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▶ アステリア セラピューティクス，インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-03-04
(54)【発明の名称】血漿カリクレイン抗体及びその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20240226BHJP
C07K 16/18 20060101ALI20240226BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20240226BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240226BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20240226BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20240226BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20240226BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240226BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240226BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20240226BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20240226BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240226BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20240226BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20240226BHJP
A61P 19/06 20060101ALI20240226BHJP
A61P 1/00 20060101ALI20240226BHJP
A61P 1/02 20060101ALI20240226BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240226BHJP
A61P 19/00 20060101ALI20240226BHJP
A61P 7/02 20060101ALI20240226BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240226BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20240226BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20240226BHJP
A61P 9/10 20060101ALI20240226BHJP
A61P 13/12 20060101ALI20240226BHJP
A61P 17/02 20060101ALI20240226BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/18 ZNA
C12P21/08
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
A61K39/395 N
A61K48/00
A61P9/00
A61P17/00
A61P27/02
A61P19/02
A61P19/06
A61P1/00
A61P1/02
A61P29/00
A61P19/00
A61P7/02
A61P25/00
A61P11/00
A61P31/04
A61P9/10
A61P13/12
A61P17/02
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023541513
(86)(22)【出願日】2022-01-28
(85)【翻訳文提出日】2023-09-05
(86)【国際出願番号】 US2022014242
(87)【国際公開番号】W WO2022165130
(87)【国際公開日】2022-08-04
(31)【優先権主張番号】63/142,748
(32)【優先日】2021-01-28
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/159,323
(32)【優先日】2021-03-10
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/220,194
(32)【優先日】2021-07-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/262,838
(32)【優先日】2021-10-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】523256339
【氏名又は名称】アステリア セラピューティクス，インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100079108
【弁理士】
【氏名又は名称】稲葉 良幸
(74)【代理人】
【識別番号】100109346
【弁理士】
【氏名又は名称】大貫 敏史
(74)【代理人】
【識別番号】100117189
【弁理士】
【氏名又は名称】江口 昭彦
(74)【代理人】
【識別番号】100134120
【弁理士】
【氏名又は名称】内藤 和彦
(72)【発明者】
【氏名】ベディアン，ヴァヘ
(72)【発明者】
【氏名】ビスタ，プラディープ
(72)【発明者】
【氏名】ハーウィン，ピーター，エヴァン
(72)【発明者】
【氏名】キセラック，トーマス
(72)【発明者】
【氏名】ヴァイオリン，ジョナサン
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG26
4B064AG27
4B064CA19
4B064CC24
4B064CE10
4B064CE12
4B064DA01
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA83X
4B065AA87X
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C084AA13
4C084MA66
4C084NA14
4C084ZA02
4C084ZA08
4C084ZA33
4C084ZA36
4C084ZA54
4C084ZA59
4C084ZA66
4C084ZA67
4C084ZA81
4C084ZA89
4C084ZA96
4C084ZB11
4C084ZB15
4C084ZB35
4C084ZC202
4C085AA14
4C085BB11
4C085BB31
4C085DD62
4C085EE01
4C085GG01
4H045AA10
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045CA40
4H045DA75
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
4H045GA21
4H045GA26
(57)【要約】
血漿カリクレインを結合する抗体及びそのような抗体またはその抗原結合断片を含有する組成物が本明細書で提供される。提供されるのはまた、そのような抗体またはその抗原結合断片を作製する方法、及び遺伝性血管浮腫またはブラジキニン依存性浮腫の治療などにてそれらを使用する方法である。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
血漿カリクレインに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と；ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）配列とを含み、ａ． （ｉ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号１４、２３、２９、または４３に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＨＣＤＲ２が配列番号１５、１７、１９、２４、３０、または４４に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＨＣＤＲ３が配列番号１６、２５、または３１に示されるアミノ酸配列を含み；且つ
（ｉｉ）前記ＬＣＤＲ１が配列番号１１、２０、または２７に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＬＣＤＲ２が配列番号１２、１８、２１、または２６に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＬＣＤＲ３が配列番号１３、２２、または２８に示されるアミノ酸配列を含む；
ｂ． （ｉ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＨＣＤＲ２が配列番号１５、１７、または１９に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＨＣＤＲ３が配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含み；且つ
（ｉｉ）前記ＬＣＤＲ１が配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＬＣＤＲ２が配列番号１２または１８に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＬＣＤＲ３が配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む；
ｃ． （ｉ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＨＣＤＲ２が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＨＣＤＲ３が配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含み；且つ
（ｉｉ）前記ＬＣＤＲ１が配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＬＣＤＲ２が配列番号２１または２６に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＬＣＤＲ３が配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む；
ｄ． （ｉ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＨＣＤＲ２が配列番号３０に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＨＣＤＲ３が配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含み；且つ
（ｉｉ）前記ＬＣＤＲ１が配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＬＣＤＲ２が配列番号２１または２６に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＬＣＤＲ３が配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含む；あるいは
ｅ． （ｉ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号４３に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＨＣＤＲ２が配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＨＣＤＲ３が配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含み；且つ
（ｉｉ）前記ＬＣＤＲ１が配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＬＣＤＲ２が配列番号１２または１８に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＬＣＤＲ３が配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含む；前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項2】
前記ＨＣＤＲ１が配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＨＣＤＲ２が配列番号１５、１７、または１９に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＨＣＤＲ３が配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含み；且つ前記ＬＣＤＲ１が配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＬＣＤＲ２が配列番号１２または１８に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＬＣＤＲ３が配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項3】
前記ＨＣＤＲ１が配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＨＣＤＲ２が配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＨＣＤＲ３が配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含み；且つ前記ＬＣＤＲ１が配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＬＣＤＲ２が配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＬＣＤＲ３が配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項4】
前記ＨＣＤＲ１が配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＨＣＤＲ２が配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＨＣＤＲ３が配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含み；且つ前記ＬＣＤＲ１が配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＬＣＤＲ２が配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＬＣＤＲ３が配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項5】
前記ＨＣＤＲ１が配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＨＣＤＲ３が配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含み；且つ前記ＬＣＤＲ１が配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＬＣＤＲ２が配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＬＣＤＲ３が配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項6】
前記ＨＣＤＲ１が配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＨＣＤＲ２が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＨＣＤＲ３が配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含み；且つ前記ＬＣＤＲ１が配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含み；前記が配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＬＣＤＲ３が配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項7】
前記ＨＣＤＲ１が配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＨＣＤＲ２が配列番号３０に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＨＣＤＲ３配列が配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含み；且つ前記ＬＣＤＲ１が配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＣＤＲ２が配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＬＣＤＲ３が配列番号２８のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項8】
（ｉ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号４３に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＨＣＤＲ２が配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＨＣＤＲ３が配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含み；且つ（ｉｉ）前記ＬＣＤＲ１が配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＬＣＤＲ２が配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＬＣＤＲ３が配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項9】
抗体またはその抗原結合断片であって、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と；ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含み、ａ． 前記ＨＣＤＲ１はアミノ酸配列に対して最大１、２、または３個のアミノ酸置換がある配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＣＤＲ２はアミノ酸配列に対して最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または１３個のアミノ酸置換がある配列番号１５、１７、または１９に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＨＣＤＲ３はアミノ酸配列に対して最大１、２、３、４、５、６、７、８、または９個のアミノ酸置換がある配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含み、且つ
ｂ． 前記ＬＣＤＲ１はアミノ酸配列に対して最大１、２、３、４、５、６、または７個のアミノ酸置換がある配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み；前記ＬＣＤＲ２はアミノ酸配列に対して最大１、２、３、または４個のアミノ酸置換がある配列番号１２または１８に示されるアミノ酸配列を含み；及び前記ＬＣＤＲ３はアミノ酸配列に対して最大１、２、３、または４個のアミノ酸置換がある配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項10】
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３のそれぞれが多くても１つのアミノ酸置換を含む、請求項９に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項11】
ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、またはＨＣＤＲ３から選択される多くても１つのＣＤＲが置換を１つ含む、請求項９または１０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項12】
ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／またはＬＣＤＲ３から選択される多くても１つのＣＤＲが置換を１つ含む、請求項９または１０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項13】
前記ＶＬ領域が配列番号２、４、または６に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項14】
前記ＶＬ領域が配列番号６に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１３または１４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項15】
前記ＶＨ領域が配列番号１、３または５に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項16】
前記ＶＨ領域が配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項17】
前記ＶＨ領域が配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬ領域が配列番号６に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項18】
前記ＶＨ領域が配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬ領域が配列番号２、４または６に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項19】
前記ＶＨ領域が配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬ領域が配列番号２、４または６に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項20】
前記ＶＨ領域が配列番号３に示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬ領域が配列番号２、４または６に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項21】
前記ＶＨ領域が配列番号１、３、または５に示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬ領域が配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項22】
前記ＶＨ領域が配列番号１、３、または５に示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬ領域が配列番号４に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項23】
前記ＶＨ領域が配列番号１、３、または５に示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記ＶＬ領域が配列番号６に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項24】
前記軽鎖が配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項25】
前記重鎖が配列番号７、９または１０に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１８または２４のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項26】
前記重鎖が配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１８、２４または２５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項27】
前記重鎖が配列番号９に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１８、２４または２５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項28】
前記重鎖が配列番号１０、９または７に示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記軽鎖が配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１８、２４または２５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項29】
前記重鎖が配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記軽鎖が配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１８、２４～２６または２８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項30】
前記重鎖が配列番号９に示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記軽鎖が配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１８、２４、２５、２７または２８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項31】
前記重鎖が配列番号７に示されるアミノ酸配列を含み、且つ前記軽鎖が配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１８、２４、２５または２８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項32】
前記ＶＨ領域が、配列番号１、３、または５に示されるアミノ酸配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である配列を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項33】
前記ＶＬ領域が、配列番号２、４、または６に示されるアミノ酸配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である配列を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項34】
前記ＶＬ領域が、配列番号６、４、または２に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のパーセント相同性がある配列を含み、且つ前記ＶＨ領域が配列番号１、３、または５に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のパーセント相同性がある配列を含む、請求項３２または３３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項35】
前記重鎖が、配列番号７、９、または１０に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のパーセント相同性がある配列を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項36】
前記軽鎖が、配列番号８に示される配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のパーセント相同性がある配列を含む、請求項１～１２または３５のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項37】
前記ＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列またはヒト化フレームワーク配列の間に挿入される、請求項１～３６のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項38】
前記抗体が、インタクト抗体または完全長抗体である、請求項１～３７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項39】
前記血漿カリクレインが配列番号３２に示されるアミノ酸配列を有するヒト血漿カリクレインである、請求項１～３８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項40】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を有するヒト血漿カリクレインの以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも１つに結合する、請求項１～３９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項41】
前記抗体またはその抗原結合断片が、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を有するヒト血漿カリクレインの以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｓ５９７、Ｙ６１７、またはＴ６２５の少なくとも１、２、３、４、５または６つに結合する、請求項１～４０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項42】
前記抗体またはその抗原結合断片が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイで測定したとき約１、２、３、４または５×１０－９Ｍ以下のＫＤでヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）に結合する、請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項43】
前記抗体が以下の特徴：ａ． ｐＨ６．０～７．４の間で実質的にｐＨに依存しないＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ２０を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）
ｂ． ヒト血漿カリクレインについては０．１ｎＭ～５ｎＭの間のＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０または７．４を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）；及び
ｃ． ヒト血漿カリクレインについては０．１ｎＭ～５ｎＭの間のＫＤ及びヒトプレカリクレインについては２５０ｎＭ～２，０００ｎＭの間のＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０または７．４を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）のうちの１つ以上を有する、請求項１～エラー！参照元が見つかりませんのいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項44】
単離された抗体またはその結合断片であって、血漿カリクレインへの結合について請求項１～４３のいずれか１項に記載の抗体と競合する、前記単離された抗体またはその結合断片。
【請求項45】
単離された抗体またはその結合断片であって、ヒト血漿カリクレインにて請求項１～４４のいずれか１項に記載の抗体と同じエピトープに結合する、前記単離された抗体またはその結合断片。
【請求項46】
血漿カリクレインに結合する組換え抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体またはその抗原結合断片が任意でａ． 少なくとも２０日の血清半減期；
ｂ． ｐＨ６．０～７．４の間で実質的にｐＨに依存しないＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）；
ｃ． ヒト血漿カリクレインについては０．１ｎＭ～５ｎＭの間のＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０または７．４を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）；及び
ｄ． ヒト血漿カリクレインについては０．１ｎＭ～５ｎＭの間のＫＤ及びヒトプレカリクレインについては２５０ｎＭ～２，０００ｎＭの間のＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０または７．４を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）のうちの１つ以上を有する、前記組換え抗体またはその抗原結合断片。
【請求項47】
抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を有するヒト血漿カリクレインの残基Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５のうちの１つ以上に結合する、前記抗体またはその抗原結合断片。
【請求項48】
配列番号３２に示されるアミノ酸配列を有するヒト血漿カリクレインの残基Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｓ５９７、Ｙ６１７、またはＴ６２５のうちの１つ以上に結合する、請求項４７に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項49】
前記抗体またはその抗原結合断片が、以下の特徴：ａ． ｐＨ６．０～７．４の間で実質的にｐＨに依存しないＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）；
ｂ． ヒト血漿カリクレインについては０．１ｎＭ～５ｎＭの間のＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０または７．４を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）；及び
ｃ． ヒト血漿カリクレインについては０．１ｎＭ～５ｎＭの間のＫＤ及びヒトプレカリクレインについては２５０ｎＭ～２，０００ｎＭの間のＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０または７．４を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）のうちの１つ以上を有する、請求項４７または４８のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項50】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１～４９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項51】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項１～５０のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項52】
前記抗体がＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ及びＩｇＭから選択されるクラスの重鎖定常領域を含む、請求項１～５１のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項53】
前記抗体が前記クラスＩｇＧ及びＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択されるサブクラスの重鎖定常領域を含む、請求項１～５２のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項54】
前記抗体がＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、請求項１～５３のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項55】
前記ＩｇＧ１重鎖定常領域が野生型（ＷＴ）配列を含む、請求項５４に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項56】
前記ＩｇＧ１重鎖定常領域が、ＥＵ番号付け目録に従って番号付けされたＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅの突然変異、またはＭ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓの突然変異を含む、請求項５４に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項57】
前記ＩｇＧ１重鎖定常領域が、ＥＵ番号付け目録に従って番号付けされたＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅの突然変異を含む、請求項５４に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項58】
前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域がリンカーによって連結されていない、請求項１～５７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項59】
前記抗体の結合断片がｓｃＦｖ抗体である、請求項１～５７のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項60】
前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域がペプチドリンカーによって連結される、請求項１～５７または５９のいずれか１項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項61】
前記ペプチドリンカーが（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号３５）；（ＧＧＧＧＡ）ｎ（配列番号３６）の配列、またはそれらの任意の組み合わせを含み、その際、各ｎは独立して１～５である、請求項６０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項62】
単離された核酸であって、請求項１～６１のいずれか１項に記載の重鎖または重鎖可変領域（ＶＨ）をコードするヌクレオチド配列を含む、前記単離された核酸。
【請求項63】
単離された核酸であって、請求項１～６１のいずれか１項に記載の軽鎖または軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードするヌクレオチド配列を含む、前記単離された核酸。
【請求項64】
請求項６２に記載の核酸を含む、発現ベクター。
【請求項65】
請求項６３に記載の核酸を含む、発現ベクター。
【請求項66】
さらに請求項６２に記載の核酸を含む、請求項６５に記載の発現ベクター。
【請求項67】
請求項６４に記載の発現ベクター及び請求項６５に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項68】
請求項６６に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項69】
血漿カリクレインに結合する抗体またはその抗原結合断片を製造する方法であって、前記方法が、（ａ）宿主細胞が重鎖または重鎖可変領域及び軽鎖可変領域または軽鎖を含むポリペプチド（単数）またはポリペプチド（複数）を発現するような条件下で請求項６７または６８に記載の宿主細胞を増殖させ、それによって前記抗体または前記抗体の前記抗原結合断片を作り出すことと；
（ｂ）前記抗体または前記抗体の前記抗原結合断片を精製することとを含む、前記方法。
【請求項70】
請求項１～６１のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合断片、または請求項６２～６３のいずれか１項に記載の核酸を含む医薬組成物。
【請求項71】
前記医薬組成物が注射用医薬組成物である、請求項７０に記載の医薬組成物。
【請求項72】
対象における遺伝性血管浮腫、ブラジキニン依存性浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、網膜浮腫、第ＸＩＩ因子関連寒冷自己炎症性症候群（ＦＡＣＡＳ）、関節リウマチ、痛風、腸疾患、口腔粘膜炎、神経因性疼痛、炎症性疼痛、脊柱管狭窄症・変性性脊椎疾患、動脈または静脈血栓症、術後イレウス、大動脈瘤、変形性関節症、血管炎、浮腫、脳浮腫、肺塞栓症、脳卒中、心室補助装置またはステントにより誘導される凝固、頭部外傷または腫瘍周囲の脳浮腫、敗血症、急性中大脳動脈（ＭＣＡ）虚血事象（脳卒中）、再狭窄（例えば、血管形成術後）、全身性エリテマトーデス腎炎、または熱傷から選択される疾患または障害がある対象を治療する方法であって、前記方法が、有効量の請求項１～６１のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または前記抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項73】
対象にて血漿カリクレインが介在する障害を治療する方法であって、前記方法が、有効量の請求項１～６１のいずれか１項に記載の抗体、または前記抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項74】
前記障害が、遺伝性血管浮腫、ブラジキニン依存性浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、網膜浮腫、第ＸＩＩ因子関連寒冷自己炎症性症候群（ＦＡＣＡＳ）、関節リウマチ、痛風、腸疾患、口腔粘膜炎、神経因性疼痛、炎症性疼痛、脊柱管狭窄症・変性性脊椎疾患、動脈または静脈血栓症、術後イレウス、大動脈瘤、変形性関節症、血管炎、浮腫、脳浮腫、肺塞栓症、脳卒中、心室補助装置またはステントにより誘導される凝固、頭部外傷または腫瘍周囲の脳浮腫、敗血症、急性中大脳動脈（ＭＣＡ）虚血事象（脳卒中）、再狭窄（例えば、血管形成術後）、全身性エリテマトーデス腎炎、または熱傷である、請求項７３に記載の方法。
【請求項75】
遺伝性血管浮腫、ブラジキニン依存性浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、網膜浮腫、第ＸＩＩ因子関連寒冷自己炎症性症候群（ＦＡＣＡＳ）、関節リウマチ、痛風、腸疾患、口腔粘膜炎、神経因性疼痛、炎症性疼痛、脊柱管狭窄症・変性性脊椎疾患、動脈または静脈血栓症、術後イレウス、大動脈瘤、変形性関節症、血管炎、浮腫、脳浮腫、肺塞栓症、脳卒中、心室補助装置またはステントにより誘導される凝固、頭部外傷または腫瘍周囲の脳浮腫、敗血症、急性中大脳動脈（ＭＣＡ）虚血事象（脳卒中）、再狭窄（例えば、血管形成術後）、全身性エリテマトーデス腎炎、または熱傷から選択される疾患または障害の治療にて使用するための、請求項１～６１１のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または前記抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物。
【請求項76】
遺伝性血管浮腫、ブラジキニン依存性浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、網膜浮腫、第ＸＩＩ因子関連寒冷自己炎症性症候群（ＦＡＣＡＳ）、関節リウマチ、痛風、腸疾患、口腔粘膜炎、神経因性疼痛、炎症性疼痛、脊柱管狭窄症・変性性脊椎疾患、動脈または静脈血栓症、術後イレウス、大動脈瘤、変形性関節症、血管炎、浮腫、脳浮腫、肺塞栓症、脳卒中、心室補助装置またはステントにより誘導される凝固、頭部外傷または腫瘍周囲の脳浮腫、敗血症、急性中大脳動脈（ＭＣＡ）虚血事象（脳卒中）、再狭窄（例えば、血管形成術後）、全身性エリテマトーデス腎炎、または熱傷から選択される疾患または障害の治療のための薬物を製造することにて使用するための、請求項１～６１のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または前記抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物。
【請求項77】
遺伝性血管浮腫、ブラジキニン依存性浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、網膜浮腫、第ＸＩＩ因子関連寒冷自己炎症性症候群（ＦＡＣＡＳ）、関節リウマチ、痛風、腸疾患、口腔粘膜炎、神経因性疼痛、炎症性疼痛、脊柱管狭窄症・変性性脊椎疾患、動脈または静脈血栓症、術後イレウス、大動脈瘤、変形性関節症、血管炎、浮腫、脳浮腫、肺塞栓症、脳卒中、心室補助装置またはステントにより誘導される凝固、頭部外傷または腫瘍周囲の脳浮腫、敗血症、急性中大脳動脈（ＭＣＡ）虚血事象（脳卒中）、再狭窄（例えば、血管形成術後）、全身性エリテマトーデス腎炎、または熱傷から選択される疾患または障害の治療のための、請求項１～６１のいずれか１項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または前記抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物の使用。
【請求項78】
ブラジキニンのレベルを低下させる、またはブラジキニン産生を阻害することを必要とする対象にてそれを行う方法であって、治療有効量の請求項１～６１のいずれか１項に記載の抗体もしくはその結合断片、または前記抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項79】
血漿カリクレイン活性を低下させる、またはそれを阻害することを必要とする対象にてそれを行う方法であって、治療有効量の請求項１～６１のいずれか１項に記載の抗体もしくはその結合断片、または前記抗体もしくはその抗原結合断片を含む医薬組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項80】
前記疾患または前記障害が遺伝性血管浮腫である、請求項７２～７９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項81】
前記疾患または前記障害がブラジキニン依存性浮腫である、請求項７２～７９のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１月２８日に出願された米国仮特許出願第６３／１４２，７４８号；２０２１年３月１０日に出願された米国仮特許出願第６３／１５９，３２３号；２０２１年７月９日に出願された米国仮特許出願第６３／２２０，１９４号；及び２０２１年１０月２１日に出願された米国仮特許出願第６３／２６２，８３８号の優先権及び利益を主張するが、その内容はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年１月２８日に出願された米国仮特許出願第６３／１４２，７４８号；２０２１年３月１０日に出願された米国仮特許出願第６３／１５９，３２３号；２０２１年７月９日に出願された米国仮特許出願第６３／２２０，１９４号；及び２０２１年１０月２１日に出願された米国仮特許出願第６３／２６２，８３８号の優先権及び利益を主張するが、その内容はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【0002】
発明の分野
本発明の分野は免疫学、特に治療用抗体、及びそれら抗体を用いた疾患の治療である。
本発明の分野は免疫学、特に治療用抗体、及びそれら抗体を用いた疾患の治療である。
【背景技術】
【0003】
血漿カリクレインはセリンプロテアーゼであり、さまざまな炎症性疾患、心血管疾患、感染症（敗血症）及び腫瘍疾患の潜在的な薬物標的である（Ｓａｉｎｚ Ｉ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ ９８，７７－８３，２００７）。血漿カリクレインの活性化は、第ＸＩＩ因子のそのフィードバック活性化を介して内因性凝固を増幅し、炎症誘発性ノナペプチドであるブラジキニンの産生を介して炎症を増強する。血漿カリクレインは、循環における主要なキニノゲナーゼとして、血管系におけるブラジキニンの生成に主に関与している。血漿カリクレインの主要な天然阻害剤であるＣ１阻害剤タンパク質（Ｃ１－ＩＮＨ）の遺伝的欠損は、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）を引き起こす。ＨＡＥ患者は未知の誘因によって引き起こされることが多い疼痛性浮腫の急性発作に苦しむ（Ｚｕｒａｗ Ｂ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３５９，１０２７－１０３６，２００８）。薬理学的薬剤の使用または動物モデルでの遺伝子研究によって、血漿カリクレイン・キニン系（血漿ＫＫＳ）は種々の疾患に関与している。血漿カリクレイン結合タンパク質（例えば、抗体、例えば、阻害抗体）は、種々の疾患及び状態、例えば、血漿カリクレイン活性のレベルに関連する疾患及び状態に対して有用な治療剤である。
【0004】
これまでに行われた努力にもかかわらず、血漿カリクレインを標的とする治療用抗体のニーズが存在する。
【発明の概要】
【0005】
本明細書に記載されている本発明は、血漿カリクレイン、例えばヒト血漿カリクレインに結合する高親和性の結合タンパク質、例えば、抗体及び抗原結合断片の発見に部分的に基づく。抗体は血漿カリクレイン、例えば、ヒト血漿カリクレインに対して高い特異性を有する。この抗体は、プレカリクレインと比べて血漿カリクレインに対する高い選択性を有し、トリプシン及び他のセリンプロテアーゼに対する有意な的外れ結合を欠く。これらの結合タンパク質はまた、延長半減期を有してもよく、例えば、血中での延長半減期を有してもよい。これら及び他の特徴のせいで、抗体は血漿カリクレインが介在する種々の障害、例えば、遺伝性血管浮腫やブラジキニン依存性浮腫の治療に有用であってもよく、また、他の抗体と比べて低い用量及び／または長い投与間隔でこれらの障害の治療を円滑にしてもよい。
【0006】
本発明の一態様では、本明細書で開示されているのは血漿カリクレインを結合する抗原結合断片を含む抗体である。血漿カリクレインは、ヒト血漿カリクレイン、例えば、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を有するヒト血漿カリクレインであってもよい。
【0007】
本明細書に開示されている抗体及び抗原結合断片は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含んでもよい。
【0008】
例えば、抗体またはその結合断片は、ＨＣＤＲ１が配列番号１４、２３、２９、または４３に示されるアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２が配列番号１５、１７、１９、２４、３０、または４４に示されるアミノ酸配列を含み；且つＨＣＤＲ３が配列番号１６、２５、または３１に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと、ＬＣＤＲ１が配列番号１１、２０、または２７に示されるアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２が配列番号１２、１８、２１、または２６に示されるアミノ酸配列を含み；且つＬＣＤＲ３が配列番号１３、２２、または２８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを有してもよい。
【0009】
例えば、抗体またはその結合断片は、ＨＣＤＲ１が配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２が配列番号１５、１７、または１９に示されるアミノ酸配列を含み；且つＨＣＤＲ３が配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと、ＬＣＤＲ１が配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２が配列番号１２または１８に示されるアミノ酸配列を含み；且つＬＣＤＲ３が配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを有してもよい。
【0010】
例えば、抗体またはその結合断片は、ＨＣＤＲ１が配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含み；且つＨＣＤＲ３が配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと、ＬＣＤＲ１が配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２が配列番号２１または２６に示されるアミノ酸配列を含み；且つＬＣＤＲ３が配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを有してもよい。
【0011】
例えば、抗体またはその結合断片は、ＨＣＤＲ１が配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２が配列番号３０に示されるアミノ酸配列を含み；且つＨＣＤＲ３が配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと、ＬＣＤＲ１が配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２が配列番号２１または２６に示されるアミノ酸配列を含み；且つＬＣＤＲ３が配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを有してもよい。
【0012】
例えば、抗体またはその結合断片は、ＨＣＤＲ１が配列番号４３に示されるアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２が配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含み；且つＨＣＤＲ３が配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと、ＬＣＤＲ１が配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２が配列番号１２または１８に示されるアミノ酸配列を含み；且つＬＣＤＲ３が配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを有してもよい。
【0013】
例えば、抗体またはその結合断片は、ＨＣＤＲ１が配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２が配列番号１５、１７、または１９に示されるアミノ酸配列を含み；且つＨＣＤＲ３が配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと、ＬＣＤＲ１が配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２が配列番号１２または１８に示されるアミノ酸配列を含み；且つＬＣＤＲ３が配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを有してもよい。
【0014】
例えば、抗体またはその結合断片は、ＨＣＤＲ１が配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２が配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含み；且つＨＣＤＲ３が配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと、ＬＣＤＲ１が配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２が配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含み；且つＬＣＤＲ３が配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを有してもよい。
【0015】
例えば、抗体またはその結合断片は、ＨＣＤＲ１が配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２が配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含み；且つＨＣＤＲ３が配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと、ＬＣＤＲ１が配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２が配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含み；且つＬＣＤＲ３が配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを有してもよい。
【0016】
例えば、抗体またはその結合断片は、ＨＣＤＲ１が配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２が配列番号１７に示されるアミノ酸配列を含み；且つＨＣＤＲ３が配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと、ＬＣＤＲ１が配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２が配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含み；且つＬＣＤＲ３が配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを有してもよい。
【0017】
例えば、抗体またはその結合断片は、ＨＣＤＲ１が配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２が配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含み；且つＨＣＤＲ３が配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと、ＬＣＤＲ１が配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２が配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含み；且つＬＣＤＲ３が配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを有してもよい。
【0018】
例えば、抗体またはその結合断片は、ＨＣＤＲ１が配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２が配列番号３０に示されるアミノ酸配列を含み；且つＨＣＤＲ３が配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと、ＬＣＤＲ１が配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み；ＣＤＲ２が配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含み；且つＬＣＤＲ３が配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを有してもよい。
【0019】
例えば、抗体またはその結合断片は、ＨＣＤＲ１が配列番号４３に示されるアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２が配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含み；且つＨＣＤＲ３が配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと、ＬＣＤＲ１が配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２が配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含み；且つＬＣＤＲ３が配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを有してもよい。
【0020】
例えば、抗体またはその結合断片は、ＨＣＤＲ１がそのアミノ酸配列に対して最大１、２、または３のアミノ酸置換がある配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含み；ＣＤＲ２がそのアミノ酸配列に対して最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または１３のアミノ酸置換がある配列番号１５、１７、または１９に示されるアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ３がそのアミノ酸配列に対して最大１、２、３、４、５、６、７、８、または９のアミノ酸置換がある配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含むＶＨと；ＬＣＤＲ１がそのアミノ酸配列に対して最大１、２、３、４、５、６、または７のアミノ酸置換がある配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２がそのアミノ酸配列に対して最大１、２、３、または４のアミノ酸置換がある配列番号１２または１８に示されるアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ３がそのアミノ酸配列に対して最大１、２、３、または４のアミノ酸置換がある配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＶＬとを有してもよい。抗体または結合断片の一部では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３のそれぞれが多くても１つのアミノ酸置換を含む一方で、他の抗体または結合断片では、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、またはＨＣＤＲ３から選択される多くても１つのＣＤＲが１つの置換を含み、及び／またはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／またはＬＣＤＲ３から選択される多くても１つのＣＤＲが１つの置換を含む。
【0021】
本明細書に開示されている抗体または結合断片のＶＬは、配列番号２、４、または６、例えば配列番号６に示されるアミノ酸配列を含んでもよい。本明細書に開示されている抗体または結合断片のＶＨは、配列番号１、３、または５、例えば配列番号５に示されるアミノ酸配列を含んでもよい。ＶＨは配列番号５に示されるアミノ酸配列を含んでもよく、ＶＬは配列番号６に示されるアミノ酸配列を含んでもよい。ＶＨは配列番号１、３、または５に示されるアミノ酸配列を含んでもよく、ＶＬは、配列番号２、４、または６に示されるアミノ酸配列を含んでもよい。
【0022】
本明細書に開示されている抗体または結合断片の軽鎖は配列番号８に示されるアミノ酸配列を含んでもよい。本明細書に開示されている抗体または結合断片の重鎖は配列番号１０、９または７に示されるアミノ酸配列を含んでもよい。例えば、軽鎖は配列番号８のアミノ酸配列を含んでもよく、重鎖は配列番号７のアミノ酸配列を含んでもよい。例えば、軽鎖は配列番号８のアミノ酸配列を含んでもよく、重鎖は配列番号９のアミノ酸配列を含んでもよい。例えば、軽鎖は配列番号８のアミノ酸配列を含んでもよく、重鎖は配列番号１０のアミノ酸配列を含んでもよい。
【0023】
抗体または抗原結合断片は、配列番号５、３または１に示されるアミノ酸配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を持つＶＨ領域、及び／または配列番号２、４、または６に示されるアミノ酸配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を持つＶＬ領域を有してもよい。
【0024】
抗体または抗原結合断片は、配列番号１０、９、または７に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、また９９％のパーセント相同性を持つ重鎖アミノ酸配列、及び／または配列番号８に示される配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のパーセント相同性を持つ軽鎖配列を有してもよい。
【0025】
本明細書に開示されている抗体及び結合断片のＣＤＲ配列はヒトフレームワーク配列またはヒト化フレームワーク配列の間に挿入されてもよい。抗体は、例えば、インタクトな抗体または完全長の抗体であってもよい。
【0026】
本明細書に開示されている抗体または抗原結合断片は、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を有するヒト血漿カリクレインの以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも１つに結合してもよい。例えば、それらは、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を有するヒト血漿カリクレインの以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｓ５９７、Ｙ６１７、またはＴ６２５の１つ以上に結合してもよい。
【0027】
本明細書に開示されている抗体または抗原結合断片は 表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイによって測定されるとき、ヒト血漿カリクレイン、例えば、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を有するヒト血漿カリクレインに約１、２、３、４、または５×１０－９Ｍ以下のＫＤで結合してもよい。それらは、ｐＨ６．０～７．４の間で実質的にｐＨに依存しないＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）、及び／またはヒト血漿カリクレインについて０．１ｎＭ～５ｎＭの間のＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０または７．４を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）；及び／またはヒト血漿カリクレインについては０．１ｎＭ～５ｎＭの間のＫＤ、及びヒトプレカリクレインについては２５０ｎＭ～２，０００ｎＭの間のＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０または７．４を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）を有してもよい。
【0028】
本発明はまた、血漿カリクレインへの結合に関して本明細書に開示されている抗体または結合断片と競合する抗体及びその結合断片も対象とする。例えば、そのような抗体は、本明細書に開示されている抗体とヒト血漿カリクレイン上の同じエピトープに結合してもよい。例えば、そのような抗体は、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を有するヒト血漿カリクレインの残基Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５のうちの１つ以上に結合してもよい。例えば、そのような抗体は、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を有するヒト血漿カリクレインの残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｓ５９７、Ｙ６１７、またはＴ６２５のうちの１つ以上に結合してもよい。そのような抗体は、以下の特徴：（ｉ）少なくとも２０日の血清半減期；（ｉｉ）ｐＨ６．０～７．４の間で実質的にｐＨに依存しないＫＤ （例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）；（ｉｉｉ）ヒト血漿カリクレインについて０．１ｎＭ～５ｎＭの間のＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０または７．４を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）；及び／または（ｉｖ）ヒト血漿カリクレインについては０．１ｎＭ～５ｎＭの間のＫＤ、及びヒトプレカリクレインについては２５０ｎＭ～２，０００ｎＭの間のＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０または７．４を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）のうちの１つ以上を有してもよい。
【0029】
本明細書に開示されている抗体または抗原結合断片はモノクローナル抗体であってもよい。それらはヒト化抗体であってもよい。それらは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭから選択されるクラスの重鎖定常領域を有してもよい。定常領域がクラスＩｇＧである場合、サブクラスはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択されてもよい。重鎖定常領域がＩｇＧ１である場合、それはＥＵ番号付け目録に従って番号付けされたＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅの突然変異、またはＭ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓの突然変異を有してもよい。重鎖可変領域と軽鎖可変領域は、リンカーによって連結されていてもよく、または連結されていなくてもよい。ｓｃＦｖ抗体のようにそれらがリンカーによって連結されている場合、リンカーは（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号３５）；（ＧＧＧＧＡ）ｎ（配列番号３６）の配列、またはそれらの任意の組み合わせを有するペプチドリンカーであってもよく、各ｎは独立して１～５である。
【0030】
別の態様では、本発明は、本明細書に開示されている抗体または結合断片の重鎖または重鎖可変領域（ＶＨ）をコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸、と同様に本明細書に開示されている抗体または抗原結合断片の軽鎖または軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸を含む。重鎖及び軽鎖は同じ核酸配列上にコードされてもよく、または重鎖が１つの核酸上にコードされ、軽鎖が別の核酸によって別々にコードされてもよい。ＶＬ及びＶＨは同じ核酸配列上にコードされてもよく、またはＶＨが１つの核酸上にコードされ、ＶＬが別の核酸によって別々にコードされてもよい。発現ベクターは重鎖と軽鎖の双方をコードする核酸を含有してもよく、または発現ベクターはＶＬ鎖とＶＨ鎖の双方をコードする核酸を含有してもよい。宿主細胞は、重鎖及び軽鎖の双方をコードする核酸を含有する発現ベクターを含有してもよく、または宿主細胞は、重鎖をコードする核酸を含有する発現ベクターと、軽鎖をコードする核酸を含有する発現ベクターとを含有してもよい。宿主細胞は、ＶＨ及びＶＬの双方をコードする核酸を含有する発現ベクターを含有してもよく、または宿主細胞は、ＶＨをコードする核酸を含有する発現ベクターと、ＶＬをコードする核酸を含有する発現ベクターとを含有してもよい。宿主細胞は、重鎖及び軽鎖、またはＶＨ及びＶＬを発現して本発明の抗体または抗原結合断片を作り出すような条件下で増殖させてもよい。
【0031】
別の態様では、本発明は本明細書に開示されている抗体もしくは抗原結合断片、またはそれをコードする核酸を含む医薬組成物を提供する。医薬組成物は、例えば、注射可能または静脈内投与可能であってもよい。
【0032】
さらに別の態様では、本発明は、本明細書に開示されているような血漿カリクレイン抗体もしくはその抗原結合断片、またはそれを含有する医薬組成物を投与することによって、対象における遺伝性血管浮腫、ブラジキニン依存性浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、網膜浮腫、第ＸＩＩ因子関連寒冷自己炎症性症候群（ＦＡＣＡＳ）、関節リウマチ、痛風、腸疾患、口腔粘膜炎、神経因性疼痛、炎症性疼痛、脊柱管狭窄症・変性性脊椎疾患、動脈または静脈血栓症、術後イレウス、大動脈瘤、変形性関節症、血管炎、浮腫、脳浮腫、肺塞栓症、脳卒中、心室補助装置またはステントにより誘導される凝固、頭部外傷または腫瘍周囲の脳浮腫、敗血症、急性中大脳動脈（ＭＣＡ）虚血事象（脳卒中）、再狭窄（例えば、血管形成術後）、全身性エリテマトーデス腎炎、または熱傷から選択される疾患または障害がある対象を治療する方法を提供する。
【0033】
開示されている抗体または抗原結合断片は、遺伝性血管浮腫またはブラジキニン依存性浮腫を含む、対象における血漿カリクレインが介在する障害を治療する方法に使用されてもよい。開示されている抗体またはその抗原結合断片は、遺伝性血管浮腫またはブラジキニン依存性浮腫のような前述の状態を治療するための薬剤の製造にも使用されてもよい。
【0034】
開示されている抗体またはその結合断片は、対象におけるブラジキニンレベルを低下させるために、対象におけるブラジキニン産生を低下させるもしくは阻害するために、及び／または対象における血漿カリクレイン活性を低下させるもしくは阻害するために使用されてもよい。
【図面の簡単な説明】
【0035】
【図1】相対光単位（ＲＬＵ）に基づいたヒト血漿カリクレインに対する種々のハイブリドーマ株の選択性を示す棒グラフである。
【図2】ヒト血漿カリクレインに対する種々の抗体の阻害活性を示すグラフである。
【図3】ｐＫａｌの濃度が１ｎＭ（上のグラフ）及び１０ｎＭ（下のグラフ）である場合の、ヒト血漿カリクレインに対する種々の抗体の阻害活性を示すグラフを提供する。
【図4】ｐＫａｌの濃度が１ｎＭである場合の、ヒト血漿カリクレインに対する種々の抗体の阻害活性を示すグラフを提供する。
【図5】試験管内でのブラジキニン産生の阻害においてＭＡｂ４－ＹＴＥがＤＸ－２９３０より強力であることを示すグラフを提供する。
【図6】ｐＨ７．４及びｐＨ６．０におけるｐＫａｌ（グラフの上の列）及びｐｒｅＫａｌ（グラフの下の列）に対するＤＸ－２９３０、ＭＡｂ４－ＹＴＥ、及びＭＡｂ４－ＬＳの親和性を比較する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）結合データのグラフを提供する。
【図7】実施例２に記載されているような異種間ｐＫａｌ結合アッセイにおいて、ＭＡｂ４－ＹＴＥの濃度に対してプロットした血漿カリクレイン（ｐＫａｌ）活性を示すグラフである。それが示すように、ＭＡｂ４－ＹＴＥはヒトだけでなく、サル、ラット、ウサギのｐＫａｌの強力な阻害剤である。
【図8】カニクイザルにおけるＭＡｂ４、ＭＡｂ４－ＬＳ、及びＭＡｂ４－ＹＴＥの濃度を経時的に示す薬物動態データのグラフを提供する。
【図9】ＭＡｂ４－ＹＴＥがカニクイザルにて生体内でＤＸ－２９３０と比べて実質的に延長された血漿半減期を有することを示すグラフを提供する。ＤＸ－２９３０の経時的な抗体濃度を上のグラフに、ＭＡｂ４－ＹＴＥ を真ん中のグラフに示し、上と真ん中のグラフのデータを一緒に下のグラフに示す。
【図10】比較抗体と比べて、ＭＡｂ４－ＹＴＥの生体内でのさらに長い作用持続時間を示すグラフである。
【図11】トリプシン阻害アッセイにおけるガベキサートメシル酸塩、ＤＸ－２９３０、及びＭＡｂ４－ＹＴＥのＩＣ５０を示すグラフを提供する。
【図12】ＭＡｂ４－ＬＳとＭＡｂ４－ＹＴＥ抗体のＤＸ－２９３０表面への競合結合、ＭＡｂ４－ＹＴＥとＤＸ－２９３０抗体のＭＡｂ４－ＬＳ表面への競合結合、及びＭＡｂ４－ＬＳとＤＸ－２９３０抗体のＭＡｂ４－ＹＴＥ表面への競合結合を示すグラフである。
【図13】ヒトｐＫａｌとＭＡｂ４－ＹＴＥのペプチド相互作用を示す図である。
【図14】Ａ～ＪはヒトｐＫａｌとＭＡｂ４－ＹＴＥとの間の相互作用を示す。ＡはｐＫａｌ－ＭＡｂ４－ＹＴＥエピトープ架橋マッピングの正面図のリボン／表面の描写を示す。ＢはｐＫａｌ－ＭＡｂ４－ＹＴＥエピトープ架橋マッピングの背面図のリボン／表面の描写を示す。ＣはｐＫａｌ－ＭＡｂ４－ＹＴＥエピトープ架橋マッピングの側面図１のリボン／表面の描写を示す。ＤはｐＫａｌ－ＭＡｂ４－ＹＴＥエピトープ架橋マッピングの側面図２のリボン／表面の描写を示す。ＥはｐＫａｌ－ＭＡｂ４－ＹＴＥエピトープ架橋マッピングの上面図のリボン／表面の描写を示す。ＦはｐＫａｌ－ＭＡｂ４－ＹＴＥエピトープ架橋マッピングの正面図のリボンの描写を示す。ＧはｐＫａｌ－ＭＡｂ４－ＹＴＥエピトープ架橋マッピングの背面図のリボンの描写を示す。ＨはｐＫａｌ－ＭＡｂ４－ＹＴＥエピトープ架橋マッピングの側面図１のリボンの描写を示す。ＩはｐＫａｌ－ＭＡｂ４－ＹＴＥエピトープ架橋マッピングの側面図２のリボンの描写を示す。ＪはｐＫａｌ－ＭＡｂ４－ＹＴＥエピトープ架橋マッピングの上面図のリボンの描写を示す。
【図15】ヒトｐＫａｌとＤＸ－２９３０のペプチド相互作用の図である。
【図16】Ａ～ＪはヒトｐＫａｌとＤＸ－２９３０との間の相互作用を示す。ＡはｐＫａｌ－ＤＸ－２９３０エピトープ架橋マッピングの正面図のリボン／表面の描写を示す。ＢはｐＫａｌ－ＤＸ－２９３０エピトープ架橋マッピングの背面図のリボン／表面の描写を示す。ＣはｐＫａｌ－ＤＸ－２９３０エピトープ架橋マッピングの側面図１のリボン／表面の描写を示す。ＤはｐＫａｌ－ＤＸ－２９３０エピトープ架橋マッピングの側面図２のリボン／表面の描写を示す。ＥはｐＫａｌ－ＤＸ－２９３０エピトープ架橋マッピングの上面図のリボン／表面の描写を示す。ＦはｐＫａｌ－ＤＸ－２９３０エピトープ架橋マッピングの正面図のリボンの描写を示す。ＧはｐＫａｌ－ＤＸ－２９３０エピトープ架橋マッピングの背面図のリボンの描写を示す。ＨはｐＫａｌ－ＤＸ－２９３０エピトープ架橋マッピングの側面図１のリボンの描写を示す。ＩはｐＫａｌ－ＤＸ－２９３０エピトープ架橋マッピングの側面図２のリボンの描写を示す。ＪはｐＫａｌ－ＤＸ－２９３０エピトープ架橋マッピングの上面図のリボンの描写を示す。
【図17】以下の実施例５に記載されているような、抗体ＭＡｂ４－ＹＴＥと比べた、抗体ＤＸ－２９３０によって架橋されたヒトｐＫａｌの残基を示すマップであり、これらの抗体がｐＫａｌ上の異なるエピトープに結合することを示す。
【発明を実施するための形態】
【0036】
本明細書に記載されている本発明は、血漿カリクレイン、例えばヒト血漿カリクレインに結合する高親和性の結合タンパク質、例えば、抗体及び抗原結合断片の発見に部分的に基づく。抗体は血漿カリクレイン、例えば、ヒト血漿カリクレインに対して高い特異性を有する。該抗体は、プレカリクレインと比べて血漿カリクレインに対する高い選択性を有し、トリプシン及び他のセリンプロテアーゼに対する有意な的外れ結合を欠く。これらの結合タンパク質はまた、延長半減期を有してもよく、例えば、血中での延長半減期を有してもよい。これら及び他の特徴のせいで、抗体は血漿カリクレインが介在する種々の障害、例えば、遺伝性血管浮腫やブラジキニン依存性浮腫の治療に有用であってもよく、また、他の抗体と比べて低い用量及び／または長い投与間隔でこれらの障害の治療を促進にしてもよい。
【0037】
本明細書に記載されている抗体は、以下の特徴：（ｉ）少なくとも２０日の血清半減期；（ｉｉ）ｐＨ６．０～７．４の間で実質的にｐＨに依存しないＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）；（ｉｉｉ）ヒト血漿カリクレインについて０．１ｎＭ～５ｎＭの間のＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０または７．４を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）；及び／または（ｉｖ）ヒト血漿カリクレインについては０．１ｎＭ～５ｎＭの間のＫＤ、及びヒトプレカリクレインについては２５０ｎＭ～２，０００ｎＭの間のＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０または７．４を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）のうちの１つ以上を有してもよい。
【0038】
これらの結合タンパク質はまた、遺伝性血管浮腫及びブラジキニン依存性浮腫のような種々の血漿カリクレイン介在性障害を治療するための組成物、例えば、医薬組成物にて使用することもできる。
【0039】
Ｉ．血漿カリクレイン抗体
本明細書で使用されるとき「抗体」という用語は、所望の生物活性を示す任意の形態の抗体を指す。したがって、「抗体」という用語は最も広い意味で使用され、具体的にはモノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、キメラ抗体、及びラクダ化単一ドメイン抗体を対象とするが、これらに限定されない。本明細書に記載されている抗体には、２つの免疫グロブリン軽鎖と結合した２つの免疫グロブリン重鎖を含有する完全長またはインタクトの抗体が含まれる。
本明細書で使用されるとき「抗体」という用語は、所望の生物活性を示す任意の形態の抗体を指す。したがって、「抗体」という用語は最も広い意味で使用され、具体的にはモノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、キメラ抗体、及びラクダ化単一ドメイン抗体を対象とするが、これらに限定されない。本明細書に記載されている抗体には、２つの免疫グロブリン軽鎖と結合した２つの免疫グロブリン重鎖を含有する完全長またはインタクトの抗体が含まれる。
【0040】
抗体軽鎖は通常、１つの可変領域（ＶＬ）と１つの定常領域（ＣＬ）とから成る。重鎖は通常、１つの可変領域（ＶＨ）と少なくとも３つの定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）（アイソタイプによってはそれ以上）とから成る。通常、各鎖のアミノ末端部分に見られる各軽鎖／重鎖ペアの可変領域は抗体結合部位を形成し、この部位は主に抗原認識に関与し、抗体の結合特異性を決定する。したがって一般に、インタクトな抗体または完全長の抗体は２つの結合部位を有し、すなわち二価である。２つの結合部位は同じであってもよく、同じ抗原を標的としてもよく；または、二官能性抗体または二重特異性抗体のように、２つの結合部位が異なっていてもよく、例えば、各結合部位は異なる抗原、または同じ抗原の異なるエピトープを標的とする。
【0041】
免疫グロブリン重鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能に関与する定常領域を定義してもよい。通常、ヒトの軽鎖はカッパ軽鎖とラムダ軽鎖に分類される。さらに、ヒト重鎖は通常、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、またはイプシロンとして分類され、抗体のアイソタイプはそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＡ、及びＩｇＥとして定義されている。
【0042】
通常、抗体の重鎖と軽鎖の双方の可変ドメインは、４つの比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）内に位置する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）とも呼ばれる超可変領域を含む。ＣＤＲはふつう、フレームワーク領域によって並べられ、特定のエピトープへの結合を可能にする。一般に、Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの双方がＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む。本明細書で使用されるとき、「ＨＣＤＲ１」、「ＨＣＤＲ２」、及び「ＨＣＤＲ３」はそれぞれ重鎖可変領域のＣＤＲ１、２、または３を指し、且つ「ＬＣＤＲ１」、「ＬＣＤＲ２」、及び「ＬＣＤＲ３」はそれぞれ軽鎖可変領域のＣＤＲ１、２または３を指す。
【0043】
各ＣＤＲへのアミノ酸の割り当ては、一般に、Ｋａｂａｔの定義（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．；Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；５ｔｈ ｅｄ．；ＮＩＨ Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１－３２４２（１９９１）；Ｋａｂａｔ（１９７８）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１－７５；Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．，（１９７７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６を参照のこと）、またはＣｈｏｔｈｉａの定義（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ，ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７またはＣｈｏｔｈｉａ，ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３を参照のこと）に従うが、例えば、ＩＭＧＴ（例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ（２００５），Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３３，Ｄ５９３－Ｄ５９７；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，（２００３），Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７，５５－７７；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，（２００５），Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２９，１８５－２０３（２００５）；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，（２００５），Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００５，２９，９１７－９３８を参照のこと）またはＡｂＭ（例えば、Ｍａｒｔｉｎ，ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６，９２６８－９２７２；Ｐｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９２），Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，１，１２６；Ｒｅｅｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｉｎ Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ Ｍ．Ｊ．Ｅ．（ｅｄ．），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ．Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１４１－１７２を参照のこと）のような代わりの定義も知られている。
【0044】
本明細書で使用されるとき「親抗体」という用語は、ヒト治療用抗体として使用するための抗体のヒト化のような、意図された用途のために抗体を修飾するのに先立って、免疫系を抗原に曝露することによって得られる抗体を指すのに使用される。
【0045】
本明細書で使用されるとき、別段の指示がない限り、「抗体断片」または「抗原結合断片」という用語は、抗体の抗原結合断片、すなわち、完全長のまたはインタクトな抗体によって結合される抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体断片、例えば、１つ以上のＣＤＲ領域を保持する断片を指す。抗体結合断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；ダイアボディ；線形抗体；単鎖抗体分子、例えば、ｓｃ－Ｆｖ；抗体断片から形成されるナノボディ及び多重特異性抗体；単一ドメイン抗体；組換え重鎖のみの抗体（ＶＨＨ）；サメ重鎖のみの抗体（ＶＮＡＲ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0046】
本明細書で使用されるとき、「Ｆａｂ断片」という用語は一方の軽鎖と、一方の重鎖のＣＨ１及び可変領域とを含む抗体断片を意味すると理解される。
【0047】
本明細書で使用されるとき、「Ｆｃ」領域という用語は、それぞれ抗体の少なくともＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む２つの重鎖断片を含有する抗体断片を指す。
【0048】
本明細書で使用されるとき、「Ｆａｂ’断片」という用語は、一方の軽鎖と、ＶＨドメインとＣＨ１ドメインとさらにはＣＨ１とＣＨ２ドメインの間の領域を含有する一方の重鎖の一部または断片とを含有する抗体断片を意味すると理解される。２つのＦａｂ’断片の２つの重鎖の間に形成される鎖間ジスルフィド結合はＦ（ａｂ’）２断片を形成することができる。
【0049】
本明細書で使用されるとき「Ｆｖ領域」という用語は、重鎖及び軽鎖の双方に由来する可変領域を含むが、定常領域を欠く抗体の領域を指す。
【0050】
「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」という用語は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含む抗体断片を指し、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドはＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これによってｓｃＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することが可能になる。ｓｃＦｖの概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４），ＴＨＥ ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＹ ＯＦ ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５を参照のこと。国際特許出願公開番号ＷＯ８８／０１６４９号及び米国特許第４，９４６，７７８号及び同第５，２６０，２０３号も参照のこと。
【0051】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用されるとき、実質的に均質な抗体の集団を指し、すなわち、集団を構成する抗体分子は、少量で存在してもよい考えられる天然に存在する突然変異を除いてアミノ酸配列が同一である。対照的に、従来の（ポリクローナル）抗体調製物は通常、可変ドメイン、特にＣＤＲに異なるアミノ酸配列を有する多数の異なる抗体を含み、これらは異なるエピトープに特異的であることが多い。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均質な抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９７５），Ｎａｔｕｒｅ， ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製されてもよく、または組み換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）によって作製されてもよい。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７に記載された技術を使用してファージ抗体ライブラリーから単離されてもよい。Ｐｒｅｓｔａ，（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１も参照のこと。
【0052】
本明細書で使用されるとき、「キメラ抗体」という用語は、第１の抗体由来の可変ドメインと第２の抗体由来の定常ドメインとを有する抗体を意味すると理解され、第１及び第２の抗体は異なる種に由来する；例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１－６８５５）を参照のこと。
【0053】
本明細書で使用されるとき、「ヒト化抗体」という用語は、ヒト及び非ヒト（例えば、マウス、ラット）の抗体の双方に由来する配列を含有する抗体の形態を指す。例えば、ヒト化抗体は、ＣＤＲまたはその一部が非ヒト免疫グロブリンの配列に由来する、またはそれに対応し、ＦＲのすべてまたは実質的にすべてまたはその一部がヒト免疫グロブリンの配列に由来する、またはそれに対応する可変領域を含むことができる。ヒト化抗体は任意で、ヒト免疫グロブリン定常領域（例えば、ヒト軽鎖定常領域及び／またはヒト重鎖定常領域、例えば、ヒトＦｃ、またはヒトＣＨ１、ＣＨ２、及び／またはＣＨ３ドメイン）の少なくとも一部を含んでもよい。本明細書に記載されているＣＤＲ配列は、ヒトまたはヒト化フレームワーク配列の間に挿入されてもよい。
【0054】
ヒト化は、ヒトに投与された場合に、抗体、例えば非ヒト抗体の免疫原性を低下させるために行うことができる。ヒト化アプローチの１つでは、マウス免疫グロブリン定常領域がヒト免疫グロブリン定常領域に置き換えられているキメラタンパク質が作り出される。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，ＰＲＯＣ．ＮＡＴ．ＡＣＡＤ．ＳＣＩ．８１：６８５１－６８５５，Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８４，ＮＡＴＵＲＥ ３１２：６０４－６０８；米国特許第６，８９３，６２５号（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ）；同第５，５００，３６２号（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ）；及び同第４，８１６，５６７号（Ｃａｂｉｌｌｙ）を参照のこと。
【0055】
ＣＤＲ移植として知られるアプローチでは、軽鎖及び重鎖の可変領域のＣＤＲが別の種のフレームワークに移植される。例えば、マウスのＣＤＲをヒトＦＲに移植することができる。いくつかの実施形態では、抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域のＣＤＲはヒトＦＲまたはコンセンサスヒトＦＲに移植される。コンセンサスヒトＦＲを作り出すには、いくつかのヒト重鎖または軽鎖のアミノ酸配列に由来するＦＲを整列させて、コンセンサスアミノ酸配列を特定する。ＣＤＲ移植は米国特許第７，０２２，５００号（Ｑｕｅｅｎ）；同第６，９８２，３２１号（Ｗｉｎｔｅｒ）；同第６，１８０，３７０号（Ｑｕｅｅｎ）；同第６，０５４，２９７号（Ｃａｒｔｅｒ）；同第５，６９３，７６２号（Ｑｕｅｅｎ）；同第５，８５９，２０５号（Ａｄａｉｒ）；同第５，６９３，７６１号（Ｑｕｅｅｎ）；同第５，５６５，３３２号（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ）；同第５，５８５，０８９号（Ｑｕｅｅｎ）；同第５，５３０，１０１号（Ｑｕｅｅｎ）；Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９８６）ＮＡＴＵＲＥ ３２１：５２２－５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）ＮＡＴＵＲＥ ３３２：３２３－３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）ＳＣＩＥＮＣＥ ２３９：１５３４－１５３６；及びＷｉｎｔｅｒ（１９９８）ＦＥＢＳ ＬＥＴＴ ４３０：９２－９４に記載されている。
【0056】
「ＳＵＰＥＲＨＵＭＡＮＩＺＡＴＩＯＮ（商標）」と呼ばれるアプローチでは、ヒトＣＤＲのヒト化されるマウス抗体との構造類似性に基づいて、ヒトＣＤＲ配列がヒト生殖系列遺伝子から選択される。例えば、米国特許第６，８８１，５５７号（Ｆｏｏｔｅ）及びＴａｎ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．ＩＭＭＵＮＯＬ．１６９：１１１９－１１２５を参照のこと。
【0057】
免疫原性を低下させる他の方法には、「再形成」、「ハイパーキメラ化」、及び「ベニアリング／再表面化」が挙げられる。例えば、Ｖａｓｗａｍｉ ｅｔ ａｌ．，１９９８，ＡＮＮＡＬＳ ＯＦ ＡＬＬＥＲＧＹ，ＡＳＴＨＭＡ，＆ ＩＭＭＵＮＯＬ．８１：１０５；Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９６，ＰＲＯＴ．ＥＮＧＩＮＥＥＲ ，９：８９５－９０４；及び米国特許第６，０７２，０３５号（Ｈａｒｄｍａｎ）を参照のこと。ベニアリング／再表面化のアプローチでは、マウス抗体における表面にアクセス可能なアミノ酸残基が、ヒト抗体における同じ位置でさらに頻繁に見られるアミノ酸残基に置き換えられる。この種の抗体再表面化は、例えば、米国特許第５，６３９，６４１号（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ）に記載されている。
【0058】
マウス抗体をヒトでの医療用途に好適な形態に変換する別のアプローチは、ＡＣＴＩＶＭＡＢ（商標）技術（Ｖａｃｃｉｎｅｘ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）として知られており、これには哺乳類細胞で抗体を発現させるワクシニアウイルス系ベクターが関与する。ＩｇＧ重鎖及び軽鎖の高レベルの組み合わせ多様性を生成することができる。例えば、米国特許第６，７０６，４７７号（Ｚａｕｄｅｒｅｒ）；同第６，８００，４４２号（Ｚａｕｄｅｒｅｒ）；及び同第６，８７２，５１８号（Ｚａｕｄｅｒｅｒ）を参照のこと。マウス抗体をヒトでの使用に好適な形態に変換する別のアプローチは、ＫａｌｏＢｉｏｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）によって商業的に実施されている技術である。この技術には、独自のヒト「アクセプター」ライブラリーを使用して抗体選択用の「エピトープに焦点を当てた」ライブラリーを作成することが関与する。マウス抗体をヒトでの医療用途に好適な形態に修飾する別のアプローチは、ＸＯＭＡ（ＵＳ）ＬＬＣによって商業的に実施されているＨＵＭＡＮ ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ（商標）技術である。例えば、国際（ＰＣＴ）公開番号ＷＯ９３／１１７９４及び米国特許第５，７６６，８８６号（Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ）；同第５，７７０，１９６号（Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ）；同第５，８２１，１２３号（Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ）；及び同第５，８６９，６１９号（Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ）を参照のこと。
【0059】
本明細書に開示されている抗体は、異なるタイプに変換することもでき、例えば、ヒトＩｇＧなどに変換することができる。抗体をヒト抗体に変換することによって、ヒト対象は抗体を異物として認識することがなくなるはずである。非ヒトＩｇＧ抗体からヒトＩｇＧ抗体への変換は周知であり、ネイティブ配列が知られれば日常的に行うことができる。本明細書で考察するように、抗体は既知の方法に従って修飾することができる。このような方法は、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ，Ｃｌａｒｋ Ｍ，Ｗａｌｄｍａｎｎ Ｈ，Ｗｉｎｔｅｒ Ｇ（１９８８）．Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｙ”．Ｎａｔｕｒｅ ３３２（６１６２）：３３２－３２３；Ｔｓｕｒｕｓｈｉｔａ Ｎ，Ｐａｒｋ Ｍ，Ｐａｋａｂｕｎｔｏ Ｋ，Ｏｎｇ Ｋ，Ａｖｄａｌｏｖｉｃ Ａ，Ｆｕ Ｈ，Ｊｉａ Ａ，Ｖａｓｑｕｅｚ Ｍ，Ｋｕｍａｒ Ｓ．（２００４）に記載されており、その全体が参照によって組み込まれる。したがって、本発明の抗体はヒト化抗体であってもよい。
【0060】
本明細書で使用されるとき、「完全ヒト抗体」という用語はヒト免疫グロブリンのタンパク質配列のみを含む抗体を指す。完全ヒト抗体は、マウス、マウス細胞、またはマウス細胞由来のハイブリドーマで産生される場合、マウスの糖鎖を含有してもよい。
【0061】
本明細書で使用されるとき、「特異的結合」、「免疫特異的結合」、「免疫特異的に結合する」、または「特異的に結合する」という用語は、所定の抗原（例えば、血漿カリクレイン）または該抗原上に存在するエピトープに結合する抗体を指す。いくつかの実施形態では、抗体は１０－７Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）で所定の抗原（例えば、血漿カリクレイン）を結合し、及び／または所定の抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン、または別の非特異的ポリペプチド）への結合についてのそのＫＤよりも少なくとも２倍低いＫＤで所定の抗原に結合する。「血漿カリクレインを認識する抗体」及び「血漿カリクレインに特異的な抗体」という語句は、本明細書では「血漿カリクレインに免疫特異的に結合する抗体」という用語と相互交換可能に使用される。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、ヒトプレカリクレインのような、しかし、これに限定されない他のタンパク質よりも血漿カリクレインに特異的にまたは優先的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体、または抗体の抗原結合断片は、他の抗原との親和性よりも少なくとも２倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも２０倍大きい、または少なくとも１００倍大きい親和性でその抗原（血漿カリクレイン）に結合する。
【0062】
競合阻害によってｍＡｂの特異性及び親和性を決定する方法は、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８），Ｃｏｌｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３），及びＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９ ６０１（１９８３）に見いだすことができ、これらの参考文献は参照によって全体が本明細書に組み込まれる。
【0063】
本明細書で使用されるとき、「相同体」という用語は、参照配列に対して少なくとも４０％であるが、１００％未満の配列相同性または配列同一性を有するタンパク質配列を指す。２つのペプチド鎖間の同一性パーセントは、Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ ｖ．９．０．０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．，Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｉｆ．）のＡｌｉｇｎＸモジュールの初期設定、またはＢＬＡＳＴのような他の好適な配列比較ソフトウェアを使用したペアごとの配列比較によって決定することができる。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載されている配列に対して少なくとも５０、６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％の相同性または同一性を有する。いくつかの実施形態では、抗体は本明細書に記載されている配列と比べて保存的置換を有する。例示的な保存的置換は表１に示されており、開示されている主題の範囲内に包含される。保存的置換は、抗体の特性に悪影響を及ぼさない限り、フレームワーク領域または抗原結合部位に存在してもよい。抗体の特性、例えば安定性や親和性を改善するために置換が行われてもよい。保存的置換は、そのような修飾がなされる分子と同様の機能的特徴及び化学的特徴を有する分子を作り出すであろう。例示的なアミノ酸置換を以下の表１に示す。
【表1】
【0064】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されているタンパク質及びペプチドの変異型が提供される。いくつかの実施形態では、変異型は置換、欠失、または挿入を含む。いくつかの実施形態では、変異型は１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０（例えば、１～１０）の置換を含む。本明細書に記載されているように、置換は保存的置換であることができる。いくつかの実施形態では、置換は非保存的である。いくつかの実施形態では、変異型は１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０（例えば、１～１０）の欠失を含む。いくつかの実施形態では、変異型は１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０（例えば、１～１０）の挿入を含む。いくつかの実施形態では、置換、欠失、または挿入は本明細書で提供されているＣＤＲに存在する。いくつかの実施形態では、置換、欠失、または挿入は本明細書で提供されているＣＤＲに存在しない。
【0065】
通常、本明細書で提供されている変異型抗体または該抗体の抗原結合断片は、その活性がモル基準で表現される場合（親抗体であることができる未修飾抗体または参照抗体と比較すると）、その血漿カリクレイン結合活性の少なくとも１０％を保持する。いくつかの実施形態では、変異型抗体（またはその抗原断片）、または本明細書で提供されている抗体の抗原結合断片は、親抗体であることができる非修飾抗体または参照抗体としての血漿カリクレイン結合親和性の少なくとも２０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％以上を保持する。本明細書に記載されているように、本発明の抗体または抗原結合断片は、その生物活性を実質的に変化させない、抗体の「保存的変異型」または「機能保存的変異型」とも呼ばれ得る、保存的または非保存的なアミノ酸置換を含むことができることも意図される。
【0066】
本明細書で使用されるとき、「エピトープ」という用語はＡｂの抗原結合領域の１つ以上にて抗体によって認識され、結合され得る任意の分子の一部を指す。エピトープはふつう、アミノ酸または糖側鎖のような分子の化学的に活性がある表面群化から成り、特定の３次元構造特性と同様に特定の電荷特性を有する。エピトープの例には、本明細書で提供されている抗体が結合する残基が挙げられるが、これらに限定されない。エピトープは、線形または連続のエピトープ、すなわち、抗原、例えば、ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の一次構造のアミノ酸の線形配列であってもよい。あるいは、他の実施形態では、エピトープは抗原がその二次構造を想定するときに特定の三次元形状を有する立体構造エピトープであってもよい。例えば、立体構造エピトープは、抗原の非線形、すなわち非連続的なアミノ酸を含んでもよい。
【0067】
本明細書に開示されている抗体は、例えば、高い効力、特異性、及び長期の血清滞留性を持つ阻害性抗体であってもよく、高い効力は、低い薬物用量での高い有効性に変換され、高い特異性は、関連する的外れセリンプロテアーゼの阻害による副作用を軽減する。
【0068】
抗体またはその抗原結合断片が本明細書に提供されているようなアミノ酸配列またはその変異型を含む、血漿カリクレインに結合する抗体またはその抗原結合断片は、以下の特徴：少なくとも２０日の血清半減期；ｐＨ６．０～７．４の間で実質的にｐＨに依存しないＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）；ヒト血漿カリクレインについて０．１ｎＭ～５ｎＭの間のＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０または７．４を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）；及び／またはヒト血漿カリクレインについては０．１ｎＭ～５ｎＭの間のＫＤ、且つヒトプレカリクレインについては２５０ｎＭ～２，０００ｎＭの間のＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０または７．４を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）のうちの１つ以上を含んでもよい。
【0069】
いくつかの実施形態では、抗体は血漿カリクレインに結合するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は血漿カリクレインのエピトープのアミノ酸に結合する。いくつかの実施形態では、血漿カリクレインは以下のアミノ酸配列：ＭＩＬＦＫＱＡＴＹＦ ＩＳＬＦＡＴＶＳＣＧ ＣＬＴＱＬＹＥＮＡＦ ＦＲＧＧＤＶＡＳＭＹ ＴＰＮＡＱＹＣＱＭＲ
ＣＴＦＨＰＲＣＬＬＦ ＳＦＬＰＡＳＳＩＮＤ ＭＥＫＲＦＧＣＦＬＫ ＤＳＶＴＧＴＬＰＫＶ ＨＲＴＧＡＶＳＧＨＳ ＬＫＱＣＧＨＱＩＳＡ ＣＨＲＤＩＹＫＧＶＤ ＭＲＧＶＮＦＮＶＳＫ ＶＳＳＶＥＥＣＱＫＲ ＣＴＮＮＩＲＣＱＦＦ ＳＹＡＴＱＴＦＨＫＡ ＥＹＲＮＮＣＬＬＫＹ ＳＰＧＧＴＰＴＡＩＫ ＶＬＳＮＶＥＳＧＦＳ ＬＫＰＣＡＬＳＥＩＧ ＣＨＭＮＩＦＱＨＬＡ ＦＳＤＶＤＶＡＲＶＬ ＴＰＤＡＦＶＣＲＴＩ ＣＴＹＨＰＮＣＬＦＦ ＴＦＹＴＮＶＷＫＩＥ ＳＱＲＮＶＣＬＬＫＴ ＳＥＳＧＴＰＳＳＳＴ ＰＱＥＮＴＩＳＧＹＳ ＬＬＴＣＫＲＴＬＰＥ ＰＣＨＳＫＩＹＰＧＶ ＤＦＧＧＥＥＬＮＶＴ ＦＶＫＧＶＮＶＣＱＥ ＴＣＴＫＭＩＲＣＱＦ ＦＴＹＳＬＬＰＥＤＣ ＫＥＥＫＣＫＣＦＬＲ ＬＳＭＤＧＳＰＴＲＩ ＡＹＧＴＱＧＳＳＧＹ ＳＬＲＬＣＮＴＧＤＮ ＳＶＣＴＴＫＴＳＴＲ ＩＶＧＧＴＮＳＳＷＧ ＥＷＰＷＱＶＳＬＱＶ ＫＬＴＡＱＲＨＬＣＧ ＧＳＬＩＧＨＱＷＶＬ ＴＡＡＨＣＦＤＧＬＰ ＬＱＤＶＷＲＩＹＳＧ ＩＬＮＬＳＤＩＴＫＤ ＴＰＦＳＱＩＫＥＩＩ ＩＨＱＮＹＫＶＳＥＧ ＮＨＤＩＡＬＩＫＬＱ ＡＰＬＮＹＴＥＦＱＫ ＰＩＣＬＰＳＫＧＤＴ ＳＴＩＹＴＮＣＷＶＴ ＧＷＧＦＳＫＥＫＧＥ ＩＱＮＩＬＱＫＶＮＩ ＰＬＶＴＮＥＥＣＱＫ ＲＹＱＤＹＫＩＴＱＲ ＭＶＣＡＧＹＫＥＧＧ ＫＤＡＣＫＧＤＳＧＧ ＰＬＶＣＫＨＮＧＭＷ ＲＬＶＧＩＴＳＷＧＥ ＧＣＡＲＲＥＱＰＧＶ ＹＴＫＶＡＥＹＭＤＷ ＩＬＥＫＴＱＳＳＤＧ ＫＡＱＭＱＳＰＡ（配列番号：３２）を有するヒト血漿カリクレイン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ０３９５２、ＫＬＫＢ１）である。
ＣＴＦＨＰＲＣＬＬＦ ＳＦＬＰＡＳＳＩＮＤ ＭＥＫＲＦＧＣＦＬＫ ＤＳＶＴＧＴＬＰＫＶ ＨＲＴＧＡＶＳＧＨＳ ＬＫＱＣＧＨＱＩＳＡ ＣＨＲＤＩＹＫＧＶＤ ＭＲＧＶＮＦＮＶＳＫ ＶＳＳＶＥＥＣＱＫＲ ＣＴＮＮＩＲＣＱＦＦ ＳＹＡＴＱＴＦＨＫＡ ＥＹＲＮＮＣＬＬＫＹ ＳＰＧＧＴＰＴＡＩＫ ＶＬＳＮＶＥＳＧＦＳ ＬＫＰＣＡＬＳＥＩＧ ＣＨＭＮＩＦＱＨＬＡ ＦＳＤＶＤＶＡＲＶＬ ＴＰＤＡＦＶＣＲＴＩ ＣＴＹＨＰＮＣＬＦＦ ＴＦＹＴＮＶＷＫＩＥ ＳＱＲＮＶＣＬＬＫＴ ＳＥＳＧＴＰＳＳＳＴ ＰＱＥＮＴＩＳＧＹＳ ＬＬＴＣＫＲＴＬＰＥ ＰＣＨＳＫＩＹＰＧＶ ＤＦＧＧＥＥＬＮＶＴ ＦＶＫＧＶＮＶＣＱＥ ＴＣＴＫＭＩＲＣＱＦ ＦＴＹＳＬＬＰＥＤＣ ＫＥＥＫＣＫＣＦＬＲ ＬＳＭＤＧＳＰＴＲＩ ＡＹＧＴＱＧＳＳＧＹ ＳＬＲＬＣＮＴＧＤＮ ＳＶＣＴＴＫＴＳＴＲ ＩＶＧＧＴＮＳＳＷＧ ＥＷＰＷＱＶＳＬＱＶ ＫＬＴＡＱＲＨＬＣＧ ＧＳＬＩＧＨＱＷＶＬ ＴＡＡＨＣＦＤＧＬＰ ＬＱＤＶＷＲＩＹＳＧ ＩＬＮＬＳＤＩＴＫＤ ＴＰＦＳＱＩＫＥＩＩ ＩＨＱＮＹＫＶＳＥＧ ＮＨＤＩＡＬＩＫＬＱ ＡＰＬＮＹＴＥＦＱＫ ＰＩＣＬＰＳＫＧＤＴ ＳＴＩＹＴＮＣＷＶＴ ＧＷＧＦＳＫＥＫＧＥ ＩＱＮＩＬＱＫＶＮＩ ＰＬＶＴＮＥＥＣＱＫ ＲＹＱＤＹＫＩＴＱＲ ＭＶＣＡＧＹＫＥＧＧ ＫＤＡＣＫＧＤＳＧＧ ＰＬＶＣＫＨＮＧＭＷ ＲＬＶＧＩＴＳＷＧＥ ＧＣＡＲＲＥＱＰＧＶ ＹＴＫＶＡＥＹＭＤＷ ＩＬＥＫＴＱＳＳＤＧ ＫＡＱＭＱＳＰＡ（配列番号：３２）を有するヒト血漿カリクレイン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ０３９５２、ＫＬＫＢ１）である。
【0070】
いくつかの実施形態では、血漿カリクレインは、カニクイザル血漿カリクレイン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ａ０Ａ２Ｋ５ＶＴＪ９－１、配列番号４５）、ウサギ血漿カリクレイン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｇ１Ｔ１２７、配列番号４６）、またはラット血漿カリクレイン（ＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ１４２７２、配列番号４７）である。例えば、抗体またはその抗原結合断片はウサギ、ラット、またはサルの血漿カリクレインに結合してもよい。
【0071】
上記に示したようなヒト血漿カリクレインの配列には、アミノ酸残基１～１９のシグナルペプチド配列が含まれるが、それは翻訳後プロセッシング中に切断され得る。いくつかの実施形態では、抗体はシグナルペプチド配列がないヒト血漿カリクレイン、例えば、成熟ヒト血漿カリクレインに結合する。
【0072】
いくつかの実施形態では、抗体は本明細書に提供されているアミノ酸配列を含む。
【0073】
抗体の配列を修飾してヒトＩｇＧ抗体を得ることができる。本明細書で提供されている配列の変換を改変して他の種類の抗体を得ることができる。ＣＤＲを他の抗体、タンパク質、または分子に結合させて、血漿カリクレインに結合する抗体断片を作り出すこともできる。これは、抗体薬物複合体（「ＡＤＣ」）または多重特異性分子の形態であることもできる。配列は本明細書に記載されているようにキメラ抗体にすることもできる。
【0074】
いくつかの実施形態では、抗体は本明細書に提供されている配列を含むアミノ酸配列またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、抗体は本明細書に提供されている１つ以上のアミノ酸配列、その抗原結合断片、またはそのヒトＩｇＧ変異型を含む。「そのヒトＩｇＧ変異型」は、出発抗体がヒトＩｇＧ抗体ではない場合に、ヒトＩｇＧとなるように修飾された抗体を指す。
【0075】
抗体はキメラ抗体またはヒト抗体に修飾することもできる。抗体はまた、注射可能な医薬組成物において使用することもできる。また、本明細書に記載されているように、抗体は単離された抗体または操作された抗体であることができる。
【0076】
いくつかの実施形態では、抗体の「誘導体」、その断片、領域、または誘導体が提供され、この用語には、免疫グロブリン断片に機能的に類似する分子種をもたらすように切り詰められたまたは修飾された遺伝子によってコードされるそれらのタンパク質が含まれる。修飾には、植物毒素や細菌毒素のような細胞毒性タンパク質をコードする遺伝子配列の付加が含まれるが、これらに限定されない。修飾には、蛍光タグや化学発光タグのようなレポータータンパク質も含まれ得る。断片及び誘導体はどんな方法でも生成することができる。
【0077】
本明細書に記載されているＡｂによって認識されるこれらの抗原結合領域及び／またはエピトープの同定は、本出願の実施形態に匹敵する同様の結合特性及び治療上または診断上の有用性を持つ追加のモノクローナル抗体を生成するのに必要な情報を提供する。
【0078】
本明細書に記載されている可変領域は、ヒト定常領域またはマウス定常領域を含む任意のタイプの定常領域と組み合わせることができる。抗体の定常（Ｃ）領域、断片及び領域をコードするヒト遺伝子は、既知の方法によってヒト胎児肝臓ライブラリーから導き出すことができる。ヒトＣ領域遺伝子は、ヒト免疫グロブリンを発現し、且つ産生する細胞を含む任意のヒト細胞に由来することができる。ヒトＣＨ領域は、ガンマ、μ、α、δ、またはεを含むヒトＨ鎖の既知のクラスまたはアイソタイプのいずれか、及びＧ１、Ｇ２、Ｇ３、及びＧ４のようなそのサブタイプに由来することができる。Ｈ鎖アイソタイプは抗体の種々のエフェクター機能に関与しているので、ＣＨ領域の選択は、補体結合または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）における活性のような所望のエフェクター機能によって導かれるであろう。好ましくは、ＣＨ領域はガンマ１（ＩｇＧ１）、ガンマ３（ＩｇＧ３）、ガンマ４（ＩｇＧ４）、またはμ（ＩｇＭ）に由来する。ヒトＣＬ領域はヒトＬ鎖アイソタイプ、カッパまたはラムダのいずれかに由来することができる。
【0079】
いくつかの実施形態では、抗体はＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは抗体の半減期を延長するための突然変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第７，６７０，６００号に記載されているもののような突然変異を含む。いくつかの実施形態では、定常領域は、ＫａｂａｔのＥＵ番号付け目録に従って番号付けされた、野生型ヒトＩｇＧ定常ドメインに対してアミノ酸残基４２８位に突然変異を含む。いかなる特定の理論にも束縛されるものではないが、残基４２８に対応する突然変異を含む抗体は、野生型ヒトＩｇＧ定常ドメインを有するＩｇＧの半減期と比べて、長い半減期を有することができる。いくつかの実施形態では、突然変異はスレオニン、ロイシン、フェニルアラニンまたはセリンによるネイティブ残基の置換である。いくつかの実施形態では、抗体はさらに、ＫａｂａｔのＥＵ番号付け目録に従って番号付けされたアミノ酸残基２５１～２５６、２８５～２９０、３０８～３１４、３８５～３８９、及び４２９～４３６のうちの１つ以上にて対応する野生型ヒトＩｇＧ定常ドメインと比べて１つ以上のアミノ酸置換を含む。これらの位置における特定の突然変異または置換は、米国特許第７，６７０，６００号に記載されており、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【0080】
例えば、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第８，３９４，９２５号に提供されているもののような他の突然変異はＦｃドメインにて使用することができる。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は４２８位及び４３４位にアミノ酸置換を含む変異型Ｆｃ領域であり、その際、アミノ酸置換は４２８位にて野生型アミノ酸ではないロイシン、及び４３４位にて野生型アミノ酸ではないセリンであり、その際、ポリペプチドは抗体であり、番号付けはＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．のＥＵ目録に従う。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はＳ２２８Ｐ、Ｌ２３５Ｅ、Ｍ４２８Ｌ、またはＮ４３４Ｓの置換を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はＭ４２８Ｌ置換を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はＮ４３４Ｓ置換を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はＭ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓの置換を含み、番号付けはＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．のＥＵ目録に従う。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／またはＴ２５６Ｅの置換を含む、またはＦｃ領域はＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅの置換を含み、番号付けはＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．のＥＵ目録に従う。
【0081】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている抗体は抗原の存在を検出するのに使用される。本抗体は抗原の存在を検出するための任意の装置または方法で使用することができる。
【0082】
Ｉ．Ａ．抗体のＣＤＲ配列
本明細書に開示されている抗体または抗原結合断片はそのＣＤＲ配列によって定義されてもよい。例えば、抗体または抗原結合断片は、Ｋａｂａｔの番号付けによって定義されるような抗体または抗原結合断片のＣＤＲである、表２に提供されているアミノ酸配列の１つ以上を含んでもよい。
本明細書に開示されている抗体または抗原結合断片はそのＣＤＲ配列によって定義されてもよい。例えば、抗体または抗原結合断片は、Ｋａｂａｔの番号付けによって定義されるような抗体または抗原結合断片のＣＤＲである、表２に提供されているアミノ酸配列の１つ以上を含んでもよい。
【表2】
【0083】
抗体または抗原結合断片は、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けによって定義されるような抗体または抗原結合断片のＣＤＲである、表３に提供されているアミノ酸配列の１つ以上を含んでもよい。
【表3】
【0084】
抗体または抗原結合断片は、ＩＭＧＴの番号付けによって定義されるような抗体または抗原結合断片のＣＤＲである、表４に提供されているアミノ酸配列の１つ以上を含んでもよい。
【表4】
【0085】
抗体または抗原結合断片は、ＡｂＭの番号付けによって定義されるような抗体または抗原結合断片のＣＤＲである、表５に提供されているアミノ酸配列の１つ以上を含んでもよい。
【表5】
【0086】
抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３１の配列を有する重鎖または軽鎖のＣＤＲを含んでもよい。例えば、抗体、またはその抗原結合断片の軽鎖ＣＤＲは配列番号１１、１２、１３、１８、２０、２１、２２、２６、２７、または２８の配列を有してもよい。例えば、抗体、またはその抗原結合断片の重鎖ＣＤＲは配列番号１４、１５、１６、１７、１９、２３、２４、２５、２９、３０、または３１．ｘｘの配列を有してもよい。
【0087】
本明細書に記載されているＣＤＲは、上記の表に示されているＣｈｏｔｈｉａ及びＩＭＧＴのような異なる定義によって特徴付けられるＣＤＲと相互交換することができる。例えば、Ｋａｂａｔによって定義されたＬＣＤＲ１はＣｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、またはＡｂＭによって定義されたＬＣＤＲ１と相互交換することができ；Ｋａｂａｔによって定義されたＬＣＤＲ２はＣｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、またはＡｂＭによって定義されたＬＣＤＲ２と相互交換することができる、などである。例えば、いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号１１、２０、または２７の配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号１２、１８、２１、または２６の配列を有し；ＬＣＤＲ３は配列番号１３、２２、または２８の配列を有する一方で、いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１４、２３、２９、または４３の配列を有し；ＨＣＤＲ２は配列番号１５、１７、１９、２４、３０、または４４の配列を有し；ＨＣＤＲ３は配列番号１６、２５、または３１の配列を有する。
【0088】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号１１の配列を有し、ＬＣＤＲ２は配列番号１２の配列を有し、ＬＣＤＲ３は配列番号１３の配列を有する。
【0089】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号１１の配列を有し、ＬＣＤＲ２は配列番号１８の配列を有し、ＬＣＤＲ３は配列番号１３の配列を有する。
【0090】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号２０の配列を有し、ＬＣＤＲ２は配列番号２１の配列を有し、ＬＣＤＲ３は配列番号２２の配列を有する。
【0091】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号２０の配列を有し、ＬＣＤＲ２は配列番号２６の配列を有し、ＬＣＤＲ３は配列番号２２の配列を有する。
【0092】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号２７の配列を有し、ＬＣＤＲ２は配列番号２１の配列を有し、ＬＣＤＲ３は配列番号２８の配列を有する。
【0093】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号２７の配列を有し、ＬＣＤＲ２は配列番号２６の配列を有し、ＬＣＤＲ３は配列番号２８の配列を有する。
【0094】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号１１の配列を有し、ＬＣＤＲ２は配列番号１２の配列を有し、ＬＣＤＲ３は配列番号２８の配列を有する。
【0095】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、ＬＣＤＲ１は配列番号１１の配列を有し、ＬＣＤＲ２は配列番号１８の配列を有し、ＬＣＤＲ３は配列番号２８の配列を有する。
【0096】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１４の配列を有し、ＨＣＤＲ２は配列番号１５の配列を有し、ＨＣＤＲ３は配列番号１６の配列を有する。
【0097】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１４の配列を有し、ＨＣＤＲ２は配列番号１７の配列を有し、ＨＣＤＲ３は配列番号１６の配列を有する。
【0098】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号１４の配列を有し、ＨＣＤＲ２は配列番号１９の配列を有し、ＨＣＤＲ３は配列番号１６の配列を有する。
【0099】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号２３の配列を有し、ＨＣＤＲ２は配列番号２４の配列を有し、ＨＣＤＲ３は配列番号２５の配列を有する。
【0100】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号２９の配列を有し、ＨＣＤＲ２は配列番号３０の配列を有し、ＨＣＤＲ３は配列番号３１の配列を有する。
【0101】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を有する重鎖可変領域を含み、ＨＣＤＲ１は配列番号４３の配列を有し、ＨＣＤＲ２は配列番号４４の配列を有し、ＨＣＤＲ３は配列番号２５の配列を有する。
【0102】
異なるＣＤＲモチーフは上記の表に示されていないものを含め、任意の組み合わせで組み合わせることができる。例えば、以下の実施形態はそのような組み合わせの非限定的な例として提供される。
【0103】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、その際、ＬＣＤＲ１は配列番号１１のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号１２または１８のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ３配列は配列番号１３のアミノ酸配列を有し、且つ（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、その際、ＨＣＤＲ１配列は配列番号１４のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ２配列は配列番号１５、１７、または１９のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ３配列は配列番号１６のアミノ酸配列を有し；または前述のいずれかの変異型を含む。
【0104】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、その際、ＬＣＤＲ１は配列番号１１のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号１２のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ３配列は配列番号１３のアミノ酸配列を有し、且つ（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、その際、ＨＣＤＲ１配列は配列番号１４のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ２配列は配列番号１５のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ３配列は配列番号１６のアミノ酸配列を有し；または前述のいずれかの変異型を含む。
【0105】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、その際、ＬＣＤＲ１は配列番号１１のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号１２のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ３配列は配列番号１３のアミノ酸配列を有し、且つ（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、その際、ＨＣＤＲ１配列は配列番号１４のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ２配列は配列番号１７のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ３配列は配列番号１６のアミノ酸配列を有し；または前述のいずれかの変異型を含む。
【0106】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、その際、ＬＣＤＲ１は配列番号１１のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号１２のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ３配列は配列番号１３のアミノ酸配列を有し、且つ（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、その際、ＨＣＤＲ１配列は配列番号１４のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ２配列は配列番号１９のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ３配列は配列番号１６のアミノ酸配列を有し；または前述のいずれかの変異型を含む。
【0107】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、その際、ＬＣＤＲ１は配列番号１１のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号１８のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ３配列は配列番号１３のアミノ酸配列を有し、且つ（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、その際、ＨＣＤＲ１配列は配列番号１４のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ２配列は配列番号１５のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ３配列は配列番号１６のアミノ酸配列を有し；または前述のいずれかの変異型を含む。
【0108】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、その際、ＬＣＤＲ１は配列番号１１のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号１８のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ３配列は配列番号１３のアミノ酸配列を有し、且つ（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、その際、ＨＣＤＲ１配列は配列番号１４のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ２配列は配列番号１７のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ３配列は配列番号１６のアミノ酸配列を有し；または前述のいずれかの変異型を含む。
【0109】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、その際、ＬＣＤＲ１は配列番号１１のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号１８のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ３配列は配列番号１３のアミノ酸配列を有し、且つ（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、その際、ＨＣＤＲ１配列は配列番号１４のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ２配列は配列番号１９のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ３配列は配列番号１６のアミノ酸配列を有し；または前述のいずれかの変異型を含む。
【0110】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、その際、ＬＣＤＲ１は配列番号２０のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号２１または２６のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ３配列は配列番号２２のアミノ酸配列を有し、且つ（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、その際、ＨＣＤＲ１配列は配列番号２３のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ２配列は配列番号２４のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ３配列は配列番号２５のアミノ酸配列を有し；または前述のいずれかの変異型を含む。
【0111】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、その際、ＬＣＤＲ１は配列番号２０のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号２１のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ３配列は配列番号２２のアミノ酸配列を有し、且つ（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、その際、ＨＣＤＲ１配列は配列番号２３のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ２配列は配列番号２４のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ３配列は配列番号２５のアミノ酸配列を有し；または前述のいずれかの変異型を含む。
【0112】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、その際、ＬＣＤＲ１は配列番号２０のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号２６のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ３配列は配列番号２２のアミノ酸配列を有し、且つ（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、その際、ＨＣＤＲ１配列は配列番号２３のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ２配列は配列番号２４のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ３配列は配列番号２５のアミノ酸配列を有し；または前述のいずれかの変異型を含む。
【0113】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、その際、ＬＣＤＲ１は配列番号２７のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号２１または２６のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ３配列は配列番号２８のアミノ酸配列を有し、且つ（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、その際、ＨＣＤＲ１配列は配列番号２９のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ２配列は配列番３０のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ３配列は配列番号３１のアミノ酸配列を有し；または前述のいずれかの変異型を含む。
【0114】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、その際、ＬＣＤＲ１は配列番号２７のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号２１のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ３配列は配列番号２８のアミノ酸配列を有し、且つ（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、その際、ＨＣＤＲ１配列は配列番号２９のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ２配列は配列番３０のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ３配列は配列番号３１のアミノ酸配列を有し；または前述のいずれかの変異型を含む。
【0115】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、その際、ＬＣＤＲ１は配列番号２７のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号２６のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ３配列は配列番号２８のアミノ酸配列を有し、且つ（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、その際、ＨＣＤＲ１配列は配列番号２９のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ２配列は配列番３０のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ３配列は配列番号３１のアミノ酸配列を有し；または前述のいずれかの変異型を含む。
【0116】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、その際、ＬＣＤＲ１は配列番号１１のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号１２または１８のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ３配列は配列番号２８のアミノ酸配列を有し、且つ（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、その際、ＨＣＤＲ１配列は配列番号４３のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ２配列は配列番４４のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ３配列は配列番号２５のアミノ酸配列を有し；または前述のいずれかの変異型を含む。
【0117】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、その際、ＬＣＤＲ１は配列番号１１のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号１２のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ３配列は配列番号２８のアミノ酸配列を有し、且つ（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、その際、ＨＣＤＲ１配列は配列番号４３のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ２配列は配列番号４４のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ３配列は配列番号２５のアミノ酸配列を有し；または前述のいずれかの変異型を含む。
【0118】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、その際、ＬＣＤＲ１は配列番号１１のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ２は配列番号１８のアミノ酸配列を有し；ＬＣＤＲ３配列は配列番号２８のアミノ酸配列を有し、且つ（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、その際、ＨＣＤＲ１配列は配列番号４３のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ２配列は配列番４４のアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ３配列は配列番号２５のアミノ酸配列を有し；または前述のいずれかの変異型を含む。
【0119】
いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１はそのアミノ酸配列に対して最大１、２、３、または４のアミノ酸置換がある配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２はそのアミノ酸配列に対して最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または１３のアミノ酸置換がある配列番号１５、１７、または１９に示されるアミノ酸配列を含み；且つＨＣＤＲ３はそのアミノ酸配列に対して最大１、２、３、４、５、６、７、８、または９のアミノ酸置換がある配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１はそのアミノ酸配列に対して最大１、２、３、４、５、６、または７のアミノ酸置換がある配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２はそのアミノ酸配列に対して最大１、２、３、または４のアミノ酸置換がある配列番号１２または１８に示されるアミノ酸配列を含み；且つＬＣＤＲ３はそのアミノ酸配列に対して最大１、２、３、または４のアミノ酸置換がある配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む。アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換であってもよい。いくつかの実施形態では、この段落に記載されている抗体は本明細書では「変異型」と呼ばれる。これらの変異型は、例えば、親和性成熟、部位特異的突然変異誘発、ランダム突然変異誘発、または当該技術分野で既知のもしくは本明細書に記載されている任意の他の方法によって、本明細書に提供されている配列に由来してもよい。あるいは、これらの変異型は本明細書に提供されている配列に由来せず、例えば、抗体を得るために本明細書に提供されている方法に従って新たに単離されてもよい。
【0120】
いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１はそのアミノ酸配列に対して最大１、２、３、４、５、６、７、または８のアミノ酸置換がある配列番号１４、２３、２９または４３に示されるアミノ酸配列を含み；ＨＣＤＲ２はそのアミノ酸配列に対して最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または１３のアミノ酸置換がある配列番号１５、１７、１９、２４、３０または４４に示されるアミノ酸配列を含み；且つＨＣＤＲ３はそのアミノ酸配列に対して最大１、２、３、４、５、６、７、８、または９のアミノ酸置換がある配列番号１６、２５または３１に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣＤＲ１はそのアミノ酸配列に対して最大１、２、３、４、５、６、または７のアミノ酸置換がある配列番号１１、２０または２７に示されるアミノ酸配列を含み；ＬＣＤＲ２はそのアミノ酸配列に対して最大１、２、３、または４のアミノ酸置換がある配列番号１２、１８、２１または２６に示されるアミノ酸配列を含み；且つＬＣＤＲ３はそのアミノ酸配列に対して最大１、２、３、４、５または６のアミノ酸置換がある配列番号１３、２２または２８に示されるアミノ酸配列を含む。アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換であってもよい。いくつかの実施形態では、この段落に記載されている抗体は本明細書では「変異型」と呼ばれる。これらの変異型は、例えば、親和性成熟、部位特異的突然変異誘発、ランダム突然変異誘発、または当該技術分野で既知のもしくは本明細書に記載されている任意の他の方法によって、本明細書に提供されている配列に由来してもよい。あるいは、これらの変異型は本明細書に提供されている配列に由来せず、例えば、抗体を得るために本明細書に提供されている方法に従って新たに単離されてもよい。
【0121】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、その際、ＬＣＤＲ１は配列番号１１、２０、または２７から選択される配列を有し、ＬＣＤＲ１は多くても１つの保存的アミノ酸置換を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号１２、１８、２１、及び２６から選択される配列を有し、ＬＣＤＲ２は多くても１つの保存的アミノ酸置換を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号１３、２２、及び２８から選択される配列を有し、ＬＣＤＲ３は多くても１つの保存的アミノ酸置換を含み、且つ（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、その際、ＨＣＤＲ１は配列番号１４、２３、または２９から選択される配列を有し、ＨＣＤＲ１は多くても１つの保存的アミノ酸置換を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１５、１９、２４、または３０から選択される配列を有し、ＨＣＤＲ２は多くても１つの保存的アミノ酸置換を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号１６、２５、または３１から選択される配列を有し、ＨＣＤＲ３は多くても１つの保存的アミノ酸置換を含む。
【0122】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は（ｉ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域を含み、その際、ＬＣＤＲ１は配列番号１１の配列を有し、ＬＣＤＲ１は多くても１つの保存的アミノ酸置換を含み、ＬＣＤＲ２は配列番号１８の配列を有し、ＬＣＤＲ２は多くても１つの保存的アミノ酸置換を含み、ＬＣＤＲ３は配列番号１３の配列を有し、ＬＣＤＲ３は多くても１つの保存的アミノ酸置換を含み、且つ（ｉｉ）ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、その際、ＨＣＤＲ１は配列番号１４の配列を有し、ＨＣＤＲ１は多くても１つの保存的アミノ酸置換を含み、ＨＣＤＲ２は配列番号１９の配列を有し、ＨＣＤＲ２は多くても１つの保存的アミノ酸置換を含み、ＨＣＤＲ３は配列番号１６の配列を有し、ＨＣＤＲ３は多くても１つの保存的アミノ酸置換を含む。
【0123】
いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域ＣＤＲ１は本明細書に開示されている他の軽鎖ＣＤＲ１配列のいずれかで置換される。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域ＣＤＲ２は本明細書に開示されている他の軽鎖ＣＤＲ２配列のいずれかで置換される。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域ＣＤＲ３は本明細書に開示されている他の軽鎖ＣＤＲ３配列のいずれかで置換される。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域ＣＤＲ１は本明細書に開示されている他の重鎖ＣＤＲ１配列のいずれかで置換される。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域ＣＤＲ２は本明細書に開示されている他の重鎖ＣＤＲ２配列のいずれかで置換される。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域ＣＤＲ３は本明細書に開示されている他の重鎖ＣＤＲ３配列のいずれかで置換される。
【0124】
本発明の抗体またはその結合断片は、配列番号１、３または５の重鎖可変領域配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及び／またはＨＣＤＲ３の配列に対応する配列を持つＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及び／またはＨＣＤＲ３を有してもよく、及び／または配列番号２、４、または６の軽鎖可変領域配列のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／またはＬＣＤＲ３の配列に対応する配列を持つＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及び／またはＬＣＤＲ３を有してもよい。例えば、本発明の抗体またはその結合断片は、配列番号３または５の重鎖可変領域配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列に対応する配列を持つＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を有してもよく；且つ配列番号４または６の軽鎖可変領域配列のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３の配列に対応する配列を持つＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有してもよい。例えば、本発明の抗体またはその結合断片は、配列番号５の重鎖可変領域配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列に対応する配列を持つＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を有してもよく；且つ配列番号６の軽鎖可変領域配列のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３の配列に対応する配列を持つＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を有してもよい。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔによって、Ｃｈｏｔｈｉａによって、ＩＭＧＴによって、またはＡｂＭによって定義されてもよい。例えば、ＣＤＲはＫａｂａｔによって定義されているとおりである。例えば、ＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａによって定義されているとおりである。
【0125】
Ｉ．Ｂ．抗体の可変配列及び完全長配列
いくつかの実施形態では、抗体は、表６に提供されている以下の配列を有する１つ以上のペプチド、またはその変異型を含む：
いくつかの実施形態では、抗体は、表６に提供されている以下の配列を有する１つ以上のペプチド、またはその変異型を含む：
【表6-1】
【表6-2】
【0126】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、以下の配列：配列番号１；配列番号２；配列番号３；配列番号４；配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、またはそれらの変異型の１つ以上から選択される配列を含む。
【0127】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は配列番号１、３または５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２、４または６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【0128】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２、４または６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【0129】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２、４または６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【0130】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２、４または６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
【0131】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、または抗体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【0132】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、または抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【0133】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施形態では、抗体は配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【0134】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、または抗体は配列番号５のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【0135】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、または抗体は配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【0136】
いくつかの実施形態では、抗体は配列番号１、３、５、７、９または１０のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号２、４、６または８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む
【0137】
いくつかの実施形態では、抗体は配列番号７、９または１０のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む
【0138】
いくつかの実施形態では、抗体は配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む
【0139】
いくつかの実施形態では、抗体は配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む
【0140】
いくつかの実施形態では、抗体は配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む
【0141】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は配列番号１、３、または５に示されるアミノ酸配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【0142】
本明細書で提供されている抗体または抗原結合断片は、最大で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５のアミノ酸置換がある配列番号１、３、または５で提供されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含んでもよい。例えば、１つ以上の置換はＣＤＲ領域のみで、フレームワーク領域のみで、またはＣＤＲ領域とフレームワーク領域の双方で見いだされてもよい。例えば、重鎖可変領域は、配列番号１、３、または５のアミノ酸配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有してもよく、その際、配列番号１、３、または５のどんな変異もＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、またはＨＣＤＲ３の内部では生じない。例えば、変異は１つ以上のフレームワーク領域で見いだされる。いくつかの例では、アミノ酸置換（複数可）は、（ａ）保存的アミノ酸置換（複数可）であってもよい。この段落に記載されている抗体は本明細書では「変異型」と呼ばれる。そのような変異型は、例えば、親和性成熟、部位特異的突然変異誘発、ランダム突然変異誘発、または当該技術分野で既知のもしくは本明細書に記載されている任意の他の方法によって、本明細書に提供されている配列から導き出されてもよい。あるいは、そのような変異型は本明細書に提供されている配列に由来しなくてもよく、例えば、抗体を得るために本明細書に提供されている方法に従って新たに単離されてもよい。
【0143】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は配列番号２、４、または６に示されるアミノ酸配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【0144】
本明細書で提供されている抗体または抗原結合断片は、最大で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５のアミノ酸置換がある配列番号２、４、または６で提供されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含んでもよい。例えば、１つ以上の置換はＣＤＲ領域のみで、フレームワーク領域のみで、またはＣＤＲ領域とフレームワーク領域の双方で見いだされてもよい。例えば、軽鎖可変領域は配列番号２、４、または６と少なくとも７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有してもよく、その際、配列番号２、４、または６のどんな変異もＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、またはＬＣＤＲ３の内部では生じない。例えば、変異は１つ以上のフレームワーク領域で見いだされる。いくつかの例では、アミノ酸置換（複数可）は、（ａ）保存的アミノ酸置換（複数可）であってもよい。この段落に記載されている抗体は本明細書では「変異型」と呼ばれる。これらの変異型は、例えば、親和性成熟、部位特異的突然変異誘発、ランダム突然変異誘発、または当該技術分野で既知のもしくは本明細書に記載されている任意の他の方法によって、本明細書に提供されている配列から導き出されてもよい。あるいは、これらの変異型は本明細書に提供されている配列に由来せず、例えば、抗体を得るために本明細書に提供されている方法に従って新たに単離されてもよい。
【0145】
重鎖可変領域（ＶＨ）配列及び軽鎖可変領域（ＶＬ）の配列は、ＶＨ及びＶＬの領域がペプチドリンカーで連結されているｓｃＦｖ型を含むが、これらに限定されない任意の型であることができる。本明細書で提供されている種々のペプチドを連結するのに使用できるペプチドリンカーの例には、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号３５）；（ＧＧＧＧＡ）ｎ（配列番号３６）、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されず、その際、各ｎは独立して１～５である。いくつかの実施形態では、可変領域、例えば、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、リンカー、例えば、ペプチドリンカーで連結されていないのに対して、他の実施形態では、可変領域、例えば、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、リンカー、例えばペプチドリンカーで連結されている。
【0146】
いくつかの実施形態では、抗体はＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭから選択されるクラスの重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体はＩｇＧクラス及びＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択されるサブクラスの重鎖定常領域を含む。
【0147】
いくつかの実施形態では、抗体はＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域は野生型（ＷＴ）配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域はＥＵ番号付け目録に従って番号付けされたときＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅの突然変異、またはＭ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓの突然変異を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域はＫａｂａｔのＥＵ番号付け目録に従って番号付けされたときＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅの突然変異を含む。Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓの突然変異を含有する配列番号９として本明細書で開示されている重鎖アミノ酸配列では、Ｍ４２８Ｌ突然変異は重鎖配列の残基４３２で発生し、Ｎ４３４Ｓ突然変異は重鎖配列の残基４３８で発生する。Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６Ｅの突然変異を含有する配列番号１０として本明細書で開示されている重鎖アミノ酸配列では、Ｍ２５２Ｙ突然変異は重鎖配列の残基２５６で発生し、Ｓ２５４Ｔ突然変異は重鎖配列の残基２５８で発生し、Ｔ２５６Ｅ突然変異は重鎖配列の残基２６０で発生する。
【0148】
いくつかの実施形態では、重鎖は配列番号１０、９、または７に示されるアミノ酸配列を含む。
【0149】
いくつかの実施形態では、重鎖は配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含む。
【0150】
いくつかの実施形態では、重鎖は配列番号９に示されるアミノ酸配列を含む。
【0151】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は配列番号１～１０及び１１～１９のいずれかに示される配列を有するペプチドを含む。
【0152】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は前述のいずれかの配列またはその変異型を含む。
【0153】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は配列番号１、３、５、７、９、もしくは１０のアミノ酸配列、または前述のいずれかの変異型を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は配列番号２、４、６、もしくは８のアミノ酸配列、または前述のいずれかの変異型を含む。
【0154】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は配列番号２、４、６もしくは８のアミノ酸配列、またはそれらの任意の組み合わせを有するＶＬペプチドを含む。ＶＬペプチドは本明細書に提供されているようなこれらの配列のいずれかの変異型を含むことができる。
【0155】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は配列番号１、３、５、７、９、もしくは１０のアミノ酸配列、またはそれらの任意の組み合わせを有するＶＨペプチドを含む。ＶＨペプチドは本明細書に提供されているこれらの配列のいずれかの変異型を含むことができる。
【0156】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号１、３、５、７、９、または１０の配列を含み、ＶＬペプチドは配列番号２、４、６、または８の配列を含む。
【0157】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号１、３、５、７、９、または１０の配列と少なくとも７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である配列を含み、且つ、ＶＬペプチドは配列番号２、４、６、または８の配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である配列を含む。
【0158】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号１、３、５、７、９、または１０の配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である配列を含み、且つＶＬペプチドは配列番号２、４、６、または８の配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である配列を含むが、ただし、該ＶＬペプチドは配列番号１１、１２、１３、１８、２０、２１、２２、２６、２７、または２８の配列を有する軽鎖ＣＤＲを含み、且つＶＨペプチドは配列番号１４、１５、１６、１７、１９、２３、２４、２５、２９、３０、３１、４３、または４４の配列を有する重鎖ＣＤＲを含むという条件がある。いくつかの実施形態では、ＶＨ鎖またはＶＬ鎖におけるＣＤＲは本明細書に提供されている組み合わせで示される通りである。
【0159】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号１、３、５、７、９、または１０の配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である配列を含み、且つ、ＶＬペプチドは配列番号２、４、６、または８の配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である配列を含むが、ただし、該ＶＬペプチドは配列番号１１、２０、または２７から選択される配列を有するＬＣＤＲ１と；配列番号１２、１８、２１、及び２６から選択される配列を有するＬＣＤＲ２と；配列番号１３、２２、及び２８から選択される配列を有するＬＣＤＲ３とを含み；且つ、該ＶＨペプチドは配列番号１４、２３、２９、または４３から選択される配列を有するＨＣＤＲ１と；配列番号１５、１７、１９、２４、３０、または４４から選択される配列を有するＨＣＤＲ２と；配列番号１６、２５、または３１から選択される配列を有するＨＣＤＲ３とを含むという条件がある。
【0160】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号１、３、５、７、９、または１０の配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である配列を含み、且つＶＬペプチドは配列番号２、４、６、または８の配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である配列を含むが、ただし、該ＶＬペプチドはＬＣＤＲ１が多くても１つの保存的アミノ酸置換を含む、配列番号１１、２０、または２７から選択されるＬＣＤＲ１と；ＬＣＤＲ２が多くても１つの保存的アミノ酸置換を含む、配列番号１２、１８、２１、及び２６から選択される配列を有するＬＣＤＲ２と；ＬＣＤＲ３が多くても１つの保存的アミノ酸置換を含む、配列番号１３、２２、及び２８から選択される配列を有するＬＣＤＲ３とを含み；且つ該ＶＨペプチドはＨＣＤＲ１が多くても１つの保存的アミノ酸置換を含む、配列番号１４、２３、２９、または４３から選択される配列を有するＨＣＤＲ１と；ＨＣＤＲ２が多くても１つの保存的アミノ酸置換を含む、配列番号１５、１７、１９、２４、３０、または４４から選択される配列を有するＨＣＤＲ２と；ＨＣＤＲ３が多くても１つの保存的アミノ酸置換を含む、配列番号１６、２５、または３１から選択される配列を有するＨＣＤＲ３とを含むという条件がある。
【0161】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号１の配列を含み、且つＶＬペプチドは配列番号２の配列を含む。
【0162】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号１の配列を含み、且つＶＬペプチドは配列番号４、６、または８の配列を含む。
【0163】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号３の配列を含み、且つＶＬペプチドは配列番号４の配列を含む。
【0164】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号３の配列を含み、且つＶＬペプチドは配列番号２、６、または８の配列を含む。
【0165】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号５の配列を含み、且つＶＬペプチドは配列番号６の配列を含む。
【0166】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号５の配列を含み、且つＶＬペプチドは配列番号２、４、または８の配列を含む。
【0167】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号７の配列を含み、且つＶＬペプチドは配列番号６の配列を含む。
【0168】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号７の配列を含み、且つＶＬペプチドは配列番号８の配列を含む。
【0169】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号７の配列を含み、且つＶＬペプチドは配列番号２または４の配列を含む。
【0170】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号９の配列を含み、且つＶＬペプチドは配列番号８の配列を含む。
【0171】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号９の配列を含み、且つＶＬペプチドは配列番号６の配列を含む。
【0172】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号９の配列を含み、且つＶＬペプチドは配列番号２または４の配列を含む。
【0173】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号１０の配列を含み、且つＶＬペプチドは配列番号８の配列を含む。
【0174】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号１０の配列を含み、且つＶＬペプチドは配列番号６の配列を含む。
【0175】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はＶＨペプチド及びＶＬペプチドを含み、その際、ＶＨペプチドは配列番号１０の配列を含み、且つＶＬペプチドは配列番号２または４の配列を含む。
【0176】
これらの特定の組み合わせに加えて、本明細書に開示されているＶＨペプチドのいずれかは本明細書に開示されているＶＬペプチドのいずれかと組み合わせることができる。
【0177】
本明細書に提供されているように、本明細書に記載されている異なるペプチド（ＶＨまたはＶＬ）はペプチドリンカーで連結することができ、またはペプチドリンカーで連結せずに、代わりに連続配列のために連結することができる。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号３５）；（ＧＧＧＧＡ）ｎ（配列番号３６）の配列、またはそれらの任意の組み合わせを含み、その際、各ｎは独立して１～５である。連結されたペプチド型はＶＨ－Ｚ－ＶＬまたはＶＬ－Ｚ－ＶＨの式で表すことができ、式中、Ｚはペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、Ｚは（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号３５）；（ＧＧＧＧＡ）ｎ（配列番号３６）、またはそれらの任意の組み合わせであり、各ｎは独立して１～５である。
【0178】
ＩＩ．抗体エピトープ結合
いくつかの実施形態では、抗体は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の残基Ｋ５５０またはＲ５５１の少なくとも１つを含むヒト血漿カリクレイン上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の残基Ｋ５８５またはＳ５９７の少なくとも１つを含むヒト血漿カリクレイン上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の残基Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、またはＳ５９７の少なくとも１つを含むヒト血漿カリクレイン上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の残基Ｙ６１７またはＴ６２５の少なくとも１つを含むヒト血漿カリクレイン上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の残基Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも１つを含むヒト血漿カリクレイン上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の残基Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｓ５９７、Ｙ６１７、またはＴ６２５の少なくとも１つを含むヒト血漿カリクレイン上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の残基Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも１つを含むヒト血漿カリクレイン上のエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、抗体は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の残基Ｋ５５０またはＲ５５１の少なくとも１つを含むヒト血漿カリクレイン上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の残基Ｋ５８５またはＳ５９７の少なくとも１つを含むヒト血漿カリクレイン上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の残基Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、またはＳ５９７の少なくとも１つを含むヒト血漿カリクレイン上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の残基Ｙ６１７またはＴ６２５の少なくとも１つを含むヒト血漿カリクレイン上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の残基Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも１つを含むヒト血漿カリクレイン上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の残基Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｓ５９７、Ｙ６１７、またはＴ６２５の少なくとも１つを含むヒト血漿カリクレイン上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の残基Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも１つを含むヒト血漿カリクレイン上のエピトープに結合する。
【0179】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３２に列挙されるヒト血漿カリクレインの以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｓ５９７、Ｙ６１７、またはＴ６２５の少なくとも１つに結合する。
【0180】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３２に列挙されるヒト血漿カリクレインの以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｓ５９７、Ｙ６１７、またはＴ６２５の少なくとも２つに結合する。
【0181】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３２に列挙されるヒト血漿カリクレインの以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｓ５９７、Ｙ６１７、またはＴ６２５の少なくとも３つに結合する。
【0182】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３２に列挙されるヒト血漿カリクレインの以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｓ５９７、Ｙ６１７、またはＴ６２５の少なくとも４つに結合する。
【0183】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３２に列挙されるヒト血漿カリクレインの以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｓ５９７、Ｙ６１７、またはＴ６２５の少なくとも５つに結合する。
【0184】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３２に列挙されるヒト血漿カリクレインの以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｓ５９７、Ｙ６１７、またはＴ６２５に結合する。
【0185】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも１つに結合する。
【0186】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５のうちの少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４に結合する。
【0187】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも２つに結合する。
【0188】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも３つに結合する。
【0189】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも４つに結合する。
【0190】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも５つに結合する。
【0191】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも６つに結合する。
【0192】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも７つに結合する。
【0193】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも８つに結合する。
【0194】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも９つに結合する。
【0195】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも１０個に結合する。
【0196】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも１１個に結合する。
【0197】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも１２個に結合する。
【0198】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも１３個に結合する。
【0199】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも１４個に結合する。
【0200】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも１５個に結合する。
【0201】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも１６個に結合する。
【0202】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも１７個に結合する。
【0203】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも１８個に結合する。
【0204】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも１９個に結合する。
【0205】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも２０個に結合する。
【0206】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも２１個に結合する。
【0207】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも２２個に結合する。
【0208】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも２３個に結合する。
【0209】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の以下の残基：Ｋ５５０、Ｒ５５１、Ｋ５８５、Ｈ５８６、Ｎ５８７、Ｇ５８８、Ｍ５８９、Ｗ５９０、Ｒ５９１、Ｌ５９２、Ｖ５９３、Ｇ５９４、Ｉ５９５、Ｔ５９６、Ｓ５９７、Ｙ６１７、Ｍ６１８、Ｄ６１９、Ｗ６２０、Ｉ６２１、Ｌ６２２、Ｅ６２３、Ｋ６２４、またはＴ６２５の少なくとも２４個に結合する。
【0210】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＫ５５０に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＲ５５１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＫ５８５に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＨ５８６に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＮ５８７に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＧ５８８に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＭ５８９に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＷ５９０に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＲ５９１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＬ５９２に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＶ５９３に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＧ５９４に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＩ５９５に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＴ５９６に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＳ５９７に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＹ６１７に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＭ６１８に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＤ６１９に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＷ６２０に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＩ６２１に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＬ６２２に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＥ６２３に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＫ６２４に結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、野生型ヒト血漿カリクレイン（配列番号３２）の少なくともＴ６２５に結合する。
【0211】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片はヒト血漿カリクレインの線形エピトープに結合する。例えば、線形エピトープは配列番号３７、３８、または３９のアミノ酸配列を有する。抗体またはその抗原結合断片はこれらの線形エピトープの１つ、２つまたは３つと結合してもよい。さらなる実施形態では、抗体または抗原結合断片は、配列番号４０、４１、及び／または４２の配列を有する線形エピトープ、及び／または配列番号４０、４１、及び／または４２のアミノ酸配列のいずれのアミノ酸残基にも結合しない。
【0212】
ＩＩＩ．抗体複合体
本明細書で提供される抗体は化学部分に結合されてもよい。化学部分は、とりわけ、ポリマー、放射性核種、または細胞毒性因子であってもよい。化学部分はＭＲＩで検出可能な標識であってもよい。いくつかの実施形態では、これを抗体薬物複合体と呼ぶことができる。いくつかの実施形態では、化学部分は対象の体内での抗体分子の半減期を延長するポリマーである。好適なポリマーには、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（例えば、２ｋＤａ、５ｋＤａ、１０ｋＤａ、１２ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａまたは４０ｋＤａの分子量を持つＰＥＧ）、デキストラン及びモノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）が挙げられるが、これらに限定されない。Ｌｅｅ，ｅｔ ａｌ．，（１９９９）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１０：９７３－９８１）はＰＥＧを結合した単鎖抗体を開示している。Ｗｅｎ，ｅｔ ａｌ．，（２００１）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１２：５４５－５５３）は放射性金属キレート剤（ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ））に連結されているＰＥＧと抗体を結合させることを開示している。化学部分の例には、カリケアマイシン（例えば、オゾガマイシン）、モノメチルオーリスタチンＥ、メルタンシンなどのような抗有糸分裂薬が挙げられるが、これらに限定されない。他の例には、生物学的に活性がある抗微小管剤、アルキル化剤、及びＤＮＡ副溝結合剤が挙げられるが、これらに限定されない。化学部分は、連結基（マレイミド）、カテプシン切断可能リンカー（バリン－シトルリン）のような切断可能リンカー、及びいくつかの実施形態では、１つ以上のスペーサー（例えば、パラ－アミノベンジルカルバメート）を介して抗体に連結することができる。
本明細書で提供される抗体は化学部分に結合されてもよい。化学部分は、とりわけ、ポリマー、放射性核種、または細胞毒性因子であってもよい。化学部分はＭＲＩで検出可能な標識であってもよい。いくつかの実施形態では、これを抗体薬物複合体と呼ぶことができる。いくつかの実施形態では、化学部分は対象の体内での抗体分子の半減期を延長するポリマーである。好適なポリマーには、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（例えば、２ｋＤａ、５ｋＤａ、１０ｋＤａ、１２ｋＤａ、２０ｋＤａ、３０ｋＤａまたは４０ｋＤａの分子量を持つＰＥＧ）、デキストラン及びモノメトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）が挙げられるが、これらに限定されない。Ｌｅｅ，ｅｔ ａｌ．，（１９９９）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１０：９７３－９８１）はＰＥＧを結合した単鎖抗体を開示している。Ｗｅｎ，ｅｔ ａｌ．，（２００１）（Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１２：５４５－５５３）は放射性金属キレート剤（ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ））に連結されているＰＥＧと抗体を結合させることを開示している。化学部分の例には、カリケアマイシン（例えば、オゾガマイシン）、モノメチルオーリスタチンＥ、メルタンシンなどのような抗有糸分裂薬が挙げられるが、これらに限定されない。他の例には、生物学的に活性がある抗微小管剤、アルキル化剤、及びＤＮＡ副溝結合剤が挙げられるが、これらに限定されない。化学部分は、連結基（マレイミド）、カテプシン切断可能リンカー（バリン－シトルリン）のような切断可能リンカー、及びいくつかの実施形態では、１つ以上のスペーサー（例えば、パラ－アミノベンジルカルバメート）を介して抗体に連結することができる。
【0213】
本発明の抗体及び抗体断片はまた、例えば、９９Ｔｃ、９０Ｙ、１１１Ｉｎ、３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、１３１Ｉ、１１Ｃ、１５Ｏ、１３Ｎ、１８Ｆ、３５Ｓ、５１Ｃｒ、５７Ｔｏ、２２６Ｒａ、６０Ｃｏ、５９Ｆｅ、５７Ｓｅ、１５２Ｅｕ、６７ＣＵ、２１７Ｃｉ、２１１Ａｔ、２１２Ｐｂ、４７Ｓｃ、１０９Ｐｄ、２３４Ｔｈ、及び４０Ｋ、１５７Ｇｄ、５５Ｍｎ、５２Ｔｒ及び５６Ｆｅのような標識と結合させてもよい。
【0214】
抗体及び抗体断片はまた、希土類キレート剤、フルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、イソチオシアネート、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ－フタルアデヒド、フルオレスカミン、１５２Ｅｕ、ダンシル、ウンベリフェロンのような蛍光色素分子、ルシフェリン、ルミナル標識、イソルミナル標識、芳香族アクリジニウムエステル標識、イミダゾール標識、アクリジニウム塩標識（ａｃｒｉｄｉｍｉｕｍ ｓａｌｔ）、シュウ酸エステル標識、エクオリン標識、２，３－ジヒドロフタラジンジオン、ビオチン／アビジン、スピン標識、及び安定したフリーラジカルを含む蛍光標識または化学発光標識と結合されてもよい。
【0215】
抗体分子はまた、例えば、ジフテリア毒素、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質及び化合物（例えば、脂肪酸）、ジアンシンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｉａｃｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ－Ｓ、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、及びエノマイシンのような細胞傷害性因子にも結合されてもよい。
【0216】
本発明の抗体分子を種々の部分に結合させるための当該技術分野で既知の任意の方法が採用されてもよく、これには、Ｈｕｎｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．，（１９６２）Ｎａｔｕｒｅ １４４：９４５；Ｄａｖｉｄ，ｅｔ ａｌ．，（１９７４）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １３：１０１４；Ｐａｉｎ，ｅｔ ａｌ．，（１９８１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．４０：２１９；及びＮｙｇｒｅｎ，Ｊ．，（１９８２）Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．ａｎｄ Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．３０：４０７によって記載された方法が含まれる。抗体を結合させる方法は従来のものであり、当該技術分野において非常に周知である。
【0217】
いくつかの実施形態では、抗体（例えば、抗血漿カリクレイン抗体）が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、抗体は血漿カリクレインに結合する組換え抗体である。いくつかの実施形態では、血漿カリクレインタンパク質はヒト血漿カリクレインタンパク質である。いくつかの実施形態では、抗体はプレカリクレインタンパク質に特異的に結合しない。本明細書で使用されるとき、「組換え抗体」という用語は天然に存在しない抗体を指す。いくつかの実施形態では、「組換え抗体」という用語はヒト対象から単離されない抗体を指す。
【0218】
ＩＶ．核酸とその製造方法
本発明はまた、本明細書に開示されている抗体または抗原結合断片のそれぞれをコードする核酸も企図しており、これには、本明細書に開示されているような抗体の重鎖もしくは軽鎖、または重鎖もしくは軽鎖の可変領域をコードする核酸が含まれる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に開示されている抗体または断片をコードする核酸分子が提供される。いくつかの実施形態では、核酸は、本明細書で提供されている抗体もしくはその抗原結合断片、または重鎖もしくは軽鎖、または重鎖もしくは軽鎖の可変領域のアミノ酸配列をコードする。
本発明はまた、本明細書に開示されている抗体または抗原結合断片のそれぞれをコードする核酸も企図しており、これには、本明細書に開示されているような抗体の重鎖もしくは軽鎖、または重鎖もしくは軽鎖の可変領域をコードする核酸が含まれる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に開示されている抗体または断片をコードする核酸分子が提供される。いくつかの実施形態では、核酸は、本明細書で提供されている抗体もしくはその抗原結合断片、または重鎖もしくは軽鎖、または重鎖もしくは軽鎖の可変領域のアミノ酸配列をコードする。
【0219】
例えば、一実施形態では、核酸は配列番号１、３、または５のいずれか１つの重鎖可変領域をコードする一方で、別の実施形態では、核酸は配列番号２、４、または６のいずれか１つの軽鎖可変領域をコードする。特定の実施形態では、核酸は配列番号７、９、または１０の重鎖配列をコードする一方で、別の実施形態では、核酸は配列番号８の軽鎖配列をコードする。
【0220】
一実施形態では、核酸は、配列番号１４、２３、２９、または４３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と；配列番号１５、１７、１９、２４、３０、または４４のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と；配列番号１６、２５、または３１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３とを含む重鎖または重鎖可変領域をコードする。
【0221】
別の実施形態では、核酸は、配列番号１１、２０、または２７のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と；配列番号１２、１８、２１、または２６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と；配列番号１３、２２、または２８のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３とを含む軽鎖または軽鎖可変領域をコードする
【0222】
別の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号３３の核酸配列によってコードされる重鎖可変領域と配列番号３４の核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域とを含む。本発明の抗体はまた、配列番号４８の核酸配列によってコードされる重鎖と配列番号４９の核酸配列によってコードされる軽鎖とを含んでもよい。
【0223】
本明細書に記載されているように、既知の配列を持つ抗体の産生は日常的であり、どんな方法によっても行うことができる。本明細書に開示されているものような抗体を作り出す方法は当該技術分野で知られている。配列が分かれば、本明細書に提供されている例に従うことを含む既知の方法に従って抗体を生成することもできる。
【0224】
例えば、軽鎖可変領域及び／または重鎖可変領域をコードするＤＮＡ分子は、本明細書に提供されている配列情報を使用して化学的に合成することができる。合成ＤＮＡ分子は、例えば、定常領域コード配列及び発現制御配列を含む他の適切なヌクレオチド配列に連結して、所望の抗体をコードする従来の遺伝子発現構築物を生成することができる。定義された遺伝子構築物の生成は当該技術分野の日常的な技術の範囲内である。あるいは、本明細書に提供されている配列は、その配列が本明細書に提供されている配列情報、またはハイブリドーマ細胞内のマウス抗体の重鎖と軽鎖コードする遺伝子に関する先行技術の配列情報に基づく合成核酸プローブを使用して、従来のハイブリッド形成技術またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術によってハイブリドーマからクローニングすることができる。
【0225】
所望の抗体をコードする核酸を発現ベクターに組み込む（連結する）ことができ、これを従来の形質移入または形質転換の技術を介して宿主細胞に導入することができる。例示的な宿主細胞は、他の方法ではＩｇＧタンパク質を産生しないＥ．ｃｏｌｉ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞、ＨｅＬａ細胞、幼若ハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、ＨｅｐＧ２）及び骨髄腫細胞である。形質転換された宿主細胞は、宿主細胞が免疫グロブリン軽鎖及び／または重鎖の可変領域をコードする遺伝子を発現できる条件下で増殖させることができる。したがって、本発明は、本発明の抗体またはその断片をコードする核酸を含むベクター、と同様にそのような核酸またはベクターを含む細胞を提供する。
【0226】
具体的な発現及び精製条件は採用される発現系に応じて異なる。例えば、遺伝子をＥ．ｃｏｌｉで発現させる場合、それは先ず、好適な細菌プロモーター、例えばＴｒｐまたはＴａｃ及び原核生物シグナル配列の下流に操作された遺伝子を配置することによって発現ベクターにクローニングされる。発現された分泌タンパク質は屈折体または封入体に蓄積し、フレンチプレスまたは超音波処理による細胞の破壊後に回収することができる。次いで、屈折体は可溶化され、当該技術分野で知られている方法によってタンパク質が畳み直され、切断される。
【0227】
操作された遺伝子が真核宿主細胞、例えばＣＨＯ細胞で発現される場合、それは先ず、好適な真核プロモーター、分泌シグナル、ポリＡ配列、及び終止コドンを含有する発現ベクターに挿入される。任意で、ベクターまたは遺伝子構築物はエンハンサー及びイントロンを含有してもよい。この発現ベクターは任意で、定常領域の全部または一部をコードする配列を含有し、重鎖または軽鎖の全体または一部を発現させるのを可能にする。遺伝子構築物は従来の技術を使用して真核宿主細胞に導入することができる。宿主細胞は、ＶＬまたはＶＨの断片、ＶＬ－ＶＨヘテロ二量体、ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＨ単鎖ポリペプチド、完全な重鎖または軽鎖の免疫グロブリン鎖、またはそれらの一部を発現し、そのそれぞれは別の機能（例えば、細胞傷害性）を有する部分に結合されてもよい。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、重鎖（例えば、重鎖可変領域）または軽鎖（例えば、軽鎖可変領域）の全体または一部を発現するポリペプチドを発現する単一のベクターで形質移入される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、（ａ）重鎖可変領域を含むポリペプチド及び軽鎖可変領域を含むポリペプチド、または（ｂ）免疫グロブリン重鎖全体及び免疫グロブリン軽鎖全体をコードする単一のベクターで形質移入される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、１を超える発現ベクター（例えば、重鎖または重鎖の可変領域の全体または一部を含むポリペプチドを発現する１つの発現ベクター、及び軽鎖または軽鎖可変領域の全体または一部を含むポリペプチドを発現する別の発現ベクター）で同時形質移入される。
【0228】
免疫グロブリン重鎖可変領域または軽鎖可変領域を含むポリペプチドは、そのような可変領域をコードする発現ベクターで形質移入した宿主細胞を、ポリペプチドの発現を可能にする条件下で増殖（培養する）させることによって作り出すことができる。発現後、ポリペプチドを回収し、当該技術分野で知られている技術、例えばグルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）またはヒスチジンタグのようなアフィニティータグを使用して精製または単離することができる。
【0229】
血漿カリクレインを結合するモノクローナル抗体、または該抗体の抗原結合断片は、（ａ）完全なもしくは部分的な免疫グロブリン重鎖をコードする発現ベクターと完全なもしくは部分的な免疫グロブリン軽鎖をコードする別の発現ベクター；または（ｂ）双方の鎖（例えば、完全なもしくは部分的な重鎖及び軽鎖）をコードする単一の発現ベクターによって形質移入した宿主細胞を双方の鎖の発現を可能にする条件下で増殖（培養する）させることによって作り出すことができる。インタクトな抗体（または抗原結合断片）は、当該技術分野で既知の技術、例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）またはヒスチジンタグのようなアフィニティータグを使用して回収し、精製または単離することができる。単一の発現ベクターまたは２つの別個の発現ベクターから重鎖及び軽鎖を発現させることは、当該技術の通常の技量の範囲内である。
【0230】
本明細書に記載されている抗体をコードする核酸配列は、本明細書に記載されている可変領域の少なくとも１つをコードするゲノムＤＮＡもしくはｃＤＮＡ、またはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）であることができる。Ｖ領域抗原結合セグメントをコードするＤＮＡ源としての染色体遺伝子断片の使用に代わる便利な方法は、例えば、その言及が全体として参照によって本明細書に組み込まれるＬｉｕ ｅｔ ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ ８４：３４３９（１９８７）及びＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １３９：３５２１（１９８７）によって報告されているように、キメラ免疫グロブリン遺伝子の構築にｃＤＮＡを使用することである。ｃＤＮＡを使用するには、所望のタンパク質の合成を達成するために、宿主細胞に適した遺伝子発現エレメントを遺伝子と組み合わせる必要がある。ｃＤＮＡ配列の使用は、ｃＤＮＡ配列が適切なＲＮＡスプライシング系を欠く細菌または他の宿主内で発現させることができるという点で、ゲノム配列（イントロンを含有する）よりも有利である。
【0231】
例えば、血漿カリクレインを検出、結合、または中和することができるＶ領域抗原結合セグメントをコードするｃＤＮＡは、本明細書で提供されているアミノ酸配列の使用に基づく既知の方法を使用して提供することができる。遺伝暗号は縮重しているので、特定のアミノ酸をコードするのに１を超えるコドンを使用することができる（（Ｗａｔｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，下記）。遺伝暗号を使用して、それぞれがアミノ酸をコードできる１つ以上の異なるオリゴヌクレオチドを同定することができる。特定のオリゴヌクレオチドが実際に実際のＸＸＸをコードする配列を構成する確率は、異常な塩基対関係と、抗体または断片を発現している真核細胞または原核細胞にて特定のコドンが実際に（特定のアミノ酸をコードするのに）使用される頻度とを考慮することによって推定することができる。このような「コドン使用規則」はＬａｔｈｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．１８３：１１２（１９８５）によって開示されている。Ｌａｔｈｅの「コドン使用規則」を使用して、抗体の可変領域または定常領域の配列をコードできる理論的に「最も可能性の高い」ヌクレオチド配列を含有する単一のオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドのセットが同定される。
【0232】
Ｖ．医薬組成物及びその投与
抗体及びその抗原結合断片を含む、且つそれらをコードする核酸分子を含む本明細書に開示されている血漿カリクレイン結合タンパク質は、例えば、対象への投与用の医薬組成物として製剤化することができる。
抗体及びその抗原結合断片を含む、且つそれらをコードする核酸分子を含む本明細書に開示されている血漿カリクレイン結合タンパク質は、例えば、対象への投与用の医薬組成物として製剤化することができる。
【0233】
本明細書で使用されるとき、「医薬組成物」という用語は、生体内または生体外での診断または治療の用途に好適である活性薬剤または薬剤（例えば、本明細書に記載されている抗体または抗原結合断片）の担体（不活性または活性がある）との組み合わせを指す。
【0234】
本明細書に開示されているような抗体、その断片、またはそのような抗体をコードする核酸を含有する医薬組成物は、単位剤形で提示することができ、任意の好適な方法によって調製することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されている抗血漿カリクレイン抗体または他のタンパク質の医薬組成物または無菌組成物を調製するために、本明細書に提供されている抗体もしくはその抗原結合断片または他のタンパク質は薬学的に許容される担体または賦形剤と混合される。医薬組成物は、その意図される投与経路に適合するように製剤化されるべきである。有用な製剤は製薬分野で知られている方法によって調製することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ ｅｄ．（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）を参照のこと。
【0235】
「薬学的に許容される」及び「薬理学的に許容される」という語句は本明細書で使用されるとき、適宜動物またはヒトに投与される際に、有害反応、アレルギー反応、または他の不必要な反応を生成することがない化合物、分子実体、組成物、材料及び／または剤形を指す。ヒトへの投与については、調製物はＦＤＡ生物学的製剤基準室（ＦＤＡ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ ｓｔａｎｄａｒｄｓ）によって要求されている無菌性、発熱性、一般的な安全性及び純度の基準を満たすべきである。「薬学的に許容される」及び「薬理学的に許容される」とは、連邦政府もしくは州政府の規制機関または米国以外の国の対応する機関によって承認もしくは認可されたもの、または動物、さらに詳しくはヒトに使用するために米国薬局方または他の一般に認められた薬局方に収載されているものを意味することができる。
【0236】
本明細書で使用されるとき「担体」は、身体のある器官または部分から身体の別の器官または部分への抗体またはその結合断片のような医薬剤の担持または輸送に関与する液体もしくは固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、または封入材料のような材料、組成物、またはビヒクルを指す。
【0237】
本明細書で使用されるとき「薬学的に許容される賦形剤」は、対象への活性剤、例えば、抗体またはその結合断片の投与及び／または対象による吸収を助け、患者に対して著しく有害な毒物学的効果を引き起こすことなく、本発明の組成物中に含まれることができる物質を指す。薬学的に許容される賦形剤の非限定的な例には、水、ＮａＣｌ、生理食塩水、例えば、リン酸緩衝生理食塩水、エマルション（例えば、油／水または水／油エマルション）、乳酸リンゲル液、通常のスクロース、通常のグルコース、結合剤、充填剤、崩壊剤、潤滑剤、コーティング剤、甘味料、香味料、塩溶液（例えば、リンゲル溶液）、アルコール、油、ゼラチン、例えば、ラクトース、デキストロース、アミロース、またはデンプンのような炭水化物、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチセルロース、ポリビニルピロリジン、及び顔料などが挙げられる。そのような調製物は、滅菌し、所望であれば、本発明の組成物と有害に反応しない、潤滑剤、防腐剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与えるための塩、緩衝液、着色剤及び／または芳香物質のような補助剤と混合することができる。賦形剤の例については、Ｍａｒｔｉｎ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１５ｔｈ Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９７５）を参照のこと。
【0238】
非経口投与に好適な製剤成分には、注射用水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒のような滅菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンのような抗菌剤；アスコルビン酸及び重亜硫酸ナトリウムのような抗酸化剤；ＥＤＴＡのようなキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩、及びリン酸塩のような緩衝液、ならびに塩化ナトリウムまたはデキストロースのような等張性調節のための薬剤が挙げられる。
【0239】
静脈内投与については、好適な担体には、生理食塩水、静菌水、クレモフォールＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、またはデキストロース溶液が挙げられる。担体は、製造及び保管の条件下で安定でなければならず、且つ微生物に対して保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール）を含有する溶媒または分散媒、及びそれらの好適な混合物であることができる。
【0240】
医薬製剤は好ましくは無菌である。滅菌は、例えば、滅菌濾過膜を介した濾過によって達成することができる。組成物が凍結乾燥される場合、フィルター滅菌は、凍結乾燥及び再構成の前または後に行うことができる。
【0241】
本明細書で提供されている抗体の製剤は、例えば凍結乾燥粉末、スラリー、水溶液または懸濁液の形態で許容される担体、賦形剤、または安定剤と混合することによって調製されてもよい（例えば、Ｈａｒｄｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｗｅｉｎｅｒ ａｎｄ Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照のこと）。いくつかの実施形態では、抗体は酢酸ナトリウム溶液ｐＨ５～６で適切な濃度に希釈され、浸透圧のためにＮａＣｌまたはスクロースが添加される。安定性を高めるために、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０のような追加の薬剤が添加されてもよい。
【0242】
単独でまたは別の薬剤との併用で投与される抗体組成物の毒性及び治療有効性は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％致死用量）及びＥＤ５０（集団の５０％に治療有効用量）を決定するための細胞培養物または実験動物における標準薬学的手順によって決定することができる。毒性と治療効果との間の用量比が治療指数（ＬＤ５０／ＥＤ５０）である。特定の態様では、高い治療指数を示す抗体が望ましい。これらの細胞培養アッセイ及び動物試験から得られるデータは、ヒトに使用するための投与量範囲を処方する際に使用することができる。そのような化合物の投与量は好ましくは、毒性がほとんどまたは全くないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。投与量は、採用される剤形及び投与経路に応じてこの範囲内で変動してもよい。
【0243】
本発明の抗体組成物は、例えば、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ２００３（Ｔｈｏｍｓｏｎ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；５７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ １，２００２））に従って対象に投与されてもよい。
【0244】
投与方法はさまざまであることができる。好適な投与経路には、経口投与、直腸投与、経粘膜投与、腸内投与、非経口投与；筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、髄内投与、髄腔内投与、直接脳室内投与、静脈内投与、腹腔内投与、鼻腔内投与、眼内投与、吸入による投与、吹送投与、局所投与、皮膚投与、経皮投与、または動脈内投与が挙げられる。
【0245】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、注射のような侵襲性経路によって投与することができる。いくつかの実施形態では、抗体もしくはその抗原結合断片、またはその医薬組成物は、静脈内に、皮下に、筋肉内に、動脈内に、関節内（例えば、関節炎の関節内）に、腫瘍内に、または吸入、エアロゾル送達によって投与される。非侵襲性経路による投与（例えば、経口；例えば、丸薬、カプセル剤または錠剤）も本発明の実施形態の範囲内である。静脈内注入による投与は抗体が対象に投与されてもよい１つの方法である。
【0246】
いくつかの実施形態では、抗血漿カリクレイン抗体またはその抗原結合断片は、例えば、本明細書に提供されている障害を治療するのに使用される任意の治療薬のような、しかし、これらに限定されない少なくとも１つの追加の治療薬と併用して投与される。いくつかの実施形態では、抗体は本明細書で提供されている障害の別の治療と組み合わせて投与される。例えば、本発明の抗血漿カリクレイン抗体は、ＨＡＥの治療に使用される１つ以上の追加療法、例えば、ＢＥＲＩＮＥＲＴ（登録商標）（Ｃ１エステラーゼ阻害剤）、ＦＩＲＡＺＹＲ（登録商標）（イカチバント注射）、ＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標）（エカランチド）、ＲＵＣＯＮＥＳＴ（登録商標）（Ｃ１エステラーゼ阻害剤、コンテストアルファ）、ＣＩＮＲＹＺＥ（登録商標）（Ｃ１エステラーゼ阻害剤）、ＨＡＥＧＡＲＤＡ（登録商標）（Ｃ１エステラーゼ阻害剤皮下）、ＴＡＫＨＺＹＲＯ（登録商標）（ラナデルマブ－ｆｌｙｏ）、ＯＲＬＡＤＥＹＯ（商標）（ベロトラルスタット）、ガラダシマブ、ドニダロルセン、ダナゾールやスタノゾロールのような合成１７－α－アルキル化アンドロゲン、及び／またはアミノカプロン酸のような抗線溶薬と共に投与されてもよい。抗血漿カリクレイン抗体は、１つ以上の前述の追加療法と同時に投与されてもよく、例えば、それらは共投与されてもよい。抗血漿カリクレイン抗体は、前述の療法の１つの前後に、例えば、前述の追加療法のいずれかと異なる日または異なる週、またはさらには異なる月に連続的に投与されてもよい。
【0247】
組成物は、当該技術分野で既知の医療機器によって投与することができる。例えば、本発明の医薬組成物は、事前充填注射器または自己注射器を含む、皮下注射針による注射によって投与することができる。
【0248】
医薬組成物は、無針皮下注射装置；例えば、米国特許第６，６２０，１３５号；同第６，０９６，００２号；同第５，３９９，１６３号；同第５，３８３，８５１号；同第５，３１２，３３５号；同第５，０６４，４１３号；同第４，９４１，８８０号；同第４，７９０，８２４号または同第４，５９６，５５６号に開示されている装置によって投与されてもよい。
【0249】
医薬組成物は点滴によって投与されてもよい。医薬組成物を投与するための周知の埋入物及びモジュール形態の例には、制御された速度で薬物を分配するための埋入可能な微量注入ポンプを開示している米国特許第４，４８７，６０３号、正確な注入速度で薬物を送達するための薬物注入ポンプを開示している米国特許第４，４４７，２３３号、連続的な薬物送達のための可変流量の埋入可能な注入装置を開示している米国特許第４，４４７，２２４号、マルチチャンバーコンパートメントを有する浸透圧薬物送達システムを開示している米国特許第４，４３９，１９６号が挙げられる。他の多くのそのような埋入物、送達システム、及びモジュールは当業者に周知である。注入はまた、生理食塩水のような薬学的に許容される担体中の抗体を規定の期間にわたって静脈内送達することによっても実施されてもよい。医薬組成物の静脈内送達は、対象の静脈または動脈に埋め込まれたポートを介して発生してもよい。
【0250】
あるいは、抗体を全身性ではなく局所性に、例えば、注射を介して、またはデポー剤もしくは徐放性製剤にて投与してもよい。さらに、標的薬物送達システム、例えば、組織特異的抗体でコーティングしたリポソームで抗体を投与してもよい。
【0251】
投与計画は、治療用抗体の血清または組織での代謝回転率、症状のレベル、治療用抗体の免疫原性、生物学的マトリックス内の標的細胞のアクセス可能性を含むいくつかの因子に左右される。好ましくは、投与計画は、標的疾患状態の改善を達成するのに十分な治療用抗体を送達する一方で同時に、望ましくない副作用を最小限に抑えるものである。したがって、送達される生物製剤の量は、特定の治療用抗体及び治療される状態の重症度にある程度依存する。治療用抗体の適切な用量を選択するための指針が利用可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（ｅｄ．）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（ｅｄ．）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔ，ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１－６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６－１９７３；Ｓｌａｍｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３－６１９；Ｇｈｏｓｈ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４－３２；Ｌｉｐｓｋｙ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４－１６０２を参照のこと）。
【0252】
適切な用量の決定は、例えば、治療に影響を与える当該技術分野で既知または疑われるパラメーターまたは因子を使用して、臨床医によって行われ得る。一般に、用量は最適用量より若干少ない量で開始し、その後、あらゆるマイナスの副作用に対して所望のまたは最適な効果が達成されるまで、少しずつ増量する。診断上重要な評価基準には、例えば、炎症の症状や炎症性サイトカインの産生レベルの評価基準が挙げられる。一般に、使用される生物製剤は、治療の対象となる動物と同じ種に由来し、それによって試薬に対する免疫反応を最小限に抑えることが望ましい。ヒト対象の場合、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、及び完全ヒト抗体が望ましくてもよい。
【0253】
抗体またはその抗原結合断片は、連続注入によって、または 例えば毎日、週に１～７回、毎週、隔週、毎月、隔月もしくは四半期ごとに投与される用量によって提供することができる。いくつかの実施形態では、週の総用量は、一般に少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ体重、さらに一般的には少なくとも０．２μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ以上である（例えば、Ｙａｎｇ，ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：４２７－４３４；Ｈｅｒｏｌｄ，ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６９２－１６９８；Ｌｉｕ，ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７：４５１－４５６；Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉ，ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：１３３－１４４を参照のこと）。用量はまた、対象の血清中の抗体の所定の標的濃度、例えば、０．１、０．３、１、３、１０、３０、１００、３００μｇ／ｍｌ以上を達成するように提供されてもよい。他の実施形態では、抗体は、毎週、隔週、「４週間ごと」、毎月、隔月、または四半期ベースにて１０、２０、５０、８０、１００、２００、５００、１０００、１５００、２０００、または２５００ｍｇ／対象で皮下にまたは静脈内に投与される。
【0254】
ＶＩ．治療方法及び医薬用途
抗体及びその抗原結合断片を含む、本明細書に開示されている血漿カリクレイン結合タンパク質は、対象にて疾患を治療するのに使用することができる。
抗体及びその抗原結合断片を含む、本明細書に開示されている血漿カリクレイン結合タンパク質は、対象にて疾患を治療するのに使用することができる。
【0255】
本明細書で使用されるとき、「治療する」または「治療」という用語は、障害に関連する症状の発生の阻害または遅延、及び／またはそのような障害の症状の重症度の軽減を含む。この用語にはさらに、既存の制御されていないまたは望ましくない症状の改善、追加の症状の予防、及びそのような症状の根本的な原因の改善または予防が含まれる。
【0256】
本明細書で使用されるとき、「治療有効量」、「治療有効用量」及び「有効量」という用語は、単独でまたは追加の治療剤と併用して細胞、組織、または対象に投与した場合に、疾患もしくは状態の１つ以上の症状、またはそのような疾患もしくは状態、例えば、血漿カリクレインが観察された病状を引き起こしたことが知られているＨＡＥまたは状態の進行に測定可能な改善を引き起こすのに有効である抗体またはその抗原結合断片の量を指す。治療有効用量はさらに、症状の少なくとも部分的な改善、例えば、関連する医学的状態、例えば、血漿カリクレインが観察された病状を引き起こしたことが知られているＨＡＥまたは状態の治療、治癒、予防または改善をもたらす、あるいはそのような状態の治療、治癒、予防、または改善の速度の増加をもたらすのに十分な抗体またはその結合断片の量を指す。単独で投与される個々の有効成分に適用される場合、治療有効用量はその成分単独を指す。組み合わせに適用される場合、治療有効用量は、組み合わせて投与しても、連続的に投与しても、同時に投与しても、治療効果をもたらす有効成分の組み合わせた量を指す。治療薬の有効量は、診断基準またはパラメーターの少なくとも１０％ふつうは少なくとも２０％、好ましくは少なくとも約３０％。さらに好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％の改善をもたらすであろう。疾患の重症度を評価するために主観的尺度が使用される場合、有効量は主観的尺度の改善ももたらすことができる。いくつかの実施形態では、ある量は、それが血漿カリクレインが観察される病状の原因として知られているＨＡＥまたは状態の症状を治療するまたは予防するのに使用できる量である場合、治療有効量である。例えば、本発明の抗体またはその結合断片の治療有効量は、ＨＡＥ発作の頻度を減らしてもよい、またはＨＡＥ発作の重症度、例えば、発作中に対象が経験する浮腫のレベルを低減してもよい。
【0257】
本明細書で使用されるとき「対象」という用語は、哺乳類（例えば、ラット、マウス、イヌ、ネコ、ウサギ）及び、例えば、ヒトを含む動物のような任意の生物を指す。一実施形態では、対象はヒトである。対象は患者とも呼ばれ得る。いくつかの実施形態では、対象はそれを必要とする（ｉｎ ｎｅｅｄ ｔｈｅｒｅｏｆ）対象である。「それを必要とする（ｉｎ ｎｅｅｄ ｔｈｅｒｅｏｆ）」対象とは、治療されるべき状態の治療が必要であると特定されており、そのような状態を治療するという特定の意図を持って治療される対象を指す。状態は、例えば、本明細書に記載されている状態のいずれかであることができる。「対象」は「患者」と相互交換可能に使用される。
【0258】
いくつかの実施形態では、本方法は、治療有効量または予防有効量の本明細書に記載されている１つ以上の抗体もしくは抗体の抗原結合断片、または治療有効量を含有する医薬組成物を、感受性のある対象または血漿カリクレインが観察された病状を引き起こしたことが知られている状態を示す対象に投与することを含む。ｓｃＦｖ、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片及び本明細書で提供されている他の形態の抗体を含むが、これらに限定されない、抗体の任意の活性形態を投与することができる。
【0259】
本明細書で使用されるとき、「血漿カリクレイン関連病状」は、血漿カリクレインの機能または異常発現によって引き起こされる状態を指す。これらの状態には、遺伝性血管浮腫、ブラジキニン依存性浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、網膜浮腫、第ＸＩＩ因子関連寒冷自己炎症性症候群（ＦＡＣＡＳ）、関節リウマチ、痛風、腸疾患、口腔粘膜炎、神経因性疼痛、炎症性疼痛、脊柱管狭窄症・変性性脊椎疾患、動脈血栓症または静脈血栓症、術後イレウス、大動脈瘤、変形性関節症、血管炎、浮腫、脳浮腫、肺塞栓症、脳卒中、心室補助装置またはステントにより誘導される凝固、頭部外傷または腫瘍周囲の脳浮腫、敗血症、急性中大脳動脈（ＭＣＡ）虚血事象（脳卒中）、再狭窄（例えば、血管形成術後）、全身性エリテマトーデス腎炎、及び熱傷が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、病状は遺伝性血管浮腫である。いくつかの実施形態では、病状はブラジキニン依存性浮腫である。
【0260】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されている抗体は血漿カリクレイン関連の障害を有する、または有すると疑われる対象を治療するのに使用される。いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン関連の障害は、遺伝性血管浮腫、ブラジキニン依存性浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、網膜浮腫、第ＸＩＩ因子関連寒冷自己炎症性症候群（ＦＡＣＡＳ）、関節リウマチ、痛風、腸疾患、口腔粘膜炎、神経因性疼痛、炎症性疼痛、脊柱管狭窄症・変性性脊椎疾患、動脈血栓症または静脈血栓症、術後イレウス、大動脈瘤、変形性関節症、血管炎、浮腫、脳浮腫、肺塞栓症、脳卒中、心室補助装置またはステントにより誘導される凝固、頭部外傷または腫瘍周囲の脳浮腫、敗血症、急性中大脳動脈（ＭＣＡ）虚血事象（脳卒中）、再狭窄（例えば、血管形成術後）、全身性エリテマトーデス腎炎、及び熱傷から成る群から選択される。
【0261】
いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン結合タンパク質は、接触活性化系（すなわち、内在性活性化系）に関連する異常な凝固を、例えば、ＡＰＴＴ凝固アッセイによって測定したとき、少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、またはさらには１００％（すなわち、検出可能な異常な凝固がない））減らす。
【0262】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されている抗体は本明細書に記載されている障害、例えば、遺伝性血管浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、網膜浮腫、第ＸＩＩ因子関連寒冷自己炎症性症候群（ＦＡＣＡＳ）、関節リウマチ、痛風、腸疾患、口腔粘膜炎、神経因性疼痛、炎症性疼痛、脊柱管狭窄症・変性性脊椎疾患、動脈血栓症または静脈血栓症、術後イレウス、大動脈瘤、変形性関節症、血管炎、浮腫、遺伝性血管浮腫、脳浮腫、肺塞栓症、脳卒中、心室補助装置またはステントにより誘導される凝固、頭部外傷または腫瘍周囲の脳浮腫、敗血症、急性中大脳動脈（ＭＣＡ）虚血事象（脳卒中）、再狭窄（例えば、血管形成術後）、全身性エリテマトーデス腎炎、もしくは熱傷の治療のために、または創傷治癒を促進するために使用することができる。いくつかの実施形態では、障害は遺伝性血管浮腫またはブラジキニン依存性浮腫である。いくつかの実施形態では、障害は遺伝性血管浮腫である。
【0263】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されている抗体は本明細書に記載されている障害、例えば、遺伝性血管浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、網膜浮腫、第ＸＩＩ因子関連寒冷自己炎症性症候群（ＦＡＣＡＳ）、関節リウマチ、痛風、腸疾患、口腔粘膜炎、神経因性疼痛、炎症性疼痛、脊柱管狭窄症・変性性脊椎疾患、動脈血栓症または静脈血栓症、術後イレウス、大動脈瘤、変形性関節症、血管炎、浮腫、遺伝性血管浮腫、脳浮腫、肺塞栓症、脳卒中、心室補助装置またはステントにより誘導される凝固、頭部外傷または腫瘍周囲の脳浮腫、敗血症、急性中大脳動脈（ＭＣＡ）虚血事象（脳卒中）、再狭窄（例えば、血管形成術後）、全身性エリテマトーデス腎炎、もしくは熱傷の治療のための薬物の製造に、または創傷治癒のための薬物の製造に使用される。
【0264】
個体の治療は、治療有効量の本明細書に記載されている抗体もしくは抗原結合断片、またはそのような抗体もしくは断片を含有する医薬組成物の投与を含んでもよい。抗体は、本明細書で提供されているもののようなキットで提供され得る。抗体は、単独で、または本明細書に提供されているような別の治療薬、鎮痛薬、または診断薬と混合して使用することができ、または投与することができる。血漿カリクレインに結合することができる抗体もしくはその断片、またはレシピエント患者にて血漿カリクレインから防御することができる抗体を患者に提供する際、投与される薬剤の投与量は、患者の年齢、体重、身長、性別、全身状態、既往歴などのような因子に応じて変化するであろう。
【0265】
血漿カリクレイン活性に関連する状態を治療することができる抗体、または血漿カリクレイン関連病状の治療に使用される抗体は、血漿カリクレイン関連の症状または病状の軽減、解消、または改善に影響を与えるのに十分な量で対象に提供されることを意図している。そのような病状には、遺伝性血管浮腫、ブラジキニン依存性浮腫、遺伝性血管浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、網膜浮腫、第ＸＩＩ因子関連寒冷自己炎症性症候群（ＦＡＣＡＳ）、関節リウマチ、痛風、腸疾患、口腔粘膜炎、神経因性疼痛、炎症性疼痛、脊柱管狭窄症・変性性脊椎疾患、動脈血栓症または静脈血栓症、術後イレウス、大動脈瘤、変形性関節症、血管炎、浮腫、脳浮腫、肺塞栓症、脳卒中、心室補助装置またはステントにより誘導される凝固、頭部外傷または腫瘍周囲の脳浮腫、敗血症、急性中大脳動脈（ＭＣＡ）虚血事象（脳卒中）、再狭窄（例えば、血管形成術後）、全身性エリテマトーデス腎炎、及び熱傷が含まれるが、これらに限定されない。例えば、病状は遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）である。
【0266】
したがって、いくつかの実施形態では、血漿カリクレイン介在性障害がある対象を治療する方法が提供される。いくつかの実施形態では、該方法は、本明細書に提供されているような、治療有効量の抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、障害は、遺伝性血管浮腫、ブラジキニン依存性浮腫、遺伝性血管浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、網膜浮腫、第ＸＩＩ因子関連寒冷自己炎症性症候群（ＦＡＣＡＳ）、関節リウマチ、痛風、腸疾患、口腔粘膜炎、神経因性疼痛、炎症性疼痛、脊柱管狭窄症・変性性脊椎疾患、動脈血栓症または静脈血栓症、術後イレウス、大動脈瘤、変形性関節症、血管炎、浮腫、脳浮腫、肺塞栓症、脳卒中、心室補助装置またはステントにより誘導される凝固、頭部外傷または腫瘍周囲の脳浮腫、敗血症、急性中大脳動脈（ＭＣＡ）虚血事象（脳卒中）、再狭窄（例えば、血管形成術後）、全身性エリテマトーデス腎炎、及び熱傷である。いくつかの実施形態では、障害は遺伝性血管浮腫である。いくつかの実施形態では、障害はブラジキニン依存性浮腫である。
【0267】
血漿カリクレイン活性を低下させるまたは阻害することを必要とする対象におけるそれを行う方法も本明細書に開示されている。例えば、本明細書に開示されている抗体またはその結合断片は、対象におけるヒト血漿カリクレインのような血漿カリクレインの活性を低下させるまたは阻害するための治療有効量でその対象に投与することができる。対象は、ＨＡＥのような本明細書に開示されている血漿カリクレイン関連の障害を有してもよい。いくつかの実施形態では、対象におけるＨＡＥ発作を少なくとも１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月、またはそれ以上防ぐのに十分な量で血漿カリクレイン活性を低下させてもよく、または阻害してもよい。
【0268】
ブラジキニンの産生または活性を減らすまたは阻害することを必要とする対象にてそれを行う方法も本明細書に開示されている。例えば、本明細書に開示されている抗体または結合断片は、対象にてブラジキニンのレベルまたは活性を低下させるための治療有効量で対象に投与することができる。対象は、ＨＡＥのような本明細書に開示されている血漿カリクレイン関連の障害を有してもよい。いくつかの実施形態では、対象にてＨＡＥ発作を少なくとも１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月、またはそれ以上防ぐための量でブラジキニンの産生または活性を低下させてもよく、または阻害してもよい。
【0269】
本明細書で提供されているように、抗体またはその抗原結合断片は他の治療薬と共に投与することができ、他の治療薬は、例えば、ＢＥＲＩＮＥＲＴ（登録商標）（Ｃ１エステラーゼ阻害剤）、ＦＩＲＡＺＹＲ（登録商標）（イカチバント注射）、ＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標）（エカランチド）、ＲＵＣＯＮＥＳＴ（登録商標）（Ｃ１エステラーゼ阻害剤、コンテストアルファ）、ＣＩＮＲＹＺＥ（登録商標）（Ｃ１エステラーゼ阻害剤）、ＨＡＥＧＡＲＤＡ（登録商標）（Ｃ１エステラーゼ阻害剤皮下）、ＴＡＫＨＺＹＲＯ（登録商標）（ラナデルマブ－ｆｌｙｏ）、ＯＲＬＡＤＥＹＯ（商標）（ベロトラルスタット）、ガラダシマブ、ドニダロルセン、ダナゾールやスタノゾロールのような合成１７－α－アルキル化アンドロゲン、及び／またはアミノカプロン酸のような抗線溶薬のような、ＨＡＥを治療するのに使用される１つ以上の追加の治療薬を含んでもよい。追加の治療法（複数可）は本明細書に開示されている抗体と同時にまたは順次、投与することができる。
【0270】
本明細書に記載されている実施形態を実施するのに有用なキットも提供される。本発明のキットは、上記の抗体を含有する、またはそれに関連して包装される第１の容器を含むことができる。キットはまた、実施形態を実施するために必要なまたは便利な溶液を含有する、または関連して溶液に包装される別の容器を含んでもよい。容器は、ガラス、プラスチック、またはホイルで作ることができ、バイアル、ボトル、パウチ、チューブ、バッグなどであることができる。キットはまた、実施形態を実施するための手順や、第１の容器手段に含有される試薬の量などの分析情報のような、書面による情報も含有してもよい。容器は、書面による情報と共に、別の容器装置、例えば、箱や袋の中に入れられていてもよい。
【0271】
いくつかの実施形態では、血漿カリクレインタンパク質に結合する抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗体は単離される。いくつかの実施形態では、抗体は血漿カリクレインに特異的に結合する。
【0272】
いくつかの実施形態では、抗体は血漿カリクレインタンパク質、例えば、ヒト血漿カリクレインの機能を阻害する、または中和する。本明細書で使用されるとき、「中和する」という用語はタンパク質の活性または機能が阻害されることを意味する。阻害は完全であることができ、または部分的であることができる。いくつかの実施形態では、タンパク質の活性または機能は少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、９５、または９９％阻害される。阻害パーセントは、抗体の非存在下でのタンパク質の機能または活性に基づくことができる。いくつかの実施形態では、抗体は血漿カリクレインによって促進される凝固機能を阻害する。したがって、本発明は、血漿カリクレイン活性を調節する方法、例えば、血漿カリクレインを、本明細書に開示されている血漿カリクレイン抗体、またはその抗体を含む医薬組成物と接触させて、ヒト血漿カリクレインのような血漿カリクレインの活性を調節する方法を提供する。いくつかの実施形態では、該方法は本明細書で提供される抗体、またはそれを含む医薬組成物を対象に投与して、対象にて血漿カリクレイン活性を調節することを含む。
【0273】
冠詞「ａ」及び「ａｎ」は本開示にて、文脈が不適切でない限り、その冠詞の文法的目的語の１つまたは複数（すなわち、少なくとも１つ）を指すのに使用される。例として、「（ａｎ）要素」は、１つの要素または１つを超える要素を意味する。
【0274】
「及び／または」という用語は、別途示されない限り、本開示にて「及び」あるいは「または」のいずれかを意味するのに使用される。３以上の列挙された対象に関連する「及び／または」という表現は、文脈から別段に理解されない限り、同じ意味を有すると理解されるべきである。
【0275】
「少なくとも１つの」という表現は、文脈及び用途から別途理解されない限り、その表現の後に列挙される対象のそれぞれ、及び列挙される対象の２以上の種々の組み合わせを個別に含むことを理解すべきである。
【0276】
「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｅ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」、または「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」という用語の使用はその文法上の等価物も含めて、一般に、特に明記されない限り、または文脈から理解されない限り、制約のない且つ非限定のものとして、例えば、追加の未記載の要素または工程を排除するものではないと理解すべきである。
【0277】
定量値の前で「約」という用語が使用される場合、本発明はまた、特に具体的に記述されない限り、その特定の定量値そのものも含む。本明細書で使用されるとき、「約」という用語は、別段の指示がない限り、または文脈から推測されない限り、公称値からの±５％の変動を指す。
【0278】
本明細書で使用されるとき「と組み合わせて」という用語は、記載されている薬剤を、混合物として一緒に、単剤として同時に、または単剤として任意の順序で連続的に動物または対象に投与できることを意味する。
【0279】
例えばポリマーの絶対値ではなく分子量が提供されている場合、特に記載がない限り、または文脈から理解されない限り、分子量は平均分子量であると理解されるべきである。
【0280】
本明細書における任意の及びあらゆる例、または例示的な表現、例えば「～のような」または「～を含む」の使用は、単に本発明をより良く説明することを意図したものであり、特許請求の範囲に記載されない限り、本発明の範囲を限定するものではない。本明細書中のいかなる文言も、請求されていない要素が本発明の実施に必須であることを示すものとして解釈されるべきではない。
【0281】
本発明が作動可能である限り、工程の順序や特定の動作を実行する順序は重要ではないことを理解すべきである。さらに、２以上の工程または動作を同時に実行してもよい。
【0282】
本説明の全体を通して、組成物が特定の成分を有する、含む、または含むものとして記載されている場合、または工程および方法が特定の工程を有する、含む、または含むものとして記載されている場合、さらに、引用された成分から本質的に成る、またはそれから成る本発明の組成物が存在すること、及び引用された処理工程から本質的に成る、またはそれから成る本発明に係る工程および方法が存在することが企図される。
【0283】
本出願では、ある要素または構成成分が引用された要素または構成成分のリストに含まれる、及び／またはそこから選択されると言われている場合、その要素または構成成分は引用された要素または構成成分のいずれか１つであり得ること、あるいは、その要素または構成成分は引用された要素または構成成分の２以上から成る群から選択され得ることが理解されるべきである。
【0284】
さらに、本明細書に記載されている組成物または方法の要素及び／または特徴は、本明細書で明示的であれ、黙示的であれ、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、種々の方法で組み合わせることができることを理解すべきである。例えば、特定の化合物に言及する場合、文脈から別途理解されない限り、その化合物は本発明の組成物の種々の実施形態及び／または本発明の方法にて使用することができる。換言すれば、本出願内では、実施形態は、明確で簡潔な本出願の記載及び図面を可能にする方法で記載され、及び描かれているが、実施形態は本教示および発明（複数可）から離れることなく、種々に組み合わせ、または分離されてもよいことが意図され、理解されるであろう。例えば、本明細書に記載され、及び図示されている特徴はすべて、本明細書に記載され、及び図示されている本発明（複数可）のすべての態様に適用可能であり得ることが理解されるであろう。
【0285】
今や、以下の実施例を参照して主題を説明する。これらの実施例は、例示目的のためにのみ提供されているにすぎず、特許請求の範囲はこれらの実施例に限定されると決して解釈されるべきではないが、むしろ、本明細書に提供されている教示の結果として明白になっている任意の及び全ての変形を包含するように解釈されるべきである。当業者は、本質的に同様の結果をもたらすために変更または修正されてもよい種々の重要性の低いパラメーターを容易に認識するであろう。
【実施例】
【0286】
実施例１：新規血漿カリクレイン抗体の生成
プレカリクレイン（ｐｒｅｋａｌ）をノックアウトした５匹のマウスを、活性型ヒト血漿カリクレイン（ｐｋａｌ、Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｓ，Ｓｏｕｔｈ Ｂｅｎｄ，ＩＮ）で踵関節経路を介して免疫した。血清力価が強力な免疫応答を示した場合、流入領域リンパ節を採取し、電気融合を使用してリンパ球を骨髄腫株と融合させた。得られたハイブリドーマを３０枚の３８４ウェルプレートに播種し、ヒトｐｋａｌ及びｐｒｅｋａｌへの結合についてＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。ｐｋａｌに優先的に結合するハイブリドーマ株をサブクローニングし、増殖させた。
プレカリクレイン（ｐｒｅｋａｌ）をノックアウトした５匹のマウスを、活性型ヒト血漿カリクレイン（ｐｋａｌ、Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｓ，Ｓｏｕｔｈ Ｂｅｎｄ，ＩＮ）で踵関節経路を介して免疫した。血清力価が強力な免疫応答を示した場合、流入領域リンパ節を採取し、電気融合を使用してリンパ球を骨髄腫株と融合させた。得られたハイブリドーマを３０枚の３８４ウェルプレートに播種し、ヒトｐｋａｌ及びｐｒｅｋａｌへの結合についてＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。ｐｋａｌに優先的に結合するハイブリドーマ株をサブクローニングし、増殖させた。
【0287】
ｐｋａｌ及びｐｒｅｋａｌへの結合についてモノクローナルＩｇＧをＥＬＩＳＡによって再び調べ、蛍光発生ペプチド基質アッセイでｐｋａｌ（１ｎＭ酵素）酵素活性の阻害についてスクリーニングした（Ｋｅｎｎｉｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１４ Ａｕｇ ２２；２８９（３４）：２３５９６－６０８）。図１に示すように、２４Ｌ１３を含む３つのモノクローナル系列はｐｋａｌに対して選択的であることが確認された。図２は、１つの系列（２４Ｌ１３、ＭＡｂ１と名付けられた抗体）も、陽性対照であるＣ１ｉｎｈ、及び米国特許第８，８１６，０５５号に記載されている別の抗体であるＤＸ－２９３０と比べて、酵素アッセイ（Ｋｅｎｎｉｓｔｏｎ，２０１４）において阻害性であったことを示している。このハイブリドーマを配列決定して、重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（配列番号１及び配列番号２；ＭＡｂ１）を決定した。図３に示すように、組換え発現させたＭＡｂ１はハイブリドーマ由来ＩｇＧの阻害活性を保持していた。ＭＡｂ１の重鎖可変ドメインの核酸配列は配列番号３３として提供され、ＭＡｂ１の軽鎖可変ドメインの核酸配列は配列番号３４として提供されている。
【0288】
ＩＭＧＴ（ｉｍｇｔ．ｏｒｇ）に列挙されているヒト生殖系列配列との比較によってマウス可変ドメインに最も近いヒト生殖系列配列を特定した。ヒト生殖系列に向けてマウス配列を展開するために重鎖と軽鎖の双方に対してフレームワーク修飾の入れ子セットを設計し、ペアで発現させ、ｐｋａｌへの結合親和性、及びｐｋａｌ酵素活性の阻害の効力について調べた。変異型ＶＨ５＿ＶＬ４（ＭＡｂ２）は結合親和性及び阻害効力の双方を維持し、最適にヒト化された（配列番号３、配列番号４）。加えて、重鎖ＣＤＲ２の構造的責任であるＮＧをＮＡに修飾して脱アミド化のリスクを減らすのに成功した（配列番号５）。
【0289】
ＭＡｂ１軽鎖ＣＤＲ配列を多様化し、Ｆａｂファージディスプレイライブラリーを構築した。ｐｋａｌによる連続的な選択及びｐｒｅｋａｌによる脱選択を使用して、ｐｋａｌ選択性クローンを濃縮した。選択性クローンをＩｇＧとして発現させ、ｐｋａｌ酵素活性の阻害について調べた（図４）。軽鎖ＣＤＲ２変異型クローンＶＬ４＿２１３Ｔ．０５（ＭＡｂ３－ＶＬ；配列番号６）は、ｐｋａｌ阻害の高い効力を持つ選択性変異型として同定された。ヒト化ＶＬ４変異型（配列番号６、ＭＡｂ３－ＶＬ）に移植されたこの軽鎖ＣＤＲ２は、ヒト化された責任固定重鎖可変領域（配列番号５、ＭＡｂ３－ＶＨ）と共に発現させた場合、選択性と活性を維持した。ＭＡｂ３のＶＬ配列及びＶＨ配列のヒト化され最適化された構築物は、完全長ヒトＩｇＧ１カッパ型として発現される場合、ＭＡｂ４（重鎖：配列番号７、軽鎖：配列番号８）と名付けられた。
【0290】
ＭＡｂ４の治療可能性をさらに最適化するために、ＬＳ（ＥＵ番号付けによるＭ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓに相当）またはＹＴＥの突然変異（ＥＵ番号付けによるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅに相当）を導入することによって重鎖定常ドメインを修飾した（それぞれ配列番号９及び配列番号１０）。軽鎖配列番号８と共に発現される場合、これらのヒト化ＩｇＧ構築物は、それぞれＭＡｂ４－ＬＳ及びＭＡｂ４－ＹＴＥと命名された。
【0291】
実施例２：血漿カリクレイン抗体の試験管内での特徴付け
血漿カリクレインを阻害することが知られ、ＨＡＥ治療の臨床試験の対象である市販のモノクローナル抗体ＤＸ－２９３０と比較した、ＭＡｂ４とそのＦｃ変異型、ＭＡｂ４－ＹＴＥ及びＭＡｂ４－ＬＳの試験管内での効力を生理学的に関連する機能アッセイ試験にて調べた。具体的には、各抗体がその天然基質である高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）のｐｋａｌ切断を阻害する能力を観察した。これらの実験では、１０または３０ｎＭのｐｋａｌを阻害抗体と共に室温で１時間予備インキュベートし、その後６００ｎＭのＨＭＷＫを添加して２０分間インキュベートし、０．５μＭのＡＥＢＳＦを添加して反応を停止させた。ｐｋａｌによって触媒されてＨＭＷＫから放出されるブラジキニン（ＢＫ）の濃度を、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｅｎｚｏ，Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ，ＮＹ）にて反応生成物の１／１００希釈を使用して測定した。ｐＫａｌ阻害アッセイにおける新たに生成した抗体と参照抗体ＤＸ－２９３０の比較を図５に示す。Ｍａｂ４、Ｍａｂ４－ＹＴＥ、及びＭａｂ４－ＬＳの構築物は、ＤＸ－２９３０と比べて、さらに強力なｐＫａｌ阻害とさらに急勾配のヒルスロープを示した。これに関連して、ＭＡｂ４及びそのＦｃ変異型は、ｐｋａｌによるＨＭＷＫ切断の強力な阻害剤であり、ヒルスロープ約２を示し（例えば、図５を参照）、これは、ＭＡｂ４及びそのＦｃ変異型がｐｋａｌのアロステリック阻害剤であってもよいという仮説と一致する。さらに、Ｍａｂ４構築物へのＹＴＥ修飾またはＬＳ修飾の導入は、阻害アッセイにおける構築物の効力に実質的な影響を与えなかった。
血漿カリクレインを阻害することが知られ、ＨＡＥ治療の臨床試験の対象である市販のモノクローナル抗体ＤＸ－２９３０と比較した、ＭＡｂ４とそのＦｃ変異型、ＭＡｂ４－ＹＴＥ及びＭＡｂ４－ＬＳの試験管内での効力を生理学的に関連する機能アッセイ試験にて調べた。具体的には、各抗体がその天然基質である高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）のｐｋａｌ切断を阻害する能力を観察した。これらの実験では、１０または３０ｎＭのｐｋａｌを阻害抗体と共に室温で１時間予備インキュベートし、その後６００ｎＭのＨＭＷＫを添加して２０分間インキュベートし、０．５μＭのＡＥＢＳＦを添加して反応を停止させた。ｐｋａｌによって触媒されてＨＭＷＫから放出されるブラジキニン（ＢＫ）の濃度を、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｅｎｚｏ，Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ，ＮＹ）にて反応生成物の１／１００希釈を使用して測定した。ｐＫａｌ阻害アッセイにおける新たに生成した抗体と参照抗体ＤＸ－２９３０の比較を図５に示す。Ｍａｂ４、Ｍａｂ４－ＹＴＥ、及びＭａｂ４－ＬＳの構築物は、ＤＸ－２９３０と比べて、さらに強力なｐＫａｌ阻害とさらに急勾配のヒルスロープを示した。これに関連して、ＭＡｂ４及びそのＦｃ変異型は、ｐｋａｌによるＨＭＷＫ切断の強力な阻害剤であり、ヒルスロープ約２を示し（例えば、図５を参照）、これは、ＭＡｂ４及びそのＦｃ変異型がｐｋａｌのアロステリック阻害剤であってもよいという仮説と一致する。さらに、Ｍａｂ４構築物へのＹＴＥ修飾またはＬＳ修飾の導入は、阻害アッセイにおける構築物の効力に実質的な影響を与えなかった。
【0292】
使用された高分子量キニノーゲンの濃度はヒトの体内を循環する濃度であり、使用された血漿カリクレインの濃度は、発作中の遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）患者の血漿中推定値の範囲内であるので、ＨＭＷＫアッセイのパラメーターは生理学的に関連性があった。Ｍａｂ４－ＹＴＥ及びＤＸ－２９３０の双方はブラジキニン産生の用量依存性阻害を示し、これは血漿カリクレイン活性の低下を示し、図５に示すように、Ｍａｂ４－ＹＴＥはＤＸ－２９３０よりも血漿カリクレイン活性及びブラジキニン放出の阻害に対してさらに大きな効力を示した。
【0293】
相対的な効力の指標を提供するために、抗体のＩＣ９０値も決定した。ＨＡＥでは、ＨＡＥ発作を防ぐための治療上関連する阻害レベルは、血漿カリクレインの約９０％を阻害することであると考えられている。これは、９０％の阻害効果をもたらす薬剤の濃度であるＩＣ９０と呼ばれる測定値に相当する。ＨＭＷＫ機能アッセイでは、図５に示すように、ＩＣ９０値は、カリクレイン活性の９０％阻害をもたらす抗体の濃度であり、治療上関連する阻害レベルであると考えられている。ＤＸ－２９３０のＩＣ９０値は３００ｎＭであるのに対し、ＭＡｂ４及びそのＦｃ変異型のＩＣ９０値は３０ｎＭである。したがって、この試験管内ＨＭＷＫ機能アッセイは、ＭＡｂ４－ＹＴＥがＤＸ－２９３０よりも約１０倍高い効力を有することを示した。ＤＸ－２９３０を用いた臨床試験では、ＨＡＥ発作率を最適に低下させ、発作のない持続時間を最大化するには２００～３００ｎＭのＤＸ－２９３０の定常状態血漿レベルを必要とすることが示されているので、このアッセイの結果はＤＸ－２９３０で観察された臨床有効性と一致している。
【0294】
リードｐｋａｌ抗体の動態特性及び選択性を３７℃、ｐＨ７．４またはｐＨ６．０にてＳＰＲによって推定した。ＭＡｂ４－ＬＳ（配列番号９及び８）及びＭＡｂ４－ＹＴＥ（配列番号１０及び８）は、ｐｋａｌに対して一桁ナノモルの低い親和性を示し、ｐｒｅｋａｌに対して実質的な選択性を示した（図６）。実際、ＭＡｂ４－ＬＳ及びＭＡｂ４－ＹＴＥ、ならびにＤＸ－２９３０は血漿カリクレインに対してプレカリクレインよりも１０００倍を超える高い親和性を有する（図６）。ヒト血漿カリクレインに関するＭＡｂ４－ＹＴＥのＫＤはｐＨ７．４で１．１ｎＭ、ｐＨ６．０で０．９ｎＭであった一方で、ＭＡｂ４－ＬＳのＫＤはｐＨ７．４で２．２ｎＭ、及びｐＨ６．０で１．２ｎＭであった。これらの抗体は、特にｐＨ６．０～ｐＨ７．４の範囲内でヒト血漿カリクレインへの標的結合にて有意なｐＨ依存性を示さなかった。対照的に、参照抗体ＤＸ－２９３０はｐＨ７．４で１８ｎＭ、ｐＨ６．０で２３６ｎＭのＫＤを示した（図６）。結果として、Ｍａｂ－ＹＴＥ抗体及びＭａｂ４－ＬＳ抗体は血漿カリクレインに対して参照抗体ＤＸ－２９３０よりも強い結合親和性（５倍を超える、例えば８～１６倍）を有し、これは機能的血漿カリクレイン阻害アッセイにてＤＸ－２９３０と比べてＭａｂ４－ＹＴＥの効力が約１０倍大きいことに一致する。さらに、ＤＸ－２９３０抗体は同じ条件下でかなりのｐＨ感受性を示した。例えば、ＤＸ－２９３０抗体はｐＨ６とｐＨ７．４で測定した場合、ＫＤの１０倍を超える低下を示した。表７は、ｐＨ７．４、３７℃における上記のようなＳＰＲ結合に基づくＭＡｂ４－ＹＴＥ及びＤＸ－２９３０のＫａ、Ｋｄ及びＫＤの値を示す。
【表7】
【0295】
まとめると、図６に提示するデータは抗体Ｍａｂ４－ＹＴＥまたはＭａｂ４－ＬＳが以下の特徴：
（ａ）ｐＨ６．０～７．４の間で実質的にｐＨに依存しないＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）；
（ｂ）ヒト血漿カリクレインについて０．１ｎＭ～５ｎＭの間のＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０または７．４を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）；及び
（ｃ）ヒト血漿カリクレインについては０．１ｎＭ～５ｎＭの間のＫＤ、及びヒトプレカリクレインについては２５０ｎＭ～２，０００ｎＭの間のＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０または７．４を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）のうちの１つ以上を有することを示している。
（ａ）ｐＨ６．０～７．４の間で実質的にｐＨに依存しないＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）；
（ｂ）ヒト血漿カリクレインについて０．１ｎＭ～５ｎＭの間のＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０または７．４を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）；及び
（ｃ）ヒト血漿カリクレインについては０．１ｎＭ～５ｎＭの間のＫＤ、及びヒトプレカリクレインについては２５０ｎＭ～２，０００ｎＭの間のＫＤ（例えば、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１または１．３ｍＭのＣａ２＋、１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．０２％のＴｗｅｅｎ－２０、ｐＨ６．０または７．４を含有する緩衝液にて３７℃でＳＰＲによって決定されるような）のうちの１つ以上を有することを示している。
【0296】
Ｆｃ突然変異（ＭＡｂ４－ＬＳ及びＭＡｂ４－ＹＴＥ）を持つ血漿カリクレイン抗体のｈＦｃＲｎ結合も評価した。ＭＡｂ４－ＬＳ及びＭＡｂ４－ＹＴＥの２つの希釈系列を作製した：０．０５％Ｐ２０（ポリソルベート２０）を含むＰＢＳ中、ｐＨ６．０で２０００ｎＭ～３１．２５ｎＭのＭＡｂ４－ＬＳ及びＭＡｂ４－ＹＴＥ、及びｐＨ７．４で２０００ｎＭ～５００ｎＭ。ＩｇＧ１を対照抗体として使用した。Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を使用してＳＰＲを介してＦｃＲｎ結合について抗体試料を評価した。ＢｉａｃｏｒｅチップはヒトＦｃＲｎと結合したＣＭ５（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、カタログ番号ＣＴ００９－Ｈ０８Ｈ）だった。使用したランニング緩衝液は、ＰＢＳ ０．０５％ Ｐ２０及びｐＨ６またはｐＨ７．４であった。ｐＨ６．０でのｈＦｃＲｎ結合を表８に示す。ＭＡｂ４－ＬＳ及びＭＡｂ４－ＹＴＥは双方とも、未修飾ＭＡｂ４と比べて（２．２９×１０１のＫｄと比べて３．１０×１０２及び２．７７×１０２のＫｄ）及びＤＸ－２９３０（１．６７×１０１ Ｋｄ）と比べてｐＨ６．０でのオフ速度の低下（１０倍遅い）によって、ｐＨ依存性のｈＦｃＲｎ結合が増加した。ｐＨ７．４では、３つの抗体すべてに対する結合の証拠はなく、ＭＡｂ４、ＭＡｂ４－ＬＳ及びＭＡｂ４－ＹＴＥのＦｃＲｎ結合がｐＨ依存性であることを示唆している［データは示さず］。したがって、理論に束縛されることを望まないが、ＭＡｂ４－ＬＳ抗体及びＭＡｂ４－ＹＴＥ抗体は双方とも、親ＭＡｂ４抗体と比べて、エンドソーム（ｐＨ６）内のＦｃＲｎにはさらに良好に結合し、血液（ｐＨ７．４）内のＦｃＲｎにはさらに弱く結合してもよく、ＩｇＧ－ＦｃＲｎ再循環経路を介して抗体が血液中に再循環し、それによってＭＡｂ４－ＬＳ及びＭＡｂ４－ＹＴＥの循環半減期をＭＡｂ４及びＤＸ－２９３０と比べて約３～４倍延長する（実施例３の表１０を参照のこと）。
【表8】
【0297】
また、ＭＡｂ４－ＹＴＥは、ｐＫａｌの低分子蛍光基質であるＰｒｏ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－ＡＭＣ（ＰＦＲ－ＡＭＣ）を使用して評価したところ、ヒトだけでなくカニクイザル、ラット、ウサギの血漿カリクレイン酵素活性も強力に阻害することが示された。ＭＡｂ４－ＹＴＥ抗体を、図７のグラフに示すような示された濃度にてそれぞれの種に由来する１ｎＭのｐＫａｌと共に３つ組ウェルにおいて３７℃で１時間インキュベートした。１０μＭの蛍光発生レポーター基質ＰＦＲ－ＡＭＣを添加し、動態モードでの蛍光プレートリーダーにてｐＫａｌ活性を６０分間測定した。各反応ウェルからの最初の４０分間の基質放出データに対する線形回帰分析を実行して、各阻害剤濃度について初期反応速度（ＲＦＵ／分）を得た。初期反応速度を適合させ（４パラメーター適合）、ＩＣ５０値を得て、基準化して、近似曲線の上限及び下限の内の酵素活性パーセントを取得した。ＩＣ５０のデータを表９に示す。ｎＭでのＭＡｂ４－ＹＴＥの濃度に対してプロットしたｐＫａｌ活性のレベルを図７に示す。このデータは、ＭＡｂ４－ＹＴＥがヒトだけでなく、サル、ウサギ、及びラットのｐＫａｌの強力な阻害剤であることを示している。
【表9】
【0298】
実施例３：血漿カリクレイン抗体の生体内の薬物動態学の特徴付け
ＭＡｂ４（配列番号７及び８）、ＭＡｂ４－ＬＳ（配列番号９及び８）、及びＭＡｂ４－ＹＴＥ（配列番号１０及び８）をさらに、別の血漿カリクレイン抗体ＤＸ－２９３０と並行して、カニクイザルの薬物動態試験にて特徴付けた。これらの抗体の試験は同時に実施されたが、直接比較ではなく独立した試験だった。ＬＭナイーブまたはナイーブの３．０～４．０ｋｇのオスＮ＝１８のカニクイザルをＨａｉｎａｎ Ｊｉｎｇａｎｇ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏ．ＬＴＤ．から購入した。抗体を２０ｍＭのヒスチジン、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．５中で調製した。これらの試験では、すべての抗体をオスのカニクイザル（Ｎ＝３）に５ｍｇ／ｋｇで１０分間かけてＩＶ注入によって投与した。各時点で、橈側皮静脈及び伏在静脈から予め冷却したクエン酸チューブに血液を採取した。試料は週に１回、４２日間（ＤＸ－２９３０及びＭＡｂ４）または８４日間（ＭＡｂ４－ＹＴＥ及びＭＡｂ４－ＬＳ）採取した。血液試料を濡れた氷の上に置き、４℃で遠心分離して、試料採取から１５分以内に血漿を得た。血漿試料を約－７０℃で保存した。血漿試料中の各抗血漿カリクレイン抗体の存在は、捕捉剤として抗ヒト抗体、検出試薬としてヒトＩｇＧ重鎖及び軽鎖サル吸着抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｃａｔ＃：２０４９－０１及びＢｅｔｈｙｌ，Ｃａｔ＃Ａ８０－３１９Ｐ）でコーティングしたプレートを使用してＥＬＩＳＡによって決定した。ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ２を使用してＥＬＩＳＡプレートを読み取った。
ＭＡｂ４（配列番号７及び８）、ＭＡｂ４－ＬＳ（配列番号９及び８）、及びＭＡｂ４－ＹＴＥ（配列番号１０及び８）をさらに、別の血漿カリクレイン抗体ＤＸ－２９３０と並行して、カニクイザルの薬物動態試験にて特徴付けた。これらの抗体の試験は同時に実施されたが、直接比較ではなく独立した試験だった。ＬＭナイーブまたはナイーブの３．０～４．０ｋｇのオスＮ＝１８のカニクイザルをＨａｉｎａｎ Ｊｉｎｇａｎｇ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏ．ＬＴＤ．から購入した。抗体を２０ｍＭのヒスチジン、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ８０、ｐＨ６．５中で調製した。これらの試験では、すべての抗体をオスのカニクイザル（Ｎ＝３）に５ｍｇ／ｋｇで１０分間かけてＩＶ注入によって投与した。各時点で、橈側皮静脈及び伏在静脈から予め冷却したクエン酸チューブに血液を採取した。試料は週に１回、４２日間（ＤＸ－２９３０及びＭＡｂ４）または８４日間（ＭＡｂ４－ＹＴＥ及びＭＡｂ４－ＬＳ）採取した。血液試料を濡れた氷の上に置き、４℃で遠心分離して、試料採取から１５分以内に血漿を得た。血漿試料を約－７０℃で保存した。血漿試料中の各抗血漿カリクレイン抗体の存在は、捕捉剤として抗ヒト抗体、検出試薬としてヒトＩｇＧ重鎖及び軽鎖サル吸着抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｃａｔ＃：２０４９－０１及びＢｅｔｈｙｌ，Ｃａｔ＃Ａ８０－３１９Ｐ）でコーティングしたプレートを使用してＥＬＩＳＡによって決定した。ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ２を使用してＥＬＩＳＡプレートを読み取った。
【0299】
ＭＡｂ４及びＤＸ－２９３０（図８に示すＭＡｂ４の半減期、図９に示すＤＸ－２９３０の半減期）は１０～１２日の終末相半減期を有し、これは非ヒト霊長類におけるＤＸ－２９３０に関するＵＳＦＤＡのレビュー文書及び出版物で報告されているものと一致する。対照的に、ＭＡｂ４－ＬＳは約２３日の終末相半減期を示し、ＭＡｂ４－ＹＴＥは約３４日の終末相半減期を示した（図８を参照のこと）。ＭＡｂ４－ＹＴＥの終末相半減期はＤＸ－２９３０及びＭＡｂ４で観察される半減期よりも約３～４倍長い。これらの結果は半減期が延長されたＭＡｂ４抗体の優位性を示している。別の血漿カリクレイン抗体へのＬＳまたはＹＴＥの突然変異の導入は半減期を増やさないことが発見された（データは示さず）ので、この結果は驚くべきものであった。加えて、新たに生成された抗体の阻害効力の増加と半減期の増加は、ＤＸ－２９３０と比べて有効量のＭＡｂ４－ＹＴＥまたはＭＡｂ４－ＬＳが生体内で長期間維持されてもよいことを示している。図９は、各抗体のｐＫａｌのＩＣ９０と比較したＭＡｂ４－ＹＴＥ（真ん中パネル）及びＤＸ－２９３０（上部パネル）のＰＫ半減期を示す。（上部パネルと真ん中パネルのデータは、ＭＡｂ４－ＹＴＥとＤＸ－２９３０の双方の血漿レベルを示すために、下部パネルで互いに重ね合わせている）。ＤＸ－２９３０の血漿レベルは約１０日目までに予測最小治療濃度（ＩＣ９０）を下回るが、ＭＡｂ４－ＹＴＥは８４日間を超えて予測最小治療濃度（ＩＣ９０）を超えたままである。表１０はカニクイザル試験由来のＰＫデータの要約を提供している。理論に束縛されるものではないが、実施例２に記載されているＦｃ修飾抗体のｐＨ依存性ＦｃＲｎ結合の増大によって、カニクイザルにおけるクリアランスが遅くなり、半減期が延長された。
【表10】
【0300】
試験管内効力データと非ヒト霊長類の試験に由来する半減期の結果の評価は、抗体の有効性の潜在的な持続期間を示唆している。具体的には、カニクイザル試験に由来する各時点で測定された抗体の血漿濃度を使用して、試験管内効力アッセイにおける抗体のその濃度で観察された血漿カリクレイン阻害に基づいてその時点での血漿カリクレイン阻害の予想レベルを予測することができる。
【0301】
図１０は、カニクイザルのＰＫ試験からの血漿濃度と、ＨＭＷＫアッセイデータに基づくＭａｂ４－ＹＴＥ及びＤＸ－２９３０による生体内ｐＫａｌ阻害パーセントを比較する試験管内機能アッセイで測定されたｐＫａｌ阻害と、生体内ＰＫデータとに基づく予測モデルを提供する。カニクイザル試験では、ＤＸ－２９３０の血漿レベルは約１０日目までに試験管内効力アッセイで予測される最小治療濃度またはＩＣ９０を下回り、２０日目までに予測される試験管内効力アッセイは血漿カリクレインの約５０％阻害をもたらすレベルになった。対照的に、カニクイザル試験では、ＭＡｂ４－ＹＴＥの血漿レベルは、実験の全期間である８４日間、試験管内効力アッセイによって予測されるＩＣ９０を超えたままだった。
【0302】
これらの前臨床データは、等用量では、ＭＡｂ４－ＹＴＥはヒトにて数ヵ月の半減期を有するので、ＤＸ－２９３０よりも作用持続時間が有意に長いことを示唆している。これによって、ＤＸ－２９３０よりも長い作用持続時間を有する、さらに低い用量のＭＡｂ４－ＹＴＥが可能になる可能性があってもよい。したがって、ＭＡｂ４－ＹＴＥは血漿カリクレインの病的活性を長期間阻害することによって、ＨＡＥ患者に対する効果的な予防療法であってもよい。加えて、ＨＡＥ発作を防ぐために必要な治療上有効な血漿レベルを維持しながら、抗体の投与頻度を低くしてもよい。したがって、ＭＡｂ４－ＹＴＥまたはＭＡｂ４－ＬＳのような抗体は、低頻度の間隔で、例えば３ヵ月ごとに、またはさらに長い間隔で投与されてもよいことが可能である。これは、ＤＸ－２９３０のような現在利用可能なＨＡＥ治療法に比べて大きな利点となる。したがって、ＭＡｂ４－ＹＴＥは低頻度の投与、さらに少ない投与量、及び長期間にわたるＨＡＥ発作の抑制という利点を組み合わせる可能性がある。
【0303】
実施例４．血漿カリクレイン抗体の的外れ結合の試験管内での特徴付け
膜プロテオームアレイアッセイを実行してＭＡｂ４の非特異的結合を特定した。ＭＡｂ４については的外れ結合は観察されなかった（データは示さず）。
膜プロテオームアレイアッセイを実行してＭＡｂ４の非特異的結合を特定した。ＭＡｂ４については的外れ結合は観察されなかった（データは示さず）。
【0304】
さらに、抗体を調べて抗体がエフェクター機能を含有するかどうかを決定した。抗体はエフェクター機能を有さないことが分かった（データは示さず）。
【0305】
抗体の特異性も、抗体が無関係なセリンプロテアーゼに結合するかどうかを評価することによって決定した。抗体をセリンプロテアーゼのパネル（約２０）に対してスクリーニングしたが、有意な交差反応性結合は観察されなかった（データは示さず）。
【0306】
ＭＡｂ４が交差反応性を示すかどうかを決定するために、トリプシン阻害アッセイを開発し、実行した。０．２５ｎＭのトリプシン、ヒト膵臓（Ｃａｔ＃１６－１９－０３２０００，Ａｔｈｅｎｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ）、及び１μＭで開始するＭＡｂ４－ＹＴＥの希釈系列を、緩衝液におけるＰＦＲ－ＡＭＣ（蛍光発生基質、Ｂａｃｈｅｍ，ｃａｔ＃４００４０２３）と共に２時間インキュベートした。蛍光強度を５分ごとに測定した。ガベキサートメシル酸塩を陽性対照として１μＭで開始する希釈系列にて使用した。各アッセイを２つ組で実施した。結果を図１１及び表１１に提供する。ＭＡｂ４－ＹＴＥはトリプシン活性を阻害せず、ＩＣ５０は計算できなかった。対照的に、抗体ＤＸ－２９３０は血漿カリクレインの機能活性を阻害する（約３００ｎＭ）ＤＸ－２９３０の効力範囲内であるＩＣ５０ （２４３ｎＭ～３７６ｎＭ）にてトリプシンの活性を阻害した。したがって、Ｍａｂ４－ＹＴＥはＤＸ－２９３０と比べてさらに優れたプロテアーゼ選択性プロファイルを示した。
【表11】
【0307】
追加のセリンプロテアーゼ阻害アッセイを開発し、実行してＭＡｂ４が交差反応性を示すかどうかを決定した。１６のプロテアーゼに対して１μＭで開始する３倍連続希釈による１０用量アッセイにて２つ組でＭＡｂ４－ＹＴＥ及びＤＸ－２９３０を調べた。対照化合物は１０μＭまたは１００ｕＭ（ｔＰＡ、マトリプターゼ２、カリクレイン５、カリクレイン２、カリクレイン１、グランザイムＢ、及びＡＰＣ）で開始する３倍連続階希釈による１０用量アッセイで調べた。蛍光標識されたペプチド基質からの蛍光シグナルの増加の経時的測定としてプロテアーゼ活性をモニターし、シグナル勾配（シグナル／分）の最初の直線部分を分析した。抗体価測定についての％酵素活性はＰＢＳ緩衝液の存在下でのビヒクル対照を１００％活性として計算した。ＭＡｂ４－ＹＴＥ及びＤＸ－２９３０によるプロテイナーゼ阻害のＩＣ５０値を以下の表１２に要約する。
【表12】
【0308】
空のセルは阻害作用がないこと、またはＩＣ５０曲線に当てはめることができなかった化合物活性を示す。１μＭを超えるＩＣ５０値は利用可能な最良の曲線の当てはめに基づいて推定した。
【0309】
このアッセイで調べたセリンプロテアーゼに対するＭＡｂ４－ＹＴＥのＩＣ５０は計算できなかった。ヘプシン及びトロンビンＡに対するＤＸ－２９３０については１μＭ（１．００Ｅ－０６）を超えるＩＣ５０が推定された。セリンプロテアーゼ阻害プロファイルの差異は、ＤＸ－２９３０と比べてＭＡｂ４－ＹＴＥのプロテアーゼ選択性が高いことと一致していた。
【0310】
要するに、ＭＡｂ４－ＹＴＥはトリプシン活性または調べたセリンプロテアーゼを阻害しなかったので、的外れ阻害活性を示さない。対照的に、ＤＸ－２９３０血漿カリクレイン抗体は有意なトリプシン阻害活性と同様にヘプシン及びトロンビンＡに関して的外れな阻害活性を示したということは、的外れ活性の欠如によるＭＡｂ４－ＹＴＥの標的に対する特異性と選択性の優れた特性を実証している。
【0311】
実施例５：血漿カリクレイン抗体のエピトープの特徴付け
競合結合アッセイ
競合結合アッセイ
【0312】
ＳＰＲに基づく競合実験（Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ Ｔｏｏｌｓ，Ｓａｌｔ Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ，ＵＴ）は、ＭＡｂ４が活性部位に結合する競合阻害剤であることが示されているＤＸ－２９３０（Ｋｅｎｎｉｓｔｏｎ，２０１４）のエピトープとは異なるエピトープに結合することを示している（図１２）。ＤＸ－２９３０、ＭＡｂ４－ＬＳ、及びＭＡｂ４－ＹＴＥを、１０ｍＭのＮａＡｃ、ｐＨ５．０との標準的なＮＨＳ／ＥＣＤカップリングを使用してＸａｎｔｅｃ３０Ｍセンサーチップにアミンカップリングした。捕捉及びスタッキングの試験では、ランニング緩衝液は１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ及び０．０２％ｐ２０と共に１．３ｍＭのＣａ＋＋を含むＨＢＳ（ｐＨ７．４）を含有した。ヒト血漿カリクレインをさまざまな抗体表面に捕捉し（時間０～１８０秒、１μＭ）、次に各表面結合複合体に対して各ｍＡｂを１μＭで調べた。
【0313】
各抗体をそれ自体に対して調べた場合、結合は観察されなかった（図１２）。しかしながら、ＭＡｂ４－ＬＳ及びＭＡｂ４－ＹＴＥは双方ともＤＸ－２９３０抗体表面によって捕捉されたカリクレインに結合した（図１２）。加えて、ＤＸ－２９３０は、ＭＡｂ４－ＬＳ抗体及びＭＡｂ４－ＹＴＥ抗体の双方によって捕捉されたカリクレインに結合した（図１２）。これらの結果は、ＭＡｂ４－ＬＳ及びＭＡｂ４－ＹＴＥがＤＸ－２９３０とは異なるエピトープに結合することを示している。
【0314】
ｐＫａｌ－抗体複合体の架橋及びマスフィンガープリンティング
【0315】
先ず、ヒトｐＫａｌをペプチドマスフィンガープリンティングによって特徴付けした。ヒト血漿カリクレインタンパク質をトリプシン、キモトリプシン、Ａｓｐ－Ｎ、エラスターゼ及びサーモリシンのタンパク質分解に供した後、ｎＬＣ－ＱＥｘａｃｔｉｖｅ＋ＯｒｂｉｔｒａｐＭＳ／ＭＳ分析を行った。ＱＥｘａｃｔｉｖｅ＋質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と連携したｎＬＣ Ｕｌｔｉｍａｔｅ ３０００－ＲＳＬＣシステムを使用した。７μＭのヒトｐＫａｌを１μＬのＤＳＳ ｄ０／ｄ１２（２ｍｇ／ｍＬ；ＤＭＦ）とインキュベートした後、室温で１８０分間インキュベートした。対照試料は架橋試薬を添加せずに調製した。試料を室温で１８０分間インキュベートした。インキュベート後、１μＬの重炭酸アンモニウム（最終濃度２０ｍＭ）を添加することによって架橋反応を停止し、室温で６０分間インキュベートした。次に、スピードバックを使用して双方のチューブを乾燥させた後、８Ｍ尿素を再懸濁（１０μＬ）した。混合後、ＤＴＴ（１μＬ、５００ｍＭ）を双方のチューブに加えた。次に混合物を３７℃で６０分間インキュベートした。インキュベート後、ヨードアセトアミド（１μＬ、１Ｍ）を各チューブに添加し、その後暗室で室温にてさらに６０分間インキュベートした。インキュベート後、１００μＬのタンパク質分解緩衝液を双方のチューブに加えた。トリプシン緩衝液は５０ｍＭのＡｍｂｉｃ、ｐＨ８．５、５％アセトニトリルを含有し；キモトリプシン緩衝液は１００ｍＭのＴｒｉｓ ＨＣｌ、１０ｍＭのＣａＣＬ２、ｐＨ７．８を含有し；ＡＳＰ－Ｎ緩衝液は５０ｍＭのリン酸緩衝液、ｐＨ７．８を含有し；エラスターゼ緩衝液は、５０ｍＭのＴｒｉｓ ＨＣｌ、ｐＨ８．０を含有し；サーモリシン緩衝液は５０ｍＭのＴｒｉｓ ＨＣｌ、０．５ｍＭのＣａＣＬ２、ｐＨ９．０を含有した。
【0316】
トリプシンのタンパク質分解
【0317】
１００μＬの還元／アルキル化ヒトｐＫａｌを１μＬのトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ）と１／１００の比率で混合した。タンパク質分解混合物を３７℃で一晩インキュベートした。
【0318】
キモトリプシンのタンパク質分解
【0319】
１００μＬの還元／アルキル化ヒトｐＫａｌを０．５μＬのキモトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ）と１／２００の比率で混合した。タンパク質分解混合物を２５℃で一晩インキュベートした。
【0320】
ＡＳＰ－Ｎのタンパク質分解
【0321】
１００μＬの還元／アルキル化ヒトｐＫａｌを０．５μＬのＡＳＰ－Ｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ）と１／２００の比率で混合した。タンパク質分解混合物を３７℃で一晩インキュベートした。
【0322】
エラスターゼのタンパク質分解
【0323】
１００μＬの還元／アルキル化ヒトｐＫａｌを１μＬのエラスターゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ）と１／１００の比率で混合した。タンパク質分解混合物を３７℃で一晩インキュベートした。
【0324】
サーモリシンのタンパク質分解
【0325】
１００μＬの還元／アルキル化ヒトｐＫａｌを２μＬのサーモリシン（Ｐｒｏｍｅｇａ）と１／５０の比率で混合した。タンパク質分解混合物を７０℃で一晩インキュベートした。
【0326】
消化後、最終１％のギ酸を溶液に添加した。タンパク質分解後、タンパク質分解によって生成されたペプチド溶液１μＬをナノ液体クロマトグラフィーシステム（Ｕｌｔｉｍａｔｅ ３０００－ＲＳＬＣ）に負荷した。Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ－Ｏｒｂｉｔｒａｐ ＭＳ分析は製造元の指示書に従って実行した。タンパク質分解ＭＳの結果に基づいて、トリプシン、キモトリプシン、ＡＳＰ－Ｎ、エラスターゼ、及びサーモリシンのペプチドの重複マッピングが得られ、ヒトｐＫａｌ配列の９９．０５％を網羅した。
【0327】
次に、重水素化架橋剤とインキュベートした後、ヒトｐＫａｌ／ＭＡｂ４－ＹＴＥ及びヒトｐＫａｌ／ＤＸ－２９３０の複合体のエピトープを上記のように決定した。架橋ペプチドを濃縮した後、試料を高分解能質量分析法（ｎＬＣ－Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ－Ｏｒｂｉｔｒａｐ ＭＳ）によって分析し、生成されたデータをＸＱｕｅｓｔ及びＳｔａｖｒｏｘソフトウェアを使用して分析した。
【0328】
調製したヒトｐＫａｌ／ＭＡｂ４－ＹＴＥ（１．４μＭ及び０．８μＭ）とヒトｐＫａｌ／ＤＸ－２９３０（１．４μＭ及び０．４μＭ）との混合物２０μＬを、２μＬのＤＳＳ ｄ０／ｄ１２（２ｍｇ／ｍＬ；ＤＭＦ）と混合し、室温で１８０分間インキュベートした。インキュベート後、１μＬの重炭酸アンモニウム（最終濃度２０ｍＭ）を添加することによって反応を停止させ、その後、室温で１時間インキュベートした。次いで、溶液をスピードバックを使用して乾燥させた後、Ｈ２Ｏ ８Ｍ尿素懸濁液（２０μＬ）を加えた。混合後、２μＬのＤＴＴ（５００ｍＭ）を溶液に添加した。次に混合物を３７℃で１時間インキュベートした。インキュベート後、２μＬのヨードアセトアミド（１Ｍ）を加え、その後、暗室で室温にて１時間インキュベートした。インキュベート後、８０μＬのタンパク質分解緩衝液を添加した。トリプシン緩衝液は５０ｍＭのＡｍｂｉｃ、ｐＨ８．５、５％アセトニトリルを含有し；キモトリプシン緩衝液は１００ｍＭのＴｒｉｓ ＨＣｌ、１０ｍＭのＣａＣｌ２、ｐＨ７．８を含有し；ＡＳＰ－Ｎ緩衝液は５０ＭＭのリン酸緩衝液、ｐＨ７．８を含有し；エラスターゼ緩衝液は５０ｍＭ のＴｒｉｓ ＨＣｌ、ｐＨ８．０を含有し；サーモリシン緩衝液は５０ｍＭのＴｒｉｓ ＨＣｌ、０．５ｍＭのＣａＣｌ２、ｐＨ９．０を含有した。トリプシン、キモトリプシン、ＡＳＰ－Ｎ、エラスターゼ、及びサーモリシンによるタンパク質分解は、ｐＫａｌタンパク質について上述した条件を使用して実行した。架橋ペプチドは、Ｘｑｕｅｓｔバージョン２．０及びＳｔａｖｒｏｘ３．６ソフトウェアを使用して分析した。
【0329】
ヒトＰＫＡＬとＭＡｂ４－ＹＴＥの間の分子界面は、化学架橋、高質量ＭＡＬＤＩ質量分析法、及びｎＬＣ－Ｏｒｂｉｔｒａｐ質量分析法を使用して特徴付けた。トリプシン、キモトリプシン、ＡＳＰ－Ｎ、エラスターゼ、及びサーモリシンによる、重水素化ｄ０ｄ１２を含むタンパク質複合体ヒト－ＰＫＡＬ／ＭＡｂ４－ＹＴＥのタンパク質分解の後、ｎＬＣ－ｏｒｂｉｔｒａｐ ＭＳ／ＭＳ分析によって、ヒト－ＰＫＡＬとＭＡｂ４－ＹＴＥの間の１０の架橋ペプチドが検出された。
【0330】
架橋データの分析によって、ＭＡＢ４－ＹＴＥの相互作用にはヒトｐＫａｌ上の以下のアミノ酸５５０、５５１、５８５、５９１、５９７、６１７、６２５が含まれることが示された。図１３はヒトｐＫａｌとＭＡＢ４－ＹＴＥのペプチド相互作用の図を提供している。ヒトｐＫａｌ配列は下に示されており、Ｍａｂ４－ＹＴＥの架橋エピトープは残基５５０、５５１、５８５、５９７、６１７、及び６２５で示されている。図１４Ａ～Ｊは、ヒトｐＫａｌ上の抗体エピトープ部位のリボン／表面及びリボンのモデルを示す。ＭＡｂ４－ＹＴＥ抗体のエピトープ部位はＵＮＩＰＲＯＴ Ｐ０３９５２を参照配列としたＰＤＢ構造６Ｏ１Ｇをモデルにした。モデル内にて濃い色で示されたアミノ酸は、ヒトｐＫａｌ配列の残基５５０～５５１（ＫＲ（配列番号３７））、残基５８５～５９７（ＫＨＮＧＭＷＲＬＶＧＩＴＳ（配列番号３８））及び残基６１７～６２５（ＹＭＤＷＩＬＥＫＴ（配列番号３９））に対応する。
【0331】
架橋データの分析によって、ＤＸ－２９３０の相互作用にはヒトｐＫａｌ上の以下のアミノ酸４３４、４４６、４７５、４８２、５５５、５５８、５６０が含まれることが示された。図１５はヒトｐＫａｌとＤＸ－２９３０のペプチド相互作用の図を提供している。ヒトｐＫａｌ配列は下に示されており、ＤＸ－２９３０の架橋エピトープは残基４３４、４４６、４７５、４８２、５５５、５５８、及び５６０で示されている。図１６Ａ～Ｊは、ヒトｐＫａｌ上の抗体エピトープ部位のリボン／表面及びリボンのモデルを示す。ＤＸ－２９３０抗体のエピトープ部位はＰＤＢ構造６Ｏ１Ｇをモデルとした。モデル内にて濃い色で示されたアミノ酸は、ヒトｐＫａｌ配列の残基４３４～４４６（ＨＣＦＤＧＬＰＬＱＤＶＷＲ（配列番号４０））、残基４７５～４８２（ＹＫＶＳＥＧＮＨ（配列番号４１））、及び残基５５５～５６０（ＹＫＩＴＱＲ（配列番号４２））に対応する。図１７は抗体ＭＡｂ４－ＹＴＥと比較した、抗体ＤＸ－２９３０によって架橋されたヒトｐＫａｌの残基を示す地図を提供している。
【0332】
架橋質量分析データによって、ＭＡＢ４－ＹＴＥがＤＸ－２９３０と比べてヒトｐＫａｌ上の異なるエピトープに結合することが確認されている。理論によって束縛されることを望まないが、ＤＸ－２９３０と比べたＭａｂ４－ＹＴＥについての血漿カリクレイン上の異なる結合部位は、ＤＸ－２９３０と比べて改善されたプロテアーゼ選択性プロファイル、血漿カリクレイン結合のｐＨ感受性の欠如、及びＭａｂ４－ＹＴＥの全体的に優れたプロファイルを説明してもよい。
【0333】
参照による組み込み
本明細書において参照される特許文書及び科学文書の各々の開示はすべて、あらゆる目的のために参照によって本明細書に組み込まれる。
本明細書において参照される特許文書及び科学文書の各々の開示はすべて、あらゆる目的のために参照によって本明細書に組み込まれる。
【0334】
均等物
本開示は、本明細書に記載されている特定の実施形態によって範囲を限定されるものではない。実際、本明細書に記載されているものに加えて種々の改変が上記の説明及び添付の図面から当業者に明らかとなるであろう。そのような改変は、実施形態及び添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれることが意図される。
本開示は、本明細書に記載されている特定の実施形態によって範囲を限定されるものではない。実際、本明細書に記載されているものに加えて種々の改変が上記の説明及び添付の図面から当業者に明らかとなるであろう。そのような改変は、実施形態及び添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれることが意図される。
【0335】
本発明は、その精神または本質的特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で具現化されてもよい。したがって、前述の実施形態は、本明細書に記載されている本発明を限定するものではなく、あらゆる点において例示的であると見なされるべきである。したがって、本発明の範囲は、前述の説明によってではなく、添付の特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲の意味および同等性の範囲内に入るすべての変更はそこに包含されることが意図される。
【表13-1】
【表13-2】
【表13-3】
【表13-4】
【表13-5】
【表13-6】
【表13-7】
【表13-8】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18A】
【図18B】
【図18C】
【図19A】
【図19B】
【配列表】
【国際調査報告】