特表 2024-509543 ＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質の製剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-04

(54)【発明の名称】ＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質の製剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/48 20060101AFI20240226BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20240226BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20240226BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20240226BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20240226BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20240226BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20240226BHJP

   C07K 14/47 20060101ALI20240226BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240226BHJP

   C07K 16/00 20060101ALI20240226BHJP

【ＦＩ】

A61K38/48 ZNA

A61K9/08

A61K47/02

A61K47/12

A61K47/18

A61K47/26

A61P31/14

C07K14/47

C07K19/00

C07K16/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023553406

(86)(22)【出願日】2022-03-03

(85)【翻訳文提出日】2023-10-26

(86)【国際出願番号】 EP2022055457

(87)【国際公開番号】W WO2022184854

(87)【国際公開日】2022-09-09

(31)【優先権主張番号】21160545.6

(32)【優先日】2021-03-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】516338305

【氏名又は名称】フォーマイコン アーゲー

【氏名又は名称原語表記】ＦＯＲＭＹＣＯＮ ＡＧ

(74)【代理人】

【識別番号】100105957

【弁理士】

【氏名又は名称】恩田 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100068755

【弁理士】

【氏名又は名称】恩田 博宣

(74)【代理人】

【識別番号】100142907

【弁理士】

【氏名又は名称】本田 淳

(74)【代理人】

【識別番号】100152489

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 美樹

(72)【発明者】

【氏名】ライター、アルヴィン

(72)【発明者】

【氏名】ジーグル、ライナー

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA12

4C076BB13

4C076CC11

4C076CC35

4C076CC50

4C076DD09F

4C076DD23D

4C076DD26Z

4C076DD38Q

4C076DD42Z

4C076DD43Z

4C076DD51Z

4C076DD60Z

4C076DD67Q

4C076EE23F

4C076FF14

4C076FF16

4C076FF36

4C076FF43

4C076FF61

4C076FF65

4C084AA03

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA22

4C084BA23

4C084BA34

4C084BA41

4C084CA53

4C084DC09

4C084MA17

4C084MA66

4C084NA12

4C084ZA421

4C084ZA422

4C084ZB331

4C084ZB332

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA75

4H045DA76

4H045DA89

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本発明はＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質の医薬組成物及びその治療的使用、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症の治療における治療的使用に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

液体医薬組成物であって、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は前記断片の変異体を含む第１の部分であって、前記ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ヒトＩｇＧのＦｃ部分を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、及び
（ｂ）ｐＨ５．４～６．４の緩衝液、
を含む、液体医薬組成物。

【請求項2】

液体医薬組成物であって、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は前記断片の変異体を含む第１の部分であって、前記ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ヒトＩｇＧのＦｃ部分の変異体を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、及び
（ｂ）ｐＨ５．４～６．４の緩衝液、
を含む、液体医薬組成物。

【請求項3】

前記緩衝液が、酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、及びコハク酸緩衝液からなる群から選択され、好ましくは前記緩衝液が、５ｍＭ～６０ｍＭの濃度で存在する、請求項１又は２に記載の液体医薬組成物。

【請求項4】

糖又は糖アルコールを更に含み、好ましくは、前記糖又は糖アルコールが、トレハロース、スクロース、及びマンニトールから選択され、並びに／又は前記糖又は糖アルコールが、１００ｍＭ～３００ｍＭの濃度で存在する、請求項１～３のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【請求項5】

非イオン性界面活性剤を更に含み、好ましくは、前記非イオン性界面活性剤が、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０から選択され、並びに／又は前記非イオン性界面活性剤が、０．０１％（ｗ／ｖ）～０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、請求項１～４のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【請求項6】

無機塩を更に含み、好ましくは前記無機塩が、塩化ナトリウムであり、及び／又は前記無機塩が、３０ｍＭ～１５０ｍＭの濃度で存在する、請求項１～５のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【請求項7】

１つ以上のアミノ酸を更に含み、好ましくは前記１つ以上のアミノ酸が、Ｌ－アルギニン及び／若しくはＬ－メチオニンであり、並びに／又は前記１つ以上のアミノ酸が、１ｍＭ～５０ｍＭの濃度で存在する、請求項１～６のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【請求項8】

前記ヒトＡＣＥ２の断片が、配列番号２によるアミノ酸配列からなるか、又は前記ヒトＡＣＥ２の断片が、配列番号３によるアミノ酸配列からなるＡＣＥ２の細胞外ドメインである、請求項１～７のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【請求項9】

前記ＩｇＧが、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４である、請求項１～８のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【請求項10】

前記融合タンパク質が、配列番号５によるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ部分を含み、好ましくは、前記第１の部分と前記第２の部分とが、配列番号１８によるアミノ酸配列によって連結されている、請求項１、３～９のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【請求項11】

前記融合タンパク質が、配列番号２０及び２１のいずれか１つによるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体を含み、好ましくは、前記第１の部分と前記第２の部分とが、配列番号１８によるアミノ酸配列によって連結されている、請求項２～９のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【請求項12】

前記融合タンパク質が、配列番号４によるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ部分を含み、好ましくは、前記第１の部分と前記第２の部分とが、配列番号１９によるアミノ酸配列によって連結されている、請求項１、３～９のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【請求項13】

前記融合タンパク質が、配列番号２２及び２３のいずれか１つによるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体を含み、好ましくは、前記第１の部分と前記第２の部分とが、配列番号１９によるアミノ酸配列によって連結されている、請求項２～９のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【請求項14】

前記ヒトＡＣＥ２断片の前記変異体が、ヒトＡＣＥ２の酵素的に不活性な変異体であり、好ましくは、前記ヒトＡＣＥ２の酵素的に不活性な変異体が、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する、請求項１～１３のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【請求項15】

前記融合タンパク質が、配列番号６～１３、４４～４７、５８～６１、７２～７５、８６～８９のいずれか１つによるアミノ酸配列を有する、請求項１、３～８のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【請求項16】

前記融合タンパク質が、配列番号２６～４１、４８～５５、６２～６９、７６～８３、及び９０～９７のいずれか１つによるアミノ酸配列を有する、請求項２～８のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【請求項17】

前記融合タンパク質の前記ＡＣＥ２部分がＮ－グリコシル化されており、前記ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％が、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する、請求項１～１６のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【請求項18】

液体医薬組成物であって、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は前記断片の変異体を含む第１の部分であって、前記ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ヒトＩｇＧのＦｃ部分又はヒトＩｇＧのＦｃ部分の変異体を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、並びに
（ｂ）ｐＨ５．６～５．８の酢酸緩衝液、
（ｃ）ポリソルベート２０又はポリソルベート８０、
（ｄ）トレハロース又はスクロース、並びに
（ｅ）任意に、Ｌ－アルギニン、Ｌ－メチオニン、及び塩化ナトリウムからなる群から選択される１つ以上の安定剤、
を含む、液体医薬組成物。

【請求項19】

前記ＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度が１～６０ｍｇ／ｍＬである、請求項１～１８のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【請求項20】

ＡＣＥ２に結合するコロナウイルス、好ましくは、ＳＡＲＳ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２、及びＮＬ６３からなる群から選択され、好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ２である、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症の予防及び／又は治療における使用のための、請求項１～１９のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明はＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質の医薬組成物及びその治療的使用、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症の治療における治療的使用に関する。

【背景技術】

【0002】

ＡＣＥ２（アンジオテンシン変換酵素２）は、中心に触媒亜鉛原子を有するレニン－アンジオテンシン系の重要なメタロプロテアーゼである（非特許文献１）。完全長ＡＣＥ２は、Ｎ末端細胞外ペプチダーゼドメイン、コレクトリン様ドメイン、単一膜貫通ヘリックス、及び短い細胞内セグメントからなる。これは、アンジオテンシンＩＩを切断することでアンジオテンシン（１－７）を産生するとともに、アンジオテンシンＩを切断することで、次いで他の酵素によって処理されてアンジオテンシン（１－７）になるアンジオテンシン（１－９）を産生するように作用する。ＡＣＥ２は血圧を低下させるように作用し、Ｒａｓ／ＭＡＳ系におけるバランスを維持するためにＡＣＥの活性に対抗する。したがって、ＡＣＥ２は心血管疾患の治療のための有望な標的である。

【0003】

最近、ＡＣＥ２は、コロナウイルス、特に、新型コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の受容体として大きな注目を集めている。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、２０１９年１２月に中国の武漢で最初に発見されたコロナウイルスであるが、世界中に急速に広がり、世界的なパンデミックを引き起こしている。パンデミックは、多くの国において、非常に顕著な経済的及び社会的影響を伴うロックダウンをもたらした。

【0004】

ＡＣＥ２が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ（非特許文献２、非特許文献３）、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（非特許文献４）の受容体として機能することが示された。更に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の呼吸器細胞への侵入は、ＡＣＥ２及びセリンプロテアーゼＴＭＰＲＳＳ２に依存する（非特許文献５）。

【0005】

細胞へのウイルス侵入に対するＡＣＥ２の重要な役割を考慮して、細胞へのＳＡＲＳ結合を遮断するために可溶性ＡＣＥ２を使用することが提案された（特許文献１、特許文献２）。同じアプローチが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症の治療について示唆された（非特許文献６）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症の治療における可溶性形態のＡＣＥ２を用いた臨床試験は、Ａｐｅｉｒｏｎによって開始されており（Ｐｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｃｈｅ Ｚｅｉｔｕｎｇ、２０２０年４月１０日）、最初の結果は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって引き起こされた重度のＣｏｖｉｄ－１９を有する１人の患者が可溶性ＡＣＥ２による治療で急速に回復したことを示した（非特許文献７）。

【0006】

しかしながら、単離された受容体ドメインは、典型的には、低い安定性及び血漿中半減期を特徴とする。ＡＣＥ２の可溶性形態については、１０時間の用量依存性の終末半減期が示された（非特許文献８）。これらの結果を考慮して、後の研究では、可溶性形態のＡＣＥ２を１日２回の注入として投与することにした（非特許文献９）。しかしながら、１日に２回以上の投与は、患者及び医療従事者の両方にとって不便である。

【0007】

ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインに連結された酵素的に活性な又は酵素的に不活性なＡＣＥ２のいずれかの細胞外ドメインからなるＡＣＥ２の融合タンパク質を構築し、試験した。両方のコンストラクトが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の両方を強力に中和し、Ｓタンパク質媒介性融合を阻害したことが示された（非特許文献１０）。非特許文献１１は、野生型ＡＣＥ２及びＡＣＥ２の触媒活性に影響を及ぼす９つのＡＣＥ２ミュータントと、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域との融合タンパク質を記載している。しかしながら、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインと免疫細胞上のＦｃガンマ受容体との相互作用は、ウイルス感染を増強し得る（非特許文献１２、非特許文献１３）。

【0008】

非特許文献１４は、触媒的に不活性なＡＣＥ２の細胞外ドメインが免疫グロブリン重鎖のＦｃドメインに融合されている「ＡＣＥ２マイクロボディ」を開示する。
非特許文献１５、特許文献３及び特許文献４は、ＡＣＥ２の細胞外ドメインとヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ４のＦｃドメインとの融合タンパク質に関する。特許文献５は、ＡＣＥ２の細胞外ドメインとヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ４のＦｃドメインとの融合タンパク質の高シアリル化及び／又は脱フコシル化された形態、並びにＩＰ１０を更に含むそのような融合タンパク質に関する。

【0009】

特許文献６は、ＩｇＭ及びＩｇＧ２のＦｃドメインを有するＡＣＥ２融合タンパク質を開示している。
特許文献７～２８もまた、ＡＣＥ２と、異なる免疫グロブリンのＦｃ部分との融合タンパク質を開示している。

【0010】

貯蔵中に必要なタンパク質安定性を提供し、ヒト患者によって十分に忍容されるＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質の医薬組成物が必要とされている。
可溶性組換えヒトＡＣＥ２を使用する臨床試験では、１００ｍＭグリシン、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、及び５０μＭ塩化亜鉛中に５．２ｍｇ／ｍＬの組換えヒトＡＣＥ２を含む、ｐＨ７．５の製剤を使用した（非特許文献８）。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0011】

【特許文献1】国際公開第２００５／０３２４８７号

【特許文献2】国際公開第２００６／１２２８１９号

【特許文献3】国際公開第２０２１／２３４１６０号

【特許文献4】国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０２１／０８０１３０号

【特許文献5】欧州特許出願第２１ ２１０ ２１５．６号

【特許文献6】欧州特許出願第２１ １８８ ８３２．６号

【特許文献7】国際公開第２０２１／１７０１１３号

【特許文献8】国際公開第２０２１／１８３４０４号

【特許文献9】米国特許出願公開第２０２１／０２８４７１６号明細書

【特許文献10】国際公開第２０２１／２１７１２０号

【特許文献11】国際公開第２０２１／２１３４３７号

【特許文献12】国際公開第２０２１／１８９７７２号

【特許文献13】国際公開第２０２１／２３１４６６号

【特許文献14】国際公開第２０２１／２３７２３９号

【特許文献15】国際公開第２０２１／２０３１０３号

【特許文献16】国際公開第２０２１／１７４１０７号

【特許文献17】国際公開第２０２１／２３６９５７号

【特許文献18】国際公開第２０２１／２０３０９８号

【特許文献19】国際公開第２０２１／２２７９３７号

【特許文献20】国際公開第２０２１／２１３４２１号

【特許文献21】国際公開第２０２１／２０５１８３号

【特許文献22】国際公開第２０２１／２０２４２７号

【特許文献23】国際公開第２０２１／１９４９０９号

【特許文献24】国際公開第２０２１／１７０１３１号

【特許文献25】国際公開第２０２２／０１２６８８号

【特許文献26】国際公開第２０２２／００６６０１号

【特許文献27】国際公開第２０２１／２６３１２８号

【特許文献28】国際公開第２０２１／２５７５１２号

【非特許文献】

【0012】

【非特許文献1】Ｄｏｎｏｇｈｕｅ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．８７：ｅ１－ｅ９

【非特許文献2】Ｌｉ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎａｔｕｒｅ ４２６：４５０－４５４

【非特許文献3】Ｐｒａｋａｂａｒａｎ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．３１４：２３５－２４１

【非特許文献4】Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６７：１４４４－１４８５

【非特許文献5】Ｈｏｆｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｃｅｌｌ １８１：１－１０

【非特許文献6】Ｋｒｕｓｅ（２０２０）Ｆ１０００Ｒｅｓ．９：７２

【非特許文献7】Ｚｏｕｆａｌｙ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ８：１１５４－１１５８

【非特許文献8】Ｈａｓｃｈｋｅ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．５２：７８３－７９２

【非特許文献9】Ｋｈａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ ２１：２３４

【非特許文献10】Ｌｅｉ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ １１：２０７０

【非特許文献11】Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．１６５：１６２６－１６３３

【非特許文献12】Ｐｅｒｌｍａｎ ａｎｄ Ｄａｎｄｅｋａｒ（２００５）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５（１２）：９１７－９２７

【非特許文献13】Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｒｅｐｏｒｔｓ ３：１－４

【非特許文献14】Ｔａｄａ ｅｔ ａｌ．（２０２０）（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｒｘｉｖ．ｏｒｇ／ｃｏｎｔｅｎｔ／１０．１１０１／２０２０．０９．１６．３００３１９ｖ１．ｆｕｌｌ）

【非特許文献15】Ｓｖｉｌｅｎｏｖ ｅｔ ａｌ．（２０２０）（Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｓｔｒａｉｎｓ ｂｙ ａ ｎｏｖｅｌ １０ ＡＣＥ２－ＩｇＧ４－Ｆｃ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｉｔｈ ａ ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ ｈｉｎｇｅ ｒｅｇｉｏｎ｜ｂｉｏＲｘｉｖ ａｎｄ ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｓｃｉｅｎｃｅｄｉｒｅｃｔ．ｃｏｍ／ｓｃｉｅｎｃｅ／ａｒｔｉｃｌｅ／ｐｉｉ／Ｓ０１６６３５４２２１００１８７Ｘ？ｖｉａ％３Ｄｉｈｕｂ）

【発明の概要】

【0013】

本発明は、ヒト対象への投与に適したＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質の安定な液体製剤を提供する。
本発明は、液体医薬組成物であって、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は当該断片の変異体を含む第１の部分であって、当該ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ヒトＩｇＧのＦｃ部分を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、及び
（ｂ）ｐＨ５．６～６．３の緩衝液、を含む、液体医薬組成物を提供する。

【0014】

本発明は、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は当該断片の変異体を含む第１の部分であって、当該ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ヒトＩｇＧのＦｃ部分の変異体を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、及び
（ｂ）ｐＨ５．６～６．３の緩衝液、を含む、液体医薬組成物を提供する。

【0015】

一実施形態では、緩衝液は、酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液、及びコハク酸緩衝液からなる群から選択され、好ましくは緩衝液は、５ｍＭ～６０ｍＭの濃度で存在する。

【0016】

液体医薬組成物は、糖又は糖アルコールを更に含んでもよく、好ましくは、糖又は糖アルコールは、トレハロース、スクロース、及びマンニトールから選択され、並びに／又は糖又は糖アルコールは、１００ｍＭ～３００ｍＭの濃度で存在する。

【0017】

液体医薬組成物は非イオン性界面活性剤を更に含んでもよく、好ましくは、非イオン性界面活性剤はポリソルベート２０及びポリソルベート８０から選択され、並びに／又は非イオン性界面活性剤は０．０１％（ｗ／ｖ）～０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。

【0018】

液体医薬組成物は、無機塩を更に含んでもよく、好ましくは、無機塩は塩化ナトリウムであり、及び／又は無機塩は３０ｍＭ～１５０ｍＭの濃度で存在する。
液体医薬組成物は、１つ以上のアミノ酸を更に含んでもよく、好ましくは、１つ以上のアミノ酸はＬ－アルギニン及び／若しくはＬ－メチオニンであり、並びに／又は１つ以上のアミノ酸は１ｍＭ～５０ｍＭの濃度で存在する。

【0019】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２によるアミノ酸配列からなるか、又は配列番号３によるアミノ酸配列からなるＡＣＥ２の細胞外ドメインである。
ＩｇＧは、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４であってもよい。

【0020】

一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号５によるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ部分、又は配列番号２０及び２１のいずれか１つによるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体を含む。

【0021】

一実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ４又はＩｇＧ４の変異体であり、第１の部分と第２の部分とは配列番号１８によるアミノ酸配列によって連結されている。
一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号４によるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ部分、又は配列番号２２及び２３のいずれか１つによるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体を含む。

【0022】

一実施形態では、ＩｇＧはＩｇＧ１又はＩｇＧ１の変異体であり、第１の部分と第２の部分とは配列番号１９によるアミノ酸配列によって連結されている。
ヒトＡＣＥ２断片の変異体は、ヒトＡＣＥ２の酵素的に不活性な変異体であってもよく、好ましくは、ヒトＡＣＥ２の酵素的に不活性な変異体は、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0023】

一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６～１３、２６～４１、４４～５５、５８～６９、７２～８３、及び８６～９７のいずれか１つによるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する。

【0024】

本発明はまた、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は当該断片の変異体を含む第１の部分であって、当該ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ヒトＩｇＧのＦｃ部分又はヒトＩｇＧのＦｃ部分の変異体を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、並びに
（ｂ）ｐＨ５．６～５．８の酢酸緩衝液、
（ｃ）ポリソルベート２０又はポリソルベート８０、
（ｄ）トレハロース又はスクロース、並びに
（ｅ）任意に、Ｌ－アルギニン、Ｌ－メチオニン、及び塩化ナトリウムからなる群から選択される１つ以上の安定剤、を含む、液体医薬組成物に関する。

【0025】

一実施形態では、ＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は１～６０ｍｇ／ｍＬである。
本発明はまた、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルス、好ましくは、ＳＡＲＳ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２、及びＮＬ６３からなる群から選択され、好ましくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ２である、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症の予防及び／又は治療における使用のための、本明細書に開示される液体医薬組成物に関する。

【発明を実施するための形態】

【0026】

以下に例示的に記載される本発明は、本明細書に具体的に開示されていない任意の要素、限定なしで好適に実施され得る。
本発明を特定の実施形態に関して説明するが、本発明はそれに限定されず、特許請求の範囲によってのみ限定される。

【0027】

「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語が本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、他の要素を排除するものではない。本発明の目的では、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という用語は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語の好ましい実施形態であると考えられる。以下、群が少なくとも特定の数の実施形態を含むと定義される場合、これはまた、好ましくはこれらの実施形態のみからなる群を開示すると理解されたい。

【0028】

本発明の目的では、「得られた」という用語は、「得ることができる」という用語の好ましい実施形態であると考えられる。以下で、例えば細胞又は生物が特定の方法によって得ることができると定義される場合、これはまた、この方法によって得られた細胞又は生物を開示すると理解されたい。

【0029】

単数名詞を指すときに不定冠詞又は定冠詞、例えば「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」又は「その（ｔｈｅ）」が使用される場合、特に明記されない限り、これはその名詞の複数形を含む。

【0030】

本明細書で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、ＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質等の化学物質又は活性成分を含む任意の組成物を指し、この組成物は、疾患の医学的治癒、治療、又は予防における使用を意図しており、活性成分が有効であることを可能にするような形態である。特に、医薬組成物は、組成物が投与される対象にとって許容できないほど毒性である賦形剤を含有しない。医薬組成物は滅菌されており、すなわち無菌であり、全ての生きている微生物及びその胞子を含まない。本発明で使用される医薬組成物は、液体であり、安定である。

【0031】

「液体医薬組成物」では、薬学的に活性な薬剤、例えばＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質を様々な賦形剤と組み合わせて、貯蔵後に安定な活性薬物を確保することができる。一実施形態では、本発明で使用される液体医薬組成物は、決して凍結乾燥されず、すなわち、製造方法は凍結乾燥ステップを含まず、組成物は貯蔵のために凍結乾燥されない。液体医薬組成物は、バイアル、ＩＶバッグ、アンプル、カートリッジ、及びプレフィルド、又はすぐに使用できるシリンジにおいて貯蔵することができる。

【0032】

「安定」液体組成物は、その中に含まれるＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質が、ある一定期間の貯蔵時にその物理的安定性及び／又は化学的安定性及び／又は生物学的活性を本質的に保持するものである。好ましくは、組成物は、貯蔵時にその物理的及び化学的安定性、並びにその生物学的活性を本質的に保持する。タンパク質安定性を測定するための様々な分析技術が当技術分野で利用可能であり、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７－３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ Ｅｄ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｐｕｂｓ（１９９１）、及びＪｏｎｅｓ，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ，１９９３，１０：２９－９０に概説されている。例えば、安定性は、選択された温度で選択された期間にわたって測定することができる。安定性は、カチオン若しくはアニオン交換クロマトグラフィー、又はキャピラリーゾーン電気泳動、アミノ末端又はカルボキシ末端配列分析、質量分析、凝集分子又は断片化分子を検出するためのＳＤＳ－キャピラリーゲル電気泳動分析、ペプチドマップ（例えば、トリプシン又はＬＹＳ－Ｃ）分析、アゴニストの生物学的活性又は結合の評価等を使用して電荷不均一性を評価することによって、凝集体形成（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、濁度を測定することによって、及び／又は目視検査によって）の評価を含む様々な異なる方法で定性的及び／又は定量的に評価することができる。

【0033】

好ましくは、医薬組成物は、約４０℃の温度及び７５％相対湿度で少なくとも１～２週間安定であり、並びに／又は約５℃の温度で少なくとも３ヶ月間、好ましくは６又は８ヶ月間、より好ましくは１年間安定であり、並びに／又は約２５℃の温度及び６０％相対湿度で少なくとも２週間若しくは１ヶ月間安定である。更に、製剤は、好ましくは本明細書の実施例に記載の製剤の凍結（例えば、－２０℃又は－８０℃）及び２５℃での解凍後に、例えば１、２、３又は４サイクルの凍結及び解凍後に安定である。

【0034】

例えば、本発明で使用される医薬組成物において、サイズ排除クロマトグラフィーによって測定される、５℃の温度で３ヶ月間貯蔵する前の試料中の高分子量種のパーセントと比較した、５℃の温度で３ヶ月間貯蔵した後の試料中の高分子量種のパーセントの絶対的増加は、１０パーセントポイント以下、好ましくは８パーセントポイント以下、より好ましくは５パーセントポイント以下である。例えば、５℃の温度で３ヶ月貯蔵する前の試料における高分子量種のパーセントが０．５％であった場合、５℃の温度で３ヶ月貯蔵した後の試料における高分子量種のパーセントは、１０．５％以下であり、好ましくは８．５％以下であり、より好ましくは５．５％以下である。

【0035】

「緩衝液」は、弱酸とその共役塩基、又はその逆の混合物からなる水溶液であり、ｐＨの変化に抵抗し、したがってｐＨをほぼ一定の値に維持する。本発明で使用される緩衝液は、ｐＨ約５．４～約６．４の範囲である。好ましくは、本発明で使用される緩衝液は、ｐＨ約５．４～約６．２の範囲、より好ましくはｐＨ約５．４～６．０の範囲、最も好ましくはｐＨ５．４～５．９又は５．６～５．８の範囲である。本発明で使用される緩衝液は、ｐＨ５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３又は６．４、好ましくは５．６又は５．８である。

【0036】

本発明で使用される緩衝液は、酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びコハク酸緩衝液からなる群から選択される。好ましくは、本発明の液体医薬組成物は、１つの緩衝液タイプのみを含み、より好ましくは、酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、及びコハク酸緩衝液から選択される１つの緩衝液タイプのみを含む。最も好ましくは、本発明の液体医薬組成物は酢酸緩衝液を含む。

【0037】

「ヒスチジン含有緩衝液」及び「ヒスチジン緩衝液」という用語は、本明細書では互換的に使用され、ヒスチジンを含む緩衝液を指す。ヒスチジン緩衝液の例としては、塩化ヒスチジン、ヒスチジン塩酸塩、ヒスチジン酢酸塩、ヒスチジンリン酸塩、及びヒスチジン硫酸塩が挙げられる。本発明の好ましいヒスチジン緩衝液は、Ｌ－ヒスチジンを更に含む。更により好ましくは、本発明のヒスチジン緩衝液は、ヒスチジン塩酸塩を含み、最も好ましくは、ヒスチジン塩酸塩及びＬ－ヒスチジンを含む。好ましくは、ヒスチジン緩衝液又はヒスチジン塩酸塩緩衝液又はヒスチジン塩酸塩／Ｌ－ヒスチジン緩衝液は、ｐＨ約５．４～６．４、好ましくはｐＨ約５．８～６．３、より好ましくはｐＨ５．９～６．２の範囲であり、最も好ましくはｐＨ約６．０である。好ましくは、ヒスチジン緩衝液又はヒスチジン塩酸塩緩衝液又はヒスチジン塩酸塩／Ｌ－ヒスチジン緩衝液は、ｐＨ５．８、５．９、６．０、６．１、６．２又は６．３である。

【0038】

特定の好ましい実施形態では、ヒスチジン含有緩衝液は、５～３０ｍＭ、好ましくは７～２０ｍＭ、より好ましくは８～１５ｍＭ、最も好ましくは１０ｍＭの濃度のヒスチジン塩酸塩／Ｌ－ヒスチジンを含む。

【0039】

別の特定の好ましい実施形態では、ヒスチジン緩衝液は１０ｍＭの濃度を有する。別の特定の好ましい実施形態では、ヒスチジン緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０である。

【0040】

別の特定の好ましい実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度のヒスチジン塩酸塩／Ｌ－ヒスチジンである。別の特定の好ましい実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン塩酸塩／Ｌ－ヒスチジンである。

【0041】

代替の実施形態では、緩衝液は酢酸緩衝液である。酢酸緩衝液を、氷酢酸と酢酸ナトリウム等の酢酸塩とを混合することによって調製してもよい。酢酸緩衝液は、１ｍＭ～５０ｍＭ、好ましくは３ｍＭ～４０ｍＭ、より好ましくは５ｍＭ～３０ｍＭ、更により好ましくは７ｍＭ～２０ｍＭ、最も好ましくは１０ｍＭの濃度を有する。好ましくは、酢酸緩衝液は、ｐＨ約５．４～６．０、好ましくはｐＨ約５．５～５．９又は５．６～６．０又は５．６～５．８の範囲であり、最も好ましくはｐＨ約５．６又は５．８である。好ましくは、酢酸緩衝液は、ｐＨ５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９又は６．０である。

【0042】

一実施形態では、酢酸緩衝液は１０ｍＭの濃度を有する。別の実施形態では、酢酸緩衝液は１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６又は５．８であり、好ましくは酢酸緩衝液は１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８である。

【0043】

一実施形態では、酢酸緩衝液は、氷酢酸及び酢酸ナトリウムを１０ｍＭの濃度で含む。別の実施形態では、酢酸緩衝液は、氷酢酸及び酢酸ナトリウムを１０ｍＭの濃度で含み、ｐＨ５．６又は５．８であり、好ましくは酢酸緩衝液は、氷酢酸及び酢酸ナトリウムを１０ｍＭの濃度で含み、ｐＨ５．８である。

【0044】

代替の実施形態では、緩衝液はリン酸緩衝液である。リン酸緩衝液は、リン酸一ナトリウムとリン酸二ナトリウムとを混合することによって調製されてもよい。リン酸緩衝液は、１ｍＭ～５０ｍＭ、好ましくは３ｍＭ～４０ｍＭ、より好ましくは５ｍＭ～３０ｍＭ、更により好ましくは７ｍＭ～２０ｍＭ、最も好ましくは１０ｍＭの濃度を有する。好ましくは、リン酸緩衝液は、ｐＨ約５．５～６．３、好ましくはｐＨ約５．５～６．２の範囲であり、最も好ましくはｐＨ約６．０である。好ましくは、リン酸緩衝液は、ｐＨ５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２又は６．３である。

【0045】

一実施形態では、リン酸緩衝液は１０ｍＭの濃度を有する。別の実施形態では、リン酸緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０である。
一実施形態では、リン酸緩衝液は、リン酸一ナトリウム及びリン酸二ナトリウムを１０ｍＭの濃度で含む。別の実施形態では、リン酸緩衝液は、リン酸一ナトリウム及びリン酸二ナトリウムを１０ｍＭの濃度で含み、ｐＨ６．０である。

【0046】

代替の実施形態では、緩衝液はコハク酸緩衝液である。コハク酸緩衝液は、コハク酸とコハク酸二ナトリウムとを混合することによって調製されてもよい。コハク酸緩衝液は、１ｍＭ～５０ｍＭ、好ましくは３ｍＭ～４０ｍＭ、より好ましくは５ｍＭ～３０ｍＭ、更により好ましくは７ｍＭ～２０ｍＭ、最も好ましくは１０ｍＭの濃度を有する。好ましくは、コハク酸緩衝液は、ｐＨ約５．８～６．５、好ましくはｐＨ約６．０～６．４の範囲であり、最も好ましくはｐＨ約６．３である。好ましくは、コハク酸緩衝液は、ｐＨ５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４又は６．５である。

【0047】

一実施形態では、コハク酸緩衝液は１０ｍＭの濃度を有する。別の実施形態では、コハク酸緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．３である。
一実施形態では、コハク酸緩衝液は、コハク酸及びコハク酸二ナトリウムを１０ｍＭの濃度で含む。別の実施形態では、コハク酸緩衝液は、コハク酸及びコハク酸二ナトリウムを１０ｍＭの濃度で含み、ｐＨ６．３である。

【0048】

代替の実施形態では、緩衝液はクエン酸緩衝液である。クエン酸緩衝液は、クエン酸とクエン酸ナトリウム等のクエン酸塩とを混合することにより調製される。クエン酸緩衝液は、１ｍＭ～５０ｍＭ、好ましくは３ｍＭ～４０ｍＭ、より好ましくは５ｍＭ～３０ｍＭ、更により好ましくは７ｍＭ～２０ｍＭ、最も好ましくは１０ｍＭの濃度を有する。好ましくは、クエン酸緩衝液は、ｐＨ約５．４～６．０、好ましくはｐＨ約５．５～５．９の範囲であり、最も好ましくはｐＨ約５．８である。好ましくは、クエン酸緩衝液は、ｐＨ５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９又は６．０である。

【0049】

一実施形態では、クエン酸緩衝液は、クエン酸及びクエン酸ナトリウムを１０ｍＭの濃度で含む。別の実施形態では、クエン酸緩衝液は、クエン酸及びクエン酸ナトリウムを１０ｍＭの濃度で含み、ｐＨ５．８である。

【0050】

本明細書で使用される場合、「界面活性剤」は、両親媒性化合物、すなわち、２つの液体間又は液体と固体との間の表面張力（又は界面張力）を低下させる、疎水性基及び親水性基の両方を含有する化合物を指す。「非イオン性界面活性剤」は、その頭部に荷電基を有していない。タンパク質含有組成物の凍結／解凍サイクル中の不溶性粒子の形成を、界面活性剤の添加によって顕著に阻害することができる。「非イオン性界面活性剤」の例としては、例えば、オクタエチレングリコールモノドデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノドデシルエーテルなどのポリオキシエチレングリコールアルキルエーテル；ポリオキシプロピレングリコールアルキルエーテル；デシルグルコシド、ラウリルグルコシド、オクチルグルコシドなどのグルコシドアルキルエーテル；トリトンＸ－１００などのポリオキシエチレングリコールオクチルフェノールエーテル；ノノキシノール－９などのポリオキシエチレングリコールアルキルフェノールエーテル；グリセリルラウレートなどのグリセロールアルキルエステル；ポリソルベートなどのポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル；スパンなどのソルビタンアルキルエステル；コカミドＭＥＡ、コカミドＤＥＡ、ドデシルジメチルアミンオキシド；ポロキサマーなどのポリエチレングリコール及びポリプロピレングリコールのブロックコポリマー；並びにポリエトキシ化タローアミン（ＰＯＥＡ）が挙げられる。本発明の液体医薬組成物は、これらの界面活性剤を１つ以上組み合わせて含有することができる。好ましい実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、１つの非イオン性界面活性剤のみを含む。

【0051】

本発明の液体医薬組成物における使用のための好ましい非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート、例えばポリソルベート２０、４０、６０又は８０、特にポリソルベート２０（すなわち、Ｔｗｅｅｎ２０）又はポリソルベート８０（すなわち、Ｔｗｅｅｎ８０）である。本発明の医薬組成物における使用のための別の好ましい非イオン性界面活性剤は、ポロキサマー１８８である。

【0052】

非イオン性界面活性剤の濃度は、組成物の総体積に対して０．００５～０．２０％（ｗ／ｖ）の範囲、好ましくは０．０１～０．１０％（ｗ／ｖ）の範囲、最も好ましくは０．０２～０．１０％（ｗ／ｖ）の範囲である。

【0053】

好ましい実施形態では、非イオン性界面活性剤はポリソルベート２０である。好ましい実施形態では、非イオン性界面活性剤は、組成物の総体積に対して０．００５％～０．２０％（ｗ／ｖ）の範囲、好ましくは０．００８～０．０５％（ｗ／ｖ）の範囲、最も好ましくは０．０１～０．０４％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0054】

別の好ましい実施形態では、非イオン性界面活性剤は、組成物の総体積に対して０．００５％～０．２０％（ｗ／ｖ）の範囲、好ましくは０．００８～０．１５％（ｗ／ｖ）の範囲、最も好ましくは０．０２～０．１％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度を有するポリソルベート８０である。

【0055】

一実施形態では、非イオン性界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０である。
一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０である。

【0056】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０である。
一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０である。

【0057】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０である。
一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０である。

【0058】

「糖」という用語は、炭素、水素、及び酸素のみを、通常は水素：酸素原子比２：１及び実験式Ｃｍ（Ｈ２Ｏ）ｎで含む有機化合物を指す。「糖」という用語は、単糖、二糖、オリゴ糖、及び多糖を含む。糖の例としては、グルコース、フルクトース、ガラクトース、キシロース、リボース、スクロース、マンノース、ラクトース、マルトース、トレハロース、デンプン、及びグリコーゲンが挙げられる。好ましくは、糖は非還元糖である。非還元糖は、遊離アルデヒド又はケトン基を含まないため、還元剤として作用することができない糖である。好ましくは、非還元糖はスクロース及びトレハロースから選択される。

【0059】

一実施形態では、糖はトレハロースである。トレハロースは非還元糖である。これは、グルコースとフルクトース単位との間の１，１－グリコシド結合によって形成される二糖である。好ましくは、トレハロースの二水和物形態が使用される。「トレハロース」及び「トレハロース二水和物」という用語は、本明細書では互換的に使用される。本発明の液体医薬組成物中のトレハロース二水和物の濃度は１００ｍＭ～３００ｍＭであり、好ましくはトレハロース二水和物の濃度は１００ｍＭ～２５０ｍＭであり、より好ましくはトレハロース二水和物の濃度は１０６ｍＭ～２５０ｍＭであり、更により好ましくはトレハロース二水和物の濃度は１０６ｍＭ、２２０ｍＭ、又は２５０ｍＭであり、最も好ましくはトレハロース二水和物の濃度は２５０ｍＭである。

【0060】

一実施形態では、糖はスクロースである。スクロースは、非還元糖である。これは、２つのα－グルコース単位間の１，２－グリコシド結合によって形成される二糖である。本発明の液体医薬組成物におけるスクロースの濃度は１００ｍＭ～３００ｍＭであり、好ましくはスクロースの濃度は１２０ｍＭ～２８０ｍＭであり、より好ましくはスクロースの濃度は１４５ｍＭ～２６３ｍＭであり、最も好ましくはスクロースの濃度は１４５ｍＭ又は２６３ｍＭである。

【0061】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、糖は、１０６ｍＭの濃度のトレハロースである。
一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、糖は、２５０ｍＭの濃度のトレハロースである。

【0062】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、糖は、１０６ｍＭの濃度のトレハロースである。
一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、糖は、２５０ｍＭの濃度のトレハロースである。

【0063】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、糖は、２６３ｍＭの濃度のスクロースである。
一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の有する酢酸緩衝液であり、糖は、２６３ｍＭの濃度のスクロースである。

【0064】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、糖は、１０６ｍＭの濃度のトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０である。

【0065】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、糖は、１０６ｍＭの濃度のトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０である。

【0066】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、糖は、２５０ｍＭの濃度のトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０である。

【0067】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、糖は、２５０ｍＭの濃度のトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０である。

【0068】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、糖は、２６３ｍＭの濃度のスクロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０である。

【0069】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、糖は、２６３ｍＭの濃度のスクロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０である。

【0070】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、糖は、１４５ｍＭの濃度のスクロースである。
一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、糖は、２２０ｍＭの濃度のトレハロースである。

【0071】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、糖は、２５０ｍＭの濃度のトレハロースである。
一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、糖は、１４５ｍＭの濃度のスクロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０である。

【0072】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、糖は、２２０ｍＭの濃度のトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０である。

【0073】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、糖は、２５０ｍＭの濃度のトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０である。

【0074】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、糖アルコールを含む。糖アルコールは、各炭素原子に結合したヒドロキシル基を含む糖に由来する有機化合物である。好適な糖アルコールとしては、グリセロール、マンニトール、ソルビトール、及びキシリトールが挙げられる。本発明の液状医薬組成物における糖アルコールの濃度は、５０ｍＭ～３００ｍＭであり、好ましくは糖アルコールの濃度は８０ｍＭ～２８０ｍＭであり、より好ましくは糖アルコールの濃度は８０ｍＭ～２７０ｍＭであり、最も好ましくは糖アルコールの濃度は８０ｍＭ～２７０ｍＭである。

【0075】

好ましくは、糖アルコールはマンニトール又はソルビトールであり、より好ましくは糖アルコールはマンニトールである。本発明の液体医薬組成物中のマンニトール又はソルビトールの濃度は５０ｍＭ～３００ｍＭであり、好ましくはマンニトール又はソルビトールの濃度は８０ｍＭ～２８０ｍＭであり、より好ましくはマンニトール又はソルビトールの濃度は８０ｍＭ～２７０ｍＭであり、最も好ましくはマンニトール又はソルビトールの濃度は８０ｍＭ～２７０ｍＭである。

【0076】

本発明の液体医薬組成物におけるマンニトールの濃度は、５０ｍＭ～３００ｍＭであり、好ましくはマンニトールの濃度は８０ｍＭ～２８０ｍＭであり、より好ましくはマンニトールの濃度は８０ｍＭ～２７０ｍＭであり、最も好ましくはマンニトールの濃度は８０ｍＭ～２７０ｍＭである。

【0077】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、８８．５ｍＭ、１９８ｍＭ、２２５ｍＭ、又は２５２ｍＭのソルビトールを含む。
一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、５０ｍＭのマンニトールを含む。

【0078】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は無機塩を含む。本明細書で使用される場合、「無機塩」は、浸透調節特性を有するイオン性化合物を指す。塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）等の無機塩は、溶液中でその構成イオンに解離することができ、すなわちＮａＣｌはＮａ＋及びＣｌ－イオンに解離し、これらは両方とも溶液の浸透圧、すなわち重量オスモル濃度に影響を及ぼす。本発明の液体医薬組成物中に存在し得る例示的な無機塩は、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、及び重炭酸ナトリウムである。一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は塩化ナトリウムを含む。

【0079】

一実施形態では、無機塩は、２０～１５０ｍＭの濃度で、好ましくは３０～１４０ｍＭの濃度で、より好ましくは４０ｍＭ～１３５ｍＭの濃度で存在する。
一実施形態では、無機塩は塩化ナトリウムであり、塩化ナトリウムは２０～１５０ｍＭの濃度で、好ましくは３０～１４０ｍＭの濃度で、より好ましくは４０ｍＭ～１３５ｍＭの濃度で存在する。一実施形態では、塩化ナトリウムは、４０ｍＭ～５０ｍＭの濃度で、好ましくは５０ｍＭの濃度で存在する。

【0080】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、無機塩は、５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムである。
一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、無機塩は、５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムである。

【0081】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、無機塩は、４０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムである。
一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、無機塩は、４０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムである。

【0082】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、無機塩は、４０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムである。
一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、無機塩は、５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムである。

【0083】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０であり、無機塩は、５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムである。

【0084】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０であり、無機塩は、４０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムである。

【0085】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のｎポリソルベート２０であり、糖は、２５０ｍＭの濃度のトレハロースであり、無機塩は、５０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムである。

【0086】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、界面活性剤は０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０であり、糖は、１４５ｍＭの濃度のスクロースであり、無機塩は、４０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムである。

【0087】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、亜鉛、銅、及びマンガンの塩等の遷移金属の塩を含む。本発明の液体医薬組成物中に存在し得る例示的な遷移金属の塩としては、塩化亜鉛、硫酸亜鉛、塩化銅、硫酸銅、塩化マンガン、及び硫酸マンガンが挙げられる。好ましい実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、塩化亜鉛又は硫酸亜鉛等の亜鉛塩を含む。

【0088】

一実施形態では、遷移金属の塩は塩化亜鉛であり、塩化亜鉛は、１０μＭ～３００μＭ、好ましくは２０μＭ～２５０μＭ、より好ましくは３０μＭ～２２０μＭ、最も好ましくは５０μＭ～２００μＭの濃度で存在する。

【0089】

一実施形態では、遷移金属の塩は塩化亜鉛であり、亜鉛イオンの濃度は、本発明の液体医薬組成物中に存在する融合タンパク質の濃度に応じて調整される。一実施形態では、融合タンパク質の量と亜鉛イオンの量との間の化学量論比は１：２であり、すなわち、タンパク質分子あたり２つの亜鉛イオンが本発明の液体医薬組成物中に存在する。一例では、融合タンパク質の濃度は２０ｍｇ／ｍＬであり、亜鉛イオンの濃度は２００μＭである。

【0090】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、１つ以上のアミノ酸を含む。一実施形態では、１つ以上のアミノ酸は、タンパク質を構成するアミノ酸の群から選択される。一実施形態では、１つ以上のアミノ酸は、Ｌ－アルギニン、グリシン、Ｌ－メチオニン、Ｌ－アスパラギン、Ｌ－グルタミン、Ｌ－リシン、Ｌ－アラニン、Ｌ－ロイシン、Ｌ－イソロイシン、Ｌ－グルタミン酸、Ｌ－アスパラギン酸、及びＬ－プロリンからなる群から選択される。一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、Ｌ－アルギニン及び／又はＬ－メチオニンを含み、好ましくは、本発明の液体医薬組成物は、Ｌ－アルギニン及びＬ－メチオニンを含む。一実施形態では、本発明の液体医薬組成物はグリシンを含まない。一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、１００ｍＭグリシンを含まない。

【0091】

一実施形態では、１つ以上のアミノ酸は、１ｍＭ～１５０ｍＭの濃度、好ましくは２ｍＭ～１４０ｍＭの濃度、より好ましくは５ｍＭ～１３５ｍＭの濃度で存在する。
一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、２０ｍＭ～６０ｍＭ、好ましくは２５ｍＭ～５５ｍＭ、より好ましくは３０ｍＭ～５０ｍＭ、最も好ましくは３０ｍＭの濃度のＬ－アルギニンを含む。一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、３０ｍＭ、４５ｍＭ又は５０ｍＭ、好ましくは３０ｍＭの濃度のＬ－アルギニンを含む。

【0092】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、１ｍＭ～２０ｍＭ、好ましくは３ｍＭ～１５ｍＭ、より好ましくは５ｍＭ～１０ｍＭ、最も好ましくは５ｍＭの濃度のＬ－メチオニンを含む。一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、５ｍＭ又は１０ｍＭの濃度のＬ－メチオニンを含む。

【0093】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、５ｍＭの濃度のＬ－メチオニン及び３０ｍＭの濃度のＬ－アルギニンを含む。
一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液と、５ｍＭのＬ－メチオニンとを含む。

【0094】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液と、３０ｍＭのＬ－アルギニンとを含む。
一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液と、５ｍＭのＬ－メチオニンと、３０ｍＭのＬ－アルギニンとを含む。

【0095】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液と、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０と、５ｍＭのＬ－メチオニンと、３０ｍＭのＬ－アルギニンとを含む。

【0096】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液と、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０と、２５０ｍＭの濃度のトレハロースと、５ｍＭのＬ－メチオニンと、３０ｍＭのＬ－アルギニンとを含む。

【0097】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液と、５ｍＭのＬ－メチオニンとを含む。
一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液と、３０ｍＭのＬ－アルギニンとを含む。

【0098】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液と、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０と、５ｍＭのＬ－メチオニンとを含む。

【0099】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液と、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート２０と、３０ｍＭのＬ－アルギニンとを含む。

【0100】

「融合タンパク質」は、互いに天然に連結されていない少なくとも２つのポリペプチド部分によって形成されるタンパク質である。２つのポリペプチド部分はペプチド結合によって連結され、任意に、リンカー分子が２つのポリペプチド部分の間に挿入される。２つのポリペプチド部分は、転写され、単一分子として翻訳される。融合タンパク質は、典型的には、両方のポリペプチド部分に由来する官能性を有する。本発明に関連して、融合タンパク質は、ＡＣＥ２の結合特性、特にコロナウイルス等のウイルスの結合、並びにヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＧ４のＦｃ部分によってもたらされる半減期の増加及びＦｃ受容体結合の増加を保持する。

【0101】

「ヒトＡＣＥ２」という用語は、ヒト対象由来のアンジオテンシン変換酵素２を指す。ヒトＡＣＥ２の完全長配列は８０５アミノ酸を有する。ヒトＡＣＥ２は、シグナルペプチド、Ｎ末端細胞外ペプチダーゼドメイン、それに続くコレクトリン様ドメイン、単一膜貫通ヘリックス、及び短い細胞内セグメントを含む。ヒトＡＣＥ２の完全長配列は配列番号１に示される。別段の指示がない限り、本明細書で使用されるアミノ酸ナンバリングは、配列番号１によるヒトＡＣＥ２の完全長配列のナンバリングを指す。ヒトＡＣＥ２の細胞外ドメインは、配列番号１のアミノ酸１８～７４０からなり、配列番号３に示されている。シグナルペプチドは配列番号１５に示される。

【0102】

「ヒトＡＣＥ２の断片」という用語は、配列番号１によるヒトＡＣＥ２の完全長配列と比較して１つ以上のアミノ酸を欠くポリペプチドを指す。ヒトＡＣＥ２の断片は、少なくとも１つのコロナウイルスのＳタンパク質、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質に結合することができる。少なくとも１つのコロナウイルスのＳタンパク質へのヒトＡＣＥ２の断片の結合は、Ｓタンパク質を基質に固定化し、ヒトＡＣＥ２の断片と接触させ、Ｓタンパク質とヒトＡＣＥ２の断片との間の相互作用を検出するＥＬＩＳＡアッセイで決定することができる。あるいは、少なくとも１つのコロナウイルスのＳタンパク質へのヒトＡＣＥ２の断片の結合は、例えばＳｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｎａｔｕｒｅ ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１５８６－０２０－２１７９－ｙ；Ｗｒａｐｐ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６７（６４８３）：１２６０－１２６３；Ｌｅｉ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ １１（１）：２０７０に記載されているように、表面プラズモン共鳴によって決定することができる。更なる代替において、少なくとも１つのコロナウイルスのＳタンパク質へのヒトＡＣＥ２の断片の結合は、例えば、Ｓｅｙｄｏｕｘ ｅｔ ａｌ．（２０２０）ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１０１／２０２０．０５．１２．０９１２９８に記載されているように、バイオレイヤー干渉法によって決定することができる。

【0103】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列内の３６０～７２３の連続アミノ酸からなる。好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列内の３８０～７２３、４００～７２３、４２０～７２３、４４０～７２３、４６０～７２３、４８０～７２３、又は５００～７２３の連続アミノ酸からなる。好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列内の５２０～７２３、５４０～７２３、５６０～７２３、５８０～７２３、又は６００～７２３の連続アミノ酸からなる。より好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列内の６２０～７２３、６４０～７２３、６６０～７２３、６８０～７２３、７００～７２３、又は７２０～７２３の連続アミノ酸からなる。

【0104】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、アミノ酸残基Ｋ３１及びＫ３５３を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、アミノ酸残基Ｑ２４、Ｄ３０、Ｅ３５、及びＱ４２を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、アミノ酸残基Ｑ２４、Ｄ３０、Ｋ３１、Ｅ３５、Ｑ４２、及びＫ３５３を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0105】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列内の３６０～７２３の連続アミノ酸からなり、アミノ酸残基Ｋ３１及びＫ３５３を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列内の３８０～７２３、４００～７２３、４２０～７２３、４４０～７２３、４６０～７２３、４８０～７２３、又は５００～７２３の連続アミノ酸からなり、アミノ酸残基Ｋ３１及びＫ３５３を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列内の５２０～７２３、５４０～７２３、５６０～７２３、５８０～７２３、又は６００～７２３の連続アミノ酸からなり、アミノ酸残基Ｋ３１及びＫ３５３を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。より好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列内の６２０～７２３、６４０～７２３、６６０～７２３、６８０～７２３、７００～７２３、又は７２０～７２３の連続アミノ酸からなり、アミノ酸残基Ｋ３１及びＫ３５３を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0106】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列内の３６０～７２３の連続アミノ酸からなり、アミノ酸残基Ｑ２４、Ｄ３０、Ｅ３５、及びＱ４２を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列内の３８０～７２３、４００～７２３、４２０～７２３、４４０～７２３、４６０～７２３、４８０～７２３、又は５００～７２３の連続アミノ酸からなり、アミノ酸残基Ｑ２４、Ｄ３０、Ｅ３５、及びＱ４２を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列内の５２０～７２３、５４０～７２３、５６０～７２３、５８０～７２３、又は６００～７２３の連続アミノ酸からなり、アミノ酸残基Ｑ２４、Ｄ３０、Ｅ３５、及びＱ４２を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。より好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列内の６２０～７２３、６４０～７２３、６６０～７２３、６８０～７２３、７００～７２３、又は７２０～７２３の連続アミノ酸からなり、アミノ酸残基Ｑ２４、Ｄ３０、Ｅ３５、及びＱ４２を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0107】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列内の３６０～７２３の連続アミノ酸からなり、アミノ酸残基Ｑ２４、Ｄ３０、Ｋ３１、Ｅ３５、Ｑ４２、及びＫ３５３を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列内の３８０～７２３、４００～７２３、４２０～７２３、４４０～７２３、４６０～７２３、４８０～７２３、又は５００～７２３の連続アミノ酸からなり、アミノ酸残基Ｑ２４、Ｄ３０、Ｋ３１、Ｅ３５、Ｑ４２、及びＫ３５３を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列内の５２０～７２３、５４０～７２３、５６０～７２３、５８０～７２３、又は６００～７２３の連続アミノ酸からなり、アミノ酸残基Ｑ２４、Ｄ３０、Ｋ３１、Ｅ３５、Ｑ４２、及びＫ３５３を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。より好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列内の６２０～７２３、６４０～７２３、６６０～７２３、６８０～７２３、７００～７２３、又は７２０～７２３の連続アミノ酸からなり、アミノ酸残基Ｑ２４、Ｄ３０、Ｋ３１、Ｅ３５、Ｑ４２、及びＫ３５３を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0108】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列のアミノ酸１８～３８０、１８～４００、１８～４２０、１８～４４０、１８～４６０、１８～４８０、又は１８～５００からなる。好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列のアミノ酸１８～５２０、１８～５４０、１８～５６０、１８～５８０、又は１８～６００からなる。より好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列のアミノ酸１８～６０５、１８～６１５、１８～６２０、１８～６４０、１８～６６０、１８～６８０、又は１８～７００からなる。更により好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列のアミノ酸１８～７１０、１８～７２０、又は１８～７３０からなる。

【0109】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２によるアミノ酸配列からなる。配列番号２によるアミノ酸配列は、配列番号１による配列において、アミノ酸Ｑ１８で始まり、アミノ酸Ｇ７３２で終わる。この断片のＣ末端のアミノ酸グリシンは、２つのタンパク質部分の融合を促進し、融合タンパク質の安定性を増加させる高い回転自由度を提供する。更に、配列番号１による配列においてアミノ酸Ｑ１８で始まりアミノ酸Ｇ７３２で終わるアミノ酸配列を含むＡＣＥ２断片の使用は、より長いＡＣＥ２断片よりも良好な収率を提供する。

【0110】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３によるアミノ酸配列を有するヒトＡＣＥ２の完全な細胞外ドメインからなる。
一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１６によるアミノ酸配列からなる。配列番号１６によるアミノ酸配列は、配列番号１による配列において、アミノ酸Ｑ１８で始まり、アミノ酸Ｇ６０５で終わる。

【0111】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、Ｎ５３、Ｎ９０、Ｎ１０３、Ｎ３２２、Ｎ４３２、Ｎ５４６、及びＮ６９０から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基においてＮ－グリコシル化されており、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、アミノ酸残基Ｎ５３、Ｎ９０、及びＮ３２２においてＮ－グリコシル化されており、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、アミノ酸残基Ｎ５３、Ｎ９０、Ｎ１０３、Ｎ３２２、Ｎ４３２、Ｎ５４６、及びＮ６９０においてＮ－グリコシル化されており、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0112】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２によるアミノ酸配列からなり、Ｎ５３、Ｎ９０、Ｎ１０３、Ｎ３２２、Ｎ４３２、Ｎ５４６、及びＮ６９０から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基においてＮ－グリコシル化されており、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２によるアミノ酸配列からなり、アミノ酸残基Ｎ５３、Ｎ９０、及びＮ３２２においてＮ－グリコシル化されており、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２によるアミノ酸配列からなり、アミノ酸残基Ｎ５３、Ｎ９０、Ｎ１０３、Ｎ３２２、Ｎ４３２、Ｎ５４６、及びＮ６９０においてＮ－グリコシル化されており、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0113】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３によるアミノ酸配列からなり、Ｎ５３、Ｎ９０、Ｎ１０３、Ｎ３２２、Ｎ４３２、Ｎ５４６、及びＮ６９０から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基においてＮ－グリコシル化されており、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３によるアミノ酸配列からなり、アミノ酸残基Ｎ５３、Ｎ９０、及びＮ３２２においてＮ－グリコシル化されており、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３によるアミノ酸配列からなり、アミノ酸残基Ｎ５３、Ｎ９０、Ｎ１０３、Ｎ３２２、Ｎ４３２、Ｎ５４６、及びＮ６９０においてＮ－グリコシル化されており、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0114】

「Ｎ－グリコシル化された」又は「Ｎ－グリコシル化」という用語は、グリカン構造がタンパク質のアスパラギン残基のアミド窒素に結合していることを意味する。グリカンは、炭水化物の分岐した柔軟な鎖であり、タンパク質のアスパラギン残基に結合したグリカンの正確な構造は、糖タンパク質産生に使用される発現系に依存する。

【0115】

一実施形態では、ＡＣＥ２タンパク質上のＮ－グリカンの７０％～９５％、好ましくは７３％～９２％、最も好ましくは７５％～９０％が、Ｎ－グリカンに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有し、これは１つの末端ガラクトース分子がシアル酸分子に連結していることを意味する。シアル酸分子は、グリカン構造の末端ガラクトース残基に結合している。一実施形態では、ＡＣＥ２タンパク質上のＮ－グリカンの３５％～６０％、好ましくは３８％～５５％、最も好ましくは４０％～５０％が、Ｎ－グリカンに結合した少なくとも２つのシアル酸分子を有し、これは２つの末端ガラクトース分子がシアル酸分子に連結していることを意味する。一実施形態では、ＡＣＥ２タンパク質上のＮ－グリカンの１％～１０％、好ましくは２％～９％、より好ましくは３％～８％、最も好ましくは５％～８％が、Ｎ－グリカンに結合した少なくとも３つのシアル酸分子を有し、これは３つの末端ガラクトース分子がシアル酸分子に連結していることを意味する。一実施形態では、ＡＣＥ２タンパク質上のＮ－グリカンの０％～４％、好ましくは０．５％～３％、より好ましくは０．８％～２．５％、最も好ましくは１％～２％が、Ｎ－グリカンに結合した少なくとも４つのシアル酸分子を有し、これは４つの末端ガラクトース分子がシアル酸分子に連結していることを意味する。

【0116】

一実施形態では、アミノ酸残基Ｎ５３、Ｎ９０、Ｎ１０３、Ｎ３２２、Ｎ４３２、Ｎ５４６、及びＮ６９０（ナンバリングは配列番号１を参照する）はＮ－グリコシル化されており、当該アミノ酸残基に結合したＮ－グリカンの７０％～９５％、好ましくは７３％～９２％、最も好ましくは７５％～９０％は、Ｎ－グリカンに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有し、これは１つの末端ガラクトース分子がシアル酸分子に連結していることを意味する。一実施形態では、アミノ酸残基Ｎ５３、Ｎ９０、Ｎ１０３、Ｎ３２２、Ｎ４３２、Ｎ５４６、及びＮ６９０（ナンバリングは配列番号１を参照する）はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２タンパク質上のＮ－グリカンの３５％～６０％、好ましくは３８％～５５％、最も好ましくは４０％～５０％は、Ｎ－グリカンに結合した少なくとも２つのシアル酸分子を有し、これは２つの末端ガラクトース分子がシアル酸分子に連結していることを意味する。一実施形態では、アミノ酸残基Ｎ５３、Ｎ９０、Ｎ１０３、Ｎ３２２、Ｎ４３２、Ｎ５４６、及びＮ６９０（ナンバリングは配列番号１を参照する）はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２タンパク質上のＮ－グリカンの１％～１０％、好ましくは２％～９％、より好ましくは３％～８％、最も好ましくは５％～８％は、Ｎ－グリカンに結合した少なくとも３つのシアル酸分子を有し、これは３つの末端ガラクトース分子がシアル酸分子に連結していることを意味する。一実施形態では、アミノ酸残基Ｎ５３、Ｎ９０、Ｎ１０３、Ｎ３２２、Ｎ４３２、Ｎ５４６、及びＮ６９０（ナンバリングは配列番号１を参照する）はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２タンパク質上のＮ－グリカンの０％～４％、好ましくは０．５％～３％、より好ましくは０．８％～２．５％、最も好ましくは１％～２％は、Ｎ－グリカンに結合した少なくとも４つのシアル酸分子を有し、これは４つの末端ガラクトース分子がシアル酸分子に連結していることを意味する。

【0117】

糖タンパク質構造は、融合タンパク質の消化及びペプチドマッピングによる分析を含む、当業者に公知の様々な方法によって分析することができる。あるいは、糖タンパク質分析のために親水性相互作用液体クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）を行ってもよい。

【0118】

シアリル化の増加は、治療用タンパク質の半減期の増加をもたらす（例えば、Ｂｙｒｎｅ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ １２（７－８）：３１９－３２６；Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ １７（５）：５２９－５４０を参照）。

【0119】

シアリル化を増加させる特定の条件下で融合タンパク質を発現する宿主細胞を培養することによって、シアリル化が増加され得る。例えば、当該融合タンパク質をコードする組換え核酸分子を含む真核生物宿主細胞は、マンガン塩、Ｎ－アセチルマンノサミン又はその誘導体、ガラクトース、グルコサミン又はその誘導体、及びＤＭＳＯの１つ以上を補充した培地中で培養されてもよい。

【0120】

上記の細胞培養添加剤は、真核生物宿主細胞で産生されるタンパク質のシアリル化を増強することが示されている（例えば、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３１（７）：１１４７－１１５６；Ｃｒｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ（２００７）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．９６（３）：５３８－５４９；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．１１４（９）：１９９１－２０００）；国際公開第２０１１／０６１２７５号；国際公開第２００４／００８１００号を参照）。

【0121】

シアリル化は、２０μＭ～８０μＭのマンガン塩、好ましくは２５μＭ～７０μＭのマンガン塩、より好ましくは３０μＭ～６０μＭのマンガン塩、最も好ましくは４０μＭのマンガン塩を補充した培地中で、当該融合タンパク質をコードする組換え核酸分子を含む真核生物宿主細胞を培養することによって増加され得る。シアリル化は、２０μＭ～８０μＭの塩化マンガン、好ましくは２５μＭ～７０μＭの塩化マンガン、より好ましくは３０μＭ～６０μＭの塩化マンガン、最も好ましくは４０μＭの塩化マンガンを補充した培地中で、当該融合タンパク質をコードする組換え核酸分子を含む真核生物宿主細胞を培養することによって増加され得る。

【0122】

シアリル化は、５～３０ｍＭのＮ－アセチルマンノサミン、好ましくは６～２５ｍＭのＮ－アセチルマンノサミン、より好ましくは８～２０ｍＭのＮ－アセチルマンノサミン、最も好ましくは１０ｍＭのＮ－アセチルマンノサミンを補充した培地中で、当該融合タンパク質をコードする組換え核酸分子を含む真核生物宿主細胞を培養することによって増加され得る。

【0123】

シアリル化は、２０～８０μＭのマンガン塩及び５～３０ｍＭのＮ－アセチルマンノサミン、好ましくは２５～７０μＭのマンガン塩及び６～２５ｍＭのＮ－アセチルマンノサミン、より好ましくは３０μＭ～６０μＭのマンガン塩及び８～２０ｍＭのＮ－アセチルマンノサミン、最も好ましくは４０μＭのマンガン塩及び１０ｍＭのＮ－アセチルマンノサミンを補充した培地中で、当該融合タンパク質をコードする組換え核酸分子を含む真核生物宿主細胞を培養することによって増加され得る。シアリル化は、２０～８０μＭの塩化マンガン及び５～３０ｍＭのＮ－アセチルマンノサミン、好ましくは２５～７０μＭの塩化マンガン及び６～２５ｍＭのＮ－アセチルマンノサミン、より好ましくは３０μＭ～６０μＭの塩化マンガン及び８～２０ｍＭのＮ－アセチルマンノサミン、最も好ましくは４０μＭの塩化マンガン及び１０ｍＭのＮ－アセチルマンノサミンを補充した培地中で、当該融合タンパク質をコードする組換え核酸分子を含む真核生物宿主細胞を培養することによって増加され得る。

【0124】

本明細書で使用される場合、「シアリル化」という用語は、糖タンパク質をはじめとするタンパク質へのシアル酸残基の付加を指す。シアル酸は、他のオリゴ糖に連結することができる固有の９炭素単糖のファミリーの一般名である。２つのファミリーメンバーは、Ｎｅｕ５Ａｃ又はＮＡＮＡと略されるＮ－アセチルノイラミン酸、及びＮｅｕ５Ｇｃ又はＮＧＮＡと略されるＮ－グリコリルノイラミン酸である。ヒトにおけるシアル酸の最も一般的な形態はＮＡＮＡである。

【0125】

ヒトＡＣＥ２の断片の「変異体」は、上記で定義した断片であって、配列番号１による野生型完全長ヒトＡＣＥ２のアミノ酸配列における対応する配列と比較して、少なくとも１つのアミノ酸残基が異なるか、又は少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、若しくは少なくとも１３個のアミノ酸が異なる断片を指す。ヒトＡＣＥ２の断片の「変異体」は、ヒトＡＣＥ２の断片の配列における１つ以上のアミノ酸置換を含む。ヒトＡＣＥ２の断片の「変異体」は、変異体が由来する配列と比較して、アミノ酸の付加又は欠失を全く含まない。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号２又は３によるヒトＡＣＥ２の断片の変異体であり、配列番号２又は３による配列と比較してアミノ酸の付加又は欠失を全く含まず、すなわち、配列番号２又は３による配列と同じ長さを有する。本明細書で使用される場合、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、少なくとも１つのコロナウイルスのＳタンパク質、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質に結合することができる。少なくとも１つのコロナウイルスのＳタンパク質、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質に対するヒトＡＣＥ２の断片の変異体の結合は、ヒトＡＣＥ２の断片について上述したように決定することができる。

【0126】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と１つのアミノ酸が異なる。別の実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と２つのアミノ酸が異なる。更に別の実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と３つのアミノ酸が異なる。更に別の実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と４つのアミノ酸が異なる。更に別の実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と５つのアミノ酸が異なる。更に別の実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と６つのアミノ酸が異なる。更に別の実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と７つのアミノ酸が異なる。更に別の実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と８つのアミノ酸が異なる。更に別の実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と９つのアミノ酸が異なる。更に別の実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と１０個のアミノ酸が異なる。更に別の実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と１１個のアミノ酸が異なる。更に別の実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と１２個のアミノ酸が異なる。更に別の実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と１３個のアミノ酸が異なる。

【0127】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と１～１３個のアミノ酸が異なる。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と１～１０個のアミノ酸が異なる。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と１～８個のアミノ酸が異なる。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と１～７個のアミノ酸が異なる。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と１～６個のアミノ酸が異なる。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と１～５個のアミノ酸が異なる。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と１～４個のアミノ酸が異なる。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と１～３個のアミノ酸が異なる。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号１による配列中の対応するアミノ酸配列と１又は２個のアミノ酸が異なる。

【0128】

ヒトＡＣＥ２の断片の１つの変異体は、酵素的に不活性な変異体であってもよい。「ヒトＡＣＥ２の断片の酵素的に不活性な変異体」は、アンジオテンシンＩＩをＡｎｇ１－７に切断する能力を欠く。ヒトＡＣＥ２の酵素活性は、当業者に公知の方法によって決定することができる。ヒトＡＣＥ２の酵素活性を決定するための好適なキットは、例えば、ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ又はＡｎａｓｐｅｃから市販されている。酵素的に不活性なＡＣＥ２変異体を使用することによって、心血管系に対する効果又は血圧の調節等のＡＣＥ２の酵素活性に関連するあらゆる副作用が排除される。更に、ＲＡＳ－ＭＡＳ平衡を相殺するリスクが低減される。

【0129】

ヒトＡＣＥ２の断片の酵素的に不活性な変異体は、ＡＣＥ２の触媒中心内のアミノ酸の１つ以上の変異を含んでもよい。特に、ヒトＡＣＥ２の断片の酵素的に不活性な変異体は、配列番号１による配列の残基３７４における野生型ヒスチジンの変異及び／又は配列番号１による配列の残基３７８における野生型ヒスチジンの変異を含む。野生型ヒスチジンは、ヒスチジン以外の任意のアミノ酸に変異していてもよく、特に、野生型ヒスチジンはアスパラギンに変異している。好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片の酵素的に不活性な変異体は、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。

【0130】

別の実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の酵素的に不活性な変異体は、以下のアミノ酸残基の１つ以上に変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する：残基３４５（野生型ではヒスチジン）、２７３（野生型ではアルギニン）、４０２（野生型ではグルタミン酸）、及び５０５（野生型ではヒスチジン）。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の酵素的に不活性な変異体は、残基３４５のヒスチジンのアラニン又はロイシンへの変異、残基２７３のアルギニンのアラニン、グルタミン又はリシンへの変異、残基４０２のグルタミン酸のアラニンへの変異、及び／又は残基５０５のヒスチジンのアラニン又はロイシンへの変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。特定の実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の酵素的に不活性な変異体は、残基２７３のアルギニンのアラニンへの変異（Ｒ２７３Ａ変異とも呼ばれる）を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。アルギニン２７３は基質結合に重要であり、その置換は酵素活性を無効にすることが見出された（Ｇｕｙ ｅｔ ａｌ．（２００５）ＦＥＢＳ Ｊ．２７２（１４）：３５１２－３５２０）。

【0131】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列のアミノ酸１８～３８０、１８～４００、１８～４２０、１８～４４０、１８～４６０、１８～４８０、又は１８～５００からなり、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列のアミノ酸１８～５２０、１８～５４０、１８～５６０、１８～５８０、又は１８～６００からなり、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。より好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列のアミノ酸１８～６１５、１８～６２０、１８～６４０、１８～６６０、１８～６８０、又は１８～７００からなり、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。更により好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列のアミノ酸１８～７１０、１８～７２０、又は１８～７３０からなり、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。

【0132】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２による配列からなり、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を含む。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３による配列からなり、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を含む。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号２４によるアミノ酸配列を有するタンパク質からなる。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号２５によるアミノ酸配列を有するタンパク質からなる。

【0133】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列のアミノ酸１８～３８０、１８～４００、１８～４２０、１８～４４０、１８～４６０、１８～４８０、又は１８～５００からなり、Ｒ２７３Ａ変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列のアミノ酸１８～５２０、１８～５４０、１８～５６０、１８～５８０、又は１８～６００からなり、Ｒ２７３Ａ変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。より好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列のアミノ酸１８～６１５、１８～６２０、１８～６４０、１８～６６０、１８～６８０、又は１８～７００からなり、Ｒ２７３Ａ変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。更により好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１による配列のアミノ酸１８～７１０、１８～７２０、又は１８～７３０からなり、Ｒ２７３Ａ変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。

【0134】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２によるアミノ酸配列を有するタンパク質からなり、Ｒ２７３Ａ変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３によるアミノ酸配列を有するタンパク質からなり、Ｒ２７３Ａ変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号４２によるアミノ酸配列を有するタンパク質からなる。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号４３によるアミノ酸配列を有するタンパク質からなる。

【0135】

ヒトＡＣＥ２の断片の別の変異体は、ＡＣＥ２のシェディング（ｓｈｅｄｄｉｎｇ）を阻害する変異体であってもよい。ＡＣＥ２がＡＣＥ２外部ドメインの切断によってヒト気道上皮から脱落（シェディング）すること、及びＡＤＡＭ１７がＡＣＥ２切断を調節することが示された。更に、ＡＣＥ２の外部ドメインに位置する完全長ＡＣＥ２のロイシン５８４における点変異は、シェディングを消失させた（Ｊｉａ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２９７（１）：Ｌ８４－９６）。したがって、一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体はロイシン５８４における変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。一実施形態では、ロイシン５８４における変異はＬ５８４Ａ変異である。

【0136】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２による配列からなり、Ｌ５８４Ａ変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。
一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３による配列からなり、Ｌ５８４Ａ変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。

【0137】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、Ｈ３７４Ｎ変異、Ｈ３７８Ｎ変異、及びＬ５８４Ａ変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。
一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２による配列からなり、Ｈ３７４Ｎ変異、Ｈ３７８Ｎ変異、及びＬ５８４Ａ変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。

【0138】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３による配列からなり、Ｈ３７４Ｎ変異、Ｈ３７８Ｎ変異、及びＬ５８４Ａ変異を含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。

【0139】

ヒトＡＣＥ２の断片の別の変異体は、プロテアーゼＴＭＰＲＳＳ２によるＡＣＥ２の切断を阻害する変異体であってもよい。ＴＭＰＲＳＳ２によるＡＣＥ２タンパク質分解が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶの侵入を増大させることが示された（Ｈｅｕｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８８（２）：１２９３－１３０７）。ＴＭＰＲＳＳ２はまた、細胞へのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の進入において役割を果たす（Ｈｏｆｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｃｅｌｌ １８１：１－１０）。ＴＭＰＲＳＳ２によるＡＣＥ２の切断を無効にするために、切断に必須のアミノ酸残基を変異させてもよい。ＡＣＥ２のアミノ酸６９７から７１６にわたるアミノ酸領域内のアルギニン残基及びリシン残基が、ＴＭＰＲＳＳ２によるＡＣＥ２切断に必須であることが示された（Ｈｅｕｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８８（２）：１２９３－１３０７）。したがって、一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、アミノ酸６９７、７０２、７０５、７０８、７１０、及び７１６から選択される少なくとも１つの残基に変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、アミノ酸６９７、７０２、７０５、７０８、７１０、及び７１６から選択される少なくとも２つ又は３つの残基に変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。より好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、アミノ酸６９７、７０２、７０５、７０８、７１０、及び７１６から選択される少なくとも４つ又は５つの残基に変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。最も好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、残基６９７、７０２、７０５、７０８、７１０、及び７１６に変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。これらの残基のいずれかにおける野生型アミノ酸残基は、他の任意のアミノ酸に変異されていてもよく、特に、野生型アミノ酸残基はアラニンに変異されている。

【0140】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、以下の変異：Ｒ６９７Ａ、Ｋ７０２Ａ、Ｒ７０５Ａ、Ｒ７０８Ａ、Ｒ７１０Ａ、及びＲ７１６Ａのうちの少なくとも１つを含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、以下の変異：Ｒ６９７Ａ、Ｋ７０２Ａ、Ｒ７０５Ａ、Ｒ７０８Ａ、Ｒ７１０Ａ、及びＲ７１６Ａのうちの少なくとも２つ又は３つを含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。より好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、以下の変異：Ｒ６９７Ａ、Ｋ７０２Ａ、Ｒ７０５Ａ、Ｒ７０８Ａ、Ｒ７１０Ａ、及びＲ７１６Ａのうちの少なくとも４つ又は５つを含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。最も好ましくは、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、以下の変異：Ｒ６９７Ａ、Ｋ７０２Ａ、Ｒ７０５Ａ、Ｒ７０８Ａ、Ｒ７１０Ａ、及びＲ７１６Ａを含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0141】

ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、残基６１９、６２１、及び／又は６２５に変異を更に含んでもよく、ナンバリングは配列番号１を参照する。特に、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、以下の変異：Ｋ６１９Ａ、Ｒ６２１Ａ、及び／又はＫ６２５Ａを更に含んでもよく、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0142】

したがって、一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、以下の変異：Ｋ６１９Ａ、Ｒ６２１Ａ、Ｋ６２５Ａ、Ｒ６９７Ａ、Ｋ７０２Ａ、Ｒ７０５Ａ、Ｒ７０８Ａ、Ｒ７１０Ａ及び、Ｒ７１６Ａを含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0143】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２による配列からなり、アミノ酸６９７、７０２、７０５、７０８、７１０、及び７１６から選択される少なくとも１つの残基に変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２による配列からなり、残基６９７、７０２、７０５、７０８、７１０、及び７１６に変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２による配列からなり、以下の変異：Ｒ６９７Ａ、Ｋ７０２Ａ、Ｒ７０５Ａ、Ｒ７０８Ａ、Ｒ７１０Ａ、及びＲ７１６Ａのうちの少なくとも１つを含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２による配列からなり、以下の変異：Ｒ６９７Ａ、Ｋ７０２Ａ、Ｒ７０５Ａ、Ｒ７０８Ａ、Ｒ７１０Ａ、及びＲ７１６Ａを含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0144】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３による配列からなり、アミノ酸６９７、７０２、７０５、７０８、７１０、及び７１６から選択される少なくとも１つの残基に変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３による配列からなり、残基６９７、７０２、７０５、７０８、７１０、及び７１６に変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３による配列からなり、以下の変異：Ｒ６９７Ａ、Ｋ７０２Ａ、Ｒ７０５Ａ、Ｒ７０８Ａ、Ｒ７１０Ａ、及びＲ７１６Ａのうちの少なくとも１つを含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３による配列からなり、以下の変異：Ｒ６９７Ａ、Ｋ７０２Ａ、Ｒ７０５Ａ、Ｒ７０８Ａ、Ｒ７１０Ａ、及びＲ７１６Ａを含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0145】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２による配列からなり、Ｈ３７４Ｎ変異、Ｈ３７８Ｎ変異、Ｌ５８４Ａ変異、並びに以下の変異：Ｒ６９７Ａ、Ｋ７０２Ａ、Ｒ７０５Ａ、Ｒ７０８Ａ、Ｒ７１０Ａ、及びＲ７１６Ａを含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。

【0146】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３による配列からなり、Ｈ３７４Ｎ変異、Ｈ３７８Ｎ変異、Ｌ５８４Ａ変異、並びに以下の変異：Ｒ６９７Ａ、Ｋ７０２Ａ、Ｒ７０５Ａ、Ｒ７０８Ａ、Ｒ７１０Ａ、及びＲ７１６Ａを含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。

【0147】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２による配列からなり、アミノ酸６１９、６２１、６２５、６９７、７０２、７０５、７０８、７１０、及び７１６から選択される少なくとも１つの残基に変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２による配列からなり、残基６１９、６２１、６２５、６９７、７０２、７０５、７０８、７１０、及び７１６に変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２による配列からなり、以下の変異：Ｋ６１９Ａ、Ｒ６２１Ａ、Ｋ６２５Ａ、Ｒ６９７Ａ、Ｋ７０２Ａ、Ｒ７０５Ａ、Ｒ７０８Ａ、Ｒ７１０Ａ、及びＲ７１６Ａのうちの少なくとも１つを含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２による配列からなり、以下の変異：Ｋ６１９Ａ、Ｒ６２１Ａ、Ｋ６２５Ａ、Ｒ６９７Ａ、Ｋ７０２Ａ、Ｒ７０５Ａ、Ｒ７０８Ａ、Ｒ７１０Ａ、及びＲ７１６Ａを含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0148】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３による配列からなり、アミノ酸６１９、６２１、６２５、６９７、７０２、７０５、７０８、７１０、及び７１６から選択される少なくとも１つの残基に変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３による配列からなり、残基６１９、６２１、６２５、６９７、７０２、７０５、７０８、７１０、及び７１６に変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３による配列からなり、以下の変異：Ｋ６１９Ａ、Ｒ６２１Ａ、Ｋ６２５Ａ、Ｒ６９７Ａ、Ｋ７０２Ａ、Ｒ７０５Ａ、Ｒ７０８Ａ、Ｒ７１０Ａ、及びＲ７１６Ａのうちの少なくとも１つを含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３による配列からなり、以下の変異：Ｋ６１９Ａ、Ｒ６２１Ａ、Ｋ６２５Ａ、Ｒ６９７Ａ、Ｋ７０２Ａ、Ｒ７０５Ａ、Ｒ７０８Ａ、Ｒ７１０Ａ、及びＲ７１６Ａを含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0149】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２による配列からなり、Ｈ３７４Ｎ変異、Ｈ３７８Ｎ変異、Ｌ５８４Ａ変異、並びに以下の変異：Ｋ６１９Ａ、Ｒ６２１Ａ、Ｋ６２５Ａ、Ｒ６９７Ａ、Ｋ７０２Ａ、Ｒ７０５Ａ、Ｒ７０８Ａ、Ｒ７１０Ａ、及びＲ７１６Ａを含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。

【0150】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３による配列からなり、Ｈ３７４Ｎ変異、Ｈ３７８Ｎ変異、Ｌ５８４Ａ変異、並びに以下の変異：Ｋ６１９Ａ、Ｒ６２１Ａ、Ｋ６２５Ａ、Ｒ６９７Ａ、Ｋ７０２Ａ、Ｒ７０５Ａ、Ｒ７０８Ａ、Ｒ７１０Ａ、及びＲ７１６Ａを含み、ナンバリングは配列番号１による配列を参照する。

【0151】

ヒトＡＣＥ２の断片の別の変異体は、２つのＡＣＥ２分子間にジスルフィド架橋を形成するための追加のシステインを提供する変異体であってもよい。ジスルフィド架橋は、融合タンパク質の固有の安定性を高め、融合タンパク質のその標的への結合にも影響を及ぼし得る。追加のシステインは、配列番号１のナンバリングにおけるセリン６４５のシステインによる置換によって提供されてもよい。

【0152】

したがって、一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体はＳ６４５Ｃ変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。
一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２による配列からなり、Ｓ６４５Ｃ変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号５６によるアミノ酸配列を有するタンパク質からなる。

【0153】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３による配列からなり、Ｓ６４５Ｃ変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号５７によるアミノ酸配列を有するタンパク質からなる。

【0154】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２によるアミノ酸配列を有するタンパク質からなり、Ｈ３７４Ｎ変異、Ｈ３７８Ｎ変異、及びＳ６４５Ｃ変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号７０によるアミノ酸配列を有するタンパク質からなる。

【0155】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３によるアミノ酸配列を有するタンパク質からなり、Ｈ３７４Ｎ変異、Ｈ３７８Ｎ変異、及びＳ６４５Ｃ変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号７１によるアミノ酸配列を有するタンパク質からなる。

【0156】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２によるアミノ酸配列を有するタンパク質からなり、Ｒ２７３Ａ変異、及びＳ６４５Ｃ変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号８４によるアミノ酸配列を有するタンパク質からなる。

【0157】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３によるアミノ酸配列を有するタンパク質からなり、Ｒ２７３Ａ変異、及びＳ６４５Ｃ変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、配列番号８５によるアミノ酸配列を有するタンパク質からなる。

【0158】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２による配列からなり、Ｈ３７４Ｎ変異、Ｈ３７８Ｎ変異、Ｌ５８４Ａ変異、及びＳ６４５Ｃ変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0159】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３による配列からなり、Ｈ３７４Ｎ変異、Ｈ３７８Ｎ変異、Ｌ５８４Ａ変異、及びＳ６４５Ｃ変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0160】

ヒトＡＣＥ２の断片の別の変異体は、二量体化を阻害する変異体であってもよい。したがって、一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体は、アミノ酸Ｑ１３９に変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片の変異体はＱ１３９Ａ変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0161】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２による配列からなり、Ｑ１３９Ａ変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。
一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３による配列からなり、Ｑ１３９Ａ変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0162】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号２による配列からなり、Ｈ３７４Ｎ変異、Ｈ３７８Ｎ変異、Ｌ５８４Ａ変異、及びＱ１３９Ａ変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0163】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号３による配列からなり、Ｈ３７４Ｎ変異、Ｈ３７８Ｎ変異、Ｌ５８４Ａ変異、及びＱ１３９Ａ変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0164】

一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１６による配列からなり、Ｑ１３９Ａ変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。
一実施形態では、ヒトＡＣＥ２の断片は、配列番号１６による配列からなり、Ｈ３７４Ｎ変異、Ｈ３７８Ｎ変異、Ｌ５８４Ａ変異、及びＱ１３９Ａ変異を含み、ナンバリングは配列番号１を参照する。

【0165】

一実施形態では、融合タンパク質の第２の部分は、ヒトＩｇＧのＦｃ部分又はヒトＩｇＧのＦｃ部分の変異体を含む。ヒトＩｇＧのＦｃ部分は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４のＦｃ部分であってもよい。

【0166】

一実施形態では、融合タンパク質の第２の部分は、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分又はその変異体を含む。ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分は、Ｆｃ部分を形成するように互いに連結されたヒトＩｇＧ４のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。完全長ヒトＩｇＧ４抗体では、Ｆｃ部分はヒンジ領域を介してＦａｂ断片に連結されている。Ｆａｂ断片は、重鎖可変領域及びＣＨ１ドメインを含む。好ましくは、融合タンパク質に使用されるヒトＩｇＧ４のＦｃ部分は、配列番号５による配列を有する。

【0167】

ＩｇＧ４サブクラスの抗体はＦｃガンマ受容体に対して部分的な親和性しか有しておらず、補体を活性化しないため（Ｍｕｈａｍｍｅｄ（２０２０）Ｉｍｍｕｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１６（１）：１７３を参照）、それはＩｇＧ１サブクラスの抗体と同程度に免疫系を活性化しない。その結果、サイトカイン発現が刺激されるのはより低い程度までであり、サイトカインストームのリスクが低下する。

【0168】

「ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体」は、配列番号５によるヒトＩｇＧ４の野生型Ｆｃ部分と比較して１つ以上のアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ４のＦｃ部分を指す。一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、配列番号５によるヒトＩｇＧ４の野生型Ｆｃ部分と比較して、１～１２、１～１１、１～１０、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１又は２個のアミノ酸置換を有する。一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、配列番号５によるヒトＩｇＧ４の野生型Ｆｃ部分と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２個のアミノ酸置換を有する。一実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号５によるヒトＩｇＧ４の野生型Ｆｃ部分と比較してエフェクター機能の低下をもたらす。一実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号５によるヒトＩｇＧ４の野生型Ｆｃ部分と比較して半減期の増加をもたらす。一実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号５によるヒトＩｇＧ４の野生型Ｆｃ部分と比較してエフェクター機能の低下、及び配列番号５によるヒトＩｇＧ４の野生型Ｆｃ部分と比較して半減期の増加をもたらす。

【0169】

一実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号４によるＩｇＧ１の野生型Ｆｃ部分を産生しない。一実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、野生型ＩｇＧ１のエフェクター機能を変化したＩｇＧ４ Ｆｃ部分に付与しない。

【0170】

好ましくは、エフェクター機能の低下は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の低下を含む。より好ましくは、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体のＣＤＣは、配列番号５によるヒトＩｇＧ４の野生型Ｆｃ部分のＣＤＣと比較して、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、又は少なくとも５倍減少する。ＣＤＣを決定及び定量する方法は、当業者に周知である。概して、ＣＤＣは、抗原結合部分に融合したＦｃ部分を好適な標的細胞及び補体とインキュベートし、標的細胞の細胞死を検出することによって決定することができる。補体動員は、ＥＬＩＳＡプレートを使用してＣ１ｑ結合アッセイで分析することができる（例えば、Ｓｃｈｌｏｔｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２９（１０）：４５７－４６６を参照）。

【0171】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、配列番号５による配列のＦ３、Ｌ４、Ｇ６、Ｐ７、Ｆ１２、Ｖ３３、Ｎ６６、及びＰ９８から選択されるアミノ酸残基に少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。これらのアミノ酸残基は、完全長ヒトＩｇＧ４のアミノ酸残基Ｆ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３７、Ｐ２３８、Ｆ２４３、Ｖ２６４、Ｎ２９７、及びＰ３２９に対応する。これらの残基におけるアミノ酸置換は、エフェクター機能の低下をもたらすことが示された（国際公開第９４／２８０２７号；国際公開第９４／２９３５１号；国際公開第９５／２６４０３号；国際公開第２０１１／０６６５０１号；国際公開第２０１１／１４９９９９号；国際公開第２０１２／１３０８３１号；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｅｌｌ．９（１）：６３－７３）。

【0172】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｌ２３５Ｅ／Ａに対応する、配列番号５による配列中のアミノ酸置換Ｌ４Ｅ／Ａを含む。この変異体は、エフェクター機能の低下、特にＣＤＣの低下を有する。

【0173】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａに対応する、配列番号５による配列中のアミノ酸置換Ｆ３Ａ及びＬ４Ａを含む。この変異体は、エフェクター機能の低下、特にＣＤＣの低下を有する。

【0174】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、及びＰ２３８Ｓに対応する、配列番号５による配列中のアミノ酸置換Ｆ３Ａ、Ｌ４Ｅ、Ｇ６Ａ、及びＰ７Ｓを含む。この変異体は、エフェクター機能の低下、特にＣＤＣの低下を有する。

【0175】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｆ２４３Ａ及びＶ２６４Ａに対応する、配列番号５による配列中のアミノ酸置換Ｆ１２Ａ及びＶ３３Ａを含む。この変異体は、エフェクター機能の低下、特にＣＤＣの低下を有する。

【0176】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｌ２３５Ｅ及びＰ３２９Ｇに対応する、配列番号５による配列中のアミノ酸置換Ｌ４Ｅ及びＰ９８Ｇを含む。この変異体は、エフェクター機能の低下、特にＣＤＣの低下を有する。

【0177】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｎ２９７Ａ／Ｑ／Ｇに対応する、配列番号５による配列中のアミノ酸置換Ｎ６６Ａ／Ｑ／Ｇを含む。この変異体は、エフェクター機能の低下、特にＣＤＣの低下を有する。

【0178】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ４のＴ２５０、Ｍ２５２、Ｓ２５４、Ｔ２５６、Ｅ２５８、Ｋ２８８、Ｔ３０７、Ｖ３０８、Ｑ３１１、Ｖ４２７、Ｍ４２８、Ｈ４３３、Ｎ４３４、及びＨ４３５から選択されるアミノ酸残基に少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。これらのアミノ酸残基は、配列番号５による配列のアミノ酸残基Ｔ１９、Ｍ２１、Ｓ２３、Ｔ２５、Ｅ２７、Ｋ５７、Ｔ７６、Ｖ７７、Ｑ８０、Ｖ１９６、Ｍ１９７、Ｈ２０２、Ｎ２０３、及びＨ２０４に対応する。これらのアミノ酸置換は、Ｆｃ含有タンパク質の増大した半減期をもたらすことが示された（国際公開第００／４２０７２号；国際公開第０２／０６０９１９号；国際公開第２００４／０３５７５２号；国際公開第２００６／０５３３０１号；国際公開第２００９／０５８４９２号；国際公開第２００９／０８６３２０号；米国特許出願公開第２０１０／０２０４４５４号；英国特許出願公開第２０１３／０２８７８；国際公開第２０１３／１６３６３０号；米国特許出願公開第２０１９／００１０２４３号）。抗体又はＦｃ融合タンパク質の半減期は、抗体又はＦｃ融合タンパク質の投与後の異なる時点で血清中の抗体又はＦｃ融合タンパク質濃度を測定し、そこから半減期を計算することによって決定することができる。

【0179】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅに対応する、配列番号５による配列中のアミノ酸置換Ｍ２１Ｙ、Ｓ２３Ｔ、及びＴ２５Ｅを含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、配列番号２０によるアミノ酸配列を有する。この変異体は、増加した半減期を有する。

【0180】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｔ２５６Ｄ及びＴ３０７Ｑに対応する、配列番号５による配列中のアミノ酸置換Ｔ２５Ｄ及びＴ７６Ｑを含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、配列番号２１によるアミノ酸配列を有する。この変異体は、増加した半減期、及び増強されたＦｃＲｎへの結合を有する。

【0181】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｔ２５０Ｑ／Ｅ及びＭ４２８Ｌ／Ｆに対応する、配列番号５による配列中のアミノ酸置換Ｔ１９Ｑ／Ｅ及びＭ１９７Ｌ／Ｆを含む。この変異体は、増加した半減期を有する。

【0182】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｎ４３４Ｓ及びＶ３０８Ｗ／Ｙ／Ｆに対応する、配列番号５による配列中のアミノ酸置換Ｎ２０３Ｓ及びＶ７７Ｗ／Ｙ／Ｆを含む。この変異体は、増加した半減期を有する。

【0183】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｍ２５２Ｙ及びＭ４２８Ｌに対応する、配列番号５による配列中のアミノ酸置換Ｍ２１Ｙ及びＭ１９７Ｌを含む。この変異体は、増加した半減期を有する。

【0184】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｔ３０７Ｑ及びＮ４３４Ｓに対応する、配列番号５による配列中のアミノ酸置換Ｔ７６Ｑ及びＮ２０３Ｓを含む。この変異体は、増加した半減期を有する。

【0185】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｍ４２８Ｌ及びＶ３０８Ｆに対応する、配列番号５による配列中のアミノ酸置換Ｍ１９７Ｌ及びＶ７７Ｆを含む。この変異体は、増加した半減期を有する。

【0186】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｑ３１１Ｖ及びＮ４３４Ｓに対応する、配列番号５による配列中のアミノ酸置換Ｑ８０Ｖ及びＮ２０３Ｓを含む。この変異体は、増加した半減期を有する。

【0187】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｈ４３３Ｋ及びＮ４３４Ｆに対応する、配列番号５による配列中のアミノ酸置換Ｈ２０２Ｋ及びＮ２０３Ｆを含む。この変異体は、増加した半減期を有する。

【0188】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｅ２５８Ｆ及びＶ４２７Ｔに対応する、配列番号５による配列中のアミノ酸置換Ｅ２７Ｆ及びＶ１９６Ｔを含む。この変異体は、増加した半減期を有する。

【0189】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｋ２８８Ｅ及びＨ４３５Ｋに対応する、配列番号５による配列中のアミノ酸置換Ｋ５７Ｅ及びＨ２０４Ｋを含む。この変異体は、増加した半減期を有する。

【0190】

一実施形態では、融合タンパク質の第２の部分は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分又はその変異体を含む。ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分は、Ｆｃ部分を形成するように互いに連結されたヒトＩｇＧ１のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。完全長ヒトＩｇＧ１抗体では、Ｆｃ部分はヒンジ領域を介してＦａｂ断片に連結されている。Ｆａｂ断片は、重鎖可変領域及びＣＨ１ドメインを含む。好ましくは、融合タンパク質に使用されるヒトＩｇＧ１のＦｃ部分は、配列番号４による配列を有する。

【0191】

「ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体」は、配列番号４によるヒトＩｇＧ１の野生型Ｆｃ部分と比較して１つ以上のアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ４のＦｃ部分を指す。一実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号４によるヒトＩｇＧ１の野生型Ｆｃ部分と比較してエフェクター機能の低下をもたらす。

【0192】

好ましくは、エフェクター機能の低下は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の低下を含む。より好ましくは、ＣＤＣは、配列番号４によるヒトＩｇＧ１の野生型Ｆｃ部分のＣＤＣと比較して、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、又は少なくとも５倍減少する。ＣＤＣを決定及び定量する方法は当業者に周知であり、上に記載されている。

【0193】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体は、配列番号４による配列のＬ３、Ｌ４、及びＰ９８から選択されるアミノ酸残基に少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。これらのアミノ酸残基は、完全長ヒトＩｇＧ１のアミノ酸残基Ｌ２３４、Ｌ２３５、及びＰ３２９に対応する。

【0194】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ１のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｌ２３５Ｅ／Ａに対応する、配列番号４による配列中のアミノ酸置換Ｌ４Ｅ／Ａを含む。この変異体は、エフェクター機能の低下、特にＣＤＣの低下を有する。

【0195】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ１のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａに対応する、配列番号４による配列中のアミノ酸置換Ｌ３Ａ及びＬ４Ａを含む。この変異体は、エフェクター機能の低下、特にＣＤＣの低下を有する。

【0196】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ１のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇに対応する、配列番号４による配列中のアミノ酸置換Ｌ３Ａ、Ｌ４Ａ、Ｐ９８Ｇを含む。この変異体は、エフェクター機能の低下、特にＣＤＣの低下を有する。

【0197】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ１のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇに対応する、配列番号４による配列中のアミノ酸置換Ｌ４Ａ及びＰ９８Ｇを含む。この変異体は、エフェクター機能の低下、特にＣＤＣの低下を有する。

【0198】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ１のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅに対応する、配列番号４による配列中のアミノ酸置換Ｍ２１Ｙ、Ｓ２３Ｔ、及びＴ２５Ｅを含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体は、配列番号２２によるアミノ酸配列を有する。この変異体は、増加した半減期、及び増強されたＦｃＲｎへの結合を有する。

【0199】

一実施形態では、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体は、完全長ヒトＩｇＧ１のアミノ酸配列中のアミノ酸置換Ｔ２５６Ｄ及びＴ３０７Ｑに対応する、配列番号４による配列中のアミノ酸置換Ｔ２５Ｄ及びＴ７６Ｑを含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体は、配列番号２３によるアミノ酸配列を有する。この変異体は、増加した半減期、及び増強されたＦｃＲｎへの結合を有する。

【0200】

一実施形態では、ヒト抗体のＦｃ部分、又はその断片若しくは変異体は、脱フコシル化されている。「脱フコシル化」という用語は、タンパク質、ここではヒト抗体のＦｃ部分が、フコース部分を欠くグリカン構造を含むことを意味する。フコース部分は、グリカン構造内のＮ－アセチルグルコサミン部分に結合していてもよい。ヒト抗体のＦｃ部分等の脱フコシル化タンパク質は、Ｎ－アセチルグルコサミン部分に結合したこのフコース部分を欠く。脱フコシル化抗体又はヒト抗体のＦｃ部分は、アスパラギン２９７（配列番号４又は５による配列におけるアスパラギン６６である）のオリゴ糖総量の６０％以下、５０％以下、４０％以下、又は３０％以下、又は２０％以下のフコース量を有する。一実施形態では、脱フコシル化抗体又はヒト抗体のＦｃ部分は、アスパラギン２９７（配列番号４又は５による配列におけるアスパラギン６６である）におけるオリゴ糖総量の４０％～６０％のフコース量を有する。一実施形態では、脱フコシル化抗体又はヒト抗体のＦｃ部分は、アスパラギン２９７（配列番号４又は５による配列におけるアスパラギン６６である）のグリカン構造に結合したフコースを全く有していない。特定の実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の脱フコシル化分子を含有する。全てのＮ－グリコシル化融合タンパク質が脱フコシル化されている必要はない。

【0201】

脱フコシル化は、融合タンパク質の消化及びペプチドマッピングによる分析を含む、当業者に公知の様々な方法によって分析することができる。あるいは、糖タンパク質分析のために親水性相互作用液体クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）を行ってもよい。

【0202】

脱フコシル化抗体又はそのＦｃ部分は、ＦｃγＲＩＩＩに対するより強い親和性のために、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の増加を示すことが示された（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３－２６７４０），Ｋａｎｄａ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３０：３００－３１０；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｕｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４－６２２）。

【0203】

脱フコシル化融合タンパク質は、融合タンパク質を発現する宿主細胞を、フコシル化阻害剤を補充した培地中、特定の条件下で培養することによって産生することができる。「フコシル化阻害剤」は、タンパク質のフコシル化に関与する酵素、特にフコシルトランスフェラーゼに結合し、その活性を阻害する分子である。好適なフコシル化阻害剤としては、２－フルオロフコース、Ａ２ＦＦ１Ｐ、Ｂ２ＦＦ１Ｐ（Ｐｉｊｎｅｎｂｏｒｇ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２７：４０２２－４０２７）、２Ｆ－ペルアセチル－フコース、ペルアセチル化５－チオフコース、２－デオキシ－Ｄ－ガラクトース、ペルアセチル化６－アルキル－フコース及び６，６，６－トリフルオロフコース（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｃｅｌｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２５：４９９－５１２）、ＧＤＰ－Ｄ－ラムノース、Ａｃ－ＧＤＰ－Ｄ－ラムノース、ラムノースリン酸ナトリウム（国際公開第２０２１／１２７４１４号）、５－アルキニル－フコース及び５－アルキニル－フコースパーアセテート（（Ｚｉｍｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（２０１９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ８（１）：９）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0204】

好ましくは、フコシル化阻害剤は２－フルオロフコースである。好ましくは、２－フルオロフコースは、５～２００μＭの濃度で、好ましくは１０～１５０μＭの濃度で細胞培養培地に添加される。

【0205】

あるいは、脱フコシル化タンパク質は、融合タンパク質を発現する宿主細胞を培養することによって産生することができ、真核生物宿主細胞は、フコシル化に関与するタンパク質の活性を低下させるように遺伝子改変されている。

【0206】

一実施形態では、フコシル化に関与するタンパク質は、ＧＤＰ－マンノース４，６－デヒドラターゼ（ＧＭＤ）（Ｋａｎｄａ ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３０：３００－３１０）、ＧＤＰ－フコース輸送体（ＧＦＴ）（Ｂａｒｄｈｉ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．９１（２０）：ｅ９３７－９１７；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１６）ＭＡＢｓ ８：７６１－７７４）、及びα－（１，６）－フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）（Ｍｏｒｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．８８：９０１－９０８；Ｉｍａｉ－Ｎｉｓｈｉｙａ ｅｔ ａｌ．（２００７）ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７：８４；Ｄｉｃｋｅｒ ａｎｄ Ｓｔｒａｓｓｅｒ（２０１５）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏ．Ｔｈｅｒ．１５：１５０１－１５１６）からなる群から選択される。

【0207】

一実施形態では、融合タンパク質の第１の部分及び第２の部分は、連結配列によって連結される。連結配列は、それ自体で機能を有しておらず、融合タンパク質の折り畳みに影響を及ぼさない短いアミノ酸配列である。一実施形態では、連結配列は、８～２０個のアミノ酸、好ましくは１０～１８個のアミノ酸、より好ましくは１１～１７個のアミノ酸、又は１２～１６個のアミノ酸、最も好ましくは１３個のアミノ酸を含む。一実施形態では、融合タンパク質の第２の部分がヒトＩｇＧ４のＦｃ部分又はその変異体である場合、連結配列は、８～２０個のアミノ酸、好ましくは１０～１８個のアミノ酸、より好ましくは１１～１７個のアミノ酸、又は１２～１６個のアミノ酸、最も好ましくは１３個のアミノ酸を含む。一実施形態では、融合タンパク質の第２の部分がヒトＩｇＧ１のＦｃ部分又はその変異体である場合、連結配列は、７～１８個のアミノ酸、好ましくは８～１５個のアミノ酸、より好ましくは９～１４個のアミノ酸、又は１０～１３個のアミノ酸、最も好ましくは１１個のアミノ酸を含む。

【0208】

一実施形態では、連結配列は、グリシン及びセリンから選択される小さいアミノ酸からなる。連結配列の概要は、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９に提供されている。

【0209】

一実施形態では、融合タンパク質の第２の部分がヒトＩｇＧ４のＦｃ部分である場合、連結配列はヒトＩｇＧ４のヒンジ領域からなる。一実施形態では、連結配列は、配列番号１８による配列からなる。配列番号１８による配列では、ＩｇＧ４の野生型ヒンジ領域の残基１０のセリン（完全長ＩｇＧ４のセリン２２８に対応する）がプロリンで置換されており、ＩｇＧ半分子の交換の減少がもたらされる。ＩｇＧ４抗体はＦａｂアーム交換を受けることがあり、２つの別個のＦａｂアームの組み合わせをもたらし、新しい二重特異性抗体分子を作り出すことが知られている（例えば、Ａａｌｂｅｒｓｅ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ ３９（４）：４６９－４７７を参照）。このＦａｂアーム交換は、ＩｇＧ４のヒンジ領域に位置するＦｃ領域のセリン２２８のプロリンへの変異（Ｓ２２８Ｐ；Ｓｉｌｖａ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２９０：５４６２－５４６９を参照）によって阻止することができる。更に、短いリンカー配列の使用は、融合タンパク質の安定性を高め、融合タンパク質のプロテアーゼへのアクセス可能性を低下させる。

【0210】

一実施形態では、融合タンパク質の第２の部分がヒトＩｇＧ１のＦｃ部分である場合、連結配列はヒトＩｇＧ１のヒンジ領域からなる。一実施形態では、連結配列は、配列番号１９による配列からなる。

【0211】

特定の実施形態では、融合タンパク質は、ヒトＡＣＥ２のアミノ酸１８～７３２（配列番号２）を含む配列番号６によるアミノ酸配列、配列番号１８による連結配列、及び配列番号５によるヒトＩｇＧ４のＦｃ部分を有する。

【0212】

別の特定の実施形態では、融合タンパク質は、ヒトＡＣＥ２のアミノ酸１８～７３２（配列番号２）を含む配列番号７によるアミノ酸配列、配列番号１９による連結配列、及び配列番号４によるヒトＩｇＧ１のＦｃ部分を有する。

【0213】

別の特定の実施形態では、融合タンパク質は、ヒトＡＣＥ２のアミノ酸１８～７４０（配列番号３）を含む配列番号８によるアミノ酸配列、配列番号１８による連結配列、及び配列番号５によるヒトＩｇＧ４のＦｃ部分を有する。

【0214】

別の特定の実施形態では、融合タンパク質は、ヒトＡＣＥ２のアミノ酸１８～７４０（配列番号３）を含む配列番号９によるアミノ酸配列、配列番号１９による連結配列、及び配列番号４によるヒトＩｇＧ１のＦｃ部分を有する。

【0215】

特定の実施形態では、融合タンパク質は、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を有するヒトＡＣＥ２のアミノ酸１８～７３２（配列番号２）を含む配列番号１０によるアミノ酸配列（ナンバリングは配列番号１を参照する）、配列番号１８による連結配列、及び配列番号５によるヒトＩｇＧ４のＦｃ部分を有する。

【0216】

特定の実施形態では、本発明の融合タンパク質は、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を有するヒトＡＣＥ２のアミノ酸１８～７３２（配列番号２）を含む配列番号１１によるアミノ酸配列（ナンバリングは配列番号１を参照する）、配列番号１９による連結配列、及び配列番号４によるヒトＩｇＧ１のＦｃ部分を有する。

【0217】

別の特定の実施形態では、融合タンパク質は、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を有するヒトＡＣＥ２のアミノ酸１８～７４０（配列番号３）を含む配列番号１２によるアミノ酸配列（ナンバリングは配列番号１を参照する）、配列番号１８による連結配列、及び配列番号５によるヒトＩｇＧ４のＦｃ部分を有する。

【0218】

特定の実施形態では、本発明の融合タンパク質は、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を有するヒトＡＣＥ２のアミノ酸１８～７４０（配列番号３）を含む配列番号１３によるアミノ酸配列（ナンバリングは配列番号１を参照する）、配列番号１９による連結配列、及び配列番号４によるヒトＩｇＧ１のＦｃ部分を有する。

【0219】

特定の実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ヒトＡＣＥ２のアミノ酸１８～７３２（配列番号２）を含む配列番号２６によるアミノ酸配列、配列番号１８による連結配列、及び配列番号２０によるヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体を有する。

【0220】

特定の実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ヒトＡＣＥ２のアミノ酸１８～７３２（配列番号２）を含む配列番号２７によるアミノ酸配列、配列番号１９による連結配列、及び配列番号２２によるヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体を有する。

【0221】

特定の実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ヒトＡＣＥ２のアミノ酸１８～７４０（配列番号３）を含む配列番号３０によるアミノ酸配列、配列番号１８による連結配列、及び配列番号２０によるヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体を有する。

【0222】

特定の実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ヒトＡＣＥ２のアミノ酸１８～７４０（配列番号３）を含む配列番号３１によるアミノ酸配列、配列番号１９による連結配列、及び配列番号２２によるヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体を有する。

【0223】

特定の実施形態では、本発明の融合タンパク質は、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を有するヒトＡＣＥ２のアミノ酸１８～７３２（配列番号２）を含む配列番号３４によるアミノ酸配列（ナンバリングは配列番号１を参照する）、配列番号１８による連結配列、及び配列番号２０によるヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体を有する。

【0224】

特定の実施形態では、本発明の融合タンパク質は、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を有するヒトＡＣＥ２のアミノ酸１８～７３２（配列番号２）を含む配列番号３５によるアミノ酸配列（ナンバリングは配列番号１を参照する）、配列番号１９による連結配列、及び配列番号２２によるヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体を有する。

【0225】

特定の実施形態では、本発明の融合タンパク質は、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を有するヒトＡＣＥ２のアミノ酸１８～７４０（配列番号３）を含む配列番号３８によるアミノ酸配列（ナンバリングは配列番号１を参照する）、配列番号１８による連結配列、及び配列番号２０によるヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体を有する。

【0226】

特定の実施形態では、本発明の融合タンパク質は、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を有するヒトＡＣＥ２のアミノ酸１８～７４０（配列番号３）を含む配列番号３９によるアミノ酸配列（ナンバリングは配列番号１を参照する）、配列番号１９による連結配列、及び配列番号２２によるヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体を有する。

【0227】

一実施形態では、本明細書に記載の上記融合タンパク質のいずれかは、ＩＰ１０又はその変異体に融合される。ＩＰ１０（ＣＸＣＬ１０、ガンマ－ＩＰ１０、小誘導性サイトカインＢ１０、ＩＮＰ１０、ＳＣＹＢ１０及び１０ｋＤＡインターフェロンガンマ誘導性タンパク質と同義）は、ケモカイン受容体ＣＸＣＲ３を介して免疫細胞に結合するケモカインであり、異なる免疫細胞の化学誘引、内皮細胞へのＴ細胞接着の促進、抗腫瘍活性、並びに骨髄コロニー形成及び血管新生の阻害をもたらす。更に、ＩＰ１０は、免疫細胞の活性化及び感染部位への移動を刺激することによって、ウイルス感染中に重要な役割を果たす。ＩＰ１０のアミノ酸配列は配列番号９８に示される。ＩＰ１０が四量体を形成することができることが示された（Ｓｗａｍｉｎａｔｈａｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ １１：５２１－５３２）。したがって、ＩＰ１０を含む融合タンパク質では、ＩＰ１０部分は融合タンパク質分子の四量体を提供し、それによってＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質等のそれらの標的に対する融合タンパク質の親和性を増加させる。標的に対する四量体融合タンパク質のより高い親和性のために、融合タンパク質の投与量を減少させることが可能であり得る。更に、ＩＰ１０とｓｃＦｖとの融合タンパク質は、免疫エフェクター細胞を動員することができることが示された（Ｇｕｏ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．３２０：５０６－５１３）。したがって、ＩＰ１０を含む融合タンパク質は、ＡＣＥ２－Ｆｃ融合タンパク質によって結合された標的、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質に免疫エフェクター細胞を動員し、ウイルスの中和をもたらすことができる。

【0228】

好ましくは、ＩＰ１０は、ヒト抗体のＦｃ部分のＣ末端に融合される。
一実施形態では、ヒト抗体のＦｃ部分とＩＰ１０とは連結配列によって連結されている。一実施形態では、ヒト抗体のＦｃ部分間の連結配列は、グリシン及びセリンから選択される小さいアミノ酸からなる。一実施形態では、ヒト抗体のＦｃ部分間の連結配列は、８～１４個、好ましくは９～１３個、より好ましくは１０～１２個、最も好ましくは１１個のアミノ酸からなる。一実施形態では、ヒト抗体のＦｃ部分間の連結配列は、グリシン及びセリンから選択される８～１４個、好ましくは９～１３個、より好ましくは１０～１２個、最も好ましくは１１個のアミノ酸からなる。一実施形態では、連結配列は、配列番号１４によるアミノ酸配列からなる。

【0229】

「ＩＰ１０の変異体」は、配列番号９８による野生型ＩＰ１０と比較して、１つ以上のアミノ酸置換を有するＩＰ１０を指す。ＩＰ１０の変異体は依然として四量体を形成し、免疫エフェクター細胞を動員することができる。

【0230】

好ましい実施形態では、融合タンパク質は、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、及び配列番号１７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。

【0231】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は当該断片の変異体を含む第１の部分であって、当該ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ＩＰ１０に連結されたヒトＩｇＧのＦｃ部分を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、及び（ｂ）ｐＨ５．６～６．４の緩衝液、を含む。一実施形態では、液体医薬組成物のｐＨは５．６～６．０であり、緩衝液は、酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、及びコハク酸緩衝液から選択され、好ましくは酢酸緩衝液である。好ましくは、緩衝液は、５ｍＭ～６０ｍＭの濃度で存在する。一実施形態では、液体医薬組成物は、トレハロース、スクロース、及びマンニトールから選択される糖及び／又は糖アルコール、好ましくはトレハロースを更に含む。好ましくは、糖及び／又は糖アルコールは、１００ｍＭ～３００ｍＭの濃度である。一実施形態では、液体医薬組成物は非イオン性界面活性剤を更に含み、好ましくは非イオン性界面活性剤はポリソルベート２０及びポリソルベート８０から選択され、好ましくは非イオン性界面活性剤は０．０１％（ｗ／ｖ）～０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。一実施形態では、液体医薬組成物は無機塩を更に含み、好ましくは無機塩は塩化ナトリウムである。好ましくは、無機塩は、３０ｍＭ～１５０ｍＭの濃度で存在する。一実施形態では、液体医薬組成物は、Ｌ－アルギニン及びＬ－メチオニンから選択される１つ以上のアミノ酸を、好ましくは１ｍＭ～５０ｍＭの濃度で更に含む。好ましい実施形態では、ＩＰ１０は、配列番号９８によるアミノ酸配列又はその変異体を含む。好ましい実施形態では、融合タンパク質は、配列番号９９～１０２、１１１～１１４、１２３～１２６、１３５～１３８、１４７～１５０、１５９～１６２のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、ＩＰ１０は、配列番号９８によるアミノ酸配列又はその変異体を含み、融合タンパク質は、配列番号９９～１０２、１１１～１１４、１２３～１２６、１３５～１３８、１４７～１５０、１５９～１６２のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。

【0232】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は当該断片の変異体を含む第１の部分であって、当該ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ＩＰ１０に連結されたヒトＩｇＧのＦｃ部分を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、
（ｂ）ｐＨ５．６～６．０の酢酸緩衝液、
（ｃ）ポリソルベート２０又はポリソルベート８０、
（ｄ）トレハロース又はスクロース、並びに
（ｅ）任意に、Ｌ－アルギニン、Ｌ－メチオニン、及び無機塩、好ましくは塩化ナトリウムからなる群から選択される１つ以上の安定剤、を含む。好ましい実施形態では、ＩＰ１０は、配列番号９８によるアミノ酸配列又はその変異体を含み、融合タンパク質は、配列番号９９～１０２、１１１～１１４、１２３～１２６、１３５～１３８、１４７～１５０、１５９～１６２のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。

【0233】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は当該断片の変異体を含む第１の部分であって、当該ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ＩＰ１０に連結されたヒトＩｇＧのＦｃ部分を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、及び（ｂ）ｐＨ５．６～６．４の緩衝液、を含む。一実施形態では、液体医薬組成物のｐＨは、６．１～６．４、好ましくは６．２である。好ましい実施形態では、緩衝液は、好ましくは１０ｍＭ～４０ｍＭの濃度のＬ－アルギニンＨＣｌである。一実施形態では、液体医薬組成物は、トレハロース、スクロース、及びマンニトールから選択される糖及び／又は糖アルコール、好ましくはトレハロースを更に含む。好ましくは、糖及び／又は糖アルコールは、２０ｍＭ～２５０ｍＭの濃度で存在する。一実施形態では、液体医薬組成物は非イオン性界面活性剤を更に含み、好ましくは非イオン性界面活性剤はポリソルベート２０及びポリソルベート８０から選択され、好ましくは非イオン性界面活性剤はポリソルベート２０である。好ましくは、非イオン性界面活性剤は、０．０１％（ｗ／ｖ）～０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。一実施形態では、液体医薬組成物は、Ｌ－メチオニンを、好ましくは１ｍＭ～５０ｍＭ、より好ましくは１ｍＭ～２０ｍＭ、更により好ましくは１ｍＭ～１０ｍＭ、例えば５ｍＭの濃度で更に含む。一実施形態では、液体医薬組成物は無機塩を更に含み、好ましくは無機塩は塩化ナトリウムである。好ましくは、無機塩は、３０ｍＭ～１５０ｍＭの濃度で存在する。好ましい実施形態では、ＩＰ１０は、配列番号９８によるアミノ酸配列又はその変異体を含む。好ましい実施形態では、融合タンパク質は、配列番号９９～１０２、１１１～１１４、１２３～１２６、１３５～１３８、１４７～１５０、１５９～１６２のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、ＩＰ１０は、配列番号９８によるアミノ酸配列又はその変異体を含み、融合タンパク質は、配列番号９９～１０２、１１１～１１４、１２３～１２６、１３５～１３８、１４７～１５０、１５９～１６２のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。

【0234】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は当該断片の変異体を含む第１の部分であって、当該ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ＩＰ１０に連結されたヒトＩｇＧのＦｃ部分を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、
（ｂ）ｐＨ６．１～６．４、好ましくは６．２のＬ－アルギニンＨＣＬ緩衝液、
（ｃ）ポリソルベート２０又はポリソルベート８０、
（ｄ）トレハロース又はスクロース、並びに
（ｅ）任意に、Ｌ－メチオニン、及び無機塩、好ましくは塩化ナトリウムから選択される１つ以上の安定剤、を含む。好ましい実施形態では、ＩＰ１０は、配列番号９８によるアミノ酸配列又はその変異体を含み、融合タンパク質は、配列番号９９～１０２、１１１～１１４、１２３～１２６、１３５～１３８、１４７～１５０、１５９～１６２のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。

【0235】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は当該断片の変異体を含む第１の部分であって、当該ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ＩＰ１０に連結されたヒトＩｇＧのＦｃ部分の変異体を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、及び（ｂ）ｐＨ５．６～６．４の緩衝液、を含む。一実施形態では、液体医薬組成物のｐＨは５．６～６．０であり、緩衝液は、酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、及びコハク酸緩衝液から選択され、好ましくは酢酸緩衝液である。好ましくは、緩衝液は、５ｍＭ～６０ｍＭの濃度で存在する。一実施形態では、液体医薬組成物は、トレハロース、スクロース、及びマンニトールから選択される糖及び／又は糖アルコール、好ましくはトレハロースを更に含む。好ましくは、糖及び／又は糖アルコールは、１００ｍＭ～３００ｍＭの濃度である。一実施形態では、液体医薬組成物は非イオン性界面活性剤を更に含み、好ましくは非イオン性界面活性剤はポリソルベート２０及びポリソルベート８０から選択され、好ましくは非イオン性界面活性剤は０．０１％（ｗ／ｖ）～０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。一実施形態では、液体医薬組成物は無機塩を更に含み、好ましくは無機塩は塩化ナトリウムである。好ましくは、無機塩は、３０ｍＭ～１５０ｍＭの濃度で存在する。一実施形態では、液体医薬組成物は、Ｌ－アルギニン及びＬ－メチオニンから選択される１つ以上のアミノ酸を、好ましくは１ｍＭ～５０ｍＭの濃度で更に含む。好ましい実施形態では、ＩＰ１０は、配列番号９８によるアミノ酸配列又はその変異体を含む。好ましい実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１０３～１１０、１１５～１２２、１２７～１３４、１３９～１４６、１５１～１５８、１６３～１７０のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、ＩＰ１０は、配列番号９８によるアミノ酸配列又はその変異体を含み、融合タンパク質は、配列番号１０３～１１０、１１５～１２２、１２７～１３４、１３９～１４６、１５１～１５８、１６３～１７０のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。

【0236】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は当該断片の変異体を含む第１の部分であって、当該ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ＩＰ１０に連結されたヒトＩｇＧのＦｃ部分を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、
（ｂ）ｐＨ５．６～６．０の有する酢酸緩衝液、
（ｃ）ポリソルベート２０又はポリソルベート８０、
（ｄ）トレハロース又はスクロース、並びに
（ｅ）任意に、Ｌ－アルギニン、Ｌ－メチオニン、及び無機塩、好ましくは塩化ナトリウムからなる群から選択される１つ以上の安定剤、を含む。好ましい実施形態では、ＩＰ１０は、配列番号９８によるアミノ酸配列又はその変異体を含み、融合タンパク質は、配列番号１０３～１１０、１１５～１２２、１２７～１３４、１３９～１４６、１５１～１５８、１６３～１７０のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。

【0237】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は当該断片の変異体を含む第１の部分であって、当該ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ＩＰ１０に連結されたヒトＩｇＧのＦｃ部分を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、及び（ｂ）ｐＨ５．６～６．４の緩衝液、を含む。一実施形態では、液体医薬組成物のｐＨは、６．１～６．４、好ましくは６．２である。好ましい実施形態では、緩衝液は、好ましくは１０ｍＭ～４０ｍＭの濃度のＬ－アルギニンＨＣｌである。一実施形態では、液体医薬組成物は、トレハロース、スクロース、及びマンニトールから選択される糖及び／又は糖アルコール、好ましくはトレハロースを更に含む。好ましくは、糖及び／又は糖アルコールは、２０ｍＭ～２５０ｍＭの濃度で存在する。一実施形態では、液体医薬組成物は非イオン性界面活性剤を更に含み、好ましくは非イオン性界面活性剤はポリソルベート２０及びポリソルベート８０から選択され、好ましくは非イオン性界面活性剤はポリソルベート２０である。好ましくは、非イオン性界面活性剤は、０．０１％（ｗ／ｖ）～０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する。一実施形態では、液体医薬組成物は、Ｌ－メチオニンを、好ましくは１ｍＭ～５０ｍＭ、より好ましくは１ｍＭ～２０ｍＭ、更により好ましくは１ｍＭ～１０ｍＭ、例えば５ｍＭの濃度で更に含む。一実施形態では、液体医薬組成物は無機塩を更に含み、好ましくは無機塩は塩化ナトリウムである。好ましくは、無機塩は、３０ｍＭ～１５０ｍＭの濃度で存在する。好ましい実施形態では、ＩＰ１０は、配列番号９８によるアミノ酸配列又はその変異体を含む。好ましい実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１０３～１１０、１１５～１２２、１２７～１３４、１３９～１４６、１５１～１５８、１６３～１７０のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態では、ＩＰ１０は、配列番号９８によるアミノ酸配列又はその変異体を含み、融合タンパク質は、配列番号１０３～１１０、１１５～１２２、１２７～１３４、１３９～１４６、１５１～１５８、１６３～１７０のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。

【0238】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は当該断片の変異体を含む第１の部分であって、当該ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ＩＰ１０に連結されたヒトＩｇＧのＦｃ部分を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、
（ｂ）ｐＨ６．１～６．４、好ましくはｐＨ６．２のＬ－アルギニンＨＣＬ緩衝液、
（ｃ）ポリソルベート２０又はポリソルベート８０、
（ｄ）トレハロース又はスクロース、並びに
（ｅ）任意に、Ｌ－メチオニン、及び無機塩、好ましくは塩化ナトリウムから選択される１つ以上の安定剤、を含む。好ましい実施形態では、ＩＰ１０は、配列番号９８によるアミノ酸配列又はその変異体を含み、融合タンパク質は、配列番号１０３～１１０、１１５～１２２、１２７～１３４、１３９～１４６、１５１～１５８、１６３～１７０のいずれか１つによるアミノ酸配列を含む。

【0239】

一実施形態では、緩衝液は酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号６によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液は、ｐＨ５．６～６．０の範囲内の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有する。

【0240】

一実施形態では、緩衝液はｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号６によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液はｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号６によるアミノ酸配列を有する。

【0241】

一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６～６．０の範囲内の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有する。

【0242】

一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号６によるアミノ酸配列を有する。

【0243】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、糖は、１０６ｍＭの濃度を有するトレハロースである。

【0244】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースである。

【0245】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、糖は、１０６ｍＭの濃度を有するトレハロースである。

【0246】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースである。

【0247】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、糖は、２６３ｍＭの濃度を有するスクロースである。

【0248】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、糖は、２６３ｍＭの濃度を有するスクロースである。

【0249】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0250】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0251】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0252】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、糖は１０６ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0253】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、糖は１０６ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0254】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、糖は１０６ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0255】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、糖は１０６ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0256】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、糖は１０６ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0257】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、糖は２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0258】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、糖は２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0259】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、糖は２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0260】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、糖は２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0261】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、糖は２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0262】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、糖は、２６３ｍＭの濃度を有するスクロースである。

【0263】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、糖は、２６３ｍＭの濃度を有するスクロースである。

【0264】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０であり、糖は、２６３ｍＭの濃度を有するスクロースである。

【0265】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号６によるアミノ酸配列を有し、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０であり、糖は、２６３ｍＭの濃度を有するスクロースである。

【0266】

一実施形態では、緩衝液は酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号７によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液は、ｐＨ５．６～６．０の範囲内の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号７によるアミノ酸配列を有する。

【0267】

一実施形態では、緩衝液はｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号７によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号７によるアミノ酸配列を有する。

【0268】

一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６～６．０の範囲内の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号７によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号７によるアミノ酸配列を有する。

【0269】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号７によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号７によるアミノ酸配列を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースである。

【0270】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号７によるアミノ酸配列を有し、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0271】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号７によるアミノ酸配列を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0272】

一実施形態では、緩衝液は酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号１０によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液は、ｐＨ５．６～６．０の範囲内の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有する。

【0273】

一実施形態では、緩衝液はｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号１０によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液はｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号１０によるアミノ酸配列を有する。

【0274】

一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６～６．０の範囲内の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有する。

【0275】

一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号１０によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号１０によるアミノ酸配列を有する。

【0276】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、１０６ｍＭの濃度を有するトレハロースである。

【0277】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースである。

【0278】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、１０６ｍＭの濃度を有するトレハロースである。

【0279】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースである。

【0280】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0281】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0282】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0283】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、１０６ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0284】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、１０６ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0285】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、１０６ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0286】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、１０６ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0287】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、１０６ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0288】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0289】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0290】

一実施形態では、緩衝液は、２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0291】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0292】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0293】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、２６３ｍＭの濃度を有するスクロースである。

【0294】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、２６３ｍＭの濃度を有するスクロースである。

【0295】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０であり、糖は、２６３ｍＭの濃度を有するスクロースである。

【0296】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０であり、糖は、２６３ｍＭの濃度を有するスクロースである。

【0297】

一実施形態では、緩衝液はヒスチジン緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号１０によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液は、ｐＨ５．６～６．０の範囲内のヒスチジン緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有する。

【0298】

一実施形態では、緩衝液はｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号１０によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度のヒスチジン緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有する。

【0299】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６～６．０の範囲内のヒスチジン緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有する。

【0300】

一実施形態では、緩衝液は、ｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、糖は、２２０ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有する。

【0301】

一実施形態では、緩衝液は、ｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有する。

【0302】

一実施形態では、緩衝液は、ｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、糖は、１４５ｍＭの濃度を有するスクロースであり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有する。

【0303】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、２２０ｍＭの濃度を有するトレハロースである。

【0304】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースである。

【0305】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、１４５ｍＭの濃度を有するスクロースである。

【0306】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0307】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、２２０ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0308】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0309】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号１０によるアミノ酸配列を有し、糖は、１４５ｍＭの濃度を有するスクロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0310】

一実施形態では、緩衝液は酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号２７によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液は、ｐＨ５．６～６．０の範囲内の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号２７によるアミノ酸配列を有する。

【0311】

一実施形態では、緩衝液はｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号２７によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号２７によるアミノ酸配列を有する。

【0312】

一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６～６．０の範囲内の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号２７によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号２７によるアミノ酸配列を有する。

【0313】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号２７によるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号２７によるアミノ酸配列を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースである。

【0314】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号２７によるアミノ酸配列を有し、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0315】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号２７によるアミノ酸配列を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0316】

一実施形態では、緩衝液は酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する。

【0317】

一実施形態では、緩衝液は、ｐＨ５．６～６．０の範囲内の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する。

【0318】

一実施形態では、緩衝液は、ｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する。

【0319】

一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する。

【0320】

一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６～６．０の範囲内の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する。

【0321】

一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する。

【0322】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する。

【0323】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースである。

【0324】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有し、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0325】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0326】

一実施形態では、緩衝液は酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号２７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する。

【0327】

一実施形態では、緩衝液は、ｐＨ５．６～６．０の範囲内の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号２７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％から９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する。

【0328】

一実施形態では、緩衝液は、ｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号２７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する。

【0329】

一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度を有する酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号２７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する。

【0330】

一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．６～６．０の範囲内の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号２７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する。

【0331】

一実施形態では、緩衝液は、１０～２０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号２７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する。

【0332】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は配列番号２７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する。

【0333】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号２７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースである。

【0334】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号２７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有し、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0335】

一実施形態では、緩衝液は、１０ｍＭの濃度及びｐＨ５．８の酢酸緩衝液であり、融合タンパク質は、配列番号２７によるアミノ酸配列を有し、融合タンパク質のＡＣＥ２部分はＮ－グリコシル化されており、ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％は、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有し、糖は、２５０ｍＭの濃度を有するトレハロースであり、界面活性剤は、０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を有するポリソルベート２０である。

【0336】

本発明の液体医薬組成物中のＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、１～６０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは５～５０ｍｇ／ｍＬ又は８～４０ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは１０～３０ｍｇ／ｍＬ又は１５～２５ｍｇ／ｍＬ、最も好ましくは２０ｍｇ／ｍＬである。別の実施形態では、本発明の液体医薬組成物中のＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度は、２０～６０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは３０～５０ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは４０ｍｇ／ｍＬである。

【0337】

本発明の液体医薬組成物は、医療的使用のためのものであり、すなわち、疾患を予防及び／又は治療するために使用されることが意図されている。
本明細書で使用される場合、「治療」又は「治療すること」は、臨床結果を含む有益な又は所望の結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のために、有益な又は所望の臨床結果としては、これらに限定されないが、以下のうちの１つ以上が挙げられる：疾患に由来する１つ以上の症状を緩和すること、疾患の程度を減少させること、疾患を安定化させること（例えば、疾患の悪化の予防又は遅延）、疾患の広がりを予防又は遅延させること、疾患の再発を予防又は遅延させること、疾患の進行を遅延又は遅らせること、疾患状態を改善すること、疾患の寛解（部分的又は全体）を提供すること、疾患を治療するために必要な１つ以上の他の薬物の用量を減少させること、及び／又は生存期間を延長すること。本発明の使用は、治療のこれらの態様のいずれか１つ以上を企図する。

【0338】

「予防する」という用語及び「予防された」、「予防すること」等の同様の用語は、疾患又は状態の再発を予防、阻害、又はその可能性を低減するためのアプローチを示す。それはまた、疾患又は状態の再発を遅延させること、又は疾患又は状態の症状の再発を遅延させることを指す。本明細書で使用される場合、「予防」及び同様の用語はまた、疾患又は状態の再発前に疾患又は状態の強度、影響、症状、及び／又は負荷を軽減することを含む。

【0339】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を予防及び／又は治療するために使用される。コロナウイルスは、ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡゲノム及び正二十面体タンパク質シェルを有するエンベロープウイルスである。Ｓ１及びＳ２サブユニットからなるスパイクタンパク質は、エンベロープから突出し、ＡＣＥ２に結合することによって標的細胞との相互作用を媒介するホモ三量体を形成する。コロナウイルスは、ヒト及び他の哺乳動物並びに鳥類種において呼吸器疾患を引き起こすことが多い。ヒトでは、７つのコロナウイルス株：ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が知られている。最初の４つのコロナウイルス株（ＨＣｏＶ－ＯＣ４３、ＨＣｏＶ－ＨＫＵ１、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＨＣｏＶ－ＮＬ６３）は、軽度の症状しか引き起こさないが、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症は、重篤で潜在的に生命を脅かす疾患につながることがある。

【0340】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、及びＨＣｏＶ－ＮＬ６３はＡＣＥ２に結合し、この結合を使用して標的細胞に入ることが示されている（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎａｔｕｒｅ ４２６（６９６５）：４５０－４；Ｈｏｆｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｃｅｌｌ １８１：１－１０；Ｈｏｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．１０２（２２）：７９８８－９３）。したがって、本発明の液体医薬組成物は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、又はＨＣｏＶ－ＮＬ６３による感染症を治療及び／又は予防するために使用することができる。ＡＣＥ２を発現する細胞に、コロナウイルススパイクタンパク質及びレポータータンパク質を発現する偽型ＶＳＶ（水疱性口内炎ウイルス）を一過性又は恒常的のいずれかで接種し、接種期間後にレポータータンパク質の活性を検出することによって、ＡＣＥ２に結合する更なるコロナウイルスを特定することができる（Ｈｏｆｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｃｅｌｌ １８１：１－１０のプロトコルを参照）。一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を治療及び／又は予防するために使用され、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶではない。

【0341】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を治療及び／又は予防するために使用され、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２であるか、又はアミノ酸置換Ｄ６１４Ｇ及び／又はアミノ酸置換Ｎ４３９Ｋを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体である。アミノ酸置換Ｄ６１４Ｇを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体は、Ｋｏｒｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｃｅｌｌ １８２（４）：８１２－８２７に記載されており、アミノ酸置換Ｎ４３９Ｋは、Ｔｈｏｍｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１０１／２０２０．１１．０４．３５５８４２）に記載されている。一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を治療及び／又は予防するために使用され、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスは、アミノ酸置換Ｄ６１４Ｇを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体である。アミノ酸置換Ｄ６１４Ｇは、Ｗｕｈａｎ参照株の２３，４０３位におけるＡからＧへのヌクレオチド変異によって引き起こされる。変異体におけるアミノ酸のナンバリングは、配列番号１７によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質におけるナンバリングを参照する。したがって、配列番号１７によるスパイクタンパク質を有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスは、任意の変異体が由来する野生型ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２であると定義される。

【0342】

一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を治療及び／又は予防するために使用され、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスは、アミノ酸置換Ｄ６１４Ｇ及び少なくとも１つの更なるアミノ酸置換を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体である。一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を治療及び／又は予防するために使用され、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスは、アミノ酸置換Ｄ６１４Ｇ、Ｎ５０１Ｙ、Ａ５７０Ｄ、Ｐ６８１Ｈ、Ｔ７１６Ｉ、Ｓ９８２Ａ、及びＤ１１１８Ｈを含み、アミノ酸６９、７０、及び１４５の欠失を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体である。一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を治療及び／又は予防するために使用され、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスは、アミノ酸置換Ｄ６１４Ｇ、Ｙ４５３Ｆ、Ｉ６９２Ｖ、及びＭ１２２９Ｉを含み、アミノ酸６９及び７０の欠失を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体である。一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を治療及び／又は予防するために使用され、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスは、アミノ酸置換Ｄ６１４Ｇ、Ｓ１３Ｉ、Ｗ１５２Ｃ、及びＬ４５２Ｒを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体である。一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を治療及び／又は予防するために使用され、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスは、アミノ酸置換Ｄ６１４Ｇ、Ｅ４８４Ｋ、及びＶ１１７６Ｆを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体である。一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を治療及び／又は予防するために使用され、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスは、アミノ酸置換Ｄ６１４Ｇ、Ｌ１８Ｆ、Ｔ２０Ｎ、Ｐ２６Ｓ、Ｄ１３８Ｙ、Ｒ１９０Ｓ、Ｋ４１７Ｔ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、Ｈ６５５Ｙ、Ｔ１０２７Ｉ、及びＶ１１７６Ｆを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体である。一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を治療及び／又は予防するために使用され、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスは、アミノ酸置換Ｄ６１４Ｇ、Ｄ８０Ａ、Ｄ２１５Ｇ、Ｋ４１７Ｎ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、及びＡ７０１Ｖを含み、アミノ酸２４２、２４３、及び２４４の欠失を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体である。一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を治療及び／又は予防するために使用され、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスは、アミノ酸置換Ｄ６１４Ｇ、Ｌ１８Ｆ、Ｄ８０Ａ、Ｄ２１５Ｇ、Ｋ４１７Ｎ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、及びＡ７０１Ｖを含み、アミノ酸２４２、２４３、及び２４４の欠失を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体である。一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を治療及び／又は予防するために使用され、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスは、アミノ酸置換Ｄ６１４Ｇ、Ｄ８０Ａ、Ｒ２４６Ｉ、Ｋ４１７Ｎ、Ｅ４８４Ｋ、Ｎ５０１Ｙ、及びＡ７０１Ｖを含み、アミノ酸２４２、２４３及び２４４の欠失を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体である。一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を治療及び／又は予防するために使用され、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスは、アミノ酸置換Ｅ４８４Ｑ及びＬ４５２Ｒを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体である。一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を治療及び／又は予防するために使用され、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスは、アミノ酸置換Ｅ４８４Ｋ及びＤ６１４Ｇを含み、アミノ酸１４５及び１４６の欠失を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体である。

【0343】

一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を治療及び／又は予防するために使用され、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスは、アミノ酸置換Ｔ１９Ｒ、Ｒ１５８Ｇ、Ｌ４５２Ｒ、Ｔ４７８Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｐ６８１Ｒ、及びＤ９５０Ｎを含み、アミノ酸１５６及び１５７の欠失を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体である。

【0344】

一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を治療及び／又は予防するために使用され、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスは、アミノ酸置換Ｋ４１７Ｎ、Ｎ４４０Ｋ、Ｇ４４６Ｓ、Ｓ４７７Ｎ、Ｔ４７８Ｋ、Ｅ４８４Ａ、Ｑ４９３Ｋ、Ｇ４９６Ｓ、Ｑ４９８Ｒ、Ｎ５０１Ｙ、Ｙ５０５Ｈ、及びＰ６８１Ｈを含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体である。

【0345】

一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を治療及び／又は予防するために使用され、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスは、アミノ酸置換Ａ６７Ｖ、Ｔ９５Ｉ、Ｙ１４５Ｄ、Ｌ２１２Ｉ、Ｇ３３９Ｄ、Ｓ３７１Ｌ、Ｓ３７３Ｐ、Ｓ３７５Ｆ、Ｑ４９３Ｒ、Ｔ５４７Ｋ、Ｄ６１４Ｇ、Ｈ６５５Ｙ、Ｎ６７９Ｋ、Ｎ７６４Ｋ、Ｄ７９６Ｙ、Ｎ８５６Ｋ、Ｑ９５４Ｈ、Ｎ９６９Ｋ、Ｌ９８１Ｆを含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体である。

【0346】

一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症を治療及び／又は予防するために使用され、ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスは、アミノ酸Ｎ２１１、Ｙ１４４、Ｖ１４３、Ｇ１４２、Ｖ７０、Ｈ６９の欠失を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異体である。

【0347】

投与経路は、公知の受け入れられている方法、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内、又は関節内の経路による注射又は注入による。別の実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、鼻腔内に、例えば、鼻スプレー、鼻軟膏、又は点鼻薬によって投与される。別の実施形態では、本発明のタンパク質担持液体医薬組成物は、局所投与又は吸入によって投与される。好ましくは、本発明の液体医薬組成物は、静脈内注射又は注入によって投与される。

【0348】

本発明の医薬組成物の投与量及び所望の薬物濃度は、想定される特定の使用に応じて変化し得る。適切な投与量又は投与経路の決定は、十分に当業者の技術の範囲内である。動物実験は、ヒト治療の有効用量を決定するための信頼できる指針を提供する。有効用量の種間増減は、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ，Ｊ．ａｎｄ Ｃｈａｐｐｅｌｌ，Ｗ．「Ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ Ｓｃａｌｉｎｇ ｉｎ Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，」Ｉｎ Ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｙａｃｏｂｉ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８９，ｐｐ．４２－４６．によって定められた原理に従って行うことができる。

【0349】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、０．１ｍｇ／ｋｇ体重～４ｍｇ／ｋｇ体重の投与量、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ体重、０．２ｍｇ／ｋｇ体重、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、０．４ｍｇ／ｋｇ体重、０．５ｍｇ／ｋｇ体重、０．６ｍｇ／ｋｇ体重、０．７ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．９ｍｇ／ｋｇ体重、１．０ｍｇ／ｋｇ体重、１．１ｍｇ／ｋｇ体重、１．２ｍｇ／ｋｇ体重、１．３ｍｇ／ｋｇ体重、１．４ｍｇ／ｋｇ体重、１．５ｍｇ／ｋｇ体重、１．６ｍｇ／ｋｇ体重、１．７ｍｇ／ｋｇ体重、１．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．９ｍｇ／ｋｇ体重、２．０ｍｇ／ｋｇ体重、２．１ｍｇ／ｋｇ体重、２．２ｍｇ／ｋｇ体重、２．３ｍｇ／ｋｇ体重、２．４ｍｇ／ｋｇ体重、２．５ｍｇ／ｋｇ体重、２．６ｍｇ／ｋｇ体重、２．７ｍｇ／ｋｇ体重、２．８ｍｇ／ｋｇ体重、２．９ｍｇ／ｋｇ体重、３．０ｍｇ／ｋｇ体重、３．１ｍｇ／ｋｇ体重、３．２ｍｇ／ｋｇ体重、３．３ｍｇ／ｋｇ体重、３．４ｍｇ／ｋｇ体重、３．５ｍｇ／ｋｇ体重、３．６ｍｇ／ｋｇ体重、３．７ｍｇ／ｋｇ体重、３．８ｍｇ／ｋｇ体重、３．９ｍｇ／ｋｇ体重、又は４．０ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で静脈内投与され、ｍｇは、液体医薬組成物で送達されるＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質のｍｇを指す。好ましくは、本発明の液体医薬組成物は、２．５ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で静脈内投与され、ｍｇは、液体医薬組成物で送達されるＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質のｍｇを指す。好ましくは、液体医薬組成物は、投与前に生理食塩水で希釈される。一実施形態では、生理食塩水は、０．４～１．５％（ｗ／ｖ）、好ましくは０．６～１．０％（ｗ／ｖ）、より好ましくは０．９％（ｗ／ｖ）の総量で塩化ナトリウムを含む。

【0350】

一実施形態では、本発明の液体医薬組成物は、１０ｍｇ／ｋｇ体重～１５０ｍｇ／ｋｇ体重の投与量、例えば１０ｍｇ／ｋｇ体重、１５ｍｇ／ｋｇ体重、２０ｍｇ／ｋｇ体重、２５ｍｇ／ｋｇ体重、３０ｍｇ／ｋｇ体重、３５ｍｇ／ｋｇ体重、４０ｍｇ／ｋｇ体重、４５ｍｇ／ｋｇ体重、５０ｍｇ／ｋｇ体重、５５ｍｇ／ｋｇ体重、６０ｍｇ／ｋｇ体重、６５ｍｇ／ｋｇ体重、７０ｍｇ／ｋｇ体重、７５ｍｇ／ｋｇ体重、８０ｍｇ／ｋｇ体重、８５ｍｇ／ｋｇ体重、９０ｍｇ／ｋｇ体重、９５ｍｇ／ｋｇ体重、１００ｍｇ／ｋｇ体重、１０５ｍｇ／ｋｇ体重、１１０ｍｇ／ｋｇ体重、１１５ｍｇ／ｋｇ体重、１２０ｍｇ／ｋｇ体重、１２５ｍｇ／ｋｇ体重、１３０ｍｇ／ｋｇ体重、１３５ｍｇ／ｋｇ体重、１４０ｍｇ／ｋｇ体重、１４５ｍｇ／ｋｇ体重、又は１５０ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で静脈内投与され、ｍｇは、液体医薬組成物で送達されるＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質のｍｇを指す。好ましくは、本発明の液体医薬組成物は、１５ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で静脈内投与され、ｍｇは、液体医薬組成物で送達されるＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質のｍｇを指す。好ましくは、液体医薬組成物は、投与前に生理食塩水で希釈される。一実施形態では、生理食塩水は、０．４～１．５％（ｗ／ｖ）、好ましくは０．６～１．０％（ｗ／ｖ）、より好ましくは０．９％（ｗ／ｖ）の総量で塩化ナトリウムを含む。

【0351】

液体医薬組成物は、１日１回、１日２回、１日３回、１日おきに、１週間に１回、又は２週間に１回投与されてもよい。
液体医薬組成物は、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、又は１０日間投与されてもよい。

【0352】

本発明の液体医薬組成物を投与することによって、コロナウイルス、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症が治療され、すなわち、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症の症状の少なくとも１つが軽減又は消失する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症の症状としては、咳、息切れ、呼吸困難、発熱、悪寒、疲労、筋肉痛、喉の痛み、頭痛、胸痛、並びに嗅覚及び／又は味覚の喪失が挙げられる。一実施形態では、本発明の融合タンパク質の投与により、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症によって引き起こされる発熱が減少する。一実施形態では、対象への本発明の液体医薬組成物の投与は、対象がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による重症感染症過程を経るリスクを低下させる。一実施形態では、対象への本発明の液体医薬組成物の投与は、対象が多臓器不全、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、又は肺炎を経るリスクを低下させる。一実施形態では、対象への本発明の液体医薬組成物の投与は、対象が肺損傷、神経障害、皮膚科学的障害、及び心血管疾患等のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症の長期的影響を受けるリスクを低下させる。一実施形態では、対象への本発明の液体医薬組成物の投与は、血液中のサイトカインＩＬ６及び／又はＩＬ８の濃度を低下させる。一実施形態では、対象への本発明の融合タンパク質の投与は、血液中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス粒子の濃度を低下させる。一実施形態では、対象への本発明の融合タンパク質の投与は、抗ウイルス抗体の産生を刺激する。一実施形態では、対象への本発明の融合タンパク質の投与は、抗ウイルスＩｇＡ及び／又はＩｇＧ抗体の産生を刺激する。

【0353】

一実施形態では、本発明の融合タンパク質を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の重度の感染症に罹患している対象に投与する。一実施形態では、本発明の融合タンパク質を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染しており、人工呼吸を必要とする対象に投与する。一実施形態では、本発明の融合タンパク質を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染しており、体外式膜型人工肺（ＥＣＭＯ）を必要とする対象に投与する。

【0354】

本発明の融合タンパク質を投与することによって、コロナウイルス、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症が予防され、すなわち、治療された対象はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症の症状を発症しない。

【0355】

一実施形態では、本発明の融合タンパク質を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した対象と接触していた対象に投与する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した対象と接触していた対象は、スマートフォンにインストールされた「コロナ警告アプリ」を利用して特定することができる。

【0356】

一実施形態では、本発明の融合タンパク質は、対象の喉スワブを用いた試験が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染していることを示すが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症の症状を何ら発症していない、当該対象に投与される。

【0357】

ＡＣＥ２に結合するコロナウイルス、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症の治療又は予防において、本発明の融合タンパク質を、公知の抗ウイルス剤と組み合わせてもよい。抗ウイルス剤は、ウイルス感染症を治療するために使用される医薬品であり、特定の抗ウイルス剤及び広範囲ウイルス剤の両方を含む。好適な抗ウイルス剤には、限定されないが、ヌクレオシド類似体、ウイルスプロテアーゼの阻害剤、ウイルスポリメラーゼの阻害剤、細胞へのウイルス侵入の遮断剤、ヤヌスキナーゼ阻害剤が含まれ、また炎症メディエーターの阻害剤も含まれる。

【0358】

特定の実施形態では、抗ウイルス剤は、レムデシビル、アルビドールＨＣｌ、リトナビル、ロピナビル、ダルナビル、リバビリン、クロロキン及びそれらの誘導体、例えばヒドロキシクロロキン、ニタゾキサニド、メシル酸カモスタット、抗ＩＬ６及び抗ＩＬ６受容体抗体、例えばトシリズマブ、シルツキシマブ並びにサリルマブ及びリン酸バリシチニブからなる群から選択される。

【0359】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症の治療又は予防において、本発明の医薬組成物は、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体を更に含有するか、又は抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２モノクローナル抗体と組み合わせてもよい。抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２モノクローナル抗体としては、限定されないが、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃａｍｐａｎｙによって開発されたバムラニビマブ（ＬＹ－ＣｏＶ５５５ ２０；ＬＹ３８１９２５３；）、エテセビマブ（ＬＹ－３８３２４７９；ＬＹ－ＣＯＶ０１６；ＪＳ－０１６；ＮＰ－００５）、ＲＥＧＮ１０９３３（カシリビマブ）及びＲＥＧＮ１０９８７（イムデビマブ）の混合物であり、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎによって開発されたＲＥＧＮ－ＣＯＶ２、Ｖｉｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ及びＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅによって開発されたソトロビマブ（ＶＩＲ－７８３１；ＧＳＫ４１８２１３６；）、Ｃｅｌｌｔｒｉｏｎによって開発されたＣＴ－Ｐ５９、抗体ＡＺＤ８８９５とＡＺＤ１０６１との組み合わせであり、Ａｓｔｒａ Ｚｅｎｅｃａによって開発されたＡＺＤ ７４４２、Ｊｕｎｓｈｉ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓによって開発されたＪＳ０１６、Ｔｙｃｈａｎ Ｐｔｅ Ｌｔｄによって開発２５されたＴＹ０２７、Ｂｒｉｉ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓによって開発されたＢＲＩＩ－９６及びＢＲＩＩ－９８、Ｓｉｎｏｃｅｌｌｔｅｃｈ Ｌｔｄによって開発されたＳＣＴＡ０１、Ｏｌｏｇｙ Ｂｉｏｓｅｒｖｉｃｅｓによって開発されたＡＤＭ０３８２０、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍなどによって開発されたＢＩ７６７５５１、Ｃｏｒａｔ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって開発されたＣＯＲ－１０１、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．によって開発されたＰａｘｌｏｖｉｄ（ＰＦ－０７３２１３３２；リトナビル）が挙げられる。

【0360】

コロナウイルスの結合におけるその機能とは別に、ＡＣＥ２はまた、高血圧症（高血圧を含む）、うっ血性心不全、慢性心不全、急性心不全、収縮性心不全、心筋梗塞、動脈硬化症、腎機能障害、腎不全、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、急性肺傷害（ＡＬＩ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺高血圧症、腎線維症、慢性腎不全、急性腎不全、急性腎傷害、炎症性腸疾患、及び多臓器機能不全症候群等、いくつかの障害及び疾患に関与している。したがって、本発明の融合タンパク質は、これらの障害及び疾患の治療にも使用することができる。

【0361】

医薬組成物は、バイアル又はプレフィルドシリンジで供給されてもよい。医薬組成物は、静脈内注入によって、例えば３０分以下の期間にわたって投与されてもよい。医薬組成物は、静脈内注入によって、例えば３０分～１時間、好ましくは１時間の期間にわたって投与されてもよい。

【0362】

本発明を図面及び上述の説明において詳細に図示及び説明してきたが、そのような図示及び説明は、説明的又は例示的なものであり、限定的なものではないとみなされるべきである。本発明は、開示された実施形態に限定されない。開示された実施形態に対する他の変形例は、図面、本開示、及び従属請求項の検討から、請求項に係る発明を実施する際に当業者によって理解され、達成され得る。

【0363】

詳細な説明は、本質的に単なる例示であり、用途及び使用を限定することを意図するものではない。以下の実施例は本発明を更に説明するが、本発明の範囲をそれに限定するものではない。当業者であれば、本発明の説明に基づいて種々の変更及び修正を加えることが可能であり、そのような変更及び修正も本発明に含まれる。

【実施例】

【0364】

２つのＡＣＥ２－ＩｇＧ４融合タンパク質（コンストラクトｖ１２６１及びコンストラクトｖ１２６３、配列番号６及び１０による配列を参照）の好適な液体医薬製剤を、５ステップの手順で特定した。

【0365】

実施例１に記載されているように、２つのＡＣＥ２－ＩｇＧ４融合タンパク質の各々について、最高融解温度及び凝集傾向について２５の異なる組成物をスクリーニングして、熱アンフォールディング及び凝集に対する安定性を提供するための最適な条件及び賦形剤を特定した。

【0366】

実施例２に記載されるように、２つのＡＣＥ２－ＩｇＧ４融合タンパク質を、標準製剤において異なる熱条件（３７℃で互いに異なる期間のインキュベーション及び凍結／解凍研究）に供した。物理的及び化学的修飾（実施例２参照）を、一連の分析方法を用いてモニターした。

【0367】

実施例３では、実施例１の結果に基づく１つの製剤を、熱安定性及び融解温度に関して、コンストラクトｖ１２６１及びｖ１２６３の細胞株開発中に試験した。
実施例２において特定された品質属性及びそれらのモニタリング方法、並びに実施例１において特定された好ましい賦形剤に基づいて、実施例４及び５において記載される製剤の新しいセットを作製した。２つのＡＣＥ２－ＩｇＧ４融合コンストラクトをこれらの製剤に移し、物理化学的安定性及び効力に関する最良の安定化効果について、異なる温度及びストレス条件での安定性研究中に評価した。

【0368】

実施例６では、製剤４ａ（表１２）が、ヒトＩｇＧ１（ｖ１２６０、配列番号７）のＦｃ部分を有するＡＣＥ２融合タンパク質にも使用できることを確認する。更に、製剤４ａにおける短期安定性を、異なるＡＣＥ２－ＩｇＧ１コンストラクト（ｖ１２６０、配列番号７、ｖ１３２８、配列番号２７）について分析し、結果を実施例７に示す。

【0369】

実施例８では、選択された製剤中のヒトＩｇＧ４（ｖ１２６１、配列番号６）のＦｃ部分を有する正常シアリル化ＡＣＥ２融合タンパク質及び高シアリル化ＡＣＥ２融合タンパク質の安定性を調べる。

【0370】

実施例９では、製剤４ａにおけるＡＣＥ２（１８－７３２）－ＩｇＧ４正常シアリル化（ｖ１２６１、配列番号６）の安定性試験の結果を、以下の条件について示す。
●Ｆ／Ｔ：－７６℃±９℃及び室温で３サイクル
●７６℃±９℃で最大６ヶ月
●５℃±３℃及び２５℃±２℃／６０％ＲＨ±５％ＲＨで最大６ヶ月、並びに４０℃±２℃／７５％ＲＨ±５％ＲＨで最大３ヶ月）。

【0371】

分析方法の説明：
１．ＮａｎｏＤＳＦ
１．１ 材料

【0372】

１．２ 分析
●試料を透析し、続いて緩衝液（０．０２％ＰＳ２０、３０ｍＭ Ｌ－アルギニン塩酸塩、２５０ｍＭトレハロース二水和物、５ｍＭ Ｌ－メチオニン、５０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ酢酸ｐＨ５．８）中で１ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈した。

【0373】

●キャピラリーが試料（約１０μＬ）で完全に満たされるまで、キャピラリーを試料溶液に浸漬し、気泡について注意深くチェックした。気泡を有するキャピラリーを廃棄し、交換した。

【0374】

●全ての試料がロードされると、ＴｈｅｒｍＣｏｎｔｒｏｌソフトウェアを開始し、必要な光強度を決定するためにディスカバリスキャンを行った。
●２５％の光強度を選択した。

【0375】

●温度を２０℃から９５℃まで上昇させた。１．０℃／分の勾配を設定した。
●ＴｈｅｒｍＳｔａｂｉｌｉｔｙソフトウェアをデータ解析に使用した。
２．サイズ排除クロマトグラフィー
２．１ 材料

【0376】

２．２ 分析
溶媒：
●移動相Ａ：２０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．０
試料調製：
●試料濃度：約１ｍｇ／ｍＬ
機器パラメータ：
●システム：拡張カラムオーブン、ＴＵＶ検出器を備えたＡｃｑｕｉｔｙ Ｈ－ｃｌａｓｓ＋ｂｉｏ
●ＵＶ検出：二重波長、２１４及び２８０ｎｍ、サンプリングレート：２点／秒／
３．アニオン交換クロマトグラフィー
３．１ 材料

【0377】

３．２ 分析
溶媒：
●移動相Ａ：２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ８．５
●移動相Ｂ：２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ８．５＋２Ｍ ＮａＣｌ
試料調製：
●ブランク：９５：５比の移動相Ａ＋移動相Ｂ
●試料濃度：約１．０ｍｇ／ｍＬ
機器パラメータ：
●システム：拡張カラムオーブン、ＴＵＶ検出器を備えたＡｃｑｕｉｔｙ Ｈ－ｃｌａｓｓ＋ｂｉｏ
●カラム：Ｐｒｏｐａｃ ＷＡＸ－１０、２×２５０ｍｍ
●２．５％から１００％までの直線勾配の緩衝液Ｂを使用した。

【0378】

４．非還元ＣＥ－ＳＤＳ
４．１ 材料

【0379】

４．２ 試料調製：
●試料緩衝液：１００ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ９．０－２％ＳＤＳ
●マスターミックス：５０μＬ試料緩衝液、２μＬ内部標準（１０ｋＤａ）、５μＬ ２５０ｍＭヨードアセトアミド；分析用試料数を乗じる（＋１０％の追加容量）
●５７μＬマスターミックスと混合した４５μＬ試料、インキュベーション：９０℃、１０分
４．３ 分析：
●システム：ＣＥＳＩ ８０００、Ｓｃｉｅｘ。

【0380】

●検出器：ＰＤＡ検出、２２０ｎｍ±１０ｎｍ、データレート：２Ｈｚ
５．結合ＥＬＩＳＡ（ＡＣＥ２－ＩｇＧ４コンストラクトの検出）
５．１材料

【0381】

５．２ 分析
●９６ウェルプレート（ＮＵＮＣ）をコーティングする。
●翌日、コーティングを除去し、洗浄緩衝液で３回（３００μＬ／ウェル）プレートを洗浄する
●ウェルを２００μＬ／ウェルのブロック緩衝液（１％ＢＳＡを補充した洗浄緩衝液）でブロックし、室温及び１５０ｒｐｍで１時間インキュベートする
●ブロック緩衝液を除去する（プレートをはじく）
●１００μＬ／ウェルの試料を適用し（調製用複製）、室温及び１５０ｒｐｍで１時間インキュベートする（濃度範囲：５．００－１．６７－０．５６－０．１９－０．０６２－０．０２１－０．００６９－０．００２３－０．０００７６－０．０００２５－０．００００８５－０μｇ／ｍＬ）
●洗浄緩衝液でプレートを３回（３００μＬ／ウェル）洗浄する
●検出Ａｂ（ブロック緩衝液で１／４０００希釈）を適用し、室温及び１５０ｒｐｍで１時間インキュベートする。

【0382】

●洗浄緩衝液でプレートを３回（３００μＬ／ウェル）洗浄する
●ＴＭＢ溶液（室温で予め温めた必要量）を適用し、室温で２分間インキュベートする
●１Ｍ ＨＣｌで反応を停止する
●室温で１５分間、光から保護してインキュベートする
●マイクロプレートリーダー（Ｓｙｎｅｒｇｙ ＨＴＸ、ＢｉｏＴｅｋ）を使用してＯＤ４５０ｎｍ及びＯＤ６５５ｎｍでの基準を測定する
●４パラメータロジスティック曲線適合モデルを使用して、ｙ軸上のＯＤ４５０ｎｍ（バックグラウンド値の減算後＝ＡＣＥ２－Ｆｃなし）に対してｘ軸上のＡＣＥ２－Ｆｃ濃度（μｇ／ｍＬ）をプロットする
６．結合ＥＬＩＳＡ（ＡＣＥ２－ＩｇＧ１コンストラクトの検出）
６．１ 材料

【0383】

６．２分析
●９６ウェルプレート（ＮＵＮＣ）をコーティングする。
●翌日、コーティングを除去し、洗浄緩衝液で３回（３００μＬ／ウェル）プレートを洗浄する
●ウェルを２００μＬ／ウェルのブロック緩衝液（１％ＢＳＡを補充した洗浄緩衝液）でブロックし、室温及び１５０ｒｐｍで１時間インキュベートする
●ブロック緩衝液を除去する（プレートをはじく）
●１００μＬ／ウェルの試料を適用し（調製用複製）、室温及び１５０ｒｐｍで１時間インキュベートする（濃度範囲：５．００－１．６７－０．５６－０．１９－０．０６２－０．０２１－０．００６９－０．００２３－０．０００７６－０．０００２５－０．００００８５－０μｇ／ｍＬ）
●洗浄緩衝液でプレートを３回（３００μＬ／ウェル）洗浄する
●検出Ａｂ（ブロック緩衝液で１／５０００希釈）を適用し、室温及び１５０ｒｐｍで１時間インキュベートする。

【0384】

●洗浄緩衝液でプレートを３回（３００μＬ／ウェル）洗浄する
●ＴＭＢ溶液（室温で予め温めた必要量）を適用し、室温で２分間インキュベートする
●１Ｍ ＨＣｌで反応を停止する
●室温で１５分間、光から保護してインキュベートする
●マイクロプレートリーダー（Ｓｙｎｅｒｇｙ ＨＴＸ、ＢｉｏＴｅｋ）を使用してＯＤ４５０ｎｍ及びＯＤ６５５ｎｍでの基準を測定する
●４パラメータロジスティック曲線適合モデルを使用して、ｙ軸上のＯＤ４５０ｎｍ（バックグラウンド値の減算後＝ＡＣＥ２－Ｆｃなし）に対してｘ軸上のＡＣＥ２－Ｆｃ濃度（μｇ／ｍＬ）をプロットする
７．分析的超遠心分離
７．１ 方法の説明
適用された設定における分析的超遠心分離（ＡＵＣ）の目的は、沈降速度分析によるタンパク質凝集及び分解の分析である。沈降速度において、高遠心場における溶質の移動は、高分子のサイズ、形状、及び相互作用を定義するための流体力学理論を使用して解釈される。遠心分離プロセス中、分析された試料は、光学検出システムを介してリアルタイムで監視される。これにより、適用された遠心場の結果としての回転軸プロファイルに対する試料濃度を観察することができる。これにより、溶解したタンパク質の形状及びモル質量、並びにそのサイズ分布を報告することが可能になる。沈降速度実験は、Ａｎ－Ｔｉ ５０ローター及び吸光度光学系を備えたＯｐｔｉｍａ ＡＵＣ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）分析的超遠心分離機を用いて行う。試料を対応する製剤緩衝液で０．５ｇ／Ｌに希釈した。実験は、４０．０００ｒｐｍのローター速度で３００分間、２０℃で独立した三連測定にて行う。ＵＶ吸光度検出は、２分のスキャン間隔により２８０ｎｍで実行される。沈降係数及び分子量の分布は、ｃ（ｓ）モデルを使用して数学的に決定された。試料種の分子量は、以下の関係を用いて計算することができる。

【0385】

【数1】

【0386】

式中、ｓは沈降係数、Ｒは気体定数、Ｄは拡散係数、Ｔは絶対温度、

【0387】

【数2】

【0388】

は部分比容、及びρは溶媒密度である。Ｄは、沈降バンドの形状から直接決定することができる。
７．２ データ分析
データ分析を、プログラムＳｅｄｆｉｔ（Ｐ．Ｓｃｈｕｃｋ（２０００）Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ７８：１６０６－１６１９）により行った。以下の適合パラメータを適用した：

【0389】

得られたデータのノイズ及びベースライン、並びに試料メニスカス及び摩擦比を試料分析中に適合させ、セル底部距離値を固定した。得られた沈降分布を、その後、ＧＵＳＳＩツールを使用してプロットした。

【0390】

８．ｃＩＥＦ
８．１ 材料及び装置

【0391】

８．２方法の説明
組換えタンパク質産物の荷電変異体は、グリコシル化、リン酸化、酸化、脱アミド化、又はリシンクリッピング等の翻訳後修飾を含むことが多い。全プロセス及び貯蔵中、タンパク質分子は物理化学的ストレスにさらされ、酸化又は脱アミド化によって引き起こされる電荷変異体の形成をもたらし得る。これらの修飾は、タンパク質の完全電荷プロファイルに寄与するものであり、分子の生物学的活性に影響を及ぼし得る。ｃＩＥＦは、これらの荷電タンパク質（例えばアイソフォーム）をｐＨ勾配内で分離するための高速高分解能技術である。両性電解質とタンパク質との混合物をｎＬ容量のキャピラリーに注入し、電流を印加してｐＨ勾配の形成を誘導する。タンパク質は、それらのｐＩに従って勾配内を移動し、キャピラリーの完全長に沿って吸光度（２８０ｎｍで）又は蛍光（消光２８０、発光３２０～４５０ｎｍ）を測定することによって検出される。

【0392】

タンパク質の同一性及び純度の決定には、ｃＩＥＦの原理を適用した。以下の条件を使用し、以下の設定を適用した：
●緩衝液交換：５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．２
●マスターミックス：
■０．３５％メチルセルロース
■４％Ｓｅｒｖａｌｙｔｅ３－６
■２％Ｓｅｒｖａｌｙｔｅ３～１０％
■２０％スクロース（６７ｍ％（２０℃）ストック溶液から）
■２％ｐＩマーカー３．３８
■２％ｐＩマーカー５．８５
●方法：１．０分、１５００ボルト（集束）、１０．０分３０００ボルト（分離）
●データ評価のための曝露：蛍光、１０秒
９．公定法
公定法を、欧州薬局方（Ｐｈ．Ｅｕｒ．）に従って行った：
●可視粒子（Ｐｈ．Ｅｕｒ．２．９．２０）
●肉眼で見えない粒子（Ｐｈ．Ｅｕｒ．２．９．１９）
●ｐＨ（Ｐｈ．Ｅｕｒ．２．２．３）
●色（Ｐｈ．Ｅｕｒ．２．２．２）
●透明度（Ｐｈ．Ｅｕｒ．２．２．１）
●重量オスモル濃度（Ｐｈ．Ｅｕｒ． ２．２．３５）。

【0393】

１０．タンパク質濃度の決定
吸光分光法は、溶液中のタンパク質の濃度を決定するための迅速で便利な方法として役立つ。溶液中のタンパク質は紫外光を吸収し、約２８０ｎｍ（芳香族アミノ酸）及び２００ｎｍ（ペプチド結合）に吸光度極大を有する。ランベルト・ベールの法則（Ａ_{２８０ｎｍ}＝ε_{２８０ｎｍ}＊ｃ＊ｄ）及びタンパク質の比吸光係数（ε_２８０）を使用して、溶液の吸光度からタンパク質の濃度を計算することができる。

【0394】

この原理を、異なる装置（ＮａｎｏＤｒｏｐ、ＳｏｌｏＶＰＥ及びＵＶ／Ｖｉｓ分光光度計（ＯＤ２８０））を使用する濃度決定に使用した。
１１．酵素活性アッセイ：
１１．１ 材料及び装置

【0395】

１１．２ 試薬調製

【0396】

１１．３ 方法の説明
ＡＣＥ２活性アッセイの原理は、２０分間にわたる５ｎｇの活性ＡＣＥ２（ＦＹＢ２０７）による合成ペプチド基質（ＭＣＡ）の切断に基づく。ＡＣＥ活性アッセイの原理は、ＡＣＥ２－ＩｇＧ融合タンパク質の酵素活性の決定に適用される。

【0397】

標準：
１）５μＬの１ｍＭ ＭＣＡ標準を１９５μＬのＡＣＥ２アッセイ緩衝液で希釈することによって、ＭＣＡ標準の２５μＭ溶液を調製した。

【0398】

２）０、２、４、６、８及び１０μＬの２５μＭ ＭＣＡ標準を９６ウェルプレート内の一連のウェルに添加し、ＡＣＥ２アッセイ緩衝液で１００μＬ／ウェルの最終容量に調整した。したがって、０、５０、１００、１５０、２００及び２５０ｐｍｏｌ／ウェルのＭＣＡ標準液をそれぞれ生成した。

【0399】

３）混合後、最も高いＭＣＡ濃度についてプレートリーダーで測定できる極大値の８０％になるようにゲインを調整して、終点モードで蛍光（Ｅｘ／Ｅｍ＝３２０／４２０ｎｍ）を測定した。

【0400】

アッセイ：
１）試料を５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－１５０ｍＭ ＮａＣｌ緩衝液ｐＨ７．５で適切な濃度に希釈した。

【0401】

０．０５ｍｇ／ｍＬへの予備希釈。
０．００２５ｍｇ／ｍＬへの更なる希釈。
２）全ての試料＋対照をＡＣＥ２アッセイ緩衝液中で調製した：
陰性対照（＝ブランク）：２μＬの５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－１５０ｍＭ ＮａＣｌ緩衝液ｐＨ７．５＋４８μＬ ＡＣＥ２アッセイ緩衝液
陽性対照：２μＬ陽性対照＋４８μＬ ＡＣＥ２アッセイ緩衝液
試料：２μＬ希釈試料＋４８μＬ ＡＣＥ２アッセイ緩衝液
３）試料を室温で１５分間インキュベートした。

【0402】

４）所望の数のウェルに対するＭＣＡ基質混合物の調製。
１ウェルの基質混合物：２μＬのＡＣＥ２基質＋４８μＬのＡＣＥ２アッセイ緩衝液。
５）５０μＬのＡＣＥ２基質混合物を試料、陽性対照、及び陰性対照ウェルの各々に添加し、混合した。

【0403】

６）蛍光（Ｅｘ／Ｅｍ＝３２０／４２０ｎｍ）を動的モードで室温にて２時間測定し、標準曲線を用いてゲインを決定した。
７）動的曲線の線形領域を選択した（最初の２０分間）。

【0404】

８）この選択された線形領域（最初の２０分）の開始時と終了時とのＲＦＵの差を決定した。
９）ＡＣＥ２－Ｆｃ試料を用いた速度論的測定からブランク測定値を差し引いた。

【0405】

１０）このＲＦＵ値は、標準曲線の線形範囲内にあるべきである。
１１）標準曲線の線形フィットを使用して、酵素によって切断されたＭＣＡの量を決定した。

【0406】

１２．実施例９内に適用された非還元ＣＥ－ＳＤＳ：
１２．１ 材料及び装置

【0407】

１２．２ 方法及び試料調製
ドデシル硫酸ナトリウムを用いたキャピラリー電気泳動（ＣＥ－ＳＤＳ）は、質量電荷比に従ってポリマーマトリックス内のＳＤＳ－タンパク質複合体を分離するための高速高分解能技術である。ＳＤＳ－タンパク質複合体は、電流が印加されるｎＬ容量のマトリックス充填キャピラリーに移動する。小さなタンパク質はマトリックス内でより速く動き、より大きなタンパク質はより遅く動く。キャピラリーの端部で吸光度（２８０ｎｍ）を測定することにより、タンパク質を検出する。ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅのモーリスｃＩＥＦ／ＣＥ－ＳＤＳ機器を使用した。

【0408】

ＣＥ－ＳＤＳの原理を、ＡＣＥ２－Ｆｃの純度の測定に適用する。以下の条件及び最適な運転パラメータを使用した。
●緩衝液交換：５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．２
●最終希釈用ＳＤＳ－緩衝液：ＣＥ－ＳＤＳ ＰＬＵＳ １×試料緩衝液
●アルキル化：１０分、７０℃
●５７５０Ｖでの分離：非還元＝４０分
１２．実施例９内に適用したＳＥ－ＨＰＬＣ：
１２．１ 材料及び装置
●Ｗａｔｅｒｓ製のＵ（Ｈ）ＰＬＣシステム
●ランニング緩衝液：１×ＰＢＳ、０．１Ｍ ＮａＣｌ、ＰＨ７．０
１２．２ 方法の説明
（超）高速液体クロマトグラフィー（（Ｕ）ＨＰＬＣ）の原理は、移動液相と固定相との間の試料の相互作用及び差次的分配に基づく。ＳＥ－ＵＰＬＣの場合、分離は成分の分子サイズ又は流体力学的体積に基づく。カラム内の多孔質充填材料の細孔に対して大きすぎる分子が最初に溶出し、細孔に入る小分子が最後に溶出する。例えば不純物又は緩衝液成分の溶出時間は、それらの相対サイズに依存する。

【0409】

ＳＥ－ＵＰＬＣの原理は、ＡＣＥ２－Ｆｃの純度及び不純物の決定に適用される。試験には以下の条件を用いた。
●移動相：１×ＰＢＳ、０．１Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．０
●カラム：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＢＥＨ ＳＥＣカラム、２００Å、１．７μｍ、４．６×１５０ｍｍ
●方法：イソクラティック０．３ｍＬ／分
●検出波長：２１４ｎｍ及び２８０ｎｍ
実施例１：融解温度及び凝集による２５の製剤のスクリーニング
１．試料調製
２つのコンストラクトｖ１２６１及びｖ１２６３の各々１ｍｇ（両方とも５０ｍＭ ＴＲＩＳ、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．５中１ｍｇ／ｍＬの濃度）をスピン濾過によって８ｍｇ／ｍＬに濃縮した。タンパク質濃度をＯＤ分光光度法によって確認した。その後、全ての試料を透析により２０ｍＭ ＭＯＰＳ、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．５に移した。最後に、透析産物のタンパク質濃度をＯＤ２８０によって再度決定したところ、７．５ｍｇ／ｍＬを得た。

【0410】

次のステップでは、２５の異なる製剤を製造した。このため、２ ｂｉｎｄ ＧｍｂＨ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）製のＦＯＲＭＯｓｃｒｅｅｎ緩衝液キット（カタログ番号２ＢＢＴ－００１）を使用し、これは、マルチプレートフォーマットに基づく製剤の調製を可能にする。最初に、個々の成分をユーザマニュアルに従って混合し、試料体積を縮小するためにわずかに変更した：４．４０μｌの各５×緩衝液ストックを９６ウェルプレート内で１４．６０μｌの超純水と混合し、３．０μｌの対応するＡＣＥ２－ＩｇＧ４－融合コンストラクト（ｖ１２６１又はｖ１２６３、タンパク質濃度：７．５ｍｇ／ｍＬ）を添加し、混合した。これを行うことによって、１ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度で合計２２μｌを、表１による製剤で調製した。

【0411】

【表1】

【0412】

表１に従って、緩衝系に加えて以下の賦形剤を安定剤／等張化剤として試験した：スクロース、トレハロース、マンニトール、ソルビトール、アミノ酸Ｌ－アルギニン、グリシン、プロリン、Ｌ－メチオニン、及び塩化ナトリウム。全てのこれらの物質の濃度及び混合物を、表１に従う製剤内で変化させた。

【0413】

ｐＨを調整するための緩衝系として以下の賦形剤を試験した：ヒスチジン／ヒスチジンＨＣｌ、クエン酸ナトリウム／クエン酸、コハク酸二ナトリウム／コハク酸、酢酸ナトリウム／酢酸、リン酸一ナトリウム／リン酸二ナトリウム、Ｌ－アルギニンＨＣｌ、及びＴｒｉｓ。「安定剤」のカテゴリーで上述したアミノ酸は、緩衝剤としても作用することができる。緩衝系の濃度を表１に示し、製剤のｐＨ値を５．４～８．６の間で変化させた。

【0414】

以下の賦形剤を界面活性剤として試験した：ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロキサマー１８８及びＰＥＧ－３３５０。この実施例における濃度を、ポリソルベート８０については０．００９％（ｗ／ｖ）～０．２％（ｗ／ｖ）、ポリソルベート２０については０．００６％（ｗ／ｖ）～０．２％（ｗ／ｖ）、ＰＥＧ－３３５０については０．４７％（ｗ／ｖ）～３．００％（ｗ／ｖ）の間で変化させ、ポロキサマー１８８については０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度を使用した。界面活性剤を使用しない製剤も評価した（Ｃ１）。更なる情報については、表１を参照されたい。

【0415】

更に、メチオニン（２．７ｍＭ～１０ｍＭ）及びＥＤＴＡナトリウム（０．０６ｍＭ）をいくつかの製剤に含めて、２つのＡＣＥ２コンストラクトの酸化を防止した。
表１による２５の製剤で製剤化された両方のコンストラクト（ｖ１２６１及びｖ１２６３）を、それらの融解温度及び不溶性凝集体の生成について分析した。

【0416】

２．ＮａｎｏＤＳＦによる融点決定及び凝集測定
立体構造の安定性は、タンパク質の長期安定性を予測するための重要なパラメータであり、本明細書では、ＡＣＥ２－ＩｇＧ４融合コンストラクトの最初の製剤候補を特定するために使用した。表１による２５の製剤での両方のコンストラクト（ｖ１２６１及びｖ１２６３）の融解温度を、Ｎａｎｏｔｅｍｐｅｒ ＧｍｂＨ製のＰｒｏｍｅｔｈｅｕｓ ＮＴ．４８ ｎａｎｏＤＳＦ装置及びＰＲ．ＴｈｅｒｍＣｏｎｔｒｏｌ－ＣＦＲソフトウェアを用いて定量した。Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ装置は、無標識条件下での固有の蛍光変化の検出に基づいてタンパク質アンフォールディング転移を分析する。これにより、３３０ｎｍ及び３５０ｎｍの波長での熱変性中のＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質のトリプトファン及びチロシン残基の蛍光の変化を測定する。通常、トリプトファン及びチロシン残基は、それが天然状態にあるとき、タンパク質の疎水性コアに位置する。温度を上昇させることにより、タンパク質の立体構造は天然の折り畳まれた状態からアンフォールディングされた状態に変化する。この転移が起こる温度は融点と呼ばれ、タンパク質の熱安定性を推定するために使用される。融点温度Ｔ_{ｏｎｓｅｔ}温度は、折り畳みの変化によってタンパク質が変性し始める温度として定義され、Ｔ_ｍは、タンパク質集団の半分がアンフォールディングされる融解温度を示す。

【0417】

ＮａｎｏＤＳＦによる熱安定性の評価に加えて、不溶性凝集体の生成も、同じキャピラリー内の後方反射によって監視することができる。凝集体は、照射されたときに光を散乱させる。試料を通過した後の光ビームの強度の損失を測定することにより、凝集レベルの指標が得られる。温度を上昇させながら生成したデータから、凝集開始温度（Ｔ_{ａｇｇ－ｏｎ}）を決定する。

【0418】

表１による試料（全て１ｍｇ／ｍＬのコンストラクトを含む）を毛管力によってキャピラリーに充填し、走査した。測定パラメータを表２に示す。

【0419】

【表2】

【0420】

融点Ｔ_ｍ及びアンフォールディング開始温度は、Ｎａｎｏｔｅｍｐｅｒ製のソフトウェアＰＲ－ＴｈｅｒｍＣｏｎｔｒｏｌ－ＣＦＲによって計算した。各試料を１回の測定で分析した。表３は、コンストラクトｖ１２６１についての異なる品質属性の平均を要約し、表５は、コンストラクトｖ１２６３についての結果を要約する。各パラメータについて１０個の最良性能の製剤を（１）～（１０）からランク付けし、更に太字で示す。

【0421】

【表3】

【0422】

Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓシステムを用いてｖ１２６１の試料を分析すると、以下の結果が得られた（詳細な結果については表３を参照）。
製剤Ｈ１１、Ａ４、Ａ７、Ｄ１１、及びＣ１２は、ｖ１２６１コンストラクトの長期安定製剤を開発するために好ましいｖ１２６１（表４を参照）について試験した２５の製剤での最高融解温度を含む。驚くべきことに、これらの製剤は、安定剤として糖を含むことができ、又は糖を含まない塩化ナトリウム製剤（Ｈ１１）に基づくことができる。すなわち、安定剤としてトレハロース及びスクロースのような糖を含有する溶液は、等張剤として塩化ナトリウムを含有する糖を含まない製剤に匹敵する融解挙動を含む。

【0423】

ソルビトール（例えば、製剤Ａ５、Ｂ８）、マンニトール（Ｈ３）、グリシン（Ｈ３）及びプロリン（Ｄ１０）の使用は、ｎａｎｏＤＳＦによって評価される安定性を改善しなかった。

【0424】

【表4】

【0425】

驚くべきことに、スクロース及び塩化ナトリウムに加えて賦形剤としてＬ－アルギニン（表２を参照）を含有する製剤Ｃ１はまた、高いＴ_{ａｇｇ－ｏｎ}をもたらし、この製剤がいかなる界面活性剤も含有しない場合であっても、他の試験された製剤と比較して凝集に対する有望な安定性を示した。

【0426】

界面活性剤ポリソルベート２０及びポリソルベート８０は、試験した範囲でスクリーニングにおいて同等に機能し、両方ともポロキサマー１８８及びＰＥＧ－３３５０の使用と比較して優れていた。界面活性剤を使用しない製剤も、安定な製剤をもたらした（Ｃ１）。

【0427】

溶液の最適ｐＨは、５．６～６．３の範囲であると決定された。表３からの結果に基づいて、これのために特定された好適な緩衝系は以下の通りである：ヒスチジン／ヒスチジンＨＣｌ（製剤Ｃ４、Ｃ１１及びＣ１２を参照）、酢酸／酢酸ナトリウム（製剤Ａ４を参照）、リン酸一ナトリウム／リン酸二ナトリウム（製剤Ａ７を参照）、及びコハク酸／コハク酸二ナトリウム（製剤Ｈ１１を参照）。

【0428】

ｖ１２６３試料をＰｒｏｍｅｔｈｅｕｓシステムで分析すると、以下の結果が得られた（詳細な結果については表５を参照）。

【0429】

【表5】

【0430】

製剤Ｃ１２、Ｂ７、Ｈ７、Ｃ４、Ｆ８、及びＨ３は、ｖ１２６３コンストラクトの長期安定製剤を開発するために好ましいｖ１２６３について試験した２５の製剤での最高融解温度を含む（表５を参照）。製剤の大部分は、安定剤としてのトレハロース又はスクロースのような糖とポリソルベート２０又はポリソルベート８０と組み合わせて、緩衝剤としてのヒスチジンに基づいており、高い融点を達成することができた（表６を参照）。

【0431】

ソルビトール（例えば、製剤Ａ５、Ｂ８）、及びプロリン（Ｄ１０）の使用は、ｎａｎｏＤＳＦによって評価される安定性を改善しなかった。
驚くべきことに、スクロース及び塩化ナトリウムに加えて賦形剤としてＬ－アルギニン（表２を参照）を含有する製剤Ｃ１は、最も高いＴ_{ａｇｇ－ｏｎ}の１つをもたらし、この製剤がいかなる界面活性剤も含有しない場合であっても、他の試験された製剤と比較して凝集に対する非常に有望な安定性を示した（表５を参照）。製剤Ａ４は、最も高いＴ_{ａｇｇ－ｏｎ}をもたらし、凝集を防止するために有望であると思われる。

【0432】

界面活性剤ポリソルベート２０及びポリソルベート８０は、試験した範囲でスクリーニングにおいて同等に機能し、両方ともポロキサマー１８８及びＰＥＧ－３３５０の使用と比較して優れていた。

【0433】

溶液の最適ｐＨは、５．８～６．３の範囲であると決定された。表５の結果に基づいて、これに適した特定された緩衝系は、ヒスチジン／ヒスチジンＨＣｌ（製剤Ｂ７、Ｈ７、Ｆ８、Ｃ４及びＣ１２を参照）、酢酸（製剤Ａ４を参照）、及びクエン酸／クエン酸ナトリウム（製剤Ｈ３を参照）である。

【0434】

【表6】

【0435】

実施例２
物理化学的分析方法によって重要な属性を特定するためのＡＣＥ２－ＩｇＧ４－融合コンストラクトｖ１２６１及びｖ１２６３の加速安定性及び凍結解凍プログラム
ＡＣＥ２－ＩｇＧ４－融合コンストラクトｖ１２６１及びｖ１２６３を５０ｍＭ ＴＲＩＳ、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．５に製剤化した。各コンストラクトの濃度を１ｍｇ／ｍＬに調整し、２８０ｎｍでのＵＶ－Ｖｉｓ分光法によって検証した。

【0436】

上記製剤中の１ｍｇ／ｍＬの濃度のコンストラクトをポリプロピレンバイアルに充填し、３７℃で最大６週間貯蔵して、分解経路を特定し、可能な製剤戦略を評価して、これらの分子修飾に対するＡＣＥ２－ＩｇＧ４－ＦＣコンストラクトの安定性を最適化した。更に、タンパク質安定性に対するこのプロセシングステップの影響を評価するために、両方のコンストラクト（ｖ１２６１及びｖ１２６３）に凍結／解凍サイクルによってストレスをかけた。

【0437】

貯蔵又はストレス処理後、試料を、高分子量種（ＨＭＷＳ）の存在についてはサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）によって、断片及びＨＭＷＳの存在については非還元ドデシル硫酸ナトリウムキャピラリー電気泳動（ＣＥ－ＳＤＳ）によって分析した。ペプチドマッピングを使用して、酸化及び脱アミド化による修飾を定量した。

【0438】

ＳＥ－ＨＰＬＣによる高分子量種（ＨＭＷＳ）の分析
１５μｇの各試料を、２つのＡＣＥ２－ＩｇＧ４－ＦＣ融合コンストラクトの高分子量種を検出するために、ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＢＥＨ ＳＥＣ ２００Å、１．７μｍ、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ、１０Ｋ～５００Ｋカラムに適用した。ガードカラムＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＳＥＣ Ｇｕａｒｄ Ｃｏｌｕｍｎ ２００Å、１．７μｍ、４．６ｍｍ×３０ｍｍ、１０Ｋ～５００Ｋを使用して、メインカラムを保護した。

【0439】

１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含む２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）を用いて、３０℃で０．３ｍＬ／分の流速によりイソクラティック溶出によってタンパク質を溶出した。溶出された種を２８０ｎｍの波長で検出し、溶出された種の濃度対時間を示すグラフに表示した。溶出プロファイルは、非凝集タンパク質を有する主ピーク及びタンパク質のより高い分子量形態を表すタンパク質のピークを示した。全てのピークの面積を決定した。

【0440】

表７は、ＨＭＷＳのピーク面積の、試料ｖ１２６１及びｖ１２６３の溶出種の総ピーク面積に対するパーセントを示す。

【0441】

【表7】

【0442】

ＨＭＷＳの生成は、３７℃で１週間貯蔵した後に既に強く増加しており、凝集の明らかな傾向が見られる。また、凍結／解凍サイクルを行った後、ＨＭＷＳは増加し、コンストラクトが凍結に対して安定でないことを示した。

【0443】

両方のＡＣＥ２－ＩｇＧ４－Ｆｃコンストラクトが、凝集しやすい。これらの結果に基づいて、凝集に対する製剤の改善が必要であり、実施例１で特定された賦形剤及び条件の使用が、長期安定製剤を開発するために必要である。

【0444】

非還元ＳＤＳ－ｃＧＥによる高分子量種（ＨＭＷＳ）及び低分子量種（ＬＭＷＳ）の検出
試料中の低分子量種（ＬＭＷＳ）及び共有結合した高分子量種（ＨＭＷＳ）を定量するために、ＡＢＳｃｉｅｘ製のＣＥＳＩ８０００システムを使用してキャピラリーゲル電気泳動を行った。２％ＳＤＳを含む、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ９．０を含む試料緩衝液を使用した。５０μｌの試料緩衝液を使用し、２μｌの内部標準及び５μｌの２５０ｍＭヨードアセトアミドを添加することによってマスターミックスを作製した。分析対象の各試料（１ｍｇ／ｍＬ）を５７μｌのマスターミックス溶液と混合した。

【0445】

分析のために、試料を圧力注入（３４．５ｋＰａ（５ｐｓｉ）、６５秒）によって注入した。ＳＤＳ－ｃＧＥは、有効長１０ｃｍの中性の剥き出しの溶融シリカキャピラリーへの順方向注入によって行った。キャピラリー温度２５℃、－１５ｋＶで２５分間分離を行った。分析の前に、試料を９０℃で１０分間熱変性させた。

【0446】

ＵＶ吸収を２２０ｎｍで測定した。３２Ｋａｒａｔソフトウェア（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して、ピーク積分に関してデータを評価した。キャピラリー電気泳動では、初期ピークが後のピークよりも検出器ウィンドウを通って速く移動するという事実を考慮して、ピーク面積を速度補正相対ピーク面積として決定した。試料ピーク積分を、製剤緩衝液又は純水ブランクの電気泳動図と比較して行い、非タンパク質特異的ピークを特定し、除外した。

【0447】

【表8】

【0448】

表８によれば、ＬＭＷＳは、３７℃での貯蔵中に両方のコンストラクトにおいて増加した。ｖ１２６１では、インキュベーション期間中にＨＭＷＳは検出されず、ｖ１２６３では、ＨＭＷＳのわずかな増加を観察することができた。凍結／解凍サイクルを両方のコンストラクトに適用することによると、ＬＭＷＳもＨＭＷＳも生成されなかった。

【0449】

これらの結果に基づいて、両方のコンストラクトは断片化を起こしやすいことが示されており、非還元ＣＥ－ＳＤＳによるこの重要な品質属性の監視は、次の製剤化ラウンドにおいて考慮する必要がある（実施例４を参照）。

【0450】

ＬＣ－ＭＳペプチドマッピングによる酸化及び脱アミド化の検出
コンストラクトｖ１２６１及びｖ１２６３の両方における酸化修飾及び脱アミド化の定量化をペプチドマッピングによって行った。

【0451】

各試料（２０μｇ）を試料緩衝液で１ｍｇ／ｍＬに希釈した。試料緩衝液は、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．８、１ｍＭ ＥＤＴＡ、及び１５ｍＭ Ｌ－メチオニンからなっていた。４２μｌの８ＭグアニジンＨＣｌ（１００ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．８、５．５ｍＭ ＤＴＴ中で調製）を４℃で１時間かけて添加することによって試料を還元した。その後、５．５μｌの１５０ｍＭヨードアセトアミドを添加し、試料を暗所で室温にて３０分間貯蔵することによってアルキル化を行った。２４０μｌの試料緩衝液、５μｌのトリプシン及び組換えＬｙｓ－Ｃの両方の１μｇ／μｌの酵素溶液を添加し、３７℃で４時間インキュベートすることによって、両方のＡＣＥ２－ＩｇＧ４－ＦＣ融合コンストラクトを消化した。インキュベーション後、１７μｌの２０％ギ酸溶液を添加した。

【0452】

ＬＣ－ＭＳペプチドマッピングによる試料分析のため、４２．５μｌの試料（２．５μｇ）をＡＣＱＵＩＴＹ Ｐｅｐｔｉｄｅ ＢＥＨ Ｃ１８、１３０Å、１．７μｍ、２．１×１５０ｍｍカラムに適用した。

【0453】

液体クロマトグラフィーには、６０分以内に５％～４３％アセトニトリルの勾配を０．２ｍＬ／分の流速で使用した。移動相ＡはＭｉｌｌｉ－Ｑ水中の０．１％ギ酸からなり、移動相Ｂはアセトニトリル中の０．１％ギ酸からなった。カラム温度５０℃で分離を行った。シール洗浄／パージを８０／２０アセトニトリル／Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水で行った。

【0454】

測定のため、以下のパラメータを使用した：
－１００～２０００ｍ／ｚ
－キャピラリー：３ｋＶ
－試料コーン：２５Ｖ
－ソース温度：１００℃
－脱溶媒温度：２５０℃
－脱溶媒ガス流量：５００Ｌ／ｈ
－低ＣＥ法：ＭＳ：６Ｖ、ＭＳＥ：１５～３０Ｖ
－高ＣＤ法：ＭＳ：６Ｖ、ＭＳＥ：６０～１００Ｖ
その後、ＵＮＩＦＹデータベースを使用して、カバレッジマップについて既知のタンパク質配列を検索した。潜在的なメチオニン酸化部位又はアスパラギン脱アミド化部位を有する全てのペプチドの抽出イオン電流（ＸＩＣ）法を、３７℃での貯蔵中及び凍結／解凍サイクル後のコンストラクトｖ１２６１及びｖ１２６３におけるこれらの修飾の定量化に関する評価に使用した。

【0455】

【表9】

【0456】

【表10】

【0457】

３７℃での貯蔵では、コンストラクトｖ１２６１及びｖ１２６３の両方におけるメチオニン酸化の増加をＬＣ－ＭＳペプチドマッピングによって実証することができた（表９及び表１０を参照）。両方のコンストラクトが、凍結／解凍サイクルを適用した後、メチオニン酸化に対して安定であった。

【0458】

メチオニン酸化は、以下のペプチドにおいて生じた：
Ｔ５：ＥＱＳＴＬＡＱＭＹＰＬＱＥＩＱＮＬＴＶＫ
Ｔ１９：ＬＭＮＡＹＰＳＹＩＳＰＩＧＣＬＰＡＨＬＬＧＤＭＷＧＲ
Ｔ５７：ＮＱＭＩＬＦＧＥＥＤＶＲ
Ｔ６８：ＤＴＬＭＩＳＲ
表９及び表１０の結果に基づいて、両方のコンストラクトは酸化されやすいことが示され、ＬＣ－ＭＳペプチドマッピングによるこの重要な品質属性を監視するために、次の製剤化ラウンドで考慮する必要がある（実施例４を参照）。酸化に対する製剤の改善が必要であり、長期安定製剤を開発するためには、実施例１で特定された酸化防止剤又は酸化を防止する条件の使用が必要である。

【0459】

【表11】

【0460】

表１１によれば、３７℃の貯蔵条件でのＬＣ－ＭＳペプチドマッピングによって、アスパラギン脱アミド化の増加を実証することができた。凍結／解凍サイクルを適用した後、両方のコンストラクトが脱アミド化に対して安定であった。

【0461】

以下のペプチドでアスパラギン脱アミド化が起こった：
Ｔ６４－６６：ＳＲＩＮＤＡＦＲＬＮＤＮＳＬＥＦＬＧＩＱＰＴＬＧＥＳＫ
Ｔ８４－Ｔ８２：ＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫ
これらの結果に基づいて、両方のコンストラクトは脱アミド化される傾向があることが示され、ＬＣ－ＭＳペプチドマッピングによるこの重要な品質属性の監視は、次の製剤化ラウンドで考慮する必要がある（実施例３を参照）。アスパラギン脱アミド化に対する最適化のために、種々の条件、例えばｐＨを評価する必要がある。

【0462】

実施例３
実施例１は、Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓシステムによって監視された融解温度及び凝集挙動に基づいて、２つのＡＣＥ２－ＩｇＧ４融合コンストラクト（ｖ１２６１及びｖ１２６３）を安定化するための賦形剤及び条件を含んだ。

【0463】

これらの結果に基づいて、１０ｍＭ酢酸、３０ｍＭ Ｌ－アルギニン塩酸塩、２５０ｍＭトレハロース二水和物、５ｍＭ Ｌ－メチオニン、５０ｍＭ塩化ナトリウム、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、ｐＨ５．８中１ｍｇ／ｍＬのＡＣＥ２ ＩｇＧ４融合コンストラクトを含む新しい製剤を製造した。

【0464】

２つのＡＣＥ２融合コンストラクト（ｖ１２６１及びｖ１２６３）の各々を、クローン評価研究中にこの製剤に移し、融点及び凝集に関してＤＳＦによって分析した。
２０℃から始まり９５℃までの範囲で１℃／分の昇温を使用して、実施例１と同一の方法設定で、ＤＳＦを行った。

【0465】

この製剤を使用することにより、全ての試験したクローンにおいて高い融点及び非常に高い凝集開始点が得られ、最終的に凝集に対する長期安定性をもたらすこととなった。
ｖ１２６１については、１６個のクローンを評価した。Ｔ_ｏｎは４５．６℃～４７．５℃、Ｔ_ｍは５４．８℃～５６．１℃、Ｔ_ａｇｇは６３．７℃～６７．８℃、Ｔ_{ａｇｇ－ＩＰ}（凝集変曲点）は７０．１℃～７２．３℃の範囲で定量した。

【0466】

ｖ１２６３については、１６個のクローンを評価した。Ｔ_ｏｎは４５．０℃～４６．３℃、Ｔ_ｍは５０．４℃～５４．５℃、Ｔ_ａｇｇは６４．７℃～６８．２℃、Ｔ_{ａｇｇ－ＩＰ}（凝集変曲点）は７０．９℃～７２．９℃の範囲で定量した。

【0467】

実施例４
実施例１及び３では、安定な製剤を生成するための高融点及び有望な凝集開始点を有する製剤が特定された。

【0468】

コンストラクトｖ１２６１及びｖ１２６３の両方を、２０ｍｇ／ｍＬの標的濃度の試験したＡＣＥ２－ＩｇＧ４融合コンストラクトを含む表１２による製剤に移し、物理化学的安定性及び効力に関する最良の安定化効果について、異なる温度及びストレス条件での安定性研究中に評価した。

【0469】

【表12】

【0470】

安定性をいくつかの温度条件（５℃、２５℃／６０％ＲＨ及び４０℃／７５℃ＲＨ）で以下の期間評価した。
５℃及び２５℃／６０％ＲＨ：最大６ヶ月
４０℃／７５％ＲＨ：最大３ヶ月
別の組の実験では、試料を３回及び５回の凍結／解凍サイクルに供した。

【0471】

上記製剤中の約２０ｍｇ／ｍＬの濃度のコンストラクトをポリプロピレンバイアルに充填し、５℃で最大３ヶ月間（ｖ１２６１のみ）及び２５℃で１ヶ月間貯蔵して、分解経路を特定し、可能な製剤戦略を評価して、これらの分子修飾に対するＡＣＥ２－ＩｇＧ４－ＦＣコンストラクトの安定性を最適化した。更に、タンパク質安定性に対するこのプロセシングステップの影響を評価するために、両方のコンストラクト（ｖ１２６１及びｖ１２６３）に凍結／解凍サイクルによってストレスをかけた。

【0472】

貯蔵又はストレス処理後、試料を、高分子量種（ＨＭＷＳ）の存在についてはサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）によって、断片（ＬＭＷＳ）及びＨＭＷＳの存在については非還元ドデシル硫酸ナトリウムキャピラリー電気泳動（ＣＥ－ＳＤＳ）によって分析した。ペプチドマッピングを、酸化、脱アミド化、及び糖化による修飾を定量するために使用した。アニオン交換クロマトグラフィーによって、酸性種及び塩基性種の存在を監視した。

【0473】

コンストラクトｖ１２６１
ＯＤ２８０ｎｍによって測定された濃度は、全ての貯蔵条件下で全ての試験した製剤において方法の変動性の範囲内で安定した結果を示した（データは示さず）。

【0474】

【表13】

【0475】

製剤４ａは、出発材料と比較してわずかな増加しか決定されなかったため、貯蔵後のＨＭＷＳの形成に関して優れた安定性を示した。
ＬＭＷＳ及びＨＭＷＳの各々のパーセントを、コンストラクトｖ１２６１の５℃又は２５℃での貯蔵後及び凍結／解凍後にＣＥ－ＳＤＳによって決定した。

【0476】

結果は、全ての製剤が２５℃で１ヶ月後及び５℃で３ヶ月後に断片化（％ＬＭＷＳ）に対して安定であることを示した。全ての製剤はまた、５℃で３ヶ月後に低い％ＨＭＷＳを示し、これも良好な安定性を示した。

【0477】

更に、２５℃で１ヶ月後の％ＨＭＷＳは、他の製剤と比較して製剤４ａにおいてより低いレベルであった。特に、製剤４ａは、出発材料と比較してＨＭＷＳのわずかな増加しか決定されなかったため、貯蔵後のＨＭＷＳの生成に関して優れた安定性を示した。

【0478】

【表15】

【0479】

製剤４ａについて、方法の変動性を超える酸化の増加は、試験した全ての貯蔵条件で定量化されなかった。脱アミド化値は、試験した全ての製剤において方法の変動性の範囲内で一定であった。

【0480】

糖化は、全貯蔵期間中、非常に低い含量（０．６％～０．７％）で安定であると決定された（データは示さず）。
ＡＣＥ２タンパク質のリシン並びにメチオニンアミノ酸残基が相互作用している及び結合したＳ－タンパク質に非常に近接している場合、トレハロース並びにメチオニンを含む製剤は、タンパク質アミノ酸の可能性のあるリシン糖化及びメチオニン酸化に関して長期貯蔵中に融合タンパク質の高い効力を維持すると考えられる。

【0481】

【表16】

【0482】

２５℃の加速貯蔵条件であっても、貯蔵後に酸性種のごくわずかな増加のみが定量化されたため、製剤４ａは最良の安定化効果をもたらした。製剤４ａでは、塩基性種は２５℃で１ヶ月貯蔵後に同等のわずかな増加を示し、塩基性種の含量は５℃で３ヶ月貯蔵後に安定であると決定された。

【0483】

要約すると、製剤４ａは、物理化学的安定性に関してコンストラクトｖ１２６１の全体的な安定化をもたらした。
コンストラクトｖ１２６３
ＯＤ２８０ｎｍによって測定された濃度は、全ての試験された製剤において、全ての貯蔵条件中、方法の変動性の範囲内で安定した結果を示した（データは示さず）。

【0484】

【表17】

【0485】

全ての製剤は、全ての試験した貯蔵条件でＨＭＷＳの生成に関して非常に良好な安定性を示した。製剤１ｂ及び２ｂは、わずかにより高い含量のＨＭＷＳを生成するようである。

【0486】

ＬＭＷＳの各々のパーセントを、２５℃での貯蔵後、コンストラクトｖ１２６３についてＣＥ－ＳＤＳによって決定した。
全ての製剤は、試験した貯蔵条件の後のＬＭＷＳの形成に関して非常に良好な安定性を含んでいた。

【0487】

【表19】

【0488】

試験した全ての製剤は、酸化及び脱アミド化に関して優れた安定性を示した。加速貯蔵条件で貯蔵した後、全ての値は出発物質に匹敵し、方法の変動性の範囲内であった。
また、糖化は、全貯蔵期間中、非常に低い含量（０．６％～０．７％）で安定であると決定された（データは示さず）。

【0489】

【表20】

【0490】

【0491】

試験した全ての製剤は、酸性種及び塩基性種の両方の生成に関して非常に良好な安定性を示した。
コンストラクトｖ１２６３については、全ての試験した製剤が優れた製剤候補であり、加速貯蔵条件でも優れた安定性を示し、この分子について２℃～８℃での有望な長期貯蔵安定性を示す。

【0492】

実施例５
実施例１では、２つのＡＣＥ２ ＩｇＧ４ Ｆｃ融合コンストラクト（ｖ１２６１及びｖ１２６３）を安定化するための賦形剤及び条件を、融解温度及び凝集挙動に基づいて特定した。

【0493】

実施例２では、品質属性を特定し、タンパク質修飾を監視するための好適な方法セットを開発した。製剤最適化の必要性も実証することができた。最適化されていない製剤は、ＨＭＷＳの生成、断片化、並びに脱アミド化、酸化及びおそらく糖化の増加をもたらす。

【0494】

実施例３では、高い融点及び有望な凝集開始点を有する新しい製剤を特定して、安定な製剤を生成した。
これらの結果に基づいて、表１３による医薬組成物を更なる分析のために選択した。

【0495】

溶液を緩衝するために、ヒスチジン、リン酸、酢酸、及びコハク酸の緩衝系を評価した。互いに異なるｐＨ値を含む複数の製剤を、最適ｐＨの特定のために分析した。
界面活性剤として、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、及びポロキサマー１８８を評価し、界面活性剤を含まない製剤も試験した。

【0496】

製剤を安定化するためにトレハロース及びスクロースを評価し、完全に無糖の塩ベースの製剤（塩化ナトリウムを含む）も評価し、更に糖と塩との両方を含む製剤を分析した。
更に、更なる産物安定化に対する賦形剤Ｌ－アルギニン及びＬ－メチオニンの影響を評価した。

【0497】

【表21】

【0498】

上に列挙した全ての医薬組成物を、透析によって調製した。
安定性をいくつかの温度条件（５℃、２５℃／６０％ＲＨ及び４０℃／７５％ＲＨ）で以下の期間評価した。

【0499】

５℃：最大１２ヶ月
２５℃／６０％ＲＨ：最大６ヶ月
４０℃／７５％ＲＨ：最大３ヶ月
別の組の実験では、試料を３回及び５回の凍結／解凍サイクルに供した。

【0500】

以下の分析パネルを使用してタンパク質安定性を分析した：
ＵＶ２８０（ＡＣＥ２－ＩｇＧ４－ＦＣ融合コンストラクトの濃度）、ＳＥ－ＨＰＬＣ（凝集）、非還元ＣＥ－ＳＤＳ（ＬＭＷＳ、ＨＭＷＳ）、ペプチドマッピング（脱アミド化、酸化、糖化）、ｎａｎｏＤＳＦ（融解温度及び凝集）、ｃＩＥＦ（塩基性種及び酸性種）、ＡＥＸ（塩基性種及び酸性種）、活性の定量のための結合ＥＬＩＳＡ及び酵素活性の定量のためのアッセイ。

【0501】

実施例６：ＡＣＥ２（１８－７３２）－ＩｇＧ１、ｖ１２６０の製剤スクリーニング
融点Ｔ_ｍ及びアンフォールディング開始温度は、Ｎａｎｏｔｅｍｐｅｒ製のソフトウェアＰＲ－ＴｈｅｒｍＣｏｎｔｒｏｌ－ＣＦＲによって計算した。各試料を１回の測定で分析した。ｖ１２６０の試料をＰｒｏｍｅｔｈｅｕｓシステムで分析すると、以下の結果が得られた（表２２を参照、各パラメータについて１０の最良に機能する製剤を（１）～（１０）からランク付けし、更に太字で示す）。

【0502】

【表22】

【0503】

ＩｇＧ１（ｖ１２６０）（表２２を参照）及びＩｇＧ４（ｖ１２６１）（表３を参照）のＡＣＥ２－Ｆｃ融合コンストラクトの安定性は、有意差なく同等である。２つの変異を有する触媒的に不活性なコンストラクト（ｖ１２６３）は、より低い融解温度を示す（表５を参照）。

【0504】

ソルビトール（例えば、製剤Ａ５、Ｂ８）、マンニトール（Ｈ３）、グリシン（Ｈ３）及びプロリン（Ｄ１０）の使用は、ｎａｎｏＤＳＦによって評価される安定性を改善しなかった。

【0505】

驚くべきことに、スクロース及び塩化ナトリウムに加えて賦形剤としてＬ－アルギニン（表２２を参照）を含有する製剤Ｃ１はまた、高いＴ_{ａｇｇ－ｏｎ}をもたらし、この製剤がいかなる界面活性剤も含有しない場合であっても、他の試験された製剤と比較して凝集に対する有望な安定性を示した。

【0506】

界面活性剤ポリソルベート２０及びポリソルベート８０は、試験した範囲でスクリーニングにおいて同等に機能し、両方ともポロキサマー１８８及びＰＥＧ－３３５０と比較して優れていた。界面活性剤を全く含まない製剤も、安定な製剤をもたらした（Ｃ１）。

【0507】

溶液の最適ｐＨは、５．６～６．３の範囲であると決定された。表２２の結果に基づいて、このｐＨ範囲に適した特定された緩衝系は、酢酸／酢酸ナトリウム（製剤Ａ４、Ｄ１１を参照）、ヒスチジン／ヒスチジンＨＣｌ（製剤Ｃ４、Ｃ１１及びＣ１２を参照）、リン酸一ナトリウム／リン酸二ナトリウム（製剤Ａ７を参照）、及びコハク酸／コハク酸二ナトリウム（製剤Ｈ１１を参照）である。

【0508】

ｖ１２６０について試験した２５の製剤の中で、製剤Ｈ１１、Ａ７、Ａ４、Ｄ１１、及びＣ１２（表２３を参照）は、ｖ１２６０コンストラクトの長期間安定な製剤を開発するために好ましい最も高い融解温度を示した。驚くべきことに、これらの製剤は、安定剤として糖を含むことができ、又は糖を含まない塩化ナトリウム製剤（Ｈ１１）に基づくことができる。すなわち、安定剤としてトレハロース及びスクロースのような糖を含有する溶液は、等張剤として塩化ナトリウムを含有する糖を含まない製剤に匹敵する融解挙動を示す。

【0509】

【表23】

【0510】

実施例７：ＡＣＥ２（１８－７３２）－ＩｇＧ１（ｖ１２６０、配列番号７）、正常シアリル化（ＮＳ）／ＡＣＥ２（１８－７３２）－ＩｇＧ１（ｖ１２６０、配列番号７）、高シアリル化（ＨＳ）／ＡＣＥ２（１８－７３２）－ＩｇＧ１（ＹＴＥ）（ｖ１３２８、配列番号２７）、高シアリル化の短期安定性
他のＡＣＥ２－Ｆｃ融合タンパク質に関しても製剤４ａの好適性を示すために、タンパク質精製及び製剤４ａへの交換後の、正常シアリル化を伴うＡＣＥ２（１８－７３２）－ＩｇＧ１（ｖ１２６０）（表２４）、ＡＣＥ２（１８－７３２）－ＩｇＧ１（ｖ１２６０）高シアリル化（ＨＳ）（表２５）、及びＡＣＥ２（１８－７３２）－ＩｇＧ１（ＹＴＥ）（ｖ１３２８）高シアリル化（表２６）の結果を示す。

【0511】

以下の分析パネルを使用してタンパク質安定性を分析した：
ＳｏｌｏＶＰＥ（ＡＣＥ２－Ｆｃ融合コンストラクトの濃度の定量化）、ＳＥ－ＨＰＬＣ（凝集）、非還元ＣＥ－ＳＤＳ（ＬＭＷＳ）、ｎａｎｏＤＳＦ（融解温度及び凝集）、ＡＥＸ（塩基性種及び酸性種）、及び結合ＥＬＩＳＡ（標的への結合に関する効力の定量化）。

【0512】

【表24】

【0513】

【表25】

【0514】

【表26】

【0515】

融合タンパク質ｖ１２６０（ＡＣＥ２（１８－７３２）－ＩｇＧ１正常シアリル化並びに高シアリル化及びｖ１３２８（ＡＣＥ２（１８－７３２）－ＩｇＧ１（ＹＴＥ）高シアリル化を、タンパク質精製及び製剤４ａへの緩衝液交換後に、凝集体、断片、塩基性種及び酸性種、融解温度、並びに標的結合に関して分析した。これらの融合タンパク質についての結果（表２４、表２５、及び表２６）は、ＩｇＧ４バージョンの分子で得られた結果に匹敵した。これにより、異なるＡＣＥ２－Ｆｃコンストラクトに対する製剤４ａの適用性が確認される。

【0516】

実施例８：ＡＣＥ２（１８－７３２）－ＩｇＧ４、正常シアリル化（５℃で８ヶ月間）、及び高シアリル化（凍結／解凍（Ｆ／Ｔ）時及び５℃又は２６℃で３ヶ月間）の安定性研究：
融合タンパク質の正常シアリル化形態及び高シアリル化形態の両方を調査した。正常シアリル化形態を、標準的な培養条件下で生成した（ＣＨＯ細胞を、４ｍＭのＬ－グルタミン、抗凝集剤（Ｇｉｂｃｏ；１：１０００に希釈）及び５μＭ塩化亜鉛を補充したＦｏｒｔｉＣＨＯ培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で培養した。３日目から１４日目まで１日あたり２％ＣｅｌｌＢｏｏｓｔ ７ａ培地及び０．２％ＣｅｌｌＢｏｏｓｔ ７ｂのフラットフィードを添加した。３日目から４ｇ Ｌ^－１までグルコース溶液からグルコースを添加した）。

【0517】

対照的に、高シアリル化形態を、４ｍＭのＬ－グルタミン、抗凝集剤（Ｇｉｂｃｏ；１：１０００に希釈）、５μＭ塩化亜鉛、４０μＭ塩化マンガン、及び１０ｍＭ Ｎ－アセチルマンノサミンを補充したＦｏｒｔｉＣＨＯ培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中、３７℃で２日間培養することにより生成した。培養３日目から１４日目まで、４０μＭ塩化マンガン及び０．１８５ｍＭガラクトースを含有するＣｅｌｌＢｏｏｓｔ ７ａ培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及びＣｅｌｌ Ｂｏｏｓｔ ７ｂ培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を細胞に毎日供給し、３７℃の温度で維持した。３日目から４ｇ Ｌ^－１までグルコース溶液からグルコースを添加した。

【0518】

１０ｍＭ酢酸、３０ｍＭ Ｌ－アルギニン塩酸塩、２５０ｍＭトレハロース二水和物、５ｍＭ Ｌ－メチオニン、５０ｍＭ塩化ナトリウム、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、ｐＨ５．８中に４０ｍｇ／ｍＬの標的濃度のＡＣＥ２ ＩｇＧ４融合コンストラクト（ｖ１２６１）を含む製剤を生成し、２５０μＬの溶液を２Ｒバイアルに充填した。

【0519】

精製されたタンパク質溶液を、異なる温度及びストレス条件で貯蔵するか、又は安定性研究内で３回の凍結解凍サイクルを行った後、異なる分析技術を用いてＡＣＥ２－ＩｇＧの物理化学的品質パラメータ並びにその効力を評価した。安定性を以下の条件で評価した：
●５℃及び２６℃：ＡＣＥ２（１８－７３２）－ＩｇＧ４高シアリル化について、最大３ヶ月
●凍結／解凍：ＡＣＥ２（１８－７３２）－ＩｇＧ４高シアリル化について、－８０℃及び室温で３サイクル
●５℃：正常シアリル化を伴うＡＣＥ２（１８－７３２）－ＩｇＧ４について、最大８ヶ月
以下の分析パネルを使用してタンパク質安定性を分析した：
Ｎａｎｏｄｒｏｐ（ＡＣＥ２－Ｆｃ融合コンストラクトの濃度の定量化）、ＳＥ－ＨＰＬＣ（凝集）、非還元ＣＥ－ＳＤＳ（ＬＭＷＳ）、ｎａｎｏＤＳＦ（融解温度及び凝集）、ＡＥＸ（塩基性種及び酸性種）、及び結合ＥＬＩＳＡ（標的への結合に関する効力の定量化）。

【0520】

以下の結果が観察され、表２７及び表２８に要約されている。

【0521】

【表27】

【0522】

貯蔵中及びＦ／Ｔ中にＡＣＥ２（１８－７３２）－ＩｇＧ４高シアリル化について、以下の傾向が観察された。試料濃度は、５℃及び２６℃で３ヶ月間貯蔵した後、アッセイ変動性内で安定していた。また、ＳＥ－ＨＰＬＣによって決定されたＨＭＷＳの含量はアッセイ変動内の全ての試験した条件で安定であったため、凝集レベルは５℃及び２６℃で３ヶ月間の貯蔵によって著しい影響を受けなかった。

【0523】

総ＬＭＷ面積％は、両方の温度条件で経時的に増加し、Ｆ／Ｔサイクル中にＬＭＷＳは形成されなかった。
酸性種のパーセントは、貯蔵時に経時的に増加した。

【0524】

２６℃で３Ｍ（３ヶ月）後のアンフォールディングは著しい影響を受けなかった。しかしながら、２６℃で３Ｍ後、凝集開始温度は低下した。
５℃又は２６℃で３ヶ月間貯蔵した試料は、標的への結合に関して、Ｔ０での試料と同様の効力を示す。

【0525】

【表28】

【0526】

５℃で８ヶ月間貯蔵した後、ＡＣＥ２（１８－７３２）－ＩｇＧ４正常シアリル化について以下の傾向が観察された：試料濃度並びにＨＭＷＳレベルの両方が、方法の変動性の範囲内で一定のままであった。

【0527】

総ＬＭＷＳ面積％は、経時的にわずかに増加しただけであった。荷電種に関して、酸性種のパーセントは、貯蔵時に経時的にわずかに増加した。アンフォールディングは著しい影響を受けず、凝集開始温度は５℃で８ヶ月後にわずかに上昇した。

【0528】

５℃で８ヶ月間貯蔵した試料は、Ｔ０と比較した場合、長期貯蔵後に同様の効力を示した。
２つの直交法を使用して凝集体形成の初期レベルを比較するために、バッチをＴ０で分析的超遠心分離（ＡＵＣ）によって更に分析した。凝集体形成は、ＳＥ－ＨＰＬＣ及びＡＵＣによって分析した場合に同等であった（データを示さず）。

【0529】

実施例９：ＡＣＥ２（１８－７３２）－ＩｇＧ４、正常シアリル化、（ｖ１２６１、配列番号６）の安定性研究
製剤４ａ（１０ｍＭ酢酸、３０ｍＭ Ｌ－アルギニン塩酸塩、２５０ｍＭトレハロース二水和物、５ｍＭ Ｌ－メチオニン、５０ｍＭ塩化ナトリウム、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、ｐＨ５．８）中の標的濃度４０ｍｇ／ｍＬのＡＣＥ２－ＩｇＧ４融合コンストラクトを含む製剤を生成し、１ｍＬの溶液を２Ｒバイアルに充填した。

【0530】

溶液を、異なる温度及びストレス条件で貯蔵するか、又は安定性研究内で３回の凍結解凍サイクルを行った後、互いに異なる分析技術を用いてＡＣＥ２－ＩｇＧの物理化学的品質パラメータ並びにその効力及び活性を評価した。安定性を以下の条件で評価した：
●Ｆ／Ｔ：－７６℃±９℃及び室温で３サイクル
●－７６℃±９℃で最大６ヶ月
●５℃±３℃及び２５℃±２℃／６０％ＲＨ±５％ＲＨで最大６ヶ月、並びに４０℃±２℃／７５％ＲＨ±５％ＲＨで最大３ヶ月。

【0531】

以下の分析パネルを使用してタンパク質安定性を分析した：
ＯＤ２８０（ＡＣＥ２－Ｆｃ融合コンストラクトの濃度の定量化）、ＳＥ－ＨＰＬＣ（凝集）、非還元ＣＥ－ＳＤＳ（ＬＭＷＳ、ＨＭＷＳ）、ｃＩＥＦ（塩基性種及び酸性種）、結合ＥＬＩＳＡ（標的への結合に関する効力の定量化）、ＡＣＥ２－ＩｇＧの酵素活性、可視粒子、肉眼で見えない粒子、ｐＨ、色、透明度、重量オスモル濃度。

【0532】

以下の結果が観察され、表２９に要約されている。

【0533】

【表29】

【0534】

【0535】

【0536】

以下の傾向が、ＡＣＥ２（１８－７３２）－ＩｇＧ４正常シアリル化について観察された。
試料濃度は、５℃、－８０℃で６ヶ月間、並びにＦ／Ｔ条件について、方法の変動性の範囲内で一定のままであった。わずかな蒸発しか伴わない１ｍＬの低い充填体積により、高温（２５℃及び４０℃）では、経時的な濃度のわずかな増加を観察することができる。

【0537】

凝集体をＳＥ－ＨＰＬＣで分析し、総ＨＭＷＳ面積％は、５℃及び－８０℃で６ヶ月間、並びにＦ／Ｔ条件で、方法の変動性の範囲内で一定のままであった。高温（２５℃及び４０℃）では、総ＨＭＷＳ面積％並びに総ＬＭＷＳ面積％の増加が経時的に観察され、これは、この方法が安定性を示すものであることを特定する。

【0538】

断片化を非還元ＣＥ－ＳＤＳで更に分析し、総ＬＭＷＳ面積％は、５℃及び－８０℃で６ヶ月間、並びにＦ／Ｔ条件で一定のままであった。高温（２５℃及び４０℃）では、総ＬＭＷＳ面積％の増加が経時的に観察され、これは、この方法が安定性を示すものであることを特定する。

【0539】

荷電種に関して、酸性種のパーセントは、５℃での貯蔵時に経時的にわずかに増加した。この傾向は高温（２５℃及び４０℃）でも観察され、これは、この方法が安定性を示すものであることを特定する。

【0540】

分析された全ての試料は、平均付近で同等の酵素活性の散布を示す。結合ＥＬＩＳＡの場合、効力は、５℃で３ヶ月間及び－８０℃で６ヶ月間、並びにＦ／Ｔ条件で、アッセイ変動性内で一定のままであった。高温（２５℃及び４０℃）では、効力の低下が経時的に観察され、これは、この方法が安定性を示すものであることを特定する。

【0541】

ｐＨ値は、５℃及び－８０℃で６ヶ月間、並びにＦ／Ｔ条件で、方法の変動性の範囲内で一定のままであった。高温（２５℃及び４０℃）では、ｐＨのわずかな増加が経時的に観察された。

【0542】

肉眼で見えない粒子は低レベルであり、予想通り高温（２５℃及び４０℃）で経時的に増加した。
安定性研究のバイアルは、試験した条件では目に見える粒子を本質的に含んでいなかった。

【0543】

ポリソルベート濃度並びに重量オスモル濃度は一定のままであり、平均付近に散在していた。
透明度及び色は許容限度内で一定のままであった。

【0544】

本発明のいくつかの実施形態は以下に関する：
１．液体医薬組成物であって、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は当該断片の変異体を含む第１の部分であって、当該ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ヒトＩｇＧのＦｃ部分を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、及び
（ｂ）ｐＨ５．４～６．３の緩衝液、
を含む、液体医薬組成物。

【0545】

２．当該緩衝液が、酢酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、及びコハク酸緩衝液からなる群から選択される、項目１に記載の液体医薬組成物。
３．当該緩衝液が、５ｍＭ～６０ｍＭの濃度で存在する、項目１又は２に記載の液体医薬組成物。

【0546】

４．液体医薬組成物であって、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は当該断片の変異体を含む第１の部分であって、当該ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ヒトＩｇＧのＦｃ部分又はヒトＩｇＧのＦｃ部分の変異体を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、及び
（ｂ）ｐＨ５．４～６．０の酢酸緩衝液、
を含む、液体医薬組成物。

【0547】

５．当該酢酸緩衝液が、５ｍＭ～６０ｍＭの濃度で存在する、項目４に記載の液体医薬組成物。
６．糖又は糖アルコールを更に含む、先行する項目のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【0548】

７．当該糖が、トレハロース及びスクロースから選択される、項目６に記載の液体医薬組成物。
８．当該糖が、１００ｍＭ～３００ｍＭの濃度で存在する、項目６又は７に記載の液体医薬組成物。

【0549】

９．非イオン性界面活性剤を更に含む、先行する項目のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０．当該非イオン性界面活性剤が、ポリソルベート２０及びポリソルベート８０から選択される、項目９に記載の液体医薬組成物。

【0550】

１１．当該非イオン性界面活性剤が、０．０１％（ｗ／ｖ）～０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、項目９又は１０に記載の液体医薬組成物。
１２．無機塩を更に含む、先行する項目のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0551】

１３．当該無機塩が、塩化ナトリウムである、項目１２に記載の液体医薬組成物。
１４．当該無機塩が、３０ｍＭ～１５０ｍＭの濃度で存在する、項目１２又は１３に記載の液体医薬組成物。

【0552】

１５．１つ以上のアミノ酸を更に含む、先行する項目のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１６．当該１つ以上のアミノ酸が、Ｌ－アルギニン及び／又はＬ－メチオニンである、項目１５に記載の液体医薬組成物。

【0553】

１７．当該１つ以上のアミノ酸が、１ｍＭ～５０ｍＭの濃度で存在する、項目１５又は１６に記載の液体医薬組成物。
１８．当該ヒトＡＣＥ２の断片が、配列番号２によるアミノ酸配列からなる、先行する項目のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0554】

１９．当該ヒトＡＣＥ２の断片が、配列番号３によるアミノ酸配列からなるＡＣＥ２の細胞外ドメインである、項目１～１７のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。
２０．当該ＩｇＧが、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４である、先行する項目のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0555】

２１．当該融合タンパク質が、配列番号５によるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ部分を含む、先行する項目のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２２．当該融合タンパク質が、配列番号２０及び２１のいずれか１つによるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体を含む、項目４～２０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0556】

２３．当該ＩｇＧがＩｇＧ４又はＩｇＧ４の変異体であり、当該第１の部分と当該第２の部分とが配列番号１８によるアミノ酸配列によって連結されている、先行する項目のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0557】

２４．当該融合タンパク質が、配列番号４によるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ部分を含む、項目１～２０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２５．当該融合タンパク質が、配列番号２２及び２３のいずれか１つによるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体を含む、項目４～２０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0558】

２６．当該ＩｇＧがＩｇＧ１又はＩｇＧ１の変異体であり、当該第１の部分と当該第２の部分とが配列番号１９によるアミノ酸配列によって連結されている、項目１～２０、２４、又は２５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0559】

２７．当該ヒトＡＣＥ２断片の変異体が、ヒトＡＣＥ２の酵素的に不活性な変異体である、先行する項目のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
２８．当該ヒトＡＣＥ２の酵素的に不活性な変異体が、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を含み、ナンバリングが配列番号１を参照する、項目２７に記載の液体医薬組成物。

【0560】

２９．当該融合タンパク質が、配列番号６～１３、４４～４７、５８～６１、７２～７５、８６～８９のいずれか１つによるアミノ酸配列を有する、項目１～１７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0561】

３０．当該融合タンパク質が、配列番号２６～４１、４８～５５、６２～６９、７６～８３、及び９０～９７のいずれか１つによるアミノ酸配列を有する、項目４～１７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0562】

３１．当該融合タンパク質の当該ＡＣＥ２部分がＮ－グリコシル化されており、当該ＡＣＥ２部分上の当該Ｎ－グリカンの７０％～９５％が、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する、先行する項目のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0563】

３２．当該ＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度が１～６０ｍｇ／ｍＬである、先行する項目のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３３．液体医薬組成物であって、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は当該断片の変異体を含む第１の部分であって、当該ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ヒトＩｇＧのＦｃ部分又はヒトＩｇＧのＦｃ部分の変異体を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、並びに
（ｂ）ｐＨ５．６～６．０のヒスチジン又は酢酸緩衝液、
（ｃ）ポリソルベート２０及びポリソルベート８０から選択される非イオン性界面活性剤、
（ｄ）スクロース及びトレハロースから選択される糖、並びに
（ｅ）任意に、無機塩及び／又は１つ以上のアミノ酸、
を含む、液体医薬組成物。

【0564】

３４．当該ヒスチジン又は酢酸緩衝液が、５ｍＭ～６０ｍＭの濃度で存在する、項目３３に記載の液体医薬組成物。
３５．当該糖が、１００ｍＭ～３００ｍＭの濃度で存在する、項目３３又は３４に記載の液体医薬組成物。

【0565】

３６．当該非イオン性界面活性剤が、０．０１％（ｗ／ｖ）～０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、項目３３～３５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
３７．無機塩を更に含む、項目３３～３６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0566】

３８．当該無機塩が、塩化ナトリウムである、項目３７に記載の液体医薬組成物。
３９．当該無機塩が、３０ｍＭ～１５０ｍＭの濃度で存在する、項目３７又は３８に記載の液体医薬組成物。

【0567】

４０．１つ以上のアミノ酸を更に含む、項目３３～３９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４１．当該１つ以上のアミノ酸が、Ｌ－アルギニン及び／又はＬ－メチオニンである、項目４０に記載の液体医薬組成物。

【0568】

４２．当該１つ以上のアミノ酸が、１ｍＭ～５０ｍＭの濃度で存在する、項目４０又は４１に記載の液体医薬組成物。
４３．当該ヒトＡＣＥ２の断片が、配列番号２によるアミノ酸配列からなる、項目３３～４２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0569】

４４．当該ヒトＡＣＥ２の断片が、配列番号３によるアミノ酸配列からなるＡＣＥ２の細胞外ドメインである、項目３３～４２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
４５．当該ＩｇＧが、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４である、項目３３～４４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0570】

４６．当該融合タンパク質が、配列番号５によるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ部分、又は配列番号２０及び２１のいずれか１つによるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体を含む、項目３３～４５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0571】

４７．当該ＩｇＧがＩｇＧ４又はＩｇＧ４の変異体であり、当該第１の部分と当該第２の部分とが配列番号１８によるアミノ酸配列によって連結されている、項目３３～４６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0572】

４８．当該融合タンパク質が、配列番号４によるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ部分、又は配列番号２２及び２３のいずれか１つによるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体を含む、項目３３～４５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0573】

４９．当該ＩｇＧがＩｇＧ１又はＩｇＧ１の変異体であり、当該第１の部分と当該第２の部分とが配列番号１９によるアミノ酸配列によって連結されている、項目３３～４５及び４８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0574】

５０．当該ヒトＡＣＥ２断片の当該変異体が、ヒトＡＣＥ２の酵素的に不活性な変異体である、項目３３～４９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５１．当該ヒトＡＣＥ２の酵素的に不活性な変異体が、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を含み、ナンバリングが配列番号１を参照する、項目５０に記載の液体医薬組成物。

【0575】

５２．当該融合タンパク質が、配列番号６～１３、２６～４１、４４～５５、５８～６９、７２～８３、及び８６～９７のいずれか１つによるアミノ酸配列を有する、項目３３～４２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0576】

５３．当該融合タンパク質の当該ＡＣＥ２部分がＮ－グリコシル化されており、当該ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％が、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する、項目３３～５２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0577】

５４．当該ＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度が１～６０ｍｇ／ｍＬである、項目３３～５３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５５．液体医薬組成物であって、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は当該断片の変異体を含む第１の部分であって、当該ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ヒトＩｇＧのＦｃ部分又はヒトＩｇＧのＦｃ部分の変異体を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、並びに
（ｂ）ｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液、
（ｃ）ポリソルベート２０、
（ｄ）トレハロース又はスクロース、並びに
（ｅ）任意に、アルギニン、メチオニン、及び塩化ナトリウムからなる群から選択される１つ以上の安定剤、
を含む、液体医薬組成物。

【0578】

５６．当該ヒスチジン緩衝液が、５ｍＭ～６０ｍＭの濃度で存在する、項目５５に記載の液体医薬組成物。
５７．製剤が、１００ｍＭ～３００ｍＭの濃度で存在するトレハロースを含む、項目５５又は５６に記載の液体医薬組成物。

【0579】

５８．当該非イオン性界面活性剤が、０．０１％（ｗ／ｖ）～０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、項目５５～５７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
５９．塩化ナトリウムを更に含む、項目５５～５８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0580】

６０．当該塩化ナトリウムが、３０ｍＭ～１５０ｍＭの濃度で存在する、項目５９に記載の液体医薬組成物。
６１．当該アルギニンが、１０ｍＭ～５０ｍＭの濃度で存在する、項目５５～６０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0581】

６２．当該メチオニンが、１ｍＭ～２０ｍＭの濃度で存在する、項目５５～６１のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６３．当該ヒトＡＣＥ２の断片が、配列番号２によるアミノ酸配列からなる、項目５５～６２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0582】

６４．当該ヒトＡＣＥ２の断片が、配列番号３によるアミノ酸配列からなるＡＣＥ２の細胞外ドメインである、項目５５～６２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
６５．当該ＩｇＧが、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４である、項目５５～６４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0583】

６６．当該融合タンパク質が、配列番号５によるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ部分、又は配列番号２０及び２１のいずれか１つによるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体を含む、項目５５～６５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0584】

６７．当該ＩｇＧがＩｇＧ４であり、当該第１の部分と当該第２の部分とが配列番号１８によるアミノ酸配列によって連結されている、項目５５～６６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0585】

６８．当該融合タンパク質が、配列番号４によるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ部分、又は配列番号２２及び２３のいずれか１つによるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体を含む、項目５５～６５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0586】

６９．当該ＩｇＧがＩｇＧ１であり、当該第１の部分と当該第２の部分とが配列番号１９によるアミノ酸配列によって連結されている、項目５５～６５及び６８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0587】

７０．当該ヒトＡＣＥ２断片の当該変異体が、ヒトＡＣＥ２の酵素的に不活性な変異体である、項目５５～６９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
７１．当該ヒトＡＣＥ２の当該酵素的に不活性な変異体が、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を含み、ナンバリングが配列番号１を参照する、項目７０に記載の液体医薬組成物。

【0588】

７２．当該融合タンパク質が、配列番号６～１３、２６～４１、４４～５５、５８～６９、７２～８３、及び８６～９７のいずれか１つによるアミノ酸配列を有する、項目５５～６２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0589】

７３．当該融合タンパク質の当該ＡＣＥ２部分がＮ－グリコシル化されており、当該ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％が、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する、項目５５～７２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0590】

７４．当該ＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度が１～６０ｍｇ／ｍＬである、項目５５～７３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
７５．配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液、ポリソルベート２０、トレハロース、Ｌ－アルギニン、及び注射用水を含む、液体医薬組成物。

【0591】

７６．１～６０ｍｇ／ｍＬの配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝液、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、２２０ｍＭトレハロース、３０ｍＭ Ｌ－アルギニン、及び注射用水を含む、項目７５に記載の液体医薬組成物。

【0592】

７７．配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ６．０のするヒスチジン緩衝液、ポリソルベート２０、トレハロース、Ｌ－アルギニン、及び注射用水からなる、液体医薬組成物。

【0593】

７８．１～６０ｍｇ／ｍＬの配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝液、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、２２０ｍＭトレハロース、３０ｍＭ Ｌ－アルギニン、及び注射用水からなる、項目７７に記載の液体医薬組成物。

【0594】

７９．配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液、ポリソルベート２０、トレハロース、Ｌ－メチオニン、及び注射用水を含む、液体医薬組成物。

【0595】

８０．１～６０ｍｇ／ｍＬの配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝液、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、２５０ｍＭトレハロース、５ｍＭ Ｌ－メチオニン、及び注射用水を含む、項目７９に記載の液体医薬組成物。

【0596】

８１．配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液、ポリソルベート２０、トレハロース、Ｌ－メチオニン、及び注射用水からなる、液体医薬組成物。

【0597】

８２．１～６０ｍｇ／ｍＬの配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝液、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、２５０ｍＭトレハロース、５ｍＭ Ｌ－メチオニン、及び注射用水からなる、項目８１に記載の液体医薬組成物。

【0598】

８３．配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液、ポリソルベート２０、スクロース、塩化ナトリウム、及び注射用水を含む、液体医薬組成物。

【0599】

８４．１～６０ｍｇ／ｍＬの配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝液、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、１４５ｍＭスクロース、４０ｍＭ塩化ナトリウム、及び注射用水を含む、項目８３に記載の液体医薬組成物。

【0600】

８５．配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ６．０のヒスチジン緩衝液、ポリソルベート２０、スクロース、塩化ナトリウム、及び注射用水からなる、液体医薬組成物。

【0601】

８６．１～６０ｍｇ／ｍＬの配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ６．０の１０ｍＭヒスチジン緩衝液、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、１４５ｍＭスクロース、４０ｍＭ塩化ナトリウム、及び注射用水からなる、項目８５に記載の液体医薬組成物。

【0602】

８７．液体医薬組成物であって、
（ａ）ヒトＡＣＥ２の断片又は当該断片の変異体を含む第１の部分であって、当該ヒトＡＣＥ２が配列番号１によるアミノ酸配列を有する、第１の部分と、ヒトＩｇＧのＦｃタンパク質又はヒトＩｇＧのＦｃ部分の変異体を含む第２の部分とを含む、融合タンパク質、並びに
（ｂ）ｐＨ５．６～５．８の酢酸緩衝液、
（ｃ）ポリソルベート２０又はポリソルベート８０、
（ｄ）トレハロース又はスクロース、並びに
（ｅ）任意に、Ｌ－アルギニン、Ｌ－メチオニン、及び塩化ナトリウムからなる群から選択される１つ以上の安定剤、
を含む、液体医薬組成物。

【0603】

８８．当該酢酸緩衝液が、５ｍＭ～６０ｍＭの濃度で存在する、項目８７に記載の液体医薬組成物。
８９．製剤が、１００ｍＭ～２５０ｍＭの濃度で存在するトレハロースを含む、項目８７又は８８に記載の液体医薬組成物。

【0604】

９０．製剤が、１５０ｍＭ～３００ｍＭの濃度で存在するスクロースを含む、項目８７又は８８に記載の液体医薬組成物。
９１．製剤が、０．０１％（ｗ／ｖ）～０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在するポリソルベート２０を含む、項目８７～９０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0605】

９２．製剤が、０．０１％（ｗ／ｖ）～０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在するポリソルベート８０を含む、項目８７～９０のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９３．塩化ナトリウムを更に含む、項目８７～９２のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【0606】

９４．当該塩化ナトリウムが、３０ｍＭ～１５０ｍＭの濃度で存在する、項目９３に記載の液体医薬組成物。
９５．当該Ｌ－アルギニンが、１０ｍＭ～５０ｍＭの濃度で存在する、項目８７～９４のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0607】

９６．当該Ｌ－メチオニンが、１ｍＭ～２０ｍＭの濃度で存在する、項目８７～９５のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９７．当該ヒトＡＣＥ２の断片が、配列番号２によるアミノ酸配列からなる、項目８７～９６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0608】

９８．当該ヒトＡＣＥ２の断片が、配列番号３によるアミノ酸配列からなるＡＣＥ２の細胞外ドメインである、項目８７～９６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
９９．当該ＩｇＧが、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４である、項目８７～９８のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0609】

１００．当該融合タンパク質が、配列番号５によるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ部分、又は配列番号２０及び２１のいずれか１つによるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ部分の変異体を含む、項目８７～９９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0610】

１０１．当該ＩｇＧがＩｇＧ４であり、当該第１の部分と当該第２の部分とが配列番号１８によるアミノ酸配列によって連結されている、項目８７～１００のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0611】

１０２．当該融合タンパク質が、配列番号４によるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ部分、又は配列番号２２及び２３のいずれか１つによるアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ部分の変異体を含む、項目８７～９９のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0612】

１０３．当該ＩｇＧがＩｇＧ１であり、当該第１の部分と当該第２の部分とが配列番号１９によるアミノ酸配列によって連結されている、項目８７～９９及び１０２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0613】

１０４．当該ヒトＡＣＥ２断片の当該変異体が、ヒトＡＣＥ２の酵素的に不活性な変異体である、項目８７～１０３のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０５．当該ヒトＡＣＥ２の酵素的に不活性な変異体が、Ｈ３７４Ｎ及びＨ３７８Ｎ変異を含み、ナンバリングが配列番号１を参照する、項目１０４に記載の液体医薬組成物。

【0614】

１０６．当該融合タンパク質が、配列番号６～１３、２６～４１、４４～５５、５８～６９、７２～８３、及び８６～９７のいずれか１つによるアミノ酸配列を有する、項目８７～９６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0615】

１０７．当該融合タンパク質の当該ＡＣＥ２部分がＮ－グリコシル化されており、当該ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％が、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する、項目８７～１０６のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0616】

１０８．当該ＡＣＥ２ Ｆｃ融合タンパク質の濃度が１～６０ｍｇ／ｍＬである、項目８７～１０７のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１０９．配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ５．８の酢酸緩衝液、ポリソルベート２０、トレハロース、塩化ナトリウム、Ｌ－アルギニン、Ｌ－メチオニン、及び注射用水を含む、液体医薬組成物。

【0617】

１１０．１～６０ｍｇ／ｍＬの配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ５．８の１０ｍＭ酢酸緩衝液、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、２５０ｍＭトレハロース、５０ｍＭ塩化ナトリウム、３０ｍＭ Ｌ－アルギニン、５ｍＭ Ｌ－メチオニン、及び注射用水を含む、項目１０９に記載の液体医薬組成物。

【0618】

１１１．配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ５．８の酢酸緩衝液、ポリソルベート２０、トレハロース、塩化ナトリウム、Ｌ－アルギニン、Ｌ－メチオニン、及び注射用水からなる、液体医薬組成物。

【0619】

１１２．１～６０ｍｇ／ｍＬの配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ５．８の１０ｍＭ酢酸緩衝液、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、２５０ｍＭトレハロース、５０ｍＭ塩化ナトリウム、３０ｍＭ Ｌ－アルギニン、５ｍＭ Ｌ－メチオニン、及び注射用水からなる、項目１１１に記載の液体医薬組成物。

【0620】

１１３．配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ５．８の酢酸緩衝液、ポリソルベート２０、スクロース、及び注射用水を含む、液体医薬組成物。
１１４．１～６０ｍｇ／ｍＬの配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ５．８の１０ｍＭ酢酸緩衝液、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、２６３ｍＭスクロース、及び注射用水を含む、項目１１３に記載の液体医薬組成物。

【0621】

１１５．配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ５．８の酢酸緩衝液、ポリソルベート２０、スクロース、及び注射用水からなる、液体医薬組成物。
１１６．１～６０ｍｇ／ｍＬの配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ５．８の１０ｍＭ酢酸緩衝液、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、２６３ｍＭスクロース、及び注射用水からなる、項目１１５に記載の液体医薬組成物。

【0622】

１１７．配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ５．６の酢酸緩衝液、ポリソルベート２０、トレハロース、及び注射用水を含む、液体医薬組成物。
１１８．１～６０ｍｇ／ｍＬの配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ５．６の２０ｍＭ酢酸緩衝液、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、１０６ｍＭトレハロース、及び注射用水を含む、項目１１７に記載の液体医薬組成物。

【0623】

１１９．配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ５．６の酢酸緩衝液、ポリソルベート２０、トレハロース、及び注射用水からなる、液体医薬組成物。
１２０．１～６０ｍｇ／ｍＬの配列番号６又は１０による融合タンパク質、ｐＨ５．６の２０ｍＭ酢酸緩衝液、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、１０６ｍＭトレハロース、及び注射用水からなる、項目１１９に記載の液体医薬組成物。

【0624】

１２１．配列番号７又は２７による融合タンパク質、ｐＨ５．８の酢酸緩衝液、ポリソルベート２０、トレハロース、塩化ナトリウム、Ｌ－アルギニン、Ｌ－メチオニン、及び注射用水を含む、液体医薬組成物。

【0625】

１２２．１～６０ｍｇ／ｍＬの配列番号７又は２７による融合タンパク質、ｐＨ５．８の１０ｍＭ酢酸緩衝液、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、２５０ｍＭトレハロース、５０ｍＭ塩化ナトリウム、３０ｍＭ Ｌ－アルギニン、５ｍＭ Ｌ－メチオニン、及び注射用水を含む、項目１２１に記載の液体医薬組成物。

【0626】

１２３．配列番号７又は２７による融合タンパク質、ｐＨ５．８の酢酸緩衝液、ポリソルベート２０、トレハロース、塩化ナトリウム、Ｌ－アルギニン、Ｌ－メチオニン、及び注射用水からなる、液体医薬組成物。

【0627】

１２４．１～６０ｍｇ／ｍＬの配列番号７又は２７による融合タンパク質、ｐＨ５．８の１０ｍＭ酢酸緩衝液、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、２５０ｍＭトレハロース、５０ｍＭ塩化ナトリウム、３０ｍＭ Ｌ－アルギニン、５ｍＭ Ｌ－メチオニン、及び注射用水からなる、項目１２３に記載の液体医薬組成物。

【0628】

１２５．配列番号７又は２７による融合タンパク質、ｐＨ５．８の酢酸緩衝液、ポリソルベート２０、スクロース、及び注射用水を含む、液体医薬組成物。
１２６．１～６０ｍｇ／ｍＬの配列番号７又は２７による融合タンパク質、ｐＨ５．８の１０ｍＭ酢酸緩衝液、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、２６３ｍＭスクロース、及び注射用水を含む、項目１２５に記載の液体医薬組成物。

【0629】

１２７．配列番号７又は２７による融合タンパク質、ｐＨ５．８の酢酸緩衝液、ポリソルベート２０、スクロース、及び注射用水からなる、液体医薬組成物。
１２８．１～６０ｍｇ／ｍＬの配列番号７又は２７による融合タンパク質、ｐＨ５．８の１０ｍＭ酢酸緩衝液、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、２６３ｍＭスクロース、及び注射用水からなる、項目１２７に記載の液体医薬組成物。

【0630】

１２９．配列番号７又は２７による融合タンパク質、ｐＨ５．６の酢酸緩衝液、ポリソルベート２０、トレハロース、及び注射用水を含む、液体医薬組成物。
１３０．１～６０ｍｇ／ｍＬの配列番号７又は２７による融合タンパク質、ｐＨ５．６の２０ｍＭ酢酸緩衝液、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、１０６ｍＭトレハロース、及び注射用水を含む、項目１２９に記載の液体医薬組成物。

【0631】

１３１．配列番号７又は２７による融合タンパク質、ｐＨ５．６の酢酸緩衝液、ポリソルベート２０、トレハロース、及び注射用水からなる、液体医薬組成物。
１３２．１～６０ｍｇ／ｍＬの配列番号７又は２７による融合タンパク質、ｐＨ５．６の２０ｍＭ酢酸緩衝液、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート２０、１０６ｍＭトレハロース、及び注射用水からなる、項目１３１に記載の液体医薬組成物。

【0632】

１３３．当該融合タンパク質の当該ＡＣＥ２部分がＮ－グリコシル化されており、当該ＡＣＥ２部分上のＮ－グリカンの７０％～９５％が、それに結合した少なくとも１つのシアル酸分子を有する、項目１２０～１３２のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。

【0633】

１３４．ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスによる感染症の予防及び／又は治療における使用のための、先行する項目のいずれか１つに記載の液体医薬組成物。
１３５．当該ＡＣＥ２に結合するコロナウイルスが、ＳＡＲＳ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２、及びＮＬ６３からなる群から選択され、好ましくは、それがＳＡＲＳ－ＣｏＶ２である、項目１３４に記載の使用のための液体医薬組成物。

【0634】

１３６．当該液体医薬組成物が、抗ウイルス剤と組み合わせて投与される、項目１３４又は１３５に記載の使用のための液体医薬組成物。
１３７．当該抗ウイルス剤が、レムデシビル、アルビドールＨＣｌ、リトナビル、ロピナビル、ダルナビル、リバビリン、クロロキン及びそれらの誘導体、ニタゾキサニド、メシル酸カモスタット、トシリズマブ、シルツキシマブ、サリルマブ、パクロビド、及びリン酸バリシチニブからなる群から選択される、項目１３１に記載の使用のための液体医薬組成物。

【0635】

１３８．高血圧症（高血圧を含む）、うっ血性心不全、慢性心不全、急性心不全、収縮性心不全、心筋梗塞、動脈硬化症、腎機能障害、腎不全、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、急性肺傷害（ＡＬＩ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺高血圧症、腎線維症、慢性腎不全、急性腎不全、急性腎傷害、炎症性腸疾患、及び多臓器機能不全症候群の治療における使用のための、項目１～１３３のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。

【配列表】

2024509543000001.app

【国際調査報告】