特表 2024-511088 ２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン免疫複合体、及びその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-12

(54)【発明の名称】２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン免疫複合体、及びその使用

(51)【国際特許分類】

   C07K 16/30 20060101AFI20240305BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240305BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240305BHJP

   A61K 47/54 20170101ALI20240305BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20240305BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20240305BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240305BHJP

   A61K 31/55 20060101ALI20240305BHJP

【ＦＩ】

C07K16/30 ZNA

A61P35/00

A61P37/02

A61K47/54

A61P35/04

A61P15/00

A61K39/395 T

A61K31/55

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023558212

(86)(22)【出願日】2022-03-25

(85)【翻訳文提出日】2023-11-16

(86)【国際出願番号】 US2022021985

(87)【国際公開番号】W WO2022204536

(87)【国際公開日】2022-09-29

(31)【優先権主張番号】63/166,710

(32)【優先日】2021-03-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】519211672

【氏名又は名称】ボルト バイオセラピューティクス、インコーポレーテッド

(74)【代理人】

【識別番号】110002077

【氏名又は名称】園田・小林弁理士法人

(72)【発明者】

【氏名】ブラント， ゲイリー

(72)【発明者】

【氏名】クディルカ， ロマス

(72)【発明者】

【氏名】サフィナ， ブライアン

【テーマコード（参考）】

4C076

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC17

4C076CC27

4C076CC41

4C076DD60

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF70

4C085AA14

4C085AA25

4C085BB11

4C085EE01

4C086AA01

4C086BC32

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA13

4C086ZA81

4C086ZB26

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA50

4H045DA76

4H045EA22

4H045EA28

4H045FA50

4H045GA21

(57)【要約】

本開示は、１つ以上の２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン誘導体にコンジュゲーションによって連結された抗体を含む、式Ｉの免疫複合体を提供する。本発明はまた、反応性官能基を含む２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン誘導体中間体組成物を提供する。このような中間体組成物は、リンカーまたは連結部位を介した前記免疫複合体の形成に適した基質である。本発明は更に、前記免疫複合体を用いてがんを治療する方法を提供する。
【化１】

【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

１つ以上の２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン部分にリンカーによって共有結合され、式Ｉ：

【化1】

を有する抗体、またはその薬学的に許容される塩を含み、
Ａｂは、ＰＤ－Ｌ１、ＨＥＲ２、ＣＥＡ及びＴＲＯＰ２から選択される標的に結合する抗体である、抗体であり、
ｐは、１～８の整数であり、
Ｘ^２及びＸ^３は、独立して、結合、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）、Ｏ、Ｎ（Ｒ^５）、Ｓ、Ｓ（Ｏ）_２、及びＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^５）からなる群から選択され、
Ｒ^１ａ、Ｒ^１ｂ及びＲ^２は、独立して、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル、Ｃ_２～Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル、及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールからなる群から選択されるか、またはＲ^１ａ及びＲ^１ｂは、５員または６員のヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^３は、
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｓ（Ｏ_２）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_６～Ｃ_２０アルキルジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリール）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリルジイル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－＊；及び
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）－Ｎ（Ｒ^５）－＊からなる群から選択され、
アスタリスク＊は、リンカーＬの結合部位を示し、
または、Ｒ^２及びＲ^３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^５は、独立して、Ｈ、Ｃ６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル、Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル、及びＣ_１～Ｃ_１２アルキルジイルからなる群から選択されるか、または２つのＲ^５基は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^５ａは、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｌは、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ^＋（Ｒ^６）_２－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－；及び
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－からなる群から選択され、
Ｒ^６は、独立して、ＨまたはＣ_１～Ｃ_６アルキルであり、
ＰＥＧは、式：－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－を有し、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり、
Ｇｌｕｃは、式：

【化2】

を有し、
ＰＥＰは、式：

【化3】

を有し、ＡＡは、天然もしくは非天然アミノ酸側鎖から独立して選択されるか、またはＡＡ及び隣接する窒素原子のうちの１つ以上は５員環プロリンアミノ酸を形成し、波線は結合点を示しており、
Ｃｙｃは、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ_２、－ＯＨ－、ＯＣＨ_３及び構造：

【化4】

を有するグルクロン酸選択される１つ以上の基で任意選択で置換されている、Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイルから選択され、
Ｒ^７は、－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－、－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２Ｎ（Ｒ^８）－及び－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－からなる群から選択され、Ｒ^８は、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ_１～Ｃ_６アルキル及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^９）_２から選択され、Ｒ^９は、独立して、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル及び－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－ＯＨからなる群から選択され、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり、または２つのＲ^９基は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリル環を形成し、
ｙは２～１２の整数であり、
ｚは０または１であり、
アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール及びヘテロアリールジイルは、独立してかつ任意選択で、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ＝ＣＨ_２、－Ｃ－ＣＨ、－Ｃ－ＣＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨＦ_２、－ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＨＦ_２、－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＮＨＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＮＨＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＣＯ_２Ｈ、－ＣＯＣＨ_３、－ＣＯ_２ＣＨ_３、－ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、－ＣＯＮＨ_２、－ＣＯＮＨＣＨ_３、－ＣＯＮ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＨＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＮＨＣＯＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＯＣＨ_３、－ＮＨＳ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＯ_２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍＣＯ_２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＦ_３、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＳＣＨ_３、－Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、及び－Ｓ（Ｏ）_３Ｈから独立して選択される１つ以上の基で置換される、免疫複合体。

【請求項2】

前記抗体は、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗原結合ドメインを有する、抗体コンストラクトである、請求項１に記載の免疫複合体。

【請求項3】

前記抗体は、アテゾリズマブ、デュルバルマブ及びアベルマブ、またはこれらのバイオシミラーまたはバイオベターからなる群から選択される、請求項２に記載の免疫複合体。

【請求項4】

前記抗体は、ＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを有する、抗体コンストラクトである、請求項１に記載の免疫複合体。

【請求項5】

前記抗体は、トラスツズマブ及びペルツズマブ、またはこれらのバイオシミラーまたはバイオベターからなる群から選択される、請求項４に記載の免疫複合体。

【請求項6】

前記抗体は、ＣＥＡに結合する抗原結合ドメインを有する、抗体コンストラクトである、請求項１に記載の免疫複合体。

【請求項7】

前記抗体は、ラベツズマブ、またはそのバイオシミラーまたはバイオベターである、請求項６に記載の免疫複合体。

【請求項8】

前記抗体は、ＴＲＯＰ２に結合する抗原結合ドメインを有する、抗体コンストラクトである、請求項１に記載の免疫複合体。

【請求項9】

前記ＴＲＯＰ２抗体は、モノクローナル抗体である、請求項８に記載の免疫複合体。

【請求項10】

Ｒ^１ａ及びＲ^１ｂは、任意選択で置換されたＣ_６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールからなる群から独立して選択される、請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫複合体。

【請求項11】

Ｒ^１ａは任意選択で置換されたＣ_６～Ｃ_２０アリールであり、Ｒ^１ｂはＨである、請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫複合体。

【請求項12】

Ｒ^１ａ及びＲ^１ｂは、５員または６員のヘテロシクリル環を形成する、請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫複合体。

【請求項13】

Ｘ^２及びＸ^３のそれぞれは結合であり、Ｒ^２及びＲ^３は、Ｃ１～Ｃ８アルキル、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）、－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＲ^５、－（Ｃ_１～Ｃ_８アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^５、－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^５、及び－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２からなる群から独立して選択される、請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫複合体。

【請求項14】

Ｘ^２は結合であり、Ｒ^２はＣ_１～Ｃ_１２アルキルである、請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫複合体。

【請求項15】

Ｘ^３はＯであり、Ｒ^３は－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊である、請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫複合体。

【請求項16】

Ｒ^３は－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ－である、請求項１５に記載の免疫複合体。

【請求項17】

Ｌは－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－である、請求項１５に記載の免疫複合体。

【請求項18】

ＬはＰＥＧを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫複合体。

【請求項19】

ｎは１０であり、ｍは１である、請求項１８に記載の免疫複合体。

【請求項20】

ＡＡ_１及びＡＡ_２は、天然に存在するアミノ酸の側鎖から独立して選択される、請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫複合体。

【請求項21】

隣接する窒素原子を有するＡＡ_１またはＡＡ_２は、５員環プロリンアミノ酸を形成する、請求項２０に記載の免疫複合体。

【請求項22】

ＡＡ_１及びＡＡ_２は、Ｈ、－ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２（Ｃ_６Ｈ_５）、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ_２、－ＣＨＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＳＯ_３Ｈ、及び－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２からなる群から独立して選択される、請求項２０に記載の免疫複合体。

【請求項23】

ＡＡ_１は－ＣＨ（ＣＨ_３）_２であり、ＡＡ_２は－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２である、請求項２２に記載の免疫複合体。

【請求項24】

式Ｉａ：を有する、請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫複合体。

【化5】

【請求項25】

Ｒ^１ａは、任意選択で置換されたＣ_６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル、及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールから選択される基である、請求項２４に記載の免疫複合体。

【請求項26】

Ｒ^１ａはピリミジニルまたはピリジルである、請求項２５に記載の免疫複合体。

【請求項27】

Ｘ^２は結合であり、Ｒ^２はＣ_１～Ｃ_１２アルキルである、請求項２４に記載の免疫複合体。

【請求項28】

Ｒ^３は－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊である、請求項２４に記載の免疫複合体。

【請求項29】

Ｘ^３－Ｒ^３－Ｌは、

【化6】

からなる群から選択され、波線はＮへの結合点を示す、請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫複合体。

【請求項30】

ＬはＰＥＧを含む、請求項２９に記載の免疫複合体。

【請求項31】

ｎは１０であり、ｍは１である、請求項３０に記載の免疫複合体。

【請求項32】

表２ａ及び表２ｂから選択される２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物。

【請求項33】

抗体と、表２ａ及び表２ｂから選択される２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物とのコンジュゲートによって調製される、免疫複合体。

【請求項34】

治療上有効な量の請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫複合体と、薬学的に許容される希釈剤、担体または賦形剤と、を含む、医薬組成物。

【請求項35】

治療上有効な量の請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫複合体をそれを必要とする患者に投与することを含む、がんを治療するための方法であって、前記がんは、膀胱癌、尿路癌、尿路上皮癌、肺癌、非小細胞肺癌、メルケル細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、及び乳癌から選択される、前記方法。

【請求項36】

前記がんは、ＴＬＲ７及び／またはＴＬＲ８アゴニズムによって誘発される炎症誘発性応答に感受性である、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記乳癌は、トリプルネガティブ乳癌である、請求項３５に記載の方法。

【請求項38】

前記メルケル細胞癌は、転移性メルケル細胞癌である、請求項３５に記載の方法。

【請求項39】

前記がんは、胃食道接合部腺癌である、請求項３５に記載の方法。

【請求項40】

請求項１～９のいずれか一項に記載の式Ｉの免疫複合体を調製する方法であって、請求項３２に記載の２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカーは、前記抗体とコンジュゲートされている、前記方法。

【請求項41】

膀胱癌、尿路癌、尿路上皮癌、肺癌、非小細胞肺癌、メルケル細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、及び乳癌から選択される、がんを治療するための請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫複合体の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月２６日出願の米国仮特許出願第６３／１６６，７１０号に対する優先権の利益を主張し、それは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。上記ＡＳＣＩＩコピーは、２０２２年３月２５日に作成され、名称は１７０１９＿０１５ＷＯ１＿ＳＬ．ｔｘｔであり、サイズは８５，３６９バイトである。

【0003】

本発明は概ね、１つ以上の２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン分子にコンジュゲートされた抗体を含む、免疫複合体に関する。

【背景技術】

【0004】

アクセスできない腫瘍に到達するために及び／またはがん患者や他の対象の治療の選択肢を拡大するために、抗体ならびに樹状細胞／骨髄細胞アジュバントを送達するための新しい組成物と方法が必要とされている。本発明は、そのような組成物及び方法を提供する。

【発明の概要】

【0005】

本開示は概ね、１つ以上の２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン誘導体にコンジュゲーションによって連結された抗体を含む、免疫複合体に関する。本発明は更に、反応性官能基を含む２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン誘導体中間体組成物に関する。そのような中間体組成物は、免疫複合体の形成に適した基質であり、抗体は、リンカーによって、式：

【化1】

を有する２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン部分の４位に共有結合され得、
Ｒ^３は、リンカーＬに結合している。３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン構造の位置は、ＩＵＰＡＣ規則に従って番号付けした。Ｘ^２－３及びＲ^１－３置換基は、本明細書に定義される。

【0006】

抗体は、ＰＤ－Ｌ１、ＨＥＲ２、ＴＲＯＰ２及びＣＥＡからなる群から選択される標的に結合する。

【0007】

本開示は更に、疾病、具体的にはがんの治療における、そのような免疫複合体の使用に関する。

【0008】

本発明の一態様は、１つ以上の２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン部分に共有結合しているリンカーに共有結合している抗体を含む、免疫複合体である。
本発明の別の態様は、２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物である。

【0009】

本発明の別の態様は、１つ以上の２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン部分へのコンジュゲーションによって連結された抗体を含む、治療上有効な量の免疫複合体を投与することを含む、がんを治療するための方法である。

【0010】

本発明の別の態様は、がんを治療するための１つ以上の２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン部分へのコンジュゲーションによって連結された抗体を含む、免疫複合体の使用である。

【0011】

本発明の別の態様は、１つ以上の２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンを抗体とコンジュゲーションさせることによって免疫複合体を調製する方法である。

【発明を実施するための形態】

【0012】

これより本発明の特定の実施形態を詳細に参照するが、それらの例は、添付の構造及び式に例証されている。本発明は、列挙される実施形態と併せて説明されるが、それらは、本発明をこれらの実施形態に限定することを意図するものではないことを理解されたい。逆に、本発明は、すべての代替形、修正形、及び同等物を網羅することが意図されており、それらは、特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内に含まれ得る。

【0013】

当業者であれば、本発明の実施に使用することができる、本明細書に記載されるものに類似または同等である多くの方法及び材料を理解するであろう。本発明は、決して記載される方法及び材料に限定されるものではない。

【0014】

定義
「Ｔｏｌｌ様受容体」及び「ＴＬＲ」という用語は、病原体関連分子パターンを認識し、自然免疫における重要なシグナル伝達要素として機能する、高度に保存された哺乳類タンパク質のファミリーのメンバーを指す。ＴＬＲポリペプチドは、ロイシンリッチリピートを持つ細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＴＬＲシグナル伝達に関与する細胞内ドメインを含む、特徴的な構造を共有している。

【0015】

「Ｔｏｌｌ様受容体７」及び「ＴＬＲ７」という用語は、一般公開されているＴＬＲ７配列（例えば、ヒトＴＬＲ７ポリペプチドのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＺ９９０２６またはマウスＴＬＲ７ポリペプチドのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＫ６２６７６）に少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％以上の配列同一性を共有している核酸またはポリペプチドを指す。

【0016】

「Ｔｏｌｌ様受容体８」及び「ＴＬＲ８」という用語は、一般公開されているＴＬＲ７配列（例えば、ヒトＴＬＲ８ポリペプチドのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＺ９５４４１またはマウスＴＬＲ８ポリペプチドのＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＫ６２６７７）に少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％以上の配列同一性を共有している核酸またはポリペプチドを指す。

【0017】

「ＴＬＲアゴニスト」は、ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ７及び／または）に直接的または間接的に結合すして、ＴＬＲシグナル伝達を誘導する物質である。ＴＬＲシグナル伝達の検出可能な差異は、アゴニストがＴＬＲを刺激または活性化するのを示している可能性がある。シグナル伝達の差異は、例えば、標的遺伝子の発現の変化、シグナル伝達成分のリン酸化の変化、核因子－γＢ（ＮＦ－γＢ）などの下流要素の細胞内局在の変化、特定の成分（ＩＬ－１受容体関連キナーゼ（ＩＲＡＫ）など）と他のタンパク質もしくは細胞内構造との関連の変化、またはキナーゼなどの成分（マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）など）の生化学的活性の変化として現れる可能性がある。

【0018】

「抗体」は、免疫グロブリン遺伝子またはその断片からの抗原結合領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む）を含む、ポリペプチドを指す。「抗体」という用語は、具体的には、所望される生物学的活性を示す、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を包含する。例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は、四量体を含む。各四量体は、２つの同一のポリペプチド鎖対で構成され、各対は、ジスルフィド結合によって接続される、１つの「軽鎖」（約２５ｋＤａ）及び１つの「重鎖」（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖は、免疫グロブリンドメインと呼ばれる構造ドメインから構成される。これらのドメインは、例えば、軽鎖及び重鎖の可変ドメインまたは領域（それぞれＶ_Ｌ及びＶ_Ｈ）、軽鎖及び重鎖の定常ドメインまたは領域（それぞれＣ_Ｌ及びＣ_Ｈ）など、サイズと機能によって様々なカテゴリーに分類される。各鎖のＮ－末端は、抗原認識を主に担う、パラトープと称される、約１００～１１０個以上のアミノ酸の可変領域、すなわち抗原結合ドメインを画定する。軽鎖は、κまたはλのいずれかに分類される。重鎖は、γ、μ、α、δまたはεとして分類され、そして、これらの重鎖によって、それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥという免疫グロブリンの分類が定められる。ＩｇＧ抗体は、４つのペプチド鎖で構成される約１５０ｋＤａの大きな分子である。ＩｇＧ抗体は、約５０ｋＤａの２つの同一のクラスγ重鎖と約２５ｋＤａの２つの同一の軽鎖を含み、したがって四量体の四次構造を含む。２つの重鎖は互いに結合され、それぞれジスルフィド結合によって軽鎖に結合されている。得られた四量体は２つの同じの半分部分を持ち、これらが一緒になってＹ字型の形状を形成する。枝分かれした両端には、同じの抗原結合ドメインが含まれている。ヒトには４つのＩｇＧサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）があり、血清中の存在量の順に名前がつけられている（つまり、ＩｇＧ１が最も豊富である）。通常、抗体の抗原結合ドメインは、がん細胞への結合の特異性と親和性において最も重要である。

【0019】

「二重特異性」抗体（ｂｓＡｂ）は、２つの異なるエピトープをがんに結合する抗体である（Ｓｕｕｒｓ Ｆ．Ｖ．ｅｔ ａｌ（２０１９）Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ２０１：１０３－１１９）。二重特異性抗体は、免疫細胞に係合して腫瘍細胞を破壊し、ペイロードを腫瘍に送達することができ、及び／または腫瘍シグナル伝達経路を遮断することができる。特定の抗原を標的にする抗体は、特定の抗原を標的にする少なくとも１つの抗原結合領域を有する二重特異性または多重特異性抗体を含む。いくつかの実施形態では、標的モノクローナル抗体は、腫瘍細胞を標的とする少なくとも１つの抗原結合領域を有する二重特異性抗体である。そのような抗原としては、メソテリン、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＨＥＲ２、ＴＲＯＰ２、ＣＥＡ、ＥＧＦＲ、５Ｔ４、ネクチン４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ７０、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４（０８Ｅとしても公知）、タンパク質チロシンキナーゼ７（ＰＴＫ７）、グリピカン３、ＲＧ１、フコシルＧＭｌ、ＣＴＬＡ－４、及びＣＤ４４（ＷＯ２０１７／１９６５９８）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0020】

特定の抗原を標的にする抗体は、特定の抗原を標的にする少なくとも１つの抗原結合領域を有する二重特異性または多重特異性抗体を含む。いくつかの実施形態では、標的モノクローナル抗体は、腫瘍細胞を標的とする少なくとも１つの抗原結合領域を有する二重特異性抗体である。そのような抗原には、ＣＤ４７、ＳＩＲＰα、デクチン－２、ＰＤ－１、及びＰＤ－Ｌ１が含まれる。

【0021】

「抗体コンストラクト」とは、（ｉ）抗原結合ドメイン及び（ｉｉ）Ｆｃドメインを含む、抗体または融合タンパク質を指す。

【0022】

「免疫複合体」という用語は、リンカーを介してアジュバント部分に共有結合している抗体コンストラクトを指す。免疫複合体は、標的抗原が結合している間に、活性アジュバント部分を標的とした送達を可能にする。

【0023】

「アジュバント」は、アジュバントに曝露された対象において免疫応答を誘発することができる物質を指す。「アジュバント部分」という用語は、本明細書に記載されるように、例えばリンカーを介して抗体コンストラクトに共有結合されるアジュバントを指す。アジュバント部分は、抗体コンストラクトに結合している間、または対象への免疫複合体の投与後の抗体コンストラクトからの切断（例えば、酵素的切断）後に免疫応答を誘発することができる。

【0024】

いくつかの実施形態では、結合剤は、抗原結合抗体「断片」であり、これは、抗体の少なくとも抗原結合領域単独で、または一緒になって抗原結合コンストラクトを構成する他の構成成分と共に含む、コンストラクトである。多くの異なる種類の抗体「断片」は当技術分野で公知であり、例えば、（ｉ）Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、Ｃ_Ｌ及びＣＨ_１ドメインからなる一価の断片であるＦａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域でのジスルフィド架橋により結合した２つのＦａｂ断片を含む２価の断片である、Ｆ（ａｂ’）_２断片、（ｉｉｉ）抗体の単一アームのＶ_Ｌ及びＶ_ＨドメインからなるＦｖ断片、（ｉｖ）穏やかな還元条件下でＦ（ａｂ’）_２断片のジスルフィド架橋の切断から得られる、Ｆ（ａｂ’）断片、（ｖ）ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、ならびに（ｖ）２つのドメインが１つのポリペプチド鎖として合成されることを可能にする合成リンカーによって結合されたＦｖ断片の２つのドメイン（つまり、Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈ）からなる１価の分子である、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む。

【0025】

抗体または抗体断片は、より大きなコンストラクトの一部、例えば、抗体断片の追加の領域へのコンジュゲートまたは融合コンストラクトの一部であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、抗体断片は、本明細書に記載されるようにＦｃ領域に融合することができる。他の実施形態では、抗体断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）は、例えば、膜貫通ドメインへの融合（任意選択で介在するリンカーまたは「ストーク」（例えば、ヒンジ領域）により）及び任意選択の細胞間シグナル伝達ドメインへの融合によって、キメラ抗原受容体またはキメラＴ細胞受容体の一部であり得る。例えば、抗体断片は、ｔ細胞受容体のγ鎖及び／またはδ鎖に融合され、ＰＤ－Ｌ１を結合するＴ細胞受容体様コンストラクトを提供し得る。更に別の実施形態では、抗体断片は、ＣＤ１またはＣＤ３結合ドメイン及びリンカーを含む二重特異性Ｔ細胞誘導（ＢｉＴＥ）の一部である。

【0026】

「システイン変異抗体」とは、抗体の１つ以上のアミノ酸残基がシステイン残基で置換されている抗体である。システイン変異抗体は、抗体工学法により親抗体から調製することができる（Ｊｕｎｕｔｕｌａ，ｅｔ ａｌ．，（２００８ｂ）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２６（８）：９２５－９３２；Ｄｏｒｎａｎ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｂｌｏｏｄ１１４（１３）：２７２１－２７２９；米国特許第７５２１５４１号；同第７７２３４８５号；同第２０１２／０１２１６１５号；ＷＯ２００９／０５２２４９）。システイン残基は、操作されたシステイン部位での反応性システインチオール基を介した抗体へのＴＬＲアゴニストなどのアジュバントの部位特異的コンジュゲーションを提供するが、免疫グロブリンの折り畳み及びアセンブリーを妨害しないか、または抗原結合及びエフェクター機能を変化させない。システイン変異抗体は、免疫複合体の均一な化学量論（例えば、単一の操作された変異システイン部位を有する抗体における抗体１つ当たり最大２つのＴＬＲアゴニスト部分）により、ＴＬＲアゴニストリンカー化合物にコンジュゲートすることができる。ＴＬＲアゴニスト－リンカー化合物は、システイン変異抗体の遊離システインチオール基と特異的に反応する反応性求電子基を有する。

【0027】

「エピトープ」とは、抗原結合ドメインが結合する抗原の任意の抗原決定基またはエピトープ決定基（すなわち、抗原結合ドメインのパラトープで）を意味する。抗原決定基は通常、アミノ酸または糖の側鎖などの分子の化学的に活性な分子の表面基群からなり、通常、特定の３次元構造特性及び特定の電荷特性を有する。

【0028】

「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」という用語は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を指す。Ｆｃ受容体には３つの主要なクラス：（１）ＩｇＧに結合するＦｃγＲ、（２）ＩｇＡに結合するＦｃαＲ、及び（３）ＩｇＥに結合するＦｃεＲがある。ＦｃγＲファミリーには、ＦｃγＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）及びＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６Ｂ）などのいくつかのメンバーが含まれる。Ｆｃγ受容体はＩｇＧに対する親和性が異なり、ＩｇＧサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）に対する親和性も異なる。

【0029】

本明細書で使用する場合、「免疫チェックポイント阻害剤」という語句は、免疫チェックポイント分子の活性を阻害する任意の調節剤を指す。免疫チェックポイント阻害剤には、免疫チェックポイント分子結合タンパク質、小分子阻害剤、抗体（免疫チェックポイントタンパク質を標的とする少なくとも１つの抗原結合領域を有する二重特異性抗体及び多重特異性抗体、例えば、免疫チェックポイントタンパク質のみを標的としない二重特異性抗体または多重特異性抗体、ならびに二重免疫調節剤（同時に２つの免疫調節標的を標的とする）（阻害標的の遮断、抑制細胞の枯渇、及び／またはエフェクター細胞の活性化をもたらす）；腫瘍標的免疫調節剤（腫瘍抗原及びＣＤ４０または４－１ＢＢなどの共刺激分子を標的とすることにより、腫瘍浸潤免疫細胞に強力な共刺激を誘導する）；ＮＫ細胞リダイレクト剤（腫瘍抗原及びＣＤ１６Ａを標的とすることにより、ＮＫ細胞を悪性細胞にリダイレクトする）；またはＴ細胞リダイレクト剤（腫瘍抗原及びＣＤ３を標的とすることにより、Ｔ細胞を悪性細胞にリダイレクトする）である抗体を含む）、抗体誘導体（Ｆｃ融合、Ｆａｂ断片及びｓｃＦｖを含む）、抗体薬物複合体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、アプタマー、ペプチド及びペプチド模倣物が含まれ得るが、これらに限定されない。

【0030】

本明細書で参照される核酸またはアミノ酸配列の「同一性」は、対象の核酸またはアミノ酸配列を参照する核酸またはアミノ酸配列と比較することによって決定され得る。同一性パーセントは、最適に整列された対象の配列と最長の配列の長さ（すなわち、対象の配列または参照配列のいずれかの長さ、いずれか長い方）で割った参照配列との間で同じ（すなわち、同一）であるヌクレオチドまたはアミノ酸残基の数である。配列のアラインメント及び同一性パーセントの計算は、利用可能なソフトウェアプログラムを用いて実行することができる。そのようなプログラムの例としては、ＣＬＵＳＴＡＬ－Ｗ、Ｔ－Ｃｏｆｆｅ、及びＡＬＩＧＮ（核酸及びアミノ酸配列のアラインメントのため）、ＢＬＡＳＴプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴ２．１、ＢＬ２ＳＥＱ、ＢＬＡＳＴｐ、ＢＬＡＳＴｎなど）、及びＦＡＳＴＡプログラム（例えば、ＦＡＳＴＡ３ｘ、ＦＡＳＴＭ及びＳＲＥＳＥＡＲＣＨ）（配列アラインメント及び配列相似性検索のため）が挙げられる。配列アラインメントアルゴリズムはまた、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３－４１０（１９９０），Ｂｅｉｇｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕｓａ，１０６（１０）：３７７０－３７７５（２００９），Ｄｕｒｂｉｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ｐｒｏｂａｌｉｓｍ Ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ（２００９），Ｓｏｄｉｎｇ，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，２１（７）：９５１－９６０（２００５），Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５（１７）：３３８９－３４０２ １９９７）及びＧｕｓｆｉｅｌｄ，Ａｌｇｏｒｉｔｈｍｓ ｏｎ Ｓｔｒｉｎｇｓ，Ｔｒｅｅ ａｎｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ＵＫ（１９９７））に開示されている。配列の同一性パーセント（％）は、例えば、１００×１［（同一位置）／ｍｉｎ（ＴＧＡ，ＴＧＢ）］として計算することもでき、ＴＧＡ及びＴＧＢは、ＴＧＡ及びＴＧＢを最小化するアラインメントにおけるペプチド配列Ａ及びＢの残基数と内部ギャップ位置の合計である。例えば、Ｒｕｓｓｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，２４４：３３２－３５０（１９９４）を参照のこと。

【0031】

結合剤は、抗原結合部位を一緒に形成するＩｇ重鎖及び軽鎖の可変領域ポリペプチドを含む。重鎖及び軽鎖の可変領域のそれぞれは、フレームワーク領域により連結された３つの相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含むポリペプチドである。結合剤は、Ｉｇ重鎖及び軽鎖を含む、当技術分野で公知の様々な種類の結合剤のいずれかであり得る。例えば、結合剤は、抗体、抗原結合抗体「断片」、またはＴ細胞受容体であり得る。

【0032】

「バイオシミラー」とは、例えば、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）、デュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩ（商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）及びアベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ（商標）、ＥＭＤＳｅｒｏｎｏ、Ｐｆｉｚｅｒ）などの以前に承認されたＰＤ－Ｌ１標的化抗体コンストラクト；トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．）及びペルツズマブ（ＰＥＲＪＥＴＡ（商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．）などの以前に承認されたＨＥＲ２標的化抗体コンストラクト；またはラベツズマブ（ＣＥＡ－ＣＩＤＥ（商標）、ＭＮ－１４、ｈＭＮ１４、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）ＣＡＳ登録番号２１９６４９－０７－７）などのＣＥＡ標的化抗体と同様の活性特性を有する、承認された抗体コンストラクトを指す。

【0033】

「バイオベター」とは、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ及びラベツズマブなどの以前に承認された抗体コンストラクトの改善である、承認された抗体コンストラクトを指す。バイオベターは、以前に承認された抗体コンストラクトに対して１つ以上の修飾（例えば、変更されたグリカンプロファイル、または固有のエピトープ）を有することができる。

【0034】

「アミノ酸」とは、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質に組み込むことができる任意のモノマー単位を指す。アミノ酸には、天然に存在するα－アミノ酸とその立体異性体、及び非天然（天然に存在しない）アミノ酸とその立体異性体が含まれる。所与のアミノ酸の「立体異性体」とは、分子式及び分子内結合が同じであるが、結合及び原子の三次元配置が異なる異性体（例えば、ｌ－アミノ酸及び対応するｄ－アミノ酸）を指す。アミノ酸は、グリコシル化（例えば、Ｎ－結合型グリカン、Ｏ－結合型グリカン、ホスホグリカン、Ｃ－結合型グリカン、またはグリピケーション）または脱グリコシル化することができる。アミノ酸は、本明細書では、広く知られている３文字の記号、またはＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨されている１文字の記号のいずれかによって表され得る。

【0035】

天然アミノ酸は、遺伝子コードによってコードされたもの、及びそれらのアミノ酸が後で修飾されたもの（例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタメート及びＯ－ホスホセリン）である。天然に存在するα－アミノ酸としては、アラニン（Ａｌａ）、システイン（Ｃｙｓ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リシン（Ｌｙｓ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、プロリン（Ｐｒｏ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、バリン（Ｖａｌ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。天然に存在するα－アミノ酸の立体異性体としては、Ｄ－アラニン（Ｄ－Ａｌａ）、Ｄ－システイン（Ｄ－Ｃｙｓ）、Ｄ－アスパラギン酸（Ｄ－Ａｓｐ）、Ｄ－グルタミン酸（Ｄ－Ｇｌｕ）、Ｄ－フェニルアラニン（Ｄ－Ｐｈｅ）、Ｄ－ヒスチジン（Ｄ－Ｈｉｓ）、Ｄ－イソロイシン（Ｄ－Ｉｌｅ）、Ｄ－アルギニン（Ｄ－Ａｒｇ）、Ｄ－リシン（Ｄ－Ｌｙｓ）、Ｄ－ロイシン（Ｄ－Ｌｅｕ）、Ｄ－メチオニン（Ｄ－Ｍｅｔ）、Ｄ－アスパラギン（Ｄ－Ａｓｎ）、Ｄ－プロリン（Ｄプロ）、Ｄ－グルタミン（Ｄ－Ｇｌｎ）、Ｄ－セリン（Ｄ－Ｓｅｒ）、Ｄ－トレオニン（Ｄ－Ｔｈｒ）、Ｄ－バリン（Ｄ－Ｖａｌ）、Ｄ－トリプトファン（Ｄ－Ｔｒｐ）、Ｄ－チロシン（Ｄ－Ｔｙｒ）及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

【0036】

天然に存在するアミノ酸には、シトルリン（Ｃｉｔ）などの翻訳後修飾によってタンパク質に形成されたものが含まれる。

【0037】

非天然（天然に存在しない）アミノ酸には、アミノ酸類似体、アミノ酸模倣物、合成アミノ酸、Ｎ－置換グリシン、及び天然アミノ酸と同様に機能するＬ－またはＤ－配置のＮ－メチルアミノ酸が含まれるが、これらに限定されない。「アミノ酸類似体」とは、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造（すなわち、水素と結合している炭素、カルボキシル基、アミノ基）を有するが、側鎖基またはペプチド主鎖が修飾されている非天然アミノ酸、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムであり得る。「アミノ酸模倣体」とは、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然アミノ酸と同様に機能する化学化合物を指す。

【0038】

「連結部位」とは、化合物や材料中の２つ以上の部分を共有結合させる官能基を指す。例えば、連結部位は、アジュバント部分を免疫複合体の抗体に共有結合させる役割を果たすことができる。

【0039】

「連結部位」とは、化合物や材料中の２つ以上の部分を共有結合させる官能基を指す。例えば、連結部位は、アジュバント部分を免疫複合体の抗体に共有結合させる役割を果たすことができる。連結部位をタンパク質及び他の材料に接続するための有用な結合には、アミド、アミン、エステル、カルバメート、尿素、チオエーテル、チオカルバメート、チオカーボネート、及びチオ尿素が含まれるが、これらに限定されない。

【0040】

「二価」とは、２つの官能基を連結するための２つの結合点を含む、化学部位を指す。多価連結部位は、更なる官能基を連結するための追加の結合点を有することができる。二価ラジカルは、接尾辞「ジイル」で示され得る。例えば、二価連結部位には、二価ポリ（エチレングリコール）、二価シクロアルキル、二価ヘテロシクロアルキル、二価アリール、及び二価ヘテロアリール基などの二価ポリマー部位が含まれる。「二価シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基」とは、分子または材料中の２つの部分を共有結合させるための２つの結合点を有するシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基を指す。シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基は、置換型または非置換型であり得る。シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリール基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換することができる。

【0041】

波線

【化2】

は、特定の化学部位の結合点を表す。特定の化学部位に２本の波線

【化3】

が存在する場合、化学部位は双方で、つまり左から右または右から左に読み取って使用できることが理解される。いくつかの実施形態では、存在する２つの波線

【化4】

を有する特定の部位は、左から右へと読み取られるように使用されると見なされる。

【0042】

「アルキル」とは、示された炭素原子の数を有する、直鎖（線状）または分岐した飽和脂肪族ラジカルを指す。アルキルには、例えば１～１２つの任意の数の炭素を含むことができる。アルキル基の例としては、メチル（Ｍｅ、－ＣＨ_３）、エチル（Ｅｔ、－ＣＨ_２ＣＨ_３）、１－プロピル（ｎ－Ｐｒ、ｎ－プロピル、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、２－プロピル（ｉ－Ｐｒ、ｉ－プロピル、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、１－ブチル（ｎ－Ｂｕ、ｎ－ブチル、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、２－メチル－１－プロピル（ｉ－Ｂｕ、ｉ－ブチル、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、２－ブチル（ｓ－Ｂｕ、ｓ－ブチル、－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_３）、２－メチル－２－プロピル（ｔ－Ｂｕ、ｔ－ブチル、－Ｃ（ＣＨ_３）_３）、１－ペンチル（ｎ－ペンチル、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、２－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、３－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２）、２－メチル－２－ブチル（－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、３－メチル－２－ブチル（－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、３－メチル－１－ブチル（－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、２－メチル－１－ブチル（－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_３）、１－ヘキシル（－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、２－ヘキシル（－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、３－ヘキシル（－ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）（ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３））、２－メチル－２－ペンチル（－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３）、３－メチル－２－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_３）、４－メチル－２－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、３－メチル－３－ペンチル（－Ｃ（ＣＨ_３）（ＣＨ_２ＣＨ_３）_２）、２－メチル－３－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ_２ＣＨ_３）ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、２，３－ジメチル－２－ブチル（－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２）、３，３－ジメチル－２－ブチル（－ＣＨ（ＣＨ_３）Ｃ（ＣＨ_３）_３、１－ヘプチル、１－オクチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルキル基は、置換されていても非置換でもよい。「置換アルキル」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換することができる。

【0043】

「アルキルジイル」という用語は、二価のアルキル基を意味する。アルキルジイル基の例としては、メチレン（－ＣＨ_２－）、エチレン（－ＣＨ_２ＣＨ_２－）、プロピレン（－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－）などが挙げられるが、これらに限定されない。アルキルジイル基は、「アルキレン」基とも呼ばれることがある。

【0044】

「アルケニル」とは、示された炭素原子の数及び少なくとも１つの炭素－炭素二重結合、ｓｐを有する、直鎖（線状）または分岐した不飽和脂肪族ラジカルを指す。アルケニルは、２～約１２個以上の炭素原子を含むことができる。アルケニル基は、「シス」及び「トランス」配向、代替的に「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有するラジカルである。例としては、エチレニルまたはビニル（－ＣＨ＝ＣＨ_２）、アリル（－ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２）、ブテニル、ペンテニル、及びこれらの異性体を含むが、これらに限定されない。アルケニル基は、非置換型または置換型であり得る。「置換アルケニル」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換することができる。

【0045】

「アルケニレン」または「アルケニルジイル」という用語は、直鎖または分岐鎖の二価の炭化水素ラジカルを指す。例としては、エチレニレンまたはビニレン（－ＣＨ＝ＣＨ－）、アリル（－ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ－）などがあるが、これらに限定されない。

【0046】

「アルキニル」とは、示された炭素原子の数及び少なくとも１つの炭素－炭素三重結合、ｓｐを有する、直鎖（線状）または分岐した不飽和脂肪族ラジカルを指す。アルキニルは、２～約１２個以上の炭素原子を含むことができる。例えば、Ｃ_２～Ｃ_６アルキニルには、エチニル（－Ｃ≡ＣＨ）、プロピニル（プロパルギル、－ＣＨ_２Ｃ≡ＣＨ）、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、及びこれらの異性体が含まれるが、これらに限定されない。アルキニル基は置換型または非置換型であり得る。「置換アルキニル」基は、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、オキソ（＝Ｏ）、アルキルアミノ、アミド、アシル、ニトロ、シアノ、及びアルコキシから選択される１つ以上の基で置換することができる。

【0047】

「アルキニレン」または「アルキニルジイル」という用語は、二価のアルキニルラジカルを指す。

【0048】

「カルボサイクル」、「カルボシクリル」、「炭素環」及び「シクロアルキル」という用語は、３～１２個の環原子または示された原子数を含む、飽和もしくは部分的に不飽和の単環式、縮合二環式または架橋多環集合体を指す。飽和単環式炭素環には、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、及びシクロオクチルが含まれる。飽和二環式及び多環式炭素環には、例えば、ノルボルナン、［２．２．２］ビシクロオクタン、デカヒドロナフタレン及びアダマンタンが含まれる。炭素環式基は部分的に不飽和であり、環に１つ以上の二重結合または三重結合を有する場合もある。部分的に不飽和である代表的な炭素環式基には、シクロブテン、シクロペンテン、シクロヘキセン、シクロヘキサジエン（１，３－及び１，４－異性体）、シクロヘプテン、シクロヘプタジエン、シクロオクテン、シクロオクタジエン（１，３－、１，４－及び１，５－異性体）、ノルボルネン、及びノルボルナジエンが含まれるが、これらに限定されない。

【0049】

「シクロアルキルジイル」という用語は、二価のシクロアルキルラジカルを指す。

【0050】

「アリール」とは、親の芳香環系の１つの炭素原子から１つの水素原子を除去することにより誘導される、６～２０個の炭素原子（Ｃ_６～Ｃ_２０）の一価の芳香族炭化水素ラジカルを意味する。アリール基は、単環式である、縮合して二環式もしくは三環式基を形成する、または結合によって連結してビアリール基を形成することができる。代表的なアリール基には、フェニル、ナフチル、ビフェニルが含まれる。他のアリール基には、メチレン連結基を有するベンジルが含まれる。フェニル、ナフタレンまたはビフェニルなど、一部のアリール基には６～１２個の環員がある。他のアリール基には、フェニルまたはナフチルなどの６～１０個の環員がある。

【0051】

「アリーレン」または「アリールジイル」とは、親の芳香環系の２個の炭素原子から２個の水素原子を除去することにより誘導される、６～２０個の炭素原子（Ｃ_６～Ｃ_２０）の二価の芳香族炭化水素ラジカルを意味する。いくつかのアリールジイル基は、例示的構造で「Ａｒ」と表される。アリールジイルは、飽和環、部分的不飽和環、または芳香族炭素環と縮合した芳香環を含む、二環式ラジカルを含む。典型的なアリールジイル基としては、ベンゼン（フェニレン）、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニレン、インデニレン、インダニレン、１，２－ジヒドロナフタレン、１，２，３，４－テトラヒドロナフチルなどに由来するラジカルが挙げられるが、これらに限定されない。アリールジイル基は「アリーレン」とも称され、任意選択で、本明細書に記載される１つ以上の置換基で置換される。

【0052】

「複素環」、「ヘテロシクリル」及び「複素環式環」という用語は、本明細書において同義で用いられ、３～約２０個の環原子の飽和または部分的に不飽和（すなわち１つ以上の二重及び／または三重結合を環の中に有する）の炭素環式ラジカルを指し、少なくとも１つの環原子は、窒素、酸素、リン、及び硫黄から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子はＣであり、１つ以上の環原子は、任意選択で、以下に記載される１つ以上の置換基で独立して置換される。複素環は、３～７員環（２～６個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１～４個のヘテロ原子）の単環または７～１０員環（４～９個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１～６個のヘテロ原子）の二環、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、もしくは［６，６］系であってよい。複素環は、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ Ａ．，″Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ″（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９６８）の特に第１章、第３章、第４章、第６章、第７章、及び第９章、″Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ″（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９５０～現在）の特に第１３巻、第１４巻、第１６巻、第１９巻、及び第２８巻、ならびにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載されている。「ヘテロシクリル」は、複素環ラジカルが、飽和環、部分的不飽和環、または芳香族炭素環式環もしくは複素環式環と縮合したラジカルも含む。複素環式環としては、例えば、モルホリン－４－イル、ピペリジン－１－イル、ピペラジニル、ピペラジン－４－イル－２－オン、ピペラジン－４－イル－３－オン、ピロリジン－１－イル、チオモルホリン－４－イル、Ｓ－ジオキソチオモルホリン－４－イル、アゾカン－１－イル、アゼチジン－１－イル、オクタヒドロピリド［１，２－ａ］ピラジン－２－イル、［１，４］ジアゼパン－１－イル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオキサニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、２－ピロリニル、３－ピロリニル、インドリニル、２Ｈ－ピラニル、４Ｈ－ピラニル、ジオキサニル、１，３－ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリニルイミダゾリニル、イミダゾリニル、３－アザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、３－アザビシクロ［４．１．０］ヘプタニル、アザビシクロ［２．２．２］ヘキサニル、３Ｈ－インドリルキノリジニル、及びＮ－ピリジルウレアが挙げられるが、これらに限定されない。スピロヘテロシクリル部位も、本定義の範囲内に含まれる。スピロヘテロシクリル部位の例には、アザスピロ［２．５］オクタニル及びアザスピロ［２．４］ヘプタニルが挙げられる。２つの環原子がオキソ（＝Ｏ）部位で置換された複素環式基の例は、ピリミジノニル及び１，１－ジオキソ－チオモルホリニルである。本明細書の複素環基は、任意選択で、本明細書に記載される１つ以上の置換基で独立して置換される。

【0053】

「ヘテロシクリルジイル」という用語は、３～約２０個の環原子の二価の飽和または部分的に不飽和（すなわち１つ以上の二重及び／または三重結合を環の中に有する）の炭素環式ラジカルを指し、少なくとも１つの環原子は、窒素、酸素、リン、及び硫黄から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子はＣであり、１つ以上の環原子は、任意選択で、記載される１つ以上の置換基で、独立して置換される。５員及び６員のヘテロシクリルジイルの例としては、モルホリニルジイル、ピペリジニルジイル、ピペラジニルジイル、ピロリジニルジイル、ジオキサニルジイル、チオモルホリニルジイル、及びＳ－ジオキソチオモルホリニルジイルが挙げられる。

【0054】

「ヘテロアリール」という用語は、５、６または７員環の一価の芳香族ラジカルを指し、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１つ以上のヘテロ原子を含む５～２０個の原子の縮合環系（その少なくとも１つは芳香族である）を含む。ヘテロアリール基の例は、ピリジニル（例えば２－ヒドロキシピリジニルを含む）、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、ピリミジニル（例えば４－ヒドロキシピリミジニルを含む）、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、及びフロピリジニルである。ヘテロアリール基は、任意選択で、本明細書に記載される１つ以上の置換基で独立して置換される。

【0055】

「ヘテロアリールジイル」という用語は、５、６または７員環の二価の芳香族ラジカルを指し、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１つ以上のヘテロ原子を含む５～２０個の原子の縮合環系（その少なくとも１つは芳香族である）を含む。５員及び６員のヘテロアリールジイルの例には、ピリジルジイル、イミダゾリルジイル、ピリミジニルジイル、ピラゾリルジイル、トリアゾリルジイル、ピラジニルジイル、テトラゾリルジイル、フリルジイル、チエニルジイル、イソオキサゾリルジイル、チアゾリルジイル、オキサジアゾリルジイル、オキサゾリルジイル、イソチアゾリルジイル及びピロリルジイルが含まれる。

【0056】

複素環またはヘテロアリール基は、可能であれば、炭素（炭素結合した）または窒素（窒素結合した）結合してもよい。例として、限定されないが、炭素結合した複素環またはヘテロアリールは、ピリジンの２、３、４、５もしくは６位、ピリダジンの３、４、５もしくは６位、ピリミジンの２、４、５もしくは６位、ピラジンの２、３、５もしくは６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール、もしくはテトラヒドロピロールの２、３、４もしくは５位、オキサゾール、イミダゾール、もしくはチアゾールの２、４もしくは５位、イソキサゾール、ピラゾール、もしくはイソチアゾールの３、４もしくは５位、アジリジンの２もしくは３位、アゼチジンの２、３もしくは４位、キノリンの２、３、４、５、６、７もしくは８位、またはイソキノリンの１、３、４、５、６、７もしくは８位で結合される。

【0057】

例として、限定されないが、窒素結合した複素環またはヘテロアリールは、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２－ピロリン、３－ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２－イミダゾリン、３－イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２－ピラゾリン、３－ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ－インダゾールの１位、イソインドールまたはイソインドリンの２位、モルホリンの４位、及びカルバゾ－ルまたはβ－カルボリンの９位で結合される。

【0058】

単独または別の置換基の一部としての「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を指す。

【0059】

単独でまたは別の置換基の一部としての「カルボニル」という用語は、Ｃ（＝Ｏ）また－Ｃ（＝Ｏ）－、すなわち、酸素に二重結合し、カルボニルを有する部分の他の２つの基に結合した炭素原子を指す。

【0060】

本明細書で使用する場合、「第四級アンモニウム塩」という語句は、アルキル置換基（例えば、メチル、エチル、プロピル、またはブチルなどのＣ_１～Ｃ_４アルキル）で四級化された第三級アミンを指す。

【0061】

「治療する」、「治療」及び「治療すること」という用語は、傷害、病態、状態（例えば、がん）もしくは症状（例えば、認知障害）の治療または寛解における任意の成功の兆候を指し、緩解、寛解、症状の軽減、もしくは症状、傷害、病態もしくは状態を患者にとってより耐えられるものにする、症状の進行速度の減少、症状もしくは状態の頻度、もしくは期間の減少、または状況によっては症状の発症の防止など、任意の客観的または主観的パラメータが含まれる。症状の治療または寛解は、身体検査の結果を含む、任意の客観的または主観的パラメータに基づくことができる。

【0062】

「がん」、「新生物」、及び「腫瘍」という用語は本明細書で、細胞増殖の制御を著しく失うことを特徴とする異常な増殖表現型を示すような、自律的で制御されない増殖を示す細胞を指すために使用される。本発明の文脈において検出、分析、及び／または治療の対象となる細胞には、がん細胞（例えば、がんを有する個体からのがん細胞）、悪性がん細胞、前転移性がん細胞、転移性がん細胞、及び非転移性がん細胞が含まれる。実質的にすべての組織のがんは、知られている。「がん負荷量」という語句は、対象中のがん細胞量またはがん体積を指す。したがって、がん負荷量を減少させることは、対象中のがん細胞数またはがん細胞体積を減少させることを指す。本明細書で使用される「がん細胞」という用語は、がん細胞（例えば、個体を治療することができる任意のがんから、例えば、がんを有する個体から単離された）である、またはがん細胞に由来する任意の細胞（例えば、がん細胞のクローン）を指す。例えば、がん細胞は、確立されたがん細胞株からのものであってもよく、がんを有する個体から単離された初代細胞であってもよく、がんを有する個体から単離された初代細胞からの子孫細胞であってもよい、などである。いくつかの実施形態では、この用語はまた、がん細胞の細胞内部分、細胞膜部分、または細胞溶解物などのがん細胞の一部を指すことができる。細胞腫、肉腫、膠芽腫、メラノーマ、リンパ腫及び骨髄腫などの固形腫瘍、ならびに白血病のような循環癌を含む、多くの種類のがんは、当業者に知られている。

【0063】

本明細書で使用する場合、「がん」という用語は、これらに限定されないが、固形腫瘍がん（例えば、皮膚、肺、前立腺、乳房、胃、膀胱、結腸、卵巣、膵臓、腎臓、肝臓、神経膠芽腫、髄芽腫、平滑筋肉腫、頭頸部扁平上皮癌、黒色腫、及び神経内分泌）、及び液状がん（例えば、血液癌）；がん腫；軟部組織腫瘍；肉腫；奇形腫；黒色腫；白血病；リンパ腫；ならびに脳癌を含み、微小残存病変を含み、ならびに原発腫瘍と転移腫瘍の両方を含む、任意の形態のがんを含む。

【0064】

「ＰＤ－Ｌ１発現」とは、細胞表面にＰＤ－Ｌ１受容体を有する細胞を指す。本明細書で使用する場合、「ＰＤ－Ｌ１過剰発現」とは、対応する非がん細胞と比較してより多くのＰＤ－Ｌ１受容体を有する細胞を指す。

【0065】

「ＨＥＲ２」とは、タンパク質ヒト上皮成長因子受容体２を指す。

【0066】

「ＨＥＲ２発現」とは、細胞表面にＨＥＲ２受容体を有する細胞を指す。例えば、細胞は、細胞の表面上に約２０，０００～約５０，０００のＨＥＲ２受容体を有し得る。本明細書で使用する場合、「ＨＥＲ２過剰発現」は、約５０，０００を超えるＨＥＲ２受容体を有する細胞を指す。例えば、細胞は、対応する非がん細胞（例えば、約１００万または２００万のＨＥＲ２受容体）と比較して、ＨＥＲ２受容体の数の２、５、１０、１００、１，０００、１０，０００、１００，０００、または１，０００，０００倍である。ＨＥＲ２は、乳癌で約２５％～約３０％過剰発現していると推定される。

【0067】

「ＴＲＯＰ２発現」とは、細胞表面にＴＲＯＰ２受容体を有する細胞を指す。本明細書で使用する場合、「ＴＲＯＰ２過剰発現」とは、対応する正常な非がん細胞と比較してより多くのＴＲＯＰ２受容体を有する細胞を指す。ＴＲＯＰ２は、約７４％の乳癌、７２％の大腸癌及び６４％の肺癌、ならびに他の臓器型のがんで過剰発現していると推定されている。

【0068】

がんの「病態」には、患者の健康状態を損なうすべての現象が含まれる。これには、異常または制御不能な細胞増殖、転移、隣接する細胞の正常な機能の阻害、異常なレベルでのサイトカインまたは他の分泌物の放出、炎症または免疫反応の抑制または悪化、新生物、前悪性、悪性腫瘍、及びリンパ節などの周辺または遠隔組織または器官への浸潤が含まれるが、これらに限定されない。

【0069】

本明細書で使用する場合、「がん再発」及び「腫瘍再発」という語句、ならびにそれらの文法的変形は、がんの診断後の腫瘍またはがん細胞の更なる増殖を指す。特に、がん組織で更なるがん細胞増殖が起こると再発が起こり得る。同様に「腫瘍の広がり」は、腫瘍の細胞が局所または遠隔組織や臓器に散在するときに発生し、したがって、腫瘍の広がりには腫瘍の転移が含まれる。「腫瘍浸潤」は、腫瘍の増殖が局所的に広がり、正常な臓器機能を圧迫、破壊または阻止することにより関係する組織の機能を損なうときに発生する。

【0070】

本明細書で使用する場合、「転移」という用語は、がん腫瘍のある器官に直接接続していない、器官または身体部分で癌腫瘍が増殖することを指す。転移は、がん腫瘍のある器官に直接接続していない器官または身体部分での検出不可能な量のがん細胞の存在である、微小転移を含むと理解されるであろう。転移は、がん細胞が元の腫瘍部位から離れること、がん細胞が身体の他の部位に移動及び／または浸潤することなど、いくつかの段階のプロセスとして定義することもできる。

【0071】

「有効量」及び「治療上有効な量」という語句は、それが投与される治療効果を生み出す免疫複合体などの物質の投与量または量を指す。実際の投与量は、治療の目的に依存し、また当業者であれば既知の技術を使用して確認可能であろう（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ（ｖｏｌｓ．１－３，１９９２）；Ｌｌｏｙｄ，Ｔｈｅ Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９）；Ｐｉｃｋａｒ，Ｄｏｓａｇｅ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９）；Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１１ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，２００６）；ａｎｄ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，２０１２）を参照）。がんの場合、治療上有効な量の免疫複合体は、がん細胞の数を低下、腫瘍サイズを低下、末梢器官へのがん細胞浸潤を阻害（すなわち、ある程度の減速及び好ましくは停止）、腫瘍転移を阻害（すなわち、ある程度の減速及び好ましくは停止）、腫瘍増殖をある程度阻害、及び／またはがんに関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減し得る。免疫複合体が、存在するがん細胞の増殖を阻害し得る、及び／またはそれらを死滅させ得る限り、それは、細胞増殖抑制性及び／または細胞毒性であり得る。がん療法に関して、有効性は、例えば、疾患進行までの時間（ＴＴＰ）の評価及び／または奏効率（ＲＲ）の決定によって測定することができる。

【0072】

「レシピエント」「個体」「対象」「宿主」及び「患者」という用語は同じ意味で使用され、診断、処置または治療が所望される任意の哺乳類対象（例えば、ヒト）を指す。治療目的のための「哺乳動物」とは、ヒト、飼育動物及び畜産動物、動物園、競技用、愛玩動物、例えば犬、馬、猫、牛、羊、山羊、豚、ラクダなどを含む哺乳動物に分類される任意の動物を指す。特定の実施形態では、哺乳動物はヒトである。

【0073】

本発明の文脈における「相乗的アジュバント」または「相乗的組み合わせ」という語句は、受容体アゴニスト、サイトカイン、及びアジュバントポリペプチドなどの２つの免疫調節因子の組み合わせを含み、これらは組み合わせて、単独で投与される場合と比較して免疫に対する相乗効果を誘発する。特に、本明細書に開示される免疫複合体は、特許請求されたアジュバント及び抗体コンストラクトの相乗的組み合わせを含む。投与時のこれらの相乗的組み合わせは、例えば、抗体コンストラクトまたはアジュバントが他の部分の非存在下で投与される場合と比較して、免疫に対してより大きな効果を誘発する。更に、抗体コンストラクトまたはアジュバントのいずれかと単独で投与した場合と比較して、減少した量の免疫複合体を投与してもよい（免疫複合体の一部として投与される抗体コンストラクトの総数またはアジュバントの総数によって測定される）。

【0074】

本明細書で使用する場合、「投与する」という用語は、非経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、腫瘍内、病巣内、鼻腔内もしくは皮下投与、経口投与、座薬としての投与、局所接触、クモ膜下投与、または徐放出装置、例えば小型浸透ポンプを対象に埋め込むことを意味する。

【0075】

本明細書で数値を修正するために使用される「約」及び「およそ」という用語は、その数値の周囲にある近い範囲を示す。したがって、「Ｘ」が値である場合、「約Ｘ」または「およそＸ」は、０．９Ｘ～１．１Ｘ、例えば、０．９５Ｘ～１．０５Ｘ、または０．９９Ｘ～１．０１Ｘの値を示す。「約Ｘ」または「およそＸ」への言及は特に、少なくとも値Ｘ、０．９５Ｘ、０．９６Ｘ、０．９７Ｘ、０．９８Ｘ、０．９９Ｘ、１．０１Ｘ、１．０２Ｘ、１．０３Ｘ、１．０４Ｘ、及び１．０５Ｘを示す。したがって、「約Ｘ」及び「およそＸ」は、例えば「０．９８Ｘ」のクレーム限定について本明細書のサポートを教示及び提供することを意図している。

【0076】

抗体
本発明の免疫複合体は抗体を含む。本発明の実施形態の範囲に含まれるのは、本明細書に記載の抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインの機能的変異体である。本明細書で使用される「機能的変異体」という用語は、親抗体コンストラクトもしくは抗原結合ドメインと実質的または有意な配列同一性もしくは類似性を有する抗原結合ドメインを有する抗体コンストラクトを指し、この機能的変異体は、それが変異体である抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインの生物学的活性を保持する。機能的変異体は、例えば、ＰＤ－Ｌ１、ＨＥＲ２、ＣＥＡもしくはＴＲＯＰ２を発現する標的細胞を認識する能力を親抗体コンストラクトもしくは抗原結合ドメインと類似する程度、同じ程度またはより高度に保持する、本明細書に記載の抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメイン（親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメイン）の変異体を包含する。

【0077】

抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインに関して、機能的変異体は、アミノ酸配列が抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインと、例えば少なくとも約３０％、約５０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％以上同一である。

【0078】

機能的変異体は、例えば、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含むことができる。あるいはまたは更に、機能的変異体は、少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換を有する親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインのアミノ酸配列を含み得る。この場合、非保存的アミノ酸置換が機能的変異体の生物学的活性を妨害または阻害しないことが好ましい。非保存的アミノ酸置換は、機能的変異体の生物学的活性を増強し得て、その結果、機能的変異体の生物学的活性は、親抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインと比較して増加する。

【0079】

本発明の抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインのアミノ酸置換は、好ましくは保存的アミノ酸置換である。保存的アミノ酸置換は当技術分野で公知であり、特定の物理的及び／または化学的特性を有する１つのアミノ酸を、同じまたは類似の化学的または物理的特性を有する別のアミノ酸に交換するアミノ酸置換が含まれる。例えば、保存的アミノ酸置換は、別の酸性／負に帯電した極性アミノ酸に置換された酸性／負に帯電した極性アミノ酸（例えば、ＡｓｐまたはＧｌｕ）、非極性側鎖を有する別のアミノ酸に置換された正に帯電したアミノ酸（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｖａｌなど）、別の塩基性／正に帯電した極性アミノ酸に置換された塩基性／正に帯電した極性アミノ酸（例えば、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｒｇなど）、極性側鎖を有する他の非荷電性アミノ酸に置換された極性側鎖を有する非荷電性アミノ酸（例えば、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒなど）、ベータ分岐側鎖を有する別のアミノ酸に置換されたベータ分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ及びＶａｌ）、芳香族側鎖を有する別のアミノ酸に置換された芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ及びＴｙｒ）などであり得る。

【0080】

抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、他の成分、例えば他のアミノ酸が抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメイン機能的変異体の生物学的活性を実質的に変化させないように、本明細書に記載の特定のアミノ酸配列（複数可）から本質的になり得る。

【0081】

いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、修飾Ｆｃ領域を含み、修飾は、１つ以上のＦｃ受容体へのＦｃ領域の結合を調節する。

【0082】

いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体（例えば、少なくとも２つのアジュバント部分に結合された抗体）は、Ｆｃ領域の変異が欠如している天然抗体と比較して、１つ以上のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）及び／またはＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ））に調節された結合（例えば、結合の増加または結合の減少）をもたらす、Ｆｃ領域の１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸の挿入、欠失及び／または置換）を含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、抗体のＦｃ領域のＦｃγＲＩＩＢへの結合を減少させる、Ｆｃ領域の１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸挿入、欠失及び／または置換）を含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、Ｆｃ領域の変異が欠如している天然抗体と比較して、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）及び／またはＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）への同じ結合または増加した結合を維持しながら、ＦｃγＲＩＩＢへの抗体の結合を減少させる、抗体のＦｃ領域の１つ以上の修飾（例えば、アミノ酸挿入、欠失及び／または置換）を含む。いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、ＦｃγＲＩＩＢへの抗体のＦｃ領域の結合を増加させる、Ｆｃ領域の１つ以上の修飾を含む。

【0083】

いくつかの実施形態では、調節された結合は、抗体の天然Ｆｃ領域と比較した抗体のＦｃ領域の変異によって提供される。変異は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはこれらの組み合わせにあり得る。「天然Ｆｃ領域」は「野生型Ｆｃ領域」と同義であり、自然界に見いだされるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一の、または天然抗体（例えば、セツキシマブ）に見いだされるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域には、天然配列ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域、ならびにこれらの天然に存在する変異型が含まれる。天然配列Ｆｃには、Ｆｃの様々なアロタイプが含まれる（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，（２００９）ｍＡｂｓ，１（４）：３３２－３３８）。

【0084】

いくつかの実施形態では、１つ以上のＦｃ受容体への調節された結合をもたらすＦｃ領域の変異は、以下の変異：ＳＤ（Ｓ２３９Ｄ）（ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＥ（Ｓ２６７Ｅ）、ＳＥＬＦ（Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ）、ＳＤＩＥ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ）、ＳＤＩＥＡＬ（Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ）、ＧＡ（Ｇ２３６Ａ）、ＡＬＩＥ（Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、ＧＡＳＤＡＬＩＥ（Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ）、Ｖ９（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ）及びＶ１１（Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２３８Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ））及び／または以下のアミノ酸：Ｅ２３３、Ｇ２３７、Ｐ２３８、Ｈ２６８、Ｐ２７１、Ｌ３２８及びＡ３３０での１つ以上の変異のうちの１つ以上を含み得る。Ｆｃ受容体結合を調節するための更なるＦｃ領域の修飾は、例えば、米国特許第２０１６／０１４５３５０号及び同第７４１６７２６号及び同第５６２４８２１号に記載されており、これらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0085】

いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体のＦｃ領域は、天然の非修飾Ｆｃ領域と比較して、Ｆｃ領域の変更されたグリコシル化パターンを有するように修飾される。

【0086】

ヒト免疫グロブリンは、各重鎖のＣγ２ドメインのＡｓｎ２９７残基でグリコシル化される。このＮ－結合型オリゴ糖は、コア七糖であるＮ－アセチルグルコサミン４マンノース３（ＧｌｃＮＡｃ４Ｍａｎ３）からなる。エンドグリコシダーゼまたはＰＮＧａｓｅＦによる七糖の除去は、抗体Ｆｃ領域の配座変化を引き起こすことが知られており、ＦｃγＲの活性化に対する抗体結合親和性を大幅に低下させ、エフェクター機能を低下させる可能性がある。コア七糖は、ガラクトース、バイセクトＧｌｃＮＡｃ、フコース、またはシアル酸で修飾されることが多く、活性型ＦｃγＲ及び抑制型ＦｃγＲへのＦｃ結合に異なる影響を与える。更に、α２，６－シアリル化はｉｎ ｖｉｖｏで抗炎症活性を増強し、脱フコシル化はＦｃγＲＩＩＩａ結合を改善し、ならびに抗体依存性細胞傷害及び抗体依存性食作用の１０倍の増加をもたらすことが実証されている。したがって、特定のグリコシル化パターンを使用して、炎症性エフェクター機能を制御することができる。

【0087】

いくつかの実施形態では、グリコシル化パターンを変更するための修飾は、変異である。例えば、Ａｓｎ２９７での置換。いくつかの実施形態では、Ａｓｎ２９７は、グルタミン（Ｎ２９７Ｑ）に変異されている。ＦｃγＲ制御シグナル伝達を調節する抗体を用いて免疫応答を制御する方法は、例えば、米国特許７，４１６，７２６号ならびに米国特許出願公開第２００７／００１４７９５号及び同第２００８／０２８６８１９号に記載されており、これらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0088】

いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体は、天然に存在しないグリコシル化パターンを有する操作されたＦａｂ領域を含むように修飾される。例えば、ハイブリドーマは、ＦｃＲγＩＩＩａ結合及びエフェクター機能の増加を可能にする特定の変異を有する脱フコシル化ｍＡｂ、脱シアリル化ｍＡｂまたは脱グリコシル化Ｆｃを分泌するように遺伝子操作することができる。いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体は、脱フコシル化されるように操作される。

【0089】

いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体の全Ｆｃ領域は、異なるＦｃ領域と交換され、その結果、抗体のＦａｂ領域は、非天然Ｆｃ領域にコンジュゲートされる。例えば、通常はＩｇＧ１Ｆｃ領域を含むセツキシマブのＦａｂ領域は、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはＩｇＡにコンジュゲートできる、または通常はＩｇＧ４Ｆｃ領域を含むニボルマブのＦａｂ領域をＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＡ１またはＩｇＧ２にコンジュゲートできる。いくつかの実施形態では、非天然Ｆｃドメインを有するＦｃ修飾抗体はまた、記載されたＦｃドメインの安定性を調節する、ＩｇＧ４ Ｆｃ内のＳ２２８Ｐ変異などの１つ以上のアミノ酸修飾を含む。いくつかの実施形態では、非天然Ｆｃドメインを有するＦｃ修飾抗体はまた、ＦｃＲへのＦｃ結合を調節する、本明細書に記載の１つ以上のアミノ酸修飾を含む。

【0090】

いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域のＦｃＲへの結合を調節する修飾は、天然の非修飾抗体と比較した場合、抗体のＦａｂ領域のその抗原への結合を変化させない。他の実施形態では、Ｆｃ領域のＦｃＲへの結合を調節する修飾はまた、天然の非修飾抗体と比較した場合、抗体のＦａｂ領域のその抗原への結合を増加させる。

【0091】

例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体は、ＰＤ－Ｌ１を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む、抗体コンストラクトを含む。

【0092】

プログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１、分化集団２７４、ＣＤ２７４、Ｂ７－ホモログ１、またはＢ７－Ｈ１）は、Ｂ７タンパク質スーパーファミリーに属し、かつプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１、ＰＤＣＤ１、分化集団２７９、またはＣＤ２７９）のリガンドである。ＰＤ－Ｌ１はまた、Ｂ７．１（ＣＤ８０）と相互作用することができ、そのような相互作用は、Ｔ細胞のプライミングを阻害すると考えられている。ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１軸は、適応免疫応答の抑制に大きな役割を果たす。より具体的には、ＰＤ－Ｌ１とその受容体であるＰＤ－１との結合は、Ｔ細胞の活性化及び増殖を阻害するシグナルをもたらすと考えられている。ＰＤ－Ｌ１に結合し、リガンドがＰＤ－１受容体に結合するのを防ぐ薬剤は、この免疫抑制を妨げ、したがって、必要に応じて、例えばがんまたは感染症の治療のために、免疫応答を増強することができる。ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１経路はまた、自己免疫の予防に寄与し、したがって、ＰＤ－Ｌ１に対するアゴニスト剤、または免疫阻害ペイロードを送達する薬剤は、自己免疫障害の治療に役立ち得る。

【0093】

ＰＤ－Ｌ１を標的とする複数の抗体、例えば、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（商標））、デュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩ（商標））及びアベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ（商標））を、がんの治療のために開発した。それにもかかわらず、ＰＤ－Ｌ１に高い親和性で結合し、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１シグナル伝達を効果的に阻害する薬剤、及びＰＤ－Ｌ１発現細胞に治療ペイロードを送達し得る薬剤を含む、新しいＰＤ－Ｌ１結合剤が依然として必要とされている。更に、自己免疫障害及び感染を治療するための新規のＰＤ－Ｌ１結合剤が必要とされている。

【0094】

ＴＬＲアゴニストである２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンペイロードをＰＤ－Ｌ１を発現する細胞に送達する方法であって、前記細胞または前記細胞を含む哺乳動物に、１つ以上の２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンズアゼピン部分に共有結合したリンカーに共有結合した抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む免疫複合体を投与することを含む、前記方法が提供される。

【0095】

本発明はまた、ＰＤ－Ｌ１阻害に応答する哺乳動物における免疫応答を増強または低減または阻害する方法、及び哺乳動物の疾患、障害または状態を治療する方法を提供し、前記方法は、哺乳動物にＰＤ－Ｌ１免疫複合体を投与することを含む。

【0096】

本発明は、免疫グロブリン重鎖可変領域ポリペプチド及び免疫グロブリン軽鎖可変領域ポリペプチドを含む、ＰＤ－Ｌ１抗体を提供する。ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する。抗体の結合特異性により、ＰＤ－Ｌ１を発現する細胞を標的とし、例えば、そのような細胞に治療用ペイロードを送達することが可能になる。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１抗体は、ヒトＰＤ－Ｌ１に結合する。しかしながら、任意のＰＤ－Ｌ１断片、ホモログまたはパラログに結合する抗体も包含される。

【0097】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＰＤ－Ｌ１がその受容体であるＰＤ－１に結合することを実質的に阻害または防止することなく、ＰＤ－Ｌ１に結合する。しかしながら、他の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＰＤ－Ｌ１のその受容体であるＰＤ－１への結合を完全にまたは部分的に遮断（阻害または防止）することができ、（例えば、治療目的のために）ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１シグナル伝達を阻害するために抗体を使用することができる。抗体または抗原結合抗体断片は、ＰＤ－Ｌ１に対して単一特異的であり得るか、または二重特異的もしくは多重特異的であってよい。例えば、２価または多価の抗体または抗体断片において、結合ドメインは、同じ抗原の異なるエピトープを標的とするか、または異なる抗原を標的とする、異なるものであってもよい。多価結合コンストラクトを構築する方法は、当技術分野で公知である。二重特異性及び多重特異性抗体は、当技術分野で公知である。更に、ポリペプチド鎖の二量体、三量体または四量体である、ダイアボディ、トリアボディまたはテトラボディを提供することができ、それぞれは、同じポリペプチド鎖上のＶ_ＨとＶ_Ｌの間の対形成を可能にするには短すぎるペプチドリンカーによってＶ_Ｌに接続されたＶ_Ｈを含み、それによって、異なるＶ_Ｈ－Ｖ_Ｌポリペプチド鎖上の相補的ドメイン間の対形成を駆動し、２、３または４個の機能的な抗原結合部位を有する多量体分子を生成する。また、２つの異なる可変領域を有する小さなｓｃＦｖ断片であるビス－ｓｃＦｖ断片を生成し、２つの異なるエピトープを結合することが可能な二重特異性ビス－ｓｃＦｖ断片を生成することができる。Ｆａｂ二量体（Ｆａｂ２）及びＦａｂ三量体（Ｆａｂ３）は、Ｆａｂ断片に基づく多特異的コンストラクトを作成するために、遺伝子工学法を用いて生成することができる。

【0098】

ＰＤ－Ｌ１抗体は、ヒト抗体、非ヒト抗体、ヒト化抗体もしくはキメラ抗体、または対応する抗体断片であってもよいし、それらから得ることもできる。「キメラ」抗体は、典型的には、ヒト定常領域及び非ヒト可変領域を含む抗体またはその断片である。「ヒト化」抗体は、典型的にはヒト抗体足場を含むが、少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１、２、３、４、５または６つのＣＤＲすべて）における非ヒト由来アミノ酸または配列を含む、モノクローナル抗体である。

【0099】

ＰＤ－Ｌ１抗体は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０２１／１５０７０１に記載されるように内部移行することができるか、またはＰＤ－Ｌ１抗体は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０２１／１５０７０２に記載されるように非内部移行であることができる。

【0100】

例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体は、ＨＥＲ２を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む、抗体コンストラクトを含む。

【0101】

いくつかの抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体が承認され、臨床開発が行われている（Ｃｏｓｔａ，ＲＬＢ ｅｔ ａｌ（２０２０）Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ６（１０）：１－１１）。

【0102】

特定の実施形態では、本発明の免疫複合体は、実施例２０１の方法により調製されるものなどの抗ＨＥＲ２抗体を含む。本発明の一実施形態では、本発明の免疫複合体の抗ＨＥＲ２抗体は、参照により本明細書に特に組み込まれる米国特許第５８２１３３７号の表３に記載されているように、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体、例えば、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－１、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－２、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－３、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－４、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－５、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－６、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－７及びｈｕＭＡｂ４Ｄ５－８を含む。これらの抗体には、ＨＥＲ２に結合するマウス抗体（４Ｄ５）の相補性決定領域を有するヒトフレームワーク領域が含まれる。ヒト化抗体ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－８はトラスツズマブとも呼ばれ、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）の商品名で市販されている。

【0103】

トラスツズマブ（ＣＡＳ １８０２８８－６９－１、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５－８、ｒｈｕＭＡｂ ＨＥＲ２、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）は、細胞ベースのアッセイにおいて、ＨＥＲ２の細胞外ドメインに高親和性で選択的に結合する（Ｋｄ＝５ｎＭ）マウス抗ＨＥＲ２抗体（４Ｄ５）のヒト化バージョンである、組換えＤＮＡ由来のＩｇＧ１κ、モノクローナル抗体である（米国特許第５６７７１７１号、同第５８２１３３７号、同第６０５４２９７号、同第６１６５４６４号、同第６３３９１４２号、同第６４０７２１３号、同第６６３９０５５号、同第６７１９９７１号、同第６８００７３８号、同第７０７４４０４号、Ｃｏｕｓｓｅｎｓ ｅｔ ａｌ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３０：１１３２－９、Ｓｌａｍｏｎ ｅｔ ａｌ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４４：７０７－１２、Ｓｌａｍｏｎ ｅｔ ａｌ（２００１）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２）。

【0104】

本発明の一実施形態では、抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、トラスツズマブのＣＤＲ領域を含む。本発明の一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブのフレームワーク領域を更に含む。本発明の一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブの一方または両方の可変領域を更に含む。

【0105】

本発明の別の実施形態では、本発明の免疫複合体の抗ＨＥＲ２抗体は、米国特許第７８６２８１７号に記載されるように、ヒト化抗ＨＥＲ２抗体、例えば、ヒト化２Ｃ４を含む。例示的なヒト化２Ｃ４抗体は、ペルツズマブである（ＣＡＳ登録番号３８０６１０－２７－５）、ＰＥＲＪＥＴＡ（商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．）。ペルツズマブはＨＥＲ二量体化阻害剤（ＨＤＩ）であり、他のＨＥＲ受容体（例えば、ＥＧＦＲ／ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３及びＨＥＲ４）と活性なヘテロ二量体またはホモ二量体を形成する能力を阻害する機能を有する。例えば、Ｈａｒａｒｉ ａｎｄ Ｙａｒｄｅｎ Ｏｎｃｏｇｅｎｅ１９：６１０２－１４（２０００）、Ｙａｒｄｅｎ ａｎｄ Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ２：１２７－３７（２００１）、Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ１０：１５８－９（２００３）、Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ４２１：７５６－６０（２００３）、及びＭａｌｉｋ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏ Ａｍ Ｓｏｃ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ４４：１７６－７（２００３）を参照のこと。ＰＥＲＪＥＴＡ（商標）は、乳癌の治療薬として承認されている。

【0106】

本発明の一実施形態では、抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ペルツズマブのＣＤＲ領域を含む。本発明の一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、ペルツズマブのフレームワーク領域を更に含む。本発明の一実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体は、ペルツズマブの一方または両方の可変領域を更に含む。

【0107】

マルゲツキシマブ（ＭＧＡＨ２２、ＭＡＲＧＥＮＺＡ（商標）、Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．），ＣＡＳ登録Ｎｏ．１３５０６２４－７５－７は、ＦＤＡ承認の抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体である。マルゲツキシマブのＦｃ領域は、活性化ＦｃγＲへの結合を増加させるが、免疫エフェクター細胞に対する抑制性Ｆｃ．γ．Ｒへの結合を減少させるように最適化されている（Ｎｏｒｄｓｔｒｏｍ，ＪＬ，ｅｔ ａｌ（２０１１）Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１３（６）：Ｒ１２３；Ｒｕｇｏ，ＨＳ，ｅｔ ａｌ（２０２１）ＪＡＭＡ Ｏｎｃｏｌ．；７（４）：５７３－５８４；Ｍａｒｋｈａｍ，Ａ．（２０２１）Ｄｒｕｇｓ８１：５９９－６０４）。マルゲツキシマブは、再発または難治性の進行乳癌で、その腫瘍が免疫組織化学により２＋レベルでＨＥＲ２を発現しており、ＦＩＳＨによるＨＥＲ２遺伝子増幅の証拠がない患者の治療についてＦＤＡによって承認されている。

【0108】

ＨＴ－１９は、トラスツズマブまたはペルツズマブのエピトープとは異なるヒトＨＥＲ２のエピトープに結合する、別の抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体である。ＨＴ－１９は、トラスツズマブに匹敵するＨＥＲ２シグナル伝達を阻害し、トラスツズマブ及びペルツズマブと組み合わせてＨＥＲ２の分解を増強することが示された。ＸＭＴ－１５２２は、ＨＴ－１９抗体を含む抗体薬物複合体である（Ｂｅｒｇｓｔｒｏｍ Ｄ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．；７５：ＬＢ－２３１）。

【0109】

例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体は、ＣＥＡを特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む、抗体コンストラクトを含む。がん胎児性抗原関連細胞接着分子５（ＣＥＡＣＡＭ５）は、ＣＤ６６ｅ（分化クラスター６６ｅ）としても公知であり、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）遺伝子ファミリーのメンバーである。

【0110】

がん胎児性抗原（ＣＥＡ、ＣＤ６６ｅ、ＣＥＡＣＡＭ５）の発現の上昇は、特に腫瘍細胞の接着、転移、細胞免疫機構の遮断、及び抗アポトーシス機能を有するなど、腫瘍の様々な生物学的側面に関係している。ＣＥＡは細胞表面抗原であり、また、多くのがん腫の血液マーカーとしても使用されている。ＭＮ－１４及びｈＭＮ１４としても公知である、ラベツズマブ（ＣＥＡ－ＣＩＤＥ（商標）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ、ＣＡＳ登録番号２１９６４９－０７－７）は、ヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体であり、結腸直腸癌の治療のために研究されている（Ｂｌｕｍｅｎｔｈａｌ，Ｒ．ｅｔ ａｌ（２００５）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ５４（４）：３１５－３２７）。カンプトテシン類似体（ラベツズマブゴビテカン、ＩＭＭＵ－１３０）にコンジュゲートしたラベツズマブは、ＣＥＡを標的とし、再発性または難治性の転移性結腸直腸癌の患者で研究されている（Ｓｈａｒｋｅｙ，Ｒ．ｅｔ ａｌ（２０１８），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ１７（１）：１９６－２０３；Ｄｏｔａｎ，Ｅ．ｅｔ ａｌ（２０１７），Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ３５（９）：３３３８－３３４６）。また、^１３１Ｉにコンジュゲートしたラベツズマブを、大腸癌及び他の固形悪性腫瘍の治療のための臨床試験で評価した（Ｓｈａｒｋｅｙ，Ｒ．ｅｔ ａｌ（１９９５），Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓｕｐｐｌ．）５５（２３）：５９３５ｓ－５９４５ｓ；Ｌｉｅｒｓｃｈ，Ｔ． ｅｔ ａｌ（２００５），Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ２３（２７）：６７６３－６７７０；Ｓａｈｌｍａｎｎ，Ｃ．－Ｏ．ｅｔ ａｌ（２０１７），Ｃａｎｃｅｒ１２３（４）：６３８－６４９）。

【0111】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、この目的のために参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６６７６９２４号に開示されているように、ｈＭＮ－１４／ラベツズマブ配列番号１の可変軽鎖（ＶＬκ）を含む。
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＳＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＴＳＴＲＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＹＳＬＹＲＳＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ 配列番号１

【0112】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＭＮ－１４／ラベツズマブ配列番号２～８（米国特許第６６７６９２４号）（配列番号１として開示されている完全長配列）の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む。

【表1】

【0113】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、この目的のために参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６６７６９２４号に開示されているように、ｈＭＮ－１４／ラベツズマブ配列番号９の可変重鎖（ＶＨ）を含む。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＳＳＳＧＦＤＦＴＴＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＥＩＨＰＤＳＳＴＩＮＹＡＰＳＬＫＤＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＤＳＬＲＰＥＤＴＧＶＹＦＣＡＳＬＹＦＧＦＰＷＦＡＹＷＧＱＧＴＰＶＴＶＳＳ 配列番号９

【0114】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＭＮ－１４／ラベツズマブ配列番号１０～１６（米国特許第６６７６９２４号）（配列番号９として開示されている完全長配列）の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む。

【表2】

【0115】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、この目的のために参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８６４２７４２号に開示されているように、ｈＰＲ１Ａ３配列番号１７の可変軽鎖（ＶＬκ）を含む。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＡＡＶＧＴＹＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＫＲＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＨＱＹＹＴＹＰＬＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ 配列番号１７

【0116】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＰＲ１Ａ３配列番号１８～２４（米国特許第８６４２７４２号）（配列番号１７として開示されている完全長配列）の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む。

【表3】

【0117】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＰＲ１Ａ３配列番号２５～３１（米国特許第８６４２７４２号）（配列番号１３０として開示されている完全長配列）の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む。

【表4】

【0118】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、この目的のために参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７２３２８８８号に開示されているように、ｈＭＦＥ－２３配列番号３２の可変軽鎖（ＶＬκ）を含む。
ＥＮＶＬＴＱＳＰＳＳＭＳＡＳＶＧＤＲＶＮＩＡＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＬＷＩＹＳＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＳＭＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ 配列番号３２

【0119】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＭＦＥ－２３配列番号３３～４０（米国特許第７２３２８８８号）の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む。前記実施形態は、ＬＦＲ１、配列番号３３及び配列番号３４の２つの変異体（見かけ順の、それぞれ配列番号３２及び配列番号１７２として開示されている完全長の配列）を含む。

【表5】

【0120】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＭＦＥ－２３配列番号４１（米国特許第７２３２８８８号）の可変重鎖（ＶＨ）を含む。
ＱＶＫＬＥＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＦＮＩＫＤＳＹＭＨＷＬＲＱＧＰＧＱＲＬＥＷＩＧＷＩＤＰＥＮＧＤＴＥＹＡＰＫＦＱＧＫＡＴＦＴＴＤＴＳＡＮＴＡＹＬＧＬＳＳＬＲＰＥＤＴＡＶＹＹＣＮＥＧＴＰＴＧＰＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ 配列番号４１

【0121】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＭＦＥ－２３配列番号４２～４９（米国特許第７２３２８８８号）の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む。前記実施形態は、ＨＦＲ１、配列番号４２及び配列番号４３の２つの変異体（見かけ順の、それぞれ配列番号４１及び配列番号１７３として開示されている完全長の配列）を含む。

【表6】

【0122】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ＳＭ３Ｅ配列番号５０（米国特許第７２３２８８８号）の可変軽鎖（ＶＬκ）を含む。
ＥＮＶＬＴＱＳＰＳＳＭＳＶＳＶＧＤＲＶＴＩＡＣＳＡＳＳＳＶＰＹＭＨＷＬＱＱＫＰＧＫＳＰＫＬＬＩＹＬＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＲＳＳＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ 配列番号５０

【0123】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ＳＭ３Ｅ配列番号５１～５６及び３８～３９（米国特許第７２３２８８８号）の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む。前記実施形態は、ＬＦＲ１、配列番号５１及び配列番号５２の２つの変異体（見かけ順の、それぞれ配列番号５０及び配列番号１７４として開示されている完全長の配列）を含む。

【表7】

【0124】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ＮＰ－４／アルシツモマブ配列番号５７の可変軽鎖を含む。
ＱＴＶＬＳＱＳＰＡＩＬＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＳＶＴＹＩＨＷＹＱＱＫＰＧＳＳＰＫＳＷＩＹＡＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＲＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＨＷＳＳＫＰＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ 配列番号５７

【0125】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ＮＰ－４／アルシツモマブ配列番号５８～６４（配列番号５７として開示されている完全長配列）の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む。

【表8】

【0126】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ＮＰ－４／アルシツモマブ配列番号６５の可変重鎖（ＶＨ）を含む。
ＥＶＫＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＴＳＧＦＴＦＴＤＹＹＭＮＷＶＲＱＰＰＧＫＡＬＥＷＬＧＦＩＧＮＫＡＮＧＹＴＴＥＹＳＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＫＳＱＳＩＬＹＬＱＭＮＴＬＲＡＥＤＳＡＴＹＹＣＴＲＤＲＧＬＲＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ 配列番号６５

【0127】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ＮＰ－４配列番号６６～７２（配列番号６５として開示されている完全長配列）の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む。

【表9】

【0128】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、この目的のために参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７７７６３３０号に開示されているように、Ｍ５Ａ／ｈＴ８４．６６配列番号７３の可変軽鎖（ＶＬκ）を含む。
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＧＥＳＶＤＩＦＧＶＧＦＬＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＲＡＳＮＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＲＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＴＮＥＤＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ 配列番号７３

【0129】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、Ｍ５Ａ／ｈＴ８４．６６配列番号７４～８０（米国特許第７７７６３３０号）（配列番号７３として開示されている完全長配列）の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む。

【表10】

【0130】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、Ｍ５Ａ／ｈＴ８４．６６配列番号８１（米国特許第７７７６３３０号）の可変重鎖（ＶＨ）を含む。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＮＩＫＤＴＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＤＰＡＮＧＮＳＫＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＰＦＧＹＹＶＳＤＹＡＭＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ 配列番号８１

【0131】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、Ｍ５Ａ／ｈＴ８４．６６配列番号８２～８８（米国特許第７７７６３３０号）（配列番号８１として開示されている完全長配列）の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む。

【表11】

【0132】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、この目的のために参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９６１７３４５号に開示されているように、ｈＡｂ２－３配列番号８９の可変軽鎖（ＶＬκ）を含む。
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＥＮＩＦＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＫＬＬＶＹＮＴＲＴＬＡＥＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＨＨＹＧＴＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ 配列番号８９

【0133】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＡｂ２－３配列番号９０～９６（米国特許第９６１７３４５号）（配列番号８９として開示されている完全長配列）の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む。

【表12】

【0134】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号９７（米国特許第９６１７３４５号）の可変重鎖（ＶＨ）を含む。
ＥＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＧＧＳＬＳＬＳＣＡＡＳＧＦＶＦＳＳＹＤＭＳＷＶＲＱＴＰＥＲＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＧＧＩＴＹＡＰＳＴＶＫＧＲＦＴＶＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＴＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＡＨＹＦＧＳＳＧＰＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ 配列番号９７

【0135】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＡｂ２－３配列番号９８～１０４（配列番号９７として開示されている完全長配列）の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む。

【表13】

【0136】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、この目的のために参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９９８２０６３号に開示されているように、Ａ２４０ＶＬ－Ｂ９ＶＨ／ＡＭＧ－２１１配列番号１０５の可変軽鎖（ＶＬκ）を含む。
ＱＡＶＬＴＱＰＡＳＬＳＡＳＰＧＡＳＡＳＬＴＣＴＬＲＲＧＩＮＶＧＡＹＳＩＹＷＹＱＱＫＰＧＳＰＰＱＹＬＬＲＹＫＳＤＳＤＫＱＱＧＳＧＶＳＳＲＦＳＡＳＫＤＡＳＡＮＡＧＩＬＬＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＭＩＷＨＳＧＡＳＡＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ 配列番号１０５

【0137】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、Ａ２４０ＶＬ－Ｂ９ＶＨ／ＡＭＧ－２１１配列番号１０６～１１２（米国特許第９９８２０６３号）（配列番号１０５として開示されている完全長配列）の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または軽鎖フレームワーク（ＬＦＲ）配列を含む。

【表14】

【0138】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、Ｂ９ＶＨ配列番号１１３（米国特許第９９８２０６３号）の可変重鎖（ＶＨ）を含む。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＳＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＲＮＫＡＮＧＧＴＴＥＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＧＬＲＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ 配列番号１１３

【0139】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号１１４～１２１（米国特許第９９８２０６３号）の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む。前記実施形態は、ＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１１７及び配列番号１１８の２つの変異体（見かけ順の、それぞれ配列番号１１３及び配列番号１７５として開示されている完全長の配列）を含む。

【表15】

【0140】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、Ｅ１２ＶＨ配列番号１２２（米国特許第９９８２０６３号）の可変重鎖（ＶＨ）を含む。
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＶＳＳＹＷＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＬＮＫＡＮＧＧＴＴＥＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＧＬＲＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ 配列番号１２２

【0141】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、配列番号１２３～１２９（米国特許第９９８２０６３号）（配列番号１２２として開示されている完全長配列）の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）または重鎖フレームワーク（ＨＦＲ）配列を含む。

【表16】

【0142】

本発明の一実施形態では、ＣＥＡ標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ＰＲ１Ａ３ ＶＨ配列番号１３０（米国特許第８６４２７４２号）の可変重鎖（ＶＨ）を含む。
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＥＦＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＫＴＧＥＡＴＹＶＥＥＦＫＧＲＶＴＦＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＷＤＦＡＹＹＶＥＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ 配列番号１３０

【0143】

例示的な実施形態では、本発明の免疫複合体は、ＴＲＯＰ２を特異的に認識して結合する抗原結合ドメインを含む、抗体コンストラクトを含む。

【0144】

腫瘍関連カルシウムシグナル伝達因子２（ＴＲＯＰ２）は、ＴＡＣＳＴＤ２遺伝子によってコードされる膜貫通糖タンパク質である（Ｌｉｎｎｅｎｂａｃｈ ＡＪ，ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１３（３）：１５０７～１５；Ｃａｌａｂｒｅｓｅ Ｇ，ｅｔ ａｌ（２００１）Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｔ．９２（１－２）：１６４－５）。それは、多くのがんで差次的に発現される細胞内カルシウムシグナル伝達因子である。それは、自己複製、増殖、浸潤、及び生存のために細胞にシグナル伝達する。それは、幹細胞に似た性質を有する。ＴＲＯＰ２は多くの正常組織で発現するが、対照的に、多くのがんで過剰発現している（Ｏｈｍａｃｈｉ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１２（１０），３０５７－３０６３；Ｍｕｈｌｍａｎｎ Ｇ，ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐａｔｈｏｌ．，６２（２），１５２－１５８；Ｆｏｎｇ Ｄ，ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｂｒ． Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，９９（８），１２９０－１２９５；Ｆｏｎｇ Ｄ，ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｍｏｄ． Ｐａｔｈｏｌ．，２１（２），１８６－１９１；Ｎｉｎｇ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，（２０１３）Ｎｅｕｒｏｌ． Ｓｃｉ．，３４（１０），１７４５－１７５０）。ＴＲＯＰ２の過剰発現は、予後的意義がある。ＴＲＯＰ２と相互作用するいくつかのリガンドが提案されている。ＴＲＯＰ２は、異なる経路を介して細胞にシグナル伝達し、それは、いくつかの転写因子の複雑なネットワークによって転写的に調節されている。

【0145】

ヒトＴＲＯＰ２（ＴＡＣＳＴＤ２：腫瘍関連カルシウムシグナル伝達因子２、ＧＡ７３３－１、ＥＧＰ－１、Ｍ１Ｓ１；以下、ｈＴＲＯＰ２という）は、３２３アミノ酸残基からなる単回膜貫通１型細胞膜タンパク質である。一方で、免疫抵抗性に関与する細胞膜タンパク質の存在（ヒト栄養細胞及びがん細胞に共通）（Ｆａｕｌｋ Ｗ Ｐ，ｅｔ ａｌ．（１９７８），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７５（４）：１９４７－１９５１）が以前に示唆されており、ヒト絨毛癌細胞株における細胞膜タンパク質に対するモノクローナル抗体によって認識される抗原分子が同定され、ヒト栄養膜細胞で発現する分子の１つとしてＴＲＯＰ２と命名された（Ｌｉｐｉｎｓｋｉ Ｍ，ｅｔ ａｌ．（１９８１），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７８（８），５１４７－５１５０）。この分子はまた、胃癌細胞株での免疫によって得られた、マウスモノクローナル抗体ＧＡ７３３（Ｌｉｎｎｅｎｂａｃｈ Ａ Ｊ，ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６（１），２７－３１）によって認識される腫瘍抗原ＧＡ７３３－１と称されるか、または非小細胞肺癌細胞での免疫によって得られたマウスモノクローナル抗体ＲＳ７－３Ｇ１１によって認識される上皮糖タンパク質（ＥＧＰ－１；Ｂａｓｕ Ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６２（４），４７２－４７９（１９９５））と称される。しかしながら、１９９５年にＴＲＯＰ２遺伝子をクローニングし、これらの分子はすべて同一の分子であることが確認された（Ｆｏｒｎａｒｏ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６２（５），６１０－６１８）。ｈＴＲＯＰ２のＤＮＡ配列及びアミノ酸配列は公開データベースに公開されており、例えば、受託番号ＮＭ＿００２３５３及びＮＰ＿００２３４４（ＮＣＢＩ）で参照することができる。

【0146】

がんとの関連を示唆するこのような情報に対して、これまで複数の抗ｈＴＲＯＰ２抗体が確立されており、それらの抗腫瘍効果について検討されている。これらの抗体の中でも、例えば、ヌードマウス異種移植片モデルにおいてそれ自体で抗腫瘍活性を示す非コンジュゲート抗体（ＷＯ２００８／１４４８９１；ＷＯ２０１１／１４５７４４；ＷＯ２０１１／１５５５７９；ＷＯ２０１３／０７７４５８号）、及び細胞傷害性薬剤とのＡＤＣとして抗腫瘍活性を示す抗体（ＷＯ２００３／０７４５６６；ＷＯ２０１１／０６８８４５；ＷＯ２０１３／０６８９４６；米国特許第７，９９９，０８３号）が開示される。しかしながら、それらの活性の強度または適用範囲は依然として不十分であり、ｈＴＲＯＰ２を治療標的とする医学的な要求が満たされていない。

【0147】

がん細胞におけるＴＲＯＰ２発現は、薬剤耐性と相関している。いくつかの戦略は、抗体、抗体融合タンパク質、化学阻害剤、ナノ粒子などを含むがん細胞上のＴＲＯＰ２を標的としている。これらの様々な治療的処置を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ研究及び前臨床研究により、マウスにおけるｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの両方で腫瘍細胞の増殖が有意に抑制された。臨床研究により、予後バイオマーカーとしてのＴｒｏｐ２の適用、及び逆耐性に対する治療標的としてのＴｒｏｐ２の適用の可能性が検討された。

【0148】

サシツズマブゴビテカン（ＴＲＯＤＥＬＶＹ（登録商標）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ、ＩＭＭＵ－１３２）、トポイソメラーゼ阻害剤に結合したＴＲＯＰ２指向性抗体を含む抗体薬物複合体は、少なくとも２回の先行治療を受けた成人患者における転移性トリプルネガティブ乳癌（ｍＴＮＢＣ）の治療に適応される。サシツズマブゴビテカン中のＴＲＯＰ２抗体は、イリノテカンの活性代謝物であるＳＮ－３８にコンジュゲートされている（米国特許第２０１６／０２９７８９０号；ＷＯ２０１５／０９８０９９）。

【0149】

本発明の一実施形態では、ＴＲＯＰ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＲＳ７（ヒト化ＲＳ７）、配列番号１３１～１３３（参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７２３８７８５号；米国特許第７４２００４０号）の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列を含む。

【表17】

【0150】

本発明の一実施形態では、ＴＲＯＰ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＲＳ７（ヒト化ＲＳ７）、配列番号１３４～１３６（米国特許第７２３８７８５号；同第９７９７９０７号；同第９３８２３２９号；ＷＯ２０２０／１４２６５９、それぞれは参照により本明細書に組み込まれる）の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列を含む。

【表18】

【0151】

本発明の一実施形態では、ＴＲＯＰ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ＡＲ４７Ａ６．４．２、配列番号１３４、１３７、１３８（参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第７４２００４０号）の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列を含む。

【表19】

【0152】

本発明の一実施形態では、ＴＲＯＰ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ヒト化ＫＭ４０９７、配列番号１３９～１４１（参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第２０１２／０２３７５１８号）の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列を含む。

【表20】

【0153】

本発明の一実施形態では、ＴＲＯＰ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ヒト化ＫＭ４０９７、配列番号１４２～１４４（参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第２０１２／０２３７５１８号）の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列を含む。

【表21】

【0154】

本発明の一実施形態では、ＴＲＯＰ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＴＩＮＡ１－Ｈ１Ｌ１、配列番号１３２、１３３、１４５（参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第１０，２２７，４１７号）の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列を含む。

【表22】

【0155】

本発明の一実施形態では、ＴＲＯＰ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＴＩＮＡ１－Ｈ１Ｌ１、配列番号１４６～１４８（参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第１０，２２７，４１７号）の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列を含む。

【表23】

【0156】

本発明の一実施形態では、ＴＲＯＰ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＴＩＮＡ１－Ｈ１Ｌ１、配列番号１４９～１５１（参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８８７１９０８号）の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列を含む。

【表24】

【0157】

本発明の一実施形態では、ＴＲＯＰ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＴＩＮＡ１－Ｈ１Ｌ１、配列番号１５２～１５７（参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８８７１９０８号）の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列を含む。

【表25】

【0158】

本発明の一実施形態では、ＴＲＯＰ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＴＩＮＡ１－Ｈ１Ｌ１の配列番号１５０、１５１、１５８（参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８８７１９０８号）の軽鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列を含む。

【表26】

【0159】

本発明の一実施形態では、ＴＲＯＰ２標的化抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、ｈＴＩＮＡ１－Ｈ１Ｌ１の配列番号１５２～１５４、１５７、１５９、１６０（参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８８７１９０８号）の重鎖ＣＤＲ（相補性決定領域）配列を含む。

【表27】

【0160】

本発明の一実施形態では、免疫複合体は、配列番号１６１～１６３から選択される軽鎖配列を有するシステイン変異抗体を含む。

【表28】

【0161】

本発明の一実施態様では、システイン変異、ＴＲＯＰ２標的化抗体は、配列番号１６４の重鎖（ＨＣ）を含む。
ＱＶＱＬＱＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＱＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＴＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＤＤＴＡＶＹＦＣＡＲＧＧＦＧＳＳＹＷＹＦＤＶＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ 配列番号１６４

【0162】

本発明の一実施形態では、ＴＲＯＰ２標的化抗体の軽鎖（ＬＣ）は、配列番号１６５～１６７から選択される。

【表29】

【0163】

本発明の一実施形態では、免疫複合体は、配列番号１６８の重鎖配列を有するシステイン変異抗体を含む。

【表30】

【0164】

本発明の一実施形態では、システイン変異ＴＲＯＰ２標的化抗体の軽鎖（ＬＣ）は、配列番号１６９の配列を有する。
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＩＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＨＹＩＴＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ 配列番号１６９

【0165】

本発明の一実施形態では、システイン変異ＴＲＯＰ２標的化抗体の重鎖（ＨＣ）は、配列番号１７０の配列を有する。
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＤＴＦＴＮＨＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＮＳＧＨＴＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＡＶＡＧＰＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＣＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ 配列番号１７０

【0166】

いくつかの実施形態では、抗体コンストラクトは、Ｆｃドメインを更に含む。特定の実施形態では、抗体コンストラクトは、抗体である。特定の実施形態では、抗体コンストラクトは、融合タンパク質である。抗原結合ドメインは、単鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）であり得る。単鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）は、合成ペプチドを介して抗体軽鎖のＶドメインに結合した抗体重鎖の可変（Ｖ）ドメインを含む切断型Ｆａｂ断片であり、通常の組換えＤＮＡ技術技法を使用して生成できる。同様に、ジスルフィド安定化可変領域断片（ｄｓＦｖ）は、組換えＤＮＡ技術によって調製できる。抗体コンストラクトまたは抗原結合ドメインは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＨＥＲ２抗体、または抗ＣＥＡ抗体の抗原結合ドメインの１つ以上の可変領域（例えば、２つの可変領域）を含むことができ、各可変領域は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、修飾Ｆｃ領域を含み、修飾は、１つ以上のＦｃ受容体へのＦｃ領域の結合を調節する。

【0167】

いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、ＴＧＦβ１に結合することができる、トランスフォーミング成長因子β１（ＴＧＦβ１）受容体またはその断片を含めることによって修飾される。例えば、受容体は、ＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）であり得る。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ受容体は、ヒトＴＧＦβ受容体である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧは、本明細書に組み込まれる米国特許第９６７６８６３号に記載されるように、ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）へのＣ末端融合を有する。「Ｆｃリンカー」を使用し、ＩｇＧをＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン、例えば、Ｇ_４Ｓ_４Ｇ Ｆｃリンカーに結合させることができる（配列番号１７１）。Ｆｃリンカーは、標的への結合特異性を維持しながら、分子の適切な三次元折り畳みを可能にする、短くて可撓性のペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、ＴＧＦβ受容体のＮ末端は、抗体コンストラクトのＦｃに融合されている（Ｆｃリンカーの有無にかかわらず）。いくつかの実施形態では、抗体コンストラクト重鎖のＣ末端は、ＴＧＦβ受容体に融合されている（Ｆｃリンカーの有無にかかわらず）。いくつかの実施形態では、抗体コンストラクト重鎖のＣ末端リシン残基は、アラニンに変異されている。

【0168】

いくつかの実施形態では、免疫複合体中の抗体は、グリコシル化されている。

【0169】

いくつかの実施形態では、免疫複合体の抗体は、操作されたシステインがコンジュゲーションに利用可能である部位でのシステイン置換を通して抗体へのアジュバントの部位特異的コンジュゲーションを提供するが、免疫グロブリンの折り畳み及び組み立てを乱さないか、または抗原結合及びエフェクター機能を改変しない、システイン操作抗体である（Ｊｕｎｕｔｕｌａ，ｅｔ ａｌ．，２００８ｂ Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２６（８）：９２５－９３２；Ｄｏｒｎａｎ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｂｌｏｏｄ１１４（１３）：２７２１－２７２９；米国特許第７５２１５４１号；同第７７２３４８５号；同第２０１２／０１２１６１５号；ＷＯ２００９／０５２２４９）。「システイン操作抗体」または「システイン操作抗体変異体」とは、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている抗体である。システイン操作抗体は、２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物（式ＩＩ）上のマレイミドなどのチオール反応性求電子基に、均一な化学量論（例えば、単一の操作システイン部位を有する抗体における抗体あたり２つまでの２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン部位）でコンジュゲートされ得る。

【0170】

いくつかの実施形態では、システイン操作抗体は、免疫複合体を調製するために使用される。免疫複合体は、Ｋａｂａｔ番号付けにより番号付けされているように、軽鎖上の部位、例えば１４９－リシン部位（ＬＣ Ｋ１４９Ｃ）、または重鎖上の部位、例えば１２２－セリン部位（ＨＣ Ｓ１２２Ｃ）に導入された反応性システインチオール残基を有し得る。他の実施形態では、システイン操作抗体は、重鎖（ＨＣ Ａ１１８Ｃ）の１１８－アラニン部位（ＥＵ番号付け）に導入されたシステイン残基を有する。この部位には、配列番号付けで１２１、Ｋａｂａｔ番号付けで１１４の番号がつけられている。他の実施形態では、システイン操作された抗体は、（ｉ）Ｋａｂａｔ番号付けによるＧ６４Ｃ、Ｒ１４２Ｃ、Ｋ１８８Ｃ、Ｌ２０１Ｃ、Ｔ１２９Ｃ、Ｓ１１４ＣもしくはＥ１０５Ｃでの軽鎖、（ｉｉ）Ｋａｂａｔ番号付けによるＤ１０１Ｃ、Ｖ１８４Ｃ、Ｔ２０５Ｃもしくは１２２Ｃでの重鎖、または（ｉｉｉ）他のシステイン変異抗体に導入され、及びＢｈａｋｔａ，Ｓ．ら，（２０１３）“Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ＴＨＩＯＭＡＢｓ ｆｏｒ Ｓｉｔｅ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｉｏｌ－Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｌｉｎｋｅｒｓ”，Ｌａｕｒｅｎｔ Ｄｕｃｒｙ（ｅｄ．），Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１０４５，ｐａｇｅｓ１８９－２０３；ＷＯ２０１１／１５６３２８；米国特許第９０００１３０号に記載されるようなシステイン残基を有する。

【0171】

２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンアジュバント化合物
本発明の免疫複合体は、２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンアジュバント部位を含む。本明細書に記載のアジュバント部位は、免疫応答を誘発する化合物（すなわち、免疫刺激剤）である。概ね、本明細書に記載のアジュバント部位は、ＴＬＲアゴニストである。ＴＬＲは、脊椎動物の自然免疫応答の開始に関与するＩ型膜貫通タンパク質である。ＴＬＲは、細菌、ウイルス及び真菌からの様々な病原体関連分子パターンを認識し、侵入する病原体に対する防御の第一線として機能する。ＴＬＲは、細胞発現とそれらが開始するシグナル伝達経路の違いにより、重複しているが異なる生物学的応答を誘発する。作動すると（例えば、自然刺激または合成ＴＬＲアゴニストによって）、ＴＬＲはシグナル伝達カスケードを開始し、アダプタータンパク質である骨髄分化一次応答遺伝子８８（ＭｙＤ８８）を介して核因子κ－Ｂ（ＮＦ－κＢ）の活性化、及びＩＬ－１受容体関連キナーゼ（ＩＲＡＫ）の動員をもたらす。そうしてＩＲＡＫのリン酸化は、ＴＮＦ受容体関連因子６（ＴＲＡＦ６）の動員につながり、その結果、ＮＦ－κＢ阻害剤Ｉ－κＢがリン酸化される。その結果、ＮＦ－κＢが細胞核に入り、そのプロモーターがサイトカインなどのＮＦ－κＢ結合部位を含む、遺伝子の転写を開始させる。ＴＬＲシグナル伝達の追加の調節モードには、ＴＩＲドメイン含有アダプター誘導型インターフェロン－β（ＴＲＩＦ）依存的なＴＮＦ受容体関連因子６（ＴＲＡＦ６）の誘導、ならびにＴＲＩＦ及びＴＲＡＦ３を介したＭｙＤ８８非依存経路の活性化が含まれ、インターフェロン応答因子３（ＩＲＦ３）のリン酸化をもたらす。同様に、ＭｙＤ８８依存経路もＩＲＦ及びＩＲＦ７を含むいくつかのＩＲＦファミリーメンバーを活性化し、ＴＲＩＦ依存経路もＮＦ－κＢ経路を活性化する。

【0172】

通常、本明細書に記載のアジュバント部位は、ＴＬＲ７及び／またはＴＬＲ８アゴニストである。ＴＬＲ７及びＴＬＲ８は、どちらも単球及び樹状細胞で発現する。ヒトでは、ＴＬＲ７は形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）及びＢ細胞でも発現する。ＴＬＲ８は、主に骨髄由来の細胞、すなわち単球、顆粒球及び骨髄樹状細胞で発現する。ＴＬＲ７及びＴＬＲ８は、ウイルスの侵入に応答する手段として、細胞内の「外来」一本鎖ＲＮＡの存在を検出することができる。ＴＬＲ８アゴニストによるＴＬＲ８発現細胞の治療は、高レベルのＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６及び他の炎症性サイトカインの産生をもたらすことができる。同様に、ＴＬＲ７アゴニストによるｐＤＣなどのＴＬＲ７発現細胞の刺激は、高レベルのＩＦＮ－α及び他の炎症性サイトカインの産生をもたらすことができる。ＴＬＲ７／ＴＬＲ８関与とその結果としてのサイトカイン産生は、樹状細胞及び他の抗原提示細胞を活性化し、腫瘍破壊につながる多様な自然免疫応答メカニズム及び後天的な免疫応答メカニズムを促進する。
本発明の例示的な化合物（２Ａｍ４ＣＢｚａ）を表１に示す。各化合物は、質量分析によって特徴付けられ、示された質量を有することが示されている。ヒトＴＬＲ７またはヒトＴＬＲ８を発現するＨＥＫ２９３ＮＦＫＢレポーター細胞に対する活性を、実施例２０３に従って測定した。

【表31】

【0173】

２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物
本発明の免疫複合体は、抗体を２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物とのコンジュゲーションによって調製される。２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物は、リンカー単位Ｌ及び反応性求電子基Ｑに共有結合した２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン（２Ａｍ４ＣＢｚａ）部分を含む。リンカー単位は、免疫複合体の安定性、透過性、溶解性、ならびに他の薬物動態、安全性、及び有効性の特性に影響を及ぼす、官能基ならびにサブユニットを含む。リンカーユニットは、抗体の反応性官能基と反応する、すなわち、コンジュゲートする反応性官能基を含む。例えば、抗体のリシン側鎖アミノなどの求核基は、２Ａｍ４ＣＢｚａリンカー化合物の求電子反応性官能基と反応して、免疫複合体（ＩＣ）を形成する。また、例えば、抗体のシステインチオールは、２Ａｍ４ＣＢｚａリンカー化合物のマレイミドまたはブロモアセトアミド基と反応して、免疫複合体を形成する。

【0174】

２Ａｍ４ＣＢｚａリンカー化合物に適した反応性求電子官能基（式ＩＩのＱ）には、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル（ＮＨＳ）エステル及びＮ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル（スルホ－ＮＨＳ）エステル（アミン反応性）；カルボジイミド（アミン及びカルボキシル反応性）；ヒドロキシメチルホスフィン（アミン反応性）；マレイミド（チオール反応性）；Ｎ－ヨードアセトアミド（チオール反応性）などのハロゲン化アセトアミド；アリールアジド（一級アミン反応性）；フッ化アリールアジド（炭素－水素（Ｃ－Ｈ）挿入を介した反応性）；ペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステル（アミン反応性）；テトラフルオロフェニル（ＴＦＰ）またはスルホテトラフルオロフェニル（ＳｕｌｆｏＴＦＰ）エステル（アミン反応性）；イミドエステル（アミン反応性）；イソシアネート（ヒドロキシル反応性）；ビニルスルホン（チオール、アミン、及びヒドロキシル反応性）；ピリジルジスルフィド（チオール反応性）；及びベンゾフェノン誘導体（Ｃ－Ｈ結合挿入を介した反応性）が含まれるが、これらに限定されない。更なる試薬には、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，２００８に記載されているものが含まれるが、これらに限定されない。

【0175】

本発明は、免疫複合体の設計、調製及び使用に対する、制限ならびに課題に対する解決策を提供する。いくつかのリンカーは、血流中で不安定であり、それにより、標的細胞での内部移行前に許容できない量のアジュバント／薬物を放出する可能性がある（Ｋｈｏｔ，Ａ．ｅｔ ａｌ（２０１５）Ｂｉｏａｎａｌｙｓｉｓ７（１３）：１６３３－１６４８）。他のリンカーは、血流中では安定性を提供し得るが、細胞内放出の有効性に悪影響が及ぼされ得る。所望の細胞内放出を提供するリンカーは通常、血流中での安定性に乏しい。あるいは、血流安定性及び細胞内放出は通常、反比例関係にある。更に、標準的なコンジュゲーションプロセスで、抗体上に負荷されたアジュバント／薬物部分の量（すなわち、薬物負荷）、コンジュゲーション反応で形成される凝集体の量、及び得ることができる最終精製コンジュゲートの収率は、相関する。例えば、凝集体の形成は一般に、抗体にコンジュゲートされるアジュバント／薬物部分及びその誘導体の当量数に正相関する。高い薬物負荷下では、形成された凝集体は、治療用途では除去されなければならない。結果として、薬物負荷媒介凝集体形成は、免疫複合体の収率を減少させ、プロセスの規模拡大を困難にする場合がある。

【0176】

２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物の例示的な実施形態は、式ＩＩ：

【化5】

を含み、
Ｘ^２及びＸ^３は、それぞれ独立して、結合、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）、Ｏ、Ｎ（Ｒ^５）、Ｓ、Ｓ（Ｏ）_２、及びＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^５）からなる群から選択され、
Ｒ^１ａ、Ｒ^１ｂ及びＲ^２は、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル、Ｃ_２～Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル、及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｒ^３は、
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｓ（Ｏ_２）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_６～Ｃ_２０アルキルジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリール）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリール）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリルジイル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－＊；及び
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）－Ｎ（Ｒ^５）－＊からなる群から選択され、
アスタリスク＊は、リンカーＬの結合部位を示し、
Ｒ^５は、Ｈ、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール及びＣ_１～Ｃ_１２アルキルからなる群から選択されるか、または２つのＲ^５は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^５ａは、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｌ－Ｑは、
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ^＋（Ｒ^６）_２－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）；
Ｑ－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－；
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－；及び
Ｑ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－からなる群から選択され、
Ｒ^６は、独立して、ＨまたはＣ_１～Ｃ_６アルキルであり、
ＰＥＧは、式：－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－を有し、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり、
Ｇｌｕｃは、式：

【化6】

を有し、
ＰＥＰは、式：

【化7】

を有し、ＡＡは、天然もしくは非天然アミノ酸側鎖から独立して選択されるか、またはＡＡ及び隣接する窒素原子のうちの１つ以上は５員環プロリンアミノ酸を形成し、波線は結合点を示しており、
Ｃｙｃは、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ_２、－ＯＨ－、ＯＣＨ_３及び構造：

【化8】

を有するグルクロン酸選択される１つ以上の基で任意選択で置換されている、Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイルから選択され、
Ｒ^７は、－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－、－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２Ｎ（Ｒ^８）－及び－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－からなる群から選択され、Ｒ^８は、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ_１～Ｃ_６アルキル及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^９）_２から選択され、Ｒ^９は、独立して、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル及び－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－ＯＨからなる群から選択され、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり、または２つのＲ^９基は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリル環を形成し、
ｙは２～１２の整数であり、
ｚは０または１であり、
Ｑは、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ_２及びＳＯ_３ ^－から独立して選択される１つ以上の基で置換された、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル、マレイミド、ならびにフェノキシからなる群から選択され、
アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール及びヘテロアリールジイルは、独立してかつ任意選択で、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ＝ＣＨ_２、－Ｃ－ＣＨ、－Ｃ－ＣＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨＦ_２、－ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＨＦ_２、－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＮＨＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＮＨＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＣＯ_２Ｈ、－ＣＯＣＨ_３、－ＣＯ_２ＣＨ_３、－ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、－ＣＯＮＨ_２、－ＣＯＮＨＣＨ_３、－ＣＯＮ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＨＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＮＨＣＯＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＯＣＨ_３、－ＮＨＳ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＯ_２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍＣＯ_２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＦ_３、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＳＣＨ_３、－Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、及び－Ｓ（Ｏ）_３Ｈから独立して選択される１つ以上の基で置換される。

【0177】

式ＩＩの２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物の例示的な実施形態は、Ｒ^ａ及びＲ^１ｂが、任意選択で置換されたＣ_６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールからなる群から独立して選択されることを含む。

【0178】

式ＩＩの２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物の例示的な実施形態では、Ｒ^１ａが任意選択で置換されたＣ_６～Ｃ_２０アリールであり、Ｒ^１ｂがＨであることを含む。．

【0179】

式ＩＩの２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物の例示的な実施態様では、Ｘ^２及びＸ^３のそれぞれが結合であり、Ｒ^２及びＲ^３が、Ｃ_１～Ｃ_８アルキル、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）、－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＲ^５、－（Ｃ_１～Ｃ_８アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^５、－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^５、及び－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２から独立して選択されることを含む。

【0180】

式ＩＩの２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物の例示的な実施形態は、Ｘ^２が結合であり、Ｒ^２がＣ_１～Ｃ_１２アルキルであることを含む。

【0181】

式ＩＩの２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物の例示的な実施形態は、Ｘ^３がＯであり、Ｒ^３が－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊であることを含む。

【0182】

式ＩＩの２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物の例示的な実施形態は、Ｒ^３が－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ－であることを含む。

【0183】

式ＩＩの２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物の例示的な実施形態は、Ｌが－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－であることを含む。

【0184】

式ＩＩの２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物の例示的な実施形態は、ＡＡ_１及びＡＡ_２が、天然に存在するアミノ酸の側鎖から独立して選択されることを含む。

【0185】

式ＩＩの２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物の例示的な実施形態は、隣接する窒素原子を有するＡＡ_１またはＡＡ_２が５員環プロリンアミノ酸を形成することを含む。

【0186】

式ＩＩの２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物の例示的な実施形態は、ＡＡ_１及びＡＡ_２が、Ｈ、－ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２（Ｃ_６Ｈ_５）、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ_２、－ＣＨＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＳＯ_３Ｈ、及び－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２から独立して選択されることを含む。

【0187】

式ＩＩの２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物の例示的な実施形態は、ＡＡ_１が－ＣＨ（ＣＨ_３）_２であり、ＡＡ_２が－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２であることを含む。

【0188】

式ＩＩの２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物の例示的な実施形態は、Ｑが、

【化9】

から選択されることを含む。

【0189】

式ＩＩの２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物の例示的な実施形態は、Ｑが、１つ以上のＦで置換されたフェノキシであることを含む。

【0190】

式ＩＩの２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物の例示的な実施形態は、Ｑが２，３，５，６－テトラフルオロフェノキシであることを含む。

【0191】

式ＩＩの２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物の例示的な実施形態は、Ｑが２，３，５，６－テトラフルオロ，４－スルホネート－フェノキシであることを含む。

【0192】

式ＩＩの２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物の例示的な実施形態は、式ＩＩａを有する。

【化10】

【0193】

２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー化合物の例示的な実施形態は、表２から選択される。それぞれの化合物は、質量分析によって特徴付けされ、示された質量を有することが示された。

【表32】

【表33-1】

【表33-2】

【表33-3】

【表33-4】

【表33-5】

【表33-6】

【表33-7】

【表33-8】

【0194】

免疫複合体
免疫複合体の例示的な実施形態は、１つ以上の２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン（２Ａｍ４ＣＢｚａ）部分にリンカーによって共有結合され、式Ｉ：

【化11】

を有する抗体、またはその薬学的に許容される塩を含み、
Ａｂは、ＰＤ－Ｌ１、ＨＥＲ２、ＣＥＡまたはＴＲＯＰ２からなる群から選択される標的に結合する抗体である、抗体であり、
ｐは、１～８の整数であり、
Ｘ^２及びＸ^３は、独立して、結合、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）、Ｏ、Ｎ（Ｒ^５）、Ｓ、Ｓ（Ｏ）_２、及びＳ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^５）からなる群から選択され、
Ｒ^１ａ、Ｒ^１ｂ及びＲ^２は、独立して、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル、Ｃ_２～Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２～Ｃ_６アルキニル、Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル、及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールからなる群から選択されるか、またはＲ^１ａ及びＲ^１ｂは、５員または６員のヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^３は、
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｓ（Ｏ_２）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_６～Ｃ_２０アルキルジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリール）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリルジイル）－ＮＲ^５－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_２０ヘテロシクリルジイル）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリルジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊；
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｏ－＊；及び
－（Ｃ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝ＮＲ^５ａ）－Ｎ（Ｒ^５）－＊からなる群から選択され、
アスタリスク＊は、リンカーＬの結合部位を示し、
または、Ｒ^２及びＲ^３は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^５は、独立して、Ｈ、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_３～Ｃ_１２カルボシクリル、Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル、及びＣ_１～Ｃ_１２アルキルジイルからなる群から選択されるか、または２つのＲ^５基は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリル環を形成し、
Ｒ^５ａは、Ｃ_６～Ｃ_２０アリール及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｌは、
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１－Ｃ_１２ ａｌｋｙｌｄｉｙｌ）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｎ^＋（Ｒ^６）_２－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）；
－Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｇｌｕｃ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｎ（Ｒ^５）－Ｃ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^６）－ＰＥＧ－ＳＳ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＣ（＝Ｏ）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－；
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－；及び
－スクシンイミジル－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＰ－Ｎ（Ｒ^６）－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）Ｎ（Ｒ^６）Ｃ（＝Ｏ）－（Ｃ_２～Ｃ_５モノヘテロシクリルジイル）－からなる群から選択され、
Ｒ^６は、独立して、ＨまたはＣ_１～Ｃ_６アルキルであり、
ＰＥＧは、式：－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－を有し、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり、
Ｇｌｕｃは、式：

【化12】

を有し、
ＰＥＰは、式：

【化13】

を有し、ＡＡは、天然もしくは非天然アミノ酸側鎖から独立して選択されるか、またはＡＡ及び隣接する窒素原子のうちの１つ以上は５員環プロリンアミノ酸を形成し、波線は結合点を示しており、
Ｃｙｃは、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ_２、－ＯＨ－、ＯＣＨ_３及び構造：

【化14】

を有するグルクロン酸から選択される１つ以上の基で任意選択で置換されている、Ｃ_６～Ｃ_２０アリールジイル及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールジイルから選択され、
Ｒ^７は、－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－、－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２Ｎ（Ｒ^８）－及び－ＣＨ（Ｒ^８）Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－からなる群から選択され、Ｒ^８は、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ_１～Ｃ_６アルキル及び－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^９）_２から選択され、Ｒ^９は、独立して、Ｈ、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル及び－（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍ－ＯＨからなる群から選択され、ｍは１～５の整数であり、ｎは２～５０の整数であり、または２つのＲ^９基は一緒になって、５員もしくは６員のヘテロシクリル環を形成し、
ｙは２～１２の整数であり、
ｚは０または１であり、
アルキル、アルキルジイル、アルケニル、アルケニルジイル、アルキニル、アルキニルジイル、アリール、アリールジイル、カルボシクリル、カルボシクリルジイル、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルジイル、ヘテロアリール及びヘテロアリールジイルは、独立してかつ任意選択で、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＣＮ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ＝ＣＨ_２、－Ｃ－ＣＨ、－Ｃ－ＣＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２ＯＨ、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨＦ_２、－ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＦ_３、－ＣＨ_２ＣＨＦ_２、－ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＮ、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＣＮ、－ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＮＨＳＯ_２ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＮＨＣＨ_３、－ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＣＯ_２Ｈ、－ＣＯＣＨ_３、－ＣＯ_２ＣＨ_３、－ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３、－ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_３、－ＣＯＮＨ_２、－ＣＯＮＨＣＨ_３、－ＣＯＮ（ＣＨ_３）_２、－Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－ＮＨ_２、－ＮＨＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＮＨＣＯＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＯＣＨ_３、－ＮＨＳ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－Ｎ（ＣＨ_３）Ｃ（ＣＨ_３）_２ＣＯＮＨ_２、－Ｎ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）Ｈ、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＣＨ_３、－ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、－ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＯ_２、＝Ｏ、－ＯＨ、－ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＨ、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－（ＣＨ_２）_ｍＣＯ_２Ｈ、－Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＨ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＦ_３、－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）_２、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、－ＳＣＨ_３、－Ｓ（Ｏ）_２ＣＨ_３、及び－Ｓ（Ｏ）_３Ｈから独立して選択される１つ以上の基で置換される。

【0195】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、抗体が、ＰＤ－Ｌ１に結合する抗原結合ドメインを有する、抗体コンストラクトであることを含む。

【0196】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ及びアベルマブ、またはそれらのバイオシミラーまたはバイオベターからなる群から選択されることを含む。

【0197】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、抗体が、ＨＥＲ２に結合する抗原結合ドメインを有する、抗体コンストラクトであることを含む。

【0198】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、抗体が、トラスツズマブ及びペルツズマブ、またはそれらのバイオシミラーまたはバイオベターからなる群から選択されることを含む。

【0199】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、抗体が、ＣＥＡに結合する抗原結合ドメインを有する、抗体コンストラクトであることを含む。

【0200】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、抗体がラベツズマブ、またはそのバイオシミラーもしくはバイオベターであることを含む。

【0201】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、抗体が、ＴＲＯＰ２に結合する抗原結合ドメインを有する、抗体コンストラクトであることを含む。

【0202】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｔｒｏｐ２抗体がモノクローナル抗体であることを含む。

【0203】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ^１ａ及びＲ^１ｂが、任意選択で置換されたＣ_６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールからなる群から独立して選択されることを含む。

【0204】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態では、Ｒ^１ａが任意選択で置換されたＣ_６～Ｃ_２０アリールであり、Ｒ^１ｂがＨであることを含む。．

【0205】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施態様では、Ｘ^２及びＸ^３のそれぞれが結合であり、Ｒ^２及びＲ^３が、Ｃ_１～Ｃ_８アルキル、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）、－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－ＯＲ^５、－（Ｃ_１～Ｃ_８アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^５、－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）－Ｎ（Ｒ^５）ＣＯ_２Ｒ^５、及び－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキル）－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^５）_２から独立して選択されることを含む。

【0206】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ^２が結合であり、Ｒ^２がＣ_１～Ｃ_１２アルキルであることを含む。

【0207】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ^３がＯであり、Ｒ^３が－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊であることを含む。

【0208】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ^３が－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ－であることを含む。

【0209】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｌが－Ｃ（＝Ｏ）－ＰＥＧ－Ｃ（＝Ｏ）－であることを含む。

【0210】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、ＬがＰＥＧを含み、ｎが１０であり、ｍが１であることを含む。

【0211】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、ＡＡ_１及びＡＡ_２が、天然に存在するアミノ酸の側鎖から独立して選択されることを含む。

【0212】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、隣接する窒素原子を有するＡＡ_１またはＡＡ_２が５員環プロリンアミノ酸を形成することを含む。

【0213】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、ＡＡ_１及びＡＡ_２が、Ｈ、－ＣＨ_３、－ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２（Ｃ_６Ｈ_５）、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ_２、－ＣＨＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_３、－ＣＨ_２ＳＯ_３Ｈ、及び－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２から独立して選択されることを含む。

【0214】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、ＡＡ_１が－ＣＨ（ＣＨ_３）_２であり、ＡＡ_２が－ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２であることを含む。

【0215】

免疫複合体の例示的な実施形態は、式Ｉａを有する。

【化15】

【0216】

式Ｉａの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ^１ａが、任意選択で置換されたＣ_６～Ｃ_２０アリール、Ｃ_２～Ｃ_９ヘテロシクリル、及びＣ_１～Ｃ_２０ヘテロアリールから選択された群であることを含む。

【0217】

式Ｉａの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ^１ａがピリミジニルまたはピリジルであることを含む。

【0218】

式Ｉａの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ^２が結合であり、Ｒ^２がＣ_１～Ｃ_１２アルキルであることを含む。

【0219】

式Ｉａの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｒ^３が－（Ｃ_１～Ｃ_１２アルキルジイル）－Ｎ（Ｒ^５）－＊であることを含む。

【0220】

式Ｉａの免疫複合体の例示的な実施形態は、Ｘ^３－Ｒ^３－Ｌが、

【化16】

からなる群から選択されることを含み、波線はＮへの結合点を示す。

【0221】

本発明は、式Ｉの実施形態のすべての合理的かつ操作可能な組み合わせ、及び特徴の並べ替えを含む。

【0222】

特定の実施形態では、本発明の免疫複合体化合物は、免疫刺激活性を有するものを含む。本発明の抗体薬物複合体は、有効用量の２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン剤を腫瘍組織に選択的に送達させ、それによって、非複合型２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンと比較して、治療指数（「治療域」）を増加させながら、より高い選択性（すなわち、より低い効果的用量）を達成し得る。

【0223】

薬物負荷は、式Ｉの免疫複合体内の１抗体あたりの２Ａｍ４ＣＢｚａ部分の数である、ｐによって表される。薬物（２Ａｍ４ＣＢｚａ）負荷は、１抗体あたり１～約８個の薬物部分（Ｄ）の範囲であり得る。式Ｉの免疫複合体は、１～約８個の範囲の薬物部分にコンジュゲートされた抗体の混合物または集団を含む。いくつかの実施形態では、抗体にコンジュゲートされ得る薬物部分の数は、リシン及びシステインなどの反応性または利用可能なアミノ酸側鎖残基の数によって制限される。いくつかの実施形態では、遊離システイン残基は、本明細書に記載される方法によって抗体アミノ酸配列中に導入される。そのような態様では、ｐは、１、２、３、４、５、６、７または８、及びその範囲、例えば、１～８または２～５であり得る。そのような態様では、ｐ及びｎは等しい（すなわち、ｐ＝ｎ＝１、２、３、４、５、６、７もしくは８、またはその間のいくつかの範囲）。式Ｉの例示的な抗体薬物複合体には、１、２、３または４個の操作されたシステインアミノ酸を有する抗体が含まれるが、これらに限定されない（Ｌｙｏｎ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍ．５０２：１２３－１３８）。いくつかの実施形態では、１個以上の遊離システイン残基が、遺伝子操作を使用することなく、鎖内ジスルフィド結合を形成する抗体にすでに存在しており、その場合、既存の遊離システイン残基を使用して、抗体を薬物にコンジュゲートし得る。。いくつかの実施形態では、抗体は、１個以上の遊離システイン残基を生成するために、抗体のコンジュゲーション前に還元条件に曝露される。

【0224】

いくつかの免疫複合体について、ｐは、抗体上の結合部位の数によって制限され得る。例えば、本明細書に記載される特定の例示的な実施形態におけるように、結合がシステインチオールである場合、抗体は、１個のみもしくは限定された数のシステインチオール基を有し得るか、または１個のみもしくは限定された数の反応性が十分なチオール基を有し得、それに、薬物が結合され得る。他の実施形態では、抗体中の１つ以上のリシンアミノ基が利用可能であり、式ＩＩの２Ａｍ４ＣＢｚａリンカー化合物とのコンジュゲーションに対して反応性であり得る。特定の実施形態では、より高い薬物負荷、例えば、５超のｐは、特定の抗体薬物複合体において凝集、不溶性、毒性、または細胞透過性の喪失を引き起こし得る。特定の実施形態では、免疫複合体の平均薬物負荷は、１～約８、約２～約６または約３～約５の範囲である。特定の実施形態では、抗体は、リシンまたはシステインなどの反応性求核基を明らかにするために変性条件に供される。

【0225】

免疫複合体の負荷（薬物／抗体比）は、異なる方法で、ならびに例えば、（ｉ）抗体と比較してモル過剰の２Ａｍ４ＣＢｚａリンカー中間体化合物を制限すること、（ｉｉ）コンジュゲーション反応時間または温度を制限すること、及び（ｉｉｉ）最適化された抗体反応性のための部分的または制限的還元変性条件によって制御され得る。

【0226】

抗体の２つ以上の求核基が薬物と反応する場合、結果として生じる産生物は、抗体に結合した１つ以上の薬物部分が分布する抗体薬物複合体化合物の混合物であることを理解されたい。１抗体あたりの平均数薬物は、抗体に特異的及び薬物に特異的である、二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって混合物から算出され得る。個々の免疫複合体分子は、質量分析法によって混合物中で特定され、ＨＰＣＬ、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって、分離されてもよい（例えば、ＭｃＤｏｎａｇｈ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｒ．Ｄｅｓｉｇｎ＆Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ１９（７）：２９９－３０７；Ｈａｍｂｌｅｔｔ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：７０６３－７０７０；Ｈａｍｂｌｅｔｔ，Ｋ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．“Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｒｕｇ ｌｏａｄｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉ－ＣＤ３０ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，”ＡｂｓｔｒａｃｔＮｏ．６２４，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ２７－３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ４５，Ｍａｒｃｈ２００４；Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｔｈｅ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｒｕｇ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”ＡｂｓｔｒａｃｔＮｏ．６２７，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ２７－３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ４５，Ｍａｒｃｈ２００４を参照されたい）。特定の実施形態では、単一の負荷値を有する均一の免疫複合体は、電気泳動またはクロマトグラフィーによって複合混合物から単離されてもよい。

【0227】

式Ｉの免疫複合体の例示的な実施形態は、表３ａ及び表３ｂの免疫複合体から選択される。がん細胞とｃＤＣ富化された初代細胞単離株の共培養において、表３ａ及び表３ｂの特定の免疫複合体は、がんに免疫応答を開始させることに関連するサイトカインＩＬ－１２ｐ７０の分泌を誘導する。クロストリジウム・ディフィシル毒素Ｂを標的とし、ベズロトックス（ベズロトクマブ）ＩＣ－２８及びＩＣ－３３を含む免疫複合体を、アイソタイプの非腫瘍結合対照として検討した。ｉｎ ｖｉｔｒｏでの免疫複合体活性の評価は、実施例２０３の方法に従って行った。

【表34】

【表35-1】

【表35-2】

【0228】

免疫複合体の医薬組成物
本発明は、本明細書に記載の複数の免疫複合体及び任意選択でそのための担体、例えば、薬学的または薬理学的に許容される担体を含む、組成物、例えば、薬学的または薬理学的に許容される組成物または製剤を提供する。免疫複合体は、組成物が同じであっても異なっていてもよく、すなわち、組成物は、抗体コンストラクト上の同じ位置に連結された同じ数のアジュバントを有する免疫複合体を含み得る、及び／または抗体コンストラクトの異なる位置に連結された同じ数の２Ａｍ４ＣＢｚａアジュバントを有する、抗体コンストラクトの同じ位置に連結された異なる数のアジュバントを有する、もしくは抗体コンストラクトの異なる位置に連結した異なる数のアジュバントを有する免疫複合体を含み得る。

【0229】

例示的な実施形態では、免疫複合体化合物を含む組成物は、免疫複合体化合物の混合物を含み、免疫複合体化合物の混合物中の１抗体当たりの平均薬物（２Ａｍ４ＣＢｚａ）負荷は、約２～約５である。

【0230】

本発明の免疫複合体の組成物は、約０．４～約１０のアジュバント対抗体コンストラクトの平均比を有することができる。当業者であれば、抗体コンストラクトにコンジュゲートした２Ａｍ４ＣＢｚａアジュバントの数が、免疫複合体から本発明の複数の免疫複合体を含む組成物中の免疫複合体まで変化し得て、したがって、アジュバント対抗体コンストラクト（例えば、抗体）比を平均として測定できることを認識するであろう。これは薬物対抗体の比率（ＤＡＲ）と呼ばれ得る。アジュバント対抗体コンストラクト（例えば、抗体）の比率は、任意の適切な手段によって評価することができ、その多くは当技術分野で公知である。

【0231】

コンジュゲーション反応から免疫複合体を調製する際の１抗体当たりのアジュバント部分の平均数（ＤＡＲ）は、質量分析法、ＥＬＩＳＡアッセイ、及びＨＰＬＣなどの従来の手段によって特徴付けることができる。ｐの観点から組成物中の免疫複合体の定量的分布もまた、決定することができる。いくつかの事例で、ｐが特定の値である均一の免疫複合体の、他の薬物負荷を有する免疫複合体からの分離、精製、及び特性評価は、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動などの手段によって達成され得る。

【0232】

いくつかの実施形態では、組成物は更に、１つ以上の薬学的にまたは薬理学的に許容される賦形剤を含む。例えば、本発明の免疫複合体は、ＩＶ投与または体腔もしくは臓器の内腔への投与などの非経口投与用に調製されることができる。あるいは、免疫複合体を腫瘍内に注射することができる。注射用の組成物は、一般に、薬学的に許容される担体に溶解された免疫複合体の溶液を含むであろう。用いられ得る許容されるビヒクル及び溶媒の中には、水、及び塩化ナトリウムなどの１つ以上の塩の等張液、例えばリンゲル溶液がある。更に、減菌された固定油を、溶媒または懸濁媒質として従来どおり使用することができる。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意の無刺激性固定油を使用できる。更に、オレイン酸などの脂肪酸が、注射剤の調製において同様に使用され得る。これらの組成物は、望ましくは滅菌されており、一般に望ましくない物質を含まない。これらの組成物は、従来の周知の滅菌技法によって滅菌され得る。組成物は、生理学的条件に近似させるために必要とされる、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、等張化剤などの薬学的に許容される補助物質、例えば酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどを含有してもよい。

【0233】

組成物は、任意の適切な濃度の免疫複合体を含むことができる。組成物中の免疫複合体の濃度は大きく変動する可能性があり、選択された特定の投与様式及び患者のニーズに従って、主に流体量、粘度、体重などに基づいて選択される。特定の実施形態では、注射用の溶液製剤中の免疫複合体の濃度は、約０．１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）の範囲である。

【0234】

免疫複合体によるがんを治療する方法
本発明は、がんを治療するための方法を提供する。前記方法は、治療上有効な量の本明細書に記載の免疫複合体（例えば、本明細書に記載の組成物）を、それを必要とする対象、例えば、がんを有し、がんの治療を必要とする対象に投与することを含む。前記方法は、表３から選択される治療上有効な量の免疫複合体（ＩＣ）を投与することを含む。

【0235】

本発明の免疫複合体は、様々な過剰増殖性疾患または障害、例えば、腫瘍抗原の過剰発現を特徴とするものを治療するために用いることができる。例示的な過剰増殖性障害としては、良性または悪性の固形腫瘍、ならびに血液疾患（白血病及びリンパ系腫瘍など）が挙げられる。
別の態様では、薬物として使用するための免疫複合体が提供される。特定の実施形態では、本発明は、有効量の免疫複合体を個体に投与することを含む、個体を治療する方法で使用するための免疫複合体を提供する。そのような一実施形態では、この方法は、例えば、本明細書に記載される、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することを更に含む。

【0236】

更なる態様では、本発明は、薬物の製造または調製での、免疫複合体の使用を提供する。一実施形態では、薬物は、がんの治療のためのものであり、その方法は、がんを有する個体に有効量の薬物を投与することを含む。そのような一実施形態では、この方法は、例えば、本明細書に記載される、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することを更に含む。

【0237】

がん腫とは、上皮組織から生じる悪性腫瘍である。上皮細胞は、体の外側表面を覆い、内部空洞を覆い、かつ腺組織の内層を形成する。がん腫の例として、腺癌（腺（分泌）細胞、例えば、乳、膵臓、肺、前立腺、胃、胃食道接合部及び結腸で始まる癌）；副腎皮質癌；肝細胞癌；腎細胞癌；卵巣癌；上皮内癌；腺管癌；乳癌；基底細胞癌；扁平上皮癌；移行細胞癌；結腸癌；鼻咽頭癌；多房嚢腫性腎細胞癌；燕麦細胞癌；大細胞肺癌；小細胞肺癌；非小細胞肺癌などを含むが、これらに限定されない。がん腫は、前立腺、膵臓、結腸、脳（通常、二次転移として）、肺、乳、皮膚などに見られることがある。いくつかの実施形態では、非小細胞肺癌を治療するための方法は、ＰＤ－Ｌ１に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、またはそれらのバイオベター）を含む免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、乳癌を治療するための方法は、ＰＤ－Ｌ１に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、またはそれらのバイオベター）を含む免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、トリプルネガティブ乳癌を治療するための方法は、ＰＤ－Ｌ１に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、またはそれらのバイオベター）を含む免疫複合体を投与することを含む。

【0238】

軟部組織腫瘍は、結合組織に由来する非常に多様なまれな腫瘍の群である。軟部腫瘍の例としては、胞状軟部肉腫、類血管腫型線維性組織球腫、軟骨粘液線維腫、骨格軟骨肉腫、骨外性粘液型軟骨肉腫、明細胞肉腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、隆起性皮膚線維肉腫、子宮内膜間質腫瘍、ユーイング肉腫、線維腫症（デスモイド）、乳児性線維腫腫、消化管間質腫瘍、骨巨細胞腫、腱鞘巨細胞腫、炎症性筋線維芽細胞性腫瘍、子宮筋腫、平滑細胞腫、脂肪芽細胞腫、典型的な脂肪腫、紡錘細胞または多形脂肪腫、異型脂肪腫、軟骨様脂肪腫、高分化脂肪肉腫、粘液様／円形細胞脂肪肉腫、多形脂肪肉腫、粘液型悪性線維性組織球腫、高悪性線維組織球腫、粘液線維肉腫、悪性末梢神経鞘腫、中皮腫、神経芽細胞腫、骨軟骨腫、骨肉腫、原始神経外胚葉性腫瘍、胞巣状横紋筋肉腫、胎児性横紋筋肉腫、良性または悪性シュワン腫、滑膜肉腫、エヴァンズ腫瘍、結節性筋膜炎、デスモイド型線維腫症、孤立性線維性腫瘍、隆起性皮膚線維肉腫（ＤＦＳＰ）、血管肉腫、類上皮血管内皮腫、腱鞘巨細胞腫（ＴＧＣＴ）、色素性絨毛結節性滑膜炎（ＰＶＮＳ）、線維性骨異形成症、粘液線維肉腫、滑膜肉腫、悪性末梢神経鞘腫、神経線維腫、軟組織の多形腺腫、ならびに線維芽細胞、筋線維芽細胞、組織球、血管細胞／内皮細胞及び神経鞘細胞に由来する腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。

【0239】

肉腫は、間葉起源の細胞で、例えば骨で、または軟骨、脂肪、筋肉、血管、線維組織、もしくは他の結合組織もしくは支持組織を含む体の軟部組織で生じる、まれなタイプのがんである。異なる種類の肉腫は、がんが形成する場所に基づく。例えば、骨肉腫は骨に形成し、脂肪肉腫は脂肪に形成し、横紋筋肉腫は筋肉に形成する。肉腫の例は、アスキン腫瘍；ブドウ状肉腫；軟骨肉腫；ユーイング肉腫；悪性血管内皮腫；悪性神経鞘腫；骨肉腫；及び軟部組織肉腫（例えば、胞状軟部肉腫；血管肉腫；葉状嚢肉腫；隆起性皮膚線維肉腫（ＤＦＳＰ）；類腱腫；線維形成性小円形細胞腫；類上皮肉腫；骨外性軟骨肉腫；骨外性骨肉腫；線維肉腫；胃腸間質腫瘍（ＧＩＳＴ）；血管外皮細胞腫；血管肉腫（より一般的には「血管肉腫」と呼ばれる）；カポジ肉腫；平滑筋肉腫；脂肪肉腫；リンパ管肉腫；悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）；神経芽肉腫；滑膜肉腫；及び未分化多形性肉腫）を含むが、これらに限定されない。

【0240】

奇形腫は、例えば、髪、筋肉、及び骨を含むいくつかの異なる種類の組織を含有し得る（例えば、３つの胚葉：内胚葉、中胚葉、及び外胚葉のうちのいずれか及び／またはすべてに由来する組織を含むことができる）生殖細胞腫瘍の一種である。奇形腫は、女性においては卵巣に、男性においては精巣に、及び小児においては尾骨に、最もよく発生する。

【0241】

黒色腫は、メラノサイト（色素メラニンを作る細胞）で発生するがんの形態である。黒色腫は、ほくろ（皮膚黒色腫）において始まる場合があるが、眼の中または腸の中などの他の色素組織でも始まる場合がある。

【0242】

メルケル細胞癌はまれなタイプの皮膚癌であり、通常、顔、頭もしくは首に肉色または青みがかった赤色の結節として現れる。メルケル細胞癌は、皮膚の神経内分泌癌とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、メルケル細胞癌を治療するための方法は、ＰＤ－Ｌ１に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、またはそれらのバイオベター）を含む免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、メルケル細胞癌は、投与が行われるときに転移している。

【0243】

白血病は、骨髄などの血液形成組織から発生し、多数の異常血球の生成及び血流への侵入を引き起こすがん細胞である。例えば、白血病は、通常であれば血流中で成熟する骨髄由来の細胞で発生する可能性がある。白血病は、病気の発生と進行の速さ（例、急性と慢性）、及び影響を受ける白血球の種類（例、骨髄性とリンパ性）にちなんで名付けられる。骨髄性白血病は、骨髄性白血病または骨髄芽球性白血病とも呼ばれる。リリンパ性白血病は、リンパ芽球性白血病またはリンパ球性白血病とも呼ばれる。リンパ性白血病細胞はリンパ節に集まり、腫れることがある。白血病の例としては、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を含むが、これらに限定されない。

【0244】

リンパ腫は、免疫系の細胞から始まるがんである。例えば、リンパ腫は、通常であればリンパ系で成熟する骨髄由来細胞に発生する可能性がある。リンパ腫には２つの基本的なカテゴリーがある。リンパ腫の１つのカテゴリーはホジキンリンパ腫（ＨＬ）であり、リードステルンベルク細胞と呼ばれる種類の細胞の存在によって特徴付けられる。現在、ＨＬには６つの認識されている種類がある。ホジキンリンパ腫の例としては、結節性硬化型古典的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、混合細胞型ＣＨＬ、リンパ球減少型ＣＨＬ、リンパ球豊富型ＣＨＬ、及び結節性リンパ球優位型ＨＬが挙げられる。

【0245】

リンパ腫の他のカテゴリーは非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であり、これには免疫系細胞のがんの大規模で多様な群が含まれる。非ホジキンリンパ腫は更に、緩徐な（成長の遅い）経過をたどる癌と、攻撃的な（成長の速い）経過をたどる癌に分けることができる。現在、ＮＨＬには６１つの認識されている種類がある。非ホジキンリンパ腫の例は、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、血液免疫芽細胞性リンパ腫、芽細胞性ＮＫ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、バーキット様リンパ腫（小型非開裂細胞性リンパ腫）、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、肝脾ガンマ・デルタＴ細胞リンパ腫、Ｔ細胞白血病、リンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、鼻Ｔ細胞リンパ腫、小児リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、形質転換リンパ腫、処置関連Ｔ細胞リンパ腫、及びワルデンストレームマクログロブリン血症を含むが、これらに限定されない。

【0246】

脳腫瘍には、脳組織の癌が含まれる。脳腫瘍の例には、神経膠腫（例えば、神経膠芽腫、星状細胞腫、乏突起膠腫、上衣腫など）、髄膜腫、下垂体腺腫、及び前庭神経鞘腫、原始神経外胚葉性腫瘍（髄芽細胞腫）が含まれるが、これらに限定されない。

【0247】

本発明の免疫複合体は、治療にて、単独で、または他の薬剤と組み合わせてのいずれかで使用することができる。例えば、本発明の免疫複合体は、化学療法剤などの少なくとも１つの追加の治療剤と共に同時投与され得る。このような併用療法は、組み合わせた投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤中に含まれる）、及び別個の投与を包含し、別個の投与の場合、免疫複合体の投与は、追加の治療剤及び／またはアジュバントの投与の前、それと同時、及び／またはその後に生じ得る。免疫複合体はまた、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。

【0248】

本発明の免疫複合体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、ならびに局所療法のために所望される場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投薬は、投与が短期であるか、または長期であるかに部分的に依存して、任意の適した経路、例えば、静脈内または皮下注入などの注入によることができる。限定されないが、様々な時点での単回または複数回投与、ボーラス投与、及びパルス点滴を含む様々な投薬スケジュールが本明細書において企図される。

【0249】

アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、及びそれらのバイオベターは、がん、特に乳癌、特にトリプルネガティブ（エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、及び過剰なＨＥＲ２タンパク質の検査で陰性）乳癌、膀胱癌、及びメルケル細胞癌の治療に有用であることが知られている。本明細書に記載の免疫複合体は、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオ類似体、及びそれらのバイオベターとして同じ種類のがん、特に乳癌、特にトリプルネガティブ（エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、及び過剰なＨＥＲ２タンパク質の検査で陰性）乳癌、膀胱癌、及びメルケル細胞癌の治療に使用できる。

【0250】

免疫複合体は、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、及びそれらのバイオベターに利用される投薬レジメンなどの任意の適切な投薬レジメンを使用して、治療上有効な量でそれを必要とする対象に投与される。例えば、この方法は、約１００ｎｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの用量を対象に提供するために免疫複合体を投与することを含むことができる。免疫複合体の用量は、約５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、または約１００μｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。免疫複合体の用量は、約１００、２００、３００、４００、または５００μｇ／ｋｇであり得る。免疫複合体の用量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇであり得る。免疫複合体の用量は、特定の複合体、及び治療される癌の種類と重症度に応じて、これらの範囲外になることもある。投与の頻度は、１週当たり単回投与から複数回投与まで、またはより頻繁に及び得る。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、月に約１回から週に約５回まで投与される。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、週に１回投与される。

【0251】

別の態様では、本発明は、がんを防ぐための方法を提供する。この方法は、治療上有効な量の免疫複合体を（例えば、上記のような組成物として）対象に投与することを含む。特定の実施形態では、対象は、予防されるべき特定のがんに感受性である。例えば、この方法は、約１００ｎｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの用量を対象に提供するために免疫複合体を投与することを含むことができる。免疫複合体の用量は、約５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ～約５ｍｇ／ｋｇ、または約１００μｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。免疫複合体の用量は、約１００、２００、３００、４００、または５００μｇ／ｋｇであり得る。免疫複合体の用量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇであり得る。免疫複合体の用量は、特定の複合体、及び治療される癌の種類と重症度に応じて、これらの範囲外になることもある。投与の頻度は、１週当たり単回投与から複数回投与まで、またはより頻繁に及び得る。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、月に約１回から週に約５回まで投与される。いくつかの実施形態では、免疫複合体は、週に１回投与される。

【0252】

本発明のいくつかの実施形態は、上記のようながんを治療するための方法を提供し、そこでがんは乳癌である。乳癌は乳房の様々な領域から生じる可能性があり、様々な種類の乳癌が特性評価されている。例えば、本発明の免疫複合体は、非浸潤性乳管癌、浸潤性乳管癌（例えば、乳房の管状癌、髄様癌、粘液癌、乳頭癌、または篩状癌）；非浸潤性小葉癌；浸潤性小葉癌；炎症性乳癌；トリプルネガティブ（エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、及び過剰なＨＥＲ２タンパク質の検査で陰性）乳癌などの他の形態の乳癌を治療するために使用することができる。いくつかの実施形態では、乳癌を治療するための方法は、ＨＥＲ２に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、それらのバイオシミラー、またはそれらのバイオベター）、及びＰＤ－Ｌ１に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、それらのバイオシミラー、またはそれらのバイオベター）を含む免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、結腸癌、肺癌、腎癌、膵臓癌、胃癌、及び食道癌を治療するための方法は、ＣＥＡ、またはＣＥＡを過剰発現する腫瘍に結合することができる抗体コンストラクト（例えば、ラベツズマブ、バイオシミラー、またはそのバイオベター）を含む免疫複合体を投与することを含む。

【0253】

いくつかの実施形態では、がんは、ＴＬＲ７及び／またはＴＬＲ８によって誘発される炎症誘発性応答に感受性である。

【実施例】

【0254】

２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン化合物（２Ａｍ４ＣＢｚａ）及び中間体の調製
実施例１ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－アミノ－８－（フェニルカルバモイル）－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］オキシエチルカルバモイルオキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１の合成

【化17】

エチル２－アミノ－８－（フェニルカルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキシラート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－１ｂの調製
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中のエチル２－アミノ－８－ブロモ－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボキシラート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－１ａ（２ｇ、６．４７ｍｍｏｌ（ミリモル）、１当量）及びアニリン（３．０１ｇ、３２．３ｍｍｏｌ、２．９５ｍＬ、５当量）の溶液に、Ｐｄ（ＯＡｃ）_２（２１８ｍｇ、９７０ｕｍｏｌ（マイクロモル）、０．１５当量）、ＤＰＰＦ（６１０ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ、０．１７当量）及びＴＥＡ（３．２７ｇ、３２．３ｍｍｏｌ、４．５０ｍＬ、５当量）をＮ_２下にて添加した。懸濁液を真空下で脱気し、一酸化炭素ガス（ＣＯ）で数回パージした。混合物を、ＣＯ（５０ｐｓｉ）下にて８０℃で１２時間撹拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をＨ_２Ｏ（６０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３０ｍＬ×３）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０～０／１）、次いで（ＳｉＯ_２、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ＝１／０～１０／１）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－１ｂ（０．８２ｇ、２．３５ｍｍｏｌ、収率３６．２８％）を黄色固体として得た。

【0255】

２－アミノ－８－（フェニルカルバモイル）－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボン酸、２Ａｍ４ＣＢｚａ－１ｃの調製
ＥｔＯＨ（８ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－１ｂ（８１０ｍｇ、２．３２ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、Ｈ_２Ｏ（２ｍＬ）中のＬｉＯＨ．Ｈ_２Ｏ（４８６．４０ｍｇ、１１．５９ｍｍｏｌ、５当量）の溶液を添加した。混合物を２０℃にて３時間撹拌し、次に１Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝６～７に調整し、真空下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ ２５０＊５０ｍｍ＊１０ｕｍ；移動相：［水（０．０５％ＨＣｌ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～３５％、１０分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－１ｃ（１８０ｍｇ、５６０．１７ｕｍｏｌ、収率２４．１６％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_４，４００ＭＨｚ）δ１２．４３（ｓ，１Ｈ），１０．４９（ｓ，１Ｈ），１０．０９（ｓ，１Ｈ），９．０７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），７．９９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９６－７．９３（ｍ，２Ｈ），７．８７－７．８３（ｍ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．３８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．１６－７．１１（ｍ，１Ｈ），３．５２（ｓ，２Ｈ）．

【0256】

ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［［２－アミノ－８－（フェニルカルバモイル）－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］オキシエチル］カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－１の調製
ＤＣＭ（３ｍＬ）及びＤＭＡ（１．５ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－１ｃ（１００ｍｇ、３１１ｕｍｏｌ、１当量）及びｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－（プロピルアミノオキシ）エチル］カルバメート（８８．３ｍｇ、４０５ｕｍｏｌ、１．３当量）の混合物に、ＥＤＣＩ（２３８ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ、４当量）を２５℃でＮ_２にて添加し、次に２５℃で１時間撹拌した。混合物を真空下で濃縮し、ＤＣＭを除去した。残渣をＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、次に混合物のｐＨをＮａＨＣＯ_３水溶液で約８に調節し、酢酸エチル（２０ｍＬ＊３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％～４５％，８分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－１（８０ｍｇ、１５３ｕｍｏｌ、収率４９．２８％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ８．０３－７．９３（ｍ，２Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７４－７．６７（ｍ，２Ｈ），７．５２（ｓ，１Ｈ），７．３９（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２４－７．１４（ｍ，１Ｈ），３．９５（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４３（ｓ，２Ｈ），３．２７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），１．７８（ｓｘｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．３７（ｓ，９Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．

【0257】

２－アミノ－Ｎ４－（２－アミノエトキシ）－Ｎ８－フェニル－Ｎ４－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４，８－ジカルボキサミド、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１ａの調製
ＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－１（８０ｍｇ、１５３ｕｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、３ｍＬ、７８．０当量）を２５℃で一度に添加し、次に２５℃で１時間撹拌した。混合物を真空下で濃縮し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１ａ（７０ｍｇ、１５２．８５ｕｍｏｌ、収率９９．６６％、ＨＣｌ）を白色固体として得た。

【0258】

ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノアート、ＰＮＣ－ＰＥＧ１０－ＣＯ２ｔＢｕの調製

【化18】

ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノアート、ＨＯ－ＰＥＧ１０－ＣＯ２ｔＢｕ（１ｇ、１．７０ｍｍｏｌ、１．０当量）及び（４－ニトロフェニル）カルボノクロリダート（３７８ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ、１．１当量）の混合物に、ピリジン（２０２ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ、２０６ｕＬ、１．５当量）を０℃で添加した。混合物を２５℃で２時間撹拌した。混合物のｐＨを１Ｍ ＨＣｌで約４に調節した。残渣を氷水（ｗ／ｗ＝１／１）（１００ｍＬ）に注ぎ入れ、１０分間撹拌した。水相をＤＣＭ（５０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高さ：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００－２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０：０／１、酢酸エチル／メタノール＝１／０：２／１）で精製し、ＰＮＣ－ＰＥＧ１０－ＣＯ２ｔＢｕ（６５０ｍｇ、８６５ｕｍｏｌ、収率５０．７３％）を無色の油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ８．３８－８．２７（ｍ，２Ｈ），７．５４－７．４５（ｍ，２Ｈ），４．４７－４．４２（ｍ，２Ｈ），３．８０－３．５３（ｍ，４０Ｈ），２．５３－２．４４（ｍ，２Ｈ），１．５０－１．４１（ｍ，９Ｈ）．

【0259】

ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－アミノ－８－（フェニルカルバモイル）－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］オキシエチルカルバモイルオキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノアート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１ｂの調製
ＤＭＦ（２．５ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１ａ（７０ｍｇ、１５３ｕｍｏｌ、１当量、ＨＣｌ）及びＰＮＣ－ＰＥＧ１０－ＣＯ２ｔＢｕ（１２６ｍｇ、１６８ｕｍｏｌ、１．１当量）の混合物に、Ｅｔ_３Ｎ（３８．７ｍｇ、３８２ｕｍｏｌ、２．５当量）を２５℃でＮ_２下で添加し、次に２５℃で１時間撹拌した。混合物を濾過し、分取－ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ Ｃ１８ １００＊４０ｍｍ＊５ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％－５５％、８分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１ｂ（７０ｍｇ、６７．７ｕｍｏｌ、収率４４．２８％）を無色の油状物として得た。

【0260】

３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－アミノ－８－（フェニルカルバモイル）－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］オキシエチルカルバモイルオキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１ｃの調製
ＣＨ_３ＣＮ（１ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（１ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１ｂ（７０ｍｇ、６７．７ｕｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＴＦＡ（７７．２ｍｇ、６７７ｕｍｏｌ、１０当量）を２５℃でＮ_２下にて添加し、次に８０℃で２時間撹拌した。混合物のｐＨをＮａＨＣＯ_３水溶液で０℃にて約５に調節し、次にＤＣＭ／ｉ－ＰｒＯＨ＝３／１（１０ｍＬ＊３）で抽出した。合わせた有機層を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１ｃ（６５ｍｇ、６６．４６ｕｍｏｌ、収率９８．１８％）を淡黄色の油状物として得た。

【0261】

２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１の調製
ＤＣＭ（２ｍＬ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１ｃ（６０ｍｇ、６１．３４ｕｍｏｌ、１当量）及びナトリウム；２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－ベンゼンスルホナート、ＳＴＰ（４９．３ｍｇ、１８４ｕｍｏｌ、３当量）の混合物に、ＥＤＣＩ（３５．３ｍｇ、１８４ｕｍｏｌ（マイクロモル）、３当量）を２５℃でＮ_２下にて添加し、次に２５℃で１時間撹拌した。混合物を真空下で濃縮し、次に分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％～４０％、８分）で精製して、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１（４０ｍｇ、３３．１６ｕｍｏｌ、収率５４．０６％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ８．０６－７．９５（ｍ，２Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝５．０，７．６Ｈｚ，３Ｈ），７．４９－７．４３（ｍ，１Ｈ），７．４５（ｓ，１Ｈ），７．３８（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２３－７．１３（ｍ，１Ｈ），３．９８（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），３．８５（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｂｒ ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ），３．７５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６６－３．５４（ｍ，３８Ｈ），３．５１－３．４２（ｍ，４Ｈ），２．９６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），１．７７（ｓｘｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）．ＨＰＬＣ：９９．４７％（２２０ｎｍ），９９．３１％（２５４ｎｍ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２０６．４（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２０６．７（測定値）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２０６．４（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２０６．７（測定値）．

【0262】

実施例４ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－アミノ－８－［（３Ｓ）－３－アニリノピペリジン－１－カルボニル］－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］オキシエチルカルバモイルオキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４の合成

【化19-1】

【化19-2】

ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－３－アニリノピペラジン－１－カルボキシラート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｂの調製
トルエン（１０．０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（３Ｓ）－３－アミノピペラジン－１－カルボキシラート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ａ（１．００ｇ、４．９９ｍｍｏｌ、１．０当量）及びブロモベンゼン（７８０ｍｇ、４．９９ｍｍｏｌ、５２６ｕＬ、１．０当量）の溶液に、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド、ＮａＯｔＢｕ（５８０ｍｇ、５．９９ｍｍｏｌ、１．２当量）、２－（２－ジシクロヘキシルホスファニルフェニル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－アニリン（１４０ｍｇ、３４９ｕｍｏｌ、０．０７当量）、及びトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３、ＣＡＳ登録番号５１３６４－５１－３（２３０ｍｇ、２４９ｕｍｏｌ、０．０５当量）を２０℃でＮ_２下にて添加した。混合物を１００℃で２４時間撹拌した。混合物を水（３０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を、フラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ；１２ｇ ＳｅｐａＦｌａｓｈシリカフラッシュカラム、０～５０％酢酸エチル／石油エーテル勾配の溶離液：４５ｍＬ／分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｂ（１．２ｇ、４．３４ｍｍｏｌ、収率８６．９％）を淡黄色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ７．１８（ｄｄ，Ｊ＝７．６，８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．７７－６．６０（ｍ，３Ｈ），４．０９－３．９５（ｍ，１Ｈ），３．８３－３．６２（ｍ，２Ｈ），３．４５－３．３３（ｍ，１Ｈ），３．０９（ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），２．９８－２．７８（ｍ，１Ｈ），２．０４－１．９４（ｍ，１Ｈ），１．８０－１．７１（ｍ，１Ｈ），１．６５－１．５３（ｍ，２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］２７７．２（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］２７７．２（測定値）．

【0263】

（３Ｓ）－Ｎ－フェニルピペリジン－３－アミン、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｃの調製
ＥｔＯＡｃ（５．００ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｂ（１．２０ｇ、４．３４ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、１８．０ｍＬ、１７．０当量）を添加した。混合物を２０℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｃ（９００ｍｇ、３．６１ｍｍｏｌ、収率８３．１％、２ＨＣｌ）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．５９－７．５２（ｍ，２Ｈ），７．４９－７．４１（ｍ，３Ｈ），３．９４（ｔｔ，Ｊ＝４．０，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．６２－３．５４（ｍ，１Ｈ），３．４０（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），３．２０（ｔ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ），３．０４（ｄｔ，Ｊ＝３．２，１２．４Ｈｚ，１Ｈ），２．２６－２．０７（ｍ，２Ｈ），１．９３－１．７８（ｍ，２Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１７７．２（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１７７．２（測定値）．

【0264】

２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｅの調製
ＤＭＦ（１．００ｍＬ）中の２－アミノ－４－［２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－８－カルボン酸、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｄ（２５０ｍｇ、５５９ｕｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＨＡＴＵ（２１０ｍｇ、５５９ｕｍｏｌ、１．０当量）、ＤＩＥＡ（２９０ｍｇ、２．２４ｍｍｏｌ、３９０ｕＬ、４．０当量）及び（３Ｓ）－Ｎ－フェニルピペリジン－３－アミン、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｃ（１３０ｍｇ、６０３ｕｍｏｌ、１．０８当量、ＨＣｌ）を添加し、次に０℃で１時間撹拌した。混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～５０％、８分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｅ（１６０ｍｇ、２２２ｕｍｏｌ、収率３９．７％、ＴＦＡ）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．７６－７．３８（ｍ，３Ｈ），７．３６－７．１５（ｍ，２Ｈ），７．１１－６．９０（ｍ，２Ｈ），６．６３－６．４２（ｍ，２Ｈ），３．９５－３．９２（ｍ，２Ｈ），３．８９－３．６１（ｍ，４Ｈ），３．６０－３．３２（ｍ，４Ｈ），３．２８－３．２３（ｍ，２Ｈ），３．０８－２．９６（ｍ，１Ｈ），２．２０－１．９４（ｍ，２Ｈ），１．８４－１．６７（ｍ，４Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ），０．９９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６０５．３（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６０５．３（測定値）．

【0265】

２－アミノ－Ｎ－（２－アミノエトキシ）－８－［（３Ｓ）－３－アニリノピペリジン－１－カルボニル］－Ｎ－プロピル－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボキサアミド、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｆの調製
ＥｔＯＡｃ（５．００ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｅ（９０．０ｍｇ、１２５ｕｍｏｌ、１．０当量、ＴＦＡ）の溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、１０．０ｍＬ、３１９．０当量）を添加した。混合物を２０℃で１時間撹拌し、次に濃縮して、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｆ（７８．０ｍｇ、粗、２ＨＣｌ）を白色固体として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５０５．３（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５０５．３（測定値）．

【0266】

ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－アミノ－８－［（３Ｓ）－３－アニリノピペリジン－１－カルボニル］－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］オキシエチルカルバモイルオキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノアート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｇの調製
ＤＭＦ（１．００ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｆ（７０．０ｍｇ、１２１ｕｍｏｌ、１．０当量、２Ｈｃｌ）の溶液に、Ｅｔ_３Ｎ（５０．０ｍｇ、４８４ｕｍｏｌ、７０．０ｕＬ、４．０当量）及びｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノアート（９０．０ｍｇ、１２１ｕｍｏｌ、１．０当量）を添加した。混合物を０℃で１時間撹拌し、次に水（１０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。

【0267】

有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｇ（２００ｍｇ、粗）を淡黄色の油状物として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１１７．６（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１１７．６（測定値）．

【0268】

３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－アミノ－８－［（３Ｓ）－３－アニリノピペリジン－１－カルボニル］－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］オキシエチルカルバモイルオキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｈの調製
ＣＨ_３ＣＮ（１．００ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（１．００ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｇ（２００ｍｇ、１７９ｕｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＴＦＡ（２００ｍｇ、１．７９ｍｍｏｌ、１３０ｕＬ、１０．０当量）を添加し、次に８０℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮し、残渣を得た。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～４０％、８分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｈ（５０ｍｇ、４２．５ｕｍｏｌ、収率２３．７％、ＴＦＡ）を無色の油状物として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０６１．５（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０６１．５（測定値）．

【0269】

２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４の調製
ＤＣＭ（２．００ｍＬ）及びＤＭＡ（０．２０ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｈ（４０．０ｍｇ、３４．０ｕｍｏｌ、１．０当量、ＴＦＡ）及び２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－ベンゼンスルホン酸（３３．５ｍｇ、１３６ｕｍｏｌ、４．０当量）の溶液に、ＥＤＣＩ（３０．０ｍｇ、１３６ｕｍｏｌ、４．０当量）を添加し、次に２０℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮し、残渣を得た。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％～５０％、８分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４（２１ｍｇ、１４．９ｕｍｏｌ、収率４３．９％、ＴＦＡ）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．６７－７．２４（ｍ，５Ｈ），７．１７－６．９６（ｍ，２Ｈ），６．７１－６．４１（ｍ，２Ｈ），３．９９－３．９４（ｍ，２Ｈ），３．９０－３．８０（ｍ，６Ｈ），３．７７－３．７１（ｍ，４Ｈ），３．６５－３．５８（ｍ，３８Ｈ），３．５４－３．４７（ｍ，４Ｈ），２．９７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．２２－１．９５（ｍ，２Ｈ），１．８５－１．６８（ｍ，４Ｈ），１．０３－０．９７（ｍ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２８９．５（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２８９．５（測定値）．

【0270】

実施例６ １－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２－オキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－３－アザペンタトリアコンタン－３５－イル（２－（（２－アミノ－８－（ジメチルカルバモイル）－Ｎ－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド）オキシ）エチル）カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－６の合成

【化20】

ｔｅｒｔ－ブチル（２－（（２－アミノ－８－（ジメチルカルバモイル）－Ｎ－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド）オキシ）エチル）カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－６の調製
２－アミノ－４－（（２－（（ｔｅｒｔ－太きしカルボニル）アミノ）エトキシ）（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－カルボン酸、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２ｄを、ジメチルアミン及びＨＡＴＵと反応させ、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－６ａを得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４７４．２７（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４７４．４５（測定値）．

【0271】

２－アミノ－Ｎ４－（２－アミノエトキシ）－Ｎ８，Ｎ８－ジメチル－Ｎ４－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４，８－ジカルボキサミド、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－６ｂの調製
２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－６ａをメタンスルホン酸と反応させ、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－６ｂを得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３７４．２２（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３７４．３６（測定値）．

【0272】

２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－６の調製
ＤＭＦ中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－６ｂの溶液に、ＤＩＥＡ及び２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル（４－ニトロフェニル）カルボナートを添加し、次に２５℃で１時間撹拌した。混合物を、ｐＨ＝約６になるまでＴＦＡでクエンチした。次に混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～３５％、８分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－６を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０３８．５２（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０３８．６３（測定値）．

【0273】

実施例７ １－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２－オキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－３－アザペンタトリアコンタン－３５－イル（２－（（２－アミノ－Ｎ－プロピル－８－（ピロリジン－１－カルボニル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド）オキシ）エチル）カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－７の合成

【化21】

ｔｅｒｔ－ブチル（２－（（２－アミノ－Ｎ－プロピル－８－（ピロリジン－１－カルボニル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド）オキシ）エチル）カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－７ａの調製
２－アミノ－４－（（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－カルボン酸、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２ｄをピロリジン及びＨＡＴＵと反応させ、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－７ａを得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５００．２９（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５００．４８（測定値）．

【0274】

２－アミノ－Ｎ－（２－アミノエトキシ）－Ｎ－プロピル－８－（ピロリジン－１－カルボニル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－７ｂの調製
２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－７ａをメタンスルホン酸と反応させ、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－７ｂを得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４００．２３（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４００．３９（測定値）．

【0275】

２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－７の調製
ＤＭＦ中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－７ｂの溶液に、ＤＩＥＡ及び２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル（４－ニトロフェニル）カルボナートを添加し、次に２５℃で１時間撹拌した。混合物を、ｐＨ＝約６になるまでＴＦＡでクエンチした。次に混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～３５％、８分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－７を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０６４．５４（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０６４．６７（測定値）．

【0276】

実施例８ １－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２－オキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－３－アザペンタトリアコンタン－３５－イル（３－（２－アミノ－８－（ジメチルカルバモイル）－Ｎ－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド）プロピル）カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－８の合成

【化22】

ｔｅｒｔ－ブチル（３－（２－アミノ－８－（ジメチルカルバモイル）－Ｎ－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド）プロピル）カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－８ｂの調製
２－アミノ－４－（（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－カルボン酸、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－８ａを、ジメチルアミン及びＨＡＴＵと反応させ、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－８ｂを得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４７２．２９（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４７２．５６（測定値）．

【0277】

２－アミノ－Ｎ４－（３－アミノプロピル）－Ｎ８，Ｎ８－ジメチル－Ｎ４－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４，８－ジカルボキサミド、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－８ｃの調製
２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－８ｂをメタンスルホン酸と反応させ、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－８ｃを得た。．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３７２．２４（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３７２．３４（測定値）．

【0278】

２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－８の調製
ＤＭＦ中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－８ｃの溶液に、ＤＩＥＡ及び２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル（４－ニトロフェニル）カルボナートを添加し、次に２５℃で１時間撹拌した。混合物を、ｐＨ＝約６になるまでＴＦＡでクエンチした。次に混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；イル：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～３５％、８分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－８を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０３６．５４（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０３６．６０（測定値）．

【0279】

実施例９ １－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２－オキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－３－アザペンタトリアコンタン－３５－イル（３－（２－アミノ－Ｎ－プロピル－８－（ピロリジン－１－カルボニル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド）プロピル）カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－９の合成

【化23】

ｔｅｒｔ－ブチル３－（２－アミノ－Ｎ－プロピル－８－（ピロリジン－１－カルボニル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド）プロピル）カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－９ａの調製
２－アミノ－４－（（３－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）（プロピル）カルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－８－カルボン酸、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－８ａを、ピロリジン及びＨＡＴＵと反応させ、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－９ａを得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４９８．３１（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４９８．４４（測定値）．

【0280】

２－アミノ－Ｎ－（３－アミノプロピル）－Ｎ－プロピル－８－（ピロリジン－１－カルボニル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－９ｂの調製
２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－９ａをメタンスルホン酸と反応させ、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－９ｂを得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３９８．２６（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３９８．３７（測定値）．

【0281】

１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２－オキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－３－アザペンタトリアコンタン－３５－イル（３－（２－アミノ－Ｎ－プロピル－８－（ピロリジン－１－カルボニル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド）プロピル）カルバメートの調製
ＤＭＦ中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－９ｂの溶液に、ＤＩＥＡ及び２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル（４－ニトロフェニル）カルボナートを添加し、次に２５℃で１時間撹拌した。混合物を、ｐＨ＝約６になるまでＴＦＡでクエンチした。次に混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～３５％、８分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－９を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０６２．５６（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０６２．２０（測定値）．

【0282】

実施例１０ ４－［３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－アミノ－８－［（３Ｒ）－３－アニリノピペリジン－１－カルボニル］－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］オキシエチルカルバモイルオキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノイルオキシ］－２，３，５，６－テトラフルオロ－ベンゼンスルホン酸、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０の合成

【化24-1】

【化24-2】

ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｒ）－３－アニリノピペリジン－１－カルボキシラート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ｂの調製
トルエン（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（３Ｒ）－３－アミノピペリジン－１－カルボキシラート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ａ（１ｇ、４．９９ｍｍｏｌ、１．０当量）及びブロモベンゼン（７８４ｍｇ、４．９９ｍｍｏｌ、５２６ｕＬ、１．０当量）の溶液に、２－（２－ジシクロヘキシルホスファニルフェニル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－アニリン（１３８ｍｇ、３４９ｕｍｏｌ、０．０７当量）、ナトリウム２－メチルプロパン－２－オラート、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（５７６ｍｇ、５．９９ｍｍｏｌ、１．２当量）及びＰｄ_２（ｄｂａ）_３（２２８ｍｇ、２５０ｕｍｏｌ、０．０５当量）をＮ_２下で添加した。懸濁液を真空下で脱気し、Ｎ_２で数回パージし、次に１００℃で１０時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して残渣を得、残渣をＨ_２Ｏ（３０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出し、合わせた有機相をブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：０～０：１で溶離）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ｂ（９００ｍｇ、３．２６ｍｍｏｌ、収率６５．２％）を無色の油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ７．２２－７．１７（ｍ，２Ｈ），６．７７－６．６７（ｍ，３Ｈ），４．０９－３．９６（ｍ，１Ｈ），３．７７－３．７０（ｍ，１Ｈ），３．４２－３．３４（ｍ，１Ｈ），３．１２－２．８２（ｍ，１Ｈ），３．０２－２．８２（ｍ，１Ｈ），２．０４－１．９８（ｍ，１Ｈ），１．７９－１．７１（ｍ，１Ｈ），１．６３－１．５２（ｍ，４Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］２７７．２（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］２７７．２（測定値）．

【0283】

（３Ｒ）－Ｎ－フェニルピペリジン－３－アミン、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ｃの調製
ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ｂ（９００ｍｇ、３．２６ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、１６．３ｍＬ、２０．０当量）を添加し、次に２０℃で２時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ｃ（６５０ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ、収率８０．１％、２ＨＣｌ）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ７．５２－７．４７（ｍ，２Ｈ），７．４３－７．３２（ｍ，３Ｈ），３．９６－３．８５（ｍ，１Ｈ），３．５６（ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ），３．４３－３．３６（ｍ，１Ｈ），３．１９－３．１０（ｍ，１Ｈ），３．０３（ｄｔ，Ｊ＝２．８，１２．２Ｈｚ，１Ｈ），２．２５－２．０８（ｍ，２Ｈ），１．９２－１．７７（ｍ，２Ｈ）．

【0284】

ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［［２－アミノ－８－［（３Ｒ）－３－アニリノピペリジン－１－カルボニル］－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］オキシエチル］カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ｄの調製
ＤＭＦ（３ｍＬ）中の２－アミノ－４－［２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－８－カルボン酸、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－４ｄ（２５０ｍｇ、５６０ｕｍｏｌ、１．０当量）、ＨＡＴＵ（２３４ｍｇ、６１６ｕｍｏｌ、１．１当量）及びＤＩＥＡ（２９０ｍｇ、２．２４ｍｍｏｌ、３９０ｕＬ、４．０当量）の溶液に、（３Ｒ）－Ｎ－フェニルピペリジン－３－アミン（２０９ｍｇ、８４０ｕｍｏｌ、１．５当量、２ＨＣｌ）をＮ_２下にて０℃で添加した。混合物を２０℃で３時間撹拌した。反応混合物を濾過し、真空下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％～４５％、８分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ｄ（２２０ｍｇ、３０６ｕｍｏｌ、収率５４．７％、ＴＦＡ）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．５８－７．５２（ｍ，１Ｈ），７．５２－７．４３（ｍ，１Ｈ），７．４３－７．３８（ｍ，１Ｈ），７．３６－７．３０（ｍ，１Ｈ），７．２４－７．１６（ｍ，１Ｈ），６．９７（ｂｒ ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９１－６．７６（ｍ，１Ｈ），６．５８－６．４９（ｍ，１Ｈ），６．４４（ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９３（ｂｒ ｓ，２Ｈ），３．８４－３．５７（ｍ，４Ｈ），３．５５－３．３５（ｍ，４Ｈ），３．２８－３．２３（ｍ，２Ｈ），３．０７－２．９７（ｍ，１Ｈ），２．２２－１．９７（ｍ，２Ｈ），１．８６－１．６５（ｍ，４Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ），１．０１－０．９６（ｍ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６０５．３（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６０５．３（測定値）．

【0285】

２－アミノ－Ｎ－（２－アミノエトキシ）－－８－［（３Ｒ）－３－アニリノピペリジン－１－カルボニル］－Ｎ－プロピル－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボキサアミド、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ｅの調製
ＥｔＯＡｃ（３ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ｄ（２２０ｍｇ、３６４ｕｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（４Ｍ、１．８２ｍＬ、２０．０当量）を添加し、次に２０℃で２時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ｅ（１７０ｍｇ、２９４ｕｍｏｌ、収率８０．９％、２ＨＣｌ）を白色固体として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５０５．３（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５０５．２（測定値）．

【0286】

ｔｅｒｔ－ブチル３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－アミノ－８－［（３Ｒ）－３－アニリノピペリジン－１－カルボニル］－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］オキシエチルカルバモイルオキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノアート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ｆの調製
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ｅ（９０ｍｇ、１５６ｕｍｏｌ、１．０当量、２ＨＣｌ）及びＤＩＥＡ（８０．６ｍｇ、６２３ｕｍｏｌ、１０９ｕＬ、４．０当量）の溶液に、ｔｅｒｔ－ブチル ３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（４－ニトロフェノキシ）カルボニルオキシエトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパノアート（１１７ｍｇ、１５６ｕｍｏｌ、１．０当量）を０℃で添加し、次に２０℃で２時間撹拌した。反応混合物を濾過し、真空下で濃縮しし、残渣をＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出し、合わせた有機相をブライン（１０ｍＬ×３）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空下で濃縮し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ｆ（１６０ｍｇ、１４３ｕｍｏｌ、収率９１．９％）を白色固体として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１１７．６（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１１７．６（測定値）．

【0287】

３－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－アミノ－８－［（３Ｒ）－３－アニリノピペリジン－１－カルボニル］－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］オキシエチルカルバモイルオキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ｇの調製
ＤＣＭ（２ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ｆ（１３０ｍｇ、１１６ｕｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、メタンスルホン酸（１１１ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ、８２．８ｕＬ、１０．０当量）を添加し、Ｎ_２下にて２０℃で２時間撹拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮し、残渣を得た。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（０．１％ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％～４５％、８分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ｇ（８０ｍｇ、７５．４ｕｍｏｌ、収率６４．８％）を明るい無色の油状物として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０６１．６（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０６１．６（測定値）．

【0288】

２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０の調製
ＤＣＭ（１．５ｍＬ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ｇ（７０ｍｇ、６５．９ｕｍｏｌ、１．０当量）及びナトリウム２，３，５，６－テトラフルオロ－４－ヒドロキシ－ベンゼンスルホナート（７０．７ｍｇ、２６４ｕｍｏｌ、４．０当量）の溶液に、ＥＤＣＩ（５０．６ｍｇ、２６４ｕｍｏｌ、４．０当量）を添加し、次に２０℃で１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮して残渣を得た。残渣を、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％～４５％、８分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０（２５．１ｍｇ、１９．５ｕｍｏｌ、収率２９．５％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ－ｄ_４，４００ＭＨｚ）δ７．７３－７．６３（ｍ，１Ｈ），７．６０－７．４２（ｍ，３Ｈ），７．４１－７．２５（ｍ，３Ｈ），７．１５－７．０３（ｍ，１Ｈ），６．７２－６．６０（ｍ，１Ｈ），４．００－３．９４（ｍ，２Ｈ），３．９０－３．８２（ｍ，４Ｈ），３．７４（ｂｒ ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６５－３．５７（ｍ，４０Ｈ），３．５１（ｂｒ ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，２Ｈ），３．４５－３．３８（ｍ，２Ｈ），３．２７－３．１４（ｍ，２Ｈ），３．００－２．９６（ｍ，２Ｈ），２．２１－２．０８（ｍ，１Ｈ），１．８１－１．６９（ｍ，４Ｈ），０．９９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２８９．５（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１２８９．５（測定値）．

【0289】

実施例１１ ２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチルＮ－［２－［［２－アミノ－８－［（３Ｒ）－３－アニリノピペリジン－１－カルボニル］－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボニル］－プロピル－アミノ］オキシエチル］カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１１の合成

【化25】

ＤＭＦ（１．００ｍＬ）中の２－アミノ－Ｎ－（２－アミノエトキシ）－８－［（３Ｒ）－３－アニリノピペリジン－１－カルボニル］－Ｎ－プロピル－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボキサミド、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１０ｅ（５０．０ｍｇ、８６．５ｕｍｏｌ、１．０当量、２Ｈｃｌ）の溶液に、ＤＩＥＡ（５０．０ｍｇ、３４６ｕｍｏｌ、６０．０ｕＬ、４．０当量）及び２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル（４－ニトロフェニル）カルボナート（７０．０ｍｇ、８６．５ｕｍｏｌ、１．０当量）を添加し、次に２０℃で１時間撹拌した。混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１５％～４０％、８分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１１（２３ｍｇ、１７．９ｕｍｏｌ、収率２０．７％、ＴＦＡ）を淡黄色の油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．７５－７．１６（ｍ，４Ｈ），７．０７－６．７９（ｍ，４Ｈ），６．６２－６．３９（ｍ，２Ｈ），４．１７（ｓ，２Ｈ），４．０４－３．８５（ｍ，４Ｈ），３．８１－３．７２（ｍ，４Ｈ），３．７２－３．５６（ｍ，３８Ｈ），３．５６－３．５１（ｍ，４Ｈ），３．４８－３．３４（ｍ，６Ｈ），３．１７－３．０５（ｍ，１Ｈ），２．２６－１．９３（ｍ，２Ｈ），１．８５－１．６５（ｍ，４Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１６９．６（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１１６９．６（測定値）．

【0290】

実施例１２ １－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２－オキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－３－アザペンタトリアコンタン－３５－イル（２－（（２－アミノ－８－カルバモイル－Ｎ－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド）オキシ）エチル）カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２の合成

【化26】

ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－［（２－アミノ－８－ブロモ－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボニル）－プロピル－アミノ］オキシエチル］カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２ｂの調製
ＤＣＭ（５０ｍＬ）中の２－アミノ－８－ブロモ－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボン酸、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２ａ（８．０８ｇ、２８．７ｍｍｏｌ、１．０当量）及びＤＭＡ（５０ｍＬ）の混合物に、メタンスルホン酸（２．７６ｇ、２８．７ｍｍｏｌ、２．０５ｍＬ、１．０当量）、ｔｅｒｔ－ブチルＮ－［２－（プロピルアミノオキシ）エチル］カルバメート（６．９ｇ、３１．６ｍｍｏｌ、１．１当量）及びＥＤＣＩ（２２．０ｇ、１１５ｍｍｏｌ、４．０当量）を０℃でＮ_２下にて添加し、次にこの温度で２時間撹拌した。混合物を濃縮してＤＣＭを除去し、ｗａｔｅｒ（１００ｍＬ）で希釈した。そうして混合物のｐＨを、Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を添加することで約８に調整した。水相をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物をＭＴＢＥ（１５ｍＬ）及び石油エーテル（１００ｍＬ）で０℃にて０．５時間、粉砕し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２ｂ（１１ｇ、２２．８５ｍｍｏｌ、収率７９．５２％）を黄色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ_６，４００ＭＨｚ）δ７．２７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０８－７．０１（ｍ，２Ｈ），７．０１－６．８７（ｍ，２Ｈ），６．８５－６．８２（ｍ，１Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），３．５７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．０９－３．０５（ｍ，２Ｈ），２．７６（ｓ，２Ｈ），１．６７－１．５６（ｍ，２Ｈ），１．３１（ｓ，９Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４８１．１（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４８１．１（測定値）．

【0291】

メチル２－アミノ－４－［２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－８－カルボキシラート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２ｃの調製
ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２ｂ（８ｇ、１６．６ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２（１．２２ｇ、１．６６ｍｍｏｌ、０．１当量）及びＥｔ_３Ｎ（５．０４ｇ、４９．９ｍｍｏｌ、６．９４ｍＬ、３．０当量）をＮ_２下で添加した。懸濁液を真空下で脱気し、ＣＯで数回パージした。混合物をＣＯ（５０ｐｓｉ）下にて８０℃で１２時間撹拌した。混合物を濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高さ：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００－２００メッシュシリカゲル、酢酸エチル／ＭｅＯＨ＝１／０，１０／１）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２ｃ（５ｇ、１０．８６ｍｍｏｌ、収率６５．３３％）を黄色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．８１（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄｄ，Ｊ＝１．６，８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｓ，１Ｈ），３．９４－３．８６（ｍ，５Ｈ），３．７３－３．６９（ｍ，２Ｈ），３．３１（ｓ，２Ｈ），３．２３（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），１．８１－１．７０（ｍ，２Ｈ），１．３５（ｓ，９Ｈ），０．９７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４６１．２（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４６１．１（測定値）．

【0292】

２－アミノ－４－［２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニルアミノ）エトキシ－プロピル－カルバモイル］－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－８－カルボン酸、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２ｄの調製
ＴＨＦ（３０ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（３０ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２ｃ（４ｇ、８．６９ｍｍｏｌ、１．０当量）の混合物に、ＬｉＯＨ．Ｈ_２Ｏ（５４７ｍｇ、１３．０ｍｍｏｌ、１．５当量）を２５℃で一度に添加し、次にこの温度で２時間撹拌した。混合物を、ｐＨ＝約６になるまでＨＣｌ（１Ｍ）水溶液でクエンチした。次に混合物を水（３０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。混合物を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～４０％、８分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２ｄ（３．３ｇ、７．３９ｍｍｏｌ、収率８５．０９％）を黄色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ８．１３（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｓ，１Ｈ），３．９７－３．９２（ｍ，２Ｈ），３．７５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．３１－３．３０（ｍ，２Ｈ），３．２６（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），１．８３－１．７１（ｍ，２Ｈ），１．３５（ｓ，９Ｈ），０．９９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４４７．２（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４４７．２（測定値）．

【0293】

ｔｅｒｔ－ブチル（２－（（２－アミノ－８－カルバモイル－Ｎ－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド）オキシ）エチル）カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２ｅの調製
２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２ｄを、塩化アンモニウム及びＨＡＴＵと反応させ、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２ｅを得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４４６．２４（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４４６．４３（測定値）．

【0294】

２－アミノ－Ｎ４－（２－アミノエトキシ）－Ｎ４－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４，８－ジカルボキサミド、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２ｆの調製
２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２ｅを酢酸エチル中の塩酸と反応させ、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２ｆを得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３４６．１９（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］３４６．３５（測定値）．

【0295】

２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２の調製
ＤＭＦ中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２ｆの溶液に、ＤＩＥＡ及び２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル（４－ニトロフェニル）カルボナートを添加し、次に２５℃で１時間撹拌した。混合物を、ｐＨ＝約６になるまでＴＦＡでクエンチした。次に混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～３５％、８分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１２を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０１０．４９（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０１０．７１（測定値）．

【0296】

実施例１３ １－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２－オキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－３－アザペンタトリアコンタン－３５－イル（３－（２－アミノ－８－（フェニルカルバモイル）－Ｎ－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド）プロピル）カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１３の合成

【化27】

２－アミノ－Ｎ４－（２－アミノエトキシ）－Ｎ８－フェニル－Ｎ４－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４，８－ジカルボキサミド、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１３ｂの調製
ｔｅｒｔ－ブチル（２－（（２－アミノ－８－（フェニルカルバモイル）－Ｎ－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド）オキシ）エチル）カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１３ａを、メタンスルホン酸と反応させ、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１３ｂを得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４２２．２２（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］４２２．３９（測定値）．

【0297】

１－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－２－オキソ－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカオキサ－３－アザペンタトリアコンタン－３５－イル（３－（２－アミノ－８－（フェニルカルバモイル）－Ｎ－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボキサミド）プロピル）カルバメートの調製
ＤＭＦ中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１３ｂの溶液に、ＤＩＥＡ及び２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル（４－ニトロフェニル）カルボナートを添加し、次に２５℃で１時間撹拌した。混合物を、ｐＨ＝約６になるまでＴＦＡでクエンチした。次に混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：５％～３５％、８分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１３を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０８６．５２（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０８６．７３（測定値）．

【0298】

実施例１７ ２－アミノ－Ｎ４－（（４０－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－４，３９－ジオキソ－８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５－デカオキサ－３，５，３８－トリアザテトラコンチル）オキシ）－Ｎ８，Ｎ８－ジメチル－Ｎ４－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４，８－ｄｉｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１７の合成

【化28】

ｔｅｒｔ－ブチル（３２－イソシアナート－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０－デカオキサドトリアコンチル）カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１７ｂの調製
ＤＣＭ中のｔｅｒｔ－ブチル（３２－アミノ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０－デカオキサドトリアコンチル）カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１７ａ（０．１５ｇ、０．２５ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴＥＡ（０．３４８ｍｌ、２．５ｍｍｏｌ、１０当量）を添加し、続いてホスゲン（トルエン中の１．４Ｍ溶液として０．８９２ｍｌ、０．２５ｍｍｏｌ、１当量）を添加した。反応混合物をＬＣＭＳで監視し、濃縮し、逆相ＨＰＬＣで精製して、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１７ｂ（７８ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ、５０％）を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６２７．３７（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］６２７．６４（測定値）．

【0299】

ｔｅｒｔ－ブチル（３９－（２－アミノ－８－（ジメチルカルバモイル）－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４－カルボニル）－３４－オキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３８－ウンデカオキサ－３３，３５，３９－トリアザドテトラコンチル）カルバメート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１７ｃの調製
ＤＭＦ中の２－アミノ－Ｎ４－（２－アミノエトキシ）－Ｎ８，Ｎ８－ジメチル－Ｎ４－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４，８－ジカルボキサミド、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－６ｂ（１当量）及び２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１７ｂ（１当量）の混合物に、ＴＥＡ（１０当量）を添加した。反応物を室温で撹拌し、次に水で希釈し、逆相ＨＰＬＣで精製して２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１７ｃを得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０００．５８（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０００．９１（測定値）．

【0300】

２－アミノ－Ｎ４－（（３７－アミノ－４－ｏｘｏ－８，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５－デカオキサ－３，５－ジアザヘプタトリアコンチル）オキシ）－Ｎ８，Ｎ８－ジメチル－Ｎ４－プロピル－３Ｈ－ベンゾ［ｂ］アゼピン－４，８－ジカルボキサミド、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１７ｄの調製
２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１７ｃ（４８ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ、１当量）を最小限のＴＦＡに溶解させた。１５分後、反応混合物を濃縮し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１７ｄをＴＦＡ塩として得た。．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９００．５３（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９００．８３（測定値）．

【0301】

２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１７の調製
ＤＭＦ中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１７ｃ（１当量）の溶液に、ＴＥＡ（１２．８当量）を添加し、続いて２，５－ジオキソピロリジン－１－イル２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）アセタート（１．２８当量）を添加した。反応混合物を濃縮し、水中の１％ＴＦＡで希釈し、逆相ＨＰＬＣで精製して、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１７を得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０３７．５４（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］１０３７．８４（測定値）．

【0302】

実施例１９ ２－アミノ－Ｎ４－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［［２－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）アセチル］アミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］－Ｎ８，Ｎ８－ジメチル－Ｎ４－プロピル－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４，８－ジカルボキサミド、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１９の合成

【化29】

エチル８－ブロモ－２－（トリチルアミノ）－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボキシラート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１９ｂの調製
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のエチル２－アミノ－８－ブロモ－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボキシラート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１９ａ（３ｇ、９．７０ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＴｒｔＣｌ（４．０６ｇ、１４．６ｍｍｏｌ、１．５当量）及びＥｔ_３Ｎ（２．９５ｇ、２９．１ｍｍｏｌ、４．０５ｍＬ、３当量）を添加した。混合物を５０℃で１２時間撹拌した。得られた混合物を氷水（ｗ／ｗ＝１／１）（３０ｍＬ）に注ぎ入れ、１０分間撹拌した。水相をＤＣＭ（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物を２５℃で５分間、ＭＴＢＥで粉砕し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１９ｂ（４ｇ、７．２５ｍｍｏｌ、収率７４．７５％）を黄色固体として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５５１．１（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５５１．１（測定値）．

【0303】

エチル８－（ジメチルカルバモイル）－２－（トリチルアミノ）－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボキシラート、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１９ｃの調製
ＤＭＦ（３０ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１９ｂ（２ｇ、３．６３ｍｍｏｌ、１当量ｅｑ）、Ｎ－メチルメタンアミン、ジメチルアミン（１．４８ｇ、１８．２ｍｍｏｌ、１．６６ｍＬ、５当量、ＨＣｌ）、Ｅｔ_３Ｎ（３．６７ｇ、３６．３ｍｍｏｌ、５．０５ｍＬ、１０当量）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ_２（２６６ｍｇ、３６３ｕｍｏｌ、０．１当量）の混合物を脱気し、一酸化炭素、ＣＯ（３．６３ｍｍｏｌ、１当量）で３回パージし、次に混合物を８０℃で１２時間、ＣＯ（５０ｐｓｉ）雰囲気下にて撹拌した。混合物を氷水（ｗ／ｗ＝１／１）（３０ｍＬ）に注ぎ入れ、１０分間撹拌した。水相を酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機相をブライン（２０ｍＬ×３）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高さ：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００－２００メッシュシリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝１／０，１／１）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１９ｃ（９００ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ、収率４５．６１％）を黄色固体として得た。ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５４４．２（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５４４．４（測定値）．

【0304】

８－（ジメチルカルバモイル）－２－（トリチルアミノ）－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボン酸、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１９ｄの調製
ＥｔＯＨ（１５ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（８ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１９ｃ（８００ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、ＬｉＯＨ．Ｈ_２Ｏ（２４７ｍｇ、５．８９ｍｍｏｌ、４当量）を添加した。混合物を２０℃で１２時間撹拌した。混合物のｐＨをＨＣｌ（１Ｍ）で約６に調節し、次に真空下で濃縮してＥｔＯＨを除去した。水（２０ｍＬ）を添加し、混合物から析出した目的の白色固体を濾過し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１９ｄ（７５０ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ、収率９８．８５％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ８．１９（ｓ，１Ｈ），７．６９（ｓ，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２９－７．１９（ｍ，１２Ｈ），７．１７－７．０９（ｍ，３Ｈ），６．８３（ｄｄ，Ｊ＝１．６，１．６Ｈｚ，１Ｈ），６．３５（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），３．００（ｓ，２Ｈ），２．９１（ｓ，３Ｈ），２．８０（ｓ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５１６．２（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］５１６．４（測定値）．

【0305】

２－アミノ－８－（ジメチルカルバモイル）－３Ｈ－１－ベンゾアゼピン－４－カルボン酸、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１９ｅの調製
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のＡｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１９ｄ（７５０ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ、１当量）にＴＦＡ（１．６６ｇ、１４．６ｍｍｏｌ、１．０８ｍＬ、１０当量）を添加し、次に５０℃で１２時間撹拌した。混合物を真空下で濃縮した。粗生成物をＭＴＢＥで２０℃にて５分間、粉砕し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１９ｅ（５５０ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ、収率９７．６２％、ＴＦＡ）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ７．９０（ｓ，１Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４４－７．３６（ｍ，２Ｈ），３．５０（ｓ，２Ｈ），３．００（ｓ，３Ｈ），２．９３（ｓ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］２７４．１（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］２７４．１（測定値）．

【0306】

２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１９の調製
ＤＣＭ（３ｍＬ）及びＤＭＡ（１ｍＬ）中の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１９ｅ（５２．３ｍｇ、１９１ｕｍｏｌ、０．８当量）及び２－（２，５－ジオキソピロール－１－ｙｌ）－Ｎ－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－［２－（プロピルアミノオキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチル］アセトアミド（２００ｍｇ、２３９ｕｍｏｌ、１．０当量、ＭｓＯＨ）の溶液に、ＥＤＣＩ（２２９ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ、５．０当量）を添加した。混合物を２５℃で０．５時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、ＤＣＭを除去した。残渣を濾過し、分取ＨＰＬＣ（ＴＦＡ条件；カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：［水（ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：１０％～３５％、８分）で精製し、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ－１９（５９．３ｍｇ、５９．６ｕｍｏｌ、収率２４．９％）を淡黄色の油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＤ，４００ＭＨｚ）δ７．６５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４８－７．４４（ｍ，２Ｈ），７．３６（ｓ，１Ｈ），６．８９（ｓ，２Ｈ），４．１７（ｓ，２Ｈ），４．０７－４．０３（ｍ，２Ｈ），３．７５（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．６８－３．５３（ｍ，４０Ｈ），３．５０－３．４５（ｍ，２Ｈ），３．４４－３．３５（ｍ，４Ｈ），３．２８－３．２３（ｍ，２Ｈ），３．１３（ｓ，３Ｈ），３．０５（ｓ，３Ｈ），１．７８（ｓｘｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．０１（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９９５．５（計算値）；ＬＣ／ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］９９５．５（測定値）．

【0307】

実施例２０１：免疫複合体（ＩＣ）の調製
リシンがコンジュゲートした免疫複合体を調製するには、抗体は、Ｇ－２５ ＳＥＰＨＡＤＥＸ（登録商標）脱塩カラム（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）またはＺｅｂａ（商標）スピン脱塩カラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、ｐＨ８．３で、１００ｍＭのホウ酸、５０ｍＭの塩化ナトリウム、１ｍＭのエチレンジアミン四酢酸を含有する、コンジュゲーション緩衝液に緩衝液交換する。次に前記緩衝液を使用して、溶出液をそれぞれ約１～１０ｍｇ／ｍｌの濃度に調整し、次いで滅菌濾過する。抗体を２０～３０℃に予熱し、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）中に５～２０ΜＭの濃度に溶解したテトラフルオロフェニル（ＴＦＰ）、またはスルホン酸テトラフルオロフェニル（スルホＴＦＰ）エステル、式ＩＩの２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー（２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ）化合物の２～２０（例えば、７～１０）モル当量とすぐに混合する。反応を３０℃で約１６時間進行させ、ｐＨ７．２のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で平衡化した連続する２つのＧ－２５脱塩カラムまたはＺｅｂａ（商標）スピン脱塩カラム上を通過させることによって、免疫複合体（ＩＣ）を反応物から分離し、表３ａ及び表３ｂの免疫複合体（ＩＣ）を得る。アジュバント－抗体比（ＤＡＲ）を、ＸＥＶＯ（商標）Ｇ２－ＸＳ ＴＯＦ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に接続された、ＡＣＱＵＩＴＹ（商標）ＵＰＬＣ Ｈ－ｃｌａｓｓ（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）のＣ４逆相カラムを使用した液体クロマトグラフィー質量分析によって決定する。

【0308】

システインがコンジュゲートした免疫複合体を調製するために、Ｚｅｂａ（商標）スピン脱塩カラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、抗体を、２ｍＭのＥＤＴＡで、ｐＨ７．２のＰＢＳを含むコンジュゲーション緩衝液に緩衝液交換する。鎖間ジスルフィドを、２～４モル過剰のトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）またはジチオスレイトール（ＤＴＴ）を用いて３７℃で３０分～２時間にわたり還元する。過剰なＴＣＥＰまたはＤＴＴを、コンジュゲーション緩衝液で予め平衡化したＺｅｂａ（商標）スピン脱塩カラムを使用して除去した。緩衝液交換抗体の濃度は、コンジュゲーション緩衝液を使用して、約５～２０ｍｇ／ｍｌに調整し、滅菌濾過した。マレイミド－２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ化合物は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）のいずれかに５～２０ｍＭの濃度まで溶解させる。コンジュゲーションのために、抗体を、１０～２０モル当量のマレイミド－２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌと混合する。場合によっては、２０％（ｖ／ｖ）までの追加のＤＭＡまたはＤＭＳＯを添加し、コンジュゲーション緩衝液中でのマレイミド－２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌの溶解度を改善した。反応を、２０℃で約３０分～４時間進行させる。得られた複合体を、２つの連続するＺｅｂａ（商標）スピン脱塩カラムを使用して、未反応のマレイミド－２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌから精製する。カラムを、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ７．２で予め平衡化する。アジュバント－抗体比（ＤＡＲ）を、ＸＥＶＯ（商標）Ｇ２－ＸＳ ＴＯＦ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に接続された、ＡＣＱＵＩＴＹ（商標）ＵＰＬＣ Ｈ－ｃｌａｓｓ（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）のＣ４逆相カラムを使用した液体クロマトグラフィー質量分析によって推定する。

【0309】

コンジュゲーションにおいて、抗体は、抗体の安定性または抗原結合特異性に悪影響を及ぼさない、当技術分野で既知の水性緩衝液系に溶解させることができる。リン酸緩衝生理食塩水を使用することができる。２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ化合物は、本明細書の別の箇所に記載される少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒を含む溶媒系に溶解される。いくつかのそのような態様では、２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌは、トリス緩衝液ｐＨ８（例えば、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ）中に、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約３０ｍＭ、約４０ｍＭ、または約５０ｍＭ、及びこれらの範囲内、例えば、約５ｍＭ～約５０ｍＭまたは約１０ｍＭ～約３０ｍＭの濃度まで溶解される。いくつかの態様では、２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピンリンカー中間体は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）、アセトニトリル、または別の適切な双極性非プロトン性溶媒に溶解する。

【0310】

あるいはコンジュゲーション反応において、当量過剰の２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ溶液を希釈し、抗体溶液と合わせてもよい。２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ溶液は、好ましくは、少なくとも１つの極性非プロトン性溶媒及び少なくとも１つの極性プロトン性溶媒で希釈され得、これらの例には、水、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、及び酢酸が含まれる。抗体に対する２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌ中間体のモル当量は、約１．５：１、約３：１、約５：１、約１０：１、約１５：１または約２０：１、及びこれらの範囲内、例えば、約１．５：１～約２０：１、約１．５：１～約１５：１、約１．５：１～約１０：１、約３：１～約１５：１、約３：１～約１０：１、約５：１～約１５：１、または約５：１～約１０：１であり得る。反応の完了は、ＬＣ－ＭＳなどの当技術分野で知られている方法で好適に監視することができる。コンジュゲーション反応は、通常、約１時間～約１６時間の範囲内で完了する。反応が完了した後、試薬を反応混合物に添加して、反応を停止させ得る。抗体チオール基が２Ａｍ４ＣＢｚａ－Ｌリンカー中間体のマレイミドなどのチオール反応性基と反応する場合、未反応の抗体チオール基は、キャッピング試薬と反応し得る。好適なキャッピング試薬の例は、エチルマレイミドである。

【0311】

コンジュゲーション後に、免疫複合体は、例えば、これらに限定されないが、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、クロマト分画、限外濾過、遠心限外濾過、接線濾過、及びこれらの組み合わせなどの当技術分野で既知の精製方法によって精製され、コンジュゲートされていない反応物質及び／またはコンジュゲート凝集体から分離され得る。例えば、精製の前に、免疫複合体を２０ｍＭコハク酸ナトリウム、ｐＨ５などで希釈することができる。希釈した溶液を陽イオン交換カラムに適用した後、例えば少なくとも１０カラム容量の２０ｍＭコハク酸ナトリウム、ｐＨ５で洗浄する。免疫複合体は、ＰＢＳなどの緩衝液で適切に溶出できる。

【0312】

実施例２０２ ＨＥＫレポーターアッセイ
ヒトＴＬＲ７またはヒトＴＬＲ８を発現するＨＥＫ２９３レポーター細胞は、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎから購入し、ベンダープロトコルに従って細胞増殖と実験を行った。簡潔に説明すると、細胞は、１０％のＦＢＳ、ゼオシン及びブラストサイジンを添加したＤＭＥＭ中にて、５％ＣＯ_２で８０～８５％コンフルエンスまで増殖した。次に、細胞を、ＨＥＫ検出媒質と免疫刺激性２－アミノ－４－カルボキサミド－ベンゾアゼピン化合物（表１のものなど）を含む基質を用いて、９６ウェル平プレートに４×１０^４細胞／ウェルで播種した。プレートリーダーを使用して、６２０～６５５ｎｍの波長で活性を測定した。

【0313】

実施例２０３：Ｉｎ Ｖｉｔｒｏでの免疫複合体活性の評価
この実施例は、表３ａ及び表３ｂのものを含む、本発明の免疫複合体が免疫活性化を誘発するのに有効であり、したがってがんの治療に有用であることを示している。

【0314】

ａ）ヒト抗原提示細胞の単離：ヒト骨髄性抗原提示細胞（ＡＰＳ）は、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＣＤ１２３及びＨＬＡ－ＤＲに対するモノクローナル抗体を含むＲＯＳＥＴＴＥＳＥＰ（登録商標）ヒト単球濃縮カクテル（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）を使用した密度勾配遠心分離により、健康な献血者（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から得たヒト末梢血液からネガティブに選択された。その後、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ４０、ＣＤ８６、ＣＤ１２３及びＨＬＡ－ＤＲに対するモノクローナル抗体を含む、ＣＤ１６欠失を伴わない、ＥＡＳＹＳＥＰ（登録商標）ヒト単球エンリッチメントキット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてネガティブ選別を行い、純度９０％を超える未熟ＡＰＣを精製した。

【0315】

ｂ）骨髄性ＡＰＣ活性化アッセイ：２×１０^５のＡＰＣを、１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬ（マイクログラム／ミリリットル）ストレプトマイシン、２ｍＭのＬ－グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸、ならびに示されている場合には、様々な濃度の非コンジュゲート（裸の）抗体、ならびに表３ａ及び表３ｂのものを含む本発明の免疫複合体（ＩＣ）（上記の実施例に従って調製したもの）を添加したｉｓｃｏｖｅ改変ダルベッコ培地、ＩＭＤＭ（Ｌｏｎｚａ）を含有する、９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）でインキュベートする。無細胞上清をＥＬＩＳＡを介して１８時間後に分析し、炎症誘発性応答の読み取りとしてＴＮＦα分泌を測定する。

【0316】

ｃ）ＰＢＭＣ活性化アッセイ：ヒト末梢血単核細胞を、密度勾配遠心分離により、健康な血液ドナー（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から得られたヒト末梢血から単離した。ＰＢＭＣを、ＣＥＡ発現腫瘍細胞（例えば、ＭＫＮ－４５、ＨＰＡＦ－ＩＩ）と共培養物中で１０：１のエフェクター対標的細胞比で９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）中でインキュベートした。細胞を、（上記の実施例に従って調製された）様々な濃度の未コンジュゲート（裸の）抗体及び本発明の免疫複合体で刺激した。無細胞上清を、製造業者のガイドライン（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（登録商標），Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）に従って、ＬｅｇｅｎｄＰｌｅｘ（商標）キットを使用してサイトカインビーズアレイにより分析した。

【0317】

ｄ）ヒト通常型樹状細胞の単離：ヒト通常型樹状細胞（ｃＤＣ）は、密度勾配遠心分離によって健康な血液ドナー（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から得られたヒト末梢血からネガティブに選択された。簡単に説明すると、細胞を最初に、ＲＯＳＥＴＴＥＳＥＰ（商標）ヒトＣＤ３枯渇カクテル（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｃａｎａｄａ）を使用して富化し、細胞調製物からＴ細胞を除去する。次にｃＤＣを、ＥＡＳＹＳＥＰ（商標）ヒト骨髄 ＤＣ富化キット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、ネガティブ選択によって更に富化する。

【0318】

ｅ）ｃＤＣ活性化アッセイ：８×１０^４個のＡＰＣを、ＩＳＡＣ標的抗原を発現する腫瘍細胞と共に１０：１のエフェクター（ｃＤＣ）対標的（腫瘍細胞）比で共培養した。細胞を、１０％のＦＢＳを補充したＲＰＭＩ－１６４０培地を含有する９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）中で、示される場合には、本発明の指示された免疫複合体（上記の実施例に従って調製）の様々な濃度でインキュベートした。約１８時間、一晩インキュベートした後、無細胞上清を収集し、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ＬＥＧＥＮＤＰＬＥＸサイトカインビーズアレイを使用して（ＴＮＦαを含む）サイトカイン分泌について分析した。

【0319】

骨髄細胞型の活性化を、様々な骨髄集団を利用する記載のアッセイに加えて、様々なスクリーニングアッセイを用いて測定することができる。これらは、健康なドナー血液から単離された単球、Ｍ－ＣＳＦ分化マクロファージ、ＧＭ－ＣＳＦ分化マクロファージ、ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－４単球由来樹状細胞、健康なドナー血液から単離された従来の樹状細胞（ｃＤＣ）、及び免疫抑制状態に分極した骨髄細胞（骨髄由来抑制細胞またはＭＤＳＣとも呼ばれる）を含み得る。ＭＤＳＣ分極細胞としては、例えばＭ２ａΜΦ（ＩＬ４／ＩＬ１３）、Ｍ２ｃΜΦ（ＩＬ１０／ＴＧＦｂ）、ＧＭ－ＣＳＦ／ＩＬ６ＭＤＳＣ、腫瘍教育単球（ＴＥＭ）などの免疫抑制状態に向けて分化した単球が挙げられる。ＴＥＭ分化は、腫瘍馴化培地（例えば、７８６．Ｏ、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＨＣＣ１９５４）を用いて行うことができる。原発性腫瘍関連骨髄細胞はまた、解離した腫瘍細胞懸濁液に存在する初代細胞を含み得る（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）。

【0320】

骨髄細胞の記載された集団の活性化の評価は、単培養として、または免疫複合体（ＩＣ）が抗体のＣＤＲ領域を介して結合し得る目的の抗原を発現する細胞との共培養として行うことができる。１８～４８時間のインキュベーション後に、フローサイトメトリーを用いた細胞表面共刺激分子の上方制御、または分泌された炎症性サイトカインの測定により活性化を評価することができる。サイトカイン測定の場合、無細胞上清を採取し、フローサイトメトリーを用いてサイトカインビーズアレイ（例えば、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ製ＬｅｇｅｎｄＰｌｅｘ）により分析する。

【0321】

本明細書において引用されている、刊行物、特許出願及び特許を含むすべての参考文献は、参照することにより、それらの参考文献のそれぞれが参照することにより組み込まれるべき旨の個別具体的な表示があるかのように、かつ、その全体が本明細書に規定されているかのように、本明細書に組み込まれる。

【配列表】

2024511088000001.app

【国際調査報告】