特表 2024-511099 癌に対する増強された効力を有する操作されたナチュラルキラー細胞の製造のための凍結保存臍帯血ユニットの選択方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-12

(54)【発明の名称】癌に対する増強された効力を有する操作されたナチュラルキラー細胞の製造のための凍結保存臍帯血ユニットの選択方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/10 20060101AFI20240305BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20240305BHJP

   C12N 5/0781 20100101ALI20240305BHJP

   C12Q 1/02 20060101ALI20240305BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240305BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240305BHJP

   C12N 15/62 20060101ALN20240305BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20240305BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20240305BHJP

   A61K 35/51 20150101ALN20240305BHJP

【ＦＩ】

C12N5/10

C12N5/0783

C12N5/0781

C12Q1/02

A61K35/17

A61P35/00

C12N15/62 Z

C12N15/13

C12N15/12

A61K35/51

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023558274

(86)(22)【出願日】2022-03-16

(85)【翻訳文提出日】2023-11-20

(86)【国際出願番号】 US2022020572

(87)【国際公開番号】W WO2022203920

(87)【国際公開日】2022-09-29

(31)【優先権主張番号】63/164,379

(32)【優先日】2021-03-22

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/243,669

(32)【優先日】2021-09-13

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】500039463

【氏名又は名称】ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム

【氏名又は名称原語表記】ＢＯＡＲＤ ＯＦ ＲＥＧＥＮＴＳ，ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＴＥＸＡＳ ＳＹＳＴＥＭ

【住所又は居所原語表記】２１０ Ｗｅｓｔ ７ｔｈ Ｓｔｒｅｅｔ Ａｕｓｔｉｎ，Ｔｅｘａｓ ７８７０１ Ｕ．Ｓ．Ａ．

(74)【代理人】

【識別番号】110000729

【氏名又は名称】弁理士法人ユニアス国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】レズヴァニ、ケイティ

(72)【発明者】

【氏名】マリン コスタ、ダビド

(72)【発明者】

【氏名】シュポール、エリザベス

【テーマコード（参考）】

4B063

4B065

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B063QA20

4B063QQ08

4B063QS40

4B065AA90

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065BD09

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB59

4C087BB65

4C087NA05

4C087ZB26

(57)【要約】

【課題】養子細胞療法用のNK細胞などの免疫細胞を産生するための臍帯血ユニットの選択の最適化に関連する方法および組成物を提供する。
【解決手段】本開示の実施形態は、養子細胞療法用のNK細胞などの免疫細胞を産生するための臍帯血ユニットの選択の最適化に関連する方法および組成物に関する。 具体的な実施形態では、臍帯血ユニットの特定の特性および／またはそれに由来する細胞の特性が分析される。 臍帯血ユニットおよび／またはそれに由来する細胞の特性について、1つ以 上の特性に関する閾値が満たされた場合、その臍帯血ユニットは免疫細胞の産生源として利用される。 測定の対象となる特定の特性には、凍結保存前の臍帯血細胞の生存率、全核細胞回収率、有核赤血球含有量、および任意で凍結保存後の免疫細胞の細胞毒性および／または増殖が含まれる。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

臍帯血組成物を選択する方法であって、
下記の（ａ）～（ｊ）：
（ａ）臍帯血細胞生存率；
（ｂ）必要な場合には総単核細胞（ＴＮＣ）回収率；
（ｃ）有核赤血球（ＮＲＢＣ）含有量；
（ｄ）前記臍帯血が由来する乳児の体重；
（ｅ）前記臍帯血が由来する乳児の生物学的母親および／または生物学的父親の人種；
（ｆ）必要な場合には、前記臍帯血が由来する乳児の在胎齢；
（ｇ）必要な場合には前記臍帯血の子宮内採取；
（ｈ）必要な場合には、前記臍帯血が由来する生物学的雄性の乳児；
（ｉ）必要な場合には、採取された前記臍帯血の体積；
（ｊ）必要な場合には、ＣＤ３４＋である前記抜き取られた臍帯血の細胞の数
を前記臍帯血組成物の凍結保存の前に測定する、または凍結保存前に考慮する工程；および
凍結保存の後、（ｄ）解凍後の前記臍帯血組成物に由来する免疫細胞の細胞傷害性を測定する工程
を含む方法。

【請求項2】

前記免疫細胞がナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項２に記載の方法。

【請求項3】

前記ＮＫ細胞を拡大する工程をさらに含む、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記ＮＫ細胞を改変する工程をさらに含む、請求項２または３に記載の方法。

【請求項5】

前記ＮＫ細胞が、１つまたは複数の非内因性遺伝子産物を発現するように改変される、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

前記非内因性遺伝子産物が１つまたは複数の非内因性受容体を含む、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

前記非内因性受容体がキメラ受容体である、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記キメラ受容体がキメラ抗原受容体である、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

前記非内因性受容体が非天然型Ｔ細胞受容体である、請求項６に記載の方法。

【請求項10】

前記非内因性遺伝子産物が、１つまたは複数の非内因性受容体、１つまたは複数のサイトカイン、１つまたは複数のケモカイン、１つまたは複数の酵素、あるいはそれらの組み合わせを含む、請求項５に記載の方法。

【請求項11】

前記ＮＫ細胞が、前記ＮＫ細胞における１つまたは複数の内因性遺伝子の発現の破壊を有するように改変される、請求項４～１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

臍帯血組成物を選択する方法であって、
凍結保存前に、
（ａ）臍帯血細胞生存率が約９８％以上または９９％以上であること；
（ｂ）必要な場合には、総単核細胞（ＴＮＣ）回収率が７６．３％以上であること；
（ｃ）有核赤血球（ＮＲＢＣ）含有量が約７．５×１０^７個～約８．０×１０^７個以下であること；
（ｄ）前記臍帯血が由来する乳児の体重が約３６５０グラム超であること；
（ｅ）前記臍帯血が由来する乳児の生物学的母親および／または生物学的父親の人種が白人であること；
（ｆ）必要な場合には、前記臍帯血が由来する乳児の在胎齢が約３８週以下であること；
（ｇ）必要な場合には前記臍帯血の子宮内採取；
（ｈ）必要な場合には、前記臍帯血が由来する生物学的雄性の乳児；
（ｉ）必要な場合には、前記採取された臍帯血＋抗凝固剤の体積が約１２０ｍＬ以下であること；
（ｊ）必要な場合には、前記抜き取られた臍帯血の細胞は約０．４％超がＣＤ３４＋であること
のうちの１つまたは複数を有すると判定される臍帯血組成物を特定する工程、および
必要な場合には（ｋ）解凍後の前記臍帯血組成物に由来する免疫細胞の細胞傷害性を測定する工程
を含む方法。

【請求項13】

凍結保存前の前記臍帯血組成物が、（ａ）、（ｃ）、（ｄ）および（ｅ）を有すると判定される、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

（ａ）における前記臍帯血細胞生存率が、９９．０％以上、９９．１％以上、９９．２％以上、９９．３％以上、９９．４％以上、９９．５％以上、９９．６％以上、９９．７％以上、９９．８％以上、または９９．９％以上である、請求項１２または１３に記載の方法。

【請求項15】

（ｂ）における前記ＴＮＣ回収率が、７７％以上、７８％以上、７９％以上、８０％以上、８１％以上、８２％以上、８３％以上、８４％以上、８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上である、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記ＮＲＢＣ含有量が、８．０×１０^７個以下、７．９×１０^７個以下、７．８×１０^７個以下、７．７×１０^７個以下、７．６×１０^７個以下、７．５×１０^７個以下、７．０×１０^７個以下、６．０×１０^７個以下、５．０×１０^７個以下、４．０×１０^７個以下、３．０×１０^７個以下、２．０×１０^７個以下、１．０×１０^７個以下、９．０×１０^６個以下、８．０×１０^６個以下、７．０×１０^６個以下、６．０×１０^６個以下、５．０×１０^６個以下、４．０×１０^６個以下、３．０×１０^６個以下、２．０×１０^６個以下、１．０×１０^６個以下、９．０×１０^５個以下、８．０×１０^５個以下、７．０×１０^５個以下、６．０×１０^５個以下、５．０×１０^５個以下、４．０×１０^５個以下、３．０×１０^５個以下、２．０×１０^５個以下、１．０×１０^５個以下、９．０×１０^４個以下、８．０×１０^４個以下、７．０×１０^４個以下、６．０×１０^４個以下、５．０×１０^４個以下、４．０×１０^４個以下、３．０×１０^４個以下、２．０×１０^４個以下、１．０×１０^４個以下、９．０×１０^３個以下、８．０×１０^３個以下、７．０×１０^３個以下、６．０×１０^３個以下、５．０×１０^３個以下、４．０×１０^３個以下、３．０×１０^３個以下、２．０×１０^３個以下、１．０×１０^３個以下、９．０×１０^２個以下、８．０×１０^２個以下、７．０×１０^２個以下、６．０×１０^２個以下、５．０×１０^２個以下、４．０×１０^２個以下、３．０×１０^２個以下、２．０×１０^２個以下、１．０×１０^２個以下、またはそれよりも少ない、請求項１２～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記臍帯血が由来する前記乳児の重量が、約３６５０グラム超、３７００グラム超、３７５０グラム超、３８００グラム超、３８５０グラム超、３９００グラム超、３９５０グラム超、４０００グラム超、４０５０グラム超、４１００グラム超、４１５０グラム超、４２００グラム超、４２５０グラム超、または４５００グラム超である、請求項１２～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記採取される臍帯血＋抗凝固剤の前記体積が、約１２０ｍＬ以下、１１５ｍＬ以下、１１０ｍＬ以下、１００ｍＬ以下、９０ｍＬ以下、８０ｍＬ以下、７０ｍＬ以下、６０ｍＬ以下、または５０ｍＬ以下である、請求項１２～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記抜き取られた臍帯血の細胞は、０．４％超、０．５％超、１％超、２％超、３％超、４％超、５％超、１０％超、１５％超、２０％超、またはそれ以上がＣＤ３４＋である、請求項１２～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

免疫細胞を前記解凍された臍帯血組成物から導く工程をさらに含む、請求項１２～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記免疫細胞が、ＮＫ細胞、インバリアントＮＫ細胞、ＮＫ Ｔ細胞、Ｔ細胞Ｂ細胞、単球、顆粒球、骨髄細胞好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞、幹細胞、またはそれらの混合物である、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

解凍後の前記臍帯血組成物に由来する前記免疫細胞がＮＫ細胞であり、前記細胞傷害性が６６．７％以上である、請求項２０または２１に記載の方法。

【請求項23】

前記細胞傷害性が、６７％以上、６８％以上、６９％以上、７０％以上、７１％以上、７２％以上、７３％以上、７４％以上、７５％以上、７６％以上、７７％以上、７８％以上、７９％以上、８０％以上、８１％以上、８２％以上、８３％以上、８４％以上、８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上である、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

前記臍帯血が、３８週以下の在胎齢である胎児または新生児に由来する、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記臍帯血が、３８週以下、３７週以下、３６週以下、３５週以下、３４週以下、３３週以下、３２週以下、３１週以下、３０週以下、２９週以下、２８週以下、２７週以下、２６週以下、２５週以下、または２４週以下の在胎齢である胎児または新生児に由来する、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

解凍後の臍帯血細胞の生存率を求めることをさらに含む、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

解凍後の臍帯血細胞の前記生存率が８６．５％以上である、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

解凍後の臍帯血細胞の前記生存率が、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上である、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記免疫細胞がＮＫ細胞である、請求項２１に記載の方法。

【請求項30】

前記ＮＫ細胞が拡大される、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

培養における０日目と６日目との間の前記ＮＫ細胞の前記拡大が３倍以上である、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

培養における６日目と１５日目との間の前記ＮＫ細胞の前記拡大が７０倍以上である、請求項３０または３１に記載の方法。

【請求項33】

０日目と１５日目との間の前記ＮＫ細胞の前記拡大が４５０倍以上である、請求項３０に記載の方法。

【請求項34】

前記ＮＫ細胞が改変される、請求項２９～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記ＮＫ細胞が、１つまたは複数の非内因性遺伝子産物を発現するように改変される、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

前記非内因性遺伝子産物が非内因性受容体である、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記非内因性受容体がキメラ受容体である、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記キメラ受容体がキメラ抗原受容体である、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

前記非内因性受容体が非天然型Ｔ細胞受容体である、請求項３６に記載の方法。

【請求項40】

前記非内因性遺伝子産物が、１つまたは複数の非内因性受容体、１つまたは複数のサイトカイン、１つまたは複数のケモカイン、１つまたは複数の酵素、あるいはそれらの組み合わせを含む、請求項３５に記載の方法。

【請求項41】

前記免疫細胞が、前記細胞における１つまたは複数の内因性遺伝子の発現の破壊を有するように改変される、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

前記臍帯血細胞生存率が９８％超または９９％超であり、前記ＴＮＣ回収率が７６．３％超であり、前記ＮＲＢＣ含有量が７．５×１０^７個超または８．０×１０^７個超である、請求項１２～４１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項43】

前記臍帯血が、３９週以下の在胎齢である胎児または新生児に由来し、解凍後の臍帯血細胞の前記生存率が８６．５％以上であり、培養における０日目と６日目との間の前記ＮＫ細胞の前記拡大が７倍以上であり、かつ、培養における６日目と１５日目との間の前記ＮＫ細胞の前記拡大が１０^５倍以上である、前記請求項のいずれか一項に記載の方法。

【請求項44】

請求項１～４３に記載の方法のいずれか１つによって特定される臍帯血組成物。

【請求項45】

医薬的に許容され得るキャリアに含まれる、請求項４４に記載の組成物。

【請求項46】

１つまたは複数の凍結保護剤とともに配合される、請求項４４に記載の組成物。

【請求項47】

請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法に由来する免疫細胞の集団を含む組成物。

【請求項48】

治療のための免疫細胞の有効性を予測する方法であって、
凍結されていない１つまたは複数の臍帯血組成物を、
（ａ）臍帯血細胞生存率；
（ｂ）必要な場合には総単核細胞（ＴＮＣ）回収率；および
（ｃ）有核赤血球（ＮＲＢＣ）含有量；
（ｄ）前記臍帯血が由来する乳児の体重；
（ｅ）前記臍帯血が由来する乳児の生物学的母親および／または生物学的父親の人種；
（ｆ）必要な場合には、前記臍帯血が由来する乳児の在胎齢；
（ｇ）必要な場合には前記臍帯血の子宮内採取；
（ｈ）必要な場合には、前記臍帯血が由来する生物学的雄性の乳児；
（ｉ）必要な場合には、採取された前記臍帯血の体積；
（ｊ）必要な場合には、ＣＤ３４＋である前記抜き取られた臍帯血の細胞の数
について測定すること、またはそれらのうちの１つもしくは複数を考慮することを含み、
前記臍帯血組成物が、下記特徴：
（ａ）臍帯血細胞生存率が９８％以上または９９％以上であること；
（ｂ）総単核細胞（ＴＮＣ）回収率が７６．３％以上であること；および
（ｃ）有核赤血球（ＮＲＢＣ）含有量が７．５×１０^７個以下または８．０×１０^７個以下であること；
（ｄ）前記臍帯血が由来する乳児の体重が約３６５０グラム超であること；
（ｅ）前記臍帯血が由来する乳児の生物学的母親および／または生物学的父親の人種が白人であること；
（ｆ）必要な場合には、前記臍帯血が由来する乳児の在胎齢が約３８週以下であること；
（ｇ）必要な場合には前記臍帯血の子宮内採取；
（ｈ）必要な場合には、前記臍帯血が由来する生物学的雄性の乳児；
（ｉ）必要な場合には、前記採取される臍帯血および抗凝固剤の体積が、約１２０ｍＬ以下、１１５ｍＬ以下、１１０ｍＬ以下、１００ｍＬ以下、９０ｍＬ以下、８０ｍＬ以下、７０ｍＬ以下、６０ｍＬ以下、または５０ｍＬ以下であること；
（ｊ）必要な場合には、ＣＤ３４＋である前記抜き取られた臍帯血の細胞の数が約０．４％超であること
の１つまたは複数を含むとき、前記免疫細胞が治療のために有効である、方法。

【請求項49】

前記１つまたは複数の血液組成物を凍結する工程をさらに含む、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

解凍時に、（ｄ）前記臍帯血組成物に由来する免疫細胞の細胞傷害性を測定することをさらに含む、請求項４９に記載の方法。

【請求項51】

前記細胞傷害性が６６．７％以上である、請求項５０に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０２１年３月２２日に出願された米国仮特許出願シリアル番号６３／１６４，３７９および２０２１年９月１３日に出願された米国仮特許出願シリアル番号６３／２４３，６６９の優先権を主張するものであり、これら両出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

本開示の実施形態は、少なくとも細胞生物学、分子生物学、免疫学、および医学の技術分野に関する。

【背景技術】

【0003】

ＣＡＲを発現するように改変された臍帯血由来ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、癌に対する有効な治療法である。実際、臍帯血由来ＮＫ細胞は、複数の悪性腫瘍および感染症を治療するために（遺伝的または非遺伝的方法のいずれかによって）改変することができる。凍結保存された臍帯血はバイオバンクで容易に入手可能であり（幹細胞移植の細胞源として使用されるため）、臨床使用のための複数の細胞療法製品を製造するのに十分な数のＮＫ細胞を提供することができる。ＮＫ細胞の供給源として臍帯血ユニットを使用する代わりに、健康なドナーから白血球アフェレーシスという方法で細胞を得る方法がある。この方法は複雑であり、ドナーのリスクも免れない。ＮＫ細胞製剤の臨床的有効性は、凍結保存された臍帯ユニットの特性に大きく影響される。本開示は、細胞治療に適した細胞を調達するという、当技術分野における長年のニーズを満たすものである。

【発明の概要】

【0004】

本開示は、個体に対する細胞療法に関連する方法及び組成物に向けられている。細胞療法はどのような種類のものであってもよいが、特定の実施形態では、細胞療法は、細胞を必要とする個体に投与する前に最終的に改変され得る免疫細胞を少なくとも含む、免疫細胞を用いた養子細胞療法を含む。特定の実施形態において、本開示は、個体に対する養子細胞療法に有効な免疫細胞を産生するのに特に適した臍帯血ユニットの同定（同定がない場合の臍帯血の選択よりも有効であることを含む）に関する。

【0005】

本開示は、少なくとも癌やあらゆる種類の感染症など、あらゆる種類の病状に対する治療を含む患者の治療のために、非常に有効な免疫細胞治療産物を産生する可能性が最も高い臍帯血ユニットを同定するための複数部分からなる戦略に関する。本開示は、（ｉ）臍帯血ユニットの凍結保存前、（ｉｉ）解凍後およびＧＭＰ施設などでの免疫細胞製造開始時、および（iii）製造中および製造終了時の免疫細胞の特性、を含む一連の選択基準を提供する。

【0006】

特定の実施形態には、臍帯血組成物の凍結保存または使用の前に測定する工程を含む、臍帯血組成物の選択方法が含まれる：（ａ）臍帯血細胞の生存率；（ｂ）任意選択で、全単核球（ＴＮＣ）回収率；（ｃ）有核赤血球（ＮＲＢＣ）含有量；（ｄ）臍帯血が由来する乳児の体重；（ｅ）臍帯血が由来する乳児の生物学的母親および／または生物学的父親の人種；（ｆ）任意選択で、臍帯血が由来する乳児の妊娠年齢；（ｇ）任意選択で、臍帯血の子宮内採取（ただし、子宮外採取、または子宮内採取と子宮外採取の組み合わせが、本開示のいずれの方法においても使用され得る）；（ｈ）任意選択で、臍帯血が由来する生物学的に男の乳児；（ｉ）任意選択で、前処理量（採取された臍帯血の体積＋抗凝固剤（一例として、３５ｍｌクエン酸リン酸デキストロース（ＣＰＤ））≦１２０ｍＬ；（ｊ）任意選択で、抽出された臍帯血の細胞が＞０．４％ＣＤ３４＋であること；および任意に、凍結保存後に（ｋ）解凍後の臍帯血組成物由来の免疫細胞の細胞傷害性；および（ｌ）解凍後の培養中の臍帯血由来の免疫細胞（ＮＫ細胞を含む）の倍数拡大を測定すること。具体的な実施態様において、基準は、特性の少なくとも１つについて定量的な閾値を満たす。

【0007】

具体的な態様では、以下の１つ以上の基準を満たす：（ａ）臍帯血細胞の生存率が９８％または９９％以上である；（ｂ）任意の全単核球（ＴＮＣ）回収率が７６．３％以上である；および（ｃ）有核赤血球（ＮＲＢＣ）含量が７．５×１０^７もしくは８．０×１０^７またはその間の量以下である。

【0008】

本開示の実施形態は、以下の工程を含む、臍帯血組成物を選択する方法を包含する：臍帯血組成物の凍結保存前に以下を測定する工程：（ａ）臍帯血細胞の生存率；（ｂ）任意選択で、全単核球（ＴＮＣ）回収率；（ｃ）有核赤血球（ＮＲＢＣ）含有量；（ｄ）臍帯血が由来する乳児の体重；（ｅ）臍帯血が由来する乳児の生物学的母親および／または生物学的父親の人種；（ｆ）任意選択で、臍帯血が由来する乳児の妊娠年齢；（ｇ）任意選択で、臍帯血の子宮内採取（ただし、子宮外採取、または子宮内採取と子宮外採取の組み合わせが、本開示のいずれの方法においても使用され得る）；（ｈ）任意選択で、臍帯血が由来する生物学的に男性の乳児；（ｉ）任意選択で、前処理量（採取された臍帯血の体積＋抗凝固剤（３５ｍｌ ＣＰＤ））≦１２０ｍＬ；（ｊ）任意選択で、抽出された臍帯血の細胞が＞０．４％ＣＤ３４＋であること；および凍結保存後に（ｄ）任意に解凍後の臍帯血組成物由来の免疫細胞の細胞毒性を測定すること。具体的な実施形態において、免疫細胞はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。方法は、ＮＫ細胞を増殖させる工程および／またはＮＫ細胞を改変する工程をさらに含み得る。場合によっては、ＮＫ細胞は、１つ又は複数の非内在性受容体（１つ又は複数のキメラ抗原受容体及び／又は１つ又は複数の非天然Ｔ細胞受容体を含む１つ又は複数のキメラ受容体など）などの１つ又は複数の非内在性遺伝子産物を発現するように改変される。場合によっては、非内在性遺伝子産物は、１つ以上の非内在性受容体、１つ以上のサイトカイン、１つ以上のケモカイン、１つ以上の酵素、またはそれらの組み合わせからなる。ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞における１つ以上の内因性遺伝子の発現が破壊されるように改変されていてもよい。

【0009】

一実施形態では、臍帯血組成物を選択する方法であって、凍結保存前に、以下の１つ以上を有すると決定される臍帯血組成物を同定する工程を含む方法が提供される：（ａ）臍帯血細胞の生存率が９８％または９９％以上である；（ｂ）任意に全単核球（ＴＮＣ）回収率が７６．３％以上である；（ｃ）有核赤血球（ＮＲＢＣ）含量が７．５×１０^７または８．０×１０^７またはその間の任意の量；（ｄ）臍帯血の由来となった乳児の体重が３６５０ｇ以上；（ｅ）臍帯血の由来となった乳児の実母および／または実父の人種が白人；（ｆ）任意で、臍帯血の由来となった乳児の妊娠週数が約３８週以下である；（ｇ）任意選択で、臍帯血の子宮内採取（ただし、子宮外採取、または子宮内採取と子宮外採取の組み合わせが、本開示のいずれの方法においても使用され得る）；（ｈ）任意選択で、臍帯血の由来となる生物学的に男性の乳児；（ｉ）任意選択で、前処理量（採取された臍帯血の体積＋抗凝固剤（３５ｍｌ ＣＰＤ））≦１２０ｍＬ；（ｊ）任意選択で、抽出された臍帯血の細胞は、＞０．４％ＣＤ３４＋であること；および任意に（ｋ）解凍後の臍帯血組成物由来の免疫細胞の細胞毒性を測定すること。場合によっては、凍結保存前の臍帯血組成物は、少なくとも（ａ）および（ｂ）を有すると判定され；（ｂ）および（ｃ）を有すると判定され；（ａ）および（ｃ）を有すると判定され；または（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を有すると判定される。

【0010】

具体的には、（ａ）の臍帯血細胞生存率は、９８．１、９８．２、９８．３、９８．４、９８．５、９８．６、９８．７、９８．８、９８．９、９９．０、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４、９９．５、９９．６、９９．７、９９．８、または９９．９％以上である。具体的には、（ｂ）のＴＮＣ回収率は７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％以上である。具体的には、ＮＲＢＣ含量は、８．０×１０^７、７．９×１０^７、７．８×１０^７、７．７×１０^７、７．６×１０^７、７．５×１０^７、７．０×１０^７、６．０×１０^７、５．０×１０^７、４．０×１０^７、３．０×１０^７、２．０×１０^７，１．０×１０^７，９．０×１０^６，８．０×１０^６，７．０×１０^６，６．０×１０^６，５．０×１０^６，４．０×１０^６，３．０×１０^６，２．０×１０^６，１．０×１０^６，９．０×１０^５，８．０×１０^５，７．０×１０^５，６．０×１０^５，５．０×１０^５，４．０×１０^５，３．０×１０^５，２．０×１０^５，１．０×１０^５，９．０×１０^４，８．０×１０^４，７．０×１０^４，６．０×１０^４，５．０×１０^４，４．０×１０^４，３．０×１０^４，２．０×１０^４，１．０×１０^４，９．０×１０^３，８．０×１０^３，７．０×１０^３，６．０×１０^３、５．０×１０^３、４．０×１０^３、３．０×１０^３、２．０×１０^３、１．０×１０^３、９．０×１０^２、８．０×１０^２、７．０×１０^２、６．０×１０^２、５．０×１０^２、４．０×１０^２、３．０×１０^２、２．０×１０^２、１．０×１０^２などである。具体的には、臍帯血の元となった乳児の体重が３６５０ｇ以上である。具体的な態様において、臍帯血の由来となった生物学的母親の人種は白人であり、および／または臍帯血の由来となった乳児の生物学的父親は白人である。特定の実施形態では、臍帯血の由来となる乳児の妊娠週数は約３８週以下である。特定の実施形態において、臍帯血は、任意の適切な方法によって得ることができるが、特定の実施形態において、子宮内、子宮外、またはその両方で得られるが、特定の場合、子宮内でのみ得られる。特定の実施形態において、約３５ｍＬの抗凝固剤に加えて抽出された臍帯血の体積は≦１２０ｍＬであり、抽出された臍帯血の体積が約８５、８４、８３、８２、８１、８０、７９、７８、７７、７６、７５、７４、７３、７２、７１、７０、６９、６８、６７、６６、６５、６４、６３、６２、６１、６０、５９、５８、５７、５６、５５、５４、５３、５２、５１、５０、４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、または３０ｍＬ以下である。

【0011】

本明細書に包含されるいずれの方法も、解凍した臍帯血組成物から免疫細胞を誘導する工程をさらに含むことができる。免疫細胞は、ＮＫ細胞、不変ＮＫ細胞、ＮＫ Ｔ細胞、Ｔ細胞Ｂ細胞、単球、顆粒球、骨髄球好中球、好酸球、好塩基球、マスト細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞、幹細胞、またはそれらの混合物であってもよい。具体的には、解凍後の臍帯血組成物由来の免疫細胞はＮＫ細胞であり、細胞傷害性は６６．７％以上である。細胞傷害性は、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％以上であってもよい。

【0012】

いくつかの実施形態において、臍帯血は、妊娠３９週または３８週以下の胎児または乳児由来である。臍帯血は、妊娠週数３９週、３８週、３７週、３６週、３５週、３４週、３３週、３２週、３１週、３０週、２９週、２８週、２７週、２６週、２５週、または２４週以下の胎児または乳児由来であってもよい。場合によっては、本方法は、解凍後の臍帯血細胞の生存率を決定することをさらに含む。具体的な態様において、解凍後の臍帯血細胞の生存率は８６．５％以上、例えば８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％以上である。

【0013】

解凍した臍帯血組成物由来の免疫細胞がＮＫ細胞である場合、ＮＫ細胞を拡大することができる。拡大パラメータは、ケースバイケースで決定してもしなくてもよい。拡大は、０日目から１５日目までの間やその間の任意の範囲など、特定の培養日数後に定量することができる。細胞の拡大倍数は、少なくとも、又は約３倍、５倍、７倍、１０倍、２０倍、２５倍、５０倍、７５倍、１００倍、１２５倍、１５０倍、１７５倍、２００倍、２２５倍、２５０倍、２７５倍、３００倍、３２５倍、３５０倍、３７５倍、４００倍、４２５倍、４５０倍、４７５倍、５００倍以上などである。場合によっては、培養０日目から６日目の間のＮＫ細胞の増殖は７倍以上である。場合によっては、培養６日目から１５日目の間のＮＫ細胞の増殖は１０倍以上である。具体的な態様では、０～１５日または６～１５日または０～６日（およびその間の任意の範囲）の間の拡大であり、７０倍を超える拡大を有する。具体的には、拡大は０～１５日（およびその間の任意の範囲）であり、４５０倍を超える拡大を有する。任意の倍数レベルでの拡大の日数の範囲には、０－１５、０－１４、０－１３、０－１２、０－１１、０－１０、０－９、０－８、０－７、０－６、０－５、０－４、０－３、０－２、０－１、１－１５、１－１４、１－１３、１－１２、１－１１、１－１０、１－９、１－８、１－７、１－６，１－５，１－４，１－３，１－２，２－１５，２－１４，２－１３，２－１２，２－１１，２－１０，２－９，２－８，２－７，２－６，２－５，２－４，２－３，３－１５，３－１４，３－１３，３－１２，３－１１，３－１０，３－９，３－８，３－７，３－６，３－５，３－４，４－１５，４－１４，４－１３，４－１２，４－１１，４－１０，４－９，４－８，４－７，４－６，４－５，５－１５，５－１４，５－１３，５－１２，５－１１，５－１０，５－９，５－８，５－７，５－６，６－１５，６－１４，６－１３，６－１２，６－１１，６－１０，６－９，６－８，６－７，７－１５，７－１４，７－１３，７－１２，７－１１，７－１０，７－９，７－８，８－１５，８－１４、８－１３、８－１２、８－１１、８－１０、８－９、９－１５、９－１４、９－１３、９－１２、９－１１、９－１０、１０－１５、１０－１４、１０－１３、１０－１２、１０－１１、１１－１５、１１－１４、１１－１３、１１－１２、１２－１５、１２－１４、１２－１３、１３－１５、１３－１４、１４－１５など。

【0014】

ＮＫ細胞は、キメラ抗原受容体などのキメラ受容体を含む非内在性受容体、または非内在性受容体が非天然Ｔ細胞受容体であるような、１つ以上の非内在性遺伝子産物を発現するように改変されるなど、改変されてもよい。場合によっては、非内在性遺伝子産物は、１つ以上の非内在性レセプター、１つ以上のサイトカイン、１つ以上のケモカイン、１つ以上の酵素、またはそれらの組み合わせからなる。特定の態様において、融解した臍帯血組成物由来の免疫細胞は、細胞内の１つ以上の内因性遺伝子の発現が破壊されるように改変される。

【0015】

具体的な態様において、臍帯血細胞の生存率は９８％または９９％より大きく、ＴＮＣ回収率は７６．３％より大きく、ＮＲＢＣ含量は７．５×１０^７もしくは８．０×１０７またはその間の任意の範囲（７．５×１０^７－８．０×１０^７、７．５×１０^７－７．９；７．５×１０^７－７．８×１０^７；７．５×１０^７－７．７×１０^７；７．５×１０^７－７．６×１０^７；７．６×１０^７－８．０×１０^７；７．６×１０^７－７．９×１０^７；７．６×１０^７－７．８×１０^７；７．６×１０^７－７．７×１０^７；７．７×１０^７－８．０×１０^７；７．７×１０^７－７．９×１０^７；７．７×１０^７－７．８×１０^７；７．８×１０^７－８．０×１０^７；７．８×１０^７－７．９×１０^７；７．９×１０^７－８．０×１０^７を含む。具体的な実施形態では、臍帯血は妊娠３９週または３８週以下の胎児または乳児由来であり、解凍後の臍帯血細胞の生存率は８６． ５％（これは任意である）、培養０日目から６日目の間のＮＫ細胞の拡大は３倍以上、培養６日目から１５日目の間のＮＫ細胞の拡大は１００倍以上、培養０日目から１５日目の間のＮＫ細胞の拡大は９００倍以上である。具体的な例では、６日目から１５日目の間のＮＫ細胞の増殖は７０倍以上である。具体的な実施態様では、０日から１５日の間のＮＫ細胞の増殖は４５０倍以上である。

【0016】

本開示の実施形態は、本明細書に包含される方法のいずれか１つによって同定される臍帯血組成物を含む。組成物は、薬学的に受容可能な担体中に含まれ得る。 組成物は、１つ以上の凍結保護剤とともに調製され得る。

【0017】

本開示の実施形態は、本明細書に包含される任意の方法由来の免疫細胞の集団を含む組成物を含む。

【0018】

いくつかの実施形態では、治療のための免疫細胞の有効性を予測する方法であって、凍結されていない１つ以上の臍帯血組成物を、以下について測定することを含む方法がある：（ａ）臍帯血細胞生存率；（ｂ）任意選択で全単核球（ＴＮＣ）回収率；（ｃ）有核赤血球（ＮＲＢＣ）含有量；（ｄ）臍帯血が由来する乳児の体重；（ｅ）臍帯血が由来する乳児の生物学的母親および／または生物学的父親の人種が白人であること；（ｆ）任意選択で、臍帯血が由来する乳児の妊娠年齢；ここで、免疫細胞は、臍帯血組成物が以下の特徴のうちの１つ以上を含む場合に、治療に有効である： （ａ）臍帯血細胞の生存率が９８％以上または９９％以上；（ｂ）全単核球（ＴＮＣ）回収率が７６．３％；（ｃ）有核赤血球（ＮＲＢＣ）含量が８．０×１０^７以下；（ｄ）臍帯血由来の乳児の体重が３６５０ｇ以上；（ｅ）臍帯血由来の乳児の生物学的母親および／または生物学的父親の人種が白人；（ｆ）任意で、臍帯血由来の乳児の妊娠週数が約３８週以下である。本方法は、１つ以上の血液組成物を凍結させる工程をさらに含んでいてもよい。本方法は、解凍時に（ｄ）臍帯血組成物由来の免疫細胞の細胞毒性を測定する工程をさらに含んでいてもよい。場合によっては、細胞毒性は６６．７％以上である。

【0019】

以上、本開示の特徴および技術的利点をかなり大まかに概説したが、これは、以下の詳細な説明をよりよく理解できるようにするためである。以下、本明細書の特許請求の範囲の主題を形成する追加の特徴および利点を説明する。開示された着想および具体的な実施形態は、本意匠の同じ目的を遂行するための他の構造を修正または設計するための基礎として容易に利用され得ることが、当業者には理解されるべきである。また、そのような等価な構造は、添付の特許請求の範囲に規定された精神および範囲から逸脱しないことも、当業者には理解されるはずである。 本明細書に開示された設計の特徴と考えられる新規な特徴は、組織および操作方法の両方に関して、さらなる目的および利点とともに、添付の図と関連して考慮される場合、以下の説明からよりよく理解されるであろう。しかしながら、各図は、例示および説明の目的のみのために提供されており、本開示の限界の定義として意図されていないことを明示的に理解されたい。

【0020】

本開示をより完全に理解するために、次に、添付の図面と併せて取られる以下の説明を参照する。

【図面の簡単な説明】

【0021】

【図1】凍結前のＣＢＵの特性は、細胞生存率に関連する臨床反応を予測する。

【0022】

【図2】凍結前ＣＢＵの特性は、全単核球（ＴＮＣ）回収に関する臨床応答を予測する。

【0023】

【図3】凍結前ＣＢＵ特性は、有核赤血球（ＮＲＢＣ）含量の減少を指示する臨床応答について予測する。

【0024】

【図4】３つのＣＢＵ特性は、患者の臨床的特性によって調整された場合、多変量モデルにおいて奏効の独立した予測因子である。

【0025】

【図5】３０日目の反応におけるＣＢＵの有利な特性の数（クロス集計）。

【0026】

【図6】凍結ＣＢからの）非形質転換ＮＫ細胞によるＲＡＪＩ腫瘍細胞の殺傷は、臨床応答（^５１Ｃｒ放出アッセイにより測定）の独立した予測因子である。

【0027】

【図7】図７Ａ－７Ｂ。細胞生存率＞９８％；ＴＮＣ回収率＞７６．３％；およびＮＲＢＣ含量（７Ａ）を使用することと、妊娠週数＜３９週；臍帯血解凍後生存率＞８６．５％；培養０日目から６日目までのＮＫ細胞拡大が３倍以上；培養６日目から１５日目までのＮＫ細胞拡大が１００倍以上；および／または培養０日目から１５日目までのＮＫ細胞拡大が９００倍以上であることとを比較した、臨床反応性の予測を改善するための追加パラメータの使用。

【0028】

【図8】図８Ａは、フローサイトメトリーにより測定される臍帯血ユニットの細胞生存率が、完全奏効の達成を予測するために使用され得、奏効を予測するための最適なカットオフとして９９％が同定されることを示す。図８Ｂは、臍帯血ユニットの細胞生存率に従った＋３０全奏効（ＰＲ／ＣＲ）および完全奏効（ＣＲ）を示す。生存率９９％以上のＣＢＵ由来の細胞製剤を投与された患者は、生存率の低いＣＢＵ由来の細胞製剤を投与された患者よりも、統計学的に有意に良好な臨床反応を示した。

【0029】

【図9】臨床応答の達成を予測する臍帯血ユニットの有核赤血球数の実証を提供する。

【0030】

【図10】図１０Ａは、選択された臍帯血ユニットおよび治療反応に関連する人種情報を提供する。 図１０Ｂは、凍結前ＣＢＵ生存率およびＣＢＵ人種に従った３０日目の反応を示す。凍結前生存率≧９９％であり、白人人種であるＣＢＵ由来の細胞産物を受けた患者は、凍結前生存率≧９９％であるが白人人種でないＣＢＵ由来の細胞産物を受けた患者よりも、統計的に有意なＣＲ率を示した。

【0031】

【図11】治療の成功に関連する臍帯血の乳児の体重を示す。

【0032】

【図12】図１２Ａ～１２Ｃは、４つの特定の基準に基づくＣＢＵの選択が、患者の反応を決定する主要な要因であることを示している。

【0033】

【図13】図１３は、異なるＮＫ細胞製品で治療された１９人の患者の独立したサンプルにおける検証を提供する。

【0034】

【図14】付加的な特性を追加することにより、モデルの予測力が改善されることを示している。

【発明を実施するための形態】

【0035】

Ｉ．定義の例
本明細書で使用される場合、「ａ」または「an」は、１つまたは複数を意味し得る。本明細書において請求項（複数可）において使用される場合、「Comprising」という語と共に使用される場合、「ａ」または「ａｎ」という語は、１つまたは複数を意味し得る。本開示のいくつかの実施形態は、本開示の１つ以上の要素、方法ステップ、および／または方法から構成されるか、または本質的に構成され得る。本明細書に記載される任意の方法または組成物が、本明細書に記載される任意の他の方法または組成物に関して実施され得、異なる実施形態が組み合わされ得ることが企図される。

【0036】

特許請求の範囲における「または」という用語の使用は、選択肢のみを指すように明示的に示されない限り、または選択肢が相互に排他的でない限り、「および／または」を意味するために使用されるが、本開示は、選択肢および「および／または」のみを指す定義を支持する。例えば、”Ｘ、Ｙ、および／またはＺ”は、”Ｘ”単独、”Ｙ”単独、”Ｚ”単独、”Ｘ、Ｙ、およびＺ”、”（ＸおよびＹ）またはＺ”、”Ｘまたは（ＹおよびＺ）”、または”ＸまたはＹまたはＺ”を指すことができる。Ｘ、Ｙ、またはＺが実施形態から特に除外され得ることが特に企図される。本明細書で使用される「別の」は、少なくとも２番目以上を意味する場合がある。用語「約」、「実質的に」および「およそ」は、一般に、記載された値プラスマイナス５％を意味する。

【0037】

本明細書を通じて、文脈上別段の必要がない限り、「含む」、「含有する」、および「包含する」という語は、記載されたステップもしくは要素またはステップもしくは要素の群を含むことを意味するが、他のステップもしくは要素またはステップもしくは要素の群を排除することを意味しないと理解される。「からなる」とは、「～からなる」という語句の後に続くものを含むこと、およびそれらに限定されることを意味する。したがって、「～からなる」という表現は、列挙された要素が必要または必須であり、他の要素が存在しない可能性があることを示す。「から本質的になる」とは、その語句の後に列挙された要素を含むことを意味し、列挙された要素について開示で指定された活性または作用を妨げないか、またはそれに寄与しない他の要素に限定される。したがって、「本質的にからなる」という語句は、列挙された要素は必須または必須であるが、他の要素は任意であり、列挙された要素の活性または作用に影響を及ぼすか否かに応じて存在してもしなくてもよいことを示す。

【0038】

本明細書で使用する「臍帯血組成物」または「臍帯血ユニット」という用語は、もともと出産後に胎盤からおよび／または付着した臍帯から得られた臍帯血の体積を指す。臍帯血ユニットまたは臍帯血組成物は、採取後、保存施設に保存される場合もあれば、保存されない場合もある。ある場合には、臍帯血ユニットまたは臍帯血組成物は、単一の個体に由来する血液を含むが、別の場合には、臍帯血ユニットまたは臍帯血組成物は、複数の個体に由来する混合物である。

【0039】

本明細書で使用する「凍結保存」という用語は、細胞を凝固点以下の温度で冷却保存するプロセスを指す。具体的な例では、凍結保存の温度は少なくとも－８０℃と低い。凍結保存は、凍結前に１つ以上の凍結保護剤を細胞に添加することを含んでも含まなくてもよい。凍結保護剤の例としては、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ヘタスターチ、デキストラン４０、またはそれらの組み合わせが挙げられる。ある具体例では、０．９％塩化ナトリウム中の５５％ジメチルスルホキシド／５％デキストラン４０の５ｍｌ中、０．９％塩化ナトリウム中の６％ヘタスターチを利用することができる。

【0040】

本明細書で使用する場合、遺伝子の「破壊」とは、破壊がない場合の遺伝子産物の発現レベルと比較して、対象遺伝子によってコードされる１つ以上の遺伝子産物の細胞内での発現の排除または減少を意味する。例示的な遺伝子産物には、遺伝子によってコードされるｍＲＮＡおよびタンパク質産物が含まれる。ある場合には遺伝子破壊は一過性または可逆的であり、他の場合には永続的である。いくつかの場合における破壊は、切断または非機能性産物が産生され得るにもかかわらず、機能的または全長のタンパク質またはｍＲＮＡの破壊である。本明細書のいくつかの実施形態では、発現とは対照的に、遺伝子活性または機能が破壊される。遺伝子破壊は、一般に、人為的な方法、すなわち、化合物、分子、複合体、または組成物の添加または導入によって、および／またはＤＮＡレベルなどの遺伝子の核酸の破壊もしくは遺伝子に関連する核酸の破壊によって誘導される。遺伝子破壊のための例示的な方法には、遺伝子サイレンシング、ノックダウン、ノックアウト、および／または遺伝子編集などの遺伝子破壊技術が含まれる。例としては、ＲＮＡｉ、siＲＮＡ、shＲＮＡ、および／またはリボザイムなどのアンチセンス技術が挙げられ、これらは一般に、一過性の発現低下をもたらすだけでなく、例えば、切断および／または相同組換えの誘導によって、標的化された遺伝子の不活性化または破壊をもたらす遺伝子編集技術が挙げられる。例としては、挿入、突然変異、欠失がある。このような遺伝子破壊は、典型的には、その遺伝子によってコードされる正常または「野生型」産物の発現の抑制および／または完全な欠如をもたらす。このような遺伝子破壊の例としては、遺伝子全体の欠失を含む、遺伝子または遺伝子の一部の挿入、フレームシフト変異およびミスセンス変異、欠失、ノックインおよびノックアウトが挙げられる。このような破壊は、コード領域、例えば、１つ以上のエクソンにおいて起こり得、その結果、全長産物、機能性産物、または停止コドンの挿入などによる任意の産物を産生できない結果につながる。このような遺伝子破壊は、遺伝子の転写を妨げるように、プロモーターやエンハンサー、あるいは転写の活性化に影響する他の領域の破壊によっても起こりうる。遺伝子破壊には、相同組換えによる標的遺伝子の不活性化を含む遺伝子標的化が含まれる。

【0041】

本明細書で使用される用語「操作された」「または「エンジニアリング」は、細胞、核酸、ポリペプチド、ベクターなどを含む、人の手（または同じものを生成するプロセス）によって生成される実体を指す。少なくともいくつかの場合において、操作された実体は合成されたものであり、本開示において利用される態様では天然には存在しない、または構成されていない要素からなる。細胞に関しては、１つ以上の内因性遺伝子の発現が低下しているため、および／または１つ以上の異種遺伝子（合成抗原受容体および／またはサイトカインなど）を発現しているため、細胞が操作されることがあるが、この場合、操作はすべて人の手によって行われる。抗原レセプターに関しては、抗原レセプターは、遺伝学的に組み替えられ、自然界に存在しない方法で構成された複数の構成要素からなるため、例えば、そのように構成された自然界に存在しない構成要素の融合タンパク質の形態であるため、工学的に操作されたと考えられる。

【0042】

本明細書で使用する「異種」という用語は、レシピエントとは異なる細胞型または異なる種に由来することを指す。具体的には、合成された、および／またはＮＫ細胞由来ではない遺伝子またはタンパク質を指す。この用語はまた、合成的に誘導された遺伝子または遺伝子構築物を指す。この用語はまた、合成的に誘導された遺伝子または遺伝子構築物を指す。例えば、サイトカインは、サイトカインをコードする核酸配列を保有するベクターでＮＫ細胞に提供されるなど、遺伝子組換えによって合成的に誘導されたものであるため、サイトカインがＮＫ細胞によって天然に産生される場合であっても、ＮＫ細胞に関しては異種とみなされることがある。

【0043】

本明細書で使用する「免疫細胞」という用語は、免疫系の一部であり、身体が感染症や他の病気と闘うのを助ける細胞を指す。免疫細胞には、ナチュラルキラー細胞、不変ＮＫ細胞、ＮＫ Ｔ細胞、あらゆる種類のＴ細胞（例えば、制御性Ｔ細胞、ＣＤ４．ｓｕｐ．＋Ｔ細胞、ＣＤ８．ｓｕｐ．＋Ｔ細胞、またはガンマデルタＴ細胞）、Ｂ細胞、単球、顆粒球、骨髄系細胞好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞、および／または幹細胞（例えば、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）または人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ））が挙げられる。また、本明細書には、適切な臍帯血ユニットを選択した後、免疫細胞を産生および工学的に作製する方法、ならびに養子細胞療法のために細胞を使用および投与する方法も提供されるが、この場合、細胞は、臍帯血の供給源および細胞のレシピエントに関して、自己由来であっても同種由来であってもよい。

【0044】

本明細書全体を通して、「一実施形態」、「一実施形態」、「特定の実施形態」、「関連する実施形態」、「ある実施形態」、「追加の実施形態」、又は「更なる実施形態」、又はそれらの組み合わせへの言及は、実施形態に関連して記載された特定の特徴、構造、又は特性が本発明の少なくとも一つの実施形態に含まれることを意味する。 したがって、本明細書を通じて様々な場所に前述の語句が現れるが、必ずしもすべてが同じ実施形態を指すわけではない。さらに、特定の特徴、構造、または特性は、１つまたは複数の実施形態において任意の適切な方法で組み合わせることができる。

【0045】

「治療する」または疾患もしくは状態の治療とは、疾患の徴候または症状を緩和するために、患者に１つまたは複数の薬剤を投与することを含み得るプロトコルを実行することを指す。治療の望ましい効果には、疾患の進行速度の減少、疾患状態の改善または緩和、寛解または予後の改善が含まれる。緩和は、疾患または病態の徴候または症状が現れる前に起こることもあれば、現れた後に起こることもある。したがって、「治療」または「処置」には、疾患または望ましくない状態の「予防」または「防止」が含まれる場合がある。さらに、「治療する」または「処置」は、徴候または症状の完全な緩和を必要とせず、治癒を必要とせず、患者にわずかな効果しか及ぼさないプロトコルを特に含む。

【0046】

本出願を通じて使用される「治療上の利益」または「治療上有効な」という用語は、この状態の医学的治療に関して対象の幸福を促進または増強するものを指す。これには、疾患の徴候または症状の頻度または重症度の減少が含まれるが、これらに限定されない。例えば、癌の治療は、例えば、腫瘍の大きさの減少、腫瘍の浸潤性の減少、癌の成長速度の減少、または転移の防止を含むことができる。また、癌の治療とは、癌に罹患した被験者の生存期間を延長することを指す場合もある。

【0047】

「被験者」及び「患者」並びに「個体」は、交換可能であり、ヒト又は霊長類、哺乳類、脊椎動物などの非ヒトのいずれかを指す場合がある。特定の実施形態では、対象はヒトである。対象は、哺乳動物、例えばヒト、実験動物（例えば、霊長類、ラット、マウス、ウサギ）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、七面鳥、ニワトリ）、家庭用ペット（例えば、イヌ、ネコ、げっ歯類）、ウマ、およびトランスジェニック非ヒト動物を含む、方法または材料の対象である任意の生物または動物対象であり得る。対象は、例えば、１つ以上の感染性疾患、１つ以上の遺伝的障害、１つ以上の癌、またはそれらの任意の組み合わせなどの疾患（病状と称され得る）を有するか、または有する疑いのある患者であり得る。本明細書で使用される「被験者」または「個人」は、医療施設に収容されていてもいなくてもよく、医療施設の外来患者として治療されていてもよい。個人は、インターネットを介して１つまたは複数の医療用組成物を受けることができる。個体は、ヒトまたは非ヒト動物の任意の年齢を含んでよく、したがって、成人および少年（例えば、子供）および乳児の両方を含み、胎内の個体を含む。被験者は、医学的治療の必要性を有していても、有していなくてもよい。個体は、臨床的であろうと基礎科学研究の支援であろうと、自発的であろうと非自発的であろうと、実験に参加することができる。

【0048】

「医薬上または薬理学的に許容される」という語句は、ヒトなどの動物に投与した場合に、有害反応、アレルギー反応、または他の有害反応を生じない分子実体および組成物を指す。抗体または追加の活性成分を含む医薬組成物の調製は、本開示に照らして当業者に公知であろう。さらに、動物（例えば、ヒト）への投与のために、調製物は、ＦＤＡ生物学的標準局（Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ）が要求する無菌性、発熱原性、一般的安全性、および純度の基準を満たすべきであることが理解されるであろう。
本明細書で使用される用語「任意に」は、本開示の任意の方法において利用されても利用されなくてもよい要素、ステップ、またはパラメータを指す。

【0049】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」には、任意のおよびすべての水性溶媒（例えば、水、アルコール／水溶液、生理食塩水、塩化ナトリウム、リンゲルデキストロースなどの非経口ビヒクル）、非水性溶媒（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、およびエチロレエートなどの注射可能な有機エステル）、分散媒体、コーティング、界面活性剤、酸化防止剤、保存剤（例えば、抗菌剤または抗真菌剤、抗酸化剤、キレート剤、および不活性ガス）、等張化剤、吸収遅延剤、塩、薬物、薬物安定化剤、ゲル、結合剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤、染料、体液および栄養補充剤、このような材料およびこれらの組み合わせは、当業者に知られているであろう。医薬組成物中の種々の成分のｐＨおよび正確な濃度は、周知のパラメータに従って調整される。

【0050】

本明細書で使用される「生存能力」という用語は、特定の細胞または複数の細胞が生存状態を維持する能力を意味する。
Ｉ．方法の実施形態

【0051】

ＩＩ．本願方法の実施形態
本開示の実施形態には、臍帯血細胞に由来する免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞など）の応答についての予測因子を特定するための方法が含まれる。特定の実施形態において、臍帯血ユニット物が１つまたは様々な予測因子について試験され、ただし、この場合、前記１つまたは様々な予測因子は、当該予測因子の１つまたは複数を欠く臍帯血ユニット物よりも良好に養子細胞療法に適する免疫細胞を産生させ得るものである。そのように試験されていない細胞と比較して臍帯血細胞に由来する免疫細胞の改善された応答について予測することができる試験されている様々なパラメーターは、細胞産生、細胞操作、および／または細胞活性プロセスを含む場合がある。これらのパラメーターは、臍帯血ユニット物そのものを評価する場合があり、あるいはこれらのパラメーターは、どのような細胞であれ当該臍帯血ユニット物に由来する細胞、あるいはその操作または改変に由来する細胞を評価する場合がある。そのようなパラメーターには、臍帯血ユニット物の生存率；当該臍帯血ユニット物の赤血球含有量；当該臍帯血ユニット物からの総単核細胞回収率；解凍された臍帯血ユニット物に由来する免疫細胞の拡大（１つまたは複数の範囲の時点における拡大を含む）；様々な材料の体積；当該乳児の性別、年齢および／または体重、当該乳児の１名または複数の生物学的親の人種；当該細胞の１つまたは複数のマーカー；解凍された臍帯血ユニット物に由来する免疫細胞の操作；当該解凍された臍帯血ユニット物に由来する免疫細胞の細胞傷害性；当該臍帯血が由来する母親の在胎齢；当該解凍された臍帯血ユニット物に由来する免疫細胞の細胞傷害性（ガン細胞または病原体感染細胞に対する細胞傷害性を含む）；解凍後の臍帯血ユニットの生存率；およびその他が含まれる。

【0052】

本開示の実施形態には、凍結保存された臍帯血ユニット物を、養子細胞療法のための細胞を製造するために選択するための方法であって、前記細胞は、そのように選択されていない細胞よりも、臨床用途を含めた具体的な目的のための、（例えば、細胞傷害性アッセイを使用して測定されること、および応答する患者の割合などによる）高い効力を有する細胞である、方法が含まれる。具体的な実施形態において、本方法は、凍結保存された臍帯血ユニット物を、例えば、ガンの処置のためであることを含めて、そのように選択されていない細胞よりも養子細胞療法のための高い効力を有する操作された免疫細胞を製造するために選択するための方法である。特定の局面において、本方法は、凍結保存された臍帯血ユニット物を、例えば、どのような種類のガンであれその処置のためであることを含めて、そのように選択されていない細胞よりも養子細胞療法のための高い効力を有する操作されたナチュラルキラー細胞を製造するために選択するための方法である。

【0053】

特定の実施形態において、本明細書中に包含される方法には、遺伝子操作されること、拡大されること、および／またはガンの処置などのために臨床的に利用されることにおいて効果的でない、または劣っている免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞など）を産生するであろう臍帯血ユニット物（これは臍帯血組成物として示されることがある）を選択するリスクが低減される方法が含まれる。具体的な実施形態において、本方法は、養子細胞療法としてのガン療法のためなどの高い効力を欠く免疫細胞を産生するであろう臍帯血ユニット物を選択するリスクを低減させる。具体的な場合において、本明細書中に包含される方法は、１つまたは複数のタイプのガンに対して有効である養子ＮＫ細胞療法をもたらす可能性を増大させる。

【0054】

本開示の方法では、選択が、そのように選択されていない細胞よりも細胞療法において量的および／または質的に良好である養子細胞療法のための細胞について行われる。質的には、細胞はより細胞傷害性である場合があり、能力がより大きくなるまで拡大される場合があり、より高い持続性を有する場合があり、より大きく操作に資する場合があり、応答する患者の割合がより大きくなる場合があり、またはそれらの組み合わせである場合がある。量的には、本方法から得られる選択された臍帯血ユニット物は、本明細書中に包含される選択パラメーターの１つまたは複数の知識を用いることなく選択される臍帯血ユニット物と比較して、少なくとも少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上である細胞生存率レベルを有する場合がある。本方法から得られる選択された臍帯血ユニット物は、本明細書中に包含される選択パラメーターの１つまたは複数の知識を用いることなく選択される臍帯血ユニット物と比較して、少なくとも少なくとも１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、２５０倍、５００倍、７５０倍、１０００倍またはそれ以上である細胞生存率レベルを有する場合がある。本方法から得られる選択された臍帯血ユニット物は、本明細書中に包含される選択パラメーターの１つまたは複数の知識を用いることなく選択される臍帯血ユニット物に比べて、少なくとも１０％超、１５％超、２０％超、２５％超、３０％超、３５％超、４０％超、４５％超、５０％超、５５％超、６５％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超またはそれ以上である総単核細胞回収率をもたらす場合がある。本方法から得られる選択された臍帯血ユニット物は、本明細書中に包含される選択パラメーターの１つまたは複数の知識を用いることなく選択される臍帯血ユニット物に比べて、少なくとも１０倍超、２０倍超、３０倍超、４０倍超、５０倍超、６０倍超、７０倍超、８０倍超、９０倍超、１００倍超、２５０倍超、５００倍超、７５０倍超、１０００倍超またはそれ以上である総単核細胞回収率をもたらす場合がある。本方法から得られる選択された臍帯血ユニット物は、本明細書中に包含される選択パラメーターの１つまたは複数の知識を用いることなく選択される臍帯血ユニット物に比べて、少なくとも１×１０^３個、１×１０^４個、１×１０^５個、１×１０^６個、１×１０^７個、５×１０^７個またはそれ以下である有核赤血球含有量を有する場合がある。本方法から得られる選択された臍帯血ユニット物は、本明細書中に包含される選択パラメーターの１つまたは複数の知識を用いることなく選択される臍帯血ユニット物に比べて、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以下である少ない有核赤血球含有量を有する場合がある。

【0055】

ある特定の実施形態において、臍帯血組織採取時における乳児の体重が、子宮内または子宮外であるか否かにかかわらず、本開示の方法では考慮される場合がある。具体的な実施形態において、乳児の体重は３６５０グラム超であり、例えば、３６５０グラム超、３７００グラム超、３７５０グラム超、３８００グラム超、３８５０グラム超、３９００グラム超、３９５０グラム超、４０００グラム超、４０５０グラム超、４１００グラム超、４１５０グラム超、４２００グラム超、４２５０グラム超、４５００グラム超、およびその他などである。具体的な実施形態において、これは、凍結保存および／または使用に先立って測定される。

【0056】

具体的な実施形態において、乳児の１人または複数の生物学的親の人種が白人である。いくつかの場合において、乳児の両方の生物学的親が白人であり、いくつかの場合には生物学的母親が白人であり、いくつかの場合には生物学的父親が白人である。

【0057】

具体的な実施形態において、乳児からの臍帯血の採取時期が方法における１つの要因である。具体的な実施形態において、臍帯血が子宮内の乳児の臍帯から得られる。採取工程は、どのような方法であれ好適な方法によってであり得るし、臍帯血を得る関係者は、臍帯血を操作する、貯蔵する、ならびに／あるいは１つまたは複数のパラメーターについて分析する関係者である場合があり、またはそうでない場合がある。具体的な実施形態において、採取時またはその直後において、臍帯血は１つまたは複数の抗凝固剤と組み合わされ、抗凝固剤の体積は標準的な量である場合があり、またはそうでない場合がある。具体的な場合において、前処理体積は、採取される臍帯血＋抗凝固剤の体積であり、ある特定の場合には、前処理体積は、採取される臍帯血＋一定体積（例えば、３５ｍＬまたは約３５ｍＬなど）の抗凝固剤の体積である。特定の実施形態において、抜き取られた臍帯血の体積は、体積で約８５ｍＬ、８４ｍＬ、８３ｍＬ、８２ｍＬ、８１ｍＬ、８０ｍＬ、７９ｍＬ、７８ｍＬ、７７ｍＬ、７６ｍＬ、７５ｍＬ、７４ｍＬ、７３ｍＬ、７２ｍＬ、７１ｍＬ、７０ｍＬ、６９ｍＬ、６８ｍＬ、６７ｍＬ、６６ｍＬ、６５ｍＬ、６４ｍＬ、６３ｍＬ、６２ｍＬ、６１ｍＬ、６０ｍＬ、５９ｍＬ、５８ｍＬ、５７ｍＬ、５６ｍＬ、５５ｍＬ、５４ｍＬ、５３ｍＬ、５２ｍＬ、５１ｍＬ、５０ｍＬ、４９ｍＬ、４８ｍＬ、４７ｍＬ、４６ｍＬ、４５ｍＬ、４４ｍＬ、４３ｍＬ、４２ｍＬ、４１ｍＬ、４０ｍＬ、３９ｍＬ、３８ｍＬ、３７ｍＬ、３６ｍＬ、３５ｍＬ、３４ｍＬ、３３ｍＬ、３２ｍＬ、３１ｍＬもしくは３０ｍＬまたはそれ以下であるに過ぎない。いくつかの場合において、抗凝固剤の体積は、２５ｍＬ、２６ｍＬ、２７ｍＬ、２８ｍＬ、２９ｍＬ、３０ｍＬ、３１ｍＬ、３２ｍＬ、３３ｍＬ、３４ｍＬ、３５ｍＬ、３６ｍＬ、３７ｍＬ、３８ｍＬ、３９ｍＬ、４０ｍＬ、４１ｍＬ、４２ｍＬ、４３ｍＬ、４４ｍＬ、４５ｍＬ、４６ｍＬ、４７ｍＬ、４８ｍＬ、４９ｍＬもしくは５０ｍＬまたはそれ以上であり、あるいはおよそそのような量である。具体的な場合において、抗凝固剤の体積は３５ｍＬであり、または約３５ｍＬである。抗凝固剤は、少なくともＣＰＤを含めてあらゆる種類の抗凝固剤であり得る（抗凝固剤は、ＣＤＰ－Ａ（ＣＤＰ＋アデノシン）；クエン酸・リン酸・可溶性デキストロース（ＣＰ２Ｄ）；クエン酸デキストロース（ＡＣＤ）；ヘパリンなどである場合がある）。特定の実施形態において、採取された臍帯血における細胞は１つまたは複数の特定のマーカーを発現する場合がある。具体的な場合において、採取された臍帯血における細胞はＣＤ３４を発現していてもよい。ある特定の実施形態において、特定の割合の細胞が、ＣＤ３４を含めてどのようなマーカーであれマーカーを発現する。ある特定の場合において、採取された血液における０．４％超の細胞がＣＤ３４を発現する。ある特定の場合において、採取された血液における０．４％超の細胞、０．５％超の細胞、０．６％超の細胞、０．７％超の細胞、０．８％超の細胞、０．９％超の細胞、１．０％超の細胞、１．５％超の細胞、２％超の細胞、３％超の細胞、４％超の細胞、５％超の細胞、６％超の細胞、７％超の細胞、８％超の細胞、９％超の細胞、１０％超の細胞、１５％超の細胞、２０％超の細胞、２５％超の細胞、３０％超の細胞、４０％超の細胞、５０％超の細胞、６０％超の細胞、７０％超の細胞、７５％超の細胞、８０％超の細胞、８５％超の細胞、９０％超の細胞、または９５％超の細胞がＣＤ３４を発現する。ある特定の場合において、採取された血液における少なくとも０．４％の細胞、少なくとも０．５％の細胞、少なくとも０．６％の細胞、少なくとも０．７％の細胞、少なくとも０．８％の細胞、少なくとも０．９％の細胞、少なくとも１．０％の細胞、少なくとも１．５％の細胞、少なくとも２％の細胞、少なくとも３％の細胞、少なくとも４％の細胞、少なくとも５％の細胞、少なくとも６％の細胞、少なくとも７％の細胞、少なくとも８％の細胞、少なくとも９％の細胞、少なくとも１０％の細胞、少なくとも１５％の細胞、少なくとも２０％の細胞、少なくとも２５％の細胞、少なくとも３０％の細胞、少なくとも４０％の細胞、少なくとも５０％の細胞、少なくとも６０％の細胞、少なくとも７０％の細胞、少なくとも７５％の細胞、少なくとも８０％の細胞、少なくとも８５％の細胞、少なくとも９０％の細胞、または少なくとも９５％の細胞がＣＤ３４を発現する。具体的な実施形態において、これは、凍結保存および／または使用に先立って測定される。

【0058】

方法から得られる選択された臍帯血細胞は、本明細書中に包含される選択パラメーターの１つまたは複数の知識を用いることなく選択される臍帯血細胞から産生される免疫細胞と比較して、少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上である、細胞傷害性を有する免疫細胞を産生させる場合がある。いくつかの場合において、選択された臍帯血細胞から産生される免疫細胞は、本明細書中に包含される選択パラメーターの１つまたは複数の知識を用いることなく臍帯血細胞から選択される免疫細胞と比較して、少なくとも１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、２５０倍、５００倍、７５０倍、１０００倍またはそれ以上である細胞傷害性レベルを有し得る。

【0059】

本開示の特定の局面では、選択が、あらゆる種類の凍結前の臍帯血ユニット物の１つまたは複数の製造物特徴について行われ、いくつかの局面では、凍結された臍帯血ユニット物が解凍された後で、選択が１つまたは複数の製造物特徴について行われる。そのような行為（１つまたは複数）は、養子細胞療法のための細胞産物を含めて細胞産物を産生するために（選定が行われる臍帯血ユニット物の集団の中で）最も適する臍帯血ユニット物を選択することを可能にする。解凍後の臍帯血ユニット物の特徴は細胞産物の産生に直接的に関連づけられる場合があり、またはそうでない場合がある。すなわち、いくつかの場合において、臍帯血ユニット物に由来する細胞の操作によって細胞療法がもたらされることが、適切な臍帯血ユニット物を選択することによって増強され、さらなる場合または代替となる場合においては、臍帯血ユニット物に由来する細胞を操作した後での細胞療法の活性が、適切な臍帯血ユニット物を選択することによって増強される（例えば、細胞傷害性（ｃｙｔｏｘｉｃｉｔｙ）などの活性、インビボ持続性、およびその他）。

【0060】

本開示の実施形態には、１つまたは複数のパラメーターが、臍帯血ユニット物のどのような種類の貯蔵バンクであれ１つまたは複数の貯蔵バンクからの１つまたは複数の臍帯血ユニット物について特徴づけられる方法が含まれる。具体的な場合において、前記１つまたは複数の臍帯血ユニット物が特徴づけられた後で、１つまたは複数の特定の臍帯血ユニット物が、最適な応答（例えば、治療的投与時の活性）を与えるには不適当であるとして拒絶されることがある。さらなる場合において、１つまたは複数の特定の臍帯血ユニット物が、増強された活性のために、例えば、治療的投与時などにおける増強された活性のために好適であると判定されることがある。いくつかの状況において、２つ以上の臍帯血ユニット物が、選択に値すると本開示の方法によって判定されるときには、それらは解凍前または解凍後に組み合わされてもよく、またはそうでなくてもよい。選択された複数の臍帯血ユニット物から産生される免疫細胞が、当該臍帯血ユニット物からの誘導の後で組み合わされてもよい。

【0061】

具体的な実施形態において、本開示は、ガンの処置のための最大効力を有するＮＫ細胞療法製造物を製造するための臍帯血ユニット物を特定するための新規な一組の基準を提供する。これらの非常に強力な臍帯血ユニット物から生じるＮＫ細胞は、最適な応答をガン患者においてもたらす可能性が最も高い。そのようなものとして、本開示の方法は、最大効力を有する臍帯血ユニット物をＮＫ細胞療法製造物の製造のための材料源として選択するために、また、臨床応答を誘導する可能性がない、もしくは効果のない臨床応答を誘導する可能性がある臍帯血ユニット物の選択および／またはＮＫ細胞の生成を避けるために使用される。特定の実施形態において、本開示の方法によって選択される臍帯血ユニット物から産生される高効力のＮＫ細胞は、寛解を養子注入後のガン患者において誘発する確率が最も高い。具体的な場合において、本開示の方法によって選択される臍帯血ユニット物から産生される高効力のＮＫ細胞は、寛解を養子注入後のガン患者において誘発する確率が、開示された有益な特徴を欠く臍帯血ユニット物から産生されるＮＫ細胞よりも大きい。

【0062】

本開示の実施形態には、臍帯血組成物を選択する方法であって、凍結保存前に、（ａ）臍帯血細胞生存率が９８％以上または９９％以上であること；（ｂ）必要な場合には、総単核細胞（ＴＮＣ）回収率が７６．３％以上であること；および（ｃ）有核赤血球（ＮＲＢＣ）含有量が７．５×１０^７個～８．０×１０^７個およびどのような量であれそれらの間の量よりも少ない、またはそれと同等であること；（ｄ）臍帯血が由来する乳児の体重；（ｅ）臍帯血が由来する乳児の生物学的母親および／または生物学的父親の人種が白人であること；（ｆ）必要な場合には、臍帯血が由来する乳児の在胎齢；（ｇ）必要な場合には臍帯血の子宮内採取（だが、子宮外、または子宮内と子宮外との組み合わせが、本開示のどのような方法においてであれ使用される場合がある）；（ｈ）必要な場合には、臍帯血が由来する生物学的雄性の乳児；（ｉ）必要な場合には、前処理体積（採取される臍帯血＋抗凝固剤（３５ｍｌのＣＰＤ）の体積）が１２０ｍＬ以下であること；（ｊ）必要な場合には、抜き取られた臍帯血の細胞は０．４％超がＣＤ３４＋であることのうちの１つまたは複数を有すると判定される臍帯血組成物を特定する工程と、必要な場合には（ｋ）解凍後の前記臍帯血組成物に由来する免疫細胞の細胞傷害性を測定する工程と、必要な場合には（ｌ）培養における前記細胞の拡大を測定する工程とを含む方法が含まれる。いくつかの場合において、凍結保存前の臍帯血組成物は、（ａ）および（ｃ）の特徴を少なくとも有すると判定される。いくつかの場合において、凍結保存前の臍帯血組成物は、（ｂ）および（ｃ）の特徴を少なくとも有すると判定される。いくつかの場合において、凍結保存前の臍帯血組成物は、（ａ）および（ｂ）の特徴を少なくとも有すると判定される。いくつかの場合において、凍結保存前の臍帯血組成物は、（ａ）、（ｃ）、（ｄ）および（ｅ）の特徴の１つ、２つ、３つ、またはすべてを有すると判定され、かつ、それらはどのような組み合わせであってもよい。いくつかの場合において、凍結保存前の臍帯血組成物は、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）を有すると判定される。いくつかの場合において、凍結保存前の臍帯血組成物は、（ａ）、（ｃ）、（ｄ）および（ｅ）の特徴の１つ、２つ、３つ、またはすべてを、（ｂ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）および（ｊ）のうちの１つまたは複数に加えて有すると判定される。

【0063】

Ａ．細胞生存率の測定
本開示の実施形態には、臍帯血ユニット物における細胞の生存率が測定され、測定により、臍帯血ユニット物が好適であるか否か、例えば、養子細胞療法のための免疫細胞を誘導するための選択のために好適であるか否かなどの情報が提供される方法が含まれる。生存率について試験されている臍帯血細胞は、臍帯血における様々な細胞（例えば、単核細胞、幹細胞（例えば、造血系または間葉系）、白血球、免疫系細胞（単球、マクロファージ、好中球、好塩基球、好酸球、巨核球、樹状細胞、Ｔ細胞（Ｔヘルパー細胞および細胞傷害性細胞を含む）、Ｂ細胞、ＮＫ細胞）、およびその他など）の混合物である場合がある。臍帯血における細胞の生存率は、これらの細胞の１つもしくは複数の物理的特性および／またはこれらの細胞の１つもしくは複数の活性によって確認することができる。

【0064】

生存率がどのような方法であれ好適な方法（１つまたは複数）によって求められ得るにもかかわらず、具体的な場合において、測定が、フローサイトメトリー、テトラゾリウム還元アッセイ、レサズリン還元アッセイ、プロテアーゼ生存率マーカーアッセイ、ＡＴＰアッセイ、ナトリウム－カリウム比、乳酸デヒドロゲナーゼアッセイ、ニュートラルレッド取り込み、ヨウ化プロピジウム、ＴＵＮＥＬアッセイ、ホルマザンに基づくアッセイ、エバンスブルー、トリパンブルー、エチジウムホモダイマーアッセイ、またはそれらの組み合わせによって行われる。

【0065】

臍帯血細胞についての細胞生存率が凍結保存前および／または凍結保存後に測定される場合がある。１つの実施形態において、所望の臍帯血ユニット物についての臍帯血細胞生存率が、９８．１％以上、９８．２％以上、９８．３％以上、９８．４％以上、９８．５％以上、９８．６％以上、９８．７％以上、９８．８％以上、９８．９％以上、９９．０％以上、９９．１％以上、９９．２％以上、９９．３％以上、９９．４％以上、９９．５％以上、９９．６％以上、９９．７％以上、９９．８％以上、または９９．９％以上である。

【0066】

生存率が、１つまたは複数の他の特徴に加えて、例えば、総有核細胞回収率、および有核赤血球含有量の測定などに加えて測定される場合において、細胞生存率は１つまたは複数の他の測定の前であってもよく、またはそうでなくてもよい。具体的な場合において、生存率がＴＮＣ回収率およびＮＲＢＣ測定に先立って測定され、またはＴＮＣ回収率およびＮＲＢＣ測定に続いて測定される。いくつかの場合において、生存率が、ＴＮＣの後で、しかしＮＲＢＣの前に測定され、またはＮＲＢＣの後で、しかしＴＮＣ回収率の前に測定される。

【0067】

Ｂ．総有核細胞回収率の測定
方法の特定の実施形態において、有核細胞が臍帯血処理後に測定される総有核細胞（ＴＮＣ）回収率が測定される。ＴＮＣ回収率により、生死両方の有核細胞が見積もられる。この工程は必要に応じて行われてもよく、またはそうでなくてもよい。

【0068】

ＴＮＣを測定するための好適なアッセイはどれも利用されるかもしれず、しかし、具体的な実施形態において、ＴＮＣ回収率アッセイには、フローサイトメトリー；トリパンブルー；メチレンブルーを伴う３％酢酸；血液学分析計分析；またはそれらの組み合わせが含まれる。ＴＮＣ回収率アッセイは具体的な場合において自動化されてもよく、または自動化されなくてもよい。

【0069】

１つの実施形態において、ＴＮＣ回収率は、７６．３％以上、７６．４％以上、７６．５％以上、７６．６％以上、７６．７％以上、７６．８％以上、７６．９％以上、７７％以上、７８％以上、７９％以上、８０％以上、８１％以上、８２％以上、８３％以上、８４％以上、８５％以上、８６％以上、８７％以上、８８％以上、８９％以上、９０％以上、９１％以上、９２％以上、９３％以上、９４％以上、９５％以上、９６％以上、９７％以上、９８％以上、または９９％以上である。

【0070】

特定の実施形態において、臍帯血ユニット物のＴＮＣ回収率が凍結保存に先立って測定される。

【0071】

ＴＮＣ回収率が、１つまたは複数の他の特徴に加えて、例えば、細胞生存率、およびＮＲＢＣ含有量の測定などに加えて測定される場合において、ＴＮＣ回収率は１つまたは複数の他の測定の前であってもよく、またはそうでなくてもよい。具体的な場合において、ＴＮＣ回収率が細胞生存率およびＮＲＢＣ測定に先立って測定され、または細胞生存率およびＮＲＢＣ測定に続いて測定される。いくつかの場合において、ＴＮＣ回収率が、細胞生存率の後で、しかしＮＲＢＣの前に測定され、またはＮＲＢＣの後で、しかし細胞生存率の前に測定される。

【0072】

Ｃ．有核赤血球数の測定
特定の実施形態において、臍帯血ユニット物が、有核赤血球（ＮＲＢＣ）含有量の測定に基づいて選択される。測定は手作業である場合があり、または自動化される場合がある。特定の実施形態において、ＮＲＢＣ含有量がより少ない臍帯血ユニット物が、有効な免疫細胞を産生させることにおいて、ＮＲＢＣ含有量がより大きい臍帯血ユニット物よりも効果的である。臍帯血ユニット物におけるＮＲＢＣのレベルにより、特定の臍帯血ユニット物に由来する免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞など）を用いて処置される個体の応答率が判定される。ＮＲＢＣ含有量が、密度遠心分離によって、例えば、Ｓｅｐａｘ（登録商標）装置などでの密度遠心分離によって測定される場合がある。

【0073】

具体的な実施形態において、ＮＲＢＣ含有量は、検出不能なレベルに至るまでを含めて、８．０×１０^７個以下、７．９×１０^７個以下、７．８×１０^７個以下、７．７×１０^７個以下、７．６×１０^７個以下、７．５×１０^７個以下、７．０×１０^７個以下、６．０×１０^７個以下、５．０×１０^７個以下、４．０×１０^７個以下、３．０×１０^７個以下、２．０×１０^７個以下、１．０×１０^７個以下、９．０×１０^６個以下、８．０×１０^６個以下、７．０×１０^６個以下、６．０×１０^６個以下、５．０×１０^６個以下、４．０×１０^６個以下、３．０×１０^６個以下、２．０×１０^６個以下、１．０×１０^６個以下、９．０×１０^５個以下、８．０×１０^５個以下、７．０×１０^５個以下、６．０×１０^５個以下、５．０×１０^５個以下、４．０×１０^５個以下、３．０×１０^５個以下、２．０×１０^５個以下、１．０×１０^５個以下、９．０×１０^４個以下、８．０×１０^４個以下、７．０×１０^４個以下、６．０×１０^４個以下、５．０×１０^４個以下、４．０×１０^４個以下、３．０×１０^４個以下、２．０×１０^４個以下、１．０×１０^４個以下、９．０×１０^３個以下、８．０×１０^３個以下、７．０×１０^３個以下、６．０×１０^３個以下、５．０×１０^３個以下、４．０×１０^３個以下、３．０×１０^３個以下、２．０×１０^３個以下、１．０×１０^３個以下、９．０×１０^２個以下、８．０×１０^２個以下、７．０×１０^２個以下、６．０×１０^２個以下、５．０×１０^２個以下、４．０×１０^２個以下、３．０×１０^２個以下、２．０×１０^２個以下、１．０×１０^２個以下、およびその他である。

【0074】

特定の実施形態において、ＮＲＢＣが凍結保存に先立って測定される。

【0075】

ＮＲＢＣが、１つまたは複数の他の特徴に加えて、例えば、総有核細胞回収率および細胞生存率などに加えて測定される場合において、ＮＲＢＣは１つまたは複数の他の測定の前であってもよく、またはそうでなくてもよい。具体的な場合において、ＮＲＢＣがＴＮＣ回収率および細胞生存率に先立って測定され、またはＴＮＣ回収率および細胞生存率に続いて測定される。いくつかの場合において、ＮＲＢＣが、ＴＮＣの後で、しかし細胞生存率の前に測定され、または細胞生存率の後で、しかしＴＮＣ回収率の前に測定される。

【0076】

Ｄ．乳児の体重
いくつかの実施形態において、臍帯血が由来する乳児の体重が、本開示によって包含されるどのような方法においてであれパラメーターとして利用される。乳児の体重は、臍帯血が採取される直前に、例えば、数日内または数時間内または数分内などにおいて取得される場合がある。いくつかの場合において、乳児の体重が、出生前超音波を使用することによって子宮内で求められる場合がある。いくつかの場合において、乳児の体重が、子宮外で、例えば、標準的な体重計などで求められる。乳児の体重を測定する関係者は、臍帯血を操作する、貯蔵する、ならびに／あるいは１つまたは複数のパラメーターについて分析する関係者である場合があり、またはそうでない場合がある。この工程は、どのような他の工程であれ凍結保存に先立つ他の工程の前に、および／または後で行われる場合がある。具体的な実施形態において、乳児の体重は、ある特定の量よりも大きく、これは一般には在胎齢と相関していてもよく、またはそうでなくてもよい。具体的な場合において、乳児の体重は約３６５０グラム超であり、例えば、３６５０グラム超、３７００グラム超、３７５０グラム超、３８００グラム超、３８５０グラム超、３９００グラム超、３９５０グラム超、４０００グラム超、４０５０グラム超、４１００グラム超、４１５０グラム超、４２００グラム超、４２５０グラム超、４５００グラム超、およびその他などである。具体的な実施形態において、これは、凍結保存および／または使用に先立って測定される。

【0077】

Ｅ．生物学的親の人種
具体的な実施形態において、生物学的親の１人または複数の人種が白人である。いくつかの場合において、生物学的母親は白人であり、かつ、生物学的父親は白人である。いくつかの場合において、生物学的母親は白人であり、しかし生物学的父親は白人でない。いくつかの場合において、生物学的父親は白人であり、しかし生物学的母親は白人でない。

【0078】

Ｆ．臍帯血のための採取パラメーター
いくつかの実施形態において、臍帯血が、この技術分野における標準的な方法によって、例えば、乳児が生まれた後の臍帯静脈からニードルを介するなどして得られる。子宮外抜き取りについては、これは胎盤排出後に行われ、臍帯血が、抗凝固剤を含む滅菌採取バッグに入れられ、または抗凝固剤が加えられる場合がある。子宮内抜き取りについては、これは、胎盤が依然として母体内にある間に臍帯静脈を介して行われ、その後で、臍帯血が、抗凝固剤を含む滅菌採取バッグに入れられ、または抗凝固剤が加えられる場合がある。いくつかの場合において、同じ乳児からの臍帯血が、子宮内抜き取りおよび子宮外抜き取りから組み合わされる。具体的な実施形態において、子宮内抜き取りは、子宮外抜き取りよりも好まれる方法である。

【0079】

特定の実施形態において、抜き取られた臍帯血の体積が本開示の方法では考慮される。例えば、前処理用組成物としての臍帯血と抗凝固剤との両方の組み合わせ物の体積が本開示の方法では考慮される。具体的な場合において、臍帯血と抗凝固剤との組み合わせ物の体積は１２０ｍＬ以下である。一例として、抗凝固剤の体積が約３５ｍＬであるとき、臍帯血の体積は、体積で約８５ｍＬ未満、８４ｍＬ未満、８３ｍＬ未満、８２ｍＬ未満、８１ｍＬ未満、８０ｍＬ未満、７９ｍＬ未満、７８ｍＬ未満、７７ｍＬ未満、７６ｍＬ未満、７５ｍＬ未満、７４ｍＬ未満、７３ｍＬ未満、７２ｍＬ未満、７１ｍＬ未満、７０ｍＬ未満、６９ｍＬ未満、６８ｍＬ未満、６７ｍＬ未満、６６ｍＬ未満、６５ｍＬ未満、６４ｍＬ未満、６３ｍＬ未満、６２ｍＬ未満、６１ｍＬ未満、６０ｍＬ未満、５９ｍＬ未満、５８ｍＬ未満、５７ｍＬ未満、５６ｍＬ未満、５５ｍＬ未満、５４ｍＬ未満、５３ｍＬ未満、５２ｍＬ未満、５１ｍＬ未満、５０ｍＬ未満、４９ｍＬ未満、４８ｍＬ未満、４７ｍＬ未満、４６ｍＬ未満、４５ｍＬ未満、４４ｍＬ未満、４３ｍＬ未満、４２ｍＬ未満、４１ｍＬ未満、４０ｍＬ未満、３９ｍＬ未満、３８ｍＬ未満、３７ｍＬ未満、３６ｍＬ未満、３５ｍＬ未満、３４ｍＬ未満、３３ｍＬ未満、３２ｍＬ未満、３１ｍＬ未満、または３０ｍＬ未満である。

【0080】

Ｇ．臍帯血細胞マーカー
具体的な実施形態において、どのようなタイプの細胞であれ臍帯血における細胞の少なくとも一部が集団として、１つまたは複数の特定のマーカーを発現する場合がある。具体的な実施形態において、臍帯血の特定割合の細胞がＣＤ３４を発現する。臍帯血細胞タイプの例には、幹細胞、始原体細胞、赤血球、白血球、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、ＮＫ細胞、単球および血小板が含まれる。いくつかの場合において、採取された臍帯血における０．４％超の細胞がＣＤ３４を発現する。ある特定の場合において、採取された血液における０．４％超の細胞、０．５％超の細胞、０．６％超の細胞、０．７％超の細胞、０．８％超の細胞、０．９％超の細胞、１．０％超の細胞、１．５％超の細胞、２％超の細胞、３％超の細胞、４％超の細胞、５％超の細胞、６％超の細胞、７％超の細胞、８％超の細胞、９％超の細胞、１０％超の細胞、１５％超の細胞、２０％超の細胞、２５％超の細胞、３０％超の細胞、４０％超の細胞、５０％超の細胞、６０％超の細胞、７０％超の細胞、７５％超の細胞、８０％超の細胞、８５％超の細胞、９０％超の細胞、または９５％超の細胞がＣＤ３４を発現する。ある特定の場合において、採取された血液における少なくとも０．４％の細胞、少なくとも０．５％の細胞、少なくとも０．６％の細胞、少なくとも０．７％の細胞、少なくとも０．８％の細胞、少なくとも０．９％の細胞、少なくとも１．０％の細胞、少なくとも１．５％の細胞、少なくとも２％の細胞、少なくとも３％の細胞、少なくとも４％の細胞、少なくとも５％の細胞、少なくとも６％の細胞、少なくとも７％の細胞、少なくとも８％の細胞、少なくとも９％の細胞、少なくとも１０％の細胞、少なくとも１５％の細胞、少なくとも２０％の細胞、少なくとも２５％の細胞、少なくとも３０％の細胞、少なくとも４０％の細胞、少なくとも５０％の細胞、少なくとも６０％の細胞、少なくとも７０％の細胞、少なくとも７５％の細胞、少なくとも８０％の細胞、少なくとも８５％の細胞、少なくとも９０％の細胞、または少なくとも９５％の細胞がＣＤ３４を発現する。具体的な実施形態において、これは、凍結保存および／または使用に先立って測定される。

【0081】

Ｈ．細胞傷害性の測定
本開示の実施形態には、臍帯血ユニット物に由来するＮＫ細胞を含めて、あらゆる種類の免疫細胞の細胞傷害性の測定が含まれる。具体的な実施形態において、臍帯血ユニット物（１つまたは複数）に由来するＮＫ細胞の細胞傷害性の測定が行われる。特定の場合において、臍帯血細胞ユニット物（１つまたは複数）が、生存率、ＮＲＢＣおよびＴＮＣ回収率について特徴づけられ、かつ、この特徴づけに基づく前記臍帯血細胞ユニット物（１つまたは複数）の選択の後で、また、必要な場合には凍結保存および解凍の後で、前記臍帯血ユニット物（１つまたは複数）からの細胞が細胞傷害性について測定されることがある。

【0082】

細胞傷害性アッセイは多くの場合、細胞質内容物の放出または細胞構造内への蛍光色素の浸透を可能にする大きく損なわれた細胞膜を有する瀕死の細胞に依拠する。細胞傷害性を、例えば、生体染色色素（ホルマザン色素）、プロテアーゼバイオマーカーを使用して細胞生存率を測定することなど数多くの異なる方法で、またはＡＴＰ含有量を測定することによって測定することができる。ホルマザン色素は、細胞死のときに放出されるデヒドロゲナーゼ（例えば、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）など）およびレダクターによるテトラゾリウム塩（ＩＮＴ、ＭＴＴ、ＭＴＳおよびＸＴＴ）の還元によって形成される発色性産物である。他のアッセイには、ハイスループットスクリーニングのために利用されることがあるスルホローダミンＢアッセイおよび水溶性テトラゾリウム塩アッセイが含まれる。細胞傷害性を、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）装置を用いて測定することができる。

【0083】

具体的な実施形態において、死細胞に選択的に浸透する色素を利用することができる（例えば、トリパンブルーなど）。他の場合において、死細胞に浸透する蛍光性のＤＮＡ結合色素を利用することができる（例えば、Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２、ＹＯ－ＰＲＯ－１、またはＣｅｌｌＴｏｘ Ｇｒｅｅｎなど）。

【0084】

細胞傷害性であることについて試験されている細胞がＴ細胞またはＮＫ細胞である具体的な実施形態においては、^５１Ｃｒ放出アッセイが利用される場合がある。

【0085】

Ｉ．ＮＫ細胞拡大の測定
本開示の方法の具体的な実施形態において、臍帯血ユニット物（本明細書中に包含される基準に基づいて選択される臍帯血ユニット物を含む）の凍結保存および解凍の後におけるＮＫ細胞拡大の度合いが臨床応答の予測因子である。すなわち、臍帯血が解凍された後、解凍された血液が、培養におけるＮＫ細胞の量が増大するような条件のもとで処理され、培養される。本明細書中に包含される選択基準を満たす臍帯血ユニット物がＮＫ細胞の拡大に先立ってプールされてもよく、またはプールされなくてもよい。いくつかの場合にはある特定の時点においてであることを含めて、ＮＫ細胞拡大の量的度合いが、いくつかの実施形態においては、ランダムに選択された臍帯血ユニット物に由来するＮＫ細胞と比較してより大きな臨床有効性を有するであろうＮＫ細胞のための選択基準として利用される。

【0086】

特定の場合において、ＮＫ細胞が拡大され、拡大レベルが求められる。ＮＫ細胞はある特定の時点で、少なくとも特定のレベルに拡大されるとき、ＮＫ細胞は、そのようなレベルに拡大され得ないＮＫ細胞と比較してより大きな臨床有効性を有する。少なくともいくつかの場合において、０日目と６日目との間の範囲で臨床有効性を有するであろうＮＫ細胞は、２倍以上、３倍以上、４倍以上、５倍以上、６倍以上、７倍以上（８倍以上、９倍以上、１０倍以上、１２倍以上、１５倍以上、２０倍以上、５０倍以上、１００倍以上、１５０倍以上、２００倍以上、２５０倍以上、５００倍以上、１０００倍以上、１５００倍以上、２０００倍以上、およびその他を含む）である。少なくともいくつかの場合において、０日目と６日目との間の範囲で拡大が７倍未満（６倍未満、５倍未満、４倍未満、３倍未満または２倍未満を含む）であるならば、ＮＫ細胞は不十分な臨床有効性を有するかもしれない。少なくともいくつかの場合において、６日目と１５日目との間の範囲で培養における拡大が、１０^２倍以上、１０^３倍以上、１０^４倍以上、１０^５倍以上（１０^６倍以上、１０^７倍以上、１０^８倍以上、１０^９倍以上、１０^１０倍以上、１０^１１倍以上、１０^１２倍以上、１０^１３倍以上、およびその他を含む）であるならば、ＮＫ細胞は臨床有効性を有するであろう。少なくともいくつかの場合において、６日目と１５日目との間の範囲で培養における拡大が１０^５倍未満（１０^４倍未満、１０^３倍未満、１０^２倍未満、およびその他を含む）であるならば、ＮＫ細胞は不十分な臨床有効性を有するかもしれない。少なくともいくつかの場合において、０日目と１５日目との間の範囲で臨床有効性を有するであろうＮＫ細胞は、９００倍以上、１０００倍以上、１１００倍以上、１２００倍以上、１３００倍以上、１４００倍以上、１５００倍以上、１６００倍以上、１７００倍以上、１８００倍以上、１９００倍以上、２０００倍以上、２５００倍以上、３０００倍以上、４０００倍以上、５０００倍以上、１０，０００倍以上、またはそれよりも大きい。少なくともいくつかの場合において、６日目と１５日目との間の範囲で培養における拡大が９００倍未満（例えば、８００倍未満、７００倍未満、６００倍未満、５００倍未満、４００倍未満、３００倍未満、２００倍未満、１００倍未満、およびその他など）であるならば、ＮＫ細胞は不十分な臨床有効性を有するかもしれない。

【0087】

いくつかの実施形態において、ＮＫ細胞拡大では、ＮＫ細胞を拡大させるための特定のインビトロ方法が利用される。いくつかの場合において、ＮＫ細胞の集団の事前活性化が、事前活性化されたＮＫ細胞を得るための効果的な濃度のＩＬ－１２、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－１８を含む事前活性化培養において行われ、その後、前記事前活性化ＮＫ細胞が、ＣＤ１３７リガンドを発現する人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）を含む拡大培養において拡大される。ある特定の局面において、ａＡＰＣはさらに、膜結合型サイトカインを発現する。いくつかの局面において、膜結合型サイトカインは、膜結合型ＩＬ－２１（ｍＩＬ－２１）および／または膜結合型ＩＬ－１５（ｍＩＬ－１５）である。いくつかの局面において、ａＡＰＣは、内因性のＨＬＡクラスＩ分子、ＨＬＡクラスＩＩ分子またはＣＤ１ｄ分子の発現を本質的に有しない。ある特定の局面において、ａＡＰＣはＩＣＡＭ－１（ＣＤ５４）およびＬＦＡ－３（ＣＤ５８）を発現する。いくつかの局面において、ａＡＰＣはさらに、白血病細胞由来ａＡＰＣとして定義される。ある特定の局面において、白血病細胞由来ａＡＰＣはさらに、ＣＤ１３７リガンドおよび／またはｍＩＬ－２１を発現するように操作されるＫ５６２細胞として定義される。Ｋ５６２細胞は、ＣＤ１３７リガンドおよびｍＩＬ－２１を発現するように操作される場合がある。ある特定の局面において、操作されるはさらに、レトロウイルス形質導入として定義される。特定の局面において、ａＡＰＣは放射線が照射される。特定の場合において、事前活性化工程は１０～２０時間であり、例えば、１４～１８時間（例えば、約１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、または１８時間）などであり、特に約１６時間である。ある特定の局面において、事前活性化培養はＩＬ－１８および／またはＩＬ－１５を１０～１００ｎｇ／ｍＬの濃度で、例えば、４０～６０ｎｇ／ｍＬなどの濃度で、特に約５０ｎｇ／ｍＬの濃度で含む。いくつかの局面において、事前活性化培養はＩＬ－１２を０．１～１５０ｎｇ／ｍＬの濃度で、例えば、１～２０ｎｇ／ｍＬなどの濃度で、特に約１０ｎｇ／ｍＬの濃度で含む。さらなる局面において、拡大培養はさらにＩＬ－２を含む。いくつかの局面において、ＩＬ－２は１０～５００Ｕ／ｍＬの濃度で、例えば、１００～３００Ｕ／ｍＬなどの濃度で、特に約２００Ｕ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの局面において、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－１５および／またはＩＬ－２は組換えヒトＩＬ－２である。いくつかの局面において、ＩＬ－２は、２～３日毎に拡大培養において補充される。いくつかの局面において、ａＡＰＣが、少なくとも第２の時間で拡大培養に加えられる。いくつかの局面において、方法は血清非含有培地で実施される。

【0088】

１つの実施形態において、拡大工程は、（１）ＣＤ４８および／またはＣＳ１（ＣＤ３１９）、（２）膜結合型インターロイキン－２１（ｍｂＩＬ－２１）、ならびに（３）４１ＢＢリガンド（４１ＢＢＬ）を発現するように操作されるユニバーサル抗原提示細胞（ＵＡＰＣ）の効果的な量の存在下でＮＫ細胞を培養することを含む。いくつかの局面において、免疫細胞と、ＵＡＰＣとは、３：１～１：３の比率で、例えば、３：１、３：２、１：１、１：２、または１：３などの比率で培養される。特定の局面において、免疫細胞と、ＵＡＰＣとは、１：２の比率で培養される。いくつかの局面において、ＵＡＰＣは、内因性のＨＬＡクラスＩ分子、ＨＬＡクラスＩＩ分子またはＣＤ１ｄ分子の発現を本質的に有しない。ある特定の局面において、ＵＡＰＣはＩＣＡＭ－１（ＣＤ５４）およびＬＦＡ－３（ＣＤ５８）を発現する。ある特定の局面において、ＵＡＰＣはさらに、白血病細胞由来ａＡＰＣとして定義される。いくつかの局面において、白血病細胞由来ＵＡＰＣはさらに、Ｋ５６２細胞として定義される。ある特定の局面において、ＵＡＰＣが、少なくとも第２の時間で加えられる。

【0089】

いくつかの局面において、拡大はＩＬ－２の存在下で行われる。具体的な局面において、ＩＬ－２は１０～５００Ｕ／ｍＬの濃度で、例えば、１０～２５Ｕ／ｍＬ、２５～５０Ｕ／ｍＬ、５０～７５Ｕ／ｍＬ、７５～１０Ｕ／ｍＬ、１００～１５０Ｕ／ｍＬ、１５０～２００Ｕ／ｍＬ、２００～２５０Ｕ／ｍＬ、２５０～３００Ｕ／ｍＬ、３００～３５０Ｕ／ｍＬ、３５０～４００Ｕ／ｍＬ、または４００～５００Ｕ／ｍＬなどの濃度で存在する。ある特定の局面において、ＩＬ－２は１００～３００Ｕ／ｍＬの濃度で存在する。特定の局面において、ＩＬ－２は２００Ｕ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの局面において、ＩＬ－２は組換えヒトＩＬ－２である。具体的な局面において、ＩＬ－２は、２～３日毎に、例えば、２日毎または３日毎などで補充される。

【0090】

ＩＩＩ．臍帯血由来の免疫細胞
本開示のある特定の実施形態は、本明細書中に包含される１つまたは複数の基準に基づいて処理のために選択される臍帯血ユニット物（１つまたは複数）に由来する免疫細胞に関する。免疫細胞は、ＮＫ細胞、インバリアントＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、Ｔ細胞（例えば、制御性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、またはガンマ－デルタＴ細胞）、単球顆粒球、骨髄系細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、幹細胞（例えば、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）または人工多能性幹（ｉＰＳＣ）細胞）、およびその他を含めて、あらゆる種類の免疫細胞であり得る。免疫細胞を産生させる方法、および操作する方法、同様にまた、前記細胞を養子細胞療法のために使用する方法、および投与する方法もまた本明細書中に提供され、そのような場合、細胞は、臍帯血が得られた個体に関して自家または同種であり得る。したがって、免疫細胞は、免疫療法として、例えば、ガン胞を標的とするなどのために使用される場合がある。

【0091】

免疫細胞は、ヒト対象からの臍帯血ユニット物から単離される場合がある。臍帯血を、目的とする対象から、例えば、特定の疾患または状態を有すると疑われる対象、特定の疾患または状態に対する素因を有すると疑われる対象、あるいは特定の疾患または状態のための治療を受けている対象などから得ることができる。臍帯血を、臍帯血（それに由来する免疫細胞を含む）が存命中に後で必要とされる場合に備えて臍帯血を預けるという目的のために対象から得ることができる。臍帯血に由来する免疫細胞はそのまま使用される場合があり、または、例えば、凍結することなどによって、一定の期間にわたって貯蔵することができる。臍帯血はプールされてもよく、またはプールされなくてもよく、例えば、２つ以上の供給源から、例えば、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０またはそれ以上の供給源（例えば、ドナー対象）などからプールされてもよく、またはプールされなくてもよい。

【0092】

免疫細胞が由来する臍帯血は、治療を必要としている対象から、または、低下した免疫細胞活性に伴う疾患を含めて、どのような種類の疾患であれ疾患に苦しむ対象から得ることができる。したがって、細胞は、治療を必要としている対象に対して自家であろう。代替において、免疫細胞の集団をドナーから、好ましくは組織適合性一致のドナーから得ることができる。免疫細胞集団を、免疫細胞が前記対象またはドナーにおいて存在する末梢血、臍帯血、骨髄、脾臓、またはどのような臓器／組織であれ他の臓器／組織から採取することができる。免疫細胞を対象および／またはドナーのプールから単離することができ、例えば、プールされた臍帯血などから単離することができる。

【0093】

免疫細胞の集団が、対象とは別個のドナーからの臍帯血ユニット物から得られるとき、得られた細胞が、当該細胞が対象に導入され得るという点で対象適合性であるならば、ドナーは好ましくは同種である。同種ドナー細胞はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）適合性であってもよく、またはそうでなくてもよい。対象適合性にするために、同種細胞は、免疫原性を低下させるように処置することができる。

【0094】

Ａ．ＮＫ細胞
いくつかの実施形態において、選択された臍帯血ユニット物（１つまたは複数）に由来する免疫細胞はＮＫ細胞である。ＮＫ細胞は、様々な腫瘍細胞、ウイルス感染細胞、ならびに骨髄および胸腺におけるいくつかの正常細胞に対する自発的な細胞傷害性を有するリンパ球の亜集団である。ＮＫ細胞は、形質転換細胞およびウイルス感染細胞に対する初期の自然免疫応答の非常に重要なエフェクターである。ＮＫ細胞はヒト末梢血におけるリンパ球の約１０％を構成する。リンパ球がＩＬ－２の存在下で培養されるとき、強い細胞傷害的反応性が現れる。ＮＫ細胞は、そのサイズがより大きく、かつ、特徴的なアズール顆粒がその細胞質に存在するため、大顆粒リンパ球として知られているエフェクター細胞である。ＮＫ細胞は、骨髄、リンパ節、脾臓、扁桃および胸腺において分化し、成熟する。ＮＫ細胞は、特異的な表面マーカーによって、例えば、ヒトにおけるＣＤ１６、ＣＤ５６およびＣＤ８などによって検出することができる。ＮＫ細胞は、Ｔ細胞抗原受容体、汎ＴマーカーのＣＤ３、または表面免疫グロブリンＢ細胞受容体を発現しない。

【0095】

ＮＫ細胞の刺激が、細胞表面の活性化受容体および抑制性受容体に由来するシグナルのクロストークを介して達成される。ＮＫ細胞の活性化状態が、生殖系列によってコードされた一連の活性化受容体および抑制性受容体から受け取られる細胞内シグナルのバランスによって調節される（Ｃａｍｐｂｅｌｌ、２００６）。ＮＫ細胞が、異常な細胞（例えば、腫瘍細胞またはウイルス感染細胞）に遭遇し、活性化シグナルが優位になったとき、ＮＫ細胞は、パーフォリンおよびグランザイムを含有する細胞溶解性顆粒の指向的分泌またはデスドメイン含有受容体の関与を介して標的細胞のアポトーシスを迅速に誘導することができる。活性化されたＮＫ細胞はまた、自然免疫細胞および適応免疫細胞の両方を活性化するＩ型サイトカイン（例えば、インターフェロン－ガンマ、腫瘍壊死因子－アルファ、および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）など）、同様にまた、他のサイトカインおよびケモカインを分泌することができる（Ｗｕ他、２００３）。初期の自然免疫応答におけるＮＫ細胞によるこれらの可溶性因子の産生は、他の造血細胞の動員および機能に著しい影響を及ぼす。また、物理的接触およびサイトカインの産生を介して、ＮＫ細胞は、免疫応答を促進するための、または抑制するための、樹状細胞および好中球との調節性クロストークネットワークにおける中心的役者である。

【0096】

ある特定の局面において、ＮＫ細胞が、ＮＫ細胞のエクスビボ拡大の以前に記載された方法（Ｓｈａｈ他、２０１３）によって単離され、拡大される。この方法において、ＣＢ単核細胞がＦｉｃｏｌｌ密度勾配遠心分離によって単離され、ＩＬ－２および人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）とともにバイオリアクターにおいて培養される。７日後には、細胞培養は、どのような細胞であれＣＤ３を発現する細胞が枯渇し、さらに７日間にわたって再培養される。細胞は、再びＣＤ３枯渇化され、ＣＤ５６^＋／ＣＤ３^－細胞またはＮＫ細胞の割合を求めるために特徴づけられる。他の方法において、臍帯ＣＢが、ＣＤ３４^＋細胞の単離、ならびに、ＳＣＦ、ＩＬ－７、ＩＬ－１５およびＩＬ－２を含有する培地での培養によるＣＤ５６^＋／ＣＤ３^－細胞への分化によってＮＫ細胞を導くために使用される。

【0097】

Ｂ．Ｔ細胞
いくつかの実施形態において、選択された臍帯血ユニット物（１つまたは複数）に由来する免疫細胞はＴ細胞である。機能的な抗腫瘍エフェクター細胞の誘導、活性化および拡大のためのいくつかの基本的な取り組みが、過去２０年において記載されている。これらは下記の細胞を含む：自家細胞（例えば、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）など）；自家ＤＣ、リンパ球、人工抗原提示細胞（ＡＰＣ）、またはＴ細胞リガンドおよび活性化抗体により被覆されるビーズ、あるいは標的細胞膜を捕捉することによって単離される細胞を使用してエクスビボで活性化されるＴ細胞；抗宿主腫瘍ＴＣＲを生来的に発現する同種の細胞；および「Ｔ－ボディー」として知られている、抗体様の腫瘍認識能を示す腫瘍反応性のＴＣＲ分子またはキメラＴＣＲ分子を発現するように遺伝子的に初期化される、または「再命令される」腫瘍非特異的な自家または同種の細胞。これらの取り組みは、本明細書中に記載される方法において使用することができる、Ｔ細胞の調製およびＴ細胞による免疫化のための数多くのプロトコルをもたらしている。

【0098】

いくつかの実施形態において、Ｔ細胞の１つまたは複数のサブセットが、選択された臍帯血に由来する：例えば、ＣＤ４^＋細胞、ＣＤ８^＋細胞、およびそれらの亜集団（例えば、機能、活性化状態、成熟度、分化能、拡大能、再循環能、局在化能および／または持続能についての潜在能力、抗原特異性、抗原受容体のタイプ、特定の器官または区画における存在、マーカーまたはサイトカインの分泌プロフィル、ならびに／あるいは分化度によって定義される亜集団など）など。処置されることになる対象に関して、Ｔ細胞が、同種もしくは自家である臍帯血、またはそれらの混合物から得られる場合がある。

【0099】

Ｔ細胞のある特定のタイプが、選択された臍帯血に由来する場合がある。Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４^＋および／またはＣＤ８^＋のＴ細胞）の様々なサブタイプおよび亜集団の中に、ナイーブＴ（Ｔ_Ｎ）細胞、エフェクターＴ細胞（Ｔ_ＥＦＦ）、メモリーＴ細胞およびそのサブタイプ（例えば、幹細胞メモリーＴ細胞（ＴＳＣ_Ｍ）、セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣ_Ｍ）、エフェクターメモリーＴ細胞（Ｔ_ＥＭ）、または最終分化したエフェクターメモリーＴ細胞など）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、未成熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、天然に存在する適応性の制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、ヘルパーＴ細胞（例えば、ＴＨ１細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞、濾胞性ヘルパーＴ細胞、アルファ／ベータＴ細胞およびデルタ／ガンマＴ細胞など）が存在する。

【0100】

いくつかの実施形態において、臍帯血に由来するＴ細胞集団のうちの１つまたは複数が、１つもしくは複数の特異的マーカー（例えば、表面マーカーなど）について陽性である細胞、または１つもしくは複数の特異的マーカーについて陰性である細胞について濃縮され、あるいはそのような細胞が枯渇化される。いくつかの場合において、そのようなマーカーは、Ｔ細胞のある特定の集団（例えば、非メモリー細胞など）では存在しないか、または比較的低いレベルで発現し、しかし、Ｔ細胞の他のある特定の集団（例えば、メモリー細胞）では存在し、または比較的より高いレベルで発現するものである。

【0101】

いくつかの実施形態において、Ｔ細胞が、非Ｔ細胞（例えば、Ｂ細胞、単球または他の白血球など）で発現されるマーカー（例えば、ＣＤ１４など）の負の選択によって臍帯血サンプルから分離される。いくつかの局面において、ＣＤ４^＋またはＣＤ８^＋の選択工程が、ＣＤ４^＋ヘルパー細胞およびＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔ細胞を分離するために使用される。そのようなＣＤ４^＋集団およびＣＤ８^＋集団はさらに、１つまたは複数のナイーブＴ細胞亜集団、メモリーＴ細胞亜集団および／またはエフェクターＴ細胞亜集団で発現される、または比較的より高い程度に発現されるマーカーについての正の選択または負の選択によって亜集団に選別することができる。

【0102】

いくつかの実施形態において、ＣＤ８^＋Ｔ細胞はさらに、ナイーブ細胞、セントラルメモリー細胞、エフェクターメモリー細胞および／またはセントラルメモリー幹細胞が、例えば、それぞれの亜集団に関連する表面抗原に基づく正の選択または負の選択などによって濃縮され、または枯渇化される。

【0103】

いくつかの実施形態において、Ｔ細胞はインターロイキン－２（ＩＬ－２）中で培養され、そして、どのような場合であれ、Ｔ細胞は拡大に先立ってプールされることがある。拡大を、この技術分野において知られているような多数の方法のいずれかによって達成することができる。例えば、Ｔ細胞を、フィーダーリンパ球およびインターロイキン－２（ＩＬ－２）またはインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）のどちらかの存在下での非特異的なＴ細胞受容体刺激を使用して迅速に拡大させることができる。非特異的なＴ細胞受容体刺激として、３０ｎｇ／ｍｌ前後のＯＫＴ３（マウスモノクローナル抗ＣＤ３抗体、これはＯｒｔｈｏ－ＭｃＮｅｉｌ．ＲＴＭ．（Ｒａｒｉｔａｎ、Ｎ．Ｊ．）から入手可能である）を挙げることができる。代替において、Ｔ細胞を、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＴ細胞増殖因子の存在下、例えば、３００ＩＵ／ｍｌのＩＬ－２またはＩＬ－１５などの存在下、必要な場合にはベクターから発現させることができるガンの１つまたは複数の抗原（その抗原性部分（例えば、エピトープなど）を含む、または細胞）により、例えば、ヒト白血球抗原Ａ２（ＨＬＡ－Ａ２）結合ペプチドなどによりインビトロで刺激することによって迅速に拡大させることができる。インビトロ誘導されたＴ細胞は、ＨＬＡ－Ａ２を発現する抗原提示細胞に対してパルス刺激されるガンの同じ抗原（１つまたは複数）による再刺激によって迅速に拡大させられる。代替において、Ｔ細胞を、例えば、放射線照射された自家リンパ球により、または放射線照射されたＨＬＡ－Ａ２＋の同種リンパ球およびＩＬ－２により再刺激することができる。

【0104】

Ｃ．幹細胞
いくつかの実施形態において、選択された臍帯血ユニット物（１つまたは複数）に由来する免疫細胞は、幹細胞、例えば、人工多能性幹細胞（ＰＳＣ）、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、または造血幹細胞（ＨＳＣ）、あるいはそれらの混合物などである場合がある。

【0105】

本明細書中に包含される多能性幹細胞は人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞（これは一般にはｉＰＳ細胞またはｉＰＳＣと略される）である場合がある。多能性の誘導が元々は、多能性に関連づけられる転写因子の導入を介した体細胞の初期化によって、マウス細胞を使用して２００６年に達成され（Ｙａｍａｎａｋａ他、２００６）、そしてヒト細胞を使用して２００７年に達成された（Ｙｕ他、２００７；Ｔａｋａｈａｓｈｉ他、２００７）。ｉＰＳＣの使用では、ＥＳ細胞の大規模な臨床使用に伴う倫理的および実際的な問題のほとんどが回避され、ｉＰＳＣ由来の自己移植片を有する患者は、移植片拒絶を防止するための生涯にわたる免疫抑制処置を必要としない場合がある。

【0106】

体細胞、例えば、臍帯血ユニット物における体細胞などを、当業者には知られている様々な方法を使用してｉＰＳ細胞を産生させるために初期化することができる。当業者はｉＰＳ細胞を容易に産生させることができる：例えば、公開された米国特許出願第２００９／０２４６８７５号、公開された米国特許出願第２０１０／０２１００１４号；公開された米国特許出願第２０１２／０２７６６３６号；米国特許第８，０５８，０６５号；同第８，１２９，１８７号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００７／０６９６６６（Ａ１）、米国特許第８，２６８，６２０号、同第８，５４６，１４０号；同第９，１７５，２６８号；同第８，７４１，６４８号；米国特許出願第２０１１／０１０４１２５号、および米国特許第８，６９１，５７４号を参照のこと（これらは参照によって本明細書中に組み込まれる）。一般には、核初期化因子が、多能性幹細胞を体細胞から産生させるために使用される。いくつかの実施形態において、Ｋｌｆ４、ｃ－Ｍｙｃ、Ｏｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、ＮａｎｏｇおよびＬｉｎ２８のうちの少なくとも３つが、またはそれらのうちの少なくとも４つが利用される。他の実施形態において、Ｏｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、ｃ－ＭｙｃおよびＫｌｆ ４が利用され、または、Ｏｃｔ３／４、Ｓｏｘ２、ＮａｎｏｇおよびＬｉｎ２８が利用される。

【0107】

これらの核初期化物質のマウスｃＤＮＡ配列およびヒトｃＤＮＡ配列が、国際公開ＷＯ２００７／０６９６６６号および米国特許第８，１８３，０３８号（これらは参照によって本明細書中に組み込まれる）において述べられるＮＣＢＩアクセション番号を参照して利用可能である。１つまたは複数の初期化物質、またはこれらの初期化物質をコードする核酸を導入するための様々な方法が、この技術分野では知られており、例えば、米国特許第８，２６８，６２０号、同第８，６９１，５７４号、同第８，７４１，６４８号、同第８，５４６，１４０号、公開された米国特許第８，９００，８７１号および同第８，０７１，３６９号（これらはともに参照によって本明細書中に組み込まれる）に開示される。

【0108】

ひとたび誘導されると、ｉＰＳＣは、多能性を維持するために十分である培地で培養することができる。ｉＰＳＣは、米国特許第７，４４２，５４８号および米国特許出願公開第２００３／０２１１６０３号において記載されるように、多能性幹細胞（より具体的には胚性幹細胞）を培養するために開発される様々な培地および技術とともに使用される場合がある。マウス細胞の場合には、培養が、白血病抑制因子（ＬＩＦ）を通常の培地に分化抑制因子として加えることにより行われる。ヒト細胞の場合には、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）がＬＩＦの代わりに加えられることが望ましい。当業者に知られているであろうようなｉＰＳＣの培養および維持のための他の方法が、本明細書中に開示される方法とともに使用される場合がある。

【0109】

ある特定の実施形態において、定義されていない条件が使用される場合があり、例えば、多能性細胞が、幹細胞を未分化状態で維持するために、線維芽細胞フィーダー細胞の上で、または線維芽細胞フィーダー細胞に曝露された培地で培養される場合がある。いくつかの実施形態において、細胞は、細胞分裂を終結させるために放射線または抗生物質により処理されるマウス胚性線維芽細胞をフィーダー細胞として共存させて培養される。代替において、多能性細胞が、定義されたフィーダー非依存的培養系（例えば、ＴＥＳＲ（商標）培地またはＥ８（商標）／Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ８（商標）培地など）を使用して、本質的に未分化の状態で培養され、かつ維持される場合がある。

【0110】

様々なプラスミドが、調節された高コピー数を達成すること、および細菌におけるプラスミド不安定性の潜在的原因を回避すること、ならびにヒト細胞を含めて哺乳動物細胞における使用に関して適合性であるプラスミド選択のための手段を提供することなど、いくつかの目的を念頭に置いて設計されている。ヒト細胞における使用のためのプラスミドの二重の要件には特に留意されている。第１には、そのようなプラスミドは大腸菌における維持および発酵のために好適であり、その結果、大量のＤＮＡが産生され、精製されることが可能である。第２には、そのようなプラスミドは安全であり、ヒト患者および動物における使用のために好適である。第１の要件では、細菌発酵の期間中に比較的容易に選択され、かつ安定に維持されることが可能である高コピー数のプラスミドが求められる。第２の要件では、選択マーカーおよび他のコード配列などの様々な要素に対する配慮が求められる。いくつかの実施形態において、マーカーをコードする様々なプラスミドが下記の（１）～（５）から構成される：（１）高コピー数の複製起点、（２）選択マーカー、例えば、限定されないが、カナマイシンによる抗生物質選抜のためのｎｅｏ遺伝子、（３）チロシナーゼエンハンサーを含めて転写終結配列、および（４）様々な核酸カセットを組み込むためのマルチクローニング部位、ならびに（５）前記チロシナーゼプロモーターに機能的に連結されるマーカーをコードする核酸配列。特定の局面において、プラスミドはチロシナーゼエンハンサーまたはチロシナーゼプロモーターを含まない。タンパク質をコードする核酸を誘導するためのこの技術分野で知られているプラスミドベクターが数多く存在する。これらには、米国特許第６，１０３，４７０号、同第７，５９８，３６４号、同第７，９８９，４２５号、および同第６，４１６，９９８号、ならびに米国特許出願第１２／４７８，１５４号（これらは参照によって本明細書中に組み込まれる）に開示されるベクターが含まれるが、これらに限定されない。

【0111】

エピソーム遺伝子送達システムとして、プラスミド、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）に基づくエピソームベクター、酵母に基づくベクター、アデノウイルスに基づくベクター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）に基づくエピソームベクター、ウシパピローマウイルス（ＢＰＶ）に基づくベクター、またはレンチウイルスベクターを挙げることができる。ウイルス遺伝子送達システムとして、ＲＮＡに基づく、またはＤＮＡに基づくウイルスベクターを挙げることができる。

【0112】

ＩＶ．細胞の操作
いくつかの実施形態において、選択された臍帯血ユニット物（１つまたは複数）に由来する免疫細胞は、様々な目的のために利用されるために人の手によって操作される。操作は、臨床用途または研究用途のためになされる場合がある。操作された免疫細胞はいくつかの場合において、貯蔵されてもよく、またはそれを必要としている個体に投与されるなど、使用されてもよい。操作は、選択された臍帯血ユニット物（１つまたは複数）から免疫細胞を生じさせた同じ人によって行われてもよく、またはそうでなくてもよい。

【0113】

具体的な実施形態において、免疫細胞は、１つまたは複数の非天然型受容体を発現するように、例えば、抗原受容体などを発現するように操作される。抗原はどのような種類のものであってもよく、抗原を発現するように免疫細胞を操作することにより、少なくともいくつかの場合には、細胞を臨床用途のために使用することが容易になる。抗原はガン抗原（腫瘍抗原または造血細胞抗原を含む）である場合があり、または抗原は、細菌性、ウイルス性、真菌性、寄生虫性、およびその他を含めて、どのような種類の病原体であれ病原体に関してである場合がある。

【0114】

選択された臍帯血ユニット物（１つまたは複数）からの免疫細胞（例えば、自己または同種のＴ細胞（例えば、制御性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、またはガンマ－デルタＴ細胞）、ＮＫ細胞、インバリアントＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、幹細胞（例えば、ＭＳＣまたはｉＰＳ細胞）は、抗原受容体（例えば、操作されたＴＣＲおよび／またはＣＡＲなど）を発現するように遺伝子操作することができる。例えば、免疫細胞は、ガン抗原についての抗原特異性を有するＴＣＲを発現するように改変される場合がある。特定の実施形態において、ＮＫ細胞が、ＴＣＲを発現するように操作される。ＮＫ細胞は代替として、またはさらに、ＣＡＲを発現するように操作される場合がある。異なる抗原に対するなどの多数のＣＡＲおよび／またはＴＣＲが、Ｔ細胞またはＮＫ細胞などのただ１つの細胞タイプに加えられる場合がある。

【0115】

様々な好適な細胞改変方法および組換え試薬がこの技術分野では知られている。例えば、ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＡｕｓｕｂｅｌ（上掲）を参照のこと。例えば、細胞は、Ｈｅｅｍｓｋｅｒｋ他（２００８）およびＪｏｈｎｓｏｎ他（２００９）において記載される形質導入技術を使用して、ガン抗原について抗原特異性を有するＴＣＲを発現するように形質導入される場合がある。

【0116】

いくつかの実施形態において、細胞は、１つまたは複数の抗原受容体をコードする、遺伝子操作により導入される１つまたは複数の核酸、およびそのような核酸の遺伝子操作された産物を含む。いくつかの実施形態において、核酸は異種であり、すなわち、通常の場合、細胞または細胞から得られるサンプルには存在しておらず、例えば、別の生物または細胞から得られるもので、例えば、操作中の細胞、および／またはそのような細胞が由来する生物において通常は見出されないものなどである。いくつかの実施形態において、核酸は天然に存在しておらず、例えば、自然界において見出されない核酸（例えば、キメラ）などである。

【0117】

いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、抗原に特異的に結合する細胞外の抗原認識ドメインを含有する。いくつかの実施形態において、抗原は、細胞の表面に発現するタンパク質である。いくつかの実施形態において、ＣＡＲはＴＣＲ様ＣＡＲであり、抗原は、ＴＣＲのようにであるが、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子との関連で細胞表面において認識されるプロセシングされたペプチド抗原、例えば、細胞内タンパク質のペプチド抗原などである。

【0118】

ＣＡＲおよび組換えＴＣＲを含めて様々な例示的な抗原受容体、同様にまた、受容体を操作し、細胞に導入するための様々な方法には、例えば、国際特許出願公開番号ＷＯ２０００／１４２５７、同ＷＯ２０１３／１２６７２６、同ＷＯ２０１２／１２９５１４、同ＷＯ２０１４／０３１６８７、同ＷＯ２０１３／１６６３２１、同ＷＯ２０１３／０７１１５４、同ＷＯ２０１３／１２３０６１、米国特許出願公開第２００２１３１９６０号、同第２０１３２８７７４８号、同第２０１３０１４９３３７号、米国特許第６，４５１，９９５号、同第７，４４６，１９０号、同第８，２５２，５９２号、同第８，３３９，６４５号、同第８，３９８，２８２号、同第７，４４６，１７９号、同第６，４１０，３１９号、同第７，０７０，９９５号、同第７，２６５，２０９号、同第７，３５４，７６２号、同第７，４４６，１９１号、同第８，３２４，３５３号および同第８，４７９，１１８号、ならびに欧州特許出願番号ＥＰ２５３７４１６に記載される抗原受容体および方法、ならびに／あるいはＳａｄｅｌａｉｎ他（２０１３）、Ｄａｖｉｌａ他（２０１３）、Ｔｕｒｔｌｅ他（２０１２）、Ｗｕ他（２０１２）によって記載される抗原受容体および方法が含まれる。いくつかの局面において、遺伝子操作された抗原受容体には、米国特許第７，４４６，１９０号に記載されるようなＣＡＲ、および国際特許出願公開番号ＷＯ／２０１４０５５６６８（Ａ１）に記載されるものが含まれる。

【0119】

ＴＣＲが利用される実施形態において、全長ＴＣＲのアルファ鎖およびベータ鎖（またはガンマ鎖およびデルタ鎖）についてコードするＲＮＡのエレクトロポレーションを、レトロウイルスにより形質導入されたＴＣＲ鎖と内因性ＴＣＲ鎖との対形成によって引き起こされる自己反応性に関する長期の問題を克服するための代替として使用することができる。そのような代わりの対形成がたとえ、一過性トランスフェクション戦略において生じるとしても、導入されたＴＣＲアルファ鎖およびＴＣＲベータ鎖は一過性にしか発現されないため、生じたかもしれない自己反応性Ｔ細胞は、時間が経つと、この自己反応性を失うであろう。導入されたＴＣＲアルファ鎖およびＴＣＲベータ鎖の発現が低下すると、正常な自家Ｔ細胞のみが残る。このことは、全長のＴＣＲ鎖が、導入されたＴＣＲ鎖を決して喪失させず、これにより、常に存在する自己反応性を患者において引き起こすであろう安定なレトロウイルス形質導入によって導入されるときには当てはまらない。

【0120】

遺伝子改変の後、免疫細胞は直ちに送達される（例えば、注入などされる）場合があり、または貯蔵される場合がある。ある特定の局面において、遺伝子改変の後、細胞は、細胞内への遺伝子移入の後で約１日、２日、３日、４日、５日またはそれ以上のうちにバルク集団としてエクスビボで数日間、数週間または数ヶ月間にわたって増やされる場合がある。さらなる局面において、トランスフェクタントがクローン化され、ただ１つの組み込まれた、またはエピソームで維持された発現カセットまたはプラスミドの存在、および（一例として）キメラ受容体の発現を明らかに示すクローンが、エクスビボで拡大される。拡大のために選択されるクローンにより、抗原を発現している標的細胞を特異的に認識し、かつ溶解する能力が明らかにされる。組換え免疫細胞が、ＩＬ－２、または共通のガンマ鎖と結合する他のサイトカイン（例えば、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５およびＩＬ－２１など）によるなどの刺激によって拡大される場合がある。組換え免疫細胞が、人工抗原提示細胞による刺激によって拡大される場合がある。さらなる局面において、遺伝子改変細胞が凍結保存される場合がある。
１．キメラ抗原レセプター

【0121】

Ａ．キメラ抗原受容体
一部の実施形態では、免疫細胞は、ＣＡＲを発現するように操作され、ＣＡＲは、ａ）１又はそれ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、およびｃ）所望の抗原に特異的に結合する場合を含む。

【0122】

一部の実施形態では、操作された抗原受容体には、活性化または刺激性ＣＡＲ、共刺激性ＣＡＲ（国際公開第２０１４／０５５６６８号を参照）、および／または抑制性ＣＡＲ（ｉＣＡＲ、Ｆｅｄｏｒｏｖら、２０１３を参照）を含むＣＡＲが挙げられる。ＣＡＲは、一般に、一部の態様ではリンカーおよび／または１つまたは複数の膜貫通ドメインを介して、１つまたは複数の細胞内シグナル伝達成分に連結された細胞外抗原（またはリガンド）結合ドメインを含む。そのような分子は、一般に、天然の抗原受容体を介したシグナル、共刺激受容体と組み合わせたそのような受容体を介したシグナル、および／または共刺激受容体のみを介したシグナルを模倣するかまたは近づく。

【0123】

本開示の特定の実施形態は、細胞内シグナル伝達ドメイン、膜貫通ドメイン、および１つまたは複数のシグナル伝達モチーフを含む細胞外ドメインを含む、免疫原性を低減するためにヒト化されたＣＡＲ（ｈＣＡＲ）を含む、抗原特異的ＣＡＲポリペプチドをコードする核酸をはじめとする、核酸の使用に関する。特定の実施形態では、ＣＡＲは、１つまたは複数の抗原間で共有された空間を含むエピトープを認識し得る。特定の実施形態では、結合領域は、モノクローナル抗体の相補決定領域、モノクローナル抗体の可変領域、および／またはそれらの抗原結合フラグメントを含み得る。もう一つの実施形態では、その特異性は、受容体に結合するペプチド（例えば、サイトカイン）に由来する。

【0124】

ヒトＣＡＲ核酸は、ヒト患者の細胞免疫療法を増強するために使用されるヒト遺伝子であり得ると想定される。具体的な実施形態では、本発明は、全長ＣＡＲのｃＤＮＡまたはコード領域を含む。抗原結合領域またはドメインは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，１９０，３０４号に記載されているものなどの特定のヒトモノクローナル抗体に由来する単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）のＶＨ鎖およびＶＬ鎖のフラグメントを含み得る。フラグメントは、ヒト抗原特異的抗体の任意の数の異なる抗原結合ドメインでもあり得る。より具体的な実施形態では、フラグメントは、ヒト細胞での発現のためのヒトコドン使用のために最適化された配列にコードされる抗原特異的ｓｃＦｖである。

【0125】

配置は、二重特異性抗体または多量体などの多量体であり得る。多量体は、軽鎖と重鎖の可変部分の交差対合によってジアボディを形成している可能性が最も高い。構造体のヒンジ部分は、完全に削除されているものから、第一システインが維持されているもの、セリンではなくプロリンで置換されているもの、第一システインまで切断されているものなど、複数の選択肢を有し得る。Ｆｃ部分は削除することができる。安定している、および／または二量体化するタンパク質は、この目的を果たすことができる。Ｆｃドメインの１つだけ、例えば、ヒト免疫グロブリンのＣＨ２またはＣＨ３ドメインのいずれかだけを使用することができる。二量体化を改善するために修飾されたヒト免疫グロブリンのヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域を使用することもできる。免疫グロブリンのヒンジ部分だけを使用することもできる。ＣＤ８αの部分を使用することもできる。

【0126】

一部の実施形態では、ＣＡＲ核酸は、膜貫通ドメインおよび修飾されたＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインなどの他の共刺激受容体をコードする配列を含む。他の共刺激受容体には、限定されるものではないが、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＯＸ－４０（ＣＤ１３４）、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）の１つまたは複数が含まれる。ＣＤ３ζによって開始される一次シグナルに加えて、ヒトＣＡＲに挿入されたヒト共刺激受容体によって提供される追加のシグナルは、ＮＫ細胞の完全な活性化に重要であり、インビボ持続性および養子免疫療法の治療的成功を改善するのに役立ち得る。

【0127】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、特定の抗原（またはマーカーまたはリガンド）、例えば、養子療法によって標的化される特定の細胞型に発現する抗原、例えば癌マーカーなど、および／または正常または非疾患細胞型で発現する抗原などの減衰応答を誘導することを意図する抗原などに対する特異性を持って構築される。したがって、ＣＡＲは、一般に、その細胞外部分に１つまたは複数の抗原結合分子、例えば、１つまたは複数の抗原結合フラグメント、ドメイン、または部分、あるいは１つまたは複数の抗体可変ドメイン、および／または抗体分子を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲには、抗体分子の１または複数の抗原結合部分、例えば、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の重鎖可変（ＶＨ）および軽鎖可変（ＶＬ）鎖に由来する単鎖抗体フラグメント（ｓｃＦｖ）が含まれる。

【0128】

キメラ抗原レセプターの特定の実施形態では、レセプターの抗原特異的部分（抗原結合領域を構成する細胞外ドメインとして共参照され得る）は、腫瘍関連抗原または病原体特異的抗原結合ドメインを含む。抗原には、Ｄｅｃｔｉｎ－１などのパターン認識受容体によって認識される糖鎖抗原が含まれる。腫瘍関連抗原は、腫瘍細胞の細胞表面で発現される限り、どのようなものでもよい。腫瘍関連抗原の例示的な実施形態としては、ＣＤ１９、ＣＤ２０、カルチノ胚性抗原、アルファフェトプロテイン、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ－１、ＣＤ５６、ＥＧＦＲ、ｃ－Ｍｅｔ、ＡＫＴ、Ｈｅｒ２、Ｈｅｒ３、上皮性腫瘍抗原、黒色腫関連抗原、変異ｐ５３、変異ｒａｓなどが挙げられる。特定の実施形態において、ＣＡＲは、腫瘍関連抗原の量が少ない場合に持続性を改善するためにサイトカインと共発現させることができる。例えば、ＣＡＲはＩＬ－１５と共発現させることができる。

【0129】

キメラ受容体をコードするオープンリーディングフレームの配列は、ゲノムＤＮＡ源、ｃＤＮＡ源から得ることができるか、または（例えば、ＰＣＲを介して）合成することができるか、またはそれらの組み合わせであり得る。ゲノムＤＮＡのサイズとイントロンの数によっては、イントロンがｍＲＮＡを安定化させることがわかっているため、ｃＤＮＡまたはその組合せを使用することが望ましい場合がある。また、内因性または外因性の非コード領域を使用してｍＲＮＡを安定化することがさらに有利であり得る。

【0130】

キメラ構築物は、裸のＤＮＡとして、または適切なベクターで免疫細胞に導入することができると想定される。裸のＤＮＡを使用してエレクトロポレーションによって細胞を安定的にトランスフェクトする方法は、当技術分野で公知である。例えば、米国特許第６，４１０，３１９号を参照されたい。裸のＤＮＡは、一般に、プラスミド発現ベクターに発現に適切な方向で含まれるキメラ受容体をコードするＤＮＡを指す。

【0131】

あるいは、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、またはレンチウイルスベクター）を使用して、キメラ構築物を免疫細胞に導入することができる。本開示の方法に従って用いるのに適したベクターは、免疫細胞で非複製性の適したベクターである。細胞内に維持されるウイルスのコピー数が、細胞の生存能力を維持ほど十分に低い、ウイルスに基づく多数のベクターが公知であり、例えば、ＨＩＶ、ＳＶ４０、ＥＢＶ、ＨＳＶ、またはＢＰＶに基づくベクターなどがある。

【0132】

一部の態様では、抗原特異的結合、または認識成分は、１つまたは複数の膜貫通型および細胞内シグナル伝達ドメインに連結されている。一部の実施形態では、ＣＡＲには、ＣＡＲの細胞外ドメインと融合した膜貫通ドメインが含まれる。一実施形態では、ＣＡＲ内のドメインの１つに自然に関連付けられている膜貫通ドメインが使用される。一部の例では、膜貫通ドメインは、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小化するために、同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインとそのようなドメインとの結合を回避するアミノ酸置換によって選択または修飾される。

【0133】

一部の実施形態の膜貫通ドメインは、天然源または合成源のいずれかに由来する。供給源が天然である場合、一部の態様のドメインは、膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質に由来する。膜貫通領域には、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータ、またはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＧＩＴＲ／ＣＤ３５７、ＮＫＧ２Ｄ、およびＤＡＰ分子に由来する（すなわち、少なくともそれらの１つまたは複数の膜貫通領域を含む）ものが含まれる。あるいは、一部の実施形態での膜貫通ドメインは合成である。一部の態様では、合成膜貫通ドメインは、主に疎水性の残基、例えば、ロイシンおよびバリンなどを含む。一部の態様では、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバリンのトリプレットが合成膜貫通ドメインの各末端に見出される。

【0134】

特定の実施形態では、ＮＫ細胞などの免疫細胞を遺伝子改変するために本明細書に開示されるプラットフォーム技術は、（ｉ）エレクトロポレーションデバイス（例えば、ヌクレオフェクター）を使用する非ウイルス遺伝子移入、（ｉｉ）エンドドメイン（例えば、ＣＤ２８／ＣＤ３－ζ、ＣＤ１３７／ＣＤ３－ζ、または他の組合せ）を介してシグナルを送るＣＡＲ、（ｉｉｉ）抗原認識ドメインと細胞表面を接続する可変長の細胞外ドメインを有するＣＡＲ、および、一部の例では、（ｉｖ）ＣＡＲsup＋免疫細胞を強固にかつ数値的に拡大できるＫ５６２由来の人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）（Ｓｉｎｇｈら、２００８；Ｓｉｎｇｈら、２０１１）を含む。

【0135】

Ｂ．Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）
一部の実施形態では、遺伝子操作された抗原受容体には、組換えＴＣＲおよび／または天然に存在するＴ細胞からクローン化されたＴＣＲが含まれる。「Ｔ細胞受容体」または「ＴＣＲ」とは、可変ａおよびβ鎖（それぞれＴＣＲαおよびＴＣＲβとして公知）または可変γおよびδ鎖（それぞれＴＣＲγおよびＴＣＲδとしても公知）を含み、ＭＨＣ受容体に結合した抗原ペプチドに特異的に結合できる分子を指す。一部の実施形態では、ＴＣＲは、αβ型である。

【0136】

一般に、αβ型およびγδ型で存在するＴＣＲは一般に構造的に類似しているが、それらを発現するＴ細胞は異なる解剖学的位置または機能を持っている場合がある。ＴＣＲは、細胞の表面に、または可溶性の形で見出すことができる。一般に、ＴＣＲは、Ｔ細胞（またはＴリンパ球）の表面に見出され、そこでは一般に主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子に結合した抗原の認識を担っている。一部の実施形態では、ＴＣＲは、定常ドメイン、膜貫通ドメインおよび／または短い細胞質側末端も含み得る（例えば、Ｊａｎｅｗａｙら、１９９７を参照）。例えば、一部の態様では、ＴＣＲの各鎖は、１つのＮ末端免疫グロブリン可変ドメイン、１つの免疫グロブリン定常ドメイン、膜貫通領域、およびＣ末端に短い細胞質側末端を有することができる。一部の実施形態では、ＴＣＲは、シグナル伝達の媒介に関与するＣＤ３複合体の不変タンパク質に関連している。特に明記しない限り、「ＴＣＲ」という用語は、その機能的なＴＣＲフラグメントを包含すると理解されるべきである。この用語は、αβ型またはγδ型のＴＣＲを含む無傷または全長ＴＣＲも包含する。

【0137】

したがって、本明細書において、ＴＣＲへの言及は、任意のＴＣＲまたは機能的フラグメント、例えば、ＭＨＣ分子に結合した特定の抗原ペプチド、すなわちＭＨＣ－ペプチド複合体に結合するＴＣＲの抗原結合部分などを含む。同義的に使用することができる、ＴＣＲの「抗原結合部分」または「抗原結合フラグメント」とは、ＴＣＲの構造ドメインの一部を含むが、完全なＴＣＲが結合する抗原に結合する分子（例えば、ＭＨＣ－ペプチド複合体）を指す。場合によっては、抗原結合部は、一般に各鎖が３つの相補性決定領域を含むなどの、特定のＭＨＣ－ペプチド複合体に結合するための結合部位を形成するのに十分なＴＣＲの可変ａ鎖および可変β鎖などのＴＣＲの可変ドメインを含む。

【0138】

一部の実施形態では、ＴＣＲ鎖の可変ドメインは、ＴＣＲ分子の結合部位を形成し、ペプチド特異性を決定することにより、抗原認識を付与し、ペプチド特異性を決定する、免疫グロブリンに類似したループまたは相補性決定領域（ＣＤＲ）を形成するために結合する。一般に、免疫グロブリンのように、ＣＤＲはフレームワーク領域（ＦＲ）によって分離される（例えば、Ｊｏｒｅｓら、１９９０；Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８８；Ｌｅｆｒａｎｃら、２００３を参照）。一部の実施形態では、ＣＤＲ３は処理された抗原の認識を担う主なＣＤＲであるが、アルファ鎖のＣＤＲ１は抗原ペプチドのＮ末端部分と相互作用することも示されており、一方で、ベータ鎖のＣＤＲ１はペプチドのＣ末端部分と相互作用する。ＣＤＲ２はＭＨＣ分子を認識すると考えられている。一部の実施形態では、β鎖の可変領域は、さらなる超可変性（ＨＶ４）領域を含むことができる。

【0139】

一部の実施形態では、ＴＣＲ鎖は定常ドメインを含む。例えば、免疫グロブリンのように、ＴＣＲ鎖（例えば、ａ鎖、β鎖）の細胞外部分は、２つの免疫グロブリンドメイン、すなわちＮ末端の可変ドメイン（例えば、ＶａまたはＶｐ；一般に、Ｋａｂａｔ番号付けに基づくアミノ酸１～１１６である。Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、ＵＳ Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、１９９１、第５版）と、細胞膜に隣接する１つの定常ドメイン（例えば、ａ鎖定常ドメインまたはＣａ、一般にＫａｂａｔに基づくアミノ酸１１７～２５９、β鎖定常ドメインまたはＣＰ、一般にＫａｂａｔに基づくアミノ酸１１７～２９５）を含み得る。例えば、一部の例では、２つの鎖によって形成されるＴＣＲの細胞外部分は、２つの膜近位定常ドメインと、ＣＤＲを含む２つの膜遠位可変ドメインを含む。ＴＣＲドメインの定常ドメインは、システイン残基がジスルフィド結合を形成し、２つの鎖間を連結する短い接続配列が含まれている。一部の実施形態では、ＴＣＲは、ＴＣＲが定常ドメインに２つのジスルフィド結合を含むように、α鎖およびβ鎖のそれぞれに追加のシステイン残基を有していてもよい。

【0140】

一部の実施形態では、ＴＣＲ鎖は、膜貫通ドメインを含むことができる。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは正に帯電している。一部の例では、ＴＣＲ鎖は細胞質側末端を含む。一部の例では、この構造により、ＴＣＲはＣＤ３のような他の分子と会合することが可能になる。例えば、膜貫通領域をもつ定常ドメインを含むＴＣＲは、タンパク質を細胞膜に固定し、ＣＤ３シグナル伝達装置または複合体の不変サブユニットと会合することができる。

【0141】

一般に、ＣＤ３は、哺乳類で３つの異なる鎖（γ、δ、およびε）と、ζ鎖を持つことができる多タンパク質複合体である。例えば、哺乳類では、この複合体は、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、２つのＣＤ３ε鎖と、ＣＤ３ζ鎖のホモ二量体を含むことができる。ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、およびＣＤ３ε鎖は、単一の免疫グロブリンドメインを含む免疫グロブリンスーパーファミリーの高度に関連した細胞表面タンパク質である。ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、およびＣＤ３ε鎖の膜貫通領域は負に帯電している。これは、これらの鎖が正に帯電したＴ細胞受容体鎖と会合することを可能にする特性である。ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、およびＣＤ３ε鎖の細胞内テールは、それぞれ、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフすなわちＩＴＡＭとして公知の保存されたモチーフを１つ含むが、各ＣＤ３ζ鎖は３つ有する。一般に、ＩＴＡＭは、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達能力に関与している。これらのアクセサリー分子は負に帯電した膜貫通領域を有し、ＴＣＲから細胞にシグナルを伝播する役割を果たす。

【0142】

一部の実施形態では、ＴＣＲは、２つの鎖αおよびβ（または任意選択でγおよびδ）のヘテロ二量体であってもよく、またはそれは単鎖ＴＣＲ構築物であってもよい。一部の実施形態では、ＴＣＲは、例えば、１つまたは複数のジスルフィド結合によって連結された２つの別個の鎖（αおよびβ鎖またはγおよびδ鎖）を含むヘテロ二量体である。一部の実施形態では、標的抗原（例えば、癌抗原）のＴＣＲが特定され、細胞に導入される。一部の実施形態では、ＴＣＲをコードする核酸は、公開されているＴＣＲのＤＮＡ配列のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅などにより、多様な供給源から得ることができる。一部の実施形態では、ＴＣＲは、Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）、Ｔ細胞ハイブリドーマ、または他の公開されている供給源などの細胞などの生物学的供給源から得られる。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、インビボで分離された細胞から得ることができる。一部の実施形態では、高親和性Ｔ細胞クローンを患者から分離し、ＴＣＲを分離することができる。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、培養されたＴ細胞ハイブリドーマまたはクローンであってよい。一部の実施形態では、標的抗原のＴＣＲクローンは、ヒト免疫系遺伝子（例えば、ヒト白血球抗原系、すなわちＨＬＡ）で操作されたトランスジェニックマウスで生成されたものである。例えば、腫瘍抗原を参照されたい（例えば、Ｐａｒｋｈｕｒｓｔら、２００９およびＣｏｈｅｎら、２００５を参照）。一部の実施形態では、ファージディスプレイを使用して標的抗原に対するＴＣＲを分離する（例えば、Ｖａｒｅｌａ－Ｒｏｈｅｎａら、２００８およびＬｉ、２００５参照）。一部の実施形態では、ＴＣＲまたはその抗原結合部分は、ＴＣＲの配列の知識から合成によって生成することができる。

【0143】

Ｃ．抗原
具体的な場合において、選択された臍帯血ユニット物（１つまたは複数）に由来する免疫細胞は、抗原を標的とするタンパク質を発現するように、例えば、抗原を標的とする受容体などを発現するように操作される。具体的な場合において、受容体は、異なる供給源からのキメラな成分を含むように遺伝子操作される。遺伝子操作された抗原受容体によって標的とされる抗原の中には、養子細胞療法を介して標的とされることになる疾患、状態または細胞タイプに関連して発現される抗原がある。このような疾患および状態の中には、血液学的ガン、免疫系のガン（例えば、リンパ腫、白血病および／または骨髄腫など、例えば、Ｂ、Ｔおよび骨髄性の白血病、リンパ腫、ならびに多発性骨髄腫など）を含めて様々なガンおよび腫瘍を含めた、増殖性、新生物性および悪性の疾患および障害がある。いくつかの実施形態において、抗原は、正常な、または標的とならない細胞または組織と比較した場合、疾患または状態の細胞の表面で、例えば、腫瘍細胞または病原性細胞の表面で選択的に発現し、または過剰発現する。他の実施形態において、抗原は正常な細胞の表面で発現し、かつ／または操作された細胞の表面で発現する。

【0144】

好適な抗原はどれも、用途が本発明の方法において見出される場合がある。例示的な抗原には、感染性病原体、自己抗原／自身の抗原、腫瘍関連抗原／ガン関連抗原、および腫瘍のネオ抗原からの抗原性分子が含まれるが、これらに限定されない（Ｌｉｎｎｅｍａｎｎ他、２０１５）。特定の局面において、抗原には、ＮＹ－ＥＳＯ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、Ｍｕｃ－１、Ｈｅｒ２、ＣＡ－１２５、ＷＴ－１、Ｍａｇｅ－Ａ３、Ｍａｇｅ－Ａ４、Ｍａｇｅ－Ａ１０、ＴＲＡＩＬ／ＤＲ４およびＣＥＡが含まれる。特定の局面において、２つ以上の抗原受容体についての抗原には、ＣＤ１９、ＥＢＮＡ、ＷＴ１、ＣＤ１２３、ＮＹ－ＥＳＯ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＭＵＣ１、ＨＥＲ２、ＣＡ－１２５、ＷＴ１、Ｍａｇｅ－Ａ３、Ｍａｇｅ－Ａ４、Ｍａｇｅ－Ａ１０、ＴＲＡＩＬ／ＤＲ４、および／またはＣＥＡが含まれるが、これらに限定されない。これらの抗原についての配列がこの技術分野では知られている：例えば、ＣＤ１９（アクセション番号ＮＧ＿００７２７５．１）、ＥＢＮＡ（アクセション番号ＮＧ＿００２３９２．２）、ＷＴ１（アクセション番号ＮＧ＿００９２７２．１）、ＣＤ１２３（アクセション番号ＮＣ＿００００２３．１１）、ＮＹ－ＥＳＯ（アクセション番号ＮＣ＿００００２３．１１）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（アクセション番号ＮＧ＿００７７２６．３）、ＭＵＣ１（アクセション番号ＮＧ＿０２９３８３．１）、ＨＥＲ２（アクセション番号ＮＧ＿００７５０３．１）、ＣＡ－１２５（アクセション番号ＮＧ＿０５５２５７．１）、ＷＴ１（アクセション番号ＮＧ＿００９２７２．１）、Ｍａｇｅ－Ａ３（アクセション番号ＮＧ＿０１３２４４．１）、Ｍａｇｅ－Ａ４（アクセション番号ＮＧ＿０１３２４５．１）、Ｍａｇｅ－Ａ１０（アクセション番号ＮＣ＿００００２３．１１）、ＴＲＡＩＬ／ＤＲ４（アクセション番号ＮＣ＿０００００３．１２）および／またはＣＥＡ（アクセション番号ＮＣ＿００００１９．１０）。

【0145】

腫瘍関連抗原は、前立腺、乳房、結腸直腸、肺、膵臓、腎臓、中皮腫、卵巣またはメラノーマの各種ガンに由来する場合がある。例示的な腫瘍関連抗原または腫瘍細胞由来抗原には、ＭＡＧＥ１、３およびＭＡＧＥ４（または他のＭＡＧＥ抗原、例えば、国際特許出願公開番号ＷＯ９９／４０１８８に開示されるＭＡＧＥ抗原など）；ＰＲＡＭＥ；ＢＡＧＥ；ＲＡＧＥ、Ｌａｇｅ（これはまた、ＮＹ ＥＳＯ １として知られている）；ＳＡＧＥ；およびＨＡＧＥまたはＧＡＧＥが含まれる。腫瘍抗原のこれらの限定されない例が、広範囲の様々な腫瘍タイプにおいて、例えば、メラノーマ、肺ガン、肉腫および膀胱ガンなどにおいて発現する。例えば、米国特許第６，５４４，５１８号を参照のこと。前立腺ガンの腫瘍関連抗原には、例えば、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺酸性ホスファターゼ、ＮＫＸ３．１、および前立腺の６回膜貫通上皮抗原（ＳＴＥＡＰ）が含まれる。

【0146】

他の腫瘍関連抗原には、Ｐｌｕ－１、ＨＡＳＨ－１、ＨａｓＨ－２、ＣｒｉｐｔｏおよびＣｒｉｐｔｉｎが含まれる。加えて、腫瘍抗原は、多くのガンの処置において有用である自分自身のペプチドホルモン、例えば、完全長のゴナドトロピンホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）（短い１０アミノ酸長のペプチド）などである場合がある。

【0147】

腫瘍抗原には、腫瘍関連抗原の発現（例えば、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ発現など）によって特徴づけられるガンに由来する腫瘍抗原が含まれる。対象となる腫瘍関連抗原には、系譜特異的な腫瘍抗原、例えば、メラノサイト－メラノーマ系譜抗原のＭＡＲＴ－１／Ｍｅｌａｎ－Ａ、ｇｐ１００、ｇｐ７５、ｍｄａ－７、チロシナーゼおよびチロシナーゼ関連タンパク質などが含まれる。例示的な腫瘍関連抗原には、下記のいずれか１つもしくは複数に由来する腫瘍抗原、または下記のいずれか１つもしくは複数を含む腫瘍抗原が含まれるが、そのような腫瘍抗原に限定されない：ｐ５３、Ｒａｓ、ｃ－Ｍｙｃ、細胞質セリン／トレオニンキナーゼ（例えば、Ａ－Ｒａｆ、Ｂ－ＲａｆおよびＣ－Ｒａｆ、サイクリン依存性キナーゼ）、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＲＴ－１、ＢＡＧＥ、ＤＡＭ－６、ＤＡＭ－１０、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－８、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７Ｂ、ＮＡ８８－Ａ、ＭＡＲＴ－１、ＭＣ１Ｒ、Ｇｐ１００、ＰＳＡ、ＰＳＭ、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＡＲＴ－４、ＣＡＭＥＬ、ＣＥＡ、Ｃｙｐ－Ｂ、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）、ＴＲＫ受容体、ＰＲＡＭＥ、Ｐ１５、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－３、ウィルムス腫瘍抗原（ＷＴ１）、ＡＦＰ、－カテニン／ｍ、カスパーゼ－８／ｍ、ＣＥＡ、ＣＤＫ－４／ｍ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧｎＴ－Ｖ、Ｇ２５０、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ＫＩＡＡ０２０５、ＭＵＭ－１、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ミオシン／ｍ、ＲＡＧＥ、ＳＡＲＴ－２、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、７０７－ＡＰ、アネキシンＩＩ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＴＰＩ／ｍｂｃｒ－ａｂｌ、ＢＣＲ－ＡＢＬ、インターフェロン調節因子４（ＩＲＦ４）、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、Ｐｍｌ／ＲＡＲ、腫瘍関連カルシウムシグナル伝達因子１（ＴＡＣＳＴＤ１）ＴＡＣＳＴＤ２、受容体チロシンキナーゼ（例えば、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）（特にＥＧＦＲｖＩＩＩ）、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ））、細胞質チロシンキナーゼ（例えば、ｓｒｃファミリー、ｓｙｋ－ＺＡＰ７０ファミリー）、インテグリン結合キナーゼ（ＩＬＫ）、シグナル伝達・転写活性化因子ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴＳ、およびＳＴＡＴＥ、低酸素誘導因子（例えば、ＨＩＦ－１およびＨＩＦ－２）、核因子－カッパＢ（ＮＦ－Ｂ）、Ｎｏｔｃｈ受容体（例えば、Ｎｏｔｃｈ１～４）、ｃ－Ｍｅｔ、ラパマイシンの哺乳動物標的（ｍＴＯＲ）、ＷＮＴ、細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）およびその調節サブユニット、ＰＭＳＡ、ＰＲ－３、ＭＤＭ２、メソテリン、腎細胞ガン－５Ｔ４、ＳＭ２２－アルファ、炭酸脱水酵素Ｉ（ＣＡＩ）およびＩＸ（ＣＡＩＸ）（これはＧ２５０としてもまた知られている）、ＳＴＥＡＤ、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＧＤ２、プロテイナーゼ３、ｈＴＥＲＴ、肉腫転位ブレークポイント、ＥｐｈＡ２、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥｐＣＡＭ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２とＥＴＳとの融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＧＤ３、フコシルＧＭ１、メソテリアン、ＰＳＣＡ、ｓＬｅ、ＰＬＡＣ１、ＧＭ３、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧＬｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＲＧｓＳ、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、精子タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ１、Ｂ７Ｈ３、レグマイン（ｌｅｇｕｍａｉｎ）、ＴＩＥ２、Ｐａｇｅ４、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＦＡＰ、ＭＡＤ－ＣＴ－２、ｆｏｓ関連抗原１、ＣＢＸ２、ＣＬＤＮ６、ＳＰＡＮＸ、ＴＰＴＥ、ＡＣＴＬ８、ＡＮＫＲＤ３０Ａ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＭＡＤ２Ｌ１、ＣＴＡＧｉＢ、ＳＵＮＣ１、ＬＲＲＮ１およびイディオタイプ。

【0148】

抗原には、正常細胞と比較される腫瘍細胞において変異する遺伝子または異なるレベルで転写される遺伝子に由来するエピトープ領域またはエピトープペプチド、例えば、テロメラーゼ酵素、サバイビン、メソテリン、変異ｒａｓ、ｂｃｒ／ａｂｌ再編成、Ｈｅｒ ２／ｎｅｕ、変異ｐ５３または野生型ｐ５３、シトクロームＰ４５０ １Ｂ１、および異常に発現したイントロン配列（例えば、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶなど）などに由来するエピトープ領域またはエピトープペプチド；特有のイディオタイプを骨髄腫およびＢ細胞リンパ腫において生み出す免疫グロブリン遺伝子のクローン再編成；オンコウイルスのプロセスに由来するエピトープ領域またはエピトープペプチドを含む腫瘍抗原、例えば、ヒトパピローマウイルスタンパク質Ｅ６およびＥ７など；エプスタイン・バーウイルスタンパク質ＬＭＰ２；腫瘍選択的発現を有する非変異型腫瘍胎児性タンパク質、例えば、ガン胎児性抗原およびアルファ－フェトプロテインなどが含まれる。

【0149】

他の実施形態において、抗原が、病原性微生物から、または日和見病原性微生物（これはまた、本明細書中では感染性疾患微生物と呼ばれる）、例えば、ウイルス、真菌、寄生生物および細菌などから得られ、あるいはそれらに由来する。ある特定の実施形態において、そのような微生物に由来する抗原には、全長のタンパク質が含まれる。

【0150】

本明細書中に記載される方法における使用のためにその抗原が意図される例示的な病原性生物には、ＳＡＲＳ－ＣｏＶおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ２を含めてあらゆる種類のコロナウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、Ａ型、Ｂ型およびＣ型インフルエンザ、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ポリオーマウイルス（例えば、ＢＫウイルスおよびＪＣウイルス）、アデノウイルス、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）を含むブドウ球菌属菌種、および肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を含む連鎖球菌属菌種が含まれる。当業者によって理解されるであろうように、本明細書中に記載されるような抗原として使用されるためのこれらの病原性微生物および他の病原性微生物に由来するタンパク質、ならびに当該タンパク質をコードするヌクレオチド配列が、刊行物において、また、公開されているデータベースにおいて、例えば、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）、ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴ（登録商標）およびＴＲＥＭＢＬ（登録商標）などにおいて特定される場合がある。

【0151】

ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に由来する抗原には、ＨＩＶビリオン構造タンパク質（例えば、ｇｐ１２０、ｇｐ４１、ｐ１７、ｐ２４）、プロテアーゼ、逆転写酵素、またはｔａｔ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、ｖｐｒおよびｖｐｕによってコードされるＨＩＶタンパク質のどれもが含まれる。

【0152】

単純ヘルペスウイルス（例えば、ＨＳＶ１およびＨＳＶ２）に由来する抗原には、ＨＳＶ後期遺伝子から発現されるタンパク質が含まれるが、これらに限定されない。後期の遺伝子群は主に、ビリオン粒子を形成するタンパク質をコードする。そのようなタンパク質には、ウイルスカプシドを形成する５つのタンパク質（ＵＬ）（ＵＬ６、ＵＬ１８、ＵＬ３５、ＵＬ３８および主要キャプシドタンパク質ＵＬ１９）、ＵＬ４５、およびＵＬ２７が含まれ、これらのそれぞれが、本明細書中に記載されるような抗原として使用される場合がある。本明細書中において抗原としての使用のために意図される他の例示的なＨＳＶタンパク質には、ＩＣＰ２７（Ｈ１、Ｈ２）、糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）および糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）の各タンパク質が含まれる。ＨＳＶゲノムは、抗原として使用される可能性があり得るかもしれないタンパク質をそれぞれがコードする少なくとも７４個の遺伝子を含む。

【0153】

サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に由来する抗原には、ＣＭＶ構造タンパク質、ウイルス複製の前初期段階および初期段階の期間中に発現されるウイルス抗原、糖タンパク質Ｉおよび糖タンパク質ＩＩＩ、カプシドタンパク質、コートタンパク質、下部（ｌｏｗｅｒ）マトリックスタンパク質ｐｐ６５（ｐｐＵＬ８３）、ｐ５２（ｐｐＵＬ４４）、ＩＥ１およびＩＥ２（ＵＬ１２３およびＵＬ１２２）、ＵＬ１２８～ＵＬ１５０からの遺伝子クラスターに由来するタンパク質産物（Ｒｙｋｍａｎ他、２００６）、エンベロープ糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）、ｇＨ、ｇＮ、ならびにｐｐ１５０が含まれる。当業者によって理解されるであろうように、本明細書中に記載されるような抗原として使用されるためのＣＭＶタンパク質が、公開されているデータベースにおいて、例えば、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）、ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴ（登録商標）およびＴＲＥＭＢＬ（登録商標）などにおいて特定される場合がある（例えば、Ｂｅｎｎｅｋｏｖ他（２００４）、Ｌｏｅｗｅｎｄｏｒｆ他（２０１０）、Ｍａｒｓｃｈａｌｌ他（２００９）を参照のこと）。

【0154】

ある特定の実施形態において使用のために意図されるエプスタイン・バン（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｎ）ウイルス（ＥＢＶ）由来の抗原には、ＥＢＶ溶解性タンパク質のｇｐ３５０およびｇｐ１１０、エプスタイン・バン核抗原（ＥＢＮＡ）－１、ＥＢＮＡ－２、ＥＢＮＡ－３Ａ、ＥＢＮＡ－３Ｂ、ＥＢＮＡ－３Ｃ、ＥＢＮＡリーダータンパク質（ＥＢＮＡ－ＬＰ）を含む潜伏周期感染（ｌａｔｅｎｔ ｃｙｃｌｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）の期間中に産生されるＥＢＶタンパク質、ならびに潜在性膜タンパク質（ＬＭＰ）－１、ＬＭＰ－２ＡおよびＬＭＰ－２Ｂが含まれる（例えば、Ｌｏｃｋｅｙ他（２００８）を参照のこと）。

【0155】

本明細書中における使用のために意図される呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）由来の抗原には、ＲＳＶゲノムによってコードされる１１個のタンパク質のいずれか、またはその抗原性フラグメントが含まれる：ＮＳ１、ＮＳ２、Ｎ（ヌクレオカプシドタンパク質）、Ｍ（マトリックスタンパク質）ＳＨ、ＧおよびＦ（ウイルスコートタンパク質）、Ｍ２（第２のマトリックスタンパク質）、Ｍ２－１（伸長因子）、Ｍ２－２（転写調節）、ＲＮＡポリメラーゼ、ならびにリンタンパク質Ｐ。

【0156】

使用のために意図される水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）由来の抗原には、ＶＳＶゲノムによってコードされる５つの主要なタンパク質のいずれか１つ、およびその抗原性フラグメントが含まれる：ラージタンパク質（Ｌ）、糖タンパク質（Ｇ）、核タンパク質（Ｎ）、リンタンパク質（Ｐ）およびマトリックスタンパク質（Ｍ）（例えば、Ｒｉｅｄｅｒ他（１９９９）を参照のこと）。

【0157】

ある特定の実施形態において使用のために意図されるインフルエンザウイルス由来の抗原には、血球凝集素（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、核タンパク質（ＮＰ）、マトリックスタンパク質Ｍ１およびＭ２、ＮＳ１、ＮＳ２（ＮＥＰ）、ＰＡ、ＰＢ１、ＰＢ１－Ｆ２、ならびにＰＢ２が含まれる。

【0158】

例示的なウイルス抗原にはまた、アデノウイルスポリペプチド、アルファウイルスポリペプチド、カリシウイルスポリペプチド（例えば、カリシウイルスカプシド抗原）、コロナウイルスポリペプチド、ジステンパーウイルスポリペプチド、エボラウイルスポリペプチド、エンテロウイルスポリペプチド、フラビウイルスポリペプチド、肝炎ウイルス（ＡＥ）ポリペプチド（Ｂ型肝炎コア抗原もしくは表面抗原、Ｃ型肝炎ウイルスのＥ１糖タンパク質もしくはＥ２糖タンパク質、コアタンパク質または非構造タンパク質）、ヘルペスウイルスポリペプチド（単純ヘルペスウイルスまたは水痘帯状疱疹ウイルスの糖タンパク質を含む）、感染性腹膜炎ウイルスポリペプチド、白血病ウイルスポリペプチド、マールブルグウイルスポリペプチド、オルソミクソウイルスポリペプチド、パピローマウイルスポリペプチド、パラインフルエンザウイルスポリペプチド（例えば、血球凝集素ポリペプチドおよびノイラミニダーゼポリペプチド）、パラミクソウイルスポリペプチド、パルボウイルスポリペプチド、ペスチウイルスポリペプチド、ピコルナウイルスポリペプチド（例えば、ポリオウイルスカプシドポリペプチド）、ポックスウイルスポリペプチド（例えば、ワクシニアウイルスポリペプチド）、狂犬病ウイルスポリペプチド（例えば、狂犬病ウイルス糖タンパク質Ｇ）、レオウイルスポリペプチド、レトロウイルスポリペプチド、およびロタウイルスポリペプチドが含まれるが、これらに限定されない。

【0159】

ある特定の実施形態において、抗原は細菌抗原である場合がある。ある特定の実施形態において、対象となる細菌抗原は分泌型ポリペプチドである場合がある。他のある特定の実施形態において、細菌抗原には、ポリペプチドの一部分（１つまたは複数）が細菌の外側細胞表面に露出している抗原が含まれる。

【0160】

使用のために意図される、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）を含むブドウ球菌属菌種に由来する抗原には、様々なビルレンス制御因子、例えば、Ａｇｒ系、ＳａｒおよびＳａｅ、Ａｒｌ系、Ｓａｒホモログ（Ｒｏｔ、ＭｇｒＡ、ＳａｒＳ、ＳａｒＲ、ＳａｒＴ、ＳａｒＵ、ＳａｒＶ、ＳａｒＸ、ＳａｒＺおよびＴｃａＲ）、Ｓｒｒ系およびＴＲＡＰなどが含まれる。抗原として役立ち得る他のブドウ球菌タンパク質には、Ｃｌｐタンパク質、ＨｔｒＡ、ＭｓｒＲ、アコニターゼ、ＣｃｐＡ、ＳｖｒＡ、Ｍｓａ、ＣｆｖＡおよびＣｆｖＢが含まれる（例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（２００８、Ｃａｉｓｔｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、編者：Ｊｏｄｉ Ｌｉｎｄｓａｙ）を参照のこと）。黄色ブドウ球菌の２つの種（Ｎ３１５およびＭｕ５０）についてのゲノムが配列決定されており、例えば、ＰＡＴＲＩＣにおいて公開されている（ＰＡＴＲＩＣ：Ｔｈｅ ＶＢＩ ＰａｔｈｏＳｙｓｔｅｍｓ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓｎｙｄｅｒ他、２００７）。当業者によって理解されるであろうように、抗原として使用されるためのブドウ球菌タンパク質がまた、他の公開されているデータベースにおいて、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ（登録商標）およびＴｒＥＭＢＬ（登録商標）などにおいて特定される場合がある。

【0161】

本明細書中に記載されるある特定の実施形態において使用のために意図される肺炎連鎖球菌由来の抗原には、ニューモリシン、ＰｓｐＡ、コリン結合タンパク質Ａ（ＣｂｐＡ）、ＮａｎＡ、ＮａｎＢ、ＳｐｎＨＬ、ＰａｖＡ、ＬｙｔＡ、Ｐｈｔ、およびピリンタンパク質（ＲｒｇＡ；ＲｒｇＢ；ＲｒｇＣ）が含まれる。肺炎連鎖球菌の抗原性タンパク質もまた、この技術分野では知られており、いくつかの実施形態において抗原として使用される場合がある（例えば、Ｚｙｓｋ他（２０００）を参照のこと）。肺炎連鎖球菌の毒性株の完全なゲノム配列が配列決定されており、また、当業者によって理解されるであろうように、本明細書中における使用のためのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅタンパク質もまた、他の公開されているデータベースにおいて、例えば、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）、ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴ（登録商標）およびＴＲＥＭＢＬ（登録商標）などにおいて特定される場合がある。本開示による抗原のための特に興味深いタンパク質には、ビルレンス因子、および連鎖球菌の表面に露出することが予測されるタンパク質が含まれる（例えば、Ｆｒｏｌｅｔ他（２０１０）を参照のこと）。

【0162】

抗原として使用され得る細菌抗原の例には、アクチノミセス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ）ポリペプチド、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ポリペプチド、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）ポリペプチド、ボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）ポリペプチド、バルトネラ（Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ）ポリペプチド、ボレリア（Ｂｏｒｒｅｌｉａ）ポリペプチド（例えば、Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉのＯｓｐＡ）、ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）ポリペプチド、カンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）ポリペプチド、カプノシトファガ（Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ）ポリペプチド、クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）ポリペプチド、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）ポリペプチド、コクシエラ（Ｃｏｘｉｅｌｌａ）ポリペプチド、デルマトフィルス（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈｉｌｕｓ）ポリペプチド、腸球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）ポリペプチド、エーリキア（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ）ポリペプチド、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）ポリペプチド、フランシセラ（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ）ポリペプチド、フソバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）ポリペプチド、ヘモバルトネラ（Ｈａｅｍｏｂａｒｔｏｎｅｌｌａ）ポリペプチド、ヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）ポリペプチド（例えば、ｂ型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅの外膜タンパク質）、ヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）ポリペプチド、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）ポリペプチド、Ｌ型細菌ポリペプチド、レプトスピラ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）ポリペプチド、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）ポリペプチド、マイコバクテリア（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）ポリペプチド、マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）ポリペプチド、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）ポリペプチド、ネオリケッチア（Ｎｅｏｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）ポリペプチド、ノカルジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）ポリペプチド、パスツレラ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）ポリペプチド、ペプトコッカス（Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）ポリペプチド、ペプトストレプトコッカス（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）ポリペプチド、肺炎球菌（Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ）ポリペプチド（すなわち、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅのポリペプチド）（本明細書中の説明を参照のこと）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）ポリペプチド、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）ポリペプチド、リケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）ポリペプチド、ロシャリメア（Ｒｏｃｈａｌｉｍａｅａ）ポリペプチド、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）ポリペプチド、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）ポリペプチド、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）ポリペプチド、Ａ群連鎖球菌ポリペプチド（例えば、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓのＭタンパク質）、Ｂ群連鎖球菌（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）ポリペプチド、トレポネマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ）ポリペプチド、およびエルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）ポリペプチド（例えば、Ｙ ｐｅｓｔｉｓのＦ１抗原およびＶ抗原）が含まれるが、これらに限定されない。

【0163】

真菌抗原の例には、アブシジア（Ａｂｓｉｄｉａ）ポリペプチド、アクレモニウム（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）ポリペプチド、アルテルナリア（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）ポリペプチド、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）ポリペプチド、バシジオボルス（Ｂａｓｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）ポリペプチド、ビポラリス（Ｂｉｐｏｌａｒｉｓ）ポリペプチド、ブラストミセス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ）ポリペプチド、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）ポリペプチド、コクシジオイデス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ）ポリペプチド、コニジオボルス（Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）ポリペプチド、クリプトコッカス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）ポリペプチド、クルバラリア（Ｃｕｒｖａｌａｒｉａ）ポリペプチド、エピデルモフィトン（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ）ポリペプチド、エクソフィアラ（Ｅｘｏｐｈｉａｌａ）ポリペプチド、ゲオトリクム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ）ポリペプチド、ヒストプラズマ（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）ポリペプチド、マズレラ（Ｍａｄｕｒｅｌｌａ）ポリペプチド、マラセジア（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ）ポリペプチド、ミクロスポルム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ）ポリペプチド、モニリエラ（Ｍｏｎｉｌｉｅｌｌａ）ポリペプチド、モルチエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）ポリペプチド、ケカビ（Ｍｕｃｏｒ）ポリペプチド、ペシロミセス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）ポリペプチド、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）ポリペプチド、フィアレモニウム（Ｐｈｉａｌｅｍｏｎｉｕｍ）ポリペプチド、フィアロフォラ（Ｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａ）ポリペプチド、プロトテカ（Ｐｒｏｔｏｔｈｅｃａ）ポリペプチド、シュードアレシェリア（Ｐｓｅｕｄａｌｌｅｓｃｈｅｒｉａ）ポリペプチド、シュードミクロドキウム（Ｐｓｅｕｄｏｍｉｃｒｏｄｏｃｈｉｕｍ）ポリペプチド、フィチウム（Ｐｙｔｈｉｕｍ）ポリペプチド、リノスポリジウム（Ｒｈｉｎｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）ポリペプチド、リゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）ポリペプチド、スコレコバシジウム（Ｓｃｏｌｅｃｏｂａｓｉｄｉｕｍ）ポリペプチド、スポロトリクス（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ）ポリペプチド、ステムフィリウム（Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｕｍ）ポリペプチド、白癬菌（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ）ポリペプチド、トリコスポロン（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ）ポリペプチド、およびキシロヒファ（Ｘｙｌｏｈｙｐｈａ）ポリペプチドが含まれるが、これらに限定されない。

【0164】

原生動物寄生虫抗原の例には、バベシア（Ｂａｂｅｓｉａ）ポリペプチド、バランチジウム（Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ）ポリペプチド、ベスノイチア（Ｂｅｓｎｏｉｔｉａ）ポリペプチド、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）ポリペプチド、エイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）ポリペプチド、エンセファリトゾーン（Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｚｏｏｎ）ポリペプチド、エントアメーバ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ）ポリペプチド、ジアルジア（Ｇｉａｒｄｉａ）ポリペプチド、ハモンジア（Ｈａｍｍｏｎｄｉａ）ポリペプチド、ヘパトゾーン（Ｈｅｐａｔｏｚｏｏｎ）ポリペプチド、イソスポラ（Ｉｓｏｓｐｏｒａ）ポリペプチド、リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）ポリペプチド、微胞子虫（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａ）ポリペプチド、ネオスポラ（Ｎｅｏｓｐｏｒａ）ポリペプチド、ノセマ（Ｎｏｓｅｍａ）ポリペプチド、ペンタトリコモナス（Ｐｅｎｔａｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ）ポリペプチド、プラスモジウム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）ポリペプチドが含まれるが、これらに限定されない。蠕虫寄生虫抗原の例には、アカントケイロネマ（Ａｃａｎｔｈｏｃｈｅｉｌｏｎｅｍａ）ポリペプチド、アエルロストロンギルス（Ａｅｌｕｒｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ）ポリペプチド、アンシロストーマ（Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ）ポリペプチド、住血線虫（Ａｎｇｉｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ）ポリペプチド、回虫（Ａｓｃａｒｉｓ）ポリペプチド、ブルギア（Ｂｒｕｇｉａ）ポリペプチド、ブノストムム（Ｂｕｎｏｓｔｏｍｕｍ）ポリペプチド、キャピラリア（Ｃａｐｉｌｌａｒｉａ）ポリペプチド、シャベルチア（Ｃｈａｂｅｒｔｉａ）ポリペプチド、クーペリア（Ｃｏｏｐｅｒｉａ）ポリペプチド、クレノソーマ（Ｃｒｅｎｏｓｏｍａ）ポリペプチド、ジクチオカウルス（Ｄｉｃｔｙｏｃａｕｌｕｓ）ポリペプチド、ジオクトフィメ（Ｄｉｏｃｔｏｐｈｙｍｅ）ポリペプチド、ジペタロネマ（Ｄｉｐｅｔａｌｏｎｅｍａ）ポリペプチド、ジフィロボトリウム（Ｄｉｐｈｙｌｌｏｂｏｔｈｒｉｕｍ）ポリペプチド、ジプリジウム（Ｄｉｐｌｙｄｉｕｍ）ポリペプチド、イヌ糸状虫（Ｄｉｒｏｆｉｌａｒｉａ）ポリペプチド、ドラクンクルス（Ｄｒａｃｕｎｃｕｌｕｓ）ポリペプチド、蟯虫（Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ）ポリペプチド、フィラロイデス（Ｆｉｌａｒｏｉｄｅｓ）ポリペプチド、ヘモンクス（Ｈａｅｍｏｎｃｈｕｓ）ポリペプチド、ラゴキルアスカリス（Ｌａｇｏｃｈｉｌａｓｃａｒｉｓ）ポリペプチド、ロア糸状虫（Ｌｏａ）ポリペプチド、マンソネラ（Ｍａｎｓｏｎｅｌｌａ）ポリペプチド、ミューレリウス（Ｍｕｅｌｌｅｒｉｕｓ）ポリペプチド、ナノフィエツス（Ｎａｎｏｐｈｙｅｔｕｓ）ポリペプチド、アメリカ鉤虫（Ｎｅｃａｔｏｒ）ポリペプチド、ネマトジルス（Ｎｅｍａｔｏｄｉｒｕｓ）ポリペプチド、エソファゴストムム（Ｏｅｓｏｐｈａｇｏｓｔｏｍｕｍ）ポリペプチド、オンコセルカ（Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ）ポリペプチド、オピストルキス（Ｏｐｉｓｔｈｏｒｃｈｉｓ）ポリペプチド、オステルタギア（Ｏｓｔｅｒｔａｇｉａ）ポリペプチド、パラフィラリア（Ｐａｒａｆｉｌａｒｉａ）ポリペプチド、肺吸虫（Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ）ポリペプチド、パラアスカリス（Ｐａｒａｓｃａｒｉｓ）ポリペプチド、フィサロプテラ（Ｐｈｙｓａｌｏｐｔｅｒａ）ポリペプチド、プロトストロンギルス（Ｐｒｏｔｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ）ポリペプチド、セタリア（Ｓｅｔａｒｉａ）ポリペプチド、スピロセルカ（Ｓｐｉｒｏｃｅｒｃａ）ポリペプチド、スピロメトラ（Ｓｐｉｒｏｍｅｔｒａ）ポリペプチド、ステファノフィラリア（Ｓｔｅｐｈａｎｏｆｉｌａｒｉａ）ポリペプチド、ストロンギロイデス（Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ）ポリペプチド、円虫（Ｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ）ポリペプチド、テラジア（Ｔｈｅｌａｚｉａ）ポリペプチド、トキサスカリス（Ｔｏｘａｓｃａｒｉｓ）ポリペプチド、トキソカラ（Ｔｏｘｏｃａｒａ）ポリペプチド、旋毛虫（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ）ポリペプチド、毛様線虫（Ｔｒｉｃｈｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ）ポリペプチド、鞭虫（Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ）ポリペプチド、ウンシナリア（Ｕｎｃｉｎａｒｉａ）ポリペプチド、およびウケレリア（Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ）ポリペプチド、（例えば、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍのスポロゾイト周囲（ＰｆＣＳＰ））、スポロゾイト表面タンパク質２（ＰｆＳＳＰ２）、肝臓状態抗原１のカルボキシル末端（ＰｆＬＳＡ１ ｃ－ｔｅｒｍ）、および輸出タンパク質１（ＰｆＥｘｐ－１）、ニューモシスチス（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ）ポリペプチド、サルコシスチス（Ｓａｒｃｏｃｙｓｔｉｓ）ポリペプチド、住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ）ポリペプチド、タイレリア（Ｔｈｅｉｌｅｒｉａ）ポリペプチド、トキソプラズマ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ）ポリペプチド、およびトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ）ポリペプチドが含まれるが、これらに限定されない。

【0165】

外部寄生虫抗原の例には、ノミ；マダニ（カタダニおよびヒメダニを含む）；ハエ（例えば、ユスリカなど）、蚊、スナバエ、ブユ、ウマバエ、ノサシバエ、メクラアブ、ツェツェバエ、サシバエ、ハエ幼虫症発症ハエ、およびヌカカ（ｂｉｔｉｎｇ ｇｎａｔ）；アリ、クモ、シラミ；コダニ；ならびに半翅目昆虫（例えば、トコジラミおよびサシガメなど）からのポリペプチド（抗原、同様にまたアレルゲンを含む）が含まれるが、これらに限定されない。

【0166】

Ｄ．サイトカイン
いくつかの場合において、選択された臍帯血ユニット物（１つまたは複数）に由来する免疫細胞は、１つまたは複数の異種サイトカインを含めて１つまたは複数のサイトカインを発現するように操作される。サイトカインはどのような種類のものであってもよく、しかし、具体的な実施形態において、異種サイトカイン（１つまたは複数）が、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－７、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0167】

具体的な実施形態において、サイトカインはＩＬ－１５である。ＩＬ－１５は組織限定的であり、病的状態のもとでのみ、どのようなレベルであれ血清中に、または全身に認められる。ＩＬ－１５は、養子療法のために望ましい属性をいくつか持っている。ＩＬ－１５は、ナチュラルキラー細胞の発達および細胞増殖を誘導し、確立された腫瘍の根絶を、腫瘍常在細胞の機能的抑制を緩和することにより促進し、かつＡＩＣＤを阻害する恒常性サイトカインである。

【0168】

１つの実施形態において、本開示は、ＣＡＲを発現する免疫細胞、および／またはＴＣＲ免疫細胞を、ＩＬ－１５を含めて１つまたは複数のサイトカインにより共改変することに関する。ＩＬ－１５に加えて、他のサイトカインが想定される。これらには、ヒト適用のために使用される細胞の活性化および増殖に寄与するサイトカイン、ケモカインおよび他の分子が含まれるが、これらに限定されない。ＩＬ－１５を発現するＮＫ細胞またはＴ細胞は、注入後のその生存にとって非常に重要である途切れない支持的サイトカインシグナル伝達を行うことができる。

【0169】

Ｅ．自殺遺伝子
臍帯血ユニット物（１つまたは複数）に由来する本開示の免疫細胞は１つまたは複数の自殺遺伝子を含む場合がある。用語「自殺遺伝子」は、本明細書中で使用される場合、プロドラッグが投与されたとき、その宿主細胞を殺す化合物への遺伝子産物の移行をもたらす遺伝子として定義される。使用され得る自殺遺伝子／プロドラッグの組み合わせの例には、単純ヘルペスウイルス－チミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）およびガンシクロビル、アシクロビルまたはＦＩＡＵ；オキシドレダクターゼおよびシクロヘキシミド；シトシンデアミナーゼおよび５－フルオロシトシン；チミジンキナーゼチミジル酸キナーゼ（Ｔｄｋ：：Ｔｍｋ）およびＡＺＴ；ならびにデオキシシチジンキナーゼおよびシトシンアラビノシドがある。

【0170】

大腸菌のプリンヌクレオシドホスホリラーゼ、これは、プロドラッグの６－メチルプリンデオキシリボシドを毒性プリンの６－メチルプリンに変換するいわゆる自殺遺伝子である。プロドラッグ療法とともに使用される自殺遺伝子の他の例として、大腸菌のシトシンデアミナーゼ遺伝子およびＨＳＶのチミジンキナーゼ遺伝子が挙げられる。

【0171】

例示的な自殺遺伝子には、ＣＤ２０、ＣＤ５２、ＥＧＦＲｖ３、または誘導性カスパーゼ９が含まれる。１つの実施形態において、ＥＧＦＲバリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖ３）の短縮型が、セツキシマブによって除去することができる自殺抗原として使用される場合がある。本開示において使用され得るこの技術分野において知られているさらなる自殺遺伝子には、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＰＮＰ）、シトクロームｐ４５０酵素（ＣＹＰ）、カルボキシペプチダーゼ（ＣＰ）、カルボキシルエステラーゼ（ＣＥ）、ニトロレダクターゼ（ＮＴＲ）、グアニンリボシルトランスフェラーゼ（ＸＧＲＴＰ）、グリコシダーゼ酵素、メチオニン－アルファ，ガンマ－リアーゼ（ＭＥＴ）、およびチミジンホスホリラーゼ（ＴＰ）が含まれる。

【0172】

Ｆ．遺伝子破壊
いくつかの実施形態において、免疫細胞は、１つまたは複数の内因性遺伝子の発現の破壊を有するように操作される。破壊は具体的な場合においてノックアウトまたはノックダウンであり得る。破壊は、ＣＲＩＳＰＲ、アンチセンス技術（例えば、発現の一過性の低下を一般にはもたらすＲＮＡｉ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、および／またはリボザイムなど）、同様にまた、標的化された遺伝子の不活性化または破壊を、例えば、切断および／または相同的組換えの誘導によってもたらす遺伝子編集技術を含めて、どのような方法であれ好適な方法によって細胞において引き起こされることがある。

【0173】

特定の場合において、免疫細胞の１つまたは複数の内因性遺伝子が改変され、例えば、発現において破壊され、この場合には発現が部分的または完全に低下させられる。具体的な場合において、１つまたは複数の遺伝子がノックダウンされ、またはノックアウトされる。具体的な場合において、多数の遺伝子が、同じ工程において、または多数の工程においてノックダウンされ、またはノックアウトされる。免疫細胞において編集される遺伝子は、どのような種類のものであってもよい。具体的な場合において、免疫細胞において編集される遺伝子は、免疫細胞が腫瘍微小環境においてより効果的に働くことを可能にする。具体的な場合において、遺伝子は、ＮＫＧ２Ａ、ＳＩＧＬＥＣ－７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＡＤＯＲＡ２、ＮＲ３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＳＨＩＰ１、ＡＤＡＭ１７、ＲＰＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ、ＩＣＡＭ１、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＴＤＡＧ８、ＣＤ５、ＣＤ７、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３８、ＬＡＧ３、ＴＣＲ、ｂｅｔａ２－ミクログルブリン（ｍｉｃｒｏｇｌｕｂｕｌｉｎ）、ＨＬＡ、ＣＤ７３およびＣＤ３９のうちの１つまたは複数である。ある特定の実施形態において、ＣＲＩＳＰＲによって破壊される内因性遺伝子がＴＩＧＩＴであり、具体的な場合において、このために利用されるｇＲＮＡがＧＡＣＡＧＧＣＡＣＡＡＴＡＧＡＡＡＣＡＡ（配列番号１）である。いくつかの実施形態において、ＣＲＩＳＰＲによって編集される内因性遺伝子がＣＤ３８であり、具体的な場合において、このために利用されるｇＲＮＡがＴＧＡＧＴＴＣＣＣＡＡＣＴＴＣＡＴＴＡＧ（配列番号２）および／またはＧＣＧＧＧＡＣＡＴＧＴＴＣＡＣＣＣＴＧＧ（配列番号３）である。

【0174】

Ｖ．使用方法
臍帯血ユニット物（１つまたは複数）が選択されると、それに由来する免疫細胞は操作されてもよく、または操作されなくてもよく、そして貯蔵されてもよく、または貯蔵されなくてもよい。いずれにせよ、免疫細胞の操作の有無にかかわらず、治療効果的な免疫細胞が、それを必要としている個体に送達される場合がある。免疫細胞は、本明細書中に記載されるように、１つまたは複数の選択基準を満たしているという明白な理由から選択された臍帯血ユニット物（１つまたは複数）に由来しているので、特に効果的である。

【0175】

いくつかの実施形態において、本開示は、免疫療法のための方法であって、本開示の方法によって産生される免疫細胞の効果的な量を投与することを含む方法を提供する。１つの実施形態においては、医学的な疾患または障害が、免疫応答を誘発する免疫細胞集団の移入によって処置される。本開示のある特定の実施形態において、ガンまたは感染症が、免疫応答を誘発する産生された免疫細胞集団の移入によって処置される。本明細書中には、個体においてガンを処置するための、または個体においてガンの進行を遅らせるための方法であって、効果的な量の抗原特異的細胞療法を個体に施すことを含む方法が提供される。本方法は、免疫障害、固形ガン、血液学的ガンおよびウイルス感染症を処置するために適用される場合がある。

【0176】

本処置方法が有用である腫瘍には、どのような細胞タイプであれ悪性の細胞タイプ、例えば、固形腫瘍または血液学的悪性腫瘍において見出される悪性の細胞タイプなどが含まれる。例示的な固形腫瘍には、膵臓、結腸、盲腸、胃、脳、頭、頸部、卵巣、腎臓、喉頭、肉腫、肺、膀胱、メラノーマ、前立腺および乳房からなる群から選択される器官の腫瘍が含まれ得るが、そのような腫瘍に限定されない。例示的な血液学的腫瘍には、骨髄の腫瘍、Ｔ細胞またはＢ細胞の悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、芽細胞腫、骨髄腫、および同類のものが含まれる。本明細書中において提供される方法を使用して処置され得るガンのさらなる例には、肺ガン（小細胞肺ガン、非小細胞肺ガン、肺の腺ガン、および肺の扁平上皮ガンを含む）、腹膜のガン、胃部または胃のガン（胃腸ガンおよび消化管間質ガンを含む）、膵臓ガン、子宮頸ガン、卵巣ガン、肝臓ガン、膀胱ガン、乳ガン、結腸ガン、結腸直腸ガン、子宮内膜ガンまたは子宮ガン、唾液腺ガン、腎臓または腎臓部のガン、前立腺ガン、外陰部ガン、甲状腺ガン、様々なタイプの頭頸部ガン、およびメラノーマが含まれるが、これらに限定されない。

【0177】

ガンは具体的には下記の組織学的タイプのものである場合があり、だが、それらに限定されない：新生物、悪性；ガン腫；ガン腫、未分化型；巨細胞ガンおよび紡錘細胞ガン；小細胞ガン；乳頭ガン；扁平上皮ガン；リンパ上皮性ガン；基底細胞ガン；毛母ガン（ｐｉｌｏｍａｔｒｉｘ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）；移行上皮ガン；乳頭状移行上皮ガン；腺ガン；ガストリノーマ、悪性；胆管ガン；肝細胞ガン；肝細胞ガンと胆管ガンとの混合型；小柱状腺ガン；腺様嚢胞ガン；腺腫性ポリープにおける腺ガン；腺ガン、家族性大腸ポリポーシス；固形ガン；カルチノイド腫瘍、悪性；鰓肺胞（ｂｒａｎｃｈｉｏｌｏ－ａｌｖｅｏｌａｒ）腺ガン；乳頭状腺ガン；嫌色素性ガン；好酸性（ａｃｉｄｏｐｈｉｌ）ガン；好酸性（ｏｘｙｐｈｉｌｉｃ）腺ガン；好塩基性ガン；明細胞腺ガン；顆粒細胞ガン；濾胞腺ガン；乳頭状濾胞腺ガン；非被包性硬化性ガン；副腎皮質ガン；類内膜ガン（ｅｎｄｏｍｅｔｒｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）；皮膚付属器ガン；アポクリン腺ガン；皮脂腺ガン；耳垢腺ガン；粘表皮ガン；嚢胞腺ガン；乳頭状嚢胞腺ガン；乳頭状漿液性嚢胞腺ガン；粘液性嚢胞腺ガン；粘液性腺ガン；印環細胞ガン；浸潤性乳管ガン；髄様ガン；小葉ガン；炎症性ガン；パジェット病、乳房；腺房細胞ガン；腺扁平上皮ガン；扁平上皮化生を伴う腺ガン；胸腺腫、悪性；卵巣間質腫瘍、悪性；莢膜細胞腫、悪性；顆粒膜細胞腫、悪性；アンドロブラストーマ、悪性；セルトリ細胞ガン；ライディッヒ細胞腫、悪性；脂質細胞腫瘍、悪性；パラガングリオーマ、悪性；乳房外パラガングリオーマ、悪性；クロム親和性細胞腫；グロムス血管肉腫；悪性メラノーマ；無色素性メラノーマ；表在拡大型メラノーマ；悪性黒子型メラノーマ；末端黒子型メラノーマ；結節性メラノーマ；巨大色素性母斑における悪性メラノーマ；類上皮細胞メラノーマ；青色母斑、悪性；肉腫；線維肉腫；線維性組織球腫、悪性；粘液肉腫；脂肪肉腫；平滑筋肉腫；横紋筋肉腫；胎児性横紋筋肉腫；胞巣状横紋筋肉腫；間質肉腫；混合腫瘍、悪性；ミュラー管混合腫瘍；腎芽腫；肝芽腫；ガン肉腫；間葉腫、悪性；ブレンナー腫瘍、悪性；葉状腫瘍、悪性；滑膜肉腫；中皮腫、悪性；未分化胚細胞腫；胎児性ガン；奇形腫、悪性；卵巣甲状腺腫、悪性；絨毛ガン；中腎腫、悪性；血管肉腫；血管内皮腫、悪性；カポジ肉腫；血管周囲細胞腫、悪性；リンパ管肉腫；骨肉腫；傍骨性骨肉腫；軟骨肉腫；軟骨芽細胞腫、悪性；間葉性軟骨肉腫；骨の巨細胞腫；ユーイング肉腫；歯原性腫瘍、悪性；エナメル上皮歯牙肉腫；エナメル上皮腫、悪性；エナメル上皮線維肉腫；松果体腫、悪性；脊索腫；神経膠腫、悪性；上衣細胞腫；星状膠細胞腫；原形質性星状膠細胞腫；原線維性星状膠細胞腫；星状膠芽細胞腫；神経膠芽細胞腫；乏突起膠腫；乏突起膠芽細胞腫；未分化神経外胚葉性；小脳肉腫；神経節芽細胞腫；神経芽細胞腫；網膜芽細胞腫；嗅神経原性腫瘍；髄膜腫、悪性；神経線維肉腫；神経鞘腫、悪性；顆粒細胞腫瘍、悪性；悪性リンパ腫；ホジキン病；ホジキン；側肉芽腫；悪性リンパ腫、小リンパ球性；悪性リンパ腫、大細胞型、びまん性；悪性リンパ腫、濾胞性；菌状息肉腫；他の指定された非ホジキンリンパ腫；Ｂ細胞リンパ腫；低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；ワルデンシュトレームマクログロブリン血症；悪性組織球腫；多発性骨髄腫；肥満細胞肉腫；免疫増殖性小腸疾患；白血病；リンパ性白血病；形質細胞性白血病；赤白血病；リンパ肉腫細胞白血病；骨髄性白血病：好塩基球性白血病；好酸球性白血病；単球性白血病；肥満細胞白血病；巨核芽球性白血病；骨髄性肉腫；ヘアリー細胞白血病；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；および慢性骨髄芽球性白血病。

【0178】

特定の実施形態が白血病の処置方法に関する。白血病は血液または骨髄のガンであり、血液細胞、通常の場合には白色血液細胞（白血球）の異常な増殖（倍増による異常な産生）によって特徴づけられる。白血病は、血液学的新生物と呼ばれる幅広い一群の疾患の一部である。白血病は、広範な疾患を含む幅広い用語である。白血病は臨床的および病理学的にはその急性型および慢性型に分けられる。

【0179】

本開示のある特定の実施形態において、免疫細胞が、それを必要としている個体に、例えば、ガンまたは感染症を有する個体などに送達される。細胞はその後、個体の免疫システムを増強して、それぞれのガン細胞または病原性細胞を攻撃する。いくつかの場合において、個体には、１回または複数回の免疫細胞が与えられる。個体に２回以上の免疫細胞が与えられる場合、投与間の期間は、個体における伝播のための時間を許すために十分でなければならず、具体的な実施形態において、服用間の期間が、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日またはそれ以上である。

【0180】

本開示のある特定の実施形態は、免疫媒介障害を処置するための、または防止するための方法を提供する。１つの実施形態において、対象は自己免疫疾患を有する。自己免疫疾患の限定されない例には、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、副腎の自己免疫性疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性の卵巣炎および精巣炎、自己免疫性血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアクスパーテ（ｃｅｌｉａｃ ｓｐａｔｅ）－皮膚炎、慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、クレスト症候群、寒冷凝集素症、クローン病、円板状狼瘡、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症－線維筋炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギラン・バレー、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少症紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡニューロパチー、若年性関節炎、扁平苔癬、紅斑性狼瘡（ｌｕｐｕｓ ｅｒｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、１型または免疫媒介の糖尿病、重症筋無力症、ネフローゼ症候群（例えば、微小変化群、巣状糸球体硬化症または膜性腎症など）、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティフマン症候群、全身性エリテマトーデス、エリテマトーデス、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎（例えば、結節性多発動脈炎、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、または疱疹状皮膚炎血管炎など）、白斑、ならびにヴェーゲナー肉芽腫症が含まれる。したがって、本明細書中に開示される方法を使用して処置することができる自己免疫疾患のいくつかの例には、多発性硬化症、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、Ｉ型糖尿病、クローン病；潰瘍性大腸炎、重症筋無力症、糸球体腎炎、強直性脊椎炎、血管炎または乾癬が含まれるが、これらに限定されない。対象はまた、アレルギー性障害、例えば、喘息などを有する可能性がある。

【0181】

さらに別の実施形態において、対象は、移植された器官または幹細胞のレシピエントであり、免疫細胞が、拒絶を防止するために、かつ／または処置するために使用される。特定の実施形態において、対象は移植片対宿主病を有するか、または移植片対宿主病を発症する危険性がある。ＧＶＨＤは、血縁ドナーまたは非血縁ドナーのどちらからでも由来する幹細胞を使用する、または含有するどのような移植片であれその起こり得る合併症である。ＧＶＨＤには、急性型および慢性型の２種類が存在する。急性ＧＶＨＤが移植後の最初の３ヶ月以内に現れる。急性ＧＶＨＤの徴候には、広がり、かつより重症になることがある手足における赤みがかった皮膚発疹が、皮膚の剥離または水疱形成を伴って含まれる。急性ＧＶＨＤはまた、胃および腸に影響を及ぼす可能性があり、そのような場合には、痙攣、悪心および下痢が存在する。皮膚および眼の黄変（黄疸）は、急性ＧＶＨＤにより肝臓が冒されたことを示している。慢性ＧＶＨＤがその重篤度に基づいてランク付けされる：ステージ／グレード１は軽度であり、ステージ／グレード４は重症である。慢性ＧＶＨＤが移植後３ヶ月以降において発症する。慢性ＧＶＨＤの症状は急性ＧＶＨＤの症状と類似しており、しかし、加えて、慢性ＧＶＨＤではまた、眼における粘液腺、口における唾液腺、ならびに胃の内張りおよび腸を潤滑する腺が冒される場合がある。本明細書中に開示される免疫細胞の集団のどれも利用することができる。移植臓器の例には、実質臓器移植片、例えば、腎臓、肝臓、皮膚、膵臓、肺および／または心臓など、あるいは細胞性の移植片、例えば、膵島、肝細胞、筋芽細胞、骨髄、または造血細胞もしくは他の幹細胞などが含まれる。移植片は、複合移植片、例えば、顔の組織などであることが可能である。免疫細胞を移植前に、移植と同時に、または移植後に投与することができる。いくつかの実施形態において、免疫細胞は移植片に先立って投与され、例えば、移植片の少なくとも１時間前、少なくとも１２時間前、少なくとも１日前、少なくとも２日前、少なくとも３日前、少なくとも４日前、少なくとも５日前、少なくとも６日前、少なくとも１週間前、少なくとも２週間前、少なくとも３週間前、少なくとも４週間前、または少なくとも１ヶ月前などにおいて投与される。１つの具体的な限定されない例において、治療効果的な量の免疫細胞の投与が移植の３～５日前に行われる。

【0182】

いくつかの実施形態において、対象には、骨髄非破壊的リンパ球枯渇化学療法を免疫細胞療法の前に施すことができる。骨髄非破壊的リンパ球枯渇化学療法は、どのような経路であれ好適な経路によって施すことができる好適なそのような治療法がどれも可能である。骨髄非破壊的リンパ球枯渇化学療法は、例えば、特にガンがメラノーマ（これは転移性である可能性がある）であるならば、シクロホスファミドおよびフルダラビンの投与を含むことができる。シクロホスファミドおよびフルダラビンを投与する例示的な経路が静脈内である。同様に、どのような用量であれシクロホスファミドおよびフルダラビンの好適な用量を投与することができる。特定の局面において、６０ｍｇ／ｋｇ前後のシクロホスファミドが２日間にわたって投与され、その後で、２５ｍｇ／ｍ^２前後のフルダラビンが５日間にわたって投与される。

【0183】

ある特定の実施形態において、免疫細胞の成長および活性化を促進させる増殖因子が、免疫細胞と同時に、または免疫細胞に続いてそのどちらでも対象に投与される。免疫細胞増殖因子は、免疫細胞の成長および活性化を促進させる好適な増殖因子がどれも可能である。好適な免疫細胞増殖因子の例には、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５およびＩＬ－１２が含まれ、これらは単独で使用することができ、または様々な組み合わせで使用することができ、例えば、ＩＬ－２およびＩＬ－７、ＩＬ－２およびＩＬ－１５、ＩＬ－７およびＩＬ－１５、ＩＬ－２、ＩＬ－７およびＩＬ－１５、ＩＬ－１２およびＩＬ－７、ＩＬ－１２およびＩＬ－１５、またはＩＬ－１２およびＩＬ２などの組み合わせで使用することができる。

【0184】

治療効果的な量の免疫細胞を、非経口投与、例えば、静脈内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、胸骨内注射もしくは関節内注射、または注入を含めて多くの経路によって投与することができる。

【0185】

養子細胞療法における使用のための免疫細胞の治療効果的な量は、所望の効果を処置が行われている対象において達成するそのような量である。例えば、これは、自己免疫疾患もしくは同種免疫疾患の進行を抑制するために、またはその退行を引き起こすために必要である免疫細胞の量、あるいは自己免疫疾患によって引き起こされる症状、例えば、疼痛および炎症などを軽減することができる免疫細胞の量とすることができる。それは、炎症に伴う症状、例えば、疼痛、浮腫および体温上昇などを軽減するために必要である量とすることができる。それはまた、移植臓器の拒絶を軽減させるために、または防止するために必要である量とすることができる。

【0186】

免疫細胞集団は、疾患と矛盾しない治療計画で、例えば、疾患状態を改善するために１日から数日にわたって１回または数回の服用で、あるいは疾患進行を抑制し、疾患再発を防止するために長期間にわたって定期的な服用で投与することができる。配合において用いられるための正確な用量は、投与経路、および疾患または障害の重篤度にもまた依存するであろうし、医師の判断およびそれぞれの患者の状況に応じて決定されなければならない。免疫細胞の治療効果的な量は、処置を受けている対象、苦痛の重篤度およびタイプ、ならびに投与様式に依存しているであろう。いくつかの実施形態において、ヒト対象の処置において使用され得るであろう用量は、１ｍ^２あたりの免疫細胞が少なくとも３．８×１０^４個、少なくとも３．８×１０^５個、少なくとも３．８×１０^６個、少なくとも３．８×１０^７個、少なくとも３．８×１０^８個、少なくとも３．８×１０^９個、または少なくとも３．８×１０^１０個からの範囲である。ある特定の実施形態において、ヒト対象の処置において使用される用量は、１ｍ^２あたりの免疫細胞が約３．８×１０^９個から約３．８×１０^１０個までの範囲である。さらなる実施形態において、免疫細胞の治療効果的な量は約５×１０^６細胞／ｋｇ体重から約７．５×１０^８細胞／ｋｇ体重まで変化させることができ、例えば、体重１ｋｇあたり約２×１０^７個の細胞から約５×１０^８個の細胞まで、または体重１ｋｇあたり約５×１０^７個の細胞から約２×１０^８個の細胞まで変化させることができる。免疫細胞の正確な量は、対象の年齢、体重、性別および生理学的状態に基づいて当業者によって容易に決定される。効果的な用量を、インビトロ試験系または動物モデル試験系から導かれる用量応答曲線から外挿することができる。

【0187】

免疫細胞は、免疫媒介障害を処置するための１つまたは複数の他の治療剤との併用で投与される場合がある。併用療法には、１つまたは複数の抗菌剤（例えば、抗生物質、抗ウイルス剤および抗真菌剤）、抗腫瘍剤（例えば、フルオロウラシル、メトトレキサート、パクリタキセル、フルダラビン、エトポシド、ドキソルビシンまたはビンクリスチン）、免疫枯渇化剤（例えば、フルダラビン、エトポシド、ドキソルビシンまたはビンクリスチン）、免疫抑制剤（例えば、アザチオプリン、あるいはグルココルチコイド、例えば、デキサメタゾンまたはプレドニゾンなど）、抗炎症剤（例えば、グルココルチコイド、例えば、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾンまたはプレドニゾンなど、あるいは非ステロイド性抗炎症剤、例えば、アセチルサリチル酸、イブプロフェンまたはナプロキセンナトリウムなど）、サイトカイン（例えば、インターロイキン－１０またはトランスフォーミング増殖因子ベータ）、ホルモン（例えば、エストロゲン）、またはワクチンが含まれ得るが、これらに限定されない。加えて、カルシニューリン阻害剤（例えば、シクロスポリンおよびタクロリムス）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、ラパマイシン）、ミコフェノール酸モフェチル、抗体（例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ１５４、ＣＤ４５、ＩＶＩＧまたはＢ細胞を認識する抗体）、化学療法剤（例えば、メトトレキサート、トレオスルファン、ブスルファン）、照射、あるいはケモカイン、インターロイキンまたはそれらの阻害剤（例えば、ＢＡＦＦ、ＩＬ－２、抗ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－４、ＪＡＫキナーゼ阻害剤）（これらに限定されない）を含めて様々な免疫抑制剤または免疫寛容原性剤を投与することができる。そのようなさらなる医薬剤は、所望の効果に依存して、免疫細胞の投与前に、投与期間中に、または投与後に投与することができる。細胞および薬剤のこの投与は、同じ経路によって、または異なる経路によって可能であり、また、同じ部位において、または異なる部位においてどちらでも可能である。

【0188】

ある特定の実施形態において、本実施形態の組成物および方法では、免疫細胞集団が、少なくとも１つのさらなる治療法との組み合わせで伴う。さらなる治療法は、放射線療法、手術（例えば、乳腺腫瘤摘出術および乳房切除術）、化学療法、遺伝子療法、ＤＮＡ療法、ウイルス療法、ＲＮＡ療法、免疫療法、骨髄移植、ナノ療法、モノクローナル抗体療法、または前述の組み合わせである場合がある。さらなる治療法はアジュバント療法またはネオアジュバント療法の形態である場合がある。

【0189】

いくつかの実施形態において、さらなる治療法は小分子酵素阻害剤または転移抑制剤の投与である。いくつかの実施形態において、さらなる治療法は、副作用制限剤（例えば、処置の副作用の発生および／または重篤度を軽減するために意図される薬剤（例えば、制吐剤など）など）の投与である。いくつかの実施形態において、さらなる治療法は放射線療法である。いくつかの実施形態において、さらなる治療法は手術である。いくつかの実施形態において、さらなる治療法は放射線療法と手術との組み合わせである。いくつかの実施形態において、さらなる治療法はガンマ線照射である。いくつかの実施形態において、さらなる治療法は、ＰＢＫ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路を標的とする治療、ＨＳＰ９０阻害剤、チューブリン阻害剤、アポトーシス阻害剤、および／または化学予防剤である。さらなる治療法は、この技術分野において知られている化学療法剤の１つまたは複数である場合がある。

【0190】

免疫細胞療法が、さらなるがん療法（例えば、免疫チェックポイント療法など）の前に、その期間中に、その後で、またはそれに対して様々な組み合わせで施される場合がある。施すことが、同時から、数分にまで、数日にまで、数週間にまで及ぶ間隔である場合がある。免疫細胞療法がさらなる治療作因とは別に患者に与えられる実施形態においては一般に、意味のある期間がそれぞれの送達時の後で終了せず、その結果、２つの化合物が依然として、好都合な併用効果を患者に及ぼすことができるであろうことが保証されるであろう。そのような場合、患者には抗体療法および抗ガン療法が互いに約１２時間～２４時間または７２時間の範囲内で、より具体的には互いに約６時間～１２時間の範囲内で与えられ得ることが意図される。いくつかの状況では、処置のための期間を著しく延長することが望ましい場合があり、この場合、数日（２、３、４、５、６または７）から数週間（１、２、３、４、５、６、７または８）までがそれぞれの投与の間において経過する。

【0191】

本実施形態の化合物または細胞療法をどのようなものであれ患者に施すことは、もし存在するならば作用因の毒性を考慮して、そのような化合物の投与のための一般的プロトコルに従うであろう。したがって、いくつかの実施形態において、併用療法に起因し得る毒性をモニターする工程が存在する。

【0192】

幅広い種類の化学療法剤が、調製された免疫細胞と共に使用され得る。「化学療法」という用語は、癌を治療するための薬物の使用を指す。「化学療法剤」は、癌の治療において投与される化合物または組成物を暗示するために使用される。これらの薬剤または薬物は、細胞内でのそれらの活性モード、例えば、それらが細胞周期に影響を与えるかどうか、およびどの段階で影響を与えるかによって分類される。あるいは、薬剤は、ＤＮＡを直接架橋する能力、ＤＮＡにインターカレートする能力、または核酸合成に影響を与えることによって染色体分裂および有糸分裂の異常を誘発する能力に基づいて特徴付けることができる。

【0193】

化学療法剤の例には、チオテパおよびシクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファンなどのスルホン酸アルキル；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、およびトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）をはじめとするエチレンイミンおよびメチルメラミン；アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体のトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコディクチン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、およびウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）などのニトロソウレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）；エンジイン抗生物質（例えば、カリチアマイシン、特にカリチアマイシンγＩＩおよびカリチアマイシンωＩ１）などの抗生物質；ダイネマイシンＡをはじめとするダイネマイシン；クロドロン酸などのビスホスホネート；エスペラミシン；ならびにネオカルチノスタチン発色団および関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団、アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎｓ）、アクチノマイシン、アウトラルニシン（ａｕｔｈｒａｒｎｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎｉｓ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラルナイシン（ｎｏｇａｌａｒｎｙｃｉｎ）、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎｓ）、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、およびゾルビシン；メトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗薬；デノプテリン、プテロプテリン、およびトリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、およびチオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、およびフロクスウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、およびテストラクトンなどのアンドロゲン；ミトタンおよびトリロスタンなどの抗副腎剤；フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン；ジアジコン；エルフォルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；マイタンシンおよびアンサマイトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ－２毒素、ベルカリンＡ（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ Ａ）、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；タキソイド、例えば、パクリタキセルおよびドセタキセルゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；シスプラチン、オキサリプラチン、およびカルボプラチンなどの白金錯体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロン酸；イリノテカン（例えば、ＣＰＴ－１１）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ｄｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｌｈｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；カペシタビン；カルボプラチン、プロカルバジン、プリカマイシン、ゲムシタビエン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｅｎ）、ナベルビン、ファルネシル－タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランス白金、および上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体が含まれる。

【0194】

ある実施形態では、本明細書で産生される免疫細胞に加えて、個体に放射線療法が提供される。放射線療法は、一般にγ線、Ｘ線、および／または腫瘍細胞への放射性同位元素の指向性送達が含まれる。マイクロ波、陽子線照射（米国特許第５，７６０，３９５号および第４，８７０，２８７号）、およびＵＶ照射などのその他の形態のＤＮＡ損傷因子も想定される。これらの要因はすべて、ＤＮＡ、ＤＮＡの前駆体、ＤＮＡの複製と修復、および染色体の組み立てと維持に対する広範囲の損傷に影響を与えている可能性が最も高い。Ｘ線の線量範囲は、長期間（３～４週間）の一日線量の５０～２００レントゲンから、単回線量の２０００～６０００レントゲンに及ぶ。放射性同位元素の線量範囲は幅広く変動し、同位体の半減期、放出される放射線の強度と種類、および腫瘍細胞による取り込みに依存する。

【0195】

当業者は、さらに追加の免疫療法が、本明細書に含まれる方法によって産生される免疫細胞と組み合わせて、またはそれとともに使用されてよいことを理解するであろう。癌治療の状況において、免疫療法は、一般に癌細胞を標的にして破壊する免疫エフェクター細胞および分子の使用に依存する。リツキシマブはそのような一例である。免疫エフェクターは、例えば、腫瘍細胞の表面上の一部のマーカーに特異的な抗体であってよい。抗体は単独で治療のエフェクターとして機能することもあれば、他の細胞を動員して実際に細胞の死滅に影響を与えることもある。抗体はまた、薬物または毒素（化学療法剤、放射性核種、リシンＡ鎖、コレラ毒素、百日咳毒素など）と結合されて、標的化薬剤としての機能を果たすこともある。あるいは、エフェクターは、腫瘍細胞標的と直接的にまたは間接的に相互作用する表面分子を有するリンパ球であってよい。さまざまなエフェクター細胞には、細胞傷害性Ｔ細胞およびＮＫ細胞が含まれる。

【0196】

抗体薬物複合体は、癌治療薬の開発への画期的なアプローチとして登場した。癌は世界の主な死因の一つである。抗体薬物複合体（ＡＤＣ）は、細胞殺傷薬に共有結合されたモノクローナル抗体（ＭＡｂ）を含む。このアプローチは、その抗原標的に対するＭＡｂの高い特異性と、非常に強力な細胞傷害性薬物を組み合わせて、濃縮レベルの抗原を有する腫瘍細胞にペイロード（薬物）を送達する、「武装した」ＭＡｂをもたらす。薬物の標的化送達も、正常組織でのその曝露を最小限に抑えるので、毒性が低下し、治療指数が改善される。２０１１年のＡＤＣＥＴＲＩＳ（登録商標）（ブレンツキシマブベドチン）と２０１３年のＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（トラスツズマブエムタンシンまたはＴ－ＤＭ１）の２つのＡＤＣ薬がＦＤＡに承認されたことにより、このアプローチは有効になった。現在、癌治療の臨床試験のさまざまな段階で３０を超えるＡＤＣ薬の候補がある（Ｌｅａｌら、２０１４）。抗体工学とリンカー・ペイロードの最適化がますます成熟していく中で、新しいＡＤＣの発見と開発は、このアプローチに適した新しい標的の特定と検証、および標的化ＭＡｂの生成にますます依存している。ＡＤＣ標的の２つの判定基準は、腫瘍細胞における発現の増加／高レベルの発現と、強固な内部移行である。

【0197】

免疫療法の一態様では、腫瘍細胞は、標的化に適した、つまり、他の細胞の大部分には存在しないマーカーを有していなければならない。多くの腫瘍マーカーが存在し、これらうちのいずかが、本発明の実施形態の状況において標的化に適している可能性がある。一般的な腫瘍マーカーには、ＣＤ２０、癌胎児性抗原、チロシナーゼ（ｐ９７）、ｇｐ６８、ＴＡＧ－７２、ＨＭＦＧ、シアリルルイス抗原、ＭｕｃＡ、ＭｕｃＢ、ＰＬＡＰ、ラミニン受容体、ｅｒｂ Ｂ、およびｐ１５５が含まれる。免疫療法の別の態様は、抗癌効果と免疫刺激効果を組み合わせることである。免疫刺激分子も存在し、それには、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、γ－ＩＦＮなどのサイトカイン、ＭＩＰ－１、ＭＣＰ－１、ＩＬ－８などのケモカイン、およびＦＬＴ３リガンドなどの成長因子が含まれる。

【0198】

現在調査中または使用中の免疫療法の例は、免疫アジュバント、例えば、マイコバクテリウム・ボビス、熱帯熱マラリア原虫、ジニトロクロロベンゼン、および芳香族化合物（米国特許第５，８０１，００５号および同第５，７３９，１６９号；ＨｕｉおよびＨａｓｈｉｍｏｔｏ、１９９８；Ｃｈｒｉｓｔｏｄｏｕｌｉｄｅｓら、１９９８）；サイトカイン療法、例えば、インターフェロンα、βおよびγ、ＩＬ－１、ＧＭ－ＣＳＦ、およびＴＮＦ（Ｂｕｋｏｗｓｋｉら、１９９８；Ｄａｖｉｄｓｏｎら、１９９８；Ｈｅｌｌｓｔｒａｎｄら、１９９８）；遺伝子療法、例えば、ＴＮＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、およびｐ５３（Ｑｉｎら、１９９８；Ａｕｓｔｉｎ－Ｗａｒｄ ａｎｄ Ｖｉｌｌａｓｅｃａ、１９９８；米国特許第５，８３０，８８０号および同第５，８４６，９４５号）；ならびにモノクローナル抗体、例えば、抗ＣＤ２０、抗ガングリオシドＧＭ２、および抗ｐ１８５（Ｈｏｌｌａｎｄｅｒ、２０１２；Ｈａｎｉｂｕｃｈｉら、１９９８；米国特許第５，８２４，３１１号）である。１つまたは複数の抗癌療法が、本明細書に記載される抗体療法とともに使用され得ることが想定される。

【0199】

一部の実施形態では、免疫療法は、免疫チェックポイント阻害剤であり得る。免疫チェックポイントは、シグナル（例えば、共刺激分子）を上げるか、シグナルを下げる。免疫チェックポイント封鎖によって標的化され得る抑制性免疫チェックポイントには、アデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２ＡＲ）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６としても公知）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４、ＣＤ１５２としても公知）、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、キラー細胞免疫グロブリン（ＫＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ３）、プログラム細胞死１（ＰＤ－１）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）およびＴ細胞活性化のＶ－ドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）が含まれる。特に、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１軸および／またはＣＴＬＡ－４を標的とする。

【0200】

免疫チェックポイント阻害剤は、小分子、リガンドまたは受容体の組換え体などの薬物であり得るか、または特に、ヒト抗体などの抗体であってよい（例えば、国際公開公報ＷＯ２０１５０１６７１８号；Ｐａｒｄｏｌｌ、Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ、１２（４）：２５２～６４、２０１２；両方とも参照により本明細書に組み込まれる）。免疫チェックポイントタンパク質またはその類似体の既知の阻害剤を使用することができる、特に、キメラ化、ヒト化、またはヒト型の抗体を使用することができる。当業者であれば分かるように、本開示で言及される特定の抗体には、代替の名称および／または同等の名称が使用されていることがある。そのような代替の名称および／または同等の名称は、本開示の文脈において互いに交換可能である。例えば、ランブロリズマブは、ＭＫ－３４７５およびペンブロリズマブという代替の名称および同等の名称でも知られていることが知られている。

【0201】

いくつかの場合において、手術が、本開示の免疫細胞を受けるであろう個体のために、またはそれらを受けたことがある個体のために行われる。ガンを有する人のおよそ約６０％が、予防的、診断的または病期分類、治療的および緩和的な手術を含めて、何らかのタイプの手術を受けるであろう。治療的手術は、ガン性組織のすべてまたは一部が物理的に除かれ、切除され、かつ／または破壊される摘出を含んでおり、他の治療法との併用で、例えば、本実施形態の処置、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、遺伝子療法、免疫療法および／または代替療法などとの併用で使用される場合がある。腫瘍摘出は、腫瘍の少なくとも一部を物理的に除くことを示す。腫瘍摘出に加えて、手術による処置には、レーザー手術、凍結手術、電気手術および顕微鏡下手術（モース術）が含まれる。ガン性細胞、組織または腫瘍の一部またはすべてを切除すると、空洞が体内に形成される場合がある。処置が、さらなる抗ガン療法による当該区域への灌流、直接注入または局所適用によって達成される場合がある。そのような処置が、例えば、１日毎、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、６日毎もしくは７日毎に、または１週間毎、２週間毎、３週間毎、４週間毎および５週間毎に、または１か月毎、２か月毎、３か月毎、４か月毎、５か月毎、６か月毎、７か月毎、８か月毎、９か月毎、１０か月毎、１１か月毎もしくは１２か月毎に繰り返される場合がある。これらの処置は同様に、様々な適用量のものである場合がある。

【0202】

他の薬剤が、処置の治療有効性を改善するために本実施形態のある特定の局面との組み合わせで使用され得ることが意図される。これらのさらなる薬剤には、細胞表面受容体およびＧＡＰ結合のアップレギュレーションに影響を与える薬剤、細胞増殖抑制剤および分化剤、細胞接着の阻害剤、アポトーシス誘導剤に対する過剰増殖性細胞の感受性を増大させる薬剤、または他の生物学的薬剤が含まれる。ＧＡＰ結合の数を増加させることによる細胞間シグナル伝達における増大は、近隣の過剰増殖性細胞集団に対する抗過剰増殖効果を増大させるであろう。他の実施形態において、細胞増殖抑制剤または分化剤を、処置の抗過剰増殖有効性を改善するために本実施形態のある特定の局面との組み合わせで使用することができる。細胞接着の阻害剤が、本実施形態の有効性を改善するために意図される。細胞接着阻害剤の例には、フォーカルアドヒージョンキナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤およびロバスタチンがある。アポトーシスに対する過剰増殖性細胞の感受性を増大させる他の薬剤（例えば、抗体ｃ２２５など）が、処置有効性を改善するために本実施形態のある特定の局面との組み合わせで使用され得るであろうことがさらに意図される。

【0203】

ＶＩ．製造品またはキット
選択された臍帯血ユニット物（１つまたは複数）から産生される免疫細胞を含む製造品またはキットもまた本明細書中において提供される。製造品またはキットはさらに、個体においてガンを処置するために、またはその進行を遅らせるために、あるいはガンを有する個体の免疫機能を増強するために免疫細胞を使用するための指図を含む添付文書を含むことができる。本明細書中に記載される抗原特異的免疫細胞のいずれかが製造品またはキットに含められる場合がある。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル、バッグおよびシリンジが含まれる。容器は様々な材料から、例えば、ガラス、プラスチック（例えば、ポリ塩化ビニルまたはポリオレフィンなど）または金属合金（例えば、ステンレス鋼またはハステロイなど）などから形成される場合がある。いくつかの実施形態において、容器は配合物を収容し、容器上の標識、または容器に付随する標識により、使用のための指示が示される場合がある。製造品またはキットにはさらに、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、ニードル、シリンジ、および使用のための指図を伴う添付文書を含めて、商業的およびユーザーの観点から望ましい他の材料が含まれる場合がある。いくつかの実施形態において、製造品にはさらに、１つまたは複数の別の薬剤（例えば、化学療法剤および抗腫瘍剤）が含まれる。そのような１つまたは複数の薬剤のための好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル、バッグおよびシリンジが含まれる。

【0204】

具体的な実施形態において、製造品は、本明細書中に記載される方法によって産生される凍結保存された免疫細胞を含む。凍結保存された細胞は、細胞を凍結時または解凍時の損傷から防止するために適する特定の凍結保護剤とともに凍結される場合がある。

【実施例】

【0205】

下記の実施例は、本開示の特定の実施形態を明らかにするために含まれる。下記の実施例において開示される技術は、本開示の実施形態の実施において十分に機能することが本発明者らによって見出される技術を表しており、したがって、その実施のための特定の態様を構成するとみなされ得ることが、当業者によって理解されなければならない。しかしながら、当業者は本開示に照らして、多くの変化を、開示される具体的な実施形態において行うことができ、また、多くの変化が依然として、同じ結果または類似する結果を、本開示の精神および範囲から逸脱することなくもたらし得ることを理解しなければならない。

【0206】

実施例１
凍結前のＣＢＵの特徴は臨床的応答を予測する
本実施例における研究は、凍結前の臍帯血ユニット物（ＣＢＵ）の特徴が、臨床的に有効な細胞産物をもたらす可能性がより大きいそのようなＣＢＵを特定するために使用することができるかを特徴づける。

【0207】

本発明者らは操作受信者特性（ＲＯＣ）曲線を利用して、目的とするＣＢＵ特徴の予測値を特徴づけ、それぞれの個々のＣＢＵを、臨床応答を患者において誘導する可能性が高い（「良好」）として、またはその見込みがない（「不良」）として分類することを可能にする適切なカットオフ値を特定した。例えば、図１では、ＣＢＵ細胞生存率を調べた。ＲＯＣ曲線上の矢印は、ＣＢＵを最良の感度および特異性により「良好または不良」として分類するために使用することができるＣＢＵ細胞生存率での値（これは、１００％の感度に最も近い点および１００％の感度［１－特異性＝０］によって決定される）を示している。この場合、値が９８％である。その後、患者がＣＡＲ－ＮＫ細胞に対して有する応答を調べた。生存率が９８％超であるＣＢＵから産生されるＣＡＲ－ＮＫ細胞を受ける患者は８１．８％の応答を示し、しかし、生存率が９８％未満である複数のＣＢＵから製造されるＣＡＲ－ＮＫ細胞を受ける患者は、２０％に過ぎない応答を有した。この結果は統計学的に有意である（フィッシャーの正確検定、ｐ＝０．００４）。その後、ロジスティック回帰モデルを利用して、この結果が患者の臨床的特徴（例えば、寛解状態など）とは無関係であることを確認した。

【0208】

上記に記載されるこの方法論を、他の変数、例えば、総単核細胞（ＴＮＣ）回収率などを詳しく調べるために適用した。応答の予測のための最適なカットオフが７６．３％である（図２）。この場合、ＴＮＣが７３．６超である複数のＣＢＵから製造されるＣＡＲ－ＮＫ細胞を受ける患者と、ＴＮＣが７３．６未満である複数のＣＢＵから製造されるＣＡＲ－ＮＫ細胞を受ける患者との間での応答における差（５８．８％対２２．２％）は統計学的に有意でない（ｐ＝０．１１）。しかしながら、多変量ロジスティック回帰モデルは、成績に対するＴＮＣの影響が、困惑させる臨床的変数（例えば、寛解状態など）の影響を考慮に入れたときには統計学的に有意であることを示す。

【0209】

この方法論をまた、他のＣＢＵ特徴に関して上記のように用いた。一例において、ＣＢＵの有核赤血球（ＮＲＢＣ）含有量を特徴づけた。細胞含有量が低い（ＮＲＢＣが７．５×１０ｅ７個未満である）複数のＣＢＵから製造されるＣＡＲ－ＮＫにより処置される患者は、ＮＲＢＣ含有量がより高いＣＢＵから製造されるＣＡＲ－ＮＫ細胞により処置される患者よりも高い応答率を有する（６２．５％対２０％、ｐ＝０．０５）。再度ではあるが、多変量ロジスティックモデルを用いて、この効果が臨床的変数とは無関係であることを明らかにした。

【0210】

実施例２
凍結前のＣＢＵの特徴は、「スーパーＣＢＵ」を特定するために組み合わせることができる
実施例１に記載される３つのＣＢＵ特徴は、臨床特徴について調整されるロジスティック多変量モデルにおける応答についての独立予測因子である。この理由から、これら３つは、「最適なＣＢＵ」のための基準を定義するために組み合わせることができる。図４は、実施例１で参照される３つのＣＢＵ特徴についての多変量統計学的有意性を示す。その後、ＲＯＣ曲線（右側パネル）を利用して、注入されたＣＡＲ－ＮＫ細胞産物に対する応答に関してのＣＢＵ基準の予測値を見積もった。０．９３２の曲線下面積（ＡＵＣ）は、これら３つの基準（９８％超の生存率、７６．３％超のＴＮＣ回収率、および７．５×１０ｅ７個未満のＮＲＢＣ含有量）を満たすことが応答についての優れた予測因子であることを示している。図５は、ＣＡＲ－ＮＫ細胞により処置される患者の応答であって、ＣＡＲ－ＮＫ細胞が、本実施例および実施例１で参照される３つの基準を満たすＣＢＵユニット物から製造される場合における応答（１００％）、２つの基準を満たすＣＢＵユニット物から製造される場合における応答（６２．５％）、および２未満の基準を満たすＣＢＵユニット物から製造される場合における応答（８．３％）を示す。これらの差は統計学的に有意である（ｐ＝０．００００９）。好都合な臍帯特徴の数が、様々な臨床特徴を含む多変量モデルにおける応答についての唯一の独立予測因子である。

【0211】

臍帯選択時には知られていないであろう、しかし、細胞産物の製造期間中に解明され得るであろう他のＣＢＵ関連変数の予測値を特徴づけた。具体的な実施形態において、そのような変数は解凍後に判定されるであろう。このことを利用して、製造後の細胞産物を、細胞産物が適切な基準を満たさないならば無視した。図６では、凍結されたＣＢＵから得られるＮＫ細胞の細胞傷害性がＣＡＲ－ＮＫ細胞に対する臨床応答を予測し得るかどうかを調べた。上記で帰される方法論を使用したとき、複数のＣＢＵから産生されるＣＡＲ－ＮＫ細胞で、２０：１の比率でのＲａｊｉ細胞株に対するＮＫ細胞の細胞傷害性が１８．２超であるＣＡＲ－ＮＫ細胞により処置される患者は、複数のＣＢＵに由来するＣＡＲ－ＮＫ細胞で、細胞傷害性がより低いＣＡＲ－ＮＫ細胞により処置される患者よりも高い応答率を有することが示された（６６．７％対１２．５％、ｐ＝０．０３）。再度ではあるが、多変量ロジスティックモデルを使用して、この効果が他の変数とは無関係であることを明らかにした。

【0212】

特定の実施形態において、他の変数が、臨床応答についての予測を改善するために考慮される場合がある。例には、以下が含まれる：（１）臍帯血が得られた胎児または新生児の在胎齢が３９週未満である；（２）臍帯血細胞の解凍後の生存率が８６．５％超である；（３）培養における０日目と６日目との間でのＮＫ細胞拡大が７倍以上である；および／または（４）培養における６日目と１５日目との間でのＮＫ細胞拡大が１０^５倍以上である。図７Ａ～図７Ｂは、９３．２％の臨床応答を有する３基準のセット（９８％超の生存率、７６．３％超のＴＮＣ回収率、および７．５×１０^７個未満のＮＲＢＣ含有量）の予測値を示す（図７Ａ）。これは、直前に記載される４つの変数を加えることによって９９．６％に増大させることができる（図７Ｂ）。

【0213】

実施例３
凍結保存された臍帯血ユニット物を、ガンに対する最大効力を有する操作されたナチュラルキラー細胞を製造するために選択するための方法
本実施例は、好適な臍帯血ユニット物（ＣＢＵ）の選択に関連づけられる基準を考慮する治療のために応答についての予測因子を特定することに関する。本発明者らは、凍結前のＣＢＵの特徴が、臨床的に有効な細胞産物をもたらす可能性がより大きいそのようなＣＢＵを特定するために使用することができるかを詳しく調べた。産物特徴には、（細胞産物を製造するための最良のＣＢＵを選択する）凍結前のＣＢＵの特徴が含まれてもよく、かつ／または具体的な場合には最適な応答をもたらす見込みがないと考えられる産物を拒絶するために使用されることがある解凍後および産生時の産物特徴が含まれてもよい。本実施例は、成績が３０日において完全奏効（ＣＲ）および部分奏効（ＰＲ）／ＣＲであるＣＤ１９－ＣＡＲ－ＮＫ治験で処置される３７名の患者に基づく分析に関する。

【0214】

操作受信者特性（ＲＯＣ）曲線を利用して、目的とするＣＢＵ特徴の予測値を特徴づけ、それぞれの個々のＣＢＵを、臨床応答を患者において誘導する可能性が高い（「良好」）として、またはその見込みがない（「不良」）として分類することを可能にするであろう適切なカットオフ値を特定した。例えば、図８では、ＣＢＵ細胞生存率を調べた。ＲＯＣ曲線上の矢印は、ＣＢＵを最良の感度および特異性により「良好または不良」として分類するために使用することができるＣＢＵ細胞生存率での値（これは、１００％の感度に最も近い点および１００％の感度［１－特異性＝０］によって決定される）を示している。この場合、値が９９％である。その後、患者がＣＡＲ－ＮＫ細胞に対して有する応答を検討した。生存率が９９％以上であるＣＢＵから産生されるＣＡＲ－ＮＫ細胞を受ける患者は、４０．９％のＣＲ率および６８．２％のＣＲ／ＰＲ率を有した。一方で、生存率が９９％未満である複数のＣＢＵから製造されるＣＡＲ－ＮＫ細胞を受ける患者は、６．７％のＣＲ率および２０％のＣＲ／ＰＲ率を有するに過ぎなかった。これらの結果は統計学的に有意である（フィッシャーの正確検定、それぞれ、ｐ＝０．０２８およびｐ＝０．００７）。その後、ロジスティック回帰モデルを使用して、この結果が患者の臨床的特徴（例えば、寛解状態など）とは無関係であることを確認した。

【0215】

図８における同じ方法論を図９における他のＣＢＵ特徴に関して適用した。この場合には、ＣＢＵの有核赤血球（ＮＲＢＣ）含有量を調べた。細胞含有量が低い（ＮＲＢＣが８．０ １０ｅ７個未満である）複数のＣＢＵから製造されるＣＡＲ－ＮＫにより処置される患者は、ＮＲＢＣ含有量がより高いＣＢＵから製造されるＣＡＲ－ＮＫ細胞により処置される患者よりも高い応答率を有する（３５．７％対０％、ｐ＝０．０７９、ＣＲ率；および６０．７％対１１．１％、ｐ＝０．０１９、ＰＲ／ＣＲ率）。再度ではあるが、多変量ロジスティックモデルを使用して、この効果が臨床的変数とは無関係であることを明らかにした。

【0216】

白人人種の複数のＣＢＵから製造されるＣＡＲ－ＮＫにより処置される患者は、他の民族性に由来するＣＢＵから製造されるＣＡＲ－ＮＫにより処置される患者よりも高い応答率を有した（図１０Ａ）。ＣＢＵ民族性は、臨床応答をもたらす可能性がより高いＣＢＵの選択を改善するために他のＣＢＵ特徴と組み合わせることができる。図１０Ｂは、ＣＢＵ人種をＣＢＵ生存率と組み合わせることの結果を示す。両方の因子の組み合わせはＣＲ率を生存率単独についての４０．９％から、両方の基準が組み合わされるときには６１．５％に増大させる（ｐ＝０．０３１）。

【0217】

体重が３６５０グラム超である乳児に由来する複数のＣＢＵから製造されるＣＡＲ－ＮＫにより処置される患者は、より低体重の乳児に由来するＣＢＵから製造されるＣＡＲ－ＮＫにより処置される患者よりも高い応答率を有する（図１１の左側のパネル）。図１０の場合と同様に、乳児の体重は、臨床応答をもたらす可能性がより高いＣＢＵをより良好に選択するために他のＣＢＵ特徴と組み合わせることができる。図１１の右側のパネルは、乳児の体重をＣＢＵ生存率と組み合わせることの結果を示す。両方の因子の組み合わせはＣＲ率を生存率単独についての４０．９％から、両方の基準が組み合わされるときには７２．７％に増大させる（ｐ＝０．００８）。

【0218】

本実施例において上記で記載される４つのＣＢＵ特徴は、臨床特徴について調整されるロジスティック多変量モデルにおける応答についての独立予測因子である。この理由から、いくつかの実施形態において、これら４つは、「最適なＣＢＵ」のための基準を定義するために組み合わせることができる（図１２Ａ）。その後、本発明者らは、ＣＡＲ－ＮＫ細胞産物に対する応答に関しての最適なＣＢＵ基準を満たす予測値を、ＲＯＣ曲線（図１２Ａ）を使用して調べた。０．８９３の曲線下面積（ＡＵＣ）は、これらの４つの基準（９９％以上の生存率、８．０未満のＮＲＢＣ含有量、３６５０グラム超の乳児体重、および白人民族性）を満たすことが応答についての優れた予測因子であることを示している。

【0219】

図１２Ｃは、患者が受けたＮＫ細胞産物が有する「最適な」ＣＢＵ特徴の数に応じた応答率（ＣＲ（上段パネル）およびＣＲ／ＰＲ（下段パネル））を示す。例えば、ＣＲ率が、１つの基準を満たしただけである複数のＣＢＵに由来する産物を受けた患者についての０％から、これら４つの基準を満たした複数のＣＢＵに由来する細胞産物を受けた患者についての１００％の応答率にまで及ぶ（ｐ＜０．００１）。同様に、ＰＲ／ＣＲ率が、所望の特徴の１つ、２つ、３つまたは４つを有した複数のＣＢＵに由来する細胞産物を受けた患者について１２．５％、３０．％、５８．３％および１００％であった（ｐ＝０．００３）。図１２Ａは、ＣＢＵ特徴の数に応じた生存確率を示す。１つ、２つ、３つまたは４つの特徴を有した複数のＣＢＵに由来する細胞産物を受けた患者についての１２ヶ月生存確率がそれぞれ、３７．５％、５７．１％、７９．５％、および１００％であった（ｐ＝０．０２）。

【0220】

これらの結果を、非常に類似した結果を有する異なるＮＫ細胞産物により処置される１９名の患者の独立したサンプルにおいて検証した。この場合、＋３０日目でのＣＲ率が、２つ以下、３つまたは４つの特徴を有した複数のＣＢＵに由来する細胞産物を受けた患者についてそれぞれ、０％、３３．３％、および７５％であった（ｐ＝０．０２９）（図１３）。

【0221】

いくつかの実施形態において、臨床応答についての予測を改善するためのさらなるパラメーターが存在する：例えば、在胎齢が３８週以下であること；子宮内採取方法；雄性乳児；前処理体積が１２０ｍｌ以下であること；ＣＤ３４％が０．４％超であること；培養における０日目と１５日目との間でのＮＫ細胞拡大が４５０倍以上であること；および培養における６日目と１５日目との間でのＮＫ細胞拡大が７０倍以上であること。

【0222】

先に示されたように、臨床応答に関しての４基準のセット（９９％以上の生存率、８未満のＮＲＢＣ含有量、白人民族性、および３６５０グラム超の乳児体重）の予測値が８９．３％である。これは、上記で記載される変数を加えることによって９７．０％に増大させることができる（図１４）。

【0223】

本開示およびその利点が詳しく説明されているが、様々な変化、置換および変更が、添付された請求項によって規定されるような設計の精神および範囲から逸脱することなく本明細書中において行われ得ることを理解しなければならない。そのうえ、本出願の範囲は、本明細書に記載されるプロセス、装置、製造、組成物、手段、方法および工程の特定の実施形態に限定されることは意図されない。当業者は本開示から容易に理解するであろうように、本明細書中に記載される対応する実施形態と実質的に同じ機能を果たす、または実質的に同じ結果を達成するプロセス、装置、製造、組成物、手段、方法または工程は、現在存在するものであろうと、または後に開発されることになるものであろうと、本開示に従って利用される場合がある。したがって、添付された請求項は、そのようなプロセス、装置、製造、組成物、手段、方法または工程をその範囲内に含むことが意図される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図13】

【図14】

【国際調査報告】