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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-02-26
(54)【発明の名称】骨格筋疾患を治療するための組成物及び方法
(51)【国際特許分類】
A61K 47/68 20170101AFI20240216BHJP
C07K 16/00 20060101ALI20240216BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20240216BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240216BHJP
A61K 31/7105 20060101ALI20240216BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20240216BHJP
A61P 21/00 20060101ALI20240216BHJP
【ＦＩ】
A61K47/68
C07K16/00 ZNA
C12N15/12
A61K39/395 L
A61K31/7105
A61K48/00
A61P21/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023553216
(86)(22)【出願日】2022-03-03
(85)【翻訳文提出日】2023-10-16
(86)【国際出願番号】 US2022018780
(87)【国際公開番号】W WO2022187543
(87)【国際公開日】2022-09-09
(31)【優先権主張番号】63/297,504
(32)【優先日】2022-01-07
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/156,060
(32)【優先日】2021-03-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】503469393
【氏名又は名称】イエール ユニバーシティ
(71)【出願人】
【識別番号】523069049
【氏名又は名称】ジェンナオ バイオ インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100102978
【弁理士】
【氏名又は名称】清水 初志
(74)【代理人】
【識別番号】100205707
【弁理士】
【氏名又は名称】小寺 秀紀
(74)【代理人】
【識別番号】100160923
【弁理士】
【氏名又は名称】山口 裕孝
(74)【代理人】
【識別番号】100119507
【弁理士】
【氏名又は名称】刑部 俊
(74)【代理人】
【識別番号】100142929
【弁理士】
【氏名又は名称】井上 隆一
(74)【代理人】
【識別番号】100148699
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 利光
(74)【代理人】
【識別番号】100188433
【弁理士】
【氏名又は名称】梅村 幸輔
(74)【代理人】
【識別番号】100128048
【弁理士】
【氏名又は名称】新見 浩一
(74)【代理人】
【識別番号】100129506
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 智彦
(74)【代理人】
【識別番号】100114340
【弁理士】
【氏名又は名称】大関 雅人
(74)【代理人】
【識別番号】100214396
【弁理士】
【氏名又は名称】塩田 真紀
(74)【代理人】
【識別番号】100121072
【弁理士】
【氏名又は名称】川本 和弥
(74)【代理人】
【識別番号】100221741
【弁理士】
【氏名又は名称】酒井 直子
(74)【代理人】
【識別番号】100114926
【弁理士】
【氏名又は名称】枝松 義恵
(72)【発明者】
【氏名】クイジャーノ イライアス
(72)【発明者】
【氏名】グレイザー ピーター
(72)【発明者】
【氏名】ターナー ブルース シー．
(72)【発明者】
【氏名】スキント スティーブン
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4C085
4C086
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA95
4C076BB13
4C076BB15
4C076BB16
4C076CC09
4C076CC41
4C076EE41
4C076EE59
4C084AA13
4C084MA66
4C084NA13
4C084NA14
4C084ZA94
4C085AA14
4C085CC23
4C085GG02
4C085GG03
4C085GG04
4C086AA01
4C086AA02
4C086EA16
4C086MA04
4C086MA55
4C086MA66
4C086NA13
4C086NA14
4C086ZA94
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA54
4H045CA40
4H045DA75
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
治療用ｍＲＮＡポリヌクレオチドと３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片との間に形成された複合体を投与することによって、ミオパチーを治療するための組成物及び方法が提供される。いくつかの事例では、本複合体は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約２：１のモル比によって安定化される。
【選択図】図１２Ｂ
【選択図】図１２Ｂ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
その必要がある対象において遺伝性骨格筋疾患を治療するための方法であって、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片と（ｉｉ）骨格筋タンパク質をコードする治療用ｍＲＮＡポリヌクレオチドとの間に形成された複合体を含む組成物の治療有効量を、非経口投与する工程
を含む、前記方法。
【請求項2】
前記治療用ｍＲＮＡポリヌクレオチドが、骨格筋ポリペプチドであって、その機能喪失型変異を前記対象が有する、骨格筋ポリペプチド
をコードする、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片が、以下：（ａ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１（配列番号９）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、
（ｂ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、
（ｃ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１ａ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、
（ｅ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び
（ｆ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３
を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項4】
前記遺伝性骨格筋疾患が、非ジストロフィー性遺伝性ミオパチーである、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
前記遺伝性骨格筋疾患が、ジストロフィー性遺伝性ミオパチーである、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
前記非経口投与が、筋肉内投与、静脈内投与、又は皮下投与である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記組成物が、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも２：１のモル比を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
前記組成物が、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも５：１のモル比を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
前記組成物が、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも２０：１のモル比を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項10】
前記組成物が、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも５０：１のモル比を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項11】
前記組成物が、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも１００：１のモル比を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項12】
前記組成物が、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、２００：１以下のモル比を含む、請求項７～１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
前記組成物が、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、１００：１以下のモル比を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項14】
前記組成物が、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～２００：１のモル比を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記組成物が、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、５：１～２００：１のモル比を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
前記組成物が、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～５０：１のモル比を含み、前記治療用ポリヌクレオチドが、２０００ヌクレオチド長以下である、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記組成物が、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～３０：１のモル比を含み、前記治療用ポリヌクレオチドが、１０００ヌクレオチド長以下である、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記組成物が、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、２０：１～２００：１のモル比を含み、前記治療用ポリヌクレオチドが、少なくとも２０００ヌクレオチド長である、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
前記対象が、骨格筋タンパク質をコードする遺伝子についての少なくとも１つのバリアント形態を担持する、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項20】
前記骨格筋ポリペプチドが、ネブリン（ＮＥＢ）、骨格筋アルファ－アクチン（ＡＣＴＡ）、アルファ－トロポミオシン－３（ＴＰＭ３）、ベータ－トロポミオシン－２（ＴＰＭ２）、トロポニンＴ１（ＴＮＮＴ１）、コフィリン－２（ＣＦＬ２）、Ｋｅｌｃｈリピート及びＢＴＢドメイン含有－１３（ＫＢＴＢＤ１３）、Ｋｅｌｃｈ様ファミリーメンバー－４０（ＫＬＨＬ４０）、Ｋｅｌｃｈ様タンパク質４（ＫＬＨＬ４）、Ｋｅｌｃｈ様ファミリーメンバー４１（ＫＬＨＬ４１）、レイオモジン－３（ＬＭＯＤ３）、ミオパラジン（ＭＹＰＮ）、リアノジン受容体（ＲＹＲ１）、セレノプロテインＮ（ＳＥＰＮ１）、ミオチューブラリン（ＭＴＭ１）、ダイナミン－２（ＤＮＭ２）、アンフィファイシン－２（ＢＩＮ１）、タイチン（ＴＴＮ）、横紋筋優先発現プロテインキナーゼ（ＳＰＥＧ）、遅骨格／ベータ－心筋ミオシン重鎖（ＭＹＨ７）、チトクロムｂ、チトクロムｃオキシダーゼ、チミジンキナーゼ（ＴＫ２）、ポリメラーゼガンマ１（ＰＯＬＧ１）、リソソーム酵素酸アルファ－グルコシダーゼ（ＧＡＡ）、グリコーゲン－脱分枝酵素（ＡＧＬ）、筋ホスホリラーゼ（ＰＹＧＭ）、カルニチン輸送体ＯＣＴＮ２（ＳＬＣ２２Ａ５）、電子伝達フラボタンパク質（ＥＴＦ）、ＥＴＦ－デヒドロゲナーゼ（ＥＴＦＨ）、脂肪トリグリセリドリパーゼ（ＰＮＰＬＡ２）、骨格筋クロライドチャネル（ＣｌＣ１）、骨格筋ナトリウムチャネルアルファ－サブユニット（ＳＣＮ４Ａ）、ミオトニンプロテインキナーゼ（ＤＭＰＫ）、ジンクフィンガー９（ＺＮＦ９）、ジストロフィン（ＤＭＤ）、ミオチリン（ＭＹＯＴ）、ラミンＡ／Ｃ（ＬＭＮＡ）、カベオリン３（ＣＡＶ３）、ＤｎａＪ熱ショックタンパク質ファミリー（Ｈｓｐ４０）メンバーＢ６（ＤＮＡＪＢ６）、デスミン（ＤＥＳ）、トランスポーチン３、ヘテロ核リボヌクレオタンパク質Ｄ様（ＨＮＲＰＤＬ）、カルパイン３、ジスフェリン（ＤＹＳＦ）、ガンマ－サルコグリカン（ＳＧＣＧ）、アルファ－サルコグリカン（ＳＧＣＡ）、ベータ－サルコグリカン（ＳＧＣＢ）、デルタ－サルコグリカン（ＳＧＣＤ）、テレソニン（ＴＣＡＰ）、Ｅ３ユビキチン－タンパク質リガーゼＴＲＩＭ３２（ＴＲＩＭ３２）、フクチン関連タンパク質（ＦＫＲＰ）、プロテインＯ－マンノシル－トランスフェラーゼ１（ＰＯＭＴ１）、アノクタミン５（ＡＮＯ５）、フクチン、プロテインＯ－マンノシル－トランスフェラーゼ２（ＰＯＭＴ２）、Ｏ結合マンノースベータ－１，２－Ｎアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（ＰＯＭＴｎＧ１）、ジストログリカン（ＤＡＧ１）、プレクチン（ＰＬＥＣ１）、ＬＧＭＤ２Ｒ、輸送タンパク質粒子複合体サブユニット１１（ＴＲＡＰＰＣ１１）、マンノース－１－リン酸グアニルトランスフェラーゼベータ（ＧＭＰＰＢ）、Ｄ－リビトール－５－リン酸シチジリルトランスフェラーゼ（ＩＳＰＤ）、アルファ－グルコシダーゼ、ＬＩＭ及び老化細胞抗原様含有ドメインタンパク質２（ＬＩＭＳ２）、イソプレノイドシンターゼドメイン含有（ＩＳＰＤ）、ポパイドメイン含有１（ＰＯＰＤＣ１）、ラミナ結合ポリペプチド１Ｂ（ＴＯＲ１ＡＩＰ１）、Ｏグリコシルトランスフェラーゼ１（ＰＯＧＬＵＴ１）、ラミニンサブユニットアルファ－２（ＬＡＭＡ２）、コラーゲンアルファ－１（ＶＩ）鎖（ＣＯＬ６Ａ１）、コラーゲンアルファ－２（ＶＩ）鎖（ＣＯＬ６Ａ２）、コラーゲンアルファ－３（ＶＩ）鎖（ＣＯＬ６Ａ３）、ダブルホメオボックス４（ＤＵＸ４）、並びにエメリン（ＥＭＤ）からなる群から選択される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
前記抗体又はその断片が、３Ｅ１０－ＶＬ（配列番号８）と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項22】
前記抗体又はその断片が、３Ｅ１０－ＶＬ（配列番号８）と同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項23】
前記抗体又はその断片が、３Ｅ１０－ＶＨ（配列番号２）と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項24】
前記抗体又はその断片が、３Ｅ１０－ＶＨ（配列番号２）と同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項25】
前記抗体又はその断片が、以下：Ｎ末端からＣ末端へとＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む、重鎖、及び
Ｎ末端からＣ末端へとＶＬ－ＣＬを含む、軽鎖
を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項26】
前記ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４由来のＦｃドメインからなる群から選択されるＦｃドメインである、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
その必要がある対象において遺伝性骨格筋疾患を治療するための方法であって、前記方法が、
（ｉ）核酸に結合する抗体又はその抗原結合断片と（ｉｉ）骨格筋ポリペプチドをコードする治療用ｍＲＮＡポリヌクレオチドとの間に形成された複合体の治療有効量を、非経口投与する工程
を含み、
前記抗体又はその断片が、以下：
（ａ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１（配列番号９）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、
（ｂ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２（配列番号１０）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、
（ｃ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３（配列番号１１）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１ａ（配列番号１６）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、
（ｅ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２（配列番号４）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び
（ｆ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３（配列番号５）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３
を含む、
前記方法。
【請求項28】
前記治療用ｍＲＮＡポリヌクレオチドが、骨格筋ポリペプチドをコードする、請求項２７に記載の方法。
【請求項29】
前記遺伝性骨格筋疾患が、非ジストロフィー性遺伝性ミオパチーである、請求項２７に記載の方法。
【請求項30】
前記遺伝性骨格筋疾患が、ジストロフィー性遺伝性ミオパチーである、請求項２７に記載の方法。
【請求項31】
前記非経口投与が、筋肉内投与、静脈内投与、又は皮下投与である、請求項２７～３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
前記組成物が、（ｉ）前記抗体又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約２：１のモル比を含む、請求項２７～３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項33】
前記組成物が、（ｉ）前記抗体又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約５：１のモル比を含む、請求項２７～３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項34】
前記組成物が、（ｉ）前記抗体又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約２０：１のモル比を含む、請求項２７～３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項35】
前記組成物が、（ｉ）前記抗体又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、約５０：１以下のモル比を含む、請求項２７～３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項36】
前記組成物が、（ｉ）前記抗体又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、約３０：１以下のモル比を含む、請求項２７～３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項37】
前記組成物が、（ｉ）前記抗体又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、約２：１～約５０：１のモル比を含む、請求項２７～３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項38】
前記組成物が、（ｉ）前記抗体又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、約２：１～約３０：１のモル比を含む、請求項２７～３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項39】
前記対象が、骨格筋タンパク質をコードする遺伝子についての少なくとも１つのバリアント形態を担持する、請求項２７～３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項40】
前記治療用ポリヌクレオチドが、前記骨格筋タンパク質に対応する骨格筋ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ分子である、請求項３９に記載の方法。
【請求項41】
前記骨格筋ポリペプチドが、ネブリン（ＮＥＢ）、骨格筋アルファ－アクチン（ＡＣＴＡ）、アルファ－トロポミオシン－３（ＴＰＭ３）、ベータ－トロポミオシン－２（ＴＰＭ２）、トロポニンＴ１（ＴＮＮＴ１）、コフィリン－２（ＣＦＬ２）、Ｋｅｌｃｈリピート及びＢＴＢドメイン含有－１３（ＫＢＴＢＤ１３）、Ｋｅｌｃｈ様ファミリーメンバー－４０（ＫＬＨＬ４０）、Ｋｅｌｃｈ様タンパク質４（ＫＬＨＬ４）、Ｋｅｌｃｈ様ファミリーメンバー４１（ＫＬＨＬ４１）、レイオモジン－３（ＬＭＯＤ３）、ミオパラジン（ＭＹＰＮ）、リアノジン受容体（ＲＹＲ１）、セレノプロテインＮ（ＳＥＰＮ１）、ミオチューブラリン（ＭＴＭ１）、ダイナミン－２（ＤＮＭ２）、アンフィファイシン－２（ＢＩＮ１）、タイチン（ＴＴＮ）、横紋筋優先発現プロテインキナーゼ（ＳＰＥＧ）、遅骨格／ベータ－心筋ミオシン重鎖（ＭＹＨ７）、チトクロムｂ、チトクロムｃオキシダーゼ、チミジンキナーゼ（ＴＫ２）、ポリメラーゼガンマ１（ＰＯＬＧ１）、リソソーム酵素酸アルファ－グルコシダーゼ（ＧＡＡ）、グリコーゲン－脱分枝酵素（ＡＧＬ）、筋ホスホリラーゼ（ＰＹＧＭ）、カルニチン輸送体ＯＣＴＮ２（ＳＬＣ２２Ａ５）、電子伝達フラボタンパク質（ＥＴＦ）、ＥＴＦ－デヒドロゲナーゼ（ＥＴＦＨ）、脂肪トリグリセリドリパーゼ（ＰＮＰＬＡ２）、骨格筋クロライドチャネル（ＣｌＣ１）、骨格筋ナトリウムチャネルアルファ－サブユニット（ＳＣＮ４Ａ）、ミオトニンプロテインキナーゼ（ＤＭＰＫ）、ジンクフィンガー９（ＺＮＦ９）、ジストロフィン（ＤＭＤ）、ミオチリン（ＭＹＯＴ）、ラミンＡ／Ｃ（ＬＭＮＡ）、カベオリン３（ＣＡＶ３）、ＤｎａＪ熱ショックタンパク質ファミリー（Ｈｓｐ４０）メンバーＢ６（ＤＮＡＪＢ６）、デスミン（ＤＥＳ）、トランスポーチン３、ヘテロ核リボヌクレオタンパク質Ｄ様（ＨＮＲＰＤＬ）、カルパイン３、ジスフェリン（ＤＹＳＦ）、ガンマ－サルコグリカン（ＳＧＣＧ）、アルファ－サルコグリカン（ＳＧＣＡ）、ベータ－サルコグリカン（ＳＧＣＢ）、デルタ－サルコグリカン（ＳＧＣＤ）、テレソニン（ＴＣＡＰ）、Ｅ３ユビキチン－タンパク質リガーゼＴＲＩＭ３２（ＴＲＩＭ３２）、フクチン関連タンパク質（ＦＫＲＰ）、プロテインＯ－マンノシル－トランスフェラーゼ１（ＰＯＭＴ１）、アノクタミン５（ＡＮＯ５）、フクチン、プロテインＯ－マンノシル－トランスフェラーゼ２（ＰＯＭＴ２）、Ｏ結合マンノースベータ－１，２－Ｎアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（ＰＯＭＴｎＧ１）、ジストログリカン（ＤＡＧ１）、プレクチン（ＰＬＥＣ１）、ＬＧＭＤ２Ｒ、輸送タンパク質粒子複合体サブユニット１１（ＴＲＡＰＰＣ１１）、マンノース－１－リン酸グアニルトランスフェラーゼベータ（ＧＭＰＰＢ）、Ｄ－リビトール－５－リン酸シチジリルトランスフェラーゼ（ＩＳＰＤ）、アルファ－グルコシダーゼ、ＬＩＭ及び老化細胞抗原様含有ドメインタンパク質２（ＬＩＭＳ２）、イソプレノイドシンターゼドメイン含有（ＩＳＰＤ）、ポパイドメイン含有１（ＰＯＰＤＣ１）、ラミナ結合ポリペプチド１Ｂ（ＴＯＲ１ＡＩＰ１）、Ｏグリコシルトランスフェラーゼ１（ＰＯＧＬＵＴ１）、ラミニンサブユニットアルファ－２（ＬＡＭＡ２）、コラーゲンアルファ－１（ＶＩ）鎖（ＣＯＬ６Ａ１）、コラーゲンアルファ－２（ＶＩ）鎖（ＣＯＬ６Ａ２）、コラーゲンアルファ－３（ＶＩ）鎖（ＣＯＬ６Ａ３）、ダブルホメオボックス４（ＤＵＸ４）、並びにエメリン（ＥＭＤ）からなる群から選択される、請求項２８～４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項42】
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１ｍ（配列番号６１）のアミノ酸配列を有する、請求項２７～４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項43】
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１（配列番号９）のアミノ酸配列を有する、請求項２７～４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項44】
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２ｍ（配列番号６２）のアミノ酸配列を有する、請求項２７～４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項45】
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２（配列番号１０）のアミノ酸配列を有する、請求項２７～４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項46】
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３ｍ（配列番号６３）のアミノ酸配列を有する、請求項２７～４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項47】
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３（配列番号１１）のアミノ酸配列を有する、請求項２７～４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項48】
前記ＶＨ ＣＤＲ１が、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１ｍ（配列番号５８）のアミノ酸配列を有する、請求項２７～４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項49】
前記ＶＨ ＣＤＲ１が、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１ａ（配列番号１６）のアミノ酸配列を有する、請求項２７～４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項50】
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２ｍ（配列番号５９）から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項２７～４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項51】
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２（配列番号４）のアミノ酸配列を有する、請求項２７～４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項52】
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３ｍ（配列番号６０）のアミノ酸配列を有する、請求項２７～５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項53】
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３（配列番号５）のアミノ酸配列を有する、請求項２７～５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項54】
３Ｅ１０－ＶＬ（配列番号８）中の対応するＶＬ ＣＤＲの配列と比較した、ＶＬ ＣＤＲ中の任意のアミノ酸置換が、３Ｅ１０－ＶＬ（配列番号８）中に存在する対応するアミノ酸と同じ電荷を有するアミノ酸への置換である、請求項２７～５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項55】
３Ｅ１０－ＶＨ＿Ｄ３１Ｎ（配列番号１４）中の対応するＶＨ ＣＤＲの配列と比較した、ＶＨ ＣＤＲ中の任意のアミノ酸置換が、３Ｅ１０－ＶＨ（配列番号１４）中に存在する対応するアミノ酸と同じ電荷を有するアミノ酸への置換である、請求項２７～５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項56】
前記抗体又はその断片が、３Ｅ１０－ＶＬ（配列番号８）と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項２７～５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項57】
前記抗体又はその断片が、３Ｅ１０－ＶＬ（配列番号８）と同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項２７～４１又は４８～５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項58】
前記抗体又はその断片が、３Ｅ１０－ＶＨ＿Ｄ３１Ｎ（配列番号１４）と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２７～５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項59】
前記抗体又はその断片が、３Ｅ１０－ＶＨ＿Ｄ３１Ｎ（配列番号１４）と同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２７～４７、５６、又は５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項60】
前記抗体又はその断片が、以下：Ｎ末端からＣ末端へとＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む、重鎖、及び
Ｎ末端からＣ末端へとＶＬ－ＣＬを含む、軽鎖
を含む、請求項２７～５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項61】
前記ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４由来のＦｃドメインからなる群から選択されるＦｃドメインである、請求項６０に記載の方法。
【請求項62】
（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片と（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドとの間に形成された複合体を含む、医薬組成物であって、（ａ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｂ）治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも２：１のモル比
を含む、前記医薬組成物。
【請求項63】
前記治療用ｍＲＮＡポリヌクレオチドが、骨格筋ポリペプチドをコードする、請求項６２に記載の医薬組成物。
【請求項64】
前記３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片が、以下：（ａ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１（配列番号９）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、
（ｂ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、
（ｃ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１ａ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、
（ｅ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び
（ｆ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３
を含む、請求項６２又は６３に記載の医薬組成物。
【請求項65】
（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも５：１のモル比を含む、請求項６２～６４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項66】
（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも２０：１のモル比を含む、請求項６５に記載の医薬組成物。
【請求項67】
（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも５０：１のモル比を含む、請求項６５に記載の医薬組成物。
【請求項68】
（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも１００：１のモル比を含む、請求項６５に記載の医薬組成物。
【請求項69】
（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、２００：１以下のモル比を含む、請求項６２～６８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項70】
（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、１００：１以下のモル比を含む、請求項６９に記載の医薬組成物。
【請求項71】
（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～２００：１のモル比を含む、請求項６２～６４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項72】
（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、５：１～２００：１のモル比を含む、請求項７１に記載の医薬組成物。
【請求項73】
前記組成物が、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～５０：１のモル比を含み、前記治療用ポリヌクレオチドが、２０００ヌクレオチド長以下である、請求項６２～６４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項74】
前記組成物が、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～３０：１のモル比を含み、前記治療用ポリヌクレオチドが、１０００ヌクレオチド長以下である、請求項６２～６４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項75】
前記組成物が、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、２０：１～２００：１のモル比を含み、前記治療用ポリヌクレオチドが、少なくとも２０００ヌクレオチド長である、請求項６２～６４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項76】
前記骨格筋ポリペプチドが、ネブリン（ＮＥＢ）、骨格筋アルファ－アクチン（ＡＣＴＡ）、アルファ－トロポミオシン－３（ＴＰＭ３）、ベータ－トロポミオシン－２（ＴＰＭ２）、トロポニンＴ１（ＴＮＮＴ１）、コフィリン－２（ＣＦＬ２）、Ｋｅｌｃｈリピート及びＢＴＢドメイン含有－１３（ＫＢＴＢＤ１３）、Ｋｅｌｃｈ様ファミリーメンバー－４０（ＫＬＨＬ４０）、Ｋｅｌｃｈ様タンパク質４（ＫＬＨＬ４）、Ｋｅｌｃｈ様ファミリーメンバー４１（ＫＬＨＬ４１）、レイオモジン－３（ＬＭＯＤ３）、ミオパラジン（ＭＹＰＮ）、リアノジン受容体（ＲＹＲ１）、セレノプロテインＮ（ＳＥＰＮ１）、ミオチューブラリン（ＭＴＭ１）、ダイナミン－２（ＤＮＭ２）、アンフィファイシン－２（ＢＩＮ１）、タイチン（ＴＴＮ）、横紋筋優先発現プロテインキナーゼ（ＳＰＥＧ）、遅骨格／ベータ－心筋ミオシン重鎖（ＭＹＨ７）、チトクロムｂ、チトクロムｃオキシダーゼ、チミジンキナーゼ（ＴＫ２）、ポリメラーゼガンマ１（ＰＯＬＧ１）、リソソーム酵素酸アルファ－グルコシダーゼ（ＧＡＡ）、グリコーゲン－脱分枝酵素（ＡＧＬ）、筋ホスホリラーゼ（ＰＹＧＭ）、カルニチン輸送体ＯＣＴＮ２（ＳＬＣ２２Ａ５）、電子伝達フラボタンパク質（ＥＴＦ）、ＥＴＦ－デヒドロゲナーゼ（ＥＴＦＨ）、脂肪トリグリセリドリパーゼ（ＰＮＰＬＡ２）、骨格筋クロライドチャネル（ＣｌＣ１）、骨格筋ナトリウムチャネルアルファ－サブユニット（ＳＣＮ４Ａ）、ミオトニンプロテインキナーゼ（ＤＭＰＫ）、ジンクフィンガー９（ＺＮＦ９）、ジストロフィン（ＤＭＤ）、ミオチリン（ＭＹＯＴ）、ラミンＡ／Ｃ（ＬＭＮＡ）、カベオリン３（ＣＡＶ３）、ＤｎａＪ熱ショックタンパク質ファミリー（Ｈｓｐ４０）メンバーＢ６（ＤＮＡＪＢ６）、デスミン（ＤＥＳ）、トランスポーチン３、ヘテロ核リボヌクレオタンパク質Ｄ様（ＨＮＲＰＤＬ）、カルパイン３、ジスフェリン（ＤＹＳＦ）、ガンマ－サルコグリカン（ＳＧＣＧ）、アルファ－サルコグリカン（ＳＧＣＡ）、ベータ－サルコグリカン（ＳＧＣＢ）、デルタ－サルコグリカン（ＳＧＣＤ）、テレソニン（ＴＣＡＰ）、Ｅ３ユビキチン－タンパク質リガーゼＴＲＩＭ３２（ＴＲＩＭ３２）、フクチン関連タンパク質（ＦＫＲＰ）、プロテインＯ－マンノシル－トランスフェラーゼ１（ＰＯＭＴ１）、アノクタミン５（ＡＮＯ５）、フクチン、プロテインＯ－マンノシル－トランスフェラーゼ２（ＰＯＭＴ２）、Ｏ結合マンノースベータ－１，２－Ｎアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（ＰＯＭＴｎＧ１）、ジストログリカン（ＤＡＧ１）、プレクチン（ＰＬＥＣ１）、ＬＧＭＤ２Ｒ、輸送タンパク質粒子複合体サブユニット１１（ＴＲＡＰＰＣ１１）、マンノース－１－リン酸グアニルトランスフェラーゼベータ（ＧＭＰＰＢ）、Ｄ－リビトール－５－リン酸シチジリルトランスフェラーゼ（ＩＳＰＤ）、アルファ－グルコシダーゼ、ＬＩＭ及び老化細胞抗原様含有ドメインタンパク質２（ＬＩＭＳ２）、イソプレノイドシンターゼドメイン含有（ＩＳＰＤ）、ポパイドメイン含有１（ＰＯＰＤＣ１）、ラミナ結合ポリペプチド１Ｂ（ＴＯＲ１ＡＩＰ１）、Ｏグリコシルトランスフェラーゼ１（ＰＯＧＬＵＴ１）、ラミニンサブユニットアルファ－２（ＬＡＭＡ２）、コラーゲンアルファ－１（ＶＩ）鎖（ＣＯＬ６Ａ１）、コラーゲンアルファ－２（ＶＩ）鎖（ＣＯＬ６Ａ２）、コラーゲンアルファ－３（ＶＩ）鎖（ＣＯＬ６Ａ３）、ダブルホメオボックス４（ＤＵＸ４）、並びにエメリン（ＥＭＤ）からなる群から選択される、請求項６３～７５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項77】
前記抗体又はその断片が、３Ｅ１０－ＶＬ（配列番号８）と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項６２～７６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項78】
前記抗体又はその断片が、３Ｅ１０－ＶＬ（配列番号８）と同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項６２～７６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項79】
前記抗体又はその断片が、３Ｅ１０－ＶＨ＿Ｄ３１Ｎ（配列番号１４）と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項６２～７８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項80】
前記抗体又はその断片が、３Ｅ１０－ＶＨ＿Ｄ３１Ｎ（配列番号１４）と同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項６２～７８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項81】
前記抗体又はその断片が、以下：Ｎ末端からＣ末端へとＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む、重鎖、及び
Ｎ末端からＣ末端へとＶＬ－ＣＬを含む、軽鎖
を含む、請求項６２～８０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項82】
前記ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４由来のＦｃドメインからなる群から選択されるＦｃドメインである、請求項８１に記載の医薬組成物。
【請求項83】
非経口投与用に製剤化されている、請求項６２～８２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項84】
前記非経口投与が、筋肉内投与、静脈内投与、又は皮下投与である、請求項８３に記載の医薬組成物。
【請求項85】
（ｉ）核酸に結合する抗体又はその抗原結合断片と（ｉｉ）治療用ｍＲＮＡポリヌクレオチドとの間に形成された複合体を含む、医薬組成物であって、前記抗体又はその断片が、以下：
（ａ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１（配列番号９）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、
（ｂ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２（配列番号１０）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、
（ｃ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３（配列番号１１）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、
（ｄ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１ａ（配列番号１６）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、
（ｅ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２（配列番号４）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び
（ｆ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３（配列番号５）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３
を含み、かつ
前記医薬組成物が、
（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも２：１のモル比
を含む、
前記医薬組成物。
【請求項86】
前記治療用ｍＲＮＡポリヌクレオチドが、骨格筋ポリペプチドをコードする、請求項８５に記載の医薬組成物。
【請求項87】
（ｉ）前記抗体又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも５：１のモル比を含む、請求項８５又は８６に記載の医薬組成物。
【請求項88】
（ｉ）前記抗体又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも２０：１のモル比を含む、請求項８７に記載の医薬組成物。
【請求項89】
（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも５０：１のモル比を含む、請求項８７に記載の医薬組成物。
【請求項90】
（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも１００：１のモル比を含む、請求項８７に記載の医薬組成物。
【請求項91】
（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、２００：１以下のモル比を含む、請求項８５～９０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項92】
（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、１００：１以下のモル比を含む、請求項９１に記載の医薬組成物。
【請求項93】
（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～２００：１のモル比を含む、請求項８５又は８６に記載の医薬組成物。
【請求項94】
（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、５：１～２００：１のモル比を含む、請求項９３に記載の医薬組成物。
【請求項95】
前記組成物が、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～５０：１のモル比を含み、前記治療用ポリヌクレオチドが、２０００ヌクレオチド長以下である、請求項８５又は８６に記載の医薬組成物。
【請求項96】
前記組成物が、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～３０：１のモル比を含み、前記治療用ポリヌクレオチドが、１０００ヌクレオチド長以下である、請求項８５又は８６に記載の医薬組成物。
【請求項97】
前記組成物が、（ｉ）３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、（ｉｉ）治療用ポリヌクレオチドに対する、２０：１～２００：１のモル比を含み、前記治療用ポリヌクレオチドが、少なくとも２０００ヌクレオチド長である、請求項８５又は８６に記載の医薬組成物。
【請求項98】
前記骨格筋ポリペプチドが、ネブリン（ＮＥＢ）、骨格筋アルファ－アクチン（ＡＣＴＡ）、アルファ－トロポミオシン－３（ＴＰＭ３）、ベータ－トロポミオシン－２（ＴＰＭ２）、トロポニンＴ１（ＴＮＮＴ１）、コフィリン－２（ＣＦＬ２）、Ｋｅｌｃｈリピート及びＢＴＢドメイン含有－１３（ＫＢＴＢＤ１３）、Ｋｅｌｃｈ様ファミリーメンバー－４０（ＫＬＨＬ４０）、Ｋｅｌｃｈ様タンパク質４（ＫＬＨＬ４）、Ｋｅｌｃｈ様ファミリーメンバー４１（ＫＬＨＬ４１）、レイオモジン－３（ＬＭＯＤ３）、ミオパラジン（ＭＹＰＮ）、リアノジン受容体（ＲＹＲ１）、セレノプロテインＮ（ＳＥＰＮ１）、ミオチューブラリン（ＭＴＭ１）、ダイナミン－２（ＤＮＭ２）、アンフィファイシン－２（ＢＩＮ１）、タイチン（ＴＴＮ）、横紋筋優先発現プロテインキナーゼ（ＳＰＥＧ）、遅骨格／ベータ－心筋ミオシン重鎖（ＭＹＨ７）、チトクロムｂ、チトクロムｃオキシダーゼ、チミジンキナーゼ（ＴＫ２）、ポリメラーゼガンマ１（ＰＯＬＧ１）、リソソーム酵素酸アルファ－グルコシダーゼ（ＧＡＡ）、グリコーゲン－脱分枝酵素（ＡＧＬ）、筋ホスホリラーゼ（ＰＹＧＭ）、カルニチン輸送体ＯＣＴＮ２（ＳＬＣ２２Ａ５）、電子伝達フラボタンパク質（ＥＴＦ）、ＥＴＦ－デヒドロゲナーゼ（ＥＴＦＨ）、脂肪トリグリセリドリパーゼ（ＰＮＰＬＡ２）、骨格筋クロライドチャネル（ＣｌＣ１）、骨格筋ナトリウムチャネルアルファ－サブユニット（ＳＣＮ４Ａ）、ミオトニンプロテインキナーゼ（ＤＭＰＫ）、ジンクフィンガー９（ＺＮＦ９）、ジストロフィン（ＤＭＤ）、ミオチリン（ＭＹＯＴ）、ラミンＡ／Ｃ（ＬＭＮＡ）、カベオリン３（ＣＡＶ３）、ＤｎａＪ熱ショックタンパク質ファミリー（Ｈｓｐ４０）メンバーＢ６（ＤＮＡＪＢ６）、デスミン（ＤＥＳ）、トランスポーチン３、ヘテロ核リボヌクレオタンパク質Ｄ様（ＨＮＲＰＤＬ）、カルパイン３、ジスフェリン（ＤＹＳＦ）、ガンマ－サルコグリカン（ＳＧＣＧ）、アルファ－サルコグリカン（ＳＧＣＡ）、ベータ－サルコグリカン（ＳＧＣＢ）、デルタ－サルコグリカン（ＳＧＣＤ）、テレソニン（ＴＣＡＰ）、Ｅ３ユビキチン－タンパク質リガーゼＴＲＩＭ３２（ＴＲＩＭ３２）、フクチン関連タンパク質（ＦＫＲＰ）、プロテインＯ－マンノシル－トランスフェラーゼ１（ＰＯＭＴ１）、アノクタミン５（ＡＮＯ５）、フクチン、プロテインＯ－マンノシル－トランスフェラーゼ２（ＰＯＭＴ２）、Ｏ結合マンノースベータ－１，２－Ｎアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（ＰＯＭＴｎＧ１）、ジストログリカン（ＤＡＧ１）、プレクチン（ＰＬＥＣ１）、ＬＧＭＤ２Ｒ、輸送タンパク質粒子複合体サブユニット１１（ＴＲＡＰＰＣ１１）、マンノース－１－リン酸グアニルトランスフェラーゼベータ（ＧＭＰＰＢ）、Ｄ－リビトール－５－リン酸シチジリルトランスフェラーゼ（ＩＳＰＤ）、アルファ－グルコシダーゼ、ＬＩＭ及び老化細胞抗原様含有ドメインタンパク質２（ＬＩＭＳ２）、イソプレノイドシンターゼドメイン含有（ＩＳＰＤ）、ポパイドメイン含有１（ＰＯＰＤＣ１）、ラミナ結合ポリペプチド１Ｂ（ＴＯＲ１ＡＩＰ１）、Ｏグリコシルトランスフェラーゼ１（ＰＯＧＬＵＴ１）、ラミニンサブユニットアルファ－２（ＬＡＭＡ２）、コラーゲンアルファ－１（ＶＩ）鎖（ＣＯＬ６Ａ１）、コラーゲンアルファ－２（ＶＩ）鎖（ＣＯＬ６Ａ２）、コラーゲンアルファ－３（ＶＩ）鎖（ＣＯＬ６Ａ３）、ダブルホメオボックス４（ＤＵＸ４）、並びにエメリン（ＥＭＤ）からなる群から選択される、請求項８６～９７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項99】
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１ｍ（配列番号６１）のアミノ酸配列を有する、請求項８５～９８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項100】
前記ＶＬ ＣＤＲ１が、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１（配列番号９）のアミノ酸配列を有する、請求項８５～９８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項101】
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２ｍ（配列番号６２）のアミノ酸配列を有する、請求項８５～１００のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項102】
前記ＶＬ ＣＤＲ２が、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２（配列番号１０）のアミノ酸配列を有する、請求項８５～１００のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項103】
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３ｍ（配列番号６３）のアミノ酸配列を有する、請求項８５～１０２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項104】
前記ＶＬ ＣＤＲ３が、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３（配列番号１１）のアミノ酸配列を有する、請求項８５～１０２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項105】
前記ＶＨ ＣＤＲ１が、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１ｍ（配列番号５８）のアミノ酸配列を有する、請求項８５～１０４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項106】
前記ＶＨ ＣＤＲ１が、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１ａ（配列番号１６）のアミノ酸配列を有する、請求項８５～１０４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項107】
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２ｍ（配列番号５８）のアミノ酸配列を有する、請求項８５～１０６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項108】
前記ＶＨ ＣＤＲ２が、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２（配列番号４）のアミノ酸配列を有する、請求項８５～１０６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項109】
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３ｍ（配列番号５９）のアミノ酸配列を有する、請求項８５～１０８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項110】
前記ＶＨ ＣＤＲ３が、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３（配列番号５）のアミノ酸配列を有する、請求項８５～１０８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項111】
３Ｅ１０－ＶＬ（配列番号８）中の対応するＶＬ ＣＤＲの配列と比較した、ＶＬ ＣＤＲ中の任意のアミノ酸置換が、３Ｅ１０－ＶＬ（配列番号８）中に存在する対応するアミノ酸と同じ電荷を有するアミノ酸への置換である、請求項８５～１１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項112】
３Ｅ１０－ＶＨ＿Ｄ３１Ｎ（配列番号１４）中の対応するＶＨ ＣＤＲの配列と比較した、ＨＬ ＣＤＲ中の任意のアミノ酸置換が、３Ｅ１０－ＶＨ＿Ｄ３１Ｎ（配列番号１４）中に存在する対応するアミノ酸と同じ電荷を有するアミノ酸への置換である、請求項８５～１１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項113】
前記抗体又はその断片が、３Ｅ１０－ＶＬ（配列番号８）と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項８５～１１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項114】
前記抗体又はその断片が、３Ｅ１０－ＶＬ（配列番号８）と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項８５～９８又は１０５～１１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項115】
前記抗体又はその断片が、３Ｅ１０－ＶＨ＿Ｄ３１Ｎ（配列番号１４）と少なくとも８５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項８５～１１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項116】
前記抗体又はその断片が、３Ｅ１０－ＶＨ＿Ｄ３１Ｎ（配列番号１４）と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項８５～１０４、１１３、又は１１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項117】
前記抗体又はその断片が、以下：Ｎ末端からＣ末端へとＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む、重鎖、及び
Ｎ末端からＣ末端へとＶＬ－ＣＬを含む、軽鎖
を含む、請求項８５～１１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項118】
前記ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４由来のＦｃドメインからなる群から選択されるＦｃドメインである、請求項１１７に記載の医薬組成物。
【請求項119】
非経口投与用に製剤化されている、請求項８５～１１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項120】
前記非経口投与が、筋肉内投与、静脈内投与、又は皮下投与である、請求項１１９に記載の医薬組成物。
【請求項121】
遺伝性骨格筋疾患の治療のための薬剤の調製のための、請求項６２～１２０のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
【請求項122】
前記遺伝性骨格筋疾患が、非ジストロフィー性遺伝性ミオパチーである、請求項１２１に記載の使用。
【請求項123】
前記遺伝性骨格筋疾患が、ジストロフィー性遺伝性ミオパチーである、請求項１２１に記載の使用。
【請求項124】
遺伝性骨格筋疾患の治療のための、請求項６２～１２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項125】
前記遺伝性骨格筋疾患が、非ジストロフィー性遺伝性ミオパチーである、請求項１２４に記載の医薬組成物。
【請求項126】
前記遺伝性骨格筋疾患が、ジストロフィー性遺伝性ミオパチーである、請求項１２４に記載の医薬組成物。
【請求項127】
障害の治療において使用するための、請求項６２～１２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項128】
遺伝性骨格筋障害の治療のための薬剤として使用するための、請求項６２～１２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項129】
前記遺伝性骨格筋障害が、非ジストロフィー性遺伝性ミオパチーである、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【請求項130】
前記遺伝性骨格筋障害が、ジストロフィー性遺伝性ミオパチーである、請求項１２８に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月３日に出願された米国仮特許出願第６３／１５６，０７０号及び２０２２年１月７日に出願された米国仮特許出願第６３／２９７，５０４号に対する優先権を主張するものであり、これらの内容は、全ての目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年３月３日に出願された米国仮特許出願第６３／１５６，０７０号及び２０２２年１月７日に出願された米国仮特許出願第６３／２９７，５０４号に対する優先権を主張するものであり、これらの内容は、全ての目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【0002】
連邦支援の研究に関する声明
本発明は、米国国立衛生研究所により授与されたＲ３５ＣＡ１９７５７４下で政府支援により作製されたものである。政府は、本発明にある特定の権利を有する。
本発明は、米国国立衛生研究所により授与されたＲ３５ＣＡ１９７５７４下で政府支援により作製されたものである。政府は、本発明にある特定の権利を有する。
【0003】
技術分野
本開示は、概して、ｍＲＮＡの骨格筋組織への標的送達によって骨格筋疾患を治療するための組成物及び方法に関する。
本開示は、概して、ｍＲＮＡの骨格筋組織への標的送達によって骨格筋疾患を治療するための組成物及び方法に関する。
【背景技術】
【0004】
背景
ミオパチーは、骨格筋の臨床障害である。これらの障害は、典型的には、筋細胞構造及び／又は代謝の異常を特徴とし、筋力低下及び機能不全の様々なパターンをもたらす。大規模な遺伝子セットのうちの１つ以上における変異によって引き起こされる、多くのタイプの遺伝性ミオパチーが存在する。遺伝性ミオパチーを有する対象は、一般に、筋力低下、運動遅延、呼吸機能障害、及び延髄性筋機能不全に罹患している。多くの異なる形態の遺伝性ミオパチーの病因が十分に特徴付けられているため、タンパク質の機能的バージョンをコードする遺伝子又は転写物を罹患組織に送達する核酸ベースの療法を含むタンパク質補充療法は、これらの障害を治療するための魅力的な選択肢を提供する。実際に、かかる戦略の臨床試験がいくつかの遺伝性ミオパチーに対して開始されている。
ミオパチーは、骨格筋の臨床障害である。これらの障害は、典型的には、筋細胞構造及び／又は代謝の異常を特徴とし、筋力低下及び機能不全の様々なパターンをもたらす。大規模な遺伝子セットのうちの１つ以上における変異によって引き起こされる、多くのタイプの遺伝性ミオパチーが存在する。遺伝性ミオパチーを有する対象は、一般に、筋力低下、運動遅延、呼吸機能障害、及び延髄性筋機能不全に罹患している。多くの異なる形態の遺伝性ミオパチーの病因が十分に特徴付けられているため、タンパク質の機能的バージョンをコードする遺伝子又は転写物を罹患組織に送達する核酸ベースの療法を含むタンパク質補充療法は、これらの障害を治療するための魅力的な選択肢を提供する。実際に、かかる戦略の臨床試験がいくつかの遺伝性ミオパチーに対して開始されている。
【0005】
治療的ｍＲＮＡ送達は、遺伝子療法の適用を制限し、かつ予防的遺伝子療法の可能性を妨げる、生産の複雑さ、限定されたパッケージング能力、及び好ましくない免疫学的特徴を含む、ウイルスベクター及び合成リポソームベースの遺伝子療法に関連する制限及びリスクの多くを回避する可能性があるため、ミオパチーを治療するための魅力的な選択肢である（Ｓｅｏｗ ａｎｄ Ｗｏｏｄ，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．１７（５）：７６７－７７７（２００９）（非特許文献１））。
【0006】
しかしながら、ｍＲＮＡ療法は、改善された送達系の必要性によって制限される。例えば、ｍＲＮＡは、細胞膜を容易に通過しない。この障害を克服するための従来のアプローチには、ＤＮＡベースの療法と同様の免疫学的課題を提示するリポソームベースの送達ビヒクルにｍＲＮＡをパッケージングすることが含まれる。更に、ｍＲＮＡは、皮膚、組織、及び血液中に存在する細胞外リボヌクレアーゼによって容易に分解される。内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｏｗａｌｓｋｉ ＰＳ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．，２７（４）：７１０－２８（２０１９）（非特許文献２）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【0007】
【非特許文献1】Ｓｅｏｗ ａｎｄ Ｗｏｏｄ，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．１７（５）：７６７－７７７（２００９）
【非特許文献2】Ｋｏｗａｌｓｋｉ ＰＳ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．，２７（４）：７１０－２８（２０１９）
【発明の概要】
【0008】
概要
上記の背景技術を考慮して、骨格筋疾患を治療するための改善された方法が必要である。ｍＲＮＡ療法は、骨格筋疾患の病因の根底にある遺伝学が十分に特徴付けられているため、これらの疾患の治療に有望な道を提示する。例えば、内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｕｓｃｌｅ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ－Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｔａｔｕｓ ｏｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｉｅｌｄ，Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｋｕｎｉｈｉｒｏ Ｓａｋｕｍａ，Ｃｈａｐｔｅｒ ６“Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ”（２０１８）を参照されたい。有利には、本開示は、リポソーム又はウイルスベクターベースの核酸送達に依存しない骨格筋疾患のｍＲＮＡ療法のための組成物及び方法を提供する。いくつかの態様では、これらの組成物及び方法は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片を使用して、治療用ｍＲＮＡ分子をインビボで骨格筋組織に効率的に送達することができるという発見に少なくとも部分的に基づく。
上記の背景技術を考慮して、骨格筋疾患を治療するための改善された方法が必要である。ｍＲＮＡ療法は、骨格筋疾患の病因の根底にある遺伝学が十分に特徴付けられているため、これらの疾患の治療に有望な道を提示する。例えば、内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｕｓｃｌｅ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ－Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｔａｔｕｓ ｏｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｉｅｌｄ，Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｋｕｎｉｈｉｒｏ Ｓａｋｕｍａ，Ｃｈａｐｔｅｒ ６“Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ”（２０１８）を参照されたい。有利には、本開示は、リポソーム又はウイルスベクターベースの核酸送達に依存しない骨格筋疾患のｍＲＮＡ療法のための組成物及び方法を提供する。いくつかの態様では、これらの組成物及び方法は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片を使用して、治療用ｍＲＮＡ分子をインビボで骨格筋組織に効率的に送達することができるという発見に少なくとも部分的に基づく。
【0009】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法の有利な特性は、以下に記載の３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片が、全身投与又は筋肉内投与後に（他の組織又は器官との関連で）インビボで骨格筋組織に局在するという発見に少なくとも部分的に基づく。例えば、実施例３に記載され、図１０に説明されるように、静脈内投与後、親３Ｅ１０抗体及び３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）バリアント抗体の両方が、他の非肝組織、例えば、脳組織、肺組織、心臓組織、脾臓組織、及び腎組織よりも骨格筋により高い濃度で蓄積した。有利には、骨格筋組織に対するこの指向性は、本明細書に記載の組成物及び方法で利用され、治療用ｍＲＮＡ分子を骨格筋組織に送達して、様々なミオパチーを治療する。
【0010】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法の有利な特性は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、ｍＲＮＡ分子に対するより高いモル比の使用により、ｍＲＮＡ分子のＲＮＡ分解からの保護がより一層高められるという発見に少なくとも部分的に基づく。例えば、実施例６に記載され、図１３Ａ及び図１３Ｂに説明されるように、親３Ｅ１０抗体及び３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）バリアント抗体は、２：１及び２０：１のモル比でｍＲＮＡをＲＮＡｓｅ Ａ媒介性ＲＮＡ分解から保護し、２０：１のモル比で得られた保護は、２：１で得られた保護を上回った。有利には、より高い３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片濃度で増加したｍＲＮＡ保護を得たｍＲＮＡが本明細書に記載の組成物及び方法で利用され、インビボでｍＲＮＡを送達する治療用組成物の薬物動態特性を改善する。
【0011】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法の有利な特性は、治療用ｍＲＮＡからの骨格筋組織における持続的なタンパク質発現が、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片と、治療用ｍＲＮＡとの複合体の投与によって実現されるという発見に少なくとも部分的に基づく。例えば、実施例５に記載され、図１２Ａ～１２Ｂに説明されるように、３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）バリアント抗体－ｍＲＮＡ複合体の筋肉内投与により、少なくとも５日間にわたるｍＲＮＡによってコードされるルシフェラーゼの持続的な発現がもたらされた。有利には、これらの複合体の投与に起因する骨格筋組織における持続的な発現が本明細書に記載の組成物及び方法で利用され、長時間作用型組成物を用いてミオパチーを治療する。
【0012】
したがって、本開示の一態様は、治療用ｍＲＮＡポリヌクレオチドと３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片との間に形成された複合体を含む組成物の治療有効量を、非経口投与することによって、その必要がある対象において遺伝性骨格筋疾患を治療するための方法を提供する。
【0013】
別の態様では、本開示は、骨格筋ポリペプチドをコードする治療用ｍＲＮＡポリヌクレオチドと３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片との間に形成された複合体の医薬組成物であって、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも２：１のモル比を有する、医薬組成物を提供する。
【0014】
本明細書に記載の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、（ａ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１（配列番号９）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、（ｂ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、（ｃ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、（ｄ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１ａ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、（ｅ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び（ｆ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
【0015】
本明細書に記載の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、（ａ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１（配列番号９）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、（ｂ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２（配列番号１０）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、（ｃ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３（配列番号１１）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、（ｄ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１ａ（配列番号１６）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、（ｅ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２（配列番号４）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び（ｆ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３（配列番号５）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
【0016】
本明細書に記載の方法及び組成物のいくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、（ａ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１ｍ（配列番号６１）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、（ｂ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２ｍ（配列番号６２）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、（ｃ）３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３ｍ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、（ｄ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１ｍ（配列番号５８）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、（ｅ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２ｍ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び（ｆ）３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３ｍ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
【図面の簡単な説明】
【0017】
本特許又は出願ファイルには、カラーで作成される少なくとも１つの図面が含まれる。カラー図面を含む本特許又は特許出願公開の写しは、要請に応じて、かつ必要な料金の支払いを済ませた後に、特許商標庁によって提供される。
【0018】
【図1】親３Ｅ１０モノクローナル抗体のアミノ酸配列を説明する。
【図2A】図２Ａ、図２Ｂ、及び図２Ｃは、本開示のいくつかの実施形態による、３Ｅ１０モノクローナル抗体のＤ３１Ｎバリアント（図２Ａ）、他のＣＤＲバリアント（図２Ｂ）、及び追加で企図されるＣＤＲバリアント（図２Ｃ）のアミノ酸配列を説明する。
【図3】本開示の様々な実施形態による、３Ｅ１０モノクローナル抗体の電荷保存ＣＤＲバリアントの例を説明する。
【図4】本開示の様々な実施形態による、３Ｅ１０モノクローナル抗体のアミノ酸置換、電荷保存アミノ酸置換、及び合理的に設計されたアミノ酸置換の組み合わせを含むＣＤＲバリアントの例を説明する。
【図5】ヒト化３Ｅ１０重鎖可変領域の例の配列アライメントを説明し、示されるようにＣＤＲには下線が引かれている。
【図6】ヒト化３Ｅ１０軽鎖可変領域の例の配列アライメントを説明し、示されるようにＣＤＲ及び推定核局在化シグナル（ＮＬＳ）には下線が引かれている。
【図8】本開示のいくつかの実施形態による、経時的な（ＩＭ注射後の日数）ｍＲＮＡのマウス筋肉（ＩＭ）への３Ｅ１０媒介性送達（生物発光（光子／秒））を示す線グラフを図解する。
【図9-1】図９Ａ、図９Ｂ、及び図９Ｃは総じて、静脈内投与後のマウス骨格筋における蛍光標識３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）抗体局在化を示す。図９Ａ及び図９Ｂは、投与の２４時間後にＩＶＩＳ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で取得した、対照組成物（図９Ａ）又は蛍光標識３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）抗体（図９Ｂ）の静脈内注射後のマウス骨格筋における蛍光の画像である。図９Ｃは、ＩＶＩＳ画像中の蛍光を定量した棒グラフである。
【図10】１００μｇ又は２００μｇの、ＶｉｖｏＴａｇ６８０で標識した３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎの、マウスへの静脈内注射の２４時間後の、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎの組織への用量依存的生体内分布のＩＶＩＳ画像中の蛍光を定量した棒グラフである（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）。
【図11A】図１１Ａ及び図１１Ｂは、推定核酸結合ポケット（ＮＡＢ１）を明らかにする、３Ｅ１０－ｓｃＦｖ構築物の分子モデルの静電表面電位レンダリングを説明する。加えて、図１１Ａは、残基ＨＣ ＣＤＲ１残基３１でのアミノ酸置換によって誘導される、予測される構造変化及び静電位変化を示す。図１１Ｂは、点状のドットで強調されたＮＡＢ１アミノ酸残基を有する３Ｅ１０－ｓｃＦｖの分子モデリング（Ｐｙｍｏｌ）の図解である。図１１Ｃは、図１１Ａ及び図１１Ｂに示される分子モデリングによって特定される推定核酸結合ポケットの、３Ｅ１０－ｓｃＦｖ構築物のアミノ酸配列へのマッピングを説明する。
【図12A】図１２Ａ及び図１２Ｂは、３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）－ｍＲＮＡ構築物の筋肉内投与後の骨格筋におけるｍＲＮＡの発現を示す。図１２Ａは、３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）と複合体化されたルシフェラーゼをコードするｍＲＮＡの筋肉内投与後の５日間の時間経過にわたるマウスの蛍光画像を示す。図１２Ｂは、全てのピクセルにわたる平均放射輝度を定量する棒グラフを説明し、対照マウス（未処理）及び３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）－ｍＲＮＡ構築物を筋肉内投与したマウスの画像中の単一のマウスにおける蛍光を示す。
【図14】実施例７に記載される、８９Ｚｒ標識アイソタイプ対照、３Ｅ１０－ＷＴ、及び３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎ抗体の投与後の細胞質、膜、核タンパク質、及びｇＤＮＡ画分のヒストグラムを示す。
【図15】実施例８に記載される、１：１、２：１、５：１、１０：１、及び１００：１（３Ｅ１０：ｍＲＮＡ）のモル比で調製した、３Ｅ１０と１４ｋｂのヒトジストロフィンタンパク質をコードするｍＲＮＡとの間に形成された複合体を用いて行ったｍＲＮＡ保護アッセイのゲル電気泳動分析を示す。
【発明を実施するための形態】
【0019】
詳細な説明
本開示は、困難で高価な生産、限定されたパッケージング能力、及び有害な免疫学的事象に関連する従来のウイルスベース又はリポソームベースの送達方法論に依存しない、治療用ｍＲＮＡ分子をインビボで送達するための組成物及び方法を提供する。以下により詳細に記載されるいくつかの態様では、これらの組成物及び方法は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片を使用して、治療用ｍＲＮＡ分子をインビボで骨格筋組織に効率的に送達することができるという発見に少なくとも部分的に基づく。
本開示は、困難で高価な生産、限定されたパッケージング能力、及び有害な免疫学的事象に関連する従来のウイルスベース又はリポソームベースの送達方法論に依存しない、治療用ｍＲＮＡ分子をインビボで送達するための組成物及び方法を提供する。以下により詳細に記載されるいくつかの態様では、これらの組成物及び方法は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片を使用して、治療用ｍＲＮＡ分子をインビボで骨格筋組織に効率的に送達することができるという発見に少なくとも部分的に基づく。
【0020】
具体的には、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片が、細胞膜を横断してｍＲＮＡを細胞質に輸送するのに役立つことが発見された。したがって、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片を使用して、特に骨格筋組織へのｍＲＮＡの送達を増強するための組成物及び方法が提供される。
【0021】
定義
本開示で使用される用語は、単に特定の実施形態を説明するためのものであり、本発明を限定するようには意図されていない。発明を実施するための形態及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈が別途明確に示さない限り、複数形態も含むよう意図されている。本明細書で使用される「及び／又は」という用語が、関連する列記された品目のうちの１つ以上のありとあらゆる可能な組み合わせを指し、かつそれらを包含することも理解されるであろう。文脈が別途必要としない限り、本明細書で使用される場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語、又はそれらのあらゆる変形が、明記された特徴、整数、ステップ、動作、要素、及び／又は構成要素の存在を特定するが、１つ以上の他の特徴、整数、ステップ、動作、要素、構成要素、及び／又はそれらの群の存在又は追加を妨げないことが更に理解されるであろう。更に、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｗｉｔｈ）」という用語、又はそれらの変形物が、発明を実施するための形態及び／又は特許請求の範囲のいずれかで使用される限り、かかる用語は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語と同様の様式で包括的であるよう意図されている。
本開示で使用される用語は、単に特定の実施形態を説明するためのものであり、本発明を限定するようには意図されていない。発明を実施するための形態及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈が別途明確に示さない限り、複数形態も含むよう意図されている。本明細書で使用される「及び／又は」という用語が、関連する列記された品目のうちの１つ以上のありとあらゆる可能な組み合わせを指し、かつそれらを包含することも理解されるであろう。文脈が別途必要としない限り、本明細書で使用される場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語、又はそれらのあらゆる変形が、明記された特徴、整数、ステップ、動作、要素、及び／又は構成要素の存在を特定するが、１つ以上の他の特徴、整数、ステップ、動作、要素、構成要素、及び／又はそれらの群の存在又は追加を妨げないことが更に理解されるであろう。更に、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｗｉｔｈ）」という用語、又はそれらの変形物が、発明を実施するための形態及び／又は特許請求の範囲のいずれかで使用される限り、かかる用語は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語と同様の様式で包括的であるよう意図されている。
【0022】
本明細書における値の範囲の列挙は、本明細書に別途指示されない限り、その範囲内にある各々の別個の値を個別に参照する簡易的な方法としての役割を果たすよう単に意図されており、各々の別個の値は、本明細書に個別に列挙されているかのように本明細書に組み入れられる。
【0023】
「約」という用語の使用は、およそ±１０％の範囲内で明記された値を上回る値又は下回る値のいずれかの値を説明するよう意図されている。
【0024】
本明細書における「抗原結合ドメイン」又は「ＡＢＤ」とは、ポリペプチド配列の一部として存在する場合、本明細書で論じられるように標的抗原に特異的に結合する、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）のセットを意味する。したがって、「核酸結合ドメイン」は、本明細書に概説されるように核酸抗原に結合する。当該技術分野で知られているように、これらのＣＤＲは、概して、可変重鎖ＣＤＲ（ｖｈＣＤＲ又はＶＨＣＤＲ）の第１のセット及び可変軽鎖ＣＤＲ（ｖｌＣＤＲ又はＶＬＣＤＲ）の第２のセットとして存在し、各々、３つのＣＤＲ、重鎖の場合、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３、軽鎖の場合、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、及びｖｌＣＤＲ３を含む。ＣＤＲは、それぞれ、可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインに存在し、一緒にＦｖ領域を形成する。（ＣＤＲ番号付けスキームについては、表１及び上記の関連する論議を参照されたい）。したがって、いくつかの事例では、抗原結合ドメインの６つのＣＤＲは、可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインによって寄与される。「Ｆａｂ」形式では、６つのＣＤＲのセットは、２つの異なるポリペプチド配列、すなわち、可変重鎖ドメイン（ｖｈ又はＶＨ；ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、及びｖｈＣＤＲ３を含む）及び可変軽鎖ドメイン（ｖｌ又はＶＬ；ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、及びｖｌＣＤＲ３を含む）によって寄与され、ｖｈドメインのＣ末端が重鎖のＣＨ１ドメインのＮ末端に結合しており、ｖｌドメインのＣ末端が定常軽鎖ドメインのＮ末端に結合している（それ故に、軽鎖を形成する）。ｓｃＦｖ形式では、ｖｈドメイン及びｖｌドメインは、一般に、本明細書に概説されるようにリンカー（「ｓｃＦｖリンカー」）の使用により、単一のポリペプチド配列に共有結合しており、これは、（Ｎ末端から始まる）ｖｈ－リンカー－ｖｌ又はｖｌ－リンカー－ｖｈのいずれかとすることができ、前者が一般に好ましい（使用される形式に応じて、各々の側に任意選択的なドメインリンカーを含む）。一般に、ｓｃＦｖドメインのＣ末端は、第２のモノマー中のヒンジのＮ末端に結合している。
【0025】
当業者であれば理解するであろうように、ＣＤＲの正確な番号付け及び配置は、様々な番号付けシステム間で異なり得る。しかしながら、可変重鎖配列及び／又は可変軽鎖配列の開示が関連する（固有の）ＣＤＲの開示を含むことを理解されたい。したがって、各々の可変重鎖領域の開示は、ｖｈＣＤＲ（例えば、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、及びｖｈＣＤＲ３）の開示であり、各々の可変軽鎖領域の開示は、ｖｌＣＤＲ（例えば、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２及びｖｌＣＤＲ３）の開示である。ＣＤＲ番号付けに有用な比較は以下のとおりであり、Ｌａｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５－７７（２００３）を参照されたい。
【0026】
（表１）
【0027】
本明細書を通して、Ｋａｂａｔ番号付けシステムは、一般に、可変ドメイン中の残基（およそ、軽鎖可変領域の残基１～１０７及び重鎖可変領域の残基１～１１３）を参照する際に使用され、ＥＵ番号付けシステムは、一般に、Ｆｃ領域を参照する際に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，上記（１９９１））を参照する際に一般に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（上記参照）（１９９１））。ＥＵインデックス又はＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックス又はＥＵ番号付けスキームは、ＥＵ抗体の番号付けを指す。Ｋａｂａｔらは、重鎖及び軽鎖の可変領域の多数の一次配列を収集した。配列の保存の程度に基づいて、Ｋａｂａｔらは、個々の一次配列をＣＤＲ及びフレームワークに分類し、そのリストを作成した。内容が参照により本明細書に組み込まれる、ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ ＩＮＴＥＲＥＳＴ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｎｏ．９１－３２４２，Ｅ．Ａ．Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９６９，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ６３：７８－８５を参照されたい。修飾は、付加、欠失、又は置換とすることができる。
【0028】
本明細書で使用される「標的抗原」とは、所与の抗体の可変領域を含む抗原結合ドメインによって特異的に結合される分子を意味する。以下で論じられるように、本事例では、標的抗原は、核酸である。
【0029】
以下に記載されるように、いくつかの実施形態では、親ポリペプチド、例えば、Ｆｃ親ポリペプチドは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４由来の重鎖定常領域又はＦｃ領域などのヒト野生型配列であるが、バリアントを有するヒト配列は、「親ポリペプチド」として機能することもでき、例えば、米国公開第２００６／０１３４１０５号のＩｇＧ１／２ハイブリッドが挙げられ得る。本明細書におけるタンパク質バリアント配列は、好ましくは、親タンパク質配列と少なくとも約７５％の同一性、又は親タンパク質配列と少なくとも約８０％の同一性を有し、最も好ましくは、少なくとも約９０％の同一性、より好ましくは、少なくとも約９５％、又は少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書におけるタンパク質バリアント配列は、親タンパク質配列と少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％の配列同一性を有する。したがって、本明細書で使用される「抗体バリアント」又は「バリアント抗体」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾が親抗体とは異なる抗体を意味し、本明細書で使用される「ＩｇＧバリアント」又は「バリアントＩｇＧ」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾が親ＩｇＧ（この場合も、多くの場合、ヒトＩｇＧ配列）とは異なる抗体を意味し、本明細書で使用される「免疫グロブリンバリアント」又は「バリアント免疫グロブリン」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾が親免疫グロブリン配列のものとは異なる免疫グロブリン配列を意味する。本明細書で使用される「Ｆｃバリアント」又は「バリアントＦｃ」とは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のＦｃドメインと比較して、Ｆｃドメインにアミノ酸修飾を含むタンパク質を意味する。
【0030】
本明細書で使用される「アイソタイプ」とは、免疫グロブリンのサブクラスのうちのいずれかを意味し、これらは、それらの定常領域の化学的特性及び抗原的特性によって定義される。治療用抗体がアイソタイプ及び／又はサブクラスのハイブリッドも含み得ることを理解されたい。
【0031】
本明細書で使用される「Ｆａｂ」又は「Ｆａｂ領域」とは、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、及びＣＬ免疫グロブリンドメインを、一般に２つの異なるポリペプチド鎖上に含む（例えば、一方の鎖上にＶＨ－ＣＨ１を含み、他方の鎖上にＶＬ－ＣＬを含む）ポリペプチドを意味する。Ｆａｂとは、この領域を別個に指し得るか、又は本開示の抗体との関連でこの領域を指し得る。Ｆａｂとの関連で、Ｆａｂは、ＣＨ１ドメイン及びＣＬドメインに加えて、Ｆｖ領域を含む。
【0032】
本明細書で使用される「Ｆｖ」又は「Ｆｖ断片」又は「Ｆｖ領域」とは、ＡＢＤのＶＬドメイン及びＶＨドメインを含むポリペプチドを意味する。Ｆｖ領域は、Ｆａｂ（上で論じたように、一般に２つの異なるポリペプチド（上で概説した定常領域も含む））及びｓｃＦｖの両方としてフォーマットすることができ、ｖｌドメインとｖｈドメインが組み合わせられて、（一般に本明細書で論じたリンカーと）ｓｃＦｖを形成する。
【0033】
本明細書における「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」とは、可変軽鎖ドメインに共有結合した可変重鎖ドメインを意味し、一般に、本明細書で論じられるｓｃＦｖリンカーを使用して、ｓｃＦｖドメイン又はｓｃＦｖドメインを形成する。ｓｃＦｖドメインは、Ｎ末端からＣ末端のいずれか（ｖｈ－リンカー－ｖｌ又はｖｌ－リンカー－ｖｈ）の配向であり得る。配列表及び図に示される配列では、ｖｈドメイン及びｖｌドメインの順序は、名称に示され、例えば、Ｈ．Ｘ＿Ｌ．Ｙは、Ｎ末端からＣ末端へとｖｈ－リンカー－ｖｌを意味し、Ｌ．Ｙ＿Ｈ．Ｘは、ｖｌ－リンカー－ｖｈである。
【0034】
本明細書で使用される「Ｆｃ」又は「Ｆｃ領域」又は「Ｆｃドメイン」とは、ＩｇＧ分子のＣＨ２－ＣＨ３ドメインを含むポリペプチドを意味し、いくつかの事例では、ヒンジを含む。ヒトＩｇＧ１のＥＵ番号付けでは、ＣＨ２－ＣＨ３ドメインは、アミノ酸２３１～４４７を含み、ヒンジは、２１６～２３０である。したがって、「Ｆｃドメイン」の定義は、両方のアミノ酸２３１～４４７（ＣＨ２～ＣＨ３）又は２１６～４４７（ヒンジ－ＣＨ２～ＣＨ３）、又はその断片を含む。この文脈における「Ｆｃ断片」は、Ｎ末端及びＣ末端のいずれか又は両方由来のより少ない数のアミノ酸を含み得るが、一般にサイズ（例えば、非変性クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィーなど）に基づいて、標準の方法を使用して検出することができる別のＦｃドメイン又はＦｃ断片と二量体を形成する能力を依然として保持する。ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインは、本開示において特に有用なものであり、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４由来のＦｃドメインとすることができる。
【0035】
「バリアントＦｃドメイン」は、親Ｆｃドメインと比較してアミノ酸修飾を含む。したがって、「バリアントヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン」は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインと比較して、アミノ酸修飾（一般にアミノ酸置換であるが、切断バリアントの場合、アミノ酸欠失が含まれる）を含むものである。概して、バリアントＦｃドメインは、対応する親ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインと少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、又は約９９％の同一性を有する（以下で論じられる同一性アルゴリズムを使用し、一実施形態は、当該技術分野で既知のＢＬＡＳＴアルゴリズムを利用し、デフォルトパラメータを使用する）。あるいは、バリアントＦｃドメインは、親Ｆｃドメインと比較して、１～約２０個（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個）のアミノ酸修飾を有することができる。加えて、本明細書で論じられるように、本明細書のバリアントＦｃドメインは、非変性ゲル電気泳動などの本明細書に記載の既知の技法を使用して測定される、別のＦｃドメインと二量体を形成する能力を保持する。
【0036】
本明細書における「重鎖定常領域」とは、可変重鎖ドメインを除く抗体（又はその断片）のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３部分を意味し、ヒトＩｇＧ１のＥＵ番号付けでは、これは、アミノ酸１１８～４４７である。本明細書における「重鎖定常領域断片」とは、Ｎ末端及びＣ末端のいずれか又は両方由来のより少ない数のアミノ酸を含むが、別の重鎖定常領域と二量体を形成する能力を依然として保持する重鎖定常領域を意味する。
【0037】
本明細書で使用される「可変領域」又は「可変ドメイン」とは、それぞれ、カッパ、ラムダ、及び重鎖免疫グロブリン遺伝子座を構成する、Ｖκ、Ｖλ、及び／又はＶＨ遺伝子のうちのいずれかによって実質的にコードされる１つ以上のＩｇドメインを含み、かつ抗原特異性を付与するＣＤＲを含む、免疫グロブリンの領域を意味する。したがって、「可変重鎖ドメイン」は、「可変軽鎖ドメイン」と対になって、抗原結合ドメイン（「ＡＢＤ」）を形成する。加えて、各々の可変ドメインは、以下の順序：ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端へと配置される、３つの超可変領域（「相補的決定領域」、「ＣＤＲ」）（可変重鎖ドメインの場合、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、及びｖｈＣＤＲ３、可変軽鎖ドメインの場合、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、及びｖｌＣＤＲ３）並びに４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。
【0038】
本明細書で使用される「ＩｇＧサブクラス修飾」又は「アイソタイプ修飾」とは、１つのＩｇＧアイソタイプの１つのアミノ酸を、異なる整列したＩｇＧアイソタイプの対応するアミノ酸に変換するアミノ酸修飾を意味する。例えば、ＥＵの２９６位にＩｇＧ１がチロシンを含み、ＩｇＧ２がフェニルアラニンを含むため、ＩｇＧ２におけるＦ２９６Ｙ置換は、ＩｇＧサブクラス修飾とみなされる。
【0039】
本明細書で使用される「非天然型修飾」とは、アイソタイプではないアミノ酸修飾を意味する。例えば、ヒトＩｇＧのいずれも４３４位にセリンを含まないため、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４における４３４Ｓは、非天然型修飾とみなされる。
【0040】
本開示の抗体は、概して、単離されているか、又は組み換えである。「単離された」とは、本明細書に開示される様々なポリペプチドを説明するために使用される場合、ポリペプチドが発現された細胞又は細胞培養物から特定及び分離された並びに／又は回収された当該ポリペプチドを意味する。通常、単離されたポリペプチドは、少なくとも１つの精製ステップによって調製される。「単離された抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指す。「組換え」とは、組換え核酸技法を使用して抗体が外因性宿主細胞に生成され、それらを単離することもできることを意味する。
【0041】
本明細書で使用される場合、「細胞透過性抗体」という用語は、生きている哺乳動物細胞の細胞質及び／又は核中に輸送される、それに基づく免疫グロブリンタンパク質、その断片、そのバリアント、又は融合タンパク質を指す。「細胞透過性抗ＤＮＡ抗体」は、ＤＮＡ（例えば、一本鎖及び／又は二本鎖ＤＮＡ）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、担体又は共役体の助けを借りずに細胞の細胞質中に輸送される。他の実施形態では、抗体は、細胞透過性ペプチドなどの細胞透過性部分に共役される。いくつかの実施形態では、細胞透過性抗体は、担体又は共役体あり又はなしで核中に輸送される。
【0042】
本明細書における「骨格筋ポリペプチド」とは、骨格筋疾患、例えば、骨格筋疾患をもたらす変異が存在する、タンパク質又はそのポリペプチド鎖に遺伝的に関連した、タンパク質又はそのポリペプチド鎖と実質的に類似した構造及び機能を有するポリペプチドを意味する。「骨格筋ポリペプチド」という用語は、骨格筋タンパク質の野生型バージョン及びそのポリペプチド鎖、骨格筋タンパク質の天然型バリアントバージョン及びそのポリペプチド鎖、並びに骨格筋タンパク質の操作型バージョン及びそのポリペプチド鎖を包含する。骨格筋ポリペプチドは、骨格筋タンパク質又はそのポリペプチド鎖の様々な相同体を含むが、これらに限定されない、骨格筋疾患に遺伝的に関連した、タンパク質又はそのポリペプチド鎖における変異によって失われた機能を部分的に又は完全にレスキューする機能を有するタンパク質及びそのポリペプチド鎖を包含するようにも意図されている。
【0043】
本明細書における「修飾」とは、ポリペプチド配列におけるアミノ酸置換、挿入、及び／又は欠失を意味する。
【0044】
本明細書で使用される「バリアントタンパク質」又は「タンパク質バリアント」又は「バリアント」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾が親タンパク質のものとは異なるタンパク質を意味する。タンパク質バリアントは、親タンパク質と比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾を有するが、バリアントタンパク質が以下に記載のものなどのアライメントプログラムを使用して親タンパク質と整列しないほど多くは有しない。一般に、バリアントタンパク質（本明細書に概説されるバリアントＦｃドメインなどは、概して、ＢＬＡＳＴなどの以下に記載のアライメントプログラムを使用して、親タンパク質と少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％同一である。
【0045】
２つの類似した配列（例えば、抗体可変ドメイン）間の配列同一性は、Ｓｍｉｔｈ，Ｔ．Ｆ．＆ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ｍ．Ｓ．（１９８１）“Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ Ｏｆ Ｂｉｏｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，”Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２［局所相同性アルゴリズム］、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．＆ Ｗｕｎｓｃｈ，ＣＤ．（１９７０）“Ａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｅｔｈｏｄ Ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ Ｔｏ Ｔｈｅ Ｓｅａｒｃｈ Ｆｏｒ Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ Ｉｎ Ｔｈｅ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｏｆ Ｔｗｏ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４３［相同性アライメントアルゴリズム］、Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｗ．Ｒ．＆ Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．（１９８８）“Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｔｏｏｌｓ Ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８５：２４４４［類似性方法の検索］、又はＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ，（１９９０）“Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ，”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０のアルゴリズムなどのアルゴリズムにより測定することができ、「ＢＬＡＳＴ」アルゴリズムについては、ＵＲＬのウェブサイトｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉを参照されたい。前述のアルゴリズムのうちのいずれかを使用する場合、デフォルトパラメータ（ウィンドウ長、ギャップペナルティなど）が使用される。別途明記されない限り、配列同一性は、デフォルトパラメータを使用するＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用して決定される。
【0046】
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、投与の標的である任意の個体を意味する。対象は、脊椎動物、例えば、哺乳動物とすることができる。したがって、対象は、ヒトとすることができる。この用語は、特定の年齢又は性別を意味しない。
【0047】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、使用される組成物の量が、疾患又は障害の１つ以上の原因又は症状を寛解させるのに十分な量のものであることを意味する。かかる寛解は、軽減又は変化のみを必要とし、必ずしも除去を必要としない。正確な投薬量は、様々な要因、例えば、対象依存的可変要因（例えば、年齢、免疫系の健康状態など）、治療されている疾患又は障害、並びに投与経路及び投与されている薬剤の薬物動態によって変動するであろう。
【0048】
本明細書で使用される場合、「担体」又は「賦形剤」という用語は、１つ以上の活性成分が組み合わせられる、製剤中の有機又は無機成分、天然又は合成不活性成分を指す。担体又は賦形剤は、当業者に周知であろうように、有効成分の分解を最小限に抑えるか、又は対象における有害な副作用を最小限に抑えるように必然的に選択されるであろう。
【0049】
本明細書で使用される場合、「治療する」という用語は、疾患、病理学的状態、又は障害を治癒する、寛解させる、安定させる、又は予防することを意図した患者の医療管理を指す。この用語は、能動的治療、すなわち、疾患、病理学的状態、又は障害の改善を特に目的とした治療を含み、原因治療、すなわち、関連する疾患、病理学的状態、又は障害の原因の除去を目的とした治療も含む。加えて、この用語は、緩和的治療、すなわち、疾患、病理学的状態、又は障害の治癒ではなく、症状の軽減のために設計された治療、予防的治療、すなわち、関連する疾患、病理学的状態、又は障害の発生を最小限に抑える、又は部分的に若しくは完全に阻止することを目的とした治療、及び支持的治療、すなわち、関連する疾患、病理学的状態、又は障害の改善を目的とした別の特定の療法を補足するために用いられる治療を含む。
【0050】
本明細書で使用される場合、「遺伝性骨格筋疾患」という用語は、主に骨格筋組織に影響を及ぼす遺伝的根拠を有する障害を指す。遺伝性ミオパチーは、筋肉構造及び機能において機能するタンパク質をコードする様々な遺伝子の変異によって引き起こされる。遺伝性ミオパチーは、典型的には、骨格筋の衰弱及び筋緊張低下として現れる。異なるタイプの遺伝性ミオパチーの非限定的な例は、表２に提供される。
【0051】
３Ｅ１０抗体、そのバリアント、及びその断片
いくつかの態様では、本開示は、対象における骨格筋組織に治療用ｍＲＮＡ分子を送達するための、例えば、遺伝性骨格筋疾患を治療するための、３Ｅ１０抗体及びその誘導体の使用に関する。以下で論じられるように、抗体という用語は一般に使用される。本開示で使用される抗体は、様々な実施形態で本明細書に記載される、伝統的な抗体、並びに抗体誘導体、断片、及び模倣物を含む、本明細書に記載のいくつかの形式をとる。
いくつかの態様では、本開示は、対象における骨格筋組織に治療用ｍＲＮＡ分子を送達するための、例えば、遺伝性骨格筋疾患を治療するための、３Ｅ１０抗体及びその誘導体の使用に関する。以下で論じられるように、抗体という用語は一般に使用される。本開示で使用される抗体は、様々な実施形態で本明細書に記載される、伝統的な抗体、並びに抗体誘導体、断片、及び模倣物を含む、本明細書に記載のいくつかの形式をとる。
【0052】
伝統的な抗体構造単位は、典型的には、四量体を含む。四量体は各々、典型的には、ポリペプチド鎖の２つの同一の対で構成されており、各々の対は、１つの「軽鎖」（典型的には、約２５ｋＤａの分子量を有する）及び１つの「重鎖」（典型的には、約５０～７０ｋＤａの分子量を有する）を有する。ヒト軽鎖は、カッパ軽鎖及びラムダ軽鎖に分類される。本開示は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含むが、これらに限定されない、いくつかのサブクラスを有するＩｇＧクラスに一般に基づく抗体を対象とする。一般に、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４は、ＩｇＧ３よりも頻繁に使用される。ＩｇＧ１が３５６（Ｄ又はＥ）及び３５８（Ｌ又はＭ）に多型を有する異なるアロタイプを有することに留意されたい。
【0053】
軽鎖は、一般に、可変軽鎖ドメイン（軽鎖ＣＤＲを含み、可変重鎖ドメインと一緒にＦｖ領域を形成する）及び定常軽鎖領域（多くの場合、ＣＬ又はＣκと称される）の２つのドメインを含む。重鎖は、可変重鎖ドメイン及び定常ドメインを含み、ＣＨ２－ＣＨ３を含むＣＨ１－任意選択的ヒンジ－Ｆｃドメインを含む。
【0054】
抗体の超可変領域は、概して、軽鎖可変領域内のアミノ酸残基約２４～３４（ＬＣＤＲ１、「Ｌ」は軽鎖を意味する）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９～９７（ＬＣＤＲ３）、並びに重鎖可変領域内の約３１～３５Ｂ（ＨＣＤＲ１、「Ｈ」は重鎖を意味する）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）由来のアミノ酸残基（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ ＩＮＴＥＲＥＳＴ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））、並びに／又は超可変ループを形成する残基（例えば、軽鎖可変領域内の残基２６～３２（ＬＣＤＲ１）、５０～５２（ＬＣＤＲ２）、及び９１～９６（ＬＣＤＲ３）、並びに重鎖可変領域内の２６～３２（ＨＣＤＲ１）、５３～５５（ＨＣＤＲ２）、及び９６～１０１（ＨＣＤＲ３）（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７）を包含する。本明細書に記載の組成物及び方法に有用な特定のＣＤＲが以下に記載される。
【0055】
当業者であれば理解するであろうように、ＣＤＲの正確な番号付け及び配置は、様々な番号付けシステム間で異なり得る。しかしながら、可変重鎖配列及び／又は可変軽鎖配列の開示が関連する（固有の）ＣＤＲの開示を含むことを理解されたい。したがって、各々の可変重鎖領域の開示は、ｖｈＣＤＲ（例えば、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、及びｖｈＣＤＲ３）の開示であり、各々の可変軽鎖領域の開示は、ｖｌＣＤＲ（例えば、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２及びｖｌＣＤＲ３）の開示である。ＣＤＲ番号付けに有用な比較は、Ｌａｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５－７７（２００３）に記載されている。
【0056】
本明細書を通して、Ｋａｂａｔ番号付けシステムは、一般に、可変ドメイン中の残基（およそ、軽鎖可変領域の残基１～１０７及び重鎖可変領域の残基１～１１３）を参照する際に使用され、ＥＵ番号付けシステムは、一般に、Ｆｃ領域を参照する際に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，上記（１９９１））を参照する際に一般に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（上記参照）（１９９１））。
【0057】
本開示は、多数の異なるＣＤＲセットを提供する。この事例では、「完全ＣＤＲセット」は、３つの可変軽鎖及び３つの可変重鎖ＣＤＲ、例えば、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、ｖｌＣＤＲ３、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２、及びｖｈＣＤＲ３を含む。これらは、丁重に、より大きい可変軽鎖ドメイン又は可変重鎖ドメインの一部とすることができる。加えて、本明細書により完全に概説されるように、可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは、重鎖及び軽鎖が使用される場合（例えば、Ｆａｂが使用される場合）、別個のポリペプチド鎖上に存在することができるか、又はｓｃＦｖ配列の場合、単一のポリペプチド鎖上に存在することができる。
【0058】
ＣＤＲは、抗体の抗原結合部位、より具体的には、エピトープ結合部位の形成に寄与する。「エピトープ」とは、パラトープとして既知の抗体分子の可変領域内の特定の抗原結合部位と相互作用する決定基を指す。エピトープは、核酸、アミノ酸、又は糖側鎖などの分子のグループ分けであり、通常、特定の構造特性、並びに特定の電荷特性を有する。単一の抗原は、２つ以上のエピトープを有し得る。本明細書に記載の抗体は、部分的に配列非依存的な様式で核酸エピトープに結合する。すなわち、本明細書に記載の抗体が他の核酸構造及び配列よりも高い親和性でいくつかのポリヌクレオチド構造及び配列に結合する一方で、それらはポリヌクレオチドに対していくらかの一般的な親和性を有する。
【0059】
重鎖の「Ｆｃドメイン」は、－ＣＨ２－ＣＨ３ドメイン、及び任意選択的にヒンジドメイン（－Ｈ－ＣＨ２－ＣＨ３）を含む。ＩｇＧの場合、Ｆｃドメインは、免疫グロブリンドメインＣＨ２及びＣＨ３（Ｃγ２及びＣγ３）、並びにＣＨ１（Ｃγ１）とＣＨ２（Ｃγ２）との間の下部ヒンジ領域を含む。Ｆｃ領域の境界が変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、そのカルボキシル末端に残基Ｃ２２６又はＰ２３０を含むように規定され、番号付けは、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従う。したがって、ＩｇＧとの関連での「ＣＨ」ドメイン、は以下のとおりである。「ＣＨ１」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従う１１８～２１５位を指す。「ヒンジ」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従う２１６～２３０位を指す。「ＣＨ２」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従う２３１～３４０位を指し、「ＣＨ３」は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従う３４１～４４７位を指す。したがって、「Ｆｃドメイン」は、－ＣＨ２－ＣＨ３ドメイン、及び任意選択的にヒンジドメイン（ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）を含む。本明細書における実施形態では、ｓｃＦｖがＦｃドメインに結合している場合、Ｆｃドメインのヒンジの全て又は一部に結合しているのは、一般にｓｃＦｖ構築物のＣ末端であり、例えば、これは、一般に、ヒンジの始まりである配列ＥＰＫＳに結合している。いくつかの実施形態では、以下により完全に記載されるように、アミノ酸修飾は、例えば、１つ以上のＦｃγＲ受容体又はＦｃＲｎ受容体への結合を変化させ、かつ本明細書に概説されるように、ヘテロ二量体の形成及び精製を可能にするために、Ｆｃ領域に対して行われる。
【0060】
重鎖の別の部分は、ヒンジ領域である。本明細書における「ヒンジ」又は「ヒンジ領域」又は「抗体ヒンジ領域」又は「ヒンジドメイン」とは、抗体の第１の定常ドメインと第２の定常ドメインとの間にアミノ酸を含む可動性ポリペプチドを意味する。構造的に、ＩｇＧ ＣＨ１ドメインは、ＥＵの２１５位で終了し、ＩｇＧ ＣＨ２ドメインは、残基のＥＵの２３１位で開始する。したがって、ＩｇＧの場合、抗体ヒンジは、本明細書において、２１６位（ＩｇＧ１におけるＥ２１６）～２３０位（ＩｇＧ１におけるｐ２３０）を含むと定義され、番号付けは、ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックスに従う。いくつかの事例では、ヒンジドメインのＮ末端及びＣ末端のいずれか又は両方により少ないアミノ酸を含む「ヒンジ断片」が使用される。
【0061】
ｓｃＦｖは、可変重鎖、ｓｃＦｖリンカー、及び可変軽鎖ドメインを含む。本明細書に概説される構築物及び配列の多くでは、可変重鎖のＣ末端は、ｓｃＦｖリンカーのＮ末端に結合しており、そのＣ末端は、可変軽鎖のＮ末端に結合している（Ｎ－ｖｈ－リンカー－ｖｌ－Ｃ）が、切り替えることができる（Ｎ－ｖｌ－リンカー－ｖｈ－Ｃ）。
【0062】
したがって、本開示は、異なる抗体ドメインに関する。本明細書に記載され、かつ当該技術分野で知られているように、本開示のある特定の実施形態に記載されるヘテロ二量体抗体は、重鎖及び軽鎖内に異なるドメインを含み、それらドメインは重複している可能性もある。これらのドメインには、Ｆｃドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ヒンジドメイン、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－Ｆｃドメイン又はＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）、可変重鎖ドメイン、可変軽鎖ドメイン、軽鎖定常ドメイン、Ｆａｂドメイン、及びｓｃＦｖドメインが含まれるが、これらに限定されない。
【0063】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体は、特定の生殖系列重鎖免疫グロブリン遺伝子由来の重鎖可変領域及び／又は特定の生殖系列軽鎖免疫グロブリン遺伝子由来の軽鎖可変領域を含む。例えば、かかる抗体は、特定の生殖系列配列、例えば、３Ｅ１０抗体の生殖系列配列「の産物」である又はそれ「に由来」する、重鎖可変領域又は軽鎖可変領域を含むヒト抗体を含み得る又はそれからなり得る。ヒト生殖系列免疫グロブリン配列「の産物」である又はそれ「に由来」するヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列をヒト生殖系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較し、ヒト抗体の配列に最も近い（すなわち、最大％同一性）配列であるヒト生殖系列免疫グロブリン配列を選択することによって（本明細書に概説される方法を使用して）、そのように特定することができる。特定のヒト生殖系列免疫グロブリン配列「の産物」である又はそれ「に由来」するヒト抗体は、例えば、天然に存在する体細胞変異又は部位特異的変異の意図的な導入に起因して、生殖系列配列と比較してアミノ酸差異を含み得る。しかしながら、ヒト化抗体は、典型的には、ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とアミノ酸配列が少なくとも９０％同一であり、かつ他の種の生殖系列免疫グロブリンアミノ酸配列（例えば、マウス生殖系列配列）と比較して、抗体をヒト配列に由来すると特定するアミノ酸残基を含む。ある特定の事例では、ヒト化抗体は、生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列とアミノ酸配列が少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％、又は更には少なくとも９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であり得る。典型的には、特定のヒト生殖系列配列に由来するヒト化抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と１０～２０個以下のアミノ酸差異を提示する。ある特定の事例では、ヒト化抗体は、生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と５個以下、又は４個以下、３個以下、２個以下、又は１個以下のアミノ酸差異を提示し得る。
【0064】
一実施形態では、親抗体は、当該技術分野で知られているように、親和性成熟している。構造ベースの方法は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＵＳＳＮ １１／００４，５９０に記載のヒト化及び親和性成熟に用いられ得る。全て参照により本明細書に組み込まれる、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９４：１５１－１６２、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１６）：１０６７８－１０６８４、Ｒｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（３７）：２２６１１－２２６１８、Ｒａｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：８９１０－８９１５、Ｋｒａｕｓｓ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １６（１０）：７５３－７５９に記載の方法を含むが、これらに限定されない、選択ベースの方法を用いて、抗体可変領域をヒト化する及び／又は親和性成熟させることができる。全て参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳＳＮ ０９／８１０，５１０、Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９－１１２５、Ｄｅ Ｐａｓｃａｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６－３０８４に記載の方法を含むが、これらに限定されない、他のヒト化方法は、ＣＤＲの部分のみをグラフトすることを含み得る。
【0065】
いくつかの態様では、本開示は、核酸に結合し、かつ３Ｅ１０抗体に由来するｍＲＮＡ分子に特異的に結合する抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）の使用に関する。親３Ｅ１０抗体の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列が図１に示される。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片を含む。
【0066】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、図１に示される親３Ｅ１０抗体に対応するＣＤＲ配列を含む。したがって、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１（配列番号９）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１（配列番号３）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
【0067】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、図２に示されるように、ＶＨ ＣＤＲ１にＤ３１Ｎアミノ酸置換を含むバリアント３Ｅ１０抗体由来のＣＤＲ配列を含む。したがって、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合性断片は、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１＿Ｄ３１Ｎ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２＿Ｄ３１Ｎ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３＿Ｄ３１Ｎ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１＿Ｄ３１Ｎ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２＿Ｄ３１Ｎ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３＿Ｄ３１Ｎ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
【0068】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、任意選択的にＶＨ ＣＤＲ１にＤ３１Ｎアミノ酸置換を含む、図１に示される親３Ｅ１０抗体に対応するＣＤＲ配列を指す。したがって、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１（配列番号９）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１ａ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
【0069】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、図１に示される親３Ｅ１０抗体に対応するＣＤＲ配列を含み、１つ以上のＣＤＲに既知のアミノ酸置換を有する。例えば、図２Ｂは、いくつかの既知のＶＨ ＣＤＲ２、ＶＬ ＣＤＲ１、及びＶＬ ＣＤＲ２アミノ酸配列のアミノ酸配列を示す。したがって、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合性断片は、ＶＨ ＣＤＲ２の５位のＧからＳへの置換、ＶＨ ＣＤＲ２の１４位のＴからＳへの置換、ＶＬ ＣＤＲ１の５位のＳからＴへの置換、ＶＬ ＣＤＲ１の１４位のＭからＬへの置換、ＶＬ ＣＤＲ１の１５位のＨからＡへの置換、及びＶＬ ＣＤＲ２の６位のＥからＱへの置換から選択される、親３Ｅ１０（図１に示される）又は３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２に示される）のＣＤＲ配列と比較して１つ以上のアミノ酸置換を含む。
【0070】
したがって、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２．１（配列番号２６）又は３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２．２（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）のＣＤＲと比較して、又は３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）と比較して、１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び３を更に含む。
【0071】
同様に、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１．１（配列番号２８）又は３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１．２（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）に従うＶＬ ＣＤＲ２及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）に従うＶＬ ＣＤＲ２及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）のＣＤＲと比較して、又は３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）と比較して、１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＬ ＣＤＲ２及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。
【0072】
同様に、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２．１（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）のＣＤＲと比較して、又は３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）と比較して、１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＬ ＣＤＲ１及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。
【0073】
上述のアミノ酸置換のうちのいくつか、例えば、ＶＬ ＣＤＲ１の５位のＳからＴへの置換がかなり保存的な置換である一方で、他の置換、例えば、ＶＬ ＣＤＲ１の１４位のＭからＬへの置換、ＶＬ ＣＤＲ１の１５位のＨからＡへの置換、及びＶＬ ＣＤＲ２の６位のＥからＱへの置換は、非常に異なる特性を有するアミノ酸へのものである。これは、理論に拘束されることなく、３Ｅ１０ ＣＤＲフレームワーク内の少なくともこれらの位置が他のアミノ酸置換に対して耐性を示すことを示唆する。
【0074】
したがって、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２．３（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、例えば、本明細書に記載されるように、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）のＣＤＲと比較して、又は３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）と比較して、１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び３を更に含む。
【0075】
同様に、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１．３（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）に従うＶＬ ＣＤＲ２及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）に従うＶＬ ＣＤＲ２及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、例えば、本明細書に記載されるように、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）のＣＤＲと比較して、又は３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）と比較して、１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＬ ＣＤＲ２及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。
【0076】
同様に、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２．２（配列番号３３）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、例えば、本明細書に記載されるように、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）のＣＤＲと比較して、又は３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）と比較して、１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＬ ＣＤＲ１及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。
【0077】
更に、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片が、部分的に配列非依存的な様式で核酸に結合するため、理論に拘束されることなく、この相互作用がヌクレオチド骨格との静電的相互作用によって媒介され得ることが企図された。この理論を調査するために、図１１Ａ及び図１１Ｂに示されるように、３Ｅ１０－ｓｃＦｖ構築物の分子モデルの静電表面電位レンダリングを生成し、そのアミノ酸配列は図１１Ｃに説明されている。これらのモデルは、図１１Ａに説明されるように、分子の表面上の大きな塩基性領域に対応する推定核酸結合ポケット（ＮＡＢ１）を明らかにした。このモデルにおける推定核酸結合ポケットに寄与するアミノ酸の非水素原子の位置が図１１Ｂに重ね合わせられており、アミノ酸残基が図１１Ｃの構築物の配列上にマッピングされている。
【0078】
したがって、この推定核酸結合ポケットの静電特性を維持する、本明細書に記載の３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片のＣＤＲ内のアミノ酸置換が、構築物の核酸結合特性も保持することが企図される。したがって、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、第１の塩基性アミノ酸から第２の塩基性アミノ酸への１つ以上のアミノ酸置換（例えば、Ｋ、Ｒ、又はＨ）を含む。同様に、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、第１の酸性アミノ酸から第２の酸性アミノ酸への１つ以上のアミノ酸置換（例えば、Ｄ又はＥ）を含む。かかる電荷保存バリアント３Ｅ１０ ＣＤＲの例が図３に示される。
【0079】
したがって、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１．ｃ１（配列番号３４）、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１．ｃ２（配列番号３５）、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１．ｃ３（配列番号３６）、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１．ｃ４（配列番号３７）、又は３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１．ｃ５（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ２及び３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、例えば、本明細書に記載されるように、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）のＣＤＲと比較して１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び３を更に含む。
【0080】
同様に、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２．ｃ１（配列番号３９）、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２．ｃ２（配列番号４０）、又は３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２．ｃ３（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、例えば、本明細書に記載されるように、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）のＣＤＲと比較して１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び３を更に含む。
【0081】
同様に、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３．ｃ１（配列番号４２）、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３．ｃ２（配列番号４３）、又は３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３．ｃ３（配列番号４４）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び２を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び２を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、例えば、本明細書に記載されるように、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）のＣＤＲと比較して１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び２を更に含む。
【0082】
同様に、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１．ｃ１（配列番号４５）、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１．ｃ２（配列番号４６）、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１．ｃ３（配列番号４７）、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１．ｃ４（配列番号４８）、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１．ｃ５（配列番号４９）、又は３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１．ｃ６（配列番号５０）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）に従うＶＬ ＣＤＲ２及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）に従うＶＬ ＣＤＲ２及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、例えば、本明細書に記載されるように、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）のＣＤＲと比較して１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＬ ＣＤＲ２及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。
【0083】
同様に、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２．ｃ１（配列番号５１）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、例えば、本明細書に記載されるように、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）のＣＤＲと比較して１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＬ ＣＤＲ１及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。
【0084】
同様に、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３．ｃ１（配列番号５２）、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３．ｃ２（配列番号５３）、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３．ｃ３（配列番号５４）、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３．ｃ４（配列番号５５）、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３．ｃ５（配列番号５６）、又は３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３．ｃ６（配列番号５７）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１及び２並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１及び２並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、例えば、本明細書に記載されるように、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）のＣＤＲと比較して１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＬ ＣＤＲ１及び２並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。
【0085】
本明細書に記載の３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、上述の３Ｅ１０ ＣＤＲアミノ酸置換の任意の組み合わせを含むことも企図される。本明細書に記載のアミノ酸置換のうちの１つ以上を組み込む３Ｅ１０バリアントＣＤＲ配列の例が図４に示される。
【0086】
したがって、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１ｍ（配列番号５８）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ２及び３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、例えば、本明細書に記載されるように、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）のＣＤＲと比較して１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び３を更に含む。
【0087】
同様に、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２ｍ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、例えば、本明細書に記載されるように、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）のＣＤＲと比較して１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び３を更に含む。
【0088】
同様に、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３ｍ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び２を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び２を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、例えば、本明細書に記載されるように、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）のＣＤＲと比較して１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＬ ＣＤＲ１～３並びにＶＨ ＣＲＤ１及び２を更に含む。
【0089】
同様に、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１ｍ（配列番号６１）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）に従うＶＬ ＣＤＲ２及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）に従うＶＬ ＣＤＲ２及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、例えば、本明細書に記載されるように、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）のＣＤＲと比較して１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＬ ＣＤＲ２及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。
【0090】
同様に、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２ｍ（配列番号６２）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、例えば、本明細書に記載されるように、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）のＣＤＲと比較して１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＬ ＣＤＲ１及び３並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。
【0091】
同様に、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３ｍ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１及び２並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎバリアント（図２Ａに示される）に従うＶＬ ＣＤＲ１及び２並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、例えば、本明細書に記載されるように、親３Ｅ１０抗体（図１に示される）のＣＤＲと比較して１つ以上のアミノ酸置換を有するＶＬ ＣＤＲ１及び２並びにＶＨ ＣＲＤ１～３を更に含む。
【0092】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合性断片は、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１ｍ（配列番号６１）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２ｍ（配列番号６２）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３ｍ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１ｍ（配列番号５８）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２ｍ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３ｍ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
【0093】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合性断片は、任意選択的にＶＨ ＣＤＲ１にＤ３１Ｎアミノ酸置換を含む、図１に示される親３Ｅ１０抗体と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有するＣＤＲ配列を指す。したがって、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１（配列番号９）と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２（配列番号１０）と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３（配列番号１１）と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１ａ（配列番号１６）と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２（配列番号４）と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３（配列番号５）と比較して１つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
【0094】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合性断片は、任意選択的にＶＨ ＣＤＲ１にＤ３１Ｎアミノ酸置換を含む、図１に示される親３Ｅ１０抗体と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するＣＤＲ配列を指す。したがって、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ１（配列番号９）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ２（配列番号１０）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、３Ｅ１０－ＶＬ－ＣＤＲ３（配列番号１１）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ１ａ（配列番号１６）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１、３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ２（配列番号４）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、及び３Ｅ１０－ＶＨ－ＣＤＲ３（配列番号５）と比較して２つ以下のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。
【0095】
３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の他のバリアントも、例えば、Ｚａｃｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５７（５）：２０８２－８（１９９６）に開示されているように、当該技術分野で既知である。例えば、３Ｅ１０の重鎖可変領域のアミノ酸３１位は、核を透過してＤＮＡに結合する抗体及びその断片の能力に影響を及ぼすと決定されている（配列番号１３及び配列番号１４に太字で示されている）。ＣＤＲ１におけるＤ３１Ｎ変異（配列番号２及び配列番号１３に太字で示されている）は、核を透過し、元の抗体よりもはるかに高い効率でＤＮＡに結合する（Ｚａｃｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，７２：５１３－５２０（１９９４）、Ｗｅｉｓｂａｒｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．，１１，５３９－５４６（１９９８）、Ｗｅｉｓｂａｒｔ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．，２５，１８６７－１８７３（２００４））。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｄ３１Ｎ置換を有する。
【0096】
本明細書において概して「３Ｅ１０」又は「３Ｅ１０抗体」と称されているが、断片及び結合タンパク質、例えば、抗原結合断片、バリアント、並びに融合タンパク質、例えば、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ、ｔｒ－ｓｃＦｖ、及び他の単鎖可変断片、並びに本明細書に開示される他の細胞透過性核酸輸送分子が、この語句によって包含され、本明細書に開示される組成物及び方法における使用のために明示的に提供されることが理解されるであろう。したがって、抗体及び他の結合タンパク質は、本明細書において細胞透過性とも称される。
【0097】
好ましい実施形態では、３Ｅ１０抗体は、担体又は共役体の助けを借りずに細胞の細胞質及び／又は核中に輸送される。例えば、細胞傷害効果なしで哺乳動物細胞の核にインビボで輸送されるモノクローナル抗体３Ｅ１０及びその活性断片は、Ｒｉｃｈａｒｄ Ｗｅｉｓｂａｒｔの米国特許第４，８１２，３９７号及び同第７，１８９，３９６号に開示されている。
【0098】
本明細書に記載の組成物及び方法に有用な抗体は、任意のクラスの全免疫グロブリン（即ち、インタクトな抗体）、その断片、及び少なくとも抗体の抗原結合可変ドメインを含む合成タンパク質を含む。可変ドメインは、抗体間で配列が異なり、その特定の抗原に対する各々の特定の抗体の結合及び特異性に使用される。しかしながら、可変性は、通常、抗体の可変ドメインを通して均等に分布しない。それは、典型的には、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインの両方における相補性決定領域（ＣＤＲ）又は超可変領域と呼ばれる３つのセグメント中に凝縮されている。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、４つのＦＲ領域を含み、ベータシート構造を接続し、かついくつかの事例ではベータシート構造の一部を形成するループを形成する、３つのＣＤＲによって接続されたベータシート構成を主に採用している。各鎖中のＣＤＲは、ＦＲ領域によって他方の鎖由来のＣＤＲとごく近接して一緒に保持され、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。したがって、本抗体は、典型的には、ＤＮＡ結合を維持する及び／又はＤＮＡ修復を妨害するのに必要な少なくともこれらのＣＤＲを含む。
【0099】
３Ｅ１０抗体は、典型的には、３Ｅ１０と同じ又は異なるエピトープに結合するモノクローナル３Ｅ１０、又はそのバリアント、誘導体、断片、融合、若しくはヒト化形態である。
【0100】
モノクローナル抗体３Ｅ１０を産生するハイブリドーマ細胞株のブダペスト条約の条件に従う寄託は、２０００年９月６日に受領され、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１１０－２２０９，ＵＳＡにより承認され、特許寄託番号ＰＴＡ－２４３９が与えられた。
【0101】
したがって、本抗体は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ２４３９ハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体３Ｅ１０と同じ又は異なるエピトープ特異性を有し得る。本抗体は、モノクローナル抗体３Ｅ１０のパラトープを有することができる。本抗体は、３Ｅ１０の一本鎖可変断片、又はそのバリアント、例えば、その保存的バリアントとすることができる。例えば、本抗体は、３Ｅ１０の一本鎖可変断片（３Ｅ１０ Ｆｖ）、又はそのバリアントとすることができる。
【0102】
加えて、又はあるいは、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）は、ＩＭＧＴシステムに従って定義することができる。ＩＭＧＴシステムによって特定される相補性決定領域（ＣＤＲ）は、ＣＤＲ Ｈ１．３（元の配列）：ＧＦＴＦＳＤＹＧ（配列番号９９）、ＣＤＲ Ｈ１．４（Ｄ３１Ｎ変異を有する）：ＧＦＴＦＳＮＹＧ（配列番号１００）、ＣＤＲ Ｈ２．２：ＩＳＳＧＳＳＴＩ（配列番号１０１）及びバリアントＩＳＳＳＳＳＴＩ（配列番号１０２）、ＣＤＲ Ｈ３．２：ＡＲＲＧＬＬＬＤＹ（配列番号１０３）を含む。
【0103】
加えて、又はあるいは、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）は、ＩＭＧＴシステムに従って定義することができる。ＩＭＧＴシステムによって特定される相補性決定領域（ＣＤＲ）は、ＣＤＲ Ｌ１．２ ＫＳＶＳＴＳＳＹＳＹ（配列番号１０４）及びバリアントＫＴＶＳＴＳＳＹＳＹ（配列番号１０５）、ＣＤＲ Ｌ２．２：ＹＡＳ（配列番号１０６）、ＣＤＲ Ｌ３．２：ＱＨＳＲＥＦＰＷＴ（配列番号１０７）を含む。
【0104】
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当該技術分野で周知である。一般に、ヒト化抗体は、非ヒトである源から導入された１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、「インポート」残基と称され、それらは、典型的には、「インポート」可変ドメインに由来する。抗体ヒト化技法は、一般に、抗体分子の１つ以上数のポリペプチド鎖をコードするＤＮＡ配列を操作するための組換えＤＮＡ技術の使用を必要とする。
【0105】
例示的な３Ｅ１０ヒト化３Ｅ１０重鎖可変領域（配列番号６４～７３）配列及び軽鎖可変領域（配列番号７４～８２）配列は、ＷＯ２０１５／１０６２９０（ＵＳ１０，２２１，２５０）、ＷＯ２０１６／０３３３２４（ＵＳ１０，５０１，５５４）、ＷＯ２０１９／０１８４２６（ＵＳ２０２０／２１６５６７）、及びＷＯ／２０１９／０１８４２８（ＵＳ２０２０／２１６５６８）に論じられており（これらの開示は、全ての目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）、それぞれ、図５及び図６に提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の３Ｅ１０抗体は、配列番号６４～７３から選択される重鎖可変領域、及び配列番号７４～８２から選択される軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の３Ｅ１０抗体は、配列番号６４～７３から選択される重鎖可変領域と少なくとも９９％のアミノ酸同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号７４～８２から選択される軽鎖可変領域と少なくとも９９％のアミノ酸同一性を有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の３Ｅ１０抗体は、配列番号６４～７３から選択される重鎖可変領域と少なくとも９８％のアミノ酸同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号７４～８２から選択される軽鎖可変領域と少なくとも９８％のアミノ酸同一性を有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の３Ｅ１０抗体は、配列番号６４～７３から選択される重鎖可変領域と少なくとも９７％のアミノ酸同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号７４～８２から選択される軽鎖可変領域と少なくとも９７％のアミノ酸同一性を有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の３Ｅ１０抗体は、配列番号６４～７３から選択される重鎖可変領域と少なくとも９６％のアミノ酸同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号７４～８２から選択される軽鎖可変領域と少なくとも９６％のアミノ酸同一性を有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の３Ｅ１０抗体は、配列番号６４～７３から選択される重鎖可変領域と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号７４～８２から選択される軽鎖可変領域と少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の３Ｅ１０抗体は、配列番号６４～７３から選択される重鎖可変領域と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、又は９４％のアミノ酸同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号７４～８２から選択される軽鎖可変領域と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、又は９４％のアミノ酸同一性を有する軽鎖可変領域を含む。
【0106】
開示される組成物及び方法は、典型的には、細胞及び任意選択的に核を透過する能力を維持する抗体を利用する。
【0107】
自己抗体による細胞内部移行の機構は多様である。静電相互作用又はＦｃＲ媒介性エンドサイトーシスにより細胞中に取り込まれるものもあれば、細胞表面ミオシン又はカルレティキュリンとの会合に基づく機構を利用し、その後にエンドサイトーシスが続くものもある（Ｙｉｎｇ－Ｃｈｙｉ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３８，３１７８－３１９０（２００８）、Ｙａｎａｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １００，２５－３１（１９９７））。３Ｅ１０は、（Ｆｃを欠く３Ｅ１０断片の細胞を透過する能力により証明されるように）Ｆｃ非依存的機構で細胞を透過するが、ヌクレオシド輸送体ＥＮＴ２の存在を必要とする（Ｗｅｉｓｂａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｒｅｐ ５：１２０２２．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓｒｅｐ１２０２２．（２０１５）、Ｚａｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５７，２０８２－２０８８（１９９６）、Ｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８２，２０７９０－２０７９３（２００７））。したがって、いくつかの実施形態では、開示される組成物及び方法に利用される抗体は、Ｆｃ非依存的機構で細胞を透過するが、ヌクレオシド輸送体ＥＮＴ２の存在を必要とするものである。
【0108】
ＤＮＡに結合する３Ｅ１０の能力を妨害する３Ｅ１０における変異は、抗体を核透過不能にし得る。したがって、典型的には、抗体の開示されるバリアント及びヒト化形態は、核酸、特にＤＮＡに結合する能力を維持する。加えて、３Ｅ１０ ｓｃＦｖは、ＥＮＴ２依存的様式で生きている細胞及び核に透過することができることが以前に示されており、ＥＮＴ２欠損細胞における取り込みの効率が損なわれている（Ｈａｎｓｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２，２０７９０－２０７９３（２００７））。したがって、いくつかの実施形態では、抗体の開示されるバリアント及びヒト化形態は、ＥＮＴ依存的様式、好ましくはＥＮＴ２依存的様式で細胞核に透過する能力を維持する。
【0109】
核酸結合
開示される組成物及び方法は、典型的には、細胞及び任意選択的に核を透過する能力を維持する抗体を利用する。
開示される組成物及び方法は、典型的には、細胞及び任意選択的に核を透過する能力を維持する抗体を利用する。
【0110】
実施例４は、３Ｅ１０及び追加の３Ｅ１０バリアントの分子モデリングについて記載している。３Ｅ１０の分子モデリング（Ｐｙｍｏｌ）は、推定核酸結合ポケット（ＮＡＢ１）を明らかにし（例えば、図１１Ａ及び図１１Ｂを参照されたい）、図１１Ｃにて下線を引いた状態で説明されている。
【0111】
いくつかの実施形態では、開示される抗体は、下線を引いたＮＡＢ１配列のうちのいくつか又は全てを含む。いくつかの実施形態では、本抗体は、核酸に結合する能力の変化を有するバリアント配列を含む。いくつかの実施形態では、ＮＡＢ１における変異（例えば、置換、挿入、及び／又は欠失）により、本抗体のＲＮＡなどの核酸への結合が改善される。いくつかの実施形態では、これらの変異は、保存的置換である。いくつかの実施形態では、これらの変異により、ＮＡＢ１ポケットのカチオン電荷が増加する。
【0112】
本明細書で論じられ、かつ例示されるように、ＣＤＲ１の残基３１のアスパラギン酸の、アスパラギンへの変異により、この残基のカチオン電荷が増加し、インビボでの核酸結合及び送達が増強された（３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎ）。追加の例示的なバリアントは、ＣＤＲ１の残基３１のアスパラギン酸の、アルギニンへの変異（３Ｅ１０－Ｄ３１Ｒ）（このモデリングはカチオン電荷の拡大を示す）、又はリジンへの変異（３Ｅ１０－Ｄ３１Ｋ）（このモデリングは電荷配向の変化を示す）を含む。したがって、いくつかの実施形態では、３Ｅ１０結合タンパク質は、Ｄ３１Ｒ又はＤ３１Ｋ置換を含む。
【0113】
３Ｅ１０ Ｄ３１又はＮ３１に対応する残基を有する本明細書に開示される配列は全て、内部にＤ３１Ｒ又はＤ３１Ｋ又はＮ３１Ｒ又はＮ３１Ｋ置換を有する状態で明示的に開示される。
【0114】
３Ｅ１０の分子モデリング（Ｐｙｍｏｌ）は、推定核酸結合ポケット（ＮＡＢ１）を明らかにした（図１１Ａ～１１Ｂ）。ＣＤＲ１の残基３１のアスパラギン酸の、アスパラギンへの変異により、この残基のカチオン電荷が増加し、インビボでの核酸結合及び送達が増強された（３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎ）。ＣＤＲ１の残基３１のアスパラギン酸の、アルギニンへの変異（３Ｅ１０－Ｄ３１Ｒ）により、カチオン電荷が更に拡大した一方で、リジンへの変異（３Ｅ１０－Ｄ３１Ｋ）により、電荷配向が変化した（図１１Ａ）。
【0115】
図１１Ｃの重鎖配列及び軽鎖配列において、分子モデリングから予測されるＮＡＢ１アミノ酸に下線が引かれている。図１１Ｂは、点状のドットを用いて図解されたＮＡＢ１アミノ酸残基を有する３Ｅ１０－ｓｃＦｖの分子モデリング（Ｐｙｍｏｌ）を示す図解である。
【0116】
遺伝性ミオパチー
遺伝子置換療法とは、遺伝子によってコードされるタンパク質を必要とする組織に遺伝子の機能的コピーを送達するためのいくつかの治療技法を指し、これらには、例えば、対象のゲノムに安定して組み込まれた状態で又は組み込まれていない状態で、その遺伝子の機能的コピーが細胞内で転写されるＤＮＡベースの遺伝子療法技法、宿主のゲノム内の遺伝子又は特定のヌクレオチドの変異コピーを修復する又は置き換える、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓなどの遺伝子編集療法、及びタンパク質をコードするｍＲＮＡが細胞に送達されて、遺伝子の外因性コピーを転写する必要性を排除するｍＲＮＡ送達ベースのアプローチが含まれる。研究者は、例えば、部分的な又は完全な機能喪失を引き起こす遺伝子の変異、遺伝子転写を下方制御する関連制御領域の変異、及び／又は小さいゲノム欠失に起因して、遺伝子の１つ又は２つの変異コピー又は非機能的コピーを有する対象における障害、最も注目すべきは遺伝性障害及びがんの多様なセットに対する遺伝子置換療法を開発しており、開発し続けている。
遺伝子置換療法とは、遺伝子によってコードされるタンパク質を必要とする組織に遺伝子の機能的コピーを送達するためのいくつかの治療技法を指し、これらには、例えば、対象のゲノムに安定して組み込まれた状態で又は組み込まれていない状態で、その遺伝子の機能的コピーが細胞内で転写されるＤＮＡベースの遺伝子療法技法、宿主のゲノム内の遺伝子又は特定のヌクレオチドの変異コピーを修復する又は置き換える、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓなどの遺伝子編集療法、及びタンパク質をコードするｍＲＮＡが細胞に送達されて、遺伝子の外因性コピーを転写する必要性を排除するｍＲＮＡ送達ベースのアプローチが含まれる。研究者は、例えば、部分的な又は完全な機能喪失を引き起こす遺伝子の変異、遺伝子転写を下方制御する関連制御領域の変異、及び／又は小さいゲノム欠失に起因して、遺伝子の１つ又は２つの変異コピー又は非機能的コピーを有する対象における障害、最も注目すべきは遺伝性障害及びがんの多様なセットに対する遺伝子置換療法を開発しており、開発し続けている。
【0117】
ミオパチーは、骨格筋の臨床障害である。これらの障害は、典型的には、筋細胞構造及び／又は代謝の異常を特徴とし、筋力低下及び機能不全の様々なパターンをもたらす。大規模な遺伝子セットのうちの１つ以上における変異によって引き起こされる、多くのタイプの遺伝性ミオパチーが存在する。遺伝性ミオパチーを有する対象は、一般に、筋力低下、運動遅延、呼吸機能障害、及び延髄性筋機能不全に罹患している。多くの異なる形態の遺伝性ミオパチーの病因が十分に特徴付けられているため、遺伝子療法は、これらの障害を治療するための魅力的な選択肢を提供する。実際に、かかる遺伝子療法の臨床試験がいくつかの遺伝性ミオパチーに対して開始されている。
【0118】
遺伝子療法が開発されているかかる障害の１つは、Ｘ連鎖性筋細管ミオパチー（ＸＬＭＴＭ）である。ＭＴＭは、５０，０００人の出生男児に１人が罹患するミオチューブラリン（ＭＴＭ１）遺伝子の機能喪失型変異によって引き起こされる先天性ミオパチーである。内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｐｉｅｒｓｏｎ ＣＲ，Ａｎｎ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．，３（５）：６１（２０１５）。機能的ＭＴＭ１遺伝子をコードする遺伝子療法ベクターのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）媒介性送達は、マウス、イヌ、及びヒト対象におけるＭＴＭの治療に有望であることが示されている。内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｕｊ－Ｂｅｌｌｏ，Ａｎｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｇｅｎｅｔｉｃｓ，（１７）１４：２１３２－４３（２００８）、Ｃｈｉｌｄｅｒｓ ＭＫ，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．，６（２２０）：２２０ｒａ１０（２０１４）、及びＫａｉｓｅｒ Ｊ．，“Ｂｏｙｓ ｗｉｔｈ ａ ｒａｒｅ ｍｕｓｃｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ａｒｅ ｂｒｅａｔｈｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅｉｒ ｏｗｎ，ｔｈａｎｋｓ ｔｏ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ”ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｅｎｃｅ．ａａｘ９００５を参照されたい。更に、ＭＴＭ１遺伝子の相同体であるミオチューブラリン関連タンパク質２（ＭＴＭＲ２）をコードする遺伝子療法ベクターのＡＡＶ媒介性送達は、ＭＴＭ１欠損ノックアウトマウスにおける運動活動及び筋力を改善する。内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｄａｎｉｅｌｅ Ｎ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ．，７７（４）：２８２－９５（２０１８）。
【0119】
同様に、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）を治療するための遺伝子療法が開発されている。ＤＭＤは、３，５００～５，０００人の出生男児に１人が罹患するジストロフィン（ＤＭＤ）遺伝子の機能喪失型変異によって引き起こされるＸ連鎖性ミオパチーである。ミニジストロフィン又はマイクロジストロフィンと称されることもあるジストロフィンタンパク質のより小さい機能的バージョンをコードする遺伝子のＡＡＶ媒介性送達によるＤＭＤの治療のためのいくつかのヒト臨床試験が行われている。内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｄｕａｎ Ｄ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．，２６（１０）：２３３７－５６（２０１８）。臨床試験が開始されている骨格筋疾患の更なる例としては、ベッカー型筋ジストロフィー及び肢帯型筋ジストロフィーが挙げられる。内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｒａｕｎ Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓ Ｍｅｄ Ｒｅｈａｂｉｌ．，９３（１１ Ｓｕｐｐｌ ３）：Ｓ９７－Ｓ１０７（２０１４）。
【0120】
したがって、一態様では、本開示は、本明細書に記載される、骨格筋タンパク質をコードする治療用ｍＲＮＡと、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片との複合体を対象の骨格筋に送達することによって、対象において骨格筋疾患を治療するための方法を提供する。
【0121】
いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡによってコードされるポリペプチドが骨格筋タンパク質の野生型バージョンであるが、骨格筋タンパク質の天然型バリアント又は合成的に操作されたバージョンも本明細書に記載の組成物及び方法に使用され得ることが理解されるであろう。例えば、ｍＲＮＡ療法が酵素補充療法に使用される場合、ｍＲＮＡによってコードされる酵素が酵素活性を改善するように操作されることが一般的である。更に、ある特定の事例では、治療用タンパク質の野生型バージョンが特に大きい場合、及び／又はタンパク質分解に対して特に感受性を示す１つ以上のドメインを含む場合、遺伝子療法ベクターによってコードされるタンパク質がタンパク質をより小さくするように及び／又はタンパク質機能に不要な感受性領域を除去するように操作されることが一般的である。
【0122】
いくつかの実施形態では、治療用ｍＲＮＡ分子は、骨格筋タンパク質をコードする。骨格筋タンパク質の非限定的な例としては、ネブリン（ＮＥＢ）、骨格筋アルファ－アクチン（ＡＣＴＡ）、アルファ－トロポミオシン－３（ＴＰＭ３）、ベータ－トロポミオシン－２（ＴＰＭ２）、トロポニンＴ１（ＴＮＮＴ１）、コフィリン－２（ＣＦＬ２）、Ｋｅｌｃｈリピート及びＢＴＢドメイン含有－１３（ＫＢＴＢＤ１３）、Ｋｅｌｃｈ様ファミリーメンバー－４０（ＫＬＨＬ４０）、Ｋｅｌｃｈ様タンパク質４（ＫＬＨＬ４）、Ｋｅｌｃｈ様ファミリーメンバー４１（ＫＬＨＬ４１）、レイオモジン－３（ＬＭＯＤ３）、ミオパラジン（ＭＹＰＮ）、リアノジン受容体（ＲＹＲ１）、セレノプロテインＮ（ＳＥＰＮ１）、ミオチューブラリン（ＭＴＭ１）、ダイナミン－２（ＤＮＭ２）、アンフィファイシン－２（ＢＩＮ１）、タイチン（ＴＴＮ）、横紋筋優先発現プロテインキナーゼ（ＳＰＥＧ）、遅骨格／ベータ－心筋ミオシン重鎖（ＭＹＨ７）、チトクロムｂ、チトクロムｃオキシダーゼ、チミジンキナーゼ（ＴＫ２）、ポリメラーゼガンマ１（ＰＯＬＧ１）、リソソーム酵素酸アルファ－グルコシダーゼ（ＧＡＡ）、グリコーゲン－脱分枝酵素（ＡＧＬ）、筋ホスホリラーゼ（ＰＹＧＭ）、カルニチン輸送体ＯＣＴＮ２（ＳＬＣ２２Ａ５）、電子伝達フラボタンパク質（ＥＴＦ）、ＥＴＦ－デヒドロゲナーゼ（ＥＴＦＨ）、脂肪トリグリセリドリパーゼ（ＰＮＰＬＡ２）、骨格筋クロライドチャネル（ＣｌＣ１）、骨格筋ナトリウムチャネルアルファ－サブユニット（ＳＣＮ４Ａ）、ミオトニンプロテインキナーゼ（ＤＭＰＫ）、ジンクフィンガー９（ＺＮＦ９）、ジストロフィン（ＤＭＤ）、ミオチリン（ＭＹＯＴ）、ラミンＡ／Ｃ（ＬＭＮＡ）、カベオリン３（ＣＡＶ３）、ＤｎａＪ熱ショックタンパク質ファミリー（Ｈｓｐ４０）メンバーＢ６（ＤＮＡＪＢ６）、デスミン（ＤＥＳ）、トランスポーチン３（ＴＮＰＯ３）、ヘテロ核リボヌクレオタンパク質Ｄ様（ＨＮＲＰＤＬ）、カルパイン３、ジスフェリン（ＤＹＳＦ）、ガンマ－サルコグリカン（ＳＧＣＧ）、アルファ－サルコグリカン（ＳＧＣＡ）、ベータ－サルコグリカン（ＳＧＣＢ）、デルタ－サルコグリカン（ＳＧＣＤ）、テレソニン（ＴＣＡＰ）、Ｅ３ユビキチン－タンパク質リガーゼＴＲＩＭ３２（ＴＲＩＭ３２）、フクチン関連タンパク質（ＦＫＲＰ）、プロテインＯ－マンノシル－トランスフェラーゼ１（ＰＯＭＴ１）、アノクタミン５（ＡＮＯ５）、フクチン、プロテインＯ－マンノシル－トランスフェラーゼ２（ＰＯＭＴ２）、Ｏ結合マンノースベータ－１，２－Ｎアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（ＰＯＭＴｎＧ１）、ジストログリカン（ＤＡＧ１）、プレクチン（ＰＬＥＣ１）、ＬＧＭＤ２Ｒ、輸送タンパク質粒子複合体サブユニット１１（ＴＲＡＰＰＣ１１）、マンノース－１－リン酸グアニルトランスフェラーゼベータ（ＧＭＰＰＢ）、Ｄ－リビトール－５－リン酸シチジリルトランスフェラーゼ（ＩＳＰＤ）、アルファ－グルコシダーゼ、ＬＩＭ及び老化細胞抗原様含有ドメインタンパク質２（ＬＩＭＳ２）、イソプレノイドシンターゼドメイン含有（ＩＳＰＤ）、ポパイドメイン含有１（ＰＯＰＤＣ１）、ラミナ結合ポリペプチド１Ｂ（ＴＯＲ１ＡＩＰ１）、Ｏ－グリコシルトランスフェラーゼ１（ＰＯＧＬＵＴ１）、ラミニンサブユニットアルファ－２（ＬＡＭＡ２）、コラーゲンアルファ－１（ＶＩ）鎖（ＣＯＬ６Ａ１）、コラーゲンアルファ－２（ＶＩ）鎖（ＣＯＬ６Ａ２）、コラーゲンアルファ－３（ＶＩ）鎖（ＣＯＬ６Ａ３）、ダブルホメオボックス４（ＤＵＸ４）、並びにエメリン（ＥＭＤ）が挙げられる。
【0123】
いくつかの実施形態では、対象は、遺伝性骨格筋疾患を有する。例えば、いくつかの実施形態では、対象は、部分的な又は完全な機能喪失型変異を有する骨格筋遺伝子を担持する。したがって、いくつかの実施形態では、対象に投与される治療用ｍＲＮＡは、対象における変異遺伝子に対応するポリペプチドの機能的コピーをコードする。しかしながら、Ｘ連鎖性筋細管ミオパチーに対するＭＴＭＲ２媒介性遺伝子療法（上述）などのいくつかの事例では、ｍＲＮＡは、対象における変異遺伝子によってコードされるタンパク質の相同体、部分的に冗長な機能を有するタンパク質、及び／又は対象における変異遺伝子によってコードされるタンパク質として部分的に冗長な経路で機能するタンパク質をコードする。
【0124】
いくつかの実施形態では、遺伝性骨格筋疾患は、非ジストロフィー性遺伝性ミオパチーである。非ジストロフィー性遺伝性ミオパチーの非限定的な例としては、ネマリンミオパチー、コアミオパチー（セントラル及びマルチミニコア）、中心核ミオパチー／筋細管ミオパチー（ＸＬＭＴＭ）、先天性線維型不均等ミオパチー、ミオシン蓄積ミオパチー、ミトコンドリアミオパチー、遺伝性ミオパチー、代謝性ミオパチー（脂質蓄積症）、先天性ミオトニー、及び先天性パラミオトニーが挙げられる。非ジストロフィー性遺伝性ミオパチーの例の概説については、例えば、内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｕｓｃｌｅ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ － Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｔａｔｕｓ ｏｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｉｅｌｄ，Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｋｕｎｉｈｉｒｏ Ｓａｋｕｍａ，Ｃｈａｐｔｅｒ ６“Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ”（２０１８）を参照されたい。
【0125】
いくつかの実施形態では、遺伝性骨格筋疾患は、ジストロフィー性遺伝性ミオパチーである。ジストロフィー性遺伝性ミオパチーの非限定的な例としては、筋緊張性ジストロフィー（ＤＭ１／ＤＭ２）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、常染色体優性型肢帯型筋ジストロフィー（ＬＧＭＤ１）、常染色体劣性型肢帯型筋ジストロフィー（ＬＧＭＤ２）、先天性筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、及びエメリー・ドレイフス型筋ジストロフィーが挙げられる。ジストロフィー性遺伝性ミオパチーの例の概説については、例えば、内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｕｓｃｌｅ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ－Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｔａｔｕｓ ｏｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｉｅｌｄ，Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｋｕｎｉｈｉｒｏ Ｓａｋｕｍａ，Ｃｈａｐｔｅｒ ６“Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍｙｏｐａｔｈｉｅｓ”（２０１８）を参照されたい。
【0126】
上記に列記されるミオパチーのクラスは各々、１つ以上の骨格筋遺伝子における変異に関連している。特定の骨格筋疾患に関連することが見出された遺伝子の例が以下の表２に列記される。したがって、いくつかの実施形態では、特定の骨格筋疾患を有する対象は、３Ｅ１０－ｍＲＮＡ複合体の投与によって治療され、ｍＲＮＡは、表２の関連遺伝子に対応するポリペプチドをコードする。例えば、一実施形態では、ミオチューブラリン（ＭＴＭ１）タンパク質に関連するポリペプチドをコードするｍＲＮＡ分子は、あるタイプの筋細管ミオパチー、例えば、Ｘ連鎖性筋細管ミオパチー（ＸＬＭＴＭ）の治療に使用される。
【0127】
（表２）様々な骨格筋疾患において変異することが見出された遺伝子の例
【0128】
遺伝性ミオパチーを治療するための組成物
一態様では、本開示は、例えば、本明細書に記載の骨格筋ポリペプチドをコードする治療用ｍＲＮＡポリヌクレオチドと、本明細書に記載の３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片との間に形成された複合体を含む医薬組成物を提供する。
一態様では、本開示は、例えば、本明細書に記載の骨格筋ポリペプチドをコードする治療用ｍＲＮＡポリヌクレオチドと、本明細書に記載の３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片との間に形成された複合体を含む医薬組成物を提供する。
【0129】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ｍＲＮＡに対する、少なくとも２：１のモル比を有する。実施例６及び実施例８に報告されるように、本明細書に記載の組成物中の３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の治療用ポリヌクレオチドに対するモル比の使用により、ｍＲＮＡ分子がＲＮＡ分解から保護される。
【0130】
更に、図１３Ａ及び図１３Ｂに説明されるように、親３Ｅ１０抗体が、２：１及び２０：１のモル比でｍＲＮＡをＲＮＡｓｅ Ａ媒介性ＲＮＡ分解から保護した一方で、２０：１のモル比で得られた保護は、２：１で得られた保護を上回った。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約２：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約７．５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約１０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約１５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約２０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約３０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約４０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約５０：１のモル比を有する。
【0131】
更に、図１５に示されるように、より高い化学量論比の使用により、より長いポリヌクレオチドが分解からより良好に保護される。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約１００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約１２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約１５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約２００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、より長いポリヌクレオチドは、少なくとも１０００ヌクレオチド長であり、例えば、一本鎖ポリヌクレオチドの場合、１０００ヌクレオチド長であり、二本鎖ポリヌクレオチドの場合、１０００塩基対長である。いくつかの実施形態では、より長いポリヌクレオチドは、少なくとも１５００ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、より長いポリヌクレオチドは、少なくとも２０００ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、より長いポリヌクレオチドは、少なくとも２５００ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、より長いポリヌクレオチドは、少なくとも３０００ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、より長いポリヌクレオチドは、少なくとも４０００ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、より長いポリヌクレオチドは、少なくとも５０００ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、より長いポリヌクレオチドは、少なくとも７５００ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、より長いポリヌクレオチドは、少なくとも１０，０００ヌクレオチド長である。
【0132】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約３：１、少なくとも約４：１、少なくとも約５：１、少なくとも約６：１、少なくとも約７：１、少なくとも約８：１、少なくとも約９：１、少なくとも約１０：１、少なくとも約１１：１、少なくとも約１２：１、少なくとも約１３：１、少なくとも約１４：１、少なくとも約１５：１、少なくとも約１６：１、少なくとも約１７：１、少なくとも約１８：１、少なくとも約１９：１、少なくとも約２０：１、少なくとも約２１：１、少なくとも約２２：１、少なくとも約２３：１、少なくとも約２４：１、少なくとも約２５：１、少なくとも約２６：１、少なくとも約２７：１、少なくとも約２８：１、少なくとも約２９：１、少なくとも約３０：１、少なくとも約３１：１、少なくとも約３２：１、少なくとも約３３：１、少なくとも約３４：１、少なくとも約３５：１、少なくとも約３６：１、少なくとも約３７：１、少なくとも約３８：１、少なくとも約３９：１、少なくとも約４０：１、少なくとも約４１：１、少なくとも約４２：１、少なくとも約４３：１、少なくとも約４４：１、少なくとも約４５：１、少なくとも約５０：１、少なくとも約５５：１、少なくとも約６０：１、少なくとも約７０：１、少なくとも約７５：１、少なくとも約８０：１、少なくとも約８５：１、少なくとも約９０：１、少なくとも約９５：１、少なくとも約１００：１、少なくとも約１１０：１、少なくとも約１２０：１、少なくとも約１２５：１、少なくとも約１３０：１、少なくとも約１４０：１、少なくとも約１５０：１、少なくとも約１６０：１、少なくとも約１７０：１、少なくとも約１７５：１、少なくとも約１８０：１、少なくとも約１９０：１、少なくとも約２００：１、又はそれ以上のモル比を有する。
【0133】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも約２：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも７．５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも１０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも１５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも２０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも３０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも４０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも１００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも１２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも１５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも２００：１のモル比を有する。
【0134】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、少なくとも３：１、少なくとも４：１、少なくとも５：１、少なくとも６：１、少なくとも７：１、少なくとも８：１、少なくとも９：１、少なくとも１０：１、少なくとも１１：１、少なくとも１２：１、少なくとも１３：１、少なくとも１４：１、少なくとも１５：１、少なくとも１６：１、少なくとも１７：１、少なくとも１８：１、少なくとも１９：１、少なくとも２０：１、少なくとも２１：１、少なくとも２２：１、少なくとも２３：１、少なくとも２４：１、少なくとも２５：１、少なくとも２６：１、少なくとも２７：１、少なくとも２８：１、少なくとも２９：１、少なくとも３０：１、少なくとも３１：１、少なくとも３２：１、少なくとも３３：１、少なくとも３４：１、少なくとも３５：１、少なくとも３６：１、少なくとも３７：１、少なくとも３８：１、少なくとも３９：１、少なくとも４０：１、少なくとも４１：１、少なくとも４２：１、少なくとも４３：１、少なくとも４４：１、少なくとも４５：１、少なくとも５０：１、少なくとも５５：１、少なくとも６０：１、少なくとも７０：１、少なくとも７５：１、少なくとも８０：１、少なくとも８５：１、少なくとも９０：１、少なくとも９５：１、少なくとも１００：１、少なくとも１１０：１、少なくとも１２０：１、少なくとも１２５：１、少なくとも１３０：１、少なくとも１４０：１、少なくとも１５０：１、少なくとも１６０：１、少なくとも１７０：１、少なくとも１７５：１、少なくとも１８０：１、少なくとも１９０：１、少なくとも２００：１、又はそれ以上のモル比を有する。
【0135】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１８：１、１９：１、２０：１、２１：１、２２：１、２３：１、２４：１、２５：１、２６：１、２７：１、２８：１、２９：１、３０：１、３１：１、３２：１、３３：１、３４：１、３５：１、３６：１、３７：１、３８：１、３９：１、４０：１、４１：１、４２：１、４３：１、４４：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１、１００：１、１１０：１、１２０：１、１２５：１、１３０：１、１４０：１、１５０：１、１６０：１、１７０：１、１７５：１、１８０：１、１９０：１、２００：１、又はそれ以上のモル比を有する。
【0136】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約２００：１以下のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約１５０：１以下のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約１００：１以下のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約５０：１以下のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約４０：１以下のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約３０：１以下のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約２５：１以下のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約２０：１以下のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約１５：１以下のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約１０：１以下のモル比を有する。
【0137】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約２００：１以下、約１７５：１以下、約１５０：１以下、約１２５：１以下、約１００：１以下、約７５：１以下、約５０：１以下、約４５：１以下、約４０：１以下、約３５：１以下、約３０：１以下、約２５：１以下、約２０：１以下、又はそれ以下のモル比を有する。
【0138】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２００：１以下のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１５０：１以下のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１００：１以下のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、５０：１以下のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、４０：１以下のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、３０：１以下のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２５：１以下のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２０：１以下のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１５：１以下のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１０：１以下のモル比を有する。
【0139】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２００：１以下、１７５：１以下、１５０：１以下、１２５：１以下、１００：１以下、７５：１以下、５０：１以下、４５：１以下、４０：１以下、３５：１以下、３０：１以下、３５：１以下、３０：１以下、２５：１以下、２０：１以下、又はそれ以下のモル比を有する。
【0140】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～２００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～１７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～１５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～１２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～１００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～４０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～３０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～２０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～１５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～１０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～７．５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２：１～３：１のモル比を有する。
【0141】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、３：１～２００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、３：１～１７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、３：１～１５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、３：１～１２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、３：１～１００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、３：１～７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、３：１～５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、３：１～４０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、３：１～３０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、３：１～２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、３：１～２０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、３：１～１５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、３：１～１０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、３：１～７．５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、３：１～５：１のモル比を有する。
【0142】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、５：１～２００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、５：１～１７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、５：１～１５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、５：１～１２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、５：１～１００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、５：１～７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、５：１～５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、５：１～４０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、５：１～３０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、５：１～２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、５：１～２０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、５：１～１５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、５：１～１０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、５：１～７．５：１のモル比を有する。
【0143】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、７．５：１～２００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、７．５：１～１７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、７．５：１～１５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、７．５：１～１２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、７．５：１～１００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、７．５：１～７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、７．５：１～５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、７．５：１～４０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、７．５：１～３０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、７．５：１～２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、７．５：１～２０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、７．５：１～１５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、７．５：１～１０：１のモル比を有する。
【0144】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１０：１～２００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１０：１～１７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１０：１～１５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１０：１～１２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１０：１～１００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１０：１～７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１０：１～５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１０：１～４０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する１０：１～３０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１０：１～２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１０：１～２０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１０：１～１５：１のモル比を有する。
【0145】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１５：１～２００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１５：１～１７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１５：１～１５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１５：１～１２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１５：１～１００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１５：１～７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１５：１～５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１５：１～４０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１５：１～３０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１５：１～２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、１５：１～２０：１のモル比を有する。
【0146】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２０：１～２００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２０：１～１７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２０：１～１５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２０：１～１２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２０：１～１００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２０：１～７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２０：１～５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２０：１～４０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２０：１～３０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２０：１～２５：１のモル比を有する。
【0147】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２５：１～２００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２５：１～１７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２５：１～１５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２５：１～１２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２５：１～１００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２５：１～７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２５：１～５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２５：１～４０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、２５：１～３０：１のモル比を有する。
【0148】
更に他の実施形態では、約２：１～約２００：１の範囲内にある他の範囲が企図される。
【0149】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約１：１～約２００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約１：１～約１７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約１：１～約１５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約１：１～約１２５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約１：１～約１００：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約１：１～約７５：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約１：１～約５０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約１：１～約３０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約１：１～約２０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約１：１～約１０：１のモル比を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片の、治療用ポリヌクレオチドに対する、約１：１～約５：１のモル比を有する。
【0150】
実施例３に報告されるように、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合断片は、全身投与後にインビボで骨格筋組織に局在する。したがって、本明細書に記載の組成物は、骨格筋組織の障害の治療に有用なタンパク質をコードする治療用ｍＲＮＡの送達によく適している。したがって、いくつかの実施形態では、治療用ｍＲＮＡポリヌクレオチドは、骨格筋ポリペプチドをコードする。
【0151】
様々なミオパチーで変異するタンパク質、及びそれらの関連遺伝子の例が表２に提示される。概して、全長タンパク質の機能を保持するこれらのタンパク質及びそれらのバリアントのうちのいずれか１つは、本明細書に開示される治療用ｍＲＮＡによってコードされ得る。したがって、いくつかの実施形態では、骨格筋ポリペプチドは、ネブリン（ＮＥＢ）、骨格筋アルファ－アクチン（ＡＣＴＡ）、アルファ－トロポミオシン－３（ＴＰＭ３）、ベータ－トロポミオシン－２（ＴＰＭ２）、トロポニンＴ１（ＴＮＮＴ１）、コフィリン－２（ＣＦＬ２）、Ｋｅｌｃｈリピート及びＢＴＢドメイン含有－１３（ＫＢＴＢＤ１３）、Ｋｅｌｃｈ様ファミリーメンバー－４０（ＫＬＨＬ４０）、Ｋｅｌｃｈ様タンパク質４（ＫＬＨＬ４）、Ｋｅｌｃｈ様ファミリーメンバー４１（ＫＬＨＬ４１）、レイオモジン－３（ＬＭＯＤ３）、ミオパラジン（ＭＹＰＮ）、リアノジン受容体（ＲＹＲ１）、セレノプロテインＮ（ＳＥＰＮ１）、ミオチューブラリン（ＭＴＭ１）、ダイナミン－２（ＤＮＭ２）、アンフィファイシン－２（ＢＩＮ１）、タイチン（ＴＴＮ）、横紋筋優先発現プロテインキナーゼ（ＳＰＥＧ）、遅骨格／ベータ－心筋ミオシン重鎖（ＭＹＨ７）、チトクロムｂ、チトクロムｃオキシダーゼ、チミジンキナーゼ（ＴＫ２）、ポリメラーゼガンマ１（ＰＯＬＧ１）、リソソーム酵素酸アルファ－グルコシダーゼ（ＧＡＡ）、グリコーゲン－脱分枝酵素（ＡＧＬ）、筋ホスホリラーゼ（ＰＹＧＭ）、カルニチン輸送体ＯＣＴＮ２（ＳＬＣ２２Ａ５）、電子伝達フラボタンパク質（ＥＴＦ）、ＥＴＦ－デヒドロゲナーゼ（ＥＴＦＨ）、脂肪トリグリセリドリパーゼ（ＰＮＰＬＡ２）、骨格筋クロライドチャネル（ＣｌＣ１）、骨格筋ナトリウムチャネルアルファ－サブユニット（ＳＣＮ４Ａ）、ミオトニンプロテインキナーゼ（ＤＭＰＫ）、ジンクフィンガー９（ＺＮＦ９）、ジストロフィン（ＤＭＤ）、ミオチリン（ＭＹＯＴ）、ラミンＡ／Ｃ（ＬＭＮＡ）、カベオリン３（ＣＡＶ３）、ＤｎａＪ熱ショックタンパク質ファミリー（Ｈｓｐ４０）メンバーＢ６（ＤＮＡＪＢ６）、デスミン（ＤＥＳ）、トランスポーチン３、ヘテロ核リボヌクレオタンパク質Ｄ様（ＨＮＲＰＤＬ）、カルパイン３、ジスフェリン（ＤＹＳＦ）、ガンマ－サルコグリカン（ＳＧＣＧ）、アルファ－サルコグリカン（ＳＧＣＡ）、ベータ－サルコグリカン（ＳＧＣＢ）、デルタ－サルコグリカン（ＳＧＣＤ）、テレソニン（ＴＣＡＰ）、Ｅ３ユビキチン－タンパク質リガーゼＴＲＩＭ３２（ＴＲＩＭ３２）、フクチン関連タンパク質（ＦＫＲＰ）、プロテインＯ－マンノシル－トランスフェラーゼ１（ＰＯＭＴ１）、アノクタミン５（ＡＮＯ５）、フクチン、プロテインＯ－マンノシル－トランスフェラーゼ２（ＰＯＭＴ２）、Ｏ結合マンノースベータ－１，２－Ｎアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（ＰＯＭＴｎＧ１）、ジストログリカン（ＤＡＧ１）、プレクチン（ＰＬＥＣ１）、ＬＧＭＤ２Ｒ、輸送タンパク質粒子複合体サブユニット１１（ＴＲＡＰＰＣ１１）、マンノース－１－リン酸グアニルトランスフェラーゼベータ（ＧＭＰＰＢ）、Ｄ－リビトール－５－リン酸シチジリルトランスフェラーゼ（ＩＳＰＤ）、アルファ－グルコシダーゼ、ＬＩＭ及び老化細胞抗原様含有ドメインタンパク質２（ＬＩＭＳ２）、イソプレノイドシンターゼドメイン含有（ＩＳＰＤ）、ポパイドメイン含有１（ＰＯＰＤＣ１）、ラミナ結合ポリペプチド１Ｂ（ＴＯＲ１ＡＩＰ１）、Ｏグリコシルトランスフェラーゼ１（ＰＯＧＬＵＴ１）、ラミニンサブユニットアルファ－２（ＬＡＭＡ２）、コラーゲンアルファ－１（ＶＩ）鎖（ＣＯＬ６Ａ１）、コラーゲンアルファ－２（ＶＩ）鎖（ＣＯＬ６Ａ２）、コラーゲンアルファ－３（ＶＩ）鎖（ＣＯＬ６Ａ３）、ダブルホメオボックス４（ＤＵＸ４）、並びにエメリン（ＥＭＤ）からなる群から選択される。
【0152】
更に、３Ｅ１０抗体若しくはそのバリアント又はその抗原結合性断片が、全身投与後にインビボで骨格筋組織に局在するため、本開示の組成物は、多くの一般的な投与経路のうちの１つ用に製剤化され、その後、それによって投与され得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、非経口投与用に製剤化される。いくつかの実施形態では、非経口投与は、筋肉内投与、静脈内投与、又は皮下投与である。
【0153】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物のｍＲＮＡは、例えば、半減期を改善するか、又は骨格筋組織における翻訳を増加させるために、コドン最適化される。コドン最適化とは、ポリペプチド（例えば、骨格筋タンパク質ポリペプチド）をコードするポリヌクレオチド配列を指し、ポリペプチドをコードする天然ポリヌクレオチドの少なくとも１つのコドンが、ポリヌクレオチド配列の特性を改善するために変更されている。いくつかの実施形態では、改善された特性により、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの転写の増加、ｍＲＮＡの安定性の増加（例えば、ｍＲＮＡ半減期の改善）、ポリペプチドの翻訳の増加、及び／又はベクター内のポリヌクレオチドのパッケージングの増加が促進される。改善された特性を達成するために使用することができる改変の非限定的な例としては、特定のアミノ酸に対するコドンの使用及び／又は分布の変更、全体及び／又は局所ＧＣ含有量の調整、ＡＴリッチ配列の除去、反復配列要素の除去、全体及び／又は局所ＣｐＧジヌクレオチド含有量の調整、隠れた調節要素（例えば、ＴＡＴＡボックス要素及びＣＣＡＡＴボックス要素）の除去、イントロン／エクソンスプライス部位の除去、調節配列の改善（例えば、コザックコンセンサス配列の導入）、並びに転写ｍＲＮＡに二次構造（例えば、ステムループ）を形成することができる配列要素の除去が挙げられる。
【0154】
同様に、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物のｍＲＮＡは、例えば、インビボでのｍＲＮＡの安定性及び／又は半減期を改善するために、１つ以上の非標準ヌクレオチドを含む。本明細書に記載のｍＲＮＡ分子への包含に好適な非標準ヌクレオチドの例は、内容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，１８１，３１９号に記載されている。
【実施例】
【0155】
以下の実験に関して、Ｄ３１Ｎバリアントであると注記した場合（例えば、実施例４）を除いて、標準３Ｅ１０配列を使用した。標準３Ｅ１０及びＤ３１Ｎバリアントの両方を全長抗体として使用した。
【0156】
実施例１ 担体ＤＮＡは、非腫瘍組織へのｍＲＮＡを増強する
２ｕｇの蛍光標識ｍＲＮＡを、２０ｕｇの３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎと、担体ＤＮＡ（５ｕｇ）あり又はなしで、室温で１５分間混合した。３Ｅ１０と複合体化したｍＲＮＡを、胎仔にＥ１５．５で注射した。処理の２４～４８時間後、胎仔を採取し、ＩＶＩＳイメージングを使用してｍＲＮＡ送達について分析した。
２ｕｇの蛍光標識ｍＲＮＡを、２０ｕｇの３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎと、担体ＤＮＡ（５ｕｇ）あり又はなしで、室温で１５分間混合した。３Ｅ１０と複合体化したｍＲＮＡを、胎仔にＥ１５．５で注射した。処理の２４～４８時間後、胎仔を採取し、ＩＶＩＳイメージングを使用してｍＲＮＡ送達について分析した。
【0157】
担体ＤＮＡなしの場合、ｍＲＮＡと複合体化した３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎは、２４時間の時点で胎仔から迅速に取り除かれた。しかしながら、担体ＤＮＡの添加により、４８時間の時点で胎仔の複数の組織に検出可能なｍＲＮＡシグナルがもたらされた。
【0158】
実施例２ ｍＲＮＡ及び担体ＤＮＡと複合体化した３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）により、持続的なレベルのタンパク質発現がもたらされる
１０ｕｇのルシフェラーゼｍＲＮＡ及び１０ｕｇの一本鎖担体ＤＮＡ（６０ｎｔ）を、１００ｕｇの３Ｅ１０（ＷＴ）又は３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）と室温で１５分間混合した。３Ｅ１０と複合体化したｍＲＮＡを、各マウスの右四頭筋に筋肉内（ＩＭ）注射した。ルシフェラーゼ発現を６日間にわたって監視した。
１０ｕｇのルシフェラーゼｍＲＮＡ及び１０ｕｇの一本鎖担体ＤＮＡ（６０ｎｔ）を、１００ｕｇの３Ｅ１０（ＷＴ）又は３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）と室温で１５分間混合した。３Ｅ１０と複合体化したｍＲＮＡを、各マウスの右四頭筋に筋肉内（ＩＭ）注射した。ルシフェラーゼ発現を６日間にわたって監視した。
【0159】
図８に見られるように、ｍＲＮＡ及び担体ＤＮＡと複合体化した３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）の投与により、持続的なレベルのルシフェラーゼ発現がもたらされた一方で、ｍＲＮＡ及び担体ＤＮＡと複合体化した３Ｅ１０（ＷＴ）では、バックグラウンドを上回るいかなる認識可能なシグナルも生成されなかった。
【0160】
実施例３ インビボでのＩＶ注射３Ｅ１０の分布
筋肉にＩＶ注射した３Ｅ１０の分布を調査した。マウスに２００μｇの３Ｅ１０（ＷＴ又はＤ３１Ｎ）を静脈内注射し、ＶｉｖｏＴａｇ６８０（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で標識した。注射の４時間後、筋肉を採取し、ＩＶＩＳ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で画像化した（図９Ａ及び図９Ｂ）。ＩＶＩＳ画像の定量により、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎが３Ｅ１０－ＷＴと比較して筋肉へのより高い分布を達成することが実証される（図９Ｃ）。
筋肉にＩＶ注射した３Ｅ１０の分布を調査した。マウスに２００μｇの３Ｅ１０（ＷＴ又はＤ３１Ｎ）を静脈内注射し、ＶｉｖｏＴａｇ６８０（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で標識した。注射の４時間後、筋肉を採取し、ＩＶＩＳ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で画像化した（図９Ａ及び図９Ｂ）。ＩＶＩＳ画像の定量により、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎが３Ｅ１０－ＷＴと比較して筋肉へのより高い分布を達成することが実証される（図９Ｃ）。
【0161】
３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎの組織への用量依存的生体内分布を調査した。マウスに１００μｇ又は２００μｇの、ＶｉｖｏＴａｇ６８０（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で標識した３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎを、静脈内注射した。注射の２４時間後、組織を採取し、ＩＶＩＳ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で画像化した。組織分布の定量により、筋蓄積における２倍の用量依存的増加が、肝臓を含む複数の組織中での同等の増加なしで、実証された（図１０）。
【0162】
実施例４ ３Ｅ１０及びその操作バリアントの分子モデリング
ＷＴ重鎖ｓｃＦｖ配列
Ｅ ＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬ ＶＫＰＧＧＳＲＫＬＳ ＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤ ＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰ ＥＫＧＬＥＷＶＡＹＩ ＳＳＧＳＳＴＩＹＹＡ ＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳ ＲＤＮＡＫＮＴＬＦＬ ＱＭＴＳＬＲＳＥＤＴ ＡＭＹＹＣＡＲＲＧＬ ＬＬＤＹＷＧＱＧＴＴ ＬＴＶＳ（配列番号１０８）
軽鎖ｓｃＦｖ配列
Ｄ ＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬ ＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩ ＳＣＲＡＳＫＳＶＳＴ ＳＳＹＳＹＭＨＷＹＱ ＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬ ＩＫＹＡＳＹＬＥＳＧ ＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳ ＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰ ＶＥＥＥＤＡＡＴＹＹ ＣＱＨＳＲＥＦＰＷＴ ＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ ＲＡＤＡＡＰＧＧＧＧ ＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０９）
ＷＴ重鎖ｓｃＦｖ配列
Ｅ ＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬ ＶＫＰＧＧＳＲＫＬＳ ＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤ ＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰ ＥＫＧＬＥＷＶＡＹＩ ＳＳＧＳＳＴＩＹＹＡ ＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳ ＲＤＮＡＫＮＴＬＦＬ ＱＭＴＳＬＲＳＥＤＴ ＡＭＹＹＣＡＲＲＧＬ ＬＬＤＹＷＧＱＧＴＴ ＬＴＶＳ（配列番号１０８）
軽鎖ｓｃＦｖ配列
Ｄ ＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬ ＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩ ＳＣＲＡＳＫＳＶＳＴ ＳＳＹＳＹＭＨＷＹＱ ＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬ ＩＫＹＡＳＹＬＥＳＧ ＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳ ＧＴＤＦＴＬＮＩＨＰ ＶＥＥＥＤＡＡＴＹＹ ＣＱＨＳＲＥＦＰＷＴ ＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ ＲＡＤＡＡＰＧＧＧＧ ＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１０９）
【0163】
３Ｅ１０の分子モデリング（Ｐｙｍｏｌ）は、推定核酸結合ポケット（ＮＡＢ１）を明らかにした（図１１Ａ～１１Ｂ）。ＣＤＲ１の残基３１のアスパラギン酸の、アスパラギンへの変異により、この残基のカチオン電荷が増加し、インビボでの核酸結合及び送達が増強された（３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎ）。
【0164】
ＣＤＲ１の残基３１のアスパラギン酸の、アルギニンへの変異（３Ｅ１０－Ｄ３１Ｒ）により、カチオン電荷が更に拡大した一方で、リジンへの変異（３Ｅ１０－Ｄ３１Ｋ）により、電荷配向が変化した（図１４Ａ）。
【0165】
上記の重鎖配列及び軽鎖配列において、分子モデリングから予測されるＮＡＢ１アミノ酸に下線が引かれている。図１１Ｂは、点状のドットを用いて図解されたＮＡＢ１アミノ酸残基を有する３Ｅ１０－ｓｃＦｖの分子モデリング（Ｐｙｍｏｌ）を示す図解である。
【0166】
実施例５ ｍＲＮＡと複合体化した３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）の筋肉間注射により、骨格筋における持続的なタンパク質発現がもたらされる
次に、３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）－ｍＲＮＡ複合体の筋肉内投与により、骨格筋におけるｍＲＮＡの持続的な発現がもたらされるかを調査した。手短に言えば、３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）と、（配列番号１１０）として以下に示す配列ＧＦＰ＿ｍＲＮＡを有する緑色蛍光タンパク質（ルシフェラーゼ）をコードするｍＲＮＡとの複合体を、３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）とｍＲＮＡを２０：１のモル比で混合することによって形成した。結果として得られた複合体を、マウスの後肢骨格筋に筋肉間注射により投与した。注射したｍＲＮＡからのルシフェラーゼの発現を示す、骨格筋における生物発光を画像化し（図１２Ａ）、５日間にわたって定量した（図１２Ｂ）。図１２Ｂに示すように、ｍＲＮＡによってコードされたルシフェラーゼの発現レベルは、少なくとも５日間維持された。
次に、３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）－ｍＲＮＡ複合体の筋肉内投与により、骨格筋におけるｍＲＮＡの持続的な発現がもたらされるかを調査した。手短に言えば、３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）と、（配列番号１１０）として以下に示す配列ＧＦＰ＿ｍＲＮＡを有する緑色蛍光タンパク質（ルシフェラーゼ）をコードするｍＲＮＡとの複合体を、３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）とｍＲＮＡを２０：１のモル比で混合することによって形成した。結果として得られた複合体を、マウスの後肢骨格筋に筋肉間注射により投与した。注射したｍＲＮＡからのルシフェラーゼの発現を示す、骨格筋における生物発光を画像化し（図１２Ａ）、５日間にわたって定量した（図１２Ｂ）。図１２Ｂに示すように、ｍＲＮＡによってコードされたルシフェラーゼの発現レベルは、少なくとも５日間維持された。
【0167】
実施例６ ３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）は、ｍＲＮＡをＲＮＡ分解から保護する
次に、ｍＲＮＡを３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）と複合体化することによってｍＲＮＡが分解から保護されるかを調査した。手短に言えば、３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）と、（配列番号１１０）として以下に示す配列ＧＦＰ＿ｍＲＮＡを有する緑色蛍光タンパク質（ルシフェラーゼ）をコードするｍＲＮＡとの複合体を、３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）とｍＲＮＡを２０：１のモル比で混合することによって形成した。その後、遊離ｍＲＮＡと３Ｅ１０－ｍＲＮＡとの複合体を、１％血清、１０％血清、又は１６μｇ／ｍＬのＲＮＡｓｅ Ａと３７℃で１０分間インキュベートした。これらの反応物のゲル電気泳動分析を行った（図１３Ａ）。図１３Ａに示すように、遊離ｍＲＮＡは、１％血清、１０％血清、及びＲＮＡｓｅ Ａの各々とのインキュベーションにより分解した。しかしながら、複合体化したｍＲＮＡは、１％血清、１０％血清、又はＲＮＡｓｅ Ａのうちのいずれとインキュベートした場合でも、明らかなＲＮＡ分解は観察されなかったことから、３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）がｍＲＮＡを分解から保護することが示唆される。
次に、ｍＲＮＡを３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）と複合体化することによってｍＲＮＡが分解から保護されるかを調査した。手短に言えば、３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）と、（配列番号１１０）として以下に示す配列ＧＦＰ＿ｍＲＮＡを有する緑色蛍光タンパク質（ルシフェラーゼ）をコードするｍＲＮＡとの複合体を、３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）とｍＲＮＡを２０：１のモル比で混合することによって形成した。その後、遊離ｍＲＮＡと３Ｅ１０－ｍＲＮＡとの複合体を、１％血清、１０％血清、又は１６μｇ／ｍＬのＲＮＡｓｅ Ａと３７℃で１０分間インキュベートした。これらの反応物のゲル電気泳動分析を行った（図１３Ａ）。図１３Ａに示すように、遊離ｍＲＮＡは、１％血清、１０％血清、及びＲＮＡｓｅ Ａの各々とのインキュベーションにより分解した。しかしながら、複合体化したｍＲＮＡは、１％血清、１０％血清、又はＲＮＡｓｅ Ａのうちのいずれとインキュベートした場合でも、明らかなＲＮＡ分解は観察されなかったことから、３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）がｍＲＮＡを分解から保護することが示唆される。
【0168】
ＧＦＰ＿ｍＲＮＡ－
ＡＵＧＧＵＧＡＧＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧＣＵＧＵＵＣＡＣＣＧＧＧＧＵＧＧＵＧＣＣＣＡＵＣＣＵＧＧＵＣＧＡＧＣＵＧＧＡＣＧＧＣＧＡＣＧＵＡＡＡＣＧＧＣＣＡＣＡＡＧＵＵＣＡＧＣＧＵＧＵＣＣＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＵＧＣＣＡＣＣＵＡＣＧＧＣＡＡＧＣＵＧＡＣＣＣＵＧＡＡＧＵＵＣＡＵＣＵＧＣＡＣＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧＣＵＧＣＣＣＧＵＧＣＣＣＵＧＧＣＣＣＡＣＣＣＵＣＧＵＧＡＣＣＡＣＣＣＵＧＡＣＣＵＡＣＧＧＣＧＵＧＣＡＧＵＧＣＵＵＣＡＧＣＣＧＣＵＡＣＣＣＣＧＡＣＣＡＣＡＵＧＡＡＧＣＡＧＣＡＣＧＡＣＵＵＣＵＵＣＡＡＧＵＣＣＧＣＣＡＵＧＣＣＣＧＡＡＧＧＣＵＡＣＧＵＣＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＣＣＡＵＣＵＵＣＵＵＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＣＵＡＣＡＡＧＡＣＣＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＵＧＡＡＧＵＵＣＧＡＧＧＧＣＧＡＣＡＣＣＣＵＧＧＵＧＡＡＣＣＧＣＡＵＣＧＡＧＣＵＧＡＡＧＧＧＣＡＵＣＧＡＣＵＵＣＡＡＧＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＡＣＡＵＣＣＵＧＧＧＧＣＡＣＡＡＧＣＵＧＧＡＧＵＡＣＡＡＣＵＡＣＡＡＣＡＧＣＣＡＣＡＡＣＧＵＣＵＡＵＡＵＣＡＵＧＧＣＣＧＡＣＡＡＧＣＡＧＡＡＧＡＡＣＧＧＣＡＵＣＡＡＧＧＵＧＡＡＣＵＵＣＡＡＧＡＵＣＣＧＣＣＡＣＡＡＣＡＵＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＧＣＧＵＧＣＡＧＣＵＣＧＣＣＧＡＣＣＡＣＵＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＣＡＣＣＣＣＣＡＵＣＧＧＣＧＡＣＧＧＣＣＣＣＧＵＧＣＵＧＣＵＧＣＣＣＧＡＣＡＡＣＣＡＣＵＡＣＣＵＧＡＧＣＡＣＣＣＡＧＵＣＣＧＣＣＣＵＧＡＧＣＡＡＡＧＡＣＣＣＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＣＧＣＧＡＵＣＡＣＡＵＧＧＵＣＣＵＧＣＵＧＧＡＧＵＵＣＧＵＧＡＣＣＧＣＣＧＣＣＧＧＧＡＵＣＡＣＵＣＵＣＧＧＣＡＵＧＧＡＣＧＡＧＣＵＧＵＡＣＡＡＧＵＡＡ（配列番号１１０）。
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【0169】
次に、より低いモル比で複合体化したｍＲＮＡもＲＮＡ分解から保護されるかを調査した。手短に言えば、３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）と、緑色蛍光タンパク質をコードするｍＲＮＡ（ＧＦＰ＿ｍＲＮＡ、配列番号１１０）との複合体を、３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）とｍＲＮＡを２：１のモル比で混合することによって形成した。その後、遊離ｍＲＮＡと３Ｅ１０－ｍＲＮＡとの複合体を、上に記載した条件下でＲＮＡｓｅ Ａとインキュベートした。これらの反応物のゲル電気泳動分析を行った（図１３Ｂ）。図１３Ｂに示すように、遊離ｍＲＮＡは、ＲＮＡｓｅ Ａとのインキュベーションにより完全に分解した。しかしながら、２：１のモル比でｍＲＮＡを３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）と複合体化することにより、ウェル中のＲＮＡシグナルの存在により示されるように、ｍＲＮＡが分解からいくらか保護され、インタクトな３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）－ｍＲＮＡ複合体の存在を示す。２：１のモル比で提供された保護は、２０：１のモル比で複合体化したときにｍＲＮＡに提供された保護よりも小さいように見える。
【0170】
実施例７ インビボで３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎは内部移行し、ｇＤＮＡと会合する
３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎの内部移行及び細胞位置実験を調査した。アイソタイプ対照、３Ｅ１０－ＷＴ（ＧＭＡＢＷＴ）抗体、及び３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎ（ＧＭＡＢＤ３１Ｎ）抗体を８９Ｚｒで標識し、インビボで細胞に投与した。ある一定の時間後、細胞成分（サイトゾル、膜、核タンパク質、及びｇＤＮＡ）を分画し、８９Ｚｒシグナル（カウント／分、ＣＰＭ）についてアッセイした。図１４に示すように、内部移行したＧＭＡＢＷＴ抗体及びＧＭＡＢＤ３１Ｎ抗体の大部分が核に局在し、核の核タンパク質画分及びｇＤＮＡ画分の両方と会合していることが見出された。しかしながら、ＧＭＡＢＷＴよりも多くの割合のＧＭＡＢＤ３１ＮがｇＤＮＡ画分と会合したことから、ＧＭＡＢＤ３１ＮがＧＭＡＢＷＴよりも容易にクロマチンに局在することが示唆される。
３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎの内部移行及び細胞位置実験を調査した。アイソタイプ対照、３Ｅ１０－ＷＴ（ＧＭＡＢＷＴ）抗体、及び３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎ（ＧＭＡＢＤ３１Ｎ）抗体を８９Ｚｒで標識し、インビボで細胞に投与した。ある一定の時間後、細胞成分（サイトゾル、膜、核タンパク質、及びｇＤＮＡ）を分画し、８９Ｚｒシグナル（カウント／分、ＣＰＭ）についてアッセイした。図１４に示すように、内部移行したＧＭＡＢＷＴ抗体及びＧＭＡＢＤ３１Ｎ抗体の大部分が核に局在し、核の核タンパク質画分及びｇＤＮＡ画分の両方と会合していることが見出された。しかしながら、ＧＭＡＢＷＴよりも多くの割合のＧＭＡＢＤ３１ＮがｇＤＮＡ画分と会合したことから、ＧＭＡＢＤ３１ＮがＧＭＡＢＷＴよりも容易にクロマチンに局在することが示唆される。
【0171】
実施例８ ３Ｅ１０（Ｄ３１Ｎ）はジストロフィンｍＲＮＡをＲＮＡ分解から保護する
３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎが複合体化した場合にジストロフィンをコードするｍＲＮＡを酵素分解から保護するか、かつより多くの化学量論的量の３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎが必要であるかを調査した。手短に言えば、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎと、全長ヒトジストロフィンをコードする１４ｋｂのｍＲＮＡとの複合体を、３Ｅ１０－Ｄ３１ＮとｍＲＮＡを１：１、２：１、５：１、１０：１、２０：１、及び１００：１のモル比（３Ｅ１０：ｍＲＮＡ）で混合することによって形成した。その後、遊離ｍＲＮＡと３Ｅ１０－ｍＲＮＡとの複合体を、プロテイナーゼＫを添加した状態で、６μｇ／ｍＬのＲＮＡｓｅ Ａと３７℃で１０分間インキュベートして、タンパク質分解を促進した。図１５は、保護アッセイのアガロースゲル電気泳動分析を示す。図１５に示すように、遊離ジストロフィンｍＲＮＡ、並びに１：１、２：１、５：１、及び１０：１のモル比（３Ｅ１０：ｍＲＮＡ）で複合体化したジストロフィンｍＲＮＡは、ＲＮＡｓｅ Ａとのインキュベーションにより完全に分解した。しかしながら、図１５に示すように、ジストロフィンｍＲＮＡを３Ｅ１０と２０：１及び１００：１のモル比で複合体化することにより、ゲル上で未分解ｍＲＮＡと同様の距離で移動するバンドにより示されるように、ＲＮＡｓｅ Ａによる分解からのｍＲＮＡの保護が増加した。これらの結果は、実施例６の結果と相まって、３Ｅ１０がサイズ依存的様式でポリヌクレオチドを保護することを示唆する。
３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎが複合体化した場合にジストロフィンをコードするｍＲＮＡを酵素分解から保護するか、かつより多くの化学量論的量の３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎが必要であるかを調査した。手短に言えば、３Ｅ１０－Ｄ３１Ｎと、全長ヒトジストロフィンをコードする１４ｋｂのｍＲＮＡとの複合体を、３Ｅ１０－Ｄ３１ＮとｍＲＮＡを１：１、２：１、５：１、１０：１、２０：１、及び１００：１のモル比（３Ｅ１０：ｍＲＮＡ）で混合することによって形成した。その後、遊離ｍＲＮＡと３Ｅ１０－ｍＲＮＡとの複合体を、プロテイナーゼＫを添加した状態で、６μｇ／ｍＬのＲＮＡｓｅ Ａと３７℃で１０分間インキュベートして、タンパク質分解を促進した。図１５は、保護アッセイのアガロースゲル電気泳動分析を示す。図１５に示すように、遊離ジストロフィンｍＲＮＡ、並びに１：１、２：１、５：１、及び１０：１のモル比（３Ｅ１０：ｍＲＮＡ）で複合体化したジストロフィンｍＲＮＡは、ＲＮＡｓｅ Ａとのインキュベーションにより完全に分解した。しかしながら、図１５に示すように、ジストロフィンｍＲＮＡを３Ｅ１０と２０：１及び１００：１のモル比で複合体化することにより、ゲル上で未分解ｍＲＮＡと同様の距離で移動するバンドにより示されるように、ＲＮＡｓｅ Ａによる分解からのｍＲＮＡの保護が増加した。これらの結果は、実施例６の結果と相まって、３Ｅ１０がサイズ依存的様式でポリヌクレオチドを保護することを示唆する。
【0172】
引用された参考文献及び代替の実施形態
本明細書に引用された全ての参考文献は、各々の個々の刊行物又は特許又は特許出願が、全ての目的のために参照によりそれらの全体が組み込まれることが具体的かつ個別に指示されているかのように、全ての目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書に引用された全ての参考文献は、各々の個々の刊行物又は特許又は特許出願が、全ての目的のために参照によりそれらの全体が組み込まれることが具体的かつ個別に指示されているかのように、全ての目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【0173】
本発明の多くの修正及び変形は、当業者に明らかであろうように、その趣旨及び範囲から逸脱することなく行うことができる。本明細書に記載の特定の実施形態は、単に例として提供される。これらの実施形態は、本発明の原理及びその実用的用途を最良に説明するために選択され、記載されたものであり、それにより、当業者が、企図される特定の使用に適した様々な修正を加えて本発明及び様々な実施形態を最良に利用することを可能にする。本発明は、添付の特許請求の範囲の条件に加えて、かかる特許請求の範囲が権利を有する均等物の全範囲によってのみ限定される。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図7D】
【図7E】
【図8】
【図9-1】
【図9-2】
【図10】
【図11A】
【図11B】
【図11C】
【図12A】
【図12B】
【図13A】
【図13B】
【図14】
【図15】
【配列表】
【国際調査報告】