特表 2024-509946 抗ヒトＣＸＣＲ５抗体及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-05

(54)【発明の名称】抗ヒトＣＸＣＲ５抗体及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20240227BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20240227BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240227BHJP

   C12N 15/70 20060101ALI20240227BHJP

   C12N 15/74 20060101ALI20240227BHJP

   C12N 15/81 20060101ALI20240227BHJP

   C12N 15/85 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 21/04 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240227BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240227BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240227BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240227BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/46 ZNA

C07K16/28

C12N15/70 Z

C12N15/74 Z

C12N15/81 Z

C12N15/85 Z

A61P37/02

A61P19/02

A61P29/00 101

A61P1/04

A61P3/10

A61P25/00

A61P17/06

A61P21/04

A61P9/10 101

A61P27/02

A61P1/16

A61P17/00

A61P35/00

A61P35/02

A61K39/395 U

A61K39/395 N

A61K45/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023555391

(86)(22)【出願日】2022-03-09

(85)【翻訳文提出日】2023-11-01

(86)【国際出願番号】 US2022019587

(87)【国際公開番号】W WO2022192423

(87)【国際公開日】2022-09-15

(31)【優先権主張番号】63/158,462

(32)【優先日】2021-03-09

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/111049

(32)【優先日】2021-08-05

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】522256668

【氏名又は名称】ハイファイバイオ（ホンコン）リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100107386

【弁理士】

【氏名又は名称】泉谷 玲子

(72)【発明者】

【氏名】シュヴァイツァー，リャン

(72)【発明者】

【氏名】エロウズ，サミ

(72)【発明者】

【氏名】ハルノバ，アイリン・コック

(72)【発明者】

【氏名】ベック，ステファニー

(72)【発明者】

【氏名】ベルトラミネッリ・ニコラ・アルトゥーロ・アルド

(72)【発明者】

【氏名】チャン，キアン

(72)【発明者】

【氏名】エイドリアン，フランシスコ

(72)【発明者】

【氏名】ルー，ユン－ユー

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084MA02

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZA02

4C084ZA33

4C084ZA45

4C084ZA68

4C084ZA75

4C084ZA89

4C084ZA94

4C084ZA96

4C084ZB07

4C084ZB15

4C084ZB26

4C084ZB27

4C084ZC35

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB31

4C085CC23

4C085EE01

4C085EE03

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本発明は、（ヒト）ＣＸＣＲ５に特異的なモノクローナル抗体及びその抗原結合フラグメント、ならびにそれらをシェーグレン症候群、ある特定のがん、及び自己免疫性疾患の治療に使用する方法（併用療法を含む）を提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントが、ヒトＣＸＣＲ５に特異的であり、前記モノクローナル抗体が、
（１）ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、及びＶＨ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、前記ＶＨ ＣＤＲ１配列、前記ＶＨ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＨ ＣＤＲ３配列が、表Ａ、Ｂ、及びＤにあるいずれか１つのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３配列をそれぞれ含み、任意選択で、前記ＶＨ ＣＤＲ１配列、前記ＶＨ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＨ ＣＤＲ３配列が、表Ａ、Ｂ、及びＤにあるいずれか１つのモノクローナル抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３配列をそれぞれ含む、前記重鎖可変領域、及び／または
（２）ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、及びＶＬ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、前記ＶＬ ＣＤＲ１配列、前記ＶＬ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＬＣＤＲ３配列が、表Ａ、Ｃ、及びＤにあるいずれか１つのＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、及びＶＬ ＣＤＲ３配列をそれぞれ含み、任意選択で、前記ＶＬ ＣＤＲ１配列、前記ＶＬ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＬ ＣＤＲ３配列が、表Ａ、Ｃ、及びＤにあるいずれか１つのモノクローナル抗体のＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、及びＶＬ ＣＤＲ３配列をそれぞれ含む、前記軽鎖可変領域を含む、前記単離されたモノクローナル抗体またはその抗体結合フラグメント。

【請求項2】

（１）前記ＶＨ ＣＤＲ１配列、前記ＶＨ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＨ ＣＤＲ３配列が、配列番号１、２、及び３のアミノ酸配列をそれぞれ含み、前記ＶＬ ＣＤＲ１配列、前記ＶＬ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＬ ＣＤＲ３配列が、配列番号９、１０、及び１１のアミノ酸配列をそれぞれ含む、
（２）前記ＶＨ ＣＤＲ１配列、前記ＶＨ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＨ ＣＤＲ３配列が、配列番号１７、１８、及び１９のアミノ酸配列をそれぞれ含み、前記ＶＬ ＣＤＲ１配列、前記ＶＬ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＬ ＣＤＲ３配列が、配列番号２５、２６、及び２７のアミノ酸配列をそれぞれ含む、
（３）前記ＶＨ ＣＤＲ１配列、前記ＶＨ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＨ ＣＤＲ３配列が、配列番号３３、３４、及び３５のアミノ酸配列をそれぞれ含み、前記ＶＬ ＣＤＲ１配列、前記ＶＬ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＬ ＣＤＲ３配列が、配列番号４１、４２、及び４３のアミノ酸配列をそれぞれ含む、
（４）前記ＶＨ ＣＤＲ１配列、前記ＶＨ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＨ ＣＤＲ３配列が、配列番号３３、４９、及び５１のアミノ酸配列をそれぞれ含み、前記ＶＬ ＣＤＲ１配列、前記ＶＬ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＬ ＣＤＲ３配列が、配列番号５７、５８、及び５９のアミノ酸配列をそれぞれ含む、
（５）前記ＶＨ ＣＤＲ１配列、前記ＶＨ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＨ ＣＤＲ３配列が、配列番号３３、４９、及び６５のアミノ酸配列をそれぞれ含み、前記ＶＬ ＣＤＲ１配列、前記ＶＬ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＬ ＣＤＲ３配列が、配列番号５７、５８、及び５９のアミノ酸配列をそれぞれ含む、
（６）前記ＶＨ ＣＤＲ１配列、前記ＶＨ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＨ ＣＤＲ３配列が、配列番号６９、７０、及び７１のアミノ酸配列をそれぞれ含み、前記ＶＬ ＣＤＲ１配列、前記ＶＬ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＬ ＣＤＲ３配列が、配列番号７６、７７、及び７８のアミノ酸配列をそれぞれ含む、
（７）前記ＶＨ ＣＤＲ１配列、前記ＶＨ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＨ ＣＤＲ３配列が、配列番号３３、４９、及び５１のアミノ酸配列をそれぞれ含み、前記ＶＬ ＣＤＲ１配列、前記ＶＬ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＬ ＣＤＲ３配列が、配列番号１４９、１５０、及び１５１のアミノ酸配列をそれぞれ含む、または
（８）前記ＶＨ ＣＤＲ１配列、前記ＶＨ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＨ ＣＤＲ３配列が、配列番号１１４、１１５、及び１１６のアミノ酸配列をそれぞれ含み、前記ＶＬ ＣＤＲ１配列、前記ＶＬ ＣＤＲ２配列、及び前記ＶＬ ＣＤＲ３配列が、配列番号１２０、１２１、及び１２２のアミノ酸配列をそれぞれ含む、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項3】

前記モノクローナル抗体が、ヒト抗体（例えば、ｈＩｇＧ１、ｈＩｇＧ２、ｈＩｇＧ３、またはｈＩｇＧ４）の定常領域配列を含むマウス－ヒトキメラ抗体であり、前記ＶＨ配列が、配列番号８、２４、４０、５６、６５、もしくは７５のいずれか１つであるか、または配列番号８、２４、４０、５６、６５、もしくは７５のアミノ酸配列のいずれか１つに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、及び／または前記ＶＬ配列が、配列番号１６、３２、４８、６３、６８、もしくは８３のいずれか１つであるか、または配列番号１６、３２、４８、６３、６８、もしくは８３のアミノ酸配列のいずれか１つに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する、請求項１または２に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項4】

（１）前記ＶＨ配列が、配列番号８であるか、もしくは配列番号８に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、前記ＶＬ配列が、配列番号１６であるか、もしくは配列番号１６に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する、
（２）前記ＶＨ配列が、配列番号２４であるか、もしくは配列番号２４に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、前記ＶＬ配列が、配列番号３２であるか、もしくは配列番号３２に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する、
（３）前記ＶＨ配列が、配列番号４０であるか、もしくは配列番号４０に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、前記ＶＬ配列が、配列番号４８であるか、もしくは配列番号４８に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する、
（４）前記ＶＨ配列が、配列番号５６であるか、もしくは配列番号５６に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、前記ＶＬ配列が、配列番号６３であるか、もしくは配列番号６３に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する、
（５）前記ＶＨ配列が、配列番号６５であるか、もしくは配列番号６５に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、前記ＶＬ配列が、配列番号６８であるか、もしくは配列番号６８に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する、または
（６）前記ＶＨ配列が、配列番号７５であるか、もしくは配列番号７５に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、前記ＶＬ配列が、配列番号８３であるか、もしくは配列番号８３に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する、請求項３に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項5】

前記モノクローナル抗体がヒト化抗体であり、任意選択で、前記ヒト化抗体が、
（１）表Ｂ、Ｄ、及びＥにあるいずれか１つのモノクローナル抗体のＶＨ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＨ配列；及び／または表Ｃ、Ｄ、及びＥにあるいずれか１つのモノクローナル抗体のＶＬ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＬ配列、
（２）配列番号９６のＶＨ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＨ配列、及び配列番号１１２のＶＬ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＬ配列、
（３）配列番号１１３のＶＨ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＨ配列、及び配列番号１１２のＶＬ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＬ配列、
（４）配列番号９６のＶＨ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＨ配列、及び配列番号１０１のＶＬ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＬ配列、
（５）配列番号９６のＶＨ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＨ配列、及び配列番号１０９のＶＬ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＬ配列を含む、請求項１または２に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項6】

前記ヒト化抗体が、
（１）ＶＨフレームワーク領域配列ＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、及びＶＨ ＦＲ４であって、
（ｉ）表Ｂ及び表Ｄにあるいずれか１つの抗体のものである、
（ｉｉ）それぞれ配列番号８４、８５、８６、及び８７と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含む、
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号８９、９０、９１、及び８７と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含む、あるいは
（ｉｖ）それぞれ配列番号９３、９４、９５、及び８７と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含む、
（ｖ）それぞれ配列番号１３２、８５、１３３、及び８７のものと実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含む、
（ｖｉ）それぞれ配列番号９３、１２６、１２７、及び８７のものと実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含む、
（ｖｉｉ）それぞれ配列番号１３２、１３３、１３４、及び８７のものと実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含む、
（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号１３８、９４、１３９、及び８７のものと実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含む、あるいは
（ｉｘ）それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、及び８７のものと実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含む、前記ＶＨフレームワーク領域配列、及び／または
（２）ＶＬフレームワーク領域配列ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、及びＶＬ ＦＲ４であって、
（ｉ）表Ｃ及び表Ｄにあるいずれか１つの抗体のものである、
（ｉｉ）それぞれ配列番号９７、９８、９９、及び１００と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含む、
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号９７、１０２、９９、及び１００と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含む、
（ｉｖ）それぞれ配列番号１０３、１０４、１０５、及び１００と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含む、
（ｖ）それぞれ配列番号１０３、１０７、１０８、及び１００と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含む、
（ｖｉ）それぞれ配列番号１３４、１３５、１３６、及び１３１のものと実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含む、
（ｖｉｉ）それぞれ配列番号１２８、１２９、１３０、及び１３１のものと実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含む、
（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号１４５、１４６、１４７、及び１３１のものと実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含む、
（ｉｘ）それぞれ配列番号９７、９８、１５２、及び１００のものと実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含む、あるいは
（ｘ）それぞれ配列番号１５４、１０２、９９、及び４７のものと実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含む、前記ＶＬフレームワーク領域配列を含む、請求項１または２に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項7】

（１）前記ＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、及びＶＨ ＦＲ４配列が、
（ｉ）それぞれ配列番号９３、９４、９５、及び８７、
（ｉｉ）それぞれ配列番号１３２、８５、１３３、及び８７、
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号９３、１２６、１２７、及び８７、もしくは
（ｉｖ）それぞれ配列番号１３２、１３３、１３４、及び８７を含み、及び／または
（２）前記ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、及びＶＬ ＦＲ４配列が、
（ｉ）それぞれ配列番号１３４、１３５、１３６、及び１３１、もしくは
（ｉｉ）それぞれ配列番号１２８、１２９、１３０、及び１３１を含む、請求項６に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項8】

（１）前記ＶＨ配列が、配列番号９６のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬ配列が、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む、または
（２）前記ＶＨ配列が、配列番号１１３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬ配列が、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む、請求項７に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項9】

前記ＶＨ配列が、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬ配列が、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項10】

ＡＤＣＣを増強するための修飾されたＦｃ領域を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項11】

前記修飾されたＦｃ領域が、
（１）ＦｃγＲＩＩＩａ結合を増強するためのＦ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ変異、
（２）ＦｃγＲＩＩＩａ結合を増強するためのＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ変異、
（３）ＦｃγＲＩＩＩａ結合の増強及びＦｃγＲＩＩＩｂ結合の減少を同時に行うためのＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ変異、
（４）ＦｃγＲＩＩＩａ結合を増強するためのＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ変異、及び／または
（５）ＦｃγＲＩＩＩａの結合を増強するためのＦｃ領域での脱フコシル化Ｎ２９７を含む、請求項１０に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項12】

前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ_ｄ、単鎖ＦｖもしくはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆ_ｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ_２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ_２、（ｓｃＦｖ）_２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである、請求項１～９のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項13】

ＡＤＣＣ活性に関し低い（例えば、１～５または１～２）ｐＭ範囲のＥＣ５０値を有する、請求項１～１２のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項14】

表面ｈＣＸＣＲ５を発現する初代Ｂ細胞、及び／または表面ｈＣＸＣＲ５を発現する初代Ｔ細胞に対しＡＤＣＣ活性を有する、請求項１～１３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項15】

ｈＣＸＣＲ５表面抗原を内在化しない（または最小限の内在化にとどまる）、請求項１～１４のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項16】

ｃＡＭＰシグナル伝達を阻害する（例えば、１ｎＭ未満のＥＣ５０）、請求項１～１５のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項17】

走化性を阻害する（例えば、約０．１～０．５ｎＭまたは約０．１ｎＭで約１００％阻害）、請求項１～１６のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項18】

ｈＣＸＣＬ１３誘導性Ｂ細胞移動を阻害する、請求項１～１７のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項19】

ｈＣＸＣＲ３と実質的に交差反応しない、請求項１～１８のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項20】

接着細胞株（例えば、ＤＸ００２）及び／または浮遊細胞株（例えば、Ｍ３００－１９）に発現したｈＣＸＣＲ５に結合する、請求項１～１９のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項21】

ｈＣＸＣＲ５のサルまたはマウスのオルソログと交差反応しないか、または最小限に交差反応する、請求項１～２０のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項22】

対象におけるメモリーＢ細胞集団のパーセンテージを低減する、請求項１～２１のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項23】

約２５ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満、またはそれ以下のＫ_ｄでｈＣＸＣＲ５に結合する、請求項１～２２のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項24】

同じエピトープへの結合に関し、請求項１～２３のいずれか１項に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項25】

シェーグレン症候群（ＳＳ）の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、請求項１～２４のいずれか１項に記載の抗体の治療有効量を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項26】

ＳＳの少なくとも１つの症状を軽減する、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

異所性胚中心（ＧＣ）を伴う疾患または適応症（自己免疫性疾患または障害を含む）の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、請求項１～２４のいずれか１項に記載の抗体の治療有効量を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項28】

前記疾患または前記適応症が、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症（ＭＳ）、サルコイドーシス、乾癬、重症筋無力症、橋本病、グレーブ病、動脈硬化症、結膜炎、胃炎、肝炎、または皮膚炎である、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

リンパ腫または白血病の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、請求項１～２４のいずれか１項に記載の抗体の治療有効量を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項30】

前記リンパ腫または前記白血病がＢ細胞リンパ腫である、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

前記Ｂ細胞リンパ腫がＣＬＬ（Ｂ細胞慢性リンパ性白血病）である、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記リンパ腫または前記白血病が非ホジキンリンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫）である、請求項３０に記載の方法。

【請求項33】

固形癌の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、請求項１～２４のいずれか１項に記載の抗体の治療有効量を前記対象に投与することを含み、前記固形癌が、胃癌、乳癌、腸癌、肺癌、または前立腺癌である、前記方法。

【請求項34】

化学療法剤、抗血管新生剤、成長阻害剤、がん免疫薬剤、及び／または抗新生物組成物を患者に投与することをさらに含む、請求項２９～３３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項35】

請求項１～２４のいずれか１項に記載の重鎖もしくは軽鎖またはその抗原結合部分をコードするポリヌクレオチド。

【請求項36】

ヒト細胞での発現のためにコドン最適化されている、請求項３５に記載のポリヌクレオチド。

【請求項37】

請求項３５または３６に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。

【請求項38】

発現ベクター（例えば、哺乳類発現ベクター、酵母発現ベクター、昆虫発現ベクター、または細菌発現ベクター）である、請求項３７に記載のベクター。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の参照
本出願は、米国仮特許出願第６３／１５８，４６２号（２０２１年３月９日出願）及び国際特許出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／１１１０４９号（２０２１年８月５日出願）の優先権を主張し、上記出願の各々の全ての内容（任意の図面及び配列表を含む）が、参照により本明細書に援用される。

【背景技術】

【0002】

Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体５型（ＣＸＣ－Ｒ５）は、ＣＤ１８５（分化抗原群１８５）またはバーキットリンパ腫受容体１（ＢＬＲ１）の別名でも知られ、ケモカインＣＸＣＬ１３（別名ＢＬＣ）に対するＧタンパク質共役型７回膜貫通受容体であり、ＣＸＣケモカイン受容体ファミリーに属する。ヒトの場合、ＣＸＣ－Ｒ５タンパク質は、ＣＸＣＲ５遺伝子によりコードされ、Ｔ細胞がリンパ節のＢ細胞ゾーンに移動できるようにする。

【0003】

ＢＬＲ１／ＣＸＣＲ５遺伝子は、バーキットリンパ腫及びリンパ組織（例えば、リンパ節及び脾臓内の濾胞）で特異的に発現する。この遺伝子は、Ｂ細胞移動に不可欠な役割を果たしている。ＣＸＣＬ１３分泌により、Ｂ細胞はリンパ節の位置を特定することができる。さらに、最近のいくつかの研究では、ＣＸＣＬ１３は、ＣＸＣＲ５を介し造血前駆細胞（ＣＤ３^－ＣＤ４^＋）を動員することが可能であり、これによりリンパ節及びパイエル板を発生を引き起こすことが示唆されている。

【0004】

一方、Ｔ細胞は、ＣＸＣＲ５の発現なしではＢ細胞濾胞にアクセスすることができない。Ｂ細胞及びＴ細胞は、Ｉｇクラススイッチを活性化するために相互作用する必要があるため、これは、高親和性抗体の生成における重要なステップである。

【0005】

したがって、ＣＸＣＲ５は、成熟静止Ｂ細胞、扁桃Ｂ細胞、ＣＤ４及びＣＤ８両方のＴ細胞で発現していることが示されているが、しばしばＴ濾胞ヘルパー（Ｔｆｈ）細胞の定義的マーカーとみなされている。

【0006】

乳癌患者におけるＣＸＣＲ５の過剰発現は、リンパ節転移との相関が高い。さらに、ＣＸＣＲ５の発現上昇は、機能的なｐ５３タンパク質を欠く乳房腫瘍において異常な細胞生存及び移動に寄与し得る。ＣＸＣＲ５遺伝子プロモーター領域内に位置し、多発性硬化症のリスクに関連するＳＮＰ ｒｓ６３０９２３のマイナーアレルは、ＭＥＦ２Ｃ結合部位の出現に関与し、活性化時のＢ細胞内でＣＸＣＲ５遺伝子プロモーター活性の低減をもたらし、自己免疫応答の減少につながる可能性がある。

【0007】

ＣＸＣＲ５は、前立腺癌の転移性進行にも関連付けられている。前立腺癌の組織及び細胞株は、より高い非基底レベルのＣＸＣＲ５を発現することが分かっている。さらには、ＣＸＣＲ５の発現レベルとグリソンスコアとの間に相関が見出されている。

【0008】

ＣＸＣＲ５はＧＣ（胚中心、Ｆｏｒｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ，１９９６－Ａｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．２００４）の極性化／組織化に必要とされる。ＣＸＣＲ５及びそのリガンドＣＸＣＬ１３は、Ｂ／Ｔ境界領域におけるＢ／Ｔ細胞の二次リンパ臓器のＧＣへの移動に必要とされる（Ａｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ，２００４－Ｒｅｌｆ ｅｔ ａｌ．，２０１２）。Ｂ／Ｔゾーン内のＢ／Ｔ細胞の相互作用は、ＢＣＲ親和性成熟及びＢ細胞の拡大に必要とされる（Ｂｒｅｉｔｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，２０００）。

【0009】

ほとんどのケモカインは、複数の受容体に結合することが知られている。しかし、ＣＸＣＲ５－ＣＸＣＬ１３相互作用は、他のリガンドがＣＸＣＲ５に結合せず、他の受容体がＣＸＣＬ１３に結合しないという点においてユニークと思われるが、ＣＸＣＲ３は、ＣＸＣＲ５と約３８．５％のアミノ酸配列同一性または５１．５％の類似性を共有する最も近いパラログである。

【0010】

シェーグレン症候群（ＳｊＳ、ＳＳ）は、体内の水分を生成する腺に影響を及ぼす長期にわたる自己免疫性疾患である。この疾患は、１９３３年にＨｅｎｒｉｋ Ｓｊｏｇｒｅｎが説明したことにちなんで命名された。ＳＳの主な症状としては、ドライマウス及びドライアイが挙げられる。他の症状としては、ドライスキン、膣の乾燥、慢性の咳、四肢の麻痺、疲労感、筋肉及び関節の疼痛、ならびに甲状腺の問題を挙げることができる。罹患者は、リンパ腫のリスクも増加する（５％）。

【0011】

人口の０．２％から１．２％がＳＳに罹患しており、半数が原発性形態（他の健康問題とは無関係に発症する）、半数が続発性形態（他の結合組織障害の結果として発症する）である。女性は、男性の約１０倍高頻度に罹患し、一般的には中年期に発症するが、誰でも罹患し得る。他の自己免疫性疾患を伴わない患者の間では、平均余命は変わらない。

【0012】

ＳＳの正確な原因は不明であるものの、遺伝的性質及び環境的誘因（例えば、ウイルスまたは細菌への曝露）の組合せが関係すると考えられている。結果的に生じる炎症は、徐々に腺を損傷する。

【0013】

現在のＳＳの治療は、症状を対象としている。ドライアイの治療としては、人工涙液、炎症を低減する薬剤、涙点プラグ、または涙管を閉鎖する手術が挙げられる。ドライマウスについては、ガム（できれば無糖）を噛むか、水を口に含むか、または唾液
代替物が使用され得る。関節または筋肉の痛みを有する患者には、イブプロフェンを使用することがある。乾燥を引き起こし得る薬剤（例えば、抗ヒスタミン剤）を中止することもある。

【0014】

したがって、シェーグレン症候群に加えて、機序的に関連する他の疾患または適応症を治療する治療試薬を開発する必要がある。

【発明の概要】

【0015】

本明細書に記載の発明は、アンタゴニスト的抗ｈＣＸＣＲ５抗体であって、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介しさらにＣＸＣＲ５^＋細胞を選択的に枯渇させる抗体を提供する。ＡＤＣＣは、Ｔｆｈ及びＢ細胞両方の移動を阻害するだけでなく、既に存在するＣＸＣＲ５^＋細胞も除去し、それにより組織損傷及び病原性抗体の生成を減少させる。

【0016】

したがって、本明細書に記載の発明は、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ヒトＣＸＣＲ５（ｈＣＸＣＲ５）に特異的であり、当該モノクローナル抗体が、（１）ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、及びＶＨ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）であって、当該ＶＨ ＣＤＲ１配列、当該ＶＨ ＣＤＲ２配列、及び当該ＶＨ ＣＤＲ３配列が、表Ａ、Ｂ、及びＤにあるいずれか１つのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３配列をそれぞれ含み、任意選択で、当該ＶＨ ＣＤＲ１配列、当該ＶＨ ＣＤＲ２配列、及び当該ＶＨ ＣＤＲ３配列が、表Ａ、Ｂ、及びＤにあるいずれか１つのモノクローナル抗体のＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、及びＶＨ ＣＤＲ３配列をそれぞれ含む、重鎖可変領域、及び／または（２）ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、及びＶＬ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、当該ＶＬ ＣＤＲ１配列、当該ＶＬ ＣＤＲ２配列、及び当該ＶＬＣＤＲ３配列が、表Ａ、Ｃ、及びＤにあるいずれか１つのＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列をそれぞれ含み、任意選択で、当該ＶＬ ＣＤＲ１配列、当該ＶＬ ＣＤＲ２配列、及び当該ＶＬ ＣＤＲ３配列が、表Ａ、Ｃ、及びＤにあるいずれか１つのモノクローナル抗体のＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、及びＶＬ ＣＤＲ３配列をそれぞれ含む、軽鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

【0017】

いくつかの実施形態において、ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、及びＶＨ ＣＤＲ３配列は、配列番号１、２、及び３のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、配列番号９、１０、及び１１のアミノ酸配列をそれぞれ含む。

【0018】

いくつかの実施形態において、ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、及びＶＨ ＣＤＲ３配列は、配列番号１７、１８、及び１９のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、配列番号２５、２６、及び２７のアミノ酸配列をそれぞれ含む。

【0019】

いくつかの実施形態において、ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、及びＶＨ ＣＤＲ３配列は、配列番号３３、３４、及び３５のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、配列番号４１、４２、及び４３のアミノ酸配列をそれぞれ含む。

【0020】

いくつかの実施形態において、ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、及びＶＨ ＣＤＲ３配列は、配列番号３３、４９、及び５１のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、配列番号５７、５８、及び５９のアミノ酸配列をそれぞれ含む。

【0021】

いくつかの実施形態において、ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、及びＶＨ ＣＤＲ３配列は、配列番号３３、４９、及び６５のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、配列番号５７、５８、及び５９のアミノ酸配列をそれぞれ含む。

【0022】

いくつかの実施形態において、ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、及びＶＨ ＣＤＲ３配列は、配列番号６９、７０、及び７１のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、配列番号７６、７７、及び７８のアミノ酸配列をそれぞれ含む。

【0023】

いくつかの実施形態において、ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、及びＶＨ ＣＤＲ３配列は、配列番号３３、４９、及び５１のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、配列番号１４９、１５０、及び１５１のアミノ酸配列をそれぞれ含む。

【0024】

いくつかの実施形態において、ＶＨ ＣＤＲ１配列、ＶＨ ＣＤＲ２配列、及びＶＨ ＣＤＲ３配列は、配列番号１１４、１１５、及び１１６のアミノ酸配列をそれぞれ含み、ＶＬ ＣＤＲ１配列、ＶＬ ＣＤＲ２配列、及びＶＬ ＣＤＲ３配列は、配列番号１２０、１２１、及び１２２のアミノ酸配列をそれぞれ含む。

【0025】

ある特定の実施形態において、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト抗体（例えば、ｈＩｇＧ１、ｈＩｇＧ２、ｈＩｇＧ３、またはｈＩｇＧ４）の定常領域配列を含むマウス－ヒトキメラ抗体であり、ＶＨ配列は、配列番号８、２４、４０、５６、６５、もしくは７５のいずれか１つであり、または配列番号８、２４、４０、５６、６５、もしくは７５のアミノ酸配列のいずれか１つに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、及び／またはＶＬ配列は、配列番号１６、３２、４８、６３、６８、もしくは８３のいずれか１つである、または配列番号１６、３２、４８、６３、６８、もしくは８３のアミノ酸配列のいずれか１つに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する。

【0026】

いくつかの実施形態において、ＶＨ配列は、配列番号８であるか、または配列番号８に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、ＶＬ配列は、配列番号１６であるか、または配列番号１６に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する。

【0027】

いくつかの実施形態において、ＶＨ配列は、配列番号２４であるか、または配列番号２４に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、ＶＬ配列は、配列番号３２であるか、または配列番号３２に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する。

【0028】

いくつかの実施形態において、ＶＨ配列は、配列番号４０であるか、または配列番号４０に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、ＶＬ配列は、配列番号４８であるか、または配列番号４８に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する。

【0029】

いくつかの実施形態において、ＶＨ配列は、配列番号５６であるか、または配列番号５６に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、ＶＬ配列は、配列番号６３であるか、または配列番号６３に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する。

【0030】

いくつかの実施形態において、ＶＨ配列は、配列番号６５であるか、または配列番号６５に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、ＶＬ配列は、配列番号６８であるか、または配列番号６８に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する。

【0031】

いくつかの実施形態において、ＶＨ配列は、配列番号７５であるか、または配列番号７５に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有し、ＶＬ配列は、配列番号８３であるか、または配列番号８３に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の配列同一性を有する。

【0032】

ある特定の実施形態において、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントはヒト化抗体であり、任意選択で、ヒト化抗体は、（１）表Ｂ、Ｄ、及びＥにあるいずれか１つのモノクローナル抗体のＶＨ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＨ配列；及び／または、表Ｃ、Ｄ、及びＥにあるいずれか１つのモノクローナル抗体のＶＬ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＬ配列；（２）配列番号９６のＶＨ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＨ配列、及び配列番号１１２のＶＬ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＬ配列；（３）配列番号１１３のＶＨ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＨ配列、及び配列番号１１２のＶＬ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＬ配列；（４）配列番号９６のＶＨ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＨ配列、及び配列番号１０１のＶＬ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＬ配列；（５）配列番号９６のＶＨ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＨ配列、及び配列番号１０９のＶＬ配列、もしくはそれに対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＶＬ配列を含む。

【0033】

いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、表Ｂ及びＤにあるいずれか１つの抗体のＶＨフレームワーク領域配列ＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、及びＶＨ ＦＲ４を含む。

【0034】

いくつかの実施形態において、ＶＨフレームワーク領域配列ＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、及びＶＨ ＦＲ４配列は、（ｉ）配列番号８４、８５、８６、及び８７とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）か、または同一であるアミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号８９、９０、９１、及び８７とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）か、または同一であるアミノ酸配列；（ｉｉｉ）配列番号９３、９４、９５、及び８７とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）か、または同一であるアミノ酸配列；（ｉｖ）配列番号１３２、８５、１３３、及び８７のものとそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）か、または同一であるアミノ酸配列；（ｖ）配列番号９３、１２６、１２７、及び８７のものとそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）か、または同一であるアミノ酸配列；（ｖｉ）配列番号１３２、１３３、１３４、及び８７のものとそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）か、または同一であるアミノ酸配列；（ｖｉｉ）配列番号１３８、９４、１３９及び８７のものとそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）か、または同一であるアミノ酸配列；（ｖｉｉｉ）配列番号１４１、１４２、１４３、及び８７のものと実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）か、または同一であるアミノ酸配列を含む。

【0035】

いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、表Ｃ及び表Ｄにあるいずれか１つの抗体のＶＬフレームワーク領域配列ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、及びＶＬ ＦＲ４を含む。

【0036】

いくつかの実施形態において、ＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、及びＶＬ ＦＲ４配列は、（ｉ）配列番号９７、９８、９９、及び１００とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）か、または同一であるアミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号９７、１０２、９９、及び１００とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）か、または同一であるアミノ酸配列；（ｉｉｉ）配列番号１０３、１０４、１０５、及び１００とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）か、または同一であるアミノ酸配列；（ｉｖ）配列番号１０３、１０７、１０８、及び１００とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）か、または同一であるアミノ酸配列；（ｖ）配列番号１３４、１３５、１３６、及び１３１のものとそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）か、または同一であるアミノ酸配列；（ｖｉ）配列番号１２８、１２９、１３０、及び１３１のものとそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）か、または同一であるアミノ酸配列；（ｖｉｉ）配列番号１４５、１４６、１４７、及び１３１とのものとそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）か、または同一であるアミノ酸配列；（ｖｉｉｉ）配列番号９７、９８、１５２、及び１００のものとそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）か、または同一である；あるいは（ｉｘ）配列番号１５４、１０２、９９、及び４７のものとそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）か、または同一であるアミノ酸配列を含む。

【0037】

いくつかの実施形態において、ＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、及びＶＨ ＦＲ４配列は、（ｉ）それぞれ配列番号９３、９４、９５、及び８７、（ｉｉ）それぞれ配列番号１３２、８５、１３３、及び８７、（ｉｉｉ）それぞれ配列番号９３、１２６、１２７、及び８７、もしくは（ｉｖ）それぞれ配列番号１３２、１３３、１３４、及び８７、及び／またはＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、及びＶＬ ＦＲ４配列は、（ｉ）それぞれ配列番号１３４、１３５、１３６、及び１３１、もしくは（ｉｉ）それぞれ配列番号１２８、１２９、１３０、及び１３１を含む。

【0038】

いくつかの実施形態において、ＶＨ配列は配列番号９６のアミノ酸配列を含み、ＶＬ配列は配列番号１１２のアミノ酸配列を含む、またはＶＨ配列は配列番号１１３のアミノ酸配列を含み、ＶＬ配列は配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。

【0039】

いくつかの実施形態において、ＶＨ配列は配列番号５６のアミノ酸配列を含み、ＶＬ配列は配列番号１１１のアミノ酸配列を含む。

【0040】

ある特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、脱フコシル化されており（例えば、Ｆｃ Ｎ－グリカン上にコアフコースが存在しないため、ＦｃγＲＩＩＩａに対するＩｇＧ１ Ｆｃ結合親和性の増加を示す）、配列番号１１４～１１６のＶＨ ＣＤＲ１～ＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ配列と、配列番号１２０～１２２のＶＬ ＣＤＲ１～ＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ配列とを含む。

【0041】

ある特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、脱フコシル化されており（例えば、Ｆｃ Ｎ－グリカン上にコアフコースが存在しないため、ＦｃγＲＩＩＩａに対するＩｇＧ１ Ｆｃ結合親和性の増加を示す）、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＶＨ配列と、配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＶＬ配列とを含む。

【0042】

ある特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、脱フコシル化されており（例えば、Ｆｃ Ｎ－グリカン上にコアフコースが存在しないため、ＦｃγＲＩＩＩａに対するＩｇＧ１ Ｆｃ結合親和性の増加を示す）、ＨＦＢ２－４ｈｚ４２ｈＧ１のＶＨ ＣＤＲ１～ＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨ配列と、ＨＦＢ２－４ｈｚ４２ｈＧ１のＶＬ ＣＤＲ１～ＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ配列とを含む。

【0043】

ある特定の実施形態において、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、脱フコシル化されており（例えば、Ｆｃ Ｎ－グリカン上にコアフコースが存在しないため、ＦｃγＲＩＩＩａに対するＩｇＧ１ Ｆｃ結合親和性の増加を示す）、ＨＦＢ２－４ｈｚ４２ｈＧ１のＶＨ配列のアミノ酸配列を含むＶＨ配列と、ＨＦＢ２－４ｈｚ４２ｈＧ１のＶＬ配列のアミノ酸配列を含むＶＬ配列とを含む。

【0044】

ある特定の実施形態において、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＤＣＣを増強するための修飾されたＦｃ領域を含む。

【0045】

ある特定の実施形態において、修飾されたＦｃ領域は、（１）ＦｃγＲＩＩＩａ結合を増強するためのＦ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ変異；（２）ＦｃγＲＩＩＩａ結合を増強するためのＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ変異；（３）ＦｃγＲＩＩＩａ結合の増強及びＦｃγＲＩＩＩｂ結合の減少を同時に行うためのＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ変異；（４）ＦｃγＲＩＩＩａ結合を増強するためのＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ変異；及び／または（５）ＦｃγＲＩＩＩａ結合を増強するためのＦｃ領域の脱フコシル化Ｎ２９７を含む。

【0046】

ある特定の実施形態において、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ_ｄ、単鎖ＦｖまたはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆ_ｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ_２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ_２、（ｓｃＦｖ）_２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである。

【0047】

ある特定の実施形態において、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＤＣＣ活性に関し低い（例えば、１～５または１～２）ｐＭ範囲のＥＣ５０値を有する。

【0048】

ある特定の実施形態において、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、表面ｈＣＸＣＲ５を発現する初代Ｂ細胞、及び／または表面ｈＣＸＣＲ５を発現する初代Ｔ細胞に対しＡＤＣＣ活性を有する。

【0049】

ある特定の実施形態において、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｈＣＸＣＲ５表面抗原を内在化しない（または、最小限の内在化にとどまる）。

【0050】

ある特定の実施形態において、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｃＡＭＰシグナル伝達を阻害する（例えば、１ｎＭ未満のＥＣ５０）。

【0051】

ある特定の実施形態において、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、走化性を阻害する（例えば、約０．１～０．５ｎＭ、または約０．１ｎＭで約１００％阻害）。

【0052】

ある特定の実施形態において、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｈＣＸＣＬ１３誘導性Ｂ細胞移動を阻害する。

【0053】

ある特定の実施形態において、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｈＣＸＣＲ３と実質的に交差反応しない。

【0054】

ある特定の実施形態において、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、接着細胞株（例えば、ＤＸ００２など）及び／または浮遊細胞株（例えば、Ｍ３００－１９）に発現するｈＣＸＣＲ５に結合する。

【0055】

ある特定の実施形態において、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｈＣＸＣＲ５のサルまたはマウスのオルソログと交差反応しないか、または最小限の交差反応にとどまる。

【0056】

ある特定の実施形態において、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、対象におけるメモリーＢ細胞集団のパーセンテージを低減する。

【0057】

ある特定の実施形態において、本発明の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、約２５ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、２ｎＭ未満、または１ｎＭ未満、またはそれ以下のＫ_ｄでｈＣＸＣＲ５に結合する。

【0058】

本発明の別の態様は、先行実施形態のいずれかの単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントと同じエピトープとの結合が競合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

【0059】

本発明の別の態様は、シェーグレン症候群（ＳＳ）の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、本発明の抗体（例えば、本発明のヒト化抗体）の治療有効量を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0060】

ある特定の実施形態において、この方法はＳＳの少なくとも１つの症状を軽減する。

【0061】

本発明の別の態様は、リンパ腫または白血病の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、本発明の抗体（例えば、本発明のヒト化抗体）の治療有効量を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0062】

ある特定の実施形態において、リンパ腫または白血病はＢ細胞リンパ腫である。

【0063】

ある特定の実施形態において、Ｂ細胞リンパ腫はＣＬＬ（Ｂ細胞慢性リンパ性白血病）である。

【0064】

ある特定の実施形態において、リンパ腫または白血病は非ホジキンリンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫）である。

【0065】

本発明の別の態様は、異所性胚中心を伴う疾患または適応症（自己免疫性疾患または障害を含む）の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、本発明の抗体（例えば、本発明のヒト化抗体）の治療有効量を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0066】

ある特定の実施形態において、疾患または適応症は、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症（ＭＳ）、サルコイドーシス、乾癬、重症筋無力症、橋本病、グレーブ病、動脈硬化症、結膜炎、胃炎、肝炎、または皮膚炎である。

【0067】

本発明の別の態様は、固形癌の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、本発明の抗体（例えば、本発明のヒト化抗体）の治療有効量を対象に投与することを含み、固形癌が、任意選択で胃癌、乳癌、腸癌、肺癌、または前立腺癌である、方法を提供する。

【0068】

ある特定の実施形態において、リンパ腫もしくは白血病を治療する方法、及び／または固形癌を治療する方法はさらに、化学療法剤、抗血管新生剤、成長阻害剤、がん免疫薬剤、及び／または抗新生物組成物を患者に投与することを含む。

【0069】

本発明の別の態様は、本発明の重鎖もしくは軽鎖またはこれらの抗原結合部分をコードするポリヌクレオチドを提供する。

【0070】

ある特定の実施形態において、ポリヌクレオチドはヒト細胞内での発現にコドン最適化されている。

【0071】

本発明の別の態様は、本発明のポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。

【0072】

ある特定の実施形態において、ベクターは、発現ベクター（例えば、哺乳類発現ベクター、酵母発現ベクター、昆虫発現ベクター、または細菌発現ベクター）である。

【0073】

本発明の任意の１つの実施形態（実施例または特許請求の範囲にのみ記載された実施形態を含む）は、明示的に否定されない限り、または不適切でない限り、本発明の任意の１つ以上の追加の実施形態と組み合わせることができることを理解されたい。

【図面の簡単な説明】

【0074】

【図1】ヒトＣＸＣＲ５及びその最も近いパラログＣＸＣＲ３の配列アラインメントを示しており、配列同一性は３８．５％、配列類似性は５１．５％と低い。

【図2】Ａ及びＢは、様々な同定されたマウス抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体のＶＨ（Ａ）及びＶＬ（Ｂ）領域のＩＭＧＴ配列アラインメントを示している。ＶＨ及びＶＬ配列のＣＤＲ１～ＣＤＲ３が強調表示されている。全ての抗体は、異なるＶＤＪ組換え事象（異なるファミリー）から得られる。ＨＦＢ２－３は、ＶＨ４及びＶＨ５に類似するＶＨ配列を有するが、ＣＤＲ３はより多様であり、そのため固有の特性を付与する。ＨＦＢ２－４及びＨＦＢ２－５は、ＣＤＲ３領域配列内の１アミノ酸（ａ．ａ）が異なる。

【図3】キメラ抗ＣＸＣＲ５マウスモノクローナル抗体ＨＦＢ２－４ｈＧ１の野生型マウスにおける薬物動態（ＰＫ）プロファイルを示している。

【図4】Ａ及びＢは、マウスモノクローナル抗体ＨＦＢ２－４に基づき、それぞれ３つのヒト化ＶＨ領域及び４つのヒト化ＶＬ領域のＩＭＧＴ配列アラインメントを示している。

【図5】本発明のいくつかのキメラモノクローナル抗体における、接着細胞株に発現したｈＣＸＣＲ５抗原に対するｎＭ以下のＥＣ５０結合能力を示している。

【図6A】本発明のキメラ抗体が、抗体交差反応性評価に基づいて、一過性に形質移入された細胞に発現したカニクイザル及びネズミのＣＸＣＲ５に対し本質的に交差反応性を有しないことを示している。

【図6B】本発明のキメラ抗体が、ｈＣＸＣＲ５の最も近いオルソログｈＣＸＣＲ３に結合しないことを示している。

【図7】本発明の抗ＣＸＣＲ５抗体が、リガンド（ＣＸＣＬ１３）誘導性Ｂ細胞移動を効率的に阻害したことを示している。

【図8】ある特定の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体が細胞内ｃＡＭＰシグナル伝達に及ぼす効果を示している。このデータは、２つのキメラ抗体が、リガンド（ＣＸＣＬ１３）の活性化に対するｃＡＭＰシグナル伝達を効率的に遮断することを示した。

【図9A】本発明の６つのキメラモノクローナル抗体に対するＡＤＣＣレポーターバイオアッセイの結果を示している。このデータは、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体が、ＣＤ１６の係合を通じてＡＤＣＣを誘発し得ることを示しており、ＨＦＢ２－４が最も強力なＣＤ１６結合を示している。

【図9B】ＨＦＢ２－４ｈＧ１抗体及びＨＦＢ２－４ｈＧ１ＤＥ抗体を用いたＡＤＣＣレポーターバイオアッセイを示している。抗ＣＤ２０ ＩｇＧ１（陽性対照）及びアイソタイプが一致した陰性対照ＩｇＧ１抗体もアッセイに含めた。代表的なＥＣ５０値（必ずしもグラフ内の値と一致するわけではない）をグラフの下の表に示す。

【図9C】初代ＮＫ細胞によるＲａｊｉ細胞のＨＦＢ２－４ｈＧ１ＤＥ媒介性ＡＤＣＣ溶解を、陽性対照リツキシマブ及びアイソタイプ対照（ＭＧＯ５３－ｈＧ１ＤＥ）と比較して示している。

【図9D】初代ＮＫ細胞による初代Ｂ細胞のＨＦＢ２－４ｈＧ１ＤＥ媒介性ＡＤＣＣ溶解を、陽性対照リツキシマブ及びアイソタイプ対照（ＭＧＯ５３－ｈＧ１ＤＥ）と比較して示している。

【図9E】ＨＦＢ２－４ｈＧ１ＤＥによって誘導された初代ＮＫ細胞による初代Ｔ細胞のＡＤＣＣ媒介性溶解を、アイソタイプ対照（ＭＧＯ５３－ｈＧ１ＤＥ）及び抗体なし（ＣＤ４^＋細胞＋ＮＫ）と比較して示している。図９Ｆも参照。

【図9F】脱フコシル化抗体ＡｆｕＨＦＢ２－４ｈＧ１によって誘導された初代ＮＫ細胞による初代Ｔ細胞のＡＤＣＣ媒介性溶解を、５：１のＥ：Ｔ比において、リツキシマブ（ｈＧ１）、アイソタイプ対照（ＭＧＯ５３－ｈＧ１）、抗体なし（ＣＤ４^＋細胞＋ＮＫ）と比較したものである。リツキシマブは、全てのＢ細胞の表面に発現するＣＤ２０を標的とするため、リツキシマブは、ＣＤ２０を発現しないＴ細胞を標的としないことが予想される。

【図9G】原発性シェーグレン症候群（ＳＳ）患者のＢ細胞を標的細胞として、ＨＦＢ２－４ｈＧ１ＤＥ、ｈＧ１形式のリツキシマブ（陽性対照）、及び３：１のＥ：Ｔ比のＤＥアイソタイプ対照を用いたＡＤＣＣレポーターアッセイの結果を示している。上のグラフ：ＡＤＣＣレポーターアッセイの発光リードアウト（ＲＬＵ）。下のグラフ：誘導の倍数（ＲＬＵ（抗体あり－バックグラウンド）／ＲＬＵ（細胞のみ－バックグラウンド）として計算）。下のグラフにおいて、左のバー：ＨＦＢ２－４ｈＧ１ＤＥ、中央のバー：陽性対照、右のバー：アイソタイプ対照。

【図9H】リンパ増殖性ｐＳＳ患者のＢ細胞を標的細胞として、ＨＦＢ２－４ｈＧ１ＤＥ、ｈＧ１形式のリツキシマブ（陽性対照）、及び３：１のＥ：Ｔ比のＤＥアイソタイプ対照を用いたＡＤＣＣレポーターアッセイの結果を示している。下のグラフ：誘導の倍数（ＲＬＵ（抗体あり－バックグラウンド）／ＲＬＵ（細胞のみ－バックグラウンド）として計算）。下のグラフにおいて、左のバー：ＨＦＢ２－４ｈＧ１ＤＥ、中央のバー：陽性対照、右のバー：アイソタイプ対照。

【図10A】２つの異なるプロトコルによる抗体内在化の測定を示している。その結果、陽性対照（ＣＤ７１）抗体と比較して、ＨＦＢ２－４ｈｚ９－ｈＧ１ＤＥ及びＨＦＢ２－４ｈｚ１２－ｈＧ１ＤＥ（いずれもＨＦＢ２－４キメラ抗体に基づくヒト化抗体）がいずれも内在化しないことが示された。

【図10B】２つの異なるプロトコルによる抗体内在化の測定を示している。その結果、陽性対照（ＣＤ７１）抗体と比較して、ＨＦＢ２－４ｈｚ９－ｈＧ１ＤＥ及びＨＦＢ２－４ｈｚ１２－ｈＧ１ＤＥ（いずれもＨＦＢ２－４キメラ抗体に基づくヒト化抗体）がいずれも内在化しないことが示された。

【図11A】選択したヒト化バリアント抗体を用いたＡＤＣＣレポーターバイオアッセイの結果を示している。

【図11B】選択したヒト化バリアント抗体を用いたＡＤＣＣレポーターバイオアッセイの結果を示している。

【図12】選択されたヒト化バリアントによる走化性阻害を示している。

【図13】初代Ｂ細胞を用いたＡＤＣＣレポーターバイオアッセイを示している。

【図14】異なるがん細胞株に対する標的結合を示している。

【図15】Ｂ細胞リンパ腫細胞株に対するＡＤＣＣレポーターアッセイを示している。

【図16】ＨＦＢ２－４－ｈＧ１の抗腫瘍ｉｎ ｖｉｖｏ有効性試験の結果を示している。ＨＦＢ２－４ｈＧ１及び陽性対照の両方が、対照（ＰＢＳまたはアイソタイプが一致したＭＧＯ５３－ｈＧ１抗体）と比較して統計的に有意であった（ｐ＜０．００００１＊＊＊＊）。

【図17】主題抗体のシェーグレン患者Ｂ細胞に対するＡＤＣＣ活性を示している。

【図18】主題抗体によるｐＳＳ患者試料中のメモリーＢ細胞集団のパーセンテージの低減を示している。

【図19A】ＨＦＢ２－４ｈＧ１のさらなるヒト化バリアント（ＨＦＢ２－４ｈｚ－ｈＧ１）とＲａｊｉ細胞との結合を示している。矢印は、上位の結合プロファイルを有するヒト化バリアントを示している。

【図19B】ＨＦＢ２－４ｈＧ１のさらなるヒト化バリアント（ＨＦＢ２－４ｈｚ－ｈＧ１）とＲａｊｉ細胞との結合を示している。

【図20】上位９種のヒト化ＨＦＢ２－４ｈｚ－ｈＧ１バリアントの薬物動態プロファイルを示している。

【図21】上位６種のＨＦＢ２－４ｈｚ－ｈＧ１バリアントとＣＸＣＲ５＋Ｒａｊｉ細胞との結合（左パネル）、及びレポーター系においてＣＤ１６に係合するＡＤＣＣ活性を示している。

【図22】ＣＸＣＲ５を発現する接着性ＤＸ００２細胞に対するｈＧ１ＤＥ形式におけるＨＦＢ２－４ｈｚバリアントの結合を示している。

【図23】上位４種のヒト化ＨＦＢ２－４ｈｚの薬物動態プロファイルを、親ｈＧ１形式（左パネル）及びｈＧ１ＤＥ形式（右パネル）で示している。

【図24A】脱フコシル化ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１（ａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１）、脱フコシル化親ＨＦＢ２－４ｈＧ１（ａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈＧ１）、脱フコシル化ベンチマークｈＧ１抗体、及びアイソタイプ対照（ＭＧＯ５３－ｈＧ１）と、ＣＸＣＲ５を発現するＤＸ００２細胞との結合を示している。

【図24B】ａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１、ａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈＧ１、脱フコシル化ベンチマークｈＧ１抗体、及びアイソタイプ対照（ＭＧＯ５３－ｈＧ１）のＡＤＣＣレポーターアッセイによって定量されたＣＤ１６係合を示している。

【図25】脱フコシル化ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１（ａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１）を介した初代ＮＫ細胞による健康ドナー由来の初代Ｂ細胞のＡＤＣＣ媒介性溶解を、ベンチマーク抗体及びアイソタイプ対照抗体（ＭＧＯ５３－ｈＧ１）と比較して示している。

【図26】脱フコシル化ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１（ａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１）を介した初代ＮＫ細胞によるＳＳ患者由来のＢ細胞のＡＤＣＣ媒介性溶解を、ベンチマーク抗体及びアイソタイプ対照抗体（ＭＧＯ５３－ｈＧ１）と比較して示している。

【図27】脱フコシル化ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１（ａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１）、脱フコシル化親ＨＦＢ２－４ｈＧ１（ａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈＧ１）、ｈＧ１形式のリツキシマブ（陽性対照）、及びアイソタイプ対照ＭＧＯ５３－ｈＧ１の補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）活性の試験結果を示している。血清を使用して補体系を準備した。Ｂでは、２つの異なる血清を試験した。

【図28A】野生型マウス（ｎ＝１）における脱フコシル化ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１（ａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１）、脱フコシル化親ＨＦＢ２－４ｈＧ１（ａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈＧ１）、及びベンチマーク抗体の薬物動態プロファイルを示している。

【図28B】１頭の雄及び２頭の雌のカニクイザルにおける脱フコシル化ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１（ａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１）の薬物動態プロファイルを示している。

【発明を実施するための形態】

【0075】

１．概要
本明細書に記載の発明によれば、複数の免疫化戦略を用いてマウスを組換えヒトＣＸＣＲ５で免疫した。出願人独自の単一細胞に基づく抗体スクリーニング技術と組み合わせることにより、３つの独立したスクリーニングから６種の高親和性抗ＣＸＣＲ５マウスモノクローナル抗体ＨＦＢ２－１～ＨＢＦ２－６が特定された。

【0076】

これらの抗体に対し、所望される機能的特徴（特異性（例えば、ｈＣＸＣＲ３に対する交差反応性がほとんどない）、細胞株（例えば、ＤＸ００２などの接着細胞株及びＭ３００－１９などの浮遊細胞株）に発現するＣＸＣＲ５に対する結合親和性、交差反応性（例えば、ｈＣＸＣＲ５のカニクイザルまたはマウスオルソログ）、Ｂ細胞移動（走化性）に及ぼす効果、細胞内ｃＡＭＰレベルに及ぼす効果、ＡＤＣＣレポーターアッセイ、ＣＸＣＲ５発現安定性細胞株を用いた内在化アッセイ、ならびにマウスにおけるＰＫプロファイルなどを含む）をさらに試験した。

【0077】

例えば、ＦＡＣＳ（フローサイトメトリー）分析により、１つのリード候補抗体を除く全てが、ｈＣＸＣＲ５発現ＣＨＯ細胞に対しｎＭ以下のＥＣ５０値を示し、いずれのリード抗体もカニクイザルまたはマウスＣＸＣＲ５オルソログと交差反応しないことが示された。さらに、いずれのリード抗体もｈＣＸＣＲ３パラログに結合せず、それらの特異性が確認された。また、リード抗体はさらに、ｈＣＸＣＬ１３を効率的に遮断してＢ細胞移動を誘導し、ＨＦＢ２－４キメラ抗体が最も効率的に走化性を阻害した。ＨＦＢ２－４及びＨＦＢ２－５は、ｈＣＸＣＬ１３誘導性ｃＡＭＰシグナル伝達を効率的に遮断し、ベンチマーク抗体よりも優れていた。ＡＤＣＣレポーターアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）から、抗ｈＣＸＣＲ５ ｍＡｂ（特にＨＦＢ２－４）がＣＤ１６に係合することが示された。

【0078】

これらの試験に基づき、６種の１桁ナノモル親和性抗体のうち、ＨＦＢ２－４を、機能的アッセイで最も高い効力及び最大の効果を有するものとして選択し、さらに野生型マウスにおいてそのＰＫプロファイルを解析した。その結果、ＨＦＢ２－４がマウスにおいて良好なＰＫプロファイルを示すことが示された。

【0079】

腫瘍のマウスＲａｊｉモデルでＨＦＢ２－４の抗腫瘍有効性を試験した予備的結果からも、陽性対照としてのリツキシマブを用いた場合と同等の有望な抗腫瘍効果が示された。

【0080】

ＨＦＢ２－４を、その全体的に優れた生物学的プロファイルに基づき、さらなる試験とヒト化のためのリード抗体として選択した。

【0081】

３つのＶＨ及び４つのＶＬ領域のＣＤＲ配列を組み合わせる（ＶＨ１をＶＬ１～ＶＬ４の各々と、ＶＨ２をＶＬ１～ＶＬ４の各々と、ＶＨ３をＶＬ１～ＶＬ４の各々と）ことにより、少なくとも１２種のヒト化バリアント（全てＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ変異を有する）を生成し、特性評価し、さらなる１３種のバリアントをさらに合成した。注目すべきことに、全てのヒト化（Ｈｚ）バリアントは、ＩＭＧＴシステムに従うヒト生殖系列配列の第１の一致を有する。これらのヒト化バリアントの大部分は、物理化学的活性（標的に対する親和性、安定性、溶解性など）及び／または生物学的活性（標的の遮断もしくは刺激、ＡＤＣＣなど）を維持していた。

【0082】

これらのヒト化バリアント抗体に対し、所望される機能的特徴（特異性（例えば、ｈＣＸＣＲ３に対する交差反応性がほとんどない）、細胞株（例えば、ＤＸ００２などの接着細胞株及びＭ３００－１９などの浮遊細胞株）に発現するＣＸＣＲ５に対する結合親和性、交差反応性（例えば、ｈＣＸＣＲ５のカニクイザルまたはマウスオルソログ）、Ｂ細胞移動（走化性）に及ぼす効果、細胞内ｃＡＭＰレベルに及ぼす効果、
ＣＸＣＲ５発現安定性細胞株を用いた内在化アッセイ、抗体開発可能性評価（例えば、ＳＥＣ及びＳＤＳ－ＰＡＧＥ解析）、ＡＤＣＣレポーターアッセイ、ならびにマウスにおけるＰＫプロファイルなどを含む）をさらに試験した。

【0083】

その結果、１２種のＨＦＢ２－４ｈｚバリアントのうちの１０種が親抗体ＨＦＢ２－４と同等のｈＣＸＣＲ５への結合を示し、１２種のＨＦＢ２－４ｈｚバリアントのうち９種によるｃＡＭＰシグナル伝達の遮断、Ｈｚバリアントによる強力な走化性阻害作用（ＨＦＢ２－４ｈｚ１２が最も強力（０．１ｎＭで約１００％））、ＨＦＢ２－４ｈｚ９における同等の効果、及びｈＣＸＣＬ１３誘導性Ｂ細胞移動の効率的遮断が示された。

【0084】

全体的な優れた生物学的プロファイルに基づき、ＨＦＢ２－４ｈｚ１２をＡＤＣＣ試験のリード候補として選択した。その結果、ＨＦＢ２－４ｈｚ１２ｈＧ１ＤＥ及びＨＦＢ２－４ｈｚ９ｈＧ１ＤＥは、低いｐＭ範囲（１～２ｐＭ）のＥＣ５０に達する強力なＡＤＣＣ活性を有することが示された。データからはさらに、ヒト化プロセスが候補抗体（例えば、ＨＦＢ２－４ＤＥ抗体）の高いＡＤＣＣ効力を変更しないことが示された。さらに、ＨＦＢ２－４ｈｚ１２ｈＧ１ＤＥは、ｈＣＸＣＲ５を発現する初代Ｂ細胞に対するＡＤＣＣ活性を示した。

【0085】

内在化試験からは、ＨＦＢ２－４ｈｚ１２－ｈＧ１ＤＥ及びＨＦＢ２－４ｈｚ９－ｈＧ１ＤＥ ＨｚバリアントがｈＣＸＣＲ５表面抗原を内在化しない（または最小限の内在化にとどまる）ことが示された。

【0086】

ＰＫプロファイリングからは、ＨＦＢ２－４ｈｚ１２－ｈＧ１ＤＥの血漿中の半減期が親抗体ＨＦＢ２－４ｈＧ１（１０９時間）よりも短い（４．５時間）ことが示された。

【0087】

また、選択されたＨｚ抗体（ＨＦＢ２－４ｈｚ２ｈＧ１、ＨＦＢ２－４ｈｚ９ｈＧ１ＤＥ、ＨＦＢ２－４ｈｚ１０ｈＧ１ＤＥ、ＨＦＢ２－４ｈｚ１１ｈＧ１ＤＥ、及びＨＦＢ２－４ｈｚ１２ｈＧ１ＤＥを含む）に対し、複数の開発可能性アッセイ（２５℃及び４０℃における最大１４日間の加速安定性試験、２５℃、ｐＨ３．５の１００ｍＭアセテート中での最大６時間の強制分解試験、及びｐＨ７．４のＰＢＳ中での最大３回の凍結解凍サイクル（全て２ｍｇ／ｍＬ抗体濃度）を含む）も試験した。その結果、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルにより、ＨＦＢ２－４ｈｚ１２ｈＧ１ＤＥが最も安定したプロファイルを有することが示された。全体的に見て、ＨＦＢ２－４ｈｚ９ｈＧ１ＤＥ及びＨＦＢ２－４ｈｚ１２ｈＧ１ＤＥは、試験抗体の中で最も好ましいプロファイルを示し、これに基づきさらなるＨｚバリアントを生成するためにこれらを選択した。

【0088】

さらなる多数の第２ラウンドヒト化抗体を生成し、選択した。このような第２ラウンドヒト化（Ｈｚ）バリアントを以下の表に列挙する。試験した全てのこのようなヒト化バリアントは、ｎＭ以下のＥＣ５０値でｈＣＸＣＲ５に結合する。全てのこのようなＨｚバリアントは、ｎＭ以下のＥＣ５０でｈＣＸＣＲ５に結合する。同等の結合特性（ｈＣＸＣＲ５に対する結合親和性及びＡＤＣＣを誘導するＣＤ１６の係合を含む）が親抗体及びヒト化バリアント抗体に見出された。

【表1】

【0089】

これらの二次Ｈｚバリアントのうち、ＨＦＢ２－４ｈｚ１４－ｈＧ１ＤＥ及びＨＦＢ２－４ｈｚ１５－ｈＧ１ＤＥをさらなる開発可能性評価のために選択された（上述のアッセイを参照）。その結果、Ｈｚ１４及びＨｚ１５ ＤＥバリアントは、２０ｍＭアセテート、ｐＨ６．０で製剤化すると、２５℃及び４０℃で不安定性を示さないことが示された。さらに、凍結解凍サイクル及び低ｐＨストレス処理（ｐＨ３．５～６時間）の後も安定性は概して保持される。全体的に見て、ＨＦＢ２－４のヒト化バリアント（ＨＦＢ２－４ｈｚ９－ｈＧ１ＤＥ、ＨＦＢ２－４ｈｚ１２－ｈＧ１ＤＥ、ＨＦＢ２－４ｈｚ１４－ｈＧ１ＤＥ、及びＨＦＢ２－４ｈｚ１５－ｈＧ１ＤＥを含む）は全て、良好な開発可能性プロファイルを示している。これらのリード候補の１つであるＨＦＢ２－４ｈｚ１２－ｈＧ１ＤＥをさらなる開発のために選択した。

【0090】

ＨＦＢ２－４に基づくさらなるヒト化バリアントを、ＨＦＢ２－４ｈＧ１（ＨＦＢ２－４ｈｚ－ｈＧ１）（ＨＦＢ２－４ｈｚ３７－ｈＧ１及びＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１を含む）に基づいて生成した。実施例５及び特に表４を参照。

【0091】

したがって、本明細書に記載の発明は、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、当該モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＣＸＣＲ５（ｈＣＸＣＲ５）に特異的であり、当該モノクローナル抗体は、（１）ＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、ＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及びＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）であって、図２Ａにあるモノクローナル抗体（例えば、ＨＦＢ２－１、ＨＦＢ２－２、ＨＦＢ２－３、ＨＦＢ２－４、ＨＦＢ２－５、及びＨＦＢ２－６）のいずれか１つのＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、及びＣＤＲ３配列をそれぞれ含む、重鎖可変領域と、（２）ＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、ＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及びＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）であって、図２Ｂにあるモノクローナル抗体（例えば、ＨＦＢ２－１、ＨＦＢ２－２、ＨＦＢ２－３、ＨＦＢ２－４、ＨＦＢ２－５、及びＨＦＢ２－６）のいずれか１つのＬＣＶＲ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３配列をそれぞれ含む、軽鎖可変領域とを含む。

【0092】

ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、（１）図２ＡにあるＨＦＢ２－４のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、ＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及びＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列と、（２）図２ＢにあるＨＦＢ２－４の（対応する）ＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、ＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及びＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列とを含む。

【0093】

ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、ヒト抗体（例えば、ｈＩｇＧ１またはｈＩｇＧ２）の定常領域配列と、図２Ａにあるモノクローナル抗体（例えば、ＨＦＢ２－１、ＨＦＢ２－２、ＨＦＢ２－３、ＨＦＢ２－４、ＨＦＢ２－５、及びＨＦＢ２－６）のいずれか１つのＨＣＶＲ配列のＨＣＶＲと、図２Ｂにあるモノクローナル抗体（例えば、ＨＦＢ２－１、ＨＦＢ２－２、ＨＦＢ２－３、ＨＦＢ２－４、ＨＦＢ２－５、及びＨＦＢ２－６）のいずれか１つの（対応する）ＬＣＶＲ配列のＬＣＶＲとを含む、マウス－ヒトキメラ抗体である。

【0094】

ある特定の実施形態において、マウス－ヒトキメラ抗体は、図２ＡにあるＨＦＢ２－４のＨＣＶＲ配列と、図２ＢにあるＨＦＢ２－４のＬＣＶＲ配列とを含む。

【0095】

ある特定の実施形態において、本発明の抗体はヒト化抗体である。

【0096】

ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、（１）図４Ａにあるモノクローナル抗体のＨＣＶＲ ＣＤＲ１配列、ＨＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及びＨＣＶＲ ＣＤＲ３配列と、（２）図４Ｂにあるモノクローナル抗体のＬＣＶＲ ＣＤＲ１配列、ＬＣＶＲ ＣＤＲ２配列、及びＬＣＶＲ ＣＤＲ３配列とを含む。

【0097】

ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、（１）図４ＡにあるＶＨ１、ＶＨ２、及びＶＨ３配列のいずれか１つのＨＣＶＲ配列のフレームワーク領域配列、及び／または（２）図４ＢにあるＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３、及びＶＬ４配列のいずれか１つのＬＣＶＲ配列のフレームワーク領域配列を含む。

【0098】

ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、（１）図４ＡにあるＶＨ３のフレームワーク領域配列、及び／または（２）図４ＢにあるＶＬ１のフレームワーク領域配列を含む。

【0099】

ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、（１）図４ＡにあるＶＨ３のフレームワーク領域配列、及び／または（２）図４ＢにあるＶＬ４のフレームワーク領域配列を含む。

【0100】

ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＡＤＣＣを増強するための修飾されたＦｃ領域を有する。例えば、ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａ結合を増強するためのＦ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ変異を含む。ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａ結合を増強するためのＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ変異を含む（本明細書におけるｈＩｇＧ１－ＤＥ）。ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａ結合の増強及びＦｃγＲＩＩＩｂ結合の減少を同時に行うためのＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ変異を含む。ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａ結合を増強するためのＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ変異を含む。

【0101】

ある特定の実施形態において、本発明の抗体はヒト化マウスモノクローナル抗体であり、任意選択で、この抗体はＦｃγＲＩＩＩａ結合を増強するためのＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ変異を含む（ｈＩｇＧ１－ＤＥ）。例えば、ヒト化モノクローナル抗体は、マウスモノクローナル抗体のＣＤＲ領域をヒトフレームワーク領域にＣＤＲ移植することにより、生成することができる。

【0102】

ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＡＤＣＣ活性に関し低い（例えば、１～５または１～２）ｐＭ範囲のＥＣ５０値を有する。

【0103】

ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、表面ｈＣＸＣＲ５を発現する初代Ｂ細胞に対するＡＤＣＣ活性を有する。

【0104】

ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、ｈＣＸＣＲ５表面抗原を内在化しない（または最小限の内在化にとどまる）。

【0105】

ある特定の実施形態において、本発明の抗体はｃＡＭＰシグナル伝達を阻害する。

【0106】

ある特定の実施形態において、本発明の抗体は走化性を阻害する（例えば、約０．１～０．５ｎＭ、または約０．１ｎＭで約１００％阻害）。

【0107】

ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、ｈＣＸＣＬ１３誘導性Ｂ細胞移動を阻害する。

【0108】

ある特定の実施形態において、本発明の抗体はｈＣＸＣＲ５に特異的であり、例えば、ｈＣＸＣＲ３に対し交差反応性を全くまたはほとんど有しない。

【0109】

ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、接着細胞株（ＤＸ００２）及び／または浮遊細胞株（Ｍ３００－１９）に発現するｈＣＸＣＲ５に結合する。

【0110】

ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、ｈＣＸＣＲ５のサルまたはマウスのオルソログと交差反応しないか、または最小限に交差反応する。

【0111】

ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、対象におけるメモリーＢ細胞集団のパーセンテージを低減する。

【0112】

本発明の別の態様は、シェーグレン症候群（ＳＳ）の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、本発明の抗体（例えば、本発明のヒト化抗体）の治療有効量を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0113】

シェーグレン症候群患者の約２５％は、唾液腺にＣＸＣＲ５^＋細胞の高い浸潤を伴う異所性胚中心（ＧＣ）を示し、ＳＳ患者におけるＧＣは、ＣＸＣＬ１３生成Ｔｆｈ細胞に富み、抗体生成細胞内にＣＸＣＲ５^＋Ｂ細胞を動員し分化させる。ＣＸＣＬ１３レベルは、ＳＳモデルマウス及びヒトの疾患において上昇することが分かっている。さらに、ＣＸＣＬ１３の中和は、シェーグレン病の動物モデルにおいて保護的であることが分かっている。

【0114】

ある特定の実施形態において、この方法はＳＳの少なくとも１つの症状を軽減する。

【0115】

本発明の別の態様は、リンパ腫または白血病の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、本発明の抗体（例えば、本発明のヒト化抗体）の治療有効量を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0116】

ある特定の実施形態において、リンパ腫または白血病はＢ細胞リンパ腫である。

【0117】

ある特定の実施形態において、Ｂ細胞リンパ腫はＣＬＬ（Ｂ細胞慢性リンパ性白血病）である。

【0118】

ある特定の実施形態において、リンパ腫または白血病は非ホジキンリンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫）である。

【0119】

本発明の別の態様は、異所性胚中心を伴う疾患または適応症（自己免疫性疾患または障害を含む）の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、本発明の抗体（例えば、本発明のヒト化抗体）の治療有効量を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0120】

ある特定の実施形態において、疾患または適応症は、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、セリアック病、クローン病、潰瘍性大腸炎、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症（ＭＳ）、サルコイドーシス、乾癬、重症筋無力症、橋本病、グレーブ病、動脈硬化症、結膜炎、胃炎、肝炎、または皮膚炎である。

【0121】

本発明の別の態様は、固形癌の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、本発明の抗体（例えば、本発明のヒト化抗体）の治療有効量を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0122】

ある特定の実施形態において、固形癌は、胃癌、乳癌、腸癌、肺癌、または前立腺癌である。

【0123】

本発明の詳細な態様について、以下の各セクションでさらに個別に説明する。ただし、本発明の任意の１つの実施形態（実施例または図面でのみ説明される実施形態、及び以下の１つのセクションでのみ説明される実施形態を含む）が、本発明の任意の他の実施形態（複数可）と組み合わされてもよいことを理解されたい。

【0124】

２．定義
「抗体」という用語は、最も広い意味では、限定されるものではないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、及び多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）を含む様々な抗体構造を包含する。「抗体」という用語は、重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ならびに軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む分子も広く指すことがあり、この分子は抗原に結合可能である。また、「抗体」という用語には、限定されるものではないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、様々な種（例えば、マウス、ヒト、カニクイザルなど）の抗体も含まれる。

【0125】

ただし、狭義には、「抗体」とは、キメラモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、及びヒトモノクローナル抗体を含む様々なモノクローナル抗体、特に本発明のヒト化モノクローナル抗体を指す。

【0126】

いくつかの実施形態において、抗体は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも１つの重鎖（ＨＣ）と、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも１つの軽鎖（ＬＣ）とを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、２つの重鎖であって、各重鎖が、重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部を含む、２つの重鎖と、２つの軽鎖であって、各軽鎖が、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む、２つの軽鎖とを含む。

【0127】

本明細書で使用する場合、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、または、例えば、６つ全てのＣＤＲ（３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲ）を含む単一のポリペプチド鎖を含む任意の他の抗体は、重鎖及び軽鎖を有するとみなされる。いくつかのこのような実施形態において、重鎖は、３つの重鎖ＣＤＲを含む抗体の領域であり、軽鎖は、３つの軽鎖ＣＤＲを含む抗体の領域である。

【0128】

本明細書で使用する場合、「重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）」という用語は、少なくとも、重鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｈ１）、フレームワーク２（ＨＦＲ２）、ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｈ２）、ＦＲ３（ＨＦＲ３）、及びＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む領域を指す。いくつかの実施形態において、重鎖可変領域はまた、ＣＤＲ－Ｈ１に対しＮ末端側であるＦＲ１（ＨＦＲ１）の少なくとも一部（例えば、全体）、及び／またはＣＤＲ－Ｈ３に対しＣ末端側であるＦＲ４（ＨＦＲ４）の少なくとも一部（例えば、全体）も含む。

【0129】

本明細書で使用する場合、「重鎖定常領域」という用語は、少なくとも３つの重鎖定常ドメイン：ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む領域を指す。非限定的な例示的な重鎖定常領域としては、γ、δ、及びαが挙げられる。非限定的な例示的な重鎖定常領域としては、ε及びμも挙げられる。各重定常領域は、抗体アイソタイプに対応する。例えば、γ定常領域を含む抗体はＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体はＩｇＤ抗体であり、α定常領域を含む抗体はＩｇＡ抗体であり、ε定常領域を含む抗体はＩｇＥ抗体であり、μ定常領域を含む抗体はＩｇＭ抗体である。

【0130】

ある特定のアイソタイプは、さらにサブクラスに細分化され得る。例えば、ＩｇＧ抗体としては、限定されるものではないが、ＩｇＧ１抗体（γ１定常領域を含む）、ＩｇＧ２抗体（γ２定常領域を含む）、ＩｇＧ３抗体（γ３定常領域を含む）、及びＩｇＧ４抗体（γ４定常領域を含む）が挙げられ、ＩｇＡ抗体としては、限定されるものではないが、ＩｇＡｌ（α１定常領域を含む）抗体及びＩｇＡ２（α２定常領域を含む）抗体が挙げられ、ＩｇＭ抗体としては、限定されるものではないが、ＩｇＭ１（μ１定常領域を含む）抗体及びＩｇＭ２（μ２定常領域を含む）抗体が挙げられる。

【0131】

本明細書で使用する場合、「重鎖」という用語は、少なくとも重鎖可変領域を含み、リーダー配列を含むまたは含まないポリペプチドを指す。いくつかの実施形態において、重鎖は、重鎖定常領域の少なくとも一部を含む。本明細書で使用する場合、「完全長重鎖」という用語は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含み、リーダー配列を含むまたは含まず、Ｃ末端リジンを含むまたは含まないポリペプチドを指す。

【0132】

本明細書で使用する場合、「軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）」という用語は、軽鎖ＣＤＲ１（ＣＤＲ－Ｌ１）、フレームワーク（ＦＲ）２（ＬＦＲ２）、ＣＤＲ２（ＣＤＲ－Ｌ２）、ＦＲ３（ＬＦＲ３）、及びＣＤＲ３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む領域を指す。いくつかの実施形態において、軽鎖可変領域はまた、ＦＲ１（ＬＦＲ１）の少なくとも一部（例えば、全体）及び／またはＦＲ４（ＬＦＲ４）の少なくとも一部（例えば、全体）も含む。

【0133】

本明細書で使用する場合、「軽鎖定常領域」という用語は、軽鎖定常ドメインＣ_Ｌを含む領域を指す。非限定的な例示的な軽鎖定常領域としては、λ及びκが挙げられる。

【0134】

本明細書で使用する場合、「軽鎖」という用語は、少なくとも軽鎖可変領域を含み、リーダー配列を含むまたは含まないポリペプチドを指す。いくつかの実施形態において、軽鎖は、軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む。本明細書で使用する場合、「完全長軽鎖」という用語は、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域を含み、リーダー配列を含むまたは含まないポリペプチドを指す。

【0135】

「抗体フラグメント」または「（抗体の）抗原結合部分」という用語は、限定されるものではないが、抗原に結合可能なフラグメント、例えば、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及び（Ｆａｂ’）_２を含む。ある特定の実施形態において、抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ_ｄ、単鎖ＦｖもしくはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆ_ｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ_２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ_２、（ｓｃＦｖ）_２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃを含む。

【0136】

「Ｆａｂ」という用語は、およそ５０，０００ダルトンの分子量の抗体フラグメントを指し、抗原に結合する活性を有する。これは、ジスルフィド架橋によって接続している重鎖のＮ末端側のおよそ半分及び軽鎖の全体を含む。Ｆａｂは、詳細には、免疫グロブリンをプロテアーゼのパパインで処理することにより得ることができる。

【0137】

「Ｆ（ａｂ’）_２」という用語は、およそ１００，０００ダルトンのフラグメント及び抗原に結合する活性を示す。このフラグメントは、ヒンジ領域内でジスルフィド橋を介し接続している２つのＦａｂフラグメントよりもわずかに大きい。これらのフラグメントは、免疫グロブリンをプロテアーゼのペプシンで処理することにより得られる。Ｆａｂフラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントから、ヒンジ領域のジスルフィド結合を切断することにより得ることができる。

【0138】

Ｆｖ短鎖「ｓｃＦｖ」は、ＶＬ及びＶＨドメインをコードする遺伝子と、これらのドメインに結合するように意図されたペプチドをコードする配列とを用いて合成されたＶＨ：ＶＬポリペプチドに相当する。本発明によるｓｃＦｖは、例えば遺伝子組換え技法を用いて、適切な立体構造で維持されているＣＤＲを含む。

【0139】

「ｓｃＦｖ」の二量体は、ペプチド結合によって一緒に接続した２つのｓｃＦｖ分子に相当する。このＦｖ鎖はしばしば、ペプチドをコードするリンカー配列によって接続しているＶＨ及びＶＬをコードする遺伝子を含む融合遺伝子の発現の結果である。ヒトｓｃＦｖフラグメントは、好ましくは遺伝子組換え技法の使用により、適切な立体構造で維持されているＣＤＲ領域を含むことができる。

【0140】

「ｄｓＦｖ」フラグメントとは、ジスルフィド結合によって安定化されたＶＨ－ＶＬヘテロ二量体のことであり、二価（ｄｓＦＶ_２）の場合もある。二価のＳｃ（Ｆｖ）_２または多価抗体のフラグメントは、一価のｓｃＦｖの会合によって自然発生的に形成することもあれば、ペプチド結合配列によってｓｃＦｖフラグメントを接続することによって生成されることもある。

【0141】

Ｆｃフラグメントは、抗体の生物学的特性、詳細には免疫エフェクターにより認識される能力または補体を活性化する能力を支持するものである。これは、ヒンジ領域を超えた重鎖の定常フラグメントからなる。

【0142】

「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原固定部位を有する小さな抗体フラグメントを意味する。これらのフラグメントは、同じＶＨ－ＶＬポリペプチド鎖内で、可変軽鎖ドメインＶＬに接続した可変重鎖ドメインＶＨを含む。短いために同じ鎖の２つのドメインが一致しない結合配列を使用すると、
別の鎖の２つの相補的なドメインとの一致が必然的に生じるため、２つの抗原固定部位が作出される。

【0143】

参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、抗体競合アッセイによって決定することができる。これは、競合アッセイで参照抗体とその抗原との結合を５０％以上遮断する抗体を指し、逆に、参照抗体は、競合アッセイで当該抗体とその抗原との結合を５０％以上遮断する。「競合」という用語は、同じエピトープに関し競合する抗体の文脈で使用される場合、試験を行っている抗体が参照抗体と共通抗原との特異的結合を防止または阻害するアッセイにより、抗体間の競合が決定されることを意味する。

【0144】

多数のタイプの競合結合アッセイを使用することができ、例えば、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２－２５３を参照）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４－３６１９を参照）；固相直接標識アッセイ；固相直接標識サンドイッチアッセイ（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，１９８８，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照）；Ｉ^１２５を用いた固相直接標識ＲＩＡ（例えば、Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：７－１５を参照）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（例えば、Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６－５５２を参照）；及び直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．を参照）を使用することができる。

【0145】

典型的には、このようなアッセイは、固体表面に結合した精製抗原か、または標識されていない試験抗原結合タンパク質及び標識された参照抗体のいずれかを有する細胞の使用を伴う。競合阻害は、試験抗体の存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を測定することによって測定される。通常、試験抗体は過剰に存在する。競合アッセイによって特定される抗体（競合抗体）としては、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体に結合する抗体、及び立体障害が生じるほど十分に近接して参照抗体が結合する隣接エピトープに結合する抗体が挙げられる。いくつかの実施形態において、競合抗体は、過剰に存在するときに、共通抗原に対する参照抗体との特異的結合を少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％阻害する。いくつかの場合において、結合は、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９７％、またはそれ以上阻害される。

【0146】

「抗原」という用語は、選択的結合剤（例えば、抗体またはその免疫学的に機能的なフラグメント）が結合可能であり、さらに、哺乳類に使用してその抗原に結合可能な抗体を生成可能である分子または分子の一部を指す。抗原は、抗体と相互作用可能な１つ以上のエピトープを有し得る。

【0147】

「エピトープ」という用語は、選択的結合剤（例えば、抗体またはそのフラグメント）によって結合される抗原分子の一部のことである。この用語は、抗体に特異的に結合可能な任意の決定基を含む。エピトープは、連続でも非連続でもよい（例えば、ポリペプチドの場合、アミノ酸残基は、ポリペプチド配列内で互いに連続していないが、分子の文脈内では抗原結合タンパク質によって結合している）。いくつかの実施形態において、エピトープは、抗体の生成に使用されるエピトープに類似する三次元構造を含むが、抗体の生成に使用されるエピトープに見られるアミノ酸残基を全くまたは一部しか含まないという点で模倣的であり得る。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリルまたはスルホニルなどの分子の化学的に活性な表面グルーピングを含み得、３次元構造特性及び／または特定の電荷特性を有し得る。

【0148】

いくつかの実施形態において、「エピトープ」は、その決定に使用される方法によって定義される。例えば、いくつかの実施形態において、抗体は、水素－重水素交換（ＨＤＸ）による定量において抗原の同じ領域に結合する場合、参照抗体と同じエピトープに結合する。

【0149】

ある特定の実施形態において、抗体は、Ｘ線結晶解析による定量において抗原の同じ領域に結合する場合、参照抗体と同じエピトープに結合する。

【0150】

本明細書で使用する場合、「キメラ抗体」とは、第１の種（例えば、マウス、ラット、カニクイザルなど）由来の少なくとも１つの可変領域と、第２の種（例えば、ヒト、カニクイザル、ニワトリなど）由来の少なくとも１つの定常領域とを含む抗体を指す。いくつかの実施形態において、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域と、少なくとも１つのヒト定常領域とを含む。いくつかの実施形態において、キメラ抗体の可変領域の全てが第１の種由来であり、キメラ抗体の定常領域の全てが第２の種由来である。

【0151】

本明細書で使用する場合、「ヒト化抗体」とは、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、カニクイザル、ニワトリなど）のフレームワーク領域内の少なくとも１つのアミノ酸が、ヒト可変領域由来の対応するアミノ酸で置き換えられた抗体を指す。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つのヒト定常領域またはそのフラグメントを含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体フラグメントは、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）_２などである。

【0152】

本明細書で使用する場合、「ＣＤＲ移植抗体」とは、第１（非ヒト）の種の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）が第２（ヒト）の種のフレームワーク領域（ＦＲ）に移植されたヒト化抗体を指す。

【0153】

本明細書で使用する場合、「ヒト抗体」とは、ヒト内で生成された抗体、非ヒト動物内で生成されたヒト免疫グロブリン遺伝子を含む抗体（例えば、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標））、及びｉｎ ｖｉｔｒｏの方法（例えば、ファージディスプレイ）を用いて選択された抗体を指し、抗体レパートリーはヒト免疫グロブリン配列に基づく。

【0154】

「増強されたＡＤＣＣ活性」を有する抗体には、対照抗体または親抗体と比較したときにより有効にｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏでＡＤＣＣを媒介する抗体が含まれ、抗体及び対照／親抗体は、少なくとも１つの構造的側面において異なり、アッセイに使用されるこのような抗体及び対照／親抗体の量は本質的に同じである。いくつかの実施形態において、抗体及び対照／親抗体は、同じアミノ酸配列を有するが、親抗体がフコシル化されているのに対し、抗体は脱フコシル化されている。ＡＤＣＣ活性は、任意の当技術分野で認められている方法を用いて定量することができる。いくつかの実施形態において、ＡＤＣＣ活性は、本明細書で開示するようなｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイを用いて定量されるが、ＡＤＣＣ活性を定量するための（例えば、動物モデルなどにおける）他のアッセイまたは方法も企図されている。いくつかの実施形態において、ＡＤＣＣ活性が増強された抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性が増強されている。いくつかの実施形態において、ＡＤＣＣ活性が増強された抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対する親和性が増強されている。いくつかの実施形態において、ＡＤＣＣ活性が増強された抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対する親和性が増強されている。

【0155】

ＦｃＲ結合親和性またはＡＤＣＣ活性が「変化した」抗体とは、対照／親抗体と比較して増強または減弱したＦｃＲ結合活性及び／またはＡＤＣＣ活性を有する抗体のことであり、この抗体及び親抗体は、少なくとも１つの構造的側面で異なる。

【0156】

ＦｃＲに対する「結合の増加を示す」抗体は、親抗体よりも良好な親和性で少なくとも１つのＦｃＲに結合する。

【0157】

ＦｃＲとの「結合の減少を示す」抗体は、親抗体よりも低い親和性で少なくとも１つのＦｃＲに結合する。ＦｃＲとの「結合の減少を示す」抗体は、ＦｃＲとの結合がほとんどまたは全く認識できず、例えば、ネイティブ配列のＩｇＧ Ｆｃ領域と比較してＦｃＲとの結合が０～２０パーセントであり得る。

【0158】

「ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する増強された親和性」とは、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（場合によってはＣＤ１６ａとも称される）に対する親和性が対照／親抗体よりも高い抗体を指し、この抗体及び親抗体は、少なくとも１つの構造的側面で異なる。いくつかの実施形態において、抗体及び対照／親抗体は、同じアミノ酸配列を有するが、対照／親抗体がフコシル化されているのに対し、抗体は脱フコシル化されている。ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性を定量する任意の好適な方法を使用することができる。いくつかの実施形態において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性は、本明細書に記載の方法によって定量される。いくつかの実施形態において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性が増強された抗体は、ＡＤＣＣ活性が増強されている。いくつかの実施形態において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性が増強された抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対する親和性が増強されている。いくつかの実施形態において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性が増強された抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対する親和性が増強されている。

【0159】

「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下での標的細胞の溶解を指す。古典的補体経路の活性化は、補体系の第１の構成要素（Ｃ１ｑ）が、同族抗原に結合している（適切なサブクラスの）抗体に結合することによって開始される。補体の活性化を評価するには、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３，１９９６に記載のようなＣＤＣアッセイを実施することができる。Ｆｃ領域アミノ酸配列が変化し、Ｃ１ｑ結合能力が増加または減少している抗体については、例えば、米国特許第６，１９４，５５１Ｂ１号、米国特許第７，９２３，５３８号、米国特許第７，９９４，２９０号、及びＷＯ１９９９／５１６４２に記載されている。

【0160】

「宿主細胞」とは、ベクターまたは単離されたポリヌクレオチドのレシピエントであり得るか、またはレシピエントであった細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞であっても真核細胞であってもよい。例示的な真核細胞としては、哺乳類細胞（例えば、霊長類または非霊長類の動物細胞）、真菌細胞（例えば、酵母）、植物細胞、及び昆虫細胞が挙げられる。非限定的な例示的な哺乳類細胞としては、限定されるものではないが、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、ならびに２９３及びＣＨＯ細胞、ならびにこれらの誘導体（例えば、それぞれについて２９３－６Ｅ細胞及びＤＧ４４細胞）が挙げられる。

【0161】

本明細書で使用する場合、「単離された」という用語は、自然界で典型的に見られる構成要素の少なくとも一部から分離されたか、または典型的に生成される構成要素の少なくとも一部から分離された分子を指す。例えば、ポリペプチドは、それを生成した細胞の構成要素の少なくとも一部から分離された場合は、「単離された」と称される。ポリペプチドが発現後の細胞により分泌される場合、ポリペプチドを含む上清をそれを生成した細胞から物理的に分離することは、ポリペプチドを「単離すること」とみなされる。同様に、ポリヌクレオチドは、自然界で典型的に見られるより大きなポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合に、ゲノムＤＮＡまたはミトコンドリアＤＮＡ）の一部でないとき、または例えばＲＮＡポリヌクレオチドの場合に、それを生成した細胞の構成要素の少なくとも一部から分離されるとき、「単離された」と称される。したがって、宿主細胞内のベクターに含まれるＤＮＡポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドが自然界でそのベクター内で見られない限り、「単離された」と称することができる。

【0162】

「対象」及び「患者」という用語は、本明細書では互換的に使用され、ヒトなどの哺乳類を指す。いくつかの実施形態において、他の非ヒト哺乳類（限定されるものではないが、げっ歯類、サル、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳類実験動物、哺乳類家畜、哺乳類スポーツ動物、及び哺乳類ペットを含む）を治療する方法も提供される。いくつかの場合において、「対象」または「患者」とは、疾患または障害の治療を必要とする（ヒト）対象または患者を指す。

【0163】

本明細書で使用する場合、「試料」または「患者試料」という用語は、例えば物理的、生化学的、化学的、及び／または生理学的特徴に基づいて、特性決定及び／または特定されるべき細胞及び／または他の分子実体を含む、目的の対象から得られるか、またはそれに由来する物質を指す。例えば、「疾患試料」及びそのバリエーションという表現は、特性評価を行う細胞及び／または分子実体を含むことが予想される、またはそれが知られている目的の対象から得られる任意の試料を指す。

【0164】

「組織または細胞試料」とは、対象または患者の組織から得られた同様の細胞の集合を意味する。組織または細胞試料の供給源は、新鮮、凍結、及び／または保管された臓器もしくは組織試料または生検もしくは吸引液からの固形組織；血液または任意の血液組成成分；脳脊髄液、羊膜液、腹腔液、または組織液などの体液；対象の妊娠期間または発育における任意の時点からの細胞であり得る。また、組織試料は、初代または培養細胞であっても、細胞株であってもよい。任意選択で、組織または細胞試料は、疾患組織または臓器から得られる。組織試料は、自然界の組織とは天然には混ざり合わない化合物、例えば、防腐剤、抗凝固剤、緩衝液、固定剤、栄養素、抗生物質などを含んでもよい。

【0165】

本明細書で使用する場合、「参照試料」、「参照細胞」、または「参照組織」とは、本発明の方法または組成物がその特定を行うために使用されている疾患または状態に罹患していないことが知られている、またはそのように考えられる供給源から得られる試料、細胞、または組織を指す。１つの実施形態において、参照試料、参照細胞、または参照組織は、本発明の組成物または方法を用いて疾患または状態の特定を行っている同じ対象または患者の身体の健康な部分から得られる。１つの実施形態において、参照試料、参照細胞、または参照組織は、本発明の組成物または方法を用いて疾患または状態の特定を行っている対象でも患者でもない少なくとも１人の個体の身体の健康な部分から得られる。いくつかの実施形態において、参照試料、参照細胞、または参照組織は、疾患もしくは状態を発症する前に、または疾患もしくは状態の早期段階で、患者から以前に得られたものである。

【0166】

「障害」または「疾患」とは、本発明の１つ以上のＧａｌ－９アンタゴニストによる治療から利益を得られると考えられる任意の状態のことである。これには、慢性及び急性の障害または疾患（哺乳類を問題とされる障害に罹患しやすくする病的状態を含む）が含まれる。本明細書で治療の対象となる障害の非限定的な例としては、がんが挙げられる。

【0167】

「がん」という用語は、本明細書では、異常に高度の増殖及び成長を示す細胞群を指すために使用される。がんは、良性（良性腫瘍とも称される）、前悪性、または悪性であり得る。がん細胞は、固形癌細胞（すなわち、固形腫瘍を形成する細胞）または白血病癌細胞であり得る。「がん成長」という用語は、本明細書では、対応するがんのサイズまたは程度の増加をもたらすがんを構成する細胞（単数または複数）による増殖または成長を指す。

【0168】

がんの例としては、限定されるものではないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病またはリンパ系悪性腫瘍が挙げられる。このようながんのより詳細な非限定的な例としては、扁平上皮癌、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌、星細胞腫、軟部組織肉腫、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、膵臓癌、膠芽腫、子宮頚癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、大腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓（ｋｉｄｎｅｙ）癌、腎臓（ｒｅｎａｌ）癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、脳腫瘍、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、黒色腫、及び様々なタイプの頭頚部癌が挙げられる。

【0169】

ある特定の実施形態において、本明細書で使用する場合、がんは、血液癌（例えば、リンパ腫もしくは白血病（ＣＬＬを含む）、バーキットリンパ腫）、または固形腫瘍（例えば、乳癌、肺癌、及び前立腺癌）を含む。

【0170】

「化学療法剤」とは、がんの治療に有用であり得る化学化合物である。化学療法剤の例としては、限定されるものではないが、アルキル化剤、例えば、チオテパ及びＣｙｔｏｘａｎ（登録商標）シクロホスファミド；アルキルスルホネート、例えば、ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドパ、カルボコン、メツルドパ、及びウレドパ；エチレンイミン及びメチルアミン、例えば、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンエチオホスホルアミド、及びトリメチロールメラミン；アセトゲニン（特に、ブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、及びビゼレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン（詳細には、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ－２１８９、及びＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチン；抗生物質、例えば、エネジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマ１ｌ（ｇａｍｍａｌｌ）及びカリケアマイシンオメガ１ｌ（ｏｍｅｇａｌｌ）（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ ｌｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ，３３：１８３－１８６（１９９４）を参照））；ダイネミシン（ダイネミシンＡを含む）；ビスホスホネート、例えば、クロドロネート；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団及び関連する色素タンパク質エナジイン抗生物質発色団、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オートラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗薬、例えば、メトトレキサート及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸アナログ、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリンアナログ、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗アドレナリン、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充物、例えば、フロリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルフォミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；マイタンシノイド、例えば、マイタンシン及びアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ－２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、及びアンギジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、Ｔａｘｏｌ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）パクリタキセルのクレモフォールフリーアルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、及びＴａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）ドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル；Ｇｅｍｚａｒ（登録商標）ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ、例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、及びカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標）ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロン酸；イリノテカン（カンプトサール、ＣＰＴ－ １１）（５－ＦＵ及びロイコボリンを伴うイリノテカンの治療レジメンを含む）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えば、レチノイン酸；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン（オキサリプラチン治療レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）を含む）；ＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、ＥＧＦＲの阻害剤（例えば、細胞増殖を低減するエルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））及びＶＥＧＦ－Ａ阻害剤、ならびに上記のいずれかの医薬的に許容される塩、酸、または誘導体が挙げられる。

【0171】

さらに非限定的な例示的な化学療法剤としては、がんに対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば、抗エストロゲン剤及び選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）（例えば、タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びＦａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）トレミフェン；副腎内でのエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、Ｍｅｇａｓｅ（登録商標）酢酸メゲストロール、Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）エキセメスタン、ホルメスタニー（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール、Ｒｉｖｉｓｏｒ（登録商標）ボロゾール、Ｆｅｍａｒａ（登録商標）レトロゾール、及びＡｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）アナストロゾール；ならびに抗アンドロゲン、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリン；ならびにトロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、詳細には、例えば、ＰＫＣ－アルファ、Ｒａｌｆ、Ｈ－Ｒａｓなどの異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの；リボザイム、例えば、ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、Ａｎｇｉｏｚｙｍｅ（登録商標）リボザイム）及びＨＥＲ２発現阻害剤；遺伝子治療ワクチンなどのワクチン、例えば、Ａｌｌｏｖｅｃｔｉｎ（登録商標）ワクチン、Ｌｅｕｖｅｃｔｉｎ（登録商標）ワクチン、及びＶａｘｉｄ（登録商標）ワクチン；Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ｒＩＬ－２；Ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ（登録商標）トポイソメラーゼ１阻害剤；Ａｂａｒｅｌｉｘ（登録商標）ｒｍＲＨ；ならびに上記のいずれかの医薬的に許容される塩、酸、または誘導体が挙げられる。

【0172】

「抗血管新生剤」または「血管新生阻害剤」とは、直接または間接のいずれかで血管新生、脈管形成、または望ましくない血管透過性を阻害する低分子量物質、ポリヌクレオチド（例えば、阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉもしくはｓｉＲＮＡ）を含む）、ポリペプチド、単離されたタンパク質、組換えタンパク質、抗体、またはこれらの結合体または融合タンパク質を指す。血管新生阻害剤には、血管新生因子またはその受容体の血管新生活性に結合し遮断する薬剤が含まれることを理解されたい。例えば、抗血管新生剤は、血管新生剤に対する抗体または他のアンタゴニスト、例えば、ＶＥＧＦ－Ａに対する抗体（例えば、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）））またはＶＥＧＦ－Ａ受容体（例えば、ＫＤＲ受容体またはＦｌｔ－１受容体）に対する抗体、抗ＰＤＧＦＲ阻害剤、例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）（メシル酸イマチニブ）、ＶＥＧＦ受容体シグナル伝達を遮断する小分子（例えば、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２８４、ＳＵ６６６８、Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）／ＳＵｌ１２４８（リンゴ酸スニチニブ）、ＡＭＧ７０６、または、例えば、国際特許出願第ＷＯ２００４／１１３３０４号に記載のもの）である。また抗血管新生剤には、ネイティブな血管新生阻害剤（例えば、アンジオスタチン、エンドスタチンなど）も含まれる。例えば、Ｋｌａｇｓｂｒｕｎ ａｎｄ Ｄ’Ａｍｏｒｅ（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．５３：２１７－３９；Ｓｔｒｅｉｔ ａｎｄ Ｄｅｔｍａｒ（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２：３１７２－３１７９（例えば、悪性黒色腫における抗血管新生療法を列挙した表３）；Ｆｅｒｒａｒａ ＆ Ａｌｉｔａｌｏ（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ５（１２）：１３５９－１３６４；Ｔｏｎｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２２：６５４９－６５５６（例えば、既知の抗血管新生因子を列挙した表２）；及びＳａｔｏ（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．８：２００－２０６（例えば、臨床試験に使用した抗血管新生剤を列挙した表１）を参照。

【0173】

本明細書で使用する場合、「成長阻害剤」とは、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで細胞（例えば、ＶＥＧＦを発現する細胞）の成長を阻害する化合物または組成物を指す。したがって、成長阻害剤は、Ｓ期の細胞（例えば、ＶＥＧＦを発現する細胞）のパーセンテージを顕著に低減するものであり得る。成長阻害剤の例としては、限定されるものではないが、（Ｓ期以外の段階で）細胞周期の進行を遮断する薬剤（例えば、Ｇ１停止及びＭ期停止を誘導する薬剤）が挙げられる。古典的なＭ期阻害薬としては、ビンカ（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（例えば、ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシン）が挙げられる。Ｇ１を停止する薬剤、例えば、ＤＮＡアルキル化剤（例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５－フルオロウラシル、及びａｒａ－Ｃ）は、Ｓ期にも停止が及ぶ。さらなる情報は、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ ａｎｄ Ｉｓｒａｅｌ，ｅｄｓ，Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｃｈａｐｔｅｒ １，“Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，ａｎｄ ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｄｒｕｇｓ”（Ｍｕｒａｋａｍｉ ｅｔ ａｌ．）（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）の、例えば１３ページに見出すことができる。タキサン（パクリタキセル及びドセタキセル）は、いずれもイチイの木に由来する抗がん薬物である。ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ）は、ヨーロッパイチイに由来し、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成アナログである。パクリタキセル及びドセタキセルは、チューブリン二量体からの微小管の集合を促進し、脱重合を防止することによって微小管を安定化させ、その結果、細胞内の有糸分裂を阻害する。

【0174】

「抗新生物組成物」という用語は、少なくとも１つの活性治療剤を含む、がんの治療に有用な組成物を指す。治療剤の例としては、限定されるものではないが、例えば、化学療法剤、成長阻害剤、細胞傷害剤、放射線療法に使用される薬剤、抗血管新生剤、がん免疫療法剤（がん免疫薬剤とも称される）、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、及びがんを治療するための他の薬剤、例えば、抗ＨＥＲ－２抗体、抗ＣＤ２０抗体、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、血小板由来成長因子阻害剤（例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）（イマチニブメシル酸塩））、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、インターフェロン、ＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ抗体イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）））、ＰＤ－１阻害剤（例えば、抗ＰＤ１抗体、ＢＭＳ－９３６５５８）、ＰＤＬ１阻害剤（例えば、抗ＰＤＬ１抗体、ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、ＰＤＬ２阻害剤（例えば、抗ＰＤＬ２抗体）、ＶＩＳＴＡ阻害剤（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）、サイトカイン、以下の標的：ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＰＤ－１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＣＴＬＡ４、ＶＩＳＴＡ、またはＶＥＧＦ受容体（複数可）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２のうちの１つ以上に結合するアンタゴニスト（例えば、中和抗体）、ならびに他の生物活性及び有機化学薬剤などが挙げられる。これらの組合せも本発明に含まれる。

【0175】

「治療」とは、例えば目的が、標的となる病的状態または障害を遅らせる（軽減する）ことである療法的治療、及び例えば目的が、病的状態または障害の再発を阻害することである療法的治療を指す。「治療」は、哺乳類（ヒトを含む）における疾患（本明細書では「障害」または「状態」とも称される）に対する治療薬の任意の投与または適用を網羅し、疾患もしくは疾患の進行を阻害すること、疾患もしくはその進行を抑制もしくは遅らせること、その発症を阻止すること、疾患を部分的もしくは完全に緩和すること、疾患の１つ以上の症状を部分的もしくは完全に緩和すること、喪失した、欠損した、もしくは不全な機能を回復もしくは修復すること、または非効率的なプロセスを刺激することを含む。また「治療」という用語は、任意の表現型特性の重症度を低減すること、及び／またはその特徴の発生率、程度、もしくは可能性を低減することも含む。治療を必要とする者には、既に障害を有する者に加えて、障害の再発のリスクがある者、または障害の再発を予防するか、もしくは遅らせるべき者も含まれる。

【0176】

「有効量」または「治療有効量」という用語は、対象における疾患または障害を治療するのに有効な薬物の量を指す。いくつかの実施形態において、有効量とは、所望の治療的または予防的結果の達成に必要な投与量及び期間における有効な量を指す。本発明の抗体の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、体重、及び個体において所望の応答を誘発するアンタゴニストの能力などの因子に応じて変化し得る。治療有効量は、主題抗体の任意の毒性または有害作用が治療的に有益な効果によって上回る量を包含する。

【0177】

「予防有効量」とは、所望の予防的結果を達成するのに必要な投与量及び期間の有効量を指す。典型的には、ただし必ずしもそうとは限らないが、予防用量は、疾患の前または疾患の早期段階の対象に使用されるため、予防有効量は、治療有効量よりも少なくなる。

【0178】

「医薬的に許容される担体」とは、対象に投与するための「医薬組成物」を一緒に構成する治療剤とともに使用するための、当技術分野で慣例的な無毒性の固体、半固体、または液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料、製剤助剤、または担体を指す。医薬的に許容される担体は、用いられる投与量及び濃度においてレシピエントに無毒性であり、製剤の他の成分と適合性である。医薬的に許容される担体は、用いられる製剤に適切である。例えば、治療剤が経口投与される場合、担体はゲルカプセルとすることができる。治療剤が皮下投与される場合、担体は、理想的には皮膚に刺激性がなく、注射部位反応を引き起こさない。

【0179】

「製造品」とは、少なくとも１つの試薬（例えば、疾患もしくは障害の治療のための医薬品）、または本明細書に記載のバイオマーカーを特異的に検出するためのプローブを含む、任意の製造物（例えば、パッケージもしくは容器）またはキットのことである。いくつかの実施形態において、製造物またはキットは、本明細書に記載の方法を実施するための単位として販売促進、流通、または販売される。

【0180】

３．使用方法（例えば、がんを治療する方法）
本明細書に記載の発明は、ヒト及び他の非ヒト哺乳類を治療する方法に使用するための抗ＣＸＣＲ５抗体を提供する。

【0181】

いくつかの実施形態において、がんを治療または予防するための方法であって、主題の抗ＣＸＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメントのいずれかの有効量を、このような治療を必要とする対象に投与することを含む、方法が提供される。

【0182】

いくつかの実施形態において、がんを治療する方法であって、がんを有する対象に、主題の抗ＣＸＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメントのいずれかを投与することを含む、方法が提供される。

【0183】

本発明の方法／使用により治療可能ながんには、本明細書／上記に記載の任意のがんが含まれる。

【0184】

主題の抗ＣＸＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメントのいずれかを用いて治療され得る非限定的な例示的ながん（癌腫、リンパ腫、胚腫、肉腫、及び白血病を含む）が本明細書で示される。このようながんのより詳細な非限定的な例としては、黒色腫、子宮頚癌、扁平上皮癌、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌、星細胞腫、軟部組織肉腫、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、膵臓癌、膠芽腫、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、大腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓（ｋｉｄｎｅｙ）癌、腎臓（ｒｅｎａｌ）癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、脳腫瘍、子宮内膜癌、精巣癌、胆管癌、胆嚢癌、胃癌、黒色腫、及び様々なタイプの頭頚部癌が挙げられる。

【0185】

ある特定の実施形態において、がんは、黒色腫、乳癌、結腸癌、子宮頚癌、腎臓癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌）、肺癌（ＮＳＣＬＣ）、卵巣癌、皮膚癌（例えば、扁平上皮癌もしくは基底細胞癌）、リンパ腫、または白血病である。

【0186】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＸＣＲ５抗体は単独で使用してもよく、あるいは疾患または適応症を治療できることが知られている他の好適な化合物、例えば抗がん剤と組み合わせて使用してもよい。

【0187】

すなわち、使用ががんの治療である場合、抗体は、例えば、手術、放射線療法、化学療法、またはこれらの組合せなどのがんに対する既知の療法と組み合わせて、使用することができる。例えば、この抗体は、腫瘍抗原（詳細には、ＥＢＶ抗原）に対するエフェクターリンパ球の１つ以上の注射からなる養子免疫療法と組み合わせて使用することができる。いくつかの態様によれば、がん療法のために本発明によるＣＸＣＲ５に対する抗体と組み合わせて使用される他の抗がん剤は、抗血管新生剤を含む。ある特定の態様によれば、抗体は、（サイトカイン、例えば、抗腫瘍免疫応答を刺激するサイトカイン）と同時投与することができる。

【0188】

このような併用療法において、本発明の抗体は、第２の治療剤の前、後、またはそれと同時に使用することができる。併用療法については、以下のさらなるセクションを参照されたい。

【0189】

本発明の関連する態様は、ＣＸＣＲ５の活性を低減する方法であって、本明細書に記載の本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0190】

本発明の関連する態様は、炎症性疾患を治療する方法であって、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0191】

本発明の関連する態様は、免疫抑制を必要とする対象を治療する方法であって、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0192】

本発明の関連する態様は、自己免疫性疾患、障害、または状態を治療する方法であって、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0193】

本発明の関連する態様は、ＣＸＣＲ５を発現する細胞の数の減少を、それを必要とする対象において行う方法であって、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物の治療有効量を対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0194】

ある特定の実施形態において、細胞は、その表面にＣＸＣＲ５を発現する。ある特定の実施形態において、細胞は、Ｂ細胞及びＴｆｈ様細胞である。

【0195】

ある特定の実施形態において、対象はヒトである。

【0196】

ある特定の実施形態において、この方法は、抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたはその医薬組成物を静脈内または皮下投与することを含む。

【0197】

ある特定の実施形態において、抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは医薬組成物は、週に約２回、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回投与される、１０週間に１回、１か月に２回、１か月に１回、２か月に１回、３か月に１回、４か月に１回、５か月に１回、６か月に１回、７か月に１回、８か月に１回、９か月に１回、１０か月に１回、１１か月に１回、または１２か月に１回投与される。

【0198】

本発明の関連する態様は、試料中のＣＸＣＲ５＋細胞の数を減少させる方法であって、当該細胞を本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物に接触させることを含む、方法を提供する。

【0199】

本発明の関連する態様は、医薬品として使用するための、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物を提供する。

【0200】

本発明の関連する態様は、対象におけるＣＸＣＲ５の活性の低減に使用するための、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物を提供する。

【0201】

本発明の関連する態様は、免疫抑制を必要とする対象の治療に使用するための、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物を提供する。

【0202】

本発明の関連する態様は、対象における自己免疫性疾患、障害、または状態の治療に使用するための、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物を提供する。

【0203】

本発明の関連する態様は、免疫疾患、障害または状態を治療するための医薬品の製造における、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントの使用を提供する。

【0204】

本発明の関連する態様は、免疫疾患、障害または状態を治療するための医薬品の製造における、本発明の医薬組成物の使用を提供する。

【0205】

本発明の関連する態様は、医学的状態を治療する方法であって、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を提供する。

【0206】

ある特定の実施形態において、状態は、炎症性応答、例えば、乾癬及び皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎）を含む炎症性皮膚疾患；皮膚筋炎；全身性強皮症及び硬化症；炎症性腸疾患（例えば、クローン病及び潰瘍性腸疾患）に関連する応答；呼吸窮迫症候群（成人呼吸窮迫症候群；ＡＲＤＳを含む）；皮膚炎；髄膜炎；脳炎；ぶどう膜炎；大腸炎；胃炎；糸球体腎炎；アレルギー性疾患、例えば、湿疹及び喘息、ならびにＴ細胞の浸潤及び慢性炎症応答を伴う他の疾患；アテローム性動脈硬化症；白血球接着不全症；関節リウマチ；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；糖尿病（例えば、Ｉ型糖尿病またはインスリン依存性糖尿病）；多発性硬化症；レイノー症候群；自己免疫性甲状腺炎；アレルギー性脳脊髄炎；シェーグレン症候群；若年発症糖尿病；ならびに結核、サルコイドーシス、多発性筋炎、肉芽腫症、及び血管炎に典型的に見出されるサイトカイン及びＴリンパ球により媒介される急性及び遅発性過敏症に関連する免疫応答；ウェゲナー病；悪性貧血（アジソン病）；白血球漏出を伴う疾患；中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性障害；多臓器損傷症候群；溶血性貧血（限定されるものではないが、クリオグロビン血症またはクームス陽性貧血を含む）；重症筋無力症；抗原抗体複合体媒介性疾患；抗糸球体基底膜疾患；抗リン脂質症候群；アレルギー性神経炎；グレーブス病；ランバート－イートン筋無力症候群；水疱性類天疱瘡；天疱瘡；自己免疫性多腺性内分泌不全症；白斑；ライター病；全身硬直症候群；ベーチェット病；巨細胞性動脈炎；免疫複合体腎炎；ＩｇＡ腎症；ＩｇＭ多発ニューロパチー；免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）または自己免疫性血小板減少症及び自己免疫性溶血性疾患；橋本病；自己免疫性肝炎；自己免疫性血友病；自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）；自己免疫性ぶどう膜炎；ギラン－バレー症候群；グッドパスチャー症候群；混合性結合組織病；自己免疫関連不妊症；結節性多発動脈炎；円形脱毛症；特発性粘液水腫；移植片対宿主病；筋ジストロフィー（デュシェンヌ型、ベッカー型、筋強直型、肢帯型、顔面肩甲上腕型、先天性、眼咽頭型、遠位型、エメリー－ドレイフス型）ならびに膵臓癌、結腸癌、膀胱癌、Ｔ細胞白血病、及びＢ細胞白血病などのＣＸＣＲ５を発現するがん細胞の増殖の制御からなる群より選択される。ある特定の実施形態において、疾患は、ＳＬＥまたは関節リウマチである。

【0207】

ある特定の実施形態において、疾患はシェーグレン症候群である。

【0208】

本発明の関連する態様は、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物を用いて、試料、組織、または細胞中のＣＸＣＲ５を検出する方法であって、試料、組織、または細胞を抗体に接触させ、抗体を検出することを含む方法を提供する。

【0209】

本発明の関連する態様は、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントを用いて試料、組織、または細胞中のＣＸＣＲ５を検出する方法であって、試料、組織、または細胞を抗体に接触させ、抗体を検出することを含む方法を提供する。

【0210】

本発明の関連する態様は、体液性免疫応答の阻害を、それを必要とする対象において行う方法であって、本発明の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはその医薬組成物の治療有効量を投与することを含む、方法を提供する。

【0211】

ある特定の実施形態において、抗体は、脾臓内のＴｆｈ細胞、末梢血中のＢ細胞、及び末梢血中のＴｆｈ様細胞からなる群より選択される、ＣＸＣＲ５を発現する少なくとも１つの細胞の枯渇を媒介する。

【0212】

４．投与経路及び担体
様々な実施形態において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、皮下または静脈内に投与することができる。分かりやすくするため、「主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体」とは、本発明のマウス－ヒトキメラ抗ＣＸＣＲ５抗体及びそのヒト化バリアントを指す。

【0213】

いくつかの実施形態において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、ｉｎ ｖｉｖｏで、限定されるものではないが、経口、動脈内、非経口、鼻腔内、筋肉内、心臓内、脳室内、気管内、頬側、経直腸、腹腔内、吸入、皮内、局所、経皮、及び髄腔内、または他の方法（例えば、移植）を含む様々な経路により、投与することができる。

【0214】

いくつかの実施形態において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、静脈内または皮下により投与することができる。

【0215】

主題の抗体組成物は、固体、半固体、液体、または気体形態の調製物に製剤化することができ、このような調製物には、限定されるものではないが、錠剤、カプセル、粉末、粒剤、軟膏、溶液、坐薬、浣腸、注射液、吸入剤、及びエアロゾルが含まれる。

【0216】

様々な実施形態において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体を含む組成物は、多種多様な医薬的に許容される担体との製剤で提供される（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ｗｉｔｈ Ｆａｃｔｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ：Ｄｒｕｇｆａｃｔｓ Ｐｌｕｓ，２０ｔｈ ｅｄ．（２００３）；Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）；Ｋｉｂｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０００）を参照）。ビヒクル、アジュバント、及び希釈剤を含む様々な医薬的に許容される担体が利用可能である。さらに、様々な医薬的に許容される補助物質、例えば、ｐＨ調整及び緩衝剤、張度調整剤、安定剤、湿潤剤なども利用可能である。非限定的な例示的な担体としては、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、及びこれらの組合せが挙げられる。

【0217】

様々な実施形態において、主題のＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、水性または非水性溶媒、例えば、植物油もしくは他の油、合成脂肪族酸グリセリド、より高級の脂肪族酸、またはプロピレングリコールのエステルに、所望に応じて可溶化剤、等張剤、懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、及び防腐剤とともに溶解、懸濁、または乳化することにより、注射用（皮下投与を含む）に製剤化することができる。

【0218】

様々な実施形態において、組成物は、加圧された許容される噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素など）を用いて、吸入用に製剤化することができる。

【0219】

また、組成物は、様々な実施形態において、例えば、生分解性または非生分解性ポリマーを用いて、持続放出マイクロカプセルに製剤化することもできる。非限定的な例示的な生分解性製剤としては、ポリ乳酸－グリコール酸（ＰＬＧＡ）ポリマーが挙げられる。非限定的な例示的な非生分解性製剤としては、ポリグリセリン脂肪酸エステルが挙げられる。このような製剤を作製するある特定の方法は、例えば、ＥＰ１１２５５８４Ａ１に記載されている。

【0220】

また、１つ以上の容器を含む医薬投与量パックであって、各々が主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体の１つ以上の用量を含む、医薬投与量パックも提供される。いくつかの実施形態において、単位投与量であって、１つ以上のさらなる薬剤を伴ってまたは伴わずに、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体を含む組成物の所定量を含む、単位投与量が提供される。いくつかの実施形態において、このような単位投与量は、使い捨ての充填済み注射用シリンジで供給される。様々な実施形態において、単位投与量に含まれる組成物は、食塩水、スクロースなど、緩衝剤（例えば、リン酸）などを含むことができ、及び／または安定し有効なｐＨ範囲内で製剤化することができる。代替的に、いくつかの実施形態において、組成物は、適切な液体（例えば、滅菌水）を加えれば再構成することができる凍結乾燥粉末として提供することができる。いくつかの実施形態において、組成物は、タンパク質凝集を阻害する１つ以上の物質を含み、このような物質としては、限定されるものではないが、スクロース及びアルギニンが挙げられる。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、ヘパリン及び／またはプロテオグリカンを含む。

【0221】

医薬組成物は、特定の適応症の治療または予防に有効な量で投与される。治療有効量は、典型的には、治療を行っている対象の体重、対象の身体または健康状態、治療を行う状態の広範さ、または治療を行っている対象の年齢に依存する。

【0222】

いくつかの実施形態において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、用量当たり約５０μｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与することができる。いくつかの実施形態において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、用量当たり約１００μｇ／ｋｇ体重～約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与することができる。いくつかの実施形態において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、用量当たり約１００μｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与することができる。いくつかの実施形態において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、用量当たり約０．５ｍｇ／ｋｇ体重～約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与することができる。

【0223】

いくつかの実施形態において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、用量当たり約１０ｍｇ～約１，０００ｍｇの範囲の量で投与することができる。いくつかの実施形態において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、用量当たり約２０ｍｇ～約５００ｍｇの範囲の量で投与することができる。いくつかの実施形態において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、用量当たり約２０ｍｇ～約３００ｍｇの範囲の量で投与することができる。いくつかの実施形態において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、用量当たり約２０ｍｇ～約２００ｍｇの範囲の量で投与することができる。

【0224】

主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体組成物は、必要に応じて対象に投与することができる。いくつかの実施形態において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体の有効用量は、１回以上対象に投与される。様々な実施形態において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体の有効用量は、１か月に１回、１か月に１回未満、例えば、２か月ごと、３か月ごと、または６か月ごとに、対象に投与される。他の実施形態において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体の有効用量は、１か月に複数回、例えば、２週間ごと、毎週、週に２回、週に３回、毎日、または１日に複数回投与される。主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体の有効用量は、少なくとも１回対象に投与される。いくつかの実施形態において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体の有効用量は、複数回（少なくとも１か月、少なくとも６か月、または少なくとも１年の期間を含む）投与することができる。いくつかの実施形態において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、状態の１つ以上の症状を軽減するように必要に応じて対象に投与される。

【0225】

５．併用療法
本発明の主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体（その機能的フラグメントを含む）は、疾患の治療のために他の生物学的活性物質または他の治療手順と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することができる。例えば、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、単独で、または他の治療様式とともに投与することができる。これらは、他の治療様式（例えば、放射線療法）の前、実質的にそれと同時、またはその後に提供することができる。

【0226】

がんの治療において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、１つ以上の抗がん剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤、化学療法剤、成長阻害剤、抗血管新生剤、または抗新生物組成物）とともに投与することができる。

【0227】

ある特定の実施形態において、ＣＸＣＲ５に特異的に結合する主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体（「ＣＸＣＲ５結合アンタゴニスト」）、例えば、ＣＸＣＲ５アンタゴニスト抗体またはその抗原結合フラグメントは、第２のアンタゴニスト、例えば、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１経路の阻害剤）とともに、免疫系の刺激が有益と考えられる疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象に投与される。２つのアンタゴニストは、例えば、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体とがん免疫薬剤との組合せについて後述するように、同時にまたは連続して投与することができる。がんまたは自己免疫性疾患を治療するために、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体による治療に１つ以上の追加の治療薬、例えば、チェックポイントモジュレーターを加えることができる。

【0228】

ある特定の実施形態において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、別の治療と同時にまたは連続して、対象（例えば、がんを有する対象）に投与される。例えば、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、放射線療法、手術、または化学療法、例えば、標的化学療法または免疫療法のうちの１つ以上とともに投与することができる。

【0229】

ある特定の実施形態において、がんを有する対象を治療する方法は、本発明の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体及び１つ以上のがん免疫薬剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）を対象に投与することを含む。

【0230】

免疫療法（例えば、がん免疫薬剤による療法）は、対象における免疫応答を増強、刺激、及び／または上方調節するのに有効である。１つの態様において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤）の投与は、がんの治療、例えば、腫瘍成長の阻害において、相乗効果を有する。

【0231】

１つの態様において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、がん免疫薬剤の投与前に、順次投与される。１つの態様において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、がん免疫薬剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤）と同時に投与される。また１つの態様において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、がん免疫薬剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤）の投与後に、順次投与される。２つの薬剤の投与は、例えば、３０分、６０分、９０分、１２０分、３時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、５日、７日、もしくは１週間以上の間隔をおいた時点で開始してもよく、または第２の薬剤の投与は、例えば、第１の薬剤を投与してから３０分後、６０分後、９０分後、１２０分後、３時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後、３日後、５日後、７日後、もしくは１週間後に開始してもよい。

【0232】

ある特定の態様において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤）は、同時に投与され、例えば、同時に、例えば、３０分間または６０分間にわたって患者に注入される。主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、がん免疫薬剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤）と共製剤化することができる。

【0233】

がん免疫薬剤としては、例えば、低分子薬物、抗体もしくはそのフラグメント、または他の生物製剤もしくは低分子が挙げられる。生物学的がん免疫薬剤の例としては、限定されるものではないが、抗体、抗体フラグメント、ワクチン、及びサイトカインが挙げられる。１つの態様において、抗体はモノクローナル抗体である。ある特定の態様において、モノクローナル抗体は、ヒト化またはヒト抗体である。

【0234】

１つの態様において、がん免疫薬剤は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞上の（ｉ）刺激性（共刺激性を含む）分子（例えば、受容体もしくはリガンド）のアゴニスト、または（ｉｉ）阻害性（共阻害性を含む）分子（例えば、受容体もしくはリガンド）のアンタゴニストであり、いずれも抗原特異的Ｔ細胞応答の増幅をもたらす。ある特定の態様において、がん免疫薬剤は、（ｉ）自然免疫に関与する細胞（例えば、ＮＫ細胞）上の（ｉ）刺激性（共刺激性を含む）分子（例えば、受容体もしくはリガンド）のアゴニスト、または（ｉｉ）阻害性（共阻害性を含む）分子（例えば、受容体もしくはリガンド）のアンタゴニストであり、がん免疫薬剤は自然免疫を増強する。このようながん免疫薬剤は、しばしば免疫チェックポイント調節剤、例えば、免疫チェックポイント阻害剤または免疫チェックポイント刺激剤と称される。

【0235】

ある特定の実施形態において、がん免疫薬剤は、膜結合リガンドのＢ７ファミリーのメンバー（Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－Ｈ１（ＰＤ－Ｌ１）、Ｂ７－ＤＣ（ＰＤ－Ｌ２）、Ｂ７－Ｈ２（ＩＣＯＳ－Ｌ）、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ５、及びＢ７－Ｈ６を含む）を標的とする（もしくはそれに特異的に結合する）薬剤、またはＢ７ファミリーのメンバーに特異的に結合する共刺激性もしくは共阻害性受容体であり得る。がん免疫薬剤は、膜結合リガンドのＴＮＦファミリーのメンバーを標的とする薬剤、またはそれに特異的に結合する共刺激性もしくは共阻害性受容体（例えば、ＴＮＦ受容体ファミリーのメンバー）であり得る。がん免疫薬剤によって標的とされ得る例示的なＴＮＦ及びＴＮＦＲファミリーメンバーとしては、ＣＤ４０及びＣＤ４０Ｌ、ＯＸ－４０、ＯＸ－４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２－Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎｌ４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴｆｉＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｃＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＩ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＥＤＡＲ、ＥＤＡ１、ＸＥＤＡＲ、ＥＤＡ２、ＴＮＦＲ１、リンパ毒素α／ΤΝΡβ、ＣＸＣＲ５、ＴＮＦａ、ＬＴｆｉＲ、リンパ毒素ａ １β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹ、ならびにＮＧＦＲが挙げられる。がんを治療するために主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体と組み合わせて使用され得るがん免疫薬剤は、Ｂ７ファミリーメンバー、Ｂ７受容体ファミリーメンバー、ＴＮＦファミリーメンバー、またはＴＮＦＲファミリーメンバー（例えば、上述のもの）を標的とする薬剤、例えば、抗体であり得る。

【0236】

１つの態様において、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、（ｉ）Ｔ細胞活性化を阻害するタンパク質（例えば、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤＩＨ、ＬＡＩＲｌ、ＴＩＭ－１、ＴＩＭ－４、及びＰＳＧＬ－１、ならびに（ｉｉ）ＰＳＧＬ－１、及びＰＳＧＬ－１）のアンタゴニスト（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）、ならびに（ｉｉ）Ｔ細胞活性化を刺激するタンパク質（例えば、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４－１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＤＲ３、及びＣＤ２８Ｈ）のアゴニストのうちの１つ以上とともに投与される。

【0237】

１つの態様において、がん免疫薬剤は、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカイン（例えば、ＩＬ－６、ＩＬ－１０、ＴＧＦ－β、ＶＥＧＦ、及び他の免疫抑制性サイトカイン）を阻害する薬剤（すなわち、そのアンタゴニスト）、またはＴ細胞活性化を刺激するサイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びＩＦＮα）のアゴニスト（例えば、サイトカイン自体）であり、免疫応答を刺激する。

【0238】

免疫系を刺激するために、例えば、がん及び感染性疾患の治療のために、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体と組み合わせることができる他の薬剤としては、ＮＫ細胞上の阻害性受容体のアンタゴニストまたはＮＫ細胞上の活性化受容体のアゴニストが挙げられる。例えば、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、ＫＩＲのアンタゴニストと組み合わせることができる。

【0239】

併用療法のためのまた他の薬剤としては、マクロファージまたは単球を阻害するまたは枯渇させる薬剤が挙げられ、これには、限定されるものではないが、ＣＳＦ－ＩＲアンタゴニスト、例えば、ＲＧ７１５５（ＷＯ１１／７００２４、ＷＯ１１／１０７５５３、ＷＯ１１／１３１４０７、ＷＯ１３／８７６９９、ＷＯ１３／１１９７１６、ＷＯ１３／１３２０４４）またはＦＰＡ００８（ＷＯ１１／１４０２４９；ＷＯ１３１６９２６４；ＷＯ１４／０３６３５７）を含むＣＳＦ－ＩＲアンタゴニスト抗体が含まれる。

【0240】

がん免疫薬剤には、ＴＧＦ－βシグナル伝達を阻害する薬剤も含まれる。

【0241】

主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体と組み合わせることができるさらなる薬剤としては、腫瘍抗原提示を増強する薬剤（例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、及びＩｍｉｑｕｉｍｏｄ）、または腫瘍細胞の免疫原性を増強する療法（例えば、アントラサイクリン）が挙げられる。

【0242】

主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体と組み合わせることができるまた他の療法としては、Ｔ_ｒｅｇ細胞を枯渇させるまたは遮断する療法（例えば、ＣＤ２５に特異的に結合する薬剤）が挙げられる。

【0243】

主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体と組み合わせることができる別の療法としては、代謝酵素（例えば、インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ、または一酸化窒素シンターゼ）を阻害する療法がある。

【0244】

使用され得る別のクラスの薬剤としては、アデノシンの形成を阻害する薬剤またはアデノシンＡ２Ａ受容体を阻害する薬剤が挙げられる。

【0245】

がんを治療するために主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体と組み合わせることができる他の療法としては、Ｔ細胞のアレルギーまたは疲弊を回復／防止する療法、ならびに腫瘍部位での自然免疫活性化及び／または炎症を誘発する療法が挙げられる。

【0246】

主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、複数のがん免疫薬剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）と組み合わせることができ、例えば、以下のうちの１つ以上のような、免疫経路の複数のエレメントを標的とするコンビナトリアルアプローチと組み合わせることができる：腫瘍抗原提示を増強する療法（例えば、樹状細胞ワクチン、ＧＭ－ＣＳＦ分泌細胞ワクチン、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）；例えば、ＣＴＬＡ－４及び／またはＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２経路を阻害することにより、及び／またはＴｒｅｇもしくは他の免疫抑制細胞を枯渇させるもしくは遮断することにより、負の免疫調節を阻害する療法；例えば、ＣＤ－１３７、ＯＸ－４０、及び／またはＧＩＴＲ経路を刺激する及び／またはＴ細胞のエフェクター機能を刺激するアゴニストを用いて、正の免疫調節を刺激する療法；抗腫瘍Ｔ細胞の出現頻度を全身的に増加させる療法；例えば、ＣＤ２５のアンタゴニスト（例えば、ダクリズマブ）を用いて、またはｅｘ ｖｉｖｏ抗ＣＤ２５ビーズ枯渇によって、Ｔｒｅｇ（例えば、腫瘍内のＴｒｅｇ）を枯渇させるまたは阻害する療法；腫瘍内のサプレッサー骨髄系細胞の機能に影響を及ぼす療法；腫瘍細胞の免疫原性を増強する療法（例えば、アントラサイクリン）；遺伝子修飾細胞（例えば、キメラ抗原受容体によって修飾された細胞（ＣＡＲ－Ｔ療法））を含む養子Ｔ細胞またはＮＫ細胞移入；代謝酵素（例えば、インドールアミンジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、ジオキシゲナーゼ、アルギナーゼ、一酸化窒素シンターゼ）を阻害する療法；Ｔ細胞のアネルギーまたは疲弊を回復／防止する療法；腫瘍部位における自然免疫活性化及び／または炎症を誘発する療法；免疫刺激性サイトカインの投与または免疫抑制性サイトカインの遮断。

【0247】

例えば、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体は、正の共刺激受容体をライゲーションする１つ以上のアゴニスト的薬剤；阻害性受容体を介しシグナル伝達を減弱させる１つ以上のアンタゴニスト（ブロッキング剤）（例えば、腫瘍微小環境内の独特の免疫抑制経路を克服するアンタゴニスト）（例えば、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ２相互作用の遮断）；抗腫瘍免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の出現頻度を全身的に増加させ、（例えば、ＣＤ２５を阻害することによって）Ｔｒｅｇを枯渇させるまたは阻害する１つ以上の薬剤；代謝酵素（例えば、ＩＤＯ）を阻害する１つ以上の薬剤；Ｔ細胞のアネルギーまたは疲弊を回復／防止する１つ以上の薬剤；ならびに腫瘍部位における自然免疫活性化及び／または炎症を誘発する１つ以上の薬剤、とともに使用することができる。

【0248】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＣＴＬＡ－４アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト的ＣＴＬＡ－４抗体）である。好適なＣＴＬＡ－４抗体としては、例えば、ＹＥＲＶＯＹ（イピリムマブ）またはトレメリムマブが挙げられる。

【0249】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、主題の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＰＤ－１アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト的ＰＤ－１抗体）である。好適なＰＤ－１抗体としては、例えば、ＯＰＤＩＶＯ（ニボルマブ）、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（ペムブロリズマブ）、またはＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４；ＷＯ２０１２／１４５４９３）が挙げられる。また、がん免疫薬剤にはピジリズマブ（ＣＴ－０１１）も含まれる。ＰＤ－１受容体を標的とする別のアプローチは、ＡＭＰ－２２４と呼ばれるＩｇＧｌのＦｃ部分と融合したＰＤ－Ｌ２の細胞外ドメイン（Ｂ７－ＤＣ）から構成された組換えタンパク質である。

【0250】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト的ＰＤ－Ｌ１抗体）である。好適なＰＤ－Ｌ１抗体としては、例えば、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＲＧ７４４６；ＷＯ２０１０／０７７６３４）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ－９３６５５９（ＷＯ２００７／００５８７４）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（ＷＯ２０１３／７９１７４）、またはｒＨｉｇＭ１２Ｂ７が挙げられる。

【0251】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＬＡＧ－３アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト的ＬＡＧ－３抗体）である。好適なＬＡＧ３抗体としては、例えば、ＢＭＳ－９８６０１６（ＷＯ１０／１９５７０、ＷＯ１４／０８２１８）、またはＩＭＰ－７３１もしくはＩＭＰ－３２１（ＷＯ０８／１３２６０１、ＷＯ０９／４４２７３）が挙げられる。

【0252】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＣＤ１３７（４－１ＢＢ）アゴニスト（例えば、アゴニスト的ＣＤ１３７抗体）である。好適なＣＤ１３７抗体としては、例えば、ウレルマブまたはＰＦ－ ０５０８２５６６（Ｗ０１２／３２４３３）が挙げられる。

【0253】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＧＩＴＲアゴニスト（例えば、アゴニスト的ＧＩＴＲ抗体）である。好適なＧＩＴＲ抗体としては、例えば、ＴＲＸ－５１８（ＷＯ０６／１０５０２１、ＷＯ０９／００９１１６）、ＭＫ－４１６６（ＷＯ１１／０２８６８３）、またはＷＯ２０１５／０３１６６７に開示されているＧＩＴＲ抗体が挙げられる。

【0254】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＯＸ４０アゴニスト（例えば、アゴニスト的ＯＸ４０抗体）である。好適なＯＸ４０抗体としては、例えば、ＭＥＤＩ－６３８３、ＭＥＤＩ－６４６９、またはＭＯＸＲ０９１６（ＲＧ７８８８；ＷＯ０６／０２９８７９）が挙げられる。

【0255】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＣＤ４０アゴニスト（例えば、アゴニスト的ＣＤ４０抗体）である。ある特定の実施形態において、がん免疫薬剤はＣＤ４０アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト的ＣＤ４０抗体）である。好適なＣＤ４０抗体としては、例えば、ルカツムマブ（ＨＣＤ１２２）、ダセツズマブ（ＳＧＮ－４０）、ＣＰ－８７０，８９３、またはＣｈｉ Ｌｏｂ７／４が挙げられる。

【0256】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＣＤ２７アゴニスト（例えば、アゴニスト的ＣＤ２７抗体）である。好適なＣＤ２７抗体としては、例えば、バリルマブ（ＣＤＸ－１１２７）が挙げられる。

【0257】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤は（Ｂ７Ｈ３に対する）ＭＧＡ２７１である（ＷＯｌ １／１０９４００）。

【0258】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＫＩＲアンタゴニスト（例えば、リリルマブ）である。

【0259】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤はＩＤＯアンタゴニストである。好適なＩＤＯアンタゴニストとしては、例えば、ＩＮＣＢ－０２４３６０（ＷＯ２００６／１２２１５０、ＷＯ０７／７５５９８、ＷＯ０８／３６６５３、ＷＯ０８／３６６４２）、インドキシモド、ＮＬＧ－９１９（ＷＯ０９／７３６２０、ＷＯ０９／１１５６６５２、ＷＯｌ １／５６６５２、ＷＯ１２／１４２２３７）、またはＦ００１２８７が挙げられる。

【0260】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益を得られ得る疾患、例えば、がんまたは感染性疾患を有する対象は、本発明の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することによって治療され、がん免疫薬剤は、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト、例えば、ＴＬＲ２／４アゴニスト（例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ）；ＴＬＲ７アゴニスト（例えば、ＨｉｌｔｏｎｏｌもしくはＩｍｉｑｕｉｍｏｄ）；ＴＬＲ７／８アゴニスト（例えば、Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）；またはＴＬＲ９アゴニスト（例えば、ＣｐＧ７９０９）である。

【0261】

１つの実施形態において、免疫系の刺激から利益が得られ得る疾患（例えば、がんまたは感染性疾患）を有する対象は、本発明の抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体及びがん免疫薬剤を対象に投与することにより治療され、がん免疫薬剤は、ＴＧＦ－β阻害剤、例えば、ＧＣ１００８、ＬＹ２１５７２９９、ＴＥＷ７１９７、またはＩＭＣ－ＴＲ１である。

【0262】

６．例示的な抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体
本明細書に記載の発明は、ＣＸＣＲ５に特異的なモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

【0263】

したがって、本発明の１つの態様は、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであって、ｈＣＸＣＲ５との結合、またはＨＦＢ２－４もしくはそのＨｚバリアントが結合するエピトープとの結合に関して、本明細書に記載の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントのいずれかと競合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

【0264】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト－マウスキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、ＣＤＲ移植抗体、またはリサーフィスド（ｒｅｓｕｒｆａｃｅｄ）抗体である。

【0265】

いくつかの実施形態において、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆ_ｄ、単鎖ＦｖまたはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆ_ｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ_２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ_２、（ｓｃＦｖ）_２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである。

【0266】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＤＣＣを増強する操作Ｆｃ領域（例えば、本明細書／上記に記載のもの（二重変異ｈＧ１ＤＥを含む））を有する。

【0267】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＣＸＣＲ５に特異的であり、例えば、ＣＸＣＲ３と実質的に交差反応しない、及び／またはマウスもしくはカニクイザルＣＸＣＲ５と実質的に交差反応しない。

【0268】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントのｈＣＸＣＲ５に対する解離定数（Ｋ_ｄ）は、１μΜ以下、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０^－８Ｍ以下、例えば、１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば、１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）である。

【0269】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＦＢ２－４またはそのＨｚバリアント（例えば、Ｈｚ９、Ｈｚ１２、Ｈｚ１４、Ｈｚ１５、Ｈｚ３７、Ｈｚ３８、Ｈｚ３９、Ｈｚ４０、Ｈｚ４１、及びＨｚ４２）により結合されるエピトープに結合する。

【0270】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、細胞に発現するｈＣＸＣＲ５に、約０．４～４ｎＭ（例えば、約０．９ｎＭまたは約１．２ｎＭ）のＥＣ５０という見かけの親和性で結合する。

【0271】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｃＡＭＰレポーターアッセイにおいて、ＣＸＣＲ５－ＣＸＣＬ１３シグナル伝達を約０．５～３．５ｎＭ（例えば、約０．４９ｎＭ）のＥＣ５０でアンタゴナイズする。

【0272】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｈＣＸＣＲ５を発現する細胞に対し、０．１ｎＭ未満、例えば、０．００１～０．１ｎＭ、例えば、約０．００２ｎＭのＥＣ５０でＡＤＣＣ活性を示す。

【0273】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＮＫ細胞によるｈＣＸＣＲ５を発現するヒトＢ細胞の殺滅を０．１ｆＭ未満、または約０．３ａＭ～０．８ｐＭのＥＣ５０で媒介する。

【0274】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｈＣＸＣＲ５に結合するが、ヒトケモカイン受容体ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＭＫＬＲ１、ＣＸＣＲ３Ｒ１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７、及びＸＣＲ１とは検出可能に結合しない。

【0275】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、末梢血中のＢ細胞を枯渇させ、任意選択で末梢血中のＢ細胞を可逆的に枯渇させる。

【0276】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、末梢血及び／または脾臓のＴｆｈ様細胞を枯渇させる。

【0277】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＸＣＲ５とＣＸＣＬ１３との結合を阻害する。

【0278】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントの非存在下のｃＡＭＰレベルと比較してｃＡＭＰレベルの増加をもたらすフォルスコリンによって別の方法で誘発される細胞におけるｃＡＭＰ生成のＣＸＣＬ１３阻害を阻害する（例えば、約０．４～３．５ｎＭ（例えば、約０．４９ｎＭ）のＥＣ５０でｃＡＭＰ生成のＣＸＣＬ１３阻害を阻害する）。任意選択で、ＣＸＣＬ１３阻害の最大阻害率は、少なくとも約６０％、７０％、または８０％である。

【0279】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトドナー末梢血単核球（ＰＢＭＣ）におけるＣＸＣＲ５発現細胞のＡＤＣＣを誘発する。

【0280】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｈＣＸＣＲ５に特異的に結合し、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントのいずれかと競合する。

【表2-1】

【表2-2】

【表2-3】

【表2-4】

【表2-5】

【表2-6】

【表2-7】

【表2-8】

【0281】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ヒトＣＸＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメントは、表Ａ及び表Ｂに収載されたいずれか１つの抗体の対応する少なくとも１つ、２つ、または３つ（例えば、３つ全て）のＶＨ ＣＤＲを含む。

【0282】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ヒトＣＸＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメントは、表Ａ及び表Ｃに収載されたいずれか１つの抗体の対応する少なくとも１つ、２つ、または３つ（例えば、３つ全て）のＶＬ ＣＤＲを含む。

【0283】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１、２、及び３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３配列と、配列番号９、１０、及び１１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列とを含む。

【0284】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７、１８、及び１９のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３配列と、配列番号２５、２６、及び２７のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列とを含む。

【0285】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３３、３４、及び３５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３配列と、配列番号４１、４２、及び４３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列とを含む。

【0286】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３３、４９、及び５１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３配列と、配列番号５７、５８、及び５９のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列とを含む。

【0287】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３３、４９、及び６５のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３配列と、配列番号５７、５８、及び５９のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列とを含む。

【0288】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６９、７０、及び７１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３配列と、配列番号７６、７７、及び７８のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列とを含む。

【0289】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３３、４９、及び５１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３配列と、配列番号１４９、１５０、及び１５１のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列とを含む。

【0290】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１４、１１５、及び１１６のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３配列と、配列番号１２０、１２１、及び１２２のアミノ酸配列をそれぞれ含むＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３配列とを含む。

【0291】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、本発明の抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のいずれか１つ以上において、最大１、２、３、４、もしくは５つ（例えば、最大１、２、もしくは３つ）のアミノ酸残基変化（例えば、欠失、挿入、もしくは置換（例えば、保存的置換））；及び／または本発明の抗体のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３のいずれか１つ以上において、１、２、３、４、もしくは５つ（例えば、最大１、２、または３つ）のアミノ酸残基変化（例えば、欠失、挿入、もしくは置換（例えば、保存的置換））を含む。

【0292】

本開示による抗ヒトＣＸＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメントは、表Ａに記載のアミノ酸配列のフレームワーク領域（ＦＲ）のいずれか、または表Ａに記載のＦＲアミノ酸配列と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）配列を用いて調製することができる。ある特定の実施形態において、重鎖ＦＲ領域は全て、本明細書で例示する同じ抗体に由来する。ある特定の実施形態において、軽鎖ＦＲ領域は全て、本明細書で例示する同じ抗体に由来する。ある特定の実施形態において、重鎖ＦＲ領域及び軽鎖ＦＲ領域はいずれも全て、本明細書で例示する同じ抗体に由来する。

【0293】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、表Ａに列挙されたいずれか１つの抗体の対応する重鎖フレームワーク領域の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨ ＦＲ１）、重鎖フレームワーク領域２（ＶＨ ＦＲ２）、重鎖フレームワーク領域３（ＶＨ ＦＲ３）、及び／または重鎖フレームワーク領域４（ＶＨ ＦＲ４）のうちの１つ、２つ、３つ、または全て（すなわち、４つ）、あるいは表Ａに記載のいずれか１つの抗体の対応するＶＨ ＦＲアミノ酸配列と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する）配列を含むＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、及び／またはＶＨ ＦＲ４を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を有する。

【0294】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４、２０、３６、５２、もしくは７２のＶＨ ＦＲ１、または配列番号４、２０、３６、５２、もしくは７２と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）アミノ酸配列を含む。

【0295】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５、２１、３７、５３、もしくは７３のＶＨ ＦＲ２、または配列番号５、２１、３７、５３、もしくは７３と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）アミノ酸配列を含む。

【0296】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６、２２、３８、５４、６４、もしくは７４のＶＨ ＦＲ３、または配列番号６、２２、３８、５４、６４、もしくは７４と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）アミノ酸配列を含む。

【0297】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７、２３、３９、もしくは５５のＶＨ ＦＲ４、または配列番号７、２３、３９、もしくは５５と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）アミノ酸配列を含む。

【0298】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、表Ａに列挙されたいずれか１つの抗体の対応する重鎖フレームワーク領域の重鎖フレームワーク領域１（ＶＬ ＦＲ１）、重鎖フレームワーク領域２（ＶＬ ＦＲ２）、重鎖フレームワーク領域３（ＶＬ ＦＲ３）、及び／または重鎖フレームワーク領域４（ＶＬ ＦＲ４）のうちの１つ、２つ、３つ、または全て（すなわち、４つ）、あるいは表Ａに記載のいずれか１つの抗体の対応するＶＬ ＦＲアミノ酸配列と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する）配列を含むＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、及び／またはＶＬ ＦＲ４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を有する。

【0299】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２、２８、４４、６０、６６、もしくは７９のＶＬ ＦＲ１、または配列番号１２、２８、４４、６０、６６、もしくは７９と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）アミノ酸配列を含む。

【0300】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３、２９、４５、６１、６７、もしくは８０のＶＬ ＦＲ２、または配列番号１３、２９、４５、６１、６７、もしくは８０と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）アミノ酸配列を含む。

【0301】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４、３０、４６、６２、もしくは８１のＶＬ ＦＲ３、または配列番号１４、３０、４６、６２、もしくは８１と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）アミノ酸配列を含む。

【0302】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５、３１、４７、もしくは８２のＶＬ ＦＲ４、または配列番号１５、３１、４７、もしくは８２と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）アミノ酸配列を含む。

【0303】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＬフレームワーク配列及びＶＨフレームワーク配列を含み、このＶＬフレームワーク配列及びＶＨフレームワーク配列の一方または両方が、それが由来するヒト生殖系列配列に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であり、このＶＬフレームワーク配列が由来するヒト生殖系列ＶＬ配列は、Ｖ１～２２、Ｖλコンセンサス、Ｖλ１コンセンサス、Ｖλ３コンセンサス、Ｖκコンセンサス、Ｖκ１コンセンサス、Ｖκ２コンセンサス、及びＶκ３からなる群より選択され、このＶＨフレームワーク配列が由来するヒト生殖系列ＶＨ配列は、ＶＨ３、ＶＨ５、ＶＨ１、及びＶＨ４からなる群より選択される。

【0304】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＬフレームワーク配列及びＶＨフレームワーク配列を含み、ＶＬフレームワーク配列及び／またはＶＨフレームワーク配列の一方または両方が、それが由来するヒト生殖系列配列と少なくとも６６％、７６％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。

【0305】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＬフレームワーク配列及びＶＨフレームワーク配列を含み、ＶＬフレームワーク配列またはＶＨフレームワーク配列の一方または両方が、それが由来するヒト生殖系列配列と同一である。

【0306】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは脱フコシル化されている。

【0307】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＡＤＣＣの増強を示す。

【0308】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＶＨ３生殖系列配列に由来するフレームワークＶＨ配列を含む。

【0309】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｆｃドメイン、例えば、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１もしくはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、またはＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４）のＦｃドメインを含む。ある特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧのＦｃドメイン、例えば、（ヒト）ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のものである。

【0310】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントにおいて、抗体または抗原結合フラグメントは、Ｆｃ融合タンパク質、モノボディ、マキシボディ、二機能性抗体、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦｖ、ペプチボディである。

【0311】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、９００ｐＭ、８００ｐＭ、７００ｐＭ、６００ｐＭ、５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１５０ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ、１５ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭ、及び１ｐＭからなる群より選択される値前後またはそれ未満のＫ_Ｄで、ヒトＣＸＣＲ５に結合する。

【0312】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１日～７日のヒトにおける予測半減期を有する。

【0313】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント（ヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを含む）は、良好な開発可能性プロファイルを有し、これには、高温（例えば、２５℃もしくは４０℃）下で、低ｐＨ条件（例えば、およそ室温でｐＨ３．５）下で、及び／または数ラウンドの凍結／解凍サイクル後に安定であることが含まれる。

【0314】

ある特定の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント（ヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを含む）は、抗体の開発可能性を改善するように設計されているアミノ酸配列の１つ以上の点変異を含む。例えば、Ｒａｙｂｏｕｌｄら（Ｆｉｖｅ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ｄｅｖｅｌｏｐａｂｉｌｉｔｙ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ，ＰＮＡＳ １１６（１０）：４０２５－４０３０，０１９）は、可変ドメイン配列のダウンロード可能な相同性モデルを構築し、５つの開発可能性ガイドラインに対しこれらを試験し、有力な配列の傾向及び正準形を報告する計算ツールＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｆｉｌｅｒ（ＴＡＰ）について説明している。著者らはさらに、ＴＡＰをｏｐｉｇ．ｓｔａｔｓ．ｏｘ．ａｃ．ｕｋ／ｗｅｂａｐｐｓ／ｓａｂｄａｂ－ｓａｂｐｒｅｄ／ＴＡＰ．ｐｈｐで自由に利用できるように提供している。

【0315】

治療用ｍＡｂの開発には、抗原に対し所望される親和性を達成することの他にも多くの障壁が存在する。このような障壁としては、内在性免疫原性、化学的及び立体構造的不安定性、自己会合、高粘度、多特異性、及び発現不良が挙げられる。例えば、高レベルの疎水性は、特に高度に可変性の相補性決定領域（ＣＤＲ）において、凝集、粘度、及び多特異性に繰り返し関与している。重鎖及び軽鎖の可変ドメインの正味電荷における非対称性は、高濃度での自己会合及び粘度とも相関する。ＣＤＲの正負の電荷のパッチは、高いクリアランス率及び低い発現レベルに関連付けられる。生成物の不均一性（例えば、酸化、異性化、またはグリコシル化）は、しばしば翻訳後修飾または共翻訳修飾がされやすい特定の配列モチーフに起因する。配列傾向の特定を容易にする計算ツールが利用可能である。Ｗａｒｓｚａｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｂｙ ｔｈｅ ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｔｈｅ ｖａｒｉａｂｌｅ ｌｉｇｈｔ－ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ．ＰＬｏＳ Ｃｏｍｐｕｔ Ｂｉｏｌ１５（８）：ｅ１００７２０７．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｃｂｉ．１００７２０７）も、可変軽鎖－重鎖界面の自動化設計により、抗体の親和性及び安定性を最適化する方法について説明している。候補抗体の潜在的な開発可能性の問題を特定するためのさらなる方法が利用可能であり、本発明の好ましい実施形態では、このような問題に対処して本発明の最適化された治療用抗体を導くために、従来の方法を介し候補抗体に１つ以上の点変異を導入することができる。

【0316】

７．ヒト化抗体
いくつかの実施形態において、本発明の抗体はヒト化抗体である。ヒト化抗体は、非ヒト抗体に対するヒトの免疫応答（例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答）（これは、結果として抗体治療薬に対する免疫応答を生じ、治療薬の有効性を減少させる可能性がある）を低減または除去するため、治療用分子として有用である。

【0317】

抗体は、任意の標準的方法によりヒト化することができる。ヒト化の非限定的な例示的な方法としては、例えば、米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；同第６，１８０，３７０号；Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－３６（１９８８）；及び米国公開第ＵＳ２００９／０１３６５００号に記載の方法が挙げられる。これらは全て、参照により援用される。

【0318】

ヒト化抗体とは、非ヒト可変領域のフレームワーク領域内の少なくとも１つのアミノ酸が、ヒトフレームワーク領域内の対応する位置に由来するアミノ酸で置き換えられた抗体のことである。いくつかの実施形態において、非ヒト可変領域のフレームワーク領域中の少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１５個、または少なくとも２０個のアミノ酸が、１つ以上のヒトフレームワーク領域内の１つ以上の対応する位置に由来するアミノ酸で置き換えられる。

【0319】

いくつかの実施形態において、置換に使用される対応するヒトアミノ酸の一部は、異なるヒト免疫グロブリン遺伝子のフレームワーク領域に由来する。すなわち、いくつかのこのような実施形態において、非ヒトアミノ酸のうちの１つ以上が、第１のヒト抗体のヒトフレームワーク領域からの対応するアミノ酸で置き換えられても、第１のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされてもよく、非ヒトアミノ酸のうちの１つ以上が、第２のヒト抗体のヒトフレームワーク領域からの対応するアミノ酸で置き換えられても、第２のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされてもよく、非ヒトアミノ酸のうちの１つ以上が、第３のヒト抗体のヒトフレームワーク領域からの対応するアミノ酸で置き換えられても、第３のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされてもよい、などとなる。さらに、いくつかの実施形態において、単一のフレームワーク領域内、例えば、ＦＲ２内で置換に使用される対応するヒトアミノ酸の全てが、同じヒトフレームワーク由来である必要はない。ただし、いくつかの実施形態において、置換に使用される対応するヒトアミノ酸は全て、同じヒト抗体由来であるか、または同じヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされる。

【0320】

いくつかの実施形態において、抗体は、１つ以上のフレームワーク領域全体を対応するヒトフレームワーク領域で置き換えることによってヒト化される。いくつかの実施形態において、置換される非ヒトフレームワーク領域に対し最も高レベルの相同性を有するヒトフレームワーク領域が選択される。いくつかの実施形態において、このようなヒト化抗体はＣＤＲ移植抗体である。

【0321】

いくつかの実施形態において、ＣＤＲ移植に続いて、１つ以上のフレームワークアミノ酸が、マウスフレームワーク領域内の対応するアミノ酸に戻される。このような「復帰変異」は、いくつかの実施形態において、１つ以上のＣＤＲの構造に寄与すると思われる、及び／または抗原接触に関与すると思われる、及び／または抗体の全体的な構造的完全性に関与すると思われる１つ以上のマウスフレームワークアミノ酸を保持するために行われる。いくつかの実施形態において、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下、１、またはゼロの復帰変異が、ＣＤＲ移植後に抗体のフレームワーク領域に対し行われる。

【表3-1】

【表3-2】

【表3-3】

【表3-4】

【表4-1】

【表4-2】

【表4-3】

【表4-4】

【表4-5】

【表5-1】

【表5-2】

【表5-3】

【表5-4】

【0322】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、表Ｂに列挙されたいずれか１つの抗体の対応する重鎖フレームワーク領域の重鎖フレームワーク領域１（ＶＨ ＦＲ１）、重鎖フレームワーク領域２（ＶＨ ＦＲ２）、重鎖フレームワーク領域３（ＶＨ ＦＲ３）、及び／または重鎖フレームワーク領域４（ＶＨ ＦＲ４）のうちの１つ、２つ、３つ、または全て（すなわち、４つ）、あるいは表Ｂ及びＤに記載のいずれか１つの抗体の対応するＶＨ ＦＲアミノ酸配列と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する）配列を含むＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、及び／またはＶＨ ＦＲ４配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を有する。

【0323】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８４、８５、８６、及び８７のアミノ酸配列とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、及びＶＨ ＦＲ４配列を含む。

【0324】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８９、９０、９１、及び８７のアミノ酸配列とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、及びＶＨ ＦＲ４配列を含む。

【0325】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９３、９４、９５、及び８７のアミノ酸配列とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、及びＶＨ ＦＲ４配列を含む。

【0326】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３８、９４、１３９、及び８７のアミノ酸配列とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、及びＶＨ ＦＲ４配列を含む。

【0327】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４１、１４２、１４３、及び８７のアミノ酸配列とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、及びＶＨ ＦＲ４配列を含む。

【0328】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３２、８５、１３３、及び８７のものとそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、及びＶＨ ＦＲ４配列を含む。

【0329】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９３、１２６、１２７、及び８７のものとそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、及びＶＨ ＦＲ４配列を含む。

【0330】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３２、１３３、１３４、及び８７のものとそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含むＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３、及びＶＨ ＦＲ４配列を含む。

【0331】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、表Ｃに列挙されたいずれか１つの抗体の対応する重鎖フレームワーク領域の重鎖フレームワーク領域１（ＶＬ ＦＲ１）、重鎖フレームワーク領域２（ＶＬ ＦＲ２）、重鎖フレームワーク領域３（ＶＬ ＦＲ３）、及び／または重鎖フレームワーク領域４（ＶＬ ＦＲ４）のうちの１つ、２つ、３つ、または全て（すなわち、４つ）、あるいは表Ｃ及び表Ｄに記載のいずれか１つの抗体の対応するＶＬ ＦＲアミノ酸配列と実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する）配列を含むＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、及び／またはＶＬ ＦＲ４を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を有する。

【0332】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９７、９８、９９、及び１００のアミノ酸配列とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、及びＶＬ ＦＲ４配列を含む。

【0333】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９７、１０２、９９、及び１００のアミノ酸配列とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、及びＶＬ ＦＲ４配列を含む。

【0334】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０３、１０４、１０５、及び１００のアミノ酸配列とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、及びＶＬ ＦＲ４配列を含む。

【0335】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０３、１０７、１０８、及び１００のアミノ酸配列とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、及びＶＬ ＦＲ４配列を含む。

【0336】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３４、１３５、１３６、及び１３１のものとそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、及びＶＬ ＦＲ４配列を含む。

【0337】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２８、１２９、１３０、及び１３１のものとそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、及びＶＬ ＦＲ４配列を含む。

【0338】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４５、１４６、１４７、及び１３１のアミノ酸配列とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、及びＶＬ ＦＲ４配列を含む。

【0339】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９７、９８、１５２、及び１００のアミノ酸配列とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、及びＶＬ ＦＲ４配列を含む。

【0340】

いくつかの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５４、１０２、９９、及び４７のアミノ酸配列とそれぞれ実質的に同一である（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する）または同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３、及びＶＬ ＦＲ４配列を含む。

【表6-1】

【表6-2】

【表6-3】

【表6-4】

【表6-5】

【0341】

いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト重鎖定常領域及び／またはヒト軽鎖定常領域も含む。

【0342】

８．ヒト抗体
いくつかの実施形態において、本発明の抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は、任意の好適な方法により作製することができる。非限定的な例示的な方法としては、ヒト免疫グロブリン座位を含むトランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を作製することが挙げられる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：２５５１－５５（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５－８（１９９３）；ｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－９（１９９４）；ならびに米国特許第５，５４５，８０７号；同第６，７１３，６１０号；同第６，６７３，９８６号；同第６，１６２，９６３号；同第５，５４５，８０７号；同第６，３００，１２９号；同第６，２５５，４５８号；同第５，８７７，３９７号；同第５，８７４，２９９号；及び同第５，５４５，８０６号を参照。

【0343】

非限定的な例示的な方法としては、ファージディスプレイライブラリーを用いてヒト抗体を作製することも挙げられる。例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１－８（１９９２）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－９７（１９９１）；及びＰＣＴ公開第ＷＯ９９／１０４９４号を参照。

【0344】

抗体定常領域
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のヒト化抗体、キメラ抗体、またはヒト抗体は、１つ以上のヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態において、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＤから選択されるアイソタイプである。いくつかの実施形態において、ヒト軽鎖定常領域は、Ｋ及びλから選択されるアイソタイプである。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４を含む。いくつかの実施形態において、抗体またはＦｃ融合パートナーは、例えばＩｇＧ１定常領域内に、Ｃ２３７Ｓ変異を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域を含む。いくつかのこのような実施形態において、ＩｇＧ２定常領域は、米国特許第６，９００，２９２号に記載のようなＰ３３１Ｓ変異を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。いくつかのこのような実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域内にＳ２４１Ｐ変異を含む。例えば、Ａｎｇａｌ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０（１）：１０５－１０８（１９９３）を参照。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。

【0345】

重鎖定常領域の選択により、抗体がｉｎ ｖｉｖｏでエフェクター機能を有するか否かが決定され得る。このようなエフェクター機能は、いくつかの実施形態において、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を含み、抗体が結合する細胞の殺滅をもたらし得る。典型的には、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３重鎖を含む抗体は、エフェクター機能を有する。

【0346】

いくつかの実施形態において、エフェクター機能は望ましくない。例えば、いくつかの実施形態において、炎症性疾患及び／または自己免疫性疾患の治療において、エフェクター機能は望ましくないことがある。いくつかのこのような実施形態において、ヒトＩｇＧ４またはＩｇＧ２重鎖定常領域が選択または操作される。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４定常領域は、Ｓ２４１Ｐ変異を含む。

【0347】

本明細書に記載の抗体はいずれも、任意の好適な方法により精製することができる。このような方法としては、限定されるものではないが、アフィニティーマトリックスまたは疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用が挙げられる。好適な親和性リガンドとしては、抗体が結合する抗原及び／またはエピトープ、ならびに抗体定常領域に結合するリガンドが挙げられる。例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ、または抗体アフィニティーカラムを使用して定常領域に結合させ、抗体を精製することができる。

【0348】

いくつかの実施形態において、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、例えばブチルまたはフェニルカラムも、いくつかのポリペプチドを精製するために使用される。ポリペプチドを精製する多くの方法が当技術分野で知られている。

【0349】

代替的に、いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体は、無細胞系で生成される。非限定的な例示的な無細胞系は、例えば、Ｓｉｔａｒａｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４９８：２２９－４４（２００９）；Ｓｐｉｒｉｎ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：５３８－４５（２００４）；Ｅｎｄｏ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．２１：６９５－７１３（２００３）に記載されている。

【0350】

９．抗体のフコシル化及び脱フコシル化
本発明の１つの態様は、ＣＸＣＲ５に結合するフコシル化抗体及び脱フコシル化抗体、ならびにこのような抗体を含む組成物、ならびにこのような抗体の使用（治療及び医薬の使用を含む）を提供する。

【0351】

代替的に、本発明は、変化したエフェクター機能を示す抗ＣＸＣＲ５抗体を提供する。いくつかの実施形態において、変化したエフェクター機能はＡＤＣＣの増加である。いくつかの実施形態において、抗体はフコースを欠くか、または検出可能に減少したレベルで（例えば、１０％未満、５％未満、２％未満）含む（すなわち、脱フコシル化されている）。

【0352】

いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ５に結合する抗体を形成可能な脱フコシル化抗体重鎖及び軽鎖が提供される。いくつかの実施形態において、１つ以上の特定の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む脱フコシル化抗体、重鎖、及び軽鎖が提供される。いくつかの実施形態において、脱フコシル化抗ＣＸＣＲ５抗体は、変化したエフェクター機能を有する。いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、他の点は同一の本発明のフコシル化抗ＣＸＣＲ５抗体と比較して増強されたＡＤＣＣ活性を有する。

【0353】

Ｌ－フコース（または６－デオキシ－Ｌ－ガラクトース）は単糖であり、動物におけるいくつかのＮ－及びＯ－結合グリカン及び糖脂質の構成要素である（Ｂｅｃｋｅｒ ａｎｄ Ｌｏｗｅ，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ １３：４１Ｒ－５１Ｒ，２００３（参照により援用される））。典型的には、フコースは、グリカン（血液型抗原、セレクチン、及び抗体に結合したグリカンを含む）の末端修飾として加えられる。フコースは、特異的なフコシルトランスフェラーゼによってα（１，２）－、α（１，３）－、α（１，４）－、及びα（１，６）－結合を介しグリカンに結合することができる。典型的には、α（１，２）－フコース結合はＨ－血液型抗原に関連する。α（１，３）－及びα（１，４）－フコース結合は、ＬｅｗｉｓＸ抗原の修飾に関連する。α（１，６）－フコース結合は、Ｎ－結合ＧｌｃＮＡｃ分子（例えば、抗体上のもの）に関連する。

【0354】

本発明の「脱フコシル化」抗体は、フコースを欠く抗体、例えば、定常領域グリコシル化においてフコースを欠くＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプ抗体を含む。ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３のグリコシル化は、最大２個のＧａｌ残基で終端されたコアフコシル化二分岐複合オリゴ糖グリコシル化としてＡｓｎ２９７で生じる。

【0355】

ＩｇＧのＣＨ２ドメインに見られる主なタイプの複合オリゴ糖構造、すなわち「グリコフォーム」は、ＷＯ９９／２２７６４（参照により援用される、７ページ参照）に記載されている。ここでは、Ｇ０とは、末端シアル酸（ＮｅｕＡｃｓ）またはＧａｌが存在しない二分岐構造を指し、Ｇ１とは、１つのＧａｌを有しＮｅｕＡｃｓを有しない二分岐構造を指し、Ｇ２とは、２つの末端Ｇａｌを有しＮｅｕＡｃｓを有しない二分岐構造を指す。

【0356】

いくつかの実施形態において、本発明の脱フコシル化抗体は、Ａｓｎ２９７においてフコースを欠いている。これらの構造は、末端Ｇａｌ残基の量に応じて、Ｇ０、Ｇ１（１，６もしくは１，３）、またはＧ２グリカン残基と呼ばれる。例えば、Ｒａｊｕ，ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔ．１：４４－５３（２００３）を参照。抗体ＦｃのＣＨＯタイプグリコシル化については、例えば、Ｒｏｕｔｉｅｒ，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｊ．１４：２０１－２０７（１９９７）に記載されている。

【0357】

いくつかの実施形態において、本明細書で互換的に使用される「脱フコシル」または「脱フコシル化」抗体は、コアフコースを欠くように糖操作された抗体を指す。グリカン部分においてフコース含量が低減した抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６）に対する親和性が増加し、結果として、活性依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性が増強される。

【0358】

脱フコシル抗体は、フコース付加を担う遺伝子（α１，６－フコシルトランスフェラーゼ）のアレルを両方とも欠くＰｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞株（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）を用いて生成することができる。また、脱フコシルまたは低減フコース抗体は、オリゴ糖生合成活性を様々な方法で修飾することによっても生成することができる。例えば、生成細胞株のゴルジ体でＮ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）を過剰発現させると、抗体のＦｃ定常領域に関連する二分岐オリゴ糖構造が生成され、フコシル化が抑制される。このような発現系では、ＧｎＴＩＩＩ発現のレベルは脱フコシル化ＩｇＧ１グリコフォームの生成と相関し、ＡＤＣＣ活性の増強がもたらされる。

【0359】

また、フコシル化は、糖アナログ（例えば、限定されるものではないが、ＷＯ２０１２／０１９１６５に記載のようなフコースアナログ）の使用によっても細胞培養で減少させることができる。このように、脱フコシル化または低減フコース抗体は、当技術分野で周知されている多種多様な方法を用いて生成することができる。

【0360】

いくつかの実施形態において、本発明の脱フコシル化抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する親和性が増強されている。いくつかの実施形態において、本発明の脱フコシル化抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対する親和性が増強されている。いくつかの実施形態において、本発明の脱フコシル化抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対する親和性が増強されている。

【0361】

「グリコフォーム」とは、様々な炭水化物単位の結合を含む複合オリゴ糖構造を指す。このような構造は、例えば、Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ ｏｆ Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｖａｒｋｉ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９９９）に記載されている（この文献では、標準的な糖鎖生物学の命名法についても概説されている）。このようなグリコフォームとしては、限定されるものではないが、Ｇ２、Ｇ１、Ｇ０、Ｇ－１、及びＧ－２が挙げられる（例えば、国際特許公開第ＷＯ９９／２２７６４号を参照）。

【0362】

「グリコシル化パターン」とは、タンパク質に共有結合している炭水化物単位（例えば、グリコフォーム）のパターン、及びグリコフォーム（複数可）がタンパク質、より具体的には免疫グロブリンタンパク質のペプチド骨格に共有結合している部位（複数可）のパターンとして定義される。

【0363】

いくつかの実施形態において、非糖修飾ＣＨＯ宿主細胞内で組換え発現した抗体のバッチの少なくとも８５パーセントが、Ａｓｎ２９７でフコシル化されている。

【0364】

複数の抗体を含む組成物について言及する場合、組成物中の抗体の約５パーセント未満が少なくとも１つのＡｓｎ２９７でフコースを含む場合、抗体は脱フコシル化されているとみなされる。

【0365】

ある特定の実施形態において、脱フコシル化のレベルは約１００％であり、すなわち、抗体のフコシル化を測定するための標準的な方法を用いると、いずれの重鎖Ａｓｎ２９７グリコフォームにもフコースが検出されない。

【0366】

フコースを測定する方法は、本明細書に記載の方法を含めて、当技術分野で知られている任意の方法を含む。いくつかの実施形態において、複数の脱フコシル化抗体を含む組成物中ではフコースが検出できない。いくつかの実施形態において、脱フコシル化抗体は、増強されたＡＤＣＣ活性を有する。

【0367】

いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体（すなわち、脱フコシル化抗体）が提供される。例えば、複数のこのような抗体を含む組成物中のフコースの量は、０～３０％、０～２０％、０～１５％、１～１０％、または０～５％であり得る。

【0368】

いくつかの実施形態において、複数の本発明の抗体を含む組成物は、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、９７％超、９９％超、または９９．５％超の脱フコシル化抗体を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、検出限界内で１００パーセント脱フコシル化されている（すなわち、抗体中のフコースを検出するための当技術分野で認められている方法（例えば、本明細書に記載のもの）を用いると、Ａｓｎ２９７ではフコースが検出できない／検出されない）。フコースの量は、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の和に対し、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することにより、定量することができる。

【0369】

いくつかの実施形態において、フコシル化のレベルは０．５％以下であり、これは試験方法における定量限界（ＬＯＱ）に基づく。したがって、いくつかの実施形態において、脱フコシル化のレベルは９９．５％以上である。

【0370】

Ｎ－結合オリゴ糖プロファイル法を使用して、試料中のフコシル化、シアリル化、マンノシル化、及び末端グラクトシル化のレベルを定量することができる。Ｎ－結合オリゴ糖法は、Ｎ－結合グリカンの評価に使用することができる。簡潔に説明すると、Ｎ－結合グリカンをペプチド－Ｎ－グリコシダーゼＦを用いてタンパク質から酵素的に放出させる。次いでグリカンを蛍光剤によって誘導体化し、親水性相互作用液体クロマトグラフィー及び蛍光検出を用いて解析する。次いで、クロマトグラフィープロファイルを標準物質のプロファイルと比較する。当技術分野で知られているこの方法及び他の多くの方法は、抗体のフコシル化の程度を評価するために使用することができ、また、本発明の抗体中に存在するフコシル化のレベルを定量するために使用することができる。

【0371】

抗体内のフコースを検出する非限定的な例示的な方法としては、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析（例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６を参照）、放出された蛍光標識オリゴ糖のＨＰＬＣ測定（例えば、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎ－Ｇｌｙｃａｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ｕｓｉｎｇ ＵＨＰＬＣ ｗｉｔｈ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．（２０１２）；Ｌｉｎｅｓ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌｙｓｉｓ １４：６０１－６０８（１９９６）；Ｔａｋａｈａｓｉ，Ｊ．Ｃｈｒｏｍ．７２０：２１７－２２５（１９９６）を参照）、放出された蛍光標識オリゴ糖のキャピラリー電気泳動測定（例えば、Ｍａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，７１：５１８５－５１９２（１９９９）を参照）、及び単糖組成を測定するためのパルスドアンペロメトリー検出を伴うＨＰＬＣ（例えば、Ｈａｒｄｙ ｅｔ ａｌ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．１７０：５４－６２（１９８８）を参照）が挙げられる。

【0372】

Ａｓｎ２９７とは、Ｆｃ領域内の約２９７位に位置するアスパラギン残基を指す（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング）が、Ａｓｎ２９７は、抗体内のわずかな配列バリエーションにより、２９７位のおよそプラスまたはマイナス３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４～３００位に位置することもある。本明細書に記載のＣＸＣＲ５抗体の場合、Ａｓｎ２９７は配列モチーフＱＹＮＳＴに見出すことができる。

【0373】

フコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、ＵＳ２００３／０１５７１０８及びＵＳ２００４／００９３６２１を参照。「脱フコシル化」または「フコース不全」抗体に関連する刊行物の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる（全て参照により本明細書に援用される）。

【0374】

脱フコシル化抗体を生成可能な細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が不全であるＬｅｃ １３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６））；ＵＳ２００３／０１５７１０８Ａ１；及びＷＯ２００４／０５６３１２（実施例１１を参照）、ならびにノックアウト細胞株、例えば、機能的アルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８を欠く細胞株、例えば、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ，９４（４）：６８０－６８８（２００６）；及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照）が挙げられる。

【0375】

ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、二等分されたオリゴ糖を有し、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二等分されている、。このような抗体は、低減されたフコシル化及び／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。このような抗体の例は、例えばＷＯ２００３／０１１８７８、米国特許第６，６０２，６８４号、及びＵＳ２００５／０１２３５４６に記載されている。

【0376】

ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を有する。このような抗体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。このような抗体は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７、ＷＯ１９９８／５８９６４、及びＷＯ１９９９／２２７６４（全て参照により本明細書に援用される）に記載されている。

【0377】

いくつかの実施形態において、本発明の脱フコシル化抗体は、ヒトエフェクター細胞の存在下で、フコースを含む対照／親抗体よりも有効にＡＤＣＣを媒介する。概して、ＡＤＣＣ活性は、本明細書で開示するようなｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイを用いて定量することができるが、ＡＤＣＣ活性を定量するための（例えば、動物モデルなどにおける）他のアッセイまたは方法も企図されている。

【0378】

いくつかの実施形態において、脱フコシル化抗ＣＸＣＲ５抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ ｖｉｖｏで増強されたＡＤＣＣ活性を有する。いくつかの実施形態において、脱フコシル化抗ＣＸＣＲ５抗体は、増強されたＡＤＣＣ活性をｉｎ ｖｉｔｒｏで有する。いくつかの実施形態において、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＡＤＣＣ活性は、本明細書に記載の方法によって定量される。簡潔に説明すると、抗ＣＸＣＲ５抗体またはアイソタイプ対照の段階希釈液を、健康ヒトドナーまたはカニクイザルの末梢血単核球（ＰＢＭＣ）とともにインキュベートする。このアッセイでは、ＰＢＭＣが、ナチュラルキラー（ＮＫ）エフェクター細胞ならびに標的ＣＸＣＲ５^＋Ｂ及びＴｆｈ様細胞の供給源となる。フローサイトメトリーを使用して、およそ２０時間後に残存するＢ細胞及びＴｆｈ様細胞の数を定量化する。ＰＦ－０６８３５３７５抗体濃度の対数に対する抗原結合集団の細胞傷害性のパーセンテージをプロットすることにより、細胞傷害性滴定曲線を生成した。ＥＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ｖｅｒｓｉｏｎ ６．０，ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）の非線形回帰曲線フィット及びアゴニスト用量応答モデルのシグモイド対数を用いて、以下の式に従って決定した：
対数（アゴニスト）ｖｓ応答－可変勾配（４パラメーター）
Ｙ＝Ｂｏｔｔｏｍ＋（Ｔｏｐ－Ｂｏｔｔｏｍ／（１＋１０＾（（ＬｏｇＥＣ_５０－Ｘ）＊ヒル勾配））
式中、Ｙは細胞傷害性のパーセンテージであり、Ｘは抗体濃度であり、Ｔｏｐはシグモイド曲線の上部プラトーに対応するＹ値の最大値であり、Ｂｏｔｔｏｍはシグモイド曲線の下部プラトーに対応するＹ値の最小値（０に拘束）であり、ＬｏｇＥＣ５０は曲線の変曲点における抗体濃度の対数である。

【0379】

平均値及び標準偏差（ＳＴＤＥＶ）を用いて、実験間でＥＣ５０値をまとめた。

【0380】

いくつかの実施形態において、ヒト化ｍＡｂがヒト扁桃由来の真正Ｔｆｈ細胞のＡＤＣＣを誘導する能力は、扁桃単核細胞から単離したＣＤ４＋Ｔ細胞を用いて、ＰＢＭＣから単離したＮＫ細胞を加えて、同様に評価した。

【0381】

いくつかの実施形態において、ＣＸＣＲ５を発現するＢａ／Ｆ３細胞が標的細胞として使用される。いくつかの実施形態において、細胞傷害性は、ＣｙｔｏＴｏｘ非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いてＬＤＨ放出を定量化することにより決定される。

【0382】

いくつかの実施形態において、最大溶解は５％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を用いて定量され、自発放出は、抗体の不在下で定量される。いくつかの実施形態において、特異的溶解のパーセンテージは、式：（実験－自発放出）／（最大－自発放出）×１００＝特異的溶解パーセントを用いて定量することができる。

【0383】

いくつかの実施形態において、増強されたＡＤＣＣ活性を有する脱フコシル化抗ＣＸＣＲ５抗体は、試験抗体の少なくとも１つの濃度において、同じ量のフコシル化抗体を用いた特異的溶解よりも少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、または少なくとも７５パーセンテージポイント大きい特異的溶解をもたらす。

【0384】

いくつかの実施形態において、増強されたＡＤＣＣ活性を有する脱フコシル化抗ＣＸＣＲ５抗体は、フコシル化抗体を用いた特異的溶解よりも少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、または少なくとも７５パーセンテージポイント大きい特異的溶解をもたらし、各抗体は、０．０１～１マイクロｇ／ｍｌの濃度であり、標的細胞は、ＣＸＣＲ５を発現するＢａ／Ｆ３細胞である。

【0385】

いくつかの実施形態において、抗体は、０．０００００５マイクロｇ／ｍｌ～５マイクロｇ／ｍｌの範囲の濃度で試験される。

【0386】

いくつかの実施形態において、脱フコシル化抗ＣＸＣＲ５抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する増強された親和性を有する。いくつかの実施形態において、脱フコシル化抗ＣＸＣＲ５抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対する増強された親和性を有する。いくつかの実施形態において、脱フコシル化抗ＣＸＣＲ５抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対する増強された親和性を有する。いくつかの実施形態において、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する抗体親和性は、表面プラズモン共鳴を用いて、及び／または以下のように定量され、これは、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）を参照して記載されるが、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対する親和性の定量にも適している。

【0387】

簡潔に説明すると、いくつかの実施形態において、フコシル化または脱フコシル化抗ＣＸＣＲ５抗体は、プロテインＡでコーティングされたデキストランチップ上に捕捉される。ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）（例えば、Ｒ ａｎｄ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから入手可能）を様々な濃度で注入する。フコシル化及び脱フコシル化抗ＣＸＣＲ５抗体に対するＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）の会合定数、解離定数、及び親和性は、例えば、表面プラズモン共鳴システム（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ １：１ ｂｉｎｄｉｎｇ ｍｏｄｅｌ）を備えたソフトウェアを用いて定量することができる。

【0388】

いくつかの実施形態において、脱フコシル化抗ＣＸＣＲ５抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（例えば、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）またはＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８））に対する増強された親和性を有し得、フコシル化抗ＣＸＣＲ５抗体と比較して、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも７倍、少なくとも１０倍、少なくとも１２倍、少なくとも１５倍、少なくとも１７倍、２０倍、３０倍、５０倍、１００倍、５００倍、または少なくとも１０００倍の親和性でＦｃガンマＲＩＩＩＡに結合することができる。

【0389】

１０．本発明の抗体をコードする核酸分子
本発明は、本明細書に記載の抗体の１つ以上の鎖をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子も提供する。いくつかの実施形態において、核酸分子は、本明細書に記載の抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、核酸分子は、本明細書に記載の抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド及び軽鎖をコードするポリヌクレオチドの両方を含む。いくつかの実施形態において、第１の核酸分子は、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチドを含み、第２の核酸分子は、軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチドを含む。

【0390】

いくつかのこのような実施形態において、重鎖及び軽鎖は、１つの核酸分子から、または２つの別々の核酸分子から、２つの別々のポリペプチドとして発現する。いくつかの実施形態において、例えば、抗体がｓｃＦｖである場合、単一のポリヌクレオチドが、一緒に結合した重鎖及び軽鎖の両方を含む単一のポリペプチドをコードする。

【0391】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、翻訳されたときに重鎖または軽鎖のＮ末端に位置するリーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含む。上記で説明したように、リーダー配列は、ネイティブの重鎖または軽鎖リーダー配列であっても、別の異種リーダー配列であってもよい。

【0392】

核酸分子は、当技術分野で慣例的な組換えＤＮＡ技法を用いて構築することができる。いくつかの実施形態において、核酸分子は、選択された宿主細胞（例えば、哺乳類細胞）での発現に適した発現ベクターである。

【0393】

１１．ベクター
本明細書に記載の抗体の重鎖及び／または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。このようなベクターとしては、限定されるものではないが、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどが挙げられる。いくつかの実施形態において、ベクターは、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチド配列と、軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチド配列とを含む。いくつかの実施形態において、重鎖及び軽鎖は、２つの別々のポリペプチドとしてベクターから発現する。いくつかの実施形態において、重鎖及び軽鎖は、例えば、抗体がｓｃＦｖであるとき、単一のポリペプチドの一部として発現ｓｙｒｙ。

【0394】

いくつかの実施形態において、第１のベクターは、重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターは、軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、第１のベクター及び第２のベクターは、同様の量（例えば、同様のモル量または同様の質量）で宿主細胞内に形質移入される。いくつかの実施形態において、５：１～１：５の第１のベクター及び第２のベクターのモル比または質量比で、宿主細胞内に形質移入される。いくつかの実施形態において、重鎖をコードするベクター及び軽鎖をコードするベクターに対し、１：１～１：５の質量比が使用される。いくつかの実施形態において、重鎖をコードするベクター及び軽鎖をコードするベクターに対し、１：２の質量比が使用される。

【0395】

いくつかの実施形態において、ＣＨＯもしくはＣＨＯ由来細胞、またはＮＳＯ細胞でのポリペプチドの発現に最適化されているベクターが選択される。例示的なこのようなベクターは、例えば、Ｒｕｎｎｉｎｇ Ｄｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：８８０－８８９（２００４）に記載されている。いくつかの実施形態において、ベクターは、動物（ヒトを含む）における主題抗体のｉｎ ｖｉｖｏ発現のために選択される。いくつかのこのような実施形態において、ポリペプチド（単数または複数）の発現は、組織特異的な方式で機能するプロモーター（単数または複数）の制御下にある。例えば、肝臓特異的プロモーターについては、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ ２００６／０７６２８８号に記載されている。

【0396】

１２．宿主細胞
本発明の別の態様は、本発明の抗ＣＸＣＲ５抗体のいずれか１つをコードする核酸分子、及び／または当該核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞を提供する。

【0397】

様々な実施形態において、本明細書に記載の抗体の重鎖及び／または軽鎖は、原核細胞（例えば、細菌細胞）、または真核細胞（例えば、真菌細胞（例えば、酵母）、植物細胞、昆虫細胞、及び哺乳類細胞）内で発現することができる。このような発現は、例えば、当技術分野で知られている手順に従って行うことができる。

【0398】

ポリペプチドを発現するために使用することができる例示的な真核細胞としては、限定されるものではないが、ＣＯＳ細胞（ＣＯＳ ７細胞を含む）、２９３細胞（２９３－６Ｅ細胞を含む）、ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－Ｓ細胞及びＤＧ４４細胞を含む）、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、ならびにＮＳＯ細胞が挙げられる。

【0399】

ある特定の実施形態において、細胞は哺乳類細胞である。ある特定の実施形態において、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ－２９３細胞、ＮＳ０細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞、またはＳｐ２．０細胞である。ある特定の実施形態において、宿主細胞は、機能的なアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）を欠いている。ある特定の実施形態において、宿主細胞は、機能的なアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ酵素を発現しない。ある特定の実施形態において、細胞は、機能的酵素をコードするＦＵＴ８遺伝子を欠いている。ある特定の実施形態において、宿主細胞は、機能的ＦＵＴ８遺伝子をコードする遺伝子を欠いている。ある特定の実施形態において、宿主細胞は、Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞、またはＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞である。ある特定の実施形態において、宿主細胞は、Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞である。

【0400】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗体の重鎖及び／または軽鎖は、酵母内で発現することができる。例えば、米国公開第ＵＳ２００６／０２７００４５Ａ１を参照。いくつかの実施形態において、特定の真核宿主細胞は、ＣＸＣＲ５抗体の重鎖及び／または軽鎖に対し所望の翻訳後修飾を行う能力に基づいて選択される。例えば、いくつかの実施形態において、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞で生成される同じポリペプチドよりも高いレベルのシアリル化を有するポリペプチドを生成する。

【0401】

１つ以上の核酸の所望の宿主細胞内への導入は、限定されるものではないが、リン酸カルシウム形質移入、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介形質移入、カチオン性脂質媒介形質移入、エレクトロポレーション、遺伝子導入、感染などを含む任意の方法によって達成することができる。非限定的な例示的な方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（２００１）に記載されている。核酸は、任意の好適な方法に従って、所望の宿主細胞に一過性または安定的に形質移入することができる。

【0402】

いくつかの実施形態において、１つ以上のポリペプチドは、任意の好適な方法に従って、そのポリペプチドをコードする１つ以上の核酸分子で操作または形質移入された動物において、ｉｎ ｖｉｖｏで生成することができる。

【0403】

したがって、本発明の別の関連する態様は、抗体またはその抗原結合フラグメントを作製する方法であって、本明細書に記載の本発明の宿主細胞（例えば、本発明の抗体またはその機能的抗原結合フラグメントのいずれか１つのためのポリヌクレオチドコード配列を含むもの）を、当該抗体または抗原結合フラグメントが当該宿主細胞により発現する条件下で培養することを含む、方法を提供する。

【0404】

ある特定の実施形態において、この方法はさらに、当該抗体またはその抗原結合フラグメントを単離することを含む。

【0405】

関連する態様において、本発明は、脱フコシル化抗ＣＸＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメントを作製する方法であって、本発明の核酸分子または本発明のベクターを含む宿主細胞を培養することを含み、宿主細胞が機能的ＦＵＴ８を欠いている、方法を提供する。

【0406】

ある特定の実施形態において、宿主細胞はＰｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞である。

【0407】

本発明の別の関連する態様は、本発明の方法を用いて生成される単離された抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

【0408】

ある特定の実施形態において、本発明の単離された抗体またはその抗原結合フラグメントは脱フコシル化されている。

【0409】

ある特定の実施形態において、脱フコシル化抗体またはその抗原結合フラグメントは、フコシル化されていること以外は同一の抗体またはその抗原結合フラグメントと比較して、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の増強を示す。

【0410】

ある特定の実施形態において、脱フコシル化抗体またはその抗原結合フラグメントは、フコシル化されていること以外は同一の抗体またはその抗原結合フラグメントと比較して、約２倍、約５倍、約７倍、約１０倍、約２０倍、約３０倍、約４０倍、約５０倍、約６０倍、約７０倍、約８０倍、約９０倍、約１００倍、約１１０倍、約１２０倍、約１３０倍、約１４０倍、及び約１４３倍大きいＡＤＣＣを示す。

【0411】

本発明の別の関連する態様は、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントと、医薬的に許容される担体または賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは脱フコシル化されている。

【実施例】

【0412】

実施例１ キメラ抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体の特定及び予備的特性評価
異なる設計を用いて３回の免疫キャンペーンを行った。これにより合計１８５種の候補マウスモノクローナル抗体が生成され、このうちの５４種でＣＸＣＲ５との結合が確認された。確認された結合体のうちの６種は高い結合親和性を有し、ベンチマーク抗体シグナルの５０％超及び陽性細胞の８０％超のＭＦＩとして特徴付けられた。

【0413】

次いで、マウス抗体の可変領域（ＶＨ及びＶＬ）ならびにヒトＩｇＧ１のｈＩｇＧ１スキャフォールド／定常領域に基づき、キメラモノクローナル抗体を生成した。特異的抗体は、アイソタイプ対照で得られる％と比較して１Ｌｏｇ超の陽性細胞の％を特徴とした。

【0414】

ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを用いた候補キメラ抗体の選択
次いで、キメラ抗体の一連のｉｎ ｖｉｔｒｏ特性評価を行って、これらの抗体に優先順位を付けた。詳細には、６つの強力な結合剤の特性評価は、目的となる標的を発現する細胞上の結合としての種々の決定的なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ、特異性アッセイ、及びフローサイトメトリーによる交差反応性アッセイに基づくものであった。いくつかの二次アッセイを確立して、Ｂ細胞移動に及ぼす機能的効果、酵素的細胞内アゴニスト活性、及び受容体内在化に基づき強力な結合剤をランク付けした。最も重要なことには、強力な候補抗体を次に抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）レポーターアッセイで特性評価した。これは、ＡＤＣＣが、強力な候補抗体の所望される作用様式であるからである。ＡＤＣＣレポーターアッセイのリードアウトは、ホタルルシフェラーゼの発現を駆動するＮＦＡＴ応答エレメントからの発光シグナルである。

【0415】

ＣＸＣＲ５に対する結合能力を試験するため、標的抗原ｈＣＸＣＲ５を発現する接着性安定性細胞株を用いた結合アッセイで６種のキメラモノクローナル抗体を試験した。その結果、６種のキメラ抗体全てが、異なる結合特性で標的抗原を発現する細胞に結合することが示された。これらのうち、キメラ抗体ＨＦＢ２－３－ｈＧ１、ＨＦＢ２－４－ｈＧ１、ＨＦＢ２－５－ｈＧ１、及びＨＦＢ２－６－ｈＧ１は、ＨＦＢ２－１－ｈＧ１及びＨＦＢ２－２－ｈＧ１と比較して高い結合能力を示した。１種のキメラ抗体を除く全ての抗体がｎＭ以下のＥＣ５０値を示した。図５を参照。

【0416】

次に、交差反応性結合を評価したところ、いずれのキメラモノクローナル抗体も、アッセイに含めた陽性対照と比較して、サルまたはマウスＣＸＣＲ５オルソログと交差反応しないことが示された。図６Ａを参照。さらに、いずれの抗ｈＣＸＣＲ５キメラ抗体もｈＣＸＣＲ５オルソログのｈＣＸＣＲ３には結合しないため、その特異性が確認された。図６Ｂを参照。

【0417】

標的抗原ＣＸＣＲ５は走化性に関与するＧＰＣＲであるため、主題抗体がｉｎ ｖｉｔｒｏでＢ細胞移動を阻害する能力について確認するために実験を行った。特異的抗体ランキングアッセイの１つとして、Ｂ細胞移動アッセイでは、ＣＸＣＲ５標的抗原を発現するＭ３００．１９浮遊細胞を利用して、全ての抗体候補及びベンチマーク／対照抗体を試験した。このアッセイにおける阻害の程度は、阻害％＝（１－移動％／抗体なしの移動％の平均）＊１００として計算した。

【0418】

アッセイを行うために、１０ｎＭ～０．１ｎＭの３段階希釈の抗体を調製し、３７℃で６時間インキュベートした。Ｃｙｔｏｆｌｅｘで細胞をカウントし、ＣＸＣＲ５標的抗原を発現するＭ３００．１９細胞に対し２回（ｎ＝２）繰り返した。

【0419】

その結果、候補抗体は異なる阻害特性を示し、少なくともその一部はリガンド（ＣＸＣＬ１３）誘導性走化性を阻害できることが示された。このような走化性を阻害する最も強力な抗体候補はキメラ抗体ＨＦＢ２－４－ｈＧ１であり、これは約１ｎＭで１００％阻害に達した。図７を参照。

【0420】

さらに、強力な結合剤をｃＡＭＰアッセイで試験して、それらのアゴニスト／アンタゴニスト特性を確認した。候補抗体が、ＣＸＣＬ１３リガンドによる活性化で細胞内ｃＡＭＰレベルを遮断できるかどうかについて評価した。このアッセイは、測定可能な化学発光シグナルが細胞内のｃＡＭＰ量に正比例するという原理に基づくものであった。Ｇαｉ経路でリガンドが活性化すると、ｃＡＭＰの減少が予想される。化学発光シグナルの増加は、ｃＡＭＰレベルと逆相関する。

【0421】

ｃＡＭＰアッセイにより、６種の候補抗体の異なる機能特性が示された。具体的には、ＨＦＢ２－４－ｈＧ１及びＨＦＢ２－５は、他の４種の候補抗体と比較して、ＣＸＣＬ１３誘導性細胞内ｃＡＭＰシグナル伝達を効率的に遮断し、いずれもベンチマーク抗体よりも優れていた。図８。

【0422】

主題抗体の望ましい標的産物プロファイルのため、この６種の強力なキメラ結合体をＡＤＣＣレポーターバイオアッセイでも試験した。

【0423】

ＡＤＣＣとは、Ｆｃ受容体を有するエフェクター細胞が、表面に抗原を発現する抗体（Ａｂ）コーティング標的細胞を認識し、殺滅することができる免疫機構のことである。ＡＤＣＣは、免疫エフェクター細胞表面での抗原結合抗体とＦｃ受容体ＣＤ１６Ａとの架橋によって作動する。これらの相互作用は、細胞内カルシウム濃度の増加を誘導し、カルシニューリン（ｃａｌｉｃｎｅｕｒｉｎ）／カルモジュリンに媒介されたＮＦＡＴの脱リン酸化を誘導して、その核内移動及びＡＤＣＣ関連遺伝子のプロモーター領域との結合を可能にする。最終的には、エフェクター細胞は標的細胞を殺滅する細胞傷害性顆粒を放出する。レポーターバイオアッセイのために、エフェクター細胞を、複数のＮＦＡＴ応答エレメントと融合した最小限のプロモーターの制御下で、ルシフェラーゼレポーター遺伝子などのレポーター遺伝子を安定的に発現するエフェクターレポーター細胞として設計した。このシステムにおいて、ＡＤＣＣ誘導は、抗原結合抗体によりＣＤ１６Ａシグナル伝達が活性化され、適切な検出試薬を加えたときにルシフェラーゼが生成する生物発光シグナルとして測定した。

【0424】

このアッセイでは、作用機序が既に知られている抗ＣＤ２０抗体を陽性対照として使用した。異なる候補抗体は明らかに異なるＡＤＣＣ能力を示したが、ＨＦＢ２－４－ｈＧ１は、ＣＤ１６係合において最高の効力を示すことが示された。図９Ａ。

【0425】

要約すると、５４種の特異的抗ＣＸＣＲ５抗体のうち、６種の１桁ナノモル親和性キメラ結合体（すなわち、ＨＦＢ２－１－ｈＧ１、ＨＦＢ２－２－ｈＧ１、ＨＦＢ２－３－ｈＧ１、ＨＦＢ２－４－ｈＧ１、ＨＦＢ２－５－ｈＧ１、ＨＦＢ２－６－ｈＧ１）を特定した。これらの６種の最も強力な結合剤の特徴により、様々な特性が示された。いずれも、マウスまたはサルのＣＸＣＲ５オルソログとは交差反応しなかった。これらの全てが標的特異的であり、最も近いホモログであるＣＸＣＲ３を認識しない。

【0426】

ＨＦＢ２－４ｈＧ１の薬物動態（ＰＫ）評価
ｃＡＭＰ、走化性、及びＡＤＣＣといった３つの異なる機能試験に基づけば、ＨＦＢ２－４ｈＧ１が最も有望で強力な候補であると思われ、これをＰＫ評価に選択した。マウスにおけるＨＦＢ２－４ ｈＧ１キメラ抗体の好ましいＰＫプロファイルを参照（図３）。

【0427】

８～１０週齢の野生型（ｗｔ）Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを用いて、ＨＦＢ２－４－ｈＧ１の薬物動態（ＰＫ）試験を行った。ＨＦＢ２－４－ｈＧ１を、１ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇの２つの異なる濃度で尾静脈から静脈内投与した。８つの異なる時点（１時間、２時間、４時間、８時間、２４時間、４８時間、７２時間、及び７日）で、各マウスから約５０μＬの血漿試料を収集した。内部で最適化した標準プロトコルを用いて、各試料中のヒトＩｇＧ濃度をＥＬＩＳＡにより定量化した。その結果、ＨＦＢ２－４－ｈＧ１が良好なＰＫプロファイル（ｔ_１／２＝１５８時間）を示すことが示された。

【0428】

ＤＥ変異がＨＦＢ２－４ｈＧ１のＡＤＣＣ活性に及ぼす影響
ＨＦＢ２－４ｈＧ１抗体が他の５つの強力なｈＣＸＣＲ５結合体の中で最高のＣＤ１６係合を示した事実を考慮し、ＨＦＢ２－４ｈＧ１抗体を選択して、ＡＤＣＣ活性を増強するためにＤＥスキャフォールド（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）で生成した。ＨＦＢ２－４－ｈＧ１抗体及びＨＦＢ２－４－ｈＧ１ＤＥ抗体の両方を、抗ＣＤ２０陽性対照抗体を含むＡＤＣＣレポーターバイオアッセイで試験した。予想されたように、結果からは、ＨＦＢ２－４が対照の抗ＣＤ２０抗体よりも高度なＣＤ１６係合を誘導することが明確に確認され、ＤＥスキャフォールドが抗体のＡＤＣＣ特性をさらに高め（Ｅ_ｍａｘ及びＥＣ_５０の両方で）、陽性対照抗体の抗ＣＤ２０よりも良好な活性を示すことが示された。図９Ｂ。

【0429】

次に、ＨＦＢ２－４ｈＧ１ＤＥについて、健康ドナー末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から単離した初代ＮＫ細胞（エフェクター細胞）及び標的を発現するＲａｊｉ細胞（標的細胞）を使用することにより、ＡＤＣＣ活性を試験した。データからは、ＨＦＢ２－４ｈＧ１ＤＥが、０．７６ｐＭのＥＣ５０値で初代ＮＫ細胞によるＲａｊｉ細胞の溶解を媒介することが示された。これは、リツキシマブ陽性対照抗体よりも強力である。図９Ｃを参照。

【0430】

さらに、ＨＦＢ２－４ｈＧ１ＤＥのＡＤＣＣ活性について、初代ＮＫ細胞（エフェクター細胞）及び標的を発現する初代Ｂ細胞（標的細胞）（いずれも異なる健康ドナーのＰＢＭＣから単離した初代細胞集団）を使用することにより、ＡＤＣＣ活性をさらに試験した。ＨＦＢ２－４ｈＧ１ＤＥは、０．４４ｆＭのＥＣ５０値で初代ＮＫ細胞による末梢Ｂ細胞の溶解を誘導した。これはまた、リツキシマブ陽性対照抗体よりも強力である。図９Ｄを参照。ヒト初代Ｔ細胞の溶解に対するＨＦＢ２－４ｈＧ１ＤＥのＡＤＣＣ活性も調べるために同様の実験を行ったところ、ＨＦＢ２－４ｈＧ１ＤＥは、ｈＣＸＣＲ５＋ＣＤ４＋初代Ｔ細胞の強力なＮＫ媒介性溶解も誘導することが分かった。図９Ｅを参照。

【0431】

さらなる同様の実験を行って、脱フコシル化ＨＦＢ２－４ｈＧ１（ＤＥ変異なし）モノクローナル抗体（ＡｆｕＨＦＢ２－４ｈＧ１）のヒト初代Ｔ細胞溶解に対するＡＤＣＣ活性を調べた。ＡｆｕＨＦＢ２－４ｈＧ１は、非常に広い抗体濃度範囲にわたり、用量依存的にｈＣＸＣＲ５＋ＣＤ４＋初代Ｔ細胞の強力なＮＫ媒介性溶解も誘導することが分かった（図９Ｆを参照）。一方、リツキシマブ（ｈＧ１）（ＣＤ２０表面抗原を発現するＢ細胞を標的とする）及びアイソタイプ対照抗体ＭＧＯ５３－ｈＧ１は、抗体なし対照（ＣＤ４＋細胞のみ、ＮＫ細胞ありまたはなし）と比較して、広い抗体濃度範囲にわたって本質的に全く効果を有しなかった。図９Ｆを参照。

【0432】

ＨＦＢ２－４ｈＧ１のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性
がん細胞株（Ｒａｊｉ及びＤａｕｄｉ細胞）で得られた結合データに続いて、Ｒａｊｉ細胞ベース腫瘍モデルのみを用いて、ＣＢ１７－ＳＣＩＤ免疫不全マウスにおいてｉｎ ｖｉｖｏ試験を行った。簡潔に説明すると、Ｒａｊｉ細胞を６～８週齢のＣＢ－１７ ＳＣＩＤマウスに皮下接種した。４つの異なる群：アイソタイプ対照（ＭＧＯ５３－ｈＧ１）、ＰＢＳ対照、陽性対照（ＨＦＢ２－リツキシマブ－ｈＧ１）、リード候補群（ＨＦＢ２－４－ｈＧ１）を試験に含めた。処置は、抗体の１つを１０ｍｇ／ｋｇで３日ごとに２１日間腹腔内（ｉ．ｐ．）投与することから構成された。各マウスの腫瘍成長及び体重を３日ごとに測定した。

【0433】

ＨＦＢ２－４ｈＧ１の投与（１０ｍｇ／ｋｇ、隔週×７、ｉ．ｐ．）により、Ｒａｊｉ異種移植モデルにおいて、リツキシマブ対照に匹敵する強力な抗腫瘍活性が得られた。図１６を参照。

【0434】

要約すると、ＨＦＢ２－４（ｈＧ１及びｈＧ１ＤＥ）キメラ抗ｈＣＸＣＲ５抗体は、ＣＸＣＲ５発現細胞との強力な結合を示し、リガンド誘導性移動及びシグナル伝達を強力に抑制し、マウスにおいて好ましいＰＫプロファイルを示し、Ｒａｊｉ異種移植マウスモデル試験で抗腫瘍活性を示し、Ｒａｊｉ Ｂ細胞リンパ腫細胞株及び初代Ｂ細胞の両方において初代ＮＫ細胞で強力なＡＤＣＣを媒介した。ｉｎ ｖｉｔｒｏ 及びｉｎ ｅで得られたデータに基づき、リード抗体シリーズＨＦＢ２－４（ｈＧ１及びｈＧ１ＤＥ）がヒト化に最も適した候補であることが示された。

【0435】

実施例２ ヒト化抗体の特性評価
ＨＦＢ２－４－ｈＧ１に基づき、ＣＤＲ－グラフティング法を用いて、抗体の抗原認識を担う相補性決定領域（ＣＤＲ）をマウス抗体配列から選択し、それをｈＩｇＧ１のヒトフレームワーク領域（ＦＲ）内に移植することにより、ヒト化抗ｈＣＸＣＲ５モノクローナル抗体を生成した。

【0436】

全体として、ＣＤＲグラフティングを用いて合計２５種のヒト化バリアントを生成した。これらのバリアントの大部分は、親キメラ抗体と比較して、物理化学的活性（標的に対する親和性、安定性、溶解性）及び／または生物学的活性（標的の遮断もしくは刺激、ＡＤＣＣ）を維持していた。

【0437】

簡潔に説明すると、ＨＦＢ２－４（すなわちＨＦＢ２－４ｈｚ）に基づく１２種のヒト化抗体バリアントのうち１０種が、親キメラ抗体ＨＦＢ２－４と同等のｈＣＸＣＲ５との結合を示した。さらに、１２種のＨＦＢ２－４ｈｚバリアントのうち９種がｃＡＭＰシグナルを遮断し、この結果は、結合の結果と一致した。さらに、ヒト化バリアントによる強力な走化性阻害が観察され、ＨＦＢ２－４ｈｚ１２が最も強力であった（０．１ｎＭで約１００％）。その後の実験では、ＨＦＢ２－４Ｈｚ９とＨＦＢ２－４Ｈｚ１２との間には同等の効力も見られた。

【0438】

ヒト化抗ｈＣＸＣＲ５モノクローナル抗体を、キメラモノクローナル抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ特性評価に使用したのと同じ手順に従い、さらに特性評価した（実施例１を参照）。クリティカル及び２次特性評価試験に加えて、開発可能性評価試験もヒト化バリアントの特性評価に含めた。

【0439】

抗体内在化の評価
目的となる抗原（例えば、ＣＸＣＲ５）を発現する細胞による抗体内在化を、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ抗体内在化及びｐＨＡｂ反応性色素（Ｐｒｏｍｅｇａ）アッセイにより評価した。

【0440】

抗原媒介性抗体内在化は、いくつかの抗体ベースの治療薬で重要な役割を果たしている。所望される作用様式に応じて、細胞表面抗原に結合したときに標的細胞内に優先的に内在化される抗体を有することが望ましい場合もある（例えば、抗体薬物結合体（ＡＤＣ）を介したがん細胞への高毒性薬物の送達、及びがん細胞からの表面受容体（すなわち、ＥＧＦＲ））の除去もしくは分解、または細胞表面に優先的に結合したままの抗体（例えば、免疫細胞による殺傷のために腫瘍細胞を識別する（すなわち、ＡＤＣＣもしくはＡＤＣＰ））。加えて、抗体に対する機能的応答（例えば、抗体クリアランス）を測定し最適化することも非常に重要である。例えば、抗体の主な排出経路の１つであるピノサイトーシスは、抗体開発時の定性的な薬物動態測定のために抗体の最適化を必要とする。各アプローチは、例えば、腫瘍細胞の同定のために細胞表面での維持を可能にするため、またはＡＤＣを送達する際の迅速な内在化のために、一連の抗体の特徴を必要とすることから、最適な抗体操作及び内在化特徴のためには、抗体候補の取込みプロファイル及びクリアランスを理解することが重要である。

【0441】

ＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）ＦａｂＦｌｕｏｒ抗体標識試薬は、ｐＨ感受性蛍光プローブと結合体化させたＦｃ領域標的化Ｆａｂフラグメントである。これらの試薬は、全てのアイソタイプが一致したＦｃ含有試験抗体のための包括的なワンステップで洗浄なしの標識プロトコルを可能にする。ｐＨ７．０では、Ｆａｂ－Ａｂ複合体は、ほとんどまたは全く蛍光を有しない。標識された抗体を細胞に加えると、Ｆａｂ－Ａｂ複合体が酸性（ｐＨ４．５～５．５）のリソソーム及びエンドソームを介して内在化及び処理されるに伴って蛍光シグナルが観察される。内在化の全時間経過は、可視化し、リアルタイム生細胞解析を用いて自動的に定量化することができる。

【0442】

ｐＨＡｂ色素は、ｐＨ＞７では蛍光が非常に低く、溶液のｐＨが酸性になるにつれて蛍光が劇的に増加するｐＨセンサー色素である。ｐＨＡｂ Ｄｙｅｓは、５３２ｎｍで励起極大（Ｅｘ）、５６０ｎｍで発光極大（Ｅｍ）を有する。ｐＨＡｂ色素は、抗体の標識用に特別に設計されている。例えば、ｐＨＡｂアミン反応性色素（ａ）は、抗体上のリジンアミノ酸で利用可能な一級アミンと反応するスクシンイミジルエステル基を有する。

【0443】

両方のアッセイから得られた結果からは、ＨＦＢ２－４ｈｚ９－ｈＧ１ＤＥもＨＦＢ２－４ｈｚ１２－ｈＧ１ＤＥも陽性対照（ＣＤ７１）抗体と比較して内在化しないことが示された。図１０Ａ～１０Ｂ。

【0444】

ヒト化バリアントのＡＤＣＣ活性
ヒト化抗体のうちの２種、ＨＦＢ２－４ｈｚ９－ｈＧ１ＤＥ及びＨＦＢ２－４ｈｚ１２－ｈＧ１ＤＥは、親キメラ抗体ＨＦＢ２－４－ｈＧ１ＤＥと同じ程度で強力なＡＤＣＣ活性を示した。予想されたように、ＨＦＢ２－４及びｈＧ１スキャフォールドのベンチマーク抗体は、ヒト化バリアントと比較して低いＡＤＣＣ活性を有した。２種のさらなるヒト化バリアントＨＦＢ２－４ｈｚ１４－ｈＧ１ＤＥ及びＨＦＢ２－４ｈｚ１５－ｈＧ１ＤＥにおける結果からも、ＨＦＢ２－４ｈｚ９－ｈＧ１ＤＥ及びＨＦＢ２－４ｈｚ１２－ｈＧ１ＤＥで先に示されたように、ＡＤＣＣを誘導する効率的なＣＤ１６の係合が示された。図１１Ａ及び１１Ｂを参照。

【0445】

シェーグレン症候群患者試料のＡＤＣＣ活性を網羅するアッセイ条件を最適化するため、健康ドナーの末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から単離した初代Ｂ細胞を使用した。具体的には、数例の健康ドナーに対し、フローサイトメトリー解析に基づいて初代Ｂ細胞上での標的抗原ＣＸＣＲ５の発現をスクリーニングした。初代Ｂ細胞のＣＸＣＲ５発現が高いドナーを使用して、ＡＤＣＣレポーターバイオアッセイの条件（エフェクター標的比）を最適化した。ＡＤＣＣに起因するＣＤ１６媒介性シグナル伝達によって活性化されたレポータールシフェラーゼが放出する蛍光シグナルを測定するために、Ｊｕｒｋａｔ細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ）をレポーターエフェクター細胞として使用した。

【0446】

その結果、親キメラ抗体及びヒト化キメラ抗体の両方ならびにこれらのヒト化バリアントが、初代Ｂ細胞に対しＡＤＣＣ活性を示すことが示された。ヒト化バリアントの１つであるＨＦＢ２－４Ｈｚ１２－ｈＧ１ＤＥに対するＡＤＣＣレポーターアッセイの結果を示す図１３を参照。ヒト化抗体は、ＣＸＣＲ５発現初代Ｂ細胞に対しＡＤＣＣ効果を示した。

【0447】

ヒト化バリアントのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性
ＨＦＢ２－４ｈｚ４２（マウスＩｇＧ２ａ形式）が抗腫瘍活性を誘導する能力を、ｉｎ ｖｉｖｏ静脈内Ｒａｊｉ異種移植モデルで評価した。群当たり８頭のマウスにＲａｊｉ細胞を接種し、ＨＦＢ２－４ｈｚ４２、またはマウスＩｇＧ２ａ形式のアイソタイプ、または陽性対照としてのリツキシマブ（ｈＧ１形式）でマウスを処置した。さらに、無処置のナイーブマウス群も含めた。マウスに、１０ｍｇ／ｋｇの試験抗体を３日ごとに１５日間腹腔内注射した。以下の結果の表に示されているように、ＨＦＢ２－４ｈｚ４２ｍＩｇＧ２を投与した結果、アイソタイプ対照抗体を投与したマウスと比較して生存期間が顕著に増加した。

【表7】

【0448】

実施例３ ヒト化抗体のがん標的の特定
ｉｎ ｖｉｖｏ有効性モデルの選択の前に、ｉｎ ｖｉｔｒｏ標的ＣＸＣＲ５発現を確認するため、８種の異なるがん細胞株を選択してスクリーニングした。

【0449】

フローサイトメトリーによる結合評価により、ＨＦＢ２－４ｈｚ１２－ｈＧ１ＤＥは、リツキシマブ（非ホジキンリンパ腫及び慢性リンパ性白血病の治療に使用される抗ＣＤ２０モノクローナル抗体）と同様の程度でＲａｊｉ及びＤａｕｄｉ細胞に結合するが、他の任意の選択されたがん細胞株には感知可能なほどには結合しないことが示された。図１４を参照。

【0450】

次いで、Ｂ細胞リンパ腫細胞株（Ｒａｊｉ及びＤａｕｄｉ細胞）を用いて、このヒト化抗体のＡＤＣＣ活性を異なるエフェクター：標的比（１：１及び３：１）で評価した。前述のように、キメラ抗体及びヒト化抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ特性評価は、既に設定した実験条件を用いてＲａｊｉ細胞を用いたＡＤＣＣレポーターアッセイで実施しているため、Ｄａｕｄｉ細胞のみをＡＤＣＣレポーターアッセイで試験した。データからは、ＨＦＢ２－４ｈｚ１２－ｈＧ１ＤＥはＤａｕｄｉ細胞に対し、対照の抗ＣＤ２０抗体が示すＡＤＣＣ活性よりも高いＡＤＣＣ活性を有することが示された。図１５を参照。

【0451】

実施例４ シェーグレン患者Ｂ細胞に対するＡＤＣＣ活性
シェーグレン症候群（ＳＳ）の治療における主題抗体の潜在的な有効性を示すため、本発明のヒト化モノクローナル抗体ＨＦＢ２－４ｈｚ１２ｈＩｇＤＥが、治療済みのＳＳ患者から得た凍結材料から単離したＢ細胞に対し、ＣＤ１６と効率的に係合してＡＤＣＣ効果を誘導できることを示すために、ＡＤＣＣレポーターアッセイを使用した。図１７を参照。

【0452】

具体的には、Ｂ細胞を、過去に治療した２例のＳＳ患者から得た凍結ＰＢＭＣ試料から単離し、上述のＡＤＣＣレポーターアッセイに使用した。各抗体について、１１ｎＭ～０．００５ｎＭの３倍段階希釈液を実験に使用した。その結果、ＨＦＢ２－４ｈｚ１２ｈＩｇＤＥはＣＤ１６に効率的に係合してＡＤＣＣを誘導することが示された。

【0453】

さらなるデータからは、ＨＦＢ２－４ｈｚ１２－ｈＧ１がＳＳ患者試料におけるメモリーＢ細胞集団のパーセンテージを低減することが示された。図１８を参照。

【0454】

前述のように、ＨＦＢ２－４ｈＧ１ＤＥを、ＳＳ患者のＢ細胞に対しても、ＡＤＣＣレポーターアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて試験した。ＨＦＢ２－４ｈＧ１ＤＥは、ｈＧ１形式のリツキシマブよりも、高度なＣＤ１６係合を有し、はるかに強力なＡＤＣＣリードアウトを誘導することが観察された。（図９Ｂ～９Ｃ）。

【0455】

全体的に見て、これまでに得られた結果からは、ヒト化抗ｈＣＸＣＲ５ ＩｇＧ１抗体が、ヒトＣＸＣＲ５に対しｎＭの親和性を有し、シェーグレン症候群（ＳＳ）患者の胚中心内のｈＣＸＣＲ５発現Ｂ細胞、潜在的には濾胞ヘルパーＴ細胞／Ｂ細胞においてＡＤＣＣを誘導することが示唆された。

【0456】

実施例５ ヒト化バリエーションのさらなるシリーズの生成及び特性評価
異なる可変重鎖及び可変軽鎖を組み合わせることにより、ＨＦＢ２－４ｈＧ１（ＨＦＢ２－４ｈｚ－ｈＧ１）に基づいた３６種のさらなるヒト化バリアントを生成した。実施例１と同様の方法または実施例１に記載の方法を用いて、これらの抗体を特性評価した。

【0457】

これらの３６種のヒト化バリアントの結合特性を、Ｒａｊｉ細胞との結合アッセイにおいて、１ｎＭ及び０．１ｎＭの２つの異なる濃度で試験した。３６種のヒト化バリアントが全て、Ｒａｊｉ細胞に対し顕著な結合プロファイルを示した。図１９Ａ及び１９Ｂを参照。

【0458】

８～１０週齢の野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（各ヒト化バリアントについてｎ＝３）を用いて、上位９種のヒト化バリアントの薬物動態試験を開始した。各ヒト化バリアントｍＡｂを、１０ｍｇ／ｋｇの濃度で単回用量において、尾部から静脈内（ｉ．ｖ．）投与した。１時間、２４時間、９６時間に０時間の前処置用量を含めた４つの異なる時点で、各マウスから５０μＬの血漿試料を収集した。内部で最適化した標準プロトコルを用いて、各試料中のヒトＩｇＧ濃度をＥＬＩＳＡにより定量化した。９種のヒト化バリアント全てが、親ＨＦＢ２－４ｈＧ１と同等のＰＫプロファイルを示した。図２０を参照。表２に示した上位６種のヒト化バリアントを、ｉｎ ｖｉｔｒｏ 及びｉｎ ｖｉｖｏでのさらなる特性評価のために選択した。

【表8】

【0459】

上位６種のＨＦＢ２－４ｈｚ－ｈＧ１バリアント全てが、Ｒａｊｉ細胞に対する同様の結合プロファイルを示し、レポーター系でＣＤ１６と係合するＡＤＣＣ活性を示した。図２１を参照。

【0460】

注目すべきことに、上位６種の候補のうち、ＨＦＢ２－４ｈｚ４１ｈＧ１及びＨＦＢ２－４ｈｚ４５ｈＧ１が示すヒト化レベルは比較的低かった。その結果、これらの２種のバリアントをリストから除外し、４種のバリアントをさらなる特性評価のために残した。

【0461】

最良の４種のヒト化バリアントのＡＤＣＣ活性を増強する目的で、これらのバリアントをｈＧ１ＤＥ形式で生成した。ｈＧ１ＤＥ形式の上位４種のヒト化バリアントに対し、標的ＣＸＣＲ５を発現する接着細胞ＤＸ００２－ＣＨＯＫ１との結合を試験した。ヒト化バリアントは、ＨＦＢ２－４ｈＧ１ＤＥ親抗体と同等の効力を示した。図２２を参照。

【0462】

ＤＥ形式が抗体の薬物動態学的（ＰＫ）プロファイルに影響を及ぼすかどうかを調べるため、８～１０週齢の野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（各ヒト化バリアントについてｎ＝１）において、ｈＧ１及びｈＧ１ＤＥスキャフォールドのヒト化バリアントにおけるスナップショットＰＫ試験に着手した。各ヒト化バリアント抗体を、１０ｍｇ／ｋｇの濃度で単回用量において、尾部から静脈内投与した。１時間、２４時間、９６時間に０時間の前処置用量を含めた４つの異なる時点で、各マウスから５０μＬの血漿試料を収集した。内部で最適化した標準プロトコルを用いて、各試料中のヒトＩｇＧ濃度をＥＬＩＳＡにより定量化した。ヒト化バリアントは、同じ形式で親抗体と同等のＰＫプロファイルを示した。

【0463】

要約
全体で３６種のヒト化バリアントを生成し、試験した。ＨＦＢ２－４ｈｚ３７ｈＧ１、ＨＦＢ２－４ｈｚ３８ｈＧ１、ＨＦＢ２－４ｈｚ３９ｈＧ１、及びＨＦＢ２－４ｈｚ４２ｈＧ１をリード候補抗体の特定のために保持した。４種のヒト化バリアントは、ＨＦＢ２－４ｈＧ１－ＤＥと非常に類似するプロファイルを有し、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの結合及び生物学的特性は同等である。

【0464】

しかし、ＰＫ解析において、ＨＦＢ２－４ｈｚ３９ｈＧ１はより短い半減期を有する。開発可能性プロファイルに関しては、ＨＦＢ２－４ｈｚ４２ｈＧ１の挙動の方がわずかに良好であった。ｃＩＥＦプロファイルに関しては、ＨＦＢ２－４ｈｚ４２ｈＧ１及びＨＦＢ２－４ｈｚ３７ｈＧ１が最も好適なプロファイルを示した。表３を参照。

【0465】

そのため、ＨＦＢ２－４ｈｚ４２ｈＧ１及びＨＦＢ２－４ｈｚ３７ｈＧ１をリード抗体及びバックアップ抗体として選択し、さらにｉｎ ｖｉｖｏ有効性試験を行う予定である。ＶＨ鎖及びＶＬ鎖の配列を表４に示す。

【表9】

【表10】

【0466】

実施例６ 脱フコシル化抗ＣＸＣＲ５抗体の生成及び特性評価
ＦｃγＲＩＩＩａとの結合を増加させ、抗体エフェクター機能を増強するためのＨＦＢ２－４ｈＧ１及びＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１の脱フコシル化形式を生成し、同様のアッセイを用いて、先に記載したものに対し試験した。結果を以下に要約する。

【0467】

脱フコシル化ＨＦＢ２－４ｈＧ１（ａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈＧ１）及びＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１（ａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１）は、ＤＸ００２細胞上のヒトＣＸＣＲ５にｎＭ以下のアビディティーで結合し、互いに類似した結合プロファイルを示す。図２４Ａを参照。

【0468】

また、ＡＤＣＣレポーターアッセイによって定量されたＣＤ１６係合からも、ａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１がａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈＧ１親抗体と同様のＣＤ１６に係合する能力を実証することが示される。図２４Ｂを参照。

【0469】

さらに、ａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１によって誘導されたＡＤＣＣを介してのＮＫ細胞によるＲａｊｉ細胞（データは示さず）及び健康なドナーから単離したＢ細胞（図２５）のｉｎ ｖｉｔｒｏ殺滅は、ベンチマーク抗体と同等であった。ＣＸＣＲ５を発現するＴ濾胞ヘルパー細胞（Ｔｆｈ）のＡＤＣＣ殺滅に関する予備データからは、ａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１が、ヒトから単離されたＣＤ４＋ＣＸＣＲ５＋初代Ｔ細胞のＮＫ媒介性溶解を誘導し得ることも示唆される（データは示さず）。

【0470】

脱フコシル化抗体を用いて、ＳＳ患者由来のＢ細胞のＮＫ殺滅について調べた。図２６に示されているように、脱フコシル化ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１は、ベンチマーク抗体と同等の程度でＢ細胞溶解を誘導した。

【0471】

さらに、脱フコシル化抗体に対し、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を試験した。ＣＤＣ活性を有することが知られているリツキシマブ（ｈＩｇＧ１形式）を陽性対照として使用した。血清を使用して、実験における補体系の構成要素を提供した。リツキシマブは、１００ｎＭで約７０～８０％の細胞溶解に達するが、脱フコシル化ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１及び脱フコシル化ＨＦＢ２－４ｈＧ１については、ＣＤＣ活性が観察されなかった。図２７Ａ～２７Ｂを参照。

【0472】

脱フコシル化抗体の薬物動態を野生型マウス及びカニクイザルにおいて調べた。野生型Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおいて、脱フコシル化ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１抗体、ＨＦＢ２－４ｈＧ１抗体、及びベンチマーク抗体を、１０ｍｇ／ｋｇの用量で単回用量において、尾部から単回静脈注射し、注射から０．５、６、２４、９６、及び１６８時間後に血漿を収集して抗体濃度を定量した。ａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１の半減期は１１４時間であり、ＰＫプロファイルは親抗体及びベンチマーク抗体と同様であった。図２８Ａを参照。

【0473】

カニクイザル（雄１頭、雌２頭）において、１ｍｇ／ｋｇで抗体の単回用量を静脈内注入し、注射後２週間にわたり、血中の抗体濃度を定量した。試験したサルにおいて、Ａｆｕ－ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１は３～６．５日の半減期を有した。図２８Ｂを参照。

【0474】

脱フコシル化ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１を、２５℃及び４０℃における最大３０日間の熱処理、３．５の低ｐＨにおける最大６時間のストレス、ならびに最大５回の凍結／解凍サイクルという複数の安定性試験に供した。その結果、脱フコシル化ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１は、これらの試験条件下で概して安定であることが示された（データは示さず）。

【0475】

全体的に見て、脱フコシル化ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１は、親抗体と同様のｐＭ濃度で、健康ドナー及びＳＳ患者の両方からの初代Ｂ細胞に対し大きな結合活性及びｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣ活性を示し、補体依存性細胞傷害を誘導せず、好ましい薬物動態プロファイル及び高い安定性を示す。そのため、脱フコシル化ＨＦＢ２－４ｈｚ４２－ｈＧ１は、臨床治療に使用できる可能性が高い。

【0476】

参考文献
本明細書で検討された全ての参考文献は、参照により本明細書に援用される。

【0477】

Ｆｏｒｓｔｅｒ Ｒ，Ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ Ｂ Ｈｅｌｐｅｒ Ｔ Ｃｅｌｌｓ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｃｘｃ Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ５，Ｌｏｃａｌｉｚｅ ｔｏ Ｂ Ｃｅｌｌ Ｆｏｌｌｉｃｌｅｓ，ａｎｄ Ｓｕｐｐｏｒｔ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２０００．
Ａｌｌｅｎ ＣＤ，Ｇｅｒｍｉｎａｌ ｃｅｎｔｅｒ ｄａｒｋ ａｎｄ ｌｉｇｈｔ ｚｏｎｅ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ＣＸＣＲ４ ａｎｄ ＣＸＣＲ５，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４．
Ｆｏｒｓｔｅｒ Ｒ，Ａ Ｐｕｔａｔｉｖｅ Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＢＬＲ１，Ｄｉｒｅｃｔｓ Ｂ Ｃｅｌｌ Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｔｏ Ｄｅｆｉｎｅｄ Ｌｙｍｐｈｏｉｄ Ｏｒｇａｎｓ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎａｔｏｍｉｃ Ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｐｌｅｅｎ，Ｃｅｌｌ，１９９６．
Ｒｅｉｆ Ｋ，Ｂａｌａｎｃｅｄ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ ｔｏ ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔｓ ｆｒｏｍ ａｄｊａｃｅｎｔ ｚｏｎｅｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ Ｂ－ｃｅｌｌ ｐｏｓｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２００２．
Ａｑｒａｗｉ Ｌ，Ｄｉｍｉｎｉｓｈｅｄ ＣＸＣＲ５ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｍａｙ ｒｅｌａｔｅ ｔｏ ｂｏｔｈ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ａｎｄ ｓａｌｉｖａｒｙ ｇｌａｎｄ ｈｏｍｉｎｇ．Ｃｌｉｎｉｃ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１８．
Ｓｚａｂｏ Ｋ，Ｔｈｅ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｌａｂｉａｌ Ｓａｌｉｖａｒｙ Ｇｌａｎｄｓ ｉｎ Ｐｒｉｍａｒｙ Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ：Ｆｏｃｕｓｉｎｇ ｏｎ Ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ Ｈｅｌｐｅｒ Ｔ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｉｎｆｉｌｔｒａｔｅｓ，Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ Ｉｎｆｌａｍｍ．２０１４．
Ｋｒａｍｅｒ ＪＭ，ＣＸＣＬ１３ ｉｓ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｉｎ Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｉｎ ｍｉｃｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎｓ ａｎｄ ｉｓ ｉｍｐｌｉｃａｔｅｄ ｉｎ ｄｉｓｅａｓｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ，２０１３．
Ｓｈａｒｍａ Ａ，Ｅａｒｌｙ ＢＡＦＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｍｉｔｉｇａｔｅｓ ｍｕｒｉｎｅ Ｓｊｏｇｒｅｎ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ：Ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ＣＸＣＬ１３ ａｎｄ ｔｈｅ ＢＡＦＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｓａｌｉｖａｒｙ ｈｙｐｏｆｕｎｃｔｉｏｎ，Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１６．
Ｍｏｓｅｒ Ｂ，ＣＸＣＲ５，ｔｈｅ ｄｅｆｉｎｉｎｇ ｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ Ｂ ｈｅｌｐｅｒ Ｔ（ＴＦＨ）ｃｅｌｌｓ，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１５．

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図7】

【図8】

【図9A】

【図9B】

【図9C】

【図9D】

【図9E】

【図9F】

【図9G】

【図9H】

【図10A】

【図10B】

【図11A】

【図11B】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19A】

【図19B】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24A】

【図24B】

【図25】

【図26】

【図27】

【図28A】

【図28B】

【配列表】

2024509946000001.app

【国際調査報告】