特表 2024-509916 インテグリンヘテロ二量体に対する抗体およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-05

(54)【発明の名称】インテグリンヘテロ二量体に対する抗体およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20240227BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20240227BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240227BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240227BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240227BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240227BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240227BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20240227BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240227BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20240227BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240227BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240227BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20240227BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13 ZNA

C12N15/62 Z

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

C07K16/28

C07K16/46

A61K39/395 T

A61P35/04

A61P35/00

A61P35/02

A61P43/00 121

A61K39/395 U

A61K48/00

A61K31/7088

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023555222

(86)(22)【出願日】2022-03-08

(85)【翻訳文提出日】2023-11-07

(86)【国際出願番号】 IB2022052070

(87)【国際公開番号】W WO2022189978

(87)【国際公開日】2022-09-15

(31)【優先権主張番号】63/158,769

(32)【優先日】2021-03-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

２．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】506222292

【氏名又は名称】ザ ガバニング カウンシル オブ ザ ユニバーシティ オブ トロント

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100122301

【弁理士】

【氏名又は名称】冨田 憲史

(74)【代理人】

【識別番号】100157956

【弁理士】

【氏名又は名称】稲井 史生

(74)【代理人】

【識別番号】100170520

【弁理士】

【氏名又は名称】笹倉 真奈美

(74)【代理人】

【識別番号】100221545

【弁理士】

【氏名又は名称】白江 雄介

(72)【発明者】

【氏名】シドゥ，サチデブ エス

(72)【発明者】

【氏名】ガッロ，エウジェニオ

(72)【発明者】

【氏名】アダムズ，ジャレット ジェイ

(72)【発明者】

【氏名】ブレイザー，レビ リン

(72)【発明者】

【氏名】カルダレッリ，ロディリア

(72)【発明者】

【氏名】ケリル，アブデラリ

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064CE12

4B064DA05

4B065AA26X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4B065CA46

4C084AA13

4C084NA05

4C084ZB26

4C084ZB27

4C084ZC75

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB01

4C085BB11

4C085BB36

4C085BB41

4C085BB43

4C085CC23

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA05

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZC75

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA28

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】

本開示は、ヒトＩＴＧＡｖ／Ｂ１と結合する抗体、およびその使用の方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、対象におけるがんを処置する方法であって、対象に、抗ＩＴＧＡｖ／Ｂ１抗体を投与することを含む、方法を対象とする。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合し、インテグリン－αｖに媒介されるＴＧＦβの活性化を阻害する、二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項2】

少なくとも第１のパラトープおよび第２のパラトープを含み、第１のパラトープが、インテグリンαｖβ１ヘテロ二量体上の第１のエピトープと結合する、請求項１に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項3】

第２のパラトープが、インテグリンαｖβ１ヘテロ二量体上の第２のエピトープと結合する、請求項２に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項4】

第１のエピトープおよび第２のエピトープが同じではない、請求項３に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項5】

第１の重鎖、第１の軽鎖、第２の重鎖、および第２の軽鎖を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項6】

第１の重鎖および第２の重鎖が異なる、請求項５に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項7】

第１の重鎖および第２の重鎖が異なり、第１の軽鎖および第２の軽鎖が同じである、請求項５または６に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項8】

第１の重鎖が、可変重鎖相補性決定領域（ＶＨ１－ＣＤＲ）１、ＶＨ１－ＣＤＲ２、およびＶＨ１－ＣＤＲ３を含む第１の可変重鎖領域（「ＶＨ１」）を含み、ＶＨ１－ＣＤＲ３が、配列番号５、１５、および２５から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５から７のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項9】

ＶＨ１－ＣＤＲ２が、配列番号４、１４、および２４から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項10】

ＶＨ１－ＣＤＲ１が、配列番号３、１３、および２３から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項８または９に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項11】

第１の軽鎖が、ＶＬ１－ＣＤＲ１、ＶＬ１－ＣＤＲ２、およびＶＬ１－ＣＤＲ３を含む第１の可変軽鎖領域（「ＶＬ１」）を含み、ＶＬ１－ＣＤＲ３が、配列番号１０、２０、および３０から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５から１０のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項12】

ＶＬ１－ＣＤＲ２が、配列番号９、１９、および２９から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項13】

ＶＬ１－ＣＤＲ１が、配列番号８、１８、および２８から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１１または１２に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項14】

（ａ）配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ２、
（ｃ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ２、および
（ｆ）配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ３
を含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項15】

（ａ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ２、
（ｃ）配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ２、および
（ｆ）配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ３
を含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項16】

（ａ）配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ２、
（ｃ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ２、および
（ｆ）配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ３
を含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項17】

（ａ）配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ１、
（ｂ）配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ２、
（ｃ）配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ３、
（ｄ）配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ１、
（ｅ）配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ２、および
（ｆ）配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ３
を含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項18】

第２の重鎖が、ＶＨ２－ＣＤＲ１、ＶＨ２－ＣＤＲ２、およびＶＨ２－ＣＤＲ３を含む第２の可変重鎖領域（「ＶＨ２」）を含み、ＶＨ２－ＣＤＲ３が、配列番号５、１５、および２５から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５から１７のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項19】

ＶＨ２－ＣＤＲ２が、配列番号４、１４、および２４から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項20】

ＶＨ２－ＣＤＲ１が、配列番号３、１３、および２３から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１８または１９に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項21】

第２の軽鎖が、ＶＬ２－ＣＤＲ１、ＶＬ２－ＣＤＲ２、およびＶＬ２－ＣＤＲ３を含む第２の可変軽鎖領域（「ＶＬ１」）を含み、ＶＬ２－ＣＤＲ３が、配列番号２０および３０から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１８から２０のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項22】

ＶＬ２－ＣＤＲ２が、配列番号１９および２９から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項23】

ＶＨ２－ＣＤＲ１が、配列番号１８および２８から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２１または２２に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項24】

（ａ）ａ．配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ２、および
ｃ．配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ３
を含む、第１の可変重鎖領域（ＶＨ１）、
（ｂ）ａ．配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ２、および
ｃ．配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ３
を含む、第１の可変軽鎖領域（ＶＬ１）、
（ｃ）ａ．配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ２－ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ２－ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ２－ＣＤＲ３
を含む、第２の可変重鎖領域（ＶＨ２）、ならびに
（ｄ）ａ．配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ２－ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ２－ＣＤＲ２、および
ｃ．配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ２－ＣＤＲ３
を含む、第２の可変軽鎖領域（ＶＬ２）
を含む、請求項１から２３のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項25】

（ａ）ａ．配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ２、および
ｃ．配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ３
を含む、第１の可変重鎖領域（ＶＨ１）、
（ｂ）ａ．配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ２、および
ｃ．配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ３
を含む、第１の可変軽鎖領域（ＶＬ１）、
（ｃ）ａ．配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ２－ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ２－ＣＤＲ２、
ｃ．配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ２－ＣＤＲ３
を含む、第２の可変重鎖領域（ＶＨ２）、ならびに
（ｄ）ａ．配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ２－ＣＤＲ１、
ｂ．配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ２－ＣＤＲ２、および
ｃ．配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ２－ＣＤＲ３
を含む、第２の可変軽鎖領域（ＶＬ２）
を含む、請求項１から２３のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項26】

第１の可変重鎖領域（ＶＨ１）および第１の可変軽鎖領域（ＶＬ１）を含み、ＶＨ１が、配列番号２、１２、または２２から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１から２５のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項27】

ＶＬ１が、配列番号７、１７、または２７から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２６に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項28】

第２の可変重鎖領域（ＶＨ２）および第２の可変軽鎖領域（ＶＬ２）を含み、ＶＨ２が、配列番号２、１２、または２２から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２６または２７に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項29】

ＶＬ２が、配列番号７、１７、または２７から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２６から２８のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項30】

ａ．ＶＨ１が、配列番号２に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｂ．ＶＬ１が、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｃ．ＶＨ２が、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｄ．ＶＬ２が、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
請求項２８または２９に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項31】

ａ．ＶＨ１が、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｂ．ＶＬ１が、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｃ．ＶＨ２が、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｄ．ＶＬ２が、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含む、
請求項２８から３０のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項32】

ａ．ＶＨ１が、配列番号２に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｂ．ＶＬ１が、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｃ．ＶＨ２が、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｄ．ＶＬ２が、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
請求項２８または２９に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項33】

ａ．ＶＨ１が、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｂ．ＶＬ１が、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｃ．ＶＨ２が、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｄ．ＶＬ２が、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含む、
請求項２８、２９、および３２のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項34】

第１の重鎖（Ｈ１）および第１の軽鎖（Ｌ１）を含み、Ｈ１が、配列番号１、１１、２１、３１、３４、または３７から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項35】

Ｌ１が、配列番号６、１６、または２６から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３４に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項36】

第２の重鎖（Ｈ２）および第２の軽鎖（Ｌ２）を含み、Ｈ２が、配列番号１、１１、２１、３１、３４、または３７から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３４または３５に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項37】

Ｌ２が、配列番号６、１６、または２６から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３４から３６のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項38】

第１の重鎖が、第２の重鎖と会合している、請求項５から３７のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項39】

第１の重鎖が、共有結合によって、第２の重鎖と会合している、請求項５から３８のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項40】

第１の重鎖および第２の重鎖のそれぞれが、ＩｇＧ定常領域または１つもしくは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ定常領域を含む、請求項５から３９のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項41】

１つまたは複数のアミノ酸置換が、第１の重鎖および第２の重鎖のヘテロ二量体化を促進する、請求項４０に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項42】

第１の重鎖が、第１の重鎖の定常領域に、ノブを作成する１つまたは複数のアミノ酸の置換を含み、第２の重鎖が、第２の重鎖の定常領域に、ホールを作成する１つまたは複数のアミノ酸の置換またはその抗原結合部分を含み、第１の重鎖のノブが、第２の重鎖のホールと会合する、請求項５から４１のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項43】

第１の重鎖が、第１の重鎖の定常領域に、ホールを作成する１つまたは複数のアミノ酸の置換を含み、第２の重鎖が、第２の重鎖の定常領域に、ノブを作成する１つまたは複数のアミノ酸の置換を含み、第１の重鎖のホールが、第２の重鎖のノブと会合する、請求項５から４１のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項44】

ａ．Ｈ１が、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｂ．Ｌ１が、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｃ．Ｈ２が、配列番号３４に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｄ．Ｌ２が、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
請求項３４から４３のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項45】

ａ．Ｈ１が、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｂ．Ｌ１が、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｃ．Ｈ２が、配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｄ．Ｌ２が、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含む、
請求項３４から４４のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項46】

ａ．Ｈ１が、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｂ．Ｌ１が、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｃ．Ｈ２が、配列番号３７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｄ．Ｌ２が、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
請求項３４から４３のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項47】

ａ．Ｈ１が、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｂ．Ｌ１が、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｃ．Ｈ２が、配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｄ．Ｌ２が、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含む、
請求項３４から４３および４６のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項48】

二重特異性抗体が、
（ａ）二重特異性抗体が、インテグリン－αｖβ１のＬＡＰ－ＴＧＦβ１との結合を阻害すること、
（ｂ）二重特異性抗体が、αｖβ１、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、αｖβ８、およびこれらの任意の組合せから選択されるインテグリンαｖと結合することができること、
（ｃ）二重特異性抗体が、細胞接着を阻害すること、
（ｄ）二重特異性抗体が、腫瘍成長および／または転移を阻害すること、
（ｅ）二重特異性抗体が、無増悪生存期間を増大させること、
（ｆ）二重特異性抗体が、全生存期間を増大させること、ならびに
（ｇ）これらの任意の組合せ
からなる群から選択される１つまたは複数の特性を有する、請求項１から４７のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項49】

（ｉ）インテグリン－αｖβ１のＬＡＰ－ＴＧＦβ１との結合を阻害すること、および（ｉｉ）細胞接着を阻害することが可能である、請求項１から４８のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項50】

約１０^－６Ｍ以下、約１０^－７Ｍ以下、約１０^－８Ｍ以下、約１０^－９Ｍ以下、約１０^－１０Ｍ以下、約１０^－１１Ｍ以下、または約１０^－１２Ｍ以下のＫ_Ｄで、インテグリン－αｖと結合する、請求項１から４９のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分。

【請求項51】

インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖相補性決定領域（ＶＨ－ＣＤＲ）１、ＶＨ－ＣＤＲ２、およびＶＨ－ＣＤＲ３を含む可変重鎖領域（「ＶＨ」）、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、およびＶＬ－ＣＤＲ３を含む可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５、１５、または２５のアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分。

【請求項52】

ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４、１４、または２４のアミノ酸配列を含む、請求項５１に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項53】

ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３、１３、または２３のアミノ酸配列を含む、請求項５１または５２に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項54】

ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１０、２０、または３０のアミノ酸配列を含む、請求項５１から５３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項55】

ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９、１９、または２９のアミノ酸配列を含む、請求項５４に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項56】

ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号８、１８、または２８のアミノ酸配列を含む、請求項５１または５２に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項57】

インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖相補性決定領域（ＶＨ－ＣＤＲ）１、ＶＨ－ＣＤＲ２、およびＶＨ－ＣＤＲ３を含む可変重鎖領域（「ＶＨ」）、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、およびＶＬ－ＣＤＲ３を含む可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、
ａ．ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｂ．ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｃ．ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｄ．ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｅ．ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｆ．ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を含む、
単離された抗体またはその抗原結合部分。

【請求項58】

インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖相補性決定領域（ＶＨ－ＣＤＲ）１、ＶＨ－ＣＤＲ２、およびＶＨ－ＣＤＲ３を含む可変重鎖領域（「ＶＨ」）、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、およびＶＬ－ＣＤＲ３を含む可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、
ａ．ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｂ．ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｃ．ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｄ．ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｅ．ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｆ．ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含む、
単離された抗体またはその抗原結合部分。

【請求項59】

インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖相補性決定領域（ＶＨ－ＣＤＲ）１、ＶＨ－ＣＤＲ２、およびＶＨ－ＣＤＲ３を含む可変重鎖領域（「ＶＨ」）、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、およびＶＬ－ＣＤＲ３を含む可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、
ａ．ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｂ．ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｃ．ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｄ．ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｅ．ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含み、
ｆ．ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含む、
単離された抗体またはその抗原結合部分。

【請求項60】

抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変領域（「ＶＨ」）および軽鎖可変領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨが、配列番号２、１２、および２２から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５１から５９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項61】

抗体またはその抗原結合部分が、重鎖可変領域（「ＶＨ」）および軽鎖可変領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＬが、配列番号７、１７、および２７から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５１から６０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項62】

ａ．ＶＨが、配列番号２から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
ｂ．ＶＨが、配列番号１２から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または
ｃ．ＶＨが、配列番号２２から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
請求項５１から６１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項63】

ａ．ＶＨが、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含む、
ｂ．ＶＨが、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含む、または
ｃ．ＶＨが、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含む、
請求項５１から６２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項64】

抗体またはその抗原結合部分が、重鎖（「ＨＣ」）および軽鎖（「ＬＣ」）を含み、ＨＣが、配列番号１、１１、および２１から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５１から６３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項65】

ＬＣが、配列番号６、１６、および１６から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項６４に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項66】

抗体またはその抗原結合部分が、重鎖（「ＨＣ」）および軽鎖（「ＬＣ」）を含み、ＨＣが、配列番号１、１１、および２１から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５１から６５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項67】

ＬＣが、配列番号６、１６、および２６から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項６４から６６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項68】

抗体またはその抗原結合部分が、重鎖（「ＨＣ」）および軽鎖（「ＬＣ」）を含み、
ａ．ＨＣが、配列番号１に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＬＣが、配列番号６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
ｂ．ＨＣが、配列番号１１に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＬＣが、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または
ｃ．ＨＣ、配列番号２１に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＬＣが、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
請求項５１から６７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項69】

抗体またはその抗原結合部分が、重鎖（「ＨＣ」）および軽鎖（「ＬＣ」）を含み、ＨＣが、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含み、ＬＣが、配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項５１から６８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項70】

抗体またはその抗原結合部分が、重鎖（「ＨＣ」）および軽鎖（「ＬＣ」）を含み、ＨＣが、配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含み、ＬＣが、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項５１から６８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項71】

抗体またはその抗原結合部分が、重鎖（「ＨＣ」）および軽鎖（「ＬＣ」）を含み、ＨＣが、配列番号２１に記載されるアミノ酸配列を含み、ＬＣが、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項５１から６８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項72】

インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖領域（「ＶＨ」）および可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨが、配列番号２、１２、または２２のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分。

【請求項73】

ＶＬが、配列番号７、１７、または２７のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項７２に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項74】

インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖領域（「ＶＨ」）および可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨが、配列番号２に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分。

【請求項75】

インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖領域（「ＶＨ」）および可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨが、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分。

【請求項76】

インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖領域（「ＶＨ」）および可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨが、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分。

【請求項77】

インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖領域（「ＶＨ」）および可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨが、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分。

【請求項78】

インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖領域（「ＶＨ」）および可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨが、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分。

【請求項79】

インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖領域（「ＶＨ」）および可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨが、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分。

【請求項80】

抗原結合部分である、請求項５１から７９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。

【請求項81】

Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド連結されたＦｖ、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである、請求項８０に記載の抗原結合部分。

【請求項82】

請求項５１から８１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分を含む、二重特異性抗体であって、インテグリン－αｖに媒介されるＴＧＦβの活性化を阻害することができる、二重特異性抗体。

【請求項83】

請求項１から５０および８２のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、または請求項５１から８１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合部分を含む、多重特異性抗体であって、インテグリン－αｖに媒介されるＴＧＦβの活性化を阻害することができる、多重特異性抗体。

【請求項84】

請求項１から５０および８２のいずれか一項に記載の二重特異性抗体もしくはその抗原結合部分、請求項５１から８１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合部分、または請求項８３に記載の多重特異性抗体を含む、抗体薬物コンジュゲート。

【請求項85】

検出可能なマーカーに融合された、請求項１から５０および８２のいずれか一項に記載の二重特異性抗体もしくはその抗原結合部分、請求項５１から８１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合部分、または請求項８３に記載の多重特異性抗体。

【請求項86】

請求項１から５０および８２のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、請求項５１から８１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合部分、または請求項８３に記載の多重特異性抗体をコードする、ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセット。

【請求項87】

ａ．請求項５から５０のいずれか一項に記載の第１の重鎖をコードする、第１のポリヌクレオチド、
ｂ．請求項５から５０のいずれか一項に記載の第２の重鎖をコードする、第２のポリヌクレオチド、および
ｃ．請求項５から５０のいずれか一項に記載の第１の軽鎖をコードする、第３のポリヌクレオチド
を含む、ポリヌクレオチドのセット。

【請求項88】

請求項８６に記載のポリヌクレオチドのセットのポリヌクレオチド、または請求項８７に記載のポリヌクレオチドのセットを含む、ベクターまたはベクターのセット。

【請求項89】

請求項１から５０および８２のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、請求項５１から８１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合部分、請求項８３に記載の多重特異性抗体、請求項８６に記載のポリヌクレオチドのセットのポリヌクレオチド、または請求項８７に記載のポリヌクレオチドのセットを含む、細胞。

【請求項90】

請求項１から５０および８２のいずれか一項に記載の二重特異性抗体、請求項５１から８１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合部分、請求項８３に記載の多重特異性抗体、請求項８６に記載のポリヌクレオチドのセットのポリヌクレオチド、または請求項８７に記載のポリヌクレオチドのセットと、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。

【請求項91】

二重特異性抗体もしくはその抗原結合部分、抗体もしくはその抗原結合部分、または多重特異性抗体もしくはその抗原結合部分を作製する方法であって、請求項９０に記載の宿主細胞を好適な条件下において培養すること、および二重特異性抗体を単離することを含む、方法。

【請求項92】

それを必要とする対象においてがんを処置する方法であって、対象に、請求項１から５０および８２のいずれか一項に記載の二重特異性抗体もしくはその抗原結合部分、請求項５１から８１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合部分、請求項８３に記載の多重特異性抗体もしくはその抗原結合部分、請求項８４に記載の抗体薬物コンジュゲート、請求項８６に記載のポリヌクレオチドのセットのポリヌクレオチド、請求項８７に記載のポリヌクレオチドのセット、請求項８８に記載のベクターもしくはベクターのセット、請求項８９に記載の細胞、または請求項９０に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。

【請求項93】

二重特異性抗体の投与が、対象におけるがんの転移を低減または阻害する、請求項９２に記載の方法。

【請求項94】

それを必要とする対象においてがんの転移を低減または阻害する方法であって、対象に、請求項１から５０および８７のいずれか一項に記載の二重特異性抗体もしくはその抗原結合部分、請求項５１から８６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合部分、請求項８８に記載の多重特異性抗体もしくはその抗原結合部分、請求項８９に記載の抗体薬物コンジュゲート、請求項９１に記載のポリヌクレオチドのセットのポリヌクレオチド、請求項９２に記載のポリヌクレオチドのセット、請求項９３に記載のベクターもしくはベクターのセット、請求項９４に記載の細胞、または請求項９５に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。

【請求項95】

それを必要とする対象においてインテグリン－αｖβ１に媒介されるＴＧＦβの活性化を阻害する方法であって、対象に、請求項１から５０および８２のいずれか一項に記載の二重特異性抗体もしくはその抗原結合部分、請求項５１から８１のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合部分、請求項８３に記載の多重特異性抗体もしくはその抗原結合部分、請求項８４に記載の抗体薬物コンジュゲート、請求項８６に記載のポリヌクレオチドのセットのポリヌクレオチド、請求項８７に記載のポリヌクレオチドのセット、請求項８８に記載のベクターもしくはベクターのセット、請求項８９に記載の細胞、または請求項９０に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。

【請求項96】

対象が、がんに罹患している、請求項９５に記載の方法。

【請求項97】

がんが、腫瘍を含む、請求項９２から９４および９６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項98】

がんが、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、扁平ＮＳＣＬＣ、非扁平ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、胃腸がん、腎臓がん、明細胞癌、卵巣がん、肝臓がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、腎細胞癌（ＲＣＣ）、前立腺がん、ホルモン難治性前立腺腺癌、甲状腺がん、神経芽細胞腫、膵臓がん、神経膠芽腫（神経膠芽腫多型）、子宮頸がん、胃がん、膀胱がん、肝細胞腫（肝細胞癌）、乳がん、結腸癌、頭頸部がん（または癌）、頭頸部扁平上皮細胞癌（ＨＮＳＣＣ）、胃がん、生殖細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、黒色腫、転移性悪性黒色腫、皮膚または眼内悪性黒色腫、中皮腫、骨がん、皮膚がん、子宮がん、肛門領域のがん、精巣がん、卵管の癌、子宮内膜の癌、子宮頸の癌、膣の癌、外陰部の癌、食道のがん、小腸のがん、内分泌系のがん、副甲状腺のがん、副腎のがん、軟部組織の肉腫、尿道のがん、陰茎のがん、小児の固形腫瘍、尿管のがん、腎盂の癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳がん、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮細胞がん、アスベストによって誘導されるものを含む環境に誘導されるがん、ウイルス関連がんまたはウイルス起源のがん、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連または起源の腫瘍、急性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、未分化ＡＭＬ、骨髄芽球性白血病、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤白血病、巨核芽球性白血病、単発性顆粒球性肉腫、緑色腫、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ球系組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔリンパ芽球性、末梢Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、真性組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、リンパ球系統の造血系腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症を伴うリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）、骨髄腫、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（無症候性骨髄腫）、孤立性形質細胞腫、多発性骨髄腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞リンパ腫、ならびに前記がんの任意の組合せからなる群から選択される、請求項９２から９３、９６、および９７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項99】

対象に、追加の抗がん療法を投与することをさらに含む、請求項９２から９８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項100】

追加の抗がん療法が、化学療法、免疫療法、外科手術、放射線療法、またはこれらの任意の組合せを含む、請求項９９に記載の方法。

【請求項101】

追加の抗がん療法が、標準治療法を含む、請求項９９または１００に記載の方法。

【請求項102】

追加の抗がん療法が、チェックポイント阻害剤を含む、請求項９９から１０１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項103】

追加の抗がん療法が、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ２７、ＣＤ９６、グルココルチコイドに誘導されるＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、およびヘルペスウイルス進入媒介因子（ＨＶＥＭ）、プログラム死－１（ＰＤ－１）、プログラム死リガンド－１（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＴＬＡ－４、ＢおよびＴリンパ球減弱因子（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン－３（ＴＩＭ－３）、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ－３）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ－１）、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４（ＣＤ２４４）、ＣＤ１６０、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、およびＴ細胞活性化のＶ－ドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）の受容体、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ－１０、ＩＬ－８、Ｂ７－Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソテリン、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＤ５２、ＨＥＲ２、ならびにこれらの任意の組合せから選択されるタンパク質と特異的に結合する、抗体またはその抗原結合部分を含む、請求項９９から１０２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項104】

抗ＰＤ－１抗体が、ニボルマブまたはペンブロリズマブを含む、請求項１０３に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月９日に出願された米国仮出願第６３／１５８，７６９号の優先権の利益を主張し、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

ＥＦＳ－ＷＥＢを介して電子的に提出された配列表の参照
本出願において提出された電子的に提出された配列表（名称：４７５６＿００１ＰＣ０１＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、サイズ：６８，２１９バイト、および作成日：２０２２年３月７日）の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0003】

ＲＧＤと結合するインテグリンのαｖファミリーは、腫瘍促進因子として機能し得る多面的なサイトカインである形質転換成長因子β１（ＴＧＦβ１）の制御因子として特定されている。αｖファミリーインテグリンは、インビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）でＴＧＦβ１を活性し、活性ＴＧＦβ１の局所的な産生を通じて間接的に腫瘍進行を調節することができる。ＴＧＦβ１は、線維芽細胞の筋線維芽細胞への分化転換の強力な活性化因子である。したがって、αｖファミリーインテグリンは、ＴＧＦβ１を活性化し、筋線維芽細胞形成を誘導し、マトリックスリモデリング、マトリックススティフニング（matrix-stiffening）、およびがん促進を含む、筋線維芽細胞依存性活性をもたらす。ここで、ＴＧＦβ１は、線維芽細胞を、収縮性創傷修復表現型をとり、腫瘍微小環境において分化転換をもたらすように誘導し、その結果、がん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）または腫瘍関連線維芽細胞（ＴＡＦ）が生じる。さらに、ＴＧＦβ１は、脂肪細胞および循環骨髄由来サプレッサー細胞を含むいくつかの非線維芽細胞を、がん関連筋線維芽細胞へと分化転換するように誘導し得る。

【0004】

細胞外マトリックスの収縮を増大させることにより、筋線維芽細胞はまた、潜在性ＴＧＦβ１を活性化する可能性を増大させる。例えば、筋線維芽細胞は、ＥＣＭプロテアーゼ、成長因子、サイトカイン、およびケモカインを含む、がん進行をさらに増強する膨大な数のタンパク質を分泌する。同様に、ＴＧＦβ１活性化線維芽細胞は、腫瘍成長、ＥＭＴ、および転移の促進に関係するＲＧＤ含有インテグリンリガンドであるオステオポンチンを分泌し得る。したがって、オステオポンチンの増大は、喉頭扁平上皮細胞癌、黒色腫、鼻咽頭癌、および乳がんを含む多種類のがんにおいて、転移の増大、およびしばしば生存の低さと相関する。

【0005】

ＴＧＦβ１はさらに、血管新生を促進し、ここで、αｖインテグリンによるＴＧＦβの局所的活性化は、腫瘍内の血管の発生を促進する。加えて、異なるαｖインテグリンが、また、新しい血管の内皮細胞において上方制御され、それらの遊走を促進し、インテグリンαｖβ３、αｖβ５、およびαｖβ８はすべてが、血管新生を制御する。

【0006】

任意のαｖインテグリンによるＴＧＦβの活性化は、局所的な炎症および免疫細胞に影響を及ぼし得、様々なエフェクターＴ細胞に対して免疫抑制作用を促進し、好中球およびマクロファージの両方において腫瘍促進表現型を誘導する。ここで、ＴＧＦβ１は、腫瘍促進性Ｍ２腫瘍関連マクロファージおよびＮ２腫瘍関連好中球の形成を促進する。「Ｍ１」を有するとして存在するマクロファージは、抗腫瘍特性を示すが、しかしながら、「Ｍ２」は、癌腫細胞においてＴＧＦβ１、ＴＧＦＢＲＩ、およびＴＧＦＢＲＩＩの転写を増大させる、腫瘍促進特徴を呈する。

【0007】

ＴＧＦβ１はまた、単球動員を刺激し、転移関連インターロイキン－６（ＩＬ－６）を増大させ、サイトカイン、例えば、ＩＬ－１０、ならびに化学誘引物質ＣＣＬ３およびＣＣＬ４を抑制することによって、マクロファージの炎症性遺伝子発現プロファイルを変更する。ＴＧＦβ１のマクロファージ刺激はまた、ＶＥＧＦ、ＭＭＰ－９の産生、およびＶＥＧＦ受容体Ｆｌｋ－１発現の上昇によって、低酸素条件下において血管新生を促進する。さらに、高いレベルのＭ２マクロファージは、様々ながんによる生存の低さとも相関する。これらには、膵臓および子宮頸がん、胃がんの拡がり、ならびに化学療法後の再発が含まれる。さらに、複数の研究が、Ｍ２細胞が転移を促進することを示唆している。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

阻害性抗体によるＴＧＦβ受容体の遮断は、有害な副作用を伴う全身標的化を促進するであろう。しかしながら、標的外作用を最小限に抑え、ＴＧＦβ活性化の局所的な制御をもたらす、好適な標的化療法は、いまだ開発されていない。がんおよび線維症においてＴＧＦβ１活性を制御する手段として、αｖインテグリンを特異的に標的とする治療用抗体が、本明細書に記載される。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合し、インテグリン－αｖに媒介されるＴＧＦβの活性化を阻害する、二重特異性抗体またはその抗原結合部分を対象とする。

【0010】

いくつかの態様では、二重特異性抗体または抗原結合部分は、少なくとも第１のパラトープおよび第２のパラトープを含み、第１のパラトープは、インテグリンαｖβ１ヘテロ二量体上の第１のエピトープと結合する。いくつかの態様では、第２のパラトープは、インテグリンαｖβ１ヘテロ二量体上の第２のエピトープと結合する。いくつかの態様では、第１のエピトープおよび第２のエピトープは同じではない。

【0011】

いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、第１の重鎖、第１の軽鎖、第２の重鎖、および第２の軽鎖を含む。いくつかの態様では、第１の重鎖および第２の重鎖は異なる。いくつかの態様では、第１の重鎖および第２の重鎖は異なり、第１の軽鎖および第２の軽鎖は同じである。

【0012】

いくつかの態様では、第１の重鎖は、可変重鎖相補性決定領域（ＶＨ１－ＣＤＲ）１、ＶＨ１－ＣＤＲ２、およびＶＨ１－ＣＤＲ３を含む第１の可変重鎖領域（「ＶＨ１」）を含み、ＶＨ１－ＣＤＲ３は、配列番号５、１５、および２５から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＨ１－ＣＤＲ２は、配列番号４、１４、および２４から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＨ１－ＣＤＲ１は、配列番号３、１３、および２３から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、第１の軽鎖は、ＶＬ１－ＣＤＲ１、ＶＬ１－ＣＤＲ２、およびＶＬ１－ＣＤＲ３を含む第１の可変軽鎖領域（「ＶＬ１」）を含み、ＶＬ１－ＣＤＲ３は、配列番号１０、２０、および３０から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＬ１－ＣＤＲ２は、配列番号９、１９、および２９から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＬ１－ＣＤＲ１は、配列番号８、１８、および２８から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0013】

いくつかの態様では、請求項１から１３のいずれか一項に記載の二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ３を含む。

【0014】

いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ３を含む。

【0015】

いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ３を含む。

【0016】

いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ３、（ｉｖ）配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ１、（ｖ）配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ２、および（ｖｉ）配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ３を含む。いくつかの態様では、第２の重鎖は、ＶＨ２－ＣＤＲ１、ＶＨ２－ＣＤＲ２、およびＶＨ２－ＣＤＲ３を含む第２の可変重鎖領域（「ＶＨ２」）を含み、ＶＨ２－ＣＤＲ３は、配列番号５、１５、および２５から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＨ２－ＣＤＲ２は、配列番号４、１４、および２４から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＨ２－ＣＤＲ１は、配列番号３、１３、および２３から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、第２の軽鎖は、ＶＬ２－ＣＤＲ１、ＶＬ２－ＣＤＲ２、およびＶＬ２－ＣＤＲ３を含む第２の可変軽鎖領域（「ＶＬ１」）を含み、ＶＬ２－ＣＤＲ３は、配列番号２０および３０から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＬ２－ＣＤＲ２は、配列番号１９および２９から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＨ２－ＣＤＲ１は、配列番号１８および２８から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0017】

いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、（ａ）（ｉ）配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ３を含む、第１の可変重鎖領域（ＶＨ１）、（ｂ）（ｉ）配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ３を含む、第１の可変軽鎖領域（ＶＬ１）、（ｃ）（ｉ）配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ２－ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ２－ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ２－ＣＤＲ３を含む、第２の可変重鎖領域（ＶＨ２）、ならびに（ｄ）（ｉ）配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ２－ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ２－ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ２－ＣＤＲ３を含む、第２の可変軽鎖領域（ＶＬ２）を含む。

【0018】

いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、（ａ）（ｉ）配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ３を含む、第１の可変重鎖領域（ＶＨ１）、（ｂ）（ｉ）配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ２、および（ｉｉｉ）配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ３を含む、第１の可変軽鎖領域（ＶＬ１）、（ｃ）（ｉ）配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ２－ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ２－ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ２－ＣＤＲ３を含む、第２の可変重鎖領域（ＶＨ２）、ならびに（ｄ）（ｉ）配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ２－ＣＤＲ１、（ｉｉ）配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ２－ＣＤＲ２、（ｉｉｉ）配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ２－ＣＤＲ３を含む、第２の可変軽鎖領域（ＶＬ２）を含む。

【0019】

いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、第１の可変重鎖領域（ＶＨ１）および第１の可変軽鎖領域（ＶＬ１）を含み、ＶＨ１は、配列番号２、１２、または２２から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0020】

いくつかの態様では、ＶＬ１は、配列番号７、１７、または２７から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0021】

いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、第２の可変重鎖領域（ＶＨ２）および第２の可変軽鎖領域（ＶＬ２）を含み、ＶＨ２は、配列番号２、１２、または２２から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0022】

いくつかの態様では、ＶＬ２は、配列番号７、１７、または２７から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0023】

いくつかの態様では、（ａ）ＶＨ１は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｂ）ＶＬ１は、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｃ）ＶＨ２は、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｄ）ＶＬ２は、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0024】

いくつかの態様では、（ａ）ＶＨ１は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｂ）ＶＬ１は、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｃ）ＶＨ２は、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｄ）ＶＬ２は、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0025】

いくつかの態様では、（ａ）ＶＨ１は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｂ）ＶＬ１は、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｃ）ＶＨ２は、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｄ）ＶＬ２は、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0026】

いくつかの態様では、（ａ）ＶＨ１は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｂ）ＶＬ１は、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｃ）ＶＨ２は、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｄ）ＶＬ２は、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0027】

いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、第１の重鎖（Ｈ１）および第１の軽鎖（Ｌ１）を含み、Ｈ１は、配列番号１、１１、２１、３１、３４、または３７から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0028】

いくつかの態様では、Ｌ１は、配列番号６、１６、または２６から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0029】

いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、第２の重鎖（Ｈ２）および第２の軽鎖（Ｌ２）を含み、Ｈ２は、配列番号１、１１、２１、３１、３４、または３７から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0030】

いくつかの態様では、Ｌ２は、配列番号６、１６、または２６から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0031】

いくつかの態様では、第１の重鎖は、第２の重鎖と会合している。いくつかの態様では、第１の重鎖は、共有結合によって、第２の重鎖と会合している。いくつかの態様では、第１の重鎖および第２の重鎖のそれぞれは、ＩｇＧ定常領域または１つもしくは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの態様では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、第１の重鎖および第２の重鎖のヘテロ二量体化を促進する。

【0032】

いくつかの態様では、第１の重鎖は、第１の重鎖の定常領域に、ノブを作成する１つまたは複数のアミノ酸の置換を含み、第２の重鎖は、第２の重鎖の定常領域に、ホールを作成する１つまたは複数のアミノ酸の置換またはその抗原結合部分を含み、第１の重鎖のノブは、第２の重鎖のホールと会合する。

【0033】

いくつかの態様では、第１の重鎖は、第１の重鎖の定常領域に、ホールを作成する１つまたは複数のアミノ酸の置換を含み、第２の重鎖は、第２の重鎖の定常領域に、ノブを作成する１つまたは複数のアミノ酸の置換を含み、第１の重鎖のホールは、第２の重鎖のノブと会合する。

【0034】

いくつかの態様では、（ａ）Ｈ１は、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｂ）Ｌ１は、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｃ）Ｈ２は、配列番号３４に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｄ）Ｌ２は、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、（ａ）Ｈ１は、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｂ）Ｌ１は、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｃ）Ｈ２は、配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｄ）Ｌ２は、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0035】

いくつかの態様では、（ａ）Ｈ１は、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｂ）Ｌ１は、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｃ）Ｈ２は、配列番号３７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｄ）Ｌ２は、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、（ａ）Ｈ１は、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｂ）Ｌ１は、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｃ）Ｈ２は、配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｄ）Ｌ２は、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0036】

いくつかの態様では、二重特異性抗体は、（ａ）二重特異性抗体が、インテグリン－αｖβ１のＬＡＰ－ＴＧＦβ１との結合を阻害すること、（ｂ）二重特異性抗体が、αｖβ１、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、αｖβ８、およびこれらの任意の組合せから選択されるインテグリンαｖと結合することができること、（ｃ）二重特異性抗体が、細胞接着を阻害すること、（ｄ）二重特異性抗体が、腫瘍成長および／または転移を阻害すること、（ｅ）二重特異性抗体が、無増悪生存期間を増大させること、（ｆ）二重特異性抗体が、全生存期間を増大させること、ならびに（ｇ）これらの任意の組合せからなる群から選択される１つまたは複数の特性を有する。いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、（ｉ）インテグリン－αｖβ１のＬＡＰ－ＴＧＦβ１との結合を阻害すること、および（ｉｉ）細胞接着を阻害することが可能である。いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、１０^－６Ｍ以下、１０^－７Ｍ以下、１０^－８Ｍ以下、１０^－９Ｍ以下、１０^－１０Ｍ以下、１０^－１１Ｍ以下、１０^－１２Ｍ以下のＫ_Ｄで、インテグリン－αｖと結合する。

【0037】

本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖相補性決定領域（ＶＨ－ＣＤＲ）１、ＶＨ－ＣＤＲ２、およびＶＨ－ＣＤＲ３を含む、可変重鎖領域（「ＶＨ」）、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、およびＶＬ－ＣＤＲ３を含む、可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５、１５、または２５のアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を対象とする。いくつかの態様では、ＶＨ－ＣＤＲ２は、配列番号４、１４、または２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＨ－ＣＤＲ１は、配列番号３、１３、または２３のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＬ－ＣＤＲ３は、配列番号１０、２０、または３０のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＬ－ＣＤＲ２は、配列番号９、１９、または２９のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＬ－ＣＤＲ１は、配列番号８、１８、または２８のアミノ酸配列を含む。

【0038】

本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖相補性決定領域（ＶＨ－ＣＤＲ）１、ＶＨ－ＣＤＲ２、およびＶＨ－ＣＤＲ３を含む可変重鎖領域（「ＶＨ」）、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、およびＶＬ－ＣＤＲ３を含む可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１は、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２は、配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３は、配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１は、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２は、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３は、配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を対象とする。

【0039】

本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖相補性決定領域（ＶＨ－ＣＤＲ）１、ＶＨ－ＣＤＲ２、およびＶＨ－ＣＤＲ３を含む可変重鎖領域（「ＶＨ」）、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、およびＶＬ－ＣＤＲ３を含む可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１は、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２は、配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３は、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１は、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２は、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３は、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を対象とする。

【0040】

本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖相補性決定領域（ＶＨ－ＣＤＲ）１、ＶＨ－ＣＤＲ２、およびＶＨ－ＣＤＲ３を含む可変重鎖領域（「ＶＨ」）、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、およびＶＬ－ＣＤＲ３を含む可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、（ｉ）ＶＨ－ＣＤＲ１は、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ２は、配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＤＲ３は、配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｉｖ）ＶＬ－ＣＤＲ１は、配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｖ）ＶＬ－ＣＤＲ２は、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含み、（ｖｉ）ＶＬ－ＣＤＲ３は、配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を対象とする。

【0041】

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、重鎖可変領域（「ＶＨ」）および軽鎖可変領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨは、配列番号２、１２、および２２から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0042】

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、重鎖可変領域（「ＶＨ」）および軽鎖可変領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＬは、配列番号７、１７、および２７から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0043】

いくつかの態様では、（ａ）ＶＨは、配列番号２から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、（ｂ）ＶＨは、配列番号１２から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または（ｃ）ＶＨは、配列番号２２から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0044】

いくつかの態様では、（ａ）ＶＨは、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含む、（ｂ）ＶＨは、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含む、または（ｃ）ＶＨは、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬは、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0045】

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、重鎖（「ＨＣ」）および軽鎖（「ＬＣ」）を含み、ＨＣは、配列番号１、１１、および２１から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0046】

いくつかの態様では、ＬＣは、配列番号６、１６、および１６から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、重鎖（「ＨＣ」）および軽鎖（「ＬＣ」）を含み、ＨＣは、配列番号１、１１、および２１から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＬＣは、配列番号６、１６、および２６から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0047】

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、重鎖（「ＨＣ」）および軽鎖（「ＬＣ」）を含み、（ａ）ＨＣは、配列番号１に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、（ｂ）ＨＣは、配列番号１１に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または（ｃ）ＨＣは、配列番号２１に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0048】

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、重鎖（「ＨＣ」）および軽鎖（「ＬＣ」）を含み、ＨＣは、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、重鎖（「ＨＣ」）および軽鎖（「ＬＣ」）を含み、ＨＣは、配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、重鎖（「ＨＣ」）および軽鎖（「ＬＣ」）を含み、ＨＣは、配列番号２１に記載されるアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0049】

本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖領域（「ＶＨ」）および可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨが、配列番号２、１２、または２２のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を対象とする。いくつかの態様では、ＶＬは、配列番号７、１７、または２７のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0050】

本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖領域（「ＶＨ」）および可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨが、配列番号２に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を対象とする。

【0051】

本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖領域（「ＶＨ」）および可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨが、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を対象とする。

【0052】

本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖領域（「ＶＨ」）および可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨが、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を対象とする。

【0053】

本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖領域（「ＶＨ」）および可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨが、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を対象とする。

【0054】

本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖領域（「ＶＨ」）および可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨが、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を対象とする。

【0055】

本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、可変重鎖領域（「ＶＨ」）および可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨが、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を対象とする。

【0056】

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、抗原結合部分である。いくつかの態様では、抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド連結されたＦｖ、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである。

【0057】

本開示のいくつかの態様は、本明細書において開示される抗体またはその抗原結合部分を含む二重特異性抗体であって、インテグリン－αｖに媒介されるＴＧＦβの活性化を阻害することができる、二重特異性抗体を対象とする。

【0058】

本開示のいくつかの態様は、本明細書において開示されるに二重特異性抗体、または本明細書において開示される抗体もしくはその抗原結合部分を含む、多重特異性抗体であって、インテグリン－αｖに媒介されるＴＧＦβの活性化を阻害することができる、多重特異性抗体を対象とする。

【0059】

本開示のいくつかの態様は、本明細書において開示される二重特異性抗体もしくはその抗原結合部分、本明細書において開示される抗体もしくはその抗原結合部分、または本明細書において開示される多重特異性抗体を含む、抗体薬物コンジュゲートを対象とする。いくつかの態様では、二重特異性抗体もしくはその抗原結合部分、抗体もしくはその抗原結合部分、または多重特異性抗体は、検出可能なマーカーに融合されている。

【0060】

本開示のいくつかの態様は、本明細書において開示される二重特異性抗体、本明細書において開示される抗体もしくはその抗原結合部分、または本明細書において開示される多重特異性抗体をコードする、ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドのセットを対象とする。

【0061】

本開示のいくつかの態様は、（ｉ）本明細書において開示される第１の重鎖をコードする、第１のポリヌクレオチド、（ｉｉ）本明細書において開示される第２の重鎖をコードする、第２のポリヌクレオチド、および（ｉｉｉ）本明細書において開示される第１の軽鎖をコードする、第３のポリヌクレオチドを含む、ポリヌクレオチドのセットを対象とする。

【0062】

本開示のいくつかの態様は、本明細書において開示されるポリヌクレオチドのセットのポリヌクレオチドを含む、ベクターまたはベクターのセットを対象とする。

【0063】

本開示のいくつかの態様は、本明細書において開示される二重特異性抗体、本明細書において開示されるいずれか１つの抗体もしくはその抗原結合部分、本明細書において開示される多重特異性抗体、または本明細書において開示されるポリヌクレオチドのセットのポリヌクレオチドを含む、細胞を対象とする。

【0064】

本開示のいくつかの態様は、本明細書において開示される二重特異性抗体、本明細書において開示される抗体もしくはその抗原結合部分、本明細書において開示される多重特異性抗体、または本明細書において開示されるポリヌクレオチドのセットのポリヌクレオチドと、薬学的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物を対象とする。

【0065】

本開示のいくつかの態様は、二重特異性抗体もしくはその抗原結合部分、抗体もしくはその抗原結合部分、または多重特異性抗体もしくはその抗原結合部分を作製する方法であって、本明細書において開示される宿主細胞を好適な条件下において培養すること、および二重特異性抗体を単離することを含む、方法を対象とする。

【0066】

本開示のいくつかの態様は、それを必要とする対象においてがんを処置する方法であって、対象に、本明細書において開示される二重特異性抗体もしくはその抗原結合部分、本明細書において開示される抗体もしくはその抗原結合部分、本明細書において開示される多重特異性抗体もしくはその抗原結合部分、本明細書において開示される抗体薬物コンジュゲート、本明細書において開示されるポリヌクレオチドのセットのポリヌクレオチド、本明細書において開示されるベクターもしくはベクターのセット、本明細書において開示される細胞、または本明細書において開示される医薬組成物を投与することを含む、方法を対象とする。いくつかの態様では、二重特異性抗体の投与は、対象におけるがんの転移を低減または阻害する。

【0067】

本開示のいくつかの態様は、それを必要とする対象においてがんの転移を低減または阻害する方法であって、対象に、本明細書において開示される二重特異性抗体もしくはその抗原結合部分、本明細書において開示される抗体もしくはその抗原結合部分、本明細書において開示される多重特異性抗体もしくはその抗原結合部分、本明細書において開示される抗体薬物コンジュゲート、本明細書において開示されるポリヌクレオチドのセットのポリヌクレオチド、本明細書において開示されるベクターもしくはベクターのセット、本明細書において開示される細胞、または本明細書において開示される医薬組成物を投与することを含む、方法を対象とする。

【0068】

本開示のいくつかの態様は、それを必要とする対象においてインテグリン－αｖβ１に媒介されるＴＧＦβの活性化を阻害をする方法であって、対象に、本明細書において開示される二重特異性抗体もしくはその抗原結合部分、本明細書において開示される抗体もしくはその抗原結合部分、本明細書において開示される多重特異性抗体もしくはその抗原結合部分、本明細書において開示される抗体薬物コンジュゲート、本明細書において開示されるポリヌクレオチドのセットのポリヌクレオチド、本明細書において開示されるポリヌクレオチドのセット、本明細書において開示されるベクターもしくはベクターのセット、本明細書において開示される細胞、または本明細書において開示される医薬組成物を投与することを含む、方法を対象とする。

【0069】

いくつかの態様では、対象は、がんに罹患している。いくつかの態様では、がんは、腫瘍を含む。いくつかの態様では、がんは、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、扁平ＮＳＣＬＣ、非扁平ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、胃腸がん、腎臓がん、明細胞癌、卵巣がん、肝臓がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、腎細胞癌（ＲＣＣ）、前立腺がん、ホルモン難治性前立腺腺癌、甲状腺がん、神経芽細胞腫、膵臓がん、神経膠芽腫（神経膠芽腫多型）、子宮頸がん、胃がん、膀胱がん、肝細胞腫（肝細胞癌）、乳がん、結腸癌、頭頸部がん（または癌）、頭頸部扁平上皮細胞癌（ＨＮＳＣＣ）、胃がん、生殖細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、黒色腫、転移性悪性黒色腫、皮膚または眼内悪性黒色腫、中皮腫、骨がん、皮膚がん、子宮がん、肛門領域のがん、精巣がん、卵管の癌、子宮内膜の癌、子宮頸の癌、膣の癌、外陰部の癌、食道のがん、小腸のがん、内分泌系のがん、副甲状腺のがん、副腎のがん、軟部組織の肉腫、尿道のがん、陰茎のがん、小児の固形腫瘍、尿管のがん、腎盂の癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳がん、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮細胞がん、アスベストによって誘導されるものを含む環境に誘導されるがん、ウイルス関連がんまたはウイルス起源のがん、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連または起源の腫瘍、急性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、未分化ＡＭＬ、骨髄芽球性白血病、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤白血病、巨核芽球性白血病、単発性（isolated）顆粒球性肉腫、緑色腫、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ球系組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔリンパ芽球性、末梢Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、真性組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、リンパ球系統の造血系腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症を伴うリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）、骨髄腫、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（無症候性骨髄腫）、孤立性形質細胞腫、多発性骨髄腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞リンパ腫、ならびに前記がんの任意の組合せからなる群から選択される。

【0070】

いくつかの態様では、本方法は、対象に、追加の抗がん療法を投与することをさらに含む。いくつかの態様では、追加の抗がん療法は、化学療法、免疫療法、外科手術、放射線療法、またはこれらの任意の組合せを含む。いくつかの態様では、追加の抗がん療法は、標準治療法を含む。

【0071】

いくつかの態様では、追加の抗がん療法は、チェックポイント阻害剤を含む。いくつかの態様では、追加の抗がん療法は、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ２７、ＣＤ９６、グルココルチコイドに誘導されるＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、およびヘルペスウイルス進入媒介因子（ＨＶＥＭ）、プログラム死－１（ＰＤ－１）、プログラム死リガンド－１（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＴＬＡ－４、ＢおよびＴリンパ球減弱因子（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン－３（ＴＩＭ－３）、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ－３）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ－１）、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４（ＣＤ２４４）、ＣＤ１６０、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、およびＴ細胞活性化のＶ－ドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）の受容体、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ－１０、ＩＬ－８、Ｂ７－Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソテリン、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＤ５２、ＨＥＲ２、ならびにこれらの任意の組合せから選択されるタンパク質と特異的に結合する、抗体またはその抗原結合部分を含む。いくつかの態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブまたはペンブロリズマブを含む。

【図面の簡単な説明】

【0072】

【図1A】図１Ａ～１Ｂは、抗インテグリン－αｖβ１クローン１０３９２（図１Ａ）およびクローン１０４０４（図１Ｂ）の力価測定の図である。

【図1B】図１Ａ～１Ｂは、抗インテグリン－αｖβ１クローン１０３９２（図１Ａ）およびクローン１０４０４（図１Ｂ）の力価測定の図である。

【図2A】図２Ａ～２Ｂは、抗インテグリン－αｖβ１ Ｆａｂ １０４０４（図２Ａ）およびＦａｂ １０３９２（図２Ｂ）のエピトープビニングをまとめた棒グラフである。棒グラフの上のすべての数字は、パーセント値を表し、ＭＦＩは、平均からの平均蛍光を示し、エラーバーは、標準偏差を示す。

【図2B】図２Ａ～２Ｂは、抗インテグリン－αｖβ１ Ｆａｂ １０４０４（図２Ａ）およびＦａｂ １０３９２（図２Ｂ）のエピトープビニングをまとめた棒グラフである。棒グラフの上のすべての数字は、パーセント値を表し、ＭＦＩは、平均からの平均蛍光を示し、エラーバーは、標準偏差を示す。

【図3A】図３Ａ～３Ｂは、異なるインテグリンＣＨＯ細胞株に対する抗インテグリン－αｖβ１ Ｆａｂ １０３９２（図３Ａ）およびＦａｂ １０４０４（図３Ｂ）のＩｇＧ親和性力価測定検証を示す、散布図である。ＭＦＩは、平均からの平均蛍光を示し、エラーバーは、標準偏差を示す。

【図3B】図３Ａ～３Ｂは、異なるインテグリンＣＨＯ細胞株に対する抗インテグリン－αｖβ１ Ｆａｂ １０３９２（図３Ａ）およびＦａｂ １０４０４（図３Ｂ）のＩｇＧ親和性力価測定検証を示す、散布図である。ＭＦＩは、平均からの平均蛍光を示し、エラーバーは、標準偏差を示す。

【図4】図４は、組換えヒトインテグリン－αｖβ１に対する抗体クローンの異なるモダリティのＩｇＧ親和性力価測定検証を示す、散布図である。

【図5】図５は、組換えマウスインテグリン－αｖβ１に対する抗体クローンの異なるモダリティのＩｇＧ親和性力価測定検証を示す、散布図である。

【図6A】図６Ａ～６Ｃは、ＩｇＧクローン１０３９２（図６Ａ）、１０４０４（図６Ｂ）、および１１８６７（図６Ｃ）のサイズ排除クロマトグラフィーのグラフを示す。

【図6B】図６Ａ～６Ｃは、ＩｇＧクローン１０３９２（図６Ａ）、１０４０４（図６Ｂ）、および１１８６７（図６Ｃ）のサイズ排除クロマトグラフィーのグラフを示す。

【図6C】図６Ａ～６Ｃは、ＩｇＧクローン１０３９２（図６Ａ）、１０４０４（図６Ｂ）、および１１８６７（図６Ｃ）のサイズ排除クロマトグラフィーのグラフを示す。

【図7】図７Ａ～７Ｂは、ＩｇＧクローン１０４０４（図７Ａ）、１０３９２（図７Ｂ）について、発現および精製後のＩｇＧ純度の評価を示す、ＰＡＧＥ－ＳＤＳゲル画像である。

【図8A】図８Ａ～８Ｂは、クローン１１８６７および異なるＩｇＧモダリティの凍結－解凍分析を示す、棒グラフである。図８Ａは、吸光２８０波長で分光測色法によって判定した濃度値を示すグラフを提供する。図８Ｂは、フローサイトメトリー平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を示すグラフを提供する。ＩｇＧ結合活性を、ＡｖＢ１ ＣＨＯ細胞を使用して測定し、すべてのサンプルを、それぞれの群の「処置なし」に対して正規化した。

【図8B】図８Ａ～８Ｂは、クローン１１８６７および異なるＩｇＧモダリティの凍結－解凍分析を示す、棒グラフである。図８Ａは、吸光２８０波長で分光測色法によって判定した濃度値を示すグラフを提供する。図８Ｂは、フローサイトメトリー平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を示すグラフを提供する。ＩｇＧ結合活性を、ＡｖＢ１ ＣＨＯ細胞を使用して測定し、すべてのサンプルを、それぞれの群の「処置なし」に対して正規化した。

【図9】図９は、クローンＩｇＧ １０４０４、１０３９２、および１０４０４／１０３９２の存在下におけるＬＡＰ－ＴＧＦβに対するインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞接着の概要の棒グラフである。

【図10A】図１０Ａは、異なる二重特異性ＩｇＧの図であり、ｎｕｌｌは、非選択的（ランダムＣＤＲ）二重ＩｇＧアームを示す。図１０Ｂは、二重特異性ＩｇＧ １０４０４／１０３９２の存在下におけるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞のＦａｂ結合活性の概要の棒グラフである。図１０Ｃは、異なるＦａｂクローンの存在下におけるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の二重特異性ＩｇＧ結合活性の概要の棒グラフである。図１０Ｄは、異なるクローンＩｇＧの存在下におけるＬＡＰ－ＴＧＦβに対するインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞接着の概要の棒グラフである。図１０Ｅは、フローサイトメトリー測定によるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の力価測定グラフである。図１０Ｆは、ＬＡＰ－ＴＧＦβに対する接着に関するインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の阻害力価測定のグラフである。ＭＦＩは、平均からの平均蛍光を示し、エラーバーは、標準偏差を示す。

【図10B】図１０Ａは、異なる二重特異性ＩｇＧの図であり、ｎｕｌｌは、非選択的（ランダムＣＤＲ）二重ＩｇＧアームを示す。図１０Ｂは、二重特異性ＩｇＧ １０４０４／１０３９２の存在下におけるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞のＦａｂ結合活性の概要の棒グラフである。図１０Ｃは、異なるＦａｂクローンの存在下におけるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の二重特異性ＩｇＧ結合活性の概要の棒グラフである。図１０Ｄは、異なるクローンＩｇＧの存在下におけるＬＡＰ－ＴＧＦβに対するインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞接着の概要の棒グラフである。図１０Ｅは、フローサイトメトリー測定によるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の力価測定グラフである。図１０Ｆは、ＬＡＰ－ＴＧＦβに対する接着に関するインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の阻害力価測定のグラフである。ＭＦＩは、平均からの平均蛍光を示し、エラーバーは、標準偏差を示す。

【図10C】図１０Ａは、異なる二重特異性ＩｇＧの図であり、ｎｕｌｌは、非選択的（ランダムＣＤＲ）二重ＩｇＧアームを示す。図１０Ｂは、二重特異性ＩｇＧ １０４０４／１０３９２の存在下におけるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞のＦａｂ結合活性の概要の棒グラフである。図１０Ｃは、異なるＦａｂクローンの存在下におけるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の二重特異性ＩｇＧ結合活性の概要の棒グラフである。図１０Ｄは、異なるクローンＩｇＧの存在下におけるＬＡＰ－ＴＧＦβに対するインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞接着の概要の棒グラフである。図１０Ｅは、フローサイトメトリー測定によるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の力価測定グラフである。図１０Ｆは、ＬＡＰ－ＴＧＦβに対する接着に関するインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の阻害力価測定のグラフである。ＭＦＩは、平均からの平均蛍光を示し、エラーバーは、標準偏差を示す。

【図10D】図１０Ａは、異なる二重特異性ＩｇＧの図であり、ｎｕｌｌは、非選択的（ランダムＣＤＲ）二重ＩｇＧアームを示す。図１０Ｂは、二重特異性ＩｇＧ １０４０４／１０３９２の存在下におけるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞のＦａｂ結合活性の概要の棒グラフである。図１０Ｃは、異なるＦａｂクローンの存在下におけるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の二重特異性ＩｇＧ結合活性の概要の棒グラフである。図１０Ｄは、異なるクローンＩｇＧの存在下におけるＬＡＰ－ＴＧＦβに対するインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞接着の概要の棒グラフである。図１０Ｅは、フローサイトメトリー測定によるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の力価測定グラフである。図１０Ｆは、ＬＡＰ－ＴＧＦβに対する接着に関するインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の阻害力価測定のグラフである。ＭＦＩは、平均からの平均蛍光を示し、エラーバーは、標準偏差を示す。

【図10E】図１０Ａは、異なる二重特異性ＩｇＧの図であり、ｎｕｌｌは、非選択的（ランダムＣＤＲ）二重ＩｇＧアームを示す。図１０Ｂは、二重特異性ＩｇＧ １０４０４／１０３９２の存在下におけるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞のＦａｂ結合活性の概要の棒グラフである。図１０Ｃは、異なるＦａｂクローンの存在下におけるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の二重特異性ＩｇＧ結合活性の概要の棒グラフである。図１０Ｄは、異なるクローンＩｇＧの存在下におけるＬＡＰ－ＴＧＦβに対するインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞接着の概要の棒グラフである。図１０Ｅは、フローサイトメトリー測定によるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の力価測定グラフである。図１０Ｆは、ＬＡＰ－ＴＧＦβに対する接着に関するインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の阻害力価測定のグラフである。ＭＦＩは、平均からの平均蛍光を示し、エラーバーは、標準偏差を示す。

【図10F】図１０Ａは、異なる二重特異性ＩｇＧの図であり、ｎｕｌｌは、非選択的（ランダムＣＤＲ）二重ＩｇＧアームを示す。図１０Ｂは、二重特異性ＩｇＧ １０４０４／１０３９２の存在下におけるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞のＦａｂ結合活性の概要の棒グラフである。図１０Ｃは、異なるＦａｂクローンの存在下におけるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の二重特異性ＩｇＧ結合活性の概要の棒グラフである。図１０Ｄは、異なるクローンＩｇＧの存在下におけるＬＡＰ－ＴＧＦβに対するインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞接着の概要の棒グラフである。図１０Ｅは、フローサイトメトリー測定によるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の力価測定グラフである。図１０Ｆは、ＬＡＰ－ＴＧＦβに対する接着に関するインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の阻害力価測定のグラフである。ＭＦＩは、平均からの平均蛍光を示し、エラーバーは、標準偏差を示す。

【図11A】図１１Ａ～１１Ｆは、異なる１０４０４および１０３９２クローンＩｇＧモダリティからの阻害性特性の比較のデータを示す。図１１Ａは、異なるインテグリン ＣＨＯ細胞株を使用して、異なるクローンＩｇＧのＬＡＰ－ＴＧＦβへの細胞接着の阻害性値の概要の表である。図１１Ｂ～１１Ｆは、異なるインテグリンＣＨＯ細胞株を使用した、クローンＩｇＧ αｖβ１（図１１Ｂ）、αｖβ６（図１１Ｃ）、αｖβ３（図１１Ｄ）、αｖβ８（図１１Ｅ）、およびαｖβ５（図１１Ｆ）のＬＡＰ－ＴＧＦβへの細胞接着の阻害性力価測定曲線の概要のグラフである。エラーバーは、標準偏差を示す。

【図11B】図１１Ａ～１１Ｆは、異なる１０４０４および１０３９２クローンＩｇＧモダリティからの阻害性特性の比較のデータを示す。図１１Ａは、異なるインテグリン ＣＨＯ細胞株を使用して、異なるクローンＩｇＧのＬＡＰ－ＴＧＦβへの細胞接着の阻害性値の概要の表である。図１１Ｂ～１１Ｆは、異なるインテグリンＣＨＯ細胞株を使用した、クローンＩｇＧ αｖβ１（図１１Ｂ）、αｖβ６（図１１Ｃ）、αｖβ３（図１１Ｄ）、αｖβ８（図１１Ｅ）、およびαｖβ５（図１１Ｆ）のＬＡＰ－ＴＧＦβへの細胞接着の阻害性力価測定曲線の概要のグラフである。エラーバーは、標準偏差を示す。

【図12A】図１２Ａは、インテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞を使用して、１０４０４ Ｆａｂタンパク質の存在下において、異なるＩｇＧ抗体のエピトープ結合競合を示す概要の棒グラフである。図１２Ｂは、異なるインテグリンＣＨＯ細胞株を使用して、異なるＬＡＰ－ＴＧＦβへの細胞接着のＩｇＧ阻害の概要の棒グラフである。それぞれの細胞株について、実験において使用した異なるＩｇＧ抗体（１１８８３、１１８５５、１１８５７、１１８７４、１１９１４、および１１８６７）を、左から右に示す。図１２Ｃ～１２Ｉは、トラスツズマブ（図１２Ｃ）、１０４０４（図１２Ｄ）、１１８５５（図１２Ｅ）、１１８５７（図１２Ｆ）、１１８６７（図１２Ｇ）、１１８８３（図１２Ｈ）、および１１９１４（図１２Ｉ）ＩｇＧクローンのサイズ排除クロマトグラフィーのグラフである。図１２Ｊは、異なるクローンＩｇＧの親和性および阻害性の値の概要の表である。図１２Ｋは、フローサイトメトリー測定によるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の力価測定グラフである。図１２Ｌは、異なるクローンＩｇＧを使用した、ＬＡＰ－ＴＧＦβに対する接着に関するインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の阻害力価測定のグラフである。ＭＦＩは、平均からの平均蛍光を示し、エラーバーは、標準偏差を示す。

【図12B】図１２Ａは、インテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞を使用して、１０４０４ Ｆａｂタンパク質の存在下において、異なるＩｇＧ抗体のエピトープ結合競合を示す概要の棒グラフである。図１２Ｂは、異なるインテグリンＣＨＯ細胞株を使用して、異なるＬＡＰ－ＴＧＦβへの細胞接着のＩｇＧ阻害の概要の棒グラフである。それぞれの細胞株について、実験において使用した異なるＩｇＧ抗体（１１８８３、１１８５５、１１８５７、１１８７４、１１９１４、および１１８６７）を、左から右に示す。図１２Ｃ～１２Ｉは、トラスツズマブ（図１２Ｃ）、１０４０４（図１２Ｄ）、１１８５５（図１２Ｅ）、１１８５７（図１２Ｆ）、１１８６７（図１２Ｇ）、１１８８３（図１２Ｈ）、および１１９１４（図１２Ｉ）ＩｇＧクローンのサイズ排除クロマトグラフィーのグラフである。図１２Ｊは、異なるクローンＩｇＧの親和性および阻害性の値の概要の表である。図１２Ｋは、フローサイトメトリー測定によるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の力価測定グラフである。図１２Ｌは、異なるクローンＩｇＧを使用した、ＬＡＰ－ＴＧＦβに対する接着に関するインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の阻害力価測定のグラフである。ＭＦＩは、平均からの平均蛍光を示し、エラーバーは、標準偏差を示す。

【図12C】図１２Ａは、インテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞を使用して、１０４０４ Ｆａｂタンパク質の存在下において、異なるＩｇＧ抗体のエピトープ結合競合を示す概要の棒グラフである。図１２Ｂは、異なるインテグリンＣＨＯ細胞株を使用して、異なるＬＡＰ－ＴＧＦβへの細胞接着のＩｇＧ阻害の概要の棒グラフである。それぞれの細胞株について、実験において使用した異なるＩｇＧ抗体（１１８８３、１１８５５、１１８５７、１１８７４、１１９１４、および１１８６７）を、左から右に示す。図１２Ｃ～１２Ｉは、トラスツズマブ（図１２Ｃ）、１０４０４（図１２Ｄ）、１１８５５（図１２Ｅ）、１１８５７（図１２Ｆ）、１１８６７（図１２Ｇ）、１１８８３（図１２Ｈ）、および１１９１４（図１２Ｉ）ＩｇＧクローンのサイズ排除クロマトグラフィーのグラフである。図１２Ｊは、異なるクローンＩｇＧの親和性および阻害性の値の概要の表である。図１２Ｋは、フローサイトメトリー測定によるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の力価測定グラフである。図１２Ｌは、異なるクローンＩｇＧを使用した、ＬＡＰ－ＴＧＦβに対する接着に関するインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の阻害力価測定のグラフである。ＭＦＩは、平均からの平均蛍光を示し、エラーバーは、標準偏差を示す。

【図12D】図１２Ａは、インテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞を使用して、１０４０４ Ｆａｂタンパク質の存在下において、異なるＩｇＧ抗体のエピトープ結合競合を示す概要の棒グラフである。図１２Ｂは、異なるインテグリンＣＨＯ細胞株を使用して、異なるＬＡＰ－ＴＧＦβへの細胞接着のＩｇＧ阻害の概要の棒グラフである。それぞれの細胞株について、実験において使用した異なるＩｇＧ抗体（１１８８３、１１８５５、１１８５７、１１８７４、１１９１４、および１１８６７）を、左から右に示す。図１２Ｃ～１２Ｉは、トラスツズマブ（図１２Ｃ）、１０４０４（図１２Ｄ）、１１８５５（図１２Ｅ）、１１８５７（図１２Ｆ）、１１８６７（図１２Ｇ）、１１８８３（図１２Ｈ）、および１１９１４（図１２Ｉ）ＩｇＧクローンのサイズ排除クロマトグラフィーのグラフである。図１２Ｊは、異なるクローンＩｇＧの親和性および阻害性の値の概要の表である。図１２Ｋは、フローサイトメトリー測定によるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の力価測定グラフである。図１２Ｌは、異なるクローンＩｇＧを使用した、ＬＡＰ－ＴＧＦβに対する接着に関するインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の阻害力価測定のグラフである。ＭＦＩは、平均からの平均蛍光を示し、エラーバーは、標準偏差を示す。

【図12E】図１２Ａは、インテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞を使用して、１０４０４ Ｆａｂタンパク質の存在下において、異なるＩｇＧ抗体のエピトープ結合競合を示す概要の棒グラフである。図１２Ｂは、異なるインテグリンＣＨＯ細胞株を使用して、異なるＬＡＰ－ＴＧＦβへの細胞接着のＩｇＧ阻害の概要の棒グラフである。それぞれの細胞株について、実験において使用した異なるＩｇＧ抗体（１１８８３、１１８５５、１１８５７、１１８７４、１１９１４、および１１８６７）を、左から右に示す。図１２Ｃ～１２Ｉは、トラスツズマブ（図１２Ｃ）、１０４０４（図１２Ｄ）、１１８５５（図１２Ｅ）、１１８５７（図１２Ｆ）、１１８６７（図１２Ｇ）、１１８８３（図１２Ｈ）、および１１９１４（図１２Ｉ）ＩｇＧクローンのサイズ排除クロマトグラフィーのグラフである。図１２Ｊは、異なるクローンＩｇＧの親和性および阻害性の値の概要の表である。図１２Ｋは、フローサイトメトリー測定によるインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の力価測定グラフである。図１２Ｌは、異なるクローンＩｇＧを使用した、ＬＡＰ－ＴＧＦβに対する接着に関するインテグリン－αｖβ１ ＣＨＯ細胞の阻害力価測定のグラフである。ＭＦＩは、平均からの平均蛍光を示し、エラーバーは、標準偏差を示す。

【図13】図１３Ａおよび１３Ｃ～１３Ｆは、インテグリン ＣＨＯ細胞株αｖβ１（図１３Ａ）、αｖβ３（図１３Ｃ）、αｖβ５（図１３Ｄ）、αｖβ６（図１３Ｅ）、およびαｖβ８（図１３Ｆ）に対する１１８６７および１０３９２ ＩｇＧモダリティの力価測定曲線を示す概要のグラフである。ＭＦＩは、平均からの平均蛍光を示し、エラーバーは、標準偏差を示す。図１３Ｂは、異なるインテグリン ＣＨＯ細胞株の親和性値の概要の表である。

【図14】図１４Ａおよび１４Ｃ～１４Ｆは、インテグリンＣＨＯ細胞株細胞株αｖβ１（図１４Ａ）、αｖβ３（図１４Ｃ）、αｖβ５（図１４Ｄ）、αｖβ６（図１４Ｅ）、およびαｖβ８（図１４Ｆ）を使用した、異なるクローンＩｇＧのＬＡＰ－ＴＧＦβへの細胞接着の阻害性力価測定曲線の概要のグラフである。エラーバーは、標準偏差を示す。図１４Ｂは、異なるインテグリン ＣＨＯ細胞株を使用して、異なるクローンＩｇＧのＬＡＰ－ＴＧＦβへの細胞接着の阻害性値の概要の表である。

【図15A】図１５Ａは、１１８７６／１０３９２二重ＩｇＧを使用したαｖ－およびβ１－サブユニットの発現レベルのフローサイトメトリーの概要のグラフであり、アイソタイプ対照抗体に対する選択的サブユニットのＭＦＩシグナルの倍数変化のｌｏｇ２値を示す。図１５Ｂは、１１８７６／１０３９２二重ＩｇＧの存在下における４日目のエンドポイント時点の肺細胞増殖の概要の棒グラフである。図１５Ｃ～１５Ｇは、１１８７６／１０３９２二重ＩｇＧの存在下における肺がん細胞株Ａ５４９（図１５Ｃ）、Ｈ２９２（図１５Ｄ）、Ｈ６６１（図１５Ｅ）、Ｈ４６０（図１５Ｆ）、およびＨ１５６３（図１５Ｇ）の細胞増殖を示す時系列グラフである。エラーバーは、標準偏差を示す。

【図15B】図１５Ａは、１１８７６／１０３９２二重ＩｇＧを使用したαｖ－およびβ１－サブユニットの発現レベルのフローサイトメトリーの概要のグラフであり、アイソタイプ対照抗体に対する選択的サブユニットのＭＦＩシグナルの倍数変化のｌｏｇ２値を示す。図１５Ｂは、１１８７６／１０３９２二重ＩｇＧの存在下における４日目のエンドポイント時点の肺細胞増殖の概要の棒グラフである。図１５Ｃ～１５Ｇは、１１８７６／１０３９２二重ＩｇＧの存在下における肺がん細胞株Ａ５４９（図１５Ｃ）、Ｈ２９２（図１５Ｄ）、Ｈ６６１（図１５Ｅ）、Ｈ４６０（図１５Ｆ）、およびＨ１５６３（図１５Ｇ）の細胞増殖を示す時系列グラフである。エラーバーは、標準偏差を示す。

【図15C】図１５Ａは、１１８７６／１０３９２二重ＩｇＧを使用したαｖ－およびβ１－サブユニットの発現レベルのフローサイトメトリーの概要のグラフであり、アイソタイプ対照抗体に対する選択的サブユニットのＭＦＩシグナルの倍数変化のｌｏｇ２値を示す。図１５Ｂは、１１８７６／１０３９２二重ＩｇＧの存在下における４日目のエンドポイント時点の肺細胞増殖の概要の棒グラフである。図１５Ｃ～１５Ｇは、１１８７６／１０３９２二重ＩｇＧの存在下における肺がん細胞株Ａ５４９（図１５Ｃ）、Ｈ２９２（図１５Ｄ）、Ｈ６６１（図１５Ｅ）、Ｈ４６０（図１５Ｆ）、およびＨ１５６３（図１５Ｇ）の細胞増殖を示す時系列グラフである。エラーバーは、標準偏差を示す。

【図16】図１６Ａは、１１８６７／１０３９２二重ＩｇＧを使用した異なる肺がん細胞株における阻害性力価測定評価を示す力価測定曲線グラフである。エラーバーは、標準偏差を示す。図１６Ｂは、異なる肺がん細胞株における二重ＩｇＧ １１８６７／１０３９２から得られたＩＣ５０値の概要の表である。

【図17A】図１７Ａ～１７Ｐは、二重ＩｇＧ １１８６７／１０３９２を使用した、細胞遊走阻害の評価のグラフ表示である。図１７Ａ（Ａ５４９）、１７Ｅ（Ｈ４６０）、１７Ｉ（Ｈ６６１）、および１７Ｍ（Ｈ１５６３）は、異なる肺がん細胞株を使用した創傷治癒アッセイの低速度撮影グラフであり、エラーバーは、標準偏差を示す。それぞれの実験について、図１７Ｂ、１７Ｆ、１７Ｊ、および１７Ｎは、未処置細胞の代表的な顕微鏡画像を示し、図１７Ｃ、１７Ｇ、１７Ｋ、および１７Ｏは、対照細胞の代表的な顕微鏡画像を示し、図１７Ｄ、１７Ｈ、１７Ｌ、および１７Ｐは、二重ＩｇＧ １１８６７／１０３９２処置細胞の代表的な顕微鏡画像を示す。

【図17B】図１７Ａ～１７Ｐは、二重ＩｇＧ １１８６７／１０３９２を使用した、細胞遊走阻害の評価のグラフ表示である。図１７Ａ（Ａ５４９）、１７Ｅ（Ｈ４６０）、１７Ｉ（Ｈ６６１）、および１７Ｍ（Ｈ１５６３）は、異なる肺がん細胞株を使用した創傷治癒アッセイの低速度撮影グラフであり、エラーバーは、標準偏差を示す。それぞれの実験について、図１７Ｂ、１７Ｆ、１７Ｊ、および１７Ｎは、未処置細胞の代表的な顕微鏡画像を示し、図１７Ｃ、１７Ｇ、１７Ｋ、および１７Ｏは、対照細胞の代表的な顕微鏡画像を示し、図１７Ｄ、１７Ｈ、１７Ｌ、および１７Ｐは、二重ＩｇＧ １１８６７／１０３９２処置細胞の代表的な顕微鏡画像を示す。

【発明を実施するための形態】

【0073】

本開示は、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合し、インテグリン－αｖに媒介されるＴＧＦβの活性化を阻害する、抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、およびそれらの抗原結合断片に関する。本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合し、インテグリン－αｖに媒介されるＴＧＦβの活性化を阻害する、抗体またはその抗原結合部分を対象とする。本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合し、インテグリン－αｖに媒介されるＴＧＦβの活性化を阻害する、二重特異性抗体またはその抗原結合部分を対象とする。いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、少なくとも第１のパラトープおよび第２のパラトープを含み、第１のパラトープは、インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）ヘテロ二量体上の第１のエピトープと結合し、第２のパラトープは、インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）ヘテロ二量体上の第２のエピトープと結合する。本開示の他の態様は、それを必要とする対象を処置する方法であって、対象に、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合し、インテグリン－αｖ媒介されるＴＧＦβの活性化を阻害する、抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、またはそれらの抗原結合断片を投与することを含む、方法に関する。いくつかの態様では、対象は、がんを有し、抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、またはそれらの抗原結合断片が、対象におけるがんを処置する。

【0074】

Ｉ．用語
本明細書において説明がより容易に理解され得るために、特定の用語をまず定義する。さらなる定義は詳細な説明を通じて示されている。

【0075】

「１つの（a）」または「１つの（an）」実体という用語は、その実体の１つまたは複数を指すことに留意されたく、例えば、「１つのヌクレオチド配列」は、１つまたは複数のヌクレオチド配列を表すことが理解される。したがって、「１つの（a）」（または「１つの（an）」）、「１つまたは複数の」、および「少なくとも１つの」という用語は、本明細書において同義的に使用することができる。

【0076】

さらに、「および／または」は、本明細書において使用されている場合、２つの指定された特徴または構成要素のそれぞれが、互いを伴う場合も伴わない場合もあるという具体的な開示として解釈されるものとする。したがって、用語「および／または」は、本明細書において「Ａおよび／またはＢ」といった語句において使用されるとき、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ（単独）」、ならびに「Ｂ（単独）」を含むことが意図される。同様に、用語「および／または」は、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」といった語句において使用されるとき、以下の態様：Ａ、ＢおよびＣ；Ａ、ＢまたはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）のそれぞれを包含することが意図される。

【0077】

態様が、「含む（comprising）」という言葉を用いて本明細書に記載されている場合、別途「からなる」および／または「から本質的になる」という用語で記載される類似の態様もまた提供されることが理解される。

【0078】

別途定義されない限り、本明細書に使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が関連する技術分野の当業者によって広く理解されているものと同じ意味を有する。例えば、the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press、The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press、
およびthe Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Pressは、当業者に、本開示において使用される用語の多くについての一般的な辞書を提供する。

【0079】

単位、接頭辞、および記号は、国際単位系（ＳＩ）に認められた形式で示される。数値範囲は、その範囲を定める数を含む。別途示されない限り、ヌクレオチド配列は、左から右に、５’から３’の方向で記述される。アミノ酸配列は、左から右に、アミノからカルボキシの方向で記述される。本明細書において提供される見出しは、全体として本明細書への参照によって得ることができる、本開示の様々な態様を制限するものではない。したがって、すぐ下に定義されている用語は、本明細書を全体として参照することによってより完全に定義される。

【0080】

用語「約」は、およそ、大体、前後、またはその範囲を意味して本明細書において使用される。用語「約」が、数値範囲とともに使用されている場合、この用語は、境界を、記載されている数値の上下に拡大することにより、その範囲を修飾する。一般に、用語「約」は、数値を、記述された値の上下、例えば、１０パーセント上または下（高いかまたは低い）に修飾し得る。

【0081】

「抗体」という用語は、いくつかの態様では、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含むタンパク質を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書において、ＶＨと略される）および重鎖定常領域（本明細書において、ＣＨと略される）から構成される。本明細書において、「二重特異性抗体」という用語は、少なくとも２つの抗原結合ドメイン、すなわち、少なくとも２つのパラトープを含む、抗体を指す。そのため、いくつかの態様では、二重特異性抗体は、少なくとも２つの重鎖可変領域（ＶＨ１およびＶＨ２）、ならびに少なくとも２つの軽鎖可変領域（ＶＬ１およびＶＬ２を含む。いくつかの態様では、少なくとも２つの重鎖可変領域は、同じであるか、または異なる。いくつかの態様では、少なくとも２つの軽鎖可変領域は、同じであるか、または異なる。本明細書において、「多重特異性抗体」は、少なくとも３つの抗原結合ドメイン、すなわち、少なくとも３つのパラトープを含む、抗体を指す。

【0082】

いくつかの抗体、例えば、天然に存在するＩｇＧ抗体では、重鎖定常領域は、ヒンジ、ならびに３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３からなる。いくつかの抗体、例えば、天然に存在するＩｇＧ抗体では、各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書において、ＶＬと略される）および軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（本明細書に置いて、ＣＬと略される）からなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれ、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存されている領域と散在している超可変性の領域にさらに細分され得る。各ＶＨおよびＶＬは、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端に配置される、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫グロブリンの、宿主組織または因子、例えば、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および伝統的な補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）との結合を媒介し得る。重鎖は、Ｃ末端リシンを有してもよくまたは有さなくてもよい。本明細書において別途指定されない限り、可変領域のアミノ酸は、カバットの番号付けシステムを使用して番号付けされ、定常領域のアミノ酸は、ＥＵシステムを使用して番号付けされている。

【0083】

「ＩｇＧ抗体」、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４抗体は、本明細書において、いくつかの態様では、天然に存在するＩｇＧ抗体の構造を有する、すなわち、これは、同一のサブクラスの天然に存在するＩｇＧ抗体と同一の数の重鎖および軽鎖ならびにジスルフィド結合を有する。例えば、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４抗体は、２つの重鎖（ＨＣ）および２つの軽鎖（ＬＣ）からなり、ここで、これらの２つのＨＣおよびＬＣは、それぞれ、天然に存在するＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４抗体において生じるものと同一の数および位置のジスルフィド架橋によって連結されている（抗体が、ジスルフィド架橋を修飾するように突然変異されている場合を除く）。

【0084】

抗体は、通常、そのコグネイト抗原と、１０^－５～１０^－１１Ｍ以下の解離定数（Ｋ_Ｄ）によって反映される高親和性で特異的に結合する。約１０^－４Ｍより大きい任意のＫ_Ｄは、一般に、非特異的結合を示すと考えられる。本明細書において、抗原と「特異的に結合する」抗体とは、抗原および実質的に同一の抗原と、１０^－７Ｍ以下、１０^－８Ｍ以下、５×１０^－９Ｍ以下、または１０^－８Ｍから１０^－１０Ｍ以下の間のＫ_Ｄを有することを意味する高親和性で結合するが、無関係の抗原とは高親和性で結合しない抗体である。抗原は、所与の抗原に対して高度の配列同一性を示す場合には、例えば、所与の抗原の配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％または少なくとも９９％の配列同一性を示す場合に、所与の抗原と「実質的に同一」である。例として、ヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と特異的に結合する抗体は、いくつかの態様では、特定の霊長類種に由来するインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗原（例えば、カニクイザルインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１））との交差反応性を有するが、その他の種に由来するインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗原と、またはインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）以外の抗原とは、交差反応し得ない。

【0085】

免疫グロブリンは、それだけには限らないがＩｇＡ、分泌型ＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＭを含めた、よく知られているアイソタイプのいずれかに由来し得る。ＩｇＧアイソタイプは、特定の種ではサブクラスに分けられる：ヒトでは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４ならびにマウスでは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂおよびＩｇＧ３。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体抗体は、ＩｇＧ１サブタイプのものである。免疫グロブリン、例えば、ＩｇＧ１は、多くても２、３個のアミノ酸で互いに異なるいくつかのアロタイプで存在する。「抗体」は、例として、天然に存在する抗体および天然に存在しない抗体の両方、モノクローナルおよびポリクローナル抗体、キメラおよびヒト化抗体、ヒトおよび非ヒト抗体、ならびに完全合成抗体を含む。

【0086】

本明細書において、抗体の「抗原結合部分」という用語は、抗原［例えば、ヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）］と特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって実施され得ることが示されている。抗体、例えば、本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例は、（ｉ）Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなるＦａｂ断片（パパイン切断に由来する断片）または同様の一価の断片、（ｉｉ）ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含むＦ（ａｂ’）２断片（ペプシン切断に由来する断片）または同様の二価の断片、（ｉｉｉ）Ｖ_ＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の一本のアームのＶ_ＬおよびＶ_ＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）Ｖ_ＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ward et al., (1989) Nature 341:544-546）、（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、ならびに（ｖｉｉ）適宜合成リンカーによって接続され得る２つ以上の単離されたＣＤＲの組合せを含む。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、ＶＬおよびＶＨ領域対が一価の分子（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Bird et al. (1988) Science 242:423-426;およびHuston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883を参照のこと）を形成する単一のタンパク質鎖として作製されることを可能にする合成リンカーによる組換え方法を使用して接続され得る。このような一本鎖抗体はまた、用語、抗体の「抗原結合部分」内に包含されるものとする。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来の技術を使用して得られ、断片は、無傷の抗体と同様の方法で有用性についてスクリーニングされる。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術によって、または無傷の免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断によって生産され得る。

【0087】

「二重特異性」または「二機能性抗体」は、２つの異なる重鎖／軽鎖対と、２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’断片の連結を含めた種々の方法によって生産できる。例えば、Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990); Kostelny et al., J. Immunol. 148:1547-1553 (1992)を参照のこと。いくつかの態様では、本明細書において開示される二重特異性抗体は、例えば、第１の重鎖の定常領域におけるアミノ酸配列または１つもしくは複数のアミノ酸側鎖の変更を通じて、第１の重鎖を、第２の重鎖に対する第１の重鎖の親和性を増大させる様式で修飾することによって、産生される。いくつかの態様では、修飾は、第１の重鎖および第２の重鎖の両方に行われる。いくつかの態様では、修飾は、第１および第２の重鎖のヘテロ二量体化を促進する。第１および第２の重鎖の親和性を増大させる任意の修飾を、使用することができる。特定の態様では、第１の重鎖は、ノブモチーフを含むように修飾され、第２の重鎖は、ホールモチーフを含むように修飾される。

【0088】

用語「モノクローナル抗体」は、本明細書において、実質的に同種の抗体の集団に由来する抗体を指す、すなわち、集団内に含まれる個々の抗体は、モノクローナル抗体の産生中に生じ得る可能性のある変異体を除き、実質的に類似であり、同一のエピトープに結合する（例えば、抗体は、単一の結合特異性および親和性を示す）が、そのような変異体は、一般に、少量で存在している。「モノクローナル」という修飾語は、抗体が、実質的に同種の抗体集団から得られているという特徴を示すものであり、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるものではない。用語「ヒトモノクローナル抗体」は、単一の結合特異性を示し、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域および適宜定常領域を有する、実質的に同種の抗体集団に由来する抗体を指す。いくつかの態様では、ヒトモノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、ヒト重鎖導入遺伝子および不死化された細胞と融合された軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスから得られたＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。

【0089】

本明細書において、用語「組換えヒト抗体」は、組換え手段によって調製され、発現され、作製されるか、または単離されたすべてのヒト抗体、例えば、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニックまたは導入染色体またはそれから調製されたハイブリドーマである動物（例えば、マウス）から単離された抗体、（ｂ）抗体を発現するよう形質転換された宿主細胞から、例えば、トランスフェクトーマから単離された抗体、（ｃ）組換え、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体および（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列のその他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意のその他の手段によって調製され、発現され、作製されるか、または単離された抗体を含む。このような組換えヒト抗体は、特定のヒト生殖系列免疫グロブリン配列を利用し、生殖系列遺伝子によってコードされる可変および定常領域を含むが、その後の再編成および例えば、抗体成熟の間に起こる突然変異を含む。当技術分野で公知のように（例えば、Lonberg (2005) Nature Biotech. 23(9):1117-1125を参照のこと）、可変領域は、外来抗原に対して特異的な抗体を形成するよう再編成する種々の遺伝子によってコードされる抗原結合ドメインを含有する。可変領域は、再配列に加えて、外来抗原に対する抗体の親和性を増大するよう、複数の単一アミノ酸変更（体細胞突然変異または高頻度突然変異とも呼ばれる）によってさらに修飾され得る。定常領域は、抗原にさらに応じて変化する（すなわち、アイソタイプスイッチ）。したがって、抗原に応じた、軽鎖および重鎖免疫グロブリンポリペプチドをコードする、再編成され、体細胞突然変異された核酸分子は、元の核酸分子との配列同一性を有し得ないが、その代わりに、実質的に同一または同様となる（すなわち、少なくとも８０％の同一性を有する）。

【0090】

「ヒト」抗体（ＨｕＭＡｂ）とは、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方が、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を指す。さらに、抗体が定常領域を含有する場合には、定常領域はまた、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する。本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的突然変異誘発によって、またはインビボでの体細胞突然変異によって導入された突然変異）を含み得る。しかし、本明細書において、用語「ヒト抗体」はマウスなどの別の哺乳類種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列にグラフトされている抗体を含むよう意図されない。用語「ヒト」抗体および「完全ヒト」抗体は、同義的に使用される。

【0091】

「ヒト化」抗体とは、非ヒト抗体のＣＤＲドメインの外側のアミノ酸の一部、ほとんどまたはすべてが、ヒト免疫グロブリンに由来する対応するアミノ酸で置換されている抗体を指す。抗体のヒト化形態のいくつかの態様では、ＣＤＲドメインの外側のアミノ酸の一部、ほとんどまたはすべてが、ヒト免疫グロブリンに由来するアミノ酸で置換されているが、１つまたは複数のＣＤＲ領域内の一部、ほとんどまたはすべてのアミノ酸は変更されていない。アミノ酸の小さい付加、欠失、挿入または置換または修飾は、抗体の特定の抗原と結合する能力を抑制しない限り許容される。「ヒト化」抗体は、元の抗体のものと同様の抗原特異性を保持する。

【0092】

「キメラ抗体」とは、可変領域がマウス抗体に由来し、定常領域がヒト抗体に由来する抗体などの、可変領域がある種に由来し、定常領域が別の種に由来する抗体を指す。

【0093】

本明細書において、「アイソタイプ」とは、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥ抗体）を指す。

【0094】

「アロタイプ」とは、特定のアイソタイプ群内の天然に存在する変異体を指し、これらの変異体は、２、３個のアミノ酸で異なっている（例えば、Jefferis et al. (2009) mAbs 1:1を参照のこと）。本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体抗体は、任意のアロタイプのものであり得る。本明細書において、「ＩｇＧ１ｆ」、「ＩｇＧ１．１ｆ」または「ＩｇＧ１．３ｆ」アイソタイプと称される抗体は、それぞれ、アロタイプ「ｆ」、すなわち、カバットにおけるＥＵ指数による２１４Ｒ、３５６Ｅおよび３５８Ｍを有する、ＩｇＧ１、エフェクターレスＩｇＧ１．１およびエフェクターレスＩｇＧ１．３抗体である。

【0095】

語句「抗原を認識する抗体」および「抗原に対して特異的な抗体」は、本明細書において、用語「抗原と特異的に結合する抗体」と同義的に使用される。

【0096】

「単離された抗体」は、本明細書において、他のタンパク質および細胞材料を実質的に含まない抗体を指すことが意図される。

【0097】

本明細書において、「インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する」抗体は、例えば、ヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）をトランスフェクトしたＣＨＯ細胞またはインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）を発現する腫瘍細胞を使用した結合アッセイにおいて、当技術分野において認識されている方法で、約２５μｇ／ｍＬ以下、約２３μｇ／ｍＬ以下、約２０μｇ／ｍＬ以下、約１５μｇ／ｍＬ以下、約１０μｇ／ｍＬ以下、約５μｇ／ｍＬ以下、約３μｇ／ｍＬ以下、約２μｇ／ｍＬ以下、約１μｇ／ｍＬ以下、約０．５μｇ／ｍＬ以下、約０．４５μｇ／ｍＬ以下、約０．４μｇ／ｍＬ以下、約０．３５μｇ／ｍＬ以下、または約０．３μｇ／ｍＬ以下のＥＣ_５０で、インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と相互作用する、抗体を指すことが意図される。いくつかの態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約２００ｎＭ以下、約１７５ｎＭ以下、約１６０ｎＭ以下、約１５０ｎＭ以下、約１２５ｎＭ以下、約１１０ｎＭ以下、約１００ｎＭ以下、約８０ｎＭ以下、約７５ｎＭ以下、約６０ｎＭ以下、約５０ｎＭ以下、約４０ｎＭ以下、約３５ｎＭ以下、約３０ｎＭ以下、約２５ｎＭ以下、約２０ｎＭ以下、約１５ｎＭ以下、約１０ｎＭ以下、約９ｎＭ以下、約８ｎＭ以下、約７ｎＭ以下、約６ｎＭ以下、約５ｎＭ以下、約４ｎＭ以下、約３ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、約１．９ｎＭ以下、約１．８ｎＭ以下、約１．７ｎＭ以下、約１．６ｎＭ以下、約１．５ｎＭ以下、約１．４ｎＭ以下、約１．３ｎＭ以下、約１．２ｎＭ以下、約１．１ｎＭ以下、約１．０ｎＭ以下、約０．９ｎＭ以下、約０．８ｎＭ以下、約０．７ｎＭ以下、約０．６ｎＭ以下、約０．５ｎＭ以下、約０．４ｎＭ以下、約０．３ｎＭ以下、約０．２ｎＭ以下、または約０．１ｎＭ以下のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現される、ヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約１０ｎＭ未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約５ｎＭ未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約４ｎＭ未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約３．５ｎＭ未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約３ｎＭ未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約２．５ｎＭ未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約２．４ｎＭ未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約２．３ｎＭ未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約２．１ｎＭ未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約２．０ｎＭ未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約１．９ｎＭ未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約１．８ｎＭ未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約１．７ｎＭ未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約１．６ｎＭ未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約１．５ｎＭ未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約１．４ｎＭ未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約１．３ｎＭ未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約１．２ｎＭ未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。特定の態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、約１．０未満のＥＣ_５０で、例えば、ＣＨＯ細胞上に発現されるヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。

【0098】

「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域とＦｃ受容体もしくはリガンドとの相互作用、またはそれにより生じる生化学的事象を指す。例示的「エフェクター機能」は、Ｃｌｑ結合、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣおよび抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）などのＦｃγＲ媒介性エフェクター機能ならびに細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方制御を含む。このようなエフェクター機能は、一般に、結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わされるＦｃ領域を必要とする。

【0099】

用語「エピトープ」または「抗原決定基」とは、例えば、それを同定するために使用される特定の方法によって定義される場合、免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する抗原（例えば、インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１））上の部位を指す。エピトープは、連続アミノ酸（普通、直鎖エピトープ）またはタンパク質の三次元フォールディングによって並置された非連続アミノ酸（普通、コンホメーションエピトープ）の両方から形成され得る。連続アミノ酸から形成されるエピトープは、通常、必ずではないが、変性溶媒に対する曝露の際に保持されるが、三次元フォールディングから形成されるエピトープは、通常、変性溶媒を用いる処理の際に失われる。エピトープは、通常、独特の空間コンホメーション中に少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸を含む。所与の抗体（すなわち、エピトープマッピング）によって結合されるエピトープを決定する方法は、当技術分野で周知であり、例えば、（例えば、インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）に由来する）重複ペプチドまたは連続ペプチドが、所与の抗体（例えば、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体）との反応性について試験される、免疫ブロット法および免疫沈降アッセイが挙げられる。エピトープの空間コンホメーションを決定する方法として、当技術分野における技術および本明細書に記載される技術、例えば、Ｘ線結晶学、Ｘ線共結晶学、抗原変異解析、２次元核磁気共鳴、およびＨＤＸ－ＭＳ（例えば、Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996)を参照されたい）が挙げられる。用語「エピトープマッピング」とは、抗体抗原認識の分子決定基の同定のプロセスを指す。

【0100】

２種以上の抗体に関して、用語「同一エピトープと結合する」は、所与の方法によって決定されるように、抗体がアミノ酸残基の同一セグメントと結合することを意味する。本明細書に記載される抗体を用いて、抗体が「インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）上の同一エピトープ」と結合するか否かを調べる技術として、例えば、エピトープの原子分解を提供する抗原：抗体複合体の結晶のＸ線分析および水素／重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）などのエピトープマッピング方法が挙げられる。その他の方法は、抗体の抗原断片との、または抗原の突然変異された変動との結合をモニタリングし、これでは、抗原配列内のアミノ酸残基の修飾による結合の喪失が、エピトープ成分の指標と考えられることが多い。さらに、エピトープマッピングのための計算コンビナトリアル法を使用してもよい。これらの方法は、対象の抗体の、コンビナトリアルファージディスプレイペプチドライブラリーから特異的な短いペプチドを親和性単離する能力に依存する。同一のＶＨおよびＶＬまたは同一のＣＤＲ１、２および３配列を有する抗体は、同一のエピトープと結合することが予測される。

【0101】

「標的との結合について別の抗体と競合する」抗体とは、その他の抗体の標的との結合を阻害する（部分的にまたは完全に）抗体を指す。２種の抗体が、標的との結合について互いに競合するか否か、すなわち、ある抗体が、その他の抗体の標的との結合を阻害するか否か、およびどの程度阻害するかは、公知の競合実験、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）解析などを使用して調べてもよい。いくつかの態様では、抗体は、別の抗体の標的との結合と、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％競合する、阻害する。阻害または競合のレベルは、どの抗体が「ブロッキング抗体」であるか（すなわち、標的とともに最初にインキュベートされるコールド抗体）に応じて異なり得る。競合アッセイは、例えば、Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.prot4277 or in Chapter 11 of "Using Antibodies" by Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA 1999に記載されるように実施できる。２つの抗体は、一方の抗体が、競合実験において抗原と最初に接触するかまたは他方の抗体が最初に接触するかにかかわらず、互いに、両方の方向で少なくとも５０％遮断する場合に、「交差競合する」。

【0102】

２つの抗体が、結合に関して競合または交差競合するかどうかを判定するための競合的結合アッセイには、例えば、フローサイトメトリー、例えば、実施例に記載されるものによる、インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）を発現する細胞との結合についての競合が含まれる。その他の方法として、ＳＰＲ（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標））、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Stahli et al., Methods in Enzymology 9:242 (1983)を参照のこと）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Kirkland et al., J. Immunol. 137:3614 (1986)を参照のこと）；固相直接標識化アッセイ、固相直接標識化サンドイッチアッセイ（Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988)を参照のこと）；１－１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ（Morel et al., Mol. Immunol. 25(1):7 (1988)を参照のこと）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Cheung et al., Virology 176:546 (1990)）；および直接標識化ＲＩＡ（Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol. 32:77 (1990)）が挙げられる。

【0103】

本明細書において、「パラトープ」という用語は、抗原上のエピトープと相互作用する、抗体またはその抗原結合断片に存在する１つまたは複数のアミノ酸を指す。

【0104】

本明細書において、用語「特異的結合」、「選択的結合」、「選択的に結合する」および「特異的に結合する」とは、所定の抗原上のエピトープとの抗体結合を指す。通常、抗体は、（ｉ）例えば、分析物として所定の抗原、例えば、組換えヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）およびリガンドとして抗体を使用したＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）２０００における表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術または抗体の抗原陽性細胞との結合のスキャッチャード解析法によって決定される場合に、およそ１０^－７Ｍ未満、例えば、およそ１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍまたは１０^－１０Ｍ未満またはさらにそれより小さい平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）で結合し、（ｉｉ）所定の抗原または密接に関連する抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）との結合に対するその親和性よりも、少なくとも２倍大きい親和性で所定の抗原と結合する。したがって、「ヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と特異的に結合する」抗体とは、１０^－７Ｍ以下、例えば、およそ１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍまたは１０^－１０Ｍ未満またはさらにそれより小さいＫ_Ｄで、ヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する抗体を指す。

【0105】

本明細書において、用語「ｋ_{ａｓｓｏｃ}」または「ｋ_ａ」とは、特定の抗体抗原相互作用の会合速度を指すものとするのに対し、本明細書において、用語「ｋ_ｄｉｓ」または「ｋ_ｄ」は、特定の抗体抗原相互作用の解離速度を指すものとする。用語「Ｋ_Ｄ」は、本明細書において、解離定数を指すものとし、これはｋ_ａに対するｋ_ｄの割合（すなわち、ｋ_ｄ／ｋ_ａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される。抗体のＫ_Ｄ値は、当技術分野で十分に確立された方法を使用して決定できる。抗体のＫ_Ｄを決定する利用可能な方法は、表面プラズモン共鳴、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）システム、またはフローサイトメトリーおよびスキャッチャード解析法を含む。

【0106】

本明細書において、ＩｇＧ抗体に関する用語「高親和性」は、抗体が、標的抗原に対して、１０^－８Ｍ以下、１０^－９Ｍ以下または１０^－１０Ｍ以下のＫ_Ｄを有することを指す。しかしながら、「高親和性」結合は、他の抗体アイソタイプについては変動し得る。例えば、ＩｇＭアイソタイプに関する「高親和性」結合は、抗体が、１０^－１０Ｍ以下または１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄを有することを指す。

【0107】

用語、抗体またはその抗原結合断片を使用するインビトロまたはインビボアッセイに関連して「ＥＣ_５０」とは、最大応答の５０％、すなわち、最大応答とベースラインの間の中間である応答を誘導する抗体またはその抗原結合部分の濃度を指す。

【0108】

用語、本明細書において対象に適用されるような「天然に存在する」とは、対象が自然界において見出され得るという事実を指す。例えば、実験室において人によって意図的に修飾されていない、自然界における供給源から単離され得る生物（ウイルスを含む）中に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列が天然に存在する。

【0109】

「ポリペプチド」とは、少なくとも２個の連続して連結しているアミノ酸残基を含む鎖を指し、鎖の長さに上限はない。タンパク質中の１個または複数のアミノ酸残基は、それだけには限らないが、グリコシル化、リン酸化またはジスルフィド結合形成などの修飾を含有し得る。「タンパク質」は、１つまたは複数のポリペプチドを含み得る。

【0110】

用語「核酸分子」とは、本明細書において、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を含むものとする。核酸分子は、一本鎖であっても、二本鎖であってもよく、ｃＤＮＡであり得る。

【0111】

「保存的アミノ酸置換」は、同様の側鎖を有するアミノ酸残基とのアミノ酸残基の置換を指す。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で規定されている。これらのファミリーとして、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分枝側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が挙げられる。いくつかの態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体中の予想される非必須アミノ酸残基は、同一側鎖ファミリーに由来する別のアミノ酸残基と置換される。抗原結合を排除しないヌクレオチドおよびアミノ酸保存的置換を同定する方法は、当技術分野で周知である（例えば、Brummel et al., Biochem. 32:1180-1187 (1993); Kobayashi et al. Protein Eng. 12(10):879-884 (1999);およびBurks et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:412-417 (1997)を参照のこと）。

【0112】

核酸については、用語「実質的な相同性」は、２種の核酸またはその指定された配列は、最適にアラインされ、比較される場合に、ヌクレオチドの少なくとも約８０％、少なくとも約９０％～９５％、またはヌクレオチドの少なくとも約９８％～９９．５％において適当なヌクレオチド挿入または欠失を用いて同一であることを示す。あるいは、セグメントが選択的ハイブリダイゼーション条件下で、鎖の相補体とハイブリダイズする場合に、実質的な相同性が存在する。

【0113】

ポリペプチドについては、用語「実質的な相同性」は、２種のポリペプチドまたはその指定された配列が、最適にアラインされ、比較される場合に、アミノ酸の少なくとも約８０％、少なくとも約９０％～９５％、またはアミノ酸の少なくとも約９８％～９９．５％において適当なアミノ酸挿入または欠失を用いて同一であることを示す。

【0114】

２種の配列間の同一性パーセントは、配列によって共有される同一位置の数の関数であり（すなわち、相同性％＝同一位置の数／位置の総数×１００）、２種の配列の最適アラインメントのために導入される必要があるギャップの数、各ギャップの長さを考慮する。２種の配列間の配列の比較および同一性パーセントの決定は、以下の限定されない例に記載されるように、数学的アルゴリズムを使用して達成され得る。

【0115】

２種のヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ.gcg.comで入手可能）中のＧＡＰプログラムを使用して、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスおよび４０、５０、６０、７０または８０のギャップ加重および１、２、３、４、５または６の長さ加重を使用して決定できる。２種のヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の同一性パーセントはまた、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているE. MeyersおよびW. Millerのアルゴリズム（CABIOS, 4:11-17 (1989)）を使用し、ＰＡＭ１２０加重残基表、１２のギャップ長ペナルティーおよび４のギャップペナルティーを使用して決定できる。さらに、２種のアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（http://www.gcg.comで入手可能）中のＧＡＰプログラム中に組み込まれたNeedlemanおよびWunsch（J. Mol. Biol. (48):444-453 (1970)）アルゴリズムを使用し、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれかおよび１６、１４、１２、１０、８、６または４のギャップ加重および１、２、３、４、５または６の長さ加重を使用して決定できる。

【0116】

本明細書に記載される核酸およびタンパク質配列は、例えば、関連配列を同定するための公開データベースに対する検索を実施するための「クエリー配列」としてさらに使用され得る。このような検索は、Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実施され得る。本明細書に記載された核酸分子と相同なヌクレオチド配列を得るために、ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いて実施できる。本明細書に記載されたタンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得るために、ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長（wordlength）＝３を用いて実施できる。比較目的でギャップ付きアラインメント得るために、Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402に記載されるようなギャップ付きＢＬＡＳＴを利用できる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合には、それぞれのプログラムのデフォルトパラメーター（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）を使用できる。ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂ.ncbi.nlm.nih.govを参照のこと。

【0117】

核酸は、全細胞中に、細胞溶解物中に、または部分精製されたかもしくは実質的に純粋な形態で存在し得る。核酸は、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンド形成、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動および当技術分野で周知のその他のものを含めた標準技術によって、その他の細胞成分またはその他の夾雑物、例えば、その他の細胞性核酸（例えば、染色体のその他の部分）またはタンパク質から精製された場合に「単離される」かまたは「実質的に純粋にされる」。F. Ausubel, et al., ed. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York (1987)を参照のこと。

【0118】

核酸、例えば、ｃＤＮＡは、遺伝子配列を提供するための標準技術に従って突然変異してもよい。コード配列については、これらの突然変異は、所望されるアミノ酸配列に影響を及ぼし得る。特に、天然のＶ、Ｄ、Ｊ、定常、スイッチおよび本明細書に記載される他のそのような配列と実質的に相同であるか、またはそれらに由来する、ＤＮＡ配列が考慮される（ここで、「由来する」とは、配列が、別の配列と同一であるか、またはそれから修飾されていることを示す）。

【0119】

本明細書において、用語「ベクター」は、それに連結している別の核酸を輸送可能な核酸分子を指すものとする。ある種のベクターは、「プラスミド」であり、これは、さらなるＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別の種類のベクターは、ウイルスベクターであり、これでは、さらなるＤＮＡセグメントがウイルスゲノム中にライゲーションされ得る。特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞において自己複製可能である（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。その他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入の際に宿主細胞のゲノム中に組み込まれ、それによって、宿主ゲノムとともに複製され得る。さらに、特定のベクターは、作動可能に連結されている遺伝子の発現を指示可能である。このようなベクターは、本明細書において、「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、プラスミドの形態であることが多い。プラスミドは、ベクターの最もよく使用される形態であるので、本明細書では、「プラスミド」および「ベクター」は、同義的に使用され得る。しかし、同等の機能を果たす、ウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）などのその他の形態の発現ベクターもまた含まれる。

【0120】

用語「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）は、本明細書において、細胞中に天然に存在しない核酸を含み、組換え発現ベクターが導入されている細胞であり得る細胞を指すものとする。このような用語は、特定の対象細胞を指すだけではなく、このような細胞の後代も指すということは理解されなければならない。特定の修飾は、突然変異または環境的影響のいずれかによって後世において起こり得るので、このような後代は実際、親の細胞と同一ではない場合もあるが、本明細書において、用語「宿主細胞」の範囲内に依然として含まれる。

【0121】

「免疫応答」とは、当技術分野において理解される通りであり、一般に、外来物質または異常な、例えば、がん性細胞に対する脊椎動物内の生物学的応答を指し、この応答が、これらの物質およびそれらによって引き起こされる疾患から生物を保護する。免疫応答は、免疫系の１つまたは複数の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞または好中球）およびこれらの細胞のいずれかまたは肝臓によって産生される可溶性高分子（抗体、サイトカインおよび補体を含む）の作用によって媒介され、これは、進入する病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、がん性もしくはその他の異常な細胞、または自己免疫もしくは病的炎症の場合には、正常なヒト細胞もしくは組織との選択的標的化、結合、損傷、破壊および／またはそれらの脊椎動物の身体からの排除をもたらす。免疫反応には、例えば、Ｔ細胞、例えば、エフェクターＴ細胞、Ｔｈ細胞、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞もしくはＴｒｅｇ細胞の活性化もしくは阻害、または免疫系の任意の他の細胞、例えば、ＮＫ細胞の活性化もしくは阻害が含まれる。

【0122】

「免疫調節物質（immunomodulator）」または「免疫制御物質（immunoregulator）」とは、免疫応答の調節、制御または修飾に関与し得る物質、例えば、シグナル伝達経路の成分を標的とする物質を指す。免疫応答の「調節」、「制御」または「修飾」とは、免疫系の細胞における、またはこのような細胞（例えば、Ｔｈ１細胞などのエフェクターＴ細胞）の活性における任意の変更を指す。このような調節は、免疫系の刺激または抑制を含み、種々の細胞型の数の増大もしくは減少、これらの細胞の活性の増大もしくは減少または免疫系内で起こり得る任意のその他の変化によって示され得る。阻害的および刺激的免疫調節物質の両方とも同定されており、その一部は、腫瘍微小環境において増強された機能を有し得る。いくつかの態様では、免疫調節物質は、Ｔ細胞の表面上の分子を標的とする。「免疫調節性標的」または「免疫制御性標的」は、物質、作用物質、部分、化合物または分子による結合に対して標的化される分子、例えば細胞表面分子であり、その活性は、物質、作用物質、部分、化合物または分子の結合によって変更される。免疫調節性標的は、例えば、細胞の表面の受容体（「免疫調節性受容体」）および受容体リガンド（「免疫調節性リガンド」）を含む。

【0123】

「免疫療法」とは、免疫系または免疫応答を誘導、増強、抑制またはそうでなければ修飾することを含む方法によって、疾患の再発に苦しむまたは、それを起こすまたは患う危険にある対象の治療を指す。

【0124】

本明細書において、用語「連結している」とは、２つ以上の分子の会合を指す。連結は、共有結合である場合も、非共有結合である場合もある。連結はまた、遺伝的であり（すなわち、組換えによって融合され）得る。このような連結は、化学的コンジュゲーションおよび組換えタンパク質生産などの様々な当技術分野において認識される技術を使用して達成され得る。

【0125】

本明細書において、「投与すること」は、種々の方法および送達システムのいずれかを使用して、治療薬を含む組成物の対象への物理的導入を指す。本明細書に記載される抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の別の投与経路は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、脊髄または例えば、注射もしくは注入によるその他の非経口投与経路を含む。本明細書において、語句「非経口投与」とは、経腸および局所投与以外の、普通、注射による投与様式を意味し、制限するものではないが、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、リンパ内、病巣内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射および注入ならびにインビボエレクトロポレーションを含む。あるいは、本明細書に記載される抗体は、局所、上皮または粘膜投与経路などの非経口ではない経路によって、例えば、鼻腔内に、経口的に、経膣的に、直腸性に、舌下にまたは局所的に投与され得る。投与することは、例えば、１回、複数回および／または１回もしくは複数回の長期間にわたって実施され得る。

【0126】

本明細書において、語句「腫瘍の成長を阻害する」には、腫瘍の成長における任意の測定可能な減少、例えば、腫瘍の成長の、少なくとも約１０％、例えば、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９９％または１００％の阻害が含まれる。いくつかの態様では、腫瘍成長の阻害は、腫瘍成長阻害パーセント（ＴＧＩ％）として測定される。ＴＧＩ％は、式：［１－（（Ｔ_ｔ／Ｔ_０）／（Ｃ_ｔ／Ｃ_０））］／［（Ｃ_ｔ－Ｃ_０）／Ｃ_ｔ］＊１００［式１］（式中、Ｔ_ｔ＝時間「ｔ」における処置動物の個々の腫瘍サイズ、Ｔ_０＝１回目の測定における処置動物の個々の腫瘍サイズ、Ｃ_ｔ＝時間「ｔ」における対照動物の中央値腫瘍サイズ、Ｃ_０＝１回目の測定における対照動物の中央値腫瘍サイズ）に従って、すべての処置動物から計算されたたデータ「ｔ」におけるＴＧＩを計算することによって、決定することができる。

【0127】

本明細書において、「がん」は、身体中での異常な細胞の制御されない成長を特徴とする疾患の広い群を指す。未制御細胞分裂は、隣接する組織へ浸潤し、リンパ系または血流によって身体の遠隔部位へ転移し得る悪性腫瘍または細胞の形成をもたらし得る。

【0128】

用語「処置する」、「処置すること」および「処置」とは、本明細書において、症状の進行、発生、重症度もしくは再発、合併症、疾病と関連している状態または生化学的兆候を逆転させ、軽減し、寛解し、阻害し、または減速し、または予防すること、または全般的な生存を増強することを目的とした、対象で実施される任意の種類の介入もしくはプロセスまたは対象へ活性薬剤を投与することを指す。処置は、疾患を有する対象または疾患を有さない対象（例えば、予防のため）のものであってもよい。

【0129】

用語「有効用量」または「有効投与量」は、所望の効果を達成または少なくとも部分的に達成するのに十分な量と定義される。薬物または治療剤の「治療上有効な量」または「治療上有効な投与量」は、単独で、または別の治療剤と組み合わせて使用される場合に、疾患症状の重症度の減少、疾患症状のない期間の頻度および期間の増大、全生存期間（疾患、例えば、がんの診断日もしくは処置開始日から、疾患が診断された患者が依然として生存している時間の長さ）の増大、または疾患苦痛による機能障害もしくは能力障害の防止によって証明される疾患退縮を促進する、薬物の任意の量である。薬物の治療上有効な量または投与量は、単独で、または別の治療薬と組み合わせて、疾患を発生するか、または疾患の再発を患う危険性にある対象に投与される場合に、疾患の発生または再発を阻害する薬物の量である、「予防的有効量」または「予防的有効投与量」を含む。治療薬の疾患退縮を促進する能力または疾患の発生もしくは再発を阻害する能力は、臨床治験の際にヒト対象において、ヒトにおける有効性を予測する動物モデル系において、インビトロアッセイにおいて薬剤の活性をアッセイすることによってなど、種々の方法を使用して評価できる。

【0130】

例として、抗がん剤は、対象において、がん退縮を促進する薬物である。いくつかの態様では、治療上有効な量の薬物は、がんを排除するところまでがん退縮を促進する。「がん退縮を促進すること」とは、有効量の薬物を、単独で、または抗新生物剤と組み合わせて投与することが、患者において、腫瘍成長または大きさの低減、腫瘍の壊死、少なくとも１種の疾患症状の重症度の減少、疾患症状のない期間の頻度および期間の増大、全生存期間の増大、疾患苦痛による機能障害もしくは能力障害の防止、またはそれ以外では疾患症状の寛解をもたらすことを意味する。さらに、処置に関する用語「有効」および「有効性」には、薬理学的有効性および生理学的安全性の両方が含まれる。薬理学的有効性とは、薬物の患者においてがん退縮を促進する能力を指す。生理学的安全性とは、薬物の投与に起因する、毒性のレベルまたは細胞、臓器および／または生物レベルでのその他の有害な生理学的効果（有害効果）を指す。

【0131】

腫瘍の治療の例として、薬物の治療上有効な量または投与量は、未治療の対象と比較して、細胞成長または腫瘍成長を少なくとも約２０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約８０％阻害する。いくつかの態様では、薬物の治療上有効な量または投与量は、細胞成長または腫瘍成長を完全に阻害し、すなわち、細胞成長または腫瘍成長を１００％阻害する。化合物の腫瘍成長を阻害する能力は、以下に記載されるアッセイを使用して評価できる。あるいは、この組成物の特性は、化合物の細胞成長を阻害する能力を調べることによって評価でき、このような阻害は、任意のアッセイによってインビトロで測定され得る。本明細書に記載されるいくつかの態様では、腫瘍退縮が観察され得、少なくとも約２０日、少なくとも約４０日、または少なくとも約６０日の期間継続し得る。

【0132】

用語「患者」は、予防的または治療的処置のいずれかを受けるヒトおよび他の哺乳動物対象を含む。

【0133】

本明細書において、用語「対象」には、任意のヒトまたは非ヒト動物が含まれる。例えば、本明細書に記載される方法および組成物は、がんを有する対象を治療するために使用され得る。用語「非ヒト動物」は、すべての脊椎動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリなどの哺乳動物および非哺乳動物、両生類、爬虫類などを含む。

【0134】

本明細書において、用語「ｕｇ」および「ｕＭ」は、それぞれ、「μｇ」および「μΜ」と同義的に使用される。

【0135】

本明細書に記載される種々の態様は、以下のサブセクションにおいてさらに詳細に記載される。

【0136】

ＩＩ．本開示の組成物
本開示の特定の態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と特異的に結合し、インテグリン－αｖに媒介されるＴＧＦβの活性化を阻害、予防または低減する、単離された抗体またはその抗原結合部分を対象とする。本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と特異的に結合し、インテグリン－αｖに媒介されるＴＧＦβの活性化を阻害、予防または低減する、二重特異性抗体を対象とする。本開示のいくつかの態様は、それを必要とする対象において疾患または状態を処置する方法であって、対象に、インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と特異的に結合し、インテグリン－αｖに媒介されるＴＧＦβの活性化を阻害、予防、または低減する、抗体もしくはその抗原結合部分または二重特異性抗体を投与することを含む、方法を対象とする。

【0137】

いくつかの態様では、インテグリン－αｖに媒介されるＴＧＦβの活性化は、本開示の抗体もしくはその抗原結合部分または二重特異性抗体との接触前のインテグリン－αｖに媒介されるＴＧＦβの活性化のレベルと比べて、少なくとも約１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、または少なくとも約１０倍低減される。いくつかの態様では、インテグリン－αｖに媒介されるＴＧＦβの活性化は、本開示の抗体もしくはその抗原結合部分または二重特異性抗体と接触した後に、完全に除去される。

【0138】

ＩＩ．Ａ．抗インテグリン－αｖヘテロ二量体抗体
本開示の特定の態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と特異的に結合し、インテグリン－αｖに媒介されるＴＧＦβの活性化を阻害、予防または低減する、単離された抗体またはその抗原結合部分を対象とする。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、可変重鎖相補性決定領域（ＶＨ－ＣＤＲ）１、ＶＨ－ＣＤＲ２、およびＶＨ－ＣＤＲ３を含む可変重鎖領域（「ＶＨ」）、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、およびＶＬ－ＣＤＲ３を含む可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨ－ＣＤＲ３は、配列番号５、１５、または１５のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＨ－ＣＤＲ２は、配列番号４、１４、または２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＨ－ＣＤＲ１は、配列番号３、１３、または２３のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＬ－ＣＤＲ３は、配列番号１０、２０、または３０のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＬ－ＣＤＲ２は、配列番号９、１９、または２９のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＬ－ＣＤＲ１は、配列番号８、１８、または２８のアミノ酸配列を含む。

【0139】

【表1】

【表2】

【表3】

【0140】

本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体との結合について、参照抗体またはその抗原結合部分と交差競合する、抗体またはその抗原結合部分であって、参照抗体が、可変重鎖相補性決定領域（ＶＨ－ＣＤＲ）１、ＶＨ－ＣＤＲ２、およびＶＨ－ＣＤＲ３を含む可変重鎖領域（「ＶＨ」）、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、ＶＬ－ＣＤＲ３を含む可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５、１５、または１５のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合部分を対象とする。

【0141】

本開示のいくつかの態様は、参照抗体またはその抗原結合部分と同じインテグリン－αｖヘテロ二量体上のエピトープと結合する抗体またはその抗原結合部分であって、参照抗体が、可変重鎖相補性決定領域（ＶＨ－ＣＤＲ）１、ＶＨ－ＣＤＲ２、およびＶＨ－ＣＤＲ３を含む可変重鎖領域（「ＶＨ」）、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、およびＶＬ－ＣＤＲ３を含む可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５、１５、または１５のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合部分を対象とする。

【0142】

本開示のいくつかの態様は、参照抗体またはその抗原結合部分によって認識されるエピトープとオーバーラップする少なくとも１つのアミノ酸残基を有するインテグリン－αｖヘテロ二量体上のエピトープと結合する抗体またはその抗原結合部分であって、参照抗体が、可変重鎖相補性決定領域（ＶＨ－ＣＤＲ）１、ＶＨ－ＣＤＲ２、およびＶＨ－ＣＤＲ３を含む可変重鎖領域（「ＶＨ」）、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、およびＶＬ－ＣＤＲ３を含む可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５、１５、または１５のアミノ酸配列を含む、抗体またはその抗原結合部分を対象とする。

【0143】

いくつかの態様では、参照抗体のＶＨ－ＣＤＲ２は、配列番号４、１４、または２４のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、参照抗体のＶＨ－ＣＤＲ１は、配列番号３、１３、または２３のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、参照抗体のＶＬ－ＣＤＲ３は、配列番号１０、２０、または３０のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、参照抗体のＶＬ－ＣＤＲ２は、配列番号９、１９、または２９のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、参照抗体のＶＬ－ＣＤＲ１は、配列番号８、１８、または２８のアミノ酸配列を含む。

【0144】

いくつかの態様では、参照抗体またはその抗原結合部分は、可変重鎖相補性決定領域（ＶＨ－ＣＤＲ）１、ＶＨ－ＣＤＲ２、およびＶＨ－ＣＤＲ３を含む可変重鎖領域（「ＶＨ」）、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、およびＶＬ－ＣＤＲ３を含む可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨ－ＣＤＲ１は、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＨ－ＣＤＲ２は、配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＨ－ＣＤＲ３は、配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ－ＣＤＲ１は、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ－ＣＤＲ２は、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ－ＣＤＲ３は、配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0145】

いくつかの態様では、参照抗体またはその抗原結合部分は、可変重鎖相補性決定領域（ＶＨ－ＣＤＲ）１、ＶＨ－ＣＤＲ２、およびＶＨ－ＣＤＲ３を含む可変重鎖領域（「ＶＨ」）、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、およびＶＬ－ＣＤＲ３を含む可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨ－ＣＤＲ１は、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＨ－ＣＤＲ２は、配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＨ－ＣＤＲ３は、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ－ＣＤＲ１は、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ－ＣＤＲ２は、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ－ＣＤＲ３は、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0146】

いくつかの態様では、参照抗体またはその抗原結合部分は、可変重鎖相補性決定領域（ＶＨ－ＣＤＲ）１、ＶＨ－ＣＤＲ２、およびＶＨ－ＣＤＲ３を含む可変重鎖領域（「ＶＨ」）、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、およびＶＬ－ＣＤＲ３を含む可変軽鎖領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨ－ＣＤＲ１は、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＨ－ＣＤＲ２は、配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＨ－ＣＤＲ３は、配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ－ＣＤＲ１は、配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ－ＣＤＲ２は、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ－ＣＤＲ３は、配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0147】

いくつかの態様では、参照抗体またはその抗原結合部分は、重鎖可変領域（「ＶＨ」）および軽鎖可変領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＨは、配列番号２、１２、および２２から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、参照抗体は、配列番号２、１２、および２２から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、参照抗体またはその抗原結合部分は、重鎖可変領域（「ＶＨ」）および軽鎖可変領域（「ＶＬ」）を含み、ＶＬは、配列番号７、１７、および２７から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、参照抗体またはその抗原結合部分は、配列番号７、１７、および２７から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0148】

いくつかの態様では、参照抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの態様では、参照抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの態様では、参照抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0149】

本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、およびＶＨ－ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、およびＶＬ－ＣＤＲ３を含むＶＬを含み、ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号１０に記載されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を対象とする。

【0150】

本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、およびＶＨ－ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、およびＶＬ－ＣＤＲ３を含むＶＬを含み、ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を対象とする。

【0151】

本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合部分であって、ＶＨ－ＣＤＲ１、ＶＨ－ＣＤＲ２、およびＶＨ－ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにＶＬ－ＣＤＲ１、ＶＬ－ＣＤＲ２、およびＶＬ－ＣＤＲ３を含むＶＬを含み、ＶＨ－ＣＤＲ１が、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＨ－ＣＤＲ２が、配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＨ－ＣＤＲ３が、配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ－ＣＤＲ１が、配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ－ＣＤＲ２が、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ－ＣＤＲ３が、配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合部分を対象とする。

【0152】

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号７に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬを含む。

【0153】

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、重鎖（「ＨＣ」）および軽鎖（「ＬＣ」）を含み、ＨＣは、配列番号１、１１、および２１から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＨＣは、配列番号１、１１、または２１に記載されるアミノ酸配列と比べて、少なくとも約１、少なくとも約２、少なくとも約３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、または少なくとも約５０個の点突然変異を含む。いくつかの態様では、ＨＣは、配列番号１、１１、または２１に記載されるアミノ酸配列と比べて、１つの点突然変異を含む。いくつかの態様では、ＨＣは、配列番号１、１１、または２１に記載されるアミノ酸配列と比べて、２つの点突然変異を含む。いくつかの態様では、ＨＣは、配列番号１、１１、または２１に記載されるアミノ酸配列と比べて、３つの点突然変異を含む。いくつかの態様では、ＨＣは、配列番号１、１１、または２１に記載されるアミノ酸配列と比べて、４つの点突然変異を含む。いくつかの態様では、ＨＣは、配列番号１、１１、または２１に記載されるアミノ酸配列と比べて、５つの点突然変異を含む。いくつかの態様では、ＨＣは、配列番号１、１１、または２１に記載されるアミノ酸配列と比べて、１０個の点突然変異を含む。

【0154】

いくつかの態様では、ＨＣは、配列番号１、１１、および２１から選択されるアミノ酸配列を含む。特定の態様では、ＨＣは、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含む。特定の態様では、ＨＣは、配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含む。特定の態様では、ＨＣは、配列番号２１に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0155】

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、ＨＣおよびＬＣを含み、ＬＣは、配列番号６、１６、および２６から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＬＣは、配列番号６、１６、または２６に記載されるアミノ酸配列と比べて、少なくとも約１、少なくとも約２、少なくとも約３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、または少なくとも約５０個の点突然変異を含む。いくつかの態様では、ＬＣは、配列番号６、１６、または２６に記載されるアミノ酸配列と比べて、１つの点突然変異を含む。いくつかの態様では、ＬＣは、配列番号６、１６、または２６に記載されるアミノ酸配列と比べて、２つの点突然変異を含む。いくつかの態様では、ＬＣは、配列番号６、１６、または２６に記載されるアミノ酸配列と比べて、３つの点突然変異を含む。いくつかの態様では、ＬＣは、配列番号６、１６、または２６に記載されるアミノ酸配列と比べて、４つの点突然変異を含む。いくつかの態様では、ＬＣは、配列番号６、１６、または２６に記載されるアミノ酸配列と比べて、５つの点突然変異を含む。いくつかの態様では、ＬＣは、配列番号６、１６、または２６に記載されるアミノ酸配列と比べて、１０個の点突然変異を含む。

【0156】

いくつかの態様では、ＬＣは、配列番号１、１１、および２１から選択されるアミノ酸配列を含む。特定の態様では、ＬＣは、配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含む。特定の態様では、ＬＣは、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含む。特定の態様では、ＬＣは、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0157】

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、ＨＣおよびＬＣを含み、ＨＣは、配列番号１、１１、および２１から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号６、１６、および２６から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、ＨＣおよびＬＣを含み、ＨＣは、配列番号１に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、ＨＣおよびＬＣを含み、ＨＣは、配列番号１１に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、ＨＣおよびＬＣを含み、ＨＣは、配列番号２１に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0158】

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、ＨＣおよびＬＣを含み、ＨＣは、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号６に記載されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、ＨＣおよびＬＣを含み、ＨＣは、配列番号１１に記載されるアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、ＨＣおよびＬＣを含み、ＨＣは、配列番号２１に記載されるアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0159】

いくつかの態様では、抗体は、抗体の抗原結合部分である。いくつかの態様では、抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド連結されたＦｖ、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである。

【0160】

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、腫瘍細胞増殖を低減または阻害する。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、腫瘍細胞遊走を低減または阻害する。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、腫瘍細胞転移を低減または阻害する。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、腫瘍細胞死を増大させる。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、腫瘍成長の阻害を、それを必要とする対象において行うことができる。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、腫瘍体積の低減を、それを必要とする対象において行うことができる。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、無増悪生存期間の増大を、それを必要とする対象において行うことができる。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合部分は、全生存期間の増大を、それを必要とする対象において行うことができる。

【0161】

いくつかの態様では、本明細書に記載される抗インテグリンαｖヘテロ二量体抗体は、高い親和性で、例えば、１０^－６Ｍ以下、１０^－７Ｍ以下、１０^－８Ｍ以下、１０^－９Ｍ以下、１０^－１０Ｍ以下、１０^－１１Ｍ以下、１０^－１２Ｍ以下、１０^－１２Ｍ～１０^－７Ｍ、１０^－１１Ｍ～１０^－７Ｍ、１０^－１０Ｍ～１０^－７Ｍ、または１０^－９Ｍ～１０^－７ＭのＫ_Ｄで、ヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。いくつかの態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体抗体は、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）（例えば、実施例に記載される）を使用して、例えば、表面プラズモン共鳴によって判定される場合、１０^－６Ｍ以下、１０^－７Ｍ以下、１０^－８Ｍ以下、１０^－９Ｍ（１ｎＭ）以下、１０^－１０Ｍ以下、１０^－１２Ｍ～１０^－７Ｍ、１０^－１１Ｍ～１０^－７Ｍ、１０^－１０Ｍ～１０^－７Ｍ、１０^－９Ｍ～１０^－７Ｍ、または１０^－８Ｍ～１０^－７ＭのＫ_Ｄで、ヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。いくつかの態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、例えばＥＬＩＳＡ、例えば、インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）ＥＬＩＳＡキットによって判定される場合、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、１００ｎＭ～０．０１ｎＭ、１００ｎＭ～０．１ｎＭ、１００ｎＭ～１ｎＭ、もしくは１０ｎＭ～１ｎＭ、または１０ｕｇ／ｍＬ以下、５ｕｇ／ｍＬ以下、１ｕｇ／ｍＬ以下、０．９ｕｇ／ｍＬ以下、０．８ｕｇ／ｍＬ以下、０．７ｕｇ／ｍＬ以下、０．６ｕｇ／ｍＬ以下、０．５ｕｇ／ｍＬ以下、０．４ｕｇ／ｍＬ以下、０．３ｕｇ／ｍＬ以下、０．２ｕｇ／ｍＬ以下、０．１ｕｇ／ｍＬ以下、０．０５ｕｇ／ｍＬ以下、もしくは０．０１ｕｇ／ｍＬ以下のＥＣ_５０のＥＣ_５０で、ヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と結合する。

【0162】

いくつかの態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体抗体は、約５×１０^－４Ｍ以下、約１×１０^－４Ｍ以下、５×１０^－５Ｍ以下、約１×１０^－５Ｍ以下、約１×１０^－６Ｍ以下、約１×１０^－７Ｍ以下、または約１×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄで、ヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と特異的に結合し、Ｋ_Ｄは、表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）分析によって測定される。いくつかの態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体抗体は、少なくとも約１×１０^３ｍｓ^－１、少なくとも約５×１０^３ｍｓ^－１、少なくとも約１×１０^４ｍｓ^－１、少なくとも約５×１０^４ｍｓ^－１、少なくとも約１×１０^５ｍｓ^－１、少なくとも約５×１０^５ｍｓ^－１、または少なくとも約１×１０^６ｍｓ^－１の結合速度定数（ｋ_ａ）で、ヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と特異的に結合し、ｋ_ａは、表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）分析によって測定される。

【0163】

いくつかの態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体抗体は、約０．１ｓ^－１以下、０．０５ｓ^－１以下、０．０１ｓ^－１以下、５×１０^－３ｓ^－１以下、１×１０^－３ｓ^－１以下、５×１０^－４ｓ^－１以下、１×１０^－４ｓ^－１以下、５×１０^－５ｓ^－１以下、または１×１０^－５ｓ^－１以下の解離速度定数（ｋ_ｄ）で、ヒトインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と特異的に結合し、Ｋ_Ｄは、表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）分析によって測定される。

【0164】

本明細書に記載されるＶＨドメインまたはその１つもしくは複数のＣＤＲは、重鎖、例えば、全長重鎖を形成するために、定常ドメインと連結され得る。同様に、本明細書に記載されるＶＬドメインまたはその１つもしくは複数のＣＤＲは、軽鎖、例えば、全長軽鎖を形成するために、定常ドメインと連結され得る。全長重鎖［適宜Ｃ末端リシン（Ｋ）またはＣ末端グリシンおよびリシン（ＧＫ）は、不在であってもよいため、除外する］ならびに全長軽鎖が、組み合わさって、全長抗体が形成され得る。

【0165】

本明細書に記載されるＶＨドメインは、天然に存在するか、または例えば、本明細書にさらに記載されるように修飾されているかのいずれかである、ヒトＩｇＧ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４の定常ドメインに融合され得る。例えば、ＶＨドメインは、ヒトＩｇＧ、例えば、ＩｇＧ１、定常領域、例えば、以下の野生型ヒトＩｇＧ１定常ドメインのアミノ酸配列：

【化1】

（配列番号４０）
または配列番号４０のアロタイプ変異体のものに融合された、本明細書に記載される任意のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み得、以下のアミノ酸配列：

【化2】

（配列番号４１、アロタイプ特異的アミノ酸残基は、太字および下線で示す）を有し得る。

【0166】

抗インテグリンαｖヘテロ二量体抗体のＶＨドメインは、エフェクターレス定常領域、例えば、以下のエフェクターレスヒトＩｇＧ１定常ドメインアミノ酸配列：

【化3】

（配列番号４２、「ＩｇＧ１．１ｆ」、下線で示される置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓを含む）
または

【化4】

（配列番号４３、「ＩｇＧ１．３ｆ」、下線で示される置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＥおよびＧ２３７Ａを含む）に融合された、本明細書に記載される任意のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み得る。

【0167】

例えば、ＩｇＧ１のアロタイプ変異体は、配列番号４０において番号付けされるＫ９７Ｒ、Ｄ２３９Ｅ、および／またはＬ２４１Ｍ（上記において下線および太字で示される）を含む。いくつかの態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の定常領域は、配列番号４１、４２、および４３において番号付けされるアミノ酸Ｌ１１７、Ａ１１８、Ｇ１２０、Ａ２１３、およびＰ２１４（上記において下線で示される）、またはＥＵ番号付けによるＬ２３４、Ａ２３５、Ｇ２３７、Ａ３３０、およびＰ３３１に、１つまたは複数の突然変異または置換をさらに含み得る。いくつかの態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の定常領域は、配列番号４０のアミノ酸Ｌ１１７Ａ、Ａ１１８Ｅ、Ｇ１２０Ａ、Ａ２１３ＳおよびＰ２１４Ｓ、またはＥＵ番号付けによるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓに、１つまたは複数の突然変異または置換を含む。抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の定常領域はまた、配列番号４０のＬ１１７Ａ、Ａ１１８ＥおよびＧ１２０Ａ、またはＥＵ番号付けによるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＥおよびＧ２３７Ａに、１つまたは複数の突然変異または置換を含んでもよい。

【0168】

あるいは、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体のＶＨドメインは、ヒトＩｇＧ４定常領域、例えば、以下のヒトＩｇＧ４アミノ酸配列またはその変異体：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
（配列番号４４、Ｓ２２８Ｐを含む）に融合した、本明細書に記載される任意のＶＨドメインのアミノ酸配列を含み得る。

【0169】

本明細書に記載されるＶＬドメインは、ヒトカッパまたはラムダ軽鎖の定常ドメインに融合され得る。例えば、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体のＶＬドメインは、以下のヒトＩｇＧ１カッパ軽鎖アミノ酸配列：
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
（配列番号４５）に融合した、本明細書に記載される任意のＶＬドメインのアミノ酸配列を含み得る。

【0170】

いくつかの態様では、重鎖定常領域は、Ｃ末端にリシンまたは別のアミノ酸を含み、例えば、それは、重鎖において、以下の最後のアミノ酸：ＬＳＰＧＫ（配列番号４６）を含む。いくつかの態様では、重鎖定常領域は、Ｃ末端における１つまたは複数のアミノ酸が欠如しており、例えば、Ｃ末端配列ＬＳＰＧ（配列番号４７）またはＬＳＰ（配列番号４８）を有する。

【0171】

抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域ならびにＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含み得、ここで、これらのＣＤＲ配列のうちの１つまたは複数は、本明細書に記載される抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体に基づく指定のアミノ酸配列またはそれらの保存的修飾形態を含み、抗体は、本明細書に記載される抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の所望される機能的特性を保持する。

【0172】

保存的アミノ酸置換は、ＣＤＲ以外の抗体の部分に行われてもよく、またはＣＤＲに加えて行われてもよい。例えば、保存的アミノ酸修飾は、フレームワーク領域またはＦｃ領域に行われてもよい。可変領域または重鎖もしくは軽鎖は、本明細書に提供される抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体配列と比べて、１個、２個、３個、４個、５個、１～２個、１～３個、１～４個、１～５個、１～１０個、１～１５個、１～２０個、１～２５個または１～５０個の保存的アミノ酸置換を含み得る。いくつかの態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、保存的アミノ酸修飾および非保存的アミノ修飾の組合せを含む。

【0173】

修飾された抗体を遺伝子操作するために、出発材料として本明細書において開示されるＶＨおよび／またはＶＬ配列のうち１種または複数を有する抗体を使用して調製され得る、遺伝子操作された、および修飾された抗体もまた提供され、この修飾された抗体は、出発抗体から変更された特性を有し得る。抗体は、一方または両方の可変領域（すなわち、ＶＨおよび／またはＶＬ）内の、例えば、１つまたは複数のＣＤＲ領域内の、および／または１つまたは複数のフレームワーク領域内の１個または複数の残基を修飾することによって、遺伝子操作され得る。さらに、またはあるいは、抗体は、例えば、抗体のエフェクター機能（単数または複数）を変更するために、定常領域（単数または複数）内の残基を修飾することによって遺伝子操作され得る。

【0174】

実施され得る１種の可変領域遺伝子操作として、ＣＤＲグラフティングがある。抗体は、主に６つの重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）中に位置するアミノ酸残基を介して標的抗原と相互作用する。このため、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、ＣＤＲの外側の配列よりも個々の抗体間でより多様である。ＣＤＲ配列は、ほとんどの抗体抗原相互作用に関与しているので、異なる特性を有する異なる抗体に由来するフレームワーク配列上にグラフトされた特定の天然に存在する抗体に由来するＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することによって、特定の天然に存在する抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現させることが可能である（例えば、Riechmann, L. et al. (1998) Nature 332:323-327; Jones, P. et al. (1986) Nature 321:522-525; Queen, C. et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86:10029-10033;Winterの米国特許第５，２２５，５３９号およびQueen et alの米国特許第５，５３０，１０１号；同５，５８５，０８９号；同５，６９３，７６２号および同６，１８０，３７０号を参照のこと）。

【0175】

したがって、本明細書に記載されるいくつかの態様は、本明細書に記載されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、ならびに本明細書に記載されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。したがって、そのような抗体は、本明細書に記載されるモノクローナル抗体のＶＨおよびＶＬ ＣＤＲ配列を含み、さらに、これらの抗体とは異なるフレームワーク配列を含んでもよい。

【0176】

このようなフレームワーク配列は、生殖系列抗体遺伝子配列を含む公開ＤＮＡデータベースまたは公開参考文献から得ることができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子の生殖系列ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖系列配列データベース（インターネット上でｗｗｗ．ｍｒｃ－ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｖｂａｓｅにおいて利用可能）に、ならびにKabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Tomlinson, I. M., et al. (1992) "The Repertoire of Human Germline V_H Sequences Reveals about Fifty Groups of V_H Segments with Different Hypervariable Loops" I. Mol. Biol. 227:776-798; and Cox, J. P. L. et al. (1994) "A Directory of Human Germ-line V_H Segments Reveals a Strong Bias in their Usage" Eur. J. Immunol. 24:827-836に見出すことができ、それらの各々の内容は、参照により本明細書に明確に組み込まれる。

【0177】

いくつかの態様では、本明細書において記載される抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体において使用するためのフレームワーク配列は、本明細書に記載される抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体によって使用されるフレームワーク配列と構造的に同様であるものである。ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列は、フレームワーク配列が由来する生殖系列免疫グロブリン遺伝子において見られるものと同一配列を有するフレームワーク領域上にグラフトされ得るか、またはＣＤＲ配列は、生殖系列配列と比較した場合に１つまたは複数の突然変異を含有するフレームワーク領域上にグラフトされ得る。例えば、特定の場合には、抗体の抗原結合能力を維持または増強するために、フレームワーク領域内の残基を突然変異させることが有益であることがわかっている（例えば、Queen et alの米国特許第５，５３０，１０１号；同５，５８５，０８９号；同５，６９３，７６２号および同６，１８０，３７０号を参照のこと）。

【0178】

本明細書に記載される遺伝子操作された抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、例えば、抗体の特性を改善するために、ＶＨおよび／またはＶＬ内のフレームワーク残基に修飾が行われているものを含む。通常、このようなフレームワーク修飾は、抗体の免疫原性を低下させるよう行われる。例えば、１つのアプローチとして、１個または複数のフレームワーク残基を、対応する生殖系列配列に「復帰突然変異」することがある。より詳しくは、体細胞突然変異を起こしている抗体は、抗体が由来する生殖系列配列とは異なるフレームワーク残基を含有し得る。このような残基は、抗体フレームワーク配列を、抗体が由来する生殖系列配列に対して比較することによって同定できる。フレームワーク領域配列をその生殖系列立体配置に戻すために、例えば、部位特異的突然変異誘発またはＰＣＲ媒介突然変異誘発によって、体細胞突然変異を生殖系列配列に「復帰突然変異する」ことができる。このような「復帰突然変異された」抗体も包含されるものとする。別の種類のフレームワーク修飾は、Ｔ細胞エピトープを除去し、それによって、抗体の免疫原性の可能性を低減するために、フレームワーク領域内の、またはさらには１つもしくは複数のＣＤＲ領域内の１個または複数の残基を突然変異することを含む。このアプローチはまた、「脱免疫化」と呼ばれ、Carr et alによる米国特許公開第２００３０１５３０４３号にさらに詳細に記載されている。

【0179】

別の種類の可変領域修飾は、それにより対象の抗体の１種または複数の結合特性（例えば、親和性）を改善するためにＶＨならびに／またはＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を突然変異することである。部位特異的突然変異誘発またはＰＣＲ媒介突然変異誘発を実施して、抗体結合または対象のその他の機能的特性に対して突然変異（単数または複数）および効果を導入でき、本明細書に記載され実施例において提供されるインビトロまたはインビボでのアッセイにおいて評価することができる。いくつかの態様では、保存的修飾（上記で論じられるような）が導入される。突然変異は、アミノ酸置換、付加、または欠失であり得る。さらに、通常、ＣＤＲ領域内の１、２、３、４または５個以下の残基が変更される。

【0180】

抗体のＣＤＲ中のメチオニン残基は、酸化され、その結果、化学的分解の可能性および結果としての抗体の効力の低減をもたらし得る。したがって、重鎖および／または軽鎖ＣＤＲ中の１個または複数のメチオニン残基は、酸化分解を受けないアミノ酸残基と置換されている抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体もまた、提供される。

【0181】

同様に、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体から、特に、ＣＤＲ中の脱アミド化部位も除去され得る。

【0182】

本明細書に記載される抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）可変領域は、Ｆｃ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ Ｆｃと連結され得（例えば、共有結合によって連結されるか、または融合される）、これは、例えば、ＩｇＧ１の任意のアロタイプまたはイソアロタイプ：Ｇ１ｍ、Ｇ１ｍ１（ａ）、Ｇ１ｍ２（ｘ）、Ｇ１ｍ３（ｆ）、Ｇ１ｍ１７（ｚ）；ＩｇＧ２の任意のアロタイプまたはイソアロタイプ：Ｇ２ｍ、Ｇ２ｍ２３（ｎ）；ＩｇＧ３の任意のアロタイプまたはイソアロタイプ：Ｇ３ｍ、Ｇ３ｍ２１（ｇ１）、Ｇ３ｍ２８（ｇ５）、Ｇ３ｍ１１（ｂ０）、Ｇ３ｍ５（ｂ１）、Ｇ３ｍ１３（ｂ３）、Ｇ３ｍ１４（ｂ４）、Ｇ３ｍ１０（ｂ５）、Ｇ３ｍ１５（ｓ）、Ｇ３ｍ１６（ｔ）、Ｇ３ｍ６（ｃ３）、Ｇ３ｍ２４（ｃ５）、Ｇ３ｍ２６（ｕ）、Ｇ３ｍ２７（ｖ）およびＫ：Ｋｍ、Ｋｍ１、Ｋｍ２、Ｋｍ３であり得る（例えば、Jefferis et al. (2009) mAbs 1:1を参照のこと）。

【0183】

一般に、本明細書に記載される可変領域は、典型的には、抗体の１つまたは複数の機能的特性、例えば、血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、抗原依存性細胞性細胞傷害性、および／または抗原依存性細胞性ファゴサイトーシスを変更するために、１つまたは複数の修飾を含むＦｃと連結され得る。さらに、本明細書に記載される抗体は、化学的に修飾され得る（例えば、１種または複数の化学部分は、抗体と結合され得る）か、またはそのグリコシル化を変更するよう、抗体の１種または複数の機能的特性を変更するよう修飾され得る。これらの態様の各々は、以下に詳細に記載される。Ｆｃ領域中の残基の番号付けは、カバットのＥＵ指数のものである。

【0184】

Ｆｃ領域は、定常領域の断片、類似体、変異体、突然変異体または誘導体を含む、免疫グロブリンの定常領域に由来するドメインを包含する。好適な免疫グロブリンとしては、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ならびにＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥおよびＩｇＭなどのその他のクラスが挙げられる。免疫グロブリンの定常領域は、免疫グロブリンＣ末端領域と相同な天然に存在するポリペプチドまたは合成により産生されたポリペプチドとして定義され、これには、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインまたはＣＨ４ドメインが、別個または組合せで含まれ得る。

【0185】

Ｉｇ分子は、複数のクラスの細胞受容体と相互作用する。例えば、ＩｇＧ分子は、ＩｇＧクラスの抗体に特異的な３つのクラスのＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）、すなわち、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩと相互作用する。ＩｇＧのＦｃγＲ受容体との結合に重要な配列は、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインに位置することが報告されている。抗体の血清半減期は、その抗体がＦｃ受容体（ＦｃＲ）と結合する能力によって影響を受ける。

【0186】

いくつかの態様では、Ｆｃ領域は、変異体Ｆｃ領域、例えば、親Ｆｃ配列（例えば、未修飾のＦｃポリペプチドであり、これが、後で修飾されて変異体が生成される）と比べて、望ましい構造的特性および／または生物学的活性を提供するように修飾されている（例えば、アミノ酸置換、欠失および／または挿入によって）Ｆｃ配列である。

【0187】

一般に、定常領域またはその部分、例えば、ＣＨ１、ＣＬ、ヒンジ、ＣＨ２またはＣＨ３ドメインの変異体は、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個もしくはそれ以上の突然変異ならびに／または多くとも１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個もしくは１個の突然変異または１～１０個もしくは１～５個の突然変異を含み得るか、あるいは対応する野生型領域またはドメイン（それぞれ、ＣＨ１、ＣＬ、ヒンジ、ＣＨ２またはＣＨ３ドメイン）のものと少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるアミノ酸配列を含み得るが、ただし、特定の変異体を含む重鎖定常領域が、必要な生物活性を保持することを条件とする。

【0188】

例えば、親のＦｃと比べて、（ａ）抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）および／もしくは抗体依存性細胞性ファゴサイトーシス（ＡＤＣＰ）の増大もしくは減少を媒介する、（ｂ）補体媒介性細胞傷害性（ＣＤＣ）の増大もしくは減少を媒介する、（ｃ）Ｃ１ｑに対する親和性が増大もしくは減少した、ならびに／または（ｄ）Ｆｃ受容体に対する親和性が増大もしくは減少した、Ｆｃ変異体を生成するために、Ｆｃ領域内に修飾を行うことができる。このようなＦｃ領域変異体は、一般に、Ｆｃ領域中に少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む。アミノ酸修飾を組み合わせることは、特に望ましいと考えられる。例えば、変異体Ｆｃ領域は、中に、本明細書において同定される特定のＦｃ領域位置の２、３、４、５つなどの置換を含み得る。

【0189】

変異体Ｆｃ領域はまた、ジスルフィド結合の形成に関与するアミノ酸が、除去されるかまたはその他のアミノ酸と置換される、配列の変更も含み得る。そのような除去により、本明細書に記載される抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を産生するために使用される宿主細胞に存在するその他のシステイン含有タンパク質との反応を回避することができる。システイン残基を除去した場合であっても、一本鎖Ｆｃドメインは、依然として、二量体Ｆｃドメインを形成することができ、これは、非共有結合的に一緒に保持される。いくつかの態様では、Ｆｃ領域は、選択された宿主細胞との適合性が高くなるように修飾され得る。例えば、典型的な天然のＦｃ領域のＮ末端の近傍のＰＡ配列を除去してもよく、これは、プロリンイミノペプチダーゼなど、大腸菌における消化酵素によって認識され得る。いくつかの態様では、Ｆｃドメイン内の１つまたは複数のグリコシル化部位が、除去され得る。典型的にはグリコシル化されている残基（例えば、アスパラギン）は、細胞溶解性応答をもたらし得る。そのような残基は、欠失させてもよく、または非グリコシル化残基（例えば、アラニン）と置換してもよい。いくつかの態様では、Ｃ１ｑ結合部位など、補体との相互作用に関与する部位が、Ｆｃ領域から除去され得る。例えば、ヒトＩｇＧ１のＥＫＫ配列を、欠失または置換してもよい。いくつかの態様では、Ｆｃ受容体との結合に影響を及ぼす部位、好ましくは、サルベージ受容体結合部位以外の部位が除去され得る。いくつかの態様では、Ｆｃ領域は、ＡＤＣＣ部位を除去するよう修飾され得る。ＡＤＣＣ部位は、当技術分野で公知である、例えば、ＩｇＧ１中のＡＤＣＣ部位に関しては、Molec. Immunol. 29 (5): 633-9 (1992)を参照のこと。変異体Ｆｃドメインの具体的な例は、例えば、ＷＯ９７／３４６３１、ＷＯ９６／３２４７８およびＷＯ０７／０４１６３５に開示されている。

【0190】

いくつかの態様では、Ｆｃのヒンジ領域は、ヒンジ領域内のシステイン残基の数が変更されるように、例えば、増大または減少されるように、修飾される。このアプローチは、Ｂｏｄｍｅｒらによる米国特許第５，６７７，４２５号にさらに記載されている。Ｆｃのヒンジ領域内のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖のアセンブリーを容易にするように、または抗体の安定性を増大もしくは減少させるように、変更されている。いくつかの態様では、抗体のＦｃヒンジ領域は、抗体の生物学的半減期を減少させるように突然変異される。より具体的には、抗体が、天然のＦｃ－ヒンジドメインのブドウ球菌タンパク質Ａ（ＳｐＡ）結合と比べて、損傷されたＳｐＡ結合を有するように、１つまたは複数のアミノ酸突然変異が、Ｆｃ－ヒンジ断片のＣＨ２－ＣＨ３ドメインの界面領域に導入される。このアプローチは、Ｗａｒｄらによる米国特許第６，１６５，７４５号にさらに詳細に記載されている。

【0191】

いくつかの態様では、Ｆｃ領域は、抗体のエフェクター機能を変更するよう、少なくとも１個のアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基と置換することによって変更される。例えば、抗体が、エフェクターリガンドに対して低減した親和性を有するが、親抗体の抗原結合能力は保持するよう、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０、３２２、３３０、および／または３３１から選択される１個または複数のアミノ酸が、異なるアミノ酸残基と置換され得る。それに対する親和性が変更されるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分であり得る。このアプローチは、いずれもＷｉｎｔｅｒらによる米国特許第５，６２４，８２１号および同第５，６４８，２６０号にさらに詳細に記載されている。

【0192】

別の例において、アミノ酸残基３２９、３３１および３２２から選択される１個または複数のアミノ酸は、抗体が、変更されたＣ１ｑ結合および／または低減もしくは消失された補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を有するように、異なるアミノ酸残基と置き換えられ得る。このアプローチは、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号にさらに詳細に記載されている。

【0193】

別の例では、アミノ酸位置２３１～２３９内の１個または複数のアミノ酸残基が変更され、それによって、抗体が補体と結合する能力を変更する。このアプローチは、ＢｏｄｍｅｒらによるＰＣＴ公開ＷＯ９４／２９３５１にさらに記載されている。

【0194】

別の例では、Ｆｃ領域は、Ｆｃγに対する親和性を増強させ、マクロファージ媒介性ファゴサイトーシスを増大させるように、修飾され得る。例えば、Richard et al., Mo. Cancer. Ther. 7(8):2517-27 (2008)を参照されたく、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。特定の態様では、Ｆｃ領域は、阻害性ＦｃγＲＩＩｂと比べて、ＦｃγＲＩＩａに対する親和性を増大させるように修飾され得る。１つの特定の点突然変異であるＧ２３６Ａ（この番号付けは、ＥＵインデックスに従う）は、阻害性ＦｃγＲＩＩｂと比べて、ＦｃγＲＩＩａに対する増大した親和性を有すると特定されている。このＦｃＲＩＩａに対する親和性の増大は、天然ＩｇＧ１と比べて増大したマクロファージ媒介性ファゴサイトーシスと相関していた。いくつかの態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体のＦｃ領域は、Ｇ２３６Ａ、Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９／Ｉ３３２Ｅ、Ｉ３３２Ｅ／Ｇ２３６Ａ、およびＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ｇ２３６Ａから選択される１つもしくは複数の突然変異または突然変異の組合せを含む。Ｆｃ領域に対する他の修飾は、例えば、活性化受容体、例えば、ＦｃγＲＩおよび／またはＦｃγＲＩＩＩａに対する親和性を増大させることによって、抗体依存性細胞性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を増大させ得る。例えば、Ｇ２３６Ａ置換、ならびに例えば、３３２および２３９における置換を含むがこれらに限定されない、Ｇ２３６Ａ置換と活性化受容体（例えば、ＦｃγＲＩおよび／またはＦｃγＲＩＩＩａ）に対する親和性を改善する修飾との組合せは、親野生型抗体と比べて実質的に改善されたＡＤＣＣをもたらす。米国特許第９，０４０，０４１号を参照されたく、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0195】

別の実施例では、Ｆｃ領域は、以下の位置：２３４、２３５、２３６、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６２、２６３、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１３、３１５、３２０、３２２、３２４、３２５、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８または４３９で１個または複数のアミノ酸を修飾することによって、抗体依存性細胞性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を低減するよう、および／またはＦｃγ受容体に対する親和性を低減するよう修飾され得る。例示的置換として、２３６Ａ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２６８Ｄ、２６７Ｅ、２６８Ｅ、２６８Ｆ、３２４Ｔ、３３２Ｄおよび３３２Ｅが挙げられる。例示的変異体として、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３６Ａ／２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６８Ｆ／３２４Ｔ、２６７Ｅ／２６８Ｆ、２６７Ｅ／３２４Ｔおよび２６７Ｅ／２６８Ｆ／３２４Ｔが挙げられる。ＦｃγＲおよび補体相互作用を増強するためのその他の修飾として、それだけには限らないが、置換２９８Ａ、３３３Ａ、３３４Ａ、３２６Ａ、２４７Ｉ、３３９Ｄ、３３９Ｑ、２８０Ｈ、２９０Ｓ、２９８Ｄ、２９８Ｖ、２４３Ｌ、２９２Ｐ、３００Ｌ、３９６Ｌ、３０５Ｉおよび３９６Ｌが挙げられる。これらおよびその他の修飾は、Strohl (2009) Current Opinion in Biotechnology 20:685-691に概説されている。

【0196】

Ｆｃγ受容体との結合を増大させるＦｃ修飾は、Ｆｃ領域のアミノ酸２３８位、２３９位、２４８位、２４９位、２５２位、２５４位、２５５位、２５６位、２５８位、２６５位、２６７位、２６８位、２６９位、２７０位、２７２位、２７９位、２８０位、２８３位、２８５位、２９８位、２８９位、２９０位、２９２位、２９３位、２９４位、２９５位、２９６位、２９８位、３０１位、３０３位、３０５位、３０７位、３１２位、３１５位、３２４位、３２７位、３２９位、３３０位、３３５位、３３７位、３３８位、３４０位、３６０位、３７３位、３７６位、３７９位、３８２位、３８８位、３８９位、３９８位、４１４位、４１６位、４１９位、４３０位、４３４位、４３５位、４３７位、４３８位または４３９位のうちの任意の１つまたは複数におけるアミノ酸修飾を含み、ここで、Ｆｃ領域における残基の番号付けは、カバットにおけるＥＵ指数のものである（ＷＯ００／４２０７２）。

【0197】

適宜、Ｆｃ領域は、追加および／または代替的な位置に、非天然のアミノ酸残基を含み得る（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、同第６，２７７，３７５号、同第６，７３７，０５６号、同第６，１９４，５５１号、同第７，３１７，０９１号、同第８，１０１，７２０号、同第９，０４０，０４１号、ＰＣＸ特許公開第ＷＯ００／４２０７２、ＷＯ０１／５８９５７、ＷＯ０２／０６９１９、ＷＯ０４／０１６７５０、ＷＯ０４／０２９２０７、ＷＯ０４／０３５７５２、ＷＯ０４／０７４４５５、ＷＯ０４／０９９２４９、ＷＯ０４／０６３３５１、ＷＯ０５／０７０９６３、ＷＯ０５／０４０２１７、ＷＯ０５／０９２９２５およびＷＯ０６／０２０１１４を参照のこと）。

【0198】

Ｆｃ領域のそのリガンドに対する親和性および結合特性は、それだけには限らないが、平衡方法（例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））または速度論（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ分析）および間接結合アッセイ、競合阻害アッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、ゲル電気泳動およびクロマトグラフィー（例えば、ゲル濾過）などのその他の方法を含めた、当技術分野で公知の種々のインビトロアッセイ法（生化学または免疫学ベースのアッセイ）によって決定され得る。これらおよびその他の方法は、調べられている１種もしくは複数の成分上の標識を利用してもよく、および／またはそれだけには限らないが、クロマトグラフィー、蛍光、発光もしくは同位体標識を含めた種々の検出方法を使用してもよい。結合親和性および速度論の詳細な説明は、抗体免疫原相互作用に焦点を当てる、Paul, W. E., ed., Fundamental immunology, 4th Ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (1999)に見出すことができる。

【0199】

いくつかの態様では、抗体は、その生物学的半減期を増大するよう修飾される。種々のアプローチが可能である。例えば、これは、Ｆｃ領域のＦｃＲｎに対する結合親和性を増大することによって行うことができる。例えば、米国特許第６，２７７，３７５号に記載されるように、以下の残基のうちの１個または複数が、突然変異され得る：２５２、２５４、２５６、４３３、４３５、４３６。特定の例示的な置換としては、以下のうちの１つまたは複数が挙げられる：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓおよび／またはＴ２５６Ｆ。あるいは、生物学的半減期を増大させるために、抗体は、Ｐｒｅｓｔａらによる米国特許第５，８６９，０４６号および同第６，１２１，０２２号に記載されているように、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから得られたサルベージ受容体結合エピトープを含むように、ＣＨ１またはＣＬ領域内で変更され得る。ＦｃＲｎとの結合を増大し、および／または薬物動態特性を改善するその他の例示的変異体は、位置２５９、３０８、４２８、および４３４での置換を含み、例えば、２５９Ｉ、３０８Ｆ、４２８Ｌ、４２８Ｍ、４３４Ｓ、４３４１ １、４３４Ｆ、４３４Ｙおよび４３４Ｘ１が挙げられる。ＦｃＲｎとのＦｃ結合を増大するその他の変異体として、２５０Ｅ、２５０Ｑ、４２８Ｌ、４２８Ｆ、２５０Ｑ／４２８Ｌ（Hinton et al. 2004、J. Biol. Chem. 279(8): 6213-6216、Hinton et al. 2006 Journal of Immunology 176:346-356）、２５６Ａ、２７２Ａ、２８６Ａ、３０５Ａ、３０７Ａ、３０７Ｑ、３１１Ａ、３１２Ａ、３７６Ａ、３７８Ｑ、３８０Ａ、３８２Ａ、４３４Ａ（Shields et al, Journal of Biological Chemistry, 2001, 276(9):6591-6604）、２５２Ｆ、２５２Ｔ２５２Ｙ、２５２Ｗ、２５４Ｔ、２５６Ｓ、２５６Ｒ、２５６Ｑ、２５６Ｅ、２５６Ｄ、２５６Ｔ、３０９Ｐ、３１１Ｓ、４３３Ｒ、４３３Ｓ、４３３１、４３３Ｐ、４３３Ｑ、４３４Ｈ、４３４Ｆ、４３４Ｙ、２５２Ｙ／２５４Ｔ／２５６Ｅ、４３３Ｋ／４３４Ｆ／４３６Ｈ、３０８Ｔ／３０９Ｐ／３１１Ｓ（Dall Acqua et al. Journal of Immunology, 2002, 169:5171-5180, Dall'Acqua et al., 2006, Journal of Biological Chemistry 281:23514-23524）が挙げられる。ＦｃＲｎ結合を調節するためのその他の修飾は、Yeung et al., 2010, J Immunol, 182:7663-7671に記載されている。

【0200】

いくつかの態様では、特定の生物学的特徴を有するハイブリッドＩｇＧアイソタイプを、使用することができる。例えば、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３ハイブリッド変異体は、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域中のＩｇＧ１位置を、２種のアイソタイプが異なる位置でＩｇＧ３に由来するアミノ酸と置換することによって構築され得る。このようにして、１つまたは複数の置換、例えば、２７４Ｑ、２７６Ｋ、３００Ｆ、３３９Ｔ、３５６Ｅ、３５８Ｍ、３８４Ｓ、３９２Ｎ、３９７Ｍ、４２２Ｉ、４３５Ｒおよび４３６Ｆを含むハイブリッド変異体ＩｇＧ抗体が、構築され得る。本明細書に記載されるいくつかの態様では、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域中のＩｇＧ２位置を、２種のアイソタイプが異なる位置でＩｇＧ１に由来するアミノ酸と置換することによって、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２ハイブリッド変異体が構築され得る。このようにして、１つまたは複数の置換、例えば、以下のアミノ酸置換：２３３Ｅ、２３４Ｌ、２３５Ｌ、－２３６Ｇ（２３６位でのグリシンの挿入を指す）および３２７Ａのうち１つまたは複数を含むハイブリッド変異体ＩｇＧ抗体が構築され得る。

【0201】

さらに、ヒトＩｇＧ１におけるＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、およびＦｃＲｎに対する結合部位が、マッピングされており、改善された結合を有する変異体が、説明されている（Shields, R.L. et al., (2001) J. Biol. Chem. 276:6591-6604を参照のこと）。２５６位、２９０位、２９８位、３３３位、３３４位および３３９位における特定の突然変異は、ＦｃγＲＩＩＩとの結合を改善することが示された。加えて、組合せ突然変異体Ｔ２５６Ａ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｋ２２４ＡおよびＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａは、ＦｃγＲＩＩＩ結合を改善することが示されており、これらは、増強されたＦｃγＲＩＩＩａ結合およびＡＤＣＣ活性を示すことが示されている（Shields et al., 2001）。Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ突然変異を有する変異体を含めた、ＦｃγＲＩＩＩａとの結合が強力に増強されたその他のＩｇＧ１変異体が同定されており、これは、ＦｃγＲＩＩＩａに対する親和性の最大の増大、ＦｃγＲＩＩｂ結合の減少およびカニクイザルにおける強力な細胞傷害性活性を示した（Lazar et al., 2006）。アレムツズマブ（ＣＤ５２特異的）、トラスツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ特異的）、リツキシマブ（ＣＤ２０特異的）およびセツキシマブ（ＥＧＦＲ特異的）などの抗体中への三重突然変異の導入は、インビトロで大きく増強されたＡＤＣＣ活性に変換され、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ変異体は、サルにおいてＢ細胞を枯渇させる増強された能力を示した（Lazar et al., 2006）。さらに、Ｂ細胞悪性腫瘍および乳がんのモデルにおいてヒトＦｃγＲＩＩＩａを発現するトランスジェニックマウスにおいて、ＦｃγＲＩＩＩａとの増強された結合および同時に増強されたＡＤＣＣ活性を示した、Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００ＬおよびＰ３９６Ｌ突然変異を含有するＩｇＧ１突然変異体が同定された（Stavenhagen et al., 2007、Nordstrom et al., 2011）。使用することができるその他のＦｃ突然変異体としては、以下のものが挙げられる：Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｌ３３４Ａ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６ＬおよびＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ。

【0202】

２３４、２３５、２３６、２３９、２６７、２６８、２９３、２９５、３２４、３２７、３２８、３３０、および３３２の位置における特定の突然変異は、ＦｃγＲＩＩａとの結合を改善し、および／またはＦｃγＲＩＩｂとの結合を低減し、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰ活性の増強をもたらすことが示されていた（Richards et al., Mol. Cancer Ther. 7(8):2517-2527; U.S. Patent No. 9,040,041）。特に、ＦｃγＲＩＩｂと比べて１つもしくは複数のヒト活性化受容体との結合を選択的に改善するか、または１つもしくは複数の活性化受容体と比べてＦｃγＲＩＩｂとの結合を選択的に改善する、Ｆｃ変異体は、２３４Ｇ、２３４Ｉ、２３５Ｄ、２３５Ｅ、２３５Ｉ、２３５Ｙ、２３６Ａ、２３６Ｓ、２３９Ｄ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、２６７Ｑ、２６８Ｄ、２６８Ｅ、２９３Ｒ、２９５Ｅ、３２４Ｇ、３２４Ｉ、３２７Ｈ、３２８Ａ、３２８Ｆ、３２８Ｉ、３３０Ｉ、３３０Ｌ、３３０Ｙ、３３２Ｄ、および３３２Ｅからなる群から選択される置換を含み得る。さらに組み合わせることができる追加の置換としては、ＦｃγＲ親和性および補体活性を調節する他の置換が挙げられ、これには、２９８Ａ、２９８Ｔ、３２６Ａ、３２６Ｄ、３２６Ｅ、３２６Ｗ、３２６Ｙ、３３３Ａ、３３３Ｓ、３３４Ｌ、および３３４Ａが挙げられるがこれらに限定されない（米国特許第６，７３７，０５６号、Shields et al, Journal of Biological Chemistry, 2001, 276(9):6591-6604、米国特許第６，５２８，６２４号、Idusogie et al., 2001, J. Immunology 166:2571-2572）。他のＦｃ変異体と組み合わせるのに特に有用であり得る好ましい変異体としては、置換２９８Ａ、３２６Ａ、３３３Ａ、および３３４Ａを含むものが挙げられる。ＦｃγＲ選択的変異体と組み合わせることができる追加の置換としては、２４７Ｌ、２５５Ｌ、２７０Ｅ、３９２Ｔ、３９６Ｌ、および４２１Ｋ（米国出願第１０／７５４，９２２号、米国出願第１０／９０２，５８８号）、ならびに２８０Ｈ、２８０Ｑ、および２８０Ｙ（米国出願第１０／３７０，７４９号）が挙げられる。

【0203】

ＩｇＧ４定常ドメインを使用する場合、これは、置換Ｓ２２８Ｐを含み得、この置換は、ＩｇＧ１におけるヒンジ配列を模倣し、それによって、ＩｇＧ４分子を安定化させる。

【0204】

ＩＩ．Ｂ．二重特異性および多重特異性抗体
本開示のいくつかの態様は、インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）と特異的に結合する二重特異性または多重特異性抗体を対象とする。いくつかの態様では、二重特異性または多重特異性抗体は、インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）および第２の抗原と結合する。いくつかの態様では、第２の抗原は、インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）ではない。いくつかの態様では、二重特異性または多重特異性抗体は、インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）上の第１のエピトープおよびインテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）の第２のエピトープと結合する。いくつかの態様では、第１のエピトープおよび第２のエピトープは、オーバーラップしない。

【0205】

本明細書に記載される任意の抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、二重特異性または多重特異性抗体を形成するために使用され得る。抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体またはその抗原結合部分は、誘導体化されるか、または別の機能的分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質（例えば、別の抗体または受容体のリガンド）と連結されて、少なくとも２つの異なる結合部位または標的分子と結合する二重特異性または多重特異性分子を生成し得る。いくつかの態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、併用処置の潜在的な標的として使用することができる任意のタンパク質、例えば、本明細書に記載されるタンパク質と特異的に結合する抗体またはｓｃＦｖ（例えば、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＮＫＧ２ａ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ－１０、ＩＬ－２、ＩＬ－８、Ｂ７－Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソテリン、ＣＤ２７、ＣＤ９６、ＶＩＳＴＡ、もしくはＧＩＴＲ、またはペグ化ＩＬ－２もしくはペグ化ＩＬ－１０に対する抗体）と連結される。本明細書に記載される抗体は、実際、誘導されるか、２種以上のその他の機能的分子と連結されて、３種以上の異なる結合部位および／または標的分子と結合する多重特異性分子を生成し得；このような多重特異性分子もまた、本明細書において、用語「二重特異性分子」に包含されるものとする。本明細書に記載される二重特異性分子を作製するために、本明細書に記載される抗体を、二重特異性分子が結果として生じるような別の抗体、抗体断片、ペプチドまたは結合模倣物などの１種または複数のその他の結合分子と機能的に連結することができる（例えば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合による結合または別の方法で）。

【0206】

したがって、少なくとも１つのインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）に対する第１の結合特異性および第２の標的エピトープに対する第２の結合特異性を含む二重特異性分子が本明細書において提供される。二重特異性分子が多重特異性である本明細書に記載されるいくつかの態様では、分子は、第３の結合特異性をさらに含み得る。

【0207】

いくつかの態様では、本明細書に記載される二重特異性分子は、結合特異性として少なくとも１種の抗体または例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖもしくは一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦＶ）を含めたその抗体断片を含む。Ladner et al.米国特許第４，９４６，７７８号に記載されるように、抗体はまた、軽鎖または重鎖二量体またはＦｖもしくは一本鎖コンストラクトなどのその任意の最小断片であり得る。

【0208】

ヒトモノクローナル抗体が好ましいが、本明細書に記載される二重特異性分子において利用することができるその他の抗体には、マウスモノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体およびヒト化モノクローナル抗体がある。

【0209】

本明細書に記載される二重特異性分子は、当技術分野において公知の方法を使用して、構成要素としての結合特異性をコンジュゲートすることによって調製することができる。例えば、二重特異性分子のそれぞれの結合特異性を、別個に生成し、次いで、互いにコンジュゲートすることができる。結合特異性が、タンパク質またはペプチドである場合、様々なカップリング剤または架橋剤を、共有結合によるコンジュゲーションに使用することができる。架橋剤の例としては、プロテインＡ、カルボジイミド、Ｎ－スクシンイミジル－Ｓ－アセチル－チオアセテート（ＳＡＴＡ）、５，５’－ジチオビス（２－ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）、ｏ－フェニレンジマレイミド（ｏＰＤＭ）、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、およびスルホスクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（スルホ－ＳＭＣＣ）が挙げられる（例えば、Karpovsky et al. (1984) J. Exp. Med. 160: 1686、Liu, MA et al. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:8648を参照のこと）。他の方法としては、Paulus (1985)Behring Ins. Mitt. No. 78, 118-132、Brennan et al. (1985)Science 229:81-83)およびGlennie et al. (1987) J. Immunol. 139: 2367-2375）に記載されているものが挙げられる。いくつかのコンジュゲーション剤としては、ＳＡＴＡおよびスルホ－ＳＭＣＣがあり、いずれも、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）から入手可能である。

【0210】

結合特異性が抗体である場合、これらは、２つの重鎖のＣ末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合によってコンジュゲートされ得る。いくつかの態様では、ヒンジ領域は、コンジュゲーションの前に、奇数、好ましくは、１つのスルフヒドロリ残基を含むように修飾される。

【0211】

あるいは、両方の結合特異性が、同じベクターにおいてコードされて、同じ宿主細胞において発現され、アセンブリーされてもよい。この方法は、二重特異性分子が、ｍＡｂ×ｍＡｂ融合タンパク質、ｍＡｂ×Ｆａｂ融合タンパク質、ｍＡｂ×（ｓｃＦｖ）_２融合タンパク質、Ｆａｂ×Ｆ（ａｂ’）_２融合タンパク質またはリガンド×Ｆａｂ融合タンパク質である場合に、特に有用である。二重特異性抗体は、それぞれの重鎖のＣ末端にｓｃＦｖを含む抗体を含み得る。本明細書に記載される二重特異性分子は、１つの一本鎖抗体および結合性決定基を含む一本鎖分子であってもよく、または２つの結合性決定基を含む一本鎖二重特異性分子であってもよい。二重特異性分子は、少なくとも２つの一本鎖分子を含み得る。二重特異性分子を調製するための方法は、例えば、米国特許第５，２６０，２０３号、米国特許第５，４５５，０３０号、米国特許第４，８８１，１７５号、米国特許第５，１３２，４０５号、米国特許第５，０９１，５１３号、米国特許第５，４７６，７８６号、米国特許第５，０１３，６５３号、米国特許第５，２５８，４９８号および米国特許第５，４８２，８５８号に記載されている。

【0212】

二重特異性分子の、その特異的標的との結合は、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＦＡＣＳ分析、生物検定法（例えば、成長阻害）またはウエスタンブロットアッセイなどの当技術分野で認識される方法を使用して確認され得る。これらのアッセイは各々、一般に、対象の複合体に対して特異的な標識試薬（例えば、抗体）を使用することによって、特に対象とされるタンパク質－抗体複合体の存在を検出する。

【0213】

いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、少なくとも第１のパラトープおよび第２のパラトープを含み、第１のパラトープは、インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）ヘテロ二量体上の第１のエピトープと結合する。いくつかの態様では、第２のパラトープは、インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）ヘテロ二量体上の第２のエピトープと結合する。いくつかの態様では、第１のエピトープおよび第２のエピトープは同じではない。いくつかの態様では、第１のエピトープおよび第２のエピトープは、オーバーラップしない。

【0214】

いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、第１の重鎖、第１の軽鎖、第２の重鎖、および第２の軽鎖を含む。いくつかの態様では、第１の重鎖および第２の重鎖は異なる。いくつかの態様では、第１の軽鎖および第２の軽鎖は異なる。いくつかの態様では、第１の重鎖および第２の重鎖は異なり、第１の軽鎖および第２の軽鎖は同じである。いくつかの態様では、第１の重鎖および第２の重鎖は同じであり、第１の軽鎖および第２の軽鎖は異なる。

【0215】

第１の重鎖、第２の重鎖、第１の軽鎖、および第２の軽鎖は、本明細書において開示される任意の重鎖または軽鎖を含み得る。いくつかの態様では、第１の重鎖は、可変重鎖相補性決定領域（ＶＨ１－ＣＤＲ）１、ＶＨ１－ＣＤＲ２、およびＶＨ１－ＣＤＲ３を含む第１の可変重鎖領域（「ＶＨ１」）を含み、ＶＨ１－ＣＤＲ３は、配列番号５、１５、および２５から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＨ１－ＣＤＲ２は、配列番号４、１４、および２４から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＨ１－ＣＤＲ１は、配列番号３、１３、および２３から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、第１の軽鎖は、ＶＬ１－ＣＤＲ１、ＶＬ１－ＣＤＲ２、およびＶＬ１－ＣＤＲ３を含む第１の可変軽鎖領域（「ＶＬ１」）を含み、ＶＬ１－ＣＤＲ３は、配列番号１０、２０、および３０から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＬ１－ＣＤＲ２は、配列番号９、１９、および２９から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＬ１－ＣＤＲ１は、配列番号８、１８、および２８から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0216】

特定の態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ１、配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ２、配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ３、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ１、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ２、および配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ３を含む。

【0217】

特定の態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ１、配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ２、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ３、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ１、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ２、および配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ３を含む。

【0218】

特定の態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ１、配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ２、配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ３、配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ１、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ２、および配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ３を含む。

【0219】

特定の態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ１、配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ２、配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ３、配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ１、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ２、および配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ３を含む。

【0220】

いくつかの態様では、第２の重鎖は、ＶＨ２－ＣＤＲ１、ＶＨ２－ＣＤＲ２、およびＶＨ２－ＣＤＲ３を含む第２の可変重鎖領域（「ＶＨ２」）を含み、ＶＨ２－ＣＤＲ３は、配列番号５、１５、および２５から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＨ２－ＣＤＲ２は、配列番号４、１４、および２４から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＨ２－ＣＤＲ１は、配列番号３、１３、および２３から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、第２の軽鎖は、ＶＬ２－ＣＤＲ１、ＶＬ２－ＣＤＲ２、およびＶＬ２－ＣＤＲ３を含む第２の可変軽鎖領域（「ＶＬ１」）を含み、ＶＬ２－ＣＤＲ３は、配列番号２０および３０から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＬ２－ＣＤＲ２は、配列番号１９および２９から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＨ２－ＣＤＲ１は、配列番号１８および２８から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0221】

特定の態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ１、配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ２、配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ３、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ１、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ２、配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ３、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ２－ＣＤＲ１、配列番号１４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ２－ＣＤＲ２、配列番号１５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ２－ＣＤＲ３、配列番号１８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ２－ＣＤＲ１、配列番号１９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ２－ＣＤＲ２、および配列番号２０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ２－ＣＤＲ３を含む。

【0222】

特定の態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ１、配列番号４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ２、配列番号５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ１－ＣＤＲ３、配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ１、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ２、配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ１－ＣＤＲ３、配列番号２３に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ２－ＣＤＲ１、配列番号２４に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ２－ＣＤＲ２、配列番号２５に記載されるアミノ酸配列を含むＶＨ２－ＣＤＲ３、配列番号２８に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ２－ＣＤＲ１、配列番号２９に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ２－ＣＤＲ２、および配列番号３０に記載されるアミノ酸配列を含むＶＬ２－ＣＤＲ３を含む。

【0223】

いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、第１の可変重鎖領域（ＶＨ１）および第１の可変軽鎖領域（ＶＬ１）を含み、ＶＨ１は、配列番号２、１２、または２２から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＬ１は、配列番号７、１７、または２７から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0224】

いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、第２の可変重鎖領域（ＶＨ２）および第２の可変軽鎖領域（ＶＬ２）を含み、ＶＨ２は、配列番号２、１２、または２２から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＬ２は、配列番号７、１７、または２７から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0225】

いくつかの態様では、（ａ）ＶＨ１は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｂ）ＶＬ１は、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｃ）ＶＨ２は、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｄ）ＶＬ２は、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＨ１は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ１は、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＨ２は、配列番号１２に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ２は、配列番号１７に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0226】

いくつかの態様では、（ａ）ＶＨ１は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｂ）ＶＬ１は、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｃ）ＶＨ２は、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｄ）ＶＬ２は、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、ＶＨ１は、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ１は、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＨ２は、配列番号２２に記載されるアミノ酸配列を含み、ＶＬ２は、配列番号２７に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0227】

いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、第１の重鎖（Ｈ１）および第１の軽鎖（Ｌ１）を含み、Ｈ１は、配列番号１、１１、２１、３１、３４、または３７から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、Ｌ１は、配列番号６、１６、または２６から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0228】

いくつかの態様では、二重特異性抗体またはその抗原結合部分は、第２の重鎖（Ｈ２）および第２の軽鎖（Ｌ２）を含み、Ｈ２は、配列番号１、１１、２１、３１、３４、または３７から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、Ｌ２は、配列番号６、１６、または２６から選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0229】

いくつかの態様では、第１の重鎖は、第２の重鎖と会合している。いくつかの態様では、第１の重鎖は、１つまたは複数の共有結合によって、第２の重鎖と会合している。いくつかの態様では、第１の重鎖および第２の重鎖のそれぞれは、ＩｇＧ定常領域または１つもしくは複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ定常領域を含む。いくつかの態様では、１つまたは複数のアミノ酸置換は、第１の重鎖および第２の重鎖のヘテロ二量体化を促進する。任意のアミノ酸置換を、ヘテロ二量体化を促進するために使用することができる。いくつかの態様では、第１の重鎖は、第１の重鎖の定常領域に、ノブを作成する１つまたは複数のアミノ酸の置換を含み、第２の重鎖は、第２の重鎖の定常領域に、ホールを作成する１つまたは複数のアミノ酸の置換またはその抗原結合部分を含み、第１の重鎖のノブは、第２の重鎖のホールと会合する。いくつかの態様では、第１の重鎖は、第１の重鎖の定常領域に、ホールを作成する１つまたは複数のアミノ酸の置換を含み、第２の重鎖は、第２の重鎖の定常領域に、ノブを作成する１つまたは複数のアミノ酸の置換を含み、第１の重鎖のホールは、第２の重鎖のノブと会合する。

【0230】

いくつかの態様では、（ａ）Ｈ１は、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｂ）Ｌ１は、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｃ）Ｈ２は、配列番号３４に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｄ）Ｌ２は、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0231】

いくつかの態様では、Ｈ１は、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列を含み、Ｌ１は、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含み、Ｈ２は、配列番号３４に記載されるアミノ酸配列を含み、Ｌ２は、配列番号１６に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0232】

いくつかの態様では、（ａ）Ｈ１は、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｂ）Ｌ１は、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｃ）Ｈ２は、配列番号３７に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、（ｄ）Ｌ２は、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0233】

いくつかの態様では、Ｈ１は、配列番号３１に記載されるアミノ酸配列を含み、Ｌ１は、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含み、Ｈ２は、配列番号３７に記載されるアミノ酸配列を含み、Ｌ２は、配列番号２６に記載されるアミノ酸配列を含む。

【0234】

いくつかの態様では、二重特異性抗体は、インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）のＬＡＰ－ＴＧＦβ１との結合を阻害する。いくつかの態様では、インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）のＬＡＰ－ＴＧＦβ１との結合は、二重特異性抗体の不在下におけるインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）のＬＡＰ－ＴＧＦβ１との結合のレベルと比べて、約９０％未満、約８０％未満、約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４５％未満、約４０％未満、約３５％未満、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約９％未満、約８％未満、約７％未満、約６％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、または約１％未満に低減される。

【0235】

いくつかの態様では、二重特異性抗体は、αｖβ１、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、αｖβ８、およびこれらの任意の組合せから選択されるインテグリンαｖヘテロ二量体と結合することができる。

【0236】

いくつかの態様では、二重特異性抗体は、細胞接着を阻害する。いくつかの態様では、二重特異性抗体は、腫瘍成長および／または転移を阻害する。いくつかの態様では、二重特異性抗体は、無増悪生存期間を増大させる。いくつかの態様では、二重特異性抗体は、全生存期間を増大させる。

【0237】

ＩＩ．Ｃ．イムノコンジュゲート、抗体誘導体および診断
本明細書に記載される抗インテグリンαｖ抗体は、サンプルの試験およびインビボ撮像を含む診断目的で使用することができ、この目的で、抗体（またはその結合断片）を、適当な検出可能な薬剤とコンジュゲートして、イムノコンジュゲートを形成することができる。診断目的では、適当な薬剤は、全身撮像のための放射性同位体ならびにサンプルの試験のための放射性同位体、酵素、蛍光標識および他の好適な抗体タグを含む、検出可能な標識である。

【0238】

本明細書に記載される任意の抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体と連結させることができる検出可能な標識は、コロイド金などの金属ゾルを含む粒子標識、例えば、Ｎ_２Ｓ_２、Ｎ_３Ｓ、もしくはＮ_４型のペプチド性キレート剤とともに提示されるＩ^１２５またはＴｃ^９９などの同位体、蛍光マーカー、発光マーカー、リン光マーカーなどを含む発色団、ならびに所与の基質を検出可能なマーカーに変換する酵素標識およびポリメラーゼ連鎖反応などによる増幅後に示されるポリヌクレオチドタグを含め、インビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）診断の分野において現在使用されている様々な種類のうちのいずれかであり得る。好適な酵素標識として、西洋ワサビペルオキシダーゼおよびアルカリホスファターゼなどが挙げられる。例えば、標識は、アダマンチルメトキシホスホリルオキシフェニルジオキセタン（ＡＭＰＰＤ）、ジナトリウム３－（４－（メトキシスピロ｛１，２－ジオキセタン－３，２’－（５’－クロロ）トリシクロ｛３．３．１．１ ３，７｝デカン｝－４－イル）フェニルホスフェート（ＣＳＰＤ）などの１，２ジオキセタン基質ならびにＣＤＰおよびＣＤＰ－ＳＴＡＲ（登録商標）または当業者に周知の他の発光性基質、例えば、テルビウム（ＩＩＩ）およびユーロピウム（ＩＩＩ）などの好適なランタニドのキレートの変換後の化学発光の存在または形成を測定することによって検出される、酵素アルカリホスファターゼであり得る。検出手段は、選択された標識によって決定される。標識またはその反応産物の出現は、標識が粒子であり、適当なレベルで蓄積する場合には、裸眼で、または分光光度計、ルミノメーター、蛍光光度計などの機器を使用して、達成され得るが、すべて標準的な慣例に従う。

【0239】

いくつかの態様では、コンジュゲーション法は、実質的に（またはほぼ）非免疫原性である結合、例えば、ペプチド（すなわち、アミド）結合、スルフィド結合（立体障害）、ジスルフィド結合、ヒドラゾン結合およびエーテル結合を生じる。これらの結合は、ほぼ非免疫原性であり、血清内で妥当な安定性を示す（例えば、Senter, P. D., Curr. Opin. Chem. Biol. 13 (2009) 235-244、ＷＯ２００９／０５９２７８、ＷＯ９５／１７８８６を参照のこと）。

【0240】

部分および抗体の生化学的性質に応じて、異なるコンジュゲーション戦略を用いることができる。部分が、５０～５００個のアミノ酸の天然に存在するまたは組換えである場合、標準的な手順は、タンパク質コンジュゲートの合成のための化学反応について記載した教則本にあり、当業者であれば容易に従うことができる（例えば、Hackenberger, C. P. R., and Schwarzer, D., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 47 (2008) 10030-10074を参照されたい）。いくつかの態様では、抗体または部分内のマレイミド部分とシステイン残基との反応が使用される。これは、例えば、抗体のＦａｂまたはＦａｂ’断片が使用される場合に、特に好適なカップリング化学反応である。あるいは、いくつかの態様では、抗体または部分のＣ末端へのカップリングが行われる。タンパク質、例えば、Ｆａｂ断片のＣ末端修飾は、記載されるように行われ得る（Sunbul, M. and Yin, J., Org. Biomol. Chem. 7 (2009) 3361-3371）。

【0241】

一般に、部位特異的反応および共有結合カップリングは、天然のアミノ酸を、存在する他の官能基の反応性に直交性である反応性を有するアミノ酸に変換することに基づく。例えば、稀な配列構成内の特定のシステインは、アルデヒドに酵素変換され得る（Frese, M. A., and Dierks, T., ChemBioChem. 10 (2009) 425-427を参照のこと）。所与の配列構成における特定の酵素の、天然のアミノ酸との特異的酵素反応性を利用することによって、所望されるアミノ酸修飾を得ることもまた可能である（例えば、Taki, M. et al., Prot. Eng. Des. Sel. 17 (2004) 119-126、Gautier, A. et al. Chem. Biol. 15 (2008) 128-136を参照のこと。プロテアーゼに触媒されるＣ－－Ｎ結合の形成は、Bordusa, F., Highlights in Bioorganic Chemistry (2004) 389-403で使用される）。部位特異的反応および共有結合カップリングはまた、末端アミノ酸の、適当な修飾試薬との選択的反応によっても達成され得る。

【0242】

Ｎ末端システインの、ベンゾニトリルとの反応性（Ren. H. et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 48 (2009) 9658-9662を参照のこと）を使用して、部位特異的共有結合カップリングを達成することができる。

【0243】

天然の化学的ライゲーションはまた、Ｃ末端システイン残基に依存し得る（Taylor, E. Vogel; Imperiali, B, Nucleic Acids and Molecular Biology (2009), 22 (Protein Engineering), 65-96）。

【0244】

ＵＳ６４３７０９５Ｂ１は、負に荷電したアミノ酸のストレッチ内のシステインの、正に荷電したアミノ酸のストレッチ内に位置するシステインとの早い反応に基づくコンジュゲーション法について記載している。

【0245】

部分はまた、合成ペプチドまたはペプチド模倣体であってもよい。ポリペプチドが化学合成される場合、直交性化学反応性を有するアミノ酸は、このような合成中に組み込まれ得る（例えば、de Graaf. A. J. et al., Bioconjug. Chem. 20 (2009) 1281-1295を参照のこと）。多種多様な直交性官能基が問題となっており、合成ペプチドに導入され得るため、このようなペプチドの、リンカーとのコンジュゲーションは、標準化学反応である。

【0246】

単一標識ポリペプチドを得るために、１：１の化学量論のコンジュゲートを、他のコンジュゲーション副産物からクロマトグラフィーによって分離してもよい。この手順は、色素標識した結合対メンバーおよび荷電リンカーを使用することにより容易となり得る。この種類の標識および高度に負に荷電した結合対メンバーを使用することにより、モノコンジュゲートしたポリペプチドは、非標識ポリペプチドおよび１種を上回るリンカーを有するポリペプチドから容易に分離されるが、これは、電荷および分子量における相違を分離に使用できるためである。蛍光色素は、標識した一価結合剤などの未結合成分から複合体を精製するのに有用であり得る。

【0247】

いくつかの態様では、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体と結合する部分は、結合部分、標識部分、および生物学的に活性な部分からなる群から選択される。

【0248】

本明細書に記載される抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体はまた、イムノコンジュゲート、例えば、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を形成するように、治療剤とコンジュゲートされ得る。好適な治療剤として、抗代謝剤、アルキル化剤、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＮＡインターカレーター、ＤＮＡ架橋剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、核外輸送阻害剤、プロテアソーム阻害剤、トポイソメラーゼＩまたはＩＩ阻害剤、熱ショックタンパク質阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、抗生物質および抗有糸分裂剤が挙げられる。ＡＤＣにおいて、抗体および治療剤は、好ましくは、ペプチジル、ジスルフィドまたはヒドラゾンリンカーなどの切断可能なリンカーを介してコンジュゲートされる。いくつかの態様では、リンカーは、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｇｌｙ－Ｖａｌ－Ｖａｌ（配列番号１０８）、Ａｌａ－Ａｓｎ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｓｎ、Ｃｉｔ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ、Ｃｉｔ、Ｓｅｒ、またはＧｌｕなどのペプチジルリンカーである。ＡＤＣは、米国特許第７，０８７，６００号、同第６，９８９，４５２号および同第７，１２９，２６１号、ＰＣＴ公開ＷＯ０２／０９６９１０、ＷＯ０７／０３８６５８、ＷＯ０７／０５１０８１、ＷＯ０７／０５９４０４、ＷＯ０８／０８３３１２およびＷＯ０８／１０３６９３、米国特許公開第２００６００２４３１７号、同第２００６０００４０８１号および同第２００６０２４７２９５号に記載されるように調製することができる。

【0249】

いくつかの態様では、治療剤は、細胞毒素、非細胞毒性薬、放射性薬剤、第２の抗体、酵素、抗新生物剤、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。

【0250】

いくつかの態様では、イムノコンジュゲートは、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体および細胞毒素を含む。細胞毒素は、当技術分野において公知の任意の細胞毒素から選択され得る。いくつかの態様では、細胞毒素は、ドラスタチン、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、マイタンシン、デュオカルマイシン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、デュオカルマイシン、センタナマイシン、ＳＮ３８、ドキソルビシン、これらの誘導体、これらの合成類似体、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。特定の態様では、イムノコンジュゲートは、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体および細胞毒素Ａを含む。他の態様では、イムノコンジュゲートは、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体および非細胞毒性薬を含む。

【0251】

いくつかの態様では、イムノコンジュゲートは、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体および放射性薬剤を含む。いくつかの態様では、放射性薬剤は、放射性ヌクレオチドである。特定の態様では、放射性薬剤は、放射性ヨウ素を含む。特定の態様では、放射性薬剤は、１３１－ヨウ素を含む。他の態様では、放射性薬剤は、放射性アイソトープイットリウム－９０を含む。

【0252】

いくつかの態様では、イムノコンジュゲートは、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体および第２の抗体を含む。第２の抗体は、本開示に記載される任意の抗体であってもよく、これには、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＮＫＧ２ａ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ－１０、ＩＬ－２、ＩＬ－８、Ｂ７－Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソテリン、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択されるタンパク質と特異的に結合する抗体が挙げられるが、これらに限定されない。一態様では、イムノコンジュゲートは、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体および抗ＰＤ－１抗体を含む。別の態様では、イムノコンジュゲートは、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体およびニボルマブを含む。

【0253】

一態様では、イムノコンジュゲートは、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体およびペグ化ＩＬ－２またはペグ化ＩＬ－１０を含む。

【0254】

特定の態様では、イムノコンジュゲートは、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体および酵素を含む。いくつかの態様では、酵素は、グルコースオキシダーゼを含む。いくつかの態様では、酵素は、ペルオキシダーゼを含む。いくつかの態様では、酵素は、ミエロペルオキシダーゼを含む。いくつかの態様では、酵素は、グルコースオキシダーゼを含む。いくつかの態様では、酵素は、西洋ワサビペルオキシダーゼを含む。

【0255】

特定の態様では、イムノコンジュゲートは、抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体および抗新生物剤を含む。抗新生物剤は、当技術分野において公知の任意のそのような薬剤であり得る。いくつかの態様では、抗新生物剤は、エピルビシンである。いくつかの態様では、抗新生物剤は、スーパー抗原である。特定の態様では、スーパー抗原は、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ Ａ）（ＳＥＡ／Ｅ－１２０、エスタフェナトックス）である。

【0256】

抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体、例えば、本明細書に記載されるものは、インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）を検出するためにも使用することができる。抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーにおいて、使用することができる。

【0257】

例えば、単剤療法または併用療法としての抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の他の使用は、本明細書の他の箇所、例えば、併用処置に関する節において提供される。

【0258】

ＩＩ．Ｄ．核酸分子
本明細書に記載される別の態様は、本明細書に記載される抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体をコードする核酸分子に関係する。核酸は、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンド形成、カラムクロマトグラフィー、制限酵素、アガロースゲル電気泳動および当技術分野で周知のその他のものを含めた標準技術によって、その他の細胞成分またはその他の夾雑物、例えば、その他の細胞性核酸（例えば、その他の染色体ＤＮＡ、例えば、自然界では単離されたＤＮＡと連結している染色体ＤＮＡ）またはタンパク質から精製された場合に、全細胞中に、細胞溶解物中に、または部分精製されたかもしくは実質的に純粋な形態で存在し得る。核酸は、「単離される」かまたは「実質的に純粋にされる」。F. Ausubel, et al., ed. (1987) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New Yorkを参照のこと。本明細書に記載される核酸は、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡであり得、イントロン配列を含有する場合も、含有しない場合もある。いくつかの態様では、核酸は、ｃＤＮＡ分子である。

【0259】

本明細書に記載される核酸は、標準分子生物学技術を使用して得ることができる。ハイブリドーマ（例えば、以下にさらに記載されるようなヒト免疫グロブリン遺伝子を保持するトランスジェニックマウスから調製されたハイブリドーマ）によって発現される抗体については、ハイブリドーマによって作製された抗体の軽鎖および重鎖をコードするｃＤＮＡは、標準ＰＣＲ増幅またはｃＤＮＡクローニング技術によって得ることができる。免疫グロブリン遺伝子ライブラリーから（例えば、ファージディスプレイ技術を使用して）から得られる抗体については、抗体をコードする核酸は、ライブラリーから回収され得る。

【0260】

本明細書に記載される一部の核酸分子は、抗インテグリンαｖヘテロ二量体抗体のＶＨおよびＶＬ配列をコードするものである。

【0261】

本明細書に記載される核酸分子は、特定の配列、例えば、制限酵素認識配列を欠失するように、またはコドンを最適化するように、修飾されていてもよい。

【0262】

本明細書において開示される抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を作製するための方法は、シグナルペプチドとともに重鎖および軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む細胞株において、重鎖および軽鎖を発現させることを含み得る。これらのヌクレオチド配列を含む宿主細胞は、本明細書に包含される。

【0263】

ＶＨおよびＶＬセグメントをコードするＤＮＡ断片が得られると、例えば、可変領域遺伝子を全長抗体鎖遺伝子に、Ｆａｂ断片遺伝子に、またはｓｃＦｖ遺伝子に変換するよう、標準組換えＤＮＡ技術によってこれらのＤＮＡ断片をさらに操作できる。これらの操作では、ＶＬまたはＶＨをコードするＤＮＡ断片は、抗体定常領域または可動性リンカーなどの別のタンパク質をコードする別のＤＮＡ断片と作動可能に連結している。この文脈において使用されるような、用語「作動可能に連結された」は、２種のＤＮＡ断片によってコードされるアミノ酸配列がインフレームのままであるよう、２種のＤＮＡ断片が接続されることを意味するものとする。

【0264】

ＶＨ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＨをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域（ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２、および／またはＣＨ３）をコードする別のＤＮＡ分子と作動可能に連結することによって、全長重鎖遺伝子に変換され得る。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当技術分野で公知であり（例えば、Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242を参照されたい）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準ＰＣＲ増幅によって得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ定常領域、例えば、ＩｇＧ１領域であり得る。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子については、ＶＨをコードするＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子と作動可能に連結され得る。

【0265】

ＶＬ領域をコードする単離されたＤＮＡは、ＶＬをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領域、ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子と作動可能に連結することによって、全長軽鎖遺伝子（ならびにＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換され得る。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当技術分野で公知であり（例えば、Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242を参照されたい）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準ＰＣＲ増幅によって得ることができる。軽鎖定常領域は、κまたはλ定常領域であり得る。

【0266】

ｓｃＦｖ遺伝子を作製するために、ＶＨおよびＶＬをコードするＤＮＡ断片を、可動性リンカーをコードする、例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ_４－Ｓｅｒ）_３をコードする、別の断片に作動可能に連結し、その結果、ＶＨおよびＶＬ配列が、可動性リンカーによって接続されたＶＬおよびＶＨ領域を有する連続した一本鎖タンパク質として発現され得る（例えば、Bird et al., (1988) Science 242:423-426;Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883;McCafferty et al., (1990) Nature 348:552-554を参照されたい）。

【0267】

さらに、例えば、コドン最適化のために、保存的置換（すなわち、核酸分子の翻訳時に得られるアミノ酸配列を変更しない置換）を有する核酸分子が、本明細書において提供される。

【0268】

ＩＩ．Ｅ．医薬組成物
医薬上許容される担体と一緒に製剤化された、本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体、または他の標的に対する抗体との組合せ、またはその抗原結合部分（単数または複数）のうちの１種または組合せを含有する組成物、例えば、医薬組成物がさらに提供される。このような組成物は、（例えば、２種以上の異なる）本明細書に記載される抗体またはイムノコンジュゲートまたは二重特異性分子のうち１種または組合せを含み得る。例えば、本明細書に記載される医薬組成物は、標的抗原上の異なるエピトープと結合するか、または補完的活性を有する抗体（イムノコンジュゲートまたは二重特異体を含む）の組合せを含み得る。

【0269】

いくつかの態様では、組成物は、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、１５０ｍｇ／ｍｌ、２００ｍｇ／ｍｌ、１～３００ｍｇ／ｍｌもしくは１００～３００ｍｇ／ｍｌの濃度で抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を含む。

【0270】

本明細書に記載される医薬組成物はまた、併用療法において、すなわち、その他の薬剤と組み合わせて投与できる。例えば、併用療法は、少なくとも１種のその他の抗がん剤および／または例えば、Ｔ細胞刺激（例えば、活性化）剤などの免疫調節物質と組み合わせた、本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を含み得る。併用療法において使用され得る治療薬の例は、本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の使用に関する節において以下により詳細に記載される。

【0271】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、化学療法薬、小分子薬、および所与のがんに対する免疫応答を刺激する抗体から選択される少なくとも１つの他の薬剤と組み合わされる。いくつかの場合には、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＯＸ４０（ＣＤ１３４、ＴＮＦＲＳＦ４、ＡＣＴ３５、および／もしくはＴＸＧＰ１Ｌとしても知られる）抗体（例えば、ＢＭＳ９８６１７８、もしくはＭＤＸ－１８０３）、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗ＴＧＦβ抗体、抗ＩＬ－１０抗体、長時間作用型ＩＬ－１０分子（例えば、ＩＬ－１０－Ｆｃ融合体、もしくはペグ化ＩＬ－１０、例えば、ＡＲＭＯ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓのＡＭ００１０）、長時間作用型ＩＬ－２（例えば、ペグ化ＩＬ－２分子、例えば、ＮｅｋｔａｒのＮＫＴＲ－２１４、ＵＳ８，２５２，２７５、ＷＯ１２／０６５０８６、およびＷＯ１５／１２５１５９を参照されたい）、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＣＤ９６抗体、抗ＩＬ－８抗体、抗Ｂ７－Ｈ４、抗Ｆａｓリガンド抗体、抗ＣＸＣＲ４抗体、抗メソテリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＭＩＣＡ／Ｂ抗体、またはこれらの任意の組合せのうちの１つまたは複数と組み合わされる。

【0272】

他の態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、第２の抗体とともに製剤化される。いくつかの態様では、第２の抗体は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＮＫＧ２ａ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ－１０、ＩＬ－２、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、ＩＬ－８、Ｂ７－Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソテリン、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＭＩＣＡ／Ｂ、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択されるタンパク質と特異的に結合する。

【0273】

いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＰＤ－１抗体である。抗ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１と結合し、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１の相互作用を阻害する、任意の抗体であり得る。いくつかの態様では、抗ＰＤ－１抗体は、本明細書において開示される任意の抗ＰＤ－１抗体である。いくつかの態様では、第２の抗体は、ニボルマブである。いくつかの態様では、第２の抗体は、ペンブロリズマブである。

【0274】

いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＰＤ－Ｌ１と結合し、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１の相互作用を阻害する、任意の抗体であり得る。いくつかの態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書において開示される任意の抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。いくつかの態様では、第２の抗体は、アテゾリズマブである。いくつかの態様では、第２の抗体は、デュルバルマブである。いくつかの態様では、第２の抗体は、アベルマブである。

【0275】

いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＣＴＬＡ－４抗体である。抗ＣＴＬＡ－４抗体は、ＣＴＬＡ－４と結合し、その活性を阻害する、任意の抗体であり得る。いくつかの態様では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、本明細書において開示される任意の抗ＣＴＬＡ－４抗体である。いくつかの態様では、第２の抗体は、トレメリムマブである。いくつかの態様では、第２の抗体は、イピリムマブである。

【0276】

いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＬＡＧ３抗体である。抗ＬＡＧ３抗体は、ＬＡＧ－３と結合し、その活性を阻害する、任意の抗体であり得る。いくつかの態様では、抗ＬＡＧ３抗体は、本明細書において開示される任意の抗ＬＡＧ３抗体である。いくつかの態様では、第２の抗体は、２５Ｆ７である。

【0277】

いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＣＤ１３７抗体である。抗ＣＤ１３７抗体は、ＣＤ１３７と結合し、その活性を阻害する、任意の抗体であり得る。いくつかの態様では、抗ＣＤ１３７抗体は、本明細書において開示される任意の抗ＣＤ１３７抗体である。いくつかの態様では、第２の抗体は、ウレルマブである。

【0278】

いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＫＩＲ抗体である。抗ＫＩＲ抗体は、ＫＩＲと結合し、その活性を阻害する、任意の抗体であり得る。いくつかの態様では、抗ＫＩＲ抗体は、本明細書において開示される任意の抗ＫＩＲ抗体である。いくつかの態様では、第２の抗体は、リリルマブである。

【0279】

いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＧＩＴＲ抗体である。抗ＧＩＴＲ抗体は、ＧＩＴＲと結合し、その活性を阻害する、任意の抗体であり得る。いくつかの態様では、抗ＧＩＴＲ抗体は、本明細書において開示される任意の抗ＧＩＴＲ抗体である。いくつかの態様では、第２の抗体は、ＭＫ４１６６である。いくつかの態様では、第２の抗体は、ＴＲＸ５１８である。

【0280】

いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＣＤ９６抗体である。

【0281】

いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＴＩＭ３抗体である。

【0282】

いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＶＩＳＴＡ抗体である。

【0283】

いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＮＫＧ２ａ抗体である。

【0284】

いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＩＣＯＳ抗体である。

【0285】

いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＯＸ４０抗体である。

【0286】

いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＩＬ８抗体、例えば、ＨｕＭａｘ（登録商標）－ＩＬ８（ＢＭＳ－９８６２５３）である。

【0287】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、長時間作用型ＩＬ－１０分子とともに製剤化される。いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、ＩＬ－１０－Ｆｃ融合分子とともに製剤化される。いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、ペグ化ＩＬ－１０、例えば、ＡＲＭＯ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓのＡＭ００１０とともに製剤化される。

【0288】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、長時間作用型ＩＬ－２とともに製剤化される。いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、ペグ化ＩＬ－２分子、例えば、ＮｅｋｔａｒのＮＫＴＲ－２１４とともに製剤化される。ＵＳ８，２５２，２７５、ＷＯ１２／０６５０８６、およびＷＯ１５／１２５１５９を参照されたい。

【0289】

いくつかの態様では、本開示の組成物は、増量剤をさらに含む。増量剤は、ＮａＣｌ、マンニトール、グリシン、アラニン、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択され得る。他の態様では、本開示の組成物は、安定化剤を含む。安定化剤は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、アルギニン、またはこれらの任意の組合せからなる群から選択され得る。他の態様では、本開示の組成物は、界面活性剤を含む。界面活性剤は、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）、ポリソルベート２０（ＰＳ２０）、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択され得る。特定の態様では、組成物は、キレート剤をさらに含む。キレート剤は、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレンジアミン四酢酸、ニトリロ三酢酸、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択され得る。

【0290】

他の態様では、組成物は、第３の抗体を含む。いくつかの態様では、第３の抗体は、本明細書において開示される任意の抗体である。

【0291】

一態様では、組成物は、ＮａＣｌ、マンニトール、ペンテト酸（ＤＴＰＡ）、スクロース、ＰＳ８０、およびこれらの任意の組合せをさらに含む。

【0292】

本明細書において、「医薬上許容される担体」として、生理学的に適合する、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。いくつかの態様では、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、または表皮投与（例えば、注射または注入による）に好適である。皮下注射のオプションは、Ｈａｌｏｚｙｍｅ ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのＥＮＨＡＮＺＥ（登録商標）薬物デリバリー技術に基づき、これは、抗体を組換えヒトヒアルロニダーゼ酵素（ｒＨｕＰＨ２０）とともに共製剤化することを含み、これにより、細胞外マトリックスに起因した皮下に送達することができる生物製剤および薬物の体積に対する従来的な制限が除去される（米国特許第７，７６７，４２９号）。投与経路に応じて、化合物を、酸および化合物を不活性化し得るその他の天然条件作用から保護するために、材料において、活性化合物、すなわち、抗体、免疫複合体または二重特異性分子をコーティングしてもよい。

【0293】

本明細書に記載される医薬化合物は、１種または複数の医薬上許容される塩を含み得る。「医薬上許容される塩」とは、親化合物の所望の生物活性を保持し、何らかの望ましくない毒物学的影響を付与しない塩を指す（例えば、Berge, S. M., et al. (1977) J. Pharm. Sci. 66:1-19を参照のこと）。このような塩の例として、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩として、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸などといった非毒性無機酸に由来するものならびに脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などといった非毒性有機酸に由来するものが挙げられる。塩基付加塩として、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどといったアルカリ土類金属に由来するものならびにＮ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどといった非毒性有機アミンに由来するものが挙げられる。

【0294】

本明細書に記載される医薬組成物はまた、医薬上許容される抗酸化物質を含み得る。医薬上許容される抗酸化物質の例として、（１）アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどといった水溶性抗酸化物質、（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α－トコフェロールなどといった油溶性抗酸化物質および（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などといった金属キレート化剤が挙げられる。

【0295】

本明細書に記載される医薬組成物において使用され得る、適した水性および非水性担体の例として、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどといった）およびそれらの適した混合物、オリーブオイルなどの植物油およびオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散物の場合には必要な粒径の維持によって、また界面活性剤の使用によって維持できる。

【0296】

これらの組成物はまた、保存料、湿潤剤、乳化剤および分散剤などのアジュバントを含有し得る。微生物の存在の防止は、滅菌法手順、前掲によって、また種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めることの両方によって確実にできる。糖、塩化ナトリウムなどといった等張剤を組成物中に含めることが望ましい場合もある。さらに、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延する薬剤を含めることによって、注射用医薬品形態の長期の吸収を引き起こすことができる。

【0297】

医薬上許容される担体として、滅菌水溶液または分散物および滅菌注射用溶液または分散物の即時調製のための滅菌散剤が挙げられる。医薬上活性な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当技術分野で公知である。任意の従来の媒体または薬剤が、活性化合物と不適合である場合を除いて、本明細書に記載される医薬組成物におけるその使用が考慮される。医薬組成物は、保存剤を含んでもよく、または保存剤を含まなくてもよい。補足活性化合物は、組成物中に組み込まれ得る。

【0298】

治療用組成物は、通常、製造および貯蔵の条件下で無菌で、安定でなくてはならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソームまたは高薬物濃度に適したその他の秩序構造として製剤化できる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）およびそれらの適した混合物を含有する、溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散物の場合には必要な粒径の維持によって、また界面活性剤の使用によって維持できる。多くの場合、組成物は、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールまたは塩化ナトリウムなどのポリアルコールを含むことができる。組成物中に吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを含めることによって、注射用組成物の長期吸収を引き起こすことができる。

【0299】

滅菌注射用溶液は、必要に応じて、上記で列挙された成分のうち１種または組合せとともに、適当な溶媒中に必要な量の活性化合物を組み込むことと、それに続く、滅菌精密濾過によって調製できる。一般に、分散物は、基本分散媒および本明細書で列挙されたものから必要なその他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌散剤の場合には、調製の方法として、その前もって滅菌濾過された溶液から有効成分および任意のさらなる所望の成分の粉末が得られる、真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）がある。

【0300】

単一投与形を生産するための担体材料と組み合わされ得る有効成分の量は、治療されている対象および特定の投与様式に応じて変わる。単一投与形を生産するための担体材料と組み合わされ得る有効成分の量は、一般に、治療効果を生産する組成物の量となる。一般に、医薬上許容される担体との組合せにおいて、この量は、１００パーセントのうち、有効成分の約０．０１パーセント～約９９パーセント、約０．１パーセント～約７０パーセント、または有効成分の約１パーセント～約３０パーセントの範囲となる。

【0301】

投与計画は、最適の所望の応答（例えば、治療的応答）を提供するよう調整される。例えば、単回ボーラスを投与してもよく、いくつかの分割用量を経時的に投与してもよく、または治療状況の緊急事態によって示されるように、用量を比例的に低減または増大してもよい。投与の容易性および投与形の均一性のための投与単位形に非経口組成物を製剤化することは特に有利である。本明細書において、投与単位形とは、治療されている対象の単位投与量として適している物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と関連して所望の治療効果を生産するよう算出された所定の量の活性化合物を含有する。本明細書に記載される投与単位形の仕様は、（ａ）活性化合物の独特の特徴および達成されるべき特定の治療効果ならびに（ｂ）個体における感受性の治療のためのこのような活性化合物の配合の技術分野に固有の制限によって決定され、それらに直接左右される。

【0302】

抗体は、持続放出製剤として投与でき、この場合には、あまり頻繁ではない投与が必要とされる。投与量および頻度は、患者における抗体の半減期に応じて変わる。一般に、ヒト抗体は、最長の半減期を示し、ヒト化抗体、キメラ抗体および非ヒト抗体が続く。投与の投与量および頻度は、治療が予防的であるか、治療的であるかに応じて変わり得る。予防的適用では、比較的少ない投与量が、比較的頻繁ではない間隔で長期間にわたって投与される。一部の患者は、生涯治療を受け続ける。治療的適用では、疾患の進行が低減または終結されるまで、患者が疾患の症状の部分的または完全寛解を示すまで、比較的短い間隔の比較的多い投与量が時には必要である。その後、患者は、予防的投与計画を投与されることがある。

【0303】

本明細書に記載される医薬組成物中の有効成分の実際の投与量レベルは、患者とって毒性ではなく、特定の患者、組成物および投与様式について所望の治療応答を達成するのに有効である有効成分の量を得るよう変えてもよい。選択される投与量レベルは、使用される本明細書に記載される特定の組成物またはそのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与経路、投与の時間、使用されている特定の化合物の排出速度、治療期間、使用される特定の組成物と組み合わせて使用されるその他の薬物、化合物および／または材料、治療されている患者の年齢、性別、体重、状態、全身の健康および先の病歴および医薬の技術分野において周知の同様の因子を含めた種々の薬物動態因子に応じて変わる。

【0304】

本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の「治療上有効な投与量」は、疾患症状の重症度の低減、疾患症状のない期間の頻度および期間の増大または疾患苦痛による機能障害もしくは能力障害の防止をもたらし得る。がんに関連して、治療上有効な用量は、生存、例えば、全生存期間の増大、および／またはがんと関連する身体症状のさらなる増悪の予防をもたらし得る。がんの症状は、当技術分野で周知であり、例えば、普通ではない黒子の特徴、非対称、境界、色および／または直径を含めた黒子の外観の変化、新規に着色した皮膚領域、異常な黒子、爪の下の黒くなった領域、乳房のしこり、乳頭の変化、乳房嚢胞、乳房疼痛、死亡、体重減少、脱力感、過度の疲労、摂食障害、食欲の喪失、慢性の咳、息切れの悪化、喀血、血尿、血便、悪心、嘔吐、肝臓転移、肺転移、骨転移、腹部膨満、鼓腸、腹膜腔中の流体、膣出血、便秘、腹部膨隆、結腸の穿孔、急性腹膜炎（感染、発熱、疼痛）、疼痛、吐血、多量の発汗、発熱、高血圧症、貧血、下痢、黄疸、めまい、悪寒、筋痙攣、結腸転移、肺転移、膀胱転移、肝臓転移、骨転移、腎臓転移および膵臓転移、嚥下困難などが挙げられる。

【0305】

疾患の早期または先行する徴候が存在する場合に望まれ得るような治療上有効な用量は、がんの発生を防ぐかまたは遅延し得る。がんの診断において使用される実験室試験は、化学（インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）レベルの測定を含む）、血液学、血清学および放射線学を含む。したがって、前記のうちいずれかをモニタリングする任意の臨床または生化学アッセイを使用して、特定の治療が、がんを治療するための治療上有効な用量であるか否かを調べてもよい。

【0306】

本明細書に記載される組成物は、当技術分野で公知の１種または複数の種々の方法を使用して、１種または複数の投与経路によって投与できる。投与経路および／または投与様式は、所望の結果に応じて変わる。本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の投与経路として、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄または例えば、注射もしくは注入によるその他の非経口投与経路が挙げられる。本明細書において、語句「非経口投与」とは、経腸および局所投与以外の、普通、注射による投与様式を意味し、制限するものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射および注入が挙げられる。

【0307】

あるいは、本明細書に記載される抗体は潜在的に、局所、上皮または粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、経膣、直腸性、舌下にまたは局所になど、非経口ではない経路によって投与できる。

【0308】

留置用剤、経皮パッチおよびマイクロカプセル化送達系を含めた徐放性製剤など、活性化合物を、化合物を迅速な放出から保護する担体を用いて調製できる。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用できる。このような製剤を調製するための多数の方法が、一般的に、当業者に公知である。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978を参照のこと。

【0309】

治療用組成物は、当技術分野で公知の医療装置を用いて投与できる。例えば、いくつかの態様では、本明細書に記載される治療用組成物は、米国特許第５，３９９，１６３号；同５，３８３，８５１号；同５，３１２，３３５号；同５，０６４，４１３号；同４，９４１，８８０号；同４，７９０，８２４号；または同４，５９６，５５６号に開示される装置などの注射針無し皮下注射装置を用いて投与できる。本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体とともに使用するための周知の留置用剤およびモジュールの例として、制御された速度で医薬を分配するための埋め込み可能な微量注入ポンプを開示する米国特許第４，４８７，６０３号；皮膚を通って医薬を投与するための治療用装置を開示する同４，４８６，１９４号；正確な注入速度で医薬を送達するための医薬注入ポンプを開示する同４，４４７，２３３号；連続薬物送達のための可変流動埋め込み可能注入器具を開示する同４，４４７，２２４号；マルチチャンバーコンパートメントを有する浸透圧薬物送達システムを開示する同４，４３９，１９６号；および浸透圧薬物送達システムを開示する同４，４７５，１９６号が挙げられる。これらの特許は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0310】

いくつかの態様では、本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、インビボでの適切な分布を確実にするよう製剤化できる。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多数の高親水性化合物を排除する。本明細書に記載される治療用化合物が、ＢＢＢを通過することを確実にするために（所望される場合、例えば、脳のがんについて）、それらを例えば、リポソーム中に製剤化できる。リポソームを作製する方法については、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号；同５，３７４，５４８号；および同５，３９９，３３１号を参照のこと。リポソームは、特定の細胞または臓器中に選択的に輸送され、したがって、標的化された薬物送達を増強する１つまたは複数の部分を含み得る（例えば、V.V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29:685を参照のこと）。例示的標的化部分として、葉酸またはビオチン（例えば、Low et al.の米国特許第５，４１６，０１６号を参照のこと）；マンノシド（Umezawa et al., (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038);抗体(P.G. Bloeman et al. (1995) FEBS Lett. 357:140; M. Owais et al. (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39:180）；界面活性剤プロテインＡ受容体（Briscoe et al. (1995) Am. J. Physiol. 1233:134）；ｐ１２０（Schreier et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:9090）が挙げられ、K. Keinanen; M.L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123; J.J. Killion; I.J. Fidler (1994) Immunomethods 4:273も参照のこと。

【0311】

ＩＩＩ．本開示の方法
ＩＩＩ．Ａ．使用および方法
本開示の特定の態様は、対象を処置する方法であって、対象に、本明細書において開示される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体をコードするポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含むベクター、ポリヌクレオチドを含む宿主細胞、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を含むイムノコンジュゲート、またはこれらの任意の組合せを投与することを含む、方法を対象とする。

【0312】

本開示の特定の態様は、それを必要とする対象においてがんを処置する方法であって、対象に、有効用量の本明細書において開示される組成物（例えば、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、イムノコンジュゲート、または医薬組成物）を投与することを含む、方法を対象とする。他の態様では、本開示は、それを必要とする対象において腫瘍細胞によるインテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）の流出を阻害する方法であって、対象に、有効用量の本明細書において開示される組成物を投与することを含む、方法を対象とする。他の態様では、本開示は、それを必要とする対象において、血清中のインテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）の流出を低減する、および／または細胞表面上のインテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）を保持する方法であって、対象に、有効用量の本明細書において開示される組成物を投与することを含む、方法を対象とする。他の態様では、本開示は、それを必要とする対象において腫瘍細胞を殺滅する行う方法であって、対象に、有効用量の本明細書において開示される組成物を投与することを含む、方法を対象とする。他の態様では、本開示は、それを必要とする対象において腫瘍のサイズを低減させる方法であって、対象に、有効用量の本明細書において開示される組成物を投与することを含む、方法を対象とする。他の態様では、本開示は、それを必要とする対象において腫瘍の転移を阻害することであって、対象に、有効用量の本明細書において開示される組成物を投与することを含む、腫瘍の転移の阻害を対象とする。いくつかの態様では、対象は、ヒトである。

【0313】

本開示の組成物は、任意の薬学的に許容される経路を使用して投与され得る。いくつかの態様では、組成物（例えば、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、イムノコンジュゲート、または医薬組成物）は、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、髄腔内、リンパ内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、胸骨内、局所、表皮、粘膜、またはこれらの任意の組合せで、投与される。いくつかの態様では、組成物は、静脈内投与される。いくつかの態様では、組成物は、皮下投与される。

【0314】

特定の態様では、本方法は、対象におけるがんのサイズ、例えば、腫瘍のサイズを低減させる。いくつかの態様では、がんのサイズは、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％低減される。

【0315】

いくつかの態様では、本方法は、対象の全生存期間を増大させる。いくつかの態様では、全生存期間は、同じがんを有するが異なる治療法で処置された対象の平均全生存期間と比べて増大する。特定の態様では、全生存期間は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約５倍増大する。いくつかの態様では、全生存期間は、少なくとも約１カ月、少なくとも約２カ月、少なくとも約３カ月、少なくとも約４カ月、少なくとも約５カ月、少なくとも約６カ月、少なくとも約７カ月、少なくとも約８カ月、少なくとも約９カ月、少なくとも約１０カ月、少なくとも約１カ月、少なくとも約１２カ月、少なくとも約１５カ月、少なくとも約１８カ月、少なくとも約２１カ月、少なくとも約２年、少なくとも約３年、少なくとも約４年、少なくとも約５年、または少なくとも約１０年増大する。

【0316】

いくつかの態様では、本方法は、対象の無増悪生存期間を増大させる。いくつかの態様では、全生存期間は、同じがんを有するが異なる治療法で処置された対象の平均無増悪生存期間と比べて増大する。特定の態様では、無増悪生存期間は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約５倍増大する。いくつかの態様では、全生存期間は、少なくとも約１カ月、少なくとも約２カ月、少なくとも約３カ月、少なくとも約４カ月、少なくとも約５カ月、少なくとも約６カ月、少なくとも約７カ月、少なくとも約８カ月、少なくとも約９カ月、少なくとも約１０カ月、少なくとも約１カ月、少なくとも約１２カ月、少なくとも約１５カ月、少なくとも約１８カ月、少なくとも約２１カ月、少なくとも約２年、少なくとも約３年、少なくとも約４年、少なくとも約５年、または少なくとも約１０年増大する。

【0317】

いくつかの態様では、本方法は、対象の奏効率を増大させる。特定の態様では、本方法は、対象において完全奏功を誘導する。いくつかの態様では、本方法は、対象において部分奏功を誘導する。

【0318】

いくつかの態様では、本方法は、本明細書において開示される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体（またはポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、もしくはイムノコンジュゲート）、および第２の治療法を投与することを含む。いくつかの態様では、第２の治療法は、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の前に投与される。いくつかの態様では、第２の治療法は、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の後に投与される。いくつかの態様では、第２の治療法は、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体と同時に投与される。特定の態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体および第２の治療法は、別個に投与される。他の態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体および第２の治療法は、単一の製剤において投与される。

【0319】

第２の治療法は、当技術分野において公知の任意の他の治療法であり得る。いくつかの態様では、第２の治療法は、免疫療法を含む。いくつかの態様では、第２の治療法は、化学療法を含む。いくつかの態様では、第２の治療法は、放射線療法を含む。いくつかの態様では、第２の治療法は、外科手術を含む。いくつかの態様では、第２の治療法は、第２の治療剤を投与することを含む。

【0320】

特定の態様では、第２の治療剤は、第２の抗体を含む。いくつかの態様では、第２の治療剤は、誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ２７、グルココルチコイドに誘導されるＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、およびヘルペスウイルス進入媒介因子（ＨＶＥＭ）、プログラム死－１（ＰＤ－１）、プログラム死リガンド－１（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＴＬＡ－４、ＢおよびＴリンパ球減弱因子（ＢＴＬＡ）、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンドメイン－３（ＴＩＭ－３）、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ－３）、アデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）、キラー細胞レクチン様受容体Ｇ１（ＫＬＲＧ－１）、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４（ＣＤ２４４）、ＣＤ１６０、ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）、およびＴ細胞活性化のＶ－ドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）の受容体、ＮＫＧ２ａ、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ－１０、ＩＬ－８、Ｂ７－Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソテリン、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＤ９６、ＣＤ５２、ＨＥＲ２、ならびにこれらの任意の組合せから選択されるタンパク質と特異的に結合する、有効量の抗体を含む。

【0321】

ＸＩ．Ａ．抗ＰＤ－１抗体
いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＰＤ－１抗体である。当技術分野において公知である抗ＰＤ－１抗体を、本明細書に記載される組成物および方法において使用することができる。高い親和性でＰＤ－１と特異的に結合する様々なヒトモノクローナル抗体は、米国特許第８，００８，４４９号に開示されている。米国特許第８，００８，４４９号に開示されている抗ＰＤ－１ヒト抗体は、以下の特徴のうちの１つまたは複数を示すことが示されている：（ａ）Ｂｉａｃｏｒｅバイオセンサーシステムを使用して表面プラズモン共鳴によって判定される場合、１×１０^－７Ｍ以下のＫ_Ｄで、ヒトＰＤ－１と結合すること、（ｂ）ヒトＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、またはＩＣＯＳと実質的に結合しないこと、（ｃ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいて、Ｔ細胞増殖を増大させること、（ｄ）ＭＬＲアッセイにおいて、インターフェロン－γ産生を増大させること、（ｅ）ＭＬＲアッセイにおいて、ＩＬ－２分泌を増大させること、（ｆ）ヒトＰＤ－１およびカニクイザルＰＤ－１と結合すること、（ｇ）ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２のＰＤ－１との結合を阻害すること、（ｈ）抗原特異的メモリー応答を刺激すること、（ｉ）抗体応答を刺激すること、ならびに（ｊ）インビボで腫瘍細胞成長を阻害すること。本開示において使用可能な抗ＰＤ－１抗体としては、ヒトＰＤ－１と特異的に結合し、前述の特徴のうちの少なくとも１つ、いくつかの態様では少なくとも５つを示す、モノクローナル抗体が挙げられる。

【0322】

他の抗ＰＤ－１モノクローナル抗体は、例えば、米国特許第６，８０８，７１０号、同第７，４８８，８０２号、同第８，１６８，７５７号、および同第８，３５４，５０９号、米国出願第２０１６／０２７２７０８号、ならびにＰＣＴ出願ＷＯ２０１２／１４５４９３号、同ＷＯ２００８／１５６７１２号、ＷＯ２０１５／１１２９００、ＷＯ２０１２／１４５４９３、ＷＯ２０１５／１１２８００、ＷＯ２０１４／２０６１０７、ＷＯ２０１５／３５６０６、ＷＯ２０１５／０８５８４７、ＷＯ２０１４／１７９６６４、ＷＯ２０１７／０２０２９１、ＷＯ２０１７／０２０８５８、ＷＯ２０１６／１９７３６７、ＷＯ２０１７／０２４５１５、ＷＯ２０１７／０２５０５１、ＷＯ２０１７／１２３５５７、ＷＯ２０１６／１０６１５９、ＷＯ２０１４／１９４３０２、ＷＯ２０１７／０４０７９０、ＷＯ２０１７／１３３５４０、ＷＯ２０１７／１３２８２７、ＷＯ２０１７／０２４４６５、ＷＯ２０１７／０２５０１６、ＷＯ２０１７／１０６０６１、ＷＯ２０１７／１９８４６、ＷＯ２０１７／０２４４６５、ＷＯ２０１７／０２５０１６、ＷＯ２０１７／１３２８２５、および同ＷＯ２０１７／１３３５４０号に記載されており、これらのそれぞれは、参照によりその全体が組み込まれる。

【0323】

いくつかの態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）、５Ｃ４、ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６、およびＯＮＯ－４５３８としても知られている）、ペンブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）、ランブロリズマブ、およびＭＫ－３４７５としても知られている、ＷＯ２００８／１５６７１２を参照されたい）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、ＷＯ２０１５／１１２９００を参照されたい）、ＭＥＤＩ－０６８０（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ、ＡＭＰ－５１４としても知られている、ＷＯ２０１２／１４５４９３を参照されたい）、セミプリマブ（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ、ＲＥＧＮ－２８１０としても知られている、ＷＯ２０１５／１１２８００を参照されたい）、ＪＳ００１（ＴＡＩＺＨＯＵ ＪＵＮＳＨＩ ＰＨＡＲＭＡ、Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)を参照されたい）、ＢＧＢ－Ａ３１７（Ｂｅｉｇｅｎｅ、ＷＯ２０１５／３５６０６およびＵＳ２０１５／００７９１０９を参照されたい）、ＩＮＣＳＨＲ１２１０（Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈｅｎｇｒｕｉ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、ＳＨＲ－１２１０としても知られている、ＷＯ２０１５／０８５８４７、Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)を参照されたい）、ＴＳＲ－０４２（Ｔｅｓａｒｏ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ、ＡＮＢ０１１としても知られている、ＷＯ２０１４／１７９６６４を参照されたい）、ＧＬＳ－０１０（Ｗｕｘｉ／Ｈａｒｂｉｎ Ｇｌｏｒｉａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＷＢＰ３０５５としても知られている、Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)を参照されたい）、ＡＭ－０００１（Ａｒｍｏ）、ＳＴＩ－１１１０（Ｓｏｒｒｅｎｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、ＷＯ２０１４／１９４３０２を参照されたい）、ＡＧＥＮ２０３４（Ａｇｅｎｕｓ、ＷＯ２０１７／０４０７９０を参照されたい）、ＭＧＡ０１２（Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ、ＷＯ２０１７／１９８４６を参照されたい）、ならびにＩＢＩ３０８（Ｉｎｎｏｖｅｎｔ、ＷＯ２０１７／０２４４６５、ＷＯ２０１７／０２５０１６、ＷＯ２０１７／１３２８２５、およびＷＯ２０１７／１３３５４０を参照されたい）からなる群から選択される。

【0324】

一態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブである。ニボルマブは、ＰＤ－１リガンド（ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２）との相互作用を選択的に防止し、それによって、抗腫瘍Ｔ細胞機能の下方制御を遮断する、完全ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）ＰＤ－１免疫チェックポイント阻害剤抗体である（米国特許第８，００８，４４９号、Wang et al., 2014 Cancer Immunol Res. 2(9):846-56）。

【0325】

別の態様では、抗ＰＤ－１抗体は、ペンブロリズマブである。ペンブロリズマブは、ヒト細胞表面受容体ＰＤ－１（プログラム死－１またはプログラム細胞死－１）を対象とするヒト化モノクローナルＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）抗体である。ペンブロリズマブは、例えば、米国特許第８，３５４，５０９号および同第８，９００，５８７号に記載されている。

【0326】

開示される組成物および方法において使用可能な抗ＰＤ－１抗体としてはまた、ヒトＰＤ－１と特異的に結合し、ヒトＰＤ－１との結合について、本明細書において開示される任意の抗ＰＤ－１抗体、例えば、ニボルマブと交差競合する、単離された抗体が挙げられる（例えば、米国特許第８，００８，４４９号および同第８，７７９，１０５号、ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照されたい）。いくつかの態様では、抗ＰＤ－１抗体は、本明細書に記載される抗ＰＤ－１抗体のうちのいずれか、例えば、ニボルマブと同一のエピトープと結合する。抗原との結合について交差競合する抗体の能力は、これらのモノクローナル抗体が、抗原の同一のエピトープ領域と結合し、他の交差競合する抗体のその特定のエピトープ領域との結合を立体的に妨害することを示す。これらの交差競合する抗体は、ＰＤ－１の同一のエピトープ領域との結合を踏まえると、参照抗体、例えば、ニボルマブのものと非常に類似する機能的特性を有することが予測される。交差競合する抗体は、標準的なＰＤ－１結合アッセイ、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、またはフローサイトメトリーにおいて、ニボルマブと交差競合する能力に基づいて容易に特定することができる（例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照されたい）。

【0327】

特定の態様では、ヒトＰＤ－１との結合について、ヒトＰＤ－１抗体、ニボルマブと交差競合するか、またはそれと同一のエピトープ領域と結合する抗体は、モノクローナル抗体である。ヒト対象への投与に関して、これらの交差競合する抗体は、キメラ抗体、遺伝子操作された抗体、またはヒト化もしくはヒト抗体である。そのようなキメラ、遺伝子操作、ヒト化、またはヒトモノクローナル抗体は、当技術分野において周知の方法によって調製および単離することができる。

【0328】

開示される本開示の組成物および方法において使用可能な抗ＰＤ－１抗体としてはまた、上述の抗体の抗原結合部分が挙げられる。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって実施され得ることが十分に示されている。

【0329】

開示される組成物および方法における使用に好適な抗ＰＤ－１抗体は、高い特異性および親和性でＰＤ－１と結合し、ＰＤ－Ｌ１およびまたはＰＤ－Ｌ２の結合を遮断し、ＰＤ－１シグナル伝達経路の免疫抑制作用を阻害する抗体である。本明細書において開示される組成物または方法のいずれにおいても、抗ＰＤ－１「抗体」は、ＰＤ－１受容体と結合し、リガンド結合の阻害および免疫系の上方制御に関して完全抗体のものと類似の機能的特性を示す、抗原結合部分または断片を含む。特定の態様では、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＰＤ－１との結合について、ニボルマブと交差競合する。

【0330】

ＸＩ．Ｂ．抗ＰＤ－Ｌ１抗体
いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。当技術分野において公知である抗ＰＤ－Ｌ１抗体を、本開示の組成物および方法において使用することができる。本開示の組成物および方法において有用な抗ＰＤ－Ｌ１抗体の例は、米国特許第９，５８０，５０７号に開示される抗体を含む。米国特許第９，５８０，５０７号に開示されている抗ＰＤ－Ｌ１ヒトモノクローナル抗体は、以下の特徴のうちの１つまたは複数を示すことが実証されている：（ａ）Ｂｉａｃｏｒｅバイオセンサーシステムを使用して表面プラズモン共鳴によって判定される場合、１×１０^－７Ｍ以下のＫ_Ｄで、ヒトＰＤ－Ｌ１と結合すること、（ｂ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいて、Ｔ細胞増殖を増大させること、（ｃ）ＭＬＲアッセイにおいて、インターフェロン－γ産生を増大させること、（ｄ）ＭＬＲアッセイにおいて、ＩＬ－２分泌を増大させること、（ｅ）抗体応答を刺激すること、ならびに（ｆ）Ｔ細胞、エフェクター細胞、および／または樹状細胞に対する制御性Ｔ細胞の作用を逆転させること。本開示において使用可能な抗ＰＤ－Ｌ１抗体としては、ヒトＰＤ－Ｌ１と特異的に結合し、前述の特徴のうちの少なくとも１つ、いくつかの態様では少なくとも５つを示す、モノクローナル抗体が挙げられる。

【0331】

特定の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＢＭＳ－９３６５５９（１２Ａ４、ＭＤＸ－１１０５としても知られている、例えば、米国特許第７，９４３，７４３号およびＷＯ２０１３／１７３２２３を参照されたい）、アテゾリズマブ（Ｒｏｃｈｅ、ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６としても知られている、米国特許第８，２１７，１４９号を参照されたく、またHerbst et al. (2013) J Clin Oncol 31(suppl):3000も参照されたい）、デュルバルマブ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ、ＩＭＦＩＮＺＩ（商標）、ＭＥＤＩ－４７３６としても知られている、ＷＯ２０１１／０６６３８９を参照されたい）、アベルマブ（Ｐｆｉｚｅｒ、ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標）、ＭＳＢ－００１０７１８Ｃとしても知られている、ＷＯ２０１３／０７９１７４を参照されたい）、ＳＴＩ－１０１４（Ｓｏｒｒｅｎｔｏ、ＷＯ２０１３／１８１６３４を参照されたい）、ＣＸ－０７２（Ｃｙｔｏｍｘ、ＷＯ２０１６／１４９２０１を参照されたい）、ＫＮ０３５（３Ｄ Ｍｅｄ／Ａｌｐｈａｍａｂ、Zhang et al., Cell Discov. 7:3 (March 2017)を参照されたい、ＬＹ３３０００５４（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ Ｃｏ、例えば、ＷＯ２０１７／０３４９１６を参照されたい）、およびＣＫ－３０１（Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Gorelik et al., AACR:Abstract 4606 (Apr 2016)を参照されたい）からなる群から選択される。

【0332】

特定の態様では、ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標））である。アテゾリズマブは、完全ヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

【0333】

特定の態様では、ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩ（商標））である。デュルバルマブは、ヒトＩｇＧ１カッパモノクローナル抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

【0334】

特定の態様では、ＰＤ－Ｌ１抗体は、アベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ（登録商標））である。アベルマブは、ヒトＩｇＧ１ラムダモノクローナル抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

【0335】

他の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体は、２８－８、２８－１、２８－１２、２９－８、５Ｈ１、またはこれらの任意の組合せからなる群から選択される。

【0336】

開示される組成物および方法において使用可能な抗ＰＤ－Ｌ１抗体としてはまた、ヒトＰＤ－Ｌ１と特異的に結合し、ヒトＰＤ－Ｌ１との結合について、本明細書において開示される任意の抗ＰＤ－Ｌ１抗体、例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、および／またはアベルマブと交差競合する、単離された抗体も挙げられる。いくつかの態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書に記載される抗ＰＤ－Ｌ１抗体のうちのいずれか、例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、および／またはアベルマブと同一のエピトープと結合する。抗原との結合について交差競合する抗体の能力は、これらの抗体が、抗原の同一のエピトープ領域と結合し、他の交差競合する抗体のその特定のエピトープ領域との結合を立体的に妨害することを示す。これらの交差競合する抗体は、ＰＤ－Ｌ１の同一のエピトープ領域との結合を踏まえると、参照抗体、例えば、アテゾリズマブおよび／またはアベルマブのものと非常に類似する機能的特性を有することが予測される。交差競合する抗体は、標準的なＰＤ－Ｌ１結合アッセイ、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、またはフローサイトメトリーにおいて、アテゾリズマブおよび／またはアベルマブと交差競合する能力に基づいて容易に特定することができる（例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照されたい）。

【0337】

特定の態様では、ヒトＰＤ－Ｌ１との結合について、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、および／またはアベルマブのようなヒトＰＤ－Ｌ１抗体と交差競合するか、またはそれと同一のエピトープ領域と結合する、抗体は、モノクローナル抗体である。ヒト対象への投与に関して、これらの交差競合する抗体は、キメラ抗体、遺伝子操作された抗体、またはヒト化もしくはヒト抗体である。そのようなキメラ、遺伝子操作、ヒト化、またはヒトモノクローナル抗体は、当技術分野において周知の方法によって調製および単離することができる。

【0338】

開示される本開示の組成物および方法において使用可能な抗ＰＤ－Ｌ１抗体としてはまた、上述の抗体の抗原結合部分が挙げられる。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって実施され得ることが十分に示されている。

【0339】

開示される組成物または方法における使用に好適な抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、高い特異性および親和性でＰＤ－Ｌ１と結合し、ＰＤ－１の結合を遮断し、ＰＤ－１シグナル伝達経路の免疫抑制作用を阻害する抗体である。本明細書において開示される組成物または方法のいずれにおいても、抗ＰＤ－Ｌ１「抗体」は、ＰＤ－Ｌ１と結合し、受容体結合の阻害および免疫系の上方制御に関して完全抗体のものと類似の機能的特性を示す、抗原結合部分または断片を含む。特定の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＰＤ－Ｌ１との結合について、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、および／またはアベルマブと交差競合する。

【0340】

ＸＩ．Ｃ．抗ＣＴＬＡ－４抗体
いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＣＴＬＡ－４抗体である。当技術分野において公知である抗ＣＴＬＡ－４抗体を、本開示の組成物および方法において使用することができる。本開示の抗ＣＴＬＡ－４抗体は、ＣＴＬＡ－４のヒトＢ７受容体との相互作用を破壊するように、ヒトＣＴＬＡ－４と結合する。ＣＴＬＡ－４のＢ７との相互作用により、ＣＴＬＡ－４受容体を有するＴ細胞の不活性化をもたらすシグナルが伝達されるため、この相互作用の破壊は、そのようなＴ細胞の活性化を効果的に誘導、増強、または延長し、それによって、免疫応答を誘導、増強、または延長する。

【0341】

高い親和性でＣＴＬＡ－４と特異的に結合するヒトモノクローナル抗体は、米国特許第６，９８４，７２０号に開示されている。その他の抗ＣＴＬＡ－４モノクローナル抗体は、例えば、米国特許第５，９７７，３１８号、同第６，０５１，２２７号、同第６，６８２，７３６号、および同第７，０３４，１２１号、ならびに国際公開ＷＯ２０１２／１２２４４４、ＷＯ２００７／１１３６４８、ＷＯ２０１６／１９６２３７、およびＷＯ２０００／０３７５０４に記載されており、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。米国特許第６，９８４，７２０号において開示されている抗ＣＴＬＡ－４ヒトモノクローナル抗体は、以下の特徴のうちの１つまたは複数を示すことが実証されている：（ａ）Ｂｉａｃｏｒｅ分析によって判定される場合、少なくとも約１０^７Ｍ^－１、または約１０^９Ｍ^－１、または約１０^１０Ｍ^－１～１０^１１Ｍ^－１、またはそれより高い平衡結合定数（Ｋ_ａ）によって反映される結合親和性で、ヒトＣＴＬＡ－４と特異的に結合すること、（ｂ）少なくとも約１０^３、約１０^４、または約１０^５ｍ^－１ｓ^－１の動力学的結合定数（ｋ_ａ）、（ｃ）少なくとも約１０^３、約１０^４、または約１０^５ｍ^－１ｓ^－１の動力学的解離定数（ｋ_ｄ）、ならびに（ｄ）ＣＴＬＡ－４のＢ７－１（ＣＤ８０）およびＢ７－２（ＣＤ８６）との結合を阻害すること。本開示に有用な抗ＣＴＬＡ－４抗体としては、ヒトＣＴＬＡ－４と特異的に結合し、前述の特徴のうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つを示す、モノクローナル抗体が挙げられる。

【0342】

特定の態様では、ＣＴＬＡ－４抗体は、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）、ＭＤＸ－０１０、１０Ｄ１としても知られる、米国特許第６，９８４，７２０号を参照されたい）、ＭＫ－１３０８（Ｍｅｒｃｋ）、ＡＧＥＮ－１８８４（Ａｇｅｎｕｓ Ｉｎｃ．、ＷＯ２０１６／１９６２３７を参照されたい）、およびトレメリムマブ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ、チシリムマブ、ＣＰ－６７５，２０６としても知られる、ＷＯ２０００／０３７５０４およびRibas, Update Cancer Ther. 2(3): 133-39 (2007)を参照されたい）からなる群から選択される。具体的な態様では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、イピリムマブである。

【0343】

具体的な態様では、ＣＴＬＡ－４抗体は、本明細書において開示される組成物および方法における使用に関して、イピリムマブである。イピリムマブは、ＣＴＬＡ－４のそのＢ７リガンドとの結合を遮断し、それによって、Ｔ細胞活性化を刺激し、進行性黒色腫を有する患者において全生存期間（ＯＳ）を改善する、完全ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体である。

【0344】

具体的な態様では、ＣＴＬＡ－４抗体は、トレメリムマブである。

【0345】

具体的な態様では、ＣＴＬＡ－４抗体は、ＭＫ－１３０８である。

【0346】

具体的な態様では、ＣＴＬＡ－４抗体は、ＡＧＥＮ－１８８４である。

【0347】

いくつかの態様では、ＣＴＬＡ－４抗体は、非フコシル化または低フコシル化である。いくつかの態様では、ＣＴＬＡ－４抗体は、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰ活性の増強を示す。いくつかの態様では、ＣＴＬＡ－４抗体は、ＰＣＴ／ＵＳ１８／１９８６８に記載されるＢＭＳ－９８６２１８である。

【0348】

開示される組成物および方法において使用可能な抗ＣＴＬＡ－４抗体はまた、ヒトＣＴＬＡ－４と特異的に結合し、ヒトＣＴＬＡ－４との結合について、本明細書において開示される任意の抗ＣＴＬＡ－４抗体、例えば、イピリムマブおよび／またはトレメリムマブと交差競合する、単離された抗体を含む。いくつかの態様では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、本明細書に記載される抗ＣＴＬＡ－４抗体のうちのいずれか、例えば、イピリムマブおよび／またはトレメリムマブと同一のエピトープと結合する。抗原との結合について交差競合する抗体の能力は、これらの抗体が、抗原の同一のエピトープ領域と結合し、他の交差競合する抗体のその特定のエピトープ領域との結合を立体的に妨害することを示す。これらの交差競合する抗体は、ＣＴＬＡ－４の同一のエピトープ領域との結合を踏まえると、参照抗体、例えば、イピリムマブおよび／またはトレメリムマブのものと非常に類似する機能的特性を有することが予測される。交差競合する抗体は、標準的なＣＴＬＡ－４結合アッセイ、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、またはフローサイトメトリーにおいて、イピリムマブおよび／またはトレメリムマブと交差競合する能力に基づいて容易に特定することができる（例えば、ＷＯ２０１３／１７３２２３を参照されたい）。

【0349】

特定の態様では、ヒトＣＴＬＡ－４との結合について、イピリムマブおよび／またはトレメリムマブのようなヒトＣＴＬＡ－４抗体と交差競合するか、またはそれと同一のエピトープ領域と結合する抗体は、モノクローナル抗体である。ヒト対象への投与に関して、これらの交差競合する抗体は、キメラ抗体、遺伝子操作された抗体、またはヒト化もしくはヒト抗体である。そのようなキメラ、遺伝子操作、ヒト化、またはヒトモノクローナル抗体は、当技術分野において周知の方法によって調製および単離することができる。

【0350】

開示される本開示の組成物および方法において使用可能な抗ＣＴＬＡ－４抗体としてはまた、上述の抗体の抗原結合部分が挙げられる。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって実施され得ることが十分に示されている。

【0351】

開示される方法または組成物における使用に好適な抗ＣＴＬＡ－４抗体は、高い特異性および親和性でＣＴＬＡ－４と結合し、ＣＴＬＡ－４の活性を遮断し、ＣＴＬＡ－４のヒトＢ７受容体との相互作用を破壊する抗体である。本明細書において開示される組成物または方法のいずれにおいても、抗ＣＴＬＡ－４「抗体」は、ＣＴＬＡ－４と結合し、ＣＴＬＡ－４のヒトＢ７受容体との相互作用の阻害および免疫系の上方制御に関して完全抗体のものと類似の機能的特性を示す、抗原結合部分または断片を含む。特定の態様では、抗ＣＴＬＡ－４抗体またはその抗原結合部分は、ヒトＣＴＬＡ－４との結合について、イピリムマブおよび／またはトレメリムマブと交差競合する。

【0352】

ＸＩ．Ｄ．抗ＬＡＧ－３抗体
いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＬＡＧ－３抗体である。本開示の抗ＬＡＧ－３抗体は、ヒトＬＡＧ－３と結合する。ＬＡＧ－３と結合する抗体は、国際公開第ＷＯ／２０１５／０４２２４６号ならびに米国公開第２０１４／００９３５１１号および同第２０１１／０１５０８９２号に開示されている。

【0353】

本開示において有用な例示的なＬＡＧ－３抗体は、２５Ｆ７（米国公開第２０１１／０１５０８９２号に記載される）である。本開示において有用な追加の例示的なＬＡＧ－３抗体は、ＢＭＳ－９８６０１６である。一態様では、組成物に有用な抗ＬＡＧ－３抗体は、２５Ｆ７またはＢＭＳ－９８６０１６と交差競合する。別の態様では、組成物に有用な抗ＬＡＧ－３抗体は、２５Ｆ７またはＢＭＳ－９８６０１６と同一のエピトープと結合する。他の態様では、抗ＬＡＧ－３抗体は、２５Ｆ７またはＢＭＳ－９８６０１６の６つのＣＤＲを含む。

【0354】

ＸＩ．Ｅ．抗ＣＤ１３７抗体
いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＣＤ１３７抗体である。抗ＣＤ１３７抗体は、ＣＤ１３７を発現する免疫細胞と特異的に結合し、それを活性化し、腫瘍細胞に対する免疫応答、特に、細胞傷害性Ｔ細胞応答を刺激する。ＣＤ１３７と結合する抗体は、米国公開第２００５／００９５２４４号、ならびに米国特許第７，２８８，６３８号、同第６，８８７，６７３号、同第７，２１４，４９３号、同第６，３０３，１２１号、同第６，５６９，９９７号、同第６，９０５，６８５号、同第６，３５５，４７６号、同第６，３６２，３２５号、同第６，９７４，８６３号、および同第６，２１０，６６９号に開示されている。

【0355】

いくつかの態様では、抗ＣＤ１３７抗体は、米国特許第７，２８８，６３８号に記載されているウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）（２０Ｈ４．９－ＩｇＧ４［１０Ｃ７またはＢＭＳ－６６３５１３］）である。いくつかの態様では、抗ＣＤ１３７抗体は、米国特許第７，２８８，６３８号に記載されているＢＭＳ－６６３０３１（２０Ｈ４．９－ＩｇＧ１）である。いくつかの態様では、抗ＣＤ１３７抗体は、米国特許第６，８８７，６７３号に記載されている４Ｅ９またはＢＭＳ－５５４２７１である。いくつかの態様では、抗ＣＤ１３７抗体は、米国特許第７，２１４，４９３号、同第６，３０３，１２１号、同第６，５６９，９９７号、同第６，９０５，６８５号、または同第６，３５５，４７６号に開示されている抗体である。いくつかの態様では、抗ＣＤ１３７抗体は、米国特許第６，３６２，３２５号に記載されている１Ｄ８もしくはＢＭＳ－４６９４９２、３Ｈ３もしくはＢＭＳ－４６９４９７、または３Ｅ１である。いくつかの態様では、抗ＣＤ１３７抗体は、発行された米国特許第６，９７４，８６３号に開示されている抗体である（例えば、５３Ａ２）。いくつかの態様では、抗ＣＤ１３７抗体は、発光された米国特許第６，２１０，６６９号に開示されている抗体である（例えば、１Ｄ８、３Ｂ８、または３Ｅ１）。いくつかの態様では、抗体は、ＰｆｉｚｅｒのＰＦ－０５０８２５６６（ＰＦ－２５６６）である。他の態様では、本開示に有用な抗ＣＤ１３７抗体は、本明細書において開示される抗ＣＤ１３７抗体と交差競合する。いくつかの態様では、抗ＣＤ１３７抗体は、本明細書において開示される抗ＣＤ１３７抗体と同一のエピトープと結合する。他の態様では、本開示において有用な抗ＣＤ１３７抗体は、本明細書において開示される抗ＣＤ１３７抗体の６つのＣＤＲを含む。

【0356】

ＸＩ．Ｆ．抗ＫＩＲ抗体
いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＫＩＲ３抗体である。ＫＩＲと特異的に結合する抗体は、ＮＫ細胞上のキラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）とそれらのリガンドとの間の相互作用を遮断する。これらの受容体を遮断することにより、ＮＫ細胞の活性化、および潜在的には後者による腫瘍細胞の破壊が促進される。抗ＫＩＲ抗体の例は、国際公開第ＷＯ／２０１４／０５５６４８号、同ＷＯ２００５／００３１６８号、同ＷＯ２００５／００９４６５号、同ＷＯ２００６／０７２６２５号、同ＷＯ２００６／０７２６２６号、同ＷＯ２００７／０４２５７３号、同ＷＯ２００８／０８４１０６号、同ＷＯ２０１０／０６５９３９号、同ＷＯ２０１２／０７１４１１号、および同第ＷＯ／２０１２／１６０４４８号に開示されている。

【0357】

本開示において有用な１つの抗ＫＩＲ抗体は、国際公開ＷＯ２００８／０８４１０６号に最初に記載された、リリルマブ（ＢＭＳ－９８６０１５、ＩＰＨ２１０２、または１－７Ｆ９のＳ２４１Ｐ変異体とも称される）である。本開示において有用な追加の抗ＫＩＲ抗体は、国際公開ＷＯ２００６／００３１７９号に記載される、１－７Ｆ９（ＩＰＨ２１０１とも称される）である。一態様では、本組成物の抗ＫＩＲ抗体は、ＫＩＲとの結合に関して、リリルマブまたはＩ－７Ｆ９と交差競合する。別の態様では、抗ＫＩＲ抗体は、リリルマブまたはＩ－７Ｆ９と同一のエピトープと結合する。他の態様では、抗ＫＩＲ抗体は、リリルマブまたはＩ－７Ｆ９の６つのＣＤＲを含む。

【0358】

ＸＩ．Ｇ．抗ＧＩＴＲ抗体
いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＧＩＴＲ抗体である。抗ＧＩＴＲ抗体は、ヒトＧＩＴＲ標的と特異的に結合し、グルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）を活性化する、任意の抗ＧＩＴＲ抗体であり得る。ＧＩＴＲは、制御性Ｔ細胞、エフェクターＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、および活性化樹状細胞を含む、複数種類の免疫細胞の表面上に発現される、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである（「抗ＧＩＴＲアゴニスト抗体」）。具体的には、ＧＩＴＲ活性化は、エフェクターＴ細胞の増殖および機能を増大させ、同様に、活性化制御性Ｔ細胞によって誘導される抑制を抑止する。加えて、ＧＩＴＲ刺激は、他の免疫細胞、例えば、ＮＫ細胞、抗原提示細胞、およびＢ細胞の活性を増大させることによって、抗腫瘍免疫を促進する。抗ＧＩＴＲ抗体の例は、国際公開第ＷＯ／２０１５／０３１６６７号、同第ＷＯ２０１５／１８４，０９９号、同第ＷＯ２０１５／０２６，６８４号、同第ＷＯ１１／０２８６８３号、および同第ＷＯ／２００６／１０５０２１号、米国特許第７，８１２，１３５号および同第８，３８８，９６７号、ならびに米国公開第２００９／０１３６４９４号、同第２０１４／０２２０００２号、同第２０１３／０１８３３２１号、および同第２０１４／０３４８８４１号に開示されている。

【0359】

一態様では、本開示において有用な抗ＧＩＴＲ抗体は、ＴＲＸ５１８（例えば、Schaer et al. Curr Opin Immunol. (2012) Apr; 24(2): 217-224およびＷＯ／２００６／１０５０２１に記載される）である。別の態様では、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＭＫ４１６６、ＭＫ１２４８、ならびにＷＯ１１／０２８６８３およびＵ．Ｓ． ８，７０９，４２４に記載される抗体から選択され、例えば、配列番号１０４を含むＶＨ鎖、および配列番号１０５を含むＶＬ鎖を含む（配列番号は、ＷＯ１１／０２８６８３またはＵ．Ｓ． ８，７０９，４２４からのものである）。特定の態様では、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＷＯ２０１５／０３１６６７に開示される抗ＧＩＴＲ抗体、例えば、それぞれ、ＷＯ２０１５／０３１６６７の配列番号３１、７１、および６３を含むＶＨ ＣＤＲ１～３、ならびにＷＯ２０１５／０３１６６７の配列番号５、１４、および３０を含むＶＬ ＣＤＲ１～３を含む抗体である。特定の態様では、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＷＯ２０１５／１８４０９９に開示される抗ＧＩＴＲ抗体、例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１もしくはＨｕｍ２３１＃２、またはそれらのＣＤＲ、またはそれらの誘導体（例えば、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９７５、もしくはｐａｂ１９７９）である。特定の態様では、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＪＰ２００８２７８８１４、ＷＯ０９／００９１１６、ＷＯ２０１３／０３９９５４、ＵＳ２０１４００７２５６６、ＵＳ２０１４００７２５６５、ＵＳ２０１４００６５１５２、もしくはＷＯ２０１５／０２６６８４に開示される抗ＧＩＴＲ抗体であるか、またはＩＮＢＲＸ－１１０（ＩＮＨＩＢＲｘ）、ＬＫＺ－１４５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、もしくはＭＥＤＩ－１８７３（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）である。特定の態様では、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０３３９９１に記載される抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、２８Ｆ３、１８Ｅ１０、または１９Ｄ３の可変領域を含む抗体）である。例えば、抗ＧＩＴＲ抗体は、以下のＶＨおよびＶＬ鎖、またはそれらのＣＤＲを含む抗体である。
ＶＨ：
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYEGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGSMVRGDYYYGMDVWGQGTTVTVS（配列番号７８）、および
ＶＬ：
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPYTFGQGTKLEIK（配列番号７９）；または
ＶＨ：
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGFHWVRQAPGKGLEWVAVIWYAGSNKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGQLDYYYYYVMDVWGQGTTVTVSS（配列番号８０）、および
ＶＬ：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIK（配列番号８１）；または
ＶＨ：
VQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYAGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGRIAVAFYYSMDVWGQGTTVTVSS（配列番号８２）、および
ＶＬ：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIK（配列番号８３）

【0360】

特定の態様では、上記のＶＨおよびＶＬ軽鎖の対、またはそれらのＣＤＲを含む抗体は、野生型、または例えばエフェクターレスとなるような突然変異型のいずれかである、ＩｇＧ１アイソタイプの重鎖定常領域を含む。一態様では、抗ＧＩＴＲ抗体は、以下の重鎖および軽鎖アミノ酸配列を含む。

【0361】

重鎖：
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYEGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGGSMVRGDYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG（配列番号８４）、および

【0362】

軽鎖：
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC（配列番号８５）、または

【0363】

重鎖：
qvqlvesgggvvqpgrslrlscaasgftfssygmhwvrqapgkglewvaviwyegsnkyyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycarggsmvrgdyyygmdvwgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapeaegapsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpssiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg（配列番号８６）、および

【0364】

軽鎖：
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISSALAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC（配列番号８７）

【0365】

ある特定の態様では、抗ＧＩＴＲ抗体は、本明細書に記載される抗ＧＩＴＲ抗体、例えば、ＴＲＸ５１８、ＭＫ４１６６、または本明細書に記載されるＶＨドメインおよびＶＬドメインアミノ酸配列を含む抗体と交差競合する。いくつかの態様では、抗ＧＩＴＲ抗体は、本明細書に記載される抗ＧＩＴＲ抗体、例えば、ＴＲＸ５１８、ＭＫ４１６６、または本明細書に記載されるＶＨドメインおよびＶＬドメインアミノ酸配列を含む抗体のものと同一のエピトープと結合する。特定の態様では、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＴＲＸ５１８、ＭＫ４１６６の６つのＣＤＲ、または本明細書に記載されるＶＨドメインおよびＶＬドメインアミノ酸配列を含む抗体のものを含む。

【0366】

ＸＩ．Ｈ．抗ＴＩＭ３抗体
いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＴＩＭ３抗体である。いくつかの態様では、抗ＴＩＭ３抗体は、国際公開第ＷＯ２０１８０１３８１８号、同第ＷＯ／２０１５／１１７００２号（例えば、ＭＧＢ４５３、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、同第ＷＯ／２０１６／１６１２７０号（例えば、ＴＳＲ－０２２、Ｔｅｓａｒｏ／ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ）、同第ＷＯ２０１１１５５６０７号、同第ＷＯ２０１６／１４４８０３号（例えば、ＳＴＩ－６００、Ｓｏｒｒｅｎｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、同第ＷＯ２０１６／０７１４４８号、同第ＷＯ１７０５５３９９号、同第ＷＯ１７０５５４０４号、同第ＷＯ１７１７８４９３号、同第ＷＯ１８０３６５６１号、同第ＷＯ１８０３９０２０号（例えば、Ｌｙ－３２２１３６７、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、同第ＷＯ２０１７２０５７２１号、同第ＷＯ１７０７９１１２号、同第ＷＯ１７０７９１１５号、同第ＷＯ１７０７９１１６号、同第ＷＯ１１１５９８７７号、同第ＷＯ１３００６４９０号、同第ＷＯ２０１６０６８８０２号、同第ＷＯ２０１６０６８８０３号、同第ＷＯ２０１６／１１１９４７号、同第ＷＯ／２０１７／０３１２４２号に開示される抗ＴＩＭ３抗体から選択される。

【0367】

ＸＩ．Ｉ．抗ＯＸ４０抗体
いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＯＸ４０（ＣＤ１３４、ＴＮＦＲＳＦ４、ＡＣＴ３５、および／またはＴＸＧＰ１Ｌとしても知られている）抗体である。いくつかの態様では、抗ＯＸ４０抗体は、国際公開第ＷＯ２０１６０１９６２２８号に記載されるＢＭＳ－９８６１７８（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ）である。いくつかの態様では、抗ＯＸ４０抗体は、国際公開第ＷＯ９５０１２６７３号、同第ＷＯ１９９９４２５８５号、同第ＷＯ１４１４８８９５号、同第ＷＯ１５１５３５１３号、同第ＷＯ１５１５３５１４号、同第ＷＯ１３０３８１９１号、同第ＷＯ１６０５７６６７号、同第ＷＯ０３１０６４９８号、同第ＷＯ１２０２７３２８号、同第ＷＯ１３０２８２３１号、同第ＷＯ１６２００８３６号、同ＷＯ１７０６３１６２号、同第ＷＯ１７１３４２９２号、同ＷＯ１７０９６１７９号、同ＷＯ１７０９６２８１号、および同ＷＯ１７０９６１８２号に記載される抗ＯＸ４０抗体から選択される。

【0368】

ＸＩ．Ｊ．抗ＮＫＧ２Ａ抗体
いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＮＫＧ２Ａ抗体である。ＮＫＧ２Ａは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびＴリンパ球のサブセットに発現されるＣ型レクチン受容体ファミリーのメンバーである。具体的には、ＮＫＧ２Ａは、主として、腫瘍浸潤先天免疫エフェクターＮＫ細胞、ならびに一部のＣＤ８＋ Ｔ細胞に発現される。その天然のリガンドであるヒト白血球抗原Ｅ（ＨＬＡ－Ｅ）は、固形腫瘍および血液腫瘍に発現される。ＮＫＧ２Ａは、ＨＬＡ－Ｅと結合する阻害性受容体である。

【0369】

いくつかの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、ＮＫＧ２ＡのそのリガンドＨＬＡ－Ｅとの相互作用を遮断し、したがって抗腫瘍免疫応答の活性化を可能にする、ヒトモノクローナル抗体であるＢＭＳ－９８６３１５である。いくつかの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、および／または腫瘍浸潤免疫細胞を活性化するチェックポイント阻害剤である。いくつかの態様では、抗ＮＫＧ２Ａ抗体は、例えば、ＷＯ２００６／０７０２８６（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ．、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｅｎｏｖａ）、米国特許第８，９９３，３１９号（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ．、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｅｎｏｖａ）、ＷＯ２００７／０４２５７３（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｓ／Ａ、Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ａ／Ｓ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｅｎｏｖａ）、米国特許第９，４４７，１８５号（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｓ／Ａ、Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ａ／Ｓ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｅｎｏｖａ）、ＷＯ２００８／００９５４５（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ａ／Ｓ）、米国特許第８，２０６，７０９号、同第８，９０１，２８３号、同第９，６８３，０４１号（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ａ／Ｓ）、ＷＯ２００９／０９２８０５（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ａ／Ｓ）、米国特許第８，７９６，４２７号および同第９，４２２，３６８号（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ａ／Ｓ）、ＷＯ２０１６／１３４３７１（Ｏｈｉｏ Ｓｔａｔｅ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ）、ＷＯ２０１６／０３２３３４（Ｊａｎｓｓｅｎ）、ＷＯ２０１６／０４１９４７（Ｉｎｎａｔｅ）、ＷＯ２０１６／０４１９４５（Ａｃａｄｅｍｉｓｃｈ Ｚｉｅｋｅｎｈｕｉｓ Ｌｅｉｄｅｎ Ｈ．Ｏ．Ｄ．Ｎ． ＬＵＭＣ）、ＷＯ２０１６／０４１９４７（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ）、ならびにＷＯ２０１６／０４１９４５（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ）に記載される抗ＮＫＧ２Ａ抗体から選択される。

【0370】

ＸＩ．Ｋ．抗ＩＣＯＳ抗体
いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＩＣＯＳ抗体である。ＩＣＯＳは、ＣＤ２８スーパーファミリーのメンバーである免疫チェックポイントタンパク質である。ＩＣＯＳは、Ｔ細胞活性化後にＴ細胞上に発現される５５～６０ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質であり、そのリガンドであるＩＣＯＳ－Ｌ（Ｂ７Ｈ２）と結合した後にＴ細胞活性化を共刺激する。ＩＣＯＳはまた、誘導性Ｔ細胞共刺激因子、ＣＶＩＤ１、ＡＩＬＩＭ、誘導性共刺激因子、ＣＤ２７８、活性化誘導性リンパ球免疫媒介性分子、およびＣＤ２７８抗原としても知られている。

【0371】

いくつかの態様では、抗ＩＣＯＳ抗体は、ヒトＩＣＯＳと結合しそれを刺激するヒト化ＩｇＧモノクローナル抗体である、ＢＭＳ－９８６２２６である。いくつかの態様では、抗ＩＣＯＳ抗体は、例えば、ＷＯ２０１６／１５４１７７（Ｊｏｕｎｃｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ．）、ＷＯ２００８／１３７９１５（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ＷＯ２０１２／１３１００４（ＩＮＳＥＲＭ、Ｆｒｅｎｃｈ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、ＥＰ３１４７２９７（ＩＮＳＥＲＭ、Ｆｒｅｎｃｈ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、ＷＯ２０１１／０４１６１３（Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｓｌｏａｎ Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ＥＰ２４８２８４９（Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｓｌｏａｎ Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ＷＯ１９９９／１５５５３（Ｒｏｂｅｒｔ Ｋｏｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、米国特許第７，２５９，２４７号および同第７，７２２，８７２号（Ｒｏｂｅｒｔ Ｋｏｔｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、ＷＯ１９９８／０３８２１６（Ｊａｐａｎ Ｔｏｂａｃｃｏ Ｉｎｃ．）、米国特許第７，０４５，６１５号、同第７，１１２，６５５号、および同第８，３８９，６９０号（Ｊａｐａｎ Ｔｏｂａｃｃｏ Ｉｎｃ．）、米国特許第９，７３８，７１８号および同第９，７７１，４２４号（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ならびにＷＯ２０１７／２２０９８８（Ｋｙｍａｂ Ｌｉｍｉｔｅｄ）に記載される抗ＩＣＯＳ抗体から選択される。

【0372】

ＸＩ．Ｌ．抗ＴＩＧＩＴ抗体
いくつかの態様では、第２の抗体は、抗ＴＩＧＩＴ抗体である。いくつかの態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＢＭＳ－９８６２０７である。いくつかの態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＷＯ２０１６／１０６３０２に記載されるクローン２２Ｇ２である。いくつかの態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＷＯ２０１７／０５３７４８に記載されるＭＴＩＧ７１９２Ａ／ＲＧ６０５８／ＲＯ７０９２２８４またはクローン４．１Ｄ３である。いくつかの態様では、抗ＴＩＧＩＴ抗体は、例えば、ＷＯ２０１６／１０６３０２（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ）およびＷＯ２０１７／０５３７４８（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）に記載される抗ＴＩＧＩＴ抗体から選択される。

【0373】

ＸＩ．Ｍ．追加の抗がん剤
いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、抗ＩＬ－１０抗体と組み合わせて使用される。いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、長時間作用型ＩＬ－１０分子と組み合わせて使用される。いくつかの態様では、長時間作用型ＩＬ－１０分子は、ＩＬ－１０－Ｆｃ融合分子であり得る。いくつかの態様では、長時間作用型ＩＬ－１０分子は、ペグ化ＩＬ－１０、例えば、ＡＭ００１０（ＡＲＭＯ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）であり得る。

【0374】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、抗ＩＬ－２抗体と組み合わせて使用される。いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、長時間作用型ＩＬ－２分子と組み合わせて使用される。いくつかの態様では、長時間作用型ＩＬ－２は、ペグ化ＩＬ－２、例えば、ＮＫＴＲ－２１４（Ｎｅｋｔａｒ、ＵＳ８，２５２，２７５、ＷＯ１２／０６５０８６、およびＷＯ１５／１２５１５９を参照されたい）であり得る。

【0375】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、抗ＶＩＳＴＡ抗体と組み合わせて使用される。

【0376】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、抗ＣＤ９６抗体と組み合わせて使用される。

【0377】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、抗ＩＬ－８抗体、例えば、ＨｕＭａｘ（登録商標）－ＩＬ８と組み合わせて使用される。

【0378】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、抗ＴＧＦβ抗体と組み合わせて使用される。

【0379】

いくつかの他の態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、抗Ｂ７－Ｈ４抗体と組み合わせて使用される。特定の態様では、抗Ｂ７－Ｈ４抗体は、国際公開第ＷＯ／２００９／０７３５３３号に開示される抗Ｂ７－Ｈ４である。

【0380】

特定の態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、抗Ｆａｓリガンド抗体と組み合わせて使用される。特定の態様では、抗Ｆａｓリガンド抗体は、国際公開第ＷＯ／２００９／０７３５３３号に開示される抗Ｆａｓリガンドである。

【0381】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、抗ＣＸＣＲ４抗体と組み合わせて使用される。特定の態様では、抗ＣＸＣＲ４抗体は、米国公開第２０１４／０３２２２０８号に開示される抗ＣＸＣＲ４［例えば、ウルクプルマブ（ＢＭＳ－９３６５６４）］である。

【0382】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、抗メソテリン抗体と組み合わせて使用される。特定の態様では、抗メソテリン抗体は、米国特許第８，３９９，６２３号に開示される抗メソテリンである。

【0383】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、抗ＨＥＲ２抗体と組み合わせて使用される。特定の態様では、抗ＨＥＲ２抗体は、ハーセプチン（米国特許第５，８２１，３３７号）、トラスツズマブ、またはアド－トラスツズマブエムタンシン（Ｋａｄｃｙｌａ、例えば、ＷＯ／２００１／０００２４４）である。

【0384】

態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、抗ＣＤ２７抗体と組み合わせて使用される。態様では、抗ＣＤ－２７抗体は、例えば、米国特許第９，１６９，３２５号に開示されるヒトＣＤ２７のアゴニストであるヒトＩｇＧ１抗体である、バルリルマブ（「ＣＤＸ－１１２７」および「１Ｆ５」としても知られている）である。

【0385】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、抗ＣＤ７３抗体と組み合わせて使用される。特定の態様では、抗ＣＤ７３抗体は、ＣＤ７３．４．ＩｇＧ２Ｃ２１９Ｓ．ＩｇＧ１．１ｆである。

【0386】

特定の態様では、第２の治療法は、化学療法剤を投与することを含む。いくつかの態様では、化学療法剤は、腫瘍細胞上のインテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）発現を誘導する。いくつかの態様では、化学療法剤は、プロテアソーム阻害剤、免疫調節薬（ＩＭｉＤ）、Ｂｅｔ阻害剤、およびこれらの任意の組合せから選択される。いくつかの態様では、プロテアソーム阻害剤は、ボルテゾミブ、イキサゾミブ、カーフィルゾミブ、オプロゾミブ、およびマリゾミブから選択される。特定の態様では、プロテアソーム阻害剤は、ボルテゾミブを含む。

【0387】

いくつかの態様では、第２の治療法は、放射線療法を含む。当技術分野において公知の任意の放射線療法を、第２の治療法として使用することができる。

【0388】

いくつかの態様では、第２の治療法は、先天免疫細胞を活性化する薬剤を投与することを含む。いくつかの態様では、先天免疫細胞を活性化する薬剤は、ＮＬＲＰ３アゴニストを含む。いくつかの態様では、ＮＬＲＰ３アゴニストは、尿酸一ナトリウム一水和物（ＭＳＵ）および／またはワクチンアジュバントであるミョウバンを含む。いくつかの態様では、先天免疫細胞を活性化する薬剤は、ｔｏｌｌ様受容体７（ＴＬＲ７）アゴニストである。いくつかの態様では、ＴＬＲ７アゴニストは、イミキモド（Ｒ８３７）、ＧＳ－９６２０（Tsai et al., J. Virology doi:10.1128/JVI.02166-16 (Feb. 8, 2017)を参照されたい）、ＯＲＮ Ｒ－２３３６（Ｍｉｌｔｅｎｙｌ Ｂｉｏｔｅｃ）、またはこれらの任意の組合せを含む。

【0389】

いくつかの態様では、第２の治療法は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＣＤ８^＋ Ｔ細胞、またはその両方の生存を増強させる薬剤を投与することを含む。いくつかの態様では、薬剤は、ＩＬ－２を含む。特定の態様では、薬剤は、ペグ化ＩＬ－２を含む。

【0390】

特定の態様では、第２の治療法は、ドキソルビシン［ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）］、シスプラチン、カルボプラチン、硫酸ブレオマイシン、カルムスチン、クロラムブシル［ＬＥＵＫＥＲＡＮ（登録商標）］、シクロホスファミド［ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）、ＮＥＯＳＡＲ（登録商標）］、レナリドマイド［ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標）］、ボルテゾミブ［ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）］、デキサメタゾン、ミトキサントロン、エトポシド、シタラビン、ベンダムスチン［ＴＲＥＡＮＤＡ（登録商標）］、リツキシマブ［ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）］、イホスファミド、ビンクリスチン［ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標）］、フルダラビン［ＦＬＵＤＡＲＡ（登録商標）］、サリドマイド［ＴＨＡＬＯＭＩＤ（登録商標）］、アレムツズマブ［ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標）］、オファツムマブ［ＡＲＺＥＲＲＡ（登録商標）］、エベロリムス［ＡＦＩＮＩＴＯＲ（登録商標）、ＺＯＲＴＲＥＳＳ（登録商標）］、カーフィルゾミブ（ＫＹＰＲＯＬＩＳＴＭ）、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される薬剤を投与することを含む。

【0391】

ＸＩ．Ｎ．がん
抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、がんを有する患者におけるがん性細胞に対する免疫応答を増強し得る。がんを有する対象を処置するための方法であって、対象が処置される、例えば、その結果、がん性腫瘍の成長が阻害もしくは低減される、および／または腫瘍が退縮する、および／または生存期間が延長されるように、対象に、本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を投与することを含む、方法が、本明細書において提供される。抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を単独で使用して、がん性腫瘍の成長を阻害することができる。あるいは、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、以下に記載されるように、別の薬剤、例えば、別の免疫原性剤、標準がん処置または別の抗体とともに使用することができる。

【0392】

したがって、対象において、例えば、腫瘍細胞の成長を阻害することによって、がんを処置する方法であって、対象に、治療上有効な量の、本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体、例えば、野生型ＩｇＧ定常領域または変更されたエフェクター機能を有する定常領域変異体を有するＭＩＣＡ．３６、ＭＩＣＡ．５２、ＭＩＣＡ．５４、ＭＩＣＡ．２、および７１Ｃ２、またはその抗原結合部分を投与することを含む方法が、本明細書において提供される。抗体は、ヒト抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体（例えば、本明細書に記載されるヒト抗ヒトインテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体のうちのいずれか）であり得る。本開示の抗体を使用して成長を阻害することができるがんには、典型的に免疫療法に応答性であるがんおよび典型的に免疫療法に応答性でないものが含まれる。処置することができるがんにはまた、インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）陽性がんも含まれる。がんは、固形腫瘍または血液悪性腫瘍（液体腫瘍）を伴うがんであってもよい。治療のためのがんの限定されない例として、扁平上皮癌、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、扁平非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）および非扁平ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、胃腸がん、腎がん（例えば、明細胞癌）、卵巣がん、肝臓がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん（例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ））、前立腺がん（例えば、ホルモン難治性前立腺腺癌）、甲状腺がん、神経芽細胞腫、膵臓がん、神経膠芽腫（神経膠芽腫多形）、子宮頸がん、胃がん、膀胱がん、肝細胞腫、乳がん、結腸癌腫および頭頸部がん（または癌腫）、胃がん（gastric cancer）、生殖細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー、黒色腫（例えば、皮膚または眼球内悪性黒色腫などの転移性悪性黒色腫）、骨がん、皮膚がん、子宮がん、肛門領域のがん、精巣がん、卵管の癌腫、子宮内膜の癌腫、子宮頸部の癌腫、膣の癌腫、外陰部の癌腫、食道のがん、小腸のがん、内分泌系のがん、上皮小体腺のがん、副腎のがん、柔組織の肉腫、尿道のがん、陰茎のがん、直腸がん、小児の固形腫瘍、尿管のがん、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄の軸の腫瘍、脳のがん、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮がん、アスベストによって誘導されるものを含めた環境誘導性がん、ウイルス関連がんまたはウイルス起源のがん（例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ関連もしくは起源の腫瘍））および前記のがんの任意の組合せが挙げられる。

【0393】

処置のためのがんの非限定的な例としては、２種の主要な血液細胞系統のいずれか、すなわち、骨髄系細胞株（顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージ、および肥満細胞を産生する）またはリンパ球系細胞株（Ｂ、Ｔ、ＮＫ、および形質細胞を産生する）に由来する血液悪性腫瘍、例えば、すべての種類の白血病、リンパ腫、および骨髄腫、例えば、急性、慢性、リンパ球性、および／または骨髄性白血病、例えば、急性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、未分化ＡＭＬ（ＭＯ）、骨髄芽球性白血病（Ｍ１）、骨髄芽球性白血病（Ｍ２；細胞成熟を伴う）、前骨髄球性白血病（Ｍ３またはＭ３変異体［Ｍ３Ｖ］）、骨髄単球性白血病（Ｍ４または好酸球増加症を伴うＭ４変異体［Ｍ４Ｅ］）、単球性白血病（Ｍ５）、赤白血病（Ｍ６）、巨核芽球性白血病（Ｍ７）、単発性顆粒球性肉腫、および緑色腫；リンパ腫、例えば、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞血液悪性腫瘍、例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ球系組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、未分化（例えば、Ｋｉ １＋）大細胞型リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽細胞性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔリンパ芽球性、およびリンパ腫／白血病（Ｔ－Ｌｂｌｙ／Ｔ－ＡＬＬ）、末梢Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、真性組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、リンパ球系統の造血系腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ）（菌状息肉症またはセザリー症候群とも呼ばれる）、およびワルデンストレームマクログロブリン血症を伴うリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；骨髄腫、例えば、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（無症候性骨髄腫とも呼ばれる）、孤立性形質細胞腫、および多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞リンパ腫；骨髄系統の造血系腫瘍、線維肉腫および横紋筋肉腫（rhabdomyoscarcoma）を含む間葉系起源の腫瘍；セミノーマ、奇形癌腫、星状細胞腫、シュワン腫を含む中枢および末梢神経の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫、および骨肉腫を含む間葉系起源の腫瘍；ならびに黒色腫、色素性乾皮症、ケラトアカントーマ、セミノーマ、甲状腺濾胞性がん、および奇形癌を含む、その他の腫瘍、リンパ球系統の造血系腫瘍、例えば、Ｔ細胞障害、例えば、小細胞および大脳様細胞型を含むＴ前リンパ球性白血病（Ｔ－ＰＬＬ）を含むがこれらに限定されない、Ｔ細胞およびＢ細胞腫瘍；Ｔ細胞型の大顆粒リンパ球性白血病（ＬＧＬ）；ａ／ｄ Ｔ－ＮＨＬ肝脾リンパ腫；末梢／胸腺後Ｔ細胞リンパ腫（多形性および免疫芽球性サブタイプ）；血管中心性（鼻腔）Ｔ細胞リンパ腫；ならびに前記のがんの任意の組合せが挙げられる。

【0394】

本明細書に記載される方法はまた、転移性がん、切除不能な難治性がん（例えば、遮断性ＣＴＬＡ－４またはＰＤ－１抗体を用いる、例えば、これまでの免疫療法に対して難治性のがん）および／または再発性がんの治療のために使用してもよい。

【0395】

いくつかの態様では、対象は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、頭頸部扁平上皮細胞癌（ＨＮＳＣＣ）、黒色腫、膀胱がん、膵臓がん、胃がん、結腸がん、腎細胞癌（ＲＣＣ）、小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）、中皮腫、肝細胞癌、前立腺がん、多発性骨髄腫、および前記がんの組合せから選択されるがんを有する。

【0396】

いくつかの態様では、対象は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、頭頸部扁平上皮細胞癌（ＨＮＳＣＣ）、黒色腫、膀胱がん、膵臓がん、胃がん、結腸がん、および前記がんの組合せから選択されるがんを有する。

【0397】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、以前の処置、例えば、免疫－腫瘍学薬物もしくは免疫療法薬を用いた以前の処置に対して不適切な応答を示したかもしくはその後進行したがんを有する患者に、または不応性もしくは耐性、本質的に不応性もしくは耐性のいずれかである（例えば、ＰＤ－１経路アンタゴニストに対して不応性である）がんを有する患者に、または耐性もしくは不応性状態が獲得された場合に投与される。例えば、第１の治療法に対して応答性でないかもしくは十分に応答性でない対象、または処置後、例えば、抗ＰＤ－１での処置後に、疾患の進行が見られる対象を、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の、単独または別の治療法（例えば、抗ＰＤ－１治療法）と組み合わせた投与によって、処置することができる。

【0398】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、これまでに免疫－腫瘍学薬剤、例えば、ＰＤ－１経路アンタゴニストを受容していない（すなわち、それを用いた処置を受けていない）患者に、投与される。

【0399】

いくつかの態様では、対象におけるがんを処置する方法は、まず、対象が、インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）陽性である、例えば、インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）を発現する腫瘍細胞を有するかどうかを判定すること、ならびに対象がインテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）陽性がん細胞を有する場合、対象に、例えば、本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を投与することを含む。がんを有する対象を、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体で処置する方法は、インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）を発現するがん細胞を有する対象に、治療上有効な量のインテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を投与することを含み得る。対象が、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体での処置に応答するかどうかを予測するための方法であって、患者のがん細胞におけるインテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）のレベルを判定することを含み、ならびに対象のがん細胞が、インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）陽性である場合、対象は、インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体での処置に応答する可能性が高い、方法もまた、本明細書において提供される。

【0400】

いくつかの態様では、対象におけるがんを処置する方法は、まず、対象が、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－１陽性である、例えば、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－１を発現する腫瘍細胞またはＴＩＬを有するかどうかを判定すること、ならびに対象がＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－１陽性がん細胞またはＴＩＬ細胞を有する場合、対象に、例えば、本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体（および適宜ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト）を投与することを含む。がんを有する対象を、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体（および適宜ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト）で処置する方法は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を発現するがん細胞またはＴＩＬ細胞を有する対象に、治療上有効な量の抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体（および適宜ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－１アンタゴニスト）を投与することを含み得る。対象が、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体（および適宜ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト）での処置に応答するかどうかを予測するための方法であって、患者のがんまたはＴＩＬ細胞におけるＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－１のレベルを判定することを含み、ならびに対象のがんまたはＴＩＬ細胞が、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－１陽性である場合、対象は、ＭＩＣＡ抗体（および適宜ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト）での処置に応答する可能性が高い、方法もまた、本明細書において提供される。

【0401】

抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、標準治療処置とともに投与され得る。抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、維持療法、例えば、腫瘍の発生または再発を予防することを意図する治療法として、投与されてもよい。

【0402】

抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、別の処置、例えば、放射線、外科手術または化学療法とともに、投与され得る。例えば、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の補助療法は、微小転移が存在し得る危険性がある場合、および／または再発の危険性を低減するために、投与され得る。

【0403】

抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、単剤療法として投与されてもよく、唯一の免疫刺激療法として投与されてもよい。インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）に対する抗体、例えば、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）はまた、免疫原性剤、例えば、がん性細胞、精製された腫瘍抗原（組換えタンパク質、ペプチドおよび炭水化物分子を含む）、細胞ならびに免疫刺激性サイトカインをコードする遺伝子をトランスフェクトした細胞と組み合わせることができる（He et al (2004) J. Immunol. 173:4919-28）。使用できる腫瘍ワクチンの限定されない例として、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原、Ｔｒｐ－２、ＭＡＲＴ１および／もしくはチロシナーゼのペプチドなどの黒色腫抗原のペプチドまたはサイトカインＧＭ－ＣＳＦを発現するようトランスフェクトされた腫瘍細胞が挙げられる。（以下にさらに論じられる）。

【0404】

ヒトにおいて、黒色腫などの一部の腫瘍は、免疫原性であることが示されている。血漿中の可溶性インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）のレベルを低減させることによってＴ細胞活性化の閾値を低下させることにより、宿主における腫瘍応答が活性化され、非免疫原性腫瘍または限定された免疫原性を有するものの処置が可能となり得る。

【0405】

抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体、例えば、本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、ワクチン接種プロトコールと組み合わせることができる。腫瘍に対するワクチン接種のための多数の実験戦略が考案されている（Rosenberg, S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62; Logothetis, C, 2000, ASCO Educational Book Spring: 300-302; Khayat, D. 2000, ASCO Educational Book Spring: 414-428; Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738を参照のこと; DeVita et al. (eds.), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology, Fifth Edition中のRestifo, N. and Sznol, M., Cancer Vaccines, Ch. 61, pp. 3023-3043も参照のこと）。これらの戦略のうちの１つでは、ワクチンは、自己または同種腫瘍細胞を使用して調製される。これらの細胞性ワクチンは、腫瘍細胞がＧＭ－ＣＳＦを発現するよう形質導入される場合に最も有効であるとわかっている。ＧＭ－ＣＳＦは、腫瘍ワクチン接種のための抗原提示の強力なアクチベーターであるとわかっている（Dranoff et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90: 3539-43）。

【0406】

種々の腫瘍における遺伝子発現および大規模遺伝子発現パターンの研究は、いわゆる腫瘍特異的抗原の定義につながった（Rosenberg, S A (1999) Immunity 10: 281-7）。多くの場合には、これらの腫瘍特異的抗原は、腫瘍において、また腫瘍が生じた細胞において発現される分化抗原、例えば、メラノサイト抗原ｇｐ１００、ＭＡＧＥ抗原およびＴｒｐ－２である。より重要なことに、これらの抗原の多くは、宿主における腫瘍特異的Ｔ細胞の標的であると示され得る。これらのタンパク質に対する免疫応答を生じさせるために、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、腫瘍において発現される組換えタンパク質および／またはペプチドの収集物とともに使用できる。これらのタンパク質は、正常には、自己抗原として免疫系によって見なされ、したがって、それらに対して寛容である。腫瘍抗原は、染色体のテロメアの合成に必要であり、ヒトがんの８５％超において、および限定された数の体細胞組織のみにおいて発現されるタンパク質テロメラーゼを含み得る（Kim et al. (1994) Science 266: 2011-2013）。腫瘍抗原はまた、タンパク質配列を変更するか、または２種の無関係の配列間の融合タンパク質（すなわち、フィラデルフィア染色体中のｂｃｒ－ａｂｌ）もしくはＢ細胞腫瘍からのイディオタイプを作製する体細胞突然変異のためにがん細胞において発現される「ネオ抗原」であり得る。

【0407】

その他の腫瘍ワクチンは、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、肝炎ウイルス（ＨＢＶおよびＨＣＶ）およびカポジヘルペス肉腫ウイルス（ＫＨＳＶ）のようなヒトがんに関わるウイルスに由来するタンパク質を含み得る。抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の投与とともに使用することができる腫瘍特異的抗原の別の形態として、腫瘍組織自体から単離された精製された熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）がある。これらの熱ショックタンパク質は、腫瘍細胞に由来するタンパク質の断片を含有し、これらのＨＳＰは、腫瘍免疫を誘発するための抗原提示細胞への送達で高度に効率的である（Suot & Srivastava (1995) Science 269:1585-1588; Tamura et al. (1997) Science 278:117-120）。

【0408】

樹状細胞（ＤＣ）は、抗原特異的応答をプライムするために使用できる強力な抗原提示細胞である。ＤＣは、エキソビボで生産され、種々のタンパク質およびペプチド抗原ならびに腫瘍細胞抽出物を搭載させることができる（Nestle et al. (1998) Nature Medicine 4: 328-332）。ＤＣはまた、同様にこれらの腫瘍抗原を発現するよう遺伝的手段によって形質導入できる。ＤＣはまた、免疫処置を目的として腫瘍細胞と直接融合されている（Kugler et al. (2000) Nature Medicine 6:332-336）。ワクチン化の方法として、より強力な抗腫瘍応答を活性化するよう、ＤＣ免疫処置を、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の投与と効率的に組み合わせることができる。

【0409】

抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の投与はまた、標準がん治療（例えば、外科手術、放射線および化学療法）と組み合わせることができる。抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の投与は、化学療法治療計画と効率的に組み合わせることができる。これらの場合には、投与される化学療法試薬の用量を低減することが可能であり得る（Mokyr et al. (1998) Cancer Research 58: 5301-5304）。このような組合せの一例として、黒色腫の治療のためのデカルバジン（decarbazine）と組み合わせた抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体がある。このような組合せの別の例として、黒色腫の処置のためのインターロイキン－２（ＩＬ－２）、例えば、ペグ化ＩＬ－２と組み合わせた抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体がある。抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体および化学療法の組合せ使用の背後の科学的論拠は、ほとんどの化学療法薬化合物の細胞傷害性作用の結果である細胞死が、抗原提示経路における腫瘍抗原のレベルの増大をもたらすはずであるということである。細胞死による、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の投与との相乗作用をもたらし得るその他の併用治療として、放射線照射、手術およびホルモン欠乏がある。これらのプロトコールの各々は、宿主において腫瘍抗原の供給源を作製する。血管新生阻害剤もまた、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の投与と組み合わせることができる。血管新生の阻害は、腫瘍細胞死につながり、これが、腫瘍抗原を宿主抗原提示経路に供給し得る。

【0410】

本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体はまた、適宜免疫－腫瘍学薬剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体）とともに、腫瘍細胞に対するＦｃαまたはＦｃγ受容体を発現するエフェクター細胞を標的とする二重特異性抗体と組み合わせて使用できる（例えば、米国特許第５，９２２，８４５号および同第５，８３７，２４３号を参照のこと）。２種の別個の抗原を標的とするよう二重特異性抗体を使用できる。例えば、抗Ｆｃ受容体／抗腫瘍抗原（例えば、Ｈｅｒ－２／ｎｅｕ）二重特異性抗体が、腫瘍の部位に対するマクロファージを標的とするために使用されている。この標的化は、腫瘍特異的応答を効率的に活性化し得る。これらの応答のＴ細胞アームは、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の作用によって増大される。あるいは、抗原は、腫瘍抗原および樹状細胞特異的細胞表面マーカーと結合する二重特異性抗体の使用によってＤＣに直接送達され得る。

【0411】

腫瘍は、多種多様な機序によって宿主免疫監視を回避する。これらの機序のうち多くは、腫瘍によって発現され、免疫抑制であるタンパク質の不活性化によって克服され得る。これらは、中でも、ＴＧＦ－β（Kehrl et al. (1986) J. Exp. Med. 163: 1037-1050）、ＩＬ－１０（Howard & O'Garra (1992) Immunology Today 13: 198-200)およびＦａｓリガンド(Hahne et al. (1996) Science 274: 1363-1365）を含む。これらの実体の各々に対する抗体は、免疫抑制剤の効果に対抗し、宿主による腫瘍免疫応答に有利に働くよう、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体と組み合わせて使用できる。

【0412】

宿主免疫応答性を活性化するその他の抗体を、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体と組み合わせて使用できる。これらは、ＤＣ機能および抗原提示を活性化する樹状細胞の表面上の分子を含む。抗ＣＤ４０抗体は、効率的に、Ｔ細胞ヘルパー活性の代わりとなることができ（Ridge et al. (1998) Nature 393: 474-478）、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体とともに使用できる。ＣＴＬＡ－４（例えば、米国特許第５，８１１，０９７）、ＯＸ－４０（Weinberg et al. (2000) Immunol 164: 2160-2169）、４－１ＢＢ（Melero et al. (1997) Nature Medicine 3: 682-685 (1997)およびＩＣＯＳ（Hutloff et al. (1999) Nature 397: 262-266）などのＴ細胞共刺激分子に対する抗体を活性化することはまた、Ｔ細胞活性化のレベルの増大を提供し得る。ＰＤ１またはＰＤ－Ｌ１の阻害剤もまた、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体とともに使用してもよい。その他の組合せは、本明細書の別の箇所に提供される。

【0413】

骨髄移植は現在、造血起源の種々の腫瘍を処置するために使用されている。この処置の結果として、移植片対宿主病があるが、治療的利点が、移植片対腫瘍の応答から得ることができる。インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）阻害を使用して、ドナーから移植された腫瘍特異的Ｔ細胞の有効性を増大することができる。

【0414】

抗原特異的Ｔ細胞のエキソビボ活性化および拡大、および腫瘍に対する抗原特異的Ｔ細胞を刺激するのための、これらの細胞のレシピエントへの養子移植を含むいくつかの実験治療プロトコールも存在する（Greenberg & RiddellScience 285: 546-51）。これらの方法はまた、ＣＭＶなどの感染性病原体に対するＴ細胞応答を活性化するよう使用できる。抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の存在下でのエキソビボ活性化は、養子導入されたＴ細胞の頻度および活性を増大することができる。

【0415】

ＩＩＩ．Ｂ．併用療法
上記に提供される併用療法に加えて、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体、例えば、本明細書に記載されるものはまた、例えば、以下に記載されるように、がんを処置するための併用療法において使用できる。

【0416】

抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を、１種または複数のさらなる薬剤、例えば、免疫応答を刺激するのに有効である小分子薬、抗体またはその抗原結合部分と同時投与し、それによって、対象において免疫応答をさらに増強、刺激または上方制御する併用療法の方法が、本明細書において提供される。

【0417】

一般に、例えば、本明細書に記載される、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、（ｉ）刺激性（例えば、共刺激性）分子（例えば、受容体もしくはリガンド）のアゴニストならびに／または（ｉｉ）免疫細胞、例えば、Ｔ細胞上の阻害性シグナルもしくは分子（例えば、受容体もしくはリガンド）のアンタゴニストと組み合わせることができ、これらのいずれも、免疫応答、例えば、抗原特異的Ｔ細胞応答の増幅をもたらす。いくつかの態様では、免疫－腫瘍学薬剤は、（ｉ）刺激性（共刺激性を含む）分子（例えば、受容体もしくはリガンド）のアゴニスト、または（ｉｉ）細胞、例えば、Ｔ細胞活性化を阻害するものまたは自然免疫に関与するもの、例えば、ＮＫ細胞上の阻害性（共阻害性を含む）分子（例えば、受容体もしくはリガンド）のアンタゴニストであり、ここで、免疫－腫瘍学薬剤は、自然免疫を増強する。そのような免疫－腫瘍学薬剤は、しばしば、免疫チェックポイント制御因子、例えば、免疫チェックポイント阻害剤または免疫チェックポイント刺激剤と称される。

【0418】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）のメンバーである、刺激性分子または阻害性分子を標的とする薬剤とともに投与される。例えば、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体、例えば、本明細書に記載されるものは、免疫応答を増大させるために、ＩｇＳＦファミリーのメンバーを標的とする薬剤とともに、対象に投与され得る。例えば、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－Ｈ１（ＰＤ－Ｌ１）、Ｂ７－ＤＣ（ＰＤ－Ｌ２）、Ｂ７－Ｈ２（ＩＣＯＳ－Ｌ）、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ５（ＶＩＳＴＡ）およびＢ７－Ｈ６を含む、膜結合型リガンドのＢ７ファミリーのメンバー、またはＢ７ファミリーメンバーと特異的に結合する共刺激性もしくは共阻害性受容体もしくはリガンドを標的とする（もしくはそれと特異的に結合する）、薬剤とともに、投与され得る。

【0419】

抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体はまた、分子のＴＮＦおよびＴＮＦＲファミリーのメンバー（リガンドまたは受容体）、例えば、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ、ＯＸ－４０、ＯＸ－４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４－ｌＢＢＬ、ＣＤ１３７、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２－Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎ １４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴｐＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｃＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＩ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＥＤＡ１、ＥＤＡ２、ＴＮＦＲ１、リンホトキシンａ／ＴＮＦｐ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦａ、ＬＴｐＲ、リンホトキシンａ１β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹならびにＮＧＦＲを標的とする薬剤とともに、投与され得る（例えば、Tansey (2009) Drug Discovery Today 00: 1を参照のこと）。

【0420】

いくつかの態様では、本方法は、本明細書において開示される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体、および以下の薬剤のうちの１つまたは複数を投与することを含む。
（１）ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＧＩＴＲ、およびＬＡＧ－３、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ－１、ＴＩＭ－３、およびＴＩＭ－４など、Ｔ細胞活性化を阻害するタンパク質（例えば、免疫チェックポイント阻害因子）のアンタゴニスト（阻害剤もしくは遮断剤）、ならびに／または
（２）Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４－１ＢＢＬ、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＤＲ３およびＣＤ２８Ｈなど、Ｔ細胞活性化を刺激するタンパク質のアゴニスト。

【0421】

上記のタンパク質のうちの１つを調節し、がんを治療するために抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体、例えば、本明細書に記載されるものと組み合わせることができる例示的薬剤として、ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）（イピリムマブ）またはトレメリムマブ（ＣＴＬＡ－４に対する）、ガリキシマブ（Ｂ７．１に対する）、ＢＭＳ－９３６５５８（ＰＤ－１に対する）、ＭＫ－３４７５（ＰＤ－１に対する）、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＣＴＲＩＱ（登録商標））、ＡＭＰ２２４（Ｂ７ＤＣに対する）、ＢＭＳ－９３６５５９（Ｂ７－Ｈ１に対する）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｂ７－Ｈ１に対する）、ＭＥＤＩ－５７０（ＩＣＯＳに対する）、ＡＭＧ５５７（Ｂ７Ｈ２に対する）、ＭＧＡ２７１（Ｂ７Ｈ３に対する）、ＩＭＰ３２１（ＬＡＧ－３に対する）、ＢＭＳ－６６３５１３（ＣＤ１３７に対する）、ＰＦ－０５０８２５６６（ＣＤ１３７に対する）、ＣＤＸ－１１２７（ＣＤ２７に対する）、抗ＯＸ－４０（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｅ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）、ｈｕＭＡｂＯＸ４０Ｌ（ＯＸ４０Ｌに対する）、アタシセプト（ＴＡＣＩに対する）、ＣＰ－８７０８９３（ＣＤ４０に対する）、ルカツムマブ（ＣＤ４０に対する）、ダセツズマブ（ＣＤ４０に対する）、ムロモナブ－ＣＤ３（ＣＤ３に対する）、抗ＧＩＴＲ抗体ＭＫ４１６６、ＴＲＸ５１８、Ｍｅｄｉ１８７３、ＩＮＢＲＸ－１１０、ＬＫ２－１４５、ＧＷＮ－３２３、ＧＩＴＲＬ－Ｆｃ、またはこれらの任意の組合せが挙げられる。

【0422】

がんの治療のために抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体と組み合わせることができるその他の分子として、ＮＫ細胞上の阻害性受容体のアンタゴニストまたはＮＫ細胞上の活性化受容体のアゴニストが挙げられる。例えば、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を、ＫＩＲのアンタゴニスト（例えば、リリルマブ（lirilumab））と組み合わせることができる。

【0423】

Ｔ細胞活性化は、可溶性サイトカインによっても制御され、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカインのアンタゴニストまたはＴ細胞活性化を刺激するサイトカインのアゴニストとともに、例えばがんを有する対象に投与され得る。

【0424】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を、（ｉ）Ｔ細胞活性化を阻害する、ＩｇＳＦファミリーもしくはＢ７ファミリーもしくはＴＮＦファミリーのタンパク質のアンタゴニスト（または阻害剤もしくは遮断剤）またはＴ細胞活性化を阻害するサイトカイン（例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－β、ＶＥＧＦ「免疫抑制サイトカイン」）のアンタゴニストおよび／または（ｉｉ）免疫応答を刺激するための、例えば、がんなどの増殖性疾患を治療するためのＩｇＳＦファミリー、Ｂ７ファミリーもしくはＴＮＦファミリーの、またはＴ細胞活性化を刺激するサイトカインの刺激性受容体のアゴニストと組み合わせて使用できる。

【0425】

併用療法のためのさらにその他の薬剤として、マクロファージまたは単球を阻害または枯渇させる薬剤、それだけには限らないが、ＲＧ７１５５（ＷＯ１１／７００２４、ＷＯ１１／１０７５５３、ＷＯ１１／１３１４０７、ＷＯ１３／８７６９９、ＷＯ１３／１１９７１６、ＷＯ１３／１３２０４４）またはＦＰＡ－００８（ＷＯ１１／１４０２４９、ＷＯ１３１６９２６４、ＷＯ１４／０３６３５７）を含めたＣＳＦ－１Ｒアンタゴニスト抗体などのＣＳＦ－１Ｒアンタゴニストが挙げられる。

【0426】

抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体はまた、ＴＧＦ－βシグナル伝達を阻害する薬剤とともに投与してもよい。

【0427】

抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体と組み合わせることができるさらなる薬剤として、腫瘍抗原提示を増強する薬剤、例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌細胞性ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチドおよびイミキモド、または腫瘍細胞の免疫原性を増強する治療法（例えば、アントラサイクリン）が挙げられる。

【0428】

抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体と組み合わせることができるさらなる他の治療法として、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇または遮断する治療法、例えば、ＣＤ２５に特異的に結合する薬剤が挙げられる。

【0429】

抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体と組み合わせることができる別の治療法は、インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼまたは一酸化窒素シンテターゼなどの代謝酵素を阻害する治療法である。好適なＩＤＯアンタゴニストとして、例えば、ＩＮＣＢ－０２４３６０（ＷＯ２００６／１２２１５０、ＷＯ０７／７５５９８、ＷＯ０８／３６６５３、ＷＯ０８／３６６４２）、インドキシモド、ＮＬＧ－９１９（ＷＯ０９／７３６２０、ＷＯ０９／１１５６６５２、ＷＯ１１／５６６５２、ＷＯ１２／１４２２３７）、またはＦ００１２８７が挙げられる。

【0430】

抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体とともに使用され得る別のクラスの薬剤として、アデノシンの形成を阻害する薬剤、例えばＣＤ７３阻害剤またはアデノシンＡ２Ａ受容体を阻害する薬剤が挙げられる。

【0431】

がんを治療するために抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体と組み合わせることができる他の治療法として、Ｔ細胞アネルギーまたはＴ細胞消耗を逆転／防止する治療法ならびに腫瘍部位における先天免疫活性化および／または炎症を引き起こす治療法が挙げられる。

【0432】

抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、１種を上回る免疫－腫瘍学薬剤と組み合わせてもよく、例えば、次の：腫瘍抗原の提示を増強する治療法（例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌細胞性ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、イミキモド）；例えば、ＣＴＬＡ－４および／もしくはＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２経路を阻害するならびに／またはＴｒｅｇもしくは他の免疫抑制細胞を枯渇もしくは遮断することによって、負の免疫制御を阻害する治療法；例えば、ＣＤ－１３７、ＯＸ－４０および／もしくはＣＤ４０もしくはＧＩＴＲ経路を刺激するアゴニストならびに／またはＴ細胞エフェクター機能を刺激するアゴニストを用いて、正の免疫調節を刺激する治療法；抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身的に増大させる治療法；例えば、ＣＤ２５のアンタゴニスト（例えば、ダクリズマブ）を使用してまたはエキソビボでの抗ＣＤ２５ビーズ枯渇によって腫瘍におけるＴｒｅｇなどのＴｒｅｇを枯渇または阻害する治療法；腫瘍における抑制骨髄系細胞の機能に影響を及ぼす治療法；腫瘍細胞の免疫原性を増強する治療法（例えば、アントラサイクリン）；遺伝子修飾された細胞、例えば、キメラ抗原受容体によって修飾された細胞（ＣＡＲ－Ｔ療法）を含む、養子Ｔ細胞またはＮＫ細胞移入；インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼまたは一酸化窒素シンテターゼなどの代謝酵素を阻害する治療法；Ｔ細胞アネルギーまたはＴ細胞消耗を逆転／防止する治療法；腫瘍部位における先天免疫活性化および／または炎症を引き起こす治療法；免疫刺激サイトカインの投与；あるいは免疫抑制サイトカインの遮断のうちの１種または複数など、免疫経路の複数の要素を標的とするコンビナトリアルアプローチと組み合わせてもよい。

【0433】

本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、１種または複数の、陽性共刺激性受容体をライゲーションするアゴニスト剤、阻害性受容体によるシグナル伝達を減弱する遮断薬、アンタゴニストならびに１種または複数の、抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身性に増大する薬剤、腫瘍微小環境内のそれぞれの免疫抑制経路に克服する（例えば阻害性受容体の関与（例えば、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１相互作用）を遮断しＴｒｅｇを枯渇または阻害し（例えば、抗ＣＤ２５モノクローナル抗体（例えば、ダクリズマブ）を使用して、またはエキソビボ抗ＣＤ２５ビーズ枯渇によって）、ＩＤＯなどの代謝酵素を阻害するか、またはＴ細胞アネルギーもしくは消耗を逆転させる／防ぐ）薬剤および先天性免疫活性化および／または腫瘍部位での炎症の引き金を引く薬剤と一緒に使用できる。

【0434】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、対象が、ＢＲＡＦ Ｖ６００突然変異に関して陽性である場合、ＢＲＡＦ阻害剤と一緒に対象に投与される。

【0435】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３、ＮＫＧ２ａ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ１３７、ＫＩＲ、ＴＧＦβ、ＩＬ－１０、ＩＬ－８、ＩＬ－２、Ｂ７－Ｈ４、Ｆａｓリガンド、ＣＸＣＲ４、メソテリン、ＣＤ２７、ＶＩＳＴＡ、ＣＤ９６、ＧＩＴＲ、またはこれらの任意の組合せと特異的に結合する抗体と一緒に、対象に投与される。

【0436】

本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体および組合せ療法を、治療されている適応症（例えば、がん）に対するその特定の有用性について選択されるその他の周知の療法とともに使用してもよい。本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体の組合せを、公知の医薬上許容される薬剤（単数または複数）と逐次使用してもよい。

【0437】

例えば、本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体および組合せ療法は、放射線照射および／または化学療法、（例えば、カンプトテシン（ＣＰＴ－１１）、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、シスプラチン、ドキソルビシン、イリノテカン、パクリタキセル、ゲムシタビン、シスプラチン、パクリタキセル、カルボプラチン－パクリタキセル（タキソール）、ドキソルビシン、５－ＦＵまたはカンプトテシン＋ａｐｏ２ｌ／ＴＲＡＩＬ（６Ｘ ｃｏｍｂｏ）を使用する）、１種または複数のプロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブまたはＭＧ１３２）、１種または複数のＢｃｌ－２阻害剤（例えば、ＢＨ３Ｉ－２’（ｂｃｌ－ｘｌ阻害剤）、インドールアミンジオキシゲナーゼ－１（ＩＤＯ１）阻害剤（例えば、ＩＮＣＢ２４３６０、インドキシモド、ＮＬＧ－９１９、またはＦ００１２８７）、ＡＴ－１０１（Ｒ－（－）－ゴシポール誘導体）、ＡＢＴ－２６３（小分子）、ＧＸ－１５－０７０（オバトクラックス（ｏｂａｔｏｃｌａｘ））またはＭＣＬ－１（骨髄系白血病細胞分化タンパク質－１）アンタゴニスト）、ｉＡＰ（アポトーシスタンパク質の阻害剤）アンタゴニスト（例えば、ｓｍａｃ７、ｓｍａｃ４、小分子ｓｍａｃミメティック、合成ｓｍａｃペプチド（Fulda et al., Nat Med 2002;8:808-15）、ＩＳＩＳ２３７２２（ＬＹ２１８１３０８）またはＡＥＧ－３５１５６（ＧＥＭ－６４０））、ＨＤＡＣ（ヒストンデアセチラーゼ）阻害剤、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）、血管新生阻害剤（例えば、ベバシズマブ）、ＶＥＧＦおよびＶＥＧＦＲを標的化する抗血管新生剤（例えば、アバスチン）、合成トリテルペノイド（Hyer et al, Cancer Research 2005;65:4799-808を参照のこと）、ｃ－ＦＬＩＰ（細胞性ＦＬＩＣＥ阻害性タンパク質）モジュレーター（例えば、ＰＰＡＲｙ（ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ）の天然および合成リガンド、５８０９３５４または５５６９１００）、キナーゼ阻害剤（例えば、ソラフェニブ）、トラスツズマブ、セツキシマブ、テムシロリムス、ラパマイシンおよびテムシロリムスなどのｍＴＯＲ阻害剤、ボルテゾミブ、ＪＡＫ２阻害剤、ＨＳＰ９０阻害剤、ＰＩ３Ｋ－ＡＫＴ阻害剤、レナリドマイド（Lenalildomide）、ＧＳＫ３Ｐ阻害剤、ＩＡＰ阻害剤および／または遺伝毒性薬物などのさらなる治療と組み合わせて（例えば、同時または別個に）使用できる。

【0438】

本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体および組合せ療法は、１種または複数の抗増殖性細胞傷害性薬剤と組み合わせてさらに使用できる。抗増殖性細胞傷害性薬剤として使用してもよい化合物のクラスとして、それだけには限らないが、以下が挙げられる：

【0439】

アルキル化剤（制限するものではないが、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソ尿素およびトリアゼンを含む）：ウラシルマスタード、クロルメチン、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））ホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレンメラミン、トリエチレンチオホスホラミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジンおよびテモゾロミド。

【0440】

代謝拮抗剤（制限するものではないが、葉酸アンタゴニスト、ピリミジン類似体、プリン類似体およびアデノシンデアミナーゼ阻害剤を含む）：メトトレキサート、５－フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、６－メルカププリン、６－チオグアニン、フルダラビンホスフェート、ペントスタチンおよびゲムシタビン。

【0441】

当技術分野で公知のその他のマイクロチューブリン分解防止剤に加えて、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体、制限するものではないが、タキサン、パクリタキセル（パクリタキセルは、ＴＡＸＯＬＴＭとして市販されている）、ドセタキセル、ディスコデルモリド（ＤＤＭ）、ジクチオスタチン（ＤＣＴ）、ペロルシド（Peloruside）Ａ、エポチロン、エポチロンＡ、エポチロンＢ、エポチロンＣ、エポチロンＤ、エポチロンＥ、エポチロンＦ、フラノエポチロンＤ、デスオキシエポチロンＢｌ、［１７］－デヒドロデスオキシエポチロンＢ、［１８］デヒドロデスオキシエポチロンＢ、Ｃ１２，１３－シクロプロピル－エポチロンＡ、Ｃ６－Ｃ８架橋エポチロンＡ、トランス－９，１０－デヒドロエポチロンＤ、シス－９，１０－デヒドロエポチロンＤ、１６－デスメチルエポチロンＢ、エポチロンＢＩＯ、ディスコデルモリド（discoderomolide）、パツピロン（patupilone）（ＥＰＯ－９０６）、ＫＯＳ－８６２、ＫＯＳ－１５８４、ＺＫ－ＥＰＯ、ＡＢＪ－７８９、ＸＡＡ２９６Ａ（ディスコデルモリド（discoderomolide））、ＴＺＴ－１０２７（ソブリドチン）、ＩＬＸ－６５１（タシドチン塩酸塩（tasidotin hydrochloride）)、ハリコンドリンＢ、エリブリンメシル酸塩（Eribulin mesylate）（Ｅ－７３８９）、ヘミアステリン（ＨＴＩ－２８６）、Ｅ－７９７４、クリプトフィシン、ＬＹ－３５５７０３、マイタンシノイドイムノコンジュゲート（ＤＭ－１）、ＭＫＣ－１、ＡＢＴ－７５１、Ｔ１－３８０６７、Ｔ－９００６０７、ＳＢ－７１５９９２（イスピネシブ（ispinesib））、ＳＢ－７４３９２１、ＭＫ－０７３１、ＳＴＡ－５３１２、エリュテロビン、１７β－アセトキシ－２－エトキシ－６－オキソ－Ｂ－ホモ－エストラ－１，３，５（１０）－トリエン－３－オール、シクロストレプチン、イソラウリマリド、ラウリマリド、４－エピ－７－デヒドロキシ－１４，１６－ジデメチル－（＋）－ディスコデルモリドおよびクリプトチロン（cryptothilone）１と組み合わせるための適した抗増殖性薬剤。

【0442】

本明細書に記載される抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を用いる治療とともに、またはそれに先立って異常に増殖性の細胞を静止状態にすることが望ましい場合には、１７ａ－エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベストロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストラクトン、メゲストロールアセテート、メチルプレドニゾロン、メチル－テストステロン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、メドロキシプロゲステロンアセテート、リュープロリド、フルタミド、トレミフェン、ＺＯＬＡＤＥＸＴＭ（登録商標）などのホルモンおよびステロイド（合成類似体を含む）も、患者に投与できる。本明細書に記載される方法または組成物を使用する場合には、鎮吐剤などの、臨床設定において腫瘍成長または転移の調節において使用されるその他の薬剤も、望まれるように投与できる。

【0443】

いくつかの態様では、本明細書において論じられる抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体および第２の薬剤の組合せを、医薬上許容される担体中の単一組成物として同時に、または医薬上許容される担体中の抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体および第２の薬剤を有する別個の組成物として同時に、投与できる。いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体および第２の薬剤の組合せは、逐次的に投与され得る。２つの薬剤の投与は、例えば、３０分間、６０分間、９０分間、１２０分間、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日間、５日間、７日間、または１週間もしくは数週間離れた時点で開始してもよく、または第２の薬剤の投与は、例えば、第１の薬剤を投与した３０分後、６０分後、９０分後、１２０分後、３時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後、３日後、５日後、７日後、または１週間後もしくは数週間後に開始してもよい。

【0444】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体および／または第２の薬剤と組み合わせることができる抗新生物抗体としては、リツキサン（登録商標）（リツキシマブ）、ハーセプチン（登録商標）（トラスツズマブ）、ベキサール（登録商標）（トシツモマブ）、ゼヴァリン（登録商標）（イブリツモマブ）、キャンパス（登録商標）（アレムツズマブ）、リンホサイド（Lymphocide）（登録商標）（エプルツズマブ（eprtuzumab））、アバスチン（登録商標）（ベバシズマブ）およびタルセバ（登録商標）（エルロチニブ）またはこれらの任意の組合せが挙げられる。いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体との併用療法に有用な第２の抗体は、抗体薬物コンジュゲートであり得る。

【0445】

いくつかの態様では、抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、単独または別の薬剤と組み合わせて、造血起源の様々な腫瘍を処置するために、骨髄移植と同時にまたは逐次的に使用される。

【0446】

抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を、第２の薬剤を伴って、または伴わずに対象に投与することを含む、免疫賦活性薬剤を用いる過剰増殖性疾患（例えば、がん）の治療と関連する有害事象を変更するための方法が、本明細書において提供される。例えば、本明細書に記載される方法は、患者に非吸収性ステロイドを投与することによって、免疫賦活性治療用抗体誘導性大腸炎または下痢の罹患率を低減する方法を提供する。本明細書において、「非吸収性ステロイド」は、広範な初回通過代謝を示し、その結果、肝臓における代謝後に、ステロイドのバイオアベイラビリティが低い、すなわち、約２０％未満であるグルココルチコイドである。本明細書に記載されるいくつかの態様では、非吸収性ステロイドは、ブデソニドである。ブデソニドは、経口投与後に広範に、主に肝臓によって代謝される局所活性糖質コルチコイドである。ＥＮＴＯＣＯＲＴ ＥＣ（登録商標）（Ａｓｔｒａ－Ｚｅｎｅｃａ）は、回腸および結腸全体への薬物送達を最適化するために開発されたブデソニドのｐＨおよび時間依存性経口製剤である。ＥＮＴＯＣＯＲＴ ＥＣ（登録商標）は、回腸および／または上行結腸が関与する軽度から中程度のクローン病の治療のために米国において承認されている。いくつかの態様では、非吸収性ステロイドを伴う抗インテグリン－αｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を、サリチル酸とさらに組み合わせることができる。サリチル酸として、例えば、スルファサラジン（ＡＺＵＬＦＩＤＩＮＥ（登録商標）、Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＆ ＵｐＪｏｈｎ）；オルサラジン（ＤＪＰＥＮＴＵＭ（登録商標）、Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＆ ＵｐＪｏｈｎ）；バルサラジド（ＣＯＬＡＺＡＬ（登録商標）、Ｓａｌｉｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；およびメサラミン（ＡＳＡＣＯＬ（登録商標）、Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ；ＰＥＮＴＡＳＡ（登録商標）、Ｓｈｉｒｅ ＵＳ；ＣＡＮＡＳＡ（登録商標）、Ａｘｃａｎ Ｓｃａｎｄｉｐｈａｒｍ，Ｉｎｃ．；ＲＯＷＡＳＡ（登録商標）、Ｓｏｌｖａｙ）などの５－ＡＳＡ薬剤が挙げられる。

【0447】

ＩＩＩ．Ｃ．抗インテグリンαｖヘテロ二量体抗体を作製する方法
本明細書に記載されるモノクローナル抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、Kohler and Milstein, Nature 256: 495 (1975)によって記載される標準体細胞ハイブリダイゼーション技術などの様々な公知の技術を使用して産生することができる。体細胞ハイブリダイゼーション手順は好ましいが、原理上、モノクローナル抗体を産生するためのその他の技術、例えば、Ｂリンパ球のウイルス性または発がん性形質転換、ヒト抗体遺伝子のライブラリーを使用するファージディスプレイ技術も使用できる。

【0448】

ハイブリドーマを調製するための好ましい動物系として、マウス系がある。マウスにおけるハイブリドーマ産生は、極めて十分に確立された手順である。免疫処置プロトコールおよび技術および融合のために免疫処置された脾細胞を単離するための技術は、当技術分野で公知である。融合パートナー（例えば、マウス骨髄腫細胞）および融合手順も公知である。

【0449】

本明細書に記載されるキメラまたはヒト化抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、上記のように調製したマウスモノクローナル抗体の配列に基づいて調製することができる。標準分子生物学技術を使用して、重鎖および軽鎖免疫グロブリンをコードするＤＮＡを、対象のマウスハイブリドーマから得、非マウス（例えば、ヒト）免疫グロブリン配列を含有するよう遺伝子操作することができる。例えば、キメラ抗体を作製するために、当技術分野で公知の方法を使用して、マウス可変領域をヒト定常領域に連結することができる（例えば、Ｃａｂｉｌｌｙらの米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。ヒト化抗体を作製するために、当技術分野で公知の方法を使用して、ヒトフレームワーク中にマウスＣＤＲ領域を挿入できる（例えば、Winterの米国特許第５，２２５，５３９号およびQueen et alの米国特許第５，５３０，１０１号；同５，５８５，０８９号；同５，６９３，７６２号および同６，１８０，３７０号を参照のこと）。

【0450】

いくつかの態様では、本明細書に記載される抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、ヒトモノクローナル抗体である。インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）を対象とするこのようなヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の部分を保持するトランスジェニックまたはトランスクロモソミック（transchromosomic）マウスを使用して作製することができる。これらのトランスジェニックおよびトランスクロモソミック（transchromosomic）マウスは、本明細書において、それぞれＨｕＭＡｂマウスおよびＫＭマウスと呼ばれるマウスを含み、本明細書において、まとめて「ヒトＩｇマウス」と呼ばれる。

【0451】

ＨＵＭＡＢ－ＭＯＵＳＥ（登録商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．）は、再編成されていないヒト重鎖（μおよびγ）ならびにκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子ミニ遺伝子座（miniloci）を、内因性μおよびκ鎖遺伝子座を不活性化する標的化された突然変異と一緒に含む（例えば、Lonberg, et al., (1994) Nature 368(6474): 856-859を参照されたい）。したがって、マウスは、マウスＩｇＭまたはκの発現の低下を示し、免疫処置に応じて、導入されたヒト重鎖および軽鎖 導入遺伝子は、クラススイッチおよび体細胞突然変異を受けて、高親和性ヒトＩｇＧＫモノクローナルを生成する（Lonberg, N. et al. (1994)、前掲; Lonberg, N. (1994) Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101; Lonberg, N. and Huszar, D. (1995) Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93およびHarding, F. and Lonberg, N. (1995) Ann. N.Y. Acad. Sci. 764:536-546に概説されている）。ＨｕＭａｂマウスの調製および使用ならびにこのようなマウスによって保持されるゲノム修飾は、Taylor, L. et al. (1992) Nucleic Acids Research 20: 6287-6295; Chen, J. et al., (1993) International Immunology 5: 647-656; Tuaillon et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:3720-3724; Choi et al. (1993) Nature Genetics 4:117-123; Chen, J. et al. (1993) EMBO J. 12: 821-830;Tuaillon et al. (1994) Immunol. 152:2912-2920;Taylor, L. et al. (1994) International Immunology 6: 579-591;およびFishwild, D. et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851にさらに記載されている。さらに、すべてLonbergおよびKayの米国特許第５，５４５，８０６号；同５，５６９，８２５号；同５，６２５，１２６号；同５，６３３，４２５号；同５，７８９，６５０号；同５，８７７，３９７号；同５，６６１，０１６号；同５，８１４，３１８号；同５，８７４，２９９号；および同５，７７０，４２９号；Surani et al.,の米国特許第５，５４５，８０７号；すべてLonbergおよびKayのＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／０３９１８、ＷＯ９３／１２２２７、ＷＯ９４／２５５８５、ＷＯ９７／１３８５２、ＷＯ９８／２４８８４およびＷＯ ９９／４５９６２ならびにKorman et al.のＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／１４４２４を参照のこと。

【0452】

いくつかの態様では、本明細書に記載される抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体は、導入遺伝子および導入染色体上にヒト免疫グロブリン配列を保持するマウス、例えば、ヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖導入染色体を保持するマウスを使用して作製される。本明細書において「ＫＭマウス」と呼ばれるこのようなマウスは、ＩｓｈｉｄａらのＰＣＴ公開ＷＯ０２／４３４７８に詳細に記載されている。

【0453】

なおもさらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替トランスジェニック動物系が、当技術分野で利用可能であり、本明細書に記載される抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を作製するために使用することができる。例えば、Xenomouse（Abgenix、Inc.）と呼ばれる代替トランスジェニック系を使用でき、このようなマウスは、例えば、Kucherlapati et al.の米国特許第５，９３９，５９８号；同６，０７５，１８１号；同６，１１４，５９８号；同６、１５０，５８４号および同６，１６２，９６３号に記載されている。

【0454】

さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替トランスクロモソミック動物系が、当技術分野で利用可能であり、本明細書に記載される抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を作製するために使用することができる。例えば、「ＴＣマウス」と呼ばれる、ヒト重鎖導入染色体（transchromosome）およびヒト軽鎖導入染色体（tranchromosome）の両方を保持するマウスを使用でき、このようなマウスは、Tomizuka et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:722-727に記載されている。さらに、ヒト重鎖および軽鎖導入染色体を保持するウシが、当技術分野で記載されており（Kuroiwa et al. (2002) Nature Biotechnology 20:889-894）、本明細書に記載される抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を作製するために使用することができる。

【0455】

ヒト抗体、例えば、ヒト抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体を作製するための当技術分野において記載されるさらなるマウス系として、（ｉ）内因性マウス重鎖および軽鎖可変領域が、相同組換えによって、内因性マウス定常領域に作動可能に連結されたヒト重鎖および軽鎖可変領域と置換されており、その結果、マウスにおいてキメラ抗体（ヒトＶ／マウスＣ）が作製され、次いで、その後、標準組換えＤＮＡ技術を使用して完全ヒト抗体に変換された、ＶＥＬＯＣＬＭＭＵＮＥ（登録商標）マウス（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）、ならびに（ｉｉ）マウスが再編成されていないヒト重鎖可変領域を含むが、単一の再変性されたヒト共通軽鎖可変領域を含む、ＭＥＭＯ（登録商標）マウス（Ｍｅｒｕｓ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）が挙げられる。このようなマウスおよび抗体を作製するためのその使用は、例えば、ＷＯ２００９／１５７７７、ＵＳ２０１０／００６９６１４、ＷＯ２０１１／０７２２０４、ＷＯ２０１１／０９７６０３、ＷＯ２０１１／１６３３１１、ＷＯ２０１１／１６３３１４、ＷＯ２０１２／１４８８７３、ＵＳ２０１２／００７０８６１およびＵＳ２０１２／００７３００４に記載されている。

【0456】

本明細書に記載されるヒトモノクローナル抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体はまた、ヒト免疫グロブリン遺伝子のライブラリーをスクリーニングするためのファージディスプレイ法を使用して調製することができる。ヒト抗体を単離するためのこのようなファージディスプレイ法は、当技術分野で確立されている。例えば、Ladner et al.の米国特許第５，２２３，４０９号；同５，４０３，４８４号；および同５，５７１，６９８号；Dower et al.の米国特許第５，４２７，９０８号および同５，５８０，７１７号； McCafferty et al.の米国特許第５，９６９，１０８号および同６，１７２，１９７号；ならびにGriffiths et al.の米国特許第５，８８５，７９３号；同６，５２１，４０４号；同６，５４４，７３１号；同６，５５５，３１３号；同６，５８２，９１５号および同６，５９３，０８１号を参照のこと。

【0457】

本明細書に記載されるヒトモノクローナル抗インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）抗体はまた、免疫処置の際にヒト抗体応答が生じ得るように、ヒト免疫細胞が再構成されているＳＣＩＤマウスを使用して調製することができる。このようなマウスは、例えば、Wilson et alの米国特許第５，４７６，９９６号および同５，６９８，７６７号に記載されている。

【0458】

本開示の実施には、別途示されない限り、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡおよび免疫学の従来的な技法が用いられ、これらは、当業者の技能の範囲内である。そのような技法は、文献に完全に説明されている。例えば、Sambrook et al., ed. (1989) Molecular Cloning A Laboratory Manual (2nd ed.; Cold Spring Harbor Laboratory Press)、Sambrook et al., ed. (1992) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (Cold Springs Harbor Laboratory, NY)、D. N. Glover ed., (1985) DNA Cloning, Volumes I and II、Gait, ed. (1984) Oligonucleotide Synthesis、Mullis et al. U.S. Pat. No. 4,683,195、Hames and Higgins, eds. (1984) Nucleic Acid Hybridization、Hames and Higgins, eds. (1984) Transcription And Translation、Freshney (1987) Culture Of Animal Cells (Alan R. Liss, Inc.)、Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press) (1986)、Perbal (1984) A Practical Guide To Molecular Cloning、the treatise, Methods In Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.)、Miller and Calos eds. (1987) Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells, (Cold Spring Harbor Laboratory)、Wu et al., eds., Methods In Enzymology, Vols. 154 and 155、Mayer and Walker, eds. (1987) Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Academic Press, London)、Weir and Blackwell, eds., (1986) Handbook Of Experimental Immunology, Volumes I-IV、Manipulating the Mouse Embryo, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., (1986); )、Crooks, Antisense drug Technology: Principles, strategies and applications, 2^nd Ed. CRC Press (2007)およびAusubel et al. (1989) Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley and Sons, Baltimore, Md.)を参照のこと。

【0459】

以下の実施例は、限定としてではなく、例示として提供されるものである。

【実施例】

【0460】

［実施例１］
抗体の生成およびスクリーニング
細胞株および培養の実施
チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）インテグリン発現細胞を、ＯＲＦ ｃＤＮＡ標的遺伝子配列を安定に導入したトランスポゾンに基づく系を使用して生成した。細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）において培養した。がん肺パネルを、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から得、細胞を、ＡＴＣＣの手順に従って培養した。

【0461】

細胞抗原での抗体選択
抗原陰性細胞株をバックグラウンド枯渇ステップとして使用し、抗原過剰発現細胞株を標的選択工程として使用して、Ｆａｂファージを、４回の結合選択に循環させた。接着細胞株を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に１０ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を加えたものを使用して、懸濁液にした。１０００万個の再懸濁細胞を、１ｍＬの細胞成長培地において、３×１０^１３ Ｆａｂファージライブラリーとともに、４℃で２時間、穏やかに回転させながらインキュベートした。Ｆａｂファージを、温度制御されたマイクロ遠心分離機を利用して、バックグラウンド枯渇細胞（親ＣＨＯ）から標的選択細胞（ＣＨＯ ＡｖＢ１）へ循環させて、細胞を穏やかにペレットにし、上清を移した。標的抗原発現細胞の標識化の後に、細胞を、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を補充した低温ＰＢＳ緩衝液を利用して４回洗浄した。最後の細胞洗浄後に、Ｆａｂファージを、０．１Ｍ塩酸を使用して細胞ペレットから溶出させ、室温で１０分間インキュベートし、続いて、１１Ｍ Ｔｒｉｓ（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）緩衝液を使用して中和した。細胞残屑を、高速遠心分離によって除去し、透明なＦａｂファージ溶離液を、清潔なバイアルに移した。４回目に、Ｆａｂファージを、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）方法を使用して分析するために、両方の株（抗原陰性および陽性細胞）のペレットから溶出したことに留意されたい。

【0462】

Ｆａｂファージの増幅
各回の選択の後に、５００μｌの体積のＦａｂファージ溶離液を使用して、５ｍｌのＯｍｎｉＭＡＸ大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞を、Ｏ．Ｄ．６００で２ＹＴ培地に接種した。細胞を、３７℃で３０分間、２００ＲＰＭで、Ｆａｂファージとともにインキュベートした。続いて、細胞に、１×１０８ｐｆｕ／ｍｌの最終濃度でＭ１３ＫＯ７ヘルパーファージを接種し、３７℃で４５分間、２００ＲＰＭでインキュベートした。細胞を、その後に、振盪フラスコに移し、１００μｇ／ｍｌのカルベニシリンおよび２５μｇ／ｍｌのカナマイシンを補充した２ＹＴ培地で最終体積５０ｍｌにし、３７℃で一晩、２００ＲＰＭで成長させた。翌日、細胞を遠心分離し、上清を、１／５の体積の２０％ポリエチレン－グリコール－８０００および２．５Ｍの塩化ナトリウムの溶液を含む清潔なチューブに移した。上清を、４℃で２０分間インキュベートし、次いで、４℃で２０分間、１３，０００ｘｇで遠心分離した。沈殿したＦａｂファージペレットを、１％ ＢＳＡを補充したＰＢＳを使用して再懸濁させ、４℃で保管した。

【0463】

ＦａｂおよびＩｇＧタンパク質の発現および精製
Ｆａｂ ＤＮＡ配列を、Ｆａｂファージファージミドまたは合成したＤＮＡからＰＣＲ増幅させた。Ｆａｂ領域を、修飾されたｐＥＴ２１タンパク質発現プラスミドにサブクローニングし、ここで、可変軽鎖および重鎖領域を、オペロンカセットに導入し、Ｆａｂの周辺質発現をもたらした。続いて、プラスミドを形質転換し、大腸菌ＢＬ２１細胞において発現させた。細胞を、カルベニシリンを含む２×酵母抽出物トリプトン培地においてＯ．Ｄ．６００ ０．８～１．０まで培養し、３７℃で３時間、１ｍＭのイソプロピルβ－Ｄ－１－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）で誘導した。細胞を、次いで、遠心分離によって採取し、細胞ペレットを、液体窒素を使用して瞬間凍結させた。続いて、細胞ペレットを解凍し、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、１ｍｇ／ｍｌリゾチーム、２ｍＭ ＭｇＣｌ_２、および１０単位のベンゾナーゼを含む溶解緩衝液を使用して再懸濁させ、４℃で１時間インキュベートした。ライセートを、遠心分離によって除去し、ｒＰｒｏｔｅｉｎ Ａ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムに適用し、１０カラム体積の５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４で洗浄した。Ｆａｂタンパク質は、１００ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ２．５（５０ｍＭ ＮａＨ_２ＰＯ_４、１４０ｍＭ ＮａＣｌ、１００ｍＭ Ｈ_３ＰＯ_４）で、１Ｍ Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０からなる中和緩衝液中に溶出させた。溶出したＦａｂタンパク質を、ＰＢＳ中に緩衝液交換し、Ａｍｉｃｏｎ－Ｕｌｔｒａ遠心濾過ユニットを使用して濃縮した。続いて、Ｆａｂを、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルクロマトグラフィーによって純度に関して、および２８０ｎｍでの吸光で分光測色法によって濃度に関して特徴付けた（図７Ａ～７Ｂ、データは示されない）。

【0464】

全長ＩｇＧ抗体の産生のために、プラスミドを、ＤＮＡ合成したか、またはＦａｂファージからサブクローニングし、可変ドメインのＤＮＡ配列を重鎖および軽鎖発現のための２つの哺乳動物発現ベクターにサブクローニングした。プラスミドを、製造業者の説明書に従ってＦｕＧＥＮＥ（登録商標）６トランスフェクション試薬を使用して、Ｅｘｐｉ２９３細胞にコトランスフェクトした。細胞培養培地を、トランスフェクションの５～６日後に採取し、ｒＰｒｏｔｅｉｎ Ａ親和性カラムに適用した。ＩｇＧタンパク質を、２５ｍＭ Ｈ_３ＰＯ_４、ｐＨ２．８、１００ｍＭ ＮａＣｌで溶出させ、０．５Ｍ Ｎａ_３ＰＯ_４、ｐＨ８．６で中和した。対象の溶出された画分を合わせ、濃縮し、ＰＢＳ、ｐＨ７．４中に透析した。

【0465】

ＦａｂファージＥＬＩＳＡおよび細胞ＥＬＩＳＡ
４回の細胞選択の後に、ファージを、９６ウェル形式で成長させた個々のクローンから産生させた。より具体的に、大腸菌Ｏｍｎｉｍａｘを有するファージミドのコロニーを、カルベニシリンおよびＭ１３－ＫＯ７ヘルパーファージを補充した４５０μｌの２ＹＴ培地に直接接種し、培養物を、９６ウェル形式において３７℃で一晩成長させた。Ｆａｂファージを含む培養上清を、１％ ＢＳＡを補充したＰＢＳ緩衝液中に２倍希釈し、室温で１５分間インキュベートした。ＥＬＩＳＡのために、Ｆａｂファージを、Ｍａｘｉｓｏｒｐ ３８４ウェルプレートにおいて４℃で一晩事前にインキュベートした標的抗原に対してインキュベートした。プレートを、ＰＢＳ＋０．０５％ Ｔｗｅｅｎを用いて洗浄し、室温で３０分間、抗Ｍ１３ ＨＲＰコンジュゲート抗体で提示させ、次いで、比色読み取りによってアッセイした。細胞ＥＬＩＳＡのために、Ｆａｂファージ混合物を、細胞培地に添加し、親、対する抗原発現接着細胞をコーティングしたプレートに、９５～１００％のコンフルエンスで添加し、室温で３０分間インキュベートした。続いて、プレートを、ＰＢＳで穏やかに洗浄し、細胞を、４％パラホルムアルデヒドを使用して固定し、次いで、ＰＢＳで再び洗浄した。細胞を、１％ ＢＳＡを補充したＰＢＳ緩衝液中で、西洋ワサビペルオキシダーゼ／抗Ｍ１３抗体コンジュゲートとともに、３０分間インキュベートした。プレートを洗浄し、ＴＭＢマイクロウェルペルオキシダーゼ基質キットで顕色させ、１．０Ｍリン酸でクエンチし、吸光度を、４５０ｎｍの波長で判定した。陽性結合クローンは、抗原発現細胞のシグナルの閾値を親細胞よりも１．５倍以上に設定することによって判定した。すべての陽性クローンを、次いで、サンガーＤＮＡ配列分析に供した。

【0466】

バイオレイヤーインターフェロメトリー
親和性推定および特異性測定を、Ｏｃｔｅｔ ＨＴＸ機器を使用して行った。組換えインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）を、ＡＨＱ ＢＬＩセンサー（１８－５００１、ＰＡＬＬ）で捕捉し、アッセイ緩衝液（ＰＢＳ、１％ ＢＳＡ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０）中１００ｎＭ抗体溶液に移し、会合を、３００秒間モニタリングした。センサーを、次いで、アッセイ緩衝液に移し、解離を、さらに３００秒間モニタリングした。エンドポイント応答値を、表にし、曲線を、Ｏｃｔｅｔデータ分析ソフトウェアバージョン９．０を使用して、ラングミュアモデルに当てはめた。すべてのアッセイ工程に関して、振盪速度は１０００ｒｐｍであり、温度は２５℃であった。

【0467】

ＩｇＧクローン１０４０４および１０３９２の親和性値力価測定グラフを、それぞれ、図１Ａおよび１Ｂに示す。図２Ａ～２Ｂは、それぞれのクローンのＩｇＧ形態によるインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）ＣＨＯ細胞の標識化、続いて、Ｆａｂ結合測定による、異なる抗体のエピトープビニングの概要を提供する。図９は、異なるクローンＩｇＧの存在下におけるＬＡＰ－ＴＧＦβに対するインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）ＣＨＯ細胞接着の概要を提供する。

【0468】

フローサイトメトリー検証および細胞結合力価測定
接着細胞を、１０ｍＭエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を補充したＰＢＳを使用して懸濁液にした。細胞を、ＰＢＳで洗浄し、１％ ＢＳＡを補充したＰＢＳ中に再懸濁させ、４℃で１５分間インキュベートした。細胞を、５０μｌのＦａｂファージ培養上清、または５００ｎＭ Ｆａｂ、またはＩｇＧで、４℃において３０分間標識し、次いで、ＰＢＳで洗浄し、１％ ＢＳＡを補充したＰＢＳ中に再懸濁させた。次に、細胞を、抗Ｆａｂ（Ｆａｂファージについて）、または抗Ｆｌａｇ（Ｆａｂについて）、または抗Ｆｃ（ＩｇＧについて）をコンジュゲートしたＡｌｅｘａ－４８８二次抗体で、製造業者の説明書に従って標識した。データを、ＣｙｔｏＦＬＥＸ－Ｓフローサイトメーターを使用し、４８８ｎｍのレーザーを５３０／２５ｎｍのフィルタ設定で使用して収集した。細胞をＰＢＳ中で分析し、すべての取得した生事象は、サンプル当たり１０，０００個の細胞を上回った。定量分析を、ＦｌｏｗＪｏ ｖ１０．２ソフトウェアを使用して行った。抗体細胞力価測定分析のために、抗体を、二連のサンプルにおいて、５００ｐＭ～１μＭの範囲で抗原陽性細胞に添加した。平均蛍光シグナル値を、対照の抗原陰性細胞シグナルから差し引き、ＥＣ５０を、Ｇｒａｐｈ－ｐａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して判定したが、ここで、ｘはＦａｂ濃度である。

【0469】

【数1】

【0470】

異なる細胞インテグリンについて特定された抗体クローンの親和性検証を、図３Ａ～３Ｂおよび表２に示す。表２は、異なるインテグリンＣＨＯ細胞株のそれぞれについて、独特のクローン識別子および対応するＥＣ５０親和性値を示す。組換えヒトおよびマウスインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）に対する抗体クローンの異なるモダリティの親和性検証を、それぞれ、図４および５に示し、具体的な値は、表３および４に提供されている。

【0471】

【表4】

【0472】

【表5】

【0473】

【表6】

【0474】

サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、様々なＩｇＧクローンをさらに特徴付けた（図６Ａ～６Ｃ）。使用した移動相は、ＰＢＳ、ｐＨ７．４であり、５０ｕｇのＩｇＧを０．５ｍｌ／分の流速において１ｇ／ｌで注入した。凍結－解凍分析は、少なくとも３回の解凍の後に安定性を示す（図８Ａ～８Ｂ）。

【0475】

細胞結合アッセイ
９６ウェルプレートを、ＰＢＳ中１０ｕｇ／ｍｌのＩ型コラーゲンリガンドでコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。翌日に、それぞれのウェルを、ＰＢＳ中の２％熱不活性化ＢＳＡを使用して、３７℃で１時間ブロッキングした。次に、親またはインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）発現ＣＨＯ細胞を、ＴｒｙｐＬＥ Ｅｘｐｒｅｓｓ細胞解離試薬を利用して懸濁液にし、次いで、ＰＢＳ（カルシウムおよびマグネシウムを含む）中で２回洗浄した。これらの細胞を、次いで、Ｆａｂタンパク質またはＩｇＧで提示させ、３７℃で３０分間インキュベートした。ＢＳＡを含む９６ウェルプレートを、ＰＢＳ（カルシウムおよびマグネシウムを含む）を使用して３回洗浄した。細胞を、次いで、９６ウェルプレートに三連に播種し、３７℃で６０分間インキュベートし、次いで、ＰＢＳ（カルシウムおよびマグネシウムを含む）を使用して穏やかに３回洗浄した。細胞コンフルエンス計数を、ＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｓ２顕微鏡を用いて判定し、ＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｓ２ソフトウェアを用いて分析した。

【0476】

細胞増殖および遊走アッセイ
細胞を、１００μｌの成長培地を使用して、９６ウェルの組織培養処理プレートに播種し、組織培養インキュベーターにおいて成長させた。三連のサンプルを、２００ｎＭ ＩｇＧで処置し、位相差顕微鏡によって、ＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｓ２顕微鏡を使用して２時間ごとに１ウェル当たり４つの画像を測定した。すべてのサンプルは、増殖アッセイでは細胞コンフルエンスパーセンテージに関して、および遊走アッセイでは創傷治癒に関して、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ Ｓ２ソフトウェアを使用して分析した。

【0477】

ＮＧＳサンプルの準備およびＩｌｌｕｍｉｎａ読み取り
ＰＣＲアンプリコンを、拡大した４回目のＦａｂファージプールを利用して生成したが、ここで、フォワードプライマーおよびリバースプライマーは、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＶＬ３およびＶＨ３の間のＦａｂ領域に隣接していた。フォワードプライマーおよびリバースプライマーはいずれも、２４塩基対の長さの鋳型アニーリング領域を含み、続いて、６～８塩基対の長さの独特のヌクレオチド「バーコード」識別子、ならびにＩｌｌｕｍｉｎａユニバーサルアダプタータグ（リバースについてはＰＥ１およびフォワードプライマーについてはＰＥ２）を含んでいた。アンプリコンを、製造業者の説明書に従って、ゲル電気泳動、続いて、アガロースゲル抽出によって単離した。サンプル濃度を、マイクロ体積分光測色計を利用して二連に判定した。すべての単離したアンプリコンを正規化し、プールし、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑ ２５００機器を対合末端３００サイクルの設定で使用してシーケンシングした。全ＣＤＲをカバーするために、ＰＥ１およびＰＥ２ Ｉｌｌｕｍｉｎａプライマーに加えて、前のＶＨ２およびＶＨ１領域をアニーリングするカスタムプライマーも含まれた。

【0478】

陽性選択および陰性選択における度数分布間のスコア付け分離
陽性選択プールおよび陰性選択プールにおけるモチーフの２つの度数分布間での分離をスコア付けするために、本発明者らは、ランクトランスフォーメーションと併用で、ウェルチ－サタスウェイトバージョンのｔ検定を利用した。このアプローチは、本発明者らの度数分布における非正規性および不等分散の両方の望ましくない作用に同時に対抗する利点を有する。まず、２つの度数分布を合わせ、昇順で配置し、同順位の度数は、それらの位置の平均に等しいランクを与える。２つのランク分布ｘ_Ｐおよびｘ_Ｎが陽性選択プールおよび陰性選択プールの度数に対応するとして、すべてそれぞれ、

【0479】

【数2】

および

【0480】

【数3】

は平均であり、ｓ_Ｐおよびｓ_Ｎは標準偏差であり、ｎ_Ｐおよびｎ_Ｐはサイズである。本発明者らは、以下に記載される手順に従って、ｔスコアの統計学的有意性を評価するために、ｐ値を計算する。

【0481】

本発明者らは、まず、ｔスコアを、

【0482】

【数4】

によって計算する。

【0483】

本発明者らは、次いで、自由度を、

【0484】

【数5】

によって計算する。

【0485】

本発明者らは、最後に、ｐ値を、

【0486】

【数6】

によって計算する。

【0487】

ｔはｔスコアであり、ｆは自由度であり、Γ（．）はガンマ関数であり、ｐは、自由度ｆを有する分布ｔからの単回の観察が、区間［－∞，ｔ］に入る確率である。言い換えると、ｐは、ｔスコアｔ以下である任意のｔスコアを偶然に有する確率である。したがって、ｐ値ｐが低いほど、ｔスコアｔの有意性は高く、結果として、陽性選択および陰性選択における２つの度数分布間の分離が高くなる。本発明者らは、

【0488】

【数7】

のストリンジェントなカットオフを使用して、ｐ値をフィルタリングして、高度に特異的な抗体クローンを特定した。ｐ値を補足するために、本発明者らは、Ｃｏｈｅｎの効果量係数ｄを計算して、陽性選択および陰性選択における度数平均間の差を評価し、巨大な効果量（ｄ＞２）を有するｐ値を保持した。

【0489】

【数8】

【0490】

ＣＤＲ配列におけるコンセンサスモチーフの列挙
コンセンサスモチーフは、配列群間で共通している線形情報を表すために利用される。モチーフにおける特定の位置は、定義されているが（例えば、「Ｐ．．Ｒ」における「Ｐ」または「Ｒ」）、その他のものは、定義されておらず、ワイルドカードと呼ばれる（例えば、「Ｐ．．Ｒ」における「．」）。本発明者らは、ここで、コンセンサスモチーフを用いて、候補抗体ならびに陽性選択および陰性選択における残りの抗体のＣＤＲ配列間で共通している線形情報を調べる。この目的で、本発明者らは、タンパク質における線形情報を調べるために最初に開発されたアルゴリズムＤＡＬＥＬを適合させた。モチーフ数が爆発的に増加するのを回避するために、本発明者らは、それぞれのモチーフにおいて許容されるワイルドカードの数を、その長さの５５％に制限した。加えて、本発明者らは、陽性選択内のマッチング配列における異なるアミノ酸にマッチするワイルドカードを有するモチーフのみを考慮し、例えば、モチーフ「Ｐ．Ｒ」におけるワイルドカードは、マッチング配列「ＰＹＲ」および「ＰＳＲ」におけるアミノ酸「Ｙ」および「Ｓ」にマッチする。最後に、本発明者らは、すべてのモチーフにマッチする陽性選択内の最小配列数を、１００に制限することによって、モチーフの数を最も代表的なものに制限した。
［実施例２］

【0491】

インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）を標的とする二重特異性抗体の生成および特徴付け
インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）をさらに標的化するために、実施例１に記載される様々なＩｇＧ単一特異性抗体の成分を使用して、２つの二重特異性抗体を生成した。特に、ＩｇＧクローン１０４０４、１０３９２、および１１８６７の重鎖および軽鎖を交換し、機能的特性および細胞結合力価測定を評価した。図１０Ａは、異なる二重特異性ＩｇＧの図であり、ｎｕｌｌは、非選択性（ランダムＣＤＲ）二重ＩｇＧアームを示す。二重特異性ＩｇＧ １０４０４／１０３９２の存在下におけるインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）ＣＨＯ細胞に対するＦａｂ結合活性を、図１０Ｂに示す。二重特異性ＩｇＧ １０４０４／１０３９２は、（ｉ）配列番号１と比べてノブモチーフを導入する修飾を含む重鎖１０３９２配列（配列番号３１）、（ｉｉ）配列番号１１と比べてホールモチーフを導入する修飾を有する重鎖１０４０４配列（配列番号３４）、（ｉｉｉ）２つの１０４０４軽鎖配列（配列番号１６）を含む。重鎖のノブおよびホール配列が、２つの重鎖のヘテロ二量体化を促進する。

【0492】

異なるＦａｂクローンの存在下におけるインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）ＣＨＯ細胞に対する１０４０４－１０３９２、１０３９２／ｎｕｌｌ、および１０４０４／ｎｕｌｌの二重特異性ＩｇＧの結合親和性を、図１０Ｃに示し、異なるクローンＩｇＧの存在下におけるＬＡＰ－ＴＧＦβに対するインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）ＣＨＯ細胞接着を、図１０Ｄに示し、図１０Ｅは、フローサイトメトリー測定によるインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）ＣＨＯ細胞の力価測定グラフを提供する。ＬＡＰ－ＴＧＦβに対する接着に関するインテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）ＣＨＯ細胞の阻害性力価測定を、図１０Ｅに示す。

【0493】

１０４０４／１０３９２二重特異性抗体の阻害性特性を、次いで、１０４０４および１０３９２単一特異性抗体のものと比較した（図１１Ａ～１１Ｆ）。

【0494】

１０４０４クローンの追加の変異体を開発し、特徴付けした（図１２Ａ～１２Ｌ）。ＩｇＧクローン１１８６７を、改善された特性を有するとして特定し、（ｉ）配列番号１と比べてノブモチーフを導入する修飾を含む重鎖１０３９２配列（配列番号３１）、（ｉｉ）配列番号２１と比べてホールモチーフを導入する修飾を含む重鎖１１８６７配列（配列番号３７）、および（ｉｉｉ）２つの１１８６７軽鎖配列（配列番号２６）を含む第２の二重特異性抗体を生成した。１１８６７／１０３９２二重特異性抗体の阻害性特性を、次いで、１１８６７および１０３９２単一特異性抗体のものと比較した（図１３Ａ～１３Ｆおよび１４Ａ～１４Ｆ）。
［実施例３］

【0495】

インビトロでの腫瘍細胞増殖の阻害
二重特異性ＩｇＧ １１８６７／１０３９２抗体を、次いで、インビトロで腫瘍細胞増殖を阻害する能力についてアッセイした。Ａ５４９、Ｈ２９２、Ｈ６６１、Ｈ４６０、およびＨ１５６３を含む様々な肺がん細胞株を、二重特異性ＩｇＧ １１８６７／１０３９２または対照ＩｇＧの存在下において培養し、４８時間にわたって細胞コンフルエンスに関してアッセイした（図１５Ｂ～１５Ｇ）。二重特異性ＩｇＧ １１８６７／１０３９２の存在下において培養した腫瘍細胞は、複数の細胞型において増殖の減少を示し（図１６Ａ）、二重特異性ＩｇＧ １１８６７／１０３９２が、腫瘍細胞増殖を阻害することができることが示唆された。

【0496】

インテグリンαｖヘテロ二量体（例えば、インテグリン－αｖβ１）は、細胞遊走において役割を果たすため、二重特異性ＩｇＧ １１８６７／１０３９２が腫瘍細胞遊走を阻害する能力を、次いで、アッセイした。肺腫瘍細胞株Ａ５４９、Ｈ４６０、Ｈ６６１、およびＨ１５６３を使用した創傷治癒アッセイにより、細胞を二重特異性ＩｇＧ １１８６７／１０３９２の存在下において培養した場合に、未処置細胞および対照細胞と比較して、相対創傷密度の減少が示された（図１７Ａ～１７Ｐ）。

【0497】

特定の態様に関する前述の説明は、本開示の一般概念から逸脱することなく、当業者が技能の範囲内の知識を適用することによって、過度の実験を行うことなくそのような特定の態様を容易に修正する、および／または様々な用途に適応することができる、本開示の一般的な本質を完全に明らかにしようとするものである。したがって、そのような適応および修正は、本明細書に提示される教示および案内に基づいて、開示される態様の均等物の意味および範囲内であることが意図される。本明細書における表現法または語法は、説明を目的とするものであり、制限を目的とするものではなく、そのため、本明細書の語法または表現法は、当業者が教示および案内を踏まえて解釈すべきものであることを、理解されたい。

【0498】

本開示の他の態様は、本明細書の考察および本明細書において開示される開示の実施により、当業者には明らかであろう。本明細書および実施例は例示と見なされるにすぎないことが意図され、本開示の真の範囲および趣旨は、以下の特許請求の範囲によって示される。

【0499】

本明細書において開示されるすべての刊行物、特許、および特許出願は、それぞれ個別の刊行物、特許、または特許出願が、具体的かつ個別に参照により組み込まれると示されるのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図10D】

【図10E】

【図10F】

【図11A】

【図11B】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図12D】

【図12E】

【図13】

【図14】

【図15A】

【図15B】

【図15C】

【図16】

【図17A】

【図17B】

【配列表】

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【国際調査報告】