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▶ ウーハン イナース ファーマシューティカル インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-03-01
(54)【発明の名称】一類の多機能ポリペプチドと医療への応用
(51)【国際特許分類】
C07K 7/06 20060101AFI20240222BHJP
C07K 5/00 20060101ALI20240222BHJP
C07K 7/00 20060101ALI20240222BHJP
C07K 5/023 20060101ALI20240222BHJP
A61K 38/07 20060101ALI20240222BHJP
A61K 38/08 20190101ALI20240222BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240222BHJP
A61P 25/16 20060101ALI20240222BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20240222BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20240222BHJP
【ＦＩ】
C07K7/06
C07K5/00 ZNA
C07K7/00
C07K5/023
A61K38/07
A61K38/08
A61P25/00
A61P25/16
A61P25/28
A61P9/10
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023555749
(86)(22)【出願日】2022-03-11
(85)【翻訳文提出日】2023-09-20
(86)【国際出願番号】 CN2022080446
(87)【国際公開番号】W WO2022188878
(87)【国際公開日】2022-09-15
(31)【優先権主張番号】202110266153.0
(32)【優先日】2021-03-11
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】523346733
【氏名又は名称】ウーハン イナース ファーマシューティカル インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】Ｗｕｈａｎ Ｉｎｎｅｒｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｃ．
(74)【代理人】
【識別番号】100147485
【弁理士】
【氏名又は名称】杉村 憲司
(74)【代理人】
【識別番号】230118913
【弁護士】
【氏名又は名称】杉村 光嗣
(74)【代理人】
【識別番号】100163511
【弁理士】
【氏名又は名称】辻 啓太
(72)【発明者】
【氏名】李 健雄
【テーマコード（参考）】
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C084AA02
4C084AA07
4C084BA01
4C084BA10
4C084BA14
4C084BA15
4C084BA16
4C084BA17
4C084BA23
4C084CA59
4C084MA13
4C084MA52
4C084MA57
4C084MA60
4C084MA66
4C084NA14
4C084ZA021
4C084ZA161
4C084ZA221
4C084ZA361
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA11
4H045BA12
4H045BA13
4H045BA14
4H045BA15
4H045CA40
4H045EA20
4H045FA33
4H045FA61
4H045GA25
(57)【要約】
本発明は、Pro－Ala－Lys、Ala－Lys－Pro、Lys－Ala－Proのうちの少なくとも１つと、それらのフラグメント及び誘導ペプチドのうちの一種又は複数種とからなり、かつＣ側及び／又はＮ側にカルノシン、アンセリン又はオフィジンを有する、多機能ポリペプチドを提供する。当該ポリペプチドは、血栓溶解作用を有するオリゴペプチドと、ヒスチジン、１-メチルヒスチジン、３-メチルヒスチジンから構成されるカルノシン、アンセリン又はオフィジンなどとが連結して構成され、血液脳関門を通りやすく、静脈内で投与され、神経疾患、特に脳損傷や脳卒中の治療に適用される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
Pro－Ala－Lys、Ala－Lys－Pro、Lys－Ala－Proのうちの少なくとも１つと、それらのフラグメント及び誘導ペプチドのうちの一種又は複数種とからなり、かつＣ側及び／又はＮ側にカルノシン、アンセリン又はオフィジンを有する一類の多機能ポリペプチドであって、前記フラグメントがPro－Ala、Ala－Lys、Lys－Pro、Lys－Ala、Ala－Pro、Pro、Ala又はLysから選べられ、
前記誘導ペプチドがAla－Arg－Pro－Ala－Lys、Arg－Pro－Ala－Lys、Ala－Arg－Ala－Lys－Pro、Ala－Arg－Lys－Ala－Pro、Arg－Ala－Lys－Pro、Arg－Lys－Ala－Pro、Gly－Arg－Pro－Ala－Lys、Gly－Arg－Ala－Lys－Pro、Gly－Arg－Lys－Ala－Pro、Gln－Arg－Pro－Ala－Lys、Gln－Arg－Ala－Lys－Pro又はGln－Arg－Lys－Ala－Proから選べられる、一類の多機能ポリペプチド。
【請求項2】
Pro－Ala－Lys、Ala－Lys－Pro、Lys－Ala－Proと、そのジペプチドフラグメントのうちの一種又は複数種とからなり、かつＣ側及び／又はＮ側にカルノシン、アンセリン又はオフィジンを有し、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro、
Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala、
β-Ala-His-Ala-Lys、
β-Ala-His-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala、
β-Ala-His-Ala-Pro、
Pro-Ala-β-Ala-His、
Ala-Lys-β-Ala-His、
Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-β-Ala-His、
Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala、
β-Ala-His-Pro-Ala-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Ala、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro-Ala、
β-Ala-His-Pro-Ala-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Ala、
β-Ala-His-Lys-Ala-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Pro、
β-Ala-His-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala、
β-Ala-His-Lys-Ala-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Pro、
β-Ala-His-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro、
Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-β-Ala-His、
Pro-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-β-Ala-His、
Pro-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-β-Ala-His、
Lys-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Ala-Pro-β-Ala-His、
Ala-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Ala-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-β-Ala-His、
Lys-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Ala-Pro-β-Ala-His、
Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-Hisを含み、
ここで、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである、請求項１に記載の多機能ポリペプチド。
【請求項3】
Pro-Ala-Lys、Ala-Lys-Pro、Lys-Ala-Proのうちの二つからなるヘキサペプチドであって、かつＣ側及び／又はＮ側にカルノシン、アンセリン又はオフィジンを有し、Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-Hisを含み、
ここで、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである、請求項１に記載の多機能ポリペプチド。
【請求項4】
（Pro-Ala-Lys）n、（Ala-Lys-Pro）n又は（Lys-Ala-Pro）nからなり、かつＣ側及び／又はＮ側にカルノシン、アンセリン又はオフィジンを有し、ｎが２～６の整数であり、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys、
Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro、
Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro、
Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-Hisを含み、
ここで、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである、請求項１に記載の多機能ポリペプチド。
【請求項5】
Pro-Ala-Lys、Ala-Lys-Pro又はLys-Ala-Proの誘導ペプチドからなり、かつＣ側及び／又はＮ側にカルノシン、アンセリン又はオフィジンを有し、Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Ala-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Ala-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Gly-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Gly-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Gln-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Gln-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Arg-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Ala-Arg-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Ala-Arg-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Arg-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Arg-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Gln-Arg-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Gly-Arg-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Gly-Arg-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Gln-Arg-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Gln-Arg-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Gly-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Gly-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Gln-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Gln-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-Hisを含み、
ここで、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである、請求項１に記載の多機能ポリペプチド。
【請求項6】
Pro-Ala-Lys、Ala-Lys-Pro又はLys-Ala-Proと、アミノ酸Pro、Ala又はLysとからなり、かつＣ側及び／又はＮ側にカルノシン、アンセリン又はオフィジンを有し、β-Ala-His-Pro-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Ala-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala、
β-Ala-His-Lys-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro、
β-Ala-His-Ala-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala、
β-Ala-His-Lys-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys、
β-Ala-His-Pro-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro、
β-Ala-His-Ala-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala、
β-Ala-His-Lys-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys、
Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Ala-β-Ala-His、
Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Lys-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Pro-β-Ala-His、
Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Ala-β-Ala-His、
Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Lys-β-Ala-His、
Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Pro-β-Ala-His、
Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Ala-β-Ala-His、
Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-β-Ala-Hisを含み、
ここで、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである、請求項１に記載の多機能ポリペプチド。
【請求項7】
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Arg-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Arg-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Arg-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Pro-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Ala-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala、
β-Ala-His-Lys-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro、
β-Ala-His-Ala-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala、
β-Ala-His-Lys-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys、
β-Ala-His-Pro-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro、
β-Ala-His-Ala-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala、
β-Ala-His-Lys-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys、
β-Ala-His-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Ala-Arg-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Ala-Arg-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Gln-Arg-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Gly-Arg-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Gly-Arg-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Gln-Arg-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Gln-Arg-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala、
β-Ala-His-Pro-Ala-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Ala、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro-Ala、
β-Ala-His-Pro-Ala-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Ala、
β-Ala-His-Lys-Ala-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Pro、
β-Ala-His-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala、
β-Ala-His-Lys-Ala-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Pro、
β-Ala-His-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His- Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His- Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His- Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro、
Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Arg-Pro-Ala-Ly-β-Ala-His、
Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Ala-β-Ala-His、
Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Lys-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Pro-β-Ala-His、
Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Ala-β-Ala-His、
Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Lys-β-Ala-His、
Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Pro-β-Ala-His、
Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Ala-β-Ala-His、
Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Lys-β-Ala-His、
Ala-Arg-Pro-Ala-Ly-β-Ala-His、
Ala-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Ala-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Gln-Arg-Pro-Ala-Ly-β-Ala-His、
Gly-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Gly-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Gln-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Gln-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-β-Ala-His、
Pro-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-β-Ala-His、
Pro-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-β-Ala-His、
Lys-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Ala-Pro-β-Ala-His、
Ala-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Ala-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-β-Ala-His、
Lys-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Ala-Pro-β-Ala-His、
Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Arg-Pro-Ala-Ly-β-Ala-His、
β-Ala-His-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Gly-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Gly-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Gln-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Gln-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-Hisを含む、請求項１に記載の多機能ポリペプチド。
【請求項8】
Pro-Ala-Lys、Ala-Lys-Pro、Lys-Ala-Proのうちの一種からなり、かつＣ側及び／又はＮ側にカルノシン、アンセリン又はオフィジンを連結して形成しているものであり、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro、
Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-β-Ala-Hisを含み、
ここで、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである、請求項１に記載の多機能ポリペプチド。
【請求項9】
Pro-Ala-LysがそのＣ側及び／又はＮ側に一つのカルノシン、アンセリン又はオフィジンと連結して形成されるものであって、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys、
Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-β-Ala-Hisを含み、
ここで、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである、請求項１に記載の多機能ポリペプチド。
【請求項10】
Ala-Lys-ProがそのＣ側及び／又はＮ側に一つのカルノシン、アンセリン又はオフィジンと連結して形成されるものであり、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro、
Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-β-Ala-Hisを含み、
ここで、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである、請求項１に記載の多機能ポリペプチド。
【請求項11】
Lys-Ala-ProがそのＣ側及び／又はＮ側に一つのカルノシン、アンセリン又はオフィジンと連結して形成されるものであり、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro、
Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-β-Ala-Hisを含み、
ここで、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである、請求項１に記載の多機能ポリペプチド。
【請求項12】
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro、Pro-Ala-Lys-β-Ala-Hisを含む、請求項１に記載の多機能ポリペプチド。
【請求項13】
請求項１～１２のいずれか１項に記載の多機能ポリペプチド又はその塩の医薬品における使用。
【請求項14】
請求項１～１２のいずれか１項に記載の多機能ポリペプチド又はその塩を含む薬物であって、前記薬物は注射剤、経口剤、舌下投与用剤、噴霧剤または肛門投与用剤である、薬物。
【請求項15】
虚血性脳卒中、出血性脳卒中、脳損傷、アルツハイマー病、パーキンソン病またはその他の神経変性疾患の治療のために用いられる、請求項１～１２のいずれか１項に記載の多機能ポリペプチド又はその塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、製薬技術分野に属し、一類の多機能ポリペプチドと医療への応用に関する。
【背景技術】
【0002】
世界中で、血栓性疾患の罹患率と死亡率はもっとも高い。脳血管の血栓症は、脳梗塞を引き起こし、臨床的には虚血性脳卒中又は脳卒中として知られている。脳卒中は多数の身体障害をもたらし，人々の日常生活の質に深刻な影響を与える。そのため、この分野の安全で効果的な薬剤の開発が急務となっている。脳梗塞の治療で直面する問題は複雑で、まず既存の血栓溶解薬が血液脳関門を突破できないということが挙げられる。血液脳関門を突破して血栓溶解が成功しても、この虚血再灌流の過程で大量の遊離ラジカルが産生され、脳組織に損傷を与えて死につながる。したがって、今日に至るまで、脳卒中の治療法はいまだにｔＰＡであるが、ｔＰＡの効果も限られており、患者が発病してから３時間以内にしか効かない。全身性の出血を招き、患者に被害を及ぼす可能性がある。また、ｔＰＡは虚血再灌流過程による脳組織への損傷には効かない。
【0003】
カルノシン（Ｌ－Ｃａｒｎｏｓｉｎｅ）は、β-アラニンとＬ-ヒスチジンという二種類のアミノ酸からなるジペプチドである。カルノシンは優れた抗酸化力を持ち、人体に役立つ。カルノシンは、酸化ストレスのもとで、細胞膜の脂肪酸が過酸化されてできる活性酸素ラジカル（ＲＯＳ）やα-β-不飽和アルデヒドを取り除く働きがあることが示されている。カルノシンは、抗炎症、抗糖化、抗酸化及びキレート作用があることから、非処方食品補充剤として、心血管疾患や神経変性疾患などの慢性疾患の予防や補助療法において有望である。動物実験では、カルノシンの神経保護機構が恒常的な脳虚血を防ぐことが確認されている。カルノシンの補給は、アルツハイマー病やパーキンソン病などの、老齢化によって引き起こされる一部の神経疾患の改善に貢献すると考えられている。カルノシンは非常に重要な細胞内抗酸化物質でもある。カルノシンは無毒性であるだけでなく、強力な抗酸化作用を有するため、これまでにない食品添加物や薬剤として広く注目されるようになっている。カルノシンは細胞内の過酸化反応に関わり、細胞膜の過酸化プロセスを抑えるだけでなく、細胞内の関連する過酸化反応も阻害できる。医学的には、カルノシンはアルツハイマー病を予防し、神経変性や脳変性も予防することができる。１９００年、ロシア学者であるＧｕｌｅｗｉｔｓｃｈがはじめてカルノシンを発見し、それから世界中の学者たちが異なる筋肉組織から他のヒスチジンジペプチド誘導体も抽出し、単離した。例えば、アンセリン（Ａｎｓｅｒｉｎｅ）は、β-アラニンと１-メチル-Ｌ-ヒスチジンという二種類のアミノ酸から構成されるジペプチドであり、また、バレニンかオフィジン（Ｂａｌｅｎｉｎｅ、Ｏｐｈｉｄｉｎｅとも呼ばれる）は、β-アラニンと３-メチル-Ｌ-ヒスチジンから構成されるジペプチドである。動物によってこれらカルノシンやカルノシン誘導体の含有量は異なり、種によってもこれらヒスチジンジペプチドの含有量や割合が異なり、ある程度の特異性がある。筋肉組織にヒスチジジペプチドが存在することに加えて、これらのジペプチドは脳組織などのほかの組織にも存在する。これらカルノシン誘導体は強い水溶性かつ顕著な抗酸化、抗老化、尿酸降下などの作用があり、食品産業において天然の抗酸化剤や尿酸降下治療薬として用いられてきただけでなく、ある程度の神経保護作用も持っている。
【0004】
カルノシンもカルノシン誘導体も顕著な神経保護作用を有するが、多量投与が必要で副作用が生じやすく、しかも血栓溶解作用がないため、臨床での実用化には限界がある。血栓溶解活性をもつペプチド自体は血栓溶解作用を有するが、神経細胞を保護したりその損傷を修復したりすることができない。
【発明の概要】
【0005】
本発明は、一類の多機能ポリペプチドとその医療への応用を提供するもので、血栓溶解作用を有するオリゴペプチドと、ヒスチジン、１-メチルヒスチジン、３-メチルヒスチジンから構成されるカルノシン、アンセリン（Ａｎｓｅｒｉｎｅ）又はオフィジンなどとが連結して構成され、カルノシン、アンセリン又はオフィジンによる保護機能と、血栓溶解作用を有するオリゴペプチドによる血栓溶解機能を兼備する一連のポリペプチド化合物を形成するものである。これらのペプチド類は思いがけず血液脳関門を通りやすく、静脈内投与で優れた生物学的活性を示すため、神経疾患、特に脳損傷や脳卒中の治療に大きな期待が寄せられている。上記の技術案は以下の通りである。
【0006】
一態様において、本発明の実施例は一類の多機能ポリペプチドを提供し、それは、Pro－Ala－Lys、Ala－Lys－Pro、Lys－Ala－Proのうちの少なくとも１つと、それらのフラグメント及び誘導ペプチドのうちの一種又は複数種とからなり、かつＣ側及び／又はＮ側にカルノシン、アンセリン又はオフィジンを有する。フラグメントがPro－Ala、Ala－Lys、Lys－Pro、Lys－Ala、Ala－Pro、Pro、Ala又はLysから選べられ、誘導ペプチドがAla－Arg－Pro－Ala－Lys、Arg－Pro－Ala－Lys、Ala－Arg－Ala－Lys－Pro、Ala－Arg－Lys－Ala－Pro、Arg－Ala－Lys－Pro、Arg－Lys-Ala－Pro、Gly－Arg－Pro－Ala－Lys、Gly－Arg－Ala－Lys－Pro、Gly－Arg－Lys－Ala－Pro、Gln－Arg－Pro－Ala－Lys、Gln－Arg－Ala－Lys－Pro又はGln－Arg－Lys－Ala－Proから選べられる。その中、誘導ペプチドのうちのAla－Arg－Pro－Ala－Lys及びArg－Pro－Ala－Lysは、溶血活性オリゴペプチドのフィブリンのβ鎖の分解産物又は代謝産物である（p6A）。
【0007】
具体的には、本発明に係る多機能ポリペプチドは、Pro－Ala－Lys、Ala－Lys－Pro、Lys－Ala－Proと、ジペプチドフラグメントのうちの一種又は複数種とからなり（ジペプチド、トリペプチド、又はペンタペプチドなどを形成する）、かつそのＣ側及び／又はＮ側にカルノシン、アンセリン又はオフィジンを有する。
【0008】
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro、Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala、β-Ala-His-Ala-Lys、β-Ala-His-Lys-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala、β-Ala-His-Ala-Pro、Pro-Ala-β-Ala-His、Ala-Lys-β-Ala-His、Lys-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-β-Ala-His、Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala、β-Ala-His-Pro-Ala-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Pro、β-Ala-His-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Ala、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro-Ala、β-Ala-His-Pro-Ala-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Pro、β-Ala-His-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Ala、β-Ala-His-Lys-Ala-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Pro、β-Ala-His-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Pro、β-Ala-His-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala、β-Ala-His-Lys-Ala-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Pro、β-Ala-His-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro、Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-β-Ala-His、Pro-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Lys-Pro-β-Ala-His、Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-β-Ala-His、Pro-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Lys-Pro-β-Ala-His、Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-β-Ala-His、Lys-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Ala-Pro-β-Ala-His、Ala-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Ala-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Lys-Pro-β-Ala-His、Lys-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-β-Ala-His、Lys-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Ala-Pro-β-Ala-His、Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-Hisを含む。
【0009】
その中、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisで、β-Alaとそれぞれカルノシン、アンセリン又はオフィジンを形成し、下記も同じである。
【0010】
その中、本発明に係る多機能ポリペプチドは、Pro-Ala-Lys、Ala-Lys-Pro、Lys-Ala-Proのうちの二つからなるヘキサペプチドであって、かつそのＣ側及び／又はＮ側にカルノシン、アンセリン又はオフィジンを有する。
【0011】
Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-Hisを含む。
【0012】
その中、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである。
【0013】
その中、本発明に係る多機能ポリペプチドは、（Pro-Ala-Lys）n、（Ala-Lys-Pro）n又は（Lys-Ala-Pro）nからなり、かつそのＣ側及び／又はＮ側にカルノシン、アンセリン又はオフィジンを有する。ｎが２～６の整数である。
【0014】
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys、Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro、Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro、Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-Hisを含む。
【0015】
その中、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである。
【0016】
その中、本発明に係る多機能ポリペプチドは、Pro-Ala-Lys、Ala-Lys-Pro又はLys-Ala-Proの誘導ペプチドからなり、かつそのＣ側及び／又はＮ側にカルノシン、アンセリン又はオフィジンを有する。
【0017】
Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Ala-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Ala-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Gly-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Gly-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Gln-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Gln-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Arg-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Ala-Arg-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Ala-Arg-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Arg-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Arg-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Gln-Arg-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Gly-Arg-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Gly-Arg-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Gln-Arg-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Gln-Arg-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Gly-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Gly-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Gln-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Gln-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-Hisを含む。
【0018】
その中、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである。
【0019】
その中、本発明に係る多機能ポリペプチドは、Pro-Ala-Lys、Ala-Lys-Pro又はLys-Ala-Proと、アミノ酸Pro、Ala又は/及びLyss（アミノ酸フラグメント）とからなり、そのＣ側及び／又はＮ側にカルノシン、アンセリン又はオフィジンを有する。
【0020】
β-Ala-His-Pro-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Ala-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala、β-Ala-His-Lys-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro、β-Ala-His-Ala-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala、β-Ala-His-Lys-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys、β-Ala-His-Pro-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro、β-Ala-His-Ala-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala、β-Ala-His-Lys-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys、Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Ala-β-Ala-His、Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Lys-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Pro-β-Ala-His、Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Ala-β-Ala-His、Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Lys-β-Ala-His、Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Pro-β-Ala-His,Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Ala-β-Ala-His、Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-β-Ala-Hisを含む。
【0021】
その中、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである。
【0022】
さらに、本発明に係る多機能ポリペプチドは、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Arg-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Arg-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Arg-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Pro-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Ala-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala、β-Ala-His-Lys-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro、β-Ala-His-Ala-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala、β-Ala-His-Lys-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys、β-Ala-His-Pro-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro、β-Ala-His-Ala-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala、β-Ala-His-Lys-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys、β-Ala-His-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Ala-Arg-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Ala-Arg-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Gln-Arg-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Gly-Arg-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Gly-Arg-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Gln-Arg-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Gln-Arg-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala、β-Ala-His-Pro-Ala-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Pro、β-Ala-His-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Ala、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro-Ala、β-Ala-His-Pro-Ala-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Pro、β-Ala-His-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Ala、β-Ala-His-Lys-Ala-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Pro、β-Ala-His-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Pro、β-Ala-His-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala、β-Ala-His-Lys-Ala-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Pro、β-Ala-His-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His- Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro、Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Arg-Pro-Ala-Ly-β-Ala-His、Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Ala-β-Ala-His、Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Lys-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Pro-β-Ala-His、Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Ala-β-Ala-His、Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Lys-β-Ala-His、Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Pro-β-Ala-His、Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Ala-β-Ala-His、Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Lys-β-Ala-His、Ala-Arg-Pro-Ala-Ly-β-Ala-His、Ala-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Ala-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Gln-Arg-Pro-Ala-Ly-β-Ala-His、Gly-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Gly-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Gln-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Gln-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-β-Ala-His、Pro-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Lys-Pro-β-Ala-His、Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-β-Ala-His、Pro-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Lys-Pro-β-Ala-His、Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-β-Ala-His、Lys-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Ala-Pro-β-Ala-His、Ala-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Ala-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Lys-Pro-β-Ala-His、Lys-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-β-Ala-His、Lys-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Ala-Pro-β-Ala-His、Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Arg-Pro-Ala-Ly-β-Ala-His、β-Ala-His-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Gly-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Gln-Arg-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Gly-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Gly-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Gln-Arg-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Gln-Arg-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro-β-Ala-Hisを含む。
【0023】
その中、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである。
【0024】
好ましくは、HisがHisで、すなわちβ-Alaとカルノシンを形成する。
【0025】
その中、本発明に係る多機能ポリペプチドは、Pro-Ala-Lys、Ala-Lys-Pro、Lys-Ala-Proのうちの一種からなり、かつそのＣ側及び／又はＮ側にカルノシン、アンセリン又はオフィジンを連結して形成しているものである。
【0026】
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro、
Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-β-Ala-Hisを含む。
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro、
Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-β-Ala-Hisを含む。
【0027】
その中、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである。好ましくは、HisがHisで、すなわちβ-Alaとカルノシンを形成する。
【0028】
好ましくは、本発明に係る多機能ポリペプチドは、Pro-Ala-LysがそのＣ側及び／又はＮ側に一つのカルノシン、アンセリン又はオフィジンと連結して形成されるものである。
【0029】
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys、
Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-β-Ala-Hisを含む。
Pro-Ala-Lys-β-Ala-His、
β-Ala-His-Pro-Ala-Lys-β-Ala-Hisを含む。
【0030】
その中、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである。好ましくは、HisがHisで、すなわちβ-Alaとカルノシンを形成する。
【0031】
好ましくは、本発明に係る多機能ポリペプチドは、Ala-Lys-ProがそのＣ側及び／又はＮ側に一つのカルノシン、アンセリン又はオフィジンと連結して形成されるものである。
【0032】
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro、
Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-β-Ala-Hisを含む。
Ala-Lys-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Ala-Lys-Pro-β-Ala-Hisを含む。
【0033】
その中、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである。好ましくは、HisがHisで、すなわちβ-Alaとカルノシンを形成する。
【0034】
好ましくは、本発明に係る多機能ポリペプチドは、Lys-Ala-ProがそのＣ側及び／又はＮ側に一つのカルノシン、アンセリン又はオフィジンと連結して形成されるものである。
【0035】
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro、
Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-β-Ala-Hisを含む。
Lys-Ala-Pro-β-Ala-His、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-β-Ala-Hisを含む。
【0036】
その中、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである。好ましくは、HisがHisで、すなわちβ-Alaとカルノシンを形成する。
【0037】
より好ましくは、本発明に係る多機能ポリペプチドは、
【0038】
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro、
Pro-Ala-Lys-β-Ala-Hisを含む。
Pro-Ala-Lys-β-Ala-Hisを含む。
【0039】
その中、HisはHis、1-Methyl-His又は3-Methyl-Hisである。
【0040】
最も好ましくは、本発明に係る多機能ポリペプチドは、
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro、
Pro-Ala-Lys-β-Ala-Hisを含む。
β-Ala-His-Lys-Ala-Pro、
Pro-Ala-Lys-β-Ala-Hisを含む。
【0041】
その中、HisがHisで、すなわちβ-Alaとカルノシンを形成する。
【0042】
他の一態様において、本発明は、前記多機能ポリペプチド又はその塩の医薬品における使用を提供する。本発明はまた前記多機能ポリペプチド又はその塩の神経疾患の治療における使用も提供する。本発明はまた前記多機能ポリペプチド又はその塩を用いる神経疾患の治療方法を提供する。
【0043】
具体的には、神経疾患とは、虚血性脳卒中、出血性脳卒中、脳損傷、アルツハイマー病、パーキンソン病またはその他の神経変性疾患である。神経疾患は虚血性脳卒中であることが好ましい。
【0044】
本発明が提供する多機能ポリペプチド又はその塩は、薬剤として製造することができる。前記薬物は注射剤である。具体的には、注射剤として粉末注射剤又は注射液がある。さらに、前記薬物は、静脈内投与により投与される。前記薬物は、用途に応じて、噴霧剤、経口錠剤、カプセル剤、舌下錠剤、顆粒剤及び坐剤などを含む他の異なる剤形で開発することができる。前記薬物は、化合物そのものでもよく、酢酸塩、塩酸塩などの任意の形態の塩でもよい。ポリペプチド薬物の塩形成は、薬物分子の物理化学的特性を改良し、薬物形成性を高めるための通常の手段の一つである。前記薬物はいかなる形態の塩であり得る。
【0045】
さらに他の一態様において、本発明は、固相合成によって本発明に係る各種の多機能ポリペプチドを調製する方法を提供するが、一部のペプチドにとっては、液相合成がより便利になる。
【0046】
本発明において、本特許で提供される合成ペプチドの神経疾患への使用を確認するために、実験対象としてＳＤラットを用い、中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）により脳虚血モデルラットを作製し、虚血１～２時間後に薬剤を静脈注射し、２２～２４時間後にそれぞれの動物について行動観察と採点を行う。行動観察後、実験ラットを安楽死させ、その脳を取り出し、脳組織を切り出し、ＴＴＣ染色して定量分析を行い、脳梗塞の体積％を算出した。
【0047】
本発明に係る合成ペプチドは、創造的に、血栓溶解作用を有するオリゴペプチドと、カルノシン、アンセリン、オフィジンなどとを組み合わせてなるものである。開発されたモザイク式の合成ペプチドは、思いがけず静脈注射によって血液脳関門を突破し、脳内に入り込み、効果的に神経疾患の治療において役立つ。このような合成ペプチドは、虚血性脳梗塞、出血性脳梗塞、脳損傷、アルツハイマー病、パーキンソン病及びその他の神経変性疾患の治療に適用される。本発明では３ｍｇ/ｋｇの多機能ポリペプチドを静脈内投与するだけで著しい治療効果が達成され、既に臨床的に活性のある標準的なポリペプチドＮＡ１で達成される治療効果と同じである。当該合成ペプチドは、血栓溶解活性のオリゴペプチドと、カルノシン、アンセリン又はオフィジンとからなり、すべて天然なアミノ酸又はペプチドであり、安全で信頼的なものである。
【0048】
本発明で用いられる溶血活性オリゴペプチドは、Pro-Ala-Lys、Ala-Lys-Pro又はLys-Ala-Proを含むポリペプチドであり、任意の二つの異なる又は同一のフラグメントからなるものであってもよく、より小さなフラグメントと組み合わせたものであってもよい。これらのポリペプチドは、Pro-Ala-Lys、Ala-Lys-Pro又はLys-Ala-Proが互いに連結して形成したポリペプチドを含み、具体的には、Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro、Pro-Ala-Lys-Lys- Ala-Pro、Ala-Lys-Pro-Pro-Ala-Lys、Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys、Ala-Lys-Pro-Lys-Ala-Pro、Pro-Ala-Lys-Ala-Lys-Pro、Lys-Ala-Pro-Ala-Lys-Pro、Lys-Ala-Pro-Pro-Ala-Lys、Lys-Ala-Pro-Lys-Ala-Pro. Pro-Ala-Lys、Ala-Lys-Pro or Lys-Ala-Proは、それぞれ自身と連結して、(Pro-Ala-Lys)n、(Ala-Lys-Pro)n又は(Lys-Ala-Pro)nのようなポリマーに形成してもよい。ｎは２～６、特に２であり得る。
【0049】
本発明で用いられる溶血活性オリゴペプチドには、フィブリンβ鎖の分解産物であるｐ６Ａ、Ala-Arg-Pro-Ala-Ly、さらに代謝産物であるArg-Pro-Ala-Ly、また、関連する血栓溶解活性オリゴペプチドAla-Arg-Ala-Lys-Pro、Ala-Arg-Lys-Ala-Pro、Arg-Ala-Lys-Pro、Arg-Lys-Ala-Proなども含まれる。本発明で用いられる溶血活性オリゴペプチドは、さらに、Gly-Arg-Pro-Ala-LyとGln-Arg-Pro-Ala-Ly、及びGly-Arg-Ala-Lys-Pro、Gly-Arg-Lys-Ala-Pro、Gln-Arg-Ala-Lys-Pro及びGln-Arg-Lys-Ala-Proを含む。
【0050】
本発明はまた、Pro-Ala-Lys、Ala-Lys-Pro又はLys-Ala-Proと、Pro、Ala又はLysの何れか１つのアミノ酸との組み合わせを含み、例えば：Pro-Pro-Ala-Lys、 Pro-Ala-Lys-Pro、 Ala-Pro-Ala-Lys、 Pro-Ala-Lys-Ala、 Lys-Pro-Ala-Lys、 Pro-Ala-Lys-Lys、 Pro-Ala-Lys-Pro、 Ala-Lys-Pro-Pro、 Ala-Ala-Lys-Pro、 Ala-Lys-Pro-Ala、 Lys-Ala-Lys-Pro、 Ala-Lys-Pro-Lys、 Pro-Lys-Ala-Pro、 Lys-Ala-Pro-Pro、 Ala-Lys-Ala-Pro、 Lys-Ala-Pro-Ala、 Lys-Lys-Ala-Pro、 Lys-Ala-Pro-Lysを含む。
【0051】
本発明はまた、Pro-Ala-Lys、Ala-Lys-Pro又はLys-Ala-Proと、Pro-Ala、Ala-Lys、Lys-Pro、Lys-Ala又はAla-Proのいずれか１つとの組み合わせを含み、例えば、Pro-Ala-Lys-Pro-Ala、 Pro-Ala-Pro-Ala-Lys、 Pro-Ala-Lys-Ala-Lys、 Ala-Lys-Pro-Ala-Lys、 Pro-Ala-Lys-Lys-Pro、 Lys-Pro-Pro-Ala-Lys、 Pro-Ala-Lys-Lys-Ala、 Lys-Ala-Pro-Ala-Lys、 Pro-Ala-Lys-Ala-Pro、 Ala-Pro-Pro-Ala-Lys、 Ala-Lys-Pro-Pro-Ala、 Pro-Ala-Ala-Lys-Pro、 Ala-Lys-Pro-Ala-Lys、 Ala-Lys-Ala-Lys-Pro、 Ala-Lys-Pro-Lys-Pro、 Lys-Pro-Ala-Lys-Pro、 Ala-Lys-Pro-Lys-Ala、 Lys-Ala-Ala-Lys-Pro、 Ala-Lys-Pro-Ala-Pro、 Ala-Pro-Ala-Lys-Pro、 Lys-Ala-Pro-Pro-Ala、 Pro-Ala-Lys-Ala-Pro、 Lys-Ala-Pro-Ala-Lys、 Ala-Lys-Lys-Ala-Pro、 Lys-Ala-Pro-Lys-Pro、 Lys-Pro-Lys-Ala-Pro、 Lys-Ala-Pro-Lys-Ala、 Lys-Ala-Lys-Ala-Pro、 Lys-Ala-Pro-Ala-Pro、 Ala-Pro-Lys-Ala-Proを含む。
【0052】
特許CN101190941、CN103665107及びCN105884905もかかる血栓溶解機能性ペプチドを紹介しており、記載されたポリペプチドは当然本特許にも含まれる。
【0053】
上記の溶血活性オリゴペプチドのＣ側及び／又はＮ側にカルノシン、アンセリン又はオフィジンを連結することにより、本発明に係る多機能ポリペプチドを得られる。
【0054】
また、本発明に係る合成ペプチドは簡単に合成することができ、合成の過程において、それに対応する二つのアミノ酸の代わりに、カルノシン、アンセリン又はオフィジン誘導体を合成フラグメントとして使用することも可能であり、目的ペプチドの合成をさらに簡略化できる。さらに、係る短いペプチドの一部、例えば、アミノ酸の数が６以下のポリペプチドは、液相合成によって得られ、コストが低く、今後の大規模生産と製品の品質監督に便利である。本発明に係るポリペプチドは、神経疾患、特に虚血性脳卒中、出血性脳卒中、脳損傷、アルツハイマー病、パーキンソン病及びその他の神経変性疾患の治療に新規な選択肢を提供する。
【図面の簡単な説明】
【0055】
【発明を実施するための形態】
【0056】
本発明の目的、技術案及び優位をよりはっきりさせるために、以下に添付図面と合わせて本発明をさらに詳細に説明する。
【0057】
実施例1：β-Ala-His-Lys-Ala-Proの合成
【0058】
1.活性化剤系（HoBT、DIC）の存在下、固相担体の2-CTC樹脂をFmoc-Pro-OHとカップリングさせることにより、Fmoc-Pro-CTC樹脂を得る。
【0059】
2.20%ピペリジンでFmoc-Pro-CTC上のFmoc保護基を取り除き、除去後、DMFで洗浄する。
【0060】
3.3倍過剰のFmoc-Ala-OHと3倍過剰の活性化剤を量り取り、少量のDMFを入れて完全に溶解させ、溶解後、洗浄済みの樹脂に加え、1時間反応させた後、DMFで洗浄する。
【0061】
4.手順2と手順3を繰り返し、主鎖の順にLysからβ-Alaまで、N側Fmoc保護と側鎖に保護が施されたアミノ酸をカップリングさせる。
【0062】
5.合成が終わった後、分解を行い、分解試薬比はTFA：EDT：Tis：TA：アニソール：H2O＝80：5：1：5：5：4（体積比）であり、1gのペプチド樹脂に対して10mlの分解試薬として、室温で約2時間（120r/min）分解し、分解後、氷メチル-tert-ブチルエーテルで沈殿させ、下層の沈殿物は粗生成物となる。
【0063】
6.これまでの手順で得られた粗製ペプチドを取り出し、溶解後、分取HPLCにて0.1%TFA/アセトニトリルで精製する。
【0064】
7.精製後、凍結乾燥を行い、その後、粉末を取り出して品質管理を実施する。
【0065】
実施例2：Pro-Ala-Lys-β-Ala-Hisの合成
【0066】
1.活性化剤系（HoBT、DIC）の存在下、固相担体の2-CTC樹脂をFmoc-His(Trt)-OHとカップリングさせることにより、Fmoc-His(Trt)-CTC樹脂を得る。
【0067】
2.20%ピペリジンでFmoc-His(Trt)-CTC上のFmoc保護基を取り除き、除去後、DMFで洗浄する。
【0068】
3.3倍過剰のFmoc-β-Ala-OHと3倍過剰の活性化剤を量り取り、少量のDMFを入れて完全に溶解させ、溶解後、洗浄済みの樹脂に加え、1時間反応させた後、DMFで洗浄する。
【0069】
4.手順2と手順3を繰り返し、主鎖の順にLys、AlaからProまで、N側Fmoc保護と側鎖に保護が施されたアミノ酸をカップリングさせる。
【0070】
5.合成が終わった後、分解を行い、分解試薬比はTFA：EDT：Tis：TA：アニソール：H2O＝80：5：1：5：5：4（体積比）である。1gのペプチド樹脂に対して10mlの分解試薬として、室温で約2時間（120r/min）分解し、分解後、氷メチルtert-ブチルエーテルで沈殿させ、下層の沈殿物は粗生成物となる。
【0071】
6.これまでの手順で得られた粗製ペプチドを取り出し、溶解後、分取HPLCにて0.1%TFA/アセトニトリルで精製する。
【0072】
7.精製後、凍結乾燥を行い、その後、粉末を取り出して品質管理を実施する。
【0073】
実施例3：β-Ala-His-Lys-Ala-Pro-β-Ala-Hisの合成
【0074】
1.活性化剤系（HoBT、DIC）の存在下、固相担体の2-CTC樹脂をFmoc-His(Trt)-OHとカップリングさせることにより、Fmoc-His(Trt)-CTC樹脂を得る。
【0075】
2.20%ピペリジンでFmoc-His(Trt)-CTC上のFmoc保護基を取り除き、除去後、DMFで洗浄する。
【0076】
3.3倍過剰のFmoc-β-Ala-OHと3倍過剰の活性化剤を量り取り、少量のDMFを入れて完全に溶解させ、溶解後、洗浄済みの樹脂に加え、1時間反応させた後、DMFで洗浄する。
【0077】
4.手順2と手順3を繰り返し、主鎖の順にPro、Ala、Lys、Hisからβ-Alaまで、N側Fmoc保護と側鎖に保護が施されたアミノ酸をカップリングさせる。
【0078】
5.合成が終わった後、分解を行い、分解試薬比はTFA：EDT：Tis：TA：アニソール：H2O＝80：5：1：5：5：4（体積比）である。1gのペプチド樹脂に対して10mlの分解試薬として、室温で約2時間（120r/min）分解し、分解後、氷メチルtert-ブチルエーテルで沈殿させ、下層の沈殿物は粗生成物となる。
【0079】
6.これまでの手順で得られた粗製ペプチドを取り出し、溶解後、分取HPLCにて0.1%TFA/アセトニトリルで精製する。
【0080】
7.精製後、凍結乾燥を行い、その後、粉末を取り出して品質管理を実施する。
【0081】
実施例4：Ala-Lys-Pro-β-Ala-His
【0082】
1.活性化剤系（HoBT、DIC）の存在下、固相担体の2-CTC樹脂をFmoc-His(Trt)-OHとカップリングさせることにより、Fmoc-His(Trt)-CTC樹脂を得る。
【0083】
2.20%ピペリジンでFmoc-His(Trt)-CTC上のFmoc保護基を取り除き、除去後、DMFで洗浄する。
【0084】
3.3倍過剰のFmoc-β-Ala-OHと3倍過剰の活性化剤を量り取り、少量のDMFを入れて完全に溶解させ、溶解後、洗浄済みの樹脂に加え、1時間反応させた後、DMFで洗浄する。
【0085】
4.手順2と手順3を繰り返し、主鎖の順にPro、LysからAlaまで、N側Fmoc保護と側鎖に保護が施されたアミノ酸をカップリングさせる。
【0086】
5.合成が終わった後、分解を行い、分解試薬比はTFA：EDT：Tis：TA：アニソール：H2O＝80：5：1：5：5：4（体積比）である。1gのペプチド樹脂に対して10mlの分解試薬として、室温で約2時間（120r/min）分解し、分解後、氷メチルtert-ブチルエーテルで沈殿させ、下層の沈殿物は粗生成物となる。
【0087】
6.これまでの手順で得られた粗製ペプチドを取り出し、溶解後、分取HPLCにて0.1%TFA/アセトニトリルで精製する。
【0088】
7.精製後、凍結乾燥を行い、その後、粉末を取り出して品質管理を実施する。
【0089】
実施例5：動物実験方法
【0090】
小動物用モニター：深セン市栄顕達科技有限公司、VT200。
SDラット：中国食品薬品鑑定研究院、180-200g。
TTC染色液：源葉生物（R24053）。
SDラット：中国食品薬品鑑定研究院、180-200g。
【0091】
動物モデル操作手順：
実験用SDラットの重量を測定し、抱水クロラールで麻酔をかけた。麻酔後、ラットの四肢を固定し、仰向けに寝かせ、小動物用モニターに接続して体温、血圧、心拍数などの重要な生理学的指標をモニターした。ラットの頸部を除毛し、75％アルコールで消毒した後、ラットの頸部に約2cmの切開を中央部に行った。そして、分離過程でラットの顎下腺をできるだけ避けて鈍的に分離し、次にラットの左総頸動脈（CCA）を鈍的に分離し、CCAに沿って内頸動脈（ICA）と外頸動脈（ECA）を慎重に上方に分離した。分離の際に迷走神経を傷つけないようにする。二つの動脈クリップを用いてCCAとICAをはさみ、ECA遠位端を切り取った後、シリコンモノフィラメントをECA「ポート」から挿入し、ICA動脈クリップに挿入し、クリップを短時間離し、そこからモノフィラメントの頭端を素早く挿入し再びICAをクランプした後、ICAの動脈クリップを静かに離し、モノフィラメントがECAとICAの分岐部を通って挿入され、モノフィラメントの頭端が中脳動脈を塞いだ後、縫合糸でECA「ポート」とモノフィラメントをきつく縛り、ラットが目覚めたときにモノフィラメントが「抜ける」ことや出血することを防いだ。CCAとICAの動脈クリップは緩めて外し、組織を元の位置に戻し、傷の感染を防ぐために適量のペニシリンを加える。医療用の糸付き縫合針で創部を縫合し、封をしてヨードホルで再度滅菌する。小動物用モニターで実験ラットの指標が正常値かどうかを観察し、ラットが目を覚ますまで小動物用電気毛布に乗せて体温を保ち、動物用かごに入れる。
実験用SDラットの重量を測定し、抱水クロラールで麻酔をかけた。麻酔後、ラットの四肢を固定し、仰向けに寝かせ、小動物用モニターに接続して体温、血圧、心拍数などの重要な生理学的指標をモニターした。ラットの頸部を除毛し、75％アルコールで消毒した後、ラットの頸部に約2cmの切開を中央部に行った。そして、分離過程でラットの顎下腺をできるだけ避けて鈍的に分離し、次にラットの左総頸動脈（CCA）を鈍的に分離し、CCAに沿って内頸動脈（ICA）と外頸動脈（ECA）を慎重に上方に分離した。分離の際に迷走神経を傷つけないようにする。二つの動脈クリップを用いてCCAとICAをはさみ、ECA遠位端を切り取った後、シリコンモノフィラメントをECA「ポート」から挿入し、ICA動脈クリップに挿入し、クリップを短時間離し、そこからモノフィラメントの頭端を素早く挿入し再びICAをクランプした後、ICAの動脈クリップを静かに離し、モノフィラメントがECAとICAの分岐部を通って挿入され、モノフィラメントの頭端が中脳動脈を塞いだ後、縫合糸でECA「ポート」とモノフィラメントをきつく縛り、ラットが目覚めたときにモノフィラメントが「抜ける」ことや出血することを防いだ。CCAとICAの動脈クリップは緩めて外し、組織を元の位置に戻し、傷の感染を防ぐために適量のペニシリンを加える。医療用の糸付き縫合針で創部を縫合し、封をしてヨードホルで再度滅菌する。小動物用モニターで実験ラットの指標が正常値かどうかを観察し、ラットが目を覚ますまで小動物用電気毛布に乗せて体温を保ち、動物用かごに入れる。
【0092】
投薬手順：
【0093】
テストする薬物の3mg/mL溶液を調製する。投与は結紮1～2時間後に尾静脈より行う。
【0094】
薬剤を投与する際は、ラットを固定具で固定し、1mLシリンジで3mg/kgの薬剤を吸い上げた後、ラットの心肺負荷を軽減するため、ゆっくりとラットの尾静脈に注射する。
【0095】
動物をそれぞれ6匹ずつ異なる実験群に分ける。
【0096】
モデル群：結紮後、尾静脈に等量の生理食塩水を投与；
【0097】
薬剤群S1（NA1）、S4（β-Ala-His-Lys-Ala-Pro）及びS5（Pro-Ala-Lys-β-Ala-His）：結紮後、尾静脈に薬剤を投与する；
【0098】
そのうち、NA1（Nerinetide）は、神経保護剤（Michael Tymianski and Jonathan D. Garman. Model systems and treatment regimes for treatment of neurological disease．2015、US Patent、US8940699B2）で、シナプス後密度タンパク質95（PSD-95）を阻害でき、細胞内NOフリーラジカルの産生を停止させることにより、前臨床虚血性脳卒中モデル動物における実験的（アカゲザル）脳虚血再灌流の梗塞面積を減少させ、機能的予後を改善し、良好な陽性対照製品である。Hill博士は、新規の神経ペプチドであるNA-1（2.6mg/kg）を、血管内血栓除去術を受けた急性虚血性脳卒中（AIS）患者に静脈内投与した場合の有効性と安全性を検討し、NA1投与が患者の予後を改善することを明らかにした。（Michael D Hill et al．Efficacy and safetyof nerinetide for the treatment of acute ischaemic stroke (ESCAPE-NA1):a multicentre、double-blind、randomised controlled trial.Lancet.Published online February 20,2020)。
【0099】
偽手術群：内頸動脈(ICA)と外頸動脈(ECA)を切り離し、結紮処理を行わず、尾静脈に等量の生理食塩水を投与する。
【0100】
行動観察：
【0101】
結紮から22～24時間後に行動観察と採点を行う。
【0102】
以下の評価基準に従って、この実験に参加していない技術者が盲検化判定を行う。
0点：普通にまっすぐ歩く；
1点：前肢の脱力；
2点：後肢の脱力；
3点：軽度の回転；
4点：重度の回転；
5点：半身麻痺。
0点：普通にまっすぐ歩く；
1点：前肢の脱力；
2点：後肢の脱力；
3点：軽度の回転；
4点：重度の回転；
5点：半身麻痺。
【0103】
TTC染色と定量分析：
【0104】
行動観察後、実験ラットを安楽死させ、その脳を取り出した。脳組織は横断方向に2mm厚に6枚切り出し、TTC染色液に移し、37℃のインキュベーターで10分間遮光しながらインキュベートし、写真を撮った。TTC染色した脳組織と残った少量のTTC染色していない脳組織を-20℃で保存した。
【0105】
ImageJ ソフトウェアを用いて、TTC 染色後の写真を定量分析した。
【0106】
脳梗塞体積％＝（総梗塞面積*切片厚さ）／（総脳切片面積*切片厚さ）*100％。
【0107】
実験結果：
【0108】
1.1 TTC定量結果を表1に示す通り：
【0109】
【表1】
【0110】
表1の結果から、TTC染色後の定量分析の結果から明らかなように、生理食塩水を注射した虚血ラットの梗塞体積は0.390±0.028であり、3mg/kgのβ-Ala-His-Lys-Ala-Proを注射した虚血ラットの梗塞体積は0.155±0.044であり、3mg/kgのPro-Ala-Lys-β-Ala-Hisを注射した脳虚血ラットの梗塞体積は0.147±0.051であり、対照として3mg/kgのNA1を静脈内投与した脳虚血ラットの梗塞体積は0.157+0.040である。対照となる偽手術群の結果として、梗塞体積が0.044±0.005である。生理食塩水の場合と較べると、他の3群は顕著な生物学的活性を示し、S4とS5はS1と統計学的な差はない。
【0111】
1.2 行動評価結果は表2に示す通りである。
【0112】
【表2】
【0113】
表2の結果から明らかなように、本発明により提供される合成ペプチドに生理的活性がある。生理食塩水を投与した虚血ラットの行動スコアは3.8±0.8であり、3mg/kgのβ-Ala-His-Lys-Ala-Proを投与した虚血ラットの行動スコアは2.0±0.9であり、3mg/kgのPro-Ala-Lys-β-Ala-Hisを投与した虚血ラットの行動スコアは1.8±0.8であり、比較として、3mg/kgのNA1を静脈内投与した脳虚血ラットのスコアは2.0±0.6である。対照となる偽手術群の結果は1.0±0.0である。生理食塩水の場合と較べると、他の3群は顕著な生物学的活性を示し、S4とS5はS1と統計学的な差はない。
【0114】
実施例6：投与量による影響の実験
【0115】
調製方法：所定量の被験物質を量り、注射用水で十分に溶解させ、必要な濃度に調製し、0.22μmのフィルターでろ過して除菌する。一群当たり280g×14匹を例にとり、具体的には下記表3の通りである。
【0116】
【表3】
【0117】
調製方法：所定量の被験物質を量り（化合物の純度は100%として計算）、必要な濃度に調製し、0.22μmのフィルターでろ過して除菌する。一群当たり280g×14匹を例にとり、具体的には下記表4の通りである。
【0118】
【表4】
【0119】
動物系：Sprague-Dawley（SD）ラット、グレード：SPFグレード。体重：適応期間開始時200.01～240.03g、群分け時213.79～278.79g、年齢：適応期間開始時約5～7週齢、群分け時6～8週齢。出処：斯貝福（北京）生物科技有限公司。
【0120】
動物は受入後5日間環境に順応させた。不適格動物は本試験に参加させなかった。
【0121】
飼育環境条件標準：中華人民共和国国家標準GB14925-2010；
【0122】
飼育環境制御システム：WINCC7.3 EMSシリーズマシンルーム環境監視システム；
【0123】
温度：室温20～26℃（日差4℃以下）；
【0124】
相対湿度：40～70％；
【0125】
照明：人工照明、12/12時間の昼夜交替による明暗；
【0126】
換気回数：一時間に15回以上換気する。
【0127】
エサの種類：ラット用エサ
【0128】
製造元：北京科澳協力飼料有限公司（Beijing Keao Xieli Feed Co.,Ltd.）；
【0129】
給餌方法：自由摂取；
【0130】
飲料水の種類：実験動物用飲料水（逆浸透水）；
【0131】
給水方法：飲料水ボトル、自由摂取；
【0132】
水質定期指標試験：中華人民共和国国家標準GB5749-2006の関連要求に従い、少なくとも半年ごとに1回、第三者認定機関に試験を委託する。
【0133】
動物の選択：適応試験に合格し、体重が実験条件を満たし、NSS得点が3点以下である動物を試験動物として選択する。
【0134】
モデルラットの構築：ラットを3.0％イソフルランを満たした麻酔導入ボックスに入れ、麻酔導入を行った。麻酔誘発後、ラットを手術台に移し、小動物用ガス麻酔器を用いて2.0～2.5%イソフルランを200mL/minで投与し麻酔を続行した。ラットの眼瞼反射と侵害受容反応を観察し、眼瞼反射と四肢や尾部の侵害受容反応が消失してから手術を開始した。
【0135】
A.血管の分離と露出：手術部位を整えた後、ラットを手術用顕微鏡下に置く。正中線に沿ってラットの皮膚を約2cmの長さで眼科用はさみで切断し、ラットの右傍頸部から顕微鏡用はさみで右側頸部の筋肉組織を鈍的に分離・後退させ、右総頸動脈（common carotid artery，CCA）を露出させ、総頸動脈に沿って上方に切り離し、引き続き外頸動脈（external carotid artery，ECA）と内頸動脈（internal carotid artery，ICA）を露出させる；
【0136】
B.ECAを結紮し、ICAをいったんクランプする。CCAの近位端と遠位端に糸を通し、遠位端はきつく結び、近位端はバックアップのために緩く結び、2本の糸の間に小さな開口部を切る；
【0137】
C.モノフィラメント押し込み：4-0号モノフィラメントをCCAの切開部から差し込み、ゆっくりと静かに内頸動脈に押し込み、ICAの動脈クリップに差し掛かったところで一時停止し、さらに予め結紮糸を締め付け（モノフィラメントを押し込む際の過度の出血を避けるため）、ICAの血流を妨げる動脈クリップを外し、すぐに頭蓋内に入るまでモノフィラメントをICAに押し込む。この際、モノフィラメントが内頸動脈の分枝である翼口蓋動脈に入り込まないように注意する（翼口蓋動脈はICAの頭蓋外分枝に分類され、モノフィラメントが10mm程度の深さで入り込むとそれ以上挿入できなくなるため、この時点でモノフィラメントを少し引き抜き、向きを調節して再開する）；
【0138】
D.モノフィラメントの固定と切開創の閉鎖：モノフィラメントを総頸動脈分岐部から約18mmの深さに挿入し、若干の抵抗感があれば、モノフィラメントの先端が前大脳動脈（cerebral anteriorartery，ACA）に入ったことを示し、モノフィラメントの側壁が中大脳動脈の開口部を閉塞したことを示すので、挿入を中止し、時間を記録する。CCAの動脈クリップを外し、活動性の出血がないことを確認して切開創を閉じる；
【0139】
E.大脳再灌流：虚血ラットを室温に置き、120分後に麻酔が導入され、麻酔状態を維持したまま、モノフィラメントをゆっくり静かに引くことにより、頭端が外頸動脈に戻り、すなわち中大脳動脈再灌流が成立する；
【0140】
F.切開創をヨードホールで消毒する。
【0141】
群別デザイン：モデル対照群、陽性薬物治療群、S5低投与量群、S5中投与量群、S5高投与量群；
【0142】
性別割合：JW Simpkins（Simpkins JW，Rajakumar G， Zhang YQ， Simpkins CE、Greenwald D、Yu CJ、Bodor N、Day AL (1997) Estrogens may reduce mortality and ischemic damage caused by middle cerebral artery occlusion in the female rat． J Neurosurg 87：724-730）及びRL Roof（Roof RL，Duvdevani R，Braswell L,Stein DG (1994)Progesterone facilitates cognitive recovery and reduces secondary neuronal loss caused by cortical contusion injury in male rats. Exp Neurol 129：64-69）などの報道によると、成体ラットにおいて、エストロジェンとプロゲステロンなどが虚血性脳梗塞に対する神経保護作用を持つが、今回の試験結果に対するエストロジェンとプロゲステロンなどの影響を排除するため、試験動物はいずれも雄であった；
【0143】
群分け方法：群分け前の直近のラットの体重に基づいてランダムに群分けを行った。
【0144】
具体的な群分け情報を下記の表5に示す通り。
【0145】
【表5】
【0146】
投与経路：静脈内投与（i.v.）；
【0147】
投与頻度及び投与間隔：再灌流直後（10分以内）に1回投与し、手術日をD1（Day1）と定義する。
【0148】
動物観察：生存中のすべての実験動物を観察対象とする；
【0149】
観察時間：一日一回、動物に異常が見られる場合は観察回数を増やせる；
【0150】
観察内容：一般的な表現、行動状態、目、口、鼻、耳、毛、皮膚、糞便、尿、生殖器などの毒性症状を含むがこれらに限らない。異常が発生した場合は詳しく説明する必要がある。
【0151】
動物測定：生存中のすべての実験動物を測定対象とする；
【0152】
測定時間：適応期間中に最低2回体重を測定し、各バッチの体重を手術前日と剖検当日に1回ずつ測定し、薬剤の投与量と麻酔薬の量を計算する。手術後は週に2回となる。
【0153】
Bederson採点
【0154】
測定時間：モデル構築当日の虚血後1時間；
【0155】
測定動物：手術で生き残ったすべての動物；
【0156】
検出方法：Bederson採点基準を参考に動物を採点する。
【0157】
【表6】
【0158】
ラット神経機能採点
【0159】
測定時間：モデル構築前及び構築後24時間；
【0160】
測定動物：生存中のすべての実験動物を測定対象とする；
【0161】
検出方法：動物の運動機能試験、感覚試験、平衡試験、反射・異常運動試験、具体的にはラット神経機能採点基準（NSS）を参照する。
【0162】
【表7】
【0163】
病理学（TTC染色）評価
【0164】
検査方法：安楽死させた動物の脳をすばやく取り出し、ラット脳を-20℃の冷蔵庫に入れ、脳組織が硬くなるまで凍結させてから取り出し、ラット脳を2mm厚のスライスに切り取り、スライスの位置は嗅球から背部とし、合計6枚のスライスをそれぞれ0.5％TTC溶液（0.9％塩化ナトリウム注射液で調製）を入れた6ウェルプレートに入れ、その後、37℃の恒温器に入れて光を避けて20分間インキュベートした後、取り出して4％ホルムアルデヒド溶液に入れ、光を避けて保存する。
【0165】
正常組織はバラ色に染め、梗塞組織は白色に染める。それぞれの脳平面をろ紙上に順次置き、デジタルカメラで撮影し、慎重に白色組織を取り出して重量を測定し、梗塞組織重量の脳全体重量に対する割合を梗塞範囲（％）とする。梗塞範囲で全脳重量に対する梗塞組織重量の割合を抑制率（％）とし、その計算式が下記の通りである。
【0166】
【0167】
統計分析：
【0168】
測定指標は平均値±標準偏差で表す。サンプル数が3未満の場合、そのグループは統計的比較対象としていない。
【0169】
データはExcel 2010、GraphPad Prism 7、SPSS 22.0、Stata 15.0ソフトウェアによって入力され、統計分析を行った。測定指標は、最初にLEVENE分散均質性検定を採用し、分散が一致(p＞0.05)であった場合、分散分析の結果を直接引用し、全体的な差が統計的に顕著であったかどうかを判定し、全体的な差が統計的に顕著であった場合、Dunnett-t検定を用いて群間の差を比較し、全体的な差が統計的に顕著でなかった場合(p≧0.05)、統計解析を終了した；LEVENE分散均質性検定で分散が一致でない（p≦0.05）ことが示された場合は、非パラメトリック検定（Kruskal-Wallis H検定）を用い、Kruskal-Wallis H検定で全体差が統計的に顕著であることが示された場合は、群間の差を比較するためにMann-Whitney U検定を用い、Kruskal-Wallis H検定により、全体的な差が統計的に顕著でない（p≧0.05）ことが示された場合に、統計解析を終了した。病理学的データなど（ある場合）は詳細に記述した。
【0170】
試験結果
【0171】
試験品がモデル動物の脳梗塞の程度に及ぼす影響
【0172】
急性虚血性脳卒中の薬理学的治療は大きく分けて2つあり、一つは血栓溶解療法による血流の回復、二つは虚血による神経細胞の二次障害を治療するための神経保護剤の投与である。本実験では、SDラットを用いて120分間の虚血後、再灌流により血管再疎通を模擬し、再疎通直後（10分以内）に尾静脈注射により試験品を介入投与し、投与終了24時間後に脳組織を採取し、TTC染色により各群の動物の梗塞範囲を測定し、抑制率を算出し、試験品の神経保護効果を評価した。S1（3mg/kg）を陽性薬物として本試験に用いた。実験動物の脳梗塞範囲及び脳梗塞抑制率を表8に示す。手術1日後に動物の脳梗塞範囲を算出するためにTTC染色を行ったところ、モデル対照群の動物の脳梗塞範囲は24.84±3.39％、陽性薬物群の動物の脳梗塞範囲は16.74±3.14％であり、陽性薬剤S1は、3mg/kgの投与で優れた脳梗塞範囲の軽減を示し、モデル対照群と比較して大きな差があった（P＜0.0001）。試験品S5の低投与量群、S5の中投与量群、S5の高投与量群の脳梗塞の範囲は、それぞれ20.20±4.07％、18.76±2.50％、15.70±2.80％であり、試験品S5は定められた投与量でいずれも脳組織の梗塞を改善する効果を示し、モデル対照群と比較して大きな差があった（P＜0.05、P＜0.001、P＜0.0001）。また、各治療群の動物の脳梗塞抑制率を算出したところ、陽性対照群、試験品S5の低投与量群、S5の中投与量群、S5の高投与量群の脳梗塞抑制率は、それぞれ33％、19％、24％、37％であった。以上の結果から、今回の実験条件下では、試験品S5がいずれも良好な神経保護作用を有することが示唆された。試験品S5の開始用量は0.6mg/kgであり、用量効果関係が認められた。
【0173】
【表8】
【0174】
臨床における脳梗塞治療の主な目的は、脳卒中後の患者の神経機能の回復と生活機能の向上を図ることであり、本試験では、虚血後1時間の動物についてBederson採点を行い、動物の虚血状態を判定し、モデル構築後1日の動物の神経行動機能をNSS採点基準を参考にして評価し、試験品における神経学的改善効果を評価した。動物のBederson採点の結果を表9に、NSS採点の結果を表10に示す。
【0175】
【表9】
【0176】
【表10】
【0177】
試験品のモデル動物の体重に及ぼす影響：脳虚血再灌流は一つの急性傷害モデルとした。実験動物のMCAOモデル構築後の体重は大幅に低下した。試験動物の体重は、動物の健康状態を総合的に反映する最も基本的かつ敏感的な指標の一つとした。本実験では、術後1日目にすべての動物の体重をモニターし、動物の体重変化の結果を表11に示す。モデル構築前の各群の動物の体重に群間差はなく、手術1日後、各群の動物の体重は著しく減少し、モデル対照群、陽性薬物治療群、S5低投与量群、S5中投与量群、S5高投与量群の動物の体重は、それぞれ48.92±5.78g、48.22±8.23g、48.22±8.23g、42.73±8.59g、48.83±5.18g及び46.66±10.90g減少し、各群間で体重減少量に大きな差はなく、上記の結果から、陽性薬物S1及び試験品S5はラットの体重に目立った影響を与えないことが示唆された。
【0178】
【表11】
【0179】
本実験において、古典的なモノフィラメント法MCAOモデルを用いて試験品S5の神経保護効果を評価した。動物に再灌流直後（10分以内）に試験品を投与し、投与1日後にTTC染色により脳梗塞範囲、抑制率、NSS採点、グリッド歩行試験、体重変化を測定し、ラットの虚血性脳梗塞に対する試験品の神経保護効果を評価したところ、その結果は以下の通りである。
【0180】
1)試験品S5は優れた神経保護効果を有し、主としてモデル動物に試験品を投与した後、脳梗塞の範囲が著しく減少したことを表し、試験品S5の開始用量は0.6mg/kgであり、用量と効果の関係がある；
【0181】
2)試験品S5は、脳卒中ラットの体重に著しい影響を及ぼさず、術後1日目では、いずれのモデル動物も体重が大幅に減少し、群間で体重減少量に大きな差は認められなかった。
【0182】
以上より、本実験モデルにおける薬剤作用評価の結果、試験品S5はあらゆる虚血性脳卒中に対して著しい治療効果を有することが示された。
【0183】
上記の内容は、本発明の好適な実施形態にとどまり、本発明を制約することを目的とはしておらず、本発明の精神及び原則内で行われるいかなる変更、同等な置換、改良等も、本発明の保護範囲に含まれるものとする。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【国際調査報告】