(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-02-26
(54)【発明の名称】長時間作用型アミリン受容体アゴニスト及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 14/00 20060101AFI20240216BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240216BHJP
A61P 3/04 20060101ALI20240216BHJP
A61P 3/06 20060101ALI20240216BHJP
A61P 1/16 20060101ALI20240216BHJP
A61K 38/16 20060101ALI20240216BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240216BHJP
A61K 38/22 20060101ALI20240216BHJP
A61K 38/12 20060101ALI20240216BHJP
【ＦＩ】
C07K14/00 ZNA
A61P3/10
A61P3/04
A61P3/06
A61P1/16
A61K38/16
A61P43/00 111
A61K38/22
A61K38/12
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023553248
(86)(22)【出願日】2022-03-02
(85)【翻訳文提出日】2023-09-25
(86)【国際出願番号】 US2022018434
(87)【国際公開番号】W WO2022187305
(87)【国際公開日】2022-09-09
(31)【優先権主張番号】63/155,894
(32)【優先日】2021-03-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】594197872
【氏名又は名称】イーライ リリー アンド カンパニー
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100126778
【弁理士】
【氏名又は名称】品川 永敏
(74)【代理人】
【識別番号】100162684
【弁理士】
【氏名又は名称】呉 英燦
(72)【発明者】
【氏名】エイブラハム，ミラタ メアリー
(72)【発明者】
【氏名】ブリエール，ダニエル アンソニー
(72)【発明者】
【氏名】グオ，リリ
(72)【発明者】
【氏名】カイザー，サマンサ グレイス ライオンズ
(72)【発明者】
【氏名】リー，ジョン
(72)【発明者】
【氏名】チュイ，ホンチャン
【テーマコード（参考）】
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C084AA02
4C084BA01
4C084BA19
4C084BA26
4C084CA18
4C084DB01
4C084MA02
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZA70
4C084ZA75
4C084ZC01
4C084ZC33
4C084ZC35
4C084ZC41
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA19
4H045EA20
4H045FA10
4H045FA34
4H045FA57
4H045FA61
4H045GA05
4H045GA25
(57)【要約】
本開示は、医学の分野に関する。特に、本開示は、糖尿病、肥満及び／若しくは慢性体重管理、脂質異常症、並びに／又はＮＡＳＨの治療の分野に属する。本開示は、アミリン受容体を刺激して、食物摂取量、体重、血糖値、及び／又はトリグリセリドを低下させることができ、そのため、糖尿病、肥満、及び／又は脂質異常症を治療するために使用することができる化合物に関する。本開示は、そのような化合物を含有する医薬組成物、並びにそのような化合物及び組成物の治療目的の使用も含む。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
Ｘａａ１－Ｃ－Ｘａａ３－ＴＡＴＣＡＴ－Ｘａａ１０－Ｘａａ１１－Ｘａａ１２－ＡＥ－Ｘａａ１５－ＬＶＲＳＳ－Ｘａａ２１－Ｘａａ２２－ＦＧＰ－Ｘａａ２６－ＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ（配列番号１４）［配列中、
Ｘａａ１は、Ｋ又はγＥであり、
Ｘａａ３は、Ｅ、Ｎ、又はＧであり、
Ｘａａ１０は、Ｇ又はＱであり、
Ｘａａ１１は、Ｏｒｎ又はＫであり、
Ｘａａ１２は、Ｌ又はαＭｅＬであり、
Ｘａａ１５は、αＭｅＦ又はＦであり、
Ｘａａ２１は、Ｎ又はＨであり、
Ｘａａ２２は、ＮＭｅＤ、ＮＭｅＮ、又はＮであり、
Ｘａａ２６は、Ｉ又はＫである］
を含む、化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項2】
Ｘａａ１が、γＥであり、Ｘａａ３が、Ｎであり、
Ｘａａ１０が、Ｇであり、
Ｘａａ１１が、Ｏｒｎであり、
Ｘａａ１２が、Ｌであり、
Ｘａａ１５が、αＭｅＦであり、
Ｘａａ２１が、Ｎであり、
Ｘａａ２２が、ＮＭｅＮであり、
Ｘａａ２６が、Ｋである、請求項１に記載の化合物（配列番号２２）又はその薬学的に許容される塩。
【請求項3】
Ｘａａ１が、γＥであり、Ｘａａ３が、Ｎであり、
Ｘａａ１０が、Ｇであり、
Ｘａａ１１が、Ｏｒｎであり、
Ｘａａ１２が、Ｌであり、
Ｘａａ１５が、αＭｅＦであり、
Ｘａａ２１が、Ｎであり、
Ｘａａ２２が、ＮＭｅＤであり、
Ｘａａ２６が、Ｋである、請求項１に記載の化合物（配列番号２３）又はその薬学的に許容される塩。
【請求項4】
Ｘａａ２６におけるリジンが、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される、請求項２又は３に記載の化合物。
【請求項5】
Ｘａａ１が、Ｋであり、Ｘａａ３が、Ｅであり、
Ｘａａ１０が、Ｇであり、
Ｘａａ１１が、Ｏｒｎであり、
Ｘａａ１２が、Ｌであり、
Ｘａａ１５が、αＭｅＦであり、
Ｘａａ２１が、Ｎであり、
Ｘａａ２２が、ＮＭｅＤであり、
Ｘａａ２６が、Ｉである、請求項１に記載の化合物（配列番号２４）又はその薬学的に許容される塩。
【請求項6】
Ｘａａ１が、Ｋであり、Ｘａａ３が、Ｅであり、
Ｘａａ１０が、Ｇであり、
Ｘａａ１１が、Ｏｒｎであり、
Ｘａａ１２が、αＭｅＬであり、
Ｘａａ１５が、Ｆであり、
Ｘａａ２１が、Ｈであり、
Ｘａａ２２が、Ｎであり、
Ｘａａ２６が、Ｉである、請求項１に記載の化合物（配列番号２５）又はその薬学的に許容される塩。
【請求項7】
Ｘａａ１におけるリジンが、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される、請求項５又は６に記載の化合物。
【請求項8】
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項9】
前記化合物が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、及び配列番号１３からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項10】
配列番号２からなる化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項11】
配列番号４からなる化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項12】
配列番号６からなる化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項13】
配列番号８からなる化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項14】
２型糖尿病を治療することを必要とする患者における２型糖尿病を治療する方法であって、有効量の請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を、前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項15】
肥満を治療することを必要とする患者における肥満を治療する方法であって、有効量の請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を、前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項16】
脂質異常症を治療することを必要とする患者における脂質異常症を治療する方法であって、有効量の請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を、前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項17】
ＮＡＳＨを治療することを必要とする患者におけるＮＡＳＨを治療する方法であって、有効量の請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を、前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項18】
食物摂取量を低下させることを必要とする患者における食物摂取量を低下させる方法であって、有効量の請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を、前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項19】
体重を低下させることを必要とする患者における体重を低下させる方法であって、有効量の、請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を、前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項20】
血糖値を低下させることを必要とする患者における血糖値を低下させる方法であって、有効量の請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を、前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項21】
トリグリセリドを低下させることを必要とする患者におけるトリグリセリドを低下させる方法であって、有効量の請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を、前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項22】
前記化合物が、週１回投与される、請求項１３～２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項23】
請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項24】
臨床又は前臨床糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び脂質異常症からなる群から選択される状態を治療することを必要とする患者における、状態を治療する方法であって、有効量の、請求項１に記載の化合物を、有効量のインクレチン又はインクレチン類似体と組み合わせて前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項25】
前記化合物は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、及び配列番号８からなる群から選択されるか、又はそれらの薬学的塩であり、前記インクレチン又はインクレチン類似体は、配列番号２１である、請求項２４に記載の治療の方法。
【請求項26】
療法における使用のための、請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項27】
療法における使用のための、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項28】
２型糖尿病、肥満、脂質異常症、及びＮＡＳＨからなる群から選択される状態の治療における使用のための、請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項29】
２型糖尿病、肥満、脂質異常症、及びＮＡＳＨからなる群から選択される状態の治療における使用のための、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項30】
２型糖尿病、肥満、脂質異常症、及びＮＡＳＨからなる群から選択される状態の治療のための医薬の製造における、請求項１～１３のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、医学の分野に関する。特に、本開示は、糖尿病、肥満及び／若しくは慢性体重管理、脂質異常症並びに／又は非アルコール性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis、ＮＡＳＨ）の治療の分野におけるものである。本開示は、アミリン受容体を刺激し、したがって、食物摂取量、体重、グルコースＨｂＡ１ｃ（糖化ヘモグロビン）、及び／又はトリグリセリドを低下させることができ、糖尿病、肥満及び／若しくは慢性的体重管理、脂質異常症、並びに／又はＮＡＳＨを治療するために使用することができる化合物に関する。本開示はまた、上記のような化合物を含有する医薬組成物、並びに上記のような化合物及び医薬組成物の治療的使用も含む。
【背景技術】
【0002】
過去数十年間、糖尿病の有病率は上昇し続けている。２型真性糖尿病（Type 2 diabetes mellitus、「Ｔ２ＤＭ」）は、全ての糖尿病の９０％を占める糖尿病の最も一般的な形態である。Ｔ２ＤＭは、高血糖値を特徴とし、かつ主にインスリン耐性と関係する。糖尿病患者に望ましい治療は、血糖値を低下させ、ＨｂＡ１ｃを安定化させるべきである。
【0003】
肥満は、脂肪組織量の過剰な蓄積につながる複雑な内科的障害である。今日、肥満は、望ましくない健康上の転帰及び罹病率に関連することが多い、世界的な公衆衛生上の懸念事項である。肥満の患者の望ましい治療においては、過度の体重が低減され、肥満に関連する併存症が改善され、かつ／又は長期的な減量が維持されるべきである。
【0004】
脂質異常症は、血中のコレステロール及び他の脂質（脂肪とも呼ばれる）の異常なレベルのことである。脂質異常症は、特に喫煙する個体において、詰まった動脈（アテローム性動脈硬化症）及び心臓発作、脳卒中、又は他の循環器系問題が発生する機会を増加させる。
【0005】
ＮＡＳＨは、非アルコール性脂肪性肝炎を表す。これは、代謝障害の肝臓における発現であり、非アルコール性脂肪性肝疾患（non-alcoholic fatty liver disease、ＮＡＦＬＤ）の最も重篤な形態である。ＮＡＳＨは、糖尿病及び肥満の共存症に密接に関連している。
【0006】
アミリンは、膵臓のβ細胞からインスリンと共分泌される、３７アミノ酸ペプチドホルモンであり、糖尿病を有する人においては不足している。これは、グルカゴンの分泌を抑制し、胃の内容物の排出を遅らせ、満腹剤として作用する。結果として、アミリンは、食後の体内のグルコースの量を調節するのを助ける。しかしながら、ヒトアミリンの生理化学的特性は、医薬としてのその使用を困難にしている。例えば、アミリンは、化学的に不安定であり、生理学的ｐＨで沈殿するので製剤化が困難であり、酸性溶液中での製剤化を必要とする。更に、この薬の半減期は１時間未満であり、この薬は食事時に使用されるため、患者は、この薬を療法に使用するのには、１日に複数回の服用を必要とするであろう。
【0007】
プラムリンチドは、インスリンへの付加薬として糖尿病の治療に使用される市販のアミリンアゴニストペプチドである。プラムリンチドは、ジスルフィド結合（－Ｓ－Ｓ－）の存在及び脱アミド化の両方のせいで、中性のｐＨでは化学的に不安定である。したがって、それは酸性製剤で提供される。ヒトアミリンと比べると、プラムリンチドの２５位、２８位及び２９位のアミノ酸はプロリンで置換されている。これらの修飾は、原線維形成に向かうペプチドの傾向を減少させる。しかしながら、プラムリンチドは依然として非常に短い血漿半減期を有し、したがって、１日に２～３回注射しなければならず、これは不便であり、そのため投薬の実施回数を十分に守ることができなくなり、更に、その結果として、薬の有効性が不完全な又は最適未満のものとなり得る。加えて、その低ｐＨ製剤は、インスリン及びＧＬＰ－１類似体に使用される中性ｐＨ製剤と適合せず、それにより、そのような化合物とのその同時投与（それ自体は相乗的であり、したがって改善された臨床有効性を有し得る）が複雑なものとなる。
【0008】
ヒトアミリンは、２つの異なる受容体複合体に結合する。これらの２つの複合体はまた、カルシトニン受容体及び受容体活性タンパク質、ＲＡＭＰ１又はＲＡＭＰ３を含む。カルシトニン受容体は、全身の多くの組織で見出され、骨代謝の調節に関与すると考えられている。しかしながら、骨の調節以外、ヒトにおけるカルシトニン受容体の生理機能についてはほとんど知られておらず、したがって、カルシトニン受容体に対して高い親和性を有する分子ではオフターゲット毒性のリスクが増大する可能性がある。したがって、カルシトニン受容体と比較してアミリン受容体に対して増加した選択性を有するアミリンベースのポリペプチドは、有利な薬物動態学的及び薬理学的プロファイルを提供し得ると考えられる。
【0009】
カルシトニン受容体とアミリン受容体との間の密接な関係から、カルシトニン受容体に対するいくらかの交差反応性がアミリン受容体アゴニストには予想され得る。一例として、アミリンアゴニストペプチドであるプラムリンチドは、アミリン受容体に対して１４倍強力であるが、カルシトニン受容体に対してある程度の親和性を有する。
【0010】
ヒトアミリンアゴニストペプチドを含み、アルブミン結合部分を有するポリペプチドが開示されている。国際公開第２０１０／０４６３５７号、同第２００９／０３４１１９号、及び同第２００９／０３４１１９号を参照されたい。アルブミン結合部分を有するこれらのポリペプチドは、プラムリンチドと比較して改善された薬物動態（ＰＫ）特性又は薬力学的（ＰＤ）特性を示すが、それらは、ある特定の条件下では依然として不十分な物理的安定性を示し得る。更に、ポリペプチドは一般にカルシトニン受容体よりもアミリン受容体に対して選択性を示さない。米国特許出願公開第２０１４／００８７９９５号は、カルシトニン受容体よりもアミリン受容体に対して選択性を有するアミリンアゴニストペプチドを含むポリペプチドに関する。しかしながら、より高い効力、より低い開発可能性リスク、より低い免疫原性リスク、改善された化学安定性、及び中性ｐＨでの製剤との適合性を有するアミリンアゴニストペプチド薬物候補が依然として必要とされている。
【0011】
カルシトニン受容体よりもアミリン受容体のアゴニズムに対して選択性を示す化合物（例えば、ペプチド）が必要とされている。更に、延長された作用時間及び保持された効力を有するアミリン受容体アゴニストが必要とされている。治療的に望ましい化合物は、アミリン受容体を刺激し、食物摂取量の低下、体重の低下、血糖レベルの低下、ＨｂＡ１ｃの低下、トリグリセリドの低下、及び／又はインスリンレベルの低下などの１つ以上の有利な特性を提供するであろう。更に、治療的に望ましい化合物は、アミリン受容体を刺激する効力が保持若しくは改善された長時間の作用、低い免疫原性応答のリスク、及び／又は低い細線維化のリスクなどの、１つ以上の追加的な有利な特性を有し得る。
【0012】
更に、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症の治療を提供するためには、インクレチン又はインクレチン類似体と任意選択的に組み合わせた、本開示のアミリン受容体アゴニストの組み合わせが望ましい。そのような組み合わせはまた、好ましくは、いずれかの分子単独よりも効果的であろう。例えば、そのような組み合わせによるそのような治療は、単独での各々の分子と比較して、いずれか又は両方の分子のより低い用量の使用を可能にし得、有効性を維持しながら、より低い副作用（又は一方若しくは他方の療法のより短い期間）をもたらす可能性がある。本明細書で提供される新規の組み合わせ（複数可）は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症のための効果的な治療になると考えられる。
【発明の概要】
【0013】
したがって、本開示は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を治療する方法であって、有効量の本発明のアミリン受容体アゴニストと、有効量の追加的薬剤とをそのような治療を必要としている患者に投与することを含む、方法を提供する。
【0014】
したがって、本開示は、アミリン受容体を刺激し、以下の特性のうちの１つ以上を有する新規化合物（ペプチド）を記載する：（１）食物摂取及び体重の有効な減少；（２）グルコース及びインスリンの低下；（３）プラムリンチドと比較して、免疫原性リスクの減少、及び低い細線維化のリスク；（４）プラムリンチドと比較して大幅に延長された半減期。ここに開示される化合物の延長された半減期によって、これらの化合物を療法において使用する場合には、週１回だけ投薬すればよい。
【発明を実施するための形態】
【0015】
本開示の一実施形態は、
Ｘａａ１－Ｃ－Ｘａａ３－ＴＡＴＣＡＴ－Ｘａａ１０－Ｘａａ１１－Ｘａａ１２－ＡＥ－Ｘａａ１５－ＬＶＲＳＳ－Ｘａａ２１－Ｘａａ２２－ＦＧＰ－Ｘａａ２６－ＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（配列中、Ｘａａ１は、Ｋ又はγＥであり、Ｘａａ３は、Ｅ、Ｎ、又はＧであり、Ｘａａ１０は、Ｇ又はＱであり、Ｘａａ１１は、Ｏｒｎ又はＫであり、Ｘａａ１２は、Ｌ又はαＭｅＬであり、Ｘａａ１５は、αＭｅＦ又はＦであり、Ｘａａ２１は、Ｎ又はＨであり、Ｘａａ２２は、ＮＭｅＤ、ＮＭｅＮ、又はＮであり、Ｘａａ２６は、Ｉ又はＫである）を含む化合物（配列番号１４）又はその薬学的に許容される塩である。任意選択的に、配列番号１４を含む化合物は、この化合物の時間作用プロファイルを延長するための追加的要素を更に含む。これらの追加的要素には、リンカーの有無にかかわらず、配列中の任意の適切な位置に、免疫グロブリンのＦｃ部分、免疫グロブリンのＦｃ部分の断片、ヒト血清アルブミン（human serum albumin、ＨＳＡ）、ＶＨＨ（重鎖抗体の可変ドメイン）の変異体、ナノボディ、ヒト血清アルブミンの断片、Ｃ２０一酸、Ｃ２０二酸、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分、又は他の種類の高分子量ポリマーが含まれる。好ましくは、追加的要素は、任意選択的にリンカーを用いて化合物上のリジンに結合される。更に、本明細書に開示される実施形態のいずれかにおいて、アミリンアゴニストペプチド及びアミリンアゴニストペプチドを含む化合物は、上記のような要素を、ペプチド配列に結合又は連結され、時間作用プロファイルを延長するすでに存在する任意の要素に加えて、又は既存の要素の代替として、更に含み得る。
Ｘａａ１－Ｃ－Ｘａａ３－ＴＡＴＣＡＴ－Ｘａａ１０－Ｘａａ１１－Ｘａａ１２－ＡＥ－Ｘａａ１５－ＬＶＲＳＳ－Ｘａａ２１－Ｘａａ２２－ＦＧＰ－Ｘａａ２６－ＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（配列中、Ｘａａ１は、Ｋ又はγＥであり、Ｘａａ３は、Ｅ、Ｎ、又はＧであり、Ｘａａ１０は、Ｇ又はＱであり、Ｘａａ１１は、Ｏｒｎ又はＫであり、Ｘａａ１２は、Ｌ又はαＭｅＬであり、Ｘａａ１５は、αＭｅＦ又はＦであり、Ｘａａ２１は、Ｎ又はＨであり、Ｘａａ２２は、ＮＭｅＤ、ＮＭｅＮ、又はＮであり、Ｘａａ２６は、Ｉ又はＫである）を含む化合物（配列番号１４）又はその薬学的に許容される塩である。任意選択的に、配列番号１４を含む化合物は、この化合物の時間作用プロファイルを延長するための追加的要素を更に含む。これらの追加的要素には、リンカーの有無にかかわらず、配列中の任意の適切な位置に、免疫グロブリンのＦｃ部分、免疫グロブリンのＦｃ部分の断片、ヒト血清アルブミン（human serum albumin、ＨＳＡ）、ＶＨＨ（重鎖抗体の可変ドメイン）の変異体、ナノボディ、ヒト血清アルブミンの断片、Ｃ２０一酸、Ｃ２０二酸、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分、又は他の種類の高分子量ポリマーが含まれる。好ましくは、追加的要素は、任意選択的にリンカーを用いて化合物上のリジンに結合される。更に、本明細書に開示される実施形態のいずれかにおいて、アミリンアゴニストペプチド及びアミリンアゴニストペプチドを含む化合物は、上記のような要素を、ペプチド配列に結合又は連結され、時間作用プロファイルを延長するすでに存在する任意の要素に加えて、又は既存の要素の代替として、更に含み得る。
【0016】
配列番号１４を含む化合物のいくつかの実施形態において、Ｘａａ２６はリジンである。配列番号１４を含む化合物のいくつかの実施形態において、２６位のリジンが存在する場合、そのリジンは、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される。配列番号１４を含む化合物のいくつかの実施形態において、２６位のリジンが存在する場合、そのリジンは、式：ＡＥＥＡ２－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される。配列番号１４を含む化合物のいくつかの実施形態において、２６位のリジンが存在する場合、そのリジンは、式：γＥ－ＡＥＥＡ２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される。配列番号１４を含む化合物のいくつかの実施形態において、２６位のリジンが存在する場合、そのリジンは、式：（γＥ）２－ＡＥＥＡ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される。配列番号１４を含む化合物の他の実施形態において、２６位のリジンが存在する場合、そのリジンは、当該技術分野で公知の別のリンカーを介して脂肪酸に結合される。更に、本明細書に開示される実施形態のいずれかにおいて、アミリンアゴニストペプチド及びアミリンアゴニストペプチドを含む化合物は、本明細書の式で示される、脂肪酸を結合するための別のリンカーを含み得る。
【0017】
配列番号１４を含む化合物のいくつかの実施形態において、Ｘａａ１はリジンである。配列番号１４を含む化合物のいくつかの実施形態において、１位のリジンが存在する場合、そのリジンは、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される。配列番号１４を含む化合物の他の実施形態において、１位のリジンが存在する場合、そのリジンは、当該技術分野で公知の別のリンカーを介して脂肪酸に結合される。
【0018】
配列番号１４を含む化合物のいくつかの実施形態において、２位のシステインと７位のシステインとの間に、ジスルフィド架橋が存在する。配列番号１４を含む化合物の好ましい実施形態において、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
【0019】
本明細書における実施形態の１つは、以下の配列を含む：
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＮ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（配列番号１）。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列からなる：
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＮ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（配列番号１）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを用いて化合物Ｉを描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を用いて形成される）、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１５位のαＭｅＦ、２２位のＮＭｅＮ、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は拡大されている：
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＮ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（配列番号１）。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列からなる：
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＮ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（配列番号１）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを用いて化合物Ｉを描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を用いて形成される）、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１５位のαＭｅＦ、２２位のＮＭｅＮ、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は拡大されている：
【0020】
【化1】
【0021】
あるいは、本化合物は、配列番号１に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有し得る。あるいは、本化合物は、配列番号１に対して、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列類似性を有し得る。
【0022】
配列番号１を含む化合物のいくつかの実施形態において、２６位のリジンは、リンカーを介して脂肪酸に結合される。配列番号１を含む化合物の好ましい実施形態において、２６位のリジンは、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される。
【0023】
本明細書における実施形態の１つは、以下の配列を含む：
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＮ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号２）で示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される）。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列からなる：γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＮ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号２）で示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＩＩを描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸を使用して形成される）、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１５位のαＭｅＦ、２２位のＮＭｅＮ、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＮ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号２）で示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される）。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列からなる：γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＮ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号２）で示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＩＩを描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸を使用して形成される）、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１５位のαＭｅＦ、２２位のＮＭｅＮ、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
【0024】
【化2】
【0025】
あるいは、本化合物は、配列番号２に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有し得る。あるいは、本化合物は、配列番号２に対して、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列類似性を有し得る。
【0026】
本明細書における実施形態の１つは、以下の配列を含む：
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（配列番号３）。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列からなる：
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（配列番号３）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを用いて化合物ＩＩＩを描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を用いて形成される）、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１５位のαＭｅＦ、２２位のＮＭｅＤ、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は拡大されている：
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（配列番号３）。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列からなる：
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（配列番号３）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを用いて化合物ＩＩＩを描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を用いて形成される）、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１５位のαＭｅＦ、２２位のＮＭｅＤ、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は拡大されている：
【0027】
【化3】
【0028】
あるいは、本化合物は、配列番号３に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有し得る。あるいは、本化合物は、化合物ＩＩＩ（配列番号３）に対して、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列類似性を有し得る。
【0029】
配列番号３を含む化合物のいくつかの実施形態において、２６位のリジンは、リンカーを介して脂肪酸に結合される。配列番号３を含む化合物の好ましい実施形態において、２６位のリジンは、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈの脂肪酸リンカー部分に結合される。
【0030】
本明細書における実施形態の１つは、以下の配列を含む：
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号４）で示される脂肪酸リンカー部分に結合される。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列：γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２からなる（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号４）で示される脂肪酸リンカー部分に結合される）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＩＶを描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を使用して形成される）、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１５位のαＭｅＦ、２２位のＮＭｅＤ、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号４）で示される脂肪酸リンカー部分に結合される。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列：γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２からなる（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号４）で示される脂肪酸リンカー部分に結合される）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＩＶを描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を使用して形成される）、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１５位のαＭｅＦ、２２位のＮＭｅＤ、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
【0031】
【化4】
【0032】
あるいは、本化合物は、配列番号４に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有し得る。あるいは、本化合物は、配列番号４に対して、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列類似性を有し得る。
【0033】
本明細書の実施形態の１つは、以下の配列を含む：ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（配列番号５）。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列：ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（配列番号５）からなる。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物Ｖを描いたものであるが、ただし、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１５位のαＭｅＦ、２２位のＮＭｅＤ、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
【0034】
【化5】
【0035】
あるいは、本化合物は、配列番号５に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有し得る。あるいは、本化合物は、配列番号５に対して、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列類似性を有し得る。
【0036】
配列番号５を含む化合物のいくつかの実施形態において、１位のリジンは、リンカーを介して脂肪酸に結合される。配列番号５を含む化合物の好ましい実施形態において、１位のリジンは、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される。
【0037】
本明細書における実施形態の１つは、以下の配列：ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２を含む（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、１位のリジンは、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号６）で示される脂肪酸リンカー部分に結合される）。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列：ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２からなる（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、１位のリジンは、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号６）で示される脂肪酸リンカー部分に結合される）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＶＩを描いたものであるが、ただし、１位のリジン、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１５位のαＭｅＦ、２２位のＮＭｅＤ、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
【0038】
【化6】
【0039】
あるいは、本化合物は、配列番号６に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有し得る。あるいは、本化合物は、化合物ＶＩ（配列番号６）に対して、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列類似性を有し得る。
【0040】
本明細書における実施形態の１つは、以下の配列を含む：ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－αＭｅＬ－ＡＥＦＬＶＲＳＳＨＮＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（配列番号７）。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列：ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－αＭｅＬ－ＡＥＦＬＶＲＳＳＨＮＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（配列番号７）からなる。以下は、化合物ＶＩＩを描いたものであるが、ただし、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１２位のαＭｅＬ、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は拡大されている：
【0041】
【化7】
【0042】
あるいは、本化合物は、配列番号７に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有し得る。あるいは、本化合物は、配列番号７に対して、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列類似性を有し得る。
【0043】
配列番号７を含む化合物のいくつかの実施形態において、１位のリジンは、脂肪酸リンカー部分に結合される。配列番号７を含む化合物の好ましい実施形態において、１位のリジンは、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される。
【0044】
本明細書における実施形態の１つは、以下の配列：ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－αＭｅＬ－ＡＥＦＬＶＲＳＳＨＮＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２を含む（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、１位のリジンは、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号８）で示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される）。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列：ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－αＭｅＬ－ＡＥＦＬＶＲＳＳＨＮＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２からなる（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、１位のリジンは、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号８）で示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＶＩＩＩを描いたものであるが、ただし、１位のリジン、２位及び７位のシステイン位のＯｒｎ、１２位のαＭｅＬ、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
【0045】
【化8】
【0046】
あるいは、本化合物は、配列番号８に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有し得る。あるいは、本化合物は、配列番号８に対して、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列類似性を有し得る。
【0047】
本明細書における実施形態の１つは、以下の配列：γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧＫＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２を含む（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：ＡＥＥＡ２－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号９）で示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される）。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列：γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧＫＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２からなる（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：ＡＥＥＡ２－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号９）で示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＩＸを描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ここで、ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を使用して形成される）、２位及び７位のシステイン、２６位のリジン、並びに３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は拡大されている：
【0048】
【化9】
【0049】
あるいは、本化合物は、配列番号９に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有し得る。あるいは、本化合物は、配列番号９に対して、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列類似性を有し得る。
【0050】
本明細書における実施形態の１つは、以下の配列を含む：
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧＫＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：γＥ－ＡＥＥＡ２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号１０）で示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される）。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列：γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧＫＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２からなる（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：γＥ－ＡＥＥＡ２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号１０）で示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物Ｘを描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を使用して形成される）、２位及び７位のシステイン、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧＫＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：γＥ－ＡＥＥＡ２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号１０）で示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される）。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列：γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧＫＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２からなる（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：γＥ－ＡＥＥＡ２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号１０）で示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物Ｘを描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を使用して形成される）、２位及び７位のシステイン、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
【0051】
【化10】
【0052】
あるいは、本化合物は、配列番号１０に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有し得る。あるいは、本化合物は、配列番号１０に対して、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列類似性を有し得る。
【0053】
本明細書における実施形態の１つは、以下の配列を含む：
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧＫＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：（γＥ）２－ＡＥＥＡ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号１１）で示される脂肪酸リンカー部分に結合される）。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列：γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧＫＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２からなる（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：（γＥ）２－ＡＥＥＡ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号１１）で示される脂肪酸リンカー部分に結合される）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＸＩを描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を使用して形成される）、２位及び７位のシステイン、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧＫＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：（γＥ）２－ＡＥＥＡ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号１１）で示される脂肪酸リンカー部分に結合される）。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列：γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧＫＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２からなる（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：（γＥ）２－ＡＥＥＡ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号１１）で示される脂肪酸リンカー部分に結合される）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＸＩを描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を使用して形成される）、２位及び７位のシステイン、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
【0054】
【化11】
【0055】
あるいは、本化合物は、配列番号１１に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有し得る。あるいは、本化合物は、配列番号１１に対して、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列類似性を有し得る。
【0056】
本明細書における実施形態の１つは、以下の配列を含む：
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＱ－Ｏｒｎ－ＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：ＡＥＥＡ２－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号１２）で示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される）。代替的一実施形態は、以下の配列：γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＱ－Ｏｒｎ－ＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２からなる（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：ＡＥＥＡ２－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号１２）で示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＸＩＩを描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を使用して形成される）、２位及び７位のシステイン、１１位のオルニチン、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＱ－Ｏｒｎ－ＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：ＡＥＥＡ２－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号１２）で示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される）。代替的一実施形態は、以下の配列：γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＱ－Ｏｒｎ－ＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２からなる（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：ＡＥＥＡ２－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号１２）で示されるリンカーを介して脂肪酸に結合される）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＸＩＩを描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を使用して形成される）、２位及び７位のシステイン、１１位のオルニチン、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
【0057】
【化12】
【0058】
あるいは、本化合物は、配列番号１２に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有し得る。あるいは、本化合物は、配列番号１２に対して、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列類似性を有し得る。
【0059】
本明細書における実施形態の１つは、以下の配列を含む：
γＥ－ＣＧＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：γＥ２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号１３）で示される脂肪酸リンカー部分に結合される）。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列：γＥ－ＣＧＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２からなる（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：γＥ２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号１３）で示される脂肪酸リンカー部分に結合される）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＸＩＩＩを描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を使用して形成される）、２位及び７位のシステイン、１１位のオルニチン、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
γＥ－ＣＧＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：γＥ２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号１３）で示される脂肪酸リンカー部分に結合される）。本明細書における代替的一実施形態は、以下の配列：γＥ－ＣＧＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２からなる（式中、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在し、２６位のリジンは、式：γＥ２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ（配列番号１３）で示される脂肪酸リンカー部分に結合される）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＸＩＩＩを描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を使用して形成される）、２位及び７位のシステイン、１１位のオルニチン、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
【0060】
【化13】
【0061】
あるいは、本化合物は、配列番号１３に対して少なくとも約９０％～約９９％の配列類似性を有し得る。あるいは、本化合物は、配列番号１３に対して、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列類似性を有し得る。
【0062】
本開示は、配列番号１からなる化合物、配列番号２からなる化合物、配列番号３からなる化合物、配列番号４からなる化合物、配列番号５からなる化合物、配列番号６からなる化合物、配列番号７からなる化合物、配列番号８からなる化合物、配列番号９からなる化合物、配列番号１０からなる化合物、配列番号１１からなる化合物、配列番号１２からなる化合物、及び／若しくは配列番号１３からなる化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩を提供する。本開示はまた、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、若しくは配列番号１４を含む化合物、又はその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。本開示はまた、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、若しくは配列番号１４からなる化合物、又はその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。
【0063】
本開示は、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５を含む化合物、又はその薬学的に許容される塩を更に提供する。別の一実施形態では、本開示は、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５からなる化合物、又はその薬学的に許容される塩を提供する。好ましくは、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５の化合物は、２位のシステインと７位のシステインとの間にジスルフィド又はチオアセタール架橋を含む。より好ましくは、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５を含む化合物は、２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋を有し、脂肪酸リンカー部分に結合される。好ましくは、脂肪酸部分はリジンに結合される。
【0064】
本開示は、患者における糖尿病、肥満、脂質異常症、及び／又はＮＡＳＨを治療する方法を提供し、その方法は、治療を必要とする患者に、有効量の、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、若しくは配列番号１４を含む化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれを含む医薬組成物を投与することを含む。本開示は、食物摂取量を低下させる、体重を低下させる、血糖値を低下させる、ＨｂＡ１ｃを低下させる、かつ／又はトリグリセリドを低下させる方法を更に提供し、その方法は、それらを必要とする患者に、有効量の、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、若しくは配列番号１４を含む化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらを含む医薬組成物を投与することを含む。好ましくは、本開示は、患者における糖尿病、肥満、脂質異常症、及び／又はＮＡＳＨを治療する方法を提供し、その方法は、治療を必要とする患者に、有効量の、配列番号２を含む化合物又はそれを含む医薬組成物を投与することを含む。より好ましくは、本開示は、患者における糖尿病を治療する方法を提供し、その方法は、治療を必要とする患者に、有効量の配列番号２を含む化合物又はそれを含む医薬組成物を投与することを含む。あるいは、本開示は、患者における肥満を治療する方法を提供し、その方法は、治療を必要とする患者に、有効量の、配列番号２を含む化合物又はそれを含む医薬組成物を投与することを含む。
【0065】
本出願は、療法における使用のための、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、若しくは配列番号１４を含む化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれを含む医薬組成物を提供する。本出願は、糖尿病、肥満、脂質異常症、及び／又はＮＡＳＨの治療における使用のための、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、若しくは配列番号１４を含む化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれを含む医薬組成物を更に提供する。本出願はまた、糖尿病、肥満、脂質異常症、及び／又はＮＡＳＨの療法、治療における使用のための、配列番号２を含む化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれを含む医薬組成物を提供する。より好ましくは、本出願は、糖尿病の治療における使用のための、配列番号２を含む化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれを含む医薬組成物を提供する。あるいは、本出願は、肥満の治療における使用のための、配列番号２を含む化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれを含む医薬組成物を提供する。あるいは、本出願は、脂質異常症の治療における使用のための、配列番号２を含む化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれを含む医薬組成物を提供する。あるいは、本出願は、ＮＡＳＨの治療における使用のための、配列番号２を含む化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれを含む医薬組成物を提供する。
【0066】
本出願は、食物摂取量を低下させる、体重を低下させる、血糖値を低下させる、ＨｂＡ１ｃを低下させる、かつ／又はトリグリセリドを低下させることにおける使用のための、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、若しくは配列番号１４を含む化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれを含む組成物を提供する。より好ましくは、本出願は、食物摂取量を低下させる、体重を低下させる、血糖値を低下させる、ＨｂＡ１ｃを低下させる、かつ／又はトリグリセリドを低下させることにおける使用のための、配列番号２を含む化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれを含む組成物を提供する。
【0067】
本開示は、糖尿病、肥満、脂質異常症、及び／又はＮＡＳＨの治療のための医薬の製造における、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、若しくは配列番号１４を含む化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を更に提供する。好ましくは、本開示は、糖尿病、肥満、脂質異常症、及び／又はＮＡＳＨの治療のための医薬の製造における、配列番号２を含む化合物の使用を更に提供する。
【0068】
本開示は、食物摂取量を低下させる、体重を低下させる、血糖値を低下させる、ＨｂＡ１ｃを低下させる、かつ／又はトリグリセリドを低下させる医薬の製造における、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、若しくは配列番号１４を含む化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を更に提供する。好ましくは、本発明は、食物摂取量を低下させる、体重を低下させる、血糖値を低下させる、ＨｂＡ１ｃを低下させる、かつ／又はトリグリセリドを低下させる医薬の製造における、配列番号２を含む化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を更に提供する。
【0069】
別段に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似又は同等の任意の方法及び材料を、アミリンアゴニストペプチド、薬学的組成物、及び方法の実施又は試験において使用することができるが、好ましい方法及び材料は、本明細書に記載されている。
【0070】
また、不定冠詞「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」による要素への言及は、文脈が１つ及び１つのみの要素があることを明確に要求しない限り、複数の要素が存在する可能性を排除しない。したがって、不定冠詞の「ａ」又は「ａｎ」は、通常、「少なくとも１つ」を意味する。
【0071】
本明細書で使用される場合、「約」は、例えば、明記された濃度、長さ、分子量、ｐＨ、配列同一性、時間枠、温度、体積などの値（単数又は複数）の統計学的に意味のある範囲内を意味する。このような値又は範囲は、所与の値又は範囲の典型的には２０％以内、より典型的には１０％以内、更により典型的には５％以内の大きさの範囲内であり得る。「約」によって包含される許容される変動は、研究での特定の系に依存し、当業者によって容易に理解され得る。
【0072】
本明細書で使用する場合、１つ以上の受容体に関して、「活性（activity）」、「活性化する（activate）」、「活性化する（activating）」などは、以下に記載されるインビトロアッセイなどの当該技術分野で既知のアッセイを使用して測定される、受容体に結合して受容体での応答を誘導する本明細書におけるペプチドなどの化合物の能力を意味する。
【0073】
本明細書で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、天然由来アミノ酸、及び非コードアミノ酸の両方を意味する。当該技術分野において既知であるように、「アミノ酸」は、化学的観点から、１つ以上のアミン基及び１つ以上のカルボン酸基の存在を特徴とし、他の官能基を含んでもよい分子である。更に、アミノ酸は典型的に、標準的な１文字のコード（例えば、Ｌはロイシンである）、及び天然アミノ酸のα－メチル置換残基（例えば、α－メチルロイシン又はαＭｅＬ、及びα－メチルフェニルアラニン又はαＭｅＦ）、並びに「γＥ」、「ＮＭｅＮ」、「ＮＭｅＤ」、「Ｏｒｎ」などの、他の特定の非コードアミノ酸を使用して示される。本開示の非コードアミノ酸の構造を以下に示す：
【0074】
【化14】
【0075】
本明細書で使用される場合、「γＥ」は、γ－グルタミン酸（ただし、ペプチド結合が、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を使用して形成される）を意味する。本明細書で使用される場合、「Ｏｒｎ」は、Ｌ－オルニチンを意味する。本明細書で使用される場合、「αＭｅＬ」は、α－メチル－Ｌ－ロイシンを意味する。本明細書で使用される場合、「αＭｅＦ」は、α－メチル－Ｌ－フェニルアラニンを意味する。本明細書で使用される場合、「ＮＭｅＮ」は、Ｎ－メチル－アスパラギンを意味し、「ＮＭｅＤ」は、Ｎ－メチル－アスパラギン酸を意味する。
【0076】
本明細書で使用される場合、「ＡＥＥＡ」は、２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］酢酸を意味する。構造は以下の通りである：
【0077】
【化15】
【0078】
本明細書で使用される場合、「アミリンアゴニストペプチド」は、標的受容体を活性化し、その受容体の天然アゴニストによって誘発される少なくとも１つのインビボ又はインビトロ効果を誘発する、合成のペプチド又はポリペプチドなどの化合物を意味する。
【0079】
本明細書で使用される場合、「慢性的な体重管理」とは、現在又は以前に肥満であると特徴付けられたヒトにおいて、低カロリー食及び身体活動の増加の補助として体重減少を維持する方法を意味する。
【0080】
「糖尿病」という用語は、ホルモンのインスリンを産生するか又はこれに応答する体の能力が損なわれ、炭水化物の異常な代謝、並びに血液中及び尿中のグルコースのレベルの上昇をもたらす疾患を指す。本明細書で使用される場合、「糖尿病」という用語は、身体が血糖又はグルコースを処理する方法に影響を及ぼす慢性状態、例えば、２型真性糖尿病（Ｔ２ＤＭ）、膵臓がインスリンをほとんど産生しないか全く産生しない慢性状態、例えば、１型真性糖尿病（type 1 diabetes mellitus、Ｔ１ＤＭ）、血糖値が高いが、２型糖尿病であるほど高くない状態、例えば、前糖尿病、妊婦に影響を及ぼす高血糖の形態、例えば、妊娠糖尿病を指し得る。
【0081】
「脂質異常症」という用語は、リポタンパク質の過剰産生又は欠乏を含む、リポタンパク質代謝の障害を指す。脂質異常症は、血液中における、総コレステロール、低密度リポタンパク質（low-density lipoprotein、ＬＤＬ）コレステロール及びトリグリセリド濃度の上昇、並びに／又は高密度リポタンパク質（high-density lipoprotein、ＨＤＬ）濃度の低下に現れ得る。脂質異常症は、糖尿病に関連して発症する場合又は発症しない場合がある。
【0082】
本明細書で使用される場合、「脂肪酸」は、偶数の炭素原子の直鎖からなり、その直鎖は、鎖の長さに沿って水素原子を有し、カルボキシル基（－ＣＯＯＨ）を、鎖の一端（一酸）又は両端（二酸）に有するというものである。好ましい実施形態では、「脂肪酸」部分は、Ｃ２０二酸である。
【0083】
【化16】
【0084】
本明細書で使用される場合、「チオアセタール架橋」とは、ペプチド構造内のジスルフィド結合（複数可）を、官能的に再架橋するためのチオアセタール基の有機合成をいう。チオアセタール架橋（－Ｓ－ＣＨ２－Ｓ－）は、２つの硫黄原子どうしの間に挿入されたメチレン基と共に以下に示される。
【0085】
【化17】
【0086】
本明細書で使用される場合、「治療」又は「治療すること」という用語は、状態の症状及び合併症に対抗するか又はこれらを緩和する目的で、アミリン受容体ペプチドアゴニスト投与が示された状態を有する患者の管理及びケアを指す。治療することは、症状若しくは合併症の発症を予防するために、症状若しくは合併症を緩和するために、又は疾患、状態若しくは障害を排除するために、ここに開示されている化合物のうちの１つの化合物又はこれを含有する医薬組成物を、この化合物又はこれを含有する医薬組成物を必要とする患者に投与することを含む。好ましくは、治療することは、本開示の化合物又は本開示の化合物を含有する医薬組成物を、本開示の化合物又は本開示の化合物を含有する医薬組成物を必要とする患者に投与して、体重の正味低下、食物摂取量の低下、血糖レベルの低下、ＨｂＡ１ｃの低下、及び／又はトリグリセリドレベルの低下をもたらすことを含む。治療される患者は、哺乳動物、好ましくは、人間である。
【0087】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、本明細書に記載の化合物の１つ以上の量又は用量を必要とする個体への単回又は複数回投与により、診断又は治療中のそのような個体において所望の効果を提供する（すなわち、例えば、体重の正味低下、食物摂取量の低下、血糖レベルの低下、ＨｂＡ１ｃの低下、及び／又はトリグリセリドレベルの低下など、個体の状態に臨床的に測定可能な差異を生じさせ得る）、本明細書に記載の化合物の１つ以上の量又は用量を意味する。有効量は、既知の技法の使用によって、かつ同様の状況下で得られた結果を観察することによって、当業者であれば容易に示すことができる。個体についての有効量を決定する際には、哺乳動物の種、その大きさ、年齢、及び全体的な健康状態、関与する特定の疾患又は障害、疾患又は障害の関与度又は重症度、個体の応答、投与される特定の化合物、投与の様式、投与される調製物の生物学的利用能の特徴、選択される用法、併用薬の使用、並びに他の関連する状況を含むが、これらに限定されない、多数の因子が考慮される。好ましくは、本開示の化合物又は本開示の化合物を含有する医薬組成物の有効量を必要とする患者に投与される、本開示の化合物又は本開示の化合物を含有する医薬組成物の有効量は、体重の正味低下、食物摂取量の低下、血糖レベルの低下、ＨｂＡ１ｃの低下、及び／又はトリグリセリドレベルの低下をもたらすであろう。用量は、より高い初期負荷用量、その後のより少ない用量を含むことができる。本明細書で提供される化合物の有効用量は、０．０５μｇ／ｋｇ～５０００μｇ／ｋｇ、又は０．０１ｎｍｏｌ／ｋｇ～１０００ｎｍｏｌ／ｋｇであり得る。
【0088】
本明細書で使用する場合、「半減期」又は「ｔ１／２」は、本明細書におけるペプチドなどの化合物の量の半分が、生物学的プロセスにより、個体の血清又は血漿などの流体又は他の生理学的空間から除去されるのにかかる時間を意味する。あるいは、ｔ１／２は、そのようなペプチドの量が、その薬理学的、生理学的、又は放射線学的活性の半分を失うのにかかる時間を意味することもできる。
【0089】
本明細書で使用される場合、「半数効果濃度」又は「ＥＣ５０」は、用量反応曲線などのアッセイエンドポイントの５０％の活性化／刺激をもたらす化合物の濃度を意味する。
【0090】
本明細書で使用する場合、「長時間作用型」は、本明細書の組成物の結合親和性及び活性が、天然のペプチド又はタンパク質よりも長い期間継続し、このため、少なくとも、１日１回又は更には週３回、週２回、週１回、若しくは月１回程度の頻度で投薬することが可能になることを意味する。本明細書の化合物の時間作用プロファイルは、以下の実施例で説明するものなどの既知の薬物動態試験方法を使用して測定されてもよい。
【0091】
用語「ＮＡＳＨ」は、非アルコール性脂肪性肝炎、別名脂肪肝疾患を指す。「ＮＡＳＨ」とは、肝臓に脂肪が蓄積することによって引き起こされる肝臓の炎症及び損傷も指す。「ＮＡＳＨ」はまた、非アルコール性脂肪肝疾患（「ＮＡＦＬＤ」）のサブタイプも指す。いくつかの実施形態において、「ＮＡＳＨ」は、「ＮＡＦＬＤ」と同義であり得る。
【0092】
本明細書で使用される場合、「肥満」という用語は、健康上の問題のリスクを高める過剰な体脂肪を伴う障害を指す。「肥満」という用語は、所定の身長に対して健康的な体重と考えられるものよりも重い体重も指す。「肥満」という用語はまた、３０．０を超えるＢＭＩ、又は少なくとも１つの体重関連共存状態（例えば、高血圧、２型真性糖尿病、又は脂質異常症）を伴う２７．０以上のＢＭＩ（過体重）を指す。
【0093】
本明細書で使用される場合、ボディマス指数（body mass index、ＢＭＩ）は、キログラム単位での人の体重をメートル単位での身長の二乗で割ったものを指す。
【0094】
本明細書で使用する場合、「患者」及び「個体」は、互換的に使用され、哺乳動物、好ましくはヒトを意味する。ある特定の実施形態では、患者、好ましくはヒトは、アミリン受容体及びカルシトニン受容体の両方を刺激する化合物の投与から利益を受け得る疾患、障害、又は状態を更に特徴とする。
【0095】
いくつかの実施形態において、ここに開示されている化合物を含む医薬組成物は、そのような治療を必要としている患者に経口で投与され得る。ここに開示されている化合物を含む医薬組成物は、そのような治療を必要としている患者に非経口で投与され得る。非経口投与は、シリンジ、任意選択的にペン様シリンジ、又は機械駆動式注射器を用いた皮下、筋肉内、又は静脈内注射によって実施することができる。あるいは、非経口投与は、注入ポンプを用いて行うことができる。ここに開示されている化合物の実施形態は医薬組成物を提供し、医薬組成物は、治療有効量のここに開示されている化合物及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を、この医薬組成物を必要としている患者に投与することを含む患者への投与に好適である。そのような医薬組成物は、当該技術分野で周知である医薬製品のための従来的な賦形剤を使用する様々な技法のうちのいずれかによって調製され得る。（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，ＵＳＡ（２００６））。
【0096】
本明細書で使用する場合、「配列類似性」は、例えば、２つ以上の配列の全長又は比較ウィンドウにわたる一致など、生物学的化合物の２つ以上の核酸配列又はアミノ酸配列の定量的特性を意味する。配列類似性は、（１）同一性パーセント又は（２）類似性パーセントにより測定され得る。同一性パーセントは、２つの生物学的化合物間で同一の残基のパーセンテージを最短配列の長さで割ったものを測定し、一方、類似性パーセントは、同一性を測定し、加えて、評価に配列ギャップ及び残基類似性を含む。配列類似性を決定するための方法及びアルゴリズムは当該技術分野で周知であるため、本明細書で徹底的に説明する必要はない。同一のヌクレオチド又はアミノ酸位置の特定のパーセンテージは、少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６、７６、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％、又はそれ以上である。
【0097】
ここに開示されている化合物は、体重低下の誘導、糖尿病、糖尿病に関連する状態、肥満及び／若しくは慢性的体重管理、脂質異常症並びに／又はＮＡＳＨの治療に有用な１つ以上の追加的な治療薬と同時に、別々に、又は連続的に組み合わせて使用され得る。特許請求の範囲に記載される化合物と組み合わせることができる追加的治療薬の非限定的な例としては、インスリン又はインスリン類似体；ビグアニド；スルホニル尿素；チアゾリジンジオン；ジペプチジルペプチダーゼ－４（「ＤＰＰ－４」）阻害剤；ナトリウム依存性グルコース輸送体（ＳＧＬＴ２）阻害剤；グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）又はＧＬＰ－１類似体、胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）又はＧＩＰ類似体、オキシントモジュリン又はオキシントモジュリン類似体などのインクレチン化合物；増殖分化因子１５（ＧＤＦ１５）アゴニスト化合物；ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）類似体；ＧＩＰ／ＧＬＰ－１デュアルアゴニスト；Ｇｃｇ／ＧＩＰ／ＧＬＰ－１トリアゴニスト（グルカゴン、ＧＩＰ、及びＧＬＰ－１のトリアゴニスト）；又は上記の薬剤のいずれかの組み合わせが挙げられる。特許請求の範囲に記載される化合物及び追加の治療剤（複数可）は、単一の丸剤、カプセル剤、錠剤、又は注射可能な製剤など、同じ送達経路及びデバイスを介して同時投与することができるか、あるいは別々の送達デバイス若しくは経路で同時に別々に投与することができるか、又は逐次的に投与することができる。
【0098】
本開示の別の一実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症からなる群から選択される状態の治療を、治療を必要としている患者において行う方法であって、その方法は、患者に、有効量の、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、若しくは配列番号１４を含む化合物、又はその薬学的に許容される塩を、有効量のインクレチン又はインクレチン類似体と組み合わせて投与することを含む、方法である。好ましくは、本開示の一実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症からなる群から選択される状態の治療を、治療を必要としている患者において行う方法であって、その方法は、有効量の、配列番号２を含む化合物又はその薬学的に許容される塩を、有効量のインクレチン又はインクレチン類似体と組み合わせて患者に投与することを含む、方法である。
【0099】
本開示の特定の一実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症からなる群から選択される状態の治療を、治療を必要としている患者において行う方法であって、その方法は、そのような治療を必要とする患者に、有効量の、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、若しくは配列番号１４を含む化合物、又はその薬学的に許容される塩を、ＧＬＰ－１アゴニストと組み合わせて投与することを含む、方法である。本開示の特定の一実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、その方法は、そのような治療を必要としている患者に、有効量の、配列番号１を含む化合物又はその薬学的に許容される塩を、化合物ＸＶＩＩ（配列番号１８）を含むＣＬＰ－１アゴニストと組み合わせて投与することを含む、方法である。本開示の別の特定の一実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、その方法は、そのような治療を必要としている患者に、有効量の、配列番号２を含む化合物又はその薬学的に許容される塩を、化合物ＸＶＩＩ（配列番号１８）を含むＣＬＰ－１アゴニストと組み合わせて投与することを含む、方法である。
【0100】
本開示の特定の一実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、その方法は、そのような治療を必要とする患者に、有効量の、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、若しくは配列番号１４を含む化合物、又はその薬学的に許容される塩を、オキシントモジュリンの類似体と組み合わせて投与することを含む、方法である。本開示の特定の一実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、その方法は、そのような治療を必要とする患者に、有効量の、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、若しくは配列番号１４を含む化合物、又はその薬学的に許容される塩を、化合物ＸＶＩＩＩ（配列番号１９）を含むオキシントモジュリンの類似体と組み合わせて投与することを含む、方法である。本開示の別の特定の一実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、その方法は、そのような治療を必要としている患者に、有効量の、配列番号２を含む化合物又はその薬学的に許容される塩を、化合物ＸＶＩＩＩ（配列番号１９）を含むオキシントモジュリンの類似体と組み合わせて投与することを含む、方法である。
【0101】
本開示の特定の一実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、その方法は、そのような治療を必要とする患者に、有効量の、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、若しくは配列番号１４を含む化合物、又はその薬学的に許容される塩を、グルカゴン、ＧＩＰ、及びＧＬＰ－１のトリアゴニストと組み合わせて投与することを含む、方法である。本開示の特定の一実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、その方法は、そのような治療を必要とする患者に、有効量の、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、若しくは配列番号１４を含む化合物、又はその薬学的に許容される塩を、化合物ＸＩＸ（配列番号２０）を含む、グルカゴン、ＧＩＰ、及びＧＬＰ－１のトリアゴニストと組み合わせて投与することを含む、方法である。本開示の別の特定の一実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、その方法は、そのような治療を必要としている患者に、有効量の、配列番号２を含む化合物又はその薬学的に許容される塩を、化合物ＸＩＸ（配列番号２０）を含む、グルカゴン、ＧＩＰ、及びＧＬＰ－１のトリアゴニストと組み合わせて投与することを含む、方法である。
【0102】
本開示の特定の一実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、その方法は、そのような治療を必要とする患者に、有効量の、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、若しくは配列番号１４を含む化合物、又はその薬学的に許容される塩を、ＧＩＰ／ＧＬＰ－１デュアルアゴニストと組み合わせて投与することを含む、方法である。本開示の特定の一実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、その方法は、そのような治療を必要とする患者に、有効量の、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、若しくは配列番号１４を含む化合物、又はその薬学的に許容される塩を、配列番号２１を含むＧＩＰ／ＧＬＰ－１デュアルアゴニストと組み合わせて投与することを含む、方法である。本開示の別の特定の一実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症を有する患者を治療する方法であって、その方法は、そのような治療を必要としている患者に有効量の、配列番号２を含む化合物又はその薬学的に許容される塩を、配列番号２１を含む、ＧＩＰ／ＧＬＰ－１デュアルアゴニストと組み合わせて投与することを含む、方法である。
【0103】
本開示の別の一実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症の治療のために、インクレチン又はインクレチン類似体と別々に、同時に、又は連続的に組み合わせて使用するための、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、若しくは配列番号１４を含む化合物又はその薬学的に許容される塩である。好ましくは、本開示の一実施形態は、糖尿病、肥満、ＮＡＳＨ、及び／又は脂質異常症の治療のために、インクレチン又はインクレチン類似体と別々に、同時に、又は連続的に組み合わせて使用するための、配列番号２を含む化合物又はその薬学的に許容される塩である。より好ましくは、インクレチン又はインクレチン類似体は、配列番号２１を含む、ＧＩＰ／ＧＬＰ－１デュアルアゴニストである。
【0104】
本明細書で使用される特定の略語は、以下のように定義される：「ＡＣＮ」は、アセトニトリルを指し、「ＡＭＹ１Ｒ」は、アミリン受容体１を指し、「ｃＡＭＰ」は、環状アデノシン一リン酸を指し、「ＣＴ」は、カルシトニンを指し、「ＤＣＭ」は、ジクロロメタンを指し、「ＤＩＥＡ」は、ジイソプロピルエチルアミンを指し、「ＤＭＦ」は、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを指し、「ＤＭＳＯ」は、ジメチルスルホキシドを指し、「ＤＯＤＴ」は、２，２’－（エチレンジオキシ）ジエタンチオールを指し、「ＦＢＳ」は、ウシ胎児血清を指し、「Ｆｍｏｃ」は、フルオレニルメチルオキシカルボニルを指し、「ＧＤＦ１５」は、増殖分化因子１５を指し、「ＧＰＣＲ」は、Ｇタンパク質共役受容体を指し、「ＨＥＰＥＳ」は、４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸を指し、「ＨＴＲＦ」は、均一時間分解蛍光法を指し、「ＩＢＭＸ」は、１－メチル－３－イソブチルキサンチンを指し、「ＭＥＭ」は、最小必須培地を指し、「Ｍｔｔ」は、４－メチルトリチルを指し、「ＮＡＳＨ」は、非アルコール性脂肪性肝疾患を指し、「ＮＥＡＡ」は、非必須アミノ酸を指し、「ＰｙＡＯＰ」は、（７－アザベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファートを指し、「ＲＰ－ＨＰＬＣ」は、逆相高圧液体クロマトグラフィーを指し、「ＴＣＥＰ」は、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンヒドロクロリドを指し、「ＴＦＡ」は、トリフルオロ酢酸を指し、「ＴＲＩＳ」はトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを指す。
【実施例】
【0105】
実施例１：化合物Ｉ及び化合物ＩＩの調製及び精製
化合物Ｉ及び化合物ＩＩは、以下のステップに従って製造される。最初に、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ １２チャネル多重ペプチド合成器（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（アリゾナ州Ｔｕｃｓｏｎ）製）で、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）／ｔｅｒｔ－ブチル（ｔ－Ｂｕ）化学反応を使用して、化合物Ｉ（配列番号１）を合成する。
化合物Ｉ及び化合物ＩＩは、以下のステップに従って製造される。最初に、Ｓｙｍｐｈｏｎｙ １２チャネル多重ペプチド合成器（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（アリゾナ州Ｔｕｃｓｏｎ）製）で、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）／ｔｅｒｔ－ブチル（ｔ－Ｂｕ）化学反応を使用して、化合物Ｉ（配列番号１）を合成する。
【0106】
Ｐｏｌｙｓｔｙｒｅｎｅ Ｒｉｎｋ Ａｍｉｄｅ ＭＢＨＡ樹脂ＬＬ樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，ｓｕｂ：０．３５ｍｅｑ／ｇ，１００～２００メッシュ、カタログ番号８５５０４５）を、０．１３ｍｍｏｌスケールでの合成に使用する。標準的な側鎖保護基を使用する。Ｂｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕを、１位に使用する。Ｆｍｏｃ－Ｌｙｓ（Ｍｔｔ）－ＯＨを、２６位のリジンに使用する。各々のカップリングステップ（２回×７分間）の前に、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンを使用して、Ｆｍｏｃ基を除去する。アミノ酸カップリングは全て、Ｆｍｏｃアミノ酸（０．３Ｍ）、ジイソプロピルカルボジイミド（０．９Ｍ）、及びＯｘｙｍａ（０．９Ｍ）の等モル比を使用して、理論上のペプチド負荷に対して７．７倍のモル過剰で、６０℃で３０分間実施する。１５位のαＭｅＦ及び２２位のＮＭｅＮに続くアミノ酸カップリングを、それぞれ６０℃で３時間及び６時間実施する。化合物Ｉ（配列番号１）については、この時点で樹脂を切断カクテルで処理する（条件については、脂肪酸－リンカー部分を付加して化合物ＩＩを生成する手順の後に記載）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを用いて化合物Ｉ（配列番号１）を概略的に描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を用いて形成される）、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１５位のαＭｅＦ、２２位のＮＭｅＮ、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は拡大されている：
【0107】
【化18】
【0108】
次いで、樹脂をＤＣＭで６回入念に洗浄して、残留ＤＭＦを除去する。２６位のリジンのＭｔｔ保護基は、ＤＣＭ中で３０％のヘキサフルオロイソプロパノール（Ｏａｋｗｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ社製）の処理を２回（２回×４０分の処理）使用して、ペプチド樹脂から選択的に除去される。脂肪酸リンカー部分のその後の結合は、Ｆｍｏｃ－グルタミン酸α－ｔ－ブチルエステル（Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ－ＯｔＢｕ（Ａｒｋ Ｐｈａｒｍ，Ｉｎｃ．製））、及びモノ－ＯｔＢｕ－エイコサン酸（ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃ社（中国上海）製）をカップリングすることによって達成される。３倍過剰の試薬（ＡＡ：ＰｙＡＯＰ：ＤＩＥＡ＝１：１：１ｍｏｌ／ｍｏｌ）を１時間の長さの各々のカップリングに使用する。
【0109】
合成が完了したら、ペプチド樹脂をＤＣＭで洗浄し、完全に空気乾燥させる。乾燥樹脂を、室温で２時間、１０ｍＬの切断カクテル（ＴＦＡ：ＤＯＤＴ：ＴＩＳ：Ｈ２Ｏ＝８９：３：３：５ ｖ／ｖ）で処理する。樹脂を濾別し、各々２ｍＬのニートＴＦＡで２回洗浄し、合わせた濾液を４倍冷ジエチルエーテル（－２０℃）で処理して、粗ペプチドを沈殿させる。その後、ペプチド／エーテル懸濁液を３５００ｒｐｍで２分間遠心分離して固体ペレットを形成し、上清を傾瀉し、固体ペレットをエーテルで更に２回粉砕する。チオアセタール架橋を作製するために、風乾後のペレットを５ｍＬの２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液及び３ｍＬのＡＣＮに溶解させる。完全に溶解したら、十分に撹拌しながら、Ｈ２Ｏ中のＴＣＥＰ（３０μＭ、５当量）、ジヨードメタン（８当量）、及びトリエチルアミン（１０当量）を添加し、５～３０分間撹拌する。ＬＣＭＳを用いて反応をモニターする。これは通常５分で完了する。反応が完了した後、０．１％のＴＦＡを有する１ｍＬのＨ２Ｏを、６ｍＬの酢酸と共に、混合物に添加する。溶液が濁っている場合、必要に応じて更にＡＣＮを添加する。
【0110】
粗ペプチドを、１００％アセトニトリル及び０．１％ＴＦＡ／水緩衝液系を使用する直線勾配を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＰｈｅｎｙｌＨｅｘｙｌカラム（５μｍ、１００Ａ、２５０×２１．２ｍｍ、部品番号：００Ｇ－４２５７－Ｐ０－ＡＸ）でのＲＰ－ＨＰＬＣによって精製する。ペプチドの純度を、Ｗａｔｅｒｓ社製のＳｙｍｍｅｔｒｙ Ｓｈｉｅｌｄ ＲＰ１８カラム（３．５μｍ、６×１００ｍｍ、部品番号：１８６０００１７９）を使用する分析ＲＰ－ＨＰＬＣを使用して評価し、プール基準は９５％超である。化合物ＩＩ（配列番号２）の主要プール純度は、９８．４％超であることが判明している。最終的な主要生成物プールのその後の凍結乾燥は、凍結乾燥されたペプチドＴＦＡ塩をもたらす。化合物Ｉ（配列番号１）の分子量は、ＬＣ／ＭＳによって決定される（実測値：［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１３１５．２であり；計算値［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１３１５．５；ＭＷ（平均）実測値＝３９４２．６；ＭＷ（平均）計算値＝３９４３．４）。化合物ＩＩ（配列番号２）の分子量は、ＬＣ／ＭＳによって決定する（実測値：［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１５０９．５；計算値［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１５０９．７；ＭＷ（平均）実測値＝４５２５．５；ＭＷ（平均）計算値＝４５２６．１）。以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを用いて化合物ＩＩ（配列番号２）を概略的に描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸を用いて形成される）、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１５位のαＭｅＦ、２２位のＮＭｅＮ、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は拡大されている：
【0111】
【化19】
【0112】
上記及び当業者に既知のものに類似した方法を使用して、ペプチド骨格を合成し、脂肪酸－リンカー部分をコンジュゲートさせ、純度を調べ、本明細書に記載されている本発明の化合物の分子量を確認することができる。
【0113】
実施例２：化合物ＩＩＩ及び化合物ＩＶの調製及び精製
化合物ＩＩＩ及び化合物ＩＶは、実施例１に概説されたプロセスに従って製造される。
化合物ＩＩＩ及び化合物ＩＶは、実施例１に概説されたプロセスに従って製造される。
【0114】
以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを用いて化合物ＩＩＩ（配列番号３）を概略的に描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を用いて形成される）、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１５位のαＭｅＦ、２２位のＮＭｅＤ、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は拡大されている：
【0115】
【化20】
【0116】
化合物ＩＩＩ（配列番号３）の分子量は、ＬＣ／ＭＳによって決定する（実測値：［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１３１４．９；計算値［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１３１５．８；ＭＷ（平均）実測値＝３９４１．７；ＭＷ（平均）計算値＝３９４４．４）。
【0117】
以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを用いて化合物ＩＶ（配列番号４）を概略的に描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を用いて形成される）、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１５位のαＭｅＦ、２２位のＮＭｅＤ、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は拡大されている：
【0118】
【化21】
【0119】
分子量は、ＬＣ／ＭＳによって決定される（実測値：［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１５０９．７；計算値［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１５１０．０；ＭＷ（平均）実測値＝４５２６．１；ＭＷ（平均）計算値＝４５２７．１）。
【0120】
実施例３：化合物Ｖ及び化合物ＶＩの調製及び精製
化合物Ｖ及び化合物ＶＩは、実施例１に概説されたプロセスに従って製造される。
化合物Ｖ及び化合物ＶＩは、実施例１に概説されたプロセスに従って製造される。
【0121】
以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物Ｖ（配列番号５）を概略的に描いたものであるが、ただし、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１５位のαＭｅＦ、２２位のＮＭｅＤ、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
【0122】
【化22】
【0123】
化合物Ｖ（配列番号５）の分子量は、ＬＣ／ＭＳによって決定する（実測値：［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１３１４．９；計算値［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１３１５．５；ＭＷ（平均）実測値＝３９４１．７；ＭＷ（平均）計算値＝３９４３．４）。
【0124】
以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＶＩ（配列番号６）を概略的に描いたものであるが、ただし、１位のリジン、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１５位のαＭｅＦ、２２位のＮＭｅＤ、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
【0125】
【化23】
【0126】
分子量は、ＬＣ／ＭＳによって決定される（実測値：［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１５０９．４；計算値［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１５０９．７；ＭＷ（平均）実測値＝４５２５．２；ＭＷ（平均）計算値＝４５２６．１）。
【0127】
実施例４：化合物ＶＩＩ及び化合物ＶＩＩＩの調製及び精製
化合物ＶＩＩ及び化合物ＶＩＩＩは、実施例１に概説された方法に従って製造される。
化合物ＶＩＩ及び化合物ＶＩＩＩは、実施例１に概説された方法に従って製造される。
【0128】
以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＶＩＩ（配列番号７）を概略的に描いたものであるが、ただし、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１２位のαＭｅＬ、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
【0129】
【化24】
【0130】
化合物ＶＩＩ（配列番号７）の分子量は、ＬＣ／ＭＳによって決定する（実測値：［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１３１７．９；計算値［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１３１８．１；ＭＷ（平均）実測値＝３９５０．７；ＭＷ（平均）計算値＝３９５１．４）。
【0131】
以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＶＩＩＩ（配列番号８）を概略的に描いたものであるが、ただし、１位のリジン、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、１２位のαＭｅＬ、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
【0132】
【化25】
【0133】
分子量は、ＬＣ／ＭＳによって決定される（実測値：［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１５１２．２；計算値［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１５１２．４；ＭＷ（平均）実測値＝４５３３．６；ＭＷ（平均）計算値＝４５３４．２）。
【0134】
実施例５：化合物ＩＸの調製及び精製
化合物ＩＸは、実施例１に概説されたプロセスに従って製造される。
化合物ＩＸは、実施例１に概説されたプロセスに従って製造される。
【0135】
以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＩＸ（配列番号９）を概略的に描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を使用して形成される）、２位及び７位のシステイン、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
【0136】
【化26】
【0137】
分子量は、ＬＣ／ＭＳによって決定される（実測値：［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１５５８．３；計算値［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１５５８．８；ＭＷ（平均）実測値＝４６７１．９；ＭＷ（平均）計算値＝４６７３．３）。
【0138】
実施例６：化合物Ｘの調製及び精製
化合物Ｘは、実施例１に概説されたプロセスに従って製造される。
化合物Ｘは、実施例１に概説されたプロセスに従って製造される。
【0139】
以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物Ｘ（配列番号１０）を概略的に描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を使用して形成される）、２位及び７位のシステイン、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
【0140】
【化27】
【0141】
分子量は、ＬＣ／ＭＳによって決定される（実測値：［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１５５８．５；計算値［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１５５８．８；ＭＷ（平均）実測値＝４６７２．５；ＭＷ（平均）計算値＝４６７３．３）。
【0142】
実施例７：化合物ＸＩの調製及び精製
化合物ＸＩは、実施例１に概説されたプロセスに従って製造される。
化合物ＸＩは、実施例１に概説されたプロセスに従って製造される。
【0143】
以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＸＩ（配列番号１１）を概略的に描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を使用して形成される）、２位及び７位のシステイン、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
【0144】
【化28】
【0145】
分子量は、ＬＣ／ＭＳによって決定される（実測値：［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１５５３．２；計算値［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１５５３．４；ＭＷ（平均）実測値＝４６５６．６；ＭＷ（平均）計算値＝４６５７．２）。
【0146】
実施例８：化合物ＸＩＩの調製及び精製
化合物ＸＩＩは、実施例１に概説されたプロセスに従って製造される。
化合物ＸＩＩは、実施例１に概説されたプロセスに従って製造される。
【0147】
以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＸＩＩ（配列番号１２）を概略的に描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を使用して形成される）、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
【0148】
【化29】
【0149】
分子量は、ＬＣ／ＭＳによって決定される（実測値：［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１５７７．４；計算値［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１５７７．８；ＭＷ（平均）実測値＝４７２９．２；ＭＷ（平均）計算値＝４７３０．３）。
【0150】
実施例９：化合物ＸＩＩＩの調製及び精製
化合物ＸＩＩＩは、実施例１に概説されたプロセスに従って製造される。
化合物ＸＩＩＩは、実施例１に概説されたプロセスに従って製造される。
【0151】
以下は、標準的な一文字アミノ酸コードを使用して化合物ＸＩＩＩ（配列番号１３）を概略的に描いたものであるが、ただし、１位のグルタミン酸（γＥ）（ペプチド結合は、典型的なα位ではなくγ位の側鎖カルボン酸基を使用して形成される）、２位及び７位のシステイン、１１位のＯｒｎ、２６位のリジン、及び３７位のチロシンについては、それらのアミノ酸残基の構造は、拡大されている：
【0152】
【化30】
【0153】
分子量は、ＬＣ／ＭＳによって決定される（実測値：［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１４８１．２；計算値［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１４８１．３；ＭＷ（平均）実測値＝１４４０．６；ＭＷ（平均）計算値＝４４４１．０）。
【0154】
ジスルフィド結合架橋の調製
ジスルフィド結合を作製するために、１０滴のヨウ素溶液（ＡｃＯＨ中２％のヨウ素）を、フラスコ中の４０ｍＬの、２０％のＭｅＣＮ／２０％のＡｃＯＨ／６０％の水に添加することによって酸化溶液を調製する。これとは別に、風乾後のペプチドペレットを、５ｍＬのＡｃＯＨに溶解させることによって、ペプチド溶液を作製する。撹拌しながら、ペプチド溶液を、酸化溶液に滴下して添加する。追加のヨウ素溶液（ＡｃＯＨ中２％のヨウ素）を、必要に応じて添加して、フラスコ中の淡黄色溶液を維持する。全てのペプチド溶液を添加した後、淡褐色／黄色が５分間維持される。過剰のヨウ素は、酸化溶液に１滴の飽和アスコルビン酸を添加することによって中和される。溶液を０．４５μｍフィルターで濾過すると、ペプチドは精製の準備ができた状態である。
ジスルフィド結合を作製するために、１０滴のヨウ素溶液（ＡｃＯＨ中２％のヨウ素）を、フラスコ中の４０ｍＬの、２０％のＭｅＣＮ／２０％のＡｃＯＨ／６０％の水に添加することによって酸化溶液を調製する。これとは別に、風乾後のペプチドペレットを、５ｍＬのＡｃＯＨに溶解させることによって、ペプチド溶液を作製する。撹拌しながら、ペプチド溶液を、酸化溶液に滴下して添加する。追加のヨウ素溶液（ＡｃＯＨ中２％のヨウ素）を、必要に応じて添加して、フラスコ中の淡黄色溶液を維持する。全てのペプチド溶液を添加した後、淡褐色／黄色が５分間維持される。過剰のヨウ素は、酸化溶液に１滴の飽和アスコルビン酸を添加することによって中和される。溶液を０．４５μｍフィルターで濾過すると、ペプチドは精製の準備ができた状態である。
【0155】
実施例１０：アミリンアゴニストペプチドのインビトロ機能活性
ＡＭＹ１受容体及びＣＴ受容体は、Ｇαｓタンパク質に機能的に共役しているＧＰＣＲである。これらの受容体を刺激すると細胞内ｃＡＭＰの産生が増加し、これは、標準的なインビトロ技術を使用して検出することができる。ペプチドのインビトロ活性は、ヒトＡＭＹ１Ｒ及びＣＴＲ過剰発現細胞において形成されるｃＡＭＰの量によって測定される。
ＡＭＹ１受容体及びＣＴ受容体は、Ｇαｓタンパク質に機能的に共役しているＧＰＣＲである。これらの受容体を刺激すると細胞内ｃＡＭＰの産生が増加し、これは、標準的なインビトロ技術を使用して検出することができる。ペプチドのインビトロ活性は、ヒトＡＭＹ１Ｒ及びＣＴＲ過剰発現細胞において形成されるｃＡＭＰの量によって測定される。
【0156】
ヒトＣＴ受容体は、ｐｃＤＮＡ発現ベクターの制御下で、ヒト膀胱細胞（ＵＭ－ＵＣ－３又はＵＭＵＣ３）において安定的に発現される。ＵＭＵＣ３細胞株を、１０％のＦＢＳ、１％の抗生物質／抗真菌剤溶液、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、１ＸＭＥＭ ＮＥＡＡ、１ＸＧｌｕｔａＭＡＸ－Ｉを補充した、ＭＥＭ １Ｘ（Ｍｅｄｉｔｅｃｈ Ｉｎｃ．、１７－３０５－ＣＶ）中で培養する。ヒトＣＴａ－ｐｃＤＮＡ３．１ Ｈｙｇｒｏ（＋）（Ｔ２６１６）ＤＮＡのプラスミドを、ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ ２０００トランスフェクション試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１１６６８－０１９）を使用して、ＵＭＵＣ３細胞にトランスフェクトする。選択下で２０日後、異なるクローンからのｍＲＮＡレベルを測定して、ｈＣＴＲの発現を確認する。過剰発現されたｈＣＴＲ細胞の機能を決定するために、サケカルシトニンに応答した細胞内ｃＡＭＰレベルを測定し、各クローンにおけるｈＣＴＲ ｍＲＮＡの発現と比較する。
【0157】
ヒトＡＭＹ１Ｒ安定細胞株は、ヒトＲＡＭＰ１－ｐＣＭＶｐｕｒｏＰＢ（Ｔ１４２１３）を、ＵＭＵＣ３のｈＣＴＲクローン細胞に、更にトランスフェクトすることによって生成される。選択後、異なるクローンからのヒトＲＡＭＰ１のｍＲＮＡレベルを測定して、ヒトＡＭＹ１Ｒの発現を確認する。
【0158】
ｈＡＭＹ１Ｒ細胞は、１０％のＦＢＳ、１％の抗生物質／抗真菌溶液、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、１Ｘ ＭＥＭ ＮＥＡＡ、１Ｘ ＧｌｕｔａＭＡＸ－Ｉ、２００μｇ／ｍＬのハイグロマイシンＢ、及び０．４μｇ／ｍＬのピューロマイシンを補足したＭＥＭ １Ｘ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）で培養される。ｈＣＴＲ細胞を、ピューロマイシンを欠く同じ培地中で培養する。培養細胞を７０％の集密度に増殖させ、次いで、新鮮な培地で一晩インキュベートする。
【0159】
アッセイ日に、１０μＬのアッセイ緩衝液（フェノールレッドを含まないＭＥＭ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製、カタログ番号１７－３０５－ＣＶ）、０．１％のカゼイン、０．５ｍＭのＩＢＭＸ、５ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）を、白色のポリ－Ｄ－リジンでコーティングされた３８４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製、カタログ番号３５４６６１）の各々のウェルに分注する。ＤＭＳＯで希釈したペプチドを、ＥＣＨＯ音響液体ハンドラー（Ｂｅｃｋｍａｎ社製）を使用して、１：３の希釈系列で添加する（２００ｎＬ／ウェル）。培養細胞をＴｒｙｐＬＥ Ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｇｉｂｃｏ社製）で剥離し、アッセイ緩衝液に再懸濁させ、１２００細胞／ウェル（ｈＣＴＲ）又は１５００細胞／ウェル（ｈＡＭＹ１Ｒ）を含む１０μＬを各ウェルに分注する。プレートを室温で、１時間インキュベートする。
【0160】
ＨＴＲＦ技術（ホモジニアス時間分解蛍光法、Ｃｉｓｂｉｏ社）を販売者の使用説明書に従って使用して、細胞内ｃＡＭＰの量を定量化する。簡潔に述べると、溶解緩衝液中の１０μＬのｃＡＭＰ－ｄ２コンジュゲート及び１０μＬの抗ｃＡＭＰ－クリプテートコンジュゲートを、処理した細胞と共に室温で６０分間インキュベートする。Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ社製）を使用して、ＨＴＲＦ信号を直ちに検出し、６６５ｎｍ対６２０ｎｍで蛍光の比を計算する。生データは、各実験について生成されたｃＡＭＰ標準曲線を使用して、ｃＡＭＰ量（ｐｍｏｌ／ウェル）に変換する。相対ＥＣ５０値は、４パラメータロジスティック曲線フィッティングプログラム（Ｇｅｎｅｄａｔａ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ（登録商標）ｖ１２．０．４）で、１ｎＭのサケＣＴ（Ｂａｃｈｅｍ社製）を最大値として、かつ緩衝液のみを最小値として使用して定義された濃度応答曲線の上下範囲から計算する。本出願の化合物は、表１に示されるように、アミリン受容体対カルシトニン受容体において、選択的活性を示す。
【0161】
表１．アミリン受容体及びカルシトニン受容体での機能活性データの比較
【表1】
【0162】
実施例１１：ｈＡＭＹ１受容体及びｈＣＴ受容体に対するアミリンアゴニストペプチドの、インビトロでの結合親和性
ヒトＡＭＹ１Ｒ及びＣＴＲ過剰発現細胞（実施例１０に記載）からの膜を標準的な方法によって単離し、結合アッセイに使用した。様々な受容体／放射性リガンド相互作用の平衡解離定数（Ｋｄ）を、化合物試験について以下に説明するのと同じ試薬と緩衝液を使用する飽和結合分析から決定する。この研究で使用した受容体調製物について測定したＫｄ値は以下の通りである：ｈＡＭＹ１Ｒ：０．０６７ｎＭ；ヒトカルシトニン受容体（ｈＣＴＲ）：０．０４６ｎＭ。
ヒトＡＭＹ１Ｒ及びＣＴＲ過剰発現細胞（実施例１０に記載）からの膜を標準的な方法によって単離し、結合アッセイに使用した。様々な受容体／放射性リガンド相互作用の平衡解離定数（Ｋｄ）を、化合物試験について以下に説明するのと同じ試薬と緩衝液を使用する飽和結合分析から決定する。この研究で使用した受容体調製物について測定したＫｄ値は以下の通りである：ｈＡＭＹ１Ｒ：０．０６７ｎＭ；ヒトカルシトニン受容体（ｈＣＴＲ）：０．０４６ｎＭ。
【0163】
ｈＡＭＹ１Ｒ結合プロトコル
ｒＡＭＹ、ｈＣＴ、及びｈＡＭＹアゴニストペプチドの受容体結合親和性（Ｋｉ）を、競合的放射性リガンド結合フィルターアッセイから決定する。アッセイ緩衝液は、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ ７．１、５ｍＭのＭｇＣｌ２、５ｍＭのＫＣｌ、０．２％（ｗ／ｖ）のバシトラシン、０．００３％（ｗ／ｖ）のサポニンからなり、放射性リガンド及び膜調製物を希釈するために使用される。結合反応は、ポリスチレン９６ディープウェルアッセイブロックにおいて、０．１ｍＬの総反応物体積で実施する。ヨウ素化ラットアミリン（ＶｉＴｒａｘ社によるカスタム合成；２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ；１２５Ｉ－ｒＡＭＹ）を、最初にアッセイ緩衝液中に約５０ｐＭの濃度に希釈する。試験化合物及び非特異的結合（ＮＳＢ：３００ｎＭのｒＡＭＹとして定義）を放射能緩衝液のアリコートに加える。簡単に説明すると、試験化合物を２００ｎＭの初期濃度に希釈し、１２５Ｉ－ｒＡＭＹ中で４倍ステップで連続希釈し、次いで０．０５ｍＬの希釈試験化合物、ＮＳＢ、又は全結合（ニート１２５Ｉ－ｒＡＭＹとして定義）を、９６ウェルポリスチレンアッセイブロックに移す。アッセイ緩衝液で希釈した２００μｇ／ｍＬのｈＡＭＹ１Ｒ、０．０５ｍＬを放射能緩衝液に添加することによって、結合反応を開始する。アッセイブロックを穏やかにボルテックスし、パラフィルムで密封し、室温で約２０時間インキュベートする。インキュベーションが完了する３０分前に、フィルターマット（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社製印刷フィルターマット、カタログ番号１４５０－４２１）を、サポニンを含まないアッセイ緩衝液からなるが、０．１％（ｗ／ｖ）脂肪酸非含有ウシ血清アルブミン（ＦＡＦ－ＢＳＡ）及び０．５％（ｖ／ｖ）ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を補充した溶液に浸漬する。インキュベーションの終わりに、結合したリガンドを、１００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのＴＲＩＳ－ＨＣｌ（ｐＨ７．１）からなる氷冷クエンチ緩衝液の添加によって遊離リガンドから分離し、ＴｏｍＴｅｃ社製９６ウェルフィルターハーベスターを用いた真空濾過によって、フィルターマット上に直ちに回収する。なお、以下のフィルタープロトコールを使用する：乾燥時間、７；サイクル３反復、０；洗浄時間、１；浸漬時間、１；１回目の吸引時間、４；洗浄／吸引時間、７；２回目の吸引時間、４；空気圧、２ＰＳＩ。応答曲線における、試験したペプチドの最終アッセイ濃度範囲は、１００ｎＭ～０．０００３８ｎＭである。
ｒＡＭＹ、ｈＣＴ、及びｈＡＭＹアゴニストペプチドの受容体結合親和性（Ｋｉ）を、競合的放射性リガンド結合フィルターアッセイから決定する。アッセイ緩衝液は、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ ７．１、５ｍＭのＭｇＣｌ２、５ｍＭのＫＣｌ、０．２％（ｗ／ｖ）のバシトラシン、０．００３％（ｗ／ｖ）のサポニンからなり、放射性リガンド及び膜調製物を希釈するために使用される。結合反応は、ポリスチレン９６ディープウェルアッセイブロックにおいて、０．１ｍＬの総反応物体積で実施する。ヨウ素化ラットアミリン（ＶｉＴｒａｘ社によるカスタム合成；２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ；１２５Ｉ－ｒＡＭＹ）を、最初にアッセイ緩衝液中に約５０ｐＭの濃度に希釈する。試験化合物及び非特異的結合（ＮＳＢ：３００ｎＭのｒＡＭＹとして定義）を放射能緩衝液のアリコートに加える。簡単に説明すると、試験化合物を２００ｎＭの初期濃度に希釈し、１２５Ｉ－ｒＡＭＹ中で４倍ステップで連続希釈し、次いで０．０５ｍＬの希釈試験化合物、ＮＳＢ、又は全結合（ニート１２５Ｉ－ｒＡＭＹとして定義）を、９６ウェルポリスチレンアッセイブロックに移す。アッセイ緩衝液で希釈した２００μｇ／ｍＬのｈＡＭＹ１Ｒ、０．０５ｍＬを放射能緩衝液に添加することによって、結合反応を開始する。アッセイブロックを穏やかにボルテックスし、パラフィルムで密封し、室温で約２０時間インキュベートする。インキュベーションが完了する３０分前に、フィルターマット（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ社製印刷フィルターマット、カタログ番号１４５０－４２１）を、サポニンを含まないアッセイ緩衝液からなるが、０．１％（ｗ／ｖ）脂肪酸非含有ウシ血清アルブミン（ＦＡＦ－ＢＳＡ）及び０．５％（ｖ／ｖ）ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を補充した溶液に浸漬する。インキュベーションの終わりに、結合したリガンドを、１００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのＴＲＩＳ－ＨＣｌ（ｐＨ７．１）からなる氷冷クエンチ緩衝液の添加によって遊離リガンドから分離し、ＴｏｍＴｅｃ社製９６ウェルフィルターハーベスターを用いた真空濾過によって、フィルターマット上に直ちに回収する。なお、以下のフィルタープロトコールを使用する：乾燥時間、７；サイクル３反復、０；洗浄時間、１；浸漬時間、１；１回目の吸引時間、４；洗浄／吸引時間、７；２回目の吸引時間、４；空気圧、２ＰＳＩ。応答曲線における、試験したペプチドの最終アッセイ濃度範囲は、１００ｎＭ～０．０００３８ｎＭである。
【0164】
ｈＣＴＲ結合プロトコル
ｈＣＴＲ膜上のｒＡＭＹ、ｈＣＴ、及びｈＡＭＹアゴニストペプチドの受容体結合親和性（Ｋｉ）を、競合的放射性リガンド結合フィルターアッセイから決定する。アッセイ手順は、ｈＡＭＹ１Ｒ結合アッセイと同様であるが、ただし、１２５Ｉ－ｈＣＴ（ＶｉＴｒａｘ社によるカスタム合成；２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）をホットリガンドとして使用する。結合反応を、１４ｐＭの１２５Ｉ－ｈＣＴ及び２０μｇ／ｍＬのｈＣＴＲ膜を用いて０．２ｍＬの総反応物体積で行い、２０時間インキュベートする。応答曲線における、試験したペプチドの最終アッセイ濃度範囲は、２５００ｎＭ～０．００１２８ｎＭである。本出願の化合物は、表２に示されるように、アミリン受容体対カルシトニン受容体において、選択的活性を示す。
ｈＣＴＲ膜上のｒＡＭＹ、ｈＣＴ、及びｈＡＭＹアゴニストペプチドの受容体結合親和性（Ｋｉ）を、競合的放射性リガンド結合フィルターアッセイから決定する。アッセイ手順は、ｈＡＭＹ１Ｒ結合アッセイと同様であるが、ただし、１２５Ｉ－ｈＣＴ（ＶｉＴｒａｘ社によるカスタム合成；２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）をホットリガンドとして使用する。結合反応を、１４ｐＭの１２５Ｉ－ｈＣＴ及び２０μｇ／ｍＬのｈＣＴＲ膜を用いて０．２ｍＬの総反応物体積で行い、２０時間インキュベートする。応答曲線における、試験したペプチドの最終アッセイ濃度範囲は、２５００ｎＭ～０．００１２８ｎＭである。本出願の化合物は、表２に示されるように、アミリン受容体対カルシトニン受容体において、選択的活性を示す。
【0165】
表２．ヒトアミリン受容体及びカルシトニン受容体でのインビトロ結合（Ｋｉ）
【表2】
【0166】
実施例１２：正常なラットの食物摂取量及び体重に対するインビボでの効果
Ｅｎｖｉｇｏ ＲＭＳ社（インディアナ州インディアナポリス）から入手の、雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを、固形飼料（２０１４；Ｔｅｋｌａｄ Ｇｌｏｂａｌ（Ｅｎｖｉｇｏ ＲＭＳ社（インディアナ州インディアナポリス））で飼育し、温度制御された施設（７２．０°Ｆ；２２．２℃）内に一匹ずつ収容し、１２：１２時間の逆転照明サイクル（午前１０時にオフ）で、食物及び水を自由に摂取させた。１０週齢時点で、絶食していない体重及び初期の食物重量を記録し、動物にビヒクル又はアシル化ペプチド（１ｍＬ／ｋｇ）の単回皮下注射（ＳＣ）を行い、その後、投与後４日間にわたり体重及び食物摂取量を毎日測定する。曲線下面積（Ａｒｅａ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｕｒｖｅ、ＡＵＣ）分析を、ビヒクルに対する体重及び食物摂取量の両方について計算する。
Ｅｎｖｉｇｏ ＲＭＳ社（インディアナ州インディアナポリス）から入手の、雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットを、固形飼料（２０１４；Ｔｅｋｌａｄ Ｇｌｏｂａｌ（Ｅｎｖｉｇｏ ＲＭＳ社（インディアナ州インディアナポリス））で飼育し、温度制御された施設（７２．０°Ｆ；２２．２℃）内に一匹ずつ収容し、１２：１２時間の逆転照明サイクル（午前１０時にオフ）で、食物及び水を自由に摂取させた。１０週齢時点で、絶食していない体重及び初期の食物重量を記録し、動物にビヒクル又はアシル化ペプチド（１ｍＬ／ｋｇ）の単回皮下注射（ＳＣ）を行い、その後、投与後４日間にわたり体重及び食物摂取量を毎日測定する。曲線下面積（Ａｒｅａ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｕｒｖｅ、ＡＵＣ）分析を、ビヒクルに対する体重及び食物摂取量の両方について計算する。
【0167】
表３：長時間作用型アミリンアゴニストペプチドの単回投与後のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおける４日間の体重及び食物摂取量の変化
＊未処置の動物の初期体重と比較した、投与後９６時間時点での平均体重の変化。
＊＊投与後９６時間時点でのペプチド処置動物の累積食物摂取量対投与後９６時間時点でのビヒクル処置動物の累積食物摂取量。
【表3】
＊未処置の動物の初期体重と比較した、投与後９６時間時点での平均体重の変化。
＊＊投与後９６時間時点でのペプチド処置動物の累積食物摂取量対投与後９６時間時点でのビヒクル処置動物の累積食物摂取量。
【0168】
実施例１３：食餌誘発性肥満ラットの食物摂取量及び体重に対するインビボでの効果
Ｅｎｖｉｇｏ ＲＭＳ社（インディアナ州インディアナポリス）から入手の、１４週齢の雄のＬｏｎｇ Ｅｖａｎｓラットに、高脂肪食（摂取カロリーの４０％が脂肪、ＴＤ．９５２１７（Ｅｎｖｉｇｏ ＲＭＳ社（インディアナ州インディアナポリス）製）を３５～４５週齢まで与える。動物を、温度制御（７５．０°Ｆ；２３．９℃）された施設内に個別に収容し、１２時間の逆転明／暗サイクル（午前１０時に消灯）で、食物及び水を自由に摂取させた。体重を記録し、身体組成（脂肪量）を、定量的核磁気共鳴分析法（ＥＣＨＯ ＭＲＩ，３－１ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｚｅｒ；Ｅｃｈｏ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ社（テキサス州ヒューストン）製））を用いて決定し、続いて実験群（ｎ＝５）に無作為化する。ラットにビヒクル又はペプチド（１ｍＬ／ｋｇ）の皮下注射を、３日ごと（１日目、４日目、７日目、１０日目、及び１３日目）に行う。毎日の体重を記録し、治療終了時（１４日目）の変化を、治療前の体重（１日目）に対するパーセンテージとして計算する。体組成を１４日目に測定し、体脂肪量及び除脂肪量（体重－体脂肪量）の変化を、グラム変化として治療前の値から計算する。
Ｅｎｖｉｇｏ ＲＭＳ社（インディアナ州インディアナポリス）から入手の、１４週齢の雄のＬｏｎｇ Ｅｖａｎｓラットに、高脂肪食（摂取カロリーの４０％が脂肪、ＴＤ．９５２１７（Ｅｎｖｉｇｏ ＲＭＳ社（インディアナ州インディアナポリス）製）を３５～４５週齢まで与える。動物を、温度制御（７５．０°Ｆ；２３．９℃）された施設内に個別に収容し、１２時間の逆転明／暗サイクル（午前１０時に消灯）で、食物及び水を自由に摂取させた。体重を記録し、身体組成（脂肪量）を、定量的核磁気共鳴分析法（ＥＣＨＯ ＭＲＩ，３－１ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｚｅｒ；Ｅｃｈｏ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ社（テキサス州ヒューストン）製））を用いて決定し、続いて実験群（ｎ＝５）に無作為化する。ラットにビヒクル又はペプチド（１ｍＬ／ｋｇ）の皮下注射を、３日ごと（１日目、４日目、７日目、１０日目、及び１３日目）に行う。毎日の体重を記録し、治療終了時（１４日目）の変化を、治療前の体重（１日目）に対するパーセンテージとして計算する。体組成を１４日目に測定し、体脂肪量及び除脂肪量（体重－体脂肪量）の変化を、グラム変化として治療前の値から計算する。
【0169】
表４：アミリンアゴニストペプチドを用いた、食餌誘導性肥満ラットにおける、２週間の研究における体重の変化
＊未処置の動物の初期体重と比較した、２週目の平均体重又は体脂肪量若しくは除脂肪量の変化。
【表4】
＊未処置の動物の初期体重と比較した、２週目の平均体重又は体脂肪量若しくは除脂肪量の変化。
【0170】
実施例１４：雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおける薬物動態
化合物ＩＩ（配列番号２）、化合物ＩＶ（配列番号４）、化合物ＶＩ（配列番号６）、及び化合物ＶＩＩＩ（配列番号８）の薬物動態を、雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットへの３０ｎｍｏｌ／ｋｇの単回皮下投与後に評価する。血液の試料を、ＳＣ投与後１、３、６、１２、２４、４８、７２、及び９６時間の時点で採取する。得られた個々の血漿濃度を用いて、薬物動態パラメータを計算する。ペプチド血漿（Ｋ３ＥＤＴＡ）濃度は、ペプチドのインタクト質量を測定する適格なＬＣ／ＭＳ法を使用して決定する。各ペプチド及び類似体を、内部標準として血漿から抽出する。高分解能Ｔｈｅｒｍｏ社製Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅを、ＬＣ／ＭＳ検出に使用する。平均薬物動態パラメータを表５に示す。
化合物ＩＩ（配列番号２）、化合物ＩＶ（配列番号４）、化合物ＶＩ（配列番号６）、及び化合物ＶＩＩＩ（配列番号８）の薬物動態を、雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットへの３０ｎｍｏｌ／ｋｇの単回皮下投与後に評価する。血液の試料を、ＳＣ投与後１、３、６、１２、２４、４８、７２、及び９６時間の時点で採取する。得られた個々の血漿濃度を用いて、薬物動態パラメータを計算する。ペプチド血漿（Ｋ３ＥＤＴＡ）濃度は、ペプチドのインタクト質量を測定する適格なＬＣ／ＭＳ法を使用して決定する。各ペプチド及び類似体を、内部標準として血漿から抽出する。高分解能Ｔｈｅｒｍｏ社製Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅを、ＬＣ／ＭＳ検出に使用する。平均薬物動態パラメータを表５に示す。
【0171】
表５．雄のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットへの３０ｎｍｏｌ／ｋｇの単回皮下投与後の、ペプチドの平均薬物動態パラメータ。
略語：Ｔ１／２＝半減期、Ｔｍａｘ＝最大濃度到達時間、Ｃｍａｘ／Ｄ＝最大血漿濃度を用量で除した値、ＡＵＣＩＮＦ／Ｄ＝ＡＵＣｉｎｆを用量で除した値、ＣＬ／Ｆ＝クリアランス／生物学的利用能。注記：データは平均値で、各群のｎ＝３である。
【表5】
略語：Ｔ１／２＝半減期、Ｔｍａｘ＝最大濃度到達時間、Ｃｍａｘ／Ｄ＝最大血漿濃度を用量で除した値、ＡＵＣＩＮＦ／Ｄ＝ＡＵＣｉｎｆを用量で除した値、ＣＬ／Ｆ＝クリアランス／生物学的利用能。注記：データは平均値で、各群のｎ＝３である。
【0172】
実施例１５：雄のカニクイザルにおける薬物動態
化合物ＩＩ（配列番号２）、化合物ＩＶ（配列番号４）、化合物ＶＩ（配列番号６）、及び化合物ＶＩＩＩ（配列番号８）の薬物動態を、雄のカニクイザルへの２０ｎｍｏｌ／ｋｇの単回皮下投与後に評価する。血液の試料を次の時点：ＳＣ投与後１、３、６、１２、２４、４８、７２、１２０、１６８、２４０、３３６、４０８、及び５０４時間の時点で採取する。得られた個々の血漿濃度を用いて、薬物動態パラメータを計算する。ペプチド血漿（Ｋ３ＥＤＴＡ）濃度は、ペプチドのインタクト質量を測定する適格なＬＣ／ＭＳ法を使用して決定する。各ペプチド及び類似体を、内部標準として血漿から抽出する。高分解能Ｔｈｅｒｍｏ社製Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅを、ＬＣ／ＭＳ検出に使用する。平均薬物動態パラメータを表６に示す。
化合物ＩＩ（配列番号２）、化合物ＩＶ（配列番号４）、化合物ＶＩ（配列番号６）、及び化合物ＶＩＩＩ（配列番号８）の薬物動態を、雄のカニクイザルへの２０ｎｍｏｌ／ｋｇの単回皮下投与後に評価する。血液の試料を次の時点：ＳＣ投与後１、３、６、１２、２４、４８、７２、１２０、１６８、２４０、３３６、４０８、及び５０４時間の時点で採取する。得られた個々の血漿濃度を用いて、薬物動態パラメータを計算する。ペプチド血漿（Ｋ３ＥＤＴＡ）濃度は、ペプチドのインタクト質量を測定する適格なＬＣ／ＭＳ法を使用して決定する。各ペプチド及び類似体を、内部標準として血漿から抽出する。高分解能Ｔｈｅｒｍｏ社製Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅを、ＬＣ／ＭＳ検出に使用する。平均薬物動態パラメータを表６に示す。
【0173】
表６．カニクイザルへの２０ｎｍｏｌ／ｋｇの単回皮下投与後のペプチドの平均薬物動態パラメータ。
略語：Ｔ１／２＝半減期、Ｔｍａｘ＝最大濃度到達時間、Ｃｍａｘ／Ｄ＝最大血漿濃度を用量で除した値、ＡＵＣＩＮＦ／Ｄ＝ＡＵＣｉｎｆを用量で除した値、ＣＬ／Ｆ＝クリアランス／生物学的利用能。注記：データは平均値で、各群のｎ＝３である。
【表6】
略語：Ｔ１／２＝半減期、Ｔｍａｘ＝最大濃度到達時間、Ｃｍａｘ／Ｄ＝最大血漿濃度を用量で除した値、ＡＵＣＩＮＦ／Ｄ＝ＡＵＣｉｎｆを用量で除した値、ＣＬ／Ｆ＝クリアランス／生物学的利用能。注記：データは平均値で、各群のｎ＝３である。
【0174】
実施例１６：免疫原性リスク評価
樹状細胞（Dendritic Cell、ＤＣ）内在化アッセイ
このアッセイは、被検抗体を内在化させるヒトＤＣの能力を評価する。ＣＤ１４＋細胞を培養し、ＩＬ－４及びＧＭ－ＣＳＦを用いて、未成熟ＤＣに分化させる。被検抗体、アイソタイプ対照、又は陽性対照を、検出剤（Ｆａｂ－ＱＳＹ７－ＴＡＭＲＡ）と１：１の比率でプレインキュベートして、複合体を形成させ、次いで、培養物に添加する。細胞を、１日間インキュベートする。内在化及び切断時に、フローサイトメトリーによって陽性ＴＡＭＲＡシグナルを検出し、ＩｇＧ１－ＥＮアイソタイプ対照及び抗ＣＸＣＲ抗体を使用して、正規化された内在化指数を計算する。
樹状細胞（Dendritic Cell、ＤＣ）内在化アッセイ
このアッセイは、被検抗体を内在化させるヒトＤＣの能力を評価する。ＣＤ１４＋細胞を培養し、ＩＬ－４及びＧＭ－ＣＳＦを用いて、未成熟ＤＣに分化させる。被検抗体、アイソタイプ対照、又は陽性対照を、検出剤（Ｆａｂ－ＱＳＹ７－ＴＡＭＲＡ）と１：１の比率でプレインキュベートして、複合体を形成させ、次いで、培養物に添加する。細胞を、１日間インキュベートする。内在化及び切断時に、フローサイトメトリーによって陽性ＴＡＭＲＡシグナルを検出し、ＩｇＧ１－ＥＮアイソタイプ対照及び抗ＣＸＣＲ抗体を使用して、正規化された内在化指数を計算する。
【0175】
ＭＡＰＰＳアッセイ（ＭＨＣ関連ペプチドプロテオミクス）
ＭＡＰＰＳは、被検分子で処理されたヒト樹状細胞上のＭＨＣ－ＩＩ提示ペプチドの特性を明らかにする。正常なヒトドナーのＰＢＭＣから単離されたＣＤ１４＋細胞を培養し、ＩＬ－４及びＧＭ－ＣＳＦとインキュベーションすることによって、未成熟ＤＣに分化させる。４日目に、培地を、被検分子を含む新鮮な培地と交換する。５日目に、ＬＰＳを添加して、細胞を、成熟ＤＣに変換する。６日目に、細胞を、プロテアーゼ阻害剤を含むＲＩＰＡ緩衝液に溶解する。ＭＨＣ－ＩＩ複合体の免疫沈降は、ストレプトアビジンビーズに結合したビオチン化抗ＭＨＣ－ＩＩ抗体を使用して行う。結合した複合体を溶出させ、濾過する。単離されたＭＨＣ－ＩＩペプチドは、質量分析計によって分析される。ペプチド同定は、酵素を含まない検索アルゴリズムと、データベースに付加された試験配列を含むウシ／ヒトデータベースとを使用して、内部プロテオミクスパイプラインによって生成される。ＫＮＩＭＥワークフローは、試料からの識別ファイルを処理するために使用される。試験品から同定されたペプチドは、試験分子の親配列に対して整列される。出力は、試験分子の領域からＭＨＣ－ＩＩペプチドを提示するドナーのパーセンテージを決定するために使用される。化合物ＩＩ、化合物ＩＶ、化合物ＶＩ、化合物ＶＩＩＩ、米国特許第９，０２３，７８９号を代表する化合物（以下、「化合物’７８９」とする）、及びプラムリンチドを、ＭＡＰＰｓアッセイで試験する。化合物ＩＩ、化合物ＩＶ、化合物ＶＩ、化合物ＶＩＩＩは、アッセイにおいてＭＨＣ－ＩＩ複合体上に提示されたペプチドを示さない。化合物’７８９は、ＭＨＣ－ＩＩ複合体上の残基８～２３にわたるペプチドクラスターを提示する。プラムリンチドは、２つのペプチドクラスターであって、その両方で、ＭＨＣ－ＩＩ複合体上に提示される残基１～３４にわたる２つのペプチドクラスターを示す。
ＭＡＰＰＳは、被検分子で処理されたヒト樹状細胞上のＭＨＣ－ＩＩ提示ペプチドの特性を明らかにする。正常なヒトドナーのＰＢＭＣから単離されたＣＤ１４＋細胞を培養し、ＩＬ－４及びＧＭ－ＣＳＦとインキュベーションすることによって、未成熟ＤＣに分化させる。４日目に、培地を、被検分子を含む新鮮な培地と交換する。５日目に、ＬＰＳを添加して、細胞を、成熟ＤＣに変換する。６日目に、細胞を、プロテアーゼ阻害剤を含むＲＩＰＡ緩衝液に溶解する。ＭＨＣ－ＩＩ複合体の免疫沈降は、ストレプトアビジンビーズに結合したビオチン化抗ＭＨＣ－ＩＩ抗体を使用して行う。結合した複合体を溶出させ、濾過する。単離されたＭＨＣ－ＩＩペプチドは、質量分析計によって分析される。ペプチド同定は、酵素を含まない検索アルゴリズムと、データベースに付加された試験配列を含むウシ／ヒトデータベースとを使用して、内部プロテオミクスパイプラインによって生成される。ＫＮＩＭＥワークフローは、試料からの識別ファイルを処理するために使用される。試験品から同定されたペプチドは、試験分子の親配列に対して整列される。出力は、試験分子の領域からＭＨＣ－ＩＩペプチドを提示するドナーのパーセンテージを決定するために使用される。化合物ＩＩ、化合物ＩＶ、化合物ＶＩ、化合物ＶＩＩＩ、米国特許第９，０２３，７８９号を代表する化合物（以下、「化合物’７８９」とする）、及びプラムリンチドを、ＭＡＰＰｓアッセイで試験する。化合物ＩＩ、化合物ＩＶ、化合物ＶＩ、化合物ＶＩＩＩは、アッセイにおいてＭＨＣ－ＩＩ複合体上に提示されたペプチドを示さない。化合物’７８９は、ＭＨＣ－ＩＩ複合体上の残基８～２３にわたるペプチドクラスターを提示する。プラムリンチドは、２つのペプチドクラスターであって、その両方で、ＭＨＣ－ＩＩ複合体上に提示される残基１～３４にわたる２つのペプチドクラスターを示す。
【0176】
インシリコＴＣＥＭ（Ｔ細胞露出モチーフ）分析
この分析は、ＭＡＰＰＳによって同定された特定のペプチドクラスターが、ＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化する可能性を評価する。非生殖系列残基を含むＭＡＰＰＳで同定されたペプチド配列は、ＩｍｍｕｎｏＥｐｉｔｏｐｅデータベース（ImmunoEpitope Database、ＩＥＤＢ）の分析リソースＭＨＣＩＩ結合予測ページに入力される。ＩＥＤＢ推奨の予測方法が選択される。予測では、２７個の最も頻度の高いＨＬＡ－ＤＲ、－ＤＰ、及び－ＤＱアレルが、人口のかなりの部分をカバーしているとみなされる。１５個の残基以上の長さの各入力配列は、配列全体にわたり重複する１５ｍｅｒ（１アミノ酸のオフセット）に分割される。各ペプチドについて、ペプチドのスコアを、ＳＷＩＳＳＰＲＯＴデータベースから選択された５００万のランダム１５ｍｅｒのスコアと比較することによって、パーセンタイルランクが生成される。レジスターの推定Ｐ－１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ５、Ｐ７、及びＰ８位置に位置するアミノ酸は、ＴＣＥＭを生成し、リスクは、これらの位置における非生殖系列残基の存在に基づいて定義される。非生殖系列残基及び複数のアレルへのコア結合の可能性は、グラフィックレンダリングで報告され、免疫原性リスク評価用に考慮される。
この分析は、ＭＡＰＰＳによって同定された特定のペプチドクラスターが、ＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化する可能性を評価する。非生殖系列残基を含むＭＡＰＰＳで同定されたペプチド配列は、ＩｍｍｕｎｏＥｐｉｔｏｐｅデータベース（ImmunoEpitope Database、ＩＥＤＢ）の分析リソースＭＨＣＩＩ結合予測ページに入力される。ＩＥＤＢ推奨の予測方法が選択される。予測では、２７個の最も頻度の高いＨＬＡ－ＤＲ、－ＤＰ、及び－ＤＱアレルが、人口のかなりの部分をカバーしているとみなされる。１５個の残基以上の長さの各入力配列は、配列全体にわたり重複する１５ｍｅｒ（１アミノ酸のオフセット）に分割される。各ペプチドについて、ペプチドのスコアを、ＳＷＩＳＳＰＲＯＴデータベースから選択された５００万のランダム１５ｍｅｒのスコアと比較することによって、パーセンタイルランクが生成される。レジスターの推定Ｐ－１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ５、Ｐ７、及びＰ８位置に位置するアミノ酸は、ＴＣＥＭを生成し、リスクは、これらの位置における非生殖系列残基の存在に基づいて定義される。非生殖系列残基及び複数のアレルへのコア結合の可能性は、グラフィックレンダリングで報告され、免疫原性リスク評価用に考慮される。
【0177】
ＭＳ血清結合
このアッセイは、試験候補のヒト血清タンパク質へのオフターゲット結合を評価する。被検抗体は、Ｉｍｍｕｌｏｎ ４ ＨＢＸマイクロプレートにコーティングされる。ブロッキング後、ヒト血清を添加し、一晩インキュベートする。プレートを洗浄し、結合したタンパク質を、溶出させ、還元し、アルキル化し、消化させる。ペプチドは、質量分析計で分析される。ペプチドの同定は、トリプシン酵素特異性による検索アルゴリズム及び試験分子の配列が追加されたヒトデータベースを使用して、内部プロテオミクスパイプラインによって生成される。イオンは、内部プロテオミクスツール（Chrom-Alignment、Metaconsense、Ｑｕａｎｔ）によって定量化され、ＪＭＰで、一元配置分析／各対、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定のプラットフォームを使用して分析される。ＪＭＰを使用したイオンのｌｏｇ２ａｕｃの分析：イオンごとにＹをＸで近似／平均の比較／全ての対、Ｔｕｋｅｙ ＨＳＤ。
このアッセイは、試験候補のヒト血清タンパク質へのオフターゲット結合を評価する。被検抗体は、Ｉｍｍｕｌｏｎ ４ ＨＢＸマイクロプレートにコーティングされる。ブロッキング後、ヒト血清を添加し、一晩インキュベートする。プレートを洗浄し、結合したタンパク質を、溶出させ、還元し、アルキル化し、消化させる。ペプチドは、質量分析計で分析される。ペプチドの同定は、トリプシン酵素特異性による検索アルゴリズム及び試験分子の配列が追加されたヒトデータベースを使用して、内部プロテオミクスパイプラインによって生成される。イオンは、内部プロテオミクスツール（Chrom-Alignment、Metaconsense、Ｑｕａｎｔ）によって定量化され、ＪＭＰで、一元配置分析／各対、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定のプラットフォームを使用して分析される。ＪＭＰを使用したイオンのｌｏｇ２ａｕｃの分析：イオンごとにＹをＸで近似／平均の比較／全ての対、Ｔｕｋｅｙ ＨＳＤ。
【0178】
Ｔ細胞増殖アッセイ
このアッセイは、細胞増殖を誘導することによって、ＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化する被検抗体又は被検ＭＡＰＰＳペプチドの能力を評価する。ＣＤ８＋Ｔ細胞を枯渇させたＰＢＭＣを調製し、ＣＦＳＥで標識する。各試料を、培地対照、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ；陽性臨床ベンチマーク対照）、被検抗体、又は被検ＭＡＰＰＳペプチドと共に試験する。培養物を、７日間インキュベートする。７日目に、試料を、フローサイトメトリーによって分析する。
このアッセイは、細胞増殖を誘導することによって、ＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化する被検抗体又は被検ＭＡＰＰＳペプチドの能力を評価する。ＣＤ８＋Ｔ細胞を枯渇させたＰＢＭＣを調製し、ＣＦＳＥで標識する。各試料を、培地対照、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ；陽性臨床ベンチマーク対照）、被検抗体、又は被検ＭＡＰＰＳペプチドと共に試験する。培養物を、７日間インキュベートする。７日目に、試料を、フローサイトメトリーによって分析する。
【0179】
既存の反応性（ＡＣＥアッセイフォーマット）
このアッセイは、未治療の正常なヒト血清（ＮＨＳ）中の被検分子に対する既存の抗体（ＡＤＡ）の存在を評価する。希釈したＮＨＳを、ビオチン化された被検分子でコーティングしたＰｉｅｒｃｅ Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎプレート上で一晩インキュベートする。翌日、捕捉された結合タンパク質を酸溶出させ、Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ（ＭＳＤ社製）プレートにハードコーティングし、ビオチン標識分子及びルテニウム標識ストレプトアビジンの組合せで検出する。抗薬物抗体が存在する場合、それらは標識された薬物に結合し、得られたシグナルはティア１シグナルと呼ばれる（電気化学発光として表される）。このシグナルは、ティア２で、検出ステップで過剰な標識されていない被検分子を添加すること（これにより、ティア１シグナルが抑制される）によって確認される。既存の抗薬物抗体の存在は、ティア２阻害の９０パーセンタイルの大きさとして表される。ティア２阻害の９０パーセンタイルは、ティア１反応性の特異性の大きさを評価するための統計ツールである。この９０パーセンタイルは、ＡＤＡリスクに関して分子をランク付けするために使用される。
このアッセイは、未治療の正常なヒト血清（ＮＨＳ）中の被検分子に対する既存の抗体（ＡＤＡ）の存在を評価する。希釈したＮＨＳを、ビオチン化された被検分子でコーティングしたＰｉｅｒｃｅ Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎプレート上で一晩インキュベートする。翌日、捕捉された結合タンパク質を酸溶出させ、Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ（ＭＳＤ社製）プレートにハードコーティングし、ビオチン標識分子及びルテニウム標識ストレプトアビジンの組合せで検出する。抗薬物抗体が存在する場合、それらは標識された薬物に結合し、得られたシグナルはティア１シグナルと呼ばれる（電気化学発光として表される）。このシグナルは、ティア２で、検出ステップで過剰な標識されていない被検分子を添加すること（これにより、ティア１シグナルが抑制される）によって確認される。既存の抗薬物抗体の存在は、ティア２阻害の９０パーセンタイルの大きさとして表される。ティア２阻害の９０パーセンタイルは、ティア１反応性の特異性の大きさを評価するための統計ツールである。この９０パーセンタイルは、ＡＤＡリスクに関して分子をランク付けするために使用される。
【0180】
表７．免疫原性リスク評価のまとめ
略語：ＡＣＥ＝酸捕捉溶出；ＡＤＡ＝抗薬物抗体；ＣＤＲ＝相補性決定領域；ＤＣ＝樹状細胞；Ｈ１＝ＶＨ ＣＤＲ１；Ｈ２＝ＶＨ ＣＤＲ２；Ｈ３＝ＶＨ ＣＤＲ３；Ｌ１＝ＶＬ ＣＤＲ１；Ｌ２＝ＶＬ ＣＤＲ２；ＭＡＰＰｓ＝ＭＨＣ関連ペプチドプロテオミクス；ＭＨＣ＝主要組織適合性複合体；ＭＳ＝質量分析；Ｔ２＝ティア２；ＴＣＥＭ＝Ｔ細胞露出モチーフ；ＶＨ＝可変重鎖；ＶＬ＝可変軽鎖；ＶＨＦＲ３＝可変重鎖フレームワーク３
【表7】
略語：ＡＣＥ＝酸捕捉溶出；ＡＤＡ＝抗薬物抗体；ＣＤＲ＝相補性決定領域；ＤＣ＝樹状細胞；Ｈ１＝ＶＨ ＣＤＲ１；Ｈ２＝ＶＨ ＣＤＲ２；Ｈ３＝ＶＨ ＣＤＲ３；Ｌ１＝ＶＬ ＣＤＲ１；Ｌ２＝ＶＬ ＣＤＲ２；ＭＡＰＰｓ＝ＭＨＣ関連ペプチドプロテオミクス；ＭＨＣ＝主要組織適合性複合体；ＭＳ＝質量分析；Ｔ２＝ティア２；ＴＣＥＭ＝Ｔ細胞露出モチーフ；ＶＨ＝可変重鎖；ＶＬ＝可変軽鎖；ＶＨＦＲ３＝可変重鎖フレームワーク３
【0181】
実施例１７：他のインクレチン化合物と組み合わせた化合物ＩＩの、食事誘発性肥満（Diet Induced Obese、ＤＩＯ）ラットにおけるインビボ有効性
この研究は、ＧＬＰ－１アゴニスト（化合物ＸＶＩＩ）、オキシントモジュリン類似体（化合物ＸＶＩＩＩ）、並びにグルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ（化合物ＸＩＸ）のトリアゴニストを含む他のインクレチン化合物と組み合わせて投与したときの、ＤＩＯラットにおける糖尿病及び／又は肥満状態に対する化合物ＩＩの効果を調査するために実施する。Ｌｉｌｌｙに到着してから高カロリー食（ＴＤ９５２１７（Ｔｅｋｌａｄ社（ウィスコンシン州マジソン）製）を与えた食事誘発性肥満（ＤＩＯ）の雄のＬｏｎｇ Ｅｖａｎｓラット（Ｅｎｖｉｇｏ社より入手）を以下の研究に使用する。動物を、温度制御した（２４℃）施設に個別に収容し、１２時間の明／暗サイクル（２２：００点灯）で、食餌（ＴＤ９５２１７）及び水へアクセスを自由にした。
この研究は、ＧＬＰ－１アゴニスト（化合物ＸＶＩＩ）、オキシントモジュリン類似体（化合物ＸＶＩＩＩ）、並びにグルカゴン、ＧＬＰ－１及びＧＩＰ（化合物ＸＩＸ）のトリアゴニストを含む他のインクレチン化合物と組み合わせて投与したときの、ＤＩＯラットにおける糖尿病及び／又は肥満状態に対する化合物ＩＩの効果を調査するために実施する。Ｌｉｌｌｙに到着してから高カロリー食（ＴＤ９５２１７（Ｔｅｋｌａｄ社（ウィスコンシン州マジソン）製）を与えた食事誘発性肥満（ＤＩＯ）の雄のＬｏｎｇ Ｅｖａｎｓラット（Ｅｎｖｉｇｏ社より入手）を以下の研究に使用する。動物を、温度制御した（２４℃）施設に個別に収容し、１２時間の明／暗サイクル（２２：００点灯）で、食餌（ＴＤ９５２１７）及び水へアクセスを自由にした。
【0182】
動物の各々の実験群が同様の体重を有するように、ラットをそれらの体重に応じて無作為化する。体重は、５２９～８２３グラムの範囲である。
【0183】
各々の群は、５匹のラットを含む。ビヒクル及び化合物ＩＩ（１ｎｍｏｌ／ｋｇ）を、ビヒクル（２０ｍＭのトリス－ＨＣｌ、ｐＨ８＋０．０２％のＰＳ８０）に溶解させ、１４日間にわたって３日ごとに暗サイクルの開始の３０～９０分前に、自由にえさを与えたＤＩＯラットに皮下（ＳＣ）注射（１ｍＬ／ｋｇ）によって投与する。１、４、７、１０、及び１３日目にＳＣ注射を行う。研究を通して、体重及び食物摂取量を毎日測定する。体重の絶対変化は、同じ動物の、分子の最初の注射の前の体重を差し引くことによって計算する。
【0184】
研究の最後に、血液を採取して血糖値及び血漿インスリンを測定する。血糖値は、ＡｃｃｕＣｈｅｋ血糖測定器（Ｒｏｃｈｅ社（インディアナ州インディアナポリス）製）によって測定する。インスリンは、ＥＬＩＳＡ（ＭＳＤ社（メリーランド州ロックビル）製）によって測定する。
【0185】
全てのデータは、群当たり５匹の動物の平均±ＳＥＭとして提示される。一方向ＡＮＯＶＡを使用して統計分析を実施し、続いて、Ｔｕｋｅｙの多重比較試験を実施して、治療群をビヒクル群と又は相互に比較する。有意差は、０．０５未満のｐ値で特定される。
【0186】
表８：体重及び累積食物摂取量に対する、化合物ＸＶＩＩ、化合物ＸＶＩＩＩ、又は化合物ＸＩＸとの組み合わせを伴う化合物ＩＩの効果及び伴わない化合物ＩＩの効果。
＊治療は、３日ごとに、１、４、７、１０、及び１３日目に皮下投与した。＊＊体重測定は、毎日行った。体重の変化は、１日目から１４日目までの差をグラムで表したものである。＊＊＊累積食物摂取量は、１４日間の治療期間にわたって消費された総食物であった。統計分析は、一元配置ＡＮＯＶＡ、続いてテューキー検定によって行った。＊ビヒクル群と比較して、ｐ値は０．０５未満；＃化合物ＸＶＩＩ、化合物ＸＶＩＩＩ、又は化合物ＸＩＸ群のいずれかと比較して、ｐ値は０．０５未満；＋化合物ＩＩと比較して、ｐ値は０．０５未満。
【表8】
＊治療は、３日ごとに、１、４、７、１０、及び１３日目に皮下投与した。＊＊体重測定は、毎日行った。体重の変化は、１日目から１４日目までの差をグラムで表したものである。＊＊＊累積食物摂取量は、１４日間の治療期間にわたって消費された総食物であった。統計分析は、一元配置ＡＮＯＶＡ、続いてテューキー検定によって行った。＊ビヒクル群と比較して、ｐ値は０．０５未満；＃化合物ＸＶＩＩ、化合物ＸＶＩＩＩ、又は化合物ＸＩＸ群のいずれかと比較して、ｐ値は０．０５未満；＋化合物ＩＩと比較して、ｐ値は０．０５未満。
【0187】
化合物ＩＩと化合物ＸＶＩＩ、化合物ＸＶＩＩＩ又は化合物ＸＩＸとの組合せでは、化合物ＩＩ単独よりも大きな体重減少がある。
【0188】
配列番号１：化合物Ｉ
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＮ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＮ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
【0189】
配列番号２：化合物ＩＩ
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＮ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
２６位のリジンは、式（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される。
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＮ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
２６位のリジンは、式（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される。
【0190】
配列番号３：化合物ＩＩＩ
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
【0191】
配列番号４：化合物ＩＶ
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
２６位のリジンは、式（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される。
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
２６位のリジンは、式（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される。
【0192】
配列番号５：化合物Ｖ
ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
【0193】
配列番号６：化合物ＶＩ
ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
１位のリジンは、式（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される。
ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
１位のリジンは、式（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される。
【0194】
配列番号７：化合物ＶＩＩ
ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－αＭｅＬ－ＡＥＦＬＶＲＳＳＨＮＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－αＭｅＬ－ＡＥＦＬＶＲＳＳＨＮＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
【0195】
配列番号８：化合物ＶＩＩＩ
ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－αＭｅＬ－ＡＥＦＬＶＲＳＳＨＮＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
１位のリジンは、式（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される。
ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－αＭｅＬ－ＡＥＦＬＶＲＳＳＨＮＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
１位のリジンは、式（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される。
【0196】
配列番号９：化合物ＩＸ
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧＫＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
２６位のリジンは、式ＡＥＥＡ２－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される。
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧＫＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
２６位のリジンは、式ＡＥＥＡ２－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される。
【0197】
配列番号１０：化合物Ｘ
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧＫＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
２６位のリジンは、式γＥ－ＡＥＥＡ２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される。
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧＫＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
２６位のリジンは、式γＥ－ＡＥＥＡ２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される。
【0198】
配列番号１１：化合物ＸＩ
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧＫＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
２６位のリジンは、式（γＥ）２－ＡＥＥＡ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される。
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧＫＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
２６位のリジンは、式（γＥ）２－ＡＥＥＡ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される。
【0199】
配列番号１２：化合物ＸＩＩ
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＱ－Ｏｒｎ－ＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
２６位のリジンは、式ＡＥＥＡ２－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される。
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＱ－Ｏｒｎ－ＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
２６位のリジンは、式ＡＥＥＡ２－γＥ－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される。
【0200】
配列番号１３：化合物ＸＩＩＩ
γＥ－ＣＧＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
２６位のリジンは、式γＥ２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される。
γＥ－ＣＧＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥＦＬＶＲＳＳＮＮＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する。
２６位のリジンは、式γＥ２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される。
【0201】
配列番号１４：化合物ＸＩＶ
Ｘａａ１－Ｃ－Ｘａａ３－ＴＡＴＣＡＴ－Ｘａａ１０－Ｘａａ１１－Ｘａａ１２－ＡＥ－Ｘａａ１５－ＬＶＲＳＳ－Ｘａａ２１－Ｘａａ２２－ＦＧＰ－Ｘａａ２６－ＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
（配列中、
Ｘａａ１は、Ｋ又はγＥであり
Ｘａａ３は、Ｅ、Ｎ、又はＧであり
Ｘａａ１０は、Ｇ又はＱであり、
Ｘａａ１１は、Ｏｒｎ又はＫであり、
Ｘａａ１２は、Ｌ又はαＭｅＬであり
Ｘａａ１５は、αＭｅＦ又はＦであり
Ｘａａ２１は、Ｎ又はＨであり
Ｘａａ２２は、ＮＭｅＤ、ＮＭｅＮ、又はＮであり
Ｘａａ２６は、Ｉ又はＫである。）
Ｘａａ１－Ｃ－Ｘａａ３－ＴＡＴＣＡＴ－Ｘａａ１０－Ｘａａ１１－Ｘａａ１２－ＡＥ－Ｘａａ１５－ＬＶＲＳＳ－Ｘａａ２１－Ｘａａ２２－ＦＧＰ－Ｘａａ２６－ＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
（配列中、
Ｘａａ１は、Ｋ又はγＥであり
Ｘａａ３は、Ｅ、Ｎ、又はＧであり
Ｘａａ１０は、Ｇ又はＱであり、
Ｘａａ１１は、Ｏｒｎ又はＫであり、
Ｘａａ１２は、Ｌ又はαＭｅＬであり
Ｘａａ１５は、αＭｅＦ又はＦであり
Ｘａａ２１は、Ｎ又はＨであり
Ｘａａ２２は、ＮＭｅＤ、ＮＭｅＮ、又はＮであり
Ｘａａ２６は、Ｉ又はＫである。）
【0202】
配列番号１５：化合物ＸＶ；プラムリンチド
ＫＣＮＴＡＴＣＡＴＱＲＬＡＮＦＬＶＨＳＳＮＮＦＧＰＩＬＰＰＴＮＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にジスルフィド架橋が存在する。
ＫＣＮＴＡＴＣＡＴＱＲＬＡＮＦＬＶＨＳＳＮＮＦＧＰＩＬＰＰＴＮＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にジスルフィド架橋が存在する。
【0203】
配列番号１６：化合物ＸＶＩ；ｈＣＴ
ＣＧＮＬＳＴＣＭＬＧＴＹＴＱＤＦＮＫＦＨＴＦＰＱＴＡＩＧＶＧＡＰ－ＮＨ２
１位のシステインと７位のシステインとの間にジスルフィド架橋が存在する。
ＣＧＮＬＳＴＣＭＬＧＴＹＴＱＤＦＮＫＦＨＴＦＰＱＴＡＩＧＶＧＡＰ－ＮＨ２
１位のシステインと７位のシステインとの間にジスルフィド架橋が存在する。
【0204】
配列番号１７：ｈＡＭＹ
ＫＣＮＴＡＴＣＡＴＱＲＬＡＮＦＬＶＨＳＳＮＮＦＧＡＩＬＳＳＴＮＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にジスルフィド架橋が存在する。
ＫＣＮＴＡＴＣＡＴＱＲＬＡＮＦＬＶＨＳＳＮＮＦＧＡＩＬＳＳＴＮＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
２位のシステインと７位のシステインとの間にジスルフィド架橋が存在する。
【0205】
配列番号１８：化合物ＸＶＩＩ
Ｈ－Ａｉｂ－ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ２Ｈ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
Ｈ－Ａｉｂ－ＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１６－ＣＯ２Ｈ）ＥＦＩＡＷＬＶＲＧＲＧ
【0206】
配列番号１９：化合物ＸＶＩＩＩ
Ｈ－Ａｉｂ－ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＥＦＶＥＷＬＬＥＧＧＰＳＳＧ－ＮＨ２
Ｈ－Ａｉｂ－ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＫＹＬＤＥＫＫＡＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＥＦＶＥＷＬＬＥＧＧＰＳＳＧ－ＮＨ２
【0207】
配列番号２０：化合物ＸＩＸ
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＫＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）－（γＧｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＡＱ－Ａｉｂ－ＡＦＩＥＹＬＬＥＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴＦＴＳＤＹＳＩ－αＭｅＬ－ＬＤＫＫ（（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）－（γＧｌｕ）－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈ）ＡＱ－Ａｉｂ－ＡＦＩＥＹＬＬＥＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ－ＮＨ２
【0208】
配列番号２１
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ
Ｘ１は、Ａｉｂであり、Ｘ２は、Ａｉｂであり、２０位のＫは、（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）１－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２ＨでのＫ側鎖のイプシロン－アミノ基へのコンジュゲーションを通じて化学的に修飾され、Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端第一級アミドとしてアミド化されている。
ＹＸ１ＥＧＴＦＴＳＤＹＳＩＸ２ＬＤＫＩＡＱＫＡＦＶＱＷＬＩＡＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ
Ｘ１は、Ａｉｂであり、Ｘ２は、Ａｉｂであり、２０位のＫは、（２－［２－（２－アミノ－エトキシ）－エトキシ］－アセチル）２－（γＧｌｕ）１－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２ＨでのＫ側鎖のイプシロン－アミノ基へのコンジュゲーションを通じて化学的に修飾され、Ｃ末端アミノ酸は、Ｃ末端第一級アミドとしてアミド化されている。
【0209】
配列番号２２：化合物Ｉ骨格
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＮ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＮ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
【0210】
配列番号２３：化合物ＩＩＩ骨格
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
γＥ－ＣＮＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＫＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
【0211】
配列番号２４：化合物Ｖ骨格
ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－ＬＡＥ－αＭｅＦ－ＬＶＲＳＳＮ－ＮＭｅＤ－ＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
【0212】
配列番号２５：化合物ＶＩＩ骨格
ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－αＭｅＬ－ＡＥＦＬＶＲＳＳＨＮＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
ＫＣＥＴＡＴＣＡＴＧ－Ｏｒｎ－αＭｅＬ－ＡＥＦＬＶＲＳＳＨＮＦＧＰＩＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ－ＮＨ２
【配列表】
【手続補正書】
【提出日】2023-09-25
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
Ｘａａ１－Ｃ－Ｘａａ３－ＴＡＴＣＡＴ－Ｘａａ１０－Ｘａａ１１－Ｘａａ１２－ＡＥ－Ｘａａ１５－ＬＶＲＳＳ－Ｘａａ２１－Ｘａａ２２－ＦＧＰ－Ｘａａ２６－ＬＰＰＴＥＶＧＳＮＴＹ（配列番号１４）［配列中、
Ｘａａ１は、Ｋ又はγＥであり、
Ｘａａ３は、Ｅ、Ｎ、又はＧであり、
Ｘａａ１０は、Ｇ又はＱであり、
Ｘａａ１１は、Ｏｒｎ又はＫであり、
Ｘａａ１２は、Ｌ又はαＭｅＬであり、
Ｘａａ１５は、αＭｅＦ又はＦであり、
Ｘａａ２１は、Ｎ又はＨであり、
Ｘａａ２２は、ＮＭｅＤ、ＮＭｅＮ、又はＮであり、
Ｘａａ２６は、Ｉ又はＫである］
を含む、化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項2】
Ｘａａ１が、γＥであり、Ｘａａ３が、Ｎであり、
Ｘａａ１０が、Ｇであり、
Ｘａａ１１が、Ｏｒｎであり、
Ｘａａ１２が、Ｌであり、
Ｘａａ１５が、αＭｅＦであり、
Ｘａａ２１が、Ｎであり、
Ｘａａ２２が、ＮＭｅＮであり、
Ｘａａ２６が、Ｋである、請求項１に記載の化合物（配列番号２２）又はその薬学的に許容される塩。
【請求項3】
Ｘａａ１が、γＥであり、Ｘａａ３が、Ｎであり、
Ｘａａ１０が、Ｇであり、
Ｘａａ１１が、Ｏｒｎであり、
Ｘａａ１２が、Ｌであり、
Ｘａａ１５が、αＭｅＦであり、
Ｘａａ２１が、Ｎであり、
Ｘａａ２２が、ＮＭｅＤであり、
Ｘａａ２６が、Ｋである、請求項１に記載の化合物（配列番号２３）又はその薬学的に許容される塩。
【請求項4】
Ｘａａ２６におけるリジンが、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される、請求項２又は３に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項5】
Ｘａａ１が、Ｋであり、Ｘａａ３が、Ｅであり、
Ｘａａ１０が、Ｇであり、
Ｘａａ１１が、Ｏｒｎであり、
Ｘａａ１２が、Ｌであり、
Ｘａａ１５が、αＭｅＦであり、
Ｘａａ２１が、Ｎであり、
Ｘａａ２２が、ＮＭｅＤであり、
Ｘａａ２６が、Ｉである、請求項１に記載の化合物（配列番号２４）又はその薬学的に許容される塩。
【請求項6】
Ｘａａ１が、Ｋであり、Ｘａａ３が、Ｅであり、
Ｘａａ１０が、Ｇであり、
Ｘａａ１１が、Ｏｒｎであり、
Ｘａａ１２が、αＭｅＬであり、
Ｘａａ１５が、Ｆであり、
Ｘａａ２１が、Ｈであり、
Ｘａａ２２が、Ｎであり、
Ｘａａ２６が、Ｉである、請求項１に記載の化合物（配列番号２５）又はその薬学的に許容される塩。
【請求項7】
Ｘａａ１におけるリジンが、式：（γＥ）２－ＣＯ－（ＣＨ２）１８－ＣＯ２Ｈで示される脂肪酸リンカー部分に結合される、請求項５又は６に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項8】
２位のシステインと７位のシステインとの間にチオアセタール架橋が存在する、請求項１～７のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項9】
前記化合物が、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、及び配列番号１３からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項10】
配列番号２からなる、化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項11】
配列番号４からなる、化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項12】
配列番号６からなる、化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項13】
配列番号８からなる、化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項14】
配列番号２を含む、化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項15】
配列番号４を含む、化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項16】
配列番号６を含む、化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項17】
配列番号８を含む、化合物又はその薬学的に許容される塩。
【請求項18】
請求項１～１７のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩と、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項19】
療法における使用のための、請求項１～１７のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物。
【請求項20】
療法における使用のための、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項21】
２型糖尿病、肥満、脂質異常症、及びＮＡＳＨからなる群から選択される状態の治療における使用のための、請求項１～１７のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物。
【請求項22】
２型糖尿病、肥満、脂質異常症、及びＮＡＳＨからなる群から選択される状態の治療における使用のための、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項23】
２型糖尿病、肥満、脂質異常症、及びＮＡＳＨからなる群から選択される状態の治療のための医薬の製造における、請求項１～１７のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【国際調査報告】