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▶ ジーンクアンタム ヘルスケア （スーチョウ） シーオー．， エルティーディー．の特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-02-28
(54)【発明の名称】抗体－免疫アゴニストコンジュゲート及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07D 471/04 20060101AFI20240220BHJP
C07D 473/18 20060101ALI20240220BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20240220BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240220BHJP
A61K 31/4738 20060101ALI20240220BHJP
A61K 31/522 20060101ALI20240220BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20240220BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240220BHJP
C07K 16/30 20060101ALI20240220BHJP
【ＦＩ】
C07D471/04 105C
C07D473/18 CSP
A61K47/68
A61K39/395 N
A61K39/395 D
A61K31/4738
A61K31/522
A61P37/02
A61K45/00
C07K16/30 ZNA
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023554827
(86)(22)【出願日】2022-03-07
(85)【翻訳文提出日】2023-09-07
(86)【国際出願番号】 CN2022079523
(87)【国際公開番号】W WO2022188740
(87)【国際公開日】2022-09-15
(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/079609
(32)【優先日】2021-03-08
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】516310910
【氏名又は名称】ジーンクアンタム ヘルスケア （スーチョウ） シーオー．， エルティーディー．
【氏名又は名称原語表記】ＧＥＮＥＱＵＡＮＴＵＭ ＨＥＡＬＴＨＣＡＲＥ （ＳＵＺＨＯＵ）ＣＯ．， ＬＴＤ．
(74)【代理人】
【識別番号】100127926
【弁理士】
【氏名又は名称】結田 純次
(74)【代理人】
【識別番号】100140132
【弁理士】
【氏名又は名称】竹林 則幸
(74)【代理人】
【識別番号】100216105
【弁理士】
【氏名又は名称】守安 智
(72)【発明者】
【氏名】ポール・エイチ・ソン
(72)【発明者】
【氏名】ギャン・チン
(72)【発明者】
【氏名】チョン・リウ
【テーマコード（参考）】
4C065
4C076
4C084
4C085
4C086
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C065AA05
4C065AA18
4C065BB06
4C065CC01
4C065DD03
4C065EE02
4C065HH01
4C065JJ07
4C065KK09
4C065LL01
4C065PP01
4C076AA95
4C076CC07
4C076CC41
4C076EE59
4C084AA17
4C084NA13
4C084ZB071
4C084ZB072
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB11
4C086AA02
4C086AA03
4C086CB05
4C086CB07
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA13
4C086ZB07
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA51
4H045BA72
4H045DA76
4H045EA28
4H045FA74
(57)【要約】
本開示は、標的化分子－薬物コンジュゲートの連結ユニット分子、及び対応するコンジュゲート、その調製と使用に関し、特に新規タイプの癌療法である抗体－免疫アゴニストコンジュゲート（ＡＩＡＣ）に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）の化合物であって、【化1】
Ｌｍ２は
【化2】
ｘは水素、ＯＨ、ＮＨ２、１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメント、１～１０個のヌクレオチドを含むヌクレオチドフラグメントから選ばれ、
ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３の組合せであり、
Ｌ１及びＬ３は、それぞれ独立して、
－ＣＨ２－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、及びＣ１－４アルキレン基と－ＣＨ２－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－という基の１つとの組合せから選ばれ、
Ｌ２は存在しないか、又はＣ７－３４アルキレン基であり、前記アルキレン基中の１つ又は複数の（－ＣＨ２－）構造は－Ｏ－によって任意に置き換えられ、
Ｙ及びＷは、それぞれ独立して存在しないか、又はＰＡＢＣであるか、又は１～１０個、好ましくは１～６個、より好ましくは１～４個のアミノ酸を含むスペーサーから選ばれ、
Ｂ２は、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－、－（ＣＨ２）ｋ１Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－（ＣＨ２）ｋ２Ｃ（Ｏ）－Ｌｙｓ－、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄという基又はそれらの組合せから選ばれ、
ａ及びｂはそれぞれ独立して０又は１であり、
各ｋ、ｋ１及びｋ２は独立して０～１０の整数、好ましくは０、１又は２、特に１又は２であり、
ｄは１～１０の整数、特に１又は２であり、
ｊは１～１０の整数、特に１、３、又は４であり、
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素、－ＯＨ、－ＮＨ２、－Ｃ１－６アルキル、－Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ１－６アルキル－ＮＨ２、－Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ１－６アルキル－Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ１－６アルキル－ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨＣ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨＳ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ－Ｃ１－６アルキル及び－Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキルから選ばれ、
ＰＬは免疫アゴニストであるペイロードである、前記化合物。
【請求項2】
ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３であり、Ｌ１は－ＮＨ－であり、Ｌ３は－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｌ２は－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｉ－Ｃ２Ｈ４－である、請求項１に記載の化合物。
【請求項3】
ｉは２～１０の整数、特に４である、請求項２に記載の化合物。
【請求項4】
Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－である、請求項１に記載の化合物。
【請求項5】
Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣである、請求項１に記載の化合物。
【請求項6】
Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－である、請求項１に記載の化合物。
【請求項7】
Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－である、請求項１に記載の化合物。
【請求項8】
Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋ１Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－（ＣＨ２）ｋ２Ｃ（Ｏ）－Ｌｙｓ－である、請求項１に記載の化合物。
【請求項9】
Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－である、請求項１に記載の化合物。
【請求項10】
Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－である、請求項１に記載の化合物。
【請求項11】
各ｋ、ｋ１及びｋ２は独立して１又は２である、請求項４から１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項12】
Ｙ及びＷは独立してロイシン（Ｌｅｕ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、ＰＡＢＣ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－ＰＡＢＣ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ及びＶａｌ－Ｌｙｓ－ＰＡＢＣから選ばれる、請求項１に記載の化合物。
【請求項13】
ａ及びｂは０である、請求項１から１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項14】
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して水素又はＣ１－６アルキル基であり、好ましくは、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して共に水素又は共にＣ１－６アルキル基であり、より好ましくは、Ｒ１及びＲ２は共にメチル基である、請求項１から１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項15】
ｘはＮＨ２である、請求項１から１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項16】
前記免疫アゴニストはイミダゾキノリン類から選ばれる、請求項１から１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項17】
前記免疫アゴニストは式ｉの構造を有し、【化3】
各Ｒ９は独立して水素、ハロゲン、Ｃ１－７アルキル－ＯＣ（Ｏ）－Ｃ１－７アルキル、 Ｃ１－７アルキル－ＯＣ（Ｏ）－Ｃ２－７アルケニル及び５～７員複素環から選ばれ、
Ｒ１０及びＲ１１はそれぞれ独立して水素及びＣ１－７アルキル基から選ばれ、
Ｒ１２はＣ１－７アルキル基及びＣ１－７アルコキシ－Ｃ１－７アルキルから選ばれ、
Ｒ１３はＣ１－７アルキル基から選ばれ、－ＯＨ及び－ＮＨ２から選ばれる置換基によって任意に置換され、
ｕは１、２、３又は４である、請求項１から１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項18】
前記免疫アゴニストは化合物ｉ－１～ｉ－５から選ばれる、請求項１７に記載の化合物。【化4】
【請求項19】
前記免疫アゴニストは式ｉｉの構造を有し、【化5】
Ｌ４は－ＣＨ２－、－ＮＨ－、－Ｏ－及び－Ｃ（Ｏ）－から選ばれ、
Ｒ１４はＣ１－７アルキル基、Ｃ１－７アルコキシ基及びＣ１－７アルキル－ＯＣ（Ｏ）－Ｃ１－７アルキルから選ばれ、
Ｒ１５及びＲ１６はそれぞれ独立して水素及びＣ１－７アルキル基から選ばれ、
Ｒ１７は－ＮＨ２、－ＯＨ、Ｃ１－７アルキル基、Ｃ１－７アルコキシ基及び－ＮＨ－Ｃ１－７アルキルから選ばれ、
Ｒ１８は－ＣＨ２－アリール、及び－ＣＨ２－ヘテロアリールから選ばれ、前記アリール基及び前記ヘテロアリール基はそれぞれ独立して、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ及び
【化6】
【請求項20】
前記免疫アゴニストは化合物ｉｉ－１～ｉｉ－２から選ばれる、請求項１９に記載の化合物。【化7】
【請求項21】
前記免疫アゴニストは式ｉｉｉの構造を有し、【化8】
Ｒ１９は－ＯＨ、－ＮＨ２、Ｃ１－７アルキル基、Ｃ１－７アルコキシ基及び－ＮＨ－Ｃ１－７アルキルから選ばれ、
Ｒ２０は－ＣＨ２－アリールから選ばれ、前記アリール基は、－ＯＨ、Ｃ１－７アルコキシ基及び－Ｃ１－７アルキル－ピペリジニルから選ばれる２つの置換基によって任意に置換される、請求項１から１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項22】
前記免疫アゴニストは化合物ｉｉｉ－１である、請求項２１に記載の化合物。【化9】
【請求項23】
前記免疫アゴニストは式ｉｖの構造を有し、【化10】
Ｌ５は－ＣＨ２－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）－及び－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－から選ばれ、
Ｒ２１は
【化11】
Ｒ２２は水素及びＣ１－７アルキル基から選ばれ、
Ｒ２３及びＲ２４はそれぞれ独立して水素及びＣ１－７アルキル基から選ばれ、
Ｌ６は－ＣＨ２－及び－Ｃ（Ｏ）－から選ばれ、
Ｒ２５は－Ｎ（Ｃ１－７アルキル）（Ｃ１－７アルキル）から選ばれ、
Ｒ２６、Ｒ２７及びＲ２８はそれぞれ独立して水素及びＣ１－７アルキル基から選ばれ、
ｖは１、２又は３である、請求項１から１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項24】
前記免疫アゴニストは化合物ｉｖ－１である、請求項２３に記載の化合物。【化12】
【請求項25】
以下の構造から選ばれる、請求項１に記載の化合物。【化13-1】
【化13-2】
【請求項26】
式（ＩＩ）の抗体薬物コンジュゲートであって、【化14】
ｚは１～２０の整数であり、
Ａは抗体又は抗原結合フラグメントである標的化分子である、前記抗体薬物コンジュゲート。
【請求項27】
以下の構造から選ばれる、請求項２６に記載の抗体薬物コンジュゲート。【化15-1】
【化15-2】
【化15-3】
【請求項28】
以下の構造から選ばれる、請求項２７に記載の抗体薬物コンジュゲート。【化16-1】
【化16-2】
【請求項29】
前記標的化分子により認識される１つ又は複数のターゲットは、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１１７／ＫＩＴ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１７４、ＣＤ２２７／ＭＵＣ１、ＣＤ３５２、ＣＬＤＮ１８．２、ＤＬＬ３、ＥｒｂＢ２／ＨＥＲ２、ＣＮ３３、ＧＰＮＭＢ、ＥＮＰＰ３、ネクチン－４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＳＬＣ４４Ａ４／ＡＧＳ－５、メソテリン、ＣＥＡＣＡＭ５、ＰＳＭＡ、ＴＩＭ１、ＬＹ６Ｅ、ＬＩＶ１、ネクチン４、ＳＬＩＴＲＫ６、ＨＧＦＲ／ｃＭｅｔ、ＳＬＡＭＦ７／ＣＳ１、ＥＧＦＲ、ＢＣＭＡ、ＡＸＬ、ＮａＰｉ２Ｂ、ＧＣＣ、ＳＴＥＡＰ１、ＭＵＣ１６、Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ、ＥＴＢＲ、ＥｐｈＡ２、５Ｔ４、ＦＯＬＲ１、ＬＡＭＰ１、カドヘリン６、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＣＡ６、ＣａｎＡｇ、インテグリンαＶ、ＴＤＧＦ１、エフリンＡ４、Ｔｒｏｐ２、ＰＴＫ７、ＮＯＴＣＨ３、Ｃ４．４Ａ、ＦＬＴ３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２及びＲＯＲ１／２から選ばれる、請求項２６から２８のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項30】
前記抗体は抗ヒトＨＥＲ２抗体である、請求項２６から２８のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項31】
前記抗ヒトＨＥＲ２抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号２のアミノ酸配列を有する重鎖、又は配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖、又は配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖、又は配列番号７のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖、又は配列番号９のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する重鎖、又は配列番号１１のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号１２のアミノ酸配列を有する重鎖、又は配列番号１３のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号１４のアミノ酸配列を有する重鎖、又は配列番号１５のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号１６のアミノ酸配列を有する重鎖を含む、請求項３０に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項32】
前記抗体は抗ヒトＴＲＯＰ２抗体である、請求項２６から２８のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項33】
前記抗ヒトＴＲＯＰ２抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号１８のアミノ酸配列を有する重鎖、又は配列番号１９のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号２０のアミノ酸配列を有する重鎖を含む、請求項３２に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項34】
前記抗体は抗ヒトＣＬＤＮ１８．２抗体である、請求項２６から２８のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項35】
前記抗ヒトＣＬＤＮ１８．２抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号２２のアミノ酸配列を有する重鎖、又は配列番号２３のアミノ酸配列を有する軽鎖及び配列番号２４のアミノ酸配列を有する重鎖を含む、請求項３４に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【請求項36】
前記コンジュゲートは１～２０、１～１０、１～８、１～６、１～４、１～３．５、１～３、１～２．５、１～２、１．５～２、１．６～２、又は１．７～２の整数又は非整数の薬物抗体比（ＤＡＲ）を有する、請求項２６～３５のいずれか１項に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示はバイオ医薬品の分野に関し、特に標的化分子－免疫アゴニストコンジュゲートの連結ユニット、及び対応するコンジュゲート、その調製プロセスと使用に関する。
【背景技術】
【0002】
開発及び臨床の環境において、治療薬の標的送達は癌治療にとってまだ大きな課題である。ＦＤＡによって承認された現在の標的化分子－薬物コンジュゲートは主に、薬物（弾頭）が一般に小分子細胞毒である抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣｓ）である。
【0003】
免疫療法は強い効果を示している癌治療の新しいモダリティである。ＣＬＴＡ－４及びＰＤ－１／Ｌ１モノクローナル抗体を代表とした免疫チェックポイント阻害薬は、基本的にＴ細胞ベースの治療法によるものであり、様々な癌適応症用に承認されたが、癌と戦う他の免疫系メカニズムを探索する多数の取り組みも行われている。骨髄細胞、主にマクロファージ、ＤＣｓを標的とすることは有望な方向となっている。アゴニスト又はマクロファージチェックポイント阻害剤によってマクロファージ及びＤＣｓを活性化すれば、それらの腫瘍細胞を除去する食作用の能力だけでなく、抗原提示の機能も強化され、適応抗腫瘍免疫がより強力に誘発される。
【0004】
ＴＬＲ７／８は、マクロファージ、ＤＣｓ、及び単球のエンドソーム膜に位置する２つの重要なパターン認識受容体である。それらはウイルス由来のｓｓＲＮＡｓを自然に検知し、免疫細胞の活性化と炎症誘発性サイトカインの放出を仲介する。多くの研究において、ＴＬＲ７／８アゴニストが抗腫瘍活性を有することが実証されている。ＴＬＲ７アゴニストであるイミキモドは、局所投与による性器疣贅、表在性基底細胞癌、及び日光角化症の治療用に承認されたものである。ＴＬＲ７／８デュアルアゴニストであるレシキモドは、皮膚Ｔ細胞リンパ腫の治療用に承認されたものである。しかしながら、ＴＬＲ７／８アゴニストの全身投与による副作用により、それらのより広範囲の癌における使用が制限されている。
【0005】
本発明は、新規タイプの腫瘍標的療法である抗体－免疫アゴニストコンジュゲート（ＡＩＡＣ）を提供する。
【発明の概要】
【0006】
一態様において、式（Ｉ）の化合物であって、
式中、ｎは３～１０の整数であり、
Ｌｍ２は
又はそれらの混合物であり、
ｘは、水素、ＯＨ、ＮＨ２、１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメント、１～１０個のヌクレオチドを含むヌクレオチドフラグメントから選ばれ、
ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３の組合せであり、
Ｌ１及びＬ３はそれぞれ独立して、
－ＣＨ２－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、及びＣ１－４アルキレン基と－ＣＨ２－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－という基の１つとの組合せから選ばれ、
Ｌ２は存在しないか、又はＣ７－３４アルキレン基であり、前記アルキレン基中の１つ又は複数の（－ＣＨ２－）構造は－Ｏ－によって任意に置き換えられ、
Ｙ及びＷはそれぞれ独立して存在しないか、又はＰＡＢＣであるか、又は１～１０個、好ましくは１～６個、より好ましくは１～４個のアミノ酸を含むスペーサーから選ばれ、
Ｂ２は、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－、－（ＣＨ２）ｋ１Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－（ＣＨ２）ｋ２Ｃ（Ｏ）－Ｌｙｓ－、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄという基又はそれらの組合せから選ばれ、
ａ及びｂはそれぞれ独立して０又は１であり、
各ｋ、ｋ１及びｋ２は独立して０～１０の整数、好ましくは０、１又は２、特に１又は２であり、
ｄは１～１０の整数、特に１又は２であり、
ｊは１～１０の整数、特に１、３、又は４であり、
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素、－ＯＨ、－ＮＨ２、－Ｃ１－６アルキル、－Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ１－６アルキル－ＮＨ２、－Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ１－６アルキル－Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ１－６アルキル－ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨＣ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨＳ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ－Ｃ１－６アルキル及び－Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキルから選ばれ、
ＰＬは免疫アゴニストであるペイロードである、前記化合物を提供する。
【化1】
Ｌｍ２は
【化2】
ｘは、水素、ＯＨ、ＮＨ２、１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメント、１～１０個のヌクレオチドを含むヌクレオチドフラグメントから選ばれ、
ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３の組合せであり、
Ｌ１及びＬ３はそれぞれ独立して、
－ＣＨ２－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、及びＣ１－４アルキレン基と－ＣＨ２－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－という基の１つとの組合せから選ばれ、
Ｌ２は存在しないか、又はＣ７－３４アルキレン基であり、前記アルキレン基中の１つ又は複数の（－ＣＨ２－）構造は－Ｏ－によって任意に置き換えられ、
Ｙ及びＷはそれぞれ独立して存在しないか、又はＰＡＢＣであるか、又は１～１０個、好ましくは１～６個、より好ましくは１～４個のアミノ酸を含むスペーサーから選ばれ、
Ｂ２は、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－、－（ＣＨ２）ｋ１Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－（ＣＨ２）ｋ２Ｃ（Ｏ）－Ｌｙｓ－、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄという基又はそれらの組合せから選ばれ、
ａ及びｂはそれぞれ独立して０又は１であり、
各ｋ、ｋ１及びｋ２は独立して０～１０の整数、好ましくは０、１又は２、特に１又は２であり、
ｄは１～１０の整数、特に１又は２であり、
ｊは１～１０の整数、特に１、３、又は４であり、
Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素、－ＯＨ、－ＮＨ２、－Ｃ１－６アルキル、－Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ１－６アルキル－ＮＨ２、－Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ１－６アルキル－Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ１－６アルキル－ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨＣ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨＳ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ－Ｃ１－６アルキル及び－Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキルから選ばれ、
ＰＬは免疫アゴニストであるペイロードである、前記化合物を提供する。
【0007】
別の態様において、式（ＩＩ）の抗体薬物コンジュゲートであって、
式中、ｎ、Ｙ、Ｌｋ、Ｗ、Ｌｍ２、Ｂ２、ｘ、ＰＬ、ａ及びｂは式（Ｉ）に定義されたとおりであり、
ｚは１～２０の整数であり、
Ａは抗体又は抗原結合フラグメントである標的化分子である、前記抗体薬物コンジュゲートを提供する。
【化3】
ｚは１～２０の整数であり、
Ａは抗体又は抗原結合フラグメントである標的化分子である、前記抗体薬物コンジュゲートを提供する。
【0008】
本発明の抗体－免疫アゴニストコンジュゲート（ＡＩＡＣｓ）は新規タイプの腫瘍標的療法を提供する。インビトロ実験によると、該ＡＩＡＣｓは裸の未修飾抗体に比べて、より高いＴＮＦα産生を誘導できる。該ＡＩＡＣｓのインビボ実験では、抗腫瘍効果が示される。
【0009】
図２３～３０において、Ｘ軸下の矢印は投与時点を示す。
【図面の簡単な説明】
【0010】
【図1】式（Ｉ’）の化合物の実例である。Ｒ７は本明細書で定義されたとおりである。
【図2a】式（ＩＩ’）の化合物の実例である。
【図2b】式（ＩＩ’）の化合物の実例である。
【図3】式（ＩＩＩ’）の化合物の実例である。
【図4a】式（ＩＶ’）の化合物の実例である。
【図4b】式（ＩＶ’）の化合物の実例である。
【図5】連結ユニットフラグメントＬＵ１０２～ＬＵ１１０である。
【図6】コンジュゲートＡＣ１０２－６－１－１及び対応する裸の未修飾抗体Ａｂ０００１（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ，トラスツズマブ）、並びにアゴニストのレシキモドの、ヒトＰＢＭＣ－ＮＣＩ Ｎ８７共培養アッセイにおけるＴＮＦα誘導活性。
【図7】コンジュゲートＡＣ１０２－６－１－１、ＡＣ１０２－８－１－１及びそれらの対応する裸の未修飾抗体Ａｂ０００１の、ヒトＰＢＭＣ－ＮＣＩ Ｎ８７共培養アッセイにおけるＴＮＦα誘導活性。
【図8】ＰＢＭＣとＮＣＩ Ｎ８７又はＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のいずれかとの共培養におけるＡＣ１０２－６－１－１及び抗体のＴＮＦα誘導活性。
【図9】ＰＢＭＣとＨＣＣ１９５４細胞との共培養におけるＡＣ１０２－８－１－１及び抗体のＴＮＦα誘導活性。
【図10】ＰＢＭＣとＳＫ－ＢＲ－３細胞との共培養におけるＡＣ１０２－８－１－１及び抗体のＴＮＦα誘導活性。
【図11】ＰＢＭＣとＢＴ４７４細胞との共培養におけるＡＣ１０２－８－１－１及び抗体のＴＮＦα誘導活性。
【図12】ＰＢＭＣとＪＩＭＴ１細胞との共培養におけるＡＣ１０２－８－１－１及び抗体のＴＮＦα誘導活性。
【図13】ＰＢＭＣとＣｏｌｏ２０５細胞との共培養におけるＡＣ１０２－８－１－１及び抗体のＴＮＦα誘導活性。
【図14】ＰＢＭＣとＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞との共培養におけるＡＣ１０２－８－１－１及び抗体のＴＮＦα誘導活性。
【図15】ＰＢＭＣとＮＣＩ Ｎ８７細胞との共培養におけるＡＣ１０２－１－１－１、ＡＣ１０２－１－１－２、ＡＣ１０２－２－１－１、ＡＣ１０２－３－１－１、ＡＣ１０２－４－１－１、及び抗体のＴＮＦα誘導活性。
【図16】ＰＢＭＣとＮＣＩ Ｎ８７細胞との共培養におけるＡＣ２０１－１－１－１及び抗体のＴＮＦα誘導活性。
【図17】ＰＢＭＣとＮＣＩ Ｎ８７細胞との共培養におけるＡＣ１０２－１－１－４、ＡＣ１０２－１－１－５、ＡＣ１０２－１－１－６及び抗体のＴＮＦα誘導活性。
【図18】ＰＢＭＣとＮＣＩ Ｎ８７細胞との共培養におけるＡＣ１０２－８－２－１及びＡＣ１０２－６－２－１並びに抗体のＴＮＦα誘導活性。
【図19】ＰＢＭＣとヒトクローディン１８．２を過剰発現するヒト胃癌細胞ＮＣＩ－Ｎ８７（ＮＣＩ－Ｎ８７－Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２と呼ばれる）との共培養におけるＡＣ１０２－８－３－１、ＡＣ２０１－１－３－１、及び抗体のＴＮＦα誘導活性。
【図20】クローディン１８．２陰性ＮＣＩ－Ｎ８７親細胞におけるＡＣ１０２－８－３－１、ＡＣ２０１－１－３－１、及び抗体のＴＮＦα誘導活性。
【図21】ＰＢＭＣとＳＫ－ＢＲ－３細胞との共培養におけるＡＣ１０２－６－１－１及び抗体のＩＮＦ－γ誘導活性。
【図22】ＰＢＭＣとＨＣＣ１９５４細胞との共培養におけるＡＣ１０２－６－１－１及び抗体のＩＮＦ－γ誘導活性。
【図23】ビヒクル（ＰＢＳ ｐＨ６．５）、抗体、及びコンジュゲートＡＣ１０２－６－１－１とＡＣ１０２－８－１－１を５ｍｇ／ｋｇで投与したＮＣＩ Ｎ８７ ＣＤＸモデルＳＣＩＤベージュマウスにおける腫瘍体積の経時変化。
【図24】ＡＣ１０２－８－１－１を０．５、１、及び３ｍｇ／ｋｇで投与したＮＣＩ Ｎ８７ ＣＤＸモデルＳＣＩＤベージュマウスにおける腫瘍体積の経時変化。
【図25】ＡＣ１０２－８－１－１を５ｍｇ／ｋｇで投与したＪＩＭＴ１ ＣＤＸモデルＳＣＩＤベージュマウスにおける腫瘍体積の経時変化。
【図26】ＡＣ１０２－６－１－１を３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇで投与した、ｈＨＥＲ２を過剰発現するＭＣ３８モデルにおける腫瘍体積の経時変化。
【図27】ＡＣ１０２－８－１－１を３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇで投与した、ｈＨＥＲ２を過剰発現するＭＣ３８モデルにおける腫瘍体積の経時変化。
【図28】ＡＣ１０２－６－２－１及びＡＣ１０２－８－２－１を５ｍｇ／ｋｇで投与したＮＣＩ－Ｎ８７異種移植モデルにおける腫瘍体積の経時変化。
【図29】ＡＣ１０２－８－２－１及びＡＣ２０１－１－２－１を３ｍｇ／ｋｇで投与したＭＤＡ－ＭＢ－４６８異種移植モデルにおける腫瘍体積の経時変化。
【図30】ＡＣ１０２－８－３－１及び抗体を５ｍｇ／ｋｇで投与したＮＵＧＣ４モデルにおける腫瘍体積の経時変化。
【発明を実施するための形態】
【0011】
以下において、具体的な実施形態を示して本開示の技術内容を説明する。当業者であれば、本明細書に開示された内容から、本開示の他の利点及び効果を容易に理解できる。本開示は他の異なる具体的実施形態により実施又は適用してもよい。当業者であれば、本開示の精神から逸脱することなく、様々な修飾及び変形を加えることが可能である。
【0012】
定義
以下において他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味である。本明細書で使用される技術は当該分野において一般的に理解される技術を指し、当業者にとって自明な変形及び等価置換を含む。以下の用語が当業者によってよく理解されると考えられるにも関わらず、本開示をよく説明するためにその定義を以下に記載する。本明細書に記載の商品名は対応する商品又はその有効成分を指すものである。本明細書に引用される全ての特許、公開された特許出願及び刊行物は参照によって本明細書に組み込まれる。
以下において他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味である。本明細書で使用される技術は当該分野において一般的に理解される技術を指し、当業者にとって自明な変形及び等価置換を含む。以下の用語が当業者によってよく理解されると考えられるにも関わらず、本開示をよく説明するためにその定義を以下に記載する。本明細書に記載の商品名は対応する商品又はその有効成分を指すものである。本明細書に引用される全ての特許、公開された特許出願及び刊行物は参照によって本明細書に組み込まれる。
【0013】
特定の量、濃度、又は他の値もしくはパラメータが、範囲、好ましい範囲、又は好ましい上限もしくは好ましい下限の形で記載されていることは、任意の上限もしくは好ましい値と任意の下限もしくは好ましい値とを組み合わせた任意の範囲が、明記されているかどうかに関わらず、具体的に開示されていることと同等であると理解すべきである。特に断らない限り、本明細書で列挙される数値の範囲は範囲の端点及び該範囲内の全ての整数及び分数（小数）を含むよう意図される。例えば、「ｉは２～２０の整数である」という表現は、ｉは２～２０の任意の整数であることを意味し、例えば、ｉは２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０であり得る。他の類似表現も同様に理解すべきである。
【0014】
特に明記されていない限り、「１つ（ｏｎｅ）」及び「前記（ｔｈｅ）」のような単数形は複数形を含む。「１つ又は複数」又は「少なくとも１つ」という表現は１、２、３、４、５、６、７、８及び９又はそれ以上を表してもよい。
【0015】
用語「約」及び「およそ」は、数値変数に関連して使用される場合、一般に、変数の値及び変数の全ての値が実験誤差の範囲内（例えば、平均値の９５％信頼区間内）又は指定値±１０％以内、又はより広い範囲内にあることを意味する。
【0016】
用語「化学量論比」は特定量の重量で様々な物質を配合する意味である。例えば、本開示において、有効成分は指定された重量比で充填剤、結合剤、及び潤滑剤と混合される。
【0017】
用語「任意の」又は「任意に」は、その後に説明される事象が発生する可能性があるが、必ずしも発生するわけではないことを意味し、該表現は、前記事象又は状況が発生する場合又は発生しない場合を含む。
【0018】
表現「含む」又は類似の表現「備える」、「含有」及び「有する」等はオープンエンドなものであり、追加の列挙されていない要素、ステップ又は成分を排除しない。表現「…からなる」は、明確に示していない要素、ステップ又は成分をいずれも除外する。表現「実質的に…からなる」は、範囲を、指定の要素、ステップ又は成分、及び保護を請求する主題の重要な特徴及び新規な特徴に実質的な影響を及ぼさない任意に存在する元素、ステップ又は成分に限定することを意味する。表現「含む」は表現「実質的に…からなる」と「…からなる」を包含すると理解すべきである。
【0019】
用語「標的化分子」とは、特定のターゲット（例えば受容体、細胞表面タンパク質、サイトカイン等）に対して親和性を有する分子を意味する。標的化分子は、標的送達によりペイロードを生体内の特異部位に送達することができる。標的化分子は、１つ又は複数のターゲットを認識することができる。特異的な標的部位は、標的化分子が認識したターゲットによって定義される。例えば、受容体を標的とする標的化分子は、大量の前記受容体を含む部位にペイロードを送達することができる。標的化分子の例としては、抗体、抗体フラグメント、所与抗原の結合タンパク質、抗体模倣体、所与ターゲットに対して親和性を有する足場タンパク質、リガンド等を含むが、これらに限定されない。
【0020】
本明細書で使用されるように、用語「抗体」は広義に使用され、所望の生物学的活性を有する限り、インタクトモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体フラグメントを含む。該抗体は任意のサブタイプ（ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ等）又はサブクラスであってもよく、任意の適切な種に由来してもよい。いくつかの実施形態において、該抗体はヒト又はマウス由来のものである。該抗体は完全ヒト抗体、ヒト化抗体又は組換え法によって調製されたキメラ抗体であってもよい。
【0021】
モノクローナル抗体は、本明細書において、実質的に均質な抗体集団から得られた抗体を指すために使用され、つまり、該集団を構成する個々の抗体は、少数の可能な自然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は単一の抗原部位に対して高度に特異的である。用語「モノクローナル」とは、抗体の特性が実質的に均質な抗体集団に由来することを指し、抗体を生成するために何らかの特定の方法を必要とするものとして解釈されるべきではない。
【0022】
インタクト抗体又は完全長抗体は、本質的に、抗原結合可変領域、軽鎖定常領域（ＣＬ）及び重鎖定常領域（ＣＨ）を含み、該重鎖定常領域（ＣＨ）は、抗体のサブタイプに応じて、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４を含み得る。抗原結合可変領域（フラグメント可変領域、Ｆｖフラグメントとしても知られる）は、典型的に、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。定常領域は、天然配列（ヒト天然配列を有する定常領域等）又はそのアミノ酸配列変異体を有する定常領域であってもよい。可変領域は標的抗原を認識し、それと相互作用する。定常領域は免疫系によって認識され得、それと相互作用する。
【0023】
抗体フラグメントは、インタクト抗体の一部、好ましくはその抗原結合領域又は可変領域を含み得る。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＶＨとＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）フラグメント、及び単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。Ｆａｂフラグメントは全長免疫グロブリンをパパイン消化して得られた抗体フラグメント、又は、例えば組換え発現等により生成されたものと同じ構造を有するフラグメントである。Ｆａｂフラグメントは軽鎖（ＶＬ及びＣＬを含む）及び別の鎖を含み、前記別の鎖は、重鎖（ＶＨ）の可変ドメイン及び重鎖（ＣＨ１）の定常領域ドメインを含む。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、免疫グロブリンをｐＨ４．０～４．５でペプシン消化して得られた抗体フラグメント、又は、例えば組換え発現等により生成されたものと同じ構造を有するフラグメントである。Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは本質的に２つのＦａｂフラグメントを含み、各重鎖部分は、２つのフラグメントを接続するジスルフィド結合を形成するシステインを含むいくつかの追加のアミノ酸を含む。Ｆａｂ’フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント（１つの重鎖及び１つの軽鎖）の半分を含むフラグメントである。抗体フラグメントは、例えばジスルフィド結合及び／又はペプチド連結ユニットを介して結合された複数の鎖を含み得る。抗体フラグメントの例としては、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ダイアボディ、Ｆｄ及びＦｄ’フラグメント、及び、修飾フラグメントを含む他のフラグメントを含む。抗体フラグメントは、典型的に少なくとも又は約５０個のアミノ酸、及び典型的に少なくとも又は約２００個のアミノ酸を含む。抗原結合フラグメントは、抗体フレームワークに（例えば、対応する領域の置換によって）挿入されると抗原に免疫特異的に結合する抗体を生じ得る任意の抗体フラグメントを含み得る。
【0024】
本開示に係る抗体は、例えば、組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術のような、本分野で公知の技術又はそれらの組合せ、又は他の本分野で公知の技術を使用して調製することができる。例えば、遺伝子操作された組換え抗体（又は抗体模倣体）は、適切な培養系（例えば、大腸菌又は哺乳類細胞）により発現可能である。該操作は、例えば、リガーゼ特異的認識配列を末端に導入することを指してもよい。
【0025】
ＨＥＲ２は、ヒト上皮成長因子受容体－２を指し、上皮成長因子（ＥＧＦＲ）受容体チロシンキナーゼファミリーに属する。本出願において、用語ＥｒｂＢ２とＨＥＲ２は同じ意味を有し、互換的に使用することができる。
【0026】
ＴＲＯＰ２は、Ｔａｃｓｔｄ２遺伝子によってコードされる膜貫通糖タンパク質である。ＴＲＯＰ２は細胞内カルシウムシグナルトランスデューサーであり、様々な腫瘍で過剰発現する。
【0027】
ＣＬＤＮ１８．２（クローディン１８アイソフォーム２）はヒトクローディンファミリーのメンバーである。ＣＬＤＮ１８．２はいくつかの種類のヒト癌の原発巣及び転移で発現する汎癌標的である。
【0028】
本明細書で使用されるように、用語「標的化分子－薬物コンジュゲート」は、「コンジュゲート」と呼ばれる。コンジュゲートの例としては、抗体薬物コンジュゲートを含むが、それらに限定されない。
【0029】
小分子化合物は、医薬品において慣用される有機分子に匹敵するサイズの分子を指す。該用語は生体高分子（例えば、タンパク質、核酸等）を包含しないが、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド等のような低分子量ペプチド又はその誘導体を包含する。典型的に、該小分子化合物の分子量は、例えば、約１００～約２０００Ｄａ、約２００～約１０００Ｄａ、約２００～約９００Ｄａ、約２００～約８００Ｄａ、約２００～約７００Ｄａ、約２００～約６００Ｄａ、約２００～約５００Ｄａであってもよい。
【0030】
免疫アゴニストは、ＤＣｓ、Ｂ細胞、マクロファージ、ＮＫ細胞、及びＴ細胞を含むがそれらに限定されない免疫細胞の活性化等を通じて、腫瘍に対する免疫応答を誘導又は増強できるアゴニストである。免疫アゴニストの非限定的な例として、ＴＬＲ７及び／又はＴＬＲ８及び／又はＴＬＲ９アゴニスト（例えば、イミキモド、レシキモド、８５２Ａ及びＶＴＸ－２３３７）を含むがそれらに限定されないＴＬＲアゴニスト、及びＳＴＩＮＧアゴニスト（例えば、ＡＤＵ－Ｓ１００及びＭＫ－１４５４）等は本分野で知られている。
【0031】
連結ユニットは、化合物又は材料中の２つ又はそれ以上の部分を共有結合する官能基を指す。例えば、該連結ユニットは、標的化分子及び／又はペイロードのアジュバント部分を共有結合するように働くことができる。
【0032】
スペーサーは、異なる構造モジュールの間に位置し、構造モジュールを空間的に分離できる構造である。スペーサーの定義は、特定の機能を有するかどうか、又は生体内で切断又は分解され得るかどうかによって限定されない。スペーサーの例としては、アミノ酸及び非アミノ酸構造を含むが、これらに限定されない。そのうち、非アミノ酸構造は、アミノ酸誘導体又は類似体であり得るが、これらに限定されない。「スペーサー配列」とは、スペーサーとして働くアミノ酸配列を指し、その例としては、Ｌｅｕ、Ｇｌｎ等の単一のアミノ酸、複数のアミノ酸を含む配列、例えばＧＡ等の２つのアミノ酸を含む配列、又は例えばＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ等を含むが、これらに限定されない。スペーサーの他の例としては、例えば、ＰＡＢＣ（ｐ－ｂｅｎｚｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ，ｐ－ベンジルオキシカルボニル）等の自壊的スペーサー等を含む。
【0033】
用語「アルキル基」とは、炭素原子と水素原子からなる直鎖又は分枝飽和脂肪族炭化水素基を意味し、該飽和脂肪族炭化水素基は単結合によって分子の残りの部分に連結されている。アルキル基は、１～２０個の炭素原子を含み得、即ちＣ１－Ｃ２０アルキル基であり得、例えば、Ｃ１－Ｃ４アルキル基、Ｃ１－Ｃ３アルキル基、Ｃ１－Ｃ２アルキル基、Ｃ３アルキル基、Ｃ４アルキル基、Ｃ３－Ｃ６アルキル基である。アルキル基の非限定的な例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、イソペンチル基、２－メチルブチル基、１－メチルブチル基、１－エチルプロピル基、１，２－ジメチルプロピル基、ネオペンチル基、１，１－ジメチルプロピル基、４－メチルペンチル基、３－メチルペンチル基、２－メチルペンチル基、１－メチルペンチル基、２－エチルブチル基、１－エチルブチル基、３，３－ジメチルブチル基、２，２－ジメチルブチル基、１，１－ジメチルブチル基、２，３－ジメチルブチル基、１，３－ジメチルブチル基、又は１，２－ジメチルブチル基、又はそれらの異性体を含むが、これらに限定されない。二価ラジカルとは、対応する一価ラジカルの自由価電子を持つ炭素原子から水素原子を１つ除去することによって得られた基を意味する。二価ラジカルは、分子の残りの部分に連結されている２つの連結部位を有する。例えば、「アルキレン基」又は「アルキリデン基」とは、直鎖又は分枝鎖の飽和二価炭化水素基を指す。アルキレン基の例としては、メチレン（－ＣＨ２－）、エチレン（－Ｃ２Ｈ４－）、プロピレン（－Ｃ３Ｈ６－）、ブチレン（－Ｃ４Ｈ８－）、ペンチレン（－Ｃ５Ｈ１０－）、ヘキシレン（－Ｃ６Ｈ１２－）、１－メチルエチレン（－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－）、２－メチルエチレン（－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）－）、メチルプロピレン基、エチルプロピレン基等を含むが、これらに限定されない。
【0034】
本明細書で使用されるように、１つの基が他の基と組み合わされる場合、化学的に安定な構造が形成されるのであれば、基の連結は直鎖状でも分枝状でもよい。このような組合せによって形成される構造は、該構造内の任意の適切な原子によって、好ましくは指定の化学結合によって分子の他の部分に連結することができる。例えば、Ｃ１－４アルキレン基と、－ＣＨ２－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－を含む基の１つとを組み合わせると記述する場合、Ｃ１－４アルキレン基は上記基と直鎖状連結を形成することができ、例えば、Ｃ１－４アルキレン－ＣＨ２－、Ｃ１－４アルキレン－ＮＨ－、Ｃ１－４アルキレン－Ｃ（Ｏ）－、Ｃ１－４アルキレン－ＮＨＣ（Ｏ）－、Ｃ１－４アルキレン－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２－Ｃ１－４アルキレン、－ＮＨ－Ｃ１－４アルキレン、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１－４アルキレン、－ＮＨＣ（Ｏ）－Ｃ１－４アルキレン、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－Ｃ１－４アルキレンを形成することができる。得られた二価構造は、分子の他の部分にさらに連結することができる。
【0035】
単独で又は他の用語と組み合わせて使用される用語「複素環」（及びその「複素環式」又は「ヘテロシクリル基」等の変形）は、通常３～１２個の環原子を有する単一の脂肪族環を広く指し、酸素、硫黄、窒素及びリンから独立して選ばれる１つ又は複数の、好ましくは１～３個のヘテロ原子、及び前記ヘテロ原子の少なくとも１つを含む組合せに加えて、少なくとも２つの炭素原子を含有する。あるいは、上記で定義した複素環は、２つ又はそれ以上の環が縮合又は架橋又はスピロ結合し得る多環式環系（例えば、二環式）であってもよく、ここで、このような環の少なくとも１つは、酸素、硫黄、窒素及びリンから独立して選ばれる１つ又は複数のヘテロ原子を含有する。
【0036】
ヘテロシクリル基は、例えば、アゼチジニル基、オキセタニル基等の４員環、又はテトラヒドロフラニル基、ジオキソリニル基、ピロリジニル基、イミダゾリジニル基、ピラゾリジニル基、ピロリニル基、オキソピロリジニル基、２－オキソイミダゾリジン－１－イル等の５員環、又はテトラヒドロピラニル基、ピペリジニル基、モルホリニル基、ジチアニル基、チオモルホリニル基、ピペラジニル基、１，１－ジオキソ－１，２－チアジナン－２－イル又はトリチアニル基等の６員環、又はジアゼピン環等の７員環であってもよい。任意に、ヘテロシクリル基はベンゾ縮合することができる。
【0037】
ヘテロシクリル基は、制限なく二環式であってもよく、例えば、ヘキサヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロール－２（１Ｈ）－イル等の５員縮合５員環、又はヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジン－２（１Ｈ）－イル等の５員縮合６員二環式環である。
【0038】
上述したように、複素環は不飽和であってもよく、つまり、１つ又は複数の二重結合を制限なく含有してもよい。例えば、窒素原子を含有する不飽和複素環は、１，６－ジヒドロピリミジン、１，２－ジヒドロピリミジン、１，４－ジヒドロピリミジン、１，６－ジヒドロピリジン、１，２－ジヒドロピリジン、１，４－ジヒドロピリジン、２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール、３，４－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール、２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロリル、４Ｈ－［１，３，４］チアジアジニル、４，５－ジヒドロオキサゾリル、又は４Ｈ－［１，４］チアジニル環であってもよく、酸素原子を含有する不飽和複素環は、２Ｈ－ピラン、４Ｈ－ピラン、又は２，３－ジヒドロフランであってもよく、硫黄原子を含有する不飽和複素環は、２Ｈ－チオピラン、又は４Ｈ－チオピランであってもよい。ジヒドロイソキノリニル環等の複素環は制限なくベンゾ縮合することができる。
［００６８］用語「ヘテロアリール基」は、好ましくは５、６、７、８、９又は１０個、特に５又は６又は９又は１０個の環原子を有する一価の単環式、二環式、又は三環式芳香族環系（「５～１０員ヘテロアリール基」）を意味すると理解すべきであり、該環原子の少なくとも１つ（好適に１～４つ、より好適に１つ、２つ又は３つ）は、酸素、窒素又は硫黄環系等のような同じ又は異なるヘテロ原子であってもよい。さらに、ヘテロアリール基は各場合においてベンゾ縮合することができる。具体的には、ヘテロアリール基は、チエニル基、フリル基、ピロリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、イソオキサゾリル基、イソチアゾリル基、オキサジアゾリル基、トリアゾリル基、チオジアゾリル基等及びそれらのベンゾ誘導体、例えばベンゾフラニル基、ベンゾチエニル基、ベンゾオキサゾリル基、ベンズイソオキサゾリル基、ベンズイミダゾリル基、ベンゾトリアゾリル基、インダゾール基、インドリル基、イソインドリル基等、又はピリジル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、トリアジニル基等及びそれらのベンゾ縮合誘導体、例えばキノリニル基、キナゾリニル基、イソキノリニル基等、又はアゾシニル基、インドリジニル基、プリニル基等及びそれらのベンゾ縮合誘導体、又はシンノリニル基、フタラジニル基、キナゾリニル基、キノキサリニル基、ナフチリジニル基、カルバゾリル基、アクリジニル基等からなる群から選ばれる。
［００６８］用語「ヘテロアリール基」は、好ましくは５、６、７、８、９又は１０個、特に５又は６又は９又は１０個の環原子を有する一価の単環式、二環式、又は三環式芳香族環系（「５～１０員ヘテロアリール基」）を意味すると理解すべきであり、該環原子の少なくとも１つ（好適に１～４つ、より好適に１つ、２つ又は３つ）は、酸素、窒素又は硫黄環系等のような同じ又は異なるヘテロ原子であってもよい。さらに、ヘテロアリール基は各場合においてベンゾ縮合することができる。具体的には、ヘテロアリール基は、チエニル基、フリル基、ピロリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、イソオキサゾリル基、イソチアゾリル基、オキサジアゾリル基、トリアゾリル基、チオジアゾリル基等及びそれらのベンゾ誘導体、例えばベンゾフラニル基、ベンゾチエニル基、ベンゾオキサゾリル基、ベンズイソオキサゾリル基、ベンズイミダゾリル基、ベンゾトリアゾリル基、インダゾール基、インドリル基、イソインドリル基等、又はピリジル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、トリアジニル基等及びそれらのベンゾ縮合誘導体、例えばキノリニル基、キナゾリニル基、イソキノリニル基等、又はアゾシニル基、インドリジニル基、プリニル基等及びそれらのベンゾ縮合誘導体、又はシンノリニル基、フタラジニル基、キナゾリニル基、キノキサリニル基、ナフチリジニル基、カルバゾリル基、アクリジニル基等からなる群から選ばれる。
【0039】
式（Ｉ’）の化合物
一態様において、式（Ｉ’）（式（Ｉ’－１）又は式（Ｉ’－２））の化合物であって、
Ｄ１―Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―Ａ２ｐ―Ｌｍ２ｐ―Ｂ２ （Ｉ’－１）
Ｂ１―Ｌｍ１ｐ―Ａ１ｐ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ―Ｄ２ （Ｉ’－２）
式中、
Ｄ１及びＤ２は独立してリガーゼ受容体又は供与体基質の認識配列を含む部分であり、
Ｂ１及びＢ２はそれぞれ独立して、１）Ｃ２－３０アルキレン基であって、該アルキレン基中の１つ又は複数の－ＣＨ２－構造が－ＣＲ１Ｒ２－、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ３－、切断可能配列１、又はスペーサーＳｐ１によって任意に置き換えられる前記アルキレン基と、２）末端基と、の組合せであり、
該末端基は水素又はＲ７であり、
Ｒ７はペイロード内の基と反応する時に離れることができる基であり、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して、水素、－ＯＨ、－ＮＨ２、－Ｃ１－６アルキル、－Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ１－６アルキル－ＮＨ２、－Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ１－６アルキル－Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ１－６アルキル－ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨＣ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨＳ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ－Ｃ１－６アルキル及び－Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキルから選ばれ、
Ｌｍ１及びＬｍ２はそれぞれ独立して開環スクシンイミド部分であり、
Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立して、ジスルフィド結合、チオエーテル結合、チオエステル結合、又はウレタン結合を介してＬｍ１又はＬｍ２とコンジュゲートされる部分であり、
ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３の組合せであり、
Ｌ１及びＬ３はそれぞれ独立して、
－ＣＨ２－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、及びＣ１－４アルキレン基と－ＣＨ２－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－という基の１つとの組合せから選ばれ、
Ｌ２は存在しないか、又はＣ７－３４アルキレン基であり、該アルキレン基中の１つ又は複数の（－ＣＨ２－）構造は－Ｏ－によって任意に置き換えられ、
Ｌ１、Ｌ２及びＬ３はそれぞれ任意に且つ独立して、－ＯＲ４及び－ＮＲ５Ｒ６から選ばれる１、２又は３個の置換基によって置換され、
Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立して、水素、－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル及び－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキルから選ばれ、
Ｙ及びＷはそれぞれ独立して存在しないか、又は切断可能配列２、スペーサーＳｐ２、及びそれらの組合せから選ばれ、
切断可能配列１は、酵素により切断可能なアミノ酸配列を含み、且つ切断可能配列１は１～１０個のアミノ酸を含み、
切断可能配列２は、酵素により切断可能なアミノ酸配列を含み、且つ切断可能配列２は１～１０個のアミノ酸を含み、
Ｓｐ１及びＳｐ２はそれぞれ独立して１～２０個のアミノ酸を含有するスペーサー配列、ＰＡＢＣ、及びそれらの組合せから選ばれ、
ａ、ｂ及びｐはそれぞれ独立して０又は１である、前記化合物を提供する。
一態様において、式（Ｉ’）（式（Ｉ’－１）又は式（Ｉ’－２））の化合物であって、
Ｄ１―Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―Ａ２ｐ―Ｌｍ２ｐ―Ｂ２ （Ｉ’－１）
Ｂ１―Ｌｍ１ｐ―Ａ１ｐ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ―Ｄ２ （Ｉ’－２）
式中、
Ｄ１及びＤ２は独立してリガーゼ受容体又は供与体基質の認識配列を含む部分であり、
Ｂ１及びＢ２はそれぞれ独立して、１）Ｃ２－３０アルキレン基であって、該アルキレン基中の１つ又は複数の－ＣＨ２－構造が－ＣＲ１Ｒ２－、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ３－、切断可能配列１、又はスペーサーＳｐ１によって任意に置き換えられる前記アルキレン基と、２）末端基と、の組合せであり、
該末端基は水素又はＲ７であり、
Ｒ７はペイロード内の基と反応する時に離れることができる基であり、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ独立して、水素、－ＯＨ、－ＮＨ２、－Ｃ１－６アルキル、－Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ１－６アルキル－ＮＨ２、－Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ１－６アルキル－Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ１－６アルキル－ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨＣ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨＳ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ－Ｃ１－６アルキル及び－Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキルから選ばれ、
Ｌｍ１及びＬｍ２はそれぞれ独立して開環スクシンイミド部分であり、
Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立して、ジスルフィド結合、チオエーテル結合、チオエステル結合、又はウレタン結合を介してＬｍ１又はＬｍ２とコンジュゲートされる部分であり、
ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３の組合せであり、
Ｌ１及びＬ３はそれぞれ独立して、
－ＣＨ２－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、及びＣ１－４アルキレン基と－ＣＨ２－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－という基の１つとの組合せから選ばれ、
Ｌ２は存在しないか、又はＣ７－３４アルキレン基であり、該アルキレン基中の１つ又は複数の（－ＣＨ２－）構造は－Ｏ－によって任意に置き換えられ、
Ｌ１、Ｌ２及びＬ３はそれぞれ任意に且つ独立して、－ＯＲ４及び－ＮＲ５Ｒ６から選ばれる１、２又は３個の置換基によって置換され、
Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立して、水素、－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル及び－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキルから選ばれ、
Ｙ及びＷはそれぞれ独立して存在しないか、又は切断可能配列２、スペーサーＳｐ２、及びそれらの組合せから選ばれ、
切断可能配列１は、酵素により切断可能なアミノ酸配列を含み、且つ切断可能配列１は１～１０個のアミノ酸を含み、
切断可能配列２は、酵素により切断可能なアミノ酸配列を含み、且つ切断可能配列２は１～１０個のアミノ酸を含み、
Ｓｐ１及びＳｐ２はそれぞれ独立して１～２０個のアミノ酸を含有するスペーサー配列、ＰＡＢＣ、及びそれらの組合せから選ばれ、
ａ、ｂ及びｐはそれぞれ独立して０又は１である、前記化合物を提供する。
【0040】
１つの実施形態において、ａ及びｂは両方とも０である。１つの実施形態において、ａは１であり、ｂは０である。１つの実施形態において、ｐは０である。
【0041】
１つの実施形態において、Ｒ１及びＲ２は両方とも水素であるか、又は両方とも－Ｃ１－６アルキルである。１つの実施形態において、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立して、水素、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ－Ｃ１－６アルキル及び－Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキルから選ばれるか、又はそれぞれ独立して、－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキル、及び－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ－Ｃ１－６アルキル及び－Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキルから選ばれる。１つの実施形態において、Ｒ１及びＲ２は両方とも水素であるか、又は両方とも－Ｃ１－６アルキルであるか、又はそれぞれ独立して水素、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル及び－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキルから選ばれるか、又はそれぞれ独立して－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル及び－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキルから選ばれる。
【0042】
１つの実施形態において、Ｌ１、Ｌ２及びＬ３は独立して、－ＯＲ４及び－ＮＲ５Ｒ６から選ばれる１、２、又は３個の置換基によって置換される。置換は、例えば、－ＣＨ３、－ＣＨ２－又は
構造上、特に－ＣＨ２－上で発生する。
【化4】
【0043】
１つの実施形態において、Ｌ１は－ＮＨ－であるか、又はＣ１－４アルキレン基と－ＮＨ－の組合せである。別の実施形態において、Ｌ１は－Ｃ（Ｏ）－であるか、又はＣ１－４アルキレン基と－Ｃ（Ｏ）－の組合せである。
【0044】
１つの実施形態において、Ｌ３は－ＮＨ－であるか、又はＣ１－４アルキレン基と－ＮＨ－の組合せである。別の実施形態において、Ｌ３は－Ｃ（Ｏ）－であるか、又はＣ１－４アルキレン基と－Ｃ（Ｏ）－の組合せである。
【0045】
１つの実施形態において、Ｌ２は、直鎖状または分枝状のアルキレン基であるＣ７－３４アルキレン基であり、該アルキレン基中の１つ又は複数の－ＣＨ２－構造は－Ｏ－によって任意に置き換えることができ、該アルキレン基は、－ＯＲ４及び－ＮＲ５Ｒ６から選ばれる１、２又は３個の置換基によって任意に置換される。さらに別の実施形態において、Ｌ２は、－ＯＲ４及び－ＮＲ５Ｒ６から選ばれる１、２又は３個の置換基によって任意に置換される二価基から選ばれ、ここで前記二価基は、メチレン基、エチレン基、プロピレン基、ブチレン基、ペンチレン基、ヘキシレン基、１－メチルエチレン基、２－メチルエチレン基、２－メチルプロピレン基、２－エチルプロピレン基である。
【0046】
別の実施形態において、Ｌ２は－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｉ－Ｃ１－４アルキレンであり、ｉは２～１０の整数である。１つの実施形態において、Ｌ２はＣ１－４アルキレン－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｉ－である。「－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｉ－」又は「－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｉ－」は、ＰＥＧユニットの重合によって形成される構造を表し、ここでｉはＰＥＧユニットの数を示す。別の実施形態において、Ｌ２は－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｉ－Ｃ１－２アルキレンである。特定の実施形態において、Ｌ２は－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｉ－Ｃ２Ｈ４－である。別の実施形態において、Ｌ２はＣ１－２アルキレン－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｉ－である。特定の実施形態において、Ｌ２は－Ｃ２Ｈ４－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｉ－である。１つの実施形態において、ｉは、２～１０、２～８、２～６、２～４又は４～６の値から選ばれる。特定の実施形態において、ｉは４である。
【0047】
１つの実施形態において、Ｙ及びＷはそれぞれ独立して存在しないか、又は切断可能配列１、スペーサーＳｐ２、及びそれらの組合せから選ばれる。特定の実施形態において、ａは０であり、Ｙはそのために存在しない。別の特定の実施形態において、ｂは０であり、Ｗはそのために存在しない。さらに別の特定の実施形態において、Ｙ及びＷの両方とも存在しない。１つの実施形態において、切断可能配列２は、酵素基質として認識可能で且つ酵素によって切断可能なアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、切断可能配列２は細胞内、特にリソソーム内で酵素的に切断可能である。別の特定の実施形態において、切断可能配列２はプロテアーゼ、具体的にはカテプシンにより切断可能である。さらに別の特定の実施形態において、切断可能配列２はグルタミナーゼにより切断可能である。１つの実施形態において、切断可能配列２は、カテプシン制限部位、グルタミナーゼ制限部位、及びそれらの組合せから選ばれる。１つの実施形態において、切断可能配列２は、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、ＧＬｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ及びそれらの組合せから選ばれる。
【0048】
１つの実施形態において、Ｙ及びＷはそれぞれ独立して存在しないか、又はスペーサーＳｐ２から選ばれる。別の実施形態において、Ｓｐ２は、１～１０個、好ましくは１～６個、より好ましくは１～４個のアミノ酸を含むスペーサー配列である。特定の実施形態において、Ｓｐ２はＬｅｕである。別の特定の実施形態において、Ｓｐ２はＧｌｎである。１つの実施形態において、Ｓｐ２はＰＡＢＣである。さらに別の実施形態において、Ｙ及びＷはそれぞれ独立して、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－ＰＡＢＣ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ、及びＶａｌ－Ｌｙｓ－ＰＡＢＣから選ばれる。
【0049】
１つの実施形態において、Ｙ及び／又はＷに含まれるアミノ酸は天然又は非天然であってもよい。特定の実施形態において、Ｙはアミノ酸フラグメント１である。アミノ酸フラグメント１は、それぞれ独立して同一又は異なる１～３０個の天然又は非天然アミノ酸である。アミノ酸フラグメント１は、１～１０個のアミノ酸を含む切断可能配列、１～２０個のアミノ酸を含むスペーサー配列、及びそれらの組合せから選ばれる。別の特定の実施形態において、Ｗはアミノ酸フラグメント２である。アミノ酸フラグメント２は、それぞれ独立して同一又は異なる１～３０個の天然又は非天然アミノ酸を含む。アミノ酸フラグメント２は、１～１０個のアミノ酸を含む切断可能配列、１～２０個のアミノ酸を含むスペーサー配列、及びそれらの組合せから選ばれる。
【0050】
リガーゼ受容体又は供与体基質の認識配列を含む部分
１つの実施形態において、リガーゼはトランスペプチダーゼである。１つの実施形態において、リガーゼは、天然トランスペプチダーゼ、非天然トランスペプチダーゼ、それらの変異体、及びこれらの組合せから選ばれる。非天然トランスペプチダーゼ酵素は、天然トランスペプチダーゼを操作して得られたものであってもよいが、それらに限定されない。好ましい実施形態において、リガーゼは、天然ソルターゼ、非天然ソルターゼ、及びそれらの組合せから選ばれる。天然ソルターゼの種類は、ソルターゼＡ、ソルターゼＢ、ソルターゼＣ、ソルターゼＤ、ソルターゼＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ等を含む（ＵＳ２０１１０３２１１８３Ａ１）。リガーゼのタイプはリガーゼ認識配列に対応するため、異なる分子又は構造フラグメント間の特異的コンジュゲーションを達成するために用いられる。１つの実施形態において、リガーゼ受容体基質の認識配列は、オリゴメリックグリシン、オリゴメリックアラニン、及び重合度３～１０のオリゴメリックグリシン／アラニンの混合物から選ばれる。特定の実施形態において、リガーゼ受容体基質の認識配列はＧｎであり、ここでＧはグリシン（Ｇｌｙ）であり、ｎは３～１０の整数である。別の特定の実施形態において、リガーゼは黄色ブドウ球菌に由来のソルターゼＡである。それに応じて、リガーゼ認識配列は、該酵素の典型的な認識配列ＬＰＸＴＧであり得る。さらに別の特定の実施形態において、リガーゼ供与体基質の認識配列はＬＰＸＴＧＪであり、リガーゼ受容体基質の認識配列はＧｎであり、ここでＸはは天然又は非天然の任意の単一アミノ酸であってもよく、Ｊは存在しないか、又は任意にラベル付けされた、１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメントである。１つの実施形態において、Ｊは存在しない。さらに別の実施形態において、Ｊは１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメントであり、ここで各アミノ酸は独立して任意の天然又は非天然アミノ酸である。別の実施形態において、ＪはＧｍであり、ここでｍは１～１０の整数である。さらに別の特定の実施形態において、リガーゼ供与体基質の認識配列はＬＰＥＴＧである。別の特定の実施形態において、リガーゼ供与体基質の認識配列はＬＰＥＴＧＧである。１つの実施形態において、リガーゼは黄色ブドウ球菌に由来のソルターゼＢであり、対応する供与体基質認識配列はＮＰＱＴＮであってもよい。別の実施形態において、リガーゼは炭疽菌に由来のソルターゼＢであり、対応する供与体基質認識配列はＮＰＫＴＧであってもよい。さらに別の実施形態において、リガーゼは化膿性連鎖球菌に由来のソルターゼＡであり、対応する供与体基質認識配列はＬＰＸＴＧＪであってもよく、ここでＪは上記で定義したとおりである。別の実施形態において、リガーゼはストレプトマイセス・セリカラーに由来のソルターゼサブファミリー５であり、対応する供与体基質認識配列はＬＡＸＴＧであってもよい。さらに別の実施形態において、リガーゼはラクトバチルス・プランタルムに由来のソルターゼＡであり、対応する供与体基質認識配列はＬＰＱＴＳＥＱであってもよい。リガーゼ認識配列は、さらに、手動スクリーニングによって最適化されたトランスペプチダーゼのための別の全く新しい認識配列であってもよい。
１つの実施形態において、リガーゼはトランスペプチダーゼである。１つの実施形態において、リガーゼは、天然トランスペプチダーゼ、非天然トランスペプチダーゼ、それらの変異体、及びこれらの組合せから選ばれる。非天然トランスペプチダーゼ酵素は、天然トランスペプチダーゼを操作して得られたものであってもよいが、それらに限定されない。好ましい実施形態において、リガーゼは、天然ソルターゼ、非天然ソルターゼ、及びそれらの組合せから選ばれる。天然ソルターゼの種類は、ソルターゼＡ、ソルターゼＢ、ソルターゼＣ、ソルターゼＤ、ソルターゼＬ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ等を含む（ＵＳ２０１１０３２１１８３Ａ１）。リガーゼのタイプはリガーゼ認識配列に対応するため、異なる分子又は構造フラグメント間の特異的コンジュゲーションを達成するために用いられる。１つの実施形態において、リガーゼ受容体基質の認識配列は、オリゴメリックグリシン、オリゴメリックアラニン、及び重合度３～１０のオリゴメリックグリシン／アラニンの混合物から選ばれる。特定の実施形態において、リガーゼ受容体基質の認識配列はＧｎであり、ここでＧはグリシン（Ｇｌｙ）であり、ｎは３～１０の整数である。別の特定の実施形態において、リガーゼは黄色ブドウ球菌に由来のソルターゼＡである。それに応じて、リガーゼ認識配列は、該酵素の典型的な認識配列ＬＰＸＴＧであり得る。さらに別の特定の実施形態において、リガーゼ供与体基質の認識配列はＬＰＸＴＧＪであり、リガーゼ受容体基質の認識配列はＧｎであり、ここでＸはは天然又は非天然の任意の単一アミノ酸であってもよく、Ｊは存在しないか、又は任意にラベル付けされた、１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメントである。１つの実施形態において、Ｊは存在しない。さらに別の実施形態において、Ｊは１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメントであり、ここで各アミノ酸は独立して任意の天然又は非天然アミノ酸である。別の実施形態において、ＪはＧｍであり、ここでｍは１～１０の整数である。さらに別の特定の実施形態において、リガーゼ供与体基質の認識配列はＬＰＥＴＧである。別の特定の実施形態において、リガーゼ供与体基質の認識配列はＬＰＥＴＧＧである。１つの実施形態において、リガーゼは黄色ブドウ球菌に由来のソルターゼＢであり、対応する供与体基質認識配列はＮＰＱＴＮであってもよい。別の実施形態において、リガーゼは炭疽菌に由来のソルターゼＢであり、対応する供与体基質認識配列はＮＰＫＴＧであってもよい。さらに別の実施形態において、リガーゼは化膿性連鎖球菌に由来のソルターゼＡであり、対応する供与体基質認識配列はＬＰＸＴＧＪであってもよく、ここでＪは上記で定義したとおりである。別の実施形態において、リガーゼはストレプトマイセス・セリカラーに由来のソルターゼサブファミリー５であり、対応する供与体基質認識配列はＬＡＸＴＧであってもよい。さらに別の実施形態において、リガーゼはラクトバチルス・プランタルムに由来のソルターゼＡであり、対応する供与体基質認識配列はＬＰＱＴＳＥＱであってもよい。リガーゼ認識配列は、さらに、手動スクリーニングによって最適化されたトランスペプチダーゼのための別の全く新しい認識配列であってもよい。
【0051】
反応性基を含む部分
ペイロードと接続するための反応性基
１つの実施形態において、Ｂ１又はＢ２はペイロードへの接続に用いられる。ペイロードと接続するために、式（Ｉ’）の化合物は反応性基を含む。１つの実施形態において、式（Ｉ’）の化合物中のＢ１又はＢ２はアミド結合又はエステル結合又はエーテル結合を介してペイロードに接続される。１つの実施形態において、式（Ｉ’）におけるＢ１又はＢ２中の反応性基は独立して、縮合反応、求核付加又は求電子付加のための反応性基（例えば反応性Ｃ＝Ｏ部分、反応性Ｃ＝Ｃ－Ｃ＝Ｏ部分、アミノ基、アミン基、ヒドロキシ基、チオール基）、又は置換反応のための反応性基（例えばＯ、Ｃ、Ｎ又はＳ原子に付着した脱離基）である。１つの実施形態において、Ｂ１又はＢ２中の反応性基は独立して、カルボキシル基、スルホン酸基、遊離－ＯＨ末端を持つホスホリル基、活性エステル、アルデヒド基、イソシアネート基、マイケル付加の受容体基（マレイミド基等）、アミノ基、アミン基、水酸基、チオール基、ピリジルジチオール基及びハロ酢酸基から選ばれる。具体的な実施形態において、ペイロードへの接続用のＢ１又はＢ２中の反応性基は独立して、アミノ基、アミン基、水酸基、チオール基、カルボキシル基及び活性エステルから選ばれる。別の具体的な実施形態において、Ｂ１又はＢ２は、－ＯＨ及び－ＣＯＯＨ、特にアルキルアルコールの水酸基又はアルキルカルボン酸のカルボキシル基から選ばれる基を介してペイロードに接続される。
ペイロードと接続するための反応性基
１つの実施形態において、Ｂ１又はＢ２はペイロードへの接続に用いられる。ペイロードと接続するために、式（Ｉ’）の化合物は反応性基を含む。１つの実施形態において、式（Ｉ’）の化合物中のＢ１又はＢ２はアミド結合又はエステル結合又はエーテル結合を介してペイロードに接続される。１つの実施形態において、式（Ｉ’）におけるＢ１又はＢ２中の反応性基は独立して、縮合反応、求核付加又は求電子付加のための反応性基（例えば反応性Ｃ＝Ｏ部分、反応性Ｃ＝Ｃ－Ｃ＝Ｏ部分、アミノ基、アミン基、ヒドロキシ基、チオール基）、又は置換反応のための反応性基（例えばＯ、Ｃ、Ｎ又はＳ原子に付着した脱離基）である。１つの実施形態において、Ｂ１又はＢ２中の反応性基は独立して、カルボキシル基、スルホン酸基、遊離－ＯＨ末端を持つホスホリル基、活性エステル、アルデヒド基、イソシアネート基、マイケル付加の受容体基（マレイミド基等）、アミノ基、アミン基、水酸基、チオール基、ピリジルジチオール基及びハロ酢酸基から選ばれる。具体的な実施形態において、ペイロードへの接続用のＢ１又はＢ２中の反応性基は独立して、アミノ基、アミン基、水酸基、チオール基、カルボキシル基及び活性エステルから選ばれる。別の具体的な実施形態において、Ｂ１又はＢ２は、－ＯＨ及び－ＣＯＯＨ、特にアルキルアルコールの水酸基又はアルキルカルボン酸のカルボキシル基から選ばれる基を介してペイロードに接続される。
【0052】
１つの実施形態において、Ｂ１又はＢ２中の反応性基は独立してアミノ基、アミン基又は水酸基であり、ペイロード内で対応する基（例えばカルボキシル基、スルホン酸基、遊離－ＯＨ末端を持つホスホリル基、活性エステル、酸塩化物又はイソシアネート基）と反応する。別の実施形態において、Ｂ１又はＢ２中の反応性基は独立してカルボキシル基、スルホン酸基、遊離－ＯＨ末端を持つホスホリル基、活性エステル又はイソシアネート基であり、ペイロード内で対応する基（例えばアミノ基、アミン基又は水酸基）と反応する。
【0053】
１つの実施形態において、Ｂ１又はＢ２中の反応性基は独立してアミノ基、水酸基又はチオール基であり、ペイロード内で対応する基（例えばハロゲン、水酸基、チオール基、アルデヒド基）と反応する。別の実施形態において、Ｂ１又はＢ２中の反応性基は独立して水酸基であり、ペイロード内で対応する基（例えばハロゲン又は水酸基）と反応する。
【0054】
Ｂ１及びＢ２
１つの実施形態において、Ｂ１及びＢ２はそれぞれ独立して、
１）－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－、－ＮＲ３－、－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－、－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－、－（Ｃ２Ｈ４）ｇ－、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ－、－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｊ－、－（Ｃ（Ｏ）－ＣＲ１Ｒ２－ＮＨ）ｄ－という二価基から選ばれる１つ又は２つもしくはそれ以上の組合せ、切断可能配列１、及びスペーサーＳｐ１と、２）末端基と、の組合せであり、ここで、
該末端基は水素又はＲ７であり、
ｋは０～２０の整数であり、ｊは１～２０の整数であり、ｄは１～２０の整数であり、ｇは１～２０の整数であり、
各－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ－及び－（Ｃ２Ｈ４）ｇ－は独立して非置換であるか、又は－ＯＨ、－ＮＨ２、Ｃ１－６アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ１－６アルキル－ＮＨ２、－Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨＣ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキル及び－ＮＨＳ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキルから選ばれる１つ又は複数の基によって置換される。
１つの実施形態において、Ｂ１及びＢ２はそれぞれ独立して、
１）－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－、－ＮＲ３－、－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－、－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－、－（Ｃ２Ｈ４）ｇ－、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ－、－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｊ－、－（Ｃ（Ｏ）－ＣＲ１Ｒ２－ＮＨ）ｄ－という二価基から選ばれる１つ又は２つもしくはそれ以上の組合せ、切断可能配列１、及びスペーサーＳｐ１と、２）末端基と、の組合せであり、ここで、
該末端基は水素又はＲ７であり、
ｋは０～２０の整数であり、ｊは１～２０の整数であり、ｄは１～２０の整数であり、ｇは１～２０の整数であり、
各－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ－及び－（Ｃ２Ｈ４）ｇ－は独立して非置換であるか、又は－ＯＨ、－ＮＨ２、Ｃ１－６アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨ－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ１－６アルキル－ＮＨ２、－Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨＣ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキル及び－ＮＨＳ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキルから選ばれる１つ又は複数の基によって置換される。
【0055】
１つの実施形態において、末端基は水素である。１つの実施形態において、Ｒ７は水酸基又は
である。
【化5】
【0056】
１つの実施形態において、末端基Ｒ７はＢ１又はＢ２とペイロードの反応から生じた生成物分子に現れない構造部分を表すため、連結ユニット－ペイロード中間体（下記参照）では、Ｂ１又はＢ２に対応する構造部分は上記二価基のうちの１つ、又は２つもしくはそれ以上の組合せである。
【0057】
１つの実施形態において、各－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ－及び－（Ｃ２Ｈ４）ｇ－は独立して非置換であるか、又は－ＯＨ、Ｃ１－６アルキル基、－Ｏ－Ｃ１－６アルキル、－Ｎ（Ｃ１－６アルキル）－Ｃ１－６アルキル、－Ｃ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル、－ＮＨＣ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキル、－Ｓ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキル及び－ＮＨＳ（＝Ｏ）２－Ｃ１－６アルキルから選ばれる１つ又は複数の基によって置換され、より好ましくは－Ｃ１－６アルキル又は－ＮＨＣ（Ｏ）－Ｃ１－６アルキルから選ばれる１つ又は複数の基によって置換される。別の実施形態において、各－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ－及び－（Ｃ２Ｈ４）ｇ－は独立して非置換であるか、又は－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２、－ＮＨ２、－Ｃ１－６アルキル－ＮＨ２、－ＮＨ－Ｃ１－６アルキルから選ばれる１つ又は複数の基によって置換され、好ましくは－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２、－Ｃ１－６アルキル－ＮＨ２、－ＮＨ－Ｃ１－６アルキルから選ばれる１つ又は複数の基によって置換される。
【0058】
１つの実施形態において、ｋは、０、１、２～１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５、２～４又は２～３、好ましくは０、１又は２、特に１又は２の値から選ばれる。１つの実施形態において、ｊは、１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、特に１、３、又は４の値から選ばれる。１つの実施形態において、ｄは、１～１０、１～８、１～６、１～４、１～３、１～２の値から選ばれる。特定の実施形態において、ｄは１又は２である。特定の実施形態において、ｄは１である。１つの実施形態において、ｇは、２～１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５、２～４の値から選ばれる。
【0059】
分子内で２つ又はそれ以上の－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－基がある場合、各ｋの値は独立して選択されることを理解すべきである。いくつかの実施形態において、分子内の「ｋ」ｓは、付加の数字が付いているか又は付いておらず、例えばｋ１、ｋ２、ｋ３等であり、ここで、該数字は順序を示すものではなく、単に「ｋ」ｓを区別するためのものである。ｇ、ｊ、ｄ等の他の下付き文字は同様に理解すべきである。
【0060】
２つ又はそれ以上のＲｘ（ｘは１、２、３、４、５、６、７等）がある場合、各Ｒｘは独立して選択されることを理解すべきである。いくつかの実施形態において、分子内の「ｘ」ｓは、付加のアポストロフィ（’）又はアポストロフィ（’’、’’’、’’’’等）が付いているか又は付いておらず、例えばＲ、Ｒ１’、Ｒ１’’、Ｒ１’’’、Ｒ２’、Ｒ２’’、Ｒ２’’’等である。Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７等の別のＲｘｓは同様に理解すべきである。
【0061】
別の実施形態において、切断可能配列１は、プロテアーゼに敏感なオリゴマーペプチド、カテプシン切断部位、グルタミナーゼ切断部位、及びそれらの組合せから選ばれる酵素切断部位を含む。特定の実施形態において、切断可能配列１は、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、及びＶａｌ－Ｌｙｓから選ばれる。
【0062】
別の実施形態において、Ｓｐ１は、１～１０個、好ましくは１～６個、より好ましくは１～４個のアミノ酸を含むスペーサー配列である。１つの実施形態において、Ｓｐ１はＰＡＢＣである。
【0063】
１つの実施形態において、Ｂ１及びＢ２はそれぞれ任意に誘導体化されたリジンである。別の実施形態において、リジンの誘導体化は、１）カルボキシル基のアミド化であって、得られたアミドＮＨ２がＣ１－６アルキル基によって任意に置換される前記アミド化と、２）１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメント又は１～１０個のヌクレオチドを含むヌクレオチドフラグメントへのカルボキシル基及び／又はアミノ基の連結であって、該アミノ酸フラグメントはＧｌｙが好ましい前記連結と、から選ばれる。
【0064】
１つの実施形態において、末端基が二価基と組み合わされる場合、下記二価基はそれぞれ下記構造部分を形成する。－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－ＯＨを形成し、－ＮＲ３－は－ＮＨＲ３又はＲ３ＨＮ－を形成し、－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－は－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－Ｈを形成し、－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－は－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄＯＨを形成し、－（Ｃ２Ｈ４）ｇ－は－（Ｃ２Ｈ４）ｇ－Ｈ、－（Ｃ２Ｈ４）ｇ－ＯＨ、Ｈ－（Ｃ２Ｈ４）ｇ－又はＨＯ－（Ｃ２Ｈ４）ｇ－を形成し、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ－はＨＯ－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ－を形成し、－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｊ－はＨ－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｊ－を形成し、－（Ｃ（Ｏ）－ＣＲ１Ｒ２－ＮＨ）ｄ－はＨＯ－（Ｃ（Ｏ）－ＣＲ１Ｒ２－ＮＨ）ｄ－を形成し、ここで－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ－及び－（Ｃ２Ｈ４）ｇ－のそれぞれは独立して非置換であるか、又は上記で定義した１つ又は複数の基によって置換される。
【0065】
１つの実施形態において、Ｂ２は、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－ＯＨ、－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＯＨ、－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－Ｈ、－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ、－（Ｌｙｓ－ＮＨ２）、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＯＨ、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－Ｈ、－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－Ｈ、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－Ｈ、－（ＣＨ２）ｋ１Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－（ＣＨ２）ｋ２Ｃ（Ｏ）－（Ｌｙｓ－ＯＨ）、－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＯＨ、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ及び－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＯＨから選ばれる。
【0066】
１つの実施形態において、Ｂ２は、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－ＯＨ、－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＯＨ、－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－Ｈ、－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ、－（Ｌｙｓ－ＮＨ２）、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＯＨ、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－Ｈ、－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－Ｈ、－（ＣＨ２）ｋ１Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－（ＣＨ２）ｋ２Ｃ（Ｏ）－（Ｌｙｓ－ＯＨ）、－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＯＨ、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ及び－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＯＨから選ばれる。
【0067】
１つの実施形態において、Ｂ２は、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－ＯＨ、－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＯＨ、－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－Ｈ、－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ、－（Ｌｙｓ－ＮＨ２）、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＯＨ、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－Ｈ、－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－Ｈ、－（ＣＨ２）ｋ１Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－（ＣＨ２）ｋ２Ｃ（Ｏ）－（Ｌｙｓ－ＯＨ）、－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＯＨ及び－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣから選ばれる。
【0068】
１つの実施形態において、Ｂ２は－（Ｌｙｓ－ＮＨ２）である。１つの実施形態において、Ｂ１は（Ｌｙｓ－ＮＨ２）－である。
【0069】
１つの実施形態において、Ｂ２は、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－ＯＨ、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＯＨ、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－Ｈ、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－Ｈ、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ及び－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＯＨから選ばれる。
【0070】
１つの実施形態において、Ｂ２は、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－ＯＨ、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＯＨ、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－Ｈ、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ及び－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＯＨから選ばれる。
【0071】
１つの実施形態において、Ｂ２は、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－ＯＨ、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＯＨ、－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－Ｈ及び－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣから選ばれる。
【0072】
１つの実施形態において、Ｂ１は、ＨＯ－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ－、ＨＯ－（Ｃ（Ｏ）－ＣＲ１Ｒ２－ＮＨ）ｄ－、Ｈ－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｊ－ＮＨ－、（Ｌｙｓ－ＮＨ２）－、ＨＯ－（Ｃ（Ｏ）－ＣＲ１Ｒ２－ＮＨ）ｄ－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ－、Ｈ－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｊ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ－、Ｈ－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｊ－ＮＨ－（Ｃ（Ｏ）－ＣＲ１Ｒ２－ＮＨ）ｄ－、Ｈ－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｊ－ＮＨ－（Ｃ（Ｏ）－ＣＲ１Ｒ２－ＮＨ）ｄＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ－、（Ｌｙｓ－ＯＨ）－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ１－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｊ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ２－、ＨＯ－（Ｃ（Ｏ）－ＣＲ１Ｒ２－ＮＨ）ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－、及びＨＯ－（Ｃ（Ｏ）－ＣＲ１Ｒ２－ＮＨ）ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ１－から選ばれる。
【0073】
１つの実施形態において、Ｂ１は、ＨＯ－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ－、ＨＯ－（Ｃ（Ｏ）－ＣＲ１Ｒ２－ＮＨ）ｄ－、Ｈ－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｊ－ＮＨ－、（Ｌｙｓ－ＮＨ２）－、ＨＯ－（Ｃ（Ｏ）－ＣＲ１Ｒ２－ＮＨ）ｄ－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ－、Ｈ－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｊ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ－、Ｈ－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｊ－ＮＨ－（Ｃ（Ｏ）－ＣＲ１Ｒ２－ＮＨ）ｄ－、（Ｌｙｓ－ＯＨ）－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ１－（Ｏ－Ｃ２Ｈ４）ｊ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ２－、ＨＯ－（Ｃ（Ｏ）－ＣＲ１Ｒ２－ＮＨ）ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－、及びＨＯ－（Ｃ（Ｏ）－ＣＲ１Ｒ２－ＮＨ）ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｋ１－から選ばれる。
【0074】
１つの実施形態において、Ｒ１及びＲ２は両方とも水素又は両方とも－Ｃ１－６アルキルであり、好ましくは両方とも水素又は両方とも－Ｃ１－３アルキルであり、より好ましくは両方とも水素又は両方とも－Ｃ１－２アルキルであり、特に両方とも水素又は両方ともメチル基である。１つの実施形態において、Ｒ３は水素又は－Ｃ１－６アルキルであり、好ましくは水素又は－Ｃ１－２アルキルであり、特に水素である。
【0075】
Ａ及びＬｍ
１つの実施形態において、式（Ｉ’）におけるＡ１及びＡ２はそれぞれ独立して、アミノ化合物、チオール化合物、ピリジルジチオール化合物及びイソシアネートから選ばれる反応性基から得られた残基である。別の実施形態において、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立して、アミノ基、チオール基、ピリジルジチオ基、及びイソシアネート基から選ばれる反応性基を介してＬｍ１又はＬｍ２にコンジュゲートされた部分である。特定の実施形態において、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立して、任意に誘導体化されたアミノ酸、好ましくは任意に誘導体化されたシステイン又はリジンから選ばれる。
１つの実施形態において、式（Ｉ’）におけるＡ１及びＡ２はそれぞれ独立して、アミノ化合物、チオール化合物、ピリジルジチオール化合物及びイソシアネートから選ばれる反応性基から得られた残基である。別の実施形態において、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立して、アミノ基、チオール基、ピリジルジチオ基、及びイソシアネート基から選ばれる反応性基を介してＬｍ１又はＬｍ２にコンジュゲートされた部分である。特定の実施形態において、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立して、任意に誘導体化されたアミノ酸、好ましくは任意に誘導体化されたシステイン又はリジンから選ばれる。
【0076】
別の特定の実施形態において、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立して、任意に誘導体化されたシステインから選ばれる。好ましい実施形態において、システインの誘導体化は、１）カルボキシル基のアミド化であって、得られたアミドＮＨ２がＣ１－６アルキル基によって任意に置換される前記アミド化と、２）アミノ基のアシル化と、３）１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメント又は１～１０個のヌクレオチドを含むヌクレオチドフラグメントへのカルボキシル基及び／又はアミノ基の連結であって、該アミノ酸フラグメントはＧｌｙが好ましい前記連結と、から選ばれる。特定の実施形態において、システインの誘導体化とは、システインのカルボキシル基のアミド化又はグリシンへの連結を指す。
【0077】
１つの実施形態において、Ａ２は
であり、ここでｘは、水素、ＯＨ、ＮＨ２、１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメント、及び１～１０個のヌクレオチドを含むヌクレオチドフラグメントから選ばれ、好ましくはＮＨ２である。１つの実施形態において、Ａ１は
であり、ここでｘは、水素、１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメント、及び１～１０個のヌクレオチドを含むヌクレオチドフラグメントから選ばれ、好ましくはＮＨ２である。１つの実施形態において、アミノ基のアシル化とは、システインのアミノ基のＣ１－６アルキルカルボニル基との置換を指す。
【化6】
【化7】
【0078】
１つの実施形態において、Ａ部分とＬｍ部分との連結は、システイン構造におけるチオール基がＬｍに含まれるマレイミド基と反応し、チオスクシンイミド構造を生成するように、形成されてもよい。
【0079】
特定の実施形態において、システイン構造におけるチオール基はマイケル付加によって前記マレイミド基に接続される。
【0080】
チオスクシンイミドは生理学的条件下で不安定であり、コンジュゲーション部位での切断を引き起こすようにマイケル付加を逆転させる傾向にある。また、系内に別のチオール化合物が存在する場合、チオスクシンイミドは他のチオール化合物とチオール交換する可能性もある。両方の反応ともペイロードの減少を引き起こし、有毒な副作用をもたらす。本開示において、スクシンイミドの開環はマイケル付加のステップ後に開環反応によって行う。開環後、スクシンイミドは逆マイケル付加又はチオール交換を行わなくなるため、生成物はより安定する。開環反応の方法はＷＯ２０１５１６５４１３Ａ１を参照すればよい。
【0081】
式（Ｉ’）の開環化合物は、スクシンイミド開環反応の効率に関わらず、セミ分取／分取ＨＰＬＣ又は他の適切な分離手段によって精製して高い純度及び規定の組成を有するペイロード担持式（Ｉ’）化合物を得ることができる。
【0082】
１つの実施形態において、Ｌｍ１及びＬｍ２はそれぞれ独立して
の混合物である。１つの実施形態において、Ｌｍ１は
又はそれらの混合物である。１つの実施形態において、Ｌｍ２は
又はそれらの混合物である。
【化8】
【化9】
【化10】
【0083】
式（Ｉ’）化合物の具体的実施形態
１、Ａ及びＬｍが存在する式（Ｉ’）化合物
ｐが１、Ｄ１がＧｎ、Ｇがグリシン、Ａ２がチオール基とＬｍ２の反応後に
である式（Ｉ’－１）の連結ユニット、及び式（Ｉ’－１）の化合物の構造は下記式（Ｉ’－１－１）に示すとおりであり、
式中、ｎは３～１０の整数であり、Ｌｍ２は
又はそれらの混合物であり、
ｘは、水素、ＯＨ、ＮＨ２、１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメント、１～１０個のヌクレオチドを含むヌクレオチドフラグメントから選ばれ、
Ｙ、Ｌｋ及びＷはそれぞれ式（Ｉ’）に定義したとおりである。
１、Ａ及びＬｍが存在する式（Ｉ’）化合物
ｐが１、Ｄ１がＧｎ、Ｇがグリシン、Ａ２がチオール基とＬｍ２の反応後に
【化11】
【化12】
【化13】
ｘは、水素、ＯＨ、ＮＨ２、１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメント、１～１０個のヌクレオチドを含むヌクレオチドフラグメントから選ばれ、
Ｙ、Ｌｋ及びＷはそれぞれ式（Ｉ’）に定義したとおりである。
【0084】
好ましい実施形態において、式（Ｉ’－１－１）中、ｘは、ＯＨ、ＮＨ２及びＧｌｙから選ばれ、特にＮＨ２である。
【0085】
特定の実施形態において、式（Ｉ’－１－１）中、ａは０であり、ｂは０であり、ｎ＝３であり、ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３であり、Ｌ１は－ＮＨ－であり、Ｌ３は－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｌ２は－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｉ－Ｃ２Ｈ４－であり、ｉ＝４であり、ｘはＮＨ２であり、連結ユニットの構造は以下のとおりである（連結ユニットＬＮ１０２）。
【0086】
【化14】
【0087】
１つの実施形態において、連結ユニットＬＮ１０２中、Ｂ２は下記表から選ばれる。
【0088】
【表1】
【0089】
１つの実施形態において、連結ユニットＬＮ１０２中、Ｂ２は下記表から選ばれる。
【0090】
【表2】
【0091】
１つの実施形態において、連結ユニットＬＮ１０２中、Ｌｍ２は
又はそれらの混合物であり、Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｒ７であり、ｋは２であり、連結ユニットの構造は以下の２つの構造の混合物である（連結ユニットＬＮ１０２－１）。
【化15】
【0092】
【化16】
【0093】
１つの実施形態において、連結ユニットＬＮ１０２中、Ｌｍ２は
又はそれらの混合物であり、Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｒ７であり、ｋは５であり、連結ユニットの構造は以下の２つの構造の混合物である（連結ユニットＬＮ１０２－２）。
【化17】
【0094】
【化18】
【0095】
１つの実施形態において、連結ユニットＬＮ１０２中、Ｌｍ２は
又はそれらの混合物であり、Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣであり、ｋは５であり、連結ユニットの構造は以下の２つの構造の混合物である（連結ユニットＬＮ１０２－３）。
【化19】
【0096】
【化20】
【0097】
１つの実施形態において、連結ユニットＬＮ１０２中、Ｌｍ２は
又はそれらの混合物であり、Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－Ｒ７であり、ｋは５であり、ｄは１であり、Ｒ１及びＲ２は水素であり、連結ユニットの構造は以下の２つの構造の混合物である（連結ユニットＬＮ１０２－４）。
【化21】
【0098】
【化22】
【0099】
１つの実施形態において、連結ユニットＬＮ１０２中、Ｌｍ２は
又はそれらの混合物であり、Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－Ｈであり、ｋは２であり、ｊは１であり、連結ユニットの構造は以下の２つの構造の混合物である（連結ユニットＬＮ１０２－６）。
【化23】
【0100】
【化24】
【0101】
１つの実施形態において、連結ユニットＬＮ１０２中、Ｌｍ２は
又はそれらの混合物であり、Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－Ｈであり、ｋは２であり、ｄは１であり、ｊは１であり、Ｒ１及びＲ２はメチル基であり、連結ユニットの構造は以下の２つの構造の混合物である（連結ユニットＬＮ１０２－７）。
【化25】
【0102】
【化26】
【0103】
１つの実施形態において、連結ユニットＬＮ１０２中、Ｌｍ２は
又はそれらの混合物であり、Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－であり、ｋは２であり、ｄは１であり、Ｒ１及びＲ２は水素であり、連結ユニットの構造は以下の２つの構造の混合物である（連結ユニットＬＮ１０２－８）。
【化27】
【0104】
【化28】
【0105】
１つの実施形態において、連結ユニットＬＮ１０２中、Ｌｍ２は
又はそれらの混合物であり、Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－Ｒ７であり、ｋは２であり、ｄは２であり、Ｒ１及びＲ２はメチル基であり、Ｒ１’及びＲ２’は水素であり、連結ユニットの構造は以下の２つの構造の混合物である（連結ユニットＬＮ１０２－１１）。
【化29】
【0106】
【化30】
【0107】
特定の実施形態において、式（Ｉ’－１－１）中、ａは０であり、ｂは０であり、ｎ＝３であり、Ｂ２は－Ｃｙｓ－ＮＨ２であり、連結ユニットの構造は以下のとおりである（連結ユニットＬＮ１０５）。
【0108】
【化31】
【0109】
特定の実施形態において、式（Ｉ’－１－１）中、ａは０であり、ｂは０であり、ｎ＝３であり、ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３であり、Ｌ１は－ＮＨ－であり、Ｌ３は－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｌ２は－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｉ－Ｃ２Ｈ４－であり、ｉ＝４であり、ｘはＯＨであり、連結ユニットの構造は以下のとおりである（連結ユニットＬＮ１０６）。
【0110】
【化32】
【0111】
特定の実施形態において、式（Ｉ’－１－１）中、ａは１であり、ｂは０であり、ＹはＬであり、Ｌはロイシン（Ｌｅｕ）であり、ｎ＝３であり、ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３であり、Ｌ１は－ＮＨ－であり、Ｌ３は－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｌ２は－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｉ－Ｃ２Ｈ４－であり、ｉ＝４であり、ｘはＮＨ２であり、連結ユニットの構造は以下のとおりである（連結ユニットＬＮ１０７）。
【0112】
【化33】
【0113】
さらに別の特定の実施形態において、式（Ｉ’－１－１）中、ａは１であり、ｂは０であり、ＹはＱであり、Ｑはグルタミン（Ｇｌｎ）であり、ｎ＝３であり、ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３であり、Ｌ１は－ＮＨ－であり、Ｌ３は－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｌ２は－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｉ－Ｃ２Ｈ４－であり、ｉ＝４であり、ｘはＮＨ２であり、連結ユニットの構造は以下のとおりである（連結ユニットＬＮ１０８）。
【0114】
【化34】
【0115】
特定の実施形態において、式（Ｉ’－１－１）中、ａは０であり、ｂは０であり、ｎ＝３であり、ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３であり、Ｌ１は－ＮＨ－であり、Ｌ３は－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｌ２は－Ｃ５Ｈ１０－であり、連結ユニットの構造は以下のとおりである（連結ユニットＬＮ１０９）。
【0116】
【化35】
【0117】
さらに別の特定の実施形態において、式（Ｉ’－１－１）中、ａは０であり、ｂは０であり、ｎ＝３であり、ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３であり、Ｌ１は－ＮＨ－であり、Ｌ３は－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｌ２は１つの－ＮＲ１Ｒ２基で置換された－Ｃ５Ｈ１０－基であり、Ｒ１は水素であり、Ｒ２は－Ｃ（Ｏ）ＣＨ３であり、ｘはＮＨ２であり、連結ユニットの構造は以下のとおりである（連結ユニットＬＮ１１０）。
【0118】
【化36】
【0119】
Ｄ２がＬＰＸＴＧ、Ａ１がチオール基とＬｍ２の反応後に
の場合の式（Ｉ’－２）の連結ユニット、及び式（Ｉ’－２）の化合物の構造は下記式（Ｉ’－２－１）に示すとおりであり、
式中、ｘは、水素、１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメント、１～１０個のヌクレオチドを含むヌクレオチドフラグメントから選ばれ、Ｌｍ１は
又はそれらの混合物であり、
Ｙ、Ｌｋ及びＷはそれぞれ式（Ｉ’）に定義したとおりである。
【化37】
【化38】
【化39】
Ｙ、Ｌｋ及びＷはそれぞれ式（Ｉ’）に定義したとおりである。
【0120】
１つの実施形態において、ｘは水素である。
【0121】
２、Ａ及びＬｍが存在しない式（Ｉ’）化合物
【0122】
ｐが０、Ｄ１がＧｎ、Ｇがグリシンである式（Ｉ’－１）の連結ユニット、及び式（Ｉ’－１）の化合物の構造は下記式（Ｉ’－１－２）に示すとおりであり、
式中、ｎは３～１０の整数であり、
Ｙ、Ｌｋ、Ｗ、ａ及びｂはそれぞれ式（Ｉ’）に定義したとおりである。
【化40】
Ｙ、Ｌｋ、Ｗ、ａ及びｂはそれぞれ式（Ｉ’）に定義したとおりである。
【0123】
１つの実施形態において、式（Ｉ’－１－２）中、ａは０であり、ｂは０であり、ｎ＝３であり、Ｂ２は－（Ｌｙｓ－ＮＨ２）であり、連結ユニットの構造は以下のとおりである（連結ユニットＬＮ２０１）。
【0124】
【化41】
【0125】
１つの実施形態において、式（Ｉ’）の化合物は図１に示す化合物の１つである。
【0126】
連結ユニットとしての式（Ｉ’）の化合物
１つの実施形態において、Ｂ１又はＢ２に含まれる反応性基は、式（Ｉ’）の化合物がペイロードを担持するように、別の反応性基を含有するペイロードと共有結合的にコンジュゲートするために用いることができる。
１つの実施形態において、Ｂ１又はＢ２に含まれる反応性基は、式（Ｉ’）の化合物がペイロードを担持するように、別の反応性基を含有するペイロードと共有結合的にコンジュゲートするために用いることができる。
【0127】
別の実施形態において、Ｄ１又はＤ２に含まれるリガーゼ認識配列は、対応するリガーゼ認識配列とのリガーゼによるコンジュゲーションに用いることができる。その結果、式（Ｉ’）の化合物は、リガーゼ認識配列を含む分子に連結することができ、ここで、前記分子に含まれるリガーゼ認識配列は、Ｄ１又はＤ２に含まれるリガーゼ認識配列に対応するリガーゼ供与体／受容体基質認識配列である。
【0128】
１つの実施形態において、該分子はリガーゼ供与体基質の認識配列を含み、それに応じて、Ｄ１又はＤ２は独立してリガーゼ受容体基質の認識配列である。別の実施形態において、該分子はリガーゼ受容体基質の認識配列を含み、それに応じて、Ｄ１又はＤ２は独立してリガーゼ供与体基質の認識配列である。
【0129】
したがって、式（Ｉ’）の化合物は、標的化分子（例えば抗体又はその抗原結合フラグメント）及び／又はペイロードに連結可能な連結ユニットとして使用することができる。該連結ユニットは連結ユニットと標的化分子のコンジュゲーション用のリガーゼ認識配列を含有してもよい。該連結ユニットは、さらに、ペイロードとの共有コンジュゲーション用の反応性基を含有してもよい。
【0130】
コンジュゲートすべき標的化分子の末端修飾のタイプに応じて、連結ユニットに含まれるリガーゼ認識配列は、リガーゼ受容体基質の認識配列又はリガーゼ供与体基質の認識配列である。認識配列は採用されるリガーゼに対応する。
【0131】
コンジュゲートすべきペイロードの反応性基のタイプに応じて、連結ユニットに含まれる反応性基は、縮合反応が進行可能なタイプに属する。
【0132】
連結ユニットはそれで形成された薬物コンジュゲートの特性に影響し得る。例えば、連結ユニットは適切な親水性を提供するために任意に用いることができ、ペイロードの適切な放出プロファイルを達成するように切断部位を任意に含有することができる。
【0133】
代替的な実施形態において、連結ユニットは、それぞれ独立して任意の適切な位置にある１つ又は複数の非酵素切断部位をさらに含む。１つの実施形態において、該非酵素切断部位はｐＨに敏感なヒドラゾンであってもよい。別の実施形態において、該非酵素切断部位は還元剤に敏感なジスルフィド結合である。別の代替的な実施形態において、連結ユニットは、それぞれ独立してＹ及びＷ以外の任意の適切な位置にある１つ又は複数の酵素切断部位をさらに含む。１つの実施形態において、該酵素切断部位は、プロテアーゼに敏感なオリゴマーペプチド、カテプシン切断部位、グルタミナーゼ切断部位、及びそれらの組合せから選ばれる。
【0134】
さらに別の代替的な実施形態において、標的化分子－薬物コンジュゲートのＤＡＲを向上させるために、連結ユニットは分枝構造フラグメントをさらに含んでもよい。この分枝構造の骨格は特定の連結パターンに従って多機能分子で形成され、分枝の数及び構造は、所望の数のペイロードに対応して作ってもよい。分枝の各々は上述した線形連結ユニットの構造を含んでもよい。
【0135】
当業者であれば、従来の固相法又は液相法によって連結ユニットを合成することができる。
【0136】
ペイロード担持式（Ｉ’）化合物
Ｂ１又はＢ２に含まれる反応性基は、別の反応性基を含有するペイロードと共有結合的にコンジュゲートされてペイロード担持式（Ｉ’）化合物を提供する。
Ｂ１又はＢ２に含まれる反応性基は、別の反応性基を含有するペイロードと共有結合的にコンジュゲートされてペイロード担持式（Ｉ’）化合物を提供する。
【0137】
さらに別の態様において、式（ＩＩ’）（式（ＩＩ’－１）又は式（ＩＩ’－２））の構造を有する化合物であって、
（式（Ｉ’）の化合物）―ＰＬｔ （ＩＩ’－１）
ＰＬｔ―（式（Ｉ’）の化合物） 化合物（ＩＩ’－２）
式中、
ＰＬは式（Ｉ’）の化合物のＢ１又はＢ２部分に連結されたペイロードであり、
ｔは１～２０の整数である、前記化合物を提供する。
ｔは式（Ｉ’）の化合物に連結されたＰＬ（ｓ）の数を表す。
（式（Ｉ’）の化合物）―ＰＬｔ （ＩＩ’－１）
ＰＬｔ―（式（Ｉ’）の化合物） 化合物（ＩＩ’－２）
式中、
ＰＬは式（Ｉ’）の化合物のＢ１又はＢ２部分に連結されたペイロードであり、
ｔは１～２０の整数である、前記化合物を提供する。
ｔは式（Ｉ’）の化合物に連結されたＰＬ（ｓ）の数を表す。
【0138】
１つの実施形態において、ｔは１～１０の整数であり、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である。
【0139】
１つの実施形態において、ｔは１であり、式（ＩＩ’－１）及び（ＩＩ’－２）の化合物はそれぞれ下記式（ＩＩ’－１－１）又は式（ＩＩ’－２－１）の構造を有し、
Ｄ１―Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ ―Ａ２ｐ―Ｌｍ２ｐ―Ｂ２―ＰＬ （ＩＩ’－１－１）
ＰＬ―Ｂ１―Ｌｍ１ｐ―Ａ１ｐ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ―Ｄ２ （ＩＩ’－２－１）
式中、Ａ１、Ａ２、Ｌｍ１、Ｌｍ２、Ｂ１、Ｂ２、Ｄ１、Ｄ２、Ｙ、Ｌｋ、Ｗ、ａ、ｂ及びｐはそれぞれ上記で定義したとおりである。
Ｄ１―Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ ―Ａ２ｐ―Ｌｍ２ｐ―Ｂ２―ＰＬ （ＩＩ’－１－１）
ＰＬ―Ｂ１―Ｌｍ１ｐ―Ａ１ｐ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ―Ｄ２ （ＩＩ’－２－１）
式中、Ａ１、Ａ２、Ｌｍ１、Ｌｍ２、Ｂ１、Ｂ２、Ｄ１、Ｄ２、Ｙ、Ｌｋ、Ｗ、ａ、ｂ及びｐはそれぞれ上記で定義したとおりである。
【0140】
別の実施形態において、ｔは２～２０であり、式（ＩＩ’）の化合物の構造は下記式（ＩＩ’－３）～式（ＩＩ’－６）のいずれかに示すとおりであり、
Ｄ１―Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―Ａ２ｐ―Ｌｍ２ｐ―（Ｂ２―ＰＬ）ｔ （ＩＩ’－１－２）
Ｄ１―Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―（Ａ２ｐ―Ｌｍ２ｐ―Ｂ２―ＰＬ）ｔ （ＩＩ’－１－３）
Ｄ１―（Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―Ａ２ｐ―Ｌｍ２ｐ―Ｂ２―ＰＬ）ｔ （ＩＩ’－１－４）
（ＰＬ―Ｂ１）ｔ―Ｌｍ１ｐ―Ａ１ｐ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ―Ｄ２ （ＩＩ’－２－２）
（ＰＬ―Ｂ１―Ｌｍ１ｐ―Ａ１ｐ）ｔ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ―Ｄ２ （ＩＩ’－２－３）
（ＰＬ―Ｂ１―Ｌｍ１ｐ―Ａ１ｐ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ）ｔ―Ｄ２ （ＩＩ’－２－４）
式中、Ａ１、Ａ２、Ｌｍ１、Ｌｍ２、Ｂ１、Ｂ２、Ｄ１、Ｄ２、Ｙ、Ｌｋ、Ｗ、ａ、ｂ及びｐはそれぞれ式（ＩＩ’－１）又は式（ＩＩ’－２）で定義したとおりである。
Ｄ１―Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―Ａ２ｐ―Ｌｍ２ｐ―（Ｂ２―ＰＬ）ｔ （ＩＩ’－１－２）
Ｄ１―Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―（Ａ２ｐ―Ｌｍ２ｐ―Ｂ２―ＰＬ）ｔ （ＩＩ’－１－３）
Ｄ１―（Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―Ａ２ｐ―Ｌｍ２ｐ―Ｂ２―ＰＬ）ｔ （ＩＩ’－１－４）
（ＰＬ―Ｂ１）ｔ―Ｌｍ１ｐ―Ａ１ｐ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ―Ｄ２ （ＩＩ’－２－２）
（ＰＬ―Ｂ１―Ｌｍ１ｐ―Ａ１ｐ）ｔ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ―Ｄ２ （ＩＩ’－２－３）
（ＰＬ―Ｂ１―Ｌｍ１ｐ―Ａ１ｐ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ）ｔ―Ｄ２ （ＩＩ’－２－４）
式中、Ａ１、Ａ２、Ｌｍ１、Ｌｍ２、Ｂ１、Ｂ２、Ｄ１、Ｄ２、Ｙ、Ｌｋ、Ｗ、ａ、ｂ及びｐはそれぞれ式（ＩＩ’－１）又は式（ＩＩ’－２）で定義したとおりである。
【0141】
ペイロード
本開示において、ペイロードは、小分子化合物、核酸及びその類似体、トレーサー分子（蛍光分子等を含む）、短ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣体、及びタンパク質から選ばれてもよい。１つの実施形態において、ペイロードは、小分子化合物、核酸分子、及びトレーサー分子から選ばれる。好ましい実施形態において、ペイロードは、小分子化合物から選ばれる。より好ましい実施形態において、ペイロードは、細胞毒及びそのフラグメントから選ばれる。より好ましい実施形態において、ペイロードは、免疫アゴニスト及びそのフラグメントから選ばれる。
本開示において、ペイロードは、小分子化合物、核酸及びその類似体、トレーサー分子（蛍光分子等を含む）、短ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣体、及びタンパク質から選ばれてもよい。１つの実施形態において、ペイロードは、小分子化合物、核酸分子、及びトレーサー分子から選ばれる。好ましい実施形態において、ペイロードは、小分子化合物から選ばれる。より好ましい実施形態において、ペイロードは、細胞毒及びそのフラグメントから選ばれる。より好ましい実施形態において、ペイロードは、免疫アゴニスト及びそのフラグメントから選ばれる。
【0142】
１つの実施形態において、免疫アゴニストは、ＴＬＲアゴニスト及びＳＴＩＮＧアゴニストから選ばれ、好ましくはＴＬＲアゴニスト（例えば、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、ＴＬＲ７／８アゴニスト）等のＴＬＲアゴニスト及びＳＴＩＮＧアゴニストである。１つの実施形態において、免疫アゴニストは、ＴＬＲアゴニストから選ばれる。
【0143】
１つの実施形態において、免疫アゴニストは、イミダゾキノリン類から選ばれる。１つの実施形態において、免疫アゴニストは式ｉの構造を有し、
式中、
各Ｒ９は独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１－７アルキル－ＯＣ（Ｏ）－Ｃ１－７アルキル、Ｃ１－７アルキル－ＯＣ（Ｏ）－Ｃ２－７アルケニル及び５～７員複素環から選ばれ、
Ｒ１０及びＲ１１はそれぞれ独立して、水素及びＣ１－７アルキル基から選ばれ、
Ｒ１２は、Ｃ１－７アルキル基及びＣ１－７アルコキシ－Ｃ１－７アルキルから選ばれ、
Ｒ１３は、－ＯＨ及び－ＮＨ２から選ばれる置換基によって任意に置換されるＣ１－７アルキルから選ばれ、
ｕは１、２、３又は４である。
【化42】
各Ｒ９は独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１－７アルキル－ＯＣ（Ｏ）－Ｃ１－７アルキル、Ｃ１－７アルキル－ＯＣ（Ｏ）－Ｃ２－７アルケニル及び５～７員複素環から選ばれ、
Ｒ１０及びＲ１１はそれぞれ独立して、水素及びＣ１－７アルキル基から選ばれ、
Ｒ１２は、Ｃ１－７アルキル基及びＣ１－７アルコキシ－Ｃ１－７アルキルから選ばれ、
Ｒ１３は、－ＯＨ及び－ＮＨ２から選ばれる置換基によって任意に置換されるＣ１－７アルキルから選ばれ、
ｕは１、２、３又は４である。
【0144】
１つの実施形態において、免疫アゴニストは、化合物ｉ－１～ｉ－５から選ばれる。
【化43】
【0145】
１つの実施形態において、免疫アゴニストは、９Ｈ－プリンから選ばれる。１つの実施形態において、免疫アゴニストは式ｉｉの構造を有し、
式中、
Ｌ４は、－ＣＨ２－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－から選ばれ、
Ｒ１４は、Ｃ１－７アルキル基、Ｃ１－７アルコキシ基及びＣ１－７アルキル－ＯＣ（Ｏ）－Ｃ１－７アルキルから選ばれ、
Ｒ１５及びＲ１６はそれぞれ独立して、水素及びＣ１－７アルキルから選ばれ、
Ｒ１７は、－ＮＨ２、－ＯＨ、Ｃ１－７アルキル基、Ｃ１－７アルコキシ基及び－ＮＨ－Ｃ１－７アルキルから選ばれ、
Ｒ１８は、－ＣＨ２－アリール、及び－ＣＨ２－ヘテロアリールから選ばれ、該アリール基及び該ヘテロアリール基はそれぞれ独立して、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ又は
から選ばれる置換基によって任意に置換される。
【化44】
Ｌ４は、－ＣＨ２－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｃ（Ｏ）－から選ばれ、
Ｒ１４は、Ｃ１－７アルキル基、Ｃ１－７アルコキシ基及びＣ１－７アルキル－ＯＣ（Ｏ）－Ｃ１－７アルキルから選ばれ、
Ｒ１５及びＲ１６はそれぞれ独立して、水素及びＣ１－７アルキルから選ばれ、
Ｒ１７は、－ＮＨ２、－ＯＨ、Ｃ１－７アルキル基、Ｃ１－７アルコキシ基及び－ＮＨ－Ｃ１－７アルキルから選ばれ、
Ｒ１８は、－ＣＨ２－アリール、及び－ＣＨ２－ヘテロアリールから選ばれ、該アリール基及び該ヘテロアリール基はそれぞれ独立して、－Ｃ（Ｏ）ＯＨ又は
【化45】
【0146】
１つの実施形態において、免疫アゴニストは、化合物ｉｉ－１及びｉｉ－２から選ばれる。
【化46】
【0147】
１つの実施形態において、免疫アゴニストは、５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］ピリミジンから選ばれる。１つの実施形態において、免疫アゴニストは式ｉｉｉの構造を有し、
式中、
Ｒ１９は、－ＯＨ、－ＮＨ２、Ｃ１－７アルキル基、Ｃ１－７アルコキシ基及び－ＮＨ－Ｃ１－７アルキルから選ばれ、
Ｒ２０は、－ＣＨ２－アリールから選ばれ、該アリール基は、－ＯＨ、Ｃ１－７アルコキシ及び－Ｃ１－７アルキル－ピペリジニルから選ばれる２つの置換基によって任意に置換される。
【化47】
Ｒ１９は、－ＯＨ、－ＮＨ２、Ｃ１－７アルキル基、Ｃ１－７アルコキシ基及び－ＮＨ－Ｃ１－７アルキルから選ばれ、
Ｒ２０は、－ＣＨ２－アリールから選ばれ、該アリール基は、－ＯＨ、Ｃ１－７アルコキシ及び－Ｃ１－７アルキル－ピペリジニルから選ばれる２つの置換基によって任意に置換される。
【0148】
１つの実施形態において、免疫アゴニストは化合物ｉｉｉ－１である。
【化48】
【0149】
１つの実施形態において、免疫アゴニストは、３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピンから選ばれる。１つの実施形態において、免疫アゴニストは式ｉｖの構造を有し、
式中、
Ｌ５は、－ＣＨ２－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）－及び－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－から選ばれ、
Ｒ２１は、
から選ばれ、Ｂはヘテロアリール環であり、
Ｒ２２は、水素及びＣ１－７アルキル基から選ばれ、
Ｒ２３及びＲ２４はそれぞれ独立して、水素及びＣ１－７アルキル基から選ばれ、
Ｌ６は、－ＣＨ２－及び－Ｃ（Ｏ）－から選ばれ、
Ｒ２５は、－Ｎ（Ｃ１－７アルキル）（Ｃ１－７アルキル）から選ばれ、
Ｒ２６、Ｒ２７及びＲ２８はそれぞれ独立して、水素及びＣ１－７アルキル基から選ばれ、
ｖは１、２又は３である。
【化49】
Ｌ５は、－ＣＨ２－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）－及び－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－から選ばれ、
Ｒ２１は、
【化50】
Ｒ２２は、水素及びＣ１－７アルキル基から選ばれ、
Ｒ２３及びＲ２４はそれぞれ独立して、水素及びＣ１－７アルキル基から選ばれ、
Ｌ６は、－ＣＨ２－及び－Ｃ（Ｏ）－から選ばれ、
Ｒ２５は、－Ｎ（Ｃ１－７アルキル）（Ｃ１－７アルキル）から選ばれ、
Ｒ２６、Ｒ２７及びＲ２８はそれぞれ独立して、水素及びＣ１－７アルキル基から選ばれ、
ｖは１、２又は３である。
【0150】
１つの実施形態において、免疫アゴニストは化合物ｉｖ－１である。
【化51】
【0151】
ペイロード担持式（Ｉ’）化合物の調製
１つの実施形態において、連結ユニットとペイロードは、縮合反応、求核付加、求電子付加等を含むがそれらに限定されない本分野で知られている任意の反応によって、上記で定義した反応性基を介して接続される。
１つの実施形態において、連結ユニットとペイロードは、縮合反応、求核付加、求電子付加等を含むがそれらに限定されない本分野で知られている任意の反応によって、上記で定義した反応性基を介して接続される。
【0152】
【0153】
【表3】
【0154】
式（ＩＩＩ’）の化合物
一態様において、式（ＩＩＩ’）（式（ＩＩＩ’－１）又は式（ＩＩＩ’－２））の化合物であって、
式中、Ｂ１及びＢ２は式（Ｉ’）に定義したとおりである、前記化合物を提供する。
一態様において、式（ＩＩＩ’）（式（ＩＩＩ’－１）又は式（ＩＩＩ’－２））の化合物であって、
【化52】
【0155】
１つの実施形態において、式（ＩＩＩ’）の化合物は、下記ルートによってペイロード担持式（Ｉ’）化合物を調製するために用いることができる。
【0156】
【化53】
【0157】
ペイロード担持式（ＩＩＩ’）化合物からペイロード担持式（Ｉ’）化合物への変換は、本分野の任意の知られている方法で、又は本明細書で説明したように、行うことができる。例えば、単一ステップ又は複数ステップ合成を行って構造フラグメント「Ｄ１―Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―Ａ２ｐ」又は「Ａ１ｐ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ―Ｄ２」をペイロード担持式（ＩＩＩ’）化合物中のマレイミド環に導入することができ、そして得られたスクシンイミド部分を含有する分子は、開環反応を行ってスクシンイミド環を開け、ペイロード担持式（Ｉ’）化合物（即ち、式（ＩＩ’）化合物）を得ることができる。１つの実施形態において、「Ｄ１―Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―Ａ２ｐ」又は「Ａ１ｐ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ―Ｄ２」は、式（ＩＩＩ’）化合物に含有されるマレイミド基とチオール基又はアミノ基の反応によってペイロード担持式（ＩＩＩ’）化合物に導入され、該チオール基又はアミノ基は「Ｄ１―Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―Ａ２ｐ」又は「Ａ１ｐ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ―Ｄ２」の構築ブロックの一部である。１つの実施形態において、該チオール基は任意に誘導体化されたシスチンに含有される。１つの実施形態において、該アミノ基は任意に誘導体化されたリジンに含有される。
【0158】
１つの実施形態において、式（ＩＩＩ’）の化合物は図３に示す化合物の１つである。
【0159】
コンジュゲート及びその調製
さらに、リガーゼ認識配列を含む部分を有するペイロード担持式（Ｉ’）化合物は、リガーゼ認識配列を含む別の分子とコンジュゲートすることができるため、例えば、抗体薬物コンジュゲート等の標的化分子－薬物コンジュゲートの調製に用いることができる。それに応じて、さらに別の態様において、式（Ｉ’）の化合物と、標的化分子と、ペイロードとを含むコンジュゲートを提供する。
さらに、リガーゼ認識配列を含む部分を有するペイロード担持式（Ｉ’）化合物は、リガーゼ認識配列を含む別の分子とコンジュゲートすることができるため、例えば、抗体薬物コンジュゲート等の標的化分子－薬物コンジュゲートの調製に用いることができる。それに応じて、さらに別の態様において、式（Ｉ’）の化合物と、標的化分子と、ペイロードとを含むコンジュゲートを提供する。
【0160】
コンジュゲートの具体的な組成
さらに別の態様において、式（ＩＶ’）（式（ＩＶ’－１）又は式（ＩＶ’－２））の構造を有するコンジュゲートであって、
Ａ―（（式（Ｉ’）の化合物）―ＰＬｔ）ｚ （ＩＶ’－１）
（（式（Ｉ’）の化合物）―ＰＬｔ）ｚ―Ａ （ＩＶ’－２）
式中、
ＰＬは式（Ｉ’）の化合物のＡ１又はＡ２部分に連結されたペイロードであり、
Ａは式（Ｉ’）の化合物のＤ１又はＤ２部分に連結された標的化分子であり、
ｚは１～２０の整数であり、
ｔは１～２０の整数である、前記コンジュゲートを提供する。
ｔは式（Ｉ’）の化合物に連結されたＰＬ（ｓ）の数を表す。
さらに別の態様において、式（ＩＶ’）（式（ＩＶ’－１）又は式（ＩＶ’－２））の構造を有するコンジュゲートであって、
Ａ―（（式（Ｉ’）の化合物）―ＰＬｔ）ｚ （ＩＶ’－１）
（（式（Ｉ’）の化合物）―ＰＬｔ）ｚ―Ａ （ＩＶ’－２）
式中、
ＰＬは式（Ｉ’）の化合物のＡ１又はＡ２部分に連結されたペイロードであり、
Ａは式（Ｉ’）の化合物のＤ１又はＤ２部分に連結された標的化分子であり、
ｚは１～２０の整数であり、
ｔは１～２０の整数である、前記コンジュゲートを提供する。
ｔは式（Ｉ’）の化合物に連結されたＰＬ（ｓ）の数を表す。
【0161】
１つの実施形態において、ペイロードは、上記で定義した免疫アゴニストである。１つの実施形態において、コンジュゲートは抗体－免疫アゴニストコンジュゲートである。
【0162】
１つの実施形態において、式（Ｉ’）の化合物中のＤ１又はＤ２で表されるリガーゼ認識配列は、それとコンジュゲートすべき標的化分子中のリガーゼ認識配列に対応し、それによって標的化分子と式（Ｉ’）の化合物の部位特異的コンジュゲーションは実現される。コンジュゲートすべき標的化分子の末端修飾がリガーゼ供与体基質の認識配列に基づく末端修飾である場合、Ｄ１又はＤ２は独立してリガーゼ受容体基質の認識配列である。あるいは、コンジュゲートすべき標的化分子の末端修飾がリガーゼ受容体基質の認識配列に基づく末端修飾である場合、Ｄ１又はＤ２は独立してリガーゼ供与体基質の認識配列である。
【0163】
１つの実施形態において、ｚは１～１０の整数であり、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である。
【0164】
１つの実施形態において、ｔは１～１０の整数であり、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０である。
【0165】
１つの実施形態において、ｔは１であり、式（ＩＶ’）のコンジュゲートは下記式（ＩＶ’－１－１）又は式（ＩＶ’－２－１）の構造を有し、
Ａ―（Ｄ１―Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―Ａ２ｐ―Ｌｍ２ｐ―Ｂ２―ＰＬ）ｚ （ＩＶ’－１－１）
（ＰＬ―Ｂ１―Ｌｍ１ｐ―Ａ１ｐ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ―Ｄ２）ｚ―Ａ （ＩＶ’－２－１）
式中、ＰＬ、Ａ１、Ａ２、Ｄ１、Ｄ２、Ｙ、Ｗ、Ｌｋ、ａ、ｂ及びｐはそれぞれ上記で定義したとおりである。
Ａ―（Ｄ１―Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―Ａ２ｐ―Ｌｍ２ｐ―Ｂ２―ＰＬ）ｚ （ＩＶ’－１－１）
（ＰＬ―Ｂ１―Ｌｍ１ｐ―Ａ１ｐ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ―Ｄ２）ｚ―Ａ （ＩＶ’－２－１）
式中、ＰＬ、Ａ１、Ａ２、Ｄ１、Ｄ２、Ｙ、Ｗ、Ｌｋ、ａ、ｂ及びｐはそれぞれ上記で定義したとおりである。
【0166】
別の実施形態において、ｔは２～２０であり、式（ＩＶ’）のコンジュゲートは下記式（ＩＶ’－１－２）、（ＩＶ’－１－３）、（ＩＶ’－１－４）、（ＩＶ’－２－２）、（ＩＶ’－２－３）及び（ＩＶ’－２－４）の構造を有し、
Ａ―（Ｄ１―Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―Ａ２ｐ―Ｌｍ２ｐ―（Ｂ２―ＰＬ）ｔ）ｚ （ＩＶ’－１－２）
Ａ―（Ｄ１―Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―（Ａ２ｐ―Ｌｍ２ｐ―Ｂ２―ＰＬ）ｔ）ｚ （ＩＶ’－１－３）
Ａ―（Ｄ１―（Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―Ａ２ｐ―Ｌｍ２ｐ―Ｂ２―ＰＬ）ｔ）ｚ （ＩＶ’－１－４）
（（ＰＬ―Ｂ１）ｔ―Ｌｍ１ｐ―Ａ１ｐ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ―Ｄ２）ｚ―Ａ （ＩＶ’－２－２）
（（ＰＬ―Ｂ１―Ｌｍ１ｐ―Ａ１ｐ）ｔ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ―Ｄ２）ｚ―Ａ （ＩＶ’－２－３）
（（ＰＬ―Ｂ１―Ｌｍ１ｐ―Ａ１ｐ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ）ｔ―Ｄ２）ｚ―Ａ （ＩＶ’－２－４）
式中、ＰＬ、Ａ１、Ａ２、Ｄ１、Ｄ２、Ｙ、Ｗ、Ｌｋ、ａ、ｂ、ｐ及びｚはそれぞれ式（ＩＶ’－１－１）又は式（ＩＶ’－２－１）で定義したとおりである。
Ａ―（Ｄ１―Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―Ａ２ｐ―Ｌｍ２ｐ―（Ｂ２―ＰＬ）ｔ）ｚ （ＩＶ’－１－２）
Ａ―（Ｄ１―Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―（Ａ２ｐ―Ｌｍ２ｐ―Ｂ２―ＰＬ）ｔ）ｚ （ＩＶ’－１－３）
Ａ―（Ｄ１―（Ｙａ―Ｌｋ―Ｗｂ―Ａ２ｐ―Ｌｍ２ｐ―Ｂ２―ＰＬ）ｔ）ｚ （ＩＶ’－１－４）
（（ＰＬ―Ｂ１）ｔ―Ｌｍ１ｐ―Ａ１ｐ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ―Ｄ２）ｚ―Ａ （ＩＶ’－２－２）
（（ＰＬ―Ｂ１―Ｌｍ１ｐ―Ａ１ｐ）ｔ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ―Ｄ２）ｚ―Ａ （ＩＶ’－２－３）
（（ＰＬ―Ｂ１―Ｌｍ１ｐ―Ａ１ｐ―Ｗｂ―Ｌｋ―Ｙａ）ｔ―Ｄ２）ｚ―Ａ （ＩＶ’－２－４）
式中、ＰＬ、Ａ１、Ａ２、Ｄ１、Ｄ２、Ｙ、Ｗ、Ｌｋ、ａ、ｂ、ｐ及びｚはそれぞれ式（ＩＶ’－１－１）又は式（ＩＶ’－２－１）で定義したとおりである。
【0167】
標的化分子
１つの実施形態において、標的化分子は抗体又はその抗原結合フラグメントである。
１つの実施形態において、標的化分子は抗体又はその抗原結合フラグメントである。
【0168】
本開示のいくつかの実施形態において、標的化分子（例えば抗体又はその抗原結合フラグメント）によって認識されるターゲットは、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１１７／ＫＩＴ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１７４、ＣＤ２２７／ＭＵＣ１、ＣＤ３５２、ＣＬＤＮ１８．２、ＤＬＬ３、ＥｒｂＢ２／ＨＥＲ２、ＣＮ３３、ＧＰＮＭＢ、ＥＮＰＰ３、ネクチン－４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＳＬＣ４４Ａ４／ＡＧＳ－５、メソテリン、ＣＥＡＣＡＭ５、ＰＳＭＡ、ＴＩＭ１、ＬＹ６Ｅ、ＬＩＶ１、ネクチン４、ＳＬＩＴＲＫ６、ＨＧＦＲ／ｃＭｅｔ、ＳＬＡＭＦ７／ＣＳ１、ＥＧＦＲ、ＢＣＭＡ、ＡＸＬ、ＮａＰｉ２Ｂ、ＧＣＣ、ＳＴＥＡＰ１、ＭＵＣ１６、Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ、ＥＴＢＲ、ＥｐｈＡ２、５Ｔ４、ＦＯＬＲ１、ＬＡＭＰ１、カドヘリン６、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＣＡ６、ＣａｎＡｇ、インテグリンαＶ、ＴＤＧＦ１、エフリンＡ４、Ｔｒｏｐ２、ＰＴＫ７、ＮＯＴＣＨ３、Ｃ４．４Ａ、ＦＬＴ３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＲＯＲ１／２を含むが、それらに限定されない。
【0169】
１つの実施形態において、標的化分子は抗ヒトＨＥＲ２抗体又はその抗原結合フラグメントである。抗ヒトＨＥＲ２抗体の例としては、ペルツズマブ及びトラスツズマブを含むが、それらに限定されない。ペルツズマブはＨＥＲ２の第２細胞外ドメイン（ＥＣＤ２）に結合し、ＨＥＲ２陽性乳癌の治療用に承認されたものである。トラスツズマブはＨＥＲ２の第４細胞外ドメイン（ＥＣＤ４）に結合し、Ｈｅｒ２陽性乳癌及び胃癌の治療用に承認されたものである。
【0170】
好ましい実施形態において、抗ヒトＨＥＲ２抗体はトラスツズマブに基づく操作された抗ＨＥＲ２抗体から選ばれる１つ又は複数である。
【0171】
１つの実施形態において、標的化分子は、抗ヒトＴＲＯＰ２抗体又はその抗原結合フラグメントから選ばれる１つ又は複数である。特定の実施形態において、抗ヒトＴＲＯＰ２抗体は、Ａｂ００６４に基づく任意に操作された抗ＴＲＯＰ２抗体から選ばれる１つ又は複数である。
【0172】
１つの実施形態において、標的化分子は、抗ヒトＣＬＤＮ１８．２抗体又はその抗原結合フラグメントから選ばれる１つ又は複数である。特定の実施形態において、抗ヒトＣＬＤＮ１８．２抗体は、Ａｂ００９８に基づく任意に操作された抗ＣＬＤＮ１８．２抗体から選ばれる１つ又は複数である。
【0173】
好ましい実施形態において、抗ヒトＨＥＲ２、ＴＲＯＰ２又はＣＬＤＮ１８．２抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、抗体フラグメント、及び抗体模倣体から選ばれる組換え抗体である。１つの実施形態において、抗体模倣体は、ｓｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、ナノボディから選ばれる。式（Ｉ’）の化合物とのコンジュゲーションのために、本開示の標的化分子は、式（Ｉ’）の化合物中のＤ１又はＤ２に接続する修飾部分を含んでもよい。このような修飾部分の導入位置は限定されず、例えば、標的化分子が抗体である場合、その導入位置は、抗体の重鎖又は軽鎖のＣ末端又はＮ末端に位置してもよいが、これに限定されない。
【0174】
代替的な実施形態において、式（Ｉ’）の化合物中のＤ１又はＤ２とのコンジュゲーション用の修飾部分は、例えば化学修飾法を使用して、抗体の重鎖又は軽鎖の非末端位置に導入してもよい。
【0175】
１つの実施形態において、本開示の標的化分子は、末端修飾を含み得る抗体又はその抗原結合フラグメントである。末端修飾とは、例えばリガーゼ認識配列を含む抗体の重鎖又は軽鎖のＣ末端又はＮ末端での修飾を指す。別の実施形態において、末端修飾は、２～１００個のアミノ酸を含むスペーサーＳｐ３をさらに含んでもよく、ここで抗体、Ｓｐ３及びリガーゼ認識配列は順次連結される。好ましい実施形態において、Ｓｐ３は２～２０個のアミノ酸を含有するスペーサー配列である。特定の実施形態において、Ｓｐ３は、ＧＡ、ＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ及びＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳから選ばれるスペーサー配列であり、特にＧＡである。
【0176】
好ましい実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖は、野生型（ＬＣ）と、リガーゼ認識配列ＬＰＸＴＧの直接導入によって修飾されたＣ末端修飾軽鎖（ＬＣＣＴ）と、短鎖ペプチドスペーサー及びリガーゼ供与体基質認識配列ＬＰＸＴＧの導入によって修飾されたＣ末端修飾軽鎖（ＬＣＣＴＬ）との３つのタイプを含む。抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖は、野生型（ＨＣ）と、リガーゼ認識配列ＬＰＸＴＧの直接導入によって修飾されたＣ末端修飾重鎖（ＨＣＣＴ）と、短鎖ペプチドスペーサー及びリガーゼ供与体基質認識配列ＬＰＸＴＧの導入によって修飾されたＣ末端修飾重鎖（ＨＣＣＴＬ）との３つのタイプを含む。Ｘは任意の天然又は非天然の単一アミノ酸であってもよい。アミノ酸配列表に示すように、式（ＩＶ’）の化合物におけるｚが１又は２である場合、上記重鎖と軽鎖の組合せは８つの好ましい抗体分子を形成することができる。
【0177】
好ましい実施形態において、抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖は、野生型（ＬＣ）と、リガーゼ認識配列ＧＧＧの直接導入によって修飾されたＮ末端修飾軽鎖（ＬＣＮＴ）と、短鎖ペプチドスペーサー及びリガーゼ受容体基質認識配列ＧＧＧの導入によって修飾されたＮ末端修飾軽鎖（ＬＣＮＴＬ）との３つのタイプを含む。抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖は、野生型（ＨＣ）と、リガーゼ認識配列ＧＧＧの直接導入によって修飾されたＮ末端修飾重鎖（ＨＣＮＴ）と、短鎖ペプチドスペーサー及びリガーゼ受容体基質認識配列ＧＧＧの導入によって修飾されたＮ末端修飾重鎖（ＨＣＮＴＬ）との３つのタイプを含む。
【0178】
本開示のコンジュゲートはペイロードをさらに含んでもよい。該ペイロードは上述したとおりである。
【0179】
コンジュゲートの具体的な実施形態
１、Ａ及びＬｍが存在する式（ＩＶ’）化合物
ｐが１、Ｄ１がＧｎ、Ｇがグリシン、Ａ２がチオール基とＬｍ２の反応後に
である式（ＩＶ’－１－１）のコンジュゲート、及び式（ＩＶ’－１－１）の化合物の構造は、下記式に示すとおりであり（式ＩＶ’－１－１－１又は式ＩＩとする）、
式中、ｎは３～１０の整数であり、Ｌｍ２は
又はそれらの混合物であり、
ｘは、水素、ＯＨ、ＮＨ２、１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメント、１～１０個のヌクレオチドを含むヌクレオチドフラグメントから選ばれ、
Ｙ、Ｌｋ及びＷはそれぞれ式（ＩＶ’）で定義したとおりである。
１、Ａ及びＬｍが存在する式（ＩＶ’）化合物
ｐが１、Ｄ１がＧｎ、Ｇがグリシン、Ａ２がチオール基とＬｍ２の反応後に
【化54】
【化55】
【化56】
ｘは、水素、ＯＨ、ＮＨ２、１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメント、１～１０個のヌクレオチドを含むヌクレオチドフラグメントから選ばれ、
Ｙ、Ｌｋ及びＷはそれぞれ式（ＩＶ’）で定義したとおりである。
【0180】
好ましい実施形態において、式（ＩＩ）中、ｘは、ＯＨ、ＮＨ２及びＧｌｙから選ばれ、特にＮＨ２である。
【0181】
１つの実施形態において、式（ＩＩ）中、ａは０であり、ｂは０であり、ｎ＝３であり、ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３であり、Ｌ１は－ＮＨ－であり、Ｌ３は－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｌ２は－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｉ－Ｃ２Ｈ４－であり、ｉ＝４であり、ｘはＮＨ２であり、式（ＩＩ）の化合物の構造は下記式に示すとおりである（ＩＩ－１）。
【化57】
【0182】
１つの実施形態において、式（ＩＩ－１）中、Ｂ２は、下記表から選ばれる。
【0183】
【表4】
【0184】
１つの実施形態において、式（ＩＩ－１）中、Ｂ２は、下記表から選ばれる。
【0185】
【表5】
【0186】
１つの実施形態において、式（ＩＩ－１）中、Ｌｍ２は
又はそれらの混合物であり、Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－であり、ｋは２であり、コンジュゲートの構造は以下のとおりである（式ＡＣ１０２－１）。
【化58】
【化59】
【0187】
１つの実施形態において、式（ＩＩ－１）中、Ｌｍ２は
又はそれらの混合物であり、Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－であり、ｋは５であり、コンジュゲートの構造は以下のとおりである（式ＡＣ１０２－２）。
【化60】
【化61】
【0188】
１つの実施形態において、式（ＩＩ－１）中、Ｌｍ２は
又はそれらの混合物であり、Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－であり、ｋは５であり、コンジュゲートの構造は以下のとおりである（式ＡＣ１０２－３）。
【化62】
【0189】
【化63】
【0190】
１つの実施形態において、式（ＩＩ－１）中、Ｌｍ２は
又はそれらの混合物であり、Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢＣ－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－であり、ｋは５であり、ｄは１であり、Ｒ１及びＲ２は水素であり、コンジュゲートの構造は以下のとおりである（式ＡＣ１０２－４）。
【化64】
【化65】
【0191】
１つの実施形態において、式（ＩＩ－１）中、Ｌｍ２は
又はそれらの混合物であり、Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－ＮＨ－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｊ－であり、ｋは２であり、ｄは１であり、ｊは１であり、Ｒ１及びＲ２はメチル基であり、コンジュゲートの構造は以下のとおりである（式ＡＣ１０２－７）。
【化66】
【化67】
【0192】
１つの実施形態において、式（ＩＩ－１）中、Ｌｍ２は
又はそれらの混合物であり、Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－であり、ｋは２でありであり、ｄは１であり、Ｒ１及びＲ２は水素であり、コンジュゲートの構造は以下のとおりである（式ＡＣ１０２－８）。
【化68】
【化69】
【0193】
１つの実施形態において、式（ＩＩ－１）中、Ｌｍ２は
又はそれらの混合物であり、Ｂ２は－（ＣＨ２）ｋＣ（Ｏ）－（ＮＨ－ＣＲ１Ｒ２－Ｃ（Ｏ））ｄ－であり、ｋは２であり、ｄは２であり、Ｒ１及びＲ２はメチル基であり、Ｒ１’及びＲ２’は水素であり、コンジュゲートの構造は以下のとおりである（式ＡＣ１０２－１１）。
【化70】
【化71】
【0194】
特定の実施形態において、式（ＩＩ）中、ａは０であり、ｂは０であり、ｎ＝３であり、Ｂ２は-（Ｃｙｓ－ＮＨ２）－であり、コンジュゲートの構造は以下のとおりである（式ＡＣ１０５）。
【化72】
【0195】
特定の実施形態において、式（ＩＩ）中、ａは０であり、ｂは０であり、ｎ＝３であり、ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３であり、Ｌ１は－ＮＨ－であり、Ｌ３は－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｌ２は－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｉ－Ｃ２Ｈ４－であり、ｉ＝４であり、ｘはＯＨであり、コンジュゲートの構造は以下のとおりである（式ＡＣ１０６）。
【化73】
【0196】
特定の実施形態において、式（ＩＩ）中、ａは１であり、ｂは０であり、ＹはＬであり、Ｌはロイシン（Ｌｅｕ）であり、ｎ＝３であり、ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３であり、Ｌ１は－ＮＨ－であり、Ｌ３は－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｌ２は－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｉ－Ｃ２Ｈ４－であり、ｉ＝４であり、ｘはＮＨ２であり、コンジュゲートの構造は以下のとおりである（式ＡＣ１０７）。
【化74】
【0197】
さらに別の特定の実施形態において、式（ＩＩ）中、ａは１であり、ｂは０であり、ＹはＱであり、Ｑはグルタミン（Ｇｌｎ）であり、ｎ＝３であり、ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３であり、Ｌ１は－ＮＨ－であり、Ｌ３は－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｌ２は－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｉ－Ｃ２Ｈ４－であり、ｉ＝４であり、ｘはＮＨ２であり、コンジュゲートの構造は以下のとおりである（式ＡＣ１０８）。
【化75】
【0198】
特定の実施形態において、式（ＩＩ）中、ａは０であり、ｂは０であり、ｎ＝３であり、ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３であり、Ｌ１は－ＮＨ－であり、Ｌ３は－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｌ２は－Ｃ５Ｈ１０－であり、コンジュゲートの構造は以下のとおりである（式ＡＣ１０９）。
【化76】
【0199】
さらに別の特定の実施形態において、式（ＩＩ）中、ａは０であり、ｂは０であり、ｎ＝３であり、ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３であり、Ｌ１は－ＮＨ－であり、Ｌ３は－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｌ２は１つの－ＮＲ１Ｒ２基で置換された－Ｃ５Ｈ１０－基であり、Ｒ１は水素であり、Ｒ２は－Ｃ（Ｏ）ＣＨ３であり、ｘはＮＨ２であり、コンジュゲートの構造は以下のとおりである（式ＡＣ１１０）。
【化77】
【0200】
Ｄ２がＬＰＸＴＧ、Ａ１がチオール基とＬｍ２の反応後に
の場合の式（ＩＶ’－２）のコンジュゲート、及び式（ＩＶ’－２－１）の化合物の構造は、下記式に示すとおりであり（ＩＶ’－２－１－１）、
式中、ｘは、水素、１～１０個のアミノ酸を含むアミノ酸フラグメント、１～１０個のヌクレオチドを含むヌクレオチドフラグメントから選ばれ、Ｌｍ１は
又はそれらの混合物であり、
Ｙ、Ｌｋ及びＷはそれぞれ式（ＩＶ’）で定義したとおりである。
【化78】
【化79】
【化80】
Ｙ、Ｌｋ及びＷはそれぞれ式（ＩＶ’）で定義したとおりである。
【0201】
１つの実施形態において、ｘは水素である。
【0202】
２、Ａ及びＬｍが存在しない式（ＩＶ’）化合物
ｐが０、Ｄ１がＧｎ、Ｇがグリシンである式（ＩＶ’－１－１）の連結ユニット、及び式（ＩＶ’－１－１）の化合物の構造は、下記式に示すとおりであり（ＩＶ’－１－１－２）、
式中、ｎは３～１０の整数であり、
Ｙ、Ｌｋ、Ｗ、ａ及びｂはそれぞれ式（ＩＶ’）で定義したとおりである。
ｐが０、Ｄ１がＧｎ、Ｇがグリシンである式（ＩＶ’－１－１）の連結ユニット、及び式（ＩＶ’－１－１）の化合物の構造は、下記式に示すとおりであり（ＩＶ’－１－１－２）、
【化81】
Ｙ、Ｌｋ、Ｗ、ａ及びｂはそれぞれ式（ＩＶ’）で定義したとおりである。
【0203】
１つの実施形態において、式（ＩＶ’－１－１－２）中、ａは０であり、ｂは０であり、ｎ＝３であり、ＬｋはＬ１－Ｌ２－Ｌ３であり、Ｌ１は－ＮＨ－であり、Ｌ３は－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｌ２は－（Ｃ２Ｈ４－Ｏ）ｉ－Ｃ２Ｈ４－であり、ｉ＝４であり、Ｂ２は－（Ｌｙｓ－ＮＨ２）－であり、コンジュゲートの構造は以下のとおりである（式ＡＣ２０１）。
【化82】
【0204】
コンジュゲートの調製
本開示のコンジュゲートは本分野の任意の知られている方法によって調製してもよい。いくつかの実施形態において、コンジュゲートは標的化分子とペイロード担持式（Ｉ’）化合物のリガーゼ触媒部位特異的コンジュゲーションによって調製され、ここで該標的化分子はリガーゼ認識配列により修飾される。該方法はステップＡ及びステップＢを含む。
本開示のコンジュゲートは本分野の任意の知られている方法によって調製してもよい。いくつかの実施形態において、コンジュゲートは標的化分子とペイロード担持式（Ｉ’）化合物のリガーゼ触媒部位特異的コンジュゲーションによって調製され、ここで該標的化分子はリガーゼ認識配列により修飾される。該方法はステップＡ及びステップＢを含む。
【0205】
ステップＡ、連結ユニット－ペイロード中間体の調製
好ましい実施形態において、式（Ｉ’）の化合物中のＢ１又はＢ２はそれぞれ独立して反応性基を介して対応する反応性基を含有するペイロードに共有連結され、ここで反応性基はそれぞれ上記で定義したとおりである。
好ましい実施形態において、式（Ｉ’）の化合物中のＢ１又はＢ２はそれぞれ独立して反応性基を介して対応する反応性基を含有するペイロードに共有連結され、ここで反応性基はそれぞれ上記で定義したとおりである。
【0206】
本開示の式（Ｉ’）の化合物を用いて調製された連結ユニット－ペイロード中間体は、規定の構造、規定の組成及び高い純度を有するため、抗体とのコンジュゲーション反応を行う際に、導入される不純物がより少ない、又は他の不純物が導入されない。リガーゼ認識配列を含有する修飾抗体とのリガーゼ触媒部位特異的コンジュゲーションにこのような中間体を使用すると、得られたＡＤＣは均質で高度に制御可能な品質を有する。
【0207】
ステップＢ、ペイロード担持式（Ｉ’）化合物への標的化分子の連結
本開示の標的化分子は本分野の任意の知られている方法によってペイロード担持式（Ｉ’）化合物（即ち、式（ＩＩ’）の化合物）とコンジュゲートすることができる。例えば、リガーゼ触媒部位特異的コンジュゲーション技術を適用し、標的化分子とペイロード担持式（Ｉ’）化合物を基質のリガーゼ特異的認識配列によって互いに連結する。認識配列は採用される具体的なリガーゼによって決まる。１つの実施形態において、標的化分子は、軽鎖及び／又は重鎖のＣ末端に導入された、認識配列に基づく末端修飾を有する抗体であり、該標的化分子は、野生型の又は最適に操作されたリガーゼ又はそれらの任意の組合せの触媒作用下で、適切な触媒反応条件下で、式（ＩＩ’）の化合物とコンジュゲートされる。
本開示の標的化分子は本分野の任意の知られている方法によってペイロード担持式（Ｉ’）化合物（即ち、式（ＩＩ’）の化合物）とコンジュゲートすることができる。例えば、リガーゼ触媒部位特異的コンジュゲーション技術を適用し、標的化分子とペイロード担持式（Ｉ’）化合物を基質のリガーゼ特異的認識配列によって互いに連結する。認識配列は採用される具体的なリガーゼによって決まる。１つの実施形態において、標的化分子は、軽鎖及び／又は重鎖のＣ末端に導入された、認識配列に基づく末端修飾を有する抗体であり、該標的化分子は、野生型の又は最適に操作されたリガーゼ又はそれらの任意の組合せの触媒作用下で、適切な触媒反応条件下で、式（ＩＩ’）の化合物とコンジュゲートされる。
【0208】
具体的な実施形態において、リガーゼはソルターゼＡであり、コンジュゲーション反応は以下のスキームで表すことができる。
【化83】
【0209】
三角形及び五角形は、それぞれ、抗体の一部又は式（ＩＩ’）の化合物の一部、及び交換可能な位置のいずれかを表す。ｎ、Ｘ及びＪはそれぞれ上記で定義したとおりである。受容体基質の対応する認識配列であるＧｎとコンジュゲートされる場合、ＬＰＸＴＧＪ配列におけるグリシンの上流のペプチド結合は、ソルターゼＡにより切断され、得られた中間体はＧｎの遊離Ｎ末端に連結されて新しいペプチド結合を生成する。得られたアミノ酸配列はＬＰＸＴＧｎである。配列Ｇｎ及びＬＰＸＴＧＪは上記で定義したとおりである。
【0210】
具体的なコンジュゲートの表
１つの実施形態において、ペイロードは免疫アゴニストである。１つの実施形態において、抗体は修飾トラスツズマブであり、好ましくはＡｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ（軽鎖：配列番号１、重鎖：配列番号２）である。Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣの配列はＡｂ０００１（トラスツズマブ）のアミノ酸配列に基づくものであり、ＧＡＬＰＥＴＧＧは軽鎖のＣ末端に導入され、ここでＬＰＥＴＧＧはリガーゼ供与体基質の認識配列であり、ＧＡはスペーサー配列である。１つの実施形態において、抗体－免疫アゴニストコンジュゲートは下記表及び図４ａと図４ｂに示すとおりである。
１つの実施形態において、ペイロードは免疫アゴニストである。１つの実施形態において、抗体は修飾トラスツズマブであり、好ましくはＡｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ（軽鎖：配列番号１、重鎖：配列番号２）である。Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣの配列はＡｂ０００１（トラスツズマブ）のアミノ酸配列に基づくものであり、ＧＡＬＰＥＴＧＧは軽鎖のＣ末端に導入され、ここでＬＰＥＴＧＧはリガーゼ供与体基質の認識配列であり、ＧＡはスペーサー配列である。１つの実施形態において、抗体－免疫アゴニストコンジュゲートは下記表及び図４ａと図４ｂに示すとおりである。
【0211】
【表6】
【0212】
医薬組成物及び医薬製剤
本開示の別の目的は、予防的又は治療的有効量の本開示のコンジュゲートと、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供することである。
本開示の別の目的は、予防的又は治療的有効量の本開示のコンジュゲートと、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供することである。
【0213】
本開示の医薬組成物は、ヒト又は動物の症状を予防、軽減、防止又は治癒する効果を達成できる限り、任意の方式で投与してもよい。例えば、投与経路に応じて、様々な適切な剤形、特に注射用凍結乾燥粉末、注射薬、又は注射用滅菌粉末等の注射剤を調製することができる。
【0214】
用語「薬学的に許容される」とは、通常の医学的判断の範囲内で患者の組織と接触した場合に、不当な毒性、刺激、又はアレルギー反応等が生じず、妥当な利点／欠点比を有し、使用目的に有効であることを意味する。
【0215】
薬学的に許容される担体という用語は、薬学的に許容され、コンジュゲートの生物活性及び特性を妨げない担体材料をいう。水性担体の例としては、緩衝食塩水等を含むが、それらに限定されない。薬学的に許容される担体は、組成物を生理的条件に近付ける担体材料、例えばｐＨ調整剤、緩衝剤、毒性調整剤等、及び酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウム等をも含む。
【0216】
１つの実施形態において、本開示の医薬組成物は１～２０の整数又は非整数の薬物抗体比（ＤＡＲ）を有し、例えば１～１０、１～８、１～６、１～４、１～３．５、１～３、１～２．５であり、好ましくは１～２である。１つの実施形態において、本開示の医薬組成物は約１．５～約２のＤＡＲを有し、好ましくは約１．６～約２であり、より好ましくは約１．７～約２である。
【0217】
治療方法及び使用
本開示のコンジュゲートは腫瘍及び／又は自己免疫疾患の治療に有用である。コンジュゲート治療の影響を受けやすい腫瘍は、特定の腫瘍関連抗原又は細胞表面受容体によって特徴付けられる腫瘍、及びコンジュゲート中の標的化分子により認識され、コンジュゲート中のアゴニストの免疫細胞活性化活性の影響を受け得る腫瘍を含む。
本開示のコンジュゲートは腫瘍及び／又は自己免疫疾患の治療に有用である。コンジュゲート治療の影響を受けやすい腫瘍は、特定の腫瘍関連抗原又は細胞表面受容体によって特徴付けられる腫瘍、及びコンジュゲート中の標的化分子により認識され、コンジュゲート中のアゴニストの免疫細胞活性化活性の影響を受け得る腫瘍を含む。
【0218】
それに応じて、さらに別の態様において、腫瘍又は自己免疫疾患から選択される疾患、障害又は症状を治療する薬剤を製造するための、本開示のコンジュゲート又は本開示の医薬組成物の使用をさらに提供する。
【0219】
別の態様において、腫瘍又は自己免疫疾患を治療するための、本開示のコンジュゲート又は本開示の医薬組成物の使用を提供する。
【0220】
さらなる態様において、腫瘍又は自己免疫疾患を治療する方法であって、需要のある個体に有効量の本開示のコンジュゲート又は本開示の医薬組成物を投与することを含む、前記方法を提供する。
【0221】
好ましい実施形態において、抗ヒトＨＥＲ２抗体とペイロードのコンジュゲーションによって形成された本開示のコンジュゲートは、腫瘍細胞表面上のＨＥＲ２に特異的に結合し、ＨＥＲ２発現腫瘍細胞を選択的に死滅させることができる。別の好ましい実施形態において、ＨＥＲ２陽性腫瘍から選択される疾患、障害又は症状を治療する薬剤を製造するための、本開示のコンジュゲート又は本開示の医薬組成物の使用を提供する。より好ましい実施形態において、該疾患、障害又は症状は、乳癌、胃癌、肺癌、卵巣癌、尿路上皮癌等から選択される。
【0222】
好ましい実施形態において、抗ヒトＴＲＯＰ２抗体とペイロードのコンジュゲーションによって形成された本開示のコンジュゲートは、腫瘍細胞表面上のＴＲＯＰ２に特異的に結合し、ＴＲＯＰ２発現腫瘍細胞を選択的に死滅させることができる。別の好ましい実施形態において、ＴＲＯＰ２陽性腫瘍から選択される疾患、障害又は症状を治療する薬剤を製造するための、本開示のコンジュゲート又は本開示の医薬組成物の使用を提供する。より好ましい実施形態において、該疾患、障害又は症状は、乳癌、尿路上皮癌、肺癌、肝臓癌、子宮内膜癌、頭頸部癌、卵巣癌等から選択される。
【0223】
好ましい実施形態において、抗ヒトＣＬＤＮ１８．２抗体とペイロードのコンジュゲーションによって形成された本開示のコンジュゲートは、腫瘍細胞表面上のＣＬＤＮ１８．２に特異的に結合し、ＣＬＤＮ１８．２発現腫瘍細胞を選択的に死滅させることができる。別の好ましい実施形態において、ＣＬＤＮ１８．２陽性腫瘍から選択される疾患、障害又は症状を治療する薬剤を製造するための、本開示のコンジュゲート又は本開示の医薬組成物の使用を提供する。より好ましい実施形態において、該疾患、障害又は症状は、胃癌又は膵臓癌等から選択される。
【0224】
対象に投与されるコンジュゲートの用量は、かなりの範囲で調整することができる。該用量は、具体的な投与経路及び対象のニーズに応じて変化してもよく、医療専門家の判断に従ってもよい。
【0225】
有益な効果
本開示は独特の構造を有する連結ユニットを利用し、リガーゼを使用して標的化分子とアゴニストのコンジュゲーションを触媒する。本開示のコンジュゲートは高い均質性、高い活性及び高い選択性を有する。特に、細胞内代謝産物は、標的抗原の発現が低い、又は発現していない細胞に対する細胞増殖毒性が大幅に軽減する。さらに、連結ユニット－アゴニスト中間体の毒性は遊離アゴニストより遥かに低いため、薬物の製造プロセスによる悪影響が少なく、工業生産に有利である。
本開示は独特の構造を有する連結ユニットを利用し、リガーゼを使用して標的化分子とアゴニストのコンジュゲーションを触媒する。本開示のコンジュゲートは高い均質性、高い活性及び高い選択性を有する。特に、細胞内代謝産物は、標的抗原の発現が低い、又は発現していない細胞に対する細胞増殖毒性が大幅に軽減する。さらに、連結ユニット－アゴニスト中間体の毒性は遊離アゴニストより遥かに低いため、薬物の製造プロセスによる悪影響が少なく、工業生産に有利である。
【0226】
本開示のコンジュゲートは以下の少なくとも１つの技術効果を達成する。
（１）標的細胞に対する高い阻害活性、又は標的細胞に対する強力な死滅効果。
（２）良好な物理化学的特性（例えば、溶解性、物理的及び／又は化学的安定性）。
（３）良好な薬物動態特性（例えば、血漿中での高い安定性、適切な半減期及び作用持続時間）。
（４）高い安全性（標的外の正常細胞又は組織に対する毒性が低く、及び／又は副作用が少なく、治療ウィンドウが広い）等。
（１）標的細胞に対する高い阻害活性、又は標的細胞に対する強力な死滅効果。
（２）良好な物理化学的特性（例えば、溶解性、物理的及び／又は化学的安定性）。
（３）良好な薬物動態特性（例えば、血漿中での高い安定性、適切な半減期及び作用持続時間）。
（４）高い安全性（標的外の正常細胞又は組織に対する毒性が低く、及び／又は副作用が少なく、治療ウィンドウが広い）等。
【0227】
実施例
調製例
発明の目的及び技術的解決手段をより明確に説明するために、以下において具体例により本開示をさらに説明する。これらの実施例は本開示の範囲を限定するためのものではないことを理解すべきである。以下の実施例に記載されていない具体的な実験方法は、従来の実験方法に従って実施する。
調製例
発明の目的及び技術的解決手段をより明確に説明するために、以下において具体例により本開示をさらに説明する。これらの実施例は本開示の範囲を限定するためのものではないことを理解すべきである。以下の実施例に記載されていない具体的な実験方法は、従来の実験方法に従って実施する。
【0228】
器具、材料及び試薬
特に断らない限り、実施例において使用される器具及び試薬は市販されるものである。試薬はさらに精製することなく直接使用できる。
ＭＳ：Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｐｌｕｓ、Ｗａｔｅｒ２７９５－Ｑｕａｔｔｒｏ ｍｉｃｒｏ三連四重極質量分析計
ＨＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ２６９５、Ａｇｉｌｅｎｔ１１００、Ａｇｉｌｅｎｔ１２００
セミ分取ＨＰＬＣ：Ｌｉｓｕｒｅ ＨＰ ｐｌｕｓ ５０Ｄ
フローサイトメトリー：ＣｙｔｏＦＬＥＸ Ｓ
ＨＩＣ－ＨＰＬＣ：Ｂｕｔｙｌ－ＨＩＣ、移動相Ａ：２５ｍＭ ＰＢ、２Ｍ （ＮＨ４）２ＳＯ４、ｐＨ７．０、移動相Ｂ：２５ｍＭ ＰＢ、ｐＨ７．０、流量：０．８ｍｌ／ｍｉｎ、収集時間：２５ｍｉｎ、試料注入量：２０μｇ、カラム温度：２５℃、検出波長：２８０ｎｍ、サンプル室温度：８℃。
ＳＥＣ－ＨＰＬＣ：カラム：ＴＳＫ－ｇｅｌ Ｇ３０００ ＳＷＸＬ、ＴＯＳＯＨ ７．８ｍｍ ＩＤ × ３００ｍｍ、５μｍ、移動相：０．２Ｍ ＫＨ２ＰＯ４、０．２５Ｍ ＫＣｌ、ｐＨ６．２、流量：０．５ｍｌ／ｍｉｎ、収集時間：３０ｍｉｎ、試料注入量：５０μｌ、カラム温度：２５℃、検出波長：２８０ｎｍ、サンプルトレイ温度：８℃。
ＣＨＯはＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手した。ｐｃＤＮＡ３．３はＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから入手した。ＨＥＫ２９３ＦはＰｒｅｊｉｎから入手した。ＰＥＩＭＡＸトランスフェクション試薬はＰｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅから入手した。ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ＰｒｏＡはＧＥから入手した。Ｃａｐｔｏ Ｓ ＩｍｐＡｃｔはＧＥから入手した。リンクアミドＭＢＨＡ樹脂及びジクロロ樹脂はＮａｎｋａｉ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓから入手した。ＨＣＣ１９５４はＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＣＲＬ－２３３８として入手した。ＳＫ－ＢＲ－３はＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＨＴＢ－３０として入手した。ＢＴ４７４細胞はＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＨＴＢ－２０として入手した。ＪＩＭＴ１細胞はＤＳＭＺ ＣＡＴ＃ＡＣＣ５８９として入手した。Ｃｏｌｏ２０５細胞はＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＣＲＬ－２２２として入手した。ＮＣＩ－Ｎ８７－Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２ヒト胃癌細胞はＫＹｉｎｎｏ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．， Ｌｔｄから入手した。クローディン１８．２陰性ＮＣＩ－Ｎ８７親細胞はＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＣＲＬ－５８２２として入手した。ＭＣ３８ｈＨＥＲ２マウス結腸直腸癌細胞はＢｉｏｃｙｔｏｇｅｎから入手した。ＮＵＧＣ４ヒト胃癌細胞はＪＣＲＢ ＣＡＴ＃ＪＣＲＢ０８３４として入手した。ＮＣＩ－Ｎ８７細胞（ＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＣＲＬ－５８２２）。ＭＤＡ－ＭＢ－４６８はＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＨＴＢ－１３２として入手した。
特に断らない限り、実施例において使用される器具及び試薬は市販されるものである。試薬はさらに精製することなく直接使用できる。
ＭＳ：Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｐｌｕｓ、Ｗａｔｅｒ２７９５－Ｑｕａｔｔｒｏ ｍｉｃｒｏ三連四重極質量分析計
ＨＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ２６９５、Ａｇｉｌｅｎｔ１１００、Ａｇｉｌｅｎｔ１２００
セミ分取ＨＰＬＣ：Ｌｉｓｕｒｅ ＨＰ ｐｌｕｓ ５０Ｄ
フローサイトメトリー：ＣｙｔｏＦＬＥＸ Ｓ
ＨＩＣ－ＨＰＬＣ：Ｂｕｔｙｌ－ＨＩＣ、移動相Ａ：２５ｍＭ ＰＢ、２Ｍ （ＮＨ４）２ＳＯ４、ｐＨ７．０、移動相Ｂ：２５ｍＭ ＰＢ、ｐＨ７．０、流量：０．８ｍｌ／ｍｉｎ、収集時間：２５ｍｉｎ、試料注入量：２０μｇ、カラム温度：２５℃、検出波長：２８０ｎｍ、サンプル室温度：８℃。
ＳＥＣ－ＨＰＬＣ：カラム：ＴＳＫ－ｇｅｌ Ｇ３０００ ＳＷＸＬ、ＴＯＳＯＨ ７．８ｍｍ ＩＤ × ３００ｍｍ、５μｍ、移動相：０．２Ｍ ＫＨ２ＰＯ４、０．２５Ｍ ＫＣｌ、ｐＨ６．２、流量：０．５ｍｌ／ｍｉｎ、収集時間：３０ｍｉｎ、試料注入量：５０μｌ、カラム温度：２５℃、検出波長：２８０ｎｍ、サンプルトレイ温度：８℃。
ＣＨＯはＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手した。ｐｃＤＮＡ３．３はＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから入手した。ＨＥＫ２９３ＦはＰｒｅｊｉｎから入手した。ＰＥＩＭＡＸトランスフェクション試薬はＰｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅから入手した。ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ＰｒｏＡはＧＥから入手した。Ｃａｐｔｏ Ｓ ＩｍｐＡｃｔはＧＥから入手した。リンクアミドＭＢＨＡ樹脂及びジクロロ樹脂はＮａｎｋａｉ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓから入手した。ＨＣＣ１９５４はＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＣＲＬ－２３３８として入手した。ＳＫ－ＢＲ－３はＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＨＴＢ－３０として入手した。ＢＴ４７４細胞はＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＨＴＢ－２０として入手した。ＪＩＭＴ１細胞はＤＳＭＺ ＣＡＴ＃ＡＣＣ５８９として入手した。Ｃｏｌｏ２０５細胞はＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＣＲＬ－２２２として入手した。ＮＣＩ－Ｎ８７－Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２ヒト胃癌細胞はＫＹｉｎｎｏ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．， Ｌｔｄから入手した。クローディン１８．２陰性ＮＣＩ－Ｎ８７親細胞はＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＣＲＬ－５８２２として入手した。ＭＣ３８ｈＨＥＲ２マウス結腸直腸癌細胞はＢｉｏｃｙｔｏｇｅｎから入手した。ＮＵＧＣ４ヒト胃癌細胞はＪＣＲＢ ＣＡＴ＃ＪＣＲＢ０８３４として入手した。ＮＣＩ－Ｎ８７細胞（ＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＣＲＬ－５８２２）。ＭＤＡ－ＭＢ－４６８はＡＴＣＣ ＣＡＴ＃ ＨＴＢ－１３２として入手した。
【0229】
実施例１ 抗体発現ベクターの構築、抗体発現、精製及び同定
１．１ 修飾抗ヒトＨＥＲ２抗体Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣの産生
抗体Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ（軽鎖：配列番号１、重鎖：配列番号２）の発現プラスミドは次のように構築される。抗体Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣの配列をトラスツズマブのアミノ酸配列に基づくものとし、ＧＡＬＰＥＴＧＧを軽鎖のＣ末端に導入し、ここでＬＰＥＴＧＧはリガーゼ供与体基質の認識配列であり、ＧＡはスペーサー配列である。プラスミドをＣＨＯ細胞内にトランスフェクトし、高発現細胞集団のための細胞集団を構築しスクリーニングし、該細胞集団はトラスツズマブの培養プロセスを参照して５～１０Ｌの反応器内で培養されたものであり、そして上清を回収した。
１．１ 修飾抗ヒトＨＥＲ２抗体Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣの産生
抗体Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ（軽鎖：配列番号１、重鎖：配列番号２）の発現プラスミドは次のように構築される。抗体Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣの配列をトラスツズマブのアミノ酸配列に基づくものとし、ＧＡＬＰＥＴＧＧを軽鎖のＣ末端に導入し、ここでＬＰＥＴＧＧはリガーゼ供与体基質の認識配列であり、ＧＡはスペーサー配列である。プラスミドをＣＨＯ細胞内にトランスフェクトし、高発現細胞集団のための細胞集団を構築しスクリーニングし、該細胞集団はトラスツズマブの培養プロセスを参照して５～１０Ｌの反応器内で培養されたものであり、そして上清を回収した。
【0230】
１．２ 抗体Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣの精製
Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣの精製はＭａｂＳｅｌｅｃｔアフィニティークロマトグラフィーとＳｅｐｈａｒｏｓｅ Ｓ陽イオン交換クロマトグラフィーの組合せを使用した標準プロセスで実施し、精製物を元のトラスツズマブ薬物緩衝液（５ｍＭヒスチジンＨＣｌ、２％トレハロース、０．００９％ポリソルベート２０、ＰＨ６．０）で溶解し、少量ずつ凍結させる。
Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣの精製はＭａｂＳｅｌｅｃｔアフィニティークロマトグラフィーとＳｅｐｈａｒｏｓｅ Ｓ陽イオン交換クロマトグラフィーの組合せを使用した標準プロセスで実施し、精製物を元のトラスツズマブ薬物緩衝液（５ｍＭヒスチジンＨＣｌ、２％トレハロース、０．００９％ポリソルベート２０、ＰＨ６．０）で溶解し、少量ずつ凍結させる。
【0231】
１．３ 抗体Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣの品質管理
上記精製された抗体Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣの純度はＳＤＳ－ＰＡＧＥで９８．５％であり、サンプルの高分子量ポリマー含有量はＳＥＣ－ＨＰＬＣで０．４％未満であり、エンドトキシン含有量は０．０９８ＥＵ／ｍｇ未満である。
上記精製された抗体Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣの純度はＳＤＳ－ＰＡＧＥで９８．５％であり、サンプルの高分子量ポリマー含有量はＳＥＣ－ＨＰＬＣで０．４％未満であり、エンドトキシン含有量は０．０９８ＥＵ／ｍｇ未満である。
【0232】
１．４ 他の修飾抗ヒト抗体の調製
同様な方法に従って、リガーゼ認識配列に基づく末端修飾をトラスツズマブの軽鎖及び／又は重鎖のＣ末端にそれぞれ導入し、修飾抗体を得た。
Ａｂ０００１（トラスツズマブ）に基づく修飾抗ヒトＨＥＲ２抗体を表１に示す。末端修飾配列におけるＬＰＥＴＧＧはリガーゼ供与体基質の認識配列であり、ＧＡはスペーサー配列である。
同様な方法に従って、リガーゼ認識配列に基づく末端修飾をトラスツズマブの軽鎖及び／又は重鎖のＣ末端にそれぞれ導入し、修飾抗体を得た。
Ａｂ０００１（トラスツズマブ）に基づく修飾抗ヒトＨＥＲ２抗体を表１に示す。末端修飾配列におけるＬＰＥＴＧＧはリガーゼ供与体基質の認識配列であり、ＧＡはスペーサー配列である。
【0233】
【表7】
【0234】
修飾抗ヒトＴＲＯＰ２抗体Ａｂ００６４－ＬＣＣＴＬ－ＨＣを表２に示す。末端修飾配列におけるＬＰＥＴＧＧはリガーゼ供与体基質の認識配列であり、ＧＡはスペーサー配列である。
【0235】
【表8】
【0236】
修飾抗ヒトＣＬＤＮ１８．２抗体を表３に示す。末端修飾配列におけるＬＰＥＴＧＧはリガーゼ供与体基質の認識配列であり、ＧＡはスペーサー配列である。
【0237】
【表9】
【0238】
実施例２ 中間体の調製
２．１ 連結ユニットの調製
２．１．１ Ａ及びＬｍが存在する連結ユニット
リンクアミドＭＢＨＡ樹脂又はジクロロ樹脂を使用して従来の固相ポリペプチド合成によって式（Ｉ’）の部分Ａを含有する連結ユニットフラグメントＬＵ１０２～ＬＵ１１０を合成した。連結ユニット内のＬｋ構造のアミノ酸及びアミノ基を保護するためにＦｍｏｃを使用した。コンジュゲーション試薬は、ＨＯＢＴ、ＨＯＡｔ／ＤＩＣ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ又はＨＡＴＵから選ばれる。合成後、トリフルオロ酢酸を用いて樹脂を切断した。生成物をＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥し、保存して使用に備える。連結ユニットフラグメントを下記表及び図５に示す。
２．１ 連結ユニットの調製
２．１．１ Ａ及びＬｍが存在する連結ユニット
リンクアミドＭＢＨＡ樹脂又はジクロロ樹脂を使用して従来の固相ポリペプチド合成によって式（Ｉ’）の部分Ａを含有する連結ユニットフラグメントＬＵ１０２～ＬＵ１１０を合成した。連結ユニット内のＬｋ構造のアミノ酸及びアミノ基を保護するためにＦｍｏｃを使用した。コンジュゲーション試薬は、ＨＯＢＴ、ＨＯＡｔ／ＤＩＣ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ又はＨＡＴＵから選ばれる。合成後、トリフルオロ酢酸を用いて樹脂を切断した。生成物をＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥し、保存して使用に備える。連結ユニットフラグメントを下記表及び図５に示す。
【0239】
【表10】
【0240】
上記表における連結ユニットフラグメントを、マレイミド構造又はその誘導体を含有する連結ユニットフラグメントと反応させ、続いてＷＯ２０１５１６５４１３Ａ１に記載の方法を用いて開環反応を行って連結ユニットＬＮ１０２－１－１、ＬＮ１０２－２－１、ＬＮ１０２－３－１、ＬＮ１０２－４－１、ＬＮ１０２－７－１、ＬＮ１０２－８－１、ＬＮ１０２－１１－１を得た。それらの構造は上記で示したとおりである。下記表において、
【表11】
【0241】
２．１．２ Ａ及びＬｍが存在しない連結ユニット
リンクアミドＭＢＨＡ樹脂を使用して従来のの固相ポリペプチド合成によって連結ユニットＬＮ２０１を合成した。連結ユニット中のアミノ酸を保護するためにＦｍｏｃを使用した。コンジュゲーション試薬は、ＨＯＢｔ、ＨＯＡｔ／ＤＩＣ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ又はＨＡＴＵから選ばれる。合成後、トリフルオロ酢酸を用いて樹脂を切断した。生成物をＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥し、保存して使用に備える。理論分子量：７８５．９、測定値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝７８６．８。
リンクアミドＭＢＨＡ樹脂を使用して従来のの固相ポリペプチド合成によって連結ユニットＬＮ２０１を合成した。連結ユニット中のアミノ酸を保護するためにＦｍｏｃを使用した。コンジュゲーション試薬は、ＨＯＢｔ、ＨＯＡｔ／ＤＩＣ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ又はＨＡＴＵから選ばれる。合成後、トリフルオロ酢酸を用いて樹脂を切断した。生成物をＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥し、保存して使用に備える。理論分子量：７８５．９、測定値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝７８６．８。
【0242】
２．２ 連結ユニット－アゴニスト中間体の調製
２．２．１ 連結ユニット－アゴニスト中間体ＬＰ１０２－１－４の調製
２．２．１ 連結ユニット－アゴニスト中間体ＬＰ１０２－１－４の調製
【化84】
【0243】
ステップ１で、４－クロロ－３－ニトロキノリン（６．２５ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１００ｍＬ）で溶解し、ＢｏｃＮＨ（ＣＨ２）４ＮＨ２（５．７６ｇ、３０．６ｍｍｏｌ）、続いてＴＥＡ（８．０ｍＬ、６１．８ｍｍｏｌ）で処理した。反応を室温で２４ｈ維持した後、Ｈ２Ｏ（８０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮した。黄色固体の目的化合物ＨＸ２００９９－ａを得た（１０．０ｇ、９２．５％）。ＭＳ ｍ／ｚ ３６１．５ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
［０２６５］ステップ２で、ニトロ化合物（ＨＸ２００９９－ａ）（３．０ｇ、８．３３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）及び水（８０ｍＬ）で溶解した。亜鉛（１３．５４ｇ、２０８．３ｍｍｏｌ）を一括で添加し、続いてＮＨ４Ｃｌ（１３．４ｇ、２５０．０ｍｍｏｌ）を添加した。懸濁液を室温で１ｈ強く撹拌した（ＴＬＣ）。濾過後、ケーキをＴＨＦ（２０ｍＬ ｘ ２）で洗浄した。濾液に水相が飽和するまでＮａＣｌを添加した。液相を収集し、ＴＨＦ層を分離した。水層をＴＨＦ／ＥＡで抽出した（５０ｍＬ／５０ｍＬ）。有機層を組み合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して次のステップのための残渣（ＨＸ２００９９－ｂ）を得た（３．１ｇ、＞１００％）。ＭＳ ｍ／ｚ ３３１．５ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
［０２６５］ステップ２で、ニトロ化合物（ＨＸ２００９９－ａ）（３．０ｇ、８．３３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）及び水（８０ｍＬ）で溶解した。亜鉛（１３．５４ｇ、２０８．３ｍｍｏｌ）を一括で添加し、続いてＮＨ４Ｃｌ（１３．４ｇ、２５０．０ｍｍｏｌ）を添加した。懸濁液を室温で１ｈ強く撹拌した（ＴＬＣ）。濾過後、ケーキをＴＨＦ（２０ｍＬ ｘ ２）で洗浄した。濾液に水相が飽和するまでＮａＣｌを添加した。液相を収集し、ＴＨＦ層を分離した。水層をＴＨＦ／ＥＡで抽出した（５０ｍＬ／５０ｍＬ）。有機層を組み合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して次のステップのための残渣（ＨＸ２００９９－ｂ）を得た（３．１ｇ、＞１００％）。ＭＳ ｍ／ｚ ３３１．５ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0244】
ステップ３で、アミン化合物（ＨＸ２００９９－ｂ）（６６０ｍｇ、粗製、＜２．０ｍｍｏｌ）及びオルト吉草酸トリエチル（８１６ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）をトルエン（５０ｍＬ）に懸濁させ、１１０℃に加熱した。次いで、ピリジンＨＣＩ（２３．２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応を４ｈ加熱した。混合物を室温で４８ｈ維持した（ＴＬＣ）。液体をデカントし、残った固体／残渣をトルエン（１０ｍＬ ｘ ２）とともに撹拌し、液体と混合し、濃縮した。残渣をＤＣＭで溶解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中メタノール、０～１０～２０％、３０ｇカラム）によって精製して目的化合物ＨＸ２００９９－ｃを得た（３００ｍｇ、２ステップで３７．８％）。ＭＳ ｍ／ｚ ３９７．５ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0245】
ステップ４で、化合物ＨＸ２００９９－ｃ（２００ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（８ｍＬ）で溶解し、ｍＣＰＢＡ（２６１．５ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）で処理した。反応を室温で４ｈ維持した。混合物をＮａＨＣＯ３飽和溶液（１５ｍＬ ｘ ３）で洗浄し、乾燥させ、濃縮して次のステップのための粗生成物ＨＸ２００９９－ｄを得た。ＭＳ ｍ／ｚ ４１３．５ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0246】
ステップ５で、圧力管内で、化合物ＨＸ２００９９－ｄ（２００ｍｇ、＜０．４８ｍｍｏｌ）をジクロロエタン（１５ｍＬ）で溶解し、濃水酸化アンモニウム（２８％、０．２４ｍＬ）で処理し、温度を０℃にした。この混合物に、冷却後に塩化トシル（１０４ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を３ｍｉｎかけて徐々に添加した。濃水酸化アンモニウム（０．１２ｍＬ）を添加し、管を密封した。管を８０℃で４ｈ加熱した（ＴＬＣ）。冷却後、混合物をＤＣＭ（２５ｍＬ）で希釈し、水（３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して目的化合物（ＨＸ２００９９－ｅ）を得た（１５０ｍｇ、７６％）。ＭＳ ｍ／ｚ ４１２．５ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0247】
ステップ６で、化合物ＨＸ２００９９－ｅ（１５０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）をＴＦＡ／ＤＣＭ（２ｍＬ／６ｍＬ）で室温にて２ｈ処理した（ＨＰＬＣ）。次に、反応を真空中で乾燥させ、残渣をセミ分取／分取ＨＰＬＣによって精製し、凍結乾燥して化合物ｉ－３を得た（７４ｍｇ、６６％）。ＭＳ ｍ／ｚ ３１２．５ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
［０２７０］ステップ７で、化合物ｉ－３（６２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）で溶解し、ＤＩＰＥＡ（６６μＬ、０．４ｍｍｏｌ）及びＮ－スクシンイミジル３－マレイミドプロピオネート（６３．９ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）で処理した。反応を室温で３ｈ維持し（ＨＰＬＣ）、そして混合物をそのまま次のステップに使用した。
［０２７０］ステップ７で、化合物ｉ－３（６２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）で溶解し、ＤＩＰＥＡ（６６μＬ、０．４ｍｍｏｌ）及びＮ－スクシンイミジル３－マレイミドプロピオネート（６３．９ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）で処理した。反応を室温で３ｈ維持し（ＨＰＬＣ）、そして混合物をそのまま次のステップに使用した。
【0248】
ステップ８～９で、ステップ７からの混合物を連結ユニットＬＵ１０２（１６１ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）とＨ２Ｏ（５ｍＬ）の溶液で処理した。混合物を０～４０℃にて０．５～２０ｈ反応させた。次いで、反応混合物を適量のトリス塩基溶液又は開環反応を促進する他の溶液と混合し、反応を０～４０℃で０．２～２０ｈ進行させた。反応完了後、生成物をセミ分取／分取ＨＰＬＣによって精製し、凍結乾燥して連結ユニット－アゴニストＬＰ１０２－１－４を得た（６０ｍｇ、３ステップで３０％）。ＭＳ ｍ／ｚ １０１９．５ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0249】
２．２．２ 連結ユニット－アゴニストＬＰ２０１－１－１の調製
【化85】
【0250】
ステップ１、Ｆｍｏｃ－ＬＰ２０１－１－１の調製
購入したアゴニストｉｉ－１を秤量し、ＤＭＦで溶解した。次いで、ＤＩＥＡ又はＥｔ３Ｎと、ＨＯＢｔ、ＨＯＡｔ／ＤＩＣ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ又はＨＡＴＵから選ばれるコンジュゲーション試薬とを添加した。混合物を１０～１２０ｍｉｎ撹拌した。次いで、連結ユニットＬＮ２０１とＤＭＦの溶液を反応混合物に添加し、０～４０℃で０．５～２０ｈ反応させた。反応完了後、生成物をセミ分取／分取ＨＰＬＣによって精製し、凍結乾燥してＦｍｏｃ－ＬＰ２０１－１－１を得た。理論分子量：１１２７．２、測定値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１１２７．７。
購入したアゴニストｉｉ－１を秤量し、ＤＭＦで溶解した。次いで、ＤＩＥＡ又はＥｔ３Ｎと、ＨＯＢｔ、ＨＯＡｔ／ＤＩＣ、ＤＣＣ、ＥＤＣＩ又はＨＡＴＵから選ばれるコンジュゲーション試薬とを添加した。混合物を１０～１２０ｍｉｎ撹拌した。次いで、連結ユニットＬＮ２０１とＤＭＦの溶液を反応混合物に添加し、０～４０℃で０．５～２０ｈ反応させた。反応完了後、生成物をセミ分取／分取ＨＰＬＣによって精製し、凍結乾燥してＦｍｏｃ－ＬＰ２０１－１－１を得た。理論分子量：１１２７．２、測定値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１１２７．７。
【0251】
ステップ２、連結ユニット－アゴニストＬＰ２０１－１－１の調製
Ｆｍｏｃ－ＬＰ２０１－１－１を秤量し、ピペリジン／ＤＭＦ（ｖ／ｖ＝１：４）で溶解した。次いで、混合物を０～４０℃で０．５～２０ｈ反応させた。反応完了後、生成物をセミ分取／分取ＨＰＬＣによって精製し、凍結乾燥してＬＰ２０１－１－１を得た。理論分子量：９０５．０、測定値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝９０５．６。
Ｆｍｏｃ－ＬＰ２０１－１－１を秤量し、ピペリジン／ＤＭＦ（ｖ／ｖ＝１：４）で溶解した。次いで、混合物を０～４０℃で０．５～２０ｈ反応させた。反応完了後、生成物をセミ分取／分取ＨＰＬＣによって精製し、凍結乾燥してＬＰ２０１－１－１を得た。理論分子量：９０５．０、測定値：［Ｍ＋Ｈ］＋＝９０５．６。
【0252】
【表12】
【0253】
実施例３ 標的化分子－薬剤コンジュゲートの調製
連結ユニット－アゴニスト中間体をリガーゼによって部位特異的に抗体にそれぞれコンジュゲーしてＡＩＡＣを形成した。コンジュゲーション反応の方法はＷＯ２０１５１６５４１３Ａ１を参照すればよい。得られたＡＩＡＣｓは下記表に示すとおりである。
連結ユニット－アゴニスト中間体をリガーゼによって部位特異的に抗体にそれぞれコンジュゲーしてＡＩＡＣを形成した。コンジュゲーション反応の方法はＷＯ２０１５１６５４１３Ａ１を参照すればよい。得られたＡＩＡＣｓは下記表に示すとおりである。
【0254】
【表13】
【0255】
効果例１ インビトロでの抗体免疫アゴニストコンジュゲートの評価
ヒト末梢単核細胞の単離
ＳｅｐＭａｔｅ５０及びＬｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して健康な献血者からヒト末梢単核細胞を単離した。生細胞を計数し、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で細胞濃度を１．２５ｘ１０６／ｍｌに調整した。腫瘍細胞をトリプシンによって剥離し、回収した。生細胞を計数し、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で細胞濃度を２．５ｘ１０５／ｍｌに調整した。１２．５ｘ１０４のヒトＰＢＭＣ及び２．５ｘ１０４の腫瘍細胞（ＰＢＭＣ：腫瘍細胞＝５：１）を９６ウェルプレートのウェルに添加し、次いで抗体又はコンジュゲートを指定の濃度で添加した。細胞混合物を薬物とともに１８時間インキュベートしてから、ヒトＴＮＦα ＥＬＩＳＡ用に無細胞上清を収集した。
ヒト末梢単核細胞の単離
ＳｅｐＭａｔｅ５０及びＬｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して健康な献血者からヒト末梢単核細胞を単離した。生細胞を計数し、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で細胞濃度を１．２５ｘ１０６／ｍｌに調整した。腫瘍細胞をトリプシンによって剥離し、回収した。生細胞を計数し、１０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で細胞濃度を２．５ｘ１０５／ｍｌに調整した。１２．５ｘ１０４のヒトＰＢＭＣ及び２．５ｘ１０４の腫瘍細胞（ＰＢＭＣ：腫瘍細胞＝５：１）を９６ウェルプレートのウェルに添加し、次いで抗体又はコンジュゲートを指定の濃度で添加した。細胞混合物を薬物とともに１８時間インキュベートしてから、ヒトＴＮＦα ＥＬＩＳＡ用に無細胞上清を収集した。
【0256】
ＨＥＲ２標的免疫コンジュゲートの活性を評価するために、ヒトＰＢＭＣ及びＮＣＩ Ｎ８７ヒト胃癌細胞を５：１の比率で共培養し、抗体又は試験免疫コンジュゲート（ＡＣ１０２－６－１－１又はＡＣ１０２－８－１－１）を指定の濃度で添加した。ＡＣ１０２－６－１－１は抗体Ａｂ０００１より高いＴＮＦα産生を誘導し、ＡＣ１０２－６－１－１の有効濃度はペイロードのレシキモドより遥かに低かった（図６）。ＡＣ１０２－８－１－１は、ＡＣ１０２－６－１－１と同様に、Ａｂ０００１より高いレベルのＴＮＦαを誘導した（図７）。ＡＣ１０２－６－１－１の活性はヒトＰＢＭＣとＭＤＡ－ＭＢ－４６８ ＨＥＲ２陰性細胞の共培養において観察されず、このことからＡＣ１０２－６－１－１の活性が標的腫瘍細胞上のＨＥＲ２発現に大きく依存することが分かる（図８）。このデータを考慮して、免疫コンジュゲートの活性は、ヒトＰＢＭＣと、ＨＣＣ１９５４（図９）、ＳＫ－ＢＲ－３（図１０）、ＢＴ４７４（図１１）、ＪＩＭＴ１（図１２）、Ｃｏｌｏ２０５（図１３）、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８（図１４）を含む異なるＨＥＲ２発現レベルの他の癌細胞との共培養で試験した。データによると、ＡＣ１０２－８－１－１はＰＢＭＣとＨＥＲ２ ｈｉｇｈ腫瘍細胞との共培養においてのみＴＮＦαを誘導できる。
【0257】
同様な実験設定において、他のいくつかのコンジュゲートのインビトロ活性を評価した（図１５～図１７）。ＡＣ１０２－２－１－１及びＡＣ１０２－３－１－１は同じアゴニストペイロードを有するが、連結ユニットが異なり、異なるレベルのＴＮＦα産生を誘導した（図１５）。
【0258】
効果例２ インビトロでの抗体免疫アゴニストコンジュゲートの評価
ＴＲＯＰ２標的免疫コンジュゲートの活性を評価するために、ヒトＰＢＭＣとＮＣＩ－Ｎ８７ヒト胃癌細胞を５：１の比率で共培養し、試験免疫コンジュゲート（ＡＣ１０２－８－２－１又はＡＣ１０２－６－２－１）又は裸の未修飾抗ＴＲＯＰ２抗体を指定の濃度で添加した。ヒトＰＢＭＣの単離及び実験設定は効果例１と同様にした。ＡＣ１０２－８－２－１及びＡＣ１０２－６－２－１は抗体Ａｂ００６４（軽鎖：配列番号１７、重鎖：配列番号１８）より高いＴＮＦα産生を誘導した（図１８）。
ＴＲＯＰ２標的免疫コンジュゲートの活性を評価するために、ヒトＰＢＭＣとＮＣＩ－Ｎ８７ヒト胃癌細胞を５：１の比率で共培養し、試験免疫コンジュゲート（ＡＣ１０２－８－２－１又はＡＣ１０２－６－２－１）又は裸の未修飾抗ＴＲＯＰ２抗体を指定の濃度で添加した。ヒトＰＢＭＣの単離及び実験設定は効果例１と同様にした。ＡＣ１０２－８－２－１及びＡＣ１０２－６－２－１は抗体Ａｂ００６４（軽鎖：配列番号１７、重鎖：配列番号１８）より高いＴＮＦα産生を誘導した（図１８）。
【0259】
効果例３ インビトロでの抗体免疫アゴニストコンジュゲートの評価
クローディン１８．２はＡＩＡＣターゲットの例とすることもできる。クローディン１８．２標的免疫コンジュゲートの活性を評価するために、ＮＣＩ－Ｎ８７－Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２ヒト胃癌細胞過剰発現ヒトクローディン１８．２又は親ＮＣＩ－Ｎ８７細胞をヒトＰＢＭＣと１：５の比率で共培養し、試験免疫コンジュゲート（ＡＣ１０２－８－３－１又はＡＣ２０１－１－３－１）又は裸の未修飾抗クローディン１８．２抗体を指定の濃度でそれぞれ添加した。ヒトＰＢＭＣの単離及び実験設定は効果例１と同様にした。ＡＣ１０２－８－３－１及びＡＣ２０１－１－３－１コンジュゲートは抗体Ａｂ００９８に比べてより高いＴＮＦα産生を誘導したが（図１９）、これらのコンジュゲートは、クローディン１８．２陰性ＮＣＩ－Ｎ８７親細胞において非常に高い用量で極僅かなＴＮＦα産生しか誘導しなかった（図２０）。リンカー－ペイロード中間体ＬＰ２０１－１－１とＡｂ００９８－ＬＣＣＴＬ－ＨＣを使用して調製されたコンジュゲートは、リンカー－ペイロード中間体ＬＰ１０２－８－１とＡｂ００９８－ＬＣＣＴＬ－ＨＣを使用して調製されたコンジュゲートに比べて、この２つのペイロードの効力と一致するように、より穏やかな活性を示した。
クローディン１８．２はＡＩＡＣターゲットの例とすることもできる。クローディン１８．２標的免疫コンジュゲートの活性を評価するために、ＮＣＩ－Ｎ８７－Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２ヒト胃癌細胞過剰発現ヒトクローディン１８．２又は親ＮＣＩ－Ｎ８７細胞をヒトＰＢＭＣと１：５の比率で共培養し、試験免疫コンジュゲート（ＡＣ１０２－８－３－１又はＡＣ２０１－１－３－１）又は裸の未修飾抗クローディン１８．２抗体を指定の濃度でそれぞれ添加した。ヒトＰＢＭＣの単離及び実験設定は効果例１と同様にした。ＡＣ１０２－８－３－１及びＡＣ２０１－１－３－１コンジュゲートは抗体Ａｂ００９８に比べてより高いＴＮＦα産生を誘導したが（図１９）、これらのコンジュゲートは、クローディン１８．２陰性ＮＣＩ－Ｎ８７親細胞において非常に高い用量で極僅かなＴＮＦα産生しか誘導しなかった（図２０）。リンカー－ペイロード中間体ＬＰ２０１－１－１とＡｂ００９８－ＬＣＣＴＬ－ＨＣを使用して調製されたコンジュゲートは、リンカー－ペイロード中間体ＬＰ１０２－８－１とＡｂ００９８－ＬＣＣＴＬ－ＨＣを使用して調製されたコンジュゲートに比べて、この２つのペイロードの効力と一致するように、より穏やかな活性を示した。
【0260】
効果例４ インビトロでの抗体免疫アゴニストコンジュゲートの評価
ＨＥＲ２標的免疫コンジュゲートの活性を評価するために、ヒトＰＢＭＣとＳＫ－ＢＲ－３（図２１）又はＨＣＣ１９５４（図２２）ヒト乳癌細胞を５：１の比率で共培養し、免疫コンジュゲート（ＡＣ１０２－６－１－１）及び抗体（Ａｂ０００１）を指定の濃度で添加した。細胞を薬物とともに１８時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡによるヒトＩＦＮγ検出のために無細胞上清を収集した。ヒトＰＢＭＣの単離及び実験設定は効果例１と同様にした。ＡＣ１０２－６－１－１は抗体Ａｂ０００１より高いＩＦＮγ産生を誘導しており、Ｔ細胞応答を活性化する潜在的な能力が示唆されている。
ＨＥＲ２標的免疫コンジュゲートの活性を評価するために、ヒトＰＢＭＣとＳＫ－ＢＲ－３（図２１）又はＨＣＣ１９５４（図２２）ヒト乳癌細胞を５：１の比率で共培養し、免疫コンジュゲート（ＡＣ１０２－６－１－１）及び抗体（Ａｂ０００１）を指定の濃度で添加した。細胞を薬物とともに１８時間インキュベートした後、ＥＬＩＳＡによるヒトＩＦＮγ検出のために無細胞上清を収集した。ヒトＰＢＭＣの単離及び実験設定は効果例１と同様にした。ＡＣ１０２－６－１－１は抗体Ａｂ０００１より高いＩＦＮγ産生を誘導しており、Ｔ細胞応答を活性化する潜在的な能力が示唆されている。
【0261】
効果例５ インビボでの抗体免疫アゴニストコンジュゲートの評価
インビボ抗腫瘍効果研究のために、１ｘ１０７のＮＣＩ－Ｎ８７ヒト胃癌細胞をＳＣＩＤベージュマウスの右脇腹に皮下接種した。６日後、腫瘍体積が平均１７３ｍｍ３に達した時、腫瘍担持マウスを振り分け、Ａｂ０００１又は又は試験免疫コンジュゲート（ＡＣ１０２－６－１－１又はＡＣ１０２－８－１－１）を５ｍｇ／ｋｇで静脈内投与した。腫瘍体積を週に２回ノギスで測定した。抗体自体、Ａｂ０００１は、非常に限られた抗腫瘍活性を示した。ＡＣ１０２－６－１－１及びＡＣ１０２－８－１－１は、最終的に腫瘍をほぼ治癒した（図２３）。別の研究では、ＡＣ１０２－８－１－１は０．５、１、及び３ｍｇ／ｋｇで用量依存的な活性を示した（図２４）。
インビボ抗腫瘍効果研究のために、１ｘ１０７のＮＣＩ－Ｎ８７ヒト胃癌細胞をＳＣＩＤベージュマウスの右脇腹に皮下接種した。６日後、腫瘍体積が平均１７３ｍｍ３に達した時、腫瘍担持マウスを振り分け、Ａｂ０００１又は又は試験免疫コンジュゲート（ＡＣ１０２－６－１－１又はＡＣ１０２－８－１－１）を５ｍｇ／ｋｇで静脈内投与した。腫瘍体積を週に２回ノギスで測定した。抗体自体、Ａｂ０００１は、非常に限られた抗腫瘍活性を示した。ＡＣ１０２－６－１－１及びＡＣ１０２－８－１－１は、最終的に腫瘍をほぼ治癒した（図２３）。別の研究では、ＡＣ１０２－８－１－１は０．５、１、及び３ｍｇ／ｋｇで用量依存的な活性を示した（図２４）。
【0262】
５ｘ１０６ のＪＩＭＴ１ヒト乳癌細胞をＳＣＩＤベージュマウスの右脇腹に皮下接種して異種移植モデルを生成した。９日後、腫瘍体積が平均１４９ｍｍ３に達した時、腫瘍担持マウスにＡＣ１０２－８－１－１を５ｍｇ／ｋｇで静脈内投与した。腫瘍の増殖は大幅に阻害された（図２５）。
【0263】
ＭＣ３８ｈＨＥＲ２マウス結腸直腸癌細胞を過剰発現する５ｘ１０５ のヒトＨＥＲ２をＣ５７ＢＬ／６マウスの右脇腹に皮下接種した。８日後、腫瘍体積が平均９０ｍｍ３に達した時、腫瘍担持マウスを振り分け、Ａｂ０００１又はＡＣ１０２－６－１－１を静脈内投与した。１０ｍｇ／ｋｇでのＡｂ０００１は明らかな抗腫瘍活性を示さなかった。３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇでのＡＣ１０２－６－１－１は用量依存的に腫瘍増殖を阻害した（図２６）。同様な設定において、３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇでのＡＣ１０２－８－１－１は両方ともマウスの１００％において完全な腫瘍退縮を誘導した（図２７）。
【0264】
効果例６ インビボでの抗体免疫アゴニストコンジュゲートの評価
抗ＴＲＯＰ２ ＡＩＡＣのインビボ抗腫瘍効果を試験するために、１ｘ１０７のＮＣＩ－Ｎ８７ヒト胃癌細胞をＳＣＩＤベージュマウスの右脇腹に皮下接種した。腫瘍体積が平均１８２ｍｍ３に達した時、腫瘍担持マウスを振り分け、ビヒクル又は試験免疫コンジュゲート（ＡＣ１０２－６－２－１、ＡＣ１０２－８－２－１又はＡＣ２０１－１－２－１）を５ｍｇ／ｋｇで静脈内投与した。腫瘍体積を週に２回ノギスで測定した。ビヒクル対照群に比べ、ＡＣ１０２－６－２－１及びＡＣ１０２－８－２－１は強い抗腫瘍活性を示した（図２８）。
抗ＴＲＯＰ２ ＡＩＡＣのインビボ抗腫瘍効果を試験するために、１ｘ１０７のＮＣＩ－Ｎ８７ヒト胃癌細胞をＳＣＩＤベージュマウスの右脇腹に皮下接種した。腫瘍体積が平均１８２ｍｍ３に達した時、腫瘍担持マウスを振り分け、ビヒクル又は試験免疫コンジュゲート（ＡＣ１０２－６－２－１、ＡＣ１０２－８－２－１又はＡＣ２０１－１－２－１）を５ｍｇ／ｋｇで静脈内投与した。腫瘍体積を週に２回ノギスで測定した。ビヒクル対照群に比べ、ＡＣ１０２－６－２－１及びＡＣ１０２－８－２－１は強い抗腫瘍活性を示した（図２８）。
【0265】
１千万のＭＤＡ－ＭＢ－４６８ヒト乳癌細胞をＳＣＩＤベージュマウスの右脇腹に皮下接種して異種移植モデルを生成した。腫瘍体積が平均１８３ｍｍ３に達した時、腫瘍担持マウスを振り分け、ビヒクル又は試験免疫コンジュゲート（ＡＣ１０２－８－２－１又はＡＣ２０１－１－２－１）を静脈内投与した。ＡＣ１０２－８－２－１及びＡＣ２０１－１－２－１は３ｍｇ／ｋｇで良好且つ同等の抗腫瘍活性を示した。ＡＣ１０２－８－２－１は３ｍｇ／ｋｇで、０．５ｍｇ／ｋｇの場合より高い抗腫瘍応答を示し、用量依存的な効果を示した（図２９）。
【0266】
効果例７ インビボでの抗体免疫アゴニストコンジュゲートの評価
ＮＵＧＣ４モデルを使用して抗クローディン１８．２ＡＩＡＣのインビボ抗腫瘍効果を評価した。１百万のＮＵＧＣ４ヒト胃癌細胞をＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの右脇腹に皮下接種して異種移植モデルを生成した。腫瘍体積が平均１０８ｍｍ３に達した時、腫瘍担持マウスを振り分け、試験抗クローディン１８．２コンジュゲート（ＡＣ１０２－８－３－１）又は対応する裸の未修飾抗体を０日目と１４日目に、５ｍｇ／ｋｇで静脈内投与した。腫瘍体積を週に２回ノギスで測定した。抗体単独、Ａｂ００９８（軽鎖：配列番号２１、重鎖：配列番号２２）は、抗腫瘍活性を示さず、ＡＣ１０２－８－３－１は抗腫瘍活性を示した（図３０）。
ＮＵＧＣ４モデルを使用して抗クローディン１８．２ＡＩＡＣのインビボ抗腫瘍効果を評価した。１百万のＮＵＧＣ４ヒト胃癌細胞をＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの右脇腹に皮下接種して異種移植モデルを生成した。腫瘍体積が平均１０８ｍｍ３に達した時、腫瘍担持マウスを振り分け、試験抗クローディン１８．２コンジュゲート（ＡＣ１０２－８－３－１）又は対応する裸の未修飾抗体を０日目と１４日目に、５ｍｇ／ｋｇで静脈内投与した。腫瘍体積を週に２回ノギスで測定した。抗体単独、Ａｂ００９８（軽鎖：配列番号２１、重鎖：配列番号２２）は、抗腫瘍活性を示さず、ＡＣ１０２－８－３－１は抗腫瘍活性を示した（図３０）。
【0267】
配列表
配列番号１：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ 軽鎖：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＮＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＲＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＨＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＧＡＬＰＥＴＧＧ
配列番号２：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ 重鎖：
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配列番号３：Ａｂ０００１－ＬＣ－ＨＣＣＴ 軽鎖：
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配列番号４：Ａｂ０００１－ＬＣ－ＨＣＣＴ 重鎖：
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配列番号５：Ａｂ０００１－ＬＣ－ＨＣＣＴＬ 軽鎖：
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配列番号６：Ａｂ０００１－ＬＣ－ＨＣＣＴＬ 重鎖：
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配列番号７：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴ－ＨＣ 軽鎖：
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配列番号８：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴ－ＨＣ 重鎖：
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配列番号９：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴ－ＨＣＣＴ 軽鎖：
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配列番号１０：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴ－ＨＣＣＴ 重鎖：
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配列番号１１：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴ－ＨＣＣＴＬ 軽鎖：
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配列番号１２：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴ－ＨＣＣＴＬ 重鎖：
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配列番号１３：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣＣＴ 軽鎖：
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配列番号１４：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣＣＴ 重鎖：
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配列番号１５：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣＣＴＬ 軽鎖：
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配列番号１６：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣＣＴＬ 重鎖：
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配列番号１７：Ａｂ００６４ 軽鎖
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配列番号１８：Ａｂ００６４ 重鎖
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配列番号１９：Ａｂ００６４－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ 軽鎖
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配列番号２０：Ａｂ００６４－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ 重鎖
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配列番号２１：Ａｂ００９８ 軽鎖
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配列番号２２：Ａｂ００９８ 重鎖
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配列番号２３：Ａｂ００９８－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ 軽鎖
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配列番号２４：Ａｂ００９８－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ 重鎖
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配列番号１：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ 軽鎖：
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配列番号２：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ 重鎖：
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配列番号３：Ａｂ０００１－ＬＣ－ＨＣＣＴ 軽鎖：
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配列番号４：Ａｂ０００１－ＬＣ－ＨＣＣＴ 重鎖：
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配列番号６：Ａｂ０００１－ＬＣ－ＨＣＣＴＬ 重鎖：
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配列番号８：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴ－ＨＣ 重鎖：
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配列番号９：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴ－ＨＣＣＴ 軽鎖：
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配列番号１０：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴ－ＨＣＣＴ 重鎖：
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配列番号１１：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴ－ＨＣＣＴＬ 軽鎖：
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配列番号１２：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴ－ＨＣＣＴＬ 重鎖：
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配列番号１３：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣＣＴ 軽鎖：
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配列番号１４：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣＣＴ 重鎖：
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配列番号１５：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣＣＴＬ 軽鎖：
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配列番号１６：Ａｂ０００１－ＬＣＣＴＬ－ＨＣＣＴＬ 重鎖：
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配列番号１７：Ａｂ００６４ 軽鎖
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配列番号１８：Ａｂ００６４ 重鎖
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配列番号１９：Ａｂ００６４－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ 軽鎖
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配列番号２０：Ａｂ００６４－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ 重鎖
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配列番号２１：Ａｂ００９８ 軽鎖
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配列番号２２：Ａｂ００９８ 重鎖
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配列番号２３：Ａｂ００９８－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ 軽鎖
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配列番号２４：Ａｂ００９８－ＬＣＣＴＬ－ＨＣ 重鎖
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【図1】
【図2a】
【図2b】
【図3】
【図4a】
【図4b】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【図23】
【図24】
【図25】
【図26】
【図27】
【図28】
【図29】
【図30】
【配列表】
【国際調査報告】