特表 2024-510191 幹細胞から由来したエクソソームを含む関節炎の緩和又は治療用医薬組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-06

(54)【発明の名称】幹細胞から由来したエクソソームを含む関節炎の緩和又は治療用医薬組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/28 20150101AFI20240228BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20240228BHJP

   A61P 19/00 20060101ALI20240228BHJP

【ＦＩ】

A61K35/28

A61P19/02

A61P19/00

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023555322

(86)(22)【出願日】2021-03-08

(85)【翻訳文提出日】2023-09-08

(86)【国際出願番号】 KR2021002853

(87)【国際公開番号】W WO2022191341

(87)【国際公開日】2022-09-15

(81)【指定国・地域】

【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第２項適用申請有り 電気通信回線を通じての発表 掲載年月日：２０２０年３月９日 掲載アドレス：ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０８０／２００１３０７８．２０２０．１７３５２４９

(71)【出願人】

【識別番号】517146460

【氏名又は名称】株式会社エキソステムテック

【氏名又は名称原語表記】ＥＸＯＳＴＥＭＴＥＣＨ ＣＯ．，ＬＴＤ．

(74)【代理人】

【識別番号】110000338

【氏名又は名称】弁理士法人 ＨＡＲＡＫＥＮＺＯ ＷＯＲＬＤ ＰＡＴＥＮＴ ＆ ＴＲＡＤＥＭＡＲＫ

(72)【発明者】

【氏名】チョ，ヨン ウ

(72)【発明者】

【氏名】チェ，ジ スク

(72)【発明者】

【氏名】チェ，ヨン チャン

(72)【発明者】

【氏名】ウ，チャン ヒ

【テーマコード（参考）】

4C087

【Ｆターム（参考）】

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB64

4C087CA04

4C087MA66

4C087NA14

4C087ZA96

4C087ZB15

(57)【要約】

本発明は、エクソソームに基づいた関節炎の緩和及び治療用医薬組成物に関する。本発明によるエクソソームは、軟骨に発生した炎症を緩和及び治療して軟骨侵食を防止するだけでなく、滑膜のような周辺組織内の炎症反応までも効果的に緩和させて関節炎を根本的に治療することができる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

増殖する脂肪由来幹細胞（ａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ）から由来したエクソソームを有効成分として含む、関節炎の緩和又は治療用医薬組成物。

【請求項2】

前記脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞である、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項3】

前記関節炎が骨関節炎（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ）及びリュウマチ関節炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ）から選択されるものである、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項4】

前記エクソソームが４回～６回継代培養で増殖する幹細胞から由来したものである、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項5】

前記エクソソームが５回継代培養で増殖する幹細胞から由来したものである、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項6】

前記エクソソームが抗炎症性サイトカインを含むものである、請求項１に記載の医薬組成物。

【請求項7】

前記抗炎症性サイトカインがＴＩＭＰ－１及びＴＩＭＰ－２から選択される１つ以上のものである、請求項６に記載の医薬組成物。

【請求項8】

請求項１から７のいずれか一項に記載の医薬組成物を含む関節炎の緩和又は治療用注射剤。

【発明の詳細な説明】

【発明の詳細な説明】

【0001】

［技術分野］
本発明は、関節炎の緩和又は治療用医薬組成物に関する。
［背景技術］
リュウマチ関節炎は、自己免疫による炎症が原因であると理解されている。退行性関節炎、すなわち骨関節炎は、関節を構成する軟骨細胞（ｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓ）に老化などの退行が発生し、インターロイキン－１（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１）及び腫瘍壊死因子－α（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－α）などの炎症性サイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）の生成により、関節基質を分解する基質金属タンパク質分解酵素（ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ：ＭＭＰ）の合成及び活性が関節細胞において増加し、関節組織が破壊されることで誘発される疾病である。

【0002】

また、関節炎は、炎症性サイトカインによる一酸化窒素の生成、及び生成された一酸化窒素による自己増幅的なサイトカインの生成によって、より多くのＭＭＰの合成が誘発されて関節基質の分解が促進されることでさらに悪化する。また、炎症性サイトカインは、脂質代謝産物であるプロスタグランジンＥ２の生成を増加させて、関節炎における炎症反応を誘発する。骨関節炎は、退行性関節炎とも称される関節炎の一種であって、特定の基質的原因なしに主に老年に頻発し、慢性的に進行すれば、関節構造の変形によって歩行障害などの運動障害を伴う。骨関節炎では、主に、関節軟骨（ｃａｒｔｉｌａｇｅ）の漸進的な損傷や退行性変化により、関節を構成する骨と靭帯などに損傷が起きて炎症が発生する。骨関節炎の進行時には、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１などの炎症性サイトカインの生成が増加し、コラゲナーゼ（ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ）、ストロメリシン（ｓｔｒｏｍｅｌｙｓｉｎ）などのようなＭＭＰの分泌が増加して、関節軟骨が破壊されるようになる。また、ＭＭＰはＩＬ－１、ＴＮＦ－αなどを誘導するが、これにより筋肉、腱、靭帯などのような組織にも影響を及ぼして酷い炎症を引き起こす。

【0003】

本明細書の全体にわたって多数の文献が参照され、その引用が示されている。引用された文献の開示内容は、その全体が本明細書に参照として援用されることで、本発明が属する技術分野の水準及び本発明の内容がより明確に説明される。
［発明の概要］
［発明が解決しようとする課題］
本発明は、幹細胞から由来したエクソソームが軟骨に発生した炎症を緩和及び治療することで、炎症による軟骨侵食を防止するだけでなく、滑膜（ｓｙｎｏｖｉｕｍ）のような周辺組織内の炎症反応までも効果的に緩和させて、関節炎の治療効果があることを見出して本発明の完成に至った。

【0004】

したがって、本発明は、幹細胞から由来したエクソソームを有効成分として含む、関節炎の緩和又は治療用医薬組成物を提供することを目的とする。
より詳しくは、本発明は、以下の具現例を提供することを目的とする。

【0005】

具現例１．増殖する脂肪由来幹細胞（ａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ）から由来したエクソソームを有効成分として含む、関節炎の緩和又は治療用医薬組成物；増殖する脂肪由来幹細胞から由来したエクソソームの、関節炎の緩和又は治療用医薬品の製造のための用途；又は増殖する脂肪由来幹細胞から由来したエクソソームを有効成分として含む組成物を対象体に投与することを含む、関節炎の緩和又は治療方法。

【0006】

具現例２．具現例１において、前記脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞である医薬組成物；用途；又は方法。

【0007】

具現例３．先行する具現例のいずれか一つにおいて、前記関節炎が、骨関節炎（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ）及びリュウマチ関節炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）から選択されるものである医薬組成物；用途；又は方法。

【0008】

具現例４．先行する具現例のいずれか一つにおいて、前記エクソソームが４回～６回継代培養で増殖する幹細胞から由来したものである医薬組成物；用途；又は方法。

【0009】

具現例５．先行する具現例のいずれか一つにおいて、前記エクソソームが５回継代培養で増殖する幹細胞から由来したものである医薬組成物；用途；又は方法。

【0010】

具現例６．先行する具現例のいずれか一つにおいて、前記エクソソームが抗炎症性サイトカインを含むものである医薬組成物；用途；又は方法。

【0011】

具現例７．先行する具現例のいずれか一つにおいて、前記抗炎症性サイトカインがＴＩＭＰ－１及びＴＩＭＰ－２から選択される１つ以上のものである医薬組成物；用途；又は方法。

【0012】

具現例８．先行する具現例のいずれか一つによる医薬組成物を含む関節炎の緩和又は治療用注射剤。

【0013】

本発明の他の目的及び利点は、下記の発明の詳細な説明、特許請求の範囲及び図面によってより明確になる。
［課題を解決するための手段］
本発明の一態様は、増殖する脂肪由来幹細胞（ａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ）から由来したエクソソームを有効成分として含む、関節炎の緩和又は治療用医薬組成物を提供する。

【0014】

本発明で使われる用語「幹細胞（ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）」とは、自己複製能力だけでなく、細胞が位置する環境の影響を受けて必要に応じて適切な信号が与えられる場合、多分化能（ｍｕｌｔｉ ｐｏｔｅｎｃｙ）の特性によって多様な細胞に分化可能な特性を有する細胞を意味する。

【0015】

本発明の幹細胞は、自己由来又は同種由来の幹細胞であり得、ヒト及び非ヒト哺乳類を含む任意の類型の動物由来であり得る。望ましくは、前記幹細胞は、患者の自己脂肪組織から由来したものであり得る。

【0016】

本発明で使われる用語「脂肪由来幹細胞（ａｄｉｐｏｓｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）」とは、脂肪組織から由来した幹細胞を意味する。脂肪組織は、多量の組織採取が容易であるため、幹細胞の収得に良い条件を有している。脂肪由来幹細胞は、培養において安定的な成長と増殖を示し、分化を誘導したときに多様な細胞への分化が可能である。

【0017】

本発明で使われる用語「エクソソーム（ｅｘｏｓｏｍｅ）」とは、多種の細胞から分泌される膜構造の小胞体であって、免疫学的に重要なタンパク質である主要組織適合性タンパク質と熱ショックタンパク質とを含む強力な抗腫瘍免疫応答を誘導し、他の細胞及び組織に結合して膜の構成要素、タンパク質、ＲＮＡを送達するなど様々な役割を果たすことが知られている。したがって、炎症緩和に関連する多様な遺伝情報、タンパク質、成長因子を含むエクソソームを用いて関節炎治療剤の組成物として活用することができる。

【0018】

本発明の脂肪由来幹細胞から由来したエクソソームは、抗炎症性サイトカインを含んでいるため、骨関節炎（ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ）及びリュウマチ関節炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）のような関節炎の緩和及び治療において重要な役割を果たすことができる。具体的には、ＴＩＭＰ－１（メタロプロテイナーゼ－１の組織阻害剤）、ＴＩＭＰ－２、ＩＬ－１ｒａ（インターロイキン－１受容体拮抗薬）、ＩＬ－４（インターロイキン－４）、ＩＬ－１０（インターロイキン－１０）、ＴＧＦ－β（トランスフォーミング増殖因子－β）などを含み、これらのサイトカインは、炎症反応の阻害を誘導し、炎症性サイトカインの阻害を誘導する役割を有している。

【0019】

前記抗炎症性サイトカインを含むエクソソームは、継代培養で増殖する幹細胞から由来したものであり得るが、望ましくは４回～６回継代培養、より望ましくは５回継代培養で増殖する幹細胞から由来したものであり得る。４回～６回継代培養で増殖する幹細胞からエクソソームを抽出する場合、３回又は７回継代から抽出したエクソソームと比べて、抗炎症性サイトカインの含有量が著しく上昇する臨界的な意義がある。

【0020】

具体的には、４回～６回継代培養で増殖する幹細胞から由来したエクソソームのタンパク質当たり含有された抗炎症性サイトカインの質量（ｐｇ／タンパク質（μｇ））は、３回又は７回継代培養で増殖する幹細胞から由来したエクソソームに含有された量の少なくても２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも４０倍、少なくとも５０倍、少なくとも６０倍、少なくとも７０倍、少なくとも８０倍、少なくとも９０倍、又は少なくとも１００倍であり得る。
本発明による医薬組成物は、脂肪由来幹細胞から由来したエクソソームの薬学的に有効な量とともに、一つ以上の薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤を含み得る。

【0021】

「薬学的に有効な量」とは、関節に発生した炎症を改善及び治療するのに十分な量を意味する。本発明による脂肪由来幹細胞から由来したエクソソームは、前記医薬組成物中に１×１０^７粒子／ｍＬ～１×１０^１０粒子／ｍＬの濃度、望ましくは５×１０^７粒子／ｍＬ～１×１０^９粒子／ｍＬの濃度で含まれ得る。しかしながら、前記エクソソームの濃度は、関節炎の進行程度、患者の年齢、体重、健康状態、性別、投与経路及び治療期間などによって適切に変更され得る。

【0022】

また、「薬学的に許容される」とは、生理学的に許容され、ヒトに投与されるとき、通常、胃腸障害、めまいなどのアレルギー反応又はこれに類似の反応を引き起こさない組成物を意味する。前記担体、賦形剤及び希釈剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルジネート、ゼラチン、カルシウムホスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアレート及び鉱物油が挙げられる。また、充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤及び防腐剤などをさらに含んでもよい。

【0023】

また、本発明の組成物は、医薬分野における通常の方法に基づき、患者の体内への投与に適した単位投与型の製剤に剤形化して投与し得、前記製剤は、１回又は数回投与により関節炎を緩和又は治療できる有効な投与量を含む。この目的に適した製剤としては、非経口投与製剤として、注射用アンプルなどの注射剤、注入バッグなどの注入剤などが望ましい。前記注射用アンプルは、使用直前に注射液と混合して調製し、注射液としては、生理食塩水、ブドウ糖、マンニトール、リンゲル液等を用い得る。

【0024】

前記医薬製剤には、前記有効成分に加え、一つ又はそれ以上の薬学的に許容可能な通常の不活性担体、例えば、注射剤の場合は、保存剤、無痛化剤、可溶化剤又は安定化剤などを、局所投与用製剤の場合は、基剤（ｂａｓｅ）、賦形剤、潤滑剤又は保存剤などをさらに含み得る。

【0025】

このように調製された本発明の組成物又は医薬製剤は、ラット、マウス、家畜、ヒトなどの哺乳動物に、非経口、経口などの多様な経路で投与され得、投与方法としては、当技術分野で通常使用する全ての方式が採用可能である。これに限定されないが、経口、直腸又は静脈、筋肉、皮下、子宮内硬膜又は脳室内（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）注射などによって投与され得る。

【0026】

具体的には、投与方法はこれに限定されないが、脂肪由来幹細胞から抽出されたエクソソームを静脈内に投与（静脈注射）するか、又は、関節炎部位に投与（局所投与）し得る。

【0027】

他の態様として、本発明は、上述した脂肪由来幹細胞から由来したエクソソームを有効成分として含む関節炎の緩和及び治療用医薬組成物を含む関節炎の緩和又は治療用注射剤を提供する。

【0028】

前記注射剤は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）をさらに含み得る。すなわち、前記注射剤は、リン酸緩衝生理食塩水に脂肪由来幹細胞から抽出されたエクソソームを担持して使用し得る。

【0029】

前記注射剤は、リン酸緩衝生理食塩水の代わりにハイドロゲルを含み得る。前記ハイドロゲルは、ヒアルロン酸、ゼラチン、アルギネート、キトサン、フィブリン、エラスチン、コラーゲン及びメチルセルロースからなる群より選択されたいずれか一つ以上であり得、具体的にはヒアルロン酸ハイドロゲルであり得るが、これに限定されない。
［発明の効果］
本発明による幹細胞由来エクソソームは、軟骨に発生した炎症を緩和及び治療して軟骨侵食を防止するだけでなく、滑膜（ｓｙｎｏｖｉｕｍ）のような周辺組織内の炎症反応までも効果的に緩和させることで、関節炎を根本的に治療することができる。
［図面の簡単な説明］
［図１］エクソソームの顕微鏡分析及びエクソソーム表面マーカーの分析結果である。
［図２］各継代毎に産生されたエクソソームに含まれた抗炎症サイトカイン（ＴＩＭＰ－１及びＴＩＭＰ－２）の含有量を示したものである。
［図３］ヒト脂肪とヒト臍帯由来幹細胞から産生されたエクソソームの炎症調節因子（ＴＩＭＰ－１）を分析した結果である（ヒト骨髓由来幹細胞から産生されたエクソソームの場合、有意な含量が確認されなかったため、示していない）。
［図４］ＭＩＡ誘導ラット骨関節炎モデルから分離した膝関節を染色して観察した結果である。
［図５］ＭＩＡ誘導ラット骨関節炎モデルにおいて、周辺滑膜及びＩＦＰの炎症反応に対するエクソソームの効能を評価した結果である。
［発明を実施するための形態］
以下、実施例を挙げて本発明をより詳しく説明する。これらの実施例は単に本発明をより具体的に説明するためのものであって、本発明の範囲を制限するものではないということは、本発明が属する技術分野で通常の知識を持つ者にとって自明であろう。

【0030】

＜実施例＞
１．増殖する幹細胞からのエクソソームの抽出
１次ヒト脂肪由来幹細胞（Ｐｒｉｍａｒｙ ｈＡＳＣｓ）はＣＥＦＯバイオ社（Ｓｅｏｕｌ、Ｋｏｒｅａ）から購入し、成長培地と補充剤はライフテクノロジーズ社（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）から購入した。一般培養培地（ウシ胎児血清１０％、ペニシリン／ストレプトマイシン１％を含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ））を用いて３７℃、５％ＣＯ_２条件でｈＡＳＣを３回～７回継代培養して増殖させた。各継代（ｐａｓｓａｇｅ）毎にエクソソームを抽出した。具体的には、エクソソームを抽出する前に、各継代毎に増殖された幹細胞を無血清ＤＭＥＭ培地に交換し、２４時間維持した後、細胞培養上清を回収した。その後、タンジェンシャルフローろ過（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ ｆｌｏｗ ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ：ＴＦＦ）システムに基づいた多重濾過システムによって回収した細胞培養上清からエクソソームを分離した。

【0031】

２．エクソソームの顕微鏡観察及び表面マーカーの分析
増殖する幹細胞から抽出されたエクソソームを、透過電子顕微鏡（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）とナノ粒子分析機（Ｄｙｎａｍｉｃ Ｌｉｇｈｔ Ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ：ＤＬＳ）を用いて大きさ及び模様を確認し、フローサイトメトリー（ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）を用いてエクソソーム膜の表面タンパク質を確認した。

【0032】

その結果、抽出されたエクソソームの模様を透過電子顕微鏡で確認でき、それぞれの大きさは平均的に約８６．４６ｎｍであることを確認した（図１）。

【0033】

また、フローサイトメトリーにより、エクソソーム表面マーカータンパク質として知られたＣＤ９、ＣＤ６３及びＣＤ８１が抽出されたエクソソームからすべて発現されていることを確認した（図１）。

【0034】

３．エクソソームに含有された抗炎症性因子の評価
炎症緩和に関して分泌される代表的なサイトカインとしてＴＩＭＰ－１（メタロプロテイナーゼ－１の組織阻害剤）及びＴＩＭＰ－２があるが、これらサイトカインは炎症反応の阻害を誘導し、炎症性サイトカインの阻害を誘導する役割を有していると知られている。

【0035】

継代３、５及び７で産生されたエクソソームに含有された抗炎症因子を確認するため、それぞれのエクソソームを用いてサイトカイン分析を行い、その結果を図２に示した。実験の結果、継代３又は継代７で産生されたエクソソームよりも継代５で産生されたエクソソームが、ヒト脂肪由来幹細胞エクソソーム内部に抗炎症サイトカイン（ＴＩＭＰ－１及びＴＩＭＰ－２）の含有量が大きく増加していることが確認された（図２）。

【0036】

また、比較対照群として、ヒト骨髓由来幹細胞（継代３）から産生されたエクソソーム（ＢＭ－ＭＳＣ－Ｅｘｏ）及びヒト臍帯由来幹細胞から産生されたエクソソーム（ＵＣ－ＭＳＣ－Ｅｘｏ；継代５）を用いて、ヒト脂肪由来幹細胞から産生されたエクソソーム（ｈＡＳＣ－Ｅｘｏ；継代５）との相対的なＴＩＭＰ－１強度（ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）を測定した。実験の結果、ＢＭ－ＭＳＣ－Ｅｘｏの場合、有意なＴＩＭＰ－１含量が確認されず、ＵＣ－ＭＳＣ－Ｅｘｏの場合は、ＴＩＭＰ－１を含むことが確認されたものの、ｈＡＳＣ－Ｅｘｏに比べてＴＩＭＰ－１含量が著しく低いことが確認された（図３）（＊Ｐ＜０．１）。

【0037】

４．ＭＩＡ誘導ＯＡモデルにおけるｈＡＳＣ－ＥＶの治療効能
上記の３．で抗炎症効果が最も優れることが確認された継代５で産生されたエクソソームを使用し、ＭＩＡ（Ｍｏｎｏｓｏｄｉｕｍ Ｉｏｄｏａｃｅｔａｔｅ、モノヨード酢酸ナトリウム）誘導ラットＯＡモデルにおける関節炎治療効能を評価した。具体的には、ＭＩＡ注入の１週後から３週間、毎週関節内にエクソソームを投与した。ＭＩＡ注入の４週後、分離した膝関節をインディアンインクで染色し、観察結果を図４に示した。

【0038】

実験の結果、ｈＡＳＣ－Ｅｘｏ処理群は、ＭＩＡモデルの関節において、ＰＢＳ及びＨＡ（ヒアルロン酸）処理群に比べて、炎症によって侵食された軟骨表面の面積が大きく減少していることが確認された（図４）。

【0039】

５．滑膜炎症に対するエクソソームの影響評価
膝関節（ｋｎｅｅ ｊｏｉｎｔ）へのＭＩＡ注入は、軟骨退化（ｃａｒｔｉｌａｇｅ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）だけでなく、周辺滑膜（ｐｅｒｉｍｅｎｉｓｃａｌ ｓｙｎｏｖｉｕｍ）及び膝蓋下脂肪パッド（ｉｎｆｒａｐａｔｅｌｌａｒ ｆａｔ ｐａｄ：ＩＦＰ）を含む関節周辺組織の変化を誘導した。このような周辺滑膜及びＩＦＰの炎症反応に対するｈＡＳＣ－Ｅｘｏの効果を評価し、その結果を図５に示した。

【0040】

急性関節炎モデルでは、ＰＢＳ処理群で内膜下繊維症及び血管新生を含む滑膜炎症が観察された。しかし、ｈＡＳＣ－Ｅｘｏ投与群では、繊維性沈着及び血管形成を防止し、ＩＦＰの脂肪細胞が豊富な模様を維持することが確認された（図５）。また、慢性関節炎モデルのＰＢＳ群では、増殖、広範囲な内膜下繊維症と血管形成、及び軟骨断片を含む深刻な滑膜炎症が見られた一方、ｈＡＳＣ－Ｅｘｏ投与群は滑膜炎症が減少することが確認された（図５）。

【0041】

このような結果は、ｈＡＳＣ－Ｅｘｏが関節炎モデルで軟骨退化を防止するだけでなく、周辺滑膜及びＩＦＰの炎症反応を緩和させて関節炎の治療効果があることを示す。

【図面の簡単な説明】

【0042】

【図1a】エクソソームの顕微鏡分析及びエクソソーム表面マーカーの分析結果である。

【図1b】エクソソームの顕微鏡分析及びエクソソーム表面マーカーの分析結果である。

【図1c】エクソソームの顕微鏡分析及びエクソソーム表面マーカーの分析結果である。

【図2】各継代毎に産生されたエクソソームに含まれた抗炎症サイトカイン（ＴＩＭＰ－１及びＴＩＭＰ－２）の含有量を示したものである。

【図3】ヒト脂肪とヒト臍帯由来幹細胞から産生されたエクソソームの炎症調節因子（ＴＩＭＰ－１）を分析した結果である（ヒト骨髓由来幹細胞から産生されたエクソソームの場合、有意な含量が確認されなかったため、示していない）。

【図4a】ＭＩＡ誘導ラット骨関節炎モデルから分離した膝関節を染色して観察した結果である。

【図4b】ＭＩＡ誘導ラット骨関節炎モデルから分離した膝関節を染色して観察した結果である。

【図5a】ＭＩＡ誘導ラット骨関節炎モデルにおいて、周辺滑膜及びＩＦＰの炎症反応に対するエクソソームの効能を評価した結果である。

【図5b】ＭＩＡ誘導ラット骨関節炎モデルにおいて、周辺滑膜及びＩＦＰの炎症反応に対するエクソソームの効能を評価した結果である。

【図5c】ＭＩＡ誘導ラット骨関節炎モデルにおいて、周辺滑膜及びＩＦＰの炎症反応に対するエクソソームの効能を評価した結果である。

【図1a】

【図1b】

【図1c】

【図2】

【図3】

【図4a】

【図4b】

【図5a】

【図5b】

【図5c】

【国際調査報告】