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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-02-28
(54)【発明の名称】局所用組成物及びその使用
(51)【国際特許分類】
A61K 8/99 20170101AFI20240220BHJP
A61K 8/25 20060101ALI20240220BHJP
A61K 8/92 20060101ALI20240220BHJP
A61K 8/31 20060101ALI20240220BHJP
A61K 8/60 20060101ALI20240220BHJP
A61K 8/36 20060101ALI20240220BHJP
A61K 8/81 20060101ALI20240220BHJP
A61K 8/86 20060101ALI20240220BHJP
A61K 8/37 20060101ALI20240220BHJP
A61K 8/55 20060101ALI20240220BHJP
A61K 8/04 20060101ALI20240220BHJP
A61Q 19/08 20060101ALI20240220BHJP
A61Q 19/00 20060101ALI20240220BHJP
【ＦＩ】
A61K8/99
A61K8/25
A61K8/92
A61K8/31
A61K8/60
A61K8/36
A61K8/81
A61K8/86
A61K8/37
A61K8/55
A61K8/04
A61Q19/08
A61Q19/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023553338
(86)(22)【出願日】2022-03-03
(85)【翻訳文提出日】2023-10-31
(86)【国際出願番号】 IB2022051860
(87)【国際公開番号】W WO2022185238
(87)【国際公開日】2022-09-09
(31)【優先権主張番号】2021900605
(32)【優先日】2021-03-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．アンドロイド
(71)【出願人】
【識別番号】507324555
【氏名又は名称】ブリス テクノロジーズ リミティド
(74)【代理人】
【識別番号】100099759
【弁理士】
【氏名又は名称】青木 篤
(74)【代理人】
【識別番号】100123582
【弁理士】
【氏名又は名称】三橋 真二
(74)【代理人】
【識別番号】100117019
【弁理士】
【氏名又は名称】渡辺 陽一
(74)【代理人】
【識別番号】100141977
【弁理士】
【氏名又は名称】中島 勝
(74)【代理人】
【識別番号】100138210
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 達則
(72)【発明者】
【氏名】ジョン デイビッド フランシス ヘイル
(72)【発明者】
【氏名】ロヒット ジャイン
(72)【発明者】
【氏名】アビゲイル ルイーズ ボス
【テーマコード（参考）】
4C083
【Ｆターム（参考）】
4C083AA031
4C083AA032
4C083AA071
4C083AA081
4C083AA111
4C083AA121
4C083AA122
4C083AB171
4C083AB172
4C083AB191
4C083AB221
4C083AB281
4C083AB321
4C083AB331
4C083AB441
4C083AC011
4C083AC021
4C083AC031
4C083AC122
4C083AC131
4C083AC172
4C083AC231
4C083AC291
4C083AC301
4C083AC421
4C083AC422
4C083AC431
4C083AC441
4C083AC442
4C083AC461
4C083AC491
4C083AC531
4C083AC581
4C083AC641
4C083AC681
4C083AC851
4C083AD091
4C083AD151
4C083AD201
4C083AD211
4C083AD241
4C083AD261
4C083AD262
4C083AD272
4C083AD331
4C083AD351
4C083AD352
4C083AD411
4C083AD412
4C083AD431
4C083AD571
4C083AD621
4C083AD631
4C083AD641
4C083AD661
4C083BB11
4C083BB23
4C083BB41
4C083BB44
4C083BB46
4C083BB47
4C083BB48
4C083BB51
4C083CC02
4C083DD05
4C083DD27
4C083DD30
4C083DD39
4C083EE01
4C083EE06
4C083EE07
4C083EE12
4C083FF01
(57)【要約】
本明細書中に記述されていることは、ミクロコッカス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）組成物を用いて、皮膚の外観又は少なくとも１つの皮膚の老化の兆候を改善する方法である。本発明はまた、そのような方法において有用な局所用組成物、キット及び局所用組成物の製造方法にも関連している。
【選択図】 なし
【選択図】 なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ミクロコッカス・ルテウスＱ２４（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｔｅｕｓ Ｑ２４）を含む局所用組成物を皮膚に適用することを含む、皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候を改善する方法。
【請求項2】
前記組成物は、約１×１０３～約１×１０１２ｃｆｕ／ｇの量のミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記組成物は、粘度調整剤を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項4】
前記組成物は、約３～約１５％ｗ／ｗの量の粘度調整剤を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項5】
前記粘度調整剤は、疎水性シリカ、親水性シリカ、白蝋、黄蝋、パラフィンワックス、ホホバワックス、マイクロクリスタリンワックス、エチルセルロース、ステアリン酸、キサンタンガム、タピオカデンプン、カーボポールポリマー、ココアバター、シアバター及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される、請求項３又は４に記載の方法。
【請求項6】
前記組成物は、分散剤を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記組成物は、約０．１～約５％ｗ／ｗの量の分散剤を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
前記分散剤は、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、オレイン酸ソルビタン、卵レシチン、大豆レシチン、ポリオキシル３５ヒマシ油及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される、請求項６又は７に記載の方法。
【請求項9】
前記組成物は、オイルビヒクルを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
前記オイルビヒクルは、中鎖トリグリセリド、植物油又はそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項11】
前記中鎖トリグリセリドは、トリ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリルである、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
前記植物油は、ひまわり油、菜種油、大豆油、オリーブオイル、ホホバオイル、アルガンオイル、ローズヒップオイル、マルラオイル、カモミールオイル、タマヌオイル、ブドウ種子油及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項13】
前記ミクロコッカス・ルテウスＱ２４は、凍結乾燥保護剤を含まない、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
前記組成物は、さらに一又は複数の追加のプロバイオティクスを含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記一又は複数の追加のプロバイオティクスは、ストレプトコッカス種（ａ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．）、ラクトバチルス種（ａ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、リモシラクトバチルス種（Ｌｉｍｏｓｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、ラクチカゼイバチルス種（ａ Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、リギラクトバチルス種（ａ Ｌｉｇｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、ラクチプランチバチルス種（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、ビフィドバクテリウム種（ａ Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．）、サッカロミセス種（ａ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
前記ストレプトコッカス種は、ストレプトコッカス・サリバリウスＫ１２（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ Ｋ１２）、ストレプトコッカス・サリバリウスＭ１８（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ Ｍ１８）、ストレプトコッカス２４ＳＭＢ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ２４ＳＭＢ）、ストレプトコッカス・オラリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｏｒａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・サリバリウスＤＢ－Ｂ５（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ ＤＢ－Ｂ５）及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項17】
前記組成物は、約１×１０３～約１×１０１２ｃｆｕ／ｇの量のそれぞれ追加のプロバイオティクスを含む、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記組成物は、阻害活性エンハンサー、緩衝剤、抗細菌剤、プレバイオティクス、香料、酸化防止剤、着色剤、皮膚保護剤、抗微生物剤、アルミニウム塩、鉱物顔料、臭気吸収剤又は中和剤、日焼け防止剤及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせをさらに含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
前記阻害活性エンハンサーは、塩化ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸、アルギニン、炭酸カルシウム及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項20】
前記緩衝剤は、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸二水素カリウム、炭酸マグネシウム、尿素、水和酸化アルミニウム、ベントナイト粘度、カオリン粘度及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項21】
前記抗細菌剤は、キシリトール、エリスリトール、エピデルミン、ナイシン、サリバリシンＡ、サリバリシンＡ１、サリバリシンＡ２、サリバリシンＢ、サリバリシン９、サリバリシンＭＰＳ及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項22】
前記プレバイオティクスは、マヌカハニーパウダー、オリーブスクワラン、ザクロ種子油、フラックスシードオイル、ココナッツオイル、コロイドオートミール、ビタミンＥ、ビタミンＣ、レチノール（ビタミンＡ）、オリーブオイル、ヒアルロン酸、カレンデュラオイル、アーモンドオイル、トマト油、アラントイン、アロエベラパウダー、キシリトール、酵母エキス、フラクトオリゴ糖粉末、フラクトオリゴ糖液、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、ナイアシンアミド、日焼け止め及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項23】
前記香料は、ローズウォーター、オレンジブロッサム、ローズガーデニア、ピオニー、ホワイトジャスミン、イランイランオイル、ゼラニウムオイル、ローズオイル及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項24】
前記酸化防止剤は、ビタミンＥ、レスベラトロール、スクワラン、ビタミンＣ、β－カロテン、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール、レチノール、ナイアシンアミド、カフェイン及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項25】
前記皮膚保護剤は、セラミド、コラーゲン、エラスチン、コエンザイムＱ１０、加水分解コラーゲン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、レチノール、パルミトイルトリペプチド－１、パルミトイルテトラペプチド－７、パルミトイルテトラペプチド－３８、アセチルヘキサペプチド－８、ヘプタペプチド－１４、ヘプタペプチド－１５－パルミテート、パルミトイルテトラペプチド－７、パルミトイルトリペプチド－１、α－ヒドロキシ酸、β－ヒドロキシ酸、ビタミンＢ５、海藻、海藻抽出物、シリコーン、キシリトール、カラスムギエキス、オートミール粉、コロイドオートミール、アロエベラ、日焼け止め及びこれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項26】
前記抗微生物剤は、亜鉛、アゼライン酸、過酸化ベンゾイル及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項27】
前記組成物は、約０．１％～約１０％ｗ／ｗのオリーブスクワラン及び約０．１～約１０％ｗ／ｗのザクロ種子油を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
前記組成物は、約０．１％～約１０％ｗ／ｗのオリーブスクワラン及び約０．１～約３％ｗ／ｗのビタミンＥを含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項29】
前記皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候を改善することには、皮膚がより輝いて見えること、皮膚がより健康に見えること、皮膚がより潤ったと感じること、毛穴が小さくなること、皮膚がより柔らかく感じること、皮膚がより透明に見えること、シワが減少すること、乾燥が減少すること、シミが減少すること、不純物が減少すること、水分が増加すること及び皮脂生成が減少することが含まれる、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
前記組成物は非水性である、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項31】
適用される場合に、前記組成物は、水相と組み合わせて適用される、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
前記組成物は、２５℃で約２０，０００～約２，０００，０００ｃｐの粘度を有する、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項33】
前記組成物は、２５℃で、６０％ＲＨで少なくとも６ヶ月の保存可能期間を有する、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項34】
ミクロコッカス・ルテウスＱ２４、粘度調整剤、分散剤及びオイルビヒクルを含む局所用組成物であって、前記組成物が、約１×１０４～約１×１０１０ｃｆｕ／ｇの量のミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む、局所用組成物。
【請求項35】
ミクロコッカス・ルテウスＱ２４、疎水性シリカ、ポリソルベート８０及びオイルビヒクルを含む局所用組成物。
【請求項36】
局所用組成物であって、以下の約１×１０３～約１×１０１２ｃｆｕ／ｇのミクロコッカス・ルテウスＱ２４、
約２～約１０％ｗ／ｗの疎水性シリカ、
約０．５～約２％ｗ／ｗのポリソルベート８０、及び
十分な量のオイルビヒクル、
を含む、局所用組成物。
【請求項37】
前記オイルビヒクルは、中鎖トリグリセリドである、請求項３６に記載の局所用組成物。
【請求項38】
０．１～３５％ｗ／ｗのプレバイオティクス（複数可）をさらに含む、請求項３６又は３７に記載の局所用組成物。
【請求項39】
前記プレバイオティクス（複数可）は、オリーブスクワラン、ザクロ種子油、ビタミンＥ又はそれらの組み合わせから選択される、請求項３８に記載の局所用組成物。
【請求項40】
前記プレバイオティクスは、オリーブスクワラン及びザクロ種子油；オリーブスクワラン及びビタミンＥ；並びにオリーブスクワラン及びザクロ種子油及びビタミンＥの組み合わせから選択される、請求項３８又は３９に記載の局所用組成物。
【請求項41】
皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候を改善するための、請求項１～４０のいずれか一項に記載の局所用組成物。
【請求項42】
皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候を改善するための、薬剤の製造におけるミクロコッカス・ルテウスＱ２４の使用。
【請求項43】
油相及び水相を含む二相組成物であって、前記油相は、請求項３６～４０のいずれか一項に記載の局所用組成物を含む、二相組成物。
【請求項44】
ミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む局所用組成物及び水性組成物を含む、キット。
【請求項45】
前記キットは、第１の容器及び第２の容器を有する分注システムを含み、前記第１の容器がミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む油相を含み、第２の容器が水相を含む、請求項４４に記載のキット。
【請求項46】
ミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む局所用組成物の製造方法であって、以下の工程：ａ）オイルビヒクル及び分散剤を混合すること、
ｂ）工程ａ）からの混合物に、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４及び粘度調整剤を添加すること、
ｃ）工程ｂ）からの混合物を均質化し、組成物を提供すること、
を含む、製造方法。
【請求項47】
前記ミクロコッカス・ルテウスＱ２４の粒径（Ｄｖ９０）は、約３００μｍ未満である、請求項４６に記載の方法。
【請求項48】
前記ミクロコッカス・ルテウスＱ２４の粒径は、約２５０μｍ未満又は約１００μｍ未満である、請求項４６又は４７に記載の方法。
【請求項49】
加熱せずに実施される、請求項４６～４８のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ミクロコッカス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）組成物を用いて、皮膚の外観又は少なくとも１つの皮膚の老化の兆候を改善する方法に関する。本発明はまた、かかる方法において有用な局所用組成物（ｔｏｐｉｃａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ）及びキットにも関連している。
【背景技術】
【0002】
プロバイオティック微生物を含むスキンケア製品は、ますますよく知られるようになってきている。現在までスキンケア製品において用いられてきた微生物又は関連製品は、一般に、ビフィドバクテリウム種（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ）、ラクトバチルス種（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ）（現在では、リモシラクトバチルス種（Ｌｉｍｏｓｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、ラクチカゼイバチルス種（Ｌａｃｔｉｃａｓｅｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、ラクチプランチバチルス種（Ｌａｃｔｉｐｌａｎｔｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、リギラクトバチルス種（Ｌｉｇｉｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）として知られている）、ラクトコッカス種（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ）及びストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ）又は前記細菌から作成されたろ液若しくは溶解物である。しかしながら、それらが皮膚微生物叢と相互作用する際に果たす役割は、十分に理解されていない。
【0003】
ＷＯ２００６１０４４０３（Ｂｌｉｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ）は、ミクロコッカス・ルテウス（Ｍ．ｌｕｔｅｕｓ）組成物及び皮膚疾患又は障害を制御するためのそれらの治療的使用を説明する。Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ Ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ、ブラウンシュヴァイク、ドイツにアセッション番号 ＤＳＭ １７１７２で寄託するプロバイオティック株Ｑ２４もまた、提供されている。この文書は、参照により本明細書中に全体として援用される。
【0004】
ＡＮＺＣＴＲ、湿疹治療（Ｅｃｚｅｍａ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）のためのプロバイオティクス（登録番号：ＡＣＴＲＮ１２６１６００００２２４６０）は、湿疹の治療のためのミクロコッカス・ルテウスＱ２４（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｔｅｕｓ Ｑ２４）の溶解物の使用を試験する臨床試験を説明する。結果は提供されていない。
【0005】
本出願人らは、化粧品用途におけるＭ．ルテウスの新たな役割を予想外に同定した。そのような化粧品用途としては、皮膚の外観又は少なくとも１つの皮膚の老化の兆候を改善することが挙げられる。この予期せぬ発見に基づき、化粧品用途に適した新しい化粧品処理方法及び組成物を開発する必要がある。
【0006】
プロバイオティック生物を扱うことは困難である。プロバイオティクスは敏感であり、様々な凍結乾燥工程、かかる工程において用いられる薬剤、処理条件及び製剤化剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｇｅｎｔｓ）などに対して、しばしば予測できない反応を示す。
【0007】
厳しい凍結乾燥工程において、微生物は、一般に様々な凍結乾燥保護剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔｓ）及び凍結保護剤（ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔｓ）を用いて保護される。本出願人らはまた、驚くべきことに、Ｍ．ルテウスがプロバイオティック微生物の生存能力の有意な低下を伴わない、凍結乾燥保護剤又は凍結保護剤の非存在下において製剤化し得るということを見出した。
【0008】
Ｍ．ルテウスが水性溶媒及び極性溶媒中で不安定であることが発見され、化学物質に敏感であり、かつ熱に敏感であるため、ミクロコッカス・ルテウスを含む製剤の調製は、困難であり得る。
【0009】
本発明の目的は、ミクロコッカス・ルテウス組成物を使用して、皮膚の外観又は少なくとも１つの皮膚の老化の兆候を改善する方法を提供すること；及び／又は少なくとも有用な選択肢を公衆に提供することである。
【0010】
本発明の他の目的は、ほんの一例として与えられる以下の記述から明らかになり得る。
【0011】
本明細書に含まれる文書、行為、材料、装置、物品又は同様のもののいかなる議論も、本発明に関する文脈を提供する目的のためだけのものである。これらの事項のいずれか又は全てが先行技術基盤の一部を形成しているか、あるいは優先日以前に存在した本発明に関連する分野における公衆の一般知識であったと認めるものと解釈してはならない。
【発明の概要】
【0012】
第１の態様において、本発明は、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む局所用組成物を皮膚に適用することを含む、皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候を改善する方法に関する。
【0013】
第２の態様において、本発明は、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４、粘度調整剤、分散剤及びオイルビヒクル（ａｎ ｏｉｌ ｖｅｈｉｃｌｅ）を含む局所用組成物を提供し、前記組成物は約１×１０４～約１×１０１０ｃｆｕ／ｇの量のミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む。
【0014】
第３の態様において、本発明は、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４、疎水性シリカ、ポリソルベート８０及びオイルビヒクルを含む局所用組成物を提供する。
【0015】
第４の態様において、本発明は、以下の
約１×１０３～約１×１０１２ｃｆｕ／ｇのミクロコッカス・ルテウスＱ２４、
約２～約１０％ｗ／ｗの疎水性シリカ
約０．５～約２％ｗ／ｗのポリソルベート８０、及び
十分な量のオイルビヒクル、
を含む、局所用組成物を提供する。
約１×１０３～約１×１０１２ｃｆｕ／ｇのミクロコッカス・ルテウスＱ２４、
約２～約１０％ｗ／ｗの疎水性シリカ
約０．５～約２％ｗ／ｗのポリソルベート８０、及び
十分な量のオイルビヒクル、
を含む、局所用組成物を提供する。
【0016】
第５の態様において、本発明は、皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候を改善するために、第１から第４の態様のいずれか１つに規定される局所用組成物を提供する。
【0017】
第６の態様において、本発明は、皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候を改善するための薬剤の製造におけるミクロコッカス・ルテウスＱ２４の使用に関する。
【0018】
第７の態様において、本発明は、油相及び水相を含む二相組成物を提供し、前記油相が第２から第４の態様のいずれか１つに記載の局所用組成物を含む。
【0019】
第８の態様において、本発明は、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む局所用組成物及び水性組成物を含むキットを提供する。
【0020】
第９の態様において、本発明は、以下の工程：
ａ）オイルビヒクルと分散剤を混合すること、
ｂ）工程ａ）からの混合物にミクロコッカス・ルテウスＱ２４及び粘度調整剤を添加すること、
ｃ）工程ｂ）からの混合物を均質化し、組成物を提供すること、
を含む、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む局所用組成物の製造方法に関する。
ａ）オイルビヒクルと分散剤を混合すること、
ｂ）工程ａ）からの混合物にミクロコッカス・ルテウスＱ２４及び粘度調整剤を添加すること、
ｃ）工程ｂ）からの混合物を均質化し、組成物を提供すること、
を含む、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む局所用組成物の製造方法に関する。
【0021】
以下の実施形態及び選好は、単独で、あるいは任意の２つ以上の任意の組み合わせで、上記の態様のいずれかに関連してもよい。
【0022】
様々な実施形態において、組成物は、約１×１０３～約１×１０１２ｃｆｕ／ｇの量のミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む。
【0023】
様々な実施形態において、組成物は粘度調整剤を含む。
【0024】
様々な実施形態において、組成物は、約３～約１５％ｗ／ｗの量の粘度調整剤を含む。
【0025】
様々な実施形態において、粘度調整剤は、疎水性シリカ、親水性シリカ、白蝋（ｗｈｉｔｅ ｂｅｅｓｗａｘ）、黄蝋（ｙｅｌｌｏｗ ｂｅｅｓｗａｘ）、パラフィンワックス、ホホバワックス、マイクロクリスタリンワックス（ｍｉｃｒｏｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ ｗａｘ）、エチルセルロース、ステアリン酸、キサンタンガム、タピオカデンプン、カーボポールポリマー（Ｃａｒｂｏｐｏｌ ｐｏｌｙｍｅｒ）、ココアバター、シアバター及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0026】
様々な実施形態において、組成物は分散剤を含む。
【0027】
様々な実施形態において、組成物は、約０．１～約５％ｗ／ｗの量の分散剤を含む。
【0028】
様々な実施形態において、分散剤は、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、オレイン酸ソルビタン、卵レシチン、大豆レシチン、ポリオキシル３５ヒマシ油（ｐｏｌｙｏｘｙｌ ３５ ｃａｓｔｏｒ ｏｉｌ）及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0029】
様々な実施形態において、組成物はオイルビヒクルを含む。
【0030】
様々な実施形態において、オイルビヒクルは、中鎖トリグリセリド（ａ ｍｅｄｉｕｍ ｃｈａｉｎ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）、植物油又はそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【0031】
様々な実施形態において、中鎖トリグリセリドは、トリ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリル（ａ ｃａｐｒｙｌｉｃ／ｃａｐｒｉｃ ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）である。
【0032】
様々な実施形態において、植物油は、ひまわり油、菜種油、大豆油、オリーブオイル、ホホバオイル、アルガンオイル、ローズヒップオイル、マルラオイル、カモミールオイル、タマヌオイル、ブドウ種子油及びそれらの２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0033】
様々な実施形態において、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４は、凍結乾燥保護剤を含まない（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ－ｆｒｅｅ）。
【0034】
様々な実施形態において、組成物は、一又は複数の追加のプロバイオティクス（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ）をさらに含む。
【0035】
様々な実施形態において、一又は複数の追加のプロバイオティクスは、ストレプトコッカス種、ラクトバチルス種、リモシラクトバチルス種、ラクチカゼイバチルス種、リギラクトバチルス種、ラクチプランチバチルス種、ビフィドバクテリウム種、サッカロミセス種（ａ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ）及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0036】
様々な実施形態において、ストレプトコッカス種は、ストレプトコッカス・サリバリウスＫ１２（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ Ｋ１２）、ストレプトコッカス・サリバリウスＭ１８（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ Ｍ１８）、ストレプトコッカス・サリバリウス２４ＳＭＢ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ２４ＳＭＢ）、ストレプトコッカス・オラリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｏｒａｌｉｓ）（例えば、Ｓ．オラリス８９ａ（Ｓ．Ｏｒａｌｉｓ８９ａ））及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。様々な実施形態において、ストレプトコッカス種は、ストレプトコッカス・サリバリウスＫ１２、ストレプトコッカス・サリバリウスＭ１８、ストレプトコッカス・サリバリウス２４ＳＭＢ、ストレプトコッカス・オラリス（例えば、Ｓ．オラリス８９ａ）、ストレプトコッカス・サリバリウスＤＢ－Ｂ５（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ ＤＢ－Ｂ５）及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0037】
様々な実施形態において、組成物は、約１×１０３～約１×１０１２ｃｆｕ／ｇの量のそれぞれ追加のプロバイオティクスを含む。
【0038】
様々な実施形態において、組成物は、阻害活性エンハンサー（ａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｅｎｈａｎｃｅｒ）、緩衝剤、抗細菌剤（ａｎ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｇｅｎｔ）、プレバイオティクス（ａ ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ）、香料、酸化防止剤、着色剤、皮膚保護剤、抗微生物剤（ａｎ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ）、アルミニウム塩、鉱物顔料（ａ ｍｉｎｅｒａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ）、臭気吸収剤又は中和剤、日焼け防止剤及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせをさらに含む。
【0039】
様々な実施形態において、阻害活性エンハンサーは、塩化ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸、アルギニン、炭酸カルシウム及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0040】
様々な実施形態において、緩衝剤は、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二カリウム及びリン酸二水素カリウム、炭酸マグネシウム、尿素、水和酸化アルミニウム（ｈｙｄｒａｔｅｄ ａｌｕｍｉｎｕｍ ｏｘｉｄｅｓ）、水和酸化アルミニウム、ベントナイト粘度、カオリン粘度並びにそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【0041】
様々な実施形態において、抗細菌剤は、キシリトール、エリスリトール、エピデルミン、ナイシン、サリバリシン（ｓａｌｉｖａｒｉｃｉｎ）Ａ、サリバリシンＡ１、サリバリシンＡ２、サリバリシンＢ及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。様々な実施形態において、抗細菌剤は、キシリトール、エリスリトール、エピデルミン、ナイシン、サリバリシンＡ、サリバリシンＡ１、サリバリシンＡ２、サリバリシンＢ、サリバリシン９、サリバリシンＭＰＳ及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【0042】
様々な実施形態において、プレバイオティクスは、マヌカハニーパウダー、オリーブスクワラン（ｏｌｉｖｅ ｓｑｕａｌｅｎｅ）、ザクロ種子油、フラックスシードオイル（ｆｌａｘ ｓｅｅｄ ｏｉｌ）、ココナッツオイル、コロイドオートミール（ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｏａｔｍｅａｌ）、ビタミンＥ、ビタミンＣ、レチノール（ビタミンＡ）、オリーブオイル、ヒアルロン酸、カレンデュラオイル、アーモンドオイル、トマト油、アラントイン、アロエベラパウダー、コロイドオートミール、キシリトール、酵母エキス、フラクトオリゴ糖粉末、フラクトオリゴ糖液、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、ナイアシンアミド、日焼け止め及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0043】
様々な実施形態において、プレバイオティクスは、酵母エキス、システイン、マルトデキストリン、イヌリン、甘草の根、甘草エキス、蜂蜜及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0044】
様々な実施形態において、香料は、ローズウォーター、オレンジブロッサム、ローズガーデニア、ピオニー、ホワイトジャスミン、イランイランオイル、ゼラニウムオイル、ローズオイル及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0045】
様々な実施形態において、酸化防止剤は、ビタミンＥ、レスベラトロール、スクワラン（ｓｑｕａｌｅｎｅ）、ビタミンＣ、β－カロテン、酢酸レチノール（ｒｅｔｉｎｙｌ ａｃｅｔａｔｅ）、パルミチン酸レチノール（ｒｅｔｉｎｙｌ ｐａｌｍｉｔａｔｅ）、レチノール、ナイアシンアミド、緑茶、緑茶抽出物、カフェイン及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0046】
様々な実施形態において、酸化防止剤は、オリーブスクワラン、ザクロ種子油、フラックスシードオイル、ココナッツオイル、コロイドオートミール、ビタミンＥ、ビタミンＣ、レチノール（ビタミンＡ）、オリーブオイル、ヒアルロン酸、カレンデュラオイル、アーモンドオイル、トマト油及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせから選択される。
【0047】
様々な実施形態において、皮膚保護剤は、セラミド、コラーゲン、エラスチン、コエンザイムＱ１０、加水分解コラーゲン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、レチノール、パルミトイルトリペプチド－１、パルミトイルテトラペプチド－７、パルミトイルテトラペプチド－３８、アセチルヘキサペプチド－８、ヘプタペプチド－１４、ヘプタペプチド－１５－パルミテート（ｈｅｐｔａｐｅｐｔｉｄｅ－１５－ｐａｌｍｉｔａｔｅ）、パルミトイルテトラペプチド－７、パルミトイルトリペプチド－１、α－ヒドロキシ酸、β－ヒドロキシ酸、ビタミンＢ５、海藻、海藻抽出物（ｓｅａｗｅｅｄ ｅｘｔｒａｃｔ）、シリコーン、キシリトール、カラスムギエキス（ｏａｔ ｅｘｔｒａｃｔ）、オートミールパウダー、コロイドオートミール、アロエベラ及びこれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。様々な実施形態において、皮膚保護剤は、セラミド、コラーゲン、エラスチン、コエンザイムＱ１０、加水分解コラーゲン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、レチノール、パルミトイルトリペプチド－１、パルミトイルテトラペプチド－７、パルミトイルテトラペプチド－３８、アセチルヘキサペプチド－８、ヘプタペプチド－１４、ヘプタペプチド－１５－パルミテート、パルミトイルテトラペプチド－７、パルミトイルトリペプチド－１、α－ヒドロキシ酸、β－ヒドロキシ酸、ビタミンＢ５、海藻、海藻抽出物、シリコーン、キシリトール、カラスムギエキス、オートミールパウダー、コロイドオートミール、アロエベラ、日焼け止め及びこれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0048】
様々な実施形態において、抗微生物剤は、亜鉛、サリチル酸、アゼライン酸、過酸化ベンゾイル及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【0049】
様々な実施形態において、組成物は、約０．１％～約１０％ｗ／ｗのオリーブスクワラン及び約０．１～約１０％ｗ／ｗのザクロ種子油を含む。
【0050】
様々な実施形態において、組成物は、約０．１％～約１０％ｗ／ｗのオリーブスクワラン及び約０．１～約３％ｗ／ｗのビタミンＥを含む。
【0051】
様々な実施形態において、組成物は、約０．１％～約１０％ｗ／ｗのオリーブスクワラン及び約０．１～約１０％ｗ／ｗのザクロ種子油及び約０．１～約３％ｗ／ｗのビタミンＥを含む。
【0052】
様々な実施形態において、皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候を改善することとしては、皮膚がより輝いて見えること、皮膚がより健康に見えること、皮膚がより潤ったと感じること、毛穴が小さくなること、皮膚がより柔らかく感じること、皮膚がより透明に見えること、シワが減少すること、乾燥が減少すること、シミが減少すること、不純物が減少すること、水分が増加すること及び皮脂生成が減少することが挙げられる。
【0053】
様々な実施形態において、組成物は非水性である。
【0054】
様々な実施形態において、適用される場合、組成物は、水相と組み合わせて適用される。
【0055】
様々な実施形態において、組成物は、２５℃で約２０，０００～約５００，０００ｃｐの粘度を有する。様々な実施形態において、組成物は、２５℃で約２０，０００～約２，０００，０００ｃｐの粘度を有する。
【0056】
様々な実施形態において、組成物は、２５℃で、６０％ＲＨで少なくとも６ヶ月の保存可能期間を有する。
【0057】
様々な実施形態において、オイルビヒクルは中鎖トリグリセリドである。
【0058】
様々な実施形態において、組成物は、０．１～１０％ｗ／ｗのプレバイオティクス（複数可）をさらに含む。様々な実施形態において、組成物は、０．１～３５％ｗ／ｗのプレバイオティクス（複数可）をさらに含む。
【0059】
様々な実施形態において、プレバイオティクス（複数可）は、オリーブスクワラン、ザクロ種子油、ビタミンＥ又はそれらの組み合わせから選択される。
【0060】
様々な実施形態において、プレバイオティクスは、オリーブスクワラン及びザクロ種子油；オリーブスクワラン及びビタミンＥ；並びにオリーブスクワラン及びザクロ種子油及びビタミンＥの組み合わせから選択される。
【0061】
様々な実施形態において、キットは、第１の容器及び第２の容器を有する分注システム（ａ ｄｉｓｐｅｎｓｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ）を含み、前記第１の容器がミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む油相を含み、第２の容器が水相を含む。
【0062】
様々な実施形態において、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４の粒径（Ｄｖ９０）は、約３００μｍ未満である。
【0063】
様々な実施形態において、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４の粒径は、約２５０μｍ未満又は約１００μｍ未満である。
【0064】
様々な実施形態において、本方法は、加熱せずに実施される。
【0065】
本発明はまた、本出願の明細書中で言及されるか、あるいは示される部分、要素及び特徴が個々に、あるいは集合的に、前記部分、要素又は特徴の任意の、あるいは全ての２つ以上の組み合わせに存在すると広く言うこともでき、本発明が関連付ける当技術分野において既知の等価物を有する特定の整数が本明細書中で言及される場合、そのような既知の等価物は個々に規定されたかのように、本明細書中に援用されるとみなされる。
【0066】
本明細書中で開示される数の範囲（例えば、１～１０）への言及はまた、その範囲内のすべての有理数（例えば、１、１．１、２、３、３．９、４、５、６、６．５、７、８、９及び１０）及びまた、その範囲内の任意の有理数の範囲（例えば、２～８、１．５～５．５及び３．１～４．７）への言及も援用することが意図され、それ故に本明細書中で明示的に開示される全ての範囲の全てのサブ範囲（ｓｕｂ－ｒａｎｇｅ）は、本明細書によって明示的に開示される。これらは、具体的に意図されたものの例のみであり、列挙された最低値と最高値の間の数値の全ての可能な組み合わせは、本出願において同様のやり方で明記されるとみなされることになっている。
【0067】
本明細書において、特許明細書、他の外部文書又は他の情報源に言及した場合、これは、一般に本発明の特徴を議論するための文脈を提供する目的である。特に別段の定めをした場合を除き、かかる外部文書への言及は、いかなる法域においても、かかる文書若しくはかかる情報源が、先行技術であること又は当技術分野における周知の一般知識の一部を形成すると認めるものとして構成されるべきではない。
【0068】
本発明が関連付ける当技術分野の当業者にとっては、本発明の構造における多くの変更並びに大きく異なる実施形態及び適用は、添付の特許請求の範囲に記載の本発明の範囲から逸脱することなく示唆されるであろう。本明細書における開示及び記述は、純粋に例示的であり、いかなる意味においても限定的であることを意図したものではない。
【0069】
本発明は広義には上記で規定したとおりであるが、当業者は、本発明がこれらに限定されず、本発明はまた、下記の説明が実施例を与える実施形態も含有するということを理解するであろう。
【図面の簡単な説明】
【0070】
本発明は、添付の図面を参照して説明されることになる：
【0071】
【0072】
【0073】
【0074】
【0075】
【0076】
【0077】
【0078】
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【0080】
【0081】
【0082】
【0083】
【0084】
【0085】
発明の詳細な説明
定義
本明細書及び特許請求の範囲において用いられる「を含む」という用語は、「少なくとも部分的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ａｔ ｌｅａｓｔ ｉｎ ｐａｒｔ ｏｆ）」を意味する。「を含む」という用語を含有する本明細書及び特許請求の範囲において各記述を解釈する場合、前記用語又は前記用語によって前置きされる用語以外の特徴もまた、存在することができる。「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」及び「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」などの関連用語も同様に解釈されることになっている。
定義
本明細書及び特許請求の範囲において用いられる「を含む」という用語は、「少なくとも部分的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ａｔ ｌｅａｓｔ ｉｎ ｐａｒｔ ｏｆ）」を意味する。「を含む」という用語を含有する本明細書及び特許請求の範囲において各記述を解釈する場合、前記用語又は前記用語によって前置きされる用語以外の特徴もまた、存在することができる。「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」及び「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」などの関連用語も同様に解釈されることになっている。
【0086】
本明細書中で用いられるとき、「及び／又は」という用語は、「及び」あるいは「又は」、あるいはその両方を意味する。
【0087】
本明細書中で用いられるとき、名詞の後に続く「（ｓ）」とは、名詞の複数形及び／又は単数形を意味する。
【0088】
本明細書において、例えば、式中で用いられる一般的な化学用語及び生物学用語は、それらの通常の意味を有する。
【0089】
本明細書中で用いられるとき、「対象」という用語は、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ヒツジ、ウシ及び他の家畜（ｄｏｍｅｓｔｉｃ ａｎｄ ｆａｒｍ ａｎｉｍａｌｓ）を含む哺乳類を指す。
【0090】
単位「ｃｆｕ／ｇ」とは、グラム当たりのコロニー形成単位を意味する。コロニー形成単位（ＣＦＵ）は、試料中の生菌数を推定するために使用される単位である。コロニー形成単位の決定は、微生物の培養を必要とし、生存細胞、すなわち増殖して目に見えるコロニーを形成することができる細胞のみをカウントする。
【0091】
単位「％ｗ／ｗ」とは、組成物の総重量に基づく百分率重量（ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｗｅｉｇｈｔ）を意味する。
【0092】
本明細書中で用いられるとき、「凍結乾燥保護剤を含まない」又は「凍結保護剤を含まない（ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ－ｆｒｅｅ）」という用語は、Ｍ．ルテウスが凍結乾燥保護剤又は凍結保護剤又はその両方の非存在下において産生されていることを意味する。
【0093】
本明細書中で用いられるとき、「対象における皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候の改善」という用語は、皮膚の輝き、皮膚の健康、皮膚保湿（ｓｋｉｎ ｈｙｄｒａｔｉｏｎ）、毛穴の大きさ、皮膚の柔らかさ、皮膚の透明感、水分レベル、皮脂レベル、シワ、乾燥、荒れ、くすみの出現、加齢によるシミ（ａｇｅ ｓｐｏｔｓ）を含むシミの出現及び不純物を含む、皮膚分析のために一般的に使用される少なくとも１つのパラメーターの改善を意味する。
【0094】
局所用組成物及び方法
本明細書中に記述されていることは、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む局所用組成物を皮膚に適用することを含む、皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候を改善する方法である。また、本明細書中に記述されていることは、皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候を改善するための、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む局所用組成物でもある。さらに、本明細書中に記述されていることは、皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候を改善するための薬剤の製造におけるミクロコッカス・ルテウスＱ２４の使用である。
本明細書中に記述されていることは、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む局所用組成物を皮膚に適用することを含む、皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候を改善する方法である。また、本明細書中に記述されていることは、皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候を改善するための、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む局所用組成物でもある。さらに、本明細書中に記述されていることは、皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候を改善するための薬剤の製造におけるミクロコッカス・ルテウスＱ２４の使用である。
【0095】
本明細書中に記述されていることは、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４、粘度調整剤、分散剤及びオイルビヒクルを含む局所用組成物であり、前記組成物が、約１×１０４～約１×１０１０ｃｆｕ／ｇの量のミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む。
【0096】
また、本明細書中に記述されていることは、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４、疎水性シリカ、ポリソルベート８０及びオイルビヒクルを含む局所用組成物である。
【0097】
また、本明細書中に記述されていることは、以下の
約１×１０３～約１×１０１２ｃｆｕ／ｇのミクロコッカス・ルテウスＱ２４、
約２～約１０％ｗ／ｗの疎水性シリカ、
約０．５～約２％ｗ／ｗのポリソルベート８０、及び
十分な量のオイルビヒクル、
を含む、局所用組成物である。
約１×１０３～約１×１０１２ｃｆｕ／ｇのミクロコッカス・ルテウスＱ２４、
約２～約１０％ｗ／ｗの疎水性シリカ、
約０．５～約２％ｗ／ｗのポリソルベート８０、及び
十分な量のオイルビヒクル、
を含む、局所用組成物である。
【0098】
様々な実施形態において、オイルビヒクルは中鎖トリグリセリドである。
【0099】
本明細書中に記述されている局所用組成物は、皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候を改善するために使用されることができる。
【0100】
本明細書中に記述されていることは、皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候を改善するための薬剤の製造におけるミクロコッカス・ルテウスＱ２４の使用である。
【0101】
本発明において有用なＱ２４は、組織培養モデルによって、耐容性良好であること、抗炎症性反応を誘発しないこと、抗炎症作用を有すること、皮膚を若返らせること及び潤いを与えること並びに皮膚の毛穴及びシワを減少させることに役立つことができる角質層の成長を促進することが見出されている（実施例９参照）。
【0102】
ミクロコッカス・ルテウスＱ２４
ミクロコッカス・ルテウスは、ヒトの皮膚上の通常の細菌（共生生物）であり、皮膚の様々な微生物叢の間のバランスを保つ上で重要な細菌である。
ミクロコッカス・ルテウスは、ヒトの皮膚上の通常の細菌（共生生物）であり、皮膚の様々な微生物叢の間のバランスを保つ上で重要な細菌である。
【0103】
Ｍ．ルテウス Ｑ２４は、２００５年３月１０日にＤｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ Ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ、ブラウンシュヴァイク、ドイツに寄託され、アクセッション番号 ＤＳＭ １７１７２を付与された。Ｍ．ルテウス株Ｑ２４は、参照により本明細書中に援用されるＷＯ２００６１０４４０３に記述されている。
【0104】
様々な実施形態において、Ｍ．ルテウスは生きているプロバイオティクスである。
【0105】
様々な実施形態において、本発明の方法において有用である本発明の組成物は、約１×１０３～約１×１０１２ｃｆｕ／ｇの量のミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む。様々な実施形態において、組成物は、約１×１０４～約１×１０１２、約１×１０５～約１×１０１２、約１×１０６～約１×１０１２、約１×１０７～約１×１０１２、約１×１０８～約１×１０１２、約１×１０４～約１×１０１０、 約１×１０５～約１×１０１０、約１×１０６～約１×１０１０、約１×１０７～約１×１０１０、約１×１０８～約１×１０１０、約１×１０４～約１×１０９、約１×１０５～約１×１０９、約１×１０６～約１×１０９、約１×１０７～約１×１０９ｃｆｕ／ｇの量のミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む。様々な実施形態において、組成物は、約１×１０９ｃｆｕ／ｇの量のミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む。
【0106】
様々な実施形態において、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４は、凍結乾燥する（ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｉｅｄ）か、あるいは凍結乾燥される（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ）。様々な実施形態において、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４は、凍結乾燥保護剤又は凍結保護剤中で提供される。凍結乾燥保護剤及び凍結保護剤は、細胞の生存性を保護及び維持するために、プロバイオティクスを含む製品の製造において一般的に使用される。「凍結乾燥保護剤」及び「凍結保護剤」という用語は、有効成分、この場合はミクロコッカス・ルテウスＱ２４を保護する組成物を指す。凍結乾燥保護剤は、乾燥時に保護するが、凍結保護剤は凍結時に保護する。同様の組成物は、両方の機能を有することができ、別段の定めがある場合を除き、用語は本明細書中で意味の区別なく使用される。
【0107】
適切な凍結乾燥保護剤又は凍結保護剤は、当業者に既知であろう。様々な実施形態において、凍結乾燥保護剤は、トレハロース又はトレハロース、マルトデキストリン及びラクチトールを含むトライミックス（ｔｒｉｍｉｘ）である。
【0108】
驚いたことに、本出願人らは、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４もまた、図１に示されるように、凍結乾燥保護剤又は凍結保護剤の非存在下において、細胞生存率の有意な減少がなくても凍結乾燥し得るということを同定した。この結果は、微生物が日常的に凍結乾燥工程中に保護される必要がある場合には、直感では理解し難い。様々な実施形態において、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４は、組成物中で凍結乾燥保護剤を含まない。
【0109】
上記の内容から分かるように、この発見は、凍結乾燥工程が簡略化される場合に重要な製造の利点につながり、凍結乾燥保護剤又は凍結保護剤を用いる必要がない場合にはコストが減少する。
【0110】
粘度調整剤
様々な実施形態において、組成物は、粘度調整剤を含む。有利には、粘度調整剤は、プロバイオティクスの放出特性を調節し、組成物の粘度を変更するためにも使用されることができる。
様々な実施形態において、組成物は、粘度調整剤を含む。有利には、粘度調整剤は、プロバイオティクスの放出特性を調節し、組成物の粘度を変更するためにも使用されることができる。
【0111】
様々な実施形態において、組成物は、約３～約１５％ｗ／ｗの量の粘度調整剤を含む。例えば、組成物は、約３～約１０％又は約３～約９％又は約３～約８％又は約４～約１５％又は約４～約１０％又は約４～約９％又は約４～約８％又は約５～約１５％又は約５～約１０％又は約５～約９％又は約５～約８％ｗ／ｗの量の粘度調整剤を含んでもよい。例えば、組成物は、組成物の総重量に基づいて、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％又は約１５％ｗ／ｗの量の粘度調整剤を含んでもよい。様々な実施形態において、組成物は、約７％ｗ／ｗの量の粘度調整剤（例えば、疎水性シリカ）を含む。
【0112】
適切な粘度調整剤としては、疎水性シリカ、親水性シリカ、白蝋、黄蝋、パラフィンワックス、ホホバワックス、マイクロクリスタリンワックス、エチルセルロース、ステアリン酸、キサンタンガム、タピオカデンプン、カーボポールポリマー（例えば９７１ｐ、９７４ｐ）、ココアバター、シアバター及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、粘度調整剤は疎水性シリカ（例えば、Ａｅｒｏｓｉｌ Ｒ９７２）（登録商標）である。
【0113】
分散剤
様々な実施形態において、組成物は、分散剤を含む。有利には、分散剤は、組成物中の固体粒子の分散を促進することができる。例えば、分散剤は、組成物中のプロバイオティクスの分散を促進することができる。さらに、分散剤は、適用前に一緒に混合される場合、油相の水相との乳化を補助することができる。分散剤は、非イオン性分散剤又は両性分散剤であることができる。非イオン性分散剤の例としては、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０）、オレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ８０）、ポリオキシル３５ヒマシ油（Ｃｒｅｍａｐｈｏｒ ＥＬ）が挙げられるが、これらに限定されない。両性分散剤の例としては、卵レシチン及び大豆レシチンなどのレシチンが挙げられるが、これらに限定されない。
様々な実施形態において、組成物は、分散剤を含む。有利には、分散剤は、組成物中の固体粒子の分散を促進することができる。例えば、分散剤は、組成物中のプロバイオティクスの分散を促進することができる。さらに、分散剤は、適用前に一緒に混合される場合、油相の水相との乳化を補助することができる。分散剤は、非イオン性分散剤又は両性分散剤であることができる。非イオン性分散剤の例としては、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０）、オレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ８０）、ポリオキシル３５ヒマシ油（Ｃｒｅｍａｐｈｏｒ ＥＬ）が挙げられるが、これらに限定されない。両性分散剤の例としては、卵レシチン及び大豆レシチンなどのレシチンが挙げられるが、これらに限定されない。
【0114】
様々な実施形態において、組成物は、約０．１～約５％ｗ／ｗの量の分散剤を含む。例えば、組成物は、約０．５～約４％、約０．５～約３％、約０．５～約２．５％ｗ／ｗ、約０．５～約２％ｗ／ｗ又は約１～約２％ｗ／ｗの量の分散剤を含んでもよい。様々な実施形態において、組成物は、約１％ｗ／ｗ又は約２％ｗ／ｗの量の分散剤（例えばＴｗｅｅｎ８０）を含む。
【0115】
オイルビヒクル
様々な実施形態において、組成物は、オイルビヒクルを含む。適切なオイルビヒクルとしては、中鎖トリグリセリド及び植物油が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、中鎖トリグリセリドは、Ｍｉｇｌｙｏｌ８１２Ｎ（飽和ココナッツオイル／パーム核油由来のカプリル脂肪酸及びカプリン脂肪酸並びに植物由来のグリセロールのトリグリセリドエステル）などのトリ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリルである。様々な実施形態において、植物油は、ひまわり油、菜種油、大豆油、オリーブオイル、ホホバオイル、アルガンオイル、ローズヒップオイル、マルラオイル、カモミールオイル、タマヌオイル、ブドウ種子油及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
様々な実施形態において、組成物は、オイルビヒクルを含む。適切なオイルビヒクルとしては、中鎖トリグリセリド及び植物油が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、中鎖トリグリセリドは、Ｍｉｇｌｙｏｌ８１２Ｎ（飽和ココナッツオイル／パーム核油由来のカプリル脂肪酸及びカプリン脂肪酸並びに植物由来のグリセロールのトリグリセリドエステル）などのトリ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリルである。様々な実施形態において、植物油は、ひまわり油、菜種油、大豆油、オリーブオイル、ホホバオイル、アルガンオイル、ローズヒップオイル、マルラオイル、カモミールオイル、タマヌオイル、ブドウ種子油及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0116】
様々な実施形態において、組成物は、十分な量（ａ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ （ｑ．ｓ．） ａｍｏｕｎｔ）、すなわち、組成物の合計％ｗ／ｗを１００％に至らせる量の非水性担体を含む。様々な実施形態において、組成物は、約５５～約９５％ｗ／ｗの量の非水性担体を含む。例えば、組成物は、約６０～約９５％又は約６０～約９０％又は約６５～約９０％又は約６５～約９０％又は約７０～約９５％又は約７５～約９５％又は約７５～約９０％又は約８０～約９０％又は約８０～約９０％ｗ／ｗ又は約８５～約９５％又は約８５～約９０％約８８～又は約９３％ｗ／ｗを含んでもよい。様々な実施形態において、組成物は、８８、８９、９０、９１、９２又は９３％ｗ／ｗの量の非水性担体を含む。
【0117】
様々な実施形態において、組成物は非水性である。様々な実施形態において、組成物は、実質的に無水である。様々な実施形態において、組成物は、７％未満の水、５％未満の水、３％未満の水、２％未満の水、１％未満の水、０．５％未満の水、０．１％未満の水又は０．０１％未満の水を含む。本組成物において、水は、周囲から吸収された水分を含有する。
【0118】
追加のプロバイオティクス
様々な実施形態において、組成物は、さらに一又は複数の追加のプロバイオティクスを含む。適切な追加のプロバイオティクスとしては、ラクトバチルス種（例えば、Ｌ．アシドフィルス（Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ））、リモシラクトバチルス属（例えば、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）、以前はラクトバチルス・ロイテリ）、ラクチカゼイバチルス種（例えば、Ｌ．ラムノサス（Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、以前はラクトバチルス・ラムノサス）、リギラクトバチルス種（例えば、Ｌ．サリバリウス（Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、以前はラクトバチルス・サリバリウス）、ラクチプランチバチルス種（例えば、Ｌ．プランタルム（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、以前はラクトバチルス・プランタルム）、ビフィドバクテリウム種（例えば、Ｂ．ビフィダム（Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ）、Ｂ．ロンガム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ）又はＢ．ラクティスＢＢ１２（Ｂ．ｌａｃｔｉｓ ＢＢ１２））、ストレプトコッカス種（例えば、Ｓ．オラリス（Ｓ．ｏｒａｌｉｓ）、Ｓ．オラリス８９ａ、Ｓ．ウベリス（Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ）、Ｓ．サリバリウス２４ＳＭＢ（Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ２４ＳＭＢ）、Ｓ．サリバリウスＭ１８（Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ Ｍ１８）、Ｓ．サリバリウスＫ１２（Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ Ｋ１２）又はＳ．サリバリウスＤＢ－Ｂ５（Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ ＤＢ－Ｂ５））及びサッカロミセス種（例えば、Ｓ．ブラウディ（Ｓ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）又はＳ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））が挙げられるが、これらに限定されない。
様々な実施形態において、組成物は、さらに一又は複数の追加のプロバイオティクスを含む。適切な追加のプロバイオティクスとしては、ラクトバチルス種（例えば、Ｌ．アシドフィルス（Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ））、リモシラクトバチルス属（例えば、Ｌ．ロイテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）、以前はラクトバチルス・ロイテリ）、ラクチカゼイバチルス種（例えば、Ｌ．ラムノサス（Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、以前はラクトバチルス・ラムノサス）、リギラクトバチルス種（例えば、Ｌ．サリバリウス（Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、以前はラクトバチルス・サリバリウス）、ラクチプランチバチルス種（例えば、Ｌ．プランタルム（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、以前はラクトバチルス・プランタルム）、ビフィドバクテリウム種（例えば、Ｂ．ビフィダム（Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ）、Ｂ．ロンガム（Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ）又はＢ．ラクティスＢＢ１２（Ｂ．ｌａｃｔｉｓ ＢＢ１２））、ストレプトコッカス種（例えば、Ｓ．オラリス（Ｓ．ｏｒａｌｉｓ）、Ｓ．オラリス８９ａ、Ｓ．ウベリス（Ｓ．ｕｂｅｒｉｓ）、Ｓ．サリバリウス２４ＳＭＢ（Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ２４ＳＭＢ）、Ｓ．サリバリウスＭ１８（Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ Ｍ１８）、Ｓ．サリバリウスＫ１２（Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ Ｋ１２）又はＳ．サリバリウスＤＢ－Ｂ５（Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ ＤＢ－Ｂ５））及びサッカロミセス種（例えば、Ｓ．ブラウディ（Ｓ．ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）又はＳ．セレビシエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））が挙げられるが、これらに限定されない。
【0119】
Ｓ．サリバリウスＫ１２は、１９９９年１０月８日にＤｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏ ｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ Ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ，Ｍａｓｃｈｅｒｏｄｅｒ Ｗｅｇ １ｂ，Ｄ－３８１２４、ブラウンシュヴァイク、ドイツに寄託され、アクセッション番号ＤＳＭ１３０８４を付与された。Ｓ．サリバリウスＭ１８は、２００１年１２月１２日にＤｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏ ｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ Ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ，Ｍａｓｃｈｅｒｏｄｅｒ Ｗｅｇ １ｂ，Ｄ－３８１２４、ブラウンシュヴァイク、ドイツに寄託され、ＤＳＭ１４６８５番を付与された。
【0120】
様々な実施形態において、ストレプトコッカス種は、ストレプトコッカス・サリバリウスＫ１２、ストレプトコッカス・サリバリウスＭ１８、ストレプトコッカス・オラリス（例えば、Ｓ．オラリス８９ａ）、ストレプトコッカス・サリバリウス２４ＳＭＢ及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。様々な実施形態において、ストレプトコッカス種は、ストレプトコッカス・サリバリウスＫ１２、ストレプトコッカス・サリバリウスＭ１８、ストレプトコッカス・サリバリウス２４ＳＭＢ、ストレプトコッカス・オラリス（例えば、Ｓ．オラリス８９ａ）、ストレプトコッカス・サリバリウスＤＢ－Ｂ５及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0121】
様々な実施形態において、組成物は、約１×１０３～約１×１０１２ｃｆｕ／ｇの量のそれぞれの追加のプロバイオティクスを含む。例えば、組成物は、約１×１０４～約１×１０１２、約１×１０５～約１×１０１２、約１×１０６～約１×１０１２、約１×１０７～約１×１０１２、約１×１０８～約１×１０１２、約１×１０４～約１×１０１０、約１×１０５～約１×１０１０、約１×１０６～約１×１０１０、約１×１０７～約１×１０１０、約１×１０８～約１×１０１０、約１×１０４～約１×１０９、約１×１０５～約１×１０９、約１×１０６～約１×１０９、約１×１０７～約１×１０９ｃｆｕ／ｇの量のそれぞれの追加のプロバイオティクスを含む。様々な実施形態において、組成物は、約１×１０９ｃｆｕ／ｇの量のそれぞれの追加のプロバイオティクスを含む。
【0122】
追加の添加剤
当業者は、局所用組成物が保湿剤のような、局所用組成物において従来の方法で用いられる他の添加剤を含んでもよいということを十分理解するであろう。当業者は、添加剤がプロバイオティクスの生存能力及び効能に適合する必要があるということをさらに理解するであろう。そのような添加剤は、組成物の治療法、化粧品、安定性、及び／又は外観の特性を提供、あるいは改善することができる。適切な添加物の例としては、阻害活性エンハンサー、緩衝剤、抗細菌剤、プレバイオティクス、香料、酸化防止剤、着色剤、皮膚保護剤、抗微生物剤、アルミニウム塩、鉱物顔料、臭気吸収剤又は中和剤又は日焼け防止剤が挙げられるが、これらに限定されない。そのような添加剤は、局所製剤に典型的な量で本発明の組成物中に含有されることができる。生菌又は凍結乾細菌の局所適用に適している様々な薬学的に許容される添加剤は、当技術分野で周知である。当業者は、任意の追加の添加剤がミクロコッカス・ルテウスＱ２４に対して阻害性であってはならないということを正しく理解するであろう。
当業者は、局所用組成物が保湿剤のような、局所用組成物において従来の方法で用いられる他の添加剤を含んでもよいということを十分理解するであろう。当業者は、添加剤がプロバイオティクスの生存能力及び効能に適合する必要があるということをさらに理解するであろう。そのような添加剤は、組成物の治療法、化粧品、安定性、及び／又は外観の特性を提供、あるいは改善することができる。適切な添加物の例としては、阻害活性エンハンサー、緩衝剤、抗細菌剤、プレバイオティクス、香料、酸化防止剤、着色剤、皮膚保護剤、抗微生物剤、アルミニウム塩、鉱物顔料、臭気吸収剤又は中和剤又は日焼け防止剤が挙げられるが、これらに限定されない。そのような添加剤は、局所製剤に典型的な量で本発明の組成物中に含有されることができる。生菌又は凍結乾細菌の局所適用に適している様々な薬学的に許容される添加剤は、当技術分野で周知である。当業者は、任意の追加の添加剤がミクロコッカス・ルテウスＱ２４に対して阻害性であってはならないということを正しく理解するであろう。
【0123】
当業者はまた、いくつかの添加物は、例えば、酸化防止剤又は皮膚保護剤がプレバイオティクスとしても機能するような、二重機能を有するということも十分理解するであろう。
【0124】
様々な実施形態において、組成物は、阻害活性エンハンサー、緩衝剤、抗細菌剤、プレバイオティクス、香料、酸化防止剤、着色剤、皮膚保護剤、抗微生物剤、アルミニウム塩、鉱物顔料、臭気吸収剤又は中和剤、日焼け防止剤及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせをさらに含む。
【0125】
様々な実施形態において、阻害活性エンハンサーは、塩化ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸、アルギニン、炭酸カルシウム及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0126】
様々な実施形態において、緩衝剤は、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸二水素カリウム、炭酸マグネシウム、尿素、水和酸化アルミニウム、ベントナイト粘度、カオリン粘度及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【0127】
様々な実施形態において、抗細菌剤は、キシリトール、エリスリトール、エピデルミン、ナイシン、サリバリシンＡ、サリバリシンＡ１、サリバリシンＡ２、サリバリシンＢ及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。様々な実施形態において、抗細菌剤は、キシリトール、エリスリトール、エピデルミン、ナイシン、サリバリシンＡ、サリバリシンＡ１、サリバリシンＡ２、サリバリシンＢ、サリバリシン９、サリバリシンＭＰＳ及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【0128】
様々な実施形態において、組成物は、プレバイオティクスを含む。プレバイオティクスは、Ｑ２４の成長を増進し、抗菌活性を強化するか、あるいは皮膚の品質パラメーターを向上させるための化合物の産生を増進することができる。
【0129】
様々な実施形態において、プレバイオティクスは、マヌカハニー、オリーブスクワラン、ザクロ種子油、フラックスシードオイル、ココナッツオイル、コロイドオートミール、ビタミンＥ、ビタミンＣ、オリーブオイル、ヒアルロン酸、カレンデュラオイル、アーモンドオイル、トマト油、アラントイン、アロエベラパウダー、コロイドオートミール、キシリトール、酵母エキス、フラクトオリゴ糖粉末、フラクトオリゴ糖液、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、キシロオリゴ糖及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0130】
様々な実施形態において、プレバイオティクスは、酵母エキス、システイン、マルトデキストリン、イヌリン、甘草の根、甘草エキス、蜂蜜及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。様々な実施形態において、プレバイオティクスは、酵母エキス、システイン、マルトデキストリン、イヌリン、甘草の根、甘草エキス及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0131】
様々な実施形態において、プレバイオティクスは、油プレバイオティクス又は粉末プロバイオティクスであってもよい。様々な実施形態において、組成物は、油プレバイオティクス及び／又は粉末プレバイオティクスを含む。様々な実施形態において、油プレバイオティクスは、オリーブスクワラン、ザクロ種子油、フラックスシードオイル、ココナッツオイル、ビタミンＥ、オリーブオイル、カレンデュラオイル、アーモンドオイル、トマト油、フラクトオリゴ糖液及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。様々な実施形態において、粉末プレバイオティクスは、マヌカハニー、コロイドオートミール、ビタミンＣ、ヒアルロン酸、アラントイン、アロエベラパウダー、コロイドオートミール、キシリトール、酵母エキス、フラクトオリゴ糖粉末、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、キシロオリゴ糖及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0132】
様々な実施形態において、プレバイオティクスは、オリーブスクワラン及びザクロ種子油；オリーブスクワラン及びビタミンＥ；又はオリーブスクワラン、ザクロ種子油及びビタミンＥの組み合わせである。本発明者らは、驚いたことに、オリーブスクワラン及びザクロ種子油又はオリーブスクワラン及びビタミンＥの組み合わせがミクロコッカス・ルテウスＱ２４の成長に対する相乗効果を有するということを同定した。
【0133】
様々な実施形態において、組成物は、約０．１％～約１０％ｗ／ｗのプレバイオティクス、例えば、約０．１％～約８％又は約０．１％～約６％又は約０．１％～約５％又は約０．３％～約８％又は約０．３％～約６％又は約０．３％～約５％又は約０．５％～約８％又は約０．５％～約６％又は約０．５％～約５％又は約１％～約８％又は約１％～約６％又は約１％～約５％ｗ／ｗのプレバイオティクスを含む。
【0134】
様々な実施形態において、組成物は、約０．１％～約３５％ｗ／ｗのプレバイオティクス、例えば、約０．１％～約３０％、約０．１％～約２５％又は約０．１％～約２０％又は約０．１％～約１８％又は約０．１％～約１６％又は約０．１％～約１５％又は約０．１％～約１２％又は約０．１％～約１０％又は約０．１％～約８％又は約０．１％～約６％又は約０．１％～約５％又は約０．１％～約２％、又は約０．３％～約３５％又は約０．３％～約３０％又は約０．３％～約２５％又は約０．３％～約２０％又は約０．３％～約１８％又は約０．３％～約１６％又は約０．３％～約１５％又は約０．３％～約１２％又は約０．３％～約１０％又は約０．３％～約８％又は約０．３％～約６％又は約０．３％～約５％又は約０．３％～約２％、又は約０．５％～約３５％又は約０．５％～約３０％又は約０．５％～約２５％又は約０．５％～約２０％又は約０．５％～約１８％又は約０．５％～約１６％又は約０．５％～約１５％又は約０．５％～約１２％又は約０．５％～約１０％又は約０．５％～約８％又は約０．５％～約６％又は約０．５％～約５％又は約０．５％～約２％、又は約０．５％～約３５％、又は約１％～約３０％又は約１％～約２５％又は約１％～約２０％又は約１％～約１８％又は約１％～約１６％又は約１％～約１５％又は約１％～約１２％又は約１％～約１０％又は約１％～約８％又は約１％～約６％又は約１％～約５％、又は約０．５％～約３５％、又は約３％～約３０％又は約３％から約２５％又は約３％から約２０％又は約３％～約１８％又は約３％～約１６％又は約３％～約１５％又は約３％～約１２％又は約３％～約１０％又は約３％～約８％又は約３％～約６％又は約３％～約５％、又は約４％～約３０％又は約４％～約２５％又は約４％～約２０％又は約４％～約１８％又は約４％～約１６％又は約４％～約１５％又は約４％～約１２％又は約４％～約１０％又は約４％～約８％又は約４％～約６％又は約４％～約５％ｗ／ｗのプレバイオティクスを含む。
【0135】
様々な実施形態において、組成物は、約３５％ｗ／ｗのプレバイオティクスの量の油プレバイオティクス、例えば、約０．１％～約３０％、約０．１％～約２５％又は約０．１％～約２０％又は約０．１％～約１８％又は約０．１％～約１６％又は約０．１％～約１５％又は約０．１％～約１２％又は約０．１％～約１０％又は約０．１％～約８％又は約０．１％～約６％又は約０．１％～約５％又は約０．１％～約２％、又は約０．３％～約３５％又は約０．３％～約３０％又は約０．３％～約２５％又は約０．３％～約２０％又は約０．３％～約１８％又は約０．３％～約１６％又は約０．３％～約１５％又は約０．３％～約１２％又は約０．３％～約１０％又は約０．３％～約８％又は約０．３％～約６％又は約０．３％～約５％又は約０．３％～約２％、又は約０．５％～約３５％又は約０．５％～約３０％又は約０．５％～約２５％又は約０．５％～約２０％又は約０．５％～約１８％又は約０．５％～約１６％又は約０．５％～約１５％又は約０．５％～約１２％又は約０．５％～約１０％又は約０．５％～約８％又は約０．５％～約６％又は約０．５％～約５％又は約０．５％～約２％、又は約０．５％～約３５％、又は約１％～約３０％又は約１％～約２５％又は約１％～約２０％又は約１％～約１８％又は約１％～約１６％又は約１％～約１５％又は約１％～約１２％又は約１％～約１０％又は約１％～約８％又は約１％～約６％又は約１％～約５％、又は約０．５％～約３５％、又は約３％～約３０％又は約３％～約２５％又は約３％～約２０％又は約３％～約１８％又は約３％～約１６％又は約３％～約１５％又は約３％～約１２％又は約３％～約１０％又は約３％～約８％又は約３％～約６％又は約３％～約５％、又は約４％～約３０％又は約４％～約２５％又は約４％～約２０％又は約４％～約１８％又は約４％～約１６％又は約４％～約１５％又は約４％～約１２％又は約４％～約１０％又は約４％～約８％又は約４％～約６％又は約４％～約５％の油プレバイオティクスを含む。
【0136】
様々な実施形態において、組成物は、約０．１％～約２０％又は約０．１％～約１８％又は約０．１％～約１６％又は約０．１％～約１５％又は約０．１％～約１２％又は約０．１％～約１０％又は約０．１％～約８％又は約０．１％～約６％又は約０．１％～約５％又は約０．１％～約２％、又は約０．３％～約２０％又は約０．３％～約１８％又は約０．３％～約１６％又は約０．３％～約１５％又は約０．３％～約１２％又は約０．３％～約１０％又は約０．３％～約８％又は約０．３％～約６％又は約０．３％～約５％又は約０．３％～約２％、又は約０．５％～約２０％又は約０．５％～約１８％又は約０．５％～約１６％又は約０．５％～約１５％又は約０．５％～約１２％又は約０．５％～約１０％又は約０．５％～約８％又は約０．５％～約６％又は約０．５％～約５％又は約０．５％～約２％、又は約１％～約２０％又は約１％～約１８％又は約１％～約１６％又は約１％～約１５％又は約１％～約１２％又は約１％～約１０％又は約１％～約８％又は約１％～約６％又は約１％～約５％、又は約３％～約２０％又は約３％～約１８％又は約３％～約１６％又は約３％～約１５％又は約３％～約１２％又は約３％～約１０％又は約３％～約８％又は約３％～約６％又は約３％～約５％、又は約４％～約２０％又は約４％～約１８％又は約４％～約１６％又は約４％～約１５％又は約４％～約１２％又は約４％～約１０％又は約４％～約８％又は約４％～約６％又は約４％～約５％ｗ／ｗの粉末プレバイオティクスの量の粉末プレバイオティクスを含む。
【0137】
特定の実施形態において、組成物は、約０．１～約３０％ｗ／ｗ又は約３％～約８％ｗ／ｗ又は約４％～約６％ｗ／ｗ又は約５％ｗ／ｗのオリーブスクワランを含む。特定の実施形態において、組成物は、約０．１～約３０％ｗ／ｗ又は約３％～約８％ｗ／ｗ又は約４％～約６％ｗ／ｗ又は約５％ｗ／ｗのオリーブスクワランを含む。特定の実施形態において、組成物は、約５％ｗ／ｗのフラックスシードオイルを含む。特定の実施形態において、組成物は、約１％ｗ／ｗのコロイドオートミールを含む。特定の実施形態において、組成物は、約０．１～約２％ｗ／ｗ又は約０．２～約１．５％又は約０．２～約０．６％又は約０．３％又は約０．５～約１．３％又は約０．８～約１．２％又は約１％ｗ／ｗのビタミンＥを含む。
【0138】
本発明者らは、プレバイオティクスであるオリーブスクワラン及びザクロ種子油の組み合わせ；及びプレバイオティクスであるオリーブスクワラン及びビタミンＥの組み合わせが相乗的であるということを予想外に同定した。その結果、特定の実施形態において、組成物は、約０．１％～約１０％ｗ／ｗのオリーブスクワラン、約３％～約８％ｗ／ｗ又は約４～約７％ｗ／ｗ又は約５％ｗ／ｗ又は約０．５％～約３％ｗ／ｗ又は約０．５～約２％ｗ／ｗ又は約１％ｗ／ｗのオリーブスクワラン、及び約０．１～約１０％ｗ／ｗのザクロ種子油又は約２～約８％ｗ／ｗ又は約３～約７％ｗ／ｗ又は約４～約６％ｗ／ｗ又は約３～約５％ｗ／ｗ又は約５％ｗ／ｗ又は約０．５～約３％ｗ／ｗ又は約０．５～約２％ｗ／ｗ又は約１％ｗ／ｗのザクロ種子油を含む。特定の実施形態において、組成物は、約０．１％～約１０％ｗ／ｗのオリーブスクワラン、約３％～約８％ｗ／ｗのオリーブスクワラン又は約４～約７％ｗ／ｗのオリーブスクワラン、例えば、約５％ｗ／ｗのオリーブスクワラン、及び約０．１～約３％ｗ／ｗ又は約０．１～約２％ｗ／ｗ又は約０．２～約１．５％又は約０．２～約０．６％又は約０．３％又は約０．５～約１．３％又は約０．８～約１．２％又は約１％ｗ／ｗのビタミンＥを含む。
【0139】
特定の実施形態において、組成物は、約０．１％～約１０％ｗ／ｗのオリーブスクワラン又は約３％～約８％ｗ／ｗ又は約４～約７％ｗ／ｗ又は約５％ｗ／ｗ又は約０．５％～約３％ｗ／ｗ又は約０．５～約２％ｗ／ｗ又は約１％ｗ／ｗのオリーブスクワラン；及び約０．１～約１０％ｗ／ｗのザクロ種子油又は約２～約８％ｗ／ｗ又は約３～約７％ｗ／ｗ又は約４～約６％ｗ／ｗ又は約３～約５％ｗ／ｗ又は約５％ｗ／ｗ又は約０．５％～約３％ｗ／ｗ又は約０．５～約２％ｗ／ｗ又は約１％ｗ／ｗのザクロ種子油；及び約０．１～約３％ｗ／ｗ又は約０．１～約２％ｗ／ｗ又は約０．２～約１．５％又は約０．２～約０．６％又は約０．３％又は約０．５～約１．３％又は約０．８～約１．２％又は約１％ｗ／ｗのビタミンＥを含む。
【0140】
様々な実施形態において、香料は、ローズウォーター、オレンジブロッサム、ローズガーデニア、ピオニー、ホワイトジャスミン、イランイランオイル、ゼラニウムオイル、ローズオイル及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。香料は、油又は粉末として添加されることができる。
【0141】
様々な実施形態において、酸化防止剤は、ビタミンＥ、レスベラトロール、スクワラン、ビタミンＣ、β－カロテン、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール、レチノール、ナイアシンアミド、緑茶、緑茶抽出物、カフェイン及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。様々な実施形態において、酸化防止剤は、ビタミンＥ、レスベラトロール、スクワラン（例えば、オリーブスクワラン）、ビタミンＣ、β－カロテン、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール、レチノール、ナイアシンアミド、ザクロ種子油、フラックスシードオイル及びそれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0142】
様々な実施形態において、皮膚保護剤は、セラミド、コラーゲン、エラスチン、コエンザイムＱ１０、加水分解コラーゲン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、レチノール、パルミトイルトリペプチド－１、パルミトイルテトラペプチド－７、パルミトイルテトラペプチド－３８、アセチルヘキサペプチド－８、ヘプタペプチド－１４、ヘプタペプチド－１５－パルミテート、パルミトイルテトラペプチド－７、パルミトイルトリペプチド－１、α－ヒドロキシ酸（例えば、乳酸、グリコール酸）、β－ヒドロキシ酸（例えば、サリチル酸）、ビタミンＢ５、海藻、海藻抽出物、シリコーン、キシリトール、カラスムギエキス、オートミールパウダー、コロイドオートミール、アロエベラ及びこれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。様々な実施形態において、皮膚保護剤は、セラミド、コラーゲン、エラスチン、コエンザイムＱ１０、加水分解コラーゲン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、レチノール、パルミトイルトリペプチド－１、パルミトイルテトラペプチド－７、パルミトイルテトラペプチド－３８、アセチルヘキサペプチド－８、ヘプタペプチド－１４、ヘプタペプチド－１５－パルミテート、パルミトイルテトラペプチド－７、パルミトイルトリペプチド－１、α－ヒドロキシ酸（例えば、乳酸、グリコール酸）、β－ヒドロキシ酸（例えば、サリチル酸）、ビタミンＢ５、海藻、海藻抽出物、シリコーン、キシリトール、カラスムギエキス、オートミールパウダー、コロイドオートミール、アロエベラ、日焼け止め及びこれらの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。
【0143】
様々な実施形態において、抗微生物剤は、亜鉛、サリチル酸、アゼライン酸、過酸化ベンゾイル及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。様々な実施形態において、抗微生物剤は、亜鉛、アゼライン酸、過酸化ベンゾイル及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【0144】
様々な実施形態において、アルミニウム塩は、クロルヒドロキシアルミニウム塩（ａｌｕｍｉｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｏｈｙｄｒａｔｅ ｓａｌｔ）又は制汗剤に一般的に使用される他の塩である。
【0145】
様々な実施形態において、鉱物顔料は、酸化亜鉛及び／又は二酸化チタンである。鉱物顔料は、例えば、太陽からの紫外線から保護することが知られている。
【0146】
様々な実施形態において、臭気吸収剤又は中和剤は、リシノール酸亜鉛（ｚｉｎｃ ｒｉｃｉｎｏｌｅａｔｅ）又はラウロイルサルコシン酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｌａｕｒｙｌ ｓａｒｃｏｓｉｎａｔｅ）である。
【0147】
様々な実施形態において、日焼け防止剤は、オキシベンゾン、アボベンゾン、オクチサレート（ｏｃｔｉｓａｌａｔｅ）、オクトクリレン、ホモサレート又はオクチノキサートである。ミネラル日焼け防止剤は、酸化亜鉛及び／又は二酸化チタンを使用する。
【0148】
当業者はまた、組成物が水相と組み合わせて適用される場合、記述されている追加の添加剤もまた、水相中に提供されることができるということも理解するであろう。
【0149】
皮膚の外観又は老化の兆候の改善
本明細書中に記述されている組成物としては、皮膚の外観を改善するためか、あるいは皮膚の老化の兆候を改善するために有用である。皮膚の外観又は老化の兆候の改善としては、皮膚がより輝いて見えること、皮膚がより健康に見えること、皮膚がより潤ったと感じること、毛穴が小さくなること、皮膚がより柔らかく感じること、皮膚がより透明に見えること、水分が増加すること、皮脂生成が減少すること並びにシワ、乾燥、荒れ、くすみ、加齢によるシミを含むシミ及び不純物の出現を減少させることを含むが、これらに限定されない効果を挙げることができる。
本明細書中に記述されている組成物としては、皮膚の外観を改善するためか、あるいは皮膚の老化の兆候を改善するために有用である。皮膚の外観又は老化の兆候の改善としては、皮膚がより輝いて見えること、皮膚がより健康に見えること、皮膚がより潤ったと感じること、毛穴が小さくなること、皮膚がより柔らかく感じること、皮膚がより透明に見えること、水分が増加すること、皮脂生成が減少すること並びにシワ、乾燥、荒れ、くすみ、加齢によるシミを含むシミ及び不純物の出現を減少させることを含むが、これらに限定されない効果を挙げることができる。
【0150】
毛穴の大きさ、皮膚の水分量、皮脂生成、シワ、シミ及び不純物は、全て皮膚分析装置（例えば、（Ｄｅｒｍｏ Ｐｒｉｍｅ（ｄｐ）／ｖｉｓｏ、ＣＨＯＷＩＳ、韓国）を用いて測定されることができる。ＡＩを搭載した皮膚分析装置は、水分補給（ｈｙｄｒａｔｉｏｎ）、皮脂、毛穴、シワ、シミ／色素沈着、不純物、角質（ｋｅｒａｔｉｎ）、肌の色合い、黒ずみ、皮膚の敏感性などの様々な皮膚パラメーターの変化を定量的に測定する。装置は、湿度センサーを装備しており、レンズ交換式の高度な光学技術を利用して最大１０の異なる皮膚測定値を測定し、アンドロイドＯＳ又はタブレット又はスマートフォンにインストールされたＤｅｒｍｏＢｅｌｌａアプリを介して高解像度画像（ｈｉｇｈ ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ ｉｍａｇｅｓ）の正確な分析を実施する。装置は、本明細書中の実施例に記載のプロトコルに従って使用される。皮膚パラメーター測定は、毎回同じ皮膚の部位で行われる。
【0151】
赤み（ｒｅｄｎｅｓｓ）のような不純物の程度は、ポルフィリンの量を測定することによって分析され得る。それは、ＵＶ光の特定の波長範囲に反応して、緋色、オレンジ色の光として示される。
【0152】
不純物は、緋色又は黄緑色として見られる。これらは、別々に分析され得るが、装置は前記２つを組み合わせ、それらを不純物として分類する。指標は、画像サイズに対する百分率によって計算される。検出されたポルフィリンの量に基づいて赤みの程度を分類する任意の値は存在しない。
【0153】
局所用組成物の形態
様々な実施形態において、組成物は、２５℃で約２０，０００～約５００，０００ｃｐ、例えば２５℃で約３０，０００～約１００，０００ｃｐの粘度を有する。様々な実施形態において、組成物は、２５℃で約２０，０００～約２，０００，０００ｃｐの粘度を有する。
様々な実施形態において、組成物は、２５℃で約２０，０００～約５００，０００ｃｐ、例えば２５℃で約３０，０００～約１００，０００ｃｐの粘度を有する。様々な実施形態において、組成物は、２５℃で約２０，０００～約２，０００，０００ｃｐの粘度を有する。
【0154】
粘度は、０．５ＲＰＭに設定されたＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ Ｈｅｌｉｐａｔｈ Ｓｐｉｎｄｌｅ（Ｓ９４又はＳ９５又はＳ９６）を用いるＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ ＬＶＤＶＩ Ｐｒｉｍｅを使用して、２５℃で測定されることができる。当業者は、粘度を測定するために使用され得る他の方法、及び粘度測定値が用いられる方法によって変化する可能性があるということを十分理解するであろう。
【0155】
様々な実施形態において、組成物は、６０％ＲＨ（相対湿度）で、２５℃で少なくとも６ヶ月の保存可能期間を有する。様々な実施形態において、組成物は、６０％ＲＨ（相対湿度）で、２５℃で少なくとも１２ヶ月の保存可能期間を有する。
【0156】
二相組成物
水性組成物は、一般に病原体の増殖を防ぐために防腐剤の添加を必要とする。これらの防腐剤は、通常は非選択性であり、プロバイオティクスの細胞死を引き起こし、それ故にすぐさま効力を失う。さらに、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４は、水性製剤において安定でないようである。しかしながら、例えば、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４の安定性又は生存能力に影響を与えずに組成物の展延性を改善し、組成物の官能的特徴（ｓｅｎｓｏｒｙ ｆｅａｔｕｒｅｓ）を改善し（例えば、油っぽい感覚が薄れる）及び／又はビヒクルとして作用するために、本発明の局所用組成物を水性組成物に応用することは、有利であることができる。
水性組成物は、一般に病原体の増殖を防ぐために防腐剤の添加を必要とする。これらの防腐剤は、通常は非選択性であり、プロバイオティクスの細胞死を引き起こし、それ故にすぐさま効力を失う。さらに、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４は、水性製剤において安定でないようである。しかしながら、例えば、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４の安定性又は生存能力に影響を与えずに組成物の展延性を改善し、組成物の官能的特徴（ｓｅｎｓｏｒｙ ｆｅａｔｕｒｅｓ）を改善し（例えば、油っぽい感覚が薄れる）及び／又はビヒクルとして作用するために、本発明の局所用組成物を水性組成物に応用することは、有利であることができる。
【0157】
様々な実施形態において、適用される場合、組成物は、水相と組み合わせて適用される。
【0158】
適切な水相は、当業者にとって明らかであろう。水相は、溶媒、皮膚軟化剤、保湿剤（ｈｕｍｅｃｔａｎｔｓ）、乳化剤、防腐剤、粘度調整剤、プレバイオティクス及び香料の適切な組合せを含むことができる。市販の保湿剤（ｍｏｉｓｔｕｒｉｓｅｒｓ）は、適切な水相の一例である。
【0159】
水相の成分としては、水、ＣＭＣナトリウム及び微結晶性セルロース（Ｖｉｖａｐｕｒ ＭＣＧ ８１１）、防腐剤（例えば、フェノキシエタノール及びエチルヘキシルグリセリン）、グリセリン、サーファクチンナトリウム、キサンタンガム、香料、カプリル酸ヤシアルキル（ｃｏｃｏ－ｃａｐｒｙｌａｔｅ）、セトステアリルアルコール、ステアリン酸グリセリル、セテアリルコムギワラグリコシズ、フェノキシエタノール及びステアロイルグルタミン酸ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない。
【0160】
水相はまた、プレバイオティクス又は酸化防止剤などの上記で概説されたような追加の添加剤を含んでもよい。
【0161】
また、本明細書中に記述されていることは、油相及び水相を含む二相組成物であり、前記油相は、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４、粘度調整剤、分散剤及びオイルビヒクルを含む。本明細書中に記述されていることは、別個の油相及び別個の水相を含む二相組成物であり、前記油相は、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４、粘度調整剤、分散剤及びオイルビヒクルを含む。組成物は、任意の前述の特徴を含んでもよい。様々な実施形態において、油相は、水相と同時に適用される。
【0162】
二相組成物は、適用時に二相を同時に分注するように設計されたノズルを有する、油相及び水相のための別個の室（ｃｈａｍｂｅｒｓ）又は容器を含むデュアルチャンバーボトル（ａ ｄｕａｌ ｃｈａｍｂｅｒ ｂｏｔｔｌｅ）に充填されることができる。相は、室に別々に保管され、適用時に組み合わされる。適切なディスペンサーの例は、米国特許１０，３８４，２２４に記述されている。
【0163】
キット
本明細書中に記述されていることは、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む局所用組成物及び水性組成物を含むキットである。
本明細書中に記述されていることは、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む局所用組成物及び水性組成物を含むキットである。
【0164】
様々な実施形態において、キットは、第１の容器及び第２の容器を有する分注システムを含み、前記第１の容器がミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む油相を含み、第２の容器が水相を含む。ＵＳ１０，３８４，２２４に記述されているようなデュアルチャンバーボトルは、キット中に含まれることに適している。
【0165】
キットはまた、使用のための導入書（ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｓ）とともに提供されてもよい。
【0166】
局所用組成物の調製方法
一態様において、本発明は、以下の工程：
ａ）オイルビヒクル及び分散剤を混合すること、
ｂ）工程ａ）からの混合物に、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４及び粘度調整剤を添加すること、
ｃ）工程ｂ）からの混合物を均質化し、組成物を提供すること、
を含む、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む局所用組成物の製造方法を提供する。
一態様において、本発明は、以下の工程：
ａ）オイルビヒクル及び分散剤を混合すること、
ｂ）工程ａ）からの混合物に、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４及び粘度調整剤を添加すること、
ｃ）工程ｂ）からの混合物を均質化し、組成物を提供すること、
を含む、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４を含む局所用組成物の製造方法を提供する。
【0167】
本明細書中に記述されている局所用組成物は、最初にオイルビヒクル及び分散剤を混合し、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４を一定の旋回をしながら混合物に添加し、粘度調整剤を混合物に添加し、混合物を、例えば、約１～３分間均質化し、組成物を提供することによって調製されることができる。様々な実施形態において、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４は、粘度調整剤の前に添加される。他の実施形態において、粘度調整剤は、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４の前に添加される。様々な実施形態において、混合物は、高せん断ホモジナイザー（ａ ｈｉｇｈ ｓｈｅａｒ ｈｏｍｏｇｅｎｉｓｅｒ）又はオーバーヘッドスターラーを用いて均質化される。
【0168】
有利には、方法は、加熱工程を含まない。様々な実施形態において、方法は、加熱することなく実施される。ミクロコッカス・ルテウスＱ２４は、熱に弱いことが判明している。加熱することは、細胞の生存性を失う結果となる。したがって、本出願人らは、プロバイオティクスの最適な生存能力を維持しながら、組成物の効率的な製造を可能にする代わりの組成物を開発した。
【0169】
ミクロコッカス・ルテウスＱ２４は、混合物に添加する前に、２５０μｍ未満の粒径に粉砕されるか、あるいはふるいにかけられることができる。様々な実施形態において、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４の粒径は約２５０μｍ未満又は約１００μｍ未満である。適切な粉砕及びふるい分け技術は、当業者にとって明らかであろう。例えば、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４は、乾式粉体機（ａ ｄｒｙ ｐｏｗｄｅｒ ｃｏｍｉｌｌ）（例えば、Ｕ１０又はＵ２１などのＱｕａｄｒｏ Ｐｏｗｄｅｒ Ｍｉｌｌｓ）を用いて粉砕されることができる。より小さい粒径は、二相ディスペンサーからの油相の分注にとって有利であり、組成物の改善された展延性を提供し、水相と組み合わせた場合に分散性を向上させ、組成物の改善された知覚特性（ｓｅｎｓｏｒｙ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）、すなわち、粒子が大きくないか、あるいはザラザラしていないことを提供することができる。
【0170】
様々な実施形態において、ミクロコッカス・ルテウスＱ２４は、約３００μｍ未満又は約２５０μｍ未満の粒径（Ｄｖ９０）を有する。Ｄｖ９０は、乾式粉体分散（ｄｒｙ ｐｏｗｅｒ ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ）の粒度分析のためのレーザー回折法（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、米国）によって測定されることができる。当業者は、Ｄｖ９０が３００μｍ未満の粒子が２５０μｍのふるいを完全に通過することができることを十分理解するであろう。
【0171】
使用方法
本発明は、それを必要とする対象者における皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候を改善する方法に関する。方法は、それを必要とする対象の皮膚に本発明の局所用組成物を適用することを含む。本発明の組成物は、油相セラム（ｓｅｒｕｍ）単独として、顔用クリーム若しくは全身用保湿剤として、スプレーとして又はスポットオンクリーム（ｓｐｏｔ ｏｎ ｃｒｅａｍ）として、二相の保湿クリームに使用されることができる。組成物は、対象者の皮膚の問題に対処するために適切な量で適用されることができる。当業者は、組成物が非常に若い人から非常に高齢の人まで、あらゆる年齢の対象者に適用されることができるということを十分理解するであろう。適用される量は、対象者の年齢、性別及び対処される問題に従って変化する可能性がある。典型的な適用体制は、本発明の組成物を月１回、週１回、毎日又は１日１～４回適用することを含むことができる。
本発明は、それを必要とする対象者における皮膚の外観又は少なくとも１つの老化の兆候を改善する方法に関する。方法は、それを必要とする対象の皮膚に本発明の局所用組成物を適用することを含む。本発明の組成物は、油相セラム（ｓｅｒｕｍ）単独として、顔用クリーム若しくは全身用保湿剤として、スプレーとして又はスポットオンクリーム（ｓｐｏｔ ｏｎ ｃｒｅａｍ）として、二相の保湿クリームに使用されることができる。組成物は、対象者の皮膚の問題に対処するために適切な量で適用されることができる。当業者は、組成物が非常に若い人から非常に高齢の人まで、あらゆる年齢の対象者に適用されることができるということを十分理解するであろう。適用される量は、対象者の年齢、性別及び対処される問題に従って変化する可能性がある。典型的な適用体制は、本発明の組成物を月１回、週１回、毎日又は１日１～４回適用することを含むことができる。
【0172】
顔に適用されるか、あるいはスポットオン製剤として使用される場合の組成物の通常用量は、典型的には０．０９～０．２０グラム、より一般的には０．１０～０．１５グラムである。用量は、典型的には約１×１０５～約１×１０９ｃｆｕを含むであろう。当然のことながら、より大量が身体の保湿のために使用される。当業者は、調剤される量が、適用される組成物におけるミクロコッカス・ルテウスＱ２４の濃度及びそれが適用される形態によって決まるということを理解するであろう。
【0173】
本発明の組成物は、従来の保湿剤として同様に、かつ任意の日常のスキンケア体制で使用されることができる。典型的な適用体制は、本発明の組成物を１日１回又は２回、通常はクレンジング後に使用することを含むことができる。組成物の長期間か、あるいは例えば、１～２ヶ月の限られた期間の使用が検討される。
【実施例】
【0174】
材料
設備：油相製剤の成分は、ホモジナイザー（ＩＫＡ Ｕｌｔｒａ Ｔｕｒｒａｘ Ｔ２５、Ｊｏｈｎ Ｍｏｒｒｉｓ ｇｒｏｕｐ、ニュージーランド）を用いて混合された。臨床試験のために、油相は、二重シリンダー単一分注ボトル（ｄｕａｌ ｃｙｌｉｎｄｅｒ ｓｉｎｇｌｅ ｄｉｓｐｅｎｓｉｎｇ ｂｏｔｔｌｅｓ）（Ｎｅｏｍｉｘ、Ｓａｌｉｅｎｔ、フランス）中に充填された。
設備：油相製剤の成分は、ホモジナイザー（ＩＫＡ Ｕｌｔｒａ Ｔｕｒｒａｘ Ｔ２５、Ｊｏｈｎ Ｍｏｒｒｉｓ ｇｒｏｕｐ、ニュージーランド）を用いて混合された。臨床試験のために、油相は、二重シリンダー単一分注ボトル（ｄｕａｌ ｃｙｌｉｎｄｅｒ ｓｉｎｇｌｅ ｄｉｓｐｅｎｓｉｎｇ ｂｏｔｔｌｅｓ）（Ｎｅｏｍｉｘ、Ｓａｌｉｅｎｔ、フランス）中に充填された。
【0175】
化学物質：Ｂｌｉｓ Ｑ２４は、ＦｏｏｄＢｏｗｌ Ａｕｃｋｌａｎｄによって発酵及び凍結乾燥した。Ｂｌｉｓリオプロテクタントブレンドは、Ｃａｌｌａｇｈａｎ ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎによって調製された（２０１７年６月）。複数の皮膚病原体株は、Ｂｌｉｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｌａｂにある－８０℃の冷凍庫から調達された。中鎖トリグリセリド（トリ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリル）、例えば、Ｍｉｇｌｙｏｌ８１２（Ｐｈ Ｅｕｒグレード）又はＲａｄｉａ７１０４は、それぞれＳａｓｏｌ、ハンブルグ、ドイツ又はＯｌｅｏｎ、マレーシアから購入された。Ｔｗｅｅｎ８０（Ｐｈ Ｅｕｒグレード）は、Ｓｉｇｍａ（ニュージーランド）から購入された。疎水性シリカ（Ａｅｒｏｓｉｌ Ｒ９７２（医薬品グレード））は、Ｅｖｏｎｉｋ、ドイツから購入された（Ｃｈｅｍｉｐｌａｓ、オークランド、ニュージーランドが供給）。水性クリームは、Ｂｌｉｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社内で調製され、水性保湿剤はＳｈｉｅｌｉｎｇ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ニュージーランドによって供給された。蒸留水は、試料及び培養物の調製のために使用された。他の全ての化学薬品及び溶媒は、分析グレードのものである（Ｓｉｇｍａ、ニュージーランド）。臨床試験及び安定性研究用のＱ２４油相及び水相を保管するためのプラスチックボトルは、Ｎｅｏｍｉｘ、フランスから購入された。皮膚分析装置（ｄｐＶｉｓｏ、Ｄｅｒｍｏｂｅｌｌａ ａｐｐ）は、ＣＨＯＷＩＳ（北朝鮮）から購入された。Ｓａｍｓｕｎｇ Ｔａｂｌｅｔ１０．１は、ＰＢ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ニュージーランドから購入された。
【0176】
実施例１：油相に含有するためのＢｌｉｓ Ｑ２４原料のサイズの最適化
Ｂｌｉｓ Ｑ２４原料は、目に見えて大きな粒径＞５００μｍを有していた。油相の製剤化に関して、二重シリンダー単一ディスペンサーボトル（Ｎｅｏｍｉｘ、フランス）からの安定した調剤及び皮膚に適用する際に感覚的な審美眼（ｓｅｎｓｏｒｙ ａｅｓｔｈｅｔｉｃ）を可能にするために、意図された粒径は＜２５０μｍ未満であることになっていた。フィルターバッグ（ＢａｇＰａｇｅ＋極小孔あきフィルター付き全面フィルターバッグ＜２５０μｍ）（Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、ニュージーランド）が使用された。Ｂｌｉｓ Ｑ２４は、フィルターバッグの内側のメッシュポケット／ふるい（２５０μｍ）の中に入れられ、５分間手で振った後に、細かくふるいにかけられた材料（＜２５０μｍ）は外側のポケットに収集された。必要に応じて、麺棒を用いて原料に軽く圧力が加えられ、大きな凝集体をさらに粉砕した。その後、ストマッカー袋の外側のポケットに小さな切れ目を入れ、分離されてふるいにかけられた原料（＜２５０μｍ）及びふるいにかけられていない原料（＞２５０μｍ）は、収集され、かつ別々に保管された。
Ｂｌｉｓ Ｑ２４原料は、目に見えて大きな粒径＞５００μｍを有していた。油相の製剤化に関して、二重シリンダー単一ディスペンサーボトル（Ｎｅｏｍｉｘ、フランス）からの安定した調剤及び皮膚に適用する際に感覚的な審美眼（ｓｅｎｓｏｒｙ ａｅｓｔｈｅｔｉｃ）を可能にするために、意図された粒径は＜２５０μｍ未満であることになっていた。フィルターバッグ（ＢａｇＰａｇｅ＋極小孔あきフィルター付き全面フィルターバッグ＜２５０μｍ）（Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、ニュージーランド）が使用された。Ｂｌｉｓ Ｑ２４は、フィルターバッグの内側のメッシュポケット／ふるい（２５０μｍ）の中に入れられ、５分間手で振った後に、細かくふるいにかけられた材料（＜２５０μｍ）は外側のポケットに収集された。必要に応じて、麺棒を用いて原料に軽く圧力が加えられ、大きな凝集体をさらに粉砕した。その後、ストマッカー袋の外側のポケットに小さな切れ目を入れ、分離されてふるいにかけられた原料（＜２５０μｍ）及びふるいにかけられていない原料（＞２５０μｍ）は、収集され、かつ別々に保管された。
【0177】
実施例２：局所用組成物の調製方法
２５０ｍｌのガラスのビーカーを用いて、必要量のビヒクル（表１、ＭＣＴ参照）は軽量され、その後に分散剤Ｔｗｅｅｎ８０の添加が続いた。その後、ビーカーは、ぼんやりした混合物が形成されるまで手動で静かに回転した。その後、Ｂｌｉｓ Ｑ２４及び疎水性シリカは、常に回転させながらＭＣＴ／Ｔｗｅｅｎ８０混合物に添加され、均一な混合物が得られ、その後に高せん断ホモジナイザー又はオーバーヘッドホモジナイザーを用いる分散が続き、全ての成分を均一に分散させた。
２５０ｍｌのガラスのビーカーを用いて、必要量のビヒクル（表１、ＭＣＴ参照）は軽量され、その後に分散剤Ｔｗｅｅｎ８０の添加が続いた。その後、ビーカーは、ぼんやりした混合物が形成されるまで手動で静かに回転した。その後、Ｂｌｉｓ Ｑ２４及び疎水性シリカは、常に回転させながらＭＣＴ／Ｔｗｅｅｎ８０混合物に添加され、均一な混合物が得られ、その後に高せん断ホモジナイザー又はオーバーヘッドホモジナイザーを用いる分散が続き、全ての成分を均一に分散させた。
【表1】
【0178】
実施例３：安定性試験
製剤の安定性は、ＩＣＨが推奨した、ガラス瓶又はデュアルチャンバーボトル中で５℃±３℃で冷蔵及び／又は２５℃±２℃／６０±５％ＲＨのリアルタイムの条件下で保管する、安定性試験のガイドライン（ＩＣＨ Ｑ１ＡＲ２）に従う温度及び湿度の保管条件のとおり試験された。
製剤の安定性は、ＩＣＨが推奨した、ガラス瓶又はデュアルチャンバーボトル中で５℃±３℃で冷蔵及び／又は２５℃±２℃／６０±５％ＲＨのリアルタイムの条件下で保管する、安定性試験のガイドライン（ＩＣＨ Ｑ１ＡＲ２）に従う温度及び湿度の保管条件のとおり試験された。
【0179】
製剤ＢＬＴ１７Ｑ２４－２（水性クリーム）に関して、５℃±３℃で保管された場合、２ヶ月以内に１対数減少（ｌｏｇ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）未満で減少が観測された。製剤ＢＬＴ１７Ｑ２４－２（水性クリーム）、ＢＬＴ１７Ｑ２４－５（ココナッツオイル）及びＢＬＴ１７Ｑ２４－１（水）に関して、製剤が２５℃±２℃／６０±５％ＲＨに従って保管された場合、１週間以内に生存細胞数の劇的な減少が観測された。製剤ＢＬＴ１７Ｑ２４－７（中鎖トリグリセリド）は、少なくとも６ヶ月間安定であった（試験終了時）。
【0180】
グリセロールを含む製剤ＢＬＴ１７Ｑ２４－３０及びＢＬＴ１７Ｑ２４－３１は、油の種類に関係なく安定でなかった。製剤ＢＬＴ１７Ｑ２４－１４（ＭＣＴビヒクル）、ＢＬＴ１７Ｑ２４－１７（ＭＣＴビヒクル）、ＢＬＴ１７Ｑ２４－１９（オリーブオイルビヒクル）、ＢＬＴ１７Ｑ２４－２１（オリーブオイルビヒクル）は、ガラス瓶中で、２５℃±２℃／６０±５％ＲＨで、少なくとも９ヶ月間安定であることが判明した（図５）。
【0181】
ＢＬＴ１７Ｑ２４－２５（ＭＣＴビヒクル）は、デュアルチャンバーボトル中では、２５℃±２℃／６０±５％ＲＨで、かつ３０℃±２℃／６５±５％ＲＨで、少なくとも６カ月間安定であり、ガラスバイアル中では、５℃±３℃で少なくとも９カ月間並びに２５℃±２℃／６０±５％ＲＨで、かつ４０℃±２℃／７５±５％ＲＨで少なくとも６カ月間安定であった。製剤は少なくとも２年間安定であるとの見込みである。
【0182】
実施例４：水相
水相の実施例が提供される。
水相の実施例が提供される。
【表2】
【0183】
実施例５：インビトロ試験
製剤ＢＬＴ１７Ｑ２４－２８を用いる化粧品試験は、成人ボランティア（ｎ＝１０）を対象にして、２０２０年１１月～１２月に実施された。参加者は全て女性であり、２２歳～６０歳であった。試設計は、新規の皮膚分析装置を用いる皮膚パラメーターの測定及びＢｌｉｓ Ｑ２４顔用保湿剤のコロニー形成効能を判定するための拭き取り（ｓｗａｂ）試料採取を含んでいた。
製剤ＢＬＴ１７Ｑ２４－２８を用いる化粧品試験は、成人ボランティア（ｎ＝１０）を対象にして、２０２０年１１月～１２月に実施された。参加者は全て女性であり、２２歳～６０歳であった。試設計は、新規の皮膚分析装置を用いる皮膚パラメーターの測定及びＢｌｉｓ Ｑ２４顔用保湿剤のコロニー形成効能を判定するための拭き取り（ｓｗａｂ）試料採取を含んでいた。
【0184】
臨床試験試料の採集
各参加者は、毎回同じ部屋で評価され、各時点で同じ手順に従った。皮膚分析装置を用いる皮膚パラメーターの測定に関して、装置のセンサーは、目尻及び鼻先に合わせて左頬に当てられた。測定値が装置アプリによって指示されたとおりに、おおよそ頬又は額のほぼ同一の部位から測られるように、この方法は、各時点で一貫性のある状態に保たれた。シワは、目尻に装置のカメラを当てることによって測定された。含水状態／保湿状態は、額（Ｔゾーン）に、それから頬（Ｕゾーン）に装置を当てることによって測定された。
各参加者は、毎回同じ部屋で評価され、各時点で同じ手順に従った。皮膚分析装置を用いる皮膚パラメーターの測定に関して、装置のセンサーは、目尻及び鼻先に合わせて左頬に当てられた。測定値が装置アプリによって指示されたとおりに、おおよそ頬又は額のほぼ同一の部位から測られるように、この方法は、各時点で一貫性のある状態に保たれた。シワは、目尻に装置のカメラを当てることによって測定された。含水状態／保湿状態は、額（Ｔゾーン）に、それから頬（Ｕゾーン）に装置を当てることによって測定された。
【0185】
皮脂／油っぽさは、額にあぶらとり紙（ｓｅｂｕｍ ｐａｐｅｒ）（ＣＨＯＷＩＳによるラベル付き）のＴゾーン側を当て、それから頬にあぶらとり紙のＵゾーン側を当てることによって測定された。その後、分析装置のカメラは、あぶらとり紙上の皮脂を撮影するために使用された。異なるパラメーターの測定に関して、画像が撮影された場合及び可能な限り各パラメーターについて３枚の画像を撮影した場合に装置のセンサーは動かなかった。測定は、段階的なやり方で収集され、装置のソフトウェアの指示に基づいて、水分、皮脂、毛穴の大きさ、シミ、不純物、シワの順番で進行する。
【0186】
試験結果
図２は、２５日間、単一のディスペンサーボトルを用いて、２ポンプ分の油相（ＢＬＴ１７Ｑ２４－２８）＋顔用保湿剤の組み合わせを顔に適用した後の種々の皮膚パラメーターの変化を示す。平均０．０５ｇで供給される各ポンプは、それによって１日あたり＝０．２００ｇの総投与量（～０．０５ｇ×２ポンプを１日２回）と一致する総投与量を供給する。投与量当たり（ポンプ２回で０．１ｇ）の顔に付着した総細胞数は、３．２９Ｅ＋８ＣＦＵ／０．１ｇ又は１日２回の投与では６．６Ｅ＋８ＣＦＵ／日であった。これらは、０日目の初期油相細胞数＝３．２９Ｅ＋９ＣＦＵ／ｇに基づいている。
図２は、２５日間、単一のディスペンサーボトルを用いて、２ポンプ分の油相（ＢＬＴ１７Ｑ２４－２８）＋顔用保湿剤の組み合わせを顔に適用した後の種々の皮膚パラメーターの変化を示す。平均０．０５ｇで供給される各ポンプは、それによって１日あたり＝０．２００ｇの総投与量（～０．０５ｇ×２ポンプを１日２回）と一致する総投与量を供給する。投与量当たり（ポンプ２回で０．１ｇ）の顔に付着した総細胞数は、３．２９Ｅ＋８ＣＦＵ／０．１ｇ又は１日２回の投与では６．６Ｅ＋８ＣＦＵ／日であった。これらは、０日目の初期油相細胞数＝３．２９Ｅ＋９ＣＦＵ／ｇに基づいている。
【0187】
ベースラインと比較して、毛穴の大きさ、シミ、シワ（目尻）、不純物（ポルフィリン）及び皮脂レベルの一貫した減少並びに水分レベル（Ｔゾーン）の一貫した増加は、各時点（１０、１８、２５日目）で、６０％～９０％の参加者において観察され、Ｂｌｉｓ Ｑ２４ハイドレーティングセラム（ｈｙｄｒａｔｉｎｇ ｓｅｒｕｍ）顔用保湿剤の有効性を示唆した。
【0188】
図２は、ベースラインから２５日目までの全ての参加者における皮膚パラメーターの変化率を記述している。水分レベル／水分補給レベルは、９０％の全体的な増加を有し、研究の参加者の中で最も大きな変化率を有した。シワは、４５％の全体的な減少を有した。皮脂生成は、１０日後に６０％減少した。皮脂生成の変化は、１０日目から２５日目まで一貫したままであった。さらなる分析は、４０％の参加者が５０％以上の毛穴の全体的な減少を有し、１０％の参加者が５０％以上のシミの出現における全体的な減少を有し、６６％の参加者が５０％以上の皮膚中のポルフィリンの量における全体的な減少を有し、５５％の参加者が５０％以上のＴゾーンに存在する水分の量における全体的な増加を有するということを示した。
【0189】
図３は、皮膚分析装置によって割り当てられた対応する数値とともに、ベースラインから２５日目までの１人の参加者の観察結果を示す。この参加者は、０日目から２５日目まで、シミ、不純物及びシワの全体的な減少を有していた。０日目から１８日目まで、毛穴の一貫した減少があったにもかかわらず、２５日目のそれらの結果である１０は、ベースラインの測定値である７よりも高かった。２５日目の皮膚の視覚的観察は、皮膚の改善された質感及びテカリ（ｓｈｉｎｅ）が少なくなり、毛穴が引き締まって見えるような結果を示している。
【0190】
図４は、ある参加者の鍵となるパラメーターに関して、スコアの減少例を示している。Ｂｌｉｓ Ｑ２４保湿剤の適用は、毛穴の大きさ、シミ及びシワの数を減少させ、適用前後の皮膚保湿を向上させた。
【0191】
実施例６：比較試験－沈降およびケーキング
３つの異なる粒径（乾式粉体分散（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、米国）を用いる粒径分析のレーザー回折によって測定されるようなＤｖ９０：２９０μｍ、Ｄｖ９０：６２３μｍ、Ｄｖ９０：１０９０μｍ）を有する原料成分を用いて、ＷＯ２００６／１０４４０３：実施例３において記述されている過程に従って、ブドウ種子油の懸濁液の３つの試料は製造された。
３つの異なる粒径（乾式粉体分散（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、米国）を用いる粒径分析のレーザー回折によって測定されるようなＤｖ９０：２９０μｍ、Ｄｖ９０：６２３μｍ、Ｄｖ９０：１０９０μｍ）を有する原料成分を用いて、ＷＯ２００６／１０４４０３：実施例３において記述されている過程に従って、ブドウ種子油の懸濁液の３つの試料は製造された。
【0192】
３つの異なる粒径（Ｄｖ９０：２９０μｍ、Ｄｖ９０：６２３μｍ、Ｄｖ９０：１０９０μｍ）を有する原料を用いて、上記実施例２において記述されている過程に従って、３つのバージョンのセラム製剤（ｓｅｒｕｍ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）は製造された。
【0193】
２９０μｍのＤｖ９０を有するＱ２４は、２５０μｍのモレキュラーシーブを通過することが示された。６２３μｍ又は１０９０μｍのＤｖ９０を有するＱ２４は通過しなかった。
【0194】
沈殿
２本の１０ｍｌシリンジは、６．４ｍＬずつの６つの製剤で満たされており、１ｍｌのヘッドスペース間隙（ｈｅａｄｓｐａｃｅ ｇａｐ）は、ブドウ種子油の懸濁液が振とうによる混合を可能にするために残され、全てのシリンジはブルータック（ｂｌｕｅ ｔａｃ）を用いて先端で密封された。
２本の１０ｍｌシリンジは、６．４ｍＬずつの６つの製剤で満たされており、１ｍｌのヘッドスペース間隙（ｈｅａｄｓｐａｃｅ ｇａｐ）は、ブドウ種子油の懸濁液が振とうによる混合を可能にするために残され、全てのシリンジはブルータック（ｂｌｕｅ ｔａｃ）を用いて先端で密封された。
【0195】
セラム製剤を含んだシリンジは、ベンチ（ｂｅｎｃｈ）に取り付けられ、沈殿したＱ２４原料成分の体積はシリンジの測定値を用いて、０、０．８、７、１５及び３０日目の時点で測定された。ブドウ種子油の懸濁液を含むシリンジは振動し、ベンチに取り付けられ、かつ沈殿したＱ２４原料の体積は０、１、３、５、１０、３０及び６０分の時点で測定された。全ての製剤のシリンジは手付かずにしておかれ、３０日間ベンチに取り付けられた。
【0196】
Ｑ２４セラム製剤の粘度は、あらゆるＱ２４原料粒径で沈降体積の変化をもたらさず、視覚的には、２９０μｍのＤｖ９０を有する原料が最も均等な分布をもたらした。全てのブドウ種子油の懸濁液は、Ｑ２４原料の１００％の沈殿を有し、最も大きな粒径の原料が数分以内に最も速く沈降した。
【0197】
ケーキング
上述の沈殿試験が３０日で完了するとすぐに、ブドウ種子油の懸濁液は、Ｑ２４原料「ケーキ」を上側にして、一定のペースで、垂直に振動した。Ｑ２４原料の１００％が再懸濁するまで、未懸濁のまま「ケーキ」に残っている原料の測定は、１０秒ごとに行われた。
上述の沈殿試験が３０日で完了するとすぐに、ブドウ種子油の懸濁液は、Ｑ２４原料「ケーキ」を上側にして、一定のペースで、垂直に振動した。Ｑ２４原料の１００％が再懸濁するまで、未懸濁のまま「ケーキ」に残っている原料の測定は、１０秒ごとに行われた。
【0198】
セラム製剤のいずれも、任意のＱ２４の沈降を有さず、「ケーキング」の試験を必要としなかった。全てのブドウ種子油懸の濁製製剤は、Ｑ２４原料の１００％の沈降を有し、試験された。２９０μｍ及び６２３μｍのＤｖ９０を有するＱ２４原料で製造されたブドウ種子油の懸濁液は、２０秒以内に１００％再懸濁したが、Ｄｖ９０が１０９０μｍの原料で製造された製剤は、１００％再懸濁するために４０秒かかった。
【0199】
したがって、ＷＯ２００６／１０４４０３に記述されているブドウ種子油の懸濁液は、本発明に従って局所用化粧品製剤として用いられるための適切な沈殿及びアンチケーキング特性を示さなかった。
【0200】
実施例７：比較試験－粘度、展延性及び安定性
４つの異なる製剤が調製された。
１． ２９０μｍのＤｖ９０を有するＱ２４原料を用いて、ＷＯ２００６／１０４４０：実施例３において記述されている過程に従って、ブドウ種子油の懸濁液が製造された。
２． ２９０μｍのＤｖ９０２を有するＱ２４原料を用いて、ＷＯ２００６／１０４４０：実施例２において記述されている過程に従って、デオドラントスティック製剤が製造された。
３． オーストラリアニュージーランド臨床試験登録（ＡＮＺＣＴＲ）試験ＡＣＴＲＮ１２６１６００００２２４６０に従って、ガンマ線照射により死滅したＱ２４原料（２５０μｍのふるいにかけられた）を市販のセトマクロゴールクリーム（ＨｅａｌｔｈＥ非イオン性クリーム、Ｊａｙｃｈｅｍ、ニュージーランド）に混合することによって、セトマクロゴールクリーム製剤が製造された。
４． ２９０μｍのＤｖ９０を有するＱ２４原料を用いて、実施例２に従って、セラム製剤ＢＬＴ１７Ｑ２４－３１が製造された。
４つの異なる製剤が調製された。
１． ２９０μｍのＤｖ９０を有するＱ２４原料を用いて、ＷＯ２００６／１０４４０：実施例３において記述されている過程に従って、ブドウ種子油の懸濁液が製造された。
２． ２９０μｍのＤｖ９０２を有するＱ２４原料を用いて、ＷＯ２００６／１０４４０：実施例２において記述されている過程に従って、デオドラントスティック製剤が製造された。
３． オーストラリアニュージーランド臨床試験登録（ＡＮＺＣＴＲ）試験ＡＣＴＲＮ１２６１６００００２２４６０に従って、ガンマ線照射により死滅したＱ２４原料（２５０μｍのふるいにかけられた）を市販のセトマクロゴールクリーム（ＨｅａｌｔｈＥ非イオン性クリーム、Ｊａｙｃｈｅｍ、ニュージーランド）に混合することによって、セトマクロゴールクリーム製剤が製造された。
４． ２９０μｍのＤｖ９０を有するＱ２４原料を用いて、実施例２に従って、セラム製剤ＢＬＴ１７Ｑ２４－３１が製造された。
【0201】
粘度
各製剤は、１０ｍｌのシリンジに充填され、気泡が叩き出され、プランジャーを押し下げることによりスライドガラス（ａ ｇｌａｓｓ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ｓｌｉｄｅ）上に分注された。分注の容易さ又は難しさは記録され、製剤は、粘度の適合性、Ｑ２４原料成分の分布及び顔用保湿剤の包装の２つの最も一般的な形態、ポンプボトル又は適用前に製剤を採取するために指をつけるための小さな丸い容器から均等に分注できそうな能力について、視覚的に評価された。
各製剤は、１０ｍｌのシリンジに充填され、気泡が叩き出され、プランジャーを押し下げることによりスライドガラス（ａ ｇｌａｓｓ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ｓｌｉｄｅ）上に分注された。分注の容易さ又は難しさは記録され、製剤は、粘度の適合性、Ｑ２４原料成分の分布及び顔用保湿剤の包装の２つの最も一般的な形態、ポンプボトル又は適用前に製剤を採取するために指をつけるための小さな丸い容器から均等に分注できそうな能力について、視覚的に評価された。
【表3】
【0202】
製剤１及び２は、それぞれ、粘性が低すぎて、粘度が高すぎるため、顔面化粧品の皮膚適用に適しているとは考えられなかった。
【0203】
展延性
試料１及び４の機械的展延性を決定するために、直径２ｃｍの円は、フラットシャーレの蓋の裏側に鮮明に印を付けられた。次に、０．５ｇの製剤は、直径２ｃｍの円を均等に覆う蓋の上に配置された。２００ｇの塊でトップダウンを上塗りする（ｆａｃｉｎｇ ｔｏｐ ｄｏｗｎ）もう１つのシャーレは、製剤の最上部に配置され、２０秒間静置された。その後、広がった製剤の円の直径が測定された。下記の方程式は、展延性の百分率を決定するために使用された。（方法 Ｓａｌｅｈ Ａ．ら、「Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｋｉｎ Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｇｅｓｉｃ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｃａｒｂｏｐｏｌ Ｌｏｒｎｏｘｉｃａｍ Ｔｏｐｉｃａｌ Ｇｅｌｓ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｒ」、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｗｏｒｌｄ Ｊｏｕｒｎａｌ、２０１４年巻、記事ＩＤ １２７４９５、９ページ、２０１）は、試験されるフォーマットに適しているわずかに修正された試験方法を設計するために使用された。
試料１及び４の機械的展延性を決定するために、直径２ｃｍの円は、フラットシャーレの蓋の裏側に鮮明に印を付けられた。次に、０．５ｇの製剤は、直径２ｃｍの円を均等に覆う蓋の上に配置された。２００ｇの塊でトップダウンを上塗りする（ｆａｃｉｎｇ ｔｏｐ ｄｏｗｎ）もう１つのシャーレは、製剤の最上部に配置され、２０秒間静置された。その後、広がった製剤の円の直径が測定された。下記の方程式は、展延性の百分率を決定するために使用された。（方法 Ｓａｌｅｈ Ａ．ら、「Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｋｉｎ Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎａｌｇｅｓｉｃ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｃａｒｂｏｐｏｌ Ｌｏｒｎｏｘｉｃａｍ Ｔｏｐｉｃａｌ Ｇｅｌｓ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｒ」、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｗｏｒｌｄ Ｊｏｕｒｎａｌ、２０１４年巻、記事ＩＤ １２７４９５、９ページ、２０１）は、試験されるフォーマットに適しているわずかに修正された試験方法を設計するために使用された。
【0204】
一旦広がった微生物増殖の一貫性を決定するために、０．１ｇの各製剤は、ヒト血液寒天プレートの最上部に配置された。その後、綿棒は、製剤をプレートの下で左右１４の筋状（ｓｔｒｅａｋｓ）に、均等に広げるために使用された。デオスティックの粘度は、寒天プレートの下に均一に広げることができなかったので、製剤があらかじめ溶かされ、それからプレートの下に広げられる第２の方法が使用された。
【0205】
製剤４は、製剤１と比較して、優良な物理的及び微生物に関する展延性を示し、身体／顔用皮膚適用に適していた。
【0206】
安定性
製剤３は、滅菌スプーンを用いて、ストマッカー袋に１９．８ｇのセトマクロゴール１００ＢＰクリーム（ＨｅａｌｔｈＥ、非イオン性クリーム、Ｂ６２２３６、Ｊａｙｃｈｅｍ、ニュージーランド）を計量することによって調製された。０．２ｇ（最終製剤中２％）のＢｌｉｓ Ｑ２４原料は、セトマクロゴールクリームに添加され、密封され、均質なクリームが形成されるまで手で混合された。次に、クリームは、ストマッカーに入れられ、追加の５分間混合された。その後、セトマクロゴールＱ２４クリームは、３０ｍｌのガラスバイアルに分注され、三重に列挙された。マイクロチューブ（ａ ｍｉｃｒｏｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ｔｕｂｅ）（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、米国）において、０．１ｇのＭ．ルテウス Ｑ２４セラム又はクリームは軽量され、０．９ｇの加温（３７℃）リン酸緩衝生理食塩水及びポリソルベート８０（０．１％ｗ／ｗ）で希釈された。混合物は、ボルテックスミキサー（オートボルテックス）を用いて２８００ｒｐｍで５分間、周囲条件下（２０℃±２℃）で振とうすることにより均質化され、均一な分散を得た。その後、１００μｌは、ＰＢＳで適切に、連続的に希釈され、ｈＢａＣａ寒天プレートに広げられ、３７℃／５％ＣＯ２で２８時間～４８時間培養された。コロニーの数を数え、コロニーは、Ｑ－Ｃｏｕｎｔ Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｃｏｌｏｎｙ Ｃｏｕｎｔｅｒ （Ｓｐｉｒａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈ、ニュージーランド）を用いて、ＣＦＵ／ｇで細菌濃度を算出された。その後、バイアルは、７及び１４日時点での安定性試験のために、２５℃／６０％ＲＨに設定したインキュベーターに入れられた。
製剤３は、滅菌スプーンを用いて、ストマッカー袋に１９．８ｇのセトマクロゴール１００ＢＰクリーム（ＨｅａｌｔｈＥ、非イオン性クリーム、Ｂ６２２３６、Ｊａｙｃｈｅｍ、ニュージーランド）を計量することによって調製された。０．２ｇ（最終製剤中２％）のＢｌｉｓ Ｑ２４原料は、セトマクロゴールクリームに添加され、密封され、均質なクリームが形成されるまで手で混合された。次に、クリームは、ストマッカーに入れられ、追加の５分間混合された。その後、セトマクロゴールＱ２４クリームは、３０ｍｌのガラスバイアルに分注され、三重に列挙された。マイクロチューブ（ａ ｍｉｃｒｏｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ｔｕｂｅ）（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、米国）において、０．１ｇのＭ．ルテウス Ｑ２４セラム又はクリームは軽量され、０．９ｇの加温（３７℃）リン酸緩衝生理食塩水及びポリソルベート８０（０．１％ｗ／ｗ）で希釈された。混合物は、ボルテックスミキサー（オートボルテックス）を用いて２８００ｒｐｍで５分間、周囲条件下（２０℃±２℃）で振とうすることにより均質化され、均一な分散を得た。その後、１００μｌは、ＰＢＳで適切に、連続的に希釈され、ｈＢａＣａ寒天プレートに広げられ、３７℃／５％ＣＯ２で２８時間～４８時間培養された。コロニーの数を数え、コロニーは、Ｑ－Ｃｏｕｎｔ Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｃｏｌｏｎｙ Ｃｏｕｎｔｅｒ （Ｓｐｉｒａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈ、ニュージーランド）を用いて、ＣＦＵ／ｇで細菌濃度を算出された。その後、バイアルは、７及び１４日時点での安定性試験のために、２５℃／６０％ＲＨに設定したインキュベーターに入れられた。
【0207】
製剤４は、実施例２において記述されている過程に従って製造された。次に、セラムは、３０ｍｌのガラスバイアルに分注され、三重に列挙された。その後、バイアルは、安定性試験のために２５℃／６０％ＲＨに設定したインキュベーターに入れられた。
【0208】
Ｂｌｉｓ Ｑ２４は、製剤３において非常に不安定であることが発見された。２５℃／６０％ＲＨで保管された場合、わずか７日後に７－ｌｏｇの低下が観測され、１４日目には生存細胞数が見られなかった。比較すると、Ｂｌｉｓ Ｑ２４は、シリカ含量、Ｑ２４の割合、ＭＣＴ及びオリーブオイルを変化させた状態で、２５℃／６０％ＲＨで少なくとも２４ヶ月間非常に安定であった（図５）。
【0209】
実施例８：比較官能検査
製剤１、２及び４は、実施例７において記述されているとおりに調製された。製剤５は、本明細書中に記述されているように、デュアルチャンバーボトル中のセラム製剤４に水和保湿剤を提供することによって調製された。
製剤１、２及び４は、実施例７において記述されているとおりに調製された。製剤５は、本明細書中に記述されているように、デュアルチャンバーボトル中のセラム製剤４に水和保湿剤を提供することによって調製された。
【0210】
各製剤は、清潔なビーカー中にセットアップされ、ラベル付きの白色の背景の上に設置された。各参加者には、製剤を寄せ集めて投薬するための滅菌綿棒が提供された。各参加者（女性５名、男性３名（ｎ＝８））は、各官能特性の試験方法及び採点システムを説明した採点用紙を提供された。各々は、提供された指示に従い、個別に、各官能特性について各製剤を評価し、採点することが求められた。
【0211】
評価された特性は以下の通りである：
・一貫性
・クッション効果
・分布（拡散）
・粘着性（Ｔａｃｋｉｎｅｓｓ）／粘性（ｓｔｉｃｋｉｎｅｓｓ）
・吸収速度
・水和作用
・一貫性
・クッション効果
・分布（拡散）
・粘着性（Ｔａｃｋｉｎｅｓｓ）／粘性（ｓｔｉｃｋｉｎｅｓｓ）
・吸収速度
・水和作用
【0212】
参加者はまた、外見、好み、適用性、メイクアップしやすいかどうか及び他の人に推奨することになるかどうかに基づいて、製剤の選択を評価することも求められた。
【0213】
試験された全てのパラメーターに関して、製剤３及び５は、製剤１及び２よりも有意に高い得点を得られた。
【0214】
実施例９：安全性および有効性
Ｂｌｉｓ Ｑ２４細菌細胞の安全性及び有効性は、ＥｐｉＤｅｒｍ ３Ｄ皮膚モデル（ＥｐｉＤｅｒｍ ３Ｄ Ｓｋｉｎ Ｍｏｄｅｌ）を用いて評価された。
Ｂｌｉｓ Ｑ２４細菌細胞の安全性及び有効性は、ＥｐｉＤｅｒｍ ３Ｄ皮膚モデル（ＥｐｉＤｅｒｍ ３Ｄ Ｓｋｉｎ Ｍｏｄｅｌ）を用いて評価された。
【0215】
方法論
ＥｐｉＤｅｒｍヒト３Ｄ皮膚モデル培養（皮膚モデル）
受領時に、未熟なＥｐｉＤｅｒｍ（ＥＰＩ－２０１－４Ｄ；ＭａｔＴｅｋＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、アッシュランド、ＭＡ、米国）組織の最終的な発育は、製造者の指示に従って完成した。手短に言えば、組織は、出荷時のアガロース含有ゲルから、あらかじめ加温した分化培地（ＥＰＩ－２０１－ＤＭ）を含む細胞培養プレートに移動した。次に、それらは、３７℃で、５％ＣＯ２雰囲気下において４日間維持され、その間に新鮮な分化培地に２又は３回交換した。最後に、完全に発育したＥｐｉＤｅｒｍ組織は、各実験で用いるために、標準培養培地（ＥＰＩ－１００－ＮＭＭ）を含む新鮮なプレートに移動した。
ＥｐｉＤｅｒｍヒト３Ｄ皮膚モデル培養（皮膚モデル）
受領時に、未熟なＥｐｉＤｅｒｍ（ＥＰＩ－２０１－４Ｄ；ＭａｔＴｅｋＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、アッシュランド、ＭＡ、米国）組織の最終的な発育は、製造者の指示に従って完成した。手短に言えば、組織は、出荷時のアガロース含有ゲルから、あらかじめ加温した分化培地（ＥＰＩ－２０１－ＤＭ）を含む細胞培養プレートに移動した。次に、それらは、３７℃で、５％ＣＯ２雰囲気下において４日間維持され、その間に新鮮な分化培地に２又は３回交換した。最後に、完全に発育したＥｐｉＤｅｒｍ組織は、各実験で用いるために、標準培養培地（ＥＰＩ－１００－ＮＭＭ）を含む新鮮なプレートに移動した。
【0216】
耐容性に関する用量反応実験
２４つの未熟なＥｐｉＤｅｒｍ組織の成熟は、上述のように実施された。完全に分化した組織は、ＰＢＳ（ネガティブコントロール）又はＢｌｉｓ Ｑ２４のどちらか一方を５つの用量レベル（１×１０５ｃｆｕ／ｍｌ～１×１０９ｃｆｕ／ｍｌ）の１つで投与を受けるために無作為に割り当てられ、１つの処理につき４つの複製組織が用いられた。組織の頂端表面は、３０μＬの処理溶液で処理され、その後組織は、５％ＣＯ２雰囲気下において、３７℃で２４時間培養した。その期間の最後に、組織は、ＰＢＳで穏やかに洗浄され、それらの生存率がＭＴＴ生存アッセイを用いて評価された。（Ｍｏｓｍａｎｎ，Ｔ．（１９８３）。Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，６５（１－２），５５－６３，Ｋｕｂｉｌｕｓ，Ｊ．（１９９６）。Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，９（２），１５７－１６６．）。
２４つの未熟なＥｐｉＤｅｒｍ組織の成熟は、上述のように実施された。完全に分化した組織は、ＰＢＳ（ネガティブコントロール）又はＢｌｉｓ Ｑ２４のどちらか一方を５つの用量レベル（１×１０５ｃｆｕ／ｍｌ～１×１０９ｃｆｕ／ｍｌ）の１つで投与を受けるために無作為に割り当てられ、１つの処理につき４つの複製組織が用いられた。組織の頂端表面は、３０μＬの処理溶液で処理され、その後組織は、５％ＣＯ２雰囲気下において、３７℃で２４時間培養した。その期間の最後に、組織は、ＰＢＳで穏やかに洗浄され、それらの生存率がＭＴＴ生存アッセイを用いて評価された。（Ｍｏｓｍａｎｎ，Ｔ．（１９８３）。Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，６５（１－２），５５－６３，Ｋｕｂｉｌｕｓ，Ｊ．（１９９６）。Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，９（２），１５７－１６６．）。
【0217】
安全性及び有効性の実験
３６個の未熟なＥｐｉＤｅｒｍ組織の成熟は、上述のように実施された。完全に分化した組織は、１～３６の番号が付けられ、表３に示される処理の１つを受けるように無作為に割り当てられた。これは、主処理（ＰＢＳ、Ｑ２４又はビタミンＣ）及び０．５％ＳＤＳ曝露処理（±０．５％ＳＤＳ）の６つの組み合わせの各々が５つの６ウェル細胞培養プレートの各々に無作為に表されるように行われた。残りの６つの組織は、組織学（ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ）用であるか、あるいは５％ＳＤＳを受けることになっているが、６番目の細胞培養プレートにまとめられた。成熟の後に、３６の組織は、アッセイ培地中で、５％ＣＯ２雰囲気下において、３７℃で２４時間培養され、その後で、ベースライン（０日目）の条件培地試料が採集され、サイトカインの測定のために－８０℃で冷凍保管された。０日目から４日間にわたって、各組織が毎日適切な主処理溶液で処理された後で、組織は、５％ＣＯ２雰囲気の３７℃に維持されたインキュベーターに戻された。Ｂｌｉｓ Ｑ２４又はＰＢＳビヒクルで処理された組織は、組織の頂端表面に適用された３０μＬの適切な溶液を含有する前に、前日の投与の残滓がＰＢＳで洗い流された。代わりに、ビタミンＣ（５０μｇ／ｍＬ）は、培養液に供給された。４日目に、条件培地試料は採集され、サイトカインの測定のために－８０℃で冷凍保管された。その後、３３の組織は、３０μＬのＰＢＳ中の０．５％又は５％ＳＤＳ、あるいはネガティブコントロールとしてＰＢＳにさらされた。１時間後、これらの組織は、ＰＢＳで洗浄され、綿棒で軽くたたかれ乾燥した後で、適切な主処理（ＰＢＳ、Ｂｌｉｓ Ｑ２４又はビタミンＣ）を再度適用し、新鮮な培地を含むプレートに移動させた。残りの３組織（組織学用）は、新鮮な培地を簡単に供給され、適切な主処理を実施された。全組織は、５％ＣＯ２雰囲気下において、３７℃でさらに２４時間培養するためにインキュベーターに戻され、その後で、５日目の条件培地が採集され、－８０℃で冷凍保管された。全ての組織は、ＰＢＳで穏やかに洗浄され、３つの組織構造組織（ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ｔｉｓｓｕｅｓ）が中性緩衝ホルマリンで固定された。他の３３組織の生存率は、ＭＴＴ生存アッセイを用いて評価された。
３６個の未熟なＥｐｉＤｅｒｍ組織の成熟は、上述のように実施された。完全に分化した組織は、１～３６の番号が付けられ、表３に示される処理の１つを受けるように無作為に割り当てられた。これは、主処理（ＰＢＳ、Ｑ２４又はビタミンＣ）及び０．５％ＳＤＳ曝露処理（±０．５％ＳＤＳ）の６つの組み合わせの各々が５つの６ウェル細胞培養プレートの各々に無作為に表されるように行われた。残りの６つの組織は、組織学（ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ）用であるか、あるいは５％ＳＤＳを受けることになっているが、６番目の細胞培養プレートにまとめられた。成熟の後に、３６の組織は、アッセイ培地中で、５％ＣＯ２雰囲気下において、３７℃で２４時間培養され、その後で、ベースライン（０日目）の条件培地試料が採集され、サイトカインの測定のために－８０℃で冷凍保管された。０日目から４日間にわたって、各組織が毎日適切な主処理溶液で処理された後で、組織は、５％ＣＯ２雰囲気の３７℃に維持されたインキュベーターに戻された。Ｂｌｉｓ Ｑ２４又はＰＢＳビヒクルで処理された組織は、組織の頂端表面に適用された３０μＬの適切な溶液を含有する前に、前日の投与の残滓がＰＢＳで洗い流された。代わりに、ビタミンＣ（５０μｇ／ｍＬ）は、培養液に供給された。４日目に、条件培地試料は採集され、サイトカインの測定のために－８０℃で冷凍保管された。その後、３３の組織は、３０μＬのＰＢＳ中の０．５％又は５％ＳＤＳ、あるいはネガティブコントロールとしてＰＢＳにさらされた。１時間後、これらの組織は、ＰＢＳで洗浄され、綿棒で軽くたたかれ乾燥した後で、適切な主処理（ＰＢＳ、Ｂｌｉｓ Ｑ２４又はビタミンＣ）を再度適用し、新鮮な培地を含むプレートに移動させた。残りの３組織（組織学用）は、新鮮な培地を簡単に供給され、適切な主処理を実施された。全組織は、５％ＣＯ２雰囲気下において、３７℃でさらに２４時間培養するためにインキュベーターに戻され、その後で、５日目の条件培地が採集され、－８０℃で冷凍保管された。全ての組織は、ＰＢＳで穏やかに洗浄され、３つの組織構造組織（ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ｔｉｓｓｕｅｓ）が中性緩衝ホルマリンで固定された。他の３３組織の生存率は、ＭＴＴ生存アッセイを用いて評価された。
【0218】
ＭＴＴ生存アッセイ（安全性）
細胞培養インサート上のＥｐｉＤｅｒｍ組織は、ＤＭＥＭ培地（サーモフィッシャーサイエンティフィック（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ））中の１ｍｇ／ｍＬ ＭＴＴを０．９ｍＬ含む６ウェル細胞培養に添加され、５％ＣＯ２雰囲気下において、３７℃で３時間培養された。その後、ＰＢＳで洗浄し、コットンガーゼ上で水分を拭き取り乾燥させた。インサートの内側に残った水分は、綿棒を用いることによって除去され、その後で各インサート及び組織が６ｍＬの２－プロパノール（ｐｒｏｐａｎ－２－ｏｌ）に浸され、密閉された２０ｍＬのシンチレーションバイアルに暗所で一晩浸された。得られたホルマザン色素の紫色溶液は、使い捨てのキュベットに移動され、ウルトロスペック（Ｕｌｔｒｏｓｐｅｃ）紫外・可視分光光度計（ＬＫＢ）で５７０ｎｍ及び６５０ｎｍ（基準波長）の吸光度を測定した。データ解析は、５７０ｎｍの測定値から基準波長の吸光度を差し引き、補正した吸光度値を与えた。各吸光度値をネガティブコントロール群（０．５％ＳＤＳに曝露していないＰＢＳ）の平均値で割り、１００をかけることによって、生存率％の値に変換した。
細胞培養インサート上のＥｐｉＤｅｒｍ組織は、ＤＭＥＭ培地（サーモフィッシャーサイエンティフィック（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ））中の１ｍｇ／ｍＬ ＭＴＴを０．９ｍＬ含む６ウェル細胞培養に添加され、５％ＣＯ２雰囲気下において、３７℃で３時間培養された。その後、ＰＢＳで洗浄し、コットンガーゼ上で水分を拭き取り乾燥させた。インサートの内側に残った水分は、綿棒を用いることによって除去され、その後で各インサート及び組織が６ｍＬの２－プロパノール（ｐｒｏｐａｎ－２－ｏｌ）に浸され、密閉された２０ｍＬのシンチレーションバイアルに暗所で一晩浸された。得られたホルマザン色素の紫色溶液は、使い捨てのキュベットに移動され、ウルトロスペック（Ｕｌｔｒｏｓｐｅｃ）紫外・可視分光光度計（ＬＫＢ）で５７０ｎｍ及び６５０ｎｍ（基準波長）の吸光度を測定した。データ解析は、５７０ｎｍの測定値から基準波長の吸光度を差し引き、補正した吸光度値を与えた。各吸光度値をネガティブコントロール群（０．５％ＳＤＳに曝露していないＰＢＳ）の平均値で割り、１００をかけることによって、生存率％の値に変換した。
【0219】
組織学（有効性）
組織は、中性緩衝ホルマリン（ＬａｂＳｅｒｖ）で固定され、ＨＥ染色切片を調製するためにＧｒｉｂｂｌｅｓ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｌａｂ（クライストチャーチ、ＮＺ）に送られた。光学顕微鏡検査は、Ｌｅｉｃａ ＤＭ６０００ Ｂ顕微鏡（Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ、スイス）で実施され、画像はＬｅｉｃａ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ Ｓｕｉｔｅ ｖ４．１２ソフトウェアを用いて取得された。
組織は、中性緩衝ホルマリン（ＬａｂＳｅｒｖ）で固定され、ＨＥ染色切片を調製するためにＧｒｉｂｂｌｅｓ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｌａｂ（クライストチャーチ、ＮＺ）に送られた。光学顕微鏡検査は、Ｌｅｉｃａ ＤＭ６０００ Ｂ顕微鏡（Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ、スイス）で実施され、画像はＬｅｉｃａ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ Ｓｕｉｔｅ ｖ４．１２ソフトウェアを用いて取得された。
【0220】
抗炎症作用のためのサイトカインの定量化（有効性）
ＩＬ－１β、ＩＦＮ－α２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＭＣＰ－１（ＣＣＬ２）、ＩＬ－６、ＩＬ－８（ＣＸＣＬ８）、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３及びＩＬ－３３の定量化のために、ビーズベースの多重化ＬＥＧＥＮＤｐｌｅｘ（商標）分析（ＬＥＧＥＮＤｐｌｅｘ（商標） Ｈｕｍａｎ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｐａｎｅｌ １（１３－ｐｌｅｘ）；ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、サンディエゴ、ＣＡ、米国）が、製造業者の指示に従って使用された。測定された各サイトカインの関連性は、表４に記載されている。反応は、二重に実施された。分析は、Ｃｙｔｅｋ（商標）Ａｕｒｏｒａフローサイトメーター（Ｃｙｔｅｋ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．、フリーモント、ＣＡ，米国）で実施された。データは、Ｌｅｇｅｎｄｐｌｅｘ Ｖ８．０ソフトウェア（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を用いて回析され、ｐｇ／ｍＬと規定された。
ＩＬ－１β、ＩＦＮ－α２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＭＣＰ－１（ＣＣＬ２）、ＩＬ－６、ＩＬ－８（ＣＸＣＬ８）、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３及びＩＬ－３３の定量化のために、ビーズベースの多重化ＬＥＧＥＮＤｐｌｅｘ（商標）分析（ＬＥＧＥＮＤｐｌｅｘ（商標） Ｈｕｍａｎ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｐａｎｅｌ １（１３－ｐｌｅｘ）；ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、サンディエゴ、ＣＡ、米国）が、製造業者の指示に従って使用された。測定された各サイトカインの関連性は、表４に記載されている。反応は、二重に実施された。分析は、Ｃｙｔｅｋ（商標）Ａｕｒｏｒａフローサイトメーター（Ｃｙｔｅｋ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．、フリーモント、ＣＡ，米国）で実施された。データは、Ｌｅｇｅｎｄｐｌｅｘ Ｖ８．０ソフトウェア（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を用いて回析され、ｐｇ／ｍＬと規定された。
【0221】
統計解析
統計解析及びグラフ化は、Ｐｒｉｓｍ９．２．０（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて実施された。データは、１元配置又は２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）によって解析され、必要に応じて、Ｄｕｎｎｅｔｔの方法又はＳｉｄａｋの方法を用いて多重比較のために補正された。
統計解析及びグラフ化は、Ｐｒｉｓｍ９．２．０（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて実施された。データは、１元配置又は２元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）によって解析され、必要に応じて、Ｄｕｎｎｅｔｔの方法又はＳｉｄａｋの方法を用いて多重比較のために補正された。
【0222】
耐容性
Ｂｌｉｓ Ｑ２４の耐容性は、用量反応実験により決定された。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の生体Ｂｌｉｓ Ｑ２４（１．４２×１０５、１．３１×１０６、１．４６×１０７、１．７１×１０８及び１．６３×１０９ｃｆｕ／ｍｌ）懸濁液で処理されたＥｐｉＤｅｒｍ組織は、＞９０％の生存率を示した（図６）。１×１０９ＣＦＵ／ｍｌの生存率は、ＰＢＳ対照と有意に異なったが、平均細胞％は、依然として＞９０％生存可能であり、Ｂｌｉｓ Ｑ２４は２４時間の曝露の間、モデル皮膚組織が良好な耐容性を示すというということを示している。
Ｂｌｉｓ Ｑ２４の耐容性は、用量反応実験により決定された。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の生体Ｂｌｉｓ Ｑ２４（１．４２×１０５、１．３１×１０６、１．４６×１０７、１．７１×１０８及び１．６３×１０９ｃｆｕ／ｍｌ）懸濁液で処理されたＥｐｉＤｅｒｍ組織は、＞９０％の生存率を示した（図６）。１×１０９ＣＦＵ／ｍｌの生存率は、ＰＢＳ対照と有意に異なったが、平均細胞％は、依然として＞９０％生存可能であり、Ｂｌｉｓ Ｑ２４は２４時間の曝露の間、モデル皮膚組織が良好な耐容性を示すというということを示している。
【0223】
これらのインビトロの結果は、１．５×１０８ＣＦＵ／ｄｏｓｅを繰り返し投与した後でも皮膚刺激が観察されなかった、Ｂｌｉｓ Ｑ２４ハイドレーションセラム（ｈｙｄｒａｔｉｏｎ ｓｅｒｕｍ）のインビボ試験と比較しても劣らない。
【0224】
結論：様々な臨床的に適切な用量のＢｌｉｓ Ｑ２４は、組織培養モデルにおいて良好な耐容性を示し、Ｂｌｉｓ Ｑ２４を含む株及び製品の安全性を示している。
【0225】
安全性
用量反応実験の後に、１×１０８ＣＦＵ／ｍｌの用量が、安全性及び有効性研究のために選択された。
用量反応実験の後に、１×１０８ＣＦＵ／ｍｌの用量が、安全性及び有効性研究のために選択された。
【0226】
１３つのサイトカインの測定（０日目及び４日目）は、Ｂｌｉｓ Ｑ２４（１×１０８ＣＦＵ／ｍｌ）、ＰＢＳ（ネガティブコントロール）及びＶｉｔ Ｃ（ポジティブコントロール）で処理されたＥｐｉＤｅｒｍ組織において実施された。１３の処理に関連する効果の中から、３つのサイトカインのみが観測された。インターロイキン－６（ＩＬ－６）、インターロイキン－８（ＩＬ－８）及びインターロイキン－１８（ＩＬ－１８）は、炎症性刺激に反応して皮膚細胞によって産生されることが知られている炎症性サイトカインである。ＩＬ－６レベルは、ビタミンＣに関して、４日目にほんのわずかではあるが有意な上昇を示したが、Ｂｌｉｓ Ｑ２４及びＰＢＳに関して、２日間変化しなかった（図７左上）。ＩＬ－８レベルは、Ｂｌｉｓ Ｑ２４及びＰＢＳに関して、４日目にほんのわずかに低下し（しかし、変化は後者でのみ有意であった）、ビタミンＣに関して、変化しなかった（図７右上）。ＩＬ－１８については、０日目及び４日目のレベルに有意差はなかったが、Ｂｌｉｓ Ｑ２４及びビタミンＣは４日目に値が低くなる傾向を示した（図７下中）。
【0227】
結論：この結果は、４日間毎日投与した後にＥｐｉＤｅｒｍ組織において炎症性免疫反応を誘発しなかったため、Ｂｌｉｓ Ｑ２４が安全であるということを示した。
【0228】
有効性（組織学）
ＰＢＳ、ＰＢＳ（ネガティブコントロール）及びＶｉｔ Ｃ（ポジティブコントロール）中の、１×１０８ＣＦＵ／ｍｌの用量の生体Ｂｌｉｓ Ｑ２４懸濁液は、ＥｐｉＤｅｒｍ細胞に適用され（継続期間４日）、組織形態に対する処理に関連する変化が記録された（ｎ＝１、図８）。処理に関連する明らかな差は見られなかったが、Ｂｌｉｓ Ｑ２４の投与を受けた組織は、角質層に捕らえられた核の遺残を明らかにし、角質層の生成を促進する可能性があることを示した。角質層はまた、ＰＢＳ又はビタミンＣで処理された組織よりも、Ｂｌｉｓ Ｑ２４の組織の方がほんのわずかに厚かった。これらの知見を確認するために、より多くの複製が必要であるが、Ｂｌｉｓ Ｑ２４の好ましい効果があるように見える。角質層は主に皮膚の深層と外部環境との間のバリアとして機能し、毒素及び細菌が体内に侵入するのを防ぐということが知られている。また、水分が大気中に蒸発することを防ぐのに役立ち、肌の潤いを保つために重要である。
ＰＢＳ、ＰＢＳ（ネガティブコントロール）及びＶｉｔ Ｃ（ポジティブコントロール）中の、１×１０８ＣＦＵ／ｍｌの用量の生体Ｂｌｉｓ Ｑ２４懸濁液は、ＥｐｉＤｅｒｍ細胞に適用され（継続期間４日）、組織形態に対する処理に関連する変化が記録された（ｎ＝１、図８）。処理に関連する明らかな差は見られなかったが、Ｂｌｉｓ Ｑ２４の投与を受けた組織は、角質層に捕らえられた核の遺残を明らかにし、角質層の生成を促進する可能性があることを示した。角質層はまた、ＰＢＳ又はビタミンＣで処理された組織よりも、Ｂｌｉｓ Ｑ２４の組織の方がほんのわずかに厚かった。これらの知見を確認するために、より多くの複製が必要であるが、Ｂｌｉｓ Ｑ２４の好ましい効果があるように見える。角質層は主に皮膚の深層と外部環境との間のバリアとして機能し、毒素及び細菌が体内に侵入するのを防ぐということが知られている。また、水分が大気中に蒸発することを防ぐのに役立ち、肌の潤いを保つために重要である。
【0229】
この結果は、Ｂｌｉｓ Ｑ２４が角質層の形成を促進することによって、皮膚を若返らせ、かつ潤いを与えることに役立つ可能性があるということを示している。
【0230】
結論：Ｂｌｉｓ Ｑ２４は、バリア機能及び水分保持を担う角質層の成長を促進するのに有効である。これらのインビトロの結果は、Ｂｌｉｓ Ｑ２４ハイドレーションセラムを適用すると、水分補給の増加、毛穴及びシワの減少が研究の参加者によって観察されたインビボ試験の結果を裏付ける。
【0231】
抗炎症作用
ＩＬ－６、ＩＬ－８及びＩＬ－１８のみが、Ｂｌｉｓ Ｑ２４、ＰＢＳ（ネガティブコントロール及びＶｉｔ Ｃポジティブコントロール）処理の効果を決定するために検出可能なレベルを有していた。（図９－左上）。
ＩＬ－６、ＩＬ－８及びＩＬ－１８のみが、Ｂｌｉｓ Ｑ２４、ＰＢＳ（ネガティブコントロール及びＶｉｔ Ｃポジティブコントロール）処理の効果を決定するために検出可能なレベルを有していた。（図９－左上）。
【0232】
Ｂｌｉｓ Ｑ２４を用いた前処理は、０．５％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）に反応して放出されたＩＬ－６の量にごくわずかな有意でない減少を引き起こし、対照的に、ビタミンＣ処理組織は、０．５％ＳＤＳ曝露に反応して５日目にごくわずかな増加を表示した。ＩＬ－８レベルの有意な増加は、３つの主処理群全てに関して０．５％ＳＤＳに反応して、４日目と比較した５日目に明らかになった（図１４－右上）。ＩＬ－１８の放出もまた、全ての群において、０．５％ＳＤＳによって刺激されたが、変化はＢｒｉｓ Ｑ２４群に関して、有意でなかった（図１４－下中央）。
【0233】
結論：Ｂｌｉｓ Ｑ２４＋０．５％ＳＤＳ群に関して、ＳＤＳ誘発性のＩＬ－６放出のごくわずかな減少及びＩＬ－１８の鈍い増加は、Ｂｌｉｓ Ｑ２４の抗炎症作用を示す。
【0234】
実施例１０：プラセボ試験
美容皮膚パラメーターについての本発明製剤の効果を決定するために、２つの試験が実施された。
・試験１：活性Ｑ２４セラム（油相）＋水相ｖｓプラセボセラム＋水相。
・試験２：生体Ｑ２４＋セトマクロゴールｖｓ死滅（Ｄｅａｄ）Ｑ２４＋セトマクロゴール。
美容皮膚パラメーターについての本発明製剤の効果を決定するために、２つの試験が実施された。
・試験１：活性Ｑ２４セラム（油相）＋水相ｖｓプラセボセラム＋水相。
・試験２：生体Ｑ２４＋セトマクロゴールｖｓ死滅（Ｄｅａｄ）Ｑ２４＋セトマクロゴール。
【0235】
試験１：この任意抽出された、プラセボ対照二重盲検試験において、８人の参加者は、２つの群に分けられた。第１群（ｎ＝４）（活性群）は、デュアルチャンバーボトルを与えられ、第１室は活性Ｂｒｉｓ Ｑ２４（１×１０９ｃｆｕ／ｇ）を含むセラムからなり、第２室が水相を含んでいた。第２群（ｎ＝４）（プラセボ群）もまた、デュアルチャンバーボトルを与えられ、第１室はセラムベース（Ｂｌｉｓ Ｑ２４を含まない偽薬）からなり、第２室が水相を含んでいた。グループ１の参加者１名は、試験とは関係のない理由により試験を完了しなかった。
【0236】
試験２：この任意抽出された、対照二重盲検試験において、８人の参加者は、２つの群に分けられた。第１群（ｎ＝４）（生体Ｑ２４群）は、デュアルチャンバーボトルを与えられ、第１室は生体Ｂｌｉｓ Ｑ２４（１×１０９ｃｆｕ／ｇ）を含むセラムからなり、第２室がセトマクロゴールクリームを含んでいた。第２群（ｎ＝４）（死滅Ｑ２４グループ）もまた、デュアルチャンバーボトルを与えられ、第１室はガンマ線を照射されたＢｌｉｓ Ｑ２４（死菌）を含む血清からなり、第２室がセトマクロゴールクリームを含んでいた。
【0237】
その後、両試験の参加者は、製剤（セラム及び保湿剤又はクリームを各１ポンプ）をポンプでくみ出し、手のひらで混ぜ合わせ、３１日間、１日２回（朝と夜）顔に適用するよう求められた。
【0238】
全顔の肌質パラメーター分析は、初回適用前（試験前０日目）に、試験期間中の１１日目、３１日目に、かつ最終試験１０日後（４１日目）に高度な皮膚分析装置（Ｃｈｏｗｉｓ、韓国）を用いて実施された。
【0239】
試験１：実薬ｖｓ偽薬
Ｂｌｉｓ Ｑ２４「活性」組成物は、様々な時点で、ベースラインと比較した偽薬に対して全ての肌質パラメーターの改善を示した（図１０）。改善は、治療（Ｔｘ）後１０日目以降でも見られた。
Ｂｌｉｓ Ｑ２４「活性」組成物は、様々な時点で、ベースラインと比較した偽薬に対して全ての肌質パラメーターの改善を示した（図１０）。改善は、治療（Ｔｘ）後１０日目以降でも見られた。
【0240】
この研究において、皮脂の増加もまた、観察された。皮脂は、重要な多面的な役割を担っているため、皮脂スコアの解釈は難しい：皮脂は、摩擦から保護するために皮膚をスベスベにし、より水分を通さないようにする。皮膚表面からの水分損失を減少させる。細菌及び真菌による感染から皮膚を保護する。さらに、皮脂腺は、皮膚の内及び上で抗酸化物質を輸送し、天然の光防御活性を示す。皮脂の過剰分泌は、脂性肌につながる。
【0241】
本研究において、参加者の誰も「脂性肌」を訴えず、皮脂のレベルが参加者にとって十分望ましい範囲内であることを示唆しており、全員が皮脂及び含水量の増加を示したことに留意する。皮脂の増加はまた、プラセボ群においても観察された。それ故に、ベースラインと比較した皮脂の増減は、必ずしも「望ましい」か、あるいは「望ましくない」ことではなく、むしろ皮脂のバランスが重要な要素である。
【0242】
試験２：生体Ｑ２４ｖｓ死菌
Ｂｌｉｓ Ｑ２４「生体」組成物は、様々な時点で、ベースラインと比較した偽薬に対して全ての肌質パラメーターの改善を示した（図１１）。改善は、治療（Ｔｘ）後１０日目以降でも見られた。
Ｂｌｉｓ Ｑ２４「生体」組成物は、様々な時点で、ベースラインと比較した偽薬に対して全ての肌質パラメーターの改善を示した（図１１）。改善は、治療（Ｔｘ）後１０日目以降でも見られた。
【0243】
実施例１１：プレバイオティクスの添加
一般的なプレバイオティクスの阻害
ＣＡＢＫ１２寒天プレートは、６つの切片に分かれて、Ｍ．ルテウス Ｑ２４原料Ｐ３の懸濁液で芝生化された（ｌａｗｎｅｄ）。滅菌蒸留水を用いて、１００％から０．３％までの濃度の範囲において、スクリーニングされるべき水性潜在的プレバイオティック物質のそれぞれは、連続的に希釈された。油性の物質は、１００％でのみ試験された。
一般的なプレバイオティクスの阻害
ＣＡＢＫ１２寒天プレートは、６つの切片に分かれて、Ｍ．ルテウス Ｑ２４原料Ｐ３の懸濁液で芝生化された（ｌａｗｎｅｄ）。滅菌蒸留水を用いて、１００％から０．３％までの濃度の範囲において、スクリーニングされるべき水性潜在的プレバイオティック物質のそれぞれは、連続的に希釈された。油性の物質は、１００％でのみ試験された。
【0244】
各濃度の各物質２０μＬは、芝生化されたＣＡＢＫ１２寒天プレートの１切片上のスポットにピペッティングされ、空気中で３７℃５％ＣＯ２で２４時間培養された。
【表4】
【0245】
結論：試験された全て濃度で抑制的であった緑茶粉末を除いて、全ての物質が、Ｑ２４非含有製品の最初のスクリーニング試験に合格した。他の６つの潜在的プレバイオティクスは、Ｑ２４に対していくつかの阻害作用を示し、生体Ｑ２４の安定性を必要とする製品用には適さないが、プレバイオティクスのみの製剤において使用できる可能性があることを示した。
【0246】
Ｂｌｉｓ Ｑ２４の増殖に対するプレバイオティクスの効果
製造者の指示に従って、ラクトース溶液を除いたＭ１７ブロス（Ｄｉｆｃｏ＃２１８５６１）のバッチは製造された。５０ｍｌのブロスは、滅菌した１００ｍｌのＳｃｈｏｔｔ瓶に分注され、２．５ｇ（５％）の各潜在的プレバイオティクス物質が添加され、マグネチックスターラー及び攪拌板（ｓｔｉｒ ｐｌａｔｅ）を用いてよく混合された。混合物は、１１０℃で１０分間オートクレーブされ、冷まされた。
製造者の指示に従って、ラクトース溶液を除いたＭ１７ブロス（Ｄｉｆｃｏ＃２１８５６１）のバッチは製造された。５０ｍｌのブロスは、滅菌した１００ｍｌのＳｃｈｏｔｔ瓶に分注され、２．５ｇ（５％）の各潜在的プレバイオティクス物質が添加され、マグネチックスターラー及び攪拌板（ｓｔｉｒ ｐｌａｔｅ）を用いてよく混合された。混合物は、１１０℃で１０分間オートクレーブされ、冷まされた。
【0247】
プレバイオティクス候補の懸濁液は、ウェルに分注する前に任意の油性成分の均質化を向上させることを可能にするために、４０℃に予熱された。各懸濁液２ｍｌ及びＭ１７のみ（対照）は、滅菌２４ウェル組織培養プレートにピペッティングされた。Ｑ２４原料Ｐ３の懸濁液は、ＰＢＳ中で製造され、０．１２５の光学濃度に調整された。１００μｌの懸濁液は、各ウェルにピペッティングされた。懸濁液が添加されると、各ウェルは、１ｍｌピペットで溶液を５回吸引し、かつ分注することによって混合された。
【0248】
各サンプルは、０、３、６、１５、２６及び３４時間の時点で、下記の方法を用いて数え上げられた。ウェルは、各時点で１ｍｌピペットを用いて、５回分注し、かつ吸引することによって混合された。次に、１００μｌが各ウェルから取り出され、９００μｌのＥｐｐｅｎｄｏｒｆのＰＢＳ（１／１０希釈液）に添加された。これらの１／１０希釈液は、２６００ｒｐｍで１０分間水平にボルテックスされた。その後、試料は、１００μｌの１／１０希釈液を新たな９００μｌのＰＢＳに移動させることによって連続的に希釈され、これが６回連続的に希釈されるまで繰り返された。各サンプルからの各希釈液２０μｌは、羊血液寒天プレートに三重でスポットされた。スポットは、乾燥させるために３０分間放置され、３７℃の５％ＣＯ２インキュベーターで２８～３６時間セットされた。その後、各スポットのコロニーの数は、電子コロニーカウンターを用いて数えられ、最終結果を与えるための平均値を求めた。
【0249】
結果：全ての試験されたプレバイオティクス候補は、対照と比較して２４時間にわたって１～２ｌｏｇの増加をもたらすものがほとんどで、対照よりも高いＱ２４の増加を示した。
【0250】
結論：驚いたことに、局所適用に典型的な、一般的に用いられているプレバイオティクス（炭水化物（オートミールを除いて））は、Ｑ２４の増殖を支持しなかった。
【0251】
腸内細菌用のプレバイオティクスとして用いられる従来の物質は、Ｑ２４の増殖を増加させるという点ではうまく機能せず、キシリトール及びマヌカハニーなどの一部は２４時間後の生体Ｑ２４細胞数にとって有害になった（図１２）。
【0252】
対照的に、機能活性及びその他の化粧品成分として一般的に用いられる油性物質は、非常にうまく機能し、最も優れたものは２４時間かけてＱ２４の生体細胞数を２－ｌｏｇだけ増加させた。
【0253】
プレバイオティクスの組み合わせ
試験された時点が０、６、１８、２４時間である以外は、研究課題１０と同じ方法が使用された。オリーブスクワランは、好ましいプレバイオティクスの１つとして選択され、他の３つはオリーブスクワランと組み合わせて分析され、プレバイオティクス候補単独の結果と比較された（図１３）。
試験された時点が０、６、１８、２４時間である以外は、研究課題１０と同じ方法が使用された。オリーブスクワランは、好ましいプレバイオティクスの１つとして選択され、他の３つはオリーブスクワランと組み合わせて分析され、プレバイオティクス候補単独の結果と比較された（図１３）。
【0254】
結果：Ｑ２４の増殖は、オリーブスクワラン及びザクロ種子油を別々に添加した和を優に上回って増加し、両方のプレバイオティクスが一緒に添加された場合に相乗反応を示し、Ｑ２４の増殖速度の上昇をもたらした。
【0255】
Ｑ２４の増殖は、オリーブスクワラン及びオートミール粉（コロイドオートミール）を別々に添加した和と同じであり、この組み合わせに関して、相乗反応を示さなかった。
【0256】
Ｑ２４の増殖は、オリーブスクワラン及びビタミンＥを別々に添加した和を優に上回って増加し、両方のプレバイオティクスが一緒に添加された場合に相乗反応を示し、Ｑ２４の増殖速度の上昇をもたらした。
【0257】
結論：オリーブスクワラン＋ザクロ種子油及びオリーブスクワラン＋ビタミンＥの両方は、どちらか一方のみと比較して、Ｑ２４の増殖率を増加させる相乗関係を有することが判明した。オリーブスクワラン及びオートミール粉は、これと同じ反応を示さなかった。オリーブスクワラン及びザクロ種子油又はビタミンＥの両方を含むように作られた製剤は、オリーブスクワラン、ザクロ種子油又はビタミンＥのみを含む製剤よりも有効であろう。
【0258】
いくつかの皮膚共生生物（ｓｋｉｎ ｃｏｍｍｅｎｓａｌｓ）に対するプレバイオティクス活性
選択された３つの皮膚共生生物のそれぞれに関して、０．１２５の光学濃度を有する懸濁液が調製された以外は、Ｂｌｉｓ Ｑ２４成分について上記と同じ方法が使用された。
選択された３つの皮膚共生生物のそれぞれに関して、０．１２５の光学濃度を有する懸濁液が調製された以外は、Ｂｌｉｓ Ｑ２４成分について上記と同じ方法が使用された。
【0259】
選択された皮膚共生生物は、以下の：
・表皮ブドウ球菌＃４（Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ＃４）－Ｑ２４阻害に感受性
・表皮ブドウ球菌Ｅ３０（Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ Ｅ３０）－Ｑ２４阻害に耐性
・Ｓ．ホミニスＡＴＣＣ２７８４４（Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ ＡＴＣＣ２７８４４）－混合耐性条件依存性（ｍｉｘｅｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ）
である。
・表皮ブドウ球菌＃４（Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ＃４）－Ｑ２４阻害に感受性
・表皮ブドウ球菌Ｅ３０（Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ Ｅ３０）－Ｑ２４阻害に耐性
・Ｓ．ホミニスＡＴＣＣ２７８４４（Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ ＡＴＣＣ２７８４４）－混合耐性条件依存性（ｍｉｘｅｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ）
である。
【0260】
Ｓ．ホミニスＡＴＣＣ２７８４４は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ （ＡＴＣＣ）から入手可能である；表皮ブドウ球菌＃４及び表皮ブドウ球菌Ｅ３０は、依頼に応じてＢＬＩＳ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｌｔｄから入手可能である。
【0261】
結果：プレバイオティクスの有無にかかわらず、皮膚共生生物に対する付加的な増殖の優位性は観察されず、プレバイオティクスがＢｌｉｓ Ｑ２４の増殖を選択的に促進ということを示唆した（図１４）。
【0262】
結論：オリーブスクワラン及びザクロ種子油は、皮膚共生生物に対して、単独で、あるいは組み合わせで対照培地と比較していかなる有意性も提供せず、効果はＢｌｉｓ Ｑ２４に対してより顕著かつ特異的であった。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【国際調査報告】