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特表2024-509540上皮修復のためのアポトーシス阻害剤５（ＡＰＩ５）の適用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-03-04
(54)【発明の名称】上皮修復のためのアポトーシス阻害剤５（ＡＰＩ５）の適用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/12 20060101AFI20240226BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240226BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20240226BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20240226BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240226BHJP
A61K 38/16 20060101ALI20240226BHJP
A61K 47/64 20170101ALI20240226BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20240226BHJP
A61K 47/60 20170101ALI20240226BHJP
A61K 31/7105 20060101ALI20240226BHJP
A61K 31/12 20060101ALI20240226BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20240226BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240226BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20240226BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240226BHJP
A61K 31/133 20060101ALI20240226BHJP
A61K 31/4245 20060101ALI20240226BHJP
A61K 31/403 20060101ALI20240226BHJP
C07D 271/06 20060101ALN20240226BHJP
C07D 209/82 20060101ALN20240226BHJP
【ＦＩ】
C12N15/12 ZNA
C12N15/63 Z
C12N15/62 Z
C07K19/00
C12N5/10
A61K38/16
A61K47/64
A61K47/68
A61K47/60
A61K31/7105
A61K31/12
A61K48/00
A61P43/00 111
A61P1/04
A61P43/00 121
A61K39/395 N
A61K31/133
A61K31/4245
A61K31/403
C07D271/06
C07D209/82
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023553403
(86)(22)【出願日】2022-03-07
(85)【翻訳文提出日】2023-10-30
(86)【国際出願番号】 US2022019138
(87)【国際公開番号】W WO2022187738
(87)【国際公開日】2022-09-09
(31)【優先権主張番号】63/157,225
(32)【優先日】2021-03-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】500350265
【氏名又は名称】ニューヨーク ユニバーシティ
(74)【代理人】
【識別番号】100099759
【弁理士】
【氏名又は名称】青木 篤
(74)【代理人】
【識別番号】100123582
【弁理士】
【氏名又は名称】三橋 真二
(74)【代理人】
【識別番号】100117019
【弁理士】
【氏名又は名称】渡辺 陽一
(74)【代理人】
【識別番号】100141977
【弁理士】
【氏名又は名称】中島 勝
(74)【代理人】
【識別番号】100138210
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 達則
(74)【代理人】
【識別番号】100182730
【弁理士】
【氏名又は名称】大島 浩明
(72)【発明者】
【氏名】ケネス キャドウェル
(72)【発明者】
【氏名】小出 昌平
(72)【発明者】
【氏名】松沢（石本） 優
(72)【発明者】
【氏名】小出 明子
【テーマコード（参考）】
4B065
4C076
4C084
4C085
4C086
4C206
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA90X
4B065AB01
4B065BA02
4B065CA24
4B065CA44
4C076AA94
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4C076BB01
4C076BB13
4C076BB29
4C076CC16
4C076CC29
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4C076EE23N
4C076EE41
4C076EE41N
4C076EE59
4C076FF34
4C084AA02
4C084AA03
4C084AA07
4C084AA13
4C084AA19
4C084BA01
4C084BA08
4C084BA22
4C084BA23
4C084BA37
4C084BA41
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4C084ZA68
4C084ZC75
4C085AA14
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4C085GG02
4C085GG08
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4C086BC71
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4C086NA05
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4C086ZA68
4C086ZC41
4C086ZC75
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4C206MA72
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4C206MA86
4C206NA05
4C206NA13
4C206NA14
4C206NA15
4C206ZA68
4C206ZC41
4C206ZC75
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA86
4H045EA20
4H045FA72
4H045FA74
(57)【要約】
本開示は、とりわけ、組換えＡＰＩ５タンパク質及びそれをコードする単離された核酸を提供する。また、その核酸を含むベクター、及びこのベクターまたは組換えＡＰＩ５タンパク質をコードする核酸を含む宿主細胞も提供される。そのような組換えタンパク質を含む組成物、及び関連する疾患及び障害の上皮修復及び治療のためにこれらの組換えタンパク質を使用する方法が更に提供される。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
アポトーシス阻害剤５（ＡＰＩ５）タンパク質、またはその断片もしくはバリアントを含む、組換えタンパク質。
【請求項2】
前記ＡＰＩ５タンパク質が、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項１に記載の組換えタンパク質。
【請求項3】
前記ＡＰＩ５の断片が、ＡＰＩ５のＮ末端ＨＥＡＴ反復領域を含む、請求項１に記載の組換えタンパク質。
【請求項4】
前記ＡＰＩ５の断片が、配列番号１の残基１～４４８を含む、請求項１または３に記載の組換えタンパク質。
【請求項5】
前記ＡＰＩ５の断片が、配列番号１の残基１～２０６を含む、請求項１または３に記載の組換えタンパク質。
【請求項6】
前記ＡＰＩ５タンパク質、またはその断片もしくはバリアントが、１つ以上の異種部分に遺伝的に融合及び／または化学的に結合される、請求項１～５のいずれか１項に記載の組換えタンパク質。
【請求項7】
前記１つ以上の異種部分が、１つ以上の親和性タグを含む、請求項６に記載の組換えタンパク質。
【請求項8】
前記親和性タグが、Ｈｉｓタグ、Ａｖｉタグ、ヘマグルチニン（ＨＡ）タグ、ＦＬＡＧタグ、Ｍｙｃタグ、ＧＳＴタグ、ＭＢＰタグ、キチン結合タンパク質タグ、カルモジュリンタグ、Ｖ５タグ、ストレプトアビジン結合タグ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ＹＦＰ、ＲＦＰ、ＣＦＰ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ＳＵＭＯタグ、ユビキチンタグ、またはそれらの組み合わせである、請求項７に記載の組換えタンパク質。
【請求項9】
前記１つ以上の異種部分が、Ｈｉｓ６タグ（配列番号７８）及びＡｖｉタグを含み、任意選択で、ＭＫＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号９）のアミノ酸配列を含む、請求項６～８のいずれか１項に記載の組換えタンパク質。
【請求項10】
前記組換えタンパク質が、前記ＡＰＩ５タンパク質、またはその断片もしくはバリアントと前記１つ以上の親和性タグとの間にプロテアーゼ切断部位を更に含む、請求項６～９のいずれか１項に記載の組換えタンパク質。
【請求項11】
前記プロテアーゼ切断部位が、ＴＥＶプロテアーゼの切断部位であり、任意選択で、ＥＮＬＹＦＱＧＳ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含む、請求項１０に記載の組換えタンパク質。
【請求項12】
前記組換えタンパク質が、配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項１、４、及び６～１１のいずれか１項に記載の組換えタンパク質。
【請求項13】
前記組換えタンパク質が配列番号６のアミノ酸配列を含む、請求項１、５、及び６～１１に記載の組換えタンパク質。
【請求項14】
前記１つ以上の異種部分が、アルブミンに特異的に結合する部分を含む、請求項６～１３のいずれか１項に記載の組換えタンパク質。
【請求項15】
前記アルブミンに特異的に結合する部分が、配列番号１２～６６、７６及び７７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の組換えタンパク質。
【請求項16】
前記アルブミンに特異的に結合する部分が、ナフタレンアシルスルホンアミド、ジフェニルシクロヘキサノールリン酸エステル、９－フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、マレイミド基を介して１６－スルファニルヘキサデカン酸に連結されたＦｍｏｃ誘導体、マレイミドを有するジクマロール誘導体、マレイミドを有するエバンスブルー誘導体、ジフルニサール－γＧｌｕ－Ｌｙｓ（±Ｏ２Ｏｃ）－インドメタシン、γＧｌｕリンカーに結合したリトコール酸、６－（４－（ｐ－ヨードフェニル）ブタンアミド）ヘキサノエート、Ａ０８３／Ｂ１３４、Ａ０９９／Ｂ３４４、８９Ｄ０３（Ａｃ－ＷＷＥＱＤＲＤＷＤＦＤＶＦＧＧＧＴＰ－ＮＨ２、配列番号６７）、アシル化ヘプタペプチドＦ－タグ（フルオレセイン－ＥＹＥＫ（パルミテート）ＥＹＥ－ＮＨ２、配列番号６８）、ジスルフィド環化ペプチドＳＡ２１（【化1】
【化2】
【請求項17】
前記アルブミンが、ラットアルブミン、ウサギアルブミン、またはヒトアルブミンである、請求項１４～１６のいずれか１項に記載の組換えタンパク質。
【請求項18】
前記アルブミンに特異的に結合する部分が、前記ＡＰＩ５タンパク質、またはその断片もしくはバリアントのＮ末端に遺伝的に融合または化学的に結合される、請求項１４～１７のいずれか１項に記載の組換えタンパク質。
【請求項19】
前記アルブミンに特異的に結合する部分が、前記ＡＰＩ５タンパク質、またはその断片もしくはバリアントのＣ末端に遺伝的に融合または化学的に結合される、請求項１４～１７のいずれか１項に記載の組換えタンパク質。
【請求項20】
前記アルブミンに特異的に結合する部分が、リンカーを介して前記ＡＰＩ５タンパク質、またはその断片もしくはバリアントに遺伝的に融合または化学的に結合される、請求項１４～１９のいずれか１項に記載の組換えタンパク質。
【請求項21】
前記１つ以上の異種部分が、ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインを含む、請求項６～２０のいずれか１項に記載の組換えタンパク質。
【請求項22】
前記Ｆｃドメインが、前記ドメインのエフェクター機能を変更するために修飾される、請求項２１に記載の組換えタンパク質。
【請求項23】
前記Ｆｃドメインが、前記組換えタンパク質の半減期を延長するために修飾される、請求項２１または２２に記載の組換えタンパク質。
【請求項24】
前記１つ以上の異種部分がアルブミンを含む、請求項６～２３のいずれか１項に記載の組換えタンパク質。
【請求項25】
前記１つ以上の異種部分が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマーを含む、請求項６～２４のいずれか１項に記載の組換えタンパク質。
【請求項26】
前記組換えタンパク質が、前記組換えタンパク質に１つ以上のグリコシル化部位を導入するために修飾される、請求項１～２５のいずれか１項に記載の組換えタンパク質。
【請求項27】
請求項１～２６のいずれか１項に記載の組換えタンパク質をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項28】
前記単離されたポリヌクレオチドが、ｍＲＮＡである、請求項２７に記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項29】
請求項２７に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項30】
請求項２７に記載のポリヌクレオチド、または請求項２９に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項31】
請求項１～２６のいずれか１項に記載の組換えタンパク質、請求項２７もしくは２８に記載のポリヌクレオチド、または請求項２９に記載のベクターと、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む、薬学的組成物。
【請求項32】
請求項１～２６のいずれか１項に記載の組換えタンパク質を産生する方法であって、前記ポリヌクレオチドによってコードされる前記タンパク質が発現される条件下で、請求項３０に記載の宿主細胞を成長させることを含む、前記方法。
【請求項33】
前記タンパク質を単離することを更に含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項34】
上皮細胞を細胞死から保護する方法であって、治療有効量の請求項１～２６のいずれか１項に記載の組換えタンパク質、請求項２７もしくは２８に記載のポリヌクレオチド、請求項２９に記載のベクター、または請求項３１に記載の薬学的組成物と前記上皮細胞を接触させることを含む、前記方法。
【請求項35】
前記上皮細胞が、腸管上皮細胞である、請求項３４に記載の方法。
【請求項36】
前記上皮細胞が、パネート細胞である、請求項３５に記載の方法。
【請求項37】
腸管上皮バリアの回復を必要としている対象において、腸管上皮バリアを回復させる方法であって、前記対象に、治療有効量の請求項１～２６のいずれか１項に記載の組換えタンパク質、請求項２７もしくは２８に記載のポリヌクレオチド、請求項２９に記載のベクター、または請求項３１に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項38】
前記対象が、胃腸疾患を有する、請求項３７に記載の方法。
【請求項39】
前記胃腸疾患が、炎症性腸疾患、移植片対宿主病、嚢炎、免疫チェックポイント阻害剤関連大腸炎、放射線誘発性胃腸毒性、過敏性腸症候群、短腸症候群、感染性胃腸炎、またはセリアック病である、請求項３７に記載の方法。
【請求項40】
前記炎症性腸疾患が、クローン病である、請求項３９に記載の方法。
【請求項41】
前記炎症性腸疾患が、潰瘍性大腸炎である、請求項３９に記載の方法。
【請求項42】
胃腸疾患の治療を必要とする対象において胃腸疾患を治療する方法であって、前記対象に、治療有効量の請求項１～２６のいずれか１項に記載の組換えタンパク質、請求項２７もしくは２８に記載のポリヌクレオチド、または請求項２９に記載のベクター、または請求項３１に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項43】
前記胃腸疾患が、炎症性腸疾患、移植片対宿主病、嚢炎、免疫チェックポイント阻害剤関連大腸炎、放射線誘発性胃腸毒性、過敏性腸症候群、短腸症候群、感染性胃腸炎、またはセリアック病である、請求項４２に記載の方法。
【請求項44】
前記炎症性腸疾患がクローン病である、請求項４３に記載の方法。
【請求項45】
前記炎症性腸疾患が、潰瘍性大腸炎である、請求項４３に記載の方法。
【請求項46】
前記組換えタンパク質、前記ポリヌクレオチド、前記ベクター、または前記薬学的組成物が、静脈内、経口、直腸内投与されるか、または内視鏡を通して送達される、請求項３７～４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項47】
１つ以上の追加の薬剤を更に投与することを含む、請求項３７～４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項48】
前記１つ以上の追加の薬剤が、ＴＮＦα及び／またはリンパ球の遊走を阻害する、請求項４７に記載の方法。
【請求項49】
前記１つ以上の追加の薬剤が、インテグリン阻害剤またはスフィンゴシン－１－リン酸（Ｓ１Ｐ）受容体モジュレーターを含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項50】
前記インテグリン阻害剤が、ベドリズマブ（Ｅｎｔｙｖｉｏ）、エトロリズマブ、ＰＮ－９４３、ＺＰ１００００、またはＭＯＲＦ－０５７である、請求項４９に記載の方法。
【請求項51】
前記Ｓ１Ｐ受容体モジュレーターが、フィンゴリモド、オザニモド、エトラシモド、またはアミセリモドである、請求項４９に記載の方法。
【請求項52】
前記対象が、ヒトである、請求項３７～５１のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本特許出願は、２０２１年３月５日に出願された米国仮特許出願第６３／１５７，２２５号の優先権を主張するものであり、それぞれの開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本特許出願は、２０２１年３月５日に出願された米国仮特許出願第６３／１５７，２２５号の優先権を主張するものであり、それぞれの開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
連邦政府支援の研究に関する声明文
本発明は、国立衛生研究所により授与されたＤＫ０９３６６８に基づく政府の支援によりなされた。政府は本発明に一定の権利を有する。
本発明は、国立衛生研究所により授与されたＤＫ０９３６６８に基づく政府の支援によりなされた。政府は本発明に一定の権利を有する。
【0003】
本発明は、組換えアポトーシス阻害剤５（ＡＰＩ５）タンパク質に関する。本発明は更に、そのような組換えタンパク質を含む組成物、ならびに関連する疾患及び障害の上皮修復及び治療のためのこれらの組換えタンパク質の使用に関する。
【0004】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２２年３月２日に作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、２４３７３５＿０００２４５＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、６０，４１２バイトのサイズである。
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２２年３月２日に作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、２４３７３５＿０００２４５＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、６０，４１２バイトのサイズである。
【背景技術】
【0005】
上皮バリアに対する免疫媒介性損傷は、クローン病などの炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の病因における中心的な事象と考えられている。ＴＮＦαまたはリンパ球の遊走をブロックするものを含む、免疫エフェクターを標的とする多数の戦略が開発されているが、これらの介入は、病理学的炎症と、腸内細菌叢との恒常性を維持するために必要な免疫プロセスとを区別しない。免疫媒介性損傷に対する上皮の弾力性を高める戦略は、免疫系を損なうことなく長期的な寛解を促進するのに有効であり得る。しかしながら、そのような療法は現在存在しない。本出願は、このニーズ及び他の関連するニーズに対処する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0006】
一態様では、アポトーシス阻害剤５（ＡＰＩ５）タンパク質、またはその断片若しくはバリアントを含む組換えタンパク質が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＡＰＩ５タンパク質は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＡＰＩ５の断片は、ＡＰＩ５のＮ末端ＨＥＡＴ反復領域を含む。いくつかの実施形態では、ＡＰＩ５の断片は、配列番号１の残基１～４４８を含む。いくつかの実施形態では、ＡＰＩ５の断片は、配列番号１の残基１～２０６を含む。
【0007】
いくつかの実施形態では、ＡＰＩ５タンパク質、またはその断片もしくはバリアントは、１つ以上の異種部分に遺伝的に融合及び／または化学的に結合される。いくつかの実施形態では、１つ以上の異種部分は、１つ以上の親和性タグを含む。いくつかの実施形態では、親和性タグは、Ｈｉｓタグ、Ａｖｉタグ、ヘマグルチニン（ＨＡ）タグ、ＦＬＡＧタグ、Ｍｙｃタグ、ＧＳＴタグ、ＭＢＰタグ、キチン結合タンパク質タグ、カルモジュリンタグ、Ｖ５タグ、ストレプトアビジン結合タグ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ＹＦＰ、ＲＦＰ、ＣＦＰ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ＳＵＭＯタグ、ユビキチンタグ、またはそれらの組み合わせである。
【0008】
いくつかの実施形態では、１つ以上の異種部分は、Ｈｉｓ６タグ（配列番号７８）及びＡｖｉタグを含み、任意選択で、ＭＫＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号９）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、組換えタンパク質は、ＡＰＩ５タンパク質、またはその断片若しくはバリアントと１つ以上の親和性タグとの間のプロテアーゼ切断部位を更に含む。いくつかの実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＴＥＶプロテアーゼの切断部位であり、任意選択で、ＥＮＬＹＦＱＧＳ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含む。
【0009】
一実施形態では、組換えタンパク質は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。
【0010】
一実施形態では、組換えタンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。
【0011】
いくつかの実施形態では、１つ以上の異種部分は、アルブミンに特異的に結合する部分を含む。いくつかの実施形態では、アルブミンに特異的に結合する部分は、配列番号１２～６６、７６及び７７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アルブミンに特異的に結合する部分は、ナフタレンアシルスルホンアミド、ジフェニルシクロヘキサノールリン酸エステル、９－フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、マレイミド基を介して１６－スルファニルヘキサデカン酸に連結されたＦｍｏｃ誘導体、マレイミドを有するジクマロール誘導体、マレイミドを有するエバンスブルー誘導体、ジフルニサール－γＧｌｕ－Ｌｙｓ（±Ｏ２Ｏｃ）－インドメタシン、γＧｌｕリンカーに結合したリトコール酸、６－（４－（ｐ－ヨードフェニル）ブタンアミド）ヘキサノエート、Ａ０８３／Ｂ１３４、Ａ０９９／Ｂ３４４、８９Ｄ０３（Ａｃ－ＷＷＥＱＤＲＤＷＤＦＤＶＦＧＧＧＴＰ－ＮＨ２、配列番号６７）、アシル化ヘプタペプチドＦ－タグ（フルオレセイン－ＥＹＥＫ（パルミテート）ＥＹＥ－ＮＨ２、配列番号６８）、ジスルフィド環化ペプチドＳＡ２１（Ａｃ－ＲＬＩＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤＤ－ＮＨ２、配列番号６９）、頭尾環化ペプチドＨＳＡ－１（可変リジン（Ｋ＊）を有するＡＫ＊Ｋ＊ＰＧＫ＊ＡＫ＊ＰＧ、配列番号７０）、ＡＢＤ０３５、ＡＢＤＣｏｎ、ＤＡＲＰｉｎ、ＡｌｂｕｄＡｂ、ｄｓＦｖ ＣＡ６４５、ナノボディＮｂ．ｂ２０１、及びＶＮＡＲ Ｅ０６から選択される。いくつかの実施形態では、アルブミンは、ラットアルブミン、ウサギアルブミン、またはヒトアルブミンである。いくつかの実施形態では、アルブミンに特異的に結合する部分は、ＡＰＩ５タンパク質、またはその断片もしくはバリアントのＮ末端に遺伝的に融合もしくは化学的に結合される。いくつかの実施形態では、アルブミンに特異的に結合する部分は、ＡＰＩ５タンパク質、またはその断片もしくはバリアントのＣ末端に遺伝的に融合もしくは化学的に結合される。いくつかの実施形態では、アルブミンに特異的に結合する部分は、リンカー（例えば、ペプチジルリンカーまたは非ペプチジルリンカー）を介してＡＰＩ５タンパク質、またはその断片もしくはバリアントに遺伝的に融合または化学的に結合される。
【0012】
いくつかの実施形態では、１つ以上の異種部分は、１つ以上のヒトＩｇＧ Ｆｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ドメインのエフェクター機能を変更するために修飾される。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、組換えタンパク質の半減期を延長するために修飾される。
【0013】
いくつかの実施形態では、１つ以上の異種部分は、アルブミンを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の異種部分は、１つ以上のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、組換えタンパク質は、組換えタンパク質に１つ以上のグリコシル化部位を導入するために修飾される。
【0014】
別の態様では、本明細書に記載される組換えタンパク質をコードする単離されたポリヌクレオチドが本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、単離されたポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡである。
【0015】
別の態様では、本明細書に記載されるポリヌクレオチドを含むベクターが本明細書に提供される。
【0016】
別の態様では、本明細書に記載のポリヌクレオチドまたはベクターを含む宿主細胞が本明細書に提供される。
【0017】
別の態様では、本明細書に記載の組換えタンパク質、ポリヌクレオチド、またはベクターと、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む、薬学的組成物が本明細書に提供される。
【0018】
別の態様では、ポリヌクレオチドによってコードされるＡＰＩ５タンパク質が発現される条件下で、本明細書に記載される宿主細胞を成長させることを含む、本明細書に記載される組換えＡＰＩ５タンパク質を産生する方法が本明細書に提供される。本方法は、タンパク質を単離することを更に含み得る。
【0019】
別の態様では、本明細書では、上皮細胞を細胞死から保護する方法であって、本明細書に記載の治療有効量の組換えタンパク質、ポリヌクレオチド、もしくはベクター、またはその薬学的組成物と上皮細胞を接触させることを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、細胞は腸管上皮細胞である。いくつかの実施形態では、細胞はパネート細胞である。
【0020】
別の態様では、本明細書では、腸管上皮バリアの回復を必要とする対象において、腸管上皮バリアを回復させる方法であって、当該対象に、本明細書に記載の治療有効量の組換えタンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、またはその薬学的組成物を投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、対象は胃腸疾患を有する。いくつかの実施形態では、胃腸疾患は、炎症性腸疾患、移植片対宿主病、嚢炎、免疫チェックポイント阻害剤関連大腸炎、放射線誘発性胃腸毒性、過敏性腸症候群、短腸症候群、感染性胃腸炎、またはセリアック病である。いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患は、クローン病である。いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患は、潰瘍性大腸炎である。
【0021】
別の態様では、本明細書において、胃腸疾患を治療することを必要とする対象において、胃腸疾患を治療する方法であって、当該対象に、本明細書に記載の治療有効量の組換えタンパク質、ポリヌクレオチド、もしくはベクター、またはその薬学的組成物を投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、胃腸疾患は、炎症性腸疾患、移植片対宿主病、嚢炎、免疫チェックポイント阻害剤関連大腸炎、放射線誘発性胃腸毒性、過敏性腸症候群、短腸症候群、感染性胃腸炎、またはセリアック病である。いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患は、クローン病である。いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患は、潰瘍性大腸炎である。
【0022】
本明細書に記載の方法の様々な実施形態では、組換えタンパク質、ポリヌクレオチド、ベクター、または薬学的組成物は、静脈内、経口、直腸内投与されるか、または内視鏡を通して送達される。
【0023】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、１つ以上の追加の薬剤を投与することを更に含む。１つ以上の追加の薬剤は、ＴＮＦα及び／またはリンパ球の遊走を阻害し得る。いくつかの実施形態において、１つ以上の追加の薬剤は、インテグリン阻害剤またはスフィンゴシン－１－リン酸（Ｓ１Ｐ）受容体モジュレーターを含む。いくつかの実施形態では、インテグリン阻害剤は、ベドリズマブ（Ｅｎｔｙｖｉｏ）、エトロリズマブ、ＰＮ－９４３、ＺＰ１００００、またはＭＯＲＦ－０５７である。いくつかの実施形態では、Ｓ１Ｐ受容体調節薬は、フィンゴリモド、オザニモド、エトラシモド、またはアミセリモドである。
【0024】
本明細書に記載の方法の様々な実施形態では、対象は、ヒトである。
【図面の簡単な説明】
【0025】
【図1】Ａ～Ｃは、γδＴ細胞がパネート細胞及び腸管オルガノイドを細胞死から保護することを示す。Ａ～Ｂは、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイドへの上皮内リンパ球（ＩＥＬ）の添加が、生存率（Ａ）及びパネス細胞の割合（Ｂ）を、対照Ａｔｇ１６Ｌ１＋／＋野生型オルガノイドと同様のレベルに回復させることを示す。Ｃは、異なるＩＥＬサブタイプの中で、γδＴ細胞が、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイドの保護を媒介するものであったことを示す。Ａ及びＣの各ドットは、異なるマウスからの独立した生物学的反復を表す。Ｂの各ドットは、顕微鏡下のフィールドを表す。＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１
【0026】
【図2A】γδＴ細胞の保護機能の阻害が、パネート細胞欠損と関連していることを示す。マウスノロウイルス（ＭＮＶ）がγδＴ細胞移動性を阻害し、その活性が変化しているという徴候であることを示す。ドットは、個々の細胞を表す。
【図2B】γδＴ細胞の保護機能の阻害が、パネート細胞欠損と関連していることを示す。ＭＮＶ感染マウスではなく、未感染マウス由来のγδＴ細胞が、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイド生存能を促進することを示し、ウイルスがこれらの細胞の保護効果を妨げることを示す。ドットは、異なるマウスからの独立した反復を表す。
【図2C】γδＴ細胞の保護機能の阻害が、パネート細胞欠損と関連していることを示す。γδＴ細胞（Ｔｃｒｄ－／－）を欠くマウスとＡｔｇ１６Ｌ１－／－マウスを交配して作製したダブルノックアウトマウスが、パネート細胞の喪失を表示することを示す。ドットは、個々のマウスを表す。
【図2D】γδＴ細胞の保護機能の阻害が、パネート細胞欠損と関連していることを示す。リゾチーム免疫蛍光顕微鏡検査の結果を示し、これは、単一のノックアウト対照と比較して、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－Ｔｃｒｄ－／－マウスにおいて、残りのパネート細胞がこの抗菌分子の異常な染色パターンを表示したことを示している。ドットは、個々のマウスを表す。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１
【0027】
【図3】ＦＡＣＳ選別されたＴＣＲγδ＋細胞及びＴＣＲβ＋細胞由来の上清試料中の重複及び異なるタンパク質の数を示すＶｅｎｎ図を示す。
【0028】
【図4A】ＡＰＩ５が腸管オルガノイドを保護し、パネート細胞を回復させることを示す。５０ｎＭの組換えヒトＡＰＩ５（ｒｈＡＰＩ５）がＡｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイド生存能を回復させることを示す。
【図4B】ＡＰＩ５が腸管オルガノイドを保護し、パネート細胞を回復させることを示す。ｒｈＡＰＩ５がパネート細胞（矢印）を回復させることを示す、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色切片を表示する。スケールバー＝５０μｍ。
【図4C】ＡＰＩ５が腸管オルガノイドを保護し、パネート細胞を回復させることを示す。オルガノイド当たりの絶対パネ－ト細胞数の定量化を示し、パネ－ト細胞の回復を確認する。
【図4D】ＡＰＩ５が腸管オルガノイドを保護し、パネート細胞を回復させることを示す。全腸管上皮細胞（ＩＥＣ）のパーセントの定量化を示し、パネ－ト細胞の回復を確認する。
【図4E】ＡＰＩ５が腸管オルガノイドを保護し、パネート細胞を回復させることを示す。全ＩＥＣが増加しないことを示し、ｒＡＰＩ５の効果がパネート細胞特異的であり、非特異的成長因子としてではないことを示す。
【図4F】ＡＰＩ５が腸管オルガノイドを保護し、パネート細胞を回復させることを示す。ＡＰＩ５が抗体で枯渇しているＩＥＬ上清を添加するとＡｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイドの死を悪化させるが、枯渇した上清にｒＡＰＩ５を添加すると、無傷のＩＥＬ上清と同様の保護がもたらされることを示す（対照ｓｕｐ）。３つの独立した反復におけるＮ＝３匹のマウス／条件＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【0029】
【図5】ＡＰＩ５の結合界面残基が保護効果に必要であることを示す。最初の２つの棒グラフは、先に示されたように、５０ｎＭの組換えヒトＡＰＩ５（ｒｈＡＰＩ５）がＡｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイド生存能を回復させることを示す対照である。ＡＰＩ５変異体１（Ｙ８Ｋ、Ｙ１１Ｋ）、変異体２（Ｅ１８４Ｋ、Ｄ１８５Ｋ）、及び変異体３（Ｙ８Ｋ、Ｙ１１Ｋ、Ｅ１８４Ｋ、Ｄ１８５Ｋ）は、最大５００ｎＭの過剰タンパク質を添加しても、保護活性を無効にした。３つの独立した反復におけるＮ＝３匹のマウス／条件＊＊＊ｐ＜０．０００１
【0030】
【図6】ＡＰＩ５が、ＴＮＦα誘発性の上皮生存能の喪失を防止することを示す。Ａｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイドは、パネート細胞の喪失により、２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦαの存在下で悪化した壊死性細胞死を経験するが、対照オルガノイドは耐性がある。５０ｎＭのｒｈＡＰＩ５を投与することは、ＴＮＦαの毒性効果を防止し、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイドの生存能を改善する。左パネルは、３つの独立した反復の定量化を示し、右パネルは、指示された治療の４８時間後の分化後５日目のＡｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイドの代表的な写真を示す。＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１
【0031】
【図7】ヒト及びマウスＡＰＩ５タンパク質の配列アラインメントを示す。出現順に、それぞれ、配列番号１～２を開示する。
【0032】
【図8A】ＡＰＩ５が、Ａｔｇ１６Ｌ１変異体マウスにおけるパネート細胞喪失を防止し、腸管損傷から保護することを実証する。ＡＰＩ５の投与がパネート細胞を回復し、Ａｔｇ１６Ｌ１及びγδＴ細胞の両方が欠損したマウスにおける細胞死を減少させることを示す。図２Ｃに示すように、Ａｔｇ１６Ｌ１及びγδＴ細胞の両方が欠損したマウス（Ａｔｇ１６Ｌ１ΔＩＥＣＴＣＲδ－／－）は、ＡＴＧ１６Ｌ１を無傷で有するマウス（Ａｔｇ１６Ｌ１ｆ／ｆＴＣＲδ－／－）と比較して、パネート細胞の減少を示す。Ｈ＆Ｅ染色切片におけるパネート細胞及び末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼｄＵＴＰニックエンドラベリング（ＴＵＮＥＬ）染色切片における死んだパネート細胞の定量化に従って、対照のバリアントタンパク質ｒＡＰＩ５Ｙ８Ｋ：Ｙ１１Ｋではなく、４０μｇの野生型組換えヒトＡＰＩ５（ｒＡＰＩ５ＷＴ）をＡｔｇ１６Ｌ１ΔＩＥＣＴＣＲδ－／－マウス（ΔＩＥＣ ＴＣＲδ－／－と略される）に静脈内注入し、この欠陥を逆転させた。Ａｔｇ１６Ｌ１ｆ／ｆＴＣＲδ－／－マウス（ｆ／ｆ ＴＣＲδ－／－と略される）を参照として示す。ｎ＝７（ｆ／ｆＴＣＲδ－／－ｒＡＰＩ５Ｙ８Ｋ：Ｙ１１Ｋ）、８（ΔＩＥＣ ＴＣＲδ－／－ｒＡＰＩ５Ｙ８Ｋ：Ｙ１１Ｋ）、８（ｆ／ｆＴＣＲδ－／－ｒＡＰＩ５ＷＴ）、１０（ΔＩＥＣ ＴＣＲδ－／－ｒＡＰＩ５ＷＴ）。
【図8B】ＡＰＩ５が、Ａｔｇ１６Ｌ１変異体マウスにおけるパネート細胞喪失を防止し、腸管損傷から保護することを実証する。部分的なＡＰＩ５欠損を有するマウスにおけるγδＴ細胞によるＡＰＩ５の減少した分泌を実証するウェスタンブロット分析を示す。ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９を使用してＡｐｉ５を欠失させた。ホモ接合性ノックアウトマウスが実験のために不十分な生存能を表示したため、ヘテロ接合性ノックアウトマウス（Ａｐｉ５＋／－）を使用した。Ａｐｉ５＋／＋またはＡｐｉ５＋／－マウスから回収されたγδ上清（ＳＮ）及び細胞溶解物のウェスタンブロット分析は、ヘテロ接合性がＡＰＩ５分泌の減少をもたらすことを示す。ＰＧＲＰ－Ｌは、上清の負荷対照である。
【図8C】ＡＰＩ５が、Ａｔｇ１６Ｌ１変異体マウスにおけるパネート細胞喪失を防止し、腸管損傷から保護することを実証する。Ａｔｇ１６Ｌ１ｆ／ｆＡｐｉ５＋／－（ｆ／ｆ Ａｐｉ５＋／－）及びＡｔｇ１６Ｌ１ΔＩＥＣＡｐｉ５＋／－（ΔＩＥＣ Ａｐｉ５＋／－）マウスからの小腸組織のＨ＆Ｅの代表的な画像及び定量化を示す。結果は、Ａｐｉ５のヘテロ接合性ノックアウトが、無傷の顆粒（矢じり）を有するパネート細胞の減少をもたらすことを示す。ｎ＝６（ｆ／ｆ Ａｐｉ５＋／－）及び５（ΔＩＥＣ Ａｐｉ５＋／－）。スケールバー：２０μｍ。
【図8D】ＡＰＩ５が、Ａｔｇ１６Ｌ１変異体マウスにおけるパネート細胞喪失を防止し、腸管損傷から保護することを実証する。Ａｔｇ１６Ｌ１ｆ／ｆＡｐｉ５＋／－（ｆ／ｆ Ａｐｉ５＋／－）及びＡｔｇ１６Ｌ１ΔＩＥＣＡｐｉ５＋／－（ΔＩＥＣ Ａｐｉ５＋／－）マウスからの小腸組織のリゾチーム染色の代表的な画像及び定量化を示す。結果は、Ａｐｉ５のヘテロ接合性ノックアウトが、無傷の顆粒（矢じり）を有するパネート細胞の減少をもたらすことを示す。ｎ＝６（ｆ／ｆ Ａｐｉ５＋／－）及び５（ΔＩＥＣ Ａｐｉ５＋／－）。スケールバー：２０μｍ。
【図8E】ＡＰＩ５が、Ａｔｇ１６Ｌ１変異体マウスにおけるパネート細胞喪失を防止し、腸管損傷から保護することを実証する。Ａｔｇ１６Ｌ１がパネート細胞から欠失しているＡｔｇ１６Ｌ１ΔＰＣ（ΔＰＣ）マウス（ｄｅｆｅｎｓｉｎ－Ｃｒｅ Ａｔｇ１６Ｌ１ｆ／ｆ）が、５％ＤＳＳで６日間腸に化学的損傷を与えた後、同腹子対照（ｆ／ｆ）と比較して、生存率が低下することを表示する。０、３、及び６日目にマウス当たり４０μｇのｒＡＰＩ５ＷＴタンパク質の治療的静脈内投与は、疾患の徴候の有意な改善とともに、ΔＰＣマウスの１００％の生存をもたらしたが、対照タンパク質ｒＡＰＩ５Ｙ８Ｋ：Ｙ１１Ｋは、効果がなかった。ｆ／ｆマウスの治療には効果がなかった。ｎ＝７（ｆ／ｆ）、８（ΔＰＣ）、ｎ＝７（ｆ／ｆ ｒＡＰＩ５ＷＴ）、９（ΔＰＣ ｒＡＰＩ５ＷＴ）、ｎ＝６（ｆ／ｆｒＡＰＩ５Ｙ８Ｋ：Ｙ１１Ｋ）、７（ΔＰＣ ｒＡＰＩ５Ｙ８Ｋ：Ｙ１１Ｋ）。データポイントの棒グラフは、個々のマウスを表す。バーは平均±ＳＥＭを表し、生存データは、独立して実施された２つの実験の組み合わせ結果である。＊＊＊ｐ＜ ０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【図8F】ＡＰＩ５が、Ａｔｇ１６Ｌ１変異体マウスにおけるパネート細胞喪失を防止し、腸管損傷から保護することを実証する。Ａｔｇ１６Ｌ１がパネート細胞から欠失しているＡｔｇ１６Ｌ１ΔＰＣ（ΔＰＣ）マウス（ｄｅｆｅｎｓｉｎ－Ｃｒｅ Ａｔｇ１６Ｌ１ｆ／ｆ）が、５％ＤＳＳで６日間腸に化学的損傷を与えた後、同腹子対照（ｆ／ｆ）と比較して、疾患スコアが高いことを表示する。０、３、及び６日目にマウス当たり４０μｇのｒＡＰＩ５ＷＴタンパク質の治療的静脈内投与は、疾患の徴候の有意な改善とともに、ΔＰＣマウスの１００％の生存をもたらしたが、対照タンパク質ｒＡＰＩ５Ｙ８Ｋ：Ｙ１１Ｋは、効果がなかった。ｆ／ｆマウスの治療には効果がなかった。ｎ＝７（ｆ／ｆ）、８（ΔＰＣ）、ｎ＝７（ｆ／ｆ ｒＡＰＩ５ＷＴ）、９（ΔＰＣ ｒＡＰＩ５ＷＴ）、ｎ＝６（ｆ／ｆｒＡＰＩ５Ｙ８Ｋ：Ｙ１１Ｋ）、７（ΔＰＣ ｒＡＰＩ５Ｙ８Ｋ：Ｙ１１Ｋ）。データポイントの棒グラフは、個々のマウスを表す。バーは平均±ＳＥＭを表し、生存データは、独立して実施された２つの実験の組み合わせ結果である。＊＊＊ｐ＜ ０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【発明を実施するための形態】
【0033】
本出願は、一部には、新規因子、アポトーシス阻害剤５（ＡＰＩ５）が、免疫媒介性損傷から腸管上皮細胞（ＩＥＣ）、特にパネート細胞を保護することができるという驚くべき予想外の発見に基づいている。ＡＰＩ５は、上皮へのサイトカイン媒介性損傷を阻害することによって、消化管の炎症性疾患を改善することが見出された。以下の実施例セクションで詳述されるように、マウスノロウイルス（ＭＮＶ）感染は、は、クローン病の前臨床動物モデルにおいて、腸内のγδＴ細胞をＴＮＦα分泌Ｔ細胞に置き換える。このプロセスを更に調査するために、エクスビボプラットフォームを利用して、免疫細胞とともにエンテロイドを培養した。驚くべきことに、抗炎症性Ｔ細胞をマウスＡｔｇ１６Ｌ１－／－エンテロイドと共培養することは、壊死をブロックし、パネート細胞を回復させる。培養上清の質量分析により、リンパ球によって分泌されることが以前に知られていない、または腸管バリアに関与することが知られていないタンパク質であるＡＰＩ５が同定された。抗体を用いてＡＰＩ５を枯渇させることは、γδＴ細胞によって媒介される保護を阻害し、組換えヒトＡＰＩ５（ｒｈＡＰＩ５）を培地に添加することは、ＴＮＦα誘発死からエンテロイドを保護するのに十分であった（図６）。
【0034】
定義
本明細書において別に定義されない限り、本出願と関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。更に、文脈によって別段の必要がない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。一般に、本明細書に記載される、細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、及びタンパク質及び核酸の化学及びハイブリダイゼーションに関連して利用される命名法及びその技術は、当該技術分野において周知であり、一般的に使用されているものである。
本明細書において別に定義されない限り、本出願と関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。更に、文脈によって別段の必要がない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。一般に、本明細書に記載される、細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、及びタンパク質及び核酸の化学及びハイブリダイゼーションに関連して利用される命名法及びその技術は、当該技術分野において周知であり、一般的に使用されているものである。
【0035】
本発明の方法及び技術は、別途指示されない限り、当該技術分野において周知の従来の方法に従って、また本明細書の全体を通して引用され、論じられる種々の一般的な及びより具体的な参考文献に記載されるように、一般的に行われる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｄ ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（１９９２）、及びＨａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９９０）が挙げられ、これらは参照により本明細書に組み込まれる。酵素反応及び精製技術は、製造業者の仕様書に従って、または当該技術分野において一般的に達成されるように、または本明細書に記載されるように実行される。本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、ならびに医薬品化学及び製薬化学に関連して利用される命名法、ならびにその研究室手順及び技術は、当該技術分野において周知であり、一般的に使用されているものである。標準的な技法は、化学合成、化学分析、薬学的調製、製剤化、及び送達、ならびに患者の治療に使用される。
【0036】
以下の用語は、別段の指示がない限り、以下の意味を有するものと理解されるものとする。
【0037】
本明細書で交換可能に使用される「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、タンパク質配列の天然または人工タンパク質、タンパク質断片及びポリペプチド類似体を包含する。ポリペプチドは、単量体または重合体であり得る。
【0038】
「単離されたタンパク質」または「単離されたポリペプチド」という用語は、その起源または誘導源によって、以下のうちの１つ～４つを有するタンパク質またはポリペプチドである：（１）その天然状態でそれに付随する天然に関連する成分と関連していない、（２）同じ種由来の他のタンパク質を含まない、（３）異なる種由来の細胞によって発現される、または（４）天然には存在しない。よって、化学合成された、または天然でそれが由来する細胞とは異なる細胞系で合成されたポリペプチドまたはタンパク質は、その天然で結合する構成成分から「単離」されている。ポリペプチドまたはタンパク質は、当該技術分野で周知のタンパク質精製技術を使用して、単離によって天然に関連する成分を実質的に含まないようにすることもできる。
【0039】
ポリペプチドに関連する「断片」という用語は、アミノ末端及び／またはカルボキシ末端欠失を有するが、残りのアミノ酸配列は、天然に存在する全長配列における対応する位置と同一であるポリペプチドを指す。また、本発明による断片は、切断、例えば、ポリペプチドのＮ末端及び／またはＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の除去によって作製され得る。このようにして、最大１０個、最大２０個、最大３０個、最大４０個またはそれ以上のアミノ酸をＮ末端及び／またはＣ末端から除去することができる。断片は、１つ以上の内部欠失によっても生成され得る。いくつかの実施形態では、断片は、少なくとも５、６、８、または１０アミノ酸長である。他の実施形態では、断片は、少なくとも１４、少なくとも２０、少なくとも５０、または少なくとも７０、８０、９０、１００、１５０、２００、または４００アミノ酸長である。
【0040】
ある特定の実施形態では、タンパク質またはその一部のアミノ酸置換は、（１）タンパク質分解に対する感受性を低減するもの、（２）酸化に対する感受性を低減するもの、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変更するもの、または（４）他の物理化学的または機能的特性を与えるか、もしくは修飾するものである。例えば、単一または複数のアミノ酸置換（好ましくは保存的アミノ酸置換）は、非自然発生の配列で行われ得る。
【0041】
保存的アミノ酸置換は、親配列の構造的特徴を実質的に変化させてはならない。当技術分野で認識されているポリペプチドの二次及び三次構造の例は、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｅｄ．，Ｗ． Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４））、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ． Ｂｒａｎｄｅｎ ａｎｄ Ｊ．Ｔｏｏｚｅ，ｅｄｓ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９１））、及びＴｈｏｒｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５４：１０５（１９９１）に開示されており、これらは各々、参照により本明細書に組み込まれる。
【0042】
本明細書で使用する２０種類の天然に存在するアミノ酸とその略語は、従来の用法に従う。Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ－Ａ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅ．Ｓ．Ｇｏｌｕｂ ａｎｄ Ｄ． Ｒ． Ｇｒｅｎ，Ｅｄｓ．，Ｓｉｎａｕｅｒ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，Ｍａｓｓ．（１９９１））を参照されたい（これは参照により本明細書に組み込まれる）。
【0043】
本明細書で言及される場合、「ポリヌクレオチド」は、少なくとも１０塩基長のヌクレオチドの重合体形態、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドのいずれか、またはいずれかの種類のヌクレオチドの修飾形態を指す。この用語は、一本鎖及び二本鎖の形態を含む。
【0044】
本明細書で使用される「単離されたポリヌクレオチド」という用語は、ゲノムのポリヌクレオチド起源、ｃＤＮＡ起源、もしくは合成起源、またはそれらのいくつかの組み合わせのポリヌクレオチドを意味し、その起源または誘導源によって、「単離されたポリヌクレオチド」は、以下のうちの１～３つを有する：（１）「単離されたポリヌクレオチド」が天然で見出されるポリヌクレオチドの全てもしくは一部と会合していない、（２）それが天然では連結していないポリヌクレオチドに作動可能に連結している、または（３）より大きな配列の一部として天然では存在しない。
【0045】
本明細書において言及される「オリゴヌクレオチド」は、天然に存在するヌクレオチド、ならびに天然に存在するオリゴヌクレオチド連鎖及び天然に存在しないオリゴヌクレオチド連鎖によってともに連結している修飾されたヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、一般に２００以下の塩基長を含むポリヌクレオチドサブセットである。好ましくは、オリゴヌクレオチドは、１０～６０塩基長、最も好ましくは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０～４０塩基長である。オリゴヌクレオチドは通常、例えば、プライマー及びプローブのためには一本鎖であるが、オリゴヌクレオチドは、例えば、遺伝子変異体の構築における使用のためには二本鎖であってもよい。本発明のオリゴヌクレオチドは、センスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドのいずれかであり得る。
【0046】
本明細書で使用される「天然に存在するヌクレオチド」という用語は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドを含む。本明細書で使用される「修飾されたヌクレオチド」という用語は、修飾または置換された糖基を有するヌクレオチドなどを含む。本明細書で使用される「オリゴヌクレオチド連鎖」という用語は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホラニラデート、及びホスホロアミデートなどのオリゴヌクレオチド連鎖を含む。例えば、ＬａＰｌａｎｃｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４：９０８１（１９８６）、Ｓｔｅｃ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ． Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ． １０６：６０７７（１９８４）、Ｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：３２０９（１９８８）、Ｚｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉ－Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ６：５３９（１９９１）、Ｚｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｐｐ．８７－１０８（Ｆ． Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９１））、米国特許第５，１５１，５１０号、Ｕｈｌｍａｎｎ ａｎｄ Ｐｅｙｍａｎ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ９０：５４３（１９９０）参照（これらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）。オリゴヌクレオチドは、所望される場合、検出のために標識を含んでもよい。
【0047】
「作動可能に連結された」配列には、目的の遺伝子と連続する発現制御配列、及び目的の遺伝子を制御するためにトランスまたは遠隔で作用する発現制御配列の両方が挙げられる。本明細書で使用される場合、「発現制御配列」という用語は、それらが連結しているコード配列の発現及びプロセシングをもたらすのに必要なポリヌクレオチド配列を指す。発現制御配列は、適切な転写開始配列、終結配列、プロモーター及びエンハンサー配列、スプライシングシグナル及びポリアデニル化シグナルなどの効率的なＲＮＡプロセシングシグナル、細胞質ｍＲＮＡを安定させる配列、翻訳効率を高める配列（すなわち、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列）、タンパク質の安定性を高める配列、所望により、タンパク質の分泌を高める配列を含む。そのような制御配列の性質は、原核生物中の宿主生物によって異なり、そのような制御配列は一般に、真核生物中のプロモーター、リボソーム結合部位、及び転写終結配列を含み、一般に、そのような制御配列は、プロモーター及び転写終結配列を含む。「制御配列」という用語は、最低でも、その存在が発現及びプロセシングに必須である全ての構成要素を含み、その存在が有利である追加の構成要素（例えば、リーダー配列及び融合パートナー配列）も含み得ることが意図される。
【0048】
本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指す。いくつかの実施形態では、ベクターは、プラスミド、すなわち、追加のＤＮＡセグメントライゲーションされ得る環状二本鎖ＤＮＡループである。いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターであって、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムにライゲーションされ得る。ある特定のベクターは、それらが導入された宿主細胞において自律的複製を行うことができる（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳動物ベクター）。他の実施形態では、ベクター（例えば、非エピソーム哺乳類ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノム内に組み込むことができ、それによって宿主ゲノムとともに複製される。更に、あるベクターは、それらが作動可能に連結されている遺伝子の発現を導くことができる。そのようなベクターは、本明細書において、「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と称される。
【0049】
本明細書で使用される「プロモーター」という用語は、ポリヌクレオチド配列の特異的な転写を開始するために必要とされる、細胞の合成装置または導入された合成装置によって認識される、ＤＮＡ配列として定義される。本明細書で使用される場合、「調節配列」という用語は、調節配列に作動可能に連結された遺伝子産物の発現を調節することができる核酸配列を意味する。いくつかの例では、この配列は、コアプロモーター配列であってよく、他の例では、この配列はまた、遺伝子産物の発現に必要とされるエンハンサー配列及び他の調節エレメントを含み得る。プロモーターまたは調節配列は、例えば、遺伝子産物を組織特異的な方法で発現するものであってもよい。
【0050】
「構成的」プロモーターは、遺伝子産物をコードまたは特定するポリヌクレオチドと作動可能に連結されると、細胞のほとんどまたはすべての生理学的条件下で遺伝子産物を細胞内で産生させるヌクレオチド配列である。
【0051】
「誘導性」プロモーターは、遺伝子産物をコードまたは特定するポリヌクレオチドと作動可能に連結された場合、プロモーターに対応するインデューサーが細胞内に存在する場合にのみ、実質的に細胞内で遺伝子産物を産生させるヌクレオチド配列である。
【0052】
「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）という用語は、本明細書において使用される場合、外来性核酸及び／または組換えベクターが導入された細胞を意味する。「組換え宿主細胞」及び「宿主細胞」が特定の対象細胞のみならず、そのような細胞の子孫も意味することが理解されるべきである。突然変異または環境的影響のいずれかに起因して、後続の世代においてある特定の修飾が起こる場合があるため、そのような子孫は、実際には、親細胞と同一でない場合があるが、本明細書で使用される「宿主細胞」という用語の範囲内に依然として含まれる。
【0053】
「配列同一性パーセント」という用語は、比較した残基の数に対する同一の残基の数のパーセントとして表される比率を意味する。
【0054】
ヌクレオチド配列の配列同一性は、少なくとも約９ヌクレオチド、通常は少なくとも約１８ヌクレオチド、より通常は少なくとも約２４ヌクレオチド、典型的には少なくとも約２８ヌクレオチド、より典型的には少なくとも約３２ヌクレオチド、及び好ましくは少なくとも約３６、４８以上のヌクレオチドのストレッチにわたって分析され得る。ヌクレオチド配列同一性を測定するために使用することができる、当該技術分野において既知の異なるアルゴリズムが存在する。例えば、ポリヌクレオチド配列は、ＦＡＳＴＡ、ＧａｐまたはＢｅｓｔｆｉｔを使用して比較することができ、これらは、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ Ｖｅｒｓｉｏｎ１０．０、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ），Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓにおけるプログラムである。例えば、プログラムＦＡＳＴＡ２及びＦＡＳＴＡ３を含むＦＡＳＴＡは、問い合わせ配列と検索配列との間の最良重複の領域の整列及び配列同一性パーセントを提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：６３－９８（１９９０）、Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３２：１８５－２１９（２０００）、Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：２２７－２５８（１９９６）、Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７６：７１－８４（１９９８）（参照により本明細書に組み込まれる。特に明記しない限り、特定のプログラムまたはアルゴリズムのデフォルトパラメータが使用される。例えば、核酸配列間の配列同一性パーセントは、参照により本明細書に組み込まれるＧＣＧ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．１の中に提供されるように、ＦＡＳＴＡをそのデフォルトパラメータで使用して（ワードサイズ６、及び スコアリングマトリックス用のＮＯＰＡＭ因子）、またはＧａｐをそのデフォルトパラメータで使用して決定することができる。
【0055】
特に指定がない限り、ヌクレオチド配列への言及は、その相補体を包含する。したがって、特定の配列を有する核酸への言及は、その相補的配列を有するその相補鎖を包含すると理解されるべきである。
【0056】
ポリペプチドに対する配列同一性は、典型的には、配列分析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質分析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含む種々の置換、欠失、及び他の修飾に割り当てられた類似性の尺度を使用して、配列をマッチングさせる。例えば、ＧＣＧは、「Ｇａｐ」及び「Ｂｅｓｔｆｉｔ」などのプログラムを含有し、これらは、異なる生物種に由来する相同ポリペプチドなどの密接に関連するポリペプチド間、または野生型タンパク質とそのムテインとの間の、配列相同性または配列同一性を決定するための、プログラムで指定されたデフォルトパラメータを用いて使用することができる。例えば、ＧＣＧ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．１を参照のこと。ポリペプチド配列は、デフォルトパラメータまたは推奨パラメータを使用したＦＡＳＴＡを使用して比較することもできる。ＧＣＧ Ｖｅｒｓｉｏｎ６．１．（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｗｉｓ．）を参照のこと。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２及びＦＡＳＴＡ３）は、問い合わせ配列と検索配列との間の最良重複の領域の整列及び配列同一性パーセントを提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：６３－９８（１９９０），Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３２：１８５－２１９（２０００））。本発明の配列を、異なる生物からの多数の配列を含むデータベースと比較する場合の別の好ましいアルゴリズムは、プログラムとともに提供されるデフォルトパラメータを使用したコンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にｂｌａｓｔｐまたはｔｂｌａｓｔｎである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０（１９９０）、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－４０２（１９９７）を参照されたい。
【0057】
相同性のために比較されるポリペプチド配列の長さは、一般的に、少なくとも約１６アミノ酸残基、通常は少なくとも約２０残基、より通常は少なくとも約２４残基、典型的には少なくとも約２８残基、及び好ましくは約３５残基超となる。多数の異なる生物からの配列を含有するデータベースを検索する場合、アミノ酸配列を比較することが好ましい。
【0058】
「実質的な類似性」または「実質的な配列類似性」という用語は、核酸またはその断片を言及する場合、適切なヌクレオチドの挿入または欠失によってもう１つの核酸（またはその相補鎖）と最適にアラインされたときに、前述のようなＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ、またはＧａｐなどの任意の周知の配列同一性のアルゴリズムによって測定すると、ヌクレオチド塩基の少なくとも約８５％、好ましくは少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、約９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％のヌクレオチド配列同一性が存在することを意味する。
【0059】
ポリペプチドに適用される場合、「実質的な同一性」という用語は、２つのペプチド配列が、既定のギャップ重みを使用して、プログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴによってなど最適に整列した場合、プログラムとともに提供されるように、少なくとも７０％、７５％、８０％または８５％の配列同一性、好ましくは、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を共有することを意味する。いくつかの実施形態では、同一ではない残基位置は、保存的なアミノ酸置換によって異なる。
【0060】
「保存的なアミノ酸置換」は、あるアミノ酸残基が、類似した化学特性（例えば、電荷または疎水性）を有する側鎖Ｒ基を有する別のアミノ酸残基によって置換されるものである。一般に、保存的なアミノ酸置換は、タンパク質の機能特性を実質的に変化させない。２つ以上のアミノ酸配列が保存的置換によって互いに異なる場合、配列同一性パーセントは、置換の保存的な性質によって補正するように上方調整されてもよい。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４３：３０７－３１（１９９４）を参照されたい。類似の化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸の基の例は、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシン、２）脂肪族－ヒドロキシル側鎖：セリン及びトレオニン、３）アミド含有側鎖：アスパラギン及びグルタミン、４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファン、５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、及びヒスチジン、６）酸性側鎖：アスパラギン酸及びグルタミン酸、ならびに７）硫黄含有側鎖：システイン及びメチオニンを含む。保存的なアミノ酸置換基は、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、グルタミン酸－アスパラギン酸、及びアスパラギン－グルタミンである。
【0061】
あるいは、用語が本明細書において互換的に使用されるような保存的置換または置換は、参照により本明細書に組み込まれている、Ｇｏｎｎｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１４４３－４５（１９９２）に開示されているＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて正の値を有する任意の変化である。「適度に保存的な」置換は、ＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて負以外の値を有する任意の変化である。
【0062】
「効力」という用語は、生物学的活性の測定であり、ＩＣ５０、またはその活性がタンパク質によって媒介される細胞内の生物学的活性の５０％を阻害するのに必要なタンパク質の有効濃度として指定され得る。
【0063】
本明細書で使用される「有効量」または「治療有効量」という語句は、所望の治療結果を達成するのに必要な量（投与量、期間、投与手段）を指す。有効量は、対象に治療的利益を与えるのに必要な活性剤の少なくとも最小量であるが、毒性量未満である。
【0064】
「ＩｇＧ」とは、本明細書で使用されるとき、認識された免疫グロブリンガンマ遺伝子によって実質的にコードされる抗体のクラスに属するポリペプチドを意味する。ヒトでは、このクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む。マウスでは、このクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３を含む。本明細書において「免疫グロブリン（Ｉｇ）」とは、免疫グロブリン遺伝子によって実質的にコードされる１つ以上のポリペプチドからなるタンパク質を意味する。免疫グロブリンは、限定されないが、抗体を含む。免疫グロブリンは、限定されないが、全長抗体、抗体断片、及び個々の免疫グロブリンドメインを含む、いくつかの構造形態を有し得る。本明細書の「免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン」とは、タンパク質構造の当業者によって確認されるように、明確に異なる構造体として存在する免疫グロブリンの領域を意味する。Ｉｇドメインは、典型的には、特徴的な折り畳みトポロジーを有する。ＩｇＧクラスの抗体における既知のＩｇドメインは、可変重鎖ドメイン（ＶＨ）、Ｃγ１とＣγ２との間のヒンジ領域を含むＣγドメインをともに含む重鎖定常ドメイン－Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、軽鎖の可変ドメイン（ＶＬ）、及びヒトではカッパ（ＣＯまたはラムダ（ＣＡ）軽鎖定常ドメインのいずれかを含む軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）である。
【0065】
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。「Ｆｃ領域」（「結晶化可能な断片」または「尾部」領域としても知られている）は、天然配列Ｆｃ領域またはバリアントＦｃ領域であり得る。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで伸びると定義される。本発明で考察されるすべての重鎖定常領域アミノ酸位置について、付番は、最初に配列決定されたヒトＩｇＧ１配列である骨髄腫タンパク質ＥＵのアミノ酸配列を記載する、Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９６９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ６３（１）：７８－８５に最初に記載されるＥＵインデックスに従う。Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．のＥＵインデックスは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１にも記載されている。したがって、「Ｋａｂａｔに記載されたＥＵインデックス」または「ＫａｂａｔのＥＵインデックス」は、Ｋａｂａｔ １９９１に記載されたＥｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．のヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体に基づくアミノ酸残基付番システムを指す。
【0066】
免疫グロブリンのＦｃ領域は、概して、２つの定常ドメイン、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。典型的には、その用語が本明細書で使用される「Ｆｃポリペプチド」は、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含み、ヒンジドメインの少なくとも一部分を含むことができるが、通常、ＣＨ１ドメイン全体を含まない。当該技術分野で知られているように、Ｆｃ領域は、二量体または単量体の形態で存在することができる。
【0067】
当技術分野で使用されるように、「Ｆｃ受容体」及び「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を示す。好ましいＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。更に、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合し、かつＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含むＦｃＲであり、これらには、これらの受容体の対立遺伝子バリアント及び選択的スプライスされた形態が含まれる。ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を含み、これらは、主にその細胞質ドメインが異なる同様のアミノ酸配列を有する。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，１９９１，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７－９２、Ｃａｐｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，４：２５－３４、及びｄｅ Ｈａａｓ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，１２６：３３０－４１に概説されている。．「ＦｃＲ」はまた、母体のＩｇＧの胎児への転移を担う新生児受容体である、ＦｃＲｎも包含する（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７６、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１７：５８７、及び Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：２４９）。
【0068】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」または「薬学的に許容される賦形剤」には、活性成分と組み合わされる場合、その成分が生物学的活性を保持し、かつその対象の免疫系と非反応性である任意の物質が含まれる。そのような担体を含む組成物は、周知の従来の方法によって製剤化される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９０、及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ Ｅｄ．Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，２０００参照）。
【0069】
本明細書で使用される「治療すること」という用語は、別段の指示がない限り、そのような用語が適用される障害もしくは状態、またはそのような障害もしくは状態の１つ以上の症状を逆転させるか、軽減するか、その進行を抑制するか、その進行を遅延させるか、その発症を遅延させるか、または予防することを意味する。本明細書で使用する場合、「治療」という用語は、別段の指示がない限り、「治療する」として治療する行為を指し、直前に上記で定義する。「治療すること」という用語はまた、対象のアジュバント及びネオアジュバント治療を含む。誤解を避けるために、本明細書における「治療」への言及は、治癒的、緩和的、及び予防的治療への言及を含む。
【0070】
ポリペプチド、ポリヌクレオチド及びベクター
一態様では、本開示は、アポトーシス阻害剤５（ＡＰＩ５）タンパク質、またはその断片もしくはバリアントを含む、組換えタンパク質を提供する。
一態様では、本開示は、アポトーシス阻害剤５（ＡＰＩ５）タンパク質、またはその断片もしくはバリアントを含む、組換えタンパク質を提供する。
【0071】
いくつかの実施形態では、ＡＰＩ５タンパク質は、配列番号１のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む。
【0072】
いくつかの実施形態では、ＡＰＩ５タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む。
ヒトＡＰＩ５
＞ｓｐ｜Ｑ９ＢＺＺ５｜ＡＰＩ５＿ヒト
ＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＴＦＮＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＧＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫＶＥＩＧＱＫＲＡＳＥＤＴＴＳＧＳＰＰＫＫＳＳＡＧＰＫＲＤＡＲＱＩＹＮＰＰＳＧＫＹＳＳＮＬＧＮＦＮＹＥＱＲＧＡＦＲＧＳＲＧＧＲＧＷＧＴＲＧＮＲＳＲＧＲＬＹ
（配列番号１）
マウスＡＰＩ５
＞ｓｐ｜Ｏ３５８４１｜ＡＰＩ５＿マウス
ＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＡＦＳＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＳＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫＶＥＩＧＱＫＲＴＳＥＤＴＳＳＧＳＰＰＫＫＳＰＧＧＰＫＲＤＡＲＱＩＹＮＰＰＳＧＫＹＳＳＮＬＳＮＦＮＹＥＲＳＬＱＧＫ
（配列番号２）
ヒトＡＰＩ５
＞ｓｐ｜Ｑ９ＢＺＺ５｜ＡＰＩ５＿ヒト
ＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＴＦＮＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＧＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫＶＥＩＧＱＫＲＡＳＥＤＴＴＳＧＳＰＰＫＫＳＳＡＧＰＫＲＤＡＲＱＩＹＮＰＰＳＧＫＹＳＳＮＬＧＮＦＮＹＥＱＲＧＡＦＲＧＳＲＧＧＲＧＷＧＴＲＧＮＲＳＲＧＲＬＹ
（配列番号１）
マウスＡＰＩ５
＞ｓｐ｜Ｏ３５８４１｜ＡＰＩ５＿マウス
ＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＡＦＳＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＳＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫＶＥＩＧＱＫＲＴＳＥＤＴＳＳＧＳＰＰＫＫＳＰＧＧＰＫＲＤＡＲＱＩＹＮＰＰＳＧＫＹＳＳＮＬＳＮＦＮＹＥＲＳＬＱＧＫ
（配列番号２）
【0073】
いくつかの実施形態では、組換えタンパク質は、ＡＰＩ５タンパク質の断片を含む。
【0074】
いくつかの実施形態では、ＡＰＩ５タンパク質断片は、ＡＰＩ５のＮ末端ＨＥＡＴ反復領域を含む。この断片は、ＡＰＩ５のＮ末端ＨＥＡＴ反復領域に対応する（Ｈａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２８７：１０７２７（２０１２））であって、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる）。例えば、ＡＰＩ５の断片は、配列番号１の残基１～２０６を含む。一実施形態では、ＡＰＩ５タンパク質断片は、配列番号８のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む。
ヒトＡＰＩ５の残基１～２０６
ＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴ
（配列番号８）
ヒトＡＰＩ５の残基１～２０６
ＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴ
（配列番号８）
【0075】
いくつかの実施形態では、ＡＰＩ５タンパク質断片は、配列番号１の残基１～４４８を含む。一実施形態では、ＡＰＩ５タンパク質断片は、配列番号７のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む。
ヒトＡＰＩ５の残基１～４４８
ＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＴＦＮＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＧＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫ
（配列番号７）
ヒトＡＰＩ５の残基１～４４８
ＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＴＦＮＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＧＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫ
（配列番号７）
【0076】
いくつかの実施形態では、ＡＰＩ５タンパク質、またはその断片もしくはバリアントは、１つ以上の異種部分に遺伝的に融合及び／または化学的に結合される。
【0077】
ＡＰＩ５タンパク質との遺伝的融合及び／または化学的結合に好適な異種部分、またはその断片もしくはバリアントには、ペプチド、ポリペプチド、小分子、ポリマー、核酸、脂質、糖などが含まれるが、これらに限定されない。
【0078】
異種ペプチド及びポリペプチドは、組換えＡＰＩ５タンパク質の検出及び／または単離を可能にするエピトープ（例えば、ＦＬＡＧ）またはタグ配列（例えば、Ｈｉｓ６（配列番号７８）など）、膜貫通受容体タンパク質、またはその一部、例えば、細胞外ドメイン、もしくは膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメイン、膜貫通受容体タンパク質に結合するリガンド、またはその一部、触媒活性である酵素、またはその一部、オリゴマー化、例えば、ロイシンジッパードメインを促進するポリペプチド、またはペプチド；安定性を増加させるポリペプチドまたはペプチド、例えば、免疫グロブリン定常領域（例えば、Ｆｃドメイン）；組換えＡＰＩ５タンパク質のための主に親水性または主に疎水性融合パートナーを形成するように設計された、２つ以上（例えば、２、５、１０、１５、２０、２５など）の天然または非天然に存在する荷電及び／または非荷電アミノ酸（例えば、セリン、グリシン、グルタミン酸、もしくはアスパラギン酸）の組み合わせを含む半減期延長配列、機能性抗体もしくは非機能性抗体、またはその重鎖もしくは軽鎖、ならびに本発明の組換えＡＰＩ５タンパク質とは異なる活性、例えば治療活性を有するポリペプチドを含むが、これらに限定されない。
【0079】
いくつかの実施形態では、１つ以上の異種部分は、１つ以上の親和性タグを含む。本開示で使用するのに適した親和性タグの非限定的な例としては、Ｈｉｓタグ、Ａｖｉタグ、ヘマグルチニン（ＨＡ）タグ、ＦＬＡＧタグ、Ｍｙｃタグ、ＧＳＴタグ、ＭＢＰタグ、キチン結合タンパク質タグ、カルモジュリンタグ、Ｖ５タグ、ストレプトアビジン結合タグ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ＹＦＰ、ＲＦＰ、ＣＦＰ、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、ＳＵＭＯタグ、ユビキチンタグ、及びこれらの組み合わせが挙げられる。一実施形態では、１つ以上の異種部分は、Ｈｉｓ６タグ（配列番号７８）及びＡｖｉタグを含み、任意に、ＭＫＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ（配列番号９）のアミノ酸配列を含む。
【0080】
いくつかの実施形態では、本開示の組換えＡＰＩ５タンパク質は、ＡＰＩ５タンパク質、またはその断片もしくはバリアントと１つ以上の親和性タグとの間にプロテアーゼ切断部位を更に含む。一実施形態では、プロテアーゼ切断部位は、ＴＥＶプロテアーゼの切断部位であり、任意選択で、ＥＮＬＹＦＱＧＳ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含む。
【0081】
一実施形態では、組換えＡＰＩ５タンパク質は、配列番号３のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む。
【0082】
一実施形態では、組換えＡＰＩ５タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有する配列を含む。
【0083】
いくつかの実施形態では、１つ以上の異種部分は、アルブミンに特異的に結合する部分を含む。アルブミンに結合する部分への結合は、短命タンパク質の半減期を延長することが示されている。アルブミンに特異的に結合する部分は、小分子、ペプチド、ポリペプチド、脂質などであり得る。アルブミンは、ラットアルブミン、ウサギアルブミン、またはヒトアルブミンであり得る。いくつかの実施形態では、アルブミンは、ヒト血清アルブミンである。
【0084】
いくつかの実施形態では、アルブミンに特異的に結合する部分は、当該技術分野、例えば、Ｄｅｎｎｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００２ Ｓｅｐ ２０；２７７（３８）：３５０３５－４３及び米国特許第１０，４４２，８５１号（それら両方の内容は、すべての目的のためにそれら全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるアルブミン結合ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、アルブミンに特異的に結合する部分は、配列番号１２～６６、７６及び７７のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
【0085】
本開示における使用に好適な追加のアルブミン結合部分としては、Ｚｏｒｚｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｄｃｈｅｍｃｏｍｍ．２０１９ Ｊｕｎ ６；１０（７）：１０６８－１０８１を参照されたい。いくつかの実施形態では、いくつかの実施形態では、アルブミンに特異的に結合する部分は、ナフタレンアシルスルホンアミド、ジフェニルシクロヘキサノールリン酸エステル、９－フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、マレイミド基を介して１６－スルファニルヘキサデカン酸に連結されたＦｍｏｃ誘導体、マレイミドを有するジクマロール誘導体、マレイミドを有するエバンスブルー誘導体、ジフルニサール－γＧｌｕ－ＬｙｓＩＪ（±Ｏ２Ｏｃ）－インドメタシン、γＧｌｕリンカーに結合したリトコール酸、６－（４－（ｐ－ヨードフェニル）ブタンアミド）ヘキサノエート、Ａ０８３／Ｂ１３４、Ａ０９９／Ｂ３４４、８９Ｄ０３（Ａｃ－ＷＷＥＱＤＲＤＷＤＦＤＶＦＧＧＧＴＰ－ＮＨ２、配列番号６７）、アシル化ヘプタペプチドＦ－タグ（フルオレセイン－ＥＹＥＫ（パルミテート）ＥＹＥ－ＮＨ２、配列番号６８）、ジスルフィド環化ペプチドＳＡ２１（Ａｃ－ＲＬＩＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤＤ－ＮＨ２、配列番号６９）、頭尾環化ペプチドＨＳＡ－１（可変リジン（Ｋ＊）を有するＡＫ＊Ｋ＊ＰＧＫ＊ＡＫ＊ＰＧ、配列番号７０）、ＡＢＤ０３５、ＡＢＤＣｏｎ、ＤＡＲＰｉｎ、ＡｌｂｕｄＡｂ、ｄｓＦｖ ＣＡ６４５、ナノボディＮｂ．ｂ２０１、またはＶＮＡＲ Ｅ０６である。
【0086】
いくつかの実施形態では、ＡＰＩ５タンパク質、またはその断片もしくはバリアントは、Ｆｃドメイン、例えば、ヒトＩｇＧのＦｃ領域の１つ以上のドメインに融合される。抗体は、２つの機能的に独立した部分、抗原に結合する「Ｆａｂ」として知られる可変ドメイン、及びとりわけ、補体活性化及び貪食細胞による攻撃などのエフェクター機能に関与する、「Ｆｃ」として知られる定常ドメインを含む。Ｆｃは、長い血清半減期を有することにより（Ｃａｐｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３３７：５２５－３１）、治療用タンパク質と結合した場合、Ｆｃドメインは、より長い半減期を提供するか、またはＦｃ受容体結合、タンパク質Ａ結合、補体結合、及び治療用タンパク質において望ましい他の特徴などのエフェクター機能を組み込むことができる。
【0087】
Ｆｃ配列は、ＡＰＩ５タンパク質の半減期を延長するために、本明細書に開示されるＡＰＩ５タンパク質またはその断片もしくはバリアントに融合され得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ドメインのエフェクター機能を変更するために修飾されてもよい。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、組換えタンパク質の半減期を延長するために修飾される。ＩｇＧ１ Ｆｃの修飾は、当該技術分野、例えば、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第１０，４６４，９７９号に記載されているように実施され得る。
【0088】
以下の表１は、本出願で例示されるＦｃ修飾のいくつかを示す。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＡＰＩ５タンパク質との融合に使用されるＦｃドメインは、Ｃ末端Ｌｙｓ残基を含まない。
【表1】
【0089】
いくつかの実施形態では、ＡＰＩ５タンパク質、またはその断片もしくはバリアントは、アルブミンなどの他の大型長寿命タンパク質に融合されてもよい（Ｓｙｅｄ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ（１９９７）８９，３２４３－３２５２、Ｙｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９９２）８９，１９０４－１９０８（その各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【0090】
ＡＰＩ５組換えタンパク質に対する他の好適な修飾としては、グリコシル化部位の導入が挙げられる（Ｋｅｙｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９９４）９１，３６７０－３６７４を参照されたく、それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、及びポリエチレングリコールポリマー（すなわちＰＥＧ）との結合（Ｃｌａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９６）２７１，２１９６９－２１９７７、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．（１９９９）１０，９７３－９８１、Ｔａｎａｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（１９９１）５１，３７１０－３７１４を参照されたく、それらの各々の内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
【0091】
いくつかの実施形態では、組換えＡＰＩ５タンパク質は、ＡＰＩ５タンパク質、またはその断片もしくはバリアントのＮ末端もしくはＣ末端のいずれかで異種配列を融合することによって作製することができる。本明細書に記載されるように、異種配列は、アミノ酸配列（例えば、アルブミン結合ペプチド／タンパク質、Ｆｃドメイン）または非アミノ酸含有ポリマー（例えば、ＰＥＧ）であり得る。異種配列は、直接ＡＰＩ５タンパク質、またはその断片もしくはバリアントに、化学的に、もしくは単一のポリヌクレオチドからの組換え発現によって、融合することができ、またはそれらは、リンカーもしくはアダプター分子を介して結合することができる。ペプチジルリンカーまたはアダプター分子は、１つ以上のアミノ酸残基（または－ｍｅｒ）、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、もしくは９残基（または－ｍｅｒ）、好ましくは１０～５０アミノ酸残基（または－ｍｅｒ）、例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、もしくは５０残基（または－ｍｅｒ）、より好ましくは１５～３５アミノ酸残基（または－ｍｅｒ）であり得る。リンカーまたはアダプター分子はまた、融合部分の分離を可能にするために、プロテアーゼの切断部位を有するように設計することができる。非アミノ酸含有ポリマーの非限定的な例としては、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）、エチレングリコールとプロピレングリコールとのコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール、ポリビニルアルコール、多糖、デキストラン、ポリビニルエーテル、ＰＬＡ（ポリ（乳酸））及びＰＬＧＡ（ポリ（乳酸－グリコール酸））などの生分解性ポリマー、脂質ポリマー、キチン、ヒアルロン酸などが挙げられる。
【0092】
本発明の組換えタンパク質を形成するとき、リンカーを用いることができるが、必要はない。リンカーは、ペプチド結合によって一緒に連結されたアミノ酸、すなわち、ペプチジルリンカーで構成され得る。本発明のいくつかの実施形態では、リンカーは、ペプチド結合によって連結された１～２０個以上のアミノ酸で構成され、アミノ酸は、２０個の天然に存在するアミノ酸から選択される。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、アミノ酸グリシン、セリン、及びグルタミン酸から選択される。いくつかの実施形態では、好適なリンカーとしては、例えば、ＧＳＧＥＧＥＧＳＥＧＳＧ（配列番号７３）、ＧＧＳＥＧＥＧＳＥＧＧＳ（配列番号７４）、及びＧＧＧＳ（配列番号７９）が挙げられる。本発明は、任意の長さまたは組成のリンカーを企図する。例示的な結果を表２に示す。
【表2】
【0093】
本明細書に記載のリンカーは例示的であり、はるかに長く、他の残基を含むリンカーもまた、本発明によって企図される。
【0094】
一態様では、本開示は、本明細書に記載の組換えＡＰＩ５タンパク質をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。本明細書に記載のポリヌクレオチドの発現のために、ＲＮＡ合成のための開始部位を配置するためにプロモーター配列を含み得る。プロモーターは、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターであり得る。ポリヌクレオチドはまた、ターミネーターまたはエンハンサーなどの１つ以上の追加の調節配列に作動可能に連結され得る。一実施形態では、単離されたポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡである。
【0095】
一態様では、本開示は、本明細書に記載の組換えタンパク質をコードする単離されたポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。
【0096】
本明細書に記載の組換えＡＰＩ５タンパク質の発現を評価するために、細胞に導入されるポリヌクレオチドまたはベクターは、選択マーカー遺伝子またはレポーター遺伝子のいずれか、またはその両方を含有して、ウイルスベクターを介してトランスフェクトまたは感染させることを求める細胞の集団からの発現細胞の同定及び選択を促進することもできる。他の実施形態では、選択マーカーは、別個のＤＮＡ片に担持され、共トランスフェクション手順で使用され得る。選択可能なマーカー及びレポーター遺伝子はいずれも適切な調節配列に挟まれて、宿主細胞での発現を可能にし得る。有用な選択可能なマーカーは、当技術分野で既知であり、例えば、ネオマイシン耐性などの抗生物質耐性遺伝子を含む。
【0097】
一態様では、本開示は、本明細書に記載の単離されたポリヌクレオチドまたはベクターを含む、宿主細胞を提供する。
【0098】
薬学的組成物
本明細書に記載の組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、またはベクターを含む薬学的組成物は、本発明の範囲内である。このような薬学的組成物は、治療有効量の組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、またはベクターを、投与様式との適合性のために選択された薬学的または生理学的に許容される製剤との混合物中に含むことができる。許容される製剤は、用いる投与量及び濃度でレシピエントに対し無毒であることが好ましい。
本明細書に記載の組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、またはベクターを含む薬学的組成物は、本発明の範囲内である。このような薬学的組成物は、治療有効量の組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、またはベクターを、投与様式との適合性のために選択された薬学的または生理学的に許容される製剤との混合物中に含むことができる。許容される製剤は、用いる投与量及び濃度でレシピエントに対し無毒であることが好ましい。
【0099】
薬学的組成物は、例えば、組成物のｐＨ、浸透圧、粘度、透明度、色、等張性、臭気、無菌性、安定性、溶解または放出速度、吸着、または貫通を修飾、維持、または保存するための製剤（複数可）を含有することができる。好適な製剤としては、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリシンなど）、抗菌剤、抗酸化剤（アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、メチオニン、もしくは亜硫酸水素ナトリウムなど）、緩衝液（ホウ酸塩、重炭酸塩、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ヒスチジン、クエン酸塩、リン酸塩、もしくは他の有機酸など）、増量剤（マンニトールもしくはグリシンなど）、キレート剤（エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）など）、錯化剤（カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ－シクロデキストリン、もしくはヒドロキシプロピル－ベータ－シクロデキストリンなど）、充填剤、単糖類、二糖類、及び他の炭水化物（グルコース、マンノース、もしくはデキストリンなど）、タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなど）、着色剤、香料、及び希釈剤、乳化剤、親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）、低分子量ポリペプチド、塩形成対イオン（ナトリウムなど）、保存剤（ベンザルコニウムクロリド、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、または過酸化水素など）、溶媒（グリセリン、プロピレングリコール、またはポリエチレングリコールなど）、糖アルコール（マンニトールまたはソルビトールなど）、懸濁剤、界面活性剤、または湿潤剤（プルロニクス、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０などのポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロールまたはチロキサパール）、安定性向上剤（スクロースもしくはソルビトールなど）、張力向上剤（アルカリ金属ハロゲン化物、好ましくは塩化ナトリウムもしくは塩化カリウム、またはマンニトールソルビトールなど）、送達ビヒクル、希釈剤、賦形剤、及び／または薬学的アジュバント（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ Ｅｄ．，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ１９９０、及びその後続の版が、任意の目的のために参照により本明細書に組み込まれる）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0100】
最適な薬学的組成物は、例えば、意図される投与経路、送達形態、及び所望の投与量に応じて、当業者によって決定されるであろう（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、上記参照）。そのような組成物は、組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、またはベクターの物理的状態、安定性、インビボ放出の速度、及びインビボクリアランスの速度に影響を及ぼすことができる。
【0101】
薬学的組成物中の一次ビヒクルまたは担体は、本質的に水性であっても非水性であってもよい。例えば、注射のための適切なビヒクルまたは担体は、水、生理食塩水、または人工脳脊髄液であり得、場合によっては、非経口投与のための組成物に共通の他の材料で補充される。中性緩衝生理食塩水または血清アルブミンと混合した生理食塩水は、更に例示的なビヒクルである。他の例示的な薬学的組成物は、約ｐＨ６．０～８．５のヒスチジンまたはＴｒｉｓ緩衝液を含み、これは、ソルビトールまたは好適な代替物を更に含み得る。本発明の一実施形態では、組換えＡＰＩ５タンパク質組成物は、所望の純度を有する選択された組成物を、水溶液の形態で任意の製剤剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、上記参照）と混合することによって保管用に調製され得る。
【0102】
薬学的組成物は、非経口送達のために選択することができる。あるいは、組成物は、吸入のために、または経口などの消化管を介した送達のために選択され得る。そのような薬学的に許容される組成物の調製は、当業者の範囲内である。製剤成分は、投与部位に許容される濃度で存在する。例えば、緩衝液は、組成物を生理学的ｐＨまたはわずかに低いｐＨ、典型的には約６～約８のｐＨ範囲内で維持するために使用される。
【0103】
非経口投与が企図される場合、本発明で使用するための治療組成物は、薬学的に許容されるビヒクル中の所望の組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、またはベクターを含むパイロジェンフリー、非経口的に許容される水溶液の形態であってもよい。非経口注射に特に好適なビヒクルは、組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、またはベクターが、無菌の等張液として製剤化され、適切に保存される無菌の蒸留水である。更に別の調製物は、注射可能なミクロスフェア、生体侵食性粒子、高分子化合物（ポリ乳酸またはポリグリコール酸など）、ビーズ、またはリポソームなどの薬剤を用いた所望の分子の製剤化を伴うことができ、これらは、次いで、デポ注射を介して送達することができる産物の制御または持続放出を提供する。ヒアルロン酸も使用することができ、これは循環中の持続期間を促進する効果を有することができる。所望の分子の導入のための他の好適な手段としては、移植可能な薬物送達デバイスが挙げられる。
【0104】
一実施形態では、吸入用に薬学的組成物を製剤化することができる。例えば、薬学的組成物は、吸入用の乾燥粉末として製剤化することができる。吸入溶液はまた、エアロゾル送達のための推進剤とともに製剤化することができる。更に別の実施形態では、溶液を噴霧することができる。肺投与は、国際公開第ＷＯ１９９４０２００６９に更に記載され、これは、化学的に修飾されたタンパク質の肺送達を記載する。
【0105】
特定の製剤が経口投与され得ることも企図される。本発明の一実施形態では、このように投与される製剤は、錠剤及びカプセル剤などの固体剤形の配合に通常使用されるそれらの担体とともに、またはそれなしで製剤化され得る。例えば、カプセルは、バイオアベイラビリティが最大化され、全身送達前の分解が最小化されるときに、消化管の点で製剤の活性部分を放出するように設計することができる。吸収を容易にするために、追加の薬剤を含めることができる。希釈剤、香料、低融点ワックス、植物油、潤滑剤、懸濁化剤、錠剤崩壊剤、及び結合剤も用いることができる。
【0106】
別の薬学的組成物は、錠剤の製造に好適な非毒性賦形剤との混合物中の有効量の組換えＡＰＩ５タンパク質を含むことができる。錠剤を滅菌水または別の好適なビヒクルに溶解することによって、溶液を単位用量形態で調製することができる。好適な賦形剤としては、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムもしくは重炭酸塩、ラクトース、もしくはリン酸カルシウムのような不活性希釈剤、またはデンプン、ゼラチン、もしくはアカシアのような結合剤、またはステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、もしくはタルクのような潤滑剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【0107】
持続送達製剤または制御送達製剤における組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、またはベクターを含む製剤を含む、追加の薬学的組成物は、当業者には明白であろう。リポソーム担体、生体侵食性粒子または多孔質ビーズ及びデポ注射などの様々な他の持続送達または制御送達手段を製剤化するための技術は、当業者にも既知である（例えば、薬学的組成物の送達のための多孔質高分子微粒子の制御放出を説明する、国際公開ＷＯ１９９３０１５７２２、及びマイクロスフィア／微粒子の調製と使用について説明する、Ｗｉｓｃｈｋｅ＆Ｓｃｈｗｅｎｄｅｍａｎ，２００８，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．３６４：２９８－３２７、及びＦｒｅｉｂｅｒｇ＆Ｚｈｕ，２００４，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．２８２：１－１８参照）。本明細書に記載されるように、ヒドロゲルは、持続送達製剤または制御送達製剤の例である。
【0108】
持続放出製剤の追加の例としては、成形品の形態の半透過性ポリマーマトリックス、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルが挙げられる。持続放出マトリックスとしては、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号及び欧州特許第００５８４８１号）、Ｌ－グルタミン酸及びガンマ－エチル－Ｌ－グルタミン酸のコポリマー（Ｓｉｄｍａｎ ｅｔ ａｈ，１９８３，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７－５６）、ポリ（２－ヒドロキシエチルメタクリレート）（Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｈ，１９８１，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ． Ｍａｔｅｒ． Ｒｅｓ．１５：１６７－２７７ ａｎｄ Ｌａｎｇｅｒ，１９８２，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ． １２：９８－１０５）、エチレン酢酸ビニル（Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ、上記参照）、またはポリ－Ｄ（－）－３－ヒドロキシ酪酸（欧州特許第０１３３９８８号）を含む。持続性放出組成物はまた、当技術分野で既知のいくつかの方法のいずれかによって調製することができるリポソームを含むことができる。例えば、Ｅｐｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｈ，１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２：３６８８－９２、欧州特許第００３６６７６号、第００８８０４６号、及び第０１４３９４９号を参照されたい。
【0109】
インビボ投与に使用される薬学的組成物は、典型的には滅菌であるべきである。これは、滅菌ろ過膜によるろ過により容易に果たされる。組成物が凍結乾燥される場合、この方法を使用する滅菌は、凍結乾燥及び再構築の前または後のいずれかで行われ得る。非経口投与用の組成物は、凍結乾燥形態または溶液中で保存することができる。更に、非経口組成物は、一般に、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針によって穿刺可能なストッパーを有する静脈注射用溶液袋またはバイアル内に置かれる。非経口組成物は、非経口的に許容される希釈剤（例えば、生理食塩水及び５％デキストロース）に希釈することができる。
【0110】
薬学的組成物が製剤化されると、それは、溶液、懸濁液、ゲル、エマルジョン、固体、または脱水もしくは凍結乾燥粉末として、滅菌バイアルに保管され得る。そのような製剤は、すぐに使用できる形態で、または投与前に再構成を必要とする形態（例えば、凍結乾燥された）で保存することができる。
【0111】
一実施形態では、本発明は、単回投与単位を製造するためのキットに関する。キットはそれぞれ、乾燥タンパク質を有する第１の容器と、水性製剤を有する第２の容器との両方を含むことができる。本発明の範囲内には、単一及び多チャンバープリフィルドシリンジ（例えば、液体シリンジ及びデュアルチャンバシリンジ）を含むキットも含まれる。
【0112】
一実施形態では、本発明は、注射用溶液への再構築後の注射用粉末として製剤化された組換えＡＰＩ５タンパク質を含む薬学的組成物を対象とする。
【0113】
治療剤のための投与レジメンの選択は、生物学的マトリックスにおける実体の血清または組織の転換率、症状のレベル、実体の免疫原性、及び標的細胞のアクセス可能性を含む、いくつかの要因に依存する。ある特定の実施形態において、投与レジメンは、許容されるレベルの副作用と一致して、患者に送達される治療剤の量を最大化する。したがって、送達される生物学的製剤の量は、特定の実体及び治療される状態の重症度に部分的に依存する。適切な用量の抗体、Ｆｃ融合治療タンパク質、サイトカイン、及び小分子を選択する際のガイダンスが利用可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ，１９９６，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ、Ｋｒｅｓｉｎａ（ｅｄ．），１９９１，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、Ｂａｃｈ（ｅｄ．），１９９３，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ．、Ｂａｅｒｔ，ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１－６０８、Ｍｉｌｇｒｏｍ，ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６－１９７３、Ｓｌａｍｏｎ，ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２、Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ，ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３－６１９、Ｇｈｏｓｈ，ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４－３２、Ｌｉｐｓｋｙ，ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４－１６０２）。
【0114】
適切な用量の決定は、例えば、治療に影響を与える、または治療に影響を与えると予測される当該技術分野で既知または疑われるパラメータまたは要因を使用して、臨床医によって行われる。一般に、用量は、最適な用量よりもやや少ない量で始まり、その後、任意の負の副作用に対して所望のまたは最適な効果が達成されるまで、わずかな増分で増加する。重要な診断尺度としては、例えば、血清リン酸塩の増加またはリン酸塩排泄の減少の症状のものが挙げられる。
【0115】
本発明の薬学的組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、患者に対して毒性であることなく、特定の患者、組成物、及び投与様式に関して所望の治療的応答を達成するのに有効な活性成分の量を得るように、変化され得る。選択される投与量レベルは、用いられる本発明の特定の組成物、またはそれらのエステル、塩、もしくはアミドの活性、投与経路、投与時間、用いられている特定の化合物の排泄率、治療の持続期間、用いられる特定の組成物と併用される他の薬物、化合物、及び／または物質を含む、多様な薬物動態学的要因、治療されている患者の年齢、性別、体重、状態、全般的な健康状態及び以前の病歴、ならびに医療分野において周知の同様の要因に依存するであろう。
【0116】
本開示の組換えＡＰＩ５タンパク質を含む組成物は、連続注入によって、または例えば、１日、１週間、週１～７回、または１ヶ月の間隔で用量によって提供することができる。用量は、静脈内、皮下、局所、経口、経鼻、直腸、筋肉内、脳内、または吸入によって提供され得る。特定の用量プロトコルは、重大な望ましくない副作用を回避する最大用量または用量頻度を伴うものである。週間の総用量は、少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ体重、少なくとも０．２μｇ／ｋｇ、少なくとも０．５μｇ／ｋｇ、少なくとも１μｇ／ｋｇ、少なくとも１０μｇ／ｋｇ、少なくとも１００μｇ／ｋｇ、少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１．０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２．０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも５０ｍｇ／ｋｇであり得る（（例えば、Ｙａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：４２７～４３４、Ｈｅｒｏｌｄ，ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６９２～１６９８、Ｌｉｕ，ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７：４５１～４５６、Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉ，ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｃａｎｃｅｒ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：１３３～１４４参照）。用量は、少なくとも１５μｇ、少なくとも２０μｇ、少なくとも２５μｇ、少なくとも３０μｇ、少なくとも３５μｇ、少なくとも４０μｇ、少なくとも４５μｇ、少なくとも５０μｇ、少なくとも５５μｇ、少なくとも６０μｇ、少なくとも６５μｇ、少なくとも７０μｇ、少なくとも７５μｇ、少なくとも８０μｇ、少なくとも８５μｇ、少なくとも９０μｇ、少なくとも９５μｇ、または少なくとも１００μｇであってもよい。対象に投与される用量は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２、またはそれ以上であってよい。
【0117】
本開示の治療用組換えＡＰＩ５タンパク質について、患者に投与される投与量は、患者の体重の０．０００１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇであり得る。投与量は、０．０００１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１及び２ｍｇ／ｋｇ、０．０００１及び１ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ及び０．７５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ及び０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ～０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１～０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１～０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．００１～０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０１～０．２５ｍｇ／ｋｇまたは０．０１～０．１０ｍｇ／ｋｇであってよい。
【0118】
本開示の治療用タンパク質の投与量は、患者の体重（キログラム（ｋｇ））に投与される用量（ｍｇ／ｋｇ）を乗じて計算され得る。本開示のタンパク質の投与量は、患者体重の１５０μｇ／ｋｇ以下、１２５μｇ／ｋｇ以下、１００μｇ／ｋｇ以下、９５μｇ／ｋｇ以下、９０μｇ／ｋｇ以下、８５μ／ｋｇ以下、８０μ／ｋｇ以下、７５μ／ｋｇ以下、７０μ／ｋｇ以下、６５μ／ｋｇ以下、６０μ／ｋｇ以下、５５μ／ｋｇ以下、５０μ／ｋｇ以下、４５μ／ｋｇ以下、４０μ／ｋｇ以下、３５μ／ｋｇ以下、３０μ／ｋｇ以下、２５μ／ｋｇ以下、２０μ／ｋｇ以下、１５μ／ｋｇ以下、１０μ／ｋｇ以下、５μ／ｋｇ以下、２．５μ／ｋｇ以下、２μ／ｋｇ以下、１．５μ／ｋｇ以下、１μ／ｋｇ以下、０．５μ／ｋｇ以下、または０．１μ／ｋｇ以下であってもよい。
【0119】
本開示の治療用タンパク質の単位用量は、０．１ｍｇ～２０ｍｇ、０．１ｍｇ～１５ｍｇ、０．１ｍｇ～１２ｍｇ、０．１ｍｇ～１０ｍｇ、０．１ｍｇ～８ｍｇ、０．１ｍｇ～７ｍｇ、０．１ｍｇ～５ｍｇ、０．１～２．５ｍｇ、０．２５ｍｇ～２０ｍｇ、０．２５～１５ｍｇ、０．２５～１２ｍｇ、０．２５～１０ｍｇ、０．２５～８ｍｇ、０．２５ｍｇ～７ｍｇ、０．２５ｍｇ～５ｍｇ、０．５ｍｇ～２．５ｍｇ、１ｍｇ～２０ｍｇ、１ｍｇ～１５ｍｇ、１ｍｇ～１２ｍｇ、１ｍｇ～１０ｍｇ、１ｍｇ～８ｍｇ、１ｍｇ～７ｍｇ、１ｍｇ～５ｍｇ、または１ｍｇ～２．５ｍｇであり得る。
【0120】
本開示の治療用タンパク質の投与量は、対象において、少なくとも０．１μｇ／ｍｌ、少なくとも０．５μｇ／ｍｌ、少なくとも１μｇ／ｍｌ、少なくとも２μｇ／ｍｌ、少なくとも５μｇ／ｍｌ、少なくとも６μｇ／ｍｌ、少なくとも１０μｇ／ｍｌ、少なくとも１５μｇ／ｍｌ、少なくとも２０μｇ／ｍｌ、少なくとも２５μｇ／ｍｌ、少なくとも５０μｇ／ｍｌ、少なくとも１００μｇ／ｍｌ、少なくとも１２５μｇ／ｍｌ、少なくとも１５０ｖ、少なくとも１７５μｇ／ｍｌ、少なくとも２００μｇ／ｍｌ、少なくとも２２５μｇ／ｍｌ、少なくとも２５０μｇ／ｍｌ、少なくとも２７５μｇ／ｍｌ、少なくとも３００μｇ／ｍｌ、少なくとも３２５μｇ／ｍｌ、少なくとも３５０μｇ／ｍｌ、少なくとも３７５μｇ／ｍｌ、または少なくとも４００μｇ／ｍｌの血清力価を達成し得る。あるいは、本開示の抗体の投与量は、対象において、少なくとも０．１μｇ／ｍｌ、少なくとも０．５μｇ／ｍｌ、少なくとも１μｇ／ｍｌ、少なくとも２μｇ／ｍｌ、少なくとも５μｇ／ｍｌ、少なくとも６μｇ／ｍｌ、少なくとも１０μｇ／ｍｌ、少なくとも１５μｇ／ｍｌ、少なくとも２０μｇ／ｍｌ、少なくとも２５μｇ／ｍｌ、少なくとも５０μｇ／ｍｌ、少なくとも１００μｇ／ｍｌ、少なくとも１２５μｇ／ｍｌ、少なくとも１５０μｇ／ｍｌ、少なくとも１７５μｇ／ｍｌ、少なくとも２００μｇ／ｍｌ、少なくとも２２５μｇ／ｍｌ、少なくとも２５０μｇ／ｍｌ、少なくとも２７５μｇ／ｍｌ、少なくとも３００μｇ／ｍｌ、少なくとも３２５μｇ／ｍｌ、少なくとも３５０μｇ／ｍｌ、少なくとも３７５μｇ／ｍｌ、または少なくとも４００μｇ／ｍｌの血清力価を達成し得る。
【0121】
本開示の治療用タンパク質の用量は、繰り返されてもよく、投与は、少なくとも１日、２日、３日、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、２か月、７５日、３か月、または少なくとも６か月で分離されてもよい。
【0122】
特定の患者の有効量は、治療される状態、患者の全体的な健康状態、投与の方法経路及び用量、ならびに副作用の重症度などの要因に応じて異なり得る（例えば、Ｍａｙｎａｒｄ，ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ａ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ＳＯＰｓ ｆｏｒ Ｇｏｏｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．、Ｄｅｎｔ，２００１，Ｇｏｏｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｄ Ｇｏｏｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｕｒｃｈ Ｐｕｂｌ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ参照）。
【0123】
投与経路は、例えば、局所的または皮膚的適用、静脈内、腹腔内、脳内、筋肉内、眼内、動脈内、脳脊髄内、病変内、または持続放出系もしくはインプラントによる注射もしくは注入であり得る（例えば、例えば、Ｓｉｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７－５５６、Ｌａｎｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７－２７７、Ｌａｎｇｅｒ，１９８２，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８－１０５、Ｅｐｓｔｅｉｎ，ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：３６８８－３６９２、Ｈｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４０３０－４０３４、米国特許第６，３５０，４６６号及び同第６，３１６，０２４号参照）： 必要に応じて、組成物は、注射部位の痛みを和らげるために、可溶化剤及びリドカインなどの局所麻酔薬を含むこともできる。更に、肺投与はまた、例えば、吸入器またはネブライザーの使用、及びエアロゾル化剤を用いた製剤化により使用することができる。例えば、米国特許第６，０１９，９６８号、同第５，９８５，３２０号、同第５，９８５，３０９号、同第５，９３４，２７２号、同第５，８７４，０６４号、同第５，８５５，９１３号、同第５，２９０，５４０号、及び同第４，８８０，０７８号、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ９２／１９２４４、同第ＷＯ９７／３２５７２、同第ＷＯ９７／４４０１３号、同第ＷＯ９８／３１３４６号、及び同第ＷＯ９９／６６９０３号を参照されたく、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。一実施形態では、本開示の操作された抗体または操作された抗体結合体、併用療法、または組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ ＡＩＲ（商標）肺薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）を使用して投与される。
【0124】
投与頻度は、使用される製剤中の組換えＡＰＩ５タンパク質の薬物動態パラメータに依存する。典型的には、臨床医は、所望の効果を達成する用量に達するまで組成物を投与する。したがって、組成物は、単回用量として、経時的に２回以上の用量（同じ量の所望の分子を含有しても含有しなくてもよい）として、または移植デバイスまたはカテーテルを介した連続注入として投与することができる。適切な投与量の更なる精製は、当業者によって日常的に行われ、それらによって日常的に行われるタスクの範囲内である。適切な投与量は、適切な用量反応データの使用によって確認することができる。
【0125】
薬学的組成物の投与経路は、公知の方法に従い、例えば、経口で、皮下、静脈内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、門脈内、または病変内経路による注射によって、持続放出系（これも注射され得る）によって、または移植デバイスによるものである。所望される場合、組成物は、ボーラス注射によって、または注入によって連続的に、または移植デバイスによって投与され得る。
【0126】
代替的または追加的に、組成物は、所望の分子が吸収またはカプセル化された膜、スポンジ、または他の適切な材料の移植を介して局所的に投与され得る。移植デバイスが使用される場合、デバイスは、任意の好適な組織または器官に移植され得、所望の分子の送達は、拡散、時限放出ボーラス、または連続投与を介し得る。薬物、例えば、本明細書に開示される組換えＡＰＩ５タンパク質を、薬物濃度が長期間にわたって所望の治療有効レベルで維持され得るように所定の速度で送達するために、様々な異なるアプローチを用いることができる。一例では、ゼラチン（例えば、ウシゼラチン、ヒトゼラチン、または別の供給源からのゼラチン）または天然に存在するまたは合成的に生成されたポリマーなどのポリマーを含むヒドロゲルを用いることができる。任意の割合のポリマー（例えば、ゼラチン）を、５、１０、１５、または２０％などのハイドロゲルに用いることができる。適切な濃度の選択は、所望される治療プロファイル及び治療分子の薬物動態プロファイルなどの様々な要因に依存し得る。
【0127】
ヒドロゲルに組み込むことができるポリマーの例としては、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）、ポリエチレンオキシド、ポリエチレンオキシド－コ－ポリプロピレンオキシド、コ－ポリエチレンオキシドブロックまたはランダムコポリマー、ポリビニルアルコール、ポリ（ビニルピロリジノン）、ポリ（アミノ酸）、デキストラン、ヘパリン、多糖類、ポリエーテルなどが挙げられる。
【0128】
ヒドロゲル製剤を生成するときに考慮され得る別の要因は、ヒドロゲル及び架橋剤における架橋の程度である。一実施形態では、架橋は、メタクリル無水物を含むメタクリル化反応を介して達成することができる。いくつかの状況では、高い程度の架橋が望ましくあり得るが、他の状況では、より低い程度の架橋が好ましい。いくつかの場合では、より高い程度の架橋は、より長い持続放出をもたらす。より高度な架橋は、より硬いヒドロゲル及び薬物が送達されるより長い期間を提供し得る。架橋剤（例えば、メタクリル無水物）に対するポリマーの任意の比率を用いて、所望の特性を有するヒドロゲルを生成することができる。例えば、架橋剤に対するポリマーの比率は、例えば、８：１、１６：１、２４：１、または３２：１であり得る。例えば、ヒドロゲルポリマーがゼラチンであり、架橋剤がメタクリレートである場合、８：１、１６：１、２４：１、または３２：１のメチアクリル無水物：：ゼラチンの比率を用いることができる。
【0129】
当業者は、異なる送達方法を利用して、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）またはベクターを細胞に投与し得ることを認識する。例としては、（１）エレクトロポレーション（電気）、遺伝子銃（物理的力）、または大量の液体（圧力）を適用するなどの物理的手段を利用する方法、及び（２）ベクターが、リポソーム、凝集タンパク質、またはトランスポーター分子などの別の実体に複合体化されている方法が挙げられる。
【0130】
更に、実際の用量及びスケジュールは、組成物が他の組成物と組み合わせて投与されるかどうか、または薬物動態、薬物配置、及び代謝における個体間の違いに応じて変化し得る。同様に、量は、利用される特定の細胞株に応じて（例えば、細胞表面上に存在するベクター受容体の数、またはその細胞株内で複製する遺伝子移入に使用される特定のベクターの能力に基づいて）インビトロ適用で変化し得る。更に、細胞当たりに添加されるポリヌクレオチドまたはベクターの量は、ポリヌクレオチドまたはベクターに挿入される治療遺伝子の長さ及び安定性だけでなく、配列の性質によっても変化する可能性が高く、特に、経験的に決定する必要があるパラメータであり、本発明の方法に固有ではない因子（例えば、合成に関連するコスト）のために変更することができる。当業者は、特定の状況の緊急性に応じて任意の必要な調整を容易に行うことができる。
【0131】
ポリヌクレオチド分子はまた、自殺遺伝子、すなわち、細胞を破壊するために使用することができる産物をコードする遺伝子を含有し得る。多くの遺伝子治療状況では、宿主細胞において治療目的で遺伝子を発現することができることが望ましいが、宿主細胞を任意に破壊する能力を有することも望ましい。治療剤は、その発現が活性化剤化合物の非存在下で活性化されない自殺遺伝子に連結され得る。薬剤及び自殺遺伝子の両方が導入された細胞の死が望まれる場合、活性化剤化合物を細胞に投与し、それによって自殺遺伝子の発現を活性化し、細胞を死滅させる。使用され得る自殺遺伝子／プロドラッグの組み合わせの例は、単純ヘルペスウイルス－チミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）及びガンシクロビル、アシクロビル、オキシドレダクターゼ及びシクロヘキシミド、シトシンデアミナーゼ及び５－フルオロシトシン、チミジンキナーゼチミジレートキナーゼ（Ｔｄｋ：：Ｔｍｋ）及びＡＺＴ、ならびにデオキシシチジンキナーゼ及びシトシンアラビノシドである。
【0132】
治療の方法
本明細書に記載される組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、及びベクター、ならびに組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、またはベクターを含む薬学的組成物を使用して、上皮細胞（例えば、パネート細胞などの腸管上皮細胞）を細胞死から保護することができる。したがって、本発明のタンパク質、ポリヌクレオチド、及びベクターを使用して、腸管上皮バリアを回復させることができ、したがって、破壊された腸管上皮バリアを有する様々な疾患または障害を治療するために使用することができる。破壊された腸管上皮バリアは、消化管の炎症性疾患に起因し得る。更に、本発明は、破壊された腸管上皮バリアを有する疾患または障害の治療または予防に使用するための薬剤の製造における、本開示の組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、もしくはベクター、またはその薬学的組成物の使用を提供する。組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、もしくはベクター、またはそれらの薬学的組成物で治療することができる疾患または障害の例としては、炎症性腸疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎）、移植片対宿主病、嚢炎、免疫チェックポイント阻害剤関連大腸炎、放射線誘発性胃腸毒性、過敏性腸症候群、短腸症候群、感染性胃腸炎、またはセリアック病が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書に記載される組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、及びベクター、ならびに組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、またはベクターを含む薬学的組成物を使用して、上皮細胞（例えば、パネート細胞などの腸管上皮細胞）を細胞死から保護することができる。したがって、本発明のタンパク質、ポリヌクレオチド、及びベクターを使用して、腸管上皮バリアを回復させることができ、したがって、破壊された腸管上皮バリアを有する様々な疾患または障害を治療するために使用することができる。破壊された腸管上皮バリアは、消化管の炎症性疾患に起因し得る。更に、本発明は、破壊された腸管上皮バリアを有する疾患または障害の治療または予防に使用するための薬剤の製造における、本開示の組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、もしくはベクター、またはその薬学的組成物の使用を提供する。組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、もしくはベクター、またはそれらの薬学的組成物で治療することができる疾患または障害の例としては、炎症性腸疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎）、移植片対宿主病、嚢炎、免疫チェックポイント阻害剤関連大腸炎、放射線誘発性胃腸毒性、過敏性腸症候群、短腸症候群、感染性胃腸炎、またはセリアック病が挙げられるが、これらに限定されない。
【0133】
適用において、障害または状態は、本明細書に記載される組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、もしくはベクター、またはその薬学的組成物を、治療有効用量の量で、それを必要とする患者に投与することによって治療することができる。投与は、静脈内注射、直腸内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、錠剤または液体形成の形態での経口で、または内視鏡による送達などによって、本明細書に記載されるように行うことができる。ほとんどの状況において、所望の投与量は、本明細書に記載されるように、臨床医によって決定され得、組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、またはベクターの治療有効用量を表すことができる。当業者には、治療上有効用量がとりわけ、投与スケジュール、投与される薬剤の単位用量、組成物が他の治療薬と組み合わせて投与されるかどうか、及びレシピエントの健康に依存することが明らかであろう。本明細書で使用される「治療有効用量」という用語は、研究者、医師、または他の臨床医によって求められている組織系、動物、またはヒトにおける生物学的または薬学的応答を引き出す組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、またはベクターの量を意味し、これには、治療されている疾患または障害の症状の緩和が含まれる。
【0134】
いくつかの実施形態では、組換えＡＰＩ５タンパク質、ポリヌクレオチド、もしくはベクター、またはそれらの薬学的組成物は、１つ以上の追加の薬剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、ＴＮＦα及び／またはリンパ球の移動を阻害する薬剤である。本開示の方法での使用に好適な例示的な薬剤には、インテグリン阻害剤（例えば、ベドリズマブ（Ｅｎｔｙｖｉｏ）、エトロリズマブ、ＰＮ－９４３、ＺＰ１００００、またはＭＯＲＦ－０５７）、またはスフィンゴシン－１－リン酸（Ｓ１Ｐ）受容体モジュレーター（例えば、フィンゴリモド、オザニモド、エトラシモド、またはアミセリモド）が含まれるが、これらに限定されない。
【実施例】
【0135】
以下の実施例は、本明細書に開示される実施形態のうちのいくつかを更に説明するために提供される。当該実施例は、開示された実施形態を例示することを意図しており、限定することを意図していない。
【0136】
実施例１、γδＴ細胞は、パネート細胞及び腸管オルガノイドを細胞死から保護する。
パネート細胞は、抗菌剤及び成長因子の産生を通じて上皮幹細胞ニッチを保護する小腸の分泌型ＩＥＣである。ＡＴＧ１６Ｌ１の共通Ｔ３００Ａバリアントを保有するマウス及びヒトの両方が、パネート細胞の喪失を表示する１，２。その後の研究は、腸管バリアにおけるパネート細胞の不可欠な役割を確認し、これらの重要な細胞の生物学のメカニズム的洞察を提供した３－７。
パネート細胞は、抗菌剤及び成長因子の産生を通じて上皮幹細胞ニッチを保護する小腸の分泌型ＩＥＣである。ＡＴＧ１６Ｌ１の共通Ｔ３００Ａバリアントを保有するマウス及びヒトの両方が、パネート細胞の喪失を表示する１，２。その後の研究は、腸管バリアにおけるパネート細胞の不可欠な役割を確認し、これらの重要な細胞の生物学のメカニズム的洞察を提供した３－７。
【0137】
クローン病のウイルス誘発性動物モデルでは、ＡＴＧ１６Ｌ１は、プログラムされた壊死の一形態であるＴＮＦα誘発性ネクロプト－シスをパネート細胞が受けるのを防止する３。マウス由来のＡｔｇ１６Ｌ１－／－エンテロイドを用いた機械的実験は、ＩＥＣネクロプトーシスが、自食作用の細胞プロセスにおけるＡＴＧ１６Ｌ１の既知の機能であるオルガネラホメオスタシスの欠陥の下流で生じることを示す。この細胞ストレス応答は、ＴＮＦαに応答して異常なＪＡＫ／ＳＴＡＴ及びＲＩＰＫシグナル伝達をもたらし、ＪＡＫ／ＳＴＡＴまたはＲＩＰＫ、またはＴＮＦαをブロックすることは、ウイルス感染したＡｔｇ１６Ｌ１変異体マウスにおいて、パネート細胞を回復させ、腸疾患を逆転させる。加えて、ＡＴＧ１６Ｌ１Ｔ３００Ａについてホモ接合したクローン病患者から生成された腸様体は、ＴＮＦα誘導細胞死に対して感受性があり、生存能は、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ及びＲＩＰＫシグナル伝達の化学的阻害剤によって回復した８。したがって、ＡＴＧ１６Ｌ１Ｔ３００Ａは、マウスと同様の様式でヒトＩＥＣにおける細胞死に対する感受性を付与する。
【0138】
Ａｔｇ１６Ｌ１－／－マウス（ｖｉｌｌｉｎ－Ｃｒｅ Ａｔｇ１６Ｌ１ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘマウス）から生成された３Ｄ腸管上皮オルガノイドは、クローン病の特徴であるパネート細胞の喪失を再現する。その後、パネート細胞の壊死細胞死は、オルガノイドの生存能の喪失につながる。図１Ａ～１Ｃは、γδＴ細胞がパネート細胞及び腸管オルガノイドを細胞死から保護することを示す。Ａｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイドへの皮内リンパ球（ＩＥＬ）の添加は、生存能（図１Ａ）及びパネート細胞の割合（図１Ｂ）を、対照Ａｔｇ１６Ｌ１＋／＋野生型オルガノイドと同様のレベルに回復させる。ＩＥＬには、免疫細胞型の不均一な群が含まれる。異なるＩＥＬサブタイプの中で、γδＴ細胞は、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイドの保護を媒介するものであった（図１Ｃ）。
【0139】
実施例２.γδＴ細胞の保護機能の阻害は、パネート細胞欠損と関連している
クローン病の前臨床動物モデルでは、マウスノロウイルス（ＭＮＶ）感染は、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－マウスにおけるパネート細胞及び下流腸疾患の喪失を誘発する。ＭＮＶは、γδＴ細胞移動性を阻害し、その活性が変化した兆候である（図２Ａ）。ＭＮＶ感染マウスではなく、未感染マウス由来のγδＴ細胞が、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイド生存能を促進し、ウイルスがこれらの細胞の保護効果を妨げることを示すことがわかった（図２Ｂ）。ＭＮＶが、γδＴ細胞を妨害することによって、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－マウスにおけるパネート細胞の喪失を引き起こす場合、これらのマウスからγδＴ細胞を除去することは、ウイルスのこの効果を模倣するべきである。実際、γδＴ細胞（Ｔｃｒｄ－／－）を欠くマウスとＡｔｇ１６Ｌ１－／－マウスを交配して作製したダブルノックアウトマウスは、パネート細胞の喪失を表示した。これらの結果は、単一のノックアウト対照と比較して、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－Ｔｃｒｄ－／－マウスにおいて、残りのパネート細胞がこの抗菌分子の異常な染色パターンを表示したことを示したリゾチーム免疫蛍光顕微鏡検査によって裏付けられた（図２Ｄ）。これらのデータは、γδＴ細胞の保護機能の阻害がパネート細胞欠損と関連していることを実証した。
クローン病の前臨床動物モデルでは、マウスノロウイルス（ＭＮＶ）感染は、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－マウスにおけるパネート細胞及び下流腸疾患の喪失を誘発する。ＭＮＶは、γδＴ細胞移動性を阻害し、その活性が変化した兆候である（図２Ａ）。ＭＮＶ感染マウスではなく、未感染マウス由来のγδＴ細胞が、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイド生存能を促進し、ウイルスがこれらの細胞の保護効果を妨げることを示すことがわかった（図２Ｂ）。ＭＮＶが、γδＴ細胞を妨害することによって、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－マウスにおけるパネート細胞の喪失を引き起こす場合、これらのマウスからγδＴ細胞を除去することは、ウイルスのこの効果を模倣するべきである。実際、γδＴ細胞（Ｔｃｒｄ－／－）を欠くマウスとＡｔｇ１６Ｌ１－／－マウスを交配して作製したダブルノックアウトマウスは、パネート細胞の喪失を表示した。これらの結果は、単一のノックアウト対照と比較して、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－Ｔｃｒｄ－／－マウスにおいて、残りのパネート細胞がこの抗菌分子の異常な染色パターンを表示したことを示したリゾチーム免疫蛍光顕微鏡検査によって裏付けられた（図２Ｄ）。これらのデータは、γδＴ細胞の保護機能の阻害がパネート細胞欠損と関連していることを実証した。
【0140】
実施例３.γδ Ｔ細胞からの分泌分子としてのＡＰＩ５の同定
ＦＡＣＳ選別されたＴＣＲγδ＋細胞（γδＴ細胞）及びＴＣＲαβ＋細胞（従来のＴ細胞）からの上清を質量分析によって分析した。合計１２００個のタンパク質を同定した。２つの試料中の重複及び異なるタンパク質の数を図３Ａに示す。ＳＴＲＩＮＧパスウェイ分析は、細胞外タンパク質の濃縮を示し（表３）、アプローチの妥当性を裏付けている。
ＦＡＣＳ選別されたＴＣＲγδ＋細胞（γδＴ細胞）及びＴＣＲαβ＋細胞（従来のＴ細胞）からの上清を質量分析によって分析した。合計１２００個のタンパク質を同定した。２つの試料中の重複及び異なるタンパク質の数を図３Ａに示す。ＳＴＲＩＮＧパスウェイ分析は、細胞外タンパク質の濃縮を示し（表３）、アプローチの妥当性を裏付けている。
【表3】
【0141】
表４は、ＴＣＲγδ＋細胞上清に固有の最も高いペプチドスペクトルマッチ（ＰＳＭ）を有するタンパク質を列挙する。ＡＰＩ５は、３０２タンパク質のトップヒットのうちにあり、更なる分析のために選択された。
【表4】
【0142】
実施例４.ＡＰＩ５は腸管オルガノイドを保護し、パネート細胞を回復させる。
組換えヒトＡＰＩ５（ｒｈＡＰＩ５）を、野生型ヒトＡＰＩ５タンパク質の残基１～４４８を使用して生成した。ヒトとマウスとの間のこの断片の配列同一性は、９９．３％（４４５／４４８）である（図７を参照されたい）。この断片を、Ｈｉｓ６（配列番号７８）、Ａｖｉタグ、及びＴＥＶプロテアーゼの切断部位をコードするＮ末端タグに融合した。ｒｈＡＰＩ５構築物を以下に示す。
ＷＴ ＡＰＩ５（ヒトＡＰＩ５の残基１～４４８）－Ｈｉｓ６（配列番号７８）、Ａｖｉ－タグ及びＴＥＶプロテアーゼの切断部位をコードするＮ末端タグは、下線が引かれている。
組換えヒトＡＰＩ５（ｒｈＡＰＩ５）を、野生型ヒトＡＰＩ５タンパク質の残基１～４４８を使用して生成した。ヒトとマウスとの間のこの断片の配列同一性は、９９．３％（４４５／４４８）である（図７を参照されたい）。この断片を、Ｈｉｓ６（配列番号７８）、Ａｖｉタグ、及びＴＥＶプロテアーゼの切断部位をコードするＮ末端タグに融合した。ｒｈＡＰＩ５構築物を以下に示す。
ＷＴ ＡＰＩ５（ヒトＡＰＩ５の残基１～４４８）－Ｈｉｓ６（配列番号７８）、Ａｖｉ－タグ及びＴＥＶプロテアーゼの切断部位をコードするＮ末端タグは、下線が引かれている。
【化1】
【0143】
Ｈｉｓタグ付きｒｈＡＰＩ５を、エンドトキシンを低減する洗浄ステップも含む標準手順を使用して、Ｎｉ－セファロースカラムで構築物を発現するＥ．ｃｏｌｉから精製した。タンパク質を、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して更に精製した。
【0144】
図４Ａに示すように、５０ｎＭの組換えヒトＡＰＩ５（ｒｈＡＰＩ５）は、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイド生存能を回復させる。Ｈ＆Ｅ染色（図４Ｂ）は、ｒｈＡＰＩ５がパネート細胞を回復させることを実証した。オルガノイド当たりの絶対パネ－ト細胞数（図４Ｃ）及び全腸管上皮細胞（ＩＥＣ）のパーセント（図４Ｄ）の定量化は、パネ－ト細胞の回復を確認した。全ＩＥＣが増加せず（図４Ｅ）、ｒＡＰＩ５の効果がパネート細胞特異的であり、非特異的成長因子としてではないことを示す。図１Ａに示すように、ＩＥＬは、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイドを保護する。ＡＰＩ５が抗体で枯渇しているＩＥＬ上清を添加することは、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイド死を悪化させ、枯渇した上清にｒＡＰＩ５を添加することは、無傷のＩＥＬ上清と同様の保護をもたらす（対照ｓｕｐ）（図４Ｆ）。
【0145】
実施例５.ＡＰＩ５の結合界面残基は、保護効果に必要である
突然変異をＡＰＩ５に導入して、利用可能な結晶構造に基づいてタンパク質相互作用を媒介すると予測される表面残基の役割を試験した。変異体１は、凹面上の疎水性残基を標的としたＹ８Ｋ；Ｙ１１Ｋのアミノ酸変化を有するＡＰＩ５をコードする。変異体２は、表面電荷を変化させるＥ１８４Ｋ；Ｄ１８５Ｋのアミノ酸変化を有するＡＰＩ５をコードする。変異体３は、４つ全てのアミノ酸変化を組み合わせる。変異体構築物を以下に提供する。変異体ｒｈＡＰＩ５タンパク質を実施例４に記載されるように同様に精製した。
ＡＰＩ５（Ｙ８Ｋ；Ｙ１１Ｋ）－太字の突然変異；Ｈｉｓ６（配列番号７８）をコードするＮ末端タグ、Ａｖｉタグ、及びＴＥＶプロテアーゼの切断部位に下線が引かれている。
ＡＰＩ５（Ｅ１８４Ｋ；Ｄ１８５Ｋ）－太字の突然変異；Ｈｉｓ６（配列番号７８）をコードするＮ末端タグ、Ａｖｉタグ、及びＴＥＶプロテアーゼの切断部位に下線が引かれている。
ＡＰＩ５（Ｙ８Ｋ；Ｙ１１Ｋ；Ｅ１８４Ｋ；Ｄ１８５Ｋ）－太字の突然変異；Ｈｉｓ６（配列番号７８）をコードするＮ末端タグ、Ａｖｉタグ、及びＴＥＶプロテアーゼの切断部位に下線が引かれている。
突然変異をＡＰＩ５に導入して、利用可能な結晶構造に基づいてタンパク質相互作用を媒介すると予測される表面残基の役割を試験した。変異体１は、凹面上の疎水性残基を標的としたＹ８Ｋ；Ｙ１１Ｋのアミノ酸変化を有するＡＰＩ５をコードする。変異体２は、表面電荷を変化させるＥ１８４Ｋ；Ｄ１８５Ｋのアミノ酸変化を有するＡＰＩ５をコードする。変異体３は、４つ全てのアミノ酸変化を組み合わせる。変異体構築物を以下に提供する。変異体ｒｈＡＰＩ５タンパク質を実施例４に記載されるように同様に精製した。
ＡＰＩ５（Ｙ８Ｋ；Ｙ１１Ｋ）－太字の突然変異；Ｈｉｓ６（配列番号７８）をコードするＮ末端タグ、Ａｖｉタグ、及びＴＥＶプロテアーゼの切断部位に下線が引かれている。
【化2】
【化3】
【化4】
【0146】
図５に示すように、最初の２つの棒グラフは、５０ｎＭの組換えヒト野生型ＡＰＩ５（ｒｈＡＰＩ５）が、前述のようにＡｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイド生存能を回復させることを示す対照である。ｒｈＡＰＩ５バリアントは、最大５００ｎＭの過剰なタンパク質を添加しても、保護活性を無効にした。これらの結果は、ＡＰＩ５の保護効果の特異性を裏付けている。
【0147】
実施例６.ＡＰＩ５は、ＴＮＦα誘発性の上皮生存能の喪失を防止する
ＴＮＦαブロックは、クローン病の主要な治療法であり、前臨床Ａｔｇ１６Ｌ１変異体動物モデルにおける疾患も改善する。Ａｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイドは、パネート細胞の喪失により、２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦαの存在下で悪化した壊死性細胞死を経験するが、対照オルガノイドは耐性がある。５０ｎＭのｒｈＡＰＩ５を投与することは、ＴＮＦαの毒性効果を防止し、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイドの生存能を改善する（図６）。
ＴＮＦαブロックは、クローン病の主要な治療法であり、前臨床Ａｔｇ１６Ｌ１変異体動物モデルにおける疾患も改善する。Ａｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイドは、パネート細胞の喪失により、２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦαの存在下で悪化した壊死性細胞死を経験するが、対照オルガノイドは耐性がある。５０ｎＭのｒｈＡＰＩ５を投与することは、ＴＮＦαの毒性効果を防止し、Ａｔｇ１６Ｌ１－／－オルガノイドの生存能を改善する（図６）。
【0148】
実施例７.ＡＰＩ５は、パネート細胞喪失を防止し、Ａｔｇ１６Ｌ１変異体マウスにおける腸管損傷から保護する。
ＡＰＩ５がオルガノイドの細胞死を防止し、インビトロでパネート細胞を回復させるという所見に基づいて、インビボ研究を行い、ＡＰＩ５が動物モデルにおいて同様の保護機能を有するかどうかを調べた。ｒＡＰＩ５を、ＡＰＩ５を分泌するＴ細胞を欠くγδＴ細胞（Ａｔｇ１６Ｌ１ΔＩＥＣＴＣＲδ－／－）を欠くＡｔｇ１６Ｌ１変異体マウスに注射したところ、パネート細胞が回復し、細胞死が減少したことがわかった（図８Ａ）。次いで、部分的なＡＰＩ５欠損（Ａｔｇ１６Ｌ１ΔＩＥＣＡｐｉ５＋／－）を有するＡｔｇ１６Ｌ１変異体マウスを生成した。部分的な欠損は、ウェスタンブロット分析によって確認されるように、γδＴ細胞によるＡＰＩ５の分泌の減少をもたらす（図８Ｂ）。変異体マウスは、パネート細胞において減少を表示し（図８Ｃ）、残りのパネート細胞は、形態的に異常である（図８Ｄ）。これらの結果は、ＡＰＩ５がインビボでのパネート細胞異常を予防するために必要であり、ＡＰＩ５の量が役割を果たすことを示した。最後に、独立した前臨床モデルにおいて、ＡＰＩ５の治療的潜在性を試験した。Ａｔｇ１６Ｌ１がパネート細胞から欠失される（ｄｅｆｅｎｓｉｎ－Ｃｒｅ Ａｔｇ１６Ｌ１ｆ／ｆ）Ａｔｇ１６Ｌ１ΔＰＣマウス株が選択されたのは、これらのマウスは、ＡＰＩ５またはγδＴ細胞において欠失を有さないからであり、追加のＡＰＩ５を提供することが治療的であるかどうかの調査が可能になる。ｒＡＰＩ５の投与は、疾患の完全な逆転をもたらした（図８Ｅ及び８Ｆ）。遺伝的病変はパネス細胞に限定されているため、これらの結果は、これらの重要な上皮細胞に対するｒＡＰＩ５治療の特異性の更なる証拠を提供した。ともに、３つの異なる変異体マウス株を使用したこれらの結果は、治療のためのＡＰＩ５の標的化を裏付ける。
参考文献
１．Ｃａｄｗｅｌｌ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，２５９（２００８）．
２．Ｃａｄｗｅｌｌ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ １１３５（２０１０）．
３．Ｍａｔｓｕｚａｗａ－Ｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，３６８７（２０１７）．
４．Ａｄｏｌｐｈ，Ｔ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，２７２（２０１３）．
５．Ｂｅｌ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ １０４７（２０１７）．
６．Ｌａｓｓｅｎ，Ｋ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ ７７４１（２０１４）．
７．ＶａｎＤｕｓｓｅｎ，Ｋ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ２００（２０１４）．
８．Ｍａｔｓｕｚａｗａ－Ｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ２３８８（２０２０）．
＊ ＊ ＊
ＡＰＩ５がオルガノイドの細胞死を防止し、インビトロでパネート細胞を回復させるという所見に基づいて、インビボ研究を行い、ＡＰＩ５が動物モデルにおいて同様の保護機能を有するかどうかを調べた。ｒＡＰＩ５を、ＡＰＩ５を分泌するＴ細胞を欠くγδＴ細胞（Ａｔｇ１６Ｌ１ΔＩＥＣＴＣＲδ－／－）を欠くＡｔｇ１６Ｌ１変異体マウスに注射したところ、パネート細胞が回復し、細胞死が減少したことがわかった（図８Ａ）。次いで、部分的なＡＰＩ５欠損（Ａｔｇ１６Ｌ１ΔＩＥＣＡｐｉ５＋／－）を有するＡｔｇ１６Ｌ１変異体マウスを生成した。部分的な欠損は、ウェスタンブロット分析によって確認されるように、γδＴ細胞によるＡＰＩ５の分泌の減少をもたらす（図８Ｂ）。変異体マウスは、パネート細胞において減少を表示し（図８Ｃ）、残りのパネート細胞は、形態的に異常である（図８Ｄ）。これらの結果は、ＡＰＩ５がインビボでのパネート細胞異常を予防するために必要であり、ＡＰＩ５の量が役割を果たすことを示した。最後に、独立した前臨床モデルにおいて、ＡＰＩ５の治療的潜在性を試験した。Ａｔｇ１６Ｌ１がパネート細胞から欠失される（ｄｅｆｅｎｓｉｎ－Ｃｒｅ Ａｔｇ１６Ｌ１ｆ／ｆ）Ａｔｇ１６Ｌ１ΔＰＣマウス株が選択されたのは、これらのマウスは、ＡＰＩ５またはγδＴ細胞において欠失を有さないからであり、追加のＡＰＩ５を提供することが治療的であるかどうかの調査が可能になる。ｒＡＰＩ５の投与は、疾患の完全な逆転をもたらした（図８Ｅ及び８Ｆ）。遺伝的病変はパネス細胞に限定されているため、これらの結果は、これらの重要な上皮細胞に対するｒＡＰＩ５治療の特異性の更なる証拠を提供した。ともに、３つの異なる変異体マウス株を使用したこれらの結果は、治療のためのＡＰＩ５の標的化を裏付ける。
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＊ ＊ ＊
【0149】
本開示は、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲を限定されるものではない。本明細書に説明されるものに加えて、本発明の種々の修正は、前述の説明から当業者には明らかとなるであろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。
【0150】
本明細書で引用されるすべての特許、出願、刊行物、試験方法、文献、及び他の資料は、本明細書に物理的に存在するかのように、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
配列の一覧
配列番号１ ヒトＡＰＩ５
ＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＴＦＮＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＧＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫＶＥＩＧＱＫＲＡＳＥＤＴＴＳＧＳＰＰＫＫＳＳＡＧＰＫＲＤＡＲＱＩＹＮＰＰＳＧＫＹＳＳＮＬＧＮＦＮＹＥＱＲＧＡＦＲＧＳＲＧＧＲＧＷＧＴＲＧＮＲＳＲＧＲＬＹ
配列番号２ マウスＡＰＩ５
ＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＡＦＳＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＳＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫＶＥＩＧＱＫＲＴＳＥＤＴＳＳＧＳＰＰＫＫＳＰＧＧＰＫＲＤＡＲＱＩＹＮＰＰＳＧＫＹＳＳＮＬＳＮＦＮＹＥＲＳＬＱＧＫ
配列番号３ ＷＴ ＡＰＩ５（残基１～４４８）構築物
ＭＫＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥＥＮＬＹＦＱＧＳＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＴＦＮＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＧＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫ
配列番号４ ＡＰＩ５（Ｙ８Ｋ；Ｙ１１Ｋ）構築物
ＭＫＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥＥＮＬＹＦＱＧＳＭＰＴＶＥＥＬＫＲＮＫＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＴＦＮＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＧＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫ
配列番号５ ＡＰＩ５（Ｅ１８４Ｋ；Ｄ１８５Ｋ）構築物
ＭＫＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥＥＮＬＹＦＱＧＳＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＫＫＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＴＦＮＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＧＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫ
配列番号６ ＡＰＩ５（残基１～２０６）構築物
ＭＫＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥＥＮＬＹＦＱＧＳＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴ
配列番号７ ＷＴ ＡＰＩ５（残基１～４４８）
ＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＴＦＮＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＧＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫ
配列番号８ ＡＰＩ５（残基１～２０６）
ＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴ
配列番号９ Ｈｉｓ６（配列番号７８）＋Ａｖｉタグ
ＭＫＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ
配列番号１０ ＴＥＶ切断部位
ＥＮＬＹＦＱＧＳ
配列番号１１ ＡＰＩ５（Ｙ８Ｋ；Ｙ１１Ｋ；Ｅ１８４Ｋ；Ｄ１８５Ｋ）構築物
ＭＫＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥＥＮＬＹＦＱＧＳＭＰＴＶＥＥＬＫＲＮＫＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＫＫＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＴＦＮＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＧＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫ
配列番号１２ アルブミン結合ペプチド
ＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷ
配列番号１３ アルブミン結合ペプチド
Ａｃ－ＲＬＩＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤＤ－ＮＨ２
配列番号１４ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＬＭＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤＤＦ－ＮＨ２
配列番号１５ アルブミン結合ペプチド
Ａｃ－ＱＧＬＩＧＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＤＳＶＫ－ＮＨ２
配列番号１６ アルブミン結合ペプチド
ＧＥＷＷＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＥＥＤ－ＮＨ２
配列番号１７ アルブミン結合ペプチド
Ａｃ－ＱＲＬＩＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤＤＦ－ＮＨ２
配列番号１８ アルブミン結合ペプチド
Ａｃ－ＲＬＩＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤ－ＮＨ２
配列番号１９ アルブミン結合ペプチド
Ａｃ－ＲＬＩＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥ－ＮＨ２
配列番号２０ アルブミン結合ペプチド
Ａｃ－ＲＬＩＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷ－ＮＨ２
配列番号２１ アルブミン結合ペプチド
Ａｃ－ＬＩＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤ－ＮＨ２
配列番号２２ アルブミン結合ペプチド
ＥＶＲＳＦＣＴＤＷＰＡＥＫＳＣＫＰＬＲＧ
配列番号２３ アルブミン結合ペプチド
ＲＡＰＥＳＦＶＣＹＷＥＴＩＣＦＥＲＳＥＱ
配列番号２４ アルブミン結合ペプチド
ＥＭＣＹＦＰＧＩＣＷＭ
配列番号２５ アルブミン結合ペプチド
ＧＥＮＷＣＤＳＴＬＭＡＹＤＬＣＧＱＶＮＭ
配列番号２６ アルブミン結合ペプチド
ＭＤＥＬＡＦＹＣＧＩＷＥＣＬＭＨＱＥＱＫ
配列番号２７ アルブミン結合ペプチド
ＤＬＣＤＶＤＦＣＷＦ
配列番号２８ アルブミン結合ペプチド
ＫＳＣＳＥＬＨＷＬＬＶＥＥＣＬＦ
配列番号２９ アルブミン結合ペプチド
ＲＮＥＤＰＣＶＶＬＬＥＭＧＬＥＣＷＥＧＶ
配列番号３０ アルブミン結合ペプチド
ＤＴＣＶＤＬＶＲＬＧＬＥＣＷＧ
配列番号３１ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＱＭＶＤＦＣＬＰＱＷＧＣＬＷＧＤＧＦ
配列番号３２ アルブミン結合ペプチド
ＤＬＣＬＲＤＷＧＣＬＷ
配列番号３３ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＱＭＶＤＦＣＬＰＱＷＧＣＬＷＧＤＧＦ
配列番号３４ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＨＰＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＤＤＤ
配列番号３５ アルブミン結合ペプチド
ＮＲＱＭＥＤＩＣＬＰＱＷＧＣＬＷＧＤＤＦ
配列番号３６ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＬＭＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＤＲＦ
配列番号３７ アルブミン結合ペプチド
ＱＷＨＭＥＤＩＣＬＰＱＷＧＣＬＷＧＤＶＬ
配列番号３８ アルブミン結合ペプチド
ＱＷＱＭＥＮＶＣＬＰＫＷＧＣＬＷＥＥＬＤ
配列番号３９ アルブミン結合ペプチド
ＬＷＡＭＥＤＩＣＬＰＫＷＧＣＬＷＥＤＤＦ
配列番号４０ アルブミン結合ペプチド
ＬＲＬＭＤＮＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＤＤＧＦ
配列番号４１ アルブミン結合ペプチド
ＨＳＱＭＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＤＥＬ
配列番号４２ アルブミン結合ペプチド
ＱＷＱＶＭＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＡＤＥＹ
配列番号４３ アルブミン結合ペプチド
ＱＧＬＩＧＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＤＳＶ
配列番号４４ アルブミン結合ペプチド
ＨＲＬＶＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＮＤＦ
配列番号４５ アルブミン結合ペプチド
ＱＭＨＭＭＤＩＣＬＰＫＷＧＣＬＷＧＤＴＳ
配列番号４６ アルブミン結合ペプチド
ＬＲＩＦＥＤＩＣＬＰＫＷＧＣＬＷＧＥＧＦ
配列番号４７ アルブミン結合ペプチド
ＱＳＹＭＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＳＤＤＡＳ
配列番号４８ アルブミン結合ペプチド
ＱＧＤＦＷＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＳＧＥＧＹ
配列番号４９ アルブミン結合ペプチド
ＲＷＱＴＥＤＶＣＬＰＫＷＧＣＬＦＧＤＧＶ
配列番号５０ アルブミン結合ペプチド
ＱＧＬＩＧＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＤＳＶ
配列番号５１ アルブミン結合ペプチド
ＬＩＦＭＥＤＶＣＬＰＱＷＧＣＬＷＥＤＧＶ
配列番号５２ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＤＭＧＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤＧＶ
配列番号５３ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＨＭＭＤＦＣＬＰＫＷＧＣＬＷＧＤＧＹ
配列番号５４ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＰＩＭＤＦＣＬＰＫＷＧＣＬＷＥＤＧＦ
配列番号５５ アルブミン結合ペプチド
ＥＲＱＭＶＤＦＣＬＰＫＷＧＣＬＷＧＤＧＦ
配列番号５６ アルブミン結合ペプチド
ＱＧＹＭＶＤＦＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＤＡＮ
配列番号５７ アルブミン結合ペプチド
ＫＭＧＲＶＤＦＣＬＰＫＷＧＣＬＷＧＤＥＬ
配列番号５８ アルブミン結合ペプチド
ＱＳＱＬＥＤＦＣＬＰＫＷＧＣＬＷＧＤＧＦ
配列番号５９ アルブミン結合ペプチド
ＱＧＧＭＧＤＦＣＬＰＱＷＧＣＬＷＧＥＤＬ
配列番号６０ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＬＭＷＥＩＣＬＰＬＷＧＣＬＷＧＤＧＬ
配列番号６１ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＱＩＭＤＦＣＬＰＨＷＧＣＬＷＧＤＧＦ
配列番号６２ アルブミン結合ペプチド
ＧＲＱＶＶＤＦＣＬＰＫＷＧＣＬＷＥＥＧＬ
配列番号６３ アルブミン結合ペプチド
ＱＭＱＭＳＤＦＣＬＰＱＷＧＣＬＷＧＤＧＹ
配列番号６４ アルブミン結合ペプチド
ＫＳＲＭＧＤＦＣＬＰＥＷＧＣＬＷＧＤＥＬ
配列番号６５ アルブミン結合ペプチド
ＥＲＱＭＥＤＦＣＬＰＱＷＧＣＬＷＧＤＧＶ
配列番号６６ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＱＶＶＤＦＣＬＰＱＷＧＣＬＷＧＤＧＳ
配列番号６７ アルブミン結合ペプチド
Ａｃ－ＷＷＥＱＤＲＤＷＤＦＤＶＦＧＧＧＴＰ－ＮＨ２
配列番号６８ アルブミン結合ペプチド
フルオレセイン－ＥＹＥＫ（パルミチン酸塩）ＥＹＥ－ＮＨ２
配列番号６９ アルブミン結合ペプチド
Ａｃ－ＲＬＩＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤＤ－ＮＨ２
配列番号７０ アルブミン結合ペプチド
ＡＫ＊Ｋ＊ＰＧＫ＊ＡＫ＊ＰＧ
配列番号７１ ＩｇＧ Ｆｃ
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＥＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫ ＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号７２ ＩｇＧ Ｆｃバリアント
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫ ＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＳＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号７３ リンカー
ＧＳＧＥＧＥＧＳＥＧＳＧ
配列番号７４ リンカー
ＧＧＳＥＧＥＧＳＥＧＧＳ
配列番号７５ リンカー
ＧＧＧＧＳ
配列番号７６
ＭＧＶＳＤＶＰＲＤＬＥＶＶＡＡＴＰＴＳＬＬＩＳＷＤＡＰＡＶＴＶＲＹＹＲＩＴＹＧＲＥＶＱＫＹＳＤＬＧＰＬＹＩＹＱＥＦＴＶＰＧＳＫＳＴＡＴＩＳＧＬＫＰＧＶＤＹＴＩＴＶＹＡＶＴＧＳＧＥＳＰＡＳＳＫＰＩＳＩＮＹＲＴＥＩＤＫ
配列番号７７
ＭＧＶＳＤＶＰＲＤＬＥＶＶＡＡＴＰＴＳＬＬＩＳＷＤＡＰＡＶＴＶＲＹＹＲＩＴＹＧＲＥＶＱＫＹＳＤＷＧＰＬＹＩＹＮＥＦＴＶＰＧＳＫＳＴＡＴＩＳＧＬＫＰＧＶＤＹＴＩＴＶＹＡＶＴＧＳＧＥＳＰＡＳＳＫＰＩＳＩＮＹＲＴＥＩＤＫ
配列の一覧
配列番号１ ヒトＡＰＩ５
ＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＴＦＮＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＧＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫＶＥＩＧＱＫＲＡＳＥＤＴＴＳＧＳＰＰＫＫＳＳＡＧＰＫＲＤＡＲＱＩＹＮＰＰＳＧＫＹＳＳＮＬＧＮＦＮＹＥＱＲＧＡＦＲＧＳＲＧＧＲＧＷＧＴＲＧＮＲＳＲＧＲＬＹ
配列番号２ マウスＡＰＩ５
ＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＡＦＳＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＳＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫＶＥＩＧＱＫＲＴＳＥＤＴＳＳＧＳＰＰＫＫＳＰＧＧＰＫＲＤＡＲＱＩＹＮＰＰＳＧＫＹＳＳＮＬＳＮＦＮＹＥＲＳＬＱＧＫ
配列番号３ ＷＴ ＡＰＩ５（残基１～４４８）構築物
ＭＫＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥＥＮＬＹＦＱＧＳＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＴＦＮＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＧＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫ
配列番号４ ＡＰＩ５（Ｙ８Ｋ；Ｙ１１Ｋ）構築物
ＭＫＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥＥＮＬＹＦＱＧＳＭＰＴＶＥＥＬＫＲＮＫＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＴＦＮＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＧＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫ
配列番号５ ＡＰＩ５（Ｅ１８４Ｋ；Ｄ１８５Ｋ）構築物
ＭＫＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥＥＮＬＹＦＱＧＳＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＫＫＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＴＦＮＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＧＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫ
配列番号６ ＡＰＩ５（残基１～２０６）構築物
ＭＫＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥＥＮＬＹＦＱＧＳＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴ
配列番号７ ＷＴ ＡＰＩ５（残基１～４４８）
ＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＴＦＮＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＧＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫ
配列番号８ ＡＰＩ５（残基１～２０６）
ＭＰＴＶＥＥＬＹＲＮＹＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＥＤＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴ
配列番号９ Ｈｉｓ６（配列番号７８）＋Ａｖｉタグ
ＭＫＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ
配列番号１０ ＴＥＶ切断部位
ＥＮＬＹＦＱＧＳ
配列番号１１ ＡＰＩ５（Ｙ８Ｋ；Ｙ１１Ｋ；Ｅ１８４Ｋ；Ｄ１８５Ｋ）構築物
ＭＫＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥＥＮＬＹＦＱＧＳＭＰＴＶＥＥＬＫＲＮＫＧＩＬＡＤＡＴＥＱＶＧＱＨＫＤＡＹＱＶＩＬＤＧＶＫＧＧＴＫＥＫＲＬＡＡＱＦＩＰＫＦＦＫＨＦＰＥＬＡＤＳＡＩＮＡＱＬＤＬＣＥＤＥＤＶＳＩＲＲＱＡＩＫＥＬＰＱＦＡＴＧＥＮＬＰＲＶＡＤＩＬＴＱＬＬＱＴＤＤＳＡＥＦＮＬＶＮＮＡＬＬＳＩＦＫＭＤＡＫＧＴＬＧＧＬＦＳＱＩＬＱＧＥＤＩＶＲＥＲＡＩＫＦＬＳＴＫＬＫＴＬＰＤＥＶＬＴＫＥＶＥＥＬＩＬＴＥＳＫＫＶＬＫＫＶＴＧＥＥＦＶＬＦＭＫＩＬＳＧＬＫＳＬＱＴＶＳＧＲＱＱＬＶＥＬＶＡＥＱＡＤＬＥＱＴＦＮＰＳＤＰＤＣＶＤＲＬＬＱＣＴＲＱＡＶＰＬＦＳＫＮＶＨＳＴＲＦＶＴＹＦＣＥＱＶＬＰＮＬＧＴＬＴＴＰＶＥＧＬＤＩＱＬＥＶＬＫＬＬＡＥＭＳＳＦＣＧＤＭＥＫＬＥＴＮＬＲＫＬＦＤＫＬＬＥＹＭＰＬＰＰＥＥＡＥＮＧＥＮＡＧＮＥＥＰＫＬＱＦＳＹＶＥＣＬＬＹＳＦＨＱＬＧＲＫＬＰＤＦＬＴＡＫＬＮＡＥＫＬＫＤＦＫＩＲＬＱＹＦＡＲＧＬＱＶＹＩＲＱＬＲＬＡＬＱＧＫＴＧＥＡＬＫＴＥＥＮＫＩＫＶＶＡＬＫＩＴＮＮＩＮＶＬＩＫＤＬＦＨＩＰＰＳＹＫＳＴＶＴＬＳＷＫＰＶＱＫ
配列番号１２ アルブミン結合ペプチド
ＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷ
配列番号１３ アルブミン結合ペプチド
Ａｃ－ＲＬＩＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤＤ－ＮＨ２
配列番号１４ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＬＭＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤＤＦ－ＮＨ２
配列番号１５ アルブミン結合ペプチド
Ａｃ－ＱＧＬＩＧＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＤＳＶＫ－ＮＨ２
配列番号１６ アルブミン結合ペプチド
ＧＥＷＷＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＥＥＤ－ＮＨ２
配列番号１７ アルブミン結合ペプチド
Ａｃ－ＱＲＬＩＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤＤＦ－ＮＨ２
配列番号１８ アルブミン結合ペプチド
Ａｃ－ＲＬＩＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤ－ＮＨ２
配列番号１９ アルブミン結合ペプチド
Ａｃ－ＲＬＩＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥ－ＮＨ２
配列番号２０ アルブミン結合ペプチド
Ａｃ－ＲＬＩＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷ－ＮＨ２
配列番号２１ アルブミン結合ペプチド
Ａｃ－ＬＩＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤ－ＮＨ２
配列番号２２ アルブミン結合ペプチド
ＥＶＲＳＦＣＴＤＷＰＡＥＫＳＣＫＰＬＲＧ
配列番号２３ アルブミン結合ペプチド
ＲＡＰＥＳＦＶＣＹＷＥＴＩＣＦＥＲＳＥＱ
配列番号２４ アルブミン結合ペプチド
ＥＭＣＹＦＰＧＩＣＷＭ
配列番号２５ アルブミン結合ペプチド
ＧＥＮＷＣＤＳＴＬＭＡＹＤＬＣＧＱＶＮＭ
配列番号２６ アルブミン結合ペプチド
ＭＤＥＬＡＦＹＣＧＩＷＥＣＬＭＨＱＥＱＫ
配列番号２７ アルブミン結合ペプチド
ＤＬＣＤＶＤＦＣＷＦ
配列番号２８ アルブミン結合ペプチド
ＫＳＣＳＥＬＨＷＬＬＶＥＥＣＬＦ
配列番号２９ アルブミン結合ペプチド
ＲＮＥＤＰＣＶＶＬＬＥＭＧＬＥＣＷＥＧＶ
配列番号３０ アルブミン結合ペプチド
ＤＴＣＶＤＬＶＲＬＧＬＥＣＷＧ
配列番号３１ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＱＭＶＤＦＣＬＰＱＷＧＣＬＷＧＤＧＦ
配列番号３２ アルブミン結合ペプチド
ＤＬＣＬＲＤＷＧＣＬＷ
配列番号３３ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＱＭＶＤＦＣＬＰＱＷＧＣＬＷＧＤＧＦ
配列番号３４ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＨＰＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＤＤＤ
配列番号３５ アルブミン結合ペプチド
ＮＲＱＭＥＤＩＣＬＰＱＷＧＣＬＷＧＤＤＦ
配列番号３６ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＬＭＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＤＲＦ
配列番号３７ アルブミン結合ペプチド
ＱＷＨＭＥＤＩＣＬＰＱＷＧＣＬＷＧＤＶＬ
配列番号３８ アルブミン結合ペプチド
ＱＷＱＭＥＮＶＣＬＰＫＷＧＣＬＷＥＥＬＤ
配列番号３９ アルブミン結合ペプチド
ＬＷＡＭＥＤＩＣＬＰＫＷＧＣＬＷＥＤＤＦ
配列番号４０ アルブミン結合ペプチド
ＬＲＬＭＤＮＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＤＤＧＦ
配列番号４１ アルブミン結合ペプチド
ＨＳＱＭＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＤＥＬ
配列番号４２ アルブミン結合ペプチド
ＱＷＱＶＭＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＡＤＥＹ
配列番号４３ アルブミン結合ペプチド
ＱＧＬＩＧＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＤＳＶ
配列番号４４ アルブミン結合ペプチド
ＨＲＬＶＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＮＤＦ
配列番号４５ アルブミン結合ペプチド
ＱＭＨＭＭＤＩＣＬＰＫＷＧＣＬＷＧＤＴＳ
配列番号４６ アルブミン結合ペプチド
ＬＲＩＦＥＤＩＣＬＰＫＷＧＣＬＷＧＥＧＦ
配列番号４７ アルブミン結合ペプチド
ＱＳＹＭＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＳＤＤＡＳ
配列番号４８ アルブミン結合ペプチド
ＱＧＤＦＷＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＳＧＥＧＹ
配列番号４９ アルブミン結合ペプチド
ＲＷＱＴＥＤＶＣＬＰＫＷＧＣＬＦＧＤＧＶ
配列番号５０ アルブミン結合ペプチド
ＱＧＬＩＧＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＤＳＶ
配列番号５１ アルブミン結合ペプチド
ＬＩＦＭＥＤＶＣＬＰＱＷＧＣＬＷＥＤＧＶ
配列番号５２ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＤＭＧＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤＧＶ
配列番号５３ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＨＭＭＤＦＣＬＰＫＷＧＣＬＷＧＤＧＹ
配列番号５４ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＰＩＭＤＦＣＬＰＫＷＧＣＬＷＥＤＧＦ
配列番号５５ アルブミン結合ペプチド
ＥＲＱＭＶＤＦＣＬＰＫＷＧＣＬＷＧＤＧＦ
配列番号５６ アルブミン結合ペプチド
ＱＧＹＭＶＤＦＣＬＰＲＷＧＣＬＷＧＤＡＮ
配列番号５７ アルブミン結合ペプチド
ＫＭＧＲＶＤＦＣＬＰＫＷＧＣＬＷＧＤＥＬ
配列番号５８ アルブミン結合ペプチド
ＱＳＱＬＥＤＦＣＬＰＫＷＧＣＬＷＧＤＧＦ
配列番号５９ アルブミン結合ペプチド
ＱＧＧＭＧＤＦＣＬＰＱＷＧＣＬＷＧＥＤＬ
配列番号６０ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＬＭＷＥＩＣＬＰＬＷＧＣＬＷＧＤＧＬ
配列番号６１ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＱＩＭＤＦＣＬＰＨＷＧＣＬＷＧＤＧＦ
配列番号６２ アルブミン結合ペプチド
ＧＲＱＶＶＤＦＣＬＰＫＷＧＣＬＷＥＥＧＬ
配列番号６３ アルブミン結合ペプチド
ＱＭＱＭＳＤＦＣＬＰＱＷＧＣＬＷＧＤＧＹ
配列番号６４ アルブミン結合ペプチド
ＫＳＲＭＧＤＦＣＬＰＥＷＧＣＬＷＧＤＥＬ
配列番号６５ アルブミン結合ペプチド
ＥＲＱＭＥＤＦＣＬＰＱＷＧＣＬＷＧＤＧＶ
配列番号６６ アルブミン結合ペプチド
ＱＲＱＶＶＤＦＣＬＰＱＷＧＣＬＷＧＤＧＳ
配列番号６７ アルブミン結合ペプチド
Ａｃ－ＷＷＥＱＤＲＤＷＤＦＤＶＦＧＧＧＴＰ－ＮＨ２
配列番号６８ アルブミン結合ペプチド
フルオレセイン－ＥＹＥＫ（パルミチン酸塩）ＥＹＥ－ＮＨ２
配列番号６９ アルブミン結合ペプチド
Ａｃ－ＲＬＩＥＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷＥＤＤ－ＮＨ２
配列番号７０ アルブミン結合ペプチド
ＡＫ＊Ｋ＊ＰＧＫ＊ＡＫ＊ＰＧ
配列番号７１ ＩｇＧ Ｆｃ
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＥＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫ ＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号７２ ＩｇＧ Ｆｃバリアント
ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫ ＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＬＨＥＡＬＨＳＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号７３ リンカー
ＧＳＧＥＧＥＧＳＥＧＳＧ
配列番号７４ リンカー
ＧＧＳＥＧＥＧＳＥＧＧＳ
配列番号７５ リンカー
ＧＧＧＧＳ
配列番号７６
ＭＧＶＳＤＶＰＲＤＬＥＶＶＡＡＴＰＴＳＬＬＩＳＷＤＡＰＡＶＴＶＲＹＹＲＩＴＹＧＲＥＶＱＫＹＳＤＬＧＰＬＹＩＹＱＥＦＴＶＰＧＳＫＳＴＡＴＩＳＧＬＫＰＧＶＤＹＴＩＴＶＹＡＶＴＧＳＧＥＳＰＡＳＳＫＰＩＳＩＮＹＲＴＥＩＤＫ
配列番号７７
ＭＧＶＳＤＶＰＲＤＬＥＶＶＡＡＴＰＴＳＬＬＩＳＷＤＡＰＡＶＴＶＲＹＹＲＩＴＹＧＲＥＶＱＫＹＳＤＷＧＰＬＹＩＹＮＥＦＴＶＰＧＳＫＳＴＡＴＩＳＧＬＫＰＧＶＤＹＴＩＴＶＹＡＶＴＧＳＧＥＳＰＡＳＳＫＰＩＳＩＮＹＲＴＥＩＤＫ
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図2C】
【図2D】
【図3】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図4D】
【図4E】
【図4F】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8A】
【図8B】
【図8C】
【図8D】
【図8E】
【図8F】
【配列表】
【国際調査報告】