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特表2024-509847エクスビボの臓器ケア用組成物

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-05

(54)【発明の名称】エクスビボの臓器ケア用組成物

(51)【国際特許分類】

A61K 38/02 20060101AFI20240227BHJP

C07K 16/28 20060101ALI20240227BHJP

C07K 19/00 20060101ALI20240227BHJP

C07K 14/475 20060101ALI20240227BHJP

C07K 14/52 20060101ALI20240227BHJP

C07K 14/50 20060101ALI20240227BHJP

C07K 14/62 20060101ALI20240227BHJP

C07K 14/54 20060101ALI20240227BHJP

C12N 5/0735 20100101ALI20240227BHJP

C12N 5/0775 20100101ALI20240227BHJP

C12N 5/0797 20100101ALI20240227BHJP

C12N 5/0789 20100101ALI20240227BHJP

A61P 31/00 20060101ALI20240227BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20240227BHJP

A61K 38/19 20060101ALI20240227BHJP

A61K 38/18 20060101ALI20240227BHJP

A61K 47/02 20060101ALI20240227BHJP

A61K 47/18 20170101ALI20240227BHJP

A61K 47/26 20060101ALI20240227BHJP

A61K 9/08 20060101ALI20240227BHJP

A61K 38/16 20060101ALI20240227BHJP

A61L 27/36 20060101ALI20240227BHJP

A61L 27/38 20060101ALI20240227BHJP

A01N 1/02 20060101ALI20240227BHJP

C12N 15/62 20060101ALN20240227BHJP

C12N 15/13 20060101ALN20240227BHJP

C12N 15/12 20060101ALN20240227BHJP

【ＦＩ】

A61K38/02

C07K16/28 ZNA

C07K19/00

C07K14/475

C07K14/52

C07K14/50

C07K14/62

C07K14/54

C12N5/0735

C12N5/0775

C12N5/0797

C12N5/0789

A61P31/00

A61P43/00 121

A61K38/19

A61K38/18

A61P43/00 105

A61K47/02

A61K47/18

A61K47/26

A61K9/08

A61K38/16

A61L27/36 400

A61L27/38 300

A01N1/02

C12N15/62 Z

C12N15/13

C12N15/12

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023553525

(86)(22)【出願日】2022-03-03

(85)【翻訳文提出日】2023-10-05

(86)【国際出願番号】 EP2022055399

(87)【国際公開番号】W WO2022184825

(87)【国際公開日】2022-09-09

(31)【優先権主張番号】21160370.9

(32)【優先日】2021-03-03

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523334442

【氏名又は名称】シンクリノエー／エス

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋香元

(72)【発明者】

【氏名】ロゼンキルド，メッテマリー

(72)【発明者】

【氏名】ジェプセン，マッズグラヴァーズ

(72)【発明者】

【氏名】クレダル，トーマスエヌ．

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C081

4C084

4H011

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AC14

4B065CA44

4C076AA12

4C076BB40

4C076CC26

4C076CC31

4C076DD25Z

4C076DD26Z

4C076DD31Z

4C076DD51

4C076DD57Z

4C076DD66

4C076DD67

4C076FF61

4C081AB11

4C081AB31

4C081BA12

4C081BA14

4C081CD34

4C084AA01

4C084AA02

4C084AA03

4C084BA02

4C084BA08

4C084BA22

4C084BA23

4C084BA41

4C084DA01

4C084MA02

4C084MA17

4C084MA70

4C084NA14

4C084ZB211

4C084ZB212

4C084ZB311

4C084ZB312

4C084ZC751

4H011BB06

4H011BB08

4H011BB18

4H011BB19

4H011CA01

4H011CB05

4H011CB08

4H011CD02

4H011DH11

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA09

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA50

4H045FA74

(57)【要約】

水性媒体中に融合タンパク質を含む組成物が提供される。融合タンパク質は、細胞上に発現された受容体に結合し、その細胞を殺傷することができる。水性媒体は、移植前のエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物の処理を可能にする１つ以上の成分を含む。したがって、組成物は、エクスビボの臓器、組織、および／または幹細胞培養物中の病原体によって引き起こされる感染の予防または治療に有用である。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

移植前のエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染を予防または治療するための組成物であって、前記組成物は、水性媒体中に：
以下を含む融合タンパク質を含み：
ｉｉｉ．病原体によってコードされる受容体など、細胞上に発現する少なくとも１つの受容体に結合する第１のペプチド；
ｉｖ．アミノ酸配列ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇを有する切断部位を含む第２のペプチド、
Ｘ２はＡｒｇまたはＬｙｓであり、第２のペプチドは毒素を含み、
前記水性媒体は以下の１つ以上をさらに含む前記組成物：
ｉ．緩衝成分；
ｉｉ．アミノ酸；
ｉｉｉ．炭水化物；または
ｉｖ．増殖因子またはサイトカイン。

【請求項2】

前記融合タンパク質が、以下を含むかそれらからなる、請求項１に記載の組成物：
ａ．配列番号６のアミノ酸配列；
ｂ．配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号６に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号６に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号６のバリアント；及び／または
ｃ．３８０、４００、もしくは４２０を超えるアミノ酸長など、３６０を超えるアミノ酸長である配列番号６の断片、または配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号６に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号６に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するそのバリアント。

【請求項3】

前記融合タンパク質が、病原体に感染された細胞、例えば、病原体に潜伏感染された細胞を殺傷する、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項4】

前記緩衝成分が、重炭酸緩衝液（ＨＣＯ_３ ^－／ＣＯ_２）、アンモニウム緩衝液（ＮＨ_３／ＮＨ_４ ^＋）、リン酸緩衝液（Ｈ_２ＰＯ_４ ^－／ＨＰＯ_４ ^２－）、４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、及び２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）からなる群から選択される１つ以上の緩衝成分である、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項5】

前記アミノ酸が、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸である、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項6】

前記炭水化物が、単糖、二糖、オリゴ糖、または多糖などの糖、及び糖アルコールからなる群から選択される１つまたは複数の炭水化物である、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項7】

前記増殖因子またはサイトカインが、トロンボポエチン、インスリン、線維芽細胞増殖因子１、ヒト幹細胞因子、ＩＬ－３、ＩＬ－６、Ｆｌｔ－３リガンド及び顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）からなる群から選択される１つ以上の増殖因子またはサイトカインである、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項8】

前記水性媒体が、以下からなる群から選択される１つ以上のさらなる成分をさらに含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
ｉ．ビタミン；
ｉｉ．電解質；
ｉｉｉ．ＯＡＣ１などの転写因子；
ｉｖ．フォルスコリンなどのジテルペン；
ｖ．低密度リポタンパク質；
ｖｉ．心臓刺激剤；
ｖｉｉ．免疫抑制剤；
ｖｉｉｉ．ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはヒト血清アルブミン（ＨＡＳ）などの血清アルブミン；
ｉｘ．未分画ヘパリンなどのヘパリン；
ｘ．ヒトトランスフェリン；
ｘｉ．ペンタフラクション；
ｘｉｉ．２－メルカプトエタノール；
ｘｉｉｉ．グルタチオン；
ｘｉｖ．ラクトビオン酸；
ｘｖ．グルタミン酸；
ｘｖｉ．アロプリノール；
ｘｖｉｉ．アデノシン；
ｘｖｉｉｉ．アデニン；
ｘｉｘ．ヒドロキシエチルデンプン；
ｘｘ．パーフルオロカーボン；
ｘｘｉ．ポリエチレングリコール修飾スーパーオキシドジスムターゼ（ＰＥＧ修飾ＳＯＤ）；
ｘｘｉｉ．デキサメタゾン；
ｘｘｉｉｉ．酢酸リジン；
ｘｘｉｖ．コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム；
ｘｘｖ．ＣＨＩＲ９９０２１；
ｘｘｖｉ．抗ウイルス剤；
ｘｘｖｉｉ．抗生剤；
ｘｘｖｉｉｉ．グルココルチコイド；
ｘｘｉｘ．抗凝固剤；
ｘｘｘ．プロスタグランジン。

【請求項9】

前記電解質が、カルシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、マグネシウム塩、塩化物塩、硫酸塩、及びリン酸塩からなる群から選択される１つ以上の電解質である、請求項８に記載の組成物。

【請求項10】

前記心臓刺激薬が、カテコールアミン、ペプチド、ポリペプチド、β１／β２アドレナリン受容体遮断薬、ブプリナロール、ピンドロール、アルプレノロール、強心配糖体、ジギタリス、パルストリン、フェルラ酸、及びエピネフリンからなる群から選択される１つ以上の心臓刺激薬である、請求項８に記載の組成物。

【請求項11】

前記抗ウイルス剤が、バルガンシクロビル、ガンシクロビル、シドフォビル、レフルノミド、プレビミス、マリバビル、及びブリンシドフォビルからなる群から選択される、請求項８に記載の組成物。

【請求項12】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－カテコールアミン、ペプチド、ポリペプチド、β１／β２アドレナリン受容体遮断薬、ブプリナロール、ピンドロール、アルプレノロール、強心配糖体、ジギタリス、パルストリン、フェルラ酸、及びエピネフリンからなる群から選択される１つ以上の心臓刺激薬；
－アスパラギン、グルタミン、及びシステインを含まない、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、及びリジンからなる群から選択される複数のアミノ酸；
－任意選択で、アデノシン、インスリン、免疫抑制剤、マルチビタミン組成物、及び／またはカルシウムなどの１つ以上の電解質。

【請求項13】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－マンニトール；
－塩化ナトリウム；
－塩化カリウム；
－硫酸マグネシウム七水和物；
－グリセロリン酸ナトリウム。

【請求項14】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－アデノシン；
－塩化カルシウム脱水物；
－グリシン；
－Ｌ－アラニン；
－Ｌ－アルギニン；
－Ｌ－アスパラギン酸；
－Ｌ－グルタミン酸；
－Ｌ－ヒスチジン；
－Ｌ－イソロイシン；
－Ｌ－ロイシン；
－Ｌ－メチオニン；
－Ｌ－フェニルアラニン；
－Ｌ－プロリン；
－Ｌ－セリン；
－Ｌ－トレオニン；
－Ｌ－トリプトファン；
－Ｌ－チロシン；
－Ｌ－バリン；
－酢酸リジン；
－硫酸マグネシウム七水和物；
－塩化カリウム；
－塩化ナトリウム；
－デキストロース；
－エピネフリン；
－インスリン；
－１つ以上のビタミン；
－コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム；
－重炭酸ナトリウム；
－マンニトール；
－グリセロリン酸ナトリウム。

【請求項15】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－デキストラン；
－グルコース一水和物；
－硫酸マグネシウム七水和物；
－塩化カリウム；
－塩化ナトリウム；
－二塩基性リン酸ナトリウム二水和物；
－リン酸一カリウム。

【請求項16】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－デキストラン；
－Ｎａ^＋；
－Ｋ^＋；
－Ｍｇ^２＋；
－Ｃｌ^－；
－ＳＯ４^２－；
－Ｈ_２ＰＯ_４ ^－；
－グルコース。

【請求項17】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－ナトリウム；
－カリウム；
－マグネシウム；
－カルシウム；
－ケトグルタレート／グルタミン酸；
－ヒスチジン；
－マンニトール；
－トリプトファン。

【請求項18】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－グルタチオン；
－マンニトール；
－ラクトビオン酸；
－グルタミン酸；
－水酸化ナトリウム；
－塩化カルシウム二水和物；
－塩化カリウム；
－塩化マグネシウム六水和物；
－ヒスチジン。

【請求項19】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－ペンタフラクション；
－アロプリノール；
－ラクトビオン酸；
－グルタチオン；
－リン酸二水素カリウム；
－水酸化カリウム；
－硫酸マグネシウム七水和物；
－ラフィノース五水和物；
－アデノシン。

【請求項20】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－アデニン；
－塩化カルシウム；
－ブドウ糖；
－グルタチオン；
－ＨＥＰＥＳ；
－ヒドロキシエチルデンプン；
－グルコン酸マグネシウム；
－マンニトール；
－リン酸カリウム；
－リボース；
－グルコン酸ナトリウム；
－水酸化ナトリウム。

【請求項21】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－ヒドロキシエチルデンプン、
－ラクトビオン酸；
－リン酸二水素カリウム；
－硫酸マグネシウム七水和物；
－ラフィノース五水和物；
－アデノシン；
－アロプリノール；
－グルタチオン；
－水酸化カリウム。

【請求項22】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－パーフルオロカーボン；
－グルコース；
－インスリン；
－アロプリノール；
－ＰＥＧ修飾ＳＯＤ；
－アデノシン；
－デキサメタゾン；
－ヒドロキシエチルデンプン；
－ナトリウムイオン；
－カリウムイオン；
－塩化物。

【請求項23】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－イスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）；
－ヒト幹細胞因子；
－トロンボポエチン；
－ＣＨＩＲ９９０２１
－フォルスコリン；
－ＯＡＣ１。

【請求項24】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－ＩＭＤＭ；
－ウシ血清アルブミン；
－ヒトインスリン；
－ヒトトランスフェリン（鉄飽和）；
－ β－メルカプトエタノール。

【請求項25】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－無血清培地；
－ヘパリン；
－トロンボポエチン；
－ヒト幹細胞因子；
－線維芽細胞増殖因子１。

【請求項26】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－無血清培地；
－ヒトＩＬ－３；
－ヒトＩＬ－６；
－トロンボポエチン；
－Ｆｌｔ－３リガンド；
－「５ＧＦ」ヒト幹細胞因子などのヒト幹細胞因子。

【請求項27】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－ＩＭＤＭ；
－ＢＳＡ；
－ヒトインスリン；
－ヒトトランスフェリン；
－低密度リポタンパク質；
－ β－メルカプトエタノール；
－ヒト幹細胞因子；
－Ｆｌｔ－３リガンド；
－Ｇ－ＣＳＦ
－ＩＬ－３；
－ＩＬ６。

【請求項28】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－ヒト血清アルブミン及びデキストラン４０；
－メチルプレドニゾロン；
－未分画ヘパリンなどのヘパリン；
－イミペネム及び任意選択でのシラスタチン。

【請求項29】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－ヒト血清アルブミン；
－リンガー乳酸塩溶液；
－マンニトール；
－グルコン酸カルシウム；
－メロペネム；
－重炭酸ナトリウム；
－デキサメタゾン。

【請求項30】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－ヒト血清アルブミン；
－リンガー乳酸塩溶液；
－赤血球、
－マンニトール；
－グルコン酸カルシウム；
－メロペネム；
－重炭酸ナトリウム；
－デキサメタゾン。

【請求項31】

前記水性媒体が以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物：
－ヒト血清アルブミン及びデキストラン４０；
－赤血球；
－セフロキシム；
－未分画ヘパリンなどのヘパリン；
－グルコン酸カルシウム；
－インスリン；
－プロスタサイクリン。

【請求項32】

エクスビボの臓器が、心臓、肺、肝臓、腎臓、膵臓、小腸、大腸、及び胃からなる群から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項33】

前記組成物が、移植前の前記エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物の生存能力を維持するのに適している、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項34】

前記エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染及び／または病原体関連障害の予防または治療における使用のための、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。

【請求項35】

エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染の予防または治療のためのキットであって、以下を含む前記キット：
ａ．請求項１～３３のいずれか１項に記載の組成物と；
ｂ．任意選択で、使用説明書と。

【請求項36】

生理学的またはほぼ生理学的条件下でエクスビボの臓器を機能状態に維持するように構成された灌流システムであって、前記エクスビボの臓器を生理学的またはほぼ生理学的条件下で機能状態に維持するように構成された１つ以上のチャンバを含み、少なくとも１つのチャンバが請求項１～３３のいずれか１つに記載の組成物を含む、臓器ケアシステムなどの前記灌流システム。

【請求項37】

移植前のエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染の治療または予防のための方法であって、請求項１～３３のいずれか１項で定義される組成物中の前記エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物を浸漬、灌流、保存、調整及び／または洗い流すことを含む方法。

【請求項38】

移植のためのエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染の治療または予防のための請求項１～３３のいずれか１つに記載の組成物の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、水性媒体中に融合タンパク質を含む組成物に関する。融合タンパク質は、特定の細胞上に発現する受容体に結合することができ、次いで、細内に取り込まれ、該細胞を殺傷することができる。水性媒体は、移植前のエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物の処理を可能にする１つ以上の成分を含む。したがって、組成物は、ウイルスなどの病原体によって引き起こされる感染症の予防または治療に有用であり、ＣＭＶはそのようなウイルスの一例であり、エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物において有用である。

【背景技術】

【0002】

免疫毒素は、毒素に連結した標的化部分を有するタンパク質である。免疫毒素は、毒素に連結または融合された標的化部分からなる人工タンパク質であるため、融合タンパク質の一例である。免疫毒素は、さまざまな病原体によって引き起こされる感染症の治療に使用できる。例えば、抗体に結合した毒素は、ＣＭＶ感染細胞を標的とするために以前に利用されていたが、成功は限られていた。

【0003】

ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）は、種特異的なヘルペスウイルスであり、特に免疫無防備状態の個人、新生児、及び移植を受けた患者において重要な病原体である。ＨＣＭＶは潜伏期と溶解期からなるライフサイクルを持ち、両方の期で構成的に細胞内移行する受容体であるＵＳ２８を発現する。

【0004】

例えば、移植のための肺におけるＣＭＶ抗体の存在は、約６２％であることが見出された（Ｃｈａｍｂｅｒｓｅｔａｌ．，２０２０）。その結果、移植レシピエントは、移植を拒否しないために服用しなければならない免疫抑制薬のために、ＣＭＶ感染症を発症するリスクが高くなる。

【0005】

臓器移植は確立された治療法であり、現在では末期臓器不全の命を救う最良であり、しばしば唯一の治療法として認められている。寄付と移植に関するＷＨＯグローバルオブザーバトリーの最新データによると、世界中で１３０，０００件を超える固形臓器移植が行われているが、この数は世界の必要量の１０％未満であると推定されている。

【0006】

臓器移植が十分に行われていない理由の１つは、提供された１０個の胸部臓器のうち、移植に適した臓器が２～３個しかないことである。冷蔵保存の方法は、ドナー臓器の利用を制限し、結果に悪影響を及ぼす可能性がある。一方、臓器ケアシステム（ＯＣＳ）は、臓器の生理学的状態を模倣する。ＯＣＳは、臓器が摘出されてから移植されるまでの間、温かく酸素を含んだ栄養豊富な血液または体液を臓器に送り込むことで、臓器が体外で長期間耐え、輸送中に損傷を受けにくくすることを可能にする。ドナー臓器の最適化とＯＣＳによる臓器生存率の評価により、より多くの臓器を利用できるようになり、移植患者により良い結果をもたらし、待ち時間を短縮できる可能性があるため、従来の冷蔵保存とは対照的に、移植前に臓器を保存するためにＯＣＳがますます普及している。

【0007】

ＨＣＭＶ感染はまた、同種造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）後の最も重大な合併症の１つであり、この手術後の罹患率と死亡率の主要な原因の１つのままである。このウイルスは、肺炎、肝炎、胃腸炎、網膜炎、脳炎など、幹細胞移植のレシピエントに多臓器疾患を引き起こす可能性があり、この疾患は移植手術の初期と後期の両方で発症する可能性がある。

【0008】

造血幹細胞（ＨＳＣ）は、原始血液前駆細胞の異種集団を表す。ヒトの体内では、主に成人の骨髄に存在するが、臍帯血、胎盤、胎児の肝臓など、さまざまな胎児の組織にも存在する。ＨＳＣは、その自己再生能力と、すべてのタイプの血液細胞の補充を可能にする多能性によって機能的に定義される。それらの子孫の骨髄枝は、単球／マクロファージ、顆粒球（好中球、好塩基球、好酸球）、赤血球、巨核球（血小板産生細胞）、及び樹状細胞によって表される。リンパ枝は、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、及びＮＫ細胞で構成されている。

【0009】

ＨＳＣＴの例としては、がんの治療がある。化学療法及び放射線療法など、がんの最も効果的な治療法のいくつかは、骨髄に対して毒性がある。ＨＳＣＴでは、非常に高用量の化学療法または放射線療法が行われる。これは、より標準的な用量の化学療法に耐性がある可能性があるがん細胞を殺傷することを目的としている。残念ながら、これは幹細胞を含む骨髄の正常な細胞も破壊する。治療後、再導入または移植された幹細胞の健全な供給が必要である。次いで、移植された細胞は、骨髄で血液細胞の生産プロセスを再確立する。

【0010】

現在、ＨＣＭＶ感染症の臨床治療に使用されるすべての薬剤には、かなりの副作用が伴う。さらに、薬剤耐性の出現はしばしば治療の失敗をもたらす。

【0011】

薬理学的課題と既存の免疫毒素による細胞標的選択性の悪さに加えて、治療失敗の別の原因は、多くの場合、感染細胞の不十分な殺傷をもたらす不十分な細胞内移行である。

【0012】

これらの制限は、患者に移植される前に、例えば幹細胞培養物、組織または臓器をエクスビボで治療するために使用できる、ＨＣＭＶなどの病原体誘発感染症の新しい薬物治療を開発する価値を裏付けている。

【発明の概要】

【0013】

本明細書では、水性媒体中に融合タンパク質を含む組成物が提供される。融合タンパク質は、特定の細胞上に発現する受容体に選択的に結合することができ、次いでそれが内部移行することができ、融合タンパク質は標的細胞を殺傷することができる。水性媒体は、移植前のエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物の処理を可能にする１つ以上の成分を含む。したがって、組成物は、エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における潜伏感染を含む病原体誘発感染の予防または治療に有用である。

【0014】

本発明者らは、潜伏感染細胞を含むＣＭＶ感染細胞などの感染細胞を効果的に標的にして殺傷する融合タンパク質を生成した。この融合タンパク質は、ＵＳ２８などのウイルスにコードされた受容体であり得る少なくとも１つの受容体に結合することができる第１のペプチドと、最適化された切断部位及び外毒素Ａの選択されたドメイン、例えばドメインＩＩ及びＩＩＩなどの毒素を含む第２のペプチドとを含む。標的が結合すると、受容体は好ましくは細胞内移行され、第２のペプチドは切断部位で少なくとも部分的に切断され、したがって毒素部分が放出され、次いで感染細胞が殺傷される。驚くべきことに、本発明者らは、外毒素Ａの天然フューリン切断部位における変異に対応する特定の切断部位モチーフ（ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇ、ここで、Ｘ２はＡｒｇなどの塩基性）が、例えばＵＳ２８などの病原体にコードされた受容体を発現する細胞に対する選択性を増加させることを見出した。この発見により、感染細胞、例えば、ＣＭＶ感染細胞の標的化と殺傷の改善が可能になる。したがって、本明細書に記載の最適化された切断部位は、融合タンパク質、特に免疫毒素に利用して、毒性／細胞殺傷効力、特に選択性を高めることができる。本発明者らはさらに、この融合タンパク質を、臓器、組織、及び／または幹細胞培養物を移植前にエクスビボで処理できるようにする１つ以上の成分を含む水性媒体と組み合わせた。

【0015】

一態様では、本開示は、移植前のエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染を予防または治療するための組成物を提供し、該組成物は、水性媒体中に：
以下を含む融合タンパク質を含み：
ｉ．細胞上に発現する少なくとも１つの受容体に結合する第１のペプチド；
ｉｉ．アミノ酸配列ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇを有する切断部位を含む第２のペプチド、
Ｘ２はＡｒｇまたはＬｙｓであり、第２のペプチドは毒素を含み、
該水性媒体は以下の１つ以上をさらに含む：
ｉ．緩衝成分；
ｉｉ．アミノ酸；
ｉｉｉ．炭水化物；または
ｉｖ．増殖因子またはサイトカイン。

【0016】

一態様では、本開示は、移植前のエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物におけるＣＭＶ感染及び／またはＣＭＶ関連障害の予防または治療に使用するための、本明細書に記載の組成物を提供する。

【0017】

一態様では、本発明は、移植のためのエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染の治療または予防のための、本明細書に記載の組成物の使用を提供する。

【0018】

本開示のいくつかの態様では、移植前のエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染の治療または予防のための方法が提供され、該方法は、本明細書に記載の組成物中の該エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物を、浸漬、灌流、保存、調整、及び／または洗い流すことを含む。

【0019】

いくつか態様ではまた、移植のためのエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染の治療または予防のための、本明細書に記載の組成物の使用を提供する。

【0020】

本開示のいくつかの態様では、エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染を予防または治療するためのキットが提供され、該キットは、
ａ．本明細書に記載の組成物と；
ｂ．任意選択で、使用説明書と、を含む。

【0021】

本開示のいくつかの態様では、生理学的またはほぼ生理学的条件下でエクスビボの臓器を機能状態に維持するように構成された灌流システムが提供され、該灌流システムは、該エクスビボの臓器を機能状態に維持するように構成された１つ以上のチャンバを備え、少なくとも１つのチャンバは、本明細書に記載の組成物を含む。

【図面の簡単な説明】

【0022】

【図1】ヒトＣＸ３ＣＬ１、緑膿菌外毒素Ａ、及び融合タンパク質ＳＹＮ００２である例示的な第１ペプチドのドメイン構造。Ａ．ヒトＣＸ_３ＣＬ１のドメイン構造の概略図（Ｓ＝シグナル配列、ＣＸ_３ＣＬ１＝ケモカインドメイン、ストーク＝ムチン様ストーク、Ｍ＝膜貫通部分、Ｃ＝細胞質ドメイン、緑膿菌外毒素Ａ（Ｓ＝シグナル配列、ドメインＩ＝受容体結合ドメイン、ドメインＩＩ＝転座ドメイン、Ｉｂ＝未知の機能を持つドメインＩｂ、及びドメインＩＩＩ＝ＡＤＰリボシル化ドメイン）、前駆体タンパク質のアミノ酸ナンバリングは、それぞれのタンパク質の上に示されている。ジスルフィド架橋は、関与するアミノ酸のナンバリングとともに角括弧でそれぞれのタンパク質の下に示されている。Ｂ．ＳＹＮ００２の模式図。特定のドメインの変異は、関与するアミノ酸の１文字コードとその番号で記述される。例えば、Ｐ３０３Ｒは、３０３位のプロリンがアルギニンに置換されたことを意味する。構築物のＮ末端とＣ末端、及びドメイン間でも、１文字コードが使用される。２つのドメイン間の破線は、アミノ酸が接続されていることを示する。フューリンは、外毒素ＡのドメインＩＩのアミノ酸３０４と３０５の間を切断する。外毒素Ａの５つのＣ末端残基は、ＳＹＮ００２で最適化された小胞体保持シグナルＫＤＥＬに置き換えられている。

【図2】Ｆ４９Ａ変異による選択性。ＳＹＮｘのケモカイン部分で単一のアミノ酸を置換すると、ＣＸＣＲ１受容体（Ｂ）と比較してＵＳ２８受容体（Ａ）への選択性が生じる。ＳＹＮ０００は野生型ヒトケモカイン（Ｃ－Ｘ３－Ｃモチーフ）リガンド１（ＣＸ３ＣＬ１）（天然ケモカイン配列）であるが、ＳＹＮ００１はタンパク質の受容体結合部分に単一の変異（Ｆ４９Ａ）がある。

【図3】フューリン切断部位（この場合、外毒素Ａの完全な長さの転座ドメイン）を導入すると、効力が増加する。フューリン切断部位を含む外毒素Ａの完全長転座ドメインをＳＹＮ００１構築物に付加してＳＹＮ０１６を生成すると、内在性ＣＸ３ＣＲ１とウイルスにコードされるＵＳ２８受容体の両方を発現する細胞で効力が増加する。

【図4】フューリンによるインビトロ切断。最適化された切断部位（ＲＱＲＲ）を有するＳＹＮ００２構築物のフューリンによるインビトロ切断では、天然のフューリン切断部位配列（ＲＱＰＲ）を有する融合タンパク質構築物ＳＹＮ０１６と比較して、改善は得られない。ＳＹＮｘのインビトロフューリン消化。レーン１；マーク１２タンパク質標準、レーン２；ＳＹＮ０００、レーン３；ＳＹＮ０１７、レーン４；ＳＹＮ０１４、レーン５；ＳＹＮ００１、レーン６；ＳＹＮ０１６、レーン７；ＳＹＮ００２。ＳＹＮ０００、ＳＹＮ０１７、ＳＹＮ０１４は天然のＣＸ３ＣＬ１ケモカイン配列を有し、ＳＹＮ００１、ＳＹＮ０１６、ＳＹＮ００２はケモカイン部分にＦ７３Ａ変異を有している。ＳＹＮ０００、ＳＹＮ０１７、ＳＹＮ００１、及びＳＹＮ０１６には天然のフューリン切断部位（ＲＱＰＲ）があり、ＳＹＮ０１４及びＳＹＮ００２には最適化された切断部位（ＲＱＲＲ）がある。

【図5】ＳＹＮ００２は広いｐＨ範囲でフューリンによって切断される。ＳＹＮ００２は広いｐＨ範囲でインビトロで切断された。レーン１；マーク１２タンパク質標準、レーン２；フューリンなし、レーン３；＋８ｍＭのＨＣｌ（約ｐＨ５．２）、レーン４；＋６ｍＭのＨＣｌ（約ｐＨ６．３）、レーン５；＋４ｍＭのＨＣｌ（約ｐＨ６．６）、レーン６；＋２ｍＭのＨＣｌ（約ｐＨ７．０）、レーン７；滴定剤無添加（約ｐＨ７．４）、レーン８；２ｍＭのＮａＯＨ（約ｐＨ７．７）、レーン９；＋４ｍＭのＮａＯＨ（約ｐＨ９．０）。

【図6】最適化された切断部位により選択性が向上する最適化された切断部位ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇを第２のペプチドに導入する場合、この特定の場合、最適化された切断部位ＡｒｇＧｌｎＡｒｇＡｒｇをＳＹＮ０１６に導入してＳＹＮ００２を得ると、ウイルスにコードされた受容体に対する選択性の増加が得られる。ＵＳ２８などのウイルスにコードされる受容体を発現する細胞上のＳＹＮ００２の場合、切断部位ＡｒｇＧｌｎＰｒｏＡｒｇ（したがってＸ２＝Ｐｒｏ）を有するＳＹＮ０１６と比較して、細胞殺傷効力はほぼ維持されるが、ＣＸ３ＣＲ１などの内在性／ヒト受容体を発現する細胞に対する効力はＳＹＮ０１６に比べ減少する。フューリン切断部位を含まない第２のペプチド、例えば、ＳＹＮ０００（図示せず）と比較すると、選択性と効力の両方が増加する。

【図7】１ｍｇ／Ｌの試料からのＳＹＮ００１による効力アッセイ３７℃（試料Ａ）で灌流液への曝露の０、１５、１８０、及び３００分後に、１ｍｇ／Ｌ（１０００ｎｇ／ｍＬまたは２３．１ｎＭ）の試料から作製されたＳＹＮ００１希釈系列による効力アッセイ。ドットで表されたＳＹＮ００２試料は、灌流液に曝露されていないＳＹＮ００２に対応する。シクロヘキシミドはアッセイの陽性対照であり、タンパク質合成を阻害する。（２つの異なるプレートからのデータを１つの図にまとめたもの）。結果は、実施例５でさらに説明する。

【図8】１．７ｍｇ／Ｌの試料からのＳＹＮ００２による効力アッセイ３７℃（試料Ａ）で灌流液への曝露の０、１５、１８０、及び３００分後に、１．７ｍｇ／Ｌ（１７００ｎｇ／ｍＬまたは３７．１ｎＭ）の試料から作製されたＳＹＮ００２希釈系列による効力アッセイ。ドットで表されたＳＹＮ００２試料は、灌流液に曝露されていないＳＹＮ００２に対応する。シクロヘキシミドはアッセイの陽性対照であり、タンパク質合成を阻害する。（２つの異なるプレートからのデータを１つの図にまとめたもの）。結果は、実施例５でさらに説明する。

【図9】０．８５ｍｇ／Ｌの試料からのＳＹＮ００２による効力アッセイ３７℃（試料Ｃ）で灌流液への曝露の０、１５、１８０、及び３００分後に、０．８５ｍｇ／Ｌ（８５０ｎｇ／ｍＬまたは１８．６ｎＭ）の試料から作製されたＳＹＮ００２希釈系列による効力アッセイ。ドットで表されたＳＹＮ００２試料は、灌流液に曝露されていないＳＹＮ００２に対応する。シクロヘキシミドはアッセイの陽性対照であり、タンパク質合成を阻害する。（２つの異なるプレートからのデータを１つの図にまとめたもの）。結果は、実施例５でさらに説明する。

【図10】０．０８５ｍｇ／Ｌの試料からのＳＹＮ００２による効力アッセイ３７℃（試料Ｄ）で灌流液への曝露の０、１５、１８０、及び３００分後に、０．０８５ｍｇ／Ｌ（８５ｎｇ／ｍＬまたは１．８６ｎＭ）の試料から作製されたＳＹＮ００２希釈系列による効力アッセイ。ドットで表されたＳＹＮ００２試料は、灌流液に曝露されていないＳＹＮ００２に対応する。シクロヘキシミドはアッセイの陽性対照であり、タンパク質合成を阻害する。（２つの異なるプレートからのデータを１つの図にまとめたもの）。結果は、実施例５でさらに説明する。

【図11】３０分及び６０分での０．０８５ｍｇ／Ｌの試料からのＳＹＮ００１による効力アッセイ３７℃（試料Ｄ）で灌流液への曝露の３０分及び３００分後に、０．０８５ｍｇ／Ｌ（８５ｎｇ／ｍＬまたは１．８６ｎＭ）の試料から作製されたＳＹＮ００２希釈系列による効力アッセイ。ドットで表されたＳＹＮ００２試料は、灌流液に曝露されていないＳＹＮ００２に対応する。シクロヘキシミドはアッセイの陽性対照であり、タンパク質合成を阻害する。結果は、実施例５でさらに説明する。

【図12】１１４０分での０．０８５ｍｇ／Ｌの試料からのＳＹＮ００１による効力アッセイ３７℃（試料Ｄ）で灌流液への曝露の１１４０分後に、０．０８５ｍｇ／Ｌ（８５ｎｇ／ｍＬまたは１．８６ｎＭ）の試料から作製されたＳＹＮ００２希釈系列による効力アッセイ。ドットで表されたＳＹＮ００２試料は、灌流液に曝露されていないＳＹＮ００２に対応する。シクロヘキシミドはアッセイの陽性対照であり、タンパク質合成を阻害する。結果は、実施例５でさらに説明する。

【発明を実施するための形態】

【0023】

本開示は、融合タンパク質の安定性及び有効性を提供し、したがってエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物での感染症の効率的な治療または予防を可能にする、１つ以上の追加の成分を含む水性媒体中に融合タンパク質を含む組成物に関する。追加の成分は、エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物の機能を維持または保存するのにさらに役立ち得る。融合タンパク質は、標的認識及び標的選択性を提供する第１のペプチドと、毒素を提供し、さらに毒素の細胞内切断及び放出を提供し、標的細胞におけるエフェクター毒性をもたらす第２のペプチドとを含む。したがって、本明細書で提供される組成物は、エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における潜伏感染の治療を含む病原体誘発感染の予防または治療に有用である。

【0024】

本発明者らは、有利には構成的に細胞内移行され得る、受容体、例えばＵＳ２８などのウイルスによってコードされる受容体に結合すると、潜伏感染した細胞を含むＣＭＶ感染細胞などの感染細胞を効果的に標的にして殺傷する融合タンパク質を生成した。

【0025】

ＵＳ２８は、ヒトサイトメガロウイルスオープンリーディングフレームＵＳ２８によってコードされるＧタンパク質共役受容体である。ＵＳ２８は、構成的に細胞内移行する受容体である。したがって、ＵＳ２８に結合するケモカインまたは他の化合物は、受容体を発現する細胞に細胞内移行される。ＵＳ２８は、ＣＭＶに溶解または潜伏感染したＣＭＶ感染細胞の表面に発現する。

【0026】

融合タンパク質は、受容体、特にＨＣＭＶによってコードされるＵＳ２８などの病原体によってコードされる受容体に結合できる第１のペプチドと、及び最適化された切断部位及び毒素、例えば、選択された外毒素Ａのドメインを含む第２のペプチドとを含む。ＵＳ２８などの病原体にコードされる受容体に対する融合タンパク質の選択性は、驚くべきことに、切断部位における変異後に増強される。

【0027】

本明細書に記載の最適化された切断部位は、標的受容体選択的様式で細胞殺傷能力を改変することにより、細胞殺傷選択性を高めるために、さまざまな融合タンパク質、特に免疫毒素に利用することができる。

【0028】

定義
本明細書で使用される場合、「ａ」は、それが使用される文脈に応じて、１つまたは複数を意味することができる。

【0029】

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、±１０％、好ましくは±５％、さらにより好ましくは±２％を意味する。

【0030】

本明細書で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、標準的な２０の遺伝的にコードされたアミノ酸、及びそれらに対応する「Ｄ」型の立体異性体（天然の「Ｉ」型と比較して）、オメガアミノ酸及び他の天然に存在するアミノ酸、非在来型アミノ酸（例えば、α，α－二置換アミノ酸、Ｎ－アルキルアミノ酸など）、及び化学的に誘導体化されたアミノ酸を含む。「アラニン」または「Ａｌａ」または「Ａ」などのアミノ酸が具体的に列挙されている場合、特に明記しない限り、その用語は、ｌ－アラニンとｄ－アラニンの両方を指す。

【0031】

本発明の一実施形態では、融合タンパク質は、天然に存在するアミノ酸のみからなる。

【0032】

本明細書で使用される場合、「配列同一性」という用語は、２つのアミノ酸配列間または２つのヌクレオチド配列間、すなわち、候補配列（例えば、変異配列）と参照配列（野生型配列など）との間の、それらのペアワイズアラインメントに基づく関連性を表す。本発明の目的のために、２つのアミノ酸配列間の配列同一性は、ＥＭＢＯＳＳパッケージのＮｅｅｄｌｅプログラム（ＥＭＢＯＳＳ：ＴｈｅＥｕｒｏｐｅａｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙＯｐｅｎＳｏｆｔｗａｒｅＳｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅｅｔａｌ．，２０００，ＴｒｅｎｄｓＧｅｎｅｔ．１６：２７６－２７７）に実装された、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（ＮｅｅｄｌｅｍａｎａｎｄＷｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏ／．Ｂｉｏｌ．４８：４４３－４５３）、好ましくはバージョン５．０．０以降（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａ／ｅｍｂｏｓｓ＿ｎｅｅｄｌｅ／で入手可能）を使用して決定される。使用されるパラメータは、１０のギャップオープンペナルティ、０．５のギャップ拡張ペナルティ、及びＥＢＬＯＳＵＭ６２（３０ＢＬＯＳＵＭ６２のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックスである。「最長同一性」というラベルの付いたＮｅｅｄｌｅの出力（－ｎｏｂｒｉｅｆオプションを使用して取得）は、同一性パーセントとして使用され、次のように計算される：（同一残基×１００）／（アライメントの長さ－アライメントのギャップの総数）。Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズムは、参照配列以外の配列内の特定のアミノ酸が参照配列の特定の位置に対応するかどうかを決定するためにも使用される。本発明の目的のために、２つのヌクレオチド配列間の配列同一性は、ＥＭＢＯＳＳパッケージ（ＥＭＢＯＳＳ：ＴｈｅＥｕｒｏｐｅａｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙＯｐｅｎＳｏｆｔｗａｒｅＳｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅｅｔａｌ．，２０００，ＴｒｅｎｄｓＧｅｎｅｔ．１６：２７６－２７７）に実装された、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム（ＮｅｅｄｌｅｍａｎａｎｄＷｕｎｓｃｈ，１９７０，ｓｕｐｒａ）、好ましくはバージョン５．０．０以降を使用して決定される。使用されるパラメータは、１０のギャップオープンペナルティ、０．５のギャップ拡張ペナルティ、及びＤＮＡＦＵＬＬ（ＮＣＢＩＮＵＣ４．４のＥＭＢＯＳＳバージョン）置換マトリックスである。「最長同一性」というラベルの付いたＮｅｅｄｌｅの出力（－ｎｏｂｒｉｅｆオプションを使用して取得）は、同一性パーセントとして使用され、次のように計算される：（同一デオキシリボヌクレオチド×１００）／（アライメントの長さ－アライメントのギャップの総数）。

【0033】

本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療」、及び「療法」という用語は、治癒療法、予防療法、改善療法及び緩和療法を指す。好ましくは、治療は治癒的である。

【0034】

組成物
本開示の一態様は、移植前のエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染を予防または治療するための組成物を提供し、該組成物は、水性媒体中に：
以下を含む融合タンパク質を含み：
ｉ．細胞上に発現する少なくとも１つの受容体に結合する第１のペプチド；
ｉｉ．アミノ酸配列ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇを有する切断部位を含む第２のペプチド、
Ｘ２はＡｒｇまたはＬｙｓであり、第２のペプチドは毒素を含み、
該水性媒体は以下の１つ以上をさらに含む：
ｉ．緩衝成分；
ｉｉ．アミノ酸；
ｉｉｉ．炭水化物；または
ｉｖ．増殖因子またはサイトカイン。

【0035】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
ｉ．緩衝成分；
ｉｉ．アミノ酸。

【0036】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
ｉ．緩衝成分；
ｉｉ．炭水化物。

【0037】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
ｉ．緩衝成分；
ｉｉ．増殖因子またはサイトカイン。

【0038】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
ｉ．アミノ酸：
ｉｉ．炭水化物。

【0039】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
ｉ．アミノ酸：
ｉｉ．増殖因子またはサイトカイン。

【0040】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
ｉ．炭水化物；
ｉｉ．増殖因子またはサイトカイン。

【0041】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
ｉ．緩衝成分；
ｉｉ．アミノ酸：
ｉｉｉ．炭水化物。

【0042】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
ｉ．緩衝成分；
ｉｉ．アミノ酸：
ｉｉｉ．増殖因子またはサイトカイン。

【0043】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
ｉ．緩衝成分；
ｉｉ．炭水化物；
ｉｉｉ．増殖因子またはサイトカイン。

【0044】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
ｉ．アミノ酸；
ｉｉ．炭水化物；または
ｉｉｉ．増殖因子またはサイトカイン。

【0045】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
ｉ．緩衝成分；
ｉｉ．アミノ酸；
ｉｉｉ．炭水化物；
ｉｖ．増殖因子またはサイトカイン。

【0046】

いくつかの実施形態では、水性媒体は抗生剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、水性媒体はグルココルチコイドをさらに含む。いくつかの実施形態では、水性媒体は抗凝固剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、水性媒体はプロスタグランジンをさらに含む。

【0047】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、移植前の該エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物の生存能力を維持するのに適している。

【0048】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、該エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物を機能状態に維持するのに適している。

【0049】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、該エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物を生理学的またはほぼ生理学的条件下で維持するのに適している。

【0050】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、臓器ケアシステムにおいて該エクスビボの臓器を保存するのに適している。

【0051】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、１つ以上のさらなる薬剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、さらなる薬剤は、免疫抑制剤及び抗ウイルス剤からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗ウイルス剤は、バルガンシクロビル、ガンシクロビル、シドフォビル、レフルノミド、プレビミス、マリバビル、及びブリンシドフォビルからなる群から選択される。

【0052】

切断部位
本開示の第２のペプチドは、アミノ酸配列：
ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇ
（Ｘ１は任意のアミノ酸であり得る）を有する切断部位を含む。一実施形態では、Ｘ１は、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、及びＡｓｎからなる群から選択される。一実施形態では、Ｘ１はＧｌｎである。

【0053】

Ｘ２はＡｒｇ及びＬｙｓから選択される。有利な実施形態では、Ｘ２はＡｒｇである。一実施形態では、Ｘ２はＬｙｓである。Ａｒｇなどの塩基性アミノ酸をアミノ酸位置Ｘ２に導入することにより、細胞殺傷選択性が強化される。例えば、ウイルスによってコードされる受容体を発現し、第１のペプチドに結合するウイルス感染細胞は、第１のペプチドにも結合し得る内在性受容体を発現する細胞よりも効率的に殺傷される。

【0054】

好ましい実施形態では、切断部位は、アミノ酸配列ＡｒｇＧｌｎＡｒｇＡｒｇ（ＲＱＲＲ；配列番号１６）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、切断部位は、アミノ酸配列ＡｒｇＧｌｎＬｙｓＡｒｇ（ＲＱＫＲ；配列番号１７）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、切断部位は、アミノ酸配列ＡｒｇＳｅｒＬｙｓＡｒｇ（ＲＳＫＲ；配列番号１８）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、切断部位は、アミノ酸配列ＡｒｇＳｅｒＡｒｇＡｒｇ（ＲＳＲＲ；配列番号１９）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、切断部位は、アミノ酸配列ＡｒｇＴｈｒＬｙｓＡｒｇ（ＲＴＫＲ；配列番号２０）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、切断部位は、アミノ酸配列ＡｒｇＴｈｒＡｒｇＡｒｇ（ＲＴＲＲ；配列番号２１）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、切断部位は、アミノ酸配列ＡｒｇＡｓｎＬｙｓＡｒｇ（ＲＮＫＲ；配列番号２２）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、切断部位は、アミノ酸配列ＡｒｇＡｓｎＡｒｇＡｒｇ（ＲＮＲＲ；配列番号２３）を含むか、またはそれからなる。

【0055】

一実施形態では、切断は切断部位のＣ末端で起こる。

【0056】

フューリンで融合タンパク質を切断することは可能であり得るが、他の酵素またはプロテアーゼも切断部位での切断に関与し得る。したがって、一実施形態では、切断部位は酵素切断部位である。

【0057】

一実施形態では、酵素切断部位はフューリン切断部位である。

【0058】

受容体
一実施形態では、第１のペプチドは、細胞上に発現する少なくとも１つの受容体に結合する。一実施形態では、第１のペプチドは、細胞上に発現する少なくとも２つの受容体に結合する。

【0059】

一実施形態では、第１のペプチドに結合する１つの受容体は、病原体によってコードされる受容体であり、第１のペプチドに結合するさらなる受容体は、第１のペプチドまたはそのバリアントに対するヒトにコードされる受容体及び／または内在性受容体である。

【0060】

一実施形態では、受容体は、配列番号１０のＵＳ２８などのＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）である。

【0061】

一実施形態では、受容体はケモカイン受容体である。一実施形態では、ケモカイン受容体は、ＣＣケモカイン受容体及び／またはＣＸ３Ｃケモカイン受容体である。

【0062】

一実施形態では、ＣＣケモカイン受容体はＵＳ２８である。一実施形態では、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体はＣＸ３ＣＲ１である。

【0063】

一実施形態では、受容体は病原体によってコードされる。一実施形態では、病原体は細菌である。一実施形態では、病原体はウイルスである。一実施形態では、ウイルスはＤＮＡウイルスである。一実施形態では、ウイルスはＲＮＡウイルスである。一実施形態では、ウイルスはヘルペスウイルスである。一実施形態では、ウイルスはサイトメガロウイルスである。

【0064】

一実施形態では、受容体は細胞内移行することができる。一実施形態では、受容体は、第１のペプチドに結合すると細胞内移行される。一実施形態では、受容体は構成的に内部移行される。病原体によってコードされる受容体は、病原体感染細胞による融合タンパク質の効率的な取り込みを確実にし、それによって、望ましくない毒性及び副作用を最小限に抑えて感染細胞を死滅させるため、構成的に細胞内移行されることが有利である。「細胞内移行」とは、受容体が発現している細胞内に受容体が移動するプロセスを指す。例えば、受容体は、エンドサイトーシスまたは食作用によって細胞に侵入する可能性がある。

【0065】

いくつかの実施形態では、本発明は、受容体に選択的に結合することによって特定の細胞を標的とし、該受容体の細胞内移行をもたらす融合タンパク質を提供する。次いで、融合タンパク質の毒素部分が切断され、細胞が殺傷される。

【0066】

毒素
一実施形態では、融合タンパク質は免疫毒素である。「免疫毒素」とは、毒素に連結した標的化部分からなるタンパク質を指す。標的化部分は、リガンドと呼ばれることもある。

【0067】

毒素は、さまざまな種類の毒素であり得る。一実施形態では、第２のペプチドは、緑膿菌外毒素Ａ、ゲロニン、ブーガニン、サポリン、リシン、リシンＡ鎖、ブリオジン、レストリクトシン、ジフテリア毒素、ジフテリア毒素Ａ鎖、ならびにそれらのバリアント及び断片からなる群から選択される毒素を含む。融合タンパク質の毒素部分は、細胞の殺傷を可能にする。毒素は細胞毒性である。

【0068】

一実施形態では、第２のペプチドは、緑膿菌外毒素Ａの１つ以上のドメインを含む。一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号９の外毒素Ａの少なくとも一部を含む。

【0069】

いくつかの実施形態では、第２のペプチドは、放射性同位体またはエミッター、例えば、^２１１Ａｔ、^２２５Ａｃ、^２２７Ｔｈ、^２２４Ｒａ、^２１３Ｂｉ、^６７Ｃｕ、^９０Ｙ、^１３１Ｉ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、及び^１２５Ｉからなる群から選択されるものをさらに含む。

【0070】

いくつかの実施形態では、放射性同位体またはエミッターは、放射性崩壊時にアルファ粒子を放出する。いくつかの実施形態では、放射性同位体またはエミッターは、放射性崩壊時にベータ粒子を放出する。いくつかの実施形態では、放射性同位体またはエミッターは電子を放出する（オージェ放出としても知られる）。

【0071】

放射性同位体またはエミッターはさらに、標的細胞の殺傷を可能にする。放射性同位体またはエミッターによって放出される電離放射線は、細胞に対して細胞毒性がある。

【0072】

融合タンパク質
第１のペプチドは、細胞上に発現した受容体への結合を可能にする標的化部分である。

【0073】

一実施形態では、第１と第２のペプチドは作動可能に連結されている。一般に、「作動可能に連結された」とは、連結されている配列が隣接していること、及び／または共有結合など、互いに機能的な関係にあることを意味する。

【0074】

一実施形態では、第１のペプチドは、以下を含むか、またはそれからなる：
ａ．配列番号１のアミノ酸配列；
ｂ．配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号１に対して少なくとも８５％、または９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号１に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる配列番号１のバリアント；
ｃ．６０、７０、もしくは７５を超えるアミノ酸長など、５０を超えるアミノ酸長である配列番号１の断片、または配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号１に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号１に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するそれらのバリアント。

【0075】

一実施形態では、第１のペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる配列番号１のバリアントを含むかまたはそれからなる。一実施形態では、第１のペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる配列番号１のバリアントを含むかまたはそれからなる。一実施形態では、第１のペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる配列番号１のバリアントを含むかまたはそれからなる。一実施形態では、第１のペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる配列番号１のバリアントを含むかまたはそれからなる。一実施形態では、第１のペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる配列番号１のバリアントを含むかまたはそれからなる。一実施形態では、第１のペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる配列番号１のバリアントを含むかまたはそれからなる。

【0076】

一実施形態では、第１のペプチドは、５０アミノ酸長を超える配列番号１の断片を含むかまたはそれからなる。一実施形態では、第１のペプチドは、６０アミノ酸長を超える配列番号１の断片を含むかまたはそれからなる。一実施形態では、第１のペプチドは、７０アミノ酸長を超える配列番号１の断片を含むかまたはそれからなる。一実施形態では、第１のペプチドは、７５アミノ酸長を超える配列番号１の断片を含むかまたはそれからなる。

【0077】

一実施形態では、第１のペプチドは、配列番号１の断片、または配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、第１のペプチドは、配列番号１の断片、または配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、第１のペプチドは、配列番号１の断片、または配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、第１のペプチドは、配列番号１の断片、または配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、第１のペプチドは、配列番号１の断片、または配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、第１のペプチドは、配列番号１の断片、または配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、第１のペプチドは、配列番号１の断片、または配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかまたはそれらからなる。一実施形態では、第１のペプチドは、配列番号１の断片、または配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかまたはそれらからなる。

【0078】

一実施形態では、配列番号１の４９位のアミノ酸残基は、Ａｌａ、Ｌｙｓ、またはＡｓｐ、好ましくはＡｌａに変異している。これらの置換は、同様に第１のペプチドに結合するヒトまたは内在性にコードされる受容体と比較して、第１のペプチドに結合する病原体にコードされる受容体を発現する細胞に対する細胞殺傷選択性の増加をもたらし得る。

【0079】

一実施形態では、第１のペプチドは、Ｎ末端にメチオニン（Ｍ）をさらに含む。

【0080】

一実施形態では、第１のペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列内のＮ末端及び／またはＣ末端及び／またはその内部に挿入された１つ以上の追加のアミノ酸を含むかまたはそれらからなる。

【0081】

一実施形態では、配列番号１のアミノ酸配列内のＮ末端及び／またはＣ末端及び／またはその内部で、１つ以上のアミノ酸が欠失している。

【0082】

一実施形態では、第１のペプチドは１００アミノ酸長未満である。

【0083】

一実施形態では、第１のペプチドは９０アミノ酸長未満である。

【0084】

一実施形態では、第１のペプチドは８５アミノ酸長未満である。

【0085】

一実施形態では、第１のペプチドは８０アミノ酸長未満である。

【0086】

一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号３によるアミノ酸配列またはその断片もしくはバリアントを有するドメインＡなどの転座ドメインであり得るドメインＡ、及び／または、配列番号４によるアミノ酸配列またはその断片もしくはバリアントを有するドメインＢなどのドメインＢ、及び／または、配列番号５によるアミノ酸配列またはその断片もしくはバリアントを有するドメインＣなどの細胞毒性ドメインであり得るドメインＣを含む。

【0087】

一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号３によるアミノ酸配列またはその断片もしくはバリアントを有するドメインＡなどのドメインＡを含む。一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号３によるアミノ酸配列またはその断片もしくはバリアントを有するドメインＡなどのドメインＡ、及び配列番号４によるアミノ酸配列またはその断片もしくはバリアントを有するドメインＢなどのドメインＢを含む。一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号３によるアミノ酸配列またはその断片もしくはバリアントを有するドメインＡなどのドメインＡ、及び、配列番号４によるアミノ酸配列またはその断片もしくはバリアントを有するドメインＢなどのドメインＢ、及び、配列番号５によるアミノ酸配列またはその断片もしくはバリアントを有するドメインＣなどのドメインＣを含む。一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号４によるアミノ酸配列またはその断片もしくはバリアントを有するドメインＢを含む。一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号５によるアミノ酸配列またはその断片もしくはバリアントを有するドメインＣなどのドメインＣを含む。

【0088】

一実施形態では、第２のペプチドは以下を含む：
ａ．配列番号３のアミノ酸配列；
ｂ．配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号４に対して少なくとも８５％、または９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる配列番号３のバリアント；
ｃ．９０、１００、もしくは１１０を超えるアミノ酸長など、８０を超えるアミノ酸長である配列番号３の断片、または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号３に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するそれらのバリアント。

【0089】

【0090】

一実施形態では、第２のペプチドは以下を含む：
ａ．配列番号５のアミノ酸配列；
ｂ．配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号５に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる配列番号５のバリアント；
ｃ．１９０、２００、もしくは２１０を超えるアミノ酸長など、１８０を超えるアミノ酸長である配列番号５の断片、または配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号５に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するそれらのバリアント。

【0091】

【0092】

一実施形態では、第２のペプチドは以下を含む：
ａ．配列番号３のアミノ酸配列；
ｂ．配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号３に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号３のバリアント；
ｃ．９０、１００、もしくは１１０を超えるアミノ酸長など、８０を超えるアミノ酸長である配列番号３の断片、または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号３に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するそれらのバリアントと；
ｄ．配列番号４のアミノ酸配列；
ｅ．配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号４に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号４のバリアント；
ｆ．８、１０、もしくは１２を超えるアミノ酸長など、６を超えるアミノ酸長である配列番号４の断片、または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号４に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するそれらのバリアントと；
ｇ．配列番号５のアミノ酸配列；
ｈ．配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号５に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号５のバリアント；
ｉ．１９０、２００、もしくは２１０を超えるアミノ酸長など、１８０を超えるアミノ酸長である配列番号５の断片、または配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号５に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するそれらのバリアント。

【0093】

【0094】

一実施形態では、第２のペプチドは以下を含む：
ａ．配列番号４のアミノ酸配列；
ｂ．配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号４に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号４のバリアント；
ｃ．８、１０、もしくは１２を超えるアミノ酸長など、６を超えるアミノ酸長である配列番号４の断片、または配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号４に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するそれらのバリアントと；
ｄ．配列番号５のアミノ酸配列；
ｅ．配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号５に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号５のバリアント；
ｆ．１９０、２００、もしくは２１０を超えるアミノ酸長など、１８０を超えるアミノ酸長である配列番号５の断片、または配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号５に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するそれらのバリアント。

【0095】

一実施形態では、ドメインＡは転座ドメインであり、ドメインＣはＡＤＰリボシル化ドメインなどの細胞毒性ドメインである。

【0096】

一実施形態では、第２のペプチドは、Ｃ末端に配列番号８のアミノ酸配列ＫＤＥＬを含む。一実施形態では、第２のペプチドの最後の５つのアミノ酸は、配列番号８のアミノ酸配列で置換される。

【0097】

一実施形態では、第２のペプチドは、以下を含むか、またはそれからなる：
ａ．配列番号２のアミノ酸配列；
ｂ．配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号２に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号２に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号２のバリアント；
ｃ．３１０、３３０、もしくは３４０を超えるアミノ酸長など、３００を超えるアミノ酸長である配列番号２の断片、または配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号２に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号２に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するそれらのバリアント。

【0098】

一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号２のバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号２のバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号２のバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号２のバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号２のバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号２のバリアントを含むかそれからなる。

【0099】

一実施形態では、第２のペプチドは、３００アミノ酸長を超える配列番号２の断片を含むかまたはそれからなる。一実施形態では、第２のペプチドは、３１０アミノ酸長を超える配列番号２の断片を含むかまたはそれからなる。一実施形態では、第２のペプチドは、３３０アミノ酸長を超える配列番号２の断片を含むかまたはそれからなる。一実施形態では、第２のペプチドは、３４０アミノ酸長を超える配列番号２の断片を含むかまたはそれからなる。

【0100】

一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号２の断片、または配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号２の断片、または配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号２の断片、または配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号２の断片、または配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号２の断片、または配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号２の断片、または配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号２の断片、または配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、第２のペプチドは、配列番号２の断片、または配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかそれからなる。

【0101】

一実施形態では、第２のペプチドは、４００アミノ酸長未満であり、例えば、３８０、３７０、３６０、３５０、または３４５未満のアミノ酸長である。

【0102】

一実施形態では、第２のペプチドは４００アミノ酸長未満である。

【0103】

一実施形態では、第２のペプチドは３８０アミノ酸長未満である。

【0104】

一実施形態では、第２のペプチドは３７０アミノ酸長未満である。

【0105】

一実施形態では、第２のペプチドは３６０アミノ酸長未満である。

【0106】

一実施形態では、第２のペプチドは３５０アミノ酸長未満である。

【0107】

一実施形態では、第２のペプチドは３４５アミノ酸長未満である。

【0108】

一実施形態では、融合タンパク質は、以下を含むまたはそれからなるＳＹＮ００２またはその機能的バリアントである：
１．配列番号６のアミノ酸配列；
２．配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号６に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号６に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号６のバリアント；
３．３８０、４００、もしくは４２０を超えるアミノ酸長など、３６０を超えるアミノ酸長である配列番号６の断片、または配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号６に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号６に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するそのバリアント。

【0109】

「機能的バリアント」という用語は、元の配列と比較して類似、同一、または改善された選択性及び効力を示すバリアントを意味する。すなわち、配列番号６の機能的バリアントは、配列番号６と比較して類似、同一、または改善された選択性及び効力を示す。好ましくは、機能的バリアントは、元の配列と比較して、同一または改善された選択性及び効力を示す。

【0110】

一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号６のバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号６のバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号６のバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号６のバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号６のバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号６のバリアントを含むかそれからなる。

【0111】

一実施形態では、融合タンパク質は、３６０アミノ酸長を超える配列番号６の断片を含むかまたはそれからなる。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号３８０アミノ酸長を超える配列番号６の断片を含むかまたはそれからなる。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号４００アミノ酸長を超える配列番号６の断片を含むかまたはそれからなる。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号４２０アミノ酸長を超える配列番号６の断片を含むかまたはそれからなる。

【0112】

一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６の断片、または配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６の断片、または配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６の断片、または配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６の断片、または配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６の断片、または配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９６％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６の断片、または配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６の断片、または配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかそれからなる。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号６の断片、または配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するそのバリアントを含むかそれからなる。

【0113】

一実施形態では、融合タンパク質は、５００アミノ酸長未満であり、例えば、４９０、４８０、４７０、４６０、４５０、４４０、４３０、４２５、またはそれ未満のアミノ酸長である。

【0114】

一実施形態では、融合タンパク質は５００アミノ酸長未満である。一実施形態では、融合タンパク質は４９０アミノ酸長未満である。一実施形態では、融合タンパク質は４８０アミノ酸長未満である。一実施形態では、融合タンパク質は４７０アミノ酸長未満である。一実施形態では、融合タンパク質は４６０アミノ酸長未満である。一実施形態では、融合タンパク質は４５０アミノ酸長未満である。一実施形態では、融合タンパク質は４４０アミノ酸長未満である。一実施形態では、融合タンパク質は４３０アミノ酸長未満である。一実施形態では、融合タンパク質は４２０アミノ酸長未満である。

【0115】

一実施形態では、融合タンパク質は、病原体に潜伏感染した細胞など、病原体に感染した細胞を殺傷する。

【0116】

一実施形態では、病原体は、サイトメガロウイルスなどのヘルペスウイルスなどのＤＮＡウイルス、またはＲＮＡウイルスなどのウイルスである。

【0117】

一実施形態では、融合タンパク質は、受容体を発現する細胞の細胞死を誘導する。

【0118】

一実施形態では、細胞死は、アポトーシス、ネクローシス、オートファジー細胞死、及び有糸分裂関連細胞死からなる群から選択される。「アポトーシス」及び「アポトーシス活性」という用語は、広い意味で使用され、細胞質の凝縮、形質膜微絨毛の喪失、核のセグメント化、染色体ＤＮＡの分解、またはミトコンドリア機能の喪失を含む、１つ以上の特徴的な細胞変化を典型的に伴う哺乳動物における細胞死の秩序ある形態または制御された形態を指す。

【0119】

一実施形態では、融合タンパク質は、病原体の増殖、複製、ゲノム安定性、成熟、パッケージング、潜伏、再活性化、播種及び／または免疫阻害の阻害をもたらす、病原体に対する直接的または間接的な効果を誘発する。

【0120】

一実施形態では、融合タンパク質は、病原体にコードされる受容体を発現する細胞を選択的に殺傷する。

【0121】

一実施形態では、融合タンパク質は、ＵＳ２８を発現する細胞を殺傷する。

【0122】

一実施形態では、融合タンパク質は、ＵＳ２８などのウイルスによってコードされる受容体に対して、１０ｎＭ未満、例えば５ｎＭ未満、例えば１ｎＭ未満、例えば０．５ｎＭ未満、例えば０．１ｎＭ未満または０，００１ｎＭ未満のＩＣ５０値を有する。

【0123】

一実施形態では、融合タンパク質は、内在性受容体またはＣＸ３ＣＲ１などのヒトにコードされる受容体を発現する細胞に対する効力と比較して、ＵＳ２８などのウイルスによってコードされる受容体を発現する細胞に対して、少なくとも１００倍の増加した効力、少なくとも３００倍の増加した効力、少なくとも４００倍の増加した効力、少なくとも５００倍の増加した効力などの増加した効力を有する。一実施形態では、融合タンパク質は、ＣＸ３ＣＲ１を発現する細胞に対する効力と比較して、ＵＳ２８を発現する細胞に対する増加した効力、例えば少なくとも１００倍の増加した効力を有する。一実施形態では、融合タンパク質は、ＣＸ３ＣＲ１を発現する細胞に対する効力と比較して、ＵＳ２８を発現する細胞に対する増加した効力、例えば少なくとも３００倍の増加した効力を有する。一実施形態では、融合タンパク質は、ＣＸ３ＣＲ１を発現する細胞に対する効力と比較して、ＵＳ２８を発現する細胞に対する増加した効力、例えば少なくとも４００倍の増加した効力を有する。一実施形態では、融合タンパク質は、ＣＸ３ＣＲ１を発現する細胞に対する効力と比較して、ＵＳ２８を発現する細胞に対する増加した効力、例えば少なくとも５００倍の増加した効力を有する。

【0124】

一実施形態では、融合タンパク質は、内在性受容体またはＣＸ３ＣＲ１などのヒトにコードされる受容体に対する親和性と比較して、ＵＳ２８などのウイルスによってコードされる受容体に対して、少なくとも５０倍の増加した親和性、少なくとも１００倍の増加した親和性などの増加した親和性を有する。一実施形態では、融合タンパク質は、ＣＸ３ＣＲ１に対する親和性と比較して、ＵＳ２８に対する増加した親和性、例えば少なくとも１００倍の増加した親和性を有する。

【0125】

一実施形態では、本発明の融合タンパク質の選択比ＵＳ２８／ＣＸ３ＣＲ１は、少なくとも７５０、例えば少なくとも８００、例えば少なくとも８５０、例えば少なくとも９００である。一実施形態では、本発明の融合タンパク質の選択比ＵＳ２８／ＣＸ３ＣＲ１は少なくとも８８０である。一実施形態では、本発明の融合タンパク質の選択比ＵＳ２８／ＣＸ３ＣＲ１は少なくとも７５０である。一実施形態では、本発明の融合タンパク質の選択比ＵＳ２８／ＣＸ３ＣＲ１は少なくとも８００である。一実施形態では、本発明の融合タンパク質の選択比ＵＳ２８／ＣＸ３ＣＲ１は少なくとも８５０である。一実施形態では、本発明の融合タンパク質の選択比ＵＳ２８／ＣＸ３ＣＲ１は少なくとも９００である。

【0126】

水性媒体
本開示の一態様では、本明細書に記載の組成物の水性媒体は、融合タンパク質に加えて、緩衝成分、アミノ酸、炭水化物、または増殖因子もしくはサイトカインを含む。これにより、組成物は、移植前のエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染を予防または治療するのに適しており、任意選択で、該エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物の生存能力を維持するのに適している。

【0127】

いくつかの実施形態では、緩衝成分は、重炭酸緩衝液（ＨＣＯ_３ ^－／ＣＯ_２）、アンモニウム緩衝液（ＮＨ_３／ＮＨ_４ ^＋）、リン酸緩衝液（Ｈ_２ＰＯ_４ ^－／ＨＰＯ_４ ^２－）、４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、及び２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）からなる群から選択される１つ以上の緩衝成分である。

【0128】

いくつかの実施形態では、アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸である。

【0129】

いくつかの実施形態では、アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸である。

【0130】

いくつかの実施形態では、炭水化物は、単糖、二糖、オリゴ糖、または多糖などの糖、及び糖アルコールからなる群から選択される１つ以上の炭水化物である。

【0131】

いくつかの実施形態では、炭水化物は、デキストラン、デキストロース（Ｄ－グルコース）、グルコース、グルコース一水和物、マンニトール、ラフィノース、及びリボースからなる群から選択される１つ以上の炭水化物である。

【0132】

いくつかの実施形態では、増殖因子またはサイトカインは、トロンボポエチン、インスリン、線維芽細胞増殖因子１、ヒト幹細胞因子、ＩＬ－３、ＩＬ－６、Ｆｌｔ－３リガンド及び顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）からなる群から選択される１つ以上の増殖因子またはサイトカインである。

【0133】

いくつかの実施形態では、水性媒体は、以下からなる群から選択される１つ以上のさらなる成分をさらに含む：
ｉ．ビタミン；
ｉｉ．電解質；
ｉｉｉ．ＯＡＣ１などの転写因子；
ｉｖ．フォルスコリンなどのジテルペン；
ｖ．低密度リポタンパク質；
ｖｉ．心臓刺激剤；
ｖｉｉ．免疫抑制剤；
ｖｉｉｉ．ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはヒト血清アルブミン（ＨＡＳ）などの血清アルブミン；
ｉｘ．未分画ヘパリンなどのヘパリン；
ｘ．ヒトトランスフェリン；
ｘｉ．ペンタフラクション；
ｘｉｉ．２－メルカプトエタノール；
ｘｉｉｉ．グルタチオン；
ｘｉｖ．ラクトビオン酸；
ｘｖ．グルタミン酸；
ｘｖｉ．アロプリノール；
ｘｖｉｉ．アデノシン；
ｘｖｉｉｉ．アデニン；
ｘｉｘ．ヒドロキシエチルデンプン；
ｘｘ．パーフルオロカーボン；
ｘｘｉ．ポリエチレングリコール修飾スーパーオキシドジスムターゼ（ＰＥＧ修飾ＳＯＤ）；
ｘｘｉｉ．デキサメタゾン；
ｘｘｉｉｉ．酢酸リジン；
ｘｘｉｖ．コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム；
ｘｘｖ．ＣＨＩＲ９９０２１；
ｘｘｖｉ．抗生剤；
ｘｘｖｉｉ．グルココルチコイド；
ｘｘｖｉｉｉ．抗凝固剤；
ｘｘｉｘ．プロスタグランジン。

【0134】

いくつかの実施形態では、電解質は、カルシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、マグネシウム塩、塩化物塩、硫酸塩、及びリン酸塩からなる群から選択される１つ以上の電解質である。

【0135】

いくつかの実施形態では、心臓刺激薬は、カテコールアミン、ペプチド、ポリペプチド、β１／β２アドレナリン受容体遮断薬、ブプリナロール、ピンドロール、アルプレノロール、強心配糖体、ジギタリス、パルストリン、フェルラ酸、及びエピネフリンからなる群から選択される１つ以上の心臓刺激薬である。

【0136】

いくつかの実施形態では、抗生剤は、イミペネム、メロペネム、及びセフロキシムからなる群から選択される１つ以上の抗生剤である。

【0137】

いくつかの実施形態では、糖質コルチコイドは、メチルプレドニゾロン及びデキサメタゾンからなる群から選択される１つ以上の糖質コルチコイドである。

【0138】

いくつかの実施形態では、電解質は、乳酸ナトリウム溶液及びハルトマン溶液としても知られるリンガー乳酸溶液（ＲＬ）などの、塩化ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化カリウム、及び塩化カルシウムである。

【0139】

いくつかの実施形態では、抗凝固剤は、未分画ヘパリンなどのヘパリンである。

【0140】

いくつかの実施形態では、プロスタグランジンはプロスタサイクリンである。

【0141】

いくつかの実施形態では、水性媒体は、血液または赤血球などの血液成分をさらに含む。

【0142】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
－カテコールアミン、ペプチド、ポリペプチド、β１／β２アドレナリン受容体遮断薬、ブプリナロール、ピンドロール、アルプレノロール、強心配糖体、ジギタリス、パルストリン、フェルラ酸、及びエピネフリンからなる群から選択される１つ以上の心臓刺激薬；
－アスパラギン、グルタミン、及びシステインを含まない、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、及びリジンからなる群から選択される複数のアミノ酸；
－任意選択で、アデノシン、インスリン、免疫抑制剤、マルチビタミン組成物、及び／またはカルシウムなどの１つ以上の電解質。

【0143】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
－アデノシン；
－塩化カルシウム脱水物；
－グリシン；
－Ｌ－アラニン；
－Ｌ－アルギニン；
－Ｌ－アスパラギン酸；
－Ｌ－グルタミン酸；
－Ｌ－ヒスチジン；
－Ｌ－イソロイシン；
－Ｌ－ロイシン；
－Ｌ－メチオニン；
－Ｌ－フェニルアラニン；
－Ｌ－プロリン；
－Ｌ－セリン；
－Ｌ－トレオニン；
－Ｌ－トリプトファン；
－Ｌ－チロシン；
－Ｌ－バリン；
－酢酸リジン；
－硫酸マグネシウム七水和物；
－塩化カリウム；
－塩化ナトリウム；
－デキストロース；
－エピネフリン；
－インスリン；
－１つ以上のビタミン；
－コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム；
－重炭酸ナトリウム；
－マンニトール；
－グリセロリン酸ナトリウム。

【0144】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
－マンニトール；
－塩化ナトリウム；
－塩化カリウム；
－硫酸マグネシウム七水和物；
－グリセロリン酸ナトリウム。

【0145】

特定の実施形態では、組成物は、臓器ケアシステムにおいてエクスビボの臓器を治療及び保存するのに特に適しており、水性媒体は以下を含む：
－約６７５ｍｇ／１５００ｍＬ～約８２５ｍｇ／１５００ｍＬの濃度のアデノシン、
－約２１００ｍｇ／１５００ｍＬ～約２６００ｍｇ／１５００ｍＬの量の塩化カルシウム脱水物、
－約３１５ｍｇ／１５００ｍＬ～約３８５ｍｇ／１５００ｍＬの量のグリシン、
－約１５０ｍｇ／１５００ｍＬ～約２００ｍｇ／１５００ｍＬの量のＬ－アラニン、
－約６００ｍｇ／１５００ｍＬ～約８００ｍｇ／１５００ｍＬの量のＬ－アルギニン、
－約２２０ｍｇ／１５００ｍＬ～約２７０ｍｇ／１５００ｍＬの量のＬ－アスパラギン酸、
－約２３０ｍｇ／１５００ｍＬ～約８２９０ｍｇ／１５００ｍＬの量のＬ－グルタミン酸、
－約２００ｍｇ／１５００ｍＬ～約２５０ｍｇ／１５００ｍＬの量のＬ－ヒスチジン、
－約１００ｍｇ／１５００ｍＬ～約１３０ｍｇ／１５００ｍＬの量のＬ－イソロイシン、
－約３００ｍｇ／１５００ｍＬ～約３８０ｍｇ／１５００ｍＬの量のＬ－ロイシン、
－約５０ｍｇ／１５００ｍＬ～約６５ｍｇ／１５００ｍＬの量のＬ－メチオニン、
－約４５ｍｇ／１５００ｍＬ～約６０ｍｇ／１５００ｍＬの量のＬ－フェニルアラニン、
－約１１０ｍｇ／１５００ｍＬ～約１４０ｍｇ／１５００ｍＬの量のＬ－プロリン、
－約８０ｍｇ／１５００ｍＬ～約１０５ｍｇ／１５００ｍＬの量のＬ－セリン、
－約６０ｍｇ／１５００ｍＬ～約８０ｍｇ／１５００ｍＬの量のＬ－トレオニン、
－約３０ｍｇ／１５００ｍＬ～約４０ｍｇ／１５００ｍＬの量のＬ－トリプトファン、
－約８０ｍｇ／１５００ｍＬ～約１１０ｍｇ／１５００ｍＬの量のＬ－チロシン、
－約１５０ｍｇ／１５００ｍＬ～約１９０ｍｇ／１５００ｍＬの量のＬ－バリン、
－約２００ｍｇ／１５００ｍＬ～約２５０ｍｇ／１５００ｍＬの量の酢酸リジン、
－約５３５ｍｇ／１５００ｍＬ～約６３５ｍｇ／１５００ｍＬの量の硫酸マグネシウム七水和物、
－約２００ｍｇ／１５００ｍＬ～約２１０ｍｇ／１５００ｍＬの量の塩化カリウム、
－約１１．１ｇ／１５００ｍＬ～約１１．６ｇ／１５００ｍＬの量の塩化ナトリウム、
－約２５ｇ／１５００ｍＬ～約１２０ｇ／１５００ｍＬの量のデキストロース、
－約０．２５ｍｇ／１５００ｍＬ～約１．０ｍｇ／１５００ｍＬの量のエピネフリン、
－約７５ＩＵ／１５００ｍＬ～約１５０ＩＵ／１５００ｍＬの量のインスリン、
－約１ｍｇ／１５００ｍＬ～約３０ｍｇ／１５００ｍＬの量の１つ以上のビタミン、
－約２００ｍｇ／１５００ｍＬ～５００ｍｇ／１５００ｍＬの量のコハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、
－約１０ｍＥｑ／１５００ｍＬ～２５ｍＥｑ／１５００ｍＬの重炭酸ナトリウム、
－約１２．５ｇ／１５００ｍＬの量のマンニトール、及び
－約９００ｍｇ／１５００ｍＬの量のグリセロリン酸ナトリウム。

【0146】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
－デキストラン；
－グルコース一水和物；
－硫酸マグネシウム七水和物；
－塩化カリウム；
－塩化ナトリウム
－二塩基性リン酸ナトリウム二水和物；
－リン酸一カリウム。

【0147】

特定の実施形態では、組成物は、臓器ケアシステムにおいてエクスビボの臓器を治療及び保存するのに特に適しており、水性媒体は以下を含む：
－約５０ｇ／Ｌの量のデキストラン４０；
－約２ｇ／Ｌの量のグルコース一水和物；
－約０．２０１ｇ／Ｌの量の硫酸マグネシウム七水和物；
－約０．４ｇ／Ｌの量の塩化カリウム；
－約８ｇ／Ｌの量の塩化ナトリウム；
－約０．０５８ｇ／Ｌの量の二塩基性リン酸ナトリウム二水和物；
－約０．０６３ｇ／Ｌの量のリン酸一カリウム。

【0148】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
－ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）；
－デキストラン。

【0149】

特定の実施形態では、組成物は、臓器ケアシステムにおいてエクスビボの臓器を治療及び保存するのに特に適しており、水性媒体は以下を含む：
－約２５％の量のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）；
－デキストラン４０。

【0150】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
－デキストラン；
－Ｎａ^＋；
－Ｋ^＋；
－Ｍｇ^２＋；
－Ｃｌ^－；
－ＳＯ４^２－；
－Ｈ_２ＰＯ_４ ^－；
－グルコース。

【0151】

特定の実施形態では、組成物は、臓器ケアシステムにおいて、冷虚血保存中または灌流中に、エクスビボの臓器を治療及び保存するのに特に適しており、水性媒体は以下を含む：
－約５％の量のデキストラン４０；
－約１３８ｍｍｏｌの量のＮａ^＋；
－約６ｍｍｏｌの量のＫ^＋；
－約０．８ｍｍｏｌの量のＭｇ^２＋；
－約１４２ｍｍｏｌの量のＣｌ^－；
－約０．８ｍｍｏｌの量のＳＯ４^２－；
－約０．８ｍｍｏｌの量のＨ_２ＰＯ_４ ^－及びＨＰＯ_４ ^２－；
－約５ｍｍｏｌの量のグルコース。

【0152】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
－ナトリウム；
－カリウム；
－マグネシウム；
－カルシウム；
－ケトグルタレート／グルタミン酸；
－ヒスチジン；
－マンニトール；
－トリプトファン。

【0153】

特定の実施形態では、組成物は、低温保管中にエクスビボの臓器を治療及び保存するのに特に適しており、水性媒体は以下を含む：
－約１５ｍＭの量のナトリウム；
－約９ｍＭの量のカリウム；
－約４ｍＭの量のマグネシウム；
－約０．０１５ｍＭの量のカルシウム；
－約１ｍＭの量のケトグルタレート／グルタミン酸；
－約１９８ｍＭの量のヒスチジン；
－約３０ｍＭの量のマンニトール；
－約２ｍＭの量のトリプトファン。

【0154】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
－グルタチオン；
－マンニトール；
－ラクトビオン酸；
－グルタミン酸；
－水酸化ナトリウム；
－塩化カルシウム二水和物；
－塩化カリウム；
－塩化マグネシウム六水和物；
－ヒスチジン。

【0155】

特定の実施形態では、組成物は、低温保管中にエクスビボの臓器を治療及び保存するのに特に適しており、水性媒体は以下を含む：
－約０．９２１ｇ／Ｌの量のグルタチオン；
－約１０．９３０ｇ／Ｌの量のマンニトール；
－約２８．６６４ｇ／Ｌの量のラクトビオン酸；
－約２．９４２ｇ／Ｌの量のグルタミン酸；
－約４．０００ｇ／Ｌの量の水酸化ナトリウム；
－約０．０３７ｇ／Ｌの量の塩化カルシウム二水和物；
－約１．１１８ｇ／Ｌの量の塩化カリウム；
－約２．６４２ｇ／Ｌの量の塩化マグネシウム六水和物；
－約４．６５０ｇ／Ｌの量のヒスチジン。

【0156】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
－ペンタフラクション；
－アロプリノール；
－ラクトビオン酸；
－グルタチオン；
－リン酸二水素カリウム；
－水酸化カリウム；
－硫酸マグネシウム七水和物；
－ラフィノース五水和物；
－アデノシン。

【0157】

特定の実施形態では、組成物は、低温保管中にエクスビボの臓器を治療及び保存するのに特に適しており、水性媒体は以下を含む：
－約５０ｇ／Ｌのペンタフラクション；
－約０．１３６ｇ／Ｌ（１ｍＭ）の量のアロプリノール；
－約３５．８３ｇ／Ｌ（１０５ｍＭ）の量のラクトビオン酸；
－約０．９２２ｇ／Ｌ（３ｍＭ）の量のグルタチオン；
－約３．４ｇ／Ｌ（２５ｍＭ）の量のリン酸二水素カリウム；
－約５．６１ｇ／Ｌ（１００ｍＭ）の量の水酸化カリウム；
－約１．２３ｇ／Ｌ（５ｍＭ）の量の硫酸マグネシウム七水和物；
－約１７．８３ｇ／Ｌ（３０ｍＭ）の量のラフィノース五水和物；
－約１．３４ｇ／Ｌ（５ｍＭ）の量のアデノシン。

【0158】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
－アデニン；
－塩化カルシウム；
－デキストロース；
－グルタチオン；
－ＨＥＰＥＳ；
－ヒドロキシエチルデンプン；
－グルコン酸マグネシウム；
－マンニトール；
－リン酸カリウム；
－リボース；
－グルコン酸ナトリウム；
－水酸化ナトリウム。

【0159】

特定の実施形態では、組成物は、一時的な連続機械灌流中にエクスビボの臓器を治療及び保存するのに特に適しており、水性媒体は以下を含む：
－約０．６８ｇ／Ｌ（５ｍＭ）の量のアデニン（遊離塩基）；
－約０．０６８ｇ／Ｌ（０．５ｍＭ）の量の塩化カルシウム（二水和物）；
－約１．８０ｇ／Ｌ（１０ｍＭ）の量のデキストロース（＋）；
－約０．９２ｇ／Ｌ（３ｍＭ）の量のグルタチオン（還元）；
－約２．３８ｇ／Ｌ（１０ｍＭ）の量のｈｅｐｅｓ（遊離酸）；
－約５０．０ｇ／Ｌの量のヒドロキシエチルデンプン；
－約１．１３ｇ／Ｌ（５ｍＭ）の量のグルコン酸マグネシウム；
－約５．４ｇ／Ｌ（３０ｍＭ）の量のマンニトール；
－約３．４ｇ／Ｌ（２５ｍＭ）の量のリン酸二水素カリウム；
－約０．７５ｇ／Ｌ（５ｍＭ）の量のリボース、Ｄ（－）；
－約１７．４５ｇ／Ｌ（８０ｍＭ）の量のグルコン酸ナトリウム；
－約０．７０ｇ／Ｌの量の水酸化ナトリウム。

【0160】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
－ヒドロキシエチルデンプン、
－ラクトビオン酸；
－リン酸二水素カリウム；
－硫酸マグネシウム七水和物；
－ラフィノース五水和物；
－アデノシン；
－アロプリノール；
－グルタチオン；
－水酸化カリウム。

【0161】

特定の実施形態では、組成物は、低温保管中にエクスビボの臓器を治療及び保存するのに特に適しており、水性媒体は以下を含む：
－約５０ｇ／Ｌの量のヒドロキシエチルデンプン；
－約３５．８３ｇ／Ｌの量のラクトビオン酸；
－約３．４ｇ／Ｌの量のリン酸二水素カリウム；
－約１．２３ｇ／Ｌの量の硫酸マグネシウム七水和物；
－約１７．８３ｇ／Ｌの量のラフィノース五水和物；
－約１．３４ｇ／Ｌの量のアデノシン；
－約０．１３６ｇ／Ｌの量のアロプリノール；
－約０．９２２ｇ／Ｌの量のグルタチオン（還元型）；
－約５．６１ｇ／Ｌの量の水酸化カリウム。

【0162】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
－パーフルオロカーボン；
－グルコース；
－インスリン；
－アロプリノール；
－ＰＥＧ修飾ＳＯＤ；
－アデノシン；
－デキサメタゾン；
－ヒドロキシエチルデンプン；
－ナトリウムイオン；
－カリウムイオン；
－塩化物。

【0163】

特定の実施形態では、組成物は、室温での保存中にエクスビボの臓器を治療及び保存するのに特に適しており、水性媒体は以下を含む：
－約０．１～１０％（ｗ／ｖ）の量のパーフルオロカーボン；
－約１～２０ｍｍｏｌ／Ｌの量のグルコース；
－約１０～２００Ｕ／Ｌの量のインスリン；
－約０．１～５ｍｍｏｌ／Ｌの量のアロプリノール；
－約１～１０ｍｇ／Ｌの量のＰＥＧ修飾ＳＯＤ；
－約１～１０ｍｍｏｌ／Ｌの量のアデノシン；
－約１～２０ｍｇ／Ｌの量のデキサメタゾン；
－約１～５％（ｗ／ｖ）の量のヒドロキシエチルデンプン；
－約１４０～１４５ｍＥｑ／Ｌの量のナトリウムイオン；
－約２～６ｍＥｑ／Ｌの量のカリウムイオン；
－約９０～９５ｍＥｑ／Ｌの量の塩化物。

【0164】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
－イスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）；
－ヒト幹細胞因子；
－トロンボポエチン；
－ＣＨＩＲ９９０２１
－フォルスコリン；
－ＯＡＣ１。

【0165】

特定の実施形態では、組成物は、ＣＤ３４^＋幹細胞培養物などのエクスビボの幹細胞培養物を処理及び培養するのに特に適しており、水性媒体は以下を含む：
－ＩＭＤＭ；
－約１００ｎｇ／ｍＬの量のヒト幹細胞因子；
－約５０ｎｇ／ｍＬの量のトロンボポエチン；
－ＣＨＩＲ９９０２１；
－フォルスコリン；
－ＯＡＣ１。

【0166】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
－ＩＭＤＭ；
－ウシ血清アルブミン；
－ヒトインスリン；
－ヒトトランスフェリン（鉄飽和）；
－ β－メルカプトエタノール。

【0167】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
－無血清培地；
－ヘパリン；
－トロンボポエチン；
－ヒト幹細胞因子；
－線維芽細胞増殖因子１。

【0168】

特定の実施形態では、組成物は、造血幹細胞培養物などのエクスビボの幹細胞培養物を処理及び培養するのに特に適しており、水性媒体は以下を含む：
－無血清培地；
－約１０μｇ／ｍＬの量のヘパリン；
－約２０ｎｇ／ｍＬの量のトロンボポエチン；
－約１０ｎｇ／ｍＬの量のヒト幹細胞因子；
－約１０ｎｇ／ｍＬの量の線維芽細胞増殖因子１。

【0169】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
－無血清培地；
－ヒトＩＬ－３；
－ヒトＩＬ－６；
－トロンボポエチン；
－Ｆｌｔ－３リガンド；
－ヒト幹細胞因子。

【0170】

特定の実施形態では、組成物は、造血幹細胞培養物などのエクスビボの幹細胞培養物を処理及び培養するのに特に適しており、水性媒体は以下を含む：
－無血清培地；
－約１０ｎｇ／ｍｌの量の組換えヒトＩＬ－３；
－約１００ｎｇ／ｍＬの量のＩＬ－６；
－約１００ｎｇ／ｍＬの量のトロンボポエチン；
－約３００ｎｇ／ｍＬの量のＦｌｔ－３リガンド；
－約３００ｎｇ／ｍＬの量の「５ＧＦ」ヒト幹細胞因子などのヒト幹細胞因子。

【0171】

いくつかの実施形態では、水性媒体は以下を含む：
－ＩＭＤＭ；
－ＢＳＡ；
－ヒトインスリン；
－ヒトトランスフェリン；
－低密度リポタンパク質；
－ β－メルカプトエタノール；
－ヒト幹細胞因子；
－Ｆｌｔ－３リガンド；
－Ｇ－ＣＳＦ；
－ＩＬ－３；
－ＩＬ６。

【0172】

特定の実施形態では、組成物は、造血幹細胞培養物などのエクスビボの幹細胞培養物を処理及び培養するのに特に適しており、水性媒体は以下を含む：
－ＩＭＤＭ；
－約１％のＢＳＡ；
－約５μｇ／ｍＬのヒトインスリン；
－約１００μｇ／ｍＬのヒトトランスフェリン；
－約１０μｇ／ｍＬの低密度リポタンパク質；
－約１０^－４Ｍのβ－メルカプトエタノール；
－約３００ｎｇ／ｍＬのヒト幹細胞因子；
－約３００ｎｇ／ｍＬのＦｌｔ－３；
－約５０ｎｇ／ｍＬの顆粒球ＣＳＦ；
－約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－３；
－約１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ－６。

【0173】

特定の実施形態では、組成物は、エクスビボの臓器、例えば、エクスビボの肺を治療及び保存するのに特に適しており、水性媒体は以下を含む：
・ヒト血清アルブミンとデキストラン４０を含む２Ｌの塩水溶液、例えば、ＳｔｅｅｎＳｏｌｕｔｉｏｎ（商標）の形態；
・５００ｍｇのメチルプレドニゾロン；
・３０００ＩＵの未分画ヘパリン；
・５００ｍｇのイミペネム；
・５００ｍｇのシラスタチン。

【0174】

特定の実施形態では、組成物は、エクスビボの臓器、例えば、エクスビボの腎臓を治療及び保存するのに特に適しており、水性媒体は以下を含む：
・１００ｍＬのヒト血清アルブミン２０％；
・４００ｍＬのリンガー乳酸塩溶液；
・５ｍＬのマンニトール１０％；
・５ｍＬのグルコン酸カルシウム１０％；
・０．５ｍｇのメロペネム；
・１２ｍＬの重炭酸ナトリウム８．４％；
・６ｍｇのデキサメタゾン。

【0175】

特定の実施形態では、組成物は、エクスビボの臓器、例えば、エクスビボの腎臓を治療及び保存するのに特に適しており、水性媒体は以下を含む：
・１００ｍＬのヒト血清アルブミン２０％；
・４００ｍＬのリンガー乳酸塩溶液；
・１単位の赤血球；
・５ｍＬのマンニトール１０％；
・５ｍＬのグルコン酸カルシウム１０％；
・０．５ｍｇのメロペネム；
・１２ｍＬの重炭酸ナトリウム８．４％；
・６ｍｇのデキサメタゾン。

【0176】

特定の実施形態では、組成物は、エクスビボの臓器、例えば、エクスビボの肝臓を治療及び保存するのに特に適しており、水性媒体は以下を含む：
・ヒト血清アルブミンとデキストラン４０を含む塩水溶液、例えば、ＳｔｅｅｎＳｏｌｕｔｉｏｎ（商標）の形態；
・赤血球；
・セフロキシム；
・未分画ヘパリンなどのヘパリン；
・グルコン酸カルシウム；
・インスリン；
・プロスタサイクリン。

【0177】

エクスビボの臓器、組織または幹細胞培養物
本発明は、移植前の広範囲のエクスビボの臓器、組織、または幹細胞培養物において、感染症、例えば、ＨＣＭＶの予防及び／または治療に有用である。

【0178】

いくつかの実施形態では、エクスビボの臓器は心臓である。いくつかの実施形態では、エクスビボの臓器は肺である。いくつかの実施形態では、エクスビボの臓器は肝臓である。いくつかの実施形態では、エクスビボの臓器は腎臓である。いくつかの実施形態では、エクスビボの臓器は膵臓である。いくつかの実施形態では、エクスビボの臓器は小腸である。いくつかの実施形態では、エクスビボの臓器は大腸である。いくつかの実施形態では、エクスビボの臓器は胃である。

【0179】

いくつかの実施形態では、組織は皮膚である。いくつかの実施形態では、組織は角膜組織である。

【0180】

該臓器及び／または組織は、ヒトドナーなどのドナーから採取することができる。該臓器及び／または組織はまた、ヒト組織または細胞成分から高度な生物医学工学を介して生成され得る。

【0181】

いくつかの実施形態では、幹細胞培養物は成体幹細胞培養物である。いくつかの実施形態では、幹細胞培養物は間葉系幹細胞培養物である。いくつかの実施形態では、幹細胞培養物は誘導多能性幹細胞（ＩＰＳＣ）培養物である。いくつかの実施形態では、幹細胞培養物は前駆細胞培養物である。いくつかの実施形態では、幹細胞培養物は前駆体細胞培養物である。

【0182】

いくつかの実施形態では、幹細胞培養物は、ヒト胚の破壊を伴わない方法によって得られた胚性幹細胞培養物である。

【0183】

いくつかの実施形態では、幹細胞培養物は造血幹細胞培養物である。

【0184】

いくつかの実施形態では、幹細胞培養物は、ＣＤ３４陽性細胞（ＣＤ３４^＋細胞）を含む。いくつかの実施形態では、幹細胞培養物のすべての細胞はＣＤ３４^＋細胞である。いくつかの実施形態では、幹細胞培養物中の細胞のサブセットのみがＣＤ３４^＋細胞である。

【0185】

疾患
本発明は、移植前のエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染の予防または治療に有用である。

【0186】

一実施形態では、病原体は細菌またはウイルスである。一実施形態では、ウイルスは、サイトメガロウイルスなどのヘルペスウイルスなどのＤＮＡウイルス、またはＲＮＡウイルスである。

【0187】

【0188】

一実施形態では、ＣＭＶ感染は潜伏性及び／または溶解性ＣＭＶ感染である。

【0189】

いくつかの実施形態では、ＣＭＶ感染は、エクスビボの臓器、組織または幹細胞培養物において検出することができる。いくつかの実施形態では、ＣＭＶ感染は、エクスビボの臓器において検出することができる。いくつかの実施形態では、ＣＭＶ感染は、エクスビボの組織において検出することができる。いくつかの実施形態では、ＣＭＶ感染は、エクスビボの幹細胞培養物において検出することができる。

【0190】

いくつかの実施形態では、ＣＭＶ感染は、臓器、組織または幹細胞培養物のドナーにおいて、例えば、
ｉ）網膜、角膜、心臓、肝臓、腎臓、肺、胃腸組織、胸腺、脾臓、皮膚及び筋肉からなる群の１つ以上から選択される組織；及び／または
ｉｉ）唾液、血液、尿、精液、及び母乳からなる群の１つ以上から選択される体液において検出することができる。

【0191】

一実施形態では、ＣＭＶ感染は、ＨＩＶ患者、新生児及び免疫抑制患者、骨髄移植患者、固形臓器移植患者、免疫療法患者、がん患者、集中治療患者、外傷患者、幹細胞患者、遺伝子治療患者、細胞治療患者、高齢者患者、多病患者からなる群から選択される免疫無防備状態の患者への移植のためのエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における感染である。

【0192】

一実施形態では、ＣＭＶ感染は、冠動脈疾患及び／または血管疾患に罹患している患者への移植のためのエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における感染である。

【0193】

いくつかの実施形態では、移植臓器、組織、及び／または幹細胞培養物を受ける患者はヒトである。一実施形態では、ヒトは小児である。一実施形態では、ヒトは成人である。

【0194】

一実施形態では、移植された臓器、組織、及び／または幹細胞培養物を受けるヒトは、免疫無防備状態の患者である。免疫無防備状態の患者とは、免疫系の障害または弱体化により、感染症に正常に応答する能力を持たない患者を指す。例えば、免疫無防備状態の患者は、糖尿病及びＨＩＶなどの免疫系に影響を及ぼす疾患と診断されている可能性がある。免疫無防備状態の患者は、化学療法などの治療後に免疫応答が抑制されている可能性がある。

【0195】

一実施形態では、ヒトは固形臓器移植及び／または造血幹細胞移植を必要としている。造血幹細胞移植は、通常１つの骨髄、末梢血、または臍帯血に由来する多能性造血幹細胞の移植である。移植は自家移植（幹細胞が同じ患者から分離される）または同種異系移植（幹細胞が別の患者から分離される）である場合がある。

【0196】

一実施形態では、ＣＭＶ関連障害は、サイトメガロウイルス肺炎、サイトメガロウイルス肝炎、サイトメガロウイルス膵炎、サイトメガロウイルス単核球症、ＣＭＶ多発性根脊髄症、サイトメガロ封入体病、サイトメガロウイルス大腸炎、サイトメガロウイルス食道炎、サイトメガロウイルス網膜炎、ギラン・バレー症候群、粘表皮癌及び潰瘍性大腸炎、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、固形臓器移植移植片対宿主病（ＳＯＴ－ＧＶＨＤ）からなる群から選択される。

【0197】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）及び／または固形臓器移植移植片対宿主病（ＳＯＴ－ＧＶＨＤ）を予防するかまたはその重症度を軽減する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、ＧＶＨＤを予防するかまたはその重症度を軽減する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、ＳＯＴ－ＧＶＨＤを予防するかまたはその重症度を軽減する。

【0198】

一態様では、本開示は、移植のためのエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染の治療または予防のための、本明細書に記載の組成物の使用を提供する。

【0199】

治療方法
本発明のいくつかの態様では、移植前のエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染の治療または予防のための方法が提供され、該方法は、本明細書に記載の組成物中の該エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物を、浸漬、灌流、保存、調整、及び／または洗い流すことを含む。

【0200】

いくつかの実施形態では、移植前のエクスビボ臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染の治療または予防のための方法は、本明細書に記載の組成物で該エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物を灌流することを含む。該灌流は、約１時間～約２４時間、例えば約２時間～２１時間、例えば約３時間～１８時間、例えば約４時間～１５時間、例えば約５時間～１２時間、例えば、約６時間～１０時間、例えば約１時間～１０時間、例えば、約４、５、６、７または８時間行うことができる。いくつかの実施形態では、灌流は約６時間行われる。

【0201】

いくつかの実施形態では、灌流などの処理は、正常体温、例えば約３７℃など、約３６．５℃～約３７．５℃の間の温度である。いくつかの実施形態では、灌流などの処理は、約３０℃～約３６．５℃の間の温度、例えば約３０℃、例えば約３１℃、例えば約３２℃、例えば約３３℃、例えば約３４℃、例えば約３５℃、または例えば約３６℃など、ほぼ正常体温である。いくつかの実施形態では、灌流などの処理は、約３０℃未満、例えば、約２℃～約３０℃、例えば約２℃、例えば約４℃、例えば約６℃、例えば約８℃、例えば約１０℃、例えば約１２℃、例えば約１４℃、例えば約１６℃、例えば約１８℃、例えば約２０℃、例えば約２２℃、例えば約２４℃、例えば約２６℃、例えば約２８℃、または例えば約３０℃などの低体温である。いくつかの実施形態では、処理は低温、例えば約２℃～約８℃の間の温度である。

【0202】

いくつかの実施形態では、方法は、移植前の該エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物の生存能力を維持するのにさらに適している。

【0203】

【0204】

いくつかの実施形態では、エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物は、該エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物の冷蔵保存の前に、本明細書に記載の組成物で洗い流される。

【0205】

キットと灌流システム
本開示のいくつかの態様では、エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染を予防または治療するためのキットが提供され、該キットは、
ａ．本明細書に記載の組成物と；
ｂ．任意選択で、使用説明書と、を含む。

【0206】

いくつかの実施形態では、キットは、移植前の臓器、組織、及び／または幹細胞培養物の生存能力を維持するのにさらに適している。

【0207】

【0208】

いくつかの実施形態では、灌流システムは臓器ケアシステム（ＯＣＳ）である。

【0209】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の融合タンパク質は、３７℃のエクスビボ肺灌流灌流液などの３７℃の灌流液中で少なくとも１時間安定であり、融合タンパク質は少なくとも０．０８５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．１００ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．２５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．５００ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．７５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．００ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．２５ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．７０ｍｇ／Ｌの濃度で存在する。いくつかの実施形態では、該融合タンパク質は、配列番号６（ＳＹＮ００２）によるタンパク質である。

【0210】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の融合タンパク質は、３７℃のエクスビボ肺灌流灌流液などの３７℃の灌流液中で少なくとも２時間安定であり、融合タンパク質は少なくとも０．０８５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．１００ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．２５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．５００ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．７５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．００ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．２５ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．７０ｍｇ／Ｌの濃度で存在する。いくつかの実施形態では、該融合タンパク質は、配列番号６によるタンパク質である。

【0211】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の融合タンパク質は、３７℃のエクスビボ肺灌流灌流液などの３７℃の灌流液中で少なくとも３時間安定であり、融合タンパク質は少なくとも０．０８５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．１００ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．２５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．５００ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．７５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．００ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．２５ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．７０ｍｇ／Ｌの濃度で存在する。いくつかの実施形態では、該融合タンパク質は、配列番号６によるタンパク質である。

【0212】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の融合タンパク質は、３７℃のエクスビボ肺灌流灌流液などの３７℃の灌流液中で少なくとも４時間安定であり、融合タンパク質は少なくとも０．０８５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．１００ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．２５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．５００ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．７５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．００ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．２５ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．７０ｍｇ／Ｌの濃度で存在する。いくつかの実施形態では、該融合タンパク質は、配列番号６によるタンパク質である。

【0213】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の融合タンパク質は、３７℃のエクスビボ肺灌流灌流液などの３７℃の灌流液中で少なくとも５時間安定であり、融合タンパク質は少なくとも０．０８５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．１００ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．２５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．５００ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも０．７５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．００ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．２５ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．５０ｍｇ／Ｌ、例えば少なくとも１．７０ｍｇ／Ｌの濃度で存在する。いくつかの実施形態では、該融合タンパク質は、配列番号６によるタンパク質である。

【0214】

項目
１．移植前のエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染を予防または治療するための組成物であって、前記組成物は、水性媒体中に：
以下を含む融合タンパク質を含み：
ｉ．細胞上に発現する少なくとも１つの受容体に結合する第１のペプチド；
ｉｉ．アミノ酸配列ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇを有する切断部位を含む第２のペプチド、
Ｘ２はＡｒｇまたはＬｙｓであり、第２のペプチドは毒素を含み、
前記水性媒体は以下の１つ以上をさらに含む前記組成物：
ｉ．緩衝成分；
ｉｉ．アミノ酸；
ｉｉｉ．炭水化物；または
ｉｖ．増殖因子またはサイトカイン。

【0215】

２．Ｘ１がＧｌｎ、Ｓｅｒ、ＴｈｒまたはＡｓｎである、項目１に記載の組成物。

【0216】

３．Ｘ１がＧｌｎである、先行項目のいずれか１つに記載の化合物。

【0217】

４．前記融合タンパク質が免疫毒素である、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0218】

５．前記切断部位がアミノ酸配列ＡｒｇＧｌｎＡｒｇＡｒｇを含むかまたはそれからなる、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0219】

６．前記第１のペプチドが、細胞上に発現する少なくとも２つの異なる受容体に結合する、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0220】

７．前記第１のペプチドに結合する１つの受容体が、病原体によってコードされる受容体であり、前記第１のペプチドに結合するさらなる受容体が、前記第１のペプチドまたはそのバリアントに対するヒトにコードされる受容体及び／または内在性受容体である、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0221】

８．前記受容体が、配列番号１０のＵＳ２８などのＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）である、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0222】

９．前記第２のペプチドが、緑膿菌外毒素Ａ、ゲロニン、ブーガニン、サポリン、リシン、リシンＡ鎖、ブリオジン、レストリクトシン、ジフテリア毒素、ジフテリア毒素Ａ鎖、ならびにそれらのバリアント及び断片からなる群から選択される毒素を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0223】

１０．前記第２のペプチドが、^２１１Ａｔ、^２２５Ａｃ、^２２７Ｔｈ、^２２４Ｒａ、^２１３Ｂｉ、^６７Ｃｕ、^９０Ｙ、^１３１Ｉ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、及び^１２５Ｉからなる群から選択される放射性同位体またはエミッターを含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0224】

１１．前記受容体がケモカイン受容体である、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0225】

１２．前記ケモカイン受容体がＣＣケモカイン受容体及び／またはＣＸ３Ｃケモカイン受容体である、項目１０に記載の組成物。

【0226】

１３．前記ＣＣケモカイン受容体がＵＳ２８である、項目１２に記載の組成物。

【0227】

１４．前記ＣＸ３Ｃケモカイン受容体がＣＸ３ＣＲ１である、項目１２に記載の組成物。

【0228】

１５．前記受容体が病原体によってコードされている、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0229】

１６．前記病原体が細菌である、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0230】

１７．前記病原体がウイルスである、項目１～１５のいずれか１項に記載の組成物。

【0231】

１８．前記ウイルスがＤＮＡウイルスである、項目１７に記載の組成物。

【0232】

１９．前記ウイルスがＲＮＡウイルスである、項目１７に記載の組成物。

【0233】

２０．前記ウイルスがヘルペスウイルスである、項目１７に記載の組成物。

【0234】

２１．前記ウイルスがサイトメガロウイルスである、項目１７に記載の組成物。

【0235】

２２．前記受容体が細胞内移行することができる、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0236】

２３．前記受容体が前記第１のペプチドに結合すると細胞内移行される、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0237】

２４．前記受容体が構成的に内部移行される、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0238】

２５．前記切断部位が酵素的切断部位である、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0239】

２６．前記酵素切断部位がフューリン切断部位である、項目２５に記載の組成物。

【0240】

２７．前記第１のペプチドが標的化部分である、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0241】

２８．前記第１のペプチド及び前記第２のペプチドが作動可能に連結されている、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0242】

２９．前記第１のペプチドが、以下を含むかそれらからなる、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
ａ．配列番号１のアミノ酸配列；
ｂ．配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号１に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号１に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号１のバリアント；及び／または
ｃ．６０、７０、もしくは７５を超えるアミノ酸長など、５０を超えるアミノ酸長である配列番号１の断片、または配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号１に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号１に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するそれらのバリアント。

【0243】

３０．配列番号１の４９位のアミノ酸残基がＡｌａ、Ｌｙｓ、またはＡｓｐ、好ましくはＡｌａに変異している、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0244】

３１．前記第１のペプチドがＮ末端にメチオニン（Ｍ）をさらに含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0245】

３２．前記第１のペプチドが、配列番号のアミノ酸配列のＮ末端及び／またはＣ末端及び／またはその内部に挿入された１つ以上の追加のアミノ酸を含むかまたはそれらからなる、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0246】

３３．１つ以上のアミノ酸が、配列番号１のアミノ酸配列のＮ末端及び／またはＣ末端及び／またはその内部で欠失している、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0247】

３４．前記第１のペプチドが、１００アミノ酸長未満、例えば、９０、８５、または８０未満のアミノ酸長である、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0248】

３５．前記第２のペプチドが、配列番号３によるアミノ酸配列またはその断片もしくはバリアントを有するドメインＡなどのドメインＡ、、及び／または、配列番号４によるアミノ酸配列またはその断片もしくはバリアントを有するドメインＢなどのドメインＢ、及び／または、配列番号５によるアミノ酸配列またはその断片もしくはバリアントを有するドメインＣなどの細胞毒性ドメインであり得るドメインＣを含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0249】

３６．前記第２のペプチドが、以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
ａ．配列番号３のアミノ酸配列；
ｂ．配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号３に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号３のバリアント；及び／または
ｃ．９０、１００、もしくは１１０を超えるアミノ酸長など、８０を超えるアミノ酸長である配列番号３の断片、または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号３に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号３に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するそのバリアント。

【0250】

３７．前記第２のペプチドが、以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
ａ．配列番号４のアミノ酸配列；
ｂ．配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号４に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号４のバリアント；及び／または
ｃ．８、１０、もしくは１２を超えるアミノ酸長など、６を超えるアミノ酸長である配列番号３の断片、または配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号４に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号４に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するそのバリアント。

【0251】

３８．前記第２のペプチドが、以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
ａ．配列番号５のアミノ酸配列；
ｂ．配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号５に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号５のバリアント；及び／または
ｃ．１９０、２００、もしくは２１０を超えるアミノ酸長など、１８０を超えるアミノ酸長である配列番号３の断片、または配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号５に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号５に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するそのバリアント。

【0252】

３９．前記ドメインＡが転座ドメインであり、前記ドメインＣがＡＤＰリボシル化ドメインなどの細胞毒性ドメインである、項目３５に記載の組成物。

【0253】

４０．前記第２のペプチドが、配列番号８のアミノ酸配列ＫＤＥＬをＣ末端に含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0254】

４１．前記第２のペプチドが、以下を含むかそれらからなる、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
ａ．配列番号２のアミノ酸配列；
ｂ．配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号２に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号２に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号２のバリアント；及び／または
ｃ．３１０、３３０、もしくは３４０を超えるアミノ酸長など、３００を超えるアミノ酸長である配列番号２の断片、または配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号２に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号２に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するそのバリアント。

【0255】

４２．前記第２のペプチドが、４００アミノ酸長未満、例えば、３８０、３７０、３６０、３５０、または３４５未満のアミノ酸長である、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0256】

４３．前記融合タンパク質が、以下を含むかそれらからなる、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
ａ．配列番号６のアミノ酸配列；
ｂ．配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号６に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号６に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むかそれからなる配列番号６のバリアント；及び／または
ｃ．３８０、４００、もしくは４２０を超えるアミノ酸長など、３６０を超えるアミノ酸長である配列番号６の断片、または配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは配列番号６に対して少なくとも８５％、もしくは９０％の配列同一性、最も好ましくは、配列番号６に対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の同一性を有するそのバリアント。

【0257】

４４．前記融合タンパク質が５００アミノ酸長未満、例えば４９０、４８０、４７０、４６０、４５０、４４０、４３０、４２５、またはそれ未満のアミノ酸長である、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0258】

４５．前記融合タンパク質が、病原体に感染された細胞、例えば、病原体に潜伏感染された細胞を殺傷する、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0259】

４６．前記病原体が、サイトメガロウイルスなどのヘルペスウイルスなどのＤＮＡウイルス、またはＲＮＡウイルスなどのウイルスである、項目４５に記載の組成物。

【0260】

４７．前記融合タンパク質が受容体を発現する細胞の細胞死を誘導する、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0261】

４８．前記細胞死が、アポトーシス、ネクローシス、オートファジー細胞死、及び有糸分裂関連細胞死からなる群から選択される、項目４７に記載の組成物。

【0262】

４９．前記融合タンパク質が、病原体の増殖、複製、ゲノム安定性、成熟、パッケージング、潜伏、再活性化、播種及び／または免疫阻害の阻害をもたらす、前記病原体に対する直接的または間接的な効果を誘発する、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0263】

５０．前記融合タンパク質が、ＵＳ２８を発現する細胞を殺傷する、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0264】

５１．前記融合タンパク質が、ＵＳ２８などのウイルスによってコードされる受容体に対して、１０ｎＭ未満、例えば５ｎＭ未満、例えば１ｎＭ未満、例えば０．５ｎＭ未満、例えば０．１ｎＭ未満または０．００１ｎＭ未満のＩＣ５０値を有する、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0265】

５２．前記融合タンパク質が、内在性受容体またはＣＸ３ＣＲ１などのヒトにコードされる受容体を発現する細胞に対する効力と比較して、ＵＳ２８などのウイルスによってコードされる受容体を発現する細胞に対して、少なくとも３００倍の増加した効力、少なくとも４００倍の増加した効力、少なくとも５００倍の増加した効力、少なくとも７００倍の増加した効力などの増加した効力を有する、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0266】

５３．前記融合タンパク質が、内在性受容体またはＣＸ３ＣＲ１などのヒトにコードされる受容体に対する親和性と比較して、ＵＳ２８などのウイルスによってコードされる受容体に対して、少なくとも５０倍の増加した親和性、少なくとも１００倍の増加した親和性などの増加した親和性を有する、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0267】

５４．前記緩衝成分が、重炭酸緩衝液（ＨＣＯ_３ ^－／ＣＯ_２）、アンモニウム緩衝液（ＮＨ_３／ＮＨ_４ ^＋）、リン酸緩衝液（Ｈ_２ＰＯ_４ ^－／ＨＰＯ_４ ^２－）、４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、及び２－（Ｎ－モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）からなる群から選択される１つ以上の緩衝成分である、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0268】

５５．前記アミノ酸が、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸である、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0269】

５６．前記アミノ酸が、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸である、項目５５に記載の組成物。

【0270】

５７．前記炭水化物が、単糖、二糖、オリゴ糖、または多糖などの糖、及び糖アルコールからなる群から選択される１つまたは複数の炭水化物である、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0271】

５８．前記炭水化物が、デキストラン、デキストロース（Ｄ－グルコース）、グルコース、グルコース一水和物、マンニトール、ラフィノース、及びリボースからなる群から選択される１つ以上の炭水化物である、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0272】

５９．前記増殖因子またはサイトカインが、トロンボポエチン、インスリン、線維芽細胞増殖因子１、ヒト幹細胞因子、ＩＬ－３、ＩＬ－６、Ｆｌｔ－３リガンド及び顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）からなる群から選択される１つ以上の増殖因子またはサイトカインである、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0273】

６０．前記水性媒体が、以下からなる群から選択される１つ以上のさらなる成分をさらに含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
ｉ．ビタミン；
ｉｉ．電解質；
ｉｉｉ．ＯＡＣ１などの転写因子；
ｉｖ．フォルスコリンなどのジテルペン；
ｖ．低密度リポタンパク質；
ｖｉ．心臓刺激剤；
ｖｉｉ．免疫抑制剤；
ｖｉｉｉ．ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはヒト血清アルブミン（ＨＡＳ）などの血清アルブミン；
ｉｘ．未分画ヘパリンなどのヘパリン；
ｘ．ヒトトランスフェリン；
ｘｉ．ペンタフラクション；
ｘｉｉ．２－メルカプトエタノール；
ｘｉｉｉ．グルタチオン；
ｘｉｖ．ラクトビオン酸；
ｘｖ．グルタミン酸；
ｘｖｉ．アロプリノール；
ｘｖｉｉ．アデノシン；
ｘｖｉｉｉ．アデニン；
ｘｉｘ．ヒドロキシエチルデンプン；
ｘｘ．パーフルオロカーボン；
ｘｘｉ．ポリエチレングリコール修飾スーパーオキシドジスムターゼ（ＰＥＧ修飾ＳＯＤ）；
ｘｘｉｉ．デキサメタゾン；
ｘｘｉｉｉ．酢酸リジン；
ｘｘｉｖ．コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム；
ｘｘｖ．ＣＨＩＲ９９０２１；
ｘｘｖｉ．抗生剤；
ｘｘｖｉｉ．グルココルチコイド；
ｘｘｖｉｉｉ．抗凝固剤；
ｘｘｉｘ．プロスタグランジン。

【0274】

６１．前記電解質が、カルシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、マグネシウム塩、塩化物塩、硫酸塩、及びリン酸塩からなる群から選択される１つ以上の電解質である、項目６０に記載の組成物。

【0275】

６２．前記心臓刺激薬が、カテコールアミン、ペプチド、ポリペプチド、β１／β２アドレナリン受容体遮断薬、ブプリナロール、ピンドロール、アルプレノロール、強心配糖体、ジギタリス、パルストリン、フェルラ酸、及びエピネフリンからなる群から選択される１つ以上の心臓刺激薬である、項目６０に記載の組成物。

【0276】

６３．前記水性媒体が、以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－カテコールアミン、ペプチド、ポリペプチド、β１／β２アドレナリン受容体遮断薬、ブプリナロール、ピンドロール、アルプレノロール、強心配糖体、ジギタリス、パルストリン、フェルラ酸、及びエピネフリンからなる群から選択される１つ以上の心臓刺激薬；
－アスパラギン、グルタミン、及びシステインを含まない、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、及びリジンからなる群から選択される複数のアミノ酸；
－任意選択で、アデノシン、インスリン、免疫抑制剤、マルチビタミン組成物、及び／またはカルシウムなどの１つ以上の電解質。

【0277】

６４．前記水性媒体が以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－マンニトール；
－塩化ナトリウム；
－塩化カリウム；
－硫酸マグネシウム七水和物；
－グリセロリン酸ナトリウム。

【0278】

６５．前記水性媒体が、以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－アデノシン；
－塩化カルシウム脱水物；
－グリシン；
－Ｌ－アラニン；
－Ｌ－アルギニン；
－Ｌ－アスパラギン酸；
－Ｌ－グルタミン酸；
－Ｌ－ヒスチジン；
－Ｌ－イソロイシン；
－Ｌ－ロイシン；
－Ｌ－メチオニン；
－Ｌ－フェニルアラニン；
－Ｌ－プロリン；
－Ｌ－セリン；
－Ｌ－トレオニン；
－Ｌ－トリプトファン；
－Ｌ－チロシン；
－Ｌ－バリン；
－酢酸リジン；
－硫酸マグネシウム七水和物；
－塩化カリウム；
－塩化ナトリウム；
－デキストロース；
－エピネフリン；
－インスリン；
－１つ以上のビタミン；
－コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム；
－重炭酸ナトリウム；
－マンニトール；
－グリセロリン酸ナトリウム。

【0279】

６６．前記水性媒体が、以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－デキストラン；
－グルコース一水和物；
－硫酸マグネシウム七水和物；
－塩化カリウム；
－塩化ナトリウム；
－二塩基性リン酸ナトリウム二水和物；
－リン酸一カリウム。

【0280】

６７．前記水性媒体が以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）；
－デキストラン。

【0281】

６８．前記水性媒体が以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－デキストラン；
－Ｎａ^＋；
－Ｋ^＋；
－Ｍｇ^２＋；
－Ｃｌ^－；
－ＳＯ４^２－；
－Ｈ_２ＰＯ_４ ^－；
－グルコース。

【0282】

６９．前記水性媒体が以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－ナトリウム；
－カリウム；
－マグネシウム；
－カルシウム；
－ケトグルタレート／グルタミン酸；
－ヒスチジン；
－マンニトール；
－トリプトファン。

【0283】

７０．前記水性媒体が以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－グルタチオン；
－マンニトール；
－ラクトビオン酸；
－グルタミン酸；
－水酸化ナトリウム；
－塩化カルシウム二水和物；
－塩化カリウム；
－塩化マグネシウム六水和物；
－ヒスチジン。

【0284】

７１．前記水性媒体が以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－ペンタフラクション；
－アロプリノール；
－ラクトビオン酸；
－グルタチオン；
－リン酸二水素カリウム；
－水酸化カリウム；
－硫酸マグネシウム七水和物；
－ラフィノース五水和物；
－アデノシン。

【0285】

７２．前記水性媒体が以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－アデニン；
－塩化カルシウム；
－デキストロース；
－グルタチオン；
－ＨＥＰＥＳ；
－ヒドロキシエチルデンプン；
－グルコン酸マグネシウム；
－マンニトール；
－リン酸カリウム；
－リボース；
－グルコン酸ナトリウム；
－水酸化ナトリウム。

【0286】

７３．前記水性媒体が以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－ヒドロキシエチルデンプン、
－ラクトビオン酸；
－リン酸二水素カリウム；
－硫酸マグネシウム七水和物；
－ラフィノース五水和物；
－アデノシン；
－アロプリノール；
－グルタチオン；
－水酸化カリウム。

【0287】

７４．前記水性媒体が以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－パーフルオロカーボン；
－グルコース；
－インスリン；
－アロプリノール；
－ＰＥＧ修飾ＳＯＤ；
－アデノシン；
－デキサメタゾン；
－ヒドロキシエチルデンプン；
－ナトリウムイオン；
－カリウムイオン；
－塩化物。

【0288】

７５．前記水性媒体が以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－イスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）；
－ヒト幹細胞因子；
－トロンボポエチン；
－ＣＨＩＲ９９０２１
－フォルスコリン；
－ＯＡＣ１。

【0289】

７６．前記水性媒体が、以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－ＩＭＤＭ；
－ウシ血清アルブミン；
－ヒトインスリン；
－ヒトトランスフェリン（鉄飽和）；
－ β－メルカプトエタノール。

【0290】

７７．前記水性媒体が以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－無血清培地；
－ヘパリン；
－トロンボポエチン；
－ヒト幹細胞因子；
－線維芽細胞増殖因子１。

【0291】

７８．前記水性媒体が以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－無血清培地；
－ヒトＩＬ－３；
－ヒトＩＬ－６；
－トロンボポエチン；
－Ｆｌｔ－３リガンド；
－「５ＧＦ」ヒト幹細胞因子などのヒト幹細胞因子。

【0292】

７９．前記水性媒体が、以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－ＩＭＤＭ；
－ＢＳＡ；
－ヒトインスリン；
－ヒトトランスフェリン；
－低密度リポタンパク質；
－ β－メルカプトエタノール；
－ヒト幹細胞因子；
－Ｆｌｔ－３リガンド；
－Ｇ－ＣＳＦ；
－ＩＬ－３；
－ＩＬ６。

【0293】

８０．前記水性媒体が以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－ヒト血清アルブミン及びデキストラン４０；
－メチルプレドニゾロン；
－未分画ヘパリンなどのヘパリン；
－イミペネム及び任意選択でのシラスタチン。

【0294】

８１．前記水性媒体が以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－ヒト血清アルブミン；
－リンガー乳酸塩溶液；
－マンニトール；
－グルコン酸カルシウム；
－メロペネム；
－重炭酸ナトリウム；
－デキサメタゾン。

【0295】

８２．前記水性媒体が以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－ヒト血清アルブミン；
－リンガー乳酸塩溶液；
－赤血球、
－マンニトール；
－グルコン酸カルシウム；
－メロペネム；
－重炭酸ナトリウム；
－デキサメタゾン。

【0296】

８３．前記水性媒体が、以下を含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物：
－ヒト血清アルブミン及びデキストラン４０；
－赤血球；
－セフロキシム；
－未分画ヘパリンなどのヘパリン；
－グルコン酸カルシウム；
－インスリン；
－プロスタサイクリン。

【0297】

８４．エクスビボの臓器が、心臓、肺、肝臓、腎臓、膵臓、小腸、大腸、及び胃からなる群から選択される、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0298】

８５．前記組織が皮膚または角膜の組織である、項目１～８３のいずれか１つに記載の組成物。

【0299】

８６．前記幹細胞培養物が、成体幹細胞培養物、例えば、間葉系幹細胞培養物または誘導多能性幹細胞（ＩＰＳＣ）培養物、前駆細胞培養物または前駆体細胞培養物である、項目１～８３のいずれか１つに記載の組成物。

【0300】

８７．前記幹細胞培養物が胚性幹細胞培養物である、項目１～８３のいずれか１つに記載の組成物。

【0301】

８８．前記幹細胞培養物が造血幹細胞培養物である、項目１～８３のいずれか１つに記載の組成物。

【0302】

８９．前記幹細胞培養物がＣＤ３４陽性細胞（ＣＤ３４^＋細胞）を含む、項目１～８３のいずれか１つに記載の組成物。

【0303】

９０．前記組成物が、移植前の前記エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物の生存能力を維持するのに適している、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0304】

９１．前記組成物が、前記エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物を機能状態に維持するのに適している、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0305】

９２．前記組成物が、前記エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物を生理学的またはほぼ生理学的条件下で維持するのに適している、項目９１に記載の組成物。

【0306】

９３．前記組成物が臓器ケアシステムにおいて前記エクスビボの臓器を保存するのに適している、項目９１～９２のいずれか１つに記載の組成物。

【0307】

９４．１つ以上のさらなる薬剤をさらに含む、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0308】

９５．前記さらなる薬剤が、免疫抑制剤及び抗ウイルス剤からなる群から選択される、項目９４に記載の組成物。

【0309】

９６．前記抗ウイルス剤が、バルガンシクロビル、ガンシクロビル、シドフォビル、レフルノミド、プレビミス、マリバビル、及びブリンシドフォビルからなる群から選択される、項目９５に記載の組成物。

【0310】

９７．前記エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染及び／または病原体関連障害の予防または治療における使用のための、先行項目のいずれか１つに記載の組成物。

【0311】

９８．前記病原体による感染がＣＭＶ感染、例えば潜伏性及び／または溶解性のＣＭＶ感染である、項目９７に記載の使用のための組成物。

【0312】

９９．前記ＣＭＶ感染が、エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物において検出され得る、項目９８に記載の使用のための組成物。

【0313】

１００．前記組成物が、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）及び／または固形臓器移植移植片対宿主病（ＳＯＴ－ＧＶＨＤ）を予防またはその重症度を軽減する、項目９７～９９のいずれか１つに記載の使用のための組成物。

【0314】

１０１．エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染の予防または治療のためのキットであって、以下を含む前記キット：
ａ．項目１～９６のいずれか１つに記載の組成物と；
ｂ．任意選択で、使用説明書と。

【0315】

１０２．前記キットが、移植前の前記臓器、組織、及び／または幹細胞培養物の生存能力を維持するのにさらに適している、項目１０１に記載のキット。

【0316】

１０３．生理学的またはほぼ生理学的条件下でエクスビボの臓器を機能状態に維持するように構成された灌流システムであって、前記エクスビボの臓器を生理学的またはほぼ生理学的条件下で機能状態に維持するように構成された１つ以上のチャンバを含み、少なくとも１つのチャンバが項目１～９６のいずれか１つに記載の組成物を含む、前記灌流システム。

【0317】

１０４．前記灌流システムが臓器ケアシステムである、項目１０３に記載の灌流システム。

【0318】

１０５．移植前のエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染の治療または予防のための方法であって、項目１～９６のいずれか１つで定義される組成物中の前記エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物を浸漬、灌流、保存、調整及び／または洗い流すことを含む方法。

【0319】

１０６．前記方法が、移植前に前記エクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物の生存能力を維持するためのものである、項目１０５に記載の方法。

【0320】

１０７．前記灌流が約１時間～約１０時間、例えば約６時間実施される、項目１０５～１０６のいずれか１つに記載の方法。

【0321】

１０８．移植のためのエクスビボの臓器、組織、及び／または幹細胞培養物における病原体による感染の治療または予防のための項目１～９６のいずれか１つに記載の組成物の使用。

【実施例】

【0322】

実施例１：融合タンパク質ＳＹＮｘの第１のペプチドの変異は、細胞殺傷の選択性をもたらす
材料及び方法
誘導性のＵＳ２８またはＣＸ３ＣＲ１を発現するＨＥＫ２９３細胞
結合及び細胞殺傷アッセイのために、ＨｊｏｒｔｏｅＧＭｅｔａｌ．，２０１３に記載されているように細胞を構築した。簡潔に述べると、ＨＡ－ＣＸ３ＣＲ１及びＨＡ－ＵＳ２８を発現する細胞の安定した誘導可能なクローンは、Ｆｌｐ－ＩｎＴ－Ｒｅｘ－２９３細胞をＦｌｐ－リコンビナーゼ発現ベクター、ｐＯＧ４４、及びｐｃＤＮＡ５／ＦＲＴ／ＴＯ受容体構築物のいずれかで共トランスフェクトすることによって生成された。このＦＲＴ部位での標的化クローニングにより、受容体遺伝子はテトラサイクリンリプレッサー／オペレーターシステムの制御下に置かれる。受容体の発現はウェスタンブロッティングで確認した。細胞培養のために、細胞を加湿インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２）で１×ＤＭＥＭ（９％（ｖ／ｖ）のＦＢＳ、１８０Ｕ／ｍＬのペニシリン及び４５μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、１３．５μｇ／ｍＬのブラストサイジン及び１．３２ｍｇ／ｍＬのハイグロマイシンＢを含む）中で増殖させた。

【0323】

細胞殺傷アッセイ
１×ＰＢＳ中の２０μｇ／ｍＬのポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）の８０μＬを、白色の９６ウェルプレートのそれぞれのウェルに加え、室温で３０分間インキュベートした。誘導性のＵＳ２８またはＣＸ３ＣＲ１を発現するＨＥＫ２９３細胞を１０ｍＬの１×ＰＢＳで洗浄し、２ｍＬの０．０５％（ｗ／ｖ）トリプシン－ＥＤＴＡで２分間放出した。細胞を１０ｍＬの増殖培地（１×ＤＭＥＭ、９％（ｖ／ｖ）のＦＢＳ、１８０Ｕ／ｍＬのペニシリン及び４５μｇ／ｍＬのストレプトマイシン）に再懸濁し、次いで細胞密度を決定した。ＰＤＬ溶液をプレートから吸引し、それぞれのウェルを１００μＬの１×ＰＢＳで洗浄した。洗浄バッファーの吸引後、９６ウェルプレートに１００μＬで２，０００～１０，０００細胞／ウェルを播種し、ＣＯ２インキュベーター（３７℃、１０％ＣＯ２）に一晩置いた。

【0324】

受容体発現のために、選択なしの増殖培地中で１０μＬのテトラサイクリン、１．３７５μｇ／ｍＬのＵＳ２８及び５．５μｇ／ｍＬのＣＸ３ＣＲ１をプレートのそれぞれのウェルに加え、プレートをＣＯ２インキュベーター（３７℃、１０％ＣＯ２）に一晩戻した。

【0325】

融合毒素タンパク質アリコートを氷上で解凍し、１ｍＭの酢酸及び５ｇ／ＬのＢＳＡで希釈系列を作製するために使用した。受容体発現増殖培地を吸引し、１００μＬの新鮮な増殖培地と交換した。融合毒素タンパク質希釈系列５μＬをそれぞれのウェルに加え、陽性対照として１ｇ／Ｌのシクロヘキシミド５μＬを１つのウェルに加えた。プレートをＣＯ２インキュベーター（３７℃、１０％ＣＯ２）に一晩戻した。

【0326】

アッセイ増殖培地中のＡｌａｍａｒＢｌｕｅの１：１０希釈物を調製した。溶液をアルミホイルで覆い、３７℃の水浴で１０分間加熱し、次いで０．２μｍフィルターでろ過した。ウェル溶液を吸引し、１００μＬのＡｌａｍａｒＢｌｕｅ溶液をそれぞれのウェルに加え、プレートをＣＯ２インキュベーター（３７℃、１０％ＣＯ２）に４時間戻した。蛍光データは、５４０ｎｍの励起と５８５ｎｍの発光を使用して、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ３で収集された。

【0327】

結果
ＳＹＮｘの細胞殺傷効率は、ＵＳ２８などのウイルスによってコードされる受容体またはＣＸ３ＣＲ１などの内在性受容体のいずれかを発現するテトラサイクリン誘導ＨＥＫ２９３細胞と、受容体発現のない非誘導細胞（陰性対照）を使用して決定された。データは、生細胞の最大数に正規化された。

【0328】

ＳＹＮｘの第１のペプチド（ここではケモカイン部分）の単一アミノ酸を置換すると、図２に示すように、ウイルスにコードされる受容体ＵＳ２８に対する選択性をもたらす。タンパク質の第１のペプチド（受容体結合部分）の単一変異（Ｆ４９Ａ、前駆体のナンバリングを使用してＦ７３Ａに対応）は、内在性受容体、ここではＣＸＣ３Ｒ１に対する選択性が低くなる（図２Ｂ）。

【0329】

結論
融合タンパク質構築物の第１のペプチド（例えば、ケモカイン部分）における単一アミノ酸Ｆ４９Ａ置換は、ウイルスにコードされる受容体ＵＳ２８に対する融合タンパク質（ＳＹＮｘ）の選択性を誘導する。

【0330】

実施例２：外毒素Ａの全長転座ドメインを介してフューリン切断部位を付加することによって得られる効力の増加
材料及び方法
実施例１を参照されたい。

【0331】

結果
ＳＹＮｘの細胞殺傷効率は、ウイルスによってコードされる受容体ＵＳ２８または内在性受容体ＣＸ３ＣＲ１のいずれかを発現するテトラサイクリン誘導ＨＥＫ２９３細胞と、受容体発現のない非誘導細胞（陰性対照）を使用して決定された。データは、生細胞の最大数に正規化された。ＳＹＮ０１６を生成するＳＹＮ００１構築物に完全長転座ドメインなどのフューリン切断部位を追加すると、図３及び表１に示すように、内在性／ヒトＣＸ３ＣＲ１及び病原体にコードされるＵＳ２８受容体を発現する細胞の両方で効力が増加する。

【0332】

結論
外毒素ＡのドメインＩＩは、エンドサイトーシス小胞からサイトゾルへの触媒ドメインであるドメインＩＩＩの移動に関与する転座ドメインとして同定されている（ＨｗａｎｇＪｅｔａｌ．，１９８７；ＳｉｅｇａｌｌＣＢｅｔａｌ．，１９８９）。外毒素ＡのドメインＩＩなどのフューリン切断部位を含む転座ドメインをＳＹＮ００１に付加してＳＹＮ０１６を生成すると、内在性受容体ＣＸ３ＣＲ１とウイルスにコードされる受容体ＵＳ２８の両方で効力が増加した融合タンパク質構築物が得られた。

【0333】

【表1】

【0334】

実施例３：ヒトフューリンによるＳＹＮｘのインビトロ切断
材料及び方法
ヒトフューリンによるＳＹＮｘのインビトロ切断
精製されたＳＹＮｘ構築物は実験台で解凍された。解凍したら、試料をスピンダウンした。試料の濃度を測定し、５ｍＭのＣａＣｌ２を含む１×ＰＢＳ中の新しいチューブで、５０μＬ中の２０μＭのＳＹＮｘで消化物を設定した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析のために５μｇを取り出した。１μＬのヒトフューリン（ＮＥＢ、２単位／μＬ）を混合物に加え、３７℃の水浴に入れた。１．５時間後、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析のために５μｇのＳＹＮｘを取り出した。ＳＹＮｘを添加する前に、反応混合物のｐＨを１ＭのＨＣＬまたは１ＭのＮａＯＨのいずれかで調整する。

【0335】

ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析の還元
試料を調製し、タンパク質マーカー標準とともに、製造業者のプロトコールに従って、２ｍＭのＤＴＴを含む１×ＭＥＳランニングバッファーを使用して、ＮｕＰＡＧＥＢｉｓ－Ｔｒｉｓ４－１２％ゲルで分析した。ゲルを１２５Ｖの定電圧で７５分間泳動した。ゲルは、ＳｉｍｐｌｙＢｌｕｅ（商標）ＳａｆｅＳｔａｉｎマニュアル（Ｎｏｖｅｘ）に従って染色された。

【0336】

結果
精製されたＳＹＮｘ構築物を精製されたヒトフューリンでインビトロで処理し、フューリンによるさまざまなＳＹＮｘ構築物の切断効率を決定した。フューリン以外の切断メカニズムが発生する可能性がある。結果をＳＤＳ－ＰＡＧＥで分析した。ＳＹＮ０００またはＳＹＮ００１に完全なＥｘｏＡ転座ドメインなどの完全な転座ドメインを付加すると、それぞれＳＹＮ０１７及びＳＹＮ０１６が生成され、フューリンによるインビトロ切断が改善される。それぞれＳＹＮ０１４とＳＹＮ００２を生成するＳＹＮ０１７とＳＹＮ０１６のフューリン切断部位の最適化は、図４に示すように、フューリンによるインビトロ切断をさらに改善するのではないらしい。

【0337】

精製されたＳＹＮ００２は、異なるｐＨ値で精製されたヒトフューリンでインビトロで処理され、切断効率を決定し、結果はＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析された。ＳＹＮ００２は、図５に示すように広いｐＨ範囲でフューリンによって切断される。

【0338】

結論
ＳＹＮ０１６のように、最適化された切断部位（この場合はＡｒｇＧｌｎＡｒｇＡｒｇ）をＳＹＮｘ構築物（ここでは転座ドメインも含むＳＹＮ００２構築物）に付加しても、天然配列（ＡｒｇＧｌｎＰｒｏＡｒｇ）を有する構築物と比較して、フューリンによるインビトロ切断が改善されなかった。ＳＹＮ００２は幅広いｐＨ範囲でインビトロで切断される可能性があり、エンドソームだけでなく、あらゆる細胞の場所でフューリンによる切断が発生する可能性があることを示唆している。

【0339】

実施例４：内在性受容体を発現する細胞とウイルスにコードされる受容体を発現する細胞との間の細胞殺傷選択性もまた、最適化された切断部位によって増強され、媒介される。
材料及び方法
実施例１を参照されたい。

【0340】

結果
ＳＹＮｘの細胞殺傷効率は、ＵＳ２８またはＣＸ３ＣＲ１のいずれかを発現するテトラサイクリン誘導ＨＥＫ２９３細胞と、受容体発現のない非誘導細胞（陰性対照）を使用して決定された。データは、生細胞の最大数に正規化された。

【0341】

最適化された切断部位ＡｒｇＸ１Ｘ２Ａｒｇを第２のペプチドに導入する場合、この特定の場合、最適化された切断部位ＡｒｇＧｌｎＡｒｇＡｒｇをＳＹＮ０１６に導入してＳＹＮ００２を得ると、選択性の驚くべき増加が得られる。ＵＳ２８などのウイルスにコードされる受容体を発現する細胞上のＳＹＮ００２の場合、切断部位ＡｒｇＧｌｎＰｒｏＡｒｇ（したがってＸ２＝Ｐｒｏ）を有するＳＹＮ０１６と比較して、細胞殺傷効力はほぼ維持される（図６Ａ、表１）。しかしながら、ＣＸ３ＣＲ１などの内在性受容体を発現する細胞に対する効力は低下するため（約０．９ｌｏｇ（ＥＣ５０））、図６Ｂを参照されたい）、副作用の少ないより効果的な薬物をサポートできる効果が得られる。最適化された切断部位を含まない第２のペプチドと比較すると、選択性と効力の両方が増加する。

【0342】

結論
細胞殺傷選択性に対する驚くべき効果は、切断部位の最適化によって得られる。いかなる理論にも拘束されることなく、これは、ＣＸ３ＣＲ１受容体などの内在性受容体に対するＵＳ２８受容体などのウイルスによってコードされる受容体の内部移行及び細胞内輸送の違いによる可能性がある。

【0343】

実施例５：肺のエクスビボ研究でのＳＹＮ００２の使用安定性
背景とまとめ
エクスビボ肺灌流（ＥＶＬＰ）システムでＳＹＮ００２（配列番号６）を試験する前に、灌流液（灌流液）中でのその安定性を調査した。ＥＶＬＰの間、人工呼吸器と灌流回路に接続されたインキュベーターに肺が置かれ、移植前に臓器からサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）を除去するためにＳＹＮ００２を添加する可能性がある。ＳＹＮ００２を灌流液に添加できるようになった後、最初の１時間で肺を３７℃まで徐々に加熱する。

【0344】

エクスビボ研究に使用されるＳＹＮ００２基準試料は、１０ｍＭのクエン酸及び３００ｍＭのＬ－アルギニンｐＨ６．５中で製剤化される。ＳＹＮ００２の効力が高いため、有効性と毒性に関するエクスビボ試験は非常に低濃度で実施される。この研究では、ＳＹＮ００２は約１．９～３７ｎＭ（それぞれ０．０８５～１．７ｍｇ／Ｌ）で試験された。

【0345】

この研究におけるＳＹＮ００２濃度は非常に低いため、典型的な分析方法は適用できない。したがって、効力アッセイが、安定性の尺度として使用されている。

【0346】

ＳＹＮ００２の安定性は、濃度範囲０．０８５～１．７ｍｇ／ＬのＥＶＬＰ灌流液で、３７℃で５時間、ポリプロピレンの容器に曝露した場合に示された。

【0347】

ＳＹＮ００１（配列番号１２）の安定性は、１ｍｇ／Ｌの濃度のＥＶＬＰ灌流液においても、３７℃で５時間にわたって、ポリプロピレンの容器に曝露して示された。

【0348】

材料及び方法
この実施例例の灌流液は、次のもので構成されていた。

【0349】

・２ＬのＳｔｅｅｎ溶液（ＸＶＩＶＯ，Ｓｗｅｄｅｎ）。
・ＳＴＥＥＮ溶液（商標）は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）とデキストラン４０を含む透明、無菌、非発熱性、非毒性の生理食塩水で、ドナーから摘出後の摘出肺の評価のための一時的な連続機械灌流溶液として使用するように設計されている。
・デキストランは、細菌が産生する不均一なグルコースポリマーであり、帯電していない。

【0350】

・５００ｍｇのメチルプレドニゾロン（Ｓｏｌｕ－Ｍｅｄｒｏｌ，ＳａｎｄｏｚＣａｎａｄａ，Ｂｏｕｃｈｅｒｖｉｌｌｅ，Ｃａｎａｄａ）
・メチルプレドニゾロンは、さまざまな臓器系、内分泌疾患、及び腫瘍性疾患の炎症または免疫反応を治療するために使用されるコルチコステロイドである。

【0351】

・３，０００ＩＵの未分画ヘパリン（ＬｅｏＰｈａｒｍａ，Ｔｈｏｒｎｈｉｌｌ，Ｃａｎａｄａ）
・ヘパリンは、血栓予防ならびに肺塞栓症及び心房細動などのさまざまな状態に関連する血栓症の治療に適応される抗凝固剤である。
・未分画ヘパリンは、３，０００～３０，０００Ｄａの範囲の重量のアニオン性硫酸化グリコサミノグリカンポリマーの不均一な調製物である。

【0352】

・５００ｍｇ（それぞれ）イミペネム／シラスタチン（Ｐｒｉｍａｘｉｎ，Ｍｅｒｃｋ，Ｗｈｉｔｅ－ｈｏｕｓｅＳｔａｔｉｏｎ，ＮＪ）
・イミペネムは、グラム陰性菌及びグラム陽性菌の好気性及び嫌気性細菌に対する広範囲の抗菌活性である、さまざまな感染症を治療するために通常シラスタチンとともに投与されるカルバペネム系抗生剤である。
・シラスタチンは、イミペネムの分解を防ぐために使用される腎臓のデヒドロペプチダーゼ阻害剤である。

【0353】

ＳＹＮ００１（配列番号１２）及びＳＹＮ００２（配列番号６）は、以下に示す濃度で試験され、所定の時点でサンプリングされた：

【表2】

【0354】

簡潔に述べると、ＳＹＮ００１とＳＹＮ００２の効力は、ＵＳ２８発現ＨＥＫ２９３細胞で決定された。ＵＳ２８は、ＳＹＮ００２を認識して内部移行するウイルスＧＰＣＲ受容体である。効力は、ＳＹＮ００１またはＳＹＮ００２の濃度を増加させた場合の細胞生存率に対するＳＹＮ００１またはＳＹＮ００２の細胞毒性効果を測定することによって決定される。ＳＹＮ００１またはＳＹＮ００２処置期間後の生存細胞のレベルを蛍光アッセイで評価し、それぞれＳＹＮ００１またはＳＹＮ００２濃度の関数としてプロットする。蛍光が高いほど、測定された細胞の生存率が高くなるため、ＳＹＮ００１またはＳＹＮ００２試料の効力が低くなる。

【0355】

安定性のために使用される容器：ポリプロピレン製の低タンパク結合チューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔｋカタログ番号７２．７０６．６００）。

【0356】

結果
選択したタイムプルポイントを効力アッセイで分析し、ＳＹＮ００１またはＳＹＮ００２の効力が３７℃での灌流液への曝露により経時的に失われたかどうかを判断した。

【0357】

１ｍｇ／Ｌの試料から作成したＳＹＮ００１希釈系列について、３７℃で０、１５、１８０、及び３００分間の灌流液曝露後の効力アッセイを図７に示す。

【0358】

１．７ｍｇ／Ｌ、０．８５ｍｇ／Ｌ、及び０．０８５ｍｇ／Ｌの試料から作成されたＳＹＮ００２希釈系列について、３７℃で０、１５、１８０、及び３００分間の灌流液曝露後の効力アッセイをそれぞれ図８、９、及び１０に示す。

【0359】

最低濃度のＳＹＮ００２も、３０、６０、及び１１４０分の時点での効力アッセイで評価された（図１１及び１２を参照されたい）。

【0360】

図７から１２までのすべてのＥＣ_５０値を以下の表に要約する。

【0361】

【表3】

【0362】

結論
ＳＹＮ００１及びＳＹＮ００２の安定性は、効力アッセイを読み出しとして使用して調べた。

【0363】

ＳＹＮ００１の安定性は、１ｍｇ／Ｌの濃度のＥＶＬＰ灌流液において、３７℃で５時間にわたって、ポリプロピレンの容器に曝露して示された。

【0364】

ＳＹＮ００２の安定性は、濃度範囲０．０８５～１．７ｍｇ／ＬのＥＶＬＰ灌流液で、３７℃で５時間、ポリプロピレンの容器に曝露した場合に示された。最低濃度のＳＹＮ００２は１９時間後にその効力の一部を失ったように見えるが、この時点は臨床ＥＶＬＰでは適切でないと考えられており、より長い暴露で負の効果が誘発されるかどうかを確認するために選択された。ＳＹＮ００２の灌流液への５時間の暴露は、ヒトの肺とＳＹＮ００２を使用した初期の前臨床試験の安定性を確認するのに十分な試験とみなされる。

【0365】

実施例６：ＳＹＮ００２を使用したエクスビボの臓器ケア
肺
正常体温のエクスビボ肺灌流プロトコール
ドナーの肺が回収された直後に、肺は低カリウム溶液で洗い流され、膨張した状態で４℃で保存される。左心房（ＬＡ）と主肺動脈（ＰＡ）のカニューレを挿入し、気管内チューブを留置する。回路は、５００ｍｇのメチルプレドニゾロン（Ｓｏｌｕ－Ｍｅｄｒｏｌ，ＳａｎｄｏｚＣａｎａｄａ，Ｂｏｕｃｈｅｒｖｉｌｌｅ，Ｃａｎａｄａ）、３，０００ＩＵの未分画ヘパリン（ＬｅｏＰｈａｒｍａ，Ｔｈｏｒｎｈｉｌｌ，Ｃａｎａｄａ）及び５００ｍｇのイミペネム／シラスタチン（Ｐｒｉｍａｘｉｎ，Ｍｅｒｃｋ，Ｗｈｉｔｅ－ｈｏｕｓｅＳｔａｔｉｏｎ，ＮＪ）を含む２．０ＬのＥＶＬＰ灌流液（Ｓｔｅｅｎ溶液、ＸＶＩＶＯ，Ｓｗｅｄｅｎ）でプライミングされる。肺はカニューレを介してＥＶＬＰ回路に接続され、灌流の最初の１時間で、ドナー予測心拍出量の４０％の目標流量でゆっくりと正常体温が達成される。ＩＣＵ人工呼吸器を使用して灌流中に保護換気を適用する（ドナー理想体重１ｋｇあたり７ｃｃ、吸気酸素分率２１％、呼気終末圧５ｃｍＨ_２Ｏ）。

【0366】

肺の評価：１時間ごとに、重要な生理学的パラメーター、例えば移植片の酸素供給、肺の伸展性、気道内圧、灌流液の消費、及び灌流液の代謝産物が記録される。

【0367】

灌流液（灌流液）：５００ｍｇのメチルプレドニゾロン、３０００ＩＵの未分画ヘパリン、５００ｍｇのイミペネム、及び５００ｍｇのシラスタチンを含む２Ｌのスティーン溶液。

【0368】

ＳＹＮ００２を含む灌流液：必要量の希釈したＳＹＮ００２を灌流バッファー（参照：ＳＹＮ００２の調製）に加え、すぐに、ただし溶液の調製後１５分以内に、灌流液＋／－ＳＹＮ００２で灌流を開始する。

【0369】

灌流温度：最初の１時間は３７℃までゆっくりと温度を上げ、その後、処理時間中（５時間）は３７℃にする。

【0370】

灌流時間：６時間（１時間の肺のプライミング、続いてＳＹＮ００２を含む５時間の灌流）。

【0371】

システムへの灌流液の追加：最初の１時間（１時間）に５００ｍＬの新鮮な灌流液を追加し、続いて１時間ごとに２００ｍＬの灌流液を追加する（２～６時間）。回路に追加される灌流液は、評価されるそれぞれの用量群の濃度でＳＹＮ００２を含むものとする。

【0372】

洗い流し：灌流の最後に、２ＬのＰｅｒｆａｄｅｘ溶液（２分間）を追加して、灌流バッファーを洗い流し、肺を冷却する。

【0373】

腎臓
無細胞正常体温機械灌流（ＮＭＰ）
氷上で輸送し、移植研究所に到着した後、腎臓はＮＭＰ灌流の期間を経る（６時間）。腎臓をＮＭＰ回路に接続し、リンガー液とヒト血清アルブミンを含む無細胞溶液５００ｍＬを（３５～３７℃）で４～６時間灌流する。

【0374】

灌流液は腎臓に流れ込み、腎内抵抗と温度は灌流全体でモニタリングされる。

【0375】

ＳＹＮ００２は、ＣＭＶを処理するために灌流液に追加される。

【0376】

配列の概要
配列番号１（例示的な第１のペプチド）ＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＦＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＧ

配列番号２（例示的な第２のペプチド）
ＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＲＲＧＷＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰ

配列番号３（外毒素ＡのドメインＡ）
ＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＲＲＧＷＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳ

配列番号４（外毒素ＡのドメインＢ）
ＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰ

配列番号５（外毒素ＡのドメインＣ）
ＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰ

配列番号６（ＳＹＮ００２）
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配列番号７（ヒトＣＸ３ＣＬ１）
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配列番号８（細胞内逆行性輸送のためのＫＤＥＬ受容体への結合を確保する配列）
ＫＤＥＬ

配列番号９（全長外毒素Ａ）
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配列番号１０（ＵＳ２８）
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配列番号１１（ＳＹＮ０００）
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配列番号１２（ＳＹＮ００１）
ＭＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＡＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＲＱＰＲＧＷＥＱＬＥＱＳＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＫＤＥ

配列番号１３（ＳＹＮ０１４）
ＭＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＦＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＧＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＲＲＧＷＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＫＤＥＬ

配列番号１４（ＳＹＮ０１６）
ＭＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＡＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＧＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＰＲＧＷＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＫＤＥＬ

配列番号１５（ＳＹＮ０１７）
ＭＱＨＨＧＶＴＫＣＮＩＴＣＳＫＭＴＳＫＩＰＶＡＬＬＩＨＹＱＱＮＱＡＳＣＧＫＲＡＩＩＬＥＴＲＱＨＲＬＦＣＡＤＰＫＥＱＷＶＫＤＡＭＱＨＬＤＲＱＡＡＡＬＴＲＮＧＧＧＳＬＡＡＬＴＡＨＱＡＣＨＬＰＬＥＴＦＴＲＨＲＱＰＲＧＷＥＱＬＥＱＣＧＹＰＶＱＲＬＶＡＬＹＬＡＡＲＬＳＷＮＱＶＤＱＶＩＲＮＡＬＡＳＰＧＳＧＧＤＬＧＥＡＩＲＥＱＰＥＱＡＲＬＡＬＴＬＡＡＡＥＳＥＲＦＶＲＱＧＴＧＮＤＥＡＧＡＡＳＧＰＡＤＳＧＤＡＬＬＥＲＮＹＰＴＧＡＥＦＬＧＤＧＧＤＩＳＦＳＴＲＧＴＱＮＷＴＶＥＲＬＬＱＡＨＲＱＬＥＥＲＧＹＶＦＶＧＹＨＧＴＦＬＥＡＡＱＳＩＶＦＧＧＶＲＡＲＳＱＤＬＤＡＩＷＲＧＦＹＩＡＧＤＰＡＬＡＹＧＹＡＱＤＱＥＰＤＡＲＧＲＩＲＮＧＡＬＬＲＶＹＶＰＲＳＳＬＰＧＦＹＲＴＧＬＴＬＡＡＰＥＡＡＧＥＶＥＲＬＩＧＨＰＬＰＬＲＬＤＡＩＴＧＰＥＥＥＧＧＲＬＥＴＩＬＧＷＰＬＡＥＲＴＶＶＩＰＳＡＩＰＴＤＰＲＮＶＧＧＤＬＤＰＳＳＩＰＤＫＥＱＡＩＳＡＬＰＤＹＡＳＱＰＧＫＰＰＫＤＥＬ

配列番号１６（切断部位）
ＲＱＲＲ

配列番号１７（切断部位）
ＲＱＫＲ

配列番号１８（切断部位）
ＲＳＫＲ

配列番号１９（切断部位）
ＲＳＲＲ

配列番号２０（切断部位）
ＲＴＫＲ

配列番号２１（切断部位）
ＲＴＲＲ

配列番号２２（切断部位）
ＲＮＫＲ

配列番号２３（切断部位）
ＲＮＲＲ

【0377】

参照文献
Ｃｈａｍｂｅｒｓ，ＤａｎｉｅｌＣｅｔａｌ．“ＴｈｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＴｈｏｒａｃｉｃＯｒｇａｎＴｒａｎｓｐｌａｎｔＲｅｇｉｓｔｒｙｏｆｔｈｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＳｏｃｉｅｔｙｆｏｒＨｅａｒｔａｎｄＬｕｎｇＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：３７ｔｈａｄｕｌｔｌｕｎｇｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｒｅｐｏｒｔ－２０２０；ｆｏｃｕｓｏｎｄｅｃｅａｓｅｄｄｏｎｏｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ．”ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆｈｅａｒｔａｎｄｌｕｎｇｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｔｈｅｏｆｆｉｃｉａｌｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＳｏｃｉｅｔｙｆｏｒＨｅａｒｔＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｖｏｌ．３９，１０（２０２０）：１０１６－１０２７．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｈｅａｌｕｎ．２０２０．０７．００９

ＨｗａｎｇＪｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ．１９８７Ｊａｎ１６；４８（１）：１２９－３６；

ＳｉｅｇａｌｌＣＢｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ．１９８９Ａｕｇ２５；２６４（２４）：１４２５６－６１）．

【図1】