特表 2024-508847 がん幹細胞を標的とするための方法及びソルチリン結合コンジュゲート化合物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-02-28

(54)【発明の名称】がん幹細胞を標的とするための方法及びソルチリン結合コンジュゲート化合物

(51)【国際特許分類】

   A61K 47/64 20170101AFI20240220BHJP

   C07K 7/08 20060101ALI20240220BHJP

   C07K 14/00 20060101ALI20240220BHJP

   C07K 7/50 20060101ALI20240220BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 31/337 20060101ALI20240220BHJP

   A61K 51/08 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240220BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240220BHJP

【ＦＩ】

A61K47/64

C07K7/08 ZNA

C07K14/00

C07K7/50

C07K19/00

A61K45/00

A61K31/337

A61K51/08 100

A61P35/00

A61P35/02

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023552236

(86)(22)【出願日】2022-02-24

(85)【翻訳文提出日】2023-10-16

(86)【国際出願番号】 CA2022050263

(87)【国際公開番号】W WO2022178634

(87)【国際公開日】2022-09-01

(31)【優先権主張番号】63/200,284

(32)【優先日】2021-02-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/264,105

(32)【優先日】2021-11-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523325222

【氏名又は名称】トランスフェール プリュ ソシエテ アン コマンディット

(71)【出願人】

【識別番号】522222124

【氏名又は名称】ゼラテクノロジーズ インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110000109

【氏名又は名称】弁理士法人特許事務所サイクス

(72)【発明者】

【氏名】ベリヴォー リシャール

(72)【発明者】

【氏名】ドゥムル ミシェル

(72)【発明者】

【氏名】アナビー ボラーヌ

(72)【発明者】

【氏名】シャルフィー シンディア

(72)【発明者】

【氏名】ラロック アラン

(72)【発明者】

【氏名】キュリー ジャン クリストフ

(72)【発明者】

【氏名】ズゲーブ アラン

(72)【発明者】

【氏名】マルソレ クリスチャン

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE59

4C084AA19

4C084NA05

4C084NA13

4C084ZB26

4C084ZB27

4C086AA01

4C086AA02

4C086BA02

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA13

4C086ZB26

4C086ZB27

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA17

4H045BA18

4H045BA30

4H045BA41

4H045EA20

(57)【要約】

本出願は、ソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）を標的とするペプチド化合物にコンジュゲートされた抗腫瘍剤（例えば、化学療法剤）を含むコンジュゲートの方法及び使用、ソルチリン発現ＣＳＣの存在に関連する標準的な抗腫瘍療法に抵抗性の予後不良のがんの治療のための実施形態における方法及び使用、並びにがんの再発（ｒｅｌａｐｓｅ）又は再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）を予防又は治療するための方法及び使用に関する。
【選択図】図９Ｂ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）を含むがんを治療するための方法であって、前記対象に、有効量のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含み、前記コンジュゲート化合物が、Ａ－（Ｂ）_nの式を有し、式中、
Ａは、３０残基以下のペプチド化合物であり、前記ペプチド化合物が、式（Ｉ）～（ＸＩＩＩ）の配列のうちの１つと少なくとも６０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、

【表1】

式中、
Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃、Ｘ₄、Ｘ₅、Ｘ₆、Ｘ₇、Ｘ₈、Ｘ₉、Ｘ₁₀、Ｘ₁₁、Ｘ₁₂、Ｘ₁₃、Ｘ₁₄、Ｘ₁₅、Ｘ₁₈、及びＸ₁₉は、独立して、任意のアミノ酸から選択され、
Ｘ₁₆、Ｘ₁₇、Ｘ₂₀、及びＸ₂₁は、独立して、Ｑ、Ｐ、Ｙ、Ｉ、及びＬから選択され、
ｎは、０、１、２、３、４、又は５であり、
Ｘ₉が２回以上存在する場合、前記Ｘ₉の各々は、独立して、任意のアミノ酸から選択され、
Ｘ₁₉が２回以上存在する場合、前記Ｘ₉の各々は、独立して、任意のアミノ酸から選択され、
任意選択的に、前記ペプチド化合物は、環状であり、
Ｂは、少なくとも１つの抗がん剤であり、Ｂが、Ａに直接又はリンカーを介して接続されている、方法。

【請求項2】

前記ペプチド化合物が、式（Ｉ）～（ＸＩＩＩ）の配列のうちの１つと少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記ペプチド化合物が、式（Ｉ）～（ＸＩＩＩ）の配列のうちの１つを含み、そのアミノ末端及び／又はカルボキシ末端に１～３個の追加のアミノ酸を更に含む、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項4】

前記ペプチド化合物が、そのアミノ末端及び／又はカルボキシ末端にシステイン残基を含む、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

前記ペプチド化合物が、式（Ｉ）によって表され、配列番号１又は２のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記ペプチド化合物が、式（ＩＩＩ）によって表され、配列番号３又は４のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

前記ペプチド化合物が、式（Ｖ）によって表され、配列番号５のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項8】

前記ペプチド化合物が、式（ＶＩ）によって表され、配列番号６のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項9】

前記ペプチド化合物が、式（ＶＩＩ）によって表され、配列番号７のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項10】

前記ペプチド化合物が、式（ＶＩＩＩ）によって表され、配列番号８のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項11】

前記ペプチド化合物が、式（ＩＸ）によって表され、配列番号９のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項12】

前記ペプチド化合物が、式（Ｘ）によって表され、配列番号１０のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項13】

前記ペプチド化合物が、式（ＸＩ）によって表され、配列番号１１のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項14】

前記ペプチド化合物が、式（ＸＩＩ）によって表され、配列番号１２のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項15】

前記ペプチド化合物が、式（ＸＩＩＩ）によって表され、配列番号１３のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。

【請求項16】

前記ペプチド化合物が、そのアミノ末端及び／又はカルボキシ末端に少なくとも１つの修飾基を含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記少なくとも１つの修飾基が、アセチル又はスクシニルである、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記ペプチド化合物が、式（ＸＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＸ）、（ＸＬ）、（ＸＬＩ）、又は（ＸＬＩＩ）によって表される、請求項１に記載の方法。

【表2】

【請求項19】

Ｂが、前記ペプチド化合物の遊離アミンにおいて、前記ペプチド化合物のＮ末端位置において、前記ペプチド化合物の遊離－ＳＨにおいて、及び／又は前記ペプチド化合物の遊離カルボキシルにおいて、Ａに接続されている、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

Ｂが、リンカーを介してＡに接続されている、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記コンジュゲートが、式（ＬＩＩＩ）又は（ＬＩＶ）によって表され、
ＧＶＲＡＫ（Ｚ¹）ＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫ（Ｚ²）ＳＥＳＹ（ＬＩＩＩ）（配列番号 ２３）、
アセチル－ＧＶＲＡＫ（Ｚ¹）ＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫ（Ｚ²）ＳＥＳＹ（ＬＩＶ）（ 配列番号２４）
式中、Ｚ¹及びＺ²は、各々独立して、リジン（Ｋ）残基に結合した抗腫瘍剤である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記抗腫瘍剤が、放射性核種又は化学療法剤である、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記化学療法剤が、タキサンである、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

前記化学療法剤が、ドセタキセルである、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連するがんの再発（ｒｅｌａｐｓｅ）又は再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）を予防又は治療するための方法であって、前記対象に、有効量の請求項１～２４のいずれか一項に記載のコンジュゲート又はその塩を投与することを含む、方法。

【請求項26】

対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する予後不良のがんを治療するための方法であって、前記対象に、有効量の請求項１～２４のいずれか一項に記載のコンジュゲート又はその塩を投与することを含む、方法。

【請求項27】

対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する切除不能な化学療法及び放射線療法に耐性のがんを治療するための方法であって、前記対象に、有効量の請求項１～２４のいずれか一項に記載のコンジュゲート又はその塩を投与することを含む、方法。

【請求項28】

前記ＣＳＣが、少なくとも１つの多剤耐性（ＭＤＲ）タンパク質を発現する、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記ＣＳＣが、ＭＤＲ１及び／又はＡＢＣＢ５を発現する、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

前記がんが、乳がん、泌尿生殖器がん、膵臓がん、肺がん、甲状腺がん、腎臓がん、胃腸管がん、神経内分泌腫瘍、神経芽腫、皮膚がん、脳がん、及び白血病である、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記泌尿生殖器がんが、卵巣がん、前立腺がん、子宮内膜がん、又は精巣がんである、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記乳がんが、浸潤性乳管がん（ＩＤＣ）又はトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）である、請求項３０に記載の方法。

【請求項33】

前記腎臓がんが、腎細胞がん（ＲＣＣ）である、請求項３０に記載の方法。

【請求項34】

前記胃腸管がんが、大腸がんである、請求項３０に記載の方法。

【請求項35】

前記皮膚がんが、黒色腫である、請求項３０に記載の方法。

【請求項36】

前記脳がんが、神経膠腫である、請求項３０に記載の方法。

【請求項37】

前記白血病が、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）である、請求項３０に記載の方法。

【請求項38】

前記がんが、乳がん、卵巣がん、膵臓がんである、請求項３０に記載の方法。

【請求項39】

前記コンジュゲート又はその塩の前記投与が、前記対象における前記ＣＳＣの遊走を阻害する、請求項１～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

前記方法が、前記対象に、１つ以上の追加の活性剤又は療法を投与することを更に含む、請求項１～３９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項41】

前記１つ以上の追加の活性剤又は療法が、放射線療法、手術、化学療法剤、免疫療法、チェックポイント阻害剤、及び／又は細胞ベースの療法を含む、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）を含むがんを治療するための医薬品の調製のための、請求項１～２４のいずれか一項に記載のコンジュゲート又はその塩の使用。

【請求項43】

対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連するがんの再発（ｒｅｌａｐｓｅ）又は再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）を予防又は治療するための医薬品の調製のための、請求項１～２４のいずれか一項に記載のコンジュゲート又はその塩の使用。

【請求項44】

対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する予後不良のがんを治療するための医薬品の調製のための、請求項１～２４のいずれか一項に記載のコンジュゲート又はその塩の使用。

【請求項45】

対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する切除不能な化学療法及び放射線療法に耐性のがんを治療するための医薬品の調製のための、請求項１～２４のいずれか一項に記載のコンジュゲート又はその塩の使用。

【請求項46】

前記ＣＳＣが、少なくとも１つの多剤耐性（ＭＤＲ）タンパク質を発現する、請求項４２～４５のいずれか一項に記載の使用。

【請求項47】

前記ＣＳＣが、ＭＤＲ１及び／又はＡＢＣＢ５を発現する、請求項４６に記載の使用。

【請求項48】

前記がんが、乳がん、泌尿生殖器がん、膵臓がん、肺がん、甲状腺がん、腎臓がん、胃腸管がん、神経内分泌腫瘍、神経芽腫、皮膚がん、脳がん、及び白血病である、請求項４２～４７のいずれか一項に記載の使用。

【請求項49】

前記泌尿生殖器がんが、卵巣がん、前立腺がん、子宮内膜がん、又は精巣がんである、請求項４８に記載の使用。

【請求項50】

前記乳がんが、浸潤性乳管がん（ＩＤＣ）又はトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）である、請求項４８に記載の使用。

【請求項51】

前記腎臓がんが、腎細胞がん（ＲＣＣ）である、請求項４８に記載の使用。

【請求項52】

前記胃腸管がんが、大腸がんである、請求項４８に記載の使用。

【請求項53】

前記皮膚がんが、黒色腫である、請求項４８に記載の使用。

【請求項54】

前記脳がんが、神経膠腫である、請求項４８に記載の使用。

【請求項55】

前記白血病が、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）である、請求項４８に記載の使用。

【請求項56】

前記がんが、乳がん、卵巣がん、膵臓がんである、請求項４８に記載の使用。

【請求項57】

前記医薬品が、前記対象における前記ＣＳＣの遊走を阻害する、請求項４２～５６のいずれか一項に記載の使用。

【請求項58】

前記医薬品が、１つ以上の追加の活性剤又は療法とともに使用するためのものである、請求項４２～５７のいずれか一項に記載の使用。

【請求項59】

前記１つ以上の追加の活性剤又は療法が、放射線療法、手術、化学療法剤、免疫療法、チェックポイント阻害剤、及び／又は細胞ベースの療法を含む、請求項５８に記載の使用。

【請求項60】

対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）を含むがんの治療に使用するための、請求項１～２４のいずれか一項に記載のコンジュゲート又はその塩。

【請求項61】

対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連するがん再発（ｒｅｌａｐｓｅ）又は再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）の予防又は治療に使用するための、請求項１～２４のいずれか一項に記載のコンジュゲート又はその塩。

【請求項62】

対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する予後不良のがんの治療に使用するための、請求項１～２４のいずれか一項に記載のコンジュゲート又はその塩。

【請求項63】

対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する切除不能な化学療法及び放射線療法に耐性のがんの治療に使用するための、請求項１～２４のいずれか一項に記載のコンジュゲート又はその塩。

【請求項64】

前記ＣＳＣが、少なくとも１つの多剤耐性（ＭＤＲ）タンパク質を発現する、請求項６０～６３のいずれか一項に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【請求項65】

前記ＣＳＣが、ＭＤＲ１及び／又はＡＢＣＢ５を発現する、請求項６４に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【請求項66】

前記がんが、乳がん、泌尿生殖器がん、膵臓がん、肺がん、甲状腺がん、腎臓がん、胃腸管がん、神経内分泌腫瘍、神経芽腫、皮膚がん、脳がん、及び白血病である、請求項６１～６５のいずれか一項に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【請求項67】

前記泌尿生殖器がんが、卵巣がん、前立腺がん、子宮内膜がん、又は精巣がんである、請求項６６に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【請求項68】

前記乳がんが、浸潤性乳管がん（ＩＤＣ）又はトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）である、請求項６６に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【請求項69】

前記腎臓がんが、腎細胞がん（ＲＣＣ）である、請求項６６に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【請求項70】

前記胃腸管がんが、大腸がんである、請求項６６に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【請求項71】

前記皮膚がんが、黒色腫である、請求項６６に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【請求項72】

前記脳がんが、神経膠腫である、請求項６６に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【請求項73】

前記白血病が、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）である、請求項６６に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【請求項74】

前記がんが、乳がん、卵巣がん、又は膵臓がんである、請求項６６に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【請求項75】

前記コンジュゲート又はその塩が、前記対象における前記ＣＳＣの遊走を阻害する、請求項６０～７４のいずれか一項に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【請求項76】

前記コンジュゲート又はその塩が、１つ以上の追加の活性剤又は療法とともに使用するためのものである、請求項６０～７５のいずれか一項に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【請求項77】

前記１つ以上の追加の活性剤又は療法が、放射線療法、手術、化学療法剤、免疫療法、チェックポイント阻害剤、及び／又は細胞ベースの療法を含む、請求項７６に記載のコンジュゲート又はその塩。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本発明は、２０２１年２月２６日に出願された米国仮特許出願第６３／２００，２８４号及び２０２１年１１月１６日に出願された米国仮特許出願第６３／２６４，１０５号の利益を主張し、これらは参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表
本出願は、２０２２年２月２４日に作成され、約１７ｋＢのサイズを有する「Ｇ１１７１８－００４２３＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」と題するコンピュータ可読形式の配列表を含む。コンピュータ可読形式は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0003】

本開示は、概して、腫瘍学の分野に関し、より具体的には、がん幹細胞（ＣＳＣ）を標的とするための化合物、方法、及びそれらの使用に関する。

【背景技術】

【0004】

最近の世界保健機関の報告によれば、２０１２年に８２０万人の患者が、がんで亡くなった。したがって、がんは、発展途上国及び先進国の両方で継続して増えつつある健康上の問題である。また、今後２０年以内に、年間のがん症例数が増加すると推定されている。がんに対する一般的な全身治療は、手術、内分泌療法、化学療法、免疫療法、及び放射線療法である。

【0005】

これら全ての治療により、近年（２００６～２０１５年）、がんの発生率は、女性では安定しており、男性ではわずかに減少しており、がんの死亡率（２００７～２０１６年）も減少している。しかしながら、従来のがん治療法は、いくつかの悪性腫瘍に対してのみ有効である。がん治療の失敗の主な理由は、転移、再発、不均一性、化学療法及び放射線療法に対する耐性、及び免疫学的監視の回避である。現在のほぼ全てのがん治療は、がん幹細胞（ＣＳＣ）という腫瘍において最も危険な細胞を標的とすることなく、腫瘍を減量することに焦点を当てている。ＣＳＣは、特にＧ０期で停止して、新しい腫瘍を生じさせるそれらの能力により、全身へのがん細胞の拡散、腫瘍の増殖、化学療法に対するがんの耐性、及び治療又は外科的除去後の腫瘍の再発に関与する。現在の治療は、ＣＳＣ集団を標的としないので、それらは、しばしば、耐性腫瘍の発生及びがんの継続的な拡散をもたらす。したがって、ＣＳＣは、がん治療のための最も有望な標的とみなされ得る。

【0006】

したがって、例えば、がん療法に対する腫瘍の耐性を克服し、がん患者におけるがん再発を予防／治療し、生存率を改善するために、がん（より具体的にはＣＳＣに関連するがん）の治療のための戦略の開発が必要である。

【0007】

本記載は、いくつかの文献を参照し、それらの内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【発明の概要】

【0008】

本開示は、がん幹細胞を標的とするための生成物（例えば、化合物）、並びにそれらの方法及び使用、並びに関連する使用に関する。

【0009】

様々な態様及び実施形態において、本開示は、以下の項目を提供する：
１． 対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）を含むがんを治療するための方法であって、対象に、有効量のコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含み、コンジュゲート化合物が、Ａ－（Ｂ）_nの式を有し、式中、
Ａは、３０残基以下のペプチド化合物であり、ペプチド化合物が、式（Ｉ）～（ＸＩＩＩ）の配列のうちの１つと少なくとも６０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、

【表1】

式中、
Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃、Ｘ₄、Ｘ₅、Ｘ₆、Ｘ₇、Ｘ₈、Ｘ₉、Ｘ₁₀、Ｘ₁₁、Ｘ₁₂、Ｘ₁₃、Ｘ₁₄、Ｘ₁₅、Ｘ₁₈、及びＸ₁₉は、独立して、任意のアミノ酸から選択され、
Ｘ₁₆、Ｘ₁₇、Ｘ₂₀、及びＸ₂₁は、独立して、Ｑ、Ｐ、Ｙ、Ｉ、及びＬから選択され、
ｎは、０、１、２、３、４、又は５であり、
Ｘ₉が２回以上存在する場合、当該Ｘ₉の各々は、独立して、任意のアミノ酸から選択され、
Ｘ₁₉が２回以上存在する場合、当該Ｘ₉の各々は、独立して、任意のアミノ酸から選択され、
任意選択的に、ペプチド化合物は、環状であり、
Ｂは、少なくとも１つの抗がん剤であり、Ｂが、Ａに直接又はリンカーを介して接続されている、方法。

【0010】

２． ペプチド化合物が、式（Ｉ）～（ＸＩＩＩ）の配列のうちの１つと少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、項目１に記載の方法。

【0011】

３． ペプチド化合物が、式（Ｉ）～（ＸＩＩＩ）の配列のうちの１つを含み、そのアミノ末端及び／又はカルボキシ末端に１～３個の追加のアミノ酸を更に含む、項目１又は２に記載の方法。

【0012】

４． ペプチド化合物が、そのアミノ末端及び／又はカルボキシ末端にシステイン残基を含む、項目３に記載の方法。

【0013】

５． ペプチド化合物が、式（Ｉ）によって表され、配列番号１又は２のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、項目１に記載の方法。

【0014】

６． ペプチド化合物が、式（ＩＩＩ）によって表され、配列番号３又は４のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、項目１に記載の方法。

【0015】

７． ペプチド化合物が、式（Ｖ）によって表され、配列番号５のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、項目１に記載の方法。

【0016】

８． ペプチド化合物が、式（ＶＩ）によって表され、配列番号６のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、項目１に記載の方法。

【0017】

９． ペプチド化合物が、式（ＶＩＩ）によって表され、配列番号７のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、項目１に記載の方法。

【0018】

１０． ペプチド化合物が、式（ＶＩＩＩ）によって表され、配列番号８のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、項目１に記載の方法。

【0019】

１１． ペプチド化合物が、式（ＩＸ）によって表され、配列番号９のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、項目１に記載の方法。

【0020】

１２． ペプチド化合物が、式（Ｘ）によって表され、配列番号１０のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、項目１に記載の方法。

【0021】

１３． ペプチド化合物が、式（ＸＩ）によって表され、配列番号１１のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、項目１に記載の方法。

【0022】

１４． ペプチド化合物が、式（ＸＩＩ）によって表され、配列番号１２のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、項目１に記載の方法。

【0023】

１５． ペプチド化合物が、式（ＸＩＩＩ）によって表され、配列番号１３のアミノ酸配列からなるアミノ酸配列を有する、項目１に記載の方法。

【0024】

１６． ペプチド化合物が、そのアミノ末端及び／又はカルボキシ末端に少なくとも１つの修飾基を含む、項目１～１５のいずれか１つに記載の方法。

【0025】

１７． 少なくとも１つの修飾基が、アセチル又はスクシニルである、項目１６に記載の方法。

【0026】

１８． ペプチド化合物が、式（ＸＸＸＶＩＩＩ）、（ＸＸＸＩＸ）、（ＸＬ）、（ＸＬＩ）、又は（ＸＬＩＩ）によって表される、項目１に記載の方法。

【表2】

【0027】

１９． Ｂが、当該ペプチド化合物の遊離アミンにおいて、当該ペプチド化合物のＮ末端位置において、当該ペプチド化合物の遊離－ＳＨにおいて、及び／又は当該ペプチド化合物の遊離カルボキシルにおいて、Ａに接続されている、項目１～１８のいずれか１つに記載の方法。

【0028】

２０． Ｂが、リンカーを介してＡに接続されている、項目１～１９のいずれか１つに記載の方法。

【0029】

２１． コンジュゲートが、式（ＬＩＩＩ）又は（ＬＩＶ）によって表され、
ＧＶＲＡＫ（Ｚ¹）ＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫ（Ｚ²）ＳＥＳＹ（ＬＩＩＩ）（配列番号２３）、
アセチル－ＧＶＲＡＫ（Ｚ¹）ＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫ（Ｚ²）ＳＥＳＹ（ＬＩＶ）（配列番号２４）
式中、Ｚ₁及びＺ₂は、各々独立して、リジン（Ｋ）残基に結合した抗腫瘍剤である、項目１～２０のいずれか１つに記載の方法。

【0030】

２２． 抗腫瘍剤が、放射性核種又は化学療法剤である、項目１～２１のいずれか１つに記載の方法。

【0031】

２３． 化学療法剤が、タキサンである、項目２２に記載の方法。

【0032】

２４． 化学療法剤が、ドセタキセルである、項目２３に記載の方法。

【0033】

２５． 対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連するがんの再発（ｒｅｌａｐｓｅ）又は再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）を予防又は治療するための方法であって、対象に、有効量の項目１～２４のいずれか１つに記載のコンジュゲート又はその塩を投与することを含む、方法。

【0034】

２６． 対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する予後不良のがんを治療するための方法であって、対象に、有効量の項目１～２４のいずれか１つに記載のコンジュゲート又はその塩を投与することを含む、方法。

【0035】

２７． 対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する切除不能な化学療法及び放射線療法に耐性のがんを治療するための方法であって、対象に、有効量の項目１～２４のいずれか１つに記載のコンジュゲート又はその塩を投与することを含む、方法。

【0036】

２８． ＣＳＣが、少なくとも１つの多剤耐性（ＭＤＲ）タンパク質を発現する、項目１～２７のいずれか１つに記載の方法。

【0037】

２９． ＣＳＣが、ＭＤＲ１及び／又はＡＢＣＢ５を発現する、項目２８に記載の方法。

【0038】

３０． がんが、乳がん、泌尿生殖器がん、膵臓がん、肺がん、甲状腺がん、腎臓がん、胃腸管がん、神経内分泌腫瘍、皮膚がん、脳がん、及び白血病である、項目１～２９のいずれか１つに記載の方法。

【0039】

３１． 泌尿生殖器がんが、卵巣がん、前立腺がん、子宮内膜がん、又は精巣がんである、項目３０に記載の方法。

【0040】

３２． 乳がんが、浸潤性乳管がん（ＩＤＣ）又はトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）である、項目３０に記載の方法。

【0041】

３３． 腎臓がんが、腎細胞がん（ＲＣＣ）である、項目３０に記載の方法。

【0042】

３４． 胃腸管がんが、大腸がんである、項目３０に記載の方法。

【0043】

３５． 皮膚がんが、黒色腫である、項目３０に記載の方法。

【0044】

３６． 脳がんが、神経膠腫である、項目３０に記載の方法。

【0045】

３７． 白血病が、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）である、項目３０に記載の方法。

【0046】

３８． がんが、乳がん、卵巣がん、膵臓がんである、項目３０に記載の方法。

【0047】

３９． コンジュゲート又はその塩の投与が、対象におけるＣＳＣの遊走を阻害する、項目１～３８のいずれか１つに記載の方法。

【0048】

４０． 方法が、対象に、１つ以上の追加の活性剤又は療法を投与することを更に含む、項目１～３９のいずれか１つに記載の方法。

【0049】

４１． １つ以上の追加の活性剤又は療法が、放射線療法、手術、化学療法剤、免疫療法、チェックポイント阻害剤、及び／又は細胞ベースの療法を含む、項目４０に記載の方法。

【0050】

４２． 対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）を含むがんを治療するための医薬品の調製のための、項目１～２４のいずれか１つに記載のコンジュゲート又はその塩の使用。

【0051】

４３． 対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連するがんの再発（ｒｅｌａｐｓｅ）又は再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）を予防又は治療するための医薬品の調製のための、項目１～２４のいずれか１つに記載のコンジュゲート又はその塩の使用。

【0052】

４４． 対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する予後不良のがんを治療するための医薬品の調製のための、項目１～２４のいずれか１つに記載のコンジュゲート又はその塩の使用。

【0053】

４５． 対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する切除不能な化学療法及び放射線療法に耐性のがんを治療するための医薬品の調製のための、項目１～２４のいずれか１つに記載のコンジュゲート又はその塩の使用。

【0054】

４６． 対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）を含むがんを治療するための、項目１～２４のいずれか１つに記載のコンジュゲート又はその塩の使用。

【0055】

４７． 対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連するがん再発（ｒｅｌａｐｓｅ）又は再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）を予防又は治療するための、項目１～２４のいずれか１つに記載のコンジュゲート又はその塩の使用。

【0056】

４８． 対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する予後不良のがんを治療するための、項目１～２４のいずれか１つに記載のコンジュゲート又はその塩の使用。

【0057】

４９． 対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する切除不能な化学療法及び放射線療法に耐性のがんを治療するための、項目１～２４のいずれか１つに記載のコンジュゲート又はその塩の使用。

【0058】

５０． ＣＳＣが、少なくとも１つの多剤耐性（ＭＤＲ）タンパク質を発現する、項目４２～４９のいずれか１つに記載の使用。

【0059】

５１． ＣＳＣが、ＭＤＲ１及び／又はＡＢＣＢ５を発現する、項目５０に記載の使用。

【0060】

５２． がんが、乳がん、泌尿生殖器がん、膵臓がん、肺がん、甲状腺がん、腎臓がん、胃腸管がん、神経内分泌腫瘍、皮膚がん、脳がん、及び白血病である、項目４２～５１のいずれか１つに記載の使用。

【0061】

５３． 泌尿生殖器がんが、卵巣がん、前立腺がん、子宮内膜がん、又は精巣がんである、項目５２に記載の使用。

【0062】

５４． 乳がんが、浸潤性乳管がん（ＩＤＣ）又はトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）である、項目５２に記載の使用。

【0063】

５５． 腎臓がんが、腎細胞がん（ＲＣＣ）である、項目５２に記載の使用。

【0064】

５６． 胃腸管がんが、大腸がんである、項目５２に記載の使用。

【0065】

５７． 皮膚がんが、黒色腫である、項目５２に記載の使用。

【0066】

５８． 脳がんが、神経膠腫である、項目５２に記載の使用。

【0067】

５９． 白血病が、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）である、項目５２に記載の使用。

【0068】

６０． がんが、乳がん、卵巣がん、膵臓がんである、項目５２に記載の使用。

【0069】

６１． 医薬品が、対象におけるＣＳＣの遊走を阻害する、項目４２～６０のいずれか１つに記載の使用。

【0070】

６２． 医薬品が、１つ以上の追加の活性剤又は療法とともに使用するためのものである、項目４２～６１のいずれか１つに記載の使用。

【0071】

６３． １つ以上の追加の活性剤又は療法が、放射線療法、手術、化学療法剤、免疫療法、チェックポイント阻害剤、及び／又は細胞ベースの療法を含む、項目６２に記載の使用。

【0072】

６４． 対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）を含むがんの治療に使用するための、項目１～２４のいずれか１つに記載のコンジュゲート又はその塩。

【0073】

６５． 対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連するがん再発（ｒｅｌａｐｓｅ）又は再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）の予防又は治療に使用するための、項目１～２４のいずれか１つに記載のコンジュゲート又はその塩。

【0074】

６６． 対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する予後不良のがんの治療に使用するための、項目１～２４のいずれか１つに記載のコンジュゲート又はその塩。

【0075】

６７． 対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する切除不能な化学療法及び放射線療法に耐性のがんの治療に使用するための、項目１～２４のいずれか１つに記載のコンジュゲート又はその塩。

【0076】

６８． ＣＳＣが、少なくとも１つの多剤耐性（ＭＤＲ）タンパク質を発現する、項目６４～６７のいずれか１つに記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【0077】

６９． ＣＳＣが、ＭＤＲ１及び／又はＡＢＣＢ５を発現する、項目６８に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【0078】

７０． がんが、乳がん、泌尿生殖器がん、膵臓がん、肺がん、甲状腺がん、腎臓がん、胃腸管がん、神経内分泌腫瘍、皮膚がん、脳がん、及び白血病である、項目６５～６９のいずれか１つに記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【0079】

７１． 泌尿生殖器がんが、卵巣がん、前立腺がん、子宮内膜がん、又は精巣がんである、項目７０に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【0080】

７２． 乳がんが、浸潤性乳管がん（ＩＤＣ）又はトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）である、項目７０に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【0081】

７３． 腎臓がんが、腎細胞がん（ＲＣＣ）である、項目７０に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【0082】

７４． 胃腸管がんが、大腸がんである、項目７０に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【0083】

７５． 皮膚がんが、黒色腫である、項目７０に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【0084】

７６． 脳がんが、神経膠腫である、項目７０に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【0085】

７７． 白血病が、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）である、項目７０に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【0086】

７８． がんが、乳がん、卵巣がん、又は膵臓がんである、項目７０に記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【0087】

７９． コンジュゲート又はその塩が、対象におけるＣＳＣの遊走を阻害する、項目６４～７８のいずれか１つに記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【0088】

３８０． コンジュゲート又はその塩が、１つ以上の追加の活性剤又は療法とともに使用するためのものである、項目６４～７９のいずれか１つに記載の使用のためのコンジュゲート又はその塩。

【0089】

８１． １つ以上の追加の活性剤又は療法が、放射線療法、手術、化学療法剤、免疫療法、チェックポイント阻害剤、及び／又は細胞ベースの療法を含む、項目８０に記載のコンジュゲート又はその塩。

【0090】

本開示の他の目的、利点、及び特徴は、添付の図面を参照して実施例としてのみ与えられる、その特定の実施形態の以下の非制限的な説明を読めばより明らかになるだろう。

【図面の簡単な説明】

【0091】

添付図面において、

【0092】

【図1A】ヒト乳房トリプルネガティブＭＤＡ－ＭＢ－２３１腫瘍細胞及び乳がん幹細胞（ｈＢＣＳＣ）によるソルチリン（ＳＯＲＴ１）の発現を示すウエスタンブロットの画像を示す。ヒトトリプルネガティブＢＣＳＣ及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ｌｕｃ細胞ホモジネート（２０μｇのタンパク質）をポリアクリルアミドゲル上で分離し、ＰＶＤＦ膜に電気転写した。ウエスタンブロッティングによって、膜上のソルチリンを、２つの異なる抗体で検出した（ＳＯＲＴ１＃１：ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＳＯＲＴ１＃２：Ａｂｃａｍ）。

【図1B】ｈＢＣＳＣによるＴＨ１９Ｐ０１－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８の内在化を示すグラフである。ｈＢＣＳＣを、２００ｎＭの蛍光標識ＴＨ１９Ｐ０１又はビヒクル単独を添加した培地に曝露した。細胞を２時間インキュベートし、洗浄し、トリプシン処理した後、細胞内に含まれる蛍光を、フローサイトメトリーによって測定した。示されるデータは、各々２回行われた、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３）を表す。統計的比較は、ｔ検定によって行われ、有意性をｐ＜０．０５と仮定した。三重のアスタリスクは、ｐ＜０．００１を示す。

【図2A-2B】ソルチリンリガンドの存在下での（図２Ａ）及びｓｉＲＮＡ媒介性ＳＯＲＴ１サイレンシング時の（図２Ｂ）、ｈＢＣＳＣによるＴＨ１９Ｐ０１－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８の内在化を示すグラフである。図２Ａ： 対照データとは、競合リガンドなしで、ＴＨ１９Ｐ０１－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８の存在下でインキュベートした細胞を指す。また、蛍光標識ＴＨ１９Ｐ０１の取り込みは、ソルチリンリガンド：１０μＭのニューロテンシン（ＮＴ）、５０μＭの非蛍光ＴＨ１９Ｐ０１、又は１ｎＭのプログラニュリン（ＰＧＲＮ）の追加の存在下でも行った。データは、一元配置ＡＮＯＶＡ、続いて対照蛍光に対するＴｕｋｅｙの多重比較検定によって比較した。有意性をｐ＜０．０５と仮定した。示されるデータは、２回行われた、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３アッセイ）を表す。二重のアスタリスクは、ｐ＜０．０１を示し、三重のアスタリスクは、ｐ＜０．００１を示す。図２Ｂ：蛍光ペプチドとのインキュベーションの前に、細胞をｓｉＲＮＡとプレインキュベートした。使用した２つのｓｉＲＮＡは、スクランブルした対照ｓｉＲＮＡ（ｓｉＳｃｒ）及びヒトソルチリンｍＲＮＡに対するｓｉＲＮＡ（ｓｉＳＯＲＴ１）であった。統計的有意性は、両側ｔ検定で評価し、有意性をｐ＜０．０５に事前に設定した。二重のアスタリスクは、ｐ＜０．０１を示す。示されるデータは、平均値±ＳＤ（ｎ＝２）を表す。

【図2C】ＴＨ１９Ｐ０１、プログラニュリン（ＰＧＲＮ）、ＫＢＰ２０１、ニューロテンシン（ＮＴ）、及びシステインペプチド（Ｎ末端又はＣ末端システインを付加したＴＨ１９Ｐ０１）の存在下でのｈＯｖＣＳＣによるＴＨ１９Ｐ０１－Ａｌｅｘａ４８８の取り込みを示すグラフである。ｈＯｖＣＳＣを、競合リガンド（１０μＭのニューロテンシン［ＮＴ］、５０μＭの非蛍光ＴＨ１９Ｐ０１、５０μＭのＴＨ２０Ｐ０１、又は１ｎＭのプログラニュリン［ＰＧＲＮ］）とともに、ＤＭＳＯ中２００ｎＭの蛍光標識されたＴＨ１９Ｐ０１、ＤＭＳＯ単独（ビヒクル）、又はＤＭＳＯ中２００ｎＭのＴＨ１９Ｐ０１のいずれかを添加した培地に曝露した。細胞を２時間インキュベートし、洗浄し、トリプシン処理した後、細胞内に含まれる蛍光を、フローサイトメトリーによって測定した。ビヒクル単独に関連する蛍光は、システムのバックグラウンド蛍光を反映する。示されるデータは、各々２回行われた、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝２）を表す。示されるように、ＴＨ１９Ｐ０１－Ａｌｅｘａ（商標）４８８単独とインキュベートした細胞と比較した取り込み阻害。

【図2D】蛍光ペプチドとのインキュベーションの前に、細胞をｓｉＲＮＡとプレインキュベートした。使用した２つのｓｉＲＮＡは、スクランブルした対照ｓｉＲＮＡ（ｓｉＳｃｒ）及びヒトソルチリンｍＲＮＡに対するｓｉＲＮＡ（ｓｉＳＯＲＴ１）であった。示されるデータは、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１）を表す。

【図3】ビヒクル（対照、ＤＭＳＯ）、ドセタキセル、又はＴＨ１９０２による処理後のｈＢＣＳＣを有するスライドの画像を示す。ｈＢＣＳＣの遊走能力を評価するために、スクラッチ（創傷治癒）アッセイを行った。細胞を有するスライドをスクラッチし、ビヒクル（ＤＭＳＯ）、２μＭのドセタキセル、又は１μＭのＴＨ１９０２（ドセタキセル含有量はドセタキセル処理と同等）で２時間処理した。次いで、細胞をリンスし、新鮮な完全な培地中でインキュベートした。スクラッチ後、４０倍の倍率で、０、２４及び４８時間での画像を取得した。１つの代表的な実験が示されている（ｎ＝３）。

【図4A】ビヒクル（対照、ＤＭＳＯ）、ドセタキセル、又はＴＨ１９０２による処理後のｈＢＣＳＣにおける経時的な総アポトーシスを示すグラフである。ｈＢＣＳＣを、ビヒクル（ＤＭＳＯ）、４μＭのドセタキセル、又は２μＭのＴＨ１９０２を含有する培地中で２時間処理し、次いで、完全培地中で２２時間、４８時間、又は７２時間インキュベートした。アポトーシスの程度は、細胞を回収した、次いで、アネキシンＶ－ＦＩＴＣ及びヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で染色した後、フローサイトメトリーを行うことによって決定した。データは、３つの異なる実験から得られ、平均値＋／－ＳＥＭとして表した。統計分析は、Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定を伴う一元配置分散分析を使用して行った（＊は、ｐ＜０．０５を意味し、＊＊＊は、ＴＨ１９０２と対照条件との間の差についてｐ＜０．００１を意味する）。

【図4B】ビヒクル（対照、ＤＭＳＯ）、ドセタキセル、又はＴＨ１９０２で処理した後のｈＢＣＳＣの共焦点顕微鏡画像を示す。ｈＢＣＳＣを、ビヒクル（ＤＭＳＯ）、４μＭのドセタキセル、又は２μＭのＴＨ１９０２を含有する培地中で２時間処理し、次いで、完全培地中で４８時間インキュベートした。処理した細胞を固定し、ＤＮＡをＤＡＰＩで染色した後、共焦点顕微鏡によって撮像した。矢印は、核の断片化の例を示す。

【図4C-4D】ビヒクル（対照、ＤＭＳＯ）、ドセタキセル、又はＴＨ１９０２による処理後、抗α－チューブリン抗体で染色したｈＢＣＳＣの共焦点顕微鏡画像である。ｈＢＣＳＣを、図４Ｂについて記載したように処理した。チューブリンに対するドセタキセル及びＴＨ１９０２の効果を、固定及び抗α－チューブリン抗体による免疫染色の後、処理された細胞において評価した。次いで、細胞を、共焦点顕微鏡を使用して可視化した。各条件からの代表的な画像は、積層した平面（ｎ＝１）として表示されている。図４Ｄは、図４Ｃに示されるが、単一の焦点面（細胞の中央）に表示されている試料に対応する。

【図5A-5D】ｈＢＣＳＣ及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ｌｕｃ腫瘍細胞のＧ２／Ｍ細胞周期停止に対するドセタキセル又はＴＨ１９０２の効果を示すフローサイトメトリープロット（図５Ａ及び図５Ｃ）並びにグラフ（図５Ｂ及び図５Ｄ）である。ｈＢＣＳＣ及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ｌｕｃ細胞をビヒクル（ＤＭＳＯ）、４μＭのドセタキセル、又は２μＭのＴＨ１９０２で２時間処理し、次いで、新鮮な完全培地中で２２時間又は４８時間インキュベートした。各細胞株のＤＮＡ含有量を、ＦｘＣｙｃｌｅ（商標）ＰＩ／ＲＮａｓｅ染色液を使用して、フローサイトメトリーによって分析した。実験を少なくとも３回繰り返し、代表的なデータを、ｈＢＣＳＣについて図５Ａに示し、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ｌｕｃ細胞について図５Ｃに示す。図５Ａ：異なる処理下のＧ２／Ｍ期におけるｈＢＣＳＣのパーセンテージを示す代表的なフローサイトメトリー取得プロット。図５Ｂ：様々な処理（対照のｘ倍）の後のＧ２／Ｍ細胞周期におけるｈＢＣＳＣの相対頻度を示すグラフ。データは、３つの異なる実験からの平均値＋／－ＳＥＭとして表されている。統計分析は、Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定を伴う一元配置分散分析を使用して行った（＊＊＊は、ＴＨ１９０２と対照条件との間の差についてｐ＜０．００１を意味する）。図５Ｃ：異なる処理下でのＧ２／Ｍ期におけるＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ｌｕｃ細胞のパーセンテージを示す代表的なフローサイトメトリー取得プロット。図５Ｄ：様々な処理（対照のｘ倍）の後のＧ２／Ｍ細胞周期におけるＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ｌｕｃ細胞の相対頻度を示すグラフ。データは、２つの異なる実験からの平均値＋／－ＳＥＭとして表されている。

【図6A】ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／Ｌｕｃ、ｈＢＣＳＣ、及びイヌＭＤＣＫ－ＭＤＲ１細胞におけるＭＤＲ１（別名、Ｐ－ｇｐ、ＡＢＣＢ１）及びＡＢＣＢ５タンパク質のレベルの発現を示すウエスタンブロットの画像を示す。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／Ｌｕｃ、ｈＢＣＳＣ、及びイヌＭＤＣＫ－ＭＤＲ１細胞からのホモジネート（２０μｇのタンパク質）を、ポリアクリルアミドゲル上で分離し、ＰＶＤＦ膜に電気転写した。ウエスタンブロッティングによって膜上の特異的抗体でＭＤＲ１及びＡＢＣＢ５を検出した。図６Ｂ～図６Ｄについて、ｈＢＣＳＣ細胞を、±１０μＭのＣｓＡ（ｎ＝４）又は１０μＭのＰＳＣ－８３３（ｎ＝３）と３０分間プレインキュベートした。次いで、細胞を、ビヒクル（対照、ＤＭＳＯ）、４μＭのドセタキセル、又は２μＭのＴＨ１９０２と２時間インキュベートした。次いで、培地を、１０μＭのＣｓＡ又はＰＳＣ－８３３を含有又は欠損する新鮮な培地に交換した。細胞を２２時間インキュベートした後、ＦｘＣｙｃｌｅ（商標）ＰＩ／ＲＮａｓｅ染色液で染色し、続いて、フローサイトメトリーによって分析した。示される値は、少なくとも３つの異なる実験からの平均値±ＳＥＭを表す。統計分析は、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉの多重比較検定を使用して行った（＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）。図６Ｂ：各条件についての代表的なフローサイトメトリー取得プロット。図６Ｃ：ドセタキセルによる治療後のＧ２／Ｍ期におけるｈＢＣＳＣの相対頻度を表すグラフ。図６Ｄ：ＴＨ１９０２での処理後のＧ２／Ｍ期におけるｈＢＣＳＣの相対頻度を表すグラフ。

【図7A】（Ｍａｔｒｉｇｅｌあり又はなしで）ｈＢＣＳＣの移植後のマウスにおける経時的な腫瘍進行を示すグラフである。１０³個のヒトＴＮＢＣ由来のがん幹細胞様細胞（ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ－ｌｉｋｅ ｃｅｌｌ）を免疫不全マウスに皮下注射し、腫瘍体積を最大２３～２８日間監視した。

【図7B】Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）を用いたヒト卵巣がん幹細胞（ｈＯｖＣＳＣ）の移植後のマウスにおける経時的な腫瘍進行を示すグラフである。１０³個のヒト卵巣がん由来のがん幹細胞様細胞を免疫不全マウスに皮下注射し、腫瘍体積を最大２３～２８日間監視した。

【図7C】Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）を用いたヒト膵臓がん幹細胞（ｈＰＣＳＣ）の移植後のマウスにおける経時的な腫瘍進行を示すグラフである。１０³個のヒト膵臓がん由来のがん幹細胞様細胞を免疫不全マウスに皮下注射し、腫瘍体積を最大２３～２８日間監視した。

【図7D】ヒト乳房ＣＳＣ、ヒト膵臓ＣＳＣ、及びヒト卵巣ＣＳＣによる、多剤タンパク質ＡＢＣＢ５及びＰｇｐ、並びにソルチリン（細胞内）の発現を示すウエスタンブロットである。

【図7E】ヒト膵臓ＣＳＣ及び卵巣ＣＳＣによるＰｇｐ及びソルチリンの発現を示すウエスタンブロットである。β－アクチンの発現を、対照として使用した。

【図8A-8C】ドセタキセル又はＴＨ１９０２の投与後のマウス内のｈＢＣＳＣ異種移植片の増殖を示す。図８Ａ：免疫不全マウス内のｈＢＣＳＣ異種移植片の皮下移植後２日目に、動物に、ビヒクル、又は３．７５ｍｇ／ｋｇ（最大耐容用量（ＭＴＤ）の１／４に対応する）のドセタキセル、１５ｍｇ／ｋｇ（ＭＴＤに対応する）のドセタキセル、８．７５ｍｇ／ｋｇのＴＨ１９０２（ドセタキセルＭＴＤの１／４に等しい）（ＴＨ１９０２ １／４）、及び３５ｍｇ／ｋｇのＴＨ１９０２（ドセタキセルＭＴＤに等しい）（ＴＨ１９０２）を含有するビヒクルを、毎週投与し始めた。試験物品の投与が腫瘍増殖に及ぼす影響を監視するために、腫瘍サイズを定期的に手動で測定した。記号は、平均値±標準誤差を表す（ｎ＝６）。１５ｍｇ／ｋｇのドセタキセル曲線と８．７５ｍｇ／ｋｇのＴＨ１９０２曲線との間に事実上の重複があることに留意されたい。横軸の下に表示されている記号は、処置が行われた日を示す。また、ドセタキセル（１５ｍｇ／ｋｇ）は、組み合わせた量がマウスにおけるドセタキセルのＭＴＤと一致するため、３回のみ投与されたことに留意されたい。図８Ｂ：ドセタキセル又はＴＨ１９０２による処置後の腫瘍体積の比較。ｈＢＣＳＣの異なる処置間の統計的比較は、処置の最初の日と実験の最後の日との間の腫瘍サイズの変化を計算することによって行われた。サイズを、一元配置ＡＮＯＶＡによって比較し、各治療に関連する腫瘍サイズの平均値を、Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較試験を使用して、ビヒクル処置動物の腫瘍サイズと比較した。有意水準をｐ＜０．０５に事前に設定した。横軸に沿って列挙された処置は、括弧内に列挙された使用した濃度（ｍｇ／ｋｇ）とともに処置を特定する。ｎｓ：有意差なし、＊Ｐ＜０．０５、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、ｎ＝６。図８Ｃは、図８Ａに記載される研究における、経時的なマウス体重の変化を示すグラフである。マウスの体重を日常的に記録し、罹患率の大まかな推定値として考慮した。データは、処置開始時の動物の体重のパーセンテージとしてここに示されている。記号は、平均値±標準誤差を表す（ｎ＝６マウス／群）。横軸の下に表示されている記号は、処置が行われた日を示す。

【図9A-9C】マウスにおけるｈＢＣＳＣ異種移植片の増殖に対するドセタキセル及びＴＨ１９０２用量の増加の効果を示す。図９Ａ：免疫不全マウス（１群当たりｎ＝６匹のマウス）内のｈＢＣＳＣ異種移植片の皮下移植後３日目に、動物に、ビヒクル、又は１５ｍｇ／ｋｇ（ＭＴＤに対応する）のドセタキセル（ドセタキセル）、３５ｍｇ／ｋｇ（ドセタキセルＭＴＤに等しい）のＴＨ１９０２（１当量のＴＨ１９０２）、４３．７５ｍｇ／ｋｇ（１．２５ドセタキセルＭＴＤに等しい）のＴＨ１９０２（１．２５当量のＴＨ１９０２）、及び５２．５ｍｇ／ｋｇ（１．５ドセタキセルＭＴＤに等しい）のＴＨ１９０２（１．５当量のＴＨ１９０２）を含有するビヒクルを、毎週投与し始めた。試験物品の投与が腫瘍増殖に及ぼす影響を監視するために、腫瘍サイズを定期的に手動で測定した。記号は、平均値±ＳＥＭを表す。横軸の下に表示されている記号は、処置が行われた日を示す。図９Ｂ：ドセタキセル又はＴＨ１９０２による処置後の腫瘍体積の比較。ｈＢＣＳＣの異なる処置間の統計的比較は、処置の最初の日と実験の最後の日との間の腫瘍サイズの変化を計算することによって行われた。サイズを、一元配置ＡＮＯＶＡによって比較し、各治療に関連する腫瘍サイズの平均値を、Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較試験を使用して、ビヒクル処置動物の腫瘍サイズと比較した。有意水準をｐ＜０．０５に事前に設定した。横軸に沿って列挙された処置は、カッコに列挙された使用した濃度（ｍｇ／ｋｇ）とともに処置を特定する。一元配置ＡＮＯＶＡ、ｔｕｒｋｅｙの多重比較検定分析。ｎｓ：有意差なし、＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、ＴＨ１９０２ ５２．５ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝５）を除いて１群当たりｎ＝６。図９Ｃは、図９Ａに記載される研究における、経時的なマウス体重の変化を示すグラフである。マウスの体重を日常的に記録し、罹患率の大まかな推定値として考慮した。データは、処置開始時の動物の体重のパーセンテージとしてここに示されている。記号は、平均値±標準誤差を表す（ｎ＝６マウス／群）。横軸の下に表示されている記号は、処置が行われた日を示す。

【図10A-10C】マウスにおけるｈＯｖＣＳＣ異種移植片の増殖に対するドセタキセル及びＴＨ１９０２用量の増加の効果を示す。図１０Ａ：ヌードマウス（１群当たりｎ＝５～６匹のマウス）内のｈＯｖＣＳＣ異種移植片の皮下移植後３日目に、動物に、ビヒクル、又は１５ｍｇ／ｋｇ（ＭＴＤに対応する）のドセタキセル（ドセタキセル）、３５ｍｇ／ｋｇ（ドセタキセルＭＴＤに等しい）のＴＨ１９０２（１当量のＴＨ１９０２）、４３．７５ｍｇ／ｋｇ（１．２５ドセタキセルＭＴＤに等しい）のＴＨ１９０２（１．２５当量のＴＨ１９０２）、及び５２．５ｍｇ／ｋｇ（１．５ドセタキセルＭＴＤに等しい）のＴＨ１９０２（１．５当量のＴＨ１９０２）を含有するビヒクルを毎週投与し始めた。試験物品の投与が腫瘍増殖に及ぼす影響を監視するために、腫瘍サイズを定期的に手動で測定した。記号は、平均値±ＳＥＭを表す。横軸の下に表示されている記号は、処置が行われた日を示す。図１０Ｂ：ドセタキセル又はＴＨ１９０２による処置後の腫瘍体積の比較。ｈＯｖＣＳＣの異なる処置間の統計的比較は、処置の最初の日と実験の最後の日との間の腫瘍サイズの変化を計算することによって行われた。サイズを、一元配置ＡＮＯＶＡによって比較し、各治療に関連する腫瘍サイズの平均値を、Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較試験を使用して、ビヒクル処置動物の腫瘍サイズと比較した。有意水準をｐ＜０．０５に事前に設定した。横軸に沿って列挙された処置は、カッコに列挙された使用した濃度（ｍｇ／ｋｇ）とともに処置を特定する。一元配置ＡＮＯＶＡ、ｔｕｒｋｅｙの多重比較検定分析。＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。図１０Ｃは、図１０Ａに記載される研究における、経時的なマウス体重の変化を示すグラフである。マウスの体重を日常的に記録し、罹患率の大まかな推定値として考慮した。データは、処置開始時の動物の体重のパーセンテージとしてここに示されている。記号は、平均値±標準誤差を表す（ｎ＝５又は６マウス／群）。横軸の下に表示されている記号は、処置が行われた日を示す。

【図11A-11B】マウスにおけるｈＯｖＣＳＣ異種移植片の増殖に対する、単独又は組み合わせて使用したドセタキセル、パクリタキセル、ＴＨ１９０２、又はカルボプラチンの効果を示す。ｈＯＣＳＣ異種移植片を有するマウス群に、カルボプラチンの腹腔内注射の有無で、ドセタキセル、ＴＨ１９０２、又はパクリタキセルを静脈内に投与した。図１１Ａは、経時的な腫瘍増殖を示すグラフである。横軸の下に示される丸は、処置が投与された日を示す。記号は、平均値±ＳＥＭを表す（全ての群についてｎ＝６）。図１１Ｂは、処置後の腫瘍サイズの比較を示すグラフである。１８日目（実験の最終日）に、全ての動物について腫瘍サイズを測定し、これらのサイズを、異なる処置を受けた群間で比較した。統計的比較は、一元配置ＡＮＯＶＡ、続いて、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定を使用して行った。統計的有意性をｐ＜０．０５に事前に設定した。＊はｐ＜０．０５を示し、＊＊はｐ＜０．０１を示し、＊＊＊はｐ＜０．００１を示し、＊＊＊＊はｐ＜０．０００１を示す（全ての群についてｎ＝６）。ボックスの端は、データセットの下半分と上半分の中央値を表し、ひげは、各セットの最小値と最大値を示す。ボックス内の垂直線は、そのセットについての中央値を示す。図でマークされていない対比較は、統計的に有意ではなかった。

【発明を実施するための形態】

【0093】

技術を説明する文脈において（特に、以下の特許請求の範囲の文脈において）、「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」という用語、並びに同様の指示対象の使用は、本明細書において別段示されないか、又は文脈に明らか矛盾しない限り、単数形及び複数形の両方を網羅するように解釈されるものである。

【0094】

「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「含有する」という用語は、別段注釈が付かない限り、オープンエンド用語（すなわち、「含むが、それに限定されない」を意味する）として解釈されるものである。

【0095】

本明細書に記載される全ての方法は、本明細書中で別段の指示がない限り、又は文脈によって明らかに矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施され得る。

【0096】

本明細書に提供される任意の及び全ての実施例、又は例示的な言語（「例えば」、「など」）の使用は、単に特許請求される技術の実施形態をより良好に例示することを意図しており、別段特許請求されない限り、範囲の限定を提起するものではない。

【0097】

本明細書におけるいかなる言語も、任意の特許請求されていない要素を特許請求される技術の実施形態の実施に不可欠であることを示すものとして解釈されるべきではない。

【0098】

本明細書では、「約」という用語は、その通常の意味を有する。「約」という用語は、値が、値を判定するために用いられるデバイス若しくは方法の誤差についての固有の変動を含むか、又は列挙された値に近い値、例えば、列挙された値（又は値の範囲）の１０％以内の値を包含することを示すために使用される。

【0099】

本明細書における値の範囲の言及は、本明細書中に別段の指示がない限り、単に、範囲に含まれる各個別の値を個々に参照する簡略方法として機能することを意図しており、各個別の値は本明細書に個別に言及されているかのように、本明細書に組み込まれる。範囲内の値の全てのサブセットもまた、本明細書に個々に列挙されているかのように本明細書に組み込まれる。

【0100】

開示の特徴又は態様が、マーカッシュ群又は代替物の一覧の観点から説明される場合、当業者は、開示がまた、それによってマーカッシュ群又は代替物の一覧の任意の個々の構成要素又は構成要素の部分群の観点からも説明されることを認識するであろう。

【0101】

別段具体的に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般的に理解される意味（例えば、幹細胞生物学、細胞培養、分子遺伝学、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学、及び生化学における）と同じ意味を有すると解釈されるべきである。

【0102】

別段示されない限り、本開示において利用される組換えタンパク質、細胞培養、及び免疫学的技法は、当業者に周知の標準的な手順である。そのような技術は、Ｊ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９８４）、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）、Ｔ．Ａ．Ｂｒｏｗｎ（編），Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ １ ａｎｄ ２，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９１）、Ｄ．Ｍ．Ｇｌｏｖｅｒ ａｎｄ Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ（編），ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅｓ １－４，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９５ ａｎｄ １９９６）、及びＦ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（編），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在に至るまでの全ての改訂版を含む）、Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（編）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，（１９８８）、及びＪ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（編）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（現在に至るまでの全ての改訂版を含む）などの情報源における文献全体を通じて記載及び説明されている。

【0103】

本明細書に記載されるものは、がん幹細胞（ＣＳＣ）を標的とするための生成物、方法、及びそれらの使用である。ＣＳＣは、Ｇ０期で停止し、新たな腫瘍を生じさせる能力を通して、がんの再発、転移、多剤耐性、及び放射線耐性と関連している。固形腫瘍は、発生の異なる段階で異なる表現型の特徴を有し、様々な増殖能力を有する、不均一な細胞集団から構成されている。ＣＳＣは、自己再生し、腫瘍を構成するがん細胞の不均一な系統を形成する排他的能力を有する自立細胞のリザーバを確立する、がんの微小環境及びニッチ内のがん細胞の小さな亜集団として定義されている。高レベルの循環がん幹細胞様細胞（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ－ｌｉｋｅ ｃｅｌｌ）（ｃＣＳＣ）は、化学療法に対するより低い腫瘍応答率、及び乳がん患者におけるより低い全生存率及び無増悪生存率と関連している（Ｌｅｅ，ＣＨ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ １９，１１６７（２０１９））。同様に、診断時の高い幹細胞頻度は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）患者において、化学療法に対するより低い応答及び再発、ひいてはより低い生存率と相関する（ｖａｎ Ｒｈｅｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００５ Ｓｅｐ １５；１１（１８）：６５２０－７、Ｗｉｔｔｅ ＫＥ ｅｔ ａｌ．，Ｐｅｄｉａｔｒ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ．２０１１ Ｍａｒ；２８（２）：９１－９）。高頻度のＣＳＣは、黒色腫におけるより高い転移可能性及びより悪い予後と相関する（Ｃｉｖｅｎｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１１ Ａｐｒ １５；７１（８）：３０９８－１０９）。

【0104】

本明細書で提示される結果は、トリプルネガティブヒト乳がん幹細胞（ｈＢＣＳＣ）が、ソルチリン受容体を発現し、そのような細胞は、ＭＤＲ１及びＡＢＣＢ５などの多剤耐性タンパク質の発現に起因して、ドセタキセル単独による処置に耐性であるが、ｈＢＣＳＣによるドセタキセルのソルチリン媒介性取り込みを可能にするペプチド化合物にコンジュゲートされたドセタキセルに感受性であることを示す。このコンジュゲートは、侵襲性トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）のマウスモデルにおいて、がんの再発を予防することも示された。ＣＳＣは、がんの再発、転移、多剤耐性、及び放射線耐性に関連しているため、これらの結果は、ソルチリン発現ＣＳＣを標的とするペプチド化合物にコンジュゲートされた抗腫瘍剤（例えば、化学療法剤）を含むコンジュゲートが、標準的な抗腫瘍療法に抵抗性の予後不良のがんの治療に使用され得、がんの再発（ｒｅｌａｐｓｅ）又は再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）を予防又は治療し得るという証拠を提供する。

【0105】

したがって、ある態様において、本開示は、対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）を含む、がんを治療するための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に定義されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む。本開示はまた、対象におけるソルチリン発現ＣＳＣを含むがんを治療するための、又は対象におけるソルチリン発現ＣＳＣを含むがんを治療するための医薬品の製造若しくは調製のための、本明細書に定義されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。本開示はまた、対象におけるソルチリン発現ＣＳＣを含むがんの治療に使用するための、本明細書に定義されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【0106】

別の態様において、本開示は、がん患者におけるソルチリン発現ＣＳＣを低減又は除去するための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に定義されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む。本開示はまた、がん患者におけるソルチリン発現ＣＳＣを低減若しくは除去するための、又はがん患者におけるソルチリン発現ＣＳＣを低減若しくは除去するための医薬品の製造若しくは調製のための、本明細書に定義されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。本開示はまた、がん患者におけるソルチリン発現ＣＳＣの低減又は除去に使用するための、本明細書に定義されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【0107】

別の態様において、本開示は、対象におけるソルチリン発現ＣＳＣの存在に関連するがんの再発（ｒｅｌａｐｓｅ）又は再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）を予防又は治療する方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に定義されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む。本開示はまた、対象におけるソルチリン発現ＣＳＣの存在に関連するがん再発若しくは再発を予防若しくは治療するための、又は対象におけるソルチリン発現ＣＳＣの存在に関連するがんの再発若しくは再発を予防若しくは治療するための医薬品の製造若しくは調製のための、本明細書に定義されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。本開示はまた、対象におけるソルチリン発現ＣＳＣの存在に関連するがんの再発（ｒｅｌａｐｓｅ）又は再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）の予防又は治療に使用するための、本明細書に定義されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。ある実施形態において、コンジュゲート化合物又はその塩は、がんの再発（ｒｅｌａｐｓｅ）又は再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）を予防する。ある実施形態において、コンジュゲート化合物又はその塩は、がんの再発（ｒｅｌａｐｓｅ）又は再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）を低減する。ある実施形態において、コンジュゲート化合物又はその塩は、がんの再発（ｒｅｌａｐｓｅ）又は再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）を治療する（すなわち、再発がんを治療する）。

【0108】

本開示はまた、対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する予後不良のがんを治療するための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に定義されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む。本開示はまた、対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する予後不良のがんを治療するための、又は対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する予後不良のがんを治療するための医薬品の製造若しくは調製のための、本明細書に定義されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。本開示はまた、対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する予後不良のがんの治療に使用するための、本明細書に定義されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【0109】

別の態様において、本開示はまた、対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する切除不能な化学療法及び放射線療法に耐性のがんを治療するための方法を提供し、本方法は、対象に、有効量の本明細書に定義されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む。本開示はまた、対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する切除不能な化学療法及び放射線療法に耐性のがんを治療するための、又は対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する切除不能な化学療法及び放射線療法に耐性のがんを治療するための医薬品の製造若しくは調製のための、本明細書に定義されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容される塩の使用を提供する。本開示はまた、対象におけるソルチリン発現がん幹細胞（ＣＳＣ）の存在に関連する切除不能な化学療法及び放射線療法に耐性のがんの治療に使用するための、本明細書に定義されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容される塩を提供する。

【0110】

本明細書で使用される「ソルチリン」又は「ソルチリン受容体」という用語は、Ｖａｃｕｏｌａｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｏｒｔｉｎｇ １０タンパク質（Ｖｐｓ１０）受容体ファミリー二属する、ＳＯＲＴ１遺伝子によってコードされるニューロン１型膜糖タンパク質を指す。ソルチリン（ニューロテンシン受容体３としても知られている、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受入番号Ｑ９９５２３）は、例えば、卵巣がん、乳がん、結腸がん、及び前立腺がんを含むいくつかのがんにおいて発現又は過剰発現される。コードされたプレプロタンパク質（残基３４～８３１、シグナルペプチドに対応する残基１～３３）は、アミノ酸７７の後、フーリン（又は他の相同プロテアーゼ）によってタンパク質分解的にプロセシングされ、約１００～１１０ｋＤａの分子量を有する成熟受容体（残基７８～８３１）を生成する。本明細書で参照されるソルチリンのアミノ酸残基は、全長形態（すなわち、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受入番号Ｑ９９５２３）における位置に対応する。

【0111】

本明細書で使用される「がん幹細胞」（ＣＳＣ）という用語は、固形腫瘍又は血液がん内に見出されるがん細胞の亜集団を指し、腫瘍形成を駆動し、正常な幹細胞に関連する特徴（具体的には、自己再生及び複数の腫瘍細胞型への分化の能力）を有する。ＣＳＣは、化学療法（多剤耐性）及び放射線療法に対する耐性を示し、がんの再発及び転移に関連していることが示されている。がん幹細胞は、特定のマーカーを発現する細胞を包含する。様々な種類のがんにおけるＣＳＣのマーカーの例は、以下の表１に示されている（例えば、Ｗａｌｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，「Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ－Ｏｒｉｇｉｎｓ ａｎｄ Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ：Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｆｏｒ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ”」，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０２０；１１：１２８０、Ｓｕｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，「Ｐｒｅｓｅｎｃｅ ａｎｄ ｒｏｌｅ ｏｆ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ」，Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ．２０１９ Ｊｕｌ ２６；１１（７）：３８３－３９７を参照されたい）。

【表3】

【0112】

ＣＳＣは、多剤耐性（ＭＤＲ）タンパク質（ＭＲＰ）を発現又は過剰発現することも知られている。ＭＲＰは、ＡＴＰ駆動エネルギーを使用して濃度勾配に対して広範囲の抗がん薬を流出させるＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）トランスポーターと呼ばれるタンパク質群のＣファミリーのメンバーである。最も一般的なＭＲＰは、ＡＢＣサブファミリーＣメンバー１（ＡＢＣＣ１／ＭＲＰ１）、ＡＢＣサブファミリーＣメンバー２（ＡＢＣＣ２／ＭＲＰ２）、ＡＢＣサブファミリーＣメンバー３（ＡＢＣＣ３／ＭＲＰ３）、ＡＢＣサブファミリーＣメンバー４（ＡＢＣＣ４／ＭＲＰ４）、ＡＢＣサブファミリーＣメンバー５（ＡＢＣＣ５／ＭＲＰ５）、ＡＢＣサブファミリーＣメンバー６（ＡＢＣＣ６／ＭＲＰ６）、ＡＢＣサブファミリーＣメンバー１０（ＡＢＣＣ１０／ＭＲＰ７）、ＡＢＣサブファミリーＣメンバー１１（ＡＢＣＣ１１／ＭＲＰ８）、ＡＢＣサブファミリーＣメンバー１２（ＡＢＣＣ１２／ＭＲＰ９）、ＡＢＣサブファミリーＢメンバー１（ＡＢＣＢ１、Ｐ－糖タンパク質（Ｐ－ｇｐ）としても知られる）、ＡＢＣサブファミリーＢメンバー５（ＡＢＣＢ５）、及びＡＢＣサブファミリーＧメンバー２（ＡＢＣＧ２）である。

【0113】

したがって、ある実施形態において、本明細書に定義される方法及び使用は、表１に列挙された１つ以上のマーカー及び／又は１つ以上のＭＲＰ（例えば、上に列挙された１つ以上のＭＲＰ）を発現するＣＳＣの増殖及び／又は死滅を阻害することを目的とする。ある実施形態において、ＣＳＣは、以下のマーカーのうちの少なくとも１つを発現する：ＣＤ１３３、ＣＤ４４、ＳＳＥＡ３／４、ＡＬＤＨ、及びＯｃｔ４。ある実施形態において、ＣＳＣは、ＣＤ１３３及び／又はＣＤ４４を発現する。ある実施形態において、ＣＳＣは、ＣＤ１３３、ＣＤ４４、ＳＳＥＡ３／４、及びＯｃｔ４を発現する。ある実施形態において、ＣＳＣは、Ｎｅｓｔｉｎ、Ｓｏｘ２、Ｎａｎｏｇ、ｃＫｉｔ、及び／又はＬｉｎ２８を発現する。別の実施形態において、ＣＳＣは、ＡＢＣＢ５を発現する。別の実施形態において、ＣＳＣは、ＡＢＣＢ５及びＰ－ｇｐを発現する。更なる実施形態において、ＣＳＣは、ＣＤ１３３及びＡＢＣＢ５を発現する。

【0114】

本明細書で使用される「ソルチリン陽性がん幹細胞」（又は「ソルチリン発現がん幹細胞」）という用語は、ＣＳＣの少なくとも一部（例えば、少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、又は９０％）が、天然のソルチリン受容体を発現又は過剰発現するＣＳＣの集団を指す。ある実施形態において、ソルチリン陽性ＣＳＣは、乳房ＣＳＣ（例えば、浸潤性乳管がん（ＩＤＣ）、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）からのＣＳＣ）、泌尿生殖器ＣＳＣ（例えば、卵巣がん、前立腺がん、子宮内膜がん、精巣がん、尿路上皮がん、又は子宮頸がんからのＣＳＣ）、頭頸部ＣＳＣ、膵臓ＣＳＣ、肺ＣＳＣ、甲状腺ＣＳＣ、腎臓ＣＳＣ（例えば、腎細胞がん（ＲＣＣ）からのＣＳＣ）、胃腸管ＣＳＣ（例えば、大腸がん、胃がんからのＣＳＣ）、神経内分泌ＣＳＣ（カルチノイドなどのＮＥＴからのＣＳＣ）、皮膚ＣＳＣ（黒色腫からのＣＳＣ）、脳ＣＳＣ（例えば、神経膠腫ＣＳＣ）、神経芽腫ＣＳＣ、及び白血病ＣＳＣ（例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病からのＣＳＣ、Ｂ－ＣＬＬ）である（例えば、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ．２００５ Ｄｅｃ；４（１２）：１９２０－３２、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｒｏｔｅｉｎａｔｌａｓ．ｏｒｇのヒトタンパク質アトラスを参照されたい）。ある実施形態において、ソルチリン陽性ＣＳＣは、乳房ＣＳＣ、例えば、ＴＮＢＣ ＣＳＣ（例えば、トリプルネガティブＩＤＣ ＣＳＣ）である。別の実施形態において、ソルチリン陽性ＣＳＣは、泌尿生殖器ＣＳＣである。更なる実施形態において、泌尿生殖器ＣＳＣは、卵巣ＣＳＣである。別の実施形態において、泌尿生殖器ＣＳＣは、前立腺ＣＳＣである。別の実施形態において、ソルチリン陽性ＣＳＣは、肺ＣＳＣである。別の実施形態において、ソルチリン陽性ＣＳＣは、膵臓ＣＳＣである。別の実施形態において、ソルチリン陽性ＣＳＣは、大腸ＣＳＣである。別の実施形態において、ソルチリン陽性ＣＳＣは、皮膚ＣＳＣ、例えば、黒色腫ＣＳＣである。

【0115】

したがって、実施形態において、ソルチリン発現ＣＳＣを含むがんは、乳がん（例えば、浸潤性乳管がん（ＩＤＣ）、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ））、泌尿生殖器がん（例えば、卵巣がん、前立腺がん、子宮内膜がん、精巣がん、尿路上皮がん、子宮頸がん）、頭頸部がん、膵臓がん、肺がん、甲状腺がん、腎臓がん（例えば、腎細胞がん（ＲＣＣ））、胃腸管がん（例えば、大腸がん、胃がん）、神経内分泌腫瘍（カルチノイドなどのＮＥＴ）、皮膚がん（黒色腫）、脳がん（例えば、神経膠腫）、神経芽腫、及び白血病（例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病、Ｂ－ＣＬＬ）である（例えば、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ．２００５ Ｄｅｃ；４（１２）：１９２０－３２、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｒｏｔｅｉｎａｔｌａｓ．ｏｒｇのヒトタンパク質アトラスを参照されたい）。ある実施形態において、ソルチリン発現ＣＳＣを含むがんは、乳がん、例えば、ＴＮＢＣ（例えば、トリプルネガティブＩＤＣ）である。別の実施形態において、ソルチリン発現ＣＳＣを含むがんは、泌尿生殖器がんである。更なる実施形態において、泌尿生殖器がんは、卵巣がんである。別の実施形態において、泌尿生殖器がんは、前立腺がんである。別の実施形態において、ソルチリン発現ＣＳＣを含むがんは、肺がんである。別の実施形態において、ソルチリン発現ＣＳＣを含むがんは、膵臓がんである。別の実施形態において、ソルチリン発現ＣＳＣを含むがんは、大腸がんである。別の実施形態において、ソルチリン発現ＣＳＣを含むがんは、皮膚がん、例えば、黒色腫である。

【0116】

ある実施形態において、がんは、再発がんである。「がん再発（ｃａｎｃｅｒ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）」及び「がん再発（ｃａｎｃｅｒ ｒｅｌａｐｓｅ）」という用語は、本明細書において互換的に使用され得、治療後及びがんが検出され得ない期間後のがんの再発を指す。別の言い方をすれば、疾患のない期間後にがんが再発することを意味する。

【0117】

本明細書で使用される「予後不良のがん」という用語は、同じがんの他のサブタイプと比較して、より低い生存率（例えば、５年又は１０年生存率）に関連する所与のがんのサブタイプを指す。予後不良のがんは、一般に、がんサブタイプの特定の特徴、例えば、特定の変異の存在、染色体異常などに関連しており、それらは治療に対してより耐性をもたらす。予後不良は、後の段階で診断されたがん（例えば、遠隔転移）にも関連する。また、上記のように、ＣＳＣの頻度が高いことは、いくつかのがんにおいて治療への応答が乏しく、生存率がより低いことと相関していることが示されている。例えば、乳がんの場合、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）は、他の乳がんサブタイプと比較して、より低い５年相対生存率に関連するため、予後不良の乳がんとみなされる。また、高レベルの循環がん幹細胞様細胞（ｃＣＳＣ）は、化学療法に対するより低い腫瘍応答率、及び乳がん患者におけるより低い全生存率及び無増悪生存率と関連している（Ｌｅｅ，ＣＨ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ １９，１１６７（２０１９））。卵巣がんについては、浸潤性上皮性卵巣がん及び卵管がんは、概して、卵巣間質腫瘍及び生殖細胞腫瘍と比較して、より低い５年相対生存率に関連している。膵臓がんの５年全生存率は非常に低い（約３％）。これは、患者の半数以上が進行期で診断されているためである。ステージＩＩＩ／ＩＶ（遠隔転移を伴う）での膵臓がんの診断は、非常な予後不良に関連している。同様に、前立腺がんについては、ステージＩＶでの診断（遠隔転移を伴う）は、予後不良に関連している（５年相対生存率が、ステージＩ～ＩＩＩでの診断での少なくとも８０～８５％と比較して、３０％未満である）。肺がんの場合、小細胞肺がんは、特に後の段階で診断された場合（例えば、局所的又は遠隔転移を伴う場合）、特に予後不良に関連している。後期（例えば、遠隔転移を伴う）に診断された非小細胞肺がんもまた、予後不良に関連している。大腸がんにおいて、粘液性腺がん（細胞外ムチンが豊富に存在することを特徴とする）は、化学療法に対する応答の低下及び予後不良に関連している。腹腔への関与及びＢＲＡＦ変異もまた、大腸がんの予後不良マーカーを構成する。腎臓がんの場合、明細胞ＲＣＣは、乳頭状ＲＣＣよりも悪い転帰（例えば、より低い５年相対生存率）に関連する。皮膚がんでは、より厚い腫瘍、リンパ節転移、及び後期での診断（例えば、局所転移又は遠隔転移を伴う）は、黒色腫におけるより低い生存率に関連する。Ｎｅｓｔｉｎ及びＣＤ１３３の発現は、黒色腫及び神経膠腫における転帰不良に関連している。

【0118】

ある実施形態において、予後不良のがんは、ステージＩＩＩ／ＩＶのがんである。ある実施形態において、予後不良のがんは、ステージＩＩＩのがんである。ある実施形態において、予後不良のがんは、ステージＩＶのがんである。別の実施形態において、予後不良のがんは、ＣＳＣの数又は頻度が高いがん、すなわち、同じタイプのがん（例えば、卵巣がん、乳がん）におけるＣＳＣの平均数又は頻度よりも高いＣＳＣの数又は頻度である。ある実施形態において、ＣＳＣの数又は頻度は、同じタイプのがんにおけるＣＳＣの平均数又は頻度よりも少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％（２倍）、２００％（３倍）、３００％（４倍）、又は４００％（５倍）である。

【0119】

ある実施形態において、予後不良のがんは、６０％未満の５年相対生存率を有するがんである。ある実施形態において、予後不良のがんは、５０％未満の５年相対生存率を有するがんである。ある実施形態において、予後不良のがんは、４０％未満の５年相対生存率を有するがんである。ある実施形態において、予後不良のがんは、３０％未満の５年相対生存率を有するがんである。ある実施形態において、予後不良のがんは、２０％未満の５年相対生存率を有するがんである。ある実施形態において、予後不良のがんは、１０％未満の５年相対生存率を有するがんである。ある実施形態において、予後不良のがんは、５％未満の５年相対生存率を有するがんである。

【0120】

本明細書に開示される方法及び使用に好適なコンジュゲートは、ソルチリンに結合することができ、ＣＳＣに抗腫瘍剤を送達するようにＣＳＣによって内在化される薬剤にコンジュゲートされた抗腫瘍剤（例えば、化学療法剤）を含むコンジュゲートである。ある実施形態において、コンジュゲート（又はコンジュゲート化合物）は、ＰＣＴ公開第２０１７／０８８０５８号、同第２０１８／２１３９２８号、及び同第２０２０／０３７４３４号に記載されている抗腫瘍剤－ペプチド化合物コンジュゲートである。

【0121】

ある実施形態において、コンジュゲート化合物は、式Ａ－（Ｂ）_nの化合物であり、式中、
Ａは、式（Ｉ）～（ＸＩＩＩ）の配列のうちの１つと少なくとも６０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するペプチド化合物であり、

【表4】

式中、
Ｘ₁、Ｘ₂、Ｘ₃、Ｘ₄、Ｘ₅、Ｘ₆、Ｘ₇、Ｘ₈、Ｘ₉、Ｘ₁₀、Ｘ₁₁、Ｘ₁₂、Ｘ₁₃、Ｘ₁₄、Ｘ₁₅、Ｘ₁₈、及びＸ₁₉が、独立して、任意のアミノ酸から選択され、Ｘ₁₆、Ｘ₁₇、Ｘ₂₀、及びＸ₂₁が、独立して、Ｑ、Ｐ、Ｙ、Ｉ、及びＬから選択され、ｎが、１～１０の整数（例えば、１、２、３、４、又は５）であり、Ｘ₉が２回以上存在する場合、当該Ｘ₉の各々が、独立して、任意のアミノ酸から選択され、Ｘ₁₉が２回以上存在する場合、当該Ｘ₉の各々が、独立して、任意のアミノ酸から選択され、任意選択的に、ペプチド化合物が、環状であり、ペプチド化合物が、ソルチリンに結合する。

【0122】

Ｂは、少なくとも１つの抗がん剤又はその薬学的に許容される塩であり、Ｂが、直接又はリンカーを介してのいずれかで、任意選択的に、当該ペプチド化合物の遊離アミンにおいて、当該ペプチド化合物のＮ末端位置において、当該ペプチド化合物の遊離－ＳＨにおいて、又は当該ペプチド化合物の遊離カルボキシルにおいて、Ａに接続されている。

【0123】

「アミノ酸」という用語は、当業者に既知の一般的な天然（遺伝子コードされた）アミノ酸又は合成アミノ酸、及びそれらの一般的な誘導体を指す。アミノ酸に適用される場合、「標準」又は「タンパク質原性」とは、それらの天然の構成で遺伝子コードされた２０個のアミノ酸を指す。同様に、アミノ酸に適用される場合、「非標準」、「非天然」又は「異常」とは、非天然、希少又は合成アミノ酸の幅広い選択、例えば、Ｈｕｎｔ，Ｓ．ｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ，Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｇ．Ｃ．ｅｄ．，Ｃｈａｐｍａｎ ａｎｄ Ｈａｌｌ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８５に記載されるものを指す。非標準アミノ酸のいくつかの例としては、非アルファ－アミノ酸及びＤ－アミノ酸が挙げられる。ある実施形態において、ペプチド化合物は、天然アミノ酸のみ含む。別の実施形態において、ペプチド化合物は、Ｄ－アミノ酸などの１つ以上の非天然又は合成アミノ酸を含む。

【0124】

本明細書で使用される「配列同一性」という表現は、２つのポリペプチド配列間又は２つの核酸配列間の配列同一性のパーセンテージを指す。２つのアミノ酸配列又は２つの核酸配列の同一性パーセントを決定するために、配列が、最適比較目的のためにアラインメントされる（例えば、第２のアミノ酸又は核酸配列との最適アラインメントのために第１のアミノ酸の配列又は核酸配列にギャップが導入され得る）。その後、対応するアミノ酸位置又はヌクレオチド位置において、アミノ酸残基又はヌクレオチドが比較される。第１の配列内の位置が、第２の配列内の対応する位置と同じアミノ酸残基又はヌクレオチドによって占められている場合、それらの分子は、その位置において同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、それらの配列によって共有される同一の位置の数の関数（すなわち、同一性％＝同一の重複した位置の数／総位置数×１００％）である。一実施形態において、２つの配列は、同じ長さである。２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用しても達成され得る。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本開示のタンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得るために、例えば、スコア－５０、ワード長＝３に設定されたＸＢＬＡＳＴプログラムパラメータを用いて行われ得る。比較目的のためにギャップありアラインメントを得るために、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴが利用され得る。代替的に、ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴを使用して、分子間の距離関係を検出する反復検索を行うことができる（同上）。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ－Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータが使用され得る（例えば、ＮＣＢＩウェブサイトを参照されたい）。配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの別の好ましい非限定的な例は、Ｍｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ，１９８８，ＣＡＢＩＯＳ ４：１１－１７のアルゴリズムである。かかるアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれる。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１２０加重残基表（ｗｅｉｇｈｔ ｒｅｓｉｄｕｅ ｔａｂｌｅ）、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４が使用され得る。２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップを許容して、又はギャップを許容することなく、上述の技術と同様の技術を使用して決定され得る。同一性パーセントを計算する際、典型的には、正確な一致のみが計測される。

【0125】

「薬学的に許容される」という表現は、動物又はヒトなどの対象の治療に適合することを意味する。本明細書に記載されるコンジュゲート化合物の薬学的に許容される塩もまた、本明細書に提供される。「薬学的に許容される塩」という表現は、動物又はヒトなどの対象の治療に好適であるか、又は適合する酸付加塩又は塩基付加塩を意味する。本明細書で使用される「薬学的に許容される酸付加塩」という表現は、本開示の任意の化合物、又はその中間体のいずれかの任意の非毒性の有機塩又は無機塩を意味する。好適な塩を形成する例示的な無機酸としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸及びリン酸、並びにオルトリン酸一水素ナトリウム及び硫酸水素カリウムなどの金属塩が挙げられる。好適な塩を形成する例示的な有機酸としては、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、酢酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、安息香酸、フェニル酢酸、桂皮酸及びサリチル酸などのモノカルボン酸、ジカルボン酸、及びトリカルボン酸、並びにｐ－トルエンスルホン酸及びメタンスルホン酸などのスルホン酸が挙げられる。一塩基酸塩又は二塩基酸塩のいずれかを形成することができ、かかる塩は、水和形態、溶媒和形態、又は実質的に無水形態のいずれかで存在し得る。一般に、本開示の化合物の酸付加塩は、それらの遊離塩基形態と比較して、水及び種々の親水性有機溶媒において、より可溶性であり、一般に、より高い融点を示す。適切な塩の選択は、当業者に既知であろう。他の薬学的に許容されない塩、例えば、シュウ酸塩は、例えば、本開示の化合物の単離において、実験室での使用のために、又は薬学的に許容される酸付加塩へのその後の変換のために使用され得る。本明細書で使用される「薬学的に許容される塩基付加塩」という表現は、本開示の任意の酸化合物、又はその中間体のいずれかの任意の非毒性の有機塩基付加塩又は無機塩基付加塩を意味する。塩基付加塩を形成し得る本開示の酸性化合物としては、例えば、ＣＯ₂Ｈが官能基である場合が挙げられる。好適な塩を形成する例示的な無機塩基としては、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、又はバリウムの水酸化物が挙げられる。好適な塩を形成する例示的な有機塩基としては、メチルアミン、トリメチルアミン、及びピコリン又はアンモニアなどの脂肪族、脂環式又は芳香族有機アミンが挙げられる。適切な塩の選択は、当業者に既知であろう。他の薬学的に許容されない塩基付加塩は、例えば、本開示の化合物又はコンジュゲート化合物の単離において、実験室での使用のために、又は薬学的に許容される酸付加塩へのその後の変換のために使用され得る。

【0126】

ある実施形態において、ペプチド化合物は、式（Ｉ）～（ＸＩＩＩ）のうちのいずれか１つの配列を含むか又はそれからなる。実施形態において、ペプチド化合物は、５０、４５、４０、３５、３０、２５、又は２０個以下のアミノ酸を含む。

【0127】

実施形態において、ペプチド化合物は、式（Ｉ）又は配列番号１によって表されるペプチド化合物と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ペプチド化合物が、ソルチリンに結合する。

【0128】

実施形態において、ペプチド化合物は、式（ＩＩ）又は配列番号２によって表されるペプチド化合物と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ペプチド化合物が、ソルチリンに結合する。

【0129】

実施形態において、ペプチド化合物は、式（ＩＩＩ）又は配列番号３によって表されるペプチド化合物と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ペプチド化合物が、ソルチリンに結合する。

【0130】

実施形態において、ペプチド化合物は、式（ＩＶ）又は配列番号４によって表されるペプチド化合物と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ペプチド化合物が、ソルチリンに結合する。

【0131】

実施形態において、ペプチド化合物は、式（Ｖ）又は配列番号５によって表されるペプチド化合物と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ペプチド化合物が、ソルチリンに結合する。

【0132】

実施形態において、ペプチド化合物は、式（ＶＩ）又は配列番号６によって表されるペプチド化合物と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ペプチド化合物が、ソルチリンに結合する。

【0133】

実施形態において、ペプチド化合物は、式（ＶＩＩ）又は配列番号７によって表されるペプチド化合物と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ペプチド化合物が、ソルチリンに結合する。

【0134】

実施形態において、ペプチド化合物は、式（ＶＩＩＩ）又は配列番号８によって表されるペプチド化合物と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ペプチド化合物が、ソルチリンに結合する。

【0135】

実施形態において、ペプチド化合物は、式（ＩＸ）又は配列番号９によって表されるペプチド化合物と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ペプチド化合物が、ソルチリンに結合する。

【0136】

実施形態において、ペプチド化合物は、式（Ｘ）又は配列番号１０によって表されるペプチド化合物と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ペプチド化合物が、ソルチリンに結合する。

【0137】

実施形態において、ペプチド化合物は、式（ＸＩ）又は配列番号１１によって表されるペプチド化合物と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ペプチド化合物が、ソルチリンに結合する。

【0138】

実施形態において、ペプチド化合物は、式（ＸＩＩ）又は配列番号１２によって表されるペプチド化合物と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ペプチド化合物が、ソルチリンに結合する。

【0139】

実施形態において、ペプチド化合物は、式（ＸＩＩＩ）又は配列番号１３によって表されるペプチド化合物と少なくとも６０％、少なくとも６１％、少なくとも６２％、少なくとも６３％、少なくとも６４％、少なくとも６５％、少なくとも６６％、少なくとも６７％、少なくとも６８％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７４％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ペプチド化合物が、ソルチリンに結合する。

【0140】

ある実施形態において、ペプチド化合物は、３０、２５、又は２０個以下の残基を含み、配列ＧＶＲＡＫＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫＳＥＳＹ（配列番号１０）を含む。別の実施形態において、ペプチド化合物は、３０、２５、又は２０個以下の残基を含み、配列ＧＶＲＡＫＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫＳＥＳＹＣ（配列番号３１）を含む。

【0141】

ある実施形態において、少なくとも１つの修飾基は、Ｎ末端及び／又はＣ末端で当該ペプチド化合物に接続される。ある実施形態において、ペプチド化合物は、Ｎ末端に修飾基を含む。ある実施形態において、ペプチド化合物は、Ｃ末端に修飾基を含む。そのような修飾基は、修飾又は分解（例えば、プロテアーゼ分解）からペプチド化合物を保護するのに有用であり得る。ある実施形態において、アミノ末端修飾基は、Ｃ₁～Ｃ₁₆又はＣ₃～Ｃ₁₆アシル基（直鎖又は分岐、飽和又は不飽和）であり、更なる実施形態において、飽和Ｃ₁～Ｃ₆アシル基（直鎖又は分岐）又は不飽和Ｃ₃～Ｃ₆アシル基（直鎖又は分岐）である。更なる実施形態において、アミノ末端修飾基は、アセチル基（ＣＨ₃－ＣＯ－、Ａｃ）又はスクシニル基（ＣＯ－ＣＨ₂－ＣＨ₂－ＣＯ－）である。カルボキシ末端修飾基は、例えば、カルボキシル基に結合したヒドロキシルアミン基（ＮＨＯＨ）（－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨＯＨ）、又はカルボキシル基に結合したアミン（－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲＲ’）であり得、アミンが、一級、二級、又は三級アミンであり、好ましくは、アミンが、好ましくは１～１０個の炭素の脂肪族アミン（例えば、メチルアミン、イソ－ブチルアミン、イソ－バレリルアミン、又はシクロヘキシルアミン）、芳香族アミン若しくはアリールアルキルアミン（例えば、アニリン、ナフチルアミン、ベンジルアミン、シンナミルアミン、又はフェニルエチルアミン）であり、好ましいアミンは－ＮＨ₂である。

【0142】

ある実施形態において、スクシニル基は、ペプチド化合物に接続される。例えば、ペプチド化合物は、配列番号６に対応し、それに対してＮ末端で接続するスクシニル基を有する、スクシニル－ＩＫＬＳＧＧＶＱＡＫＡＧＶＩＮＭＦＫＳＥＳＹの配列を有する。

【0143】

ある実施形態において、アセチル基は、ペプチド化合物に接続される。例えば、ペプチド化合物は、アセチル－ＧＶＲＡＫＡＧＶＲＮＭＦＫＳＥＳＹ（配列番号１４）の配列を有する。例えば、ペプチド化合物は、アセチル－ＧＶＲＡＫＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫＳＥＳＹ（配列番号１５）の配列を有する。例えば、ペプチド化合物は、アセチル－ＹＫＳＬＲＲＫＡＰＲＷＤＡＰＬＲＤＰＡＬＲＱＬＬ（配列番号１６）の配列を有する。例えば、ペプチド化合物は、アセチル－ＹＫＳＬＲＲＫＡＰＲＷＤＡＹＬＲＤＰＡＬＲＱＬＬ（配列番号１７）の配列を有する。例えば、ペプチド化合物は、アセチル－ＹＫＳＬＲＲＫＡＰＲＷＤＡＹＬＲＤＰＡＬＲＰＬＬ（配列番号１８）の配列を有する。

【0144】

ある実施形態において、ペプチド化合物は、ペプチド末端での優先的な結合部位を得る又は増加させるために、１つ以上（例えば、１～５又は１～３）のアミノ酸残基を付加することによって、Ｃ末端及び／又はＮ末端で修飾され得る。例えば、アミノ酸は、システインであり得る。例えば、アミノ酸は、リジンであり得る。例えば、アミノ酸は、ペプチドのＣ末端にシステインを付加することができる。一実施形態において、ペプチド化合物は、Ｃ末端にシステインを付加することによって修飾される。特定の実施形態において、ペプチド化合物は、それぞれ配列番号１０及び配列番号１５に対応し、Ｃ末端でのシステイン残基の付加によって修飾される、ＧＶＲＡＫＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫＳＥＳＹＣ（配列番号３１）又はアセチル－ＧＶＲＡＫＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫＳＥＳＹＣ（配列番号３２）の配列を有する。

【0145】

コンジュゲート化合物は、例えば、それに接続する１～１０又は１～５（例えば、１、２、３、又は４）分子の抗腫瘍剤を含み得る。これらの抗がん剤の分子は、同じであってもよく、又は異なっていてもよく、例えば、２、３、４、又はそれ以上の異なる抗腫瘍剤を、ペプチド化合物に接続することができる。抗腫瘍剤は、少なくとも１つの共有結合、少なくとも１つの原子、又は少なくとも１つのリンカーを介して、ペプチド化合物に接続される。ある実施形態において、少なくとも２分子の抗腫瘍剤がＡに結合している。ある実施形態において、少なくとも２分子は、同じ抗腫瘍剤（例えば、化学療法剤）の分子である。

【0146】

抗腫瘍剤は、増殖を阻害する及び／又は腫瘍細胞を死滅させる能力を有する任意の化合物であってもよく、例えば、小分子、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ）、放射性核種剤、抗体、並びに治療用抗腫瘍剤を装填したナノ粒子、リポソーム、ナノチューブ、グラフェン粒子を含む薬物送達系を含む。

【0147】

いくつかの実施形態において、抗腫瘍剤は、化学療法剤である。「化学療法剤」という用語は、腫瘍細胞を殺傷する及び／又はそれらの繁殖／増殖を阻害する薬剤を指す。化学療法剤の例としては、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、イホスファミド、メクロレタミン、クロラムブシル、メルファラン、ダカルバジン、ニトロソウレア、テモゾロミド、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ブスルファン、プロカルバジン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、バルルビシン）、細胞骨格破壊剤（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、アブラキサン、タキソテール、カバジタキセルなどのタキサン）、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（例えば、ボリノスタット、ロミデプシン）、トポイソメラーゼＩ阻害剤（例えば、イリノテカン、トポテカン）、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（例えば、エトポシド、テニポシド、タフルポシド）、キナーゼ阻害剤（例えば、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ベムラフェニブ、ビスモデギブ、ダサチニブ、ニロチニブ、オシメルチニブ、クリゾチニブ、ダブラフェニブ、ベムラフェニブ、トラメチニブ、イブルチニブ）、ヌクレオチド類似体及び前駆体類似体（例えば、アザシチジン、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、ドキシフルリジン、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メルカプトプリン、メトトレキサート、チオグアニン（チオグアニン））、ペプチド抗生物質（例えば、ブレオマイシン、アクチノマイシン）、白金系薬剤（例えば、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン）、レチノイド（トレチノイン、アリトレチノイン、ベキサロテン）、ビンカアルカロイド及び誘導体などの有糸分裂阻害剤（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）、毒素（例えば、マイタンシノイド、アウリスタチン、カリケアマイシン、アマトキシン、又はアマニチン）、並びに抗腫瘍特性を有する天然の植物化学物質（例えば、クルクミン）、アルカロイド（例えば、クロロゲン酸、テオブロミン、テオフィリン）、アントシアニン（例えば、シアニジン、マルビジン、カロテノイド（ベータ－カロテン、ルテイン、リコピン）、クメスタン、フラバン－３－オール、フラボノイド（例えば、エピカテキン、ヘスペリジン、イソラムネチン、ケンフェロール、ミリセチン、ナリンギン、ノビレチン、プロアントシアニジン、ケルセチン、ルチン、タンゲレチン）、ヒドロキシ桂皮酸（例えば、チコリ酸、クマリン、フェルラ酸、スコポレチン）、イソフラボン（例えば、ダイゼイン，ゲニステイン）、リグナン（例えば、シリマリン）、モノテルペン（例えば、ゲラニオール、リモネン）、有機硫化物（例えば、アリシン、グルタチオン、インドール－３－カルビノール、イソチオシアネート、スルフォラファン）、ダムナカンタール、ジゴキシン、フィチン酸、フェノール酸（例えば、カプサイシン、エラグ酸、没食子酸、ロスマリン酸、タンニン酸）、植物ステロール（例えば、ベータ－シトステロール）、サポニン、スチルベン（例えば、プテロスチルベン、レスベラトロール）、トリテルペノイド（例えば、ウルソール酸）、キサントフィル（例えば、アスタキサンチン、ベータ－クリプトキサンチン）、及びモノフェノール（例えば、ヒドロキシチロソール））が挙げられる。

【0148】

別の実施形態において、抗腫瘍剤は、腫瘍細胞、より具体的にはＣＳＣによって発現される抗原を認識する抗体又はその抗原結合断片である。

【0149】

ある実施形態において、Ｂは、当該ペプチド化合物のリジン残基の遊離アミンにおいて、任意選択的にリンカーを介してＡに接続されているか、又は当該ペプチド化合物のＮ末端位置において、任意選択的にリンカーを介してＡに接続されている。

【0150】

ある実施形態において、Ｂは、リンカーを介して、任意選択的に切断可能なリンカーを介して、Ａに接続される。

【0151】

本明細書で使用される「リンカー」という用語は、本明細書に開示されるペプチド化合物を少なくとも１つの療法剤に接続する化学構造を意味する。リンカーは、ペプチド化合物上の異なる官能基でペプチド化合物に接続することができる。例えば、リンカーは、一級アミン（アミン（－ＮＨ₂）で、ペプチド化合物に接続され得る。この基は、各ポリペプチド鎖のＮ末端に存在し（アルファ－アミンと呼ばれる）、また、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）残基の側鎖に存在する（ε－アミンと呼ばれる）。例えば、リンカーは、カルボキシル（－ＣＯＯＨ）でペプチド化合物に接続し得る。この基は、各ポリペプチド鎖のＣ末端に存在し、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）及びグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）の側鎖に存在する。例えば、リンカーは、スルフヒドリル（－ＳＨ）でペプチド化合物に接続し得る。この基は、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）の側鎖に存在する。多くの場合、タンパク質の二次構造又は三次構造の一部として、システインは、ジスルフィド結合（－Ｓ－Ｓ－）を介して、それらの側鎖の間で一緒に連結される。ほとんどの種類の反応性基による架橋に利用可能にするためには、これらをスルフヒドリルに還元しなければならない。例えば、リンカーは、カルボニル（－ＣＨＯ）でペプチド化合物に接続し得る。ケトン基又はアルデヒド基は、多糖の翻訳後修飾（グリコシル化）をメタ過ヨウ素酸ナトリウムで酸化することによって、糖タンパク質中に作製することができる。

【0152】

以下の表は、標準的な化学コンジュゲート化のためのいくつかの主要リンカーの反応性クラス及び化学基をまとめたものである。

【表5】

【0153】

例えば、ホモ二官能性架橋剤及びヘテロ二官能性架橋剤を使用することができる。例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル（ＤＳＳ）は、短いスペーサーアームの両方の末端に同一のアミン反応性ＮＨＳエステル基を有するホモ二官能性架橋剤である。例えば、スルホスクシンイミジル ４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（スルホ－ＳＭＣＣ）は、シクロヘキサンスペーサーアームの一方にアミン反応性スルホ－ＮＨＳ－エステル基と、反対側の末端にスルフヒドリル反応性マレイミド基とを有するヘテロ二官能性架橋剤である。これにより、連続した２工程のコンジュゲート化手順が可能になる。市販のホモ二官能性架橋剤の中で、特に、ＢＳＯＣＯＥＳ（ビス（２－［スクシンイミドオキシカルボニルオキシ］エチル）スルホン、ＤＰＤＰＢ（１，４－ジ（３’－［２ピリジルジチオ］－プロピオンアミド）ブタン）、ＤＳＳ（スベリン酸ジスクシンイミジル）、ＤＳＴ（酒石酸ジスクシンイミジル）、スルホＤＳＴ（酒石酸ジスルホジスクシンイミジル）、ＤＳＰ（ジチオビス（プロピオン酸スクシンイミジル）、ＤＴＳＳＰ（３，３’－ジチオビス（プロピオン酸スルホスクシンイミジル）、ＥＧＳ（エチレングリコールビス（コハク酸スクシンイミジル））、及びＢＡＳＥＤ（ビス（β－［４－アジドサリチルアミド］－エチル）ジスルフィドヨウ素化可能物）である。

【0154】

ペプチド化合物は、様々なリンカー、例えば、スルフヒドリル基、アミノ基（アミン）、又は任意の適切な反応性基を介してコンジュゲートされ得る。リンカーは、共有結合であり得る。リンカー基は、可撓性アーム、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個の炭素原子を含み得る。

【0155】

例示的なリンカーとしては、これに限定されないが、ピリジンジスルフィド、チオスルホネート、ビニルスルホネート、イソシアネート、イミドエステル、ジアジン、ヒドラジン、チオール、カルボン酸、マルチペプチドリンカー、及びアセチレンが挙げられる。代替的に、使用可能な他のリンカーとしては、ＢＳ³［ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート］（接近可能な一級アミンを標的とするホモ二官能性Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステルである）、ＮＨＳ／ＥＤＣ（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド及び１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＮＨＳ／ＥＤＣは、一級アミン基をカルボキシル基とコンジュゲート化させることを可能にする））、スルホ－ＥＭＣＳ（［Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸］ヒドラジド（スルホ－ＥＭＣＳは、スルフヒドリル及びアミノ基に対して反応性であるヘテロ二官能性反応性基である））、ヒドラジド（ほとんどのタンパク質は、露出した炭水化物を含有し、ヒドラジドは、カルボキシル基を一級アミンに連結するための有用な試薬である）が挙げられる。

【0156】

共有結合を形成するために、ヒドロキシル部分がペプチド化合物を修飾するのに必要なレベルで生理学的に許容される多種多様な活性カルボキシル基（例えば、エステル）を化学反応性基として使用することができる。具体的な薬剤としては、例えば、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、Ｎ－ヒドロキシ－スルホスクシンイミド（スルホ－ＮＨＳ）、マレイミド－ベンゾイル－スクシンイミド（ＭＢＳ）、ガンマ－マレイミド－ブチリルオキシスクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）、マレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）、マレイミドヘキサン酸（ＭＨＡ）、及びマレイミドウンデカン酸（ＭＵＡ）が挙げられる。

【0157】

一級アミンは、ＮＨＳエステルの主な標的であり、ＮＨＳエステルは、一級アミンと反応して共有結合性アミド結合を形成する。タンパク質のＮ末端に存在する接近可能なα－アミン基及びリジンのε－アミンは、ＮＨＳエステルと反応する。したがって、本明細書に開示されるコンジュゲート化化合物は、ペプチド化合物のＮ末端アミノ、又はリジンのε－アミンにコンジュゲート化されたＮＨＳエステルを有するリンカーを含むことができる。ＮＨＳエステルが一級アミンと反応してＮ－ヒドロキシスクシンイミドを放出すると、アミド結合が形成される。反応性基を含有するスクシンイミドは、より単純にスクシンイミジル基と呼ばれる場合がある。いくつかの実施形態において、ペプチド化合物上の官能基は、チオール基であり、化学反応性基は、ガンマ－マレイミド－ブチルアミド（ＧＭＢＡ又はＭＰＡ）などのマレイミド含有基である。そのようなマレイミド含有基は、本明細書では、マレイド基と呼ばれてもよい。

【0158】

アミン－アミンリンカーとしては、ＮＨＳエステル、イミドエステルなどが挙げられ、その例を以下に列挙する。

【表6】

【0159】

リンカーはまた、以下に列挙されるマレイミド及びピリジルジチオールなどのスルフヒドリル－スルフヒドリルリンカーであってもよい。

【表7】

【0160】

リンカーは、ＮＨＳエステル／マレイミド化合物を含むアミン－スルフヒドリルリンカーであってもよい。これらの化合物の例を以下に提供する。

【表8】

【0161】

リンカーは、アミノ基及び非選択的エンティティと反応することができる。かかるリンカーとしては、ＮＨＳエステル／アリールアジド及びＮＨＳエステル／ジアジリンリンカーが挙げられ、その例を以下に列挙する。

【表9】

【0162】

例示的なアミン－カルボキシルリンカーとしては、カルボジイミド化合物（例えば、ＤＣＣ（Ｎ，Ｎ－ジシクロヘキシルカルボジミド）及びＥＤＣ（１－エチル－３－［３－ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド））が挙げられる。例示的なスルフヒドリル非選択的リンカーとしては、ピリジルジチオール／アリールアジド化合物（例えば、ＡＰＤＰ（（Ｎ－［４－（ｐ－アジドサリシルアミド）ブチル］－３’－（２’－ピリジルジチオ）プロピオンアミド））が挙げられる。例示的なスルフヒドリル－炭水化物リンカーとしては、マレイミド／ヒドラジド化合物（例えば、ＢＭＰＨ（Ｎ－［β－マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド）、ＥＭＣＨ（［Ｎ－ε－マレイミドカプロン酸］ヒドラジド）、ＭＰＢＨ４－（４－Ｎ－マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド）、及びＫＭＵＨ（Ｎ－［κ－マレイミドウンデカン酸］ヒドラジド））、及びピリジルジチオール／ヒドラジド化合物（例えば、ＰＤＰＨ（３－（２－ピリジルジオ）プロピオニルヒドラジド））が挙げられる。例示的な炭水化物－非選択的リンカーとしては、ヒドラジド／アリールアジド化合物（例えば、ＡＢＨ（ｐ－アジドベンゾイルヒドラジド））が挙げられる。例示的なヒドロキシル－スルフヒドリルリンカーとしては、イソシアネート／マレイミド化合物（例えば、（Ｎ－［ｐ－マレイミドフェニル］イソシアネート））が挙げられる。例示的なアミン－ＤＮＡリンカーとしては、ＮＨＳエステル／ソラレン化合物（例えば、ＳＰＢ（スクシンイミジル－［４－（ソラレン－８－イルオキシ）－ブチレート））が挙げられる。

【0163】

コンジュゲートペプチド化合物中に様々な複雑性の分岐点を生成するために、リンカーは、３～７個のエンティティを連結することができる。

【表10】

【0164】

ＴＭＥＡ及びＴＳＡＴは、スルフヒドリル基を有するマレイミド基を通じて到達する。ＴＨＰＰのヒドロキシル基及びカルボキシ基は、一級アミン又は二級アミンと反応することができる。他の有用なリンカーは、式Ｙ＝Ｃ＝Ｎ－Ｑ－Ａ－Ｃ（Ｏ）－Ｚに適合し、式中、Ｑは、ホモ芳香族又はヘテロ芳香族環系であり、Ａは、単結合、又は非置換若しくは置換二価Ｃ₁～₃₀架橋基であり、Ｙは、Ｏ又はＳであり、Ｚは、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｎ₃、Ｎ－スクシンイミジルオキシ、イミダゾリル、１－ベンゾトリアゾリルオキシ、ＯＡｒ（式中、Ａｒは、電子欠乏活性化アリール基である）、又はＯＣ（Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、－Ａ－Ｑ－Ｎ＝Ｃ＝Ｙ若しくはＣ₄～２０三級アルキルである（米国特許第４，６８０，３３８号を参照されたい）。

【0165】

他の有用なリンカーは、式

【化1】

を有し、式中、Ｒ₁は、Ｈ、Ｃ_1-6アルキル、Ｃ_2-6アルケニル、Ｃ_6-12アリール若しくはアラルキニル、又は二価有機－Ｏ－、－Ｓ－、若しくは

【化2】

とカップリングしたこれらのものであり、式中、Ｒ’は、Ｃ_1-6アルキル、連結部分であり、Ｒ₂は、Ｈ、Ｃ_1-12アルキル、Ｃ_6-12アリール、又はＣ_6-12アラルキルであり、Ｒ₃は、

【化3】

又は隣接窒素の孤立電子対を非局在化することが可能な別の化学構造であり、Ｒ₄は、Ｒ₃をペプチド化合物に連結することが可能なペンダント反応性基である（例えば、米国特許第５，３０６，８０９号を参照されたい）。

【0166】

リンカーは、少なくとも１つのアミノ酸残基を含んでいてもよく、少なくとも又は約２、３、４、５、６、７、１０、１５、２０、２５、３０、４０、又は５０個のアミノ酸残基のペプチドであり得る。リンカーが、単一アミノ酸残基である場合、リンカーは、任意の天然に存在するアミノ酸又は天然に存在しないアミノ酸（例えば、Ｇｌｙ又はＣｙｓ）であり得る。リンカーが、短いペプチドである場合、リンカーは、配列［Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ］_n（式中、ｎは、端点を含む１～６の整数である）を有するペプチドなどのグリシンリッチペプチド（可撓性である傾向がある）（米国特許第７，２７１，１４９号を参照されたい）又はセリンリッチペプチドリンカー（米国特許第５，５２５，４９１号を参照されたい）であり得る。セリンリッチペプチドリンカーとしては、式［Ｘ－Ｘ－Ｘ－Ｘ－Ｇｌｙ］_y（配列番号１９）のものが挙げられ、式中、Ｘのうちの最大２個はＴｈｒであり、残りのＸはＳｅｒであり、ｙは、端点を含む１より大きい整数、例えば、１～５である（例えば、［Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ］_y（配列番号２０）であり、ｙは１より大きい整数、例えば、１～５である）。他のリンカーとしては、剛性リンカー（例えば、ＰＡＰＡＰ（配列番号２１）及び（ＰＴ）_nＰ、式中、ｎは、２、３、４、５、６、又は７である）及びα－ヘリックスリンカー（例えば、Ａ（ＥＡＡＡＫ）_nＡ（配列番号２２）、式中、ｎは、１、２、３、４、又は５である）が挙げられる。

【0167】

リンカーは、脂肪族リンカーであり得る（例えば、ポリペプチドへのアミド結合及び療法剤へのエステル結合を有する）。脂肪族リンカーが使用される場合、脂肪族リンカーは、長さ（例えば、Ｃ₁～Ｃ₂₀、Ｃ₁～Ｃ₁₂、Ｃ₁～Ｃ₆）及びそれが含む化学部分（例えば、アミノ基又はカルバメート）に関して様々であり得る。

【0168】

好適なアミノ酸リンカーの例は、コハク酸、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、及びＡｓｐ、又はＧｌｙ－Ｌｙｓなどのジペプチドである。リンカーがコハク酸である場合、その一方のカルボキシル基は、アミノ酸残基のアミノ基とアミド結合を形成してもよく、その他方のカルボキシル基は、例えば、ペプチド又は置換基のアミノ基とアミド結合を形成してもよい。リンカーが、Ｌｙｓ、Ｇｌｕ、又はＡｓｐである場合、そのカルボキシル基は、アミノ酸残基のアミノ基とアミド結合を形成してもよく、そのアミノ基は、例えば、置換基のカルボキシル基とアミド結合を形成してもよい。Ｌｙｓがリンカーとして使用される場合、更なるリンカーが、Ｌｙｓのε－アミノ基と置換基との間に挿入されてもよい。更なるリンカーは、Ｌｙｓのε－アミノ基及び置換基中に存在するアミノ基とアミド結合を形成することができる、コハク酸であってよい。一実施形態において、更なるリンカーは、Ｇｌｕ又はＡｓｐ（例えば、Ｌｙｓのε－アミノ基とアミド結合を形成し、置換基中に存在するカルボキシル基と別のアミド結合を形成する）であり、すなわち、置換基は、Ｎε－アシル化リジン残基である。

【0169】

リンカーはまた、分岐ポリペプチドであり得る。例示的な分岐ペプチドリンカーは、米国特許第６，７５９，５０９号に記載されている。

【0170】

リンカーは、切断可能な結合（例えば、チオエステル結合）又は切断不可能な結合（例えば、マレイミド結合）を提供することができる。例えば、細胞傷害性タンパク質は、ポリペプチド内のリジン残基及びポリペプチドのアミノ末端に存在する修飾遊離アミンと反応するリンカーに結合し得る。したがって、本コンジュゲート化合物で有用なリンカーは、療法剤部分がコンジュゲート化されるポリペプチド又は修飾ポリペプチド上の一級アミンと反応性である基を含み得る。より具体的には、リンカーは、モノフルオロシクロオクチン（ＭＦＣＯ）、ビシクロ［６．１．０］ノニン（ＢＣＮ）、Ｎ－スクシンイミジル－Ｓ－アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）、Ｎ－スクシンイミジル－Ｓ－アセチルチオプロピオネート（ＳＡＴＰ）、マレイミド及びジベンゾシクロオクチンエステル（ＤＢＣＯエステル）から選択され得る。所与のリンカー内の有用なシクロオクチンとしては、ＯＣＴ、ＡＬＯ、ＭＯＦＯ、ＤＩＦＯ、ＤＩＢＯ、ＢＡＲＡＣ、ＤＩＢＡＣ、及びＤＩＭＡＣが挙げられる。

【0171】

リンカーは、例えば、短いアーム（２個未満の炭素鎖）、中程度のサイズのアーム（２～５個の炭素鎖）、又は長いアーム（３～６個の炭素鎖）などの可撓性アームを含み得る。

【0172】

クリック化学は、ペプチド（ＤＢＣＯ、ＴＣＯ、テトラジン、アジド及びアルキンリンカー）上のコンジュゲート化にも使用され得る。これらのリンカーファミリーは、アミン、カルボキシル及びスルフヒドリル基に対して反応性であり得る。加えて、これらのリンカーは、ビオチン化され、ペグ化され、蛍光撮像色素で修飾され、又はオリゴヌクレオチド配列に組み込むためにホスホラミド化され得る。

【0173】

ある実施形態において、抗腫瘍剤－ペプチド化合物コンジュゲートは、式（ＬＩＩＩ）又は（ＬＩＶ）によって表される。
ＧＶＲＡＫ（Ｚ¹）ＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫ（Ｚ²）ＳＥＳＹ（ＬＩＩＩ）（配列番号 ２３）、
アセチル－ＧＶＲＡＫ（Ｚ¹）ＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫ（Ｚ²）ＳＥＳＹ（ＬＩＶ）（ 配列番号２４）
式中、Ｚ¹及びＺ²は、各々独立して、リジン（Ｋ）残基に結合した抗腫瘍剤（例えば、化学療法剤）である。

【0174】

ある実施形態において、コンジュゲート化合物は、配列番号１０を有するペプチド化合物を含み、各リジン残基が、それに接続したクルクミン分子を有する、ＧＶＲＡＫ（クルクミン）ＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫ（クルクミン）ＳＥＳＹ－式（ＸＩＶ）（配列番号２５）、又は配列番号１１を有するペプチド化合物を含み、各リジン残基が、それに接続したクルクミン分子を有する、ＹＫ（クルクミン）ＳＬＲＲＫ（クルクミン）ＡＰＲＷＤＡＰＬＲＤＰＡＬＲＱＬＬ－式（ＸＶ）（配列番号２６）である。

【0175】

ある実施形態において、コンジュゲート化合物は、配列番号１５を有するペプチド化合物を含み、各リジン残基が、それに接続したクルクミン分子を有する、アセチル－ＧＶＲＡＫ（クルクミン）ＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫ（クルクミン）ＳＥＳＹ－式（ＸＶＩ）（配列番号２７）、又は配列番号１６を有するペプチド化合物を含み、各リジン残基が、それに接続したクルクミン分子を有する、アセチル－ＹＫ（クルクミン）ＳＬＲＲＫ（クルクミン）ＡＰＲＷＤＡＰＬＲＤＰＡＬＲＱＬＬ－式（ＸＶＩＩ）（配列番号２８）である。

【0176】

ある実施形態において、コンジュゲート化合物は、配列番号１０を有するペプチド化合物を含み、各リジン残基が、それに接続したクルクミン分子を有する、ＧＶＲＡＫ（ドセタキセル）ＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫ（ドセタキセル）ＳＥＳＹ－式（ＸＩＸ）（配列番号２９）である。

【0177】

別の実施形態において、コンジュゲート化合物は、配列番号１５を有するペプチド化合物を含み、各リジン残基が、それに接続したドセタキセル分子を有する、アセチル－ＧＶＲＡＫ（ドセタキセル）ＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫ（ドセタキセル）ＳＥＳＹ－式（ＸＸＩＩＩ）（配列番号３０）である。

【0178】

ある実施形態において、コンジュゲート化合物は、配列番号１０を有するペプチド化合物を含み、各リジン残基が、それに接続したドキソルビシン分子を有する、ＧＶＲＡＫ（ドキソルビシン）ＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫ（ドキソルビシン）ＳＥＳＹ－式（ＸＸＶＩ）（配列番号３３）である。

【0179】

別の実施形態において、コンジュゲート化合物は、配列番号１５を有するペプチド化合物を含み、各リジン残基が、それに接続したドキソルビシン分子を有する、アセチル－ＧＶＲＡＫ（ドキソルビシン）ＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫ（ドキソルビシン）ＳＥＳＹ－式（ＸＸＶＩＩＩ）（配列番号３４）である。

【0180】

ある実施形態において、コンジュゲート化合物は、配列番号３１を有するペプチド化合物を含み、システイン残基が、それに接続したアルドキソルビシン分子を有するか、又は配列番号１０を有するペプチド化合物を含み、システイン残基が、当該ペプチド化合物のＣ末端に付加され、システイン残基が、それに接続したアルドキソルビシン分子を有する、ＧＶＲＡＫＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫＳＥＳＹＣ（アルドキソルビシン）－式（ＬＩ）（配列番号３５）である。

【0181】

ある実施形態において、コンジュゲート化合物は、配列番号３２を有するペプチド化合物を含み、システイン残基が、それに接続したアルドキソルビシン分子を有するか、又は配列番号１５を有するペプチド化合物を含み、システイン残基が、当該ペプチド化合物のＣ末端に付加され、システイン残基が、それに接続したアルドキソルビシン分子を有する、アセチル－ＧＶＲＡＫＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫＳＥＳＹＣ（アルドキソルビシン）－式（ＬＩＩ）（配列番号３６）である。

【0182】

ある実施形態において、コンジュゲートは、プロドラッグの形態で投与される。本明細書で使用される「プロドラッグ」という用語は、既知の化合物又は組成物の活性形態の誘導体を指し、その誘導体は、対象に投与されると、より良い治療応答及び／又は低減された毒性レベルをもたらすために、活性形態に徐々に変換される。一般に、プロドラッグは、インビボで、概念的にその由来となる化合物へと容易に変換することが可能な、本明細書で開示される化合物の機能的誘導体である。プロドラッグは、アシルエステル、カーボネート、ホスフェート、及びウレタンを含むが、これらに限定されない。これらの群は、例示的であり、網羅的ではなく、当業者であれば、他の既知の種類のプロドラッグを調製することができる。プロドラッグは、例えば、利用可能なヒドロキシ基、チオール基、アミノ基又はカルボキシル基で形成され得る。例えば、本開示のコンジュゲート中の利用可能なＯＨ又はＮＨ₂は、塩基の存在下、及び任意選択的に、不活性溶媒中で（例えば、ピリジン中の酸塩化物）、活性化された酸を使用してアシル化されてもよい。プロドラッグとして利用されているいくつかの一般的なエステルは、フェニルエステル、脂肪族（Ｃ₁～Ｃ₂₄）エステル、アシルオキシメチルエステル、カルバメート、及びアミノ酸エステルである。特定の場合において、本開示の化合物のプロドラッグは、化合物中のヒドロキシ基及び／又はアミノ基が、インビボでヒドロキシ基及び／又はアミノ基に変換され得る基としてマスキングされるものである。好適なプロドラッグの選択及び調製のための従来の手順は、例えば、「Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５に記載されている。

【0183】

コンジュゲートの共有結合修飾は、本開示の範囲内に含まれる。共有結合修飾は、コンジュゲートの標的化アミノ酸残基を、選択された側鎖又はコンジュゲートのＮ末端残基若しくはＣ末端残基と反応することができる有機誘導体化剤と反応させることを含む。他の修飾としては、グルタミニル残基及びアスパラギニル残基の対応するグルタミル残基及びアスパルチル残基への脱アミド化、プロリン及びリジンのヒドロキシル化、セリル又はスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リジン、アルギニン、及びヒスチジン側鎖のα－アミノ基のメチル化が挙げられる（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ｐｐ．７９－８６（１９８３））。本開示の範囲内に含まれるコンジュゲートの他のタイプの共有結合修飾は、コンジュゲートをタンパク質（例えば、アルブミン）又は非タンパク質性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレン）に連結することを含み、これは、例えば、コンジュゲートのインビボ半減期を増加させ得る。

【0184】

ある実施形態において、本明細書に開示されるコンジュゲート化合物又はその薬学的に許容される塩は、医薬組成物に製剤化される。ある実施形態において、医薬組成物は、薬学的に許容される担体又は賦形剤を更に含む。そのような組成物は、好適な純度を有するコンジュゲート化合物を、１つ以上の任意選択的な薬学的に許容される担体又は賦形剤と混合することによって、医薬分野で周知の様式で調製されてもよい（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，ｂｙ Ｌｏｙｄ Ｖ Ａｌｌｅｎ，Ｊｒ，２０１２，２２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，ｂｙ Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，２０１２，７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）。担体／賦形剤は、任意の従来の投与経路、例えば、経口、静脈内、非経口、皮下、筋肉内、頭蓋内、眼窩内、眼科、脳室内、嚢内、脊髄内、髄腔内、硬膜外、大槽内、腹腔内、鼻腔内、又は肺（例えば、エアロゾル）投与によるコンジュゲート化合物の投与に好適であり得る。ある実施形態において、担体／賦形剤は、静脈内又は皮下経路によるコンジュゲート化合物又はその塩の投与に適合される。ある実施形態において、担体／賦形剤は、静脈内経路によるコンジュゲート化合物の投与に適合される。別の実施形態において、担体／賦形剤は、皮下経路によるコンジュゲート化合物又はその塩の投与に適合される。別の実施形態において、担体／賦形剤は、経口経路によるコンジュゲート化合物又はその塩の投与に適合される。

【0185】

本明細書で使用される「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、当該技術分野における通常の意味を有し、有効成分（薬物）自体ではない任意の成分である。賦形剤には、例えば結合剤、潤滑剤、希釈剤、増粘剤、崩壊剤、可塑剤、コーティング剤、バリア層製剤、潤滑剤、安定化剤、放出遅延剤、及びその他の成分を含む。本明細書で使用される「薬学的に許容される賦形剤」とは、有効成分の生物学的活性の有効性を妨げず、対象に対して毒性がない賦形剤、すなわち、賦形剤の一種であり、及び／又は対象に対して毒性がない量で使用するための任意の賦形剤を指す。賦形剤は当技術分野でよく知られており、本システムはこれらの点で限定されるものではない。特定の実施形態において、組成物は、１つ以上のバインダー（結合剤）、増粘剤、界面活性剤、希釈剤、放出遅延剤、着色剤、香味剤、充填剤、崩壊剤／溶解促進剤、潤滑剤、可塑剤、シリカ流動調整剤、滑剤、ケーキング防止剤、付着防止剤、安定化剤、帯電防止剤、膨潤剤、及びこれらの任意の組み合わせなどの賦形剤を含み得る。当業者であれば認識するように、単一の賦形剤は一度に２つ以上の機能を果たすことができ、例えば、結合剤と増粘剤の両方として作用することができる。また、当業者であれば認識するように、これらの用語は必ずしも相互に排他的ではない。注射用製剤に一般的に使用される賦形剤の例としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、並びにそれらの組み合わせが挙げられる。多くの場合、等張化剤、例えば、糖、多価アルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、又は塩化ナトリウムを組成物中に含むことが好ましい。薬学的に許容される物質の追加の例は、湿潤剤又は補助物質、例えば、保存期間又は有効性を増加させる、乳化剤、防腐剤、又は緩衝剤である。

【0186】

投与されるコンジュゲートの正確な量／投薬量は、関与する特定のがん細胞及び特定のがん疾患などの要因、がん疾患の程度、関与、若しくは重症度、がん患者のサイズ、年齢、及び全般的な健康状態、個々の患者の応答、投与される特定の化合物、投与される調製物の生物学的利用能特性、選択される用量レジメン、コンジュゲートが単独で又は他の薬剤と組み合わせて投与されるか、コンジュゲートの薬力学的特性及び投与様式及び投与経路、並びに医師又は当業者が既知の技術を使用することによって及び同様の状況下で得られる結果を観察することによって容易に決定されるであろう他の関連する特性に応じて変化する。コンジュゲート／組成物は、１回の治療で又は一連の治療にわたって患者に好適に投与される。好ましくは、ヒトで試験する前に、インビトロで、次いで、有用な動物モデルで用量応答曲線を決定することが望ましい。本開示は、コンジュゲート及びそれを含む組成物の投薬量を提供する。例えば、疾患の種類及び重症度に応じて、１日当たり体重１ｋｇ当たり約１μｇ／ｋｇ～１０００ｍｇ／ｋｇ（ｍｇ／ｋｇ）である。更に、有効用量は、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ／２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、５５ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、７５ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１７５ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇであってもよく、最大１０００ｍｇ／ｋｇまで２５ｍｇ／ｋｇ増分で増加させてもよく、又は前述の値のうちのいずれか２つの間の範囲であってもよい。典型的な１日投薬量は、上述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。数日間又はそれ以上にわたる反復投与については、病状に応じて、病徴の所望の抑制が生じるまで治療は継続される。しかしながら、他の投薬量レジメンも有用であり得る。この療法の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易に監視される。

【0187】

本明細書に記載のコンジュゲート化合物若しくはその塩、又はそれを含む組成物は、標的化疾患／状態の治療、又は標的化疾患／状態のうちの１つ以上の症状の管理（例えば、鎮痛剤、制吐剤など）のために、１つ以上の追加の活性剤又は治療（放射線療法、手術、ワクチンなど）と組み合わせて使用され得る。ある実施形態において、本明細書に記載のコンジュゲート化合物は、１つ以上の化学療法剤、免疫療法、チェックポイント阻害剤、細胞ベースの療法などと組み合わせて使用される。本明細書に記載のコンジュゲートと組み合わせて使用するのに好適な化学療法剤の例としては、限定されないが、ビンカアルカロイド、微小管形成を阻害する薬剤（コルヒチン及びその誘導体など）、抗血管新生剤、治療用抗体、ＥＧＦＲ標的化剤、チロシンキナーゼ標的化剤（チロシンキナーゼ阻害剤など）、遷移金属錯体、プロテアソーム阻害剤、代謝拮抗剤（ヌクレオシド類似体など）、アルキル化剤、白金系薬剤、アントラサイクリン抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、マクロライド、レチノイド（オールトランスレチノイン酸又はその誘導体など）、ゲルダナマイシン又はその誘導体（１７－ＡＡＧなど）、及び当該技術分野で認識されている他のがん治療剤が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のコンジュゲートと組み合わせて使用するための化学療法剤は、アドリアマイシン、コルヒチン、シクロホスファミド、アクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、マイトマイシン、メトトレキサート、ミトキサントロン、フルオロウラシル、カルボプラチン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、メチル－ＣＣＮＵ、シスプラチン、エトポシド、インターフェロン、カンプトテシン及びその誘導体、フェネステリン、タキサン及びその誘導体（例えば、タキソール、パクリタキセル及びその誘導体、タキソテール及びその誘導体など）、トペテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、タモキシフェン、ピポスルファン、ｎａｂ－５４０４、ｎａｂ－５８００、ｎａｂ－５８０１、イリノテカン、ＨＫＰ、オルタタキセル、ゲムシタビン、オキサリプラチン、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、ビノレルビン、Ｄｏｘｉｌ（登録商標）、カペシタビン、Ａｌｉｍｔａ（登録商標）、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）、Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標）、Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標）、ラパチニブ、ソラフェニブ、エルロチニブ、エルビタックス、その誘導体のうちの１つ以上を含む。ある実施形態において、本明細書に記載のコンジュゲート化合物又はそれを含む組成物は、ＥＧＦＲ又はチロシンキナーゼ標的化剤、例えば、ＥＧＦＲ阻害剤（ＲＴＫ阻害剤）と組み合わせて使用される。本明細書に記載のコンジュゲート化合物若しくはその塩、又はそれを含む組成物はまた、１つ以上の治療用抗体又は抗体断片（例えば、腫瘍の治療に使用される治療用抗体又は抗体断片）と組み合わせて使用され得る。がんの治療に使用される抗体の例としては、ＣＤ５２を標的とする抗体（例えば、アレムツズマブ）、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ（例えば、ベバシズマブ、ラムシルマブ）、ＥＧＦＲ（例えば、セツキシマブ、ネシツムマブ、パニツムマブ）、ＣＤ３８（例えば、ダラツムマブ、イサツキシマブ）、ＲＡＮＫＬ（例えば、デノスマブ）、ＧＤ２（例えば、ジヌツキシマブ、ナキシタマブ－ｇｑｇｋ）、ＳＬＡＭＦ７（例えば、エロツズマブ）、ＨＥＲ２（例えば、マルジェツキシマブ－ｃｍｋｂ、ペルツズマブ）、ＣＣＲ４（例えば、モガムリズマブ）、ＣＤ２０（オビヌツズマブ、オファツムマブ、リツキシマブ）、ＢＣＭＡ（例えば、テクリスタマブ）、ＣＤ１９（例えば、タファシタマブ）、ＣＴＬＡ－４（例えば、トレメリムマブ）、ＬＡＧ－３（例えば、レラトリマブ）、ＰＤ－１（例えば、チスレリズマブ、ペンプリマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、レチファンリマブ、ドスタルリマブ）、ＰＤ－Ｌ１（例えば、デュルバルマブ、アベルマブ、アテゾリズマブ）、ＥｐＣＡＭ（例えば、オポルツズマブ、エドレコロマブ）、Ｎｅｃｔｉｎ－４（例えば、エンホルツマブ）、ＣＤ７９ｂ（例えば、ポラツズマブ）が挙げられる。

【0188】

活性剤の組み合わせ及び／又はそれを含む組成物は、任意の従来の剤形で投与され得るか、又は（例えば、連続的に、同時に、異なる時間に）同時投与され得る。本発明の文脈における同時投与は、改善された臨床転帰を達成するように調整された治療の過程における、２つ以上の治療薬の投与を指す。そのような同時投与は、同じ時間範囲内（ｃｏｅｘｔｅｎｓｉｖｅ）であり得、すなわち、重複する期間中に起こり得る。例えば、第１の薬剤（例えば、本明細書に記載のコンジュゲート化合物）は、第２の活性剤（例えば、化学療法剤又は免疫療法剤）が投与される前に、同時に、前後に、又は後に、患者に投与され得る。薬剤は、ある実施形態において、単一の組成物中で組み合わされ／製剤化されてもよく、したがって、同時に投与され得る。

【0189】

本明細書で使用される場合、「対象」又は「患者」という用語は、げっ歯類、ネコ、イヌ、及び霊長類などの哺乳動物を示す。好ましくは、本開示による対象又は患者は、ヒトである。

【実施例】

【0190】

本開示は、以下の非限定的な例によって更に詳細に例示される。

【0191】

実施例１：材料及び方法
試薬。ＴＨ１９Ｐ０１（ＧＶＲＡＫＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫＳＥＳＹ、配列番号１０）及びＴＨ１９０２（アセチル－ＧＶＲＡＫ（ドセタキセル）ＡＧＶＲＮ（Ｎｌｅ）ＦＫ（ドセタキセル）ＳＥＳＹ、配列番号３０）を、以前に記載されているように合成した（ＰＣＴ公開第２０１７／０８８０５８号）。ＴＨ１９Ｐ０１－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）４８８は、Ｃ末端残基にシステインを付加すること（ＴＨ１９Ｐ０１－Ｃ末端_Cys）によってＴＨ１９Ｐ０１ペプチドを修飾することによって合成して、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）４８８タグを結合させた。ＴＨ１９Ｐ０１－Ｃ末端_Cysを、２．５ｍｇ／ｍｌの濃度で１５％のアセトニトリル／ギ酸（０．１％）に溶解した。１０ｍｇ／ｍｌの濃度でＤＭＳＯ中に溶解させたＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）４８８Ｃ₅－マレイミド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，＃Ａ１０２５４）を、ＴＨ１９Ｐ０１－Ｃ末端_Cys溶液（比率：ペプチド５ｍｇ当たり１ｍｇの蛍光プローブ）に付加した。この比率は、蛍光プローブを溶液中で完全にコンジュゲートするために、過剰のペプチドを含有する。混合物のｐＨを、０．１Ｎ ＮａＯＨで５に調整した。反応を、ＵＰＬＣ－ＭＳ（ｐＨ５で約５～１０分）によって完了させ、次いで、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８（商標）標識ＴＨ１９Ｐ０１ペプチド（ＴＨ１９Ｐ０１－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）４８８）を、Ａ）水中０．１％のギ酸及びＢ）ＡＣＮ中０．１％のギ酸を用いて３０ＲＰＣ樹脂を使用してＡＫＴＡ精製器上の分取スケールＨＰＬＣによって精製した。良好な画分を試験し、プールし、凍結乾燥した。ＴＨ１９Ｐ０１－Ａｌｅｘａ４８８は、黄色の粉末であり、使用するまで－２０℃で暗所に保存した。ドセタキセルは、Ｔｅｃｏｌａｎｄ Ｉｎｃ．から購入した。

【0192】

腫瘍細胞株。トリプルネガティブヒト乳がん幹細胞（ｈＢＣＳＣ）は、Ｃｅｌｐｒｏｇｅｎ（Ｓａｎ Ｐｅｄｒｏ，カタログ＃３６１０２－２９）から購入した。ヒトトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）由来のＭＤＡ－ＭＢ－２３１／Ｌｕｃ（上皮性乳房腺がん）細胞は、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｉｎｃ．（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，＃ＡＫＲ－２３１）から得た。イヌ腎上皮ＭＤＣＫ－ＭＤＲ１細胞は、Ｄｒ．Ａｍａｎｄａ Ｙａｎｃｙ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，ＬＰ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ ＤＥ，ＵＳＡ）（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（２００５）５６：１７３－１８１）によって提供された。

【0193】

細胞株及び細胞培養。血清（＃Ｍ３６１０２－２９Ｓ）を含むヒト乳がん幹細胞完全増殖培地（＃Ｍ３６１０２－２９Ｓ）及び未分化培地（＃Ｍ３６１０２－２９ＵＳ）、並びにそれらに対応するヒト乳がん幹細胞培養細胞外増殖マトリックス（＃Ｅ３６１０２－２９－Ｔ７５）又は未分化マトリックス（＃Ｕ３６１０２－２９－Ｔ７５）でプレコーティングされたＴ７５フラスコを、Ｃｅｌｐｒｏｇｅｎから入手した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ｌｕｃ細胞を培養するために、ＤＭＥＭ培地（Ｗｉｓｅｎｔ，＃３１９－００５－ＣＬ）、１００×非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ；Ｈｙｃｌｏｎｅ（商標）Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，＃３０２３８．０１）、及びウシ胎児血清（ＦＢＳ；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．；＃１２４８３－０２０）を使用した。高グルコースＤＭＥＭは、Ｗｉｓｅｎｔ（Ｓｔ－ＢｒｕｎｏＱＣ，＃３１９－０２０－ＣＬ）から得た。ヒトトリプルネガティブヒト乳がん幹細胞（ｈＢＣＳＣ，カタログ＃３６１０２－２９、マーカーＣＤ１３３、ＣＤ４４、ＳＳＥＡ３／４及びＯｃｔ４が陽性）、ヒト卵巣がん幹細胞（ｈＯｖＣＳＣ，カタログ番号＃３６１１３－４０、マーカーＣＤ４４、ＣＤ１３３、ＳＳＥＡ３／４、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、Ｎａｎｏｇ、ｃＫｉｔ、Ｎｅｓｔｉｎ、Ｌｉｎ２８が陽性）、並びにヒト膵臓がん幹細胞（ｈＰＣＳＣ，カタログ番号＃３６１１５－４２、マーカーＣＤ１３３、ＣＤ４４、ＳＳＥＡ３／４、Ｏｃｔ４、及びＮｅｓｔｉｎが陽性）は、Ｃｅｌｐｒｏｇｅｎ（Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）から購入した。細胞を、接着単層として、加湿雰囲気（５％ ＣＯ₂）中、３７℃で増殖させた。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ｌｕｃ細胞を、１×ＮＥＡＡを含む１０％のＦＢＳを補充したＤＭＥＭ中で培養した。ＭＤＣＫ－ＭＤＲ１細胞を、１×ＮＥＡＡ溶液及び１０％のＦＢＳを補充した高グルコースＤＭＥＭ中で増殖させた。ｈＢＣＳＣ、ｈＯｖＣＳＣ、及びｈＰＣＳＣＳを、プロバイダの指示（Ｃｅｌｐｒｏｇｅｎ）に従って、対応する増殖及び未分化マトリックスでプレコーティングされたＴ７５フラスコを使用して、血清を含む適切な増殖及び未分化培地で増殖させた。

【0194】

実験的使用のために、細胞を、トリプシン（Ｗｉｓｅｎｔ、番号３２５－０４２－ＣＬ）で５～１０分間処理することによって培養フラスコから切り離し、次いで、１０倍希釈し、完全培養培地を添加することによって中和した。細胞数は、細胞のトリパンブルー（０．４％、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃１５２５００６１）排除染色後、血球計（Ｈａｕｓｓｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃３２００）によって手動で評価した。

【0195】

ＴＨ１９Ｐ０１－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）４８８による細胞内蛍光の評価では、ｈＢＣＳＣを、完全培地中、１２ウェルプレートで２４時間増殖させた。いくつかの実験では、細胞を、ＨＢＳＳ（フェノールを含まない）で洗浄し、過剰な非標識ＴＨ１９Ｐ０１（５０μＭ）、ニューロテンシン（１０μＭ）（Ａｍｂｉｏｐｈａｒｍ；Ｎｏｒｔｈ Ａｕｇｕｓｔａ、ＳＣ；＃ＡＰｉ１２６０）、又はプログラニュリン（１ｎＭ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ；Ｏａｋｖｉｌｌｅ，ＯＮ；＃Ｋ１１０５１７－Ｌ１）とともに、２００ｎＭのＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）４８８標識ＴＨ１９Ｐ０１の存在下又は不在下で、ＨＢＳＳ中でインキュベートした。別の実験では、ｓｉＳｃｒａｍｂｌｅｄ－又はｓｉＳＯＲＴ１トランスフェクト細胞を、ＨＢＳＳで洗浄し、２００ｎＭのＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）４８８標識ＴＨ１９Ｐ０１の存在下又は不在下で、ＨＢＳＳ中でインキュベートした。両方のタイプの実験について、３７℃で２時間インキュベーションした後、細胞を、ＨＢＳＳで洗浄し、トリプシン処理し、再び洗浄し、Ｃ６ Ａｃｃｕｒｉ（商標）フローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用して、ＦＬ１チャネルで蛍光を評価した。

【0196】

ソルチリンサイレンシング。ｈＢＣＳＣを、１００ｎＭのスクランブルされたｓｉＲＮＡ配列（ＡｌｌＳｔａｒ陰性対照ｓｉＲＮＡ，１０２７２８１）又はＳＯＲＴ１ ｍＲＮＡに対して生成されたヒトｓｉＲＮＡ（Ｈｓ＿ＳＯＲＴ＿５ ＦｌｅｘｉＴｕｂｅ ｓｉＲＮＡ：ＳＩ０３１１５１６８；Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）で、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２０００（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＯＮ）を使用して、２４時間一過的にトランスフェクトした。

【0197】

試験物品によるｈＢＣＳＣの遊走の阻害。スクラッチ（創傷治癒）アッセイを使用して、細胞遊走実験を行った。細胞（２．８×１０⁵細胞／ウェル）を、６ウェルプレートに播種し、２４時間後、滅菌ｐ２００ピペットチップを使用してスクラッチした。細胞を、無血清培地で洗浄して、剥離された細胞を取り出し、次いで、ビヒクル（ＤＭＳＯ）、２μＭドセタキセル、又は１μＭＴＨ１９０２を含有する無血清培地で２時間処理した。細胞を、完全培地ですすぎ、新鮮な完全培地中で４８時間インキュベートした。スクラッチの０、２４、及び４８時間後、倒立顕微鏡を使用して画像を取得した。

【0198】

フローサイトメトリーによるｈＢＣＳＣアポトーシスの評価。アネキシンＶ／ＰＩ染色は、製造元の指示に従って、アポトーシス検出キット（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ，ＯＮ）を使用して行った。簡潔には、ｈＢＣＳＣ（１．３×１０⁵細胞／ウェル）を１２ウェルプレートに２４時間播種した。細胞を、ビヒクル（ＤＭＳＯ）、４μＭのドセタキセル、又は２μＭのＴＨ１９０２を含む無血清培地中で２時間処理した。細胞を、完全培地で洗浄し、新鮮な完全培地中で２２、４８、及び７２時間インキュベートした。細胞を、最終的に回収し、５μＬのアネキシンＶ－ＦＩＴＣ及び５μＬのＰＩを含有する１００μｌの１×結合緩衝液の染色溶液に再懸濁した。細胞を、暗所で、室温で１５分間インキュベートした後、フローサイトメトリーによって分析した。アポトーシスの程度を測定し、次いで、ＢＤ Ａｃｃｕｒｉ（商標）Ｃ６ソフトウェアを使用して分析した。

【0199】

チューブリン重合に対するドセタキセル及びＴＨ１９０２の効果。ｈＢＣＳＣを、プレコーティングされた１８ｍｍ顕微鏡カバースリップ（Ｃｅｌｐｒｏｇｅｎ，＃Ｅ３６１０２－２９－ＣＳ１８）上で８０％コンフルエンスまで増殖させ、ＰＢＳですすぎ、３７℃で、ビヒクル（ＤＭＳＯ）、４μＭのドセタキセル、又は２μＭのＴＨ１９０２を含有する無血清培地に曝露した。２時間インキュベーションした後、細胞を、完全培養培地ですすぎ、新鮮な完全培地中で４８時間インキュベーションした。次いで、細胞を、ＰＨＥＭ緩衝液（６０ｍＭのＰｉｐｅｓ、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０ｍＭのＥＧＴＡ、及び２ｍＭのＭｇＣｌ2、ｐＨ６．９）で洗浄し、４％のパラホルムアルデヒドで１５分間固定し、次いで、ＰＨＥＭ緩衝液中１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００で５分間透過処理し、ＰＨＥＭ緩衝液で再び洗浄した。細胞を、１０％の正常ヤギ血清及び０．０５％のＴｒｉｔｏｎ（商標）を含有するＰＢＳ（２．６ｍＭのＫＣｌ、１．４ｍＭのＫＨ₂ＰＯ₄、１３６．９ｍＭのＮａＣｌ、及び６．５ｍＭのＮａ₂ＨＰＯ₄・７Ｈ₂Ｏ；ｐＨ７．２）中でブロッキングし、次いで、洗浄緩衝液（５％の正常ヤギ血清及び０．０２５％のＴｒｉｔｏｎを含有するＰＢＳ）に希釈した１：２０００の抗α－チューブリン一次モノクローナル抗体（クローンＢ－５－１－２，Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ；＃Ｔ５１６８）と１時間インキュベートした。細胞を、洗浄緩衝液で洗浄し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）４８８コンジュゲートヤギ抗マウス二次抗体（１：１０００；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；＃Ａ－１１００１）で１時間インキュベートし、希釈したブロッキング緩衝液で洗浄し、ＤＡＰＩ（ＰＢＳ中２μｇ／ｍｌ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；＃Ｄ１３０６）で３分間染色し、再び洗浄ブロッキング緩衝液で洗浄し、Ｐｒｏｌｏｎｇ（商標）Ｇｏｌｄアンチフェイド試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｐ３６９３４）を使用してスライド上にマウントした。細胞の画像を、共焦点顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ Ａ１）によって最終的にデジタル化し、ＮＩＨ ＩｍａｇｅＪ（商標）バージョン１．４．２１ソフトウェアを使用して分析した。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）４８８に使用した励起波長及び発光波長は、それぞれ４８８ｎｍ及び５２５ｎｍであり、ＤＡＰＩに使用した励起波長及び発光波長は、それぞれ４０４ｎｍ及び４５０ｎｍであった。

【0200】

試験物品によるｈＢＣＳＣの処理後の細胞周期分析。ｈＢＣＳＣ（２．８×１０⁵細胞／ウェル）及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ｌｕｃ細胞（２．３×１０⁵細胞／ウェル）を、処理の１日前に６ウェルプレートに播種した。細胞周期に対するドセタキセル及びＴＨ１９０２の効果を試験するために、ｈＢＣＳＣ及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ｌｕｃ細胞を、ビヒクル（ＤＭＳＯ）、４μＭのドセタキセル、又は２μＭのＴＨ１９０２（等モルのドセタキセル）を含む無血清培地中で２時間処理し、完全培地ですすぎ、新鮮な完全培地中で２２時間及び４８時間インキュベートした。Ｐ－ｇｐ阻害剤を用いた実験の場合、ｈＢＣＳＣを、ビヒクル（ＤＭＳＯ）、又は１０μＭのシクロスポリンＡ若しくはＰＳＣ－８３３（Ｐ－ｇｐ阻害剤）を含む無血清培地中で３０分間前処理した。次に、細胞を、Ｐ－ｇｐ阻害剤の継続的な存在又は不在下、４μＭのドセタキセル又は２μＭのＴＨ１９０２で２時間処理した後、すすぎ、Ｐ－ｇｐ阻害剤の継続的な存在又は不在下、新鮮な完全培地中でインキュベートした。次いで、細胞を、２２及び４８時間インキュベートした。両方のアッセイにおいて、インキュベーション後、細胞を、トリプシンで剥離し、氷冷７０％のＥｔＯＨで固定し、４℃で一晩維持した。細胞を、ＰＢＳで１回洗浄し、その後、ＦｘＣｙｃｌｅ（商標）ＰＩ／ＲＮａｓｅ染色溶液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；＃Ｆ１０７９７）で、室温で３０分間染色した。細胞を、最終的に、ＢＤ Ａｃｃｕｒｉ（商標）Ｃ６フローサイトメーターを使用して細胞周期の分析に供した。

【0201】

ウエスタンブロッティングによるＭＤＲタンパク質の検出。細胞を、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）からの完全なプロテアーゼ阻害剤カクテルを補充した溶解緩衝液（１％のＳＤＳ）中でホモジナイズした。細胞を、室温で３０分間インキュベートし、５分ごとにボルテックスした。次いで、細胞を、超音波処理器（Ｓｏｎｉｃｓ、モデル：Ｖｉｂｒａ Ｃｅｌｌ（商標）ＶＣ１３０）で、８０％の振幅で、各３秒間を３サイクル超音波処理し、１５，０００ｇで、４℃で１０分間遠心分離した。マイクロＢＣＡタンパク質アッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，＃２３２３５）を使用して、タンパク質を定量化した。等量のタンパク質（２０μｇ）を、ＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動法（ＰＡＧＥ）によって分離した。次いで、タンパク質をフッ化ポリビニリデン（ＰＶＤＦ）膜に電気転写し、０．１％のＴｗｅｅｎ（商標）－２０を含有するＴｒｉｓ緩衝生理食塩水（１５０ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．５）（ＴＢＳＴ）中５％の脱脂粉乳を使用して、室温で１時間ブロッキングした。膜を、ＴＢＳＴで洗浄し、３％のＢＳＡ及び０．０５％のＮａＮ₃を含むＴＢＳＴに希釈したα－Ｐｇｐ（１μｇ／ｍｌ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＃ＭＡ１－２６５２８）、ＡＢＣＢ５（１：１，０００，Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ Ｃｅｎｔｅｎｎｉａｌ，ＣＯ，＃ＮＢＰ１－７７６８７）、ソルチリン（マウスｍＡｂ（１：１，０００，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）、又はウサギポリクローナルＡｂ（１μｇ／ｍｌ，Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ））に対する一次抗体と一晩インキュベートした。膜をＴＢＳＴ中で洗浄し、５％無脂肪ドライミルクを含有するＴＢＳＴ中のホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲート抗マウス又は抗ウサギＩｇＧ（１／５０００希釈，Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）と室温で１時間インキュベーションした。膜を、ＴＢＳＴで再び洗浄し、増強型化学発光（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂａｉｅ ｄ’Ｕｒｆｅ，ＱＣ）を使用してシグナルを検出した。

【0202】

ドセタキセル及びＴＨ１９０２抗腫瘍有効性のインビボ評価。腫瘍異種移植片を、５０％のＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）を含有する１００μＬのＨＢＳＳ中に再懸濁した１０³個のｈＢＣＳＣ細胞、ｈＯｖＣＳＣ、及びｈＰＣＳＣを、軽いイソフルラン麻酔下でＮＣＧトリプル免疫不全雌マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ，Ｓａｉｎｔ－Ｃｏｎｓｔａｎｔ，ＱＣ）の右脇腹に皮下接種することによって確立した。ｈＢＣＳＣ又はｈＯｖＣＳＣＳのいずれかの移植の３日後、マウスは、ビヒクル（１０％のポリソルベート－８０、５％のデキストロース、０．０４％のギ酸、ｐＨ４．３）、ドセタキセル（１５ｍｇ／ｋｇ（この薬剤のＭＴＤ）又は３．７５ｍｇ／ｋｇ（この薬剤の１／４ＭＴＤ）；５％のデキストロース、３．３％のエタノール、１．７％のＴｗｅｅｎ（商標）－８０に溶解したもの）、又はＴＨ１９０２（３５ｍｇ／ｋｇ又は８．７５ｍｇ／ｋｇ；ビヒクルに溶解したもの）の毎週の静脈内ボーラス注射による処置を受け始めた。ＴＨ１９０２及びドセタキセルの２つの濃度は、１分子のＴＨ１９０２当たりの２分子のドセタキセル部分に起因して、等モル量のドセタキセルを含むことに留意されたい。電子キャリパーを用いて行われた二次元測定値を使用して、腫瘍増殖を測定し、腫瘍体積を、以下の式：腫瘍体積（ｍｍ³）＝π／６×長さ×幅²に従って計算した。動物の体重を、１０ｍｇの精度で、週３回測定した。

【0203】

統計解析．使用した個々の統計検定は、図の凡例及びそれぞれのテキストに記載されている。Ｐｒｉｓｍソフトウェアバージョン８．３．１（ＧｒａｐｈＰａｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を使用して、全ての統計分析を行った。

【0204】

実施例２：ｈＢＣＳＣによる蛍光標識ＴＨ１９Ｐ０１の内在化
ｈＢＣＳＣ及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ｌｕｃ細胞におけるソルチリンの発現を、ウエスタンブロット分析によって評価した（図１Ａを参照）。結果は、両方の細胞株が測定可能なレベルのソルチリンを含有することを示した。ｈＢＣＳＣを、ビヒクル単独又は２００ｎＭの蛍光ペプチドＴＨ１９Ｐ０１－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）４８８を含むビヒクルのいずれかに２時間曝露した。ビヒクル処理細胞で見られる蛍光のレベルは、使用される装置で測定された細胞のバックグラウンド蛍光のみの推定値である。ＴＨ１９Ｐ０１－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）４８８への細胞の曝露は、バックグラウンド蛍光よりも１桁大きく、したがって、容易に見える蛍光シグナルを生成した（図１Ｂを参照）。

【0205】

実施例３：ソルチリンリガンドによる及びソルチリンサイレンシング時のＴＨ１９Ｐ０１内在化の阻害
ＴＨ１９Ｐ０１－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）４８８のｈＢＣＳＣ内在化がソルチリンによって媒介されることを実証するために、蛍光ペプチドへの細胞の曝露を、過剰量のいくつかの既知のソルチリンリガンドの存在下又は不在下で繰り返して、これらの物質が内在化に対してペプチドと競合することができるかどうかを決定した。図２Ａは、ｈＢＣＳＣへの蛍光ペプチドの内在化に対するニューロテンシン（ＮＴ）、ＴＨ１９Ｐ０１、及びプログラニュリン（ＰＧＲＮ）の効果を示す。競合する３つの薬剤の全てが、細胞内蛍光を有意に減少させた（ｐ＜０．０１）。これは、蛍光ペプチドの内在化が急激に減少したことを示す。その後、この所見の確認は、スクランブルされたｓｉＲＮＡ（ｓｉＳｃｒ）又はヒトソルチリンに特異的なｓｉＲＮＡ（ｓｉＳＯＲＴ１）のいずれかの存在下で、ｈＢＣＳＣをプレインキュベートすることによって提供された。後者は、ＴＨ１９Ｐ０１－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）４８８への曝露後、細胞内蛍光の量を７７％減少させた。これは、ソルチリンがｈＢＣＳＣにおけるこの蛍光ペプチドの内在化に関与することを再度示す。ｈＯｖＣＳＣでも同様の結果が得られた（図２Ｃ及び図２Ｄ）が、ヒトソルチリンに特異的なｓｉＲＮＡ（ｓｉＳＯＲＴ１）とのｈＯｖＣＳＣのプレインキュベーションに続くＴＨ１９Ｐ０１－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８への曝露後の細胞内蛍光の量の減少は、それほど顕著ではなかった（３７％）（図２Ｄ）。これは、卵巣ＣＳＣにおけるＴＨ１９Ｐ０１－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）４８８の可能な代替的なソルチリン非依存的内在化機構を示唆する。

【0206】

実施例４：ドセタキセル又はＴＨ１９０２によるｈＢＣＳＣの遊走の阻害
細胞遊走の１つの標準的な測定は、スクラッチアッセイであり、培養腫瘍細胞を有するスライドのある領域から細胞を掻き取り、その後の腫瘍細胞によるその領域の再定着を監視する。図３に示されるように、最初の細胞除去により、特定の領域の細胞が除去された。細胞除去の２４時間後までに、ビヒクルを含有する培地で処理された除去された領域、並びに２μＭのドセタキセルを含有する培地で処理された領域は、完全に再定着し、除去された領域を、もはや区別することができなかった。対照的に、ＴＨ１９０２で処置された領域は、少なくとも４８時間、ｈＢＣＳＣが実質的に不毛のままであった。これは、ＴＨ１９０２がｈＢＣＳＣの遊走を阻害することを示す。

【0207】

実施例５：ドセタキセル又はＴＨ１９０２によるｈＢＣＳＣのアポトーシスの誘導
ｈＢＣＳＣをＴＨ１９０２又はドセタキセルに曝露して、アポトーシスを誘導することができるかどうかを調べた。ＴＨ１９０２が、早くも処理の２２時間後、これらの細胞においてアポトーシスの大幅な増加をもたらし、それが次の５０時間にわたって増加し続けたのに対し、ドセタキセル処理細胞におけるアポトーシスは、対照細胞において見られるものと区別できないことは、図４Ａにおいて明らかである。この発見は、処理の４８時間後にＴＨ１９０２で処理された多くの細胞において断片化された核の出現によって確認され（図４Ｂを参照）、これは、ビヒクルで処理された細胞又はドセタキセルで処理された細胞には見られない。また、処理の４８時間後、細胞形態も調べた。図４Ｃ及び図４Ｃからわかるように、ＴＨ１９０２又はドセタキセルのいずれかによるｈＢＣＳＣの処理は、ビヒクル処理細胞とは対照的に、目に見える形態変化を引き起こす。更に、チューブリン標識によって観察される細胞の増殖及び微小管の再編成は、一部のドセタキセル処理細胞に存在するが、ＴＨ１９０２処理細胞においてより顕著である。ドセタキセルなどの細胞傷害性剤による微小管の撹乱が、細胞アポトーシスを導くことが知られている。

【0208】

実施例６：ｈＢＣＳＣ対ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ｌｕｃ細胞におけるドセタキセル及びＴＨ１９０２によるＧ２／Ｍ期停止の誘導の比較
図５Ａ～図５Ｂに報告された結果は、ドセタキセルではなくＴＨ１９０２が、ｈＢＣＳＣにおけるＧ２／Ｍ細胞周期停止の有意な増加を誘導することを示す。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞において、ＴＨ１９０２及びドセタキセルは、増加した効果が顕著になる時間に違いがあるものの、同様のＧ２／Ｍ細胞周期停止の増加を誘発し、ＴＨ１９０２で処理したＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞において、一部のＧ２／Ｍ細胞周期停止が２２時間で検出される（ただし、ドセタキセルでは検出されない）（図５Ｄ、左パネル）。これらの結果は、実施例５に報告されたアポトーシス誘導実験の結果と一致し、ＴＨ１９０２が、ドセタキセルなどの標準的な細胞傷害性剤による処理に耐性であることが知られているｈＢＣＳＣにおいて、細胞周期停止及びアポトーシスを誘導する能力を有するという説得力のある証拠を提供する。

【0209】

実施例７：多剤耐性（ＭＤＲ）阻害剤の存在下でのｈＢＣＳＣにおけるドセタキセル及びＴＨ１９０２によるＧ２／Ｍ期停止の誘導の比較
ドセタキセル及びＴＨ１９０２によるアポトーシスの誘導を更に調査するために、これらの化合物を使用して、ＭＤＲタンパク質の阻害剤の存在下でｈＢＣＳＣを処理した。多種多様な薬物の腫瘍細胞からの除去を媒介する（及びドセタキセルの蓄積を制限することが知られている）ＭＤＲタンパク質は、化学療法に対する耐性の基礎となる主な要因の１つである。図６Ａに示されるように、ｈＢＣＳＣは、ヒトタンパク質がトランスフェクションを介して過剰発現されたイヌ細胞株ＭＤＣＫ－ＭＤＲ１よりも高いレベルのＭＤＲ１（Ｐ－ｇｐ）を発現する。加えて、ｈＢＣＳＣは、ＭＤＲ１に関連する多剤排出タンパク質であるタンパク質ＡＢＣＢ５を高レベルで発現することも示された（図６Ａ）。結果として、これらの細胞は、ドセタキセルによるアポトーシスの誘導に対するそれらの耐性におけるＭＤＲタンパク質の関与を調べるための優れたモデルを提供する。

【0210】

Ｇ２／Ｍ期におけるｈＢＣＳＣ細胞の割合を、ドセタキセルによる処理とＴＨ１９０２による処理との間で比較すると（図６Ｃ及び図６Ｄ）、注目される最初の違いは、ドセタキセルではなく、ＴＨ１９０２が、Ｇ２／Ｍ期における細胞の割合の強い増加を引き起こすことである（図５Ａ～図５Ｄに報告された結果と一致する）。２つの多剤排出タンパク質の阻害剤であるＣｓＡ及びＰＣＣ－８３１は、ｈＢＣＳＣにおけるＧ２／Ｍ細胞周期停止を誘導するＴＨ１９０２の能力に影響を与えなかった。対照的に、ＣｓＡ又はＰＣＣ－８３１の存在下では、ドセタキセルは、Ｇ２／Ｍ細胞周期停止に影響を与え、これは、ＴＨ１９０２で見られたものと同様であった。これらの結果は、ｈＢＣＳＣによって発現されたＭＤＲタンパク質の排出活性が、ドセタキセルに対する耐性を付与するが、ＴＨ１９０２の細胞毒性は、これらのタンパク質の存在によって影響されないことを示し、したがって、ＴＨ１９０２及びソルチリンを標的とする他のペプチドベースのコンジュゲートが、ＭＤＲタンパク質を発現又は過剰発現するＣＳＣの増殖を阻害するのに有用であり得るという証拠を提供する。

【0211】

実施例８：ＴＨ１９０２の投与は、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ルシフェラーゼ異種移植片マウスモデルにおけるがんの再発を予防する
次いで、ＴＮＢＣのＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ルシフェラーゼ異種移植片マウスモデルを使用して、ドセタキセル又はＴＨ１９０２による処置が、がんの再発を予防することができるかどうかを評価した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１腫瘍細胞は、がん幹細胞（ＣＳＣ）様の特性を有する細胞を有することが報告されている（Ｓｌｅｅｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｓｃｉ．２０１８ Ｏｃｔ；１９（１０）：３０４７、Ｇｈａｎｂａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｒｐｈｏｌ．，３４（４）：１１９７－１２０２，２０１６）。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１／ルシフェラーゼ腫瘍異種移植片を有するマウスを、０、７、１４、及び２１日目に、ビヒクル（対照）、ドセタキセル、又はＴＨ１９０２のいずれかで処置し、腫瘍の増殖を７４日目まで評価した。ドセタキセルとＴＨ１９０２との両方による処置は、投与中及び投与直後に腫瘍増殖の減少をもたらしたが、ＴＨ１９０２のみによる処置は、後の時点でがんの再発を予防したことが見出された。ＴＨ１９０２処置群では、７４日目に残存する腫瘍は検出されなかったが、ドセタキセル処置群では、腫瘍の再発が観察された。これらの結果は、ドセタキセルではなく、ＴＨ１９０２が、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１腫瘍異種移植片におけるＣＳＣを含む全ての腫瘍細胞の除去をもたらし、したがって、これらの細胞の持続性に起因するがんの再発を予防したという証拠を提供する。

【0212】

実施例９：ＴＨ１９０２の投与は、異種移植マウスモデルにおいて乳房、卵巣、及び膵臓ＣＳＣ腫瘍の増殖を減少させる
次に、ＴＨ１９０２がインビボでＣＳＣに由来するヒト腫瘍の増殖を阻害することができるかどうかを試験した。図７Ａ～図７Ｃに示される結果は、ヒトＴＮＢＣ（ＨＢＣＳＣ、図７Ａ）、卵巣（ＨＯｖＣＳＣ、図７Ｂ）、及び膵臓（ＨＰＣＳＣ、図７Ｃ）がんからのがん幹細胞様細胞の皮下注射が、免疫不全マウスにおける腫瘍の増殖をもたらすことを示す。図７Ｄ及び図７Ｅに示されるように、ＨＢＣＳＣ、ＨＯｖＣＳＣ、及びＨＰＣＳＣは全て、多剤タンパク質ＡＢＣＢ５及びＰ－ｇｐ（ＭＤＲ１）、並びにソルチリンを発現する。

【0213】

図８Ａ～図８Ｂ、図９Ａ～図９Ｂ、及び図１０Ａ～図１０Ｂに示される結果は、１、１．２５、又は１．５ＭＴＤのドセタキセルに等しい用量で投与されたＴＨ１９０２が、乳房、卵巣、及び膵臓のＣＳＣに由来する腫瘍の増殖の有意な阻害をもたらすことを示す。対照的に、ＭＴＤのドセタキセル（１５ｍｇ／ｋｇ）の投与後、腫瘍増殖の有意な減少は測定されなかった。また、ＴＨ１９０２の投与は、ドセタキセルの投与とは対照的に、これらのマウスにおける腫瘍塊の増加にもかかわらず（典型的には５～１０％の体重減少に関連付けられる）、動物の体重に何ら影響しなかったか又は影響が最小限であった（図８Ｃ、図９Ｃ、及び図１０Ｃ）。

【0214】

実施例１０：併用化学療法を用いた処置による卵巣ＣＳＣ腫瘍増殖の阻害
卵巣ｈＯＣＳＣ異種移植片を有するマウスを、ビヒクル、ドセタキセル、パクリタキセル、ＴＨ１９０２、又はカルボプラチンで処置し、マウスの他の群には、カルボプラチンを、ドセタキセル、パクリタキセル、又はＴＨ１９０２のいずれかと組み合わせて投与した。併用治療に起因する副作用のリスクを最小限に抑えるために、各薬物に使用される投薬量を以下に減少させた：ドセタキセル１０ｍｇ／ｋｇ；ＴＨ１９０２ ２３ｍｇ／ｋｇ（ドセタキセル投薬量に等しい）；パクリタキセル１０ｍｇ／ｋｇ；カルボプラチン４０ｍｇ／ｋｇ（不変）。

【0215】

ドセタキセルによる腫瘍増殖の阻害は、再びＴＨ１９０２の阻害よりも明らかに劣っていた（図１１Ａ及び図１１Ｂを参照されたい）。パクリタキセル及びカルボプラチンは、各々、ドセタキセルで見られるものと実質的に同等のレベルの腫瘍増殖阻害を示した。いずれかのタキサンをカルボプラチンと組み合わせて投与すると、腫瘍増殖の阻害がわずかに増加した。ＴＨ１９０２による阻害は、（カルボプラチンあり又はなしで）いずれかのタキサンよりもはるかに大きく、カルボプラチンとの併用投与によってわずかに増加した。ＴＨ１９０２単独による腫瘍増殖の阻害の程度は、非常に重要であり、カルボプラチンとの併用投与の効果を測定することは困難であった。

【0216】

本発明は、本明細書に上記の特定の実施形態によって説明されてきたが、添付の特許請求の範囲で定義される主題発明の趣旨及び性質から逸脱することなく、変更され得る。特許請求の範囲では、「含む」という単語は、「限定されないが、含む」という語句と実質的に等価である、オープンエンド用語として使用される。「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数形は、別段文脈が明らかに指示しない限り、対応する複数の対象物を含む。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図7E】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図11A】

【図11B】

【配列表】

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【国際調査報告】