特表 2024-510943 上皮間葉転換をモジュレートするための組成物および方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-12

(54)【発明の名称】上皮間葉転換をモジュレートするための組成物および方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/00 20060101AFI20240305BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240305BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20240305BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20240305BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240305BHJP

   A61K 31/352 20060101ALI20240305BHJP

【ＦＩ】

A61K45/00

A61P29/00

A61P9/00

A61P27/02

A61P43/00 111

A61K31/352

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023553496

(86)(22)【出願日】2022-03-02

(85)【翻訳文提出日】2023-10-31

(86)【国際出願番号】 US2022018557

(87)【国際公開番号】W WO2022187387

(87)【国際公開日】2022-09-09

(31)【優先権主張番号】773493

(32)【優先日】2021-03-02

(33)【優先権主張国・地域又は機関】NZ

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】508037005

【氏名又は名称】オークランド ユニサービシズ リミテッド

(71)【出願人】

【識別番号】523333755

【氏名又は名称】インフラメックス セラピューティクス， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】レヴィ， ブライアン

(72)【発明者】

【氏名】グリーン， コリン リチャード

(72)【発明者】

【氏名】ムギショー， オドゥナヨ オモローラ ボルワリン

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA17

4C084MA52

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZA331

4C084ZA332

4C084ZA361

4C084ZA362

4C084ZA591

4C084ZA592

4C084ZA751

4C084ZA752

4C084ZA811

4C084ZA812

4C084ZB111

4C084ZB112

4C084ZC411

4C084ZC412

4C086AA01

4C086AA02

4C086BA08

4C086GA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA52

4C086MA66

4C086NA14

4C086ZA33

4C086ZA36

4C086ZA59

4C086ZA75

4C086ZA81

4C086ZB11

4C086ZC41

(57)【要約】

本発明は、線維性疾患、障害および状態ならびに線維症に関連する他の状態を含む疾患、障害および状態において、上皮間葉転換および／または内皮間葉転換をモジュレート、抑制および安定化するための、抗コネキシン４３ヘミチャネル開口化合物、阻害剤および遮断薬を含む抗ヘミチャネル化合物の使用に関する。本発明は、概して、コネキシンヘミチャネル、ならびに疾患における上皮間葉転換または他の病理学的もしくは異常なレベルの上皮間葉転換を阻害するための組成物および方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

部分的に病理学的または望ましくない上皮間葉転換活性を特徴とする疾患、障害または状態を有する対象における上皮間葉転換活性を阻害するための方法であって、ヘミチャネル阻害剤を前記対象に上皮間葉転換活性を阻害するのに有効な量で投与することを含む方法。

【請求項2】

前記ヘミチャネル阻害剤がコネキシン４３ヘミチャネル阻害剤である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記ヘミチャネル阻害剤が低分子ヘミチャネル阻害剤である、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記ヘミチャネル阻害剤がＮ－［（３Ｓ，４Ｓ）－６－アセチル－３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－３，４－ジヒドロクロメン－４－イル］－３－クロロ－４－フルオロベンズアミド（トナベルサット）である、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記ヘミチャネル阻害剤が式（Ｉ）の化合物：

【化5】

（式中、ＹはＣ－Ｒ_１であり；
Ｒ_１はアセチルであり；
Ｒ_２は、水素、Ｃ_３～８シクロアルキル、必要に応じて酸素によって中断またはヒドロキシ、Ｃ_１～６アルコキシもしくは置換アミノカルボニルによって置換されたＣ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルキルカルボニル、Ｃ_１～６アルコキシカルボニル、Ｃ_１～６アルキルカルボニルオキシ、Ｃ_１～６アルコキシ、ニトロ、シアノ、ハロ、トリフルオロメチル、またはＣＦ_３Ｓ；またはＣＦ_３－Ａ－基（式中、Ａは－ＣＦ_２－、－ＣＯ－、－ＣＨ_２－、ＣＨ（ＯＨ）、ＳＯ_２、ＳＯ、ＣＨ_２－ＯまたはＣＯＮＨである）；またはＣＦ_２Ｈ－Ａ’－基（式中、Ａ’は酸素、硫黄、ＳＯ、ＳＯ_２、ＣＦ_２またはＣＦＨである）；トリフルオロメトキシ、Ｃ_１～６アルキルスルフィニル、ペルフルオロＣ_２～６アルキルスルホニル、Ｃ_１～６アルキルスルホニル、Ｃ_１～６アルコキシスルフィニル、Ｃ_１～６アルコキシスルホニル、アリール、ヘテロアリール、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ホスホノ、アリールカルボニルオキシ、ヘテロアリールカルボニルオキシ、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アリールスルホニルもしくはヘテロアリールスルホニル（任意の芳香族部分は必要に応じて置換されている）、Ｃ_１～６アルキルカルボニルアミノ、Ｃ_１～６アルコキシカルボニルアミノ、Ｃ_１～６アルキル－チオカルボニル、Ｃ_１～６アルコキシ－チオカルボニル、Ｃ_１～６アルキル－チオカルボニルオキシ、１－メルカプトＣ_２～７アルキル、ホルミル、またはアミノスルフィニル、アミノスルホニルもしくはアミノカルボニル（任意のアミノ部分は１つもしくは２つのＣ_１～６アルキル基によって必要に応じて置換されている）、またはＣ_１～６アルキルスルフィニルアミノ、Ｃ_１～６アルキルスルホニルアミノ、Ｃ_１～６アルコキシスルフィニルアミノもしくはＣ_１～６アルコキシスルホニルアミノ、またはＣ_１～６アルキルカルボニル、ニトロもしくはシアノによって末端置換されたエチレニル、または－Ｃ（Ｃ_１～６アルキル）ＮＯＨもしくは－Ｃ（Ｃ_１～６アルキル）ＮＮＨ_２；または１つもしくは２つのＣ_１～６アルキルによってまたはＣ_２～７アルカノイルによって必要に応じて置換されたアミノであり；Ｒ_３およびＲ_４の一方は水素またはＣ_１～４アルキルであり、他方はＣ_１～４アルキル、ＣＦ_３またはＣＨ_２Ｘ^ａであり、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、Ｃ_１～４アルコキシ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキルカルボニルオキシ、－Ｓ－Ｃ_１～４アルキル、ニトロ、１つもしくは２つのＣ_１～４アルキル基によって必要に応じて置換されたアミノ、シアノまたはＣ_１～４アルコキシカルボニルである；あるいはＲ_３およびＲ_４が一緒になって、Ｃ_１～４アルキルによって必要に応じて置換されたＣ_２～５ポリメチレンであり；
Ｒ_５は、Ｃ_１～６アルキルカルボニルオキシ、ベンゾイルオキシ、ＯＮＯ_２、ベンジルオキシ、フェニルオキシまたはＣ_１～６アルコキシであり、Ｒ_６およびＲ_９は水素である、あるいはＲ_５はヒドロキシであり、Ｒ_６は水素またはＣ_１～２アルキルであり、Ｒ_９は水素であり；
Ｒ_７はヘテロアリールまたはフェニルであり、これらは共に、独立して、クロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード、ニトロ、Ｃ_１～４アルキルによって１回もしくは２回必要に応じて置換されたアミノ、シアノ、アジド、Ｃ_１～４アルコキシ、トリフルオロメトキシおよびトリフルオロメチルから選択される基または原子で１またはそれを超える回数必要に応じて置換されており；
Ｒ_８は、水素、Ｃ_１～６アルキル、ＯＲ_１１またはＮＨＣＯＲ_１０であり、Ｒ_１１は、水素、Ｃ_１～６アルキル、ホルミル、Ｃ_１～６アルカノイル、アロイルまたはアリール－Ｃ_１～６アルキルであり、Ｒ_１０は、水素、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、モノもしくはジＣ_１～６アルキルアミノ、アミノ－Ｃ_１～６アルキル、ヒドロキシ－Ｃ_１～６アルキル、ハロ－Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アシルオキシ－Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシカルボニル－Ｃ_１～６アルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｒ_８－Ｎ－ＣＯ－Ｒ_７基はＲ_５基に対してシスであり；Ｘは酸素またはＮＲ_１２であり、Ｒ_１２は水素またはＣ_１～６アルキルである）
である、請求項１に記載の方法。

【請求項6】

前記低分子ヘミチャネル遮断薬が式（ＩＩ）の化合物：

【化6】

（式中、
ＱはＯまたは式＝ＮＨＯＲ_４３のオキシムであり、Ｒ_４３は、
（ｉ）Ｈ、Ｃ_１～４フルオロアルキルもしくは必要に応じて置換されたＣ_１～４アルキルから選択される、または
（ｉｉ）－Ａ_３００－Ｒ_３００
であり、
Ａ_３００は、直接結合、－Ｃ（Ｏ）Ｏ^＊－、－Ｃ（Ｒ_３）（Ｒ_４）Ｏ^＊－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ（Ｒ_３）（Ｒ_４）Ｏ^＊－、または－Ｃ（Ｒ_３）（Ｒ_４）ＯＣ（Ｏ）Ｏ^＊－であり、^＊印が付けられた原子はＲ_３００に直接結合しており、
Ｒ_３およびＲ_４は、Ｈ、フルオロ、Ｃ_１～４アルキルもしくはＣ_１～４フルオロアルキルから独立して選択される、または
Ｒ_３およびＲ_４は、これらが結合している原子と一緒になって、シクロプロピル基を形成し、
Ｒ_３００は、［１］、［２］、［２Ａ］、［３］、［４］、［５］または［６］基から選択され；
Ｒ_２はＨまたはＢ－Ｒ_２１であり、
Ａは、直接結合、－Ｃ（Ｏ）Ｏ^＊－、－Ｃ（Ｒ_３）（Ｒ_４）Ｏ^＊－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ（Ｒ_３）（Ｒ_４）Ｏ^＊－または－Ｃ（Ｒ_３）（Ｒ_４）ＯＣ（Ｏ）Ｏ^＊－であり、^＊印が付けられた原子はＲ_１に直接結合しており、Ｒ_３およびＲ_４は、Ｈ、フルオロ、Ｃ_１～４アルキルもしくはＣ_１～４フルオロアルキルから独立して選択される、またはＲ_３およびＲ_４は、これらが結合している原子と一緒になって、シクロプロピル基を形成し、
Ｒ_１は、［１］、［２］、［２Ａ］、［３］、［４］、［５］および［６］基から選択され、^＊＊印を付けられた原子はＡに直接結合しており：

【化7】

Ｒ_５およびＲ_６は、Ｈ、Ｃ_１～４アルキル、Ｃ_１～４フルオロアルキルおよびベンジルからそれぞれ独立して選択され；
Ｒ_７は、Ｈ、Ｃ_１～４アルキルおよびＣ_１～４フルオロアルキルから独立して選択され；
Ｒ_８は、
（ｉ）Ｈ、Ｃ_１～４アルキルもしくはＣ_１～４フルオロアルキル、または
（ｉｉ）天然もしくは非天然α－アミノ酸、または本明細書に記載されるペプチドの側鎖、または
（ｉｉｉ）ビオチンもしくはビオチンに化学的に連結している
から選択され；
Ｒ_９は、Ｈ、－Ｎ（Ｒ_１１）（Ｒ_１２）、または－Ｎ^＋（Ｒ_１１）（Ｒ_１２）（Ｒ_１３）Ｘ^－、または－Ｎ（Ｒ_１１）Ｃ（Ｏ）Ｒ_１４から選択され、
Ｒ_１１、Ｒ_１２およびＲ_１３は、Ｈ、Ｃ_１～４アルキルまたはＣ_１～４フルオロアルキルから独立して選択され、
Ｒ_１４は、Ｈ、Ｃ_１～４アルキルまたはＣ_１～４フルオロアルキルであり、
Ｒ_１５は、Ｃ_１～４アルキルおよびＣ_１～４フルオロアルキルから独立して選択され、
Ｘ^－は薬学的に許容され得るアニオンである）
である、請求項１に記載の方法。

【請求項7】

前記ヘミチャネル遮断薬が、１投与当たり約１０～２００ｍｇの範囲の量で経口投与される、請求項１から５または６のいずれかに記載の方法。

【請求項8】

前記ヘミチャネル遮断薬が、１日当たり約８０～３２０ｍｇの範囲の量で経口投与される、請求項１から５または６のいずれかに記載の方法。

【請求項9】

前記ヘミチャネル遮断薬が、１投与当たりまたは１日当たり約０．２ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇの範囲の量で経口投与される、請求項１から５または６のいずれかに記載の方法。

【請求項10】

前記対象におけるトナベルサットの循環濃度が約１０マイクロモル濃度～約９０マイクロモル濃度の範囲である、請求項４に記載の方法。

【請求項11】

前記ヘミチャネル阻害剤が注射によって投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項12】

前記ヘミチャネル阻害剤が経口投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項13】

前記ヘミチャネル阻害剤が１日１回または１週間に１回投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項14】

前記ヘミチャネル阻害剤が１日２回以上投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項15】

前記ヘミチャネル阻害剤がヘミチャネルの閉鎖を誘導または促進する、請求項１に記載の方法。

【請求項16】

前記ヘミチャネル阻害剤がヘミチャネル開口を遮断する、阻害するまたは減少させる、請求項１に記載の方法。

【請求項17】

前記ヘミチャネル阻害剤がヘミチャネルの細胞内在化を誘発、誘導または促進する、請求項１に記載の方法。

【請求項18】

前記疾患、障害または状態が増殖性硝子体網膜症である、請求項１に記載の方法。

【請求項19】

前記対象がヒトである、請求項１に記載の方法。

【請求項20】

対象における上皮間葉転換活性を阻害するための方法であって、ヘミチャネル阻害剤を前記対象に上皮間葉転換活性を阻害するのに有効な量で投与することを含む方法。

【請求項21】

前記ヘミチャネル阻害剤がコネキシン４３ヘミチャネル阻害剤である、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

前記ヘミチャネル阻害剤が低分子ヘミチャネル阻害剤である、請求項２０に記載の方法。

【請求項23】

前記ヘミチャネル阻害剤がＮ－［（３Ｓ，４Ｓ）－６－アセチル－３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－３，４－ジヒドロクロメン－４－イル］－３－クロロ－４－フルオロベンズアミド（トナベルサット）である、請求項２０に記載の方法。

【請求項24】

前記ヘミチャネル阻害剤が化合物であり式（Ｉ）の化合物である、請求項２０に記載の方法。

【請求項25】

前記ヘミチャネル阻害剤が化合物であり式（ＩＩ）の化合物である、請求項２０に記載の方法。

【請求項26】

前記対象が線維性障害を有する、請求項２０または２３のいずれかに記載の方法。

【請求項27】

前記対象が、部分的に病理学的または望ましくない上皮間葉転換活性を特徴とする障害を有する、請求項２０または２３のいずれかに記載の方法。

【請求項28】

前記障害が腎臓障害である、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記障害が肺障害である、請求項２７に記載の方法。

【請求項30】

前記障害が肝障害である、請求項２７に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

分野
本発明は、概して、コネキシンヘミチャネル、ならびに疾患における上皮間葉転換または他の病理学的もしくは異常なレベルの上皮間葉転換を阻害するための組成物および方法に関する。本発明は、病理学的または他の望ましくない上皮間葉転換をモジュレート、阻害、抑制および安定化するための、抗コネキシン４３ヘミチャネル開口化合物、阻害剤および遮断薬を含む抗ヘミチャネル化合物の使用に関する。
参照による組み込み

【0002】

本明細書に記載される全ての米国特許、米国特許出願公開、外国特許、外国およびＰＣＴ公開出願、論文および他の文書、参考文献および刊行物、ならびにそこから発行されるいずれかの単一の特許もしくは複数の特許において引用された参考文献として列挙される全てのものは、全体が参照により本明細書に組み込まれる。組み込まれる情報は、全てのテキストおよび他の内容が本出願で繰り返されるのと同様に本出願の一部であり、出願時の本出願のテキストおよび内容の一部として扱われる。

【背景技術】

【0003】

簡単な背景
以下は、本発明を理解するのに有用となり得る情報を含む。本明細書で具体的または暗示的に言及される情報、刊行物または文書のいずれも、ここに記載または特許請求されている発明に対する先行技術であることを認めるものでも、必須であることを認めるものでもない。

【0004】

上皮細胞および内皮細胞が間葉系細胞に形質転換する能力は、周知の細胞機序である。上皮間葉転換（ＥＭＴ）または内皮間葉転換（ＥｎｄＭＴ）と呼ばれるこのプロセスは、胚発生の様々な段階を調節するが、広範囲の疾患の進行にも寄与する。Ｊ．Ｐ．Ｔｈｉｅｒｙら「Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｓ ｉｎ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ」、Ｃｅｌｌ 第１３９巻、第５号、８７１～８９０頁、２００９年；Ｒ．ＫａｌｌｕｒｉおよびＲ．Ａ．Ｗｅｉｎｂｅｒｇ、「Ｔｈｅ ｂａｓｉｃｓ ｏｆ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ」、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、第１１９巻、第６号、１４２０～１４２８頁、２００９年を参照されたい。ＥＭＴにおいて、極性化上皮細胞は、運動性中皮表現型の特徴を獲得する。これは、極性化上皮細胞が間葉系になるまで表現型を変化させる多段階プロセスである（Ｋａｌｌｕｒｉ＆Ｗｅｉｎｂｅｒｇ、２００９年）。これらの変化は、転写因子の活性化および不活性化ならびに特異的ｍＲＮＡの発現から、細胞骨格タンパク質および細胞表面タンパク質の発現および構造の変化にまで及ぶ（Ｋａｌｌｕｒｉ＆Ｗｅｉｎｂｅｒｇ、２００９年）。移行中の細胞は、上皮表現型と間葉表現型の両方を示し、それらのそれぞれの割合は、プロセスが進行するにつれて変化する。共通の進行にもかかわらず、ＥＭＴが起こる条件は３つのタイプに分けられている。「１型」ＥＭＴは、着床、胚形成および器官発生中に起こるが、「３型」ＥＭＴは新生物細胞で起こり、がんの進行および転移に関連する。「２型」は、臓器線維症、組織再生および創傷治癒に関連し、外傷および／または炎症後の組織で頻繁に起こる。

【0005】

胚形成中、ＥＭＴは原腸形成、原始線条形成、体節解離、神経堤発達、ならびに口蓋および口唇融合に不可欠である。ＥｎｄＭＴは、心臓の発達、特に心臓の弁および中隔の形成、ならびに中胚葉細胞および複能性前駆体の生成に重要である。

【0006】

成体生物では、ＥＭＴおよびＥｎｄＭＴは通常、病理学的刺激がこの胚性機序を覚醒させるまで休眠状態である。例えば、ＥＭＴは、がん転移の主要な機序である（Ｇ．Ｐ．ＧｕｐｔａおよびＪ．Ｍａｓｓａｇｕｅ、「Ｃａｎｃｅｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ：ｂｕｉｌｄｉｎｇ ａ ｆｒａｍｅｗｏｒｋ」、Ｃｅｌｌ、第１２７巻、第４号、６７９～６９５頁、２００６年；Ｊ．－Ｙ．ＳｈｉｈおよびＰ．－Ｃ．Ｙａｎｇ、「Ｔｈｅ ＥＭＴ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｓｌｕｇ ａｎｄ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ」、Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ、第３２巻、第９号、１２９９～１３０４頁、２０１１年）のに対して、ＥｎｄＭＴは、腫瘍微小環境においてがん関連線維芽細胞を形成する。Ｓ．Ｐｏｔｅｎｔａら、「Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｔｏ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ」、Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ、第９９巻、第９号、１３７５～１３７９頁、２００８年。また、ＥＭＴとＥｎｄＭＴの両方が、組織損傷後または炎症性疾患および線維性疾患に関連して瘢痕組織の形成を引き起こす線維芽細胞を生成することが示されている。Ｒ．ＫａｌｌｕｒｉおよびＥ．Ｇ．Ｎｅｉｌｓｏｎ、「Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ」、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、第１１２巻、第１２号、１７７６～１７８４頁、２００３年；Ｓ．Ｐｉｅｒａ－Ｖｅｌａｚｑｕｅｚら、「Ｒｏｌｅ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ（ＥｎｄｏＭＴ）ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｆｉｂｒｏｔｉｃ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ」、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、第１７９巻、第３号、１０７４～１０８０頁、２０１１年；Ｐ．Ｐｅｓｓｉｎａら、「Ｆｉｂｒｏｇｅｎｉｃ ｃｅｌｌ ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ ｂｌｕｎｔｓ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｇｇｒａｖａｔｅｓ ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ」、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ、第４巻、第６号、１０４６～１０６０頁、２０１５年。間葉転換は、伝統的に、発生においてプラスの効果を有し、疾患においてマイナスの効果を有すると考えられてきた。多くの研究は、ＥＭＴの誘導が、上皮がん細胞が転移を促進する悪性表現型を獲得する主要な機序であることを提案している。

【0007】

ＥＭＴは、傷害後の網膜色素上皮細胞においても観察されている（Ｌｅｅら、２０２０年；Ｙａｎｇら、２０２０年；Ｃｈｅら、２０１６年；Ｃｈｅｎら、２０１４年）。網膜色素上皮細胞における上皮間葉転換もまた、黄斑変性に関連するなど、網膜下線維症の発病に関連する。ＲＰＥ細胞は、眼の後部で外側血液網膜関門（ＢＲＢ）を形成し、機能的重要性が高く、網膜グルコース恒常性、光受容体機能性および血管新生のバランスを調節し、ＲＰＥ機能の破壊は、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）および増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）を含む複数の眼疾患に関与している（Ｈｙｔｔｉｎｅｎら、２０１９年；Ｃｈｅｎら、２０１４年；Ｃｈｅら、２０１６年）。これらのうち、ＰＶＲは既にＥＭＴと関連づけられているが（Ｔａｍｉｙａ＆Ｋａｐｌａｎ、２０１６年）、糖尿病状態に特徴的な高グルコースもまた、ＲＰＥ細胞においてＥＭＴを誘導することが見出されている（Ｃｈｅら、２０１６年）。ＲＰＥ細胞においてＥＭＴが誘導される機序は依然として議論されているが、複数の疾患経路がその活性化に関連づけられている。高グルコース（Ｃｈｅら、２０１６年）とＴＧＦ－β_２（Ｍｏｎｙら、２０１３年；Ｃｈｅｎら、２０１４年）の両方が、独立して、ＲＰＥ細胞においてＥＭＴを誘導することが示されている。特に、高グルコースは、重要なＥＭＴ転写因子の１つであるＳｎａｉｌの発現を増加させることが見出された（Ｃｈｅら、２０１６年）。

【0008】

増殖性硝子体網膜症は、裂孔原性網膜剥離の重度の失明する合併症である。ＲＰＥ細胞の上皮間葉転換は、ＰＶＲの発病において極めて重要な役割を果たすと考えられている。ＲＰＥ細胞がそれらの上皮特性を失い、間葉系細胞に形質転換することを可能にする上皮間葉転換（ＥＭＴ）は、ＰＶＲ膜の形成の根底にある基本的な機序と考えられている。発癌におけるＥＭＴと同様に、ＲＰＥ細胞のＥＭＴは、関連する細胞経路の活性化、細胞骨格の再構成、およびＲＰＥ細胞間の接合部の分解を伴う。古典的なＥＭＴトリガーであるトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）－βもＰＶＲ患者の眼に見出される。したがって、ＲＰＥ細胞のＥＭＴを遮断することが、ＰＶＲを予防するための効率的な方法となる。しかしながら、数十年にわたるＰＶＲにおけるＲＰＥ細胞のＥＭＴの研究にもかかわらず、これを予防するための現在利用可能な薬物はない。

【0009】

ＥＭＴはまた、内皮細胞密度の喪失および線維芽細胞型への形態変化を含む後天性または遺伝性角膜疾患の一次的変化と共に、眼の角膜内皮でも観察されている。遺伝性疾患には、最も一般的な角膜内皮ジストロフィーであり、視力喪失につながるフックス角膜内皮ジストロフィーが含まれる。後天性疾患には、偽水晶体性または無水晶体性水疱性角膜症（Ａｐｈａｋｉｃ ｂｕｌｂｏｕｓ ｋｅｒａｔｏｐｌａｓｔｙ）、および以前の角膜移植の失敗が含まれる。

【0010】

デスメ膜剥離角膜内皮移植術（ＤＳＥＫ）または自動化ＤＳＥＫ（ＤＡＥＳＫ）は、角膜の透明度および生存率を保持するために不可欠であるが、限られたドナー組織の利用可能性によって制約される、角膜内皮修復のために多くのセンターで選択される手技である。人工角膜組織を構築するために組織工学が使用されているが、内皮細胞のＥｎｄｏＭＴが依然として課題である。
本発明者らは、コネキシン４３およびコネキシン４３ヘミチャネルを含む、コネキシンおよびコネキシンヘミチャネルのＥＭＴにおける潜在的役割を研究した。本発明者らは、コネキシンヘミチャネル調節剤（modulation agent）が、ＥＭＴをモジュレートするために使用することができ、ＥＭＴ、ならびに網膜下線維症などを特徴とするものを含む網膜疾患を含む疾患におけるＥｎｄＭＴの治療薬として役立つ抗ＥＭＴ剤であることを発見した。本特許は、ＥＭＴ関連疾患、障害および状態における上皮間葉転換を改変および阻害することができる抗ヘミチャネル化合物を含む方法および組成物の重要な発見に関する。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0011】

【非特許文献1】Ｊ．Ｐ．Ｔｈｉｅｒｙら「Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｓ ｉｎ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ」、Ｃｅｌｌ 第１３９巻、第５号、８７１～８９０頁、２００９年

【非特許文献2】Ｒ．ＫａｌｌｕｒｉおよびＲ．Ａ．Ｗｅｉｎｂｅｒｇ、「Ｔｈｅ ｂａｓｉｃｓ ｏｆ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ」、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、第１１９巻、第６号、１４２０～１４２８頁、２００９年

【非特許文献3】Ｇ．Ｐ．ＧｕｐｔａおよびＪ．Ｍａｓｓａｇｕｅ、「Ｃａｎｃｅｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ：ｂｕｉｌｄｉｎｇ ａ ｆｒａｍｅｗｏｒｋ」、Ｃｅｌｌ、第１２７巻、第４号、６７９～６９５頁、２００６年

【非特許文献4】Ｊ．－Ｙ．ＳｈｉｈおよびＰ．－Ｃ．Ｙａｎｇ、「Ｔｈｅ ＥＭＴ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｓｌｕｇ ａｎｄ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ」、Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ、第３２巻、第９号、１２９９～１３０４頁、２０１１年

【非特許文献5】Ｓ．Ｐｏｔｅｎｔａら、「Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｔｏ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ」、Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ、第９９巻、第９号、１３７５～１３７９頁、２００８年

【非特許文献6】Ｒ．ＫａｌｌｕｒｉおよびＥ．Ｇ．Ｎｅｉｌｓｏｎ、「Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ」、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、第１１２巻、第１２号、１７７６～１７８４頁、２００３年

【非特許文献7】Ｓ．Ｐｉｅｒａ－Ｖｅｌａｚｑｕｅｚら、「Ｒｏｌｅ ｏｆ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ（ＥｎｄｏＭＴ）ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｆｉｂｒｏｔｉｃ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ」、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、第１７９巻、第３号、１０７４～１０８０頁、２０１１年

【非特許文献8】Ｐ．Ｐｅｓｓｉｎａら、「Ｆｉｂｒｏｇｅｎｉｃ ｃｅｌｌ ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ ｂｌｕｎｔｓ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｇｇｒａｖａｔｅｓ ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ」、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ、第４巻、第６号、１０４６～１０６０頁、２０１５年

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0012】

簡単な概要
本明細書に記載および特許請求される発明は、それだけに限らないが、この発明の概要に示されるまたは記載されるまたは言及されるものを含む、多くの属性および実施形態を有する。これは包括的であることを意図するものではなく、本明細書に記載および特許請求される発明は、制限ではなく例示のみの目的のために含まれる、この序論で特定される特徴または実施形態に限定されず、これらによって限定もされない。

【0013】

本特許は、上皮間葉転換（ＥＭＴ）を阻害するための抗ヘミチャネル化合物の方法および組成物および使用に関する。本特許はまた、適切な（非病理学的）レベルのＥＭＴを維持するための抗ヘミチャネル化合物の方法および組成物および使用に関する。本特許はさらに、内皮間葉転換（ＥｎｄＭＴ）を阻害するための抗ヘミチャネル化合物の方法および組成物および使用に関する。本特許はまた、適切な（非病理学的）レベルのＥｎｄＭＴを維持するための抗ヘミチャネル化合物の方法および組成物および使用に関する。

【0014】

本明細書のデータは、例えば、抗ヘミチャネル化合物を使用して、慢性網膜疾患、状態および障害におけるＥＭＴを含む、ＥＭＴを阻害することができることを示す。抗ヘミチャネル化合物を使用して、ＥＭＴを非病理学的レベルで維持することができることも発見された。抗ヘミチャネル化合物を使用して、内皮間葉転換（ＥｎｄＭＴ）を非病理学的レベルで維持することもできる。

【0015】

よって、一態様では、本発明は、上皮間葉転換（ＥＭＴ）を阻害するための抗ヘミチャネル化合物の使用を提供する。別の態様では、本発明は、内皮間葉転換（ＥｎｄＭＴ）を阻害するための抗ヘミチャネル化合物の使用を提供する。

【0016】

別の態様では、本発明は、網膜におけるＥＭＴを調節するための方法を提供する。

【0017】

別の態様では、本発明は、網膜色素上皮におけるＥＭＴを調節するための方法を提供する。

【0018】

別の態様では、本発明は、網膜色素上皮細胞におけるＥＭＴを調節するための方法を提供する。

【0019】

別の態様では、本発明は、角膜におけるＥｎｄＭＴを調節するための方法を提供する。

【0020】

別の態様では、本発明は、角膜内皮細胞におけるＥｎｄＭＴを調節するための方法を提供する。

【0021】

別の態様では、本発明は、がんにおけるＥＭＴを調節するための方法を提供する。

【0022】

別の態様では、本発明は、線維性疾患、障害および状態におけるＥＭＴを調節するための方法を提供する。

【0023】

本特許はまた、罹患患者におけるＥＭＴを阻害するための経口送達抗ヘミチャネル化合物の使用、ＥＭＴ関連疾患を逆転または実質的に逆転させるための経口送達抗ヘミチャネル化合物の使用も記載している。

【0024】

本特許はまた、慢性眼疾患に罹患している、必要とする患者における正常なＥＭＴ機能を救済するための経口送達抗ヘミチャネル化合物の使用も記載している。

【0025】

本特許はまた、少なくとも部分的に調節不全ＥＭＴを特徴とする慢性眼疾患に罹患している、必要とする患者におけるＥＭＴを阻害するための経口送達抗ヘミチャネル化合物の使用も記載している。

【0026】

本特許はまた、これらの目的のために、例えば、トナベルサット、ベンゾピラン化合物（シス－６－アセチル－４Ｓ－（３－クロロ－４－フルオロベンゾイルアミノ）－３，４－ジヒドロ－２，２－ジメチル－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］ピラン－３ Ｓ－オール（ＳＢ－２２０４５３、Ｘｉｆｌａｍまたはトナベルサットとも呼ばれる）、ならびにトナベルサットプロドラッグ（例えば、式ＩＩの化合物参照）を含む、抗ヘミチャネル化合物を使用するための方法に関する。

【0027】

本発明は、一態様では、例えば、糖尿病性網膜症、加齢黄斑変性および増殖性硝子体網膜症を含む、全体的または部分的に病理学的または他の望ましくないＥＭＴ活性を特徴とする状態を有する対象におけるＥＭＴ調節不全を処置するための抗ヘミチャネル化合物の使用に関する。

【0028】

いくつかの方法では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害が慢性網膜障害を処置する。他の態様では、慢性網膜障害が糖尿病性網膜症、加齢黄斑変性または増殖性硝子体網膜症である。他の態様では、生存を増加させる方法が、病理学的または他の望ましくないレベルのＥＭＴ活性を特徴とする網膜障害または他の障害を処置する。

【0029】

いくつかの方法では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が線維症／線維性障害を処置する。一実施形態では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害が眼線維症障害を処置する。上皮間葉転換は、損傷した腎尿細管細胞が、腎臓および慢性腎不全における線維症の発症に寄与する間葉系細胞に形質転換する機序として広く受け入れられており、いくつかの実施形態では、例えばコネキシン４３ヘミチャネルを含むコネキシンヘミチャネルをモジュレートする化合物および方法を使用したＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が腎線維症を処置する。いくつかの実施形態では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が、腎不全または慢性腎不全を処置する。いくつかの実施形態では、ＥＭＴ調節または阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が、腎臓損傷後の腎上皮細胞におけるＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴを処置する。本方法の別の実施形態では、対象におけるＥＭＴまたはＥｎｄＭＴ関連の疾患、障害または状態が、がんである。いくつかの実施形態では、例えばコネキシン４３ヘミチャネルを含むコネキシンヘミチャネルをモジュレートする化合物および方法を使用したＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が、腎線維症を処置する。いくつかの実施形態では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が、腎不全または慢性腎不全を処置する。いくつかの実施形態では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が、腎臓損傷後の腎上皮細胞におけるＥＭＴを処置する。いくつかの実施形態では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が、眼および腎臓以外の器官における線維症を処置する。いくつかの実施形態では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が、炎症後の線維症を処置する。いくつかの実施形態では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が、腎臓損傷後の腎上皮または内皮細胞におけるＥＭＴまたはＥｎｄＭＴを処置する。いくつかの実施形態では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が任意の線維性障害を処置する。本明細書で使用される場合、線維性障害には、上皮細胞が筋線維芽細胞表現型および最終的に線維性表現型を獲得するように誘導される任意の疾患、障害または状態が含まれる。本発明の化合物および方法で処置可能なＥＭＴおよびＥｎｄＭＴ関連線維性障害には、例えば、肺（pulmonary）（肺（lung））線維症、腎線維症、特発性肺線維症、肝線維症（Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、およびアルコール乱用に起因する肝線維症を含む）、腸線維症、眼線維症、脂肪組織線維症、心臓および他の器官の線維症、ならびに強皮症が含まれる。

【0030】

本特許は、一態様では、コネキシン４３ヘミチャネルを含むコネキシンヘミチャネルをモジュレートして、ＥＭＴ活性を阻害するための、化合物および方法の使用を記載している。本特許はまた、コネキシン４３ヘミチャネルを含むコネキシンヘミチャネルをモジュレートして、正常なＥＭＴ活性を維持するための、化合物および方法の使用を記載している。

【0031】

本特許は、一態様では、コネキシン４３ヘミチャネルを含むコネキシンヘミチャネルをモジュレートして、急性または慢性全身性高血糖によって引き起こされるＥＭＴを阻害するための、化合物および方法の使用を記載している。

【0032】

本発明で有用な抗ヘミチャネル化合物には、式Ｉの化合物、例えばＸｉｆｌａｍ（トナベルサット）、および／または前記化合物のいずれかのプロドラッグ、ならびに本明細書に記載または参照により組み込まれる他の抗ヘミチャネル化合物が含まれる。いくつかの実施形態では、ヘミチャネル遮断薬が、Ｘｉｆｌａｍ（トナベルサット）以外の低分子、例えば、その開示全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｏｌｉｎ Ｇｒｅｅｎらの名前で出願された米国特許出願公開第２０１６０１７７２９８号において式Ｉまたは式ＩＩに記載されるヘミチャネル遮断薬である。

【0033】

一実施形態では、コネキシンヘミチャネルをモジュレートするために使用される化合物が式Ｉによる化合物である。

【0034】

別の実施形態では、コネキシンヘミチャネルをモジュレートするために使用される化合物が式ＩＩによる化合物である。

【0035】

一実施形態では、コネキシンヘミチャネルをモジュレートするために使用される化合物がペプチドヘミチャネル阻害剤である。一実施形態では、コネキシンヘミチャネルをモジュレートするために使用される化合物がコネキシン４３ペプチド模倣物である。有用なコネキシン４３ペプチド模倣物には、例えば、ペプチド５、ＧＡＰ９、ＧＡＰ１９、ＧＡＰ２６、ＧＡＰ２７またはα－コネキシンカルボキシ末端（ＡＣＴ）ペプチド、例えばＡＣＴ－１、または他の活性抗ヘミチャネルペプチド模倣物が含まれる。

【0036】

一実施形態では、コネキシンヘミチャネルをモジュレートするために使用される化合物が、（ａ）Ｂ型肝炎ウイルスのＸタンパク質に由来する標的化キャリアペプチド、および（ｂ）コネキシン４３（Ｃｘ４３）の細胞内ドメインと相互作用することができるペプチド、例えばその開示全体が参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＮＺ２０１８／０５００５９（「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ Ｎｏｖｅｌ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｓ」）に記載されるＸＧ１９を含むペプチド構築物である。

【0037】

本発明の別の目的は、ＥＭＴの阻害および／または正常なＥＭＴ活性の回復から利益を得る疾患、障害および状態を処置するための化合物、組成物、製剤、キット、用量および方法を提供することである。

【0038】

いくつかの態様では、処置方法が哺乳動物、例えばヒトに適用される。

【0039】

ヘミチャネル阻害剤は、任意の当技術分野で公知の方法を使用して送達され得るが、いくつかの好ましい実施形態は、網膜および／または脈絡膜の構造または機能の喪失のリスクがある、またはそのリスクがある可能性がある対象におけるＥＭＴ活性を阻害するための、経口で利用可能な低分子抗ヘミチャネル化合物の使用を含む。

【0040】

本発明の他の態様は、慢性網膜障害を有する対象におけるＥＭＴを阻害またはモジュレートする方法であって、有効量のヘミチャネル遮断薬を前記対象に投与することを含む方法を含む。

【0041】

ＥＭＴを阻害することまたはモジュレートすることを必要とする対象においてＥＭＴを阻害するまたはモジュレートするための方法であって、例えば、ＥＭＴ阻害量のＮ－［（３Ｓ，４Ｓ）－６－アセチル－３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－３，４－ジヒドロクロメン－４－イル］－３－クロロ－４－フルオロベンズアミド（Ｘｉｆｌａｍ）を前記対象に投与することを含む方法が含まれる。いくつかの実施形態では、阻害量が１投与当たりまたは１日当たり約５０～約２５０ｍｇである。他の実施形態では、生存促進量が１日当たり約８０～約３２０ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇまたは最大約１０００ｍｇである。これらの量は、単回投与または分割投与、例えばＢＩＤで投与され得る。他の１日量、ならびに特に有用な毎週、毎月およびインプラントの投与および投与レジメンが本明細書で提供される。様々な実施形態では、ヘミチャネル開口を遮断または改善または阻害する低分子が、Ｘｉｆｌａｍ（トナベルサット）のプロドラッグまたはその類似体である。

【0042】

別の態様では、本発明は、本明細書に記載または言及される、対象、または疾患、障害および状態の処置に使用するための医薬の製造におけるヘミチャネル遮断薬の使用を提供する。医薬は、抗ヘミチャネル化合物を含む、から本質的になる、またはからなる。一実施形態では、抗ヘミチャネル化合物が低分子抗ヘミチャネル化合物である。別の実施形態では、低分子抗ヘミチャネル化合物が経口で利用可能な低分子抗ヘミチャネル化合物である。

【0043】

本発明の方法の他の態様では、ＥＭＴが改善または正常化される。

【0044】

別の態様では、本発明は、ヘミチャネルをモジュレートするため、ならびに本明細書に記載または言及される疾患、障害および／または状態のいずれかを含むＥＭＴ関連疾患、障害および／または状態を処置するための医薬（あるいは使用のための指示の有無にかかわらず、１またはそれを超える医薬および／または容器を含有するパッケージまたはキット）の製造におけるヘミチャネル遮断薬の使用を提供する。一態様では、例えば、本発明は、例えば、Ｘｉｆｌａｍおよび／またはその類似体もしくはプロドラッグを含む低分子コネキシンヘミチャネル遮断薬の使用を提供する。一実施形態では、医薬が、コネキシン４３ヘミチャネル遮断薬、例えば低分子コネキシン４３ヘミチャネル遮断薬を含む、から本質的になる、またはからなる。一実施形態では、本発明で有用なヘミチャネル遮断薬組成物が、薬学的に許容され得る担体を含み得、例えば、丸剤、液剤、ミクロスフェア、リポソーム、ナノ粒子、インプラント（例えば、腹膜、皮下および眼インプラント、ならびに遅延放出または制御放出インプラントを含む）、マトリックス、もしくはヒドロゲル製剤として製剤化され得る、または凍結乾燥形態で提供され得る。

【0045】

本明細書に記載される目的のためにモジュレートされるヘミチャネルは、その目的のために対象となる任意のコネキシンであり得る。例えば、本明細書に記載される目的のためにモジュレートされるヘミチャネルは、網膜、血管および／または血管壁で発現されるコネキシンヘミチャネルであり得る。一実施形態では、ヘミチャネル遮断薬が、血管内のコネキシンヘミチャネルを遮断する。他の実施形態では、ヘミチャネル遮断薬が、微小血管内のコネキシンヘミチャネルを遮断する。他の実施形態では、ヘミチャネル遮断薬が、毛細血管内のコネキシンヘミチャネルを遮断する。

【0046】

他の実施形態では、ヘミチャネル遮断薬が、上皮内または内皮内のコネキシンヘミチャネルを遮断する。

【0047】

様々な実施形態では、例として、モジュレートされるヘミチャネルが、コネキシン３６（Ｃｘ３６）、コネキシン３７（Ｃｘ３７）、コネキシン４０（Ｃｘ４０）、コネキシン４３（Ｃｘ４３）、コネキシン４５（Ｃｘ４５）、コネキシン５７（Ｃｘ５７）、コネキシン５９（Ｃｘ５９）および／またはコネキシン６２（Ｃｘ６２）のうちの１またはそれを超える数を含む。

【0048】

一実施形態では、特に網膜に関する場合、モジュレートされるヘミチャネルが、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４３、Ｃｘ４５またはＣｘ５７タンパク質のうちの１またはそれを超える数を含む。標的化ヘミチャネルコネキシンには、例えば、血管内の選択されたヘミチャネルコネキシン（例えば、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０またはＣｘ４３）、ならびに星状膠細胞（例えば、Ｃｘ４３）、アマクリン細胞（例えば、Ｃｘ３６、Ｃｘ４５）、双極細胞（例えば、Ｃｘ３６、Ｃｘ４５）、外網状層および内網状層、神経節細胞層（例えば、Ｃｘ３６、Ｃｘ４５）、錐体光受容体および網膜内皮細胞、ならびに他の網膜ニューロン内のヘミチャネルコネキシンのうちの１またはそれを超える数が含まれる。いくつかの実施形態では、Ｃｘ３６およびＣｘ４３ヘミチャネルが標的化される。１つの特定の実施形態では、モジュレートされるヘミチャネルおよび／またはヘミチャネルがＣｘ４３を含む。一実施形態では、外網状層の細胞内のコネキシンを含むヘミチャネルが標的化される（例えば、Ｃｘ４３）。

【0049】

他の実施形態、特に脈絡膜または網膜の血管に関する実施形態では、モジュレートされるヘミチャネルが、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０またはＣｘ４３タンパク質のうちの１またはそれを超える数を優先的に含み得る。１つの特定の実施形態では、モジュレートされるヘミチャネルおよび／またはヘミチャネルがＣｘ４３を含む。一実施形態では、大口径の有窓でない血管で構成される、ハラー層としても知られる、外脈絡膜の細胞内の血管コネキシンを含むヘミチャネルが標的化される。別の実施形態では、有意に小さい血管で構成される、サットレル層としても知られる、内脈絡膜の細胞内の血管および内皮細胞コネキシンを含むヘミチャネルが標的化される。別の実施形態では、外脈絡膜および内脈絡膜の細胞内のコネキシンを含むヘミチャネルが標的化される。別の実施形態では、脈絡毛細管板の毛細血管内のコネキシンを含むヘミチャネルが標的化される。一実施形態では、本発明の方法において標的化されるヘミチャネル血管コネキシンが、周皮細胞内のヘミチャネルコネキシンならびに血管平滑筋および内皮細胞内のコネキシンを含む。別の実施形態では、本発明の方法において標的化されるヘミチャネル血管コネキシンが、周皮細胞内のヘミチャネルおよび内皮細胞、例えば微小毛細血管内のコネキシンを含む。Ｃｘ４３ヘミチャネルが本発明の好ましい標的である。

【0050】

本発明の１つの方法は、（１）ＥＭＴ関連疾患、障害または状態を有する対象を特定するステップ、（２）治療有効量のコネキシンヘミチャネル阻害剤を対象に投与するステップ、および必要に応じて、（３）対象におけるＥＭＴ活性を測定または可視化するステップを含む。一実施形態では、ＥＭＴ活性が測定または可視化され、用量が維持または調整される。本方法の一実施形態では、対象がＥＭＴ関連疾患を有することが既に知られているので、ステップ（１）は必要とされない。一実施形態では、疾患、障害または状態がＥｎｄＭＴ関連疾患、障害または状態である。一実施形態では、ＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴが、低下、阻害または減弱される。本方法の一実施形態では、コネキシンヘミチャネル阻害剤がコネキシン４３ヘミチャネル阻害剤である。本方法の一実施形態では、コネキシン４３ヘミチャネル阻害剤が低分子コネキシン４３ヘミチャネル阻害剤である。本方法の別の実施形態では、コネキシンヘミチャネル阻害剤が、コネキシン４３ヘミチャネル開口または活性を阻害または遮断する抗コネキシン４３ヘミチャネルペプチドまたはペプチド模倣物である。本方法の一実施形態では、コネキシン４３ヘミチャネル阻害剤がトナベルサットである。本方法の別の実施形態では、コネキシン４３ヘミチャネル阻害剤がカラベルサットである。本方法の一実施形態では、対象におけるＥＭＴ関連疾患、障害または状態がＥＭＴ調節不全を特徴とする。本方法の一実施形態では、対象におけるＥＭＴ関連疾患、障害または状態が、全体的または部分的に病理学的または他の望ましくないＥＭＴ活性を特徴とする。本方法の一実施形態では、対象におけるＥＭＴ関連疾患、障害または状態が、糖尿病性網膜症、加齢黄斑変性または増殖性硝子体網膜症である。本方法の別の実施形態では、対象におけるＥＭＴ関連疾患、障害または状態が、病理学的または他の望ましくないレベルのＥＭＴ活性を特徴とする網膜障害または他の障害である。本方法の別の実施形態では、対象におけるＥＭＴ関連疾患、障害または状態がフックス角膜内皮ジストロフィーまたは偽水晶体性もしくは無水晶体性角膜症である。本方法の別の実施形態では、対象におけるＥＭＴ関連疾患、障害または状態が線維症障害である。一実施形態では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害が眼線維症障害を処置する。本方法の別の実施形態では、対象におけるＥＭＴ関連疾患、障害または状態ががんまたは腎疾患もしくは損傷である。

【0051】

本発明のこの態様の別の実施形態は、低分子または他のヘミチャネル遮断薬を含む医薬品パックを提供する。一実施形態では、ヘミチャネル遮断薬がＸｉｆｌａｍ（トナベルサット）である。別の実施形態では、医薬品パック中のヘミチャネル遮断薬が、例えば、ペプチド５、ＧＡＰ９、ＧＡＰ１９、ＧＡＰ２６、ＧＡＰ２７またはα－コネキシンカルボキシ末端（ＡＣＴ）ペプチド、例えばＡＣＴ－１、または他の活性抗ヘミチャネルペプチド模倣物を含む、から本質的になる、またはからなる。

【0052】

ヘミチャネル遮断薬の活性は、ある特定の生物学的アッセイを使用して評価され得る。分子運動性に対する既知のまたは候補ヘミチャネル遮断薬の効果は、ヒト成人網膜色素上皮細胞を使用する以下の実施例に記載される方法、またはコネキシンヘミチャネルを通る化合物の通過を決定するための他の当技術分野で公知の方法もしくは等価な方法を使用して、特定、評価、またはスクリーニングすることができる。色素移動実験、例えば、検出可能なマーカーで標識された分子の移動、ならびにヘミチャネルの機能状態を研究するために広く使用されている小型蛍光透過性トレーサーの膜貫通通過を含む様々な方法が当技術分野で知られている。化合物がヘミチャネルを遮断する能力を特定または評価するのに使用する方法であって、（ａ）試験試料と試験系を一緒にし、前記試験試料は１またはそれを超える試験化合物を含み、前記試験系はヘミチャネル遮断を評価するための系を含み、前記系は、例えば、前記系への低酸素もしくは虚血の導入に応答した、色素もしくは標識代謝産物の移動の増加、炎症のメディエーター、またはヘミチャネル開口を誘導する他の化合物もしくは事象、例えば細胞外Ｃａ^２＋の低下を示すことを特徴とすることと；（ｂ）前記系における、例えば、色素または他の標識代謝産物（複数可）の存在または増加量を決定すること、とを含む方法を含む、本発明のこの態様の様々な実施形態が本明細書に記載される。陽性および／または陰性対照も同様に使用され得る。必要に応じて、所定量のヘミチャネル遮断薬（例えば、Ｘｉｆｌａｍ）が試験系に加えられ得る。ヘミチャネル遮断薬活性を評価するのに有用な他の方法には、電気生理学およびチャネルコンダクタンスブロック技術、細胞質膨潤または細胞浮腫の減少、および細胞からのカリウム流出の減少が含まれ、これらは全て当技術分野で公知である。

【0053】

一態様では、ＡＲＰＥ－１９細胞を使用する試験を含むアッセイを使用して、網膜機能を回復または救済するのに有用な化合物の活性を確認、測定または評価するための方法が提供される。Ｄｕｎｎ ＫＣら、ＡＲＰＥ－１９，ａ ｈｕｍａｎ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ Ｅｘｐ Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１９９６年２月；６２（２）：１５５－６９を参照されたい。超音波検査、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、ならびに増強深度イメージング光干渉断層撮影（ＥＤＩ－ＯＣＴ）および波長掃引型ＯＣＴ（ＳＳ－ＯＣＴ）を含む当技術分野の方法が、ＥＭＴおよびＥｎｄＭＴ活性を阻害するのに有用な化合物の活性を確認、測定または評価するために使用され得る。

【0054】

一態様では、Ｂ４Ｇ１２細胞を使用する試験を含むアッセイを使用して、角膜内皮機能を回復または救済するのに有用な化合物の活性を確認、測定または評価するための方法が提供される。インビボ共焦点顕微鏡法、角膜厚測定、接触および非接触鏡面光顕微鏡法（specular photo microscopy）（Ｇａｓｓｅｒ，Ｌ．、Ｒｅｉｎｈａｒｄ，Ｔ．＆Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ，Ｄ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｃｏｒｎｅａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ ｂｙ ｔｗｏ ｎｏｎ－ｃｏｎｔａｃｔ ｓｐｅｃｕｌａｒ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｓ．ＢＭＣ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ ２０１５；１５：８７参照）を含む当技術分野の方法が、角膜内皮機能を回復または救済するのに有用な化合物の活性を確認、測定または評価するために使用され得る。

【図面の簡単な説明】

【0055】

【図1】図１ ＨＧ＋Ｃｙｔ処理は、７２時間にわたってＡＲＰＥ－１９細胞の表現型の変化を誘導し、効果は経時的に増加した。未処理細胞は、切断された線維芽細胞または立方体形態を有する。ＨＧ＋Ｃｙｔ処理細胞は伸長および伸展する。スケールバー＝５０μｍ。

【0056】

【図2】図２（ａ、ｂ）ＲＰＥ６５発現は、ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害後に低下したが、式Ｉのヘミチャネル阻害剤であるトナベルサットの共適用（ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ）によって防止された。（ｃ、ｄ）α－ＳＭＡ発現は、未処理条件と比較して、ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害後に増加し、より線状に見えたが、トナベルサットの添加によって（ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ）変化が妨げられた。ｎ＝４；四角で囲まれた領域は拡大されている；スケールバー＝５０または２５μｍ。

【0057】

【図3】図３（ａ）平均蛍光強度によるＲＰＥ６５発現の定量は、ＲＰＥ６５発現が２４時間でＨＧ＋Ｃｙｔ群と比較してＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ群で有意に高いことを示した（ｐ＝０．０２８６）。（ｂ）７２時間までに、ＨＧ＋Ｃｙｔは、未処理条件と比較してＲＰＥ６５発現が有意に低下した（ｐ＝０．００４０）が、ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ群とＨＧ＋Ｃｙｔ群との間に統計学的有意差はなかった。（ｃ）２４時間で、α－ＳＭＡ発現は、未処理条件よりもＨＧ＋Ｃｙｔ後に有意に高かった（ｐ＝０．０４５９）。（ｄ）７２時間までに、ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ処理群は、ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害単独と比較して、α－ＳＭＡ発現レベルが有意に低下した（ｐ＝０．０１１９）。（ｅ）α－ＳＭＡのＲＰＥ６５に対する発現の割合は、２４時間と７２時間の両方のインキュベーション後、未処理およびＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ条件と比較して、ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害後に著しく高かった。２４時間で、未処理群は１．０のα－ＳＭＡ対ＲＰＥ６５比を有し、ＨＧ＋Ｃｙｔ群は１．７の比を有し、ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ群は１．１の比を有した。同様の傾向が７２時間で見られ、未処理群およびＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ群は１．０および０．８の同様の比を有し、ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害群は１．５に上がっていた。破線は、１．０の比を示す。統計分析は、ダネットの多重比較検定を用いた一元配置ＡＮＯＶＡを使用して行った。^＊ｐ≦０．０５；^＊＊ｐ≦０．０１；ｎ＝４。図３、図６および図７では、基礎状態が左側の全て黒いバーに示されており、ＨＧ＋Ｃｙｔが中央のバーであり、ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎが右側のバーである。

【0058】

【図4】図４（ａ）ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ処理は、ＨＧ＋Ｃｙｔによって誘導されるタイトジャンクション喪失を防止する。ＺＯ－１局在化は、ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害後に見られる細胞膜への局在化の喪失を伴い、処理条件によって影響されることが分かった。トナベルサットの追加（ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ）は、ＺＯ－１細胞膜局在化の喪失を防止したが、未処理群と比較して少量の内在化が依然として起こった。（ｂ）ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ処理は、Ｃｘ４３局在化のＨＧ＋Ｃｙｔによって誘導される喪失を防止し、これは外因性ＡＴＰの添加によって逆転された。Ｃｘ４３細胞膜局在化はＨＧ＋Ｃｙｔ条件によって減少したが、トナベルサットの添加がＣｘ４３局在化を維持した。スケールバー＝５０または２５μｍ。

【0059】

【図5-1】図５ ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害後に細胞遊走が増加したが、ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ処理はこれらの変化を部分的に防止した。２４時間で、未処理群の細胞は、擦過傷幅（scrape wound width）の有意な変化を示さなかった（ｐ＝０．９７８９）が、ＨＧ＋Ｃｙｔで処理した細胞は、０時間と比較して有意な擦過傷閉鎖を示した（ｐ＜０．０００１）。ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ処理は、擦過傷閉鎖の減少をもたらしたが、未処理細胞と比較して有意な変化が依然として観察された（ｐ＝０．００１５）。ダネットの多重比較検定を用いた一元配置ＡＮＯＶＡを使用して統計分析を行って、ある時点内の処理を比較し、次いで、経時的に処理群内の擦過傷閉鎖を比較した。^＊所与の時点での処理条件間の比較。^＊＊ｐ≦０．０１；^＊＊＊＊ｐ≦０．０００１。＋所与の処理群内の０時間時点との比較。＋＋ｐ≦０．０１；＋＋＋＋ｐ≦０．０００１；ｎ＝１０；点線は、擦過傷の縁を示す。スケールバー＝５０μｍ。

【図5-2】図５ ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害後に細胞遊走が増加したが、ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ処理はこれらの変化を部分的に防止した。２４時間で、未処理群の細胞は、擦過傷幅（scrape wound width）の有意な変化を示さなかった（ｐ＝０．９７８９）が、ＨＧ＋Ｃｙｔで処理した細胞は、０時間と比較して有意な擦過傷閉鎖を示した（ｐ＜０．０００１）。ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ処理は、擦過傷閉鎖の減少をもたらしたが、未処理細胞と比較して有意な変化が依然として観察された（ｐ＝０．００１５）。ダネットの多重比較検定を用いた一元配置ＡＮＯＶＡを使用して統計分析を行って、ある時点内の処理を比較し、次いで、経時的に処理群内の擦過傷閉鎖を比較した。^＊所与の時点での処理条件間の比較。^＊＊ｐ≦０．０１；^＊＊＊＊ｐ≦０．０００１。＋所与の処理群内の０時間時点との比較。＋＋ｐ≦０．０１；＋＋＋＋ｐ≦０．０００１；ｎ＝１０；点線は、擦過傷の縁を示す。スケールバー＝５０μｍ。

【0060】

【図6】図６（ａ）ＦＩＴＣ－デキストランは、未処理細胞（ｐ＜０．０００１）とＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ処理細胞（ｐ＜０．０００１）の両方と比較して、ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害後にＡＲＰＥ－１９細胞単層を通した有意に高い透過性を示した。統計分析は、ダネットの多重比較検定を用いた一元配置ＡＮＯＶＡを使用して行った。^＊＊＊＊ｐ≦０．０００１；ｎ＝３。（ｂ）経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）は、未処理細胞およびＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ処理細胞と比較して、ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害後に有意に減少した。２４時間から７２時間まで、有意な処理効果が観察され、ＨＧ＋Ｃｙｔ群は、未処理（ｐ＝０．０２９２）群とＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ（ｐ＝０．００１５）処理群の両方よりも有意に低いＴＥＥＲを示した。４８時間で、ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害細胞は依然として、ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ処理よりも有意に低いＴＥＥＲを示した（ｐ＝０．００２９）。７２時間までに、ＴＥＥＲは、未処理（ｐ＝０．００４８）群とＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ（ｐ＝０．０００４）群の両方と比較して、ＨＧ＋Ｃｙｔ群で再び有意に低かった。統計分析は、ダネットの多重比較検定を用いた二元配置ＡＮＯＶＡを使用して行った。^＊ｐ≦０．０５；^＊＊ｐ≦０．０１；^＊＊＊ｐ≦０．００１；ｎ＝３。

【0061】

【図7】図７（ａ）ＨＧ＋Ｃｙｔは、２４時間でＴＧＦ－β２を誘導した（ｐ＝０．００８９）が、ＴＧＦ－β１放出は誘導しなかった。トナベルサット処置（ｐ＝０．００５７）は、ＨＧ＋Ｃｙｔによって誘導されたＴＧＦ－β２放出を防止し、未処理レベルに戻した。（ｂ）７２時間までに、ＴＧＦ－β１レベルとＴＧＦ－β２レベルの両方に関して全ての群の間に有意差はなかった。統計分析は、ダネットの多重比較検定を用いた二元配置ＡＮＯＶＡを使用して行った。^＊ｐ≦０．０５；^＊＊ｐ≦０．０１；^＊＊＊ｐ≦０．００１；ｎ＝３。

【発明を実施するための形態】

【0062】

詳細な説明
上皮細胞が間葉系細胞に変形するＥＭＴのプロセスは、間葉表現型を共有する多様な細胞型を作り出すために胚形態形成において必要な正常な出来事である（Ｋａｌｌｕｒｉ＆Ｗｅｉｎｂｅｒｇ、２００９年）。しかしながら、ＥＭＴが、他の状況において、例えば、眼、腎臓および他の器官におけるがんの進行および組織線維症で起こり、炎症後に組織線維症が発症する場合、問題が生じる。眼においては、網膜の線維症は、網膜の柔軟性の喪失と収縮特性の獲得の両方をもたらし、視力の喪失をもたらし得るだけでなく、網膜剥離を引き起こし得る（Ｔａｍｉｙａ＆Ｋａｐｌａｎ、２０１６年；Ｋｒｏｌｌら、２００７年）。最近の研究は、ＮＬＲＰ３インフラマソームをヒト腎尿細管およびヒト気管支上皮細胞のＥＭＴに関係づけており、ＮＬＲＰ３インフラマソームのノックダウンはＥＭＴ誘導を阻害する（Ｌｉら、２０１８年；Ｓｏｎｇら、２０１８年）。しかしながら、網膜、特にＲＰＥ細胞におけるＥＭＴの調節におけるＮＲＬＰ３の役割は不明のままである。

【0063】

本特許は、コネキシンヘミチャネルがＲＰＥ細胞のＥＭＴにおいて役割を果たすことを示し、様々な病態におけるコネキシン４３ヘミチャネルの広範な影響をさらに裏付けている。ＡＲＰＥ－１９細胞は、ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害後に形態を変化させ、古典的な立方体玉石単層（cuboidal cobblestone monolayer）から、線維性組織に存在する線維芽細胞を連想させる細長い紡錘状の形状に形質転換することが最初に分かった。これら２つの形態間の進行は、ＥＭＴの指標として既に十分に確立されている（Ｔａｍｉｙａ＆Ｋａｐｌａｎ、２０１６年；Ｗａｎｇら、２０１７年；Ｈｙｔｔｉｎｅｎら、２０１９年；Ｔａｍｉｙａら、２０１０年）。インキュベーション時間が増加するにつれて、細胞の割合および形態変化の程度も増加した。これらの形態学的変化は、ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害後の表現型調整によって裏付けられ、ＲＰＥ特異的マーカーであるＲＰＥ６５の発現低下が、間葉系マーカーであるα－ＳＭＡの発現増加によって打ち消された。さらに、α－ＳＭＡ標識は、その細胞分布がより伸長し、線条化することを示した。また、これらの表現型変化は、ＥＭＴについて予想される通りであり、Ｔａｍｉｙａら（２０１０）は、以前に、ＲＰＥ６５発現がＥＭＴの進行とともに低下することを実証し、誘導されたＥＭＴのマーカーとして頻繁に使用されるα－ＳＭＡ発現が獲得された（Ｗａｎｇら、２０１７年；Ｓｏｎｇら、２０１８年；Ｊｉｎｇら、２０１９年；Ｙａｎｇら、２０２０年；Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、２０１９年）。

【0064】

これらの観察された細胞変化は、機能的帰結の変化に置き換えられた。ＤＲ様傷害（ＨＧ＋Ｃｙｔ）は、細胞膜ＺＯ－１局在化の喪失をもたらし、細胞間タイトジャンクションの喪失を示した。タイトジャンクションのこの喪失は、より大きな細胞運動性を可能にし、これは、細胞表現型の変化と合わせて、創傷治癒アッセイにおいて示されるように、また以前に報告されたように（Ｓｈｕｋａｌら、２０２０年）、細胞遊走の増加に寄与した。ＦＩＴＣ－デキストラン色素漏出およびＴＥＥＲ研究からの結果はまた、ＨＧ＋Ｃｙｔに曝露されたＡＲＰＥ－１９細胞のバリア機能が失われ、インビボではもはや外側ＢＲＢとしてのその機能を維持することができないことを確認した。いくつかの研究が、ＤＲ、ＡＭＤおよびブドウ膜炎を含む疾患におけるＲＰＥ ＢＲＢ完全性の喪失を報告している（Ｃｕｎｈａ－Ｖａｚ、２００４年、２００９年；Ｋｌａａｓｓｅｎら、２０１３年）。さらに、ＥＭＴは、ＲＰＥ機能の喪失をもたらす重要な病態として記載されている（Ｃｈｅら、２０１６年；Ｌｉら、２０２０年）。Ｈｙｔｔｉｎｅｎら（２０１９）は、ＥＭＴとＲＰＥ線維症が主な特徴である状態であるＡＭＤの関連性を論じたが、ＥＭＴが細胞剥離と合わせた細胞遊走の増加を通してＡＭＤの「終末」期に見られるＲＰＥ破壊を引き起こし得ることも示唆している。最後に、ＰＶＲでは、網膜上膜を形成する移行した細胞の獲得された収縮特性が、網膜ひだおよび牽引媒介網膜剥離（traction mediated retinal detachment）をもたらす（Ｔａｍｉｙａ＆Ｋａｐｌａｎ、２０１６年）。ＤＲおよび滲出型ＡＭＤの場合、抗血管内皮成長因子（抗ＶＥＧＦ）が現在のところゴールドスタンダード処置であるが、これは疾患の根本原因にほとんど効果を及ぼさず、疾患の初期段階においても価値がない（Ｃａｍｐｏｃｈｉａｒｏら、２０１６年；Ｋｏｖａｃｈら、２０１２年；Ｄｈｏｏｔ＆Ａｖｅｒｙ、２０１６年）。

【0065】

実施例では、コネキシンヘミチャネル阻害剤トナベルサットの添加が、ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害後に観察される表現型変化を防止し、Ｃｘ４３ヘミチャネルがＲＰＥ細胞におけるＥＭＴに重要であることを示した。本発明者らの所見は、新たな治療標的、ならびに例えば、ＥＭＴ関連眼疾患を処置する可能性を提示する。重要なことに、本発明者らはまた、根本原因に対抗することによる、ＥＭＴ関連眼疾患の初期段階におけるコネキシンヘミチャネル阻害剤処置の有用性を実証している。

【0066】

実施例は、ＲＰＥ細胞を使用したＨＧ＋Ｃｙｔによる上皮細胞の傷害がＥＭＴを誘導することを実証している。さらに、コネキシンヘミチャネルの遮断はＥＭＴを減弱させ、ヘミチャネルがプロセスを促進し、ＥＭＴが根底にある疾患の別の治療標的を提供するのに重要な役割を果たすことを実証している。これらの所見は、ここでＥＭＴに頻繁に関連付けられる眼疾患が一般的であると共に、非常に衰弱性である、糖尿病などの健康状態を有する人に機会を提供する。

【0067】

本発明者らは、コネキシン４３ヘミチャネル開口の増加がＥＭＴ活性化に関連し、眼障害を含む一定範囲の病態に関連することを発見した。本発明者らは、ＥＭＴの阻害における、臨床的に安全な用量のコネキシンヘミチャネル遮断薬、例えば、Ｘｉｆｌａｍを含む経口送達低分子コネキシンヘミチャネル遮断薬の有用性を発見した。本発明者らは、ヘミチャネル遮断薬を使用してＥＭＴ関連慢性網膜疾患を改善することができることを発見した。
定義

【0068】

「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」または「特徴とする（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ）」と同義であり、包括的またはオープンエンドであり、医薬からの追加の列挙されていない要素も成分も（方法の場合はステップも）排除しない。「からなる」という句は、医薬において指定されていない要素、ステップまたは成分（方法の場合はステップ）を除外する。「から本質的になる」という句は、指定される材料、および医薬の基本的かつ新規な特徴に実質的に影響を及ぼさない材料（方法の場合はステップ）を指す。本発明の基本的かつ新規な特徴は、本明細書全体を通して記載されており、本発明の医薬および方法が、コネキシンギャップ結合ヘミチャネルを遮断またはモジュレートし、場合によってはＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴをモジュレートまたは阻害する能力を含む。本明細書に記載される医薬および方法を含む、本発明の基本的かつ新規な特徴における材料の変化には、ヘミチャネルモジュレーションならびに／あるいはＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴのモジュレーションまたは阻害の望ましくないまたは臨床的に望ましくない、不利益な、不利なまたは有害な減少が含まれる。一実施形態では、医薬が、コネキシン４３ヘミチャネル遮断薬、例えば低分子コネキシン４３ヘミチャネル遮断薬を含む、から本質的になる、またはからなる。

【0069】

ここで使用される場合、「約」値またはパラメータという用語は、当技術分野で理解されているその意味を指し、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む。例えば、「約Ｘ（ａｂｏｕｔ Ｘ）」という記載は、「Ｘ」の記載を含む。例えば、投与量における重量値の「約５ｍｇ」という用語は、重量値の＋／－０．５度を指す。

【0070】

「低分子」は、本明細書では、約６００～９００ダルトン未満の分子量を有すると定義され、一般に有機化合物である。低分子は、ヘミチャネル遮断薬プロドラッグの活性剤であり得る。一実施形態では、低分子が６００ダルトン未満である。別の実施形態では、低分子が９００ダルトン未満である。

【0071】

本明細書で使用される場合、「処置」（および「処置する」または「処置すること」などのその文法的変形）は、処置される個体、組織または細胞の自然経過を変化させるための臨床的介入を指し、予防のためにまたは臨床病理中に実施することができる。処置の望ましい効果には、それだけに限らないが、疾患、障害または状態の発生または再発の予防、徴候または症状の緩和、疾患の直接的または間接的な病理学的結果の減少、疾患進行速度の低下、疾患状態の改善または緩和、および寛解または予後改善が含まれる。いくつかの実施形態では、本発明の化合物、方法および組成物を使用して、疾患、障害もしくは状態の発症を遅延させる、またはＥＭＴ関連疾患、障害もしくは状態の進行を遅延させることができる。この用語は、対象が完全に回復するまで処置されることを必ずしも意味しない。したがって、「処置」は、特定の疾患、障害もしくは状態の症状もしくは重症度を軽減、緩和もしくは改善すること、または特定の疾患、障害もしくは状態の発症を予防すること、または特定の疾患、障害もしくは状態を発症するリスクを軽減することを含む。これはまた、状態の完全または部分的な寛解状態を維持または促進することも含み得る。

【0072】

本明細書で使用される「処置」はまた、ヘミチャネル遮断薬の投与後の対象におけるＥＭＴ活性の阻害を含む。好ましいヘミチャネル遮断薬はＸｉｆｌａｍである。好ましい投与経路は経口である。

【0073】

疾患、状態または障害などを「処置すること」という用語は、ＥＭＴ関連障害、疾患または状態を予防すること、遅延させること、低下させること、減少させること、および特に停止することおよび逆転させることを指し得る。

【0074】

他の実施形態では、網膜が、実施例に示されるように、本明細書に記載される化合物および方法を使用して保護され、これは、本発明の保護効果も有用性を見出す加齢黄斑変性を含む慢性網膜疾患において重要である。

【0075】

「予防すること」という用語は、全体的または部分的に予防すること、または改善すること、または制御することを意味する。

【0076】

本明細書で使用される場合、「有効量」は、所望の治療的または予防的結果を達成するために、必要な投与量および期間で有効な量を指す。例えば、限定としてではないが、「有効量」は、病理学的もしくは他の望ましくないＥＭＴ活性を伴う疾患、障害もしくは状態の徴候および／もしくは症状を処置することができる、本明細書に開示される化合物もしくは組成物の量、または正常もしくはほぼ正常なＥＭＴ機能を有益に維持することができるヘミチャネル化合物もしくは組成物の量を指すことができる。

【0077】

本明細書で使用される場合、本発明の物質／分子、アゴニストまたはアンタゴニストの「治療有効量」は、個体の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびに物質／分子、アゴニストまたはアンタゴニストが個体において所望の応答を誘発する能力などの因子によって変化し得る。治療有効量はまた、好ましくは、物質／分子、アゴニストまたはアンタゴニストの任意の毒性または有害作用を治療上有益な効果が上回ることができる量である。ヘミチャネル遮断薬の治療有効量は、対象におけるＥＭＴ活性を有益に阻害する。

【0078】

本明細書で使用される場合、「予防有効量」は、所望の予防的結果、典型的には望ましくないＥＭＴ活性の阻害を達成するために、必要な投与量および期間で有効な量を指す。典型的には、必ずしもそうとは限らないが、予防有効量は治療有効量よりも少ない。

【0079】

「医薬製剤」という用語は、その中に含有される有効成分、例えばヘミチャネル遮断薬の生物学的活性が有効となることを可能にするような形態であり、製剤が投与される対象にとって許容できないほど毒性である追加の成分を含有しない調製物を指す。

【0080】

本明細書で使用される「薬学的に許容され得る担体」は、対象に安全に投与することができる、有効成分以外の医薬製剤中の成分を指す。薬学的に許容され得る担体には、それだけに限らないが、バッファー、賦形剤、安定剤および保存剤が含まれる。

【0081】

本明細書で使用される場合、「個体」および「患者」を含む「対象」などの用語は、その全てが本明細書で互換的に使用され得るが、ヒト、飼育動物および農場動物、ならびに動物園、野生動物公園、スポーツ、またはペット動物、例えばイヌ、ウマ、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウシなどを含む任意の哺乳動物を指す。好ましい哺乳動物は、成人、小児および高齢者を含むヒトである。好ましいスポーツ動物はウマおよびイヌである。好ましいペット動物はイヌおよびネコである。ある特定の実施形態では、対象、個体または患者がヒトである。

【0082】

ＥＭＴは、当技術分野で公知の方法を使用してインビボで測定および監視および可視化され得る。ＥＭＴは、サイトケラチンおよびＥ－カドヘリンなどの上皮細胞マーカーの喪失、引き続いてＮ－カドヘリン、ビメンチンおよびフィブロネクチンなどの間葉系細胞マーカーの発現の上方調節を特徴とする。上皮および間葉系細胞マーカーの発現の変化は、移行中の細胞と隣接上皮細胞との間の接着の減少、および細胞外マトリックスを分解する酵素の分泌の増加をもたらす。まとめると、これは、上皮細胞が頂端－基底細胞極性を失い、それらの細胞骨格を再編成し、遺伝子発現を再プログラミングすることをもたらす。がんにおいては、これはがん転移における浸潤表現型の発生を可能にする。ＥＭＴは、いくつかの方法を使用して測定され得る。例えば、Ｂｕｓｃｈ，ＥＬら Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｔ ｒｉｓｋ ｆｏｒ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ２０１６年１月；３３（１）：５３～６２（原発腫瘍標本におけるＥＭＴマーカーの測定）；Ｓｏｎｇ Ｊ．ら、Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｍａｒｋｅｒｓ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｉｎ ａ ｃｅｌｌ－ｂａｓｅｄ ｍｏｄｅｌ ａｎｄ ｖａｌｉｄａｔｅｄ ｉｎ ｌｕｎｇ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ 第１９巻、論文番号：６８０（２０１９年）；Ｍｉｃｈａｅｌ ＺｅｉｓｂｅｒｇおよびＥｒｉｃ Ｇ．Ｎｅｉｌｓｏｎ、Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｓ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２００９年；１１９（６）：１４２９～１４３７；Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ（ＥＭＴ）Ｍａｒｋｅｒｓ ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｏｖｕｓｂｉｏ．ｃｏｍ／ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｎｅｗｓ／ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ／ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ－ｆｏｒ－ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ－ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ－ｅｍｔ－ｍａｒｋｅｒ ０８／１８／２０１６－１４：１５を参照されたい。ＥＭＴは、Ｉｅｄａ，Ｔ．ら、Ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ａｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ－ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｎｅｔｗｏｒｋ Ｓｃｉ Ｒｅｐ ９、１６３７８（２０１９）（間葉系ビメンチンプロモーターが赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）発現を駆動する蛍光ガイドＥＭＴイメージングシステムを使用した、ＥＭＴを受けているＣＲＣ細胞のインビボ時空間可視化）；Ｍａｉｅ，Ｊ．ら、Ｖｉｓｕａｌｉｚｉｎｇ Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｃｈｒｏｍｏｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、７６（１９）；５５９２－６（ｃｈｒｏｍｏｂｏｄｙ技術および生物系におけるＥＭＴ関連プロセスの可視化を考察している）に記載されるＥＭＴイメージングシステムなどの公知の技術を使用して可視化および監視され得る。「Ｔｈｅ ｂａｓｉｃｓ ｏｆ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ」において、ＫａｌｌｕｒｉおよびＷｅｉｎｂｅｒｇは、転写因子の活性化および不活性化ならびに特異的ｍＲＮＡの発現から、細胞骨格タンパク質および細胞表面タンパク質の発現および構造の変化にまで及ぶ、上皮細胞が間葉系になるまでに受ける変化を記載している（Ｋａｌｌｕｒｉ＆Ｗｅｉｎｂｅｒｇ、２００９年）。

【0083】

眼では、単純で非侵襲的なイメージング試験である光干渉断層撮影（ＯＣＴ）を使用してＥＭＴを可視化、測定および監視することができる。眼ＥＭＴは、細胞形態の変化を可視化することによって直接測定することができる。角膜では、例えば、虹彩角膜内皮症候群が、フックス角膜内皮ジストロフィーで見られる滴状角膜と同様に、ＩＣＥ症候群患者において「槌目銀」または「打ち延ばされた青銅」の外観を有する角膜内皮をもたらす。病理学的レベルでは、正常な内皮細胞が、遊走特性を有するより上皮様の細胞で置き換えられている。これは、インビボ共焦点顕微鏡法を使用して観察することができる（例えば、Ｇｒｕｐｃｈｅｖａ ＣＮら、Ｉｎ ｖｉｖｏ ｃｏｎｆｏｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｉｒｉｄｏｃｏｒｎｅａｌ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．２００４年；３２：２７５～２８３参照）。網膜では、ＲＰＥ機能の破壊が、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）および増殖性硝子体網膜症（ＰＶＲ）を含む複数の眼疾患に関与している。網膜色素上皮の変化は、細胞がＥＭＴを受けるにつれて色素上皮の喪失を示す、眼底イメージングを使用して、ならびに網膜色素上皮厚さおよび完全性（ＥＭＴが起こっていることを示すＲＰＥ過形成から生じる反射率の増加を含む）を測定するためにＯＣＴを使用して直接可視化される。

【0084】

本明細書で使用される場合、「ヘミチャネル」という用語は、ギャップ結合（２つのヘミチャネルまたはコネキソンが隣接細胞間の細胞間空間を横切って接続してギャップ結合を形成する）の一部であり、２つの隣接細胞の細胞質間のギャップ結合のための細孔を形成する、典型的には同種または異種の、すなわちコネキシンタンパク質のホモマーまたはヘテロマーヘキサマーである、いくつかのコネキシンタンパク質で構成される。ヘミチャネルは、結合の片側の細胞によって供給され、対向する細胞からの２つのヘミチャネルが通常一緒になって完全な細胞間ヘミチャネルを形成する。しかしながら、一部の細胞において、および一部の状況下における細胞においては、ヘミチャネル自体が、細胞質と細胞外空間との間の導管として活性となり、イオンおよび低分子の移動を可能にする。

【0085】

式Ｉの化合物、例えばＸｉｆｌａｍ、および／または前記化合物のいずれかの類似体もしくはプロドラッグは、ヘミチャネル、好ましくは任意のタイプのコネキシンタンパク質を含むヘミチャネルの機能および／または活性をモジュレートすることができる。したがって、「ヘミチャネル」への言及は、文脈上別段の要求がない限り、いくつかの異なるコネキシンタンパク質のいずれか１またはそれを超える数を含む、から本質的になる、またはからなるヘミチャネルを含むと広く解釈されるべきである。しかしながら、例として、ヘミチャネルは、上記で具体的に言及されるものを含むいずれかのコネキシンのうちの１またはそれを超える数を含み得る。一実施形態では、ヘミチャネルが前記コネキシンのうちの１つからなる。一実施形態では、ヘミチャネルが、コネキシン３６、３７、４０、４３、４５および５７のうちの１またはそれを超える数を含む。一実施形態では、ヘミチャネルが、コネキシン３７、４０または４３のうちの１つからなる。一実施形態では、ヘミチャネルがコネキシン４３ヘミチャネルである。一実施形態では、ヘミチャネルが網膜ヘミチャネルである。一実施形態では、ヘミチャネルが脈絡膜ヘミチャネルである。一実施形態では、ヘミチャネルが血管ヘミチャネルである。一実施形態では、ヘミチャネルが、血管内皮細胞に見出されるコネキシンヘミチャネルである。１つの特定の実施形態では、ヘミチャネルが、コネキシン３０、３７およびコネキシン４３のうちの１またはそれを超える数を含む。１つの特定の実施形態では、ヘミチャネルがコネキシン３０からなる。１つの特定の実施形態では、ヘミチャネルがコネキシン３７からなる。１つの特定の実施形態では、ヘミチャネルがコネキシン４３からなる。一実施形態では、ヘミチャネルが、コネキシン２６を除く１またはそれを超えるコネキシンを含む。一実施形態では、組成物が、前記のものを含む任意のコネキシンのヘミチャネル遮断薬を含むまたは除外することができる。

【0086】

ヘミチャネルおよびヘミチャネルは、任意の種類の細胞に存在し得る。したがって、「ヘミチャネル」または「ヘミチャネル」への言及は、任意の上皮または内皮細胞型に存在し、ＥＭＴまたはＥｎｄＭＴの阻害の標的となるヘミチャネルまたはヘミチャネルへの言及を含むと解釈されるべきである。本発明の一実施形態では、前記ヘミチャネルまたはヘミチャネルが、器官内、またはがんもしくは腫瘍内の細胞に存在する。一実施形態では、前記ヘミチャネルが血管ヘミチャネルである。一実施形態では、前記ヘミチャネルが、血管内皮細胞および／または眼上皮もしくは内皮細胞に見出されるコネキシンヘミチャネルである。

【0087】

本明細書で使用される場合、「ヘミチャネルのモジュレーション」は、ヘミチャネルの１またはそれを超える機能および／または活性、典型的には、ヘミチャネルを通る細胞間の分子の流れのモジュレーションである。このような機能および活性には、例えば、細胞外空間もしくは環境からヘミチャネルを通る細胞内への分子の流れ、および／またはヘミチャネルを通る細胞内空間もしくは環境から細胞外空間もしくは環境への分子の流れが含まれる。ヘミチャネルのモジュレーションに有用な化合物は、「ヘミチャネル調節剤」または「ヘミチャネル阻害剤」と呼ばれ得る。本発明および本明細書に記載される方法の全ての態様は、例えば、ヘミチャネル開口および／またはＡＴＰの放出を阻害または遮断することを含む、その活性を破壊するためのヘミチャネルのモジュレーションによって達成され得る。コネキシンヘミチャネルの調節剤または阻害剤は、本明細書では、例えば抗コネキシン４３ヘミチャネル化合物を含む「抗ヘミチャネル化合物」とも呼ばれる。

【0088】

ヘミチャネルの機能のモジュレーションは、任意の手段によって行われ得る。しかしながら、単なる例として、モジュレーションは、ヘミチャネルの閉鎖の誘導または促進；ヘミチャネル開口の防止、遮断、阻害または減少；ヘミチャネルおよび／またはギャップ結合の細胞内在化の誘発、誘導または促進のうちの１またはそれを超える数によって行われ得る。「遮断すること」、「阻害すること」、「防止すること」、「減少させること」、および「拮抗すること」などの単語の使用は、完全な遮断、阻害、防止、または拮抗を意味すると解釈されない場合があるが、これが好ましい場合があり、ヘミチャネルおよび／またはヘミチャネルの機能または活性を少なくとも低減するための部分的な遮断、阻害、防止、または拮抗を含むと解釈されるべきである。同様に、「誘導すること」または「促進すること」は、ヘミチャネル（またはヘミチャネルの群）の完全な内在化を意味すると解釈されるべきではなく、ヘミチャネルの機能または活性を少なくとも低下させるための部分的な内在化を含むと解釈されるべきである。

【0089】

本明細書で使用される場合、「抗ヘミチャネル化合物」および「ヘミチャネル遮断薬」という用語は、コネキシンヘミチャネルを通る分子の通過を妨げる化合物である。抗ヘミチャネル化合物またはヘミチャネル遮断薬は、ヘミチャネル開口を遮断もしくは減少させる、ヘミチャネルを通した細胞外空間への分子の放出を遮断もしくは減少させる、および／または細胞内空間へのヘミチャネルを通した分子の進入を遮断もしくは減少させることができる。抗ヘミチャネル化合物およびヘミチャネル遮断薬には、ヘミチャネル漏出または細胞外空間へのもしくは細胞外空間からの分子の通過を完全にまたは部分的に遮断する化合物が含まれる。抗ヘミチャネル化合物およびヘミチャネル遮断薬には、ヘミチャネルの開口確率を低下させる化合物も含まれる。開口確率は、チャネルが閉じている時間に対する開いたままである時間の割合の尺度である（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ ＧＳら、Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｇａｐ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｃｈａｎｎｅｌｓ Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １６６２（２００４年）９６～１０１に概説）。抗ヘミチャネル化合物およびヘミチャネル遮断薬には、ヘミチャネル調節剤が含まれる。抗ヘミチャネル化合物およびヘミチャネル遮断薬は、コネキシンヘミチャネルを通る分子の通過を直接または直接妨害し得る。本発明および本明細書に記載される方法の全ての態様は、例えば、本明細書に記載されるように、ヘミチャネルを遮断すること、またはヘミチャネルの開口確率を低下させることによって達成され得る。一実施形態では、コネキシンヘミチャネルが、コネキシン４３ヘミチャネル、および／または他の血管コネキシンヘミチャネルである。

【0090】

本明細書で使用される場合、「ＥＭＴを阻害する」および「ＥｎｄＭＴを阻害する」などの用語は、場合によっては、上皮間葉転換または内皮間葉転換を低下させる、減少させるまたは下方調節することを指す。本発明のいくつかの実施形態では、網膜色素上皮、網膜血管内皮、ＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭｔが正常状態または疾患前状態に戻される。

【0091】

「ペプチド」、「ペプチド模倣物」および「模倣物」という用語は、それらが模倣するタンパク質領域の実質的に同じ構造的および機能的特徴を有し得る合成または遺伝子操作された化学化合物を含む。コネキシンヘミチャネルの場合、これらは、例えばヘミチャネルコネキシンの細胞外ループを模倣し得る。

【0092】

本特許は、本発明の方法によって改善され得るＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴ関連の疾患、障害または状態に対する新たな方法を記載する。

【0093】

本発明は、とりわけ、全体的または部分的に病理学的または他の望ましくないＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴ活性を特徴とする疾患、障害または状態を処置するために、ヘミチャネル遮断薬、例えば式Ｉの化合物、例えばＸｉｆｌａｍ、または式ＩＩの化合物、および／または前記化合物のいずれかの類似体もしくはプロドラッグの投与によりＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴ活性を阻害する方法を提供する。

【0094】

いくつかの実施形態では、本発明は、Ｃｘ４３ヘミチャネルを直接および直ちに遮断し、ＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴの阻害を引き起こすための、式Ｉの化合物、例えばＸｉｆｌａｍ、または式ＩＩの化合物、および／または前記化合物のいずれかの類似体もしくはプロドラッグの使用を特徴とする。いくつかの例示的な用量は、例えば、１．０～３．０ｍｇ／ｋｇ、または３．０～４．０ｍｇ／ｋｇおよび４．０～５．０ｍｇ／ｋｇ、または１．１～１．５ｍｇ／ｋｇを含む、約１．０～約７．０ｍｇ／ｋｇの範囲である。いくつかの例示的な毎日の投与量または他の定期投与量は、例えば、約８０～１６０ｍｇ／投与、約１６０～２４０ｍｇ／投与、約２４０～３００ｍｇ／投与および約３００～５００ｍｇ／投与（８０、１５０、２５０および５００ｍｇ／投与の用量を含む）を含む、約１０～２５０ｍｇ／投与の範囲である。
コネキシン

【0095】

様々な実施形態では、モジュレートされるヘミチャネルが、任意のコネキシンヘミチャネルであり、コネキシン２６（Ｃｘ２６）ヘミチャネルを含み得るまたは除外し得る。ある特定の実施形態では、モジュレートされるヘミチャネルが、コネキシン３６（Ｃｘ３６）ヘミチャネル、コネキシン３７（Ｃｘ３７）ヘミチャネル、コネキシン４０（Ｃｘ４０）ヘミチャネル、コネキシン４３（Ｃｘ４３）ヘミチャネル、コネキシン４５（Ｃｘ４５）ヘミチャネルおよび／またはコネキシン５７（Ｃｘ５７）ヘミチャネルである。一実施形態では、モジュレートされるヘミチャネルが、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４３、Ｃｘ４５および／またはＣｘ５７タンパク質のうちの１またはそれを超える数を含む。１つの特定の実施形態では、モジュレートされるヘミチャネルおよび／またはヘミチャネルが、Ｃｘ３７および／またはＣｘ４０および／またはＣｘ４３ヘミチャネルである。１つの特定の実施形態では、モジュレートされるヘミチャネルおよび／またはヘミチャネルが、Ｃｘ３０および／またはＣｘ４３および／またはＣｘ４５ヘミチャネルである。１つの特定の実施形態では、モジュレートされるヘミチャネルおよび／またはヘミチャネルが、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４３および／またはＣｘ４５ヘミチャネルである。

【0096】

いくつかの実施形態では、モジュレートされるヘミチャネルが、前記コネキシンタンパク質のいずれかを含むまたは除外することができる。いくつかの態様では、ヘミチャネル遮断薬が、Ｃｘ４３ヘミチャネル、Ｃｘ４０ヘミチャネルおよび／またはＣｘ４５ヘミチャネルの遮断薬である。ある特定の好ましい実施形態では、ヘミチャネル遮断薬が、上皮および／または内皮細胞コネキシン４３ヘミチャネル遮断薬である。本明細書で特徴とされる使用のいずれかのための本発明の医薬組成物はまた、記載されるコネキシンヘミチャネル（同種および異種ヘミチャネルを含む）のいずれかを阻害または遮断し得るヘミチャネル遮断薬を含み得る。いくつかの実施形態では、モジュレートされるヘミチャネルが、前記コネキシンヘミチャネルのいずれかを含むもしくは除外することができる、またはヘテロマーヘミチャネルであり得る。

【0097】

本発明の投与、共投与、組成物、キットまたは処置方法のいずれかで使用されるヘミチャネル遮断薬は、一実施形態では、Ｃｘ４３ヘミチャネル遮断薬である。他の実施形態は、Ｃｘ４５ヘミチャネル遮断薬、Ｃｘ３０ヘミチャネル遮断薬、Ｃｘ３７ヘミチャネル遮断薬、Ｃｘ４０ヘミチャネル遮断薬、ならびに上記もしくは本明細書に記載されるものを含む、または上記もしくは本明細書に記載される任意の他のコネキシンから本質的になる、もしくはからなるコネキシンヘミチャネルまたはヘミチャネルのいずれかの遮断薬を含む。いくつかの実施形態は、前記コネキシンもしくはヘミチャネル、または本特許に記載されているその他のいずれかを含み得るまたは除外し得る。様々な実施形態では、例として、モジュレートされるヘミチャネルが、コネキシン３６、コネキシン３７、コネキシン４０、コネキシン４３、コネキシン４５、コネキシン５７、コネキシン５９および／またはコネキシン６２のうちの１またはそれを超える数を含む。

【0098】

一実施形態では、特に網膜に関する場合、モジュレートされるヘミチャネルが、Ｃｘ３６、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４３、Ｃｘ４５またはＣｘ５７タンパク質のうちの１またはそれを超える数を含む。標的化ヘミチャネルコネキシンには、例えば、血管内の選択されたヘミチャネルコネキシン（例えば、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０またはＣｘ４３）、ならびに神経上皮細胞、例えば星状膠細胞（例えば、Ｃｘ４３）、アマクリン細胞（例えば、Ｃｘ３６、Ｃｘ４５）、双極細胞（例えば、Ｃｘ３６、Ｃｘ４５）、外網状層および内網状層、神経節細胞層（例えば、Ｃｘ３６、Ｃｘ４５）、錐体光受容体および網膜内皮細胞、ならびに他の網膜ニューロン内のヘミチャネルコネキシンのうちの１またはそれを超える数が含まれる。いくつかの実施形態では、Ｃｘ３６およびＣｘ４３ヘミチャネルが標的化される。１つの特定の実施形態では、モジュレートされるヘミチャネルおよび／またはヘミチャネルがＣｘ４３を含む。一実施形態では、外網状層の細胞内のコネキシンを含むヘミチャネルが標的化され（例えば、Ｃｘ４３）、本発明の方法が、ＯＰＬ薄化を停止および逆転させ、ＯＰＬを救済することができる。

【0099】

他の実施形態、特に脈絡膜または網膜の血管に関する実施形態では、モジュレートされるヘミチャネルが、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０またはＣｘ４３タンパク質のうちの１またはそれを超える数を優先的に含み得る。１つの特定の実施形態では、モジュレートされるヘミチャネルおよび／またはヘミチャネルがＣｘ４３を含む。一実施形態では、大口径の有窓でない血管で構成される、ハラー層としても知られる、外脈絡膜の細胞内の血管コネキシンを含むヘミチャネルが標的化される。別の実施形態では、有意に小さい血管で構成される、サットレル層としても知られる、内脈絡膜の細胞内の血管および内皮細胞コネキシンを含むヘミチャネルが標的化される。別の実施形態では、外脈絡膜および内脈絡膜の細胞内のコネキシンを含むヘミチャネルが標的化される。別の実施形態では、脈絡毛細管板の毛細血管内のコネキシンを含むヘミチャネルが標的化される。一実施形態では、本発明の方法において標的化されるヘミチャネル血管コネキシンが、周皮細胞内のヘミチャネルコネキシンならびに血管平滑筋および内皮細胞内のコネキシンを含む。別の実施形態では、本発明の方法において標的化されるヘミチャネル血管コネキシンが、周皮細胞内のヘミチャネルおよび内皮細胞、例えば微小毛細血管内のコネキシンを含む。Ｃｘ４３ヘミチャネルが本発明の好ましい標的である。
低分子ヘミチャネル遮断薬

【0100】

ヘミチャネル遮断薬の例としては、低分子ヘミチャネル遮断薬、例えばＸｉｆｌａｍ（トナベルサット）が挙げられる。トナベルサット（ＰｕｂＣｈｅｍ、ＤｒｕｇＢａｎｋおよびＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓにも示される）の構造は以下の通りである：

【化1】

【0101】

トナベルサットについての他の化学名は、ＰｕｂＣｈｅｍ（Ｎ－［（３Ｓ，４Ｓ）－６－アセチル－３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－３，４－ジヒドロクロメン－４－イル］－３－クロロ－４－フルオロベンズアミド）、ＤｒｕｇＢａｎｋ（
Ｎ－［（３Ｓ，４Ｓ）－６－アセチル－３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－３，４－ジヒドロ－２Ｈ－１－ベンゾピラン－４－イル］－３－クロロ－４－フルオロベンズアミド）およびＣｈｅｍｉｃａｌ Ｂｏｏｋ（Ｎ－（（３Ｓ，４Ｓ）－６－アセチル－３－ヒドロキシ－２，２－ジメチルクロマン－４－イル）－３－クロロ－４－フルオロベンズアミド；または２Ｈ－ベンゾ（Ｂ）ピラン－３－オール、６－アセチル－４－（３－クロロ－４－フルオロベンゾイルアミノ）－３，４－ジヒドロ－２，２－ジメチル－；またはＮ－［（３Ｓ，４Ｓ）－６－アセチル－３，４－ジヒドロ－３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－２Ｈ－１－ベンゾピラン－４－イル］－３－クロロ－４－フルオロ－ベンズアミド）に見出される。

【0102】

いくつかの実施形態では、ヘミチャネル遮断薬が、Ｘｉｆｌａｍ以外の低分子、例えば、上記のように、その開示全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｏｌｉｎ Ｇｒｅｅｎらの名前で出願された米国特許出願公開第２０１６０１７７２９８号において式Ｉまたは式ＩＩに記載されるヘミチャネル遮断薬である。様々な好ましい実施形態は、本明細書に記載または言及される疾患、障害および状態を含む、ＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴ関連の疾患、障害および状態を処置するための、ヘミチャネル開口を遮断または改善または拮抗または阻害する低分子の使用を含む。様々な実施形態では、ヘミチャネル開口を遮断または改善または阻害する低分子が、Ｘｉｆｌａｍのプロドラッグまたはその類似体である。

【0103】

いくつかの実施形態では、本発明は、例えば、ＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴ関連の疾患、障害または状態を処置するために、例えば、Ｃｘ４３ヘミチャネルを遮断するための、式Ｉの化合物、例えばＸｉｆｌａｍ、および／または前記化合物のいずれかの類似体もしくはプロドラッグを含む低分子ヘミチャネル遮断薬の使用を特徴とする。

【0104】

例として、ヘミチャネル遮断薬Ｘｉｆｌａｍ（トナベルサット）は、ＩＵＰＡＣ名Ｎ－［（３Ｓ，４Ｓ）－６－アセチル－３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－３，４－ジヒドロクロメン－４－イル］－３－クロロ－４－フルオロベンズアミドまたは（３Ｓ－シス）－Ｎ－（６－アセチル－３，４－ジヒドロ－３－ヒドロキシ－２，２－（ジメチル－ｄ６）－２Ｈ－１－ベンゾピラン－４－イル）－３－クロロ－４－フルオロベンズアミドによって知られている場合がある。

【0105】

別の有用な化合物は、ボルドの木およびテンダイウヤク（Ｌｉｎｄｅｒａ ａｇｇｒｅｇａｔａ）に見出されるアポルフィンクラスのアルカロイドであるボルジンである。

【0106】

一実施形態では、Ｘｉｆｌａｍおよび／またはその類似体もしくはプロドラッグが、式Ｉを有する化合物：

【化2】

（式中、
ＹはＣ－Ｒ_１であり；
Ｒ_１はアセチルであり；
Ｒ_２は、水素、Ｃ_３～８シクロアルキル、必要に応じて酸素によって中断またはヒドロキシ、Ｃ_１～６アルコキシもしくは置換アミノカルボニルによって置換されたＣ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルキルカルボニル、Ｃ_１～６アルコキシカルボニル、Ｃ_１～６アルキルカルボニルオキシ、Ｃ_１～６アルコキシ、ニトロ、シアノ、ハロ、トリフルオロメチル、またはＣＦ_３Ｓ；またはＣＦ_３－Ａ－基（式中、Ａは－ＣＦ_２－、－ＣＯ－、－ＣＨ_２－、ＣＨ（ＯＨ）、ＳＯ_２、ＳＯ、ＣＨ_２－ＯまたはＣＯＮＨである）；またはＣＦ_２Ｈ－Ａ’－基（式中、Ａ’は酸素、硫黄、ＳＯ、ＳＯ_２、ＣＦ_２またはＣＦＨである）；トリフルオロメトキシ、Ｃ_１～６アルキルスルフィニル、ペルフルオロＣ_２～６アルキルスルホニル、Ｃ_１～６アルキルスルホニル、Ｃ_１～６アルコキシスルフィニル、Ｃ_１～６アルコキシスルホニル、アリール、ヘテロアリール、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ホスホノ、アリールカルボニルオキシ、ヘテロアリールカルボニルオキシ、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アリールスルホニルもしくはヘテロアリールスルホニル（任意の芳香族部分は必要に応じて置換されている）、Ｃ_１～６アルキルカルボニルアミノ、Ｃ_１～６アルコキシカルボニルアミノ、Ｃ_１～６アルキル－チオカルボニル、Ｃ_１～６アルコキシ－チオカルボニル、Ｃ_１～６アルキル－チオカルボニルオキシ、１－メルカプトＣ_２～７アルキル、ホルミル、またはアミノスルフィニル、アミノスルホニルもしくはアミノカルボニル（任意のアミノ部分は１つもしくは２つのＣ_１～６アルキル基によって必要に応じて置換されている）、またはＣ_１～６アルキルスルフィニルアミノ、Ｃ_１～６アルキルスルホニルアミノ、Ｃ_１～６アルコキシスルフィニルアミノもしくはＣ_１～６アルコキシスルホニルアミノ、またはＣ_１～６アルキルカルボニル、ニトロもしくはシアノによって末端置換されたエチレニル、または－Ｃ（Ｃ_１～６アルキル）ＮＯＨもしくは－Ｃ（Ｃ_１～６アルキル）ＮＮＨ_２；または１つもしくは２つのＣ_１～６アルキルによってまたはＣ_２～７アルカノイルによって必要に応じて置換されたアミノであり；Ｒ_３およびＲ_４の一方は水素またはＣ_１～４アルキルであり、他方はＣ_１～４アルキル、ＣＦ_３またはＣＨ_２Ｘ^ａであり、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、Ｃ_１～４アルコキシ、ヒドロキシ、Ｃ_１～４アルキルカルボニルオキシ、－Ｓ－Ｃ_１～４アルキル、ニトロ、１つもしくは２つのＣ_１～４アルキル基によって必要に応じて置換されたアミノ、シアノまたはＣ_１～４アルコキシカルボニルである；あるいはＲ_３およびＲ_４が一緒になって、Ｃ_１～４アルキルによって必要に応じて置換されたＣ_２～５ポリメチレンであり；
Ｒ_５は、Ｃ_１～６アルキルカルボニルオキシ、ベンゾイルオキシ、ＯＮＯ_２、ベンジルオキシ、フェニルオキシまたはＣ_１～６アルコキシであり、Ｒ_６およびＲ_９は水素である、あるいはＲ_５はヒドロキシであり、Ｒ_６は水素またはＣ_１～２アルキルであり、Ｒ_９は水素であり；
Ｒ_７はヘテロアリールまたはフェニルであり、これらは共に、独立して、クロロ、フルオロ、ブロモ、ヨード、ニトロ、Ｃ_１～４アルキルによって１回もしくは２回必要に応じて置換されたアミノ、シアノ、アジド、Ｃ_１～４アルコキシ、トリフルオロメトキシおよびトリフルオロメチルから選択される基または原子で１またはそれを超える回数必要に応じて置換されており；
Ｒ_８は、水素、Ｃ_１～６アルキル、ＯＲ_１１またはＮＨＣＯＲ_１０であり、Ｒ_１１は、水素、Ｃ_１～６アルキル、ホルミル、Ｃ_１～６アルカノイル、アロイルまたはアリール－Ｃ_１～６アルキルであり、Ｒ_１０は、水素、Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシ、モノもしくはジＣ_１～６アルキルアミノ、アミノ－Ｃ_１～６アルキル、ヒドロキシ－Ｃ_１～６アルキル、ハロ－Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アシルオキシ－Ｃ_１～６アルキル、Ｃ_１～６アルコキシカルボニル－Ｃ_１～６アルキル、アリールまたはヘテロアリールであり；Ｒ_８－Ｎ－ＣＯ－Ｒ_７基はＲ_５基に対してシスであり；Ｘは酸素またはＮＲ_１２であり、Ｒ_１２は水素またはＣ_１～６アルキルである）
の群から選択される。

【0107】

いくつかの実施形態では、本発明は、例えば、ＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴ活性を阻害するために、例えば、Ｃｘ４３ヘミチャネルを遮断するための、式ＩＩの化合物、および／または前記化合物のいずれかの類似体もしくはプロドラッグを含む低分子ヘミチャネル遮断薬の使用を特徴とする。
式ＩＩ

【化3】

（式中、
ＱはＯまたは式＝ＮＨＯＲ_４３のオキシムであり、Ｒ_４３は、
（ｉ）Ｈ、Ｃ_１～４フルオロアルキルもしくは必要に応じて置換されたＣ_１～４アルキルから選択される、または
（ｉｉ）－Ａ_３００－Ｒ_３００
であり、
Ａ_３００は、直接結合、－Ｃ（Ｏ）Ｏ^＊－、－Ｃ（Ｒ_３）（Ｒ_４）Ｏ^＊－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ（Ｒ_３）（Ｒ_４）Ｏ^＊－、または－Ｃ（Ｒ_３）（Ｒ_４）ＯＣ（Ｏ）Ｏ^＊－であり、^＊印が付けられた原子はＲ_３００に直接結合しており、
Ｒ_３およびＲ_４は、Ｈ、フルオロ、Ｃ_１～４アルキルもしくはＣ_１～４フルオロアルキルから独立して選択される、または
Ｒ_３およびＲ_４は、これらが結合している原子と一緒になって、シクロプロピル基を形成し、
Ｒ_３００は、［１］、［２］、［２Ａ］、［３］、［４］、［５］または［６］基から選択され；
Ｒ_２はＨまたはＢ－Ｒ_２１であり、
Ａは、直接結合、－Ｃ（Ｏ）Ｏ^＊－、－Ｃ（Ｒ_３）（Ｒ_４）Ｏ^＊－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ（Ｒ_３）（Ｒ_４）Ｏ^＊－または－Ｃ（Ｒ_３）（Ｒ_４）ＯＣ（Ｏ）Ｏ^＊－であり、^＊印が付けられた原子はＲ_１に直接結合しており、Ｒ_３およびＲ_４は、Ｈ、フルオロ、Ｃ_１～４アルキルもしくはＣ_１～４フルオロアルキルから独立して選択される、またはＲ_３およびＲ_４は、これらが結合している原子と一緒になって、シクロプロピル基を形成し、
Ｒ_１は、［１］、［２］、［２Ａ］、［３］、［４］、［５］および［６］基から選択され、^＊＊印を付けられた原子はＡに直接結合しており：

【化4】

Ｒ_５およびＲ_６は、Ｈ、Ｃ_１～４アルキル、Ｃ_１～４フルオロアルキルおよびベンジルからそれぞれ独立して選択され；
Ｒ_７は、Ｈ、Ｃ_１～４アルキルおよびＣ_１～４フルオロアルキルから独立して選択され；
Ｒ_８は、
（ｉ）Ｈ、Ｃ_１～４アルキルもしくはＣ_１～４フルオロアルキル、または
（ｉｉ）天然もしくは非天然α－アミノ酸、または本明細書に記載されるペプチド模倣物もしくは他のペプチドの側鎖、または
（ｉｉｉ）ビオチンもしくはビオチンに化学的に連結している
から選択され；
Ｒ_９は、Ｈ、－Ｎ（Ｒ_１１）（Ｒ_１２）、または－Ｎ^＋（Ｒ_１１）（Ｒ_１２）（Ｒ_１３）Ｘ^－、または－Ｎ（Ｒ_１１）Ｃ（Ｏ）Ｒ_１４から選択され、
Ｒ_１１、Ｒ_１２およびＲ_１３は、Ｈ、Ｃ_１～４アルキルまたはＣ_１～４フルオロアルキルから独立して選択され、
Ｒ_１４は、Ｈ、Ｃ_１～４アルキルまたはＣ_１～４フルオロアルキルであり、
Ｒ_１５は、Ｃ_１～４アルキルおよびＣ_１～４フルオロアルキルから独立して選択され、
Ｘ^－は薬学的に許容され得るアニオンである）。
いくつかの実施形態では、ＱがＯである。

【0108】

上に示されるマーカッシュ群のいずれについても、その群は、その群について列挙される種のいずれかを含むまたは除外することができる。本発明の方法で使用するためのヘミチャネル遮断薬は、これらの化合物のいずれかを含み得るまたは除外し得る。

【0109】

別の実施形態では、式Ｉの類似体が、化合物カラベルサット（Ｎ－［（３Ｒ，４Ｓ）－６－アセチル－３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－３，４－ジヒドロクロメン－４－イル］－４－フルオロベンズアミド）またはトランス－（＋）－６－アセチル－４－（Ｓ）－（４－フルオロベンゾイルアミノ）－３，４－ジヒドロ－２，２－ジメチル－２Ｈ－１－ベンゾ［ｂ］ピラン－３Ｒ－オール、半水和物である。

【0110】

ある特定の実施形態では、Ｘｉｆｌａｍおよび／またはその類似体が、遊離塩基または薬学的に許容され得る塩の形態である。他の実施形態では、Ｘｉｆｌａｍおよび／またはその類似体の１またはそれを超える多形、１またはそれを超える異性体、ならびに／あるいは１またはそれを超える溶媒和物が使用され得る。

【0111】

他の様々な低分子がヘミチャネル活性の阻害に有用であると報告されている。上記のように、全て全体が参照により組み込まれる、Ｇｒｅｅｎらの米国特許出願公開第２０１６０１７７２９８号、式ＩＩ；Ｓａｖｏｒｙらの米国特許出願公開第２０１６０３１８８９１号；およびＳａｖｏｒｙらの米国特許出願公開第２０１６０３１８８９２号を参照されたい。本発明の方法で使用するためのヘミチャネル遮断薬は、これらの化合物のいずれかを含み得るまたは除外し得る。

【0112】

一態様では、本発明は、本明細書に記載される疾患、障害または状態、ならびに病理学的または他の望ましくないＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴ活性を特徴とする疾患、障害または状態を処置する方法における、単独でのまたはキット、パッケージもしくは他の製造品内の医薬組成物の使用に関する。いくつかの態様では、ヘミチャネル遮断薬がコネキシン４３ヘミチャネル遮断薬である。記載されるように、他のコネキシンヘミチャネルの遮断薬は本発明の範囲内である。

【0113】

いくつかの実施形態では、「プロモイエティ（ｐｒｏｍｏｉｅｔｙ）」が、活性剤内の官能基をマスクし、それによって、活性剤をプロドラッグに変換する保護基として作用する種を指す。典型的には、プロモイエティは、インビボで酵素的または非酵素的手段によって切断される結合（複数可）を介して薬物に付着され、それによって、プロドラッグをその活性形態に変換する。いくつかの実施形態では、プロモイエティが活性剤であってもよい。いくつかの実施形態では、プロモイエティが、ヘミチャネル遮断薬分子、ペプチド、抗体または抗体断片に結合され得る。いくつかの実施形態では、プロモイエティが、例えば、ペプチドまたはペプチド模倣物または低分子または他の有機ヘミチャネル遮断薬のいずれかに結合され得る。いくつかの実施形態では、プロモイエティが式Ｉの化合物に結合され得る。いくつかの実施形態では、プロドラッグが、別のヘミチャネル化合物、例えば、Ｇｒｅｅｎらの米国特許出願公開第２０１６０１７７２９８号；Ｓａｖｏｒｙらの米国特許出願公開第２０１６０３１８８９１号；またはＳａｖｏｒｙらの米国特許出願公開第２０１６０３１８８９２号に記載される化合物であり得る。
処置方法

【0114】

本発明の１つの方法は、（１）ＥＭＴ関連疾患、障害または状態を有する対象を特定するステップ、（２）治療有効量のコネキシンヘミチャネル阻害剤を対象に投与するステップ、および必要に応じて、（３）対象におけるＥＭＴ活性を測定または可視化するステップを含む。一実施形態では、ＥＭＴ活性が測定または可視化され、用量が維持または調整される。本方法の一実施形態では、対象がＥＭＴ関連疾患を有することが既に知られているので、ステップ（１）は必要とされない。

【0115】

一実施形態では、疾患、障害または状態がＥｎｄＭＴ関連疾患、障害または状態であり、ＥｎｄＭＴ活性が必要に応じて測定される。一実施形態では、ＥｎｄＭＴ活性が測定または可視化され、用量が維持または調整される。

【0116】

一実施形態では、ＥＭＴが、低下、阻害または減弱される。

【0117】

一実施形態では、ＥｎｄＭＴが、低下、阻害または減弱される。

【0118】

本方法の一実施形態では、コネキシンヘミチャネル阻害剤がコネキシン４３ヘミチャネル阻害剤である。

【0119】

本方法の一実施形態では、コネキシン４３ヘミチャネル阻害剤が低分子コネキシン４３ヘミチャネル阻害剤である。

【0120】

本方法の別の実施形態では、コネキシンヘミチャネル阻害剤が、コネキシン４３ヘミチャネル開口または活性を阻害または遮断する抗コネキシン４３ヘミチャネルペプチドまたはペプチド模倣物である。

【0121】

本方法の一実施形態では、コネキシン４３ヘミチャネル阻害剤がトナベルサットである。本方法の別の実施形態では、コネキシン４３ヘミチャネル阻害剤がカラベルサットである。

【0122】

本方法の一実施形態では、対象におけるＥＭＴ関連疾患、障害または状態がＥＭＴ調節不全を特徴とする。本方法の別の実施形態では、対象におけるＥｎｄＭＴ関連疾患、障害または状態がＥｎｄＭＴ調節不全を特徴とする。

【0123】

本方法の一実施形態では、対象におけるＥＭＴ関連疾患、障害または状態が、全体的または部分的に病理学的または他の望ましくないＥＭＴ活性を特徴とする。本方法の一実施形態では、対象におけるＥｎｄＭＴ関連疾患、障害または状態が、全体的または部分的に病理学的または他の望ましくないＥｎｄＭＴ活性を特徴とする。本方法の一実施形態では、対象におけるＥＭＴまたはＥｎｄＭＴ関連の疾患、障害または状態が、糖尿病性網膜症、加齢黄斑変性または増殖性硝子体網膜症である。

【0124】

本方法の別の実施形態では、対象におけるＥＭＴまたはＥｎｄＭＴ関連の疾患、障害または状態が、病理学的または他の望ましくないレベルのＥＭＴ活性を特徴とする網膜障害または他の障害である。

【0125】

本方法の別の実施形態では、対象におけるＥＭＴまたはＥｎｄＭＴ関連の疾患、障害または状態が線維症障害である。一実施形態では、ＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴの調節または阻害が眼線維症障害を処置する。

【0126】

本方法の別の実施形態では、対象におけるＥＭＴまたはＥｎｄＭＴ関連の疾患、障害または状態が、がんである。いくつかの実施形態では、例えばコネキシン４３ヘミチャネルを含むコネキシンヘミチャネルをモジュレートする化合物および方法を使用したＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が、腎線維症を処置する。いくつかの実施形態では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が、腎不全または慢性腎不全を処置する。いくつかの実施形態では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が、腎臓損傷後の腎上皮細胞におけるＥＭＴを処置する。いくつかの実施形態では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が、眼および腎臓以外の器官における線維症を処置する。いくつかの実施形態では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が、炎症後の線維症を処置する。いくつかの実施形態では、ＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴのモジュレーションまたは阻害が、腎臓損傷後の腎上皮細胞におけるＥＭＴまたはＥｎｄＭＴを処置する。いくつかの方法では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が任意の線維症／線維性障害を処置する。一実施形態では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害が眼線維症障害を処置する。上皮間葉転換は、損傷した腎尿細管細胞が、腎臓および慢性腎不全における線維症の発症に寄与する間葉系細胞に転換する機序として広く受け入れられており、いくつかの実施形態では、例えばコネキシン４３ヘミチャネルを含むコネキシンヘミチャネルをモジュレートする化合物および方法を使用したＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が腎線維症を処置する。いくつかの実施形態では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が、腎不全または慢性腎不全を処置する。いくつかの実施形態では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が、腎臓損傷後の腎上皮細胞におけるＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴを処置する。いくつかの実施形態では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が、炎症後の線維症を処置する。いくつかの実施形態では、ＥＭＴモジュレーションまたは阻害（またはＥｎｄＭＴモジュレーションもしくは阻害）が任意の線維性障害を処置する。本明細書で使用される場合、線維性障害には、上皮細胞が筋線維芽細胞表現型および最終的に線維性表現型を獲得するように誘導される任意の疾患、障害または状態が含まれる。本発明の化合物および方法で処置可能なＥＭＴおよびＥｎｄＭＴ関連線維性障害には、例えば、肺（肺）線維症、腎線維症、特発性肺線維症、肝線維症、腸線維症、眼線維症、脂肪組織線維症、心臓および他の器官の線維症、ならびに強皮症が含まれる。いくつかの実施形態では、肝線維症の最も一般的な原因につながる線維性状態、すなわちＢ型肝炎およびＣ型肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、ならびにアルコール乱用が、本発明の化合物および方法で処置可能である。Ａ１～Ａ３の範囲の肝臓活動性グレードおよび／またはＦ１～Ｆ３の範囲の線維化ステージを有する対象が、例えば、本発明の化合物および方法で処置され得る。
化学送達修飾

【0127】

本発明で有用なヘミチャネル遮断薬は、マイクロ粒子（ミクロスフェア、Ｍｐｓ）またはナノ粒子（ナノスフェア、Ｎｐｓ）製剤、またはその両方、ならびにリポソームまたはインプラントに製剤化することもできる。粒子薬物送達系には、ナノ粒子（１～９９９ｎｍ）およびマイクロ粒子（１～１，０００μｍ）が含まれ、これらはナノスフェアおよびミクロスフェアならびにナノカプセルおよびマイクロキャップとしてさらに分類される。ナノカプセルおよびマイクロカプセルでは、薬物粒子または液滴がポリマー膜に捕捉される。粒子系は、注射による送達の利点を有し、それらのサイズおよびポリマー組成は、インビボでのそれらの生物学的挙動に顕著に影響を及ぼす。ミクロスフェアはナノスフェアよりもはるかに長期間硝子体内に留まることができ、したがって、マイクロ粒子は注射後にリザーバーのように作用する。ナノ粒子は急速に拡散し、組織および細胞内に内在化される。
ヘミチャネル遮断薬活性の評価

【0128】

ヘミチャネル遮断薬の活性または有効性を評価するために、様々な方法が使用され得る。本発明の一態様では、対象におけるヘミチャネル遮断薬処置の効果が、例として本明細書に記載されるように、ＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴ活性を評価するための技術を使用して評価または監視される。

【0129】

ヘミチャネル遮断薬の活性はまた、ある特定の生物学的アッセイを使用して評価され得る。分子運動性に対する既知のまたは候補ヘミチャネル遮断薬の効果は、以下の実施例に記載される方法、またはコネキシンヘミチャネルを通る化合物の通過を決定するための他の当技術分野で公知の方法もしくは等価な方法を使用して、特定、評価、またはスクリーニングすることができる。色素移動実験、例えば、検出可能なマーカーで標識された分子の移動、ならびにヘミチャネルの機能状態を研究するために広く使用されている小型蛍光透過性トレーサーの膜貫通通過を含む様々な方法が当技術分野で知られている。例えば、Ｓｃｈｌａｐｅｒ，ＫＡら Ｃｕｒｒｅｎｔｌｙ Ｕｓｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｅｍｉｃｈａｎｎｅｌｓ．Ｃｅｌｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｄｈｅｓｉｏｎ １５：２０７～２１８（２００８年）を参照されたい。インビボ法も使用され得る。例えば、Ｄａｎｅｓｈ－Ｍｅｙｅｒ，ＨＶら Ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ ｍｉｍｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ ｒｅｄｕｃｅｓ ｖａｓｃｕｌａｒ ｌｅａｋ ａｎｄ ｒｅｔｉｎａｌ ｇａｎｇｌｉｏｎ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｒｅｔｉｎａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ．Ｂｒａｉｎ，１３５：５０６～５２０（２０１２年）；Ｄａｖｉｄｓｏｎ，ＪＯら（２０１２年）．Ｃｏｎｎｅｘｉｎ ｈｅｍｉｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｉｎ ａ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｆｅｔａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ７１：１２１～１３２（２０１２年）の方法を参照されたい。

【0130】

化合物がヘミチャネルを遮断する能力を特定または評価するのに使用するための１つの方法は、（ａ）試験試料と試験系を一緒にすることであって、前記試験試料は１またはそれを超える試験化合物を含み、前記試験系はヘミチャネル遮断を評価するための系を含み、前記系は、例えば、前記系への高グルコース、低酸素もしくは虚血の導入に応答した、色素もしくは標識代謝産物の移動の増加、炎症のメディエーター、またはヘミチャネル開口を誘導する他の化合物もしくは事象、例えば細胞外Ｃａ^２＋の低下を示すという点で特徴付けられる、一緒にすることと；（ｂ）前記系における、例えば、色素または他の標識代謝産物（複数可）の存在または増加量を決定すること、とを含む。陽性および／または陰性対照も同様に使用され得る。必要に応じて、所定量のヘミチャネル遮断薬（例えば、ペプチド５またはＸｉｆｌａｍ）が試験系に加えられ得る。
剤形および製剤および投与

【0131】

投与に関する全ての記載が、特に明記しない限り、本発明のヘミチャネル遮断薬に適用される。ヘミチャネル遮断薬は、本明細書に記載されるように投与（dosed）、投与（administered）または製剤化することができる。一実施形態では、１またはそれを超えるヘミチャネル遮断薬を含む、から本質的になる、またはからなる組成物が投与される。ヘミチャネル遮断薬（複数可）は、ＱＤ、ＢＩＤ、ＴＩＤ、ＱＩＤ、または毎週の用量で、例えばＱＷＫ（１週間に１回）またはＢＩＷ（１週間に２回）投与され得る。これらはまた、本明細書に記載される用量を使用して毎月投与され得る。これらはまた、ＰＲＮ（すなわち、必要に応じて）およびＨＳ（ｈｏｒａ ｓｏｍｎｉ、すなわち就寝前に）で投与され得る。ヘミチャネル遮断薬は、処置を必要とする対象に投与することができる。したがって、本発明によると、コネキシンヘミチャネル、例えばコネキシン４３ヘミチャネルまたはコネキシン４５ヘミチャネルまたはコネキシン３６ヘミチャネルをモジュレートして、一過的かつ部位特異的にその開口確率を低下させることができる製剤が提供される。ヘミチャネル遮断薬は、製剤中に実質的に単離された形態で存在し得る。生成物は、生成物の意図された目的を妨害せず、依然として実質的に単離されていると見なされる担体または希釈剤と混合され得ることが理解されよう。本発明の生成物はまた、実質的に精製された形態であってもよく、その場合、これは一般に、低分子ヘミチャネル遮断薬の、例えば、または調製物の乾燥質量の約８０％、８５％または９０％、例えば、少なくとも約８８％、少なくとも約９０、９５または９８％、または少なくとも約９９％を構成する。

【0132】

対象へのヘミチャネル遮断薬の投与は、薬剤を対象の体内の標的部位に送達することができる任意の手段によって行われ得る。例として、ヘミチャネル遮断薬は、以下の経路のうちの１つによって投与され得る：経口、局所、全身（例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、経皮、鼻腔内、または坐剤による）、非経口（例えば、筋肉内、皮下、または静脈内または動脈内注射）、植え込み（腹膜、皮下および眼への植え込みを含む）、および浸透圧ポンプ、経皮パッチなどのようなデバイスを通した注入による。例示的な投与経路は、Ｂｉｎｇｈｅ，Ｗ．およびＢ．Ｗａｎｇ（２００５年）．Ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ：ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｂｉｎｇｈｅ Ｗａｎｇ、Ｔｅｒｕｎａ Ｓｉａｈａａｎ、Ｒｉｃｈａｒｄ Ｓｏｌｔｅｒｏ、Ｈｏｂｏｋｅｎ、Ｎ．Ｊ．Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、ｃ２００５にも概説されている。一実施形態では、ヘミチャネル遮断薬が全身投与される。別の実施形態では、ヘミチャネル遮断薬が経口投与される。別の実施形態では、ヘミチャネル遮断薬が、例えば、眼の上に局所投与される、または眼内に直接投与される。

【0133】

いくつかの態様では、ヘミチャネル遮断薬が、インプラントとして、またはインプラントと併せて提供され得る。いくつかの態様では、インプラントが、バースト投与の有無にかかわらず、遅延放出、制御放出または徐放性送達を提供し得る。いくつかの実施形態では、マイクロニードル、ニードル、イオン導入デバイスまたはインプラントがヘミチャネル遮断薬の投与に使用され得る。インプラントは、例えば、Ｓ．Ｐｆｌｕｇｆｅｌｄｅｒら、ＡＣＳ Ｎａｎｏ、９（２）、１７４９～１７５８頁（２０１５年）に記載されているような溶解性ディスク材料であり得る。いくつかの態様では、本発明のヘミチャネル遮断薬、例えばコネキシン４３ヘミチャネル遮断薬が、脳室内、および／または髄腔内、および／または硬膜外（extradural,）、および／または硬膜下、および／または硬膜外（epidural）経路を介して投与され得る。

【0134】

ヘミチャネル遮断薬は、１回または２回以上または定期的に投与され得る。これはまた、ＰＲＮ（必要に応じて）もしくは所定のスケジュールで、またはその両方で投与され得る。いくつかの態様では、ヘミチャネル遮断薬が、毎日、毎週、毎月、隔月もしくは３か月ごとに、またはこれらの期間の任意の組み合わせで投与される。例えば、処置は、ある期間にわたって毎日投与され、その後、毎週および／または毎月などで投与され得る。遮断薬を投与する他の方法は、本明細書において紹介される。一態様では、ヘミチャネル遮断薬が、患者を処置するのに十分な量で、１～５、１０、３０、４５、６０、７５、９０、または１００～１８０日目の時点でまたはその間に患者に投与される。

【0135】

ヘミチャネル遮断薬、例えば式Ｉの化合物、例えばＸｉｆｌａｍ、および前記化合物のいずれかの類似体もしくはプロドラッグ、または式ＩＩの化合物は、単独で、あるいは１またはそれを超える追加の成分と組み合わせて投与され得、１またはそれを超える薬学的に許容され得る賦形剤、希釈剤および／または担体を含む医薬組成物に製剤化され得る。いくつかの実施形態では、ヘミチャネル遮断薬、例えば式Ｉの化合物、例えばＸｉｆｌａｍ（トナベルサット）、および前記化合物のいずれかの類似体もしくはプロドラッグ、または式ＩＩの化合物が、食材を含む組成物で経口投与され得る。いくつかの実施形態では、食材がピーナッツバターまたはヘーゼルナッツ系クリームである。理論によって拘束されるものではないが、トナベルサットを含む式Ｉまたは式ＩＩの比較的疎水性の化合物は、食材（foodstsuff）（例えば、ピーナッツバター）の乳化脂肪に封入された後にゆっくり放出され、治療寿命を延ばすと考えられる。

【0136】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容され得る希釈剤、担体および／または賦形剤」という用語は、医薬組成物を調製するのに有用であり、式Ｉの化合物、例えばＸｉｆｌａｍ、および前記化合物のいずれかの類似体、または式ＩＩの化合物と共投与され得ると同時に、化合物がその意図した機能を果たすことを可能にし、一般に安全で、非毒性であり、生物学的にも他の点でも望ましくないものではない物質を含むことを意図している。薬学的に許容され得る希釈剤、担体および／または賦形剤には、獣医学的使用ならびにヒト医薬使用のために適したものが含まれる。適切な担体および／または賦形剤は、式Ｉの化合物、例えばＸｉｆｌａｍ、および前記化合物のいずれかの類似体の性質を考慮して、当業者によって容易に理解される。しかしながら、例として、希釈剤、担体および／または賦形剤には、溶液、溶媒、分散媒、遅延剤、ポリマーおよび脂質剤、エマルジョンなどが含まれる。さらなる例として、特に注射液剤に適した液体担体には、水、食塩水溶液、デキストロース水溶液などが含まれ、等張溶液が静脈内、脊髄内および大槽内投与に好ましく、ビヒクル、例えばリポソームも薬剤の投与に特に適している。

【0137】

組成物は、錠剤、丸剤、カプセル剤、半固体、散剤、徐放性製剤、液剤、懸濁剤、エリキシル剤、エアロゾル剤、溶液注射剤、ゲル剤、クリーム剤、経皮送達デバイス（例えば、経皮パッチ）、臓器インサート、例えば皮膚もしくは眼などのインサート、または任意の他の適切な組成物を含む任意の標準的な既知の剤形の形態をとることができる。本発明が関連する分野の当業者であれば、過度の実験を行うことなく、処置される状態および使用される活性剤の性質を考慮して最も適切な剤形を容易に理解するであろう。１またはそれを超えるヘミチャネル遮断薬、例えば式Ｉの化合物、例えばＸｉｆｌａｍ、および前記化合物のいずれかの類似体、および／または式ＩＩの化合物が単一組成物に製剤化され得ることを理解すべきである。ある特定の実施形態では、好ましい剤形が、注射液剤、インプラント（好ましくは、バースト投与の有無にかかわらず、遅延放出、制御放出性または徐放性インプラント）および経口製剤を含む。

【0138】

本発明で有用な組成物は、剤形および投与様式を考慮して、任意の適切なレベルのヘミチャネル遮断薬、例えば式Ｉの化合物、例えばＸｉｆｌａｍ、および前記化合物のいずれかの類似体、および／または式ＩＩの化合物を含有し得る。しかしながら、例として、本発明で使用される組成物は、投与方法に応じて、およそ０．１重量％～およそ９９重量％、好ましくはおよそ１％～およそ６０％のヘミチャネル遮断薬を含有し得る。

【0139】

標準的な希釈剤、担体および／または賦形剤に加えて、本発明による組成物は、ヘミチャネル遮断薬、例えば式Ｉの化合物、例えばＸｉｆｌａｍ、および前記化合物のいずれかの類似体、および／または式ＩＩの化合物の活性もしくはバイオアベイラビリティを増強する、完全性を保護するまたはその半減期もしくは貯蔵寿命を増加させるのを助ける、対象への投与の際の遅延放出を可能にする、または他の望ましい利益を提供するように、１またはそれを超える追加の構成成分と共に、またはそのような方法で製剤化され得る。例えば、遅延放出ビヒクルには、マクロマー、ポリ（エチレングリコール）、ヒアルロン酸、ポリ（ビニルピロリドン）またはヒドロゲルが含まれる。さらなる例として、組成物はまた、保存剤、可溶化剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、香味剤、コーティング剤、バッファーなどを含み得る。本発明が関連する分野の当業者であれば、特定の目的のために望ましい場合があるさらなる添加剤を特定することができる。

【0140】

上記のように、ヘミチャネル遮断薬は徐放システムによって投与され得る。徐放性組成物の適切な例としては、成形物品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形態の半透性ポリマーマトリックスが挙げられる。徐放性マトリックスには、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号；欧州特許第５８，４８１号）、Ｌ－グルタミン酸とγ－エチル－Ｌ－グルタメートのコポリマー、ポリ（２－ヒドロキシエチルメタクリレート）、エチレン酢酸ビニル、またはポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸（欧州特許第１３３，９８８号）が含まれる。徐放性組成物には、リポソーム封入化合物も含まれる。ヘミチャネル遮断薬を含有するリポソームは、例えば、ドイツ特許第３，２１８，１２１号；欧州特許第５２，３２２号；欧州特許第３６，６７６号；欧州特許第８８，０４６号；欧州特許第１４３，９４９号；欧州特許第１４２，６４１号；日本国特許出願第８３－１１８００８号；米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号；ならびに欧州特許第１０２，３２４号に記載される方法を含む公知の方法によって調製され得る。通常、リポソームは、脂質含有量が約３０モルパーセント超のコレステロールであり、選択される割合が最も有効な治療のために調整されている小型（または約２００～８００オングストローム）単層型である。例えば、ＰＧＬＡナノ粒子もしくはマイクロ粒子、またはインサイチュイオン活性化ゲル化システムを使用した遅延放出送達も使用され得る。

【0141】

さらに、本発明によって使用するためのヘミチャネル遮断薬医薬組成物が、特定の場合に対象にとって治療的利益または他の利益となり得る追加の有効成分または薬剤と共に製剤化され得ることが企図される。本発明が関連する分野の当業者であれば、本明細書中の本発明の記載ならびに処置されるＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴ関連障害の性質を考慮して、適切な追加の有効成分を理解するであろう。

【0142】

さらに、本発明によって使用するためのヘミチャネル遮断薬医薬組成物がキャンディまたは食品に、例えば「グミ」医薬品として製剤化され得ることが企図される。

【0143】

組成物は、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ ＡＲ：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、２０００年のような標準的な参考文献に見出されるような標準的な技術に従って製剤化され得る。しかしながら、さらなる例として、米国特許出願公開第２０１３／０２８１５２４号または米国特許第５９４８８１１号で提供される情報が使用され得る。

【0144】

医薬組成物を保存および／または投与するのに適した任意の容器が、本発明の方法で使用するためのヘミチャネル遮断薬製品に使用され得る。

【0145】

ヘミチャネル遮断薬（複数可）、例えばコネキシン４３ヘミチャネル遮断薬（複数可）は、いくつかの態様では、投与部位に制御されたおよび／または区画化された放出を提供するように製剤化され得る。本発明のいくつかの態様では、製剤が即時放出または持続放出または徐放性剤形であり得る。いくつかの態様では、剤形が、持続放出および／または徐放性剤形と組み合わせた即時放出剤形の両方を含み得る。いくつかの態様では、ヘミチャネル遮断薬（複数可）の即時放出と徐放および／または持続放出の両方を、即時放出形態のヘミチャネル遮断薬（複数可）を組み合わせることによって得ることができる。本発明のいくつかの態様では、ヘミチャネル遮断薬が、例えば、コネキシン４３遮断薬または本開示の他のヘミチャネル遮断薬である。本発明のいくつかの態様では、剤形がインプラント、例えば生分解性または非生分解性インプラントであり得る。

【0146】

本発明は、様々な障害の処置および回復もしくは実質的な回復または改善のためにヘミチャネルの機能をモジュレートする方法を含む。本発明の方法は、ヘミチャネル遮断薬を単独で、あるいは所望であれば１またはそれを超える他の薬剤または治療と組み合わせて投与することを含む。

【0147】

ヘミチャネル遮断薬、および必要に応じて１またはそれを超える活性剤の投与は、障害の進行中、あるいは障害または障害の１またはそれを超える症状の発症前または発症後の任意の時点で行われ得る。一実施形態では、ヘミチャネル遮断薬が、症状の進行中の管理または回復を補助するために長期間にわたって定期的に投与される。別の実施形態では、ヘミチャネル遮断薬が、ＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴ関連障害の発症を予防するもしくは遅延させるために、またはこれを排除するために長期間または生涯にわたって定期的に投与される。

【0148】

いくつかの実施形態では、ヘミチャネル遮断薬、例えばコネキシン４３ヘミチャネル遮断薬（例えば、トナベルサットを含む式（Ｉ）の化合物、または式（ＩＩ）の化合物）を、１つまたは複数の粒子を含む医薬組成物として投与することができる。いくつかの態様では、医薬組成物が、例えば、即時放出製剤または制御放出製剤、例えば遅延放出粒子であり得る。他の態様では、ヘミチャネル遮断薬を、処置される領域への選択的送達のための１つまたは複数の粒子を含む粒子製剤に製剤化することができる。いくつかの実施形態では、粒子が、例えば、ナノ粒子、ナノスフェア、ナノカプセル、リポソーム、ポリマーミセルまたはデンドリマーであり得る。いくつかの実施形態では、粒子がマイクロ粒子であり得る。ナノ粒子またはマイクロ粒子は、生分解性ポリマーを含むことができる。他の実施形態では、ヘミチャネル遮断薬が、インプラントもしくはマトリックスとして調製もしくは投与される、または投与部位への区画化放出を提供するように製剤化される。いくつかの実施形態では、ヘミチャネル遮断薬、例えばコネキシン４３ヘミチャネル遮断薬（例えば、トナベルサットを含む式（Ｉ）の化合物、または式（ＩＩ）の化合物）の医薬組成物がマイクロ粒子を含まない。

【0149】

いくつかの実施形態では、述べられるように、製剤化されたヘミチャネル遮断薬が、例として、コネキシン３７またはコネキシン４０またはコネキシン４３またはコネキシン４５ヘミチャネル遮断薬である。コネキシン３６またはコネキシン３７またはコネキシン４０またはコネキシン４３またはコネキシン４５遮断薬が好ましい。コネキシン３６およびコネキシン４３ヘミチャネル遮断薬が最も好ましい。コネキシン４３ヘミチャネル遮断薬が特に好ましい。本明細書で使用される場合、「マトリックス」は、例えば、ポリマーマトリックス、生分解性または非生分解性マトリックス、およびヘミチャネル遮断薬を送達するためのインプラントまたは適用構造を作製するのに有用な他の担体などのマトリックスを含む。インプラントには、リザーバーインプラントおよび生分解性マトリックスインプラントが含まれる。
コネキシンヘミチャネル遮断薬の組み合わせの製造品／キット

【0150】

本発明の別の実施形態では、本明細書に記載または言及されるＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴ関連の疾患、障害または状態を処置するのに有用な材料を含有する製造品または「キット」が提供される。キットは、コネキシンヘミチャネル遮断薬／阻害剤を含む、から本質的になる、またはからなる容器を含む。キットは、容器上のまたは容器に関連したラベルまたは添付文書をさらに含み得る。「添付文書」という用語は、治療用製品の使用に関する適応症、用法、用量、投与、禁忌および／または警告に関する情報を含む、治療用製品の市販パッケージに習慣的に含まれる指示を指すために使用される。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ブリスターパック等が含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、状態を処置するのに有効なヘミチャネル遮断薬またはその製剤を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、輸液バッグまたは皮下注射針によって穿刺可能なストッパーを有するバイアルであり得る）。ラベルまたは添付文書は、組成物が、選択された状態、例えば、本明細書に記載または言及されるものを含む、ＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴ関連の疾患、障害および／または状態を処置するために使用されることを示す。あるいはまたはさらに、製造品は、薬学的に許容され得るバッファー、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液およびデキストロース溶液を含む第２の容器をさらに含み得る。これは、他のバッファー、希釈剤、フィルタ、針、およびシリンジを含む、商業的観点および使用者観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。

【0151】

キットはさらに、ヘミチャネル遮断薬の投与を必要とする患者へのヘミチャネル遮断薬の投与についての指示を含み得る、またはオンラインもしくはクラウドで指示（direction）にアクセスするための指示（instruction）を提供し得る。

【0152】

ヘミチャネル遮断薬化合物、組成物または製剤を含有する容器と、対象の処置に使用するための指示とを含む、から本質的になる、またはからなる製造品も提供される。例えば、別の態様では、本発明は、治療有効量の１またはそれを超える、低分子を含むコネキシンヘミチャネル遮断薬を含有する容器と、対象の処置のための使用を含む、使用のための指示とを含む、から本質的になる、またはからなる製造品を含む。

【0153】

いくつかの態様では、製造品が、１またはそれを超えるコネキシンヘミチャネル遮断薬、例えば低分子ヘミチャネル遮断薬を単独でまたは組み合わせて含むマトリックスを含み得る。
用量、量および濃度

【0154】

理解されるように、投与されるヘミチャネル遮断薬の用量、投与期間、および一般的な投与体制は、送達される標的部位、処置される対象のいずれかの症状の重症度、処置される障害の種類、単位投与量のサイズ、選択される投与様式、ならびに対象の年齢、性別および／または健康全般、ならびに当業者に公知の他の因子のような可変要素に応じて、対象間で異なり得る。

【0155】

対象のＥＭＴおよび／またはＥｎｄＭＴ関連の疾患、障害または状態を処置する方法であって、例えば、有効量の、例えば、Ｎ－［（３Ｓ，４Ｓ）－６－アセチル－３－ヒドロキシ－２，２－ジメチル－３，４－ジヒドロクロメン－４－イル］－３－クロロ－４－フルオロベンズアミド（Ｘｉｆｌａｍ）を含むヘミチャネル遮断薬を前記対象に投与することを含む方法が本明細書に含まれる。いくつかの実施形態では、用量が本明細書に記載される通りである。生存促進量は、約１０～約２００ｍｇ／日、またはいくつかの実施形態では、約３．５～３５０ｍｇ／日である。他の実施形態では、生存促進量が１日当たり約２０～約１００ｍｇである。これらの量は、単回投与または分割投与、例えばＢＩＤで投与され得る。１日当たり約１．０～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量が好ましい。用量は、例えば、１日当たり約１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５ １．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９等、または約１０．０ｍｇ／ｋｇ、または列挙される用量のいずれか２つの間の任意の範囲であり得る。

【0156】

特に好ましい１日量は、１投与当たりまたは１日当たり約１～３ｍｇ／ｋｇであり、後者は単回投与または分割投与（例えば、ＢＩＤ）である。したがって、例えば、体重が約７０ｋｇ、９０ｋｇまたは１００ｋｇの対象では、投与される量は、それぞれ、１日当たりもしくは１投与当たり約７０、１４０もしくは２１０ｍｇ、１日当たりもしくは１投与当たり約９０、１８０もしくは２７０ｍｇ、または１日当たりもしくは１投与当たり約１００、２００もしくは３００ｍｇとなるだろう。例えば、トナベルサットでは、これらの用量が、約１０日後にヘミチャネル遮断薬の有効なピーク定常状態濃度を提供する。

【0157】

いくつかの実施形態では、ヘミチャネル阻害剤が１週間に１回（ＱＷＫ）投与される。１つのＱＷＫ投与実施形態では、ヘミチャネル遮断薬化合物が、１０～２０％バースト投与または他の所望のバースト投与の有無にかかわらず、遅延放出、徐放性または制御放出の経口またはインプラント製剤で投与される。インプラント製剤、例えば眼インプラント製剤は、好ましくは、遅延放出、徐放性または制御放出の経口またはインプラント製剤で配置される範囲である。
製造および純度

【0158】

式ＩおよびＩＩのものを含む低分子ヘミチャネル遮断薬は、前記のように調製され得る。

【0159】

いくつかの実施形態では、本発明の製剤が実質的に純粋である。実質的に純粋とは、製剤が約１０％、５％または１％未満、好ましくは約０．１％未満の不純物を含むことを意味する。いくつかの実施形態では、コネキシン４３調節剤の代謝産物を含む全不純物が１～１５％以下である。いくつかの実施形態では、コネキシン４３調節剤の代謝産物を含む全不純物が２～１２％以下である。いくつかの実施形態では、コネキシン４３調節剤の代謝産物を含む全不純物が３～１１％以下である。他の実施形態では、コネキシン４３調節剤の代謝産物を含む全不純物が４～１０％以下である。

【実施例】

【0160】

これらの実施例に記載される研究は、ヘミチャネル遮断薬投与および投与レジメンによるコネキシンヘミチャネルのモジュレーションが上皮間葉転換を減弱させる能力を評価および実証した。上皮細胞を、継代１５以降で、高グルコース＋サイトカイン（ＨＧ＋Ｃｙｔ）で傷つけたのみとした、またはＨＧ＋Ｃｙｔ傷害と並行して式Ｉによるコネキシン４３ヘミチャネル調節剤（トナベルサット）で処理した。上皮表現型と間葉表現型の両方のマーカーを、細胞遊走速度およびバリア機能と共に監視した。実験は、ヘミチャネルモジュレーションが上皮間葉転換の調節において役割を果たすこと、およびヘミチャネル遮断薬がそれを有利にモジュレートし得ることを示す。
実施例１
方法
細胞培養

【0161】

ヒト成人網膜色素上皮細胞（ＡＲＰＥ－１９；アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関、米国）を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ：Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、米国）および１×抗生物質と抗真菌剤の混合物（ＡＡ、１００ ｘストック）を補充したダルベッコ改変イーグル培地Ｆ－１２（ＤＭＥＭ－Ｆ１２；Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．、米国）中、加湿５％ ＣＯ_２インキュベーター中３７℃で培養した。細胞をＴ７５フラスコで成長させ、コンフルエントになるまで培地を１週間に２回交換した。
高グルコース（ＨＧ）およびサイトカイン負荷

【0162】

継代１５～１８において、細胞を、免疫組織化学的試験のための８ウェルチャンバースライド、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）－デキストラン色素漏出および経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）測定のためのインサートを有する６ウェルプレート、ならびに細胞遊走試験のための２４ウェルプレートに２．５×１０^５細胞／ｍＬで蒔いた。コンフルエントになったら、細胞を３つの別々の群：未処理、ＨＧ＋Ｃｙｔの傷害、またはＨＧ＋Ｃｙｔ傷害＋トナベルサット処理（ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ）として処理した。ＨＧ＋Ｃｙｔの傷害は、以前に記載されたように（Ｋｕｏら、２０２０年；Ｍｕｇｉｓｈｏら、２０１８ａ、２０１８ｂ）ＤＲ様状態を誘発するために使用し、３２．５ｍＭ ＨＧと炎症誘発性サイトカイン；腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α；１０ｎｇ／ｍＬ；Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、米国）およびインターロイキン－１ベータ（ＩＬ－１β；１０ｎｇ／ｍＬ；Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、米国）の組み合わせからなった。
処理の適用

【0163】

トナベルサット（ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ、ＮＪ、米国）を１００μＭの濃度で、ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害と同時に細胞に投与した（ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ）。これを達成するために、トナベルサットを１００ｍＭの濃度で１００％ ＤＭＳＯに溶解し、次いで、１μｌのストック溶液を、ＨＧ＋Ｃｙｔを含有する９９９μｌの培養培地に添加した。特に明記しない限り、細胞を処理条件下で７２時間インキュベートした。明視野画像を、処理後２４、４８および７２時間で光学顕微鏡を使用して撮影した。全ての実験を３回繰り返した。
免疫細胞化学

【0164】

細胞を４％パラホルムアルデヒドで１０分間固定し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標） Ｘ－１００で１０分間透過処理した。細胞を正常ヤギまたはウマ血清で１時間ブロッキングし、次いで、マウス抗ＲＰＥ６５（１：１０００；Ａｂｃａｍ、英国）およびヤギ抗α－ＳＭＡ（１：２００；Ａｂｃａｍ、英国）、またはウサギ抗ＺＯ－１（１：１０００；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、米国）のいずれかと４℃で一晩インキュベートした。ＰＢＳで２回、１０分間の洗浄し、その後、細胞をそれぞれの二次抗体；ロバ抗ウサギＡｌｅｘａ－４８８（１：５００；Ａｂｃａｍ、英国）、ロバ抗マウスＡｌｅｘａ－４８８（１：５００；Ａｂｃａｍ、英国）またはロバ抗ヤギＣｙ３（１：５００；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、米国）と室温で２時間インキュベートした。細胞をＰＢＳで２回、１０分間洗浄した。細胞核をＤＡＰＩ（１：１０００；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、米国）で染色し、スライドをＣｉｔｉｆｌｕｏｒ（商標）退色防止試薬を使用してマウントし、ネイルワニスで密封した。
画像分析およびタンパク質定量

【0165】

蛍光画像をＯｌｙｍｐｕｓ ＦＶ１０００共焦点レーザー走査型顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ、日本）で撮影し、Ｏｌｙｍｐｕｓ ＦＶ１０－ＡＳＷビューアーおよびＩｍａｇｅＪソフトウェア（バージョン１．５２ａ、米国国立衛生研究所、米国）を使用して処理した。５つの画像を条件ごとに単一チャンバーから撮影し、３つの別々の実験で繰り返した。ＲＰＥ６５およびα－ＳＭＡの発現を、平均蛍光強度（ＭＦＩ）を測定することによって定量した。データをそれぞれの未処理群と比較して示す。α－ＳＭＡとＲＰＥ６５の発現の比を（α－ＳＭＡ ＭＦＩ／ＲＰＥ６５ ＭＦＩ）によってさらに計算した。ＺＯ－１を、局在化の変化について定性的に評価した。
細胞遊走アッセイ

【0166】

７２時間の処理後の細胞遊走速度を決定するために、１０００μＬのピペットチップを手で細胞上に垂直に引くことによって細胞単層中に擦過傷を作製し、創傷幅を経時的に測定した。細胞遊走試験全体を通して様々な処理培地（未処理、ＨＧ＋Ｃｙｔ、ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ）中でインキュベートした細胞を用いて、処理効果を２連ウェルで観察した。光学顕微鏡を使用して、擦過前、擦過直後、ならびに擦過後４時間および２４時間の細胞の画像を撮影した。１ウェル当たり５枚の画像を撮影し、擦過傷の同じ切片を毎回画像化した。擦過傷の幅は、各画像内で８つの規則的な間隔（グリッドオーバーレイを使用してガイドされる）でＩｍａｇｅＪのラインツールおよび「測定」機能を用いて測定した。次いで、５つの画像のそれぞれについての平均値を統計分析に使用した。２連ウェルを使用し、条件ごとに１０の試料サイズを作成した。擦過傷幅を、０時間の擦過後幅に対して定量し、各条件について擦過閉鎖率に変換した。擦過傷閉鎖率を、所与の時点内の処理群間でおよび処理群内で経時的に比較した。
ＦＩＴＣ－デキストラン傍細胞透過性の測定

【0167】

細胞の単層を横切る７０，０００ＤａのＦＩＴＣ－デキストラン（Ｄ １８２０、Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．、米国）の運動を以前に記載されたように（Ｋｕｏら、２０２０年）評価した。手短に言えば、処理後、各プレートインサート中の１０００μＬの使用済み培地を１０００μＬの培地中ＦＩＴＣ－デキストラン（１０μｇ／ｍＬ）によって置き換え、１５分間インキュベートした。インサートを除去し、ウェルベースからの培地試料を分光光度法（励起４９０ｎｍおよび発光５２０ｎｍ）による定量のために９６ウェルプレートに移した。ＦＩＴＣ－デキストラン透過性を、処理なしの細胞を含有する未処理ウェルと比較して表した。条件ごとに３つのウェルがあり、それぞれ１０回サンプリングした。
経上皮電気抵抗（ＴＥＥＲ）の測定

【0168】

細胞単層のＴＥＥＲに対する条件の効果を決定するために、細胞を６ウェルＴｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ、米国）のインサートに、ベースに培地を追加して、再び播種した。コンフルエントになったら、インサート中の培地を３つの条件（未処理培地、ＨＧ＋ＣｙｔまたはＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ）で７２時間置き換えた。次いで、ＳＴＸ３電極を備えたＥＶＯＭ２（Ｗｏｒｌｄ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、米国）を使用して、処理追加後０、２４、４８および７２時間でＴＥＥＲ測定値を得た。ＴＥＥＲ値を、それぞれの群について０時間値に対して定量した。条件ごとに３つのウェルがあり、それぞれ６回サンプリングした。
統計分析

【0169】

データは、棒グラフ上の算術平均＋Ｓ．Ｅ．Ｍ．および折れ線グラフ上の平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として示される。ＲＰＥ６５およびα－ＳＭＡの発現、ならびにＦＩＴＣ－デキストラン透過性の場合、データをそれぞれの未処理群に対して定量した。統計学的比較を、事後検定を伴う一元または二元配置ＡＮＯＶＡを使用して実施した。各データセットに使用される具体的な統計方法は、それぞれの図の凡例に示される。Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）用のＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン８．２．１（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、サンディエゴ、カリフォルニア州、米国）を全ての統計分析に使用した。調整されたｐ＜０．０５を、統計学的に有意な差を示すとみなした。
実施例２

【0170】

この実施例は、ＨＧ＋Ｃｙｔの共適用が細胞形態の変化をもたらしたことを示す。培養中の正常なＡＲＰＥ－１９細胞は、切断された線維芽細胞形態を有し、所々でほぼ立方体に見える。ＨＧ＋Ｃｙｔ適用は、２４時間以内に開始し、４８時間以内に非常に明らかになる、伸長および伸展した表現型への分化を誘導した（図１）。ＨＧ＋Ｃｙｔ処理の効果は、より長い処理期間でさらに強化され、７２時間にわたって細胞を傷つけたところ、２４時間のインキュベーション後のＨＧ＋Ｃｙｔ処理細胞と比較して、より大きな伸長とより高い割合の伸展細胞の両方が示された。
実施例３

【0171】

この実施例は、上皮特異的表現型マーカーＲＰＥ６５が、ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害後に下方調節されたが、ヘミチャネル阻害剤（トナベルサット）の存在下で維持されたことを示す。上皮細胞表現型の変化を決定するために、定量的免疫細胞化学を使用して、ＲＰＥ細胞に特異的な細胞マーカーであるＲＰＥ６５の発現レベルを分析した。

【0172】

ＲＰＥ６５発現は、２４時間後（Ｆ（２，１１）＝４．０４１、ｐ＝０．０４８３）と７２時間後（Ｆ（２，１０）＝８．５０４、ｐ＝０．００７０）の両方で処理条件によって有意に影響された（図２）。結果は、ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ群（１１２．６±６．４％）が、傷害ＨＧ＋Ｃｙｔ群よりも２４時間で有意に高いＲＰＥ６５発現を示すことを示した（８４．５±６．０％、ｐ＝０．０２８６）（図２ｂ）。

【0173】

７２時間までに、ＲＰＥ６５発現は、未処理群（１００．０±４．５％、ｐ＝０．００４０）よりもＨＧ＋Ｃｙｔ群で有意に低かった（７２時間で未処理レベルと比較して８１．２±２．８％）（図２ｄ）。ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ群はここでは中間にあり、いずれの群とも有意には異ならなかった。
実施例４

【0174】

この実施例は、ＨＧ＋Ｃｙｔ条件が、間葉表現型分化のマーカーであるα－ＳＭＡの発現増加をもたらすが、ヘミチャネル阻害剤（トナベルサット）による処理によって防止されることを示した。間葉マーカーα－ＳＭＡに対する処理条件の有意な効果が、２４時間（Ｆ（２，１１）＝３．３５８、ｐ＝０．０７２）と７２時間（Ｆ（２，１０）＝５．８８９、ｐ＝０．０２０４）の両方で一元配置ＡＮＯＶＡによって決定された（図３）。ダネットの多重比較検定は、２４時間後、α－ＳＭＡ発現が、未処理（１００．０±１３．７％、ｐ＝０．０４５９）条件と比較して、ＨＧ＋Ｃｙｔ後に有意に増加する（１４０．６±６．４％）ことを示した（図３ｃ）。７２時間で、ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ（７２時間で未処理レベルと比較して７５．５±８．４％）は、ＨＧ＋Ｃｙｔ群（１１８．８±４．０％、ｐ＝０．０１１９）よりも有意に低いα－ＳＭＡ発現を有していた（図３ｄ）。さらに、細胞内のα－ＳＭＡの位置は、未処理群またはＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ処理群よりも、傷害後およびインキュベーション時間の増加に伴って発現がより線維性の性質を示し、処理条件に応じて変化する（図３ａ、ｃ）ことが認められた。
実施例５

【0175】

この実施例は、コネキシン４３ヘミチャネル遮断が、ＲＰＥ６５に対するα－ＳＭＡの発現比のＨＧ＋Ｃｙｔによって誘導される増加を防止することを示した。α－ＳＭＡとＲＰＥ６５の両方の発現で見られる変化を組み合わせると、ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害が、２４時間と７２時間の両方で、未処理条件と比較して、ＲＰＥ６５に対するα－ＳＭＡの発現比の増加をもたらすことが実証された（２４時間：未処理＝１．０、ＨＧ＋Ｃｙｔ＝１．７；７２時間：未処理＝１．０、ＨＧ＋Ｃｙｔ＝１．５）（図４）。

【0176】

さらに、ヘミチャネル阻害剤であるトナベルサットの添加（ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ）は、この増加を防止し、未処理群（２４時間＝１．１；７２時間＝０．８）と同様に、比を約１で維持した。
実施例６

【0177】

この実施例は、式Ｉによる化合物（トナベルサット）を含むコネキシン４３ヘミチャネル遮断が、ＨＧ＋Ｃｙｔによって誘導される細胞遊走を減少させることを示した。全ての条件の擦過を同様の幅（ｐ＞０．９９９９）で開始した（図５）。擦過後４時間で、創傷閉鎖に対する有意な処理効果は観察されず（Ｆ（２，２７）＝１．１４８、ｐ＝０．３３２２）、処理条件のいずれについてもそれぞれの０時間の擦過傷幅と比較して閉鎖率に有意差はなかった（未処理、ｐ＝０．９８４６；ＨＧ＋Ｃｙｔ、ｐ＝０．１６７５；ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ、ｐ＝０．８７５２）。しかしながら、２４時間までに、処理条件が擦過傷閉鎖に影響を及ぼす（Ｆ（２，２７）＝２３．７６、ｐ＜０．０００１）ことが分かった（図５ｂ）。ＨＧ＋Ｃｙｔは、０時間と比較して擦過傷幅の有意な減少（６１．３±３．１％、ｐ＜０．０００１）をもたらし、ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ処理（３３．８±９．６％）もまた、程度は低いが、０～２４時間の間に有意な擦過傷閉鎖をもたらした（ｐ＝０．００１５）。未処理群では、経時的な擦過傷幅の有意な変化は見られなかった（ｐ＝０．９８４６）。処理条件間の２４時間での擦過傷幅の比較は、ＨＧ＋Ｃｙｔ（６１．３±３．１％）が未処理群（０．９±３．７％、ｐ＜０．０００１）と比較して擦過傷閉鎖を加速することを実証した。ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ処理は、ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害単独（３３．８±９．６％、ｐ＝０．００２８）と比較して、擦過傷閉鎖の減少をもたらした。
実施例７

【0178】

この実施例は、タイトジャンクションの完全性がＨＧ＋Ｃｙｔ傷害によって損なわれるが、ヘミチャネル遮断薬であるトナベルサットの共適用によって維持されることを示した。ＺＯ－１はタイトジャンクションタンパク質であり、通常、細胞の細胞質膜に位置する。ＺＯ－１の免疫細胞化学的標識後、未処理条件の細胞は、細胞質標識をほとんど伴わず、細胞膜におけるＺＯ－１の明確な局在化を示した（図６ａ）。しかしながら、ＨＧ＋Ｃｙｔに曝露された細胞では、ＺＯ－１膜細胞－細胞界面局在化の喪失が見られた。ＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ処理は、細胞膜でのＺＯ－１局在化を維持した。ＺＯ－１細胞膜標識は、未処理群と比較してわずかに明確ではなかったが、それにもかかわらず本質的に正常であったのに対し、ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害細胞では、ＺＯ－１膜局在化が制限されたままであった。
実施例８

【0179】

傍細胞透過性に対する処理条件の効果を決定するために、細胞単層を横切る大きなＦＩＴＣ－デキストラン分子の通過を試験した。傍細胞透過性に対する処理の有意な効果が観察され（Ｆ（２，２７）＝５８．７２、ｐ＜０．０００１）、ＨＧ＋Ｃｙｔ傷害後のＦＩＴＣ－デキストラン透過性（１．７９±０．０９）は、未処理（１．００±０．０８、ｐ＜０．０００１）群とＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ（０．７７±０．０２、ｐ＜０．０００１）群の両方より有意に高かった（図６ｂ）。この実施例は、ＨＧ＋Ｃｙｔが傍細胞透過性の増加（色素通過）を誘導し、これがヘミチャネル阻害剤（トナベルサット）による処理によって防止されることを示した。
実施例９

【0180】

この実施例は、経上皮電気抵抗がＨＧ＋Ｃｙｔ傷害によって損なわれるが、ヘミチャネル阻害剤であるトナベルサットの共適用によって維持されることを示した。全ての条件の細胞を同じＴＥＥＲで開始した（ｐ＝０．７６２５）。しかしながら、２４時間以内に、ＴＥＥＲに対する有意な処理効果が観察された（ｐ＝０．００２４）（図７）。２４時間で、ＨＧ＋Ｃｙｔ群（８９．２±１．０％）は、未処理（９４．９±０．４％、ｐ＝０．０２９２）群とＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ（９９．５±１．２％、ｐ＝０．００１５）群の両方よりも有意に低いＴＥＥＲを有していた。４８時間でのＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎもまた、ＨＧ＋Ｃｙｔ単独（８９．０±０．８％）よりも高いＴＥＥＲ（１１４．９±３．２％、ｐ＝０．００２９）を維持したが、７２時間でのＴＥＥＲもまた、ＨＧ＋Ｃｙｔ単独（８１．３±１．６％）と比較して、未処理（９１．５±１．７％、ｐ＝０．００４８）およびＨＧ＋Ｃｙｔ＋Ｔｏｎ（９７．７±１．１％、ｐ＝０．０００４）条件で有意に高かった。

【0181】

本明細書に記載および特許請求される発明は、それだけに限らないが、この発明を実施するための形態に示されるまたは記載されるまたは言及されるものを含む、多くの属性および実施形態を有する。これは包括的であることを意図するものではなく、本明細書に記載および特許請求される発明は、制限ではなく例示のみの目的のために含まれる、この発明を実施するための形態で特定される特徴または実施形態に限定されず、これらによって限定もされない。当業者であれば、本発明の範囲から逸脱することなく、構成要素およびパラメータの多くをある程度変更もしくは修正することができる、または既知の等価物に置き換えることができることを容易に認識するであろう。このような修正および等価物は、あたかも個別に示されているかのように本明細書に組み込まれることを理解すべきである。本発明はまた、本明細書で言及または指示されるステップ、特徴、組成物および化合物の全てを個別にまたは集合的に含み、前記ステップまたは特徴のいずれか２つまたはそれを超える数のありとあらゆる組み合わせを含む。

【0182】

本明細書で言及されるまたは述べられる全ての特許、刊行物、科学論文、ウェブサイト、ならびに他の文書および資料は、本発明が関係する分野の当業者の技能レベルを示しており、このような言及される各文書および資料は、全体が参照により個別に組み込まれているか、または全体が本明細書に示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。出願人は、このような特許、刊行物、科学論文、ウェブサイト、電子的に利用可能な情報、および他の言及される資料または文書からのありとあらゆる資料および情報を本明細書に物理的に組み込む権利を留保する。本明細書における任意の出願、特許および刊行物への言及は、それらが有効な先行技術を構成するまたは世界の任意の国における共通の一般知識の一部を形成することの自認でもいかなる形態の示唆でもなく、またそのように解釈されるべきでもない。

【0183】

本明細書に記載される特定の方法および組成物は、好ましい実施形態を代表するものであり、例示的なものであり、本発明の範囲に対する限定として意図されるものではない。他の目的、態様および実施形態が、本明細書を考慮すると当業者に思い浮かぶであろうし、特許請求の範囲によって定義される本発明の精神の範囲内に包含される。本発明の範囲および精神から逸脱することなく、本明細書に開示される発明に対して様々な置換および修正を行うことができることが、当業者には容易に明らかであろう。本明細書に例示的に記載される本発明は、必須であるとして本明細書に具体的に開示されていない任意の１つもしくは複数の要素、または１つもしくは複数の限定の非存在下で適切に実施することができる。したがって、例えば、本明細書の各例において、および本発明の実施形態または実施例において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という用語のいずれも、本明細書において他の２つの用語のいずれかで置き換えられ得る。したがって、例えば、ある特定の列挙される成分を「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」組成物はまた、列挙される成分「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」または「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」組成物の明示的な記述要件の裏付けを提供し、このような組成物としても特許請求され得る。同様に、ある特定のステップを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」方法はまた、列挙されるステップ「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」または「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」組成物の明示的な記述要件の裏付けを提供し、このような組成物としても特許請求され得る。

【0184】

本明細書に例示的に記載される方法およびプロセスは、異なる順序のステップで適切に実施することができ、それらは、本明細書または特許請求の範囲に示されるステップの順序に必ずしも制限されない。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかにそうでないと指示しない限り、複数の言及を含む。いかなる状況下でも、本特許が、本明細書に具体的に開示される特定の例または実施形態または方法に限定されると解釈されるべきでない。いかなる状況下でも、審査官または特許商標庁の他の役人もしくは従業員によってなされた陳述が、出願人による応答の書面において具体的にかつ資格も留保もなしに明示的に採用されない限り、本特許がこのような陳述によって限定されると解釈されるべきでない。さらに、表題または見出しなどは、読者のこの文書の理解を高めるために提供されるものであり、本発明の範囲を限定するものとして読まれるべきではない。本明細書で言及される本発明の態様、実施形態または構成要素のいずれの例も非限定的であるとみなされるべきである。

【0185】

使用されている用語および表現は、限定ではなく説明の用語として使用され、このような用語および表現の使用において、示され、記載される特徴またはその一部の等価物を排除する意図はなく、特許請求される本発明の範囲内で様々な修正が可能であることが認識される。したがって、本発明は好ましい実施形態および任意の特徴によって具体的に開示されているが、本明細書に開示される概念の修正および変形が当業者によって使用されてもよく、このような修正および変形が、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内にあると見なされることが理解されよう。

【0186】

本発明は、本明細書において広範かつ一般的に記載されている。一般的な開示に入るより狭い種および亜属の群の各々も、本発明の一部を形成する。これは、切除される材料が本明細書に具体的に列挙されているか否かにかかわらず、属からいずれかの主題を除去するという条件または否定的限定を伴う本発明の一般的な説明を含む。

【0187】

他の実施形態は以下の特許請求の範囲内である。さらに、本発明の特徴または態様がマーカッシュ群に関して記載されている場合、当業者であれば、本発明がそれによってマーカッシュ群の任意の個々のメンバーまたはメンバーのサブグループに関しても記載されていることを認識するであろう。
引用
Ｃａｍｐｏｃｈｉａｒｏ，Ｐ．Ａ．、Ａｉｅｌｌｏ，Ｌ．Ｐ．＆Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ，Ｐ．Ｊ．（２０１６年）．Ａｎｔｉ－ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ａｇｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｒｅｔｉｎａｌ ｄｉｓｅａｓｅ：ｆｒｏｍ ｂｅｎｃｈ ｔｏ ｂｅｄｓｉｄｅ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．［オンライン］．１２３（１０）．Ｓ７８～Ｓ８８頁．ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｏｐｈｔｈａ．２０１６．０４．０５６から入手可能。
Ｃｈｅ，Ｄ．、Ｚｈｏｕ，Ｔ．、Ｌａｎ，Ｙ．、Ｘｉｅ，Ｊ．、Ｇｏｎｇ，Ｈ．、Ｌｉ，Ｃ．、Ｆｅｎｇ，Ｊ．、Ｈｏｎｇ，Ｈ．、Ｑｉ，Ｗ．、Ｍａ，Ｃ．、Ｗｕ，Ｑ．、Ｙａｎｇ，Ｘ．＆Ｇａｏ，Ｇ．（２０１６年）．Ｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ ｔｏ ｔｈｅ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｉｂｒｏｇｅｎｉｃ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．３８（６）．１８１５～１８２２頁。
Ｃｈｅｎ，Ｘ．、Ｙｅ，Ｓ．、Ｘｉａｏ，Ｗ．、Ｌｕｏ，Ｌ．＆Ｌｉｕ，Ｙ．（２０１４年）．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ ｉｎ ＴＧＦβ２－ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ ｃｅｌｌｓ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．３３（５）．１１９５～１２００頁。
Ｃｕｎｈａ－Ｖａｚ，Ｊ．（２００９年）．Ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ－ｒｅｔｉｎａｌ ｂａｒｒｉｅｒ ｉｎ ｒｅｔｉｎａｌ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ Ｒｅｖｉｅｗ．３．１０５～１０８頁。
Ｃｕｎｈａ－Ｖａｚ，Ｊ．Ｇ．（２００４年）．Ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ－ｒｅｔｉｎａｌ ｂａｒｒｉｅｒｓ ｓｙｓｔｅｍ．Ｂａｓｉｃ ｃｏｎｃｅｐｔｓ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．７８（３）．７１５～７２１頁。
Ｄｈｏｏｔ，Ｄ．Ｓ．＆Ａｖｅｒｙ，Ｒ．Ｌ．（２０１６年）．Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｆｏｒ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｒｅｐｏｒｔｓ．［オンライン］．１６（１２２）．１～７頁．ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００７／ｓ１１８９２－０１６－０８２５－４から入手可能。
Ｈｙｔｔｉｎｅｎ，Ｊ．Ｍ．Ｔ．、Ｋａｎｎａｎ，Ｒ．、Ｆｅｌｓｚｅｇｈｙ，Ｓ．、Ｎｉｉｔｔｙｋｏｓｋｉ，Ｍ．、Ｓａｌｍｉｎｅｎ，Ａ．＆Ｋａａｒｎｉｒａｎｔａ，Ｋ．（２０１９年）．Ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＮＦＥ２Ｌ２（ＮＲＦ２）ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ａｎｄ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｔｏ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．２０（５８００）．１～３５頁。
Ｊｉｎｇ，Ｒ．、Ｑｉ，Ｔ．、Ｗｅｎ，Ｃ．、Ｙｕｅ，Ｊ．、Ｗａｎｇ，Ｇ．、Ｐｅｉ，Ｃ．＆Ｍａ，Ｂ．（２０１９年）．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２ ｉｎｄｕｃｅｓ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ＴＧＦ－β２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．６１．４１０～４１８頁。
Ｋａｌｌｕｒｉ，Ｒ．＆Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ｒ．Ａ．（２００９年）．Ｔｈｅ ｂａｓｉｃｓ ｏｆ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ．１１９（６）．１４２０～１４２８頁。
Ｋｌａａｓｓｅｎ，Ｉ．、Ｖａｎ Ｎｏｏｒｄｅｎ，Ｃ．Ｊ．Ｆ．＆Ｓｃｈｌｉｎｇｅｍａｎｎ，Ｒ．Ｏ．（２０１３年）．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｎｅｒ ｂｌｏｏｄ－ｒｅｔｉｎａｌ ｂａｒｒｉｅｒ ａｎｄ ｉｔｓ ｂｒｅａｋｄｏｗｎ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｍａｃｕｌａｒ ｅｄｅｍａ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｒｅｔｉｎａｌ ａｎｄ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．［オンライン］．３４．１９～４８頁．ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｐｒｅｔｅｙｅｒｅｓ．２０１３．０２．００１から入手可能。
Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｍ．、Ｔｏｋｕｄａ，Ｋ．、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｙ．、Ｙａｍａｓｈｉｒｏ，Ｃ．、Ｕｃｈｉ，Ｓ．Ｈ．、Ｈａｔａｎｏ，Ｍ．＆Ｋｉｍｕｒａ，Ｋ．（２０１９年）．Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ａｎ ＭＲＴＦ－Ａ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｖｉｓｕａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ．６０（２）．５２８～５３７頁。
Ｋｏｖａｃｈ，Ｊ．Ｌ．、Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｓ．Ｇ．、Ｆｌｙｎｎ，Ｈ．Ｗ．＆Ｓｃｏｔｔ，Ｉ．Ｕ．（２０１２年）．Ａｎｔｉ－ＶＥＧＦ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｗｅｔ ＡＭＤ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．２０１２（７８６８７０）．１～７頁。
Ｋｒｏｌｌ，Ｐ．、Ｂ ｃｈｅｌｅ Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ，Ｅ．＆Ｈｏｅｒｌｅ，Ｓ．（２００７年）．Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｖｉｔｒｅｏｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｉｃａ．２２１（２）．７８～９４頁。
Ｋｕｏ，Ｃ．、Ｇｒｅｅｎ，Ｃ．Ｒ．、Ｒｕｐｅｎｔｈａｌ，Ｉ．Ｄ．＆Ｍｕｇｉｓｈｏ，Ｏ．Ｏ．（２０２０）．Ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ ｈｅｍｉｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｂａｒｒｉｅｒ ｂｒｅａｋｄｏｗｎ．Ａｃｔａ Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉｃａ．［オンライン］．５７（１）．１３～２２頁．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００７／ｓ００５９２－０１９－０１３５２－３から入手可能。
Ｌｅｅ，Ｈ．、Ｈｗａｎｇ－Ｂｏ，Ｈ．、Ｊｉ，Ｓ．Ｙ．、Ｋｉｍ，Ｍ．Ｙ．、Ｋｉｍ，Ｓ．Ｙ．、Ｐａｒｋ，Ｃ．、Ｈｏｎｇ，Ｓ．Ｈ．、Ｋｉｍ，Ｇ．Ｙ．、Ｓｏｎｇ，Ｋ．Ｓ．、Ｈｙｕｎ，Ｊ．Ｗ．＆Ｃｈｏｉ，Ｙ．Ｈ．（２０２０年）．Ｄｉｅｓｅｌ ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ ｍａｔｔｅｒ２．５ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｖｉａ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ．Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ．２６２（１１４３０１）．１～１０頁。
Ｌｉ，Ｘ．、Ｙａｎ，Ｘ．、Ｗａｎｇ，Ｙ．、Ｗａｎｇ，Ｊ．、Ｚｈｏｕ，Ｆ．、Ｗａｎｇ，Ｈ．、Ｘｉｅ，Ｗ．＆Ｋｏｎｇ，Ｈ．（２０１８年）．ＮＬＲＰ３ ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｓｉｌｉｃａ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｔｏ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ（ＥＭＴ）ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｒｏｎｃｈｉａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．［オンライン］．３６２（２）．４８９～４９７頁．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｙｅｘｃｒ．２０１７．１２．０１３から入手可能。
Ｌｉ，Ｘ．、Ｚｈａｏ，Ｍ．＆Ｈｅ，Ｓ．（２０２０年）．ＲＰＥ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｐｌａｙｓ ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｖｉｔｒｅｏｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．８（６）．２６３～２６３頁。
Ｌｙｏｎ，Ｈ．、Ｓｈｏｍｅ，Ａ．、Ｒｕｐｅｎｔｈａｌ，Ｉ．Ｄ．、Ｇｒｅｅｎ，Ｃ．Ｒ．＆Ｍｕｇｉｓｈｏ，Ｏ．Ｏ．（２０２１年）．Ｔｏｎａｂｅｒｓａｔ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ Ｈｅｍｉｃｈａｎｎｅｌ Ｏｐｅｎｉｎｇ ａｎｄ Ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ ａｎ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２２（１），２９８．ＡＲＴＮ ２９８ Ｍｏｎｙ，Ｓ．、Ｌｅｅ，Ｓ．Ｊ．、Ｈａｒｐｅｒ，Ｊ．Ｆ．、Ｂａｒｗｅ，Ｓ．Ｐ．＆Ｌａｎｇｈａｎｓ，Ｓ．Ａ．（２０１３年）．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎａ，Ｋ－ＡＴＰａｓｅ β１－ｓｕｂｕｎｉｔ ｉｎ ＴＧＦ－β２－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｔｏ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１１５．１１３～１２２頁。
Ｍｕｇｉｓｈｏ，Ｏ．Ｏ．、Ｇｒｅｅｎ，Ｃ．Ｒ．、Ｋｈｏ，Ｄ．Ｔ．、Ｚｈａｎｇ，Ｊ．、Ｇｒａｈａｍ，Ｅ．Ｓ．、Ａｃｏｓｔａ，Ｍ．Ｌ．＆Ｒｕｐｅｎｔｈａｌ，Ｉ．Ｄ．（２０１８ａ）．Ｔｈｅ ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ ｐａｔｈｗａｙ ｉｓ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｐｅｒｐｅｔｕａｔｅｄ ｉｎ ａｎ ａｕｔｏｃｒｉｎｅ ｍａｎｎｅｒ ｔｈｒｏｕｇｈ ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ ｈｅｍｉｃｈａｎｎｅｌ ｍｅｄｉａｔｅｄ ＡＴＰ ｒｅｌｅａｓｅ．ＢＢＡ－Ｇｅｎｅｒａｌ Ｓｕｂｊｅｃｔｓ．１８６２．３８５～３９３頁。
Ｍｕｇｉｓｈｏ，Ｏ．Ｏ．、Ｇｒｅｅｎ，Ｃ．Ｒ．、Ｓｑｕｉｒｒｅｌｌ，Ｄ．Ｍ．、Ｂｏｕｌｄ，Ｓ．、Ｄａｎｅｓｈ－Ｍｅｙｅｒ，Ｈ．Ｖ．、Ｚｈａｎｇ，Ｊ．、Ａｃｏｓｔａ，Ｍ．Ｌ．＆Ｒｕｐｅｎｔｈａｌ，Ｉ．Ｄ．（２０１９年）．Ｃｏｎｎｅｘｉｎ４３ ｈｅｍｉｃｈａｎｎｅｌ ｂｌｏｃｋ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ ｓｉｇｎｓ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．９７（２）．２１５～２２９頁。
Ｍｕｇｉｓｈｏ，Ｏ．Ｏ．、Ｒｕｐｅｎｔｈａｌ，Ｉ．Ｄ．、Ｓｑｕｉｒｒｅｌｌ，Ｄ．Ｍ．、Ｂｏｕｌｄ，Ｓ．Ｊ．、Ｄａｎｅｓｈ－Ｍｅｙｅｒ，Ｈ．Ｖ．、Ｚｈａｎｇ，Ｊ．、Ｇｒｅｅｎ，Ｃ．Ｒ．＆Ａｃｏｓｔａ，Ｍ．Ｌ．（２０１８ｂ）．Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｐｒｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ｎｏｎ－ｏｂｅｓｅ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｍｉｃｅ：Ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ ｓｉｇｎｓ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ．１３（８）．１～２０頁。
Ｓｈｕｋａｌ，Ｄ．、Ｂｈａｄｒｅｓｈａ，Ｋ．、Ｓｈａｓｔｒｉ，Ｂ．、Ｍｅｈｔａ，Ｄ．、Ｖａｓａｖａｄａ，Ａ．＆Ｊｏｈａｒ ＳＲ，Ｋ．（２０２０）．Ｄｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔａｔｅ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ＴＧＦβ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１０８０７２。
Ｓｏｎｇ，Ｓ．、Ｑｉｕ，Ｄ．、Ｌｕｏ，Ｆ．、Ｗｅｉ，Ｊ．、Ｗｕ，Ｍ．、Ｗｕ，Ｈ．、Ｄｕ，Ｃ．、Ｄｕ，Ｙ．、Ｒｅｎ，Ｙ．、Ｃｈｅｎ，Ｎ．、Ｄｕａｎ，Ｈ．＆Ｓｈｉ，Ｙ．（２０１８年）．Ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ ｏｆ ＮＬＲＰ３ ａｌｌｅｖｉａｔｅｓ ｈｉｇｈ ｇｌｕｃｏｓｅ ｏｒ ＴＧＦＢ１－ｉｎｄｕｃｅｄ ＥＭＴ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｒｅｎａｌ ｔｕｂｕｌａｒ ｃｅｌｌｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．６１（３）．１０１～１１３頁。
Ｔａｍｉｙａ，Ｓ．＆Ｋａｐｌａｎ，Ｈ．Ｊ．（２０１６）．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｉｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｖｉｔｒｅｏｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｅｙｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１４２．２６～３１頁。
Ｔａｍｉｙａ，Ｓ．、Ｌｉｕ，Ｌ．Ｈ．＆Ｋａｐｌａｎ，Ｈ．Ｊ．（２０１０）．Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎｉｔｉａｔｅｄ ｕｐｏｎ ｌｏｓｓ ｏｆ ｃｅｌｌ－ｃｅｌｌ ｃｏｎｔａｃｔ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｖｉｓｕａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ．５１（５）．２７５５～２７６３頁。
Ｗａｎｇ，Ｈ．Ｆ．、Ｍａ，Ｊ．Ｘ．、Ｓｈａｎｇ，Ｑ．Ｌ．、Ａｎ，Ｊ．Ｂｉｎ＆Ｃｈｅｎ，Ｈ．Ｔ．（２０１７）．Ｃｒｏｃｅｔｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ＴＧＦ－β２－ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．８１５．３９１～３９８頁。
Ｙａｎｇ，Ｉ．Ｈ．、Ｌｅｅ，Ｊ．Ｊ．、Ｗｕ，Ｐ．Ｃ．、Ｋｕｏ，Ｈ．Ｋ．、Ｋｕｏ，Ｙ．Ｈ．＆Ｈｕａｎｇ，Ｈ．Ｍ．（２０２０年）．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－β２－ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｌｉｇａｎｄ １ ｏｎ ＡＲＰＥ－１９ ｃｅｌｌ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ．［オンライン］．１０（４０００）．１～１０頁．ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓ４１５９８－０２０－６０７８５－ｘから入手可能。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5-1】

【図5-2】

【図6】

【図7】

【国際調査報告】