特表 2024-510065 防御免疫の送達における、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２受容体結合ドメインに基づくワクチン組成物の使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-06

(54)【発明の名称】防御免疫の送達における、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２受容体結合ドメインに基づくワクチン組成物の使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/215 20060101AFI20240228BHJP

   A61K 39/39 20060101ALI20240228BHJP

   A61P 31/14 20060101ALI20240228BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240228BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240228BHJP

   A61K 35/74 20150101ALI20240228BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20240228BHJP

【ＦＩ】

A61K39/215

A61K39/39

A61P31/14

A61P37/04

A61K45/00

A61K35/74 B

A61K47/64

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023536891

(86)(22)【出願日】2021-12-14

(85)【翻訳文提出日】2023-08-09

(86)【国際出願番号】 CU2021050014

(87)【国際公開番号】W WO2022127946

(87)【国際公開日】2022-06-23

(31)【優先権主張番号】2020-0101

(32)【優先日】2020-12-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CU

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】523057415

【氏名又は名称】インスティテュート フィンレイ デ バクナス

(71)【出願人】

【識別番号】509352381

【氏名又は名称】セントロ デ インミュノロヒア モレキュラル

(74)【代理人】

【識別番号】110000855

【氏名又は名称】弁理士法人浅村特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ベレス ベンコモ、ビンセント ギレルモ

(72)【発明者】

【氏名】バルデス バルビン、ユーリー

(72)【発明者】

【氏名】ガルシア リベラ、ダグマー

(72)【発明者】

【氏名】オチョア アッセ、ロランド

(72)【発明者】

【氏名】クリメント ルイス、ヤネット

(72)【発明者】

【氏名】ゴンザレス ロドリゲス、ウンベルト

(72)【発明者】

【氏名】オロサ バスケス、イヴェッテ

(72)【発明者】

【氏名】ディアス エルナンデス、マリアンニス

(72)【発明者】

【氏名】サンチェス ラミレス、ベリンダ

(72)【発明者】

【氏名】オヒト マガス、エドアルド

(72)【発明者】

【氏名】レオン モンソン、カレト

(72)【発明者】

【氏名】マシアス アブラハム、コンスエロ ミラグロ

(72)【発明者】

【氏名】チャン モンテアグド、アルトゥーロ

(72)【発明者】

【氏名】ポルト ゴンザレス、デリア エステル

(72)【発明者】

【氏名】デユベド エチェヴェリア、マルタ

(72)【発明者】

【氏名】ロドリゲス アコスタ、ミレイダ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

4C087

【Ｆターム（参考）】

4C076EE41

4C076EE59

4C084AA19

4C084NA05

4C084ZB092

4C085AA03

4C085BA71

4C085CC08

4C085EE01

4C085EE06

4C085FF02

4C087AA01

4C087AA02

4C087AA03

4C087BC50

4C087MA02

4C087NA05

4C087ZB09

(57)【要約】

本発明は、バイオテクノロジー及び医学の分野に関する。ＣＯＶＩＤ－１９から回復した患者及びサブユニットワクチン以外のワクチンプラットフォームでワクチン接種された対象であって、有効な防御免疫を発達させることができず、又は免疫が経時的に低下しており、一次ワクチン接種で使用されたのと同じワクチンによるブースターは推奨されない場合の治療における、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの受容体結合ドメインに基づくワクチン組成物の使用を記載している。特に、この使用は、受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）と、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド及びジフテリアトキソイド変異体ＣＲＭ１９７などの担体タンパク質との共有結合コンジュゲートを含むワクチン組成物、並びに血清型Ｂナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の免疫賦活剤外膜小胞を有する又は有さないＲＢＤを抗原として有するワクチン組成物について記載される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

回復したＣＯＶＩＤ－１９患者の治療におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）を含むワクチン組成物の使用。

【請求項2】

回復した患者が、以下の条件：
－ＲＢＤに対する応答力価が１：１０００未満である、
－ＲＢＤ－ＡＣＥ２タンパク質相互作用の阻害能が１：１００希釈で５０％未満である、又は
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和抗体価が１：１６０未満である、
の少なくとも１つを特徴とする体液性免疫を有する、請求項１に記載の使用。

【請求項3】

ワクチン組成物が、ＲＢＤと、以下：
－破傷風トキソイド、
－ジフテリアトキソイド、及び
－ＣＲＭ１９７、
からなる群から選択される担体タンパク質との共有結合コンジュゲートを含むことを特徴とする、請求項１に記載の使用。

【請求項4】

ワクチン組成物が、抗原としてＡｌ（ＯＨ）_３に吸着されたＲＢＤを特徴とする、請求項１に記載の使用。

【請求項5】

免疫賦活剤をさらに含むワクチン組成物を特徴とする、請求項４に記載の使用。

【請求項6】

ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）外膜小胞を免疫賦活剤として有することを特徴とする、請求項５に記載の使用。

【請求項7】

ＲＢＤが単量体形態である、請求項４に記載の使用。

【請求項8】

ＲＢＤが二量体形態である、請求項４に記載の使用。

【請求項9】

ワクチン組成物が、２１～２８日の間隔で、１～３用量の範囲の１～１００μｇのＲＢＤを含む免疫化スケジュールで回復期患者に筋肉内又は皮下投与される、請求項１～８のいずれか一項に記載の使用。

【請求項10】

高いＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和能を有する高度免疫血漿を得るための、請求項９に記載の使用。

【請求項11】

以下：
－アデノウイルス、
－不活化ウイルス
－弱毒化ウイルス
－ｍＲＮＡベースのワクチン
からなる群から選択されるワクチンで以前に免疫化された対象において有効な防御免疫を送達するための、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤを含むワクチン組成物の使用。

【請求項12】

以下の条件：
－ＲＢＤに対する応答力価が１：１０００より大きい、
－ＲＢＤ－ＡＣＥ２相互作用の阻害能が１：１００希釈で５０％超である、又は
－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和抗体価が１：１６０超である、
の少なくとも１つが適用される場合に、防御免疫が有効であると考えられる、請求項１１に記載の使用。

【請求項13】

ワクチン組成物が、ＲＢＤと、以下：
－破傷風トキソイド、
－ジフテリアトキソイド、及び
－ジフテリアトキソイド変異体
－ＣＲＭ１９７、
からなる群から選択される担体タンパク質との間の共有結合コンジュゲートを特徴とする、請求項１１に記載の使用。

【請求項14】

ワクチン組成物が、抗原としてＡｌ（ＯＨ）_３に吸着されたＲＢＤを特徴とする、請求項１１に記載の使用。

【請求項15】

免疫賦活剤をさらに含むことを特徴とする、請求項１４に記載のワクチン組成物。

【請求項16】

ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）外膜小胞を免疫賦活剤として有することを特徴とする、請求項１５に記載のワクチン組成物。

【請求項17】

ＲＢＤが単量体形態である、請求項１４に記載の使用。

【請求項18】

ＲＢＤが二量体形態である、請求項１４に記載の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、バイオテクノロジー及び医学の分野に関し、特に、ＣＯＶＩＤ－１９から回復した患者、及び防御免疫を発達させることができず顕著な自然防御抗体応答が低下しているか又は誘導されなかったワクチン接種された対象の治療における、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２受容体結合ドメインに基づくワクチン組成物の使用に関する。

【背景技術】

【0002】

ＣＯＶＩＤ－１９は、病因不明の肺炎の重篤な症例が報告され始めた２０１９年１２月に中国の武漢で発見された非常に最近の疾患である。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスによって引き起こされる疾患は、その急速な広がり、並びに症候性患者（５０％未満を占める）の場合には発熱、咳、鼻漏、喉の痛み及び呼吸困難などの症候の出現を特徴とする。この疾患に感染した残りの人々は無症候性であり、これはウイルスの拡散における重要な要因であり、その制御に関して疫学的課題を表す（ＷＨＯ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ（ＣＯＶＩＤ－２０１９）ｓｉｔｕａｔｉｏｎ ｒｅｐｏｒｔｓ．ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｅｍｅｒｇｅｎｃｉｅｓ ／ｄｉｓｅａｓｅｓ／ｎｏｖｅｌ－ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ－２０１９／ｓｉｔｕａｔｉｏｎ－ｒｅｐｏｒｔｓ。２０２０年８月１３日参照）。

【0003】

ＭＥＲＳ及びＳＡＲＳとして知られるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２と同様の他のコロナウイルスは、過去数十年に同様の流行を既に引き起こしている。ＳＡＲＳはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２とのより大きな相同性を示し、それらの間の主な類似性の１つは、両方のウイルスがＡＣＥ２タンパク質を受容体として使用してヒト細胞に浸透することである。したがって、ＳＡＲＳもＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２も、Ｓ１ウイルスタンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）とＡＣＥ２（アンジオテンシン変換酵素２）タンパク質との相互作用が、ヒトがウイルスに感染する決定的要因である（Ｗａｌｌｓ Ａ ｅｔ ａｌ（２０２０）Ｃｅｌｌ ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２０２０．０２．０５８）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質のＲＢＤは、およそ１９５アミノ酸のフラグメント（配列３３３～２５７）であり、受容体結合モチーフ（ＲＢＭ）を含有し、ウイルスがＡＣＥ２受容体と相互作用する領域である。ＲＢＤは、システインＣｙｓ３３６－Ｃｙｓ３６１、Ｃｙｓ３７９－Ｃｙｓ４３２、Ｃｙｓ３９１－Ｃｙｓ５２５、及びＣｙｓ４８０－Ｃｙｓ４８８の間に４つの分子内ジスルフィド架橋を含有し、非常にコンパクトで安定した構造の作成に役立つ（Ｌａｎ ｅｔ ａｌ（２０２０），Ｎａｔｕｒｅ ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓ４１５８６－０２０－２１８０－５）。

【0004】

ＲＢＤは小分子であり、その分子質量は、発現宿主及び組み込まれた炭水化物に応じて２５～２７ｋＤａの範囲であり、主にアスパラギンＮ３３１及びＮ３４３に結合している（Ｃｈｅｎ ＷＨ ｅｔ ａｌ，２０１７，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １０６：１９６１－１９７０）。

【0005】

ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２ワクチンのための戦略には、不活化ウイルス、アデノウイルス又はメッセンジャーＲＮＡに組み込まれたウイルス遺伝物質を含有する遺伝子構築物、及び遺伝子改変宿主において発現されるウイルスタンパク質サブユニット又はフラグメントに基づくワクチンが含まれる。この場合、好ましい分子は、スパイクタンパク質としても知られるＳタンパク質、又はその構造のフラグメント、すなわちＲＢＤである。この戦略は使用中の多くのワクチンの戦略に近いので、それらの主な利点は安全性である。それにもかかわらず、その主な課題は、ウイルス感染から保護するのに十分な免疫応答の達成である。

【0006】

２０２０年１２月２日現在、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１６３種のワクチン候補が前臨床評価中であり、５１種が臨床試験中であった。この数のうち、ＲＢＤを特異的抗原として有するワクチン候補は少なくとも１３種（臨床試験では５種、前臨床試験では８種）存在する（ＤＲＡＦＴ Ｌａｎｄｓｃａｐｅ ｏｆ ＣＯＶＩＤ－１９ Ｃａｎｄｉｄａｔｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ－Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２，２０２０、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ／ｍ／ｉｔｅｍ／ｄｒａｆｔ－ｌａｎｄｓｃａｐｅ－ｏｆ－ｃｏｖｉｄ－１９－ｃａｎｄｉｄａｔｅ－ｖａｃｃｉｎｅｓで入手可能）。

【0007】

パンデミックの開始から数ヶ月後、ＣＯＶＩＤ－１９の患者の免疫系に対する影響がよりよく理解されつつある。この疾患は、特にその重症及び重篤な段階では、サイトカインストームを引き起こす強力な過剰炎症性成分を有し（ｄｅ ｌａ Ｒｉｃａ，Ｒ；Ｂｏｒｇｅｓ Ｍ；Ｇｏｎｚａｌｅｚ－Ｆｒｅｉｒｅ，Ｍ（２０２０）Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０２０．５５８８９８；Ｒｉｖａ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ．２４：５４９）、適切に制御されなければ致死に寄与し得る。（Ｔｉｓｏｎｃｉｋ，Ｊ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ．７６（１）：１６－３２）。実際に、この目的のためにいくつかの薬物が開発されており、そのうちのいくつかが、キューバ（Ｍａｒｔｉｎｅｚ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ａｎａｌｅｓ ｄｅ ｌａ Ａｃａｄｅｍｉａ ｄｅ Ｃｉｅｎｃｉａｓ ｄｅ Ｃｕｂａ．１０（２）ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｅｖｉｓｔａｃｃｕｂａ．ｓｌｄ．ｃｕ、２０２０年１２月２日参照）及び世界（Ｘｕ，Ｘ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．７：２２）のＣＯＶＩＤ－１９治療プロトコルに導入されている。

【0008】

さらに、いくつかの研究は、疾患から回復した患者（回復期患者）において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する抗ＲＢＤ抗体を示している。抗体レベルは個体間で異なり、それらの力価と疾患の重症度との間には一定の相関がある（無症候性患者では、中等度、重度又は重篤な疾患の患者よりも低い）。（Ｓｅｏｗ，Ｊ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１５６４－０２０－００８１３－８；Ｂｏｓｎｊａｋ，Ｂ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１４２３－０２０－００５７３－９）。回復期患者における抗ＲＢＤ抗体価は、インビトロ細胞のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス感染を中和する能力と強く相関することも実証されている（Ｔａｎ，Ｃ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓ４１５８７－０２０－０６３１－ｚ）。

【0009】

それにもかかわらず、最近の研究は、抗ＲＢＤ抗体価及びそのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和能が時間依存的であり、感染から回復した個体において徐々に低下することを示している。（Ｌｅｅ，Ｗ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，ＤＯＩ：１０．１０９３／ｉｎｆｄｉｓ／ｊｉａａ６７３）。さらに、第２の感染が第１の感染よりも重症であった場合でも、患者の再感染の証拠が増加している。（Ｑｕ，ＹＭ ａｎｄ Ｃｏｎｇ ＨＹ（２０２０）Ｔｒａｖｅｌ Ｍｅｄ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．３４：１０１６１９；Ｌａｎ Ｌ ｅｔ ａｌ．（２０２０）ＪＡＭ．３２３：１５０２－３；Ｔｉｌｌｅｔｔ，Ｒ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｌａｎｃｅｔ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／Ｓ１４７３－３０９９（２０）３０７６４－７）。これらのデータは、効果的な保護のための戦略の必要性に国際科学界の注目を集めている。（Ｏｖｅｒｂａｕｇｈ，Ｊ（２０２０）Ｎａｔｕｒｅ，２６ １６７８－１６８５）。

【0010】

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２回復期患者の免疫系が非常に特異的な（ｓｕｉ－ｇｅｎｅｒｉｓ）免疫学的状況でウイルス抗原に遭遇したことを考えると、ウイルスと接触していないナイーブ個体を保護するために開発されたワクチン又はワクチン戦略が、サイトカインストームの再活性化又は抗体産生の刺激などの意図しない有害作用を生じさせずに、ＡＤＥ（抗体依存性増強）として知られる現象を引き起こさずに、再感染に対する保護を達成又は増強するのに適切又は有効であることは明らかではない（Ａｒｖｉｎ，ＡＭ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｎａｔｕｒｅ ５８４（７８２１）：３５３－３６３）。さらに、ＣＯＶＩＤ－１９に使用されている様々なワクチン技術によって提供される誘導防御の長さは知られておらず、ブースター用量が必要な場合、これらのワクチンの一部をブースターとして使用することができなかった。

【0011】

本発明は、防御抗体応答が低下しているか又は誘導されなかったＣＯＶＩＤ－１９回復患者の治療におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２受容体結合ドメインに基づくワクチン組成物の使用を初めて記載する。さらに、これらのワクチン組成物は、アデノウイルス又はＲＮＡワクチンで以前にワクチン接種された個体に使用することができる。記載されるワクチン組成物はまた、非感染個体において試験されているが、ここで初めて、回復期患者において中和能を有する強い免疫応答を効率的に再刺激する能力を実証する。両方のワクチン戦略がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの小さな組換えタンパク質であるＲＢＤに基づくという事実は、この応用分野において特別な利点をもたらし得る。特に、それらは、宿主細胞におけるウイルスとＡＣＥ２受容体との相互作用の原因であるＲＢＭに対する高度に標的化された応答を引き起こす。満足のいく安全性プロファイルを有するこの高度に標的化された応答は、弱毒化ウイルスワクチン、Ｓタンパク質ベースのワクチン又はウイルスベクターワクチンなどの他のワクチン戦略と比較した場合に利点である。

【発明の概要】

【0012】

一実施形態では、本発明は、回復したＣＯＶＩＤ－１９患者の治療におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）を含むワクチン組成物の使用に関する。特に、これらの回復した患者は、以下の条件の少なくとも１つを特徴とする体液性免疫を有する：ＲＢＤに対する応答力価が１：１，０００未満であるか、ＲＢＤ－ＡＣＥ２相互作用の阻害能が１：１００希釈で５０％未満であるか、又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和抗体価が１：１６０未満である。

【0013】

特定の実施形態では、本発明は、ＲＢＤと、以下：破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、及びジフテリアトキソイド変異体ＣＲＭ１９７からなる群から選択される担体タンパク質の共有結合コンジュゲートを含むことを特徴とするワクチン組成物の上記使用に関する。特許請求の範囲における他のワクチン組成物は、Ａｌ（ＯＨ）_３に吸着された単量体又は二量体のいずれかの形態の抗原としてＲＢＤを含むものである。他の特許請求の範囲に記載されているワクチン組成物は、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）外膜小胞などの免疫賦活剤の使用を含む。

【0014】

特定の実施形態では、上記ワクチン組成物は、２１～２８日の間隔で、１～３用量の１～１００μｇのＲＢＤを含む免疫化スケジュールで回復ＣＯＶＩＤ－１９患者に筋肉内又は皮下投与される。本発明は、高いＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和能を有する高度免疫血漿を得るための上記免疫スケジュールによる使用が意図される。

【0015】

別の実施形態では、本発明は、サブユニットワクチン以外のワクチンプラットフォームでワクチン接種され、有効な防御免疫を発達させていないか、又はこの防御免疫が経時的に低下しており、アデノウイルス、不活化ウイルス、弱毒化ウイルス及びｍＲＮＡワクチンなどの一次免疫に使用される同じワクチンではブースター用量が推奨されない対象の免疫における本明細書で言及されるワクチン組成物の使用を網羅する。本発明によれば、以下の条件の少なくとも１つが適用される場合に、効果的な防御免疫が達成される：ＲＢＤに対する応答力価が１：１，０００より大きいか、ＲＢＤ－ＡＣＥ２タンパク質相互作用の阻害能が１：１００希釈で５０％超であるか、又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和抗体価が１：１６０超である。

【発明を実施するための形態】

【0016】

本発明は、中和能を有する有意なレベルの天然抗ＲＢＤ抗体を伴わない、ＣＯＶＩＤ－１９回復（回復期）患者におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス受容体結合ドメインに基づくワクチン組成物の使用を記載する。特に、これらのワクチン組成物は、免疫賦活剤を含む、若しくは含まずに、Ａｌ（ＯＨ）_３に吸着された二量体及び／又は単量体形態のＲＢＤを含有し得るか、又は限定されないが、特許出願ＣＵ－２０２０－００５７及びＣＵ－２０２０－００６９に含まれるものに詳述されているように、より複雑であり得る。

【0017】

ＣＯＶＩＤ－１９回復期で使用するためには、以下の条件の少なくとも１つが適用されることを検証しなければならない：ＥＬＩＳＡで測定して抗ＲＢＤ抗体価が１：１，０００未満であるか、又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染力中和抗体価が生ウイルス若しくは偽ウイルスを用いたアッセイで測定して１：１６０未満であるか、又は競合ＥＬＩＳＡで測定して血清の１：１００希釈物においてＲＢＤ－ＡＣＥ２相互作用タンパク質を阻害する能力が５０％未満である。

【0018】

ワクチン調製物は、ウイルスに対する記憶免疫応答の活性化を誘導し、主に数ヶ月間（少なくとも６ヶ月間）中和能を有する高いＲＢＤ抗体力価を確保する。患者の力価が再び低下した場合、保護を回復するために追加のブースター用量が投与され得る。それらの広範な安全性を考慮すると、ワクチン調製物は、２～５年の数年間連続して投与することができる。さらに、本発明で言及されるワクチン組成物は、サブユニットワクチン以外のワクチンプラットフォームでワクチン接種された対象であって、有効な防御免疫を発達させていない対象、又は免疫が一旦低下してブースター用量が必要になった後の対象の免疫化に使用することができる。アデノウイルスベクターベースのワクチンプラットフォームは、１回目の注射後、アデノウイルスベクター自体に対する抗体が産生され、２回目の用量を無効にし得るので、１回又は２回だけ対象を免疫することができることが実証されている。（Ｃａｓｉｍｉｒｏ，ＤＲ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７７：７６６３－７６６８）。

【0019】

ワクチン調製物は、２１～２８日の間隔で、１～３用量の範囲の１～１００μｇ、好ましくは３０～６０μｇのＲＢＤを含む免疫化スケジュールで回復期患者に筋肉内又は皮下投与される。

【0020】

本発明はさらに、ワクチン接種後のＣＯＶＩＤ－１９回復期患者によって産生された抗体からＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス中和能を有する高度免疫血漿を得る方法を含む。高度免疫血漿は、いくつかの著者によって強調されているように、中等度、重度又は重篤なＣＯＶＩＤ－１９を有する患者の治療に有用である（Ｂｌｏｃｈ ＥＭ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１３０：２７５７－６５，Ｃａｓａｄｅｖａｌｌ Ａ．（２０２０）ＪＡＭＡ ３２４：４５５－７）。ドナーは、ＦＤＡの勧告に従って、症候がなく、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２リアルタイムＰＣＲについて陰性と試験され、少なくとも１：１６０の中和抗体価を有する必要がある（ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ ＣＯＶＩＤ－１９ ｃｏｎｖａｌｅｓｃｅｎｔ ｐｌａｓｍａ：ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ ｉｎｄｕｓｔｒｙ．Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ：ＦＤＡ，２０２０）。本発明の方法は、良好な免疫応答を自発的に生じさせていない回復期患者から高度免疫血漿を得ることを可能にする。この目的のために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗体の受動的移入に有用な高度免疫血漿を得るために望ましい中和抗体レベル（力価＞１：１６０）に達するまで、本明細書に記載の免疫化スケジュールに従って回復期患者を免疫化する。この方法で使用される血漿は、そのような目的のために血液処理基準に従って処理される。

【図面の簡単な説明】

【0021】

【図1】ＲＢＤに対して検出された総ＩｇＧ抗体力価と１：１００希釈での血清の阻害値（パーセンテージ）との間の相関。

【図2A】ｍＲＮＡワクチンによる免疫化スキームを受けた６ヶ月後及びＲＢＤワクチンによるブースター用量を適用後の対象血清の相互作用阻害ＲＢＤ－ＡＣＥ２のパーセンテージ値。

【図2B】ＲＢＤワクチンによるブースター用量を受けた、不活化ウイルスワクチンによる免疫化対象において検出された抗ＲＢＤ抗体の濃度。

【図3】コンジュゲートＲＢＤワクチンによるブースター用量を受けた、ＲＢＤワクチンで免疫された対象において検出された抗ＲＢＤ抗体の濃度。

【実施例】

【0022】

例１．ＣＯＶＩＤ－１９から回復したキューバ患者における抗ＲＢＤ力価及びＲＢＤ－ＡＣＥ２相互作用の阻害能の変動。
３９人のＣＯＶＩＤ－１９回復期個体の血清を間接ＥＬＩＳＡで分析して、抗ＲＢＤ抗体価を決定する。ＮＵＮＣ ＭａｘｉＳｏｒｐ ９６ウェルマイクロタイタープレートを、５０μＬのＲＢＤ（リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．０）中５μｇ／ｍＬ）でコーティングし、３７℃で１時間インキュベートした。コーティングされていない部位を１５０μＬのブロッキング溶液（ＰＢＳ、Ｔｗｅｅｎ ２０ ０．０５％［ｖ：ｖ］、４％スキムミルク）で３７℃で３０分間ブロッキングした。次いで、ブロッキング溶液に溶解した血清（１００μＬ／ウェル）を、一般に１：１００から始まる連続希釈（１：２）で添加した。プレートを４℃で一晩インキュベートし、ＰＢＳ、Ｔｗｅｅｎ ２０（０．０５％）［ｖ：ｖ］で３回洗浄した。ペルオキシダーゼコンジュゲートヒト抗免疫グロブリンＧの希釈物（１００μＬ）をブロッキング溶液（１：５０００）に添加し、室温で１時間インキュベートした。最終洗浄工程の後、ペルオキシダーゼ酵素基質溶液（１００μＬ／ウェル）を添加した。これを暗所で２０分間インキュベートし、反応をＨ_２ＳＯ_４ ２Ｎ（５０μＬ／ウェル）で停止させた。ＥＬＩＳＡリーダーを用いて４９０ｎｍで吸光度を読み取った。ＩｇＧ力価を決定するために、評価した希釈範囲で線形回帰を行い、補間した。閾値は、１：１００に希釈したＣＯＶＩＤ－１９の前に得られた陰性血清の平均吸光度の２倍であった。

【0023】

これらの同じ３９人の回復期患者の血清をＥＬＩＳＡで評価して、ＲＢＤ－ＡＣＥ２相互作用を阻害する能力を決定した。ヒトＡＣＥ２－Ｆｃ（５μｇ／ｍＬ）でコーティングしたプレートをブロッキングし、マウスＲＢＤ－Ｆｃ融合物を、３７℃で１時間予めインキュベートした１：１００～１：１０，０００の希釈の回復期患者由来の血清とともに添加した。乳０．２％及びＳＳＴＦ－Ｔに希釈した抗マウスＩｇＧ－アルカリホスファターゼコンジュゲートを認識検出に使用した。最終洗浄工程の後、ジエタノールアミン緩衝液（１ｍｇ／ｍＬ）中の５０μＬ／ウェルのｐＮＰＰを適用した。これを暗所で３０分間インキュベートし、反応を３Ｍ ＮａＯＨ（５０μＬ／ウェル）で停止させた。吸光度を４０５ｎｍで読み取った。阻害率を、以下の式を使用して計算した：（１－Ａｂｓ４０５ｎｍマウスＲＢＤ Ｆｃ＋回復期血清／Ａｂｓ４０５ｎｍマウスＲＢＤ Ｆｃ）＊１００。

【0024】

図１は、ＲＢＤに対する抗体力価の関数として、１：１００の希釈での回復期個体（ｎ＝３９）からの血清の阻害能を示す。スピアマンの正の相関（ｒ＝０．９１７８）が、ＲＢＤに対する総抗体力価とそれらの阻害能との間で観察される（ｒ＝０．９１７８）。試験した全個体のうち、４１％が３０％未満の阻害値及び１：８００未満の抗ＲＢＤ抗体力価を有した。

【0025】

抗ＲＢＤ抗体力価とＲＢＤ－ＡＣＥ２相互作用を阻害する能力の両方において、キューバ回復期患者で観察された高い変動性は、文献（Ｔａｎ，Ｃ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓ４１５８７－０２０－０６３１－ｚ）で報告されたデータと一致する。文献はまた、ＣＯＶＩＤ－１９回復期において、抗ＲＢＤ ＩｇＧ力価と血清／血漿が生ウイルス感染を中和する能力との間に正の相関があることを確認している。高い抗ＲＢＤ抗体力価（１：１３５０超）のみが、１：１６０希釈での中和能のより高い確率（８０％）を予測する。（Ｓａｌａｚａｒ，Ｅ ｅｔ ａｌ．（２０２０）ｂｉｏＲｘｉｖ．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１０１／２０２０．０６．０８．１３８９９０）。

【0026】

例２．効果的な液性免疫を発達させていないＣＯＶＩＤ－１９回復期患者は、免疫後に防御を達成する。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出するための陰性ＲＴ－ＰＣＲ試験の２ヶ月後及び４ヶ月後に、ＣＯＶＩＤ－１９から回復している２人の患者から血液試料を採取した。血清を、抗ＲＢＤ抗体価及びＲＢＤ－ＡＣＥ２相互作用の阻害能については例１においてそのような目的のために記載されるＥＬＩＳＡで、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和抗体価については特許出願ＣＵ－２０２０－００６９に記載される比色ニュートラルレッドアッセイによって試験した。上記の技術は、特許出願ＣＵ－２０２０－００５７及びＣＵ－２０２０－００６９に詳述されている。

【0027】

両方の場合において、抗ＲＢＤ抗体力価及び中和抗体力価が、防御応答について確立されたパラメータを下回ったことを確認した後、両方の患者を、Ａｌ（ＯＨ）_３に吸収された５０μｇの二量体ＲＢＤで免疫化した。免疫後１４日目に採血した。得られた血清から、抗ＲＢＤ抗体価及びＲＢＤ－ＡＣＥ２相互作用の阻害能、並びにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和抗体価を再度測定した。

【0028】

表１は、０日目（免疫前）及び免疫後１４日目に実施した測定についての２人の患者の転帰を示す。留意され得るように、単回免疫後、両方の患者は高い抗ＲＢＤ抗体力価、ＲＢＤ－ＡＣＥ２相互作用について８０％を超える阻害値及び１：１６０をはるかに超える中和抗体力価を有した。中和力価の増加は抗ＲＢＤ力価の増加よりも高いことに留意することが重要であり、これは、この免疫によって中和能を持つ抗体が血清／血漿中に優先的に濃縮されることを証明している。

【表1】

【0029】

満足のいく安全性プロファイルが両方の個体において認められたことを強調することも重要である。有意な有害事象は発生しなかった。

【0030】

例３．ＲＢＤを含むワクチン接種組成物を用いたブースター用量を受ける、不活化ワクチン及びｍＲＮＡワクチンを用いた以前に免疫化された対象における抗ＲＢＤ抗体の濃度及びＲＢＤ－ＡＣＥ２相互作用の阻害能の増加。
不活化ワクチン又はｍＲＮＡウイルスワクチンの完全な２用量スキームを受けた対象は、６ヶ月後に血液抽出を行い、以前のワクチン接種によって生じた応答の持続時間を評価した。これらの対象は、ブースター用量の１４～２８日後に、ＳＡＲＳ－ＣＯＶウイルスＲＢＤに基づくワクチン組成物の用量、並びに抗ＲＢＤ抗体の濃度及びＡＣＥ２ ＲＢＤ－タンパク質相互作用の阻害能を受けた。

【0031】

図２は、ｍＲＮＡワクチンを接種し、ＡｌｏＨ３に吸着されたナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の外膜小胞を有するＲＢＤを含有するワクチン組成物のブースター用量を投与した、個体の血清の阻害能を示す（図２ａ）。見てとれるように、完全なスキームを受けた６ヶ月後、阻害値は６５％未満であり、ブースター用量による免疫化後、これらの値は、評価された全ての対象について９０％を超えて増加する。

【0032】

ＡＲＨ３に吸着したＲＢＤを含有するワクチン組成物を２用量の不活化ウイルスワクチンで以前に免疫化された対象に適用した場合、同様の増加が観察される。不活化ウイルスワクチンの完全スキームを適用した２１日後に血清を評価し、抗ＲＢＤ抗体濃度値を観察し、ブースター用量を適用した後に平均４０ ＵＡ／ｍｌで２００ ＵＡ／ｍｌ超に増加した。

【0033】

両方の場合において、既存の免疫を強化する能力は、以前にワクチン接種された対象において用量を適用することによって実証された。

【0034】

例４．コンジュゲート破傷風トキソイドを含むワクチン組成物を用いたブースター用量を受け取る、ＲＢＤワクチンで以前に免疫化された対象における抗ＲＢＤ抗体の濃度の増加。
２用量のＲＢＤベースのワクチン候補で免疫化された対象は、ＲＢＤと破傷風トキソイドとの間の共有結合コンジュゲートを担体タンパク質として含むワクチン組成物の強化用量を６ヶ月で受けた。図３に見られるように、全ての対象は、コンジュゲートＲＢＤを含有するワクチン接種組成物によるブースター用量後に抗体濃度値の増加を示した。

【図1】

【図2】

【図3】

【国際調査報告】