特表 2024-510458 美容スキンケア組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-07

(54)【発明の名称】美容スキンケア組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 8/37 20060101AFI20240229BHJP

   A61K 8/67 20060101ALI20240229BHJP

   A61Q 19/00 20060101ALI20240229BHJP

【ＦＩ】

A61K8/37

A61K8/67

A61Q19/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】有

(21)【出願番号】P 2023556758

(86)(22)【出願日】2022-03-10

(85)【翻訳文提出日】2023-10-27

(86)【国際出願番号】 EP2022056114

(87)【国際公開番号】W WO2022194653

(87)【国際公開日】2022-09-22

(31)【優先権主張番号】21162783.1

(32)【優先日】2021-03-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521042714

【氏名又は名称】ユニリーバー・アイピー・ホールディングス・ベスローテン・ヴェンノーツハップ

(74)【代理人】

【識別番号】100114188

【弁理士】

【氏名又は名称】小野 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100119253

【弁理士】

【氏名又は名称】金山 賢教

(74)【代理人】

【識別番号】100124855

【弁理士】

【氏名又は名称】坪倉 道明

(74)【代理人】

【識別番号】100129713

【弁理士】

【氏名又は名称】重森 一輝

(74)【代理人】

【識別番号】100137213

【弁理士】

【氏名又は名称】安藤 健司

(74)【代理人】

【識別番号】100143823

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 英彦

(74)【代理人】

【識別番号】100183519

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻田 芳恵

(74)【代理人】

【識別番号】100196483

【弁理士】

【氏名又は名称】川嵜 洋祐

(74)【代理人】

【識別番号】100160749

【弁理士】

【氏名又は名称】飯野 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100160255

【弁理士】

【氏名又は名称】市川 祐輔

(74)【代理人】

【識別番号】100219265

【弁理士】

【氏名又は名称】鈴木 崇大

(74)【代理人】

【識別番号】100146318

【弁理士】

【氏名又は名称】岩瀬 吉和

(74)【代理人】

【識別番号】100127812

【弁理士】

【氏名又は名称】城山 康文

(72)【発明者】

【氏名】オー，バン

(72)【発明者】

【氏名】デイビス，アンドリュー・ジョン

(72)【発明者】

【氏名】ギエラキス，マリアン・ペレイラ

(72)【発明者】

【氏名】ハリキアン，ビヤン

(72)【発明者】

【氏名】ラスロップ，ウィリアム・エフ

(72)【発明者】

【氏名】リー，ジアンミン

(72)【発明者】

【氏名】ルウ，ナンドウ

(72)【発明者】

【氏名】ローザ，ホセ・ギレルモ

【テーマコード（参考）】

4C083

【Ｆターム（参考）】

4C083AB432

4C083AC072

4C083AC122

4C083AC182

4C083AC242

4C083AC302

4C083AC352

4C083AC402

4C083AC421

4C083AC422

4C083AC442

4C083AC472

4C083AC482

4C083AC542

4C083AC552

4C083AD152

4C083AD282

4C083AD352

4C083AD492

4C083AD532

4C083AD572

4C083AD621

4C083AD622

4C083AD662

4C083CC02

4C083DD02

4C083DD33

4C083EE11

(57)【要約】

（ａ）美容皮膚有益剤；（ｂ）レチノイド；及び（ｃ）皮膚科学的に許容されるビヒクルを含む局所組成物。当該組成物は、美容アンチエイジングスキンケアクリーム及びローションとして有用である。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ａ）１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロール、（２Ｓ）－１－オレオイルグリセロール、オレオイル－ｒａｃ－グリセロール（ＯＲＧ）、（２Ｒ）－１－オレオイルグリセロール、２－オレオイルグリセロール、及び／又はそれの誘導体、及び／又はそれらの混合物から選択される美容皮膚有益剤；
（ｂ）レチノイド［当該レチノイドはプロピオン酸レチニルである。］；
及び
（ｃ）皮膚科学的に許容されるビヒクル
を含む、局所用組成物。

【請求項2】

前記美容皮膚有益剤がＹＡＰ／ＴＡＺ経路活性剤である、請求項１に記載の局所組成物。

【請求項3】

前記美容皮膚有益剤が１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロールである、請求項２に記載の局所組成物。

【請求項4】

前記美容皮膚有益剤が２－オレオイルグリセロールである、請求項１～３のいずれか１項に記載の局所組成物。

【請求項5】

前記組成物がさらに環状ホスファチジン酸（ｃＬＰＡ）を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の局所組成物。

【請求項6】

しわ、たるみ、乾燥、老化及び／又は光損傷を受けた皮膚の治療／予防；皮膚におけるコラーゲンの増加／維持、皮膚におけるデコリンレベルの上昇／維持、組織修復の促進；皮膚の質感、滑らかさ及び／又は張りの向上；皮膚バリアの回復の促進から選択される少なくとも一つの美容スキンケア効果を提供する美容方法であって、
前記皮膚に請求項１～５のいずれか１項に記載の局所組成物を適用することを含む方法。

【請求項7】

しわ、たるみ、老化、乾燥及び／又は光損傷を受けた皮膚の治療／予防、皮膚におけるコラーゲンレベルの上昇／維持、皮膚細胞核におけるＹＡＰレベルの上昇／維持、組織修復の促進；皮膚の質感、滑らかさ及び／又は張りの向上及び／又は皮膚バリアの回復の促進から選択される少なくとも一つの美容スキンケア効果を提供するための、請求項１～６のいずれか１項に記載の局所組成物の使用。

【請求項8】

しわ、たるみ、老化及び／又は光損傷を受けた皮膚の治療／予防；皮膚におけるコラーゲン沈着の増加／維持、皮膚におけるデコリン産生の増加／維持、組織修復の促進；皮膚の質感、及び滑らかさ及び／又は張りの向上及び皮膚バリアの回復の促進から選択される少なくとも一つの美容スキンケア効果を提供するための、局所組成物中のＹＡＰ活性化受容体の活性剤としてのプロピオン酸レチニルと組み合わせたオレオイル－ｒａｃ－グリセロールの使用。

【請求項9】

前記美容皮膚有益剤がＯＲＧ又はＯＲＧを含むオイルである、前記請求項のいずれか１項に記載の局所組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ヒト皮膚に塗布するための局所化粧品組成物、並びに皮膚の状態及び外観を改善する上でのそれらの使用に関する。

【背景技術】

【0002】

皮膚は、皮膚障害、環境乱用（風、空調、セントラルヒーティング、汚染）による劣化、又は皮膚が太陽に曝露（光老化）されることによって加速される可能性のある通常の老化プロセス（経年老化）による劣化を受ける。ヒト皮膚の外観及び状態を美容的に改善したいという要求は普遍的かつ時代を超えている。特に、しわ、老化、及び／又は光損傷を受けた皮膚の目に見える兆候を回復、軽減、又は予防することに、大きな需要がある。世界中の消費者が、しわ、線、たるみ、色素沈着過剰及び染みなどの皮膚の経年老化や光老化の目に見える兆候を回復、治療、又は遅延させる「アンチエイジング」化粧品を求め続けている。

【0003】

主要な皮膚基質タンパク質であるコラーゲンは、皮膚に引張強度を与えることが知られている。皮膚のコラーゲンレベルは、皮膚が老化したり光損傷を受けたりすると、大幅に減少する。すなわち、コラーゲン原線維が破壊され、メカノトランスダクションシグナルを受信しない（下記の定義を参照）。多くの研究が、皮膚におけるＩ型コラーゲンのレベルが、年齢とともに、及び／又は光損傷の増加とともに低下することを示している（例えば、Ｌａｖｋｅｒ， Ｒ． Ｅｎｇ． Ｊ． Ｍｅｄ． （１９９３） ３２９， ５３０－５３５）。皮膚のコラーゲンレベルの低下は、皮膚の引張強度の低下、つまり老化した皮膚の構造的損傷と関連しており、シワ及び緩みを引き起こし、そのように現れる。逆に、皮膚のコラーゲンレベルを高めることによる皮膚基質の強化は、アンチエイジング／皮膚修復の利点をもたらす。

【0004】

かつて細胞を構造的に支える足場としてのみ機能すると考えられていた細胞外基質（ＥＣＭ）は、形態、増殖、分化及び生存などの細胞挙動の多くの側面を制御する。メカノトランスダクションのプロセスを通じて、細胞は機械的刺激を生化学的変化又は転写変化に変換することができる［Ｃｈｉｑｕｅｔ， Ｍ． ｅｔ ａｌ．， Ｆｒｏｍ ｍｅｃｈａｎｏｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ ｅｘｔｒａｃｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｉｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ． Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ， ２００９， １７９３（５）：ｐ．９１１－２０． Ｄａｌｅｙ， ＷＰ，ＳＢ Ｐｅｔｅｒｓ ａｎｄ Ｍ． Ｌａｒｓｅｎ， Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｄｙｎａｍｉｃｓ ｉｎ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ． Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ， ２００８， １２１（Ｐｔ３）：ｐ．こ２５５－６４］。このシグナル伝達には、ＥＣＭ、細胞質膜、細胞骨格及び核膜のタンパク質が関与し、最終的には遺伝子レベル及びエピジェネティックレベルで核クロマチンに影響する。

【0005】

メカノトランスダクションシグナル伝達は細胞挙動の重要な推進力である。細胞微小環境の物理的及び機械的特性は、細胞の形状を制御し、細胞表現型に強い影響を与え得る。最近、メカノセンサー及びメカノトランスデューサーとしての、どちらもＨｉｐｐｏ経路の転写エフェクターであるＹＡＰ（Ｙｅｓ関連タンパク質）とＴＡＺ（ＰＤＺ結合モチーフを有する転写コアクチベータ）が同定され、それが手がかりとなって、細胞が機械的合図を感知及び伝達して遺伝子発現を調節する機序がわかるようになり始めた。

【0006】

以下を参照のこと：
Ｍｏｈｒｉ， Ｚ．， Ａ． Ｄｅｌ Ｒｉｏ Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ， ａｎｄ Ｒ． Ｋｒａｍｓ， Ｔｈｅ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｒｏｌｅ ｏｆ ＹＡＰ／ＴＡＺ ｉｎ ｍｅｃｈａｎｏｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ． Ｊ Ｔｈｏｒａｃ Ｄｉｓ， ２０１７． ９（５）： ｐ． Ｅ５０７－Ｅ５０９．
Ｄｕｐｏｎｔ， Ｓ．， Ｒｏｌｅ ｏｆ ＹＡＰ／ＴＡＺ ｉｎ ｃｅｌｌ－ｍａｔｒｉｘ ａｄｈｅｓｉｏｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｏｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ． Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ， ２０１６． ３４３（１）： ｐ． ４２－５３．
Ｈａｌｄｅｒ， Ｇ．， Ｓ． Ｄｕｐｏｎｔ， ａｎｄ Ｓ． Ｐｉｃｃｏｌｏ， Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ａｎｄ ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ ｃｕｅｓ ｂｙ ＹＡＰ ａｎｄ ＴＡＺ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ， ２０１２． １３（９）： ｐ． ５９１－６００．
Ｚｈａｎｇ， Ｈ．， Ｈ．Ａ． Ｐａｓｏｌｌｉ， ａｎｄ Ｅ． Ｆｕｃｈｓ， Ｙｅｓ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ （ＹＡＰ） ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｂａｌａｎｃｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｓｋｉｎ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ， ２０１１． １０８（６）： ｐ． ２２７０－５．
Ｄｕｐｏｎｔ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ．， Ｒｏｌｅ ｏｆ ＹＡＰ／ＴＡＺ ｉｎ ｍｅｃｈａｎｏｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ． Ｎａｔｕｒｅ， ２０１１． ４７４（７３５０）： ｐ． １７９－８３．

【0007】

ＹＡＰとＴＡＺは、重要なメカノセンサー及びメカノトランスデューサーとして機能して、剪断応力や細胞の形状からＥＣＭの剛性に至るまでの広範囲の機械的手がかりを細胞特異的転写プログラムに変換することが明らかになっている。

【0008】

適切な皮膚ＥＣＭの機械的特性は、若い線維芽細胞挙動を維持する。若い皮膚では、真皮の線維芽細胞がよく広がっており、インテグリンを介して豊富で組織化されたコラーゲン原線維の束と結合している。（光）老化により、コラーゲン原線維が断片化され、組織化されなくなる。線維芽細胞はコラーゲン（及び他のＥＣＭ）接着部位を失い、その結果、形態が崩れ、ＴＧＦｂシグナル伝達とコラーゲンの産生が減少し、基質分解酵素の産生が増加する。この老化した微小環境では、細胞とＥＣＭ原線維の間の力の恒常性が損なわれ、その結果、メカノトランスダクションシグナル伝達の欠損が生じる［Ｆｉｓｈｅｒ， Ｇ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ．， Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｓｉｚｅ／ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｆｏｒｃｅ ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＴＧＦ－ｂｅｔａ ｔｙｐｅ ＩＩ ｒｅｃｅｐｔｏｒ： ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ａｇｉｎｇ． Ａｇｉｎｇ Ｃｅｌｌ， ２０１６． １５（１）： ｐ． ６７－７６；Ｑｉｎ， Ｚ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｇｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｐｒｅａｄｉｎｇ／ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｆｏｒｃｅ ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｆｉｂｒｉｌ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｖｉａ ｃ－Ｊｕｎ／ＡＰ－１ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｄｅｒｍａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ． Ａｇｉｎｇ Ｃｅｌｌ， ２０１４． １３（６）： ｐ． １０２８－３７；Ｑｉｎ， Ｚ．， ｅｔ ａｌ．， Ｏｘｉｄａｎｔ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｉｎｄｕｃｅｓ ｃｙｓｔｅｉｎｅ－ｒｉｃｈ ｐｒｏｔｅｉｎ ６１ （ＣＣＮ１） ｖｉａ ｃ－ Ｊｕｎ／ＡＰ－１ ｔｏ ｒｅｄｕｃｅ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｄｅｒｍａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ． ＰＬｏＳ Ｏｎｅ， ２０１４． ９（１２）： ｐ． ｅ１１５４０２；Ｆｉｓｈｅｒ， Ｇ．Ｊ．， Ｄ．Ｌ． Ｓａｃｈｓ， ａｎｄ Ｊ．Ｊ． Ｖｏｏｒｈｅｅｓ， Ａｇｅｉｎｇ： ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｓ ａ ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ ｔａｒｇｅｔ． Ｂｒ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ， ２０１４． １７１（３）： ｐ． ４４６－９；Ｆｉｓｈｅｒ， Ｇ．Ｊ．， Ｊ． Ｖａｒａｎｉ， ａｎｄ Ｊ．Ｊ． Ｖｏｏｒｈｅｅｓ， Ｌｏｏｋｉｎｇ ｏｌｄｅｒ： Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｃｏｌｌａｐｓｅ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ． Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ， ２００８． １４４（５）： ｐ． ６６６－６７２．］。さらに、架橋ヒアルロン酸の充填剤で真皮の機械的特性を強化すると、皮膚の若返り活性が活性化されることが明らかになっており、非架橋材料の注入は、同じ生物活性を刺激しなかった。Ｑｕａｎ， Ｔ．， ｅｔ ａｌ．， Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｓｕｐｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｒｍａｌ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ， ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ， ａｎｄ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ａｇｅｄ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ｉｎ ｖｉｖｏ． Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ， ２０１３． １３３（３）： ｐ． ６５８－６７を参照する。

【0009】

したがって、本願人は、皮膚への局所塗布によるＹＡＰの活性化が、老化した真皮からの欠損した機械的シグナル伝達を無効にして、皮膚の若返り挙動を駆動する可能性があるという仮説を立てた。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0010】

【非特許文献1】Ｌａｖｋｅｒ， Ｒ． Ｅｎｇ． Ｊ． Ｍｅｄ． （１９９３） ３２９， ５３０－５３５

【非特許文献2】Ｃｈｉｑｕｅｔ， Ｍ． ｅｔ ａｌ．， Ｆｒｏｍ ｍｅｃｈａｎｏｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ ｅｘｔｒａｃｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｉｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ． Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ， ２００９， １７９３（５）：ｐ．９１１－２０．

【非特許文献3】Ｄａｌｅｙ， ＷＰ，ＳＢ Ｐｅｔｅｒｓ ａｎｄ Ｍ． Ｌａｒｓｅｎ， Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｄｙｎａｍｉｃｓ ｉｎ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ． Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ， ２００８， １２１（Ｐｔ３）：ｐ．こ２５５－６４

【非特許文献4】Ｍｏｈｒｉ， Ｚ．， Ａ． Ｄｅｌ Ｒｉｏ Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ， ａｎｄ Ｒ． Ｋｒａｍｓ， Ｔｈｅ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｒｏｌｅ ｏｆ ＹＡＰ／ＴＡＺ ｉｎ ｍｅｃｈａｎｏｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ． Ｊ Ｔｈｏｒａｃ Ｄｉｓ， ２０１７． ９（５）： ｐ． Ｅ５０７－Ｅ５０９．

【非特許文献5】Ｄｕｐｏｎｔ， Ｓ．， Ｒｏｌｅ ｏｆ ＹＡＰ／ＴＡＺ ｉｎ ｃｅｌｌ－ｍａｔｒｉｘ ａｄｈｅｓｉｏｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｏｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ． Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ， ２０１６． ３４３（１）： ｐ． ４２－５３．

【非特許文献6】Ｈａｌｄｅｒ， Ｇ．， Ｓ． Ｄｕｐｏｎｔ， ａｎｄ Ｓ． Ｐｉｃｃｏｌｏ， Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ａｎｄ ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ ｃｕｅｓ ｂｙ ＹＡＰ ａｎｄ ＴＡＺ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ， ２０１２． １３（９）： ｐ． ５９１－６００．

【非特許文献7】Ｚｈａｎｇ， Ｈ．， Ｈ．Ａ． Ｐａｓｏｌｌｉ， ａｎｄ Ｅ． Ｆｕｃｈｓ， Ｙｅｓ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ （ＹＡＰ） ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｂａｌａｎｃｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｓｋｉｎ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ， ２０１１． １０８（６）： ｐ． ２２７０－５．

【非特許文献8】Ｄｕｐｏｎｔ， Ｓ．， ｅｔ ａｌ．， Ｒｏｌｅ ｏｆ ＹＡＰ／ＴＡＺ ｉｎ ｍｅｃｈａｎｏｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ． Ｎａｔｕｒｅ， ２０１１． ４７４（７３５０）： ｐ． １７９－８３．

【非特許文献9】Ｆｉｓｈｅｒ， Ｇ．Ｊ．， ｅｔ ａｌ．， Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｓｉｚｅ／ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｆｏｒｃｅ ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＴＧＦ－ｂｅｔａ ｔｙｐｅ ＩＩ ｒｅｃｅｐｔｏｒ： ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ａｇｉｎｇ． Ａｇｉｎｇ Ｃｅｌｌ， ２０１６． １５（１）： ｐ． ６７－７６．

【非特許文献10】Ｑｉｎ， Ｚ．， ｅｔ ａｌ．， Ａｇｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｐｒｅａｄｉｎｇ／ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｆｏｒｃｅ ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｆｉｂｒｉｌ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｖｉａ ｃ－Ｊｕｎ／ＡＰ－１ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｄｅｒｍａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ． Ａｇｉｎｇ Ｃｅｌｌ， ２０１４． １３（６）： ｐ． １０２８－３７．

【非特許文献11】Ｑｉｎ， Ｚ．， ｅｔ ａｌ．， Ｏｘｉｄａｎｔ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｉｎｄｕｃｅｓ ｃｙｓｔｅｉｎｅ－ｒｉｃｈ ｐｒｏｔｅｉｎ ６１ （ＣＣＮ１） ｖｉａ ｃ－ Ｊｕｎ／ＡＰ－１ ｔｏ ｒｅｄｕｃｅ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｄｅｒｍａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ． ＰＬｏＳ Ｏｎｅ， ２０１４． ９（１２）： ｐ． ｅ１１５４０２．

【非特許文献12】Ｆｉｓｈｅｒ， Ｇ．Ｊ．， Ｄ．Ｌ． Ｓａｃｈｓ， ａｎｄ Ｊ．Ｊ． Ｖｏｏｒｈｅｅｓ， Ａｇｅｉｎｇ： ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｓ ａ ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ ｔａｒｇｅｔ． Ｂｒ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ， ２０１４． １７１（３）： ｐ． ４４６－９．

【非特許文献13】Ｆｉｓｈｅｒ， Ｇ．Ｊ．， Ｊ． Ｖａｒａｎｉ， ａｎｄ Ｊ．Ｊ． Ｖｏｏｒｈｅｅｓ， Ｌｏｏｋｉｎｇ ｏｌｄｅｒ： Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｃｏｌｌａｐｓｅ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ． Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ， ２００８． １４４（５）： ｐ． ６６６－６７２．

【非特許文献14】Ｑｕａｎ， Ｔ．， ｅｔ ａｌ．， Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｓｕｐｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｒｍａｌ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ， ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ， ａｎｄ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ａｇｅｄ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ｉｎ ｖｉｖｏ． Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ， ２０１３． １３３（３）： ｐ． ６５８－６７．

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0011】

ＹＡＰ／ＴＡＺは、心臓や腸などのさまざまな組織の組織再生に関して研究されている［Ｈｏｎｇ， Ａ．Ｗ．， Ｚ． Ｍｅｎｇ， ａｎｄ Ｋ．Ｌ． Ｇｕａｎ， Ｔｈｅ Ｈｉｐｐｏ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ， ２０１６． １３（６）： ｐ． ３２４－３７；Ｌｉｎ， Ｚ． ａｎｄ Ｗ．Ｔ． Ｐｕ， Ｈａｒｎｅｓｓｉｎｇ Ｈｉｐｐｏ ｉｎ ｔｈｅ ｈｅａｒｔ： Ｈｉｐｐｏ／Ｙａｐ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｔｏ ｈｅａｒｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ． Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ， ２０１４． １３（３ Ｐｔ Ｂ）： ｐ．５７１－８１；Ｍｏｙａ， Ｉ．Ｍ． ａｎｄ Ｇ． Ｈａｌｄｅｒ， Ｔｈｅ Ｈｉｐｐｏ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｏｒｇａｎｓ． Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ， ２０１６． ４３： ｐ．６２－６８；１８． Ｗａｎｇ， Ｙ．， Ａ． Ｙｕ， ａｎｄ Ｆ．Ｘ． Ｙｕ， Ｔｈｅ Ｈｉｐｐｏ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ａｎｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ． Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｅｌｌ， ２０１７． ８（５）： ｐ．３４９－３５９；Ｘｉａｏ， Ｙ．， ｅｔ ａｌ．， Ｈｉｐｐｏ／Ｙａｐ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ Ｃａｒｄｉａｃ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ． Ｃｕｒｒ Ｔｒｅａｔ Ｏｐｔｉｏｎｓ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｍｅｄ， ２０１６． １８（６）： ｐ．３８．］。

【0012】

研究において本願人は、皮膚の若返り活性を駆動する上でのＹＡＰ／ＴＡＺの力と、それを大幅に高めることができる活性物質を予期せず発見している。

【0013】

研究において本願人は、ソフトヒドロゲルモデルシステム上のＹＡＰの活性化が、プロコラーゲンの産生並びにＥＣＭ構築活性の他のバイオマーカーの活性化を誘発することを明らかにしており、これらのデータを総合すると、ＹＡＰの活性化がＥＣＭ構築生理活性を介して皮膚の外観を改善する可能性があることを示唆している。

【0014】

ＹＡＰ／ＴＡＺの細胞内局在は、それの活性の調節及びシグナル伝達におけるそれの役割における重要な決定因子である。ＹＡＰ／ＴＡＺは細胞核と細胞質の間を往復する。ＹＡＰが核内にある場合、それは活性であると考えられ、組織の成長に非常に重要な遺伝子の転写の駆動を助ける。ＹＡＰが細胞質に隔離されている場合、それは細胞のそのコンパートメントで遺伝子転写活性を駆動することができないため、ＹＡＰは不活性になる。したがって、コラーゲン産生につながるシグナル伝達機序の活性化が、メカノトランスダクション経路を介して達成される可能性がある。ＹＡＰは、コラーゲンの産生を駆動するために皮膚細胞核において必要である。ＹＡＰ／ＴＡＺ経路はヒト細胞に存在するメカノトランスダクションシグナル伝達経路であり、両者とも細胞外空間の機械的シグナルを感知し、遺伝子発現活性を直接の結果的な細胞挙動に駆動することでこれらのシグナルに応答する。ＹＡＰは組織再生のマーカーとして使用される。公開された文献に基づいて、本願人は、日常的な組織培養能力で行われ、ＹＡＰに対する抗体を使用する核転座アッセイを開発した。このアッセイは、細胞質と核の間の核転座を示し、核内の蓄積パーセントを測定するものである。高スループットアッセイが、Ｃｙｔｏｏ， Ｇｒｅｎｏｂｌｅ， Ｆｒａｎｃｅなどの所有権者から入手可能である。

【0015】

本願人は、ＹＡＰ核転座アッセイ結果の下流への影響又は利用の確認として、遺伝子発現及びプロコラーゲン研究を追加した。本願人は、理論に束縛されることを望むものではないが、皮膚細胞内のＹＡＰ活性化経路を促進する、皮膚への局所適用のための美容若返り活性物質を予期せずに確認した。

【0016】

本願人は今般、しわ、線、たるみ、色素沈着過剰及びシミなどの経年性老化又は光老化による、正常ではあるが美容上望ましくない皮膚状態の効果的な治療及び予防が、グリセロールの特定のモノ不飽和脂肪酸エステルを含む化粧品組成物を皮膚に適用することによって得られることを認めた。本発明によるモノグリセリドは、メカノトランスダクション経路において役割を有する。

【0017】

リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）は、脂肪酸モノグリセリドリン酸モノエステルを代表するものであり、モノグリセリド基の脂肪酸鎖は飽和脂肪酸（主にパルミトイル及びステアロイル）及び不飽和脂肪酸（主にリノレオイル、アラキドニル及びオレオイル）で構成されている。ＬＰＡは限られた数のスキンケア製品用にしか使用されてこなかったが、この種のリン酸モノエステルには、より広範囲のパーソナルケア製品での利用を制限する重大な欠点を有する。例えば、ＬＰＡは、特に高温下で、製剤された製品での長期貯蔵期間基準に耐えられるほど安定ではない。さらに、ＬＰＡの極性リン酸ヘッド基は、ＬＰＡを界面活性剤分子にし、皮膚を通した効率的な送達が生体標的の機能レベルに到達するのを防ぐ。さらに、大規模ＬＰＡ供給は困難であり、各種製品カテゴリーにわたる幅広い使用を可能にするためにはかなりの費用がかかる。したがって、ＬＰＡのような利点を皮膚に提供できる、許容可能な皮膚送達プロファイルを有する、より商業的に実現可能で化学的に安定した化合物が必要とされている。

【0018】

ＬＰＡについての構造機能相関研究により、１２個を超える炭素を含む脂肪酸アルキル基及びリン酸モノエステル基の両方がＬＰＡ誘導生理活性に必要であることが実証されている。しかしながら、本願人は驚くべきことに、リン酸エステルヘッド基を欠く特定の化合物（例えば特定のモノグリセリド）がメカノトランスダクション経路において同等のＬＰＡ様機能を示すことを発見した。本願人は、観察されたメカノトランスダクションシグナル伝達がモノグリセリドの脂肪酸基の構造に敏感であることも発見した。本発明による化合物はまた、大規模供給、安価な調達及びより優れた化学的安定性及び皮膚送達プロファイルなど、パーソナルケア製品用のＬＰＡ様化合物を超える大きな利点を提供する。

【0019】

皮膚バリア回復のための特定のグリセリン脂肪酸誘導体、主にモノオレイン酸グリセリル及びモノステアリン酸グリセリル（本明細書において、「ＧＭＳ」と称する）は、ＫＲ２０１５／１１２５７８に記載されている。

【0020】

モノステアリン酸グリセリル（ＧＭＳ）及びオレオイル－ｒａｃ－グリセロール（ＯＲＧ）は、通常、最大５％のレベルで乳化剤として、又は医薬組成物の担体として使用される。ＫＲ１０１５５６６５５２Ｂ１では、オレイン酸又はステアリン酸モノアシルグリセロールが、料理用油の機能性油、代謝性疾患用の機能性油、又は化粧品の脂質として使用されている。

【0021】

上記の技術は、老化する皮膚を治療するための、グリセロール主鎖の１位又は２位のグリセロールのシス－モノ不飽和脂肪酸エステルから選択される特定のグリセロールの脂肪酸エステルを開示していない。また、上記技術は、そのようなグリセロールエステルと皮膚細胞レベルでの有益な効果／結果又は作用機序をもたらす生体標的との間のいかなる関連も開示していない。

【課題を解決するための手段】

【0022】

本願人は、皮膚の老化を治療するために、グリセロール主鎖の１位又は２位のグリセロールのシス－モノ不飽和脂肪酸エステルから選択される特定のグリセロールの脂肪酸エステルを確認した。

【0023】

本発明の第１の態様によれば、
（ａ）ＹＡＰ／ＴＡＺ経路の活性化剤及び／又はそれの誘導体及び／又はそれらの混合物である美容皮膚有益剤；
（ｂ）レチノイド［当該レチノイドはプロピオン酸レチニルである。］；
及び
（ｃ）皮膚科学的に許容されるビヒクル
を含む局所用組成物が提供される。

【0024】

本発明は、しわ、たるみ、老化及び／又は光損傷を受けた皮膚の治療／予防；皮膚におけるコラーゲン沈着の増加、皮膚細胞におけるメカノトランスダクションの増加、組織修復の促進；及び皮膚の質感、滑らかさ及び／又は張りの改善；及び皮膚バリア回復の促進から選択される少なくとも一つのスキンケア効果を提供するための、スキンケア組成物中にグリセロール主鎖の１位若しくは２位にグリセロールのシス－モノ不飽和脂肪酸エステル、好ましくはオレオイル－ｒａｃ－グリセロール（「ＯＲＧ」）及びＯＲＧ豊富オイルを含む本発明の組成物の使用を包含する。

【0025】

本発明は、
しわ、たるみ、乾燥、老化及び／又は光損傷を受けた皮膚の治療／予防；皮膚におけるコラーゲンの増加／維持、皮膚におけるデコリンレベルの上昇／維持、組織修復の促進；皮膚の質感、滑らかさ及び／又は張りの向上；皮膚バリアの回復の促進から選択される少なくとも一つの美容スキンケア効果を提供する美容方法であって、
皮膚に上記の局所組成物を適用することを含む方法を包含する。

【0026】

本発明の第２の態様によれば、しわ、たるみ、乾燥、老化及び／又は光損傷を受けた皮膚の治療／予防；皮膚におけるコラーゲン沈着の増加、皮膚細胞におけるメカノトランスダクションの増加、組織修復の促進；皮膚の質感、滑らかさ及び／又は張りの向上；及び皮膚バリアの回復の促進から選択される少なくとも一つのスキンケア効果を提供する美容方法であって、
前記皮膚に上記の局所組成物を適用することを含む方法が提供される。

【0027】

本発明の第３の態様によれば、しわ、たるみ、老化及び／又は光損傷を受けた皮膚の治療／予防；皮膚におけるコラーゲン沈着の増加／維持、皮膚におけるデコル（ｄｅｃｏｒ）の増加／維持、組織修復の促進；皮膚の質感、及び滑らかさ及び／又は張りの向上、及び／又は皮膚バリアの回復の促進から選択される少なくとも一つのスキンケア効果を提供するための、局所組成物中でＹＡＰ活性化受容体の活性剤としてのプロピオン酸レチニルと組み合わせたオレオイル－ｒａｃ－グリセロール（「ＯＲＧ」）の美容的使用が提供される。

【0028】

本発明のさらに別の態様によれば、しわ、たるみ、老化及び／又は光損傷を受けた皮膚の治療／予防；皮膚におけるコラーゲン沈着の増加、皮膚におけるメカノトランスダクションの増加、組織修復の促進；及び皮膚の質感、滑らかさ及び／又は張りの向上及び皮膚バリアの回復の促進から選択される少なくとも一つの美容スキンケア効果を提供するための、美容局所組成物でのＹＡＰ活性化受容体の活性剤である脂質成分及び／又はそれの誘導体及び／又はそれらの混合物の使用が提供される。

【0029】

したがって、本発明の組成物、方法及び使用は、改善されたより均一な肌の色とともに、弾力性が改善され、しわ及び老化した皮膚の出現が減少又は遅延される、滑らかでしなやかな皮膚の促進をもたらす、アンチエイジング効果を提供する。特に皮膚の輝き、透明感、及び全体的な若々しい外観に関して、外観、質感及び状態に改善が達成される。

【0030】

本明細書で使用される「美容（の）」という用語は、消費者によって認識される、正常ではあるが肉眼的に望ましくない皮膚の外観をその範囲内に含む。

【0031】

本明細書で使用される「皮膚基質」という用語は、加齢に伴って大きな構造的損傷が生じる皮膚の真皮層の真皮細胞外基質（「ＥＣＭ」）をその範囲内に含む。

【0032】

本明細書で使用される「細胞外基質」又は「細胞外真皮基質」又は「ＥＣＭ」という用語は、細胞を構造的に支持する足場としての機能をその範囲内に含む。理論に拘束されることを望むものではないが、本願人は、ＥＣＭがさらに、形態、増殖、分化、及び生存などの細胞挙動の多くの側面を調節すると考えている。メカノトランスダクションのプロセスを通じて、細胞は機械的刺激を生化学的変化又は転写的変化に変換することができる。このシグナル伝達には、ＥＣＭ、細胞質膜、細胞骨格、及び核膜のタンパク質が関与し、最終的には遺伝子レベル及びエピジェネティックレベルで核クロマチンに影響を与える。

【0033】

本明細書において使用される「リーブオン」という用語は、ウォッシュオフ前の長期間にわたり、皮膚上に残すことをその範囲に含む。

【0034】

本明細書で使用される「局所的」という用語には、その範囲内に皮膚の外側への適用を含む。

【0035】

本明細書で使用される「治療する」という用語は、その範囲内に、正常な老化プロセスによって引き起こされる、上記の正常ではあるが美容上望ましくない皮膚状態を美容的に又は肉眼的に軽減、遅延、及び／又は予防することを含む。しわ、線及び／又はたるみなどの目に見える老化の兆候が遅れるか軽減される。一般に、しわを予防又は軽減し、皮膚の柔軟性、張り、滑らかさ、しなやかさ及び弾性を高めることによって、皮膚の質が向上し、その外観及び質感が改善される。本発明による組成物、方法及び使用は、すでにしわができ、老化及び／又は光損傷状態にある皮膚を治療するのに、又は正常な老化／光老化プロセスによる前述の望ましくない変化を予防又は軽減するために若々しい皮膚を治療するのに有用であり得る。

【0036】

メカノトランスダクションは、細胞が機械的刺激を電気化学的活動に変換する機序である。本明細書で使用される「メカノトランスダクション」という用語は、細胞が機械的情報をどのように認識し、ＥＣＭから核に伝達するかについてのシグナル伝達機構をその範囲内に含む。メカノトランスダクションシグナル伝達が細胞挙動の重要な要素であることがますます明らかになってきている。最近、Ｈｉｐｐｏシグナル伝達経路の二つの転写エフェクターであるＹＡＰ及びＴＡＺが、重要なメカノセンサー及びメカノトランスデューサーとして機能して、剪断応力及びＥＣＭ剛性からの広範囲の機械的手がかりを細胞特異的な転写プログラムに変換することが明らかになっている。

【0037】

ここで使用されるＧＭＳという用語は、グリセリルモノステアレートの略称である。

【0038】

本明細書で使用されるオレオイル－ｒａｃ－グリセロール又はＯＲＧという用語は、下記の化学構造：

【化1】

を有する１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロール（又はオレイン酸モノグリセリド、又は１～シス共役オレイン酸モノグリセリド）
及び下記の化学構造：

【化2】

を有する２－オレオイルグリセロール（又は２－シス共役オレイン酸モノグリセリド又は２－オレオイル－ｒａｃ－グリセロール）
の組み合わせを指す。

【0039】

ＯＲＧは、１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロール及び２－オレオイルグリセロールの組み合わせを有するモノオレイン酸グリセリル（又はオレイン酸グリセリル又はオレオイルモノグリセリド）を指すこともできる。

【0040】

ある実施形態において、ＯＲＧは、約５～９９重量％、又は１５重量％～約９９重量％、又は約２５重量％～約９９重量％、又は約３５重量％～約９９重量％、又は約４５重量％～約９９重量％、又は約５０重量％～約９９重量％、又は約５５重量％～約９９重量％、又は約６５重量％～約９９重量％、又は約７５重量％～約９９重量％、又は約８５重量％～約９９重量％、又は約９０重量％～約９９重量％、又は約９５重量％～９９重量％、又は約５重量％～約９５重量％、又は約１５重量％～約９５重量％、又は約２５重量％～約９５重量％、又は約３５重量％～約９５重量％、又は約４５重量％～約９５重量％、又は約５０重量％～約９５重量％、又は約５５重量％～約９５重量％、又は約６５重量％～約９５重量％、又は約７５重量％～約９５重量％、又は約８５重量％～約９５重量％、又は約９０重量％～約９５重量％、５重量％～約９０重量％、又は約１５重量％～約９０重量％、又は約２５重量％～約９０重量％、又は約３５重量％～約９０重量％、又は約４５重量％～約９０重量％、又は約５０重量％～約９０重量％、又は約５５重量％～約９０重量％、又は約６５重量％～約９０重量％、又は約７５重量％～約９０重量％、又は約８５重量％～約９０重量％の１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロール（ここで包含される組み込まれた全ての範囲を含む）を有する。

【0041】

本明細書で使用される「ＹＡＰ」という用語は、その範囲内に、Ｙｅｓ関連タンパク質を含む。本明細書で使用される「ＴＡＺ」という用語は、その範囲内に、ＰＤＸ結合モチーフを有する転写共活性化因子を含む。どちらも、メカノセンサー及びメカノトランスデューサーとしての、Ｈｉｐｐｏ経路の転写エフェクターである。本明細書で使用される「Ｈｉｐｐｏ経路」は、その範囲内に、細胞の増殖、分化、及び細胞死を制御する高度に保存されたシグナル伝達ネットワークを含む。

【発明を実施するための形態】

【0042】

オレイン酸及びそれのトリグリセリドエステル
１，２，３－プロパントリオール又はトリグリセリドとしても知られるグリセロールは、３個のＯＨ基を有する炭素３個の骨格を持っている。そのＯＨ基は自然に又は合成的に容易にエステル化されて、トリグリセリドエステル誘導体、又はトリグリセリド、グリセロール主鎖上で脂肪酸で置換された全ての位置異性体が得られる。Ｆｅｓｓｅｎｄｅｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｃｈａｐｔｅｒ １９， ｐ． ８７０ （１９７９）を参照する。前記トリグリセリド（グリセロール主鎖）は、少なくとも一つの脂肪酸部分を含まなければならない。例えば、本発明によるグリセロール主鎖上の三つのエステル化可能な位置のうち、１位及び／又は２位を、オレイン酸で及び別の脂質により、好ましくは１位で脂質により、より好ましくはシスモノ不飽和を有する脂質で、最も好ましくはグリセロール主鎖の１位でオレイン酸でエステル化されていても良い。

【0043】

オレイン酸（以下、ＯＡと称する）は、式ＣＨ_３（ＣＨ_２）_７ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ_２）_７ＣＯＯＨを有する、動物及び／又は植物脂肪に由来するシスモノ不飽和長鎖（Ｃ１８）脂肪酸である。Ｆｅｓｓｅｎｄｅｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｃｈａｐｔｅｒ １９， ｐ． ８７０ （１９７９）を参照する。

【0044】

本発明は、そうしてオレイン酸部分を含む遊離酸の誘導体を含む。好ましい誘導体には、エステル（例、トリグリセリドエステル、モノグリセリドエステル、ジグリセリドエステル、リン酸エステル）、アミド（例、セラミド誘導体）、塩（例、アルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩）；及び／又はα－ヒドロキシ及び／又はβ－ヒドロキシ誘導体などのＣ１８／Ｃ２２炭素鎖の置換から誘導されたもの、並びに１２－ヒドロキシステアリン酸などのカルボキシル基から離れた脂肪酸鎖のさらに下流にヒドロキシ基を含む誘導体、例えば１２－ヒドロキシステアリン酸及びリシノール酸誘導体などがある。好ましくは、グリセロール主鎖の１位又は２位上のグリセロールのシス－モノ不飽和脂肪酸エステル（例えば、１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロール及び／又は２－オレオイルグリセロール）、好ましくはＯＲＧ及びＯＲＧ豊富オイルである。

【0045】

ＯＲＧ豊富であるオイルも本発明での使用に適している。このようなオイルは市販されており、ＢＡＳＦのＭＯＮＯＭＵＬＳ（登録商標）ブランドなどがあり、それは約９０％のモノオレイン酸グリセリル（１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロール及び２－オレオイルグリセロールの組み合わせを有する）を含有し、残りがジエステル及びトリエステルと遊離グリセロールを含む。

【0046】

ＹＡＰ核蓄積の美容活性剤
ＹＡＰ／ＴＡＺの活性は、細胞内の局在化によって決まり、核ＹＡＰ／ＴＡＺは活性であるが、細胞質ＹＡＰ／ＴＡＺタンパク質は不活性である。目標は、ＹＡＰが細胞質から皮膚細胞核まで往復するように誘導することで、メカノトランスダクションシグナル伝達経路の活性化を誘発することである。核中のＹＡＰは皮膚細胞の増殖／組織成長を促進する。ＹＡＰ／ＴＡＺは若返りのマーカーである。

【0047】

本願人は、ＯＲＧがＹＡＰ／ＴＡＺ核蓄積の特に効果的な活性剤であること、及び／又はメカノトランスダクション経路のシグナル伝達分子であることを予想外に発見した。本願人は、ＯＲＧが皮膚の深層に存在する細胞におけるＹＡＰ／ＴＡＺ生理活性の独特の効果的な活性剤であることを発見し、それを明らかにした。ＹＡＰ／ＴＡＺ活性は、皮膚の最上層の細胞の挙動を調節することが以前に報告されている（ケラチノサイト生物学）。ＯＲＧがＹＡＰ／ＴＡＺの活性剤であること、又はＹＡＰを皮膚細胞核に向かわせることでメカノトランスダクションシグナルを強化し、皮膚層の線維芽細胞からのコラーゲン産生を促進したり、美容上のアンチエイジング治療を提供するための化粧品組成物に使用することについては、当該技術分野においては開示も示唆もない。

【0048】

ＹＡＰ活性化を実証することができ、したがってＹＡＰの活性剤を確認できる、確立された広く受け入れられている方法は、核転座アッセイである。したがって、ＹＡＰの活性化剤である化粧品材料は、下記の実施例１に概説されるように、ＹＡＰの核蓄積を引き起こす化合物として、当業者によって容易に識別され得るものである。

【0049】

したがって、化粧品化合物がこのイン・ビトロＹＡＰアッセイに合格する場合、すなわち、下記の実施例１に概説されるアッセイにおいてＹＡＰを皮膚細胞核に向かわせる場合、それは、本明細書で具体的に言及されていなくても、脂質ＹＡＰ活性剤として含まれる。本発明の好ましい実施形態では、脂質ＹＡＰ活性剤は、より効果的なアンチエイジング剤であるため、ビヒクル対照によって達成されるレベルを超えて核内でのＹＡＰの蓄積を促進する化合物である。

【0050】

本願人は、皮膚の若返りに関連したＹＡＰ／ＴＡＺメカノトランスダクションシグナル伝達を研究するために、調整可能な基質剛性のヒドロゲルに基づくモデルを開発し、皮膚若返り活性の駆動におけるＹＡＰの重要性について科学的証拠を提供した。

【0051】

本明細書で使用される美容皮膚有益剤は、ＹＡＰ活性剤である。ＹＡＰ／ＴＡＺアッセイ試験を満足させる美容ＹＡＰ活性剤の例には、モノ不飽和モノグリセリドなどがある。

【0052】

脂肪酸部分は、直鎖又は分枝鎖、不飽和であってもよく、置換されていても良く、例えば１２－ヒドロキシ脂肪酸である。

【0053】

ＹＡＰ活性剤は、これらの酸のいずれかの相当するジグリセリド及びトリグリセリド及びリン脂質であってもよく、本発明での使用のためである。好ましい誘導体には、酸のカルボキシル基の置換から誘導されるもの、例えばエステル（例えば、トリグリセリドエステル、モノグリセリドエステル、ジグリセリドエステル、リン酸エステル）などがある。トリグリセリドエステル誘導体の場合には、グリセロール主鎖上のすべての位置異性体が含まれる。グリセロール主鎖上の１位及び２位異性体が好ましく、グリセロール主鎖上の１位異性体がより好ましい。

【0054】

したがって、脂肪酸トリグリセリド豊富なオイルも本発明での使用に適している。このようなオイルは市販されており、コリアンダーシードオイル（ペトロセリン酸豊富）、パセリ種子オイル（ペトロセリン酸豊富）、月見草オイル（ガンマリノレン酸豊富）、ルリヂサ種子オイル（ガンマリノレン酸豊富）、シアバター（オレイン酸とリノール酸が豊富）、魚油及びそれの濃縮物（ＤＨＡとＥＰＡが豊富）、亜麻仁オイル（αリノレン酸豊富）、アーモンドオイル（オレイン酸豊富）、綿実油（リノール酸豊富）などがある。

【0055】

本発明による好ましいＹＡＰ活性剤には、１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロール、（２Ｓ）－１－オレオイルグリセロール、（２Ｒ）－１－オレオイルグリセロール、２－オレオイルグリセロール、及びＮ－（２－ヒドロキシエチル）リシノレイルアミド（ＲＭＥＡ）／リシノール酸及びそれらの組み合わせなどがある。本発明によるより好ましいＹＡＰ活性剤は、１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロール、（２Ｓ）－１－オレオイルグリセロール、（２Ｒ）－１－オレオイルグリセロール、２－オレオイルグリセロール、オレオイル－ｒａｃ－グリセロール（ＯＲＧ）及びそれらの組み合わせである。１実施形態において、ＹＡＰ活性剤は、１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロール及び２－オレオイルグリセロール又はオレオイル－ｒａｃ－グリセロール（ＯＲＧ）の組み合わせである。１実施形態において、ＹＡＰ活性剤は１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロールである。１実施形態において、ＹＡＰ活性剤は２－オレオイルグリセロールである。

【0056】

理解すべき点として、本発明による組成物中に存在するＹＡＰ活性剤は、理想的には「活性」形態で存在する、すなわち、それは、ジグリセリド又はトリグリセリドとしてエステル化されていない。したがって、オイルなどの天然の材料源については上で言及したが、本発明による組成物で使用されるＹＡＰ活性剤は、その活性剤の生のエステル化された形態ではなく、むしろ、エステル化されていないＹＡＰ活性剤豊富である原材料源、又はエステル化された形態が専らオレイン酸から誘導されるジグリセリド若しくはトリグリセリド又はオレイン酸から誘導されるジグリセリド若しくはトリグリセリド及び優先的に「活性」形態を放出するＣ６－Ｃ２２脂肪酸の混合物を含む原材料源である。

【0057】

理論に拘束されることを望むものではないが、本願人は、長鎖（例えば、Ｃ１６～Ｃ２２）飽和脂肪酸グリセリド（例えば、１－ステアロイル－ｒａｃ－グリセロールに見られるＣ１８炭素鎖）の直鎖炭素鎖構造は、対応するシスモノ不飽和脂肪酸炭素鎖（例えば、ＯＲＧに存在するＣ１８：１シス炭素鎖など）と比較して、ＹＡＰ活性化能力に有害であると考えている。このような脂肪酸誘導体の直鎖及び飽和長鎖炭素鎖の性質により、これらの分子は強いファンデルワールス分子間力を介して積み重なることができ、その結果、シス－モノ－不飽和炭素鎖を有する脂肪酸誘導体と比較してその分子を分解するのに必要なエネルギーがより多くなる。結果的に、本願人はまた、ＯＲＧの溶解性及び皮膚送達が、飽和誘導体１－ステアロイル－ｒａｃ－グリセロール又は１－ラウロイル－ｒａｃ－グリセロールよりも優れていると考えている。

【0058】

ＯＲＧを含むＹＡＰ活性剤は、本発明の組成物中で、組成物の０．０００１重量％～５０重量％、又は０．００１重量％～１０重量％、又は０．０１重量％～１０重量％の量で使用される。より好ましくは、その量は、最小のコストで最大の利益を得るためには、０．０１％～５％、又は０．１％～５％、又は０．１％～０．４％、最も好ましくは０．１％～３％であり；さらにより好ましくは、下限は約１．１５％～約１．５％、上限は約２．０％～約３．０％である。好ましくは、それは４重量％未満のレベルで存在し；好ましい例は、１．５％、２．０％、及び３．０％を含む。

【0059】

皮膚科学的に許容されるビヒクル
本発明に従って使用される組成物は、活性成分の希釈剤、分散剤又は担体として作用する皮膚科学的／化粧品的に許容されるビヒクルも含む。ビヒクルは、水、液体若しくは固体の皮膚軟化剤、シリコーンオイル、乳化剤、溶媒、湿潤剤、増粘剤、粉剤、噴射剤などのスキンケア製品に一般的に使用される材料を含んでもよい。

【0060】

ビヒクルは、通常、組成物の５重量％～９９．９重量％、好ましくは２５重量％～８０重量％を形成し、他の化粧品補助剤の非存在下では、組成物の残りの部分を形成することができる。

【0061】

任意の皮膚有益材料及び化粧品補助剤
選択された美容スキン効果有益物質に加えて、追加のアンチエイジング活性物質、例えば、プロピオン酸レチニルなど（これに限定されるものではない）のレチノイド、リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）及び環状ホスファチジン酸（ｃＬＰＡ、或いはＣｙＰＡ（登録商標）として知られる）など（これらに限定されるものではない）のホスファチジン酸誘導体、焼け止め剤、美白剤、皮膚の日焼け剤などの他の特定のスキン有益活性物質も含まれ得る。プロピオン酸レチニルが特に有利である。保湿活性物質には、ペトロセリン酸、リシノール酸、リノール酸、リノレン酸、オレイン酸及びアラキドン酸などがあり得て、それらはグリセロールの所望の脂肪酸エステルを形成するのに有用である。ビヒクルはまた、酸化防止剤、香料、乳白剤、防腐剤、着色剤及び緩衝剤などの補助剤をさらに含んでもよい。

【0062】

プロピオン酸レチニルなどのレチノイドは、局所組成物の約０．００１重量％～１０重量％、又は約０．００１重量％～約５重量％、又は約０．００１重量％～約２重量％、又は約０．００１重量％～約１重量％、又は約０．００１重量％～約０．５重量％、又は約０．０１重量％～約５重量％、又は約０．０１重量％～約３重量％、又は約０．０１重量％～約１．５重量％、又は約０．０１重量％～約１重量％、又は約０．０１重量％～約０．５重量％（ここで包含される全ての範囲を含む）の量で本発明の組成物で使用される。

【0063】

本明細書に記載のホスファチジン酸誘導体は、局所組成物の約０．００１重量％～１０重量％、又は約０．００１重量％～約５重量％、又は約０．００１重量％～約３重量％、又は約０．００１重量％～約１重量％、又は約０．００１重量％～約０．５重量％、又は約０．０１重量％～約５重量％、又は約０．０１重量％～約３重量％、又は約０．０１重量％～約１．５重量％、又は約０．０１重量％～約１重量％、又は約０．０１重量％～約０．５重量％（ここで包含される全ての範囲を含む）の量で本発明の組成物で使用される。

【0064】

本発明の１態様において、ＹＡＰ活性剤：レチノイドの重量比は、２０：１～１：１、又は１０：１～１：１、又は９：１～１：１、又は８：１～１：１、又は７：１～１：１、又は６：１～１：１、又は５：１～１：１、又は４：１～１：１、又は３：１～１：１である。

【0065】

本発明の１態様において、ＹＡＰ活性剤：レチノイドの重量比は、２０：１～１：１、又は１０：１～１：１、又は９：１～１：１、又は８：１～１：１、又は７：１～１：１、又は６：１～１：１、又は５：１～１：１、又は４：１～１：１、又は３：１～１：１である。

【0066】

製品の調製、形状、使用及び包装
本発明の方法で使用される局所組成物を調製するのに、スキンケア製品を調製するための通常の方法を使用することができる。一般に、活性成分を、従来の方法で皮膚科学的／化粧品的に許容される担体に組み込む。活性成分を好適には、最初に、ある量の水又は別の溶媒若しくは液体に溶解若しくは分散させて、組成物中に組み込む。好ましい組成物は、水中油型又は油中水型又は水中油中水型乳濁液である。

【0067】

組成物は、クリーム、ジェル又はローション、カプセルなどの従来のスキンケア製品の形態であってもよい。最も好ましくは、その製品は「リーブオン」製品；すなわち、皮膚に適用した直後に入念なリンスの段階を行わずに皮膚に適用される製品である。

【0068】

当該組成物は、従来の方法で、ジャー、瓶、管、ロールボールなどの任意の適切な方法で包装することができる。本発明の組成物を、二つの別個の組成物のキットとして包装することができ、一方は本発明の脂質成分ＯＡを含み、第二は任意の皮膚有益剤成分を含み、同時又は連続的に又は別個の時間で皮膚に適用することができることも想到される。

【0069】

本発明の方法は、処置を必要とする皮膚に対して１日１回以上実施することができる。皮膚の外観の改善は、皮膚の状態、本発明の方法で使用される活性成分の濃度、使用される組成物の量、及びそれを適用する頻度に応じて、通常３～６か月後に目に見えるようになる。一般に、少量の組成物、例えば０．１～５ｍＬを適切な容器又はアプリケーターから皮膚に適用し、手又は指又は適切な機器を使用して皮膚上に広げる及び／又は皮膚に擦り込む。組成物が「リーブオン」製品として製剤されるか、「リンスオフ」製品として製剤されるかに応じて、リンス段階を続けても良い。

【0070】

本発明をより容易に理解できるようにするため、例示のみを目的として以下の実施例を示す。

【実施例】

【0071】

実施例１．ＹＡＰ／ＴＡＺ生理活性の活性剤を同定するための核転座アッセイ
ＹＡＰの細胞局在は、細胞が付着する基質又はＥＣＭの剛性、又は細胞が基質上で広がる程度によって制御することができる。したがって、イン・ビトロモデルが、ＹＡＰ活性の低い状態を操作するのに役立つ。ＹＡＰ／ＴＡＺの活性化を実証できる確立され広く受け入れられている方法が公開されている。

【0072】

すなわち、初代ヒト皮膚線維芽細胞をフィブロネクチンのマイクロプリント基質アイランド（＜１０００μｍ^２）上に播種し、細胞培養インキュベータ内で３７℃、５％ＣＯ_２で終夜インキュベートした。次に、線維芽細胞を表１に記載の材料で処理した。２時間の処理期間後、細胞を固定して染色した。核をＨｏｅｃｈｓｔ色素で染色し、ＹＡＰ／ＴＡＺをＹＡＰ／ＴＡＺに対するマウス抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で染色し、続いて二次蛍光タグ抗体（ロバ抗マウスＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８）で染色した。顕微鏡画像を取得し、各細胞の細胞質及び核におけるＹＡＰ／ＴＡＺ蛍光シグナルを測定した。以下の表１に示すように、核で測定された蛍光強度を、細胞質で測定された蛍光強度で割ることで、ＹＡＰ／ＴＡＺ比の読み取り値が得られる。

【0073】

ＹＡＰ／ＴＡＺを活性化する化粧品材料を特定する。

【0074】

Ａ．以下の実験データは、細胞核におけるＹＡＰの蓄積を記録することにより、他の飽和グリセロールエステルに比べてモノ不飽和グリセロールエステル１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロールの利点を裏付けるものである。核内のＹＡＰの蓄積を、メカノトランスダクション活性化の読み取り値として使用する。

【0075】

表１．
メカノトランスダクションに対する脂肪酸グリセロールエステルのアルキル鎖の効果

【表1】

【0076】

上記の表１のデータからわかるように、陽性対照リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）は、ビヒクルＤＭＳＯに勝るメカノトランスダクションシグナル伝達（すなわち、細胞質ＹＡＰ／ＴＡＺの核への移行）を誘発する。驚くべきことに、モノ不飽和脂肪酸グリセロールエステルである１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロールも、メカノトランスダクションシグナル伝達をかなり誘発する。対照的に、飽和脂肪酸グリセロールエステル、１－ステアロイル－ｒａｃ－グリセロール又は１－ペンタデカノイル－ｒａｃ－グリセロールは、メカノトランスダクションを誘発しない。したがって、メカノトランスダクションＹＡＰ／ＴＡＺシグナル伝達経路を活性化するには、長鎖脂肪酸グリセロールエステルのモノ不飽和化が必要である。さらに、そして予想外なことに、（－）－荷電リン酸アニオン性ヘッド基を長鎖モノ不飽和脂肪酸グリセロールエステルに結合させることは、そのようなメカノトランスダクションシグナル伝達を引き起こすのに必須ではない。

【0077】

Ｂ．送達及び沈着
局所適用製剤からの１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロール及び１－ステアロイル－ｒａｃ－グリセロールの皮膚送達を、数学モデルを使用して予測した。この皮膚送達モデルでは、皮膚を、角質層、生存表皮及び真皮の三つの層を有するものとして扱い、各層は文献で報告されている代表的な厚さ（それぞれ１５、８５、１０００ｍｍ）を有するものとしている。試験化合物を含む製剤は、皮膚表面で別の層として扱われる。この皮膚送達モデルは、分配－拡散理論に基づく試験化合物の皮膚への浸透の動的プロセスをシミュレートするものであり、すなわち、各皮膚及び製品層において、試験化合物の物質移行がフィックの拡散第２法則を使用して特徴付けられるが、二つの隣接する層間の界面での試験化合物の移動は分配によって支配される。各皮膚層における試験化合物の潜在的な結合もシミュレートする。皮膚送達モデルの主要な入力パラメータには、分子量、水－オクタノール分配係数、化学組成（各種類の原子及び二重結合の数）などがある。数式、モデル入力パラメータからパラメータ（拡散性、分配係数及び結合係数など）を推定する方法が、Ｄａｎｃｉらの論文（Ｙｕｒｉ Ｄａｎｃｉｋ， Ｍａｔｔｅｗ Ａ． Ｍｉｌｌｅｒ， Ｊｏａｎｎａ Ｊａｗｏｒｓｋａ， Ｇｅｒａｌｄ Ｂ． Ｋａｓｔｉｎｇ， Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｏｆ ａ ｓｐｒｅａｄｓｈｅｅｔ－ｂａｓｅｄ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ｆｒｏｍ ｄｅｒｍａｌ ｅｘｐｏｓｕｒｅ． Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ， ６５：２２１－２３６， ２０１３．） Ｄａｎｃｉｋｅｔａｌ．で報告された。しかしながら、本モデルは、製品と角質層の間の分配係数の推定を改良して、代表的な皮膚製剤からの試験化合物の送達をよりよく予測するものであった。

【0078】

局所適用２４時間後の生存表皮及び真皮への１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロール及び１－ステアロイル－ｒａｃ－グリセロールの予測皮膚送達を表２に提供している。製剤は、臨床研究では一般的な２ｍｇ／ｃｍ^２のレベルで適用されると仮定した。送達量は、適用された製剤中に含まれる試験化合物の総量のパーセント（％用量）として表される。予測結果は、最大５重量％の試験化合物を含む製剤について、及び異なる適用レベル（例えば、１又は５ｍｇ／ｃｍ^２）では未変化のままであることに留意する。

【0079】

表２．皮膚送達予測：
１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロール対１－ステアロイル－ｒａｃ－グリセロール

【表2】

【0080】

上の表２のデータからわかるように、１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロールは、代表的な皮膚製剤から皮膚を通って表皮層及び真皮層まで１－ステアロイル－ｒａｃ－グリセロールよりもはるかに優れて（少なくとも３倍優れて）送達されると予測され、後者は、ＬＰＡなどのリゾホスファチジン酸よりもはるかに優れて送達されると予測された。さらに、１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロール（１－ステアロイル－ｒａｃ－グリセロールではない）の機能レベルは、一部の皮膚製品で認められる脂肪酸グリセロールエステルのレベルに相当する３％１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロールを含む皮膚製剤からこれらの皮膚層に送達されると予測される。したがって、１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロールは、メカノトランスダクションを誘発できるだけでなく、適切な物理化学的特性（飽和グリセロールエステル及びリゾホスファチジン酸を超える）も有しており、メカノトランスダクション経路を活性化するのに必要である表皮層及び真皮層への効果的な送達を可能とするものである。

【0081】

Ｃ．この実施例は、水溶解度が、化粧品用途における１－ステアロイル－ｒａｃ－グリセロールに勝る１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロールのもう一つの利点であることを実証する。

【0082】

表３．１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロール対１－ステアロイル－ｒａｃ－グリセロールの水溶解度予測

【表3】

【0083】

上記の表３のデータからわかるように、１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロールは、１－ステアロイル－ｒａｃ－グリセロールよりも水系媒体への溶解度がほぼ２倍高いことが予測され、これにより前者は、より広範囲の局所塗布化粧品製剤に適し、より汎用性が高くなる。さらに、１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロールの融点（すなわち、３５℃）は体温（つまり３７℃）より低いことで、（製剤中で）皮膚に塗布すると、それが液体の状態のままであり、意図どおりに皮膚に浸透し、皮膚を通って送達され得る。対照的に、１－ステアロイル－ｒａｃ－グリセロールの融点は体温より高い（すなわち、４０．５℃）ため、皮膚の上に早期に沈殿し、経皮送達を著しく妨げる可能性がある。したがって、１－オレオイル－ｒａｃ－グリセロールは、水溶解度が高く、融点が低い（体温より低い）ため、局所化粧品組成物及び用途には１－ステアロイル－ｒａｃ－グリセロールよりも優れた選択肢となる。

【0084】

実施例２
この実施例は、本発明の有効成分のアンチエイジング効果を実証するものである。

【0085】

若返り活性を評価するためのハイドロゲルモデル
ＹＡＰ活性は基質の剛性に大きく依存するため、調整可能な機械的特性を備えた基質上でのアッセイを開発及び実行する必要があった。文献では、約２ｋＰａ以下のヒドロゲル基質上で培養された細胞は無視できるレベルの核ＹＡＰしか示さないことが報告されており、したがって、これらの材料は、若返り表現型（皮膚の真皮層の細胞外マトリクスの量及び／又は質の構築に重要なプロコラーゲン産生及び遺伝子活性化の促進など）に対するＹＡＰ活性剤の効果を評価するのに理想的である。

【0086】

初代ヒト皮膚線維芽細胞（Ｐ３）を、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中の２％ウシ胎仔血清１ｍＬ中で２４ウェル２ｋＰａコラーゲンでコーティングしたヒドロゲルプレートに３１，５７９細胞／ｃｍ^２で蒔き、５％二酸化炭素の細胞培養インキュベータ内で２４時間維持する。細胞をダルベッコリン酸緩衝生理食塩水で２回洗浄し、次いで０．６％無脂肪酸ウシ血清アルブミンを補充したＤＭＥＭ １ｍＬで洗浄した。細胞は、５％二酸化炭素の細胞培養インキュベータ内で２４時間維持した。

【0087】

培地２００マイクロリットルを各ウェルから除去した。各ウェルに、０．６％無脂肪酸ウシ血清アルブミンを補充したＤＭＥＭ中の５００μｇ／ｍＬアスコルビン酸１００μＬを添加した。試験材料を、０．６％無脂肪酸ウシ血清アルブミンを添加したＤＭＥＭ又は０．１％無脂肪酸ウシ血清アルブミンを添加したＰＢＳ中で最終濃度１０倍まで希釈し、１００μＬを二連のウェルに投与した。細胞／プレートを細胞培養インキュベータ内で３７℃、５％ＣＯ_２で３日間インキュベートした。第３日に培地をウェルから除去し、０．６％無脂肪酸ウシ血清アルブミンと５０μｇ／ｍＬアスコルビン酸を添加したＤＭＥＭ ９００μＬを加えた。処理を上記のように追加した。治療開始後６日目に、プロコラーゲンのレベルを測定するために、各ウェルから培地１００μＬを取り出す。

【0088】

プロコラーゲンアッセイ
培地サンプル中のプロコラーゲンの量を、Ｔａｋａｒａ Ｂｉｏ Ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ ｔｙｐｅ １Ｃ－ｐｅｐｔｉｄｅ（ＰＩＰ）検出ＥＩＡアッセイを使用して測定した。そのアッセイは、次のような製造者の説明書に従って実行した。すなわち、培地サンプル及び標準曲線に必要な数の再生抗体－ＰＯＤコンジュゲート１００μＬをアッセイのウェルに加えた。プロコラーゲン標準溶液を、サンプル希釈液を使用して２倍連続希釈して、６４０、３２０、１６０、８０、４０、２０、１０及び０ｎｇ／ｍＬプロコラーゲンの標準曲線を作成した。培地サンプルをサンプル希釈剤で１／２０希釈した。標準曲線希釈液２０μＬをアッセイプレートのウェルに二連で加えた。サンプル希釈液中の培地希釈液２０μＬを一連でアッセイプレートのウェルに加えた。プレートを３７℃で３時間インキュベートし、リン酸緩衝生理食塩水洗浄緩衝液で４回洗浄し、軽く叩いて残留洗浄緩衝液をすべて除去した。基質溶液（ＴＭＢＺ）１００μＬを各ウェルに添加し、１５分間インキュベートした。停止溶液１００μＬを各ウェルに添加し、プレートを振盪して混合し、４５０ｎｍでの光学密度をプレートリーダーで読み取った。試験サンプル中のプロコラーゲンの量を標準曲線の値から計算し、希釈係数とウェルでの体積について補正して、サンプル中のプロコラーゲンのｎｇ数を得た。試験材料によって誘発されたプロコラーゲンの量を基本培地と比較した。

【0089】

以下の表の結果は、ＯＲＧ（本発明の範囲内）が、驚くべきことに、既知の抗アンチエイジングマーカーであるヒト皮膚線維芽細胞におけるプロコラーゲン－Ｉの合成を促進することを実証している。対照的に、マグノロール、ヒノキオール、グリシン酸オレオイル及びプロピオン酸レチニル（これらは単独では本発明の範囲外）などの、このアッセイに単独で含まれる他の分子は、皮膚の生体力学的特性を模倣する基質でのプロコラーゲン活性を誘発する上でそのような顕著な効果を示さない。

【0090】

表４．ヒト皮膚線維芽細胞におけるプロコラーゲン合成に対する各種化合物処理の効果

【表4】

【0091】

皮膚におけるプロコラーゲン１のレベルの上昇又は維持は、しわの解消や光損傷を受けた皮膚の皮膚修復など、多くの皮膚アンチエイジング効果と関連している。

【0092】

驚くべきことに、ＯＲＧとプロピオン酸レチニルの組み合わせにより、プロコラーゲン生成が相乗的に増加した。ＯＲＧとプロピオン酸レチニルの組み合わせの効果は、いずれかの材料単独よりも統計的に有意に大きな増加をもたらし、プロコラーゲンのＯＲＧ誘発間の差は、プロピオン酸レチニルと組み合わせた場合のＯＲＧとは統計的に（ｓｔａｔｉｃａｌｌｙ）異なった。

【0093】

若返りに関連するＹＡＰ下流遺伝子の活性化
ＹＡＰの活性化は、心臓や腸などのいくつかの臓器系における組織再生に重要な下流遺伝子の制御と関連している。したがって、我々は、ヒドロゲルモデルシステムにおけるＹＡＰの活性化が細胞外マトリックスの構築に重要な遺伝子の制御ももたらすか否かを調べようとした。

【0094】

初代ヒト皮膚線維芽細胞（Ｐ３）を、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中の２％ウシ胎仔血清２ｍＬ中で６ウェル２ｋＰａヒドロゲルコラーゲンコートプレートに３１，５７９細胞／ｃｍ^２で蒔き、５％二酸化炭素の細胞培養インキュベータで２４時間維持する。細胞をダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）で２回洗浄し、次いで、０．６％無脂肪酸ウシ血清アルブミン（ＦＡＦ－ＢＳＡ）を補充したＤＭＥＭ １ｍＬで洗浄した。細胞を、５％二酸化炭素の細胞培養インキュベータで２４時間維持した。培地４００μＬをプレートの各ウェルから除去した。所望の最終濃度の１０倍に希釈したＹＡＰ活性処理液２００μＬ＋１％ＤＭＳＯを、０．６％無脂肪酸ウシ血清アルブミンを補充したＤＭＥＭで希釈した。対照ウェルを１％ＤＭＳＯ ２００μＬで処理し、０．６％無脂肪酸ウシ血清アルブミンを補充したＤＭＥＭで希釈した。所望の最終濃度の１０倍に希釈した水溶性ＹＡＰ活性物質２００μＬを、ＤＰＢＳ＋０．１％ＦＡＦ－ＢＳＡで希釈した。対照ウェルをＤＰＢＳ＋０．１％ＦＡＦ－ＢＳＡ ２００μＬで処理した。プレートを３７℃、５％ＣＯ_２で終夜インキュベートした。午前中に、プレートにＤＰＢＳ＋０．１％ＦＡＦ－ＢＳＡ中の水溶性ＹＡＰ活性物質２２０μＬに投与するか、対照ウェルにＤＰＢＳ＋０．１％ＦＡＦ－ＢＳＡ ２２０μＬを投与した。６時間後、培地をウェルから吸引し、細胞をＤＰＢＳで２回洗浄し、ＲＮＡが単離されるまでプレートを－８０℃で凍結した。

【0095】

ＲＮＡ単離
次の変更を加えて製造者の説明書にしたがって、Ｑｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙミニキットを使用して、ＲＮＡを単離した。

【0096】

プレートを冷凍庫から取り出した直後に、ＲＬＴ緩衝液＋β－メルカプトエタノール７００μＬを各ウェルに加えた。プレートを５００回転／分のオービタルシェーカー上に１５分間置き、その間に緩衝液を解凍し、細胞を抽出した。細胞溶解物をＱｉａｓｈｅｄｄｅｒに移し、Ｑｉａｓｈｅｄｄｅｒを通過させて細胞を破壊した。回収溶解物を等体積の７０％エタノール、３０％水と混合した。ＲＮＡを、ＮＡ汚染を除去するためのＤＮａｓｅ段階を含むミニカラムで精製した。ＲＮＡサンプルを、ＮａｎｏＤｒｏｐ８００で定量し、定量アクセスはＡｇｉｌｅｎｔ Ｂｉｏ－ａｎａｌｙｚｅｒで行った。ＲＮＡサンプルの小分けサンプルをｃＤＮＡに逆転写し、５ｎｇ／μＬの入力ＲＮＡに希釈した。ｃＤＮＡサンプルについて、反応当たりｃＤＮＡ ２μＬを使用する比較Ｔａｑｍａｎ解析を使用して特定マーカーの発現レベルを評価した。ＲＮＡ発現レベルを、デルタデルタサイクル閾値（ｄｄＣｔ）法を使用して比較した。ＲＮＡの小分けサンプルも、ＲＮＡ配列分析のためにＬｅｘｏｇｅｎ（ウィーン、オーストリア）に提出した。

【0097】

表５．ｍＲＮＡ遺伝子発現に対するＯＲＧ（Ｍｏｎｏｍｕｌｓ（登録商標））の効果

【表5】

【0098】

表５に、次式：増加パーセント＝１００×（２＾ｌｏｇ２ＦＣ）－１００を用いて平均ｌｏｇ２倍－変化（ＤＥＳｅｑ２を用いて計算）を増加パーセントに変換することによって計算されたＢｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｈｏｃｈｂｅｒｇ調整ｐ値（ａｄｊ． ｐ． ｖａｌｕｅ）とともに、ビヒクル対照と比較したＯＲＧ処理語の細胞外マトリクス産生に関与する遺伝子のｍＲＮＡ発現における平均増加パーセントを示している。

【0099】

実施例２Ａ
レチノイド活性のよく知られたマーカーであるＣＲＡＢＰＩＩ（細胞レチノイン酸結合タンパク質ＩＩ）を分析することによって、プロピオン酸レチニル＋ＯＲＧ相乗効果（表４で観察される通り）をさらに解明するために、実施例２に記載の細胞培養及びＲＮＡ単離方法を使用して独立の実験を行った。ＲＮＡを細胞から採取した後（実施例２に記載の方法で）、Ｈｉｇｈ－Ｃａｐａｃｉｔｙ ＲＮＡ－ｔｏ－ｃＤＮＡキット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（商標名））を使用して、ＲＮＡサンプルの小分けサンプルをｃＤＮＡに逆転写した。次に、反応当たり１０ｎｇのｃＤＮＡサンプルを、プライマー及び比較ＴａｑＭａｎ（商標名）遺伝子発現アッセイ及びＴａｑＭａｎ（商標名）Ｆａｓｔ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｓｔｅｒ（ＦＡＭ） Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（商標名）から購入）を使用してＣＲＡＢＰＩＩの発現レベルについて評価し、ＶｉｉＡ（商標名） ７ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（商標名）製）で実行した。ＣＲＡＢＰＩＩ発現の増加パーセントを、次式：増加パーセント＝１００×（２＾ｌｏｇ２ＦＣ）－１００を用いてｌｏｇ２倍変化を増加パーセントに変換することによって計算した。

【0100】

表６

【表6】

【0101】

レチノイドは細胞の増殖及び分化において重要な役割を果たし、皮膚の老化を防ぐのに有益であることが示されている。超微細構造レベルでは、レチノイドは表皮の厚さを増加させ、コラーゲンＩ、ＩＩ、ＶＩＩ並びにエラスチン及びムチンなどの真皮層の細胞外マトリクス分子の産生を増加させることも明らかになっている。レチノイドは、細胞レチノイン酸結合タンパク質（ＣＲＡＢＰ）によって細胞核に輸送され、ＣＲＡＢＰＩＩは皮膚における支配的なアイソフォームである。レチノイドの細胞シグナル伝達の開始におけるＣＲＡＢＰＩＩの重要な役割を考慮すると、ＣＲＡＢＰＩＩ発現は、レチノイド活性と、それに続くコラーゲン産生の増加などの上記の下流の皮膚若返り効果の初期マーカーとみなされる。

【0102】

表６に示すように、レチノイド、例えばプロピオン酸レチニルは、予想通りＣＲＡＢＰＩＩ遺伝子発現の強力な増加を誘発するが、ＯＲＧはレチノイドバイオマーカーのより緩やかな増加をもたらした。驚くべきことに、ＯＲＧとプロピオン酸レチニルの組み合わせはＣＲＡＢＰＩＩ遺伝子発現の相乗的な増加をもたらし、プロピオン酸レチニルとＯＲＧの組み合わせによってもたらされる予期せぬ生理活性の証拠をさらに提供した。プロピオン酸レチニルとＯＲＧの組み合わせによるＣＲＡＢＰＩＩ遺伝子発現におけるこの予期せぬ相乗的増加は、コラーゲン産生増加など（これに限定されるものではない）の皮膚アンチエイジング効果にとって重要であることが知られているレチノイド活性の増加を裏付けるものである。

【0103】

実施例３
下記の処方は、本発明による方法及び使用に適した水中油型クリームについて説明するものである。示されたパーセンテージは組成物の重量基準である。

【0104】

表７

【表7】

【0105】

実施例４
下記の処方は、本発明による乳濁液クリームについて説明するものである。

【0106】

表８

【表8】

【0107】

上記の局所組成物は、通常の老化プロセスによって滑らかさ及び張りを失った正常な皮膚に適用した場合、又はそのような望ましくない変化を予防若しくは遅延させるのに役立てるために若い皮膚に適用した場合、しわのある、老化した、光損傷を受けた皮膚の外観を改善する上で効果的な美容処置を提供する。その組成物は従来の方法で加工することができる。

【国際調査報告】