特表 2024-508326 抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-02-26

(54)【発明の名称】抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20240216BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240216BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240216BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20240216BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20240216BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20240216BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20240216BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20240216BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20240216BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20240216BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20240216BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20240216BHJP

   C07K 16/28 20060101ALN20240216BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 N

A61P43/00 111

A61P29/00

A61P37/08

A61P37/06

A61P29/00 101

A61P11/06

A61P19/02

A61K39/395 D

A61K9/08

A61K47/18

A61K47/12

A61K47/02

A61K47/26

C07K16/28 ZNA

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023553279

(86)(22)【出願日】2022-03-02

(85)【翻訳文提出日】2023-09-01

(86)【国際出願番号】 US2022070927

(87)【国際公開番号】W WO2022187834

(87)【国際公開日】2022-09-09

(31)【優先権主張番号】63/156,121

(32)【優先日】2021-03-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】516166030

【氏名又は名称】アラコス インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ウィリアムズ， ジェイソン

(72)【発明者】

【氏名】トマセヴィック， ネナド

(72)【発明者】

【氏名】ベビントン， クリストファー ロバート

【テーマコード（参考）】

4C076

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA12

4C076BB13

4C076BB16

4C076CC04

4C076CC07

4C076DD23

4C076DD42

4C076DD51

4C076EE23

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB11

4C085BB36

4C085BB42

4C085CC01

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG02

4C085GG04

4H045AA11

4H045AA30

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA45

(57)【要約】

本開示は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む製剤、及びそれに関する製品を提供する。いくつかの実施形態では、製剤は、アルギニン、スクシナート、塩化ナトリウム、及びポリソルベートをさらに含む。本開示の特定の態様は、（ａ）ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を約５ｍｇ／ｍＬから約１５ｍｇ／ｍＬの濃度で；（ｂ）アルギニンを約５０ｍＭから約２００ｍＭの濃度で；（ｃ）スクシナートを約５ｍＭから約５０ｍＭの濃度で；（ｄ）塩化ナトリウムを約４０ｍＭから約１５０ｍＭの濃度で；及び（ｅ）ポリソルベートを約０．００２％から約０．０５％の濃度で含み、約５．０から約７．０のｐＨ（例えば、約６．０のｐＨ）を有する製剤（例えば、液体製剤）に関する。
【選択図】図６Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ａ）ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を約５ｍｇ／ｍＬから約１５ｍｇ／ｍＬの濃度で；（ｂ）アルギニンを約５０ｍＭから約２００ｍＭの濃度で；（ｃ）スクシナートを約５ｍＭから約５０ｍＭの濃度で；（ｄ）塩化ナトリウムを約４０ｍＭから約１５０ｍＭの濃度で；及び（ｅ）ポリソルベートを約０．００２％から約０．０５％の濃度で含む液体製剤であって、前記抗体は、（１）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、（１）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、を含む、前記製剤。

【請求項2】

前記抗体は、約１５ｍｇ／ｍＬの濃度である、請求項１に記載の製剤。

【請求項3】

アルギニンを約１００ｍＭから約２００ｍＭの濃度で含む、請求項１または請求項２に記載の製剤。

【請求項4】

アルギニンを約１００ｍＭから約１５０ｍＭの濃度で含む、請求項１または請求項２に記載の製剤。

【請求項5】

アルギニンを約１２５ｍＭの濃度で含む、請求項１または請求項２に記載の製剤。

【請求項6】

前記アルギニンは、アルギニンＨＣｌ塩である、請求項１～５のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項7】

スクシナートを約１０ｍＭから約５０ｍＭの濃度で含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項8】

スクシナートを約１０ｍＭから約３０ｍＭの濃度で含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項9】

スクシナートを約２０ｍＭの濃度で含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項10】

前記スクシナートは、コハク酸ナトリウム塩である、請求項１～９のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項11】

塩化ナトリウムを約５０ｍＭから約１３０ｍＭの濃度で含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項12】

塩化ナトリウムを約７５ｍＭから約１００ｍＭの濃度で含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項13】

塩化ナトリウムを約８０ｍＭの濃度で含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項14】

ポリソルベートを約０．０１％から約０．０５％の濃度で含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項15】

ポリソルベートを約０．０２５％の濃度で含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項16】

前記ポリソルベートは、ポリソルベート－８０である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項17】

前記製剤は、約５．０から約７．０のｐＨを有する、請求項１～１６のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項18】

前記製剤は、約６．０のｐＨを有する、請求項１～１６のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項19】

（ａ）前記抗体を１５ｍｇ／ｍＬの濃度で；（ｂ）アルギニンを１２５ｍＭの濃度で；（ｃ）スクシナートを２０ｍＭの濃度で；（ｄ）塩化ナトリウムを８０ｍＭの濃度で；及び（ｅ）ポリソルベートを０．０２５％の濃度で含み、前記製剤のｐＨは６．０である、請求項１に記載の製剤。

【請求項20】

サイズ排除クロマトグラフィー・高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）によって小さな抗体オリゴマーの存在量により測定される場合、凍結融解後、前記製剤中の前記抗体の５％未満が凝集する、請求項１～１９のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項21】

サイズ排除クロマトグラフィー・高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）によって小さな抗体オリゴマーの存在量により測定される場合、５回の凍結融解後、前記製剤中の前記抗体の５％未満が凝集する、請求項２０に記載の製剤。

【請求項22】

サイズ排除クロマトグラフィー・高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）によって小さな抗体オリゴマーの存在量により測定される場合、８００ｒｐｍでの一晩の振盪後、前記製剤中の前記抗体の５％未満が凝集する、請求項１～２１のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項23】

紫外可視分光測定によって測定される場合、凍結融解後、前記製剤は、参照標準のＡ_{４００ｎｍ}の約１５０％未満の４００ｎｍにおける吸光度（Ａ_{４００ｎｍ}）を有する、請求項１～２２のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項24】

紫外可視分光測定によって測定される場合、５回の凍結融解後、前記製剤は、約０．１未満の４００ｎｍにおける吸光度（Ａ_{４００ｎｍ}）を有する、請求項２３に記載の製剤。

【請求項25】

紫外可視分光測定によって測定される場合、８００ｒｐｍでの一晩の振盪後、前記製剤は、約０．１未満の４００ｎｍにおける吸光度（Ａ_{４００ｎｍ}）を有する、請求項１～２４のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項26】

前記抗体は、Ｆｃ領域と、前記Ｆｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、前記製剤中の前記抗体の前記Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満がフコース残基を含む、請求項１～２５のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項27】

前記組成物中の前記抗体の前記Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖のいずれもフコース残基を実質的に含まない、請求項２６に記載の製剤。

【請求項28】

前記抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／または配列番号８もしくは９から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１～２７のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項29】

前記抗体は、ヒトＩｇＧのＦｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む、請求項２８に記載の製剤。

【請求項30】

前記ヒトＩｇＧのＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域を含む、請求項２９に記載の製剤。

【請求項31】

前記ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域は、非フコシル化されている、請求項３０に記載の製剤。

【請求項32】

前記ヒトＩｇＧのＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域を含む、請求項２９に記載の製剤。

【請求項33】

前記ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、アミノ酸残基はＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスに従って番号付けされる、請求項３２に記載の製剤。

【請求項34】

前記抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を改善するように操作されている、請求項２９～３３のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項35】

前記抗体は、前記Ｆｃ領域にＡＤＣＣ活性を改善する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、請求項３４に記載の製剤。

【請求項36】

前記抗体の前記重鎖の少なくとも１つまたは２つは、非フコシル化されている、請求項２９～３５のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項37】

前記抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び／または配列番号２０もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１～２７のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項38】

前記抗体は、モノクローナル抗体である、請求項１～３７のいずれか１項に記載の製剤。

【請求項39】

請求項１～３８のいずれか１項に記載の製剤を封入した容器を含む製品。

【請求項40】

前記容器は、ガラスバイアルである、請求項３９に記載の製品。

【請求項41】

前記製剤を静脈内に投与することに関する説明書をさらに含む、請求項３９または請求項４０に記載の製品。

【請求項42】

前記製剤を皮下に投与することに関する説明書をさらに含む、請求項３９または請求項４０に記載の製品。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月３日に出願された米国仮出願第６３／１５６，１２１号に対する優先権を主張するものであり、その開示は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出物に関する内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：配列表のコンピュータ可読形式（ＣＲＦ）（ファイル名：７０１７１２０００８４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２２年２月２５日、サイズ：３２，８６８バイト）。

【0003】

本開示は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む製剤及び／または製品に関する。

【背景技術】

【0004】

Ｓｉｇｌｅｃ（シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン）は、主に白血球に見られる１回膜貫通細胞表面タンパク質であり、これは、細胞表面複合多糖に結合したシアル酸に対する特異性を特徴とする。Ｓｉｇｌｅｃファミリーは、哺乳動物に見られる少なくとも１５のメンバーを含む（Ｐｉｌｌａｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１２，３０：３５７－３９２）。これらのメンバーとして、シアロアドヘシオン（Ｓｉｇｌｅｃ－１）、ＣＤ２２（Ｓｉｇｌｅｃ－２）、ＣＤ３３（Ｓｉｇｌｅｃ－３）、ミエリン関連糖タンパク質（Ｓｉｇｌｅｃ－４）、Ｓｉｇｌｅｃ－５、ＯＢＢＰ１（Ｓｉｇｌｅｃ－６）、ＡＩＲＭ１（Ｓｉｇｌｅｃ－７）、ＳＡＦ－２（Ｓｉｇｌｅｃ－８）、及びＣＤ３２９（Ｓｉｇｌｅｃ－９）が挙げられる。ヒトで発現するが、マウスでは発現しないメンバーであるＳｉｇｌｅｃ－８は、新しいヒト好酸球タンパク質を特定する一環として最初に発見された。好酸球による発現に加えて、マスト細胞及び好塩基球によっても発現される。Ｓｉｇｌｅｃ－８は、硫酸化グリカン、すなわち、６’－スルホ－シアリルルイスＸまたは６’－スルホ－シアリル－Ｎ－アセチル－Ｓ－ラクトサミンを認識し、マスト細胞の働きを抑制することが示されている細胞内免疫受容体抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）ドメインを含む。

【0005】

マスト細胞とともに、好酸球は、特定の組織部位での感染を抑制するなど、有益な機能的役割を果たす炎症反応を促進することができる。炎症反応中、好酸球のアポトーシスは、ＩＬ－３及びＧＭ－ＣＳＦなどの生存促進サイトカインの活性により阻害される可能性がある。しかしながら、アポトーシスによって速やかに除去されない活性化好酸球の増加は、既に炎症を起こしている部位において好酸球顆粒タンパク質の放出をもたらすことがあり、これが、組織を損傷させ、炎症をさらに悪化させる可能性がある。チャーグシュトラウス症候群、関節リウマチ、アレルギー性喘息など、いくつかの疾患が好酸球の活性化に関連していることが示されている（Ｗｅｃｈｓｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１２，１３０（３）：５６３－７１）。現在、好酸球及びマスト細胞の活動などの炎症に関与する免疫細胞の活動を制御できる治療法が必要とされている。
Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合するヒト化抗体が開発され、現在、前臨床及び臨床試験段階である。例えば、米国特許第９，５４６，２１５号を参照。したがって、そのような抗体の保存、輸送、及び投与を可能にすると同時に安定に維持し、凝集を予防する製剤が依然として必要とされている。
特許出願、特許公報、及び科学的文献を含む、本明細書に引用される全ての参照文献は、各個々の参照文献が参照により組み込まれるように具体的かつ個別に示されているかのように、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0006】

【特許文献1】米国特許第９，５４６，２１５号明細書

【非特許文献】

【0007】

【非特許文献1】Ｐｉｌｌａｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１２，３０：３５７－３９２

【非特許文献2】Ｗｅｃｈｓｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１２，１３０（３）：５６３－７１

【発明の概要】

【0008】

このような要求及びその他の要求を満たすため、本開示は、とりわけ、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む製剤に関する。有利にも、こうした製剤は、向上した安定性を提供し、例えば、撹拌及び／または凍結融解による抗体のオリゴマー化及び凝集を予防する。

【0009】

したがって、本開示の特定の態様は、（ａ）ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を約５ｍｇ／ｍＬから約１５ｍｇ／ｍＬの濃度で；（ｂ）アルギニンを約５０ｍＭから約２００ｍＭの濃度で；（ｃ）スクシナートを約５ｍＭから約５０ｍＭの濃度で；（ｄ）塩化ナトリウムを約４０ｍＭから約１５０ｍＭの濃度で；及び（ｅ）ポリソルベートを約０．００２％から約０．０５％の濃度で含み、約５．０から約７．０のｐＨ（例えば、約６．０のｐＨ）を有する製剤（例えば、液体製剤）に関する。いくつかの実施形態では、抗体は、（１）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、（１）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。

【0010】

いくつかの実施形態では、抗体は、約１５ｍｇ／ｍＬの濃度である。

【0011】

いくつかの実施形態では、製剤は、アルギニンを、例えば、約１００ｍＭから約２００ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、アルギニンを約１００ｍＭから約１５０ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、アルギニンを約１２５ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、アルギニンは、アルギニンＨＣｌ塩である。

【0012】

いくつかの実施形態では、製剤は、スクシナートを、例えば、約１０ｍＭから約５０ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、スクシナートを約１０ｍＭから約３０ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、スクシナートを約２０ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、スクシナートは、コハク酸ナトリウム塩である。

【0013】

いくつかの実施形態では、製剤は、塩化ナトリウムを、例えば、約５０ｍＭから約１３０ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、塩化ナトリウムを約７５ｍＭから約１００ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、塩化ナトリウムを約８０ｍＭの濃度で含む。

【0014】

いくつかの実施形態では、製剤は、ポリソルベートを、例えば、約０．０１％から約０．０５％の濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、ポリソルベートを約０．０２５％の濃度で含む。いくつかの実施形態では、ポリソルベートは、ポリソルベート－８０である。

【0015】

いくつかの実施形態では、製剤は、（ａ）抗体を１５ｍｇ／ｍＬの濃度で；（ｂ）アルギニンを１２５ｍＭの濃度で；（ｃ）スクシナートを２０ｍＭの濃度で；（ｄ）塩化ナトリウムを８０ｍＭの濃度で；及び（ｅ）ポリソルベートを０．０２５％の濃度で含み、製剤のｐＨは６．０である。

【0016】

いくつかの実施形態では、サイズ排除クロマトグラフィー・高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）によって小さな抗体オリゴマーの存在量により測定される場合、凍結融解後、製剤中の抗体の５％未満が凝集する。いくつかの実施形態では、サイズ排除クロマトグラフィー・高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）によって小さな抗体オリゴマーの存在量により測定される場合、５回の凍結融解後、製剤中の抗体の５％未満が凝集する。いくつかの実施形態では、サイズ排除クロマトグラフィー・高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）によって小さな抗体オリゴマーの存在量により測定される場合、８００ｒｐｍでの一晩の振盪後、製剤中の抗体の５％未満が凝集する。いくつかの実施形態では、紫外可視分光測定によって測定される場合、凍結融解後、製剤は、参照標準のＡ_{４００ｎｍ}の約１５０％未満の４００ｎｍにおける吸光度（Ａ_{４００ｎｍ}）を有する。いくつかの実施形態では、紫外可視分光測定によって測定される場合、５回の凍結融解後、製剤は、約０．１未満の４００ｎｍにおける吸光度（Ａ_{４００ｎｍ}）を有する。いくつかの実施形態では、紫外可視分光測定によって測定される場合、８００ｒｐｍでの一晩の振盪後、製剤は、約０．１未満の４００ｎｍにおける吸光度（Ａ_{４００ｎｍ}）を有する。

【0017】

いくつかの実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、製剤中の抗体のＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満がフコース残基を含む。いくつかの実施形態では、組成物中の抗体のＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖のいずれもフコース残基を実質的に含まない。

【0018】

いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び／または配列番号８もしくは９から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧのＦｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧのＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧのＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び／または配列番号２０もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）（１）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ１；（２）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（３）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ２；（４）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（５）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ３；（６）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；及び（７）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ４を含む重鎖可変領域；及び／または（ｂ）（１）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ１；（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（３）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ２；（４）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；（５）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ３；（６）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；及び（７）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ４を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、（ａ）（１）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ１；（２）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；（３）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ２；（４）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；（５）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ３；（６）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；及び（７）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ４を含む重鎖可変領域；及び／または（ｂ）（１）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ１；（２）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；（３）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ２；（４）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；（５）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ３；（６）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；及び（７）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ４を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を改善するように操作されている。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域にＡＤＣＣ活性を改善する少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、抗体の重鎖の少なくとも１つまたは２つは、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）_２フラグメントからなる群から選択される抗体フラグメントを含む。

【0019】

いくつかの実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、組成物中の抗体のＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満がフコース残基を含む。いくつかの実施形態では、組成物中の抗体のＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖のいずれもフコース残基を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧのＦｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧのＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域は、非フコシル化されている。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧのＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、アミノ酸残基はＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。いくつかの実施形態では、抗体は、血液好酸球を枯渇させ、及び／またはマスト細胞活性化を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。

【0020】

別の態様では、本開示は、任意の上記の実施形態による製剤を封入した容器を含む製品またはキットを提供する。いくつかの実施形態では、容器はガラスバイアルである。いくつかの実施形態では、製品またはキットは、製剤を（例えば、静脈内注入により）静脈内または（例えば、皮下注射により）皮下に投与することに関する説明書をさらに含む。

【0021】

本明細書に記載の種々の実施形態の特性のうちの１つ、一部、または全てを組み合わせて、本開示の他の実施形態が形成され得るということが理解されるものとする。本開示のこれら及び他の態様は、当業者には明らかとなるであろう。本開示のこれら及び他の実施形態は、以下の発明を実施するための形態によってさらに説明される。

【図面の簡単な説明】

【0022】

【図1A】ＥＬＩＳＡによって測定した、０時点における示した抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤の一部としての抗体ＨＥＫＡのＳｉｇｌｅｃ－８細胞外ドメイン（ＥＣＤ）との結合を示す。各製剤のＥＣ５０値が示される。

【図1B】ＥＬＩＳＡによって測定した、０時点における示した抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤の一部としての抗体ＨＥＫＦのＳｉｇｌｅｃ－８細胞外ドメイン（ＥＣＤ）との結合を示す。各製剤のＥＣ５０値が示される。

【図1C】ＥＬＩＳＡによって測定した、３７℃での１週間後における示した抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤の一部としての抗体ＨＥＫＡのＳｉｇｌｅｃ－８細胞外ドメイン（ＥＣＤ）との結合を示す。各製剤のＥＣ５０値が示される。

【図1D】ＥＬＩＳＡによって測定した、３７℃での１週間後における示した抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤の一部としての抗体ＨＥＫＦのＳｉｇｌｅｃ－８細胞外ドメイン（ＥＣＤ）との結合を示す。各製剤のＥＣ５０値が示される。

【図2A】示した抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤の紫外可視分光分析の結果を示す。各製剤を４℃での２週間後（製剤＃．４）、２５℃での２週間後（製剤＃．２５）、３７℃での２週間後（製剤＃．３７）、または１サイクル（製剤＃．ＦＴ）もしくは５サイクル（製剤＃．ＦＴ５×）の凍結融解後にアッセイした。抗体ＨＥＫＡの４００ｎｍにおける吸光度値（Ａ４００ｎｍ）が示される。

【図2B】示した抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤の紫外可視分光分析の結果を示す。各製剤を４℃での２週間後（製剤＃．４）、２５℃での２週間後（製剤＃．２５）、３７℃での２週間後（製剤＃．３７）、または１サイクル（製剤＃．ＦＴ）もしくは５サイクル（製剤＃．ＦＴ５×）の凍結融解後にアッセイした。抗体ＨＥＫＦの４００ｎｍにおける吸光度値（Ａ４００ｎｍ）が示される。

【図3A】抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤のサイズ排除クロマトグラフィー・高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）分析の結果を示す。分子量標準物質、参照ＨＥＫＡ及びＨＥＫＦ抗体、及びデキストランのＳＥＣ－ＨＰＬＣピークを示す。

【図3B】抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤のサイズ排除クロマトグラフィー・高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）分析の結果を示す。参照と比較した、示した温度における２週間の保存後のｐＨ５緩衝液中の抗体ＨＥＫＡ製剤（表Ａを参照）のＳＥＣ－ＨＰＬＣプロフィールを示す。抗体の小さなオリゴマーを示すより小さなピークが図３Ｂにおいて分類される。

【図3C】抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤のサイズ排除クロマトグラフィー・高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）分析の結果を示す。参照と比較した、示した温度における２週間の保存後のｐＨ５緩衝液中の抗体ＨＥＫＦ製剤（表Ａを参照）のＳＥＣ－ＨＰＬＣプロフィールを示す。抗体の小さなオリゴマーを示すより小さなピークが図３Ｃにおいて分類される。

【図4A】２週間後にサイズ排除クロマトグラフィー・高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）によってアッセイした示した抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤中で形成された抗体オリゴマーのパーセンテージを示す。抗体ＨＥＫＡの結果を示す。各製剤を４℃での２週間後（製剤＃．４）、２５℃での２週間後（製剤＃．２５）、３７℃での２週間後（製剤＃．３７）、または１サイクル（製剤＃．ＦＴ）もしくは５サイクル（製剤＃．ＦＴ５×）の凍結融解後にアッセイした。

【図4B】２週間後にサイズ排除クロマトグラフィー・高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）によってアッセイした示した抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤中で形成された抗体オリゴマーのパーセンテージを示す。抗体ＨＥＫＦの結果を示す。各製剤を４℃での２週間後（製剤＃．４）、２５℃での２週間後（製剤＃．２５）、３７℃での２週間後（製剤＃．３７）、または１サイクル（製剤＃．ＦＴ）もしくは５サイクル（製剤＃．ＦＴ５×）の凍結融解後にアッセイした。

【図5A】示した製剤中における示した温度での保存後のＨＥＫＡ及びＨＥＫＦ抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析の結果を示す。０時点におけるＨＥＫＡ及びＨＥＫＦの還元及び非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析の結果を示す。

【図5B】示した製剤中における示した温度での保存後のＨＥＫＡ抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析の結果を示す。１週間後のＨＥＫＡの還元／非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析の結果を示す。

【図5C】示した製剤中における示した温度での保存後のＨＥＫＦ抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析の結果を示す。１週間後のＨＥＫＦの還元／非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析の結果を示す。

【図5D】示した製剤中における示した温度での保存後のＨＥＫＡ抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析の結果を示す。２週間後のＨＥＫＡの還元／非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析の結果を示す。

【図5E】示した製剤中における示した温度での保存後のＨＥＫＦ抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析の結果を示す。２週間後のＨＥＫＦの還元／非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析の結果を示す。

【図6A】示した抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤中のアルギニン濃度の影響の紫外可視分光分析の結果を示す。１サイクル（中央の棒）または５サイクル（最も右の棒）の凍結融解後の（Ａ_{４００ｎｍ}を測定することによって）各製剤をアッセイし、凍結融解に供していない対応する抗体製剤（最も左の棒）と比較した。抗体ＨＥＫＡの結果を示す。

【図6B】示した抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤中のアルギニン濃度の影響の紫外可視分光分析の結果を示す。１サイクル（中央の棒）または５サイクル（最も右の棒）の凍結融解後の（Ａ_{４００ｎｍ}を測定することによって）各製剤をアッセイし、凍結融解に供していない対応する抗体製剤（最も左の棒）と比較した。抗体ＨＥＫＦの結果を示す。

【図7A】抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤のサイズ排除クロマトグラフィー・高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）分析の結果を示す。参照と比較した、１または５回の凍結融解サイクル後のアルギニンを含まない製剤（表Ｅの緩衝液１を参照）中の抗体ＨＥＫＡ製剤のＳＥＣ－ＨＰＬＣプロフィールを示す。抗体の小さなオリゴマーを示すより小さなピークが分類される。

【図7B】抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤のサイズ排除クロマトグラフィー・高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）分析の結果を示す。参照と比較した、１または５回の凍結融解サイクル後のアルギニンを含まない製剤（表Ｅの緩衝液１を参照）中の抗体ＨＥＫＦ製剤のＳＥＣ－ＨＰＬＣプロフィールを含む。抗体の小さなオリゴマーを示すより小さなピークが分類される。

【図8A】抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤のサイズ排除クロマトグラフィー・高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）分析の結果を示す。凍結融解に供していない抗体製剤と比較した、１回（製剤＃．１ ＦＴ）または５回（製剤＃．５×）の凍結融解サイクル後の抗体ＨＥＫＡを含む示した製剤のＳＥＣ－ＨＰＬＣによって測定した小さなオリゴマーのパーセンテージを示す。

【図8B】抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤のサイズ排除クロマトグラフィー・高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）分析の結果を示す。凍結融解に供していない抗体製剤と比較した、１回（＃．１ ＦＴ）または５回（＃．５×）の凍結融解サイクル後の抗体ＨＥＫＦを含む示した製剤のＳＥＣ－ＨＰＬＣによって測定した小さなオリゴマーのパーセンテージを示す。

【図9】２日間（左の棒）または４日間（右の棒）の撹拌後の示した濃度のポリソルベート－８０を含むＨＥＫＡ抗体製剤の紫外可視分光分析の結果（Ａ_{４００ｎｍ}）を示す。

【図10】ＳＥＣ－ＨＰＬＣによって測定した、示した濃度のポリソルベート－８０を含むＨＥＫＡ抗体製剤のオリゴマー化の割合を示す。

【図11】４００ｎｍにおける吸光度によって測定した凍結融解後のＨＥＫＡ抗体の凝集に対する製剤組成の影響を示す。

【図12A】４００ｎｍにおける吸光度によって測定した、１日の８００ｒｐｍでの撹拌後のＨＥＫＡ抗体の凝集に対する製剤組成の影響を示す。製剤は表Ｇに記載されている。

【図12B】ＳＥＣ－ＨＰＬＣによって測定した、１日の８００ｒｐｍでの撹拌後のＨＥＫＡ抗体のオリゴマー化に対する製剤組成の影響を示す。製剤は表Ｇに記載されている。

【発明を実施するための形態】

【0023】

Ｉ．定義
本開示は、特定の組成物または生体系に限定されず、言うまでもなく変化し得る点は理解されるべきである。本明細書で使用される用語は、あくまで特定の実施形態を説明する目的のものに過ぎず、これを限定しようとするものではない点も理解されるべきである。本明細書及び付属の請求項で使用する単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、内容による明確な別段の定めがない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「分子」への言及は、２つ以上のそのような分子の組み合わせなどを任意に含む。

【0024】

本明細書に使用される「約」という用語は、本技術分野の当業者であれば容易に理解している、それぞれの値に対する通例的な誤差範囲を指す。本明細書で「約」の値またはパラメータを参照することは、その値またはパラメータをそれ自体で対象とする実施形態を含む（かつ記載する）。

【0025】

本開示の態様及び実施形態は、態様及び実施形態「を含む」、「からなる」、及び「から本質的になる」を含むことが理解される。

【0026】

「抗体」という用語には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する完全長抗体を含む）、ポリエピトープ性（ｐｏｌｙｅｐｉｔｏｐｉｃ）特異性を有する抗体組成物、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ、及び一本鎖分子、ならびに抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、及びＦｖ）が含まれる。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書において「抗体」と交換可能に使用される。

【0027】

塩基性４鎖抗体単位は、２つの同一軽（Ｌ）鎖及び２つの同一重（Ｈ）鎖で構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、５つの基本的なヘテロ四量体ユニットと併せて、Ｊ鎖と呼ばれる追加のポリペプチドからなり、１０個の抗原結合部位を含有しているが、一方でＩｇＡ抗体は、２～５個の基本的な４本鎖ユニットから構成されており、このユニットは、重合してＪ鎖と組み合わさった多価集合体を形成することができる。ＩｇＧの場合、４鎖単位は、一般に約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１つのジスルフィド共有結合によってＨ鎖に連結されており、一方で、２つのＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに応じて、１つ以上のジスルフィド結合によって互いに連結されている。各Ｈ鎖及びＬ鎖はまた、一定間隔の鎖内ジスルフィド架橋を有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を有し、これに続いて、α及びγ鎖のそれぞれでは３個の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ）、ならびにμ及びεアイソタイプでは４個のＣ_Ｈドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）を有し、続いてその反対側の端部に定常ドメインを有する。Ｖ_ＬはＶ_Ｈと整列し、Ｃ_Ｌは重鎖の第１の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）と整列する。特定のアミノ酸残基が、軽鎖及び重鎖の可変ドメインの間に界面を形成すると考えられる。Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌの組合せが、共に単一の抗原結合部位を形成する。異なるクラスの抗体の構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｄａｎｉｅｌ Ｐ．Ｓｔｉｅｓ，Ａｂｂａ Ｉ．Ｔｅｒｒ ａｎｄ Ｔｒｉｓｔｒａｍ Ｇ．Ｐａｒｓｏｌｗ（ｅｄｓ），Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，１９９４の７１ページ及び第６章を参照されたい。

【0028】

脊椎動物種由来のＬ鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、κとλと呼ばれる２つの明確に異なる型のいずれかに割り当てることができる。重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを、異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭの５つのクラスが存在し、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと表記される重鎖を有する。γ及びαクラスは、ＣＨ配列及び機能における比較的わずかな相違に基づいてさらにサブクラスに分類され、例えば、ヒトは、以下のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を発現する。ＩｇＧ１抗体は、複数の多型変異体として存在し（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ａｎｄ Ｌｅｆｒａｎｃ ２００９．ｍＡｂｓ Ｖｏｌ １ Ｉｓｓｕｅ ４ １－７に概説されている）、これらのいずれもが本開示での使用に適している。ヒト集団における一般的なアロタイプ変異体は、文字ａ、ｆ、ｎ、ｚで表記されるものである。

【0029】

「単離された」抗体は、その産生環境（例えば、天然または組換え）の成分から特定、分離、及び／または回収されたものである。いくつかの実施形態では、単離されたポリペプチドは、その産生環境からの全ての他の成分との会合を含まない。組換え形質移入細胞に由来する成分などの、その生産環境の混入成分は、一般的に、抗体の研究、診断または治療用途を妨げるであろう物質であり、これには、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質が含まれ得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、（１）例えば、ローリー法により決定して抗体の９５重量％超まで、及びいくつかの実施形態では、９９重量％超まで、（１）スピニングカップシークエネーターを使用して少なくとも１５残基のＮ末端または内部アミノ酸配列を得るのに十分な程度まで、または（３）クマシー・ブルー、もしくは銀染色を使用する非還元もしくは還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥによる均一性まで精製される。単離抗体には、組み換え細胞内でインサイツの抗体が含まれるが、これは、抗体の天然環境の少なくとも１つの構成要素が存在していないためである。しかしながら、通常、単離ポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製ステップにより調製される。

【0030】

「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用されるとき、実質的に同種の抗体集団から得られる抗体を指す、すなわち、その集団に含まれる個々の抗体は、微量で存在し得る可能性のある自然に発生する変異及び／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除き、同一である。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖及び／または軽鎖にＣ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４、または５個のアミノ酸残基が、重鎖及び／または軽鎖のＣ末端で切断される。いくつかの実施形態では、Ｃ末端切断は、重鎖からＣ末端リシンを除去する。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖及び／または軽鎖にＮ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４、または５個のアミノ酸残基が、重鎖及び／または軽鎖のＮ末端で切断される。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位を標的とする。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は高度に特異的であり、複数の抗原部位を標的とする（二重特異性抗体または多重特異性抗体など）。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均質な抗体の集団から得られたものであるという抗体の特性を示し、いずれかの特定の方法による抗体の産生を要するものとして理解されるべきではない。例えば、本開示に従って使用されるモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ技術、及び、ヒト免疫グロブリン遺伝子座またはヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部または全体を有する動物でヒトまたはヒト様抗体を産生するための技術を含む、様々な技術によって作製することができる。

【0031】

「裸の抗体」という用語は、細胞傷害性部分または放射標識に結合されていない抗体を指す。

【0032】

「完全長抗体」、「インタクト抗体」、または「全抗体」という用語は、抗体断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態にある抗体を指すように、互換的に使用される。具体的には、全抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有するものを含む。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒトの天然配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。場合によっては、無傷の抗体は、１つ以上のエフェクター機能を有し得る。

【0033】

「抗体フラグメント」は、インタクトな抗体の一部、インタクト抗体の抗原結合領域及び／または可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、及びＦｖ断片；ダイアボディ；直線状抗体（米国．米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２（１９９５）を参照のこと）；一本鎖抗体分子、ならびに抗体断片から形成される多重特異抗体が挙げられる。

【0034】

抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一な抗原結合フラグメントと、容易に結晶化する能力を反映して表記される残りの「Ｆｃ」フラグメントとが得られた。Ｆａｂ断片は、Ｌ鎖全体に加えて、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（Ｖ_Ｈ）、及び１本の重鎖の第１の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関しては一価であり、すなわち、それは単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理によって、異なる抗原結合活性を有する２つのジスルフィド結合されたＦａｂ断片におおむね相当し、依然として抗原を架橋することができる単一の大きなＦ（ａｂ’）_２断片が得られる。Ｆａｂ’断片は、Ｃ_Ｈ１ドメインのカルボキシ末端に、抗体のヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含む幾つかの追加の残基を有する点でＦａｂ断片と異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、本明細書において、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離のチオール基を有するＦａｂ’の呼称である。Ｆ（ａｂ’）_２抗体断片は、元々、Ｆａｂ’断片の間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として生成された。抗体断片のその他の化学的結合も公知である。

【0035】

Ｆｃ断片は、ジスルフィド結合により互いに保持された両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域の配列によって決まり、この領域は、特定の種類の細胞上に見出されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によっても認識される。

【0036】

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含む最小抗体フラグメントである。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメイン及び１つの軽鎖可変領域ドメインが緊密に非共有結合的に会合した二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みにより、抗原結合のためのアミノ酸残基を提供し、抗体に抗原結合特異性を付与する、６つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＨＶＲのみを含むＦｖの半分）でさえも、結合部位全体よりも低い親和性であるが、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。

【0037】

「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される「一本鎖Ｆｖ」は、接続されて単一のポリペプチド鎖になるＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。いくつかの実施形態では、ｓＦｖポリペプチドは、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含み、これは、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能とする。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照のこと。

【0038】

本開示の抗体の「機能性フラグメント」は、インタクトな抗体の一部分を含み、これには、概して、インタクトな抗体の抗原結合領域若しくは可変領域、またはＦｃＲ結合能力を保持するか若しくは修飾されたＦｃＲ結合能力を有する抗体のＦｖ領域が含まれる。抗体フラグメントの例としては、線形抗体、一本鎖抗体分子、及び抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体が挙げられる。

【0039】

本明細書におけるモノクローナル抗体は、重鎖及び／または軽鎖の一部が特定の種に由来する抗体または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一か、またはそれと相同である一方で、鎖（複数可）の残りが、別の種に由来する抗体または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一か、またはそれと相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）に加えて、そのような抗体のフラグメントが所望の生物活性を示す限り、そのフラグメントを特に含む（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１－６８５５（１９８４）を参照のこと）。本明細書における関心対象のキメラ抗体としては、抗体の抗原結合領域が、例えば、関心対象の抗原でマカクサルを免疫することにより生成される抗体に由来するＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体が挙げられる。本明細書で使用する場合、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用される。

【0040】

非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体である。一実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲ由来の残基が、非ヒト種、例えば、マウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類のＨＶＲ由来の所望の特異性、親和性、及び／または能力を有する残基（ドナー抗体）で置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。幾つかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基が、相当する非ヒト残基で置き換えられる。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体において見出されない残基を含み得る。これらの改変は、結合親和性等の抗体性能をさらに改良するために行うことができる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、ここで、超可変ループの全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリン配列のものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン配列のものに対応するが、ＦＲ領域には、結合親和性、異性体化、免疫原性等の抗体の性能を向上させる１つ以上の個々のＦＲ残基置換が含まれてもよい。いくつかの実施形態では、ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は、Ｈ鎖で６以下、Ｌ鎖で３以下である。ヒト化抗体は、任意に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、通常はヒト免疫グロブリンの少なくとも一部も含む。さらなる詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照のこと。例えば、Ｖａｓｗａｎｉ ａｎｄ Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ ＆ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５－１１５（１９９８）；Ｈａｒｒｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ２３：１０３５－１０３８（１９９５）；Ｈｕｒｌｅ ａｎｄ Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８－４３３（１９９４）、ならびに米国特許第６，９８２，３２１号及び同第７，０８７，４０９号も参照のこと。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、単一の抗原部位を標的とする。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、複数の抗原部位を標的とする。代替のヒト化方法が、米国特許第７，９８１，８４３号及び米国特許出願公開第２００６／０１３４０９８号に記載されている。

【0041】

抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「ＶＨ」及び「ＶＬ」と呼ばれる場合がある。これらのドメインは、一般に（同じクラスの他の抗体と比較して）抗体の最可変部分であり、抗原結合部位を含む。

【0042】

「超可変領域」、「ＨＶＲ」、または「ＨＶ」という用語は、本明細書で使用される場合、配列において超可変である、及び／または構造的に定義されたループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、６つのＨＶＲを含み、このうち３つがＶＨにあり（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、３つがＶＬにある（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。天然抗体では、Ｈ３及びＬ３は、６つのＨＶＲの中で最大の多様性を示し、特にＨ３は、抗体に好適な特異性を与えることにおいて固有の役割を果たすと考えられる（例えば、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １３：３７－４５（２０００）；Ｊｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ Ｗｕ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１－２５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３））を参照）。実際に、重鎖のみからなる天然のラクダ抗体は、軽鎖の不在下において機能性であり、かつ安定である。例えば、Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－４４８（１９９３）及びＳｈｅｒｉｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：７３３－７３６（１９９６）を参照のこと。

【0043】

多くのＨＶＲ描写が用いられており、これらは本明細書に包含される。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＨＶＲは、配列の多様性に基づいており、最も一般的に使用されている（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５^ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））。ＣｈｏｔｈｉａのＨＶＲは、その代わりに構造的ループの位置を指す（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。「接触」ＨＶＲは、使用可能な複合結晶構造の解析に基づく。これらのＨＶＲのそれぞれに由来する残基を以下に示す。
ループ Ｋａｂａｔ Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃｏｎｔａｃｔ
Ｌ１ Ｌ２４－Ｌ３４ Ｌ２６－Ｌ３４ Ｌ３０－Ｌ３６
Ｌ２ Ｌ５０－Ｌ５６ Ｌ５０－Ｌ５６ Ｌ４６－Ｌ５５
Ｌ３ Ｌ８９－Ｌ９７ Ｌ９１－Ｌ９６ Ｌ８９－Ｌ９６
Ｈ１ Ｈ３１－Ｈ３５Ｂ Ｈ２６－Ｈ３２ Ｈ３０－Ｈ３５Ｂ（Ｋａｂａｔ番号付け）
Ｈ１ Ｈ３１－Ｈ３５ Ｈ２６－Ｈ３２ Ｈ３０－Ｈ３５（Ｃｈｏｔｈｉａ番号付け）
Ｈ２ Ｈ５０－Ｈ６５ Ｈ５３－Ｈ５６ Ｈ４７－Ｈ５８
Ｈ３ Ｈ９５－Ｈ１０２ Ｈ９５－Ｈ１０２ Ｈ９３－Ｈ１０１

【0044】

別途指示のない限り、可変ドメインの残基（ＨＶＲ残基及びフレームワーク領域の残基）は、前出のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に従って番号付けされる。

【0045】

「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書中で定義するＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。

【0046】

「Ｋａｂａｔにあるような可変ドメイン残基番号付け」または「Ｋａｂａｔにあるようなアミノ酸位置番号付け」という表現、及びそれらの変形形態は、Ｋａｂａｔら（上記）における抗体の編成において重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用されている番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用すると、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲもしくはＨＶＲの短縮、またはそれへの挿入に対応するより少ないアミノ酸または追加のアミノ酸を含み得る。例えば、重鎖可変ドメインには、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸インサート（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）、及び重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）が含まれ得る。残基のＫａｂａｔ番号付けは、特定の抗体に対して、抗体の配列と「標準の」Ｋａｂａｔによって番号付けされた配列との相同領域での整列によって決定され得る。

【0047】

本明細書における目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンフレームワーク由来またはヒトコンセンサスフレームワーク由来のＶＬフレームワークまたはＶＨフレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに「由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含み得るか、または既存のアミノ酸配列変化を含み得る。いくつかの実施形態において、既存のアミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。

【0048】

参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一率（％）」は、保存的置換を配列同一性の一部として考慮せず、最大の配列同一率（％）が得られるように配列同士を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後の参照ポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同じである候補配列内のアミノ酸残基の割合（％）として定義される。アミノ酸配列同一率（％）を決定する目的でのアライメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公開されているコンピュータソフトウェアを使用して、当該技術分野の技能の範囲内である種々の方法で実現することができる。当業者であれば、比較される配列の完全長にわたって最大のアライメントを得るために必要とされるあらゆるアルゴリズムを含む、配列同士を整列するために適切なパラメータを決定することができる。例えば、特定のアミノ酸配列Ｂに対する、アミノ酸配列Ｂとの、またはアミノ酸配列Ｂと対比した、特定のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一率（％）（あるいは、特定のアミノ酸配列Ｂに対して、アミノ酸配列Ｂと、またはアミノ酸配列Ｂと対比して特定のアミノ酸配列同一率（％）を有する、または含む、特定のアミノ酸配列Ａと表現することもできる）は、以下のように計算される：
１００×分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列によってそのプログラムのＡとＢとの整列において完全な一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性％は、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％とは等しくないことが理解される。

【0049】

特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに「結合する」、「特異的に結合する」、または「特異的である」抗体は、他のいずれのポリペプチドまたはポリペプチドエピトープにも実質的に結合することなく、その特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに結合する抗体である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）の、無関係な非Ｓｉｇｌｅｃ－８ポリペプチドへの結合は、当該技術分野では周知の方法（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ））によって測定されるＳｉｇｌｅｃ－８への抗体結合の約１０％未満である。いくつかの実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．７ｎＭ、≦０．６ｎＭ、≦０．５ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍ以下、例えば、１０^－８ Ｍ～１０^－１３ Ｍ、例えば、１０^－９ Ｍ～１０^－１３ Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。

【0050】

「抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体」または「ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体」という用語は、他のいずれのポリペプチドまたは無関係の非Ｓｉｇｌｅｃ－８ポリペプチドのエピトープに実質的に結合することなくヒトＳｉｇｌｅｃ－８のポリペプチドまたはエピトープに結合する抗体を指す。

【0051】

本明細書で使用する「Ｓｉｇｌｅｃ－８」という用語は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８タンパク質を指す。この用語はまた、スプライス変異体または対立遺伝子変異体を含む、Ｓｉｇｌｅｃ－８の天然に存在する変異体も含む。例示的なヒトＳｉｇｌｅｃ－８のアミノ酸配列を、配列番号２５に示す。別の例示的なヒトＳｉｇｌｅｃ－８のアミノ酸配列を、配列番号２６に示す。いくつかの実施形態では、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８タンパク質は、免疫グロブリンのＦｃ領域に融合されたヒトＳｉｇｌｅｃ－８の細胞外ドメインを含む。
ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のアミノ酸配列
ＧＹＬＬＱＶＱＥＬＶＴＶＱＥＧＬＣＶＨＶＰＣＳＦＳＹＰＱＤＧＷＴＤＳＤＰＶＨＧＹＷＦＲＡＧＤＲＰＹＱＤＡＰＶＡＴＮＮＰＤＲＥＶＱＡＥＴＱＧＲＦＱＬＬＧＤＩＷＳＮＤＣＳＬＳＩＲＤＡＲＫＲＤＫＧＳＹＦＦＲＬＥＲＧＳＭＫＷＳＹＫＳＱＬＮＹＫＴＫＱＬＳＶＦＶＴＡＬＴＨＲＰＤＩＬＩＬＧＴＬＥＳＧＨＳＲＮＬＴＣＳＶＰＷＡＣＫＱＧＴＰＰＭＩＳＷＩＧＡＳＶＳＳＰＧＰＴＴＡＲＳＳＶＬＴＬＴＰＫＰＱＤＨＧＴＳＬＴＣＱＶＴＬＰＧＴＧＶＴＴＴＳＴＶＲＬＤＶＳＹＰＰＷＮＬＴＭＴＶＦＱＧＤＡＴＡＳＴＡＬＧＮＧＳＳＬＳＶＬＥＧＱＳＬＲＬＶＣＡＶＮＳＮＰＰＡＲＬＳＷＴＲＧＳＬＴＬＣＰＳＲＳＳＮＰＧＬＬＥＬＰＲＶＨＶＲＤＥＧＥＦＴＣＲＡＱＮＡＱＧＳＱＨＩＳＬＳＬＳＬＱＮＥＧＴＧＴＳＲＰＶＳＱＶＴＬＡＡＶＧＧＡＧＡＴＡＬＡＦＬＳＦＣＩＩＦＩＩＶＲＳＣＲＫＫＳＡＲＰＡＡＧＶＧＤＴＧＭＥＤＡＫＡＩＲＧＳＡＳＱＧＰＬＴＥＳＷＫＤＧＮＰＬＫＫＰＰＰＡＶＡＰＳＳＧＥＥＧＥＬＨＹＡＴＬＳＦＨＫＶＫＰＱＤＰＱＧＱＥＡＴＤＳＥＹＳＥＩＫＩＨＫＲＥＴＡＥＴＱＡＣＬＲＮＨＮＰＳＳＫＥＶＲＧ（配列番号２５）
ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のアミノ酸配列
ＧＹＬＬＱＶＱＥＬＶＴＶＱＥＧＬＣＶＨＶＰＣＳＦＳＹＰＱＤＧＷＴＤＳＤＰＶＨＧＹＷＦＲＡＧＤＲＰＹＱＤＡＰＶＡＴＮＮＰＤＲＥＶＱＡＥＴＱＧＲＦＱＬＬＧＤＩＷＳＮＤＣＳＬＳＩＲＤＡＲＫＲＤＫＧＳＹＦＦＲＬＥＲＧＳＭＫＷＳＹＫＳＱＬＮＹＫＴＫＱＬＳＶＦＶＴＡＬＴＨＲＰＤＩＬＩＬＧＴＬＥＳＧＨＰＲＮＬＴＣＳＶＰＷＡＣＫＱＧＴＰＰＭＩＳＷＩＧＡＳＶＳＳＰＧＰＴＴＡＲＳＳＶＬＴＬＴＰＫＰＱＤＨＧＴＳＬＴＣＱＶＴＬＰＧＴＧＶＴＴＴＳＴＶＲＬＤＶＳＹＰＰＷＮＬＴＭＴＶＦＱＧＤＡＴＡＳＴＡＬＧＮＧＳＳＬＳＶＬＥＧＱＳＬＲＬＶＣＡＶＮＳＮＰＰＡＲＬＳＷＴＲＧＳＬＴＬＣＰＳＲＳＳＮＰＧＬＬＥＬＰＲＶＨＶＲＤＥＧＥＦＴＣＲＡＱＮＡＱＧＳＱＨＩＳＬＳＬＳＬＱＮＥＧＴＧＴＳＲＰＶＳＱＶＴＬＡＡＶＧＧＡＧＡＴＡＬＡＦＬＳＦＣＩＩＦＩＩＶＲＳＣＲＫＫＳＡＲＰＡＡＧＶＧＤＴＧＭＥＤＡＫＡＩＲＧＳＡＳＱＧＰＬＴＥＳＷＫＤＧＮＰＬＫＫＰＰＰＡＶＡＰＳＳＧＥＥＧＥＬＨＹＡＴＬＳＦＨＫＶＫＰＱＤＰＱＧＱＥＡＴＤＳＥＹＳＥＩＫＩＨＫＲＥＴＡＥＴＱＡＣＬＲＮＨＮＰＳＳＫＥＶＲＧ（配列番号２６）

【0052】

「アポトーシスを誘導する」または「アポトーシス性」である抗体とは、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞収縮、小胞体の拡張、細胞の断片化、及び／または膜小胞（アポトーシス小体と呼ばれる）の形成などの標準的なアポトーシスアッセイによって測定されるプログラムされた細胞死を誘導するような抗体である。例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）のアポトーシス活性は、細胞をアネキシンＶで染色することによって示すことができる。

【0053】

抗体「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列変異型Ｆｃ領域）に起因する生物学的活性を指し、抗体アイソタイプによって異なる。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞毒性；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；及びＢ細胞活性化が挙げられる。

【0054】

「抗体依存性細胞傷害作用」（Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）または「ＡＤＣＣ」とは、分泌されたＩｇが特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合することで、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が、抗原を保持する標的細胞に特異的に結合し、その後、標的細胞を細胞毒素で殺傷する、細胞傷害性の１つの形態である。抗体は、細胞傷害性細胞で「武装」し、この機序により標的細胞を死滅させるために必要である。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞であるＮＫ細胞が、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するのに対し、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：４５７－９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、ＡＤＣＣを増強する。対象とする分子のＡＤＣＣ活性を評価するには、例えば米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されるようなインビトロＡＤＣＣアッセイを行うことができる。このようなアッセイのための有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。上記に代えて、または上記に加えて、目的とする分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されるものなどの動物モデルで評価することもできる。ＡＤＣＣ活性及び他の抗体特性を変化させる他のＦｃ変異体としては、Ｇｈｅｔｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：６３７－４０，１９９７；Ｄｕｎｃａｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：５６３－５６４，１９８８；Ｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １４７：２６５７－２６６２，１９９１；Ｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２９：５３－５９，１９９２；Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７－１５４３，１９９４；Ｈｕｔｃｈｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９２：１１９８０－１１９８４，１９９５；Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ．４４：１１１－１１７，１９９５；Ｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ９：１１５－１１９，１９９５；Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ ５４：１０１－１０４，１９９６；Ｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５７：４９６３－４９６９，１９９６；Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２９：２６１３－２６２４，１９９９；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４：４１７８－４１８４，２００；Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４：１９２５－１９３３，２０００；Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００：１６－２６，２０００；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６６：２５７１－２５７５，２００１；Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７６：６５９１－６６０４，２００１；Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ ８２：５７－６５．２００２；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓ ３０：４８７－４９０，２００２；Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３：４００５－４０１０，２００６；米国特許第５，６２４，８２１号、同第５，８８５，５７３号、同第５，６７７，４２５号、同第６，１６５，７４５号、同第６，２７７，３７５号、同第５，８６９，０４６号、同第６，１２１，０２２号、同第５，６２４，８２１号、同第５，６４８，２６０号、同第６，１９４，５５１号、同第６，７３７，０５６号、同第６，８２１，５０５号、同第６，２７７，３７５号、同第７，３３５，７４２号、及び同第７，３１７，０９１号により開示されるものが挙げられる。

【0055】

本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は異なり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０からそのカルボキシル末端まで広がると定義される。本開示の抗体における使用に好適な天然配列Ｆｃ領域としては、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４が挙げられる。組換えＩｇＧ４抗体で観察される異種性をなくすために、単一のアミノ酸置換（Ｋａｂａｔ番号付けによるＳ２２８Ｐ；ＩｇＧ４Ｐｒｏと称される）を導入することができる（例えば、Ａｎｇａｌ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３０，１０５－１０８を参照）。

【0056】

「非フコシル化」または「フコース欠損」抗体とは、Ｆｃ領域に結合した炭水化物構造にフコースが少ないかまたはフコースがないＦｃ領域を含むグリコシル化抗体変異体を指す。いくつかの実施形態では、フコースが減少した、またはフコースがない抗体は、ＡＤＣＣ機能が改善されている。非フコシル化抗体またはフコース欠損抗体は、１つの細胞株で産生された同じ抗体のフコース量と比較して、フコースが減少している。いくつかの実施形態では、本明細書で想到される非フコシル化またはフコース欠損抗体組成物は、組成物中の抗体のＦｃ領域に結合したＮ結合型グリカンの約５０％未満がフコースを含む組成物である。

【0057】

「フコシル化」または「フコシル化された」という用語は、抗体のペプチド骨格に結合したオリゴ糖内のフコース残基の存在を指す。具体的には、フコシル化抗体は、抗体のＦｃ領域、例えばヒトＩｇＧ１のＦｃドメインのＡｓｎ２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）に結合したＮ－結合型オリゴ糖の一方または両方の最も内側のＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）残基にα（１，６）－結合型フコースを含む。Ａｓｎ２９７はまた、免疫グロブリンのわずかな配列変動のために、２９７位のアミノ酸約＋３個上流または下流、すなわち２９４位と３００位の間に位置し得る。

【0058】

「フコシル化度」は、例えば、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ）によって評価されるＮ－グリコシダーゼＦ処理抗体組成物中の、当該技術分野では周知の方法によって同定される全オリゴ糖に対するフコシル化オリゴ糖のパーセンテージである。「完全フコシル化抗体」の組成物では、本質的にすべてのオリゴ糖がフコース残基を含む、すなわち、フコシル化されている。いくつかの実施形態では、完全フコシル化抗体の組成物は、少なくとも約９０％のフコシル化度を有する。したがって、そのような組成物中の個々の抗体は、一般的には、Ｆｃ領域中の２個のＮ結合型オリゴ糖のそれぞれにフコース残基を含む。逆に、「完全非フコシル化」抗体の組成物では、本質的にどのオリゴ糖もフコシル化されておらず、そのような組成物中の個々の抗体は、Ｆｃ領域中の２個のＮ結合オリゴ糖のいずれにもフコース残基を含まない。いくつかの実施形態では、完全非フコシル化抗体の組成物は、約１０％未満のフコシル化度を有する。「部分フコシル化抗体」の組成物では、一部のオリゴ糖のみがフコースを含む。そのような組成物中の個々の抗体は、組成物を構成する本質的にすべての個々の抗体がＦｃ領域のＮ－結合型オリゴ糖中のフコース残基を欠くわけではなく、本質的にすべての個々の抗体がＦｃ領域の両方のＮ結合型オリゴ糖にフコース残基を含むわけでもない条件で、Ｆｃ領域のＮ－結合型オリゴ糖のどちらにもフコース残基を含まないか、または一方もしくは両方にフコース残基を含むことができる。一実施形態では、部分フコシル化抗体の組成物は、約１０％～約８０％（例えば、約５０％～約８０％、約６０％～約８０％、または約７０％～約８０％）のフコシル化度を有する。

【0059】

「結合親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性の相互作用の強度のことを指す。いくつかの実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－８（本明細書に記載のＳｉｇｌｅｃ－８－Ｆｃ融合タンパク質などの二量体であってもよい）に対する抗体の結合親和性は、一般的に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載のものを含む当該技術分野では周知の一般的な方法によって測定することができる。

【0060】

「結合アビディティー」とは、分子（例えば、抗体）の複数の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性の相互作用の強度のことを指す。

【0061】

本明細書に抗体をコードする「単離された」核酸分子とは、核酸分子が産生される環境中で通常、核酸分子に付随する少なくとも１つの混入核酸分子から同定及び分離された核酸分子である。いくつかの実施形態では、単離核酸は、産生環境に付随するいずれの成分とも結合していない。本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする単離核酸分子は、それが自然界で見出される形態または状況以外での形態である。したがって、単離核酸分子は、細胞内に天然に存在する本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする核酸とは区別される。

【0062】

「医薬製剤」（あるいは「製剤」）という用語は、活性成分の生物学的活性を有効とするような形態であり、製剤が投与される個体に許容しえない毒性を示すさらなる成分を含有しない製剤を指す。そのような製剤は、無菌である。

【0063】

本明細書で使用される「担体」は、用いられる投与量及び濃度でそれに曝露されている細胞または哺乳動物に非毒性の薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤を含む。多くの場合、生理学的に許容される担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。生理学的に許容される担体の例としては、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸が含まれる酸化予防剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンが含まれる単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成性対イオン；及び／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。

【0064】

本明細書で使用する場合、「治療」または「治療する」という用語は、臨床病理学の過程で処置される個体または細胞の自然経過を変化させるように設計された臨床的介入を指す。治療の望ましい効果としては、疾患進行速度の低減、疾患状態の回復または緩和、及び寛解または予後の改善が挙げられる。例えば、疾患（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－８関連疾患または障害）に関連する１つ以上の症状が軽減または消失する場合に個体は効果的に「治療される」。例えば、治療によって疾患に罹患した者の生活の質が向上し、疾患の治療に必要な他の薬の用量が減り、疾患の再発の頻度が減り、疾患の重症度が軽減され、疾患の発症もしくは進行が遅延され、及び／または個体の生存期間が延長される場合、個体は「治療」に成功したとみなされる。

【0065】

本明細書で使用する場合、「～と併せて」または「～と組み合わせて」とは、１つの治療モダリティに加えた別の治療モダリティを指す。したがって、「～と併せて」または「～と組み合わせて」とは、個体への１つの治療モダリティの、他の治療モダリティの投与前、投与中、または投与後の投与のことを指す。

【0066】

本明細書で使用する場合、「予防」または「予防する」という用語は、個体における疾患の発症または再発に対する予防を与えることを含む。個体は、疾患の素因を有するか、疾患に罹患しやすいか、または疾患を発症するリスクがある可能性があるが、まだ疾患を診断されていない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、疾患（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－８関連疾患または障害）の発症を遅らせるために用いられる。

【0067】

本明細書で使用する場合、疾患（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－８関連疾患または障害）を発症する「リスクのある」個体は、検出可能な疾患または疾患の症状を有していてもいなくてもよく、本明細書に記載される治療方法の前に、検出可能な疾患または疾患の症状を呈していてもいなくてもよい。「リスクがある」とは、個体が、当該技術分野では周知の疾患の発症と相関する測定可能なパラメータである１つ以上のリスク因子を有することを意味する。これらのリスク因子のうちの１つ以上を有する個体は、これらのリスク因子のうちの１つ以上を有さない個体より、疾患を発症する確率が高い。

【0068】

「有効量」とは、所望または指示される効果（治療的結果または予防的結果を含む）を達成するために必要な、投与量及び期間における少なくとも有効な量を指す。有効量は、１回以上の投与で提供され得る。「治療有効量」は、少なくとも特定の疾患の測定可能な改善をもたらすために必要な最小限の濃度である。本明細書における治療有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、及び体重などの因子、ならびに個体における所望の反応を誘発する抗体の能力に応じて変化することもある。治療有効量はまた、治療上有益な効果が抗体のあらゆる毒性または有害作用を上回るものである。「予防有効量」は、必要な投与量及び投与期間において、所望の予防的結果を達成するのに有効な量を指す。典型的であって必ずしもそうではないが、疾患の前または早期段階で予防用量が個体において使用されるため、予防有効量は、治療有効量よりも少なくてもよい。

【0069】

「慢性」投与は、急性の形態に対して、初期の治療効果（活性）を長期間維持するような連続的な医薬（複数可）の投与を指す。「間欠」投与は、中断なく連続的に行うのではなく、むしろ本質的に周期的な治療である。

【0070】

「添付文書」という用語は、治療製品の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症についての情報、及び／またはかかる治療製品の使用に関する警告を含む、治療製品の市販のパッケージに通例含まれる指示書を指して用いられる。

【0071】

本明細書で使用する場合、「個体」または「対象」は哺乳動物である。治療目的での「個体」は、ヒト、飼育動物及び家畜、ならびに動物園の動物、競技用動物、または愛玩動物、例えば、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、スナネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどを含む。いくつかの実施形態では、個体または対象は、ヒトである。

【0072】

ＩＩ．抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤
本明細書に記載の任意の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）を含む製剤（例えば、医薬製剤）が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、製剤は、液体製剤である。いくつかの実施形態では、液体製剤は、約２℃から約８℃の間で保存される。有利にも、これらの製剤は、安定性を改善し、本開示の抗体の（例えば、撹拌または凍結融解後の）凝集及びオリゴマー化を低減することがわかった。

【0073】

Ａ．抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体
本明細書に記載の任意の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、本開示の製剤における用途を見出すことができる（例えば、下記セクションＤを参照）。いくつかの実施形態では、抗体は、本開示の製剤中に約５ｍｇ／ｍＬから約１５ｍｇ／ｍＬの間、または約１０ｍｇ／ｍＬから約１５ｍｇ／ｍＬの間の量または濃度で存在する。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、約１２ｍｇ／ｍＬ、約１３ｍｇ／ｍＬ、約１４ｍｇ／ｍＬ、または約１５ｍｇ／ｍＬで存在する。

【0074】

例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、（１）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、（１）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。

【0075】

いくつかの実施形態では、抗体は、（１）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ１；配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ２；配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ３；配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；及び配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ４を含む重鎖可変領域と、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ１；配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ２；配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；配列番号１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ３；配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ４を含む軽鎖可変領域と、を含む。そのような抗体のさらなる説明は、例えば、米国特許第９，５４６，２１５号で提供されている。

【0076】

いくつかの実施形態では、抗体は、（１）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ１；配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ２；配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ３；配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３；及び配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＦＲ４を含む重鎖可変領域と、（１）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ１；配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号１５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ２；配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；配列番号１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ３；配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３；及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＦＲ４を含む軽鎖可変領域と、を含む。

【0077】

いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号８または配列番号２１のアミノ酸配列を含む。例えば、いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む軽鎖と、を含む。他の実施形態では、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む軽鎖と、を含む。

【0078】

いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、血液好酸球を枯渇させ、マスト細胞活性化を阻害する。

【0079】

一態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、モノクローナル抗体である。一態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、抗体フラグメント（抗原結合フラグメントを含む）、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）_２ フラグメントである。一態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、抗体フラグメント（抗原結合フラグメントを含む）、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）_２フラグメントを含む。一態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体である。一態様では、本明細書に記載の任意の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、精製される。

【0080】

いくつかの実施形態では、抗体は、以下に限定されないがヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４のＦｃ領域を含む、ヒトＩｇＧのＦｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む。

【0081】

いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、例えば、野生型ヒトＦｃ領域と比較して、１つ以上の変異を含む。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｓ２２８Ｐ置換（ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスに従ったアミノ酸残基番号付け）を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域である。

【0082】

いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む。他の実施形態では、抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む。他の実施形態では、抗体は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む。

【0083】

いくつかの実施形態では、抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を改善するように操作されている。

【0084】

いくつかの態様において、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む製剤であって、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖を含み、Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の約５０％未満がフコース残基を含む、製剤が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖の約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、または約１５％未満がフコース残基を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む製剤であって、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖を含み、Ｎ－グリコシド結合型炭水化物鎖のいずれもフコース残基を実質的に含まない、製剤が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗体の重鎖の１つまたは２つは、非フコシル化されている。

【0085】

一態様では、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体に適した製剤（例えば、液体製剤）であって、重鎖可変領域は、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含み、及び／または軽鎖可変領域は、（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む、製剤が本明細書で提供される。

【0086】

本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、抗体がヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する能力を保持するという条件で、任意の適当なフレームワーク可変ドメイン配列を含むことができる。本明細書で使用される場合、重鎖フレームワーク領域は「ＨＣ－ＦＲ１－ＦＲ４」で示され、軽鎖フレームワーク領域は「ＬＣ－ＦＲ１－ＦＲ４」で示される。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号１０、１１、１２及び１３の重鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれ、ＨＣ－ＦＲ１、ＨＣ－ＦＲ２、ＨＣ－ＦＲ３、及びＨＣ－ＦＲ４）を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号１４、１５、１６及び１８の軽鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれ、ＬＣ－ＦＲ１、ＬＣ－ＦＲ２、ＬＣ－ＦＲ３、及びＬＣ－ＦＲ４）を含む。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、配列番号１４、１５、１７及び１８の軽鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれ、ＬＣ－ＦＲ１、ＬＣ－ＦＲ２、ＬＣ－ＦＲ３、及びＬＣ－ＦＲ４）を含む。

【0087】

免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭの５つのクラスが存在し、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと表記される重鎖を有する。γ及びαクラスは、さらにサブクラス（アイソタイプ）に分けられ、例えば、ヒトは以下のサブクラス、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２を発現している。ＩｇＧ１抗体は、複数の多型変異体として存在し（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ａｎｄ Ｌｅｆｒａｎｃ ２００９．ｍＡｂｓ Ｖｏｌ １ Ｉｓｓｕｅ ４ １－７に概説されている）、これらのいずれもが本明細書の実施例の一部での使用に適している。ヒト集団における一般的なアロタイプ変異体は、文字ａ、ｆ、ｎ、ｚ、またはこれらの組み合わせで表記されるものである。本明細書の実施例のいずれにおいても、抗体はヒトＩｇＧのＦｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含んでよい。さらなる実施形態では、ヒトＩｇＧのＦｃ領域は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４抗体である。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ４は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、アミノ酸残基はＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ４は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。

【0088】

いくつかの実施形態では、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び／または配列番号２０もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び／または配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含んでもよい。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、活性化好酸球のアポトーシスを誘導する。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、休止状態の好酸球のアポトーシスを誘導する。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、活性化された好酸球を枯渇させ、マスト細胞活性化を阻害する。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、マスト細胞を枯渇または減少させ、マスト細胞活性化を阻害する。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、マスト細胞を枯渇またはその数を減少させる。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、ＡＤＣＣ活性によってマスト細胞を殺滅する。いくつかの実施形態では、抗体は、組織でＳｉｇｌｅｃ－８を発現するマスト細胞を枯渇または減少させる。いくつかの実施形態では、抗体は、生体液中でＳｉｇｌｅｃ－８を発現するマスト細胞を枯渇または減少させる。

【0089】

Ｂ．賦形剤
治療製剤は、所望の純度を有する活性成分（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体）を、任意の薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤と混合することにより、保存用に調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｋｌｉｎｓ，Ｐｕｂ．，Ｇｅｎｎａｒｏ Ｅｄ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．２０００）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、使用される投与量及び濃度でレシピエントに対して無毒であり、緩衝液；アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ、メタ重亜硫酸ナトリウムを含む抗酸化剤；防腐剤、等張化剤、安定剤、金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；ＥＤＴＡなどのキレート剤及び／または非イオン性界面活性剤を含む。

【0090】

いくつかの実施形態では、本開示の製剤は、アルギニンを含む。いくつかの実施形態では、アルギニンは、アルギニンＨＣｌ塩である。いくつかの実施形態では、アルギニンは、本開示の製剤中に約５０ｍＭから約２００ｍＭの間、約１００ｍＭから約２００ｍＭ、または約１００ｍＭから約１５０ｍＭの量または濃度で存在する。例えば、いくつかの実施形態では、アルギニンは、本開示の製剤中に約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、または１９０を超える量または濃度（ｍＭ単位）で存在してもよい。いくつかの実施形態では、アルギニンは、本開示の製剤中に約２００、１９０、１８０、１７０、１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７０、または６０未満の量または濃度（ｍＭ単位）で存在してもよい。すなわち、本開示の製剤は、約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、または１９０の下限及び独立して選択される約２００、１９０、１８０、１７０、１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７０、または６０の上限を有する任意の量または濃度（ｍＭ単位）でアルギニンを含んでもよく、この場合、上限は、下限よりも大きい。いくつかの実施形態では、本開示の製剤は、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、約９０、約９５、約１００、約１０５、約１１０、約１１５、約１２０、約１２５、約１３０、約１３５、約１４０、約１４５、約１５０、約１５５、約１６０、約１６５、約１７０、約１７５、約１８０、約１８５、約１９０、約１９５、または約２００の量または濃度（ｍＭ単位）でアルギニンを含む。

【0091】

いくつかの実施形態では、本開示の製剤は、スクシナートを含む。いくつかの実施形態では、スクシナートは、コハク酸ナトリウム塩である。いくつかの実施形態では、スクシナートは、コハク酸（塩形態）である。いくつかの実施形態では、スクシナートは、本開示の製剤中に約５ｍＭから約５０ｍＭの間、約１０ｍＭから約３０ｍＭ、または約１０ｍＭから約５０ｍＭの量または濃度で存在する。例えば、いくつかの実施形態では、スクシナートは、本開示の製剤中に約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、または４５を超える量または濃度（ｍＭ単位）で存在してもよい。いくつかの実施形態では、スクシナートは、本開示の製剤中に約５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、または１０未満の量または濃度（ｍＭ単位）で存在してもよい。すなわち、本開示の製剤は、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、または４５の下限及び独立して選択される約５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、または１０の上限を有する任意の量または濃度（ｍＭ単位）でアルギニンを含んでもよく、この場合、上限は、下限よりも大きい。いくつかの実施形態では、本開示の製剤は、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、または約５０の量または濃度（ｍＭ単位）でスクシナートを含む。

【0092】

いくつかの実施形態では、本開示の製剤は、塩化ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、塩化ナトリウムは、本開示の製剤中に約４０ｍＭから約１５０ｍＭの間、約５０ｍＭから約１３０ｍＭ、または約７５ｍＭから約１００ｍＭの量または濃度で存在する。例えば、いくつかの実施形態では、塩化ナトリウムは、本開示の製剤中に約４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、または１４０を超える量または濃度（ｍＭ単位）で存在してもよい。いくつかの実施形態では、塩化ナトリウムは、本開示の製剤中に約１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７０、６０、または５０未満の量または濃度（ｍＭ単位）で存在してもよい。すなわち、本開示の製剤は、約４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、または１４０の下限及び独立して選択される約１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７０、６０、または５０の上限を有する任意の量または濃度（ｍＭ単位）で塩化ナトリウムを含んでもよく、この場合、上限は、下限よりも大きい。いくつかの実施形態では、本開示の製剤は、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、約９０、約９５、約１００、約１０５、約１１０、約１１５、約１２０、約１２５、約１３０、約１３５、約１４０、約１４５、または約１５０の量または濃度（ｍＭ単位）で塩化ナトリウムを含む。

【0093】

いくつかの実施形態では、本開示の製剤は、非イオン性界面活性剤を含む。非イオン性界面活性剤または洗浄剤（「湿潤剤」としても知られる）は、治療薬の可溶化を助けるために、ならびに撹拌により誘発される凝集から治療タンパク質を保護するために存在させることができ、これにより、活性な治療タンパク質または抗体の変性を引き起こすことなく製剤が剪断表面応力に曝露されることも可能にする。

【0094】

好適な非イオン性界面活性剤としては、ポリソルベート（２０、４０、６０、６５、８０など）、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）－２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０など）、ポリオキサマー（ｐｏｌｙｏｘａｍｅｒ）（１８４、１８８など）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ポリオール、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油１０、５０、及び６０、モノステアリン酸グリセロール、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロース、ならびにカルボキシメチルセルロースが挙げられる。使用することができる陰イオン性洗浄剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、及びジオクチルスルホン酸ナトリウムが挙げられる。陽イオン性洗浄剤としては、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムが挙げられる。本明細書で使用される場合、「ポリソルベート」に対する言及は、ＴＷＥＥＮ（登録商標）－２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０などのポリオキシエチレンソルビタンベースの界面活性剤を含む場合がある。

【0095】

いくつかの実施形態では、本開示の製剤は、ポリソルベートを含む。いくつかの実施形態では、ポリソルベートは、ポリソルベート－２０またはポリソルベート－８０である。いくつかの実施形態では、ポリソルベートは、本開示の製剤中に約０．００２％から約０．０５％の間、約０．０１％から約０．０５％、または約０．０２％から約０．０４％（ｗ／ｖ）の量または濃度で存在する。例えば、いくつかの実施形態では、ポリソルベートは、本開示の製剤中に約０．００２、０．００５、０．０１０、０．０１５、０．０２０、０．０２５、０．０３０、０．０３５、０．０４０、または０．０４５を超える量または濃度（％、ｗ／ｖ単位）で存在してもよい。いくつかの実施形態では、ポリソルベートは、本開示の製剤中に約０．０５または０．０５０、０．０４５、０．０４０、０．０３５、０．０３０、０．０２５、０．０２０、０．０１５、０．０１０、または０．００５未満の量または濃度（％、ｗ／ｖ単位）で存在してもよい。すなわち、本開示の製剤は、約０．００２、０．００５、０．０１０、０．０１５、０．０２０、０．０２５、０．０３０、０．０３５、０．０４０、または０．０４５の下限及び独立して選択される約０．０５または０．０５０、０．０４５、０．０４０、０．０３５、０．０３０、０．０２５、０．０２０、０．０１５、０．０１０、または０．００５の上限を有する任意の量または濃度（％、ｗ／ｖ単位）でポリソルベートを含んでもよく、この場合、上限は、下限よりも大きい。いくつかの実施形態では、本開示の製剤は、約０．００２、約０．００５、約０．０１０、約０．０１５、約０．０２０、約０．０２５、約０．０３０、約０．０３５、約０．０４０、約０．０４５、または約０．０５０の量または濃度（％、ｗ／ｖ単位）でポリソルベートを含む。

【0096】

いくつかの実施形態では、本開示の製剤は、約５．０から約７．０の間、例えば、約５．０、約５．５、約６．０、約６．５、または約７．０のｐＨを有する。

【0097】

緩衝液は、特に安定性がｐＨ依存的である場合、治療有効性を最適化する範囲内でｐＨ（例えば、上記の任意の範囲またはｐＨ値）を制御するために使用され得る。緩衝液は、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭの範囲の濃度で存在し得る。本開示で使用するのに適した緩衝剤には、上記のものを含む、有機酸及び無機酸の両方ならびにそれらの塩が含まれる。例えば、クエン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酢酸塩。さらに、緩衝液は、ヒスチジン及びトリメチルアミン塩、例えば、トリスから構成されてもよい。

【0098】

防腐剤は、微生物増殖を防止するために添加することができ、典型的には、約０．２％～１．０％（ｗ／ｖ）の範囲で存在する。本開示で使用するのに適した防腐剤としては、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムハロゲン化物（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、塩化ベンゼトニウム；チメロサール、フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルもしくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びｍ－クレゾールが挙げられる。

【0099】

「安定剤」として知られている場合もある等張化剤が、組成物中の液体の張性を調整または維持するために存在してもよい。タンパク質及び抗体などの大きい荷電した生体分子とともに使用される場合、それらが、荷電したアミノ酸側鎖群と相互作用し、それにより分子間及び分子内相互作用の可能性を低減するため、それらは、多くの場合、「安定剤」と称される。等張化剤は、他の成分の相対量を考慮して、約０．１重量％から約２５重量％の間または約１から約５重量％の間の任意の量で存在してもよい。いくつかの実施形態では、等張化剤としては、多価糖アルコール、三価以上の糖アルコール、例えば、グリセリン、エリトリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、及びマンニトールが挙げられる。

【0100】

さらなる賦形剤としては、（１）増量剤、（２）溶解促進剤、（３）安定剤、及び（４）変性または容器壁への付着を防止する薬剤のうちの１つ以上として働くことができる薬剤が挙げられる。かかる賦形剤としては、多価糖アルコール（上に列挙されるもの）；アミノ酸、例えば、アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、オルニチン、ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、トレオニン等；有機糖または糖アルコール、例えば、スクロース、ラクトース、ラクチトール、トレハロース、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイニシトース（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｓｅ）、ミオイニシトール（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｌ）、ガラクトース、ガラクチトール、グリセロール、シクリトール（例えば、イノシトール）、ポリエチレングリコール；硫黄含有還元剤、例えば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α－モノチオグリセロール、及びチオ硫酸ナトリウム；低分子量タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、または他の免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；単糖（例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース；二糖（例えば、ラクトース、マルトース、スクロース）；三糖、例えば、ラフィノース；ならびに多糖、例えば、デキストリンまたはデキストランが挙げられる。

【0101】

製剤がインビボ投与に使用されるためには滅菌状態でなければならない。製剤は、滅菌濾過膜を通した濾過によって滅菌させることができる。本明細書における治療用組成物は、一般に、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針によって穿刺可能なストッパーを有する静脈注射用溶液バッグまたはバイアルに充填される。

【0102】

投与経路は、適切な方法、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内もしくは関節内経路、局所投与、吸入、または徐放もしくは持続放出手段による注射または注入で、公知かつ受け入れられている方法、例えば、長期間にわたる単回または複数回のボーラスまたは注入により行う。

【0103】

本明細書の製剤はまた、治療されている特定の適応症に対して必要な２つ以上の活性化合物、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を有する活性化合物を含有してもよい。そのような活性化合物は、意図される目的に対して効果的な量で一緒に適切に存在する。

【0104】

いくつかの実施形態では、本開示の製剤は、（ａ）本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を約５ｍｇ／ｍＬから約１５ｍｇ／ｍＬの間、または約１０ｍｇ／ｍＬから約１５ｍｇ／ｍＬの間の量で；（ｂ）アルギニンを約５０ｍＭから約２００ｍＭの間、約１００ｍＭから約２００ｍＭ、または約１００ｍＭから約１５０ｍＭの量で；（ｃ）スクシナートを約５ｍＭから約５０ｍＭの間、約１０ｍＭから約３０ｍＭ、または約１０ｍＭから約５０ｍＭの量で；（ｄ）塩化ナトリウムを約４０ｍＭから約１５０ｍＭの間、約５０ｍＭから約１３０ｍＭ、または約７５ｍＭから約１００ｍＭの量で；及び（ｅ）ポリソルベートを約０．００２％から約０．０５％の間、約０．０１％から約０．０５％、または約０．０２％から約０．０４％（ｗ／ｖ）の量で含み、製剤のｐＨは、約５．０から約７．０の間である。いくつかの実施形態では、本開示の製剤は、（ａ）本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を約５ｍｇ／ｍＬから約１５ｍｇ／ｍＬの間の量で；（ｂ）アルギニンを約５０ｍＭから約２００ｍＭの間の量で；（ｃ）スクシナートを約５ｍＭから約５０ｍＭの間の量で；（ｄ）塩化ナトリウムを約４０ｍＭから約１５０ｍＭの間の量で；及び（ｅ）ポリソルベートを約０．００２％から約０．０５％の間の量で含み、任意に製剤のｐＨは、約５．０から約７．０の間である。いくつかの実施形態では、本開示の製剤は、（ａ）本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を１５ｍｇ／ｍＬの量で；（ｂ）アルギニンを１２５ｍＭの量で；（ｃ）スクシナートを２０ｍＭの量で；（ｄ）塩化ナトリウムを８０ｍＭの量で；及び（ｅ）ポリソルベートを０．０２５％の量で含み、製剤のｐＨは、６．０である。いくつかの実施形態では、抗体は、（１）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１；配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２；配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む重鎖可変領域と、（１）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１；配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２；及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む重鎖と、配列番号８または配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む軽鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１９または２７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２０または２１のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、液体製剤である（例えば、２℃～４０℃の温度で液体）。

【0105】

いくつかの実施形態では、本開示の製剤は、抗体（例えば、本開示の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体）の凝集及び／またはオリゴマー化を予防または低減する。いくつかの実施形態では、凝集のパーセンテージは、小さな抗体オリゴマーに存在する抗体のパーセンテージを指す。いくつかの実施形態では、小さな抗体オリゴマーの存在量は、サイズ排除クロマトグラフィー・高速液体クロマトグラフィーによってアッセイされる。理論に束縛されることを望まないが、凝集／オリゴマー化の低減により、治療製剤の輸送または保存の過程で行われる可能性のある凍結融解及び／または撹拌後の製剤の安定性を改善し、それによって製剤の均一性及び／または効力（例えば、製剤の活性成分または薬物）を維持することができると考えられる。

【0106】

例えば、いくつかの実施形態では、凍結融解後、製剤中の抗体の５％未満が凝集する。抗体の凝集／オリゴマー化を測定するための例示的な凍結融解条件及びアッセイについては、下に記載されている。いくつかの実施形態では、製剤は、１、２、３、４、または５サイクルの凍結融解に供される。

【0107】

いくつかの実施形態では、振盪または撹拌後、製剤中の抗体の５％未満が凝集する。抗体の凝集／オリゴマー化を測定するための例示的な撹拌条件及びアッセイについては、下に記載されている。いくつかの実施形態では、製剤は、一晩振盪に供される。いくつかの実施形態では、製剤は、８００ｒｐｍで一晩；２００ｒｐｍで２～４日間；５００ｒｐｍで２～４日間；または２００ｒｐｍで２日間に続いて５００ｒｐｍで２日間振盪に供される。

【0108】

いくつかの実施形態では、小さな抗体オリゴマーの存在量は、紫外可視分光測定によってアッセイされる。例えば、いくつかの実施形態では、４００ｎｍにおける吸光度（Ａ_{４００ｎｍ}）が測定される。いくつかの実施形態では、抗体製剤のＡ_{４００ｎｍ}は、参照標準のものと比較される。いくつかの実施形態では、参照標準とは、抗体を除いた対応する製剤を指す。

【0109】

例えば、いくつかの実施形態では、凍結融解後、本開示の製剤は、参照標準のＡ_{４００ｎｍ}と比較して、約０．１未満のＡ_{４００ｎｍ}、または約１５０％未満のＡ_{４００ｎｍ}を有する。例示的な凍結融解条件については、下に記載されている。いくつかの実施形態では、製剤は、１、２、３、４、または５サイクルの凍結融解に供される。

【0110】

いくつかの実施形態では、振盪または撹拌後、本開示の製剤は、参照標準のＡ_{４００ｎｍ}と比較して、約０．１未満のＡ_{４００ｎｍ}、または約１５０％未満のＡ_{４００ｎｍ}を有する。例示的な撹拌条件については、下に記載されている。いくつかの実施形態では、製剤は、一晩振盪に供される。いくつかの実施形態では、製剤は、８００ｒｐｍで一晩；２００ｒｐｍで２～４日間；５００ｒｐｍで２～４日間；または２００ｒｐｍで２日間に続いて５００ｒｐｍで２日間振盪に供される。

【0111】

Ｃ．投与
疾患の予防または治療に関して、本開示の活性剤または製剤の適切な投与量は、上述のような治療される疾患の種類、疾患の重症度及び経過、薬剤または製剤が予防目的で投与されるか治療目的で投与されるか、以前の治療法、個体の病歴及び薬剤に対する反応、ならびに主治医の裁量に依存することになる。薬剤または製剤は、１回で、または一連の治療にわたって個体に適切に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）または製剤の投与間隔は、約１ヶ月以上である。いくつかの実施形態では、投与間隔は、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月またはそれ以上である。本明細書で使用される場合、投与間隔とは、抗体の１回の投与から次の抗体の投与の間の期間を指す。本明細書で使用される場合、約１ヶ月の間隔は、４週間を含む。したがって、いくつかの実施形態では、投与間隔は、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１６週間、約２０週間、約２４週間、またはそれ以上である。いくつかの実施形態では、治療は、抗体または製剤の複数回の投与を含み、投与間隔は変化することもある。例えば、初回の投与と２回目の投与の間隔が約１ヶ月であり、それに続く投与間隔が約３ヶ月である。いくつかの実施形態では、初回の投与と２回目の投与の間隔が約１ヶ月であり、２回目の投与と３回目の投与の間隔が約２ヶ月であり、それに続く投与間隔が約３ヶ月である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、一律の用量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、１用量当たり約０．１ｍｇから約１８００ｍｇの投与量で個体に投与される。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、１用量当たり約０．１ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、１２００ｍｇ、１３００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、１６００ｍｇ、１７００ｍｇ、及び１８００ｍｇのいずれかの投与量で個体に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、１用量当たり約１５０ｍｇから約４５０ｍｇの投与量で個体に投与される。いくつかの実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、１用量当たり約１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、及び４５０ｍｇのいずれかの投与量で個体に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、１用量当たり約０．１ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇの投与量で個体に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、１用量当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で個体に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、１用量当たり約０．１ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇまたは約１．０ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で個体に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、または１０．０ｍｇ／ｋｇのいずれかの投与量で個体に投与される。上記の任意の投与頻度が使用されてもよい。上記の任意の投与頻度が、本明細書に記載の組成物の方法または使用において使用されてもよい。本明細書に記載の抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）による治療の有効性は、１週から３ヶ月毎の間の範囲の間隔で本明細書に記載の任意の手法またはアッセイを使用して評価することができる。いくつかの実施形態では、治療の有効性（例えば、１つ以上の症状の低減または改善）は、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体の投与後、約１ヶ月毎、約２ヶ月毎、約３ヶ月毎、約４ヶ月毎、約５ヶ月毎、約６ヶ月毎またはそれ以上で評価される。いくつかの実施形態では、治療の有効性（例えば、１つ以上の症状の低減または改善）は、約１週間毎、約２週間毎、約３週間毎、約４週間毎、約５週間毎、約６週間毎、約７週間毎、約８週間毎、約９週間毎、約１０週間毎、約１１週間毎、約１２週間毎、約１６週間毎、約２０週間毎、約２４週間毎、またはそれ以上で評価される。

【0112】

ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する本明細書に記載の抗体は、本明細書に記載の方法において、単独で、または他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ－８関連疾患または障害を治療及び／または予防するための１つ以上の（例えば、１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上など）追加の治療薬と共投与されてもよい。

【0113】

上述のそのような併用療法は、併用投与（２つ以上の治療薬が同じまたは別個の製剤に含まれる場合）及び個別投与を包含し、個別投与の場合、本開示の抗体の投与は、１つ以上のさらなる治療薬の投与前に、投与と同時に、及び／または投与後に行われてよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の投与と、１つ以上のさらなる治療剤の投与とは、互いの約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、または約６ヶ月以内に行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の投与と、１つ以上のさらなる治療剤の投与とは、互いの約１週間、約２週間、または約３週間以内に行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の投与と、１つ以上の追加の治療薬の投与とは、互いの約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、または約６日以内に行われる。

【0114】

抗Ｓｉｇｌｅｃ８抗体及び／または１つ以上の追加の治療薬は、以下に限定されない、経口投与、舌下投与、頬側投与、局所（ｔｏｐｉｃａｌ）投与、直腸投与、吸入によるもの、経皮投与、皮下注射、皮内注射、静脈内（ＩＶ）注射、動脈内注射、筋肉内注射、心臓内注射、骨内注射、腹腔内注射、経粘膜投与、経膣投与、硝子体内投与、関節腔内投与、関節周囲投与、局所（ｌｏｃａｌ）投与、皮膚上投与、または任意のそれらの組み合わせを含む、当該技術分野において既知の任意の適した投与経路により投与されてもよい。

【0115】

生物学的活性のアッセイ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、好酸球を枯渇させ、マスト細胞を阻害する。細胞のアポトーシスを評価するためのアッセイは、当該技術分野では周知のものであり、例えば、アネキシンＶによる染色及びＴＵＮＮＥＬアッセイがある。

【0116】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、ＡＤＣＣ活性を誘導する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、ＡＤＣＣ活性によりＳｉｇｌｅｃ－８を発現する好酸球を殺滅する。いくつかの実施形態では、組成物は、非フコシル化（すなわち、アフコシル化）抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非フコシル化抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む組成物は、部分フコシル化抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む組成物と比較して、Ｓｉｇｌｅｃ－８を発現する好酸球に対するＡＤＣＣ活性を増強する。ＡＤＣＣ活性を評価するためのアッセイは、当該技術分野では周知のものであり、本明細書に記載されている。例示的なアッセイでは、ＡＤＣＣ活性を測定するために、エフェクター細胞と標的細胞を用いる。エフェクター細胞の例としては、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、大顆粒リンパ球（ＬＧＬ）、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞、ならびにＮＫ及びＬＧＬを含むＰＢＭＣ、または細胞表面にＦｃ受容体を有する、好中球、好酸球及びマクロファージなどの白血球が挙げられる。エフェクター細胞は、対象となる疾患（例えば、慢性蕁麻疹）を有する個体を含む任意の由来源から分離できる。標的細胞は、評価される抗体が認識できる抗原を細胞表面に発現する任意の細胞である。そのような標的細胞の例としては、細胞表面にＳｉｇｌｅｃ－８を発現する好酸球がある。そのような標的細胞の別の例としては、細胞表面上にＳｉｇｌｅｃ－８を発現する細胞株（例えば、Ｒａｍｏｓ細胞株）（例えば、Ｒａｍｏｓ２Ｃ１０）である。標的細胞は、細胞溶解の検出を可能にする試薬で標識できる。標識試薬としては、例えばクロム酸ナトリウム（Ｎａ_２ ^５１ＣｒＯ_４）などの放射性物質が挙げられる。例えば、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１４，１８１（１９６８）；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．，１７２，２２７（１９９４）；ａｎｄ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．，１８４，２９（１９９５）を参照されたい。

【0117】

マスト細胞に対する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体のＡＤＣＣ及びアポトーシス活性を評価するための例示的なアッセイでは、ヒトマスト細胞を、公開されたプロトコールに従って、ヒト組織または生体液から単離する（Ｇｕｈｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２０１１，７５：３８２－３８４；Ｋｕｌｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００１，（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．））か、または、例えば、Ｙｏｋｏｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００８，１２１：４９９－５０５に記載されるように、ヒト造血幹細胞から分化させる。精製マスト細胞を無菌９６ウェルＵ底プレートで完全ＲＰＭＩ培地に再懸濁し、０．０００１ｎｇ／ｍｌ～１０μｇ／ｍｌの範囲の濃度の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の存在下または非存在下で３０分間インキュベートする。ＡＤＣＣを誘導するため、各試料を精製されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞または新鮮なＰＢＬの存在下及び非存在下でさらに４～４８時間インキュベートする。アポトーシスまたはＡＤＣＣによる細胞殺滅を、マスト細胞（ＣＤ１１７及びＦｃεＲ１）を検出するための蛍光標識抗体及び生細胞と死細胞または死にかけている細胞とを識別するためのアネキシンＶ及び７ＡＡＤを使用したフローサイトメトリーによって分析する。アネキシンＶ及び７ＡＡＤ染色は、製造者の指示に従って行う。

【0118】

いくつかの態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体はマスト細胞媒介活性を阻害する。マスト細胞の総数及び活性化のバイオマーカーとしてマスト細胞トリプターゼが使用されている。例えば、総トリプターゼ及び活性トリプターゼ、ならびにヒスタミン、Ｎ－メチルヒスタミン、及び１１－β－プロスタグランジンＦ２を血液または尿で測定して、マスト細胞の減少を評価することができる。例えば、マスト細胞活性アッセイの例については、米国特許出願公開第２０１１０２９３６３１号を参照されたい。

【0119】

Ｅ．抗体の調製
本明細書に記載の抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）は、抗体を作製するための当該技術分野で利用可能な技法を使用して調製され、その例示的な方法を、以下のセクションでより詳細に記載する。抗体を作製するための技法のさらなる説明は、例えば、米国特許第９，５４６，２１５号で見出すことができる。

【0120】

抗体フラグメント
本開示は、抗体フラグメントを包含する。抗体フラグメントは、酵素消化などの従来の手段によって、または組み換え法によって作製することができる。ある特定の状況では、全抗体ではなく抗体フラグメントを使用する利点がある。ある特定の抗体フラグメントの概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４に記載されている。

【0121】

抗体フラグメントを作製するための様々な技術が開発されている。従来、これらのフラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質分解消化により得られていた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４：１０７－１１７（１９９２）、及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）。しかしながら、現在、これらのフラグメントは、組み換え宿主細胞によって直接生成することができる。Ｆａｂ、Ｆｖ、及びＳｃＦｖ抗体フラグメントはいずれもＥ．ｃｏｌｉで発現させ、分泌されることができるため、これらのフラグメントの大量生産を容易に行うことができる。抗体フラグメントは、上述の抗体ファージライブラリから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’－ＳＨフラグメントをＥ．ｃｏｌｉから直接回収し、化学的に結合させてＦ（ａｂ’）_２フラグメントを形成することもできる（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３－１６７（１９９２））。別のアプローチに従って、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントを組換え宿主細胞の培養物から直接単離することもできる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含むインビボ半減期が延長されたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）_２ フラグメントが、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。抗体フラグメントを産生するための他の技術は当業者には明らかであろう。特定の実施形態では、抗体は、一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。例えば、ＷＯ９３／１６１８５、米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号を参照されたい。Ｆｖ及びｓｃＦｖは、定常領域を欠くインタクトな結合部位を有する唯一の種であり、このため、これらはインビボ使用時の非特異的結合の低減に好適であり得る。ｓｃＦｖ融合タンパク質は、ｓｃＦｖのアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかでエフェクタータンパク質の融合が生じるように構築されてもよい。前出のＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｅｄ．Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋを参照されたい。抗体フラグメントは、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されるような「線状抗体」でもあってもよい。かかる線状抗体は、単一特異性または二重特異性であってもよい。

【0122】

ヒト化抗体
本開示は、ヒト化抗体を包含する。非ヒト抗体をヒト化するためのさまざまな方法が当該技術分野で知られている。例えば、ヒト化抗体は、非ヒトの由来源から導入された１つ以上のアミノ酸残基を含む。これらの非ヒトアミノ酸残基はしばしば「インポート」残基と呼ばれ、通常は「インポート」可変ドメインに由来する。ヒト化は、本質的には、Ｗｉｎｔｅｒの方法（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６）に従って、超可変領域の配列をヒト抗体の対応する配列に置換することによって行うことができる。したがって、こうしたヒト化抗体は、インタクトなヒト可変ドメインよりも大幅に小さい部分が非ヒト種由来の対応する配列によって置換されたキメラ抗体である（米国特許第４，８１６，５６７号）。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかの超可変領域残基、かつ可能性としてはいくつかのＦＲ残基が、齧歯類抗体中の類似部位からの残基によって置換されているヒト抗体である。

【0123】

ヒト化抗体の作製に使用されるヒト可変ドメインの選択は、軽鎖及び重鎖の双方ともに、抗原性を低減するために非常に重要であり得る。いわゆる「ベストフィット」法によれば、げっ歯類（例えば、マウス）抗体の可変ドメインの配列は、既知のヒト可変ドメイン配列の全ライブラリーに対してスクリーニングされる。次いで、齧歯類の配列に最も近いヒト配列が、ヒト化抗体のヒトフレームワークとして認められる（Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１）。別の方法は、すべてのヒト抗体の軽鎖または重鎖の特定のサブグループのコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークを、いくつかの異なるヒト化抗体に使用することができる（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３．）。

【0124】

抗体が、抗原に対する高親和性及び他の好ましい生物学的特性を保持してヒト化されることがさらに一般的に望ましい。この目標を達成するために、１つの方法に従って、ヒト化抗体は、親配列及びヒト化配列の三次元モデルを使用して親配列及び様々な概念的ヒト化産物の分析プロセスによって調製される。三次元免疫グロブリンモデルは、一般に使用されており、当業者には周知のものである。選択された候補免疫グロブリン配列の予想される立体配座構造を例示及び表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示の検査により、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の予想される役割の解析、すなわち、候補免疫グロブリンのその抗原に結合する能力に影響を与える残基の解析が可能となる。このように、標的抗原（複数可）に対する増加した親和性などの所望の抗体特性が達成されるように、ＦＲ残基をレシピエント配列及び移入配列から選択し、組み合わせることができる。一般に、超可変領域残基は、抗原結合への影響に直接かつ最も実質的に関与する。

【0125】

ヒト抗体
本開示のヒト抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列（複数可）を既知のヒト定常ドメイン配列（複数可）と組み合わせることによって構築され得る。あるいは、本開示のヒトモノクローナル抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、ハイブリドーマ法によって作製され得る。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が、例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）によって説明されている。

【0126】

内因性免疫グロブリン産生の不在下で免疫化時にヒト抗体の全レパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を産生することが可能である。例えば、キメラ及び生殖系列変異体マウスにおける抗体重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合型欠失により、内因性抗体産生の完全な阻害がもたらされることが説明されている。かかる生殖系列変異体マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移入により、抗原曝露時にヒト抗体の産生がもたらされる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５（１９９３）、Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７：３３（１９９３）を参照。

【0127】

遺伝子シャッフリングを使用して、ヒト抗体を非ヒト（例えば、齧歯類）抗体から誘導することもでき、ヒト抗体は、出発非ヒト抗体と同様の親和性及び特異性を有する。「エピトープインプリンティング」とも呼ばれるこの方法に従って、本明細書に記載のファージディスプレイ技法によって得られた非ヒト抗体フラグメントの重鎖可変領域または軽鎖可変領域のいずれかが、ヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーで置き換えられ、非ヒト鎖／ヒト鎖ｓｃＦｖまたはＦａｂキメラの集団を作り出す。抗原を用いた選択により、非ヒト鎖／ヒト鎖キメラｓｃＦｖまたはＦａｂの単離がもたらされ、そこで、ヒト鎖が一次ファージディスプレイクローンにおける対応する非ヒト鎖の除去時に破壊された抗原結合部位を復元する、すなわち、エピトープがヒト鎖パートナーの選択を管理する。残りの非ヒト鎖を置き換えるためにこのプロセスが繰り返されると、ヒト抗体が得られる（１９９３年４月１日公開のＰＣＴ ＷＯ９３／０６２１３を参照のこと）。ＣＤＲグラフティングによる非ヒト抗体の伝統的なヒト化とは異なり、この技法は、非ヒト起源のＦＲまたはＣＤＲ残基を有しない完全なヒト抗体を提供する。

【0128】

抗体変異体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体のアミノ酸配列改変（複数可）が想定される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異形は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な変化を導入することによって、またはペプチド合成によって調製され得る。かかる改変としては、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基の欠失、及び／またはそれらへの挿入、及び／またはそれらの置換が挙げられる。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせが行われて、最終構築に到達することができるが、但し、最終構築物が所望の特性を有することを条件とする。主題の抗体アミノ酸配列が作製された時点で、アミノ酸改変がその配列に導入されてもよい。

【0129】

変異誘発に好ましい位置である本抗体のある特定の残基または領域の特定に有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５に記載される「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。ここで、残基または標的残基群（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕ等の荷電残基）が特定され、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）により置き換えられて、アミノ酸と抗原との相互作用に影響を及ぼす。次いで、置換に対する機能的感受性を実証するアミノ酸位置は、さらなるまたは他の変異体を置換部位に、またはそこの代わりに導入することにより洗練される。したがって、アミノ酸配列変異を導入する部位が予め決定されているが、変異自体の性質は予め決定されている必要はない。例えば、所与の部位での変異の性能を分析するために、ａｌａスキャニングまたはランダム変異誘発が標的コドンまたは領域で行われ、発現された免疫グロブリンが所望の活性についてスクリーニングされる。

【0130】

アミノ酸配列挿入には、長さが１残基から１００以上の残基を含有するポリペプチドの範囲であるアミノ末端及び／またはカルボキシル末端の融合、及び単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントとしては、抗体のＮ末端またはＣ末端の、酵素または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの融合が挙げられる。

【0131】

いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖及び／または軽鎖にＣ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４、または５個のアミノ酸残基が、重鎖及び／または軽鎖のＣ末端で切断される。いくつかの実施形態では、Ｃ末端切断は、重鎖からＣ末端リシンを除去する。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、重鎖及び／または軽鎖にＮ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４、または５個のアミノ酸残基が、重鎖及び／または軽鎖のＮ末端で切断される。いくつかの実施形態では、切断型のモノクローナル抗体は、組換え技術によって作製することができる。

【0132】

特定の実施形態では、本開示の抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または低減するように改変される。ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合型またはＯ結合型である。Ｎ結合型は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の付加を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン－Ｘ－セリン及びアスパラギン－Ｘ－スレオニン（式中、Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素結合の認識配列である。従って、ポリペプチド内でのこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在は、潜在的なグリコシル化部位をもたらす。Ｏ結合型グリコシル化とは、糖類、Ｎ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つのヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはトレオニンへの結合を指すが、５－ヒドロキシプロリンまたは５－ヒドロキシリジンも使用され得る。

【0133】

抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、上述の（Ｎ結合型グリコシル化部位のための）トリペプチド配列のうちの１つ以上が生成されるかまたは除去されるように、アミノ酸配列を改変することにより簡便に達成される。この改変は、元の抗体の配列への１つ以上のセリンまたはトレオニン残基の付加、欠失または置換によって行うこともできる（Ｏ結合型グリコシル化部位の場合）。

【0134】

抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物を改変することができる。例えば、本抗体のＦｃ領域に結合しているフコースを欠く成熟炭水化物構造を有する抗体が、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）に記載されている。同第ＵＳ２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）も参照されたい。抗体のＦｃ領域に結合した炭水化物中にバイセクトＮ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を有する抗体が、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔ）及び米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ）に参照されている。抗体のＦｃ領域に結合するオリゴ糖中で少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体が、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．）に報告されている。それらのＦｃ領域に結合した改変炭水化物を有する抗体に関してはＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）も参照されたい。修飾されたグリコシル化を有する抗原結合分子に関して、ＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．）も参照されたい。

【0135】

特定の実施形態では、グリコシル化変異体は、Ｆｃ領域を含み、ここで、炭水化物構造は、フコースを欠くＦｃ領域に結合する。かかる変異体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有する。場合により、Ｆｃ領域は、ＡＤＣＣをさらに改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、及び／または３３４位（残基のＥｕ番号付け）における置換をその中にさらに含む。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体に関連する刊行物の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生する細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）；米国特許出願第２００３／０１５７１０８ Ａ１号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ）、及びＷＯ２００４／０５６３１２ Ａ１号（Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．）（特に実施例１１で））、ならびにα－１，６－フコース転移酵素遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４））、及びβ１，４－Ｎ－アセチルグリコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴ－ＩＩＩ）及びゴルジ体μ－マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）を過剰発現する細胞が挙げられる。

【0136】

野生型ＣＨＯ細胞で産生される同じ抗体のフコースの量と比較してフコースが減少した抗体が本明細書で企図される。例えば、抗体は、天然ＣＨＯ細胞（例えば、天然ＦＵＴ８遺伝子を含有するＣＨＯ細胞などの天然グリコシル化パターンを産生するＣＨＯ細胞）によって産生された場合にさもなければ有するであろう量よりも少ない量のフコースを有する。特定の実施形態では、本明細書で提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、そのＮ結合型グリカンの約５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％または１％未満がフコースを含む抗体である。特定の実施形態では、本明細書で提供される抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体は、そのＮ結合型グリカンのいずれもフコースを含まない抗体であり、すなわち、抗体は、フコースをまったく有さないか、またはフコースを有さないか、または非フコシル化またはアフコシル化されている。フコースの量は、例えばＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるように、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分光分析により測定されるＡｓｎ２９７に付着する全てのグリコ構造体（例えば、複合、混成、及び高マンノース構造体）の合計に対する、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することにより決定することができる。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域における約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ付番）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体における小規模な配列変異に起因して、２９７位から約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位～３００位の間に位置してもよい。いくつかの実施形態では、抗体の重鎖の少なくとも１つまたは２つが非フコシル化されている。

【0137】

一実施形態では、抗体は、その血清半減期が改善されるように改変される。抗体の血清半減期を増加させるために、例えば、米国米国特許第５，７３９，２７７号に記載されるように、サルベージ受容体に結合するエピトープが抗体（特に、抗体断片）に組み込まれ得る。本明細書で使用する場合、用語「サルベージ受容体に結合するエピトープ」とは、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期の増加を担う、ＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す（ＵＳ２００３／０１９０３１１、米国特許第６，８２１，５０５号、米国特許第６，１６５，７４５号、米国特許第５，６２４，８２１号、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第６，１６５，７４５号、米国特許第５，８３４，５９７）。

【0138】

別の種類の変異体は、アミノ酸置換変異体である。これらの変異体は、異なる残基に置き換えられた抗体分子内に少なくとも１つのアミノ酸残基を有する。置換変異誘発において対象となる部位としては超可変領域が挙げられるが、ＦＲ改変も意図される。保存的置換を表５の見出し「好ましい置換」の下に示す。かかる置換が生物学的活性の望ましい変化をもたらす場合、表５に「例示的な置換」と表示されるか、またはアミノ酸クラスを参照して以下にさらに記載されるより実質的な変化が導入され、産物がスクリーニングされ得る。

【表5】

【0139】

抗体の生物学的性質の実質的な改変は、（ａ）置換領域におけるポリペプチド骨格の構造、例えば、シートもしくはらせん形構造、（ｂ）標的部位での分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖のかさ高さ、の維持への置換の影響が顕著に異なる置換を選択することにより達成される。アミノ酸は、それらの側鎖の特性の類似性に従って群分けされ得る（Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｓｅｃｏｎｄ ｅｄ．，ｐｐ．７３－７５，Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９７５））：
（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）
（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）
（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）
（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）

【0140】

あるいは、天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいて群分けされてもよい。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【0141】

非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーと別のクラスとの交換を伴う。そのような置換残基は、保存的置換部位に、または残りの（保存されていない）部位にも導入され得る。

【0142】

置換変異体の種類の１つは、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、さらなる開発のために選択される、得られた変異体（複数可）は、それらが生成される親抗体と比較して改変された（例えば、改善された）生物学的特性を有する。かかる置換変異体を生成するための簡便な方法は、ファージディスプレイを使用した親和性成熟を伴う。簡潔には、いくつかの超可変領域部位（例えば、６～７つの部位）は、各部位に全ての可能なアミノ酸置換を生成するために突然変異される。このようにして生成された抗体は、繊維状ファージ粒子から、各粒子内にパッケージングされたファージコートタンパク質（例えば、Ｍ１３の遺伝子ＩＩＩ産物）の少なくとも一部との融合物として提示される。その後、ファージディスプレイされた変異体は、それらの生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。改変の超可変領域部位候補を同定するために、抗原結合に顕著に寄与する超可変領域残基を同定するためのスキャニング変異誘発（例えば、アラニンスキャニング）を行うことができる。あるいは、または加えて、抗原－抗体複合体の結晶構造を分析して、抗体と抗原との間の接触点を特定することが有益であり得る。かかる接触残基及び隣接残基は、本明細書において詳述するものを含む、当該技術分野では周知の方法に従う置換の候補である。かかる変異体が生成されたなら、変異体のパネルを、本明細書に記載されるものを含む、当該技術分野では周知の方法を用いたスクリーニングに供し、１つ以上の関連するアッセイにおいて優れた特性を有する抗体をさらなる開発のために選択することができる。

【0143】

本抗体のアミノ酸配列変異体をコードする核酸分子は、当該技術分野で周知の種々の方法により調製される。これらの方法としては、天然源からの単離（天然に存在するアミノ酸配列変異体の場合）、または事前に調製された変異体または本抗体の非変異体バージョンのオリゴヌクレオチド媒介（または部位特異的）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発、及びカセット変異誘発による調製が挙げられるが、これらに限定されない。

【0144】

１つ以上のアミノ酸改変を本開示の抗体のＦｃ領域に導入し、それによりＦｃ領域変異体を生成することが望ましい場合がある。Ｆｃ領域変異体は、ヒンジシステインの位置を含む１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸改変（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域変異体は、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域を含む。さらなる実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、ただし、アミノ酸残基はＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスに従って番号付けされる。

【0145】

本記述及び当該技術分野の教示に従って、いくつかの実施形態では、本開示の抗体が、例えばＦｃ領域において、野生型対応物抗体と比較して１つ以上の改変を含み得ることが企図される。それにもかかわらず、これらの抗体は、それらの野生型対応物と比較して治療的有用性に必要な実質的に同じ特徴を保持する。例えば、Ｆｃ領域にある特定の改変を行うことにより、例えば、ＷＯ９９／５１６４２に記載されるように、改変された（すなわち、改善または減少のいずれか）Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）がもたらされると考えられる。Ｆｃ領域変異体の他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ ＆ Ｗｉｎｔｅｒ Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１号も参照されたい。ＷＯ００／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）及びＷＯ２００４／０５６３１２（Ｌｏｗｍａｎ）は、ＦｃＲｓへの改善または減少した結合を有する抗体変異体について記載している。これらの特許公開の内容を本明細書に参照により具体的に援用するＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）も参照されたい。母体ＩｇＧの胎児への移入の原因である、増加した半減期及び新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合を有する抗体（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））は、米国公開特許第２００５／００１４９３４Ａ１号（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）に記載される。これらの抗体は、ＦｃＲｎへＦｃ領域の結合を改善する１つ以上の置換を有するＦｃ領域を含む。改変されたＦｃ領域アミノ酸配列及び増加または減少したＣ１ｑ結合能を有するポリペプチド変異体が、米国特許第６，１９４，５５１Ｂ１号、ＷＯ９９／５１６４２に記載されている。これらの特許公開の内容を本明細書に参照により具体的に援用するＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４（２０００）も参照されたい。

【0146】

７．ベクター、宿主細胞、及び組換え方法
本開示の抗体の組換え産生について、それをコードする核酸が単離され、更なるクローニング（ＤＮＡ増幅）または発現のために複製可能なベクターに挿入される。本抗体をコードするＤＮＡは容易に単離され、従来の手技を使用して（例えば、本抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用して）配列決定される。多くのベクターが利用可能である。ベクターの選択は使用される宿主細胞に一部拠る。一般に、宿主細胞は、原核生物起源または真核生物（一般に、哺乳類）起源のいずれかのものである。ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ定常領域等の任意のアイソタイプの定常領域をこの目的のために使用することができ、かかる定常領域を任意のヒトまたは動物種から得ることができることが理解される。

【0147】

真核宿主細胞を使用した抗体の生成
真核生物宿主細胞で使用するためのベクターは、一般に以下の非限定的な成分、すなわち、シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列のうちの１つ以上を含む。

【0148】

ａ）シグナル配列成分
真核宿主細胞で使用するためのベクターは、目的とする成熟タンパク質またはポリペプチドのＮ末端に特異的切断部位を有するシグナル配列または他のポリペプチドも含有し得る。選択された異種シグナル配列は、宿主細胞によって認識及びプロセシングされ得る（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される）。哺乳類細胞発現において、哺乳類シグナル配列、ならびにウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスｇＤシグナルが利用可能である。かかる前駆体領域のＤＮＡがリーディングフレーム内で本抗体をコードするＤＮＡにライゲートされる。

【0149】

ｂ）複製起点
一般に、複製起点成分は、哺乳類発現ベクターに必要ではない。例えば、単にＳＶ４０起点は初期プロモーターを含有するため、ＳＶ４０起点が一般に使用される場合もある。

【0150】

ｃ）選択遺伝子成分
発現及びクローニングベクターは、選択可能なマーカとも称される選択遺伝子を含有しても良い。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質または他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート、またはテトラサイクリンへの耐性を付与するタンパク質、（ｂ）関連性がある場合、栄養要求性欠損を補足するタンパク質、または（ｃ）複合培地から入手不可能な重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。

【0151】

選択スキームの一例は、宿主細胞の成長を停止するための薬物を利用する。異種遺伝子による形質転換に成功した細胞は、薬物耐性を与え、それにより選択レジメンで生存するタンパク質を生成する。かかる優勢選択の例は、薬物である、ネオマイシン、ミコフェノール酸、及びハイグロマイシンを使用する。

【0152】

哺乳類細胞に好適な選択可能なマーカーの別の例は、ＤＨＦＲ、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン－Ｉ及び－ＩＩ、霊長類メタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼ等の抗体核酸の取り込みにコンピテントな細胞の特定を可能にするものである。

【0153】

例えばいくつかの実施形態では、ＤＨＦＲ選択遺伝子で形質転換された細胞は、最初に、ＤＨＦＲの競合アンタゴニストであるメトトレキサート（Ｍｔｘ）を含有する培養培地中で全ての形質転換体を培養することによって特定される。いくつかの実施形態では、野生型ＤＨＦＲが用いられるときに適切な宿主細胞は、ＤＨＦＲ活性が欠損したチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株（例えば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－９０９６）である。

【0154】

あるいは、抗体、野生型ＤＨＦＲタンパク質、及びアミノグリコシド３’－ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）等の別の選択可能なマーカーをコードするＤＮＡ配列で形質転換または共形質転換された宿主細胞（特に、内因性ＤＨＦＲを含有する野生型宿主）は、アミノグリコシド抗生物質、例えば、カナマイシン、ネオマイシン、またはＧ４１８等の選択可能なマーカー用の選択剤を含有する培地中での細胞成長によって選択され得る（米国特許第４，９６５，１９９号を参照）。宿主細胞には、グルタミン合成酵素（ＧＳ）が欠損した細胞系を含む、ＮＳ０、ＣＨＯＫ１、ＣＨＯＫ１ＳＶ、または誘導体が含まれ得る。哺乳動物細胞の選択マーカーとしてＧＳを使用する方法は、米国特許第５，１２２，４６４号及び米国特許第５，８９１，６９３号に記載されている。

【0155】

ｄ）プロモーター成分
発現ベクター及びクローニングベクターは、一般に、宿主生物によって認識され、かつ目的のポリペプチド（例えば、抗体）をコードする核酸に機能的に連結されたプロモーターを含む。真核生物のプロモーター配列は既知である。例えば、実質的に全ての真核遺伝子が、転写が始まる部位からおよそ２５～３０塩基上流に位置するＡＴに富んだ領域を有する。多くの遺伝子の転写開始から７０～８０塩基上流に見られる別の配列は、Ｎが任意のヌクレオチドであり得るＣＮＣＡＡＴ領域である。大半の真核遺伝子の３’末端は、コード配列の３’末端へのポリＡ尾部の付加のためのシグナルであり得るＡＡＴＡＡＡ配列である。特定の実施形態では、これらの配列のいずれかまたはすべてを、真核生物発現ベクターに適当に挿入することができる。

【0156】

哺乳類宿主細胞におけるベクターからの転写は、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（アデノウイルス２等）、ウシ乳頭腫ウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス及びシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）等のウイルスのゲノムから、異種哺乳類プロモーター、例えば、アクチンプロモーターまたは免疫グロブリンプロモーターから、熱ショックプロモーターから得られるプロモーターによって制御されるが、但し、かかるプロモーターが宿主細胞系と適合性であることを条件とする。

【0157】

ＳＶ４０ウイルスの早期及び後期プロモーターは、ＳＶ４０ウイルス複製起点も含有するＳＶ４０制限断片として好都合に得られる。ヒトサイトメガロウイルスの前初期プロモーターは、ＨｉｎｄＩＩＩ Ｅ制限断片として好都合に得られる。ウシ乳頭腫ウイルスをベクターとして使用して哺乳動物宿主におけるＤＮＡを発現させるための系は特許第４，４１９，４４６号に開示されている。このシステムの改変については特許第４，６０１，９７８号に記載されている。単純ヘルペスウイルスからのチミジンキナーゼプロモーターの制御下でのマウス細胞におけるヒトβ－インターフェロンｃＤＮＡの発現について記載した、Ｒｅｙｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２９７：５９８－６０１（１９８２）も参照されたい。あるいは、ラウス肉腫ウイルス長末端反復配列をプロモーターとして使用することができる。

【0158】

ｅ）エンハンサーエレメント成分
より高次の真核生物による本開示の抗体をコードするＤＮＡの転写は、多くの場合、エンハンサー配列をベクターに挿入することによって増加する。哺乳動物遺伝子（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトプロテイン、及びインスリン）由来の多くのエンハンサー配列が現在知られている。しかしながら、典型的には、真核細胞ウイルス由来のエンハンサーを使用する。例としては、複製起点の後半側のＳＶ４０エンハンサー（ｂｐ１００～２７０）、ヒトサイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、マウスサイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後半側のポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。真核プロモーターの活性化のためのエンハンサーエレメントについて記載したＹａｎｉｖ，Ｎａｔｕｒｅ ２９７：１７－１８（１９８２）も参照されたい。このエンハンサーは、抗体ポリペプチドコード配列に対して５’位または３’位でベクターにスプライスされるが、一般にプロモーターから５’部位に位置する。

【0159】

ｆ）転写終結成分
真核宿主細胞において使用される発現ベクターはまた、転写の終結及びｍＲＮＡの安定化に必要な配列を含有しても良い。かかる配列は、一般的には、真核生物またはウイルスＤＮＡまたはｃＤＮＡの５’非翻訳領域、時折、３’非翻訳領域から入手可能である。これらの領域は、抗体をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分中のポリアデニル化断片として転写されたヌクレオチドセグメントを含有する。１つの有用な転写終結成分は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。ＷＯ９４／１１０２６及びそれに開示される発現ベクターを参照されたい。

【0160】

ｇ）宿主細胞の選択及び形質転換
本明細書でのベクターにおけるＤＮＡのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞としては、脊椎動物宿主細胞を含む本明細書に記載のより高次の真核生物細胞が挙げられる。脊椎動物培養細胞（組織培養）の繁殖が日常的な手技になっている。有用な哺乳動物細胞株の例としては、例えば、ＳＶ４０によって形質転換したサル腎由来細胞ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）、ヒト胎児腎細胞株（２９３細胞、または増殖のために懸濁培養でサブクローニングした２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））、ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ，Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４，Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０））、サル腎由来細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）、アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）、ヒト子宮頚部癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、イヌ腎由来細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）、マウス乳癌（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）、ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２））、ＭＲＣ５細胞、ＦＳ４細胞、ＣＨＯＫ１細胞、ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞または誘導体、ならびにヒト肝癌株（Ｈｅｐ Ｇ２）がある。

【0161】

宿主細胞は、抗体産生のために上述の発現またはクローニングベクターで形質転換され、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅に適切なものとして修飾された従来の栄養培地中で培養される。

【0162】

ｈ）宿主細胞の培養
本開示の抗体を産生するために使用される宿主細胞は、様々な培地中で培養され得る。Ｈａｍ’ｓ Ｆ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）、及びダルベッコ修飾イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）等の市販されている培地は、宿主細胞の培養に好適である。さらに、Ｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４（１９７９），Ｂａｒｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５（１９８０）、米国特許第４，７６７，７０４号、同第４，６５７，８６６号、同第４，９２７，７６２号、同第４，５６０，６５５号、または同第５，１２２，４６９号、ＷＯ９０／０３４３０、ＷＯ８７／００１９５、または米国再発行特許第３０，９８５号に記載される培地のいずれも宿主細胞の培地として使用することができる。これらの培地のうちのいずれかには、必要に応じて、ホルモン及び／または他の成長因子（インスリン、トランスフェリン、または上皮成長因等子）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、及びリン酸塩等）、緩衝液（ＨＥＰＥＳ等）、ヌクレオチド（アデノシン及びチミジン等）、抗生物質（ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬物等）、微量元素（通常マイクロモル範囲の最終密度で存在する無機化合物と定義される）、ならびにグルコースまたは等価エネルギー源が補充され得る。当業者には周知の他の任意の補助物質も適当な濃度で添加することができる。温度、ｐＨなどの培養条件は、発現のために選択された宿主細胞とともにこれまでに使用されているものであり、当業者には明らかであろう。

【0163】

ｉ）抗体の精製
組換え技法を使用する際、本抗体は、細胞内に産生され得るか、または培地に直接分泌され得る。抗体が細胞内で産生される場合、第１のステップとして、微粒子残屑（宿主細胞または溶解フラグメントのいずれか）を、例えば、遠心分離または限外濾過により除去することができる。抗体が培地に分泌される場合、かかる発現系の上清は、一般に、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して最初に濃縮することができる。タンパク質分解を阻害するためのＰＭＳＦ等のプロテアーゼ阻害剤が前述のステップのうちのいずれかに含まれてもよく、外来性夾雑物の成長を阻止するための抗生物質が含まれてもよい。

【0164】

細胞から調製された抗体組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、及び親和性クロマトグラフィーを使用して精製することができ、親和性クロマトグラフィーが便宜のよい方法である。タンパク質Ａの親和性リガンドとしての適合性は、本抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種及びアイソタイプに依存する。タンパク質Ａは、ヒトγ１、γ２、またはγ４重鎖に基づく抗体を精製するために使用され得る（Ｌｉｎｄｍａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ６２：１－１３（１９８３））。タンパク質Ｇは、全てのマウスアイソタイプ及びヒトγ３に対して推奨される（Ｇｕｓｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．５：１５６７１５７５（１９８６））。親和性リガンドが結合するマトリックスは、多くの場合アガロースとすることができるが、他のマトリックスも利用可能である。制御された細孔ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼン等の機械的に安定したマトリックスにより、アガロースを用いて達成され得るものよりも流速を早くして処理時間を短くすることが可能となる。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，Ｎ．Ｊ．）が精製に有用である。タンパク質を精製するための他の技法、例えば、イオン交換カラム上での分別、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上でのクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）上でのクロマトグラフィー、陰イオンまたは陽イオン交換樹脂（ポリアスパラギン酸カラム等）上でのクロマトグラフィー、クロマト分画、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、及び硫酸アンモニウム沈殿も回収される抗体に応じて利用可能である。

【0165】

任意の予備精製ステップ（複数可）後、目的とする抗体及び混入物質を含む混合物をさらなる精製、例えば、低塩濃度（例えば、約０～０．２５Ｍの塩）で行われる、約２．５～４．５のｐＨの溶出緩衝液を使用した低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーにかけることができる。

【0166】

一般に、研究、試験、及び臨床使用で使用するための抗体を調製するための様々な方法論が当該技術分野で十分に確立されており、上述の方法論と一致しており、かつ／または当業者により目的とする特定の抗体に適切であるとみなされる。

【0167】

非フコシル化抗体の産生
本明細書では、フコシル化度が低い抗体を調製する方法が提供される。例えば、本明細書で想到される方法としては、これらに限定されるものではないが、タンパク質フコシル化が欠損している細胞株（例えば、Ｌｅｃ１３ ＣＨＯ細胞、α－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ノックアウトＣＨＯ細胞、β１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩを過剰発現し、さらにゴルジ体μ－マンノシダーゼＩＩを過剰発現する細胞など）の使用、ならびに抗体の産生に使用される細胞培養培地へのフコース類似体（複数可）の添加が挙げられる（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）；米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８ Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；ＷＯ ２００４／０５６３１２ Ａ１；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；及び米国特許第８，５７４，９０７号を参照）。抗体のフコース含有量を減少させるためのさらなる方法としては、米国特許出願公開第２０１２／０２１４９７５号に記載されるＧｌｙｍａｘｘ技術が含まれる。抗体のフコース含有量を減少させるためのさらなる技術には、抗体の産生に使用される細胞培養培地への１つ以上のグリコシダーゼ阻害剤の添加も含まれる。グリコシダーゼ阻害剤としては、α－グルコシダーゼＩ、α－グルコシダーゼＩＩ、及びα－マンノシダーゼＩが挙げられる。いくつかの実施形態では、グリコシダーゼ阻害剤は、α－マンノシダーゼＩの阻害剤（例えば、キフネンシン）である。

【0168】

本明細書で使用する場合、「コアフコシル化」とは、Ｎ結合型グリカンの還元末端におけるＮ－アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）へのフコースの付加（「フコシル化」）を指す。そのような方法によって産生される抗体及びその組成物もまた提供される。

【0169】

いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域（またはドメイン）に結合した複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖のフコシル化が低減される。本明細書で使用する場合、「複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖」は、一般的にアスパラギン２９７（Ｋａｂａｔの番号付けによる）に結合するが、複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖は他のアスパラギン残基に結合することもできる。「複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖」には、コア構造の非還元末端にマンノースのみが組み込まれた高マンノース型の糖鎖は含まれないが、１）コア構造の非還元末端側が、ガラクトース－Ｎ－アセチルグルコサミン（「ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃ」とも呼ばれる）の１つ以上の分岐を有し、Ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側が場合によりシアル酸、バイセクトＮ－アセチルグルコサミンなどを有するような複合型、または２）コア構造の非還元末端側が高マンノースＮ－グリコシド結合型糖鎖と複合型Ｎ－グリコシド結合型糖鎖の両方の分岐を有するようなハイブリッド型が含まれる。

【0170】

いくつかの実施形態では、「複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖」は、コア構造の非還元末端側が、０個、１個、または複数個のガラクトース－Ｎ－アセチルグルコサミン（「ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃ」とも呼ばれる）の分岐を有し、Ｇａｌ－ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側が場合によりシアル酸、バイセクトＮ－アセチルグルコサミンなどの構造をさらに有するような複合型を含む。

【0171】

本方法によれば、一般的に、少量のフコースのみが複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖に取り込まれる。例えば、異なる実施形態において、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、または約１％未満の抗体が、組成物中でフコースによるコアフコシル化を有する。いくつかの実施形態では、組成物中でフコースによるコアフコシル化を有する抗体は実質的に存在しない（すなわち、約０．５％未満）。いくつかの実施形態では、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、約９１％超、約９２％超％、約９３％超、約９４％超、約９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超、または約９９％超の抗体が、組成物中で非フコシル化されている。

【0172】

いくつかの実施形態では、本明細書において、フコース残基を含むＮ－グリコシド結合型炭水化物鎖が実質的に存在しない（すなわち、約０．５％未満）抗体が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書において、抗体の重鎖の少なくとも１つまたは２つが非フコシル化されている抗体が提供される。

【0173】

上記のように、様々な哺乳動物宿主発現ベクター系を利用して抗体を発現させることができる。いくつかの実施形態では、培地にフコースは添加されない。いくつかの実施形態では、有効量のフコース類似体が培地に添加される。この関連において、「有効量」とは、抗体の複合Ｎ－グリコシド結合型糖鎖へのフコースの取り込みを少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％減少させるのに十分な類似体の量を指す。いくつかの実施形態では、本方法によって製造される抗体は、フコース類似体の非存在下で培養された宿主細胞から産生された抗体と比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％の非コアフコシル化タンパク質（例えば、コアフコシル化を欠く）を含む。

【0174】

糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖と、糖鎖の還元末端のＮ－アセチルグルコサミンにフコースが結合している糖鎖との含有量（例えば、比）は、例えば、実施例に記載されるようにして決定することができる。他の方法としては、ヒドラジン分解や酵素消化（例：生化学実験法２３：糖タンパク質糖鎖研究法（学会出版センター）、高橋礼子編（１９８９年）参照）、放出された糖鎖の蛍光標識または放射性同位体標識の後、標識された糖鎖をクロマトグラフィーで分離することが挙げられる。また、放出された糖鎖の組成は、ＨＰＡＥＣ－ＰＡＤ法で分析することにより決定することができる（例えば、Ｊ．Ｌｉｑ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．６：１５５７（１９８３）参照）。（一般的には米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号を参照）。

【0175】

ＩＩＩ．製品またはキット
別の態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）を含む本開示の製剤を含む製品またはキットが提供される。

【0176】

製品またはキットは、容器をさらに含んでもよい。適当な容器としては、例えば、ボトル、バイアル（例えば、二室バイアル）、シリンジ（一室または二室シリンジ）、及び試験管が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどのさまざまな材料から形成することができる。容器は製剤を保持する。いくつかの実施形態では、容器はガラスバイアルである。例えば、いくつかの実施形態では、ガラスバイアルは、１０ｍｇの抗体を含み、抗体は製剤中に約１５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

【0177】

製品またはキットは、容器の表面または容器に付属する、製剤の使用についての指示を示すことができるラベルまたは添付文書をさらに含んでもよい。ラベルまたは添付文書は、製剤が個体におけるＳｉｇｌｅｃ－８関連疾患もしくは障害を治療及び／または予防するための皮下、静脈内、または他の様式の投与に有用であるか、それが意図されることをさらに示してもよい。いくつかの実施形態では、添付文書は、製剤の静脈内投与に関する説明書を含む。いくつかの実施形態では、添付文書は、製剤の皮下投与に関する説明書を含む。いくつかの実施形態では、添付文書は、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤を、例えば、約２℃から約８℃の間、例えば、４℃で保存することに関する説明書をさらに含む。

【0178】

製剤を保持する容器は、一回使用バイアル、または再構成された製剤の繰り返し投与を可能にする複数回使用バイアルであってよい。製造品またはキットは、好適な希釈剤を含む第２の容器を更に含んでもよい。製品またはキットは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、及び使用上の指示を有する添付文書を含む商業的、治療的、及び使用者の視点から望ましい他の材料をさらに含み得る。

【0179】

したがって、特定の実施形態では、製品またはキットは、個体に有効量の製剤を投与することを含む、個体においてＳｉｇｌｅｃ－８関連疾患または障害を治療及び／または予防するための方法における抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤の使用に関する説明書を含む。特定の実施形態では、製品は、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８製剤を含む医薬と、Ｓｉｇｌｅｃ－８関連疾患または障害を治療及び／または予防するためにそれを必要とする個体へ医薬を投与することに関する説明書を含む添付文書とを含む。いくつかの実施形態では、添付文書は、治療が、Ｓｉｇｌｅｃ－８関連疾患または障害を有する個体において１つ以上の症状を、医薬の投与前のベースラインレベルと比較して低減するのに有効であることをさらに示す。いくつかの実施形態では、個体は、抗体を含む医薬の投与前にＳｉｇｌｅｃ－８関連疾患または障害であると診断される。特定の実施形態では、個体は、ヒトである。

【0180】

特定の実施形態では、本開示は、単回用量投与単位用のキットを提供する。このようなキットは、一室または多室のプレフィルドシリンジの両方を含む治療用抗体の水性製剤の容器を含む。例示的なプレフィルドシリンジは、Ｖｅｔｔｅｒ ＧｍｂＨ、Ｒａｖｅｎｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙより販売されている。

【0181】

別の実施形態では、本明細書において、オートインジェクターで投与するための、本明細書に記載の製剤を含む製造品またはキットが提供される。オートインジェクターは、起動時に患者または管理者によるさらなる必要な操作なしで内容物を投与する注射装置として述べることができる。オートインジェクターは、投与速度が一定である必要があり、投与時間が数分よりも長い場合の治療用製剤の自己投薬に特に適している。

【0182】

別の態様では、本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）を含む製剤を含む製品またはキットが提供される。製品またはキットは、本開示の方法における製剤の使用に関する説明書をさらに含んでもよい。したがって、特定の実施形態では、製品またはキットは、個体に有効量の製剤を投与することを含む、個体においてＳｉｇｌｅｃ－８関連疾患または障害を治療または予防するための方法におけるヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む製剤の使用に関する説明書を含む。特定の実施形態では、製品またはキットは、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む製剤を含む医薬と、Ｓｉｇｌｅｃ－８関連疾患または障害を治療及び／または予防するためにそれを必要とする個体に医薬を投与することに関する説明書を含む添付文書とを含む。

【0183】

本開示はまた、個体においてＳｉｇｌｅｃ－８関連疾患または障害を治療または予防するための１つ以上の追加の医薬（例えば、第２の医薬）と組み合わせて本明細書に記載の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体（例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体）を含む製剤を含む製品またはキットを提供する。製品またはキットは、本開示の方法における１つ以上の追加の医薬と組み合わせた製剤の使用に関する説明書をさらに含んでもよい。例えば、本明細書の製品またはキットは、任意に第２の医薬を含む容器をさらに含み、この場合、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む製剤は第１の医薬であり、その製品またはキットは、有効量で第２の医薬により個体を治療することに関する説明書をラベルまたは添付文書上にさらに含む。したがって、特定の実施形態では、製品またはキットは、個体においてＳｉｇｌｅｃ－８関連疾患または障害を治療または予防するための方法における１つ以上の追加の医薬と組み合わせたヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を含む製剤の使用に関する説明書を含む。特定の実施形態では、製品またはキットは、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８に結合する抗体を含む製剤を含む医薬（例えば、第１の医薬）と、１つ以上の追加の医薬と、１つ以上の追加の医薬（例えば、第２の医薬）と組み合わせた第１の医薬の投与に関する説明書を含む添付文書とを含む。

【0184】

当然のことながら、本明細書に記載の態様及び実施形態は説明のためのものに過ぎず、それを鑑みさまざまな改変または変更が当業者に示されることになるが、それらは本出願の趣旨及び範囲ならびに添付の特許請求の範囲に含まれるものである。

【実施例】

【0185】

以下の実施例を参照することにより、本開示のより完全な理解が得られるであろう。しかしながら、これらの実施例は本開示の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。当然のことながら、本明細書に記載の実施例及び実施形態は説明のためのものに過ぎず、それを鑑みさまざまな改変または変更が当業者に示されることになるが、それらは本出願の趣旨及び範囲ならびに添付の特許請求の範囲に含まれるものである。

【0186】

実施例１：抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤のｐＨスクリーニング
この実施例は、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８製剤が凝集せずに最高の安定性を示すであろうｐＨを求めるために行った一連の実験を説明する。

【0187】

材料及び方法
ｐＨスクリーニング
抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体ＨＥＫＡ及びＨＥＫＦを、表Ａに示す各緩衝液に透析することによって１０ｍｇ／ｍＬで製剤化した。液体抗体製剤を、１または５回の凍結融解サイクルに供するか、または、示すとおり、４℃、２５℃、もしくは３７℃で１週間、２週間、３週間、１ヶ月、２ヶ月、もしくは３ヶ月インキュベートした。

【表A】

【0188】

ＥＬＩＳＡ
ＥＬＩＳＡプレート（Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェル、４００μＬの平底の透明なプレート）を１×ＰＢＳ中の１００μＬの０．１μｇ／ｍＬ Ｓｉｇｌｅｃ－８－ＥＣＤでコーティングした後、４℃で一晩インキュベートした。プレートを３００μＬの１×ＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０で４回洗浄した後、６００ｒｐｍ、室温で１時間振盪しながらＰＢＳ－Ｔｗｅｅｎ（登録商標）中の２％ＢＳＡを２００μＬ／ウェルで使用してブロッキングした。次いで、プレートを３００μＬの１×ＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０でさらに４回洗浄した。次に、（ブロッキング緩衝液中）１．０μｇ／ｍＬで開始する試験抗体の５倍希釈系列を１００μＬ／ウェルを使用してプレートに適用し、室温で振盪しながら１時間インキュベートした。次いで、プレートを３００μＬの１×ＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０でさらに４回洗浄した。１００μＬの二次抗体（ブロッキング緩衝液中０．２μｇ／ｍＬのヤギ抗ｈｕＦａｂ：ＨＲＰ；Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈカタログ番号１１５－０３５－０７１）を各ウェルに添加し、室温で振盪しながら１時間インキュベートした。次に、プレートを３００μＬの１×ＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）－２０でさらに４回洗浄した。１００μＬのＴＭＢ基質（Ｓｇｉｍａ Ｔ０４４０－１Ｌ）を各ウェルに添加し、５分間発色させた後、１００μＬの１Ｍ硫酸を添加することによって基質発色を停止させた。ＥＬＩＳＡプレートを４５０ｎｍで読み取った。

【0189】

ＳＥＣ－ＨＰＬＣ
ＳＵＰＥＲＤＥＸ（商標）２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）２．８／３００ｍｍ ＳＥＣカラムを示した製剤緩衝液中、０．０７５ｍＬ／分の流量で使用した。ピークを以下のように割り当てた：１２．０分（ｍｉｎ）－ボイド；１３．５分－デキストラン；１４．１分－８８０ｋＤ；１５．５分－４４４ｋＤ；１８．０分－１５０ｋＤ；２０．０分－６７ｋＤ；２３．０分－２７ｋＤ（図３Ａ）。小さな抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体オリゴマーは１５．４分ピークが観察された一方で、抗体モノマーは１８．０分に溶出された。

【0190】

ＤＳＣ
それぞれの製剤をブランクとして使用し、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を６０℃／時間で行い、２０℃から１１０℃まで監視した（１５分のプレスキャンあり）。製剤（表Ａを参照）を３７℃で２週間インキュベートした後、分析した。

【0191】

紫外可視分光測定
試験した製剤中の目に見える凝集体の存在の測定するために、抗体を含む溶液の４００ｎｍにおける吸光度をＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｌａｍｂｄａ ３５紫外可視分光計で測定した。抗体溶液の吸光度測定値を製剤緩衝液から差し引いた。

【0192】

ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
抗体を、４～２０％Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎゲル上におけるドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）により分析して、安定性及び断片化を評価した。分析は、還元及び非還元条件下で行った。

【0193】

結果
抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を、表Ａに示したように製剤化し、凍結／融解に供し、上記のＥＬＩＳＡによってＳｉｇｌｅｃ－８－ＥＣＤとの結合に関してアッセイした。０時点における抗体ＨＥＫＡ及びＨＥＫＦの結合曲線及びＥＣ５０値をそれぞれ図１Ａ及び１Ｂに示す。３７℃における１週間のインキュベーション後の同じ抗体製剤の結合曲線及びＥＣ５０値をそれぞれ図１Ｃ及び１Ｄに示す。Ｓｉｇｌｅｃ－８との抗体の結合は、異なるｐＨ値製剤によっては大きな影響を受けなかった。

【0194】

次に、紫外可視分光測定を使用して、表Ａに示した抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤を、示した温度または凍結融解（１または５サイクル）での２週間の保存後に分析した。キュベットを４００ｎｍの吸光度で１回読み取った。ＨＥＫＡ及びＨＥＫＦの結果をそれぞれ図２Ａ及び２Ｂに示す。ｐＨ６、７、及びＨｉｓ ＨＥＫＡ製剤において５回の凍結融解サイクル後に粒子が見えたが、それは沈殿せず、最終的に分散した。これらのデータは、抗体ＨＥＫＡがアルギニンの存在下においてｐＨ６でより安定であったことを示す。

【0195】

ＳＥＣ－ＨＰＬＣも使用して、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤中のＩｇＧモノマー対小さなオリゴマーの形成を定量した。抗体オリゴマーのいくらかの増加がより高い温度で観察された（図３Ｂ及び３Ｃ）が、全抗体の１％未満であった。ＨＥＫＦに関してより小さなピークが観察されたが、これも１％未満であった（図３Ｃ）。２週間後にｐＨ５製剤から得られた代表的なピークを示す（表Ａを参照）。これらのデータは、可溶性凝集体の存在がｐＨ５、高温で観察されたことを示す。

【0196】

図４Ａ及び４Ｂはそれぞれ、ＨＥＫＡまたはＨＥＫＦを含む各製剤中のオリゴマーのパーセンテージを示す。示した温度での２週間後または示した数の凍結融解サイクル後に製剤を試験した。これらの結果は、抗体オリゴマーのいくらかの増加がより高い温度で見られるが、全抗体の１％未満であったという観察結果を裏付けた。これらのデータは、アルギニンが抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体の安定性を改善することを示唆する。

【0197】

抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤を還元及び非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥによっても調べた。図５Ａは、０時点における示したＨＥＫＡ及びＨＥＫＦ製剤の還元及び非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析の結果を示す。１週間または２週間後に行った分析を図５Ｂ～５Ｅに示す。試験したいずれの条件下でも大幅な断片化は観察されなかった。

【0198】

示差走査熱量測定（ＤＳＣ）も使用して、抗体の安定性を調べた。ＨＥＫＡ及びＨＥＫＦに関するＤＳＣ分析及びＴｍピークの結果をそれぞれ表Ｂ及びＣに示す。抗体は、ｐＨ６及びアルギニンの存在下でより良好な安定性を示した。

【表B】

【表C】

【0199】

まとめると、これらの結果は、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体が、例えば、ｐＨ７における安定性と比較して、ｐＨ６でより良好な安定性を示したことを示す。

【0200】

実施例２：抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤中のアルギニン濃度の賦形剤スクリーニング
実施例１に記載されている方法を使用して抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤中の抗体の安定性及び凝集に対する影響に関してさまざまな賦形剤を試験した。まず、アルギニン濃度の影響を試験するために一連の製剤を生成した。

【0201】

結果
抗体凝集に対するアルギニン濃度の影響を紫外可視分光測定によって測定した。抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体を、表Ｄに示した緩衝液に従い１０ｍｇ／ｍＬで製剤化した後、１または５回の凍結融解サイクルに供し、紫外可視分光測定によって分析した。

【表D】

【0202】

図６Ａ及び６Ｂに示されるとおり、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤中の５０～２００ｍＭのアルギニンの存在により、凍結融解後のＨＥＫＡ及びＨＥＫＦ抗体の凝集が低減された。

【0203】

表Ｄに示した製剤の抗体オリゴマー化も上記のとおりＳＥＣ－ＨＰＬＣによって分析した。製剤１に関する代表的なピークを図７Ａ及び７Ｂに示す。これらの結果は、両方の抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体に関して凍結融解後の小さな抗体オリゴマーの極めて小さな増加（≦０．１％）を示す。試験したすべての製剤の結果を図８Ａ（抗体ＨＥＫＡ）及び８Ｂ（抗体ＨＥＫＦ）に示す。１００ｍＭを超える濃度のアルギニンの効果が明らかであり、１５０ｍＭで持続した。

【0204】

まとめると、これらの結果は、抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤中におけるアルギニンの存在、特に１００ｍＭを超えるアルギニンの濃度が抗体の凝集及びオリゴマー化を低減することを示す。

【0205】

実施例３：抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤中のスクロース、スクシナート、及びポリソルベート濃度に関する撹拌試験
抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤中の抗体の安定性及び凝集に対する影響に関してさまざまな賦形剤を試験した。次に、スクロース、スクシナート、及びポリソルベート濃度の影響を試験するために一連の製剤を生成した。これらの撹拌試験における安定性を助けるためにスクロース及びポリソルベートを使用した。

【0206】

結果
撹拌後の抗体性能に対するポリソルベート濃度の影響を試験するために一連の緩衝液を構築した。これらの緩衝液は、１００ｍＭのアルギニン、４０ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのスクシナート、及び０％、０．００２％、０．００５％、０．０１％、０．０２％、及び０．０５％の濃度のうちの１つのポリソルベート－８０を含んでいた。ＨＥＫＡ抗体を１０ｍｇ／ｍＬで製剤化し、液体製剤を滅菌したガラス製剤バイアルに等分した。バイアルを２００ｒｐｍで２日間水平に振盪した後、さらに２日間５００ｒｐｍに加速した。４日後に、４００ｎｍにおける吸光度をアッセイした。

【0207】

撹拌実験の結果を図９に示す。これらの結果は、ポリソルベートを含むすべてのＨＥＫＡ製剤に関して低い吸光度値を示した。

【0208】

ポリソルベート含有製剤を、次に小さな抗体オリゴマーの形成に関してＳＥＣ－ＨＰＬＣによって分析した。結果の概要を図１０及び表Ｅに示す。

【表E】

【0209】

４００ｎｍにおける吸光度値は、ポリソルベート濃度により大きくは変化しなかったが（図９）、オリゴマー化の存在はポリソルベートレベルに影響されやすいことがわかった（図１０及び表Ｅ）。０．００５％まではポリソルベートの濃度が低下するにつれ抗体オリゴマーの割合が増加したが、０．００２％及び０％ポリソルベートでは低いオリゴマーレベルが観察された。

【0210】

次に、Ａ_{４００ｎｍ}によって測定される、アルギニン、ヒスチジン、スクロース、及びポリソルベートの抗体の凝集に対する影響を試験するために一連の製剤を生成した。ヒスチジンを５０ｍＭで使用した。試験したＨＥＫＡ製剤及び得られた結果を図１１に示す。これらの結果は、アルギニンまたはヒスチジンを含む製剤が凝集を減少させ、スクロース及びポリソルベートが凍結時の抗体の安定性を改善したことを示した。

【0211】

次に、ＨＥＫＡ抗体撹拌後のアルギニン、スクロース、及びポリソルベート濃度の影響を調べた。バイアルを８００ｒｐｍで１日撹拌したこと以外、上記のとおり撹拌を行った。試験した製剤、及びＡ_{４００ｎｍ}値を表Ｆに示す。結果を図１２Ａ及び表Ｆに示す。

【表F】

【0212】

これらの結果は、抗体製剤中のポリソルベートの存在がＨＥＫＡの凝集を低減したことを示した。

【0213】

これらの製剤をＳＥＣ－ＨＰＬＣによって小さな抗体オリゴマーの形成に関して分析した（図１２Ｂ）。ポリソルベート－８０を含まないバイアルは、撹拌後に濁り及びより大きなオリゴマーを示した。ポリソルベート－８０を用いずに１００ｍＭスクロースを使用しても濁りが生じた。これらの結果は、アルギニン及びポリソルベートの存在により撹拌後にオリゴマー化が少ない抗体製剤がもたらされることを示した。

【0214】

ＨＥＫＡ製剤も凍結融解後の凝集及びオリゴマー化に関して試験した。製剤を生成し、表Ｇに従って１回の凍結融解サイクル（Ｆ／Ｔ）、５回の凍結融解サイクル（Ｆ／Ｔ ５×）、または撹拌（Ａｇｉｔ）に供した。これらの製剤は、１２５ｍＭのアルギニン－ＨＣｌ、２５ｍＭのＮａＣｌ、及び２０ｍＭのコハク酸ナトリウム、ｐＨ６を含んでいた。

【表G】

【0215】

表Ｇに示されるとおり、吸光度値及びオリゴマー化のパーセンテージは、すべての製剤で一貫して低く、撹拌後に最低の濃度のポリソルベート－８０に関してオリゴマー化のわずかな増加が観察された。

【0216】

スクロース及びポリソルベートのアルギニンとの相加効果がｐＨ６で観察された。撹拌安定性データは、バイアルが撹拌された場合（例えば、輸送中）及び／または材料が凍結融解された場合に製剤が抗体の凝集を防いだことを示す。理論に束縛されることを望まないが、スクロースが凍結保護物質として機能し、アルギニンが抗体安定剤として機能し、ポリソルベートが凝集を最小限にするよう作用すると考えられる。

【0217】

実施例４：抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤に対する成分除外及び目標重量試験
この実施例の目的は、１２５ｍＭのアルギニン、８０ｍＭの塩化ナトリウム、２０ｍＭのスクシナート、及び０．０２５％のポリソルベート８０、ｐＨ６．０を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ－８製剤緩衝液中の各成分の働き及び影響を確認することであった。

【0218】

対照として上記のすべての成分を含む製剤、または各成分を一度に１つ除外した製剤を調製した（１Ｌを二組）。すべての成分の目標重量の下限（２０％減）及び上限（２０％増）で製剤緩衝液を調製した。ｐＨ及び導電率を２２．０～２４．０℃で測定した。

【0219】

結果を表Ｈに示す。ポリソルベート８０は、添加容積が極めて小さく、試験したパラメータに影響がないため、この試験では評価しなかった。

【表H】

【0220】

結果は、Ｌ－アルギニンを除外するとｐＨの低下につながることを示した。Ｌ－アルギニンＨＣｌまたは塩化ナトリウムを除外すると導電率の低下につながった。コハク酸を除外するとｐＨの上昇につながった。

【0221】

理論に束縛されることを望まないが、これらの製剤においてＬ－アルギニン及びＬ－アルギニンＨＣｌが緩衝液／安定剤として働き、コハク酸が緩衝液として働き、塩化ナトリウムが等張性をもたらし、ポリソルベート８０が界面活性剤として働き、注射用水が溶媒であると考えられる。

【0222】

緩衝液調製に対する±２０％の目標重量変動の影響を調べるために試験を行った。結果を表Ｉに示す。

【表I】

【0223】

結果は、成分の割合の変化によるｐＨへの影響がないことを示した。ただし、導電率に対する直接的な影響が範囲の両端で観察された。導電率基準範囲は２２．０～２４．０℃で１３．３５～１６．３５ｍＳ／ｃｍであり、ｐＨ基準範囲は５．９０～６．１０であった。

【0224】

これらの試験により、この製剤緩衝液の各成分の機能が確認された。いずれかの成分を除外すると、緩衝液のｐＨまたは導電率が基準外になるであろう。目標重量実験により、両端で導電率が基準外になることが示された。

【0225】

実施例５：抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤中のポリソルベート濃度に関する凍結／融解及び撹拌試験
この実施例の目的は、０．０％、０．０１５％、０．０２５％、及び０．０３０％のポリソルベート８０濃度で調製した４つの抗Ｓｉｇｌｅｃ－８抗体製剤に対する凍結／融解及び撹拌の影響を評価することであった。

【0226】

５回の凍結／融解サイクルは、以下の製剤を含むＨＤＰＥボトル（合計１２サンプル）を使用して行った。
●０．０％ＰＳ８０を含む１５ｍｇ／ｍＬの抗Ｓｉｇｌｅｃ－８ ＨＥＫＡ、１回、３回、及び５回の凍結／融解サイクル
●０．０１５％ＰＳ８０を含む１５ｍｇ／ｍＬの抗Ｓｉｇｌｅｃ－８ ＨＥＫＡ、１回、３回、及び５回の凍結／融解サイクル
●０．０２５％ＰＳ８０を含む１５ｍｇ／ｍＬの抗Ｓｉｇｌｅｃ－８ ＨＥＫＡ、１回、３回、及び５回の凍結／融解サイクル
●０．０３０％ＰＳ８０を含む１５ｍｇ／ｍＬの抗Ｓｉｇｌｅｃ－８ ＨＥＫＡ、１回、３回、及び５回の凍結／融解サイクル

【0227】

サンプル体積は、８．０ｍＬのＨＤＰＥボトル中に５．６ｍＬとした（７０％充填）。－２０℃で少なくとも１時間ゆっくりと凍結した後、－８０℃で少なくとも１時間凍結を完了させた。同じランでバッチ試験を行う前にすべてのサンプルを室温で融解させた。

【0228】

サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、画像化キャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）、ＨＩＡＣ、及び視覚による検証／外観を使用して分析を行った。ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷｘｌカラム（Ｔｏｓｏｈ＃０８５４１）を使用してＳＥＣ分析を行った。移動相は、０．２Ｍのリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０から構成された。移動相を希釈剤として使用してサンプルを５ｍｇ／ｍＬに希釈した。流量は１．０ｍＬ／分とした。Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０ ＨＰＬＣを使用して周囲温度で分離を行った。２８０ｎｍにおける吸光度を監視し、ピーク面積を求めるために使用した。フッ化炭素コーティングキャピラリー（ＦＣ）カートリッジを備えたＩＣＥ３装置を使用して周囲温度でｉｃＩＥＦを行った。分離及び分析を助けるために使用した添加物は４Ｍ尿素、３～１０のｐＨ範囲に及ぶ４％ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ、ならびにそれぞれ４．６５及び９．２２の低ｐＩマーカー及び高ｐＩマーカーであった。

【0229】

撹拌試験を室温で行った。回転式ミキサーで毎分１０回転の撹拌速度を使用した。２０の試験サンプルを１０Ｒバイアル中に調製した（７．０ｍＬ充填）。
●０．０％ＰＳ８０を含む１５ｍｇ／ｍＬの抗Ｓｉｇｌｅｃ－８ ＨＥＫＡ、０、４、８、２４、及び４８時間
●０．０１５％ＰＳ８０を含む１５ｍｇ／ｍＬの抗Ｓｉｇｌｅｃ－８ ＨＥＫＡ、０、４、８、２４、及び４８時間
●０．０２５％ＰＳ８０を含む１５ｍｇ／ｍＬの抗Ｓｉｇｌｅｃ－８ ＨＥＫＡ、０、４、８、２４、及び４８時間
●０．０３０％ＰＳ８０を含む１５ｍｇ／ｍＬの抗Ｓｉｇｌｅｃ－８ ＨＥＫＡ、０、４、８、２４、及び４８時間

【0230】

表Ｊに示されるとおり、凍結／融解試験の結果は、ＳｏｌｏＶＰＥ（１４．８～１４．９ｍｇ／ｍＬ範囲）において大きな変化を示さなかった。最大５回の凍結／融解サイクルまで０．０％、０．０１５％、０．０２５％、及び０．０３０％のＰＳ８０に関してＳＥＣにより顕著な傾向及び／または差は観察されなかった（９９．２～９９．３％のモノマー範囲）。ｉｃＩＥＦは、≦１％の％酸性成分、≦１．８％の主成分、及び≦１％の塩基性成分を示した。ＨＩＡＣは、ＰＳ８０を含むサンプルと比較して、ＰＳ８０を含まないサンプルでより多くの粒子が観察されたことを示した。１回の凍結／融解でＰＳ８０を含まない抗体は、１０μＭのＵＳＰ承認基準（≦６０００カウント／容器）を満たしていなかった。３回及び５回の凍結／融解でＰＳ８０を含まない抗体は、１０μＭ（≦６０００カウント／容器）及び２５μＭ（≦６００カウント／容器）のＵＳＰ承認基準を満たしていなかった。外観に関しては、ＰＳ８０を含まないサンプルはいくらかの目に見える粒子を含んでいた。

【0231】

表Ｋに示されるとおり、撹拌試験の結果は、ＳｏｌｏＶＰＥにより濃度の変化を示さなかった。最大４８時間まで０．０％、０．０１５％、０．０２５％、及び０．０３０％のＰＳ８０に関してＳＥＣにより顕著な傾向及び／または差は観察されなかった（９９．２～９９．１％モノマー範囲）。ＨＩＡＣは、ＰＳ８０を含むサンプルと比較して、ＰＳ８０を含まないサンプルでより多くの粒子が観察されたことを示した。外観に関しては、ＰＳ８０を含まないサンプルはいくらかの目に見える粒子を含んでいた。

【0232】

凍結／融解及び撹拌の両試験は、ポリソルベート８０を含まないサンプルでＨＩＡＣにより高い粒子数を示した。ポリソルベート８０を含まない１回、３回、及び５回の凍結／融解サンプルは、≧１０μＭまたは≧２５μＭのいずれの粒子数に関してもＵＳＰ承認基準を満たさなかった。これは、製剤中のポリソルベート８０の重要性を裏付ける。それぞれの試験において３つすべてのポリソルベート８０の濃度は非常に類似した分析結果をもたらし、これは、操作後の製品の品質がほとんど変わらない～まったく変わらないことを示す。これは、０．０２５％の製剤中のＰＳ８０の濃度が正当な目標であり、試験した範囲（０．０１５％～０．０３０％）が類似の許容される結果をもたらすことを示唆する。

【表J-1】

【表J-2】

【表J-3】

【表K-1】

【表K-2】

【表K-3】

【0233】

配列
すべてのポリペプチド配列は、特に断らない限り、Ｎ末端からＣ末端の方向に表される。
すべての核酸配列は、特に断らない限り、５’から３’の方向に表される。
２Ｅ２ ＨＶＲ－Ｈ１のアミノ酸配列
ＩＹＧＡＨ（配列番号１）
２Ｅ２ ＨＶＲ－Ｈ２のアミ酸配列
ＶＩＷＡＧＧＳＴＮＹＮＳＡＬＭＳ（配列番号２）
２Ｅ２ ＨＶＲ－Ｈ３のアミノ酸配列
ＤＧＳＳＰＹＹＹＳＭＥＹ（配列番号３）
２Ｅ２ ＨＶＲ－Ｌ１のアミノ酸配列
ＳＡＴＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号４）
２Ｅ２ ＨＶＲ－Ｌ２のアミノ酸配列
ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号５）
２Ｅ２ ＨＶＲ－Ｌ３のアミノ酸配列
ＱＱＲＳＳＹＰＦＴ（配列番号６）
２Ｅ２ ＲＨＥ重鎖可変ドメインのアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＴＩＹＧＡＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＷＡＧＧＳＴＮＹＮＳＡＬＭＳＲＦＴＩＳＫＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＳＳＰＹＹＹＳＭＥＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７）
２Ｅ２ ＲＫＡ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＳＡＴＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＦＴＦＧＰＧＴＫＬＤＩＫ（配列番号８）
２Ｅ２ ＲＫＦ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＳＡＴＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＦＴＦＧＰＧＴＫＬＤＩＫ（配列番号９）
例示的な重鎖ＦＲ１のアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＴ（配列番号１０）
例示的な重鎖ＦＲ２のアミノ酸配列
ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧ（配列番号１１）
例示的な重鎖ＦＲ３のアミノ酸配列
ＲＦＴＩＳＫＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１２）
例示的な重鎖ＦＲ４のアミノ酸配列
ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１３）
例示的な軽鎖ＦＲ１のアミノ酸配列
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号１４）
例示的な軽鎖ＦＲ２のアミノ酸配列
ＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号１５）
例示的な軽鎖ＦＲ３のアミノ酸配列
ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号１６）
例示的な軽鎖ＦＲ３のアミノ酸配列
ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号１７）
例示的な軽鎖ＦＲ４のアミノ酸配列
ＦＧＰＧＴＫＬＤＩＫ（配列番号１８）
ＨＥＫＡ重鎖及びＨＥＫＦ重鎖のアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＴＩＹＧＡＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＷＡＧＧＳＴＮＹＮＳＡＬＭＳＲＦＴＩＳＫＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＳＳＰＹＹＹＳＭＥＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１９）
ＨＥＫＡ軽鎖のアミノ酸配列
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＳＡＴＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＦＴＦＧＰＧＴＫＬＤＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２０）
ＨＥＫＦ軽鎖のアミノ酸配列
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＳＡＴＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＦＴＦＧＰＧＴＫＬＤＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２１）
ＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２２）
ＩｇＧ４重鎖定常領域のアミノ酸配列
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ（配列番号２３）
Ｉｇκ軽鎖定常領域のアミノ酸配列
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２４）
ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のアミノ酸配列
ＧＹＬＬＱＶＱＥＬＶＴＶＱＥＧＬＣＶＨＶＰＣＳＦＳＹＰＱＤＧＷＴＤＳＤＰＶＨＧＹＷＦＲＡＧＤＲＰＹＱＤＡＰＶＡＴＮＮＰＤＲＥＶＱＡＥＴＱＧＲＦＱＬＬＧＤＩＷＳＮＤＣＳＬＳＩＲＤＡＲＫＲＤＫＧＳＹＦＦＲＬＥＲＧＳＭＫＷＳＹＫＳＱＬＮＹＫＴＫＱＬＳＶＦＶＴＡＬＴＨＲＰＤＩＬＩＬＧＴＬＥＳＧＨＳＲＮＬＴＣＳＶＰＷＡＣＫＱＧＴＰＰＭＩＳＷＩＧＡＳＶＳＳＰＧＰＴＴＡＲＳＳＶＬＴＬＴＰＫＰＱＤＨＧＴＳＬＴＣＱＶＴＬＰＧＴＧＶＴＴＴＳＴＶＲＬＤＶＳＹＰＰＷＮＬＴＭＴＶＦＱＧＤＡＴＡＳＴＡＬＧＮＧＳＳＬＳＶＬＥＧＱＳＬＲＬＶＣＡＶＮＳＮＰＰＡＲＬＳＷＴＲＧＳＬＴＬＣＰＳＲＳＳＮＰＧＬＬＥＬＰＲＶＨＶＲＤＥＧＥＦＴＣＲＡＱＮＡＱＧＳＱＨＩＳＬＳＬＳＬＱＮＥＧＴＧＴＳＲＰＶＳＱＶＴＬＡＡＶＧＧＡＧＡＴＡＬＡＦＬＳＦＣＩＩＦＩＩＶＲＳＣＲＫＫＳＡＲＰＡＡＧＶＧＤＴＧＭＥＤＡＫＡＩＲＧＳＡＳＱＧＰＬＴＥＳＷＫＤＧＮＰＬＫＫＰＰＰＡＶＡＰＳＳＧＥＥＧＥＬＨＹＡＴＬＳＦＨＫＶＫＰＱＤＰＱＧＱＥＡＴＤＳＥＹＳＥＩＫＩＨＫＲＥＴＡＥＴＱＡＣＬＲＮＨＮＰＳＳＫＥＶＲＧ（配列番号２５）
ヒトＳｉｇｌｅｃ－８のアミノ酸配列
ＧＹＬＬＱＶＱＥＬＶＴＶＱＥＧＬＣＶＨＶＰＣＳＦＳＹＰＱＤＧＷＴＤＳＤＰＶＨＧＹＷＦＲＡＧＤＲＰＹＱＤＡＰＶＡＴＮＮＰＤＲＥＶＱＡＥＴＱＧＲＦＱＬＬＧＤＩＷＳＮＤＣＳＬＳＩＲＤＡＲＫＲＤＫＧＳＹＦＦＲＬＥＲＧＳＭＫＷＳＹＫＳＱＬＮＹＫＴＫＱＬＳＶＦＶＴＡＬＴＨＲＰＤＩＬＩＬＧＴＬＥＳＧＨＰＲＮＬＴＣＳＶＰＷＡＣＫＱＧＴＰＰＭＩＳＷＩＧＡＳＶＳＳＰＧＰＴＴＡＲＳＳＶＬＴＬＴＰＫＰＱＤＨＧＴＳＬＴＣＱＶＴＬＰＧＴＧＶＴＴＴＳＴＶＲＬＤＶＳＹＰＰＷＮＬＴＭＴＶＦＱＧＤＡＴＡＳＴＡＬＧＮＧＳＳＬＳＶＬＥＧＱＳＬＲＬＶＣＡＶＮＳＮＰＰＡＲＬＳＷＴＲＧＳＬＴＬＣＰＳＲＳＳＮＰＧＬＬＥＬＰＲＶＨＶＲＤＥＧＥＦＴＣＲＡＱＮＡＱＧＳＱＨＩＳＬＳＬＳＬＱＮＥＧＴＧＴＳＲＰＶＳＱＶＴＬＡＡＶＧＧＡＧＡＴＡＬＡＦＬＳＦＣＩＩＦＩＩＶＲＳＣＲＫＫＳＡＲＰＡＡＧＶＧＤＴＧＭＥＤＡＫＡＩＲＧＳＡＳＱＧＰＬＴＥＳＷＫＤＧＮＰＬＫＫＰＰＰＡＶＡＰＳＳＧＥＥＧＥＬＨＹＡＴＬＳＦＨＫＶＫＰＱＤＰＱＧＱＥＡＴＤＳＥＹＳＥＩＫＩＨＫＲＥＴＡＥＴＱＡＣＬＲＮＨＮＰＳＳＫＥＶＲＧ（配列番号２６）
ＨＥＫＡ ＩｇＧ４重鎖のアミノ酸配列（ＩｇＧ４はＳ２２８Ｐ変異を含む）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＴＩＹＧＡＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＶＩＷＡＧＧＳＴＮＹＮＳＡＬＭＳＲＦＴＩＳＫＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＳＳＰＹＹＹＳＭＥＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧ（配列番号２７）

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図5E】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【配列表】

2024508326000001.app

【国際調査報告】