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特表2024-508157炎症、線維症及び肺疾患を治療するためのペリオスチン抗体の使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-02-22
(54)【発明の名称】炎症、線維症及び肺疾患を治療するためのペリオスチン抗体の使用
(51)【国際特許分類】
C07K 16/28 20060101AFI20240215BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240215BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20240215BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240215BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20240215BHJP
C12N 15/62 20060101ALN20240215BHJP
【ＦＩ】
C07K16/28 ZNA
A61K39/395 N
A61P11/00
A61P29/00
C12N15/13
C12N15/62 Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023553553
(86)(22)【出願日】2022-03-04
(85)【翻訳文提出日】2023-09-04
(86)【国際出願番号】 EP2022055605
(87)【国際公開番号】W WO2022184910
(87)【国際公開日】2022-09-09
(31)【優先権主張番号】21305260.8
(32)【優先日】2021-03-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】504007888
【氏名又は名称】センター ナショナル デ ラ レシェルシェ サイエンティフィーク
(71)【出願人】
【識別番号】516017684
【氏名又は名称】ユニバーシテ ド オルレアン
(74)【代理人】
【識別番号】110002860
【氏名又は名称】弁理士法人秀和特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ペレス－クルス，マグディエル
(72)【発明者】
【氏名】リッフェル，ベルンハルト
【テーマコード（参考）】
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C085AA14
4C085BB11
4C085CC23
4C085DD62
4C085GG01
4C085GG03
4C085GG04
4C085GG06
4C085GG08
4C085GG10
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
4H045DA76
4H045EA22
4H045EA52
4H045EA60
(57)【要約】
本発明は、ＭＰＣ５Ｂ４抗ペリオスチンモノクローナル抗体が、様々な動物モデルにおける炎症、線維症、並びに肺炎症及び呼吸器疾患の悪化を効果的に予防及び治療することができるという驚くべき発見に基づく。ＭＰＣ５Ｂ４抗ペリオスチンモノクローナル抗体は、ペリオスチンタンパク質（ＰＯＳＴＮ）のファシクリン（ＦＡＳ）１－１ドメイン内に位置するアミノ酸配列１３６～１５１に対応する配列５番号１のペプチド配列を特異的に認識し、αｖβ３インテグリンへのその結合を阻害する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
医薬品としての使用のための、ペリオスチンのファシクリン（ＦＡＳ）１－１ドメイン中の配列番号１のペプチド配列を特異的かつ高親和性で認識する、モノクローナル抗ペリオスチン抗体、又はその機能的抗原結合性断片。
【請求項2】
炎症性、線維性又は呼吸器障害の治療を必要としている対象において、炎症性、線維性又は呼吸器障害を治療するための使用のための、請求項１に記載のモノクローナル抗ペリオスチン抗体。
【請求項3】
前記障害が、喘息、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺線維症、例えば、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、気腫及び肺炎症又はウイルス、真菌若しくは細菌感染から生じる呼吸器疾患からなる群において選択される、請求項２に記載の使用のためのモノクローナル抗ペリオスチン抗体。
【請求項4】
前記障害が、ＣＯＶＩＤ１９疾患の症状型である、請求項３に記載の使用のためのモノクローナル抗ペリオスチン抗体。
【請求項5】
ＩｇＧ、好ましくはＩｇＧ１である、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用のためのモノクローナル抗ペリオスチン抗体。
【請求項6】
ヒトＰＯＳＴＮのαｖβ３インテグリンへの結合を、３０μｇ／ｍＬ未満のＩＣ５０で阻害する、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用のためのモノクローナル抗ペリオスチン抗体。
【請求項7】
約０．０８の配列番号１との解離定数（ＫＤ）を有する、請求項１～６のいずれか一項に記載の使用のためのモノクローナル抗ペリオスチン抗体。
【請求項8】
オボアルブミンにコンジュゲートされた配列番号１又はＰＯＳＴＮでマウスを免疫することによって産生されており、前記マウスが乳酸脱水素酵素上昇ウイルスに予め感染している、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用のためのモノクローナル抗ペリオスチン抗体。
【請求項9】
キメラ抗体、ヒト化抗体又は完全ヒト抗体である、請求項１～８のいずれか一項に記載の使用のためのモノクローナル抗ペリオスチン抗体。
【請求項10】
ヒトＩｇＧ１重鎖にＮ２９７Ａ変異を導入することによって組換え改変されている、請求項１～９のいずれか一項に記載の使用のためのモノクローナル抗ペリオスチン抗体。
【請求項11】
前記機能的断片が、請求項７に記載の抗体と同じ解離定数を有するＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又はＦｖ断片である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の使用のためのモノクローナル抗ペリオスチン抗体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＭＰＣ５Ｂ４抗ペリオスチンモノクローナル抗体が、様々な動物モデルにおける炎症、線維症、並びに肺炎症及び呼吸器疾患の悪化を効果的に予防及び治療することができるという驚くべき発見に基づく。ＭＰＣ５Ｂ４抗ペリオスチンモノクローナル抗体は、ペリオスチンタンパク（periostin protein、ＰＯＳＴＮ）のファシクリン（fasciclin、ＦＡＳ）１－１ドメイン内に位置するアミノ酸配列１３６～１５１に対応する配列番号１のペプチド配列を特異的に認識し、αｖβ３インテグリンへのその結合を阻害する。
【背景技術】
【0002】
炎症は、病原体、刺激物及び損傷細胞などの有害な刺激を除去し、治癒過程を開始するための身体の自然防御機構である。一般に、炎症は、急性又は慢性の炎症として分類される。急性の炎症は、本来、損傷領域を固定し、免疫系を活性化して損傷を治癒するのに役立つ有益な過程であるが、例えば、ＣＯＶＩＤ－１９における死亡の主な原因である急性呼吸窮迫症候群（Acute Respiratory Distress Syndrome、ＡＲＤＳ）などの急性の炎症
をもたらし得る。他方、慢性の炎症は、治癒過程を開始しようとする誤った試みにおいて健康な組織を破壊し得るので、問題となる１。
をもたらし得る。他方、慢性の炎症は、治癒過程を開始しようとする誤った試みにおいて健康な組織を破壊し得るので、問題となる１。
【0003】
気道炎症は、通常、病原体によって、又は毒素、汚染物質、刺激物、及びアレルゲンへの曝露によって引き起こされる。ＴＬＲは、病原体によって共有される分子パターンを認識し、活性化Ｂ細胞の核因子カッパ軽鎖エンハンサー（ＮＦ－κＢ）などの経路を介して炎症細胞を活性化して、増殖因子、ケモカイン、インターロイキン８（interleukin 8、
ＩＬ－８）及び腫瘍壊死因子アルファ（tumor necrosis factor alpha、ＴＮＦ－α）な
どの炎症促進性サイトカインを産生する。ＩＬ－８は好中球動員を誘発し、ＴＮＦ－αは、肺毛細血管における内皮細胞接着分子の発現を誘導する。更に、マトリックスメタロプロテイナーゼ－９（matrix metalloproteinase-9、ＭＭＰ－９）、細胞間接着分子１（intercellular adhesion molecule-1、ＩＣＡＭ－１）、血管細胞接着分子－１（vascular cell adhesion molecule-1、ＶＣＡＭ－１）、シクロオキシゲナーゼ－２（cyclooxygenase-2、ＣＯＸ－２）、及び細胞質ホスホリパーゼＡ２（cytosolic phospholipase A2、ｃＰＬＡ２）などの既知の炎症標的タンパク質の多くは、様々な刺激に応答して気道炎症に特異的に関連する１。
ＩＬ－８）及び腫瘍壊死因子アルファ（tumor necrosis factor alpha、ＴＮＦ－α）な
どの炎症促進性サイトカインを産生する。ＩＬ－８は好中球動員を誘発し、ＴＮＦ－αは、肺毛細血管における内皮細胞接着分子の発現を誘導する。更に、マトリックスメタロプロテイナーゼ－９（matrix metalloproteinase-9、ＭＭＰ－９）、細胞間接着分子１（intercellular adhesion molecule-1、ＩＣＡＭ－１）、血管細胞接着分子－１（vascular cell adhesion molecule-1、ＶＣＡＭ－１）、シクロオキシゲナーゼ－２（cyclooxygenase-2、ＣＯＸ－２）、及び細胞質ホスホリパーゼＡ２（cytosolic phospholipase A2、ｃＰＬＡ２）などの既知の炎症標的タンパク質の多くは、様々な刺激に応答して気道炎症に特異的に関連する１。
【0004】
肺は、体内の全ての器官に必須の酸素を供給するための重要な器官であり、過剰な炎症は生命を脅かす可能性がある。炎症と抗炎症との間の微妙なバランスは、肺ホメオスタシス（恒常性維持）にとって不可欠である。
【0005】
世界保健機関によれば、肺及び気道炎症性疾患の有病率は、世界中で何百万人もの患者に関して、ここ３０年でかなり増加している。これらの重要な疾患の中で、世界中で５億人を超える人々が罹患している喘息及び慢性閉塞性肺疾患（chronic obstructive pulmonary disease、ＣＯＰＤ）を挙げることができる。
【0006】
喘息の現在のコンセンサス定義は、「喘鳴、息切れ、胸苦しさ及び咳などの、時間と共に強度が変化し、可変気流閉塞を伴う呼吸器症状の履歴によって定義される、慢性気道炎を通常特徴とする異質性の疾患」である。喘息を有する患者は、可変気流閉塞及び気道過敏性（airway hyper-responsiveness、ＡＨＲ）を有する。喘息は、欧州の成人人口の１
０％～１２％が罹患している。重度の疾患を有する患者は、軽度～中程度の喘息の主要な治療である従来の抗炎症性コルチコステロイドに十分に応答しない２。
０％～１２％が罹患している。重度の疾患を有する患者は、軽度～中程度の喘息の主要な治療である従来の抗炎症性コルチコステロイドに十分に応答しない２。
【0007】
一方、ＣＯＰＤは、通常進行性であり、有害な粒子又はガスに対する気道及び肺における亢進された慢性の炎症反応に関連する持続性の気流制限を特徴とする。増悪及び共存症は、個々の患者における全体的な重症度に寄与する。ＣＯＰＤは、今後５年以内に世界中で罹患率及び死亡率の第４位から第３位の主な原因に上昇すると予想される。世界保健機関によれば、世界で約３００万人が毎年ＣＯＰＤの結果として死亡している。先進国では、ＣＯＰＤの主要な危険因子は喫煙であり、喫煙者はＣＯＰＤ患者の９０％超を占める。発展途上国では、調理に使用されるバイオマス燃料及び他の環境汚染物質が主要な要因である。ＣＯＰＤの病理学的特徴は、肺（lung）実質破壊（肺気腫（pulmonary emphysema
））、小（末梢）気道の炎症（呼吸細気管支炎）、及び中心気道の炎症である。炎症は、全てのこれらの区画（中枢及び末梢気道並びに肺実質）内で起こる。気流閉塞の主な部位は、ＣＯＰＤにおける小気道及び肺実質である２。
））、小（末梢）気道の炎症（呼吸細気管支炎）、及び中心気道の炎症である。炎症は、全てのこれらの区画（中枢及び末梢気道並びに肺実質）内で起こる。気流閉塞の主な部位は、ＣＯＰＤにおける小気道及び肺実質である２。
【0008】
特発性肺線維症（Idiopathic pulmonary fibrosis、ＩＰＦ）は、急速かつ不可逆性の
肺（lung）機能低下を特徴とする慢性進行型線維性肺（lung）疾患の一種である。肺の組織は硬くなり、肺の空気／肺胞を取り囲む組織に影響を及ぼす。症状は、典型的には、息切れ及び空咳の漸進的な開始を含む。合併症には、肺高血圧症、心不全、肺炎、又は肺塞栓症が含まれ得る。原因は不明である。危険因子としては、喫煙、特定のウイルス感染、及びこの状態の家族歴が挙げられる。根底にある機構は、肺の進行性線維症を含む。世界中で約５００万人が罹患している。診断後の平均寿命は約４年である。
肺（lung）機能低下を特徴とする慢性進行型線維性肺（lung）疾患の一種である。肺の組織は硬くなり、肺の空気／肺胞を取り囲む組織に影響を及ぼす。症状は、典型的には、息切れ及び空咳の漸進的な開始を含む。合併症には、肺高血圧症、心不全、肺炎、又は肺塞栓症が含まれ得る。原因は不明である。危険因子としては、喫煙、特定のウイルス感染、及びこの状態の家族歴が挙げられる。根底にある機構は、肺の進行性線維症を含む。世界中で約５００万人が罹患している。診断後の平均寿命は約４年である。
【0009】
急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）は、重篤な病気の患者の生命を脅かす状態であり、不十分な酸素化、肺浸潤、及び発症の鋭敏さによって特徴付けられる。顕微鏡レベルでは、この障害は毛細血管内皮損傷及びびまん性肺胞損傷に関連する。ＡＲＤＳは、誘発事象の７日以内に始まる急性障害として定義され、心原性肺水腫（cardiogenic pulmonary edema）のいかなる証拠も存在しない両側性肺浸潤（bilateral lung infiltrate）及び重度の進行性低酸素血症を特徴とする。ＡＲＤＳは、患者の動脈血中の酸素濃度（ＰａＯ２）対吸入空気中の酸素濃度（ＦｉＯ２）の割合で定義される。これらの患者は、３００未満のＰａＯ２／ＦｉＯ２比を有する。一旦ＡＲＤＳが発症すると、患者は、通常、様々な程度の肺動脈血管収縮を有し、その後、肺高血圧症を発症し得る。ＡＲＤＳは高い死亡率を有し、この状態と戦うための有効な治療様式はほとんど存在しない３。
【0010】
ほとんどの慢性の炎症性疾患に共通して、コルチコステロイドは、喘息気道における炎症を弱めることができ、この疾患に関連する１秒努力呼気肺活量（forced expiratory volume in one second、ＦＥＶ１）の低下の逆転及び正常レベルへのＡＨＲの減少をもたらす。しかしながら、コルチコステロイドは喘息患者を治癒せず、喘息の症状の多くは治癒せず、炎症はコルチコステロイドを中止すると再発する。更に、重篤な喘息患者は、コルチコステロイドにほとんど応答せず、しばしば、入院を必要とするより頻繁な増悪、及び従来の治療によって制御されない疾患の慢性的性質に関連するうつ病を有する。ＣＯＰＤ患者において、コルチコステロイド治療は、口腔咽頭カンジダ症、しわがれ声、及び肺炎のリスクの増加などの副作用を伴う。
【0011】
他の処置は、複数のサイトカイン４、ケモカイン、及びＴＧＦ－βなどの増殖因子５を含む、肺炎症に関与している炎症性メディエーターを標的化することを含む。炎症シグナル伝達の複雑さを考慮すると、単一のメディエーターを遮断することは、これらの複雑な疾患において非常に有効である可能性は低く、メディエーターアンタゴニストは、これまで、コルチコステロイドなどの広範囲の抗炎症作用を有する薬物と比較して非常に有効であることが証明されていない。例えば、ＣＯＰＤにおける抗ＴＮＦαの効果の欠如は、関節リウマチなどの他の慢性の炎症性疾患において見られる有益な効果とは全く対照的である。
【0012】
加えて、非特異的免疫抑制治療の使用は、患者の免疫防御を低下させ、患者をウイルス又は細菌感染に対して感受性にするので、しばしば副作用を誘発する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0013】
これに関連して、これらの患者を予防し、治療し、更には最終的に治癒させることができる新規の有効な薬物が緊急に必要とされている。なぜなら、これらの薬物は、個々の患者の福祉に対して、また関連する莫大な社会的費用に対しても重大な影響を及ぼすからである。
【課題を解決するための手段】
【0014】
本発明者らは、本明細書において、ペリオスチンタンパク質（ＰＯＳＴＮ）上の特定のドメインに高度に特異的であり、その標的の１つ、すなわちインテグリンαｖβ３へのＰＯＳＴＮの結合を阻害し、したがって炎症性細胞の遊走を阻害することができるモノクローナル抗体の炎症性肺疾患に対する有益な効果を実証する。それらの結果は、当該抗体が、いくつかの動物モデルにおいて炎症、肺線維症及び増悪を低減することを示す（図２～図６及び図８参照）。その高い特異性及びαｖβ３へのＰＯＳＴＮ結合に特異的な強い阻害活性は、肺炎症及び線維症におけるＰＯＳＴＮの有害作用を遮断するためのその高い治療可能性を説明すると考えられる。
【発明の効果】
【0015】
ペリオスチンのαｖβ３のみに対する結合から生じる、シグナル伝達事象を遮断することにより、本発明の抗体は、肺炎症を有利に予防及び治療するが、全体的な定常状態免疫応答に影響を及ぼさない。したがって、この提案された治療は、非特異的免疫抑制治療を使用することによって観察される副作用を誘導しない。
【0016】
これはまた、特定のサイトカインを標的とする新規な治療４又は抗ＩｇＥ中和治療を含む新規な治療よりも有益であり、これらもまた感染の危険性を高める。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【図1】パパインがマウスにおいてＰＯＳＴＮ産生を増加させることを示す。（Ａ）アレルギー性喘息におけるＰＯＳＴＮ産生を誘導するパパインの能力を評価するために、マウスを２５μｇパパインで気管内（ｉ．ｔ．）処置したか又は処置しなかった。パパイン投与４８時間後にマウスを安楽死させた。Ｂ）ＢＡＬＦ（bronchoalveolar lavage fluid、ＢＡＬＦ）試料中のＰＯＳＴＮレベルをＥＬＩＳＡによって定量化した。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）として表す。２日目の統計分析は、マン－ホイットニー検定を用いて決定した。＊対照マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図2-1】ＰＯＳＴＮの遮断が喘息における肺炎症を予防することを記載する。Ａ）喘息を予防する抗ＰＯＳＴＮ抗体処置の能力を評価するために、マウスに抗ＰＯＳＴＮ ＭＰＣ５Ｂ４抗体又はアイソタイプ対照抗体（１２．５、５、２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）を注射した。１時間後、マウスを、２５μｇのパパインで鼻腔内に３日間処置するか又は処置せずに、重度の喘息を誘導した。マウスを４日目に安楽死させた。Ｂ）アレルギー性喘息におけるモノクローナル抗ＰＯＳＴＮ抗体の用量反応試験。ＢＡＬＦ中の好酸球及びリンパ球数。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ≧５）として表す。４日目の統計分析を、一元配置分散分析検定多重比較を用いて決定した。＊対照未処置マウスと比較してｐ＜０．０５。＃パパイン処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図2-2】ＰＯＳＴＮの遮断が喘息における肺炎症を予防することを記載する。Ａ）喘息を予防する抗ＰＯＳＴＮ抗体処置の能力を評価するために、マウスに抗ＰＯＳＴＮ ＭＰＣ５Ｂ４抗体又はアイソタイプ対照抗体（１２．５、５、２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）を注射した。１時間後、マウスを、２５μｇのパパインで鼻腔内に３日間処置するか又は処置せずに、重度の喘息を誘導した。マウスを４日目に安楽死させた。Ｂ）アレルギー性喘息におけるモノクローナル抗ＰＯＳＴＮ抗体の用量反応試験。ＢＡＬＦ中の好酸球及びリンパ球数。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ≧５）として表す。４日目の統計分析を、一元配置分散分析検定多重比較を用いて決定した。＊対照未処置マウスと比較してｐ＜０．０５。＃パパイン処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図3-1】ＰＯＳＴＮの全身性遮断が喘息における肺炎症を予防することを開示する。Ａ）喘息を予防するための抗ＰＯＳＴＮ抗体全身治療の能力を評価するために、マウスに抗ＰＯＳＴＮ ＭＰＣ５Ｂ４又はアイソタイプ対照抗体（１２．５ｍｇ／ｋｇ：ｉ．ｐ．）を注射した。注射の１時間後、マウスを２５μｇパパインで３日間鼻腔内処置したか又は処置せず、重度の喘息を誘導した。マウスを４日目に安楽死させた。Ｂ）全細胞、Ｃ－Ｄ）好酸球、リンパ球及び単球の浸潤を、投与後４日目にＢＡＬＦ中でモニターした。Ｄ）肺における好酸球及びＣＣＬ１７産生を、４日目にＥＬＩＳＡによって肺において定量化した。Ｅ）抗ＰＯＳＴＮ抗体を伴う又は伴わないパパインの３回の投与後４日目の肺の組織損傷。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）として表す。４日目の統計分析を、一元配置分散分析検定多重比較を用いて決定した。＊対照未処置マウスと比較してｐ＜０．０５。＃パパイン処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図3-2】ＰＯＳＴＮの全身性遮断が喘息における肺炎症を予防することを開示する。Ａ）喘息を予防するための抗ＰＯＳＴＮ抗体全身治療の能力を評価するために、マウスに抗ＰＯＳＴＮ ＭＰＣ５Ｂ４又はアイソタイプ対照抗体（１２．５ｍｇ／ｋｇ：ｉ．ｐ．）を注射した。注射の１時間後、マウスを２５μｇパパインで３日間鼻腔内処置したか又は処置せず、重度の喘息を誘導した。マウスを４日目に安楽死させた。Ｂ）全細胞、Ｃ－Ｄ）好酸球、リンパ球及び単球の浸潤を、投与後４日目にＢＡＬＦ中でモニターした。Ｄ）肺における好酸球及びＣＣＬ１７産生を、４日目にＥＬＩＳＡによって肺において定量化した。Ｅ）抗ＰＯＳＴＮ抗体を伴う又は伴わないパパインの３回の投与後４日目の肺の組織損傷。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）として表す。４日目の統計分析を、一元配置分散分析検定多重比較を用いて決定した。＊対照未処置マウスと比較してｐ＜０．０５。＃パパイン処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図3-3】ＰＯＳＴＮの全身性遮断が喘息における肺炎症を予防することを開示する。Ａ）喘息を予防するための抗ＰＯＳＴＮ抗体全身治療の能力を評価するために、マウスに抗ＰＯＳＴＮ ＭＰＣ５Ｂ４又はアイソタイプ対照抗体（１２．５ｍｇ／ｋｇ：ｉ．ｐ．）を注射した。注射の１時間後、マウスを２５μｇパパインで３日間鼻腔内処置したか又は処置せず、重度の喘息を誘導した。マウスを４日目に安楽死させた。Ｂ）全細胞、Ｃ－Ｄ）好酸球、リンパ球及び単球の浸潤を、投与後４日目にＢＡＬＦ中でモニターした。Ｄ）肺における好酸球及びＣＣＬ１７産生を、４日目にＥＬＩＳＡによって肺において定量化した。Ｅ）抗ＰＯＳＴＮ抗体を伴う又は伴わないパパインの３回の投与後４日目の肺の組織損傷。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）として表す。４日目の統計分析を、一元配置分散分析検定多重比較を用いて決定した。＊対照未処置マウスと比較してｐ＜０．０５。＃パパイン処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図3-4】ＰＯＳＴＮの全身性遮断が喘息における肺炎症を予防することを開示する。Ａ）喘息を予防するための抗ＰＯＳＴＮ抗体全身治療の能力を評価するために、マウスに抗ＰＯＳＴＮ ＭＰＣ５Ｂ４又はアイソタイプ対照抗体（１２．５ｍｇ／ｋｇ：ｉ．ｐ．）を注射した。注射の１時間後、マウスを２５μｇパパインで３日間鼻腔内処置したか又は処置せず、重度の喘息を誘導した。マウスを４日目に安楽死させた。Ｂ）全細胞、Ｃ－Ｄ）好酸球、リンパ球及び単球の浸潤を、投与後４日目にＢＡＬＦ中でモニターした。Ｄ）肺における好酸球及びＣＣＬ１７産生を、４日目にＥＬＩＳＡによって肺において定量化した。Ｅ）抗ＰＯＳＴＮ抗体を伴う又は伴わないパパインの３回の投与後４日目の肺の組織損傷。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ＝５）として表す。４日目の統計分析を、一元配置分散分析検定多重比較を用いて決定した。＊対照未処置マウスと比較してｐ＜０．０５。＃パパイン処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図4-1】ＰＯＳＴＮの遮断が、重度喘息における肺炎症を局所的に低減することを示す。Ａ）喘息を予防する抗ＰＯＳＴＮ抗体局所治療の能力を評価するために、マウスは抗ＰＯＳＴＮ ＭＰＣ５Ｂ４（１０、１ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｔ．）を気管内注射された。注射の１時間後、マウスを２５μｇパパインで３日間処置したか又は処置せず、喘息を誘導した。マウスを４日目に安楽死させた。Ｂ）全細胞、Ｃ）マクロファージ、好酸球、リンパ球、及び好中球の浸潤を、投与後４日目にＢＡＬＦ中でモニターした。Ｄ）ＰＯＳＴＮ及びＭＰＯ産生を、ＥＬＩＳＡによってＢＡＬＦにおいて定量化した。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ≧３）として表す。４日目の統計分析を、一元配置分散分析検定多重比較を用いて決定した。＊対照未処置マウスと比較してｐ＜０．０５。＃パパイン処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図4-2】ＰＯＳＴＮの遮断が、重度喘息における肺炎症を局所的に低減することを示す。Ａ）喘息を予防する抗ＰＯＳＴＮ抗体局所治療の能力を評価するために、マウスは抗ＰＯＳＴＮ ＭＰＣ５Ｂ４（１０、１ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｔ．）を気管内注射された。注射の１時間後、マウスを２５μｇパパインで３日間処置したか又は処置せず、喘息を誘導した。マウスを４日目に安楽死させた。Ｂ）全細胞、Ｃ）マクロファージ、好酸球、リンパ球、及び好中球の浸潤を、投与後４日目にＢＡＬＦ中でモニターした。Ｄ）ＰＯＳＴＮ及びＭＰＯ産生を、ＥＬＩＳＡによってＢＡＬＦにおいて定量化した。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ≧３）として表す。４日目の統計分析を、一元配置分散分析検定多重比較を用いて決定した。＊対照未処置マウスと比較してｐ＜０．０５。＃パパイン処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図4-3】ＰＯＳＴＮの遮断が、重度喘息における肺炎症を局所的に低減することを示す。Ａ）喘息を予防する抗ＰＯＳＴＮ抗体局所治療の能力を評価するために、マウスは抗ＰＯＳＴＮ ＭＰＣ５Ｂ４（１０、１ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｔ．）を気管内注射された。注射の１時間後、マウスを２５μｇパパインで３日間処置したか又は処置せず、喘息を誘導した。マウスを４日目に安楽死させた。Ｂ）全細胞、Ｃ）マクロファージ、好酸球、リンパ球、及び好中球の浸潤を、投与後４日目にＢＡＬＦ中でモニターした。Ｄ）ＰＯＳＴＮ及びＭＰＯ産生を、ＥＬＩＳＡによってＢＡＬＦにおいて定量化した。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ≧３）として表す。４日目の統計分析を、一元配置分散分析検定多重比較を用いて決定した。＊対照未処置マウスと比較してｐ＜０．０５。＃パパイン処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図4-4】ＰＯＳＴＮの遮断が、重度喘息における肺炎症を局所的に低減することを示す。Ａ）喘息を予防する抗ＰＯＳＴＮ抗体局所治療の能力を評価するために、マウスは抗ＰＯＳＴＮ ＭＰＣ５Ｂ４（１０、１ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｔ．）を気管内注射された。注射の１時間後、マウスを２５μｇパパインで３日間処置したか又は処置せず、喘息を誘導した。マウスを４日目に安楽死させた。Ｂ）全細胞、Ｃ）マクロファージ、好酸球、リンパ球、及び好中球の浸潤を、投与後４日目にＢＡＬＦ中でモニターした。Ｄ）ＰＯＳＴＮ及びＭＰＯ産生を、ＥＬＩＳＡによってＢＡＬＦにおいて定量化した。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ≧３）として表す。４日目の統計分析を、一元配置分散分析検定多重比較を用いて決定した。＊対照未処置マウスと比較してｐ＜０．０５。＃パパイン処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図5-1】ＰＯＳＴＮの阻害が、重度喘息モデルにおいて肺炎症及びコラーゲン沈着を低減することを示す。Ａ）抗ＰＯＳＴＮ抗体処置の喘息治療能力を評価するため、マウスを生理食塩水ビヒクル、又は１、２、１４、及び２１日目にパパイン（２５μｇ ｉ．ｎ．）を４回投与して処置して喘息を誘導し、１４、１８、及び２１日目に抗ＰＯＳＴＮ抗体ＭＰＣ５Ｂ４（１２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）を伴う又は伴わなかった。マウスは２２日目に安楽死させた。２２日目にマウスを安楽死させた。Ｂ）全細胞、好酸球、リンパ球、マクロファージ及び好中球の浸潤を、２２日目にＢＡＬＦ中でモニターした。Ｃ）肺における組織損傷、可溶性コラーゲンタンパク質及びコラーゲンメッセージ転写を２２日目にモニターした。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）として表す。＊対照アイソタイプ処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図5-2】ＰＯＳＴＮの阻害が、重度喘息モデルにおいて肺炎症及びコラーゲン沈着を低減することを示す。Ａ）抗ＰＯＳＴＮ抗体処置の喘息治療能力を評価するため、マウスを生理食塩水ビヒクル、又は１、２、１４、及び２１日目にパパイン（２５μｇ ｉ．ｎ．）を４回投与して処置して喘息を誘導し、１４、１８、及び２１日目に抗ＰＯＳＴＮ抗体ＭＰＣ５Ｂ４（１２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）を伴う又は伴わなかった。マウスは２２日目に安楽死させた。２２日目にマウスを安楽死させた。Ｂ）全細胞、好酸球、リンパ球、マクロファージ及び好中球の浸潤を、２２日目にＢＡＬＦ中でモニターした。Ｃ）肺における組織損傷、可溶性コラーゲンタンパク質及びコラーゲンメッセージ転写を２２日目にモニターした。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）として表す。＊対照アイソタイプ処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図5-3】ＰＯＳＴＮの阻害が、重度喘息モデルにおいて肺炎症及びコラーゲン沈着を低減することを示す。Ａ）抗ＰＯＳＴＮ抗体処置の喘息治療能力を評価するため、マウスを生理食塩水ビヒクル、又は１、２、１４、及び２１日目にパパイン（２５μｇ ｉ．ｎ．）を４回投与して処置して喘息を誘導し、１４、１８、及び２１日目に抗ＰＯＳＴＮ抗体ＭＰＣ５Ｂ４（１２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）を伴う又は伴わなかった。マウスは２２日目に安楽死させた。２２日目にマウスを安楽死させた。Ｂ）全細胞、好酸球、リンパ球、マクロファージ及び好中球の浸潤を、２２日目にＢＡＬＦ中でモニターした。Ｃ）肺における組織損傷、可溶性コラーゲンタンパク質及びコラーゲンメッセージ転写を２２日目にモニターした。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）として表す。＊対照アイソタイプ処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図5-4】ＰＯＳＴＮの阻害が、重度喘息モデルにおいて肺炎症及びコラーゲン沈着を低減することを示す。Ａ）抗ＰＯＳＴＮ抗体処置の喘息治療能力を評価するため、マウスを生理食塩水ビヒクル、又は１、２、１４、及び２１日目にパパイン（２５μｇ ｉ．ｎ．）を４回投与して処置して喘息を誘導し、１４、１８、及び２１日目に抗ＰＯＳＴＮ抗体ＭＰＣ５Ｂ４（１２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）を伴う又は伴わなかった。マウスは２２日目に安楽死させた。２２日目にマウスを安楽死させた。Ｂ）全細胞、好酸球、リンパ球、マクロファージ及び好中球の浸潤を、２２日目にＢＡＬＦ中でモニターした。Ｃ）肺における組織損傷、可溶性コラーゲンタンパク質及びコラーゲンメッセージ転写を２２日目にモニターした。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）として表す。＊対照アイソタイプ処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図5-5】ＰＯＳＴＮの阻害が、重度喘息モデルにおいて肺炎症及びコラーゲン沈着を低減することを示す。Ａ）抗ＰＯＳＴＮ抗体処置の喘息治療能力を評価するため、マウスを生理食塩水ビヒクル、又は１、２、１４、及び２１日目にパパイン（２５μｇ ｉ．ｎ．）を４回投与して処置して喘息を誘導し、１４、１８、及び２１日目に抗ＰＯＳＴＮ抗体ＭＰＣ５Ｂ４（１２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）を伴う又は伴わなかった。マウスは２２日目に安楽死させた。２２日目にマウスを安楽死させた。Ｂ）全細胞、好酸球、リンパ球、マクロファージ及び好中球の浸潤を、２２日目にＢＡＬＦ中でモニターした。Ｃ）肺における組織損傷、可溶性コラーゲンタンパク質及びコラーゲンメッセージ転写を２２日目にモニターした。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）として表す。＊対照アイソタイプ処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図6-1】抗ＰＯＳＴＮ抗体ＭＰＣ５Ｂ４による処置が肺（pulmonary）線維症モデルにおいて肺（lung）炎症を予防することを示す。Ａ）線維症を予防する抗ＰＯＳＴＮ抗体予防的処置の能力を評価するために、マウスに、３用量のモノクローナル抗ＰＯＳＴＮ ＭＰＣ５Ｂ４又はアイソタイプ対照抗体（１．２５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）を０日目、５日目及び１０日目に投与した。１回目の抗体注射の１時間後、マウスをブレオマイシン（ＢＬＭ、３ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｎ．）で処置するか又は処置せずに、肺線維症を誘導した。マウスを１４日目に安楽死させた。Ｂ）モノクローナル抗ＰＯＳＴＮ抗体の治療効果を分析するために、Ａと同様に、ＢＬＭ投与後７日目及び１０日目に、２用量のＭＰＣ５Ｂ４を腹腔内経路により投与した。Ｃ）ＢＬＭ投与後１４日目に、全細胞、好中球及びリンパ球の浸潤をＢＡＬＦ中でモニターした。
【図6-2】抗ＰＯＳＴＮ抗体ＭＰＣ５Ｂ４による処置が肺（pulmonary）線維症モデルにおいて肺（lung）炎症を予防することを示す。Ａ）線維症を予防する抗ＰＯＳＴＮ抗体予防的処置の能力を評価するために、マウスに、３用量のモノクローナル抗ＰＯＳＴＮ ＭＰＣ５Ｂ４又はアイソタイプ対照抗体（１．２５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）を０日目、５日目及び１０日目に投与した。１回目の抗体注射の１時間後、マウスをブレオマイシン（ＢＬＭ、３ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｎ．）で処置するか又は処置せずに、肺線維症を誘導した。マウスを１４日目に安楽死させた。Ｂ）モノクローナル抗ＰＯＳＴＮ抗体の治療効果を分析するために、Ａと同様に、ＢＬＭ投与後７日目及び１０日目に、２用量のＭＰＣ５Ｂ４を腹腔内経路により投与した。Ｃ）ＢＬＭ投与後１４日目に、全細胞、好中球及びリンパ球の浸潤をＢＡＬＦ中でモニターした。
【図7】ＬＰＳがマウスにおいてＰＯＳＴＮ産生を増加させることを示す。Ａ）ＰＯＳＴＮ産生を誘導するＬＰＳの能力を評価するために、マウスをＬＰＳ（１０μｇ ｉ．ｔ．）で処置したか又は処置しなかった。ＬＰＳ投与４８時間後にマウスを安楽死させた。Ｂ）ＢＡＬＦ試料中のＰＯＳＴＮレベルをＥＬＩＳＡによって定量化した。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ＝３～４）として表す。２日目の統計分析は、マン－ホイットニー検定を用いて決定した。＊対照未処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図8-1】ＰＯＳＴＮの遮断が感染による肺炎症を予防することを開示している。Ａ）増悪を予防する抗ＰＯＳＴＮ抗体処置の能力を評価するために、マウスにＭＰＣ５Ｂ４又は抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体（１２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）を注射した。注射の１時間後、マウスをＬＰＳで処置したか又は処置しなかった（１μｇを鼻腔内投与）。ＬＰＳ投与の２４時間後にマウスを安楽死させた。Ｂ）全細胞、好中球及びリンパ球浸潤を、ＬＰＳ投与の２４時間後にＢＡＬＦ中でモニターした。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ≧５）として表す。統計分析は、一元配置分散分析検定多重比較を用いて決定した。＊対照未処置マウスと比較してｐ＜０．０５。＃ＬＰＳ処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図8-2】ＰＯＳＴＮの遮断が感染による肺炎症を予防することを開示している。Ａ）増悪を予防する抗ＰＯＳＴＮ抗体処置の能力を評価するために、マウスにＭＰＣ５Ｂ４又は抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体（１２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）を注射した。注射の１時間後、マウスをＬＰＳで処置したか又は処置しなかった（１μｇを鼻腔内投与）。ＬＰＳ投与の２４時間後にマウスを安楽死させた。Ｂ）全細胞、好中球及びリンパ球浸潤を、ＬＰＳ投与の２４時間後にＢＡＬＦ中でモニターした。結果を平均±ＳＥＭ（ｎ≧５）として表す。統計分析は、一元配置分散分析検定多重比較を用いて決定した。＊対照未処置マウスと比較してｐ＜０．０５。＃ＬＰＳ処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【発明を実施するための形態】
【0018】
第１の態様において、本発明は、ペリオスチンのファシクリン（ＦＡＳ）１－１ドメイン中の配列番号１（ＡＰＳＮＥＡＷＤＮＬＤＳＤＩＲＲ）のペプチド配列を特異的かつ高親和性で認識するモノクローナル抗ペリオスチン（ＰＯＳＴＮ）ＩｇＧ抗体又はその抗原結合性断片の、好ましくは肺疾患、炎症性疾患又は呼吸器疾患を予防及び／又は治療するための医薬としての使用に関する。
【0019】
Ｏｒｅｃｃｈｉａら、２０１１１５によって開示されたＯＣ－２０抗体（ＩｇＭ）が、ＰＯＳＴＮのＦａｓ １－２ドメインに結合し、ペリオスチンの（ＦＡＳ）１－１ドメインには結合しないことは注目に値する。更に、ＯＣ－２０抗体は、αｖβ３及びαｖβ５インテグリンの両方（αｖβ３インテグリンのみならず）に対する阻害活性を有する。この抗体は、肺（lung）線維症の低減２３及びマウスモデルにおける空気アレルゲンに対する炎症反応２４に対して効果を有するが、ヒト肺（pulmonary）線維症に対するその治療
的使用は、提案も示唆もされていない。より重要なことに、これらの研究のいずれも、ヒトにおける治療薬として抗体を使用することを提案していない。これは、試験した抗体が、ヒトＰＯＳＴＮではなくマウスＰＯＳＴＮを認識するＩｇＭであった（したがって、補体を活性化することができる）という事実による可能性がある。
的使用は、提案も示唆もされていない。より重要なことに、これらの研究のいずれも、ヒトにおける治療薬として抗体を使用することを提案していない。これは、試験した抗体が、ヒトＰＯＳＴＮではなくマウスＰＯＳＴＮを認識するＩｇＭであった（したがって、補体を活性化することができる）という事実による可能性がある。
【0020】
本発明の抗体
「抗体」という用語は、本明細書において最も広い意味で使用され、具体的には、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥなどの任意のアイソタイプのモノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体、キメラ抗体、並びに抗原結合性断片を包含する。
「抗体」という用語は、本明細書において最も広い意味で使用され、具体的には、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥなどの任意のアイソタイプのモノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体、キメラ抗体、並びに抗原結合性断片を包含する。
【0021】
好ましい実施形態では、本発明の抗体はモノクローナルＩｇＧであり、これは他のタイプの免疫グロブリンと比較してより強い免疫応答を誘発する。より好ましい実施形態では、本発明の抗体はモノクローナルＩｇＧ１であり、すなわち、それは２つのγ１重鎖を含有する。ＩｇＧ１アイソタイプは、ヒト血清中に見出される最も豊富なアイソタイプであるだけでなく、最もよく研究され、最もよく理解されているヒト抗体形態でもある。更に、ＩｇＧ１活性プロファイルは、ＰＯＳＴＮなどの可溶性標的に合理的に適合する。
【0022】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、ほぼ均一な抗体集団から生じる抗体を指す。より詳細には、集団の個々の抗体は、最小限の割合で見出され得るいくつかの可能な自然発生変異を除いて同一である。言い換えれば、モノクローナル抗体は、単一の細胞クローン（例えば、ハイブリドーマ、均質な抗体をコードするＤＮＡ分子でトランスフェクトされた真核生物宿主細胞、均質な抗体をコードするＤＮＡ分子でトランスフェクトされた原核生物宿主細胞など）の増殖から生じる均質な抗体集団からなり、一般に、１つ及び唯一のクラス並びにサブクラスの重鎖と、唯一の型の軽鎖とによって特徴付けられる。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、抗原上の単一エピトープに対して向けられ、当該エピトープは例えば配列番号１のペプチドである。連続アミノ酸によって形成されるこのエピトープの配列は、典型的には、変性剤への曝露の際に保持される。
【0023】
配列番号１のエピトープ（ＡＰＳＮＥＡＷＤＮＬＤＳＤＩＲＲ）は、ヒトペリオスチン蛋白（ＰＯＳＴＮ）のファシクリン（ＦＡＳ）１－１ドメイン内に位置するアミノ酸配列１３６－１５１に対応する。この高度に保存されたドメインはまた、マウスペリオスチン蛋白にも存在し、１４５位に単一の保存的点変異Ｄ－Ｅを有し（ＡＰＳＮＥＡＷＥＮＬＤＳＤＩＲＲ、配列番号１４と称する）、これも当該モノクローナル抗体によってエピトープとして認識される。
【0024】
ヒトＰＯＳＴＮタンパク質は、以下の番号でＵｎｉＰｒｏｔに記載されている７つのアイソフォームを有する。
Ｑ１５０６３アイソフォーム１、ヒト）：配列番号２
Ｑ１５０６３－２アイソフォーム２、ヒト）：配列番号３
Ｑ１５０６３－３アイソフォーム３、ヒト）：配列番号４
Ｑ１５０６３－４アイソフォーム４、ヒト）：配列番号５
Ｑ１５０６３－５アイソフォーム５、ヒト）：配列番号６
Ｑ１５０６３－６アイソフォーム６、ヒト）：配列番号７
Ｑ１５０６３－７アイソフォーム７、ヒト）：配列番号８
Ｑ１５０６３アイソフォーム１、ヒト）：配列番号２
Ｑ１５０６３－２アイソフォーム２、ヒト）：配列番号３
Ｑ１５０６３－３アイソフォーム３、ヒト）：配列番号４
Ｑ１５０６３－４アイソフォーム４、ヒト）：配列番号５
Ｑ１５０６３－５アイソフォーム５、ヒト）：配列番号６
Ｑ１５０６３－６アイソフォーム６、ヒト）：配列番号７
Ｑ１５０６３－７アイソフォーム７、ヒト）：配列番号８
【0025】
それらの全ては、配列番号１を含有する。
マウスＰＯＳＴＮタンパク質は、以下の番号でＵｎｉＰｒｏｔに記載される５つのアイソフォームを有する。
Ｑ６２００９アイソフォーム１、マウス）：配列番号９
Ｑ６２００９－２アイソフォーム２、マウス）：配列番号１０
Ｑ６２００９－３アイソフォーム３、マウス）：配列番号１１
Ｑ６２００９－４アイソフォーム４、マウス）：配列番号１２
Ｑ６２００９－５アイソフォーム５、マウス）：配列番号１３
マウスＰＯＳＴＮタンパク質は、以下の番号でＵｎｉＰｒｏｔに記載される５つのアイソフォームを有する。
Ｑ６２００９アイソフォーム１、マウス）：配列番号９
Ｑ６２００９－２アイソフォーム２、マウス）：配列番号１０
Ｑ６２００９－３アイソフォーム３、マウス）：配列番号１１
Ｑ６２００９－４アイソフォーム４、マウス）：配列番号１２
Ｑ６２００９－５アイソフォーム５、マウス）：配列番号１３
【0026】
それらの全ては、１４５位に単一の保存的点変異Ｄ－Ｅを有する配列番号１を含有する。
【0027】
ペリオスチン（ＰＯＳＴＮ）は、タンパク質のマトリックス細胞ファミリーのメンバーである。マトリックス細胞タンパク質は、細胞外マトリックス（extracellular matrix、ＥＣＭ）及び細胞表面受容体の両方に結合するそれらの能力によって定義される。ＰＯＳＴＮは、気道発達及び肺胞上皮修復に関与することが知られており、気管支肺異形成症を有する乳児において特に上方制御される６。ＰＯＳＴＮは、インテグリン受容体との細胞間相互作用に影響を及ぼし、線維化サイトカイン及び増殖因子の産生及び局在化に影響を及ぼす７，８。ＰＯＳＴＮは、他のＥＣＭタンパク質及び酵素との相互作用を介して、組織リモデリング及びコラーゲン架橋を促進する９。これは、肺を含むいくつかの異なるヒト組織において発現される。ＰＯＳＴＮは、炎症及び間質性線維症の進展における重要な因子であると考えられており、喘息及び間質性肺疾患（ＩＬＤ）を含むいくつかの慢性肺疾患の病因に関与している７。
【0028】
ペリオスチン（ＰＯＳＴＮ）は、マウス骨芽細胞株において骨芽細胞特異的因子２として最初に同定され１０、骨膜及び歯周靭帯において発現される。これが「ＯＳＦ－２」、「ＯＳＦ２」及び「ＰＤＬＰＮ」とも呼ばれている理由である。
【0029】
ＰＯＳＴＮ分子は、Ｎ末端領域内のシステインリッチドメイン、４つのファシクリンＩドメイン、及びＣ末端領域内の選択的スプライシングドメインから構成される。
【0030】
興味深いことに、最大９つのスプライスバリアントが同定されているが、全長転写物は、全てのエキソン１１を含む９３．３ｋＤａの分泌タンパク質をコードする。
【0031】
ＰＯＳＴＮは、Ｉ型コラーゲン及びフィブロネクチンに結合し、コラーゲン線維形成に関与することが示されている８。ＰＯＳＴＮはインテグリンαｖβ３、αｖβ５、及びα６β４に結合し、Ａｋｔ／プロテインキナーゼＢ（Protein kinase B、ＰＫＢ）及び接着斑キナーゼ（Focal adhesion kinase、ＦＡＫ）シグナル伝達経路の活性化をもたらし、
細胞生存、血管新生及び低酸素誘導性アポトーシスに対する抵抗性を促進する１２。それはまた、Ｃ末端に依存して、ヘパリン、フィブロネクチン、コラーゲンＶ及びテネイシンＣなどのいくつかのＥＣＭタンパク質に結合し、それによって、ＥＣＭ原線維形成８及び様々な腫瘍の転移に影響を及ぼすことによって腫瘍細胞の浸潤性を増強する１３。
細胞生存、血管新生及び低酸素誘導性アポトーシスに対する抵抗性を促進する１２。それはまた、Ｃ末端に依存して、ヘパリン、フィブロネクチン、コラーゲンＶ及びテネイシンＣなどのいくつかのＥＣＭタンパク質に結合し、それによって、ＥＣＭ原線維形成８及び様々な腫瘍の転移に影響を及ぼすことによって腫瘍細胞の浸潤性を増強する１３。
【0032】
好ましい実施形態では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合性断片は、ヒト及びマウスタンパク質ＰＯＳＴＮの全てのアイソフォームの、上皮細胞によって発現されたαｖβ３インテグリンへの結合を阻害することができる。言い換えれば、本発明は、ヒト及びマウスＰＯＳＴＮタンパク質の全てのアイソフォームの、上皮細胞によって発現されたαｖβ３インテグリンとの相互作用を阻害することができる、拮抗抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0033】
本発明の抗体又はその抗原結合性断片の阻害活性は、ヒト又はマウスＰＯＳＴＮのαｖβ３及び／又はＦｉｅｌｄら、２０１６１４に開示されているようなαｖβ被覆ＥＬＩＳＡプレートに対する結合への影響を評価することにより、決定することができる。Ｆｉｅｌｄら１４の図２ａの条件において、ＰＯＳＴＮ結合を阻害するためのＩＣ５０が３０μｇ／ｍＬ未満である場合、阻害活性を結論付けることができる。
【0034】
本発明の抗体の阻害活性はまた、組換えヒト又はマウスＰＯＳＴＮ又はそのＦａｓｌ－１ドメインに応答して、ＥＣＦＣなどの遊走細胞の遊走に対するその影響を研究すること
によって実証することができる。Ｆｉｅｌｄら１４に開示されているように（図５）、本発明の抗体は、好ましくは、ＰＯＳＴＮによって誘導されるＥＣＦＣの遊走を陰性対照のレベルまで減少させることができる。
によって実証することができる。Ｆｉｅｌｄら１４に開示されているように（図５）、本発明の抗体は、好ましくは、ＰＯＳＴＮによって誘導されるＥＣＦＣの遊走を陰性対照のレベルまで減少させることができる。
【0035】
本発明の抗体又はその抗原結合性断片の高い特異性及び強い阻害活性は、以下の実施例部分に示されるように、ヒト肺疾患のマウスモデルにおいて観察される強い効果を説明すると考えられる。
【0036】
実際、本出願の抗体は、配列番号１に対して高い親和性を有する。より好ましくは、それらは、配列番号１との非常に低い解離定数を有する。例えば、この非常に低い解離定数は、５０ｎＭ以下であり、ピコモル範囲（１０－１２Ｍ）まで達し得る。より具体的には、本発明の抗体又はその機能的抗原結合性断片は、約０．０８の配列番号１との解離定数（dissociation constant、ＫＤ）を有する。
【0037】
本明細書で使用される場合、「ＫＤ」という用語は、特定の抗体／抗原相互作用の解離定数を指す。本明細書で使用される場合、「結合親和性」又は「結合の親和性」という用語は、一般に、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。別段の指示がない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体及び抗原）のメンバー間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般的には、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載されるものを含む、当技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。低親和性抗体は、一般に、抗原にゆっくりと結合し、容易に解離する傾向があるのに対して、高親和性抗体は、一般に、抗原により速く結合し、より長く結合したままである傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法が当技術分野で公知であり、そのうちのいずれも本発明の目的のために使用することができる。Ｆｉｅｌｄら１４に開示されているものなどの競合ペプチドを用いた競合実験も行うことができる。
【0038】
抗ＰＯＳＴＮ抗体（ＭＰＣ５Ｂ４）の滴定を、ペリオスチン被覆プレート上で行った。これは、実際の親和性計算を可能にしないが、アビディティの概念を与える。ヒトＰＯＳＴＮ（０．００６３ｎＭ、Ｋｄ＝０．０８）及びマウスＰＯＳＴＮ（０．００４１９ｎＭ）について、５０％最大結合率を計算した。
【0039】
好ましい実施形態では、本発明の抗体又はその機能的断片は、ヒトＰＯＳＴＮタンパク質における任意の他のエピトープに結合しない（全ての他のエピトープに対して１ｍＭを超える解離定数を有するため）。具体的には、それは、Ｏｒｅｃｃｈｉａら、２０１１１５によって開示されたＯＣ－２０抗体（ＩｇＭ）のように、ＰＯＳＴＮのＦａｓ １－２ドメインに結合しない。
【0040】
本発明の抗体の取得
好ましい実施形態では、本発明の抗体は、Ｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ，２０１６１４によって開示された「ＭＰＣ５Ｂ４」と呼ばれるＩｇＧ１モノクローナル抗体であり得、これは、Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ａｖｅｎｕｅ Ｈｉｐｐｏｃｒａｔｅ ７４，Ｂｏｘ Ｂ １．７４．０３ Ｂ－１２００
Ｂｒｕｓｓｅｌｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）において要求に応じて利用可能である。
好ましい実施形態では、本発明の抗体は、Ｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ，２０１６１４によって開示された「ＭＰＣ５Ｂ４」と呼ばれるＩｇＧ１モノクローナル抗体であり得、これは、Ｌｕｄｗｉｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ａｖｅｎｕｅ Ｈｉｐｐｏｃｒａｔｅ ７４，Ｂｏｘ Ｂ １．７４．０３ Ｂ－１２００
Ｂｒｕｓｓｅｌｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）において要求に応じて利用可能である。
【0041】
Ｆｉｅｌｄら、２０１６１４に開示されているように、他の効率的なモノクローナル抗体は、オボアルブミン（ovalbumin、ＯＶＡ）などの免疫原性担体にコンジュゲートされ
たエピトープ（配列番号１）又は配列番号２～１３からなる群から選択される配列を有する全ＰＯＳＴＮタンパク質でマウスを免疫することによって産生することができる。この
コンジュゲーションは、任意の従来の手段によって行うことができる。当該コンジュゲーションの例は、Ｆｉｅｌｄら１４に示されており、ここでは、最初に、完全長ＰＯＳＴＮを、０．１Ｍ ＭＥＳ緩衝液ｐＨ４．８中の１０ｍＭ Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミドの存在下で１００ｍＭ Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミドと１時間重合させた。０．１Ｍ酢酸緩衝液ｐＨ５．８に対して透析した後、重合ＰＯＳＴＮをグルタルアルデヒド活性化ＯＶＡにコンジュゲートさせた。更なる詳細は、Ｕｙｔｔｅｎｈｏｖｅ Ｃら、２０１１１６に記載されている。
たエピトープ（配列番号１）又は配列番号２～１３からなる群から選択される配列を有する全ＰＯＳＴＮタンパク質でマウスを免疫することによって産生することができる。この
コンジュゲーションは、任意の従来の手段によって行うことができる。当該コンジュゲーションの例は、Ｆｉｅｌｄら１４に示されており、ここでは、最初に、完全長ＰＯＳＴＮを、０．１Ｍ ＭＥＳ緩衝液ｐＨ４．８中の１０ｍＭ Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミドの存在下で１００ｍＭ Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミドと１時間重合させた。０．１Ｍ酢酸緩衝液ｐＨ５．８に対して透析した後、重合ＰＯＳＴＮをグルタルアルデヒド活性化ＯＶＡにコンジュゲートさせた。更なる詳細は、Ｕｙｔｔｅｎｈｏｖｅ Ｃら、２０１１１６に記載されている。
【0042】
Ｆｉｅｌｄら１４において示唆されているように、例えば、感染血漿の腹腔内注射によって、Ｂ細胞活性化特性を有する一本鎖ポジティブセンスＲＮＡエンベロープアルテリウイルスである乳酸脱水素酵素上昇ウイルス（lactate dehydrogenase-elevating virus、
ＬＤＶ）ウイルスをマウスに感染させることによって、免疫系が強力に刺激されたマウスにおいて抗体を産生することが好ましい１７。
ＬＤＶ）ウイルスをマウスに感染させることによって、免疫系が強力に刺激されたマウスにおいて抗体を産生することが好ましい１７。
【0043】
あるいは、先行技術において報告されているように、内因性ＰＯＳＴＮタンパク質を有さない（すなわち、ＰＯＳＴＮタンパク質のアイソフォームを有さない）ＰＯＳＴＮ欠損マウスを使用することができる（Ｆｉｅｌｄら１４の議論において引用されている論文を参照されたい）。
【0044】
Ｆｉｅｌｄらは、このようなワクチン接種手順がマウスの免疫自己寛容を破り、ＴＧＦβ１と交差反応することなく、配列番号２～１３のヒト及びマウスＰＯＳＴＮタンパク質の配列番号１を特異的に認識するいくつかの抗体を生成することを可能にすることを示唆している。
【0045】
これらのマウスは、１０μｇのＰＯＳＴＮ（配列番号２～１３の任意のアイソフォーム）又はオボアルブミン（ＯＶＡ）にコンジュゲートされた配列番号１で、好ましくは週間隔で数回、例えば２週間隔で３回、足蹠において免疫することができる。５μｇのＰＯＳＴＮ（配列番号２～１３の任意のアイソフォーム又は配列番号１のエピトープ）の静脈内注射を、骨髄腫細胞との細胞融合の４日前に行うことができる。
【0046】
これらの免疫化されたマウスは、ＰＯＳＴＮタンパク質中の配列番号１エピトープに特異的に結合する抗体を生成するリンパ球を産生する。これらのリンパ球を収集し、次いでポリエチレングリコールなどの適切な融合剤を用いて骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する。このように調製されたハイブリドーマ細胞は、好ましくは融合していない親骨髄腫細胞の増殖又は生存を阻害する１つ以上の物質を含有する適切な培養培地中に播種し、増殖させることができる。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマのための培養培地は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを含み（ＨＡＴ培地）、これらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防止する。好ましい骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベル産生を支持し、ＨＡＴ培地などの培地に対して感受性であるものである。これらの中で、好ましい骨髄腫細胞株は、Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ＵＳＡから入手可能なＭＯＰＣ－２１及びＭＰＣ－１１マウス腫瘍に由来するもの、並びにＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ ＵＳＡから入手可能なＳＰ－２又はＸ６３－Ａｇ８－６５３細胞などのマウス骨髄腫株である。
【0047】
ハイブリドーマ細胞が増殖している培養培地を、抗原に対するモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクロ
ーナル抗体の結合特異性は、インビトロ結合アッセイ（例えば、ラジオイムノアッセイ（radioimmunoassay、ＲＩＡ）又は酵素結合免疫吸着アッセイ（enzyme-linked immunoabsorbent assay、ＥＬＩＳＡ））によって決定される。
ーナル抗体の結合特異性は、インビトロ結合アッセイ（例えば、ラジオイムノアッセイ（radioimmunoassay、ＲＩＡ）又は酵素結合免疫吸着アッセイ（enzyme-linked immunoabsorbent assay、ＥＬＩＳＡ））によって決定される。
【0048】
所望の特異性、親和性、及び／又は活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定された後、クローンを限界希釈法によってサブクローニングし、標準的な方法によって増殖させることができる。この目的のための適切な培養培地としては、例えば、Ｄ－ＭＥＭ又はＲＰＭＩ－１６４０培地が挙げられる。
【0049】
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製手順（例えば、プロテインＧ又はプロテインＡ－セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、又はアフィニティークロマトグラフィ）によって、培養培地、腹水液、又は血清から適切に分離される。
【0050】
更なる実施形態では、抗体又は抗体断片は、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２－５５４（１９９０）に記載される技術を使用して生成される抗体ファージライブラリから単離され得る。Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１－５９７（１９９１）は、ファージライブラリを用いたマウス及びヒト抗体の単離をそれぞれ記載している。その後発表された論文には、チェーンシャフリングによる高親和性（ｎＭ範囲）ヒト抗体の生産（Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９－７８３（１９９２））、同様に非常に大きなファージライブラリを構築する戦略としてのコンビナトリアル感染及びインビボ組換えが記載されている（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．，２１：２２６５－２２６６（１９９３））。したがって、これらの技術は、モノクローナル抗体の単離のための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に対する実行可能な代替法である。
【0051】
本発明の抗体の特異性／アビディティは、例えば、配列番号１のポリペプチド、ヒトＰＯＳＴＮ（任意のアイソフォーム）、マウスＰＯＳＴＮ（任意のアイソフォーム）又は他の関連タンパク質で被覆されたマイクロプレートを使用して、ＥＬＩＳＡ実験によって評価することができる。目的の抗体の選択は、それらの相対的なアビディティ／特異性に基づいて行われる。
【0052】
Ｆｃドメインにおける変異
ここで、本発明は、好ましくは、天然形態の抗体に関するものではない、すなわち、それらは、それらの自然環境から採取されたものではなく、天然源からの精製によって単離又は得られたものであるか、あるいは遺伝子組換え又は化学合成によって得られたものであることを理解しなければならない。したがって、それらは、以下に記載されるような「非天然」アミノ酸を有し得る。
ここで、本発明は、好ましくは、天然形態の抗体に関するものではない、すなわち、それらは、それらの自然環境から採取されたものではなく、天然源からの精製によって単離又は得られたものであるか、あるいは遺伝子組換え又は化学合成によって得られたものであることを理解しなければならない。したがって、それらは、以下に記載されるような「非天然」アミノ酸を有し得る。
【0053】
例えば、以下のアミノ酸変異を導入することによって、本発明の抗体又は断片の半減期を増加させることが可能である。
・Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ（「ＹＴＥ」）：この変異は、ＩｇＧ又はＦｃドメインのＩｇＧリサイクリング受容体ＦｃＲｎへの結合を増加させ、半減期の延長をもたらす１８。
・Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ（「ＬＳ」）：この変異は、ＩｇＧ又はＦｃドメインのＩｇＧリサイクリング受容体ＦｃＲｎへの結合を増加させ、半減期の延長をもたらす１９。
・Ｌ３０９Ｄ／Ｑ３１１Ｈ／Ｎ４３４Ｓ（「ＤＨＳ」）：この変異は、ＩｇＧ又はＦｃドメインのＩｇＧリサイクリング受容体ＦｃＲｎへの結合を増加させ、半減期の延長をも
たらす２０。
・Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ：この変異は、ＩｇＧ又はＦｃドメインのＩｇＧリサイクリング受容体ＦｃＲｎへの結合を増加させ、半減期の延長をもたらす２１。
・Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ（「ＹＴＥ」）：この変異は、ＩｇＧ又はＦｃドメインのＩｇＧリサイクリング受容体ＦｃＲｎへの結合を増加させ、半減期の延長をもたらす１８。
・Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ（「ＬＳ」）：この変異は、ＩｇＧ又はＦｃドメインのＩｇＧリサイクリング受容体ＦｃＲｎへの結合を増加させ、半減期の延長をもたらす１９。
・Ｌ３０９Ｄ／Ｑ３１１Ｈ／Ｎ４３４Ｓ（「ＤＨＳ」）：この変異は、ＩｇＧ又はＦｃドメインのＩｇＧリサイクリング受容体ＦｃＲｎへの結合を増加させ、半減期の延長をも
たらす２０。
・Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ：この変異は、ＩｇＧ又はＦｃドメインのＩｇＧリサイクリング受容体ＦｃＲｎへの結合を増加させ、半減期の延長をもたらす２１。
【0054】
更に、本発明の抗体及び断片は、ヒトにおける処置及び／又は治療において使用されることが意図されるので、それらの潜在的な免疫原性及び有害な効果は、任意の手段によって最小化されるべきである。
【0055】
したがって、当技術分野で既に提案されているように、それらのエフェクター機能を改変するために、これらの抗体のＦｃ領域を改変することが推奨される。特に、受容体ＦｃγＲ（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＢ、Ｆｃγｎ）の活性化だけでなく、オプソニン作用、細胞病原体の溶解、及び炎症反応において重要な役割を果たす補体のＣ１ｑ成分の活性化も回避するために、抗体のＦｃ領域を変異させる方がよい。
【0056】
本明細書で使用される場合、「Ｆｃ領域」という用語は、ＩｇＧ重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。境界はわずかに変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６からカルボキシ末端まで伸長すると定義される。ＩｇＧのＦｃ領域は、２つの定常ドメイン、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、通常、アミノ酸２３１～アミノ酸３４１に及ぶ。ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＣＨ３ドメインは、通常、アミノ酸３４２～４４７に及ぶ。ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインは、通常、アミノ酸２３１～３４０に及ぶ。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密接に対合していないという点で独特である。むしろ、２つのＮ結合分岐炭水化物鎖が、無傷の天然ＩｇＧの２つのＣＨ２ドメイン間に挿入されている。
【0057】
本明細書中で使用される場合、「エフェクター機能を欠く」Ｆｃ領域は、Ｆｃ受容体に結合せず、及び／又は補体のＣ１ｑ成分に結合せず、このような結合に特徴的な生物学的応答を誘発しない。
【0058】
その通常のグリコシル化部位でグリコシル化されていない（又は「アグリコシル化」されている）Ｆｃ領域を生成することによって、抗体のエフェクター機能を損なうことが可能である。
【0059】
「グリコシル化部位」という用語は、糖残基の付着のための位置として哺乳動物細胞によって認識されるアミノ酸残基を指す。オリゴ糖などの炭水化物が結合するアミノ酸残基は、通常、アスパラギン（Ｎ－結合）、セリン（Ｏ－結合）、及びトレオニン（Ｏ－結合）残基である。特異的結合部位は、通常、「グリコシル化部位配列」と呼ばれる特徴的なアミノ酸配列を有する。Ｎ結合型グリコシル化のためのグリコシル化部位配列は、－Ａｓｎ－Ｘ－Ｓｅｒ－又は－Ａｓｎ－Ｘ－Ｔｈｒ－（式中、Ｘはプロリン以外の従来のアミノ酸のうちのいずれかであり得る）である。ヒトＩｇＧのＦｃ領域は、ＣＨ２ドメインの各々に１つずつ、２つのグリコシル化部位を有する。ヒトＩｇＧのＣＨ２ドメイン中のグリコシル化部位で生じるグリコシル化は、２９７位のアスパラギン（Ａｓｎ ２９７）でのＮ結合型グリコシル化である。
【0060】
特に、本発明の抗体のＦｃ領域を、以下の変異のうちのいずれかで変異させることによって改変することが可能である。
・Ｎ２９７Ａ：この変異は、Ｎ－グリコシル化を受けることができるアスパラギンを置換する。このＮ－グリコシル化は、ＩｇＧのＦｃ領域とヒト低親和性ＦｃγＲ（ＣＤ３２Ａ、ＣＤ３２Ｂ、ＣＤ３２Ｃ、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ１６Ｂ）との間の相互作用に必要である。それは、ＩｇＧの高親和性ＦｃγＲ、ＦｃγＲＩ／ＣＤ６４との相互作用に影響を及ぼ
さない。
・Ｎ２９７Ｄ：ＦｃγＲ結合に対して同じ結果を有するＮ２９７Ａと同様の変異。
・Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）：この二重変異は、ＩｇＧのＦｃ領域とヒト低親和性ＦｃγＲ（ＣＤ３２Ａ、ＣＤ３２Ｂ、ＣＤ３２Ｃ、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ１６Ｂ）との間の相互作用を消失させる。それは、ＩｇＧの高親和性ＦｃγＲ、ＦｃγＲＩ／ＣＤ６４との相互作用に影響を及ぼさない。
・Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ（ＬＡＬＡＰＧ）：この三重変異は、低親和性ＦｃγＲ（ＣＤ３２Ａ、ＣＤ３２Ｂ、ＣＤ３２Ｃ、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ１６Ｂ）であろうと高親和性ＦｃγＲ（ＣＤ６４）であろうと、ＩｇＧのＦｃ領域と全てのヒトＦｃγＲとの間の相互作用を消失させる。
・Ｎ２９７Ａ：この変異は、Ｎ－グリコシル化を受けることができるアスパラギンを置換する。このＮ－グリコシル化は、ＩｇＧのＦｃ領域とヒト低親和性ＦｃγＲ（ＣＤ３２Ａ、ＣＤ３２Ｂ、ＣＤ３２Ｃ、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ１６Ｂ）との間の相互作用に必要である。それは、ＩｇＧの高親和性ＦｃγＲ、ＦｃγＲＩ／ＣＤ６４との相互作用に影響を及ぼ
さない。
・Ｎ２９７Ｄ：ＦｃγＲ結合に対して同じ結果を有するＮ２９７Ａと同様の変異。
・Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）：この二重変異は、ＩｇＧのＦｃ領域とヒト低親和性ＦｃγＲ（ＣＤ３２Ａ、ＣＤ３２Ｂ、ＣＤ３２Ｃ、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ１６Ｂ）との間の相互作用を消失させる。それは、ＩｇＧの高親和性ＦｃγＲ、ＦｃγＲＩ／ＣＤ６４との相互作用に影響を及ぼさない。
・Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｐ３２９Ｇ（ＬＡＬＡＰＧ）：この三重変異は、低親和性ＦｃγＲ（ＣＤ３２Ａ、ＣＤ３２Ｂ、ＣＤ３２Ｃ、ＣＤ１６Ａ、ＣＤ１６Ｂ）であろうと高親和性ＦｃγＲ（ＣＤ６４）であろうと、ＩｇＧのＦｃ領域と全てのヒトＦｃγＲとの間の相互作用を消失させる。
【0061】
この変異のうちのいずれかを使用して、ヒトに安全に投与することができる効率的な治療用抗体を生成することができる。
【0062】
更に、治療用抗体の有効性を高め、有害な副作用を低減するための当技術分野で公知の全ての変異が本明細書に包含される。
【0063】
抗体のヒト化
別の態様では、本発明は、遺伝子工学又は化学合成によって得ることができるキメラ抗体若しくはヒト化抗体、又は抗原結合性断片に関する。具体的には、本発明のＰＯＳＴＮ抗体はキメラ抗体である。
別の態様では、本発明は、遺伝子工学又は化学合成によって得ることができるキメラ抗体若しくはヒト化抗体、又は抗原結合性断片に関する。具体的には、本発明のＰＯＳＴＮ抗体はキメラ抗体である。
【0064】
本明細書で使用される「キメラ抗体」という用語は、所与の種の抗体に由来する天然可変領域（軽鎖及び重鎖）を、当該所与の種とは異種の種の抗体の軽鎖及び重鎖の定常領域と組み合わせて含有する抗体を指す。したがって、本明細書で使用される「キメラ抗体」は、可変領域が異なる種の、又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する定常領域に連結されるように、定常領域又はその一部が改変、置換又は交換されている抗体である。「キメラ抗体」はまた、定常領域が異なる種の、又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する可変領域に連結されるように、可変領域又はその一部が改変、置換又は交換されている抗体も指す。このようなキメラ抗体又はその断片は、組換え工学によって調製され得る。例えば、キメラ抗体は、プロモーターと、本発明の非ヒトモノクローナル抗体、特にマウスの可変領域をコードする配列と、ヒト抗体定常領域をコードする配列とを含む組換えＤＮＡをクローニングすることによって産生することができる。１つのこのような組換え遺伝子によってコードされる本発明によるキメラ抗体は、例えば、マウス－ヒトキメラであり得、この抗体の特異性は、マウスＤＮＡに由来する可変領域によって決定され、そのアイソタイプは、ヒトＤＮＡに由来する定常領域によって決定される。
【0065】
別の態様において、本発明は、ヒト化抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0066】
本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体を指す。一実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントのＣＤＲ由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び／又は能力を有するマウス、ラット、ウサギ、又は非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基によって置換されるヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク（「ＦＲ」）残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体において見出されない残基を含み得る。これらの改変は、結合親和性などの抗体性能を更に洗練するために行うことができる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、超可変ループの全て又は実質的に全ては非ヒト免疫グロブリン配列のものに対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全てはヒト免疫グロブリン配列のもので
あるが、ＦＲ領域は、結合親和性、異性化、免疫原性などの抗体性能を向上させる１つ以上の個々のＦＲ残基置換を含んでいてもよい。ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は、典型的には、重（Ｈ）鎖で６個以下、軽（Ｌ）鎖で３個以下である。ヒト化抗体は、任意選択で、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含む。
あるが、ＦＲ領域は、結合親和性、異性化、免疫原性などの抗体性能を向上させる１つ以上の個々のＦＲ残基置換を含んでいてもよい。ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は、典型的には、重（Ｈ）鎖で６個以下、軽（Ｌ）鎖で３個以下である。ヒト化抗体は、任意選択で、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部も含む。
【0067】
ヒト化の目標は、抗体の完全な抗原結合親和性及び特異性を維持しながら、ヒトへの導入のためのマウス抗体などの異種抗体の免疫原性を低下させることである。ヒト化抗体、又は他の哺乳動物による非拒絶に適合させた抗体は、リサーフェシング（resurfacing）
及びＣＤＲ移植などのいくつかの技術を用いて作製することができる。本明細書中で使用される場合、表面再構成技術は、分子モデリング、統計分析及び変異誘発の組み合わせを使用して、抗体可変領域の非ＣＤＲ表面を、標的宿主の公知の抗体の表面に類似するように改変する。
及びＣＤＲ移植などのいくつかの技術を用いて作製することができる。本明細書中で使用される場合、表面再構成技術は、分子モデリング、統計分析及び変異誘発の組み合わせを使用して、抗体可変領域の非ＣＤＲ表面を、標的宿主の公知の抗体の表面に類似するように改変する。
【0068】
抗体の再表面化のための戦略及び方法、並びに異なる宿主内で抗体の免疫原性を低下させるための他の方法は、米国特許第５，６３９，６４１号に開示されている。簡単に述べると、好ましい方法では、（１）抗体重鎖及び軽鎖可変領域のプールの位置アラインメントを生成して、重鎖及び軽鎖可変領域フレームワーク表面露出位置のセットを得、ここで、全ての可変領域についてのアラインメント位置は少なくとも約９８％同一である。（２）重鎖及び軽鎖可変領域フレームワーク表面露出アミノ酸残基のセットが、齧歯類抗体（又はその断片）について定義される。（３）齧歯類表面露出アミノ酸残基のセットと最も密接に同一である重鎖及び軽鎖可変領域フレームワーク表面露出アミノ酸残基のセットが同定される；（４）ステップ（２）で定義された重鎖及び軽鎖可変領域フレームワーク表面露出アミノ酸残基のセットが、齧歯類抗体の相補性決定領域のいずれかの残基の原子から５オングストローム（Å）以内にあるアミノ酸残基を除き、ステップ（３）で同定された重鎖及び軽鎖可変領域フレームワーク表面露出アミノ酸残基のセットで置換され、（５）結合特異性を有するヒト化齧歯類抗体が産生される。抗体は、ＣＤＲ移植（欧州特許第０２３９４００号、国際公開第９１／０９９６７号、米国特許第５，５３０，１０１号及び米国特許第５，５８５，０８９号）、ベニアリング又はリサーフェシング（欧州特許第０５９２１０６号、欧州特許第０５１９５９６号）、及び鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）を含む他の様々な技術を使用してヒト化することができる。ヒト抗体は、ファージディスプレイ法（米国特許第４，４４４，８８７号、米国特許第４，７１６，１１１号、米国特許第５，５４５，８０６号、及び米国特許第５，８１４，３１８号）を含む、当技術分野で公知の様々な方法によって作製することができる。
【0069】
免疫原性を減少させるための上記の方法の代替として、又はそれに加えてのいずれかで使用され得る別の技術は、本発明の抗体の「脱免疫化」である。脱免疫化技術は、抗体及び他のタンパク質生物学的治療剤からのＴヘルパー（Ｔｈ）細胞エピトープの同定及び除去を含む。Ｔｈ細胞エピトープは、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合する能力を有するタンパク質内の短いペプチド配列を含む。ペプチド－ＭＨＣクラスＩＩ複合体は、Ｔ細胞によって認識され得、そしてＴｈ細胞の活性化及び分化を誘発し得、これは、Ｂ細胞との相互作用を介して免疫原性を開始及び維持するために必要であり、したがって、投与された生物学的治療剤に特異的に結合する抗体の分泌を生じる。抗体脱免疫化のために、Ｔｈ細胞エピトープは、例えば、ヒトＭＨＣクラスＩＩ分子へのペプチドの結合を予測するためのコンピュータベースの方法によって、抗体配列内で同定される。Ｔ細胞による認識を避けるために、このようにして同定されたＴｈ細胞エピトープは、アミノ酸置換によってタンパク質配列から除去される。これは、例えば、治療用タンパク質中のＴｈ細胞エピトープをコードする核酸配列を改変するための部位特異的変異誘発などの標準的な分子生物学技術の使用によって達成することができる。このようにして、抗体又は抗原結合性断片は、ＨＡＭＡ（ヒト抗マウス抗原性）及び／又は抗イディオタイプ応答が低減又は回避されるよ
うに改変され得る。したがって、特定の実施形態では、本発明の抗体は、それらの配列中に存在する任意のＴｈ細胞エピトープを除去するように改変され得る。このような結合分子は、本明細書中で脱免疫化抗体と呼ばれる。
うに改変され得る。したがって、特定の実施形態では、本発明の抗体は、それらの配列中に存在する任意のＴｈ細胞エピトープを除去するように改変され得る。このような結合分子は、本明細書中で脱免疫化抗体と呼ばれる。
【0070】
本発明のヒト化抗体は、好ましくは、上記のマウス抗体ＭＰＣ５Ｂ４から生じる。より好ましくは、それらはＦｉｅｌｄら１４に開示されたマウス抗体ＭＰＣ５Ｂ４から生じる。
【0071】
したがって、特定の実施形態では、本発明は、配列番号１に特異的に結合し、ヒト及びマウスＰＯＳＴＮ（任意のアイソフォーム）と上皮細胞上のそれらのインテグリンリガンドとの間の相互作用、並びにその後のシグナル伝達を阻害するヒト化抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
【0072】
別の特定の実施形態では、本発明の阻害抗体又は抗原結合性断片は、完全ヒトである。本明細書で使用される「完全ヒト」という用語は、そのアミノ酸配列がヒトに由来する（すなわち、ヒトを起源とするか、又はヒトにおいて見出され得る）抗体又は抗原結合性断片に関する。
【0073】
本発明の抗体断片
本発明はまた、上記で定義したように、本発明の阻害抗体の機能的断片を使用することによって実施することができる。「機能的断片」は、無傷な抗体の一部を含み、一般に無傷な抗体の抗原結合領域又は可変領域を含み、ここではヒト及びマウスＰＯＳＴＮタンパク質中の配列番号１を認識する。それらは、好ましくは、上記で定義された本発明の抗体と同じ阻害活性を有する。
本発明はまた、上記で定義したように、本発明の阻害抗体の機能的断片を使用することによって実施することができる。「機能的断片」は、無傷な抗体の一部を含み、一般に無傷な抗体の抗原結合領域又は可変領域を含み、ここではヒト及びマウスＰＯＳＴＮタンパク質中の配列番号１を認識する。それらは、好ましくは、上記で定義された本発明の抗体と同じ阻害活性を有する。
【0074】
特に、本発明による機能的断片は、ヒト及びマウスＰＯＳＴＮの、上皮細胞によって発現されたαｖβ３インテグリンへの結合を阻害することができる。この阻害活性は、ヒトＰＯＳＴＮの、Ｆｉｅｌｄら１４に開示されるような、αｖβ３及び／又はαｖβ５で被覆されたＥＬＩＳＡプレートへの結合に対する抗体断片の影響を評価することにより、決定することができる。機能的断片は、ヒト及びマウスＰＯＳＴＮ結合を阻害するそのＩＣ５０が、Ｆｉｅｌｄら１４の図２ａの条件において３０μｇ／ｍＬ未満である場合に、本発明による阻害活性を示す。当該断片の阻害活性はまた、組換えヒト又はマウスＰＯＳＴＮ又はそのＦａｓｌ－１ドメインに応答して、ＥＣＦＣなどの内皮細胞の遊走に対するその影響を研究することによって実証することができる。Ｆｉｅｌｄら１４に開示されているように（図５）、本発明の機能的断片は、ＰＯＳＴＮによって誘導されるＥＣＦＣの遊走を陰性対照のレベルまで減少させることができる。
【0075】
「抗体断片」は、無傷な抗体の一部、好ましくは無傷な抗体の抗原結合領域及び／又は可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片、ダイアボディ、直鎖状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号参照）、一本鎖抗体分子及び抗体断片から形成される多重特異性抗体がある。
【0076】
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合性断片と、容易に結晶化する能力を反映する名称である残りの「Ｆｃ」断片とを生成した。Ｆａｂ断片は、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（variable region domain of the H chain、ＶＨ）及び１
つの重鎖の第１の定常ドメイン（first constant domain of one heavy chain、ＣＨ１）と共に全Ｌ鎖からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価であり、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。
つの重鎖の第１の定常ドメイン（first constant domain of one heavy chain、ＣＨ１）と共に全Ｌ鎖からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価であり、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。
【0077】
抗体のペプシン処理は、異なる抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合されたＦ
ａｂ断片にほぼ対応し、依然として抗原を架橋することができる単一の大きなＦ（ａｂ’）２断片を生じる。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に数個の追加の残基を有することによってＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’についての本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学的結合もまた公知である。
ａｂ断片にほぼ対応し、依然として抗原を架橋することができる単一の大きなＦ（ａｂ’）２断片を生じる。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に数個の追加の残基を有することによってＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’についての本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学的結合もまた公知である。
【0078】
本明細書で使用される「Ｆｖ」という用語は、完全な抗原認識及び結合部位を含有する最小抗体断片を指す。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインとが強固に非共有結合した二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に特異的な３つの超可変領域のみを含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体よりも親和性は低いが、抗原を認識して結合する能力を有する。
【0079】
「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」とも略される「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に接続されたＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは更に、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーを含む。
【0080】
本発明の抗体又は断片は、多重特異性、特に二重特異性であってもよい。したがって、それは、二重特異性ＩｇＧ、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ２、（ｓｃＦｖ）４－ＩｇＧ、（Ｆａｂ’）２、（ｓｃＦｖ）２、（ｄｓＦｖ）２、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ融合タンパク質、（Ｆａｂ－ｓｃＦｖ）２、（ｓｃＦｖ）２－Ｆａｂ、（ＳＣＦＶ－ＣＨ２－ＣＨ３－ＳＣＦＶ）２、バイボディ（bibody）、トリボディ（tribody）、二重特異性ダイアボディ、ジスルフィ
ド安定化（ｄｓ）ダイアボディ、「ノブイントゥホール（knob-into whole）」ダイアボ
ディ、一本鎖ダイアボディ（single-chain diabody、ｓｃＤｂ）、タンデムダイアボディ（tandem diabody、ＴａｎｄＡｂ）、フレキシボディ（flexibody）、ＤｉＢｉミニ抗体
（miniantibody）、［（ｓｃＦｖ）２－Ｆｃ］２、（ｓｃＤｂ－ＣＨ３）２、（ｓｃＤｂ－Ｆｃ）２、Ｄｉ－ダイアボディ、Ｔａｎｄｅｍａｂなどからなる群において選択され得る。
ド安定化（ｄｓ）ダイアボディ、「ノブイントゥホール（knob-into whole）」ダイアボ
ディ、一本鎖ダイアボディ（single-chain diabody、ｓｃＤｂ）、タンデムダイアボディ（tandem diabody、ＴａｎｄＡｂ）、フレキシボディ（flexibody）、ＤｉＢｉミニ抗体
（miniantibody）、［（ｓｃＦｖ）２－Ｆｃ］２、（ｓｃＤｂ－ＣＨ３）２、（ｓｃＤｂ－Ｆｃ）２、Ｄｉ－ダイアボディ、Ｔａｎｄｅｍａｂなどからなる群において選択され得る。
【0081】
本明細書中で使用される場合、用語「ダイアボディ」は、Ｖドメインの鎖内ではなく鎖間対合が達成され、それによって二価断片、すなわち、２つの抗原結合部位を有する断片を生じるように、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に短いリンカー（約５～１０残基）を有するｓＦｖ断片（前の段落を参照のこと）を構築することによって調製される小さな抗体断片をいう。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨ及びＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する２つの「クロスオーバー」ｓＦｖ断片のヘテロ二量体である。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第９３／１１１６１号により詳細に記載されている。
【0082】
より詳細には、本発明は、抗体断片Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ及びダイアボディの中から選択される機能的断片、又は化学改変によって半減期が延長された任意の断片を提供する。
【0083】
上記で引用した化学改変は、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコールの付加（ＰＥＧ化）（ＰＥＧ化断片は、Ｆｖ－ＰＥＧ、ｓｃＦｖ－ＰＥＧ、Ｆａｂ－ＰＥＧ、Ｆ（ａｂ’）２－ＰＥＧ及びＦａｂ’－ＰＥＧと呼ばれる）などであってもよく、又はリポソーム、マイクロスフェア若しくはポリ（Ｄ，Ｌ－乳酸－ｃｏ－グリコール酸）（
ＰＬＧＡ）への組み込みによるものであってもよく、当該断片は、特に、それが生じる抗体の活性を一般的な様式で、部分的であっても発揮することが顕著に可能である、本発明のＣＤＲを少なくとも６つ有する。
ＰＬＧＡ）への組み込みによるものであってもよく、当該断片は、特に、それが生じる抗体の活性を一般的な様式で、部分的であっても発揮することが顕著に可能である、本発明のＣＤＲを少なくとも６つ有する。
【0084】
好ましくは、当該抗原結合性断片は、それらが由来する抗体の可変重鎖又は軽鎖の部分配列を含むか又は包含し、当該部分配列は、それが生じる抗体と同じ結合特異性及び十分な親和性、好ましくはそれが生じる抗体の親和性の少なくとも１／１００、より好ましくは少なくとも１／１０に等しい親和性を保持するのに十分である。
【0085】
好ましくは、この抗原結合性断片は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、又はダイアボディのタイプのものである。これらは、一般的に、それらが由来する抗体と同じ結合特異性を有する。
【0086】
本発明によれば、本発明の抗原結合性断片は、ペプシン若しくはパパインを含む酵素消化などの方法によって、及び／又は化学的還元によるジスルフィド架橋の切断によって、上記の抗体から得ることができる。抗原結合性断片はまた、当業者に公知の組換え遺伝学技術によって、又は例えば、自動ペプチド合成機（例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓなどによって販売されているもの）によるペプチド合成によって得ることができる。
【0087】
治療方法
上記のように、本発明の抗体又は断片は、ヒト及びマウスＰＯＳＴＮタンパク質中の配列番号１のエピトープに高い親和性で特異的に結合する。したがって、それらは、ＥＣＦＣにおいて実証されているように、インテグリン媒介性細胞内シグナル伝達及び炎症細胞遊走などのＰＯＳＴＮ誘導性機能を阻害することができる。ＰＯＳＴＮは、Ｔｈ２サイトカインＩＬ－４及びＩＬ－１３に応答して気管支上皮細胞によって発現され、気管支喘息における上皮下線維症の構成要素を表す２２。
上記のように、本発明の抗体又は断片は、ヒト及びマウスＰＯＳＴＮタンパク質中の配列番号１のエピトープに高い親和性で特異的に結合する。したがって、それらは、ＥＣＦＣにおいて実証されているように、インテグリン媒介性細胞内シグナル伝達及び炎症細胞遊走などのＰＯＳＴＮ誘導性機能を阻害することができる。ＰＯＳＴＮは、Ｔｈ２サイトカインＩＬ－４及びＩＬ－１３に応答して気管支上皮細胞によって発現され、気管支喘息における上皮下線維症の構成要素を表す２２。
【0088】
結果として、本発明の抗体及び断片は、炎症性及び線維性呼吸器障害を予防又は治療するのに特に有用である。
【0089】
本明細書で使用される場合、「炎症性及び線維性呼吸器障害」という用語は、肺組織の望ましくない炎症から生じる状態又は疾患を指す。そのような状態には、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、及び喘息などのいくつかの慢性疾患が含まれる。他の障害は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）又は感染から生じるものを含む。
【0090】
より一般的には、本発明の方法に従って予防、処置又は管理され得る炎症性障害としては、喘息、慢性閉塞性肺（pulmonary）疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤ
Ｓ）、肺（pulmonary）線維症、例えば、特発性肺（pulmonary）線維症（ＩＰＦ）、気腫及び肺（lung）炎症又はウイルス、真菌若しくは細菌感染から生じる呼吸器疾患が挙げられるが、これらに限定されない。
Ｓ）、肺（pulmonary）線維症、例えば、特発性肺（pulmonary）線維症（ＩＰＦ）、気腫及び肺（lung）炎症又はウイルス、真菌若しくは細菌感染から生じる呼吸器疾患が挙げられるが、これらに限定されない。
【0091】
特定の実施形態では、本発明の抗体又はその断片は、例えばベータコロナウイルスによるウイルス感染によって誘発される呼吸器疾患を治療するために使用することができる。ヒトにおけるベータコロナウイルス感染は、通常、感染患者の症状の観察に基づいて医療専門家によって診断される。診断を確認するために、追加の生物学的試験、すなわち血液及び／又は痰及び／又は気管支肺胞洗浄液試験が必要とされる場合がある。ベータコロナウイルスによる感染は、例えば、呼吸器検体の分子生物学的検出及び／若しくはウイルス滴定によって、又は当該ベータコロナウイルスに特異的な抗体について血液をアッセイすることによって確定することができる。従来の診断方法は、当業者に周知であるＰＣＲな
どの分子生物学の技術を含む。
どの分子生物学の技術を含む。
【0092】
この特定の実施形態では、本発明の抗体又はその断片は、症候性ＣＯＶＩＤ１９疾患を治療するために使用することができる。本発明の文脈において、「ＣＯＶＩＤ－１９疾患」という用語は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２）による感染に関連する疾患を意味する。本発明の文脈において、「症候性ＣＯＶＩＤ－１９疾患」は、ＣＯＶＩＤ－１９疾患の少なくとも１つの症状を示す患者によって特徴付けられる。ＣＯＶＩＤ－１９疾患の最も一般的な症状は、発熱、筋肉痛、頭痛、倦怠感、味覚及び嗅覚の喪失、並びに空咳、呼吸困難及び酸素不足などの呼吸器症状である。症候性疾患は、疾患又は感染のキャリアであるが症状を経験しない患者を特徴とする無症候性疾患とは対照的である。
【0093】
別の特定の実施形態では、本発明の抗体又はその断片は、軽度のＣＯＶＩＤ１９疾患が「重度の形態」、すなわち、重篤な症状（例えば、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ））によって特徴付けられるＣＯＶＩＤ１９疾患に悪化することを予防するために使用され得、この重篤な症状は、任意のユニット、特に、重篤な感染の場合には、集中治療室（intensive care unit、ＩＣＵ）における患者の入院を必要とする。本発明の文脈において、略
語「ＩＣＵ」は、集中治療室、集中治療薬を提供する病院又は医療施設の専門部門を指す。
語「ＩＣＵ」は、集中治療室、集中治療薬を提供する病院又は医療施設の専門部門を指す。
【0094】
この特定の実施形態では、本発明の抗体又は断片は、７５歳を超える、又は６５～７４歳のヒト患者に優先的に投与される。実際、これらの人々は、通常、当該ウイルスに感染した場合、若い人々よりも高い死亡率を有する。
【0095】
本明細書で使用される場合、用語「治療する」、「治療すること」、「治療」などは、障害（例えば、炎症性障害）の症状及び／又はそれに関連する症状を減少又は改善することを指す。障害又は状態を治療することは、排除されないが、障害、状態又はそれに関連する症状が完全に除去されることを必要としないことが理解される。
【0096】
本明細書中で使用される場合、「それを必要とする」対象において疾患を「治療すること」又は「それを必要とする」対象を「治療すること」は、疾患の少なくとも１つの症状が減少又は予防されるように、当該障害に罹患している対象を薬物治療（例えば、医薬品の投与）に供することを意味する。本明細書中で使用される場合、治療は、予防投与（すなわち、病理学的事象の開始前の投与）、及びＡＲＤＳ又は慢性疾患（例えば、喘息又はＢＰＣＯ）における発作又は増悪の予防を含む。
【0097】
一実施形態では、「対象」は、不適切な肺又は呼吸器炎症を特徴とする障害に罹患している哺乳動物を指す。「対照対象」は、肺／気道が炎症も線維化もない哺乳動物を指す。当該哺乳動物には、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ヤギ、ブタ、ブタ、ヒツジ及びサルが含まれる。ヒト対象は、本明細書では「患者」と称される。
【0098】
別の実施形態では、本発明はまた、上述の疾患のうちのいずれかの予防又は治療のための薬物及び／又は医薬品及び／又は医薬組成物の調製のための本発明の抗体又は断片の使用に関する。
【0099】
当該薬物／医薬品／医薬組成物は、本発明の抗体又はその機能的抗原結合性断片を含む。好ましくは、本発明の抗体／断片に加えて、種々の希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤、及び当該分野で周知の他の物質を含む。より一般的には、本発明の抗体／断片に加えて、薬学的に許容される担体を含有する。
【0100】
本明細書中で使用される場合、「薬学的に許容される担体」としては、生理学的に適合性である、任意の及び全ての溶媒、緩衝液、塩溶液、分散媒、被覆、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などが挙げられる。担体のタイプは、意図される投与経路に基づいて選択することができる。様々な実施形態では、担体は、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、局所、経皮又は経口投与に適している。薬学的に許容される担体としては、滅菌水溶液又は分散液、及び滅菌注射用溶液又は分散液の即時調製のための滅菌粉末が挙げられる。薬学的に活性な物質のための媒体及び薬剤の使用は、当該分野で周知である。静脈内注入のための代表的な薬学的組成物は、２５０ｍｌの滅菌リンゲル溶液及び１００ｍｇの組み合わせを含有するように作製され得る。非経口的に投与可能な化合物を調製するための実際の方法は、当業者に公知又は明らかであり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１７ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ．（１９８５）、及びその第１８版及び１９版により詳細に記載され、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。
【0101】
本発明の組成物中の抗体／断片は、好ましくは有効量で製剤化される。「有効量」は、呼吸器疾患の予防又は治療などの所望の結果を達成するために必要な用量及び期間で有効である量を指す。「治療有効量」は、特定の疾患状態の治療経過に影響を及ぼすのに十分な量を意味する。治療的有効量はまた、治療的に有益な効果が薬剤の任意の毒性又は有害な効果を上回る量である。
【0102】
別の態様では、本発明は、医薬品としての本発明の抗体又はその抗原結合性断片の使用に関する。また、本発明は、医薬品としての使用のための本発明の医薬組成物に関する。
【0103】
患者に投与される本発明の組成物中の抗体の投与量は、典型的には、患者の体重の約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、例えば、患者の体重の約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１、約１．５、約２、約２．５、約３、約３．５、約４、約４．５、約５、約５．５、約６、約６．５、約７、約７．５、約８、約８．５、約９、約９．５、及び約１０ｍｇ／ｋｇである。好ましくは、患者に投与される抗体の投与量は、患者の体重の約１ｍｇ／ｋｇ～約９ｍｇ／ｋｇである。他の実施形態では、本発明の組成物中の抗体の投与量は、患者の体重の約０．１、約０．３、約１．０又は約３．０ｍｇ／ｋｇである。
【0104】
本発明の抗体は、例えば、病気の性質、患者の状態及び抗体の半減期のような因子に依存して、治療する医師の判断に従って、例えば、毎日、毎週、隔週、又は任意の他の適切な間隔で投与され得る。好ましい例では、対象は、約０．１～約１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の本発明の抗体又は断片で、１～３週間に１回、約１～約１０週間、好ましくは約２～約８週間、より好ましくは約３～約７週間、更により好ましくは約４、約５、又は約６週間治療される。他の実施形態では、本発明の医薬組成物は、１日１回、１日２回、又は１日３回投与される。他の実施形態では、医薬組成物は、週１回、週２回、２～３週間毎に１回、月１回、６週間毎に１回、２ヶ月毎に１回、年２回、又は年１回投与される。治療のために使用される抗体の有効投与量は、特定の治療の過程にわたって増加又は減少し得ることもまた理解される。
【0105】
最も好ましい実施形態では、本発明の組成物は、約３０分間にわたって静脈内投与される。他の実施形態では、本発明の組成物は、少なくとも約１時間、少なくとも約３０分、又は少なくとも約１５分にわたって静脈内投与される。
【0106】
より一般的には、治療用途のために、本発明の抗体は、ボーラスとして、又はある期間にわたる連続注入によって、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液嚢内、くも膜下腔内、経口、局所、又は吸入経路によって対象に投与され得る。
【0107】
最も好ましい実施形態では、本発明の組成物は、スプレーを用いて吸入によって投与される。
【実施例】
【0108】
本明細書において本発明を特定の実施形態を参照して説明してきたが、これらの実施形態は、本発明の原理及び用途の単なる例示であることを理解されたい。したがって、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、例示的な実施形態に対して多数の修正を行うことができ、他の構成を考案することができることを理解されたい。
【0109】
Ｉ．材料及び方法
マウス
雄の８週齢Ｃ５ＢＬ／６マウスをＪａｎｖｉｅｒ Ｌａｂｓ（Ｓａｉｎｔ Ｂｅｒｔｈｅｖｉｎ，Ｆｒａｎｃｅ）から購入した。マウスを１２時間の明暗サイクル下で維持し、それらに標準実験食を与えた。全ての研究は、フランス国立科学研究センター（Centre national de la recherche scientifique、ＣＮＲＳ）のＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認された。
マウス
雄の８週齢Ｃ５ＢＬ／６マウスをＪａｎｖｉｅｒ Ｌａｂｓ（Ｓａｉｎｔ Ｂｅｒｔｈｅｖｉｎ，Ｆｒａｎｃｅ）から購入した。マウスを１２時間の明暗サイクル下で維持し、それらに標準実験食を与えた。全ての研究は、フランス国立科学研究センター（Centre national de la recherche scientifique、ＣＮＲＳ）のＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認された。
【0110】
マウスにおけるパパイン誘導性肺炎症モデル
パパイン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の投与によって喘息を誘導した後、マウスを２～３％イソフルオラン及び２％Ｏ２によって麻酔した。パパインを滅菌ＮａＣｌ溶液に溶解した。動物を、鼻腔内又は気管内投与された２５μｇパパインを含有する４０μｌ溶液で３回感作した。マウスを喘息誘導後４日目に屠殺した。対照動物はいずれも未処置であった。
パパイン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の投与によって喘息を誘導した後、マウスを２～３％イソフルオラン及び２％Ｏ２によって麻酔した。パパインを滅菌ＮａＣｌ溶液に溶解した。動物を、鼻腔内又は気管内投与された２５μｇパパインを含有する４０μｌ溶液で３回感作した。マウスを喘息誘導後４日目に屠殺した。対照動物はいずれも未処置であった。
【0111】
パパイン投与の４日後にマウスをＣＯ２吸入により安楽死させ、ＢＡＬＦを収集した。ＩＳＯＴＯＮ ＩＩ（酸を含まない平衡電解質溶液Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｋｒｅｆｅｌｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）での炉灌流（hearth perfusion）後、肺を収集し、分析のためにサンプリングした。
【0112】
マウスにおけるブレオマイシン誘導性肺線維症モデル
ブレオマイシン（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の投与によって肺線維症を誘導した後、マウスを２～３％イソフルオラン及び２％Ｏ２によって麻酔した。ブレオマイシンを滅菌ＮａＣｌ溶液に溶解した。動物を、鼻腔内投与される３ｍｇ／ｋｇを含有する４０μｌの溶液で３回感作した。気腫誘導後１４日目にマウスを屠殺した。対照動物はいずれも未処置であった。ＢＡＬＦ及び肺を収集し、分析のためにサンプリングした。
ブレオマイシン（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の投与によって肺線維症を誘導した後、マウスを２～３％イソフルオラン及び２％Ｏ２によって麻酔した。ブレオマイシンを滅菌ＮａＣｌ溶液に溶解した。動物を、鼻腔内投与される３ｍｇ／ｋｇを含有する４０μｌの溶液で３回感作した。気腫誘導後１４日目にマウスを屠殺した。対照動物はいずれも未処置であった。ＢＡＬＦ及び肺を収集し、分析のためにサンプリングした。
【0113】
マウスにおけるＬＰＳ誘導性肺感染モデル
マウスを２～３％イソフルオラン及び２％Ｏ２で麻酔した後、ＬＰＳの投与によって喘息を誘導した。ＬＰＳを滅菌ＮａＣｌ溶液に溶解した。動物を、鼻腔内又は気管内投与された１μｇのＬＰＳを含有する４０ｍｌの溶液で３回感作した。ＬＰＳ投与の２４時間後にマウスを屠殺した。対照動物はいずれも未処置であった。マウスをＣＯ２吸入により安楽死させ、ＢＡＬＦを収集した。ＩＳＯＴＯＮ ＩＩでの炉灌流後、肺を収集し、分析のためにサンプリングした。
マウスを２～３％イソフルオラン及び２％Ｏ２で麻酔した後、ＬＰＳの投与によって喘息を誘導した。ＬＰＳを滅菌ＮａＣｌ溶液に溶解した。動物を、鼻腔内又は気管内投与された１μｇのＬＰＳを含有する４０ｍｌの溶液で３回感作した。ＬＰＳ投与の２４時間後にマウスを屠殺した。対照動物はいずれも未処置であった。マウスをＣＯ２吸入により安楽死させ、ＢＡＬＦを収集した。ＩＳＯＴＯＮ ＩＩでの炉灌流後、肺を収集し、分析のためにサンプリングした。
【0114】
抗体投与
抗ＰＯＳＴＮ（ＭＰＣ５Ｂ４）又はアイソタイプ対照（ＩｇＧ１）抗体を、示された時点で与えた（図２Ａ、図３Ａ、図４Ａ、図５Ａ～図５Ｂ及び図６Ａ）。異なる用量のモノ
クローナル抗体（１２．５、５、２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．又は１０、３、１ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｔ．）を用量応答研究に使用した。
抗ＰＯＳＴＮ（ＭＰＣ５Ｂ４）又はアイソタイプ対照（ＩｇＧ１）抗体を、示された時点で与えた（図２Ａ、図３Ａ、図４Ａ、図５Ａ～図５Ｂ及び図６Ａ）。異なる用量のモノ
クローナル抗体（１２．５、５、２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．又は１０、３、１ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｔ．）を用量応答研究に使用した。
【0115】
試料サイズ及び統計分析
Ｐｒｉｓｍ ５（ＧｒａｐｈＰａｄ ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて統計分析を行った。結果を、ノンパラメトリック検定（マンホイットニー検定）、確率（Ｐ）に関して表されるＴ検定を用いて分析した。ｐ＜０．０５の場合、差は有意であるとみなした。全てのデータを平均±ＳＥＭとして表した。
Ｐｒｉｓｍ ５（ＧｒａｐｈＰａｄ ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて統計分析を行った。結果を、ノンパラメトリック検定（マンホイットニー検定）、確率（Ｐ）に関して表されるＴ検定を用いて分析した。ｐ＜０．０５の場合、差は有意であるとみなした。全てのデータを平均±ＳＥＭとして表した。
【0116】
ＩＩ．結果
パパインはＰＯＳＴＮ産生を増加させる。
ペリオスチン（ＰＯＳＴＮ）産生を誘導するパパインの能力を評価するために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを２５μｇのパパインで気管内処置したか、又は処置しなかった。マウスに１用量のパパインを投与した（図１Ａ）。パパイン投与の４８時間後にＰＯＳＴＮレベルを測定した。パパイン処置マウスは、対照マウスと比較して、気管支肺胞洗浄液（bronchoalveolar lavage fluid、ＢＡＬＦ）中のＰＯＳＴＮのレベルの有意な増加を示す（図１Ｂ）。
パパインはＰＯＳＴＮ産生を増加させる。
ペリオスチン（ＰＯＳＴＮ）産生を誘導するパパインの能力を評価するために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを２５μｇのパパインで気管内処置したか、又は処置しなかった。マウスに１用量のパパインを投与した（図１Ａ）。パパイン投与の４８時間後にＰＯＳＴＮレベルを測定した。パパイン処置マウスは、対照マウスと比較して、気管支肺胞洗浄液（bronchoalveolar lavage fluid、ＢＡＬＦ）中のＰＯＳＴＮのレベルの有意な増加を示す（図１Ｂ）。
【0117】
抗ＰＯＳＴＮ抗体は、喘息における肺炎症を予防する。
モノクローナルマウス抗ＰＯＳＴＮ抗体（ＭＰＣ５Ｂ４、ＩｇＧ１アイソタイプ）は、インテグリンαｖβ３とのＰＯＳＴＮ結合部位相互作用（ａａｌ４０－ｌ５０）を遮断する１４。ＭＰＣ５Ｂ４による処置は、肺炎症におけるＰＯＳＴＮシグナル伝達調節の影響を評価するために含まれた。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに抗ＰＯＳＴＮ又はアイソタイプ対照抗体を注射した（１２．５、５、２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）。注射の１時間後、マウスをパパイン（２５μｇ ｉ．ｎ．）で処置するか又は処置せずに、アレルギー性喘息を誘導した。マウスに３用量のパパインを３日間連続で投与した（図２Ａ）。細胞数を、最初の投与の４日後に気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）及び肺においてモニターした。用量応答分析は、喘息アレルギーにおける肺炎を制御するための抗ＰＯＳＴＮ抗体療法の有効性を示す（図２Ｂ）。対照群としてのパパイン処置マウスは、総細胞数、好酸球及びリンパ球数の増加を示した（図２Ｂ）。更に、パパイン処置マウスは、抗ＰＯＳＴＮ療法が、肺炎症からレシピエントマウスを保護し、ＢＡＬＦ中の好酸球及びリンパ球数を有意に減少させたことを示す（図２Ｂ）。しかしながら、対照アイソタイプ抗体療法は、レシピエントマウスを炎症から保護することができなかった。
モノクローナルマウス抗ＰＯＳＴＮ抗体（ＭＰＣ５Ｂ４、ＩｇＧ１アイソタイプ）は、インテグリンαｖβ３とのＰＯＳＴＮ結合部位相互作用（ａａｌ４０－ｌ５０）を遮断する１４。ＭＰＣ５Ｂ４による処置は、肺炎症におけるＰＯＳＴＮシグナル伝達調節の影響を評価するために含まれた。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに抗ＰＯＳＴＮ又はアイソタイプ対照抗体を注射した（１２．５、５、２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）。注射の１時間後、マウスをパパイン（２５μｇ ｉ．ｎ．）で処置するか又は処置せずに、アレルギー性喘息を誘導した。マウスに３用量のパパインを３日間連続で投与した（図２Ａ）。細胞数を、最初の投与の４日後に気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）及び肺においてモニターした。用量応答分析は、喘息アレルギーにおける肺炎を制御するための抗ＰＯＳＴＮ抗体療法の有効性を示す（図２Ｂ）。対照群としてのパパイン処置マウスは、総細胞数、好酸球及びリンパ球数の増加を示した（図２Ｂ）。更に、パパイン処置マウスは、抗ＰＯＳＴＮ療法が、肺炎症からレシピエントマウスを保護し、ＢＡＬＦ中の好酸球及びリンパ球数を有意に減少させたことを示す（図２Ｂ）。しかしながら、対照アイソタイプ抗体療法は、レシピエントマウスを炎症から保護することができなかった。
【0118】
用量応答研究の後、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに抗ＰＯＳＴＮ又はアイソタイプ対照抗体（１２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）を注射した。注射の１時間後、マウスを２５μｇのパパインで処置するか又は処置せずにアレルギー性喘息を誘導した。マウスに３用量のパパインを３日間連続で投与した（図３Ａ）。細胞数を、最初の投与の４日後にＢＡＬＦ及び肺においてモニターした。対照群としてのパパイン処置マウスは、総細胞数（図３Ｂ）、好酸球、リンパ球及び単球数（図３Ｃ～図３Ｄ）の増加を示した。更に、パパイン処置マウスは、抗ＰＯＳＴＮ療法が肺炎症からレシピエントマウスを保護し、好酸球及びリンパ球数を有意に減少させることを示した（図２Ｂ～図２Ｃ）。しかしながら、対照アイソタイプ抗体療法は、レシピエントマウスを炎症から保護することができなかった。胸腺及び活性化調節ケモカイン（ＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７）は、マウスにおいてＴｈ２優位の炎症反応を誘導する。パパイン処置マウスは、肺におけるＣＣＬ１７レベルの増加を示したが、抗ＰＯＳＴＮ抗体処置は、ＣＣＬ１７産生を減少させた（図３Ｄ）。一方、パパイン処置マウスは、４日後に組織学的スコア気腫によって測定される肺における組織損傷を有意に増加させた。抗ＰＯＳＴＮ抗体処置は、肺組織損傷を低減した（図３Ｅ）。
【0119】
抗ＰＯＳＴＮ抗体の局所投与は、肺炎症を予防する。
肺炎症におけるＰＯＳＴＮの影響を評価するためにも、気管内経路による抗ＰＯＳＴＮ抗体ＭＰＣ５Ｂ４による局所治療を含めた。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、抗ＰＯＳＴＮ抗体ＭＰＣ５Ｂ４（１０、１ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｔ．）を注射した。注射の１時間後、マウスを２５μｇパパインで処置したか又は処置せずに、アレルギー性喘息を誘導した。マウスに３用量のパパインを投与した（図４Ａ）。細胞数を、最初の投与の４日後にＢＡＬＦ中でモニターした。対照群としてのパパイン処置マウスは、総細胞数、好酸球、リンパ球、好中球及びマクロファージ数の増加を示した（図４Ｂ、Ｃ）。更に、パパイン処置マウスは、抗ＰＯＳＴＮ療法が肺炎症からレシピエントマウスを保護し、好酸球、リンパ球、及び好中球数を有意に減少させることを示した（図４Ｂ、Ｃ）。
肺炎症におけるＰＯＳＴＮの影響を評価するためにも、気管内経路による抗ＰＯＳＴＮ抗体ＭＰＣ５Ｂ４による局所治療を含めた。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、抗ＰＯＳＴＮ抗体ＭＰＣ５Ｂ４（１０、１ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｔ．）を注射した。注射の１時間後、マウスを２５μｇパパインで処置したか又は処置せずに、アレルギー性喘息を誘導した。マウスに３用量のパパインを投与した（図４Ａ）。細胞数を、最初の投与の４日後にＢＡＬＦ中でモニターした。対照群としてのパパイン処置マウスは、総細胞数、好酸球、リンパ球、好中球及びマクロファージ数の増加を示した（図４Ｂ、Ｃ）。更に、パパイン処置マウスは、抗ＰＯＳＴＮ療法が肺炎症からレシピエントマウスを保護し、好酸球、リンパ球、及び好中球数を有意に減少させることを示した（図４Ｂ、Ｃ）。
【0120】
パパイン処置マウスは、肺におけるＰＯＳＴＮ及びミエロペルオキシダーゼ（myeloperoxidase、ＭＰＯ）レベルの増加を示したが、抗ＰＯＳＴＮ抗体処置は、ＰＯＳＴＮ産生
を減少させた（図４Ｄ）。
を減少させた（図４Ｄ）。
【0121】
抗ＰＯＳＴＮ抗体は、慢性重症パパイン誘導性喘息を遮断する。
慢性重症喘息を処置する抗ＰＯＳＴＮ抗体の能力を評価するために、マウスを生理食塩水ビヒクルで、又は１日目、２日目、更に１４日目及び２１日目にパパイン（２５μｇ ｉ．ｎ．）の４回投与で処置した（図５Ａ）。抗ＰＯＳＴＮ抗体ＭＰＣ５Ｂ４（１２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）を１４、１８及び２１日目に投与すると、この重度喘息モデルにおいて肺炎症及びコラーゲン沈着が減少した。総細胞、好酸球、リンパ球、マクロファージ及び好中球の浸潤は、アイソタイプ対照処置マウスと比較して、抗ＰＯＳＴＮ ＭＰＣ５Ｂ４抗体後の肺組織損傷、可溶性コラーゲンタンパク質及びコラーゲンメッセージ転写（図５Ｃ）と同様に、２２日目にＢＡＬＦにおいて減少した（図５Ｂ）。
慢性重症喘息を処置する抗ＰＯＳＴＮ抗体の能力を評価するために、マウスを生理食塩水ビヒクルで、又は１日目、２日目、更に１４日目及び２１日目にパパイン（２５μｇ ｉ．ｎ．）の４回投与で処置した（図５Ａ）。抗ＰＯＳＴＮ抗体ＭＰＣ５Ｂ４（１２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）を１４、１８及び２１日目に投与すると、この重度喘息モデルにおいて肺炎症及びコラーゲン沈着が減少した。総細胞、好酸球、リンパ球、マクロファージ及び好中球の浸潤は、アイソタイプ対照処置マウスと比較して、抗ＰＯＳＴＮ ＭＰＣ５Ｂ４抗体後の肺組織損傷、可溶性コラーゲンタンパク質及びコラーゲンメッセージ転写（図５Ｃ）と同様に、２２日目にＢＡＬＦにおいて減少した（図５Ｂ）。
【0122】
抗ＰＯＳＴＮ抗体は、肺線維症を低減する。
肺線維症におけるＰＯＳＴＮシグナル伝達調節の影響を評価するために、モノクローナル抗ＰＯＳＴＮ抗体（ＭＰＣ５Ｂ４）による処置も含めた。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、抗ＰＯＳＴＮ又はアイソタイプ対照抗体（１２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）を注射した。最初の注射の１時間後に、マウスに予防的処置として３用量のモノクローナル抗体を投与し（図６Ａ）、マウスをブレオマイシン（３ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｎ．）で処置するか又は処置せずに、肺線維症を誘導した。細胞数を、最初の投与の１４日後にＢＡＬＦ及び肺においてモニターした。対照群としてのブレオマイシン処置マウスは、総細胞、好中球及びリンパ球数の増加を示した（図６Ｂ及び図６Ｃ）。更に、ブレオマイシン処置マウスは、予防的抗ＰＯＳＴＮ（Ｐｒｏ）が肺線維症からレシピエントマウスを保護し、好中球及びリンパ球数を有意に減少させたことを示した（図６Ｃ）。しかしながら、対照アイソタイプ抗体は、レシピエントマウスを線維症から保護することができなかった（図６Ｃ）。
肺線維症におけるＰＯＳＴＮシグナル伝達調節の影響を評価するために、モノクローナル抗ＰＯＳＴＮ抗体（ＭＰＣ５Ｂ４）による処置も含めた。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、抗ＰＯＳＴＮ又はアイソタイプ対照抗体（１２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）を注射した。最初の注射の１時間後に、マウスに予防的処置として３用量のモノクローナル抗体を投与し（図６Ａ）、マウスをブレオマイシン（３ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｎ．）で処置するか又は処置せずに、肺線維症を誘導した。細胞数を、最初の投与の１４日後にＢＡＬＦ及び肺においてモニターした。対照群としてのブレオマイシン処置マウスは、総細胞、好中球及びリンパ球数の増加を示した（図６Ｂ及び図６Ｃ）。更に、ブレオマイシン処置マウスは、予防的抗ＰＯＳＴＮ（Ｐｒｏ）が肺線維症からレシピエントマウスを保護し、好中球及びリンパ球数を有意に減少させたことを示した（図６Ｃ）。しかしながら、対照アイソタイプ抗体は、レシピエントマウスを線維症から保護することができなかった（図６Ｃ）。
【0123】
一方、モノクローナル抗体を２回投与して、その治療効果を示した（図６Ｂ）。ブレオマイシン処置マウスは、治療用モノクローナル抗ＰＯＳＴＮ（ＭＰＣ５Ｂ４）処置（Ｔｈｅｒ）が、１４日後にＢＡＬＦ中の炎症細胞数によって測定される肺炎症を有意に低減したことを示した（図６Ｃ）。肺の病理組織学的分析は、ブレオマイシン処置マウスにおけるＭＰＣ５Ｂ４処置が、アイソタイプ対照抗体処置マウスと比較して、炎症及び組織リモデリングを有意に改善することを示した（図示せず）。１４日目の統計分析を、一元配置分散分析検定多重比較を用いて決定した。＊対照未処置マウスと比較してｐ＜０．０５。＃ブレオマイシン処置マウスと比較してｐ＜０．０５。
【0124】
ＬＰＳはＰＯＳＴＮ産生を増加させる。
ペリオスチン産生を誘導するＬＰＳの能力を評価するために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを１０μｇのＬＰＳ又は生理食塩水ビヒクルで気管内処置し、ＰＯＳＴＮレベルを４８時間後に測定した。ＬＰＳ処置マウスは、対照マウスと比較して、ＢＡＬＦ中のＰＯＳＴＮの
レベルの有意な増加を示した（図７Ｂ）。
ペリオスチン産生を誘導するＬＰＳの能力を評価するために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを１０μｇのＬＰＳ又は生理食塩水ビヒクルで気管内処置し、ＰＯＳＴＮレベルを４８時間後に測定した。ＬＰＳ処置マウスは、対照マウスと比較して、ＢＡＬＦ中のＰＯＳＴＮの
レベルの有意な増加を示した（図７Ｂ）。
【0125】
抗ＰＯＳＴＮ抗体は、増悪における肺炎症を予防する。
肺疾患の増悪におけるＰＯＳＴＮシグナル伝達調節の影響を評価するために、ＭＰＣ５Ｂ４による処置を含めた。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、抗ＰＯＳＴＮ ＭＰＣ５Ｂ４又は抗ＧＭＣＳＦ抗体（１２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）を注射した。注射の１時間後、マウスを１μｇのＬＰＳで処置したか又は処置せずに炎症を誘導した。マウスに１用量のＬＰＳを投与した（図８Ａ）。細胞数を２４時間でＢＡＬＦ中でモニターした。対照群としてのＬＰＳ処置マウスは、総細胞数、好中球及びリンパ球数の増加を示した（図８Ｂ）。更に、抗ＰＯＳＴＮ療法は、肺に対してレシピントマウスを保護した。炎症は、ＬＰＳ誘導性炎症を遮断するための参照化合物として使用される抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体と同様のレベルまで、ＢＡＬＦ中の好中球及びリンパ球数を有意に減少させる（図８Ｂ）。
肺疾患の増悪におけるＰＯＳＴＮシグナル伝達調節の影響を評価するために、ＭＰＣ５Ｂ４による処置を含めた。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、抗ＰＯＳＴＮ ＭＰＣ５Ｂ４又は抗ＧＭＣＳＦ抗体（１２．５ｍｇ／ｋｇ；ｉ．ｐ．）を注射した。注射の１時間後、マウスを１μｇのＬＰＳで処置したか又は処置せずに炎症を誘導した。マウスに１用量のＬＰＳを投与した（図８Ａ）。細胞数を２４時間でＢＡＬＦ中でモニターした。対照群としてのＬＰＳ処置マウスは、総細胞数、好中球及びリンパ球数の増加を示した（図８Ｂ）。更に、抗ＰＯＳＴＮ療法は、肺に対してレシピントマウスを保護した。炎症は、ＬＰＳ誘導性炎症を遮断するための参照化合物として使用される抗ＧＭ－ＣＳＦ抗体と同様のレベルまで、ＢＡＬＦ中の好中球及びリンパ球数を有意に減少させる（図８Ｂ）。
【0126】
参考文献
１． Ａｇｈａｓａｆａｒｉ Ｐ，Ｇｅｏｒｇｅ Ｕ，Ｐｉｄａｐａｒｔｉ Ｒ．Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｎ ａｉｒｗａｙ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｉｎｆｌａｍｍ Ｒｅｓ ２０１９；６８：５９－７４。
２． Ｄｕｒｈａｍ ＡＬ，Ｃａｒａｍｏｒｉ Ｇ，Ｃｈｕｎｇ ＫＦ，Ａｄｃｏｃｋ
ＩＭ．Ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｉｎ ａｓｔｈｍａ ａｎｄ ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｌｕｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｔｒａｎｓｌ Ｒｅｓ ２０１６；１６７：１９２－２０３。
３． Ｄｉａｍｏｎｄ Ｍ，Ｐｅｎｉｓｔｏｎ Ｆｅｌｉｃｉａｎｏ ＨＬ，Ｓａｎｇｈａｖｉ Ｄ，Ｍａｈａｐａｔｒａ Ｓ．Ａｃｕｔｅ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｄｉｓｔｒｅｓｓ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｉｎ：ＳｔａｔＰｅａｒｌｓ．Ｔｒｅａｓｕｒｅ Ｉｓｌａｎｄ（ＦＬ）；２０２０。
４． Ｈａｎｓｂｒｏ ＰＭ，Ｋａｉｋｏ ＧＥ，Ｆｏｓｔｅｒ ＰＳ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ／ａｎｔｉ－ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ － ｎｏｖｅｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ａｓｔｈｍａ？ Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２０１１；１６３：８１－９５。
５． Ｎａｎｒｉ Ｙ，Ｎｕｎｏｍｕｒａ Ｓ，Ｔｅｒａｓａｋｉ Ｙ，Ｙｏｓｈｉｈａｒａ Ｔ，Ｈｉｒａｎｏ Ｙ，Ｙｏｋｏｓａｋｉ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｃｒｏｓｓ－Ｔａｌｋ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ－ｂｅｔａ ａｎｄ Ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ Ｃａｎ Ｂｅ Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｆｏｒ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２０２０；６２：２０４－１６。
６． Ｂｏｚｙｋ ＰＤ，Ｂｅｎｔｌｅｙ ＪＫ，Ｐｏｐｏｖａ ＡＰ，Ａｎｙａｎｗｕ ＡＣ，Ｌｉｎｎ ＭＤ，Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈ ＡＭ，ｅｔ ａｌ．Ｎｅｏｎａｔａｌ
ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｍｉｃｅ ａｒｅ ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｈｙｐｅｒｏｘｉａ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｌｖｅｏｌａｒ ｓｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ２０１２；７；ｅ３１３３６。
７． Ｉｚｕｈａｒａ Ｋ，Ｃｏｎｗａｙ ＳＪ，Ｍｏｏｒｅ ＢＢ，Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ Ｈ，Ｈｏｌｗｅｇ ＣＴ，Ｍａｔｔｈｅｗｓ ＪＧ，ｅｔ ａｌ．Ｒｏｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｉｎ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ ２０１６；１９３：９４９－５６。
８． Ｋｕｄｏ Ａ．Ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｉｎ ｆｉｂｒｉｌｌｏｇｅｎｅｓｉｓ ｆｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ａｃｔｉｏｎｓ ｉｎｓｉｄｅ ａｎｄ ｏｕｔｓｉｄｅ ｔｈｅ ｃｅｌｌ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ２０１１；６８：３２０１－７。
９． Ｌｉｕ ＡＹ，Ｚｈｅｎｇ Ｈ，Ｏｕｙａｎｇ Ｇ．Ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ，ａ ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｍａｔｒｉｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ
ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ．Ｍａｔｒｉｘ Ｂｉｏｌ ２０１４；３７：１５０－６。
１０． Ｈｏｒｉｕｃｈｉ Ｋ，Ａｍｉｚｕｋａ Ｎ，Ｔａｋｅｓｈｉｔａ Ｓ，Ｔａｋａｍａｔｓｕ Ｈ，Ｋａｔｓｕｕｒａ Ｍ，Ｏｚａｗａ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ，ｗｉｔｈ ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｔｏ ｐｅｒｉｏｓｔｅｕｍ ａｎｄ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｅｔａ．Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｒｅｓ １９９９；１４：１２３９－４９。
１１． Ｍｏｒｒａ Ｌ，Ｒｅｃｈｓｔｅｉｎｅｒ Ｍ，Ｃａｓａｇｒａｎｄｅ Ｓ，ｖｏｎ Ｔｅｉｃｈｍａｎ Ａ，Ｓｃｈｒａｍｌ Ｐ，Ｍｏｃｈ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｉｓｏｆｏｒｍ ｐａｔｔｅｒｎ ｉｎ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ．Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ ２０１２；７６：１８３－９０。
１２． Ｍｏｒｒａ Ｌ，Ｍｏｃｈ Ｈ．Ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ａｎｄ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ：ａ ｒｅｖｉｅｗ ａｎｄ ａｎ ｕｐｄａｔｅ．Ｖｉｒｃｈｏｗｓ
Ａｒｃｈ ２０１１；４５９：４６５－７５。
１３． Ｒｕａｎ Ｋ，Ｂａｏ Ｓ，Ｏｕｙａｎｇ Ｇ．Ｔｈｅ ｍｕｌｔｉｆａｃｅｔｅｄ ｒｏｌｅ ｏｆ ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｉｎ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ２００９；６６：２２１９－３０。
１４． Ｆｉｅｌｄ Ｓ，Ｕｙｔｔｅｎｈｏｖｅ Ｃ，Ｓｔｒｏｏｂａｎｔ Ｖ，Ｃｈｅｏｕ Ｐ，Ｄｏｎｃｋｅｒｓ Ｄ，Ｃｏｕｔｅｌｉｅｒ ＪＰ，ｅｔ ａｌ．Ｎｏｖｅｌ ｈｉｇｈｌｙ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉ－ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｕｎｃｏｖｅｒ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ
ｔｈｅ ｆａｓｃｉｃｌｉｎ １－１ ｄｏｍａｉｎ ａｎｄ ｈｉｇｈｌｉｇｈｔ ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｉｎ ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２０１６；１３８：１９５９－７０。
１５． Ｏｒｅｃｃｈｉａ Ｐ，Ｃｏｎｔｅ Ｒ，Ｂａｌｚａ Ｅ，Ｃａｓｔｅｌｌａｎｉ Ｐ，Ｂｏｒｓｉ Ｌ，Ｚａｒｄｉ Ｌ，ｅｔ ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｃｅｌｌ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｏｆ ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｕｍｏｕｒ ｇｒｏｗｔｈ．Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２０１１；４７：２２２１－９。
１６． Ｕｙｔｔｅｎｈｏｖｅ Ｃ，Ｍａｒｉｌｌｉｅｒ ＲＧ，Ｔａｃｃｈｉｎｉ－Ｃｏｔｔｉｅｒ Ｆ，Ｃｈａｒｍｏｙ Ｍ，Ｃａｓｐｉ ＲＲ，Ｄａｍｓｋｅｒ ＪＭ，ｅｔ ａｌ．Ａｍｉｎｅ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ＯＶＡ ｍｕｌｔｉｍｅｒｓ ｆｏｒ ａｕｔｏ－ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ：ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ ｆｏｒ ＧＣＰ－２ ｉｎ Ｌ．ｍａｊｏｒ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ ２０１１；８９：１００１－７。
１７． Ｇｏｍｅｚ ＫＡ，Ｃｏｕｔｅｌｉｅｒ ＪＰ，Ｒｅｔｅｇｕｉ ＬＡ．Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｍｉｃｅ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｌａｃｔａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ－ｅｌｅｖａｔｉｎｇ ｖｉｒｕｓ．Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９７；４６：１６８－７４。
１８． Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ＷＦ，Ｗｏｏｄｓ ＲＭ，Ｗａｒｄ ＥＳ，Ｐａｌａｓｚｙｎｓｋｉ ＳＲ，Ｐａｔｅｌ ＮＫ，Ｂｒｅｗａｈ ＹＡ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｔｈｅ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｏｆ ａ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ１ ｆｏｒ
ｔｈｅ ｎｅｏｎａｔａｌ Ｆｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００２；１６９：５１７１－８０。
１９． Ｚａｌｅｖｓｋｙ Ｊ，Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎ ＡＫ，Ｈｏｒｔｏｎ ＨＭ，Ｋａｒｋｉ Ｓ，Ｌｅｕｎｇ ＩＷ，Ｓｐｒｏｕｌｅ ＴＪ，ｅｔ ａｌ．Ｅｎｈａｎｃｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｈａｌｆ－ｌｉｆｅ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２０１０；２８：１５７－９。
２０． Ｌｅｅ ＣＨ，Ｋａｎｇ ＴＨ，Ｇｏｄｏｎ Ｏ，Ｗａｔａｎａｂｅ Ｍ，Ｄｅｌｉｄａｋｉｓ Ｇ，Ｇｉｌｌｉｓ ＣＭ，ｅｔ ａｌ．Ａｎ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ
ｈｕｍａｎ Ｆｃ ｄｏｍａｉｎ ｔｈａｔ ｂｅｈａｖｅｓ ｌｉｋｅ ａ ｐＨ－ｔｏｇｇｌｅ ｓｗｉｔｃｈ ｆｏｒ ｕｌｔｒａ－ｌｏｎｇ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ
ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１９；１０：５０３１。
２１． Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬ，Ｎａｍｅｎｕｋ ＡＫ，Ｈｏｎｇ Ｋ，Ｍｅｎｇ ＹＧ，Ｒａｅ Ｊ，Ｂｒｉｇｇｓ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｈｉｇｈ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｏｎ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ１
ｆｏｒ Ｆｃ ｇａｍｍａ ＲＩ，Ｆｃ ｇａｍｍａ ＲＩＩ，Ｆｃ ｇａｍｍａ ＲＩＩＩ，ａｎｄ ＦｃＲｎ ａｎｄ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ＩｇＧ１ ｖａｒｉａｎｔｓ
ｗｉｔｈ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ Ｆｃ ｇａｍｍａ Ｒ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２００１；２７６：６５９１－６０４。
２２． Ｔａｋａｙａｍａ Ｇ，Ａｒｉｍａ Ｋ，Ｋａｎａｊｉ Ｔ，Ｔｏｄａ Ｓ，Ｔａｎａｋａ Ｈ，Ｓｈｏｊｉ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ：ａ ｎｏｖｅｌ
ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｏｆ ｓｕｂｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｏｆ ｂｒｏｎｃｈｉａｌ ａｓｔｈｍａ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｏｆ ＩＬ－４ ａｎｄ ＩＬ－１３ ｓｉｇｎａｌｓ．Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００６；１１８：９８－１０４。
２３． Ｎａｉｋ ＰＫ．ｅｔ ａｌ，Ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｐｒｅｄｉｃｔｓ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．３０３：Ｌ１０４６－１０５６，２０１２
２４． Ｂｅｎｔｌｅｙ Ｊ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．Ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｍａｘｉｍａｌ ａｉｒｗａｙｓ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｈｙｐｅｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ
Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４
１． Ａｇｈａｓａｆａｒｉ Ｐ，Ｇｅｏｒｇｅ Ｕ，Ｐｉｄａｐａｒｔｉ Ｒ．Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｎ ａｉｒｗａｙ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｉｎｆｌａｍｍ Ｒｅｓ ２０１９；６８：５９－７４。
２． Ｄｕｒｈａｍ ＡＬ，Ｃａｒａｍｏｒｉ Ｇ，Ｃｈｕｎｇ ＫＦ，Ａｄｃｏｃｋ
ＩＭ．Ｔａｒｇｅｔｅｄ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｉｎ ａｓｔｈｍａ ａｎｄ ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｌｕｎｇ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｔｒａｎｓｌ Ｒｅｓ ２０１６；１６７：１９２－２０３。
３． Ｄｉａｍｏｎｄ Ｍ，Ｐｅｎｉｓｔｏｎ Ｆｅｌｉｃｉａｎｏ ＨＬ，Ｓａｎｇｈａｖｉ Ｄ，Ｍａｈａｐａｔｒａ Ｓ．Ａｃｕｔｅ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｄｉｓｔｒｅｓｓ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｉｎ：ＳｔａｔＰｅａｒｌｓ．Ｔｒｅａｓｕｒｅ Ｉｓｌａｎｄ（ＦＬ）；２０２０。
４． Ｈａｎｓｂｒｏ ＰＭ，Ｋａｉｋｏ ＧＥ，Ｆｏｓｔｅｒ ＰＳ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ／ａｎｔｉ－ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ － ｎｏｖｅｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ａｓｔｈｍａ？ Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２０１１；１６３：８１－９５。
５． Ｎａｎｒｉ Ｙ，Ｎｕｎｏｍｕｒａ Ｓ，Ｔｅｒａｓａｋｉ Ｙ，Ｙｏｓｈｉｈａｒａ Ｔ，Ｈｉｒａｎｏ Ｙ，Ｙｏｋｏｓａｋｉ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｃｒｏｓｓ－Ｔａｌｋ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ－ｂｅｔａ ａｎｄ Ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ Ｃａｎ Ｂｅ Ｔａｒｇｅｔｅｄ ｆｏｒ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２０２０；６２：２０４－１６。
６． Ｂｏｚｙｋ ＰＤ，Ｂｅｎｔｌｅｙ ＪＫ，Ｐｏｐｏｖａ ＡＰ，Ａｎｙａｎｗｕ ＡＣ，Ｌｉｎｎ ＭＤ，Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈ ＡＭ，ｅｔ ａｌ．Ｎｅｏｎａｔａｌ
ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｍｉｃｅ ａｒｅ ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｈｙｐｅｒｏｘｉａ－ｉｎｄｕｃｅｄ ａｌｖｅｏｌａｒ ｓｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ２０１２；７；ｅ３１３３６。
７． Ｉｚｕｈａｒａ Ｋ，Ｃｏｎｗａｙ ＳＪ，Ｍｏｏｒｅ ＢＢ，Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ Ｈ，Ｈｏｌｗｅｇ ＣＴ，Ｍａｔｔｈｅｗｓ ＪＧ，ｅｔ ａｌ．Ｒｏｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｉｎ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ ２０１６；１９３：９４９－５６。
８． Ｋｕｄｏ Ａ．Ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｉｎ ｆｉｂｒｉｌｌｏｇｅｎｅｓｉｓ ｆｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ａｃｔｉｏｎｓ ｉｎｓｉｄｅ ａｎｄ ｏｕｔｓｉｄｅ ｔｈｅ ｃｅｌｌ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ２０１１；６８：３２０１－７。
９． Ｌｉｕ ＡＹ，Ｚｈｅｎｇ Ｈ，Ｏｕｙａｎｇ Ｇ．Ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ，ａ ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｍａｔｒｉｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ
ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ．Ｍａｔｒｉｘ Ｂｉｏｌ ２０１４；３７：１５０－６。
１０． Ｈｏｒｉｕｃｈｉ Ｋ，Ａｍｉｚｕｋａ Ｎ，Ｔａｋｅｓｈｉｔａ Ｓ，Ｔａｋａｍａｔｓｕ Ｈ，Ｋａｔｓｕｕｒａ Ｍ，Ｏｚａｗａ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ，ｗｉｔｈ ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｔｏ ｐｅｒｉｏｓｔｅｕｍ ａｎｄ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｅｔａ．Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｒｅｓ １９９９；１４：１２３９－４９。
１１． Ｍｏｒｒａ Ｌ，Ｒｅｃｈｓｔｅｉｎｅｒ Ｍ，Ｃａｓａｇｒａｎｄｅ Ｓ，ｖｏｎ Ｔｅｉｃｈｍａｎ Ａ，Ｓｃｈｒａｍｌ Ｐ，Ｍｏｃｈ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｉｓｏｆｏｒｍ ｐａｔｔｅｒｎ ｉｎ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ．Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ ２０１２；７６：１８３－９０。
１２． Ｍｏｒｒａ Ｌ，Ｍｏｃｈ Ｈ．Ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ａｎｄ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ：ａ ｒｅｖｉｅｗ ａｎｄ ａｎ ｕｐｄａｔｅ．Ｖｉｒｃｈｏｗｓ
Ａｒｃｈ ２０１１；４５９：４６５－７５。
１３． Ｒｕａｎ Ｋ，Ｂａｏ Ｓ，Ｏｕｙａｎｇ Ｇ．Ｔｈｅ ｍｕｌｔｉｆａｃｅｔｅｄ ｒｏｌｅ ｏｆ ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｉｎ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ２００９；６６：２２１９－３０。
１４． Ｆｉｅｌｄ Ｓ，Ｕｙｔｔｅｎｈｏｖｅ Ｃ，Ｓｔｒｏｏｂａｎｔ Ｖ，Ｃｈｅｏｕ Ｐ，Ｄｏｎｃｋｅｒｓ Ｄ，Ｃｏｕｔｅｌｉｅｒ ＪＰ，ｅｔ ａｌ．Ｎｏｖｅｌ ｈｉｇｈｌｙ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉ－ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｕｎｃｏｖｅｒ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｏｆ
ｔｈｅ ｆａｓｃｉｃｌｉｎ １－１ ｄｏｍａｉｎ ａｎｄ ｈｉｇｈｌｉｇｈｔ ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｉｎ ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２０１６；１３８：１９５９－７０。
１５． Ｏｒｅｃｃｈｉａ Ｐ，Ｃｏｎｔｅ Ｒ，Ｂａｌｚａ Ｅ，Ｃａｓｔｅｌｌａｎｉ Ｐ，Ｂｏｒｓｉ Ｌ，Ｚａｒｄｉ Ｌ，ｅｔ ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｃｅｌｌ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｏｆ ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｕｍｏｕｒ ｇｒｏｗｔｈ．Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２０１１；４７：２２２１－９。
１６． Ｕｙｔｔｅｎｈｏｖｅ Ｃ，Ｍａｒｉｌｌｉｅｒ ＲＧ，Ｔａｃｃｈｉｎｉ－Ｃｏｔｔｉｅｒ Ｆ，Ｃｈａｒｍｏｙ Ｍ，Ｃａｓｐｉ ＲＲ，Ｄａｍｓｋｅｒ ＪＭ，ｅｔ ａｌ．Ａｍｉｎｅ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ＯＶＡ ｍｕｌｔｉｍｅｒｓ ｆｏｒ ａｕｔｏ－ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ：ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ ｆｏｒ ＧＣＰ－２ ｉｎ Ｌ．ｍａｊｏｒ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ ２０１１；８９：１００１－７。
１７． Ｇｏｍｅｚ ＫＡ，Ｃｏｕｔｅｌｉｅｒ ＪＰ，Ｒｅｔｅｇｕｉ ＬＡ．Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｍｉｃｅ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｌａｃｔａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ－ｅｌｅｖａｔｉｎｇ ｖｉｒｕｓ．Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９７；４６：１６８－７４。
１８． Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ＷＦ，Ｗｏｏｄｓ ＲＭ，Ｗａｒｄ ＥＳ，Ｐａｌａｓｚｙｎｓｋｉ ＳＲ，Ｐａｔｅｌ ＮＫ，Ｂｒｅｗａｈ ＹＡ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｔｈｅ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｏｆ ａ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ１ ｆｏｒ
ｔｈｅ ｎｅｏｎａｔａｌ Ｆｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００２；１６９：５１７１－８０。
１９． Ｚａｌｅｖｓｋｙ Ｊ，Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎ ＡＫ，Ｈｏｒｔｏｎ ＨＭ，Ｋａｒｋｉ Ｓ，Ｌｅｕｎｇ ＩＷ，Ｓｐｒｏｕｌｅ ＴＪ，ｅｔ ａｌ．Ｅｎｈａｎｃｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｈａｌｆ－ｌｉｆｅ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２０１０；２８：１５７－９。
２０． Ｌｅｅ ＣＨ，Ｋａｎｇ ＴＨ，Ｇｏｄｏｎ Ｏ，Ｗａｔａｎａｂｅ Ｍ，Ｄｅｌｉｄａｋｉｓ Ｇ，Ｇｉｌｌｉｓ ＣＭ，ｅｔ ａｌ．Ａｎ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ
ｈｕｍａｎ Ｆｃ ｄｏｍａｉｎ ｔｈａｔ ｂｅｈａｖｅｓ ｌｉｋｅ ａ ｐＨ－ｔｏｇｇｌｅ ｓｗｉｔｃｈ ｆｏｒ ｕｌｔｒａ－ｌｏｎｇ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ
ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１９；１０：５０３１。
２１． Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬ，Ｎａｍｅｎｕｋ ＡＫ，Ｈｏｎｇ Ｋ，Ｍｅｎｇ ＹＧ，Ｒａｅ Ｊ，Ｂｒｉｇｇｓ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｈｉｇｈ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｏｎ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ１
ｆｏｒ Ｆｃ ｇａｍｍａ ＲＩ，Ｆｃ ｇａｍｍａ ＲＩＩ，Ｆｃ ｇａｍｍａ ＲＩＩＩ，ａｎｄ ＦｃＲｎ ａｎｄ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ＩｇＧ１ ｖａｒｉａｎｔｓ
ｗｉｔｈ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ Ｆｃ ｇａｍｍａ Ｒ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２００１；２７６：６５９１－６０４。
２２． Ｔａｋａｙａｍａ Ｇ，Ａｒｉｍａ Ｋ，Ｋａｎａｊｉ Ｔ，Ｔｏｄａ Ｓ，Ｔａｎａｋａ Ｈ，Ｓｈｏｊｉ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ：ａ ｎｏｖｅｌ
ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｏｆ ｓｕｂｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｏｆ ｂｒｏｎｃｈｉａｌ ａｓｔｈｍａ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｏｆ ＩＬ－４ ａｎｄ ＩＬ－１３ ｓｉｇｎａｌｓ．Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００６；１１８：９８－１０４。
２３． Ｎａｉｋ ＰＫ．ｅｔ ａｌ，Ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｐｒｅｄｉｃｔｓ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．３０３：Ｌ１０４６－１０５６，２０１２
２４． Ｂｅｎｔｌｅｙ Ｊ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．Ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｍａｘｉｍａｌ ａｉｒｗａｙｓ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｈｙｐｅｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ
Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１４
【図1】
【図2-1】
【図2-2】
【図3-1】
【図3-2】
【図3-3】
【図3-4】
【図4-1】
【図4-2】
【図4-3】
【図4-4】
【図5-1】
【図5-2】
【図5-3】
【図5-4】
【図5-5】
【図6-1】
【図6-2】
【図7】
【図8-1】
【図8-2】
【配列表】
【国際調査報告】