特表 2024-510653 急性虚血性脳卒中を治療するＤＣ００９

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-08

(54)【発明の名称】急性虚血性脳卒中を治療するＤＣ００９

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/4725 20060101AFI20240301BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20240301BHJP

   A61K 31/616 20060101ALI20240301BHJP

   A61K 31/4365 20060101ALI20240301BHJP

   A61K 31/4545 20060101ALI20240301BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240301BHJP

【ＦＩ】

A61K31/4725

A61P9/10

A61K31/616

A61K31/4365

A61K31/4545

A61P25/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023557404

(86)(22)【出願日】2022-03-21

(85)【翻訳文提出日】2023-09-19

(86)【国際出願番号】 CN2022082100

(87)【国際公開番号】W WO2022199551

(87)【国際公開日】2022-09-29

(31)【優先権主張番号】63/164,336

(32)【優先日】2021-03-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】517413638

【氏名又は名称】ルモサ セラピューティクス カンパニー， リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100120891

【弁理士】

【氏名又は名称】林 一好

(74)【代理人】

【識別番号】100165157

【弁理士】

【氏名又は名称】芝 哲央

(74)【代理人】

【識別番号】100126000

【弁理士】

【氏名又は名称】岩池 満

(72)【発明者】

【氏名】リン ジュン－チン

(72)【発明者】

【氏名】イェ シェン－ウェン

(72)【発明者】

【氏名】ペン シーチー

(72)【発明者】

【氏名】チャオ ミン

(72)【発明者】

【氏名】チョウ デイヴィッド チー－クアン

【テーマコード（参考）】

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086BC30

4C086CB05

4C086CB26

4C086DA17

4C086GA07

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA66

4C086MA67

4C086NA05

4C086NA06

4C086NA14

4C086ZA02

4C086ZA36

4C086ZA45

(57)【要約】

【課題】本発明は、低用量のＤＣ００９を１回以上投与することを含む、ヒトの急性虚血性脳卒中を治療する方法に関する。
【解決手段】該用量は、約０．０１～０．０７５ｍｇ／ｋｇ／回である。低用量投与は、ヒト被験者の急性虚血性脳卒中を治療するのに安全で有効である。
【選択図】図６

【特許請求の範囲】

【請求項1】

用量が約０．０１～０．０７５ｍｇ／ｋｇ／回である、ヒトの急性虚血性脳卒中を治療する方法において使用されるＤＣ００９

【化1】

の化合物。

【請求項2】

前記用量は、約０．０２５～０．０５ｍｇ／ｋｇ／回である、請求項１に記載の使用される化合物。

【請求項3】

前記用量は、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／回である、請求項２に記載の使用される化合物。

【請求項4】

前記用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／回である、請求項２に記載の使用される化合物。

【請求項5】

前記用量は、少なくとも１日１回投与される、請求項１～４のいずれか１項に記載の使用される化合物。

【請求項6】

前記用量は、１日２回投与される、請求項５に記載の使用される化合物。

【請求項7】

前記用量は、約３～１２時間の投与間隔で投与される、請求項１～６のいずれか１項に記載の使用される化合物。

【請求項8】

前記用量は、少なくとも１日１回で、２日間又は３日間投与される、請求項１～７のいずれか１項に記載の使用される化合物。

【請求項9】

前記用量は、少なくとも１日２回で、３日間投与される、請求項４に記載の使用される化合物。

【請求項10】

前記用量は、約３～１２時間の投与間隔で投与される、請求項９に記載の使用される化合物。

【請求項11】

急性虚血性脳卒中の発症後、直ちに又は１～２４時間以内に被験者に投与される、請求項１～１０のいずれか１項に記載の使用される化合物。

【請求項12】

静脈内注入及び／又はボーラス注射によって投与される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の使用される化合物。

【請求項13】

静脈内注入によって投与される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の使用される化合物。

【請求項14】

５～６０分間かけて静脈内注入によって投与される、請求項１３に記載の使用される化合物。

【請求項15】

アスピリン、クロピドグレル、アピキサバン、又はダビガトランと同時に投与される、請求項１～１４のいずれか１項に記載の使用される化合物。

【請求項16】

投与後の被験者の血漿中のＣ_ｍａｘは、２００ｎｇ／ｍＬ未満である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の使用される化合物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、低用量の３Ｓ－６，７－ジヒドロキシ－１，１－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロ－イソキノリン－３－アシル－Ｌｙｓ（Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｌｙｓ）（ＣＡＳ登録番号（ＲＮ）：１６３９３０３－７３－３）を用いてヒトの急性虚血性脳卒中を治療する方法に関する。

【背景技術】

【0002】

脳卒中は、血管の原因による中枢神経系の急性局所損傷に起因する神経学的欠損として古典的に特徴付けられる。虚血性脳卒中は、全脳卒中の約８７％を占め、１０％が脳内出血であり、３％がクモ膜下出血である。毎年、世界中で１５００万人が脳卒中を患っており、米国では、平均して４０秒ごとに１人が脳卒中を経験している。世界的に、脳卒中は、６０歳以上の死因の第２位であり、身体障害の主な原因となっている。

【0003】

組換え組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｒｔＰＡ）であるアルテプラーゼ（アクティバーゼ（登録商標））は、１９９６年にアメリカ食品医薬品局によって虚血性脳卒中の治療薬として承認された最初の薬剤であった（ＢＬＡ １０３１７２／Ｓ－１０５５）。アルテプラーゼは、急性虚血性脳卒中（ＡＩＳ）を患った被験者の転帰（ｏｕｔｃｏｍｅ）を改善することが示されているが、症状発現後の３時間以内（米国内）又は４．５時間以内の投与のみが承認されているため、その使用が制限され、症候性脳内出血のリスクがほぼ５倍になる。

【0004】

以上の理由により、アルテプラーゼの使用率は低く、脳卒中患者の約５％のみにアルテプラーゼが投与される。そのため、アルテプラーゼと同様の効果を達成できるが、出血の増加が少なく、及び／又は治療可能時間域が長い治療法を開発する必要がある。

【0005】

ＤＣ００９は、ペプチド－テトラヒドロイソキノリン複合体であり、化学名が３Ｓ－６，７－ジヒドロキシ－１，１－ジメチル－１，２，３，４－テトラヒドロ－イソキノリン－３－アシル－Ｌｙｓ（Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｌｙｓ）又はＬ－リジン、Ｎ６－（Ｌ－プロリル－Ｌ－アラニル－Ｌ－リシル）－Ｎ２－［［（３Ｓ）－１，２，３，４－テトラヒドロ－６，７－ジヒドロキシ－１，１－ジメチル－３－イソキノリニル］カルボニル］（ＣＡＳ登録番号：１６３９３０３－７３－３）である。ＤＣ００９は、リジン連結アームを介して血栓溶解ペプチド（Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｌｙｓ）と２つのＣ１－４アルキル基を有するテトラヒドロイソキノリン化合物とを結合することによって形成できる二成分複合体である。ＤＣ００９の構造は、図１Ａに示され、リジン連結アームとＰｒｏ－Ａｌａ－Ｌｙｓペプチドとの間のアミド結合は、図１Ｂに示される。

【0006】

医薬品開発は、動物とヒトの薬効及び安全情報の両方の評価を伴う段階的な処理である。非臨床安全性評価の目標は、一般的に、毒性作用の特徴を含み、この情報を用いて、人体試験のための初期の安全開始用量と用量範囲を推定し、潜在的な副作用を臨床的にモニタリングするためのパラメータを特定する。薬理学的作用量、化合物の完全な毒物学的プロファイル、及び治療薬の薬物動態（吸収、分布、代謝、排泄）に関する情報を含む、関連する全ての前臨床データを考慮すべきである。

【0007】

成人の健康な被験者に対する新規化合物のヒト初回投与臨床試験における最大推奨開始用量（ＭＲＳＤ）は、動物無毒性量（ＮＯＡＥＬ）に由来するヒト等価用量（ＨＥＤ）を安全係数で割ることによって決定されるべきである。通常用いられるデフォルトの安全係数は、１０であり、これは、歴史的に受け入れられた値であるが、入手可能な情報に基づいて評価される必要がある。これは、ＦＤＡの医薬品評価研究センター（ＣＤＥＲ）による拘束力のない助言である。しかし、安全係数１０は、全ての場合に適切であるとは限らない。安全係数は、懸念が増大する理由がある場合に引き上げられるべきであり、安全性のさらなる保証を提供する入手可能なデータにより懸念が軽減される場合に引き下げられるべきである（Ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ ”Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍａｘｉｍｕｍ Ｓａｆｅ Ｓｔａｒｔｉｎｇ Ｄｏｓｅ ｉｎ Ｉｎｉｔｉａｌ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌｓ ｆｏｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｉｎ Ａｄｕｌｔ Ｈｅａｌｔｈｙ Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ”、ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｍｅｄｉａ／７２３０９／ｄｏｗｎｌｏａｄ）。

【0008】

急性虚血性脳卒中（ＡＩＳ）の治療法の開発は、この異質な疾患の病態生理学と臨床面が複雑であるため、困難かつ挑戦的な取り組みである。脳卒中発症後の３時間以内に活性化された組み換え組織プラスミノーゲン活性化因子（ｒｔＰＡ）は、ＡＩＳに対して現在承認されている唯一の治療法である。ＡＩＳ治療法の開発における動物モデルの使用を評価するための実績は制限されている。ＡＩＳ動物モデルでは、多くの介入が有効性を示しているが、これらの介入、主に神経保護薬は、患者のＡＩＳの転帰を改善することが示されていない（Ｆｉｓｈｅｒ， ａｌ， Ｓｔｒｏｋｅ．Ｖｏｌｕｍｅ ３６， Ｉｓｓｕｅ １０， １ Ｏｃｔｏｂｅｒ ２００５； Ｐａｇｅｓ ２３２４－２３２５）。動物実験と臨床試験における神経保護薬に関する結果の差異は大きな問題である。多くの神経保護薬は、様々な動物虚血性脳卒中モデルで有効であることが証明されているが、臨床試験では効果が示されたものがない（Ｘｕ， ｅｔ ａｌ， Ｍｅｄ Ｓｃｉ Ｍｏｎｉｔ Ｂａｓｉｃ Ｒｅｓ．２０１３ Ｊａｎ ２８；１９：３７－４５． ｄｏｉ： １０．１２６５９／ｍｓｍｂｒ．８８３７５０．）。

【0009】

急性虚血性脳卒中を治療する方法が必要になる。該方法は、効果的であり、副作用及び毒性が最小限であるべきである。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1A】ＤＣ００９の化学構造を示す。

【図1B】ＤＣ００９の化学構造をＮＨ－Ｌｙｓ－Ａｌａ－Ｐｒｏの詳細とともに示す。

【図2】神経学的欠損の評価の方法を示す。

【図3】ラットＭＣＡＯモデルにおけるＤＣ００９の単回投与による血流結果を示す。

【図4】ラットＭＣＡＯモデルにおけるＤＣ００９の複数回投与による梗塞サイズ結果を示す。

【図5】実施例１～１０（ラットモデル）をまとめる。

【図6】ヒト被験者におけるＤＣ００９の神経学的改善を示す。

【図7】実施例１１～１６（ヒト臨床試験結果又はプロトコール）をまとめる。

【発明を実施するための形態】

【0011】

ラットにおけるＤＣ００９の血栓溶解効果及びフリーラジカル捕捉効果を考慮して、本発明者らは、ヒト被験者の急性虚血性脳卒中を治療する方法を発見した。該方法は、有効量のＤＣ００９又はその薬学的に許容される塩を、それを必要とする被験者に投与することを含み、ＤＣ００９の量は、疾患を治療するのに有効であり、最小毒性量で安全なＣ_ｍａｘを提供する。本発明の方法は、適切な投与量を提供する。該投与量は、ヒト被験者の急性虚血性脳卒中を治療するのに有効であり、出血のリスクを最小限に抑え、治療可能時間域を延長する可能性がある。

【0012】

本発明者らによるミニブタにおけるＤＣ００９の前臨床毒性結果によれば、本発明者らは、ミニブタにおける血漿曝露限界値を１１７７ｎｇ／ｍＬと設定した。そして、本発明者らは、安全係数を設定して、初期臨床用量を受けたヒト被験者を保護するための安全余裕度を提供する。背景技術で説明したように、デフォルトの安全係数は、１０であるが、利用可能な安全データに基づいて調整されてもよい。本発明において、ヒト被験者におけるＤＣ００９の投与は、血漿Ｃ_ｍａｘが約２００ｎｇ／ｍＬ以下、好ましくは約１５０ｎｇ／ｍＬ以下又は約１１０ｎｇ／ｍＬ以下となる用量に制限される。

【0013】

本発明者らは、ヒト被験者の急性虚血性脳卒中を治療するための有効かつ安全なＤＣ００９の量が約０．０１～０．０７５ｍｇ／ｋｇ／回（ｄｏｓｅ）又は約０．０２５～０．０５ｍｇ／ｋｇ／回の低用量であることを発見した。例えば、有効かつ安全な用量は、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／回又は約０．０５ｍｇ／ｋｇ／回である。

【0014】

本願全体を通して使用されるように、「約」とは、列挙された値の±１０％を指す。

【0015】

本発明者らは、本発明の低用量のＤＣ００９が急性虚血性脳卒中を治療するのに有効であり、低い血漿中薬物レベルを提供し、潜在的な薬物毒性が低減されることを発見した。ＤＣ００９の（消失）半減期は、非常に短く（半減期＜５分間）、ＤＣ００９は、投与後にすぐに循環系から排出され、投与後の３０分間以降にヒト血漿においてほとんど測定できない。ＤＣ００９の複数回投与は、ＤＣ００９の蓄積を引き起こさず、ＤＣ００９の治療効果は、各用量の薬物曝露によって達成される。

【0016】

ＤＣ００９の薬学的に許容される塩（図１Ａ及び１Ｂを参照）は、薬学的に許容される任意の塩、例えば、塩酸塩、即ち、Ｌ－リジン、Ｎ６－（Ｌ－プロリル－Ｌ－アラニル－Ｌ－リシル）－Ｎ２－［［（３Ｓ）－１，２，３，４－テトラヒドロ－６，７－ジヒドロキシ－１，１－ジメチル－３－イソキノリニル］カルボニル］－塩酸塩（１：３）（ＣＡＳ登録番号：２４１９９３０－７１－３）を含む。ＤＣ００９の分子式は、Ｃ３２Ｈ５１Ｎ７Ｏ８であり、遊離塩基の分子量は、６６１．８ｇ／ｍｏｌｅである。

【0017】

ＤＣ００９化合物の製造は、米国公開第２０１６－００８３４２３号の実施例６３に開示されており、これは、参照により本明細書に組み込まれる。本発明は、１つ以上の薬学的に許容される担体及びＤＣ００９化合物又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を使用する。

【0018】

不活性成分である薬学的に許容される担体は、当業者によって従来の基準で選択することができる。薬学的に許容される担体としては、生理食塩水及び電解質水溶液；塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセロール、ブドウ糖などのイオン性及び非イオン性浸透圧剤；水酸化物の塩、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、ホウ酸塩などのｐＨ調整剤及び緩衝剤、及びトロラミン；亜硫酸水素塩、亜硫酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ亜硫酸塩、アスコルビン酸、アセチルシステイン、システイン、グルタチオン、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、トコフェロール、及びパルミチン酸アスコルビルの塩、酸及び／又は塩基などの抗酸化剤；レシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン及びホスファチジルイノシオールを含むがこれらに限定されないリン脂質などの界面活性剤；ポロキサマー及びポロキサミン、ポリソルベート８０、ポリソルベート６０、及びポリソルベート２０などのポリソルベート、ポリエチレングリコール及びポリプロピレングリコールなどのポリエーテル；ポリビニルアルコール、ポビドンなどのポリビニル；メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのセルロース誘導体及びその塩；カルボキシポリメチレンゲルなどのアクリル酸のポリマー及び疎水変性架橋アクリレートコポリマー；デキストラン、ヒアルロン酸ナトリウムなどのグリコサミノグリカンなどの多糖類を含むが、これらに限定されない成分を含み得る。このような薬学的に許容される担体は、周知の防腐剤を用いて細菌汚染から保存することができ、塩化ベンザルコニウム、エチレンジアミン四酢酸及びその塩、塩化ベンゼトニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、メチルパラベン、チメロサール、及びフェニルエチルアルコールを含むが、これらに限定されず、又は単回若しくは複数回の使用のために非保存製剤として製剤化することができる。

【0019】

ヒト用の医薬組成物の１つは、ＤＣ００９の塩酸塩（Ｃ３２Ｈ５１Ｎ７Ｏ８・３ＨＣｌ）を含む凍結乾燥粉末であり、主な賦形剤は、マンニトールである。ＤＣ００９は、投与前に生理食塩水で適切な濃度に更に希釈される。

【0020】

いくつかの実施形態では、ヒト被験者の急性虚血性脳卒中を治療するためのＤＣ００９の用量（ｄｏｓｅ）は、約０．０１～０．０７５ｍｇ／ｋｇ／回である。いくつかの実施形態では、ヒト被験者の急性虚血性脳卒中を治療するためのＤＣ００９の用量は、約０．０２５～０．０５ｍｇ／ｋｇ／回である。１つの実施形態では、ヒト被験者の急性虚血性脳卒中を治療するためのＤＣ００９の用量は、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／回である。１つの実施形態では、ヒト被験者の急性虚血性脳卒中を治療するためのＤＣ００９の用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／回である。

【0021】

いくつかの実施形態では、用量は、少なくとも１日１回投与される。いくつかの実施形態では、用量は、１日１回投与される。いくつかの実施形態では、用量は、１日２回投与される。いくつかの実施形態では、用量は、１日３回投与される。本願全体を通して使用されるように、用量は、ＤＣ００９の用量を指す。

【0022】

いくつかの実施形態では、用量は、約３～１２時間の投与間隔で投与される。いくつかの実施形態では、用量は、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２時間の投与間隔で投与される。いくつかの実施形態では、用量は、約３時間、６時間、９時間又は１２時間の投与間隔で投与される。いくつかの実施形態では、用量は、約３時間の投与間隔で投与される。いくつかの実施形態では、用量は、約６時間の投与間隔で投与される。いくつかの実施形態では、用量は、約１２時間の投与間隔で投与される。

【0023】

いくつかの実施形態では、用量は、被験者に１～６日間投与される。例えば、用量は、被験者に１、２、３、４、５又は６日間投与される。１つの実施形態では、用量は、被験者に１日間投与される。１つの実施形態では、用量は、被験者に２日間投与される。１つの実施形態では、用量は、被験者に３日間投与される。１つの実施形態では、用量は、被験者に４日間投与される。１つの実施形態では、用量は、被験者に５日間投与される。１つの実施形態では、用量は、被験者に６日間投与される。いくつかの実施形態では、用量は、被験者に１日１～３回で、１～６日間投与される。１つの実施形態では、用量は、被験者に１日３回で、３日間投与される。１つの実施形態では、用量は、被験者に１日２回で、３日間投与される。１つの実施形態では、用量は、被験者に１日２回で、６日間投与される。１つの実施形態では、用量は、被験者に１日１回で、６日間投与される。

【0024】

１つの実施形態では、用量は、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／回であり、被験者に単回投与される。１つの実施形態では、用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／回であり、被験者に単回投与される。

【0025】

１つの実施形態では、用量は、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／回であり、被験者に１日２回で、３日間投与される。１つの実施形態では、用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／回であり、被験者に１日２回で、３日間投与される。１つの実施形態では、用量は、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／回であり、被験者に１日３回で、３日間投与される。１つの実施形態では、用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／回であり、被験者に１日３回で、３日間投与される。

【0026】

いくつかの実施形態では、化合物又は医薬組成物は、急性虚血性脳卒中の発症後、直ちに又は１～２４時間以内、又は３～２４時間以内に被験者に投与される。１つの実施形態では、化合物又は医薬組成物は、急性虚血性脳卒中の発症後、直ちに被験者に投与される。１つの実施形態では、化合物又は医薬組成物は、急性虚血性脳卒中の発症後の１～２４時間以内に被験者に投与される。１つの実施形態では、化合物又は医薬組成物は、急性虚血性脳卒中の発症後の３～２４時間以内に被験者に投与される。いくつかの実施形態では、化合物又は医薬組成物は、急性虚血性脳卒中の発症後の３時間、６時間、９時間、又は２４時間以内に被験者に投与される。いくつかの実施形態では、化合物又は医薬組成物は、急性虚血性脳卒中の発症後の３時間以内に被験者に投与される。いくつかの実施形態では、化合物又は医薬組成物は、急性虚血性脳卒中の発症後の２４時間以内に被験者に投与される。

【0027】

脳卒中重症度評価スケール（ＮＩＨＳＳ）は、急性虚血性脳卒中（ＡＩＳ）の予後を予測する指標（ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ）であり、その予測が時間に依存する。いくつかの実施形態では、本発明による治療に適したＡＩＳ患者は、ＮＩＨＳＳが４～３０である。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、ＮＩＨＳＳが４～２５である。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、ＮＩＨＳＳが６～２５である。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、ＮＩＨＳＳが６～１２である。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、ＮＩＨＳＳが１３～２５である。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、ＮＩＨＳＳが６以上である。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、ＮＩＨＳＳが４以上である。

【0028】

いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、大動脈アテローム性動脈硬化症を患っている。

【0029】

いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、年齢が６５歳未満である。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、年齢が８０歳未満である。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、年齢が６５歳を超えている。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、年齢が８０歳を超えている。

【0030】

いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、６時間以内に発症する脳卒中症状を有する。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、９時間以内に発症する脳卒中症状を有する。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、１２時間以内に発症する脳卒中症状を有する。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、１６時間以内に発症する脳卒中症状を有する。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、１６時間を超えて発症する脳卒中症状を有する。

【0031】

いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、Ｍ１中大脳動脈に症候性頭蓋内閉塞を有する。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、Ｍ２中大脳動脈に症候性頭蓋内閉塞を有する。

【0032】

いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、ＭＲＩ（核磁気共鳴画像法）又はＣＴＰ（コンピュータ断層撮影灌流）で、虚血性コア体積≦７０ｍＬ、ミスマッチ比＞１．２、及びミスマッチ体積≧５ｍＬのミスマッチプロファイルを有する。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、虚血性コア≦２０ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、虚血性コア≦３０ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、虚血性コア≦５０ｍＬである。

【0033】

いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、ミスマッチ比＞１．８である。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、ミスマッチ体積＞１０ｍＬである。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、ミスマッチ体積＞２０ｍＬである。

【0034】

静脈内（ＩＶ）注射は、医薬組成物を血流に送達し、組成物は、迅速に、最大限の効果で吸収することができる。静脈内投与治療薬は、プッシュ、ボーラス、又は持続注入によって投与することができる。この迅速な応答を達成するために、静脈内プッシュ（ＩＶプッシュ）は、３０秒以内に投与される。ＩＶプッシュは、点滴バッグに依存しない。静脈内ボーラス（ＩＶボーラス）は、注入ポンプを必要とせずに簡単に行うことができる。静脈内注入（ＩＶ ｂｏｌｕｓ）は、治療薬の定常状態濃度を提供しながら薬剤を投与するのにより長い時間がかかる。

【0035】

いくつかの実施形態では、ＤＣ００９化合物を含む本発明の医薬組成物は、静脈内注入によって投与される。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、５～６０分間かけて静脈内注入によって投与される。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物は、１５～３０分間かけて静脈内注入によって投与される。１つの実施形態では、医薬組成物は、１５分間かけて静脈内注入によって投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、３０分間かけて静脈内注入によって投与される。

【0036】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内ボーラス注射によって投与される。

【0037】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、静脈内ボーラス注射とそれに続く静脈内注入によって投与される。

【0038】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、使用可能な任意の静脈によってＡＩＳ患者に投与された。

【0039】

一例では、用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／回であり、医薬組成物は、３０分間かけて静脈内注入によって投与される。

【0040】

他の例では、用量は、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／回であり、医薬組成物は、１５分間かけて静脈内注入によって投与される。

【0041】

他の例では、用量は、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／回であり、医薬組成物は、３０分間かけて静脈内注入によって投与される。

【0042】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、アスピリン、クロピドグレル、アピキサバン、又はダビガトランと同時に投与される。１つの実施形態では、医薬組成物は、アスピリンと同時に投与される。１つの実施形態では、医薬組成物は、クロピドグレルと同時に投与される。１つの実施形態では、医薬組成物は、アピキサバンと同時に投与される。１つの実施形態では、医薬組成物は、ダビガトランと同時に投与される。

【0043】

いくつかの実施形態では、ヒト被験者は、血管内血栓除去術の前、最中、又は後に投与される。いくつかの実施形態では、ヒト被験者は、血管内血栓除去術の前に投与される。いくつかの実施形態では、ヒト被験者は、血管内血栓除去術の最中に投与される。いくつかの実施形態では、ヒト被験者は、血管内血栓除去術の前、後に投与される。

【0044】

いくつかの実施形態では、血管内血栓除去術及びＤＣ００９の投与は両方とも、脳卒中発症後の２４時間以内に行われる。

【0045】

いくつかの実施形態では、治療期間中のヒト被験者の血漿中薬物レベルは、２００ｎｇ／ｍＬ未満である。いくつかの実施形態では、治療期間中のヒト被験者の血漿中薬物レベルは、１５０ｎｇ／ｍＬ未満である。いくつかの実施形態では、治療期間中のヒト被験者の血漿中薬物レベルは、１１０ｎｇ／ｍＬ未満である。

【0046】

ＤＣ００９の有効性転帰（ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｕｔｃｏｍｅ）は、投与後の特定期間におけるＮＩＨＳＳの変化などの神経学的結果によって評価することができる。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、ＮＩＨＳＳがベースラインから４以上減少している。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、ＮＩＨＳＳがベースラインから８以上減少している。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、投与後にＮＩＨＳＳ≦２になった。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、投与後にＮＩＨＳＳ≦４になった。

【0047】

ＤＣ００９の有効性転帰は、投与後の特定期間における修正ランキンスケール（ｍＲＳ）の変化などの機能的転帰によって評価することができる。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、ｍＲＳがベースラインから１以上減少している。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、治療後にｍＲＳが０～２になった。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、治療後にｍＲＳが０～１になった。

【0048】

ＤＣ００９の有効性転帰は、投与後の特定期間におけるバーセル（Ｂａｒｔｈｅｌ）インデックスによって評価された機能的転帰によって評価することができる。

【0049】

ＤＣ００９の有効性転帰は、ＭＲＩ／ＣＴＰによるベースラインからの梗塞体積の変化、脳灌流画像ＭＲＩ／ＣＴＰによるベースラインからの低灌流病変の変化などの画像結果によって評価することができる。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、梗塞の成長が１０％減少した。いくつかの実施形態では、ＡＩＳ患者は、梗塞の成長が２０％減少した。

【0050】

いくつかの実施形態では、ＤＣ００９で治療されたＡＩＳ患者は、＞５０％の再灌流を達成した患者が非治療群より１０％、２０％又は３０％多い。いくつかの実施形態では、ＤＣ００９で治療されたＡＩＳ患者は、＞９０％の再灌流を達成した患者が非治療群より１０％、２０％又は３０％多い。いくつかの実施形態では、ＤＣ００９で治療されたＡＩＳ患者は、再疎通を達成した患者が非治療群より１０％、２０％又は３０％多い。

【0051】

要約すると、本発明は、急性虚血性脳卒中の治療を必要とするヒト被験者にＤＣ００９化合物を投与することを含む、ヒト被験者の急性虚血性脳卒中を治療する方法に関し、用量が約０．０１～０．０７５ｍｇ／ｋｇ／回である。１つの実施形態では、用量は、約０．０２５～０．０５ｍｇ／ｋｇ／回である。１つの実施形態では、用量は、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ／回である。他の実施形態では、用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／回である。

【0052】

本発明の方法において、化合物は、少なくとも１日１回投与される。１つの実施形態では、化合物は、１日２回投与される。他の実施形態では、化合物は、約３～１２時間の投与間隔で投与される。他の実施形態では、化合物は、少なくとも１日１回で、２日間又は３日間投与される。更に他の実施形態では、化合物は、少なくとも１日２回で、３日間投与される。更に他の実施形態では、化合物は、約１２時間の投与間隔で投与される。

【0053】

本発明の方法において、化合物は、急性虚血性脳卒中の発症後、直ちに又は１～２４時間以内に被験者に投与される。

【0054】

本発明の方法において、化合物は、静脈内注入及び／又はボーラス注射によって投与される。１つの実施形態では、化合物は、静脈内注入によって投与される。１つの実施形態では、化合物は、５～６０分間かけて静脈内注入によって投与される。

【0055】

本発明の方法において、化合物は、アスピリン、クロピドグレル、アピキサバン、又はダビガトランと同時に投与されてもよい。

【0056】

本発明の方法において、投与後の被験者の血漿中のＣ_ｍａｘは、２００ｎｇ／ｍＬ未満である。いくつかの実施形態では、投与後の被験者の血漿中のＣ_ｍａｘは、１５０ｎｇ／ｍＬ未満である。

【0057】

以下の実施例は、本発明を更に説明するものである。これらの実施例は、単に本発明を説明することを意図しており、限定するものとして解釈されるべきではない。

【実施例】

【0058】

〔略語リスト〕
〔略語〕 〔定義〕
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
ＡＥ 有害事象
ＡＩＳ 急性虚血性脳卒中
ａＩＣＨ 無症候性頭蓋内出血
ＡＵＣ 血中濃度－時間曲線下面積
ａＰＴＴ 活性化部分トロンボプラスチン時間
ＢＩＤ １日２回
ＥＣＧ 心電図
Ｃ_ｍａｘ 最高血漿中濃度
Ｃ_{ｔｒｏｕｇｈ} 投与前トラフ濃度
ＣＤＥＲ 医薬品評価研究センター
ＣＴ コンピュータ断層撮影
ＣＴＡ コンピュータ断層撮影血管造影法
ＣＣＡ 総頸動脈
ＣＬ 血漿中濃度の全身クリアランス
ＥＣＡ 外頸動脈
ＥＶＴ 血管内血栓除去術
ＨＥ ヘマトキシリン及びエオシン
ＨＥＤ ヒト等価用量
ＩＣＡ 内頸動脈
ＩＶ 静脈内
ｍＲＳ 修正ランキンスケール
ｍＴＩＣＩ 脳梗塞の修正された治療
ＭＲＳＤ 最大推奨開始用量
ＭＲＩ／ＣＴＰ 核磁気共鳴画像法又はコンピュータ断層撮影灌流
ＭＲＡ 核磁気共鳴血管造影法
ＭＣＡＯ 中大脳動脈閉塞
ＭｏＣＡ モントリオール認知評価
ＮＩＨＳＳ 脳卒中重症度評価スケール
ＮＯＡＥＬ 無毒性量
ＮＳＳ 神経学的重症度スコア
ＮＤＳ 神経学的欠損スコア
ＰＫ 薬物動態学
ＰＰＡ 翼口蓋動脈
ＰＴ プロトロンビン時間
ｒｔＰＡ 組換え組織型プラスミノーゲン活性化因子
ＲＴ 室温
ＲＢＣ 赤血球
ＲＰ２Ｄ 第ＩＩ相（ｐｈａｓｅ ＩＩ）臨床試験の推奨用量
ｒＣＢＦ 局所脳血流量
ＳＡＥ 重篤な有害事象
ＳＢＰ／ＤＢＰ 最高血圧／最低血圧
ＳＤラット スプラーグドーリーラット
ｓＩＣＨ 症候性頭蓋内出血
ＰＩＴ 光化学誘導血栓性
Ｔ_１／２ 半減期
ＴＥＡＥ 治療に起因する有害事象
Ｔ_ｍａｘ 最高血漿中濃度到達時間
ＴＩＤ １日３回
ＴＴ トロンビン時間
ＴＴＣ ２，３，５－トリフェニルテトラゾリウムクロリド
Ｖ_ｓｓ 定常状態の分布容積

【0059】

〔実施例１、ＳＤラットの塞栓性脳卒中モデル〕
１０％抱水クロラール溶液（４００ｍｇ／ｋｇ）を、麻酔のためにＳＤ雄性ラット（２４０～３２０ｇ）の腹腔内に注射した。首の中央付近の右側に長さが約２ｃｍの縦切開部を作り、右総頸動脈（ＣＣＡ）、外頸動脈（ＥＣＡ）及び内頸動脈（ＩＣＡ）を胸鎖乳突筋の内側の縁に沿って分離した。内頸動脈の切開部と総頸動脈の近位端をそれぞれ非侵襲性動脈クリップでクリップした。外頸動脈に小さい切開部を作り、外頸動脈の遠位端を結紮した。総頸動脈の近位端にある動脈クリップを外し、１０μｌの血液を採取した。採血後、総頸動脈の近位端を非侵襲性動脈クリップで再度クリップした。採取した１０μｌの血液を１ｍＬのＥＰバイアルに入れ、ＲＴで３０分間保持して血液を凝固させ、次に－２０℃の冷蔵庫に移して１時間保持して、固体凝固物を形成した。１時間後、血餅（ｂｌｏｏｄ ｃｌｏｔ）を取り出し、１ｍＬの生理食塩水を血餅に添加し、次に鋼製スパチュラで血餅を比較的均一な微小血栓に砕いた。次に、微小血栓懸濁液を、使用のために１ｍＬのシリンジに移した。ラットの内頸動脈でのクリップを解除すると、シリンジ内の１ｍＬの血栓懸濁液をラットの外頸動脈の近位端にゆっくりと注射し、次に内頸動脈を通してラットの脳内に注射した。続いて、外頸動脈の近位端を結紮し、内頸動脈及び総頸動脈での動脈クリップを解除し、血流を回復させた。総頸静脈を分離し、次に通常の生理食塩水又は試験化合物を注射した。静脈を結紮した。傷口に３滴のペニシリンを滴下した。傷口を縫合し、動物が目覚めるのを待った。

【0060】

ラットが目覚めてから２４時間後に、神経機能の損傷程度をＺｅａｌｏｎｇａ法によって評価した。スコア０は、神経機能の損失の兆候がないことを示し、スコア１は、損傷を受けていない側の前肢が伸びることができないことを示し、スコア２は、損傷を受けていない側に向かって歩くことを示し、スコア３は、損傷を受けていない側に向かって円を描くように尻尾を追いかけて歩くことを示し、スコア４は、意識障害を伴う不随意歩行を示し、スコア５は、死亡を示す。評価結果を統計的に解析し、ｔ検定（ｔ－ｔｅｓｔ）を行った。

【0061】

ラットが目覚めてから２４時間後かつＺｅａｌｏｎｇａ法によって神経機能の損傷程度を評価した後、ウレタンでラットを麻酔し、直ちに断頭して脳を摘出した。脳組織を－２０℃の冷蔵庫に２時間保持し、前頭葉前部から順次約２ｍｍの冠状切片を計５枚切り出し、次に２％ＴＴＣ溶液に入れ、光なしで３７℃で３０分間インキュベートした。脳切片の色の変化を観察した。正常な脳組織がＴＴＣによって赤色に染色されたが、虚血性脳組織が白色に見えた。デジタルカメラで写真を撮り、画像統計ソフトで処理し、脳組織の梗塞体積と冠状切片における正常な脳組織の面積とを計算した。各群の脳梗塞体積の比を統計的に計算し、ｔ検定を行った。

【0062】

〔実施例２、中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）モデル〕
〔ウィスターラットのＭＣＡＯ手術〕
０日目に、ラットを麻酔して大腿動脈から血液を採取し、同種（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ）血餅を準備した。マイクロハサミで一部の動脈切開部を作り、次に動脈に沿って滅菌ＰＥ－５０チューブ（４０～５０ｍｍ）を挿入した。この長さのＰＥ－５０チューブから採取された動脈血は、通常、ＭＣＡＯに適した１０個以下の個別血餅を形成した。チューブ内の血餅を室温で２時間保持し、続いて４℃で２２時間保持した。

【0063】

１日目に、塞栓を準備するために、ＰＥ－５０チューブとともに血餅を長さ３２ｍｍのセグメントに切断し、生理食塩水で満たされた、２３Ｇ針を備えた３ｍｌのシリンジを用いてセグメントを接続した。シリンジを押して血餅をＰＥ－５０チューブから生理食塩水で満たされたペトリ皿に勢いよく流した（ｆｌｕｓｈ）。ＰＥ－１０チューブに血餅を引き込み、ＰＥ－１０チューブから血餅を勢いよく流し（血餅の折り及びねじれを避けるために血餅の端部から引き込む）、それぞれ１０～１５回行い、捕捉された赤血球の大部分を、血餅がＲＢＣを更に放出しないまで洗い流した。ＰＥ－１０チューブを修正されたＰＥ－５０カテーテルに接続し、血餅をＰＥ－５０カテーテルに移した。次に、修正されたＰＥ－５０カテーテルを１００μｌのハミルトンマイクロシリンジに接続した。これで、使用のために血餅の準備が整った。

【0064】

１日目に、ラットを麻酔した。ＥＣＡ（同側外頸動脈）、ＰＰＡ（翼口蓋動脈）、及びＩＣＡ（内頸動脈）分岐が露出するまで、総頸動脈（ＣＣＡ）に沿って頸動脈鞘をずばっと解剖した（ｂｌｕｎｔｌｙ ｄｉｓｓｅｃｔ）。後頭動脈及び上甲状腺動脈（ＥＣＡの第１分岐と第２分岐）を解剖し、双極マイクロ凝固器を用いてＥＣＡから脈管を除去した。レーザードップラーフロープローブを頭のチューブに準備した。ＣＣＡ、ＰＰＡ、ＩＣＡをクリップで一時的にクランプし、分岐近くのＥＣＡ幹の周りに４－０絹製縫合糸を緩く適用した。クリップをゆっくりと解除し、ＩＣＡ内でカテーテルを更に進めて、抵抗を感じるまでＩＣＡの頭蓋内セグメントに入った。進められたカテーテルの全長は、ＥＣＡ動脈切開部位から約１９～２２ｍｍであった。カテーテルを１～２ｍｍ引き込み、５～１０μｌの生理食塩水を１０μｌ／ｍｉｎの速度でゆっくりと血餅に注射した。血餅注射後、局所脳血流量（ｒＣＢＦ）の割合は、約２０～３０％に減少した。ＩＣＡで血餅が安定するまで、３０分間待った。カテーテルの先端がＥＣＡ／ＩＣＡ分岐に到達するまで、カテーテルを引き込んだ。クリップを再度適用してＣＣＡ及びＩＣＡを一時的にクランプし、次に動脈切開部からカテーテルを引き抜いた。ＥＣＡ幹の周りに４－０絹製縫合糸を締めて、動脈切開部を結紮した。クリップを取り外した。動物が安定し、出血の問題がないことを確認するように、更に３０分間待った。切開部を閉じて麻酔を終了した。

【0065】

〔神経機能試験〕
ＭＣＡＯ手術後の２４時間後に神経学的欠損を評価した。神経機能は、０～１８のスケールで等級付けされ、０が正常な機能を表し、１８が最大の神経学的欠損を表す（図２を参照）。

【0066】

〔ＴＴＣ染色と梗塞サイズ及び膨潤率の計算〕
ＭＣＡＯの誘導後の２４時間後に、５％イソフルランでラットを麻酔し、生理食塩水を用いて心臓から灌流を行った（１５０ｍｌ）。ラットを断頭して脳を収集した。収集した皿及びマトリックスを使用前にＰＢＳですすいだ。写真を撮った後に血餅を切り取った。氷上で脳マトリックスを用いて脳を４つの２ｍｍ冠状スライスにスライスした（脳を８枚に切る）。脳スライスを１ＸＰＢＳ中の２％２，３，５－トリフェニルテトラゾリウムクロリド（ＴＴＣ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で室温で（光を避けて）２０分間インキュベートし、結果を写真で記録した。次に、Ｉｍａｇｅ Ｊを用いて梗塞のサイズ及び範囲を決定した。

【0067】

全てのＴＴＣ切片の尾側をデジタルカメラでスキャンし、画像をＪＰＥＧとして保存した。Ｉｍａｇｅ Ｊ（Ｉｍａｇｅ Ｊ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ）ソフトウェアを用いて非虚血性及び虚血性半球梗塞領域を測定した。８つの梗塞領域の測定値を全てスライス間の距離２ｍｍで計算した。これらの測定値を用いて各脳の総梗塞サイズ（％）を計算した。
・１００×［（健康な半球の体積－損傷のない同側半球の体積）／健康な半球の体積］により、各切片の梗塞サイズ（％）を計算した。
・８枚の切片の合計／８により、総梗塞サイズ（％）を計算した。
・１００×［（梗塞半球の体積－健康な半球の体積）／健康な半球の体積］により、各脳切片の膨潤率（％）を計算した。
・８枚の切片の合計／８により、総膨潤率（％）を計算した。

【0068】

〔脳血流の測定（ｒＣＢＦ）〕
ｒＣＢＦを測定するために、骨から側頭筋を解剖した。（このとき、特にｒｔＰＡを使用する場合、皮膚及び筋肉からの出血を双極凝固器で制御する必要がある）。ドリルでブレグマの後方２ｍｍ、側方６ｍｍの骨を薄くした。強力接着剤でレーザードップラーフロープローブを配置し、局所脳血流量（ｒＣＢＦ）を監視し始めた。

【0069】

〔実施例３、光化学誘導血栓性（ＰＩＴ）脳卒中モデル〕
〔光化学誘導性の中大脳動脈血栓症〕
麻酔下で、光照射部位に生じた血栓により左中大脳動脈（ＭＣＡ）が閉塞した。経眼窩アプローチによって左ＭＣＡを露出した。左眼窩と外耳道との間に縦切開部を作った。側頭筋を反射し、頬骨弓を切除せずに側頭下開頭術を実施した。頭蓋骨の底部に直径が約３ｍｍの窓を開けた。左ＭＣＡ主幹が窓から見えた。ローズベンガルと緑色照明（λ５４０ｎｍ、６００，０００ルクス）との間の光化学反応によって、ＭＣＡの内皮細胞を局所的に損傷した。ローズベンガル（２０ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与し、次にＭＣＡを緑色光に１０分間曝露した。手術中、３８℃に設定された加熱パッドに動物を置いた。

【0070】

〔ラット神経学的欠損スコアの評価〕
血栓塞栓症の発症後の２４時間（±２時間）後に１回、次の５日間に１日１回、Ｅｄｅｒｓｏｎらによって記載された修正方法（Ｓｔｒｏｋｅ、１９８６、１７：４７２－４７６）に従って神経学的欠損をスコア化した。合計「０」は、欠損がないことを示し、最大スコア「１５」は、重度の欠損を示す。

【0071】

１）前肢の屈曲
ラットを尻尾で軽く掴み、床から約１０ｃｍの高さに吊り下げ、前肢の屈曲を観察した。
０：両前肢が床に向かう。
１：前肢の伸展にわずかに違う。
２：手首の屈曲、肩の内転及び肘の伸展が軽度である。
３：手首、肘の完全に屈曲、及び肩の内旋を伴う内転を有する厳しい姿勢がある。

【0072】

２）後肢の屈曲
ラットを休ませた状態で、足裏を上に向けた後肢を尻尾の方へそっと引っ張った。
０：後肢の間で引き込み反応に違いがない。
１：右後肢の引き込み反応が左後肢の引き込み反応よりも弱い。
２：右後肢が異常に伸びているが、足裏を指で触ると引っ込めることができる。
３：右後肢が異常に伸びており、足裏を指で触っても引っ込めることができない。

【0073】

３）回転挙動
ラットの尻尾をそっと掴み、前肢を床につけた状態で旋回挙動を観察した。
０：前へ歩いている。
１：普段は前へ歩いているが、左へ歩くことができない。
２：普段は右に歩いているが、前へ歩くことができる。
３：右へ歩いているが、前へ歩くことができない。

【0074】

４）横変位
ラットを休ませた状態で、ラットの肩の後ろにどちらかの方向から穏やかな側圧を加えた。
０：どちらの方向にも均等に滑りに抵抗する。
１：右方向への横押しに対する抵抗が若干減少する。
２：右方向への横押しに対する抵抗が顕著に減少する。
３：右方向への横方向の押しに対する抵抗が顕著に減少し、ラットが仰向けに倒れる。

【0075】

５）一般的な姿勢
ラットを休ませた状態で、一般的な姿勢を観察した。
０：手術後の一般的な姿勢が通常のラットと変わらない。
１：ラットを上から見ると、左の前肢と後肢が見える。
２：体が少し傾く。
３：体が顕著に傾く。

【0076】

〔ヘマトキシリン及びエオシン染色のための脳〕
ラット脳マトリックス（２ｍｍ間隔）を用いて各脳を６つの冠状ブロックに切断した。脳を４％パラホルムアルデヒド中で３．１～６．２℃で一晩固定し、リン酸緩衝生理食塩水に保存し、組織学的処理に送った。各冠状ブロックをパラフィンに包埋した。各ブロックから１つの冠状切片を採取し、ヘマトキシリン及びエオシン（ＨＥ）で染色した。

【0077】

ＨＥ染色切片から、ＯｓｉｒｉＸバージョン８．０．２（Ｐｉｘｍｅｏ ＳＡＲＬ、Ｂｅｒｎｅｘ、スイス）を用いて梗塞領域（ｍｍ^２）を手動でマークした。虚血性梗塞の体積（ｍｍ^３）を、各冠状切片（脳ごとに６つの冠状切片）の梗塞領域の合計として計算した。梗塞体積を大脳皮質及び大脳基底核で計算した。大脳基底核及び大脳皮質の梗塞体積を加算することによって総梗塞体積を計算した。

【0078】

〔実施例４、ラット塞栓性脳卒中モデルにおけるＤＣ００９の単回投与の前臨床有効性（脳卒中発症後の３時間後の治療可能時間域）〕
本試験の目的は、実施例１に記載のスプラーグドーリーラットの塞栓性脳卒中モデルにおいて、脳卒中発症後の３時間後に０．００７ｍｇ／ｋｇでＤＣ００９を単回投与した場合の有効性を評価することであった。

【0079】

頸動脈に血餅を導入することによって、雄スプラーグドーリーラットの中大脳動脈の塞栓性閉塞を誘導した。ラットを媒体（生理食塩水）で、ｒｔＰＡ（１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＶボーラス注射）で、又は脳卒中発症後の３時間後にＤＣ００９（０．００７ｍｇ／ｋｇ、ＩＶボーラス注射）で処理した（処理群ごとにｎ＝１２～１３）。薬物投与後の２４時間後に、ラットの神経学的欠損スケール（ＮＤＳ）を評価した（０＝神経機能の損失の兆候がない。１＝左前肢が伸びることができない。２＝左側に向かって歩く。３＝左側に向かって円を描くように尻尾を追いかけて歩く。４＝意識障害を伴う不随意歩行。５＝死亡。）。神経学的評価後、動物を殺し、冠状脳切片（厚さ２ｍｍ）をＴＴＣで染色した。コンピュータ支援画像解析技術を用いて梗塞体積を定量化した。

【0080】

脳卒中発症後の２４時間後のラットのＮＤＳ及び梗塞体積を以下の表１にまとめた。

【0081】

【表1】

【0082】

ＤＣ００９処理群（０．００７ｍｇ／ｋｇ）は、生理食塩水処理群と比較して、神経学的挙動スコアの改善及び脳梗塞体積の減少を示した。したがって、脳卒中発症後の３時間後にＩＶボーラス注射として投与されたＤＣ００９製剤（０．００７ｍｇ／ｋｇ）は、前臨床ラット塞栓性脳卒中モデルにおいて有効であった。

【0083】

〔実施例５、ラット塞栓性脳卒中モデルにおけるＤＣ００９の単回投与の前臨床有効性（脳卒中発症後の６時間後の治療可能時間域）〕
本試験の目的は、実施例１に記載の雄スプラーグドーリー（ＳＤ）ラットの塞栓性脳卒中モデルにおいて、脳卒中発症後の６時間後に０．００７ｍｇ／ｋｇでＤＣ００９を単回投与した場合の有効性を評価することであった。

【0084】

頸動脈に血餅を導入することによって、雄ＳＤラットの中大脳動脈の塞栓性閉塞を誘導した。同種全血によって作られた血餅を、ラットの外頸動脈の近位端にゆっくりと注射し、次に内頸動脈を通して注入した。ラットを媒体（生理食塩水）で、ｒｔＰＡ（３ｍｇ／ｋｇ、静脈内ボーラス注射）で、又は脳卒中発症後の６時間後にＤＣ００９（０．００７ｍｇ／ｋｇ、静脈内ボーラス注射）で処理した（処理群ごとにｎ＝１１～１２）。薬物投与後の２４時間後に、ラットの神経学的欠損スケールを６点として評価した。神経学的評価後、動物を殺し、冠状脳切片（厚さ２ｍｍ）をＴＴＣで染色した。コンピュータ支援画像解析技術を用いて梗塞体積を定量化した。

【0085】

脳卒中発症後の２４時間後のラットのＮＤＳ及び梗塞体積を以下の表２にまとめた。

【0086】

【表2】

【0087】

ＤＣ００９処理群（０．００７ｍｇ／ｋｇ）は、生理食塩水処理群と比較して、神経学的挙動スコアの改善及び脳梗塞体積の減少を示した。したがって、脳卒中発症後の６時間後に単回静脈内ボーラス注射（０．００７ｍｇ／ｋｇ）として投与されたＤＣ００９製剤は、前臨床ラット塞栓性脳卒中モデルにおいて有効であった。

【0088】

〔実施例６、ラット塞栓性脳卒中モデルにおけるＤＣ００９の複数回投与の前臨床有効性（脳卒中発症後の２４時間後の治療可能時間域、ＱＤ６）〕
本試験の目的は、実施例１に記載のラットの塞栓性脳卒中モデルにおいて、０．０００７ｍｇ／ｋｇ、０．００７ｍｇ／ｋｇ、及び０．０７ｍｇ／ｋｇの用量でＤＣ００９を６日間連続反復投与した場合の有効性を評価することであった。

【0089】

頸動脈に血餅を導入することによって、雄スプラーグドーリーラットの中大脳動脈の塞栓性閉塞を誘導した。ラットを、媒体（生理食塩水）で、又は脳卒中発症後の２４時間後に、さらなる５日間に１日１回、ＤＣ００９（０．０００７ｍｇ／ｋｇ、０．００７ｍｇ／ｋｇ及び０．０７ｍｇ／ｋｇ、静脈内ボーラス注射）で処理した（処理群ごとにｎ＝９～１０）。薬物投与後の２４時間後及び薬物投与前に１日１回、ラットの神経学的欠損スケールを評価した。最後の神経学的評価後、動物を殺し、冠状脳切片（厚さ２ｍｍ）をＴＴＣで染色した。コンピュータ支援画像解析技術を用いて梗塞体積を定量化した。
脳卒中発症後の７日間後のラットの梗塞体積を以下の表３にまとめた。

【0090】

【表3】

【0091】

神経学的転帰についても評価されたが、データの解釈は、処理群間のベースラインスコアの違いによって混乱している（データは示されていない）。結論として、ＤＣ００９（０．００７ｍｇ／ｋｇ及び０．０７ｍｇ／ｋｇ）の６日間連続反復ＩＶボーラス投与は、前臨床ラット塞栓性脳卒中モデルにおいて有効であった。

【0092】

実施例４～６のデータは、実施例１のラット塞栓性脳卒中モデルにおけるＤＣ００９治療の有効用量が０．００７～０．０７ｍｇ／ｋｇであったことを示している。治療効果は、脳卒中発症後の２４時間後にも実証されており、この効力には臨床応用の見込みがあることが示されている。

【0093】

〔実施例７、ラットＭＣＡＯモデルにおけるＤＣ００９の単回投与の前臨床有効性（脳卒中発症後の３時間後の治療可能時間域、ＳＤ）〕
本試験の目的は、実施例２に記載の塞栓性中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）ラットにおいて、０．０５ｍｇ／ｋｇ及び０．００５ｍｇ／ｋｇでＤＣ００９を単回投与した場合の治療効果を評価することであった。

【0094】

頸動脈に血餅を導入することによって、雄ウィスターラットの中大脳動脈の塞栓性閉塞を誘導した。同種全血によって作られた血餅を内頸動脈にゆっくりと注射した。ラットを、媒体（生理食塩水）で、ｒｔＰＡ（１０ｍｇ／ｋｇ、まず１０％の薬物を静脈内ボーラス注射し、その後、残りの薬物を３０分間注入する）で、又は脳卒中発症後の３時間後にＤＣ００９（０．０５ｍｇ／ｋｇ又は０．００５ｍｇ／ｋｇ、１５分間ＩＶ注入）で処理した（処理群ごとにｎ＝８～９）。処理前、ＭＣＡＯ手術後の３時間後、及びＭＣＡＯ手術後の２４時間後に、神経学的欠損を評価した。神経学的重症度スコア（ＮＳＳ）は、０～１８のスケールで等級付けされ、０が正常を表し、１８が重度の障害を表す。手術後の３時間後に、ＮＳＳが７以上の動物をいずれかの処理群に入れた。次に、手術後の２４時間後に、処理された動物の神経機能を評価した。神経学的評価後、動物を安楽死させ、脳を２％２，３，５－トリフェニルテトラゾリウムクロリド（ＴＴＣ）溶液で染色して、梗塞サイズを定量化した。Ｉｍａｇｅ Ｊソフトウェアを用いて、虚血の割合と脳の膨潤率を計算した。

【0095】

【表4】

【0096】

ＭＣＡＯモデルにおいて、脳卒中発症後の２４時間後に、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量レベルのＤＣ００９処理後のＮＳＳは、生理食塩水処理後のＮＳＳよりも有意に低かった。０．００５ｍｇ／ｋｇ及び０．０５ｍｇ／ｋｇの用量レベルのＤＣ００９も、ｒｔＰＡ及び生理食塩水処理と比較して、梗塞サイズを有意に減少させた（表４）。

【0097】

〔実施例８、ラットＭＣＡＯモデルにおけるＤＣ００９の単回投与の前臨床有効性（脳卒中発症後の１時間後の治療可能時間域、ＳＤ）〕
本試験の目的は、実施例２に記載の塞栓性中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）ラットにおいて、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ及び０．４ｍｇ／ｋｇでＤＣ００９を単回投与した場合の治療効果を評価することであった。

【0098】

頸動脈に血餅を導入することによって、雄ウィスターラットの中大脳動脈の塞栓性閉塞を誘導した。同種全血によって作られた血餅を内頸動脈にゆっくりと注射した。ラットを、媒体（生理食塩水）で、ｒｔＰＡ（１０ｍｇ／ｋｇ、まず１０％の薬物を静脈内ボーラス注射し、その後、残りの薬物を３０分間注入する）で、又は脳卒中発症後の１時間後にＤＣ００９（０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ及び０．４ｍｇ／ｋｇ、１５分間ＩＶ注入）で処理した（処理群ごとにｎ＝５～８）。血流を３時間測定した。

【0099】

図３に示すように、データは、生理食塩水処理群と比較して、ｒｔＰＡ及び全てのＤＣ００９処理群において血流が増加したことを示している（ｐ＜０．０００１対生理食塩水）。０．０５ｍｇ／ｋｇの低用量のＤＣ００９は、ラットの閉塞した血流の回復に優れた有効性を実証した。

【0100】

〔実施例９、ラットＭＣＡＯモデルにおけるＤＣ００９の復数回投与の前臨床有効性（脳卒中発症後の３時間後の治療可能時間域、１日２回）〕
本試験の目的は、実施例２に記載の塞栓性ＭＡＣＯラットにおいて、ＤＣ００９を１日２回で、１日間投与した場合の治療効果を評価することであった。

【0101】

合計２２匹のラットを生理食塩水で処理し（ｎ＝８）、ＭＣＡＯ手術後の３時間後に１０ｍｇ／ｋｇでｒｔＰＡで処理し（ｎ＝８）、ＭＣＡＯ手術後の３時間及び６時間後に０．０２５ｍｇ／ｋｇでＤＣ００９で処理した（ｎ＝６）。脳卒中発症後の２４時間後に、全ての動物を犠牲にし、脳スライサーマトリックスを用いて脳組織を８枚に切断した。切片を更に２％ ２，３，５－トリフェニルテトラゾリウムクロリド（ＴＴＣ）溶液で染色し、Ｉｍａｇｅ Ｊソフトウェアを用いて虚血領域の割合と脳の膨潤率を計算した。結果は、ＤＣ００９を１日２回投与すると、生理食塩水及びｒｔＰＡ処理群と比較して、梗塞サイズが有意に小さくなったことを示している（図４）。

【0102】

〔実施例１０、ラット光化学誘導血栓性脳卒中モデルにおけるＤＣ００９の単回投与の前臨床有効性（脳卒中発症後の１時間及び３時間後の治療可能時間域）〕
本試験の目的は、実施例３に記載のラット光化学誘導血栓性（ＰＩＴ）脳卒中モデルにおいて、０．００７ｍｇ／ｋｇでＤＣ００９を１日１回投与した場合の有効性を評価することであった。

【0103】

ラットを、媒体（生理食塩水）で、ｒｔＰＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）で、脳卒中発症１時間後にＤＣ００９（０．００７ｍｇ／ｋｇ、１５分間ＩＶ注入）で、又は脳卒中発症３時間後にＤＣ００９（０．００７ｍｇ／ｋｇ、１５分間ＩＶ注入）で処理した（処理群ごとにｎ＝１０）。薬物投与後の２４時間後に、ラットの神経学的欠損スケール（ＮＤＳ）を評価した。

【0104】

ＰＩＴ手術後の２４時間後に、ラットを安楽死させ、脳をＴＴＣ染色のために処理した。梗塞体積を以下の表５にまとめた。

【0105】

【表5】

【0106】

媒体処理と比較して、ＤＣ００９又はｒｔＰＡのいずれかは、ＰＩＴ手術後の異なる投与時点で梗塞を減少させた。ｒｔＰＡ処理（ＰＩＴ手術後の１時間後）を早く行うと、媒体処理と比較して、総脳梗塞体積を減少させた。ＰＩＴ手術後の１時間後のＤＣ００９処理も、媒体処理と比較して、全脳梗塞を有意に減少させた。

【0107】

〔実施例１１、試験１０１：健康な被験者におけるＤＣ００９製剤の安全性、忍容性、及び薬物動態〕
第Ｉ相（Ｐｈａｓｅ １）二重盲検ランダム化プラセボ対照試験の第１の目的は、健康な被験者における、１５分間ＩＶ注入によって投与されるＤＣ００９製剤の単回投与用量漸増試験の安全性、忍容性、及び薬物動態を判定することであった。第２の目的は、単回投与用量漸増試験の薬力学を特徴付け、単回投与用量漸増試験の薬物動態と薬力学の関係を調査し、ＤＣ００９製剤のＲＰ２Ｄを決定することであった。

【0108】

被験者集団は、１８～６５歳の健康な成人男性及び女性であった。１６人の健康な被験者が試験を完了した。１５分間ＩＶ注入によってＤＣ００９製剤又はプラセボを全ての被験者に単回投与した。

【0109】

０．０５ｍｇ／ｋｇでＤＣ００９製剤又はプラセボをコーホート１（被験者８人）に投与し、０．０２５ｍｇ／ｋｇでＤＣ００９製剤又はプラセボをコーホート０（被験者８人）に投与した。投与量及び設計を表６にまとめた。

【0110】

【表6】

【0111】

〔一次エンドポイント〕
・有害事象（ＡＥ）の性質及び重症度、並びにＡＥ被験者の数
・バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）の結果、検査所見の異常、プラスミン－抗プラスミン複合体、オイグロブリン溶解時間、血小板凝集、及び身体検査所見におけるベースラインからの変化
・薬物動態パラメータ：最高血漿中濃度（Ｃ_ｍａｘ）、最高（ピーク）血漿中濃度到達時間（Ｔ_ｍａｘ）、０時間から最後の定量可能な濃度の時間までの血漿中濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ_０－ｔ）、０時間から最後の定量可能な濃度の時間までの血漿中濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ_０－ｔ）、半減期（Ｔ_１／２）、血漿からの薬物の全身クリアランス（ＣＬ）、及び分布容積

【0112】

〔二次エンドポイント〕
・投与後最大４８時間までの、血圧、トロンビン時間（ＴＴ）、プロトロンビン時間（ＰＴ）、オイグロブリン溶解時間、及び活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）に対するＤＣ００９製剤の薬力学的影響
・ＤＣ００９血漿濃度と選択されたＰＤ及び安全性パラメータとの関係
・ＲＰ２Ｄ（第ＩＩ相臨床試験の推奨用量）

【0113】

〔結果〕
ＤＣ００９製剤は、安全であり、両方の投与コーホートで忍容性が高かった。どちらのコーホートでも重篤な有害事象（ＳＡＥ）が報告されなかった。コーホート０では、ＡＥが報告されなかった。コーホート１では、０．０５ｍｇ／ｋｇ用量群の２人の被験者（頭痛、接触皮膚炎）と、プラセボを受けた１人の被験者（注射部位血腫）でＴＥＡＥが報告された。

【0114】

本試験で収集された安全性データには、バイタルサイン（心拍数、血圧、呼吸数、体温）、ＥＣＧ、臨床化学、尿検査、血液学、凝固パラメータ及び便潜血検査も含まれた。測定された安全性パラメータのいずれにも臨床的に有意な所見がなかった。

【0115】

最高血漿中濃度（Ｃ_ｍａｘ）、Ｃ_ｍａｘ到達時間（Ｔ_ｍａｘ）、０時間から無限までの血漿中濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ_０－∞）、０時間から最後の定量可能な濃度の時間までの血漿中濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ_０－ｔ）、半減期（Ｔ_１／２）、血漿からの薬物の全身クリアランス（ＣＬ）、及び定常状態の分布容積によって、ＤＣ００９製剤の薬物動態パラメータを評価した。血漿中のＤＣ００９を定量化するために、投与前、５、１０、１５（注入終了）、２０、２５、３０、及び４５分、注入後の１、２、４、６、１２、１８、２４時間という時点で単一の血液サンプルを収集した。

【0116】

表８のデータは、ＤＣ００９が全身循環系から急速に除去され、注入開始後の血漿サンプルで最初の３０分以内にのみ測定可能であったことを示している。Ｔ_１／２の平均値は、０．０５４時間で、０．０５～０．０７時間の範囲であった。Ｔ_ｍａｘは、６分～１８分の間に発生した。０．０５ｍｇ／ｋｇ用量群は、０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量群と比較して、分布容積及びクリアランスがより高かった。データは、ＤＣ００９製剤からのＤＣ００９曝露量がほぼ用量比例したことを示唆している。０．０５ｍｇ／ｋｇ用量群のＡＵＣ及びＣ_ｍａｘは、０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量群のＡＵＣ及びＣ_ｍａｘの２倍よりもやや少なかった。０．０５ｍｇ／ｋｇ用量群に対する０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量群の用量正規化幾何平均比は、ＡＵＣ_{０－ｉｎｆ}が１．４０で、Ｃ_ｍａｘが１．４６であった。

【0117】

データは、０．０５ｍｇ／ｋｇ群及び０．０２５ｍｇ／ｋｇ群の平均Ｃ_ｍａｘが両方ともＤＣ００９の安全な血漿曝露限界値１１０ｎｇ／ｍＬよりも低かったことを示している。被験者００１－００８（Ｃ_ｍａｘ：１５２ｎｇ／ｍＬ）及び被験者００１－０４２（Ｃ_ｍａｘ：１２０ｎｇ／ｍＬ）からの結果は、ＤＣ００９が約１５０ｎｇ／ｍＬのＣ_ｍａｘでヒトにおいて忍容可能であったことを示している。

【0118】

【表7】

【0119】

〔実施例１２、試験１０３：健康な被験者におけるＤＣ００９製剤の安全性、忍容性、及び薬物動態〕
第Ｉ相二重盲検ランダム化プラセボ対照試験の目的は、健康な成人被験者における、ＤＣ００９製剤の複数回投与の安全性、忍容性、及び薬物動態を評価することであった。

【0120】

【表8】

【0121】

〔一次エンドポイント〕
・ＡＥの性質及び重症度、並びにＡＥ被験者の数
・バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）の結果、検査所見の異常、及び身体検査所見におけるベースラインからの変化
・薬物動態パラメータ：最高血漿中濃度（Ｃ_ｍａｘ）、最高（ピーク）血漿中濃度到達時間（Ｔ_ｍａｘ）、０時間から無限までの血漿中濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ_０－∞）、０時間から最後の定量可能な濃度の時間までの血漿中濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ_０－ｔ）、半減期（Ｔ_１／２）、血漿からの薬物の全身クリアランス（ＣＬ）、及び分布容積

【0122】

〔二次エンドポイント〕
・投与後最大２４時間までの、血圧、プロトロンビン時間（ＰＴ）、及び活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）に対するＤＣ００９製剤の薬力学的影響

【0123】

〔結果〕
最高血漿中濃度（Ｃ_ｍａｘ）、Ｃ_ｍａｘ到達時間（Ｔ_ｍａｘ）、０時間から無限までの血漿中濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ_０－∞）、０時間から最後の定量可能な濃度の時間までの血漿中濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ_０－ｔ）、半減期（Ｔ_１／２）、血漿からの薬物の全身クリアランス（ＣＬ）、及び定常状態の分布容積によって、ＤＣ００９製剤の薬物動態パラメータを評価した。０．０２５ｍｇ／ｋｇ群の場合、血漿中のＤＣ００９を定量化するために、投与前、５、１０、１５（注入終了）、２０、２５、３０、４５、及び６０分という時点で１回目の投与（１日目）と５回目の投与（３日目）後の単一の血液サンプルを収集した。０．０５ｍｇ／ｋｇ群の場合、血漿中のＤＣ００９を定量化するために、投与前、１０、２０、３０（注入終了）、３５、４０、４５、５０、６０、及び７０分という時点で１回目の投与（１日目）と５回目の投与（３日目）後の単一の血液サンプルを収集した。

【0124】

【表9】

【0125】

ＤＣ００９製剤は、ヒト被験者に１日２回で、３日間投与された場合、０．０２５ｍｇ／ｋｇ群（１５分間注入）及び０．０５ｍｇ／ｋｇ群（３０分間注入）で安全であり、忍容性も高かった。報告されたＡＥのレベルは全て、グレードＩとして定義され、無関係であるか又は関連する可能性が低いと考えられる。安全上のリスクは、十分に管理されている。

【0126】

０．０２５ｍｇ／ｋｇ（１５分間注入）及び０．０５ｍｇ／ｋｇ（３０分間注入）の単回投与及び複数回投与後のＴ_ｍａｘ及びＣ_ｍａｘは、同様であった。０．０５ｍｇ／ｋｇ群のＡＵＣ_０－ｔ及びＡＵＣ_０－∞は、０．０２５ｍｇ／ｋｇ群のＡＵＣ_０－ｔ及びＡＵＣ_０－∞よりも高かった。両群のＣ_ｍａｘは全て、暴露限界値１１０ｎｇ／ｍＬ未満であった。

【0127】

０．０２５ｍｇ／ｋｇ及び０．０５ｍｇ／ｋｇで投与した後に、血圧（ＳＢＰ／ＤＢＰ）及び凝固因子（ＰＴ／ＡＰＴＴ）の有意な影響が観察されなかった。

【0128】

試験の健康な被験者の安全性結果から分かるように、ＤＣ００９製剤の複数回の３日間静脈内注入は、健康な被験者において安全で忍容性が高く、Ｃ_ｍａｘは、暴露限界値をはるかに下回った。

【0129】

〔実施例１３、試験１０５：健康な被験者におけるＤＣ００９製剤の安全性、忍容性、及び薬物動態〕
第Ｉ相二重盲検ランダム化プラセボ対照試験の目的は、健康な成人被験者における、ＤＣ００９製剤の複数回投与の安全性、忍容性、薬物動態、及び薬物間相互作用を評価することであった。

【0130】

〔パートＡ〕
健康な被験者において、ＤＣ００９製剤を１日間以内に３時間の投与間隔（Ｑ３ｈ）でＩＶ注入として投与した場合の、３日間、１日３回（ＴＩＤ）の使用の安全性、忍容性、及びＰＫを決定する。パートＡは、二重盲検プラセボ対照試験であり、本試験は、健康な被験者における、ＤＣ００９製剤の複数回投与の安全性とＰＫプロファイルを検査する。

【0131】

【表10】

【0132】

・エンドポイント
－ ＡＥの性質及び重症度、並びにＡＥ被験者の数
－ 身体検査、バイタルサイン、ＥＣＧ評価、オキシメトリ、凝固、及び臨床検査におけるベースラインからの変化
－ 血漿及び尿のＰＫパラメータ
－ 収縮期血圧及び拡張期血圧（ＳＢＰ／ＤＢＰ）、プロトロンビン時間（ＰＴ）、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）、及びトロンビン時間（ＴＴ）に対する影響

【0133】

〔パートＢ〕
アスピリン、クロピドグレル、アピキサバン、又はダビガトランと同時に投与された場合の、ＤＣ００９の安全性とＰＫを評価する非盲検試験

【0134】

【表11】

【0135】

・エンドポイント
－ ＡＥの性質及び重症度、並びにＡＥ被験者の数
－ 身体検査、バイタルサイン、ＥＣＧ評価、オキシメトリ、凝固、及び臨床検査におけるベースラインからの変化
－ ＤＣ００９の血漿ＰＫパラメータ
－ アスピリン、クロピドグレル、アピキサバン、及びダビガトランの血漿ＰＫパラメータ

【0136】

〔結果〕
ＤＣ００９製剤は、単独で投与された場合でも、アスピリン、クロピドグレル、アピキサバン、又はダビガトランと組み合わせて投与された場合でも、一般的に安全で忍容性も高かった。

【0137】

報告されたＴＥＡＥは、重症度が軽度であり、重篤なものがなく、試験からの被験者の除外につながるものがなかった。最も多く報告されたＴＥＡＥは、試験のパートＡでは月経不順、腹痛、口唇ヘルペス、及び頭痛、パートＢでは腹痛及び頭痛であった。異常な検査結果に関連するＴＥＡＥがなかった。試験のどのパートにおいても、検査パラメータ（血液学、臨床化学、及び尿検査）、バイタルサイン、ＥＣＧ、及びパルスオキシメトリの結果について、臨床的に有意な変化が報告されなかった。

【0138】

ＤＣ００９製剤は、アピキサバン及びダビガトランと同時に投与された場合に、凝固に対する効果が限定的である。ＤＣ００９製剤は、アスピリン及びクロピドグレルと同時に投与された場合に、ＣＯＬ／ＡＤＰ及びＣＯＬ／ＥＰＩに対する効果が限定的である。

【0139】

全ての集団（Ｎ＝１２）の場合、ＤＣ００９製剤の平均Ｃ_ｍａｘは、１日目に４０．１４ｎｇ／ｍＬで、３日目に４８．８６ｎｇ／ｍＬであった。ＤＣ００９製剤のピーク血漿濃度は、投与１０～１５分間後に達し、ＤＣ００９製剤は、投与１５分間後に排出され始めた。中国人の集団（Ｎ＝６）の場合、ＤＣ００９製剤の平均Ｃ_ｍａｘは、１日目に３７．３０ｎｇ／ｍＬで、３日目に４０．００ｎｇ／ｍＬであった。非アジア人の集団（Ｎ＝６）の場合、ＤＣ００９製剤の平均Ｃ_ｍａｘは、１日目に４２．９８ｎｇ／ｍＬで、３日目に５７．７２ｎｇ／ｍＬであった。ＤＣ００９製剤のＡＵＣ_{０－ｌａｓｔ}、Ｃ_{ｔｒｏｕｇｈ}、及びＴ_ｍａｘの平均値は、中国人及び非アジア人の集団全体で同等であった。

【0140】

【表12】

【0141】

ＤＣ００９の投与が複数回投与レジメンで蓄積されたかどうかを調べるために、ＤＣ００９の複数日間ＴＩＤレジメンにおける最初の投与と最後の投与のＰＫパラメータを比較することによって、潜在的な投与蓄積効果を評価した。比較は、ＤＣ００９が単独で投与された場合、又はアスピリン、クロピドグレル、アピキサバン、又はダビガトランと同時に投与された場合に行われた。比較のためのＰＫパラメータには、ＡＵＣ_０－ｔ及びＣ_ｍａｘが含まれた。結果は、ＤＣ００９製剤の３日間ＴＩＤ投与により、平均Ｃ_ｍａｘが４８．８６ｎｇ／ｍＬになり、最大Ｃ_ｍａｘが９５ｎｇ／ｍＬになり、これが被験者における血漿蓄積の安全なレベルであることを示している。

【0142】

〔実施例１４、試験２０１：急性虚血性脳卒中患者に対する第ＩＩ相単回投与試験〕
第ＩＩ相二重盲検単回投与ランダム化プラセボ対照試験の目的は、急性虚血性脳卒中（ＡＩＳ）患者におけるＤＣ００９製剤の安全性、忍容性、及び潜在的な有効性を評価することであった。第ＩＩ相試験の安全性及び潜在的な有効性転帰は、急性虚血性脳卒中患者に対する今後の試験の設計の指針になる。適格な患者を２：１でランダムに割り付け、ＤＣ００９製剤又はプラセボを１５分間ＩＶ注入により投与して、合計約２４人の評価可能な患者が得られる。適格な患者に対して、脳卒中症状の発症後の２４時間以内に、０．０２５ｍｇ／ｋｇでＤＣ００９製剤又はプラセボを単回投与した。

【0143】

【表13】

【0144】

主な選択規準は、被験者が、ａ）選択時に年齢が１８～９０歳であること、ｂ）ＮＩＨＳＳが４～３０であること、ｃ）脳卒中症状の発症後の２４時間以内にＡＩＳの臨床診断を受けることである。

【0145】

組織プラスミノーゲン活性化因子（アルテプラーゼ）は、ＵＳで承認されている唯一の脳卒中治療薬であり、ラベルによると、脳卒中症状の発症後の３時間以内に投与される必要がある。他の国で承認されている投与可能時間域は異なる。ＵＳでは、急性虚血性脳卒中に対して、脳卒中症状の発症後の３時間を超えて投与する承認された薬物療法がないため、プラセボ対照試験は、倫理的に許容され、薬物の効果を客観的に評価するために必要である。初期の有効性は、梗塞体積、再発性脳卒中の発生、ＮＩＨＳＳによって測定される神経学的転帰、及び修正ランキンスケール（ｍＲＳ）によって測定される機能的自立度を評価することによって評価される。

【0146】

・一次エンドポイント
－ 投与後の３６時間以内の症候性頭蓋内出血（ｓＩＣＨ）の発生、ＮＩＨＳＳの４点以上の増加として定義され、コンピュータ断層撮影又は核磁気共鳴画像法によって確認された臨床的悪化

【0147】

・二次エンドポイント
－ 投与後の７日間以内に症候性頭蓋内出血（ｓＩＣＨ）及び無症候性頭蓋内出血（ａＩＣＨ）の発生
－ 投与後の２４時間、７日間、３０日間、及び９０日間以内の脳内又は他の重大な出血合併症による死亡の発生
－ 投与後の９０日間以内のＡＥの数及び重症度
－ 投与後の９０日間以内の再発性脳卒中の発生
－ ｍＲＳなどの機能的転帰
－ ３０日間後のＮＩＨＳＳなどの神経学的転帰
－ ２４時間後と７日間後のＣＴ又はＭＲＩ検査における梗塞体積の変化
－ ＤＣ００９の血漿ＰＫパラメータ

【0148】

〔結果〕
〔ベースライン特性〕

【0149】

【表14】

【0150】

〔安全性結果〕
７日間以内に試験中にｓＩＣＨを患っていると報告された被験者がいなかった。９０日間以内に脳内又はその他の重大な出血合併症により死亡した被験者がいなかった。３０日間以内に何らかの理由で死亡した被験者がいなかった。

【0151】

３０日目に、プラセボ群では１人の被験者（１４．３％）でＮＩＨＳＳの４点以上の増加が観察されたが、ＤＣ００９製剤群の被験者で観察されなかった。

【0152】

重篤なＴＥＡＥは、ＤＣ００９製剤群では４人の被験者（２５％）で、プラセボ群では２人の被験者（２５％）で報告され、いずれも試験薬とは無関係であるか又は関連する可能性が低かったと考えられる。これらの６人の被験者のうち、２人の被験者、群ごとに１人は、重篤なＴＥＡＥにより９０日目までに死亡した。

【0153】

プラセボ群の１人の被験者を除き、安全性集団の被験者全員で少なくとも１つのＴＥＡＥが報告された。試験中に報告された最も一般的なＴＥＡＥには、ＤＣ００９製剤群の１０人の被験者（６２．５％）とプラセボ群の４人の被験者（５０．０％）で報告された便秘と、ＤＣ００９製剤群の５人の被験者（３１．３％）とプラセボ群の２人の被験者（２５％）で報告された高血圧とが含まれた。試験中に報告されたＴＥＡＥのほとんどは、試験薬とは無関係であるか又は関連する可能性が低かった。ＴＥＡＥが明らかに試験薬に関連していると報告された被験者がいなかった。試験中に報告されたＴＥＡＥのほとんどは、軽度又は中程度であった。ＴＥＡＥを理由に試験薬を中止した被験者がいなかった。

【0154】

臨床検査パラメータ、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）、及び神経学的検査では、臨床的に有意な傾向が観察されなかった。

【0155】

〔有効性結果〕
ＤＣ００９製剤群の被験者で３０日目にＮＩＨＳＳの４点以上の減少が報告された割合（４６．７％）は、プラセボ群の割合（１４．３％）よりも高かった。なお、ＤＣ００９製剤群（１０．１［±７．４５］）のベースラインでのＮＩＨＳＳは、プラセボ群のベースラインでのＮＩＨＳＳ（７．３［±４．７７］）よりも高かく、これは、ベースラインでＮＩＨＳＳのバランスが取れておらず、ＤＣ００９製剤群の被験者がより悪いＮＩＨＳＳで開始されたことを示唆している。

【0156】

【表15】

【0157】

図６は、ベースラインＮＩＨＳＳ≧６の部分集団のベースラインからのＮＩＨＳＳスコアの変化を実証した。ＤＣ００９製剤群の平均スコアの変化は、－４．３±３点であり、神経学的転帰の改善を示したが、プラセボ群の平均スコアの変化は、３．５±２．１点であり、神経学的転帰の抑制を示した。この結果は、ＤＣ００９製剤の有効性が、より重篤な神経学的欠陥を持つ患者部分集団において観察される可能性があることを示した。

【0158】

９０日目に、ＤＣ００９製剤群の３人の被験者（２１．４％）とプラセボ群の１人の被験者（１４．３％）で０～１のｍＲＳが報告された。ＤＣ００９製剤群の７人の被験者（５０．０％）とプラセボ群の３人の被験者（５７．２％）で０～２のｍＲＳが報告された。０～２のｍＲＳが報告された被験者の割合は、いずれの訪問においても両処理群で同等であった。脳卒中発症後のベースラインでは、ＤＣ００９製剤群の１３人の被験者（８１．３％）、プラセボ群の４人の被験者（５０．０％）で４～５のｍＲＳが報告された。ｍＲＳの結果を表１６にまとめた。

【0159】

【表16】

【0160】

試験２０１の結果は、ＤＣ００９製剤が安全であり、ＡＩＳ被験者において忍容性が高かったことを示している。０．０２５ｍｇ／ｋｇの用量のＤＣ００９製剤は、ＡＩＳ患者の治療において、プラセボ群と比較して、有効性を示している。

【0161】

〔実施例１５、試験２０２：急性虚血性脳卒中患者に対する第ＩＩ相複数回投与試験〕
第ＩＩ相二重盲検複数回投与ランダム化プラセボ対照試験の目的は、ＡＩＳ被験者におけるＤＣ００９製剤の安全性、忍容性、及び潜在的な有効性を評価することであった。

【0162】

【表17】

【0163】

主な選択規準は、被験者が、ａ）選択時に年齢が１８～８０歳であること、ｂ）ＮＩＨＳＳが４～２５であること、ｃ）脳卒中発症後の２４時間以内にＡＩＳの臨床診断を受けることである。

【0164】

・安全性エンドポイント
－ 投与後のｓＩＣＨ及びａＩＣＨの発生
－ 投与後の脳内又は他の重大な出血合併症による死亡の発生
－ 投与後の死亡の発生
－ 投与後の９０日間以内のＡＥの数及び重症度

【0165】

・一次エンドポイント
－ ｍＲＳが０～２の患者の割合
－ 投与後にＮＩＨＳＳが４点以上低下し、ＮＩＨＳＳ≦１になった患者の割合

【0166】

・二次エンドポイント
－ 投与後の特定期間における修正ランキンスケール（ｍＲＳ）の変化などの機能的転帰
－ 投与後の特定期間におけるベースラインと比較したＮＩＨＳＳの変化などの神経学的転帰
－ 投与後の特定期間におけるバーセルインデックスによって評価される日常生活活動及び生活の質

【0167】

〔実施例１６、試験２０３：急性虚血性脳卒中患者に対する第ＩＩ相単回及び複数回投与試験〕
本試験は、血管内血栓除去術（ＥＶＴ）を受けたＡＩＳ被験者におけるＤＣ００９製剤の安全性及び有効性を評価する、第ＩＩ相二重パート二重盲検ランダム化プラセボ対照試験である。

【0168】

主な選択規準は、被験者が、ａ）選択時に年齢が１８～９０歳であること、ｂ）ＮＩＨＳＳが≧６であること、ｃ）脳卒中症状の発症後の２４時間以内にＥＶＴによる治療を受けることができること、ｄ）ＥＶＴ前かつ脳卒中症状の発症後の２４時間以内に試験薬の投与を受けること、ｅ）核磁気共鳴血管造影法（ＭＲＡ）／コンピュータ断層撮影血管造影法（ＣＴＡ）に基づいて、Ｍ２の分岐の前にあるＭ１中大脳動脈（ＭＣＡ）に症候性頭蓋内閉塞があることが確認されたこと、ｆ）ＭＲＩ（灌流を含む）又はＣＴＰで、虚血性コア体積≦７０ｍＬ、ミスマッチ比＞１．２というターゲットミスマッチプロファイルがあることである。

【0169】

【表18】

【0170】

試験のパートＡの目的は、血管内血栓除去術（ＥＶＴ）を受けている急性虚血性脳卒中（ＡＩＳ）被験者に静脈内投与されたＤＣ００９製剤の単回投与の安全性及び有効性を判定することであった。

【0171】

・一次エンドポイント
－ 単回投与後の２４時間以内のｓＩＣＨの発生、ＮＩＨＳＳの４点以上の増加として定義され、核磁気共鳴（ＭＲ）／コンピュータ断層撮影（ＣＴ）画像法によって確認された臨床的悪化

【0172】

・二次エンドポイント
（１）安全性転帰
－ ｓＩＣＨ、ａＩＣＨの発生と死亡
－ ＡＥの数及び重症度、並びにＡＥ被験者の数
（２）機能的転帰
－ 投与後にｍＲＳ≦２として定義された、独立した機能的転帰を示した被験者の割合
－ 投与後にｍＲＳ≦１として定義された、優れた機能的転帰を示した被験者の割合
－ ｍＲＳの各グレードでの被験者の割合のベースラインからの変化
－ 再発性脳卒中の発生
（３）神経学的転帰
－ ベースラインからのＮＩＨＳＳの減少／変化として定義された、神経学的転帰が改善した被験者の割合
－ 投与後にＮＩＨＳＳ≦２になった被験者の割合
（４）イメージングの転帰
－ ＭＲＩ／ＣＴＰによるベースラインからの梗塞体積の変化
－ 脳灌流画像ＭＲＩ／ＣＰＴによるベースラインからの低灌流病変の変化
－ 脳灌流画像ＭＲＩ／ＣＴＰによってベースラインから低灌流病変が９０％減少した被験者の割合
－ ＥＶＴ処置の前後の再疎通率
－ ＥＶＴ処置後の脳梗塞の修正された治療（ｍＴＩＣＩ）≧２ｂとして定義された、完全な再疎通／実質的な血管造影再灌流を示した被験者の割合

【0173】

【表19】

【0174】

試験のパートＢの目的は、ＥＶＴを受けているＡＩＳ被験者におけるＤＣ００９製剤の複数回投与の有効性及び安全性を判定することであった。

【0175】

・一次エンドポイント
－ ベースラインからのＮＩＨＳＳの４点以上の減少として定義された、神経学的転帰が改善した被験者の割合

【0176】

・二次エンドポイント
（１）機能的転帰
１回目の投与後にｍＲＳ≦２として定義された、独立した機能的転帰を示した被験者の割合
－ 投与後にｍＲＳ≦１として定義された、優れた機能的転帰を示した被験者の割合
－ ｍＲＳの各グレードでの被験者の割合のベースラインからの変化
（２）神経学的転帰
－ ベースラインからのＮＩＨＳＳの減少／変化として定義された、神経学的転帰が改善した被験者の割合
－ １回目の投与後にＮＩＨＳＳ≦２になった被験者の割合
（３）再発性脳卒中の発生
（４）モントリオール認知評価（ＭｏＣＡ）によるベースラインからの認知評価の変化
（５）イメージングの転帰
－ ＭＲＩ／ＣＴＰによるベースラインからの梗塞体積の変化
－ 脳灌流画像ＭＲＩ／ＣＰＴによるベースラインからの低灌流病変の変化
－ 脳灌流画像ＭＲＩ／ＣＴＰによってベースラインから低灌流病変が９０％減少した被験者の割合
－ ＥＶＴ処置前、ＥＶＴ後、２４時間後、７日間後の再疎通率
－ ＥＶＴ処置後のｍＴＩＣＩ≧２ｂとして定義された、完全な再疎通／実質的な血管造影再灌流を示した被験者の割合
（６）安全性転帰
－ ｓＩＣＨ及びａＩＣＨの発生
－ 死亡の発生
－ ＡＥの数及び重症度、並びにＡＥ被験者の数

【0177】

〔実施例１７、試験２０５：急性虚血性脳卒中患者に対する第ＩＩ相複数回投与試験〕
第ＩＩ相二重盲検ランダム化プラセボ対照試験の目的は、急性虚血性脳卒中（ＡＩＳ）被験者におけるＤＣ００９製剤の複数回投与の安全性及び有効性を評価することであった。

【0178】

【表20】

【0179】

主な選択規準は、被験者が、ａ）選択時に年齢が１８～９０歳であること、ｂ）ＮＩＨＳＳが６～２５であること、ｃ）ＭＲＩ又はＣＴＰで、虚血性コア体積≦７０ｍＬ、ミスマッチ比＞１．２、及びミスマッチ体積≧５ｍＬというターゲットミスマッチプロファイルがあることである。

【0180】

・一次エンドポイント
－ １回目投与後の９０日間以内に、おそらくＤＣ００９製剤に関連しているか又は確実に関連していると判断された、治療中に発現した有害事象（ＴＥＡＥ）が発生した被験者の割合

【0181】

・二次エンドポイント
（１）機能的転帰
－ １回目の投与後にｍＲＳ≦２になった被験者の割合
－ １回目の投与後にｍＲＳ≦１になった被験者の割合
－ １回目の投与後のｍＲＳの各グレードでの被験者の割合のベースラインからの変化
（２）神経学的転帰
－ ベースラインからＮＩＨＳＳ≦４の被験者の割合
－ １回目投与後のベースラインからのＮＩＨＳＳ≧４点又はＮＩＨＳＳの０～１点の減少として定義された、神経学的転帰が改善した被験者の割合
－ ＮＩＨＳＳ≦２及びＮＩＨＳＳ≦１の被験者の割合
－ １回目の投与後のＮＩＨＳＳのベースラインからの変化
－ 再発性脳卒中の発生
－ モントリオール認知評価（ＭｏＣＡ）によるベースラインからの認知評価の変化
（ｃ）イメージングの転帰
－ ＭＲＩ／ＣＴＰによるベースラインからの梗塞体積の変化
－ 脳灌流画像ＭＲＩ／ＣＰＴによるベースラインからの低灌流病変の変化
－ 脳灌流画像ＭＲＩ／ＣＴＰによってベースラインから低灌流病変が９０％減少した被験者の割合
（ｄ）安全性転帰
－ ｓＩＣＨ及びａＩＣＨの発生、ＮＩＨＳＳの４点以上の増加として定義され、核磁気共鳴（ＭＲ）／コンピュータ断層撮影（ＣＴ）画像法によって確認された臨床的悪化
－ １回目の投与後、何らかの理由による死亡の発生
－ ＡＥの数及び重症度、並びにＡＥ被験者の数

【0182】

〔実施例１８、スプラーグドーリーラットにおける単回静脈内投与後のＤＣ００９の薬物動態試験〕
ＤＣ００９の単回ＩＶボーラス投与後に、ＤＣ００９の血漿薬物動態をＳＤラットで試験した。雄ＳＤラットに、０．００１、０．０１、０．１、１及び１０ｍｇ／ｋｇで１ｍＬ／ｋｇの用量体積でＤＣ００９を静脈内ボーラス注射により投与した（処理群ごとにｎ＝３）。

【0183】

【表21】

【0184】

【表22】

【0185】

０．１～１０ｍｇ／ｋｇ用量群からの結果は、ＤＣ００９の用量の増加により、ＳＤラットにおけるＣ_ｍａｘ及びＡＵＣ_０－∞がほぼ用量比例して増加したことを示唆している。

【0186】

〔実施例１９、医薬製剤、投与量及び投与（実施例１１～１４の場合）〕
ＤＣ００９化合物の調製は、米国公開第２０１６－００８３４２３号の実施例６３に開示されている。

【0187】

ＤＣ００９製剤（注射用凍結乾燥粉末）は、ブチルゴム栓及びフリップオフアルミニウム圧着シールで密封されたガラスバイアルに入った、防腐剤を含まない滅菌凍結乾燥材料として提供される注射用製品である。各バイアルには、２０ｍｇの遊離塩基に相当するＤＣ００９原薬が凍結乾燥ケーキ又は粉末として含まれている。プラセボは、成分、組成、及び外観においてＤＣ００９製剤と同一に処方されているが、活性化合物を含んでいない。

【0188】

ＤＣ００９製剤の製造において、まずマンニトールを注射用水（ＷＦＩ）に溶解し、続いてＤＣ００９の塩酸塩（Ｃ_３２Ｈ_５１Ｎ_７Ｏ_８・３ＨＣｌ）を添加する。ｐＨ４．５に調節した後、溶液をＷＦＩで目標重量まで希釈し、溶液の浸透圧をチェックし、次に０．２μｍのＰＶＤＦフィルターを用いた無菌濾過によって滅菌する。前製剤には、１０ｍｇ／ｍＬのＤＣ００９及び３．８ｗ／ｗ％マンニトールが含まれている。各バイアルを目標重量±２％以内まで充填した後、バイアルを２０ｍｍのストッパーで半分ほど覆い、凍結乾燥機用のトレイに置く。凍結乾燥サイクルが完了した後、窒素で真空を解除し、完成した製剤に不活性なヘッドスペースを設ける。

【0189】

ＤＣ００９製剤を使用前に０．９％生理食塩水で４ｍｇ／ｍＬに再構成し、更に生理食塩水で適切な濃度に希釈し、ＩＶ注入によって投与する。実施例１１～１４では、適量の製剤を９０ｍＬに希釈し、注入体積を６０ｍＬとした。

【0190】

実施例１５～１７では、ＤＣ００９の医薬製剤、投与量、及び投与は、製剤バイアル当たりのＤＣ００９原薬の量、生理食塩水の希釈係数、及び注入体積が慣例に従って変更され得ることを除いて、上記のものと同様である。

【0191】

本発明、並びにそれを製造及び使用する方法及びプロセスは、本発明に関連する当業者が本発明を製造及び使用できるように完全、明確、簡潔かつ正確な用語で説明される。以上は、本発明の好ましい実施形態について説明しており、特許請求の範囲に記載の本発明の範囲から逸脱することなく変更を加えることができることを理解されたい。本発明の主題を特に指摘し、明確に請求するために、以下の特許請求の範囲によって明細書を特定する。

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【国際調査報告】