熟及び不活化Ｂ細胞、または成熟型及び機能的もしくは活性化Ｂ細胞であり得る。したがって、「Ｂ細胞」は、ナイーブＢ細胞、形質細胞、制御性Ｂ細胞、辺縁帯Ｂ細胞、濾胞性Ｂ細胞、リンパ形質細胞様細胞、形質芽細胞、及びメモリーＢ細胞（例えば、ＣＤ２７＋、ＩｇＤ－）を包含する。

【0051】

免疫受容体（例えば、ＣＡＲ）をその表面に発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）に関する「細胞傷害活性」という用語は、「細胞溶解活性」とも呼ばれ、抗原特異的シグナル伝達（例えば、該ＣＡＲを介した）の際に、該細胞が、標的細胞がアポトーシスを起こすように誘導することを意味する。いくつかの実施形態では、細胞傷害性細胞は、顆粒からの細胞毒素、例えば、パーフォリン、グランザイム、及びグラニュリシンの放出を介して、標的細胞においてアポトーシスを誘導し得る。パーフォリンは、標的の細胞膜に挿入されて孔が形成され、それにより、水及び塩が急速に標的細胞に侵入する。グランザイムは、セリンプロテアーゼであり、標的細胞にアポトーシスを誘導する。グラニュリシンもまた、標的の細胞膜に孔を形成することが可能であり、炎症性分子である。いくつかの実施形態では、細胞傷害性細胞は、抗原特異的シグナル伝達の後にＴ細胞上で上方制御されるＦａｓリガンドと、該標的細胞上で発現されるＦａｓ分子との相互作用を介して、標的細胞においてアポトーシスを誘導し得る。Ｆａｓは、いくつかの異なる細胞の表面にあるアポトーシスシグナル伝達受容体分子である。

【0052】

「疾患」は、対象が恒常性を維持できない該対象の健康状態であり、該疾患が改善されない場合、該対象の健康状態は悪化し続ける。対照的に、対象における「障害」または「望ましくない状態」とは、該対象が恒常性を維持することはできるが、該対象の健康状態が、該障害または望ましくない状態が存在しない場合よりもよくない健康状態である。治療せずに放置しても、障害または望ましくない状態は、必ずしも該対象の健康状態のさらなる低下をもたらすわけではない。

【0053】

本明細書で使用される、「がん」という用語は、異常な細胞の急速かつ制御されない増殖を特徴とする疾患として定義される。該異常な細胞は、固形腫瘍を形成する場合もあれば、血液悪性腫瘍を構成する場合もある。がん細胞は、局所的に広がることもあれば、血流及びリンパ系を通って体の他の部分に広がることもある。様々ながんの例としては、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、皮膚癌、膵臓癌、結腸直腸癌、腎臓癌、肝臓癌、脳癌、リンパ腫、白血病、肺癌等が挙げられるがこれらに限定されない。

【0054】

「対象」、「患者」及び「個体」という用語は、本明細書では同義で使用され、免疫応答が誘発され得る生存生物（例えば、哺乳類）を含むことが意図される。対象の例としては、ヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタ、及びそれらのトランスジェニック種が挙げられる。

【0055】

「養子細胞免疫療法」または「養子免疫療法」とは、天然に存在する、または遺伝子操作された疾患抗原特異的免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の投与を指す。養子細胞免疫療法は、自己（免疫細胞はレシピエント由来）、同種異系（免疫細胞は同じ種のドナー由来）または同系（免疫細胞はレシピエントと遺伝的に同一のドナーからのもの）であり得る。

【0056】

「自己」とは、後に再導入される同じ対象に由来する移植片（例えば、臓器、組織、細胞）を指す。

【0057】

「同種」とは、同じ種の異なる対象に由来する移植片を指す。

【0058】

本明細書に記載のレンチウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターによって形質導入された細胞（例えば、レンチウイルスベクターの導入遺伝子によってコードされるＣＡＲを発現するＴ細胞）の「治療有効量」または「有効量」とは、治療される疾患、障害、または望ましくない状態の１つ以上の症状の改善をもたらすのに十分なレンチウイルス粒子または細胞の量を指す。

【0059】

「治療する」または「治療」または「改善する」とは、対象の疾患、障害、または望ましくない状態の医療管理を指す。一般に、本開示のレンチウイルスベクターまたはＣＡＲを発現する細胞を含む適切な用量または治療レジメンは、治療効果または予防効果を引き出すのに十分な量で投与される。治療効果または予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）／予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ）効果としては、臨床転帰の改善、疾患、障害、もしくは望ましくない状態と関連する症状の緩和もしくは軽減、症状の発生の減少、生活の質の改善、無病状態の延長、疾患、障害、もしくは望ましくない状態の程度の減少、病態の安定化、疾患進行の遅延、寛解、生存、生存期間の延長、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。

【0060】

「抗腫瘍効果」という用語は、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞数の減少、転移数の減少、平均余命の延長、またはがん性状態と関連する様々な生理的症状の改善により明らかになり得る生物学的効果を指す。「抗腫瘍効果」は、血液悪性腫瘍または腫瘍形成の予防によっても明らかになり得る。

【0061】

さらなる定義は、本開示を通して提供される。

【0062】

レンチウイルスベクター
レンチウイルスは、宿主ゲノムに組み込まれる能力により、通常、ゆっくりと進行する疾患を引き起こすレトロウイルスの属である。改変されたレンチウイルスゲノムは、宿主細胞に核酸を送達するためのウイルスベクターとして有用である。

【0063】

本開示は、変異型の異種エンベロープタンパク質を含むウイルスエンベロープ及び指向性を特徴づける分子（「標的タンパク質」とも呼ばれる）を含む自己不活性化レンチウイルスベクター（「ＬＶＶ」）を提供する。本明細書に記載のＬＶＶは、さらに導入遺伝子を含み、該ＬＶＶは、標的免疫細胞に特異的に結合すること、及び該導入遺伝子が該免疫細胞によって発現されるように該標的免疫細胞を形質導入することが可能である。いくつかの実施形態では、該ＬＶＶは、２つ以上の導入遺伝子を担持し得る。さらなる特定の実施形態では、該導入遺伝子は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする。

【0064】

変異型ウイルスエンベロープタンパク質
本明細書に記載のレンチウイルスベクターは、変異が存在しない場合、細胞付着と膜融合の両方を媒介する、変異型異種ウイルスエンベロープタンパク質でシュードタイプ化されている。特定の実施形態では、該変異型エンベロープタンパク質は、エンベロープタンパク質の融合特性を保存しながら、エンベロープタンパク質がその天然の標的に結合する能力を阻害する少なくとも１つの変異を含む。特定の実施形態では、該異種エンベロープタンパク質は、１つ以上の変異を含む水疱性口内炎ウイルスＧタンパク質（「ＶＳＶ－Ｇ」、「ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質」または「ＶＳＶ－Ｇタンパク質」）であり、該変異は、ＶＳＶ－Ｇタンパク質の融合機能を保存しながら、ＶＳＶ－Ｇの低密度リポタンパク質受容体（「ＬＤＬ－Ｒ」）への結合を阻害する。

【0065】

該エンベロープタンパク質がその天然の標的に結合する能力に言及する場合、「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）」及び「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔｓ）」という用語は、エンベロープタンパク質によるその天然の標的への結合の完全な排除と、該エンベロープタンパク質によるその天然の標的への結合の有意な減少の両方を包含する。特定の実施形態では、「有意な減少」とは、該天然の標的に対する結合の少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６０％、少なくとも５５％、少なくとも５０％、少なくとも４５％、少なくとも４０％、少なくとも３５％、少なくとも３０％、少なくとも２５％、少なくとも２０％、少なくとも１５％、及び少なくとも１０％の減少から選択される減少を指す。

【0066】

表１０に示す核酸配列及びアミノ酸配列は、野生型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質の参照配列、及び本開示に従う変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質の例を提供する。配列番号７７は、該ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質をコードする参照核酸配列であり、配列番号７８は、参照ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質のアミノ酸配列である。配列番号８７は、該参照ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質の切断可能なシグナルペプチドをコードする核酸配列である。配列番号８８は、該参照ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質の切断可能なシグナルペプチドのアミノ酸配列である。配列番号８９は、該シグナル配列が欠けている、ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質をコードする参照核酸配列である。配列番号９０は、該配列が欠けている、参照ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質のアミノ酸配列である。本明細書に開示するＶＳＶ－Ｇ変異の位置及び性質は、配列番号８７のＮ末端シグナル配列が欠けている配列番号７７、及び配列番号８８のＮ末端シグナル配列が欠けている配列番号７８によってそれぞれ示される、核酸配列及びアミノ酸配列を参照して記載される。したがって、変異位置を特定する目的でのＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖアミノ酸配列の１位への言及は、配列番号７８の野生型ＶＳＶ－Ｇアミノ酸配列のリジン（Ｋ）である１７位、または配列番号９０の野生型ＶＳＶ－Ｇアミノ酸配列の１位を指す。

【0067】

いくつかの実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、変異をアミノ酸位置Ｈ８、Ｎ９、Ｑ１０、Ｋ４７、Ｋ５０、Ａ５１、Ｓ１８３、Ｓ１７９、Ｎ１８０、Ｉ１８２、Ｍ１８４、Ｙ２０９、Ｉ３４７、Ｔ３５０、Ｔ３５２、Ｅ３５３、Ｒ３５４に、ＴＴの挿入をＮ９とＱ１０の間に、ＧＧＳの挿入をＨ８とＮ９の間に、ＧＧＳの挿入をＮ９とＱ１０の間に、ＴＴの挿入をＮ２０８とＹ２０９の間に、ＧＧＳの挿入をＰ４６とＫ４７の間に、ＧＧＳの挿入をＮ２０８とＹ２０９の間に、及び／または残基１～８の欠失を含む。ある特定の実施形態では、該ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、２つ以上の変異をＨ８、Ｎ９、Ｑ１０、Ｋ４７、Ｋ５０、Ａ５１、Ｓ１８３、Ｓ１７９、Ｎ１８０、Ｉ１８２、Ｍ１８４、Ｙ２０９、Ｉ３４７、Ｔ３５０、Ｔ３５２、Ｅ３５３、Ｒ３５４から選択されるアミノ酸位置に、ＴＴの挿入をＮ９とＱ１０の間に、ＧＧＳの挿入をＨ８とＮ９の間に、ＧＧＳの挿入をＮ９とＱ１０の間に、ＴＴの挿入をＮ２０８とＹ２０９の間に、ＧＧＳの挿入をＰ４６とＫ４７の間に、ＧＧＳの挿入をＮ２０８とＹ２０９の間に、及び残基１～８の欠失を含む。他の実施形態では、該ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、３つ以上の変異をＨ８、Ｎ９、Ｑ１０、Ｋ４７、Ｋ５０、Ａ５１、Ｓ１８３、Ｓ１７９、Ｎ１８０、Ｉ１８２、Ｍ１８４、Ｙ２０９、Ｉ３４７、Ｔ３５０、Ｔ３５２、Ｅ３５３、Ｒ３５４から選択されるアミノ酸位置に、ＴＴの挿入をＮ９とＱ１０の間に、ＧＧＳの挿入をＨ８とＮ９の間に、ＧＧＳの挿入をＮ９とＱ１０の間に、ＴＴの挿入をＮ２０８とＹ２０９の間に、ＧＧＳの挿入をＰ４６とＫ４７の間に、ＧＧＳの挿入をＮ２０８とＹ２０９の間に、及び残基１～８の欠失を含む。他の実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、Ｈ８Ａ、Ｋ４７Ａ、Ｋ４７Ｑ、Ｙ２０９Ａ、Ｒ３５４Ａ、及び／またはＲ３５４Ｑの変異を含む。さらに他の実施形態では、該ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、Ｎ９、Ｑ１０、Ｋ５０、Ａ５１、Ｓ１８３、Ｓ１７９、Ｎ１８０、Ｉ１８２、Ｍ１８４、Ｉ３４７、Ｔ３５０、Ｔ３５２、及びＥ３５３から選択される１つ以上の変異、ＴＴの挿入をＮ９とＱ１０の間に、ＧＧＳの挿入をＨ８とＮ９の間に、ＧＧＳの挿入をＮ９とＱ１０の間に、ＴＴの挿入をＮ２０８とＹ２０９の間に、ＧＧＳの挿入をＰ４６とＫ４７の間に、ＧＧＳの挿入をＮ２０８とＹ２０９の間に、及び残基１～８の欠失を含む。さらに他の実施形態では、該ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、Ｎ９、Ｑ１０、Ｋ５０、Ａ５１、Ｓ１８３、Ｓ１７９、Ｎ１８０、Ｉ１８２、Ｍ１８４、Ｉ３４７、Ｔ３５０、Ｔ３５２、及びＥ３５３のうちの１つ以上での変異から選択される２つ以上の変異、ＴＴの挿入をＮ９とＱ１０の間に、ＧＧＳの挿入をＨ８とＮ９の間に、ＧＧＳの挿入をＮ９とＱ１０の間に、ＴＴの挿入をＮ２０８とＹ２０９の間に、ＧＧＳの挿入をＰ４６とＫ４７の間に、ＧＧＳの挿入をＮ２０８とＹ２０９の間に、及び残基１～８の欠失を含む。いくつかの実施形態では、変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、Ｈ８Ａ、Ｎ９Ａ、Ｑ１０Ａ、Ｋ４７Ａ、Ｋ４７Ｑ、Ｎ１８０Ａ、Ｉ１８２Ａ、Ｙ２０９Ａ、Ｔ３５２Ａ、Ｔ３５２Ｗ、Ｅ３５３Ａ、Ｒ３５４Ａ、及びＲ３５４Ｑの変異のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、Ｈ８Ａ、Ｋ４７Ａ、Ｋ４７Ｑ、Ｙ２０９Ａ、Ｒ３５４Ａ、及びＲ３５４Ｑの変異のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、Ｋ４７の変異及びＲ３５４の変異を含む。いくつかの実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、Ｋ４７Ｑの変異及びＲ３５４Ａの変異を含む。いくつかの実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、Ｎ１８０の変異、Ｉ１８２の変異、Ｔ３５２の変異、及びＥ３５３の変異を含む。いくつかの実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、Ｎ１８０Ａの変異、Ｉ１８２Ａの変異、Ｔ３５２Ａの変異、及びＥ３５３Ａの変異を含む。いくつかの実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、Ｔ３５２の変異及びＥ３５３の変異を含む。さらなる実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、Ｔ３５２Ｗの変異及びＥ３５３Ａの変異を含む。いくつかの実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、Ｎ９の変異、Ｑ１０の変異、及びＮ１８０の変異を含む。いくつかの実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、Ｎ９Ａの変異、Ｑ１０Ａの変異、及びＮ１８０Ａの変異を含む。いくつかの実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、ＧＧＳの挿入をＨ８とＮ９の間に、及びＧＧＳの挿入をＮ９とＱ１０の間に含む。いくつかの実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、ＴＴの挿入をＮ９とＱ１０の間に含む。いくつかの実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、ＧＧＳの挿入をＰ４６とＫ４７の間に含む。他の実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、Ｎｉｋｏｌｉｃ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ＬＤＬ－ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆａｍｉｌｙ ｍｅｍｂｅｒｓ ｂｙ ＶＳＶ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ．”Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍ．，２０１８，９：１０２９に記載されている通りであり、その関連する開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0068】

特定の実施形態では、該変異型ＶＳＶエンベロープタンパク質は、Ｋ４７Ｑの変異及びＲ３５４Ａの変異を含む。特定の実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、配列番号７４に従うアミノ酸配列を有する。

【0069】

特定の実施形態では、該変異型ＶＳＶエンベロープタンパク質は、Ｎ１８０Ａの変異、Ｉ１８２Ａの変異、Ｔ３５２Ａの変異、及びＥ３５３Ａの変異を含む。特定の実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、配列番号９３に従うアミノ酸配列を有する。

【0070】

特定の実施形態では、該変異型ＶＳＶエンベロープタンパク質は、Ｔ３５２Ｗの変異及びＥ３５３Ａの変異を含む。特定の実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、配列番号９５に従うアミノ酸配列を有する。

【0071】

特定の実施形態では、該変異型ＶＳＶエンベロープタンパク質は、Ｎ９Ａの変異、Ｑ１０Ａの変異、及びＮ１８０Ａの変異を含む。特定の実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、配列番号９７に従うアミノ酸配列を有する。

【0072】

特定の実施形態では、該変異型ＶＳＶエンベロープタンパク質は、Ｎ９とＱ１０の間にＴＴの挿入変異を含む。特定の実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、配列番号９９に従うアミノ酸配列を有する。

【0073】

特定の実施形態では、該変異型ＶＳＶエンベロープタンパク質は、Ｐ４６とＫ４７の間にＧＧＳの挿入変異を含む。特定の実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、配列番号１０１に従うアミノ酸配列を有する。

【0074】

特定の実施形態では、該変異型ＶＳＶエンベロープタンパク質は、ＧＧＳの挿入をＨ８とＮ９の間に、及びＧＧＳの挿入をＮ９とＱ１０の間に含む。特定の実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質は、配列番号１０３に従うアミノ酸配列を有する。

【0075】

標的タンパク質
標的タンパク質は、ウイルスエンベロープ上に提示される膜結合タンパク質であり、リンパ球を標的とするドメインを含む細胞外ドメイン及び膜貫通ドメインを含む。リンパ球を標的とするドメインは、あるアミノ酸配列を有する任意のタンパク質またはペプチドであり、標的リンパ球細胞表面上の標的分子またはリガンド（例えば、同種タンパク質またはリガンド）の結合パートナーである。いくつかの実施形態では、リンパ球を標的とするドメインは、Ｔ細胞を標的とするドメインである。いくつかの実施形態では、リンパ球を標的とするドメインは、ＮＫ細胞を標的とするドメインである。いくつかの実施形態では、リンパ球を標的とするドメインは、Ｂ細胞を標的とするドメインである。例えば、ある特定の実施形態では、該標的タンパク質の細胞外ドメインは、リンパ球を標的とするドメインを含み、該ドメインは、規定の細胞集団、例えば、該細胞表面の標的タンパク質またはリガンドの存在を特徴とするリンパ球の集団の表面の該タンパク質またはリガンドに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、リンパ球を標的とするドメインは、特定の型のリンパ球、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を標的とする。いくつかの実施形態では、該標的タンパク質は、さらに、該膜貫通ドメインと該細胞外ドメインとの間に位置する細胞外リンカーまたはヒンジドメインを含む。

【0076】

いくつかの実施形態では、該標的タンパク質は、完全長の細胞表面タンパク質または受容体であり、各成分（例えば、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインの各々）は、単一のタンパク質または受容体に由来する。他の実施形態では、該標的タンパク質は、キメラタンパク質であり、異なるタンパク質または受容体に由来する少なくとも２つの成分を有する。いくつかの実施形態では、該標的タンパク質は、ヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、及びブタを含む哺乳類種から得られる。いくつかの実施形態では、該標的タンパク質は、完全ヒト配列である。いくつかの実施形態では、該標的タンパク質は、ヒト配列成分（複数可）及び別の種に由来する成分（複数可）または合成成分（複数可）を含むキメラ配列である。いくつかの実施形態では、キメラ標的タンパク質は、完全合成タンパク質であり得る。さらに他の実施形態では、キメラ標的タンパク質は、細胞外ドメイン、細胞外結合ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞内ドメイン、ヒンジドメイン、または完全合成タンパク質であるリンカーのうちの１つ以上を含み得る。

【0077】

いくつかの実施形態では、該リンパ球を標的とするドメインは、抗体を含む。かかる実施形態では、該細胞外標的指向性ドメインは、完全長抗体、抗体断片、ナノボディ、または一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）であり得る。

【0078】

特定の実施形態では、該標的指向性分子は、Ｔ細胞を標的とするドメインを含み、該ドメインは、例えば、Ｔ細胞抗原、Ｔ細胞表面受容体、または標的Ｔ細胞の表面に存在する任意の他のタンパク質を含めた、Ｔ細胞表面マーカーに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、該標的タンパク質は、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ８０、４－１ＢＢ、ＡｈＲ、ＣＤ３、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ４４、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４７、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６９、ＣＤ９４、ＣＤ９５、ＣＤ１２７、ＣＤ１６１、ＣＤ１８３（ＣＸＣＲ３）、ＣＤ１８４（ＣＸＣＲ４）、ＣＤ１８５（ＣＸＣＲ５）、ＣＤ１９３（ＣＣＲ３）、ＣＤ１９４（ＣＣＲ４）、ＣＤ１９５（ＣＣＲ５）、ＣＤ１９６（ＣＣＲ６）、ＣＤ１９７（ＣＣＲ７）、ＣＣＲ１０、ＰＤ－１、ＴＣＲａ／ｂ、ＣＤ５、ＣＤ２７、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ５７、ＣＤ１０３、ＣＤ１２２、Ｐ２ＲＸ７、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＩＬ６ＳＴ、及びそれらの任意の組み合わせから選択されるＴ細胞マーカーに特異的に結合する。

【0079】

さらなる実施形態では、該標的タンパク質は、γδＴＣＲ、Ｖデルタ１、Ｖデルタ２、ＮＫＧ２Ｄ（ＫＬＲＫ１、ＣＤ３１４）、及びそれらの任意の組み合わせから選択されるγδＴ細胞マーカーに特異的に結合する。

【0080】

他の実施形態では、該標的タンパク質は、インバリアントＴＣＲ（Ｖａ２４－Ｊａ１８）、ＣＤ１８５（ＣＸＣＲ５）、ＣＸＣＲ６、ＩＬ－２１Ｒ、及びそれらの任意の組み合わせから選択されるＮＫ Ｔ細胞マーカーに特異的に結合する。

【0081】

他の実施形態では、該標的タンパク質は、Ｖａ７．２、Ｊａ３３、ＣＸＣＲ６、ＩＬ－１８Ｒ、ＫＬＲＢ１（ＣＤ１６１）、ＶＬＡ４（アルファ４ベータ１インテグリン）、及びそれらの任意の組み合わせから選択されるＭＡＩＴ細胞マーカーに特異的に結合する。

【0082】

他の実施形態では、該標的タンパク質は、ＣＤ５６、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６、ＫＩＲ（複数可）、ＮＫＧ２タンパク質（例えば、ＮＫＧ２Ｄ（ＫＬＲＫ１、ＣＤ３１４））、ＫＬＲＢ１（ＣＤ１６１）、ＫＬＲＤ１（ｃｄ９４）、ＩＬ２Ｒｂ（ＣＤ１２２）、ＩＬ－２１Ｒ、ＳＬＡＭＦ６（ＣＤ３５２）、ＳＬＡＭＦ７（ＣＤ３１９）、ＩＬ－１８Ｒ、及びそれらの任意の組み合わせから選択されるＮＫ細胞マーカーに特異的に結合する。

【0083】

他の実施形態では、該標的タンパク質は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ７２、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ２６８、ＣＤ２６９、ＣＤ２６７、ＣＤ８６、ＣＤ８０、ＣＤ５２、ＣＤ１３８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２３、ＣＤ８４、ＣＤ２５７、ＣＤ２７０、ＣＤ３７、ＣＤ７４、及びＣＤ２６９、ならびにそれらの任意の組み合わせから選択されるＢ細胞マーカーに特異的に結合する。

【0084】

実施形態では、該標的タンパク質は、ＣＤ８０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、及びそれらの任意の組み合わせから選択されるリンパ球マーカー（例えば、Ｂ細胞及びＴ細胞）に特異的に結合する。

【0085】

該標的タンパク質のいくつかの実施形態では、リンカーは、該膜貫通ドメインと該リンパ球を標的とするドメインとの間に位置する。リンカーは、アミノ酸リンカーであり、剛直なリンカー、柔軟なリンカー、またはオリゴマー化リンカーであり得る。剛直なリンカーは、柔軟性に欠けるアミノ酸配列である（例えば、少なくとも１つのプロリンを含み得る）。いくつかの実施形態では、剛直なリンカーは、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）柄またはＣＤ８ａ柄を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤＧＦＲ柄は、ＡＶＧＱＤＴＱＥＶＩＶＶＰＨＳＬＰＦＫ（配列番号１０４）を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤＧＦＲ柄は、ＡＳＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＡＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＫ（配列番号１０５）を含むアミノ酸配列を含む。

【0086】

柔軟なリンカーは、多くの自由度を有するアミノ酸配列である（例えば、小さな側鎖を有する複数のアミノ酸、例えば、グリシンまたはアラニンを含み得る）。いくつかの実施形態では、柔軟なリンカーは、ＧＡＰＧＡＳを含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、柔軟なリンカーは、ＧＡＰＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＳ（配列番号１０６）からなるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、柔軟なリンカーは、ＧＧＧＧＳを含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、柔軟なリンカーは、ＧＧＧＳを含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、柔軟なリンカーは、（ＧＡＰＧＡＳ）_Ｎ、（Ｇ_３Ｓ）_Ｎ、または（Ｇ_４Ｓ）_Ｎを含むアミノ酸配列を含み、ここで、Ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上である。

【0087】

オリゴマー化リンカーは、別の関連アミノ酸にオリゴマー化され得るアミノ酸である。いくつかの実施形態では、オリゴマー化リンカーは、二量体、三量体、または四量体を形成し得るアミノ酸配列である。いくつかの実施形態では、オリゴマー化リンカーは、ＩｇＧ４ヒンジドメイン（例えば、ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＶＧＱＤＴＱＥＶＩＶＶＰＨＳＬＰＦＫ（配列番号１０７））を含む。いくつかの実施形態では、オリゴマー化リンカーは、四量体コイルドコイルを形成し得るアミノ酸配列（例えば、ＡＳＧＧＧＧＳＧＥＬＡＡＩＫＱＥＬＡＡＩＫＫＥＬＡＡＩＫＷＥＬＡＡＩＫＱＧＡＧ（配列番号１０８））を含む。いくつかの実施形態では、オリゴマー化リンカーは、二量体コイルドコイルを形成し得るアミノ酸配列（例えば、ＡＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰ（配列番号１０９））を含む。

【0088】

該標的タンパク質は、通常、シグナル配列（局在配列のシグナルペプチドとも呼ばれる）を含む。該シグナル配列は、該標的タンパク質のＮ末端またはＣ末端に位置し得る。シグナル配列は、該標的タンパク質を、該レンチウイルスベクターのエンベロープとして機能する膜に移動させるように機能する。本明細書に記載の標的タンパク質に含まれ得るシグナル配列の非限定的な例としては、Ｉｇカッパリーダー配列（例えば、ＭＥＴＤＴＬＬＬＷＶＬＬＬＷＶＰＧＳＴＧ（配列番号１１０）を含むマウスＩｇカッパリーダー配列、ＣＤ８ａシグナルペプチド配列（例えば、ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰ（配列番号１２）を含むＣＤ８ａシグナルペプチド）、及びＢ２Ｍシグナルペプチド配列（例えば、ＭＳＲＳＶＡＬＡＶＬＡＬＬＳＬＳＧＬＥＡ（配列番号１２３）を含むＢ２Ｍシグナルペプチド配列）が挙げられる。ある特定の実施形態では、成熟型標的タンパク質は、該完全長シグナル配列の１つ以上のアミノ酸を保持する、部分的に切断されたシグナル配列を有する。他の実施形態では、シグナルペプチダーゼによる切断により、シグナル配列が完全に除去され、シグナル配列が完全に欠如した成熟型標的タンパク質が得られる。

【0089】

いくつかの実施形態では、該標的タンパク質は、ＣＤ８０タンパク質である。該標的タンパク質がＣＤ８０タンパク質である場合、それは、配列番号６に従う細胞外ドメインを含み得る。かかる実施形態では、ＣＤ８０タンパク質は、配列番号４に従うシグナルペプチドならびに配列番号８に従う膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインと、を含み得る。特定の実施形態では、本明細書に記載のレンチウイルスベクターに含まれるＣＤ８０標的タンパク質は、配列番号２に従うアミノ酸配列、または配列番号４のシグナルペプチドが欠けている配列番号２に従うアミノ酸配列を含む。

【0090】

いくつかの実施形態では、該標的タンパク質がＣＤ８０タンパク質の場合、それは、配列番号６に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する細胞外ドメインを含み得る。かかる実施形態では、ＣＤ８０タンパク質は、配列番号４に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するシグナルペプチド、及び／または配列番号８に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する膜貫通及び細胞内ドメインを含み得る。特定の実施形態では、本明細書に記載のレンチウイルスベクターに含まれるＣＤ８０標的タンパク質は、配列番号２に対して、または配列番号４のシグナルペプチドが欠けている配列番号２に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【表1-1】

【表1-2】

【0091】

いくつかの実施形態では、ＣＤ８０標的タンパク質を含むレンチウイルスベクターは、標準ＬＶＶによる形質導入と比較して、全ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の相対パーセンテージとして、ＣＤ８Ｔ細胞よりも高いＣＤ４Ｔ細胞の形質導入を示す。本明細書で使用される、「標準レンチウイルスベクター」または「標準ＬＶＶ」は、本開示の変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質及びリンパ球を標的とするタンパク質を含まないレンチウイルスベクターを指す。いくつかの実施形態では、標準ＬＶＶは、第３世代のＬＶＶパッケージング系を使用して生成される。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０標的タンパク質を含むレンチウイルスベクターは、全ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の相対パーセンテージとして、標準ＬＶＶと比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれ以上、ＣＤ８Ｔ細胞よりもＣＤ４Ｔ細胞の形質導入を高める。

【0092】

いくつかの実施形態では、該標的タンパク質は、抗ＣＤ３標的タンパク質である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３標的タンパク質は、抗体またはその結合断片であり、例えば、ｓｃＦｖを含む。該標的タンパク質が抗ＣＤ３標的タンパク質である場合、それは、配列番号１４に従う軽鎖可変領域を有する抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ、配列番号１６に従うＧ_３Ｓリンカー、及び配列番号１８に従う重鎖可変領域を含み得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３標的タンパク質は、配列番号１１５に従う軽鎖可変領域を有する抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ、配列番号１６に従うＧ_３Ｓリンカー、及び配列番号１１３に従う重鎖可変領域を含み得る。記載の抗ＣＤ３標的タンパク質は、配列番号１２に従うシグナルペプチド、ならびに配列番号２０に従うヒンジ及び膜貫通ドメインを含み得る。特定の実施形態では、本明細書に記載のレンチウイルスベクターに含まれる抗ＣＤ３標的タンパク質は、配列番号１０に従うアミノ酸配列、または配列番号１２のシグナルペプチドが欠けている配列番号１０に従うアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、本明細書に記載のレンチウイルスベクターに含まれる抗ＣＤ３標的タンパク質は、配列番号１１７に従うアミノ酸配列、または配列番号１２のシグナルペプチドが欠けている配列番号１１７に従うアミノ酸配列を含む。

【0093】

いくつかの実施形態では、該標的タンパク質が抗ＣＤ３標的タンパク質である場合、それは、配列番号１４に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する軽鎖可変領域、及び配列番号１８に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する重鎖可変領域を有する抗ＣＤ３ ｓｃＦｖを含み得る。記載の抗ＣＤ３標的タンパク質は、配列番号１２に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するシグナルペプチド、及び配列番号２０に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するヒンジ及び膜貫通ドメインを含み得る。特定の実施形態では、本明細書に記載のレンチウイルスベクターに含まれる抗ＣＤ３標的タンパク質は、配列番号１０、または配列番号１２のシグナルペプチドが欠けている配列番号１０に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0094】

いくつかの実施形態では、該標的タンパク質が抗ＣＤ３標的タンパク質である場合、それは、配列番号１１５に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する軽鎖可変領域、及び配列番号１１３に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する重鎖可変領域を有する抗ＣＤ３ ｓｃＦｖを含み得る。記載の抗ＣＤ３標的タンパク質は、配列番号１２に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するシグナルペプチド、及び配列番号２０に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するヒンジ及び膜貫通ドメインを含み得る。特定の実施形態では、本明細書に記載のレンチウイルスベクターに含まれる抗ＣＤ３標的タンパク質は、配列番号１１７、または配列番号１２のシグナルペプチドが欠けている配列番号１１７に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【表2-1】

【表2-2】

【表2-3】

【表2-4】

【0095】

なおさらなる実施形態では、本明細書に従うレンチウイルスベクターは、複数の標的タンパク質、または複数の異なるリンパ球を標的とするドメインを有する単一の標的タンパク質を含み得る。例えば、本明細書に記載のレンチウイルスベクターは、少なくとも２つの標的タンパク質を含むことができ、該標的タンパク質の各々は、異なる標的に特異的に結合するＮＫ細胞を標的とするドメインを有する。別の例では、本明細書に記載のレンチウイルスベクターは、少なくとも２つの標的タンパク質を含むことができ、該標的タンパク質の各々は、異なる標的に特異的に結合するＴ細胞を標的とするドメインを有する。別の例では、本明細書に記載のレンチウイルスベクターは、少なくとも２つの標的タンパク質を含むことができ、該標的タンパク質の各々は、異なる標的に特異的に結合するＢ細胞を標的とするドメインを有する。さらに別の例では、本明細書に記載のレンチウイルスベクターは、少なくとも２つの標的タンパク質を含むことができ、第一の標的タンパク質は、Ｔ細胞を標的とするドメインを有し、第二の標的タンパク質は、ＮＫ細胞を標的とするドメインを有する。さらに別の例では、本明細書に記載のレンチウイルスベクターは、少なくとも２つの標的タンパク質を含むことができ、第一の標的タンパク質は、Ｔ細胞を標的とするドメインを有し、第二の標的タンパク質は、Ｂ細胞を標的とするドメインを有する。さらに別の例では、本明細書に記載のレンチウイルスベクターは、少なくとも２つの標的タンパク質を含むことができ、第一の標的タンパク質は、Ｂ細胞を標的とするドメインを有し、第二の標的タンパク質は、ＮＫ細胞を標的とするドメインを有する。代替的な実施形態では、本明細書に記載のレンチウイルスベクターは、２つ以上の異なるリンパ球を標的とするドメイン、２つ以上の異なるＴ細胞を標的とするドメイン、２つ以上の異なるＮＫ細胞を標的とするドメイン、または２つ以上の異なるＢ細胞を標的とするドメインを有する単一の標的タンパク質を含む（例えば、二重特異性または多重特異性標的タンパク質）。任意のかかる実施形態では、該標的タンパク質に含まれるＴリンパ球を標的とするドメインは、本明細書に記載のもののいずれかから選択され得る。さらに別の例では、本明細書に記載のレンチウイルスベクターは、少なくとも２つの標的タンパク質を含むことができ、第一の標的タンパク質は、リンパ球を標的とするドメインを有し、第二の標的タンパク質は、Ｔ細胞を標的とするドメインを有する。さらに別の例では、本明細書に記載のレンチウイルスベクターは、少なくとも２つの標的タンパク質を含むことができ、第一の標的タンパク質は、リンパ球を標的とするドメインを有し、第二の標的タンパク質は、Ｂ細胞を標的とするドメインを有する。

【0096】

例示的な実施形態では、複数の標的タンパク質を有するレンチウイルスベクターは、それぞれ、表１及び表２に詳述されるＣＤ８０標的タンパク質及び抗ＣＤ３標的タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０標的タンパク質は、配列番号２に従うアミノ酸配列、または配列番号４のシグナルペプチドが欠けている配列番号２に従うアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３標的タンパク質は、配列番号１０に従うアミノ酸配列、または配列番号１２のシグナルペプチドが欠けている配列番号１０に従うアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３標的タンパク質は、配列番号１１７に従うアミノ酸配列、または配列番号１２のシグナルペプチドが欠けている配列番号１１７に従うアミノ酸配列を含む。該レンチウイルスベクターがＣＤ８０標的タンパク質及び抗ＣＤ３標的タンパク質を含む場合、該標的タンパク質は、該レンチウイルスベクターの産生に使用される別個の発現ベクター上にコードされ得る。代替的に、ＣＤ８０標的タンパク質と抗ＣＤ３標的タンパク質の両方をタンデム発現カセット上にコードしてもよく、該レンチウイルスベクターの産生のために両方の標的タンパク質の発現をもたらす単一の発現ベクター内で単一の発現カセットが提供される。ＣＤ８０標的タンパク質の核酸配列及び対応するアミノ酸配列ならびに同じ発現カセットから発現される抗ＣＤ３標的タンパク質の例示的な実施形態を表３に示す。かかる実施形態では、これら２つの標的タンパク質は、Ｐ２Ａ自己開裂ペプチドによって連結され得る。表３は、Ｐ２Ａ配列を介して抗ＣＤ３結合タンパク質に連結されたＣＤ８０結合タンパク質を含むタンデム発現カセットに使用され得る例示的な核酸を提供する。特定の実施形態では、該Ｐ２Ａ配列は、配列番号２９に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する核酸配列によってコードされ、該Ｐ２Ａ配列のアミノ酸配列は、配列番号３０に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３結合タンパク質に連結されたＣＤ８０結合タンパク質を含むタンデム発現カセットは、配列番号２１の核酸配列を含むか、または配列番号２１に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３結合タンパク質に連結されたＣＤ８０結合タンパク質を含むタンデム発現カセットは、配列番号２２のアミノ酸配列をコードするか、または配列番号２４のシグナルペプチドが欠けている配列番号２２のアミノ酸配列をコードする。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３結合タンパク質に連結されたＣＤ８０結合タンパク質を含むタンデム発現カセットは、配列番号２２に対して、または配列番号２４のシグナルペプチドが欠けている配列番号２２に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする。

【表3-1】

【表3-2】

【表3-3】

【表3-4】

【0097】

導入遺伝子
本明細書に記載のレンチウイルスベクターは、該ベクターによって標的とされるリンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞）に送達され、該リンパ球によって発現される１つ以上のタンパク質をコードする導入遺伝子を含む。特定の実施形態では、該導入遺伝子は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードし、該ＣＡＲは、標的分子に特異的に結合する結合ドメインを含む細胞外ドメイン、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む細胞内シグナル伝達ドメイン、及び該細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを接続する膜貫通ドメインを含む。

【0098】

本開示のＣＡＲにおける使用に適した結合ドメインは、任意の抗原結合ポリペプチドを含む。結合ドメインは、抗体またはその抗原結合断片を含んでよく、例えば、標的疾患抗原に特異的な全長重鎖、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ｓＦｖ、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ｄＡｂ、ＶＨＨ、ＣＤＲ、及びｓｃＦｖを含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ結合ドメインは、マウス、キメラ、ヒト、またはヒト化である。さらなる実施形態では、該ＣＡＲ結合ドメインは、ヒトまたはヒト化Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を有するｓｃＦｖである。さらなる実施形態では、該ＣＡＲ結合ドメインは、該Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を結合する、Ｎ＝１－１０の（ＧＧＧＳ）_Ｎリンカーまたは（ＧＧＧＧＳ）_Ｎリンカーを有するｓｃＦｖである。他の実施形態では、該ＣＡＲ結合ドメインは、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を結合する配列番号６４を含むリンカーを有するｓｃＦｖである。

【0099】

本開示のＣＡＲの細胞外ドメインによって結合された標的分子は、標的細胞上で見出される場合もあれば、標的細胞と関連して見出される場合もある。例示的な標的細胞としては、がん細胞、自己免疫疾患もしくは障害、神経変性疾患、または炎症性疾患もしくは障害に関連する細胞、感染性微生物（例えば、細菌、ウイルスもしくは真菌）及び感染細胞（例えば、ウイルス感染細胞）が挙げられる。感染性生物の細胞、例えば、哺乳類の寄生虫もまた標的細胞として企図される。

【0100】

本明細書に記載のＣＡＲに含まれる細胞外ドメインは、様々な標的分子のうちの１つ以上を標的とする結合ドメインを含み得る。ある特定の実施形態では、該ＣＡＲは、腫瘍抗原に特異的に結合する結合ドメインを含む。いくつかのかかる実施形態では、該ＣＡＲ結合ドメインは、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、アルファ葉酸受容体、５Ｔ４、Ａｂインテグリン、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ６、ＣＡＩＸ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ５２、ＣＤ７０、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１７１、ＣＥＡ、ＣＳＰＧ４、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＥｐＣＡＭ、ＦＡＰ、胎児ＡｃｈＲ、ＦＬＴ３、Ｆｒａ、ＧＤ２、ＧＤ３、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、ＨＬＡ－Ａ１＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ－Ａ２＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ－Ａ３＋ＭＡＧＥ１、ＨＬＡ－Ａ１＋ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＨＬＡ－Ａ２＋ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＨＬＡ－Ａ３＋ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＨＬＡＤＲ、ＩＬ－１１Ｒアルファ、ＩＬ－１３Ｒアルファ２、ラムダ、ルイス－Ｙ、カッパ、メソテリン、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６、ＮＣＡＭ、ＮＫＧ２ｄリガンド、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＳＳＸ、サバイビン、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ、ＶＥＧＦＲ２、ＢＡＦＦ－Ｒ、クローディン１８．２、ＣＤ８６、ＦｃＲＬ５、ＧＰＲＣ５、及びＴＡＣＩのうちの１つ以上に特異的に結合する。

【0101】

ある特定の実施形態では、本開示に記載のレンチウイルスベクターの導入遺伝子によりコードされたＣＡＲの細胞外ドメインは、任意に、該結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に、細胞外、非シグナル伝達スペーサまたはリンカードメインを含む。含まれる場合、かかるスペーサまたはリンカードメインは、結合ドメインを宿主細胞表面から離して配置し、さらに細胞と細胞との適切な接触、結合、及び活性化を可能にし得る。細胞外スペーサドメインは、一般に、該ＣＡＲの細胞外結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置している。該細胞外スペーサの長さは、選択された標的分子、選択された結合エピトープ、結合ドメインのサイズ及び親和性に基づいて、標的分子の結合を最適化するように変化させてもよい（例えば、Ｇｕｅｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２８：２０３－１１，２００５、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／０３１６８７号参照）。ある特定の実施形態では、細胞外スペーサドメインは、免疫グロブリンのヒンジ領域（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ）である。免疫グロブリンのヒンジ領域は、野生型免疫グロブリンのヒンジ領域、または変更された野生型免疫グロブリンのヒンジ領域であり得る。変更されたＩｇＧ_４のヒンジ領域は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／０３１６８７号に記載されており、このヒンジ領域は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、細胞外スペーサドメインは、アミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰ（配列番号１１８）を有する改変されたＩｇＧ_４のヒンジ領域を含む。

【0102】

本明細書に記載のＣＡＲに使用され得るヒンジ領域の他の例としては、ＣＤ８ａ、ＣＤ４、ＣＤ２８及びＣＤ７等の１型膜タンパク質の細胞外領域に由来するヒンジ領域を含む、これらは、野生型でもそのバリアントでもよい。いくつかの実施形態では、細胞外スペーサドメインは、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはそれらの組み合わせから選択される免疫グロブリンＦｃドメインの全部または一部を含む（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／０３１６８７号参照。これらのスペーサは、参照により全体として本明細書に組み込まれる）。さらなる実施形態では、細胞外スペーサドメインは、ＩＩ型Ｃ－レクチンの柄領域（Ｃ型レクチンドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する細胞外ドメイン）を含み得る。ＩＩ型Ｃ－レクチンは、ＣＤ２３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ及びＮＫＧ２Ｄを含む。

【0103】

本開示のＣＡＲは、細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを接続しかつ細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に配置された膜貫通ドメインを含む。該膜貫通ドメインは、通常、約１５アミノ酸～約３０アミノ酸長に及ぶ。該膜貫通ドメインは、宿主細胞膜を横断して該宿主細胞膜内にＣＡＲを固定する疎水性アルファヘリックスである。該膜貫通ドメインは、結合ドメインまたは存在する場合には細胞外スペーサドメインに直接融合され得る。ある特定の実施形態では、該膜貫通ドメインは、内在性膜タンパク（例えば、受容体、表面抗原分類（ＣＤ）分子、酵素、トランスポーター、細胞接着分子等）に由来する。該膜貫通ドメインは、該細胞外ドメインまたは該細胞内シグナル伝達ドメインと同じ分子から選択され得る。いくつかの実施形態では、該膜貫通ドメイン及び該細胞外ドメインは、各々異なる分子から選択される。いくつかの実施形態では、該膜貫通ドメイン及び該細胞内シグナル伝達ドメインは、各々異なる分子から選択される。さらに他の実施形態では、該膜貫通ドメイン、該細胞外ドメイン、及び該細胞内シグナル伝達ドメインは、各々異なる分子から選択される。

【0104】

本開示のＣＡＲに使用するための例示的な膜貫通ドメインとしては、ＣＤ２８、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ８ａ、ＣＤ５、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９５（Ｆａｓ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ）、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ３００、ＣＤ３５７（ＧＩＴＲ）、Ａ２ａＲ、ＤＡＰ１０、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲγ、Ｆｙｎ、ＧＡＬ９、ＫＩＲ、Ｌｃｋ、ＬＡＴ、ＬＲＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＰＴＣＨ２、ＲＯＲ２、Ｒｙｋ、Ｓｌｐ７６、ＳＩＲＰα、ｐＴα、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＩＭ３、ＴＲＩＭ、ＬＰＡ５、及びＺａｐ７０の膜貫通ドメインが挙げられる。ＣＤ８ａヒンジ領域を有する例示的なＣＤ８ａ膜貫通ドメインは、配列番号５２のアミノ酸配列を含む。

【0105】

ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、細胞内エフェクタードメインであり、該ＣＡＲの細胞外ドメインの標的分子への結合に応答して細胞に機能的シグナルを伝達することが可能であり、かつ免疫細胞、例えば、該ＣＡＲを発現するよう操作されたＴ細胞の正常なエフェクター機能または応答の少なくとも１つを活性化する。いくつかの実施形態では、該ＣＡＲは、Ｔ細胞の機能、例えば、細胞傷害活性またはＴヘルパー活性、例えば、サイトカインまたは他の因子の分泌を誘導する。該細胞内シグナル伝達ドメインは、十分なシグナル伝達活性を保持する細胞内シグナル伝達分子の任意の部分であり得る。いくつかの実施形態では、該細胞内シグナル伝達ドメインは、抗原受容体成分（例えば、ＴＣＲ）または共刺激分子から得られる。いくつかの実施形態では、抗原受容体または共刺激分子の完全長細胞内シグナル伝達ドメインが使用される。いくつかの実施形態では、抗原受容体または共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインの切断された部分が使用されるが、ただし、この切断された部分は、十分なシグナル伝達活性を保持している。さらなる実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、抗原受容体共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインの全長または切断された部分のバリアントであるが、ただし、該バリアントは、十分なシグナル伝達活性を保持している（すなわち、機能的バリアントである）。

【0106】

ある特定の実施形態では、該ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、シグナル伝達ドメインを含む免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。ＩＴＡＭ含有シグナル伝達ドメインは、一般に、少なくとも１つ（１、２、３、４、またはそれ以上）のＩＴＡＭを含み、これは、ＹＸＸＬ／Ｉ－Ｘ_６－８－ＹＸＸＬ／Ｉの保存されたモチーフを指す。ＩＴＡＭを含むシグナル伝達ドメインは、抗原結合またはリガンド係合後に、Ｔ細胞活性化シグナル伝達を開始し得る。ＩＴＡＭ－シグナル伝達ドメインとしては、例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦｃＲγ及びＣＤ６６ｄの細胞内シグナル伝達ドメインが挙げられる。本開示のＣＡＲにおいて使用され得る例示的なＣＤ３ζシグナル伝達ドメインは、配列番号５６または配列番号１２２のアミノ酸配列を含む。

【0107】

ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、任意に、第一級または古典的な（例えば、ＩＴＡＭ駆動の）活性化シグナルと併せて活性化された場合に、Ｔ細胞応答、例えば、Ｔ細胞の活性化、サイトカイン産生、増殖、分化、生存、エフェクター機能、またはそれらの組み合わせを促進または増強する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。ＣＡＲに使用するための共刺激シグナル伝達ドメインとしては、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＡＲＤ１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２２６、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＬＦＡ－１、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＤ２Ｃ、ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、ＺＡＰ７０、またはそれらの組み合わせが挙げられる。特定の実施形態では、該共刺激シグナル伝達ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、または４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）のシグナル伝達ドメインを含む。例示的な４－１ＢＢ共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号５４のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、１つ、２つまたはそれより多くの共刺激シグナル伝達ドメインを含む。

【0108】

いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、第１世代のＣＡＲ、第２世代のＣＡＲ、または第３世代のＣＡＲである。第１世代のＣＡＲは、一般に、ＣＤ３ζ、ＦｃγＲＩまたは他のＩＴＡＭ含有活性化ドメインの細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを有し、Ｔ細胞活性化シグナルを提供する。第２世代のＣＡＲはさらに、共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、またはＩＣＯＳ等の内因性Ｔ細胞共刺激受容体からの共刺激シグナル伝達ドメイン）を含む。第３世代のＣＡＲは、ＩＴＡＭ含有活性化ドメイン、第一の共刺激シグナル伝達ドメイン、及び第二の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。

【0109】

いくつかの実施形態では、該細胞外ドメイン、該結合ドメイン、該リンカー、該膜貫通ドメイン、該細胞内シグナル伝達ドメイン、または該共刺激ドメインの１つ以上は、接合部アミノ酸を含む。「接合部アミノ酸」または「接合部アミノ酸残基」とは、２つの隣接するドメイン、モチーフ、領域、モジュール、またはタンパク質の断片間、例えば、結合ドメインと隣接するリンカーとの間、膜貫通ドメインと隣接する細胞外もしくは細胞内ドメインとの間、または２つのドメイン、モチーフ、領域、モジュール、もしくは断片を連結するリンカーの一方または両方の末端（例えば、リンカーと隣接する結合ドメインとの間、またはリンカーと隣接するヒンジとの間）の１つ以上（例えば、約２～２０個）のアミノ酸残基を指す。接合部アミノ酸は、融合タンパク質の構築設計から生じ得る（例えば、融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの構築中の制限酵素部位または自己開裂ペプチド配列の使用から生じるアミノ酸残基）。例えば、融合タンパク質の膜貫通ドメインは、アミノ末端、カルボキシ末端、またはその両方に１つ以上の接合部アミノ酸を有し得る。

【0110】

特定の実施形態では、該導入遺伝子は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ分子をコードする。かかる実施形態では、該細胞外結合ドメインは、配列番号４６の抗ＣＤ１９軽鎖可変領域、配列番号４８のＧ４Ｓリンカー、及び配列番号５０の抗ＣＤ１９重鎖可変領域を有する、表４に詳述されるｓｃＦｖを含み得る。本明細書の文脈において有用な抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号５２のＣＤ８ａのヒンジ及び膜貫通ドメインを含み得る。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号５４に従う４－１ＢＢ共刺激ドメイン及び配列番号５６に従うＣＤ３ζエフェクタードメインを含む。特定の実施形態では、該導入遺伝子によりコードされる抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号４２に従うアミノ酸配列、または配列番号４４のシグナルペプチドが欠けている配列番号４２に従うアミノ酸配列を有する。

【0111】

他の実施形態では、該導入遺伝子は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ分子をコードし、細胞外結合ドメインは、配列番号４６に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する抗ＣＤ１９軽鎖可変領域、及び配列番号５０に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する抗ＣＤ１９重鎖可変領域を有するｓｃＦｖを含み得る。本明細書の文脈において有用な抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号５２に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するＣＤ８ａのヒンジ及び膜貫通ドメインを含み得る。ある特定の実施形態では、該抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号５４に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及び配列番号５６に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するＣＤ３ζエフェクタードメインを含む。特定の実施形態では、該導入遺伝子によりコードされる抗ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号４２に対して、または配列番号４４のシグナルペプチドが欠けている配列番号４２に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。

【表4-1】

【表4-2】

【表4-3】

【0112】

他の実施形態では、該導入遺伝子は、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ分子をコードする。かかる実施形態では、該細胞外結合ドメインは、配列番号６２の抗ＢＣＭＡ軽鎖可変領域、配列番号６４のリンカー、及び配列番号６６の抗ＢＣＭＡ重鎖可変領域を有する、表５に詳述されるｓｃＦｖを含み得る。本明細書の文脈において有用な抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、配列番号５２のＣＤ８ａのヒンジ及び膜貫通ドメインを含み得る。ある特定の実施形態では、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、配列番号５４に従う４－１ＢＢ共刺激ドメイン及び配列番号１２２に従うＣＤ３ζエフェクタードメインを含む。特定の実施形態では、該導入遺伝子によりコードされる抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、配列番号５８に従うアミノ酸配列、または配列番号６０のシグナルペプチドが欠けている配列番号５８に従うアミノ酸配列を有する。

【0113】

いくつかの実施形態では、該導入遺伝子は、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ分子をコードする。かかる実施形態では、該細胞外結合ドメインは、配列番号６２に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する抗ＢＣＭＡ軽鎖可変領域、及び配列番号６６に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する抗ＢＣＭＡ重鎖可変領域を有するｓｃＦｖを含み得る。本明細書の文脈において有用な抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、配列番号５２に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するＣＤ８ａのヒンジ及び膜貫通ドメインを含み得る。ある特定の実施形態では、該抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、配列番号５４に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及び配列番号１２２に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するＣＤ３ζエフェクタードメインを含む。特定の実施形態では、該導入遺伝子によりコードされる抗ＢＣＭＡ ＣＡＲは、配列番号５８に対して、または配列番号６０のシグナルペプチドが欠けている配列番号５８に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有する。

【表5-1】

【表5-2】

【表5-3】

【0114】

本開示のＣＡＲは、ヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタ、それらのトランスジェニック種、またはそれらの任意の組み合わせを含めた任意の哺乳類種に由来するポリヌクレオチド配列を含み得る。いくつかの実施形態では、該キメラ抗原受容体は、マウス、キメラ、ヒトまたはヒト化である。

【0115】

レンチウイルスベクターの産生方法
本開示のＬＶＶの産生方法を提供する。ＬＶＶは、レトロウイルスのゲノムに基づいて、その成分を組み換えプラスミドＤＮＡベクターに結合することによって開発された。次いで、該プラスミドＤＮＡベクターを、プロデューサー細胞株にトランスフェクトして、レンチウイルス粒子の産生に必要な遺伝子が導入され得る。ＬＶＶパッケージング系は一般に、目的の導入遺伝子をコードするトランスファープラスミド、エンベローププラスミド（例えば、ＶＳＶ－Ｇ）、及びパッケージングプラスミド（複数可）を含む。第２世代のＬＶＶパッケージング系は、Ｇａｇ、Ｐｏｌ、Ｒｅｖ、及びＴａｔ遺伝子をコードする単一のパッケージングプラスミドならびに別個のＥｎｖプラスミドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＬＶＶを産生するために第３世代のベクター系を利用する。第３世代のベクター産生系は、第２世代のＬＶＶパッケージング系の安全性を向上させ、通常は３つのパッケージングプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ、ＧａｇＰｏｌ及びＲｅｖと組み合わされた導入遺伝子プラスミドを含む４つのプラスミド系である。したがって、Ｒｅｖ及びＧａｇＰｏｌは、２つのプラスミドに分離される。Ｔａｔはまた、トランスファープラスミド上の異種プロモーター（例えば、ＣＭＶまたはＲＳＶプロモーター）に融合したキメラ５’ＬＴＲを追加することによって、第３世代のＬＶＶパッケージング系から除去される。該ｇａｇ遺伝子は、マトリックス、カプシド、及びヌクレオカプシドを含めたレンチウイルスの構造タンパク質を含むＧａｇポリタンパク質前駆体をコードする。ｐｏｌ遺伝子は、プロテアーゼ、逆転写酵素、インテグラーゼを含めた、複製に必須のレンチウイルスの酵素機能を供給するＰｏｌポリタンパク質前駆体をコードする。該ｒｅｖ遺伝子は、Ｒｅｖ応答エレメント（ＲＲＥ）に結合するＲｅｖタンパク質をコードし、ウイルス複製中にスプライスされていないＨＩＶ ＲＮＡ及び単一スプライスされたＨＩＶ ＲＮＡの核外輸送を可能にする。該Ｇａｇ及びＰｏｌポリタンパク質前駆体は、ウイルス粒子の産生中に切断される。

【0116】

本開示のＬＶＶを作製するために使用され得るプロデューサー細胞としては、ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）２９３細胞及びその派生物が含まれる。プロデューサー細胞は、接着細胞株、例えば、ＨＥＫ２９３Ｔプロデューサー細胞、または浮遊細胞株、例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ／１７ ＳＦプロデューサー細胞であってもよい。

【0117】

該導入遺伝子プラスミドは、３つのパッケージングプラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドと組み合わせられ、プロデューサー細胞、例えば、ＨＥＫ２９３プロデューサー細胞をトランスフェクトするために使用される。いくつかの実施形態では、該プロデューサー細胞は、規定の比率の導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドでトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、パッケージングプラスミドの比率は、質量によって決定される。いくつかの実施形態では、該導入遺伝子プラスミド及びＧａｇＰｏｌプラスミドの各々の質量は、該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド及びＲｅｖプラスミドの各々の質量よりも高い。いくつかの実施形態では、該導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドの規定の比率は、約１：１：１：１～約５：４：１：１である。いくつかの実施形態では、該プロデューサー細胞は、約２：１：１：１～約５：４：１：１の規定の比率の該導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドでトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、該プロデューサー細胞は、約２：１：１：１の規定の比率の該導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドでトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、該プロデューサー細胞は、約３：１：１：１の規定の比率の該導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドでトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、該プロデューサー細胞は、約３．１２５：３．１２５：２．５：１．２５の規定の比率の該導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドでトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、該プロデューサー細胞は、約４：２：１：１の規定の比率の該導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドでトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、該プロデューサー細胞は、約５：４：１：１の規定の比率の該導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドでトランスフェクトされる。生産的なレンチウイルス粒子は、該プロデューサー細胞培地から採取される。ＬＶＶ粒子を産生するための例示的な材料及び方法は、Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ，Ｍｅｒｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ － Ｍｅｔｈｏｄｓ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（２０１６），３，１６０１７に記載されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。第３世代の産生系は、研究開発及び臨床目的に使用されている。第３世代のＬＶＶ産生系での使用に適したヘルパープラスミドの概略図を図１に示す。

【0118】

該導入遺伝子プラスミドは、得られるＬＶＶによって標的とされるリンパ球（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）に導入される遺伝物質のみをコードし、カプシド形成、逆転写及び組み込みのためのシス作用性エレメントに隣接される導入遺伝子発現カセットを含むレンチウイルス骨格を含む。特定の実施形態では、該導入遺伝子プラスミドは、標的細胞に移入されるとウイルスＬＴＲの転写能力の損失を引き起こす３’ＬＴＲのＵ３エレメントの欠失を含む。該導入遺伝子プラスミドに含まれる発現カセットは、標的細胞への導入及び標的細胞による発現のために、単一の異種タンパク質（例えば、本明細書に記載の単一のＣＡＲ）または複数の異種タンパク質（例えば、本明細書に記載の複数のＣＡＲ）をコードし得る。

【0119】

４つのプラスミドＬＶＶ系のいくつかの実施形態では、該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドは、本明細書に開示する変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質及び標的タンパク質をコードするタンデム発現カセットを含む。特定の実施形態では、該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドに含まれるタンデム発現カセットは、第一のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド、標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、フューリン切断部位、またはウイルス２Ａペプチドのうちの１つをコードするポリヌクレオチド、第二のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド、及び変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、標的タンパク質をコードするポリヌクレオチドの５’側に位置する。他の実施形態では、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、標的タンパク質をコードするポリヌクレオチドの３’側に位置する。該標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び該変異型ＶＳＶ－Ｇをコードするポリヌクレオチドは、単一のｍＲＮＡから２つのタンパク質の共発現を可能にするＩＲＥＳ、フューリン切断部位、またはウイルス２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチドによって、タンデムカセットで分離される。ある特定の実施形態では、ウイルス２Ａペプチドは、ブタテッショウウイルス－１（Ｐ２Ａ）、Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス（Ｔ２Ａ）、ウマ鼻炎Ａウイルス（Ｅ２Ａ）、口蹄疫ウイルス（Ｆ２Ａ）、またはそれらのバリアントである。該ウイルス２Ａペプチドのアミノ酸配列及びヌクレオチド配列の具体例を表７に示す。

【表7】

【0120】

ある特定の実施形態では、本開示は、先行する請求項のいずれか１項に記載のリンパ球を標的とするレンチウイルスベクターの産生方法を提供し、該方法は、以下を含む：プロデューサー細胞をＧａｇＰｏｌプラスミド、Ｒｅｖプラスミド、導入遺伝子プラスミド、及びＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドでトランスフェクトすること、ここで、該ＧａｇＰｏｌプラスミドは、レンチウイルスｇａｇ遺伝子及びレンチウイルスｐｏｌ遺伝子をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含み、レンチウイルスｇａｇポリタンパク質及びレンチウイルスｐｏｌポリタンパク質を該プロデューサー細胞内で発現することが可能であり、該Ｒｅｖプラスミドは、レンチウイルスｒｅｖ遺伝子をコードするポリヌクレオチドを含み、レンチウイルスｒｅｖタンパク質を該プロデューサー細胞内で発現することが可能であり、該導入遺伝子プラスミドは、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む発現カセットを含み、該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドは、タンデム発現カセットを含み、該タンデム発現カセットは、本明細書に開示する変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質をコードするポリヌクレオチド及び本明細書に開示するリンパ球を標的とするタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含み、該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドは、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質及び該リンパ球を標的とするタンパク質を該プロデューサー細胞内で発現することが可能であること、該プロデューサー細胞を培地内で培養すること、ならびに該培地からレンチウイルスベクターを採取すること。

【0121】

いくつかの実施形態では、該プロデューサー細胞は、規定の比率の導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドでトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、該導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドの規定の比率は、約１：１：１：１～約５：４：１：１である。いくつかの実施形態では、該プロデューサー細胞は、約２：１：１：１～約５：４：１：１の規定の比率の該導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドでトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、該プロデューサー細胞は、約２：１：１：１の規定の比率の該導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドでトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、該プロデューサー細胞は、約３：１：１：１の規定の比率の該導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドでトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、該プロデューサー細胞は、約３．１２５：３．１２５：２．５：１．２５の規定の比率の該導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドでトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、該プロデューサー細胞は、約４：２：１：１の規定の比率の該導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドでトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、該プロデューサー細胞は、約５：４：１：１の規定の比率の該導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びＲｅｖプラスミドでトランスフェクトされる。

【0122】

１つの実施形態では、該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドのタンデム発現カセットは、抗ＣＤ３標的タンパク質及び変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質をコードする。例えば、特定の実施形態では、該タンデム発現カセットは、配列番号６７に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するポリヌクレオチドを含んでもよく、これは、配列番号６８に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする。かかる実施形態は、表８により詳細に記載されている。別の実施形態では、該タンデム発現カセットは、配列番号３１のシグナルペプチドが欠けている配列番号６７に対して、約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するポリヌクレオチドを含んでもよく、これは、配列番号３２のシグナルペプチドが欠けている配列番号６８に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする。表８に示すように、該抗ＣＤ３標的タンパク質は、Ｐ２Ａ自己開裂ペプチドを介して変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質から分離される。ある特定の実施形態では、該Ｐ２Ａペプチドは、配列番号６９に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する核酸配列によってコードされ得るとともに、該Ｐ２Ａペプチドは、配列番号７０に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有し得る。

【表8-1】

【表8-2】

【表8-3】

【表8-4】

【表8-5】

【表8-6】

【0123】

別の実施形態では、該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドのタンデム発現カセットは、ＣＤ８０標的タンパク質及び変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質をコードする。例えば、特定の実施形態では、該タンデム発現カセットは、配列番号７５に従うポリヌクレオチドを含み、これは、配列番号７６のアミノ酸配列をコードする。かかる実施形態は、表９により詳細に記載されている。表９に示すように、該ＣＤ８０標的タンパク質は、配列番号６９によってコードされ、配列番号７０に従うアミノ酸配列を有するＰ２Ａ自己開裂ペプチドを介して変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質から分離される。

【0124】

該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドのタンデム発現カセットがＣＤ８０標的タンパク質及び変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質をコードするいくつかの実施形態では、該タンデム発現カセットは、配列番号７５に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するポリヌクレオチドを含んでもよく、これは、配列番号７６に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする。ある特定の実施形態では、該ＣＤ８０標的タンパク質は、配列番号６９に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する核酸配列によってコードされるＰ２Ａ自己開裂ペプチドを介して該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質から分離され、該Ｐ２Ａ自己開裂ペプチドは、配列番号７０に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【表9-1】

【表9-2】

【表9-3】

【表9-4】

【表9-5】

【0125】

別の実施形態では、該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドのタンデム発現カセットは、ＣＤ８０標的タンパク質、抗ＣＤ３標的タンパク質、及び変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質をコードする。例えば、特定の実施形態では、該タンデム発現カセットは、配列番号２のアミノ酸配列をコードする配列番号１に従うＣＤ８０標的ポリヌクレオチドを含み得る。特定の実施形態では、該タンデム発現カセットは、配列番号１０のアミノ酸配列をコードする配列番号９に従う抗ＣＤ３標的ポリヌクレオチドを含み得る。かかる実施形態は、表３により詳細に記載されている。表３に示すように、該ＣＤ８０標的タンパク質は、配列番号２９によってコードされ、配列番号３０に従うアミノ酸配列を有するＰ２Ａ自己開裂ペプチドを介して該抗ＣＤ３標的タンパク質から分離される。

【0126】

該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドのタンデム発現カセットがＣＤ８０標的タンパク質、抗ＣＤ３標的タンパク質、及び変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質をコードするいくつかの実施形態では、該タンデム発現カセットは、該ＣＤ８０標的タンパク質、及び配列番号２１に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する抗ＣＤ３標的タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含んでもよく、これは、配列番号２２に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする。ある特定の実施形態では、該ＣＤ８０標的タンパク質は、配列番号２９に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有する核酸配列によってコードされるＰ２Ａ自己開裂ペプチドを介して該抗ＣＤ３標的タンパク質から分離され、該Ｐ２Ａ自己開裂ペプチドは、配列番号３０に対して、少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0127】

該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドのタンデム発現カセットがＣＤ８０標的タンパク質、抗ＣＤ３標的タンパク質、及び変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質をコードするいくつかの実施形態では、該ＣＤ８０標的タンパク質及び抗ＣＤ３標的タンパク質は、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質から、２Ａ自己開裂ペプチドを介して分離される。

【0128】

４つのプラスミドＬＶＶ系のいくつかの実施形態では、該ＧａｇＰｏｌプラスミドは、Ｇａｇポリタンパク質前駆体及びＰｏｌポリタンパク質前駆体ならびに本明細書に開示する標的タンパク質をコードするタンデム発現カセットを含む。特定の実施形態では、該ＧａｇＰｏｌプラスミドに含まれるタンデム発現カセットは、第一のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド、標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、フューリン切断部位、またはウイルス２Ａペプチドのうちの１つをコードするポリヌクレオチド、第二のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド、ならびにＧａｇポリタンパク質前駆体及びＰｏｌポリタンパク質前駆体をコードするポリヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、該Ｇａｇポリタンパク質前駆体及びＰｏｌポリタンパク質前駆体をコードするポリヌクレオチドは、標的タンパク質をコードするポリヌクレオチドの５’側に位置する。他の実施形態では、該Ｇａｇポリタンパク質前駆体及びＰｏｌポリタンパク質前駆体をコードするポリヌクレオチドは、標的タンパク質をコードするポリヌクレオチドの３’側に位置する。該標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド、ならびに該Ｇａｇポリタンパク質前駆体及びＰｏｌポリタンパク質前駆体をコードするポリヌクレオチドは、単一のｍＲＮＡからＧａｇポリタンパク質前駆体及びＰｏｌポリタンパク質前駆体ならびに該標的タンパク質の共発現を可能にするＩＲＥＳ、フューリン切断部位、またはウイルス２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチドによって、タンデムカセットで分離される。ある特定の実施形態では、ウイルス２Ａペプチドは、ブタテッショウウイルス－１（Ｐ２Ａ）、Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス（Ｔ２Ａ）、ウマ鼻炎Ａウイルス（Ｅ２Ａ）、口蹄疫ウイルス（Ｆ２Ａ）、またはそれらのバリアントである。該ウイルス２Ａペプチドのアミノ酸配列及びヌクレオチド配列の具体例を表７に示す。

【0129】

いくつかの実施形態では、Ｇａｇポリタンパク質前駆体及びＰｏｌポリタンパク質前駆体ならびに該標的タンパク質をコードするタンデム発現カセットを含むＧａｇＰｏｌプラスミドは、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドよりも高いモル濃度でプロデューサー細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、Ｇａｇポリタンパク質前駆体及びＰｏｌポリタンパク質前駆体ならびに該標的タンパク質をコードするタンデム発現カセットを含むＧａｇＰｏｌプラスミドは、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドよりも低いモル濃度でプロデューサー細胞にトランスフェクトされる。

【0130】

１つの実施形態では、該ＧａｇＰｏｌプラスミドのタンデム発現カセットは、抗ＣＤ３標的タンパク質ならびにＧａｇポリタンパク質前駆体及びＰｏｌポリタンパク質前駆体をコードする。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３標的タンパク質は、Ｇａｇポリタンパク質前駆体及びＰｏｌポリタンパク質前駆体から、Ｐ２Ａ自己開裂ペプチドを介して分離される。

【0131】

別の実施形態では、該ＧａｇＰｏｌプラスミドのタンデム発現カセットは、ＣＤ８０標的タンパク質ならびにＧａｇポリタンパク質前駆体及びＰｏｌポリタンパク質前駆体をコードする。いくつかの実施形態では、該ＣＤ８０標的タンパク質は、Ｇａｇポリタンパク質前駆体及びＰｏｌポリタンパク質前駆体から、Ｐ２Ａ自己開裂ペプチドを介して分離される。

【0132】

４つのプラスミドＬＶＶ系のいくつかの実施形態では、該Ｒｅｖプラスミドは、該Ｒｅｖタンパク質及び本明細書に開示する標的タンパク質をコードするタンデム発現カセットを含む。特定の実施形態では、該Ｒｅｖプラスミドに含まれるタンデム発現カセットは、第一のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド、標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、フューリン切断部位、またはウイルス２Ａペプチドのうちの１つをコードするポリヌクレオチド、第二のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド、及びＲｅｖタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、該Ｒｅｖタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、標的タンパク質をコードするポリヌクレオチドの５’側に位置する。他の実施形態では、該Ｒｅｖタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、標的タンパク質をコードするポリヌクレオチドの３’側に位置する。該標的タンパク質をコードするポリヌクレオチド、及び該Ｒｅｖタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、単一のｍＲＮＡから該Ｒｅｖタンパク質及び該標的タンパク質の共発現を可能にするＩＲＥＳ、フューリン切断部位、またはウイルス２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチドによって、タンデムカセットで分離される。ある特定の実施形態では、ウイルス２Ａペプチドは、ブタテッショウウイルス－１（Ｐ２Ａ）、Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス（Ｔ２Ａ）、ウマ鼻炎Ａウイルス（Ｅ２Ａ）、口蹄疫ウイルス（Ｆ２Ａ）、またはそれらのバリアントである。該ウイルス２Ａペプチドのアミノ酸配列及びヌクレオチド配列の具体例を表７に示す。

【0133】

いくつかの実施形態では、該Ｒｅｖタンパク質及び該標的タンパク質をコードするタンデム発現カセットを含むＲｅｖプラスミドは、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドよりも高いモル濃度でプロデューサー細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、該Ｒｅｖタンパク質及び該標的タンパク質をコードするタンデム発現カセットを含むＲｅｖプラスミドは、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドよりも低いモル濃度でプロデューサー細胞にトランスフェクトされる。

【0134】

１つの実施形態では、該Ｒｅｖプラスミドのタンデム発現カセットは、抗ＣＤ３標的タンパク質及びＲｅｖタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、該抗ＣＤ３標的タンパク質は、該Ｒｅｖタンパク質から、Ｐ２Ａ自己開裂ペプチドを介して分離される。

【0135】

別の実施形態では、該ＧａｇＰｏｌプラスミドのタンデム発現カセットは、ＣＤ８０標的タンパク質及びＲｅｖタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、該ＣＤ８０標的タンパク質は、該Ｒｅｖタンパク質から、Ｐ２Ａ自己開裂ペプチドを介して分離される。

【0136】

本開示の４つのプラスミド、第３世代のレンチウイルスベクター系で使用され得る変異型ＶＳＶ－Ｇ配列の例を、表１０に示す。

【表10-1】

【表10-2】

【表10-3】

【表10-4】

【表10-5】

【表10-6】

【表10-7】

【表10-8】

【表10-9】

【表10-10】

【表10-11】

【表10-12】

【表10-13】

【表10-14】

【0137】

他の実施形態では、本開示に従うＬＶＶの産生方法は、５つのプラスミド系を利用してもよい。５つのプラスミド系を使用する場合、該ＬＶＶ産生系は、第３世代のベクター系から４つのプラスミド（すなわち、導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、Ｅｎｖプラスミド、及びＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド）を利用する。さらに、本明細書に記載の５つのプラスミド系は、標的タンパク質をコードする第五のプラスミド（「標的タンパク質プラスミド」）を含む。５つのプラスミド系に含まれるＧａｇＰｏｌ及びＥｎｖパッケージングプラスミドは、Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ，Ｍｅｒｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ－Ｍｅｔｈｏｄｓ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（２０１６），３，１６０１７に記載される標準的なパッケージングプラスミドであってよい。該導入遺伝子プラスミドは、本開示に従う１つ以上のＣＡＲ導入遺伝子をコードする発現カセットを含み、該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドは、本明細書に記載の変異型ＶＳＶ－Ｇをコードする発現カセットを含む。

【0138】

いくつかの実施形態では、該第五のプラスミドは、ＣＤ８０標的タンパク質をコードする発現カセットを含む。いくつかの実施形態では、該第五のプラスミドは、抗ＣＤ３標的タンパク質をコードする発現カセットを含む。いくつかの実施形態では、該第五のプラスミドは、ＣＤ８０標的タンパク質及び抗ＣＤ３標的タンパク質をコードする発現カセットを含む。該第五のプラスミドに使用され得るＣＤ８０標的タンパク質及び抗ＣＤ３標的タンパク質の例は、表１～３に示されている。

【0139】

ある特定の実施形態では、本開示は、先行する請求項のいずれか１項に記載のリンパ球を標的とするレンチウイルスベクターの産生方法を提供し、該方法は、以下を含む：プロデューサー細胞をＧａｇＰｏｌプラスミド、Ｒｅｖプラスミド、導入遺伝子プラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、及びリンパ球を標的とするタンパク質プラスミドでトランスフェクトすること、ここで、該ＧａｇＰｏｌプラスミドは、レンチウイルスｇａｇ遺伝子及びレンチウイルスｐｏｌ遺伝子をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含み、レンチウイルスｇａｇタンパク質及びレンチウイルスｐｏｌタンパク質を該プロデューサー細胞内で発現することが可能であり、該Ｒｅｖプラスミドは、レンチウイルスｒｅｖ遺伝子をコードするポリヌクレオチドを含み、レンチウイルスｒｅｖタンパク質を該プロデューサー細胞内で発現することが可能であり、該導入遺伝子プラスミドは、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む発現カセットを含み、該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドは、本明細書に記載の変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含み、該変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質を該プロデューサー細胞内で発現することが可能であり、該リンパ球を標的とするタンパク質プラスミドは、本明細書に記載のリンパ球を標的とするタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含み、該リンパ球を標的とするタンパク質を該プロデューサー細胞内で発現することが可能であること、該プロデューサー細胞を培地内で培養すること、ならびにレンチウイルスベクターを該培地から採取すること。

【0140】

いくつかの実施形態では、該プロデューサー細胞は、規定の比率の導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、Ｒｅｖプラスミド、及びリンパ球を標的とするプラスミドでトランスフェクトされる。該リンパ球を標的とするプラスミドは、該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドに対して、（質量基準で）約０．２５～約５の比であり得る。例えば、本明細書に記載の４つのパッケージングプラスミド系（導入遺伝子プラスミド、ＧａｇＰｏｌプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミド、Ｒｅｖプラスミド）について規定の比率を使用して、該リンパ球を標的とするタンパク質プラスミドの該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドに対する比率を調節することができる。例えば、該リンパ球を標的とするプラスミドは、該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドに対して、約０．２５：１、０．５：１、１：１、１．２５：１、１．５：１、１．７５：１、２：１、２．２５：１、２．５：１、２．７５：１、３：１、３．２５：１、３．５：１、３．７５：１、４：１、４．２５：１、４．５：１、４．７５：１または５：１の比であり得る。

【0141】

５つのプラスミドの組み合わせを利用するＬＶＶの産生方法の実施形態では、第五のプラスミドは、標的タンパク質プラスミドであり、１つ以上の標的タンパク質をコードする発現カセットを含む。例えば、該標的タンパク質プラスミドは、ＣＤ８０標的タンパク質、抗ＣＤ３標的タンパク質、またはＣＤ８０標的タンパク質と抗ＣＤ３標的タンパク質の両方をコードするポリヌクレオチドを含む発現カセットを含み得る。ある特定の実施形態では、標的タンパク質ベクタープラスミドは、配列番号２に従うＣＤ８０標的タンパク質をコードする配列番号１に従うポリヌクレオチドを含む発現カセット。他の実施形態では、標的タンパク質プラスミドは、配列番号１０に従う抗ＣＤ３標的タンパク質をコードする配列番号９に従うポリヌクレオチドを含む発現カセットを含む。他の実施形態では、標的タンパク質プラスミドは、配列番号１１７に従う抗ＣＤ３標的タンパク質をコードする配列番号１１６に従うポリヌクレオチドを含む発現カセットを含む。他の実施形態では、標的タンパク質プラスミドは、配列番号２２に従うポリペプチドをコードする配列番号２１に従うポリヌクレオチドを含むタンデム発現カセットを含む。本開示の５つのプラスミド、第３世代のレンチウイルスベクター系に使用され得る変異型ＶＳＶ－Ｇ配列の例が表１０に示されている。

【0142】

該４つのプラスミドパッケージング系では、形質導入された細胞の表面におけるリンパ球を標的とするタンパク質の濃度は、該標的タンパク質を含むプラスミドの濃度と関連し得る。例えば、該リンパ球を標的とするタンパク質プラスミドプラスミドが、該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドに含まれる場合、該リンパ球を標的とするタンパク質の該形質導入された細胞の表面での濃度は、該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドの濃度と関連し得る。別の例では、該リンパ球を標的とするタンパク質プラスミドプラスミドが、該ＧａｇＰｏｌプラスミドに含まれる場合、該リンパ球を標的とするタンパク質の該形質導入された細胞の表面での濃度は、該ＧａｇＰｏｌプラスミドの濃度と関連し得る。別の例では、該リンパ球を標的とするタンパク質プラスミドプラスミドが該Ｒｅｖプラスミドに含まれる場合、該リンパ球を標的とするタンパク質の該形質導入された細胞の表面での濃度は、該Ｒｅｖプラスミドの濃度と関連し得る。該５つのプラスミドパッケージング系では、形質導入された細胞の表面におけるリンパ球を標的とするタンパク質の濃度は、該標的タンパク質を含むプラスミドの濃度と関連し得る。

【0143】

該４つのプラスミドパッケージング系では、形質導入効率は、該標的タンパク質を含むプラスミドの濃度と関連し得る。例えば、該リンパ球を標的とするタンパク質プラスミドプラスミドが該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドに含まれる場合、該形質導入効率は、該ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖプラスミドの濃度と関連し得る。別の例では、該リンパ球を標的とするタンパク質プラスミドプラスミドが該ＧａｇＰｏｌプラスミドに含まれる場合、該形質導入効率は、該ＧａｇＰｏｌプラスミドの濃度と関連し得る。別の例では、該リンパ球を標的とするタンパク質プラスミドプラスミドが該Ｒｅｖプラスミドに含まれる場合、該形質導入効率は、該Ｒｅｖプラスミドの濃度と関連し得る。該５つのプラスミドパッケージング系では、該形質導入効率は、該リンパ球を標的とするタンパク質プラスミドの濃度と関連し得る。

【0144】

プロデューサー細胞のトランスフェクションに続いて、該レンチウイルス粒子産物が細胞上清または培地から採取され得る。有効性または安全性に悪影響を与える可能性のある成分を最小限に抑えながら、ＬＶＶの回収を最大化するためのＬＶＶの下流プロセスは、当技術分野で知られている。通常のプロセスは、細胞及びその破片の除去、その後のＬＶＶの濃縮、及び宿主細胞または血清タンパク質、核酸及び脂質の除去を含む一連の精製ステップを含む。該ＬＶＶ産物はさらに、安定性に適した製剤緩衝液に交換する前にさらに濃縮されてもよく、その後最終的に滅菌濾過を受け、保存または適用される。採取されたＬＶＶ上清に対して最初に清澄化ステップを行い、大きな不純物、例えば、凝集物及び細胞の破片を除去してもよい。いくつかの実施形態では、該清澄化ステップは、遠心分離及び／または従来のフロー濾過を含む。いくつかの実施形態では、該清澄化ステップは、ヌクレアーゼ消化ステップを含む。いくつかの実施形態では、該ＬＶＶ産物はさらに、例えば、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、アニオン交換クロマトグラフィー）を含めた精製ステップを受ける。該ＬＶＶは、例えば、タンジェンシャルフロー濾過または限外濾過／透析濾過によっても濃縮され得る。いくつかの実施形態では、培地からのＬＶＶの採取は、遠心分離を含む。いくつかの実施形態では、培地からのＬＶＶの採取は、アニオン交換クロマトグラフィーを含む。いくつかの実施形態では、培地からのＬＶＶの採取は、アニオン交換クロマトグラフィー及びタンジェンシャルフロー濾過を含む。

【0145】

いくつかの実施形態では、変異型ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖ及び１つ以上のリンパ球を標的とするタンパク質を組み込む本明細書に記載のレンチウイルスベクターは、別の融合性ｅｎｖタンパク質（例えば、球菌ｅｎｖ、パラミクソウイルスｅｎｖ、切断型ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖ）を組み込む標準ＬＶＶと比較して、高力価のＬＶＶ産物を産生することが可能である。本明細書で使用される、ウイルス力価とは、１ｍＬあたりの形質導入単位（ＴＵ）によって測定される感染性ウイルス粒子力価を指す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＬＶＶの力価は、濃縮されたＬＶＶ産物で測定して、少なくとも１ｅ７ＴＵ／ｍＬ、少なくとも１ｅ８ＴＵ／ｍＬ、少なくとも１ｅ９ＴＵ／ｍＬ、少なくとも１ｅ１０ＴＵ／ｍＬ、少なくとも１ｅ１１ＴＵ／ｍＬ、または少なくとも１ｅ１２ＴＵ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＬＶＶの力価は、濃縮されたＬＶＶ産物において約１ｅ７ＴＵ／ｍＬ～約１ｅ１２ＴＵ／ｍＬである。

【0146】

操作されたリンパ球
本明細書に記載のＬＶＶを使用して、該ＬＶＶが担持する導入遺伝子によってコードされるＣＡＲを発現するように標的リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞）を改変することができる。ある特定の実施形態では、該リンパ球を本開示のＬＶＶと接触させることによって、該操作されたリンパ球は、本開示に従うＬＶＶによって形質導入されている。かかる実施形態では、該操作されたリンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞）は、該ＬＶＶが担持する導入遺伝子によってコードされるＣＡＲを発現する。これらのリンパ球は、本明細書では「ＣＡＲ改変リンパ球」とも呼ばれる。特定の実施形態では、該操作されたＴ細胞は、本明細書では「ＣＡＲ改変Ｔ細胞」と呼ばれる。他の特定の実施形態では、該操作されたＮＫ細胞は、本明細書では「ＣＡＲ改変ＮＫ細胞」と呼ばれる。特定の実施形態では、該操作されたＴ細胞は、本明細書では「ＣＡＲ改変Ｂ細胞」と呼ばれる。特定の実施形態では、該ＣＡＲ改変Ｔ細胞は、本明細書に記載のＬＶＶが担持する導入遺伝子によってコードされるＣＡＲを発現し、ナイーブＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ２７＋、ＣＤ４５ＲＯ－）、セントラルメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－、ＣＤ４５ＲＯ^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＣＲ７＋、ＣＤ２７＋）、エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＣＲ７－、ＣＤ６２Ｌ－、ＣＤ２７－）、γδＴ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、Ｔｒｅｇ、ナチュラルキラーＴ細胞、及び組織常在性Ｔ細胞から選択される。

【0147】

本明細書に記載のＬＶＶによる標的リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞）の形質導入は、エキソビボまたはインビボで行われ得る。

【0148】

ある特定の実施形態では、該リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞）は、ヒト、マウス、ラット、または他の哺乳類に由来する一次細胞または細胞株であり得る。哺乳類から得られる場合、リンパ球は、血液、骨髄、リンパ節、胸腺、または他の組織もしくは流体を含めた多数の供給源から得ることができる。リンパ球組成物（例えば、Ｔ細胞組成物、Ｂ細胞組成物、またはＮＫ細胞組成物）は、濃縮または精製され得る。Ｔ細胞株は、当技術分野で周知であり、そのいくつかは、Ｓａｎｄｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２１：２３０，２０００に記載されている。ある特定の実施形態では、該Ｔ細胞は、ＴＣＲα遺伝子、ＴＣＲβ遺伝子、またはその両方の内因性発現を欠く。かかるＴ細胞は、ＴＣＲα及びβ鎖の内因性発現を天然に欠いている場合もあれば、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、またはその両方の遺伝子の発現をブロックするように（例えば、ＴＣＲα及びβ鎖を発現しないトランスジェニックマウスのＴ細胞またはＴＣＲα及びβ鎖の発現を阻害するように操作された細胞）またはＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、またはその両方の遺伝子をノックアウトするように改変されている場合もある。

【0149】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲ分子をコードするポリヌクレオチドで該リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞）を遺伝子改変する前に、リンパ球（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の供給源を、対象（例えば、全血、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織）から得てもよい。リンパ球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞は、当技術分野で知られている方法を使用して、該対象から採取したサンプルから濃縮または単離することができる。例えば、Ｔ細胞は、赤血球の低張溶解のための既知の方法を使用して対象から採取した全血サンプルで濃縮される場合もあれば、Ｔ細胞は、既知の勾配沈降、例えば、Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標）還元技術を使用して対象から採取したサンプルから単離される場合もある。代替的に、Ｔ細胞は、抗体標識磁気ビーズを使用し、その後カラム分離によって全血から単離され得る。特定の宿主細胞のサブセットは、公知の技術に従って収集され、既知の技術、例えば、抗体に対する親和性結合、フローサイトメトリー及び／または免疫磁気選択によって濃縮または枯渇され得る。いくつかの実施形態では、濃縮及び／または枯渇ステップの後、該Ｔ細胞は、対象から得られたＴ細胞がＬＶＶによって形質導入され、該ＬＶＶが担持する導入遺伝子によってコードされるＣＡＲを発現するように、開示のＬＶＶと接触して配置される。いくつかの実施形態では、濃縮及び／または枯渇ステップの後、該ＮＫ細胞は、対象から得られたＮＫ細胞がＬＶＶによって形質導入され、該ＬＶＶが担持する導入遺伝子によってコードされるＣＡＲを発現するように、開示のＬＶＶと接触して配置される。いくつかの実施形態では、濃縮及び／または枯渇ステップの後、該Ｂ細胞は、対象から得られたＢ細胞がＬＶＶによって形質導入され、該ＬＶＶが担持する導入遺伝子によってコードされるＣＡＲを発現するように、開示のＬＶＶと接触して配置される。

【0150】

一般に、休止Ｔ細胞、例えば、休止ＣＤ４及びＣＤ８リンパ球、休止Ｂ細胞、ならびに休止ＮＫ細胞は、レンチウイルスベクターによる遺伝子導入が無効である。休止Ｔ細胞は、静止Ｔ細胞またはナイーブＴ細胞としても知られ、有糸分裂的に活性ではないか、または抗原提示細胞、例えば、マクロファージまたは樹状細胞で提示される同種抗原に曝露されたことがないＴ細胞を指す。休止Ｔ細胞のマーカーの例は、ＣＤ２８である。代替的に、活性化Ｔ細胞で発現され、休止Ｔ細胞では発現されないマーカーとしては、例えば、４－１ＢＢ、ＰＤ－１、及びＨＬＡ－ＤＲが挙げられる。同様に、休止Ｂ細胞及び休止ＮＫ細胞は、有糸分裂的に活性ではないか、または同種抗原に曝露されたことがないＢ細胞及びＮＫ細胞をそれぞれ指す。休止Ｂ細胞のマーカーの例としては、ＣＤ２１及びＣＤ２３が挙げられるとともに、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９５またはＣＤ２５の不在が挙げられる。活性化ＮＫ細胞上で発現するＣＤ１３７及びＧＩＴＲは、休止ＮＫ細胞上では存在しない。その結果、レンチウイルスベクターを用いたＴ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞の形質導入を容易にするために、該Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞は、通常、刺激試薬を用いてインビトロで活性化された後、レンチウイルスベクターを介した遺伝子改変が行われ得る。刺激及び形質導入の後、該遺伝子改変された細胞を、次いで、通常はインビトロで増殖させ、その後、患者に再導入する。しかしながら、本明細書に記載のＬＶＶは、休止Ｔ細胞、Ｂ細胞及び／または休止ＮＫ細胞を形質導入することが可能である。ある特定の実施形態では、本明細書に従うＬＶＶでＴ細胞を形質導入する方法としては、該ＬＶＶをＴ細胞の集団と接触して配することを含み、ここで、該Ｔ細胞は、形質導入プロセスの間に活性化されず、また、該Ｔ細胞は、外因性の刺激剤に曝露されない。いくつかのかかる実施形態では、該Ｔ細胞が形質導入プロセスの間に活性化されず、また、該Ｔ細胞が、外因性の刺激剤に曝露されないＴ細胞の形質導入方法は、Ｔ細胞を、ＣＤ８０標的タンパク質、抗ＣＤ３標的タンパク質、またはＣＤ８０標的タンパク質と抗ＣＤ３標的タンパク質の両方を含むＬＶＶで形質導入することを含む。外因性Ｔ細胞刺激剤の例としては、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片（すなわち、ＬＶＶの一部ではない抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片）、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合断片（すなわち、ＬＶＶの一部ではない抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合断片）、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＨＡ、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。外因性刺激剤は、可溶性形態でＴ細胞に接触させてもよいし、固体基剤、例えば、ビーズまたは細胞培養プレートに固定化してＴ細胞と接触させてもよい。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合断片、抗ＣＤ２８抗体もしくはその抗原結合断片、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体もしくはそれらの抗原結合断片の両方を、可溶性形態でまたは固体基材上に固定化してＴ細胞に接触させる。抗ＣＤ３抗体の例としては、ＯＫＴ３、ＵＣＴＨ１及びＢＷ２６４／５６が挙げられる。抗ＣＤ２抗体の一例は、ＬＴ２である。抗ＣＤ２８抗体の一例は、１５Ｅ８である。ある特定の実施形態では、本明細書に従うＬＶＶでＮＫ細胞を形質導入する方法としては、該ＬＶＶをＮＫ細胞の集団と接触して配することを含み、ここで、該ＮＫ細胞は、形質導入プロセスの間に活性化されず、また、該ＮＫ細胞は、外因性の刺激剤に曝露されない。外因性ＮＫ細胞刺激剤の例としては、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片、抗ＣＤ３３５抗体またはその抗原結合断片、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、またはそれらの組み合わせが挙げられる。ある特定の実施形態では、本明細書に従うＬＶＶでＢ細胞を形質導入する方法としては、該ＬＶＶをＢ細胞の集団と接触して配することを含み、ここで、該Ｂ細胞は、形質導入プロセスの間に活性化されず、また、該Ｂ細胞は、外因性の刺激剤に曝露されない。外因性Ｂ細胞刺激剤の例としては、ＣＤ１５４及び混合Ｉｇ Ｆ（ａｂ）_２が挙げられる。

【0151】

いくつかの実施形態では、ＣＤ８０標的タンパク質及び抗ＣＤ３標的タンパク質を有するレンチウイルスベクターは、標準ＬＶＶと比較して、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の両方を効率的に形質導入することができる。

【0152】

いくつかの実施形態では、ＣＤ８０標的タンパク質及び抗ＣＤ３標的タンパク質を有するレンチウイルスベクターは、外因性刺激（例えば、Ｔ細胞刺激剤）なしで、外因性刺激によって処理された標準ＬＶＶで形質導入されたＴ細胞と同等のレベルまでＴ細胞を活性化することが可能である。外因性Ｔ細胞刺激剤の例としては、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片（すなわち、ＬＶＶの一部ではない抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片）、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合断片（すなわち、ＬＶＶの一部ではない抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合断片）、抗ＣＤ２抗体またはその抗原結合断片、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＰＨＡ、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。

【0153】

ある特定の実施形態では、本明細書に従うＬＶＶでＴ細胞を形質導入する方法は、標準ＬＶＶと比較して、ＣＤ４Ｔ細胞の形質導入の向上を示す。いくつかのかかる実施形態では、Ｔ細胞の混合集団（例えば、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞から構成される）におけるＣＤ４Ｔ細胞の形質導入を高める方法は、該Ｔ細胞の混合集団を、ＣＤ８０標的タンパク質を含む本明細書に従うＬＶＶで形質導入することを含む。

【0154】

ある特定の実施形態では、本明細書に従うＬＶＶでＴ細胞を形質導入する方法は、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の両方を効率的に形質導入する。いくつかのかかる実施形態では、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の両方が効率的に形質導入されるＴ細胞の形質導入方法は、ＣＤ８０標的タンパク質及び抗ＣＤ３標的タンパク質を含むＬＶＶでＴ細胞を形質導入することを含む。

【0155】

ある特定の実施形態では、本明細書に従うＬＶＶは、形質導入の過程で、「ストレス」条件下、例えば、低い感染の多重度（ＭＯＩ）で、または外因性ＩＬ－２での処理を行わずに、Ｔ細胞を形質導入することができる。いくつかの実施形態では、該ＬＶＶは、ＣＤ８０標的タンパク質及び抗ＣＤ３標的タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に従うＬＶＶは、リンパ球を標的としないＬＶＶより約５～約２５倍低いＬＶＶ濃度でＴ細胞を形質導入することが可能である。

【0156】

宿主細胞上でのＣＡＲ分子の発現は、当技術分野で知られる方法、例えば、定量的ＰＣＲまたはＣＡＲ結合ドメインについての蛍光標識抗原での染色後のフローサイトメトリーによって評価され得る。

【0157】

宿主細胞上でのＣＡＲ分子の発現は、Ｔ細胞の結合、活性化または誘導の測定、ならびに抗原特異的なＴ細胞応答の測定を含めた、宿主Ｔ細胞の活性をアッセイするための多数の当技術分野で受け入れられている方法のいずれかに従って機能的に特徴付けることができる。例としては、Ｔ細胞増殖、Ｔ細胞サイトカイン放出、抗原特異的Ｔ細胞刺激、ＣＴＬ活性（例えば、予めロードされた標的細胞からの^５１Ｃｒまたはユウロピウム放出の検出、標的細胞におけるカスパーゼ活性の誘導、標的細胞による乳酸デヒドロゲナーゼの細胞外放出による）、Ｔ細胞表現型マーカー発現の変化、及びＴ細胞機能の他の尺度の測定が挙げられる。同様の方法を用いて、宿主のＮＫ細胞活性のアッセイもアッセイされ得る。これら及び同様のアッセイを行う手順は、例えば、Ｌｅｆｋｏｖｉｔｓ（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍａｎｕａｌ：Ｔｈｅ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｓｏｕｒｃｅｂｏｏｋ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９９８）に見出され得る。同様に、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；Ｗｅｉｒ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ（１９８６）、Ｍｉｓｈｅｌｌ ａｎｄ Ｓｈｉｇｉｉ（ｅｄｓ．）Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｆｒｅｅｍａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ（１９７９）、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｒｅｅｄ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８１：１３０９（１９９８）及びそこで引用されている参考文献も参照されたい。サイトカインレベルは、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、細胞内サイトカイン染色、フローサイトメトリー、及びそれらの任意の組み合わせ（例えば、細胞内サイトカイン染色とフローサイトメトリー）を含めた、当技術分野で知られている方法に従って測定され得る。免疫応答の抗原特異的誘発または刺激に起因する免疫細胞の増殖及びクローン性増殖は、末梢血細胞またはリンパ節の細胞のサンプル中の循環リンパ球等のリンパ球を単離し、該細胞を抗原で刺激し、サイトカイン産生、細胞増殖及び／または細胞生存率を測定すること、例えば、トリチウム化したチミジンの組み込みまたは非放射性アッセイ、例えば、ＭＴＴアッセイ等によって特定され得る。

【0158】

治療のための方法及び組成物
１つの態様では、本開示は、対象における疾患の治療方法を提供し、該方法は、該対象に対して、有効量の本明細書に記載のＬＶＶ、本明細書に記載のＣＡＲ改変リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、もしくはＮＫ細胞）、またはその医薬組成物を投与することを含む。別の態様では、本明細書に従う対象における疾患の治療方法は、該対象に対して、有効量の本明細書に記載のＬＶＶ、本明細書に記載のＣＡＲ改変リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、もしくはＮＫ細胞）、またはその医薬組成物を、１つ以上のさらなる治療薬と組み合わせて投与することを含む。

【0159】

本明細書に従うＬＶＶまたはＣＡＲ改変リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、もしくはＮＫ細胞）で治療され得る疾患としては、がんが挙げられる。養子免疫療法及び遺伝子治療は、様々な種類のがん（Ｍｏｒｇａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１４：１２６，２００６、Ｓｃｈｍｉｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０：１２４０，２００９、Ｊｕｎｅ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１７：１４６６，２００７）及び感染症（Ｋｉｔｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ４：３８２０８，２００９、Ｒｏｓｓｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２５：１４４４，２００７、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇ．６：ｅ１００１０１８，２０１０、Ｌｕｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８９：９０３，２０１１）に対する有望な治療法である。

【0160】

固形腫瘍及び白血病を含めた広範ながんが、本明細書に開示する組成物及び方法に適している。本明細書に記載の受容体、改変宿主細胞、及び組成物を使用して治療され得る例示的ながんとしては、乳房、前立腺、及び結腸の腺癌、あらゆる形態の肺の気管支癌、骨髄性白血病、黒色腫、肝癌、神経芽細胞腫、乳頭腫、アプドーマ、分離腫、鰓腫、悪性カルチノイド症候群、カルチノイド心疾患、ならびに癌腫（例えば、ウォーカー、基底細胞、基底扁平上皮、ブラウン・ピアース、腺管、エールリッヒ腫瘍、クレブス２、メルケル細胞、粘液性、非小細胞肺、エンバク細胞、乳頭、硬性、細気管支、気管支原性、扁平上皮細胞、及び移行上皮）が挙げられる。本明細書に記載の受容体、改変宿主細胞、及び組成物を使用して治療され得るさらなるがんの種類としては、組織球性障害、悪性組織球増殖症、白血病、ホジキン病、免疫増殖性小、非ホジキンリンパ腫、形質細胞腫、多発性骨髄腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、形質細胞腫、細網内皮症、黒色腫、軟骨芽細胞腫、軟骨腫、軟骨肉腫、線維腫、線維肉腫、巨細胞腫、組織球腫、脂肪腫、脂肪肉腫、中皮腫、粘液腫、粘液肉腫、骨腫、骨肉腫、脊索腫、頭蓋咽頭腫、未分化胚細胞腫、過誤腫、間葉腫、中腎腫、筋肉腫、エナメル上皮腫、セメント腫、歯牙腫、奇形腫、胸腺腫、絨毛性腫瘍が挙げられる。さらに、以下の種類のがんも、本明細書に記載の受容体、改変宿主細胞、及び組成物を使用した治療に適していることが企図される：アデノーマ、胆管腫、真珠腫、円柱腫、嚢胞腺癌、嚢胞腺腫、顆粒膜細胞腫、男性胚腫、肝癌、汗腺腫、膵島細胞腫瘍、ライディッヒ細胞腫瘍、乳頭腫、セルトリ細胞腫、莢膜細胞腫、平滑筋腫、平滑筋肉腫、筋芽細胞腫、筋腫、筋肉腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、上衣腫、神経節神経腫、神経膠腫、髄芽腫、髄膜腫、神経鞘腫、神経芽細胞腫、神経上皮腫、神経線維腫、神経腫、傍神経節腫、非クロム性親和性傍神経節腫。治療され得るがんの種類としては、被角血管腫、好酸球性血管リンパ球増殖症、硬化性血管腫、血管腫症、グロムス血管腫、血管内皮腫、血管腫、血管周囲細胞腫、血管肉腫、リンパ管腫、リンパ管肉腫、松果体腫、がん肉腫、軟骨肉腫、葉状嚢肉腫、線維肉腫、血管肉腫、平滑筋肉腫、白血肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、筋肉腫、粘液肉腫、卵巣癌、横紋筋肉腫、肉腫、新生物、神経線維腫症、子宮頸部異形成、及び腹膜癌も挙げられる。

【0161】

本明細書に記載の受容体、改変宿主細胞、及び組成物を使用した治療に適している過剰増殖性障害の例としては、Ｂ細胞リンパ腫（例えば、様々な形態のホジキン病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）または中枢神経系リンパ腫）を含めたＢ細胞癌（Ｂ細胞悪性腫瘍）、白血病（例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリー細胞白血病、慢性骨髄性白血病のＢ細胞芽球化現象、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病、及び骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）が挙げられる。本明細書に記載の受容体、改変宿主細胞、及び組成物を使用して治療され得るさらなるＢ細胞癌としては、小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、孤立性骨形質細胞腫、骨外形質細胞腫、粘膜内リンパ組織（ＭＡＬＴ）の節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性体液性リンパ腫、バーキットリンパ腫／白血病、悪性度が不明確なＢ細胞増殖、リンパ腫様肉芽腫症、及び移植後リンパ増殖性疾患が挙げられる。

【0162】

本明細書に開示する組成物に含まれ、対象に投与されるＣＡＲ改変リンパ球としては、ＣＡＲ改変Ｔ細胞、例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、ガンマデルタＴ細胞、もしくはＭＡＩＴ細胞、ＣＡＲ改変Ｂ細胞、またはＣＡＲ改変ＮＫ細胞を挙げてもよい。ある特定の実施形態では、対象の治療方法は、有効量の本明細書に記載のＬＶＶまたは本開示に従うＣＡＲ改変リンパ球（すなわち、１つ以上のＣＡＲを発現する組み換え細胞）を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ改変Ｔ細胞が、対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ改変ＮＫ細胞が、対象に投与される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ改変Ｂ細胞が、対象に投与される。該ＣＡＲ改変リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞）は、対象にとって異種、同系、同種、または自己であり得る。

【0163】

該ＬＶＶまたはＣＡＲで操作されたリンパ球を含む医薬組成物は、医学分野の当業者によって決定される、治療（または予防）される疾患または状態に適切な方法で投与され得る。該組成物の適切な用量、適切な投与期間、及び投与頻度は、患者の状態、サイズ、体重、体表面積、年齢、性別、疾患の種類及び重症度、投与される特定の療法、活性成分の特定の形態、投与の時間及び方法、ならびに同時に投与される他の薬物等の要因によって決定される。本開示は、ＬＶＶまたはＣＡＲ改変リンパ球、及び医薬的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。適切な賦形剤としては、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール等及びそれらの組み合わせが挙げられる。他の適切な注入媒体は、生理食塩水、Ｎｏｒｍｏｓｏｌ Ｒ（Ａｂｂｏｔｔ）、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（Ｂａｘｔｅｒ）、５％デキストロース水溶液、または乳酸リンゲル液を含めた任意の等張媒体配合物でよい。

【0164】

医薬組成物に含まれる治療有効量の操作されたリンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞）は、少なくとも１個の細胞（例えば、１個のＣＡＲ改変Ｔ細胞）であり、より典型的には、１０^２個より多く、例えば、最大１０^６個、最大１０^７個、最大１０^８個、最大１０^９個、最大１０^１０個、または最大１０^１１個もしくはそれを超える。ある特定の実施形態では、該細胞は、約１０^６～約１０^１０個／ｍ^２の範囲で、好ましくは、約１０^７～約１０^９細胞／ｍ^２の範囲で投与される。細胞の数は、該組成物が意図される最終的な用途ならびにその中に含まれる細胞の種類に依存する。例えば、ＣＡＲを含むように改変されたＴ細胞を含む組成物は、かかる細胞を約５％～約９５％またはそれ以上含むＴ細胞集団を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ改変Ｔ細胞を含む組成物は、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上のかかる細胞を含む細胞集団を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ改変ＮＫ細胞を含む組成物は、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上のかかる細胞を含む細胞集団を含む。ある特定の実施形態では、ＣＡＲ改変Ｂ細胞を含む組成物は、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上のかかる細胞を含む細胞集団を含む。本明細書に提供する使用の場合、該リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞）は、一般に、１リットル以下、５００ｍｌ以下、２５０ｍｌ以下、または１００ｍｌ以下の体積である。したがって、所望の細胞の密度は、通常は、１０^４細胞／ｍｌより高く、一般に、１０^７細胞／ｍｌより高く、一般に１０^８細胞／ｍｌ以上である。該リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞）は、単一の注入として投与される場合もあれば、一定時間にわたる複数回の注入で投与される場合もある。ＣＡＲ改変リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞）の繰り返しの注入は、疾患または疾患活動性の再発が存在する場合、数日、数週間、数ヶ月、またはさらには数年間隔でよい。臨床的に意義のある数の免疫細胞を、累積で１０^６、１０^７、１０^８、１０^９、１０^１０、または１０^１１個の細胞以上となるように複数回の注入に分配することができる。本明細書に記載の組み換え発現ベクターを含む宿主細胞の投与に好ましい用量は、約１０^７細胞／ｍ^２、約５ｘ１０^７細胞／ｍ^２、約１０^８細胞／ｍ^２、約５ｘ１０^８細胞／ｍ^２、約１０^９細胞／ｍ^２、約５ｘ１０^９細胞／ｍ^２、約１０^１０細胞／ｍ^２、約５ｘ１０^１０細胞／ｍ^２、または約１０^１１細胞／ｍ^２である。

【0165】

本明細書に記載のＬＶＶ及び／またはＣＡＲ改変リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞）組成物は、対象に対して、静脈内、腹腔内、腫瘍内、骨髄内（例えば、骨内投与）、リンパ節内（節内）、及び／または脳脊髄液内投与され得る。

【0166】

該ＬＶＶベクター及び／またはＣＡＲ改変リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞）組成物は、１つ以上のさらなる治療薬と組み合わせて対象に投与され得る。本明細書に従うＬＶＶベクターまたはＣＡＲ改変リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞）と組み合わせて投与され得る治療薬の例としては、放射線療法、養子細胞免疫療法薬（例えば、組み換えＴＣＲ、親和性強化ＴＣＲ、ＣＡＲ、ＴＣＲ－ＣＡＲ、ｓｃＴＣＲ融合タンパク質、樹状細胞ワクチン）、抗体療法、免疫チェックポイント分子阻害剤療法、紫外線療法、電気パルス療法、高密度焦点式超音波療法、腫瘍溶解性ウイルス療法、または薬物療法、例えば、化学療法薬、治療用ペプチド、ホルモン、アプタマー、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗炎症剤、小分子療法、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。

【0167】

放射線療法としては、外照射療法（例えば、従来の外照射療法、定位放射線、３次元原体放射線治療、強度変調放射線治療、強度変調回転放射線治療、粒子線治療、陽子線療法、及びオージェ療法）、小線源療法、全身放射性同位体療法、術中放射線療法、またはそれらの任意の組み合せが挙げられる。

【0168】

本明細書に記載のＬＶＶまたはＣＡＲ改変リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞）組成物と併用され得る例示的な抗体としては、リツキシマブ、ペルツズマブ、トラスツズマブ、アレムツズマブ、イブリツモマブチウキセタン、ブレンツキシマブベドチン、セツキシマブ、ベバシズマブ、アブシキシマブ、アダリムマブ、アレファセプト、バシリジマブ（ｂａｓｉｌｉｚｉｍａｂ）、ベリムマブ、ベズロトクスマブ、カナキヌマブ、セルトリズマブペゴル、ダクリズマブ、デノスマブ、エファリズマブ、ゴリムマブ、オララツマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、及びトシリズマブが挙げられる。

【0169】

本明細書に記載のＬＶＶまたはＣＡＲ改変リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞）組成物と併用され得る例示的な免疫チェックポイント分子の阻害剤としては、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＨＶＥＭ、アデノシン、ＧＡＬ９、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－５、ＰＶＲＬ２、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ａ２ａＲ、ＣＤ２４４／２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ－１、ＰＶＲＩＧ／ＣＤ１１２Ｒ、またはそれらの任意の組み合わせを標的とするチェックポイント阻害剤が挙げられる。ある特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗体、ペプチド、ＲＮＡｉ剤、または小分子であり得る。ＣＴＬＡ－４に特異的な抗体は、イピリムマブまたはトレメリムマブであり得る。ＰＤ－１に特異的な抗体は、ピジリズマブ、ニボルマブ、またはペムブロリズマブであり得る。ＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、またはアベルマブであり得る。

【0170】

本明細書に記載のＬＶＶまたはＣＡＲ改変リンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞）組成物と併用され得る例示的な化学療法剤としては、アルキル化剤、白金系薬剤、細胞傷害性薬、クロマチン機能の阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管阻害薬、ＤＮＡ損傷剤、代謝拮抗剤（例えば、葉酸アンタゴニスト、ピリミジンアナログ、プリンアナログ、糖修飾アナログ）、ＤＮＡ合成阻害剤、ＤＮＡ相互作用剤（例えば、挿入剤）、及びＤＮＡ修復阻害剤を挙げてもよい。

【0171】

本明細書で言及される化学療法としては、有糸分裂または細胞分裂を阻害する非特異的な細胞傷害剤、ならびに腫瘍増殖、進行及び転移に関与する特定の分子（例えば、発がん遺伝子）を標的とすることによってがん細胞の増殖及び拡大をブロックする分子標的療法が挙げられる。本明細書に記載の発現カセット組成物と併用される例示的な非特異的化学療法剤としては、アルキル化剤、白金系薬剤、細胞傷害性薬、クロマチン機能の阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管阻害薬、ＤＮＡ損傷剤、代謝拮抗剤（例えば、葉酸アンタゴニスト、ピリミジンアナログ、プリンアナログ、糖修飾アナログ）、ＤＮＡ合成阻害剤、ＤＮＡ相互作用剤（例えば、挿入剤）、低メチル化剤、及びＤＮＡ修復阻害剤を挙げてもよい。

【0172】

本明細書で企図される併用療法での使用が考慮される化学療法剤の例としては、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、トラメチニブ、コビメチニブ、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、硫酸ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、ブスルファン注射液（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、Ｎ４－ペントキシカルボニル－５－デオキシ－５－フルオロシチジン、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）またはＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ－Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注射液（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ Ｄ、Ｃｏｓｍｅｇａｎ）、塩酸ダウノルビシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、ダウノルビシンクエン酸塩リポソーム注射液（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、塩酸ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、リン酸フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、５－フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン（ｔｅｚａｃｉｔｉｂｉｎｅ）、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ－アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、６－メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、メトトレキサート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、フェニックス（イットリウム９０／ＭＸ－ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、ポリフェプロサン２０とカルムスチンインプラント（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））、ｆｄａｂｒａクエン酸タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６－チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注射用トポテカン塩酸塩（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、イブルチニブ、ベネトクラクス、クリゾチニブ、アレクチニブ、ブリガチニブ、セリチニブ、及びビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））が挙げられる。

【0173】

本明細書で企図される併用療法での使用のための例示的なアルキル化剤としては、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソウレア及びトリアゼン、ウラシルマスタード（Ａｍｉｎｏｕｒａｃｉｌ Ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎａｃｉｌ（登録商標）、Ｄｅｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｈａｅｍａｎｔｈａｍｉｎｅ（登録商標）、Ｎｏｒｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌ ｎｉｔｒｏｇｅｎ Ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｌｏｓｔ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｍｏｓｔａｚａ（登録商標）、Ｕｒａｍｕｓｔｉｎ（登録商標）、Ｕｒａｍｕｓｔｉｎｅ（登録商標））、クロルメチン（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｃｌａｆｅｎ（登録商標）、Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（商標））、イホスファミド（Ｍｉｔｏｘａｎａ（登録商標））、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、ピポブロマン（Ａｍｅｄｅｌ（登録商標）、Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））、トリエチレンメラミン（Ｈｅｍｅｌ（登録商標）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、Ｈｅｘａｓｔａｔ（登録商標））、トリエチレンチオホスホルアミン、テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標））、チオテパ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、ブスルファン（Ｂｕｓｉｌｖｅｘ（登録商標）、Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ロムスチン（ＣｅｅＮＵ（登録商標））、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））、ならびにダカルバジン（ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））が挙げられる。本明細書で企図される併用療法での使用のためのさらなる例示的なアルキル化剤としては、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））、テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標）及びＴｅｍｏｄａｌ（登録商標））、ダクチノマイシン（別名アクチノマイシン－Ｄ、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））、メルファラン（別名Ｌ－ＰＡＭ、Ｌ－サルコリシン、及びフェニルアラニンマスタード、Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、アルトレタミン（別名ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ベンダムスチン（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））、ブスルファン（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）及びＭｙｌｅｒａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、ロムスチン（別名ＣＣＮＵ、ＣｅｅＮＵ（登録商標））、シスプラチン（別名ＣＤＤＰ、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）及びＰｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）－ＡＱ）、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）及びＮｅｏｓａｒ（登録商標））、ダカルバジン（別名ＤＴＩＣ、ＤＩＣ及びイミダゾールカルボキサミド、ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））、アルトレタミン（別名ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））、イホスファミド（Ｉｆｅｘ（登録商標））、プレドヌムスチン（Ｐｒｅｄｎｕｍｕｓｔｉｎｅ）、プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））、メクロレタミン（別名ナイトロジェンマスタード、ムスチン及び塩酸メクロレタミン、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））、チオテパ（別名チオホスホアミド、ＴＥＳＰＡ及びＴＳＰＡ、Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、ならびにベンダムスチンＨＣｌ（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））が挙げられるがこれらに限定されない。

【0174】

本明細書で企図される併用療法での使用のための例示的な白金系薬剤としては、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン、フェナントリプラチン、及びトリプラチンテトラニトレートが挙げられる。

【0175】

併用療法での使用のための例示的な低メチル化剤としては、アザシチジン及びデシタビンが挙げられる。

【0176】

本明細書で企図される併用療法での使用するための例示的な分子標的阻害剤としては、例えば、受容体チロシンキナーゼ阻害剤、ＲＡＦ阻害剤、ＢＣＬ－２阻害剤、ＡＢＬ阻害剤、ＴＲＫ阻害剤、ｃ－ＫＩＴ阻害剤、ｃ－ＭＥＴ阻害剤、ＣＤＫ４／６阻害剤、ＦＡＫ阻害剤、ＦＧＦＲ阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＩＤＨ１阻害剤、ＩＤＨ２阻害剤、ＰＤＧＦＲＡ阻害剤、及びＲＥＴ阻害剤を含めたがん細胞の増殖及び生存に関与する分子を標的とする小分子が挙げられる。

【0177】

例示的な分子標的治療としては、ホルモンアンタゴニスト、シグナル伝達阻害剤、遺伝子発現阻害剤（例えば、翻訳阻害剤）、アポトーシス誘導剤、血管新生阻害剤（例えば、ＶＥＧＦ経路阻害剤）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＥＧＦ／ＥＧＦＲ経路阻害剤）、成長因子阻害剤、ＧＴＰａｓｅ阻害剤、セリン／スレオニンキナーゼ阻害剤、転写因子阻害剤、がんに関連するドライバー変異の阻害剤、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤、ＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、アデノシン経路阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＢＣＬ２阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＭＹＣ阻害剤、ＢＣＲ－ＡＢＬ阻害剤、ＡＢＬ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、Ｈ－ＲＡＳ阻害剤、Ｋ－ＲＡＳ阻害剤、ＰＤＧＦＲ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ＲＯＳ１阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ＴＲＫ阻害剤、ｃ－ＫＩＴ阻害剤、ｃ－ＭＥＴ阻害剤、ＣＤＫ４／６阻害剤、ＦＡＫ阻害剤、ＦＧＦＲ阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＩＤＨ１阻害剤、ＩＤＨ２阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、ＰＤＧＦＲＡ阻害剤、及びＲＥＴ阻害剤が挙げられる。

【0178】

例示的な血管新生阻害剤としては、Ａ６（Ａｎｇｓｔｒｏｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＢＴ－５１０（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＡＢＴ－６２７（Ａｔｒａｓｅｎｔａｎ）（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ／Ｘｉｎｌａｙ）、ＡＢＴ－８６９（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、Ａｃｔｉｍｉｄ（ＣＣ４０４７、ポマリドミド）（Ｃｅｌｇｅｎｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＡｄＧＶＰＥＤＦ．１１Ｄ（ＧｅｎＶｅｃ）、ＡＤＨ－１（Ｅｘｈｅｒｉｎ）（Ａｄｈｅｒｅｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＡＥＥ７８８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＡＧ－０１３７３６（Ａｘｉｔｉｎｉｂ）（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＡＧ３３４０（Ｐｒｉｎｏｍａｓｔａｔ）（Ａｇｏｕｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＧＸ１０５３（ＡｎｇｉｏＧｅｎｅｘ）、ＡＧＸ５１（ＡｎｇｉｏＧｅｎｅｘ）、ＡＬＮ－ＶＳＰ（ＡＬＮ－ＶＳＰ Ｏ２）（Ａｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＭＧ ３８６（Ａｍｇｅｎ）、ＡＭＧ７０６（Ａｍｇｅｎ）、アパチニブ（ＹＮ９６８Ｄ１）（Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈｅｎｇｒｕｉ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）、ＡＰ２３５７３（Ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ／ＭＫ８６６９）（Ａｒｉａｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＱ４Ｎ（Ｎｏｖａｖｅａ）、ＡＲＱ １９７（ＡｒＱｕｌｅ）、ＡＳＡ４０４（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ａｎｔｉｓｏｍａ）、Ａｔｉｐｒｉｍｏｄ（Ｃａｌｌｉｓｔｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＴＮ－１６１（Ａｔｔｅｎｕｏｎ）、ＡＶ－４１２（Ａｖｅｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＶ－９５１（Ａｖｅｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、アバスチン（ベバシズマブ）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＡＺＤ２１７１（セディラニブ／Ｒｅｃｅｎｔｉｎ）（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＢＡＹ ５７－９３５２（テラチニブ）（Ｂａｙｅｒ）、ＢＥＺ２３５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＩＢＦ１１２０（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＩＢＷ ２９９２（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＭＳ－２７５２９１（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＢＭＳ－５８２６６４（ブリバニブ）（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＢＭＳ－６９０５１４（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、カルシトリオール、ＣＣＩ－７７９（トーリセル）（Ｗｙｅｔｈ）、ＣＤＰ－７９１（ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、セフラトニン（Ｃｅｆｌａｔｏｎｉｎ）（ホモハリングトニン／ＨＨＴ）（ＣｈｅｍＧｅｎｅｘ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、セレブレックス（セレコキシブ）（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＣＥＰ－７０５５（セファロン／Ｓａｎｏｆｉ）、ＣＨＩＲ－２６５（Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＮＧＲ－ＴＮＦ、ＣＯＬ－３（メタスタット）（Ｃｏｌｌａｇｅｎｅｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、コンブレタスタチン（Ｏｘｉｇｅｎｅ）、ＣＰ－７５１，８７１（フィギツムマブ）（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＣＰ－５４７，６３２（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＣＳ－７０１７（Ｄａｉｉｃｈｉ Ｓａｎｋｙｏ Ｐｈａｒｍａ）、ＣＴ－３２２（Ａｎｇｉｏｃｅｐｔ）（Ａｄｎｅｘｕｓ）、クルクミン、ダルテパリン（Ｆｒａｇｍｉｎ）（Ｐｆｉｚｅｒ））、ジスルフィラム（アンタビュース）、Ｅ７８２０（Ｅｉｓａｉ Ｌｉｍｉｔｅｄ）、Ｅ７０８０（Ｅｉｓａｉ Ｌｉｍｉｔｅｄ）、ＥＭＤ １２１９７４（Ｃｉｌｅｎｇｉｔｉｄｅ）（ＥＭＤ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＥＮＭＤ－１１９８（ＥｎｔｒｅＭｅｄ）、ＥＮＭＤ－２０７６（ＥｎｔｒｅＭｅｄ）、Ｅｎｄｏｓｔａｒ（Ｓｉｍｃｅｒｅ）、アービタックス（ＩｍＣｌｏｎｅ／Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＥＺＮ－２２０８（Ｅｎｚｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＥＺＮ－２９６８（Ｅｎｚｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＧＣ１００８（Ｇｅｎｚｙｍｅ）、ゲニステイン、ＧＳＫ１３６３０８９（フォレチニブ）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＧＷ７８６０３４（パゾパニブ）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＧＴ－１１１（Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｂｉｏｇｅｎｉｃｓ Ｌｔｄ．）、ＩＭＣ－１１２１Ｂ（ラムシルマブ）（ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ＩＭＣ－１８Ｆ１（ＩｍＣｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ＩＭＣ－３Ｇ３（ＩｍＣｌｏｎｅ ＬＬＣ）、ＩＮＣＢ００７８３９（Ｉｎｃｙｔｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＩＮＧＮ ２４１（Ｉｎｔｒｏｇｅｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、イレッサ（ＺＤ１８３９／Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）、ＬＢＨ５８９（Ｆａｒｉｄａｋ／Ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔｓｔ）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ルセンティス（ラニビズマブ）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＬＹ３１７６１５（エンザスタウリン）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）、マクジェン（ペガプタニブ）（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＭＥＤＩ５２２（Ａｂｅｇｒｉｎ）（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ＭＬＮ５１８（タンズチニブ）（Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ）、Ｎｅｏｖａｓｔａｔ（ＡＥ９４１／ベネフィン）（Ａｅｔｅｒｎａ Ｚｅｎｔａｒｉｓ）、ネクサバール（Ｂａｙｅｒ／Ｏｎｙｘ）、ＮＭ－３（Ｇｅｎｚｙｍｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ノスカピン（Ｃｏｕｇａｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ＮＰＩ－２３５８（Ｎｅｒｅｕｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＯＳＩ－９３０（ＯＳＩ）、Ｐａｌｏｍｉｄ ５２９（Ｐａｌｏｍａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、Ｐａｎｚｅｍ Ｃａｐｓｕｌｅｓ（２ＭＥ２）（ＥｎｔｒｅＭｅｄ）、Ｐａｎｚｅｍ ＮＣＤ（２ＭＥ２）（ＥｎｔｒｅＭｅｄ）、ＰＦ－０２３４１０６６（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＰＦ－０４５５４８７８（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＰＩ－８８（Ｐｒｏｇｅｎ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ／Ｍｅｄｉｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ＰＫＣ４１２（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ポリフェノンＥ（緑茶抽出物）（Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏ Ｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）、ＰＰＩ－２４５８（Ｐｒａｅｃｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＰＴＣ２９９（ＰＴＣ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＰＴＫ７８７（バタラニブ）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＰＸＤ１０１（ベリノスタット）（ＣｕｒａＧｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＲＡＤ００１（エベロリムス）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＲＡＦ２６５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３－４５０６）（Ｂａｙｅｒ）、レブラミド（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、Ｒｅｔａａｎｅ（Ａｌｃｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、ＳＮ３８（Ｌｉｐｏｓｏｍａｌ）（Ｎｅｏｐｈａｒｍ）、ＳＮＳ－０３２（ＢＭＳ－３８７０３２）（Ｓｕｎｅｓｉｓ）、ＳＯＭ２３０（パシレオチド）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、スクアラミン（Ｇｅｎａｅｒａ）、スラミン、スーテント（Ｐｆｉｚｅｒ）、タルセバ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＴＢ－４０３（Ｔｈｒｏｍｂｏｇｅｎｉｃｓ）、Ｔｅｍｐｏｓｔａｔｉｎ（Ｃｏｌｌａｒｄ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、テトラチオモリブデート（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＴＧ１００８０１（ＴａｒｇｅＧｅｎ）、サリドマイド（Ｃｅｌｇｅｎｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、チンザパリンナトリウム、ＴＫＩ２５８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＴＲＣ０９３（Ｔｒａｃｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．）、ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（アフリベルセプト）（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ－Ｅｙｅ（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、Ｖｅｇｌｉｎ（ＶａｓＧｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ボルテゾミブ（Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ）、ＸＬ１８４（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＸＬ６４７（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＸＬ７８４（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＸＬ８２０（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＸＬ９９９（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ボリノスタット（Ｍｅｒｃｋ）、及びＺＳＴＫ４７４が挙げられるがこれらに限定されない。

【0179】

例示的なＢ－Ｒａｆ阻害剤としては、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、及びエンコラフェニブが挙げられる。

【0180】

例示的なＭＥＫ阻害剤としては、ビニメチニブ、コビメチニブ、レファメチニブ（ｒｅｆａｍｅｔｉｎｉｂ）、セルメチニブ、及びトラメチニブが挙げられる。

【0181】

例示的なＢＴＫ阻害剤としては、イブルチニブ、Ｌｏｘｏ－３０５、チラブルチニブ（ｔｉｒａｂｒｕｔｉｎｉｂ）、ＧＤＣ－０８５３、アカラブルチニブ、ＯＮＯ－４０５９、スペブルチニブ（ｓｐｅｂｒｕｔｉｎｉｂ）、ＢＧＢ－３１１１、ＨＭ７１２２４、及びＭ７５８３が挙げられる。

【0182】

例示的なＴＲＫ阻害剤としては、エントレクチニブ（ｅｎｔｒｅｃｔｉｎｉｂ）、ラロトレクチニブ（ｌａｒｏｔｒｅｃｔｉｎｉｂ）、ＣＨ７０５７２８８、ＯＮＯ－７５７９、ＬＯＸＯ－１０１、レスタウルチニブ、及びＬＯＸＯ－１９５が挙げられる。

【0183】

例示的なｃ－ＫＩＴ阻害剤としては、イマチニブ、スニチニブ、及びポナチニブが挙げられる。

【0184】

例示的なｃ－ＭＥＴ阻害剤としては、カプマチニブ、クリゾチニブ、チバンチニブ、オナルツズマブ（ｏｎａｒｔｕｚｕｍａｂ）、ＩＮＣＢ２８０６０、ＡＭＧ－４５８、サボリチニブ（ｓａｖｏｌｉｔｉｎｉｂ）、及びテポチニブ（ｔｅｐｏｔｉｎｉｂ）が挙げられる。

【0185】

例示的なＣＤＫ４／６阻害剤としては、パルボシクリブ、リボシクリブ（ｒｉｂｏｃｉｃｌｉｂ）、アベマシクリブ、及びトリラシクリブ（ｔｒｉｌａｃｉｃｌｉｂ）が挙げられる。

【0186】

例示的なＦＡＫ阻害剤には、デファクチニブ（ｄｅｆａｃｔｉｎｉｂ）、ＧＳＫ２２５６０９８、ＢＩ８５３５２０、及びＰＦ－００５６２２７１が挙げられる。

【0187】

例示的なＦＧＦＲ阻害剤としては、エルダフィチニブ（ｅｒｄａｆｉｔｉｎｉｂ）、ペミガチニブ、インフィグラチニブ（ｉｎｆｉｇｒａｔｉｎｉｂ）、ロガラチニブ（ｒｏｇａｒａｔｉｎｉｂ）、ＡＺＤ４５４７、ＢＧＪ３９８、ＦＰ－１０３９、及びＡＲＱ０８７が挙げられる。

【0188】

例示的なＦＬＴ－３阻害剤としては、キザルチニブ、クレノラニブ（ｃｒｅｎｏｌａｎｉｂ）、ギルテリチニブ、ミドスタウリン（ｍｉｄｏｓｔａｕｒｉｎ）、及びレスタウルチニブが挙げられる。

【0189】

例示的なＩＤＨ１阻害剤としては、イボシデニブ（ｉｖｏｓｉｄｅｎｉｂ）、ＢＡＹ－１４３６０３２、及びＡＧＩ－５１９８が挙げられる。

【0190】

例示的なＩＤＨ２阻害剤としては、エナシデニブ（ｅｎａｓｉｄｅｎｉｂ）が挙げられる。

【0191】

例示的なＰＡＲＰ阻害剤としては、タラゾパリブ（ｔａｌａｚｏｐａｒｉｂ）、ニラパリブ、ルカパリブ（ｒｕｃａｐａｒｉｂ）、オラパリブ、ベリパリブ（ｖｅｌｉｐａｒｉｂ）、ＣＥＰ ９７２２、Ｅ７０１６、ＡＧ０１４６９９、ＭＫ４８２７、ＢＭＮ－６７３、及びパミパリブ（Ｐａｍｉｐａｒｉｂ）（ＢＧＢ－２９０）が挙げられる。

【0192】

例示的なＰＤＧＦＲＡ阻害剤としては、イマチニブ、レゴラフェニブ、クレノラニブ（ｃｒｅｎｏｌａｎｉｂ）、及びオララツマブ（ｏｌａｒａｔｕｍａｂ）が挙げられる。

【0193】

例示的な汎ＲＡＦ阻害剤としては、ベルバラフェニブ（ｂｅｌｖａｒａｆｅｎｉｂ）、ＬＸＨ２５４、ＬＹ３００９１２０、ＩＮＵ－１５２、及びＨＭ９５５７３が挙げられる。

【0194】

例示的なＲＥＴ阻害剤としては、レンバチニブ、アレクチニブ、バンデタニブ、カボザンチニブ、ＢＬＵ－６６７、及びＬＯＸＯ－２９２が挙げられる。

【0195】

例示的なＲＯＳ１阻害剤としては、セリチニブ、ロルラチニブ、エントレクチニブ、クリゾチニブ、ＴＰＸ－０００５、及びＤＳ－６０５１ｂが挙げられる。

【0196】

例示的な血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体阻害剤としては、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、アキシチニブ（Ｉｎｌｙｔａ（登録商標））、ブリバニブアラニネート（ＢＭＳ－５８２６６４、（Ｓ）－（（Ｒ）－１－（４－（４－フルオロ－２－メチル－１Ｈ－インドール－５－イルオキシ）－５－メチルピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－６－イルオキシ）プロパン－２－イル）２－アミノプロパノエート）、ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））、パゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標））、リンゴ酸スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））、セディラニブ（ＡＺＤ２１７１、ＣＡＳ ２８８３８３－２０－１）、バルガテフ（Ｖａｒｇａｔｅｆ）（ＢＩＢＦ１１２０、ＣＡＳ ９２８３２６－８３－４）、フォレチニブ（ＧＳＫ１３６３０８９）、テラチニブ（ＢＡＹ５７－９３５２、ＣＡＳ ３３２０１２－４０－５）、アパチニブ（ＹＮ９６８Ｄ１、ＣＡＳ ８１１８０３－０５－１）、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、ポナチニブ（ＡＰ２４５３４、ＣＡＳ ９４３３１９－７０－８）、チボザニブ（ＡＶ９５１、ＣＡＳ ４７５１０８－１８－０）、レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３－４５０６、ＣＡＳ ７５５０３７－０３－７）、バタラニブ二塩酸塩（ＰＴＫ７８７、ＣＡＳ ２１２１４１－５１－０）、ブリバニブ（ＢＭＳ－５４０２１５、ＣＡＳ ６４９７３５－４６－６）、バンデタニブ（Ｃａｐｒｅｌｓａ（登録商標）またはＡＺＤ６４７４）、モテサニブ二リン酸塩（ＡＭＧ７０６、ＣＡＳ ８５７８７６－３０－３、Ｎ－（２，３－ジヒドロ－３，３－ジメチル－１Ｈ－インドール－６－イル）－２－［（４－ピリジニルメチル）アミノ］－３－ピリジンカルボキサミド、ＰＣＴ公開第ＷＯ０２／０６６４７０号に記載されている）、ドビチニブ（Ｄｏｖｉｔｉｎｉｂ）ジ乳酸（ＴＫＩ２５８、ＣＡＳ ８５２４３３－８４－２）、リンファニブ（Ｌｉｎｆａｎｉｂ）（ＡＢＴ８６９、ＣＡＳ ７９６９６７－１６－３）、カボザンチニブ（ＸＬ１８４、ＣＡＳ ８４９２１７－６８－１）、レスタウルチニブ（ＣＡＳ １１１３５８－８８－４）、Ｎ－［５－［［［５－（１，１－ジメチルエチル）－２－オキサゾリル］メチル］チオ］－２－チアゾリル］－４－ピペリジンカルボキサミド（ＢＭＳ３８７０３、ＣＡＳ ３４５６２７－８０－７）、（３Ｒ，４Ｒ）－４－アミノ－１－（（４－（（３－メトキシフェニル）アミノ）ピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－５－イル）メチル）ピペリジン－３－オール（ＢＭＳ６９０５１４）、Ｎ－（３，４－ジクロロ－２－フルオロフェニル）－６－メトキシ－７－［［（３ａα，５β，６ａα）－オクタヒドロ－２－メチルシクロペンタ［ｃ］ピロール－５－イル］メトキシ］－４－キナゾリンアミン（ＸＬ６４７、ＣＡＳ ７８１６１３－２３－８）、４－メチル－３－［［１－メチル－６－（３－ピリジニル）－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－４－イル］アミノ］－Ｎ－［３－（トリフルオロメチル）フェニル］－ベンズアミド（ＢＨＧ７１２、ＣＡＳ ９４０３１０－８５－０）、及びアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））が挙げられるがこれらに限定されない。

【0197】

例示的なＥＧＦ経路阻害薬としては、チロホスチン４６、ＥＫＢ－５６９、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））、アービタックス、ニモツズマブ、ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標））、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ）、^１８８Ｒｅ標識ニモツズマブ（抗ＥＧＦＲ ｍＡｂ）、ならびにＷＯ ９７／０２２６６、ＥＰ ０ ５６４ ４０９、ＷＯ ９９／０３８５４、ＥＰ ０ ５２０ ７２２、ＥＰ ０ ５６６ ２２６、ＥＰ ０ ７８７ ７２２、ＥＰ ０ ８３７ ０６３、米国特許第５，７４７，４９８号、ＷＯ ９８／１０７６７、ＷＯ ９７／３００３４、ＷＯ ９７／４９６８８、ＷＯ ９７／３８９８３及びＷＯ ９６／３３９８０に一般的及び具体的に開示される化合物が挙げられるがこれらに限定されない。例示的なＥＧＦＲ抗体としては、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標））、マツズマブ（ＥＭＤ－７２０００）、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、ニモツズマブ（ｈＲ３）、ザルツムマブ、ＴｈｅｒａＣＩＭ ｈ－Ｒ３、ＭＤＸ０４４７（ＣＡＳ ３３９１５１－９６－１）、及びｃｈ８０６（ｍＡｂ－８０６、ＣＡＳ ９４６４１４－０９－１）が挙げられるがこれらに限定されない。例示的な上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤としては、塩酸エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、セリチニブ、ブリガチニブ、オシメリチニブ（ｏｓｉｍｅｒｉｔｉｎｉｂ）、イコチニブ（ｉｃｏｔｉｎｉｂ）、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））、Ｎ－［４－［（３－クロロ－４－フルオロフェニル）アミノ］－７－［［（３“Ｓ”）－テトラヒドロ－３－フラニル］オキシ］－６－キナゾリニル］－４（ジメチルアミノ）－２－ブテンアミド、Ｔｏｖｏｋ（登録商標））、バンデタニブ（Ｃａｐｒｅｌｓａ（登録商標））、ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標））、（３Ｒ，４Ｒ）－４－アミノ－１－（（４－（（３－メトキシフェニル）アミノ）ピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－５－イル）メチル）ピペリジン－３－オール（ＢＭＳ６９０５１４）、カネルチニブ二塩酸塩（ＣＩ－１０３３）、６－［４－［（４－エチル－１－ピペラジニル）メチル］フェニル］－Ｎ－［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－アミン（ＡＥＥ７８８、ＣＡＳ ４９７８３９－６２－０）、ムブリチニブ（Ｍｕｂｒｉｔｉｎｉｂ）（ＴＡＫ１６５）、ペリチニブ（ＥＫＢ５６９）、アファチニブ（ＢＩＢＷ２９９２）、ネラチニブ（ＨＫＩ－２７２）、Ｎ－［４－［［１－［（３－フルオロフェニル）メチル］－１Ｈ－インダゾール－５－イル］アミノ］－５－メチルピロロ［２，１－ｆ］［１，２，４］トリアジン－６－イル］－カルバミン酸、（３Ｓ）－３－モルホリニルメチルエステル（ＢＭＳ５９９６２６）、Ｎ－（３，４－ジクロロ－２－フルオロフェニル）－６－メトキシ－７－［［（３ａα，５β，６ａα）－オクタヒドロ－２－メチルシクロペンタ［ｃ］ピロール－５－イル］メトキシ］－４－キナゾリンアミン（ＸＬ６４７、ＣＡＳ ７８１６１３－２３－８）、４－［４－［［（１Ｒ）－１－フェニルエチル］アミノ］－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－６－イル］－フェノール（ＰＫＩ１６６、ＣＡＳ １８７７２４－６１－４）、ロセリチニブ（ｒｏｃｅｌｉｔｉｎｉｂ）が挙げられるがこれらに限定されない。

【0198】

例示的なｍＴＯＲ阻害剤としては、ラパマイシン（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、ならびにそのアナログ及び誘導体、ＳＤＺ－ＲＡＤ、テムシロリムス（Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標）、別名ＣＣＩ－７７９）、リダフォロリムス（正式にはデフェロリムス（ｄｅｆｅｒｏｌｉｍｕｓ）として知られ、（１Ｒ，２Ｒ，４Ｓ）－４－［（２Ｒ）－２［（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１８Ｒ，１９Ｒ，２１Ｒ，２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２８Ｚ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）－１，１８－ジヒドロキシ－１９，３０－ジメトキシ－１５，１７，２１，２３，２９，３５－ヘキサメチル－２，３，１０，１４，２０－ペンタオキソ－１１，３６－ジオキサ－４－アザトリシクロ［３０．３．１．０^４，９］ヘキサトリアコンタ－１６，２４，２６，２８－テトラエン－１２－イル］プロピル］－２－メトキシシクロヘキシルジメチルホスフィネート、別名ＡＰ２３５７３及びＭＫ８６６９、ＰＣＴ公開第ＷＯ０３／０６４３８３に記載されている）、エベロリムス（Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標）またはＲＡＤ００１）、ラパマイシン（ＡＹ２２９８９、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ（登録商標））、シマピモド（Ｓｉｍａｐｉｍｏｄ）（ＣＡＳ １６４３０１－５１－３）、（５－｛２，４－ビス［（３Ｓ）－３－メチルモルホリン－４－イル］ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７－イル｝－２－メトキシフェニル）メタノール（ＡＺＤ８０５５）、２－アミノ－８－［トランス－４－（２－ヒドロキシエトキシ）シクロヘキシル］－６－（６－メトキシ－３－ピリジニル）－４－メチル－ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（８Ｈ）－１－オン（ＰＦ０４６９１５０２、ＣＡＳ １０１３１０１－３６－４）、及びＮ^２－［１，４－ジオキソ－［［４－（４－オキソ－８－フェニル－４Ｈ－１－ベンゾピラン－２－イル）モルホリニウム－４－イル］メトキシ］ブチル］－Ｌ－アルギニルグリシル－Ｌ－α－アスパルチル－Ｌ－セリン－、分子内塩（ＳＦ１１２６、ＣＡＳ ９３６４８７－６７－１）が挙げられるがこれらに限定されない。

【0199】

例示的なホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤としては、デュベリシブ（ｄｕｖｅｌｉｓｉｂ）、イデラリシブ、４－［２－（１Ｈ－インダゾール－４－イル）－６－［［４－（メチルスルホニル）ピペラジン－１－イル］メチル］チエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－イル］モルホリン（別名ＧＤＣ ０９４１、ＰＣＴ公開第ＷＯ ０９／０３６０８２号及び第ＷＯ ０９／０５５７３０号に記載されている）、２－メチル－２－［４－［３－メチル－２－オキソ－８－（キノリン－３－イル）－２，３－ジヒドロイミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－１－イル］フェニル］プロピオニトリル（別名ＢＥＺ ２３５またはＮＶＰ－ＢＥＺ ２３５、ＰＣＴ公開第ＷＯ０６／１２２８０６号に記載されている）、４－（トリフルオロメチル）－５－（２，６－ジモルホリノピリミジン－４－イル）ピリジン－２－アミン（別名ＢＫＭ１２０またはＮＶＰ－ＢＫＭ１２０、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００７／０８４７８６号に記載されている）、Ｔｏｚａｓｅｒｔｉｂ（ＶＸ６８０またはＭＫ－０４５７、ＣＡＳ ６３９０８９－５４－６）、（５Ｚ）－５－［［４－（４－ピリジニル）－６－キノリニル］メチレン］－２，４－チアゾリジンジオン（ＧＳＫ１０５９６１５、ＣＡＳ ９５８８５２－０１－２）、（１Ｅ，４Ｓ，４ａＲ，５Ｒ，６ａＳ，９ａＲ）－５－（アセチルオキシ）－１－［（ジ－２－プロペニルアミノ）メチレン］－４，４ａ，５，６，６ａ，８，９，９ａ－オクタヒドロ－１１－ヒドロキシ－４－（メトキシメチル）－４ａ，６ａ－ジメチル－シクロペンタ［５，６］ナフト［１，２－ｃ］ピラン－２，７，１０（１Ｈ）－トリオン（ＰＸ８６６、ＣＡＳ ５０２６３２－６６－８）、ならびに８－フェニル－２－（モルホリン－４－イル）－クロメン－４－オン（ＬＹ２９４００２、ＣＡＳ １５４４４７－３６－６）が挙げられるがこれらに限定されない。

【0200】

例示的なプロテインキナーゼＢ（ＰＫＢ）またはＡＫＴ阻害剤としては、８－［４－（１－アミノシクロブチル）フェニル］－９－フェニル－１，２，４－トリアゾロ［３，４－ｆ］［１，６］ナフチリジン－３（２Ｈ）－オン（ＭＫ－２２０６、ＣＡＳ １０３２３４９－９３－１）、Ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ（ＫＲＸ０４０１）、４－ドデシル－Ｎ－１，３，４－チアジアゾール－２－イル－ベンゼンスルホンアミド（ＰＨＴ－４２７、ＣＡＳ １１９１９５１－５７－１）、４－［２－（４－アミノ－１，２，５－オキサジアゾール－３－イル）－１－エチル－７－［（３Ｓ）－３－ピペリジニルメトキシ］－１Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］ピリジン－４－イル］－２－メチル－３－ブチン－２－オール（ＧＳＫ６９０６９３、ＣＡＳ ９３７１７４－７６－０）、８－（１－ヒドロキシエチル）－２－メトキシ－３－［（４－メトキシフェニル）メトキシ］－６Ｈ－ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン－６－オン（ｐａｌｏｍｉｄ ５２９、Ｐ５２９、またはＳＧ－００５２９）、Ｔｒｉｃｉｒｂｉｎｅ（６－アミノ－４－メチル－８－（β－Ｄ－リボフラノシル）－４Ｈ，８Ｈ－ピロロ［４，３，２－ｄｅ］ピリミド［４，５－ｃ］ピリダジン）、（αＳ）－α－［［［５－（３－メチル－１Ｈ－インダゾール－５－イル）－３－ピリジニル］オキシ］メチル］－ベンゼンエタンアミン（Ａ６７４５６３、ＣＡＳ ５５２３２５－７３－２）、４－［（４－クロロフェニル）メチル］－１－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－４－イル）－４－ピペリジンアミン（ＣＣＴ１２８９３０、ＣＡＳ ８８５４９９－６１－６）、４－（４－クロロフェニル）－４－［４－（１Ｈピラゾール－４－イル）フェニル］－ピペリジン（ＡＴ７８６７、ＣＡＳ ８５７５３１－００－１）、及びＡｒｃｈｅｘｉｎ（ＲＸ－０２０１、ＣＡＳ ６６３２３２－２７－７）が挙げられるがこれらに限定されない。

【0201】

ある特定の実施形態では、該ＬＶＶまたはＣＡＲ改変Ｔ細胞と組み合わせて使用されるチロシンキナーゼ阻害剤は、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）阻害剤である。例示的なＡＬＫ阻害剤としては、クリゾチニブ、セリチニブ、アレクチニブ、ブリガチニブ、ダランテルセプト（ｄａｌａｎｔｅｒｃｅｐｔ）、エヌトレクチニブ、及びロラチニブが挙げられる。

【0202】

該ＬＶＶまたはＣＡＲ改変リンパ球（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）が１つ以上のさらなる療法と組み合わせて投与されるある特定の実施形態では、該ＬＶＶ、ＣＡＲ改変リンパ球（例えば、Ｔ細胞もしくはＮＫ細胞）、または１つ以上のさらな療法は、単剤療法として投与された場合に治療量以下と見なされ得る用量で投与され得る。併用療法は、さらなる療法の前（例えば、さらなる療法の１日～３０日前もしくはそれ以前）、さらなる療法と同時（同日）、またはさらなる療法の後（例えば、さらなる療法の１日～３０日後もしくはそれ以降）の本明細書に記載のＬＶＶまたはＣＡＲ改変リンパ球（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）組成物の投与を含む。ある特定の実施形態では、該ＬＶＶまたはＣＡＲ改変リンパ球（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）は、該１つ以上のさらなる療法と同時に投与される。さらなる実施形態では、該ＬＶＶまたはＣＡＲ改変リンパ球（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）は、該１つ以上のさらなる療法の投与の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、もしくは３０日前または後に投与される。なおさらなる実施形態では、該ＬＶＶまたはＣＡＲ改変リンパ球（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）は、該１つ以上のさらなる療法の投与の前または後４週間以内、３週間以内、２週間以内、もしくは１週間以内に投与される。該１つ以上のさらなる療法が複数回の投与を含む場合、該ＬＶＶまたはＣＡＲ改変リンパ球（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）は、該１つ以上のさらなる療法の最初の投与の前もしくは後、該１つ以上のさらなる療法の最後の投与の後、または該１つ以上のさらなる療法の複数回の投与の間に投与され得る。

【0203】

本開示の組成物及び方法によって治療され得る対象としては、動物、例えば、ヒト、霊長類、ウシ、ウマ、ヒツジ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、またはブタが挙げられる。該対象は、雌雄どちらでもよく、幼年、若年、青年、成年、及び老年対象を含めた任意の適切な年齢でよい。

【実施例】

【0204】

実施例１：規定の指向性を有するレンチウイルスベクターの生成方法
本明細書に記載の自己不活性化レンチウイルスベクター（ＬＶＶ）を、第３世代の産生系を使用して産生した。ＬＶＶによる送達に必要な遺伝子配列を含む発現プラスミドを、規定の比率で３つのパッケージングプラスミド、ＶＳＶ－Ｇ、ＧａｇＰｏｌ、及びＲｅｖと組み合わせ、ＨＥＫ２９３プロデューサー細胞をトランスフェクトするために使用した。２～３日後に、生産的なウイルス粒子をＨＥＫ２９３培地から採取した。

【0205】

得られたＬＶＶの指向性を調べ、３つのパッケージングプラスミドのうちの１つから発現される、本明細書に記載の非ウイルス標的タンパク質を使用して、またはトランスフェクションミックスへの第五のプラスミドの添加によって向けなおすことができるかどうかを判断した。このＬＶＶベクターには、変異型ＶＳＶ－Ｇエンベロープタンパク質が含まれており、この変異型ＶＳＶ－Ｇには、変異型ＶＳＶ－Ｇの天然受容体への結合を無効にする変異が含まれており、ウイルスの侵入が、非ウイルスの指向性を規定する標的タンパク質を介して生じる。ＶＳＶ－ＧのＬＤＬ受容体結合部位の変異により、その天然の受容体への結合が無効になることが分かった。様々な変異を有するＶＳＶ－Ｇ（Ｔｒｏｐ－００２（配列番号７４）、Ｔｒｏｐ－０５１（配列番号９３）、Ｔｒｏｐ－０５２（配列番号９５）、Ｔｒｏｐ－０５５（配列番号９７）、またはＴｒｏｐ－０６１（配列番号１０３））を、ＬＶＶ上でＣＤ８０（配列番号２）とともに発現させた。ＣＤ８０は、Ｔ細胞表面受容体、ＣＤ２８及びＣＴＬＡ４に対する天然のリガンドであり、Ｂ細胞ではなくＴ細胞に指向性を与える。ＶＳＶ－Ｇの天然受容体への結合は、Ｒａｊｉ Ｂ細胞の形質導入によって評価される。ＶＳＶ－Ｇにおけるいくつかの変異は、Ｒａｊｉ Ｂ細胞の形質導入を禁止するが、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞の形質導入は維持される（図２Ａ～２Ｂ）。

【0206】

第一の方法では、ＣＤ８０由来の指向性を規定する標的タンパク質（配列番号７６）をＶＳＶ－Ｇパッケージングプラスミドから発現させた。ＣＤ８０は、Ｔ細胞表面受容体、ＣＤ２８及びＣＴＬＡ４に対する天然のリガンドであり、Ｔ細胞に指向性を与える。コドン最適化されたＣＤ８０分子（配列番号２をコードする）を、ＬＤＬ受容体結合を無効にする変異を含む変異型ＶＳＶ－Ｇ（Ｔｒｏｐ－００２、配列番号７４をコードする）の下流にクローニングし、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するＬＶＶのパッケージングに使用した。ＣＤ８０及びＶＳＶ－Ｇは、ＨＥＫ２９３プロデューサー細胞の表面上で比較的同等のレベルで発現され、ＬＶＶ粒子での同等の装飾が示唆された（図３Ａ）。このアプローチで生成されたＬＶＶは、ＧＦＰ発現によって評価して、Ｔ細胞を形質導入することが可能であった（図３Ｂ）。

【0207】

第二の方法では、指向性を規定するＣＤ８０標的タンパク質（配列番号２をコードする）を、Ｒｅｖパッケージングプラスミドにクローニングし、より低いモル濃度でＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖ（Ｔｒｏｐ－００２（配列番号７４））プラスミドにトランスフェクトした。この改変プラスミドを使用して、ＧＦＰ発現ＬＶＶをパッケージングした。ＨＥＫ－２９３プロデューサー細胞上のＶＳＶ－Ｇ及びＣＤ８０発現の評価により、パッケージングプラスミドのモル濃度に応じて相対的な発現レベルの傾向が示された。これらのパッケージングアプローチで生成されたＬＶＶは、ＧＦＰ発現によって評価して、Ｔ細胞を形質導入することが可能であった（図４）。Ｒｅｖパッケージングプラスミドに含まれるＣＤ８０標的タンパク質でパッケージングしたＬＶＶでは、Ｒｅｖプラスミドの比率が低いためにＣＤ８０の発現の低下が観察された。

【0208】

第三の方法では、指向性を規定するＣＤ８０標的タンパク質（配列番号２をコードする）を、ＬＶＶ（Ｔｒｏｐ－００２ ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖ）を産生することを目的としたＨＥＫ２９３細胞のトランスフェクションの過程でさらなるプラスミドとして添加した。ＬＶＶ産生中に使用されたＣＤ８０プラスミドの量は、ＨＥＫ２９３プロデューサー細胞での発現と関連しており、おそらくはＬＶＶ粒子の装飾を表していると考えられる。このパッケージング手法で生成されたＬＶＶは、ＧＦＰ発現によって評価されるＴ細胞の形質導入が可能であり、形質導入効率は、ＬＶＶ粒子上のＣＤ８０レベルと関連していた（図５）。

【0209】

選択された方法に関係なく、高力価の向性再指向型ＬＶＶは、接着性または浮遊ＨＥＫ２９３プロデューサー細胞で産生され、遠心分離またはアニオン交換クロマトグラフィー（ＡＥＸ）に続いてタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）によって濃縮され得る（図６Ａ～６Ｃ）。ＡＥＸ／ＴＦＦによる濃縮は、高レベルの純度及び回収でのＬＶＶの調製につながった（図６Ｄ）。

【0210】

実施例２：ＣＤ８０ＬＶＶにより濃縮されたＣＤ４Ｔ細胞
指向性を定義する標的指向性分子は、このＬＶＶで形質導入される特定の細胞型を正確に定義する。ＣＤ８０のリガンドであるＣＤ２８は、Ｔ細胞上で自然に発現される。しかしながら、ヒト末梢血中では、ＣＤ４Ｔ細胞の方が、ＣＤ８Ｔ細胞と比較してＣＤ２８を発現する頻度が高い（８０％対５０％）。Ｔｒｏｐ－００２ ＶＳＶ－ＧエンベロープをＣＤ８０標的タンパク質（配列番号７６）で装飾するようにＬＶＶをパッケージングし、ヒトＰＢＭＣを形質導入するために使用した場合、形質導入されたＣＤ８Ｔ細胞と比較して、形質導入されたＣＤ４Ｔ細胞のより高い組成が観察され、培養中で最長１週間維持された（図１３）。

【0211】

実施例３：Ｔ細胞特異的指向性を含むレンチウイルスベクターを使用して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作された腫瘍反応性Ｔ細胞のエキソビトロ（ｅｘ ｖｉｔｒｏ）生成のための方法
一般的な第三世代のパッケージング系を使用する標準的なレンチウイルスベクター（ＬＶＶ）と比較して、本明細書に提供する指向性を向けなおすようにパッケージングされたＬＶＶは、改善された形質導入効率及び特異性を有し得る。このＬＶＶ粒子は、他の望ましくない細胞型に取り込まれないため、不均一混合物の一部として特定の細胞型に形質導入する場合、利用可能なウイルス粒子のレベルが増加すると考えられる。ＣＡＲ分子によるＴ細胞の形質導入の改善が、不均一な末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）混合物中で可能であるかどうかを評価した。多発性骨髄腫の治療に使用される代表的な抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（配列番号５８）または非ホジキンリンパ腫の治療に使用される代表的な抗ＣＤ１９ ＣＡＲ（配列番号４２）を使用した。ＧＦＰレポーターを対照として使用した。ＬＶＶを、エンベロープを抗ＣＤ３標的タンパク質及びＣＤ８０標的タンパク質で修飾し、指向性をＴ細胞表面分子、ＣＤ３、ＣＤ２８及びＣＴＬＡ４に向けなおすようにパッケージングした。このＣＤ８０標的タンパク質をＴｒｏｐ－００２ ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖパッケージングプラスミド（配列番号７６）にクローニングし、抗ＣＤ３標的タンパク質（配列番号１０をコードする）を第五のパッケージングプラスミドから発現させた。

【0212】

インフォームド・コンセント後の健康なドナーの白血球アフェレーシスから得られたＰＢＭＣ内でのＴ細胞の形質導入効率を調べた。赤血球溶血を使用してＰＢＭＣを濃縮し、対応するドナーに標準ＬＶＶまたはＴ細胞再指向型の指向性（抗ＣＤ３及びＣＤ８０）を備えたＬＶＶで、ＣＡＲ Ｔ細胞形質導入に通常使用されるＬＶＶ濃度より５～２５倍低いＬＶＶ濃度で形質導入した。抗ＢＣＭＡ ＣＡＲの発現は、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を特異的に検出するために蛍光標識されたＢＣＭＡ分子で染色した後、フローサイトメトリーによって評価した。ウイルスレベルが極めて低い場合でも、Ｔ細胞指向性ＬＶＶを使用して形質導入されたＴ細胞は、標準ＬＶＶと比較してより高いレベルの形質導入を示した（図７）。

【0213】

同じ試験で、Ｔ細胞を活性化する抗体を使用せずに抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞を生成できるかどうかを評価した。Ｔ細胞活性化抗体（例えば、抗ＣＤ２８及びＣＤ３）は通常、ＣＡＲ Ｔ細胞生成の過程で標準ＬＶＶを使用して形質導入するのに必要である。標準ＬＶＶは実際に、正常なヒト初代Ｔ細胞を形質導入するために抗体を用いた活性化を必要とすることが確認された（図７）。対照的に、Ｔ細胞再指向型ＬＶＶ（抗ＣＤ３及びＣＤ８０）は、事前のＴ細胞活性化がない場合でも（ＩＬ－２ならびに外因性活性化抗体である抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８が存在しない場合でも）形質導入を引き起こすことができる（図７）。ＩＬ－２を含む培地で培養すると、Ｔ細胞活性化の結果、その後の細胞増殖が起こる。標準ＬＶＶまたはＴ細胞再指向型ＬＶＶ（抗ＣＤ３及びＣＤ８０）の後に、外因性活性化抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体の存在下または非存在下で形質導入されたＰＢＭＣは、Ｔ細胞再指向型ＬＶＶが、抗体活性化がない場合であっても特異的にＴ細胞を増殖させることができることを示した（図８）。別の例では、抗ＣＤ１９ＣＡＲの形質導入も、Ｔ細胞再指向型ＬＶＶ（抗ＣＤ３及びＣＤ８０）を使用した場合、事前のＴ細胞活性化なしで達成された（図９）。

【0214】

Ｔ細胞の活性化及び形質導入効率は、Ｔ細胞再指向型ＬＶＶの生成に使用される抗ＣＤ３抗体の選択によって決定され得る。ＶＨ（配列番号１１３）－ＶＬ（配列番号１１５）配向及びＶＬ（配列番号１１５）－ＶＨ（配列番号１１３）配向の１２Ｆ６結合ドメインを有するエンベロープ結合抗ＣＤ３結合タンパク質の例は、可変量のＴ細胞形質導入及びＴ細胞活性化を引き起こすことが示されている（図１０）。

【0215】

実施例４：Ｔ細胞を標的とするレンチウイルスベクターのＴ細胞特異性
抗ＣＤ３標的タンパク質（配列番号１０）及びＣＤ８０標的タンパク質（配列番号２）でエンベロープを修飾するようにパッケージングしたＬＶＶ（Ｔｒｏｐ－００２ ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖ）のＴ細胞特異性を、Ｔ細胞株及びＢ細胞株のパネル（Ｒａｊｉ、Ｒａｍｏｓ、Ｊｅｋｏ－１、ＮＡＬＭ－６）の形質導入によって確認した。ＧＦＰ導入遺伝子のフローサイトメトリーによって評価されたこれらの細胞株の形質導入を、標準ＬＶＶと比較した。標準ＬＶＶとＴ細胞を標的とするＬＶＶの両方が、Ｔ細胞株（Ｊｕｒｋａｔ）を効果的に形質導入した。標準ＬＶＶはこれらすべてのＢ細胞株を効果的に形質導入し、これらの株がＬＶＶ形質導入に対して感受性であることを確認したが、Ｔ細胞を標的とするＬＶＶによる実質的な形質導入はいずれのＢ細胞株でも検出されなかった（図１４）。

【0216】

実施例５：Ｔ細胞を標的とするレンチウイルスベクターを使用して生成された腫瘍特異的Ｔ細胞
本明細書に記載の方法を使用して、健康なドナーのＰＢＭＣに、Ｔｒｏｐ－００２ ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖならびにＣＤ８０標的タンパク質及び抗ＣＤ３標的タンパク質を有するＬＶＶを形質導入することによって、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ（配列番号５８）を発現するＴ細胞を生成した。このＣＤ８０標的タンパク質をＴｒｏｐ－００２ ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖパッケージングプラスミド（配列番号７６）にクローニングし、抗ＣＤ３標的タンパク質（配列番号１０をコードする）を第五のパッケージングプラスミドから発現させ、Ｔ細胞を標的とするＬＶＶを産生した。このＴ細胞形質導入は、効率的なＬＶＶ媒介遺伝子導入に通常必要とされるＴ細胞刺激（外因性抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８）の非存在下で実施した。

【0217】

まず、Ｔ細胞再指向型ＬＶＶによって生成された抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞の活性を、標準ＬＶＶと比較して調べた。抗腫瘍活性は、ＢＣＭＡ陰性細胞株（Ｎａｌｍ－６）またはＢＣＭＡ陽性細胞株（ＲＰＭＩ－８８２６）との共培養後のインターフェロンガンマ及び腫瘍壊死因子アルファの細胞内サイトカイン染色によって評価した。抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ陽性細胞株との培養後に、Ｔ細胞エフェクターサイトカインの発現の増加を示し、これは、標準ＬＶＶによって生成されたものであってもＴ細胞再指向型ＬＶＶによって生成されたものであっても、ＢＣＭＡ陰性細胞株では観察されない（図１１）。

【0218】

実施例６：Ｔ細胞指向性レンチウイルスベクターを使用した遺伝物質のＴ細胞特異的インビボ送達方法
Ｔ細胞を標的とするＬＶＶによるＴ細胞の効率的かつ特異的な形質導入により、インビボでのＴ細胞への遺伝物質の安全かつ効果的な送達を可能にすることができる。ＧＦＰを発現するＴ細胞を標的とするＬＶＶを静脈内注入したヒト化マウスモデルを使用して、この仮説を検証した。Ｔｒｏｐ－００２変異型ＶＳＶ－Ｇを有し、抗ＣＤ３標的タンパク質及びＣＤ８０標的タンパク質でコーティングされたＬＶＶを産生した。このＣＤ８０標的タンパク質をＴｒｏｐ－００２ ＶＳＶ－Ｇ ｅｎｖパッケージングプラスミド（配列番号７６）にクローニングし、抗ＣＤ３標的タンパク質（配列番号１０をコードする）を第五のパッケージングプラスミドから発現させ、Ｔ細胞を標的とするＬＶＶを産生した。免疫不全ＮＣＧマウスを、ヒトＰＢＭＣの静脈内注射によりヒト化し、４日間毎日の組み換えＩＬ－２の腹腔内投与により支持した。ＰＢＭＣ投与の１日後、Ｔ細胞を標的とするレンチウイルスベクターをこのマウスに静脈内投与した。７日目に末梢血及び脾臓細胞を採取し、Ｔ細胞の特異性をフローサイトメトリーで評価した。ＧＦＰ陽性細胞は、ヒトＴ細胞（ＣＤ３＋）においてのみ検出され、ヒトＢ細胞（ＣＤ２０＋）においては検出されず、ＬＶＶ形質導入のＴ細胞特異性が確認された（図１２Ａ）。ＧＦＰは、ＣＤ８＋及びＣＤ８－（ＣＤ４）Ｔ細胞の両方で検出され、Ｔ細胞特異的ＬＶＶがインビボでＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の両方を形質導入することが示された（図１２Ｂ）。

【0219】

特異的Ｔ細胞形質導入は、腫瘍細胞を形質導入するリスクを最小限に抑えることで、他のインビボＣＡＲ送達アプローチに比べて重要な安全性の利点を有する。腫瘍細胞の形質導入を伴わないＴ細胞の形質導入は、検出可能なＣＤ１９腫瘍細胞を有する慢性リンパ性白血病患者のＰＢＭＣを用いて評価する。ＰＢＭＣを、Ｔ細胞を標的とするＬＶＶで形質導入し、形質導入された細胞を、フローサイトメトリーを使用して評価する。

【0220】

上記の様々な実施形態を組み合わせて、さらなる実施形態を提供することができる。２０２１年２月２６日に出願された米国仮特許出願第６３／１５４，６３９号が挙げられるがこれに限定されない本明細書中で言及される、及び／または出願データシートに列挙されるすべての米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願、及び非特許刊行物は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。これら実施形態の態様は、必要に応じて、様々な特許、出願及び公開の概念を使用して、さらなる実施形態を提供するように修正することができる。

【0221】

これら及び他の変更は、上記の説明に照らして、該実施形態になされ得る。一般に、以下の特許請求の範囲で使用される用語は、該特許請求の範囲を本明細書及び該特許請求の範囲に開示された特定の実施形態に限定するものと解釈されるべきではなく、すべての可能な実施形態と、かかる特許請求の範囲が権利を有する均等物の全範囲を含むものと解釈されるべきである。したがって、該特許請求の範囲は、本開示によって限定されない。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図13】

【図14】

【配列表】

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【国際調査報告】