特表 2024-510989 ワクチン接種方法及びＣＤ４７遮断薬の使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-12

(54)【発明の名称】ワクチン接種方法及びＣＤ４７遮断薬の使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/00 20060101AFI20240305BHJP

   C12N 15/09 20060101ALI20240305BHJP

   C12N 15/113 20100101ALI20240305BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240305BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240305BHJP

   C12N 5/09 20100101ALI20240305BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240305BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20240305BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20240305BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240305BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240305BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240305BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20240305BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240305BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20240305BHJP

   C12N 15/86 20060101ALN20240305BHJP

【ＦＩ】

A61K39/00 H

C12N15/09 100

C12N15/113 140Z

C12N15/13

C12N5/10

C12N5/09

C07K16/28

C12N15/12

C12N15/09 110

A61K35/12

A61K39/395 D

A61P37/04

A61P35/00

A61K31/7088

A61K48/00

A61K9/08

C12N15/86 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023555665

(86)(22)【出願日】2022-03-11

(85)【翻訳文提出日】2023-10-24

(86)【国際出願番号】 IB2022052211

(87)【国際公開番号】W WO2022190058

(87)【国際公開日】2022-09-15

(31)【優先権主張番号】63/160,296

(32)【優先日】2021-03-12

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】521022691

【氏名又は名称】メンドゥス・ベスローテン・フェンノートシャップ

【氏名又は名称原語表記】ＭＥＮＤＵＳ Ｂ．Ｖ．

(74)【代理人】

【識別番号】100145403

【弁理士】

【氏名又は名称】山尾 憲人

(74)【代理人】

【識別番号】100106518

【弁理士】

【氏名又は名称】松谷 道子

(74)【代理人】

【識別番号】100138911

【弁理士】

【氏名又は名称】櫻井 陽子

(72)【発明者】

【氏名】マンティング，エリック ハンス

(72)【発明者】

【氏名】シン，サトウィンダー カウア

(72)【発明者】

【氏名】ズオ，ハオシャオ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C085

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA93X

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4C087ZB26

4H045AA11

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4H045BA10

4H045CA40

4H045DA76

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞を提供する。がん治療において、改変細胞を、単独で、またはＣＤ４７遮断剤と組み合わせて使用して治療するための方法も提供される。また、白血病起源の改変細胞を含む組成物、その薬学的組成物及びその製剤、ならびに改変細胞の産生方法も提供される。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の単離された改変細胞と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。

【請求項2】

前記下方調節されたＣＤ４７経路が、前記ＣＤ４７経路のメンバーの枯渇及び／または阻害の結果である、請求項１に記載の薬学的組成物。

【請求項3】

前記ＣＤ４７経路の前記メンバーが、ＣＤ４７である、請求項２に記載の薬学的組成物。

【請求項4】

前記下方調節されたＣＤ４７経路が、ＣＤ４７及び／または前記ＣＤ４７経路のメンバーの枯渇及び／または阻害の結果である、先行請求項のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項5】

前記下方調節されたＣＤ４７経路が、ＣＤ４７及び／または前記ＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤によって媒介される、先行請求項のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項6】

ＣＤ４７及び／または前記ＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる前記薬剤が、抗体、低分子、低分子ＲＮＡ、または操作されたヌクレアーゼ系からなる群から選択される、請求項５に記載の薬学的組成物。

【請求項7】

前記抗体が、抗ＣＤ４７抗体である、請求項６に記載の薬学的組成物。

【請求項8】

前記低分子ＲＮＡが、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である、請求項６に記載の薬学的組成物。

【請求項9】

前記操作されたヌクレアーゼ系が、メガヌクレアーゼ系、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）系、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）系、及びＣＲＩＳＰＲ系からなる群から選択される、請求項８に記載の薬学的組成物。

【請求項10】

前記操作されたヌクレアーゼ系が、ＣＤ４７遺伝子座及び／または前記改変細胞の前記ＣＤ４７経路のメンバーの遺伝子座における挿入及び／または欠失を媒介する、請求項６に記載の薬学的組成物。

【請求項11】

前記操作されたヌクレアーゼ系が、前記改変細胞のＣＤ４７遺伝子座における挿入及び／または欠失を媒介する、請求項１０に記載の薬学的組成物。

【請求項12】

前記操作されたヌクレアーゼ系が、ＣＲＩＳＰＲ系である、請求項１０または１１に記載の薬学的組成物。

【請求項13】

ＣＤ４７遺伝子座における挿入及び／または欠失を含む、白血病起源の改変細胞を含む薬学的組成物であって、前記ＣＤ４７遺伝子座における前記挿入及び／または欠失が、下方調節されたＣＤ４７の発現をもたらす、前記薬学的組成物。

【請求項14】

ＣＤ４７遺伝子座における前記挿入及び／または欠失が、前記ＣＤ４７遺伝子座における二本鎖切断の修復によって媒介される、請求項１３に記載の薬学的組成物。

【請求項15】

前記修復が、非相同末端接合（ＮＨＥＪ）及び相同組換え修復（ＨＤＲ）を介する、請求項１４に記載の薬学的組成物。

【請求項16】

前記ＣＤ４７遺伝子座における前記挿入及び／または欠失が、操作されたヌクレアーゼ系によって媒介される、請求項１３～１５のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項17】

前記操作されたヌクレアーゼ系が、メガヌクレアーゼ系、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）系、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）系、及びＣＲＩＳＰＲ系からなる群から選択される、請求項１６に記載の薬学的組成物。

【請求項18】

前記操作されたヌクレアーゼ系が、ＣＲＩＳＰＲ系である、請求項１７に記載の薬学的組成物。

【請求項19】

ＣＤ４７及び／または前記ＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤を更に含む、先行請求項のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項20】

ＣＤ４７及び／または前記ＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する前記薬剤が、抗ＣＤ４７抗体である、請求項１９に記載の薬学的組成物。

【請求項21】

白血病起源の改変細胞と、抗ＣＤ４７抗体と、を含む、薬学的組成物。

【請求項22】

下方調節されたＣＤ４７経路と、抗ＣＤ４７抗体と、を含む、白血病起源の改変細胞を含む、薬学的組成物。

【請求項23】

薬学的に許容される賦形剤を更に含む、請求項２１または２２に記載の薬学的組成物。

【請求項24】

凍結保存剤を更に含む、先行請求項のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項25】

前記改変細胞が、少なくとも１つの腫瘍関連抗原または少なくとも１つの腫瘍関連抗原をコードする核酸を含み、前記腫瘍関連抗原が、ＷＴ－１、ＭＵＣ－１、ＲＨＡＭＭ、ＰＲＡＭＥ、ｐ５３、及びＳｕｒｖｉｖｉｎからなる群から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項26】

前記改変細胞が、ＷＴ－１、ＭＵＣ－１、ＰＲＡＭＥ、及びＳｕｒｖｉｖｉｎを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項27】

前記改変細胞が、外因性抗原を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項28】

前記外因性抗原が、腫瘍関連抗原である、先行請求項のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項29】

前記改変細胞が、樹状細胞表現型を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項30】

前記改変細胞が、成熟樹状細胞表現型を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項31】

前記改変細胞が、染色体１１ｐ１５．５～１１ｐ１２の遺伝子異常を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項32】

前記遺伝子異常が、約１６Ｍｂのゲノム領域を包含する、請求項７６に記載の薬学的組成物。

【請求項33】

前記改変細胞が、ＣＤ３４陽性、ＣＤ１ａ陽性、及びＣＤ８３陽性である、先行請求項のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項34】

前記改変細胞が、ＤＣ－ＳＩＧＮ、Ｌａｎｇｅｒｉｎ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される細胞表面マーカーを発現する、先行請求項のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項35】

前記改変細胞が、ＣＤ３４陽性、ＣＤ１ａ陽性、ＣＤ８３陽性、ＣＤ８０陽性、ＣＤ８６陽性、及びＣＤ４０陽性である、先行請求項のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項36】

前記改変細胞が、ＣＤ１４陰性である、先行請求項のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項37】

前記改変細胞が、ＤＣＯｎｅ細胞株に由来する、先行請求項のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項38】

前記改変細胞が、非増殖性である、先行請求項のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項39】

前記改変細胞が、照射されている、先行請求項のいずれか１項に記載の薬学的組成物。

【請求項40】

下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞の産生方法であって、
前駆細胞を、前記前駆細胞の未成熟細胞への分化を可能にする条件下でインキュベートすることと、
ＣＤ４７及び／または前記ＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤の存在下で、ならびに前記未成熟細胞の成熟を可能にする条件下で、前記未成熟細胞をインキュベートし、それによって下方調節されたＣＤ４７経路を含む前記改変細胞を産生することと、を含む、前記産生方法。

【請求項41】

ＣＤ４７及び／または前記ＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する前記薬剤が、抗体、低分子、低分子ＲＮＡ、または操作されたヌクレアーゼ系からなる群から選択される、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

前記抗体が、抗ＣＤ４７抗体である、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

前記低分子ＲＮＡが、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である、請求項４１に記載の方法。

【請求項44】

前記操作されたヌクレアーゼ系が、ＣＤ４７遺伝子座及び／または前記改変細胞の前記ＣＤ４７経路のメンバーの遺伝子座における挿入及び／または欠失を媒介する、請求項４１に記載の方法。

【請求項45】

前記操作されたヌクレアーゼ系が、前記改変細胞のＣＤ４７遺伝子座における挿入及び／または欠失を媒介する、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

前記操作されたヌクレアーゼ系が、メガヌクレアーゼ系、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）系、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）系、及びＣＲＩＳＰＲ系からなる群から選択される、請求項４４または４５に記載の方法。

【請求項47】

前記操作されたヌクレアーゼ系が、ＣＲＩＳＰＲ系である、請求項４４～４６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項48】

請求項４０～４７のいずれか１項に記載の方法によって産生される前記改変細胞を含む、薬学的組成物。

【請求項49】

薬学的に許容される賦形剤を更に含む、請求項４８に記載の薬学的組成物。

【請求項50】

凍結保存剤を更に含む、請求項４８及び４９に記載の薬学的組成物。

【請求項51】

免疫応答の増強を必要とする対象において免疫応答を増強する方法であって、有効量の請求項１～３９及び４８～５０のいずれか１項に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項52】

がんの治療または予防を必要とする対象においてがんを治療または予防する方法であって、有効量の請求項１～３９及び４８～５０のいずれか１項に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項53】

免疫応答の増強を必要とする対象において免疫応答を増強する方法であって、下方制御されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞を含む第１の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項54】

前記第１の組成物が、ＣＤ４７及び／または前記ＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤を更に含む、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

ＣＤ４７を枯渇させる及び／または阻害する薬剤を含む有効量の第２の組成物を前記対象に投与することを更に含む、請求項５３または５４に記載の方法。

【請求項56】

前記第１の組成物及び前記第２の組成物が、同時に投与される、請求項５３～５５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項57】

前記第１の組成物が、前記第２の組成物の前に投与される、請求項５３～５５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項58】

前記第１の組成物が、前記第２の組成物の後に投与される、請求項５３～５５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項59】

免疫応答を増強することを必要とする対象において免疫応答を増強する方法であって、前記対象に、白血病起源の改変細胞と、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤と、を含む第１の組成物を投与すること含む、前記方法。

【請求項60】

前記改変細胞が、少なくとも１つの腫瘍関連抗原または前記腫瘍関連抗原をコードする核酸を含み、前記腫瘍関連抗原が、前記対象における腫瘍に関連する、請求項５３～５９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項61】

前記改変細胞が、少なくとも１つの腫瘍関連抗原または前記腫瘍関連抗原をコードする核酸を含み、前記腫瘍関連抗原が、前記対象における前記腫瘍と関連しない、請求項５３～６０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項62】

前記第１の組成物及び／または前記第２の組成物が、筋肉内、皮下、静脈内、動脈内、腹腔内、胸骨内、皮内、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、組織の間質空間への送達、及び非腫瘍組織への送達、からなる群から選択される経路を介して投与される、請求項５３～６１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項63】

前記第１の組成物及び／または前記第２の組成物が、静脈内に投与される、請求項５３～６２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項64】

前記第１の組成物及び／または前記第２の組成物が、静脈内投与のために調製される、請求項６３に記載の方法。

【請求項65】

前記第１の組成物及び／または前記第２の組成物が、静脈内投与に許容される希釈剤または溶媒を含む、請求項６３または６４に記載の方法。

【請求項66】

前記第１の組成物及び／または前記第２の組成物が、皮内に投与される、請求項５３～６２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項67】

前記第１の組成物及び／または前記第２の組成物が、皮内投与のために調製される、請求項６６に記載の方法。

【請求項68】

前記第１の組成物及び／または前記第２の組成物が、皮内投与に許容される希釈剤または溶媒を含む、請求項６６または６７に記載の方法。

【請求項69】

前記第１の組成物及び／または前記第２の組成物が、筋肉内に投与される、請求項５３～６２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項70】

前記第１の組成物及び／または前記第２の組成物が、筋肉内投与のために調製される、請求項６９に記載の方法。

【請求項71】

前記第１の組成物及び／または前記第２の組成物が、筋肉内投与に許容される希釈剤または溶媒を含む、請求項６９または７０に記載の方法。

【請求項72】

前記第１の組成物及び／または前記第２の組成物が、腫瘍内に投与される、請求項５３～６２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項73】

前記第１の組成物及び／または前記第２の組成物が、腫瘍内投与のために調製される、請求項７２に記載の方法。

【請求項74】

前記第１の組成物及び／または前記第２の組成物が、腫瘍内投与に許容される希釈剤または溶媒を含む、請求項７２または７３に記載の方法。

【請求項75】

前記ＣＤ４７を枯渇させる及び／または阻害する薬剤が、抗体、低分子、低分子ＲＮＡ、または操作されたヌクレアーゼ系からなる群から選択される、請求項５３～７４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項76】

前記抗体が、抗ＣＤ４７抗体である、請求項７５に記載の方法。

【請求項77】

前記低分子ＲＮＡが、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である、請求項７５に記載の方法。

【請求項78】

前記操作されたヌクレアーゼ系が、ＣＤ４７遺伝子座及び／または前記改変細胞の前記ＣＤ４７経路のメンバーの前記遺伝子座における挿入及び／または欠失を媒介する、請求項７５に記載の方法。

【請求項79】

前記操作されたヌクレアーゼ系が、前記改変細胞のＣＤ４７遺伝子座における挿入及び／または欠失を媒介する、請求項７８に記載の方法。

【請求項80】

前記操作されたヌクレアーゼ系が、メガヌクレアーゼ系、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）系、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）系、及びＣＲＩＳＰＲ系からなる群から選択される、請求項７８または７９に記載の方法。

【請求項81】

前記操作されたヌクレアーゼ系が、ＣＲＩＳＰＲ系である、請求項７８～８０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項82】

前記ＣＤ４７を枯渇させる及び／または阻害する薬剤が、抗ＣＤ４７抗体をコードする核酸、ＣＤ４７標的化低分子ＲＮＡ、またはＣＤ４７を標的化する操作されたヌクレアーゼ系を含むウイルスベクターを含む、請求項５３～８１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項83】

前記ウイルスベクターが、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、及び単純ヘルペスウイルスからなる群から選択されるウイルスに由来する、請求項８２に記載の方法。

【請求項84】

前記ＣＤ４７を標的化する低分子ＲＮＡが、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である、請求項８２に記載の方法。

【請求項85】

前記ＣＤ４７を標的化する操作されたヌクレアーゼ系が、前記改変細胞のＣＤ４７遺伝子座における挿入及び／または欠失を媒介する、請求項８２に記載の方法。

【請求項86】

前記ＣＤ４７を標的化する操作されたヌクレアーゼ系が、メガヌクレアーゼ系、ＺＦＮ系、ＴＡＬＥＮ系、及びＣＲＩＳＰＲ系からなる群から選択される、請求項８５に記載の方法。

【請求項87】

前記ＣＤ４７を標的化する操作されたヌクレアーゼ系が、ＣＲＩＳＰＲ系である、請求項８５または８６に記載の方法。

【請求項88】

前記改変細胞が、少なくとも１つの腫瘍関連抗原または少なくとも１つの腫瘍関連抗原をコードする核酸を含み、前記腫瘍関連抗原が、ＷＴ－１、ＭＵＣ－１、ＲＨＡＭＭ、ＰＲＡＭＥ、ｐ５３、及びＳｕｒｖｉｖｉｎからなる群から選択される、請求項５３～８７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項89】

前記改変細胞が、ＷＴ－１、ＭＵＣ－１、ＰＲＡＭＥ、及びＳｕｒｖｉｖｉｎを含む、請求項５３～８８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項90】

前記改変細胞が、外因性抗原を含む、請求項５３～８９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項91】

前記外因性抗原が、腫瘍関連抗原である、請求項５３～９０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項92】

前記改変細胞が、樹状細胞表現型を含む、請求項５３～９１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項93】

前記改変細胞が、成熟樹状細胞表現型を含む、請求項５３～９２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項94】

前記改変細胞が、染色体１１ｐ１５．５～１１ｐ１２の遺伝子異常を含む、請求項５３～９３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項95】

前記遺伝子異常が、約１６Ｍｂのゲノム領域を包含する、請求項９４に記載の方法。

【請求項96】

前記改変細胞が、ＣＤ３４陽性、ＣＤ１ａ陽性、及びＣＤ８３陽性である、請求項５３～９５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項97】

前記改変細胞が、ＤＣ－ＳＩＧＮ、Ｌａｎｇｅｒｉｎ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される細胞表面マーカーを発現する、請求項５３～９６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項98】

前記改変細胞が、ＣＤ３４陽性、ＣＤ１ａ陽性、ＣＤ８３陽性、ＣＤ８０陽性、ＣＤ８６陽性、及びＣＤ４０陽性である、請求項５３～９７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項99】

前記改変細胞が、ＣＤ１４陰性である、請求項５３～９８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項100】

前記改変細胞が、ＤＣＯｎｅ細胞株に由来する、請求項５３～９９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項101】

前記改変細胞が、非増殖性である、請求項５３～１００のいずれか１項に記載の方法。

【請求項102】

前記改変細胞が、照射されている、請求項５３～１０１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項103】

前記対象が、以前がんに罹患したことがある、請求項５３～１０２のいずれか１項に記載の方法。

【請求項104】

前記対象が、以前前記がんの治療を受けたことがある、請求項５３～１０３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項105】

前記対象が、前記がんの再発に罹患している、請求項５３～１０４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項106】

前記がんが、腫瘍である、請求項５３～１０５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項107】

前記腫瘍が、固形腫瘍である、請求項１０６に記載の方法。

【請求項108】

前記固形腫瘍が、肉腫、癌腫、及びリンパ腫からなる群から選択される、請求項１０７に記載の方法。

【請求項109】

前記対象が、ヒトである、請求項５３～１０８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項110】

前記対象が、家畜動物及び／または獣医学的ヘルスケアに好適な動物である、請求項５３～１０８のいずれか１項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
本出願は、２０２１年３月１２日に出願された米国仮出願第６３／１６０，２９６号の利益を主張し、これは、あらゆる目的のためにその全体が参照により組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

免疫系を活性化してがん細胞を標的として殺傷し、臨床的に関連する応答を生み出すことが、がん研究の目的となっている。免疫療法は、免疫細胞及びがん上に発現される分子を標的とすることによって、がんに対する強力な免疫応答を誘発することを目的とする。腫瘍特異的抗原を同定することによって、効果的ながんワクチンの開発に多大な努力が投資されてきた。がんワクチンは、そのような抗原及びそれらを表示する細胞を標的とし破壊する、免疫系の能力を高めるように設計されている。

【0003】

しかしながら、腫瘍逃避メカニズムの複雑さに起因して、従来のがんワクチンは、全ての患者に所望の免疫応答を常に提供するわけではなく、それによって免疫療法の有効性を低下させる。更に、免疫チェックポイントは、免疫系を制御する様々な阻害障壁を提示し、そのために腫瘍は、免疫抵抗性を発達させるメカニズムとして調節することが示されている。例えば、最初の免疫チェックポイントは、Ｔ細胞がＣＴＬＡ－４と呼ばれる陰性免疫チェックポイントタンパク質によって制御されることが観察されたときに発見された。ＣＴＬＡ－４は、Ｔ細胞が誤って健康な細胞を損傷するのを防ぐために、Ｔ細胞の活性をシャットダウンすることが見出された。

【0004】

したがって、当技術分野では、がんを治療するための新規の免疫療法的アプローチの必要性が存在する。具体的には、がんを治療するための新規のがんワクチン接種アプローチの必要性が存在する。本発明は、この必要性に対応し、これを満たす。

【発明の概要】

【0005】

本開示は、少なくとも一部において、特定の白血病由来細胞（例えば、本明細書に記載の白血病起源の改変細胞）が抗原提示細胞によって効率的に処理されるという発見に基づいている。これは、かかる白血病由来細胞が細胞ベースのワクチンとして対象に投与されるとき、対象の樹状細胞が、白血病由来細胞によって運ばれる抗原の消化及びプロセシング、ならびにその後の局所及び全身免疫応答の刺激に関与するメカニズムを支持する。白血病由来の細胞ベースのワクチンの免疫刺激能力に基づいて、ワクチンを皮膚、腫瘍内微小環境、または他のワクチン接種部位に投与した後、ワクチンは、免疫細胞を動員することによって免疫原性環境を誘導し得る。ワクチン投与部位への免疫細胞の動員は、サイトカインの分泌、及び常駐及び動員された抗原提示細胞によるワクチン成分の食作用の刺激を誘導する。

【0006】

本明細書に記載されるように、白血病由来細胞ベースのワクチン食作用プロセスは、白血病由来細胞ベースのワクチンと抗原提示細胞との間の相互作用を制限する顕著な「私を食べないで」シグナルを提供するＳＩＲＰα／ＣＤ４７経路によって調節されることが見出されている。抗ＣＤ４７遮断抗体の使用が、抗原提示細胞による白血病由来細胞の取り込みを増強することが見出された。これは、腫瘍を免疫系に曝露し、白血病由来の細胞ワクチンの生物活性を更に高めることによって、細胞ベースのワクチン及びＣＤ４７遮断剤が相乗的な様式で機能する作用様式を実証し得る。

【0007】

本発明の例示的な白血病由来細胞ワクチンは、ＤＣＰ－００１である。ＤＣＰ－００１は、ＤＣＯｎｅ白血病細胞株由来のワクチンであり、ＤＣＯｎｅ細胞は、免疫原性の高い成熟樹状細胞（ｍＤＣ）表現型を採用する可能性がある。ＤＣＯｎｅ細胞は、複数の共通の腫瘍関連抗原を発現する。ＤＣＯｎｅ ｍＤＣは、ＤＣＯｎｅ腫瘍関連抗原レパートリーをｍＤＣ共刺激プロファイルと組み合わせ、非増殖性、凍結、照射産物であるＤＣＰ－００１の基礎を形成する。本明細書に記載されるように、ＤＣＰ－００１は、ＤＣＰ－００１が由来する白血病起源とは異なる起源であるにもかかわらず、固形腫瘍がん（例えば、非白血病癌）の治療に予想外に有効である。

【0008】

本開示は、がんに由来する細胞ベースのワクチン（例えば、ＤＣＰ－００１）の使用を説明する。ＣＤ４７免疫療法における現在の開発は、がん細胞の表面上のＣＤ４７を遮断することを対象とするが、本開示は、がんを治療するために使用される細胞の表面上のＣＤ４７を遮断することを目的とするＣＤ４７免疫療法に関する。例えば、本開示におけるＣＤ４７の遮断は、ある特定の実施形態において、細胞ベースのワクチン（例えば、ＤＣＰ－００１）の細胞の表面上のＣＤ４７を遮断することを対象とする。

【0009】

一態様において、下方調節されたＣＤ４７経路を含む、白血病起源の単離された改変細胞と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物が提供される。

【0010】

ある特定の典型的な実施形態において、下方調節されたＣＤ４７経路は、ＣＤ４７経路のメンバーの枯渇及び／または阻害の結果である。ある特定の典型的な実施形態において、ＣＤ４７経路のメンバーは、ＣＤ４７である。ある特定の典型的な実施形態において、下方調節されたＣＤ４７経路は、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーの枯渇及び／または阻害の結果である。

【0011】

ある特定の典型的な実施形態において、下方調節されたＣＤ４７経路は、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤によって媒介される。ある特定の典型的な実施形態において、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる薬剤は、抗体、低分子、低分子ＲＮＡ、または操作されたヌクレアーゼ系からなる群から選択される。ある特定の典型的な実施形態において、抗体は、抗ＣＤ４７抗体である。ある特定の典型的な実施形態において、低分子ＲＮＡは、低分子干渉型ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である。ある特定の典型的な実施形態において、操作されたヌクレアーゼ系は、メガヌクレアーゼ系、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）系、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）系、及びＣＲＩＳＰＲ系からなる群から選択される。ある特定の典型的な実施形態において、操作されたヌクレアーゼ系は、ＣＤ４７遺伝子座及び／または改変細胞のＣＤ４７経路のメンバーの遺伝子座における挿入及び／または欠失を媒介する。ある特定の典型的な実施形態において、操作されたヌクレアーゼ系は、改変細胞のＣＤ４７遺伝子座における挿入及び／または欠失を媒介する。ある特定の典型的な実施形態において、操作されたヌクレアーゼ系は、ＣＲＩＳＰＲ系である。

【0012】

別の態様において、ＣＤ４７遺伝子座における挿入及び／または欠失を含む、白血病起源の改変細胞を含む薬学的組成物であって、ＣＤ４７遺伝子座における挿入及び／または欠失が、ＣＤ４７の下方調節された発現をもたらす、薬学的組成物が提供される。

【0013】

ある特定の典型的な実施形態において、ＣＤ４７遺伝子座における挿入及び／または欠失は、ＣＤ４７遺伝子座における二本鎖切断の修復によって媒介される。ある特定の典型的な実施形態において、修復は、非相同末端接合（ＮＨＥＪ）及び相同組換え修復（ＨＤＲ）を介する。

【0014】

ある特定の典型的な実施形態において、ＣＤ４７遺伝子座における挿入及び／または欠失は、操作されたヌクレアーゼ系によって媒介される。ある特定の典型的な実施形態において、操作されたヌクレアーゼ系は、メガヌクレアーゼ系、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）系、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）系、及びＣＲＩＳＰＲ系からなる群から選択される。ある特定の典型的な実施形態において、操作されたヌクレアーゼ系は、ＣＲＩＳＰＲ系である。

【0015】

ある特定の典型的な実施形態において、薬学的組成物は、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤を更に含む。ある特定の典型的な実施形態において、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤は、抗ＣＤ４７抗体である。

【0016】

別の態様において、白血病起源の改変細胞と、抗ＣＤ４７抗体とを含む、薬学的組成物が提供される。

【0017】

別の態様において、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞と、抗ＣＤ４７抗体と、を含む、薬学的組成物が提供される。

【0018】

ある特定の典型的な実施形態において、薬学的組成物は、薬学的に許容される賦形剤を更に含む。ある特定の典型的な実施形態において、薬学的組成物は、凍結保存剤を更に含む。

【0019】

ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、少なくとも１つの腫瘍関連抗原または少なくとも１つの腫瘍関連抗原をコードする核酸を含み、腫瘍関連抗原は、ＷＴ－１、ＭＵＣ－１、ＲＨＡＭＭ、ＰＲＡＭＥ、ｐ５３、及びＳｕｒｖｉｖｉｎからなる群から選択される。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、ＷＴ－１、ＭＵＣ－１、ＰＲＡＭＥ、及びＳｕｒｖｉｖｉｎを含む。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、外因性抗原を含む。ある特定の典型的な実施形態において、外因性抗原は、腫瘍関連抗原である。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は樹状細胞表現型を含む。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、成熟樹状細胞表現型を含む。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、染色体１１ｐ１５．５～１１ｐ１２の遺伝子異常を含む。ある特定の典型的な実施形態において、遺伝子異常は、約１６Ｍｂのゲノム領域を含む。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、ＣＤ３４陽性、ＣＤ１ａ陽性、及びＣＤ８３陽性である。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、ＤＣ－ＳＩＧＮ、Ｌａｎｇｅｒｉｎ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される細胞表面マーカーを発現する。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、ＣＤ３４陽性、ＣＤ１ａ陽性、ＣＤ８３陽性、ＣＤ８０陽性、ＣＤ８６陽性、及びＣＤ４０陽性である。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、ＣＤ１４陰性である。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、ＤＣＯｎｅ細胞株に由来する。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、非増殖性である。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、照射されている。

【0020】

別の態様において、下方調節されたＣＤ４７経路を含む、白血病起源の改変細胞の産生方法であって、前駆細胞を未成熟細胞への分化を可能にする条件下で前駆細胞をインキュベートすることと、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤の存在下、及び未成熟細胞の成熟を可能にする条件下で、未成熟細胞をインキュベートすることと、を含み、それによって下方調節されたＣＤ４７経路を含む改変細胞を産生する。

【0021】

ある特定の典型的な実施形態において、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤は、抗体、低分子、低分子ＲＮＡ、または操作されたヌクレアーゼ系からなる群から選択される。ある特定の典型的な実施形態において、抗体は、抗ＣＤ４７抗体である。ある特定の典型的な実施形態において、低分子ＲＮＡは、低分子干渉型ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である。

【0022】

ある特定の典型的な実施形態において、操作されたヌクレアーゼ系は、ＣＤ４７遺伝子座及び／または改変細胞のＣＤ４７経路のメンバーの遺伝子座における挿入及び／または欠失を媒介する。ある特定の典型的な実施形態において、操作されたヌクレアーゼ系は、改変細胞のＣＤ４７遺伝子座における挿入及び／または欠失を媒介する。ある特定の典型的な実施形態において、操作されたヌクレアーゼ系は、メガヌクレアーゼ系、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）系、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）系、及びＣＲＩＳＰＲ系からなる群から選択される。ある特定の典型的な実施形態において、操作されたヌクレアーゼ系は、ＣＲＩＳＰＲ系である。

【0023】

別の態様において、前述の方法のいずれかによって産生される改変細胞を含む、薬学的組成物が提供される。

【0024】

ある特定の典型的な実施形態において、薬学的組成物は、薬学的に許容される賦形剤を更に含む。ある特定の典型的な実施形態において、薬学的組成物は、凍結保存剤を更に含む。

【0025】

別の態様において、有効量の前述の組成物のいずれかを対象に投与することを含む、免疫応答の増強を必要とする対象において免疫応答を増強する方法が提供される。別の態様において、免疫応答の増強を必要とする対象の免疫応答を増強する方法において使用するための、前述の組成物のうちのいずれかが提供される。

【0026】

別の態様において、がんの治療または予防を必要とする対象においてがんを治療または予防する方法であって、有効量の前述の組成物のいずれかを対象に投与することを含む方法が提供される。別の態様において、がんの治療または予防を必要とする対象におけるがんの治療または予防する方法において使用するための前述の組成物のいずれかが提供される。

【0027】

別の態様において、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞を含む第１の組成物を対象に投与することを含む、免疫応答の増強を必要とする対象において免疫応答を増強する方法が提供される。

【0028】

ある特定の典型的な実施形態において、第１の組成物は、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤を更に含む。

【0029】

ある特定の典型的な実施形態において、方法は、対象に、ＣＤ４７を枯渇させる及び／または阻害する薬剤を含む有効量の第２の組成物を投与することを更に含む。

【0030】

ある特定の典型的な実施形態において、第１の組成物及び第２の組成物は、同時に投与される。ある特定の典型的な実施形態において、第１の組成物は、第２の組成物の前に投与される。ある特定の典型的な実施形態において、第１の組成物は、第２の組成物の後に投与される。

【0031】

別の態様において、免疫応答の増強を必要とする対象において免疫応答を増強する方法であって、白血病起源の改変細胞と、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤とを含む第１の組成物を対象に投与することを含む方法が提供される。

【0032】

ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、少なくとも１つの腫瘍関連抗原または腫瘍関連抗原をコードする核酸を含み、腫瘍関連抗原は、対象における腫瘍と関連している。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、少なくとも１つの腫瘍関連抗原または腫瘍関連抗原をコードする核酸を含み、腫瘍関連抗原は、対象の腫瘍とは関連していない。

【0033】

ある特定の典型的な実施形態において、第１の組成物及び／または第２の組成物は、筋肉内、皮下、静脈内、動脈内、腹腔内、胸骨内、皮内、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、組織の間質空間への送達、及び非腫瘍組織への送達からなる群から選択される経路を介して投与される。

【0034】

ある特定の典型的な実施形態において、第１の組成物及び／または第２の組成物は、静脈内に投与される。ある特定の典型的な実施形態において、第１の組成物及び／または第２の組成物は、静脈内投与のために調製される。ある特定の典型的な実施形態において、第１の組成物及び／または第２の組成物は、静脈内投与に許容される希釈剤または溶媒を含む。

【0035】

ある特定の典型的な実施形態において、第１の組成物及び／または第２の組成物は、皮内に投与される。ある特定の典型的な実施形態において、第１の組成物及び／または第２の組成物は、皮内投与のために調製される。ある特定の典型的な実施形態において、第１の組成物及び／または第２の組成物は、皮内投与に許容される希釈剤または溶媒を含む。

【0036】

ある特定の典型的な実施形態において、第１の組成物及び／または第２の組成物は、筋肉内に投与される。ある特定の典型的な実施形態において、第１の組成物及び／または第２の組成物は、筋肉内投与のために調製される。ある特定の典型的な実施形態において、第１の組成物及び／または第２の組成物は、筋肉内投与に許容される希釈剤または溶媒を含む。

【0037】

ある特定の典型的な実施形態において、第１の組成物及び／または第２の組成物は、腫瘍内に投与される。ある特定の典型的な実施形態において、第１の組成物及び／または第２の組成物は、腫瘍内投与のために調製される。ある特定の典型的な実施形態において、第１の組成物及び／または第２の組成物は、腫瘍内投与に許容される希釈剤または溶媒を含む。

【0038】

ある特定の典型的な実施形態において、ＣＤ４７を枯渇させる及び／または阻害する薬剤は、抗体、低分子、低分子ＲＮＡ、または操作されたヌクレアーゼ系からなる群から選択される。ある特定の典型的な実施形態において、抗体は、抗ＣＤ４７抗体である。ある特定の典型的な実施形態において、低分子ＲＮＡは、低分子干渉型ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である。

【0039】

ある特定の典型的な実施形態において、操作されたヌクレアーゼ系は、ＣＤ４７遺伝子座及び／または改変細胞のＣＤ４７経路のメンバーの遺伝子座における挿入及び／または欠失を媒介する。ある特定の典型的な実施形態において、操作されたヌクレアーゼ系は、改変細胞のＣＤ４７遺伝子座における挿入及び／または欠失を媒介する。ある特定の典型的な実施形態において、操作されたヌクレアーゼ系は、メガヌクレアーゼ系、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）系、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）系、及びＣＲＩＳＰＲ系からなる群から選択される。ある特定の典型的な実施形態において、操作されたヌクレアーゼ系は、ＣＲＩＳＰＲ系である。

【0040】

ある特定の典型的な実施形態において、ＣＤ４７を枯渇させる及び／または阻害する薬剤は、抗ＣＤ４７抗体をコードする核酸、ＣＤ４７標的化低分子ＲＮＡ、またはＣＤ４７を標的化する操作されたヌクレアーゼ系を含むウイルスベクターを含む。ある特定の典型的な実施形態において、ウイルスベクターは、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、及び単純ヘルペスウイルスからなる群から選択されるウイルスに由来する。ある特定の典型的な実施形態において、ＣＤ４７標的化低分子ＲＮＡは、低分子干渉型ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である。ある特定の典型的な実施形態において、ＣＤ４７を標的化する操作されたヌクレアーゼ系は、改変細胞のＣＤ４７遺伝子座における挿入及び／または欠失を媒介する。

【0041】

ある特定の典型的な実施形態において、ＣＤ４７を標的化する操作されたヌクレアーゼ系は、メガヌクレアーゼシステム、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）システム、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）システム、及びＣＲＩＳＰＲシステムからなる群から選択される。ある特定の典型的な実施形態において、ＣＤ４７を標的化する操作されたヌクレアーゼ系は、ＣＲＩＳＰＲ系である。

【0042】

ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、少なくとも１つの腫瘍関連抗原または少なくとも１つの腫瘍関連抗原をコードする核酸を含み、腫瘍関連抗原は、ＷＴ－１、ＭＵＣ－１、ＲＨＡＭＭ、ＰＲＡＭＥ、ｐ５３、及びＳｕｒｖｉｖｉｎからなる群から選択される。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、ＷＴ－１、ＭＵＣ－１、ＰＲＡＭＥ、及びＳｕｒｖｉｖｉｎを含む。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、外因性抗原を含む。ある特定の典型的な実施形態において、外因性抗原は、腫瘍関連抗原である。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は樹状細胞表現型を含む。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、成熟樹状細胞表現型を含む。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、染色体１１ｐ１５．５～１１ｐ１２の遺伝子異常を含む。ある特定の典型的な実施形態において、遺伝子異常は、約１６Ｍｂのゲノム領域を含む。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、ＣＤ３４陽性、ＣＤ１ａ陽性、及びＣＤ８３陽性である。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、ＤＣ－ＳＩＧＮ、Ｌａｎｇｅｒｉｎ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＣＤ４０、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される細胞表面マーカーを発現する。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、ＣＤ３４陽性、ＣＤ１ａ陽性、ＣＤ８３陽性、ＣＤ８０陽性、ＣＤ８６陽性、及びＣＤ４０陽性である。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、ＣＤ１４陰性である。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、ＤＣＯｎｅ細胞株に由来する。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、非増殖性である。ある特定の典型的な実施形態において、改変細胞は、照射されている。

【0043】

ある特定の典型的な実施形態において、対象は、以前がんに罹患したことがある。ある特定の典型的な実施形態において、対象は、以前がんの治療を受けたことがある。ある特定の典型的な実施形態において、対象は、がんの再発に罹患している。

【0044】

ある特定の典型的な実施形態において、がんは腫瘍である。ある特定の典型的な実施形態において、腫瘍は、固形腫瘍である。ある特定の典型的な実施形態において、固形腫瘍は、肉腫、癌種、及びリンパ腫からなる群から選択される。

【0045】

ある特定の典型的な実施形態において、対象はヒトである。ある特定の典型的な実施形態において、対象は、家畜化された動物及び／または獣医学的ヘルスケアに好適な動物である。

【0046】

本発明の前述及び他の特徴及び利点は、付属の図面と併せて例示的な実施形態の以下の詳細な説明からより完全に理解される。

【図面の簡単な説明】

【0047】

【図1】ｉＭｏＤＣによるＤＣＰ－００１またはＤＣＯｎｅ前駆体（ｐｒｏｇ）の取り込み率を示すグラフである。

【図2】示されるように、ＰＢＭＣ中に見出される細胞の特定の亜集団によるＤＣＰ－００１またはＤＣＯｎｅ前駆体の取り込み率を示すグラフである。

【図3】示されるように、薬剤の存在下で共培養したときのｉＭｏＤＣによるＤＣＰ－００１またはＤＣＯｎｅ前駆体（ｐｒｏｇ）の取り込み率を示すグラフである。

【図4】Ａ～Ｃは、フローサイトメトリーによって決定される、ＤＣＰ－００１またはＤＣＯｎｅ前駆体（ｐｒｏｇ）の表面上のホスファチジルセリン（ＰＳ、Ａ）、カルレチクリン（ＣＲＴ、Ｂ）またはＣＤ４７（Ｂ）の発現を示すグラフである。

【図5】Ａ～Ｃは、アネキシンＶ（Ａ）、ＣＲＴ特異的抗体（Ｂ）、または抗ＣＤ４７モノクローナル抗体（Ｃ）の存在下で共培養したときのｉＭｏＤＣによるＤＣＰ－００１またはＤＣＯｎｅ前駆体（ｐｒｏｇ）の取り込み率を示すグラフである。

【図6】Ａ～Ｈは、示されるように、ＤＣＰ－００１による刺激時の、ＰＢＭＣにおける様々な炎症誘発性サイトカイン及びケモカインの分泌を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0048】

抗ＣＤ４７免疫療法は、がん細胞を飲み込むための免疫細胞の食作用を誘発するために、がん細胞の表面上のＣＤ４７を遮断することを目的とした最近の研究の標的となっている。例えば、Ｌｕ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏ．Ｔａｒｇｅｔｓ Ｔｈｅｒ．（２０２０）１３：９３２３－９３３１を参照されたく、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されるように、白血病由来細胞ベースワクチン（例えば、ＤＣＰ－００１）の食作用プロセスは、白血病由来細胞ベースワクチンと抗原提示細胞との間の相互作用を制限する顕著な「私を食べないで」シグナルを提供するＳＩＲＰα／ＣＤ４７経路によって調節されることが見出されている。抗ＣＤ４７遮断抗体の使用は、抗原提示細胞によるＤＣＰ－００１の取り込みを増強することが見出された。これは、腫瘍を免疫系に曝露し、ＤＣＰ－００１ワクチンの生物学的活性を更に高めることによって、細胞ベースのワクチン及びＣＤ４７遮断剤が相乗的に機能する作用様式を実証し得る。

【0049】

本明細書に記載の方法は、本明細書で開示される特定の方法及び実験条件に限定されず、したがって方法及び条件は変わる場合があることを理解されたい。本明細書で使用される用語が特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定するようには意図されていないことも理解されたい。本明細書に記載の方法は、当業者の技能の範囲内である従来の分子及び細胞生物学的及び免疫学的技術を使用する。そのような技術は当業者によく知られており、科学文献で説明されている。

【0050】

Ａ．定義
別段の定義がない限り、本明細書で使用される科学的及び技術的用語は、当業者によって一般に理解される意味を有する。任意の潜在的な曖昧さの場合、本明細書で提供される定義は、任意の辞書または外因的定義よりも優先される。別段文脈によって要求されない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。「または」の使用は、特に明記されていない限り、「及び／または」を意味する。「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」等の他の形態の使用は、限定的ではない。

【0051】

概して、本明細書に記載される細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、ならびにタンパク質及び核酸化学及びハイブリダイゼーションと関連して使用される専門用語は、当該技術分野で周知であり、一般的に使用されている。本明細書に提供される方法及び技術は、別段の指示がない限り、概して、当該技術分野で周知の従来の方法に従って、また本明細書全体を通して引用及び議論される様々な一般的及びより具体的な参考文献に記載されるように、実施される。酵素反応及び精製技術は、製造業者の仕様書に従って、または当該技術分野において一般的に達成されるように、または本明細書に記載されるように実行される。本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、及び医薬品及び製薬化学と関連して使用される専門用語ならびに研究室の手順及び技術は、当該技術分野で周知であり、一般的に使用されている。標準的な技術は、化学合成、化学分析、薬学的調製、製剤、及び送達、ならびに患者の治療に使用される。

【0052】

本開示がより容易に理解され得ることを理解されるために、選択用語が以下に定義される。

【0053】

冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、本明細書において、物品の文法的対象物の１つまたは複数（すなわち、少なくとも１つ）を指すために使用される。一例として、「１つの要素（ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」は、１つまたは１つを超える要素を意味する。

【0054】

量、時間的な持続時間などの測定可能な値を指すときに本明細書で使用される「約」は、そのような変動が開示された方法を実行するのに適切であるため、指定された値から±２０％または±１０％、±５％、±１％、及び±０．１％の変動を包含することを意味する。

【0055】

本明細書で使用される場合、疾患を「軽減する」ことは、疾患の１つ以上の症状の重症度を低減することを意味する。

【0056】

本明細書で使用される「抗原」という用語は、免疫応答を誘発する分子として定義される。この免疫応答には、抗体産生、もしくは特定の免疫担当細胞の活性化、またはその両方が含まれる場合がある。当業者は、実質的に全てのタンパク質またはペプチドを含む任意の巨大分子が、抗原として機能し得ることを理解するであろう。

【0057】

本明細書に記載のポリペプチドに関して使用される「抗原」または「抗原性」という用語は、概して、Ｔ細胞受容体、抗体、または特異的体液性及び／または細胞免疫の他の要素によって特異的に認識される少なくとも１つのエピトープを含有する生体分子を指す。分子全体、または分子の１つ以上の部分が、例えばポリペプチドのＭＨＣペプチド抗原複合体への細胞内プロセシング及び後続の抗原提示の後に認識され得る。「抗原」または「抗原性」という用語は、本明細書に記載のポリペプチドの少なくとも１つ以上の抗原性エピトープへの言及を含む。

【0058】

更に、抗原は、組換えまたはゲノムＤＮＡに由来し得る。当業者は、免疫応答を誘発するタンパク質をコードするヌクレオチド配列または部分ヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡが、したがって、その用語が本明細書で使用される「抗原」をコードすることを理解するであろう。更に、当業者は、抗原が遺伝子の完全長ヌクレオチド配列のみによってコードされる必要がないことを理解するであろう。更に、当業者は、抗原が「遺伝子」によってコードされる必要が全くないことを理解するであろう。抗原が生成、合成され得るか、または生体試料に由来し得ることは容易に明らかである。そのような生体試料には、組織試料、腫瘍試料、細胞、または生体液が含まれ得るが、これらに限定されない。

【0059】

本明細書で使用される場合、「同種異系」という用語は、治療を必要とする対象に関して、遺伝的に異なっており、したがって免疫学的に不適合である生体組織または細胞の関与を指す。遺伝的に異なっているが、本明細書に記載の同種異系細胞、例えば、同種異系白血病由来細胞（例えば、白血病起源の改変細胞）は、同じ種に由来する。例えば、白血病起源の改変細胞を対象に投与することを含む本明細書に記載の方法は、同じ種であるにもかかわらず、対象と遺伝的に異なる白血病起源の改変細胞の投与を指す。

【0060】

「疾患」は、動物が恒常性を維持することができない動物の健康状態である。疾患が改善されない場合、動物の健康状態は悪化し続ける。対照的に、動物における「障害」は、動物が恒常性を維持することができるが、動物の健康状態が障害の不在下での健康状態よりも良好ではない健康状態である。治療しないままでいても、障害が必ずしも動物の健康状態の更なる低下を引き起こすとは限らない。

【0061】

「有効量」または「治療有効量」は、本明細書では互換的に使用され、特定の生物学的結果を得るのに効果的であるかまたは治療的もしくは予防的利益をもたらす本明細書に記載される化合物、製剤、材料、または組成物の量を指す。そのような結果には、哺乳動物に投与されたときに、本発明の組成物の不在下で検出された免疫応答と比較して、検出可能なレベルの免疫抑制または寛容を引き起こす量が含まれ得るが、これらに限定されない。免疫応答は、当該技術分野で認められている極めて多くの方法によって容易に評価することができる。本明細書において投与される組成物の量は変動するものであり、複数の要因（例えば、処置されている疾患または症状、処置されている哺乳動物の年齢及び健康及び身体状態、疾患の重症度、投与されている特定の化合物など）に基づいて容易に決定することができることを、当業者は理解するであろう。

【0062】

「コードする」とは、規定のヌクレオチド配列（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、及びｍＲＮＡ）または規定のアミノ酸配列のいずれか、ならびにそれらから生じる生物学的特性を有する生物学的プロセスにおける他のポリマー及び高分子の合成のための鋳型として機能するための、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド中のヌクレオチドの特定の配列の固有の特性を指す。したがって、遺伝子は、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳が、細胞または他の生物系においてタンパク質を産生させる場合、タンパク質をコードする。ヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一であり、通常は配列表に示されるコード鎖と、遺伝子またはｃＤＮＡの転写のための鋳型として使用される非コード鎖の両方を、その遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質または他の産物をコードする、と称することができる。

【0063】

本明細書で使用される場合、「内因性」は、生物、細胞、組織、もしくは系に由来する、またはその内部で産生される任意の物質を指す。

【0064】

本明細書で使用される場合、「外因性」という用語は、生物、細胞、組織、もしくは系の外部に由来する、または外部で生成される任意の物質を指す。

【0065】

「対象」という用語は、本明細書で使用される場合、本明細書に記載される方法のレシピエント、すなわち、細胞性免疫応答を開始することができるレシピエントであり、哺乳動物である。ある特定の実施形態において、対象はヒトである。ある特定の実施形態において、対象は、飼育動物、例えば、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、イヌ、ネコなどである。「患者」及び「対象」という用語は、互換的に使用され得る。ある特定の実施形態において、対象は、がん（例えば、固形腫瘍）に罹患しているヒトである。ある特定の実施形態において、対象は、がん（例えば、固形腫瘍）に罹患している飼育動物である。

【0066】

「治療」という用語は、本明細書で使用される場合、処置及び／または予防を意味する。治療効果は、病状の抑制、寛解、または根絶によって得られる。

【0067】

疾患を「処置する」とは、この用語を本明細書で用いる場合、対象が経験する疾患または障害の少なくとも１つの兆候または症状の頻度または重症度を減らすことを意味する。

【0068】

「腫瘍」という用語は、本明細書で使用される場合、異常に高速で増殖する細胞物質（例えば、組織）への言及を含む。新生細胞を含む増殖は新生物（「腫瘍」としても知られる）であり、概して、対象の体内に別個な組織塊を形成する。腫瘍は、正常組織との構造的組織及び機能的協調の部分的または完全な欠如を示し得る。本明細書で使用される場合、腫瘍は、造血腫瘍ならびに固形腫瘍を包含することが意図される。ある特定の実施形態において、腫瘍は、固形腫瘍である。「腫瘍」という用語は、本明細書で使用される場合、腫瘍微小環境または腫瘍部位、すなわち、腫瘍内の領域及び腫瘍性組織のすぐ外側の領域への言及を含む。ある特定の実施形態において、腫瘍微小環境または腫瘍部位は、腫瘍組織の境界内の領域を含む。ある特定の実施形態において、腫瘍微小環境または腫瘍部位は、腫瘍の腫瘍間質コンパートメントを含む。これは、本明細書では、新生細胞の形質膜と新たに形成された新生血管の血管壁との間に介在する全てのものとして定義される。本明細書で使用される場合、「腫瘍微小環境」または「腫瘍部位」という用語は、腫瘍が存在する対象内の位置（腫瘍を直接取り囲んでいる領域を含む）を指す。

【0069】

腫瘍は、良性（例えば、良性腫瘍）または悪性（例えば、悪性腫瘍もしくはがん）であり得る。悪性腫瘍は、大きく３つの主要なタイプに分類することができ、上皮構造から生じるものは癌腫と呼ばれ、筋肉、軟骨、脂肪または骨などの結合組織に由来するものは肉腫と呼ばれ、免疫系の成分を含む造血構造（血液細胞の形成に関連する構造）に影響を与えるものは白血病及びリンパ腫と呼ばれる。他の腫瘍としては、神経線維腫症が挙げられるが、これに限定されない。

【0070】

固形腫瘍は、良性または悪性であり得る組織の異常な塊である。ある特定の実施形態において、固形腫瘍は、それらを形成する細胞のタイプ（肉腫、癌腫、及びリンパ腫など）から命名される。肉腫及び癌腫などを含む、固形腫瘍の例には、これらに限定されないが、脂肪肉腫、線維肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、粘液肉腫、及び他の肉腫、中皮腫、滑膜腫、平滑筋肉腫、ユーイング腫瘍、結腸癌、横紋筋肉腫、膵臓癌、リンパ系悪性腫瘍、肺癌、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、肝細胞癌、腺癌、基底細胞癌、汗腺癌、扁平上皮癌、甲状腺髄様癌、褐色細胞腫皮脂腺癌、甲状腺乳頭癌、乳頭腺癌、乳頭癌、髄様癌、気管支原性癌、肝臓腫、腎細胞癌、胆管癌、ウィルムス腫瘍、絨毛癌、子宮頸癌、セミノーマ、精巣腫瘍、膀胱癌、黒色腫、ＣＮＳ腫瘍（例えば、神経膠腫、例えば、脳幹神経膠腫及び混合神経膠腫、膠芽腫（例えば、多形性神経膠芽腫）、胚細胞腫、星細胞腫、頭蓋咽頭腫、髄芽腫、上衣腫、シュワン細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、聴神経腫、松果体腫、血管芽腫、髄膜腫、乏突起神経膠腫、網膜芽細胞腫、神経芽細胞腫、及び脳転移）、などが挙げられる。

【0071】

本明細書に開示される方法による治療に適している癌腫には、扁平上皮癌（様々な組織）、基底細胞癌（皮膚癌の一種）、食道癌、移行上皮癌（膀胱の悪性新生物）を含む膀胱癌、肝細胞癌、結腸直腸癌、気管支原性癌、肺癌、肺の小細胞癌及び非小細胞癌、結腸癌、甲状腺癌、胃癌、乳癌、卵巣癌、副腎皮質癌、膵臓癌、汗腺癌、前立腺癌、乳頭癌、腺癌、脂腺癌、髄様癌、乳頭腺癌、非浸潤性乳管癌または胆管癌、嚢胞腺癌、腎細胞癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、セミノーマ、胎児性癌、子宮頸癌、精巣癌、上咽頭癌、骨原性癌、上皮癌、子宮癌、などが含まれるが、これらに限定されない。

【0072】

本明細書に開示される方法によって治療可能であり得る肉腫としては、粘液肉腫、軟骨肉腫、脊索腫、骨原性肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫、血管肉腫、リンパ管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、骨肉腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、及び他の軟部組織肉腫が挙げられるが、これらに限定されない。

【0073】

「免疫原性組成物」という用語は、本明細書で使用される場合、当該免疫原に対する免疫応答を必要としている対象内の免疫原に対する特異的な免疫応答を誘導する物質を指す。組成物には、アジュバント、及び任意選択で１つ以上の薬学的に許容される担体、賦形剤、及び／または希釈剤が含まれ得る。ある特定の実施形態において、免疫原性組成物は、本明細書に記載される白血病起源の改変細胞を含む。

【0074】

本明細書で使用される場合、「免疫応答」という用語は、Ｔ細胞媒介性及び／またはＢ細胞媒介性免疫応答を含む。Ｔ細胞の例示的な免疫機能としては、例えば、サイトカイン産生及び他の細胞における細胞傷害性の誘導が挙げられる。Ｂ細胞の機能には、抗体産生が含まれる。加えて、この用語には、Ｔ細胞活性化、例えば、サイトカイン応答性細胞、例えば、マクロファージの抗体産生及び活性化によって間接的に影響を受ける免疫応答が含まれる。免疫応答に関与する免疫細胞としては、Ｂ細胞及びＴ細胞（ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋細胞）などのリンパ球、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂリンパ球、ランゲルハンス細胞などのプロフェッショナル抗原提示細胞、及びケラチノサイト、内皮細胞、星状細胞、線維芽細胞、乏突起膠細胞などの非プロフェッショナル抗原提示細胞）、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、好酸球、マスト細胞、好塩基球、及び顆粒球などの骨髄細胞が挙げられる。ある特定の実施形態において、この用語は、Ｔ細胞媒介免疫応答を指す。免疫応答は、いくつかの実施形態において、Ｔ細胞依存性免疫応答であり得る。

【0075】

本明細書で使用される場合、「腫瘍内」という用語は、腫瘍への材料（例えば、白血病起源の改変された細胞）の送達または輸送を指す。本明細書に記載される腫瘍内送達の一例は、当該技術分野で概して公知の投与経路である腫瘍内投与によるものである。腫瘍内投与のための代替経路として、材料は、腫瘍溶解性ウイルスまたは遺伝子治療ベクターなどの腫瘍特異的担体を介して腫瘍に送達されてもよく、これらは、腫瘍に遺伝子配列を送達するために広く開発されている。かかるビヒクルの使用は、静脈内投与または腹腔内投与などの腫瘍内投与に加えて、その後、当該ポリペプチドをコードする核酸の腫瘍への送達をもたらす複数の投与経路を可能にする。例えば、開示全体が参照により本明細書に取り込まれる、Ｌｕｎｄｓｔｒｏｍ，Ｄｉｓｅａｓｅｓ，６（２）：４２（２０１８）、Ａｌｅｍａｎｙ，Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ，２，ｐ．３６－４９（２０１４）、Ｔｗｕｍａｓｉ－Ｂｏａｔｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ １８，ｐ．４１９－４３２（２０１８）を参照されたい。

【0076】

本明細書で使用される場合、「腫瘍外」という用語は、例えば、対象の体内で、腫瘍から離れている（例えば、遠位にある）位置を指す。

【0077】

本明細書で使用される場合、「白血病起源の改変細胞」という用語は、抗原を取り込み、ＭＨＣクラスＩ複合体またはＭＨＣクラスＩＩ複合体とともに抗原またはその免疫原性部分を提示することができる白血病細胞株に由来する細胞を指す。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、ＤＳＭＺとのブダペスト条約の条件下で２０１２年１１月１５日に受託番号ＤＳＭＺ ＡＣＣ３１８９の下で寄託された細胞株ＤＣＯｎｅに由来する細胞である。寄託されたＤＣＯｎｅ細胞株から成熟細胞を得るプロセスは、例えばＥＰ２９３１８７８Ｂ１に説明されており、この文献の開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。

【0078】

範囲：本開示を通して、本発明の様々な態様を範囲形式で提示することができる。範囲形式の説明は、単に利便性及び簡潔性のためであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の説明は、全ての可能な部分範囲及びその範囲内の個々の数値を具体的に開示しているとみなされるべきである。例えば、１～６などの範囲の説明は、部分範囲、例えば、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６など、及びその範囲内の個々の数、例えば、１、２、２．７、３、４、５、５．３、及び６を具体的に開示しているとみなされるべきである。これは、範囲の幅を問わず適用される。

【0079】

Ｂ．白血病起源の改変細胞及び産生方法
本明細書に提供されるのは、免疫細胞を刺激及び拡大し、抗原特異的免疫細胞を生成するために、及び治療方法のために、白血病起源の改変細胞を使用することを含む方法である。本明細書で使用される場合、「白血病起源の改変細胞」という用語は、抗原性ポリペプチドなどの抗原を取り込み、ＭＨＣクラスＩ複合体またはＭＨＣクラスＩＩ複合体とともに抗原またはその免疫原性部分を提示することができる細胞を指す。本明細書に提供される白血病起源の改変細胞は、成熟樹状細胞表現型を含む。本明細書で使用される場合、「樹状細胞」という用語は、抗原性ポリペプチドなどの抗原をその細胞に取り込み、ＭＨＣクラスＩ複合体またはＭＨＣクラスＩＩ複合体とともに抗原またはその免疫原性部分を提示することができるプロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）を指す。成熟樹状細胞表現型を有することは、白血病起源の改変細胞が、成熟樹状細胞の機能と同様の機能を果たすことができることを意味する。この用語は、成熟度に応じて、未成熟樹状細胞（「ｉｍＤＣ」）及び成熟樹状細胞（「ｍＤＣ」）の両方を含む。

【0080】

ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、白血病細胞に由来する。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、白血病を有する患者に由来する。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、白血病を有する患者の末梢血に由来する。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、急性骨髄性白血病を有する患者の末梢血に由来する。白血病起源の改変細胞は、末梢血が得られた任意の患者に由来することができ、この際、こうして得られた白血病起源の改変細胞が本明細書に開示される特徴を含んでいるならば、患者は任意のタイプの白血病を有することを、当業者は認識するであろう。

【0081】

ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、ＣＤ３４陽性、ＣＤ１ａ陽性、及びＣＤ８３陽性である。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、ＣＤ１４、ＤＣ－ＳＩＧＮ、Ｌａｎｇｅｒｉｎ、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される細胞表面マーカーを含む。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、ＭＨＣクラスＩ分子を含む。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ分子を含む。

【0082】

ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、染色体１１ｐ１５．５～１１ｐ１２の遺伝子異常を含む。ある特定の実施形態において、遺伝子異常は、約１６Ｍｂ（例えば、約２０．７Ｍｂ～約３６．６Ｍｂ）のゲノム領域を包含する。ある特定の実施形態において、遺伝子異常は、約６０の既知及び未知遺伝子の喪失を含む。

【0083】

ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、共刺激分子を含む。ある特定の実施形態において、共刺激分子には、限定されないが、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡ、及びＴｏｌｌリガンド受容体が含まれる。共刺激分子の例としては、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７リガンド）、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＰＤ－Ｌ１、ＩＣＯＳＬ、ＩＣＡＭ－１、リンパ球機能関連抗原３（ＬＦＡ３（ＣＤ５８））、Ｋ１２／ＳＥＣＴＭ１、ＬＩＧＨＴ、ＨＬＡ－Ｅ、Ｂ７－Ｈ３、及びＣＤ８３が挙げられる。

【0084】

ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、少なくとも１つの内因性抗原を含む。改変細胞の白血病起源に応じて、白血病起源の改変細胞は、白血病起源に特異的な少なくとも１つの公知の内因性抗原を含み得る。ある特定の実施形態において、内因性抗原は、腫瘍関連抗原である。ある特定の実施形態において、内因性の腫瘍関連抗原は、ＷＴ－１、ＲＨＡＭＭ、ＰＲＡＭＥ、ｐ５３、Ｓｕｒｖｉｖｉｎ、及びＭＵＣ－１からなる群から選択され得る。

【0085】

ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、外因性抗原またはそのペプチド断片を含む。そのような外因性抗原は、様々な抗原ロード戦略を介して白血病起源の改変細胞に提供され得る。例えば、白血病起源の改変細胞をロードするための戦略には、限定されないが、合成長鎖ペプチド、ｍＲＮＡロード、ペプチドパルス、タンパク質ロード、腫瘍溶解物ロード、腫瘍細胞との共培養、ＲＮＡ／ＤＮＡトランスフェクションまたはウイルス形質導入の使用が含まれ得る。白血病起源の改変細胞をロードするための他の戦略は、当業者に公知であり、白血病起源の改変細胞に外因性抗原をロードするために使用され得る。一般に、白血病起源の改変細胞は、例えば、ＭＨＣ ＩまたはＭＨＣ ＩＩを介して、特定の分子を介して外因性抗原を処理する。したがって、白血病起源の改変細胞によって構成される外因性抗原は、ＭＨＣクラスＩ抗原またはＭＨＣクラスＩＩ抗原であり得る。ある特定の実施形態において、外因性抗原は、腫瘍関連抗原である。例えば、ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞に、ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド及び／またはＷＴ－１ペプチド、または腫瘍非依存性抗原（例えばＣＭＶｐｐ６５）をロードする。ある特定の実施形態において、外因性抗原は、疾患または障害、例えば、非がん関連疾患または障害に関連する。あらゆる腫瘍関連抗原または疾患もしくは障害に関連する抗原を本明細書に記載の白血病起源の改変細胞に提供することができることを、当業者は理解するであろう。したがって、ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、当業者によって企図されるあらゆる腫瘍関連抗原または疾患もしくは障害に関連する抗原を含む。

【0086】

ある特定の実施形態において、外因性抗原は、非腫瘍関連抗原（すなわち、腫瘍非依存性抗原）である。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞に、腫瘍非依存性抗原、すなわち腫瘍に関連しない抗原をロードする。例えば、好適な腫瘍非依存性抗原には、限定されないが、ウイルス、細菌、真菌起源のタンパク質、アレルゲン、毒素及び毒液、または鶏卵オボアルブミン及びジャイアントｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔであるＭｅｇａｔｈｕｒａ ｃｒｅｎｕｌａｔａに由来するｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔヘモシアニンなどの様々な供給源のモデル抗原が含まれる。ある特定の実施形態において、好適な腫瘍非依存性抗原は、細菌起源のものである。ある特定の実施形態において、好適な腫瘍非依存性抗原は、ジフテリア毒素である。ある特定の実施形態において、好適な腫瘍非依存性抗原は、ジフテリア毒素の非毒性バリアントである。例えば、ある特定の実施形態において、好適な腫瘍非依存性抗原は、ＣＲＭ１９７またはそのバリアントである。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、ＣＲＭ１９７またはそのバリアントを含む。ある特定の実施形態において、好適な腫瘍非依存性抗原は、ウイルス起源のものである。ある特定の実施形態において、好適な腫瘍非依存性抗原は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来のペプチド、例えば、ＣＭＶ内部マトリックスタンパク質ｐｐ６５由来のペプチドである。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、ｐｐ６５ペプチドを含む。あらゆる腫瘍非依存性抗原を、本明細書に記載の白血病起源の改変細胞に提供することができることを、当業者は理解するであろう。したがって、ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、当業者によって企図されるあらゆる腫瘍非依存性抗原を含む。

【0087】

ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞に外因性抗原またはそのペプチド断片をロードすることは、光化学的プロセス（例えば、光化学的内在化）を使用することを含む。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞に外因性抗原またはそのペプチド断片をロードすることは、光化学的内在化を使用して実現される。ある特定の実施形態において、光化学的内在化は、抗原またはそのペプチド断片（例えば、抗原性ポリペプチド（例えば、非腫瘍抗原）、または抗原性ポリペプチドをコードする核酸）の白血病起源の改変細胞への送達を増強させるために使用され得る。

【0088】

光化学的内在化とは、通常であれば膜不透過性である分子を、標的細胞のサイトゾルに導入するための光及び光増感剤の使用を含む送達方法を指すが、これは必ずしも標的細胞を破壊または死滅させるわけではない。この方法では、内在化または移入される分子は、光増感剤と組み合わせて細胞に適用される。細胞を適切な波長の光に曝露させると、光増感剤が活性化され、次に細胞内コンパートメント膜が破壊されて、続いて分子がサイトゾルに放出される。光化学的内在化では、光増感剤と光との間の相互作用を使用して細胞に作用し、分子の細胞内取り込薬剤みが改善される。光化学的内在化及び様々な光増感剤は、ＰＣＴ公開第ＷＯ９６／０７４３２号、同第ＷＯ００／５４７０８号、同第ＷＯ０１／１８６３６号、同第ＷＯ０２／４４３９６号、同第ＷＯ０２／４４３９５号、及び同第ＷＯ０３／０２０３０９号、米国特許第６，６８０，３０１号、米国特許第５，８７６，９８９号に記載されており、これらの開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態において、光化学的内在化は、抗原を腫瘍細胞のサイトゾルに送達するために使用される。ある特定の実施形態において、光化学的内在化は、腫瘍細胞のサイトゾルへの抗原の送達を増強させるために使用される。

【0089】

白血病起源の改変細胞への外因性抗原またはそのペプチド断片のロードは、任意の時点で実施することができる。当業者は、当業者の必要性に最も適合するように、白血病起源の改変細胞をロードする特定のタイミングを決定し、実行することができるであろう。例えば、ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞に、それが成熟樹状細胞表現型を呈する前に、外因性抗原またはそのペプチド断片をロードする。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞が成熟樹状細胞表現型へと移行している間に、白血病起源の改変細胞に外因性抗原またはそのペプチド断片をロードする。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞が成熟樹状細胞表現型を呈した後に、白血病起源の改変細胞に外因性抗原またはそのペプチド断片をロードする。

【0090】

ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／００６０５８号及び同第ＷＯ２０１４／０９０７９５号に記載の細胞株ＤＣＯｎｅの細胞であり、これらの開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、細胞株ＤＣＯｎｅの細胞であり、ＣＤ３４陽性、ＣＤ１ａ陽性、及びＣＤ８３陽性である成熟樹状細胞表現型を含む。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、細胞株ＤＣＯｎｅの細胞であり、ＣＤ３４陽性、ＣＤ１ａ陽性、及びＣＤ８３陽性である。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、細胞株ＤＣＯｎｅの細胞であり、ＣＤ１４、ＤＣ－ＳＩＧＮ、Ｌａｎｇｅｒｉｎ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０、ＣＤ７０、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される細胞表面マーカーを含む。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、細胞株ＤＣＯｎｅの細胞であり、ＭＨＣクラスＩを含む。特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、細胞株ＤＣＯｎｅの細胞であり、ＭＨＣクラスＩＩを含む。特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、細胞株ＤＣＯｎｅの細胞であり、染色体１１ｐ１５．５～１１ｐ１２の遺伝子異常を含む。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、細胞株ＤＣＯｎｅの細胞であり、約１６Ｍｂ（例えば、約２０．７Ｍｂ～約３６．６Ｍｂ）のゲノム領域を包含する遺伝子異常を含む。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、細胞株ＤＣＯｎｅの細胞であり、約６０の既知及び未知遺伝子の喪失を含む遺伝子異常を含む。

【0091】

一態様において、本開示の白血病起源の改変細胞は、下方調節されたＣＤ４７経路を含む。ＣＤ４７は、遍在的に発現し、マクロファージ及び樹状細胞（ＤＣ）を含む骨髄細胞上で発現するシグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）αのリガンドとして機能する。ＣＤ４７は、食作用を防止するためにＳＩＲＰαを介してマクロファージに「私を食べないで」シグナルを提供するため、マクロファージはＣＤ４７欠損細胞の強力な拒絶を媒介する。例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍ．（２０２０）１１：５８１を参照されたく、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。そのため、本明細書で使用される場合、「ＣＤ４７経路」は、ＣＤ４７及びＳＩＲＰαを介して細胞間の通信を促進する分子のネットワークを指す。したがって、下方調節されたＣＤ４７経路は、ＣＤ４７及びＳＩＲＰαを介した細胞間の通信を促進する分子のネットワークのうちのいずれか１つの下方調節を指す。

【0092】

ＣＤ４７免疫療法における現在の開発は、がん細胞の表面上のＣＤ４７を遮断することを対象とするが、本開示は、がんを治療するために使用される細胞の表面上のＣＤ４７経路を下方制御することを対象とするＣＤ４７免疫療法に関する。そのような下方調節は、がんを治療するために使用される細胞（例えば、白血病起源の改変細胞に基づくワクチン）を飲み込む免疫細胞の能力を高めるように機能する。いずれの理論にも拘束されるものではないが、がんを治療するために使用される細胞の取り込みを増強することは、がんを治療するために使用される細胞の有効性及び生物活性の増加をもたらし得る。

【0093】

ある特定の実施形態において、下方調節されたＣＤ４７経路は、ＣＤ４７経路のメンバーの枯渇及び／または阻害の結果である。ある特定の実施形態において、ＣＤ４７経路のメンバーは、ＣＤ４７である。したがって、本明細書では、ＣＤ４７の枯渇及び／または阻害の結果として下方調節されたＣＤ４７経路を含む、白血病起源の改変細胞が提供される。本明細書に記載されるように、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞（例えば、ＤＣＰ－００１）は、抗原提示細胞による増加した取り込みを示すことが見出された。実施例２を参照されたい。

【0094】

ある特定の実施形態において、下方調節されたＣＤ４７経路は、ＣＤ４７を枯渇させる及び／または阻害する薬剤によって媒介されてもよい。薬剤は、ＣＤ４７を枯渇させる及び／または阻害するように機能する、当該技術分野で知られる任意の薬剤であり得る。例えば、薬剤は、限定されないが、結合ポリペプチド（例えば、抗体）、低分子、低分子ＲＮＡ、または操作されたヌクレアーゼ系であり得る。ある特定の実施形態において、低分子ＲＮＡは、低分子干渉型ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）であってもよい。

【0095】

ある特定の実施形態において、下方調節されたＣＤ４７経路は、ＣＤ４７及び／またはＳＩＲＰαを調節する薬剤（例えば、抗ＣＤ４７抗体または抗ＳＩＲＰα抗体）によって媒介され得る。ＣＤ４７及び／またはＳＩＲＰαを調節する様々な薬剤が当業者に知られており、様々な企業によって開発され続けており、例えば、Ｈｕ５Ｆ９－Ｇ４（Ｆｏｒｔｙ Ｓｅｖｅｎ）、ＴＩ－０６１（Ａｒｃｈ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、ＴＴＩ－６６２（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＴＴＩ－６２１（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＳＲＦ２３１（Ｓｕｒｆａｃｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、ＳＨＲ－１６０３（Ｈｅｎｇｒｕｉ）、ＯＳＥ－１７２（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＮＩ－１７０１（Ｎｏｖｉｍｍｕｎｅ ＳＡ）、ＩＢＩ１８８（Ｉｎｎｏｖｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）、ＣＣ－９５２５１（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、ＣＣ－９０００２（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、ＡＯ－１７６（Ａｒｃｈ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、ＡＬＸ１４８（ＡＬＸ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、ＩＭＭ０１（ＩｍｍｕｎｅＯｎｃｏ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、ＴＪＣ４（Ｉ－ＭＡＢ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、ＴＪＣ４－ＣＫ（Ｉ－ＭＡＢ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、ＳＹ１０２（Ｓａｉｙｕａｎ）、ＳＬ－１７２１５４（Ｓｈａｔｔｕｃｋ Ｌａｂｓ）、ＰＳＴｘ－２３（Ｐａｒａｄｉｇｍ Ｓｈｉｆｔ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＰＤＬ１／ＣＤ４７ ＢｓＡｂ（Ｈａｎｍｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＮＩ－１８０１（Ｎｏｖｉｍｍｕｎｅ ＳＡ）、ＭＢＴ－００１（Ｍｏｒｐｈｉｅｘ）、ＬＹＮ００３０１（ＬｙｎｋＣｅｌｌ）、ＩＭＭ２５０４（ＩｍｍｕｎｅＯｎｃｏ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、ＩＭＭ２５０２（ＩｍｍｕｎｅＯｎｃｏ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、ＩＭＭ０３（ＩｍｍｕｎｅＯｎｃｏ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、ＩＭＣ－００２（ＩｍｍｕｎｅＯｎｃｉａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＩＢＩ３２２（Ｉｎｎｏｖｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）、ＨＭＢＤ－００４Ｂ（Ｈｕｍｍｉｎｇｂｉｒｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＨＭＢＤ－００４Ａ（Ｈｕｍｍｉｎｇｂｉｒｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＨＬＸ２４（Ｈｅｎｌｉｕｓ）、ＦＳＩ－１８９（Ｆｏｒｔｙ Ｓｅｖｅｎ）、ＤＳＰ１０７（ＫＡＨＲ Ｍｅｄｉｃａｌ）、ＣＴＸ－５８６１（Ｃｏｍｐａｓｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＢＡＴ６００４（Ｂｉｏ－Ｔｈｅｒａ）、ＡＵＲ－１０５（Ａｕｒｉｇｅｎｅ）、ＡＵＲ－１０４（Ａｕｒｉｇｅｎｅ）、ａｎ ａｎｔｉ－ＣＤ４７ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｂｙ Ｂｉｏｃａｄ、ＡＢＰ－５００（Ａｂｐｒｏ）、ＡＢＰ－１６０（Ａｂｐｒｏ）、ＢＨ－２９ｘｘ（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｈａｎｍｉ）が含まれる。ある特定の実施形態において、薬剤は、可溶性ＣＤ４７受容体、例えば、可溶性ＳＩＲＰαタンパク質である。ある特定の実施形態において、可溶性ＣＤ４７受容体は、Ｆｃドメインに融合したＳＩＲＰαのＣＤ４７結合ドメインを含むＦｃ融合タンパク質である。例えば、ＴＴＩ－６２１（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）は、ＩｇＧ１Ｆｃドメインに融合したＳＩＲＰαのＣＤ４７結合ドメインを含むＦｃ融合タンパク質であり、ＴＴＩ－６２２（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）は、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインに融合したＳＩＲＰαのＣＤ４７結合ドメインを含むＦｃ融合タンパク質である。

【0096】

ある特定の実施形態において、ＣＤ４７及び／またはＳＩＲＰαを調節する薬剤は、ＣＤ４７の薬剤化可能な改変因子である。例えば、薬剤化可能な改変因子は、グルタミニルペプチドシクロトランスフェラーゼ様タンパク質（ＱＰＣＴＬ）であってもよく、その阻害及び／または欠失は、ＳＩＲＰα－ＣＤ４７相互作用を破壊し、標的細胞の食作用の増加をもたらすことが示されている。例えば、Ｌｏｇｔｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．（２０１９）２５（４）：６１２－６１９を参照されたく、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態において、ＣＤ４７及び／またはＳＩＲＰαを調節する薬剤は、ＱＰＣＴＬの阻害剤である。

【0097】

ＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用を遮断する薬剤としては、抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＤ４７ナノボディ、操作されたＳＩＲＰαバリアント及び他の融合タンパク質、ならびにｓｉＲＮＡが挙げられるが、これらに限定されない。かかる薬剤の使用は、学術文献で報告されている。例えば、Ａｌｖｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．（２０１７）２７（１４）：２０６５－２０７７．ｅ６、Ｗｅｉｓｋｏｐｆ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０１３）３４１（６１４１）：８８－９１、Ｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎａｎｏｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２０２０）１８（１）：１２、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ（２０１５）１０（９）：ｅ０１３７３４５、Ｓｏｃｋｏｌｏｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２０１６）１１３（１９）：Ｅ２６４６－２６５４、Ｔｓｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２０１３）；１１０（２７）：１１１０３－１１１０８、Ｗｅｉｓｋｏｐｆ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２０１６）１２６（７）：２６１０－２６２０、及びＺｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０２０）１１：１８による概説を参照されたく、これらの開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0098】

ＣＤ４７－ＳＩＲＰα相互作用を調節する好適な薬剤には、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０２００４３１８８号、同第ＷＯ２０２００３６９７７号、同第ＷＯ２０２００１９１３５号、同第ＷＯ２０２０００９７２５号、同第ＷＯ２０１９２４１７３２号、同第ＷＯ２０１９２３８０１２号、同第ＷＯ２０１９２０１２３６号、同第ＷＯ２０１９１８５７１７号、同第ＷＯ２０１９１８４９１２号、同第ＷＯ２０１９１７９３６６号、同第ＷＯ２０１９１５７８４３号、同第ＷＯ２０１９１４４８９５号、同第ＷＯ２０１９１３８３６７号、同第ＷＯ２０１９１０８７３３号、同第ＷＯ２０１９０８６５７３号、同第ＷＯ２０１９０４２４７０号、同第ＷＯ２０１９０４２２８５号、同第ＷＯ２０１９０４２１１９号、同第ＷＯ２０１９０３４８９５号、同第ＷＯ２０１９０２７９０３号、同第ＷＯ２０１８２３３５７５号、同第ＷＯ２０１８１３７７０５号、同第ＷＯ２０１８０９５４２８号、同第ＷＯ２０１８０８９５０８号、同第ＷＯ２０１８０７５９６０号、同第ＷＯ２０１８０７５８５７号、同第ＷＯ２０１７２１５５８５号、同第ＷＯ２０１７１９６７９３号、同第ＷＯ２０１７１９４６３４号、同第ＷＯ２０１７１２１７７１号、同第ＷＯ２０１７０５３４２３号、同第ＷＯ２０１７０４９２５１号、同第ＷＯ２０１７０２７４２２号、同第ＷＯ２０１６１８８４４９号、同第ＷＯ２０１６１４１３２８号、同第ＷＯ２０１６１０９４１５号、同第ＷＯ２０１６０８１４２３号、同第ＷＯ２０１６０２４０２１号、同第ＷＯ２０１６０２３０４０号、同第ＷＯ２０１６０２２９７１号、同第ＷＯ２０１５１９１８６１号、同第ＷＯ２０１４０８７２４８号、同第ＷＯ２０１３１１９７１４号、同第ＷＯ２０１３１０９７５２号、同第ＷＯ２０１２１７０２５０号、同第ＷＯ２０１１１４３６２４号、同第ＷＯ２０１００７００４７号、同第ＷＯ２００９０４６５４１号、同第ＷＯ２００５０４４８５７号、同第ＷＯ２００２０９２７８４号、同第ＷＯ１９９９０４０９４０号、及び同第ＷＯ１９９７０２７８７３号、に記載されるものが挙げられ、これらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

【0099】

本開示の下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞は、ＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤で予めコーティングされてもよい。ある特定の実施形態において、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞は、ＣＤ４７を枯渇させる及び／または阻害する薬剤で予めコーティングされる。例えば、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞は、抗ＣＤ４７抗体で事前コーティングすることができる。例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍ．（２０２０）１１：５８１を参照されたく、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0100】

ある特定の実施形態において、ＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤は、操作されたヌクレアーゼ系である。

【0101】

ＣＤ４７経路のメンバーの枯渇及び／または阻害の使用に好適な様々な操作されたヌクレアーゼ系は、当業者に既知であり、例えば、メガヌクレアーゼ系、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）系、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）系、及びクラスター化された規則的に間隔が置かれた短い回文配列反復（ＣＲＩＳＰＲ）系を含む。操作されたヌクレアーゼ系は、ＣＤ４７経路のメンバーの遺伝子座における挿入及び／または欠失を媒介し得る。ある特定の実施形態において、操作されたヌクレアーゼ系は、ＣＤ４７遺伝子座における挿入及び／または欠失を媒介する。したがって、本開示は、ＣＤ４７遺伝子座またはＣＤ４７経路のメンバーの遺伝子座への挿入及び／または欠失を含む、白血病起源の改変細胞を提供する。ＣＤ４７遺伝子座またはＣＤ４７経路のメンバーの遺伝子座への挿入及び／または欠失が、ＣＤ４７またはＣＤ４７経路のメンバーの発現の下方調節をもたらすことは、当業者によって容易に理解されるであろう。挿入及び／または欠失は、例えば、ＣＤ４７遺伝子座における二本鎖切断の修復によって媒介され得る。ある特定の実施形態において、修復は、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）及び相同組換え修復（ＨＤＲ）を介する。

【0102】

ある特定の実施形態において、ＣＤ４７遺伝子座における挿入及び／または欠失を含む白血病起源の改変細胞が本明細書に提供され、ＣＤ４７遺伝子座における挿入及び／または欠失は、ＣＤ４７の発現の下方調節をもたらす。

【0103】

様々なＣＲＩＳＰＲシステム及び遺伝子編集のためのそれらの使用は、当業者に知られている。ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ配列及びＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）遺伝子は、組み込まれたＲＮＡを利用して、相補ＤＮＡ配列において配列特異的二本鎖切断を生成する触媒タンパク質－ＲＮＡ複合体を生成する。例えば、Ｂｈａｙａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（２０１１）４５：２７３－２９７を参照されたく、その開示は、その全体が参照により本明細書に取り込まれる。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ（「Ｃａｓ９」）からのＣａｓ９ヌクレアーゼは、操作された単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）の２０ヌクレオチドガイド領域とゲノム標的配列との間の塩基対相補性を通じて、ヒトゲノム内の特定の部位に誘導することができる。例えば、Ｃｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０１３）３３９（６１２１）：８１９－８２３、Ｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０１３）３３９（６１２１）：８２３－８２６、Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２０１３）３１（３）：２３０－２３２、及びＪｉｎｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｅｌｉｆｅ（２０１３）２：ｅ００４７１を参照されたく、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。触媒不活性のプログラム可能なＲＮＡ依存性ＤＮＡ結合タンパク質（ｄＣａｓ９）は、直接的にまたは組み込まれたエフェクタードメインを介して細菌または真核生物内の転写を調節することができるＣａｓ９内のエンドヌクレアーゼドメインを変異させることによって生成することができる。例えば、Ｑｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ（２０１３）１５２（５）：１１７３－１１８３、Ｂｉｋａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２０１３）４１（１５）：７４２９－７４３７、Ｇｉｌｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ（２０１３）１５４（２）：４４２－４５１、及びＭａｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２０１３）３１（９）：８３３－８３８を参照されたく、これらの開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0104】

ＣＲＩＳＰＲシステムは、ＲＮＡ誘導ヌクレアーゼ媒介編集システムである。ＲＮＡ誘導ヌクレアーゼとしては、Ｃａｓ９などの天然ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼ、ならびにそれに由来またはそれから得られる他のヌクレアーゼが挙げられるが、これらに限定されない。本開示で使用され得る例示的なＣａｓ９ヌクレアーゼとしては、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ Ｃａｓ９（ＳｐＣａｓ９）、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ Ｃａｓ９（ＳａＣａｓ９）、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ Ｃａｓ９（ＮｍＣａｓ９）、Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ Ｃａｓ９（ＣｊＣａｓ９）、及びＧｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｓ９（ＧｅｏＣａｓ９）が挙げられるが、これらに限定されない。機能的には、ＲＮＡ誘導ヌクレアーゼは、（ａ）ｇＲＮＡと相互作用する（例えば、ｇＲＮＡと複合体を形成する）、及び（ｂ）ｇＲＮＡとともに、（ｉ）ｇＲＮＡの標的化ドメインに相補的な配列、及び、任意選択的に、（ｉｉ）「プロトスペーサー隣接モチーフ」、または「ＰＡＭ」と称される追加の配列を含むＤＮＡの標的領域と会合し、任意選択的に切断または改変するヌクレアーゼとして定義される。ＲＮＡ誘導ヌクレアーゼは、広義には、同じＰＡＭ特異性または切断活性を共有する個々のＲＮＡ誘導ヌクレアーゼ間にバリエーションが存在し得るにもかかわらず、そのＰＡＭ特異性及び切断活性によって定義することができる。ＲＮＡ誘導ヌクレアーゼという用語は、一般的な用語として理解されるべきであり、任意の特定のタイプ（例えば、Ｃａｓ９対Ｃｐｆｌ）、種（例えば、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ対Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）または変異（例えば、全長対切断または分割、天然に存在するＰＡＭ特異性対操作されたＰＡＭ特異性）に限定されない。

【0105】

様々なＲＮＡ誘導ヌクレアーゼは、ＰＡＭとプロトスペーサーとの間の異なる連続関係を必要とし得る。一般に、Ｃａｓ９は、プロトスペーサーの５’であるＰＡＭ配列を、上部または相補鎖に対して視覚化されたものとして認識する。ＰＡＭ及びプロトスペーサーの特定の連続した方向を認識することに加えて、ＲＮＡ誘導ヌクレアーゼは、概して、特定のＰＡＭ配列を認識する。Ｓ．ａｕｒｅｕｓ Ｃａｓ９は、例えば、ＮＮＧＲＲＴのＰＡＭ配列を認識し、Ｎ配列は、ｇＲＮＡ標的化ドメインによって認識される領域の直ちに３’である。Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ Ｃａｓ９は、ＮＧＧ ＰＡＭ配列を認識する。また、操作されたＲＮＡ誘導ヌクレアーゼは、同様のヌクレアーゼのＰＡＭ特異性（ＲＮＡ誘導ヌクレアーゼが由来する天然に存在するバリアント、または操作されたＲＮＡ誘導ヌクレアーゼに対して最大のアミノ酸配列相同性を有する天然に存在するバリアント等）とは異なるＰＡＭ特異性を有し得ることに留意すべきである。代替のＰＡＭ配列を認識する改変されたＣａｓ９は、当該技術分野で既知である。ＲＮＡ誘導ヌクレアーゼはまた、それらのＤＮＡ切断活性によって特徴付けられ、天然に存在するＲＮＡ誘導ヌクレアーゼは、典型的には、標的核酸において二本鎖切断（ＤＳＢ）を形成するが、一本鎖切断（ＳＳＢ）のみを生成する、または全く切断しない操作されたバリアントが産生されている。

【0106】

他の例示的なＣａｓ９は、活性が変化したＣａｓ９のバリアントであり得る。これらには、例えば、Ｃａｓ９ニッカーゼ（ｎＣａｓ９）、触媒により死んだＣａｓ９（ｄＣａｓ９）、高精度Ｃａｓ９（ＨｙｐａＣａｓ９）、高忠実度Ｃａｓ９（Ｃａｓ９－ＨＦ）、強化された特異性Ｃａｓ９（ｅＣａｓ９）、及び拡大したＰＡＭ Ｃａｓ９（ｘＣａｓ９）が含まれる。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１７）５５０（７６７６）：４０７－４１０、Ｋｌｅｉｎｓｔｉｖｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１６）５２９（７５８７）：４９０－４９５、Ｓｌａｙｍａｋｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０１６）３５１（６２６８）：８４－８８、及びＨｕ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ（２０１８）５５６（７６９９）：５７－６３を参照されたく、その開示は、その全体が参照により本明細書に取り込まれる。

【0107】

転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）は、ＴＡＬエフェクターＤＮＡ結合ドメインをＤＮＡ切断ドメインに融合させることによって生成される人工制限酵素である。これらの試薬は、効率的でプログラム可能な特異的なＤＮＡ切断を可能にし、インサイチュでのゲノム編集のための強力なツールを表す。転写活性化因子様エフェクター（ＴＡＬＥ）は、実質的に任意のＤＮＡ配列に結合するように迅速に操作することができる。ＴＡＬＥＮという用語は広範であり、別のＴＡＬＥＮからの援助なしに二本鎖ＤＮＡを切断することができる単量体ＴＡＬＥＮを含む。ＴＡＬＥＮという用語は、同じ部位でＤＮＡを切断するように一緒に働くように操作された一対のＴＡＬＥＮの１つまたは両方のメンバーを指すためにも使用される。ともに機能するＴＡＬＥＮは、ＤＮＡの利き手を参照する左ＴＡＬＥＮ及び右ＴＡＬＥＮと称され得る。例えば、米国特許出願第１２／９６５，５９０号、米国出願第１３／４２６，９９１号（米国特許第８，４５０，４７１号）、米国出願第１３／４２７，０４０号（米国特許第８，４４０，４３１号）、米国出願第１３／４２７，１３７号（米国特許第８，４４０，４３２号）、及び米国出願第１３／７３８，３８１号、及び米国特許第９，３９３，２５７号を参照されたく、これらの全ては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0108】

ＴＡＬエフェクターは、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ菌によって分泌されるタンパク質である。ＤＮＡ結合ドメインは、１２番目及び１３番目のアミノ酸を除いて、高度に保存された３３～３４アミノ酸配列を含有する。これらの２つの位置は、非常に可変であり（反復可変二残基（ＲＶＤ））、特異的ヌクレオチド認識と強い相関を示す。アミノ酸配列とＤＮＡ認識との間のこの単純な関係は、適切なＲＶＤを含有する反復セグメントの組み合わせを選択することによって、特異的ＤＮＡ結合ドメインの操作を可能にした。

【0109】

Ｆｏｋ１エンドヌクレアーゼの末端からの非特異的ＤＮＡ切断ドメインを使用して、酵母アッセイにおいて活性であるハイブリッドヌクレアーゼを構築することができる。これらの試薬は、植物細胞及び動物細胞においても活性である。初期のＴＡＬＥＮ研究は、野生型Ｆｏｋ１切断ドメインを使用したが、その後のいくつかのＴＡＬＥＮ研究は、切断特異性及び切断活性を改善するように設計された変異を有するＦｏｋ１切断ドメインバリアントも使用した。Ｆｏｋ１ドメインは、二量体として機能し、適切な配向及び間隔を有する標的ゲノム内の部位のための独自のＤＮＡ結合ドメインを有する２つの構築物を必要とする。ＴＡＬＥＮ ＤＮＡ結合ドメインとＦｏｋ１切断ドメインとの間のアミノ酸残基の数、及び２つの個々のＴＡＬＥＮ結合部位間の塩基の数の両方が、高レベルの活性を達成するためのパラメータである。ＴＡＬＥＮ ＤＮＡ結合ドメインとＦｏｋ１切断ドメインとの間のアミノ酸残基の数は、複数のＴＡＬエフェクター反復配列とＦｏｋ１エンドヌクレアーゼドメインとの間にスペーサー（スペーサー配列とは異なる）を導入することによって改変され得る。スペーサー配列は、１２～３０ヌクレオチドであり得る。

【0110】

アミノ酸配列とＴＡＬＥＮ結合ドメインのＤＮＡ認識との関係は、設計可能なタンパク質を可能にする。この場合、人工遺伝子合成は、ＴＡＬＥ結合ドメインに見出される反復配列の不適切なアニーリングのために問題がある。これに対する１つの解決策は、公的に入手可能なソフトウェアプログラム（ＤＮＡＷｏｒｋｓ）を使用して、２段階ＰＣＲ：オリゴヌクレオチド組み立てと、それに続く全遺伝子増幅でのアセンブリに適したオリゴヌクレオチドを計算することである。操作されたＴＡＬＥ構築物を生成するためのいくつかのモジュラーアセンブリスキームも報告されている。両方の方法は、ジンクフィンガーＤＮＡ認識ドメインを生成するためのモジュラーアセンブリ方法に概念的に類似する、ＤＮＡ結合ドメインを操作するための体系的アプローチを提供する。

【0111】

ＴＡＬＥＮ遺伝子が組み立てられると、プラスミドに挿入され、次いでプラスミドを使用して、遺伝子産物が発現される標的細胞にトランスフェクトし、核に入りゲノムにアクセスする。ＴＡＬＥＮを使用して、細胞が修復メカニズムで応答する二本鎖切断（ＤＳＢ）を誘導することによってゲノムを編集することができる。このようにして、それらを使用して、例えば、疾患を引き起こすゲノム内の変異を修正することができる。

【0112】

ＭｅｇａＴＡＬは、ホーミングエンドヌクレアーゼをＴＡＬＥＮのモジュラーＤＮＡ結合ドメインと組み合わせ、ＤＮＡ配列標的化の改善及び遺伝子編集効率の向上をもたらす融合タンパク質である。ＴＡＬアンカーのＮ末端融合を用いて、Ｉ－ＨｊｅＭＩ、Ｉ－ＣｐａＭＩ、及びＩ－ＯｎｕＩホーミングエンドヌクレアーゼのうちの１つ以上などの１つ以上のホーミングエンドヌクレアーゼを含む、遺伝子標的化エンドヌクレアーゼの特異性及び活性を増加させることができる。ＭｅｇａＴＡＬは、ＲＶＤプラスミドライブラリ及びデスティネーションベクターを使用して、Ｃｅｒｍａｋ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２０１１）３９：ｅ８２－ｅ８２に記載されたゴールデンゲートアセンブリ戦略を使用して構築することができ、その開示は、その全体が参照により本明細書に取り込まれる。

【0113】

ＭｅｇａＴＡＬは依然としてホーミングエンドヌクレアーゼ切断生化学を使用してＤＮＡを切断するため、他の全ての遺伝子編集ヌクレアーゼとは異なる方法でＤＮＡ修復経路に関与する。ＭｅｇａＴＡＬは、ＷＯ２０１３／１２６７９４及びＷＯ２０１４／１９１５２５の手順に従って設計及び予測することができ、本方法で使用することができる。

【0114】

メガヌクレアーゼは、１４～４０塩基対のポリヌクレオチド認識部位を有する二本鎖エンドヌクレアーゼを指し、これは単量体または二量体のいずれかであり得る。メガヌクレアーゼは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、ＵＳ２０１４／０１２１１１５の手順に従って設計及び予測することができ、本方法で使用することができる。例示的なメガヌクレアーゼには、Ｉ－Ｓｃｅ Ｉ、Ｉ－Ｃｈｕ Ｉ、Ｉ－Ｄｍｏ Ｉ、Ｉ－Ｃｒｅ Ｉ、Ｉ－Ｃｓｍ Ｉ、ＰＩ－Ｓｃｅ Ｉ、ＰＩ－Ｔｌｉ Ｉ、ＰＩ－Ｍｔｕ Ｉ、Ｉ－Ｃｅｕ Ｉ、Ｉ－Ｓｃｅ ＩＩ、Ｉ－Ｓｃｅ ＩＩＩ、ＨＯ、ＰＩ－Ｃｉｖ Ｉ、ＰＩ－Ｃｔｒ Ｉ、ＰＩ－Ａａｅ Ｉ、ＰＩ－Ｂｓｕ Ｉ、ＰＩ－Ｄｈａ Ｉ、ＰＩ－Ｄｒａ Ｉ、ＰＩ－Ｍａｙ Ｉ、ＰＩ－Ｍｃｈ Ｉ、ＰＩ－Ｍｆｕ Ｉ、ＰＩ－Ｍｆｌ Ｉ、ＰＩ－Ｍｇａ Ｉ、ＰＩ－Ｍｇｏ Ｉ、ＰＩ Ｍｉｎ Ｉ、ＰＩ－Ｍｋａ Ｉ、ＰＩ－Ｍｌｅ Ｉ、ＰＩ－Ｍｍａ Ｉ、ＰＩ－Ｍｓｈ Ｉ、ＰＩ－Ｍｓｍ Ｉ、ＰＩ－Ｍｔｈ Ｉ、ＰＩ－Ｍｔｕ Ｉ、ＰＩ－Ｍｘｅ Ｉ、ＰＩ－Ｎｐｕ Ｉ、ＰＩ－Ｐｆｕ Ｉ、ＰＩ－Ｒｍａ Ｉ、ＰＩ－Ｓｐｂ Ｉ、ＰＩ－Ｓｓｐ Ｉ、ＰＩ－Ｆａｃ Ｉ、ＰＩ－Ｍｊａ Ｉ、ＰＩ－Ｐｈｏ Ｉ、ＰＩ－Ｔａｇ Ｉ、ＰＩ－Ｔｈｙ Ｉ、ＰＩ－Ｔｋｏ Ｉ、及びＰＩ－Ｔｓｐ Ｉ、が含まれるがそれらに限定されず、特定の例示的なメガヌクレアーゼには、Ｉ－Ｓｃｅ Ｉ、Ｉ－Ｃｈｕ Ｉ、Ｉ－Ｄｍｏ Ｉ、Ｉ－Ｃｒｅ Ｉ、Ｉ－Ｃｓｍ Ｉ、ＰＩ－Ｓｃｅ Ｉ、ＰＩ－Ｐｆｕ Ｉ、ＰＩ－Ｔｌｉ Ｉ、ＰＩ－Ｍｔｕ Ｉ、及びＩ－Ｃｅｕ Ｉが含まれ、特定の例示的なメガヌクレアーゼには、Ｉ－Ｄｍｏ Ｉ、Ｉ－Ｃｒｅ Ｉ、ＰＩ－Ｓｃｅ Ｉ、及びＰＩ－Ｐｆｕ Ｉが含まれる。

【0115】

ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）は、ＤＮＡ切断ドメイン及びＤＮＡ結合ジンクフィンガードメインを有する酵素である。ＺＦＮは、エンドヌクレアーゼの非特異的ＤＮＡ切断ドメインを部位特異的ＤＮＡ結合ジンクフィンガードメインと融合させることによって作製され得る。そのようなヌクレアーゼは、遺伝子編集のための強力なツールであり、部位特異的に二本鎖切断（ＤＳＢ）を、ゲノムＤＮＡに誘導するように組み立てることができる。ＺＦＮは、ＤＮＡ修復の間、標的遺伝子が変異原性非相同末端関節（ＮＨＥＪ）を介して破壊され得るか、または密接に関連するＤＮＡ鋳型が供給される場合、相同組換え（ＨＲ）を介して改変され得るように、特異的な遺伝子破壊を可能にする。

【0116】

ジンクフィンガータンパク質は、ＷＯ９８／５４３１１、米国特許第９，１８７，７５８号、同第９，２０６，４０４号、及び同第８，７７１，９８５号の手順に従って設計及び予測することができ、これらの開示は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれ、本方法で使用することができる。参照により本明細書に組み込まれるＷＯ９８／５４３１１は、標的遺伝子に固有の特定のヌクレオチド配列を結合するジンクフィンガータンパク質ドメインの設計を可能にする技術を開示する。１８ヌクレオチドを含む配列は、高等生物のゲノム内の独自の位置を特定するのに十分であると計算されている。したがって、典型的には、ジンクフィンガータンパク質ドメインは、ヘキサダクチルであり、すなわち、６本のジンクフィンガーを含み、それぞれが、特定のトリプレットとの相互作用のためにその特別に設計されたアルファヘリックスを有する。しかしながら、いくつかの場合において、より短いまたはより長いヌクレオチド標的配列が望ましい場合がある。したがって、タンパク質中のジンクフィンガードメインは、少なくとも３本のフィンガー、または２～１２本のフィンガー、または３～８本のフィンガー、または３～４本のフィンガー、または５～７本のフィンガー、または６本のフィンガーを含み得る。一態様において、ＺＦＰは、３つのジンクフィンガーを含み、別の態様において、ＺＦＰは、４つのジンクフィンガーを含む。ＺＦＮ及びゲノム編集のためのそれらの設計に関する追加の説明は、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２０１２０３２９０６７号に見出すことができる。

【0117】

また、本明細書では、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞を産生するための方法が提供される。ある特定の実施形態において、そのような方法は、前駆細胞を未成熟細胞への分化を可能にする条件下で前駆細胞をインキュベートすることと、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤の存在下で、ならびに未成熟細胞の成熟を可能にする条件下で未成熟細胞をインキュベートし、それによって、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞を産生することと、を含む。

【0118】

ある特定の実施形態において、前駆細胞は、ＤＣＯｎｅ細胞である。そのため、本明細書では、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞を産生するための方法を提供し、本方法は、ＤＣＯｎｅ細胞を未成熟細胞（例えば、未成熟樹状細胞表現型を有する細胞）に分化させることを可能にする条件下でＤＣＯｎｅ細胞をインキュベートすることと、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤の存在下で、未成熟細胞の成熟（例えば、成熟樹状細胞表現型を有する細胞）を可能にする条件下で未成熟細胞をインキュベートすることと、それによって下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞を産生することとを含む。ＤＣＯｎｅ細胞の成熟を可能にする条件は、例えば、ＥＰ２９３１８７８Ｂ１に記載されており、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0119】

ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤の量は、当業者によって容易に決定され得る。ある特定の実施形態において、薬剤の量は、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーの枯渇及び／または阻害をもたらす薬剤の有効量である。

【0120】

薬剤が生物学的薬剤、例えば、結合ポリペプチド（例えば、抗体）、低分子ＲＮＡ（例えば、ｓｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ）、または操作されたヌクレアーゼ系である場合、白血病起源の改変細胞は、薬剤の薬剤または成分をコードする１つ以上の操作された核酸を導入することによって概して操作される。

【0121】

ある特定の実施形態において、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤（例えば、抗体、低分子ＲＮＡ、または操作されたヌクレアーゼ系）は、発現ベクター、例えば、薬剤をコードする核酸を含む発現によって細胞内に導入される。好適な発現ベクターは、当業者に周知であり、限定されないが、レンチウイルスベクター、ガンマレトロウイルスベクター、発泡性ウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、操作されたハイブリッドウイルス、ネイキッドＤＮＡ（スリーピングビューティー、Ｐｉｇｇｙｂａｃ等のトランスポゾン媒介ベクター、及びＰｈｉ３１等のインテグラーゼを含むが、これらに限定されない）を含む。いくつかの他の好適な発現ベクターには、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）及びレトロウイルス発現ベクターが含まれる。

【0122】

ある特定の実施形態において、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤（例えば、抗体、低分子ＲＮＡ、または操作されたヌクレアーゼ系）をコードする核酸は、ウイルス形質導入を介して細胞に導入される。ある特定の実施形態において、ウイルス形質導入は、白血病起源の改変細胞を、薬剤をコードする核酸を含むウイルスベクターと接触させることを含む。

【0123】

アデノウイルス発現ベクターは、アデノウイルスをベースとしたものであり、ゲノムＤＮＡへの組み込み能は低いが、宿主細胞へのトランスフェクション効率は高い。アデノウイルス発現ベクターは、（ａ）発現ベクターのパッケージングを支援し、（ｂ）宿主細胞内で免疫受容体を最終的に発現させるのに、十分なアデノウイルス配列を含有する。ある特定の実施形態において、アデノウイルスゲノムは、３６ｋｂの線形二本鎖ＤＮＡであり、外来ＤＮＡ配列（例えば、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤をコードする核酸）は、本発明の発現ベクターを作製するために、アデノウイルスＤＮＡの大部分を置換するために挿入され得る（例えば、Ｄａｎｔｈｉｎｎｅ ａｎｄ Ｉｍｐｅｒｉａｌｅ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０００）７（２０）：１７０７－１７１４を参照されたく、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0124】

別の発現ベクターは、アデノウイルス結合系を利用するアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に基づく。このＡＡＶ発現ベクターは、宿主ゲノムに高頻度で組み込まれる。この発現ベクターは、非分裂細胞を感染させることができるため、例えば組織培養またはインビボでの、哺乳動物細胞への遺伝子の送達に有用である。ＡＡＶベクターは、感染能力のある宿主範囲が広い。ＡＡＶベクターの生成及び使用に関する詳細は、米国特許第５，１３９，９４１号及び同第４，７９７，３６８号に記載されており、これらの開示は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

【0125】

レトロウイルス発現ベクターは、宿主ゲノムへの組み込み、大量の外来遺伝物質の送達、広範な種及び細胞タイプへの感染、ならびに特殊な細胞株へのパッケージ化が可能である。レトロウイルスベクターは、ある特定の位置でウイルスゲノムに核酸（例えば、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤をコードする核酸）を挿入して、複製欠陥のあるウイルスを産生することによって構築される。レトロウイルスベクターは、多種多様な細胞型に感染することができるが、薬剤の組み込み及び安定した発現は、宿主細胞の分裂を必要とする。

【0126】

レンチウイルスベクターは、一般的なレトロウイルス遺伝子ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖに加えて、調節または構造的機能を有する他の遺伝子を含む複合体レンチウイルスであるレンチウイルスに由来する（例えば、米国特許第６，０１３，５１６号及び同第５，９９４，１３６号を参照されたく、これらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。レンチウイルスのいくつかの例としては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２）及びサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が挙げられる。レンチウイルスベクターは、ＨＩＶ病原性遺伝子を多重に弱毒化することによって作製される。例えば、遺伝子ｅｎｖ、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、及びｎｅｆを欠失させることにより、生物学的に安全なベクターとする。レンチウイルスベクターは、非分裂細胞に感染することができ、例えば、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤をコードする核酸のインビボ及びエクスビボの遺伝子移入及び発現の両方に使用することができる（例えば、米国特許第５，９９４，１３６号を参照されたく、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0127】

発現ベクターは、当業者に既知の任意の手段によって細胞（例えば、白血病起源の改変細胞）に導入することができる。発現ベクターは、必要に応じて、トランスフェクションのためのウイルス配列を含み得る。代替的に、発現ベクターは、融合、エレクトロポレーション、微粒子銃、トランスフェクション、リポフェクションなどによって導入され得る。細胞は、発現ベクターの導入、続いてベクターの導入及び組み込みのための適切な処置の前に、培養において増殖及び拡大され得る。次いで、細胞を拡大し、ベクターに存在するマーカーによってスクリーニングし得る。使用され得る様々なマーカーは、当該技術分野で既知であり、ｈｐｒｔ、ネオマイシン耐性、チミジンキナーゼ、ヒグロマイシン耐性などを含み得る。

【0128】

下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞を生成するための追加の方法としては、化学形質転換方法（例えば、リン酸カルシウム、デンドリマー、リポソーム、及び／またはカチオン性ポリマーを使用する）、非化学形質転換方法（例えば、電気穿孔、光学的形質転換、遺伝子電気移入、及び／または流体力学的送達）、及び／または粒子ベースの方法（例えば、遺伝子銃を使用したインペールフェクション、及び／またはｍａｇｎｅｔｏｆｅｃｔｉｏｎ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0129】

発現ベクターを細胞に導入するための物理的方法は、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、粒子衝撃、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションなどを含む。ベクター及び／または外因性核酸を含む細胞を産生するための方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（２００１），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい。発現ベクターを宿主細胞に導入するための化学的方法としては、コロイド分散系、例えば、巨大分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、ならびに脂質ベース系（水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル、及びリポソームを含む）が挙げられる。

【0130】

使用に適した脂質は、商業的供給源から得ることができる。例えば、ジミリスチルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）は、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯから得ることができ、リン酸ジセチル（「ＤＣＰ」）は、Ｋ ＆ Ｋ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，ＮＹ）から得ることができ、コレステロール（「Ｃｈｏｉ」）は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ－Ｂｅｈｒｉｎｇから得ることができ、ジミリスチルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）及び他の脂質は、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）から得ることができる。クロロホルムまたはクロロホルム／メタノール中の脂質のストック溶液は、約－２０℃で保存され得る。クロロホルムはメタノールよりも容易に蒸発するため、単独の溶媒として使用され得る。「リポソーム」は、封入脂質二重層または凝集体が生じることにより形成される様々な単層及び多層脂質ビヒクルを包含する総称である。リポソームは、リン脂質二重層膜と内部水性媒体とを有する小胞構造を有することを特徴とし得る。多層リポソームは、水性媒体によって分離された複数の脂質層を有する。それらは、リン脂質が過剰の水溶液に懸濁すると自然に形成される。脂質成分は、閉じた構造を形成する前に自己再配列を行い、脂質二重層の間に水及び溶解溶質を閉じ込める（Ｇｈｏｓｈ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ（１９９１）５：５０５－１０）。溶液中で通常の小胞構造とは異なる構造を有する組成物もまた、包含される。例えば、脂質は、ミセル構造をとる場合もあり、または単に脂質分子の不均一な凝集体として存在する場合もある。また、リポフェクタミン－核酸複合体も企図される。

【0131】

外因性核酸を宿主細胞に導入するか、さもなければ細胞を薬剤に曝露するために使用される方法にかかわらず、宿主細胞における核酸の存在を確認するために、様々なアッセイを行ってもよい。かかるアッセイには、例えば、サザンブロッティング及びノーザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲ及びＰＣＲ等の、当業者に周知の分子生物学アッセイ、例えば、免疫学的手段（ＥＬＩＳＡ及びウエスタンブロット）によって、特定のペプチドの存在または非存在を検出する等の生化学アッセイが含まれる。

【0132】

一実施形態において、細胞内に導入される核酸は、ＲＮＡである。別の実施形態において、ＲＮＡは、インビトロ転写ＲＮＡまたは合成ＲＮＡを含むｍＲＮＡである。ＲＮＡは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）生成鋳型を使用してインビトロ転写によって産生され得る。任意の供給源からの目的のＤＮＡは、適切なプライマー及びＲＮＡポリメラーゼを使用して、インビトロｍＲＮＡ合成のための鋳型にＰＣＲによって直接変換することができる。ＤＮＡの供給源は、例えば、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ファージＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ配列、または任意の他の適切なＤＮＡの供給源であり得る。

【0133】

ＰＣＲを使用して、ｍＲＮＡのインビトロ転写のための鋳型を生成し、それを次いで細胞に導入してもよい。ＰＣＲを行うための方法は、当該技術分野で周知である。ＰＣＲで使用するためのプライマーは、ＰＣＲの鋳型として使用するＤＮＡの領域と実質的に相補的な領域を有するように設計される。「実質的に相補的」は、本明細書で使用される場合、プライマー配列中の塩基の大部分または全てが相補的であるヌクレオチドの配列を指す。実質的に相補的な配列は、ＰＣＲに使用されるアニーリング条件下で目的のＤＮＡ標的とアニーリングまたはハイブリダイズすることができる。プライマーは、ＤＮＡ鋳型の任意の部分に実質的に相補的であるように設計され得る。例えば、プライマーは、５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲを含む、細胞内で通常転写される遺伝子の部分（オープンリーディングフレーム）を増幅するように設計され得る。プライマーはまた、目的の特定のドメインをコードする遺伝子の一部を増幅するように設計され得る。一実施形態において、プライマーは、５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲの全部または一部を含む、ヒトｃＤＮＡのコード領域を増幅するように設計される。ＰＣＲに有用なプライマーは、当該技術分野で周知の合成方法によって生成される。「フォワードプライマー」は、増幅されるＤＮＡ配列の上流にあるＤＮＡ鋳型上のヌクレオチドに実質的に相補的なヌクレオチドの領域を含有するプライマーである。「上流」は、本明細書では、コード鎖に対して、増幅されるＤＮＡ配列の５’の位置を指すために使用される。「リバースプライマー」は、増幅されるＤＮＡ配列の下流にある二本鎖ＤＮＡ鋳型に実質的に相補的なヌクレオチドの領域を含有するプライマーである。「下流」は、本明細書では、コード鎖に対して、増幅されるＤＮＡ配列の３側の位置を指すために使用される。

【0134】

ＲＮＡの安定性及び／または翻訳効率を促進する能力を有する化学構造も使用され得る。ＲＮＡは通常、５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲを有する。一実施形態において、５’ＵＴＲは、０～３０００ヌクレオチド長である。コード領域に付加される５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲ配列の長さは、ＵＴＲの様々な領域とアニーリングするＰＣＲ用プライマーの設計を含むがこれに限定されない、様々な方法によって変更され得る。このアプローチを使用して、当業者は、転写されたＲＮＡのトランスフェクション後に最適な翻訳効率を実現するために必要な５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲの長さを改変することができる。

【0135】

５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲは、目的遺伝子の天然の内因性５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲであり得る。代替的に、目的遺伝子に対して内因性ではないＵＴＲ配列を、フォワード及びリバースプライマーにＵＴＲ配列を組み込むことによって、または鋳型の任意の他の変更によって付加することができる。目的遺伝子に対して内因性ではないＵＴＲ配列の使用は、ＲＮＡの安定性及び／または翻訳効率を変更するのに有用であり得る。例えば、３’ＵＴＲ配列のＡＵリッチエレメントがｍＲＮＡの安定性を低下させ得ることが知られている。したがって、３’ＵＴＲは、当該技術分野で周知であるＵＴＲの特性に基づいて、転写されたＲＮＡの安定性を増加させるように選択または設計され得る。

【0136】

一実施形態において、５’ＵＴＲは、内因性遺伝子のコザック配列を含有し得る。代替的に、目的遺伝子に対して内因性ではない５’ＵＴＲが上記のようにＰＣＲにより付加されている場合、５’ＵＴＲ配列を付加することによってコンセンサスコザック配列を再設計することができる。コザック配列は、一部のＲＮＡ転写物の翻訳効率を高めることができるが、全てのＲＮＡが効率的な翻訳を可能にすることを必要としているわけではないように思われる。多くのｍＲＮＡのＫｏｚａｋ配列の必要性は、当該技術分野で知られている。他の実施形態において、５’ＵＴＲは、ＲＮＡゲノムが細胞内で安定しているＲＮＡウイルスに由来し得る。他の実施形態において、ｍＲＮＡのエキソヌクレアーゼ分解を妨害するために、様々なヌクレオチド類似体が、３’ＵＴＲまたは５’ＵＴＲで使用され得る。

【0137】

遺伝子クローニングを必要とせずにＤＮＡ鋳型からＲＮＡを合成できるようにするには、転写される配列の上流のＤＮＡ鋳型に転写のプロモーターを結合させる必要がある。ＲＮＡポリメラーゼのプロモーターとして機能する配列がフォワードプライマーの５’末端に付加されると、ＲＮＡポリメラーゼプロモーターは、転写されるオープンリーディングフレームの上流のＰＣＲ産物に組み込まれる。一実施形態において、プロモーターは、本明細書の他所に記載されているように、Ｔ７ポリメラーゼプロモーターである。他の有用なプロモーターとしては、Ｔ３及びＳＰ６ ＲＮＡポリメラーゼプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。Ｔ７、Ｔ３、及びＳＰ６プロモーターのコンセンサスヌクレオチド配列は、当該技術分野で公知である。

【0138】

一実施形態において、ｍＲＮＡは、細胞内でのリボソーム結合、翻訳の開始、及び安定性ｍＲＮＡを決定する、５’末端上のキャップ及び３’ポリ（Ａ）テールの両方を有する。環状ＤＮＡ鋳型、例えばプラスミドＤＮＡでは、ＲＮＡポリメラーゼは、真核細胞での発現に適さない長いコンカテマー産物を産生する。３’ＵＴＲの末端で線状化されたプラスミドＤＮＡの転写により、たとえ転写後にポリアデニル化されたとしても真核生物のトランスフェクションには有効でない、通常サイズのｍＲＮＡがもたらされる。

【0139】

線形ＤＮＡ鋳型上で、ファージＴ７ ＲＮＡポリメラーゼは、転写物の３’末端を鋳型の最後の塩基を超えて伸長することができる（Ｓｃｈｅｎｂｏｒｎ ａｎｄ Ｍｉｅｒｅｎｄｏｒｆ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（１９８５）１３：６２２３－３６、Ｎａｃｈｅｖａ ａｎｄ Ｂｅｒｚａｌ－Ｈｅｒｒａｎｚ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（２００３）２７０：１４８５－６５。

【0140】

転写ＤＮＡ鋳型のポリＡ／Ｔセグメントは、ＰＣＲ中にポリＴテール、例えば１００Ｔテール（サイズは５０～５０００Ｔであり得る）を含有するリバースプライマーを使用して生成され得るか、またはＰＣＲ後にＤＮＡライゲーションもしくはインビトロ組換えを含むがこれらに限定されない任意の他の方法により産生され得る。ポリ（Ａ）テールはまた、ＲＮＡに安定性をもたらし、ＲＮＡの分解を低減させる。概して、ポリ（Ａ）テールの長さは、転写されたＲＮＡの安定性と正に相関する。一実施形態において、ポリ（Ａ）テールは、１００～５０００個のアデノシンである。

【0141】

ＲＮＡのポリ（Ａ）テールは、Ｅ．ｃｏｌｉポリＡポリメラーゼ（Ｅ－ＰＡＰ）などのポリ（Ａ）ポリメラーゼを使用して、インビトロ転写後に更に伸長され得る。一実施形態において、ポリ（Ａ）テールの長さを１００ヌクレオチドから３００～４００ヌクレオチドに増加させると、ＲＮＡの翻訳効率が約２倍増加する。追加的に、３’末端に様々な化学基を結合させることで、ｍＲＮＡの安定性を増加させることができる。このような結合には、改変／人工ヌクレオチド、アプタマー、及び他の化合物を含めることができる。例えば、ＡＴＰ類似体は、ポリ（Ａ）ポリメラーゼを使用してポリ（Ａ）テールに組み込むことができる。ＡＴＰ類似体は、ＲＮＡの安定性を更に増加させることができる。

【0142】

５’キャップもまた、ＲＮＡ分子に安定性をもたらす。例示的な実施形態において、本明細書に開示する方法によって産生されるＲＮＡは、５’キャップを含む。５’キャップは、当該技術分野で既知であり、本明細書に記載される技法を使用して提供される（例えば、Ｃｏｕｇｏｔ ｅｔ ａｌ．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．（２００１）２９：４３６－４４４、Ｓｔｅｐｉｎｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，ＲＮＡ（２００１）７：１４６８－９５、Ｅｌａｎｇｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．（２００５）３３０：９５８－９６６を参照されたい）。

【0143】

ある特定の実施形態において、ＲＮＡ、例えばインビトロ転写ＲＮＡは、細胞にエレクトロポレーションされる。細胞の透過性及び生存率を促進する因子、例えば、糖、ペプチド、脂質、タンパク質、抗酸化剤、及び界面活性剤を含んでもよい、細胞エレクトロポレーションに適した任意の溶質を含めることができる。

【0144】

本方法はまた、例えばプロモーターまたは入力ＲＮＡの量を変化させることにより広範囲にわたって発現レベルを制御する能力を提供し、発現レベルを個別に調節することを可能にする。更に、ｍＲＮＡ産生のＰＣＲベースの手法は、様々な構造及びそれらのドメインの組み合わせを有するｍＲＮＡの設計を大幅に容易にする。

【0145】

ＲＮＡトランスフェクションの１つの利点は、それが本質的に一過性であり、ベクターを含まないことである。ＲＮＡ導入遺伝子は、任意の追加のウイルス配列を必要とせずに、最小発現カセットとして細胞に送達され、その中で発現され得る。これらの条件下では、導入遺伝子が細胞ゲノムに組み込まれる可能性は低い。細胞のクローニングは、ＲＮＡのトランスフェクションの効率のために必要ではない。

【0146】

インビトロ転写ＲＮＡ（ＩＶＴ－ＲＮＡ）を有する細胞の操作は、リポフェクションまたはエレクトロポレーションの使用を含む。移入されたＩＶＴ－ＲＮＡの長期発現を実現するために、様々な改変を使用してＩＶＴ－ＲＮＡを安定化させることが望ましい。

【0147】

いくつかのＩＶＴベクターが文献中で知られており、それらはインビトロ転写の鋳型として標準化された方法で利用され、安定化されたＲＮＡ転写物が産生されるように遺伝子改変されている。現在、当該技術分野で使用されるプロトコルは、以下の構造を有するプラスミドベクターに基づいている：ＲＮＡ転写を可能にする５’ＲＮＡポリメラーゼプロモーター、続いて、３’及び／または５’のいずれかに非翻訳領域（ＵＴＲ）が隣接する目的の遺伝子、ならびに５０～７０のＡのヌクレオチドを含有する３’ポリアデニルカセット。インビトロ転写の前に、環状プラスミドは、ＩＩ型制限酵素によってポリアデニルカセットの下流で線状化される（認識配列は切断部位に対応する）。したがって、ポリアデニルカセットは、転写物の後方のポリ（Ａ）配列に対応する。この手順の結果として、一部のヌクレオチドは、線状化後に酵素切断部位の一部として残り、３’末端のポリ（Ａ）配列を伸長させるかまたはマスクする。この非生理学的オーバーハングが、そのような構築物から細胞内に産生されるタンパク質の量に影響を及ぼすかどうかは不明である。

【0148】

別の態様において、ＲＮＡコンストラクトは、エレクトロポレーションによって細胞内に送達される。例えば、ＵＳ２００４／００１４６４５、ＵＳ２００５／００５２６３０、ＵＳ２００５／００７０８４１、ＵＳ２００４／００５９２８５、ＵＳ２００４／００９２９０７Ａ１に教示される、哺乳動物細胞への核酸構築物のエレクトロポレーションの製剤及び方法論を参照されたい。任意の公知の細胞タイプのエレクトロポレーションに必要な電界強度を含む様々なパラメータは、関連する研究文献、ならびに当該分野における多数の特許及び出願で概して公知である。例えば、米国特許第６，６７８，５５６号、米国特許第７，１７１，２６４号、及び米国特許第７，１７３，１１６号を参照されたい。エレクトロポレーションの治療用途のための装置は、市販されており、例えば、ＭＥＤＰＵＬＳＥＲ（商標）ＤＮＡエレクトロポレーションセラピーシステム（Ｉｎｏｖｉｏ／Ｇｅｎｅｔｒｏｎｉｃｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）であって、米国特許第６，５６７，６９４号、米国特許第６，５１６，２２３号、米国特許第５，９９３，４３４号、米国特許第６，１８１，９６４号、米国特許第６，２４１，７０１号、及び米国特許第６，２３３，４８２号などの特許に記載されており、例えば、ＵＳ２００７０１２８７０８Ａ１に記載されているように、エレクトロポレーションは、インビトロでの細胞のトランスフェクションにも使用され得る。エレクトロポレーションはまた、インビトロで核酸を細胞に送達するために利用され得る。したがって、当業者に公知の多くの利用可能なデバイス及びエレクトロポレーション系のいずれかを利用する発現コンストラクトを含む核酸の細胞へのエレクトロポレーション媒介投与は、目的のＲＮＡを標的細胞に送達するための刺激的な新規手段を提示する。

【0149】

本明細書で提供されるように、ある特定の方法は、白血病起源の改変細胞の使用を利用し、ここで、改変細胞は非増殖性である。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、照射されている。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、本明細書に開示される方法におけるその使用の前に照射される。照射は、例えば、標準的な照射装置（Ｇａｍｍａｃｅｌｌまたは同等物）を使用して、３０～１５０Ｇｙ（例えば、１００Ｇｙ）で１～３時間の間、ガンマ線照射することで実現され得る。照射によって、白血病起源の改変細胞（例えば、ＣＤ３４陽性細胞）を含む組成物内のあらゆる残存前駆細胞が、分裂を継続することできないことを確実にする。細胞は、例えば、ワクチンとして使用する場合に患者に注射する前に、または培養を停止した直後に、照射してもよい。ある特定の実施形態において、細胞は、それらの免疫刺激能力を維持しながら、増殖及び／または拡大する能力を阻害するように照射される。

【0150】

Ｃ．処置方法
本明細書において、対象において免疫応答を増強するための方法が提供される。また、対象におけるがん（例えば、腫瘍）を治療または予防するための方法も提供される。対象における免疫応答を増強する方法は、対象が罹患しているがん（例えば、腫瘍）の治療をもたらし得る。方法は、概して、対象に、本明細書に記載の白血病起源の改変細胞を投与することを含む。

【0151】

本明細書で使用される場合、「対象」または「個体」または「患者」という用語は、本明細書では交換可能に用いられ、診断または治療が望まれる任意の対象（特に、哺乳類対象）を指す。哺乳類対象には、例えば、ヒト、飼育動物、家畜、及び動物園、スポーツ、または愛玩動物、例えばイヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、及びメスウシが含まれる。

【0152】

本明細書で使用される場合、「処置する」または「処置」という用語は、治療処置及び予防または防止手段の両方を指す。目的は、望ましくない生理的変化または障害（例えば、がんの発生または転移）を防止するかまたは減速（減少）させることである。有用なまたは所望の臨床結果としては以下が挙げられる（しかし、これらに限定されない）。症状の緩和、疾患の程度の減少、疾患の安定した（すなわち、悪化していない）状態、疾患進行を遅らせる、または遅くする、病態の改善または緩和、及び寛解（部分的または完全であるか、検出可能または検出不能であるかにかかわらず）。また「処置」は、処置を受けていない場合に予想される生存期間と比べて生存期間を延長することを意味することができる。処置を必要としているものには、すでに症状もしくは障害を伴うもの、ならびに症状もしくは障害を有する傾向もしくはリスクがあるもの、または症状もしくは障害を防止する必要があるものが含まれる。ある特定の実施形態において、治療はまた、疾患または障害、例えば、がんの再発の予防及び再発の遅延を指す。

【0153】

本明細書で使用される場合、「有効量」は、有益なまたは所望の結果、例えば、所望の治療エンドポイントの達成（例えば、腫瘍のサイズの部分的または完全な縮小）を達成するのに十分な量である。有効量は、１つ以上の投与、適用、または用量で投与することができる。本明細書で使用される場合、「治療的に有効な量」は、異常な生理学的応答を防止、修正及び／または正常化するか、または所望の応答（例えば、強化された適応免疫応答）における測定可能な改善を行うのに十分な量を意味するために用いられる。一態様において、「治療的に有効な量」は、少なくとも約３０％、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％の、病理学の臨床的に重要な特徴（例えば、腫瘍塊のサイズなど）を減らすのに十分な量である。

【0154】

本明細書に提供されるがんを治療する方法から利益を得るであろう対象としては、がんを有する対象が挙げられる。また、以前がんの初期治療を受けたことがある対象も好適である。ある特定の実施形態において、初期処置は、がんに対する標準のケア処置を含む。がんの標準的なケアには、手術、化学療法、及び／または放射線療法が含まれ得る。かかる対象は、初回治療に良好に応答したか、または初回治療に難治性であってもよい。したがって、ある特定の実施形態において、本明細書中提供される方法は、標準的なケア処置に対して難治性であるがんを処置するために有用である。ある特定の実施形態において、本明細書中に提供される方法は、がんの再発（ｒｅｌａｐｓｅ）または再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）を予防するために、対象を治療するのに有用である。

【0155】

ある特定の実施形態において、本開示によって提供される方法は、本明細書に記載される白血病起源の改変細胞を含む第１の組成物（例えば、第１の免疫原性組成物）を対象に投与することを含む。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、下方制御されたＣＤ４７経路を含む。ある特定の実施形態において、本開示によって提供される方法は、対象に、白血病起源の改変細胞を含む第１の組成物と、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤を含む第２の組成物とを投与することを含む。本明細書に記載されるように、ＣＤ４７を阻害することは、免疫細胞による細胞ベースのワクチン（例えば、ＤＣＰ－００１）の取り込みを増強する。したがって、本明細書に提供される方法は、（例えば、細胞ベースのワクチンに含まれる抗原を提示し、それに反応することによって）細胞ベースのワクチンの生体活性を増強するために、そのような免疫細胞による細胞ベースのワクチンの増強された取り込みと組み合わせて、存在する免疫細胞を刺激し、及び／または周囲の免疫細胞をリクルートするために、細胞ベースのワクチンの免疫原性を利用する。

【0156】

ある特定の実施形態において、対象における免疫応答を増強するための方法は、対象に、有効量の白血病起源の改変細胞を含む組成物を投与することを含む。ある特定の実施形態において、対象における免疫応答を増強するための方法は、対象に、有効量の、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞を含む組成物を投与することを含む。ある特定の実施形態において、対象における免疫応答を増強するための方法は、対象に、白血病起源の改変細胞を含む有効量の第１の組成物と、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤を含む有効量の第２の組成物とを投与することを含む。ある特定の実施形態において、対象における免疫応答を増強するための方法は、対象に、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞を含む有効量の第１の組成物と、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤を含む有効量の第２の組成物とを投与することを含む。

【0157】

ある特定の実施形態において、対象におけるがんの治療または予防する方法は、対象に、白血病起源の改変細胞を含む有効量の組成物を投与することを含む。ある特定の実施形態において、対象におけるがんの治療または予防する方法は、対象に、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞を含む有効量の組成物を投与することを含む。ある特定の実施形態において、対象におけるがんの治療または予防する方法は、対象に、白血病起源の改変細胞を含む有効量の第１の組成物と、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤を含む有効量の第２の組成物と、を投与することを含む。ある特定の実施形態において、対象におけるがんの治療または予防する方法は、対象に、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞を含む有効量の第１の組成物と、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤を含む有効量の第２の組成物と、を投与することを含む。

【0158】

ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、少なくとも１つの腫瘍関連抗原または腫瘍関連抗原をコードする核酸を含み、腫瘍関連抗原は、対象における腫瘍と関連している。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞は、少なくとも１つの腫瘍関連抗原または腫瘍関連抗原をコードする核酸を含み、腫瘍関連抗原は、対象における腫瘍とは関連していない。ある特定の実施形態において、腫瘍関連抗原または腫瘍関連抗原をコードする核酸は、白血病起源の改変細胞によって内因的に含まれ得る。ある特定の実施形態において、腫瘍関連抗原または腫瘍関連抗原をコードする核酸は、白血病起源の改変細胞に外因的に提供されてもよい。腫瘍関連抗原または腫瘍関連抗原をコードする核酸を細胞に提供するための様々な方法は、当業者に既知である。

【0159】

ある特定の実施形態において、本明細書で提供するがんを治療するための方法は、対象に、本明細書に記載の白血病起源の改変細胞（例えば、下方制御されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞）を含む組成物の有効量の１回以上の用量を投与することを含む。組成物は、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤を更に含み得る。

【0160】

ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞を含む組成物の１回以上の用量が、対象に投与される。例えば、白血病起源の改変細胞を含む組成物の１回用量、２回用量、３回用量、４回用量、５回用量、６回用量、７回用量、８回用量、９回用量、１０回用量、１１回用量、１２回用量、またはそれ以上が対象に投与される。１つ以上の用量のそれぞれは、実質的に同じ数の白血病起源の改変細胞を含有してもよく、または異なる数の白血病起源の改変細胞を含有してもよい。

【0161】

ある特定の実施形態において、組成物（すなわち、白血病起源の改変細胞を含む）の用量は、時間間隔で、例えば、１週間の間隔で、２週間の間隔で、３週間の間隔で、４週間の間隔で、５週間の間隔で、６週間の間隔で、７週間の間隔で、８週間の間隔で、９週間の間隔で、１０週間の間隔で、１１週間の間隔で、１２週間の間隔で、またはそれ以上で投与されてもよい。ある特定の実施形態において、用量間の時間は、約１日～約２１日、約１日～約２２日、約１日～約２３日、約１日～約２４日、約１日～約３週間、約１日～約４週間、約１日～約５週間、約１日～約１０週間、約１日～約１５週間、約１日～約２０週間、約１日～約２５週間、約１日～約３０週間、約１日～約３５週間、約１日～約４０週間、約１日～約４５週間、約１日～約５０週間、約１日～約１年、及びその間の任意の時間量である。ある特定の実施形態において、投与間隔は、約１日～約１ヶ月、１４日～約２ヶ月、１ヶ月～約３ヶ月、２ヶ月～約５ヶ月、４ヶ月～約６ヶ月、５ヶ月～約７ヶ月、６ヶ月～約８ヶ月、７ヶ月～約９ヶ月、８ヶ月～約１０ヶ月、９ヶ月～約１１ヶ月、１０ヶ月～約１２ヶ月、１１ヶ月～約１３ヶ月、１２ヶ月～約１４ヶ月、１３ヶ月～約１５ヶ月、１４ヶ月～約１６ヶ月、１５ヶ月～約１７ヶ月、１６ヶ月～約１８ヶ月、１７ヶ月～約１９ヶ月、１８ヶ月～約２０ヶ月、１９ヶ月～約２１ヶ月、２０ヶ月～約２２ヶ月、２１ヶ月～約２３ヶ月、２２ヶ月～約２４ヶ月、３ヶ月～約１年、６ヶ月～約１年、及びその間の任意の時間量である。

【0162】

前述したように、本明細書に記載の方法は、免疫原性組成物の１回以上の用量を投与することを含む方法を含む。ある特定の実施形態において、１つ以上の用量は、同じ送達経路を介して投与される。ある特定の実施形態において、１つ以上の用量は、異なる送達経路を介して投与される。本明細書に記載の方法はまた、１つ以上の組成物（例えば、白血病起源の改変細胞を含む第１の組成物、及びＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤を含む第２の組成物）の投与を含む。

【0163】

ある特定の実施形態において、第１及び／または第２の組成物は、腫瘍内または腫瘍周囲に投与される。そのような場合、組成物は、腫瘍内投与のために製剤化される。組成物の腫瘍内投与には、腫瘍、例えば、腫瘍の中心、または腫瘍塊内の任意の位置への免疫原性組成物の直接投与が含まれる。腫瘍内投与はまた、腫瘍、例えば、腫瘍を取り囲む空間に近接する組成物の投与を含む。ある特定の実施形態において、第１及び／または第２の組成物は、腫瘍内に投与される。ある特定の実施形態において、第１及び／または第２の組成物は、腫瘍内投与のために調製され、例えば、第１及び／または第２の組成物は、腫瘍内投与に許容される希釈剤または溶媒を含む。

【0164】

ある特定の実施形態において、第１及び／または第２の組成物は、腫瘍外に投与される。そのような場合、組成物は、特定の腫瘍外投与のために製剤化される。腫瘍外投与には、例えば、静脈内、動脈内、皮下、皮内、結節内、リンパ管内、及び筋肉内投与を含む非経口投与が含まれ、これらは全て当業者に周知である。ある特定の実施形態において、本明細書に記載の組成物の投与は、筋肉内注射、皮下注射、静脈内注射、動脈内注射、腹腔内注射、胸骨内注射、皮内注射、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）注射、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）注射、及び組織の間質空間への送達からなる群から選択されるモードによって送達される。

【0165】

また腫瘍外投与には、腫瘍部位よりも遠位の部位への投与が含まれる。例えば、腫瘍外投与は、腫瘍から少なくとも約０．１ｍｍ、少なくとも約０．２ｍｍ、少なくとも約０．３ｍｍ、少なくとも約０．４ｍｍ、少なくとも約０．５ｍｍ、少なくとも約０．６ｍｍ、少なくとも約０．７ｍｍ、少なくとも約０．８ｍｍ、少なくとも約０．９ｍｍ、少なくとも約１ｍｍ、少なくとも約２ｍｍ、少なくとも約３ｍｍ、少なくとも約４ｍｍ、少なくとも約５ｍｍ、少なくとも約６ｍｍ、少なくとも約７ｍｍ、少なくとも約８ｍｍ、少なくとも約９ｍｍ、少なくとも約１０ｍｍ、少なくとも約１５ｍｍ、少なくとも約２０ｍｍ、少なくとも約２５ｍｍ、少なくとも約３０ｍｍ、少なくとも約３５ｍｍ、少なくとも約４０ｍｍ、少なくとも約４５ｍｍ、少なくとも約５０ｍｍ、少なくとも約６０ｍｍ、少なくとも約７０ｍｍ、少なくとも約８０ｍｍ、少なくとも約９０ｍｍ、少なくとも約１０ｃｍ、少なくとも約２０ｃｍ、少なくとも約３０ｃｍ、少なくとも約４０ｃｍ、少なくとも約５０ｃｍ、５０ｃｍ以上の距離（例えば、腫瘍の縁、または腫瘍の中心）にある部位への組成物の投与が含まれる。

【0166】

腫瘍外投与はまた、腫瘍が存在する臓器系とは異なる臓器系の部位に組成物を投与することを含む。例えば、腫瘍が卵巣に存在する場合、または卵巣内に存在する場合、方法は、卵巣ではない臓器系の部位、例えば、肝臓、腎臓など遠位に組成物を投与することを含む。「臓器」または「臓器系」という用語は、本明細書で使用される場合、同様の機能を有する組織の群を指す。臓器系の例には、限定することなく、以下が含まれる。筋肉系、消化器系（例えば、胃、小腸、大腸、肝臓、膵臓など）、呼吸器系（例えば、肺）、泌尿器系（例えば、腎臓、膀胱など）、生殖器（例えば、男性及び女性生殖器系、卵巣、胎盤、前立腺など）、内分泌系、循環系、神経系（例えば、中枢及び末梢神経系）、及び外皮系（例えば、皮膚、皮下組織）。

【0167】

組成物の投与はまた、腫瘍部位の反対側の部位で行ってもよい。ある特定の実施形態において、方法は、腫瘍部位（腫瘍が存在する部位）の対側の部位に組成物を投与することを含む。例えば、腫瘍が卵巣に存在する場合、または卵巣内に存在する場合、方法は、対側卵巣にまたは対側卵巣内に組成物を遠位に投与することを含む。例えば、腫瘍が左卵巣に存在する場合、または左卵巣内に存在する場合、方法は、組成物を右卵巣に遠位に投与することを含む。例えば、腫瘍が右卵巣に存在する場合、または右卵巣内に存在する場合、方法は、組成物を左卵巣に遠位に投与することを含む。

【0168】

ある特定の実施形態において、第１及び／または第２の組成物は、静脈内に投与される。ある特定の実施形態において、第１及び／または第２の組成物は、静脈内投与のために調製され、例えば、第１及び／または第２の組成物は、静脈内投与に許容される希釈剤または溶媒を含む。ある特定の実施形態において、第１及び／または第２の組成物は、皮内に投与される。ある特定の実施形態において、第１及び／または第２の組成物は、皮内投与のために調製され、例えば、第１及び／または第２の組成物は、皮内投与に許容される希釈剤または溶媒を含む。ある特定の実施形態において、第１及び／または第２の組成物は、筋肉内に投与される。ある特定の実施形態において、第１及び／または第２の組成物は、筋肉内投与のために調製され、例えば、第１及び／または第２の組成物は、筋肉内投与に許容される希釈剤または溶媒を含む。

【0169】

Ｄ．併用療法
本明細書に提供される方法は、それ自体で、または他の療法と組み合わせてがんの治療に有用である。したがって、本明細書では、本明細書に記載の方法と組み合わせて用いる併用療法も提供される。例えば、本明細書で提供される方法を、照射線療法と組み合わせて、または細胞増殖抑制作用もしくは抗がん作用を有する第２の治療とともに用いることができる。

【0170】

ある特定の実施形態において、本明細書に記載のがんを治療または予防する方法は、対象に第２の療法を投与することを更に含む。ある特定の実施形態において、第２の療法は、組成物（例えば、第３の組成物）内に含まれる。ある特定の実施形態において、第２の療法は、放射線療法を含む。ある特定の実施形態において、第２の療法は、免疫チェックポイント療法を含む。ある特定の実施形態において、第２の療法は、抗血管新生療法を含む。ある特定の実施形態において、第２の療法は、ポリ（ＡＤＰ－リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤療法を含む。当業者（例えば、医師）であれば、本明細書に記載の併用療法にとって有用な特定の用量及び投与レジメンを、容易に決定できるであろう。

【0171】

ある特定の態様において、本明細書で提供される方法は、細胞増殖抑制作用または抗がん作用を有する第２の治療と組み合わせて有用である。好適な細胞増殖抑制性化学療法化合物には以下が含まれる（しかし、これらに限定されない）。ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡ断片化剤、挿入剤、タンパク質合成阻害剤、トポイソメラーゼＩ及びＩＩ阻害剤、代謝拮抗剤、微小管標的剤、キナーゼ阻害剤、ホルモン、及びホルモン拮抗薬。

【0172】

ある特定の態様において、本明細書で提供される方法は、１つ以上のがん免疫（ＩＯ）剤を含む第２の治療と組み合わせて有用である。ＩＯ薬は、対象における免疫応答を増強し、刺激し、及び／または上方制御するのに効果的であることが知られている。ある特定の実施形態において、ＩＯ剤を本明細書に記載のがんを治療する方法と組み合わせて使用することは、がんを治療することにおいて相乗効果をもたらす。ＩＯ薬の例には、限定することなく、低分子薬物、抗体、及び細胞ベースの薬剤が含まれる。ある実施形態において、ＩＯ薬は、ヒト抗体またはヒト化抗体である可能性がある、モノクローナル抗体である。

【0173】

ＩＯ薬は、刺激受容体（例えば、共刺激受容体）のアゴニスト、またはＴ細胞上の抑制信号のアンタゴニストとすることができる。両方の結果には、抗原特異的なＴ細胞応答の増幅が含まれる。このようなＩＯ薬は、当該技術分野において、免疫チェックポイントレギュレータ（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）とも言われる。ある特定の実施形態において、ＩＯ剤は、共刺激経路及び／または共阻害経路を調節し、抗原特異的Ｔ細胞応答の機能を増強及び／または回復することが可能である。共刺激経路及び／または共抑制経路に含まれる分子の例には、限定することなく、以下が含まれる。免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）のメンバー；膜タンパク質のＢ７ファミリーのメンバー、例えば、Ｂ７－１、Ｂ７－２、Ｂ７－Ｈ１（ＰＤ－Ｌ１）、Ｂ７－ＤＣ（ＰＤ－Ｌ２）、Ｂ７－Ｈ２（ＩＣＯＳ－Ｌ）、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ５（ＶＩＳＴＡ）、及びＢ７－Ｈ６など；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのメンバー、例えば、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ－４０、ＯＸ－４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２－Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎｌ４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴβＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｃＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＩ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＥＤＡＲ、ＥＤＡ１、ＸＥＤＡＲ、ＥＤＡ２、ＴＮＦＲ１、リンホトキシンα／ＴＮＦβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦα、ＬＴβＲ、リンホトキシンα１β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹ、及びＮＧＦＲなど。

【0174】

したがって、ある実施形態において、免疫チェックポイント治療には、（ｉ）Ｔ細胞活性化を阻害するタンパク質のアンタゴニスト（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）、例えば、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ－１、及びＴＩＭ－４など、及び（ｉｉ）Ｔ細胞活性化を刺激するタンパク質のアゴニスト、例えば、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４－１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ－Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＤＲ３及びＣＤ２８Ｈなどである１つ以上の免疫チェックポイントレギュレータを用いることが含まれる。

【0175】

ある実施形態において、本明細書に記載の第２の治療は、１つ以上の免疫チェックポイントレギュレータを標的としてもよい。本開示の第２の治療が標的とし得る免疫チェックポイントレギュレータ（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）には、限定することなく、以下が含まれ得る。アデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２ＡＲ）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られている）、Ｂ及びＴリンパ球減衰因子（ＢＴＬＡ）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４、ＣＤ１５２としても知られている）、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、キラー細胞免疫グロブリン（ＫＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ３）、プログラム死１（ＰＤ－１）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）、Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサ（ＶＩＳＴＡ）、及びＮＫＧ２Ａ。

【0176】

ある特定の実施形態において、本明細書に記載のがんを治療する方法は、有効量の免疫チェックポイント阻害剤を対象に投与することを更に含む。ある特定の典型的な実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ４７、ＮＫＧ２Ａ、Ｂ７－Ｈ３、及びＢ７－Ｈ４からなる群から選択される免疫チェックポイントレギュレータを標的とする。ある特定の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、低分子、組換えリガンド、組換え受容体、または抗体であってもよい。免疫チェックポイント阻害剤抗体は、ヒト化、ヒト、キメラ化、または当該技術分野で既知の任意の形態の抗体であり得る。したがって、ある特定の典型的な実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ－４、抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＣＤ４７、抗ＮＫＧ２Ａ、抗Ｂ７－Ｈ３、及び抗Ｂ７－Ｈ４からなる群から選択される抗体である。ある特定の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、イピリムマブ、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、及びセミプリマブからなる群から選択される抗体である。

【0177】

ある特定の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－１結合アンタゴニスト（ＰＤ－１がそのリガンド結合パートナーに結合することを阻害することができる分子）である。ある実施形態において、ＰＤ－１リガンド結合パートナーはＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２である。ある特定の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。ある特定の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１結合パートナーは、ＰＤ－１及び／またはＢ７－１である。ある特定の実施形態において、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ２のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。ある特定の実施形態において、ＰＤ－Ｌ２の結合パートナーは、ＰＤ－１である。典型的な抗体が、米国特許第８，７３５，５５３号、同第８，３５４，５０９号、及び同第８，００８，４４９号に記載されており、これらの文献の開示内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。

【0178】

ある特定の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は抗ＰＤ－１抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体）である。ある特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、及びＣＴ－０１１からなる群から選択される。ニボルマブ（ＭＤＸ－１１０６－０４、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８、ＢＭＳ－９３６５５８、及びＯＰＤＩＶＯとしても知られている）は、は、国際特許出願第ＷＯ２００６／１２１１６８号に記載される抗ＰＤ－１抗体である。この文献の開示は、その全体が本明細書において組み込まれている。ペムブロリズマブ（ＭＫ－３４７５、Ｍｅｒｃｋ ３４７５、ランブロリズマブ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ、及びＳＣＨ－９００４７５としても知られている）は、国際特許出願第ＷＯ２００９／１１４３３５号に記載される抗ＰＤ－１抗体である。この文献の開示は、その全体が本明細書において組み込まれている。ＣＴ－０１１（ピディリズマブとしても知られている）は、国際特許出願第ＷＯ２００９／１０１６１１号に記載される抗ＰＤ－１抗体である。この文献の開示は、その全体が本明細書において組み込まれている。追加の抗ＰＤ－１抗体としては、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、ＷＯ２０１５／１１２９００を参照されたい）、ＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４）（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ、ＷＯ２０１２／１４５４９３を参照されたい）、ＲＥＧＮ－２８１０（Ｓａｎｏｆｉ／Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ、ＷＯ２０１５／１１２８００を参照されたい）、ＪＳ００１（Ｔａｉｚｈｏｕ Ｊｕｎｓｈｉ）、ＢＧＢ－Ａ３１７（Ｂｅｉｇｅｎｅ、ＷＯ２０１５／３５６０６を参照されたい）、ＩＮＣＳＨＲ１２１０（ＳＨＲ－１２１０）（Ｉｎｃｙｔｅ／Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈｅｎｇｒｕｉ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、ＷＯ２０１５／０８５８４７を参照されたい）、ＴＳＲ－０４２（ＡＮＢ００１）（Ｔｅｓａｒａ／ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ、ＷＯ２０１４／１７９６６４を参照されたい）、ＧＬＳ－０１０（Ｗｕｘｉ／Ｈａｒｂｉｎ Ｇｌｏｒｉａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＭ－０００１（Ａｒｍｏ／Ｌｉｇａｎｄ）、またはＳＴＩ－１１１０（Ｓｏｒｒｅｎｔｏ、ＷＯ２０１４／１９４３０２を参照されたい）が挙げられ、これらの全ては、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0179】

ある実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤はＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニスト、例えば、拮抗性ＰＤ－Ｌ１抗体である。典型的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、テセントリク（アテゾリズマブ）、デュルバルマブ、アベルマブ、セミプリマブ、ＳＴＩ－１０１４（Ｓｏｒｒｅｎｔｏ、ＷＯ２０１３／１８１６３４を参照されたい）、またはＣＸ－０７２（ＣｙｔｏｍＸ、ＷＯ２０１６／１４９２０１を参照されたい）から選択することができる。ある特定の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＭＥＤＩ４７３６としても知られるデュルバルマブ、ＭＰＤＬ３２８０Ａとしても知られるアテゾリズマブ、またはＭＳＢ０００１０１１８Ｃとしても知られるアベルマブなどのＰＤ－Ｌ１アンタゴニストである。

【0180】

ある実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４結合アンタゴニスト（ＣＴＬＡ－４がそのリガンド結合パートナーに結合することを阻害することが可能な分子）である。ＣＴＬＡ－４は、Ｔ細胞の表面上に見出され、それぞれＢ７－１及びＢ７－２とも呼ばれる、抗原提示細胞の表面上のＣＤ８０またはＣＤ８６に結合したときに「オフ」スイッチとして機能する。ＣＴＬＡ４は、ヘルパーＴ細胞の表面上で発現され、Ｔ細胞に抑制信号を伝達する免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。ある特定の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ－４抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体）である。抗ＣＴＬＡ－４抗体は、米国特許第８，１１９，１２９号、国際特許出願第ＷＯ０１／１４４２４号、同第ＷＯ９８／４２７５２号、同第ＷＯ００／３７５０４号（ＣＰ６７５，２０６、トレメリムマブとしても知られる。旧チシリムマブ）、米国特許第６，２０７，１５６号、Ｈｕｒｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９９８に開示され、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＣＴＬＡ－４と結合するためにこれらの当該技術分野で認められている抗体のいずれかと競合する抗体を用いることもでき、例えば、国際特許出願第ＷＯ２００１０１４４２４号、同第ＷＯ２００００３７５０４号、及び米国特許第８，０１７，１１４号に記載されているヒト化ＣＴＬＡ－４抗体であり、これらの開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。例示的な抗ＣＴＬＡ－４抗体には、イピリムマブ（１０Ｄ１としても知られている、ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１、及びヤーボイ）が含まれる。

【0181】

ある特定の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、Ｂ７－Ｈ４に対する抗体（例えば、国際特許出願第ＷＯ２０１３０２５７７９号及び同第ＷＯ２０１３０６７４９２号に開示されるものであり、これらの開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）である。ある特定の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ヒトＢ７－Ｈ３を中和する抗体（例えば、ＢＲＣＡ８４Ｄとして開示されるＭＧＡ２７１、及び米国特許公開第２０１２０２９４７９６号における誘導体であり、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を含むが、これらに限定されないＢ７－Ｈ３に対する抗体である。ある特定の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＮＫＧ２Ａに対する抗体であり、例えば、Ｍｏｎｔｆｏｏｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ（２０１８）１７５（７）：１７４４－１７５５を参照されたく、この文献の開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0182】

ある実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤はマクロファージチェックポイント阻害である。例えば、ＣＤ４７は、優勢なマクロファージチェックポイントとして特定されており、マクロファージによる食作用の腫瘍回避に至る骨髄性悪性腫瘍において過剰発現することが分かっている。ＣＤ４７阻害は白血病細胞の飲み込みとなることが示されており、前臨床データは、ＡＭＬ及び骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を含む複数の血液悪性腫瘍において抗がん作用を示している。例えば、Ｃｈａｏ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（２０１９）９：１３８０を参照されたい。したがって、ある実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤はＣＤ４７に対する抗体である。

【0183】

ある特定の態様において、本明細書で提供される方法は、１つ以上の血管新生剤を含む第２の治療と組み合わせて有用である。したがって、本明細書で提供される方法は、抗血管新生療法と組み合わせて有用である。新しい血管の形成、または血管新生によって、腫瘍に専用の血液供給をもたらして、その増殖にとって必要な酸素及び必須栄養素を与えることによって、がん増殖及び転移が促進される。血管新生及び関連する成長因子（例えば、限定することなく、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、及び線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ））を標的とした治療は、新しい血管の成長を阻害することが示されている。

【0184】

多くの抗血管新生剤が当該技術分野で知られており、本明細書で提供される方法と組み合わせて用いることに適しているであろう。例示的な抗血管新生剤として、成長因子（例えば、ＡＮＧ－２、ＮＫ１、２、４（ＨＧＦ）、形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦ－β））、サイトカイン（例えば、ＩＦＮ－α、－β、－γ、血小板因子４（ＰＦ－４）、ＰＲ－３９などのインターフェロン）、プロテアーゼ（例えば、切断されたＡＴ－ＩＩＩ、コラーゲンＸＶＩＩＩ断片（エンドスタチン））、ＨｍｗＫａｌｌｉｋｒｅｉｎ－ｄ５プラスミン断片（アンジオスタチン）、プロトロンビン－Ｆ１－２、ＴＳＰ－１）、プロテアーゼ阻害剤（例えば、ＴＩＭＰ－１、－２、または－３などのメタロプロテアーゼの組織阻害剤、マスピン、ＰＡＩ－１などのプラスミノゲン活性化因子阻害剤、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ））、タムスタチン、抗体産物（例えば、コラーゲン結合抗体ＨＵＩＶ２６、ＨＵ１７７、ＸＬ３１３、抗ＶＥＧＦ：アンチインテグリン（例えば、Ｖｉｔａｘｉｎ、（Ｌｘｓｙｓ））、及びグリコシダーゼ（例えば、ヘパリナーゼ－Ｉまたは－ＩＩ））などの生理学的薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。血管新生関連抗原（タンパク質及びポリペプチドを含む）に対するアンタゴニストである分子も好適であり、例えば、限定することなく、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ受容体、ＥＧＦＲ、ｂＦＧＦ、ＰＤＧＦ－Ｂ、ＰＤ－ＥＣＧＦ、ＴＧＦ－αを含むＴＧＦ、エンドグリン、Ｉｄタンパク質、様々なプロテアーゼ、一酸化窒素シンターゼ、アミノペプチダーゼ、トロンボスポンジン、ｋ－ｒａｓ、Ｗｎｔ、サイクリン依存性キナーゼ、微小管、熱ショックタンパク質、ヘパリン結合因子、シンターゼ、コラーゲン受容体、インテグリン、及び表面プロテオグリカンＮＧ２に向けられた分子を含む。抗血管新生の可能性があることが知られているか、またはあると考えられる「化学」または改変された生理学的薬剤としては、例えば、ビンブラスチン、タキソール、ケトコナゾール、サリドマイド、ドレスタチン、コンブレスタチンＡ、ラパマイシン（Ｇｕｂａ，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００２）８：１２８－１３５、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、ＣＥＰ－７０５５（Ｃｅｐｈａｌｏｎ，Ｉｎｃ．から入手可能）、フラボン酢酸、Ｂａｙ １２－９５６６（Ｂａｙｅｒ Ｃｏｒｐ．）、ＡＧ３３４０（Ａｇｏｕｒｏｎ，Ｉｎｃ．）、ＣＧＳ．２７０２３Ａ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、テトラシルシン誘導体（例えば、ＣＯＬ－３（Ｃｏｌｌａｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．））、Ｎｅｏｖａｓｔａｔ（Ａｅｔｅｒｎａ）、ＢＭＳ－２７５２９１（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、低用量５－ＦＵ、低用量メトトレキサート（ＭＴＸ）、イルソフラジン、ラディシコール、シクロスポリン、カプトプリル、セレコキシブ、Ｄ４５１５２－硫酸化多糖類、カチオン性タンパク質（プロタルニン）、カチオン性ペプチド－ＶＥＧＦ、スラミン（ポリスルホン化ナフチル尿素）、ＶＥＧＦの機能または産生を妨げる化合物（例えば、ＳＵ５４１６またはＳＵ６６６８（Ｓｕｇｅｎ）、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２５８４（Ｎｏｖａｒｔｉｓ））、ディスタマイシンＡ、Ａｎｇｉｏｚｙｍｅ（リボザイム）、イソフラビノイド、スタウロスポリン誘導体、ゲニステイン、ＥＭＤ１２１９７４（Ｍｅｒｃｋ ＫｃｇａＡ）、チルホスチン、イソキノロン、レチノイン酸、カルボキシアミドトリアゾール、ＴＮＰ－４７０、オクトレオチド、２－メトキシエストラジオール、アミノステロール（例えば、スクアラミン）、グルタチオン類似体（例えば、Ｎ－アセチル－Ｌ－システイン）、コンブレスタチンＡ－４（Ｏｘｉｇｅｎｅ）、Ｅｐｈ受容体ブロッキング剤（Ｈｉｍａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ（２００１）４１４（６８６６）：９３３－９３８、その開示は、その全体が参照により本明細書に取り込まれる）、Ｒｈ－アンジオスタチン、Ｒｈ－エンドスタチン（国際特許出願第ＷＯ０１／９３８９７号、その開示は、参照によりその全体が本明細書に取り込まれる）、環状ＲＧＤペプチド、アキュチン－ディスインテグリン、ベンゾジアゼピン（ｂｅｎｚｏｄｉａｚｅｐｅｎｅ）、ヒト化抗ａｖｂ３ Ａｂ、Ｒｈ－ＰＡＩ－２、アミロライド、ｐ－アミノベンズアミジン、抗ｕＰＡ ａｂ、抗ｕＰＡＲ Ａｂ、Ｌ－フェニルアラニン－Ｎ－メチルアミド（例えば、バチミスタット、マリマスタット）、ＡＧ３３４０、及びミノサイクリンが挙げられる。

【0185】

ある実施形態において、抗血管新生剤は抗ＶＥＧＦ抗体である。例示的な抗ＶＥＧＦ抗体には、十分な親和性及び特異性を伴ってＶＥＧＦに結合してＶＥＧＦの生物活性を減らすかまたは阻害することができる任意の抗体（またはその抗原結合断片）が含まれる。ある特定の実施形態において、抗ＶＥＧＦ抗体は、限定されないが、ハイブリドーマＡＴＣＣ ＨＢ １０７０９によって産生されるモノクローナル抗ＶＥＧＦ抗体Ａ４．６．１と同じエピトープに結合するモノクローナル抗体、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９７）５７：４５９３－４５９９に従って生成される組換えヒト化抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体を含み、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ある実施形態において、抗ＶＥＧＦ抗体はベバシズマブ（ＢＶ）（ｒｈｕＭＡｂ ＶＥＧＦまたはＡＶＡＳＴＩＮとしても知られている）である。ベバシズマブ及び他のヒト化抗ＶＥＧＦ抗体は更に米国特許第６，８８４，８７９号に記載されており、この文献の開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。更なる抗体には、国際特許出願第ＷＯ２００５／０１２３５９号及び同第ＷＯ２００５／０４４８５３号に記載されている、例えば、Ｇ６－３１及びＢ２０－４．１が含まれ、これらの文献の開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。更なる抗ＶＥＧＦ抗体が、米国特許第７，０６０，２６９号、同第６，５８２，９５９号、同第６，７０３，０２０号、及び同第６，０５４，２９７号、国際特許公報第ＷＯ９８／４５３３２号、同第ＷＯ９６／３００４６号、及び同第ＷＯ９４／１０２０２号、欧州特許第ＥＰ０６６６８６８Ｂ１号、米国特許出願公開第２００６００９３６０号、同第２００５０１８６２０８号、同第２００３０２０６８９９号、同第２００３０１９０３１７号、同第２００３０２０３４０９号、及び同第２００５０１１２１２６号、及びＰｏｐｋｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８８：１４９－１６４（２００４）に記載されており、これらの文献の開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。更なるＶＥＧＦ阻害剤には以下が含まれる。スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）及びソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）、Ｏｎｙｘ ａｎｄ Ｂａｙｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）。これらは、ＶＥＧＦＲ及びＰＤＧＦＲの両方に対する活性を伴うＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ＲＴＫＩ）のグループに属する。ある特定の実施形態において、抗血管新生剤はスニチニブである。更に他のＶＥＧＦ阻害剤には、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）へのリガンド結合を防止する融合タンパク質が含まれる。これらの融合タンパク質は、ＶＥＧＦトラップと言われることがあり、アフリベルセプトを含む。したがって、ある実施形態において、抗血管新生療法は、ベバシズマブ、アフリベルセプト、スニチニブ、及びソラフェニブからなる群から選択される抗血管新生剤を含む。

【0186】

ある特定の態様において、本明細書で提供される方法は、１つ以上のポリ（ＡＤＰリボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤を含む第２の治療と組み合わせて有用である。したがって、本明細書で提供される方法はＰＡＲＰ阻害剤療法と組み合わせて有用である。ＰＡＲＰは、細胞における多くの機能（例えば、ＤＮＡ修復、遺伝子発現、細胞周期制御、細胞内輸送、及びエネルギー代謝）に関与するタンパク質のファミリーである。ＰＡＲＰタンパク質は、塩基除去修復経路を通した一本鎖切断修復において重要な役割を担う。ＰＡＲＰ阻害剤は、既存のＤＮＡ修復欠陥（例えばＢＲＣＡ１及びＢＲＣＡ２）を伴う腫瘍に対する単剤療法として、及びＤＮＡ損傷を誘発する抗がん剤とともに投与されるときの併用療法としての活性を示していた。ＰＡＲＰ阻害剤は、低分子、核酸、核酸類似体または誘導体、ペプチド、ペプチド模倣薬、タンパク質、抗体またはその抗原結合断片、単糖類、二糖類、三糖類、オリゴ糖、多糖類、脂質、グリコサミノグリカン、生物学的材料から形成された抽出物、及びそれらの組み合わせからなる群から選択してもよい。典型的なＰＡＲＰ阻害剤には、限定することなく、オラパリブ、ベリパリブまたはそのプロドラッグ、ルカパリブ、タラゾパリブ、ニラパリブ、ＩＮＯ－１００１、ＡＺＤ２４６１、ＳＣ１０９１４、ＢＧＢ－２９０、及びフルゾパリブが含まれる。したがって、ある特定の実施形態において、ＰＡＲＰ阻害剤療法には、オラパリブ、ニラパリブ、ルカパリブ、及びベリパリブからなる群から選択されるＰＡＲＰ阻害剤が含まれる。

【0187】

がんの治療（例えば、がん療法）及び第２の療法（例えば、免疫チェックポイント療法、抗血管新生療法、ＰＡＲＰ阻害剤療法）に有用な方法を含む本明細書に記載の併用療法は、がん療法及び第２の療法が同時に（例えば、実質的に同時に）または連続的に対象に投与される治療レジメンを包含する。例えば、本明細書に記載のがん療法は、第２の療法とともに対象に実質的に同時に投与することができる。実質的に同時の投与は、例えば、対象に、各治療の固定比率を有する単一剤形を投与するか、または各治療に対する単一剤形を複数投与することによって行うことができる。各治療は、任意の適切な経路（例えば、限定することなく、経口経路、静脈内経路、腫瘍内経路、筋肉内経路、及び粘膜組織を通した直接吸収を含む）によって、順次にまたは実質的に同時に投与することができる。

【0188】

ある特定の実施形態において、がん療法及び第２の療法は、同じ経路によって、または異なる経路によって投与される。例えば、選択された組み合わせのがん療法は、静脈内注射によって投与してもよく、その組み合わせの第２の療法は、腫瘍内投与してもよい。代替的に、例えば、全ての治療を静脈内投与してもよいし、または全ての治療薬を腫瘍内に投与してもよい。

【0189】

ある特定の実施形態において、併用療法は、他の生物学的に活性な成分及び非薬物療法（例えば、手術または放射線治療）と組み合わせて、がん療法及び第２の療法の投与を含むことができる。併用療法に更に非薬物処置が含まれる場合、非薬物処置は、治療及び非薬物処置の組み合わせの共作用からの有益な効果が達成される限り、任意の好適な時間に行ってもよい。

【0190】

Ｅ．薬学的組成物及び製剤
単位用量形態組成物などの薬学的組成物及び製剤を含む、本開示の白血病起源の改変細胞（例えば、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞）を含む免疫原性組成物もまた提供される。薬学的組成物及び製剤は、概して、１つ以上の任意選択による薬学的に許容される担体または賦形剤を含む。本開示の治療は、組成物、例えば、白血病起源の改変細胞（例えば、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞）及び任意選択的に薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物（例えば、免疫原性薬学的組成物）にて構成することができる。

【0191】

ある特定の実施形態において、組成物は、本開示の白血病起源の改変細胞（例えば、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞）を含む。ある特定の実施形態において、組成物は、本明細書に記載されるように、ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤（例えば、結合ポリペプチド、低分子、低分子ＲＮＡ、または操作されたヌクレアーゼ系）を更に含む。ＣＤ４７及び／またはＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤は、ＣＤ４７及び／または白血病起源の改変細胞によって構成されるＣＤ４７経路のメンバーの枯渇及び／または阻害をもたらすために、有効量で組成物中に共製剤化され得る。

【0192】

本開示の下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞は、ＣＤ４７経路のメンバーを枯渇させる及び／または阻害する薬剤で予めコーティングされてもよい。ある特定の実施形態において、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞は、ＣＤ４７を枯渇させる及び／または阻害する薬剤で予めコーティングされる。例えば、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞は、抗ＣＤ４７抗体で事前コーティングすることができる。例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍ．（２０２０）１１：５８１を参照されたい。ある特定の実施形態において、組成物は、例えば、白血病起源の改変細胞を被覆する抗ＣＤ４７抗体を更に含む。したがって、本開示は、白血病起源の改変細胞及び抗ＣＤ４７抗体を含む組成物（例えば、免疫原性組成物）を提供する。本開示はまた、下方調節されたＣＤ４７経路及び抗ＣＤ４７抗体を含む白血病起源の改変細胞を含む組成物（例えば、免疫原性組成物）を提供する。

【0193】

ある実施形態において、組成物は、少なくとも１つの更なる治療薬を含む（例えば、細胞増殖抑制作用または抗がん作用を有する第２の治療）。

【0194】

「薬学的製剤」という用語は、その中に含まれる活性成分の生物活性を有効にすることができる形態の調剤品であって、製剤が投与される対象に対して容認できないほどに毒性がある追加成分は含まない調剤品を指す。「薬学的に許容される担体」は、対象には無毒の、活性成分以外の薬学的製剤内の成分を指す。したがって、様々な好適な製剤がある。薬学的に許容される担体には、限定することなく、緩衝剤、賦形剤、安定剤、または防腐剤が含まれる。ある特定の実施形態において、担体の選択は、特定の細胞及び／または投与の方法によって部分的に決定される。薬学的に許容される担体には、生理学的に適合するありとあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などが含まれる。ある特定の実施形態において、白血病起源の改変細胞（例えば、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞）を含有する組成物用の担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または上皮投与（例えば、注射または注入による）に適している。ある実施形態において、好適な場合、例えば、低分子ベースの第２の治療では、第２の治療を含む組成物に対する担体は、非非経口（例えば、経口投与）に適している。本開示の薬学的組成物には、１つ以上の薬学的に許容される塩、抗酸化剤、水性及び非水性担体、及び／または例えば防腐剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などのアジュバントを含めることができる。ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、防腐剤を含有することができる。好適な防腐剤は、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸ナトリウム、及び塩化ベンザルコニウムを含み得る。ある特定の実施形態において、２つ以上の防腐剤の混合物が使用される。防腐剤またはその混合物は、典型的には、全組成物の約０．０００１重量％～約２重量％の量で存在する。担体は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に記載されている。薬学的に許容される担体は、概して、使用する投与量及び濃度においてレシピエントには無毒であり、以下が含まれる（しかし、これらに限定されない）。緩衝剤、例えば、ホスフェート、シトレート、及び他の有機酸、アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤、防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール、アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びｍ－クレゾール）、低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン、親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン、アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン、単糖類、二糖類、及び他の炭水化物、例えば、グルコース、マンノース、またはデキストリン、キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ、糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトール、塩形成対イオン、例えば、ナトリウム、金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）、及び／または非イオン界面活性剤、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）。

【0195】

ある実施形態において緩衝剤が組成物に含まれる。好適な緩衝剤としては、例えば、クエン酸、クエン酸ナトリウム、リン酸、リン酸カリウム、及び様々な他の酸及び塩が挙げられる。ある特定の実施形態において、２つ以上の緩衝剤の混合物が使用される。緩衝剤またはその混合物は、典型的には、全組成物の約０．００１重量％～約４重量％の量で存在する。投与可能な薬学的組成物を調製する方法が知られている。例示的な方法は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ；２１ｓｔ ｅｄ．（Ｍａｙ １，２００５）により詳細に記載される。

【0196】

製剤は水溶液を含むことができる。製剤または組成物はまた、それぞれの活性が互いに悪影響を及ぼさない、細胞に相補的な活性を有するもの等の細胞で治療される特定の適応症、疾患、または病態に有用な２つ以上の活性成分を含有してもよい。このような活性成分は、意図される目的に有効な量で、組み合わせて好適に存在する。したがって、ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、他の薬学的に活性な薬剤または薬物、例えば、化学療法剤、例えば、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メトトトレキサート、パクリタキセル、リツキシマブ、ビンブラスチン、及び／またはビンクリスチンを更に含む。ある特定の実施形態における薬学的組成物は、疾患または病態を治療または予防するのに有効な量、例えば、治療的有効量または予防的有効量で細胞を含有する。ある特定の実施形態における治療的または予防的有効性は、治療対象の定期的評価によってモニタリングされる。所望の投与量を、細胞の単回のボーラス投与、細胞の複数回のボーラス投与、または細胞の持続注入投与によって送達することができる。

【0197】

製剤には、経口投与、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、経肺投与、経皮投与、筋肉内投与、鼻腔内投与、頬側投与、舌下投与、または坐剤投与のためのものが含まれる。ある実施形態において、細胞集団を非経口的に投与する。「非経口」という用語は、本明細書で使用される場合、静脈内、筋肉内、皮下、直腸内、膣内、及び腹腔内投与を含む。ある特定の実施形態において、細胞は、静脈内注射、腹腔内注射、または皮下注射による末梢全身性送達を使用して対象に投与される。

【0198】

ある特定の実施形態において、がんを治療するための方法は、白血病起源の改変細胞（例えば、下方調節されたＣＤ４７経路を含む白血病起源の改変細胞）を含む免疫原性組成物を投与することを含み、免疫原性組成物は、薬学的に許容される担体を更に含む。ある実施形態において、免疫原性組成物は皮内投与用に製剤化される。ある実施形態において、免疫原性組成物の投与は皮内である。ある実施形態において、免疫原性組成物は腹腔内投与用に製剤化される。ある実施形態において、免疫原性組成物の投与は腹腔内である。ある実施形態において、免疫原性組成物は腫瘍内投与用に製剤化される。ある実施形態において、免疫原性組成物の投与は腫瘍内である。

【0199】

ある実施形態において、免疫原性組成物を局所領域リンパ節投与用に製剤化される。ある実施形態において、免疫原性組成物の投与を局所領域リンパ節内に行う。ある実施形態において、局所領域リンパ節投与を卵巣癌の初期処置の間にまたはその後に行う。ある実施形態において、局所領域リンパ節投与を卵巣癌の初期処置の間にまたはその後に行い、初期処置には外科手術が含まれる。

【0200】

ある実施形態において、組成物は滅菌した液体調剤品として提供され、例えば、等張水溶液、懸濁液、エマルジョン、分散液、または粘性組成物であり、これらを、いくつかの態様において、選択したｐＨまで緩衝してもよい。液体調剤品は、通常、ゲル、他の粘性組成物、及び固体組成物よりも調製が容易である。追加的に、液体組成物は、特に注射によって、投与することが幾分より便利である。他方では、粘性組成物は、特定の組織とのより長い接触期間を提供するために、適切な粘度範囲内で製剤化することができる。液体または粘性組成物は、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）、及びそれらの好適な混合物を含有する溶媒または分散媒であってもよい担体を含んでもよい。

【0201】

無菌注射液は、細胞を溶媒、例えば無菌水、生理食塩水、グルコース、デキストロースなどの適当な担体、希釈剤、賦形剤と混和して取り込むことによって調製できる。組成物は、投与経路及び所望の調剤品に応じて、湿潤剤、分散剤、または乳化剤（例えば、メチルセルロース）、ｐＨ緩衝剤、ゲル化もしくは粘度向上添加剤、防腐剤、香味剤、及び／または色剤などの補助物質を含有することができる。いくつかの態様において、標準テキストを参考にして好適な調剤品を調製してもよい。インビボ投与用に用いるべき製剤は概して、滅菌である。滅菌は、例えば滅菌濾過膜を通した濾過によって、容易に行い得る。

【0202】

組成物の安定性及び無菌性を改善する様々な添加物（例えば、抗菌防腐剤、酸化防止剤、キレート剤、及び緩衝剤を含む）を加えることができる。微生物作用の防止は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、及びソルビン酸などの様々な抗菌剤及び抗真菌剤によって確実となり得る。注射可能な剤形の持続的吸収を、吸収を遅らせる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチン）を用いることによってもたらすことができる。

【0203】

本開示の薬学的組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、患者に過度に毒性であることなく、特定の患者、組成物、及び投与方法に対して所望の治療応答を達成するのに有効な量の活性成分を得るように変更することができる。選択した用量レベルは、使用する本開示の特定の組成物の活性、投与経路、投与時間、使用している特定の化合物の排泄速度、処置時間、他の薬剤、使用する特定の組成物と組み合わせて使用される化合物及び／または材料、年齢、性別、体重、症状、健康状態、及び処置している患者の既往歴、ならびに医術で良く知られている同様の要因、を含む様々な薬物動態学要因に依存する。本開示の組成物を、当該技術分野で良く知られている様々な方法のうちの１つ以上を用いて、１つ以上の投与経路を介して投与することができる。当業者には理解されるであろう通り、投与経路及び／または投与様式は、所望の結果に応じて変化するであろう。

【0204】

ある特定の実施形態において、組成物は、凍結保存剤（ＣＰＡ）を含む。細胞の凍結保存のための方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｃ．Ｂ．Ｍｏｒｒｉｓ，“Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅｓ”（２００７），ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ ３６８：Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｒｅｅｚｅ－Ｄｒｙｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２ｎｄ Ｅｄ．（Ｊ．Ｇ．Ｄａｙ ａｎｄ Ｇ． Ｎ． Ｓｔａｃｅｙ ｅｄｓ．），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，ｐｐ．２２７－２３６を参照されたく、これは全体が本明細書に取り込まれる。ある特定の実施形態において、ＣＰＡを含む組成物は、組成物内に含まれる材料（例えば、本明細書に記載される白血病起源の改変細胞）の構造的側面を保存するために、非常に低い温度を使用することを可能にする。概して、凍結保存及びＣＰＡの使用は、組成物の非結晶相での固化を可能にする。通常は液体であるＣＰＡは、凍結保存プロセスによる凍結傷害を軽減する。ＣＰＡは２つのカテゴリーに分類できる：（１）ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、グリセロール、及び１，２－プロパンジオール等の細胞膜透過性凍結保護剤、ならびに（２）２－メチル－２，４－ペンタンジオール等の非膜透過性凍結保護剤、ならびにポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルデンプン、及び様々な糖等のポリマー。好適なＣＰＡとしては、限定されないが、ＣＥＬＬＢＡＮＫＥＲ（登録商標）シリーズのＣＰＡ、ＣＲＹＯＳＴＯＲ（登録商標）シリーズのＣＰＡ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、エチレングリコール、グリセロール、トレハロース、プロピレングリコール等が挙げられる。更に、アルギン酸塩、ポリビニルアルコール、及びキトサンなどの生体材料を使用して、従来の低分子とともに氷晶の成長を妨げることができる。

【0205】

本明細書において言及または引用した論文、特許、及び特許出願、ならびに他の全ての文献及び電子的に利用可能な情報の内容は、それぞれの個々の刊行物が参照により組み込まれることを具体的及び個別に示す場合と同じ程度まで、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。出願人は、任意のそのような論文、特許、特許出願、または他の物理的文書及び電子文書からのありとあらゆる資料及び情報を本出願に物理的に組み込む権利を留保する。

【0206】

本発明を、その特定の実施形態を参照して説明してきたが、当業者は、本発明の真の主旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更が行われてもよく、均等物が置き換えられてもよいことを理解されたい。本明細書で開示した実施形態の範囲から逸脱することなく好適な均等物を使用して、本明細書に記載の方法の他の好適な改変及び適合を施してもよいことが、当業者には容易に明らかとなるであろう。また、特定の状態、材料、物質の組成、プロセス、単数または複数のプロセスステップを、本発明の目的、主旨、及び範囲に適応させるために、多くの修正が行われてもよい。全てのこのような改変は、添付の特許請求の範囲内であることが意図されている。ここである特定の実施形態を詳細に説明したが、これは例示のためにのみ含まれ、限定することを意図するものではない以下の実施例を参照することによってより明確に理解されるであろう。

【実施例】

【0207】

Ｆ．実験的実施例
実施例１：抗原提示細胞によるＤＣＰ－００１の処理
ＤＣＰ－００１は、細胞株ＤＣＯｎｅの分化及び成熟によって生成された成熟樹状細胞（ＤＣ）表現型を有する白血病起源の改変細胞を含む、同種異系細胞ベースのワクチンである。ＤＣＯｎｅは、２０１２年１１月１５日にＤＳＭＺに受託番号ＤＳＭＺ ＡＣＣ３１８９でブダペスト条約の条件の下で寄託される。寄託されたＤＣＯｎｅ細胞株から成熟細胞を得るプロセスは、例えばＥＰ２９３１８７８Ｂ１に説明されており、この文献の開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。

【0208】

ＤＣＰ－００１は、未成熟単球由来樹状細胞（ｉＭｏＤＣ）によってエンドサイトーシスされることを見出した。ＶＰＤ４５０染料を使用してｉＭｏＤＣを標識し、ＣＦＳＥ染料を使用してＤＣＰ－００１またはＤＣＯｎｅ前駆体を標識した。ＶＰＤ４５０標識ｉＭｏＤＣを、ＣＦＳＥ標識ＤＣＰ－００１またはＤＣＯｎｅ前駆体（１：１の比）と３７℃で４時間共培養した。次いで、細胞を、抗原提示細胞（ＡＰＣ）コンジュゲート抗ＣＤ２７４について、４℃で３０分間染色した。図１は、全ＡＰＣ陽性ｉＭｏＤＣ集団におけるＶＰＤ４５０／ＣＦＳＥ陽性集団として決定された、ｉＭｏＤＣによるＤＣＰ－００１またはＤＣＯｎｅ前駆体の取り込み率を示す。図１では、データは１６～２５の独立した実験を表しており、＊＊＊＊は、独立ｔ検定によって計算された統計的に有意な差を示し、ｐ＜０．０００１である。

【0209】

ＤＣＰ－００１もまた、末梢血中の抗原提示細胞によって取り込まれることが見出された。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ＣＦＳＥ標識ＤＣＰ－００１またはＤＣＯｎｅ前駆体と１：１の比で４時間共培養した。４時間の共培養後、細胞を、単球（ＣＤ１４^＋）、骨髄ＤＣ（ＣＤ１１ｃ^ｈｉ、ＨＬＡ－ＤＲ^＋、ＣＤ１４^－）、形質細胞様ＤＣ（ＣＤ３０４^＋、ＨＬＡ－ＤＲ^＋）、Ｔ細胞（ＣＤ３^＋）、Ｂ細胞（ＣＤ１９^＋）として同定した。取り込みを定量化するために、ＰＢＭＣの特定の亜集団におけるＶＰＤ４５０／ＣＦＳＥ陽性集団のパーセンテージを決定した。図２は、示されるように、ＰＢＭＣの各特定の亜集団によるＤＣＰ－００１またはＤＣＯｎｅ前駆体の取り込み率を示す。図２では、データは３つの独立した実験を表し、平均値±ＳＥＭとして表され、＊はＨｏｌｍ－Ｓｉｄａｋ法を使用した独立ｔ検定によって計算された統計的に有意な差を示し、ｐ＜０．０５であり、＊＊ｐ＜０．０１である。

【0210】

実施例２：ＤＣＰ－００１の処理におけるホスファチジルセリン（ＰＳ）及びＣＤ４７の役割
抗原提示細胞によるＤＣＰ－００１の処理に関与する経路を解明するために、宿主ｉＭｏＤＣによるＤＣＰ－００１またはＤＣＯｎｅ前駆体（ｐｒｏｇ）の取り込みにおけるスカベンジャー受容体の役割を調査した。スカベンジャー受容体は、ｉＭｏＤＣによるＤＣＰ－００１の取り込みにおいて冗長であることが見出された。実施例１に記載のｉＭｏＤＣ取り込みアッセイ中に、ポリイノシン酸（ｐｏｌｙＩ、５０μｇ／ｍＬ）、抗ＣＤ３６抗体（５０μｇ／ｍＬ）、抗ＣＤ２０４抗体（５０μｇ／ｍＬ）、または抗ＬＯＸ－１抗体（５０μｇ／ｍＬ）から選択される薬剤を添加した。図３は、各薬剤の存在下でのｉＭｏＤＣによるＤＣＰ－００１またはＤＣＯｎｅ前駆体の取り込み率を示す。図３では、データは３つの独立した実験を表し、平均±ＳＥＭとして表される。

【0211】

ＤＣＰ－００１及びＤＣＯｎｅ前駆体の表面上のホスファチジルセリン（ＰＳ、図４Ａ）、カルレチクリン（ＣＲＴ、図４Ｂ）、及びＣＤ４７（図４Ｃ）の発現を、フローサイトメトリーによって決定した。ＤＣＰ－００１がＰＳ、ＣＲＴ、ＣＤ４７を発現することが分かった。図４Ａ～図４Ｃでは、データは、ＤＣＰ－００１及びＤＣＯｎｅ前駆体の４～６バッチから得られた値を表し、平均±ＳＥＭとして表される。図４Ａにおいて、＊＊＊は、独立ｔ検定によって計算された、ｐ＜０．００１の統計的に有意な差を示す。

【0212】

抗原提示細胞によるＤＣＰ－００１の取り込みにおけるＰＳ及びＣＲＴ（「私を食べて」シグナル）の役割を評価するために、精製された組換えアネキシンＶまたはＣＲＴ特異的抗体を、ＤＣＰ－００１またはＤＣＯｎｅ前駆体と共培養したｉＭｏＤＣに添加した（それぞれ、図５Ａ及び図５Ｂ）。図５Ａに示すように、共培養へのアネキシンＶの添加は、ＤＣＰ－００１の取り込み率の有意な減少をもたらした。図５Ａでは、データは、３～４個の独立した実験を表し、平均値±ＳＥＭとして表され、＊は、独立ｔ検定によって計算された、ｐ＜０．０５の統計的に有意な差を示す。図５Ｂに示すように、共培養へのＣＲＴ特異的抗体の添加は、ＤＣＰ－００１の取り込みの正規化されたパーセンテージの有意な減少をもたらした。取り込みの正規化されたパーセンテージは、対照に対してＣＲＴ特異的抗体の存在下で取り込みを正規化することによって計算された（抗体の不在下では、１００％に設定された）。図５Ｂでは、データは、３～４個の独立した実験を表し、平均値±ＳＥＭとして表され、＊＊は、独立ｔ検定によって計算された、ｐ＜０．０１の統計的に有意な差を示す。

【0213】

抗原提示細胞によるＤＣＰ－００１の取り込みにおける「私を食べないで」シグナルＣＤ４７の役割を評価するために、ＣＤ４７を標的とするモノクローナル抗体を、ＤＣＰ－００１またはＤＣＯｎｅ前駆体と共培養したｉＭｏＤＣに添加した（図５Ｂ）。図５Ｂに示すように、ＣＤ４７の遮断は、ＤＣＰ－００１及びＤＣＯｎｅ前駆体の両方の取り込みの増加をもたらした。図５Ｂでは、データは、３～４個の独立した実験を表し、平均値±ＳＥＭとして表され、＊は、独立ｔ検定によって計算された、ｐ＜０．０５の統計的に有意な差を示し、＊＊ｐ＜０．００５である。

【0214】

実施例３：ＤＣＰ－００１の免疫原性
ＤＣＰ－００１及びＤＣＯｎｅ前駆体（ｐｒｏｇ）を、ＰＢＭＣ刺激アッセイにおいて共培養によって６日間試験し、その後、上清を収集して、Ｌｕｍｉｎｅｘプラットフォーム上で多重分析を行った。図６Ａ～図６Ｈに示すように、ＤＣＰ－００１は、ＰＢＭＣにおける様々な炎症誘発性サイトカイン（ＩＬ－１β、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、及びＩＬ－６）ならびにケモカイン（ＩＬ－８及びＲＡＮＴＥＳ）の分泌を刺激することが見出された。データは、１２の独立した実験を表し、平均値±ＳＥＭとして表す。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【国際調査報告】