特表 2024-511092 ＴＭＥＭ１７３ｓａＲＮＡ組成物及び使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-12

(54)【発明の名称】ＴＭＥＭ１７３ｓａＲＮＡ組成物及び使用方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/11 20060101AFI20240305BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240305BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20240305BHJP

   A61P 1/18 20060101ALI20240305BHJP

   A61P 15/08 20060101ALI20240305BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20240305BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20240305BHJP

【ＦＩ】

C12N15/11 Z ZNA

A61P35/00

A61P1/16

A61P1/18

A61P15/08

A61K31/7105

A61K31/713

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023558251

(86)(22)【出願日】2022-03-25

(85)【翻訳文提出日】2023-10-30

(86)【国際出願番号】 GB2022050757

(87)【国際公開番号】W WO2022200810

(87)【国際公開日】2022-09-29

(31)【優先権主張番号】63/166,390

(32)【優先日】2021-03-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/318,927

(32)【優先日】2022-03-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】512325200

【氏名又は名称】ミナ セラピューティクス リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100105957

【弁理士】

【氏名又は名称】恩田 誠

(74)【代理人】

【識別番号】100068755

【弁理士】

【氏名又は名称】恩田 博宣

(74)【代理人】

【識別番号】100142907

【弁理士】

【氏名又は名称】本田 淳

(74)【代理人】

【識別番号】100152489

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 美樹

(72)【発明者】

【氏名】タン、チュン ピン

(72)【発明者】

【氏名】シニガーリャ、ラウラ

(72)【発明者】

【氏名】ゴメス マルティネス、バレンティン

(72)【発明者】

【氏名】ライアン、ブリッド

(72)【発明者】

【氏名】セトロム、ポール

(72)【発明者】

【氏名】ヘグレ、シブ アニタ

(72)【発明者】

【氏名】デバッカー、アレクサンダー

【テーマコード（参考）】

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA16

4C086MA17

4C086MA28

4C086MA43

4C086MA52

4C086MA55

4C086MA56

4C086MA57

4C086MA58

4C086MA59

4C086MA63

4C086MA66

4C086NA14

4C086ZA66

4C086ZA75

4C086ZA81

4C086ZB26

(57)【要約】

本開示は、標的遺伝子の発現を上方制御するのに有用なｓａＲＮＡ、及びそのｓａＲＮＡを含む治療用組成物に関し、標的遺伝子はＴＭＥＭ１７３である。上記ｓａＲＮＡ及び治療用組成物の使用方法も提供される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

標的遺伝子の発現を上方制御する合成単離低分子活性化ＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）であって、前記標的遺伝子はＴＭＥＭ１７３であり、
前記ｓａＲＮＡは標的遺伝子の標的配列に少なくとも８０％相補的なアンチセンス鎖を含み、前記標的配列は配列番号２～１５からなる群から選択され、
前記アンチセンス鎖は１４～３０ヌクレオチドを有する、ｓａＲＮＡ。

【請求項2】

前記アンチセンス鎖は配列番号３０～４３から選択される配列を含む、請求項１に記載のｓａＲＮＡ。

【請求項3】

前記アンチセンス鎖は３’オーバーハングを含む、請求項２に記載のｓａＲＮＡ。

【請求項4】

前記３’オーバーハングは、ｕｕ、ＵＵ、又はＵＵＵである、請求項３に記載のｓａＲＮＡ。

【請求項5】

前記アンチセンス鎖は配列番号６９～８２から選択される配列を含む、請求項４に記載のｓａＲＮＡ。

【請求項6】

前記ｓａＲＮＡは二本鎖であり、センス鎖をさらに含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のｓａＲＮＡ。

【請求項7】

前記センス鎖は配列番号１６～２９から選択される配列を含む、請求項６に記載のｓａＲＮＡ。

【請求項8】

前記センス鎖は３’オーバーハング及び／又は５’オーバーハングを含む、請求項７に記載のｓａＲＮＡ。

【請求項9】

前記３’オーバーハングは、ｕｕ、ＵＵ、又はＵＵＵである、請求項８に記載のｓａＲＮＡ。

【請求項10】

前記５’オーバーハングは、ｄＴ、ｄｄＴ、ｉｎｖ ｄｄＴ又はｉｎｖＡｂである、請求項８に記載のｓａＲＮＡ。

【請求項11】

前記センス鎖は、配列番号４４～６８から選択される配列を含む、請求項８に記載のｓａＲＮＡ。

【請求項12】

少なくとも１つの修飾を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載のｓａＲＮＡ。

【請求項13】

前記ｓａＲＮＡは、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｉｎｖＡｂ－Ｓｅ－ｍ１又はＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｍ１－ｅｍｏｄ５１である、請求項１に記載のｓａＲＮＡ。

【請求項14】

請求項１～１３のいずれか一項に記載のｓａＲＮＡ及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。

【請求項15】

標的遺伝子の発現を上方制御する方法であって、前記標的遺伝子はＴＭＥＭ１７３であり、請求項１～１３のいずれか一項に記載のｓａＲＮＡを投与することを含む、方法。

【請求項16】

前記標的遺伝子の発現は、少なくとも３０％、４０％、又は５０％上昇する、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

がんを治療を必要とする対象のがんを治療する方法であって、治療有効量の請求項１～１３のいずれか一項に記載のｓａＲＮＡ又は請求項１４に記載の医薬組成物を、前記必要とする対象に投与することを含む方法。

【請求項18】

前記がんは固形腫瘍である、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記がんは、肝細胞がん、膵臓がん、又は卵巣がんである、請求項１８に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

配列表の参照
本出願は、電子形式の配列表とともに提出されている。２０５８＿１０３４ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔというタイトルで提出された配列表は、２０２２年３月２３日に作成され、サイズは３４，３８０バイトである。配列表の電子形式の情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本開示の分野
本開示は、オリゴヌクレオチド、具体的にはｓａＲＮＡ、遺伝子発現を調節するための組成物、及び診断及び治療用途における前記組成物の使用方法に関する。

【背景技術】

【0003】

最近、小さい二本鎖ＲＮＡが、遺伝子プロモーターと重複するｎｃＲＮＡを標的とすることによって遺伝子発現を増加させることが発見された（非特許文献１、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。何らかの機構によって標的遺伝子の発現の上方制御をもたらす短いＲＮＡは、短い活性化ＲＮＡ又は低分子活性化ＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）と呼ばれる。

【0004】

多くの固形がんは、機能不全に陥った免疫微小環境を含む。外来病原体に対する免疫応答を開始するモジュレーターは、腫瘍に対する生産的応答を誘導するための有望な治療薬となる可能性がある。ｓａＲＮＡによる免疫刺激遺伝子の標的とする調節のための組成物及び方法が依然として必要とされている。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0005】

【非特許文献1】Ｊａｎｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．３：１６６－１７３（２００７）

【発明の概要】

【0006】

開示内容の概要
本開示は、標的遺伝子の発現を上方制御する合成単離低分子活性化ＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）を提供し、前記標的遺伝子はＴＭＥＭ１７３（ＳＴＩＮＧ）である。いくつかの実施形態では、ｓａＲＮＡは標的遺伝子の標的配列上の領域に少なくとも８０％相補的なアンチセンス鎖を含み、前記標的配列は配列番号２～１５からなる群から選択され、前記アンチセンス鎖は１４～３０ヌクレオチドを有する。そのようなｓａＲＮＡを含む医薬組成物、キット、及びデバイスも提供される。

【0007】

本開示はまた、対象における標的遺伝子の発現を上方制御する方法を提供し、前記標的遺伝子はＴＭＥＭ１７３（ＳＴＩＮＧ）である。免疫シグナル伝達経路を調節する方法、及びＴＭＥＭ１７３に関連する疾患（例えば、がんなどであるがこれに限定されない）を治療する方法も提供される。この方法は、本開示のｓａＲＮＡを対象に投与することを含む。

【0008】

本開示の様々な実施形態の詳細は、以下で説明される。本開示の他の特徴、目的、及び利点は、説明、図面、及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0009】

前述の及び他の目的、特徴及び利点は、添付の図面に示されるように、本開示の特定の実施形態の以下の説明から明らかになるであろう。図面において、同様の参照符号は異なる図面全体にわたって同じ部分を指す。図面は必ずしも縮尺どおりではなく、代わりに本開示の様々な実施形態の原理を示すことに重点が置かれている。

【図1】本開示のｓａＲＮＡの機能に関与する核酸部分間の関係を示す概略図である。

【図2】ＴＭＥＭ１７３－ｓａＲＮＡで処理したＨｅｐＧ２細胞におけるＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡ発現を示す。

【図3】ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｉｎｖＡｂ－Ｓｅ－ｍ２、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｉｎｖＡｂ－Ｓｅ－ｍ１、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｉｎｖＡｂ－Ｓｅ－０、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｉｎｖＡｂ－Ｓｅ－ｐ１、及びＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｉｎｖＡｂ－Ｓｅ－ｐ２で処理したＨｅｐＧ２細胞におけるＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡ発現を示す。

【図4】様々なＴＭＥＭ１７３－ｓａＲＮＡ及び対照で処理したＡ５４９細胞におけるＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡ発現を示す。

【図5】図５Ａ～５Ｃは、ＴＭＥＭ１７３－ｓａＲＮＡで処理した後のＡ５４９細胞におけるＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡ及びＴＭＥＭ１７３タンパク質レベルの変化を示す。

【図6】ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｉｎｖＡｂ－Ｓｅ－ｍ１及びＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｍ１－ｅｍｏｄ５１で処理したＡ５４９細胞におけるＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡ発現を示す。

【図7】図７Ａ～７Ｃは、異なる時間における様々な用量のＴＭＥＭ１７３－ｓａＲＮＡでの処理後のＡ５４９細胞におけるＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡの変化を示す。

【発明を実施するための形態】

【0010】

詳細な説明
本開示は、治療目的で標的遺伝子の発現及び／又は機能を調節するための組成物、方法、及びキットを提供する。これらの組成物、方法、及びキットは、標的遺伝子の発現を上方制御する少なくとも１つのｓａＲＮＡを含む。

【0011】

Ｉ．ｓａＲＮＡの設計及び合成
本開示の一態様は、ｓａＲＮＡを設計及び合成する方法を提供する。
本開示の文脈における「低分子活性化ＲＮＡ」、「短い活性化ＲＮＡ」、又は「ｓａＲＮＡ」という用語は、特定の遺伝子の発現を上方制御する、又はそれに対してプラスの効果を有する一本鎖又は二本鎖ＲＮＡを意味する。ｓａＲＮＡは、１４～３０ヌクレオチド、例えば、１９、２０、２１、２２、又は２３ヌクレオチドの一本鎖であり得る。ｓａＲＮＡは二本鎖であってもよく、各鎖は１４～３０ヌクレオチド、例えば１９、２０、２１、２２、又は２３ヌクレオチドを含む。この遺伝子をｓａＲＮＡの標的遺伝子と呼ぶ。本明細書において使用される場合、標的遺伝子は、コード鎖及び鋳型鎖を含む二本鎖ＤＮＡである。例えば、ＴＭＥＭ１７３遺伝子の発現を上方制御するｓａＲＮＡは「ＴＭＥＭ１７３－ｓａＲＮＡ」と呼ばれ、ＴＭＥＭ１７３遺伝子はＴＭＥＭ１７３－ｓａＲＮＡの標的遺伝子である。標的遺伝子は、関心のある任意の遺伝子であり得る。いくつかの実施形態では、標的遺伝子は、鋳型鎖上にプロモーター領域を有する。

【0012】

遺伝子の「上方制御」又は「活性化」とは、遺伝子の発現レベル、又は遺伝子によってコードされるポリペプチドのレベルもしくはその活性、又は、遺伝子の鋳型鎖から転写されたＲＮＡ転写物のレベルの、本開示のｓａＲＮＡの非存在下で観察されるレベルを超える上昇を意味する。本開示のｓａＲＮＡは、標的遺伝子の発現に対して直接的な上方制御効果を有し得る。

【0013】

本開示のｓａＲＮＡは、標的遺伝子の鋳型鎖及び／又は標的遺伝子もしくはｍＲＮＡによってコードされるポリペプチドから転写されるＲＮＡ転写物に対して間接的な上方制御効果を有し得る。標的遺伝子から転写されたＲＮＡ転写物を、以降、標的転写物と呼ぶ。標的転写物は、標的遺伝子のｍＲＮＡであってもよい。標的転写物はミトコンドリアに存在し得る。本開示のｓａＲＮＡは、生物学的プロセス又は生物学的活性に対して下流効果を有し得る。そのような実施形態では、第１の転写物を標的とするｓａＲＮＡは、第２の非標的転写物に対して効果（上方制御又は下方制御）を有し得る。

【0014】

標的配列
いくつかの実施形態では、ｓａＲＮＡは、標的遺伝子の鋳型鎖又はコード鎖上の領域に対して少なくとも８０％相補的なアンチセンス鎖を含む。ｓａＲＮＡの鎖がハイブリダイズ又は結合する、鋳型鎖又はコード鎖上のこの領域は、「標的配列」又は「標的部位」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、標的領域はコード鎖上にある。いくつかの実施形態では、標的領域は鋳型鎖上にある。図１は、アンチセンス鎖と鋳型鎖上の標的領域との関係を示している。

【0015】

この文脈における「相補的」という用語は、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズできることを意味する。ＤＮＡのチミジンはＲＮＡではウリジンに置き換えられており、この違いは「相補性」という用語の理解を変えるものではないことが理解される。

【0016】

ｓａＲＮＡのアンチセンス鎖（一本鎖又は二本鎖）は、標的配列の逆相補鎖と少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％又は１００％同一であり得る。したがって、ｓａＲＮＡのアンチセンス鎖の逆相補体は、標的配列と高度な配列同一性を有する。標的配列は、ｓａＲＮＡ及び／又はｓａＲＮＡの逆相補体と同じ長さ、すなわち同じ数のヌクレオチドを有し得る。

【0017】

いくつかの実施形態では、標的配列は、少なくとも１４かつ３０未満のヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、標的配列は、１９、２０、２１、２２、又は２３ヌクレオチドを有する。

【0018】

いくつかの実施形態では、標的配列の位置は、鋳型鎖のプロモーター領域内に位置する。
いくつかの実施形態では、標的配列は、鋳型鎖のＴＳＳ（転写開始部位）コア内に位置する。本明細書で使用される「ＴＳＳコア」又は「ＴＳＳコア配列」は、ＴＳＳ（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｓｔａｒｔ ｓｉｔｅ：転写開始部位）の上流２０００ヌクレオチドと下流２０００ヌクレオチドとの間の領域を指す。したがって、ＴＳＳコアは４００１ヌクレオチドを含み、ＴＳＳはＴＳＳコア配列の５’末端から２００１位に位置する。本明細書で使用される「転写開始部位」（ＴＳＳ）という用語は、転写開始位置に対応する、又は転写開始位置をマークする遺伝子の鋳型鎖上のヌクレオチドを意味する。ＴＳＳは、遺伝子の鋳型鎖上のプロモーター領域内に位置し得る。

【0019】

いくつかの実施形態では、標的配列は、ＴＳＳの上流１０００ヌクレオチドと下流１０００ヌクレオチドとの間に位置する。
いくつかの実施形態では、標的配列は、ＴＳＳの上流５００ヌクレオチドと下流５００ヌクレオチドとの間に位置する。

【0020】

いくつかの実施形態では、標的配列は、ＴＳＳの上流２５０ヌクレオチドと下流２５０ヌクレオチドとの間に位置する。
いくつかの実施形態では、標的配列は、ＴＳＳの上流の１００ヌクレオチドと下流の１００ヌクレオチドとの間に位置する。

【0021】

いくつかの実施形態では、標的配列は、ＴＳＳコア内のＴＳＳの上流に位置する。標的配列は、ＴＳＳの上流２０００ヌクレオチド未満、１０００ヌクレオチド未満、５００ヌクレオチド未満、２５０ヌクレオチド未満、又は１００ヌクレオチド未満であり得る。

【0022】

いくつかの実施形態では、標的配列は、ＴＳＳコア内のＴＳＳの下流に位置する。標的配列は、ＴＳＳの下流２０００ヌクレオチド未満、１０００ヌクレオチド未満、５００ヌクレオチド未満、２５０ヌクレオチド未満、又は１００ヌクレオチド未満であり得る。

【0023】

いくつかの実施形態では、標的配列は、ＴＳＳコアのＴＳＳの周囲＋／－５０ヌクレオチドに位置する。いくつかの実施形態では、標的配列は、ＴＳＳコアのＴＳＳと実質的に重複する。いくつかの実施形態では、標的配列は、ＴＳＳコアのＴＳＳで始まるか、又はＴＳＳで終わる。いくつかの実施形態では、標的配列は、ＴＳＳコアのＴＳＳと、上流方向又は下流方向のいずれかに１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、又は１９ヌクレオチドだけ重複する。

【0024】

鋳型鎖上の標的配列の位置は、標的配列の５’末端の位置によって定義される。標的配列の５’末端はＴＳＳコアの任意の位置にあってもよく、標的配列はＴＳＳコアの１位から４００１位までから選択される任意の位置で開始してもよい。本明細書で参照すると、標的配列の５’末端がＴＳＳコアの１位から２０００位の間に位置する場合、標的配列はＴＳＳの上流にあるとみなされ、標的配列の５’末端が２００２位から４００１までの場合、標的配列はＴＳＳの下流にあるとみなされる。標的配列の５’末端がヌクレオチド２００１位にある場合、標的配列はＴＳＳ中心配列であるとみなされ、ＴＳＳの上流でも下流でもない。

【0025】

さらなる参考として、例えば、標的配列の５’末端がＴＳＳコアの１６００位にある場合、すなわち、それがＴＳＳコアの１６００番目のヌクレオチドである場合、標的配列はＴＳＳコアの１６００位から始まり、ＴＳＳの上流にあると考えられる。

【0026】

ｓａＲＮＡ設計
一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは一本鎖ｓａＲＮＡである。一本鎖ｓａＲＮＡは、少なくとも１４ヌクレオチド長、又は少なくとも１８ヌクレオチド長、例えば、１９、２０、２１、２２もしくは２３ヌクレオチド長であり得る。なぜなら、この長さを超えるオリゴヌクレオチド二本鎖は、インターフェロン応答を誘導するリスクを高める可能性があるからである。好ましくは、一本鎖ｓａＲＮＡの長さは３０ヌクレオチド未満である。いくつかの実施形態では、一本鎖ｓａＲＮＡの長さは１９～２５ヌクレオチドである。一実施形態では、一本鎖ｓａＲＮＡは、正確に１９ヌクレオチドの長さであり得る。別の実施形態では、一本鎖ｓａＲＮＡは、正確に２０ヌクレオチドの長さであり得る。別の実施形態では、一本鎖ｓａＲＮＡは、正確に２１ヌクレオチドの長さであり得る。別の実施形態では、一本鎖ｓａＲＮＡは、正確に２２ヌクレオチドの長さであり得る。別の実施形態では、一本鎖ｓａＲＮＡは、正確に２３ヌクレオチドの長さであり得る。いくつかの実施形態では、本開示の一本鎖ｓａＲＮＡは、少なくとも１４ヌクレオチドかつ３０ヌクレオチド未満の配列を含み、これは標的配列に対して少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％又は１００％の相補性を有する。一実施形態では、標的配列に対して少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％又は１００％の相補性を有する配列は、長さが少なくとも１５、１６、１７、１８又は１９ヌクレオチド、又は１８～２２、又は１９～２１、又は正確に１９である。

【0027】

別の実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、二本鎖を形成する２つの鎖を有し、一方の鎖はアンチセンス鎖又はガイド鎖である。ｓａＲＮＡ二本鎖は二本鎖ｓａＲＮＡとも呼ばれる。本明細書で使用される二本鎖ｓａＲＮＡ又はｓａＲＮＡ二重鎖は、鎖間ハイブリダイゼーションが二重鎖構造の領域を形成することができる２つ以上の、好ましくは２つの鎖を含むｓａＲＮＡである。二本鎖ｓａＲＮＡの２本の鎖は、アンチセンス鎖又はガイド鎖、及びセンス鎖又はパッセンジャー鎖と呼ばれる。

【0028】

二重鎖の各鎖は、長さが少なくとも１４ヌクレオチド、又は少なくとも１８ヌクレオチド、例えば、１９、２０、２１又は２２ヌクレオチドであり得る。二重鎖は、少なくとも１２ヌクレオチド、又は少なくとも１５ヌクレオチド、又は少なくとも１７ヌクレオチド、又は少なくとも１９ヌクレオチドの長さにわたってハイブリダイズされ得る。各鎖の長さは正確に１９、２０、２１、２２、又は２３ヌクレオチドであり得る。好ましくは、ｓａＲＮＡの各鎖の長さは３０ヌクレオチド未満である。なぜなら、この長さを超えるオリゴヌクレオチド二重鎖は、インターフェロン応答を誘導するリスクを高める可能性があるからである。一実施形態では、ｓａＲＮＡの各鎖の長さは１９～２５ヌクレオチドである。ｓａＲＮＡ二重鎖を形成する鎖は、長さが等しくても等しくなくてもよい。

【0029】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡのアンチセンス鎖は、少なくとも１４ヌクレオチドかつ３０ヌクレオチド未満、例えば正確に１９、２０、２１、２２、又は２３ヌクレオチドの長さの配列を含み、これは標的配列に対して少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％又は１００％の相補性を有する。一実施形態では、標的配列に対して少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％又は１００％の相補性を有する配列は、少なくとも１５、１６、１７、１８又は１９ヌクレオチドの長さ、又は１８～２２、又は１９～２１、又は正確に１９ヌクレオチドの長さである。

【0030】

アンチセンス鎖は、鋳型鎖上の標的配列と５つ以下、又は４つもしくは３つ以下、又は２つ以下、又は１つ以下のミスマッチを有し得るか、又はミスマッチを有しなくてもよい。したがって、アンチセンス鎖は鋳型鎖上の標的配列に対して高度な相補性を有する。ｓａＲＮＡ二重鎖のセンス鎖は、鋳型鎖上の標的配列と高度な配列同一性を有する。

【0031】

ｓａＲＮＡ二重鎖、標的遺伝子、標的遺伝子のコード鎖、標的遺伝子の鋳型鎖、標的転写物、標的配列／標的部位、及びＴＳＳの間の関係を図１に示す。
本開示の文脈における「鎖」とは、天然に存在しないヌクレオチド又は修飾されたヌクレオチドを含むヌクレオチドの連続配列を意味する。２つ以上の鎖は、別個の分子であってもよく、又はそれぞれが別個の分子の一部を形成していてもよく、又はそれらは、例えば、ポリエチレングリコールリンカーなどのリンカーによって共有結合されていてもよい。ｓａＲＮＡの少なくとも１つの鎖は、標的遺伝子のガイド鎖上の領域（標的配列）に相補的であり、標的遺伝子のコード鎖上の領域と配列同一性を有する領域を含み得る。そのような鎖は、ｓａＲＮＡ二重鎖のアンチセンス鎖又はガイド鎖と呼ばれる。ｓａＲＮＡのアンチセンス鎖に相補的な領域を含むｓａＲＮＡの第２の鎖は、センス鎖又はパッセンジャー鎖と呼ばれる。

【0032】

ｓａＲＮＡ二重鎖は、少なくとも部分的に自己相補的であり、二重鎖領域を含むヘアピン構造を形成する単一分子から形成され得る。そのような場合、「鎖」という用語は、ｓａＲＮＡの別の内部領域に相補的なｓａＲＮＡの領域の１つを指す。ｓａＲＮＡのガイド鎖は、標的遺伝子の鋳型鎖上の領域内の配列（標的配列）と５つ以下、又は４つ又は３つ以下、又は２つ以下、又は１つ以下のミスマッチを有し得るか、又はミスマッチを有しない。

【0033】

いくつかの実施形態では、ｓａＲＮＡのパッセンジャー鎖は、ガイド鎖とのミスマッチと呼ばれる、ガイド鎖上の対応するヌクレオチドに相補的でない少なくとも１つのヌクレオチドを含み得る。ガイド鎖とのミスマッチは、ガイド鎖の優先的なローディングを促進し得る（Ｗｕ ｅｔ ａｌｌ，ＰＬｏＳ ＯＮＥ，ｖｏｌ．６（１２）：ｅ２８５８０（２０１１）、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。一実施形態では、ガイド鎖との少なくとも１つのミスマッチは、パッセンジャー鎖の３’末端にあり得る。一実施形態では、パッセンジャー鎖の３’末端は、ガイド鎖との１～５個のミスマッチを含み得る。一実施形態では、パッセンジャー鎖の３’末端は、ガイド鎖と２～３個のミスマッチを含み得る。一実施形態では、パッセンジャー鎖の３’末端は、ガイド鎖と６～１０個のミスマッチを含み得る。

【0034】

ｓａＲＮＡ二重鎖は、鋳型鎖上の標的配列に対してｓｉＲＮＡに似た相補性、すなわち、ｓａＲＮＡ二重鎖のガイド鎖の５’末端から２～６番目のヌクレオチドと標的配列上の領域との間の１００％の相補性を有し得る。さらに、ｓａＲＮＡの他のヌクレオチドは、標的配列の領域に対して少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、又は１００％の相補性を有し得る。例えば、ｓａＲＮＡのヌクレオチド７（５’末端から数えて）から３’末端までは、標的配列の領域に対して少なくとも８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、又は１００％の相補性を有し得る。

【0035】

この文脈における「低分子干渉ＲＮＡ」又は「ｓｉＲＮＡ」という用語は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路に関与し、特定の遺伝子の発現を干渉又は阻害する、通常２０～２５ヌクレオチド長の二本鎖ＲＮＡを意味する。この遺伝子はｓｉＲＮＡの標的遺伝子である。ｓｉＲＮＡは通常約２１ヌクレオチド長であり、２本の鎖の各末端に３’オーバーハング（例えば、２ヌクレオチド）を有する。

【0036】

いくつかの実施形態では、ｓａＲＮＡは、３’オーバーハング又はテールを形成する各鎖の３’末端に多数の不対ヌクレオチドを含み得る。各鎖の３’オーバーハングを形成する不対ヌクレオチドの数は、１～５ヌクレオチド、又は１～３ヌクレオチド、又は２ヌクレオチドの範囲であり得る。

【0037】

したがって、いくつかの実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは一本鎖であってもよく、（ｉ）標的遺伝子の鋳型鎖上の標的配列に対して少なくとも８０％の相補性を有する配列；及び（ｉｉ）ＵＵ、ＵＵＵ、又はｍＵｍＵ（２’－ＯＭｅ修飾のためのｍ鎖）などのウラシル残基を含み得る１～５ヌクレオチドの３’テール（オーバーハング）からなる。いくつかの実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは二本鎖であってもよく、（ｉ）標的遺伝子の鋳型鎖上の標的配列に対して少なくとも８０％の相補性を有する第１の配列；及び（ｉｉ）１～５ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む第１の鎖；及び（ｉ）第１の配列と二重鎖を形成する第２の配列、及び（ｉｉ）１～５ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む第２の鎖からなる。そのような３’テール（オーバーハング）は、ｓａＲＮＡアンチセンス鎖と標的配列との間の相補性の決定に関してミスマッチとはみなされない。本開示のｓａＲＮＡは、３’テール（オーバーハング）が存在する場合にはそれを除いて、その全長にわたって標的配列に対して相補性を有し得る。

【0038】

本開示のｓａＲＮＡは、フランキング配列を含み得る。フランキング配列は、本開示のｓａＲＮＡの３’末端又は５’末端に挿入され得る。一実施形態では、フランキング配列はｍｉＲＮＡの配列であり、ｓａＲＮＡがｍｉＲＮＡ構造を有するようにし、Ｄｒｏｓｈａ及びＤｉｃｅｒでプロセシングされ得る。非限定的な例では、本開示のｓａＲＮＡは２本の鎖を有し、マイクロＲＮＡ前駆体、例えば、ｍｉＲ－３０骨格フランキング配列にクローニングされる。

【0039】

本開示のｓａＲＮＡは、制限酵素基質又は認識配列を含み得る。制限酵素認識配列は、本開示のｓａＲＮＡの３’末端又は５’末端にあり得る。制限酵素の非限定的な例としては、ＮｏｔＩ及びＡｓｃＩが挙げられる。

【0040】

標的遺伝子及びｓａＲＮＡ
上述したように、ｓａＲＮＡのアンチセンス鎖は、標的配列の逆相補鎖と高度な配列同一性を有する。「標的配列に相補的」の代わりに、本開示のｓａＲＮＡのアンチセンス鎖は、標的遺伝子のコード鎖上の領域に対して「同一性」を有すると定義することもできる。したがって、標的遺伝子のゲノム配列を使用してｓａＲＮＡを設計することができる。

【0041】

いくつかの実施形態では、本開示のｓａＲＮＡの標的遺伝子はＴＭＥＭ１７３（ＳＴＩＮＧ）である。標的遺伝子、標的遺伝子によってコードされるタンパク質及びｍＲＮＡ、ならびに標的遺伝子のＴＳＳコアの配列が表１に提供される。

【0042】

【表1】

【0043】

表２は、ｓａＲＮＡの標的配列、標的配列のゲノム位置、及び３’オーバーハングのないｓａＲＮＡの相対位置を示している。表２では、標的配列は標的遺伝子の鋳型鎖上の領域として定義される。相対位置は、標的配列の５’末端からＴＳＳまでの距離である。負の数はＴＳＳの上流の位置を表し、正の数はＴＳＳの下流の位置を表す。

【0044】

【表2】

【0045】

ｓａＲＮＡは一本鎖であってもよく、１４～３０のヌクレオチドを含み得る。一本鎖ｓａＲＮＡの配列は、表３のアンチセンス鎖の配列から選択される配列と少なくとも６０％、７０％、８０％又は９０％の同一性を有し得る。一実施形態では、一本鎖ｓａＲＮＡは、表３のアンチセンス鎖の配列から選択される配列を含む。一実施形態では、一本鎖ｓａＲＮＡは３’テール（オーバーハング）を有し得る。３’テール（オーバーハング）を有する一本鎖ｓａＲＮＡの配列は、表４のアンチセンス鎖の配列から選択される配列と少なくとも６０％、７０％、８０％又は９０％の同一性を有し得る。一実施形態では、一本鎖ｓａＲＮＡは、表４のアンチセンス鎖の配列から選択される配列を含む。

【0046】

ｓａＲＮＡは二本鎖であってもよい。２本の鎖は二重鎖を形成し、各鎖は１４～３０個のヌクレオチドを含む。二本鎖ｓａＲＮＡの第１の鎖は、表３のアンチセンス鎖の配列から選択される配列と少なくとも６０％、７０％、８０％又は９０％の同一性を有し得る。一実施形態では、二本鎖ｓａＲＮＡの第１鎖は、表３のアンチセンス鎖の配列から選択される配列を含む。二本鎖ｓａＲＮＡの第２の鎖は、表３のセンス鎖の配列から選択される配列と少なくとも６０％、７０％、８０％又は９０％の同一性を有し得る。一実施形態では、二本鎖ｓａＲＮＡの第２の鎖は、表３のセンス鎖の配列から選択される配列を含む。一実施形態では、二本鎖ｓａＲＮＡは、各鎖上に３’オーバーハングを有し得る。二本鎖ｓａＲＮＡの第１の鎖は、表４のアンチセンス鎖の配列から選択される配列と少なくとも６０％、７０％、８０％又は９０％の同一性を有し得る。一実施形態では、二本鎖ｓａＲＮＡの第１の鎖は、表４のアンチセンス鎖の配列から選択される配列を含む。二本鎖ｓａＲＮＡの第２の鎖は、表４のセンス鎖の配列から選択される配列と少なくとも６０％、７０％、８０％又は９０％の同一性を有し得る。一実施形態では、二本鎖ｓａＲＮＡの第２の鎖は、表４のセンス鎖の配列から選択される配列を含む。

【0047】

ｓａＲＮＡは修飾されていても修飾されていなくてもよい。

【0048】

【表3】

【0049】

【表4-1】

【0050】

【表4-2】

【0051】

２０１１年６月２３日に出願されたＵＳ２０１３／０１６４８４６（ｓａＲＮＡアルゴリズム）に開示された方法（その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる）も、ｓａＲＮＡを設計するために使用され得る。ｓａＲＮＡの設計は、Ｃｏｒｅｙらの米国特許第８，３２４，１８１号及び米国特許第７，７０９，５６６号、Ｌｉらの米国特許出願公開第２０１０／０２１０７０７号、及びＶｏｕｔｉｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，ｖｏｌ．１，ｅ３５（２０１２）にも開示されており、それぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0052】

本開示のｓａＲＮＡは、任意の適切な方法、例えば合成により、又は当業者に周知の標準的な分子生物学技術を使用した細胞内での発現により生成され得る。例えば、本開示のｓａＲＮＡは、当技術分野で知られている方法を使用して、化学的に合成することも、組換えによって生成することもできる。

【0053】

二機能性オリゴヌクレオチド
二機能性又は二重機能性オリゴヌクレオチド、例えば、ｓａＲＮＡは、第１の遺伝子の発現を上方制御し、少なくとも１つの第２の遺伝子の発現を下方制御するように設計され得る。二重機能性オリゴヌクレオチドの一方の鎖は第１の遺伝子の発現を活性化し、他方の鎖は第２の遺伝子の発現を阻害する。各鎖は、ダイサー基質配列をさらに含み得る。

【0054】

ｓａＲＮＡの化学修飾
本明細書では、ｓａＲＮＡにおいて、「修飾」又は必要に応じて「修飾された」という用語は、Ａ、Ｇ、Ｕ又はＣリボヌクレオチドに関する構造的及び／又は化学的修飾を指す。本開示のｓａＲＮＡ中のヌクレオチドは、非天然ヌクレオチド又は化学合成ヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドなどの非標準ヌクレオチドを含み得る。本開示のｓａＲＮＡは、糖、核酸塩基、又はヌクレオシド間結合（例えば、結合しているリン酸／ホスホジエステル結合／ホスホジエステル主鎖）などに対する任意の有用な修飾を含み得る。ピリミジン核酸塩基の１つ以上の原子は、任意選択で置換されたアミノ、任意選択で置換されたチオール、任意選択で置換されたアルキル（例えば、メチル又はエチル）、又はハロ（例えば、クロロ又はフルオロ）で置換されてもよい。特定の実施形態では、修飾（例えば、１つ以上の修飾）は、糖及びヌクレオシド間結合のそれぞれに存在する。本開示による修飾は、リボ核酸（ＲＮＡ）からデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロック核酸（ＬＮＡ）又はそれらのハイブリッドの修飾であり得る。非限定的な例では、Ｕの２’－ＯＨは２’－ＯＭｅで置換される。

【0055】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、本明細書に記載される少なくとも１つの修飾を含み得る。
別の実施形態では、ｓａＲＮＡはｓａＲＮＡ二重鎖であり、センス鎖及びアンチセンス配列は独立して少なくとも１つの修飾を含み得る。非限定的な例として、センス配列は修飾を含んでもよく、アンチセンス鎖は修飾されていなくてもよい。別の非限定的な例として、アンチセンス配列は修飾を含むことができ、センス鎖は修飾されていなくてもよい。さらに別の非限定的な例として、センス配列は２つ以上の修飾を含んでもよく、アンチセンス鎖は１つの修飾を含んでもよい。非限定的な例として、アンチセンス配列は２つ以上の修飾を含んでもよく、センス鎖は１つの修飾を含んでもよい。

【0056】

本開示のｓａＲＮＡは、糖、核酸塩基、及び／又はヌクレオシド間結合に対する修飾の組み合わせを含むことができる。これらの組み合わせは、本明細書又は２０１２年１０月３日に出願された国際公開第２０１３／０５２５２３号に記載される任意の１つ以上の修飾、特に式（Ｉａ）～（Ｉａ－５）、（Ｉｂ）～（Ｉｆ）、（ＩＩａ）～（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ－１）、（ＩＩｂ－２）、（ＩＩｃ－１）～（ＩＩｃ－２）、（ＩＩｎ－１）、（ＩＩｎ－２）、（ＩＶａ）～（ＩＶｌ）、及び（ＩＸａ）～（ＩＸｒ）（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を含むことができる。

【0057】

本開示のｓａＲＮＡは、分子の全長に沿って均一に修飾されていても、されていなくてもよい。例えば、１つ以上又は全ての種類のヌクレオチド（例えば、プリンもしくはピリミジン、又はＡ、Ｇ、Ｕ、Ｃのいずれか１つもしくは複数もしくは全て）は、本開示のｓａＲＮＡにおいて均一に修飾されていても、されていなくてもよい。いくつかの実施形態では、本開示のｓａＲＮＡ中のすべてのヌクレオチドＸは修飾されており、ＸはヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｕ、Ｃのいずれか１つ、又は組み合わせＡ＋Ｇ、Ａ＋Ｕ、Ａ＋Ｃ、Ｇ＋Ｕ、Ｇ＋Ｃ、Ｕ＋Ｃ、Ａ＋Ｇ＋Ｕ、Ａ＋Ｇ＋Ｃ、Ｇ＋Ｕ＋Ｃ、又はＡ＋Ｇ＋Ｃのいずれかであり得る。

【0058】

様々な糖修飾、ヌクレオチド修飾、及び／又はヌクレオシド間結合（例えば、骨格構造）が、ｓａＲＮＡ内の様々な位置に存在し得る。当業者は、ヌクレオチドアナログ又は他の修飾が、ｓａＲＮＡの機能が実質的に低下しないように、ｓａＲＮＡの任意の位置に位置し得ることを理解するであろう。本開示のｓａＲＮＡは、約１％～約１００％の修飾ヌクレオチド（全体のヌクレオチド含量に関して、又は１つ以上のタイプのヌクレオチド、すなわちＡ、Ｇ、Ｕ、又はＣのいずれか１つ以上に関して）又は任意の介在パーセンテージ（例えば、１％～２０％、１％～２５％、１％～５０％、１％～６０％、１％～７０％、１％～８０％、１％～９０％、１％～９５％、１０％～２０％、１０％～２５％、１０％～５０％、１０％～６０％、１０％～７０％、１０％～８０％、１０％～９０％、１０％～９５％、１０％～１００％、２０％～２５％、２０％～５０％、２０％～６０％、２０％～７０％、２０％～８０％、２０％～９０％、２０％～９５％、２０％～１００％、５０％～６０％、５０％～７０％、５０％～８０％、５０％～９０％、５０％～９５％、５０％～１００％、７０％～８０％、７０％～９０％、７０％～９５％、７０％～１００％、８０％～９０％、８０％～９５％、８０％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、及び９５％～１００％）の修飾ヌクレオチドを含み得る。

【0059】

いくつかの実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、環状核酸となるように修飾され得る。本開示のｓａＲＮＡの末端は、化学試薬又は酵素によって結合され、自由末端を持たない環状ｓａＲＮＡを生成し得る。環状ｓａＲＮＡは、その直鎖状対応物よりも安定であり、ＲＮａｓｅＲエキソヌクレアーゼによる消化に対して耐性があると予想される。環状ｓａＲＮＡは、Ａ、Ｇ、Ｕ、又はＣリボヌクレオチドに関する他の構造的及び／又は化学的修飾をさらに含み得る。

【0060】

本開示のｓａＲＮＡは、２０１３年１０月１０日に公開されたＰＣＴ国際公開第２０１３／１５１６６６号の第１３６～２４７頁に開示されるオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドの任意の修飾によって修飾することができ、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0061】

本開示のｓａＲＮＡは、修飾の組み合わせを含み得る。ｓａＲＮＡは、各鎖に少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０個の修飾を含み得る。

【0062】

いくつかの実施形態では、ｓａＲＮＡは少なくとも５０％修飾されており、例えばヌクレオチドの少なくとも５０％が修飾されている。いくつかの実施形態では、ｓａＲＮＡは少なくとも７５％修飾されており、例えば、ヌクレオチドの少なくとも７５％が修飾されている。いくつかの実施形態では、ｓａＲＮＡの両方の鎖が全長にわたって修飾され得る（１００％修飾）。ヌクレオチド（糖、塩基及びリン酸部分、例えばリンカー）はそれぞれ修飾され得るため、ヌクレオチド又はヌクレオシドの任意の部分に対する任意の修飾が修飾を構成することを理解されたい。

【0063】

いくつかの実施形態では、ｓａＲＮＡは、ヌクレオチドの１つの構成要素のみにおいて少なくとも１０％修飾されており、そのような構成要素は、核酸塩基、糖、又はヌクレオシド間の結合から選択される。例えば、ｓａＲＮＡの修飾は、前記ｓａＲＮＡの核酸塩基、糖、又は結合の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は１００％まで行われ得る。

【0064】

いくつかの実施形態では、ｓａＲＮＡは少なくとも１つの糖修飾を含む。糖修飾の非限定的な例には、以下が含まれ得る：

【0065】

【化1-1】

【0066】

【化1-2】

【0067】

いくつかの実施形態では、ｓａＲＮＡのヌクレオチドの糖の２’位（ＲＮＡにおけるＯＨ又はＤＮＡにおけるＨ）の少なくとも１つが－ＯＭｅで置換されており、２’－ＯＭｅと呼ばれる。

【0068】

【化2】

【0069】

いくつかの実施形態では、ｓａＲＮＡのヌクレオチドの糖の２’位（ＲＮＡにおけるＯＨ又はＤＮＡにおけるＨ）の少なくとも１つが－Ｆで置換されており、２’－Ｆと呼ばれる。

【0070】

【化3】

【0071】

いくつかの実施形態では、ｓａＲＮＡは、ヌクレオチド間に少なくとも１つのホスホロチオエート結合又はメチルホスホネート結合を含む。
いくつかの実施形態では、ｓａＲＮＡは、３’及び／又は５’キャッピング又はオーバーハングを含む。いくつかの実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、少なくとも１つの反転（ｉｎｖｅｒｔｅｄ）デオキシリボヌクレオシド又はジデオキシリボヌクレオシドオーバーハング（例えば、ｄＴ又はｄｄＴ）を含み得る。反転オーバーハング、例えばｄＴは、パッセンジャー（センス）鎖の５’末端又は３’末端にあってもよい。いくつかの実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、パッセンジャー鎖上に反転脱塩基（ｉｎｖＡｂ）修飾を含み得る。少なくとも１つの反転脱塩基修飾は、パッセンジャー鎖の５’末端、３’末端、又は両端にあってもよい。反転脱塩基修飾は、ガイド（アンチセンス）鎖の優先的なローディングを促進し得る。

【0072】

いくつかの実施形態では、ｓａＲＮＡは、少なくとも１つの５’－（Ｅ）－ビニルホスホナート（５’－Ｅ－ＶＰ）修飾を含む。

【0073】

【化4】

【0074】

いくつかの実施形態では、ｓａＲＮＡは、修飾として非環式核酸アナログである少なくとも１つのグリコール核酸（ＧＮＡ）を含む。

【0075】

【化5】

【0076】

ｓａＲＮＡコンジュゲート及び組み合わせ
コンジュゲーションは、安定性及び／又は半減期を増す可能性があり、本開示のｓａＲＮＡを細胞、組織又は生物内の特定の部位に標的化するのに特に有用であり得る。本開示のｓａＲＮＡは、他のポリヌクレオチド、色素、挿入剤（例えば、アクリジン）、架橋剤（例えば、ソラレン、マイトマイシンＣ）、ポルフィリン（ＴＰＰＣ４、テキサフィリン、サフィリン）、多環芳香族炭化水素（例えば、フェナジン、ジヒドロフェナジン）、人工エンドヌクレアーゼ（例えば、ＥＤＴＡ）、アルキル化剤、リン酸、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ－４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］_２、ポリアミノ、アルキル、置換アルキル、放射性標識マーカー、酵素、ハプテン（例えば、ビオチン）、輸送／吸収促進剤（例えば、アスピリン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌレアーゼ、タンパク質、例えば、糖タンパク質、又はペプチド、例えば、共リガンドに対して特異的親和性を有する分子、又は抗体、例えば、がん細胞、内皮細胞、骨細胞などの特定の細胞種に結合する抗体、ホルモン及びホルモン受容体、非ペプチド種、例えば、脂質、レクチン、炭水化物、ビタミン、補因子、又は薬物にコンジュゲーションするように設計することができる。核酸分子に適したコンジュゲートは、２０１２年１２月１４日に出願された国際公開第２０１３／０９０６４８号に開示されており、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0077】

本開示によれば、本開示のｓａＲＮＡは、様々な機能を達成するために、ＲＮＡｉ剤、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、長鎖非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）、エンハンサーＲＮＡ、エンハンサー由来ＲＮＡ又はエンハンサー駆動ＲＮＡ（ｅＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ結合部位、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、触媒ＤＮＡ、ｔＲＮＡ、三重らせん形成を誘導するＲＮＡ、アプタマー又はベクターなどのうちの１つ以上とともに投与されてもよいし、これらをさらに含んでもよい。１つ以上のＲＮＡｉ剤、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、長鎖非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ結合部位、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、触媒ＤＮＡ、ｔＲＮＡ、三重らせん形成を誘導するＲＮＡ、アプタマー又はベクターは、少なくとも１つの修飾又は置換を含み得る。

【0078】

いくつかの実施形態では、修飾は、糖位置での核酸の化学置換、リン酸位置での化学置換、及び塩基位置での化学置換から選択される。他の実施形態では、化学修飾は、修飾ヌクレオチドの組み込み；３’キャッピング；高分子量の非免疫原性化合物へのコンジュゲーション；親油性化合物へのコンジュゲーション；及びリン酸骨格へのホスホロチオエートの組み込みから選択される。一実施形態では、高分子量の非免疫原性化合物は、ポリアルキレングリコール、又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。

【0079】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターから共発現されることができるように、導入遺伝子に結合され得る。非限定的な例では、本開示のｓａＲＮＡは、緑色蛍光タンパク質遺伝子（ＧＦＰ）に結合される。

【0080】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、ＤＮＡ又はＲＮＡアプタマーに結合され得、それによって、ｓａＲＮＡ－アプタマーコンジュゲートが生成される。アプタマーは、高い選択性、親和性、及び安定性を備えたオリゴヌクレオチド又はペプチドである。それらは特定の安定した三次元形状をとるため、標的分子に対する高度に特異的で強固な結合を提供する。アプタマーは、小分子、タンパク質、核酸、さらには細胞、組織及び生物などの様々な分子標的に結合するように、ｉｎ ｖｉｔｒｏ選択又は同等のＳＥＬＥＸ（ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇａｎｄｓ ｂｙ ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ（指数関数的濃縮によるリガンドの系統的進化））の繰り返しを通して操作された核酸種であり得る。核酸アプタマーは、古典的なワトソンクリック塩基対以外の相互作用を通じて分子に対して特異的結合親和性を有する。核酸アプタマーは、ファージディスプレイやモノクローナル抗体（ｍＡｂ）によって生成されるペプチドと同様に、選択された標的に特異的に結合することができ、結合を通じて、標的が機能する能力をブロックする。場合によっては、アプタマーはペプチドアプタマーであってもよい。任意の特定の分子標的について、核酸アプタマーは、例えばＳＥＬＥＸによって核酸の組み合わせライブラリから同定され得る。ペプチドアプタマーは、酵母ツーハイブリッド（ｙｅａｓｔ ｔｗｏ ｈｙｂｒｉｄ）システムを使用して同定され得る。したがって、当業者は、肝細胞などの標的細胞に本開示のｓａＲＮＡ又は細胞を送達するための適切なアプタマーを設計することができる。ＤＮＡアプタマー、ＲＮＡアプタマー、及びペプチドアプタマーが考えられる。肝臓特異的アプタマーを使用した肝臓への本開示のｓａＲＮＡの投与が好ましい。

【0081】

本明細書で使用される場合、典型的な核酸アプタマーは、約１０～１５ｋＤａ（２０～４５ヌクレオチド）のサイズであり、少なくともナノモルの親和性でその標的に結合し、近い関係にある標的から区別する。核酸アプタマーは、リボ核酸、デオキシリボ核酸、又はリボ核酸とデオキシリボ核酸の混合物であり得る。アプタマーは、一本鎖リボ核酸、デオキシリボ核酸、又はリボ核酸とデオキシリボ核酸の混合物であり得る。アプタマーは、少なくとも１つの化学修飾を含み得る。

【0082】

アプタマーの適切なヌクレオチド長は、約１５～約１００ヌクレオチド（ｎｔ）の範囲であり、他の様々な実施形態では、１５～３０ｎｔ、２０～２５ｎｔ、３０～１００ｎｔ、３０～６０ｎｔ、２５～７０ｎｔ、２５～６０ｎｔ、４０～６０ｎｔ、２５～４０ｎｔ、３０～４０ｎｔ、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０ｎｔのいずれか、又は４０～７０ｎｔの長さである。しかしながら、配列は、本明細書に記載の距離にある２つの標的とアプタマーの相互作用に適応できるように、十分な柔軟性を持って設計することができる。アプタマーは、ヌクレアーゼ及び他の酵素活性からの保護を提供するようにさらに修飾され得る。アプタマー配列は、当技術分野で知られている任意の適切な方法によって修飾することができる。

【0083】

ｓａＲＮＡ－アプタマーコンジュゲートは、直接化学結合形成、ストレプトアビジンなどのリンカーを介した結合などの、２つの部分を結合するための任意の既知の方法を使用して形成され得る。

【0084】

一実施形態において、本開示のｓａＲＮＡは、抗体に結合され得る。標的細胞表面受容体に対する抗体を生成する方法はよく知られている。本開示のｓａＲＮＡは、既知の方法、例えばＲＮＡキャリアタンパク質を使用して、そのような抗体に結合され得る。次いで、得られた複合体を対象に投与し、受容体媒介エンドサイトーシスを介して標的細胞に取り込ませることができる。

【0085】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、コレステロール部分（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃｉｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８９，８６：６５５３－６５５６）、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９４，４：１０５３－１０６０）、チオエーテル、例えばベリル－５－トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９２，６６０：３０６－３０９；Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９３，３：２７６５－２７７０）、チオコールステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９２，２０：５３３－５３８）、脂肪族鎖、例えばドデカンジオール又はウンデシル残基（Ｓａｉｓｏｎ－Ｂｅｈｍｏａｒａｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１９９１，１０：１１１１－１１１８；Ｋａｂａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ，１９９０，２５９：３２７－３３０；Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，１９９３，７５：４９－５４）、リン脂質、例えば、ジ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロール又はトリエチル－アンモニウム１，２－ジ－Ｏ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロ－３－Ｈホスホネート（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６：３６５１－３６５４；Ｓｈｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９０，１８：３７７７－３７８３）、ポリアミン又はポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ＆Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５，１４：９６９－９７３）、又はアダマンタン酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６：３６５１－３６５４）、パルミチル部分（Ｍｉｓｈｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９５，１２６４：２２９－２３７）、又はオクタデシルアミン又はヘキシルアミノカルボニルオキシコレステロール部分（Ｃｒｏｏｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，１９９６，２７７：９２３－９３７）などの脂質部分とコンジュゲートされ得、そのそれぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0086】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡはリガンドとコンジュゲートされている。１つの非限定的な例において、リガンドは、ＭａｎｏｈａｒａｎらのＵＳ２０１３０１８４３２８に開示されている任意のリガンドであってよく、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。このコンジュゲートは、リガンド－［リンカー］_{オプション}－［テザー］_{オプション}－オリゴヌクレオチド剤の式を有する。オリゴヌクレオチド剤は、ＭａｎｏｈａｒａｎらのＵＳ２０１３０１８４３２８によって開示された式（Ｉ）を有するサブユニットを含んでもよく、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。別の非限定的な例では、リガンドは、ＡｋｉｎｃらのＵＳ２０１３０３１７０８１に開示されている、脂質、タンパク質、ホルモン、又は式ＩＩ～ＸＸＶＩの炭水化物リガンドなどの任意のリガンドであってもよく、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。リガンドは、Ａｋｉｎｃに開示されている式ＸＸＸＩ～ＸＸＸＶの二価又は三価の分岐リンカーを用いてｓａＲＮＡと結合され得る。

【0087】

そのような核酸／脂質コンジュゲートの調製を教示する代表的な米国特許としては、限定するものではないが、米国特許第４，８２８，９７９号；第４，９４８，８８２号；第５，２１８，１０５号；第５，５２５，４６５号；第５，５４１，３１３号；第５，５４５，７３０号；第５，５５２，５３８号；第５，５７８，７１７号，第５，５８０，７３１号；第５，５９１，５８４号；第５，１０９，１２４号；第５，１１８，８０２号；第５，１３８，０４５号；第５，４１４，０７７号；第５，４８６，６０３号；第５，５１２，４３９号；第５，５７８，７１８号；第５，６０８，０４６号；第４，５８７，０４４号；第４，６０５，７３５号；第４，６６７，０２５号；第４，７６２，７７９号；第４，７８９，７３７号；第４，８２４，９４１号；第４，８３５，２６３号；第４，８７６，３３５号；第４，９０４，５８２号；第４，９５８，０１３号；第５，０８２，８３０号；第５，１１２，９６３号；第５，２１４，１３６号；第５，０８２，８３０号；第５，１１２，９６３号；第５，２１４，１３６号；第５，２４５，０２２号；第５，２５４，４６９号；第５，２５８，５０６号；第５，２６２，５３６号；第５，２７２，２５０号；第５，２９２，８７３号；第５，３１７，０９８号；第５，３７１，２４１号，第５，３９１，７２３号；第５，４１６，２０３号，第５，４５１，４６３号；第５，５１０，４７５号；第５，５１２，６６７号；第５，５１４，７８５号；第５，５６５，５５２号；第５，５６７，８１０号；第５，５７４，１４２号；第５，５８５，４８１号；第５，５８７，３７１号；第５，５９５，７２６号；第５，５９７，６９６号；第５，５９９，９２３号；第５，５９９，９２８号及び第５，６８８，９４１号が挙げられ、これらのそれぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0088】

本開示のｓａＲＮＡは、考慮されている特定の方法において効果を有することが知られている他の活性成分と組み合わせて提供され得る。他の活性成分を、本開示のｓａＲＮＡと同時に、別々に、又は順番に投与することができる。一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、異なる標的遺伝子を調節するｓａＲＮＡとともに投与される。

【0089】

一実施形態では、ｓａＲＮＡは、Ｍａｎｏｈａｒａｎらの米国特許第８１０６０２２号及び同第８８２８９５６号に開示されている任意の炭水化物リガンドなどの炭水化物リガンドとコンジュゲートされ（Ａｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。例えば、炭水化物リガンドは、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖、又は多糖であり得る。これらの炭水化物にコンジュゲートされたＲＮＡ剤は、肝臓の実質細胞を標的とし得る。一実施形態では、ｓａＲＮＡは、２つ以上、好ましくは２つ又は３つの炭水化物リガンドとコンジュゲートされる。一実施形態では、ｓａＲＮＡは、１つ以上のガラクトース部分とコンジュゲートされる。別の実施形態では、ｓａＲＮＡは、少なくとも１つ（例えば、２つ又は３つ以上）のラクトース分子とコンジュゲートされる（ラクトースは、ガラクトースに結合したグルコースである）。別の実施形態では、ｓａＲＮＡは、少なくとも１つ（例えば、２つ又は３つ以上）のＮ－アセチル－ガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ－Ａｃ－グルコサミン（ＧｌｕＮＡｃ）、又はマンノース（例えば、マンノース－６－リン酸）とコンジュゲートされる。一実施形態では、ｓａＲＮＡは少なくとも１つのマンノースリガンドとコンジュゲートされ、コンジュゲートされたｓａＲＮＡはマクロファージを標的とする。

【0090】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、遺伝子の発現を阻害する低分子干渉ＲＮＡ又はｓｉＲＮＡとともに投与される。
一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、治療目的で１つ以上の薬物とともに投与される。

【0091】

ＩＩ．本開示の組成物
本開示の一態様は、標的遺伝子を上方制御する低分子活性化ＲＮＡ（ｓａＲＮＡ）と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。

【0092】

製剤、送達、投与、及び用量
医薬製剤は、薬学的に許容される賦形剤をさらに含んでもよく、本明細書で使用される場合、これには、限定するものではないが、所望の特定の剤形に適したあらゆる溶媒、分散媒、希釈剤、又は他の液体ビヒクル、分散助剤又は懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤又は乳化剤、保存剤などが含まれる。医薬組成物を製剤化するための様々な賦形剤及び組成物を調製するための技術は当技術分野で知られている（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１^ｓｔＥｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６を参照；参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。従来の賦形剤媒体の使用は、本開示の範囲内で考慮され得る。ただし、任意の従来の賦形剤媒体が、例えば、望ましくない生物学的効果を生み出すことによって、又は医薬組成物の他の成分と有害な相互作用をすることによって、物質又はその誘導体と適合しない可能性がある場合を除く。

【0093】

いくつかの実施形態では、組成物はヒト、ヒト患者又は対象に投与される。本開示の目的上、「活性成分」という語句は総じて、本明細書に記載のように送達されるｓａＲＮＡを指す。

【0094】

本明細書に提供される医薬組成物の説明は主にヒトへの投与に適した医薬組成物を対象とするが、そのような組成物は一般に他の動物、例えば非ヒト動物、例えばヒト以外の哺乳類への投与にも適していることが当業者には理解されるであろう。ヒトへの投与に適した医薬組成物を様々な動物への投与に適したものにするための修飾はよく理解されており、通常の熟練した獣医薬理学者は、通常の実験程度でそのような修飾を設計及び／又は実施することができる。医薬組成物の投与が想定される対象には、限定するものではないが、ヒト及び／又は他の霊長類；ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、イヌ、マウス、及び／又はラットなどの商業関連の哺乳類を含む哺乳類；及び／又は、家禽、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、及び／又はシチメンチョウなどの商業関連の鳥類を含む鳥類が挙げられる。

【0095】

本明細書に記載の医薬組成物の製剤は、薬理学の分野で既知の方法、又は今後開発される任意の方法によって調製され得る。通常、そのような調製方法は、活性成分を賦形剤及び／又は１つ以上の他の副成分と組み合わせ、その後、必要な場合及び／又は望ましい場合には、製品を所望の単回又は複数回投与単位に分割、成形及び／又は包装するステップを含む。

【0096】

本開示による医薬組成物は、単一の単位用量として、及び／又は複数の単一の単位用量として、バルクで調製、包装、及び／又は販売され得る。本明細書で使用される場合、「単位用量」は、所定量の活性成分を含む医薬組成物の個別の量である。活性成分の量は、通常、対象に投与される活性成分の用量及び／又はそのような用量の都合のよい部分量、例えば、そのような用量の２分の１又は３分の１に等しい。

【0097】

本開示による医薬組成物中の活性成分、薬学的に許容される賦形剤、及び／又は任意の追加成分の相対量は、治療される対象の属性、大きさ、及び／又は状態に応じて、さらには組成物が投与される経路に応じて様々であろう。例として、組成物は、０．１％～１００％、例えば、５～５０％、１～３０％、５～８０％、少なくとも８０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得る。

【0098】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される製剤は、少なくとも１つのｓａＲＮＡを含み得る。非限定的な例として、製剤は、異なる配列を有する１、２、３、４又は５つのｓａＲＮＡを含み得る。一実施形態では、製剤は、異なる配列を有する少なくとも３つのｓａＲＮＡを含む。一実施形態では、製剤は、異なる配列を有する少なくとも５つのｓａＲＮＡを含む。

【0099】

本開示のｓａＲＮＡは、（１）安定性を高めるため；（２）細胞トランスフェクションを高めるため；（３）（例えば、ｓａＲＮＡのデポー製剤からの）徐放又は遅延放出を可能にするため；（４）生体内分布を変更する（例えば、ｓａＲＮＡを特定の組織又は細胞種に標的化する）ため；（５）コードされたタンパク質の翻訳をｉｎ ｖｉｖｏで増加させるため；及び／又は（６）コードされたタンパク質の放出プロファイルをｉｎ ｖｉｖｏで変更するための１つ以上の賦形剤を使用して製剤化することができる。

【0100】

あらゆる溶媒、分散媒、希釈剤、又は他の液体ビヒクルなどの従来の賦形剤、分散助剤又は懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤又は乳化剤、保存剤に加えて、本開示の賦形剤としては、限定するものではないが、リピドイド、リポソーム、脂質ナノ粒子、ポリマー、リポプレックス、コアシェルナノ粒子、ペプチド、タンパク質、ｓａＲＮＡをトランスフェクトした細胞（例えば、対象への移植用）、ヒアルロニダーゼ、ナノ粒子模倣体、及びそれらの組み合わせが挙げられる。したがって、本開示の製剤は、それぞれが一緒になってｓａＲＮＡの安定性を高め、及び／又はｓａＲＮＡによる細胞トランスフェクションを増加させる量で、１つ以上の賦形剤を含むことができる。さらに、本開示のｓａＲＮＡは、自己集合核酸ナノ粒子を使用して製剤化され得る。本開示のｓａＲＮＡとの製剤化に使用され得る、薬学的に許容される担体、賦形剤、及び核酸の送達剤は、２０１２年１２月１４日に出願された国際公開第２０１３／０９０６４８号に開示されており、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0101】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、アニーリングされて活性成分として二本鎖ｓａＲＮＡを形成する、それぞれが２１ヌクレオチドの長さの２つの一本ＲＮＡ鎖を含む。組成物は、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ８．０、１００ｍＭ ＮａＣｌ及び５ｍＭ ＥＤＴＡから構成される塩緩衝液をさらに含む。

【0102】

別の実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、デンドリマーとともに送達され得る。デンドリマーは高度に分岐した高分子である。一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、標的化されたｉｎ ｖｉｖｏ送達のために、構造的に柔軟なポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーと複合体化される。この複合体はｓａＲＮＡ－デンドリマーと呼ばれる。デンドリマーは、高度な分子均一性、狭い分子量分布、特定のサイズ及び形状特性、及び高度に官能化された末端表面を有する。製造プロセスは、中心のイニシエーターコアから始まる一連の繰り返しステップである。その後の各成長ステップは、前の世代よりも分子直径と分子量が大きく、より反応性の高い表面部位を備えた新世代のポリマーを表す。

【0103】

ＰＡＭＡＭデンドリマーは、表面に第一級アミン基を有し、構造の内部にも第三級アミン基を有する効率的なヌクレオチド送達システムである。第一級アミン基はヌクレオチドの結合に関与し、細胞への取り込みを促進する一方で、埋め込まれた第三級アミノ基はエンドソーム内でプロトンスポンジとして機能し、細胞質への核酸の放出を促進する。これらのデンドリマーは、デンドリマーによって運ばれるｓａＲＮＡをリボヌレアーゼ分解から保護し、効率的な遺伝子ターゲティングのためにエンドサイトーシスを介して長期間にわたってｓａＲＮＡの実質的な放出を達成する。これらのナノ粒子のｉｎ ｖｉｖｏ有効性は以前に評価されており、生体内分布研究により、デンドリマーが末梢血単核細胞に優先的に蓄積し、識別可能な毒性なしに生存することが示されている（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒ．２０１１ Ｖｏｌ．１９，２２２８－２２３８を参照。その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＰＡＭＡＭデンドリマーは、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）コア、ジアミノブタン（ＤＡＢ）コア、シスタミンコア、ジアミノヘキサン（ＨＥＸ）コア、ジアモノドデカン（ｄｉａｍｏｎｏｄｏｄｅｃａｎｅ）（ＤＯＤＥ）コア、又はエチレンジアミン（ＥＤＡ）コアを含み得る。一実施形態では、ＰＡＭＡＭデンドリマーは、ＴＥＡコア又はＤＡＢコアを含む。

【0104】

リピドイド
リピドイドの合成は広範囲に記載されており、これらの化合物を含む製剤は、オリゴヌクレオチド又は核酸の送達に特に適している（Ｍａｈｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ．２０１０ ２１：１４４８－１４５４；Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ．２０１０ ２６７：９－２１；Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００８ ２６：５６１－５６９；Ｌｏｖｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１０ １０７：１８６４－１８６９；Ｓｉｅｇｗａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１１ １０８：１２９９６－３００１；これらはすべて、その全体が本明細書に組み込まれる）。

【0105】

これらのリピドイドは、げっ歯類や非ヒト霊長類に二本鎖低分子干渉ＲＮＡ分子を効果的に送達するために使用されており（Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００８ ２６：５６１－５６９；Ｆｒａｎｋ－Ｋａｍｅｎｅｔｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００８ １０５：１１９１５－１１９２０；Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００９ １７：８７２－８７９；Ｌｏｖｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１０ １０７：１８６４－１８６９；Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１ ２９：１００５－１０１０を参照；これらすべてはその全体が本明細書に組み込まれる）、本開示は、ｓａＲＮＡの送達におけるそれらの製剤及び使用を想定している。これらのリピドイドを含む複合体、ミセル、リポソーム、又は粒子を調製することができるため、局所的及び／又は全身的な投与経路を介したリピドイド製剤の注射後、ｓａＲＮＡを効果的に送達することができる。ｓａＲＮＡのリピドイド複合体は、静脈内、筋肉内、又は皮下経路を含むがこれらに限定されない様々な手段で投与できる。

【0106】

核酸のｉｎ ｖｉｖｏ送達は、製剤組成、粒子ＰＥＧ化の性質、負荷の程度、オリゴヌクレオチドと脂質の比、粒子径（Ａｋｉｎｃ ｅｔａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００９ １７：８７２－８７９；その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を含むがこれに限定されない生物物理学的パラメーターなどを含むがこれらに限定されない多くのパラメーターによって影響を受け得る。一例として、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）脂質のアンカー鎖長の小さな変化が、ｉｎ ｖｉｖｏでの有効性に重大な影響を与え得る。ペンタ［３－（１－ラウリルアミノプロピオニル）］－トリエチレンテトラミン塩酸塩（ＴＥＴＡ－５ＬＡＰ；別名９８Ｎ１２－５、Ｍｕｒｕｇａｉａｈ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４０１：６１（２０１０）を参照；その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、Ｃ１２－２００（誘導体及びバリアントを含む）、及びＭＤ１を含むがこれに限定されない様々なリピドイドとの製剤を、ｉｎ ｖｉｖｏ活性について試験することができる。

【0107】

本明細書において「９８Ｎ１２－５」と呼ばれるリピドイドは、Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００９ １７：８７２－８７９に開示されており、その内容は参照によりその全体が組み込まれる。

【0108】

本明細書において「Ｃ１２－２００」と呼ばれるリピドイドは、Ｌｏｖｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１０ １０７：１８６４－１８６９及びＬｉｕ ａｎｄ Ｈｕａｎｇ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ．２０１０ ６６９－６７０に開示されており；両方の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。リピドイド製剤は、ｓａＲＮＡに加えて、３つ又は４つ又はそれ以上の成分を含む粒子を含むことができる。一例として、特定のリピドイドを含む製剤には、９８Ｎ１２－５が含まれるが、これに限定されず、４２％のリピドイド、４８％のコレステロール及び１０％のＰＥＧ（Ｃ１４アルキル鎖長）を含み得る。別の例として、特定のリピドイドを含む製剤には、Ｃ１２－２００が含まれるが、これに限定されず、５０％のリピドイド、１０％のジステロイルホスファチジルコリン、３８．５％のコレステロール、及び１．５％のＰＥＧ－ＤＭＧを含み得る。

【0109】

一実施形態では、全身静脈内投与のためにリピドイドとともに製剤化されたｓａＲＮＡは、肝臓を標的とすることができる。例えば、ｓａＲＮＡを用い、４２％の９８Ｎ１２－５、４８％のコレステロール、及び１０％のＰＥＧ脂質の脂質のモル組成を含み、総脂質対ｓａＲＮＡの最終重量比が約７．５対１であり、ＰＥＧ脂質上のアルキル鎖長がＣ１４であり、約５０～６０ｎｍの平均粒径を有する最終的な最適化静脈内投与製剤は、肝臓への分布が９０％を超える製剤をもたらし得る。（Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００９ １７：８７２－８７９を参照；その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。別の例では、Ｃ１２－２００（公開された国際公開第２０１０１２９７０９号を参照。その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）リピドイドを使用する静脈内投与製剤は、Ｃ１２－２００／ジステロイルホスファチジルコリン／コレステロール／ＰＥＧ－ＤＭＧが５０／１０／３８．５／１．５のモル比、総脂質対核酸の重量比７：１、及び平均粒径８０ｎｍを有し得、ｓａＲＮＡの送達に効果的であり得る（Ｌｏｖｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１０ １０７：１８６４－１８６９を参照。その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0110】

別の実施形態では、ＭＤ１リピドイド含有製剤は、ｉｎ ｖｉｖｏで肝細胞にｓａＲＮＡを効果的に送達するために使用され得る。筋肉内経路用又は皮下経路用に最適化されたリピドイド製剤の特性は、標的細胞の種類と細胞外マトリックスを通って血流に拡散する製剤の能力に応じて大きく異なり得る。内皮細胞小孔のサイズのため、効果的な肝細胞送達には１５０ｎｍ未満の粒径が望ましい場合があるが（Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００９ １７：８７２－８７９を参照。その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、内皮細胞、骨髄細胞、及び筋細胞を含むがこれらに限定されない他の細胞種に製剤を送達するためのリピドイドと製剤化されたｓａＲＮＡの使用は、同様のサイズ制限をされなくてもよい。

【0111】

骨髄細胞及び内皮などの他の非肝細胞にｉｎ ｖｉｖｏでｓｉＲＮＡを送達するためのリピドイド製剤の使用が報告されている（Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００８ ２６：５６１－５６９；Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１ ２９：１００５－１０１０；Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ．Ａｄｖ．Ｆｕｎｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２００９ １９：３１１２－３１１８；８ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｕｄａｈ Ｆｏｌｋｍａｎ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａ Ｏｃｔｏｂｅｒ ８－９，２０１０；それぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。単球などの骨髄細胞への効果的な送達では、リピドイド製剤は同様の成分モル比を有し得る。ジステロイルホスファチジルコリン、コレステロール及びＰＥＧ－ＤＭＧを含むがこれらに限定されないリピドイド及び他の成分の異なる比率を使用して、肝細胞、骨髄細胞、筋肉細胞などを含むがこれらに限定されない様々な細胞種への送達のためにｓａＲＮＡの製剤を最適化することができる。例えば、成分のモル比としては、５０％のＣｌ２－２００、１０％のジステロイルホスファチジルコリン、３８．５％のコレステロール、及び１．５％のＰＥＧ－ＤＭＧが挙げられるが、これに限定されない（Ｌｅｕｓｅｈｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２０１１ ２９：１００５－１０１０参照；その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。皮下送達又は筋肉内送達のいずれかを介して細胞（脂肪細胞及び筋細胞など、ただしこれらに限定されない）に核酸を局所送達するためのリピドイド製剤の使用において、全身送達に望ましい製剤成分のすべてが必要という訳ではない場合があり、したがって、リピドイド及びｓａＲＮＡのみを含み得る。

【0112】

リポソーム、リポプレックス、及び脂質ナノ粒子
本開示のｓａＲＮＡは、１つ以上のリポソーム、リポプレックス、又は脂質ナノ粒子を使用して製剤化することができる。一実施形態では、ｓａＲＮＡの医薬組成物はリポソームを含む。リポソームは、人工的に調製された小胞であり、主に脂質二重層で構成されており、栄養素及び医薬製剤を投与するための送達媒体として使用され得る。リポソームは、限定するものではないが、直径が数百ナノメートルであり得、狭い水性区画によって分離された一連の同心二重層を含むことがある多重薄層小胞（ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ ｖｅｓｉｃｌｅ：ＭＬＶ）、直径が５０ｎｍ未満であり得る小さい単細胞小胞（ｓｍａｌｌ ｕｎｉｃｅｌｌｕｌａｒ ｖｅｓｉｃｌｅ：ＳＵＶ）、直径が５０～５００ｎｍの間であり得る大きい単層小胞（ｌａｒｇｅ ｕｎｉｃｅｌｌｕｌａｒ ｖｅｓｉｃｌｅ：ＬＵＶ）など、様々なサイズのものがあり得る。リポソームの設計には、不健康な組織へのリポソームの付着を改善するため、又はエンドサイトーシスなどのイベント（これに限定されない）を活性化するために、オプソニン又はリガンドが含まれ得るが、これらに限定されない。リポソームは、医薬製剤の送達を改善するために、低い又は高いｐＨを有し得る。

【0113】

リポソームの形成は、閉じ込められた医薬製剤やリポソーム成分、脂質小胞が分散する媒体の性質、閉じ込められた物質の有効濃度及びその潜在的な毒性などであるがこれらに限定されない物理化学的特性、小胞の適用及び／又は送達中に関与する追加プロセス、目的の用途に対する小胞の最適化サイズ、多分散性及び保存期間、及びバッチ間の再現性及び安全で効率的なリポソーム製品の大規模な製造の可能性に依存し得る。

【0114】

一実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、限定するものではないが、１，２－ジオレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）リポソーム、Ｍａｒｉｎａ Ｂｉｏｔｅｃｈ（ワシントン州ボセル）製のＤｉＬａ２リポソーム、１，２－ジリノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、及びＭＣ３（ＵＳ２０１００３２４１２０；その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）及び、小分子薬物、例えば、限定するものではないが、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（ペンシルベニア州ホーシャム）のＤＯＸＩＬ（登録商標））を送達することができるリポソームから形成されるものなどのリポソームを含み得る。

【0115】

一実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、これまでに記載され、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでのオリゴヌクレオチド送達に適切であることが示されている（Ｗｅｅｌｅｒ ｅｔａｌ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ．１９９９ ６：２７１－２８１；Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ．１９９９ ６：１４３８－１４４７；Ｊｅｆｆｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．２００５ ２２：３６２－３７２；Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５ ２：１００２－１００７；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２００６ ４４１：１１１－１１４；Ｈｅｙｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｏｎｔｒ Ｒｅｌ．２００５ １０７：２７６－２８７；Ｓｅｍｐｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０１０ ２８：１７２－１７６；Ｊｕｄｇｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２００９ １１９：６６１－６７３；ｄｅＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００８ １９：１２５－１３２を参照；それぞれの内容は、その全体が本明細書に組み込まれる）安定化プラスミド脂質粒子（ＳＰＬＰ）又は安定化核酸脂質粒子（ＳＮＡＬＰ）の合成から形成されるものなどのリポソームを制限なく含み得る。Ｗｈｅｅｌｅｒらによる独自の製造方法は洗剤透析法であり、後にＪｅｆｆｓらによって改良された。これは自発的小胞形成法と呼ばれる。リポソーム製剤は、ｓａＲＮＡに加えて３～４つの脂質成分から構成され得る。一例として、リポソームは、Ｊｅｆｆｓらによって説明されているように、５５％のコレステロール、２０％のジステロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、１０％のＰＥＧ－Ｓ－ＤＳＧ、及び１５％の１，２－ジオレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）を含み得るが、これに限定されない。別の例では、特定のリポソーム製剤は、４８％のコレステロール、２０％のＤＳＰＣ、２％のＰＥＧ－ｃ－ＤＭＡ、及び３０％のカチオン性脂質を含み得るが、これに限定されない。ここで、カチオン性脂質は、Ｈｅｙｅｓらによって説明されているように、１，２－ジステアロキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＳＤＭＡ）、ＤＯＤＭＡ、ＤＬｉｎ－ＤＭＡ、又は１，２－ジリノレニルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）であり得る。別の例では、核酸－脂質粒子は、ＭａｃｌａｃｈｌａｎらのＷＯ２００９１２７０６０（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているように、粒子中に存在する全脂質の約５０ｍｏｌ％～約８５ｍｏｌ％を構成するカチオン性脂質；粒子中に存在する総脂質の約１３ｍｏｌ％～約４９．５ｍｏｌ％を構成する非カチオン性脂質；及び粒子中に存在する総脂質の約０．５ｍｏｌ％～約２ｍｏｌ％を構成する、粒子の凝集を阻害するコンジュゲート脂質を含み得る。別の例では、核酸－脂質粒子は、ＭａｃｌａｃｈｌａｎらのＵＳ２００６００８９１０に開示されている任意の核酸－脂質粒子であってもよく、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。非限定的な例として、核酸－脂質粒子は、式１のカチオン性脂質、非カチオン性脂質、及び粒子の凝集を阻害するコンジュゲート脂質を含み得る。

【0116】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、官能化脂質二重層間に架橋を有し得る脂質小胞内に製剤化され得る。
一実施形態では、リポソームは、ＢａｌｌｙらのＵＳ５５９５７５６に開示されている糖修飾脂質を含んでもよく、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。脂質は、約１０モルパーセントの量のガングリオシド及びセレブロシドであり得る。

【0117】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、カチオン性脂質を含むリポソーム中に製剤化され得る。リポソームは、国際公開第２０１３００６８２５号に記載されているように、カチオン性脂質中の窒素原子：ｓａＲＮＡ中のリン酸のモル比（Ｎ：Ｐ比）が１：１～２０：１であってもよく、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。別の実施形態では、リポソームは、２０：１を超える、又は１：１未満のＮ：Ｐ比を有し得る。

【0118】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、脂質－ポリカチオン複合体に製剤化され得る。脂質－ポリカチオン複合体の形成は、当技術分野で知られている方法、及び／又は米国特許出願公開第２０１２０１７８７０２号に記載されている方法によって達成され得、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。非限定的な例として、ポリカチオンには、ポリリジン、ポリオルニチン及び／又はポリアルギニンなどであるがこれらに限定されないカチオン性ペプチド又はポリペプチド、及び国際公開第２０１２０１３３２６号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているカチオン性ペプチドが含まれ得る。別の実施形態では、ｓａＲＮＡは、コレステロール又はジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）などであるがこれらに限定されない中性脂質をさらに含み得る脂質－ポリカチオン複合体に製剤化され得る。

【0119】

リポソーム製剤は、カチオン性脂質成分の選択、カチオン性脂質の飽和度、ＰＥＧ化の性質、全成分の比率、及びサイズなどの生物物理学的パラメーター（ただし、これらに限定されない）によって影響を受け得る。Ｓｅｍｐｌｅらによる一例では（Ｓｅｍｐｌｅ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０１０ ２８：１７２－１７６；その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、リポソーム製剤は、５７．１％のカチオン性脂質、７．１％のジパルミトイルホスファチジルコリン、３４．３％のコレステロール、及び１．４％のＰＥＧ－ｃ－ＤＭＡで構成されていた。

【0120】

いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤中のＰＥＧの比率を高め又は低下させることができ、及び／又はＰＥＧ脂質の炭素鎖長をＣ１４からＣ１８に改変することで、ＬＮＰ製剤の薬物動態及び／又は体内分布を変化させることができる。非限定的な例として、ＬＮＰ製剤は、カチオン性脂質、ＤＳＰＣ及びコレステロールと比較して、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧの脂質モル比１～５％を含み得る。別の実施形態では、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧは、ＰＥＧ－ＤＳＧ（１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロール、メトキシポリエチレングリコール）又はＰＥＧ－ＤＰＧ（１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロール、メトキシポリエチレングリコール）などであるがこれらに限定されないＰＥＧ脂質で置換することができる。カチオン性脂質は、ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ、ＤＬｉｎ－ＤＭＡ、Ｃ１２－２００及びＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡなどであるがこれらに限定されない当技術分野で知られている任意の脂質から選択され得る。

【0121】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２１７０９３０号に記載の脂質ナノ粒子などの脂質ナノ粒子中に製剤化され得る。

【0122】

一実施形態では、本開示の製剤に使用され得るカチオン性脂質は、国際公開第２０１２０４０１８４号、第２０１１１５３１２０号、第２０１１１４９７３３号、第２０１１０９０９６５号、第２０１１０４３９１３号、第２０１１０２２４６０号、第２０１２０６１２５９号、第２０１２０５４３６５号、第２０１２０４４６３８号、第２０１００８０７２４号、第２０１０２１８６５及び第２００８１０３２７６号、米国特許第７，８９３，３０２号、第７，４０４，９６９号及び第８，２８３，３３３号、ならびに米国特許出願公開第２０１０００３６１１５号及び第２０１２０２０２８７１号（それぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のカチオン性脂質（ただしこれらに限定されない）から選択され得る。別の実施形態では、カチオン性脂質は、国際公開第２０１２０４０１８４号、第２０１１１５３１２０号、第２０１１１４９７３３号、第２０１１０９０９６５号、第２０１１０４３９１３号、第２０１１０２２４６０号、第２０１２０６１２５９号、第２０１２０５４３６５号及び第２０１２０４４６３８号（それぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載の式Ａ（ただし、これらに限定されない）から選択され得る。さらに別の実施形態では、カチオン性脂質は、国際公開第２００８１０３２７６号の式ＣＬＩ－ＣＬＸＸＩＸ、米国特許第７，８９３，３０２号の式ＣＬＩ－ＣＬＸＸＩＸ、米国特許第７，４０４，９６９号の式ＣＬＩ－ＣＬＸＸＸＸＩＩ、及び米国特許出願公開第２０１０００３６１１５号の式Ｉ～ＶＩ（それぞれの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）（ただし、これらに限定されない）から選択され得る。さらに別の実施形態では、カチオン性脂質は、Ｇａｕｃｈｅｒｏｎらの米国特許第７２２３８８７号に開示されているカチオン性脂質などの多価カチオン性脂質であってもよく、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。カチオン性脂質は、Ｇａｕｃｈｅｒｏｎらの米国特許第７２２３８８７号に記載されているように、２つの第四級アミン基を含む正に帯電した頭部基と、４つの炭化水素鎖を含む疎水性部分とを有し得、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。さらに別の実施形態では、カチオン性脂質は、ＭａｉｅｒらのＵＳ２０１３０１９５９２０に開示されている生分解性脂質のように生分解性であり得、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。カチオン性脂質は、ＭａｉｅｒらのＵＳ２０１３０１９５９２０号の式Ｉ～ＩＶに記載されているように、カチオン性脂質の脂質部分に位置する１つ以上の生分解性基を有してもよく、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0123】

非限定的な例として、カチオン性脂質は、（２０Ｚ，２３Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナコサ－２０，２３－ジエン－１０－アミン、（１７Ｚ，２０Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメミルヘキサコサ－１７，２０－ジエン－９－アミン、（１Ｚ，１９Ｚ）－Ｎ５Ｎ－ジメチルペンタコサ－１６，１９－ジエン－８－アミン、（１３Ｚ，１６Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルドコサ－１３，１６－ジエン－５－アミン、（１２Ｚ，１５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘニコサ－１２，１５－ジエン－４－アミン、（１４Ｚ，１７Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルトリコサ－１４，１７－ジエン－６－アミン、（１５Ｚ，１８Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルテトラコサ－１５，１８－ジエン－７－アミン、（１８Ｚ，２１Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘプタコサ－１８，２１－ジエン－１０－アミン、（１５Ｚ，１８Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルテトラコサ－１５，１８－ジエン－５－アミン、（１４Ｚ，１７Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルトリコサ－１４，１７－ジエン－４－アミン、（１９Ｚ，２２Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルオクタコサ－１９，２２－ジエン－９－アミン、（１８Ｚ，２１Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘプタコサ－１８，２１－ジエン－８－アミン、（１７Ｚ，２０Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘキサコサ－１７，２０－ジエン－７－アミン、（１６Ｚ，１９Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルペンタコサ－１６，１９－ジエン－６－アミン、（２２Ｚ，２５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘントリアコンタ－２２，２５－ジエン－１０－アミン、（２１Ｚ，２４Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルトリアコンタ－２１，２４－ジエン－９－アミン、（１８Ｚ）－Ｎ、Ｎ－ジメチルヘプタコス－１８－エン－１０－アミン、（１７Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘキサコス－１７－エン－９－アミン、（１９Ｚ，２２Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルオクタコサ－１９，２２－ジエン－７－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルヘプタコサン－１０－アミン、（２０Ｚ，２３Ｚ）－Ｎ－エチル－Ｎ－メチルノナコサ－２０，２３－ジエン－１０－アミン、１－［（１１Ｚ，１４Ｚ）－１－ノニリコサ－１１，１４－ジエン－１－イル］ピロリジン、（２０Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘプタコス－２０－エン－１０－アミン、（１５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルエプタコス－１５－エン－１０－アミン、（１４Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナコス－１４－エン－１０－アミン、（１７Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナコス－１７－エン－１０－アミン、（２４Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルトリトリアコント－２４－エン－１０－アミン、（２０Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナコス－２０－エン－１０－アミン、（２２Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘントリアコント－２２－エン－１０－アミン、（１６Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルペンタコス－１６－エン－８－アミン、（１２Ｚ，１５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２－ノニルヘニコサ－１２，１５－ジエン－１－アミン、（１３Ｚ，１６Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－ノニルドコサ－１３，１６－ジエン－１－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］エプタデカン－８－アミン、１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－ヘキシルシクロプロピル］－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナデカン－１０－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ノナデカン－１０－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－２１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ヘニコサン－１０－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｓ）－２－｛［（１Ｒ，２Ｒ）－２－ペンチルシクロプロピル］メチル｝シクロプロピル］ノナデカン－１０－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ヘキサデカン－８－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ウンデシルシクロプロピル］テトラデカン－５－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－｛７－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ヘプチル｝ドデカン－１－アミン、１－［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヘプチルシクロプロピル］－Ｎ，Ｎ－ジメチルオクタデカン－９－アミン、１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－デシルシクロプロピル］－Ｎ，Ｎ－ジメチルペンタデカン－６－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ペンタデカン－８－アミン、Ｒ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、Ｓ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、１－｛２－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］－１－［（オクチルオキシ）メチル］エチル｝ピロリジン、（２Ｓ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］－３－［（５Ｚ）－オクト－５－エン－１－イルオキシ］プロパン－２－アミン、１－｛２－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］－１－［（オクチルオキシ）メチル］エチル｝アゼチジン、（２Ｓ）－１－（ヘキシルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－２－アミン、（２Ｓ）－１－（ヘプチルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－２－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－（ノニルオキシ）－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－２－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（９Ｚ）－オエタデカ－９－エン－１－イルオキシ］－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン；（２Ｓ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（６Ｚ，９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－６，９，１２－トリエン－１－イルオキシ］－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、（２Ｓ）－１－［（１１Ｚ，１４Ｚ）－イコサ－１１，１４－ジエン－１－イルオキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－（ペンチルオキシ）プロパン－２－アミン、（２Ｓ）－１－（ヘキシルオキシ）－３－［（１１Ｚ，１４Ｚ）－イコサ－１１，１４－ジエン－１－イルオキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－２－アミン、１－［（１１Ｚ，１４Ｚ）－イコサ－１１，１４－ジエン－１－イルオキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、１－［（１３Ｚ，１６Ｚ）－ドコサ－１３，１６－ジエン－１－イルオキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、（２Ｓ）－１－［（１３Ｚ，１６Ｚ）－ドコサ－１３，１６－ジエン－１－イルオキシ］－３－（ヘキシルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－２－アミン、（２Ｓ）－１－［（１３Ｚ）－ドコス－１３－エン－１－イルオキシ］－３－（ヘキシルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－２－アミン、１－［（１３Ｚ））－ドコス－１３－エン－１－イルオキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン，１－［（９Ｚ）－ヘキサデカ－９－エン－１－イルオキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、（２Ｒ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｈ（１－メトイルオクチル）オキシ］－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－２－アミン、（２Ｒ）－１－［（３，７－ジメチルオクチル）オキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－２－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－（オクチルオキシ）－３－（｛８－［（１Ｓ，２Ｓ）－２－｛［（１Ｒ，２Ｒ）－２－ペンチルシクロプロピル］メチル｝シクロプロピル］オクチル｝オキシ）プロパン－２－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－｛［８－（２－オクリルシクロプロピル）オクチル］オキシ｝－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン及び（１１Ｅ，２０Ｚ，２３Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナコサ－１１，２０，２－トリエン－１０－アミン又はその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体から選択され得る。

【0124】

一実施形態では、脂質は、国際公開第２０１２１７０８８９号に記載されているような切断可能な脂質であってもよく、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0125】

一実施形態では、本明細書に記載のナノ粒子は、本明細書に記載の、及び／又は当技術分野で知られている少なくとも１つのカチオン性ポリマーを含み得る。
一実施形態では、カチオン性脂質は、当技術分野で知られている方法によって、及び／又は国際公開第２０１２０４０１８４号、同第２０１１１５３１２０号、同第２０１１１４９７３３号、同第２０１１０９０９６５号、同第２０１１０４３９１３号、同第２０１１０２２４６０号、同第２０１２０６１２５９号、同第２０１２０５４３６５号、同第２０１２０４４６３８号、同第２０１００８０７２４号及び同第２０１０２１８６５号（それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている方法によって合成され得る。

【0126】

一実施形態では、ｓａＲＮＡのＬＮＰ製剤は、３％の脂質モル比でＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧを含有し得る。別の実施形態では、ｓａＲＮＡのＬＮＰ製剤は、１．５％の脂質モル比でＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧを含有し得る。

【0127】

一実施形態では、ｓａＲＮＡの医薬組成物は、国際公開第２０１２０９９７５５号に記載されているＰＥＧ化脂質のうちの少なくとも１つを含んでもよく、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0128】

一実施形態では、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ－ＤＭＧ２０００（１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン－Ｎ－［メトキシ（ポリエチレングリコール）－２０００）を含み得る。一実施形態では、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ－ＤＭＧ２０００、当技術分野で知られているカチオン性脂質、及び少なくとも１つの他の成分を含有し得る。別の実施形態では、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ－ＤＭＧ２０００、当技術分野で知られているカチオン性脂質、ＤＳＰＣ、及びコレステロールを含有し得る。非限定的な例として、ＬＮＰ製剤はＰＥＧ－ＤＭＧ２０００、ＤＬｉｎ－ＤＭＡ、ＤＳＰＣ及びコレステロールを含み得る。別の非限定的な例として、ＬＮＰ製剤は、ＰＥＧ－ＤＭＧ２０００、ＤＬｉｎ－ＤＭＡ、ＤＳＰＣ及びコレステロールを２：４０：１０：４８のモル比で含有し得る（例えば、Ｇｅａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｏｎｖｉｒａｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｓｅｌｆ－ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ ＲＮＡ ｖａｃｃｉｎｅｓ（自己増幅ＲＮＡワクチンの非ウイルス送達），ＰＮＡＳ ２０１２；ＰＭＩＤ：２２９０８２９４を参照；その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。別の非限定的な例として、本明細書に記載されるｓａＲＮＡは、米国特許出願公開第２０１２０２０７８４５号（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるように、非経口経路によって送達されるナノ粒子中に製剤化され得る。カチオン性脂質はまた、ＭａｎｏｈａｒａｎらのＵＳ２０１３０１５６８４５及びＭａｎｏｈａｒａｎらのＵＳ２０１３０１２９７８５、ＷａｓａｎらのＷＯ２０１２０４７６５６、ＣｈｅｎらのＷＯ２０１０１４４７４０、ＡｎｓｅｌｌらのＷＯ２０１３０８６３２２、又はＭａｎｏｈａｒａｎらのＷＯ２０１２０１６１８４（それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されているカチオン性脂質であり得る。

【0129】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、ＨｏｐｅらのＵＳ２０１３００１７２２３に記載されているような第１及び第２のカチオン性脂質などの複数のカチオン性脂質を用いて製剤化することができ、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。第１のカチオン性脂質は第１の特性に基づいて選択することができ、第２のカチオン性脂質は第２の特性に基づいて選択することができ、それらの特性はＵＳ２０１３００１７２２３に概説されているように決定することができ、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。一実施形態では、第１及び第２の特性は相補的である。

【0130】

別の実施形態では、ｓａＲＮＡは、１つ以上のカチオン性脂質及び１つ以上の第２の脂質、ならびに１つ以上の核酸を含む脂質粒子とともに製剤化することができ、ここで、脂質粒子は、Ｃｕｌｌｉｓらの米国特許出願公開第２０１２０２７６２０９号（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているように、固体コアを含む。

【0131】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、ＳａｔｉｓｈｃｈａｎｄｒａｎらのＥＰ２２９８３５８に記載されているように、水中油型（ｏ／ｗ）エマルション中でカチオン性両親媒性物質と複合体化されてもよく、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。カチオン性両親媒性物質は、カチオン性脂質、修飾又は未修飾のスペルミン、ブピバカイン、又は塩化ベンザルコニウムであってもよく、油は植物油又は動物油であってもよい。非限定的な例として、核酸－カチオン性両親媒性物質複合体の少なくとも１０％が水中油型エマルションの油相中にある（例えば、Ｓａｔｉｓｈｃｈａｎｄｒａｎらの欧州特許出願公開第２２９８３５８号に記載の複合体を参照。その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0132】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、カチオン性化合物及び中性脂質の混合物を含む組成物を用いて製剤化され得る。非限定的な例として、カチオン性化合物は、ＡｎｓｅｌｌらのＷＯ１９９９０１０３９０に開示されている式（Ｉ）であってもよく、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれ、中性脂質は、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、及びスフィンゴミエリンからなる群から選択され得る。別の非限定的な例では、脂質製剤は、ＡｋｉｎｅらのＵＳ２０１２０１０１１４８に開示されている式Ａのカチオン性脂質、中性脂質、ステロール、及びＰＥＧ又はＰＥＧ修飾脂質を含んでもよく、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0133】

一実施形態では、ＬＮＰ製剤は、国際公開第２０１１１２７２５５号又は同２００８１０３２７６号に記載の方法によって製剤化することができ、それぞれの全体が参照により本明細書に組み込まれる。非限定的な例として、本開示のｓａＲＮＡは、ＷＯ２０１１１２７２５５及び／又はＷＯ２００８１０３２７６に記載されている脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤のいずれかにカプセル化され得る。それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0134】

一実施形態では、本明細書に記載のＬＮＰ製剤は、ポリカチオン性組成物を含み得る。非限定的な例として、ポリカチオン性組成物は、米国特許出願公開第２００５０２２２０６４号（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の式１～６０から選択され得る。別の実施形態では、ポリカチオン性組成物を含むＬＮＰ製剤は、本明細書に記載されるｓａＲＮＡのｉｎ ｖｉｖｏ及び／又はｉｎ ｖｉｔｒｏの送達に使用され得る。

【0135】

一実施形態では、本明細書に記載のＬＮＰ製剤は、透過性増強剤分子をさらに含んでもよい。非限定的な透過性増強剤分子は、米国特許出願公開第２００５０２２２０６４号に記載されており、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0136】

一実施形態では、医薬組成物は、ＤｉＬａ２リポソーム（Ｍａｒｉｎａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、ワシントン州ボセル）、ＳＭＡＲＴＩＣＬＥＳ（登録商標）／ＮＯＶ３４０（Ｍａｒｉｎａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、ワシントン州ボセル）、中性ＤＯＰＣ（１、２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン）ベースのリポソーム（例えば、卵巣がんに対するｓｉＲＮＡ送達（Ｌａｎｄｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｙ ２００６ ５（１２）１７０８－１７１３）；その内容は参照によりその全体ｇａ本明細書に組み込まれる）及びヒアルロン酸でコーティングされたリポソーム（Ｑｕｉｅｔ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、イスラエル）などであるがこれらに限定されないリポソーム中に製剤化され得る。

【0137】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＰａｎｚｎｅｒのＷＯ２００８０４３５７５及びＥｓｓｌｅｒら（Ｍａｒｉｎａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）のＵＳ８５８０２９７（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されている任意の両性リポソームを用いて製剤化され得る。両性リポソームは、カチオン性両親媒性物質、アニオン性両親媒性物質、及び任意の１つ以上の中性両親媒性物質を含む脂質の混合物を含み得る。両性リポソームは、頭部基が１つ以上の両性基で置換されている両親媒性分子に基づく両性化合物を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｅｓｓｌｅｒら（Ｍａｒｉｎａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）のＵＳ２０１４０２２７３４５（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されているように、医薬組成物は、４～９の間の等電点を有する１つ以上の両性基を含む両性脂質を用いて製剤化され得る。

【0138】

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、Ｐａｎｚｎｅｒら（Ｎｏｖｏｓｏｍ）のＵＳ７３１２２０６（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されているように、ステロール誘導体を含むリポソームを用いて製剤化され得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１つの両親媒性カチオン性脂質、少なくとも１つの両親媒性アニオン性脂質、及び少なくとも１つの中性脂質を含む両性リポソームを用いて製剤化され得るか、又はリポソームは、正電荷及び負電荷の両方を有する少なくとも１つの両親媒性脂質、及び少なくとも１つの中性脂質を含み、Ｐａｎｚｎｅｒら（Ｎｏｖｏｓｏｍ）の米国特許第７７８０９８３号（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されているように、このリポソームはｐＨ４．２及びｐＨ７．５で安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＰａｎｚｎｅｒらのＵＳ２０１１００７６３２２（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に教示されている脂質の血清安定性混合物を含むリポソームを用いて製剤化され得る。それらは、本開示のｓａＲＮＡをカプセル化することができる。脂質混合物は、ホスファチジルコリンとホスファチジルエタノールアミンを約０．５～約８の範囲の比率で含む。脂質混合物はまた、混合物が両性であり、ｐＨ７．４で負に帯電又は中性であり、ｐＨ４で正に帯電するように、ｐＨ感受性のアニオン性及びカチオン性両親媒性物質を含み得る。薬物／脂質比を調整することで、リポソームを体内の特定の器官又は他の部位に向けることができる。いくつかの実施形態では、カーゴとして本開示のｓａＲＮＡがロードされたリポソームは、ＰａｎｚｎｅｒらのＵＳ２０１２００２１０４２（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示された方法によって調製される。この方法は、ポリアニオン性活性剤の水溶液と１つ以上の両親媒性物質のアルコール溶液とを混合するステップと、前記混合物を酸性ｐＨに緩衝するステップとを含み、上記１つ以上の両親媒性物質は酸性ｐＨで両性リポソームを形成しやすく、それによって、上記活性剤を封入した懸濁液中で両性リポソームを形成する。

【0139】

ナノ粒子製剤は、炭水化物担体及び核酸分子（例えば、ｓａＲＮＡ）を含む炭水化物ナノ粒子であり得る。非限定的な例として、炭水化物担体には、限定するものではないが、無水物修飾フィトグリコーゲン又はグリコーゲン型材料、フィトグリコーゲンオクテニルコハク酸塩、フィトグリコーゲンβデキストリン、無水物修飾フィトグリコーゲンβデキストリンが含まれ得る。（例えば、国際公開第２０１２１０９１２１号を参照。その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0140】

脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質を急速除去（ｒａｐｉｄｌｙ ｅｌｉｍｉｎａｔｅｄ）脂質ナノ粒子（ｒｅＬＮＰ）として知られる生分解性カチオン性脂質に置き換えることによって改善され得る。ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ、ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡなどであるがこれらに限定されないイオン化可能なカチオン性脂質は、時間の経過とともに血漿及び組織に蓄積することが示されており、潜在的な毒性源となる可能性がある。急速に除去される脂質の急速な代謝により、ラットにおける脂質ナノ粒子の忍容性と治療指数が、１ｍｇ／ｋｇ用量から１０ｍｇ／ｋｇ用量まで一桁改善される。酵素的に分解されたエステル結合を含めることで、ｒｅＬＮＰ製剤の活性を維持しながら、カチオン性成分の分解及び代謝プロファイルを改善することができる。エステル結合は脂質鎖の内部に位置することも、脂質鎖の末端に位置することもある。内部のエステル結合は、脂質鎖内の任意の炭素を置き換えることができる。

【0141】

一実施形態では、ｓａＲＮＡは、Ｓｉｌｅｎｃｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（ロンドン、英国）のＡＴＵＰＬＥＸ（商標）システム、ＤＡＣＣシステム、ＤＢＴＣシステム及び他のｓｉＲＮＡ－リポプレックス技術、ＳＴＥＭＧＥＮＴ製のＳＴＥＭＦＥＣＴ（商標）などであるがこれらに限定されないリポプレックスとして製剤化され得る。（マサチューセッツ州ケンブリッジ）、及びポリエチレンイミン（ＰＥＩ）又はプロタミンに基づく核酸の標的化及び非標的化送達（Ａｌｅｋｕ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００８ ６８：９７８８－９７９８；Ｓｔｒｕｍｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ ２０１２ ５０：７６－７８；Ｓａｎｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２００６ １３：１２２２－１２３４；Ｓａｎｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２００６ １３：１３６０－１３７０；Ｇｕｔｂｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｕｌｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０１０ ２３：３３４－３４４；Ｋａｕｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ Ｒｅｓ ２０１０ ８０：２８６－２９３Ｗｅｉｄｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００９ ３２：４９８－５０７；Ｗｉｄｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００８ ３１：１８０－１８８；Ｐａｓｃｏｌｏ Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｓ．Ｔｈｅｒ．４：１２８５－１２９４；Ｆｏｔｉｎ－Ｍｌｅｃｚｅｋ ｅｔ ａｌ．，２０１１ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３４：１－１５；Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５，２３：７０９－７１７；Ｐｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００７ ６；１０４：４０９５－４１００；ｄｅＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００８ １９：１２５－１３２；それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0142】

一実施形態では、このような製剤は、肝細胞、免疫細胞、腫瘍細胞、内皮細胞、抗原提示細胞、及び白血球を含むがこれらに限定されない様々な細胞種に、ｉｎ ｖｉｖｏで受動的又は能動的に向けられるように構築又は組成物を変更することもできる。Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１０ １８：１３５７－１３６４；Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｉ．２００５ ２３：７０９－７１７；Ｊｕｄｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２００９ １１９：６６１－６７３；Ｋａｕｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ Ｒｅｓ ２０１０ ８０：２８６－２９３；Ｓａｎｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２００６ １３：１２２２－１２３４；Ｓａｎｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２００６ １３：１３６０－１３７０；Ｇｕｔｂｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｕｌｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０１０ ２３：３３４－３４４；Ｂａｓｈａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０１１ １９：２１８６－２２００；Ｆｅｎｓｋｅ ａｎｄ Ｃｕｌｌｉｅｓ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．２００８ ５：２５－４４；Ｐｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００８ ３１９：６２７－６３０；Ｐｅｅｒ ａｎｄ Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０１１ １８：１１２７－１１３３；それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。肝細胞に対する製剤の受動的ターゲティングの一例には、ｉｎ ｖｉｖｏでアポリポタンパク質Ｅに結合し、肝細胞へのこれらの製剤の結合と取り込みを促進することが示されているＤＬｉｎ－ＤＭＡ、ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ、及びＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡベースの脂質ナノ粒子製剤が含まれる（Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１０ １８：１３５７－１３６４；その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。製剤はまた、葉酸、トランスフェリン、Ｎ－アエチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、及び抗体標的化アプローチによって例示されるがこれらに限定されない、その表面上の異なるリガンドの発現を通じて選択的に標的化することができる（Ｋｏｌｈａｔｋａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１ ８：１９７－２０６；Ｍｕｓａｃｃｈｉｏ ａｎｄ Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｓｃｉ．２０１１ １６：１３８８－１４１２；Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｍｅｍｂｒ Ｂｉｏｌ．２０１０ ２７：２８６－２９８；Ｐａｔｉｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｔｈｅｒ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ．２００８ ２５：１－６１；Ｂｅｎｏｉｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２０１１ １２：２７０８－２７１４；Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．２００８ ５：３０９－３１９；Ａｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１０ １８：１３５７－１３６４；Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１２ ８２０：１０５－１１６；Ｂｅｎ－Ａｒｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１２ ７５７：４９７－５０７；Ｐｅｅｒ ２０１０ Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ．２０：６３－６８；Ｐｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００７ １０４：４０９５－４１００；Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１１ ７２１：３３９－３５３；Ｓｕｂｒａｍａｎｙａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１０ １８：２０２８－２０３７；Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５ ２３：７０９－７１７；Ｐｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００８ ３１９：６２７－６３０；Ｐｅｅｒ ａｎｄ Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０１１ １８：１１２７－１１３３；それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0143】

一実施形態では、ｓａＲＮＡは固体脂質ナノ粒子として製剤化される。固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）は、平均直径が１０～１０００ｎｍの球形であってもよい。ＳＬＮは、親油性分子を可溶化できる固体脂質コアマトリックスを有しており、界面活性剤及び／又は乳化剤で安定化できる。さらなる実施形態では、脂質ナノ粒子は、自己集合脂質ポリマーナノ粒子であってもよい（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，ＡＣＳ Ｎａｎｏ，２００８，２（８），ｐｐ１６９６～１７０２を参照；その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0144】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、制御放出及び／又は標的送達のために製剤化することができる。本明細書で使用される場合、「制御放出」とは、治療結果をもたらすために特定の放出パターンに従う医薬組成物又は化合物の放出プロファイルを指す。一実施形態では、ｓａＲＮＡは、制御放出及び／又は標的化送達のために、本明細書に記載の及び／又は当技術分野で公知の送達剤にカプセル化され得る。本明細書で使用される場合、「カプセル化する」という用語は、封入する、取り囲む、又は包み込むことを意味する。本開示の化合物の製剤に関連する場合、カプセル化は、実質的、完全又は部分的であり得る。「実質的にカプセル化された」という用語は、本開示の医薬組成物又は化合物の少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９％超、又は９９．９９９％超が、送達剤に封入され、取り囲まれ、又は包み込まれ得ることを意味する。「部分的にカプセル化された」とは、本開示の医薬組成物又は化合物の１０未満、１０、２０、３０、４０、５０以下が送達剤に封入され、取り囲まれ、又は包み込まれ得ることを意味する。有利には、カプセル化は、蛍光及び／又は電子顕微鏡写真を使用して、本開示の医薬組成物又は化合物の放出又は活性を測定することによって決定され得る。例えば、本開示の医薬組成物又は化合物の少なくとも１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９９、又は９９．９９％超が送達剤にカプセル化される。

【0145】

別の実施形態において、ｓａＲＮＡは、脂質ナノ粒子又は急速に除去される脂質ナノ粒子にカプセル化され得、その後、脂質ナノ粒子又は急速に除去される脂質ナノ粒子は、本明細書に記載され、及び／又は当技術分野で知られているポリマー、ヒドロゲル及び／又は外科用シーラントにカプセル化され得る。非限定的な例として、ポリマー、ヒドロゲル、又は外科用シーラントは、ＰＬＧＡ、エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡｃ）、ポロキサマー、ＧＥＬＳＩＴＥ（商標）（Ｎａｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．フロリダ州アラチュア）、ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）（Ｈａｌｏｚｙｍｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、カリフォルニア州サンディエゴ）、フィブリノーゲンポリマー（Ｅｔｈｉｃｏｎ Ｉｎｃ．ジョージア州コーネリア）、ＴＩＳＳＥＬＬ（商標）（Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．イリノイ州ディアフィールド）、ＰＥＧベースのシーラント、及びＣＯＳＥＡＬ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．イリノイ州ディアフィールド）などの外科用シーラントであり得る。

【0146】

別の実施形態では、脂質ナノ粒子は、対象に注射されたときにゲルを形成し得る、当技術分野で知られている任意のポリマーにカプセル化され得る。別の非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、生分解性であり得るポリマーマトリックスにカプセル化され得る。

【0147】

一実施形態では、制御放出及び／又は標的送達のためのｓａＲＮＡ製剤は、少なくとも１つの制御放出コーティングも含み得る。制御放出コーティングには、限定するものではないが、ＯＰＡＤＲＹ（登録商標）、ポリビニルピロリドン／酢酸ビニルコポリマー、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ＥＵＤＲＡＧＩＴ ＲＬ（登録商標）、ＥＵＤＲＡＧＩＴ ＲＳ（登録商標）、及びエチルセルロース水性分散液（ＡＱＵＡＣＯＡＴ（登録商標）及びＳＵＲＥＬＥＡＳＥ（商標）などのセルロース誘導体が含まれる。

【0148】

一実施形態では、制御放出及び／又は標的送達製剤は、ポリカチオン性側鎖を含み得る少なくとも１つの分解性ポリエステルを含み得る。分解性ポリエステルには、限定するものではないが、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ－ラクチド－ｃｏ－Ｌ－リジン）、ポリ（４－ヒドロキシ－Ｌ－プロリンエステル）、及びそれらの組み合わせが含まれる。別の実施形態では、分解性ポリエステルは、ＰＥＧ化ポリマーを形成するためのＰＥＧ結合体を含み得る。

【0149】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、ＭａｎｏｈａｒａｎらのＵＳ２０１３０２０２６５２（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示される標的化部分などの標的化部分を有する標的化脂質とともに製剤化され得る。非限定的な例として、ＭａｎｏｈａｒａｎらのＵＳ２０１３０２０２６５２の式Ｉの標的化部分は、脂質が所望の器官、組織、細胞、細胞種又はサブタイプ、又は細胞小器官に局在化するのを助けるために選択され得る。本開示において想定される非限定的な標的化部分には、トランスフェリン、アニサミド、ＲＧＤペプチド、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、フコース、抗体、又はアプタマーが含まれる。

【0150】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、治療用ナノ粒子にカプセル化され得る。治療用ナノ粒子は、本明細書に記載される方法、及び、例えば、国際公開第２０１０００５７４０号、同第２０１００３０７６３号、同第２０１０００５７２１号、同第２０１０００５７２３号、同第２０１２０５４９２３号、米国特許出願公開第２０１１０２６２４９１号、同第２０１００１０４６４５号、同第２０１０００８７３３７号、同第２０１０００６８２８５号、同第２０１１０２７４７５９号、同第２０１０００６８２８６号及び同第２０１２０２８８５４１号、ならびに米国特許第８，２０６，７４７号、同第８，２９３，２７６号、同第８，３１８，２０８号及び同第８，３１８，２１１号（それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）などの当技術分野で知られている方法（ただし、これらに限定されない）によって製剤化され得る。別の実施形態では、治療用ポリマーナノ粒子は、米国特許出願公開第２０１２０１４０７９０号（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載の方法によって同定され得る。

【0151】

一実施形態では、治療用ナノ粒子は、徐放用に製剤化され得る。本明細書で使用される場合、「徐放」とは、特定の期間にわたる放出速度に従う医薬組成物又は化合物を指す。上記期間には、数時間、数日、数週、数月、数年が含まれるが、これらに限定されない。非限定的な例として、徐放性ナノ粒子は、ポリマーと、本開示のｓａＲＮＡなどであるがこれらに限定されない治療薬とを含み得る（国際公開第２０１００７５０７２号及び米国特許出願公開第２０１００２１６８０４号、同第２０１１０２１７３７７号及び同第２０１２０２０１８５９号を参照。それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0152】

一実施形態では、治療用ナノ粒子は、標的特異的となるように製剤化され得る。非限定的な例として、治療用ナノ粒子には、コルチコステロイドが含まれ得る（国際公開第２０１１０８４５１８号を参照。その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。一実施形態では、治療用ナノ粒子は、がん特異的となるように製剤化され得る。非限定的な例として、治療用ナノ粒子は、国際公開第２００８１２１９４９号、同第２０１０００５７２６号、同第２０１０００５７２５号、同第２０１１０８４５２１号、及び米国特許出願公開第２０１０００６９４２６号、同第２０１２０００４２９３号及び同第２０１００１０４６号（それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているナノ粒子として製剤化され得る。

【0153】

一実施形態では、本開示のナノ粒子は、ポリマーマトリックスを含み得る。非限定的な例として、ナノ粒子は、２つ以上のポリマー、例えば、限定するものではないが、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリ無水物、ポリヒドロキシ酸、ポリプロピレンフマル酸塩、ポリカプロラクトン、ポリアミド、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリシアノアクリレート、ポリ尿素、ポリスチレン、ポリアミン、ポリリジン、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ－ラクチド－ｃｏ－Ｌ－リジン）、ポリ（４－ヒドロキシ－Ｌ－プロリンエステル）又はそれらの組み合わせを含み得る。

【0154】

一実施形態では、治療用ナノ粒子はジブロックコポリマーを含む。一実施形態では、ジブロックコポリマーは、ＰＥＧを、限定するものではないが、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリ無水物、ポリヒドロキシ酸、ポリプロピルフマル酸塩、ポリカプロラクトン、ポリアミド、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリシアノアクリレート、ポリ尿素、ポリスチレン、ポリアミン、ポリリジン、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ－ラクチド－ｃｏ－Ｌ－リジン）、ポリ（４－ヒドロキシ－Ｌ－プロリンエステル）、又はそれらの組み合わせなどのポリマーとの組み合わせで含み得る。

【0155】

非限定的な例として、治療用ナノ粒子は、ＰＬＧＡ－ＰＥＧブロックコポリマーを含む（米国特許出願公開第２０１２０００４２９３号及び米国特許第８，２３６，３３０号を参照。それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。別の非限定的な例では、治療用ナノ粒子は、ＰＥＧとＰＬＡ、又はＰＥＧとＰＬＧＡのジブロックコポリマーを含むステルスナノ粒子である（米国特許第８，２４６，９６８号及び国際公開第２０１２１６６９２３号を参照。それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0156】

一実施形態では、治療用ナノ粒子は、米国特許第８，２６３，６６５号及び同第８，２８７，９１０号（それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているマルチブロックコポリマーなどであるがこれらに限定されないマルチブロックコポリマーを含み得る。

【0157】

一実施形態では、本明細書に記載のブロックコポリマーは、非ポリマーミセルとブロックコポリマーとを含むポリイオン複合体に含まれ得る（例えば、米国特許出願公開第２０１２００７６８３６号を参照。その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0158】

一実施形態では、治療用ナノ粒子は、少なくとも１つのアクリルポリマーを含み得る。アクリルポリマーとしては、限定するものではないが、アクリル酸、メタクリル酸、アクリル酸とメタクリル酸のコポリマー、メタクリル酸メチルコポリマー、メタクリル酸エトキシエチル、メタクリル酸シアノエチル、メタクリル酸アミノアルキルコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、ポリシアノアクリレート及びそれらの組み合わせが挙げられる。

【0159】

一実施形態では、治療用ナノ粒子は、ポリリジン、ポリエチレンイミン、ポリ（アミドアミン）デンドリマー、ポリ（ベータアミノエステル）など（例えば、米国特許第８，２８７，８４９号を参照。その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、及びそれらの組み合わせであるがこれらに限定されない少なくとも１つのアミン含有ポリマーを含み得る。

【0160】

一実施形態では、治療用ナノ粒子は、ポリカチオン性側鎖を含み得る少なくとも１つの分解性ポリエステルを含み得る。分解性ポリエステルには、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ－ラクチド－ｃｏ－Ｌ－リジン）、ポリ（４－ヒドロキシ－Ｌ－プロリンエステル）、及びそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。別の実施形態では、分解性ポリエステルは、ＰＥＧ化ポリマーを形成するためのＰＥＧ結合体を含み得る。

【0161】

別の実施形態では、治療用ナノ粒子は、少なくとも１つの標的化リガンドの結合体を含み得る。標的化リガンドは、モノクローナル抗体などであるがこれに限定されない当技術分野で知られている任意のリガンドであり得る（Ｋｉｒｐｏｔｉｎ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００６ ６６：６７３２－６７４０；その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0162】

一実施形態では、治療用ナノ粒子は、がんを標的とするために使用され得る水溶液中に製剤化され得る（国際公開第２０１１０８４５１３号及び米国特許出願公開第２０１１０２９４７１７号を参照。それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0163】

一実施形態では、ｓａＲＮＡは、合成ナノキャリア内にカプセル化され、合成ナノキャリアに連結され、及び／又は合成ナノキャリアと組み合わせられ得る。合成ナノキャリアとしては、限定するものではないが、国際公開第２０１０００５７４０号、同第２０１００３０７６３号、同第２０１２１３５０１号、同第２０１２１４９２５２号、同第２０１２１４９２５５号、同第２０１２１４９２５９号、同第２０１２１４９２６５号、同第２０１２１４９２６８号、同第２０１２１４９２８２号、同第２０１２１４９３０１号、同第２０１２１４９３９３号、同第２０１２１４９４０５号、同第２０１２１４９４１１号、同第２０１２１４９４５４号及び同第２０１３０１９６６９号、ならびに米国特許出願公開第２０１１０２６２４９１号、同第２０１００１０４６４５号、同第２０１０００８７３３７号、及び同第２０１２０２４４２２２号（それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているものが挙げられる。合成ナノキャリアは、当技術分野で知られている方法及び／又は本明細書に記載されている方法を使用して製剤化され得る。非限定的な例として、合成ナノキャリアは、国際公開第２０１０００５７４０号、同第２０１００３０７６３号、及び同第２０１２１３５０号、ならびに米国特許出願公開第２０１１０２６２４９１号、同第２０１００１０４６４５号、同第２０１０００８７３３７号、及び同第２０１２０２４４２２号（それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載の方法によって製剤化され得る。別の実施形態では、合成ナノキャリア製剤は、国際公開第２０１１０７２２１８号及び米国特許第８，２１１，４７３号（それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載の方法によって凍結乾燥され得る。

【0164】

一実施形態では、合成ナノキャリアは、本明細書に記載のｓａＲＮＡを放出するための反応性基を含有し得る（国際公開第２０１２０９５２５５２号及び米国特許出願公開第２０１２０１７１２２９号を参照。それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0165】

一実施形態では、合成ナノキャリアは、標的化放出のために製剤化され得る。一実施形態では、合成ナノキャリアは、特定のｐＨで、及び／又は所望の時間間隔後にｓａＲＮＡを放出するように製剤化され得る。非限定的な例として、合成ナノ粒子は、２４時間後及び／又はｐＨ４．５でｓａＲＮＡを放出するように配合することができる（国際公開第２０１０１３８１９３及び同第２０１０１３８１９４、及び米国特許出願公開第２０１１００２０３８８号及び同第２０１１００２７２１７号を参照。それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0166】

一実施形態では、合成ナノキャリアは、本明細書に記載されるｓａＲＮＡの制御放出及び／又は持続放出のために製剤化され得る。非限定的な例として、持続放出用の合成ナノキャリアは、当技術分野で知られている方法、本明細書に記載される方法、及び／又は国際公開第２０１０１３８１９２号及び米国特許出願公開第２０１００３０３８５０号（それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載される方法によって製剤化され得る。

【0167】

一実施形態では、ナノ粒子は経口投与用に最適化され得る。ナノ粒子は、キトサン又はその誘導体などであるがこれらに限定されない少なくとも１つのカチオン性生体高分子を含み得る。非限定的な例として、ナノ粒子は、米国特許出願公開第２０１２０２８２３４３号（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載の方法によって製剤化され得る。

【0168】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、ＭａｎｏｈａｒａｎらのＵＳ８５７５１２３（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているようなモジュラー組成物に製剤化され得る。非限定的な例として、モジュラー組成物は、核酸、例えば、本開示のｓａＲＮＡ、少なくとも１つのエンドソーム溶解成分、及び少なくとも１つの標的化リガンドを含み得る。モジュラー組成物は、ＭａｎｏｈａｒａｎらのＵＳ８５７５１２３（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている任意の式などの式を有し得る。

【0169】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡを脂質製剤中にカプセル化することで、ｄｅ Ｆｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓらに対するＵＳ８５４６５５４（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているような安定な核酸脂質粒子（ＳＮＡＬＰ）を形成することができる。脂質はカチオン性であっても非カチオン性であってもよい。１つの非限定的な例において、脂質対核酸の比（質量／質量比）（例えば、脂質対ｓａＲＮＡ比）は、約１：１～約５０：１、約１：１～約２５：１、約３：１～約１５：１、約４：１～約１０：１、約５：１～約９：１、又は約６：１～約９：１、又は５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、又は１１：１の範囲となる。別の例では、ＳＮＡＬＰは、４０％の２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノエチル－［１，３］－ジオキソラン（脂質Ａ）、１０％のジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、４０％のコレステロール、１０％のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）－Ｃ－ＤＯＭＧ（モルパーセント）を含み、粒径６３．０±２０ｎｍ及び核酸／脂質比０．０２７である。別の実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、Ｌａｍらに対するＵＳ７１８９７０５に開示されているように、エンドソーム膜不安定化剤を含む核酸－脂質粒子とともに製剤化することができ、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。非限定的な例として、エンドソーム膜不安定化剤はＣａ^２＋イオンであり得る。

【0170】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、ＡｋｉｎｃらのＵＳ８１４８３４４（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されている配合脂質粒子（ＦＬｉＰ）を用いて製剤化され得る。Ａｋｉｎｃらは、ＦＬｉＰが、親油性物質にコンジュゲートされた一本鎖又は二本鎖オリゴヌクレオチドの少なくとも１つと、コンジュゲートされたオリゴヌクレオチドが凝集、混合、又は結合されたエマルション又はリポソームの少なくとも１つとを含み得ることを教示している。これらの粒子は、驚くべきことに、ＡｋｉｎｃらのＵＳ８１４８３４４（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されている、心臓、肺、及び筋肉にオリゴヌクレオチドを効果的に送達することが示されている。

【0171】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、ＴａｍらのＵＳ６０８６９１３（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているように、脂質製剤中に発現ベクターを含む組成物を使用して細胞に送達され得る。Ｔａｍによって開示された組成物は血清安定であり、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）由来の第１及び第２の逆位反復配列、ＡＡＶ由来のｒｅｐ遺伝子、及び核酸断片を含む発現ベクターを含む。Ｔａｍの発現ベクターは脂質と複合体を形成している。

【0172】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、ｄｅ ＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓらのＵＳ２０１２０２７０９２１（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示される脂質製剤を用いて製剤化され得る。１つの非限定的な例において、脂質製剤は、ＵＳ２０１２０２７０９２１（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている式Ａを有するカチオン性脂質を含み得る。別の非限定的な例では、ＵＳ２０１２０２７０９２１（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の表Ａに開示される例示的な核酸－脂質粒子の組成物は、本開示のｓａＲＮＡとともに使用され得る。

【0173】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、ＭａｕｒｅｒらのＵＳ２０１２０２７６２０７（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示される脂質粒子中に完全にカプセル化され得る。粒子は、予め形成された脂質小胞、荷電した治療薬、及び不安定化溶媒中で予め形成された小胞と治療薬の混合物を形成するための不安定化剤を含む脂質組成物を含んでもよく、ここで、不安定化溶媒は、予め形成された脂質小胞の膜を、小胞を破壊することなく不安定化するのに有効である。

【0174】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、コンジュゲートされた脂質とともに製剤化され得る。非限定的な例において、コンジュゲートされた脂質は、ＬｉｎらのＵＳ２０１２０２６４８１０（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているような式を有し得る。コンジュゲート脂質は、カチオン性脂質、中性脂質、及び凝集を減少させることができる脂質をさらに含む脂質粒子を形成し得る。

【0175】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、ＦｉｔｚｇｅｒａｌｄらのＵＳ２０１２０２４４２０７（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されているような中性リポソーム製剤に製剤化され得る。「中性リポソーム製剤」という語句は、生理学的ｐＨでほぼ中性又は中性の表面電荷を有するリポソーム製剤を指す。生理学的ｐＨは、例えば約７．０～約７．５、又は例えば約７．５、又は例えば７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、もしくは７．５、又は例えば７．３、又は例えば７．４であり得る。中性リポソーム製剤の例は、イオン化可能な脂質ナノ粒子（ｉＬＮＰ）である。中性リポソーム製剤には、イオン化可能なカチオン性脂質、例えば、ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡが含まれ得る。

【0176】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、荷電脂質又はアミノ脂質とともに製剤化され得る。本明細書で使用される場合、「荷電脂質」という用語は、１つ又は２つの脂肪アシル又は脂肪アルキル鎖、及び第４級アミノ頭部基を有する脂質を含むことを意味する。第４級アミンは永久的な正電荷を帯びている。頭部基は、生理学的ｐＨでプロトン化され得る第一級、第二級、又は第三級アミンなどのイオン化可能な基を任意に含むことができる。第四級アミンの存在は、第四級アミンを欠く構造的に類似した化合物における基のｐＫａと比較して、イオン化可能な基のｐＫａを変化させることができる（例えば、第四級アミンが第三級アミンによって置き換えられる）。いくつかの実施形態において、荷電した脂質は「アミノ脂質」と呼ばれる。非限定的な例において、アミノ脂質は、ＨｏｐｅらのＵＳ２０１１０２５６１７５に記載されている任意のアミノ脂質であってよく、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。例えば、アミノ脂質は、構造（ＩＩ）、ＤＬｉｎ－Ｋ－Ｃ２－ＤＭＡ、ＤＬｉｎ－Ｋ２－ＤＭＡ、ＤＬｉｎ－Ｋ６－ＤＭＡなどのＨｏｐｅの表３～７に開示されている構造を有し得る。得られた医薬製剤は、Ｈｏｐｅに従って凍結乾燥することができる。別の非限定的な例において、アミノ脂質は、ＨｏｐｅらのＵＳ２０１１０２５６１７５（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている任意のアミノ脂質、例えば、構造（Ｉ）、ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ、ＤＬｉｎ－Ｃ－ＤＡＰ、ＤＬｉｎ－ＤＡＣ、ＤＬｉｎ－ＭＡ、ＤＬｉｎ－Ｓ－ＤＭＡなどであり得る。別の非限定的な例では、アミノ脂質は、ＭａｎｏｈａｒａｎらのＷＯ２００９１３２１３１（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているような構造（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、もしくは（ＩＶ）、又は４－（Ｒ）－ＤＵｎ－Ｋ－ＤＭＡ（ＶＩ）、４－（Ｓ）－ＤＵｎ－Ｋ－ＤＭＡ（Ｖ）を有し得る。別の非限定的な例では、本明細書に記載の製剤のいずれかで使用される荷電脂質は、ＭａｎｏｈａｒａｎらのＥＰ２５０９６３６（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている任意の荷電脂質であり得る。

【0177】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、脂質、リポソーム、又はリポプレックスを含む会合複合体とともに製剤化され得る。非限定的な例では、会合複合体は、ＭａｎｏｈａｒａｎらのＵＳ８０３４３７６（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されている式（Ｉ）で定義される構造をそれぞれ有する１つ以上の化合物、式（ＸＶ）で定義される構造を有するＰＥＧ脂質、ステロイド、及び核酸を含む。ｓａＲＮＡは、ＵＳ８０３４３７６（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている任意の会合複合体とともに製剤化され得る。

【0178】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、逆頭部基脂質とともに製剤化され得る。非限定的な例として、ｓａＲＮＡは、正電荷がアシル鎖領域の近くに位置し、負電荷が頭部基の遠位端に位置する頭部基を含む両性イオン性脂質、例えば、ＬｅｕｎｇらのＷＯ２０１１０５６６８２（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている構造（Ａ）又は構造（Ｉ）を有する脂質とともに製剤化され得る。

【0179】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、脂質二重層担体中に製剤化され得る。非限定的な例として、ｓａＲＮＡは、約５モル％～約２０モル％の量の凝集防止剤、約０．５モル％～約５０モル％の量のカチオン性脂質、及び融合性脂質及び界面活性剤の脂質混合物を含む脂質－界面活性剤混合物と組み合わせることで、核酸－脂質－界面活性剤混合物を提供すること；次いで、核酸－脂質－界面活性剤混合物を緩衝塩溶液に対してダイアライズすることで界面活性剤を除去し、核酸を脂質二重層担体にカプセル化し、脂質二重層－核酸組成物を提供することができる。緩衝塩溶液は、核酸の約４０％～約８０％をカプセル化するのに十分なイオン強度を有する。これはＣｕｌｌｉｓらのＷＯ１９９９０１８９３３に記載されており、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0180】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、ｓａＲＮＡを心臓、肝臓、又は腫瘍組織部位に選択的に標的化することができる核酸－脂質粒子中に製剤化され得る。例えば、核酸－脂質粒子は、ＣｕｉｌｉｓらのＥＰ１３２８２５４（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているように、（ａ）核酸；（ｂ）１．０モル％～４５モル％のカチオン性脂質；（ｃ）０．０モル％～９０モル％の別の脂質；（ｄ）１．０モル％～１０モル％の二重層安定化成分；（ｅ）０．０モル％～６０モル％のコレステロール；及び（ｆ）０．０モル％～１０モル％のカチオン性ポリマー脂質を含み得る。Ｃｕｉｌｉｓは、カチオン性脂質、二重層安定化成分、別の脂質、コレステロール、及びカチオン性ポリマー脂質のそれぞれの量を変えることで、心臓、肝臓、又は腫瘍組織部位への組織選択性を与えることができ、それによって核酸を心臓、肝臓、又は主要組織部位に選択的に標的化できる核酸－脂質粒子を同定することができると教示している。

【0181】

ポリマー、生分解性ナノ粒子、及びコアシェルナノ粒子
本開示のｓａＲＮＡは、天然ポリマー及び／又は合成ポリマーを使用して製剤化することができる。送達に使用され得るポリマーの非限定的な例としては、限定するものではないが、ＭＩＲＵＳ Ｂｉｏ（ウィスコンシン州マディソン）製のＤＹＮＡＭＩＣ ＰＯＬＹＣＯＮＪＵＧＡＴＥ（商標）（Ａｒｒｏｗｈｅａｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｒｐ．、カリフォルニア州パサデナ）製剤及びＲｏｃｈｅ Ｍａｄｉｓｏｎ（ウィスコンシン州マディソン）のＰＨＡＳＥＲＸ（商標）ポリマー製剤、例えば、限定するものではないが、ＳＭＡＲＴＴ ＰＯＬＹＭＥＲ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（商標）（ＰＨＡＳＥＲＸ、ワシントン州シアトル）、ＤＭＲＩ／ＤＯＰＥ、ポロキサマー、Ｖｉｃａｌ（カリフォルニア州サンディエゴ）のＶＡＸＦＥＣＴＦＮ（商標）アジュバント、Ｃａｌａｎｄｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（カリフォルニア州パサデナ）のキトサン、シクロデキストリン、デンドリマー、及びポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）ポリマー、ＲＯＮＤＥＬ（商標）（ＲＮＡｉ／オリゴヌクレオチドナノ粒子送達）ポリマー（Ａｒｒｏｗｈｅａｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、カリフォルニア州パサデナ）及びｐＨ応答性コブロックポリマー、例えば、限定するものではないが、ＰＨＡＳＥＲＸ（商標）（ワシントン州シアトル）などが挙げられる。

【0182】

キトサン配合物の非限定的な例には、正に帯電したキトサンのコアと負に帯電した基材の外側部分が含まれる（米国特許出願公開第２０１２０２５８１７６号。その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。キトサンとしては、限定するものではないが、Ｎ－トリメチルキトサン、モノ－Ｎ－カルボキシメチルキトサン（ＭＣＣ）、Ｎ－パルミトイルキトサン（ＮＰＣＳ）、ＥＤＴＡ－キトサン、低分子量キトサン、キトサン誘導体、又はそれらの組み合わせが挙げられる。

【0183】

一実施形態において、本開示で使用されるポリマーは、細菌などであるがこれに限定されない不要な物質のポリマーの表面への付着を低減及び／又は阻害するための処理を受けている。ポリマーは、公知の方法、及び／又は当技術分野で記載され、及び／又は国際公開第２０１２１５０４６７号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている方法によって処理され得る。

【0184】

ＰＬＧＡ製剤の非限定的な例には、限定するものではないが、ＰＬＧＡ注射用デポ剤（例えば、ＰＬＧＡを６６％Ｎ－メチル－２－ピロリドン（ＮＭＰ）（残りが水性溶媒及びロイプロリドである）に溶解することによって形成されるＥＬＩＧＡＲＤ（商標）。注射されると、ＰＬＧＡ及びロイプロリドペプチドは皮下空間に沈殿する）が含まれる。

【0185】

これらのポリマーアプローチの多くは、オリゴヌクレオチドをｉｎ ｖｉｖｏで細胞細胞質に送達する際の有効性を実証している（ｄｅ Ｆｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００８ １９：１２５－１３２でレビューされている。その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。核酸の強力なｉｎ ｖｉｖｏ送達を実現する２つのポリマーアプローチ（この場合は低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を使用）は、動的ポリコンジュゲートとシクロデキストリンベースのナノ粒子である。これらの送達アプローチのうちの１つ目は、動的ポリコンジュゲートを使用しており、マウスにおいてｉｎ ｖｉｖｏで効果的にｓｉＲＮＡを送達し、肝細胞において内因性標的ｍＲＮＡをサイレンシングすることが示されている（Ｒｏｚｅｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００７ １０４：１２９８２－１２８８７；参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。この特定のアプローチは、多成分ポリマーシステムであり、その主な特徴には、核酸（この場合はｓｉＲＮＡ）がジスルフィド結合を介して共有結合している膜活性ポリマーが含まれており、ＰＥＧ（電荷マスキング用）基とＮ－アセチルガラクトサミン（肝細胞用）基の両方が、ｐＨ感受性結合を介して結合している（Ｒｏｚｅｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００７ １０４：１２９８２－１２８８７；その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。肝細胞に結合してエンドソームに侵入すると、ポリマー複合体は低ｐＨ環境で分解し、ポリマーは自身の正電荷を露出し、エンドソーム脱出をもたらし、ポリマーからｓｉＲＮＡが細胞質に放出される。Ｎ－アセチルガラクトサミン基をマンノース基に置換することにより、アシアロ糖タンパク質受容体発現肝細胞から類洞内皮細胞及びクッパー細胞へと標的化を変更できることが示された。別のポリマーアプローチには、トランスフェリンを標的としたシクロデキストリン含有ポリカチオンナノ粒子の使用が含まれる。これらのナノ粒子は、トランスフェリン受容体を発現するユーイング肉腫腫瘍細胞におけるＥＷＳ－ＦＬＩ１遺伝子産物の標的化サイレンシングを実証しており（Ｈｕ－Ｌｉｅｓｋｏｖａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００５ ６５：８９８４－８９８２；その全体が参照により本明細書に組み込まれる）、及びこれらのナノ粒子中に配合されたｓｉＲＮＡは、非ヒト霊長類において良好に忍容された（Ｈｅｉｄｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２００７ １０４：５７１５－２１；その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。これらの送達戦略はどちらも、標的送達とエンドソーム回避メカニズムの両方を使用した合理的なアプローチを組み込んでいる。

【0186】

ポリマー製剤は、ｓａＲＮＡの持続的又は遅延放出を可能にすることができる（例えば、筋肉内又は皮下注射後）。ｓａＲＮＡの放出プロファイルの変化により、例えば、コードされたタンパク質が長期間にわたって翻訳される可能性がある。生分解性ポリマーは、核酸を分解から保護するために以前に使用されており、ｉｎ ｖｉｖｏでペイロードの持続放出をもたらすことが示されている（Ｒｏｚｅｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００７ １０４：１２９８２－１２８８７；Ｓｕｌｌｉｖａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．２０１０ ７：１４３３－１４４６；Ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２０１０ Ｏｃｔ １；Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｃ Ｃｈｅｍ Ｒｅｓ．２０１２ Ｊａｎ １３；Ｍａｎｇａｎｉｅｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．２０１２ ３３：２３０１－２３０９；Ｂｅｎｏｉｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２０１１ １２：２７０８－２７１４；Ｓｉｎｇｈａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｔｈｅｒ．２０１１ ２：１３３－１４７；ｄｅ Ｆｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００８ １９：１２５－１３２；Ｓｃｈａｆｆｅｒｔ ａｎｄ Ｗａｇｎｅｒ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２００８ １６：１１３１－１１３８；Ｃｈａｔｕｒｖｅｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．２０１１ ８：１４５５－１４６８；Ｄａｖｉｓ，Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ．２００９ ６：６５９－６６８；Ｄａｖｉｓ，Ｎａｔｕｒｅ ２０１０ ４６４：１０６７－１０７０；これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。

【0187】

一実施形態では、医薬組成物は徐放性製剤であり得る。さらなる実施形態では、徐放性製剤は皮下送達用であり得る。徐放性製剤は、限定するものではないが、ＰＬＧＡミクロスフェア、エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡｃ）、ポロキサマー、ＧＥＬＳＩＴＥ（商標）（Ｎａｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．フロリダ州アラチュア）、ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）（Ｈａｌｏｚｙｍｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、カリフォルニア州サンディエゴ）、フィブリノーゲンポリマーなどの外科用シーラント（Ｅｔｈｉｃｏｎ Ｉｎｃ．ジョージア州コーネリア）、ＴＩＳＳＥＬＬ（商標）（Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ イリノイ州ディアフィールド）、ＰＥＧベースのシーラント、及びＣＯＳＥＡＬ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ イリノイ州ディアフィールド）を含み得る。

【0188】

非限定的な例として、ｓａＲＮＡは、調節可能な放出速度（例えば、数日及び数週間）でＰＬＧＡミクロスフェアを調製し、カプセル化プロセス中にｓａＲＮＡの完全性を維持しながらＰＬＧＡミクロスフェア中にｓａＲＮＡをカプセル化することによって、ＰＬＧＡミクロスフェア中に製剤化され得る。ＥＶＡｃは非生分解性で生体適合性のポリマーであり、前臨床の徐放性インプラント用途（例えば、徐放性製品、緑内障用ピロカルピン眼科用インサートのＯｃｕｓｅｒｔ又は徐放性プロゲステロン子宮内デバイスのプロゲスタサート、経皮送達システムのＴｅｓｔｏｄｅｒｍ、Ｄｕｒａｇｅｓｉｃ及びセレギリン、カテーテル）に広く使用される。ポロキサマーＦ－４０７ＮＦは、５℃未満の温度で低粘度を示し、１５℃を超える温度で固体ゲルを形成する、ポリオキシエチレン－ポリオキシプロピレン－ポリオキシエチレンの親水性非イオン性界面活性剤トリブロックコポリマーである。ＰＥＧベースの外科用シーラントは、送達デバイス内で混合された２つの合成ＰＥＧ成分を含み、１分で調製でき、３分でシールでき、３０日以内に再吸収される。ＧＥＬＳＩＴＥ（商標）及び天然ポリマーは、投与部位のその場でゲル化することができる。これらは、イオン相互作用を通じてタンパク質及びペプチドの治療候補と相互作用し、安定化効果をもたらすことが示されている。ポリマー製剤は、限定するものではないが、葉酸、トランスフェリン、及びＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）によって例示されるような、様々なリガンドの発現を通じて選択的に標的とすることもできる（Ｂｅｎｏｉｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２０１１ １２：２７０８－２７１４；Ｒｏｚｅｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００７ １０４：１２９８２－１２８８７；Ｄａｖｉｓ，Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ．２００９ ６：６５９－６６８；Ｄａｖｉｓ，Ｎａｔｕｒｅ ２０１０ ４６４：１０６７－１０７０；これらのそれぞれは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0189】

本開示のｓａＲＮＡは、ポリマー化合物とともに、又はポリマー化合物中で製剤化され得る。ポリマーは、ポリエテン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（１－リジン）（ＰＬＬ）、ＰＬＬにグラフトされたＰＥＧ、カチオン性リポポリマー、生分解性カチオン性リポポリマー、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、架橋分岐ポリ（アルキレンイミン）、ポリアミン誘導体、変性ポロキサマー、生分解性ポリマー、弾性生分解性ポリマー、生分解性ブロックコポリマー、生分解性ランダムコポリマー、生分解性ポリエステルコポリマー、生分解性ポリエステルブロックコポリマー、生分解性ポリエステルブロックランダムコポリマー、マルチブロックコポリマー、直鎖状生分解性コポリマー、ポリ［α－（４－アミノブチル）－Ｌ－グリコール酸）（ＰＡＧＡ）、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマー、ポリカーボネート、ポリ無水物、ポリヒドロキシ酸、ポリプロピルフマル酸塩、ポリカプロラクトン、ポリアミド、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリシアノアクリレート、ポリ尿素、ポリスチレン、ポリアミン、ポリリジン、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ－ラクチド－ｃｏ－Ｌ－リジン）、ポリ（４－ヒドロキシ－Ｌ－プロリンエステル）、アクリルポリマー、アミン含有ポリマー、デキストランポリマー、デキストランポリマー誘導体、又はそれらの組み合わせなどであるがこれらに限定されない少なくとも１つのポリマーを含み得る。

【0190】

非限定的な例として、本開示のｓａＲＮＡは、米国特許第６，１７７，２７４号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、ＰＬＬをグラフトしたＰＥＧのポリマー化合物とともに製剤化され得る。この製剤は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞をトランスフェクションするために、又はｓａＲＮＡをｉｎ ｖｉｖｏで送達するために使用され得る。別の例では、ｓａＲＮＡは、カチオン性ポリマーとともに溶液又は媒体中に、乾燥医薬組成物中に、又は米国特許出願公開第２００９００４２８２９号及び同第２００９００４２８２５号（それぞれの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように乾燥可能な溶液中に懸濁され得る。

【0191】

別の非限定的な例として、本開示のｓａＲＮＡは、ＰＬＧＡ－ＰＥＧブロックコポリマー（米国特許出願公開第２０１２０００４２９３号及び米国特許第８，２３６，３３０号を参照。その全体が参照により本明細書に組み込まれる）又はＰＬＧＡ－ＰＥＧ－ＰＬＧＡブロックコポリマー（米国特許第６，００４，５７３号を参照。その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を用いて製剤化され得る。非限定的な例として、本開示のｓａＲＮＡは、ＰＥＧとＰＬＡ、又はＰＥＧとＰＬＧＡのジブロックコポリマーを用いて製剤化され得る（米国特許第８，２４６，９６８号を参照。その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。

【0192】

ポリアミン誘導体は、核酸を送達するために、又は疾患を治療及び／又は予防するために、又は植込み可能なもしくは注射可能なデバイスに含めるために使用され得る（米国特許出願公開第２０１００２６０８１７号、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。非限定的な例として、医薬組成物は、米国特許出願公開第２０１００２６０８１７号（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているｓａＲＮＡ及びポリアミン誘導体を含み得る。非限定的な例として、本開示のｓａＲＮＡは、ポリアミドポリマー、例えば、限定するものではないが、炭水化物ジアジドモノマーとオリゴアミンを含むジルキンユニットとを組み合わせることによって調製される１，３－双極子付加ポリマーを含むポリマー（米国特許第８，２３６，２８０号；その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を使用して送達され得る。

【0193】

一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、国際公開第２０１１１１５８６２号、同第２０１２０８２５７４号、及び同第２０１２０６８１８７号、ならびに米国特許出願公開第２０１２０２８３４２７号（それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている少なくとも１つのポリマー及び／又はその誘導体とともに製剤化され得る。別の実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、ＷＯ２０１１１１５８６２号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、式Ｚのポリマーとともに製剤化され得る。さらに別の実施形態では、ｓａＲＮＡは、国際公開第２０１２０８２５７４号又は同第２０１２０６８１８７号及び米国特許出願公開第２０１２０２８３４２号（それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているように、式Ｚ、Ｚ’、又はＺ’’のポリマーとともに製剤化され得る。本開示のｓａＲＮＡとともに製剤化されるポリマーは、国際公開第２０１２０８２５７４号又は同第２０１２０６８１８７号（それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載の方法によって合成することができる。

【0194】

本開示のｓａＲＮＡは、少なくとも１つのアクリルポリマーとともに製剤化され得る。アクリルポリマーとしては、限定するものではないが、アクリル酸、メタクリル酸、アクリル酸とメタクリル酸のコポリマー、メタクリル酸メチルコポリマー、メタクリル酸エトキシエチル、メタクリル酸シアノエチル、メタクリル酸アミノアルキルコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、ポリシアノアクリレート、及びそれらの組み合わせが挙げられる。

【0195】

本開示のｓａＲＮＡの製剤は、ポリリジン、ポリエチレンイミン、ポリ（アミドアミン）デンドリマー又はそれらの組み合わせなどであるがこれらに限定されない少なくとも１つのアミン含有ポリマーを含み得る。

【0196】

例えば、本開示のｓａＲＮＡは、ポリ（アルキレンイミン）、生分解性カチオン性リポポリマー、生分解性ブロックコポリマー、生分解性ポリマーもしくは生分解性ランダムコポリマー、生分解性ポリエステルブロックコポリマー、生分解性ポリエステルポリマー、生分解性ポリエステルランダムコポリマー、直鎖状生分解性コポリマー、ＰＡＧＡ、生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマー、又はそれらの組み合わせを含む医薬品化合物中に製剤化され得る。生分解性カチオン性リポポリマーは、当技術分野で知られている方法、及び／又は米国特許第６，６９６，０３８号、米国特許出願第２００３００７３６１９号及び同第２００４０１４２４７４号（それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている方法によって製造することができる。ポリ（アルキレンイミン）は、当技術分野で知られている方法、及び／又は米国特許出願公開第２０１００００４３１５号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている方法を使用して作製され得る。生分解性ポリマー、生分解性ブロックコポリマー、生分解性ランダムコポリマー、生分解性ポリエステルブロックコポリマー、生分解性ポリエステルポリマー、又は生分解性ポリエステルランダムコポリマーは、当技術分野で知られている方法、及び／又は米国特許第６，５１７，８６９号及び同第６，２６７，９８７号（それぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている方法を使用して作製され得る。直鎖状生分解性コポリマーは、当技術分野で知られている方法、及び／又は米国特許第６，６５２，８８６号に記載されている方法を使用して作製され得る。ＰＡＧＡポリマーは、当技術分野で知られている方法、及び／又は米国特許第６，２１７，９１２号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている方法を使用して作製され得る。ＰＡＧＡポリマーは、ポリ－Ｌ－リジン、ポリアルギン、ポリオルニチン、ヒストン、アビジン、プロタミン、ポリラクチド、及びポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）などであるがこれらに限定されないポリマーとコポリマー又はブロックコポリマーを形成するように共重合され得る。生分解性架橋カチオン性マルチブロックコポリマーは、当技術分野で知られている方法、及び／又は米国特許第８，０５７，８２１号又は米国特許出願公開第２０１２００９１４５号（それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている方法で作製され得る。例えば、マルチブロックコポリマーは、分岐状ポリエチレンイミンと比較して異なるパターンを有する直鎖状ポリエチレンイミン（ＬＰＥＩ）ブロックを使用して合成することができる。さらに、組成物又は医薬組成物は、当技術分野で知られている方法、本明細書に記載の方法、又は米国特許出願公開第２０１００００４３１５号又は米国特許第６，２６７，９８７号及び同第６，２１７，９１２号（それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載の方法によって作製され得る。

【0197】

本開示のｓａＲＮＡは、ポリカチオン性側鎖を含み得る少なくとも１つの分解性ポリエステルとともに製剤化され得る。分解性ポリエステルには、限定するものではないが、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ－ラクチド－ｃｏ－Ｌ－リジン）、ポリ（４－ヒドロキシ－Ｌ－プロリンエステル）、及びそれらの組み合わせが含まれる。別の実施形態では、分解性ポリエステルは、ＰＥＧ化ポリマーを形成するためのＰＥＧ結合体を含み得る。

【0198】

本開示のｓａＲＮＡは、少なくとも１つの架橋性ポリエステルとともに製剤化され得る。架橋性ポリエステルとしては、当技術分野で知られているもの、及び米国特許出願公開第２０１２０２６９７６１号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものが挙げられる。

【0199】

一実施形態において、本明細書に記載されるポリマーは、脂質終結（ｌｉｐｉｄ－ｔｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ）ＰＥＧにコンジュゲートされ得る。非限定的な例として、ＰＬＧＡは、ＰＬＧＡ－ＤＳＰＥ－ＰＥＧを形成する脂質終結ＰＥＧにコンジュゲートされ得る。別の非限定的な例として、本開示で使用されるＰＥＧコンジュゲートは、国際公開第２００８１０３２７６号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。ポリマーは、リガンドコンジュゲート、例えば、限定するものではないが、米国特許第８，２７３，３６３号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載のコンジュゲートを使用してコンジュゲートされ得る。

【0200】

一実施形態では、本明細書に記載のｓａＲＮＡは、別の化合物とコンジュゲートされ得る。コンジュゲートの非限定的な例は、米国特許第７，９６４，５７８号及び同第７，８３３，９９２号（それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。別の実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、米国特許第７，９６４，５７８号及び同第７，８３３，９９２号（それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている式１～１２２のコンジュゲートと結合され得る。本明細書に記載されるｓａＲＮＡは、金などであるがこれに限定されない金属とコンジュゲートされてもよい。（例えば、Ｇｉｌｊｏｈａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００９ １３１（６）：２０７２－２０７３参照。その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。別の実施形態では、本明細書に記載のｓａＲＮＡは、金ナノ粒子にコンジュゲート及び／又はカプセル化され得る。（国際公開第２０１２１６２６９号及び米国特許出願公開第２０１２０３０２９４０号。それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0201】

米国特許出願公開第２０１００００４３１３号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、遺伝子送達組成物は、ヌクレオチド配列及びポロキサマーを含み得る。例えば、本開示のｓａＲＮＡは、米国特許出願公開第２０１００００４３１３号に記載されているポロキサマーとともに遺伝子送達組成物において使用され得る。

【0202】

一実施形態では、本開示のポリマー製剤は、カチオン性担体を含み得るポリマー製剤を、コレステロール及びポリエチレングリコール基に共有結合し得るカチオン性リポポリマーと接触させることによって安定化され得る。ポリマー製剤は、米国特許出願公開第２００９００４２８２９号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載の方法を用いてカチオン性リポポリマーと接触させてもよい。

【0203】

カチオン性担体としては、限定するものではないが、ポリエチレンイミン、ポリ（トリメチレンイミン）、ポリ（テトラメチレンイミン）、ポリプロピレンイミン、アミノグリコシドポリアミン、ジデオキシ－ジアミノ－ｂ－シクロデキストリン、スペルミン、スペルミジン、ポリ（２－ジメチルアミノ）エチルメタクリレート、ポリ（リジン）、ポリ（ヒスチジン）、ポリ（アルギニン）、カチオン化ゼラチン、デンドリマー、キトサン、１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ－［１－（２，３－ジオレオイルオキシ）プロピル］－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１－［２－（オレオイルオキシ）エチル］－２－オレイル－３－（２－ヒドロキシエチル）イミダゾリニウムクロリド（ＤＯＴＩＭ）、２，３－ジオレイルオキシ－Ｎ－［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－プロパンアミニウムトリフルオロ酢酸（ＤＯＳＰＡ）、３Ｂ－［Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタン）－カルバモイル］コレステロール塩酸塩（ＤＣ－コレステロールＨＣｌ）ジヘプタデシルアミドグリシルスペルミジン（ＤＯＧＳ）、Ｎ，Ｎ－ジステアリル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、Ｎ－（１，２－ジミリスチルオキシプロパ－３－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、Ｎ，Ｎ－ジオレイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウムクロリドＤＯＤＡＣ）及びそれらの組み合わせが挙げられる。

【0204】

本開示のｓａＲＮＡは、１つ以上のポリマーのポリプレックスとして製剤化され得る（米国特許出願公開第２０１２０２３７５６５号及び同第２０１２０２７０９２７号。それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。一実施形態では、ポリプレックスは２つ以上のカチオン性ポリマーを含む。カチオン性ポリマーは、直鎖状ＰＥＩなどのポリ（エチレンイミン）（ＰＥＩ）を含み得る。

【0205】

本開示のｓａＲＮＡは、ポリマー、脂質、及び／又はリン酸カルシウムなど（ただしこれに限定されない）の他の生分解性薬剤の組み合わせを使用してナノ粒子として製剤化することもできる。構成要素は、コアシェル、ハイブリッド、及び／又はレイヤーバイレイヤーアーキテクチャで組み合わせることができ、ｓａＲＮＡの送達を強化するためにナノ粒子の微調整を可能にすることができる（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍａｔｅｒ．２００６ ５：７９１－７９６；Ｆｕｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．２００８ ２９：１５２６－１５３２；ＤｅＫｏｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２０１１ ６３：７４８－７６１；Ｅｎｄｒｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．２０１１ ３２：７７２１－７７３１；Ｓｕ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ．２０１１ Ｊｕｎ ６；８（３）：７７４－８７；その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。非限定的な例として、ナノ粒子は、親水性－疎水性ポリマー（例えば、ＰＥＧ－ＰＬＧＡ）、疎水性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）及び／又は親水性ポリマーなどであるがこれらに限定されない複数のポリマーを含み得る（国際公開第２０１２０２２５１２９号；その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。

【0206】

生分解性リン酸カルシウムナノ粒子を脂質及び／又はポリマーと組み合わせて使用することで、ｉｎ ｖｉｖｏでｓａＲＮＡを送達することができる。一実施形態では、アニサミドなどの標的化リガンドも含み得る脂質被覆リン酸カルシウムナノ粒子を、本開示のｓａＲＮＡを送達するために使用することができる。例えば、マウス転移性肺モデルにｓｉＲＮＡを効果的に送達するために、脂質でコーティングされたリン酸カルシウムナノ粒子が使用された（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｏｎｔｒ Ｒｅｌ．２０１０ １４２：４１６－４２１；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｏｎｔｒ Ｒｅｌ．２０１２ １５８：１０８－１１４；Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１２ ２０：６０９－６１５；その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。この送達システムは、ｓｉＲＮＡの送達を向上させるために、標的ナノ粒子と、エンドソーム脱出を促進する成分であるリン酸カルシウムとの両方を組み合わせる。

【0207】

一実施形態では、リン酸カルシウムとＰＥＧ－ポリアニオンブロックコポリマーとを使用して、ｓａＲＮＡを送達することができる（Ｋａｚｉｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｏｎｔｒ Ｒｅｌ．２００４ ９７：３４５－３５６；Ｋａｚｉｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｏｎｔｒ Ｒｅｌ．２００６ １１１：３６８－３７０；その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。

【0208】

一実施形態では、ＰＥＧ－電荷変換ポリマー（Ｐｉｔｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ．２０１１ ３２：３１０６－３１１４）を使用して、本開示のｓａＲＮＡを送達するためのナノ粒子を形成することができる。ＰＥＧ－電荷変換ポリマーは、酸性ｐＨでポリカチオンに切断されることにより、ＰＥＧ－ポリアニオンブロックコポリマーを改良し、エンドソーム脱出を促進し得る。

【0209】

コアシェルナノ粒子の使用は、カチオン性架橋ナノゲルコア及び様々なシェルを合成するためのハイスループットアプローチにさらに焦点を当てている（Ｓｉｅｇｗａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１１ １０８：１２９９６－１３００１）。ポリマーナノ粒子の複合体形成、送達、及び内部移行は、ナノ粒子のコア成分とシェル成分の両方の化学組成を変更することによって正確に制御できる。例えば、コアシェルナノ粒子は、ナノ粒子にコレステロールを共有結合させた後、マウス肝細胞にｓａＲＮＡを効率的に送達し得る。

【0210】

一実施形態では、ＰＬＧＡの中間層と、ＰＥＧを含有する外側の中性脂質層とを含む中空脂質コアを、本開示のｓａＲＮＡの送達に使用することができる。非限定的な例として、ルシフェラーゼ発現腫瘍を有するマウスにおいて、脂質－ポリマー－脂質ハイブリッドナノ粒子は、従来のリポプレックスと比較してルシフェラーゼ発現を有意に抑制することが確認された（Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ，Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ．２０１１ ５０：７０２７－７０３１；その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。

【0211】

一実施形態では、脂質ナノ粒子は、本明細書に開示されるｓａＲＮＡのコア及びポリマーシェルを含み得る。ポリマーシェルは、本明細書に記載されているポリマー及び当技術分野で知られているポリマーのいずれであってもよい。さらなる実施形態では、ポリマーシェルを使用して、コア内の修飾された核酸を保護することができる。

【0212】

本開示のｓａＲＮＡとともに使用するためのコアシェルナノ粒子は、米国特許第８，３１３，７７７号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載の方法によって形成され得る。

【0213】

一実施形態では、コアシェルナノ粒子は、本明細書に開示されるｓａＲＮＡのコア及びポリマーシェルを含み得る。ポリマーシェルは、本明細書に記載されているポリマー及び当技術分野で知られているポリマーのいずれであってもよい。さらなる実施形態において、ポリマーシェルは、コア内のｓａＲＮＡを保護するために使用され得る。非限定的な例として、コアシェルナノ粒子は、目の病気又は障害を治療するために使用され得る（例えば、米国特許出願公開第２０１２０３２１７１９号を参照。その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。

【0214】

一実施形態では、本明細書に記載の製剤とともに使用されるポリマーは、国際公開第２０１１１２００５３号（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているような修飾ポリマー（変性ポリアセタールなどであるがこれに限定されない）であり得る。

【0215】

送達
本開示は、薬物送達の科学における進歩の可能性を考慮した、任意の適切な経路による、治療、予防、薬学的、診断又は画像化のいずれかのためのｓａＲＮＡの送達を包含する。送達は裸のまま（ｎａｋｅｄ）の場合もあれば、調合された場合もある。

【0216】

本開示のｓａＲＮＡは、裸のままで細胞に送達され得る。本明細書で使用される場合、「裸の」とは、トランスフェクションを促進する薬剤を伴わずにｓａＲＮＡを送達することを指す。例えば、細胞に送達されるｓａＲＮＡは修飾を含まなくてもよい。裸のｓａＲＮＡは、当技術分野で知られている投与経路及び本明細書に記載される投与経路を使用して細胞に送達され得る。

【0217】

本開示のｓａＲＮＡは、本明細書に記載の方法を使用して製剤化され得る。製剤は、修飾され及び／又は修飾されていないｓａＲＮＡを含み得る。製剤はさらに、限定するものではないが、細胞浸透剤、薬学的に許容される担体、送達剤、生侵食性又は生体適合性ポリマー、溶媒、及び徐放性送達デポーを含み得る。製剤化されたｓａＲＮＡは、当技術分野で知られている投与経路及び本明細書に記載される投与経路を使用して細胞に送達され得る。

【0218】

組成物はまた、直接浸漬又は直接浴、カテーテルの使用、ゲル、粉末、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、及び／又は滴下によるもの、組成物をコーティングし又は含浸させたファブリック又は生分解性材料などの基材を使用することによるものなどを含むがこれらに限定されない、当技術分野におけるいくつかの方法のいずれかで器官又は組織に直接送達するために製剤化され得る。本開示のｓａＲＮＡはまた、レトロウイルス複製ベクター（ＲＲＶ）にクローニングされ、細胞に形質導入され得る。

【0219】

投与
本開示のｓａＲＮＡは、治療的に有効な結果をもたらす任意の経路によって投与され得る。これらには、限定するものではないが、経腸、胃腸、硬膜外、経口、経皮、硬膜外（硬膜外）、脳内（大脳内）、脳室内（脳室内）、皮上（皮膚への適用）、皮内（皮膚そのものへ）、皮下（皮膚の下）、経鼻投与（鼻から）、静脈内（静脈へ）、動脈内（動脈へ）、筋肉内（筋肉へ）、心臓内（心臓へ）、骨内注入（骨髄へ）、くも膜下腔内（脊柱管へ）、腹腔内、（腹膜への注入又は注射）、膀胱内注入、硝子体内、（目を通して）、海綿体腔注射、（陰茎の根元へ）、膣内投与、子宮内、羊水外投与、経皮（全身に分布させるための無傷の皮膚を通した拡散）、経粘膜（粘膜を通した拡散）、注入（鼻から吸う）、舌下、口唇下、浣腸、点眼（結膜上へ）、又は点耳薬による投与が含まれる。特定の実施形態では、組成物は、血液脳関門、血管関門、又は他の上皮関門を通過できる方法で投与され得る。２０１２年１２月１４日に出願された国際公開第２０１３／０９０６４８号（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示される投与経路を、本開示のｓａＲＮＡを投与するために使用することができる。

【0220】

いくつかの実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは腫瘍内に送達される。
剤形
本明細書に記載の医薬組成物は、局所用、鼻腔内用、気管内用、又は注射用（例えば、静脈内、眼内、硝子体内、筋肉内、心臓内、腹腔内、皮下）などの本明細書に記載の剤形に製剤化することができる。２０１２年１２月１４日に出願された国際公開第２０１３／０９０６４８号（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている液体剤形、注射用製剤、経肺剤形、及び固体剤形は、本開示のｓａＲＮＡのための剤形として使用され得る。

【0221】

ＩＩＩ．使用方法
本開示の一態様は、本開示のｓａＲＮＡ、及びｓａＲＮＡ及び少なくとも１つの薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を使用する方法を提供する。本開示のｓａＲＮＡは、その標的遺伝子の発現を調節する。一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡを投与することを含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで標的遺伝子の発現を調節する方法が提供される。一実施形態では、標的遺伝子の発現は、本開示のｓａＲＮＡの非存在下での標的遺伝子の発現と比較して、本開示のｓａＲＮＡの存在下で少なくとも５、１０、２０、３０、４０％、又は少なくとも４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５％、又は少なくとも８０％増加する。さらなる実施形態では、標的遺伝子の発現は、本開示のｓａＲＮＡの非存在下での標的遺伝子の発現と比較して、本開示のｓａＲＮＡの存在下で少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０倍、又は少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０倍、又は少なくとも６０、７０、８０、９０、１００倍増加する。

【0222】

ＳＴＩＮＧ（ＴＭＥＭ１７３）遺伝子
本出願の一態様は、本開示のＴＭＥＭ１７３－ｓａＲＮＡを投与することを含む、ＳＴＩＮＧ（インターフェロン応答刺激因子ＣＧＡＭＰインタラクター（Ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ Ｏｆ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ＣＧＡＭＰ Ｉｎｔｅｒａｃｔｏｒ）；ＳＴＩＮＧ１；ＴＭＥＭ１７３）遺伝子の発現を調節する方法を提供する。一実施形態では、ＴＭＥＭ１７３遺伝子の発現は、本開示のＴＭＥＭＩ７３－ｓａＲＮＡの非存在下でのＴＭＥＭ１７３遺伝子の発現と比較して、本開示のＴＭＥＭＩ７３－ｓａＲＮＡの存在下で少なくとも２０、３０、４０％、又は少なくとも４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５％、又は少なくとも８０％増加する。さらなる実施形態では、ＴＭＥＭ１７３遺伝子の発現は、本開示のＴＭＥＭＩ７３－ｓａＲＮＡの非存在下でのＳＴＩＮＧ遺伝子の発現と比較して、本開示のＴＭＥＭＩ７３－ｓａＲＮＡの存在下で少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０倍、又は少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０倍、又は少なくとも６０、７０、８０、９０、１００倍増加する。ＴＭＥＭ１７３遺伝子の発現の調節は、ＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡレベルの変化によって反映又は決定され得る。

【0223】

ＴＭＥＭ１７３遺伝子は、自然免疫シグナル伝達に重要な小胞体アダプタータンパク質をコードする。これはサイクリックＧＭＰ－ＡＭＰ（ｃＧＡＭＰ）によって活性化されることで、下流の自然免疫シグナル伝達を引き起こす。ｃＧＡＭＰは、ｃＧＡＳが細胞内外来ＤＮＡを検出すると合成され、ｃＧＡＭＰ－ＳＴＩＮＧ経路の活性化は腫瘍免疫療法にとって重要である。ＳＴＩＮＧは、プロモーターの過剰メチル化によって様々な種類の腫瘍で下方制御されることが注目されている。ＤＮＡメチル化阻害剤によるＳＴＩＮＧ発現の回復により、腫瘍増殖の制御が改善される（Ｋｉｔａｊｉｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，ｖｏｌ．９（１）：３４（２０１９））。本開示のＴＭＥＭ１７３－ｓａＲＮＡは、ＳＴＩＮＧに関連する疾患又は障害を予防又は治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、本開示のＴＭＥＭ１７３－ｓａＲＮＡは、がん、ＴＭＥＭ１７３関連血管障害、乳児期発症及び家族性凍瘡状狼瘡などの疾患を予防又は治療するために使用される。

【0224】

いくつかの実施形態では、本発明のｓａＲＮＡは、ＴＭＥＭ１７３遺伝子に関連する任意の疾患を治療するために使用され得る。様々な実施形態において、対象を治療するための方法が提供され、この方法は、がんを有する対象、がんを有する疑いのある対象、又はがんの素因を有する対象に、治療有効量の本開示のｓａＲＮＡを投与することを含む。本開示によれば、がんは、制御されない細胞増殖、例えば過剰増殖を特徴とする任意の疾患又は疾病を包含する。がんは、腫瘍、例えば固形腫瘍又は任意の新生物を特徴とし得る。いくつかの実施形態では、がんは固形腫瘍である。

【0225】

さらに、いくつかの実施形態では、本発明のｓａＲＮＡは、サイズ（重量、表面積又は体積）の正味値として測定しても、経時的な速度として測定しても、複数の種類の腫瘍において腫瘍増殖を阻害するのに有効である。

【0226】

いくつかの実施形態では、本発明のｓａＲＮＡでの治療後に、腫瘍のサイズが約６０％以上減少する。いくつかの実施形態では、腫瘍のサイズは、重量及び／又は面積及び／又は体積で測定して、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約１００％減少する。

【0227】

様々な実施形態において、がんとしては、限定するものではないが、聴神経腫瘍、急性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（単球性、骨髄芽球性、腺がん、血管肉腫、星状細胞腫、骨髄単球性及び前骨髄球性）、急性Ｔ細胞白血病、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、脳がん、乳がん、気管支がん、子宮頸がん、軟骨肉腫、脊索腫、絨毛がん、慢性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病、結腸がん、結腸直腸がん、頭蓋咽頭腫、嚢胞腺がん、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、増殖異常変化（異形成及び化生）、胎児がん、子宮内膜がん、内皮肉腫、上衣腫、上皮がん、赤白血病、食道がん、エストロゲン受容体陽性乳がん、本態性血小板血症、ユーイングの腫瘍、線維肉腫、卵胞リンパ腫、生殖細胞精巣がん、神経膠腫、重鎖病、血管芽細胞腫、肝腫、肝細胞がん、ホルモン感覚性前立腺がん、平滑筋腫、脂肪肉腫、肺がん、リンパ管内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ芽球性白血病、リンパ腫（ホジキン及び非ホジキン）、膀胱、乳房、結腸、肺、卵巣、膵臓、前立腺、皮膚、子宮の悪性腫瘍及び過剰増殖性疾患、Ｔ細胞又はＢ細胞由来のリンパ性悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、髄様がん、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄性白血病、骨髄腫、粘液肉腫、神経芽腫、非小細胞肺がん、乏突起膠腫、口腔がん、骨原性肉腫、卵巣がん、膵臓がん、乳頭状腺がん、乳頭がん、松果体腫、真性赤血球増加症、前立腺がん、直腸がん、腎細胞がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、肉腫、脂腺がん、精上皮腫、皮膚がん、小細胞肺がん、固形腫瘍（がん腫及び肉腫）、小細胞肺がん、胃がん、扁平上皮がん、滑膜腫、汗腺がん、甲状腺がん、ワルデンストレームマクログロブリン血症、精巣腫瘍、子宮がん、及びウィルムス腫瘍が挙げられる。他のがんには、原発がん、転移がん、中咽頭がん、下咽頭がん、肝臓がん、胆嚢がん、胆管がん、小腸がん、尿路がん、腎臓がん、尿路上皮がん、女性生殖器がん、子宮がん、妊娠性絨毛性疾患、男性生殖器がん、精嚢がん、精巣がん、胚細胞腫瘍、内分泌腺腫瘍、甲状腺がん、副腎がん、下垂体がん、血管腫、骨軟組織から生じる肉腫、カポジ肉腫、神経がん、眼がん、髄膜がん、膠芽腫、神経腫、神経芽腫、神経鞘腫、白血病などの造血系悪性腫瘍から生じる固形腫瘍、転移性黒色腫、再発又は持続性の卵巣上皮がん、卵管がん、原発性腹膜がん、消化管間質腫瘍、結腸直腸がん、胃がん、黒色腫、多形神経膠芽腫、非扁平上皮非小細胞肺がん、悪性神経膠腫、上皮性卵巣がん、原発性腹膜漿液性がん、転移性肝がん、神経内分泌がん、難治性悪性腫瘍、トリプルネガティブ乳がん、ＨＥＲ２増幅乳がん、上咽頭がん、口腔がん、胆道、肝細胞がん、頭頸部扁平上皮がん（ＳＣＣＨＮ）、非髄様甲状腺がん、再発性多形神経膠芽腫、神経線維腫症１型、中枢神経系がん、脂肪肉腫、平滑筋肉腫、唾液腺がん、粘膜黒色腫、先端／ほくろ黒色腫、傍神経節腫、褐色細胞腫、進行転移がん、固形腫瘍、トリプルネガティブ乳がん、結腸直腸がん、肉腫、黒色腫、腎がん、子宮内膜がん、甲状腺がん、横紋筋肉腫、多発性骨髄腫、卵巣がん、神経膠芽腫、消化管間質腫瘍、マントル細胞リンパ腫、及び難治性悪性腫瘍が挙げられる。

【0228】

いくつかの実施形態では、がんは固形腫瘍である。
いくつかの実施形態では、がんは、肝細胞がんなどの肝臓がん、膵臓がん、又は卵巣がんである。

【0229】

本開示の方法によって治療可能ながんは、一般に哺乳類に発生する。哺乳類としては、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ラット、マウス、ウサギ、フェレット、モルモット、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、及びウシが挙げられる。

【0230】

ＩＶ．キット及びデバイス
キット
本開示は、本開示の方法を便利に及び／又は効果的に実施するための様々なキットを提供する。典型的には、キットは、使用者が対象の複数の治療を行うこと、及び／又は複数の実験を行うことを可能にするのに十分な量及び／又は数の成分を含む。

【0231】

一実施形態では、本開示は、本開示のｓａＲＮＡ、又は本開示のｓａＲＮＡ、他の遺伝子を調節するｓａＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、又は他のオリゴヌクレオチド分子の組み合わせを含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏで遺伝子の発現を調節するためのキットを提供する。

【0232】

キットはさらに、包装及び説明書及び／又は製剤組成物を形成するための送達剤を含み得る。送達剤は、生理食塩水、緩衝溶液、リピドイド、デンドリマー、又は本明細書に開示される任意の送達剤を含み得る。

【0233】

１つの非限定的な例において、緩衝液は、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、リン酸塩及び／又はＥＤＴＡを含み得る。別の非限定的な例では、緩衝液には、限定するものではないが、生理食塩水、２ｍＭカルシウムを含む生理食塩水、５％スクロース、２ｍＭカルシウムを含む５％スクロース、５％マンニトール、２ｍＭカルシウムを含む５％マンニトール、乳酸リンゲル液、塩化ナトリウム、２ｍＭのカルシウム及びマンノースを含む塩化ナトリウムが含まれ得る（米国特許出願公開第２０１２０２５８０４６号。その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。さらに別の非限定的な例では、緩衝液を沈殿させてもよく、又は凍結乾燥させてもよい。各成分の量は、一貫した再現可能な高濃度の生理食塩水又は単純な緩衝液の配合を可能にするために変化させてもよい。成分はまた、一定期間にわたって及び／又は様々な条件下で緩衝液中のｓａＲＮＡの安定性を高めるために変化させてもよい。

【0234】

デバイス
本開示は、本開示のｓａＲＮＡを組み込むことができるデバイスを提供する。これらのデバイスは、人間の患者など、それを必要とする対象に即座に送達できる安定した製剤を含む。

【0235】

デバイスの非限定的な例としては、ポンプ、カテーテル、針、経皮パッチ、加圧嗅覚送達デバイス、イオン導入デバイス、多層マイクロ流体デバイスが挙げられる。デバイスは、単回、複数回又は分割投薬計画に従って本開示のｓａＲＮＡを送達するために使用され得る。デバイスは、本開示のｓａＲＮＡを生体組織全体、腎内、皮下、又は筋肉内に送達するために使用され得る。オリゴヌクレオチドの送達に適したデバイスのさらなる例は、２０１２年１２月１４日に出願された国際公開第２０１３／０９０６４８号（その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されている。

【0236】

定義
便宜上、明細書、実施例、及び添付の特許請求の範囲で使用される特定の用語及び語句の意味を以下に示す。本明細書の他の部分での用語の使用とこのセクションで提供されるその定義との間に明らかな不一致がある場合は、このセクションの定義が優先される。

【0237】

約：本明細書で使用される場合、「約」という用語は、記載された値の＋／－１０％を意味する。
組み合わせて投与される：本明細書で使用される場合、「組み合わせて投与される」又は「組み合わせ投与」という用語は、２つ以上の薬剤が同時に又はある間隔内で対象に投与され、患者への各薬剤の効果の重複があり得ることを意味する。いくつかの実施形態では、それらは互いに約６０、３０、１５、１０、５、又は１分以内に投与される。いくつかの実施形態では、薬剤の投与は、組み合わせ効果（例えば、相乗効果）が得られるように十分に近い間隔で投与される。

【0238】

アミノ酸：本明細書で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、すべての天然に存在するＬ－アルファ－アミノ酸を指す。アミノ酸は、次のように１文字又は３文字の指定によって識別される：アスパラギン酸（Ａｓｐ：Ｄ）、イソロイシン（ｌｉｅ：Ｉ）、スレオニン（Ｔｈｒ：Ｔ）、ロイシン（Ｌｅｕ：Ｌ）、セリン（Ｓｅｒ：Ｓ）、チロシン（Ｔｙｒ：Ｙ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ：Ｅ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ：Ｆ）、プロリン（Ｐｒｏ：Ｐ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ：Ｈ）、グリシン（Ｇｌｙ：Ｇ）、リジン（Ｌｙｓ：Ｋ）、アラニン（Ａｌａ：Ａ）、アルギニン（Ａｒｇ：Ｒ）、システイン（Ｃｙｓ：Ｃ）、トリプトファン（Ｔｒｐ：Ｗ）、バリン（Ｖａｌ：Ｖ）、グルタミン（Ｇｌｎ：Ｑ）メチオニン（Ｍｅｔ：Ｍ）、アスパラギン（Ａｓｎ：Ｎ）。最初にアミノ酸名、続いて括弧内にそれぞれ３文字と１文字のコードを記す。

【0239】

動物：本明細書で使用される場合、「動物」という用語は、動物界のあらゆるメンバーを指す。いくつかの実施形態では、「動物」は、発達の任意の段階にあるヒトを指す。いくつかの実施形態では、「動物」は、発生の任意の段階にある非ヒト動物を指す。特定の実施形態では、非ヒト動物は哺乳類（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類、又はブタ）である。いくつかの実施形態では、動物には、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、及び虫が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、動物は、トランスジェニック動物、遺伝子操作された動物、又はクローンである。

【0240】

およそ：本明細書で使用される場合、「およそ」又は「約」という用語は、対象とする１つ以上の値に適用される場合、記載された基準値に類似した値を指す。特定の実施形態では、「およそ」又は「約」という用語は、特に明記されていない限り、又は文脈から明らかな場合を除き、記載された基準値のいずれかの方向（より大きい又はより小さい）の２５％以内、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、又はそれ未満の範囲内に該当する値の範囲を指す（ただし、そのような数値が可能な範囲である１００％を超える場合を除く）。

【0241】

～と結びついた：本明細書で使用される場合、「～と結びついた」、「コンジュゲートされた」、「連結した」、「結合された」、及び「係留された」という用語は、２つ以上の部分に関して使用する場合、それらの部分が、直接的に、又は結合剤として機能する１つ以上の追加部分を介して互いに物理的に結びつけられ又は結合されることで、十分に安定な構造を形成し、その構造が使用される条件、例えば生理学的条件下で上記部分が物理的に結びついたままとなっていることを意味する。「結びつき」は、厳密に直接の共有結合による化学結合である必要はない。また、イオン結合又は水素結合、又はハイブリダイゼーションに基づくつながりが、「結びつけられた」実体が物理的に結びついたままであるように十分に安定していることを示唆する場合もある。

【0242】

二機能又は二機能性：本明細書で使用される場合、「二機能」及び「二機能性」という用語は、少なくとも２つの機能を可能にし又は維持できる任意の物質、分子又は部分を指す。機能は、同じ結果に影響を与える場合もあれば、異なる結果に影響を与える場合もある。機能を生じさせる構造は同じである場合もあれば、異なる場合もある。例えば、本開示の二機能性ｓａＲＮＡは、細胞傷害性ペプチド（第１の機能）を含み得る一方で、このｓａＲＮＡを含むヌクレオシドは、それ自体で細胞傷害性である（第２の機能）。

【0243】

生体適合性：本明細書で使用される場合、「生体適合性」という用語は、傷害、毒性、又は免疫系による拒絶反応の危険性がほとんど又は全くなく、生きた細胞、組織、器官又は系と適合することを意味する。

【0244】

生分解性：本明細書で使用される場合、「生分解性」という用語は、生物の作用によって無害な生成物に分解できることを意味する。
生物学的に活性な：本明細書で使用される場合、「生物学的に活性な」という語句は、生物学的システム及び／又は生物において活性を有する任意の物質の特性を指す。例えば、生物に投与されたときにその生物に対する生物学的効果を有する物質は、生物学的に活性であると考えられる。特定の実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、ｓａＲＮＡの一部であっても生物学的に活性であるか、又は生物学的に関連すると考えられる活性を模倣する場合、生物学的に活性であると考えられ得る。

【0245】

がん：本明細書で使用される場合、個体における「がん」という用語は、制御されない増殖、不死性、転移能、急速な成長及び増殖速度、及び特定の特徴的な形態学的特徴など、がんを引き起こす細胞に典型的な特徴を有する細胞の存在を指す。多くの場合、がん細胞は腫瘍の形態をとるが、そのような細胞は個体内に単独で存在することもあれば、白血病細胞などの独立した細胞として血流中を循環することもある。

【0246】

細胞増殖：本明細書で使用される場合、「細胞増殖」という用語は、主に細胞数の増加に関連しており、これは、細胞再生（すなわち、増殖）の速度が細胞死（例えば、アポトーシス又は壊死によるもの）の速度より大きい場合に起こり、細胞集団のサイズの増加を生じる。しかし、特定の状況では、その増殖の小さな要素は、個々の細胞の細胞サイズ又は細胞質容積の増加にも起因する可能性がある。したがって、細胞増殖を阻害する薬剤は、増殖を阻害するか細胞死を刺激するか、あるいはその両方によって細胞増殖を阻害することができ、その結果、これら２つの相反するプロセス間の平衡が変化する。

【0247】

細胞種：本明細書で使用される場合、「細胞種」という用語は、所与の供給源（例えば、組織、器官）からの細胞、又は所与の分化状態にある細胞、又は所与の病状もしくは遺伝子構造に関連する細胞を指す。

【0248】

染色体：本明細書で使用される場合、「染色体」という用語は、細胞内に見られるＤＮＡとタンパク質の組織化された構造を指す。
相補的：本明細書で使用される場合、核酸に関する「相補的」という用語は、ヌクレオチド間又は核酸間、例えば、二本鎖ＤＮＡ分子の２本の鎖の間又はオリゴヌクレオチドプローブと標的との間などのハイブリダイゼーション又は塩基対合が相補的であることを指す。

【0249】

状態：本明細書で使用される場合、「状態」という用語は、任意の細胞、器官、器官系又は生物の状態を指す。状態は、病気の状態を反映する場合もあれば、単に実体の生理学的症状や状況を反映する場合もある。状態は、疾患の巨視的症状などの表現型状態、又は状態に関連する基礎となる遺伝子又はタンパク質発現プロファイルなどの遺伝子型状態として特徴付けられる場合がある。状態は良性又は悪性の場合がある。

【0250】

制御放出：本明細書で使用される場合、「制御放出」という用語は、治療結果をもたらす特定の放出パターンに従う医薬組成物又は化合物の放出プロファイルを指す。
細胞増殖抑制：本明細書で使用される場合、「細胞増殖抑制」とは、細胞（例えば、哺乳類細胞（例えば、ヒト細胞））、細菌、ウイルス、真菌、原生動物、寄生虫、プリオン、又はそれらの組み合わせの成長、分裂、又は増殖を、阻害し、減少させ、又は抑制することを指す。

【0251】

細胞毒性：本明細書で使用される場合、「細胞毒性」とは、細胞（例えば、哺乳類細胞（例えば、ヒト細胞））、細菌、ウイルス、真菌、原生動物、寄生虫、プリオン、又はそれらの組み合わせを殺す、又はそれらに対して有害な、毒性のある、又は致命的な影響を引き起こすことを指す。

【0252】

送達：本明細書で使用される場合、「送達」とは、化合物、物質、実体、部分、カーゴ、又はペイロードを送達する行為又は方法を指す。
送達剤：本明細書で使用される場合、「送達剤」は、標的細胞への本開示のｓａＲＮＡのｉｎ ｖｉｖｏ送達を少なくとも部分的に促進する任意の物質を指す。

【0253】

不安定化：本明細書で使用される場合、「不安定な」、「不安定化する」、又は「不安定化領域」という用語は、同じ領域又は分子の出発形態、野生型又は天然型よりも安定性が低い領域又は分子を意味する。

【0254】

検出可能な標識：本明細書で使用される場合、「検出可能な標識」は、ラジオグラフィー、蛍光、化学発光、酵素活性、吸光度などを含む当技術分野で知られている方法によって容易に検出される別の実体と結合され、組み込まれ、又は結びついている１つ以上のマーカー、シグナル、又は部分を指す。検出可能な標識には、放射性同位体、蛍光団、発色団、酵素、色素、金属イオン、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン及びハプテンなどのリガンド、量子ドットなどが含まれる。検出可能な標識は、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド内の任意の位置に位置し得る。それらはヌクレオチド内に存在することも、５’末端又は３’末端に存在することもある。

【0255】

カプセル化する：本明細書で使用される場合、「カプセル化する」という用語は、封入する、取り囲む、又は包み込むことを意味する。
操作された：本明細書で使用される場合、本開示の実施形態は、構造的であろうと化学的であろうと、出発時の、野生型又は天然型の分子から異なる特徴又は特性を有するように設計される場合、「操作された」とされる。

【0256】

同等の対象：本明細書で使用される場合、「同等の対象」とは、例えば、同様の年齢、性別、及び健康状態（例えば、肝臓の健康状態又はがんの段階）の対象、又は本開示による治療前の同じ対象であり得る。同等の対象は、本開示によるｓａＲＮＡによる治療を受けていないという点で「未治療」である。しかしながら、本開示のｓａＲＮＡで治療される対象が同一又は同等の従来の抗がん治療を受けることを条件として、同等の対象は従来の抗がん治療を受けてもよい。

【0257】

エキソソーム：本明細書で使用される場合、「エキソソーム」は、哺乳類細胞によって分泌される小胞である。
発現：本明細書で使用される場合、核酸配列の「発現」は、以下の事象の１つ以上を指す：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡ鋳型の生成（例えば、転写による）；（２）ＲＮＡ転写物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、及び／又は３’末端プロセシングによる）；（３）ＲＮＡのポリペプチド又はタンパク質への翻訳；及び（４）ポリペプチド又はタンパク質の翻訳後修飾。

【0258】

特徴：本明細書で使用される「特徴」とは、特徴、特性、又は特徴的な要素を指す。
製剤：本明細書で使用される場合、「製剤」には、本開示の少なくとも１つのｓａＲＮＡ及び送達剤が含まれる。

【0259】

断片：本明細書で使用される「断片」とは、一部分を指す。例えば、タンパク質の断片は、培養細胞から単離された全長タンパク質を消化することによって得られるポリペプチドを含み得る。オリゴヌクレオチドの断片は、ヌクレオチド又はヌクレオチドの領域を含み得る。

【0260】

機能的：本明細書で使用される場合、「機能的」生体分子は、それを特徴付ける特性及び／又は活性を示す形態の生体分子である。
遺伝子：本明細書で使用される場合、「遺伝子」という用語は、ポリペプチド又は前駆体の生成に必要な制御配列及びほとんどの場合コード配列を含む核酸配列を指す。しかし、遺伝子は翻訳されず、代わりに制御性又は構造ＲＮＡ分子をコードする場合がある。

【0261】

遺伝子は、植物、真菌、動物、細菌のゲノム又はエピソーム、真核生物、核又はプラスミドＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、又は化学合成ＤＮＡを含む、当技術分野で知られている任意の供給源に全体又は部分的に由来し得る。遺伝子は、生物活性又は発現生成物の化学構造、発現速度、又は発現制御の方法に影響を与える可能性のあるコード領域又は非翻訳領域に１つ以上の改変を含み得る。このような改変には、１つ以上のヌクレオチドの突然変異、挿入、欠失、及び置換が含まれるが、これらに限定されない。遺伝子は、途切れのないコード配列を構成することも、適切なスプライス接合部によって結合された１つ以上のイントロンを含むこともできる。

【0262】

遺伝子発現：本明細書で使用される場合、「遺伝子発現」という用語は、核酸配列が転写、及びほとんどの場合翻訳を問題なく受けてタンパク質又はペプチドを生成するプロセスを指す。明確にするために、「遺伝子発現」の測定に言及する場合、これは、転写の核酸産物（例えば、ＲＮＡ又はｍＲＮＡ）、又は翻訳のアミノ酸産物（例えば、ポリペプチド又はペプチド）の測定であってもよいことを意味すると理解されるべきである。ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ポリペプチド及びペプチドの量又はレベルを測定する方法は、当技術分野でよく知られている。

【0263】

ゲノム：「ゲノム」という用語は、核ＤＮＡ成分、染色体又は染色体外ＤＮＡ、及び細胞質ドメイン（例えば、ミトコンドリアＤＮＡ）を含む、生物の完全なＤＮＡ相補体を含むことを意図している。

【0264】

相同性：本明細書で使用される場合、「相同性」という用語は、ポリマー分子間、例えば核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／又はＲＮＡ分子）間及び／又はポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。いくつかの実施形態では、ポリマー分子は、それらの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％同一又は類似である場合、互いに「相同」であるとみなされる。「相同」という用語は必然的に、少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチド又はポリペプチド配列）間の比較を指す。本開示によれば、２つのポリヌクレオチド配列は、それらがコードするポリペプチドが、少なくとも１つのひとつながりの少なくとも約２０個のアミノ酸について少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、さらには９９％である場合に相同であるとみなされる。いくつかの実施形態では、相同ポリヌクレオチド配列は、少なくとも４～５個の固有に特定されたひとつながりのアミノ酸をコードする能力によって特徴付けられる。長さが６０ヌクレオチド未満のポリヌクレオチド配列の場合、相同性は、少なくとも４～５個の固有に特定されたひとつながりのアミノ酸をコードする能力によって決定される。本開示によれば、２つのタンパク質配列は、タンパク質が少なくとも１つのひとつながりの少なくとも約２０個のアミノ酸について少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％同一である場合、相同であるとみなされる。

【0265】

「過剰増殖細胞」という用語は、同等の健康な細胞（「対照」と呼ばれる場合がある）の増殖速度と比較して異常に高い速度で増殖している任意の細胞を指し得る。「同等の健康な」細胞は、細胞の正常かつ健康な対応物である。したがって、それは、比較細胞と同じ機能を果たす、同じ種類の、例えば同じ器官に由来する細胞である。例えば、過剰増殖性肝細胞の増殖は、健康な肝細胞を参照して評価されるべきであり、過剰増殖性前立腺細胞の増殖は、健康な前立腺細胞を参照して評価されるべきである。

【0266】

「異常に高い」増殖速度とは、過剰増殖細胞の増殖速度が、同等の健康な（過剰増殖していない）細胞の増殖速度と比較して、少なくとも２０、３０、４０％、又は少なくとも４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５％、又は少なくとも８０％上昇することを意味する。「異常に高い」増殖速度は、同等の健康な細胞の増殖速度と比較して、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０倍、又は少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０倍、又は少なくとも６０、７０、８０、９０、１００倍上昇する速度を指す場合もある。

【0267】

過剰増殖性障害：本明細書で使用される場合、「過剰増殖性障害」は、上記で定義した過剰増殖性細胞が関与する任意の障害であり得る。過剰増殖性疾患の例には、がんなどの腫瘍性疾患、乾癬性関節炎、関節リウマチ、炎症性腸疾患などの胃の過剰増殖性疾患、乾癬、ライター症候群、毛孔性紅斑性粃糠疹を含む皮膚疾患、及び角化疾患の過剰増殖性変異体が含まれる。

【0268】

当業者は、過剰増殖細胞を同定する方法を十分に認識している。動物内の過剰増殖細胞の存在は、Ｘ線、ＭＲＩ、又はＣＴスキャンなどのスキャンを使用して特定され得る。また、ＭＴＴ、ＸＴＴ、ＭＴＳ又はＷＳＴ－１アッセイなどの細胞増殖アッセイを使用してｉｎ ｖｉｔｒｏで試料を培養することによっても過剰増殖細胞を特定することができ、又は細胞の増殖をアッセイすることができる。ｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞増殖は、フローサイトメトリーを使用して測定することもできる。

【0269】

同一性：本明細書で使用される場合、「同一性」という用語は、ポリマー分子間、例えば、オリゴヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／又はＲＮＡ分子）間及び／又はポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。２つのポリヌクレオチド配列の同一性パーセントの計算は、例えば、最適な比較目的のために２つの配列をアライメントすることによって行うことができる（例えば、最適なアライメントのために、第１及び第２の核酸配列の一方又は両方にギャップを導入することができ、同一でない配列は比較目的では無視できる）。特定の実施形態では、比較目的でアライメントされる配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％である。次いで、対応するヌクレオチド位置のヌクレオチドが比較される。第１の配列内の位置が第２の配列内の対応する位置と同じヌクレオチドによって占められている場合、これらの分子はその位置で同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップの数と、２つの配列を最適にアライメントするために導入する必要がある各ギャップの長さとを考慮した、これらの配列によって共有される同一位置の数の関数である。配列の比較と２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して実行できる。例えば、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８７；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ Ｉ，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；及びＳｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１（それぞれ参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているような方法を使用して決定することができる。例えば、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０重量残基テーブル、ギャップ長ペナルティ１２及びギャップペナルティ４を使用するＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている、ＭｅｙｅｒｓとＭｉｌｌｅｒのアルゴリズム（ＣＡＢＩＯＳ，１９８９，４：１１－１７）を使用して決定できる。あるいは、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＮＷＳｇａｐｄｎａＣＭＰマトリックスを使用するＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを使用して決定することもできる。配列間の同一性パーセントを決定するために一般的に使用される方法としては、限定するものではないが、Ｃａｒｉｌｌｏ，Ｈ．，ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．，ＳＩＡＭ Ｊ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．，４８：１０７３（１９８８）（参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているものが挙げられる。同一性を特定するための技術は、公的に入手可能なコンピュータプログラムに体系化されている。２つの配列間の相同性を決定するためのコンピュータソフトウェアの例には、限定するものではないが、ＧＣＧプログラムパッケージ、Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１２（１），３８７（１９８４））、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、及びＦＡＳＴＡ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ，２１５、４０３（１９９０））が挙げられる。

【0270】

遺伝子の発現を阻害する：本明細書で使用される場合、「遺伝子の発現を阻害する」という語句は、遺伝子の発現産物の量の減少を引き起こすことを意味する。発現産物は、遺伝子から転写されたＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）、又は遺伝子から転写されたｍＲＮＡから翻訳されたポリペプチドであり得る。典型的には、ｍＲＮＡのレベルの低下は、そこから翻訳されるポリペプチドのレベルの低下をもたらす。発現レベルは、ｍＲＮＡ又はタンパク質を測定するための標準的な技術を使用して決定され得る。

【0271】

ｉｎ ｖｉｔｒｏ：本明細書で使用される場合、「ｉｎ ｖｉｔｒｏ」という用語は、生物体内（例えば、動物、植物、又は微生物）ではなく、人工環境、例えば、試験管又は反応容器、細胞培養、ペトリ皿などで起こる事象を指す。

【0272】

ｉｎ ｖｉｖｏ：本明細書で使用される場合、「ｉｎ ｖｉｖｏ」という用語は、生物体内（例えば、動物、植物、又は微生物又はそれらの細胞もしくは組織）で起こる事象を指す。

【0273】

単離された：本明細書で使用される場合、「単離された」という用語は、（自然界又は実験環境を問わず）関連する成分の少なくとも一部から分離された物質又は実体を指す。単離された物質は、それらが結び付けられている物質と比較して、様々なレベルの純度を有し得る。単離された物質及び／又は実体は、最初にそれが結び付けられていた他の成分の少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又はそれ以上から分離され得る。いくつかの実施形態では、単離された薬剤は、約８０％以上、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％以上の純度である。本明細書で使用される場合、物質は、他の成分を実質的に含まない場合に「純粋」である。実質的に単離された：「実質的に単離された」とは、化合物がそれが形成又は検出された環境から実質的に分離されていることを意味する。部分的分離物には、例えば、本開示の化合物が豊富な組成物が含まれ得る。実質的な分離には、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、又は少なくとも約９９重量％の本開示の化合物又はその塩を含有する組成物を含むことができる。化合物及びその塩を単離する方法は、当技術分野では日常的である。

【0274】

標識：「標識」という用語は、物質、化合物、又は物体が検出可能となるように物体に組み込まれる物質又は化合物を指す。
リンカー：本明細書で使用される場合、リンカーは、原子のグループ、例えば、１０～１，０００個の原子を指し、炭素、アミノ、アルキルアミノ、酸素、硫黄、スルホキシド、スルホニル、カルボニル、及びイミンなどであるがこれらに限定されない原子又は基を含み得る。リンカーは、第１の末端で核酸塩基又は糖部分上の修飾されたヌクレオシド又はヌクレオチドに結合することができ、第２の末端でペイロード、例えば検出可能な薬剤又は治療薬に結合することができる。リンカーは、核酸配列への組み込みに干渉しないように十分な長さであり得る。リンカーは、本明細書に記載されるように、ｓａＲＮＡコンジュゲートを形成するためや、ペイロードを投与するためなど、任意の有用な目的に使用することができる。

【0275】

リンカーに組み込むことができる化学基の例としては、限定するものではないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、エーテル、チオエーテル、エステル、アルキレン、ヘテロアルキレン、アリール、又はヘテロシクリルが挙げられ、これらはそれぞれ、本明細書に記載されるように、任意選択で置換される。リンカーの例には、限定するものではないが、不飽和アルカン、ポリエチレングリコール（例えば、エチレン又はプロピレングリコールのモノマー単位、例えば、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、トリプロピレングリコール、テトラエチレングリコール、又はテトラエチレングリコール）、及びデキストランポリマー及びその誘導体が挙げられる。他の例としては、限定するものではないが、リンカー内の切断可能部分、例えば、還元剤又は光分解を使用して切断できるジスルフィド結合（－Ｓ－Ｓ－）又はアゾ結合（－Ｎ＝Ｎ－）などが挙げられる。選択的に切断可能な結合の非限定的な例には、例えばトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、又は他の還元剤、及び／又は光分解の使用によって切断できるアミド結合、ならびに、例えば酸性又は塩基性加水分解によって切断できるエステル結合が挙げられる。

【0276】

転移：本明細書で使用される場合、「転移」という用語は、がんが原発腫瘍として最初に発生した場所から体内の離れた場所に浸潤して広がるプロセスを意味する。転移とは、原発腫瘍の広がりによって生じるがんも指す。例えば、乳がんに罹患している人は、リンパ系、肝臓、骨、又は肺に転移を示すことがある。

【0277】

修飾された：本明細書で使用される場合、「修飾された」とは、本開示の分子の変化した状態又は構造を指す。分子は、化学的、構造的、機能的などを含む、様々な方法で修飾され得る。一実施形態では、本開示のｓａＲＮＡは、非天然ヌクレオシド及び／又はヌクレオチドの導入によって修飾される。

【0278】

天然に存在する：本明細書で使用される場合、「天然に存在する」とは、人工的な援助なしに自然界に存在することを意味する。
核酸：本明細書で使用される「核酸」という用語は、１つ以上のヌクレオチド、すなわち、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、又はそれらの両方を含む分子を指す。この用語には、リボヌクレオチド及びデオキシリボヌクレオチドのモノマー及びポリマーが含まれ、ポリマーの場合、リボヌクレオチド及び／又はデオキシリボヌクレオチドは、５’対３’結合を介して互いに結合している。リボヌクレオチド及びデオキシリボヌクレオチドポリマーは一本鎖であっても二本鎖であってもよい。しかし、結合には、例えば、５’対３’結合を含む核酸を含む、当技術分野で知られている任意の結合が含まれ得る。ヌクレオチドは、天然に存在するものであってもよく、又は天然に存在する塩基対と塩基対関係を形成できる合成的に生成されたアナログであってもよい。塩基対合関係を形成することができる非天然塩基の例には、限定するものではないが、アザ及びデアザピリミジンアナログ、アザ及びデアザプリンアナログ、及び他の複素環式塩基アナログが挙げられ、ピリミジン環の炭素原子及び窒素原子のうちの１つ以上は、酸素、硫黄、セレン、リンなどのヘテロ原子によって置換されている。

【0279】

患者：本明細書で使用される場合、「患者」とは、治療を求めている、又は治療を必要としている、治療を必要としている、治療を受けている、治療を受ける予定の対象、又は特定の疾患又は状態に関して訓練を受けた専門家による治療を受けている対象を指す。

【0280】

ペプチド：本明細書で使用される場合、「ペプチド」は、５０アミノ酸長以下、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、又は５０アミノ酸長である。

【0281】

薬学的に許容される：「薬学的に許容される」という語句は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、その他の問題や合併症がなく、合理的な利益／リスク比に見合ったヒト及び動物の組織と接触させて使用するのに適した化合物、材料、組成物、及び／又は剤形を指すために本明細書で使用される。

【0282】

薬学的に許容される賦形剤：「薬学的に許容される賦形剤」という語句は、本明細書で使用される場合、本明細書に記載の化合物以外の任意の成分（例えば、活性化合物を懸濁又は溶解できるビヒクル）、及び患者において実質的に無毒で非炎症性の特性を有する任意の成分を指す。賦形剤には、例えば、付着防止剤、酸化防止剤、結合剤、コーティング、圧縮助剤、崩壊剤、染料（着色剤）、皮膚軟化剤、乳化剤、充填剤（希釈剤）、皮膜形成剤又はコーティング、香料、芳香剤、滑剤（流動促進剤）、潤滑剤、防腐剤、印刷インク、吸着剤、懸濁剤又は分散剤、甘味料、及び水分補給水が含まれる。賦形剤の例としては、限定するものではないが、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、アルファ化デンプン、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、セラック、二酸化ケイ素、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、ナトリウムグリコール酸デンプン、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、及びキシリトールが含まれる。

【0283】

薬学的に許容される塩：本開示には、本明細書に記載の化合物の薬学的に許容される塩も含まれる。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」とは、既存の酸又は塩基部分をその塩の形態に変換することによって（例えば、遊離塩基基を適切な有機酸と反応させることによって）親化合物が修飾されている、開示された化合物の誘導体を指す。薬学的に許容される塩の例としては、限定するものではないが、アミンなどの塩基性残基の鉱酸塩又は有機酸塩；アルカリ又はカルボン酸などの酸性残基の有機塩などが挙げられる。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩等が挙げられる。代表的なアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどの他に、非毒性のアンモニウム、第四級アンモニウム、及びアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどを含むがこれらに限定されないアミンカチオンが含まれる。本開示の薬学的に許容される塩には、例えば非毒性の無機酸又は有機酸から形成される親化合物の従来の非毒性塩が含まれる。本開示の薬学的に許容される塩は、塩基性又は酸性部分を含む親化合物から従来の化学的方法によって合成することができる。一般に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸又は塩基形態を、水中又は有機溶媒中、又はその２つの混合物中で、化学量論量の適切な塩基又は酸と反応させることによって調製することができる。一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、又はアセトニトリルなどの非水性媒体が好ましい。適切な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、イーストン、ペンシルバニア州、１９８５、ｐ．１４１８、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ，Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（編）、Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ、２００８、及びＢｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，１－１９（１９７７）に見いだされ、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0284】

薬学的に許容される溶媒和物：本明細書で使用される「薬学的に許容される溶媒和物」という用語は、適切な溶媒の分子が結晶格子に組み込まれている本開示の化合物を意味する。適切な溶媒は、投与される用量において生理学的に許容できるものである。例えば、溶媒和物は、有機溶媒、水、又はそれらの混合物を含む溶液からの結晶化、再結晶、又は沈殿によって調製され得る。適切な溶媒の例は、エタノール、水（例えば、一水和物、二水和物、及び三水和物）、Ｎ－メチルピロリジノン（ＮＭＰ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ’－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ’－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、１，３－ジメチル－２－イミダゾリジノン（ＤＭＥＵ）、１，３－ジメチル－３，４，５，６－テトラヒドロ－２－（１Ｈ）－ピリミジノン（ＤＭＰＵ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）、プロピレングリコール、酢酸エチル、ベンジルアルコール、２－ピロリドン、安息香酸ベンジル等である。水が溶媒である場合、溶媒和物は「水和物」と呼ばれる。

【0285】

薬理効果：本明細書で使用される場合、「薬理効果」とは、生物又は系が外因性因子と接触又は外因性因子に曝露された後に生じる、生物又は系における測定可能な生物学的現象である。薬理効果は、治療、１つ以上の症状の改善、診断、予防、及び疾患、障害、状態又は感染の発症の遅延などの治療上有効な結果をもたらし得る。そのような生物学的現象の測定は、定量的、定性的、又は別の生物学的現象との相対的なものであり得る。定量的測定は統計的に有意であり得る。定性的測定は程度又は種類によるものであり、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又はそれ以上異なり得る。それらは、存在するか存在しないか、良いか悪いか、大きいか小さいかとして観察され得る。外因性因子とは、薬理学的効果に言及する場合、全体的又は部分的に、生物又は系にとって異物である因子を指す。例えば、野生型生体分子に対する修飾は、構造的であれ化学的であれ、外因性因子を生成し得る。同様に、生物又は系において天然には見出されない化合物、分子又は物質への野生型分子の組み込み又はそれらとの組み合わせも、外因性因子を生成するであろう。

【0286】

本開示のｓａＲＮＡは、外因性因子を含む。薬理効果の例には、限定するものではないが、細胞数の変化、例えば、好中球、網赤血球、顆粒球、赤血球、巨核球、血小板、単球、結合組織マクロファージ、表皮ランゲルハンス細胞、破骨細胞、樹状細胞、ミクログリア細胞、好中球、好酸球、好塩基球、マスト細胞、ヘルパーＴ細胞、サプレッサーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、又は網赤血球などの増加又は減少が挙げられる。薬理効果には、血液化学、ｐＨ、ヘモグロビン、ヘマトクリットの変化、肝酵素ＡＳＴ及びＡＬＴなどの（これらに限定されない）酵素レベルの変化、脂質プロファイル、電解質、代謝マーカー、ホルモン又は他の当業者に既知のマーカー又はプロファイルの変化も挙げられる。

【0287】

物理化学的：本明細書で使用される場合、「物理化学的」とは、物理的及び／又は化学的特性を、又は物理的及び／又は化学的特性に関することを意味する。
予防する：本明細書で使用される場合、「予防する」という用語は、感染、疾患、障害及び／又は状態の発症を部分的又は完全に遅らせること；特定の感染症、疾患、障害、及び／又は状態の１つ以上の症状、特徴、又は臨床症状の発症を部分的又は完全に遅らせること；特定の感染症、疾患、障害、及び／又は状態の１つ以上の症状、特徴、又は発現の発症を部分的又は完全に遅らせること；感染症、特定の疾患、障害及び／又は症状の進行を部分的又は完全に遅らせること；及び／又は感染症、疾患、障害、及び／又は状態に関連する病状を発症するリスクを減少させることを指す。

【0288】

プロドラッグ：本開示には、本明細書に記載の化合物のプロドラッグも含まれる。本明細書で使用される場合、「プロドラッグ」とは、化学的又は物理的変化の際に治療薬として作用する、その物質、分子又は実体に対する述語（ｐｒｅｄｉｃａｔｅ）の形態にある任意の物質、分子又は実体を指す。プロドラッグは、いくつかの方法で共有結合又は封鎖されてもよく、哺乳類対象への投与前、投与時、又は投与後に活性薬剤部分を放出するか、又は活性薬剤部分に変換される。プロドラッグは、日常的な操作又はｉｎ ｖｉｖｏで修飾が切断されて親化合物になるような方法で、化合物中に存在する官能基を修飾することによって調製することができる。プロドラッグには、ヒドロキシル、アミノ、スルフヒドリル、又はカルボキシル基が、哺乳類対象に投与されると切断されてそれぞれ遊離のヒドロキシル、アミノ、スルフヒドリル、又はカルボキシル基を形成する任意の基に結合している化合物が含まれる。プロドラッグの調製及び使用については、Ａ．Ｃ．Ｓ．シンポジウムシリーズのＶｏｌ．１４，Ｔ．Ｈｉｇｕｇｉ ａｎｄ Ｖ．Ｓｔｅｌｌａ，“Ｐｒｏ－ｄｒｕｇｓ ａｓ Ｎｏｖｅｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，”及びＢｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，ＥｄｗａｒｄＢ．Ｒｏｃｈｅ編、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ＰｅｒｇａｍｏｎＰｒｅｓｓ，１９８７（両方ともその全体が参照により本明細書に組み込まれる）に述べられている。

【0289】

予後判定：本明細書で使用される場合、「予後判定」という用語は、特定の生物学的事象が将来起こるか、又はその可能性が非常に高いという声明又は主張を意味する。
進行：本明細書で使用される場合、「進行」又は「がんの進行」という用語は、疾患又は状態が進むこと又は悪化すること、又は疾患又は状態に向かって進むこと又は悪化することを意味する。

【0290】

増殖：本明細書で使用される場合、「増殖」という用語は、成長、拡張もしくは増加すること、又は急速な成長、拡張もしくは増加を生じさせることを意味する。「増殖性」とは、増殖する能力を有することを意味する。「抗増殖性」とは、増殖特性に対抗する、又は増殖特性に適さない特性を有することを意味する。

【0291】

タンパク質：「タンパク質」とは、ペプチド結合によって結合したアミノ酸残基のポリマーを意味する。本明細書で使用されるこの用語は、任意のサイズ、構造、又は機能のタンパク質、ポリペプチド、及びペプチドを指す。ただし、通常、タンパク質は少なくとも５０アミノ酸の長さになる。場合によっては、コードされるタンパク質は約５０アミノ酸よりも小さい。この場合、ポリペプチドはペプチドと呼ばれる。タンパク質が短いペプチドである場合、その長さは少なくとも約１０アミノ酸残基になる。タンパク質は、天然のもの、組換え体、合成のもの、又はこれらの任意の組み合わせであり得る。タンパク質はまた、天然に存在するタンパク質又はペプチドの断片を含み得る。タンパク質は単一分子であっても、多分子複合体であってもよい。タンパク質という用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の人工化学的アナログであるアミノ酸ポリマーにも適用される。

【0292】

タンパク質発現：「タンパク質発現」という用語は、検出可能なレベルのアミノ酸配列又はタンパク質が発現されるように、核酸配列が翻訳を受けるプロセスを指す。
精製された：本明細書で使用される場合、「精製する」、「精製された」、「精製」は、実質的に純粋にすること、又は望ましくない成分、物質の汚れ、混合物又は不完全さを除去することを意味する。

【0293】

退行：本明細書で使用される場合、「退行」又は「退行の程度」という用語は、がんの進行の、表現型又は遺伝子型のいずれかでの逆転を指す。がんの進行を遅らせたり止めたりすることは、退行とみなされる場合がある。

【0294】

試料：本明細書で使用される場合、「試料」又は「生体試料」という用語は、その組織、細胞、又は構成部分（例えば、血液、粘液、リンパ液、滑液、脳脊髄液、唾液、羊水、羊膜血液、尿、膣液及び精液を含むがこれらに限定されない体液）のサブセットを指す。試料はさらに、生物体全体、又はその組織、細胞もしくは構成部分のサブセット、又はそれらの分画もしくは部分（例えば、血漿、血清、脊髄液、リンパ液、皮膚の外部部分、呼吸器、腸管、及び泌尿生殖器管、涙、唾液、乳、血球、腫瘍、臓器を含むがこれらに限定されない）から調製されたホモジネート、溶解物、又は抽出物を含み得る。試料はさらに、タンパク質又は核酸分子などの細胞成分を含み得る、栄養ブロス又はゲルなどの培地を指す。

【0295】

シグナル配列：本明細書で使用される場合、「シグナル配列」という語句は、タンパク質の輸送又は局在化を指示することができる配列を指す。
単回単位用量：本明細書で使用される場合、「単回単位用量」は、１回用量／１回／単一経路／単一接触点、すなわち、単一投与事象で投与される任意の治療薬の用量である。

【0296】

類似性：本明細書で使用される場合、「類似性」という用語は、ポリマー分子間、例えば、ポリヌクレオチド分子間（例えば、ＤＮＡ分子及び／又はＲＮＡ分子）及び／又はポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。ポリマー分子の互いに対する類似性パーセントの計算は、当技術分野で理解されているように、類似性パーセントの計算が保存的置換を考慮に入れることを除いて、同一性パーセントの計算と同じ方法で行うことができる。

【0297】

分割用量：本明細書で使用される場合、「分割用量」とは、単一の単位用量又は１日の合計用量を２つ以上の用量に分割することである。
安定：本明細書で使用される場合、「安定」とは、反応混合物から有用な純度まで単離しても生き残るのに十分に堅牢であり、一実施形態では、有効な治療薬に製剤化できる化合物を指す。

【0298】

安定化：本明細書で使用される場合、「安定化する」、「安定化された」、「安定化領域」という用語は、安定にする、又は安定になることを意味する。
対象：本明細書で使用される場合、「対象」又は「患者」という用語は、例えば実験、診断、予防、及び／又は治療の目的で、本開示による組成物が投与され得る任意の生物を指す。典型的な対象には、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、及びヒトなどの哺乳類）及び／又は植物が含まれる。

【0299】

実質的に：本明細書で使用される場合、「実質的に」という用語は、対象とする特徴又は特性の全体的又はほぼ全体的な程度又は度合いを示す定性的な状態を指す。生物学的技術の当業者であれば、生物学的及び化学的現象は、たとえあったとしても、めったに完成に至らないこと、及び／又は完全に進まないこと、又は絶対的な結果を達成すること又は回避することはまれであることを理解するであろう。したがって、「実質的に」という用語は、多くの生物学的及び化学的現象に固有の完全性の潜在的な欠如を捉えるために本明細書で使用される。

【0300】

実質的に同等：投与間の時間差に関連して本明細書で使用される場合、この用語はプラス／マイナス２％を意味する。
実質的に同時に：本明細書で使用される場合、及び複数回の用量に関連する場合、この用語は２秒以内を意味する。

【0301】

罹患している：疾患、障害、及び／又は状態に「罹患している」個体は、疾患、障害、及び／又は状態と診断されているか、又は疾患、障害、及び／又は状態の１つ以上の症状を示している。

【0302】

罹患しやすい：疾患、障害、及び／又は状態に「罹患しやすい」個体は、その疾患、障害、及び／又は状態と診断されていない、及び／又はその疾患、障害、及び／又は状態の症状を示さないことがあるが、疾患又はその症状を発症する傾向を抱えている。いくつかの実施形態では、疾患、障害、及び／又は状態（例えば、がん）に罹患しやすい個体は、以下のうちの１つ以上によって特徴付けられ得る：（１）疾患、障害、及び／又は状態の発症に関連する遺伝子変異；（２）疾患、障害、及び／又は状態の発症に関連する遺伝子多型；（３）疾患、障害、及び／又は状態に関連するタンパク質及び／又は核酸の発現及び／又は活性の上昇及び／又は低下；（４）疾患、障害、及び／又は状態の発症に関連する習慣及び／又はライフスタイル；（５）疾患、障害、及び／又は状態の家族歴；及び（６）疾患、障害、及び／又は状態の発症に関連する微生物への曝露及び／又は感染。いくつかの実施形態では、疾患、障害、及び／又は状態に罹患しやすい個体は、その疾患、障害、及び／又は状態を発症することになる。いくつかの実施形態では、疾患、障害、及び／又は状態に罹患しやすい個体は、その疾患、障害、及び／又は状態を発症しない。

【0303】

徐放性：本明細書で使用される場合、「徐放性」という用語は、特定の期間にわたる放出速度に従う医薬組成物又は化合物の放出プロファイルを指す。
合成：「合成」という用語は、人の手によって生成、調製、及び／又は製造されることを意味する。本開示のポリヌクレオチド又はポリペプチド又は他の分子の合成は、化学的又は酵素的であり得る。

【0304】

標的細胞：本明細書で使用される場合、「標的細胞」とは、任意の１つ以上の目的の細胞を指す。細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｓｉｔｕ、又は生物の組織又は器官内で見出され得る。生物は、動物、一実施形態では哺乳類、又はヒト、一実施形態では患者であり得る。

【0305】

治療剤：「治療剤」という用語は、対象に投与されると、治療、診断、及び／又は予防効果を有し、及び／又は所望の生物学的及び／又は薬理学的効果を誘発する任意の薬剤を指す。

【0306】

治療有効量：本明細書で使用される場合、「治療有効量」という用語は、送達される薬剤（例えば、核酸、薬物、治療薬、診断薬、予防薬など）の、感染症、疾患、障害、及び／又は状態に罹患している、又はそれらに罹りやすい対象への投与時に、感染症、疾患、障害、及び／又は状態に罹患している、又はそれらに罹りやすい対象に対して、その感染症、疾患、障害、及び／又は状態を治療し、症状を改善し、診断し、予防し、及び／又は発症を遅延させるのに十分な量を意味する。

【0307】

治療上有効な転帰：本明細書で使用される場合、「治療上有効な転帰」という用語は、感染症、疾患、障害、及び／又は状態に罹患している、又は罹患しやすい対象において、その感染症、疾患、障害、及び／又は状態を治療、症状を改善、診断、予防、及び／又は発症を遅らせるのに十分な転帰を意味する。

【0308】

１日の総用量：本明細書で使用される場合、「１日の総用量」とは、２４時間以内に与えられる、又は処方される量である。それは、単一の単位用量として投与され得る。
転写因子：本明細書で使用される場合、「転写因子」という用語は、例えば転写の活性化又は抑制によって、ＤＮＡからＲＮＡへの転写を調節するＤＮＡ結合タンパク質を指す。いくつかの転写因子は単独で転写の制御に影響を与えるが、他の転写因子は他のタンパク質と協調して作用する。一部の転写因子は、特定の条件下で転写を活性化することも抑制することもできる。一般に、転写因子は、特定の標的配列、又は標的遺伝子の調節領域内の特定のコンセンサス配列に非常に類似した配列に結合する。転写因子は、単独で、又はそれ自体との複合体で（ホモ二量体として）、又は他の分子との複合体で（ヘテロ二量体として）、標的遺伝子の転写を調節し得る。これらの複合体形成はそれぞれ、単一の転写因子から複数の調節機能を誘導することができる。

【0309】

治療する：本明細書で使用される場合、「治療する」という用語は、特定の感染症、疾患、障害、及び／又は状態の１つ以上の症状又は特徴の部分的又は完全に軽減、好転、改善、緩和、発症の遅延、進行の阻害、重症度の軽減、及び／又は発生率の低下を指す。例えば、がんを「治療する」とは、腫瘍の生存、増殖、及び／又は広がりを阻害することを指し得る。治療は、疾患、障害、及び／又は状態に関連する病状が発症するリスクを低減する目的で、疾患、障害、及び／又は状態の兆候を示さない対象、及び／又は疾患、障害、及び／又は状態の初期の兆候のみを示す対象に施され得る。

【0310】

「治療方法」又はその同等の語句は、例えばがんに適用される場合、個体のがん細胞の数を減少させ、除去し、又は予防し、又はがんの症状を緩和するように設計された手順又は行動方針を指す。がん又は他の増殖性疾患の「治療方法」は、がん細胞又は他の疾患が実際に完全に除去されること、細胞又は疾患の数が実際に減少すること、又はがん又は他の疾患の症状が実際に軽減されることを必ずしも意味するわけではない。多くの場合、がんの治療方法は、成功の可能性が低くても実施されるが、個人の病歴と推定生存予想を考慮すると、全体的に有益な行動方針であると考えられる。

【0311】

腫瘍増殖：本明細書で使用される場合、「腫瘍増殖」又は「腫瘍転移増殖」という用語は、別段の指示がない限り、腫瘍学で一般的に使用されるように使用され、この用語は主に腫瘍細胞の増殖の結果としての腫瘍又は腫瘍転移の質量又は体積の増加に関連する。

【0312】

腫瘍負荷：本明細書で使用される場合、「腫瘍負荷」という用語は、対象が有する直径３ｍｍを超えるすべての腫瘍結節の総腫瘍体積を指す。
腫瘍体積：本明細書で使用される場合、「腫瘍体積」という用語は、腫瘍のサイズを指す。ｍｍ^３単位の腫瘍体積は、次の式で計算される：体積＝（幅）^２×長さ／２。

【0313】

未修飾：本明細書で使用される場合、「未修飾」とは、何らかの方法で変更される前の任意の物質、化合物、又は分子を指す。未修飾とは、常にではないが、生体分子の野生型又は天然型を指す場合がある。分子は一連の修飾を受けることがあり、それによって修飾された各分子は、その後の修飾のための「未修飾」開始分子として機能し得る。

【0314】

同等物及び範囲
当業者は、本明細書に記載の開示による特定の実施形態と多くの同等物を認識するか、日常的な実験のみを使用して確認することができるであろう。本開示の範囲は、上記の説明に限定されるものではなく、むしろ添付の特許請求の範囲に記載されるとおりである。

【0315】

特許請求の範囲において、「１つ」、「その」、及び「前記」などの冠詞は、反対の指示がない限り、又は文脈から明らかでない限り、１つ又は複数を意味し得る。グループの１つ以上のメンバー間に「又は」を含む請求項又は説明は、反対の指示がない限り、又は文脈から明らかでない限り、グループメンバーの１つ、複数、又はすべてが所与の製品又は方法において存在するか、採用されるか、又はその他の態様で関連している場合に充足するとみなされる。本開示には、グループの厳密に１つのメンバーが所与の製品又は方法において存在するか、採用されるか、又はその他の態様で関連している実施形態が含まれる。本開示には、グループメンバーの２つ以上、又はすべてが所与の製品又は方法において存在するか、採用されるか、又はその他の態様で関連している実施形態が含まれる。

【0316】

また、「含む」という用語はオープンであることを意図しており、追加の要素又は工程を含めることを許容することにも留意されたい。
範囲が指定されている場合は、上限値、下限値も含まれる。さらに、別段の指示がない限り、又は文脈及び当業者の理解から明らかでない限り、範囲として表現される値は、文脈上明らかに別段の指示がない限り、本発明の様々な実施形態において、記載された範囲内の、範囲の下限値の単位の１０分の１までの任意の特定の値又は部分範囲を想定し得ることを理解されたい。

【0317】

さらに、従来技術に該当する本開示の特定の実施形態は、いずれか１つ以上の請求項から明示的に除外され得ることを理解されたい。そのような実施形態は当業者には既知であると考えられるため、本明細書に除外が明示的に記載されていなくても、除外することができる。本開示の組成物の特定の実施形態（例えば、任意の核酸又はそれによってコードされるタンパク質、任意の製造方法、任意の使用方法など）は、理由を問わず、又は従来技術の存在と関係するか否かを問わず、任意の１つ以上の請求項から除外することができる。

【0318】

本明細書で引用される参考文献、出版物、データベース、データベースエントリ、及び技術などのすべての引用情報源は、引用文に明示的に記載されていない場合でも、参照により本願に組み込まれる。引用情報源と本願の記述が矛盾する場合には、本願の記述が優先されるものとする。

【0319】

本開示は、以下の非限定的な実施例によってさらに説明される。
実施例
材料及び手順：
ｓａＲＮＡのトランスフェクション
ｓａＲＮＡのセンス鎖とアンチセンス鎖を合成した。最初に、これらをＴｒｉｓ－ＥＤＴＡベースのバッファー中でアニーリングし、続いて９０℃での変性ステップ、続いて室温まで徐々にアニーリングステップを行った。細胞を２４ウェルプレートに１ウェル当たり０．２５～１×１０^５で播種し、リポフェクタミン２０００（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してトランスフェクションした。トランスフェクションは、播種した直後に、１ｕＬのリポフェクタミン２０００を使用して、示されたオリゴヌクレオチド濃度で行った。２４時間後に細胞をトランスフェクションし、播種後４８時間及び７２時間後に分析のために収集した。

【0320】

ＲＴ－ＰＣＲ
各実験で示されているように、播種後４８時間から９６時間で全ＲＮＡを収集した。メーカーの推奨に従ってＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を使用してＲＮＡを回収し、ＱＩＡｘｐｅｒｔマシン（ＱＩＡＧＥＮ）を使用して定量した。ＲＮＡ試料を正規化し、メーカーの推奨に従ってＱｕａｎｔｉｔｅｃｈ逆転写キット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して逆転写した。相対発現レベルは、ＰｏｗｅｒＵｐ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ＱＩＡＧＥＮ）とＱＩＡＧＥＮの検証済みＱｕａｎｔｉＴｅｃｈ ＳＹＢＲプライマーを使用したリアルタイムＰＣＲによって決定された。

【0321】

ウエスタンブロット
プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を添加した放射免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）バッファーを使用して細胞を溶解し、溶解物を氷上で１０分間インキュベートし、３０秒で３回超音波処理した。総タンパク質レベルを、Ｒａｐｉｄ Ｇｏｌｄ ＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｐｉｅｒｃｅ）によって測定し、溶解物をローディング前の総タンパク質含有量によって正規化した。標的タンパク質の発現レベルを、１２～２３０ｋＤａ Ｗｅｓ分離モジュール及び抗ウサギ検出モジュールを使用するＷｅｓシステム（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｅ）によって決定した。標的を、ＴＭＥＭ１７３特異的抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）で検出した。総タンパク質含有量を、総タンパク質検出モジュールを使用して確認した。

【0322】

実施例１．ｉｎ ｖｉｔｒｏでのｓａＲＮＡによるＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡ発現の上方制御
この研究では、ヒトＨｅｐＧ２細胞（肝細胞がん）に、１０ｎＭの対照ＦＬｕｃオリゴ又はＴＭＥＭ１７３（ＳＴＩＮＧ）を標的とするｓａＲＮＡの様々なバリアントをトランスフェクトした。７２時間目にＲＮＡを抽出し、ＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡの発現レベルをＲＴ－ｑＰＣＲによって測定した（図２及び図３）。

【0323】

図２に示すように、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－１、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－３２、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－４８、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－８９、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－１２１、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－１６１、及びＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－１６４は、ＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡを上方制御した。

【0324】

図３に示すように、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｉｎｖＡｂ－Ｓｅ－ｍ２、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｉｎｖＡｂ－Ｓｅ－ｍ１、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｉｎｖＡｂ－Ｓｅ－０、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｉｎｖＡｂ－Ｓｅ－ｐ１及びＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｉｎｖＡｂ－Ｓｅ－ｐ２はすべてＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡを上方制御した。

【0325】

別の研究では、ヒトＡ５４９細胞（肺腺がん）に、１０ｎＭの対照ＦＬｕｃオリゴ又はＴＭＥＭ１７３（ＳＴＩＮＧ）を標的とするｓａＲＮＡの様々なバリアントをトランスフェクトした。７２時間目にＲＮＡを抽出し、ＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡの発現レベルをＲＴ－ｑＰＣＲによって測定した（図４）。対照ｓａＲＮＡの配列を表５に示す。

【0326】

図４に示すように、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｉｎｖＡｂ－Ｓｅ－ｍ１はＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡを上方制御し、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｉｎｖＡｂ－Ａｓ－ｍ１の活性はより低かった。陰性対照ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｉｎｖＡｂ－Ｓｅ－ｍ１－ｓｅｅｄｍｕｔは、ＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡを上方制御しなかった。

【0327】

【表5】

【0328】

別の研究では、未処理のＡ５４９細胞（ＵＮＴＲ）、Ａ５４９細胞に１０ｎＭの対照ＦＬｕｃオリゴ又はＴＭＥＭ１７３（ＳＴＩＮＧ）を標的とするｓａＲＮＡをトランスフェクトした。ＲＮＡ及びタンパク質を７２時間で抽出し、ＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡ及びＴＭＥＭ１７３タンパク質の発現レベルをそれぞれＲＴ－ｑＰＣＲ及びＷｅｓＰｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅアッセイによって測定した（図５）。

【0329】

図５に示すように、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｉｎｖＡｂ－Ｓｅ－ｍ１は、ＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡ（図５Ａ）及びＴＭＥＭ１７３タンパク質（図５Ｂ）を上方制御した。総タンパク質の定量化により、Ｗｅｓ分析用の３つの試料すべてに等しいローディングが示された。

【0330】

別の研究では、ヒトＡ５４９細胞に１０ｎＭの対照ＦＬｕｃオリゴ又はＴＭＥＭ１７３（ＳＴＩＮＧ）を標的とするｓａＲＮＡの様々なバリアントをトランスフェクトした。７２時間目にＲＮＡを抽出し、ＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡの発現レベルをＲＴ－ｑＰＣＲによって測定した（図６）。

【0331】

図６に示すように、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｉｎｖＡｂ－Ｓｅ－ｍ１及びＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｍ１－ｅｍｏｄ５１は両方ともＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡを上方制御した。

【0332】

別の研究では、ヒトＡ５４９細胞に、様々な濃度（０．３７～５０ｎＭ）の対照ＦＬｕｃオリゴ又はＴＭＥＭ１７３（ＳＴＩＮＧ）を標的とするｓａＲＮＡの様々なバリアントをトランスフェクトした。ＲＮＡを指定の時点で抽出し、ＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡの発現レベルをＲＴ－ｑＰＣＲによって測定した（図７）。

【0333】

図７に示すように、ＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｉｎｖＡｂ－Ｓｅ－ｍ１及びＴＭＥＭ１７３－Ｐｒ－７０－ｍ１－ｅｍｏｄ５１は両方とも、すべての時点で用量依存的にＴＭＥＭ１７３ｍＲＮＡを上方制御した。

【0334】

他の実施形態
本開示をその詳細な説明と併せて説明したが、上記の説明は例示を目的とするものであり、添付の特許請求の範囲によって定義される本開示の範囲を限定するものではないことを理解されたい。他の態様、利点、及び修正は、以下の特許請求の範囲内に含まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【配列表】

2024511092000001.app

【国際調査報告】