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特表2024-509361複数のタンパク質供給物を用いたβラクトグロブリンの結晶化
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-03-01
(54)【発明の名称】複数のタンパク質供給物を用いたβラクトグロブリンの結晶化
(51)【国際特許分類】
C07K 4/12 20060101AFI20240222BHJP
A23L 33/19 20160101ALI20240222BHJP
A23C 21/00 20060101ALI20240222BHJP
A23C 9/14 20060101ALI20240222BHJP
A23J 1/20 20060101ALI20240222BHJP
【ＦＩ】
C07K4/12
A23L33/19
A23C21/00
A23C9/14
A23J1/20
【審査請求】未請求
【予備審査請求】有
(21)【出願番号】P 2023547146
(86)(22)【出願日】2022-02-08
(85)【翻訳文提出日】2023-09-22
(86)【国際出願番号】 EP2022053010
(87)【国際公開番号】W WO2022167683
(87)【国際公開日】2022-08-11
(31)【優先権主張番号】21155726.9
(32)【優先日】2021-02-08
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522257023
【氏名又は名称】アーラ フーズ アンバ
(74)【代理人】
【識別番号】100114775
【弁理士】
【氏名又は名称】高岡 亮一
(74)【代理人】
【識別番号】100121511
【弁理士】
【氏名又は名称】小田 直
(74)【代理人】
【識別番号】100202751
【弁理士】
【氏名又は名称】岩堀 明代
(74)【代理人】
【識別番号】100208580
【弁理士】
【氏名又は名称】三好 玲奈
(74)【代理人】
【識別番号】100191086
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 香元
(72)【発明者】
【氏名】ローリセン，カスパー・ボーゲルンド
(72)【発明者】
【氏名】バーテルセン，ハンス
(72)【発明者】
【氏名】ドラックマン，ニコライ
【テーマコード（参考）】
4B001
4B018
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B001AC05
4B001BC05
4B001BC99
4B001EC99
4B018LB07
4B018MD71
4B018ME14
4B018MF01
4B018MF10
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA50
4H045CA43
4H045EA01
4H045FA71
4H045GA01
(57)【要約】
本発明は、βラクトグロブリン（ＢＬＧ）の結晶化によりＢＬＧ組成物を生成する改善された方法に関する。発明は、少なくとも２つの異なるＢＬＧ含有タンパク質供給物を利用し、これらが混合され、過飽和タンパク質溶液が調製され、この中でＢＬＧが結晶化される。タンパク質供給物の１つは少なくとも５．６のｐＨを有さなければならず、タンパク質供給物の１つは最大でも５．４のｐＨを有さなければならない。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
好ましくは結晶化および／または単離形態でのβラクトグロブリン（ＢＬＧ）を含む可食組成物を調製する方法であって、ｂ）ＢＬＧを含む初期タンパク質溶液を調製するステップであって、前記初期タンパク質溶液はＢＬＧに関して過飽和であり、５－６の範囲のｐＨを有する、ステップ、
ｂ）前記過飽和、初期タンパク質溶液中、好ましくは塩溶モードでＢＬＧを結晶化させ、よって、ＢＬＧ結晶含有溶液を得るステップ、ならびに
ｃ）任意で、前記ＢＬＧ結晶含有溶液の残りの液体からＢＬＧ結晶を分離するステップ
を含み、
ステップａ）は、１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）を１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）と混合することにより、前記初期タンパク質溶液を調製することを含み、
－「Ａ型タンパク質供給物」は、ＢＬＧを含み、少なくとも５．６のｐＨを有するタンパク質供給物として規定され、ならびに、
－「Ｂ型タンパク質供給物」は、ＢＬＧを含み、最大でも５．４のｐＨを有するタンパク質供給物として規定される、方法。
【請求項2】
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
少なくとも５．６、より好ましくは少なくとも５．７、さらにいっそう好ましくは少なくとも５．８、最も好ましくは少なくとも５．９のｐＨ、ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、請求項１に記載の方法：
最大でも５．４、より好ましくは最大でも５．３、さらにいっそう好ましくは、５．２、最も好ましくは５．１のｐＨ。
【請求項3】
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
少なくとも６．０、より好ましくは少なくとも６．１、さらにいっそう好ましくは少なくとも６．２、最も好ましくは少なくとも６．３のｐＨ、ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、前記請求項のいずれかに記載の方法：
最大でも５．０、より好ましくは最大でも４．９、さらにいっそう好ましくは４．８、最も好ましくは４．７のｐＨ。
【請求項4】
Ａ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、前記請求項のいずれかに記載の方法：
５．６－１０、より好ましくは５．８－８、さらにいっそう好ましくは、６．０－７、最も好ましくは６．１－６．５の範囲のｐＨ。
【請求項5】
Ａ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、前記請求項のいずれかに記載の方法：
６．０－８、より好ましくは６．１－７．５、さらにいっそう好ましくは、６．２－７．０、最も好ましくは６．２－６．５の範囲のｐＨ。
【請求項6】
Ｂ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、前記請求項のいずれかに記載の方法：
２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨ。
【請求項7】
Ｂ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、前記請求項のいずれかに記載の方法：
４．０－５．０、より好ましくは４．１－４．９、さらにいっそう好ましくは、４．３－４．８、最も好ましくは４．５－４．８の範囲のｐＨ。
【請求項8】
前記１つ以上のＡ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧ結晶を含まず、より好ましくは前記１つ以上のＡ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧ結晶を含まず、および／または前記１つ以上のＢ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧ結晶を含まず、より好ましくは前記１つ以上のＢ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧ結晶を含まない、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項9】
前記１つ以上のＡ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧに関して過飽和ではなく、より好ましくは前記１つ以上のＡ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧに関して過飽和でなく、および／または前記１つ以上のＢ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧに関して過飽和ではなく、より好ましくは前記１つ以上の型のいずれもＢＬＧに関して過飽和でない、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項10】
ＢＬＧ結晶を含まないＡ型およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、前記初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の少なくとも１％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも１０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも２０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗで寄与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項11】
ＢＬＧ結晶を含まないＡ型およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、前記初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の少なくとも５０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも７０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９０％ｗ／ｗで寄与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項12】
Ａ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、前記請求項のいずれかに記載の方法：
最大でも６０℃、より好ましくは最大でも５０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも４０℃、最も好ましくは最大でも３０℃の温度。
【請求項13】
Ｂ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、前記請求項のいずれかに記載の方法：
最大でも６０℃、より好ましくは最大でも５０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも４０℃、最も好ましくは最大でも３０℃の温度。
【請求項14】
Ａ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む、前記請求項のいずれかに記載の方法：
Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも１％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは少なくとも３％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも７％ｗ／ｗのＢＬＧ。
【請求項15】
Ｂ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む前記請求項のいずれかに記載の方法：
Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも１％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは少なくとも３％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも７％ｗ／ｗのＢＬＧ。
【請求項16】
前記初期タンパク質溶液は、前記初期タンパク質溶液の重量に対して１－９９％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲のＡ型タンパク質供給物の総量を含む、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項17】
前記初期タンパク質溶液は、前記初期タンパク質溶液の重量に対して１－９９％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲のＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量を含む、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項18】
前記初期タンパク質溶液は下記を含む、前記請求項のいずれかに記載の方法：－前記初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の５．８－８のｐＨを有するＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－前記初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の３－５．２のｐＨを有するＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
【請求項19】
前記初期タンパク質溶液は下記を含む、前記請求項のいずれかに記載の方法：－前記初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の６．０－８のｐＨを有するＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－前記初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の３－５．０のｐＨを有するＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
【請求項20】
Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、前記初期タンパク質溶液のタンパク質含量の少なくとも５０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも７０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９０％ｗ／ｗで寄与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項21】
Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、前記初期タンパク質溶液のタンパク質含量の少なくとも９２％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも９４％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも９６％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９９％ｗ／ｗで寄与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項22】
Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、前記初期タンパク質溶液の固体含量の少なくとも５０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも７０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９０％ｗ／ｗで寄与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項23】
Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、前記初期タンパク質溶液の固体含量の少なくとも９２％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも９４％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも９６％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９９％ｗ／ｗで寄与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項24】
Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、前記初期タンパク質溶液の重量の少なくとも５０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも７０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９０％ｗ／ｗで寄与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項25】
Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、前記初期タンパク質溶液の重量の少なくとも９２％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも９４％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも９６％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９９％ｗ／ｗで寄与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項26】
前記初期タンパク質溶液のＢＬＧの過飽和度は下記の過飽和度の両方より高い、前記請求項のいずれかに記載の方法：－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、Ａ型タンパク質供給物、または
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、合わせられた場合の、Ａ型タンパク質供給物、
および
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、Ｂ型タンパク質供給物、または
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、合わせられた場合の、Ｂ型タンパク質供給物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、βラクトグロブリン（ＢＬＧ）の結晶化によりＢＬＧ組成物を生成する改善された方法に関する。発明は、少なくとも２つの異なるＢＬＧ含有タンパク質供給物を利用し、これらが混合され、過飽和タンパク質溶液が調製され、この中でＢＬＧが結晶化される。タンパク質供給物の１つは少なくとも５．６のｐＨを有さなければならず、タンパク質供給物の１つは最大でも５．４のｐＨを有さなければならない。
【背景技術】
【0002】
乳タンパク質分画の概念は当技術分野でよく知られており、過去数十年の間に、各々が特定の特性および特徴を有する様々な乳タンパク質種で強化された組成物を調製するための一連の技術に開発されてきた。
【0003】
乳清またはホエーからのβラクトグロブリン（ＢＬＧ）の単離は多くの刊行物の主題であり、典型的には、精製βラクトグロブリン生成物に到達するために、複数の分離ステップ、および、しばしばクロマトグラフィーの技術を伴う。
【0004】
ＷＯ２０１８／１１５５２０号は、塩溶モードおよびｐＨ範囲５－６での結晶化によるタンパク質溶液からのＢＬＧの工業規模分離を記載する。しかしながら、ＷＯ２０１８／１１５５２０号は、本発明により規定される、ＢＬＧ含有Ａ型タンパク質供給物（複数可）と、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）を混合することにより過飽和ホエータンパク質溶液を調製することを開示しない。
【0005】
ＷＯ２０２０／００２４２２号は、塩溶モード、５－６の範囲ｐＨでのＢＬＧ結晶化を使用する、ＢＬＧのホエータンパク質溶液からの工業規模除去による、αラクトアルブミン強化ホエータンパク質製品の生成を記載する。しかしながら、ＷＯ２０２０／００２４２２号は、本発明により規定される、ＢＬＧ含有Ａ型タンパク質供給物（複数可）と、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）を混合することにより過飽和ホエータンパク質溶液を調製することを開示しない。
【0006】
ｄｅ Ｊｏｎｇｈら（Ｍｉｌｄ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ Ｄｉｓｃｌｏｓｅｓ Ｎｅｗ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ β－Ｌａｃｔｏｇｌｏｂｕｌｉｎ， Ｊ Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．， ｖｏｌ． ８４（３）， ２００１，５６２－５７１ページ）は、カゼインの低温酸凝固、および、得られた酸ホエーをアフィニティークロマトグラフィー（ＤＥＡＥセファロース）およびゲル浸透クロマトグラフィーの組み合わせに供することによる搾り立て乳からのＢＬＧの精製を記載した。得られたＢＬＧ組成物は、１ｇのタンパク質あたり０．９８５ｇのβラクトグロブリンを含むと明言された。
【0007】
Ｓｌａｃｋら（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ａｎｄ Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ， ｖｏｌ． １０， １９８６， １９－３０ページ）は異なるアプローチを探り、脱塩した酸ホエーおよびスイートホエーをｐＨ４．６５にｐＨ調整し、形成した沈殿物を遠心分離およびデカンテーションにより分離することにより、ＢＬＧ強化沈殿物を調製した。得られた沈殿ペレットは比較的不溶性で、追加のＢＬＧ中にかなりの量のタンパク質不純物を含んでいると説明された。結晶形成は観察されなかった。ｐＨ４．６５で形成され得るＢＬＧ沈殿物はＢＬＧ結晶ではないことに注意すべきである。
【0008】
Ｐａｌｍｅｒ（Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ Ｇｌｏｂｕｌｉｎ ｆｒｏｍ Ｃｏｗ’ｓ Ｍｉｌｋ， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， Ｖｏｌ． １０４， ３５９－３７２ページ）は、望まれないタンパク質の塩析沈殿、ｐＨ調整および透析の複数のシーケンスを使用して、他の望まれないタンパク質を除去する、酸ホエーに基づくタンパク質結晶を生成するための骨の折れる、かつ、時間のかかるプロセスを報告した。最後に、高度に精製されたＢＬＧ溶液が得られた時に、ＢＬＧが結晶化された。プロセスは１２日を超えて続き、トルエンの添加を必要とした。よって、Ｐａｌｍｅｒにおいて開示される手順は安全な食糧生産と適合せず、明らかに食べることができない製品を提供する。
【0009】
Ａｓｃｈａｆｆｅｎｂｕｒｇら（Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ ｂｅｔａ－Ｌａｃｔｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ａｎｄ ａｌｐｈａ－Ｌａｃｔａｌｂｕｍｉｎ ｆｒｏｍ Ｃｏｗ’ｓ Ｍｉｌｋ， Ｂｉｏｃｈ．， ｖｏｌ． ６５， １９５７， ２７３－２７７ページ）はＰａｌｍｅｒのプロセスのプロセスに対して改善されたプロセスを開示し、この改善により、数週ではなく、数日のオーダーでのβラクトグロブリン結晶の調製が可能になる。しかしながら、改善された方法は依然として、結晶化前の望まれないタンパク質の除去を必要とし、さらに結晶化のためにトルエンを使用し、これにより、安全な食糧生産と適合しないものとされる。
【0010】
ＪＰ Ｈ１０ ２１８７５５ Ａ号は、メラニン生成阻害剤を含む化粧品組成物の生成を開示し、これは、ＢＬＧを活性材料成分として含む。その文書はさらに、ＢＬＧは例えば、下記プロセスにより単離することができることを示唆する：塩酸が乳に添加され、カゼインが沈殿し、続いて濾過され、ホエーが得られる。ホエーのｐＨが６．０に調整され、硫酸アンモニウムが半飽和の量で添加され；沈殿したタンパク質が塩析により除去され、濾液が回収される。濾液が硫酸アンモニウムで飽和され、沈殿したタンパク質が回収される。回収されたタンパク質が水に再び溶解され、ｐＨ５．２で透析され、結晶が分離され、β－ラクトグロブリンが１Ｌのホエーから約１．８ｇの割合で調製される。しかしながら、ＪＰ Ｈ１０ ２１８７５５ Ａ号において記載される提案されたプロセスの一般プロセスステップはＢＬＧ結晶の形成に導くには不十分である。よって、その文書はＢＬＧの結晶化またはＢＬＧ結晶の実現可能開示を含まない。
【0011】
ＵＳ ２ ７９０ ７９０号は、溶液からのタンパク質の沈殿のためのプロセスを開示し、より特定的には、沈殿剤として塩化ナトリウムを使用することによる水溶液からの比較的非共役タンパク質の分別沈殿のためのプロセスを開示する。プロセスは、ｐＨ３．６－３．８でのＮａＣｌ誘導沈殿によりＢＬＧを単離するのに有用であることが示唆される。その文書の実施例ＩＩでは、ＮａＣｌ－沈殿物は通常の様式で透析することができ、結晶β－ラクトグロブリンが形成されることが示唆される。しかしながら、ＵＳ ２ ７９０ ７９０号は、ｐＨ３．６－３．８でのＢＬＧ結晶の形成が、実際に可能であることを示しておらず、ＢＬＧ沈殿物を透析する「通常の様式」の意味への言及を含んでいない。よって、その文書はＢＬＧの結晶化またはＢＬＧ結晶の実現可能開示を含まない。
【発明の概要】
【0012】
βラクトグロブリン（ＢＬＧ）は、結晶化により工業規模で効率的に単離することができることが前に発見されている（ＰＣＴ出願ＷＯ２０１８／１１５５２０号を参照されたい）。この結晶化法は大量の過飽和タンパク質溶液の処理および操作を必要とする。
【0013】
発明者らは、ＷＯ２０１８／１１５５２０号の大規模実施はしばしば、結晶化がプロセスにおいて意図される前のＢＬＧの望ましくない結晶化につながることを発見した。これは、例えば、ＢＬＧ結晶化が、微粒子状物質の存在に高感度である膜濾過ユニットまたは他の装置で起こる場合問題となる。
【0014】
本発明者らは今や、結晶化によるＢＬＧの単離は、２つ以上のＢＬＧ含有タンパク質供給物（ＢＬＧ過飽和をそれ自体で有さないか、または、低レベルでしか有さないが、合わせられるとより高い過飽和度を提供する）を混合することにより、過飽和タンパク質溶液を調製することにより改善することができることを発見した。これらのタンパク質供給物の１つは少なくとも５．６、より好ましくは少なくとも６．０のｐＨを有するべきであり、他は最大でも５．４、より好ましくは最大でも５．０のｐＨを有するべきである。合わせると、２つの供給物は５．５（発明者らは、これが、ＢＬＧ結晶化の収率にとって最適ｐＨであることを見出している）に近いｐＨを有する過飽和ＢＬＧタンパク質溶液を提供する。
【0015】
タンパク質供給物を合わせるステップは好ましくは供給物を混合することにより実施され、タンパク質の結晶化に高感度な機器の使用を必要としない。よって、この発明は早期の望まれないＢＬＧ結晶化のリスク（関連するプロセス機器の目詰りおよび故障につながる可能性がある）を低減させ、または、さらには完全に回避する。
【0016】
過飽和タンパク質溶液の形成の略図が図１に示され、この場合、１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）（最大でも５．４、好ましくはそれ以下のｐＨを有する）が１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）（少なくとも５．６、好ましくはそれ以上のｐＨを有する）と、５－６の範囲のｐＨを有し、ＢＬＧに関して過飽和である初期タンパク質溶液を提供するのに十分な量で混合される。
【0017】
発明者らはこのアプローチがＢＬＧの大規模結晶化に非常に有利であることを見出した。というのも、個々のＡ型およびＢ型タンパク質供給物は、早期（よって、望まれない）ＢＬＧ結晶化のリスクがない、またはリスクが非常に限定的であるように生成させることができるからである。しかしながら、Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型供給物（複数可）が混合されるとすぐに、過飽和初期タンパク質溶液が形成される。
【0018】
図２は、どのように、ＢＬＧ結晶化の収率が、結晶化が起こることになっているタンパク質溶液のｐＨに依存するかを概略的に示す。発明者らは、最適ｐＨはおよそ５．５であることを見出した。よって、より酸性のＢ型タンパク質供給物（複数可）をより酸性でないＡ型タンパク質供給物（複数可）と混合することにより、ＢＬＧに関して過飽和である初期タンパク質溶液が得られる。Ａ型タンパク質供給物（複数可）および／またはＢ型タンパク質供給物（複数可）が、ＢＬＧに関してわずかに過飽和である場合、初期タンパク質溶液はさらにいっそう過飽和でなければならない。
【0019】
本出願およびＷＯ２０１８／１１５５２０号（全ての目的のために本明細書に組み込まれる）の開示により導かれ、当業者は、Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）を調製し、それらを混合し、本明細書で記載される初期タンパク質溶液を提供することができる。
【0020】
よって、発明の一態様は、好ましくは結晶化および／または単離形態でのβラクトグロブリン（ＢＬＧ）を含む可食組成物を調製する方法に関し、方法は下記のステップを含み：
ａ）ＢＬＧを含む初期タンパク質溶液を調製するステップであって、前記初期タンパク質溶液はＢＬＧに関して過飽和であり、５－６の範囲のｐＨを有する、ステップ、
ｂ）過飽和、初期タンパク質溶液中、好ましくは塩溶モードでＢＬＧを結晶化させ、よって、ＢＬＧ結晶含有溶液を得るステップ、ならびに
ｃ）任意で、ＢＬＧ結晶含有溶液の残りの液体からＢＬＧ結晶を分離するステップ、
ステップａ）は、１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）を１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）と合わせる、好ましくは混合することにより、初期タンパク質溶液を調製することを含み、
ならびに、
－「Ａ型タンパク質供給物」はＢＬＧを含み、少なくとも５．６のｐＨを有するタンパク質供給物として規定され、ならびに、
－「Ｂ型タンパク質供給物」はＢＬＧを含み、最大でも５．４のｐＨを有するタンパク質供給物として規定される。
ａ）ＢＬＧを含む初期タンパク質溶液を調製するステップであって、前記初期タンパク質溶液はＢＬＧに関して過飽和であり、５－６の範囲のｐＨを有する、ステップ、
ｂ）過飽和、初期タンパク質溶液中、好ましくは塩溶モードでＢＬＧを結晶化させ、よって、ＢＬＧ結晶含有溶液を得るステップ、ならびに
ｃ）任意で、ＢＬＧ結晶含有溶液の残りの液体からＢＬＧ結晶を分離するステップ、
ステップａ）は、１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）を１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）と合わせる、好ましくは混合することにより、初期タンパク質溶液を調製することを含み、
ならびに、
－「Ａ型タンパク質供給物」はＢＬＧを含み、少なくとも５．６のｐＨを有するタンパク質供給物として規定され、ならびに、
－「Ｂ型タンパク質供給物」はＢＬＧを含み、最大でも５．４のｐＨを有するタンパク質供給物として規定される。
【図面の簡単な説明】
【0021】
【図1】方法のステップａ）を示し、Ａ型タンパク質供給物（複数可）はＢ型タンパク質供給物（複数可）と混合され、初期タンパク質溶液が調製される。
【図2】どのように、Ａ型タンパク質供給物（複数可）、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）および初期タンパク質溶液のｐＨが結晶化によるＢＬＧの単離のための最適ｐＨに対して位置するかの略図である。
【発明を実施するための形態】
【0022】
上述のように、発明の一態様は、好ましくは結晶化および／または単離形態でのβラクトグロブリン（ＢＬＧ）を含む可食組成物を調製する方法に関し、方法は下記のステップを含み：
ａ）ＢＬＧを含む初期タンパク質溶液を調製するステップであって、前記初期タンパク質溶液はＢＬＧに関して過飽和であり、５－６の範囲のｐＨを有する、ステップ、
ｂ）過飽和、初期タンパク質溶液中、好ましくは塩溶モードでＢＬＧを結晶化させ、よって、ＢＬＧ結晶含有溶液を得るステップ、ならびに
ｃ）任意で、ＢＬＧ結晶含有溶液の残りの液体からＢＬＧ結晶を分離するステップ、
ステップａ）は、１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）を１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）と合わせる、好ましくは混合することにより、初期タンパク質溶液を調製することを含む。
ａ）ＢＬＧを含む初期タンパク質溶液を調製するステップであって、前記初期タンパク質溶液はＢＬＧに関して過飽和であり、５－６の範囲のｐＨを有する、ステップ、
ｂ）過飽和、初期タンパク質溶液中、好ましくは塩溶モードでＢＬＧを結晶化させ、よって、ＢＬＧ結晶含有溶液を得るステップ、ならびに
ｃ）任意で、ＢＬＧ結晶含有溶液の残りの液体からＢＬＧ結晶を分離するステップ、
ステップａ）は、１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）を１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）と合わせる、好ましくは混合することにより、初期タンパク質溶液を調製することを含む。
【0023】
本発明との関連で、「可食組成物」という用語は、人の飲食に安全であり、食品成分として使用され、問題となる量のトルエンなどの毒性成分または他の望まれない有機溶媒を含まない組成物に関する。
【0024】
「βラクトグロブリンを含む可食組成物」および「可食ＢＬＧ組成物」という用語は、本明細書では同じ意味で使用される。
【0025】
ＢＬＧはウシホエーおよび乳清中の最も顕著なタンパク質であり、いくつかの遺伝子変異体で存在し、牛乳中の主なものはＡおよびＢと標識される。ＢＬＧはリポカリンタンパク質であり、多くの疎水性分子に結合することができ、それらの輸送における役割が示唆される。ＢＬＧはまた、シデロホアを介して鉄に結合することができることが示されており、病原体との闘いにおいて役割と果たし得る。ＢＬＧの相同体はヒト母乳に欠けている。
【0026】
ウシＢＬＧは、およそ１６２アミノ酸残基の比較的小さなタンパク質であり、およそ１８．３－１８．４ｋＤａの分子量を有する。生理的条件下では、それは主に二量体であるが、約ｐＨ３未満で解離してモノマーになり、ＮＭＲを使用して決定されるように、その天然状態を保存する。反対に、ＢＬＧはまた、様々な自然条件下、四量体、八量体および他の多量体凝集形態で生じる。
【0027】
ＢＬＧ溶液は、天然構造が凝集を可能にするのに十分不安定化されると、様々な条件下でゲルを形成することができる。低ｐＨおよび低イオン強度での長期加熱下、透明な「微細鎖」ゲルが形成され、この場合、タンパク質分子が、アセンブリして、長く堅い繊維になる。
【0028】
本発明との関連で、「ＢＬＧ」または「βラクトグロブリン」という用語は、例えば、天然および／またはグリコシル化形態の、哺乳動物種由来のＢＬＧに関し、天然起源の遺伝子変異体を含む。ＢＬＧという用語はまた、組換え微生物により生成された哺乳動物ＢＬＧを包含する。「ＢＬＧ」または「βラクトグロブリン」という用語は、本明細書では、折り畳まれていない、凝集ＢＬＧを排除する。ＢＬＧの含量は、ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例９．９に従い測定される。
【0029】
本発明との関連で、「結晶」という用語は、その構成要素（例えば原子、分子またはイオン）が高秩序の顕微鏡的構造で配列されており、全ての方向に延在する結晶格子を形成する、固体材料に関する。ＢＬＧ結晶は、高秩序の顕微鏡的構造で配列され、全ての方向に延在する結晶格子を形成するＢＬＧを主に含むタンパク質結晶である。ＢＬＧ結晶は、例えば、モノリシックまたは多結晶であってもよく、例えば、無傷結晶、結晶の断片、またはそれらの組み合わせであってもよい。結晶の断片は、例えば、無傷の結晶が処理中、機械的せん断に供された時に形成される。結晶の断片はまた、結晶の高秩序の顕微鏡的構造を有するが、無傷の結晶の平らな表面および／または均一な縁または角を欠く可能性がある。例えば、多くの無傷のＢＬＧ結晶の一例については図１８、および、ＢＬＧ結晶の断片の一例については図１３を参照されたい。どちらの場合も、ＢＬＧ結晶または結晶断片は、光学顕微鏡法を使用して視覚的に、明確に定義された、小型の可干渉構造として同定することができる。ＢＬＧ結晶または結晶断片はしばしば少なくとも部分的に透明である。タンパク質結晶は、さらに、複屈折性であることが知られており、この光学特性を使用して、未知の粒子を、結晶構造を有すると同定することができる。他方、非晶質ＢＬＧ強凝集体は、きちんとは定義されていない、不透明なものとして、および、不規則なサイズの開放性または多孔性塊として現れる。
【0030】
本発明との関連で、「結晶化する」という用語は、タンパク質結晶の形成に関する。結晶化は例えば、自然に起こり得る、または、結晶化シードの添加により開始させることができる。
【0031】
可食組成物は、結晶化および／または単離形態のＢＬＧを含む。単離形態のＢＬＧを含む可食組成物は総固体に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのＢＬＧを含む。結晶化形態のＢＬＧを含む可食組成物は、少なくともいくらかのＢＬＧ結晶、好ましくは、かなりの量のＢＬＧ結晶を含む。
【0032】
ＢＬＧ結晶はしばしば、顕微鏡法により観察することができ、さらに、目で視認可能となるサイズに到達することができる。
【0033】
本発明との関連で、「過飽和」または「ＢＬＧに関して過飽和」である液体は、その液体中、所定の物理的および化学的条件でＢＬＧの飽和点を超える濃度の溶解ＢＬＧを含む。「過飽和」という用語は結晶化の分野でよく知られており（例えば、Ｇｅｒａｒｄ Ｃｏｑｕｅｒｅｌａ， “Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｙｓｔｅｍｓ ｆｒｏｍ ｓｏｌｕｔｉｏｎ： ｐｈａｓｅ ｄｉａｇｒａｍｓ， ｓｕｐｅｒｓａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｂａｓｉｃ ｃｏｎｃｅｐｔｓ”， Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ， ｐ． ２２８６－２３００， Ｉｓｓｕｅ ７， ２０１４を参照されたい）、過飽和は、多くの異なる測定技術により（例えば、分光法または粒径分析により）決定することができる。本発明との関連で、ＢＬＧに関しての過飽和は下記手順により決定される。
【0034】
特定の組の条件での液体がＢＬＧに関して過飽和であるかどうかを試験するための手順：
ａ）５０ｍｌの、試験される液体の試料を、１１５ｍｍの高さ、２５ｍｍの内径および５０ｍＬの容量を有する遠心管（ＶＷＲカタログ番号５２５－０４０２）に移す。試料およびそのその後の画分を、ステップａ）－ｈ）中、液体の元の物理的および化学的条件で維持するように注意しなければならない。
ｂ）試料は、３０００ｇで３．０分間、最大３０秒加速および最大３０秒減速を用いて直ちに遠心分離される。
ｃ）遠心分離直後に、できるだけ多くの上清（ペレットが形成された場合ペレットをかき乱さずに）を第２の遠心管（ステップａと同じ型）に移す
ｄ）０．０５ｍＬのサブサンプルを上清から取る（サブサンプルＡ）
ｅ）最大でも２００ミクロンの粒径を有する、１０ｍｇのＢＬＧ結晶（総固体に対して少なくとも９８％の純粋ＢＬＧ）を第２の遠心管に添加し、混合物を撹拌する。
ｆ）第２の遠心管を６０分間元の温度で静置させる。
ｇ）ステップｆ）の直後に、第２の遠心管を５００ｇで１０分間遠心分離し、ついで別の０．０５ｍＬのサブサンプルを上清から取る（サブサンプルＢ）。
ｈ）ステップｇ）の遠心分離ペレットがあれば回収し、それをミリＱ水中に再懸濁させ、懸濁液を、顕微鏡法により視認可能である結晶の存在について直ちに検査する。
ｉ）サブサンプルＡおよびＢ中のＢＬＧの濃度を、ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例９．９において概説された方法を使用して決定する－結果がサブサンプルの総重量に対して％ＢＬＧｗ／ｗとして表される。サブサンプルＡのＢＬＧの濃度はＣＢＬＧ、Ａと呼ばれ、サブサンプルＢのＢＬＧの濃度はＣＢＬＧ、Ｂと呼ばれる。
ｊ）ステップａ）の試料が取られた液体は、ｃＢＬＧ、ＢがｃＢＬＧ、Ａより低く、結晶がステップｉ）で観察される場合、（特定条件で）過飽和であった。
ａ）５０ｍｌの、試験される液体の試料を、１１５ｍｍの高さ、２５ｍｍの内径および５０ｍＬの容量を有する遠心管（ＶＷＲカタログ番号５２５－０４０２）に移す。試料およびそのその後の画分を、ステップａ）－ｈ）中、液体の元の物理的および化学的条件で維持するように注意しなければならない。
ｂ）試料は、３０００ｇで３．０分間、最大３０秒加速および最大３０秒減速を用いて直ちに遠心分離される。
ｃ）遠心分離直後に、できるだけ多くの上清（ペレットが形成された場合ペレットをかき乱さずに）を第２の遠心管（ステップａと同じ型）に移す
ｄ）０．０５ｍＬのサブサンプルを上清から取る（サブサンプルＡ）
ｅ）最大でも２００ミクロンの粒径を有する、１０ｍｇのＢＬＧ結晶（総固体に対して少なくとも９８％の純粋ＢＬＧ）を第２の遠心管に添加し、混合物を撹拌する。
ｆ）第２の遠心管を６０分間元の温度で静置させる。
ｇ）ステップｆ）の直後に、第２の遠心管を５００ｇで１０分間遠心分離し、ついで別の０．０５ｍＬのサブサンプルを上清から取る（サブサンプルＢ）。
ｈ）ステップｇ）の遠心分離ペレットがあれば回収し、それをミリＱ水中に再懸濁させ、懸濁液を、顕微鏡法により視認可能である結晶の存在について直ちに検査する。
ｉ）サブサンプルＡおよびＢ中のＢＬＧの濃度を、ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例９．９において概説された方法を使用して決定する－結果がサブサンプルの総重量に対して％ＢＬＧｗ／ｗとして表される。サブサンプルＡのＢＬＧの濃度はＣＢＬＧ、Ａと呼ばれ、サブサンプルＢのＢＬＧの濃度はＣＢＬＧ、Ｂと呼ばれる。
ｊ）ステップａ）の試料が取られた液体は、ｃＢＬＧ、ＢがｃＢＬＧ、Ａより低く、結晶がステップｉ）で観察される場合、（特定条件で）過飽和であった。
【0035】
本発明との関連で、「液体」および「溶液」という用語は、液体および固体または半固体粒子、例えば、例としてタンパク質結晶または他のタンパク質粒子の組み合わせを含む組成物を包含する。よって、「液体」または「溶液」は懸濁液またはさらにはスラリーであってもよい。しかしながら、「液体」および「溶液」は好ましくはポンピング可能である。
【0036】
本発明との関連で、「ＢＬＧ結晶」を含む、例えば、粉末などの乾燥生成物は、ＢＬＧ結晶の懸濁液を乾燥させることにより得られる生成物を含み、湿性ＢＬＧ結晶の結晶構造は乾燥プロセス中に歪められた可能性があり、少なくとも部分的にそれらのＸ線回折特性を失った可能性がある。同じように、「乾燥ＢＬＧ結晶」および「乾燥されたＢＬＧ結晶」という用語は湿性ＢＬＧ結晶を乾燥させることから得られた粒子を示し、この乾燥粒子はそれ自体結晶構造を有する必要はない。しかしながら、本発明者らは、乾燥されたＢＬＧ結晶は冷（４℃）脱塩水に、重量比２部水対１部乾燥ＢＬＧ結晶で再懸濁させると、ＢＬＧ結晶は再水和され、乾燥前と実質的に同じ結晶構造（空間群型および単位格子寸法）を回復することを観察した。
【0037】
ＰＣＴ出願ＷＯ２０１８／１１５５２０号との関連で記載される分析の方法は本発明に等しく適用され、本明細書で記載されるパラメータを決定するために使用されるべきである。
【0038】
本発明との関連で、「初期タンパク質溶液」という用語は、１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）および１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）を合わせる、好ましくは混合することにより調製したタンパク質溶液に関する。初期タンパク質溶液はＢＬＧに関して過飽和であり、ステップｂ）の結晶化が開始されるＢＬＧ含有溶液である。使用されるタンパク質供給物（複数可）の１つ以上がすでにＢＬＧ結晶を含む場合、初期タンパク質溶液は５．０－６．０の範囲のｐＨを有し、ＢＬＧに関して過飽和である第１のタンパク質溶液であり、これは、Ａ型タンパク質供給物およびＢ型タンパク質供給物を合わせる、好ましくは混合することにより得られる。
【0039】
本発明との関連で、「Ａ型タンパク質供給物」という用語は、少なくとも５．６のｐＨを有し、ＢＬＧをさらに含むタンパク質供給物に関する。よって、少なくとも５．６のｐＨを有し、初期タンパク質溶液を調製するために使用される任意のＢＬＧ含有タンパク質供給物は、Ａ型タンパク質供給物と考えられる。
【0040】
本発明との関連で、「Ｂ型タンパク質供給物」という用語は、最大でも５．４のｐＨを有し、ＢＬＧをさらに含むタンパク質供給物に関する。よって、最大でも５．４のｐＨを有し、初期タンパク質溶液を調製するために使用される任意のＢＬＧ含有タンパク質供給物はＢ型タンパク質供給物と考えられる。
【0041】
本発明との関連で、「１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）」という用語は、発明は、単一Ａ型タンパク質供給物を用いて、または、いくつかのＡ型タンパク質供給物を用いて実行され得、それらは、初期タンパク質溶液の調製中に、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）と合わせられることを意味する。
【0042】
本発明との関連で「１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）」という用語は、発明はどちらも、単一Ｂ型タンパク質供給物を用いて、または、いくつかのＢ型タンパク質供給物を用いて実行され得、それらは、初期タンパク質溶液の調製中に、Ａ型タンパク質供給物（複数可）と合わせられることを意味する。
【0043】
本発明との関連で、「Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、になる」という用語は、それらが仮定で、単一Ａ型タンパク質供給物に、初期タンパク質溶液を調製するために使用されるのと同じ量で混合された場合、それらが有しているであろう特性に基づく１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）を説明する。この用語はまた、単一Ａ型タンパク質供給物のみの使用を包含することに注目することが重要であり、この場合、特性は単一Ａ型タンパク質供給物に関連する。この用語は、１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）と混合する前に、複数のＡ型タンパク質供給物が実際に合わせられることを必要としないことに注目することがさらに重要である。
【0044】
本発明との関連で、「Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、になる」という用語は、それらが仮定で、単一Ｂ型タンパク質供給物に初期タンパク質溶液を調製するために使用されるのと同じ量で混合された場合、それらが有しているであろう特性に基づく１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）を説明する。この用語はまた、単一Ｂ型タンパク質供給物のみの使用を包含することに注目することが重要であり、この場合、特性は単一Ｂ型タンパク質供給物に関連する。この用語は、１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）と混合する前に、複数のＢ型タンパク質供給物が実際に合わせられることを必要としないことに注目することがさらに重要である。
【0045】
ステップａ）の初期タンパク質溶液は典型的には、ＢＬＧに加えて非ＢＬＧ固体を含む。本発明との関連で、「非ＢＬＧ固体」という用語は、例えば、炭水化物、ミネラル、脂質、ペプチドならびにＢＬＧ以外のタンパク質などの固体に関する。初期タンパク質溶液中に存在する固体は、タンパク質供給物が調製された１つまたは複数のタンパク質源に特徴的である。ホエータンパク質源に基づくタンパク質供給物は、典型的には、ＢＬＧに加えて、他のホエータンパク質、例えば、例としてαラクトアルブミン、カゼイノマクロペプチド、および／またはウシ血清アルブミンを含むであろう。発酵により調製したＢＬＧ源に基づくタンパク質供給物は、典型的には、発酵ブロス由来の不純物、例えば、残留栄養分および代謝副産物、例えば、例として他のタンパク質、ペプチドおよび代謝された栄養分を含む。
【0046】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、方法はステップｃ）の分離を含まず、ＢＬＧ結晶および追加のタンパク質、例えば追加のホエータンパク質の両方を含む可食組成物を提供する。この方法変形が、ステップｆ）の乾燥をさらに含む場合、それは、ＢＬＧ結晶および追加のホエータンパク質、すなわち、ＷＰＣまたはＷＰＩを含む乾燥組成物を提供し、この場合、ＢＬＧの少なくとも一部はＢＬＧ結晶の形態で存在する。好ましくは、方法はステップａ）、ｂ）およびｆ）を直接シーケンスで含む。
【0047】
タンパク質供給物がホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）、ホエータンパク質分離物（ＷＰＩ）、セラムタンパク質濃縮物（ＳＰＣ）またはセラムタンパク質分離物（ＳＰＩ）から調製される場合、上記方法変形は、ＷＰＣ、ＷＰＩ、ＳＰＣ、またはＳＰＩを液体または乾燥形態で調製することを可能にし、この場合、ＢＬＧの少なくとも一部は結晶形態である。
【0048】
「ホエータンパク質濃縮物」および「セラムタンパク質濃度」という用語は、総固体に対して２０－８９％ｗ／ｗのタンパク質の総量を含む乾燥または水性組成物に関する。
【0049】
ＷＰＣまたはＳＰＣは好ましくは下記を含む：
総固体に対して２０－８９％ｗ／ｗのタンパク質、
総タンパク質に対して１５－７０％ｗ／ｗのＢＬＧ、
総タンパク質に対して８－５０％ｗ／ｗのＡＬＡ、および
タンパク質に対して０－４０％ｗ／ｗのＣＭＰ。
総固体に対して２０－８９％ｗ／ｗのタンパク質、
総タンパク質に対して１５－７０％ｗ／ｗのＢＬＧ、
総タンパク質に対して８－５０％ｗ／ｗのＡＬＡ、および
タンパク質に対して０－４０％ｗ／ｗのＣＭＰ。
【0050】
あるいは、これもまた好ましいが、ＷＰＣまたはＳＰＣは下記を含み得る：
総固体に対して２０－８９％ｗ／ｗのタンパク質、
総タンパク質に対して１５－９０％ｗ／ｗのＢＬＧ、
総タンパク質に対して４－５０％ｗ／ｗのＡＬＡ、および
タンパク質に対して０－４０％ｗ／ｗのＣＭＰ。
総固体に対して２０－８９％ｗ／ｗのタンパク質、
総タンパク質に対して１５－９０％ｗ／ｗのＢＬＧ、
総タンパク質に対して４－５０％ｗ／ｗのＡＬＡ、および
タンパク質に対して０－４０％ｗ／ｗのＣＭＰ。
【0051】
好ましくは、ＷＰＣまたはＳＰＣは下記を含む：
総固体に対して２０－８９％ｗ／ｗのタンパク質、
総タンパク質に対して１５－８０％ｗ／ｗのＢＬＧ、
総タンパク質に対して４－５０％ｗ／ｗのＡＬＡ、および
タンパク質に対して０－４０％ｗ／ｗのＣＭＰ。
総固体に対して２０－８９％ｗ／ｗのタンパク質、
総タンパク質に対して１５－８０％ｗ／ｗのＢＬＧ、
総タンパク質に対して４－５０％ｗ／ｗのＡＬＡ、および
タンパク質に対して０－４０％ｗ／ｗのＣＭＰ。
【0052】
より好ましくはＷＰＣまたはＳＰＣは下記を含む：
総固体に対して７０－８９％ｗ／ｗのタンパク質、
総タンパク質に対して３０－９０％ｗ／ｗのＢＬＧ、
総タンパク質に対して４－３５％ｗ／ｗのＡＬＡ、および
タンパク質に対して０－２５％ｗ／ｗのＣＭＰ。
総固体に対して７０－８９％ｗ／ｗのタンパク質、
総タンパク質に対して３０－９０％ｗ／ｗのＢＬＧ、
総タンパク質に対して４－３５％ｗ／ｗのＡＬＡ、および
タンパク質に対して０－２５％ｗ／ｗのＣＭＰ。
【0053】
「ホエータンパク質分離物」および「セラムタンパク質分離物」という用語は、総固体に対して９０－１００％ｗ／ｗのタンパク質の総量を含む乾燥または水性組成物に関する。
【0054】
ＷＰＩまたはＳＰＩは好ましくは下記を含む：
総固体に対して９０－１００％ｗ／ｗのタンパク質、
総タンパク質に対して１５－７０％ｗ／ｗのＢＬＧ、
総タンパク質に対して８－５０％ｗ／ｗのＡＬＡ、および
総タンパク質に対して０－４０％ｗ／ｗのＣＭＰ。
総固体に対して９０－１００％ｗ／ｗのタンパク質、
総タンパク質に対して１５－７０％ｗ／ｗのＢＬＧ、
総タンパク質に対して８－５０％ｗ／ｗのＡＬＡ、および
総タンパク質に対して０－４０％ｗ／ｗのＣＭＰ。
【0055】
あるいは、これもまた好ましいが、ＷＰＩまたはＳＰＩは下記を含み得る：
総固体に対して９０－１００％ｗ／ｗのタンパク質、
総タンパク質に対して３０－９５％ｗ／ｗのＢＬＧ、
総タンパク質に対して４－３５％ｗ／ｗのＡＬＡ、および
総タンパク質に対して０－２５％ｗ／ｗのＣＭＰ。
総固体に対して９０－１００％ｗ／ｗのタンパク質、
総タンパク質に対して３０－９５％ｗ／ｗのＢＬＧ、
総タンパク質に対して４－３５％ｗ／ｗのＡＬＡ、および
総タンパク質に対して０－２５％ｗ／ｗのＣＭＰ。
【0056】
より好ましくはＷＰＩまたはＳＰＩは下記を含み得る：
総固体に対して９０－１００％ｗ／ｗのタンパク質、
総タンパク質に対して３０－９０％ｗ／ｗのＢＬＧ、
総タンパク質に対して４－３５％ｗ／ｗのＡＬＡ、および
総タンパク質に対して０－２５％ｗ／ｗのＣＭＰ。
総固体に対して９０－１００％ｗ／ｗのタンパク質、
総タンパク質に対して３０－９０％ｗ／ｗのＢＬＧ、
総タンパク質に対して４－３５％ｗ／ｗのＡＬＡ、および
総タンパク質に対して０－２５％ｗ／ｗのＣＭＰ。
【0057】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、方法は、ＢＬＧ結晶、例えばステップｃ）から得られた、分離されたＢＬＧ結晶を洗浄するステップｄ）をさらに含む。
【0058】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、方法は、ＢＬＧ結晶、例えば、ステップｃ）またはｄ）から得られたＢＬＧ結晶を再結晶化させるステップｅ）をさらに含む。
【0059】
方法は、例えば、ステップａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、およびｅ）を含み、またはさらには、これから構成され得る。あるいは、方法は、ステップａ）、ｂ）、ｃ）、およびｅ）を含み、またはさらには、これから構成され得る。
【0060】
発明のいくつかの特に好ましい実施形態では、方法は、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物を乾燥させるステップｆ）をさらに含む。
【0061】
方法は、例えば、ステップａ）、ｂ）、およびｆ）を含み、またはさらには、これから構成され得る。あるいは、方法は、ステップａ）、ｂ）、ｃ）およびｆ）を含み、またはさらには、これから構成され得る。あるいは、方法は、ステップａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）およびｆ）を含み、またはさらには、これから構成され得る。あるいは、方法は、ステップａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）およびｆ）を含み、またはさらには、これから構成され得る。前述の通り、本発明のステップａ）は、５－６の範囲のｐＨを有し、ＢＬＧに関して過飽和である初期タンパク質溶液を提供することを含む。
【0062】
初期タンパク質溶液はしばしば、ＢＬＧに加えて追加のタンパク質を含む。本発明との関連で、「追加のタンパク質」という用語は、ＢＬＧではないタンパク質を意味する。初期タンパク質溶液中に存在する追加のタンパク質は典型的には、乳清またはホエー中で見出される１つ以上の非ＢＬＧタンパク質を含む。そのようなタンパク質の非限定的な例は、αラクトアルブミン、ウシ血清アルブミン、免疫グロブリン、カゼイノマクロペプチド（ＣＭＰ）、オステオポンチン、ラクトフェリン、および乳脂肪球膜タンパク質である。あるいは、追加のタンパク質は、例えば、ＢＬＧが組換え細胞培養物の発酵により生成される場合、発酵ブロス由来のタンパク質不純物または細胞デブリであり得る。
【0063】
本発明との関連で、「ホエータンパク質」という用語は、ホエーまたは乳清中で見出されるタンパク質に関する。初期タンパク質溶液のホエータンパク質は、ホエーまたは乳清中で見出されるタンパク質種のサブセットであってもよく、または、それはホエーまたは／および乳清中で見出されるタンパク質種の完全セットであってもよい。しかしながら、初期タンパク質溶液はＢＬＧを常に含む。
【0064】
よって、初期タンパク質溶液は好ましくは、αラクトアルブミン、ウシ血清アルブミン、免疫グロブリン、カゼイノマクロペプチド（ＣＭＰ）、オステオポンチン、ラクトフェリン、乳脂肪球膜タンパク質、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される少なくとも１つの追加のホエータンパク質を含み得る。
【0065】
αラクトアルブミン（ＡＬＡ）はほとんど全ての哺乳動物種の乳中に存在するタンパク質である。ＡＬＡはラクトースシンターゼ（ＬＳ）ヘテロ二量体の調節サブユニットを形成し、および、β－１，４－ガラクトシルトランスフェラーゼ（β４Ｇａｌ－Ｔ１）は触媒成分を形成する。一緒に、これらのタンパク質は、ＬＳが、ガラクトース部分をグルコースに転移させることによりラクトースを生成することを可能にする。多量体として、αラクトアルブミンは、カルシウムおよび亜鉛イオンに強く結合し、殺菌または抗腫瘍活性を有し得る。βラクトグロブリンとの主な構造的差異の１つは、ＡＬＡは、共有結合凝集反応のための開始点として機能することができる遊離チオール基を有さないことである。その結果、純粋ＡＬＡは変性および酸性化でゲルを形成しない。
【0066】
本発明との関連で、「ＡＬＡ」または「αラクトアルブミン」という用語は、例えば天然および／またはグリコシル化形態の、哺乳動物種由来のαラクトアルブミンに関し、天然起源の遺伝子変異体を含む。
【0067】
発明のいくつかの実施形態では、初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して最大でも１０％ｗ／ｗのカゼイン、好ましくは最大でも５％ｗ／ｗ、より好ましくは最大でも１％ｗ／ｗ、さらにより好ましくはタンパク質の総量に対して最大でも０．５％のカゼインを含む。発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液は検出可能な量のカゼインを含まない。
【0068】
「乳清」という用語は、カゼインおよび乳脂肪球が、例えば、精密濾過または大細孔限外濾過により乳から除去された場合に残る液体に関する。乳清はまた、「理想ホエー」と呼ばれ得る。
【0069】
「乳清タンパク質」または「セラムタンパク質」という用語は、乳清中に存在するタンパク質に関する。
【0070】
「ホエー」という用語は、乳のカゼインが沈殿され、除去された後に残る液体上清に関する。カゼイン沈殿は、例えば、乳の酸性化および／またはレンネット酵素の使用により達成され得る。
【0071】
いくつかの型のホエーが存在し、例えば、カゼインのレンネットに基づく沈殿により生成されたホエー生成物である「スイートホエー」、および、カゼインの酸に基づく沈殿により生成されたホエー生成物である「酸ホエー」または「サワーホエー」である。カゼインの酸に基づく沈殿は、例えば、食物酸の添加により、または、細菌培養により達成され得る。
【0072】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、総固体に対して少なくとも１％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも２％ｗ／ｗ、さらにより好ましい少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも１０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体を含む。
【0073】
本発明の他の好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、総固体に対して少なくとも１５％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも２０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも３０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体を含む。
【0074】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、総固体に対して０－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは１－６０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは２－５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３－４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体を含む。
【0075】
本発明の他の好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、総固体に対して０－２０％ｗ／ｗ、より好ましくは０－１５％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは０－１０％ｗ／ｗ、最も好ましくは０－５％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体を含む。
【0076】
本発明のさらに好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、総固体に対して１５－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは２０－６５％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは２５－６０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－５０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体を含む。
【0077】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも５％ｗ／ｗの追加のホエータンパク質を含む。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも１０％ｗ／ｗの追加のホエータンパク質を含む。より好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも１５％ｗ／ｗの追加のホエータンパク質を含む。さらにいっそう好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも２０％ｗ／ｗの追加のホエータンパク質を含む。最も好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗの追加のホエータンパク質を含み得る。
【0078】
発明の他の好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも１％ｗ／ｗの追加のホエータンパク質を含む。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも２％ｗ／ｗの追加のホエータンパク質を含む。さらにいっそう好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも３％ｗ／ｗの追加のホエータンパク質を含む。最も好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも４％ｗ／ｗの追加のホエータンパク質を含み得る。
【0079】
発明のさらに他の好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも３５％ｗ／ｗの追加のホエータンパク質を含む。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも４０％ｗ／ｗの追加のホエータンパク質を含み得る。より好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は例えば、タンパク質の総量に対して少なくとも４５％ｗ／ｗの追加のホエータンパク質を含み得る。さらにいっそう好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも５０％ｗ／ｗの追加のホエータンパク質を含み得る。
【0080】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して５－９０％ｗ／ｗの範囲の追加のホエータンパク質を含む。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して１０－８０％ｗ／ｗの範囲の追加のホエータンパク質を含み得る。ステップａ）の初期タンパク質溶液は例えば、タンパク質の総量に対して２０－７０％ｗ／ｗの範囲の追加のホエータンパク質を含み得る。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して３０－７０％ｗ／ｗの範囲の追加のホエータンパク質を含む。
【0081】
前述の通り、本発明者らは、有機溶媒を使用せずにＢＬＧを結晶化することが可能であることを見出した。この精製アプローチはまた、ホエータンパク質を含む調製物を純化するために使用することができ（その調製物はすでに、いくらかのＢＬＧ精製に供されている）、ＢＬＧの純度をさらにいっそう増加させる簡単な方法を提供する。よって、発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して１－２０％ｗ／ｗの範囲の追加のホエータンパク質を含む。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して２－１５％ｗ／ｗの範囲の追加のホエータンパク質を含み得る。さらにいっそう好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は例えば、タンパク質の総量に対して３－１０％ｗ／ｗの範囲の追加のホエータンパク質を含み得る。
【0082】
発明のいくつかの実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも５％ｗ／ｗのＡＬＡを含む。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも１０％ｗ／ｗのＡＬＡを含む。さらにいっそう好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも１５％ｗ／ｗのＡＬＡを含む。あるいは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも２０％ｗ／ｗのＡＬＡを含み得る。
【0083】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも２５％ｗ／ｗのＡＬＡを含む。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗのＡＬＡを含む。ステップａ）の初期タンパク質溶液は好ましくは、タンパク質の総量に対して少なくとも３５％ｗ／ｗのＡＬＡを含む。さらにいっそう好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも４０％ｗ／ｗのＡＬＡを含み得る。
【0084】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して５－９５％ｗ／ｗの範囲のＡＬＡを含む。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して５－７０％ｗ／ｗの範囲のＡＬＡを含む。さらにいっそう好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して１０－６０％ｗ／ｗの範囲のＡＬＡを含み得る。ステップａ）の初期タンパク質溶液は好ましくは、タンパク質の総量に対して１２－５０％ｗ／ｗの範囲のＡＬＡを含む。さらにより好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して２０－４５％ｗ／ｗの範囲のＡＬＡを含み得る。
【0085】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、少なくとも０．０１のＢＬＧとＡＬＡの間の重量比を有する。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、少なくとも０．５のＢＬＧとＡＬＡの間の重量比を有する。さらにいっそう好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、少なくとも１、例えば、例として少なくとも２のＢＬＧとＡＬＡの間の重量比を有する。例えば、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、少なくとも３のＢＬＧとＡＬＡの間の重量比を有し得る。
【0086】
初期タンパク質溶液およびタンパク質供給物中のＢＬＧおよび他のタンパク質の量および濃度は全て溶解したタンパク質を示し、沈殿した、または、結晶化したタンパク質を含まない。
【0087】
本発明との関連で、成分Ｘと成分Ｙの間の「重量比」という用語は、計算ｍＸ／ｍＹにより得られる値を意味し、ここで、ｍＸは成分Ｘの量（重量）であり、ｍＹは成分Ｙの量（重量）である。
【0088】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、０．０１－２０の範囲の、ＢＬＧとＡＬＡの間の重量比を有する。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、０．２－１０の範囲の、ＢＬＧとＡＬＡの間の重量比を有する。さらにいっそう好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、０．５－４の範囲の、ＢＬＧとＡＬＡの間の重量比を有する。例えば、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、１－３の範囲の、ＢＬＧとＡＬＡの間の重量比を有し得る。
【0089】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも１％ｗ／ｗのＢＬＧを含む。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも２％ｗ／ｗのＢＬＧを含む。さらにいっそう好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも５％ｗ／ｗのＢＬＧを含む。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも１０％ｗ／ｗのＢＬＧを含み得る。
【0090】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも１２％ｗ／ｗのＢＬＧを含む。例えば、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも１５％ｗ／ｗのＢＬＧを含み得る。ステップａ）の初期タンパク質溶液は例えば、タンパク質の総量に対して少なくとも２０％ｗ／ｗのＢＬＧを含み得る。あるいは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗのＢＬＧを含み得る。
【0091】
発明の他の好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも４０％ｗ／ｗのＢＬＧを含む。より好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも４５％ｗ／ｗのＢＬＧを含み得る。さらにいっそう好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は例えば、タンパク質の総量に対して少なくとも５０％ｗ／ｗのＢＬＧを含み得る。最も好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも５５％ｗ／ｗのＢＬＧを含み得る。
【0092】
発明のいくつかの特に好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して最大でも９５％ｗ／ｗのＢＬＧを含む。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して最大でも９０％ｗ／ｗのＢＬＧを含み得る。より好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は例えば、タンパク質の総量に対して最大でも８５％ｗ／ｗのＢＬＧを含み得る。さらにいっそう好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は例えば、タンパク質の総量に対して最大でも８０％ｗ／ｗのＢＬＧを含み得る。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して最大でも７８％ｗ／ｗのＢＬＧを含み得る。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して最大でも７５％ｗ／ｗのＢＬＧを含み得る。
【0093】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して１－９５％ｗ／ｗの範囲のＢＬＧを含む。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して５－９０％ｗ／ｗの範囲のＢＬＧを含み得る。より好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して１０－８５％ｗ／ｗの範囲のＢＬＧを含む。さらにいっそう好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して１０－８０％ｗ／ｗの範囲のＢＬＧを含む。最も好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して２０－７０％ｗ／ｗの範囲のＢＬＧを含み得る。
【0094】
発明の他の好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して１０－９５％ｗ／ｗの範囲のＢＬＧを含む。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して１２－９０％ｗ／ｗの範囲のＢＬＧを含み得る。より好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して１５－８５％ｗ／ｗの範囲のＢＬＧを含む。さらにいっそう好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して１５－８０％ｗ／ｗの範囲のＢＬＧを含む。最も好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して３０－７０％ｗ／ｗの範囲のＢＬＧを含み得る。
【0095】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、初期タンパク質溶液の重量に対して少なくとも０．４％ｗ／ｗの量のＢＬＧを含む。好ましくは、初期タンパク質溶液は、少なくとも１．０％ｗ／ｗの量のＢＬＧを含む。より好ましくは、初期タンパク質溶液は、少なくとも２．０％ｗ／ｗの量のＢＬＧを含む。初期タンパク質溶液は、少なくとも４％ｗ／ｗの量のＢＬＧを含むことが、さらにより好ましい。
【0096】
より高い濃度のＢＬＧがさらにより好ましく、好ましくは、初期タンパク質溶液は、少なくとも６％ｗ／ｗの量のＢＬＧを含む。より好ましくは、初期タンパク質溶液は、少なくとも１０％ｗ／ｗの量のＢＬＧを含む。初期タンパク質溶液は、少なくとも１５％ｗ／ｗの量のＢＬＧを含むことが、さらにより好ましい。
【0097】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、初期タンパク質溶液の重量に対して０．４－４０％ｗ／ｗの範囲の量のＢＬＧを含む。好ましくは、初期タンパク質溶液は、１－３５％ｗ／ｗの範囲の量のＢＬＧを含む。より好ましくは、初期タンパク質溶液は、４－３０％ｗ／ｗの範囲の量のＢＬＧを含む。初期タンパク質溶液は、１０－２５％ｗ／ｗの範囲の量のＢＬＧを含むことが、さらにより好ましい。
【0098】
発明の他の好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、初期タンパク質溶液の重量に対して１－４５％ｗ／ｗの範囲の量のＢＬＧを含む。好ましくは、初期タンパク質溶液は、３－４０％ｗ／ｗの範囲の量のＢＬＧを含む。より好ましくは、初期タンパク質溶液は、５－３６％ｗ／ｗの範囲の量のＢＬＧを含む。初期タンパク質溶液は、７－３４％ｗ／ｗの範囲の量のＢＬＧを含むことが、さらにより好ましい。
【0099】
発明のさらに好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、初期タンパク質溶液の重量に対して６－３２％ｗ／ｗの範囲の量のＢＬＧを含む。好ましくは、初期タンパク質溶液は、８－３０％ｗ／ｗの範囲の量のＢＬＧを含む。より好ましくは、初期タンパク質溶液は、１０－２８％ｗ／ｗの範囲の量のＢＬＧを含む。初期タンパク質溶液は、１２－２６％ｗ／ｗの範囲の量のＢＬＧを含むことが、さらにより好ましい。
【0100】
初期タンパク質溶液は脱塩初期タンパク質溶液であることが好ましい。
【0101】
この状況では、脱塩という用語は、初期タンパク質溶液の導電率が最大でも１５ｍＳ／ｃｍ、好ましくは最大でも１０ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも８ｍＳ／ｃｍであることを意味する。脱塩初期タンパク質溶液のＵＦ透過導電率は好ましくは、最大でも７ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは、最大でも４ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは、最大でも１ｍＳ／ｃｍである。
【0102】
初期タンパク質溶液は脱塩乳清タンパク質濃縮物、脱塩乳清タンパク質分離物、脱塩ホエータンパク質濃縮物、または脱塩ホエータンパク質分離物であることが特に好ましい。
【0103】
発明のいくつかの特に好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液は、脱塩およびｐＨ調整された乳清タンパク質濃縮物、ホエータンパク質濃縮物、乳清タンパク質分離物、ホエータンパク質分離物、またはそれらの組み合わせを含み、またはさらには、これから構成される。
【0104】
初期タンパク質溶液は、例えば、脱塩乳清タンパク質濃縮物を含み、またはさらには、これから構成され得る。あるいは、初期タンパク質溶液は、脱塩ホエータンパク質濃縮物を含み、またはさらには、これから構成され得る。あるいは、初期タンパク質溶液は、脱塩乳清タンパク質分離物を含み、またはさらには、これから構成され得る。あるいは、初期タンパク質溶液は、脱塩ホエータンパク質分離物を含み、またはさらには、これから構成され得る。
【0105】
本発明との関連で、「ホエータンパク質濃縮物」および「乳清タンパク質濃縮物」という用語はホエーまたは乳清の調製物に関し、その調製物は総固体に対しておよそ２０－８９％ｗ／ｗの範囲のタンパク質を含む。
【0106】
本発明との関連で、「ホエータンパク質分離物」および「乳清タンパク質分離物」という用語はホエーまたは乳清の調製物に関し、その調製物は総固体に対して少なくとも９０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。
【0107】
「から本質的に構成される」および「から本質的に構成されている」という用語は、問題になっている特許請求の範囲または特徴は特定された材料またはステップおよび特許請求される発明の基本的な、新規特性（複数可）に実質的に影響しないものを包含することを意味する。
【0108】
初期タンパク質溶液のタンパク質は好ましくは、哺乳動物乳、好ましくは、例えば、雌ウシ、ヒツジ、ヤギ、水牛、ラクダ、ラマ、雌馬および／またはシカなどの反芻動物の乳に由来する。ウシ（雌ウシ）乳由来のタンパク質が特に好ましい。よって、ＢＬＧおよび任意の追加のタンパク質は好ましくはウシＢＬＧおよびウシホエータンパク質である。発明の他の実施形態では、初期タンパク質溶液のＢＬＧは組換え微生物により生成されたが、依然として、哺乳動物乳由来のＢＬＧのアミノ酸配列を有する。
【0109】
初期タンパク質溶液のタンパク質は好ましくは、その天然状態に可能な限り近く、好ましくは、あるとすれば、穏やかな、未変性熱処理にしか供されていない。
【0110】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液のＢＬＧは最大でも１のラクトシル化度を有する。好ましくは、初期タンパク質溶液のＢＬＧは最大でも０．６のラクトシル化度を有する。より好ましくは、初期タンパク質溶液のＢＬＧは最大でも０．４のラクトシル化度を有する。さらにいっそう好ましくは、初期タンパク質溶液のＢＬＧは最大でも０．２のラクトシル化度を有する。最も好ましくは、初期タンパク質溶液のＢＬＧは最大でも０．１、例えば、例として好ましくは最大でも０．０１のラクトシル化度を有する。
【0111】
ＢＬＧのラクトシル化度は、Ｃｚｅｒｗｅｎｋａら（Ｊ． Ａｇｒｉｃ． Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．， Ｖｏｌ． ５４， Ｎｏ． ２３， ２００６， ８８７４－８８８２ページ）に従い決定される。
【0112】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液は最大でも８０ｍｇ／１００ｇタンパク質のフロシン値を有する。好ましくは、初期タンパク質溶液は最大でも４０ｍｇ／１００ｇタンパク質のフロシン値を有する。より好ましくは、初期タンパク質溶液は最大でも２０ｍｇ／１００ｇタンパク質のフロシン値を有する。さらにいっそう好ましくは、初期タンパク質溶液は最大でも１０ｍｇ／１００ｇタンパク質のフロシン値を有する。最も好ましくは、初期タンパク質溶液は最大でも５ｍｇ／１００ｇタンパク質のフロシン値、例えば、例として好ましくは０ｍｇ／１００ｇタンパク質のフロシン値を有する。
【0113】
初期タンパク質溶液は典型的には、タンパク質に加えて他の成分を含む。初期タンパク質溶液はホエーまたは乳清中で普通に見出される他の成分、例えば、例としてミネラル、炭水化物、および／または脂質を含み得る。その代わりに、または、加えて、初期タンパク質溶液はホエーまたは乳清に本来含まれていない成分を含み得る。しかしながら、そのような本来含まれていない成分は好ましくは、食糧生産において使用するのに、および、好ましくはまた、人の飲食にとっても安全でなければならない。
【0114】
本方法は、ＢＬＧ以外の固体を含む粗初期タンパク質溶液からＢＬＧを分離するのに特に有利である。
【0115】
初期タンパク質溶液は例えば、炭水化物、例えば、例としてラクトース、オリゴ糖および／またはラクトースの加水分解生成物（すなわち、グルコースおよびガラクトース）を含み得る。初期タンパク質溶液は、例えば、０－４０％ｗ／ｗの範囲、例えば、１－３０％ｗ／ｗの範囲、または２－２０％ｗ／ｗの範囲の炭水化物を含み得る。
【0116】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液は最大でも２０％ｗ／ｗの炭水化物、好ましくは最大でも１０％ｗ／ｗの炭水化物、より好ましくは最大でも５％ｗ／ｗの炭水化物、さらにいっそう好ましくは最大でも２％ｗ／ｗの炭水化物を含む。
【0117】
初期タンパク質溶液はまた、例えば、トリグリセリドおよび／またはリン脂質などの他の脂質型の形態の脂質を含み得る。
【0118】
発明のいくつかの実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、総固体に対して最大でも１５％ｗ／ｗの総量の脂質を含む。好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、総固体に対して最大でも１０％ｗ／ｗの総量の脂質を含む。より好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、総固体に対して最大でも６％ｗ／ｗの総量の脂質を含む。さらにいっそう好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、総固体に対して最大でも１．０％ｗ／ｗの総量の脂質を含む。最も好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、総固体に対して最大でも０．５％ｗ／ｗの総量の脂質を含む。
【0119】
初期タンパク質溶液のタンパク質の総量は典型的には、初期タンパク質溶液の重量に対して少なくとも１％ｗ／ｗである。好ましくは、初期タンパク質溶液のタンパク質の総量は、少なくとも５％ｗ／ｗである。より好ましくは、初期タンパク質溶液のタンパク質の総量は、少なくとも１０％ｗ／ｗである。さらにより好ましくは、初期タンパク質溶液のタンパク質の総量は、少なくとも１５％ｗ／ｗである。
【0120】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液のタンパク質の総量は、１－５０％ｗ／ｗの範囲である。好ましくは、初期タンパク質溶液のタンパク質の総量は、５－４０％ｗ／ｗの範囲である。より好ましくは、初期タンパク質溶液のタンパク質の総量は、１０－３０％ｗ／ｗの範囲である。さらにより好ましくは、初期タンパク質溶液のタンパク質の総量は、１５－２５％ｗ／ｗの範囲である。
【0121】
初期タンパク質溶液の総固体は典型的には、初期タンパク質溶液の重量に対して少なくとも１％ｗ／ｗである。好ましくは、初期タンパク質溶液の総固体は、少なくとも５％ｗ／ｗである。より好ましくは、初期タンパク質溶液の総固体は、少なくとも１０％ｗ／ｗである。さらにより好ましくは、初期タンパク質溶液の総固体は、少なくとも１５％ｗ／ｗである。
【0122】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液の総固体は、５－５０％ｗ／ｗの範囲である。好ましくは、初期タンパク質溶液の総固体は、８－４０％ｗ／ｗの範囲である。より好ましくは、初期タンパク質溶液の総固体は、１０－３０％ｗ／ｗの範囲である。さらにより好ましくは、初期タンパク質溶液の総固体は、１５－２５％ｗ／ｗの範囲である。
【0123】
発明の他の好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液の総固体は、８－５０％ｗ／ｗの範囲である。好ましくは、初期タンパク質溶液の総固体は、１０－４５％ｗ／ｗの範囲である。より好ましくは、初期タンパク質溶液の総固体は、１２－４０％ｗ／ｗの範囲である。さらにより好ましくは、初期タンパク質溶液の総固体は、１５－３５％ｗ／ｗの範囲である。
【0124】
初期タンパク質溶液のタンパク質の総量は、ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例９．２に従い決定される。
【0125】
ステップａ）の初期タンパク質溶液は、１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）を１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）と合わせる、好ましくは混合することにより調製される。上述のように、少なくとも５．６のｐＨを有する任意のＢＬＧ含有タンパク質供給物はＡ型タンパク質供給物として規定され、最大でも５．４のｐＨを有する任意のＢＬＧ含有タンパク質供給物はＢ型タンパク質供給物として規定される。
【0126】
最も好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液は、単一Ａ型タンパク質供給物を単一Ｂ型タンパク質供給物と合わせる、好ましくは混合することにより調製される。結晶化は、好ましくは液体の形態、あるいは粉末の形態のシード組成物のその後の添加により、好ましくは開始される。
【0127】
初期タンパク質溶液は、Ａ型でもＢ型でもないタンパク質供給物（複数可）、例えば、およそ５．５のｐＨを有するタンパク質供給物（複数可）、または、ＢＬＧを含まないタンパク質供給物（複数可）をさらに含み得るが、例えば、結晶化を開始するためにＢＬＧ結晶または他のシード材料を提供することにより、プロセスを最適化するために使用される場合を除き、そのような追加のタンパク質供給物の存在を制限する、または、さらには回避することが好ましい。
【0128】
初期タンパク質溶液の調製は、好適なｐＨを有する初期タンパク質溶液を提供するための、タンパク質供給物に加えて他の材料成分の添加、例えば酸または塩基の添加を含み得る。しかしながら、１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）および１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられると所望のｐＨを提供するように、すでに調整されており、よって、他の材料成分の添加が制限され、または、さらには回避されることが好ましい。
【0129】
本発明との関連で、「１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）」および「１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）」という用語は、ＢＬＧに関して過飽和である初期タンパク質溶液の調製中に合わせられるＢＬＧ含有組成物に関連する。前述の通り、「Ａ型タンパク質供給物」は少なくとも５．６のｐＨを有し、「Ｂ型タンパク質供給物」は最大でも５．４のｐＨを有する。タンパク質供給物は典型的には、ＢＬＧおよび不純物を含む水性液体および／または粉末である。典型的な不純物の例はミネラル、炭水化物、例えば、追加のタンパク質などの他のタンパク質である。
【0130】
よって、１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）、１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）、および任意のさらなる材料成分は、任意の順序で合わせることができ、初期タンパク質溶液が提供される。
【0131】
初期タンパク質溶液は、タンパク質供給物を合わせる、好ましくは、１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）を１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）と、および任意で、任意のさらなるタンパク質供給物または材料成分と混合することにより調製される。
【0132】
全てのタンパク質供給物および任意のさらなる材料成分は適切な化学組成が提供され、本明細書で記載される初期タンパク質溶液を提供するのに十分な量で合わせられる。
【0133】
発明者らは、ＢＬＧ結晶化の最大ＢＬＧ収率は、およそｐＨ５．５で得られることを見出した。よって、初期タンパク質溶液は、下記より５．５に近いｐＨを有することが好ましい：
－それらが合わせられた場合のＡ型タンパク質供給物（複数可）のｐＨ、または
－それらが合わせられた場合のＢ型タンパク質供給物（複数可）のｐＨ、または
－それらが合わせられた場合のＡ型タンパク質供給物（複数可）のｐＨおよびそれらが合わせられた場合のＢ型タンパク質供給物（複数可）のｐＨ。
－それらが合わせられた場合のＡ型タンパク質供給物（複数可）のｐＨ、または
－それらが合わせられた場合のＢ型タンパク質供給物（複数可）のｐＨ、または
－それらが合わせられた場合のＡ型タンパク質供給物（複数可）のｐＨおよびそれらが合わせられた場合のＢ型タンパク質供給物（複数可）のｐＨ。
【0134】
タンパク質供給物を合わせ、ＢＬＧ過飽和に関して準安定領域にある、すなわち、過飽和領域にある初期タンパク質溶液を提供することがしばしば好ましく、この場合、シーディングが使用されるとＢＬＧ結晶が成長することができるが、結晶化は自然には始まらない。
【0135】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では：
－Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、少なくとも５．６、より好ましくは少なくとも５．７、さらにいっそう好ましくは少なくとも５．８、最も好ましくは少なくとも５．９のｐＨを有し、ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも５．４、より好ましくは最大でも５．３、さらにいっそう好ましくは、５．２、最も好ましくは５．１のｐＨを有する。
－Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、少なくとも５．６、より好ましくは少なくとも５．７、さらにいっそう好ましくは少なくとも５．８、最も好ましくは少なくとも５．９のｐＨを有し、ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも５．４、より好ましくは最大でも５．３、さらにいっそう好ましくは、５．２、最も好ましくは５．１のｐＨを有する。
【0136】
単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、「合わせられた場合、になる」という句は、そのようなものとして単一Ａ型タンパク質供給物を示す。同様に、単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、「合わせられた場合、になる」という句は、そのようなものとして単一Ｂ型タンパク質供給物を示す。
【0137】
よって、「Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、混合された場合、［特定の特性］を有する」という句は、下記を意味する：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それは［特定の特性］を有する
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらは、混合された場合、［特定の特性］を有する。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それは［特定の特性］を有する
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらは、混合された場合、［特定の特性］を有する。
【0138】
例えば、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、混合された場合、少なくとも５．６のｐＨを有すると述べることにより、下記が意味される：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それは少なくとも５．６のｐＨを有する
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらは、混合された場合、少なくとも５．６のｐＨを有する。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それは少なくとも５．６のｐＨを有する
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらは、混合された場合、少なくとも５．６のｐＨを有する。
【0139】
例えば、２つのＡ型タンパク質供給物が使用される一実施形態では、「合わせられた場合、になる」という句は、２つのＡ型タンパク質供給物が混合された場合、特定の特性が得られることを意味する。
【0140】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では：
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
少なくとも５．６、より好ましくは少なくとも５．７、さらにいっそう好ましくは少なくとも５．８、最も好ましくは少なくとも５．９のｐＨ、ならびに、
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも５．４、より好ましくは最大でも５．３、さらにいっそう好ましくは、５．２、最も好ましくは５．１のｐＨ。
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
少なくとも５．６、より好ましくは少なくとも５．７、さらにいっそう好ましくは少なくとも５．８、最も好ましくは少なくとも５．９のｐＨ、ならびに、
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも５．４、より好ましくは最大でも５．３、さらにいっそう好ましくは、５．２、最も好ましくは５．１のｐＨ。
【0141】
本発明の他の好ましい実施形態では：
－Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、少なくとも６．０、より好ましくは少なくとも６．１、さらにいっそう好ましくは少なくとも６．２、最も好ましくは少なくとも６．３のｐＨを有し、ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも５．０、より好ましくは最大でも４．９、さらにいっそう好ましくは４．８、最も好ましくは４．７のｐＨを有する。
－Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、少なくとも６．０、より好ましくは少なくとも６．１、さらにいっそう好ましくは少なくとも６．２、最も好ましくは少なくとも６．３のｐＨを有し、ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも５．０、より好ましくは最大でも４．９、さらにいっそう好ましくは４．８、最も好ましくは４．７のｐＨを有する。
【0142】
よって、本発明の他の好ましい実施形態では：
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
少なくとも６．０、より好ましくは少なくとも６．１、さらにいっそう好ましくは少なくとも６．２、最も好ましくは少なくとも６．３のｐＨ、ならびに、
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも５．０、より好ましくは最大でも４．９、さらにいっそう好ましくは４．８、最も好ましくは４．７のｐＨ。
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
少なくとも６．０、より好ましくは少なくとも６．１、さらにいっそう好ましくは少なくとも６．２、最も好ましくは少なくとも６．３のｐＨ、ならびに、
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも５．０、より好ましくは最大でも４．９、さらにいっそう好ましくは４．８、最も好ましくは４．７のｐＨ。
【0143】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、５．６－１０、より好ましくは５．８－８、さらにいっそう好ましくは、６．０－７、最も好ましくは６．１－６．５の範囲のｐＨを有する。
【0144】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
５．６－１０、より好ましくは５．８－８、さらにいっそう好ましくは、６．０－７、最も好ましくは６．１－６．５の範囲のｐＨ。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
５．６－１０、より好ましくは５．８－８、さらにいっそう好ましくは、６．０－７、最も好ましくは６．１－６．５の範囲のｐＨ。
【0145】
本発明の他の好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、６．０－８、より好ましくは６．１－７．５、さらにいっそう好ましくは、６．２－７．０、最も好ましくは６．２－６．５の範囲のｐＨを有する。
【0146】
よって、本発明の他の好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
６．０－８、より好ましくは６．１－７．５、さらにいっそう好ましくは、６．２－７．０、最も好ましくは６．２－６．５の範囲のｐＨ。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
６．０－８、より好ましくは６．１－７．５、さらにいっそう好ましくは、６．２－７．０、最も好ましくは６．２－６．５の範囲のｐＨ。
【0147】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨを有する。
【0148】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨ。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨ。
【0149】
本発明の他の好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、４．０－５．０、より好ましくは４．１－４．９、さらにいっそう好ましくは、４．３－４．８、最も好ましくは４．５－４．８の範囲のｐＨを有する。
【0150】
よって、本発明の他の好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
４．０－５．０、より好ましくは４．１－４．９、さらにいっそう好ましくは、４．３－４．８、最も好ましくは４．５－４．８の範囲のｐＨ。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
４．０－５．０、より好ましくは４．１－４．９、さらにいっそう好ましくは、４．３－４．８、最も好ましくは４．５－４．８の範囲のｐＨ。
【0151】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）の少なくとも１つはＢＬＧに関して飽和されておらず、より好ましくは１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）のいずれもＢＬＧに関して飽和されていない。
【0152】
本発明の他の好ましい実施形態では、１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）の少なくとも１つはＢＬＧに関して飽和されておらず、より好ましくは１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）のいずれもＢＬＧに関して飽和されていない。
【0153】
本発明のさらに好ましい実施形態では、Ａ型またはＢ型タンパク質供給物（複数可）のいずれもＢＬＧに関して飽和されていない。
【0154】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）の少なくとも１つはＢＬＧ結晶を含まず、より好ましくは１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）のいずれもＢＬＧ結晶を含まない。
【0155】
本発明の他の好ましい実施形態では、１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）の少なくとも１つはＢＬＧ結晶を含まず、より好ましくは１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）のいずれもＢＬＧ結晶を含まない。
【0156】
たとえ、供給物がＢＬＧ結晶を含まなくても、それはＢＬＧに関して依然として飽和されており、またはさらには過飽和である可能性があることに注意すべきである。
【0157】
本発明のさらに好ましい実施形態では、Ａ型またはＢ型タンパク質供給物（複数可）のいずれも、ＢＬＧ結晶を含まない。
【0158】
本発明の他の好ましい実施形態では、Ａ型またはＢ型タンパク質供給物（複数可）のいずれも、ＢＬＧ結晶を含まない。
【0159】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）の少なくとも１つはＢＬＧに関して過飽和ではなく、より好ましくは１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）のいずれも、ＢＬＧに関して過飽和ではない。
【0160】
本発明の他の好ましい実施形態では、１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）の少なくとも１つはＢＬＧに関して過飽和ではなく、より好ましくは１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）のいずれも、ＢＬＧに関して過飽和ではない。
【0161】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップａ）の１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）の少なくとも１つはＢＬＧに関して飽和されている。
【0162】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップａ）の１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）の少なくとも１つはＢＬＧに関して飽和されている。
【0163】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）の少なくとも１つはＢＬＧに関して過飽和であるが、自然結晶化は起こらない準安定ゾーンにある。
【0164】
本発明の他の好ましい実施形態では、１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）の少なくとも１つはＢＬＧに関して過飽和であるが、自然結晶化は起こらない準安定ゾーンにある。
【0165】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ結晶を含まないＡ型およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の少なくとも１％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも１０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも２０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗで寄与する。
【0166】
好ましくは、ＢＬＧ結晶を含まないＡ型およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の少なくとも５０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも７０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９０％ｗ／ｗで寄与する。
【0167】
本発明の他の好ましい実施形態では、ＢＬＧ結晶を含まないＡ型およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の少なくとも９２％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも９４％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも９６％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９９％ｗ／ｗで寄与する。
【0168】
例えば、ＢＬＧ結晶を含まないＡ型およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の１００％ｗ／ｗで寄与することは好ましい可能性がある。これは、例えば、典型的には、初期タンパク質溶液の調製後にシード材料が添加される状況である。
【0169】
発明者らは、タンパク質供給物の少なくともいくつかはＢＬＧに関して過飽和ではないことがしばしば望ましく、というのも、これは、生成中のコントロール不良の結晶化のリスクを著しく低減させるからであることを見出した。
【0170】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では、ＢＬＧに関して過飽和ではないＡ型およびＢ型タンパク質供給物は、初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の少なくとも１％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも１０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも２０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗで寄与する。
【0171】
好ましくは、ＢＬＧに関して過飽和ではないＡ型およびＢ型タンパク質供給物は、初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の少なくとも５０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも７０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９０％ｗ／ｗで寄与する。
【0172】
本発明のさらに好ましい実施形態では、ＢＬＧに関して過飽和ではないＡ型およびＢ型タンパク質供給物は、初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の少なくとも９２％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも９４％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも９６％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９９％ｗ／ｗで寄与する。
【0173】
ＢＬＧに関して過飽和ではないＡ型およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量のおよそ１００％ｗ／ｗで寄与することがしばしば好ましい。
【0174】
Ａ型およびＢ型タンパク質供給物をタンパク質変性および／または分解を回避する温度で調製し、保存し、使用することが好ましい。
【0175】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも６０℃、より好ましくは最大でも５０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも４０℃、最も好ましくは最大でも３０℃の温度を有する。
【0176】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では：
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも６０℃、より好ましくは最大でも５０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも４０℃、最も好ましくは最大でも３０℃の温度。
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも６０℃、より好ましくは最大でも５０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも４０℃、最も好ましくは最大でも３０℃の温度。
【0177】
本発明の他の好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度を有する。
【0178】
よって、本発明の他の好ましい実施形態では：
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度。
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度。
【0179】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも６０℃、より好ましくは最大でも５０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも４０℃、最も好ましくは最大でも３０℃の温度を有する。
【0180】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では：
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも６０℃、より好ましくは最大でも５０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも４０℃、最も好ましくは最大でも３０℃の温度。
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも６０℃、より好ましくは最大でも５０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも４０℃、最も好ましくは最大でも３０℃の温度。
【0181】
本発明の他の好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度を有する。
【0182】
よって、本発明の他の好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度。
【0183】
発明者らは低い導電率を有するタンパク質供給物から調製した初期タンパク質溶液は典型的にはより高いＢＬＧ結晶化収率を提供することを見出した。
【0184】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、混合された場合、最大でも１０ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも４ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。
【0185】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では：
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも１０ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも４ｍＳ／ｃｍの導電率。
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも１０ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも４ｍＳ／ｃｍの導電率。
【0186】
本発明の他の好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、混合された場合、最大でも３ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも２ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも１ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも０．５ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。
【0187】
よって、本発明の他の好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも３ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも２ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも１ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも０．５ｍＳ／ｃｍの導電率。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも３ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも２ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも１ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも０．５ｍＳ／ｃｍの導電率。
【0188】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、混合された場合、最大でも１０ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも４ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。
【0189】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも１０ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも４ｍＳ／ｃｍの導電率。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも１０ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも４ｍＳ／ｃｍの導電率。
【0190】
本発明の他の好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、混合された場合、最大でも３ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも２ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも１ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも０．５ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。
【0191】
よって、本発明の他の好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも３ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも２ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも１ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも０．５ｍＳ／ｃｍの導電率。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも３ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも２ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも１ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも０．５ｍＳ／ｃｍの導電率。
【0192】
発明者らはさらに、Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）の導電率（ｍＳ／ｃｍで表される）とタンパク質の総量（供給物（複数可）の総重量に対する％ｗｔ総タンパク質で表される）の間の比がある一定の閾値以下で維持される場合、ＢＬＧ結晶化収率が得られることを観察した。
【0193】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、混合された場合、最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、より好ましくは最大でも０．２０、より好ましくは最大でも０．１８、さらにいっそう好ましくは最大でも０．１２、最も好ましくは最大でも０．１０の導電率とタンパク質の総量の間の比を有する。
【0194】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では：
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、より好ましくは最大でも０．２０、より好ましくは最大でも０．１８、さらにいっそう好ましくは最大でも０．１２、最も好ましくは最大でも０．１０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、より好ましくは最大でも０．２０、より好ましくは最大でも０．１８、さらにいっそう好ましくは最大でも０．１２、最も好ましくは最大でも０．１０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
【0195】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、混合された場合、最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、より好ましくは最大でも０．２０、より好ましくは最大でも０．１８、さらにいっそう好ましくは最大でも０．１２、最も好ましくは最大でも０．１０の導電率とタンパク質の総量の間の比を有する。
【0196】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、より好ましくは最大でも０．２０、より好ましくは最大でも０．１８、さらにいっそう好ましくは最大でも０．１２、最も好ましくは最大でも０．１０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、より好ましくは最大でも０．２０、より好ましくは最大でも０．１８、さらにいっそう好ましくは最大でも０．１２、最も好ましくは最大でも０．１０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
【0197】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、Ａ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して少なくとも１％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは少なくとも３％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して少なくとも７％ｗ／ｗのＢＬＧを含む。
【0198】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも１％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは少なくとも３％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも７％ｗ／ｗのＢＬＧ。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも１％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは少なくとも３％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも７％ｗ／ｗのＢＬＧ。
【0199】
本発明の他の好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、Ａ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して１－４５％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは３－４０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは、５－３６％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して７－３４％ｗ／ｗのＢＬＧを含む。
【0200】
よって、本発明の他の好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して１－４５％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは３－４０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは、５－３６％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して７－３４％ｗ／ｗのＢＬＧ。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して１－４５％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは３－４０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは、５－３６％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して７－３４％ｗ／ｗのＢＬＧ。
【0201】
本発明のさらに好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、Ａ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して６－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧを含む。
【0202】
よって、本発明のさらに好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して６－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧ。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して６－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧ。
【0203】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して少なくとも１％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは少なくとも３％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して少なくとも７％ｗ／ｗのＢＬＧを含む。
【0204】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも１％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは少なくとも３％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも７％ｗ／ｗのＢＬＧ。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも１％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは少なくとも３％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも７％ｗ／ｗのＢＬＧ。
【0205】
本発明の他の好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して１－４５％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは３－４０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは、５－３６％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して７－３４％ｗ／ｗのＢＬＧを含む。
【0206】
よって、本発明の他の好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して１－４５％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは３－４０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは、５－３６％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して７－３４％ｗ／ｗのＢＬＧ。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して１－４５％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは３－４０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは、５－３６％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して７－３４％ｗ／ｗのＢＬＧ。
【0207】
本発明のさらに好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して、６－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧを含む。
【0208】
よって、本発明のさらに好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して６－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧ。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して６－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧ。
【0209】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、混合された場合、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧを含む。
【0210】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧ。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧ。
【0211】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、混合された場合、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧを含む。
【0212】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧ。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧ。
【0213】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、総固体に対して少なくとも１％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも２％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも１０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体を含む。
【0214】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して少なくとも１％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも２％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも１０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して少なくとも１％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも２％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも１０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
【0215】
本発明の他の好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、混合された場合、総固体に対して少なくとも１５％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも２０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも３０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体を含む。
【0216】
よって、本発明の他の好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して少なくとも１５％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも２０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも３０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して少なくとも１５％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも２０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも３０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
【0217】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、総固体に対して０－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは１－６０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは２－５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３－４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体を含む。
【0218】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して０－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは１－６０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは２－５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３－４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して０－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは１－６０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは２－５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３－４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
【0219】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、混合された場合、総固体に対して０－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは０－６０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは０－５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは０－４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体を含む。
【0220】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して０－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは１－６０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは２－５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３－４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して０－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは１－６０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは２－５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３－４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
【0221】
本発明の他の好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、総固体に対して０－２０％ｗ／ｗ、より好ましくは０－１５％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは０－１０％ｗ／ｗ、最も好ましくは０－５％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体を含む。
【0222】
よって、本発明の他の好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して０－２０％ｗ／ｗ、より好ましくは０－１５％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは０－１０％ｗ／ｗ、最も好ましくは０－５％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して０－２０％ｗ／ｗ、より好ましくは０－１５％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは０－１０％ｗ／ｗ、最も好ましくは０－５％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
【0223】
本発明のさらに好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、総固体に対して１５－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは２０－６５％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは２５－６０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－５０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体を含む。
【0224】
よって、本発明のさらに好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して１５－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは２０－６５％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは２５－６０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－５０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して１５－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは２０－６５％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは２５－６０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－５０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
【0225】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、総固体に対して少なくとも１％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも２％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも１０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体を含む。
【0226】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して少なくとも１％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも２％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも１０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して少なくとも１％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも２％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも１０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
【0227】
本発明の他の好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、総固体に対して少なくとも１５％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも２０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも３０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体を含む。
【0228】
よって、本発明の他の好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して少なくとも１５％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも２０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも３０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して少なくとも１５％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも２０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも３０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
【0229】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、総固体に対して０－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは１－６０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは２－５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３－４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体を含む。
【0230】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して０－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは１－６０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは２－５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３－４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して０－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは１－６０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは２－５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３－４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
【0231】
本発明の他の好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、総固体に対して０－２０％ｗ／ｗ、より好ましくは０－１５％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは０－１０％ｗ／ｗ、最も好ましくは０－５％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体を含む。
【0232】
よって、本発明の他の好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して０－２０％ｗ／ｗ、より好ましくは０－１５％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは０－１０％ｗ／ｗ、最も好ましくは０－５％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して０－２０％ｗ／ｗ、より好ましくは０－１５％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは０－１０％ｗ／ｗ、最も好ましくは０－５％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
【0233】
本発明のさらに好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、総固体に対して１５－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは２０－６５％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは２５－６０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－５０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体を含む。
【0234】
よって、本発明のさらに好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して１５－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは２０－６５％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは２５－６０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－５０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む：
総固体に対して１５－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは２０－６５％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは２５－６０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－５０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体。
【0235】
発明のいくつかの実施形態では、タンパク質供給物は、低い含量の変性タンパク質を有する。好ましくは、タンパク質供給物は、合わせられた場合、最大でも２０％、より好ましくは最大でも１０％、さらにいっそう好ましくは最大でも５％、最も好ましくは最大でも２％のタンパク質変性度を有する。
【0236】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液は、初期タンパク質溶液の重量に対して１－９９％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲のＡ型タンパク質供給物の総量を含む。
【0237】
本発明の他の好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液は、初期タンパク質溶液の重量に対して５－９５％ｗ／ｗ、より好ましくは１５－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７５％ｗ／ｗ、最も好ましくは３５－７０％ｗ／ｗの範囲のＡ型タンパク質供給物の総量を含む。
【0238】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液は、初期タンパク質溶液の重量に対して１－９９％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲のＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量を含む。
【0239】
本発明の他の好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液は、初期タンパク質溶液の重量に対して５－９５％ｗ／ｗ、より好ましくは１５－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７５％ｗ／ｗ、最も好ましくは３５－７０％ｗ／ｗの範囲のＢ型タンパク質供給物の総量を含む。
【0240】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液は下記を含む：
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲のＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲のＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲のＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲のＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
【0241】
本発明の他の好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液は下記を含む：
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の５．８－９のｐＨを有するＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の２．５－５．２のｐＨを有するＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の５．８－９のｐＨを有するＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の２．５－５．２のｐＨを有するＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
【0242】
本発明のさらに好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液は下記を含む：
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の６．０－８のｐＨを有するＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の３－５．０のｐＨを有するＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の６．０－８のｐＨを有するＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の３－５．０のｐＨを有するＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
【0243】
本発明のさらにいっそう好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液は下記を含む：
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の６．１－８のｐＨを有するＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの３－４．９のｐＨを有するＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の６．１－８のｐＨを有するＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの３－４．９のｐＨを有するＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
【0244】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、全てのタンパク質供給物は液体形態である。
【0245】
本発明の他の好ましい実施形態では、タンパク質供給物の少なくとも１つは乾燥形態である。
【0246】
本発明のさらに好ましい実施形態では、タンパク質供給物の少なくとも１つは乾燥形態、好ましくは粉末形態であり、タンパク質供給物の少なくとも１つは液体形態である。
【0247】
タンパク質供給物は好ましくは、ＷＰＣ、ＷＰＩ、ＳＰＣ、ＳＰＩ、またはそれらの組み合わせから調製される。
【0248】
初期タンパク質溶液の化学組成に関連する実施形態はＡ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）に等しく適用されるが、しかしながら、典型的には、タンパク質供給物の少なくとも１つのパラメータは、過飽和、または、少なくとも自然結晶化を回避するように設定される。
【0249】
初期タンパク質溶液のＢＬＧの過飽和度は下記の過飽和度より高いことがしばしば好ましい：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、Ａ型タンパク質供給物、または
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、合わせられた場合の、Ａ型タンパク質供給物。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、Ａ型タンパク質供給物、または
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、合わせられた場合の、Ａ型タンパク質供給物。
【0250】
加えて、初期タンパク質溶液のＢＬＧの過飽和度は下記の過飽和度より高いことがしばしば好ましい：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、Ｂ型タンパク質供給物、または
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、合わせられた場合の、Ｂ型タンパク質供給物。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、Ｂ型タンパク質供給物、または
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、合わせられた場合の、Ｂ型タンパク質供給物。
【0251】
初期タンパク質溶液のＢＬＧの過飽和度は下記の過飽和度の両方より高いことが特に好ましい：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、Ａ型タンパク質供給物、または
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、合わせられた場合の、Ａ型タンパク質供給物、
および：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、Ｂ型タンパク質供給物、または
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、合わせられた場合の、Ｂ型タンパク質供給物。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、Ａ型タンパク質供給物、または
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、合わせられた場合の、Ａ型タンパク質供給物、
および：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、Ｂ型タンパク質供給物、または
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、合わせられた場合の、Ｂ型タンパク質供給物。
【0252】
液体の過飽和度は液体の試料にＢＬＧ結晶をシーディングし、試料を同じ条件（例えば温度、圧力および湿度）で２４時間維持した場合に試料中で生成された追加ＢＬＧ結晶質量の量を定量することにより決定される。ＢＬＧ結晶質量の定量化は、１５０００ｇで５分間の、液体の温度での遠心分離、その後、得られたペレット中でのＢＬＧの含量を、ＷＯ２０１８／１１５５２０Ａ１号の分析９．９を使用して定量することにより実施される。過飽和度はペレット中で単離することができる、液体試料のＢＬＧのパーセンテージである。
【0253】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物との関連で、単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する：
－Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－５．６－１０、より好ましくは５．８－８、さらにいっそう好ましくは、６．０－７、最も好ましくは６．１－６．５の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧの含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
－Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－５．６－１０、より好ましくは５．８－８、さらにいっそう好ましくは、６．０－７、最も好ましくは６．１－６．５の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧの含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
【0254】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物との関連で、単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらは、混合された場合、下記を有する：
－Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧの含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
－Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧの含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
【0255】
発明の特に好ましい実施形態では、
－Ａ型タンパク質供給物との関連で、単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
－Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－５．６－１０、より好ましくは５．８－８、さらにいっそう好ましくは、６．０－７、最も好ましくは６．１－６．５の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧの含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で、単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらは、混合された場合、下記を有する：
－Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧの含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
－Ａ型タンパク質供給物との関連で、単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
－Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－５．６－１０、より好ましくは５．８－８、さらにいっそう好ましくは、６．０－７、最も好ましくは６．１－６．５の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧの含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で、単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらは、混合された場合、下記を有する：
－Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧの含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
【0256】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物との関連で、単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらは、混合された場合、下記を有する：
－Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、総固体に対して０－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは０－６０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは０－５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは０－４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体の含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
－Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、総固体に対して０－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは０－６０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは０－５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは０－４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体の含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
【0257】
発明の特に好ましい実施形態では、
－Ａ型タンパク質供給物との関連で、単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
－Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－５．６－１０、より好ましくは５．８－８、さらにいっそう好ましくは、６．０－７、最も好ましくは６．１－６．５の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、総固体に対して０－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは０－６０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは０－５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは０－４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体の含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で、単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらは、混合された場合、下記を有する：
－Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、総固体に対して０－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは０－６０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは０－５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは０－４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体の含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
－Ａ型タンパク質供給物との関連で、単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
－Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－５．６－１０、より好ましくは５．８－８、さらにいっそう好ましくは、６．０－７、最も好ましくは６．１－６．５の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、総固体に対して０－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは０－６０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは０－５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは０－４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体の含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で、単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらは、混合された場合、下記を有する：
－Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、総固体に対して０－７０％ｗ／ｗ、より好ましくは０－６０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは０－５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは０－４０％ｗ／ｗの量の非ＢＬＧ固体の含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
【0258】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、タンパク質供給物は下記プロセスステップの１つ以上により調製される：
－ｐＨを調整するステップ、
－導電率を低減させるステップ
－温度を低減させるステップ
－タンパク質濃度を増加させるステップ
－水分活性を低減させる作用物質を添加するステップ
－イオン組成を改変させるステップ。
－ｐＨを調整するステップ、
－導電率を低減させるステップ
－温度を低減させるステップ
－タンパク質濃度を増加させるステップ
－水分活性を低減させる作用物質を添加するステップ
－イオン組成を改変させるステップ。
【0259】
本発明者らは、圧力駆動膜濾過は、液体タンパク質供給物を調製するのによく適していることを見出した。
【0260】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、タンパク質供給物の少なくとも１つは、タンパク質源、好ましくはホエータンパク質源の圧力駆動膜濾過を含むプロセスにより調製される。好ましい圧力駆動膜濾過は、限外濾過、精密濾過、ナノ濾過および逆浸透による濾過を含む。限外濾過が、タンパク質供給物を調製するのに特に好ましいことが見出されており、タンパク質供給物の調製中の圧力駆動膜濾過の唯一の型として使用することができ、または、他の濾過方法と組み合わせて使用され得る。
【0261】
タンパク質供給物の調製はしばしば、所望のｐＨを有するタンパク質供給物を提供するためのｐＨ調整を含む。好ましくは、ｐＨは、Ａ型タンパク質供給物を調製する場合６．０－７．０の範囲のｐＨに、Ｂ型タンパク質供給物を調製する場合４．０－５．０の範囲のｐＨに調整される。ｐＨは好ましくは、食品に許容される酸および／または塩基を用いて調整される。例えば、カルボン酸などの食品に許容される酸が特に好ましい。そのような酸の有用な例は、例えば塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、マレイン酸、酒石酸、乳酸、クエン酸、またはグルコン酸、および／またはそれらの混合物である。
【0262】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ｐＨは、ラクトン、例えば、例としてＤ－グルコノ－δ－ラクトンを用いて調整され、それは徐々に加水分解し、同時に、それを含む水性液体のｐＨを低減させる。ラクトンの加水分解が終わった後の標的ｐＨは正確に計算することができる。
【0263】
食品に許容される塩基の有用な例は例えば水酸化物源、例えば、例として、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、例えば、クエン酸三ナトリウムなどの食物酸の塩、および／またはそれらの組み合わせである。
【0264】
発明の他の好ましい実施形態では、ｐＨはそのＨ＋形態のカチオン交換材料の添加により調整される。ビーズ型／大粒子型カチオン交換材料は、初期タンパク質溶液から結晶化前に、または実に結晶化後に容易に除去される。そのＨ＋形態のカチオン交換材料の添加によるｐＨの調整は本発明において特に有利であり、というのも、それはタンパク質供給物の導電率に著しく影響する負の対イオンを添加せずにｐＨを低減させたからである。
【0265】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液の調製は、タンパク質供給物の導電率を低減させることを含む。
【0266】
本明細書で言及される導電率値は別段の指定がない限り２５℃に正規化されている。
【0267】
発明者らは、初期タンパク質溶液の導電率を低減させると、ＢＬＧ結晶のより高い収率につながることを見出した。初期タンパク質溶液の最小の得られ得る導電率は、タンパク質画分および脂質画分（もしあれば）の組成に依存する。例えば、カゼイノマクロペプチド（ＣＭＰ）などのいくつかのタンパク質種は、他のタンパク質種よりも導電率により大きく寄与する。よって、タンパク質供給物の導電率は、タンパク質およびタンパク質の対イオンが導電率への主因となるレベルに近づけられることが好ましい。導電率の低減はしばしば、液相中に存在し、タンパク質にしっかりと結合されていない小さな、遊離イオンの少なくともいくつかの除去を含む。
【0268】
タンパク質供給物は最大でも１０ｍＳ／ｃｍの導電率を有することがしばしば好ましい。発明のいくつかの好ましい実施形態では、タンパク質供給物は最大でも５ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。好ましくは、タンパク質供給物は最大でも４ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。
【0269】
より低い導電率がさらにより好ましく、ＢＬＧ結晶のより高い収率を生じさせる。よって、タンパク質供給物は好ましくは、最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。発明のいくつかの好ましい実施形態では、タンパク質供給物は最大でも１ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。好ましくは、タンパク質供給物は最大でも０．５ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。
【0270】
タンパク質供給物の低い導電率は好ましくは、透析またはダイアフィルトレーションにより得られる。限外濾過によるダイアフィルトレーションは特に好ましく、というのも、それにより、塩および小さな荷電分子を洗い流すことができるが、一方、タンパク質は保持されるからである。発明のいくつかの好ましい実施形態では、同じＵＦユニットがＵＦ／ダイアフィルトレーションおよびその後のタンパク質供給物の濃縮のために使用される。
【0271】
本発明者らは、導電率（ｍＳ／ｃｍで表される）と初期タンパク質溶液中のタンパク質の総量（初期タンパク質溶液の総重量に対する％ｗｔ総タンパク質で表される）の間の比は便宜的に、ある一定の閾値以下で維持することができ、ＢＬＧの結晶化が促進されるという兆候を見た。
【0272】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、導電率とタンパク質供給物のタンパク質の総量の間の比は最大でも０．３である。好ましくは、導電率とタンパク質供給物のタンパク質の総量の間の比は最大でも０．２５である。好ましくは、導電率とタンパク質供給物のタンパク質の総量の間の比は最大でも０．２０である。より好ましくは、導電率とタンパク質供給物のタンパク質の総量の間の比は最大でも０．１８である。さらにいっそう好ましくは、導電率とタンパク質供給物のタンパク質の総量の間の比は最大でも０．１２である。最も好ましくは、導電率とタンパク質供給物のタンパク質の総量の間の比は最大でも０．１０である。
【0273】
例えば、導電率とタンパク質供給物のタンパク質の総量の間の比はおよそ０．０７、さらにはそれ以下であることが好ましい。
【0274】
本発明者らはさらに、タンパク質供給物は便宜的に、最大でも１０ｍＳ／ｃｍのＵＦ透過導電率を得るように調整することができることを見出した。ＵＦ透過導電率は、液体の小分子画分の導電率の測定値であり、ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例９．１０に従い測定される。「導電率」という用語が本明細書でそのようなものとして使用される場合、それは、問題になっている液体の導電率を示す。「ＵＦ透過導電率」という用語が使用される場合、それは、液体の小分子画分の導電率を示し、ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例９．１０に従い測定される。
【0275】
好ましくは、タンパク質供給物のＵＦ透過導電率は最大でも７ｍＳ／ｃｍである。より好ましくは、タンパク質供給物のＵＦ透過導電率は最大でも５ｍＳ／ｃｍであり得る。さらにいっそう好ましくは、タンパク質供給物のＵＦ透過導電率は最大でも３ｍＳ／ｃｍであり得る。
【0276】
さらに低いＵＦ透過導電率が使用される可能性があり、ＢＬＧの高い収率が得られなければならない場合、特に好ましい。よって、好ましくは、タンパク質供給物のＵＦ透過導電率は、最大でも１．０ｍＳ／ｃｍである。より好ましくは、タンパク質供給物のＵＦ透過導電率は最大でも０．４ｍＳ／ｃｍであり得る。さらにいっそう好ましくは、タンパク質供給物のＵＦ透過導電率は最大でも０．１ｍＳ／ｃｍであり得る。最も好ましくは、タンパク質供給物のＵＦ透過導電率は最大でも０．０４ｍＳ／ｃｍであり得る。
【0277】
例えば、ダイアフィルトレーション中、ミリＱ水が希釈剤として使用される（ミリＱ水はおよそ０．０６μＳ／ｃｍの導電率を有する）と、さらに低いＵＦ透過導電率に到達し得る。よって、タンパク質供給物のＵＦ透過導電率は最大でも０．０１ｍＳ／ｃｍであり得る。あるいは、タンパク質供給物のＵＦ透過導電率は最大でも０．００１ｍＳ／ｃｍであり得る。あるいは、タンパク質供給物のＵＦ透過導電率は最大でも０．０００１ｍＳ／ｃｍであり得る。
【0278】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、タンパク質供給物の調製は、温度低減を含む。
【0279】
タンパク質供給物の温度は、最大でも３０℃、好ましくは最大でも２０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃であってもよい。発明者らはさらに低い温度は、タンパク質供給物が混合された場合より高い過飽和度を提供することを見出し、よって、タンパク質供給物の温度は、例えば、最大でも５℃、好ましくは最大でも２℃、さらにいっそう好ましくは最大でも０℃まで低減されてもよい。温度はさらに、０℃より低くてもよく、しかしながら、好ましくは、タンパク質供給物はポンピング可能なまま、例えば氷スラリーの形態でなければならない。
【0280】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、タンパク質供給物は、氷スラリーであり、その後、それらが合わされ、初期タンパク質溶液が調製される。
【0281】
タンパク質供給物の調製は好ましくは、１つ以上のタンパク質濃縮ステップ、例えば限外濾過、ナノ濾過、逆浸透、および／または蒸発を含む。
【0282】
限外濾過が特に好ましく、というのも、それは、タンパク質の選択的濃縮を可能にするからである。上述のように、限外濾過が好ましくは、タンパク質供給物の調製中、ダイアフィルトレーションおよび濃縮の両方のために使用される。
【0283】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、タンパク質供給物のＢＬＧの濃度は、ＢＬＧの自然結晶化が起こるレベルより低い。
【0284】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、タンパク質供給物の調製は、１つ以上の水分活性低減剤（複数可）の添加を含む。
【0285】
そのような水分活性低減剤の有用であるが、非限定的な例は、多糖および／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。
【0286】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、タンパク質供給物の調製は、新規イオン種の添加による、透析またはダイアフィルトレーションによる、イオン交換を含む。
【0287】
発明のさらに他の好ましい実施形態では、タンパク質供給物の調製は、例えば、少なくともＢＬＧを保持する膜を使用するダイアフィルトレーションにより導電率を低減させることを含む。限外濾過によるダイアフィルトレーションが特に好ましい。
【0288】
タンパク質供給物を調製するために任意の好適なタンパク質源が使用され得る。本発明のいくつかの好ましい実施形態では、タンパク質源は、哺乳動物細胞、組換え植物細胞、組換え哺乳動物細胞、および／またはＢＬＧを生成することができる組換え微生物の１つ以上の発酵により生成される。
【0289】
発明の他の好ましい実施形態では、タンパク質源は哺乳動物乳からのホエーまたは乳清に由来する。発明の特に好ましい実施形態では、タンパク質供給物のタンパク質源は、乳清タンパク質濃縮物、ホエータンパク質濃縮物、乳清タンパク質分離物、ホエータンパク質分離物、またはそれらの組み合わせを含み、またはさらには、これから構成される。
【0290】
典型的には、タンパク質供給物は、上記プロセスの２つ以上を合わせる、好ましくは混合することにより調製される。
【0291】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、タンパク質供給物の調製は、タンパク質源（好ましくは、ホエータンパク質源である）を下記に供することを含む：
－所望のｐＨ、好ましくはＡ型タンパク質供給物を調製する場合６．０－８の範囲のｐＨ、および、Ｂ型タンパク質供給物を調製する場合３－５．０の範囲のｐＨへのｐＨ調整、ならびに
－限外濾過、ナノ濾過および／または逆浸透による濃縮。
－所望のｐＨ、好ましくはＡ型タンパク質供給物を調製する場合６．０－８の範囲のｐＨ、および、Ｂ型タンパク質供給物を調製する場合３－５．０の範囲のｐＨへのｐＨ調整、ならびに
－限外濾過、ナノ濾過および／または逆浸透による濃縮。
【0292】
発明の他の好ましい実施形態では、タンパク質供給物の調製は、タンパク質源（好ましくは、ホエータンパク質源である）を下記に供することを含む：
－所望のｐＨ、好ましくはＡ型タンパク質供給物を調製する場合６．０－８の範囲のｐＨ、および、Ｂ型タンパク質供給物を調製する場合３－５．０の範囲のｐＨへのｐＨ調整、
－限外濾過、ナノ濾過および／または逆浸透による濃縮、
－低い導電率を有するタンパク質供給物を提供するための限外濾過／ダイアフィルトレーション、ならびに
－処理中の液体ストリームの温度を最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃に維持するための温度調整。
－所望のｐＨ、好ましくはＡ型タンパク質供給物を調製する場合６．０－８の範囲のｐＨ、および、Ｂ型タンパク質供給物を調製する場合３－５．０の範囲のｐＨへのｐＨ調整、
－限外濾過、ナノ濾過および／または逆浸透による濃縮、
－低い導電率を有するタンパク質供給物を提供するための限外濾過／ダイアフィルトレーション、ならびに
－処理中の液体ストリームの温度を最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃に維持するための温度調整。
【0293】
本発明者らはさらに、本方法のＢＬＧ収率は、ナトリウム＋カリウムの合計対カルシウムとマグネシウムの合計間のモル比を制御することにより改善することができることを見出した。カルシウムとマグネシウムの相対量が高くなるほど、驚いたことに、ＢＬＧの収率が増加し、よって本方法のＢＬＧ回収の効率が増加するように思われる。
【0294】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも４のＮａ＋ＫとＣａ＋Ｍｇの間のモル比を有する。より好ましくは、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも２のＮａ＋ＫとＣａ＋Ｍｇの間のモル比を有する。さらにいっそう好ましくは、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも１．５、さらにいっそう好ましくは最大でも１．０のＮａ＋ＫとＣａ＋Ｍｇの間のモル比を有する。最も好ましくは、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも０．５、例えば、例として最大でも０．２のＮａ＋ＫとＣａ＋Ｍｇの間のモル比を有する。
【0295】
Ｎａ＋ＫとＣａ＋Ｍｇの間のモル比は、（ｍＮａ＋ｍＫ）／（ｍＣａ＋ｍＭｇ）として計算され、式中、ｍＮａはｍｏｌで表される元素Ｎａの含量であり、ｍＫはｍｏｌで表される元素Ｋの含量であり、ｍＣａはｍｏｌで表される元素Ｃａの含量であり、ｍＭｇはｍｏｌで表される元素Ｍｇの含量である。
【0296】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも４のＮａ＋ＫとＣａ＋Ｍｇの間のモル比を有する。より好ましくは、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも２のＮａ＋ＫとＣａ＋Ｍｇの間のモル比を有する。さらにいっそう好ましくは、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも１．５、さらにいっそう好ましくは最大でも１．０のＮａ＋ＫとＣａ＋Ｍｇの間のモル比を有する。最も好ましくは、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも０．５、例えば、例として最大でも０．２のＮａ＋ＫとＣａ＋Ｍｇの間のモル比を有する。
【0297】
発明のいくつかの実施形態では、タンパク質供給物は、低い含量の変性タンパク質を有する。好ましくは、タンパク質供給物は、最大でも２０％、好ましくは最大でも１０％、より好ましくは最大でも５％、最も好ましくは最大でも２％のタンパク質変性度を有する。
【0298】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液の調製は５－６の範囲のｐＨを有する。
【0299】
ｐＨ値は全て、ｐＨガラス電極を用いて測定され、２５℃に正規化される。
【0300】
初期タンパク質溶液は、例えば、４．９－６．１の範囲のｐＨを有し得る。初期タンパク質溶液のｐＨは、例えば、５．０－６．１の範囲であってもよい。あるいは、初期タンパク質溶液のｐＨは、５．１－６．１の範囲であってもよい。好ましくは、初期タンパク質溶液のｐＨは５．１－６．０の範囲である。
【0301】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液のｐＨは、５．０－６．０の範囲である。好ましくは、初期タンパク質溶液のｐＨは、５．１－６．０の範囲である。より好ましくは初期タンパク質溶液のｐＨは、５．１－５．９の範囲である。さらにより好ましくは、初期タンパク質溶液のｐＨは５．２－５．８の範囲であってもよい。最も好ましくは、初期タンパク質溶液のｐＨは、５．４－５．６の範囲である。
【0302】
発明者らは、最大ＢＬＧ結晶化収率はおよそｐＨ５．５で得られること、および、初期タンパク質溶液のｐＨは便宜的にはｐＨ５．５の外側で選択することができるが、結晶化中に、例えば、食物酸、または追加のＢ型タンパク質供給物もしくはＡ型タンパク質供給物の添加により、最適ｐＨにより近づくようにすることができることを観察した。よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液のｐＨは、５．０－５．３または５．７－６．０の範囲である。
【0303】
発明者らは、結晶化中の自然結晶化を回避することが有利であること、および、準安定ゾーンでの制御された結晶化により形成されたＢＬＧ結晶はより均一なサイズ分布を有し、母液から自然ＢＬＧ結晶化に起因するそのＢＬＧ結晶をより効率的に分離するのがより用意であることを見出した。
【0304】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液、好ましくはまた、結晶化しているタンパク質溶液は、自然ＢＬＧ結晶化を回避するように制御される。例えば、初期タンパク質溶液はＢＬＧに関して過飽和であるが、準安定ゾーンにあることが好ましく、自然ＢＬＧ結晶化は起こり得ないことが意味される。
【0305】
発明者らは初期タンパク質溶液の低い導電率がＢＬＧ結晶のより高い収率につながることを見出した。初期タンパク質溶液の最小の得られ得る導電率は、タンパク質画分および脂質画分（もしあれば）の組成に依存する。例えば、カゼイノマクロペプチド（ＣＭＰ）などのいくつかのタンパク質種は、他のタンパク質種よりも導電率により大きく寄与する。よって、タンパク質供給物の導電率は、タンパク質およびタンパク質の対イオンが導電率への主因となるレベルに近づけられることが好ましい。導電率の低減はしばしば、液相中に存在し、タンパク質にしっかりと結合されていない小さな、遊離イオンの少なくともいくつかの除去を含む。
【0306】
初期タンパク質溶液は最大でも１０ｍＳ／ｃｍの導電率を有することがしばしば好ましい。発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液は最大でも５ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。好ましくは、初期タンパク質溶液は最大でも４ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。
【0307】
より低い導電率がさらにより好ましく、ＢＬＧ結晶のより高い収率を生じさせる。よって、初期タンパク質溶液は好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液は最大でも１ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。好ましくは、初期タンパク質溶液は最大でも０．５ｍＳ／ｃｍの導電率を有する。
【0308】
本発明者らは、導電率（ｍＳ／ｃｍで表される）および初期タンパク質溶液のタンパク質の総量（初期タンパク質溶液の総重量に対する％ｗｔ総タンパク質で表される）の間の比は便宜的に、ある一定の閾値以下で維持することができ、ＢＬＧの結晶化が促進されるという兆候を見た。
【0309】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液の導電率とタンパク質の総量の間の比は最大でも０．３である。好ましくは、初期タンパク質溶液の導電率とタンパク質の総量の間の比は最大でも０．２５である。好ましくは、初期タンパク質溶液の導電率とタンパク質の総量の間の比は最大でも０．２０である。より好ましくは、初期タンパク質溶液の導電率とタンパク質の総量の間の比は最大でも０．１８である。さらにいっそう好ましくは、初期タンパク質溶液の導電率とタンパク質の総量の間の比は最大でも０．１２である。最も好ましくは、初期タンパク質溶液の導電率とタンパク質の総量の間の比は最大でも０．１０である。
【0310】
例えば、初期タンパク質溶液の導電率とタンパク質の総量の間の比はおよそ０．０７、またはそれ以下であることが好ましい。
【0311】
本発明者らはさらに、初期タンパク質溶液は便宜的に、最大でも１０ｍＳ／ｃｍのＵＦ透過導電率を有し得ることを見出した。ＵＦ透過導電率は液体の小分子画分の導電率の測定値であり、ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例９．１０に従い測定される。「導電率」という用語が本明細書でそのようなものとして使用される場合、それは、問題になっている液体の導電率を示す。「ＵＦ透過導電率」という用語が使用される場合、それは、液体の小分子画分の導電率を示し、ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例９．１０に従い測定される。
【0312】
好ましくは、初期タンパク質溶液のＵＦ透過導電率は最大でも７ｍＳ／ｃｍである。より好ましくは、初期タンパク質溶液のＵＦ透過導電率は最大でも５ｍＳ／ｃｍであり得る。さらにいっそう好ましくは、初期タンパク質溶液のＵＦ透過導電率は最大でも３ｍＳ／ｃｍであり得る。
【0313】
さらに低いＵＦ透過導電率が使用される可能性があり、ＢＬＧの高い収率が得られなければならない場合特に好ましい。よって、好ましくは、初期タンパク質溶液のＵＦ透過導電率は、最大でも１．０ｍＳ／ｃｍである。より好ましくは、初期タンパク質溶液のＵＦ透過導電率は最大でも０．４ｍＳ／ｃｍであり得る。さらにいっそう好ましくは、初期タンパク質溶液のＵＦ透過導電率は最大でも０．１ｍＳ／ｃｍであり得る。最も好ましくは、初期タンパク質溶液のＵＦ透過導電率は最大でも０．０４ｍＳ／ｃｍであり得る。
【0314】
例えば、ダイアフィルトレーション中、ミリＱ水が希釈剤として使用される（ミリＱ水はおよそ０．０６μＳ／ｃｍの導電率を有する）と、さらに低いＵＦ透過導電率に到達し得る。よって、初期タンパク質溶液のＵＦ透過導電率は最大でも０．０１ｍＳ／ｃｍであり得る。あるいは、初期タンパク質溶液のＵＦ透過導電率は最大でも０．００１ｍＳ／ｃｍであり得る。あるいは、初期タンパク質溶液のＵＦ透過導電率は最大でも０．０００１ｍＳ／ｃｍであり得る。
【0315】
発明者らは、低温はＢＬＧ結晶化収率を増加させることを見出した。本発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液の温度は、最大でも３０℃、より好ましくは最大でも２０℃、最も好ましくは最大でも１０℃である。より低い温度はさらに高い過飽和度を提供し、よって、初期タンパク質溶液の温度は好ましくは最大でも５℃、より好ましくは最大でも２℃、さらにいっそう好ましくは最大でも０℃である。温度はさらに、０℃より低くてもよいが、しかしながら、好ましくは、初期タンパク質溶液はポンピング可能なまま、例えば氷スラリーの形態でなければならない。
【0316】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液はＢＬＧ結晶化の初期では氷スラリーである。その代わりに、または、加えて、結晶化初期タンパク質溶液は、ステップｂ）のＢＬＧ結晶化中、氷スラリーに変換され、または氷スラリーとして維持され得る。
【0317】
本発明者らはさらに、本方法のＢＬＧ収率は、ナトリウム＋カリウムの合計対カルシウムとマグネシウムの合計間のモル比を制御することにより改善することができることを見出した。カルシウムとマグネシウムの相対量が高くなるほど、驚いたことに、ＢＬＧの収率が増加し、よって本方法のＢＬＧ回収の効率が増加するように思われる。
【0318】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、最大でも４のＮａ＋ＫとＣａ＋Ｍｇの間のモル比を有する。より好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、最大でも２のＮａ＋ＫとＣａ＋Ｍｇの間のモル比を有する。さらにいっそう好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、最大でも１．５、さらにいっそう好ましくは最大でも１．０のＮａ＋ＫとＣａ＋Ｍｇの間のモル比を有する。最も好ましくは、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、最大でも０．５、例えば、例として最大でも０．２のＮａ＋ＫとＣａ＋Ｍｇの間のモル比を有する。
【0319】
Ｎａ＋ＫとＣａ＋Ｍｇの間のモル比は、（ｍＮａ＋ｍＫ）／（ｍＣａ＋ｍＭｇ）として計算され、式中、ｍＮａはｍｏｌで表される元素Ｎａの含量であり、ｍＫはｍｏｌで表される元素Ｋの含量であり、ｍＣａはｍｏｌで表される元素Ｃａの含量であり、ｍＭｇはｍｏｌで表される元素Ｍｇの含量である。
【0320】
初期タンパク質溶液は塩溶によりＢＬＧに関して過飽和であり、よってＢＬＧは初期タンパク質溶液から塩溶モードで結晶化させることができることが特に好ましい。
【0321】
発明のいくつかの実施形態では、初期タンパク質溶液は変性タンパク質の低い含量を有し、特に、本発明の可食ＢＬＧ生成物がタンパク質変性度を有する場合そうである。好ましくは、初期タンパク質溶液は最大でも２０％、好ましくは最大でも１０％、より好ましくは最大でも５％、最も好ましくは最大でも２％のタンパク質変性度を有する。
【0322】
方法のステップｂ）は、過飽和初期タンパク質溶液のＢＬＧの少なくともいくらかを結晶化することを含む。
【0323】
ステップｂ）の結晶化は塩溶モードで、すなわち、低いイオン強度および導電率を有する液体中で実施されることが特に好ましい。これは、塩析モードに反しており、その場合、結晶化を引き起こすためにかなりの量の塩が溶液に添加される。
【0324】
ステップｂ）のＢＬＧの結晶化は例えば、下記の１つ以上を含み得る：
－結晶化が起こるのを待つこと、
－結晶化シードの添加、
－ＢＬＧの過飽和度をさらにいっそう増加させること、および／または
－機械的刺激。
－結晶化が起こるのを待つこと、
－結晶化シードの添加、
－ＢＬＧの過飽和度をさらにいっそう増加させること、および／または
－機械的刺激。
【0325】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップｂ）は、結晶化シードを初期タンパク質溶液に添加することを含む。発明者らは、結晶化シードの添加は、生成中でのプロセス機器の突然の目詰りおよび意図していない停止を回避するために、いつ、どこでＢＬＧ結晶化が起こるかの制御を可能にすることを見出した。例えば、タンパク質供給物を濃縮している間の結晶化の開始を回避することがしばしば望ましい。
【0326】
原則として、ＢＬＧの結晶化を開始させる任意のシード材料が使用され得る。しかしながら、水和ＢＬＧ結晶または乾燥されたＢＬＧ結晶が、シーディングのために使用され、追加の不純物を初期タンパク質溶液に添加することが回避されることが好ましい。
【0327】
結晶化シードは乾燥形態であってもよく、または、初期タンパク質溶液に添加されると懸濁液の一部を形成してもよい。結晶化シード、例えばＢＬＧ結晶を含む懸濁液を添加することが、現在のところ好ましく、というのも、結晶化のより早い開始を提供すると考えられるからである。そのような懸濁液は結晶化シードを含み、５－６の範囲のｐＨ、および、最大でも１０ｍＳ／ｃｍの導電率を有することが好ましい。
【0328】
発明のいくつかの実施形態では、結晶化シードの少なくともいくつかは初期タンパク質溶液と接触させられる固相上に位置する。
【0329】
結晶化シードは好ましくは、ＢＬＧ結晶の所望のサイズより小さい粒径を有する。結晶化シードのサイズは、ふるい分けまたは他のサイズ分画プロセスにより、最大シードを除去することにより、改変させることができる。例えば、粉砕による粒径低減もまた、粒径分画前に採用することができる。
【0330】
発明のいくつかの実施形態では、少なくとも９０％ｗ／ｗの結晶化シードが、０．１－６００ミクロンの範囲の粒径（ふるい分け分析により測定）を有する。例えば、少なくとも９０％ｗ／ｗの結晶化シードは１－４００ミクロンの範囲の粒径を有し得る。好ましくは、少なくとも９０％ｗ／ｗの結晶化シードは５－２００ミクロンの範囲の粒径を有し得る。より好ましくは、少なくとも９０％ｗ／ｗの結晶化シードは５－１００ミクロンの範囲の粒径を有し得る。
【0331】
結晶化シードの粒径および投与量は、ＢＬＧの最適結晶化を提供するように調整され得る。
【0332】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、１つ以上のＡ型またはＢ型タンパク質供給物（複数可）の少なくとも１つはすでにＢＬＧ結晶を含み、この場合、さらなるシーディングは必要ないが、しばしば、十分な量の結晶化シードを確保することが好ましい。
【0333】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップｂ）は、ＢＬＧの過飽和度をさらにいっそう、好ましくは、ＢＬＧの結晶化が直ちに、すなわち、最大でも２０分、好ましくは、最大でも５分で開始する過飽和度まで、増加させることを含む。これは、核形成ゾーンとも呼ばれ、この場合、結晶子が自然に形成し、結晶化プロセスを開始する。
【0334】
過飽和度は例えば、下記の１つ以上により増加され得る：
－初期タンパク質溶液のタンパク質濃度をさらに増加させること
－初期タンパク質溶液をさらに冷却すること
－初期タンパク質溶液をＢＬＧ結晶化のための最適ｐＨにより近づけること
－導電率をさらにいっそう低減させること。
－初期タンパク質溶液のタンパク質濃度をさらに増加させること
－初期タンパク質溶液をさらに冷却すること
－初期タンパク質溶液をＢＬＧ結晶化のための最適ｐＨにより近づけること
－導電率をさらにいっそう低減させること。
【0335】
初期タンパク質溶液のタンパク質濃度をさらに増加させること、および／または、追加のＡ型またはＢタンパク質供給物の添加により、初期タンパク質溶液をＢＬＧ結晶化のための最適ｐＨ（およそｐＨ５．５）により近づけることは特に好ましい。
【0336】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップｂ）は、ＢＬＧ結晶が形成するのを待つことを含む。これには数時間かかることがあり、典型的には、ＢＬＧに関してわずかに過飽和であるにすぎず、結晶化シードが添加されていない初期タンパク質溶液のためである。
【0337】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液の提供（ステップａ）およびＢＬＧの結晶化（ステップｂ）は２つの別個のステップとして実施される。しかしながら、初期タンパク質溶液がすでに少なくともいくらかのＢＬＧ結晶を含む場合、ステップｂ）は初期タンパク質溶液が調製されるや否や開始する。
【0338】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップｂ）は、好ましくは、ＢＬＧの過飽和度を上昇させる、または少なくとも過飽和を維持するための結晶化するタンパク質溶液の追加調整を含む。追加調整は好ましくは、ＢＬＧ結晶の収率の増加をもたらし、または、例えばより大きく、より均一な結晶サイズの形態のより良好な品質のＢＬＧ結晶を提供する。
【0339】
そのような追加調整は下記の１つ以上を含み得る：
－結晶化するタンパク質溶液のタンパク質濃度をさらにいっそう増加させること
－結晶化するタンパク質溶液をさらに低い温度まで冷却すること
－結晶化するタンパク質溶液をＢＬＧ結晶化のための最適ｐＨにさらに近づけること
－結晶化するタンパク質溶液の導電率をさらにいっそう低減させること。
－結晶化するタンパク質溶液のタンパク質濃度をさらにいっそう増加させること
－結晶化するタンパク質溶液をさらに低い温度まで冷却すること
－結晶化するタンパク質溶液をＢＬＧ結晶化のための最適ｐＨにさらに近づけること
－結晶化するタンパク質溶液の導電率をさらにいっそう低減させること。
【0340】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、結晶化するタンパク質溶液は、新規結晶子の自然形成を回避するために、ステップｂ）中準安定ゾーンで維持される。
【0341】
追加のＡ型またはＢ型タンパク質供給物の添加により、結晶化するタンパク質溶液のタンパク質濃度をさらに増加させる、および／または、結晶化するタンパク質溶液をＢＬＧ結晶化のための最適ｐＨ（およそｐＨ５．５）に近づけることが特に好ましい。ｐＨ調整は好ましくは、自然結晶化または大きな局所ｐＨ差を回避するために徐々に実施される。０．０５－０．５ｐＨ－単位／時間の範囲のｐＨ調整速度が、ＢＬＧ結晶化の制御には有利であることが見出された。
【0342】
結晶化するタンパク質溶液の温度がステップｂ）中、初期タンパク質溶液の温度より少なくとも２℃低い、より好ましくは少なくとも４℃低い、最も好ましくは、初期タンパク質溶液の温度より少なくとも６℃低い温度まで低減されることが、さらに特に好ましい。しかしながら、結晶化するタンパク質溶液は完全には凍結しないことが好ましい。
【0343】
発明者らは、最大ＢＬＧ結晶化収率はおよそｐＨ５．５で得られること、および、初期タンパク質溶液のｐＨは便宜的に、最適の外側で選択することができるが、結晶化中、例えば、食物酸の添加により、または、より好ましくは追加のＢ型タンパク質供給物またはＡ型タンパク質供給物により、最適ｐＨにより近づくようにすることができることを観察した。
【0344】
よって、本発明のいくつかの好ましい実施形態では、初期タンパク質溶液のｐＨは、５．０－５．３または５．７－６．０の範囲である。本発明のそのような好ましい実施形態では、結晶化するタンパク質溶液のｐＨを調整し、結晶化するタンパク質溶液のｐＨを初期タンパク質溶液のｐＨよりも、好ましくは追加のＡ型タンパク質供給物または追加のＢ型タンパク質供給物の添加により、ｐＨ５．５に近づけることが、さらに好ましい。結晶化するタンパク質溶液が結晶化中、およそｐＨ５．５に調整されることが特に好ましい。結晶化するタンパク質溶液を調整するために使用される追加のＡ型タンパク質供給物または追加のＢ型タンパク質供給物は好ましくは、結晶化するタンパク質溶液以下である導電率を有する。結晶化中の上記ｐＨ調整を、結晶化するタンパク質溶液の温度の低減と合わせることが、さらに好ましく、そのため、結晶化するタンパク質溶液は、例えば同時に、または、順次、初期タンパク質溶液の温度より低い温度まで冷却される。
【0345】
本発明のいくつかの好ましい実施形態では：
－ステップａ）の初期タンパク質溶液のｐＨは５．０－５．３または５．７－６．０の範囲であり、初期タンパク質溶液の温度は５－２０℃の範囲であり、
－ステップｂ）中、結晶化するタンパク質溶液のｐＨは、好ましくは初期タンパク質溶液のｐＨが５．０－５．３の範囲である場合、追加Ａ型タンパク質供給物の添加により、または、初期タンパク質溶液のｐＨが５．７－６．０の範囲である場合、追加のＢ型タンパク質供給物の添加により、５．４－５．６の範囲のｐＨに調整され、ならびに、
－ステップｂ）中、結晶化するタンパク質溶液の温度は、初期タンパク質溶液の温度より少なくとも２℃低い温度まで低減される。
－ステップａ）の初期タンパク質溶液のｐＨは５．０－５．３または５．７－６．０の範囲であり、初期タンパク質溶液の温度は５－２０℃の範囲であり、
－ステップｂ）中、結晶化するタンパク質溶液のｐＨは、好ましくは初期タンパク質溶液のｐＨが５．０－５．３の範囲である場合、追加Ａ型タンパク質供給物の添加により、または、初期タンパク質溶液のｐＨが５．７－６．０の範囲である場合、追加のＢ型タンパク質供給物の添加により、５．４－５．６の範囲のｐＨに調整され、ならびに、
－ステップｂ）中、結晶化するタンパク質溶液の温度は、初期タンパク質溶液の温度より少なくとも２℃低い温度まで低減される。
【0346】
「追加のＡ型タンパク質供給物」および「追加のＢ型タンパク質供給物」という用語は、初期タンパク質溶液に添加され、結晶化を引き起こす、または、結晶化するタンパク質溶液に添加され、少なくともそのｐＨおよびＢＬＧ含量を改変させる、ＢＬＧ含有組成物に関連する。「Ａ型タンパク質供給物」および「Ｂ型タンパク質供給物」との関連で記載される特徴および優先性は、それぞれ、「追加のＡ型タンパク質供給物」および「追加のＢ型タンパク質供給物」に等しく適用される。
【0347】
発明者らは、単離したＢＬＧ結晶の結晶格子構造をＸ線結晶解析により決定し、先行技術において同様の結晶を見出していない。
【0348】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップｂ）中に得られたＢＬＧ結晶の少なくともいくらかは斜方晶空間群Ｐ ２１ ２１ ２１を有する。
【0349】
好ましくは、得られたＢＬＧ結晶の少なくともいくらかは斜方晶空間群Ｐ ２１ ２１ ２１、および、単位格子寸法ａ＝６８．６８（±５％）A、ｂ＝６８．６８（±５％）A、およびｃ＝１５６．６５（±５％）A；ならびに単位格子積分角α＝９０度、β＝９０度、およびγ＝９０度を有する。
【0350】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、得られたＢＬＧ結晶の少なくともいくらかは斜方晶空間群Ｐ ２１ ２１ ２１、および、単位格子寸法ａ＝６８．６８（±２％）A、ｂ＝６８．６８（±２％）A、およびｃ＝１５６．６５（±２％）A；ならびに単位格子積分角α＝９０度、β＝９０度、およびγ＝９０度を有する。
【0351】
さらにより好ましくは、得られたＢＬＧ結晶の少なくともいくらかは、斜方晶空間群Ｐ ２１ ２１ ２１、および、単位格子寸法ａ＝６８．６８（±１％）A、ｂ＝６８．６８（±１％）A、およびｃ＝１５６．６５（±１％）A；ならびに単位格子積分角α＝９０度、β＝９０度、およびγ＝９０度を有し得る。
【0352】
最も好ましくは、得られたＢＬＧ結晶の少なくともいくらかは斜方晶空間群Ｐ ２１ ２１ ２１、および、単位格子寸法ａ＝６８．６８A、ｂ＝６８．６８A、およびｃ＝１５６．６５A；ならびに単位格子積分角α＝９０度、β＝９０度、およびγ＝９０度を有する。
【0353】
発明のいくつかの特に好ましい実施形態では、方法はＢＬＧ結晶の少なくともいくらかをＢＬＧ結晶含有溶液の残りの液体から分離するステップｃ）を含む。これはＢＬＧの精製が望ましい場合にとりわけ好ましい。
【0354】
ステップｃ）は例えば、ＢＬＧ結晶を少なくとも３０％ｗ／ｗの固体含量まで分離することを含み得る。好ましくは、ステップｃ）はＢＬＧ結晶を少なくとも４０％ｗ／ｗの固体含量まで分離することを含む。さらにいっそう好ましくは、ステップｃ）は、ＢＬＧ結晶を少なくとも５０％ｗ／ｗの固体含量まで分離することを含む。
【0355】
発明者らは高い固体含量はＢＬＧの精製に有利であることを見出した。というのも、分離されたＢＬＧ結晶に付着する水性部分は典型的には、回避されるべきである不純物を含むからである。加えて、高い固体含量は、分離されたＢＬＧ結晶を、例えば、粉末などの乾燥生成物に変換するためのエネルギー消費を低減させ、それは、一定の容量を有する乾燥ユニットから得られるＢＬＧ収率を増加させる。
【0356】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップｃ）は、ＢＬＧ結晶を少なくとも６０％の固体含量まで分離することを含む。好ましくは、ステップｃ）は、ＢＬＧ結晶を少なくとも７０％の固体含量まで分離することを含む。さらにいっそう好ましくは、ステップｃ）は、ＢＬＧ結晶を少なくとも８０％の固体含量まで分離することを含む。
【0357】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップｃ）の分離は、下記操作の１つ以上を含む：
－遠心分離、
－デカンテーション、
－濾過、
－沈降、
－上記の組み合わせ。
－遠心分離、
－デカンテーション、
－濾過、
－沈降、
－上記の組み合わせ。
【0358】
これらの単位操作は当業者によく知られており、容易に実行される。濾過による分離は例えば、真空濾過、ダイナミッククロスフロー濾過（ＤＣＦ）、濾液プレスまたはフィルタ遠心分離機の使用を含み得る。
【0359】
濾過のための異なる孔径が所望の結果に基づいて使用され得る。好ましくは、フィルタは天然ホエータンパク質および小さな凝集体を通過させるが、ＢＬＧ結晶を保持する。フィルタは好ましくは少なくとも０．１ミクロンの公称孔径を有する。フィルタは例えば、少なくとも０．５ミクロンの公称孔径を有し得る。さらにいっそう好ましくは、フィルタは少なくとも２ミクロンの公称孔径を有し得る。
【0360】
より大きな孔径を有するフィルタもまた使用することができ、実際に、主に大きな結晶がＢＬＧ結晶を含む液体から分離されなければならない場合、好ましい。発明のいくつかの実施形態では、フィルタは少なくとも５ミクロンの公称孔径を有する。好ましくは、フィルタは少なくとも２０ミクロンの公称孔径を有する。さらにいっそう好ましくは、フィルタは少なくとも４０ミクロンの孔径を有し得る。
【0361】
フィルタは例えば、０．０３－５０００ミクロン、例えば、例として０．１－５０００ミクロンの範囲の孔径を有し得る。好ましくは、フィルタは、０．５－１０００ミクロンの範囲の孔径を有し得る。さらにいっそう好ましくは、フィルタは、５－８００ミクロンの範囲、例えば、例として、１０－５００ミクロンの範囲または５０－５００ミクロンの範囲の孔径を有し得る。
【0362】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、フィルタは０．０３－１００ミクロンの範囲の孔径を有する。好ましくは、フィルタは、０．１－５０ミクロンの範囲の孔径を有し得る。より好ましくは、フィルタは、４－４０ミクロンの範囲の孔径を有し得る。さらにいっそう好ましくは、フィルタは、５－３０ミクロンの範囲、例えば、１０－２０ミクロンの範囲の孔径を有し得る。
【0363】
１ミクロンより大きな孔径を有するフィルタを使用する利点は、細菌および他の微生物もまた、分離中に、および、任意で洗浄および／または再結晶中にも、少なくとも部分的に除去されることである。よって本方法は、非常に低い細菌量、その上、タンパク質の熱損傷の回避の両方を有する高純度ＢＬＧの生成を可能にする。
【0364】
１ミクロンより大きな孔径を有するフィルタを使用する別の利点は、水の除去およびその後の乾燥がより容易になり、エネルギー消費がより少なくなることである。
【0365】
ＢＬＧ結晶から分離される残りの液体は、初期タンパク質溶液の調製中に、１つ以上のタンパク質供給物にリサイクルされ得る。
【0366】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップｃ）は、フィルタ遠心分離機を使用する。発明の他の好ましい実施形態では、ステップｃ）は、デカンター遠心分離機を使用する。結果（ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例１３を参照されたい）により、ＢＬＧ結晶を母液から分離するためのフィルタ遠心分離機および／またはデカンター遠心分離機の使用は、例えば真空濾過よりも、方法のよりロバストな操作を提供することが示されている。
【0367】
しばしば、形成された濾過ケーキを、乾燥ガスを用いて乾燥させ、濾過ケーキの含水量を低減させる、好ましくは、濾過ケーキをフィルタから剥がすのを可能にすることが好ましい。乾燥ガスの使用は、分離ステップの一部、あるいは、濾過ケーキが直接、乾燥可食ＢＬＧ組成物に変換される場合、最終乾燥ステップを形成することができる。
【0368】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップｃ）は、ＤＣＦユニットを使用する。
【0369】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップｃ）は、ＢＬＧ結晶を保持することができる膜が取り付けられたＤＣＦユニットを使用して実施され、ＤＣＦ透過物はリサイクルされ、初期タンパク質溶液またはタンパク質供給物の一部を形成し、ＤＣＦリテンテートは、回収され、または結晶化タンクに戻され得る。好ましくは、ＤＣＦ透過物は、例えば、限外濾過／ダイアフィルトレーションにより処理され、初期タンパク質溶液またはタンパク質供給物との混合前にＢＬＧに関して過飽和とされる。
【0370】
便宜的に、これらの実施形態は、液体ストリームの温度が１５℃を超えて上昇されることを必要とせず、よって、より高い温度を必要とする方法変形よりも、微生物汚染の傾向が少ない。これらの実施形態の別の工業的利点は、過飽和のレベルが容易に制御され、望まれない、自然結晶化は起こらないレベルで維持することができることである。よって、方法のこれらの実施形態中の液体ストリームの温度は好ましくは最大でも１５℃、より好ましくは最大でも１２℃、さらにより好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃である。
【0371】
これらの実施形態はＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例１０において例示される。これらの実施形態はバッチ方法または連続方法として実行され得る。
【0372】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、方法は、ＢＬＧ結晶、例えばｃ）の分離されたＢＬＧ結晶を洗浄するステップｄ）を含む。洗浄は単一洗浄ステップまたは複数の洗浄ステップから構成され得る。
【0373】
ステップｄ）の洗浄は好ましくは、ＢＬＧ結晶を完全に溶解させずにＢＬＧ結晶を洗浄液と接触させ、その後に残りのＢＬＧ結晶を洗浄液から分離することを含む。
【0374】
洗浄液は好ましくは、ＢＬＧ結晶の完全溶解を回避するように選択され、例えば、冷脱塩水、冷水道水、または冷逆浸透透過物を含むことができ、またはさらには、これから本質的に構成され得る。
【0375】
洗浄液は５－６の範囲、好ましくは５．０－６．０の範囲、さらにいっそう好ましくは、５．１－６．０の範囲、例えば、例として５．１－５．９の範囲のｐＨを有し得る。
【0376】
洗浄液は、最大でも０．１ｍＳ／ｃｍ、好ましくは最大でも０．０２ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも０．００５ｍＳ／ｃｍの導電率を有し得る。
【0377】
さらにより低い導電率を有する洗浄液が使用され得る。例えば、洗浄液は最大でも１ｍｉｃｒｏＳ／ｃｍの導電率を有し得る。あるいは、洗浄液を最大でも０．１ｍｉｃｒｏＳ／ｃｍ、例えば、例としておよそ０．０５ｍｉｃｒｏＳ／ｃｍの導電率を有し得る。
【0378】
洗浄ステップは好ましくは、低温で実施され、結晶化されたＢＬＧの溶解が制限される。洗浄液の温度は好ましくは最大でも３０℃、より好ましくは最大でも２０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃である。
【0379】
洗浄ステップは例えば、最大でも５℃で、より好ましくは最大でも２℃、例えば、例としておよそ０℃で実施され得る。０℃より低い温度は、例えば、１つ以上の凝固点降下剤（複数可）の存在のために、洗浄液がその温度で凍結しない限りにおいて使用され得る。
【0380】
発明のいくつかの実施形態では、洗浄液は、例えば少なくとも１％ｗ／ｗの量の、好ましくは少なくとも３％ｗ／ｗの量の、例えば、例として４％ｗ／ｗの量のＢＬＧを含む。
【0381】
ステップｄ）の洗浄は、典型的には、ＢＬＧ結晶の初期量の最大でも８０％ｗ／ｗ、好ましくは最大でも５０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは、ＢＬＧ結晶の初期量の最大でも２０％ｗ／ｗを溶解する。好ましくは、ステップｄ）の洗浄は、ＢＬＧ結晶の初期量の最大でも１５％ｗ／ｗ、より好ましくは最大でも１０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは、ＢＬＧ結晶の初期量の最大でも５％ｗ／ｗを溶解する。
【0382】
洗浄液の総量と分離されたＢＬＧ結晶の初期量の間の重量比はしばしば、少なくとも１、好ましくは少なくとも２、より好ましくは少なくとも５である。例えば、洗浄液の量と分離されたＢＬＧ結晶の初期量の間の重量比は、少なくとも１０であってもよい。あるいは、洗浄液の総量と分離されたＢＬＧ結晶の初期量の間の重量比は、少なくとも２０、例えば、例として少なくとも５０または少なくとも１００であってもよい。
【0383】
「洗浄液の総量」という用語は、全プロセス中に使用される洗浄液の総量に関する。
【0384】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、１つ以上の洗浄シーケンスは、ＢＬＧ結晶分離と同じフィルタ配列または同様のフィルタ配列で起こる。主にＢＬＧ結晶を含む濾過ケーキが１つ以上の洗浄液シーケンスに添加され、洗浄液は、フィルタを通して除去され、一方、ＢＬＧ結晶の残りの部分が濾過ケーキ内に存在する。
【0385】
発明の特に好ましい実施形態では、ステップｃ）の分離は、ＢＬＧ結晶を保持するフィルタを使用して実施される。その後、濾過ケーキは、濾過ケーキおよびフィルタを通って移動する１つ以上の量の洗浄液と接触させられる。各量の洗浄液は、濾過ケーキの体積の最大でも１０倍、好ましくは濾過ケーキの体積の最大でも５倍、より好ましくは濾過ケーキの体積の最大でも１倍、さらにいっそう好ましくは、濾過ケーキの体積の最大でも０．５倍、例えば、例として濾過ケーキの体積の最大でも０．２倍であることがしばしば好ましい。濾過ケーキの体積は、濾過ケーキの固体および流体（液体および気体）の両方を含む。濾過ケーキは好ましくは、このように少なくとも２回、好ましくは少なくとも４回、さらにいっそう好ましくは少なくとも６回洗浄される。
【0386】
ステップｄ）からの使用された洗浄液は、例えば、タンパク質供給物または初期タンパク質溶液にリサイクルすることができ、この場合、洗い流されたＢＬＧは再び単離され得る。
【0387】
方法はさらに、ステップｅ）を含むことができ、これは、再結晶ステップを含む。再結晶ステップは例えば、下記を含み得る：
－分離されたＢＬＧ結晶を再結晶液に溶解させること、
－再結晶液を調整して、ＢＬＧに関して過飽和を得ること、
－過飽和の調整再結晶液中でＢＬＧを結晶化すること、ならびに
－ＢＬＧ結晶を残りの調整再結晶液から分離すること。
－分離されたＢＬＧ結晶を再結晶液に溶解させること、
－再結晶液を調整して、ＢＬＧに関して過飽和を得ること、
－過飽和の調整再結晶液中でＢＬＧを結晶化すること、ならびに
－ＢＬＧ結晶を残りの調整再結晶液から分離すること。
【0388】
あるいは、かつ、しばしばより好ましくは、分離されたＢＬＧ結晶は１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）および１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）に変換され、それらは合わされて、ステップａ）におけるように、新規過飽和タンパク質溶液、例えばホエータンパク質溶液が形成され、この場合、新規タンパク質溶液ＢＬＧが再び結晶化される。
【0389】
ステップｅ）は、単一再結晶化シーケンスまたは複数の再結晶化シーケンスのいずれかを含み得る。
【0390】
発明のいくつかの実施形態では、ステップｃ）またはｄ）のＢＬＧ結晶は少なくとも２回再結晶化される。例えば、ＢＬＧ結晶は少なくとも３回、例えば、例として少なくとも４回再結晶化され得る。
【0391】
洗浄および再結晶化ステップはいずれの順序でも合わせることができ、必要なら複数回実施することができる。
【0392】
ステップｃ）の分離されたＢＬＧ結晶は例えば、下記プロセスシーケンスに供することができる：
－洗浄の１つ以上のステップ（ステップｄ）、続いて
－再結晶化の１つ以上のステップ（ステップｅ）。
－洗浄の１つ以上のステップ（ステップｄ）、続いて
－再結晶化の１つ以上のステップ（ステップｅ）。
【0393】
あるいは、ステップｃ）の分離されたＢＬＧ結晶は、下記プロセスシーケンスに供することができる：
－再結晶化の１つ以上のステップ（ステップｅ）、続いて
－洗浄の１つ以上のステップ（ステップｄ）。
－再結晶化の１つ以上のステップ（ステップｅ）、続いて
－洗浄の１つ以上のステップ（ステップｄ）。
【0394】
洗浄および再結晶化の複数のステップを、例えば、下記順番に：
－洗浄の１つ以上のステップ（ステップｄ）、
－再結晶化の１つ以上のステップ（ステップｅ）、
－洗浄の１つ以上のステップ（ステップｄ）、および
－再結晶化の１つ以上のステップ（ステップｅ）。
または、例えば下記順番に、合わせることもまた可能である：
－再結晶化の１つ以上のステップ（ステップｅ）、
－洗浄の１つ以上のステップ（ステップｄ）、
－再結晶化の１つ以上のステップ（ステップｅ）
－洗浄の１つ以上のステップ（ステップｄ）。
－洗浄の１つ以上のステップ（ステップｄ）、
－再結晶化の１つ以上のステップ（ステップｅ）、
－洗浄の１つ以上のステップ（ステップｄ）、および
－再結晶化の１つ以上のステップ（ステップｅ）。
または、例えば下記順番に、合わせることもまた可能である：
－再結晶化の１つ以上のステップ（ステップｅ）、
－洗浄の１つ以上のステップ（ステップｄ）、
－再結晶化の１つ以上のステップ（ステップｅ）
－洗浄の１つ以上のステップ（ステップｄ）。
【0395】
発明のいくつかの実施形態では、方法はさらに、分離されたＢＬＧを、例えばクロマトグラフィーまたは選択的濾過に基づく、追加のＢＬＧ強化ステップに供することを含む。しかしながら、発明の他の好ましい実施形態では、方法はステップｂ）後に追加のＢＬＧ強化ステップを含まない。「追加のＢＬＧ強化ステップ」という用語により、タンパク質の総量に対してＢＬＧを強化するプロセスステップが意味され、そのステップは、ＢＬＧの結晶化またはＢＬＧ結晶の取扱いに関連しない。そのような追加のＢＬＧ強化ステップの一例はイオン交換クロマトグラフィーである。ＢＬＧ結晶の洗浄および／またはＢＬＧの再結晶化は、「追加のＢＬＧ強化ステップ」と考えられない。
【0396】
発明のいくつかの特に好ましい実施形態では、方法は、乾燥ステップｆ）を含み、この場合、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物は、乾燥組成物に変換される。
【0397】
本発明との関連で、「乾燥」という用語は、問題になっている組成物または生成物が、最大でも６％ｗ／ｗの水、好ましくはそれ以下を含むことを意味する。
【0398】
本発明との関連で、「ＢＬＧ含有組成物」という用語は、ステップｆ）の乾燥に供せられる組成物を説明するために使用される。
【0399】
本発明との関連で、「ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物」は、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）からのＢＬＧの少なくともいくつかを含む組成物を意味する。発明のいくつかの好ましい実施形態では、「ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物」はステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）から直接得られる。しかしながら、発明の他の好ましい実施形態では、「ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物」は、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）から直接得られた組成物のさらなる処理の結果である。
【0400】
ＢＬＧ含有組成物は、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）から直接得られた組成物中に存在するかなりの量のＢＬＧを含むことがしばしば好ましい。発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物は、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）から得られたＢＬＧの少なくとも５０％ｗ／ｗ、好ましくは少なくとも７０％、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％を含む。
【0401】
好ましくは、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物は、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）から得られたＢＬＧの少なくとも８５％ｗ／ｗを含む。より好ましくは、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物は、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）から得られたＢＬＧの少なくとも９０％ｗ／ｗを含む。さらにいっそう好ましくは、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物は、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）から得られたＢＬＧの少なくとも９５％ｗ／ｗを含む。最も好ましくは、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物は、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）から得られたＢＬＧの１００％ｗ／ｗを含む。
【0402】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、乾燥ステップは、噴霧乾燥、フリーズドライ、スピンフラッシュ乾燥、回転乾燥、および／または流動床乾燥の１つ以上を含む。
【0403】
発明のいくつかの特に好ましい実施形態では、乾燥ステップは、ＢＬＧ含有組成物を含み、この場合、ＢＬＧ結晶が溶解され、得られた粉末は、ステップｂ）により、または、乾燥ステップ前の再結晶化により形成されたＢＬＧ結晶を含まない。これらの実施形態は、可食ＢＬＧ組成物が例えば、従来の、乾燥されたホエータンパク質粉末に類似していたら、好ましい。
【0404】
ＢＬＧ結晶は、例えば、下記により溶解され得る：
－温度の増加、
－例えば、１つ以上の塩の添加による、導電率の増加
－例えば、５－６の範囲の外側でのｐＨの変更、
－例えば希釈による、ＢＬＧの濃度の減少
－または上記の組み合わせ。
－温度の増加、
－例えば、１つ以上の塩の添加による、導電率の増加
－例えば、５－６の範囲の外側でのｐＨの変更、
－例えば希釈による、ＢＬＧの濃度の減少
－または上記の組み合わせ。
【0405】
噴霧乾燥は、ＢＬＧ結晶を含まないＢＬＧ含有組成物を乾燥させる、現在のところ好ましい方法である。
【0406】
発明の他の特に好ましい実施形態では、乾燥ステップは、ＢＬＧ結晶を依然として含むＢＬＧ含有組成物を含み、得られた粉末はＢＬＧ結晶を含む。これらの実施形態は、可食ＢＬＧ組成物が、従来の、乾燥されたホエータンパク質粉末より高い密度を有する場合、好ましい。
【0407】
発明のいくつかの特に好ましい実施形態では、乾燥ステップは、ＢＬＧ結晶を依然として含むＢＬＧ含有組成物を含み、得られた粉末はＢＬＧ結晶を含む。これらの実施形態は、可食ＢＬＧ－組成物が、従来の、乾燥されたホエータンパク質粉末よりも高い密度を有する場合、好ましい。
【0408】
ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例７において示されるように、本発明者らは前に、ＢＬＧ結晶のスラリーをスプレー－乾燥させ、乾燥されたＢＬＧ結晶は、冷脱塩水中に再懸濁させると、結晶構造の少なくともいくらかを保持することが可能であることを発見した。ＢＬＧ結晶を含むＢＬＧ含有組成物を、噴霧前にかなりの量のＢＬＧ結晶を溶解させる熱処理レジームに曝露することを回避することは、特に有利である。よって、ＢＬＧ結晶を含むＢＬＧ含有組成物の予熱が噴霧前に使用される場合、熱負荷を注意深く制御することが好ましい。
【0409】
発明のいくつかの実施形態では、ＢＬＧ結晶を含むＢＬＧ含有組成物は、スプレー装置（例えば、ノズルまたはアトマイザ）の出口に到達した時に、最大でも７０℃、好ましくは最大でも６０℃、より好ましくは最大でも５０℃の温度を有する。発明のいくつかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ結晶を含むＢＬＧ含有組成物は、スプレー－装置の出口に到達した時に最大でも４０℃、好ましくは最大でも３０℃、より好ましくは最大でも２０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度を有する。
【0410】
噴霧乾燥機のスプレー－装置は装置、例えばノズルまたはアトマイザであり、これは、乾燥される溶液または懸濁液を噴霧乾燥機の乾燥チャンバに入る小滴に変換する。
【0411】
ＢＬＧ結晶を含むＢＬＧ含有組成物は、スプレー－装置の出口に到達した時に０－５０℃の範囲、好ましくは２－４０℃の範囲、より好ましくは４－３５℃の範囲、最も好ましくはスプレー－装置の出口に到達した時に５－１０℃の範囲の温度を有することが特に好ましい。
【0412】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ含有組成物はスプレー－装置の出口に到達した時に少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも６０％、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％、例えば、例として好ましくは９７－１００％のＢＬＧの結晶化度を有する。ＢＬＧ含有組成物はＢＬＧ単離物であってもよく、例えば、総タンパク質に対して９０％ｗ／ｗを超える量のＢＬＧを含み、または、それはかなりの量の他のタンパク質を含んでもよく、よって、総タンパク質に対して最大でも９０％ｗ／ｗの量のＢＬＧを含み得る。
【0413】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ含有組成物は、本明細書で記載される従来の液体ＷＰＣもしくはＷＰＩまたは従来の液体ＳＰＣもしくはＳＰＩのタンパク質組成を有し得るが、スプレー－装置の出口に到達した時に、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも６０％、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％、例えば、例として好ましくは９７－１００％のＢＬＧの結晶化度を有し得る。
【0414】
噴霧乾燥機のガスの入口温度は好ましくは１４０－２２０℃の範囲、より好ましくは１６０－２００℃の範囲、さらにいっそう好ましくは、１７０－１９０℃の範囲、例えば、例として好ましくはおよそ１８０℃である。噴霧乾燥機からのガスの出口温度は好ましくは５０－９５℃の範囲、より好ましくは７０－９０℃の範囲、さらにいっそう好ましくは、８０－８８℃の範囲、例えば、例として好ましくはおよそ８５℃である。経験則として、噴霧乾燥に供される固体は、ガス出口温度より１０－１５℃低い温度まで加熱されると言われている。
【0415】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、噴霧乾燥機は好ましくは５０－８５℃の範囲、より好ましくは６０－８０℃の範囲、さらにいっそう好ましくは、６５－７５℃の範囲、例えば、例として好ましくはおよそ７０℃である。
【0416】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、乾燥されるＢＬＧ含有組成物は乾燥ＢＬＧ単離物と混合され、固体含量が、混合物が流動床乾燥により乾燥することができるレベルまで上昇される。これはバックミキシングとも呼ばれ、ＢＬＧ生成物の非常にコスト効率の高い乾燥が可能になる。これらの実施形態は、ＢＬＧ結晶を含むＢＬＧ含有組成物に特に好ましい。
【0417】
本方法の利点は、乾燥されるＢＬＧ含有組成物は、乾燥ステップ前に非常に高い固体含量を有し得ることであり、よって、除去されなければならない水がより少なくなり、乾燥操作において消費されるエネルギーがより少なくなる。
【0418】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物は、少なくとも２０％ｗ／ｗの固体含量を有する。好ましくは、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物は、少なくとも３０％ｗ／ｗの固体含量を有する。より好ましくは、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物は、少なくとも４０％ｗ／ｗの固体含量を有する。さらにいっそう好ましくは、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物は、少なくとも５０％ｗ／ｗ、例えば、例として少なくとも６０％ｗ／ｗの固体含量を有する。
【0419】
発明の他の好ましい実施形態では、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物は、２０－８０％ｗ／ｗの範囲の固体含量を有する。好ましくは、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物は、３０－７０％ｗ／ｗの範囲の固体含量を有する。より好ましくは、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物は、４０－６５％ｗ／ｗの範囲の固体含量を有する。さらにいっそう好ましくは、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物は、５０－６５％ｗ／ｗの範囲、例えば、例としておよそ６０％ｗ／ｗの固体含量を有する。
【0420】
本発明者らは、ＢＬＧ含有組成物の結晶化度が高くなるほど、ＢＬＧ含有組成物に結合される水が少なくなり、ＢＬＧ含有組成物のより高い総固体含量が乾燥ステップ前に達成され得ることを見出した。よって発明のいくつかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ含有組成物は少なくとも１０％ｗ／ｗのＢＬＧの結晶化度を有する。好ましくは、ＢＬＧ含有組成物のＢＬＧは少なくとも２０％ｗ／ｗの結晶化度を有する。より好ましくはＢＬＧ含有組成物のＢＬＧは少なくとも３０％ｗ／ｗの結晶化度を有する。さらにいっそう好ましくは、ＢＬＧ含有組成物のＢＬＧは少なくとも４０％ｗ／ｗの結晶化度を有する。
【0421】
さらに高い結晶化度がしばしば好ましい。よって、発明のいくつかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ含有組成物のＢＬＧは少なくとも５０％ｗ／ｗの結晶化度を有する。好ましくは、ＢＬＧ含有組成物のＢＬＧは少なくとも６０％ｗ／ｗの結晶化度を有する。より好ましくは、可食ＢＬＧ組成物のＢＬＧは少なくとも７０％ｗ／ｗの結晶化度を有する。さらにいっそう好ましくは、ＢＬＧ含有組成物のＢＬＧは少なくとも８０％ｗ／ｗの結晶化度を有する。最も好ましくは、ＢＬＧ含有組成物のＢＬＧは少なくとも９０％ｗ／ｗ、好ましくは少なくとも９５％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも９７％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも９９％ｗ／ｗの結晶化度を有する。
【0422】
発明者らは水の低減された含量は組成物のＢＬＧの結晶化度を増加させる傾向があることを見出した。よって、高い水：ＢＬＧ比を有する組成物（例えば、４％ＢＬＧ結晶を含む水の懸濁液）は、同じ条件でより低い水：ＢＬＧ比を有する組成物（例えば、濾過ケーキまたは湿潤単離結晶）より低いＢＬＧの結晶化度を有する傾向がある。
【0423】
本発明の方法は、初期タンパク質溶液のＢＬＧおよび他のホエータンパク質のいずれの栄養価にもダメージを与えない穏やかな温度を使用して操作され得る。
【0424】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ＢＬＧは、方法中、９０℃を超える温度に供されない。好ましくは、ＢＬＧは、方法中、８０℃を超える温度に供されない。さらにより好ましくは、ＢＬＧは、方法中、７５℃を超える温度に供されない。噴霧乾燥はしばしば１５０℃を超える温度を採用するが、短い曝露時間および水の同時蒸発は、噴霧乾燥されたタンパク質は５０－７０℃を超える温度を経験しないことを意味することに注意すべきである。
【0425】
発明者らは、乾燥ステップ中の延長加熱は結晶形態であるＢＬＧの量を低減させるという兆候を見た。発明のいくつかの好ましい実施形態では、乾燥ステップ中の熱曝露は十分低く維持され、最大でも１０％、好ましくは最大でも４％、より好ましくは最大でも１％、さらにいっそう好ましくは最大でも０．４％、さらにより好ましくは最大でも０．１％のＢＬＧの変性度が提供される。最も好ましくは、乾燥ステップはＢＬＧの検出可能な変性に全くつながらない。
【0426】
乾燥ステップにより引き起こされる変性度は、ステップｆ）における乾燥されるＢＬＧ含有組成物中のＢＬＧ含量（総固体に対して）（ｃステップｆ前）および再溶解された、乾燥された組成物中のＢＬＧ含量（総固体に対して）を決定し、下記式を使用することにより計算される：
【数1】
【0427】
発明のいくつかの好ましい実施形態は、結晶化形態のβラクトグロブリン（ＢＬＧ）を含む可食組成物を調製する方法に関し、方法は、下記ステップを含み
ａ）ＢＬＧおよび少なくとも１つの追加のホエータンパク質を含む初期タンパク質溶液を提供するステップであって、前記初期タンパク質溶液はＢＬＧに関して過飽和であり、５－６の範囲のｐＨを有し、前記初期タンパク質溶液は下記を含む、ステップ：
－総固体に対して７０－１００％ｗ／ｗのタンパク質、
－総タンパク質に対して３０－９０％ｗ／ｗのＢＬＧ、好ましくは３０－７０％ｗ／ｗのＢＬＧ
－総タンパク質に対して４－５０％ｗ／ｗのＡＬＡ、および好ましくは８－３５％ｗ／ｗのＡＬＡ、
－タンパク質に対して０－２５％ｗ／ｗのＣＭＰ、
－初期タンパク質溶液の総重量に対して、少なくとも１０％ｗ／ｗタンパク質、
ｂ）過飽和初期タンパク質溶液中のＢＬＧを、好ましくは結晶化シードの添加により結晶化させ、よって、ＢＬＧ結晶含有溶液を得るステップ、ならびに
ｆ）ステップｂ）のＢＬＧ結晶含有溶液またはその濃縮物を乾燥させるステップであって、前記ＢＬＧ結晶含有溶液は好ましくは、少なくとも３０％のＢＬＧの結晶化度を有するステップ、
この方法はステップｃ）、ｄ）またはｅ）を含まない。
ａ）ＢＬＧおよび少なくとも１つの追加のホエータンパク質を含む初期タンパク質溶液を提供するステップであって、前記初期タンパク質溶液はＢＬＧに関して過飽和であり、５－６の範囲のｐＨを有し、前記初期タンパク質溶液は下記を含む、ステップ：
－総固体に対して７０－１００％ｗ／ｗのタンパク質、
－総タンパク質に対して３０－９０％ｗ／ｗのＢＬＧ、好ましくは３０－７０％ｗ／ｗのＢＬＧ
－総タンパク質に対して４－５０％ｗ／ｗのＡＬＡ、および好ましくは８－３５％ｗ／ｗのＡＬＡ、
－タンパク質に対して０－２５％ｗ／ｗのＣＭＰ、
－初期タンパク質溶液の総重量に対して、少なくとも１０％ｗ／ｗタンパク質、
ｂ）過飽和初期タンパク質溶液中のＢＬＧを、好ましくは結晶化シードの添加により結晶化させ、よって、ＢＬＧ結晶含有溶液を得るステップ、ならびに
ｆ）ステップｂ）のＢＬＧ結晶含有溶液またはその濃縮物を乾燥させるステップであって、前記ＢＬＧ結晶含有溶液は好ましくは、少なくとも３０％のＢＬＧの結晶化度を有するステップ、
この方法はステップｃ）、ｄ）またはｅ）を含まない。
【0428】
初期タンパク質溶液は好ましくは脱塩タンパク質溶液であり、好ましくは最大でも０．３の導電率とタンパク質の総量の間の比および／または最大でも７ｍＳ／ｃｍのＵＦ透過導電率を有する。
【0429】
これらの実施形態では、ＢＬＧ結晶はＢＬＧ結晶含有溶液から分離されないが、乾燥され、粉末形態の高密度可食タンパク質組成物が得られる。
【0430】
発明の他の好ましい実施形態は、結晶化形態のβラクトグロブリン（ＢＬＧ）を含む可食組成物を調製する方法に関し、方法は、下記ステップを含む
ａ）ＢＬＧおよび少なくとも１つの追加のホエータンパク質を含む初期タンパク質溶液を提供するステップであって、前記初期タンパク質溶液はＢＬＧに関して過飽和であり、５－６の範囲のｐＨを有し、前記初期タンパク質溶液は下記を含む、ステップ：
－総固体に対して７０－１００％ｗ／ｗのタンパク質、
－総タンパク質に対して３０－９０％ｗ／ｗのＢＬＧ、好ましくは３０－７０％
－総タンパク質に対して４－５０％ｗ／ｗのＡＬＡ、および好ましくは８－３５％
－総タンパク質に対して０－２５％ｗ／ｗのＣＭＰ、
－初期タンパク質溶液の総重量に対して、少なくとも１０％ｗ／ｗタンパク質、
ｂ）過飽和初期タンパク質溶液中のＢＬＧを、好ましくは結晶化シードの添加により結晶化させ、よって、ＢＬＧ結晶含有溶液を得るステップ、
ｃ）ＢＬＧ結晶含有溶液の残りの液体からＢＬＧ結晶を分離するステップ、
ｄ）任意で、ステップｃ）から得られた、分離されたＢＬＧ結晶を洗浄するステップ、
ｅ）任意で、ステップｃ）またはｄ）から得られたＢＬＧ結晶を再結晶化させるステップ、ならびに
ｆ）ステップｃ）、ｄ）、またはｅ）由来の、好ましくはこれから直接得られたＢＬＧ含有組成物を乾燥させるステップであって、ＢＬＧ含有組成物はＢＬＧ結晶を含み、好ましくは、少なくとも３０％のＢＬＧの結晶化度を有する、ステップ。
ａ）ＢＬＧおよび少なくとも１つの追加のホエータンパク質を含む初期タンパク質溶液を提供するステップであって、前記初期タンパク質溶液はＢＬＧに関して過飽和であり、５－６の範囲のｐＨを有し、前記初期タンパク質溶液は下記を含む、ステップ：
－総固体に対して７０－１００％ｗ／ｗのタンパク質、
－総タンパク質に対して３０－９０％ｗ／ｗのＢＬＧ、好ましくは３０－７０％
－総タンパク質に対して４－５０％ｗ／ｗのＡＬＡ、および好ましくは８－３５％
－総タンパク質に対して０－２５％ｗ／ｗのＣＭＰ、
－初期タンパク質溶液の総重量に対して、少なくとも１０％ｗ／ｗタンパク質、
ｂ）過飽和初期タンパク質溶液中のＢＬＧを、好ましくは結晶化シードの添加により結晶化させ、よって、ＢＬＧ結晶含有溶液を得るステップ、
ｃ）ＢＬＧ結晶含有溶液の残りの液体からＢＬＧ結晶を分離するステップ、
ｄ）任意で、ステップｃ）から得られた、分離されたＢＬＧ結晶を洗浄するステップ、
ｅ）任意で、ステップｃ）またはｄ）から得られたＢＬＧ結晶を再結晶化させるステップ、ならびに
ｆ）ステップｃ）、ｄ）、またはｅ）由来の、好ましくはこれから直接得られたＢＬＧ含有組成物を乾燥させるステップであって、ＢＬＧ含有組成物はＢＬＧ結晶を含み、好ましくは、少なくとも３０％のＢＬＧの結晶化度を有する、ステップ。
【0431】
初期タンパク質溶液は好ましくは脱塩タンパク質溶液であり、好ましくは最大でも０．３の導電率とタンパク質の総量の間の比および／または最大でも７ｍＳ／ｃｍのＵＦ透過導電率を有する。
【0432】
これらの実施形態は、高密度粉末の形態の低ミネラルおよび低リン可食ＢＬＧ組成物を製造するのに特に有用である。
【0433】
発明のさらに他の好ましい実施形態はβラクトグロブリンを単離形態で含む可食組成物を調製する方法に関し、方法は、下記ステップを含む：
ａ）ＢＬＧおよび少なくとも１つの追加のホエータンパク質を含む初期タンパク質溶液を提供するステップであって、前記初期タンパク質溶液はＢＬＧに関して過飽和であり、５－６の範囲のｐＨを有し、前記初期タンパク質溶液は下記を含む、ステップ：
－総固体に対して７０－１００％ｗ／ｗのタンパク質、
－総タンパク質に対して３０－９０％ｗ／ｗのＢＬＧ、好ましくは３０－７０％ｗ／ｗのＢＬＧ、
－総タンパク質に対して５－５０％ｗ／ｗのＡＬＡ、および好ましくは８－３５％ｗ／ｗのＡＬＡ、
－総タンパク質に対して０－２５％ｗ／ｗのＣＭＰ、
－初期タンパク質溶液の総重量に対して、少なくとも１０％ｗ／ｗタンパク質、
ｂ）過飽和初期タンパク質溶液中のＢＬＧを、好ましくは結晶化シードの添加により結晶化させ、よって、ＢＬＧ結晶含有溶液を得るステップ、
ｃ）ＢＬＧ結晶含有溶液の残りの液体からＢＬＧ結晶を分離するステップ、
ｄ）任意で、ステップｃ）から得られた、分離されたＢＬＧ結晶を洗浄するステップ、
ｅ）任意で、ステップｃ）またはｄ）から得られたＢＬＧ結晶を再結晶化させるステップ、ならびに
ｆ）ステップｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物を乾燥させるステップであって、そのＢＬＧ含有組成物はＢＬＧ結晶を含まない、ステップ。
ａ）ＢＬＧおよび少なくとも１つの追加のホエータンパク質を含む初期タンパク質溶液を提供するステップであって、前記初期タンパク質溶液はＢＬＧに関して過飽和であり、５－６の範囲のｐＨを有し、前記初期タンパク質溶液は下記を含む、ステップ：
－総固体に対して７０－１００％ｗ／ｗのタンパク質、
－総タンパク質に対して３０－９０％ｗ／ｗのＢＬＧ、好ましくは３０－７０％ｗ／ｗのＢＬＧ、
－総タンパク質に対して５－５０％ｗ／ｗのＡＬＡ、および好ましくは８－３５％ｗ／ｗのＡＬＡ、
－総タンパク質に対して０－２５％ｗ／ｗのＣＭＰ、
－初期タンパク質溶液の総重量に対して、少なくとも１０％ｗ／ｗタンパク質、
ｂ）過飽和初期タンパク質溶液中のＢＬＧを、好ましくは結晶化シードの添加により結晶化させ、よって、ＢＬＧ結晶含有溶液を得るステップ、
ｃ）ＢＬＧ結晶含有溶液の残りの液体からＢＬＧ結晶を分離するステップ、
ｄ）任意で、ステップｃ）から得られた、分離されたＢＬＧ結晶を洗浄するステップ、
ｅ）任意で、ステップｃ）またはｄ）から得られたＢＬＧ結晶を再結晶化させるステップ、ならびに
ｆ）ステップｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物を乾燥させるステップであって、そのＢＬＧ含有組成物はＢＬＧ結晶を含まない、ステップ。
【0434】
初期タンパク質溶液は好ましくは脱塩タンパク質溶液であり、好ましくは最大でも０．３の導電率とタンパク質の総量の間の比および／または最大でも７ｍＳ／ｃｍのＵＦ透過導電率を有する。
【0435】
これらの実施形態では、ＢＬＧ結晶は乾燥前に溶解される。
【0436】
いくつかの好ましい実施形態では、本方法は、バッチプロセスとして実行される。あるいは、時として好ましくは、方法は半バッチプロセスとして実行され得る。他の好ましい実施形態では、方法は連続プロセスとして実行される。
【0437】
本方法の利点は、先行技術のＢＬＧ結晶化のための同等方法よりずっと速いことである。タンパク質供給物の初期調整から、ステップｃの分離の完了までの期間は最大でも１０時間、好ましくは最大でも４時間、より好ましくは最大でも２時間、さらにいっそう好ましくは最大でも１時間であり得る。
【0438】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、ＢＬＧ結晶がステップｃ）において分離された後に残るＢＬＧ結晶含有溶液が回収され、直接、食糧生産における材料成分として使用され、または、ＰＣＴ出願ＷＯ２０２０／００２，４２２号（全ての目的のために参照により本明細書に組み込まれる）によるさらなる処理に供せられる。そうだとしたら、本方法は可食ＢＬＧ組成物に加えて、可食、αラクトアルブミン強化ホエータンパク質組成物を提供する。
【0439】
可食ＢＬＧ組成物は好ましくは、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗの量のＢＬＧ、および、総固体に対して少なくとも３０％ｗ／ｗの量の総タンパク質を含む。
【0440】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物のＢＬＧは最大でも１のラクトシル化度を有する。好ましくは、可食ＢＬＧ組成物のＢＬＧは最大でも０．６のラクトシル化度を有する。より好ましくは、可食ＢＬＧ組成物のＢＬＧは最大でも０．４のラクトシル化度を有する。さらにいっそう好ましくは、可食ＢＬＧ組成物のＢＬＧは最大でも０．２のラクトシル化度を有する。最も好ましくは、可食ＢＬＧ組成物のＢＬＧは最大でも０．１、例えば、例として好ましくは最大でも０．０１のラクトシル化度を有する。
【0441】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物のＢＬＧは、少なくとも９０％ｗ／ｗの非ラクトシル化ＢＬＧ、好ましくは少なくとも９５％ｗ／ｗの非ラクトシル化ＢＬＧ、さらにいっそう好ましくは少なくとも９８％ｗ／ｗの非ラクトシル化ＢＬＧを含む。
【0442】
非ラクトシル化ＢＬＧのパーセンテージは、ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例９．１に従い決定される。
【0443】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物のＢＬＧは少なくとも１０％ｗ／ｗの結晶化度を有する。好ましくは、可食ＢＬＧ組成物のＢＬＧは少なくとも２０％ｗ／ｗの結晶化度を有する。より好ましくは、可食ＢＬＧ組成物のＢＬＧは少なくとも３０％ｗ／ｗの結晶化度を有する。さらにいっそう好ましくは、可食ＢＬＧ組成物のＢＬＧは少なくとも４０％ｗ／ｗの結晶化度を有する。
【0444】
さらに高い結晶化度がしばしば好ましい。よって、発明のいくつかの好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物のＢＬＧは少なくとも５０％ｗ／ｗの結晶化度を有する。好ましくは、可食ＢＬＧ組成物のＢＬＧは少なくとも６０％ｗ／ｗの結晶化度を有する。より好ましくは、可食ＢＬＧ組成物のＢＬＧは少なくとも７０％ｗ／ｗの結晶化度を有する。さらにいっそう好ましくは、可食ＢＬＧ組成物のＢＬＧは少なくとも８０％ｗ／ｗの結晶化度を有する。最も好ましくは、可食ＢＬＧ組成物のＢＬＧは少なくとも９０％ｗ／ｗ、好ましくは少なくとも９５％ｗ／ｗの結晶化度を有する。
【0445】
５－６の範囲のｐＨを有する液体におけるＢＬＧの結晶化度は、ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例９．７に従い測定される。粉末材料におけるＢＬＧの結晶化度は、ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例９．８に従い測定される。可食組成物が乾燥生成物であるが、粉末形態ではない場合、それは、ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例９．８の方法に供される前に、例えば粉砕またはミリングにより粉末に変換されなければならない。
【0446】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物はＷＰＣ、ＷＰＩ、ＳＰＣ、またはＳＰＩであり、この場合、ＢＬＧの少なくともいくらかは結晶形態である。可食ＢＬＧ組成物は例えば、タンパク質の総量に対して最大でも９０％ｗ／ｗのＢＬＧを含むことができ、少なくとも１０％のＢＬＧの結晶化度を有する。例えば、可食ＢＬＧ組成物はタンパク質の総量に対して最大でも８０％ｗ／ｗのＢＬＧを含むことができ、少なくとも１０％のＢＬＧの結晶化度を有する。可食ＢＬＧ組成物は例えば、タンパク質の総量に対して３０－７０％ｗ／ｗのＢＬＧを含むことができ、少なくとも１０％のＢＬＧの結晶化度を有する。
【0447】
発明の他の好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は、タンパク質の総量に対して最大でも９０％ｗ／ｗのＢＬＧを含み、少なくとも３０％のＢＬＧの結晶化度を有する。好ましくは、可食ＢＬＧ組成物はタンパク質の総量に対して最大でも８０％ｗ／ｗのＢＬＧを含むことができ、少なくとも３０％のＢＬＧの結晶化度を有する。さらにいっそう好ましくは、可食ＢＬＧ組成物はタンパク質の総量に対して３０－７０％ｗ／ｗのＢＬＧを含むことができ、少なくとも３０％のＢＬＧの結晶化度を有する。
【0448】
本発明者らは、本発明は、リンおよび他のミネラルの非常に低い含量を有する可食ホエータンパク質製品を調製することを可能にし、これは腎臓疾患を患う、またはそうでなければ、腎機能が低減した患者に有利であることを見出した。
【0449】
可食ＢＬＧ組成物は好ましくは低リン組成物である。
【0450】
本発明との関連で、「低リン」という用語は、最大でも１００ｍｇリン／１００ｇタンパク質のリンの総含量を有する組成物、例えば液体、粉末または別の食品に関する。好ましくは、低リン組成物は最大でも８０ｍｇリン／１００ｇタンパク質の総含量を有する。より好ましくは、低リン組成物は、最大でも５０ｍｇリン／１００ｇタンパク質の総含量を有し得る。さらにいっそう好ましくは、低リン組成物は、最大でも２０ｍｇリン／１００ｇタンパク質のリンの総含量を有し得る。さらにいっそう好ましくは、低リン組成物は、最大でも５ｍｇリン／１００ｇタンパク質のリンの総含量を有し得る。本発明による低リン組成物は、腎機能が低減した患者群のための食品の生成のための食品成分として使用され得る。
【0451】
よって、発明のいくつかの特に好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は、最大でも８０ｍｇリン／１００ｇタンパク質を含む。好ましくは、可食ＢＬＧ組成物は、最大でも３０ｍｇリン／１００ｇタンパク質を含む。より好ましくは、可食ＢＬＧ組成物は、最大でも２０ｍｇリン／１００ｇタンパク質を含む。さらにいっそう好ましくは、可食ＢＬＧ組成物は、最大でも１０ｍｇリン／１００ｇタンパク質を含む。最も好ましくは、可食ＢＬＧ組成物は、最大でも５ｍｇリン／１００ｇタンパク質を含む。
【0452】
リンの含量は問題になっている組成物の元素リンの総量に関し、ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例９．５に従い決定される。
【0453】
発明の他の好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は低ミネラル組成物である。
【0454】
本発明との関連で「低ミネラル」という用語は、下記の少なくとも１つ、好ましくは２つ、さらにいっそう好ましくは、全てを有する組成物、例えば液体、粉末または別の食品に関する：
－総固体に対して最大でも１．２％ｗ／ｗの灰分、
－総固体に対して最大でも０．３％ｗ／ｗのカルシウムとマグネシウムの総含量、
－総固体に対して最大でも０．１０％ｗ／ｗのナトリウムとカリウムの総含量、
－最大でも１００ｍｇリン／１００ｇタンパク質のリンの総含量。
－総固体に対して最大でも１．２％ｗ／ｗの灰分、
－総固体に対して最大でも０．３％ｗ／ｗのカルシウムとマグネシウムの総含量、
－総固体に対して最大でも０．１０％ｗ／ｗのナトリウムとカリウムの総含量、
－最大でも１００ｍｇリン／１００ｇタンパク質のリンの総含量。
【0455】
好ましくは、低ミネラル組成物は、下記の少なくとも１つ、好ましくは２つ以上、さらにいっそう好ましくは、全てを有する：
－総固体に対して最大でも０．７％ｗ／ｗの灰分、
－総固体に対して最大でも０．２％ｗ／ｗのカルシウムとマグネシウムの総含量、
－総固体に対して最大でも０．０８％ｗ／ｗのナトリウムとカリウムの総含量、
－最大でも８０ｍｇリン／１００ｇタンパク質のリンの総含量。
－総固体に対して最大でも０．７％ｗ／ｗの灰分、
－総固体に対して最大でも０．２％ｗ／ｗのカルシウムとマグネシウムの総含量、
－総固体に対して最大でも０．０８％ｗ／ｗのナトリウムとカリウムの総含量、
－最大でも８０ｍｇリン／１００ｇタンパク質のリンの総含量。
【0456】
さらにいっそう好ましくは、低ミネラル組成物は、下記の少なくとも１つ、好ましくは２つ以上、さらにいっそう好ましくは、全てを有する：
－総固体に対して最大でも０．５％ｗ／ｗの灰分、
－総固体に対して最大でも０．１５％ｗ／ｗのカルシウムとマグネシウムの総含量、
－総固体に対して最大でも０．０６％ｗ／ｗのナトリウムとカリウムの総含量、
－最大でも５０ｍｇリン／１００ｇタンパク質のリンの総含量。
－総固体に対して最大でも０．５％ｗ／ｗの灰分、
－総固体に対して最大でも０．１５％ｗ／ｗのカルシウムとマグネシウムの総含量、
－総固体に対して最大でも０．０６％ｗ／ｗのナトリウムとカリウムの総含量、
－最大でも５０ｍｇリン／１００ｇタンパク質のリンの総含量。
【0457】
低ミネラル組成物は下記を有することが特に好ましい：
－総固体に対して最大でも０．５％ｗ／ｗの灰分、
－総固体に対して最大でも０．１５％ｗ／ｗのカルシウムとマグネシウムの総含量、
－総固体に対して最大でも０．０６％ｗ／ｗのナトリウムとカリウムの総含量、
－最大でも５０ｍｇリン／１００ｇタンパク質のリンの総含量。
－総固体に対して最大でも０．５％ｗ／ｗの灰分、
－総固体に対して最大でも０．１５％ｗ／ｗのカルシウムとマグネシウムの総含量、
－総固体に対して最大でも０．０６％ｗ／ｗのナトリウムとカリウムの総含量、
－最大でも５０ｍｇリン／１００ｇタンパク質のリンの総含量。
【0458】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は、可食ＢＬＧ組成物の総固体に対して少なくとも２５％ｗ／ｗのタンパク質の総量を含む。好ましくは、可食ＢＬＧ組成物は、可食ＢＬＧ組成物の総固体に対して少なくとも５０％ｗ／ｗのタンパク質の総量を含む。より好ましくは、可食ＢＬＧ組成物は、可食ＢＬＧ組成物の総固体に対して少なくとも７５％ｗ／ｗのタンパク質の総量を含む。さらにより好ましくは、可食ＢＬＧ組成物は、可食ＢＬＧ組成物の総固体に対して少なくとも９０％ｗ／ｗのタンパク質の総量を含む。
【0459】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物のタンパク質の総量は、総固体に対して２５－１００％ｗ／ｗの範囲である。好ましくは、可食ＢＬＧ組成物のタンパク質の総量は、５０－１００％ｗ／ｗの範囲である。より好ましくは、可食ＢＬＧ組成物のタンパク質の総量は総固体に対して７５－１００％ｗ／ｗの範囲である。さらにより好ましくは、可食ＢＬＧ組成物のタンパク質の総量は、総固体に対して９０－１００％ｗ／ｗの範囲である。
【0460】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は、タンパク質の総量に対して少なくとも７５％ｗ／ｗのＢＬＧを含む。好ましくは、可食ＢＬＧ組成物はタンパク質の総量に対して少なくとも９０％ｗ／ｗのＢＬＧを含み得る。より好ましくは、可食ＢＬＧ組成物はタンパク質の総量に対して少なくとも９５％ｗ／ｗのＢＬＧを含み得る。さらにいっそう好ましくは、可食ＢＬＧ組成物はタンパク質の総量に対して少なくとも９７％ｗ／ｗのＢＬＧを含み得る。最も好ましくは、可食ＢＬＧ組成物は、タンパク質の総量に対しておよそ１００％ｗ／ｗのＢＬＧを含む。
【0461】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は、最大でも１０％ｗ／ｗの炭水化物、好ましくは最大でも５％ｗ／ｗの炭水化物、より好ましくは最大でも１％ｗ／ｗの炭水化物、さらにいっそう好ましくは最大でも０．１％ｗ／ｗの炭水化物を含む。
【0462】
可食ＢＬＧ組成物はまた、脂質を、例えばトリグリセリドおよび／またはリン脂質などの他の脂質型の形態で含み得る。
【0463】
発明のいくつかの実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は、総固体に対して最大でも１％ｗ／ｗの脂質の総量を含む。好ましくは、可食ＢＬＧ組成物は、総固体に対して最大でも０．５％ｗ／ｗの脂質の総量を含む。より好ましくは、可食ＢＬＧ組成物は、総固体に対して最大でも０．１％ｗ／ｗの脂質の総量を含む。さらにいっそう好ましくは、可食ＢＬＧ組成物は、総固体に対して最大でも０．０５％ｗ／ｗの脂質の総量を含む。最も好ましくは、可食ＢＬＧ組成物は、総固体に対して最大でも０．０１％ｗ／ｗの脂質の総量を含む。
【0464】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は乾燥組成物、例えば粉末である。可食ＢＬＧ組成物は噴霧乾燥粉末であることが特に好ましい。
【0465】
本発明者らは、ＢＬＧの少なくともいくらかが乾燥された時に結晶形態である粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は、ＢＬＧ結晶を有さない同等ＢＬＧ組成物よりも高い密度を有することを観察した（実施例７を参照されたい）。この高密度効果はまた、非常に驚いたことに、噴霧乾燥ＢＬＧ結晶スラリーから得られる粉末形態の可食ＢＬＧ組成物について観察される。
【0466】
よって、発明のいくつかの好ましい実施形態では、粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は少なくとも０．４０ｇ／ｍＬの嵩密度を有する。好ましくは粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は少なくとも０．４５ｇ／ｍＬの嵩密度を有する。より好ましくは、粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は少なくとも０．５０ｇ／ｍＬの嵩密度を有する。粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は少なくとも０．６ｇ／ｍＬの嵩密度を有することが、さらにより好ましい。粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は例えば、少なくとも０．７ｇ／ｍＬの嵩密度を有し得る。
【0467】
嵩密度の利点は、ＢＬＧが存在するほぼ唯一のタンパク質である可食ＢＬＧ組成物の粉末およびＢＬＧの濃度が初期タンパク質溶液中に存在した他のタンパク質に対して強化されていない可食ＢＬＧ組成物の粉末の両方に適用される。よって、発明は単離されたＢＬＧおよび粗ホエータンパク質（ＢＬＧに加えてかなりの量のＡＬＡおよび他のホエータンパク質を含む）の両方の高密度粉末を提供する。
【0468】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は少なくとも０．４５ｇ／ｍＬの嵩密度を有し、組成物の総重量に対して少なくとも７０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。より好ましくは、粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は少なくとも０．５０ｇ／ｍＬの嵩密度を有し、組成物の総重量に対して少なくとも７０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は少なくとも０．６ｇ／ｍＬの嵩密度を有し、組成物の総重量に対して少なくとも７０％ｗ／ｗのタンパク質を含むことが、さらにより好ましい。粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は例えば、少なくとも０．７ｇ／ｍＬの嵩密度を有することができ、組成物の総重量に対して少なくとも７０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。
【0469】
発明の他の好ましい実施形態では、粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は少なくとも０．４５ｇ／ｍＬの嵩密度を有し、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。より好ましくは、粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は少なくとも０．５０ｇ／ｍＬの嵩密度を有し、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は少なくとも０．６ｇ／ｍＬの嵩密度を有し、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含むことが、さらにより好ましい。粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は、例えば、少なくとも０．７ｇ／ｍＬの嵩密度を有することができ、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。
【0470】
粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は、例えば、０．４０－１．５ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することができ、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。好ましくは、粉末可食ＢＬＧ組成物は０．４５－１．０ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有し、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。より好ましくは、粉末可食ＢＬＧ組成物は０．５０－０．９ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することができ、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。粉末可食ＢＬＧ組成物は０．６－０．９ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有し、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含むことが、さらにより好ましい。粉末可食ＢＬＧ組成物は、例えば、０．６－０．８ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することができ、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。
【0471】
発明者らは、発明の高密度粉末は、便宜的に、粉末のよりコスト効率の良いパッケージングおよびロジスティクスを可能にし、というのも、１ｋｇの粉末あたりより少ないパッケージング材料が必要とされ、より多くの粉末（質量）が所定の容器またはトラックにより輸送され得るからであることを見出した。
【0472】
粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は、例えば、０．４０－１．５ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することができる。好ましくは、粉末可食ＢＬＧ組成物は０．４５－１．０ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有する。より好ましくは、粉末可食ＢＬＧ組成物は０．５０－０．９ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することができる。粉末可食ＢＬＧ組成物は０．６－０．９ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することが、さらにより好ましい。粉末可食ＢＬＧ組成物は、例えば、０．６－０．８ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することができる。
【0473】
発明の他の好ましい実施形態では、粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は０．５０－１．５ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有する。好ましくは、粉末可食ＢＬＧ組成物は０．５５－１．０ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有する。より好ましくは、粉末可食ＢＬＧ組成物は０．６０－１．０ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することができる。粉末可食ＢＬＧ組成物は０．６５－１．０ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することが、さらにより好ましい。粉末可食ＢＬＧ組成物は好ましくは０．７０－１．０ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有し得る。
【0474】
粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は、例えば、０．４０－１．５ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することができ、組成物の総重量に対して少なくとも７０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。好ましくは、粉末可食ＢＬＧ組成物は０．４５－１．０ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有し、組成物の総重量に対して少なくとも７０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。より好ましくは、粉末可食ＢＬＧ組成物は０．５０－０．９ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することができ、組成物の総重量に対して少なくとも７０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。粉末可食ＢＬＧ組成物は０．６－０．９ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有し、組成物の総重量に対して少なくとも７０％ｗ／ｗのタンパク質を含むことが、さらにより好ましい。粉末可食ＢＬＧ組成物は、例えば、０．６－０．８ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することができ、組成物の総重量に対して少なくとも７０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。
【0475】
粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は、例えば、０．４０－１．５ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することができ、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。好ましくは、粉末可食ＢＬＧ組成物は０．４５－１．０ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有し、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。より好ましくは、粉末可食ＢＬＧ組成物は０．５０－０．９ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することができ、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。粉末可食ＢＬＧ組成物は０．６－０．９ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有し、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含むことが、さらにより好ましい。粉末可食ＢＬＧ組成物は、例えば、０．６－０．８ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することができ、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。
【0476】
発明の他の好ましい実施形態では、粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は０．５０－１．５ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有し、組成物の総重量に対して少なくとも７０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。好ましくは、粉末可食ＢＬＧ組成物は０．５５－１．０ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有し、組成物の総重量に対して少なくとも７０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。より好ましくは、粉末可食ＢＬＧ組成物は０．６０－１．０ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することができ、組成物の総重量に対して少なくとも７０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。粉末可食ＢＬＧ組成物は０．６５－１．０ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有し、組成物の総重量に対して少なくとも７０％ｗ／ｗのタンパク質を含むことが、さらにより好ましい。粉末可食ＢＬＧ組成物は好ましくは０．７０－１．０ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することができ、組成物の総重量に対して少なくとも７０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。
【0477】
発明の他の好ましい実施形態では、粉末形態の可食ＢＬＧ組成物は０．５０－１．５ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有し、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。好ましくは、粉末可食ＢＬＧ組成物は０．５５－１．０ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有し、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。より好ましくは、粉末可食ＢＬＧ組成物は０．６０－１．０ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することができ、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。粉末可食ＢＬＧ組成物は０．６５－１．０ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有し、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含むことが、さらにより好ましい。粉末可食ＢＬＧ組成物は好ましくは０．７０－１．０ｇ／ｍＬの範囲の嵩密度を有することができ、組成物の総重量に対して少なくとも８０％ｗ／ｗのタンパク質を含む。
【0478】
粉末の嵩密度は、ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例９．３に従い測定される。
【0479】
本発明者らは、本発明によるＢＬＧ組成物は、同様のＢＬＧ組成物より良好な長期安定性を有するという兆候を見た。これは、ＢＬＧの少なくともいくらかはＢＬＧ結晶の形態で存在する場合にとくにそうであり、それは、ＢＬＧ分子のより良好な保存安定性を提供すると考えられる。
【0480】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、乾燥ＢＬＧ組成物は、３０℃で６０日後、最大でも８０ｍｇ／１００ｇタンパク質、好ましくは最大でも６０ｍｇ／１００ｇタンパク質、より好ましくは最大でも４０ｍｇ／１００ｇタンパク質、さらにいっそう好ましくは最大でも２０ｍｇ／１００ｇタンパク質のフロシン値を有する。最も好ましくは、乾燥ＢＬＧ組成物は、３０℃で６０日後、最大でも１０ｍｇ／１００ｇタンパク質のフロシン値を有する。
【0481】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、乾燥ＢＬＧ組成物は最大でも８０ｍｇ／１００ｇタンパク質、好ましくは最大でも６０ｍｇ／１００ｇタンパク質、より好ましくは最大でも４０ｍｇ／１００ｇタンパク質、さらにいっそう好ましくは最大でも２０ｍｇ／１００ｇタンパク質のフロシン値を有する。最も好ましくは、乾燥ＢＬＧ組成物は最大でも１０ｍｇ／１００ｇタンパク質のフロシン値を有する。好ましくは、乾燥ＢＬＧ組成物は０ｍｇ／１００ｇタンパク質のフロシン値を有する。
【0482】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、乾燥ＢＬＧ組成物のＢＬＧは、３０℃で６０日後、最大でも１、好ましくは最大でも０．６、より好ましくは０．２、さらにいっそう好ましくは最大でも０．１、最も好ましくは最大でも０．０１のラクトシル化度を有する。
【0483】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は液体組成物である。液体可食ＢＬＧ組成物は好ましくは、少なくとも２０％ｗ／ｗの水、より好ましくは少なくとも３０％ｗ／ｗの水、さらにいっそう好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗを含む。
【0484】
液体可食ＢＬＧ組成物は、例えば、２０－９０％ｗ／ｗの範囲の水、より好ましくは、３０－８０％ｗ／ｗの範囲の水、さらにいっそう好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗを含み得る。
【0485】
本発明者らは本発明による可食ＢＬＧ組成物は、可食ＢＬＧ粉末組成物を調製するために噴霧乾燥が使用されたとしても、驚いたことに低いタンパク質変性度を有することを見出した（ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例１１を参照されたい）。
【0486】
よって、発明のいくつかの好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は最大でも１０％のタンパク質変性度を有する。好ましくは、可食ＢＬＧ組成物は最大でも５％のタンパク質変性度を有する。より好ましくは、可食ＢＬＧ組成物は最大でも２％のタンパク質変性度を有する。さらにいっそう好ましくは、可食ＢＬＧ組成物は最大でも１％のタンパク質変性度を有する。さらにいっそう好ましくは、可食ＢＬＧ組成物は最大でも０．５％のタンパク質変性度を有する。
【0487】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は乾燥粉末、好ましくは噴霧乾燥粉末であり、最大でも２％、好ましくは最大でも１．５％のタンパク質変性度を有する。より好ましくは、例えば噴霧乾燥粉末の形態の乾燥可食ＢＬＧ組成物は、最大でも１．０％のタンパク質変性度を有する。さらにいっそう好ましくは、例えば噴霧乾燥粉末の形態の乾燥可食ＢＬＧ組成物は最大でも０．８％のタンパク質変性度を有する。さらにいっそう好ましくは、例えば噴霧乾燥粉末の形態の乾燥可食ＢＬＧ組成物は最大でも０．５％のタンパク質変性度を有する。
【0488】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は、下記を含み：
－最大でも６％ｗ／ｗの水
－総固体に対して少なくとも８０％の総タンパク質
－総タンパク質に対して少なくとも９５％のＢＬＧ、ならびに
前記可食ＢＬＧ組成物は：
－乾燥粉末であり、
－少なくとも０．５０ｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも０．６０ｇ／ｍＬの嵩密度を有する。
－最大でも６％ｗ／ｗの水
－総固体に対して少なくとも８０％の総タンパク質
－総タンパク質に対して少なくとも９５％のＢＬＧ、ならびに
前記可食ＢＬＧ組成物は：
－乾燥粉末であり、
－少なくとも０．５０ｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも０．６０ｇ／ｍＬの嵩密度を有する。
【0489】
発明の他の好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は、下記を含み：
－最大でも６％ｗ／ｗの水
－総固体に対して少なくとも８０％の総タンパク質
－総タンパク質に対して少なくとも９５％のＢＬＧ、ならびに
前記可食ＢＬＧ組成物は
－乾燥粉末であり、
－少なくとも０．５０ｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも０．６０ｇ／ｍＬの嵩密度を有し、および
－少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％のＢＬＧの結晶化度を有する。
－最大でも６％ｗ／ｗの水
－総固体に対して少なくとも８０％の総タンパク質
－総タンパク質に対して少なくとも９５％のＢＬＧ、ならびに
前記可食ＢＬＧ組成物は
－乾燥粉末であり、
－少なくとも０．５０ｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも０．６０ｇ／ｍＬの嵩密度を有し、および
－少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％のＢＬＧの結晶化度を有する。
【0490】
発明のさらに好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は、下記を含み：
－最大でも６％ｗ／ｗの水
－総固体に対して少なくとも８０％の総タンパク質
－総タンパク質に対して少なくとも９５％のＢＬＧ、ならびに
前記可食ＢＬＧ組成物は：
－乾燥粉末であり、
－少なくとも０．５０ｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも０．６０ｇ／ｍＬの嵩密度を有し、および
－最大でも２％、好ましくは最大でも１．０％のタンパク質変性度を有する。
－最大でも６％ｗ／ｗの水
－総固体に対して少なくとも８０％の総タンパク質
－総タンパク質に対して少なくとも９５％のＢＬＧ、ならびに
前記可食ＢＬＧ組成物は：
－乾燥粉末であり、
－少なくとも０．５０ｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも０．６０ｇ／ｍＬの嵩密度を有し、および
－最大でも２％、好ましくは最大でも１．０％のタンパク質変性度を有する。
【0491】
発明のさらに好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は、下記を含み：
－最大でも６％ｗ／ｗの水
－総固体に対して少なくとも８０％の総タンパク質、
－総タンパク質に対して少なくとも９５％のＢＬＧ、
－最大でも８０ｍｇリン／１００ｇタンパク質、
前記可食ＢＬＧ組成物は：
－乾燥粉末である。
－最大でも６％ｗ／ｗの水
－総固体に対して少なくとも８０％の総タンパク質、
－総タンパク質に対して少なくとも９５％のＢＬＧ、
－最大でも８０ｍｇリン／１００ｇタンパク質、
前記可食ＢＬＧ組成物は：
－乾燥粉末である。
【0492】
発明のさらに好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は、下記を含み：
－最大でも６％ｗ／ｗの水
－総固体に対して少なくとも９０％の総タンパク質、
－総タンパク質に対して少なくとも９７％のＢＬＧ、
－最大でも５０ｍｇリン／１００ｇタンパク質、
前記可食ＢＬＧ組成物は：
－乾燥粉末である。
－最大でも６％ｗ／ｗの水
－総固体に対して少なくとも９０％の総タンパク質、
－総タンパク質に対して少なくとも９７％のＢＬＧ、
－最大でも５０ｍｇリン／１００ｇタンパク質、
前記可食ＢＬＧ組成物は：
－乾燥粉末である。
【0493】
発明の他の好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は、下記を含み：
－最大でも６％ｗ／ｗの水
－総固体に対して少なくとも８０％の総タンパク質、好ましくは総固体に対して少なくとも９０％の総タンパク質、
－総タンパク質に対して３０－９０％のＢＬＧ、
－総タンパク質に対して８－２５％ｗ／ｗのＡＬＡ、
前記可食ＢＬＧ組成物は：
－乾燥粉末であり、および
－少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％のＢＬＧの結晶化度を有する。
－最大でも６％ｗ／ｗの水
－総固体に対して少なくとも８０％の総タンパク質、好ましくは総固体に対して少なくとも９０％の総タンパク質、
－総タンパク質に対して３０－９０％のＢＬＧ、
－総タンパク質に対して８－２５％ｗ／ｗのＡＬＡ、
前記可食ＢＬＧ組成物は：
－乾燥粉末であり、および
－少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％のＢＬＧの結晶化度を有する。
【0494】
発明のいくつかの好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は、下記を含み：
－２０－８０％ｗ／ｗの水、好ましくは２０－６０％ｗ／ｗの水、
－総固体に対して少なくとも８０％の総タンパク質、好ましくは少なくとも９０％の総タンパク質
－総タンパク質に対して少なくとも９５％のＢＬＧ、
－最大でも８０ｍｇリン／１００ｇタンパク質、
前記可食ＢＬＧ組成物は：
－少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０のＢＬＧの結晶化度を有し、ならびに
－任意で、最大でも２％、好ましくは最大でも１．０％のタンパク質変性度を有する。
－２０－８０％ｗ／ｗの水、好ましくは２０－６０％ｗ／ｗの水、
－総固体に対して少なくとも８０％の総タンパク質、好ましくは少なくとも９０％の総タンパク質
－総タンパク質に対して少なくとも９５％のＢＬＧ、
－最大でも８０ｍｇリン／１００ｇタンパク質、
前記可食ＢＬＧ組成物は：
－少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０のＢＬＧの結晶化度を有し、ならびに
－任意で、最大でも２％、好ましくは最大でも１．０％のタンパク質変性度を有する。
【0495】
これらの実施形態による可食組成物は、乾燥形態の可食ＢＬＧ組成物を調製するのに特に有用であり、ホエータンパク質種ホエータンパク質の標準濃度プロファイルを有するが、ＢＬＧの少なくともいくらかを乾燥されたＢＬＧ結晶の形態で含む高密度ホエータンパク質粉末の噴霧乾燥および調製に特に好適である。
【0496】
発明の他の好ましい実施形態では、可食ＢＬＧ組成物は、下記を含み：
－２０－８０％ｗ／ｗの水、好ましくは２０－６０％ｗ／ｗの水、
－総固体に対して少なくとも８０％の総タンパク質、好ましくは総固体に対して少なくとも９０％の総タンパク質、
－総タンパク質に対して３０－７９％のＢＬＧ、
－総タンパク質に対して８－２５％ｗ／ｗのＡＬＡ、
前記可食ＢＬＧ組成物は：
－少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％のＢＬＧの結晶化度を有する。
－２０－８０％ｗ／ｗの水、好ましくは２０－６０％ｗ／ｗの水、
－総固体に対して少なくとも８０％の総タンパク質、好ましくは総固体に対して少なくとも９０％の総タンパク質、
－総タンパク質に対して３０－７９％のＢＬＧ、
－総タンパク質に対して８－２５％ｗ／ｗのＡＬＡ、
前記可食ＢＬＧ組成物は：
－少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％のＢＬＧの結晶化度を有する。
【0497】
これらの実施形態による可食組成物は乾燥形態の可食ＢＬＧ組成物を調製するのに特に有用であり、ホエータンパク質種ホエータンパク質の標準濃度プロファイルを有するが、ＢＬＧの少なくともいくらかを乾燥されたＢＬＧ結晶の形態で含む高密度ホエータンパク質粉末の噴霧乾燥および調製に特に好適である。
【0498】
本方法は好ましくは、１－６５℃の範囲、好ましくは２－５０℃、より好ましくは３－２０℃の範囲、さらにいっそう好ましくは、４－１５℃の範囲の温度で実施される。
【0499】
発明の特に好ましい実施形態は下記番号付き実施形態において記載される：
番号付き実施形態１．好ましくは結晶化および／または単離形態でのβラクトグロブリン（ＢＬＧ）を含む可食組成物を調製する方法であって、方法は、下記ステップを含み：
ａ）ＢＬＧを含む初期タンパク質溶液を調製するステップであって、前記初期タンパク質溶液はＢＬＧに関して過飽和であり、５－６の範囲のｐＨを有する、ステップ、
ｂ）過飽和、初期タンパク質溶液中、好ましくは塩溶モードでＢＬＧを結晶化させ、よって、ＢＬＧ結晶含有溶液を得るステップ、ならびに
ｃ）任意で、ＢＬＧ結晶含有溶液の残りの液体からＢＬＧ結晶を分離するステップ、
ステップａ）は、１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）を１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）と合わせる、好ましくは混合することにより、初期タンパク質溶液を調製することを含み、
－「Ａ型タンパク質供給物」はＢＬＧを含み、少なくとも５．６のｐＨを有するタンパク質供給物として規定され、ならびに、
－「Ｂ型タンパク質供給物」はＢＬＧを含み、最大でも５．４のｐＨを有するタンパク質供給物として規定される、方法。
番号付き実施形態１．好ましくは結晶化および／または単離形態でのβラクトグロブリン（ＢＬＧ）を含む可食組成物を調製する方法であって、方法は、下記ステップを含み：
ａ）ＢＬＧを含む初期タンパク質溶液を調製するステップであって、前記初期タンパク質溶液はＢＬＧに関して過飽和であり、５－６の範囲のｐＨを有する、ステップ、
ｂ）過飽和、初期タンパク質溶液中、好ましくは塩溶モードでＢＬＧを結晶化させ、よって、ＢＬＧ結晶含有溶液を得るステップ、ならびに
ｃ）任意で、ＢＬＧ結晶含有溶液の残りの液体からＢＬＧ結晶を分離するステップ、
ステップａ）は、１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）を１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）と合わせる、好ましくは混合することにより、初期タンパク質溶液を調製することを含み、
－「Ａ型タンパク質供給物」はＢＬＧを含み、少なくとも５．６のｐＨを有するタンパク質供給物として規定され、ならびに、
－「Ｂ型タンパク質供給物」はＢＬＧを含み、最大でも５．４のｐＨを有するタンパク質供給物として規定される、方法。
【0500】
番号付き実施形態２．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって：
－Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、少なくとも５．６、より好ましくは少なくとも５．７、さらにいっそう好ましくは少なくとも５．８、最も好ましくは少なくとも５．９のｐＨを有し、ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも５．４、より好ましくは最大でも５．３、さらにいっそう好ましくは、５．２、最も好ましくは５．１のｐＨを有する、方法。
－Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、少なくとも５．６、より好ましくは少なくとも５．７、さらにいっそう好ましくは少なくとも５．８、最も好ましくは少なくとも５．９のｐＨを有し、ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも５．４、より好ましくは最大でも５．３、さらにいっそう好ましくは、５．２、最も好ましくは５．１のｐＨを有する、方法。
【0501】
番号付き実施形態３．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって：
－Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、少なくとも６．０、より好ましくは少なくとも６．１、さらにいっそう好ましくは少なくとも６．２、最も好ましくは少なくとも６．３のｐＨを有し、ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも５．０、より好ましくは最大でも４．９、さらにいっそう好ましくは４．８、最も好ましくは４．７のｐＨを有する、方法。
－Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、少なくとも６．０、より好ましくは少なくとも６．１、さらにいっそう好ましくは少なくとも６．２、最も好ましくは少なくとも６．３のｐＨを有し、ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも５．０、より好ましくは最大でも４．９、さらにいっそう好ましくは４．８、最も好ましくは４．７のｐＨを有する、方法。
【0502】
番号付き実施形態４．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、５．６－１０、より好ましくは５．８－８、さらにいっそう好ましくは、６．０－７、最も好ましくは６．１－６．５の範囲のｐＨを有する、方法。
【0503】
番号付き実施形態５．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型タンパク質供給物は、合わせられた場合、６．０－８、より好ましくは６．１－７．５、さらにいっそう好ましくは、６．２－７．０、最も好ましくは６．２－６．５の範囲のｐＨを有する、方法。
【0504】
番号付き実施形態６．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ｂ型タンパク質供給物は、合わせられた場合、２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨを有する、方法。
【0505】
番号付き実施形態７．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ｂ型タンパク質供給物は、合わせられた場合、４．０－５．０、より好ましくは４．１－４．９、さらにいっそう好ましくは、４．３－４．８、最も好ましくは４．５－４．８の範囲のｐＨを有する、方法。
【0506】
番号付き実施形態８．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、１つ以上のＡ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧに関して飽和されておらず、より好ましくは１つ以上のＡ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧに関して飽和されていない、方法。
【0507】
番号付き実施形態９．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、１つ以上のＢ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧに関して飽和されておらず、より好ましくは１つ以上のＢ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧに関して飽和されていない、方法。
【0508】
番号付き実施形態１０．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型またはＢ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧに関して飽和されていない、方法。
【0509】
番号付き実施形態１１．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、１つ以上のＡ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧ結晶を含まず、より好ましくは１つ以上のＡ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧ結晶を含まない、方法。
【0510】
番号付き実施形態１２．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、１つ以上のＢ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧ結晶を含まず、より好ましくは１つ以上のＢ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧ結晶を含まない、方法。
【0511】
番号付き実施形態１３．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型またはＢ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧ結晶を含まない、方法。
【0512】
番号付き実施形態１４．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、１つ以上のＡ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧに関して過飽和ではなく、より好ましくは１つ以上のＡ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧに関して過飽和でない、方法。
【0513】
番号付き実施形態１５．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型またはＢ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧ結晶を含まない、方法。
【0514】
番号付き実施形態１６．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、１つ以上のＡ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧに関して過飽和ではなく、より好ましくは１つ以上のＡ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧに関して過飽和でない、方法。
【0515】
番号付き実施形態１７．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、１つ以上のＢ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧに関して過飽和ではなく、より好ましくは１つ以上の型のいずれもＢＬＧに関して過飽和でない、方法。
【0516】
番号付き実施形態１８．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ステップａ）の１つ以上のＡ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧに関して飽和されている、方法。
【0517】
番号付き実施形態１９．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ステップａ）の１つ以上のＢ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧに関して飽和されている、方法。
【0518】
番号付き実施形態２０．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ＢＬＧ結晶を含まないＡ型およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の少なくとも１％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも１０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも２０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗで寄与する、方法。
【0519】
番号付き実施形態２１．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ＢＬＧ結晶を含まないＡ型およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の少なくとも５０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも７０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９０％ｗ／ｗで寄与する、方法。
【0520】
番号付き実施形態２２．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ＢＬＧ結晶を含まないＡ型およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の少なくとも９２％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも９４％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも９６％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９９％ｗ／ｗで寄与する、方法。
【0521】
番号付き実施形態２３．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ＢＬＧに関して過飽和ではないＡ型およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の少なくとも１％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも１０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも２０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗで寄与する、方法。
【0522】
番号付き実施形態２４．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ＢＬＧに関して過飽和ではないＡ型およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の少なくとも５０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも７０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９０％ｗ／ｗで寄与する、方法。
【0523】
番号付き実施形態２５．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ＢＬＧに関して過飽和ではないＡ型およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の少なくとも９２％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも９４％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも９６％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９９％ｗ／ｗで寄与する、方法。
【0524】
番号付き実施形態２６．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも６０℃、より好ましくは最大でも５０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも４０℃、最も好ましくは最大でも３０℃の温度を有する、方法。
【0525】
番号付き実施形態２７．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度を有する、方法。
【0526】
番号付き実施形態２８．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも６０℃、より好ましくは最大でも５０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも４０℃、最も好ましくは最大でも３０℃の温度を有する、方法。
【0527】
番号付き実施形態２９．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度を有する、方法。
【0528】
番号付き実施形態３０．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、Ａ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して少なくとも１％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは少なくとも３％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して少なくとも７％ｗ／ｗのＢＬＧを含む、方法。
【0529】
番号付き実施形態３１．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、Ａ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して１－４５％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは３－４０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは、５－３６％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して７－３４％ｗ／ｗのＢＬＧを含む、方法。
【0530】
番号付き実施形態３２．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して少なくとも１％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは少なくとも３％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して少なくとも７％ｗ／ｗのＢＬＧを含む、方法。
【0531】
番号付き実施形態３３．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）は、合わせられた場合、Ｂ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して１－４５％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは３－４０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは、５－３６％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物（複数可）の組み合わせの重量に対して７－３４％ｗ／ｗのＢＬＧを含む、方法。
【0532】
番号付き実施形態３４．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、初期タンパク質溶液は、初期タンパク質溶液の重量に対して１－９９％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲のＡ型タンパク質供給物の総量を含む、方法。
【0533】
番号付き実施形態３５．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、初期タンパク質溶液は、初期タンパク質溶液の重量に対して１－９９％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲のＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量を含む、方法。
【0534】
番号付き実施形態３６．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、初期タンパク質溶液は下記を含む、方法：
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲のＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲のＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲のＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲のＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
【0535】
番号付き実施形態３７．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、初期タンパク質溶液は下記を含む、方法：
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の５．８－８のｐＨを有するＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の３－５．２のｐＨを有するＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の５．８－８のｐＨを有するＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の３－５．２のｐＨを有するＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
【0536】
番号付き実施形態３８．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、初期タンパク質溶液は下記を含む、方法：
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の６．０－８のｐＨを有するＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の３－５．０のｐＨを有するＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の６．０－８のｐＨを有するＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の３－５．０のｐＨを有するＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
【0537】
番号付き実施形態３９．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、初期タンパク質溶液は下記を含む、方法：
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の６．１－８のｐＨを有するＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの３－４．９のｐＨを有するＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の６．１－８のｐＨを有するＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの３－４．９のｐＨを有するＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
【0538】
番号付き実施形態４０．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、初期タンパク質溶液を調製するために使用されるタンパク質供給物の少なくとも１つは液体形態である、方法。
【0539】
番号付き実施形態４１．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、タンパク質供給物は全て液体形態である、方法。
【0540】
番号付き実施形態４２．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、タンパク質供給物の少なくとも１つは乾燥形態、好ましくは粉末形態であり、タンパク質供給物の少なくとも１つは液体形態である、方法。
【0541】
番号付き実施形態４３．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、タンパク質供給物は全て、乾燥形態である、方法。
【0542】
番号付き実施形態４４．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ＢＬＧ結晶、例えばステップｃ）から得られた、分離された結晶を洗浄するステップｄ）をさらに含む、方法。
【0543】
番号付き実施形態４５．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ＢＬＧ結晶、例えば、ステップｃ）またはｄ）から得られたＢＬＧ結晶を再結晶化させるステップｅ）をさらに含む、方法。
【0544】
番号付き実施形態４６．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ステップｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）由来のＢＬＧ含有組成物を乾燥させるステップｆ）をさらに含む、方法。
【0545】
番号付き実施形態４７．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、総固体に対して少なくとも１％ｗ／ｗの非ＢＬＧ固体を含む、方法。
【0546】
番号付き実施形態４８．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも５％ｗ／ｗのＡＬＡを含む、方法。
【0547】
番号付き実施形態４９．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して少なくとも１５％ｗ／ｗの追加のホエータンパク質を含む、方法。
【0548】
番号付き実施形態５０．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、タンパク質の総量に対して最大でも４０％ｗ／ｗのＢＬＧを含む、方法。
【0549】
番号付き実施形態５１．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ステップａ）の初期タンパク質溶液は、初期タンパク質溶液の重量に対して少なくとも５％ｗ／ｗのＢＬＧを含む、方法。
【0550】
番号付き実施形態５２．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、タンパク質供給物は乳清タンパク質濃縮物、ホエータンパク質濃縮物、乳清タンパク質分離物、および／またはホエータンパク質分離物から調製される、方法。
【0551】
番号付き実施形態５３．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、初期タンパク質溶液の導電率とタンパク質の総量の間の比は最大でも０．３である、方法。
【0552】
番号付き実施形態５４．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、初期タンパク質溶液のＵＦ透過導電率は最大でも７ｍＳ／ｃｍである、方法。
【0553】
番号付き実施形態５５．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、タンパク質供給物（複数可）の１つ以上は、１つ以上のホエータンパク質材料を下記調整の１つ以上に供することにより調製される、方法：
－ｐＨを調整すること、
－導電率を低減させること
－温度を低減させること
－タンパク質濃度を増加させること、ならびに
－水分活性を低減させる作用物質を添加すること。
－ｐＨを調整すること、
－導電率を低減させること
－温度を低減させること
－タンパク質濃度を増加させること、ならびに
－水分活性を低減させる作用物質を添加すること。
【0554】
番号付き実施形態５６．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、１つ以上のタンパク質供給物の調製はホエータンパク質材料のｐＨを調整することを含む、方法。
【0555】
番号付き実施形態５７．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、１つ以上のタンパク質供給物の調製は、ホエータンパク質材料の導電率を低減させることを含む、方法。
【0556】
番号付き実施形態５８．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、１つ以上のタンパク質供給物の調製は、ホエータンパク質材料の温度を低減させることを含む、方法。
【0557】
番号付き実施形態５９．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、１つ以上のタンパク質供給物の調製は、ホエータンパク質材料の総タンパク質濃度を増加させることを含む、方法。
【0558】
番号付き実施形態６０．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、タンパク質供給物の１つ以上は乳清タンパク質濃縮物、ホエータンパク質濃縮物、乳清タンパク質分離物、および／またはホエータンパク質分離物に由来する、方法。
【0559】
番号付き実施形態６１．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、タンパク質供給物の１つ以上は、乳清タンパク質濃縮物、ホエータンパク質濃縮物、乳清タンパク質分離物、および／またはホエータンパク質分離物のタンパク質を含む、方法。
【0560】
番号付き実施形態６２．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ステップｂ）のＢＬＧの結晶化は、下記の１つ以上を含む、方法：
－結晶化が起こるのを待つこと、
－結晶化シードの添加、
－ＢＬＧの過飽和度をさらにいっそう増加させること、および／または
－機械的刺激。
－結晶化が起こるのを待つこと、
－結晶化シードの添加、
－ＢＬＧの過飽和度をさらにいっそう増加させること、および／または
－機械的刺激。
【0561】
番号付き実施形態６３．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ステップｂ）のＢＬＧの結晶化は、ＢＬＧの結晶化が進行している間にＢＬＧを含む１つ以上の追加のタンパク質供給物の添加を含む、方法。
【0562】
番号付き実施形態６４．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ステップｃ）は、残りの初期タンパク質溶液からＢＬＧ結晶を分離することを含む、方法。
【0563】
番号付き実施形態６５．番号付き実施形態６４による方法であって、ステップｃ）は、ＢＬＧ結晶を少なくとも３０％ｗ／ｗ、好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗの固体含量まで分離することを含む、方法。
【0564】
番号付き実施形態６６．番号付き実施形態４４－６５のいずれかによる方法であって、ステップｄ）での洗浄は、分離されたＢＬＧ結晶を洗浄液とＢＬＧ結晶を完全に溶解させずに接触させ、その後に残りのＢＬＧ結晶を洗浄液から分離することを含む、方法。
【0565】
番号付き実施形態６７．番号付き実施形態６６による方法であって、ステップｄ）の洗浄はＢＬＧ結晶の初期量の最大でも８０％ｗ／ｗ、好ましくは最大でも５０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくはＢＬＧ結晶の初期量の最大でも２０％ｗ／ｗを溶解させる、方法。
【0566】
番号付き実施形態６８．番号付き実施形態４５－６７のいずれかによる方法であって、再結晶ステップは、下記を含む、方法：
－分離されたＢＬＧ結晶を再結晶液に溶解させること、
－再結晶液を調整して、ＢＬＧに関して過飽和を得ること、
－過飽和の調整再結晶液中でＢＬＧを結晶化すること、ならびに
－ＢＬＧ結晶を残りの調整再結晶液から分離すること。
－分離されたＢＬＧ結晶を再結晶液に溶解させること、
－再結晶液を調整して、ＢＬＧに関して過飽和を得ること、
－過飽和の調整再結晶液中でＢＬＧを結晶化すること、ならびに
－ＢＬＧ結晶を残りの調整再結晶液から分離すること。
【0567】
番号付き実施形態６９．番号付き実施形態４５－６８のいずれかによる方法であって、ステップｄ）のＢＬＧ結晶は少なくとも２回再結晶化される、方法。
【0568】
番号付き実施形態７０．番号付き実施形態４６－６９のいずれかによる方法であって、乾燥ステップは、噴霧乾燥、フリーズドライ、スピンフラッシュ乾燥機、回転乾燥、および／または流動床乾燥の１つ以上を含む、方法。
【0569】
番号付き実施形態７１．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって：
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
少なくとも５．６、より好ましくは少なくとも５．７、さらにいっそう好ましくは少なくとも５．８、最も好ましくは少なくとも５．９のｐＨ、ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、方法：
最大でも５．４、より好ましくは最大でも５．３、さらにいっそう好ましくは、５．２、最も好ましくは５．１のｐＨ。
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
少なくとも５．６、より好ましくは少なくとも５．７、さらにいっそう好ましくは少なくとも５．８、最も好ましくは少なくとも５．９のｐＨ、ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、方法：
最大でも５．４、より好ましくは最大でも５．３、さらにいっそう好ましくは、５．２、最も好ましくは５．１のｐＨ。
【0570】
番号付き実施形態７２．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって：
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
少なくとも６．０、より好ましくは少なくとも６．１、さらにいっそう好ましくは少なくとも６．２、最も好ましくは少なくとも６．３のｐＨ、ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、方法：
最大でも５．０、より好ましくは最大でも４．９、さらにいっそう好ましくは４．８、最も好ましくは４．７のｐＨ。
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
少なくとも６．０、より好ましくは少なくとも６．１、さらにいっそう好ましくは少なくとも６．２、最も好ましくは少なくとも６．３のｐＨ、ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、方法：
最大でも５．０、より好ましくは最大でも４．９、さらにいっそう好ましくは４．８、最も好ましくは４．７のｐＨ。
【0571】
番号付き実施形態７３．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、方法：
５．６－１０、より好ましくは５．８－８、さらにいっそう好ましくは、６．０－７、最も好ましくは６．１－６．５の範囲のｐＨ。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、方法：
５．６－１０、より好ましくは５．８－８、さらにいっそう好ましくは、６．０－７、最も好ましくは６．１－６．５の範囲のｐＨ。
【0572】
番号付き実施形態７４．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、方法：
６．０－８、より好ましくは６．１－７．５、さらにいっそう好ましくは、６．２－７．０、最も好ましくは６．２－６．５の範囲のｐＨ。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、方法：
６．０－８、より好ましくは６．１－７．５、さらにいっそう好ましくは、６．２－７．０、最も好ましくは６．２－６．５の範囲のｐＨ。
【0573】
番号付き実施形態７５．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、方法：
２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨ。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、方法：
２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨ。
【0574】
番号付き実施形態７６．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、方法：
４．０－５．０、より好ましくは４．１－４．９、さらにいっそう好ましくは、４．３－４．８、最も好ましくは４．５－４．８の範囲のｐＨ。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、方法：
４．０－５．０、より好ましくは４．１－４．９、さらにいっそう好ましくは、４．３－４．８、最も好ましくは４．５－４．８の範囲のｐＨ。
【0575】
番号付き実施形態７７．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、
１つ以上のＡ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧ結晶を含まず、より好ましくは１つ以上のＡ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧ結晶を含まず、および／または
１つ以上のＢ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧ結晶を含まず、より好ましくは１つ以上のＢ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧ結晶を含まない、方法。
１つ以上のＡ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧ結晶を含まず、より好ましくは１つ以上のＡ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧ結晶を含まず、および／または
１つ以上のＢ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧ結晶を含まず、より好ましくは１つ以上のＢ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧ結晶を含まない、方法。
【0576】
番号付き実施形態７８．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、１つ以上のＡ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧに関して過飽和ではなく、より好ましくは１つ以上のＡ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧに関して過飽和でなく、および／または
１つ以上のＢ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧに関して過飽和ではなく、より好ましくは１つ以上の型のいずれもＢＬＧに関して過飽和でない、方法。
１つ以上のＢ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧに関して過飽和ではなく、より好ましくは１つ以上の型のいずれもＢＬＧに関して過飽和でない、方法。
【0577】
番号付き実施形態７９．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ＢＬＧ結晶を含まないＡ型およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の少なくとも１％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも１０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも２０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗで寄与する、方法。
【0578】
番号付き実施形態８０．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、ＢＬＧ結晶を含まないＡ型およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の少なくとも５０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも７０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９０％ｗ／ｗで寄与する、方法。
【0579】
番号付き実施形態８１．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、方法：
最大でも６０℃、より好ましくは最大でも５０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも４０℃、最も好ましくは最大でも３０℃の温度。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、方法：
最大でも６０℃、より好ましくは最大でも５０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも４０℃、最も好ましくは最大でも３０℃の温度。
【0580】
番号付き実施形態８２．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、方法：
最大でも６０℃、より好ましくは最大でも５０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも４０℃、最も好ましくは最大でも３０℃の温度。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、方法：
最大でも６０℃、より好ましくは最大でも５０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも４０℃、最も好ましくは最大でも３０℃の温度。
【0581】
番号付き実施形態８３．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む、方法：
Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも１％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは少なくとも３％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも７％ｗ／ｗのＢＬＧ。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む、方法：
Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも１％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは少なくとも３％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも７％ｗ／ｗのＢＬＧ。
【0582】
番号付き実施形態８４．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む、方法：
Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも１％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは少なくとも３％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも７％ｗ／ｗのＢＬＧ。
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む、方法：
Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも１％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは少なくとも３％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも７％ｗ／ｗのＢＬＧ。
【0583】
番号付き実施形態８５．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、初期タンパク質溶液は下記を含む、方法：
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の６．０－８のｐＨを有するＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の３－５．０のｐＨを有するＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の６．０－８のｐＨを有するＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗ、より好ましくは１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の３－５．０のｐＨを有するＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
【0584】
番号付き実施形態８６．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、
－Ａ型タンパク質供給物との関連で、単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
－Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－５．６－１０、より好ましくは５．８－８、さらにいっそう好ましくは、６．０－７、最も好ましくは６．１－６．５の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧの含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比、
ならびに、
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で、単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらは、混合された場合、下記を有する、方法：
－Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧの含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
－Ａ型タンパク質供給物との関連で、単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
－Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－５．６－１０、より好ましくは５．８－８、さらにいっそう好ましくは、６．０－７、最も好ましくは６．１－６．５の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧの含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比、
ならびに、
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で、単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらは、混合された場合、下記を有する、方法：
－Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧの含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
【0585】
番号付き実施形態８７．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、
－Ａ型タンパク質供給物との関連で、単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
－Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－５．６－１０、より好ましくは５．８－８、さらにいっそう好ましくは、６．０－７、最も好ましくは６．１－６．５の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧの含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比、
ならびに、
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で、単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらは、混合された場合、下記を有する、方法：
－Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧの含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
－Ａ型タンパク質供給物との関連で、単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
－Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－５．６－１０、より好ましくは５．８－８、さらにいっそう好ましくは、６．０－７、最も好ましくは６．１－６．５の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧの含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、さらにいっそう好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比、
ならびに、
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で、単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらは、混合された場合、下記を有する、方法：
－Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して４－３２％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは６－３２％ｗ／ｗ、より好ましくは８－３０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは１０－２８％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して１２－２６％ｗ／ｗのＢＬＧの含量、
－２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨ、
－好ましくは、最大でも２０℃、より好ましくは最大でも１５℃、さらにいっそう好ましくは最大でも１０℃、最も好ましくは最大でも５℃の温度、
－好ましくは、タンパク質の総量に対して少なくとも３０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗ、さらにより好ましくは少なくとも５０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも５５％ｗ／ｗの量のＢＬＧの含量、
－下記の１つ以上：
－最大でも７ｍＳ／ｃｍ、より好ましくは最大でも５ｍＳ／ｃｍ、最も好ましくは最大でも３ｍＳ／ｃｍの導電率、および
－最大でも０．３、より好ましくは最大でも０．２５、最も好ましくは最大でも０．２０の導電率とタンパク質の総量の間の比。
【0586】
番号付き実施形態８８．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液のタンパク質含量の少なくとも５０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも７０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９０％ｗ／ｗで寄与する、方法。
【0587】
番号付き実施形態８９．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液のタンパク質含量の少なくとも９２％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも９４％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも９６％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９９％ｗ／ｗで寄与する、方法。
【0588】
番号付き実施形態９０．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液の固体含量の少なくとも５０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも７０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９０％ｗ／ｗで寄与する、方法。
【0589】
番号付き実施形態９１．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液の固体含量の少なくとも９２％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも９４％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも９６％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９９％ｗ／ｗで寄与する、方法。
【0590】
番号付き実施形態９２．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液の重量の少なくとも５０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも７０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９０％ｗ／ｗで寄与する、方法。
【0591】
番号付き実施形態９３．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、初期タンパク質溶液の重量の少なくとも９２％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも９４％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも９６％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９９％ｗ／ｗで寄与する、方法。
【0592】
番号付き実施形態９４．前記番号付き実施形態のいずれかによる方法であって、初期タンパク質溶液のＢＬＧの過飽和度は下記の過飽和度の両方より高い、方法：
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、Ａ型タンパク質供給物、または
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、合わせられた場合の、Ａ型タンパク質供給物、
および
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、Ｂ型タンパク質供給物、または
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、合わせられた場合の、Ｂ型タンパク質供給物。
－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、Ａ型タンパク質供給物、または
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、合わせられた場合の、Ａ型タンパク質供給物、
および
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、Ｂ型タンパク質供給物、または
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、合わせられた場合の、Ｂ型タンパク質供給物。
【0593】
本発明について、以上で、特定の実施形態を参照して記載してきた。しかしながら、上記以外の他の実施形態も、発明の範囲内で同様に可能である。発明の様々な実施形態および態様の異なる特徴およびステップは、特に明記されない限り、本明細書で記載されるもの以外の様式で組み合わせることができる。
【0594】
実施例
実施例１：２つのＷＰＩストリームの混合に基づく結晶化
導入：
ＷＯ２０１８／１１５５２０号の方法の大規模実行の最初の試用中、頻繁な自然ＢＬＧ結晶化事象が、ホエータンパク質溶液を調製するために使用される限外濾過ユニットにおいて観察された。自然ＢＬＧ結晶化事象は、生成の中断、および、結晶化により影響されるプロセスユニットの時間のかかるクリーニングにつながった。
実施例１：２つのＷＰＩストリームの混合に基づく結晶化
導入：
ＷＯ２０１８／１１５５２０号の方法の大規模実行の最初の試用中、頻繁な自然ＢＬＧ結晶化事象が、ホエータンパク質溶液を調製するために使用される限外濾過ユニットにおいて観察された。自然ＢＬＧ結晶化事象は、生成の中断、および、結晶化により影響されるプロセスユニットの時間のかかるクリーニングにつながった。
【0595】
次いで、発明者らは、調製中の好ましくない条件下（例えば、高い局所タンパク質濃度および／または突然の冷却の発生）でＢＬＧに関して過飽和になる可能性がある単一供給物からＷＯ２０１８／１１５５２０号の過飽和タンパク質溶液を生成する代わりに、２つ（またはそれ以上）の供給物から過飽和ホエータンパク質溶液を生成することがより賢明であるという考えを有し、各々が明らかにＢＬＧに関して過飽和でない（または、限定された程度までしか過飽和でない）ものとするｐＨを有し、次いで、２つ（またはそれ以上）の供給物を混合して、ＢＬＧの過飽和に対して適切なｐＨ、すなわちｐＨ５．５に近いｐＨを得る。
【0596】
この新しいアプローチは、非常に高いタンパク質含量を有し、コントロール不良のＢＬＧ結晶化のリスクを有さない供給物を調製することを可能にする。加えて、このアプローチは、微生物の最適増殖より著しく低い温度で、供給物、その後初期タンパク質溶液を調製することを可能にし、これは、最終生成物の微生物量を許容されるレベルまで低減させるのに必要とされる熱処理が少なくなるので有利となる。発明者らはさらに、本Ａ型および／またはＢ型タンパク質供給物によりなされるｐＨ調整は、従来の食物酸または食物塩基を用いてなされる同じｐＨ変化とは対照的に、初期タンパク質溶液の導電率における非常に限られた変化のみで寄与することを見出した。これは、初期タンパク質溶液の低減された導電率は典型的にはより高いＢＬＧ結晶化収率を生じさせるので有益である。
【0597】
この新しいアプローチの実現可能性はこの実施例において証明され、この場合、第１のタンパク質供給物（バッチ１、Ａ型タンパク質供給物）は６．２のｐＨを有し、第２のタンパク質供給物（バッチ２、Ｂ型タンパク質供給物）は４．９のｐＨを有した。高いタンパク質濃度にもかかわらず、供給物のいずれも過飽和でなかった。しかしながら、２つの供給物を（ｐＨ５．５に近いｐＨを得るのに）適切な量で単純に混合することにより、過飽和タンパク質混合物が得られ、これからＢＬＧは結晶化することができた。
【0598】
プロセス：
この実施例のためのホエー原料は標準チーズ生成プロセスからのスイートホエーに由来するラクトース枯渇ＵＦリテンテートであり、ホエーは使用前にＳｙｎｄｅｒ ＦＲ膜を介して脂肪低減されていた。この原料から２バッチを生成させ、限外濾過セットアップにより、Ａｌｆａ Ｌａｖａｌ ＧＲ８２ＰＥ膜を使用して３０ミル（ｍｉｌｌ）スペーサおよび１．５－３．０バール供給圧を用いて調整した。生成物をダイアフィルトレーション媒体としてポリッシュ水を用いて脱塩し、供給物は１８パーセントＴＳ（総固体）±５パーセントの濃度を有した。ダイアフィルトレーションは少なくとも、リテンテートにおける導電率の降下が、リテンテート中のＴＳが安定であった（±０．５パーセントＴＳ）２０分期間にわたって０．０２ｍＳ／ｃｍ未満となるまで続けられた。次いで、リテンテートをおよそ２２パーセントＴＳまで濃縮した。バッチ１および２の供給物組成は表１．１および１．２において見ることができる。
この実施例のためのホエー原料は標準チーズ生成プロセスからのスイートホエーに由来するラクトース枯渇ＵＦリテンテートであり、ホエーは使用前にＳｙｎｄｅｒ ＦＲ膜を介して脂肪低減されていた。この原料から２バッチを生成させ、限外濾過セットアップにより、Ａｌｆａ Ｌａｖａｌ ＧＲ８２ＰＥ膜を使用して３０ミル（ｍｉｌｌ）スペーサおよび１．５－３．０バール供給圧を用いて調整した。生成物をダイアフィルトレーション媒体としてポリッシュ水を用いて脱塩し、供給物は１８パーセントＴＳ（総固体）±５パーセントの濃度を有した。ダイアフィルトレーションは少なくとも、リテンテートにおける導電率の降下が、リテンテート中のＴＳが安定であった（±０．５パーセントＴＳ）２０分期間にわたって０．０２ｍＳ／ｃｍ未満となるまで続けられた。次いで、リテンテートをおよそ２２パーセントＴＳまで濃縮した。バッチ１および２の供給物組成は表１．１および１．２において見ることができる。
【0599】
第１のバッチ（バッチ１）を１０～１２℃でのＵＦ処理前に食品グレードの塩酸（ＨＣｌ）を用いてｐＨ６．１にｐＨ調整した。他のバッチ（バッチ２）を１０～１２℃でのＵＦ処理前に食品グレードの塩酸（ＨＣｌ）を用いてｐＨ４．９にｐＨ調整した。
【表1】
【表2】
【0600】
ＵＦ処理後、２つのバッチの温度を１０℃に調整し、その後、バッチの一部を５つの異なる比で混ぜ合わせ、タンパク質溶液を生成させ、これにおいて、結晶化を実施した。詳細については表１．３を参照されたい。各混合物に１０℃で０．１％ｗ／ｗのシード材料を用いてシーディングし、シーディング後５℃まで冷却し、撹拌しながら一晩放置した。
【0601】
バッチ１およびバッチ２がすでに過飽和であるかどうか確認するために、２つのバッチの各々の試料を上記混合前にとり、同様にシーティングし、１０℃で一晩保存した。翌朝の顕微鏡法による目視検査により、インキュベーション後結晶は存在しなかったことが示され、よって、バッチ１およびバッチ２は過飽和でなかったと結論付けることができる。
【0602】
シード材料を、バッチ１および２のごく一部を混ぜ合わせ、５．５の最終ｐＨに到達させ、その後、少量の乾燥されたＢＬＧ結晶材料を添加することにより生成させた。次いで、シード溶液を氷上に１時間、撹拌しながら置いた。
【0603】
タンパク質溶液の試料をシーディング前および結晶化後にとり、３０００ｇで５分間遠心分離させ、上清の試料を、ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例１において記載されるようにＲＰ－ＨＰＬＣにより分析し、結晶化収率を下記式により計算した：
式において、％ＢＬＧ結晶化前は、シーディングおよび結晶化前の試料においてＨＰＬＣにより測定されたＢＬＧ濃度であり、％ＢＬＧ結晶化後は結晶化後の試料の上清においてＨＰＬＣにより測定されたＢＬＧ濃度である。
【数2】
式において、％ＢＬＧ結晶化前は、シーディングおよび結晶化前の試料においてＨＰＬＣにより測定されたＢＬＧ濃度であり、％ＢＬＧ結晶化後は結晶化後の試料の上清においてＨＰＬＣにより測定されたＢＬＧ濃度である。
【0604】
結果：
下記表からわかるように、ホエータンパク質供給物をＢＬＧに関して低い過飽和度を有する（またはさらには過飽和でない）ｐＨ領域で調整することが可能であり、よって、ＵＦプラントでの自然結晶化のリスクが低下し、自然ＢＬＧ結晶化なしで使用することができる最大タンパク質濃度が増加される。その後、２つの供給物を混合し、高いＢＬＧ過飽和度を有する初期タンパク質溶液を提供した。
下記表からわかるように、ホエータンパク質供給物をＢＬＧに関して低い過飽和度を有する（またはさらには過飽和でない）ｐＨ領域で調整することが可能であり、よって、ＵＦプラントでの自然結晶化のリスクが低下し、自然ＢＬＧ結晶化なしで使用することができる最大タンパク質濃度が増加される。その後、２つの供給物を混合し、高いＢＬＧ過飽和度を有する初期タンパク質溶液を提供した。
【表3】
【0605】
実施例２：市販のＷＰＩを使用した、２つのＷＰＩストリームの混合に基づく結晶化
この実施例のためのホエー材料は市販のＬａｃｐｒｏｄａｎ ＤＩ－９２１３および別の自作のｐＨ６．２ ＷＰＩであった。
この実施例のためのホエー材料は市販のＬａｃｐｒｏｄａｎ ＤＩ－９２１３および別の自作のｐＨ６．２ ＷＰＩであった。
【0606】
ｐＨ６．２ ＷＰＩを標準チーズ生成プロセスからのスイートホエーに由来するラクトース枯渇ＵＦリテンテートから作製し、ホエーをＳｙｎｄｅｒ ＦＲ膜を介して使用前に脂肪低減させた。原料を、食品グレード塩酸を用いて１０～１２℃でのＵＦ処理前にｐＨ６．２にｐＨ調整した。この原料からバッチを生成させ、限外濾過セットアップにより、Ａｌｆａ Ｌａｖａｌ ＧＲ８２ＰＥ膜を使用して３０ミルスペーサおよび１．５－３．０バール供給圧を用いて調整した。生成物をダイアフィルトレーション媒体としてポリッシュ水を用いて脱塩し、供給物は１８パーセントＴＳ±５パーセントの濃度を有した。ダイアフィルトレーションは少なくとも、リテンテートにおける導電率の降下が、リテンテート中のＴＳが安定であった（±０．５パーセントＴＳ）２０分期間にわたって０．０２ｍＳ／ｃｍ未満となるまで続けられた。次いで、リテンテートをおよそ２２パーセントＴＳまで濃縮し、バッチ１および２の供給物組成は表２．１および２．２において見ることができる。
【0607】
バッチ２を粉末形態のＬａｃｐｒｏｄａｎ ＤＩ－９２１３から作製した。粉末を１６．３のＴＳまでそれを再水和させ、１０℃で全ての粉末が溶解されるまで撹拌しながらそれを放置することにより調整した。
【表4】
【表5】
【0608】
コンディショニング後、実施例１におけるように（２つの溶液のみを作製したことを除き）２つのバッチを処理し、分析した。
【0609】
混合物の特性は表２．３において見ることができる。
【0610】
結果：
下記表からわかるように、ホエータンパク質供給物をＢＬＧに関して過飽和でないｐＨ領域で調整することが可能であり、よって、自然結晶化のリスクが低下し、ＵＦプラントでの結晶化のリスクなしで可能なレベルタンパク質濃度が増加し、次いで、その後、２つが混ぜ合わせられ、高い過飽和度が得られる。予想通りに、より高い導電率は収率に影響することがわかる。
下記表からわかるように、ホエータンパク質供給物をＢＬＧに関して過飽和でないｐＨ領域で調整することが可能であり、よって、自然結晶化のリスクが低下し、ＵＦプラントでの結晶化のリスクなしで可能なレベルタンパク質濃度が増加し、次いで、その後、２つが混ぜ合わせられ、高い過飽和度が得られる。予想通りに、より高い導電率は収率に影響することがわかる。
【表6】
【0611】
実施例３：２つのＷＰＩストリーム、ｐＨ４．０および６．１の混合に基づく結晶化
この実施例のためのホエー原料は、標準チーズ生成プロセスからのスイートホエーに由来するラクトース枯渇ＵＦリテンテートであり、ホエーをＳｙｎｄｅｒ ＦＲ膜を介して使用前に脂肪低減させた。この原料から２バッチを生成させ、限外濾過セットアップにより、Ａｌｆａ Ｌａｖａｌ ＧＲ８２ＰＥ膜を使用して３０ミルスペーサおよび１．５－３．０バール供給圧を用いて調整した。生成物をダイアフィルトレーション媒体としてポリッシュ水を用いて脱塩し、供給物は１８パーセントＴＳ±５パーセントの濃度を有した。ダイアフィルトレーションを、少なくとも、リテンテートにおける導電率の降下が、リテンテート中のＴＳが安定であった（±０．５パーセントＴＳ）、２０分期間にわたって０．０２ｍＳ／ｃｍ未満となるまで続けた。次いで、リテンテートをおよそ２２パーセントＴＳまで濃縮し、バッチ１および２の供給物組成は表３．１および３．２において見ることができる。
この実施例のためのホエー原料は、標準チーズ生成プロセスからのスイートホエーに由来するラクトース枯渇ＵＦリテンテートであり、ホエーをＳｙｎｄｅｒ ＦＲ膜を介して使用前に脂肪低減させた。この原料から２バッチを生成させ、限外濾過セットアップにより、Ａｌｆａ Ｌａｖａｌ ＧＲ８２ＰＥ膜を使用して３０ミルスペーサおよび１．５－３．０バール供給圧を用いて調整した。生成物をダイアフィルトレーション媒体としてポリッシュ水を用いて脱塩し、供給物は１８パーセントＴＳ±５パーセントの濃度を有した。ダイアフィルトレーションを、少なくとも、リテンテートにおける導電率の降下が、リテンテート中のＴＳが安定であった（±０．５パーセントＴＳ）、２０分期間にわたって０．０２ｍＳ／ｃｍ未満となるまで続けた。次いで、リテンテートをおよそ２２パーセントＴＳまで濃縮し、バッチ１および２の供給物組成は表３．１および３．２において見ることができる。
【0612】
１つのバッチ（バッチ１）を食品グレードの塩酸（ＨＣｌ）を用いて、１０～１２℃でのＵＦ処理前にｐＨ６．１にｐＨ調整した。他のバッチ（バッチ２）を食品グレードの塩酸（ＨＣｌ）を用いて、１０～１２℃でのＵＦ処理前にｐＨ４．０にｐＨ調整した。
【表7】
【表8】
【0613】
コンディショニング後、ＷＯ２０１８／１１５５２０号の実施例１におけるように、（４つの溶液のみを作製したこと除き）、２つのバッチを処理し、分析した。
【0614】
混合物の特性は表３．３において見ることができる。
【0615】
結果：
下記表からわかるように、ホエータンパク質供給物を、ＢＬＧに関して低い過飽和度を有する領域で調整することが可能であり、よって、自然結晶化のリスクが低下し、ＵＦプラントでの結晶化のリスクなしで可能なレベルタンパク質濃度が増加し、次いで、その後、２つが混ぜ合わせられ、高い過飽和度が得られる。
下記表からわかるように、ホエータンパク質供給物を、ＢＬＧに関して低い過飽和度を有する領域で調整することが可能であり、よって、自然結晶化のリスクが低下し、ＵＦプラントでの結晶化のリスクなしで可能なレベルタンパク質濃度が増加し、次いで、その後、２つが混ぜ合わせられ、高い過飽和度が得られる。
【表9】
【0616】
実施例４：結晶サイズ分布
この実施例のためのホエー原料は標準チーズ生成プロセスからのスイートホエーに由来するラクトース枯渇ＵＦリテンテートであり、ホエーをＳｙｎｄｅｒ ＦＲ膜を介して使用前に脂肪低減させた。この原料から、各結晶化のための２つのバッチを生成させ、限外濾過セットアップにより、Ａｌｆａ Ｌａｖａｌ ＧＲ８２ＰＥ膜を使用して３０ミルスペーサおよび１．５－３．０バール供給圧を用いて調整した。生成物をダイアフィルトレーション媒体としてポリッシュ水を用いて脱塩し、供給物は１８パーセントＴＳ±５パーセントの濃度を有した。ダイアフィルトレーションを、少なくとも、リテンテートにおける導電率の降下が、リテンテート中のＴＳが安定であった（±０．５パーセントＴＳ）、２０分期間にわたって０．０２ｍＳ／ｃｍ未満となるまで続けた。次いで、リテンテートをおよそ２２パーセントＴＳまで濃縮し、バッチ１および２の供給物組成は下記表において見ることができる。
この実施例のためのホエー原料は標準チーズ生成プロセスからのスイートホエーに由来するラクトース枯渇ＵＦリテンテートであり、ホエーをＳｙｎｄｅｒ ＦＲ膜を介して使用前に脂肪低減させた。この原料から、各結晶化のための２つのバッチを生成させ、限外濾過セットアップにより、Ａｌｆａ Ｌａｖａｌ ＧＲ８２ＰＥ膜を使用して３０ミルスペーサおよび１．５－３．０バール供給圧を用いて調整した。生成物をダイアフィルトレーション媒体としてポリッシュ水を用いて脱塩し、供給物は１８パーセントＴＳ±５パーセントの濃度を有した。ダイアフィルトレーションを、少なくとも、リテンテートにおける導電率の降下が、リテンテート中のＴＳが安定であった（±０．５パーセントＴＳ）、２０分期間にわたって０．０２ｍＳ／ｃｍ未満となるまで続けた。次いで、リテンテートをおよそ２２パーセントＴＳまで濃縮し、バッチ１および２の供給物組成は下記表において見ることができる。
【0617】
１つのバッチ（バッチ１）を、食品グレードの塩酸（ＨＣｌ）を用いて１０～１２℃でのＵＦ処理前に、ｐＨおよそ６．１にｐＨ調整した。他のバッチ（バッチ２）を食品グレードの塩酸（ＨＣｌ）を用いて、１０～１２℃でのＵＦ処理前にｐＨ４．８にｐＨ調整した。
【0618】
結晶化を３００Ｌ結晶化タンクにおいて実施し、０．１％ｗ／ｗシード材料を使用した。シード材料は実施例１におけるように生成させた。
【0619】
第１の結晶化
コンディショニング後、２つのバッチを混ぜ合わせ、５．５０の最終ｐＨを得、混合物にシーディングし、直ちに５℃まで冷却し、一晩放置し、結晶化させた。スラリーの試料を実施例１において記載されるように分析し、収率を計算した。結晶スラリーの粒径分布をＭａｌｖｅｒｎ粒径キャラクタリゼーションにより分析した。
【表10】
【表11】
コンディショニング後、２つのバッチを混ぜ合わせ、５．５０の最終ｐＨを得、混合物にシーディングし、直ちに５℃まで冷却し、一晩放置し、結晶化させた。スラリーの試料を実施例１において記載されるように分析し、収率を計算した。結晶スラリーの粒径分布をＭａｌｖｅｒｎ粒径キャラクタリゼーションにより分析した。
【0620】
第２の結晶化
コンディショニング後２つのバッチを混ぜ合わせ、５．４５の最終ｐＨを得、混合物にシーディングし、直ちに５℃まで冷却し、一晩放置し、結晶化させた。スラリーの試料を実施例１において記載されるように分析し、収率を計算した。結晶スラリーの粒径分布をＭａｌｖｅｒｎ粒径キャラクタリゼーションにより分析した。
【表12】
【表13】
コンディショニング後２つのバッチを混ぜ合わせ、５．４５の最終ｐＨを得、混合物にシーディングし、直ちに５℃まで冷却し、一晩放置し、結晶化させた。スラリーの試料を実施例１において記載されるように分析し、収率を計算した。結晶スラリーの粒径分布をＭａｌｖｅｒｎ粒径キャラクタリゼーションにより分析した。
【0621】
第３の結晶化：
コンディショニング後、２つのバッチを混ぜ合わせ、５．８０のｐＨを得、混合物にシーディングし、１時間インキュベートし、その後、２時間にわたるバッチ２のさらなる添加により、５．４５の最終ｐＨに調整し、次いで、直ちに、５℃まで冷却し、一晩放置し、結晶化させた。スラリーの試料を実施例１において記載されるように分析し、収率を計算した。結晶スラリーの粒径分布をＭａｌｖｅｒｎ粒径キャラクタリゼーションにより分析した。
【表14】
【表15】
コンディショニング後、２つのバッチを混ぜ合わせ、５．８０のｐＨを得、混合物にシーディングし、１時間インキュベートし、その後、２時間にわたるバッチ２のさらなる添加により、５．４５の最終ｐＨに調整し、次いで、直ちに、５℃まで冷却し、一晩放置し、結晶化させた。スラリーの試料を実施例１において記載されるように分析し、収率を計算した。結晶スラリーの粒径分布をＭａｌｖｅｒｎ粒径キャラクタリゼーションにより分析した。
【0622】
結果：
表４．７において、結晶化の結果が示され、見てわかるように、異なる原料を使用し、結晶化プロセスが異なっていたとしても、結晶サイズ分布は同様であった。
表４．７において、結晶化の結果が示され、見てわかるように、異なる原料を使用し、結晶化プロセスが異なっていたとしても、結晶サイズ分布は同様であった。
【表16】
【図1】
【図2】
【手続補正書】
【提出日】2023-04-13
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
好ましくは結晶化および／または単離形態でのβラクトグロブリン（ＢＬＧ）を含む可食組成物を調製する方法であって、ａ）ＢＬＧを含む初期タンパク質溶液を調製するステップであって、前記初期タンパク質溶液はＢＬＧに関して過飽和であり、５－６の範囲のｐＨを有し、前記初期タンパク質溶液は、
前記初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗの範囲の６．０－８のｐＨを有するＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
前記初期タンパク質溶液の重量に対して５－９０％ｗ／ｗの範囲の３－５．０のｐＨを有するＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量
を含む、ステップ、
ｂ）前記過飽和、初期タンパク質溶液中、好ましくは塩溶モードでＢＬＧを結晶化させ、よって、ＢＬＧ結晶含有溶液を得るステップ、ならびに
ｃ）任意で、前記ＢＬＧ結晶含有溶液の残りの液体からＢＬＧ結晶を分離するステップ
を含み、
ステップａ）は、１つ以上のＡ型タンパク質供給物（複数可）を１つ以上のＢ型タンパク質供給物（複数可）と混合することにより、前記初期タンパク質溶液を調製することを含み、
－「Ａ型タンパク質供給物」は、ＢＬＧを含み、少なくとも５．６のｐＨを有するタンパク質供給物として規定され、ならびに、
－「Ｂ型タンパク質供給物」は、ＢＬＧを含み、最大でも５．４のｐＨを有するタンパク質供給物として規定される、方法。
【請求項2】
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
少なくとも５．６、より好ましくは少なくとも５．７、さらにいっそう好ましくは少なくとも５．８、最も好ましくは少なくとも５．９のｐＨ、ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、請求項１に記載の方法：
最大でも５．４、より好ましくは最大でも５．３、さらにいっそう好ましくは、５．２、最も好ましくは５．１のｐＨ。
【請求項3】
－Ａ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有し：
少なくとも６．０、より好ましくは少なくとも６．１、さらにいっそう好ましくは少なくとも６．２、最も好ましくは少なくとも６．３のｐＨ、ならびに
－Ｂ型タンパク質供給物との関連で：
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、前記請求項のいずれかに記載の方法：
最大でも５．０、より好ましくは最大でも４．９、さらにいっそう好ましくは４．８、最も好ましくは４．７のｐＨ。
【請求項4】
Ａ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、前記請求項のいずれかに記載の方法：
５．６－１０、より好ましくは５．８－８、さらにいっそう好ましくは、６．０－７、最も好ましくは６．１－６．５の範囲のｐＨ。
【請求項5】
Ａ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、前記請求項のいずれかに記載の方法：
６．０－８、より好ましくは６．１－７．５、さらにいっそう好ましくは、６．２－７．０、最も好ましくは６．２－６．５の範囲のｐＨ。
【請求項6】
Ｂ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、前記請求項のいずれかに記載の方法：
２－５．４、より好ましくは３－５．２、さらにいっそう好ましくは、４－５．０、最も好ましくは４．５－４．９の範囲のｐＨ。
【請求項7】
Ｂ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、前記請求項のいずれかに記載の方法：
４．０－５．０、より好ましくは４．１－４．９、さらにいっそう好ましくは、４．３－４．８、最も好ましくは４．５－４．８の範囲のｐＨ。
【請求項8】
前記１つ以上のＡ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧ結晶を含まず、より好ましくは前記１つ以上のＡ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧ結晶を含まず、および／または前記１つ以上のＢ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧ結晶を含まず、より好ましくは前記１つ以上のＢ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧ結晶を含まない、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項9】
前記１つ以上のＡ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧに関して過飽和ではなく、より好ましくは前記１つ以上のＡ型タンパク質供給物のいずれもＢＬＧに関して過飽和でなく、および／または前記１つ以上のＢ型タンパク質供給物の少なくとも１つはＢＬＧに関して過飽和ではなく、より好ましくは前記１つ以上の型のいずれもＢＬＧに関して過飽和でない、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項10】
ＢＬＧ結晶を含まないＡ型およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、前記初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の少なくとも１％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも１０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも２０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも４０％ｗ／ｗで寄与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項11】
ＢＬＧ結晶を含まないＡ型およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、前記初期タンパク質溶液のＢＬＧ含量の少なくとも５０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも７０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９０％ｗ／ｗで寄与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項12】
Ａ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、前記請求項のいずれかに記載の方法：
最大でも６０℃、より好ましくは最大でも５０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも４０℃、最も好ましくは最大でも３０℃の温度。
【請求項13】
Ｂ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を有し、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を有する、前記請求項のいずれかに記載の方法：
最大でも６０℃、より好ましくは最大でも５０℃、さらにいっそう好ましくは最大でも４０℃、最も好ましくは最大でも３０℃の温度。
【請求項14】
Ａ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む、前記請求項のいずれかに記載の方法：
Ａ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも１％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは少なくとも３％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくはＡ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも７％ｗ／ｗのＢＬＧ。
【請求項15】
Ｂ型タンパク質供給物との関連で：－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、それが下記を含み、または、
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、それらが、混合された場合、下記を含む前記請求項のいずれかに記載の方法：
Ｂ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも１％ｗ／ｗのＢＬＧ、より好ましくは少なくとも３％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも５％ｗ／ｗ、最も好ましくはＢ型タンパク質供給物の総重量に対して少なくとも７％ｗ／ｗのＢＬＧ。
【請求項16】
前記初期タンパク質溶液は下記を含む、前記請求項のいずれかに記載の方法：－前記初期タンパク質溶液の重量に対して１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の６．０－８のｐＨを有するＡ型タンパク質供給物（複数可）の総量、および
－前記初期タンパク質溶液の重量に対して１０－８０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは２０－７０％ｗ／ｗ、最も好ましくは３０－６０％ｗ／ｗの範囲の３－５．０のｐＨを有するＢ型タンパク質供給物（複数可）の総量。
【請求項17】
Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、前記初期タンパク質溶液のタンパク質含量の少なくとも５０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも７０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９０％ｗ／ｗで寄与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項18】
Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、前記初期タンパク質溶液のタンパク質含量の少なくとも９２％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも９４％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも９６％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９９％ｗ／ｗで寄与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項19】
Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、前記初期タンパク質溶液の固体含量の少なくとも５０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも７０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９０％ｗ／ｗで寄与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項20】
Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、前記初期タンパク質溶液の固体含量の少なくとも９２％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも９４％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも９６％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９９％ｗ／ｗで寄与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項21】
Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、前記初期タンパク質溶液の重量の少なくとも５０％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも７０％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも８０％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９０％ｗ／ｗで寄与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項22】
Ａ型タンパク質供給物（複数可）およびＢ型タンパク質供給物（複数可）は、前記初期タンパク質溶液の重量の少なくとも９２％ｗ／ｗ、より好ましくは少なくとも９４％ｗ／ｗ、さらにいっそう好ましくは少なくとも９６％ｗ／ｗ、最も好ましくは少なくとも９９％ｗ／ｗで寄与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項23】
前記初期タンパク質溶液のＢＬＧの過飽和度は下記の過飽和度の両方より高い、前記請求項のいずれかに記載の方法：－単一Ａ型タンパク質供給物のみが使用される場合、Ａ型タンパク質供給物、または
－２つ以上のＡ型タンパク質供給物が使用される場合、合わせられた場合の、Ａ型タンパク質供給物、
および
－単一Ｂ型タンパク質供給物のみが使用される場合、Ｂ型タンパク質供給物、または
－２つ以上のＢ型タンパク質供給物が使用される場合、合わせられた場合の、Ｂ型タンパク質供給物。
【国際調査報告】