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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-03-12
(54)【発明の名称】抗セラミド抗体による創傷治癒の強化
(51)【国際特許分類】
A61K 39/395 20060101AFI20240305BHJP
A61P 17/02 20060101ALI20240305BHJP
C07K 16/18 20060101ALI20240305BHJP
A61P 3/10 20060101ALN20240305BHJP
【ＦＩ】
A61K39/395 N
A61P17/02
C07K16/18 ZNA
A61P3/10
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023557734
(86)(22)【出願日】2022-03-15
(85)【翻訳文提出日】2023-11-09
(86)【国際出願番号】 US2022020385
(87)【国際公開番号】W WO2022197703
(87)【国際公開日】2022-09-22
(31)【優先権主張番号】63/161,758
(32)【優先日】2021-03-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】500213834
【氏名又は名称】メモリアル スローン－ケタリング キャンサー センター
(71)【出願人】
【識別番号】508007514
【氏名又は名称】ボード オブ トラスティーズ オブ ミシガン ステイト ユニバーシティ
【氏名又は名称原語表記】ＢＯＡＲＤ ＯＦ ＴＲＵＳＴＥＥＳ ＯＦ ＭＩＣＨＩＧＡＮ ＳＴＡＴＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ
(71)【出願人】
【識別番号】522023761
【氏名又は名称】メモリアル ホスピタル フォー キャンサー アンド アライド ディジージズ
(71)【出願人】
【識別番号】399026731
【氏名又は名称】スローン － ケタリング・インスティテュート・フォー・キャンサー・リサーチ
(74)【代理人】
【識別番号】100094569
【弁理士】
【氏名又は名称】田中 伸一郎
(74)【代理人】
【識別番号】100103610
【弁理士】
【氏名又は名称】▲吉▼田 和彦
(74)【代理人】
【識別番号】100109070
【弁理士】
【氏名又は名称】須田 洋之
(74)【代理人】
【識別番号】100119013
【弁理士】
【氏名又は名称】山崎 一夫
(74)【代理人】
【識別番号】100123777
【弁理士】
【氏名又は名称】市川 さつき
(74)【代理人】
【識別番号】100111796
【弁理士】
【氏名又は名称】服部 博信
(74)【代理人】
【識別番号】100123766
【弁理士】
【氏名又は名称】松田 七重
(74)【代理人】
【識別番号】100136249
【弁理士】
【氏名又は名称】星野 貴光
(72)【発明者】
【氏名】コールスニック リチャード
(72)【発明者】
【氏名】ブシク ジュリア
【テーマコード（参考）】
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB11
4C085DD62
4C085EE01
4C085GG01
4C085GG02
4C085GG10
4H045AA11
4H045AA30
4H045BA09
4H045DA76
4H045EA20
4H045EA28
4H045FA74
(57)【要約】
本開示は、創傷の治癒を改善又は加速するための組成物及び方法を提供する。様々な実施形態では、本方法は、抗セラミド抗体及び抗体断片の使用を含む。いくつかの実施形態では、創傷は、慢性創傷である。いくつかの実施形態では、創傷は、糖尿病性創傷である。
【選択図】図１Ａ
【選択図】図１Ａ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
創傷を治療又は予防することを必要とする対象においてそれを行う方法であって、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項2】
創傷の治癒を強化することを必要とする対象においてそれを行う方法であって、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項3】
前記創傷が、慢性創傷又は糖尿病性創傷である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項4】
前記創傷が、慢性創傷である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項5】
前記創傷が、糖尿病性創傷である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項6】
投与の経路が、局所投与、病巣内投与、皮下投与、経皮投与、筋肉内投与、静脈内投与、及び非経口投与からなる群から選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記投与の経路が、局所投与である、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
前記投与の経路が、静脈内投与である、請求項６に記載の方法。
【請求項9】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、単回用量として投与される、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、２回以上の用量で投与される、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
連続用量の投与が、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、又は少なくとも１週間離される、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
前記投与の持続時間が、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、又は少なくとも４週間である、請求項１０又は１１に記載の方法。
【請求項13】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、創傷治癒の炎症段階の間に投与される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、創傷治癒の増殖段階の間に投与される、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、創傷治癒の再形成段階の間に投与される、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、抗体である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記方法が、対照創傷と比較して、創傷治癒を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、又は少なくとも７０％強化する、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
創傷治癒の強化が、創傷後１０日目、２０日目、又は３０日目の前記創傷の全表面積の死亡によって測定される、請求項１８に記載の方法。
【請求項20】
前記創傷治癒の強化が、創傷後１０日目に測定される、請求項１９に記載の方法。
【請求項21】
前記創傷治癒の強化が、前記創傷の全表面積の５０％、７０％、９０％、９５％、又は１００％の減少を達成するのにかかる時間の死亡によって測定される、請求項１８に記載の方法。
【請求項22】
前記創傷治癒の強化が、前記創傷の全表面積の９５％の減少で測定される、請求項２１に記載の方法。
【請求項23】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、前記創傷の１つ以上の症状の発症前に投与される、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項24】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、前記創傷の１つ以上の症状の発症後に投与される、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項25】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、ａ）前記ＶHが、ＧＹＴＦＴＤＨＴＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）と、ＹＮＹＰＲＤＧＳＴＫＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２と、ＧＦＩＴＴＶＶＰＳＡＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、を含み、
ｂ）前記ＶLが、ＲＡＳＫＳＩＳＫＹＬＡ（配列番号４）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）と、ＳＧＳＴＬＱＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２と、ＱＱＨＮＥＹＰＷＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項26】
前記ＶHが、配列番号７のアミノ酸配列を含み、前記ＶLが、配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項27】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、６Ｂ５抗体である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、６Ｂ５ｓｃＦｖである、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項29】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、ａ）前記ＶHが、ＮＹＷＭＨ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）と、ＡＩＹＰＧＤＳＤＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２と、ＬＹＹＧＹＤ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、を含み、
ｂ）前記ＶLが、ＫＳＳＱＳＬＩＤＳＤＧＫＴＦＬＮ（配列番号３６）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）と、ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号３７）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２と、ＷＱＧＴＨＦＰＹＴ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
前記ＶHが、配列番号３９のアミノ酸配列を含み、前記ＶLが、配列番号４０のアミノ酸配列を含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項31】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、２Ａ２抗体である、請求項１～２４及び２９～３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、２Ａ２ｓｃＦｖである、請求項１～２４及び２９～３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項33】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、ａ）前記ＶHが、配列番号１及び４３から選択されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）と、配列番号４４～４７から選択されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＨＣＤＲ２と、ＧＦＩＴＴＶＶＰＳＡＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＨＣＤＲ３と、を含み、
ｂ）前記ＶLが、ＲＡＳＫＳＩＳＫＹＬＡ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）と、ＳＧＳＴＬＱＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＬＣＤＲ２と、ＱＱＨＮＥＹＰＷＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＬＣＤＲ３と、を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項34】
前記ＨＣＤＲ１が、ＧＹＴＦＴＤＨＴＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＨＣＤＲ２が、ＹＮＹＰＲＤＧＳＴＫＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項35】
前記ＨＣＤＲ１が、ＧＹＴＦＴＤＨＴＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＨＣＤＲ２が、ＹＮＹＰＲＥＧＳＴＫＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項36】
前記ＨＣＤＲ１が、ＧＹＴＦＴＤＨＴＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＨＣＤＲ２が、ＹＮＹＰＲＤＶＳＴＫＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４６）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項37】
前記ＨＣＤＲ１が、ＧＹＴＦＴＤＨＴＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＨＣＤＲ２が、ＹＮＹＰＲＤＧＳＴＫＹＡＥＫＦＱＧ（配列番号４７）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項38】
前記ＨＣＤＲ１が、ＧＹＴＦＴＤＨＴＭＨ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＨＣＤＲ２が、ＹＮＹＰＲＤＧＳＴＫＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項39】
前記ＨＣＤＲ１が、ＧＹＴＦＴＤＨＴＭＨ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＨＣＤＲ２が、ＹＮＹＰＲＥＧＳＴＫＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項40】
前記ＨＣＤＲ１が、ＧＹＴＦＴＤＨＴＭＨ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＨＣＤＲ２が、ＹＮＹＰＲＤＶＳＴＫＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４６）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項41】
前記ＨＣＤＲ１が、ＧＹＴＦＴＤＨＴＭＨ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＨＣＤＲ２が、ＹＮＹＰＲＤＧＳＴＫＹＡＥＫＦＱＧ（配列番号４７）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項42】
前記ＶＨが、配列番号４８に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＶＬが、配列番号５３に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項43】
前記ＶＨが、配列番号４８に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＶＬが、配列番号５４に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項44】
前記ＶＨが、配列番号４８に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＶＬが、配列番号５５に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項45】
前記ＶＨが、配列番号４９に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＶＬが、配列番号５３に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項46】
前記ＶＨが、配列番号４９に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＶＬが、配列番号５４に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項47】
前記ＶＨが、配列番号４９に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＶＬが、配列番号５５に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項48】
前記ＶＨが、配列番号５０に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＶＬが、配列番号５３に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項49】
前記ＶＨが、配列番号５０に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＶＬが、配列番号５４に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項50】
前記ＶＨが、配列番号５０に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＶＬが、配列番号５５に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項51】
前記ＶＨが、配列番号５１に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＶＬが、配列番号５３に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項52】
前記ＶＨが、配列番号５１に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＶＬが、配列番号５４に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項53】
前記ＶＨが、配列番号５１に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＶＬが、配列番号５５に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項54】
前記ＶＨが、配列番号５２に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＶＬが、配列番号５３に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項55】
前記ＶＨが、配列番号５２に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＶＬが、配列番号５４に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項56】
前記ＶＨが、配列番号５２に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、前記ＶＬが、配列番号５５に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、請求項３３に記載の方法。
【請求項57】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、ヒト化６Ｂ５（ｈ６Ｂ５）抗体である、請求項３３～５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項58】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、ｈ６Ｂ５ｓｃＦｖである、請求項３３～５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項59】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、前記ＶHが、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、前記ＶLが、配列番号５３のアミノ酸配列を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項60】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、前記ＶHが、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、前記ＶLが、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項61】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、前記ＶHが、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記ＶLが、配列番号５３のアミノ酸配列を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項62】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、前記ＶHが、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、前記ＶLが、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項63】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、前記ＶHが、配列番号５０のアミノ酸配列を含み、前記ＶLが、配列番号５３のアミノ酸配列を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項64】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、前記ＶHが、配列番号５０のアミノ酸配列を含み、前記ＶLが、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項65】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、前記ＶHが、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、前記ＶLが、配列番号５３のアミノ酸配列を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項66】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、前記ＶHが、配列番号５２のアミノ酸配列を含み、前記ＶLが、配列番号５３のアミノ酸配列を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項67】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、ヒト化抗体である、請求項５９～６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項68】
前記抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、ヒト化ｓｃＦｖである、請求項５９～６６のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月１６日に出願された継続米国仮出願第６３／１６１，７５８号であり、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年３月１６日に出願された継続米国仮出願第６３／１６１，７５８号であり、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
配列表に関する記載
本出願に関連する配列表は、紙コピーの代わりにテキスト形式で提供され、参照により本明細書に組み込まれる。配列表のコンピュータ可読形式のコピー：ファイル名：ＣＥＲＡ＿０２０＿００ＵＳ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、記録日：２０２１年３月１６日、ファイルサイズ約３１．７キロバイト。
本出願に関連する配列表は、紙コピーの代わりにテキスト形式で提供され、参照により本明細書に組み込まれる。配列表のコンピュータ可読形式のコピー：ファイル名：ＣＥＲＡ＿０２０＿００ＵＳ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、記録日：２０２１年３月１６日、ファイルサイズ約３１．７キロバイト。
【0003】
本開示は、創傷を治療若しくは予防するための、又は創傷治癒、例えば、糖尿病性創傷治癒の強化のための抗セラミド組成物、及びその使用方法に関する。
【背景技術】
【0004】
糖尿病は、米国の２９１０万人を含む、世界中の３億４０００万人が罹患している。糖尿病患者の合併症は、創傷の治癒不能であり、その結果、２０１０年に米国で７３，０００回の下肢切断が行われた。
【0005】
糖尿病患者では、高血糖は、長期にわたる慢性炎症、循環不良、及び神経障害の引き金となる。これらの因子の組み合わせは、創傷治癒プロセスを遅らせ、更には停止させる。この分野での広範な研究にもかかわらず、糖尿病性創傷の治癒障害の根底にある機構は多因子であり、あまり理解されていないままである。
【0006】
糖尿病性創傷の標準的な治療としては、創傷の清拭、抗生物質による感染の治療、及び下肢からの体重圧の低減又は排除が挙げられる。しかしながら、創傷治癒を加速するための、特に糖尿病性創傷のための、安全かつ効果的な治療の必要性は未だ満たされていない。
【図面の簡単な説明】
【0007】
【図1A】経時的な創傷治癒の代表的な写真を示す。各行は、示された実験群における特定の病巣部位の画像を示す。
【図1B】経時的な創傷治癒の代表的な写真を示す。各行は、示された実験群における特定の病巣部位の画像を示す。
【図2】経時的な各実験群における創傷治癒の平均速度を示す。Ｙ軸は、創傷のサイズを示し、各創傷の開始時のサイズを１として正規化する。Ｘ軸は、日数を示す。「Ｄ＋Ａ２Ａ」は、糖尿病性＋２Ａ２群であり、「Ｃ＋Ａ２Ａ」は、対照＋２Ａ２群である。
【図4】経時的な各実験群における創傷治癒の平均速度を示す。Ｙ軸は、創傷のサイズを示し、各創傷の開始時のサイズを１として正規化する。Ｘ軸は、日数を示す。
【図5A】それぞれ各実験群について、マウスが２５％の治癒を達成するのにかかった平均日数を示す棒グラフである。
【図5B】それぞれ各実験群について、マウスが５０％の治癒を達成するのにかかった平均日数を示す棒グラフである。
【図5C】それぞれ各実験群について、マウスが７５％の治癒を達成するのにかかった平均日数を示す棒グラフである。
【図5D】それぞれ各実験群について、マウスが９０％の治癒を達成するのにかかった平均日数を示す棒グラフである。
【発明の概要】
【0008】
一態様では、本開示は、創傷を治療又は予防することを必要とする対象においてそれを行う方法であって、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片を対象に投与することを含む、方法を提供する。
【0009】
一態様では、本開示は、創傷の治癒を強化することを必要とする対象においてそれを行う方法であって、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片を対象に投与することを含む、方法を提供する。
【0010】
いくつかの実施形態では、創傷は、慢性創傷又は糖尿病性創傷である。いくつかの実施形態では、創傷は、慢性創傷である。いくつかの実施形態では、創傷は、糖尿病性創傷である。
【0011】
いくつかの実施形態では、投与の経路は、局所投与、病巣内投与、皮下投与、経皮投与、筋肉内投与、静脈内投与、及び非経口投与からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、投与の経路は、局所投与である。いくつかの実施形態では、投与の経路は、静脈内投与である。
【0012】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、単回用量として投与される。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、２回以上の用量で投与される。いくつかの実施形態では、連続用量の投与は、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、又は少なくとも１週間離される。いくつかの実施形態では、投与の持続時間は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、又は少なくとも４週間である。
【0013】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、創傷治癒の炎症段階の間に投与される。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、創傷治癒の増殖段階の間に投与される。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、創傷治癒の再形成段階の間に投与される。
【0014】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、抗体である。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。
【0015】
いくつかの実施形態では、本方法は、対照創傷と比較して、創傷治癒を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、又は少なくとも７０％強化する。いくつかの実施形態では、創傷治癒の強化は、創傷後１０日目、２０日目、又は３０日目の創傷の全表面積の死亡によって測定される。いくつかの実施形態では、創傷治癒の強化は、創傷後１０日目に測定される。いくつかの実施形態では、創傷治癒の強化は、創傷の全表面積の５０％、７０％、９０％、９５％、又は１００％の減少を達成するのにかかる時間の死亡によって測定される。いくつかの実施形態では、創傷治癒の強化は、創傷の全表面積の９５％の減少で測定される。
【0016】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、創傷の１つ以上の症状の発症前に投与される。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、創傷の１つ以上の症状の発症後に投与される。
【0017】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、ＶHは、ＧＹＴＦＴＤＨＴＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）と、ＹＮＹＰＲＤＧＳＴＫＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２と、ＧＦＩＴＴＶＶＰＳＡＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、を含み、ＶLは、ＲＡＳＫＳＩＳＫＹＬＡ（配列番号４）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）と、ＳＧＳＴＬＱＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２と、ＱＱＨＮＥＹＰＷＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む。いくつかの実施形態では、ＶHは、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＶLは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、６Ｂ５抗体である。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、６Ｂ５ｓｃＦｖである。
【0018】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、ＶHは、ＮＹＷＭＨ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）と、ＡＩＹＰＧＤＳＤＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２と、ＬＹＹＧＹＤ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、を含み、ＶLは、ＫＳＳＱＳＬＩＤＳＤＧＫＴＦＬＮ（配列番号３６）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）と、ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号３７）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２と、ＷＱＧＴＨＦＰＹＴ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む。いくつかの実施形態では、ＶHは、配列番号３９のアミノ酸配列を含み、ＶLは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、２Ａ２抗体である。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、２Ａ２ｓｃＦｖである。
【0019】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、ＶHは、配列番号１及び４３から選択されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）と、配列番号４４～４７から選択されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＨＣＤＲ２と、ＧＦＩＴＴＶＶＰＳＡＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＨＣＤＲ３と、を含み、ＶLは、ＲＡＳＫＳＩＳＫＹＬＡ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）と、ＳＧＳＴＬＱＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＬＣＤＲ２と、ＱＱＨＮＥＹＰＷＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＬＣＤＲ３と、を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は、ＧＹＴＦＴＤＨＴＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＨＣＤＲ２は、ＹＮＹＰＲＤＧＳＴＫＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は、ＧＹＴＦＴＤＨＴＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＨＣＤＲ２は、ＹＮＹＰＲＥＧＳＴＫＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は、ＧＹＴＦＴＤＨＴＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＨＣＤＲ２は、ＹＮＹＰＲＤＶＳＴＫＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４６）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は、ＧＹＴＦＴＤＨＴＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＨＣＤＲ２は、ＹＮＹＰＲＤＧＳＴＫＹＡＥＫＦＱＧ（配列番号４７）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は、ＧＹＴＦＴＤＨＴＭＨ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＨＣＤＲ２は、ＹＮＹＰＲＤＧＳＴＫＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は、ＧＹＴＦＴＤＨＴＭＨ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＨＣＤＲ２は、ＹＮＹＰＲＥＧＳＴＫＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は、ＧＹＴＦＴＤＨＴＭＨ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＨＣＤＲ２は、ＹＮＹＰＲＤＶＳＴＫＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４６）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＨＣＤＲ１は、ＧＹＴＦＴＤＨＴＭＨ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＨＣＤＲ２は、ＹＮＹＰＲＤＧＳＴＫＹＡＥＫＦＱＧ（配列番号４７）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号４８に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬは、配列番号５３に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号４８に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬは、配列番号５４に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号４８に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬは、配列番号５５に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号４９に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬは、配列番号５３に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号４９に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬは、配列番号５４に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号４９に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬは、配列番号５５に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号５０に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬは、配列番号５３に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号５０に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬは、配列番号５４に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号５０に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬは、配列番号５５に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号５１に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬは、配列番号５３に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号５１に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬは、配列番号５４に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号５１に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬは、配列番号５５に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号５２に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬは、配列番号５３に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号５２に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬは、配列番号５４に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号５２に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬは、配列番号５５に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
【0020】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、ヒト化６Ｂ５（ｈ６Ｂ５）抗体である。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、ｈ６Ｂ５ｓｃＦｖである。
【0021】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、ＶHは、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、ＶLは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、ＶHは、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、ＶLは、配列番号５５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、ＶHは、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、ＶLは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、ＶHは、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、ＶLは、配列番号５４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、ＶHは、配列番号５０のアミノ酸配列を含み、ＶLは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、ＶHは、配列番号５０のアミノ酸配列を含み、ＶLは、配列番号５４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、ＶHは、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、ＶLは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、可変重鎖（ＶH）及び可変軽鎖（ＶL）を含み、ＶHは、配列番号５２のアミノ酸配列を含み、ＶLは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、ヒト化ｓｃＦｖである。
【発明を実施するための形態】
【0022】
概要
本開示は、創傷治癒を強化するための組成物及び方法に関する。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体及びその抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ）の組成物、並びに創傷の治療又は予防における使用方法が提供される。いくつかの実施形態では、創傷は、慢性創傷である。いくつかの実施形態では、創傷は、糖尿病性創傷である。かかる組成物及び方法は、以前に糖尿病性創傷の別の治療に失敗した患者において糖尿病性創傷の治療に使用され得る。
本開示は、創傷治癒を強化するための組成物及び方法に関する。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体及びその抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ）の組成物、並びに創傷の治療又は予防における使用方法が提供される。いくつかの実施形態では、創傷は、慢性創傷である。いくつかの実施形態では、創傷は、糖尿病性創傷である。かかる組成物及び方法は、以前に糖尿病性創傷の別の治療に失敗した患者において糖尿病性創傷の治療に使用され得る。
【0023】
定義
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈により明らかにそうではないと指示されない限り、複数の参照を含む。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈により明らかにそうではないと指示されない限り、複数の参照を含む。
【0024】
本明細書で使用されるように、「及び／又は」という用語は、別段の指定がない限り、「及び」又は「又は」のいずれかを意味するように本開示で使用される。
【0025】
本明細書全体にわたって、文脈上他に要求されない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という語句、又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」若しくは「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という変形語は、述べられた要素若しくは整数、又は要素若しくは整数の群を包含するが、任意の他の要素若しくは整数、又は要素若しくは整数の群を除外しないことを暗に示すことが理解されるであろう。
【0026】
本出願で使用される場合、「約」及び「およそ」という用語は、同等語として使用される。本出願で使用される任意の数字は、約／およその有無にかかわらず、関連技術分野の当業者によって理解される任意の通常の変動をカバーすることを意味する。特定の実施形態では、「およそ」又は「約」という用語は、別段の記載がない限り、又は文脈から明らかでない限り（そのような数値が可能な値の１００％を超えるか、又は可能な値の０％未満である場合を除く）、記載された参照値のいずれかの（それよりも大きいか、それよりも小さい）方向に１０％以下に入る値の範囲を指す。
【0027】
「試料」という用語は、分析及び／又は修飾を受ける生物学的組成物（例えば、細胞又は組織の一部）を指す。いくつかの実施形態では、試料は、対象から直接得られるという点で「一次試料」であり、いくつかの実施形態では、「試料」は、例えば、特定の成分を除去するため、及び／又は目的の特定の構成成分を単離若しくは精製するための一次試料の処理の結果である。
【0028】
「対象」という用語は、例えば、哺乳動物などの動物を含む。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、霊長類である。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、ウシ（ｃａｔｔｌｅ）、ヒツジ、ヤギ、ウシ（ｃｏｗ）、ブタなどのような家畜、又はイヌ及びネコなどの飼育動物である。いくつかの実施形態では（例えば、特に研究の文脈において）、対象は、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ハムスター）、ウサギ、霊長類、又は近交系ブタなどのブタである。本明細書では、対象及び患者という用語は、互換的に使用される。いくつかの実施形態では、対象は、新生児、若年者、又は成人であり得る。哺乳動物対象が特に興味深い。本方法で治療され得る哺乳動物種には、イヌ及びネコ、ウマ、ウシ、ヒツジなど、並びに霊長類、特にヒトが含まれる。動物モデル、特に小型哺乳動物（例えば、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギなど）は、実験研究のために使用され得る。
【0029】
本明細書で使用される場合、「治療」、「治療すること」、又は「緩和すること」という用語は、治療的治療又は予備的／予防的治療のいずれかを指す。治療を受ける個体における疾患の少なくとも１つの症状が改善するか、又は治療が個体における進行性疾患の悪化を遅らせるか、又は追加の関連疾患の発症を予防することができる場合、治療は、治療的である。
【0030】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、特定の生理学的効果をもたらすために必要な薬剤又は組成物の量を指す。特定の薬剤の有効量は、質量／体積、細胞の数／体積、粒子／体積、（薬剤の質量）／（対象の質量）、細胞の数／（対象の質量）、又は粒子／（対象の質量）など、薬剤の性質に基づいて多様な方法で表され得る。特定の薬剤の有効量はまた、半数効果濃度（ＥＣ50）として表されてもよく、これは、参照レベルと最大応答レベルとの間の中間値である特定の生理学的応答の大きさをもたらす薬剤の濃度を指す。
【0031】
「抗体」という用語は、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の可変領域に位置する少なくとも１つのエピトープ認識部位を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、又はポリペプチドなどの特異的標的に結合することができるＩｇ分子を指す。本明細書で使用される場合、この用語は、無傷のポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体、及びその抗原結合断片を包含する。例えば、天然免疫グロブリン分子は、２つの重鎖ポリペプチド及び２つの軽鎖ポリペプチドから構成される。重鎖ポリペプチドの各々は、重鎖ポリペプチドと軽鎖ポリペプチドとの間の鎖間ジスルフィド結合によって軽鎖ポリペプチドと会合して、２つのヘテロ二量体タンパク質又はポリペプチド（すなわち、２つの異種ポリペプチド鎖から構成されるタンパク質）を形成する。次いで、２つのヘテロ二量体タンパク質は、重鎖ポリペプチド間の追加の鎖間ジスルフィド結合によって会合して、免疫グロブリンタンパク質又はポリペプチドを形成する。
【0032】
本明細書で使用される「抗原結合断片」という用語は、目的の抗原の少なくとも１つのエピトープに結合する免疫グロブリン重鎖及び／又は軽鎖の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むポリペプチド断片を指す。この点で、本明細書に記載の抗体の抗原結合断片は、セラミドに特異的に結合する抗体からの可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）配列の１、２、３、４、５、又は６つ全てのＣＤＲを含み得る。抗原結合断片としては、全長抗体の一部、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆｖ断片、ミニボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、抗体断片から形成される多重特異性抗体、及び必要な特異性の抗原結合部位又は断片を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された構成などの一般にその抗原結合又は可変領域を含むタンパク質が挙げられる。本開示の特定の実施形態では、無傷の抗体ではなく、抗原結合断片を使用して、組織貫通又は腫瘍貫通を増加させる。他の実施形態では、抗原結合断片は、血清半減期を増加させるように更に修飾される。
【0033】
「Ｆｃ領域」又は「Ｆｃドメイン」は、細胞上のＦｃ受容体及び／又は補体のＣ１ｑ構成成分に結合することができ、それによって抗体のエフェクター機能を媒介する抗体の部分に対応するか、又はそれに由来するポリペプチド配列を指す。Ｆｃは、タンパク質結晶を容易に形成する抗体の断片である「結晶性断片」を表す。タンパク質分解消化によって最初に記載された異なるタンパク質断片は、免疫グロブリンタンパク質の全体的な一般構造を定義することができる。文献で元々定義されているように、Ｆｃ領域は、ジスルフィド結合によって会合され、各々がヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含む２つのポリペプチドを含むホモ二量体タンパク質である。しかしながら、より最近では、この用語は、ＣＨ３、ＣＨ２、及び第２のそのような鎖とジスルフィド連結二量体を形成するのに十分なヒンジの少なくとも一部からなる一本鎖モノマー構成成分に適用されている。したがって、文脈に応じて、「Ｆｃ領域」又は「Ｆｃドメイン」という用語の使用は、本明細書では、二量体形態、又は二量体タンパク質を形成するために会合する個々のモノマーのいずれかを指す。免疫グロブリンの構造及び機能の概説については、Ｐｕｔｎａｍ，Ｔｈｅ Ｐｌａｓｍａ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｖｏｌ．Ｖ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８７），ｐｐ．４９－１４０、及びＰａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１６９－２１７，１９９４を参照されたい。本明細書で使用される場合、Ｆｃドメインという用語は、天然に存在する配列のバリアントを含む。
【0034】
「免疫グロブリン定常領域」又は「定常領域」という用語は、免疫グロブリン（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）の１つ以上の定常ドメインの一部又は全てに対応するか、又はそれらに由来するペプチド又はポリペプチド配列を指す。特定の実施形態では、定常領域は、ＣＨ１ドメインを含まない。特定の実施形態では、定常領域を構成する定常ドメインは、ヒトである。
【0035】
「軽鎖可変領域」（「軽鎖可変ドメイン」又は「ＶＬ」とも称される）及び「重鎖可変領域」（「重鎖可変ドメイン」又は「ＶＨ」とも称される）という用語は、それぞれ、抗体軽鎖及び重鎖からの可変結合領域を指す。可変結合領域は、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）及び「フレームワーク領域」（ＦＲ）として知られる、別個の明確に定義された部分領域で構成される。
【0036】
「免疫グロブリン軽鎖定常領域」（「軽鎖定常領域」又は「ＣＬ」とも称される）という用語は、抗体軽鎖からの定常領域である。
【0037】
「免疫グロブリン重鎖定常領域」（「重鎖定常領域」又は「ＣＨ」とも称される）という用語は、抗体重鎖からの定常領域を指す。ＣＨは、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ）、又はＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４ドメイン（ＩｇＥ、ＩｇＭ）内の抗体アイソタイプに応じて、更に分割可能である。
【0038】
「Ｆ（ａｂ）」という用語は、酵素パパインによるＩｇＧ分子のタンパク質分解切断から生じるタンパク質断片のうちの２つを指す。各Ｆ（ａｂ）は、ＶＨ鎖及びＶＬ鎖の共有ヘテロ二量体を含み、無傷の抗原結合部位を含む。各Ｆ（ａｂ）は、一価の抗原結合断片である。「Ｆａｂ」という用語は、Ｆ（ａｂ’）２に由来する断片を指し、Ｆｃの小部分を含有し得る。各Ｆａｂ’断片は、一価の抗原結合断片である。
【0039】
「Ｆ（ａｂ’）２」という用語は、酵素ペプシンによるタンパク質分解切断によって生成されるＩｇＧのタンパク質断片を指す。各Ｆ（ａｂ’）２断片は、２つのＦ（ａｂ’）断片を含み、したがって、二価の抗原結合断片である。
【0040】
「Ｆｄ断片」は、ＶＨ及びＣＨ１ドメインを含む。
【0041】
「Ｆｖ断片」は、天然抗体分子の抗原認識及び結合能力の多くを保持するが、Ｆａｂ内に含まれるＣＨ１及びＣＬドメインを欠く抗原結合部位を含む非共有結合性ＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体を指す。Ｉｎｂａｒ ｅｔ ａｌ．（１９７２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ６９：２６５９－２６６２、Ｈｏｃｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９７６）Ｂｉｏｃｈｅｍ１５：２７０６－２７１０、及びＥｈｒｌｉｃｈ ｅｔ ａｌ．（１９８０）Ｂｉｏｃｈｅｍ１９：４０９１－４０９６。いくつかの実施形態では、Ｆｖ断片は、ＩｇＭの優先的なタンパク質分解切断、及びまれに生じるＩｇＧ又はＩｇＡ免疫グロブリン分子によって産生され得る。しかしながら、Ｆｖ断片は、当該技術分野で既知の組換え技術を使用して、より一般的に誘導される。
【0042】
「ｄＡｂ断片」（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４ ５４６，１９８９）は、ＶＨドメインを含む。
【0043】
「一本鎖単鎖抗体」又は「ｓｃＦｖ」は、免疫グロブリンの重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）の融合タンパク質であり、１０～約２５アミノ酸の短いリンカーペプチドで連結される。リンカーは、柔軟性のためにグリシン、溶解性のためにセリン又はトレオニンが豊富であってもよく、ＶＨのＮ末端とＶＬのＣ末端とを接続してもよく、又はその逆を接続してもよい。ｓｃＦｖは、定常領域の除去及びリンカーの導入にもかかわらず、元の免疫グロブリンの特異性を保持している。本開示では、抗体又は抗体断片又はその使用のいずれかの言及は、ｓｃＦｖ分子及びその使用を含むことが意図される。
【0044】
「ミニボディ」とは、ＣＨ３ドメインに接続したｓｃＦｖを含む融合タンパク質を指し、本明細書にも含まれる（Ｓ．Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５６，３０５５－３０６１，１９９６）。例えば、Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３４１，５４４－５４６（１９８９）、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２，４２３－４２６，１９８８、Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ，８５，５８７９－５８８３，１９８８）、ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５、ＷＯ９４／１３８０４、Ｐ．Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０ ６４４４－６４４８，１９９３、Ｙ．Ｒｅｉｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ，１４，１２３９－１２４５，１９９６、Ｓ．Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５６，３０５５－３０６１，１９９６を参照されたい。
【0045】
「ダイアボディ」という用語は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインが、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用して単一のポリペプチド鎖上に発現され、それにより、これらのドメインを別の鎖の相補性ドメインと対合させ、２つの抗原結合部位を作製する、二重特異性抗体を指す（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４－４８（１９９３）及びＰｏｌｊａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ２：１１２１－２３（１９９４）を参照されたい）。
【0046】
「ナノボディ」又は「単一ドメイン抗体」という用語は、単一単量体可変抗体ドメインからなる抗原結合断片を指す。ナノクローン法は、Ｂ細胞の自動化された高スループット選択に基づいて、所望の標的に対するナノボディを生成するための方法である。（ＷＯ２００６／０７９３７２を参照されたい）
【0047】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る天然に生じる可能性のある変異を除いて、同一である。
【0048】
本明細書で使用される「キメラ抗体」という用語は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が、特定の種に由来するか、又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同であり、鎖の残りが、別の種に由来するか、又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一又は相同であるモノクローナル抗体、並びに所望の生物学的活性を示す限り、そのような抗体の断片を指す。
【0049】
「一本鎖可変断片」又は「ｓｃＦｖ」という用語は、免疫グロブリンの重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）の融合タンパク質を指し、１０～約２５アミノ酸の短いリンカーペプチドで接続されている。Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５（１６）：５８７９－５８８３。リンカーは、ＶＨのＮ末端とＶＬのＣ末端とを接続してもよく、又はその逆を接続してもよい。自然に凝集されるが、化学的に分離された、軽鎖及び重鎖ポリペプチド鎖を、抗体Ｖ領域から、抗原結合部位の構造と実質的に同様の三次元構造に折り畳まれるｓｃＦｖ分子に変換するための化学構造を識別するための多くの方法が記載されている。例えば、Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第５，０９１，５１３号及び同第５，１３２，４０５号、並びにＬａｄｎｅｒ ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第４，９４６，７７８号を参照されたい。
【0050】
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」という用語は、免疫グロブリン（抗体）分子の「相補性決定領域」を指す。ＣＤＲは、抗体において、抗体がその特異的抗原に結合する可変ドメインの部分である。可変ドメインごとに３つのＣＤＲ（すなわち、軽鎖の可変ドメイン内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに重鎖の可変ドメイン内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）が存在する。可変ドメイン内では、ＣＤＲ１及びＣＤＲ２は、ポリペプチド鎖の可変（Ｖ）領域に見出され、ＣＤＲ３は、軽鎖領域の場合にはＶＪ、重鎖領域の場合にはＶＤＪの組換えによってコードされるため、最大の可変性を示す。
【0051】
「単離された抗体」は、（１）天然状態でそれに伴う他の天然で会合する抗体を含む、天然で会合する構成成分と会合していないか、（２）同じ種由来の他のタンパク質を含まないか、（３）異なる種由来の細胞によって発現されるか、又は（４）天然には存在しない抗体である。
【0052】
「ヒト抗体」という用語は、ヒト免疫グロブリン配列由来の１つ以上の可変領域及び定常領域を有する全ての抗体を含む。好ましい実施形態では、可変ドメイン及び定常ドメインの全ては、ヒト免疫グロブリン配列に由来する（完全なヒト抗体）。これらの抗体は、以下に記載されるように、様々な方法で調製され得る。
【0053】
本明細書で使用される場合、「ヒト化」という用語は、元の非ヒト抗体の抗原結合特性を保持する、非ヒト種に由来する抗体又はその抗原結合断片を指す。いくつかの実施形態では、抗体の結合断片（例えば、軽鎖及び重鎖可変領域、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ）は、ヒト化される。非ヒト抗原結合断片は、ＣＤＲグラフティングとして知られる技術（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２（１９８６））、並びに「再成形（ｒｅｓｈａｐｉｎｇ）」（Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ，ｅｔ ａｌ．，１９８８ Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４－１５３６、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，ｅｔ ａｌ．，１９８８ Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３－３３７、Ｔｅｍｐｅｓｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ１９９１ ９：２６６－２７１）、「超キメラ化（ｈｙｐｅｒｃｈｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）」（Ｑｕｅｅｎ，ｅｔ ａｌ．，１９８９ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ８６：１００２９－１００３３、Ｃｏ，ｅｔ ａｌ．，１９９１ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ８８：２８６９－２８７３、Ｃｏ，ｅｔ ａｌ．，１９９２ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ１４８：１１４９－１１５４）、及び「ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）」（Ｍａｒｋ，ｅｔ ａｌ．，“Ｄｅｒｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ａｎｄ ｖｅｎｅｅｒｅｄ ａｎｔｉ－ＣＤ１８ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．”Ｉｎ：Ｍｅｔｃａｌｆ ＢＷ，Ｄａｌｔｏｎ ＢＪ，ｅｄｓ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｓｉｏｎ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，１９９４：２９１－３１２）を含むその変形法を使用してヒト化することができる。非ヒト源に由来する場合、ヒンジ領域及び定常領域ドメインなどの抗体の他の領域もヒト化することができる。
【0054】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、当該技術分野で周知の経路を使用して投与されるときに、一般的にアレルギー又は他の重篤な有害反応を生じない分子実体及び組成物を指す。連邦若しくは州政府の規制機関によって承認されているか、又は動物、より特定的にはヒトにおいて使用するための米国薬局方若しくは他の一般に認められた薬局方に列挙されている分子実体及び組成物は、「薬学的に許容される」と考えられる。
【0055】
「予防する」、「防止」、及び「防止的に」という用語は、疾患の発症前（例えば、疾患の特定の症状の発症前）の化合物、例えば、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片の投与を指す。疾患を予防することは、疾患が発生する可能性を低減すること、疾患の発症を遅延させること、長期的な症状を緩和すること、又は疾患の最終的な進行を遅延させることを含み得る。
【0056】
本明細書中、「特異的に結合する」という用語は、混合物中に存在する他の構成成分又は抗原に顕著に結合しない一方で、少なくとも１０5Ｍ-1の結合親和性（Ｋａ）で標的抗原に結合する抗体又はその抗原結合断片の能力を指す。本明細書における抗セラミド抗体への言及は、セラミドに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を指す。
【0057】
本明細書で使用される場合、「配列同一性」という用語は、２つ以上のポリヌクレオチド配列の間、又は２つ以上のポリペプチド配列の間の関係を指す。１つの配列中の位置が、比較配列の対応する位置において同じ核酸塩基又はアミノ酸残基によって占有されている場合、配列は、その位置で「同一」であると言われる。配列同一性の割合は、同一の核酸塩基又はアミノ酸残基が両方の配列中に発生する位置の数を決定して、同一の位置の数を得ることによって計算される。次いで、同一の位置の数を比較ウィンドウにおける位置の総数で除算し、１００を掛けて、配列同一性の割合を得る。配列同一性の割合は、比較ウィンドウにわたって２つの最適にアラインメントされた配列を比較することによって決定される。ポリヌクレオチド配列の比較ウィンドウは、例えば、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、又は１０００個以上の核酸長であり得る。ポリペプチド配列の比較ウィンドウは、例えば、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、３００個以上の核酸長であり得る。比較のために配列を最適にアラインメントするために、比較ウィンドウにおけるポリヌクレオチド又はポリペプチド配列の部分は、参照配列が一定に保たれている間に、ギャップと称される付加又は欠失を含み得る。最適なアラインメントは、ギャップがあっても、参照配列と比較配列との間に可能な最大数の「同一の」位置を生成するアラインメントである。２つの配列間の「配列同一性」の割合は、２００４年９月１日の時点でＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎから入手可能であったプログラム「ＢＬＡＳＴ２Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」のバージョンを使用して決定することができ、そのプログラムは、プログラムＢＬＡＳＴＮ（ヌクレオチド配列比較用）及びＢＬＡＳＴＰ（ポリペプチド配列比較用）を組み込んでおり、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０（１２）：５８７３－５８７７，１９９３）のアルゴリズムに基づいている。「ＢＬＡＳＴ２Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」を利用する場合、２００４年９月１日の時点でデフォルトパラメータであったパラメータを、ワードサイズ（３）、オープンギャップペナルティ（１１）、伸長ギャップペナルティ（１）、ギャップドロップオフ（５０）、期待値（１０）、及びマトリックスオプションを含むがこれらに限定されない任意の他の必要なパラメータに使用することができる。２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列が、互いに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する場合、２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列は、「実質的に類似した配列同一性」又は「実質的な配列同一性」を有するとみなされる。
【0058】
「血管新生」は、新しい血管の形成を指す。
【0059】
本明細書で使用される場合、「創傷」という用語は、組織への損傷を指し、急性、亜急性、遅延型又は治癒が困難な創傷、及び慢性創傷を含むが、これらに限定されない。損傷は、外傷、暴力、事故、手術、疾患によるものであってもよい。創傷は、膜（皮膚など）の裂創又は破損に起因して起こり、通常はその下にある組織に損傷を与える可能性がある。創傷は、ベッドでの静養の延長からの圧迫傷によって引き起こされる場合がある。慢性創傷は、糖尿病を含むがこれらに限定されない疾患、肝臓、腎臓、若しくは肺の疾患を含むがこれらに限定されない内臓の疾患、がん、又は治癒プロセスを遅らせる任意の他の状態によって引き起こされる場合がある。いくつかの実施形態では、創傷は、この段落に記載の因子の組み合わせによって引き起こされる場合がある。創傷は、局所的な場所で、又は内部的に起こる場合がある。創傷は、開いた創傷であっても閉じた創傷であってもよい。創傷としては、例えば、糖尿病性創傷又は潰瘍、火傷、切開部、切除部、裂創、擦過傷、穿刺又は貫通創傷、外科的創傷、挫傷、血腫、粉砕損傷、及び潰瘍が挙げられる。
【0060】
「糖尿病性創傷」という用語は、糖尿病状態、例えば、Ｉ型又はＩＩ型糖尿病に少なくとも部分的に起因する糖尿病対象において生じる創傷を指す。糖尿病性創傷は、下肢に生じることが多い（例えば、糖尿病性の足の創傷）。
【0061】
「創傷治癒の強化」又は「創傷治癒の加速」という用語は、互換的に使用され、対照群と比較した、治療群における創傷治癒プロセスの改善を指す。
【0062】
抗セラミド抗体、抗体断片、及び誘導体
本開示は、創傷治癒の強化のための、又は創傷を治療若しくは予防するための、抗セラミド抗体及びその抗原結合断片に関する。いくつかの実施形態では、創傷は、慢性創傷である。いくつかの実施形態では、創傷は、糖尿病性創傷である。
本開示は、創傷治癒の強化のための、又は創傷を治療若しくは予防するための、抗セラミド抗体及びその抗原結合断片に関する。いくつかの実施形態では、創傷は、慢性創傷である。いくつかの実施形態では、創傷は、糖尿病性創傷である。
【0063】
セラミドは、ワックス状脂質分子のファミリーである。セラミドは、スフィンゴシン及び脂肪酸から構成される。セラミドは、脂質二重層の主要脂質の１つであるスフィンゴミエリンを構成する構成成分脂質であるため、真核細胞の細胞膜内に高濃度で見出される。セラミドは、細胞の分化、増殖、及びプログラム細胞死（ＰＣＤ）を調節することを含む、様々な細胞シグナル伝達に関与する。生体活性脂質として、セラミドは、アポトーシス、細胞成長停止、分化、細胞老化、細胞移行及び接着を含む多様な生理機能に関与している。セラミド及びその下流代謝産物の役割は、がん、神経変性、糖尿病、微生物病態、肥満、及び炎症を含むいくつかの病理学的状態においても示唆されている。
【0064】
例示的な抗セラミド抗体の配列及び特性は、米国特許公開第２０１０／０２３９５７２号及び同第２０１７／０３３５０１４号にも開示されており、これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる。例示的な抗セラミド抗体の配列を表１に提供する。しかしながら、任意の抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、開示される方法及び用途に従って用いられ得る。
【表1】
【0065】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、ヒト化６Ｂ５（ｈ６Ｂ５）である。いくつかの実施形態では、ｈ６Ｂ５抗体又はその抗原結合断片は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ｈ６Ｂ５抗体の配列は、２０２０年３月１８日に出願された米国仮出願第６２／９９１，２３２号に提供され、その内容は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。ｈ６Ｂ５抗体又はその抗原結合断片の各ＣＤＲの配列は、本明細書全体で開示され、以下の表２にまとめられている。
【表2】
【0066】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、組換え抗体、又は合成抗体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗原結合抗体断片は、前述のうちのいずれか１つの抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗原結合抗体断片は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、Ｆｄ断片、ｄＡｂ断片、ダイアボディ、ｓｃＦｖなどである。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体及びその抗原結合断片は、組換えＤＮＡ技術を使用して産生される。組換えタンパク質の発現及び精製のための手順は、当該技術分野において十分に確立されている。
【0067】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、２Ａ２、ｈ２Ａ２、６Ｃ８、７Ｂ１０、９Ｈ１０、ｈ６Ｂ５、又は６Ｂ５抗体のＣＤＲ配列及び／又は可変鎖配列を含む。
【0068】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、米国特許公開第２０１０／０２３９５７２号に記載されているように、２Ａ２抗体又はその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、米国公開第２０１７／０３３５０１４号に記載されているように、６Ｂ５抗体又はその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、本開示のｈ６Ｂ５抗体又はその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、表１に開示される抗体のうちのいずれかのＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、２Ａ２のＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、６Ｂ５のＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ｈ６Ｂ５のＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ｈ２Ａ２の可変重鎖及び軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、６Ｂ５の可変重鎖及び軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ｈ６Ｂ５の可変重鎖及び軽鎖配列を含む。
【0069】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、任意の免疫グロブリンアイソタイプを有する。免疫グロブリンは、ＩｇＡ、分泌型ＩｇＡ、ＩｇＧ、及びＩｇＭを含むがこれらに限定されない、一般的に知られているアイソタイプのいずれかに由来するものであってもよい。ＩｇＧアイソタイプは、以下の特定の種において、サブクラスに分けられる。ヒトにおけるＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４、及びマウスにおけるＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、Ｆｃ領域に１つ以上の修飾を含む。特定の修飾は、所望のエフェクター機能又は血清半減期を提供し得る。いくつかの実施形態では、適切なＦｃ領域を用いて、細胞表面に結合した裸の抗体は、例えば、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を介して、又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）の補体を動員することによって、又は標的細胞上の結合抗体を認識し、その後、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）、又はいくつかの他の機構において標的細胞の食作用を引き起こす１つ以上のエフェクターリガンドを発現する非特異的細胞傷害性細胞を動員することによって、細胞傷害性を誘導することができる。副作用又は治療上の合併症を最小限に抑えるために、エフェクター機能を排除又は低減することが望ましい場合、特定の他のＦｃ領域が使用され得る。抗体のＦｃ領域は、ＦｃＲｎに対する結合親和性を増加させ、したがって血清半減期を増加させるように修飾することができる。あるいは、Ｆｃ領域をＰＥＧ又はアルブミンにコンジュゲートして、血清半減期、又は所望の効果をもたらすいくつかの他のコンジュゲーションを増加させることができる。
【0070】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、検出可能な標識又はタグを含む。例示的な検出可能な標識としては、蛍光性タグ、親和性タグ、放射性同位体、発光マーカー、粒子標識、発色団、リン酸マーカー、及び酵素標識が挙げられる。例示的な蛍光性標識としては、ＧＦＰ、ＲＦＰ、及びＹＦＰが含まれる。例示的な酵素標識としては、セイヨウワサビペルオキシダーゼ及びアルカリホスファターゼが挙げられる。例示的なペプチドタグとしては、Ｈｉｓタグ、ＭＢＰ、及びストレプトアビジンが挙げられる。
【0071】
検出手段は、選択された標識によって決定される。標識又はその反応生成物の外観は、標識が粒子状であり、適切なレベルで蓄積する場合には、肉眼を使用して、又は分光光度計、ルミノメーター、蛍光光度計などの機器を使用して、又はＥＬＩＳＡ若しくはウエスタンブロットによって、達成することができる。
【0072】
創傷治癒
一態様では、本開示は、創傷治癒の強化のための方法及び組成物を提供する。一態様では、本開示は、創傷を治療又は予防するための方法及び組成物を提供する。
一態様では、本開示は、創傷治癒の強化のための方法及び組成物を提供する。一態様では、本開示は、創傷を治療又は予防するための方法及び組成物を提供する。
【0073】
自然な創傷治癒は、明確に定義された段階で起こる。急性の皮膚創傷は、皮膚及びその下にある組織の完全性及び機能を回復させる生物学的プロセスにおいて、１～３週間で治癒し得る。かかる傷は、皮膚に対する擦り傷、擦過傷、切り傷、擦り剥け、切開部、裂傷、又は打撲の結果であり得る。
【0074】
創傷は、創傷の深さに応じて、以下の４つのグレードのうちの１つに分類され得る。ｉ）グレードＩ：上皮に限定された創傷、ｉｉ）グレードＩＩ：真皮内に延びる創傷、ｉｉｉ）グレードＩＩＩ：皮下組織内に延びる創傷、及びｉｖ）グレードＩＶ（又は全層創傷）：骨が露出する創傷（例えば、大転子又は仙骨などの骨圧覚点）。「中間層損傷（ｐａｒｔｉａｌ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｗｏｕｎｄ）」という用語は、グレードＩ～ＩＩＩを包含する創傷を指し、中間層損傷の例としては、圧迫傷、静脈性潰瘍、及び糖尿病性創傷又は潰瘍が挙げられる。「深創傷」という用語は、グレードＩＩＩ及びグレードＩＶの創傷の両方を含むことを意味している。
【0075】
自然な創傷治癒は、主に３つの主要な時系列に従って生じる。これらの配列の各々は、特定の細胞活性によって特徴付けられ、修復プロセスの進行を集合的に管理し、サポートする多数の調節シグナル（正及び負の両方）によって制御される。したがって、以下は、以下のように区別される。
（ａ）炎症期、
（ｂ）増殖期（肉芽期及び上皮化期を含む）、並びに
（ｃ）再形成期。
（ａ）炎症期、
（ｂ）増殖期（肉芽期及び上皮化期を含む）、並びに
（ｃ）再形成期。
【0076】
炎症期である第１期は、血管が破裂するとすぐに始まり、これは、主にフィブリン及びフィブロネクチンで構成され、暫定的なマトリックスを構成する血栓（血液凝固）の形成を引き起こす事象である。このマトリックスは、部分的に病巣部を埋め、損傷を受けた領域内で、創傷の除去を確実にするために動員される炎症性細胞の移行を可能にする。血小板はまた、治癒プロセスに関与する細胞を動員することを可能にする因子（例えば、サイトカイン及び／又は成長因子）を放出する。この期間は、病巣部位における多数の炎症細胞（多形核細胞、マクロファージ）の浸潤及び活性化を特徴とし、これは、生物を任意の外来微生物から保護し、また、創傷を洗浄又は拭き取る。
【0077】
第２期は、肉芽組織の発達に対応する。まず、線維芽細胞の移行及び増殖による損傷のコロニー形成が観察される。次に、健康な血管からの内皮細胞の移行が、損傷を受けた組織の血管形成、又は血管新生を可能にする。肉芽組織では、線維芽細胞が活性化され、アクチンマイクロフィラメントによって提供される顕著な収縮特性を有する筋線維芽細胞に分化し、したがって、創傷の収縮を可能にする。マイクロフィラメントは、タンパク質、α平滑筋アクチンを介して発現される。これらの筋線維芽細胞は、病巣部の治癒につながる肉芽組織の形成及び収縮において重要な役割を果たす。その後、ケラチノサイトが創傷の縁部から移行し、次に分化し、表皮の再建につながる。肉芽組織のこの発達期は、病巣部の炎症の一般的な状態の事前の低下、多形核好中球が徐々に消失、及び「修復」マクロファージを含むマクロファージの出現に続いて開始される。炎症期から増殖／修復期へのこの遷移は、炎症の収束期として知られている。
【0078】
プロセスの第３期は、新しく形成された組織が元の組織の初期の特徴及び特性をとるように、機能的組織を再構築することを目的とした再形成段階である。細胞外マトリックスの一部は、プロテアーゼ（本質的にマトリックスメタロプロテアーゼ及びエラスターゼ）によって消化され、細胞外マトリックスの再編成が観察される。肉芽組織内で優勢であるＩＩＩ型コラーゲンは、真皮の主要なマトリックス構成成分であるＩ型コラーゲンに徐々に置き換えられる。成熟期の終了時に、線維芽細胞、筋線維芽細胞、及び血管細胞は、増殖及び／又は活性の低下を経験する。次いで、過剰な細胞は、細胞外マトリックスの同時再形成を伴って、アポトーシスによって死亡する。
【0079】
通常の期間内に創傷が治癒しない場合、「慢性創傷」と考えられる。例えば、慢性創傷は、治癒するのに２週間よりも長く、３週間よりも長く、４週間よりも長く、５週間よりも長く、６週間よりも長く、６週間よりも長く、７週間よりも長く、８週間よりも長く、９週間よりも長く、１０週間よりも長く、１１週間よりも長く、１２週間よりも長く、３ヶ月間よりも長く、４ヶ月間よりも長く、５ヶ月間よりも長く、又は６ヶ月間よりも長くかかり得る。いくつかの実施形態では、慢性創傷は、創傷の出現から始まる３、４、５、６、７、８、９、又は１０週間の期間後に治癒を開始しない。
【0080】
慢性創傷の場合、創傷は、治癒の段階のうちの１つで弱まるか、又は治癒の正常な段階を通って進行しない場合がある。慢性創傷は、例えば、１）長期にわたる炎症期、２）遅発性又は欠損性の細胞外マトリックス（ＥＣＭ）、及び３）停滞又は減少した上皮化速度のうちの１つ以上によって少なくとも部分的に特徴付けられる創傷を含み得る。慢性創傷は、１ヶ月間などの比較的短い期間存在していてもよいか、又は数年間にわたって存在していてもよい。本明細書に記載の組成物及び方法は、慢性創傷の治癒を開始させ、強化することができる。
【0081】
慢性皮膚創傷としては、皮膚潰瘍、褥瘡、圧迫傷、糖尿病性創傷（例えば、糖尿病性潰瘍及び褥瘡）、並びに他の皮膚障害が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、慢性創傷は、糖尿病性創傷、静脈潰瘍、動脈潰瘍、圧潰瘍、及び血管炎性潰瘍から選択される。いくつかの実施形態では、慢性創傷は、糖尿病性創傷である。
【0082】
慢性皮膚創傷は、任意のサイズ、形状又は深さであってもよく、正常な健康な皮膚色素と比較して、変色したように見えることがある。慢性皮膚創傷は、出血するか、腫れるか、化膿性分泌物若しくは他の液体を浸透させるか、疼痛を引き起こすか、又は患部の動きを困難にするか、若しくは患部の動きに痛みを伴う可能性がある。慢性皮膚創傷は、感染し、体温が上昇し、乳白色、黄色、緑色、又は茶色の膿又は分泌物が発生する可能性がある。分泌物は無臭であるか、又は刺激的な臭いを有していてもよい。感染した場合、慢性皮膚創傷は、触ると赤いか、柔らかいか、又は暖かい可能性がある。
【0083】
慢性皮膚創傷は、糖尿病、血液供給不良、低血中酸素、低血圧に起因して血流が減少する状態、又は血管の閉塞、遮断、又は狭窄を特徴とする状態によって引き起こされ得る。酸素供給不足は、特定の血液、心臓、及び肺疾患、並びに／又は喫煙によって引き起こされる可能性がある。慢性皮膚創傷はまた、組織内の腫脹又は圧力の増加、又は創傷領域への一定の圧力など、皮膚に対する繰り返しの外傷の結果である場合がある。慢性皮膚創傷は、免疫系の弱体化又は損傷によっても引き起こされる場合がある。免疫系の弱体化又は損傷は、年齢の上昇、放射線、栄養不良、及び／又は抗がん薬若しくはステロイドなどの薬物療法によって引き起こされる場合がある。慢性皮膚創傷は、細菌、ウイルス、若しくは真菌の感染、又は異物の存在によっても引き起こされる場合がある。
【0084】
糖尿病対象における損傷後の創傷治癒障害は、主要な臨床的問題を表し、長期の入院及び顕著な医療費を生じさせる。全ての非外傷性切断の３分の２は、糖尿病性創傷が先行している。糖尿病性創傷の治癒障害は多因子であり、ケモカインの産生の減少、血管新生の減少、及び異常な炎症応答を特徴としている。
【0085】
いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、これらの糖尿病性創傷の治癒の不存在が、グルコースの増加した生物学的利用能と少なくとも部分的に関連付けられると考えられる。これにより、皮膚の肥厚化、又は神経障害及び動脈症につながる顕著な酸化ストレスなどの多数の生理学的変化及び代謝的変化が起こる。動脈症及び神経障害は、慢性化のための２つの主要な危険因子であり、したがって、糖尿病性創傷、より詳細には糖尿病性足部創傷の治癒の遅延である。褥瘡、静脈潰瘍、動脈潰瘍又は混合潰瘍などの最もよく知られた種類の慢性非糖尿病性創傷は、同じ病理に由来しない。例えば、静脈不全は、形成、慢性化、したがって静脈潰瘍の治癒の遅延の原因である。褥瘡は、それらに関する限り、皮膚組織への過度かつ長期の圧力及び摩擦に続く虚血及び再灌流のサイクルの後に生じる創傷である。
【0086】
いくつかの主要な問題は、糖尿病対象における正しい創傷治癒シーケンスを中断させる。治癒の第一の遅延は、炎症期から生じ、炎症期から増殖期への移行が中断される。炎症期は、治癒に不可欠な期間であるが、一時的なものでなければならない。炎症の収束は、治癒の他の期間の開始を条件付ける重要なポイントである。この動的事象は、炎症性細胞（多形核好中球）の消失及びマクロファージの出現を伴う。次に、走化性及び血管新生性抗炎症メディエーターが生成され、これは特に、肉芽期の重要な細胞である線維芽細胞の移行及び分化を可能にする。前述の対象の場合のように、この炎症期の中断は、炎症期の異常な延長を引き起こし、創傷の慢性化を引き起こし、それによって治癒の全ての後続の段階を遅らせる。最後に、創傷塞がりの期間は、特に上皮形成中に遅延されるか、又は更には、ほとんどの場合、起こらない。
【0087】
創傷治癒におけるセラミド及びＡＳＭの役割
いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、セラミドリッチプラットフォーム（ＣＲＰ）の形成は、例えば、慢性創傷又は糖尿病性創傷の場合に、創傷治癒の困難さに寄与する、微小血管内皮病態の基礎となることが企図される。
いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、セラミドリッチプラットフォーム（ＣＲＰ）の形成は、例えば、慢性創傷又は糖尿病性創傷の場合に、創傷治癒の困難さに寄与する、微小血管内皮病態の基礎となることが企図される。
【0088】
スフィンゴ脂質は、膜マイクロドメインの主要な構成成分を表し、セラミド濃縮マイクロドメインは、炎症性サイトカインシグナル伝達のための前提条件であるようである。酸スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）及び中性スフィンゴミエリナーゼ（ＮＳＭ）は、スフィンゴ脂質代謝の主要な調節酵素であり、炎症誘発性セラミドに対してスフィンゴミエリン加水分解を促進する。ＡＳＭは、炎症性サイトカインシグナル伝達における重要な初期応答因子である。
【0089】
内皮組織損傷は、細胞膜の外細胞小葉における膜損傷及び酸性スフィンゴミエリナーゼ依存性セラミド形成を引き起こす。損傷後の組織損傷の発生の間、ＣＲＰ依存性アポトーシスは、フィードフォワードプロセスを表す可能性が高い。免疫媒介性組織損傷において、細胞溶解性Ｔ細胞はまた、効率的な細胞殺傷に必要な標的細胞上のＣＲＰを誘発する。このプロセスの中断は、免疫媒介性組織損傷の更なる進化を防止し、堅牢で耐久性のある組織修復プロセスの開始をもたらす。
【0090】
抗セラミド抗体又はその抗原結合断片の投与は、血管内皮恒常性を回復させ、血液と組織との間のシグナル伝達の調節、造血細胞の輸送、非血栓性血流の維持、免疫及び炎症応答の促進、並びに損傷後の線維症を誘発することなく恒常性修復及び再生をもたらす。更に、セラミドリッチプラットフォームは、主に損傷した細胞に存在するため、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片の系統的な送達は、正常な組織に影響を与えることなく、損傷した組織に局所的に作用し得るため、潜在的に広い治療指数を提供する。
【0091】
薬学的組成物、投与経路、投薬量、及び投薬スケジュール
いくつかの実施形態では、本開示は、創傷治癒の強化、又は創傷を治療若しくは予防するための抗セラミド抗体又はその抗原結合断片を含む薬学的組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、創傷治癒の強化、又は創傷を治療若しくは予防するための抗セラミド抗体又はその抗原結合断片を含む薬学的組成物を提供する。
【0092】
投与のために、本開示の抗体又は断片（例えば、抗セラミド抗体及びその抗原結合断片）は、薬学的組成物として製剤化され得る。薬学的組成物は、（ｉ）抗セラミド抗体又はその抗原結合断片と、（ｉｉ）薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と、を含み得る。抗セラミド抗体若しくはその抗原結合断片、及び／又はｓｃＦｖを含む薬学的組成物は、薬学的に有用な組成物を調製するための既知の方法に従って製剤化されてもよく、それによって、治療用分子は、薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤との混合物中で組み合わされる。好適な担体、希釈剤又は賦形剤は、当業者に周知である。（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（編集）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９ｔｈ ｅｄ．１９９５）を参照されたい。）製剤は、１つ以上の賦形剤、防腐剤、可溶化剤、緩衝剤、バイアル表面でのタンパク質損失を防止するためのアルブミンなどを更に含み得る。
【0093】
いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、経口単位剤形、静脈内単位剤形、鼻腔内単位剤形、坐剤単位剤形、皮内単位剤形、筋肉内単位剤形、腹腔内単位剤形、皮下単位剤形、又は局所剤形といった剤形のうちの１つで製剤化されてもよい。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、局所剤形で製剤化されてもよい。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、静脈内剤形で製剤化されてもよい。
【0094】
いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、局所投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片の局所薬学的組成物は、薬学的に許容される担体と組み合わせて製剤化されてもよい。局所組成物のための剤形の非限定的な例は、粉末、スプレー、泡、ゼリー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチ、坐剤、及びリポソーム調製物を含む。剤形は、活性成分の持続放出のために粘膜接着性ポリマーとともに製剤化され得る。活性化合物は、無菌条件下で、薬学的に許容される担体、及び必要とされる可能性のある防腐剤、緩衝剤、又は噴射剤と混合してもよい。局所製剤は、活性成分を、局所乾燥製剤、液体製剤、クリーム製剤、及びエアロゾル製剤で一般的に使用される従来の薬学的希釈剤及び担体と組み合わせることによって調製することができる。軟膏及びクリームは、例えば、好適な増粘剤及び／又はゲル化剤を添加した水性又は油性の基剤とともに製剤化されてもよい。かかる基剤は、水及び／又は液体パラフィンなどの油、又はピーナッツ油又はヒマシ油などの植物油を含み得る。基剤の性質に従って使用され得る増粘剤には、軟パラフィン、ステアリン酸アルミニウム、セトステアリルアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、羊毛脂、水素化ラノリン、蜜蝋などが含まれる。ローションは、水性又は油性ベースで製剤化されてもよく、概して、安定剤、乳化剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤、着色剤、香料などのうちの１つ以上も含む。粉末は、任意の好適な粉末基剤、例えば、タルク、ラクトース、デンプンなどを用いて形成され得る。液滴は、１つ以上の分散剤、懸濁剤、可溶化剤なども含む水性基剤又は非水性基剤とともに製剤化され得る。
【0095】
いくつかの実施形態では、軟膏、ペースト、クリーム及びゲルはまた、賦形剤、例えば、動物性及び植物性脂肪、油類、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク及び酸化亜鉛、又はそれらの混合物を含有し得る。粉末及びスプレーはまた、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム及びポリアミド粉末、又はこれらの物質の混合物などの賦形剤を含有し得る。スプレーは、クロロフルオロ炭化水素などの通常の噴射剤、並びにブタン及びプロパンなどの揮発性非置換炭化水素を追加で含有することができる。
【0096】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、薬学的に許容される担体、並びに以下の第２の薬理学的薬剤である局所麻酔剤（例えば、リドカイン、プリロカインなど）、局所抗炎症剤（例えば、ナプロキセン、プラモキシカムなど）、コルチコステロイド（例えば、コルチゾン、ヒドロコルチゾンなど）、かゆみ止め剤（例えば、ロペラミド、ジフィレノキサレートなど）、二価及び三価の金属イオン（例えば、マンガン、カルシウム、ストロンチウム、ニッケル、ランタン、セリウム、亜鉛など）を含む、末梢感覚ニューロンの活性化を妨害する薬剤、鎮痛剤、滑沢剤、酵母系製品（例えば、凍結酵母、酵母抽出物など）、殺精子剤、再上皮化を促進することが知られている成長促進及び／若しくは創傷治癒促進剤（例えば、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、インターロイキン－１１（ＩＬ－１１）など）、抗菌剤（例えば、ネオスポリン、硫酸ポリミキシンＢ、バシトラシン亜鉛など）、粘膜付着剤（例えば、セルロース誘導体など）、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓに定義されるような凍結防止剤（例えば、コロイド状ビスマス、ミソプロストール、スクラルファートなど）、又はメタノールのうちの少なくとも１つとともに製剤化され得る。
【0097】
本明細書に記載の抗セラミド抗体及びその抗原結合断片は、１つ以上の投与経路によって対象に投与することができる。可能な投与経路としては、例えば、筋肉内、皮下、静脈内、心房内、関節内、非経口、鼻腔内、肺内、経皮、髄腔内、経口、局所、及び病巣内経路によるものが挙げられる。いくつかの実施形態では、投与経路は、局所投与、病巣内投与、皮下投与、経皮投与、筋肉内投与、静脈内投与、及び非経口投与からなる群から選択される。
【0098】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗セラミド抗体及びその抗原結合断片、又はその薬学的組成物の投与は、局所投与を含むか、又は局所投与からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗セラミド抗体及びその抗原結合断片、又はその薬学的組成物の投与は、病巣内投与を含むか、又は病巣内投与からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗セラミド抗体及びその抗原結合断片、又はその薬学的組成物の投与は、皮下投与を含むか、又は皮下投与からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗セラミド抗体及びその抗原結合断片、又はその薬学的組成物の投与は、経皮投与を含むか、又は経皮投与からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗セラミド抗体及びその抗原結合断片、又はその薬学的組成物の投与は、筋肉内投与を含むか、又は筋肉内投与からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗セラミド抗体及びその抗原結合断片、又はその薬学的組成物の投与は、静脈内投与を含むか、又は静脈内投与からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗セラミド抗体及びその抗原結合断片、又はその薬学的組成物の投与は、非経口投与を含むか、又は非経口投与からなる。
【0099】
予防及び治療目的のために、抗セラミド抗体及びその抗原結合断片は、単一ボーラス送達で、長期間にわたる連続送達（例えば、連続経皮送達）を介して、又は反復投与プロトコル（例えば、毎時、毎日、毎週、毎月、又は毎年）で対象に投与することができる。
【0100】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、治療有効量の抗セラミド抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む。上で定義される治療有効用量、投薬量、又は量は、特定の生理学的効果、例えば、創傷の１つ以上の症状の予防若しくは緩和、又は創傷治癒の強化をもたらすのに必要な抗セラミド抗体又はその抗原結合断片の量を指す。本文脈における治療有効投薬量の決定は、典型的には、動物モデル研究の後のヒト臨床試験に基づいており、モデル対象における創傷の発生若しくは重症度を顕著に低減するか、又は創傷治癒を強化する有効投薬量及び投与プロトコルを決定することによって導かれる。本開示の組成物の有効用量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトであるか又は動物であるか、投与される他の医薬、治療が予防的であるか又は治療的であるか、並びに組成物自体の特異的活性及び個体において所望の応答を誘発するその能力を含む、多くの異なる因子に応じて変化する。典型的には、投薬レジメンは、最適な治療応答を提供するように、すなわち、安全性及び有効性を最適化するように調整される。
【0101】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片の用量は、約０．１μｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、又は１μｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、又は１０μｇ～５ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、有効量の抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、約１μｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、又は約０．１ｍｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇである。本明細書に記載の抗セラミド抗体及びその抗原結合断片はまた、単回用量又は２回以上の用量として与えられる、体重１キログラム当たり約０．００１～約１０ミリグラム（ｍｇ）（ｍｐｋ）の投薬量で投与されてもよい。ヒト成人患者への投与のために、治療有効量は、１用量当たり０．２ｍｇ～８００ｍｇの範囲の用量で投与されてもよく、これには、限定されないが、１用量当たり０．２ｍｇ、１用量当たり０．５ｍｇ、１用量当たり１ｍｇ、１用量当たり５ｍｇ、１用量当たり１０ｍｇ、１用量当たり２５ｍｇ、１用量当たり１００ｍｇ、１用量当たり２００ｍｇ、及び１用量当たり４００ｍｇが含まれ、１回以上の用量は、一連の治療で投与されてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗セラミド抗体及びその抗原結合断片の１日総投薬量は、約１ｍｇ～約２ｇ、約１００ｍｇ～約１．５ｇ、又は約２００ｍｇ～約１２００ｍｇの範囲であり得る。
【0102】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片の用量は、創傷の表面積の約０．１μｇ／ｃｍ2～１００ｍｇ／ｃｍ2、又は１μｇ／ｃｍ2～約５０ｍｇ／ｃｍ2、又は１０μｇ／ｃｍ2～５ｍｇ／ｃｍ2である。いくつかの実施形態では、有効量の抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、約１μｇ／ｃｍ2～約２０ｍｇ／ｃｍ2、約１０μｇ／ｃｍ2～約１０ｍｇ／ｋｇｃｍ2、又は約０．１ｍｇ／ｃｍ2～約５ｍｇ／ｃｍ2である。本明細書に記載の抗セラミド抗体及びその抗原結合断片はまた、単回用量又は２回以上の用量として与えられる、創傷の１平方センチメートル（ｃｍ2）当たり約０．００１～約１０ミリグラム（ｍｇ）の投薬量で投与されてもよい。ヒト成人患者への投与のために、治療有効量は、１用量当たり０．２ｍｇ～８００ｍｇの範囲の用量で投与されてもよく、これには、限定されないが、１用量当たり０．２ｍｇ、１用量当たり０．５ｍｇ、１用量当たり１ｍｇ、１用量当たり５ｍｇ、１用量当たり１０ｍｇ、１用量当たり２５ｍｇ、１用量当たり１００ｍｇ、１用量当たり２００ｍｇ、及び１用量当たり４００ｍｇが含まれ、１回以上の用量は、一連の治療で投与されてもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗セラミド抗体及びその抗原結合断片の１日総投薬量は、約１ｍｇ～約２ｇ、約１００ｍｇ～約１．５ｇ、又は約２００ｍｇ～約１２００ｍｇの範囲であり得る。
【0103】
いくつかの実施形態では、抗セラミド抗体、その抗原結合断片、又はそれを含む組成物は、約０．１ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、又は５０ｍｇ／ｍＬの濃度で製剤化されてもよい。濃度は、０．１～１ｍｇ／ｍＬ、１～５ｍｇ／ｍＬ、５～１０ｍｇ／ｍＬ、又は１０～５０ｍｇ／ｍＬであり得る。いくつかの実施形態では、開示される抗体、断片又は組成物は、約０．０５ｍｇ、０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、又は１ｍｇの用量で投与されてもよい。用量の体積は、約０．００５ｍＬ、０．０１ｍＬ、０．０２ｍＬ、０．０３ｍＬ、０．０４ｍＬ、０．０５ｍＬ、０．０６ｍＬ、０．０７ｍＬ、０．０８ｍＬ、０．０９ｍＬ、又は０．１ｍＬであり得る。
【0104】
本明細書に記載の抗セラミド抗体及びその抗原結合断片は、１日の異なる時間に投与することができる。一実施形態では、用量は、夕方に投与することができる。別の実施形態では、用量は、朝に投与することができる。投薬量は、例えば、複数の毎週、隔週、毎月、又は毎年の投与を含む、単回又は複数回の投与で投与され得る。いくつかの実施形態では、単回用量の抗セラミド抗体又は抗体断片を、それを必要とする対象に投与する。いくつかの実施形態では、患者は、２回以上の用量の抗セラミド抗体治療を受けてもよい。いくつかの実施形態では、患者は、２回以上の用量の抗セラミド抗体治療を受けてもよく、連続用量は、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、又は少なくとも１週間離される。いくつかの実施形態では、患者は、２回以上の用量の抗セラミド抗体治療を受けてもよく、連続用量は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、又は少なくとも３ヶ月間の期間離される。いくつかの実施形態では、２回以上の用量は、それを必要とする患者に、約１週間～約２週間、約２週間～約４週間、約１ヶ月間～約２ヶ月間、約２ヶ月間～約４ヶ月間、又は約１ヶ月間～約６ヶ月間の期間離されて投与されてもよい。いくつかの実施形態では、投与の持続時間は、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１年間、少なくとも２年間、少なくとも３年間、少なくとも４年間、又は少なくとも５年間である。いくつかの実施形態では、投与は、障害の臨床症状をモニタリングすることによって示されるように、不規則に行うことができる。
【0105】
抗セラミド抗体及びその抗原結合断片を含む薬学的組成物の投薬量は、標的部位で所望の濃度を維持するために、主治医によって変化させることができる。より高い濃度又はより低い濃度を、送達モードに基づき選択することができる。抗セラミド抗体又はその抗原結合断片は、対象の生涯の間の任意の時点で投与されてもよい。投与は、創傷治癒の炎症段階、増殖段階、再形成段階、又はそれらの組み合わせの間に行われてもよい。いくつかの実施形態では、投与は、創傷治癒の炎症段階の間に行われる。いくつかの実施形態では、投与は、創傷治癒の増殖段階の間に行われる。いくつかの実施形態では、投与は、創傷治癒の再形成段階の間に行われる。
【0106】
治療方法及び使用
いくつかの実施形態では、本開示は、対象において創傷を治療するか、予防するか、又は緩和する方法であって、対象に、治療有効量の抗セラミド抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、創傷は、慢性創傷である。いくつかの実施形態では、創傷は、糖尿病性創傷である。
いくつかの実施形態では、本開示は、対象において創傷を治療するか、予防するか、又は緩和する方法であって、対象に、治療有効量の抗セラミド抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、創傷は、慢性創傷である。いくつかの実施形態では、創傷は、糖尿病性創傷である。
【0107】
いくつかの実施形態では、本開示は、創傷の治癒を強化することを必要とする対象においてそれを行う方法であって、対象に、治療有効量の抗セラミド抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、創傷は、慢性創傷である。いくつかの実施形態では、創傷は、糖尿病性創傷である。
【0108】
対象
本明細書に開示される方法による治療のための対象には、創傷（例えば、糖尿病性創傷）を有するか、又はそれを発症するリスクがある対象が含まれる。創傷（例えば、糖尿病性創傷）を有する対象は、早期段階又は後期段階の疾患を有し得る。
本明細書に開示される方法による治療のための対象には、創傷（例えば、糖尿病性創傷）を有するか、又はそれを発症するリスクがある対象が含まれる。創傷（例えば、糖尿病性創傷）を有する対象は、早期段階又は後期段階の疾患を有し得る。
【0109】
いくつかの実施形態では、対象は、創傷（例えば、糖尿病性創傷）のための１つ以上の治療を以前に受けたことがあるが、以前の治療に応答しなかった対象である。このような実施形態では、「応答しなかった」とは、以前の治療が創傷（例えば、糖尿病性創傷）の緩和及び／又は改善に失敗したことを示す。いくつかの実施形態では、以前の療法は、いくつかの結果を示している可能性があるが、所望のパフォーマンスを達成していないか、又はいくつかの期間の後に有効性を示すのを停止している可能性がある。
【0110】
治療の読み出し（Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｒｅａｄｏｕｔｓ）
創傷治癒は、様々な手段によって測定することができる。いくつかの実施形態では、創傷治癒は、創傷の全表面積の変化によって測定される。いくつかの実施形態では、創傷治癒は、創傷の主軸の長さ（長さ及び幅）の変化によって測定される。いくつかの実施形態では、創傷治癒は、創傷中心からの創傷マージン距離によって測定される。いくつかの実施形態では、創傷治癒は、創傷の周囲の変化によって測定される。いくつかの実施形態では、創傷治癒は、周囲に対する表面積の（Ｓ／Ｐ）比の変化によって測定される。これらのパラメータの評価は、多様な方法、例えば、コンピュータ支援型面積測定によって行うことができる。いくつかの実施形態では、創傷治癒の程度は、これらのパラメータのうちのいずれか１つの初期値と比較した経時的な値の割合によって表される。
創傷治癒は、様々な手段によって測定することができる。いくつかの実施形態では、創傷治癒は、創傷の全表面積の変化によって測定される。いくつかの実施形態では、創傷治癒は、創傷の主軸の長さ（長さ及び幅）の変化によって測定される。いくつかの実施形態では、創傷治癒は、創傷中心からの創傷マージン距離によって測定される。いくつかの実施形態では、創傷治癒は、創傷の周囲の変化によって測定される。いくつかの実施形態では、創傷治癒は、周囲に対する表面積の（Ｓ／Ｐ）比の変化によって測定される。これらのパラメータの評価は、多様な方法、例えば、コンピュータ支援型面積測定によって行うことができる。いくつかの実施形態では、創傷治癒の程度は、これらのパラメータのうちのいずれか１つの初期値と比較した経時的な値の割合によって表される。
【0111】
抗セラミド抗体又はその抗原結合断片を用いて創傷治癒を強化する方法が提供される。このような治療の有効性は、いくつかのパラメータに基づいて特徴付けられ、評価され、測定され、及び／又はモニタリングされ得る。
【0112】
いくつかの実施形態では、改善は、特定の程度の創傷治癒を達成するための時間の減少によって測定される。例えば、対照群の創傷が治癒するのに２５日かかり、治療群の創傷が治癒するのに２０日しかかからない場合、創傷治癒は、そのような測定によって２０％強化／加速される。いくつかの実施形態では、改善は、予め設定された時点での創傷治癒の相対的な程度の増加によって測定される。例えば、創傷後２０日目に、治療群が平均５０％程度の創傷治癒（例えば、全表面積によって測定される場合）を達成し、上述の群が平均４０％程度の創傷治癒しか達成していない場合、創傷治癒は、そのような測定によって２５％強化／加速される。当業者であれば、適切な対照群（例えば、対照創傷）を容易に認識するであろう。いくつかの実施形態では、対照創傷は、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片（例えば、特許請求の範囲に列挙されるもの）を除いて、同一の治療を受ける。いくつかの実施形態では、対照創傷は、標準ケア治療を受ける。全ての場合において、対照群への言及は、列挙された特性（例えば、強化された創傷治癒）が、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片の使用の結果であることを示すことを意味する。
【0113】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法は、予め設定された程度での創傷治癒パラメータのうちの１つに従って創傷を改善するのにかかる時間の減少によって測定される場合、対照創傷と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％（全ての範囲及びその間の部分範囲を含む）、対象における創傷治癒を強化する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、創傷治癒を少なくとも１０％強化する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、創傷治癒を少なくとも２０％強化する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、創傷治癒を少なくとも３０％強化する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、創傷治癒を少なくとも５０％強化する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、創傷治癒を少なくとも７０％強化する。いくつかの実施形態では、創傷治癒パラメータは、創傷の全表面積、創傷の周囲、創傷のＳ／Ｐ比、又は創傷中心からのマージン距離である。いくつかの実施形態では、創傷治癒パラメータは、創傷の全表面積である。いくつかの実施形態では、予め設定された程度は、約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％の減少である。いくつかの実施形態では、予め設定された程度は、５０％である。いくつかの実施形態では、予め設定された程度は、９５％である。いくつかの実施形態では、創傷治癒の強化は、創傷の全表面積の５０％の減少を達成するのにかかる時間の死亡によって測定される。いくつかの実施形態では、創傷治癒の強化は、創傷の全表面積の９５％の減少を達成するのにかかる時間の死亡によって測定される。いくつかの実施形態では、創傷治癒の強化は、創傷の完全な塞がりを達成するのにかかる時間の死亡によって測定される。いくつかの実施形態では、創傷は、慢性創傷である。いくつかの実施形態では、創傷は、糖尿病性創傷である。
【0114】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法は、創傷治癒パラメータのうちの１つに従って予め設定された時点での創傷治癒の相対的な程度の増加によって測定される場合、対照創傷と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも７倍、又は少なくとも１０倍（全ての範囲及びその間の部分範囲を含む）、対象における創傷治癒を強化する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、創傷治癒を少なくとも１０％強化する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、創傷治癒を少なくとも２０％強化する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、創傷治癒を少なくとも３０％強化する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、創傷治癒を少なくとも５０％強化する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、創傷治癒を少なくとも７０％強化する。いくつかの実施形態では、創傷治癒パラメータは、創傷の全表面積、創傷の周囲、創傷のＳ／Ｐ比、又は創傷中心からのマージン距離である。いくつかの実施形態では、創傷治癒パラメータは、創傷の全表面積である。いくつかの実施形態では、予め設定された時点は、創傷後１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０日目である。いくつかの実施形態では、予め設定された時点は、創傷後１週目、２週目、３週目、４週目、５週目、６週目、７週目、８週目、９週目、１０週目、１１週目、１２週目、１３週目、１４週目、１５週目、１６週目、１７週目、１８週目、１９週目、又は２０週目の終了時である。いくつかの実施形態では、予め設定された時点は、創傷後１０日目である。いくつかの実施形態では、予め設定された時点は、創傷後２０日目である。いくつかの実施形態では、予め設定された時点は、創傷後３０日目である。いくつかの実施形態では、創傷治癒の強化は、創傷後１０日目の創傷の全表面積の死亡によって測定される。いくつかの実施形態では、創傷治癒の強化は、創傷後２０日目の創傷の全表面積の死亡によって測定される。いくつかの実施形態では、創傷治癒の強化は、創傷後３０日目の創傷の全表面積の死亡によって測定される。いくつかの実施形態では、創傷は、慢性創傷である。いくつかの実施形態では、創傷は、糖尿病性創傷である。
【0115】
いくつかの実施形態では、本開示の治療は、皮膚に対するものなどの表在性創傷の治療に有効である。いくつかの実施形態では、本開示の治療は、外傷又は手術に起因して生じ得る創傷などの内傷の治療に有効である。
【0116】
いくつかの実施形態では、治療は、損傷（例えば、創傷）が生じた後に施される。いくつかの実施形態では、本開示の治療は、創傷を引き起こす可能性のある活動に着手する前、又は外科的手技の前などに、予防的に投与される。
【実施例】
【0117】
実施例１：糖尿病のマウスモデルにおいて、抗セラミド抗体は、創傷治癒を加速する。
糖尿病性創傷治癒に対する抗セラミド抗体の効果を研究するために、標準化されたパンチ生検ベースのマウス表面創傷モデルを、ＭＳＵのコア施設で使用した。
糖尿病性創傷治癒に対する抗セラミド抗体の効果を研究するために、標準化されたパンチ生検ベースのマウス表面創傷モデルを、ＭＳＵのコア施設で使用した。
【0118】
この研究では、マウスを以下の４つの実験群に分けた。
（ａ）１）抗セラミド抗体２Ａ２を適用した糖尿病マウス（６匹の動物）（糖尿病性＋２Ａ２）、
（ｂ）２）抗セラミド抗体２Ａ２を含まない糖尿病マウス（６匹の動物）（糖尿病性）、
（ｃ）３）抗セラミド抗体２Ａ２を適用した対照マウス（３匹の動物）（対照＋２Ａ２）、
（ｄ）４）抗セラミド抗体２Ａ２を含まない対照マウス（５匹の動物）（対照）。
（ａ）１）抗セラミド抗体２Ａ２を適用した糖尿病マウス（６匹の動物）（糖尿病性＋２Ａ２）、
（ｂ）２）抗セラミド抗体２Ａ２を含まない糖尿病マウス（６匹の動物）（糖尿病性）、
（ｃ）３）抗セラミド抗体２Ａ２を適用した対照マウス（３匹の動物）（対照＋２Ａ２）、
（ｄ）４）抗セラミド抗体２Ａ２を含まない対照マウス（５匹の動物）（対照）。
【0119】
創傷を、５ｍｍの生検針によって、対照（非糖尿病性）の上背部に、及びＳＴＺ誘発性糖尿病ＳＫＨ１無毛マウスの上背部に導入し、１ｍｇの２Ａ２抗セラミド抗体又はビヒクル対照（ＰＢＳ）のいずれかを４日ごとにＩＶ注射することによって注射した。創傷後０、１、４、８、１０、１２、１３、１６、２０、及び２５日目の創傷部位の代表的な写真を、図１Ａ～図１Ｂに示す。
【0120】
図２は、経時的な病巣部のサイズによって表される、各実験群における創傷治癒の平均速度を示す。病巣部サイズを正規化するために、各症例の病巣部の元のサイズを１に設定した。糖尿病マウス及び非糖尿病マウスの両方において、２Ａ２抗体の適用は、創傷治癒プロセスを加速し、この効果は、糖尿病マウス群において、より顕著であった。
【0121】
図３Ａは、１０日目の元の創傷サイズに対する％として計算された平均創傷塞がりを示す。対照群及び糖尿病群の両方で、２Ａ２を注射したマウスでは、ＰＢＳビヒクル対照を注射したマウスよりも、１０日後に、より大きな程度の創傷塞がりが達成された。
【0122】
図３Ｂは、各実験群でマウスが（元の創傷サイズと比較して）９５％の創傷塞がりを達成するのにかかった平均日数を示す。糖尿病マウス群では、２Ａ２抗体の適用は、９５％の治癒を達成するのにかかる時間の長さを顕著に短縮した。
【0123】
全体的に、この研究は、抗セラミド抗体の適用が、創傷、特に糖尿病性創傷の治癒を顕著に加速することを実証する。
【0124】
研究プロトコル：
実施例１で実施される動物試験のプロトコルを以下に示す。
実施例１で実施される動物試験のプロトコルを以下に示す。
【0125】
研究目的：ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）誘発性Ｉ型糖尿病を受けている雄ＳＫＨ１マウスに４日に１回静脈内（ＩＶ）投与した場合の創傷治癒に対する抗セラミド抗体２Ａ２の効果を調べること。
【0126】
体重が２０～２５ｇの雄ＳＫＨ１マウスを、およそ２週間かけて慣れさせた。動物を、対照（Ｃ）及び糖尿病誘発（Ｄ）マウスに分けた。糖尿病は、５日間連続してストレプトゾトシン（体重１ｋｇ当たり６５ｍｇ）を腹腔内注射することによって作り出した。最後の注射から２週間後、足背静脈から採取された血液の液滴から血糖を測定し、１ｄｌ当たり３００ｍｇを超える血糖値によって糖尿病を確認した。体重減少、多尿症、水及び食物の摂取を毎日モニタリングし、動物の臨床状態に基づいてＮＰＨインスリン注射（０～２単位／日）を提供した。創傷は、糖尿病が確認された後、前述のように導入された。
【0127】
動物を、ビヒクル又は２Ａ２のＩＶ注射治療のために２つの群に無作為に分けた。
【0128】
治療は、創傷導入の日に開始した。創傷が完全に治癒するまで（約３０日）、４日ごとにＩＶ投与を継続した。対照（Ｃ）動物に、糖尿病動物と同じ日に創傷を生成し、ビヒクル又は２Ａ２のＩＶ注射治療のために２つの群に無作為に分けた。ＩＶ治療は、創傷生成の日に開始した。創傷が完全に治癒するまで（約１５日）、４日ごとに投与を継続した。２Ａ２抗体のＩＶ用量は、４日ごとに１ｍｇ／マウス２５ｇであった。
【0129】
写真としての創傷測定は、手術直後に撮影し、その後一日おきに撮影し、治癒時間率を算出した。実験終了時に、創傷を切除し、固定し、真皮層の厚さ、マトリックス堆積、再血管形成、免疫細胞浸潤について分析した。
【0130】
【0131】
図４は、経時的な各実験群における創傷治癒の平均速度を示す。Ｙ軸は、創傷のサイズを示し、各創傷の開始時のサイズを１として正規化する。Ｘ軸は、日数を示す。
【0132】
図５Ａ～Ｄは、それぞれ各実験群について、マウスが２５％、５０％、７５％、及び９０％の治癒を達成するのにかかった平均日数を示す棒グラフである。
【0133】
この実験は、創傷治癒、特に糖尿病性創傷の統計的に顕著な加速における抗セラミド抗体によるマウスの治療を更に検証する。
【0134】
実施例３：局所抗体投与
実施例１～２に記載される創傷治癒の抗体治療加速は、創傷の場所における局所化されたセラミドシグナル伝達効果に起因すると考えられる。したがって、本開示の抗セラミド抗体及び／又はその抗原結合断片の局所投与は、実施例１～２に記載されるのと同様の効果を示すことが予想される。これらの抗体及び抗原結合断片の効果を、マウスなどの動物モデルで試験する。実験は、抗体がローション、セーブ（ｓａｖｅ）、又は当業者に既知の他の局所製剤を介して局所的に投与されることを除いて、実施例１～２に記載される実験と同様に実施される。実施例１～２に記載されるものと同様に実施される別の実験では、創傷は、抗体又はその抗原結合断片の皮下注射を介して治療される。イミプラミンなどの他のセラミドシグナル伝達阻害剤の局所投与を、実施例１及び２の方法に従って、創傷治癒に対して試験する。抗体及び／又はその抗原結合断片（又はイミプラミン）で治療された創傷は、対照動物及び／又は糖尿病動物における創傷治癒を加速／改善することが期待される。
実施例１～２に記載される創傷治癒の抗体治療加速は、創傷の場所における局所化されたセラミドシグナル伝達効果に起因すると考えられる。したがって、本開示の抗セラミド抗体及び／又はその抗原結合断片の局所投与は、実施例１～２に記載されるのと同様の効果を示すことが予想される。これらの抗体及び抗原結合断片の効果を、マウスなどの動物モデルで試験する。実験は、抗体がローション、セーブ（ｓａｖｅ）、又は当業者に既知の他の局所製剤を介して局所的に投与されることを除いて、実施例１～２に記載される実験と同様に実施される。実施例１～２に記載されるものと同様に実施される別の実験では、創傷は、抗体又はその抗原結合断片の皮下注射を介して治療される。イミプラミンなどの他のセラミドシグナル伝達阻害剤の局所投与を、実施例１及び２の方法に従って、創傷治癒に対して試験する。抗体及び／又はその抗原結合断片（又はイミプラミン）で治療された創傷は、対照動物及び／又は糖尿病動物における創傷治癒を加速／改善することが期待される。
【0135】
実施例４：内傷
追加の確認実験は、内傷を強化／加速する現在開示されている治療の能力を実証するために実施される。対照及び糖尿病対象に内傷を与え、ビヒクルを用い／用いずに、又は本開示の抗セラミド抗体若しくはイミプラミンで治療された対象において、内傷からの治癒が経時的に追跡される、モデル動物で実験が行われる。治癒は、ソノグラム、ＭＲＩ、ＣＴ、又は外科的手段による視覚的評価を含む、当業者に既知の技術のいずれかを介して追跡される。
追加の確認実験は、内傷を強化／加速する現在開示されている治療の能力を実証するために実施される。対照及び糖尿病対象に内傷を与え、ビヒクルを用い／用いずに、又は本開示の抗セラミド抗体若しくはイミプラミンで治療された対象において、内傷からの治癒が経時的に追跡される、モデル動物で実験が行われる。治癒は、ソノグラム、ＭＲＩ、ＣＴ、又は外科的手段による視覚的評価を含む、当業者に既知の技術のいずれかを介して追跡される。
【0136】
実施例５：開示された抗体及びその抗原結合断片の更なる検証
本開示は、２Ａ２抗体の検証実験を通じて、抗セラミド抗体及び／又はその抗原結合断片の効果を例示する。実施例１～２の実験は、本明細書に開示される追加の抗体及び抗原結合断片のうちのいずれか１つ、又はセラミドに結合するか、又はセラミドリッチプラットフォームの形成を阻害することができる他の抗体／抗原結合断片を使用して繰り返される。例えば、実施例１～２に記載の創傷治癒実験は、６ｂ５マウス（ＵＳ２０１９－０３８９９７０、これは参照により本明細書に組み込まれる）、並びに６ｂ５ヒト化（ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０２２９１４及びその対応する米国仮出願第６２／９９１，２３２号、これらの両方は参照により本明細書に組み込まれる）、抗体及びその断片を使用して繰り返される。
本開示は、２Ａ２抗体の検証実験を通じて、抗セラミド抗体及び／又はその抗原結合断片の効果を例示する。実施例１～２の実験は、本明細書に開示される追加の抗体及び抗原結合断片のうちのいずれか１つ、又はセラミドに結合するか、又はセラミドリッチプラットフォームの形成を阻害することができる他の抗体／抗原結合断片を使用して繰り返される。例えば、実施例１～２に記載の創傷治癒実験は、６ｂ５マウス（ＵＳ２０１９－０３８９９７０、これは参照により本明細書に組み込まれる）、並びに６ｂ５ヒト化（ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０２２９１４及びその対応する米国仮出願第６２／９９１，２３２号、これらの両方は参照により本明細書に組み込まれる）、抗体及びその断片を使用して繰り返される。
【0137】
更なる付番された実施形態
本発明の更なる実施形態は、以下の付番された実施形態で提供される。
本発明の更なる実施形態は、以下の付番された実施形態で提供される。
【0138】
実施形態１．創傷を治療又は予防することを必要とする対象においてそれを行う方法であって、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片を対象に投与することを含む、方法。
【0139】
実施形態２．創傷の治癒を強化することを必要とする対象においてそれを行う方法であって、抗セラミド抗体又はその抗原結合断片を対象に投与することを含む、方法。
【0140】
実施形態３．創傷が、慢性創傷又は糖尿病性創傷である、実施形態１又は２の方法。
【0141】
実施形態４．創傷が、慢性創傷である、実施形態１又は２の方法。
【0142】
実施形態５．創傷が、糖尿病性創傷である、実施形態１又は２の方法。
【0143】
実施形態５．１ 創傷が、外部創傷である、実施形態１又は２の方法。
【0144】
実施形態５．２ 創傷が、内部創傷である、実施形態１又は２の方法。
【0145】
実施形態５．３ 創傷が、内皮組織上にある、実施形態１又は２の方法。
【0146】
実施形態６．投与の経路が、局所投与、病巣内投与、皮下投与、経皮投与、筋肉内投与、静脈内投与、及び非経口投与からなる群から選択される、実施形態１～５．３のうちのいずれか１つの方法。
【0147】
実施形態７．投与の経路が、局所投与である、実施形態６の方法。
【0148】
実施形態８．投与の経路が、静脈内投与である、実施形態６の方法。
【0149】
実施形態９．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、単回用量として投与される、実施形態１～８のうちのいずれか１つの方法。
【0150】
実施形態１０．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、２回以上の用量で投与される、実施形態１～８のうちのいずれか１つの方法。
【0151】
実施形態１１．連続用量の投与が、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、又は少なくとも１週間離される、実施形態１０の方法。
【0152】
実施形態１２．投与の持続時間が、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、又は少なくとも４週間である、実施形態１０又は１１の方法。
【0153】
実施形態１３．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、創傷治癒の炎症段階の間に投与される、実施形態１～１２のうちのいずれか１つの方法。
【0154】
実施形態１４．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、創傷治癒の増殖段階の間に投与される、実施形態１～１３のうちのいずれか１つの方法。
【0155】
実施形態１５．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、創傷治癒の再形成段階の間に投与される、実施形態１～１４のうちのいずれか１つの方法。
【0156】
実施形態１６．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、抗体である、実施形態１～１５のうちのいずれか１つの方法。
【0157】
実施形態１７．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、実施形態１～１５のうちのいずれか１つの方法。
【0158】
実施形態１８．本方法が、対照創傷と比較して、創傷治癒を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、又は少なくとも７０％強化する、実施形態１～１７のうちのいずれか１つの方法。
【0159】
実施形態１９．創傷治癒の強化が、創傷後１０日目、２０日目、又は３０日目の創傷の全表面積の死亡によって測定される、実施形態１８の方法。
【0160】
実施形態２０．創傷治癒の強化が、創傷後１０日目に測定される、実施形態１９の方法。
【0161】
実施形態２１．創傷治癒の強化が、創傷の全表面積の５０％、７０％、９０％、９５％、又は１００％の減少を達成するのにかかる時間の死亡によって測定される、実施形態１８の方法。
【0162】
実施形態２２．創傷治癒の強化が、創傷の全表面積の９５％の減少で測定される、実施形態２１の方法。
【0163】
実施形態２３．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、創傷の１つ以上の症状の発症前に投与される、実施形態１～２２のうちのいずれか１つの方法。
【0164】
実施形態２４．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、創傷の１つ以上の症状の発症後に投与される、実施形態１～２２のうちのいずれか１つの方法。
【0165】
実施形態２５．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含み、
ａ）ＶＨが、ＧＹＴＦＴＤＨＴＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）と、ＹＮＹＰＲＤＧＳＴＫＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２と、ＧＦＩＴＴＶＶＰＳＡＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、を含み、
ｂ）ＶＬが、ＲＡＳＫＳＩＳＫＹＬＡ（配列番号４）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）と、ＳＧＳＴＬＱＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２と、ＱＱＨＮＥＹＰＷＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、実施形態１～２４のうちのいずれか１つの方法。
ａ）ＶＨが、ＧＹＴＦＴＤＨＴＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）と、ＹＮＹＰＲＤＧＳＴＫＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２と、ＧＦＩＴＴＶＶＰＳＡＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、を含み、
ｂ）ＶＬが、ＲＡＳＫＳＩＳＫＹＬＡ（配列番号４）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）と、ＳＧＳＴＬＱＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２と、ＱＱＨＮＥＹＰＷＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、実施形態１～２４のうちのいずれか１つの方法。
【0166】
実施形態２６．ＶＨが、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号８のアミノ酸配列を含む、実施形態１～２５のうちのいずれか１つの方法。
【0167】
実施形態２７．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、６Ｂ５抗体である、実施形態１～２６のうちのいずれか１つの方法。
【0168】
実施形態２８．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、６Ｂ５ｓｃＦｖ抗体である、実施形態１～２６のうちのいずれか１つの方法。
【0169】
実施形態２９．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含み、
ａ）ＶＨが、ＮＹＷＭＨ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）と、ＡＩＹＰＧＤＳＤＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２と、ＬＹＹＧＹＤ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、を含み、
ｂ）ＶＬが、ＫＳＳＱＳＬＩＤＳＤＧＫＴＦＬＮ（配列番号３６）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）と、ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号３７）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２と、ＷＱＧＴＨＦＰＹＴ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、実施形態１～２４のうちのいずれか１つの方法。
ａ）ＶＨが、ＮＹＷＭＨ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）と、ＡＩＹＰＧＤＳＤＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２と、ＬＹＹＧＹＤ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、を含み、
ｂ）ＶＬが、ＫＳＳＱＳＬＩＤＳＤＧＫＴＦＬＮ（配列番号３６）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）と、ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号３７）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２と、ＷＱＧＴＨＦＰＹＴ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、実施形態１～２４のうちのいずれか１つの方法。
【0170】
実施形態３０．ＶＨが、配列番号３９のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号４０のアミノ酸配列を含む、実施形態１～２９のうちのいずれか１つの方法。
【0171】
実施形態３１．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、２Ａ２抗体である、実施形態１～２４及び２９～３０のうちのいずれか１つの方法。
【0172】
実施形態３２．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、２Ａ２ｓｃＦｖである、実施形態１～２４及び２９～３０のうちのいずれか１つの方法。
【0173】
実施形態３３．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含み、
ａ）ＶＨが、配列番号１及び４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）と、配列番号４４～４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＨＣＤＲ２と、ＧＦＩＴＴＶＶＰＳＡＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＨＣＤＲ３と、を含み、
ｂ）ＶＬが、ＲＡＳＫＳＩＳＫＹＬＡ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）と、ＳＧＳＴＬＱＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＬＣＤＲ２と、ＱＱＨＮＥＹＰＷＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＬＣＤＲ３と、を含む、実施形態１～２４のうちのいずれか１つの方法。
ａ）ＶＨが、配列番号１及び４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）と、配列番号４４～４７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＨＣＤＲ２と、ＧＦＩＴＴＶＶＰＳＡＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＨＣＤＲ３と、を含み、
ｂ）ＶＬが、ＲＡＳＫＳＩＳＫＹＬＡ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）と、ＳＧＳＴＬＱＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＬＣＤＲ２と、ＱＱＨＮＥＹＰＷＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＬＣＤＲ３と、を含む、実施形態１～２４のうちのいずれか１つの方法。
【0174】
実施形態３４．ＨＣＤＲ１が、ＧＹＴＦＴＤＨＴＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＨＣＤＲ２が、ＹＮＹＰＲＤＧＳＴＫＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0175】
実施形態３５．ＨＣＤＲ１が、ＧＹＴＦＴＤＨＴＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＨＣＤＲ２が、ＹＮＹＰＲＥＧＳＴＫＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0176】
実施形態３６．ＨＣＤＲ１が、ＧＹＴＦＴＤＨＴＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＨＣＤＲ２が、ＹＮＹＰＲＤＶＳＴＫＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４６）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0177】
実施形態３７．ＨＣＤＲ１が、ＧＹＴＦＴＤＨＴＩＨ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＨＣＤＲ２が、ＹＮＹＰＲＤＧＳＴＫＹＡＥＫＦＱＧ（配列番号４７）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0178】
実施形態３８．ＨＣＤＲ１が、ＧＹＴＦＴＤＨＴＭＨ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＨＣＤＲ２が、ＹＮＹＰＲＤＧＳＴＫＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0179】
実施形態３９．ＨＣＤＲ１が、ＧＹＴＦＴＤＨＴＭＨ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＨＣＤＲ２が、ＹＮＹＰＲＥＧＳＴＫＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0180】
実施形態４０．ＨＣＤＲ１が、ＧＹＴＦＴＤＨＴＭＨ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＨＣＤＲ２が、ＹＮＹＰＲＤＶＳＴＫＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４６）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0181】
実施形態４１．ＨＣＤＲ１が、ＧＹＴＦＴＤＨＴＭＨ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＨＣＤＲ２が、ＹＮＹＰＲＤＧＳＴＫＹＡＥＫＦＱＧ（配列番号４７）のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0182】
実施形態４２．ＶＨが、配列番号４８に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬが、配列番号５３に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0183】
実施形態４３．ＶＨが、配列番号４８に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬが、配列番号５４に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0184】
実施形態４４．ＶＨが、配列番号４８に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬが、配列番号５５に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0185】
実施形態４５．ＶＨが、配列番号４９に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬが、配列番号５３に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0186】
実施形態４６．ＶＨが、配列番号４９に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬが、配列番号５４に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0187】
実施形態４７．ＶＨが、配列番号４９に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬが、配列番号５５に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0188】
実施形態４８．ＶＨが、配列番号５０に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬが、配列番号５３に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0189】
実施形態４９．ＶＨが、配列番号５０に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬが、配列番号５４に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0190】
実施形態５０．ＶＨが、配列番号５０に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬが、配列番号５５に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0191】
実施形態５１．ＶＨが、配列番号５１に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬが、配列番号５３に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0192】
実施形態５２．ＶＨが、配列番号５１に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬが、配列番号５４に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0193】
実施形態５３．ＶＨが、配列番号５１に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬが、配列番号５５に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0194】
実施形態５４．ＶＨが、配列番号５２に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬが、配列番号５３に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0195】
実施形態５５．ＶＨが、配列番号５２に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬが、配列番号５４に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0196】
実施形態５６．ＶＨが、配列番号５２に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり、ＶＬが、配列番号５５に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％同一、又は１００％同一であるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、実施形態３３の方法。
【0197】
実施形態５７．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、ヒト化６Ｂ５（ｈ６Ｂ５）抗体である、実施形態３３～５６のうちのいずれか１つの方法。
【0198】
実施形態５８．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、ｈ６Ｂ５ｓｃＦｖ抗体である、実施形態３３～５６のうちのいずれか１つの方法。
【0199】
実施形態５９．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含み、ＶＨが、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号５３のアミノ酸配列を含む、実施形態１～２４のうちのいずれか１つの方法。
【0200】
実施形態６０．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含み、ＶＨが、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、実施形態１～２４のうちのいずれか１つの方法。
【0201】
実施形態６１．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含み、ＶＨが、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号５３のアミノ酸配列を含む、実施形態１～２４のうちのいずれか１つの方法。
【0202】
実施形態６２．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含み、ＶＨが、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、実施形態１～２４のうちのいずれか１つの方法。
【0203】
実施形態６３．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含み、ＶＨが、配列番号５０のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号５３のアミノ酸配列を含む、実施形態１～２４のうちのいずれか１つの方法。
【0204】
実施形態６４．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含み、ＶＨが、配列番号５０のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、実施形態１～２４のうちのいずれか１つの方法。
【0205】
実施形態６５．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含み、ＶＨが、配列番号５１のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号５３のアミノ酸配列を含む、実施形態１～２４のうちのいずれか１つの方法。
【0206】
実施形態６６．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含み、ＶＨが、配列番号５２のアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号５３のアミノ酸配列を含む、実施形態１～２４のうちのいずれか１つの方法。
【0207】
実施形態６７．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、ヒト化抗体である、実施形態５９～６６のうちのいずれか１つの方法。
【0208】
実施形態６８．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、ヒト化ｓｃＦｖである、実施形態５９～６６のうちのいずれか１つの方法。
【0209】
実施形態６９．創傷を治療又は予防することを必要とする対象においてそれを行う方法であって、イミプラミン又はその塩を対象に投与することを含む、方法。
【0210】
実施形態７０．創傷の治癒を強化することを必要とする対象においてそれを行う方法であって、イミプラミン又はその塩を対象に投与することを含む、方法。
【0211】
実施形態７１．創傷が、慢性創傷又は糖尿病性創傷である、実施形態７０又は７１の方法。
【0212】
実施形態７２．創傷が、慢性創傷である、実施形態７０又は７１の方法。
【0213】
実施形態７３．創傷が、糖尿病性創傷である、実施形態７０又は７１２の方法。
【0214】
実施形態７４．投与の経路が、局所投与、病巣内投与、皮下投与、経皮投与、筋肉内投与、静脈内投与、及び非経口投与からなる群から選択される、実施形態７０～７３のうちのいずれか１つの方法。
【0215】
実施形態７５．投与の経路が、局所投与である、実施形態７４の方法。
【0216】
実施形態７６．投与の経路が、静脈内投与である、実施形態７４の方法。
【0217】
実施形態７７．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、単回用量として投与される、実施形態７０～７６のうちのいずれか１つの方法。
【0218】
実施形態７８．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、２回以上の用量で投与される、実施形態１～８のうちのいずれか１つの方法。
【0219】
実施形態７９．連続用量の投与が、少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、又は少なくとも１週間離される、実施形態７８の方法。
【0220】
実施形態８０．投与の持続時間が、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、又は少なくとも４週間である、実施形態７８又は７９の方法。
【0221】
実施形態８１．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、創傷治癒の炎症段階の間に投与される、実施形態７０～８０のうちのいずれか１つの方法。
【0222】
実施形態８２．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、創傷治癒の増殖段階の間に投与される、実施形態７０～８１のうちのいずれか１つの方法。
【0223】
実施形態８３．抗セラミド抗体又はその抗原結合断片が、創傷治癒の再形成段階の間に投与される、実施形態７０～８２のうちのいずれか１つの方法。
【0224】
参照による組み込み
本明細書で引用される全ての引用文献、文献、刊行物、特許、特許公開、及び特許出願は、あらゆる目的に関して、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。しかしながら、本明細書に引用される任意の引用文献、文献、刊行物、特許、特許公開、及び特許出願の言及は、それらが有効な先行技術を構成する、又は世界のどの国でも一般的な知識の一部を形成するという認識、又はいかなる形態の示唆ではなく、そのようにみなされるべきではない。
本明細書で引用される全ての引用文献、文献、刊行物、特許、特許公開、及び特許出願は、あらゆる目的に関して、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。しかしながら、本明細書に引用される任意の引用文献、文献、刊行物、特許、特許公開、及び特許出願の言及は、それらが有効な先行技術を構成する、又は世界のどの国でも一般的な知識の一部を形成するという認識、又はいかなる形態の示唆ではなく、そのようにみなされるべきではない。
【図1A】
【図1B】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図4】
【図5A】
【図5B】
【図5C】
【図5D】
【配列表】
【国際調査報告】