特表 2024-508678 ＡＫＲ１Ｃ３活性化化合物の使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-02-28

(54)【発明の名称】ＡＫＲ１Ｃ３活性化化合物の使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/675 20060101AFI20240220BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 31/7068 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 31/513 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 31/404 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 31/58 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 31/573 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 31/517 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 31/506 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 31/53 20060101ALI20240220BHJP

   G01N 33/574 20060101ALI20240220BHJP

   G01N 33/573 20060101ALI20240220BHJP

【ＦＩ】

A61K31/675

A61P35/00

A61P35/02

A61P43/00 105

A61K45/00

A61P43/00 121

A61K31/7068

A61K31/513

A61K31/404

A61K31/58

A61K31/573

A61K31/517

A61K31/506

A61K31/53

G01N33/574 A

G01N33/573 A

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023547650

(86)(22)【出願日】2021-02-26

(85)【翻訳文提出日】2023-08-07

(86)【国際出願番号】 CN2021078115

(87)【国際公開番号】W WO2022178821

(87)【国際公開日】2022-09-01

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】517319271

【氏名又は名称】アセンタウィッツ ファーマシューティカルズ リミテッド

【住所又は居所原語表記】Ｒｏｏｍ １００３， １０ｔｈ Ｆｌｏｏｒ， Ｂｕｉｌｄｉｎｇ １０， Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐａｒｋ， Ｎｏ．１４ Ｊｉｎｈｕｉ Ｒｏａｄ，Ｊｉｎｓｈａ Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ， Ｋｅｎｇｚｉ Ｓｔｒｅｅｔ， Ｐｉｎｇｓｈａｎ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１８１１８，Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】100115255

【弁理士】

【氏名又は名称】辻丸 光一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100201732

【弁理士】

【氏名又は名称】松縄 正登

(74)【代理人】

【識別番号】100154081

【弁理士】

【氏名又は名称】伊佐治 創

(72)【発明者】

【氏名】デュアン、ジャンーシン

(72)【発明者】

【氏名】モン、ファンイン

(72)【発明者】

【氏名】チ、テンヤン

(72)【発明者】

【氏名】ワン、チャン－チャン

(72)【発明者】

【氏名】チェン、ル－ズー

(72)【発明者】

【氏名】リ、ワン－フェン

(72)【発明者】

【氏名】ライ、ミン－テン

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084NA05

4C084ZB26

4C084ZC75

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC13

4C086BC43

4C086BC46

4C086BC50

4C086BC64

4C086DA10

4C086DA12

4C086DA38

4C086EA17

4C086GA07

4C086GA08

4C086GA12

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZB21

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZC75

(57)【要約】

本発明は、化合物１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダート、またはその薬学的に許容できる塩、同位体変異体もしくは溶媒和物の医学的使用、ならびに上記化合物と、少なくとも１つの抗がん剤とを含む組成物と、その医学的使用に関する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

患者のがんを治療するための医薬の製造における、下記式Ｉを有する化合物１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダート、またはその薬学的に許容される塩、同位体変異体もしくは溶媒和物の使用であって、

【化I】

前記がんのＡＫＲ１Ｃ３還元酵素レベルは、ＡＫＲ１Ｃ３タンパク質レベルまたはＲＮＡレベルで表され、所定の値に等しいかまたはそれ以上である。

【請求項2】

化合物が、下記式I－１を有する、（Ｓ）－１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダート、または下記式I－２を有する（Ｒ）－１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダートである、請求項１記載の使用。

【化II】

【請求項3】

前記がんが、肝臓がん、肝細胞がん（ＨＣＣ）、肺がん、メラノーマ、前立腺がん、乳がん、白血病、食道がん、腎臓がん、胃がん、結腸がん、脳がん、膀胱がん、頚がん、卵巣がん、頭頸がん、内膜がん、膵臓がん、肉腫がんまたは直腸がんである、請求項１記載の使用。

【請求項4】

前記がんが、肝臓がん、非小細胞肺がん、去勢抵抗性前立腺がん、胃がん、腎細胞がんまたは膵臓がんである、請求項３記載の使用。

【請求項5】

それを必要とする患者におけるがんを治療する方法であって、下記式Iを有する化合物１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダート、またはその薬学的に許容される塩、同位体変異体もしくは溶媒和物の有効量を患者に投与する工程を含み、

【化I】

前記がんのＡＫＲ１Ｃ３還元酵素レベルは、ＡＫＲ１Ｃ３タンパク質レベルまたはＲＮＡレベルで表され、所定の値に等しいかまたはそれ以上である。

【請求項6】

化合物が、下記式I－１を有する（Ｓ）－１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダート、または下記式I－２を有する（Ｒ）－１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダートである、請求項５記載の方法。

【化II】

【請求項7】

前記がんが、肝臓がん、肝細胞がん（ＨＣＣ）、肺がん、メラノーマ、前立腺がん、乳がん、白血病、食道がん、腎臓がん、胃がん、結腸がん、脳がん、膀胱がん、子宮頸がん、卵巣がん、頭頸部がん、内膜がん、膵臓がん、肉腫がん、直腸がんである、請求項５記載の方法。

【請求項8】

前記がんが、肝臓がん、非小細胞肺がん、去勢抵抗性前立腺がん、胃がん、腎細胞がんまたは膵臓がんである、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

ＡＫＲ１Ｃ３抗体を用いて患者のがん細胞のＡＫＲ１Ｃ３還元酵素の含有量を測定する工程をさらに含み、ＡＫＲ１Ｃ３還元酵素の含有量が所定の値以上と測定された場合、化合物が患者に投与される、請求項５記載の方法。

【請求項10】

有効量の式Iを有する化合物１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダートまたはその薬学的に許容される塩、同位体変異体もしくは溶媒和物と、細胞を接触させる工程を含み、
細胞のＡＫＲ１Ｃ３還元酵素レベルは、ＡＫＲ１Ｃ３タンパク質レベルまたはＲＮＡレベルで表され、所定の値に等しいかまたはそれ以上である、細胞の増殖を阻害する方法。

【請求項11】

前記細胞が、がん細胞である、請求項１０記載の方法。

【請求項12】

ＡＫＲ１Ｃ３抗体を用いて、細胞のＡＫＲ１Ｃ３還元酵素の含有量を測定する工程をさらに含み、ＡＫＲ１Ｃ３還元酵素の含有量が所定の値以上であると測定された場合、化合物を細胞に接触させる、請求項１０記載の方法。

【請求項13】

細胞の増殖を阻害するための医薬品の製造における、式Iを有する化合物１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダート、またはその薬学的に許容される塩、同位体異性もしくは溶媒和物の使用であって、
ＡＫＲ１Ｃ３還元酵素レベルが、ＡＫＲ１Ｃ３タンパク質レベルまたはＲＮＡレベルにより表され、所定の値に等しいかまたはそれ以上である。

【請求項14】

前記細胞が、がん性細胞である、請求項１３記載の使用。

【請求項15】

以下の１）および２）を含む、組成物。
１）式Iを有する化合物１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダート、またはその薬学的に許容される塩、同位体変異体もしくは溶媒和物、および
２）少なくとも１つの他の抗がん剤。

【請求項16】

化合物が、式I－１を有する（Ｓ）－１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダート、または式I－２を有する（Ｒ）－１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダートである、請求項１５記載の組成物。

【請求項17】

前記抗がん剤が、ゲムシタビン、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、スニチニブ、酢酸アビラテロン、プレドニゾロン、エルロチニブ、メツレデパ、ウレデパ、アルトレタミン、イマチニブ、トリエチレンメラミン、トリメチルメラミン、クロラムブシル、クロルナファジン、エストラムスチン、ゲフィチニブ、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドハイドロクロライド、メルファラン、ノベムビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カルビシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ダウノマイシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ミコフェノール酸、ノガマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、プリカマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン、デノプテリン、プテロプテリン、トリメトレキサート、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、テガフール、Ｌ－アスパラギナーゼ、プルモザイム、アセグラトン、アルドホスファミド配糖体、アミノレブリン酸、アムサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、デフォファミド、デメコルチン、ジアジコン、エフロルニチン、エリプチシンアセトメチラート、エトグルシド、フルタミド、ヒドロキシウレア、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、インターロイキン２、レンチナン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダモール、ニトラクリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ポドフィリン酸、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ラゾキサン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、パクリタキセル、タモキシフェン、エルロチニブ、テニポシド、テヌアゾン酸、トリアジコン、２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン、ウレタン、ビンブラスチン、およびビンクリスチンからなる群から選択される、請求項１５記載の組成物。

【請求項18】

前記抗がん剤が、ゲムシタビン、酢酸アビラテロン、プレドニゾロン、５－ＦＵ、スニチニブ、または酢酸アビラテロンとプレドニゾロンの組み合わせから成る群から選択される、請求項１７記載の組成物。

【請求項19】

前記がんが、腎細胞がん（ＲＣＣ）である場合、前記抗がん剤がゲムシタビンおよびスニチニブからなる群から選択され、
前記がんが胃がんである場合、前記抗がん剤が５－ＦＵであり、
前記がんが去勢抵抗性前立腺がん（ＣＲＰＣ）である場合、前記抗がん剤がアビラテロン酢酸およびプレドニゾロンまたはそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１８記載の組成物。

【請求項20】

組成物が、薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、請求項１５記載の組成物。

【請求項21】

患者のがんを治療するための医薬の製造における、請求項１５から２０のいずれか１項に記載の組成物の使用。

【請求項22】

前記がんが、肝臓がん、肝細胞がん（ＨＣＣ）、肺がん、メラノーマ、前立腺がん、乳がん、白血病、食道がん、腎臓がん、胃がん、結腸がん、脳がん、膀胱がん、頸がん、卵巣がん、頭頸部がん、内膜がん、膵臓がん、肉腫がんまたは直腸がんである、請求項２１記載の使用。

【請求項23】

前記がんのＡＫＲ１Ｃ３還元酵素レベルが、所定の値に等しいかまたはそれ以上である、請求項２２記載の使用。

【請求項24】

前記がんが、肝臓がん、非小細胞肺がん、去勢抵抗性前立腺がん、胃がん、腎細胞がんまたは膵臓がんである、請求項２３記載の使用。

【請求項25】

請求項１５から２０のいずれか１項に記載の組成物の有効量を患者に投与する工程を含む、それを必要とする患者におけるがんを治療する方法。

【請求項26】

前記がんが、肝臓がん、肝細胞がん（ＨＣＣ）、肺がん、メラノーマ、前立腺がん、乳がん、白血病、食道がん、腎臓がん、胃がん、結腸がん、脳がん、膀胱がん、頸部がん、卵巣がん、頭頸部がん、内膜がん、膵臓がん、肉腫がんまたは直腸がんである、請求項２５記載の方法。

【請求項27】

前記がんのＡＫＲ１Ｃ３還元酵素レベルが、所定の値に等しいかまたはそれ以上である、請求項２６記載の方法。

【請求項28】

前記がんが、肝臓がん、非小細胞肺がん、去勢抵抗性前立腺がん、胃がん、腎細胞がんまたは膵臓がんである、請求項２７記載の方法。

【請求項29】

ＡＫＲ１Ｃ３抗体を用いて、患者のがん細胞のＡＫＲ１Ｃ３還元酵素の含有量を測定する工程をさらに含み、ＡＫＲ１Ｃ３還元酵素の含有量が所定の値以上であると測定された場合、組成物が患者に投与される、請求項２５記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、化合物１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダート、またはその薬学的に許容できる塩、同位体変異体もしくは溶媒和物の医学的使用、ならびに上記化合物と少なくとも１つの抗がん剤とを含む組成物と、その医学的使用に関する。

【背景技術】

【0002】

がんは、ヒトの罹患率や死亡率の主な原因の一つである。がん治療は、正常な細胞を傷つけたり殺したりすることなくがん細胞を殺すことが難しいため、困難である。がん治療中に正常な細胞を傷つけたり殺したりすることは、患者に副作用をもたらす原因となり、がん患者に投与する抗がん剤の量が制限される可能性がある。

【0003】

アルドケト還元酵素１Ｃ３（ＡＫＲ１Ｃ３）は、５型、１７β－ヒドロキシステロイド脱水素酵素（１７β－ＨＳＤ）およびプロスタグランジンＦ合成酵素としても知られている。ＡＫＲ１Ｃ３は、アルドケト還元酵素（ＡＫＲ）の１５遺伝子ファミリーの１つである。ＡＫＲ１Ｃ３は、もともとヒトの前立腺（非特許文献１）と、プラセンタ（非特許文献２）のｃＤＮＡライブラリーからクローニングされた。ＡＫＲ１Ｃ３は、単量体、細胞質、ＮＡＤ（Ｐ）（Ｈ）依存性酸化還元酵素で、３２３個のアミノ酸と３７ｋＤａの分子量を持つ（非特許文献１）。ＡＫＲ１Ｃ３は、ＡＫＲ１Ｃ１、ＡＫＲ１Ｃ２、ＡＫＲ１Ｃ４などの関連するヒトＡＫＲ１Ｃファミリーと高い配列相同性を有する。ＡＫＲ１Ｃ３は、アンドロゲン、エストロゲン、プロゲステロン、プロスタグランジン（ＰＧ）の代謝を触媒し、その後、核内受容体活性の制御に関与している（非特許文献３、４）。ＡＫＲ１Ｃ３は、ステロイドホルモン依存性細胞やステロイドホルモン非依存性細胞を含む正常組織で発現しているが、肝臓、腎臓、小腸を除いて平均的に低い発現レベルである（非特許文献５）。多くの研究により、ＡＫＲ１Ｃ３が、多くの悪性固形腫瘍および血液腫瘍で異常に過剰発現していることが示されている。肝腫瘍、膀胱がん、腎臓がん、胃がんの５０％以上が、免疫組織化学スコア（ＩＨＣスコア）が０から６のスケールで４以上のＡＫＲ１Ｃ３の高発現で検出されたことを示すデータがある（非特許文献６）。ＡＫＲ１Ｃ３は非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）で高発現するが、小細胞肺がんでは発現しない（非特許文献７）。

【0004】

がんにおけるＡＫＲ１Ｃ３の発現増加は、去勢抵抗性前立腺がん（ＣＲＰＣ）（非特許文献８）、大腸がん（ＣＲＣ）（非特許文献９）の転移に関連し、予後不良や生存率の低下にもつながることが報告されている（非特許文献１０、１１）。また、多くの種類の治療抵抗性がＡＫＲ１Ｃ３の過剰発現に起因するとされている。ドキソルビシン（非特許文献１２、１３）、エンザルタミド（非特許文献１４）、アビラテロン（非特許文献１５）、およびメトトレキサート（非特許文献１６）に対する化学療法抵抗性は、細胞内のＡＫＲ１Ｃ３の高発現と直接的に関連していると報告されている。食道がん（非特許文献１７）、前立腺がん（非特許文献１８）、および非小細胞肺がん細胞（非特許文献１９）における放射線治療抵抗性は、ＡＫＲ１Ｃ３の過剰発現と関連している。電離放射線に対するＡＫＲ１Ｃ３の主な作用機序は、細胞内のＲＯＳ（活性酸素）を減少させ、ＰＧＦ２αを増加させ、その後、ＭＡＰキナーゼ活性化とＰＰＡＲγ阻害が起こり、ＤＮＡ損傷の著しく減少する（非特許文献１８）。免疫療法抵抗性もまた、ＡＫＲ１Ｃ３の高発現に起因している。ある研究では、全ゲノムマイクロアレイと多重定量（ｑ）ＲＴ－ＰＣＲ遺伝子発現解析に基づき、進行した腎細胞がん（ＲＣＣ）のＰＤ－Ｌ１陽性患者において、ＡＫＲ１Ｃ３の高発現が、ＰＤ－１標的療法の失敗と関連していることが示されている（非特許文献２０）。ＡＫＲ１Ｃ３は、腫瘍特異的に過剰発現するため、ＡＫＲ１Ｃ３活性化プロドラッグの設計は、がんを特異的に標的とする魅力的なアプローチとなる。そのような例として、ＡＫＲ１Ｃ３活性化プロドラッグであるＰＲ１０４は、もともと低酸素活性化プロドラッグとして設計された（非特許文献２２、２４）ものの、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで、優れた抗腫瘍活性を示した（非特許文献６、２１）。

【0005】

本発明の抗がん剤プロドラッグである構造式I－１（本明細書では３４２４と表記）は、化学的に合成された強力なナイトロジェンマスタードであり、ＮＡＤＰＨの存在下で、ＡＫＲ１Ｃ３によって細胞毒性アジリジン（本明細書では２６６０と表記）へと選択的に切断される。３４２４によって放出される活性分子２６６０は、標準的な化学療法薬であるチオテパやマイトマイシンＣに似ており、グアニンのＮ７（またはＯ６）位で、ＤＮＡのアルキル化し、架橋させる。プロドラッグ３４２４は、悪性腫瘍の治療薬として、アジア諸国ではＡｓｃｅｎｔａｗｉｔｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，ＬＴＤが、アジア以外の国ではＯＢＩ Ｐｈａｒｍａ，Ｉｎｃ．が、現在開発中である（薬剤コード：ＯＢＩ－３４２４）。プロドラッグ３４２４は、現在、米国（ＮＣＴ０４３１５３２４ ＆ ＮＣＴ０３５９２２６４）および中国（ＣＸＨＬ１９００１３７ ＆ ＣＸＨＬ２０００２６３）で、固形がんや血液悪性腫瘍を含む１４種類以上のヒトがんの治療を目的として、複数の第１相臨床試験で試験されている。プロドラッグ３４２４は、腫瘍におけるＡＫＲ１Ｃ３の高発現のため、腫瘍で特異的に活性化されるよう設計されているが、腫瘍特異的な標的指向化を実現するため、ＡＫＲ１Ｃ３の発現量が少ない正常細胞では温存されるように設計されている。さらに、３４２４の腫瘍選択的な活性化は、シクロホスファミドやイホスファミドのような、非選択的な従来のアルキル化剤と区別できることから、３４２４は、広域かつ高選択的な抗腫瘍薬となる可能性を持つと考えられる。プロドラッグ３４２４は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで、Ｔ－ＡＬＬの前臨床モデルに対して、強力な有効性を示すことが報告されている（非特許文献２５、２６）。

【0006】

ＮＡＤＰＨの存在下、３４２４は、ＡＫＲ１Ｃ３によって還元され、アジリジンビスアルキル化剤である細胞毒性部位２６６０を放出し、グアニンのＮ７（またはＯ６）位でＤＮＡを架橋し、その後の細胞死をもたらす。

【化A】

【0007】

近年、がん細胞を標的としたプロドラッグが、がん治療の魅力的な戦略として登場しているが、患者を選択する有効なバイオマーカーがないため、多くのプロドラッグが、第３相臨床試験で失敗している（非特許文献３３）。ＡＫＲ１Ｃ３の発現は、ＲＴ－ＰＣＲや免疫組織化学を用いてで評価できるため、ＡＫＲ１Ｃ３の発現量が多く、プロドラッグに反応しやすい患者を選択することで、臨床的に効率よく３４２４を開発することができる。ＡＫＲ１Ｃ３は、化学療法抵抗性（非特許文献１３、１４）、放射線抵抗性（非特許文献１９）、免疫抵抗性（非特許文献２０）の獲得に伴い、過剰発現することが証明されている。また、卵巣がん、乳がん、膵臓がんなどの相同組換え欠損症（ＨＲＤ）を有するがんは、ＤＮＡ損傷剤に対し、感受性が高いことが知られている（非特許文献３４）。ＤＮＡアルキル化剤である３４２４は、ＡＫＲ１Ｃ３が発現しているＨＲＤがんを治療するための良い候補薬となる可能性もある。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0008】

【非特許文献1】Ｌｉｎ ＨＫ，Ｊｅｚ ＪＭ，Ｓｃｈｌｅｇｅｌ ＢＰ，Ｐｅｅｈｌ ＤＭ，Ｐａｃｈｔｅｒ ＪＡ，Ｐｅｎｎｉｎｇ ＴＭ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｔｙｐｅ ２ ３ ａｌｐｈａ－ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＨＳＤ） ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ：ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ３ ａｌｐｈａ／１７ ｂｅｔａ－ＨＳＤ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ．Ｍｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ １９９７；１１：１９７１－８４

【非特許文献2】Ｄｕｆｏｒｔ Ｉ，Ｒｈｅａｕｌｔ Ｐ，Ｈｕａｎｇ ＸＦ，Ｓｏｕｃｙ Ｐ，Ｌｕｕ－Ｔｈｅ Ｖ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ａ ｈｉｇｈｌｙ ｌａｂｉｌｅ ｈｕｍａｎ ｔｙｐｅ ５ １７ｂｅｔａ－ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １９９９；１４０：５６８－７４

【非特許文献3】Ｐｅｎｎｉｎｇ ＴＭ，Ｄｒｕｒｙ ＪＥ．Ｈｕｍａｎ ａｌｄｏ－ｋｅｔｏ ｒｅｄｕｃｔａｓｅｓ：Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｇｅｎｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ．Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ ２００７；４６４：２４１－５０

【非特許文献4】Ｒｉｚｎｅｒ ＴＬ，Ｐｅｎｎｉｎｇ ＴＭ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ａｌｄｏ－ｋｅｔｏ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｆａｍｉｌｙ １ （ＡＫＲ１） ｅｎｚｙｍｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｔｅｒｏｉｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．Ｓｔｅｒｏｉｄｓ ２０１４；７９：４９－６３

【非特許文献5】Ｃｈａｎｇ ＴＳ，Ｌｉｎ ＨＫ，Ｒｏｇｅｒｓ ＫＡ，Ｂｒａｍｅ ＬＳ，Ｙｅｈ ＭＭ，Ｙａｎｇ Ｑ，ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｌｄｏ－ｋｅｔｏ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｆａｍｉｌｙ １ ｍｅｍｂｅｒ Ｃ３（ＡＫＲ１Ｃ３） ｉｎ ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｔｕｍｏｒｓ ＆ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ｏｆ ｐａｎｃｒｅａｓ，ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｒａｃｔ，ａｎｄ ｌｕｎｇ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｐａｔｈｏｌ ２０１３；６：２４１９－２９

【非特許文献6】Ｇｕｉｓｅ ＣＰ，Ａｂｂａｔｔｉｓｔａ ＭＲ，Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ＲＳ，Ｈｏｌｆｏｒｄ ＳＤ，Ｃｏｎｎｏｌｌｙ Ｊ，Ｄａｃｈｓ ＧＵ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｂｉｏｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ｐｒｏｄｒｕｇ ＰＲ－１０４Ａ ｉｓ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｕｎｄｅｒ ａｅｒｏｂｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｂｙ ｈｕｍａｎ ａｌｄｏ－ｋｅｔｏ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ １Ｃ３．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１０；７０：１５７３－８４

【非特許文献7】Ｍｉｌｌｅｒ ＶＬ，Ｌｉｎ ＨＫ，Ｍｕｒｕｇａｎ Ｐ，Ｆａｎ Ｍ， Ｐｅｎｎｉｎｇ ＴＭ，Ｂｒａｍｅ ＬＳ，ｅｔ ａｌ．Ａｌｄｏ－ｋｅｔｏ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｆａｍｉｌｙ １ ｍｅｍｂｅｒ Ｃ３（ＡＫＲ１Ｃ３） ｉｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｂｕｔ ｎｏｔ ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｐａｔｈｏｌ ２０１２；５：２７８－８９

【非特許文献8】Ｚｈａｏ Ｊ，Ｚｈａｎｇ Ｍ，Ｌｉｕ Ｊ，Ｌｉｕ Ｚ，Ｓｈｅｎ Ｐ， Ｎｉｅ Ｌ，ｅｔ ａｌ．ＡＫＲ１Ｃ３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｌｅｓｉｏｎ ｒｅｂｉｏｐｓｙ ａｔ ｔｈｅ ｔｉｍｅ ｏｆ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｉｓ ｓｔｒｏｎｇｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ａｂｉｒａｔｅｒｏｎｅ ａｓ ａ ｆｉｒｓｔ－ｌｉｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｐｒｏｓｔａｔｅ ２０１９；７９：１５５３－６２

【非特許文献9】Ｎａｋａｒａｉ Ｃ，Ｏｓａｗａ Ｋ，Ａｋｉｙａｍａ Ｍ，Ｍａｔｓｕｂａｒａ Ｎ，Ｉｋｅｕｃｈｉ Ｈ，Ｙａｍａｎｏ Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＫＲ１Ｃ３ ａｎｄ ＣＮＮ３ ａｓ ｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ ｉｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２０１５；１５：３３３－４１

【非特許文献10】Ｈｓｕ ＮＹ，Ｈｏ ＨＣ，Ｃｈｏｗ ＫＣ，Ｌｉｎ ＴＹ，Ｓｈｉｈ ＣＳ，Ｗａｎｇ ＬＳ，ｅｔ ａｌ．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｄｉｈｙｄｒｏｄｉｏｌ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ａｓ ａ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｍａｒｋｅｒ ｏｆ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００１；６１：２７２７－３１

【非特許文献11】Ｐｏｗｅｌｌ Ｋ，Ｓｅｍａａｎ Ｌ，Ｃｏｎｌｅｙ－ＬａＣｏｍｂ ＭＫ，Ａｓａｎｇａｎｉ Ｉ，Ｗｕ ＹＭ，Ｇｉｎｓｂｕｒｇ ＫＢ，ｅｔ ａｌ．ＥＲＧ／ＡＫＲ１Ｃ３／ＡＲ Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ａ Ｆｅｅｄ－Ｆｏｒｗａｒｄ Ｌｏｏｐ ｆｏｒ ＡＲ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１５；２１：２５６９－７９

【非特許文献12】Ｈｅｉｂｅｉｎ ＡＤ，Ｇｕｏ Ｂ，Ｓｐｒｏｗｌ ＪＡ，Ｍａｃｌｅａｎ ＤＡ，Ｐａｒｉｓｓｅｎｔｉ ＡＭ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ａｌｄｏ－ｋｅｔｏ ｒｅｄｕｃｔａｓｅｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＤＮＡ ｂｉｎｄｉｎｇ，ａｎｄ ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ．ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ ２０１２；１２：３８１

【非特許文献13】Ｚｈｏｎｇ Ｔ，Ｘｕ Ｆ，Ｘｕ Ｊ，Ｌｉｕ Ｌ，Ｃｈｅｎ Ｙ．Ａｌｄｏ－ｋｅｔｏ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ １Ｃ３（ＡＫＲ１Ｃ３） ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｖｉａ ＰＴＥＮ ｌｏｓｓ．Ｂｉｏｍｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ ２０１５；６９：３１７－２５

【非特許文献14】Ｌｉｕ Ｃ，Ｌｏｕ Ｗ，Ｚｈｕ Ｙ，Ｙａｎｇ ＪＣ，Ｎａｄｉｍｉｎｔｙ Ｎ，Ｇａｉｋｗａｄ ＮＷ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔｒａｃｒｉｎｅ Ａｎｄｒｏｇｅｎｓ ａｎｄ ＡＫＲ１Ｃ３ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｃｏｎｆｅｒ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ Ｅｎｚａｌｕｔａｍｉｄｅ ｉｎ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１５；７５：１４１３－２２

【非特許文献15】Ｌｉｕ Ｃ，Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ ＣＭ，Ｌｏｕ Ｗ，Ｌｏｍｂａｒｄ Ａ，Ｅｖａｎｓ ＣＰ，Ｇａｏ ＡＣ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＡＫＲ１Ｃ３ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｏｖｅｒｃｏｍｅｓ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ Ａｂｉｒａｔｅｒｏｎｅ ｉｎ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ．Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ ２０１７；１６：３５－４４

【非特許文献16】Ｚｈａｏ Ｊ，Ｘｉａｎｇ Ｙ，Ｘｉａｏ Ｃ，Ｇｕｏ Ｐ，Ｗａｎｇ Ｄ，Ｌｉｕ Ｙ，ｅｔ ａｌ．ＡＫＲ１Ｃ３ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｃｈｏｒｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ．Ｉｎｔ Ｊ Ｍｅｄ Ｓｃｉ ２０１４；１１：１０８９－９７

【非特許文献17】Ｘｉｏｎｇ Ｗ，Ｚｈａｏ Ｊ，Ｙｕ Ｈ，Ｌｉ Ｘ，Ｓｕｎ Ｓ，Ｌｉ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｅｌｅｖａｔｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＫＲ１Ｃ３ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｉｏｎｉｚｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｖｉａ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ２０１４；９：ｅ１１１９１１

【非特許文献18】Ｓｕｎ ＳＱ，Ｇｕ Ｘ，Ｇａｏ ＸＳ，Ｌｉ Ｙ，Ｙｕ Ｈ，Ｘｉｏｎｇ Ｗ，ｅｔ ａｌ．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＫＲ１Ｃ３ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｒａｄｉａｔｉｏｎ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ ２０１６；７：４８０５０－８

【非特許文献19】Ｘｉｅ Ｌ，Ｙｕ Ｊ，Ｇｕｏ Ｗ，Ｗｅｉ Ｌ，Ｌｉｕ Ｙ，Ｗａｎｇ Ｘ，ｅｔ ａｌ．Ａｌｄｏ－ｋｅｔｏ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ １Ｃ３ ｍａｙ ｂｅ ａ ｎｅｗ ｒａｄｉｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｍａｒｋｅｒ ｉｎ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２０１３；２０：２６０－６

【非特許文献20】Ａｓｃｉｅｒｔｏ ＭＬ，ＭｃＭｉｌｌｅｒ ＴＬ，Ｂｅｒｇｅｒ ＡＥ，Ｄａｎｉｌｏｖａ Ｌ，Ａｎｄｅｒｓ ＲＡ，Ｎｅｔｔｏ ＧＪ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ Ｂａｌａｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｉｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ａｎｔｉ－ＰＤ－１ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｒｅｎａｌ Ｃｅｌｌ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ ２０１６；４：７２６－３３

【非特許文献21】Ｍｏｒａｄｉ Ｍａｎｅｓｈ Ｄ，Ｅｌ－Ｈｏｓｓ Ｊ，Ｅｖａｎｓ Ｋ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ Ｊ，Ｔｏｓｃａｎ ＣＥ，Ｂｒａｃｋｅｎ ＬＳ，ｅｔ ａｌ．ＡＫＲ１Ｃ３ ｉｓ ａ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｏｆ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ＰＲ－１０４ ｉｎ ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ｔ－ｃｅｌｌ ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｂｌｏｏｄ ２０１５；１２６：１１９３－２０２

【非特許文献22】Ｇｕｉｓｅ ＣＰ，Ａｂｂａｔｔｉｓｔａ ＭＲ，Ｔｉｐｐａｒａｊｕ ＳＲ，Ｌａｍｂｉｅ ＮＫ，Ｓｕ Ｊ，Ｌｉ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ｄｉｆｌａｖｉｎ ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅｓ ａｃｔｉｖａｔｅ ｔｈｅ ｂｉｏｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ｐｒｏｄｒｕｇ ＰＲ－１０４Ａ ｕｎｄｅｒ ｈｙｐｏｘｉａ．Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２０１２；８１：３１－４０

【非特許文献23】Ｇｕｉｓｅ ＣＰ，Ｗａｎｇ ＡＴ，Ｔｈｅｉｌ Ａ，Ｂｒｉｄｅｗｅｌｌ ＤＪ，Ｗｉｌｓｏｎ ＷＲ，Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ ＡＶ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｒｅｄｕｃｔａｓｅｓ ｔｈａｔ ａｃｔｉｖａｔｅ ｔｈｅ ｄｉｎｉｔｒｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ ｍｕｓｔａｒｄ ｐｒｏｄｒｕｇ ＰＲ－１０４Ａ：ａ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ＮＡＤＰＨ：ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ Ｐ４５０ ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｕｎｄｅｒ ｈｙｐｏｘｉａ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２００７；７４：８１０－２０

【非特許文献24】Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ ＡＶ，Ｆｅｒｒｙ ＤＭ，Ｅｄｍｕｎｄｓ ＳＪ， Ｇｕ Ｙ，Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ＲＳ，Ｐａｔｅｌ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｎｏｖｅｌ ｈｙｐｏｘｉａ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ＤＮＡ ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｉｎｇ ａｇｅｎｔ ＰＲ－１０４．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００７；１３：３９２２－３２

【非特許文献25】Ｅｖａｎｓ Ｋ，Ｄｕａｎ Ｊ，Ｐｒｉｔｃｈａｒｄ Ｔ，Ｊｏｎｅｓ ＣＤ，ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ Ｌ，Ｇｕ Ｚ，ｅｔ ａｌ．ＯＢＩ－３４２４，ａ Ｎｏｖｅｌ ＡＫＲ１Ｃ３－Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｐｒｏｄｒｕｇ，Ｅｘｈｉｂｉｔｓ Ｐｏｔｅｎｔ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｇａｉｎｓｔ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ｔ－ＡＬＬ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１９；２５：４４９３－５０３

【非特許文献26】Ｗａｎｇ Ｙ，Ｌｉｕ Ｙ，Ｚｈｏｕ Ｃ，Ｗａｎｇ Ｃ，Ｚｈａｎｇ Ｎ，Ｃａｏ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ａｎ ＡＫＲ１Ｃ３－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｏｄｒｕｇ ｗｉｔｈ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ Ｔ－ＡＬＬ．Ｌｅｕｋ Ｌｙｍｐｈｏｍａ ２０２０：１－９

【非特許文献27】Ｆｌａｎａｇａｎ ＪＵ， Ａｔｗｅｌｌ ＧＪ，Ｈｅｉｎｒｉｃｈ ＤＭ，Ｂｒｏｏｋｅ ＤＧ，Ｓｉｌｖａ Ｓ，Ｒｉｇｏｒｅａｕ ＬＪ，ｅｔ ａｌ Ｍｏｒｐｈｏｌｙｌｕｒｅａｓ ａｒｅ ａ ｎｅｗ ｃｌａｓｓ ｏｆ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｙｐｅ ５ １７－ｂｅｔａ－ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ （ＡＫＲ１Ｃ３）．Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２０１４；２２：９６７－７７

【非特許文献28】Ｍｅｎｇ Ｆ，Ｂｈｕｐａｔｈｉ Ｄ，Ｓｕｎ ＪＤ，Ｌｉｕ Ｑ， Ａｈｌｕｗａｌｉａ Ｄ，Ｗａｎｇ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ ｈｙｐｏｘｉａ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｄｒｕｇ ＴＨ－３０２ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｂｙ Ｃｈｋ１ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ．ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ ２０１５；１５：４２２

【非特許文献29】Ｍｅｎｇ Ｆ，Ｅｖａｎｓ ＪＷ，Ｂｈｕｐａｔｈｉ Ｄ，Ｂａｎｉｃａ Ｍ，Ｌａｎ Ｌ，Ｌｏｒｅｎｔｅ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｈｙｐｏｘｉａ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｄｒｕｇ ＴＨ－３０２．Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ ２０１２；１１：７４０－５１

【非特許文献30】Ｌｅｅ Ｙ，Ｖａｓｓｉｌａｋｏｓ Ａ，Ｆｅｎｇ Ｎ，Ｊｉｎ Ｈ， Ｗａｎｇ Ｍ，Ｘｉｏｎｇ Ｋ，ｅｔ ａｌ．ＧＴＩ－２５０１，ａｎ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ａｇｅｎｔ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｒ１，ｔｈｅ ｌａｒｇｅ ｓｕｂｕｎｉｔ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ｓｈｏｗｓ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ａ ｖａｒｉｅｔｙ ｏｆ ｔｕｍｏｒｓ．Ｉｎｔ Ｊ Ｏｎｃｏｌ ２００６；２８：４６９－７８

【非特許文献31】Ｏｋｓａｌａ Ｒ，Ｍｏｉｌａｎｅｎ Ａ，Ｒｉｉｋｏｎｅｎ Ｒ， Ｒｕｍｍａｋｋｏ Ｐ，Ｋａｒｊａｌａｉｎｅｎ Ａ，Ｐａｓｓｉｎｉｅｍｉ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ＯＤＭ－２０４：Ａ Ｎｏｖｅｌ ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｂｙ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｔｈｅ ａｎｄｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ＣＹＰ１７Ａ１．Ｊ Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２０１９；１９２：１０５１１５

【非特許文献32】Ｗａｎｇ Ｘ，Ｚｈａｎｇ Ｌ，Ｏ’Ｎｅｉｌｌ Ａ，Ｂａｈａｍｏｎ Ｂ，Ａｌｓｏｐ ＤＣ，Ｍｉｅｒ ＪＷ， ｅｔ ａｌ．Ｃｏｘ－２ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ．Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ２０１３；１０８：３１９－２６

【非特許文献33】Ｓｐｉｅｇｅｌｂｅｒｇ Ｌ，Ｈｏｕｂｅｎ Ｒ，Ｎｉｅｍａｎｓ Ｒ， ｄｅ Ｒｕｙｓｓｃｈｅｒ Ｄ，Ｙａｒｏｍｉｎａ Ａ，Ｔｈｅｙｓ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｈｙｐｏｘｉａ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｄｒｕｇｓ ａｎｄ（ｌａｃｋ ｏｆ） ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｒｏｇｒｅｓｓ：Ｔｈｅ ｎｅｅｄ ｆｏｒ ｈｙｐｏｘｉａ－ｂａｓｅｄ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ｐａｔｉｅｎｔ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｐｈａｓｅ ＩＩＩ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ．Ｃｌｉｎ Ｔｒａｎｓｌ Ｒａｄｉａｔ Ｏｎｃｏｌ ２０１９；１５：６２－９

【非特許文献34】Ｈｅｅｋｅ ＡＬ，Ｐｉｓｈｖａｉａｎ ＭＪ，Ｌｙｎｃｅ Ｆ，Ｘｉｕ Ｊ，Ｂｒｏｄｙ ＪＲ，Ｃｈｅｎ ＷＪ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ Ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ－Ｒｅｌａｔｅｄ Ｇｅｎｅ Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ Ａｃｒｏｓｓ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｙｐｅｓ．ＪＣＯ Ｐｒｅｃｉｓ Ｏｎｃｏｌ ２０１８；２０１８

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0009】

選択的なＡＫＲ１Ｃ３還元酵素活性化プロドラッグであり、がん患者の治療に適した化合物、および新規で選択的かつ広範な抗がん剤が必要とされている。本発明は、この要求に応えるものである。

【課題を解決するための手段】

【0010】

本発明は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２１５８１（ＷＯ２０１６／１４５０９２）、およびＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６２１１４（ＷＯ２０１７／０８７４２８）に開示されている、化合物、またはその薬学的に許容できる塩、もしくは溶媒和物に基づいて、前記化合物の医学的使用を提供し、前記化合物、またはその薬学的に許容できる塩、同位体異種、もしくは溶媒和物を含む組成物と、その抗がん医学的使用を提供する。

【0011】

本発明は、一態様では、患者のがんを治療するための医薬の製造における、下記式Ｉを有する化合物１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダート、またはその薬学的に許容される塩、同位体変異体もしくは溶媒和物の使用を提供する。

【化III】

【0012】

ここで、がんのＡＫＲ１Ｃ３還元酵素レベルは、ＡＫＲ１Ｃ３のタンパク質レベルまたはＲＮＡレベルにより表され、所定の値と等しいか、または所定の値より大きい。ＡＫＲ１Ｃ３のレベルは、当業者によく知られた通例の手法に従って測定される。

【0013】

本発明の特定の実施形態によれば、化合物は、下記式I－１を有する、（Ｓ）－１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダート、または、下の式I－２（本明細書では３４２３と表記）を有する、（Ｒ）－１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダートである。

【化IV】

【0014】

式Ｉ、式Ｉ－１または式Ｉ－２の化合物の調製は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０２１５８１（ＷＯ２０１６／１４５０９２）、およびＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６２１１４（ＷＯ２０１７／０８７４２８）に開示されており、その開示内容は参照により、その全体が本書に組み込まれる。ここで、化合物２８７０は、Ｒ－エナンチオマー３４２３とＳ－エナンチオマー３４２４の、１：１の比率のラセミ混合物である。

【0015】

ここで、塩は塩基性塩であってもよく、無機塩基（水酸化アルカリ金属、水酸化アルカリ土類金属など）または有機塩基（モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミンなど）との化合物の塩を含む。または、塩は酸塩であってもよく、化合物の無機酸（塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、過塩素酸、硫酸またはリン酸など）との塩、もしくは有機酸（メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、フマル酸、シュウ酸、マレイン酸、クエン酸など）との塩を含む。化合物の塩、溶媒和物などを選択し、調製することは、当技術分野において周知技術である。

【0016】

本発明の特定の実施形態によれば、式Ｉ－１または式Ｉ－２の化合物は、８０％以下のエナンチオマー過剰を有する。前記化合物は、好ましくは、９０％以下、より好ましくは、９５％以下のエナンチオマー過剰を有する。

【0017】

本発明の特定の実施形態によれば、式Ｉ－１または式Ｉ－２の化合物は、実質的に純粋である。

【0018】

本発明の特定の実施形態によれば、がんは、肝臓がん、肝細胞がん（ＨＣＣ）、肺がん、メラノーマ、前立腺がん、乳がん、白血病、食道がん、腎臓がん、胃がん、結腸がん、脳がん、膀胱がん、頸部がん、卵巣がん、頭頸部がん、内膜がん、膵臓がん、肉腫がんまたは直腸がんである。

【0019】

本発明の特定の実施形態によれば、がんは、肝臓がん、非小細胞肺がん、去勢抵抗性前立腺がん、胃がん、腎細胞がんまたは膵臓がんである。

【0020】

がんの治療に用いられる医薬の投与量、または医薬に含まれる化合物、その塩、同位体変異体もしくは溶媒和物、またはその他の抗がん剤の投与量は、通常、適用される特定の化合物、患者、特定の疾患または状態およびその重症度、投与経路および回数などに依存し、特定の条件に従って主治医が決定する必要がある。例えば、本発明が提供する組成物または医薬品を経口投与する場合、投与量は０．１～３０ｍｇ／７日、好ましくは、１～１０ｍｇ／７日、より好ましくは、５ｍｇ／日であり、投与は７日毎に１回、または７日毎に２回に分けて投与してもよく、好ましくは、７日毎に１回投与される。

【0021】

医薬品は、錠剤、坐剤、散剤、腸溶錠、チュアブル錠、口腔内崩壊錠、カプセル剤、糖衣剤、顆粒剤、乾燥粉末、内服液、注射用小針、注射用凍結乾燥粉末、輸液などの臨床投与用の任意の剤形であってもよい。

【0022】

別の態様では、本発明は、それを必要とする患者におけるがんの治療方法であって、下記式Ｉを有する化合物１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダート、またはその薬学的に許容される塩、同位体変異体もしくは溶媒和物の有効量を、患者に投与する工程を含む。

【化I】

ここで、がんのＡＫＲ１Ｃ３還元酵素レベルは、ＡＫＲ１Ｃ３タンパク質レベルまたはＲＮＡレベルで表され、所定の値以上である。

【0023】

本発明の特定の実施形態によれば、化合物は、下記式I－１を有する（Ｓ）－１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダート、または、下記式I－２を有する（Ｒ）－１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダートである。

【化II】

【0024】

本発明の特定の実施形態によれば、がんは、肝臓がん、肝細胞がん（ＨＣＣ）、肺がん、メラノーマ、前立腺がん、乳がん、白血病、食道がん、腎臓がん、胃がん、結腸がん、脳がん、膀胱がん、頸部がん、卵巣がん、頭頸部がん、内膜がん、膵臓がん、肉腫がんまたは直腸がんである。

【0025】

本発明の特定の実施形態によれば、がんは、肝臓がん、非小細胞肺がん、去勢抵抗性前立腺がん、胃がん、腎細胞がんまたは膵臓がんである。

【0026】

本発明の特定の実施形態によれば、前記方法は、ＡＫＲ１Ｃ３抗体を用いて患者のがん細胞のＡＫＲ１Ｃ３還元酵素の含有量を測定する工程をさらに含み、ＡＫＲ１Ｃ３還元酵素の含有量が所定の値以上であると測定された場合、化合物は患者に投与される。

【0027】

別の態様において、本発明は、細胞の成長を阻害する方法であって、有効量の、式Ｉを有する化合物１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダート、または、その薬学的に許容される塩、同位体変異体もしくは溶媒和物に、細胞を接触する工程を含む。ここで、細胞のＡＫＲ１Ｃ３還元酵素レベルは、ＡＫＲ１Ｃ３タンパク質レベルまたはＲＮＡレベルで表され、所定の値に等しいか、またはそれ以上である。

【0028】

本発明の特定の実施形態によれば、細胞は、がん細胞である。

【0029】

本発明の特定の実施形態によれば、方法は、ＡＫＲ１Ｃ３抗体を用いて、細胞のＡＫＲ１Ｃ３還元酵素の含有量を測定する工程をさらに含み、ＡＫＲ１Ｃ３還元酵素の含有量が所定の値以上であると測定された場合、化合物を細胞に接触させる。

【0030】

別の態様において、本発明は、式Ｉを有する化合物１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダート、または、その薬学的に許容される塩、同位体異性または溶媒和物の使用を提供する。ここで、細胞のＡＫＲ１Ｃ３レダクターゼレベルは、ＡＫＲ１Ｃ３タンパク質レベル、またはＲＮＡレベルで表され、所定の値以上である。

【0031】

本発明の特定の実施形態によれば、細胞は、がん細胞である。

【0032】

別の態様において、本発明は、以下を含む組成物を提供する。
１）化合物１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダートは、式Ｉ、またはその薬学的に許容される塩、同位体変異体もしくは溶媒和物、および
２）少なくとも１つの他の抗がん剤。

【0033】

本発明の特定の実施形態によれば、化合物は、式I－１を有する（Ｓ）－１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダート、または、式I－２を有する（Ｒ）－１－（３－（３－Ｎ、Ｎ－ジメチルアミノカルボニル）フェノキシル－４－ニトロフェニル）－１－エチル－Ｎ、Ｎ’－ビス（エチレン）ホスホロアミダートである。

【0034】

本発明の特定の実施形態によれば、抗がん剤は、ゲムシタビン、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、スニチニブ、酢酸アビラテロン、プレドニゾロン、エルロチニブ、メツレデパ、ウレデパ、アルトレタミン、イマチニブ、トリエチレンメラミン、トリメチルメラミン、クロラムブシル、クロルナファジン、エストラムスチン、ゲフィチニブ、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドハイドロクロライド、メルファラン、ノベムビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カルビシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ダウノマイシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ミコフェノール酸、ノガマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、プリカマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン、デノプテリン、プテロプテリン、トリメトレキサート、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、テガフール、Ｌ－アスパラギナーゼ、プルモザイム、アセグラトン、アルドホスファミド配糖体、アミノレブリン酸、アムサクリン、ベストラブシル、ビサントレン、デフォファミド、デメコルチン、ジアジコン、エフロルニチン、エリプチシンアセトメチラート、エトグルシド、フルタミド、ヒドロキシウレア、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、インターロイキン２、レンチナン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダモール、ニトラクリン、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ポドフィリン酸、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ラゾキサン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、パクリタキセル、タモキシフェン、エルロチニブ、テニポシド、テヌアゾン酸、トリアジコン、２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン、ウレタン、ビンブラスチン、およびビンクリスチンからなる群から選択される。

【0035】

本発明の特定の実施形態によれば、抗がん剤は、ゲムシタビン、酢酸アビラテロン、プレドニゾロン、５－ＦＵ、スニチニブ、または酢酸アビラテロンとプレドニゾロンの組み合わせからなる群から選択される。

【0036】

本発明の特定の実施形態によれば、がんが腎細胞がん（ＲＣＣ）である場合、抗がん剤は、ゲムシタビン、およびスニチニブからなる群から選択され、がんが胃がんである場合、抗がん剤は、５－ＦＵであり、がんが去勢抵抗性前立腺がん（ＣＲＰＣ）である場合、抗がん剤は、酢酸アビラテロンおよびプレドニゾロン、またはそれらの組み合わせから成る群から選択される。

【0037】

本発明の特定の実施形態によれば、組成物は、薬学的に許容される賦形剤をさらに含む。好ましくは、賦形剤は、不活性な希釈剤、分散剤および／または造粒剤、界面活性剤および／または乳化剤、崩壊剤、結合剤、保存剤、緩衝剤、潤滑剤および油から選択される。

【0038】

別の態様において、本発明は、患者のがんを治療するための医薬の製造における、本発明による組成物の使用を提供する。

【0039】

本発明の特定の実施形態によれば、がんは、肝臓がん、肝細胞がん（ＨＣＣ）、肺がん、メラノーマ、前立腺がん、乳がん、白血病、食道がん、腎臓がん、胃がん、結腸がん、脳がん、膀胱がん、頸部がん、卵巣がん、頭頸部がん、内膜がん、膵臓がん、肉腫がんまたは直腸がんである。

【0040】

本発明の特定の実施形態によれば、がんのＡＫＲ１Ｃ３還元酵素レベルは、所定の値と等しいか、または所定の値より大きい。

【0041】

本発明の特定の実施形態によれば、がんは、肝臓がん、非小細胞肺がん、去勢抵抗性前立腺がん、胃がん、腎細胞がんまたは膵臓がんである。

【0042】

別の態様において、本発明は、それを必要とする患者においてがんを治療するための方法であって、本発明による組成物の有効量を患者に投与する工程を含む方法を提供する。

【0043】

本発明の特定の実施形態によれば、がんは、肝臓がん、肝細胞がん（ＨＣＣ）、肺がん、メラノーマ、前立腺がん、乳がん、白血病、食道がん、腎臓がん、胃がん、結腸がん、脳がん、膀胱がん、頸部がん、卵巣がん、頭頸部がん、内膜がん、膵臓がん、肉腫がんまたは直腸がんである。

【0044】

本発明の特定の実施形態によれば、がんのＡＫＲ１Ｃ３還元酵素レベルは、所定の値と等しいか、または所定の値より大きい。

【0045】

本発明の特定の実施形態によれば、がんは、肝臓がん、非小細胞肺がん、去勢抵抗性前立腺がん、胃がん、腎細胞がんまたは膵臓がんである。

【0046】

本発明の特定の実施形態によれば、方法は、ＡＫＲ１Ｃ３抗体を用いて、患者におけるがん細胞のＡＫＲ１Ｃ３還元酵素の含有量を測定する工程をさらに含み、ＡＫＲ１Ｃ３還元酵素の含有量が所定の値以上であると測定された場合、組成物は患者に投与される。

【図面の簡単な説明】

【0047】

【図1】図１は、ＡＫＲ１Ｃ３依存的な３４２４の活性化を描いたものである。（Ａ）は３４２４の減少を示し、（Ｂ）は２６６０の産生を示す。

【図2】図２は、ウエスタンブロットによる、肝臓がん細胞におけるＡＫＲ１Ｃ３タンパク質の発現の検出を示す。

【図3】図３は、３４２４のＡＫＲ１Ｃ３依存的なｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性を描写している。（Ａ）は、肝臓がん細胞におけるＡＫＲ１Ｃ３タンパク質発現と、３４２４ ＩＣ_５０との相関（左）、肝臓がん細胞におけるＡＫＲ１Ｃ３ ＲＮＡ発現と３４２４ ＩＣ_５０との相関（中）、ＮＳＣＬＣがん細胞におけるＡＫＲ１Ｃ３ ＲＮＡ発現と３４２４ ＩＣ_５０との相関（右）、（Ｂ）は、ＡＫＲ１Ｃ３特異的阻害剤３０２１は、３４２４（左）、３４２３（中）およびラセミ混合物２８７０の細胞毒性を効率的に阻害したことを示し、（Ｃ）は、化合物２８７０は濃度依存的にＤＮＡクロスリンクを誘発したことを示す。

【図4】図４は、様々なヒト細胞株由来の異種移植（ＣＤＸ）モデルにおける３４２４の抗腫瘍活性を示している。ＨｅｐＧ２肝臓同所性モデル（ＡおよびＢ）、去勢オスＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのＶＣａｐ去勢抵抗性前立腺がん（Ｃ）、メスＢＡＬＢ／ｃヌードマウスのＳＮＵ－１６胃がん（Ｄ）、およびメスＳＣＩＤマウスのＡ４９８腎細胞がん（ＥおよびＦ）である。動物は、説明文に示されるように、様々な濃度の３４２４、標準治療薬、およびその組み合わせで処置された。ここで、「ＡＡ」は酢酸アビラテロンを、「Ｐ」はプレドニゾロンを、「Ｓ」はスニチニブを、「Ｇ」はジェムザールを表す。

【図5】図５は、肺がん皮下モデルＨ４６０ ＣＤＸモデルにおける、３４２４の抗腫瘍活性を示す図である。

【図6】図６は、表示された時間における、治療後の血清前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の測定結果を示す図である。

【図7】図７は、ＰＤＸのパネルに対する３４２４の抗腫瘍活性を示す。膵臓がんＰＡ１２８０（Ａ）、胃がんＧＡ６２０１（Ｂ）、ＡＫＲ１Ｃ３発現量が多い肺がんＬＵ２５０（Ｃ）、ＡＫＲ１Ｃ３発現量が少ない肺がんＬＵ２０５７（Ｄ）である。

【発明を実施するための形態】

【0048】

以下、本発明を、具体的な実施例を参照しながら説明する。当業者であれば、これらの実施例は、本発明を説明するために使用されるに過ぎず、いかなる意味でもその範囲を限定するものではないことを理解し得る。

【0049】

［定義］
以下の定義は、読者を補助するために提供されるものである。特に定義しない限り、本明細書で使用されるすべての術語、表記、およびその他の科学的もしくは医学的用語または専門用語は、化学および医学分野の当業者によって一般的に理解される意味を有することが意図される。場合によっては、一般的に理解されている意味を有する用語は、明確化および／または迅速な参照のために、本明細書で定義され、そのような定義を本明細書に含めることは、当技術分野で一般的に理解されている用語の定義と、実質的に異なることを表すと解釈されるべきではない。

【0050】

すべての数値表記、例えば、ｐＨ、温度、時間、濃度、および重量（それらの各々の範囲を含む）は、典型的には、適宜、０．１、１．０、または１０．０刻みで（＋）または（－）に変化し得る概算値である。すべての数値表記は、用語「約」が先行すると理解され得る。本明細書に記載される試薬は例示的なものであり、その等価物は当技術分野で知られている場合がある。

【0051】

「１つ」および「前記」は、文脈が明らかにそうでないことを指示しない限り、複数の参照語を含む。したがって、例えば、化合物への言及は、１つもしくは複数の化合物、または少なくとも１つの化合物を指す。このように、用語「１つの」、「１つまたは複数の」、および「少なくとも１つの」は、本明細書において交換可能に使用される。

【0052】

用語「約」または「およそ」は、当業者によって決定される特定の値に対する許容可能な誤差を意味し、これは、値がどのように測定または決定されるかに部分的に依存する。特定の実施形態では、用語「約」または「およそ」は、１、２、３、または４標準偏差以内を意味する。特定の実施形態では、用語「約」または「およそ」は、所定の値または範囲の５０％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、または０．０５％の範囲内を意味する。

【0053】

本明細書で使用される場合、用語「含む」は、組成物および方法が、言及された要素を含むが、他の要素を除外しないことを意味することを意図する。組成物および方法を定義するために使用される場合、「から本質的に構成される」は、組成物または方法にとって本質的な意味を持つ他の要素を除外することを意味するものとする。また、「から構成される」は、クレームされた組成物および実質的な方法工程について、他の成分の微量元素以上のものを除外することを意味する。これらの移行用語の各々によって定義される実施形態は、本発明の範囲内である。したがって、方法および組成物は、追加の工程および成分を含むことができ（含み）、または代替的に、重要性のない工程および組成物を含む（から本質的に構成される）、または代替的に、記載の方法工程または組成物のみを意図している（から構成される）ことを意味している。

【0054】

薬物を患者に「投与すること」または「投薬」（およびこのフレーズの文法的同等物）とは、医療従事者による患者への投与または自己投与である直接投与、および薬物を処方する行為である間接投与のことを指す。例えば、患者に薬剤の自己投与を指示し、および／または患者に薬剤の処方箋を提供する医師は、患者に薬剤を投与している。

【0055】

「がん」とは、白血病、リンパ腫、がん腫、および固形腫瘍を含む他の悪性腫瘍であって、浸潤により局所的に拡大し、転移により全身的に拡大し得る、潜在的に無制限に成長する可能性のあるものをいう。がんの例としては、副腎、骨、脳、乳房、気管支、結腸および／または直腸、胆嚢、頭頸部、腎臓、喉頭、肝臓、肺、神経組織、膵臓、前立腺、副甲状腺、皮膚、胃、および甲状腺のがんがあるが、これらに限定されない。がんの特定の他の例としては、急性および慢性リンパ球および顆粒球性腫瘍、腺がん、腺腫、基底細胞がん、子宮頸部異形成、および上皮内腫瘍、ユーイング肉腫、類表皮がん、巨細胞腫、多形神経膠芽腫、毛様細胞腫、腸管神経節腫、過形成性角膜神経腫瘍、膵島細胞がん、カポジ肉腫、平滑筋腫、白血病、リンパ腫、悪性カルチノイド、メラノーマ、悪性高カルシウム血症、マルファノイドハビトゥス腫瘍、髄様がん、転移性皮膚細胞腫、粘膜神経腫、骨髄腫、菌状息肉症、神経芽細胞腫、骨肉腫、骨原性肉腫等、卵巣腫瘍、褐色細胞腫、真性多血症、原発性脳腫瘍、小細胞肺腫瘍、潰瘍型および乳頭型の扁平上皮がん、過形成、セミノーマ、軟部組織肉腫、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、腎細胞腫、局所的皮膚病変、細網肉腫、ウィルム腫瘍などがある。

【0056】

「接触させる」または「接触」という用語は、治療薬と細胞または組織とを接触させ、その結果、生理学的および／または化学的な効果が生じることを意味する。接触は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｖｏで行われてもよい。一実施形態において、治療薬は、細胞に対する治療薬の効果を決定するために、細胞培養（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）において、細胞と接触される。別の実施形態では、治療薬を細胞または組織と接触させることは、接触させる細胞または組織を有する被験者に治療薬を投与することを含む。

【0057】

「光学活性」という用語は、エナンチオマー過剰が、約１０％以上、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上であり、約８０％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９３％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、約９９％以上、約９９．５％以上、約９９．８％以上、または約９９．９％以上である分子の集まりを指す。特定の実施形態において、光学活性化合物のエナンチオマー過剰は、約９０％以上、約９５％以上、約９８％以上、または約９９％以上である。化合物のエナンチオマー過剰は、当業者によって使用される任意の標準的な方法によって決定することができ、これには、光学活性固定相を用いたキロプティカルクロマトグラフィー（ガスクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、および薄層クロマトグラフィー）、同位体希釈、電気泳動、熱量測定、偏光測定、キラル誘発体を用いたＮＭＲ分離法、およびキラル溶媒化剤またはキラル転換試薬によるＮＭＲ法などが挙げられるが、それらに限定されない。

【0058】

光学活性化合物の説明では、キラル中心に関する分子の絶対配置を示す接頭辞として、ＲとＳが使用される。

【0059】

「実質的に純粋」とは、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、ゲル電気泳動、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、質量分析（ＭＳ）を含むがこれらに限定されない、当業者が用いる標準分析法によって決定される、容易に検出できる不純物を含まないよう十分に均質な状態を意味するか、または、さらなる精製が、物質の物理的、化学的、生物学的、および／または薬理学的特性（酵素活性および生物活性など）を、検出可能なほどに変化させないような十分な純度を有することを意味する。特定の実施形態において、「実質的に純粋」とは、分子の集合体を指し、ここで、分子の少なくとも約５０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０質量％、少なくとも約９５質量％、少なくとも約９８質量％、少なくとも約９９質量％、または少なくとも約９９．５重量％が、標準分析法により決定される化合物の単一の立体異性体である。

【0060】

「患者」および「被験者」は、がんの治療を必要とする哺乳動物を指すために互換的に使用される。一般に、患者はヒトである。一般に、患者はがんと診断されたヒトである。特定の実施形態では、「患者」または「被験者」が非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウサギ、ブタ、マウスまたはラットなどの、薬剤および治療のスクリーニング、特徴づけ、および評価に使用される非ヒト哺乳動物を指すことがある。

【0061】

「プロドラッグ」は、投与後に、少なくとも１つの特性に関して、代謝されるか、または生物学的に活性な化合物、またはより活性な化合物（または薬剤）に変換される化合物のことをいう。プロドラッグは、薬剤に対してより活性が低くなるかまたは不活性となるように化学的に修飾されるが、前記化学的修飾は、プロドラッグが投与された後に、対応する薬剤が代謝または他の生物学的プロセスによって生成されるようなものである。プロドラッグは活性薬剤に対して、変化した代謝安定性または輸送特性、より少ない副作用またはより低い毒性、または改善されたフレーバーを有してもよい。（例えば、参考文献：Ｎｏｇｒａｄｙ、１９８５年、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、オックスフォード大学出版局、ニューヨーク、３８８－３９２ページを参照。参考として本明細書に組み込まれる。）プロドラッグは、対応する薬剤以外の反応物を使用して合成されてもよい。

【0062】

「固形腫瘍」とは、骨、脳、肝臓、肺、リンパ節、膵臓、前立腺、皮膚、軟部組織（肉腫）の転移性腫瘍を含むが、これらに限定されない固形腫瘍を指す。

【0063】

「治療上有効な量」の薬剤とは、がん患者に投与した場合に、意図した治療効果、例えば、患者におけるがんの１つ以上の症状の軽減、改善、緩和、除去をもたらす薬剤の量を指す。治療効果は、必ずしも１回の投与で生じるわけではなく、一連の投与の後にのみ生じる可能性がある。したがって、治療上有効な量は、１回以上の投与で投与されることができる。

【0064】

患者の状態の「治療」とは、臨床結果を含む、有益なまたは所望の結果を得るための工程をとることをいう。本発明の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果は特に限定されないが、がんの１つ以上の症状の軽減または改善；疾患の程度の減少；疾患進行の遅延または緩徐化；疾患状態の軽減、緩和、または安定化；または他の有益な結果が挙げられる。がんの治療により、場合によっては部分奏効または病勢安定が得られることがある。

【0065】

「腫瘍細胞」は、任意の適切な種（例えば、マウス、イヌ、ネコ、ウマまたはヒトなどの哺乳動物）の腫瘍細胞をいう。

【0066】

「同位体変異体」という用語は、そのような化合物を構成する原子の１つ以上に、不自然な比率の同位体を含む化合物を指す。特定の実施形態では、化合物の「同位体変異体」は、水素（^１Ｈ）、重水素（^２Ｈ）、トリチウム（^３Ｈ）、炭素１１（^１１Ｃ）、炭素１２（^１２Ｃ）、炭素１３（^１３Ｃ）、炭素１４（^１４Ｃ）、窒素１３（^１３Ｎ）、窒素１４（^１４Ｎ）、窒素１５（^１５Ｎ）、酸素１４（^１４Ｏ）、酸素１５（^１５Ｏ）、酸素１６（^１６Ｏ）、酸素１７（^１７Ｏ）、酸素１８（^１８Ｏ）、フッ素１７（^１７Ｆ）、フッ素１８（^１８Ｆ）、リン３１（^３１Ｐ）、リン３２（^３２Ｐ）、リン３３（^３３Ｐ）、硫黄３２（^３２Ｓ）、硫黄３３（^３３Ｓ）、硫黄３４（^３４Ｓ）、硫黄３５（^３５Ｓ）、硫黄３６（^３６Ｓ）、塩素３５（^３５Ｃｌ）、塩素３６（^３６Ｃｌ）、塩素３７（^３７Ｃｌ）、臭素７９（^７９Ｂｒ）、臭素８１（^８１Ｂｒ）、ヨウ素１２３（^１２３Ｉ）、ヨウ素１２５（^１２５Ｉ）、ヨウ素１２７（^１２７Ｉ）、ヨウ素１２９（^１２９Ｉ）、ヨウ素１３１（^１３１Ｉ）を含むが、これらに限定されない１つ以上の不自然な比率の同位体を含む。

【0067】

特定の実施形態では、化合物の「同位体変異体」は、安定な形態、すなわち、非放射性である。特定の実施形態では、化合物の「同位体変異体」は、水素（^１Ｈ）、重水素（^２Ｈ）、炭素１２（^１２Ｃ）、炭素１３（^１３Ｃ）、窒素１４（^１４Ｎ）、窒素１５（^１５Ｎ）、酸素１６（^１６Ｏ）、酸素１７（^１７Ｏ）、酸素１８（^１８Ｏ）、フッ素１７（^１７Ｆ）、リン３１（^３１Ｐ）、硫黄３２（^３２Ｓ）、硫黄３３（^３３Ｓ）、硫黄３４（^３４Ｓ）、硫黄３６（^３６Ｓ）、塩素３５（^３５Ｃｌ）、塩素３７（^３７Ｃｌ）、臭素７９（^７９Ｂｒ）、臭素８１（^８１Ｂｒ）、ヨウ素１２７（^１２７Ｉ）を含むが、これらに限定されない１つ以上の不自然な比率の同位体を含む。

【0068】

特定の実施形態では、化合物の「同位体変異体」は、不安定な形態、すなわち、放射性である。特定の実施形態では、化合物の「同位体変異体」は、トリチウム（^３Ｈ）、炭素１１（^１１Ｃ）、炭素１４（^１４Ｃ）、窒素１３（^１３Ｎ）、酸素１４（^１４Ｏ）、酸素１５（^１５Ｏ）、フッ素１８（^１８Ｆ）、リン３２（^３２Ｐ）、リン３３（^３３Ｐ）、硫黄３５（^３５Ｓ）、塩素３６（^３６Ｃｌ）、ヨウ素１２３（^１２３Ｉ）、ヨウ素１２５（^１２５Ｉ）、ヨウ素１２９（^１２９Ｉ）、およびヨウ素１３１（^１３１Ｉ）を含むが、これらに限定されない１つ以上の不自然な比率の同位体を含む。

【0069】

本明細書で提供されるような化合物において、当業者の判断に従って実行可能な場合、任意の水素は、例えば^２Ｈであってもよく、または任意の炭素は、例えば^１３Ｃであってもよく、または任意の窒素は、例えば^１５Ｎであってもよく、および任意の酸素は、^１８Ｏであってもよいと理解されるだろう。特定の実施形態では、化合物の「同位体変異体」は、不自然な割合の重水素を含む。

【0070】

「溶媒和化合物」という用語は、溶質、例えば本明細書で提供される化合物の１つ以上の分子と、化学量論的または非化学量論的量で存在する溶媒の１つ以上の分子によって形成される、複合体または凝集体を指す。好適な溶媒としては、水、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、および酢酸が挙げられるが、これらに限定されるものではない。特定の実施形態では、溶媒は、薬学的に許容可能である。一実施形態では、複合体または凝集体は、結晶の形態である。別の実施形態では、複合体または凝集体は、非結晶の形態である。溶媒が水である場合、溶媒和物は水和物である。水和物の例としては、半水和物、一水和物、二水和物、三水和物、四水和物、および五水和物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

【0071】

「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、液体または固体の充填剤、希釈剤、溶媒、またはカプセル化材料などの、薬学的に許容される材料、組成物、または溶媒を指す。一実施形態では、各成分は、医薬製剤の他の成分と適合性があり、過度の毒性、刺激、アレルギー反応なしに、ヒトおよび動物の組織または器官と接触して使用するのに適しているという意味で、「薬学的に許容できる」ものである。

【実施例】

【0072】

（材料および方法）
（細胞株）
全てのヒトがん細胞株は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ、マナッサス、バージニア州）、Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅｓ（ＪＣＲＢ、大阪、日本）、またはＣｏｂｉｏｅｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社のいずれかから入手した。

【0073】

（試薬・化学品）
抗ヒトＡＫＲ１Ｃ３モノクローナル抗体、ブレオマイシン、ＮＡＤＰＨ、凍結乾燥ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、およびＡＫＲ１Ｃ１／ＡＫＲ１Ｃ３（プロゲステロン、アンドロステンジオン、およびジヒドロテストステロン）の陽性対照基板は、Ｓｉｇｍａ社（ミズーリ州セントルイス）から購入した。組換えヒトＡＫＲ１Ｃ３は、Ａｂｃａｍ社（マサチューセッツ州ケンブリッジ）から購入し、ＡＫＲ１Ｃ１およびＡＫＲ１Ｃ４は、Ｓｉｇｍａ社から購入した。コメットアッセイキットは、Ｔｒｅｖｉｇｅｎ社（メリーランド州ゲイザースバーグ）から購入した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ（ＣＴＧ）アッセイキットは、Ｐｒｏｍｅｇａ社（ウィスコンシン州マディソン）から入手した。Ｒａｃｅｍｉｃ２８７０は、Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ社（カリフォルニア州、サウス・サンフランシスコ）によって合成した。プロドラッグ３４２３および３４２４は、Ａｓｃｅｎｔａｗｉｔｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＬＴＤ（シェンチェン、中国）によって合成された。３０２１は、報告されている方法（非特許文献２７）に基づいて合成した。標準治療薬は、以下の通り、アビラテロン（Ｂｏｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ社、米国）、プレドニゾロン（Ｓａｅｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、中国）、５－ＦＵ（Ｓｈａｎｈａｉ Ｘｕｄｏｎｇ Ｈａｉｐｕ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．社、中国）、ゲムシタビン（Ｖｉａｎｅｘ Ｓ．Ａ．社、ギリシャ）、およびスニチニブ（Ｃａｙｍａｎ社、米国）を購入した。

【0074】

以下の実施例において、ＡＫＲ１Ｃ３依存的活性化、広範囲のヒトがん細胞株におけるｉｎ ｖｉｔｒｏでの３４２４の細胞毒性、および３４２４の濃度依存性ＤＮＡ架橋を調べた。さらに、ＣＤＸおよびＰＤＸモデルの広範なパネルにおける３４２４のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性も調べた。

【0075】

実施例１：ＡＫＲ１Ｃ３依存的な３４２４の活性化
（酵素活性アッセイ）
アッセイ混合物は、１０～５０μＭの３４２４または陽性対照（アンドロステンジオンまたはジヒドロテストステロン）、１００ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ ７．０、３００μＭのＮＡＤＰＨ、４％ エタノール、および８Ｍの組換えヒトＡＫＲ１Ｃ３、ＡＫＲ１Ｃ１またはＡＫＲ１Ｃ４で構成され、総容量を２００μＬとした。反応は２５℃でインキュベートし、アセトニトリルとメタノール（９：１の比率）を添加することにより様々な時点で停止させ、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析に供した。酵素動態解析のため、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ２ｅ分光光度計（モレキュラーデバイス社、サンノゼ、カリフォルニア州）を用いて、３４０ｎｍにおけるＮＡＤＰＨの吸光度の減少（ε＝６２７０Ｍ^－１ｃｍ^－１）を測定することにより、活性を判定した。基質の添加による反応の開始後、反応を２５℃で、３０秒間隔でモニターした。非基質反応速度もバックグラウンドとしてモニターし、その勾配を用いて反応の初期速度を決定した。報告された動態データは、３回の測定の平均値であった。

【0076】

（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析）
ＡＫＲ１Ｃ３を介した３４２４代謝については、Ａｇｉｌｅｎｔ １２００ ＨＰＬＣシステム（アジレント・テクノロジー社、サンタ・クララ、カリフォルニア州）と結合したＳｃｉｅｘ ＡＰＩ－４０００ Ｑｔｒａｐ（ＡＢＳｃｉｅｘ社、フレーミングハム、マサチューセッツ州）質量分析計を用いて、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析を行った。３４２４分析では、Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ Ｃ１８カラム（２．１×１００ｍｍ、３．５μｍ、ウォーターズコーポレーション社、ミルフォード、マサチューセッツ州）を用いて、逆相液体クロマトグラフィーによる分離を、流速０．３ｍＬ／分で、合計ランタイムを１２分間として実施した。移動相Ａは、水（０．１％ギ酸）からなり、移動相Ｂは、ＡＣＮ（アセトニトリル）（０．１％ギ酸）からなる。グラジエントは、１５％の移動相Ｂで１．５分間、そして３分間で移動像Ｂを５０％までグラジエントさせ、次いで６分間で移動相Ｂを９５％までグラジエントさせて１分間保持し、最後に０．１分間で移動相Ｂを１５％まで戻し、１５％の移動相Ｂで４．９分間平衡化させた。カラムオーブン温度は４０℃であり、試料注入量は２μＬであった。質量スペクトルは、ポジティブＭＲＭモードで得られた。ポジティブイオンモードでは、イオンスプレー電圧を４５００Ｖに設定し、脱クラスター電位を８０Ｖに設定し、衝突エネルギーを２０Ｖに設定し、ソース温度を３５０℃に設定し、カーテンガスを１０ｐｓｉに設定し、ソースガス１および２を共に６０ｐｓｉに設定した。３４２４および３４２４－ＩＳのＭＲＭペアは、それぞれｍ／ｚ：４６１→３１３およびｍ／ｚ：４６５→３１３であった。２６６０分析では、Ｗａｔｅｒｓ Ａｔｌａｎｔｉｓ ＨＩＬＩＣ Ｓｉｌｉｃａカラム（２．１ｍｍ×１００ｍｍ、３μｍ、ウォーターズコーポレーション社、ミルフォード、マサチューセッツ州）を用いて、順相液体クロマトグラフィー分離を、流速０．３ｍＬ／分で、合計ランタイムを９分間として実施した。移動相Ａは、１ｍＭギ酸アンモニウム水溶液から構成され、移動相Ｂは、ＡＣＮを用いた。グラジエントは、８９％の移動相Ｂで１分間のイソクラティックランから実施し、１．５分間で移動像Ｂを６０％までグラジエントし、次いで２．５分間で移動相Ｂを４０％にグラジエントして２分間保持し、最後に０．１分間で移動相Ｂを８９％へ戻し、１５％の移動相Ｂで４．４分間平衡化した。カラムオーブン温度は４０℃であり、試料注入量は２μＬであった。質量スペクトルは、ネガティブＭＲＭモードで得た。ネガティブイオンモードでは、イオンスプレー電圧を－４５００Ｖに設定し、脱クラスター電位を－６０Ｖに設定し、衝突エネルギーを－３０Ｖに設定し、ソース温度を３５０℃に設定し、カーテンガスを１０ｐｓｉに設定し、ソースガス１および２を共に６０ｐｓｉに設定した。２６６０および２６６０－ＩＳのＭＲＭ一対は、それぞれｍ／ｚ：１４７→６３およびｍ／ｚ：１５１→６３であった。校正標準物質および試料の各ＭＲＭ遷移のピーク面積比（分析対象物質のピーク面積／分析対象物質のピーク面積－ＩＳ）は、Ａｎａｌｙｓｔ １．６ソフトウェア（ＡＢＳｃｉｅｘ社、フレーミングハム、マサチューセッツ州）を用いた定量分析に使用した。

【0077】

ＡＫＲ１Ｃ３による３４２４の活性化を、ＬＣ／ＭＳ－ＭＳを用いて、３４２４の還元および活性型２６６０の生成によってモニターした。図１に示すように、組換えヒトＡＫＲ１Ｃ３は、６０分間で３４２４を２６６０に活性化することができた（図１Ａおよび１Ｂ）。一方で、３４２４は、ＡＫＲ１Ｃ系統群のうちの２つであるＡＫＲ１Ｃ１またはＡＫＲ１Ｃ４によって代謝されなかった（表１）。したがって、プロドラッグ３４２４のＡＫＲ１Ｃ３依存的活性化が明らかとなった。ＡＫＲ１Ｃ３は、３４２４（Ｓ－エナンチオマー）およびそのＲ－エナンチオマー３４２３に対して、同様の触媒効率を示した（表２）。生理学的基質４－アンドロステンジオンおよび５－αジヒドロテストステロン（５α－ＤＨＴ）と比較して、３４２４はＡＫＲ１Ｃ３に、より高い速度で活性化された。

【0078】

【表1】

【0079】

【表2】

【0080】

このように、３４２４の還元が、ＡＫＲ１Ｃ３依存的であることが確認された。ヒト組換えＡＫＲ１Ｃ３は、ＡＫＲ１Ｃ１またはＡＫＲ１Ｃ４ではなく、３４２４を、その活性アジリジン窒素マスタード成分２６６０に還元した。

【0081】

実施例２：ＡＫＲ１Ｃ３依存的３４２４の細胞毒性
（ｉｎ ｖｉｔｒｏ増殖アッセイ）
指数関数的に増殖する細胞を、試験化合物の添加の２４時間前に播種した。試験化合物の添加後、プレートを、標準的な組織恒温培養器内において、３７℃で、示された時間した。実験終了後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ（ＣＴＧ）アッセイキット、またはＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（非特許文献２８、２９）のいずれかを用いて、生存細胞を検出した。非処置対照と比較して５０％の増殖阻害をもたらす薬物濃度（ＩＣ_５０）を、ＸＬｆｉｔ（ＩＤＢＳ社、ボストン、マサチューセッツ州）またはプリズム６（ＧｒａｐｈＰａｄ社、サンディエゴ、カリフォルニア州）のいずれかを用いて計算した。３０２１の実験は、細胞を３μＭの３０２１で２時間前処理し、その後、空気下で化合物処理した。ＩＣ_５０は、上記のように計算した。

【0082】

（ウエスタンブロット）
ヒト細胞抽出物を調製し、タンパク質濃度を測定した。タンパク質は、ヒトＡＫＲ１Ｃ３およびチューブリンまたはβ－アクチンを認識する抗体を用いて検出した。ＡＫＲ１Ｃ３およびチューブリンまたはアクチンのバンド密度を、Ｏｄｙｓｓｅｙレーザーイメージングシステムおよびソフトウェア（ＬＩ－ＣＯＲ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社、リンカーン、ネブラスカ州）、またはＵＶＰ ＣｈｅｍＳｔｕｄｉｏイメージングシステムおよびＶｉｓｉｏｎＷｏｒｋｓソフトウェア（Ａｎａｌｙｔｉｋ Ｊｅｎａ ＡＧ社）を用いてスキャンおよび定量し、チューブリンまたはアクチンに対するＡＫＲ１Ｃ３の比率を計算した。

【0083】

（コメットアッセイ）
細胞を２４時間播種した後、被験物質を表示濃度で添加し、２時間インキュベートした。細胞は２回洗浄し、化合物を完全に除去した。２０μｍｏｌ／Ｌのブレオマイシンを添加し、空気下で１時間インキュベートし、細胞を２時間静止させた後、ＤＮＡ鎖切断を誘発した。ＰＢＳで２回洗浄した後、Ｔｒｅｖｉｇｅｎ社（ゲイザースバーグ、メリーランド州）の単細胞電気泳動システムを用いて、コメットアッセイを実施した。データは、Ｐｅｒｃｅｐｔｉｖｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社（非特許文献２９）のコメットアッセイＩＶソフトウェアを用いて解析した。

【0084】

肝臓がん細胞株および非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞株を用いて、３４２４の細胞毒性を評価した。肝がん細胞株におけるＡＫＲ１Ｃ３タンパク質の発現は、ウエスタンブロットを用いて決定し、チューブリンを負荷対照として使用した（図２）。ＡＫＲ１Ｃ３ ＲＮＡの発現データは、ＣｒｏｗｎＢｉｏ社（北京、中国）のデータベースから得た。表３に示すように、３４２４に９６時間曝露した後、タンパク質およびＲＮＡレベルの両方でＡＫＲ１Ｃ３の発現量が高かった肝臓がん細胞株は、ＩＣ_５０値が低ｎＭの範囲にあり、３４２４に対する感受性が高かった。一方、ＡＫＲ１Ｃ３の発現量が少ない細胞は、３４２４に対する感受性が低く、ＩＣ_５０値は１０００ｎＭ以上だった。同様に、ＮＳＣＬＣ細胞も、３４２４に７２時間曝露した後、ＡＫＲ１Ｃ３依存的細胞毒性の特性を示した（表４）。肝がん細胞およびＮＳＣＬＣ細胞において、３４２４のＩＣ_５０、ＡＫＲ１Ｃ３タンパク質のレベル（Ｒ２＝０．７１、図３Ａ、上）、およびＲＮＡ発現量（Ｒ２＝０．８７、図３Ａ、中央）との間には、それぞれ高い相関があった（Ｒ２＝０．８０、図３Ａ、下）。これらの結果から、３４２４を介した性細胞毒性が、肝臓がんおよびＮＳＣＬＣ細胞株の両方におけるＡＫＲ１Ｃ３の発現レベルと高い相関があることを実証された。

【0085】

【表3】

【0086】

【表4】

【0087】

ＡＫＲ１Ｃ３を介した３４２４の特異的活性化は、Ｈ４６０細胞において、ＡＫＲ１Ｃ３阻害剤３０２１を用いて確認した。Ｈ４６０細胞を３μＭの３０２１で２時間前処理した後、３４２４で２時間共処理したところ、ＡＫＲ１Ｃ３特異的阻害剤３０２１は、６．３μＭのＩＣ_５０値であり、３０２１の非存在下でのＩＣ_５０値が４ｎＭ（図３Ｂ、上）であるのに対し、Ｈ４６０中の３４２４細胞毒性を効果的に阻害することが可能であり、これは、Ｅｖａｎｓら（非特許文献２５）によっても報告された。また、Ｈ４６０細胞における、３０２１の非存在下または存在下での、Ｒ－鏡像異性体である３４２３、ならびにＲ－鏡像異性体およびＳ－鏡像異性体の１：１比率のラセミ混合物である２８７０の細胞毒性も明らかにした。図３Ｂに示すように、３４２３（中央）および２８７０（下）は、それぞれＩＣ_５０値が５ｎＭおよび４ｎＭであり、３４２４と同等に強力な細胞毒性を示した。３４２４と同様に、３４２３と２８７０の細胞毒性はＡＫＲ１Ｃ３依存性が高く、３０２１は、ＩＣ_５０値がそれぞれ６．３μＭと５μＭ以上で阻害剤の非存在下よりも１０００倍以上高い濃度で、これらの細胞毒性を阻害した。阻害剤３０２１単独では、１００μＭまで細胞毒性を発揮しなかった（データは示さず）。

【0088】

３４２４がＤＮＡを架橋しているかどうかを評価するために、Ｈ４６０細胞を用いた、ＤＮＡ架橋の直接的な生化学的アッセイである単細胞電気泳動ベースのコメットアッセイが採用された。このアッセイでは、ラセミ混合物２８７０を使用した。図３Ｃに示すように、溶媒ジメチルスルホキシドで処理したＨ４６０細胞では、テールモーメント０．３で検出可能な二本鎖切断は存在しなかった。ブレオマイシンによりＤＮＡ鎖の切断が誘発されたことは、テールモーメントが３５まで増加したことから明らかである。２８７０に誘発されたＤＮＡ架橋を、ブレオマイシンに使用したのと同一の条件下で、３つの濃度を使用して試験した。化合物２８７０が濃度依存歴なＤＮＡ架橋を誘発したことは、テールモーメントが３６から１．６へ減少したことから明らかである。このように、３４２４を介した細胞毒性は、ＡＫＲ１Ｃ３依存性が高いことが実証された。

【0089】

（ｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性）
本研究における動物の取り扱い、ケア、および処理に関連する全ての手順は、国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）のガイダンスに従い、動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認された、ＣｒｏｗｎＢｉｏ社（北京、中国）、ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃ社（上海、中国）、またはＥｕｒｏｆｉｎｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ Ｔａｉｗａｎ社（台北、台湾）のガイドラインに従って実施した。定期的なモニタリングの際、動物は、運動性、食物および水の消費、体重の増加／減少、眼／毛髪のつや消し、およびその他の異常な影響などの、正常な行動における腫瘍増殖の影響について確認した。死亡および観察された臨床徴候は、各サブセット内の動物の数に基づいて記録した。

【0090】

全ての動物試験において、薬物の有効性を腫瘍増殖阻害の効果によって評価した。腫瘍体積（ｍｍ^３）は、以下の長楕円の公式に従って週２回測定した。
長さ（ｍｍ）×［幅（ｍｍ）］^２×０．５
腫瘍成長阻害率（％ＴＧＩ）は、投薬期間中に週２回、下記式により求めた。
％ＴＧＩ＝（１－［（Ｔ－Ｔ０）／（Ｃ－Ｃ０）］）×１００（式中、Ｔ＝治療群の平均腫瘍体積、Ｔ０＝試験開始時の治療群の平均腫瘍体積、Ｃ＝対照群の平均腫瘍体積、およびＣ０＝治療開始時の対照群の平均腫瘍体積を指す。）
そして、ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ２３（ＩＢＭ社、アーモンク、ニューヨーク州）またはＲ（バージョン３．３．１）を用いて、二方向分散分析およびボンフェローニ試験により、各溶媒の対照と比較した群の統計的有意性を評価した。０．０５未満のＰ値は、統計的に有意であるとみなした。

【0091】

実施例３：ＣＤＸモデルにおける３４２４の抗腫瘍効果
実施例３－１：ＨｅｐＧ２およびＨ４６０モデルにおける３４２４の抗腫瘍効果
３４２４のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性は、同所性肝がんモデル（ＨｅｐＧ２）、およびＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ Ｉｎｃ（北京、中国）の皮下肺がんモデル（Ｈ４６０）ＣＤＸモデルにおいて、ＧＦＰ発現がん細胞株を用いて評価した。研究には、メスの胸腺欠損ヌードマウス（６週：ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ、Ｂｅｉｊｉｎｇ ＨＦＫ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｏ Ｌｔｄ．、北京、中国）を使用した。各マウスは、腫瘍を発生させるために、肝臓右葉にＨｅｐＧ２－ＧＦＰ腫瘍塊（直径～１ｍｍ^３）を移植するか、Ｈ４６０－ＧＦＰ腫瘍塊（直径～１ｍｍ^３）を皮下に播種した。約３～１０日後、ＦｌｕｏｒＶｉｖｏ Ｍｏｄｅｌ－１００蛍光イメージャー（ＩＮＤＥＣ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ．Ｉｎｃ、ロスアルトス、カリフォルニア州）を用いてマウスの全身スキャンを実施した。類似する蛍光領域を有するマウスを選択し、無作為にグループ分けした。両方の細胞株は、高レベルのＡＫＲ１Ｃ３を発現した。プロドラッグ３４２４は、ＨｅｐＧ２同所性モデルには、１．２５、２．５ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇ Ｑ７Ｄ（７日毎）×２を、Ｈ４６０異種移植モデルには、０．６２５、１．２５または２．５ｍｇ／ｋｇを、Ｑ７Ｄ（７日毎）×２、そして１週間の休薬、次いで再度Ｑ７Ｄ（７日毎）×２の投与計画で静脈内投与（ＩＶ）した。ＨｅｐＧ２モデルでは、ソラフェニブを陽性対照として使用し、３０ｍｇ／ｋｇを１日１回×５×７サイクルの投与計画で経口投与した。Ｈ４６０モデルでは、タキソールを陽性対照として使用し、１５ｍｇ／ｋｇをＢＩＷ（隔週）×４回の投与計画で、静脈内投与した。実験の間、マウスを毎日観察し、体重を週２回測定した。腫瘍量は、ノギス測定（Ｈ４６０）またはＦｌｕｏｒＶｉｖｏ蛍光イメージャー（Ｈ４６０－ＧＦＰおよびＨｅｐＧ２－ＧＦＰ）のいずれかによって、週２回モニターした。

【0092】

ＨｅｐＧ２同所性異種移植モデルを用いて、全身蛍光イメージングにより３４２４の用量依存的抗腫瘍活性を調べた。３４２４を、１．２５、２．５または５ｍｇ／ｋｇの用量で週１回、２週間静脈内投与した場合、３４日目の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）は、それぞれ５２．４％、９１．５％および１０１．２％であった（表５）。３４２４の抗腫瘍効果は、用量依存的と認められた（図４Ａ）。溶媒群と比較して、２．５ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇの３４２４によって誘発された腫瘍阻害は、それぞれ８０％および１００％の完全退縮率で統計的に有意であった。実験終了時、腫瘍の蛍光画像（図４Ｂ）および腫瘍重量のデータは、蛍光面積の測定と一致した（図４Ａ）。肝細胞がん（ＨＣＣ）の第一選択治療薬であるソラフェニブを３０ｍｇ／ｋｇ経口投与すると、腫瘍増殖を５２．１％減少させたが、統計的有意差はなかった。この投与計画では、ソラフェニブが体重減少をもたらした（－１１％、データは示さず）。一方、今回の試験では、全ての試験用量で、３４２４処置群に体重減少は観察されなかった（表５）。

【0093】

Ｈ４６０皮下モデルでは、プロドラッグ３４２４を週２回投与し、１週間休薬し、さらに週２回、０．６２５、１．２５、および２．５ｍｇ／ｋｇを投与した。図５および表５に示すように、プロドラッグ３４２４は用量依存的抗腫瘍活性を示し、ＴＧＩはそれぞれ６０．２％、６７．２％および８８％であった。３４２４の抗腫瘍効果はパクリタキセルに匹敵し、１５ｍｇ／ｋｇのパクリタキセルは６４％のＴＧＩを示した。試験終了時（３５日目）、３４２４の投与により、低用量および中用量では極小の体重減少、高用量では統計的に有意でない１４％の減少をもたらしたが、パクリタキセル投与では、１１％の有意な体重減少をもたらした（表５）。

【0094】

【表5】

【0095】

実施例３－２：ＶＣａＰ、ＳＮＵ－１６およびＡ４９８モデルにおける３４２４の抗腫瘍効果
３４２４およびそれを含む組成物の抗腫瘍活性を、去勢抵抗性前立腺がん（ＣＲＰＣ）ＶＣａＰ、胃がんＳＮＵ－１６、および腎細胞がん（ＲＣＣ）Ａ４９８異種移植モデルにおいて評価した。調査は、ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃ（ＶＣａＰおよびＳＮＵ－１６モデル）およびＥｕｒｏｆｉｎｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ Ｔａｉｗａｎ（Ａ４９８モデル）で行った。ＣＲＰＣ、胃がんおよびＲＣＣのＣＤＸモデルにおいて、それぞれオスＢＡＬＢ／ｃヌード、メスＢＡＬＢ／ｃヌードおよびメスＳＣＩＤマウスを使用した。５×１０６または１×１０７のヒトがん細胞を、１：１のマトリゲルと共に、マウスの右側腹部に皮下注射した。腫瘍体積が１５０～２００ｍｍ^３に達した時点で、溶媒および被験物質を投与した（ＳＮＵ－１６モデルでは１日目または０日目と表記）。モデルに応じて、溶媒または被験物質を週１回、合計４または５回静脈内投与した。アビラテロン／プレドニゾロン（ＣＲＰＣ用）、５－フルオロウラシル（胃がん用）、スニチニブおよびゲムシタビン（共にＲＣＣ用）を含む標準治療薬は、文献（非特許文献１５、３０～３２）で推奨されるように投与した。同時投与の日には、まず３４２４の静脈内投与を行い、その後１時間以内に併用薬を投与した。

【0096】

去勢抵抗性前立腺がん（ＣＲＰＣ）ＶＣａＰ、胃がんＳＮＵ－１６、および腎細胞がんＡ４９８異種移植モデルにおいて、３４２４の単独療法または標準治療療法との併用治療のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効力を評価した。これらの３つのヒトがん細胞株は、タンパク質およびＲＮＡの両方のレベルでＡＫＲ１Ｃ３を高レベルで発現した。ＶＣａｐ、ＳＮＵ－１６およびＡ４９８におけるＡＫＲ１Ｃ３タンパク質の発現を、それぞれ８．９、１．９および１．６のチューブリンに対するＡＫＲ１Ｃ３の比率を用いたウエスタンブロットによって測定した。ＶＣａｐ、ＳＮＵ－１６およびＡ４９８におけるＡＫＲ１Ｃ３ ＲＮＡの発現量（ＬＯＧ２ ＦＰＫＭ）は、それぞれ５．２、８．０および１０．０であった。

【0097】

これらの研究では、動物を、単薬剤療法としての様々な濃度の３４２４、単薬剤療法としての抗がん薬剤もしくは単薬剤療法としての薬物（標準治療療法、制御）、または３４２４と少なくとも１つの抗がん薬剤とを組み合わせた本発明の組成物で処置した。

【0098】

実施例３－２－１：３４２４の単独療法またはアビラテロン酢酸エステル＋プレドニゾロンとの併用療法
ＣＲＰＣモデルでは、去勢したオスＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに、３４２４（週１回の静脈内注射で５回投与）、酢酸アビラテロン＋プレドニゾロン（毎日の経口投与）、またはその組合せで処置した（図４Ｃ）。５ｍｇ／ｋｇで、３４２４は１４８％の有意なＴＧＩを示し、これは酢酸アビラテロン／プレドニゾロンとの併用で、さらに１５８％まで増強された。

【0099】

なお、３２日目の最終安楽死の時に、併用投与を受けた動物は、血清前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の減少を示した（図６）。

【0100】

実施例３－２－２：３４２４の単独療法または５－ＦＵとの併用療法
胃がんＳＮＵ－１６モデルにおいて、メスＢＡＬＢ／ｃマウスを、３４２４（週１回のＩＶ注射で４回投与）、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）（週２回のＩＰ注射）、または３４２４と５－ＦＵの組み合わせで処置した（図４Ｄ）。２．５または５ｍｇ／ｋｇの３４２４で処置された動物は、それぞれ８７．８％または９６．２％の顕著なＴＧＩを示したが、５－ＦＵは３０ｍｇ／ｋｇのレベルでは、抗腫瘍活性を示さなかった。３４２４と５－ＦＵと組み合わせた場合には、相乗効果が認められた。

【0101】

実施例３－２－３：３４２４の単独療法またはスニチニブとの併用療法
腎細胞がんＡ４９８モデルでは、メスＳＣＩＤマウスに３４２４（週１回の静脈内注射で４回投与）、スニチニブ（２５ｍｇ／ｋｇ、毎日の経口投与）、またはその組合せを投与した（図４Ｅ）。２．５ｍｇ／ｋｇで、３４２４は、７３％の有意なＴＧＩを示したのに対し、スニチニブのＴＧＩは５２％と控えめだった。動物を、３４２４とスニチニブの組合せで処置した場合、ＴＧＩはさらに８８％に増加した。

【0102】

実施例３－２－４：３４２４の単独療法またはゲムシタビン（ジェムザール）との併用療法
Ａ４９８異種移植モデルにおいて、３４２４とゲムシタビンを併用した場合の有効性を試験したところ、８０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビン（週１回のＩＰ注射で４回投与）は１９％のＴＧＩを示し、２．５ｍｇ／ｋｇの３４２４との併用では、ＴＧＩは８７％に増加した（図４Ｆ）。

【0103】

３つのモデル全てにおいて、３４２４は、マウスに良好な耐容性を示し、処置中に有意な体重減少は見られなかった（データは示さず）。図４は、様々なＣＤＸモデルにおける３４２４または本発明の組成物の抗腫瘍活性を示す。本発明者らは、併用療法において、３４２４がＣＲＰＣ、胃がん、およびＲＣＣのＣＤＸモデルにおける標準治療の有効性を高め得ることを実証した。

【0104】

実施例４：ＰＤＸモデルにおける３４２４の抗腫瘍活性
ＰＤＸモデルにおける３４２４の抗腫瘍活性は、メスＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（６～７週齢、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ａｎｉｋｅｅｐｅｒ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ、北京、中国）を使用し、ＣｒｏｗｎＢｉｏ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（北京、中国）で評価した。選択した一次ヒトがん組織（膵臓、胃がん、および肺）を接種したストックマウスから、腫瘍断片（ＰＡ１２８０、ＧＡ６２０１、ＬＵ２０５７、およびＬＵ２５０５）を採取し、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスへの接種に使用した。各マウスに皮下接種し、腫瘍を発生させた。ＳｔｕｄｙＤｉｒｅｃｔｏｒＴＭ Ｖｅｒ３．１．３９９．１９（Ｓｔｕｄｙｌｏｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．、サウス・サンフランシスコ、カリフォルニア州、米国）を用いて、平均腫瘍径が～１００ｍｍ^３に達した時点で、マウスを無作為に実験群に割り振った。プロドラッグ３４２４を、Ｑ７Ｄ（７日毎）×３回の投与計画で、示された用量で静脈内投与した。各グループは、５～６匹のマウスで構成された。グループ分けの日を、０日目とした。プロドラッグ３４２４を、０日目から各試験で指示された日まで、腫瘍担がんマウスに投与した。

【0105】

さらに、膵臓がん、胃がん、およびＡＫＲ１Ｃ３が高発現している肺がんとＡＫＲ１Ｃ３が低発現している肺がんを含む患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルにおいて、３４２４のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を評価した。プロドラッグ３４２４は、週３回、静脈内注射により投与した。４つのＰＤＸモデルの患者情報を表６に示す。膵臓ＰＤＸモデル（図７Ａおよび表７）において、２．５ｍｇ／ｋｇの３４２４は、７７．４％のＴＧＩという統計的に有意な抗腫瘍活性を示した。胃ＰＤＸモデルにおいて、５ｍｇ／ｋｇの３４２４は、１１０％のＴＧＩという顕著な抗腫瘍阻害を示した（図７Ｂおよび表７）。腫瘍体積は減少し続け、治療中止から１カ月後でも、低値または測定不能な状態であった。試験終了時には、マウスの６０％は腫瘍が認められなかった。異なるレベルのＡＫＲ１Ｃ３発現性を有する２つの肺がんＰＤＸモデルを選択し、３４２４のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性がＡＫＲ１Ｃ３依存的であるかを調べた。ＬＵ２５０５ＰＤＸモデルは、ＡＫＲ１Ｃ３ ＲＮＡ（ｌｏｇ２＝６．０３）を高発現したのに対し、ＬＵ２０５７モデルは、ＡＫＲ１Ｃ ＲＮＡ（ｌｏｇ２＝２．０８）を低発現した。

【0106】

図７、７Ｄおよび表７に示すように、同じ２．５ｍｇ／ｋｇの用量で、３４２４は、ＡＫＲ１Ｃ３発現量の多いＬＵ２５０５（ＴＧＩ：１０５．２％）で、優れた腫瘍増殖阻害効果を示したが、ＡＫＲ１Ｃ３発現量の少ないＬＵ２０５７ＰＤＸ腫瘍（ＴＧＩ：－２０．９％）においては阻害が認められず、３４２４のＡＫＲ１Ｃ３依存的なｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性が示された。１．２５ｍｇ／ｋｇという低用量でも、３４２４は、ＬＵ２５０５腫瘍増殖を統計的に有意に阻害した（ＴＧＩ：１０５．０％）。全てのＰＤＸモデルにおいて、プロドラッグ３４２４は、試験した全ての用量で体重減少が観察されず、良好な耐容性を示した（表７）。

【0107】

【表6】

【0108】

【表7】

【0109】

肝臓がんまたはＮＳＣＬＣのいずれかから得られた２０以上の細胞株を用いることにより、ＡＫＲ１Ｃ３を高発現する全ての細胞株において、ＡＫＲ１Ｃ３が低発現または検出できない細胞と比較して、３４２４が、増強された細胞毒性を示すことを見出した。ＡＫＲ１Ｃ３を高発現する株のＩＣ_５０３４２４は低ｎＭであり、強力なナイトロジェンマスタードに特徴的な高い効力を示した。特に注目すべきは、高ＡＫＲ１Ｃ３を発現するＮＣＩ－Ｈ２２２８ ＮＳＣＬＣ系統において、細胞毒性が５０００倍まで増強されたことである。この結果は、正常組織に見られる低いＡＫＲ１Ｃ３発現領域を温存しながら、ＡＫＲ１Ｃ３の高い発現を有する腫瘍を標的とすることと一致する。

【0110】

本明細書に記載した結果は、３４２４が、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＡＫＲ１Ｃ３依存的な細胞毒性を示し、ｉｎ ｖｉｖｏで幅広い型のヒトのがんにおいて抗腫瘍活性を示すことを強調している。本発明者らは、ＡＫＲ１Ｃ３を高発現するＣＤＸおよびＰＤＸモデルの幅広いパネルにおいて、臨床的に達成可能な用量で、３４２４の優れたｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を示す。特に、３４２４は、肝臓がん、胃がん、腎臓がん、肺がん、膵臓がん、および去勢抵抗性前立腺がんに対して、ｉｎ ｖｉｖｏで顕著な有効性を示す。３４２４のＡＫＲ１Ｃ３依存的活性は、がん細胞を特異的に標的とする、進行中および将来の臨床試験のための基礎となり、または、がん患者の特性を明らかにし、３４２４による治療に対する患者の選択をさらに導くためのバイオマーカーとなっている。

【0111】

なお、以上の本発明の実施形態の説明は、本発明を限定するものではない。当業者は、本発明に従って様々な修正および変更を行うことができ、本発明の精神の範囲内での修正および変更は、本発明に付加される特許請求の範囲に包含されるものとする。

【0112】

本明細書に引用される全ての参考文献は、法律により許容される全範囲まで、参照により本明細書に組み込まれる。これらの文献の考察は、単にそれらの著者によってなされた主張を要約することを意図している。いかなる文献（または文献の一部）も、関連する先行技術であることを認めるものではない。出願人は、引用された文献の正確性および適切性に異議を申し立てる権利を留保する。

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図4E】

【図4F】

【図5】

【図6】

【図7】

【国際調査報告】