特表 2024-511424 抗ＩＧＦＢＰ７構築物およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-13

(54)【発明の名称】抗ＩＧＦＢＰ７構築物およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20240306BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240306BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240306BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240306BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240306BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240306BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240306BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20240306BHJP

   C12N 1/00 20060101ALI20240306BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 13/08 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 13/10 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 1/18 20060101ALI20240306BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240306BHJP

   A61K 45/06 20060101ALI20240306BHJP

   A61K 41/00 20200101ALI20240306BHJP

   A61K 51/00 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240306BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240306BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/28 ZNA

C12N15/63 Z

C12N5/10

C12N1/21

C12N1/19

C12N1/15

C12P21/08

C12N1/00 G

A61K39/395 N

A61K39/395 L

A61P9/00

A61P35/00

A61P35/04

A61P35/02

A61P1/04

A61P15/00

A61P13/08

A61P13/12

A61P13/10

A61P11/00

A61P17/00

A61P1/18

A61K45/00

A61P43/00 111

A61K45/06

A61K41/00

A61K51/00 100

A61K39/395 D

A61P37/04

A61K47/68

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023558177

(86)(22)【出願日】2022-03-25

(85)【翻訳文提出日】2023-11-17

(86)【国際出願番号】 US2022071354

(87)【国際公開番号】W WO2022204724

(87)【国際公開日】2022-09-29

(31)【優先権主張番号】63/166,146

(32)【優先日】2021-03-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522469578

【氏名又は名称】ダイナミキュア バイオテクノロジー エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】チェン， ジロン

(72)【発明者】

【氏名】リー， ジアン

(72)【発明者】

【氏名】ノートン， アンジェラ

(72)【発明者】

【氏名】ワン， シュオ

(72)【発明者】

【氏名】シャ， ジナン

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C076

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064DA01

4B064DA05

4B065AA90X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4B065CA45

4C076CC11

4C076CC15

4C076CC16

4C076CC17

4C076CC18

4C076CC27

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF34

4C084AA11

4C084AA17

4C084AA19

4C084AA20

4C084MA55

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZA361

4C084ZA591

4C084ZA661

4C084ZA811

4C084ZA891

4C084ZB072

4C084ZB092

4C084ZB212

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZC032

4C084ZC411

4C084ZC712

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB41

4C085BB43

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG10

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA09

4H045BA72

4H045DA76

4H045DA83

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本出願は、ＩＧＦＢＰ７に結合する抗ＩＧＦＢＰ７構築物（例えば、抗ＩＧＦＢＰ７抗体）、抗ＩＧＦＢＰ７のアミノ酸配列をコードする核酸分子、核酸分子を含むベクター、ベクターを含む宿主細胞、抗ＩＧＦＢＰ７構築物を調製する方法、抗ＩＧＦＢＰ７構築物を含む医薬組成物、および抗ＩＧＦＢＰ７構築物または組成物を使用する方法を提供する。上記抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み得る。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含む抗ＩＧＦＢＰ７構築物であって、前記ｓｄＡｂ部分が、
１）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または前記ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
２）配列番号２もしくは１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または前記ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
３）配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または前記ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
４）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または前記ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
５）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または前記ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
６）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または前記ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
７）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または前記ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
８）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または前記ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
９）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または前記ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
１０）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または前記ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
１１）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または前記ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
１２）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または前記ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；または、
１３）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、または前記ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【請求項2】

ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含む抗ＩＧＦＢＰ７構築物であって、前記ｓｄＡｂ部分が、配列番号３２～５１のいずれかに示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む、抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【請求項3】

前記ｓｄＡｂ部分が、配列番号３２～５１のいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号３２～５１のいずれか１つに対して少なくとも約８０％の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む、請求項１または２に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【請求項4】

前記ｓｄＡｂ部分が、ラクダ科、キメラ、ヒト、部分的ヒト化、または完全ヒト化である、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【請求項5】

前記ｓｄＡｂ部分がＶ_ＨＨ抗体である、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【請求項6】

ＣＤ９３のＩＧＦＢＰ７への結合を遮断する、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【請求項7】

前記ＩＧＦＢＰ７がヒトＩＧＦＢＰ７である、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【請求項8】

前記ＣＤ９３がヒトＣＤ９３である、請求項６または請求項７に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【請求項9】

第二の部分をさらに含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【請求項10】

前記第二の部分が、抗原を特異的に認識する抗体部分を含む、請求項９に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【請求項11】

前記抗原がＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－１である、請求項１０に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【請求項12】

前記第二の抗体部分が、全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）_２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、またはｓｄＡｂである、請求項１０または１１に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【請求項13】

前記第二の部分が半減期延長部分を含む、請求項９に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【請求項14】

前記構築物が抗体－薬物コンジュゲートである、請求項９に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【請求項15】

請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物と競合的にＩＧＦＢＰ７に特異的に結合する抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【請求項16】

請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物と、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物。

【請求項17】

請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物のポリペプチドまたはその一部をコードするポリヌクレオチド。

【請求項18】

請求項１７に記載のポリヌクレオチドを含む核酸構築物であって、前記ポリヌクレオチドと作動可能に関連するプロモーターを必要に応じてさらに含む核酸構築物。

【請求項19】

請求項１８に記載の核酸構築物を含むベクター。

【請求項20】

請求項１８に記載のポリヌクレオチド、請求項１８に記載の核酸構築物または請求項１９に記載のベクターを含む単離された宿主細胞。

【請求項21】

請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物のポリペプチド、請求項１７に記載のポリヌクレオチド、請求項１８に記載の核酸構築物、請求項１９に記載のベクター、または請求項２０に記載の宿主細胞を含む培養培地。

【請求項22】

抗ＩＧＦＢＰ７構築物を製造する方法であって、
ａ）前記ポリペプチドを発現するのに有効な条件下で、請求項２０に記載の単離された宿主細胞を培養すること；および
ｂ）前記宿主細胞から前記ポリペプチドを得ること、を含む方法。

【請求項23】

個体における疾患もしくは症状を処置するか、または組織における異常な血管成長を阻害する方法であって、前記個体に、有効量の請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物、または請求項１６に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。

【請求項24】

前記症状の疾患が異常な血管構造に関連する、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記疾患または症状が癌である、請求項２３または請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記癌が固形腫瘍である、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

前記癌がＣＤ９３＋内皮細胞を含む、請求項２５または請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

前記癌がＩＧＦＢＰ７＋血管を含む、請求項２５～２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記癌が腫瘍低酸素症を特徴とする、請求項２５～２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記癌が局所進行癌または転移癌である、請求項２５～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記癌が、リンパ腫、結腸癌、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、食道癌、前立腺癌、子宮頸癌、腎癌、膀胱癌、胃癌、非小細胞肺癌、黒色腫、および膵臓癌からなる群から選択される、請求項２５～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記抗ＩＧＦＢＰ７構築物を前記個体に非経口投与する、請求項２３～３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

第二の治療を投与することをさらに含む、請求項２３～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

前記第二の治療が、手術、放射線、遺伝子治療、免疫治療、骨髄移植、幹細胞移植、ホルモン治療、標的治療、凍結治療、超音波治療、光線力学治療、および化学治療からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記第二の治療が免疫治療である、請求項３４に記載の方法。

【請求項36】

前記免疫治療が、免疫調節剤を投与することを含む、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

前記免疫調節剤が免疫チェックポイント阻害剤である、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－Ｌ１抗体または抗ＰＤ－１抗体を含む、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

前記個体がヒトである、請求項２３～３８のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月２５日に出願された米国仮出願第６３／１６６，１４６号に基づく優先権を主張し、その内容はすべての目的のためにその全体が参照により組み込まれる。

【0002】

技術分野
本開示は、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（抗ＩＧＦＢＰ７抗体など）およびその使用に関する。

【0003】

ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出物
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出物の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：配列表（ファイル名：１９３８５２０００５４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２２年３月２４日、サイズ：５６，６９８バイト）のコンピュータ可読形式（ＣＲＦ）。

【背景技術】

【0004】

本出願の背景
ＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）は、ヒトにおいてＩＧＦＢＰ７遺伝子によってコードされるタンパク質である。インスリン様成長因子（ＩＧＦ）は、細胞の成長および分裂を促進し、早すぎるアポトーシスを防止することに関与するタンパク質である。ＩＧＦＢＰ７の主な機能は、体液および組織におけるＩＧＦの利用可能性を調節すること、ならびに受容体へのＩＧＦの結合を調節することである。ＩＧＦＢＰ７は血管の内層で活性である；そのＩＧＦおよびＩＧＦ受容体との相互作用は、細胞増殖の指示に関与するＢＲＡＦシグナル伝達を制御するために重要である。これらのプロセスから、ＩＧＦＢＰ７は細胞接着と癌に関与していると考えられている。

【0005】

本明細書で言及されるすべての刊行物、特許、特許出願および公開特許出願の開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0006】

本出願の簡潔な要旨
以下の要旨は例示にすぎず、決して限定することを意図するものではない。すなわち、以下の要旨は、新規分子およびその使用のハイライト、利点および長所を紹介するために提供される。したがって、以下の要旨は、特許請求される主題の本質的な特徴を特定することを意図しておらず、特許請求される主題の範囲を決定する際に使用することも意図していない。

【0007】

本出願は、一態様では、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含む抗ＩＧＦＢＰ７構築物を提供し、ｓｄＡｂ部分は、
１）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
２）配列番号２もしくは１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
３）配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
４）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
５）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
６）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
７）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
８）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
９）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
１０）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
１１）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
１２）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；または、
１３）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。

【0008】

別の態様における本出願は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含む抗ＩＧＦＢＰ７構築物を提供し、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３２～５１のいずれかに示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0009】

上記の抗ＩＧＦＢＰ７構築物のいずれかによるいくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３２～５１のいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号３２～５１のいずれか１つに対して少なくとも約８０％の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0010】

上記の抗ＩＧＦＢＰ７構築物のいずれかによるいくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、ラクダ科、キメラ、ヒト、部分的ヒト化、または完全ヒト化である。

【0011】

上記の抗ＩＧＦＢＰ７構築物のいずれかによるいくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分はＶ_ＨＨ抗体である。

【0012】

上記の抗ＩＧＦＢＰ７構築物のいずれかによるいくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＣＤ９３のＩＧＦＢＰ７への結合を遮断する。いくつかの実施形態では、ＣＤ９３はヒトＣＤ９３である。

【0013】

上記の抗ＩＧＦＢＰ７構築物のいずれかによるいくつかの実施形態では、ＩＧＦＢＰ７はヒトＩＧＦＢＰ７である。

【0014】

上記の抗ＩＧＦＢＰ７構築物のいずれかによるいくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、第二の部分をさらに含む。いくつかの実施形態では、第二の部分は、抗原を特異的に認識する抗体部分を含む。いくつかの実施形態では、抗原はＰＤ－Ｌ１である。いくつかの実施形態では、抗体部分は、全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、またはｓｄＡｂである。

【0015】

上記の抗ＩＧＦＢＰ７構築物のいずれかによるいくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、半減期延長部分を含む第二の部分をさらに含む。

【0016】

上記の抗ＩＧＦＢＰ７構築物のいずれかによるいくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、抗体－薬物コンジュゲートである。

【0017】

別の態様における本出願は、上記の抗ＩＧＦＢＰ７構築物のいずれか１つの抗ＩＧＦＢＰ７構築物と競合的にＩＧＦＢＰ７に特異的に結合する抗ＩＧＦＢＰ７構築物を提供する。

【0018】

別の態様における本出願は、上記の抗ＩＧＦＢＰ７構築物のいずれかと、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物を提供する。

【0019】

別の態様における本出願は、上記の抗ＩＧＦＢＰ７構築物のいずれかのポリペプチドまたはその一部をコードするポリヌクレオチドを提供する。

【0020】

別の態様における本出願は、上記のポリヌクレオチドのいずれかを含み、ポリヌクレオチドと作動可能に関連するプロモーターを必要に応じてさらに含む核酸構築物を提供する。

【0021】

別の態様における本出願は、上記の核酸構築物のいずれかを含むベクターを提供する。

【0022】

別の態様における本出願は、上記のポリヌクレオチド、核酸構築物またはベクターのいずれかを含む単離された宿主細胞を提供する。

【0023】

別の態様における本出願は、上記の抗ＩＧＦＢＰ７構築物、ポリヌクレオチド、核酸構築物、ベクターまたは宿主細胞のいずれかのポリペプチドを含む培養培地を提供する。

【0024】

別の態様における本出願は、抗ＩＧＦＢＰ７構築物を製造する方法であって、ａ）ポリペプチドを発現するのに有効な条件下で、上記の単離された宿主細胞のいずれかを培養すること、およびｂ）宿主細胞からポリペプチドを得ることを含む方法を提供する。

【0025】

別の態様における本出願は、疾患もしくは症状（例えば癌、例えば固形腫瘍）を処置するか、または組織における異常な血管成長を阻害する方法であって、個体に、有効量の上記の抗ＩＧＦＢＰ７構築物または医薬組成物のいずれかを投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、症状の疾患は異常な血管構造に関連する。いくつかの実施形態では、疾患または症状は癌である。いくつかの実施形態では、癌は固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、癌はＣＤ９３＋内皮細胞を含む。いくつかの実施形態では、癌はＩＧＦＢＰ７＋血管を含む。いくつかの実施形態では、癌は腫瘍低酸素症を特徴とする。いくつかの実施形態では、癌は局所進行癌または転移癌である。いくつかの実施形態では、癌は、リンパ腫、結腸癌、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、食道癌、前立腺癌、子宮頸癌、腎癌、膀胱癌、胃癌、非小細胞肺癌、黒色腫、および膵臓癌からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物を個体に非経口投与する。いくつかの実施形態では、本方法は、第二の治療を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、第二の治療は、手術、放射線、遺伝子治療、免疫治療、骨髄移植、幹細胞移植、ホルモン治療、標的治療、凍結治療、超音波治療、光線力学治療、および化学治療からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、第二の治療は免疫治療である。いくつかの実施形態では、免疫治療は免疫調節剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、免疫チェックポイント阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は抗ＰＤ－Ｌ１抗体または抗ＰＤ－１抗体を含む。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。

【図面の簡単な説明】

【0026】

【図1】図１は、ラマをヒトＩＧＦＢＰ７で免疫した後のラマ血清中の抗ヒトＩＧＦＢＰ７抗体力価を示す。

【0027】

【図2A】図２Ａ～図２Ｂは、ヒトＩＧＦＢＰ７発現（ｈＩＧＦＢＰ７）ＨＥＫ２９３Ｔ細胞への様々な抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディの結合を示す。

【図2B】図２Ａ～図２Ｂは、ヒトＩＧＦＢＰ７発現（ｈＩＧＦＢＰ７）ＨＥＫ２９３Ｔ細胞への様々な抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディの結合を示す。

【0028】

【図3A】図３Ａ～図３Ｂは、マウスＩＧＦＢＰ７発現（ｍＩＧＦＢＰ７）ＨＥＫ２９３Ｔ細胞への様々な抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディの結合を示す。

【図3B】図３Ａ～図３Ｂは、マウスＩＧＦＢＰ７発現（ｍＩＧＦＢＰ７）ＨＥＫ２９３Ｔ細胞への様々な抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディの結合を示す。

【0029】

【図4】図４は、ヒトＩＧＦＢＰ７発現（ｈＩＧＦＢＰ７）ＨＥＫ２９３Ｔ細胞への様々な抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物の結合を示す。

【0030】

【図5】図５は、マウスＩＧＦＢＰ７発現（ｍＩＧＦＢＰ７）ＣＨＯ－Ｋ１細胞への様々な抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物の結合を示す。

【0031】

【図6】図６は、ヒトＩＧＦＢＰ７に対する様々な抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物の結合親和性を示す。

【0032】

【図7】図７は、マウスＩＧＦＢＰ７に対する様々な抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物の結合親和性を示す。

【0033】

【図8】図８は、２つの抗ＩＧＦＢＰ７二重特異性分子の概略図を示す。

【0034】

【図9】図９は、ヒトＩＧＦＢＰ７に対する様々な単一特異性および二重特異性の抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物の結合親和性を示す。

【0035】

【図10】図１０は、マウスＩＧＦＢＰ７に対する様々な単一特異性および二重特異性の抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物の結合親和性を示す。

【0036】

【図11】図１１は、カニクイザルＩＧＦＢＰ７に対する様々な単一特異性および二重特異性の抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物の結合親和性を示す。

【0037】

【図12A】図１２Ａ～図１２Ｂは、細胞表面に提示されたヒトＩＧＦＢＰ７に対する様々な単一特異性および二重特異性の抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物の結合を示す。

【図12B】図１２Ａ～図１２Ｂは、細胞表面に提示されたヒトＩＧＦＢＰ７に対する様々な単一特異性および二重特異性の抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物の結合を示す。

【0038】

【図13】図１３は、ヒトおよびマウスＩＧＦＢＰ７発現ＨＥＫ２９３Ｔ細胞への様々な二重特異性抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物の結合を示す。

【0039】

【図14】図１４は、ヒトＣＤ９３発現ＣＨＯ細胞における様々な抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディによるＣＤ９３とＩＧＦＢＰ７との間の相互作用の遮断効果を示す。

【0040】

【図15A】図１５Ａ～図１５Ｃは、ヒトＣＤ９３発現ＣＨＯ細胞における様々な抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物によるＣＤ９３とＩＧＦＢＰ７との間の相互作用の遮断効果を示す。

【図15B】図１５Ａ～図１５Ｃは、ヒトＣＤ９３発現ＣＨＯ細胞における様々な抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物によるＣＤ９３とＩＧＦＢＰ７との間の相互作用の遮断効果を示す。

【図15C】図１５Ａ～図１５Ｃは、ヒトＣＤ９３発現ＣＨＯ細胞における様々な抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物によるＣＤ９３とＩＧＦＢＰ７との間の相互作用の遮断効果を示す。

【0041】

【図16】図１６は、ヒトＣＤ９３発現ＣＨＯ細胞における様々な単一特異性および二重特異性の抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物によるＣＤ９３とＩＧＦＢＰ７との間の相互作用の遮断効果を示す。

【0042】

【図17A】図１７Ａ～図１７Ｂは、対照と比較した、様々な抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物によるＨＵＶＥＣチューブ形成の阻害を示す。

【図17B】図１７Ａ～図１７Ｂは、対照と比較した、様々な抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物によるＨＵＶＥＣチューブ形成の阻害を示す。

【0043】

【図18】図１８は、Ｏｃｔｅｔ競合による抗ＩＧＦＢＰ７抗体のエピトープビニングを示す。

【発明を実施するための形態】

【0044】

本出願の詳細な説明
本出願は、ＩＧＦＢＰ７に特異的に結合する新規な抗ＩＧＦＢＰ７構築物（例えば、抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体）、抗ＩＧＦＢＰ７構築物を調製する方法、構築物を使用する方法（例えば、疾患または症状を処置する方法）を提供する。

【0045】

Ｉ．定義
「抗体」という用語は、その最も広い意味で使用され、所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、全長抗体およびその抗原結合フラグメントを含むがこれらに限定されない様々な抗体構造を包含する。「抗体部分」という用語は、全長抗体またはその抗原結合フラグメントを指す。

【0046】

全長抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む。軽鎖および重鎖の可変領域は、抗原結合を担う。重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「Ｖ_Ｈ」および「Ｖ_Ｌ」と呼ばれることがある。両方の鎖の可変領域は、一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる３つの高度に可変なループを含む（ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ、およびＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ）。本明細書に開示される抗体および抗原結合断片のＣＤＲ境界は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ １９９７；Ｃｈｏｔｈｉａ １９８５；Ｃｈｏｔｈｉａ １９８７；Ｃｈｏｔｈｉａ １９８９；Ｋａｂａｔ １９８７；Ｋａｂａｔ １９９１）の慣例によって定義または同定され得る。重鎖または軽鎖の３つのＣＤＲは、ＣＤＲよりも高度に保存されており、超可変ループを支持するための足場を形成するフレームワーク領域（ＦＲ）として公知の隣接するストレッチの間に介在する。重鎖および軽鎖の定常領域は抗原結合に関与しないが、様々なエフェクター機能を示す。抗体は、その重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいてクラスに割り当てられる。抗体の５つの主要なクラスまたはアイソタイプは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭであり、それぞれα、δ、ε、γおよびμ重鎖の存在を特徴とする。主要な抗体クラスのいくつかは、ＩｇＧ１（γ１重鎖）、ＩｇＧ２（γ２重鎖）、ＩｇＧ３（γ３重鎖）、ＩｇＧ４（γ４重鎖）、ｌｇＡ１（α１重鎖）、またはｌｇＡ２（α２重鎖）などのサブクラスに分けられる。

【0047】

本明細書で使用される「抗原結合フラグメント」という用語は、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１またはそれを超えるＣＤＲを含む抗体の一部から形成された多重特異性抗体、ラクダ状単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、または抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体フラグメントを含む抗体フラグメントを指す。抗原結合フラグメントは、親抗体または親抗体フラグメント（例えば、親ｓｃＦｖ）が結合する同じ抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、フラグメント異なるヒト抗体由来のフレームワーク領域にグラフトされた特定のヒト抗体由来の１またはそれを超えるＣＤＲを含み得る。

【0048】

「単一ドメイン抗体」または「ｓｄＡｂ」という用語は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する単一の抗原結合ポリペプチドを指す。ｓｄＡｂは、単独で、対応するＣＤＲ含有ポリペプチドと対形成することなく抗原に結合することができる。場合によっては、ｓｄＡｂはラクダ科ＨＣＡｂｓから操作され、それらの重鎖可変ドメインは本明細書では「Ｖ_ＨＨ」と呼ばれる。ラクダ科ｓｄＡｂは、最小の既知の抗原結合抗体断片の１つである（例えば、Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６－８（１９９３）；Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３７４：１６８－７３（１９９５）；Ｈａｓｓａｎｚａｄｅｈ－Ｇｈａｓｓａｂｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｌｏｎｄ），８：１０１３－２６（２０１３）を参照されたい）。

【0049】

「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および結合部位を含む最小の抗体断片である。この断片は、１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインとが密接に共有結合によらずに結合した二量体からなる。これらの２つのドメインのフォールディングから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に対する抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（それぞれ重鎖および軽鎖からの３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえ、抗原を認識して結合する能力を有するが、結合部位全体よりも低い親和性である。

【0050】

「単鎖Ｆｖ」（「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される）は、単一のポリペプチド鎖に連結されたＶ_ＨおよびＶ_Ｌ抗体ドメインを含む抗体フラグメントである。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖの総説については、Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。

【0051】

本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」という用語は、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見られる不連続な抗原結合部位を意味することを意図している。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６（１９７７）；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９９１）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７－９４８（１９９７）；ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６）；Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２－３８３９（２００８）；Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７：５５－７７（２００３）；およびＨｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３０９：６５７－６７０（２００１）に記載されており、ここで、定義は、互いに比較した場合のアミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体またはグラフト抗体またはその改変体のＣＤＲを指すためのいずれかの定義の適用は、本明細書で定義および使用される用語の範囲内であることが意図される。上記で引用した参考文献のそれぞれによって定義されるＣＤＲを包含するアミノ酸残基を、比較として以下の表１に示す。ＣＤＲ予測アルゴリズムおよびインターフェースは当技術分野で公知であり、例えば、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２－３８３９（２００８）；Ｅｈｒｅｎｍａｎｎ Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３８：Ｄ３０１－Ｄ３０７（２０１０）；およびＡｄｏｌｆ－Ｂｒｙｆｏｇｌｅ Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，４３：Ｄ４３２－Ｄ４３８（２０１５）。この段落で引用された参考文献の内容は、本出願で使用するため、および本明細書の１またはそれを超える請求項中の包含の可能性のために、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【表1】

【0052】

「Ｋａｂａｔにおける可変ドメイン残基ナンバリング」または「Ｋａｂａｔにおけるアミノ酸位置ナンバリング」という表現およびその変形は、上記のＫａｂａｔらの抗体の編集の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用されるナンバリングシステムを指す。このナンバリングシステムを使用して、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたは超可変領域（ＨＶＲ）の短縮または挿入に対応するより少ないまたは追加のアミノ酸を含み得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後の単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）および重鎖ＦＲ残基８２の後の挿入残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂおよび８２ｃなど）を含み得る。残基のＫａｂａｔナンバリングは、抗体の配列と「標準的な」Ｋａｂａｔナンバリング配列との相同性領域でのアラインメントによって、所与の抗体について決定され得る。

【0053】

本明細書中で他に示されない限り、免疫グロブリン重鎖における残基のナンバリングは、上記のＫａｂａｔらにおけるＥＵインデックスのナンバリングである。「ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基ナンバリングを指す。

【0054】

「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義されるＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。

【0055】

非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する最小配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域（ＨＶＲ）由来の残基が、所望の抗体特異性、親和性および能力を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基で置き換えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの例において、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体には見られない残基を含むことができる。これらの改変は、抗体の性能をさらに改良するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、超可変ループのすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲのすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、必要に応じて、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（典型的にはヒト免疫グロブリンのもの）の少なくとも一部を含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３－３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照のこと。

【0056】

「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体であり、および／または本明細書に開示されるヒト抗体を作製するための技術のいずれかを使用して作製されている。ヒト抗体のこの定義は、具体的には、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを含む当技術分野で公知の様々な技術を使用して産生することができる。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）。また、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能なのは、Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６－９５（１９９１）に記載される方法である。ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５：３６８－７４（２００１）も参照のこと。ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してそのような抗体を産生するように改変されているが、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物、例えば免疫化異種に抗原を投与することによって調製することができる（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）に関する米国特許第６，０７５，１８１号および第６，１５０，５８４号を参照のこと）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体に関するＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）も参照のこと。

【0057】

本明細書で同定されるポリペプチドおよび抗体配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」または「相同性」は、任意の保存的置換を配列同一性の一部として考慮して配列を整列させた後の、比較されるポリペプチド中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定するためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）、またはＭＵＳＣＬＥソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当技術分野の技術の範囲内である様々な方法で達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大アラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書の目的のために、％アミノ酸配列同一性の値は、配列比較コンピュータプログラムＭＵＳＣＬＥ（Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３２（５）：１７９２－１７９７，２００４；Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．，ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ５（１）：１１３，２００４を使用して生成される。

【0058】

「相同」とは、２つのポリペプチド間または２つの核酸分子間の配列類似性または配列同一性を指す。２つの比較された配列の両方の位置が同じ塩基またはアミノ酸モノマーサブユニットによって占められている場合、例えば、２つのタンパク質分子のそれぞれの位置がリジンによって占められている場合、または２つのＤＮＡ分子のそれぞれの位置がアデニンによって占められている場合、分子はその位置で相同である。二つの配列間の相同性のパーセントは、比較した位置の数で割った２つの配列が共有する一致または相同位置の数を１００倍した関数である。例えば、２つの配列中の１０個の位置のうち６個が一致または相同である場合、２つの配列は６０％相同である。例として、タンパク質配列ＳＧＴＳＴＤおよびＴＧＴＳＤＡは、５０％の相同性を共有する。一般に、２つの配列が最大の相同性を得るように並べられた場合に比較が行われる。

【0059】

「定常ドメイン」という用語は、抗原結合部位を含む免疫グロブリンの他の部分、可変ドメインと比較してより保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。定常ドメインは、重鎖のＣ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２およびＣ_Ｈ３ドメイン（集合的にＣ_Ｈ）ならびに軽鎖のＣＨＬ（またはＣ_Ｌ）ドメインを含む。

【0060】

任意の哺乳動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（「κ」）およびラムダ（「λ」）と呼ばれる２つの明確に異なるタイプのうちの１つに割り当てることができる。

【0061】

「ＣＨ１ドメイン」（「Ｈ１」ドメインの「Ｃ１」とも呼ばれる）は、通常、約アミノ酸１１８から約アミノ酸２１５に及ぶ（ＥＵナンバリングシステム）。

【0062】

「ヒンジ領域」は、一般に、ヒトＩｇＧ１のＧｌｕ２１６～Ｐｒｏ２３０に対応するＩｇＧ中の領域として定義される（Ｂｕｒｔｏｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：１６１－２０６（１９８５））。他のＩｇＧアイソタイプのヒンジ領域は、重鎖間Ｓ－Ｓ結合を形成する最初および最後のシステイン残基を同じ位置に配置することによってＩｇＧ１配列と整列させることができる。

【0063】

ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域の「ＣＨ２ドメイン」（「Ｃ２」ドメインとも呼ばれる）は、通常、約アミノ酸２３１から約アミノ酸３４０に及ぶ。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密接に対になっていないという点で独特である。むしろ、２つのＮ結合分枝炭水化物鎖が、インタクトな天然ＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメインの間に挟まれている。炭水化物は、ドメイン－ドメイン対合の代替物を提供し、ＣＨ２ドメインの安定化を助け得ると推測されている。Ｂｕｒｔｏｎ，Ｍｏｌｅｃ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：１６１－２０６（１９８５）。

【0064】

「ＣＨ３ドメイン」（「Ｃ２」ドメインとも呼ばれる）は、Ｆｃ領域中のＣＨ２ドメインに対してＣ末端側の残基のストレッチ（すなわち、約アミノ酸残基３４１から抗体配列のＣ末端、典型的にはＩｇＧのアミノ酸残基４４６または４４７まで）を含む。

【0065】

本明細書における「Ｆｃ領域」または「断片結晶化可能領域」という用語は、天然配列Ｆｃ領域および改変体Ｆｃ領域を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、位置Ｃｙｓ２２６のアミノ酸残基またはＰｒｏ２３０のアミノ酸残基からそのカルボキシル末端まで伸びるように定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵナンバリングシステムによる残基４４７）は、例えば、抗体の産生もしくは精製中に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することによって除去され得る。したがって、インタクトな抗体の組成物は、すべてのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、およびＫ４４７残基を有するおよび有しない抗体の混合物を有する抗体集団を含み得る。本明細書中に記載される抗体において使用するための好適な天然配列Ｆｃ領域としては、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２（ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ）、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４が挙げられる。

【0066】

「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記載する。好ましいＦｃＲは、天然配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合し、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃＲＮ、およびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含むものであり、これらの受容体の対立遺伝子改変体および選択的にスプライシングされた形態を含み、ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）を含み、これらは主にその細胞質ドメインが異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン阻害性モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する。（Ｍ．Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３－２３４（１９９７）を参照のこと。ＦｃＲＮは、抗体の血清半減期の増加を可能にする血液への抗体の再利用にとって重要である。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２５－３４（１９９４）；およびｄｅ Ｈａａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０－４１（１９９５）で概説されている。将来同定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書において「ＦｃＲ」という用語に包含される。

【0067】

本明細書で使用される「エピトープ」という用語は、抗体または抗体部分が結合する抗原上の原子またはアミノ酸の特定の群を指す。２つの抗体または抗体部分は、抗原に対する競合的結合を示す場合、抗原内の同じエピトープに結合し得る。

【0068】

本明細書で使用される場合、第一の抗体またはそのフラグメントは、第一の抗体またはそのフラグメントが等モル濃度の第一の抗体またはそのフラグメントの存在下で第二の抗体またはそのフラグメントの標的抗原結合を少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％のいずれか１つ）阻害する場合、標的抗原への結合について第二の抗体またはそのフラグメントと「競合」し、またはその逆も同様である。交差競合に基づく抗体の「ビニング」のための高スループットプロセスは、ＰＣＴ公開番号ＷＯ ０３／４８７３１に記載されている。

【0069】

本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」、「特異的に認識する」および「に特異的である」という用語は、生物学的分子を含む不均一な分子集団の存在下で標的の存在を決定する、標的と抗体または抗体部分との間の結合などの測定可能かつ再現可能な相互作用を指す。例えば、標的（エピトープであり得る）を特異的に認識する抗体または抗体部分は、他の標的への結合よりも高い親和性、結合活性で、より容易に、および／またはより長い持続時間でこの標的に結合する抗体または抗体部分である。いくつかの実施形態では、無関係な標的に対する抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定して、標的に対する抗体の結合の約１０％未満である。いくつかの実施形態では、標的に特異的に結合する抗体は、≦１０^－５Ｍ、≦１０^－６Ｍ、≦１０^－７Ｍ、≦１０^－８Ｍ、≦１０^－９Ｍ、≦１０^－１０Ｍ、≦１０^－１１Ｍ、または≦１０^－１２Ｍの解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、異なる種由来のタンパク質間で保存されているタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、特異的結合は、排他的結合を含み得るが、それを必要としない。抗体または抗原結合ドメインの結合特異性は、当技術分野で公知の方法によって実験的に決定することができる。そのような方法は、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ－、ＲＩＡ－、ＥＣＬ－、ＩＲＭＡ－、ＥＩＡ－、ＢＬＩ、ＳＰＲ、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）－試験およびペプチドスキャンを含むが、これらに限定されない。

【0070】

「二重特異性」または「多重特異性」抗体は、２またはそれを超える異なる抗原に結合する抗体、または同じ抗原の２またはそれを超える異なるエピトープに結合する抗体を指すことができる。

【0071】

「単離された」抗体（または構築物）は、その産生環境の構成要素（例えば、天然または組換え）から同定、分離および／または回収されたものである。好ましくは、単離されたポリペプチドは、その産生環境からの他のすべての構成要素と会合していない。

【0072】

本明細書に記載の構築物、抗体、またはその抗原結合フラグメントをコードする「単離された」核酸分子は、それが産生された環境においてそれが通常会合している少なくとも１つの汚染核酸分子から同定および分離される核酸分子である。好ましくは、単離された核酸は、産生環境に関連するすべての構成要素と会合していない。本明細書中に記載されるポリペプチドおよび抗体をコードする単離された核酸分子は、それが自然界で見出される形態または状況以外の形態である。したがって、単離された核酸分子は、細胞内に天然に存在する本明細書に記載のポリペプチドおよび抗体をコードする核酸とは区別される。単離された核酸は、その核酸分子を通常含む細胞に含まれる核酸分子を含むが、その核酸分子は染色体外に、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。

【0073】

「制御配列」という用語は、特定の宿主生物における作動可能に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。原核生物に適した制御配列には、例えば、プロモーター、必要に応じてオペレーター配列、およびリボソーム結合部位が含まれる。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを利用することが公知である。

【0074】

核酸は、別の核酸配列と機能的関係に置かれた場合に「作動可能に連結される」。例えば、プレ配列または分泌リーダーのためのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合、ポリペプチドのためのＤＮＡに作動可能に連結されており；プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に作動可能に連結されており；またはリボソーム結合部位は、翻訳を促進するように配置されている場合、コード配列に作動可能に連結されている。一般に、「作動可能に連結されている」とは、連結されているＤＮＡ配列が連続していることを意味し、分泌リーダーの場合、連続しており、リーディングフレーム内にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは連続している必要はない。連結は、好都合な制限部位でのライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが従来の慣例に従って使用される。

【0075】

本明細書で使用される「ベクター」という用語は、それが連結されている別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、ならびにそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。特定のベクターは、それらが作動可能に連結されている核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と呼ばれる。

【0076】

本明細書で使用される「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」という用語は、外因性核酸が宿主細胞に移入または導入されるプロセスを指す。「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」細胞は、外因性核酸でトランスフェクト、形質転換または形質導入された細胞である。細胞は、初代対象細胞およびその子孫を含む。

【0077】

「宿主細胞」、「宿主細胞株」および「宿主細胞培養物」という用語は互換的に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞には、「形質転換体」および「形質転換細胞」が含まれ、これらには、初代形質転換細胞および継代数を問わずそれに由来する子孫が含まれる。子孫は、親細胞と核酸含有量が完全に同一でなくてもよく、変異を含有してもよい。最初に形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異体子孫が本明細書に含まれる。

【0078】

「免疫コンジュゲート」という用語は、本明細書に記載の抗体部分などの抗体に対する治療剤または検出可能な標識の共有結合への言及を含む。連結は、リンカー（ペプチドリンカーなど）を介して直接的または間接的であり得る。

【0079】

本明細書で使用される場合、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、臨床結果を含む有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチである。本出願の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果には、それだけに限らないが、以下のうちの１つまたは複数が含まれる：疾患に起因する１またはそれを超える症候の緩和、疾患の程度の縮小、疾患の安定化（例えば、疾患の悪化の予防または遅延）、疾患の拡大（例えば、転移）の予防または遅延、疾患の再発の予防または遅延、疾患の進行の遅延または減速、疾患状態の改善、疾患の寛解（部分的または全体）の提供、疾患を処置するに必要な１またはそれを超える他の医薬の用量の低下、疾患の進行の遅延、生活の質の向上もしくは改善、体重増の増加、および／または生存期間の延長。癌（例えば、腫瘍体積など）の病理学的結果の減少も「処置」に包含される。本出願の方法は、処置のこれらの態様のいずれか１またはそれを超える態様を企図する。

【0080】

癌の文脈において、「処置する」という用語は、癌細胞の増殖を阻害すること、癌細胞の複製を阻害すること、全体的な腫瘍負荷を軽減すること、および疾患に関連する１またはそれを超える症候を改善することのいずれかまたはすべてを含む。

【0081】

「阻害」または「阻害する」という用語は、任意の表現型特性の減少もしくは停止、またはその特性の発生率、程度もしくは可能性の減少もしくは停止を指す。「低減する」または「阻害する」ことは、基準と比較して活性、機能、および／または量を減少、低減または停止することである。特定の実施形態では、「低減する」または「阻害する」とは、２０％またはそれを超える全体的な減少を引き起こす能力を意味する。別の実施形態では、「低減する」または「阻害する」とは、５０％またはそれを超える全体的な減少を引き起こす能力を意味する。さらに別の実施形態では、「低減する」または「阻害する」とは、７５％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える全体的な減少を引き起こす能力を意味する。

【0082】

本明細書で使用される「基準」は、比較目的で使用される任意の試料、標準、またはレベルを指す。基準は、健康および／または非疾患の試料から得ることができる。いくつかの例では、基準は、未処理試料から得ることができる。いくつかの例では、基準は、個体の非疾患または非処置の試料から得られる。いくつかの例では、基準は、個体または患者ではない１またはそれを超える健康な個体から得られる。

【0083】

本明細書で使用される場合、「疾患の発症を遅延させる」とは、疾患（癌など）の発症を延期、妨害、緩徐、阻止、安定化、抑制および／または延期することを意味する。この遅延は、処置される疾患および／または個体の病歴に応じて、様々な時間長であり得る。当業者に明らかなように、十分なまたは有意な遅延は、事実上、個体が疾患を発症しないという点で予防を包含し得る。例えば、転移の発生などの後期癌が遅延され得る。

【0084】

本明細書で使用される「予防する」は、疾患の素因を有し得るが、疾患とまだ診断されていない個体における疾患の発生または再発に関して予防を提供することを含む。

【0085】

本明細書で使用される場合、機能または活性を「抑制する」ことは、関心のある条件またはパラメータを除いて他の点では同じ条件と比較した場合、または別の条件と比較した場合に、機能または活性を減少させることである。例えば、腫瘍成長を抑制する抗体は、抗体の非存在下での腫瘍の成長速度と比較して、腫瘍の成長速度を低減させる。

【0086】

「対象」、「個体」、および「患者」という用語は、ヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、げっ歯類、または霊長類を含むがこれらに限定されない哺乳動物を指すために本明細書では互換的に使用される。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。

【0087】

薬剤の「有効量」は、所望の治療的または予防的結果を達成するために、必要な投与量および期間で有効な量を指す。具体的な用量は、選択される特定の薬剤、従うべき投薬レジメン、他の化合物と組み合わせて投与されるかどうか、投与のタイミング、画像化される組織、およびそれが担持される物理的送達系のうちの１つまたは複数に応じて変化し得る。

【0088】

「医薬製剤」および「医薬組成物」という用語は、有効成分（複数可）の生物学的活性が有効であることを可能にするような形態であり、製剤が投与される個体に対して許容できないほど毒性である追加の構成要素を含まない調製物を指す。そのような製剤は無菌であり得る。

【0089】

「薬学的に許容され得る担体」は、個体への投与のための「医薬組成物」を一緒に含む治療剤と共に使用するための、当技術分野で慣用的な非毒性の固体、半固体または液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料、製剤補助剤または担体を指す。薬学的に許容され得る担体は、使用される投与量および濃度でレシピエントに非毒性であり、製剤の他の成分と適合性である。薬学的に許容され得る担体は、使用される製剤に適している。

【0090】

「無菌」製剤は、無菌であるか、または生きている微生物およびその胞子を本質的に含まない。

【0091】

１またはそれを超えるさらなる治療剤と「組み合わせて」投与することは、任意の順序での同時（同時発生の）および連続または逐次投与を含む。

【0092】

「同時発生的に（concurrently）」という用語は、本明細書では、投与の少なくとも一部が時間的に重複するか、または１つの治療剤の投与が他の治療剤の投与と比較して短期間内に入る２またはそれを超える治療剤の投与を指すために使用される。例えば、２またはそれを超える治療剤は、約６０分以下、例えば約３０、１５、１０、５、または１分のいずれか以下の時間間隔で投与される。

【0093】

「逐次」という用語は、本明細書では、１またはそれを超える他の薬剤の投与を中止した後に１またはそれを超える薬剤の投与が連続する２またはそれを超える治療剤の投与を指すために使用される。例えば、２またはそれを超える治療剤の投与は、約１５分を超える、例えば約２０、３０、４０、５０もしくは６０分、１日、２日、３日、１週間、２週間もしくは１ヶ月のいずれかまたはそれを超える時間間隔で投与される。

【0094】

本明細書で使用される場合、「と組み合わせて」とは、別の処置モダリティに加えて１つの処置モダリティを投与することを指す。したがって、「と組み合わせて」は、個体への他の処置モダリティの投与前、投与中または投与後の１つの処置モダリティの投与を指す。

【0095】

「添付文書」という用語は、治療用製品の市販パッケージに通例含まれる説明書であって、そのような治療用製品の使用に関する適応症、用法、用量、投与、併用療法、禁忌および／または警告に関する情報を含む説明書を指すために使用される。

【0096】

「製造品」は、少なくとも１つの試薬、例えば疾患または障害（例えば、がん）を処置するための医薬品、または本明細書に記載のバイオマーカーを特異的に検出するためのプローブを含む任意の製造品（例えば、パッケージまたは容器）またはキットである。特定の実施形態では、製造品またはキットは、本明細書に記載の方法を実施するためのユニットとして促進、配布、または販売される。

【0097】

本明細書で記載される本出願の実施形態は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」および／または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」ことを含むことが理解される。

【0098】

本明細書における値またはパラメータの「約」への言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする変動を含む（および説明する）。例えば、「約Ｘ」という記載は、「Ｘ」という記載を含む。

【0099】

本明細書で使用される場合、値またはパラメータ「ではないもの」への言及は、一般に、値またはパラメータ「以外」を意味し、説明する。例えば、本方法がタイプＸの癌を処置するために使用されないとは、本方法がタイプＸ以外の癌を処置するために使用されることを意味する。

【0100】

ここでいう「約Ｘ～Ｙ」は、「約Ｘ～約Ｙ」と同義である。

【0101】

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ｏｒ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかにそうでないことを指示しない限り、複数の指示対象を含む。

【0102】

ＩＩ．抗ＩＧＦＢＰ７構築物
本出願は、本明細書に記載のＩＧＦＢＰ７に特異的に結合する抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分を含む抗ＩＧＦＢＰ７構築物を提供する。

【0103】

ＩＧＦＢＰ７
インスリン様成長因子（ＩＧＦ）結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ）７は、Ｍａｃ２５、ＩＧＦＢＰ－ｒｐ１、腫瘍由来接着因子（ＴＡＦ）、プロスタサイクリン刺激因子（ＰＳＦ）、およびアンジオモジュリン（ａｎｇｉｏｍｏｄｕｌｉｎ）（ＡＧＭ）としても公知であり、ＩＧＦＢＰファミリーに属する分泌細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパク質である。Ｈｗａ ｅｔ ａｌ．Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｖ．１９９９；２０（６）：７６１－８７；Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．２０１８；１５９（２）：５７０－８を参照のこと。ＩＧＦＢＰファミリーのメンバーは、ＩＧＦ１に結合し、血液中のＩＧＦ１のバイオアベイラビリティを調節するのに役立つＩＧＦ結合（ＩＢ）ドメインをＮ末端に含む。ＩＧＦＢＰ７は、ＩＧＦ１結合を安定化するように機能するＣ末端ドメインを欠いており、したがって、ＩＧＦ－１に対するその親和性は、ＩＧＦＢＰ１～６の親和性よりも有意に低い。Ｏｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１９９６；２７１（４８）：３０３２２－５を参照のこと。ＩＧＦＢＰ７は、多くの正常組織および癌細胞において発現されることが見出された；しかしながら、癌におけるＩＧＦＢＰ７の正確な役割は議論の余地があった。一方、ＩＧＦＢＰ７は、癌細胞から放出され、腫瘍アポトーシスを誘発し、血管新生を抑制する腫瘍抑制因子として作用することが示された（Ｗａｊａｐｅｙｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ．２００８；１３２（３）：３６３－７４）。ＩＧＦ１Ｒが受容体として提案され、ＩＧＦＢＰ７が結合すると、ＩＧＦ－１とＩＧＦ１Ｒとの間の相互作用が遮断され、癌幹様細胞の増殖および攻撃性が阻害された。Ｃａｏ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２０１７；３１（１）：１１０－２６；Ｅｖｄｏｋｉｍｏｖａ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ Ｓｉｇｎａｌ．２０１２；５（２５５）：ｒａ９２を参照のこと。ＩＧＦＢＰ７の投与は、インビボで腫瘍成長を阻害し、ＩＧＦＢＰ７－／－マウスは、ジエチルニトロソアミン誘発性肝癌発生に感受性であった。Ａｋｉｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１７；７７（１５）：４０１４－２５；Ｄａｒｒ ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２０１４；３３（２３）：３０２４－３２を参照のこと。一方、ＩＧＦＢＰ７は、癌組織の血管において上方制御され、血管新生を促進することができることが示された（４８，６４）。Ｋｏｍｉｙａ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｄ．２０１４；３（３）：５３７－４９；Ｐｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２００８；２７（５４）：６８３４－４４を参照のこと。ＩＧＦＢＰ７は、血管ＥＣ中のＶＥＧＦによって強く誘導され得、血管新生におけるＩＧＦＢＰ７とＶＥＧＦとの間の相乗効果が報告されている。Ｋｏｍｉｙａ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｄ．２０１４；３（３）：５３７－４９；Ｈｏｏｐｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ．２００９；１０５（２）：２０１－８を参照のこと。上記に挙げた各参考文献は、あらゆる目的のためにその全体が参照により組み込まれる。

【0104】

ヒトＩＧＦＢＰ７遺伝子は４ｑ１２に位置し、ポリペプチドをコードする。ポリペプチドの１つのアイソフォームは、２６４アミノ酸残基を有する（配列番号１１１、シグナルペプチドドメイン（配列番号１１１の残基１～２６）、インスリン結合ドメイン（ＩＢドメイン、配列番号１１１の残基２８～１０６）、Ｋａｚａｌ様ドメイン（配列番号１１１の残基１０５～１５８）およびＩｇ様Ｃ２型ドメイン（配列番号１１１の残基１６０～２６４）を含む）。

【0105】

抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分
いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、ＩＧＦＢＰ７の結合について単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗体または抗体断片と競合し、ｓｄＡｂ部分は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４または１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分である。

【0106】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４または１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0107】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４または１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分に由来するヒト化抗体部分を含む。

【0108】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３３に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0109】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３３のアミノ酸配列、または配列番号３３と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0110】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、ＩＧＦＢＰ７の結合について単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗体または抗体断片と競合し、ｓｄＡｂ部分は、配列番号２または１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４または１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分である。

【0111】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、配列番号２もしくは１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0112】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、配列番号２または１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４または１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分に由来するヒト化抗体部分を含む。

【0113】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３２に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0114】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３２のアミノ酸配列、または配列番号３２と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0115】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４６に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0116】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４６のアミノ酸配列、または配列番号４６と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0117】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４７に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0118】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４７のアミノ酸配列、または配列番号４７と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0119】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４８に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0120】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４８のアミノ酸配列、または配列番号４８と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0121】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、ＩＧＦＢＰ７の結合について単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗体または抗体断片と競合し、ｓｄＡｂ部分は、配列番号５または１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５または１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分である。

【0122】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0123】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、配列番号５または１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５または１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分に由来するヒト化抗体部分を含む。

【0124】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３４に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0125】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３４のアミノ酸配列、または配列番号３４と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0126】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４９に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0127】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４９のアミノ酸配列、または配列番号４９と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0128】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号５０に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0129】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号５０のアミノ酸配列、または配列番号５０と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0130】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号５１に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0131】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号５１のアミノ酸配列、または配列番号５１と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0132】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、ＩＧＦＢＰ７の結合について単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗体または抗体断片と競合し、ｓｄＡｂ部分は、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分である。

【0133】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0134】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分に由来するヒト化抗体部分を含む。

【0135】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３５に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0136】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３５のアミノ酸配列、または配列番号３５と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0137】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、ＩＧＦＢＰ７の結合について単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗体または抗体断片と競合し、ｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分である。

【0138】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0139】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分に由来するヒト化抗体部分を含む。

【0140】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３６に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0141】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３６のアミノ酸配列、または配列番号３６と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0142】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0143】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３７のアミノ酸配列、または配列番号３７と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0144】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、ＩＧＦＢＰ７の結合について単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗体または抗体断片と競合し、ｓｄＡｂ部分は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分である。

【0145】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0146】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分に由来するヒト化抗体部分を含む。

【0147】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３８に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0148】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３８のアミノ酸配列、または配列番号３８と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0149】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、ＩＧＦＢＰ７の結合について単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗体または抗体断片と競合し、ｓｄＡｂ部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分である。

【0150】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0151】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分に由来するヒト化抗体部分を含む。

【0152】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３９に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0153】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３９のアミノ酸配列、または配列番号３９と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0154】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、ＩＧＦＢＰ７の結合について単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗体または抗体断片と競合し、ｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分である。

【0155】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0156】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分に由来するヒト化抗体部分を含む。

【0157】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４０に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0158】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４０のアミノ酸配列、または配列番号４０と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0159】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、ＩＧＦＢＰ７の結合について単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗体または抗体断片と競合し、ｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分である。

【0160】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0161】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分に由来するヒト化抗体部分を含む。

【0162】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４１に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0163】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４１のアミノ酸配列、または配列番号４１と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0164】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、ＩＧＦＢＰ７の結合について単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗体または抗体断片と競合し、ｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分である。

【0165】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0166】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分に由来するヒト化抗体部分を含む。

【0167】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４２に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0168】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４２のアミノ酸配列、または配列番号４２と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0169】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、ＩＧＦＢＰ７の結合について単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗体または抗体断片と競合し、ｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分である。

【0170】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0171】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分に由来するヒト化抗体部分を含む。

【0172】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４３に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0173】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４３のアミノ酸配列、または配列番号４３と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0174】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、ＩＧＦＢＰ７の結合について単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗体または抗体断片と競合し、ｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分である。

【0175】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0176】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分に由来するヒト化抗体部分を含む。

【0177】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４４に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0178】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４４のアミノ酸配列、または配列番号４４と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0179】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、ＩＧＦＢＰ７の結合について単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗体または抗体断片と競合し、ｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分である。

【0180】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する抗体部分を含み、抗体部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0181】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分に由来するヒト化抗体部分を含む。

【0182】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４５に示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。

【0183】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号４５のアミノ酸配列、または配列番号４５と少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0184】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、ａ）アミノ酸配列ＩＮＴＹＬ（配列番号５２）を含むＣＤＲ１、ｂ）アミノ酸配列ＡＩＴＳＧＧＳＩＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１２）を含むＣＤＲ２、およびｃ）アミノ酸配列ＫＡＨＰＮＰＷＧＦＤＮＤＹ（配列番号１３）を含むＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含み、ｓｄＡｂ部分は、ａ）アミノ酸配列ＡＸ_１ＮＧＡＭ（配列番号５３）を含むＣＤＲ１（式中Ｘ_１＝ＮまたはＩ）、ｂ）ＡＩＴＳＧＧＳＩＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、およびｃ）アミノ酸配列ＫＡＨＰＮＰＷＧＦＤＮＤＹ（配列番号１３）を含むＣＤＲ３を含む。

【0185】

いくつかの実施形態では、上記の抗ＩＧＦＢＰ７ ｓｄＡｂ部分は、ラクダ科、キメラ、ヒト、部分的ヒト化、または完全ヒト化である。

【0186】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７ ｓｄＡｂ部分はＶ_ＨＨ抗体である。

【0187】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、抗ＩＧＦＢＰ７融合タンパク質を含むか、または抗ＩＧＦＢＰ７融合タンパク質である。

【0188】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、多重特異性抗ＩＧＦＢＰ７構築物（二重特異性抗体など）を含むか、または多重特異性抗ＩＧＦＢＰ７構築物である。

【0189】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、抗ＩＧＦＢＰ７免疫コンジュゲートを含むか、または抗ＩＧＦＢＰ７免疫コンジュゲートである。

【0190】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７およびＣＤ９３の結合を遮断する。いくつかの実施形態では、ＣＤ９３はヒトＣＤ９３である。いくつかの実施形態では、ＩＧＦＢＰ７はヒトＩＧＦＢＰ７である。いくつかの実施形態では、ＩＧＦＢＰ７のＣＤ９３への結合は、抗ＩＧＦＢＰ７抗体とＩＧＦＢＰ７またはＩＧＦＢＰ７発現細胞とのプレインキュベーション後に、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超えて遮断される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７抗体およびＩＧＦＢＰ７の用量は、約１：１０、１：６、１：３、１：１．５、１：１、４：３、２：１または５：１の比である。いくつかの実施形態では、ＩＧＦＢＰ７のＣＤ９３への結合は、約５０μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、２μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ、０．６μｇ／ｍｌまたは０．４μｇ／ｍｌの濃度での抗ＩＧＦＢＰ７抗体のプレインキュベーション後に、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超えて遮断される。

【0191】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７およびＭＭＲＮ２のＣＤ９３への結合を遮断する。いくつかの実施形態では、ＭＭＲＮ２はヒトＭＭＲＮ２である。いくつかの実施形態では、ＩＧＦＢＰ７はヒトＩＧＦＢＰ７である。いくつかの実施形態では、ＩＧＦＢＰ７のＭＭＲＮ２への結合は、抗ＩＧＦＢＰ７抗体とＩＧＦＢＰ７またはＩＧＦＢＰ７発現細胞とのプレインキュベーション後に、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超えて遮断される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ＩＧＦＢＰ７およびＭＭＲＮ２の結合を遮断しない。

【0192】

いくつかの実施形態では、ＩＧＦＢＰ７はヒトＩＧＦＢＰ７である。いくつかの実施形態では、ＩＧＦＢＰ７はマウスＩＧＦＢＰ７である。いくつかの実施形態では、ＩＧＦＢＰ７はカニクイザルＩＧＦＢＰ７である。

【0193】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、ヒトＩＧＦＢＰ７とカニクイザルＩＧＦＢＰ７の両方に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、ヒトＩＧＦＢＰ７とマウスＩＧＦＢＰ７の両方に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、カニクイザルＩＧＦＢＰ７および／またはマウスＩＧＦＢＰ７に結合しない。

【0194】

ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する少なくとも２つの抗体部分を含む抗ＩＧＦＢＰ７構築物
本出願はまた、２またはそれを超える抗体部分を含む抗ＩＧＦＢＰ７構築物を提供し、２またはそれを超える抗体部分のうちの少なくとも２つはＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する。

【0195】

いくつかの実施形態では、少なくとも２つの抗体部分は異なる。いくつかの実施形態では、少なくとも２つの抗体部分は、ＩＧＦＢＰ７の２つの異なるエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、少なくとも２つの抗体部分は、同じＩＧＦＢＰ７エピトープに結合する。

【0196】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、少なくとも２つの異なる抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（例えば、２つの異なるＶＨＨドメイン、例えばＡ１およびＤ４）を含む四量体融合タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、２つの異なる抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、ＩＧＦＢＰ７の２つの異なるエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、Ｆｃ断片を含む。

【0197】

いくつかの実施形態では、少なくとも２つの抗体部分は同じである。

【0198】

いくつかの実施形態では、少なくとも２つの抗体部分は両方とも単一ドメイン抗体部分（本明細書に記載のｓｄＡｂ部分のいずれかなど）である。

【0199】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0200】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0201】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0202】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0203】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0204】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0205】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0206】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0207】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0208】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0209】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0210】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0211】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0212】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0213】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0214】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0215】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0216】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0217】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0218】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0219】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0220】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0221】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0222】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0223】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0224】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0225】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0226】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0227】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0228】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0229】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0230】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0231】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0232】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0233】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0234】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0235】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0236】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0237】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0238】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0239】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0240】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0241】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0242】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0243】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0244】

いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分を含む第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体構築物が提供され、第一のｓｄＡｂ部分は、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み；第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。

【0245】

本明細書に記載の２つの抗体部分（例えば、２つのｓｄＡｂ）は、両方の部分の適切な特性（例えば、ＩＧＦＢＰ７への結合）を可能にする任意の方法で互いに融合することができる。いくつかの実施形態では、第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分のＮ末端に融合される（例えば、直接融合される）。いくつかの実施形態では、第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分のＣ末端に融合される（例えば、直接融合される）。いくつかの実施形態では、構築物は、第一のＦｃドメインおよび第二のＦｃドメインを含むＦｃ断片を含み、各ＦｃドメインはＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む。いくつかの実施形態では、両方の抗体部分は、２つのＦｃドメインのＮ末端に融合されている。例えば、図８を参照されたい。いくつかの実施形態では、両方の抗体部分は、２つのＦｃドメインのＣ末端に融合されている。いくつかの実施形態では、第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は両方のＦｃドメインのＮ末端に融合され、第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は両方のＦｃドメインのＣ末端に融合される。いくつかの実施形態では、第一の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は両方のＦｃドメインのＣ末端に融合され、第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は両方のＦｃドメインのＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、第一または第二の抗体部分は、リンカー（例えば、ＧＳリンカー）を介してＦｃドメインの一方または両方のＣ末端に融合される。いくつかの実施形態では、第一または第二の抗体部分は、リンカー（例えば、ＧＳリンカー）を介してＦｃドメインの一方または両方のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインはヒンジ領域を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、低下したエフェクター機能をもたらす突然変異を有する。

【0246】

いくつかの実施形態では、構築物は、第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチドを含み、両方のポリペプチドは各々、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分、およびｃ）Ｆｃドメインを含み、２つのＦｃドメインは、Ｆｃ断片を形成し、第一のｓｄＡｂは、ｉ）配列番号１または２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４または１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号５または１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５または１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、第一のｓｄＡｂは、そのＣ末端を介して第二のｓｄＡｂのＮ末端に直接融合され、第二のｓｄＡｂは、そのＣ末端を介して、必要に応じてリンカー（例えば、ＧＳリンカー）を介して、両方のＦｃドメインのＮ末端に融合される、方法。

【0247】

いくつかの実施形態では、構築物は、第一のポリペプチドおよび第二のポリペプチドを含み、両方のポリペプチドは各々、ａ）第一の単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分、ｂ）第二のｓｄＡｂ部分、およびｃ）Ｆｃドメインを含み、２つのＦｃドメインは、Ｆｃ断片を形成し、第一のｓｄＡｂは、ｉ）配列番号１または２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４または１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、第二のｓｄＡｂ部分は、配列番号５または１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５または１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含み、第一のｓｄＡｂは、そのＣ末端を介して両方のＦｃドメインのＮ末端に融合され、第二のｓｄＡｂは、そのＮ末端を介して、必要に応じてリンカー（例えば、ＧＳリンカー）を介して、両方のＦｃドメインのＣ末端に融合される。

【0248】

いくつかの実施形態では、第一または第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、このセクションに記載される抗体部分のいずれかに由来するヒト化抗体部分である。

【0249】

いくつかの実施形態では、第一または第二の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、ＩＧＦＢＰ７の結合エピトープについて、このセクションに記載される抗体部分のいずれかと競合する抗体部分である。

【0250】

第二の薬剤に結合する多重特異性抗ＩＧＦＢＰ７構築物
いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（例えば、本明細書中に記載される抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分のいずれか１つ）を含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＩＧＦＢＰ７構築物を含み、第二の結合部分（第二の抗体部分など）は、ＩＧＦＢＰ７とは異なる第二の抗原を特異的に認識する。いくつかの実施形態では、第二の抗原は免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、第二の抗原はＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１である。いくつかの実施形態では、第二の抗原は腫瘍抗原である。いくつかの実施形態では、第二の抗原は血管新生剤である。いくつかの実施形態では、血管新生剤はＶＥＧＦ（例えば、ヒトＶＥＧＦ）である。いくつかの実施形態では、血管新生剤はＶＥＧＦ受容体である。いくつかの実施形態では、血管新生剤は、ＶＥＧＦＲ１（例えば、ヒトＶＥＧＦＲ１）またはその断片である。いくつかの実施形態では、血管新生剤は、ＶＥＧＦＲ２（例えば、ヒトＶＥＧＦＲ２）またはその断片である。

【0251】

いくつかの実施形態では、第二の結合部分は、リンカー（例えば、本明細書中に記載されるリンカーのいずれか）を介して抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分に融合される。

【0252】

いくつかの実施形態では、第二の抗体部分は、全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）_２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、ナノボディ、またはｓｄＡｂである。

【0253】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ａ）本明細書に記載の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分のいずれか１つによる抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分；ｂ）ＰＤ－Ｌ１を特異的に認識する第二の抗体部分（本明細書に記載されるもののいずれかなどの抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分）またはＰＤ－１を特異的に認識する第二の抗体部分（本明細書に記載されるもののいずれかなどの抗ＰＤ－１抗体部分）を含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＩＧＦＢＰ７構築物である。

【0254】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む全長抗体を含む抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＰＤ－１抗体部分であって、２つの重鎖はそれぞれ重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、２つの軽鎖はそれぞれ軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＰＤ－１抗体部分と、ｂ）抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＰＤ－１全長抗体の重鎖の少なくとも一方または両方に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（本明細書に記載の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分のいずれかなど）とを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＩＧＦＢＰ７構築物である。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、両方の重鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、両方の重鎖のＣ末端に融合される

【0255】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む全長抗体を含む抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＰＤ－１抗体部分であって、２つの重鎖はそれぞれ重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、２つの軽鎖はそれぞれ軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＰＤ－１抗体部分と、ｂ）抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＰＤ－１全長抗体の軽鎖の少なくとも一方または両方に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（本明細書に記載の抗体部分のいずれかなど）とを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＩＧＦＢＰ７構築物である。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、両方の軽鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、両方の軽鎖のＣ末端に融合される。

【0256】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む全長抗体を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分であって、２つの重鎖がそれぞれ重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、２つの軽鎖がそれぞれ軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む、抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分と、ｂ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１全長抗体に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（本明細書に記載の抗体部分のいずれかなど）であって、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲにおいて最大５、４、３、２、もしくは１個の１つのアミノ酸置換を含むその改変体を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む。

【0257】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む全長抗体を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分であって、２つの重鎖がそれぞれ重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、２つの軽鎖がそれぞれ軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む、抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分と、ｂ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１全長抗体に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（本明細書に記載の抗体部分のいずれかなど）であって、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲにおいて最大５、４、３、２、もしくは１個の１つのアミノ酸置換を含むその改変体を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む。

【0258】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む全長抗体を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分であって、２つの重鎖がそれぞれ重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、２つの軽鎖がそれぞれ軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む、抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分と、ｂ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１全長抗体に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（本明細書に記載の抗体部分のいずれかなど）であって、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲにおいて最大５、４、３、２、もしくは１個の１つのアミノ酸置換を含むその改変体を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む。

【0259】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む全長抗体を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分であって、２つの重鎖がそれぞれ重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、２つの軽鎖がそれぞれ軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む、抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分と、ｂ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１全長抗体に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（本明細書に記載の抗体部分のいずれかなど）であって、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲにおいて最大５、４、３、２、もしくは１個の１つのアミノ酸置換を含むその改変体を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む。

【0260】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む全長抗体を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分であって、２つの重鎖がそれぞれ重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、２つの軽鎖がそれぞれ軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む、抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分と、ｂ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１全長抗体に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（本明細書に記載の抗体部分のいずれかなど）であって、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲにおいて最大５、４、３、２、もしくは１個の１つのアミノ酸置換を含むその改変体を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む。

【0261】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む全長抗体を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分であって、２つの重鎖がそれぞれ重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、２つの軽鎖がそれぞれ軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む、抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分と、ｂ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１全長抗体に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（本明細書に記載の抗体部分のいずれかなど）であって、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲにおいて最大５、４、３、２、もしくは１個の１つのアミノ酸置換を含むその改変体を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む。

【0262】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む全長抗体を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分であって、２つの重鎖がそれぞれ重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、２つの軽鎖がそれぞれ軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む、抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分と、ｂ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１全長抗体に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（本明細書に記載の抗体部分のいずれかなど）であって、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲにおいて最大５、４、３、２、もしくは１個の１つのアミノ酸置換を含むその改変体を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む。

【0263】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む全長抗体を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分であって、２つの重鎖がそれぞれ重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、２つの軽鎖がそれぞれ軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む、抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分と、ｂ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１全長抗体に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（本明細書に記載の抗体部分のいずれかなど）であって、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲにおいて最大５、４、３、２、もしくは１個の１つのアミノ酸置換を含むその改変体を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む。

【0264】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む全長抗体を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分であって、２つの重鎖がそれぞれ重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、２つの軽鎖がそれぞれ軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む、抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分と、ｂ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１全長抗体に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（本明細書に記載の抗体部分のいずれかなど）であって、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲにおいて最大５、４、３、２、もしくは１個の１つのアミノ酸置換を含むその改変体を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む。

【0265】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む全長抗体を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分であって、２つの重鎖がそれぞれ重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）を含み、２つの軽鎖がそれぞれ軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む、抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１抗体部分と、ｂ）抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分または抗ＰＤ－１全長抗体に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（本明細書に記載の抗体部分のいずれかなど）であって、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲにおいて最大５、４、３、２、もしくは１個の１つのアミノ酸置換を含むその改変体を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分とを含む。

【0266】

いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0267】

いくつかの実施形態では、ａ）抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）ＶＥＧＦ（例えば、ヒトＶＥＧＦ）またはＶＥＧＦＲ（例えば、ヒトＶＥＧＦＲ１、例えば、ヒトＶＥＧＦＲ２）を特異的に認識する結合部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７構築物が提供される。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦＲを特異的に認識する結合部分は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７ ｓｄＡｂは、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７ ｓｄＡｂは、リンカーまたは免疫グロブリン（ヒトＩｇＧなど）の定常領域を介してＶＥＧＦまたはＶＥＧＦＲを特異的に認識する結合部分に融合される。

【0268】

いくつかの実施形態では、ａ）抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分と、ｂ）ＶＥＧＦ（例えば、ヒトＶＥＧＦ）またはＶＥＧＦＲ（例えば、ヒトＶＥＧＦＲ１、例えば、ヒトＶＥＧＦＲ２）を特異的に認識する結合部分とを含む抗ＩＧＦＢＰ７構築物が提供される。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦＲを特異的に認識する結合部分は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７ ｓｄＡｂは、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７ ｓｄＡｂは、リンカーまたは免疫グロブリン（ヒトＩｇＧなど）の定常領域を介してＶＥＧＦまたはＶＥＧＦＲを特異的に認識する結合部分に融合される。

【0269】

いくつかの実施形態では、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む抗ＶＥＧＦ（例えば、抗ヒトＶＥＧＦ）または抗ＶＥＧＦＲ（例えば、抗ヒトＶＥＧＦＲ１、例えば、抗ヒトＶＥＧＦＲ２）全長抗体と、ｂ）抗ＩＧＦＢＰ７単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）とを含む抗ＩＧＦＢＰ７構築物が提供され、抗ＩＧＦＢＰ７ ｓｄＡｂは、全長抗体の重鎖および／または軽鎖の一方または両方に融合されている。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７ ｓｄＡｂは、全長抗体の両方の重鎖のＣ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７ ｓｄＡｂは、全長抗体の両方の重鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７ ｓｄＡｂは、全長抗体の両方の軽鎖のＣ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７ ｓｄＡｂは、全長抗体の両方の軽鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７ ｓｄＡｂは、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７ ｓｄＡｂは、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、全長抗体は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）および軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含むＶＥＧＦを特異的に認識し、Ｖ_Ｈは、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、全長抗体は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）および軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含むＶＥＧＦＲ２を特異的に認識し、Ｖ_Ｈは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７ ｓｄＡｂは、リンカー（上記のリンカーのいずれかなど）を介して全長抗体に融合される。

【0270】

いくつかの実施形態では、第二の結合（例えば、第二の抗体部分）および抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、結合部分の適切な機能を可能にする任意の操作可能な形態で、本明細書に記載の任意のリンカーなどのリンカーを介して互いに融合される。いくつかの実施形態では、リンカーはＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号５４～６１からなる群から選択される。

【0271】

例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分
例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分には、ＷＯ２０１９２２８５１４Ａ１、ＷＯ２０１９２２７４９０Ａ１およびＷＯ２０２００１９２３２Ａ１に記載されているものが含まれるが、これらに限定されない。

【0272】

いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＩＧＦＢＰ７構築物に使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分（ｓｃＦｖなど）は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）および軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む抗体部分を含み、抗体部分は、ＰＤ－Ｌ１の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）および第二の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、Ｖ_Ｈ－２は、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌ－２は、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。

【0273】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１部分は、配列番号６８、６９、または７０に示される配列を有するＶ_Ｈ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号７１、７２、または７３に示される配列を有するＶ_Ｌ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。

【0274】

いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＩＧＦＢＰ７構築物において使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分（ｓｃＦｖなど）は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）および軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含み、ａ）Ｖ_Ｈは、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に全部で約５、４、３、２もしくは１個までのアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ｂ）Ｖ_Ｌ は、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号６７のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に全部で約５、４、３、２、または１個までのアミノ酸置換を含むその改変体を含む。

【0275】

いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号６８、６９、または７０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；Ｖ_Ｌは、配列番号７１、７２、または７３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号６８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；Ｖ_Ｌは、配列番号７１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号６９のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；Ｖ_Ｌは、配列番号７２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、Ｖ_Ｈは、配列番号７０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；Ｖ_Ｌは、配列番号７３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。

【0276】

例示的な抗ＰＤ－１抗体部分
例示的な抗ＰＤ－１抗体部分としては、ＷＯ２０１８１３３８４２およびＷＯ２０１８１３３８３７に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない。

【0277】

いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＩＧＦＢＰ７構築物に使用される抗ＰＤ－１抗体部分（ｓｃＦｖなど）は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）および軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む抗体部分を含み、抗体部分は、ＰＤ－１の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）および第二の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、Ｖ_Ｈ－２は、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌ－２は、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。

【0278】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１部分は、配列番号９２に示される配列を有するＶ_Ｈ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号９３に示される配列を有するＶ_Ｌ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。

【0279】

いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＩＧＦＢＰ７構築物において使用される抗ＰＤ－１抗体部分（ｓｃＦｖなど）は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）および軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含み、ａ）Ｖ_Ｈは、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に全部で約５、４、３、２もしくは１個までのアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ｂ）Ｖ_Ｌ は、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号７８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７９のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に全部で約５、４、３、２、または１個までのアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0280】

いくつかの実施形態では、第二の抗体部分は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含むマウス抗体に由来するヒト化抗体部分を含む。

【0281】

いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＩＧＦＢＰ７構築物に使用される抗ＰＤ－１抗体部分（ｓｃＦｖなど）は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）および軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む抗体部分を含み、抗体部分は、ＰＤ－１の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）および第二の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、Ｖ_Ｈ－２は、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌ－２は、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。

【0282】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１部分は、配列番号９４に示される配列を有するＶ_Ｈ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号９５に示される配列を有するＶ_Ｌ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。

【0283】

いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＩＧＦＢＰ７構築物において使用される抗ＰＤ－１抗体部分（ｓｃＦｖなど）は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）および軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含み、ａ）Ｖ_Ｈは、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に全部で約５、４、３、２もしくは１個までのアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ｂ）Ｖ_Ｌ は、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号８４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号８５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に全部で約５、４、３、２、または１個までのアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0284】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体部分は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、配列番号９５に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含むマウス抗体に由来するヒト化抗体部分を含む。

【0285】

いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＩＧＦＢＰ７構築物に使用される抗ＰＤ－１抗体部分（ｓｃＦｖなど）は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）および軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む抗体部分を含み、抗体部分は、ＰＤ－１の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ－２）および第二の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、Ｖ_Ｈ－２は、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌ－２は、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号９０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号９１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。

【0286】

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１部分は、配列番号９６に示される配列を有するＶ_Ｈ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号９７に示される配列を有するＶ_Ｌ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。

【0287】

いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＩＧＦＢＰ７構築物において使用される抗ＰＤ－１抗体部分（ｓｃＦｖなど）は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）および軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含み、ａ）Ｖ_Ｈは、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に全部で約５、４、３、２もしくは１個までのアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ｂ）Ｖ_Ｌ は、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号９０のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号９１のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に全部で約５、４、３、２、または１個までのアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0288】

いくつかの実施形態では、第二の抗体部分は、配列番号９６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）とを含むマウス抗体に由来するヒト化抗体部分を含む。

【0289】

ＶＥＧＦを特異的に認識する例示的な結合部分
ＶＥＧＦを特異的に認識する例示的な結合部分には、アバスチン、ラムシルマブもしくはＶＥＧＦトラップ（アフリベルセプト）、またはその改変体もしくは機能的部分が含まれるが、これらに限定されない。

【0290】

いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＩＧＦＢＰ７構築物に使用されるＶＥＧＦを特異的に認識する結合部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）および軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む抗体部分を含む抗体部分（ｓｃＦｖなど）であり、Ｖ_Ｈは、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。

【0291】

いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＩＧＦＢＰ７構築物に使用されるＶＥＧＦを特異的に認識する結合部分は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）および軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）を含む抗体部分を含む抗体部分（ｓｃＦｖなど）であり、Ｖ_Ｈは、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、Ｖ_Ｌは、配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。

【0292】

いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＩＧＦＢＰ７構築物に使用されるＶＥＧＦを特異的に認識する結合部分は、配列番号９９のアミノ酸配列を含む。

【0293】

抗ＩＧＦＢＰ７融合タンパク質
いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（例えば、抗ＩＧＦＢＰ７ ｓｄＡｂ部分）および第二の部分を含む。

【0294】

いくつかの実施形態では、第二の部分は、リガンド（例えば、別の分子と相互作用するリガンド）である。いくつかの実施形態において、第二の部分は、ペプチドである。いくつかの実施形態において、第二の部分は、サイトカインである。

【0295】

いくつかの実施形態では、第二の部分は、半減期延長部分を含む。

【0296】

いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、アルブミン結合部分（例えば、アルブミン結合抗体部分）である。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分および半減期延長部分は、リンカー（「リンカー」の章に記載されるリンカーのいずれかなど）を介して連結される。

【0297】

いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、Ｆｃ断片である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、およびそれらの組み合わせおよびハイブリッドからのＦｃ断片からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、およびそれらの組み合わせおよびハイブリッドからのＦｃ断片からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃは、血清中の抗体部分の半減期の延長をもたらす１またはそれを超えるアミノ酸修飾を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、対応する野生型Ｆｃ断片と比較して低下したエフェクター機能を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、対応する野生型Ｆｃ断片と比較して増強されたエフェクター機能を有する。

【0298】

いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片はＩｇＧ２ａ（マウスＩｇＧ２ａなど）に由来する。

【0299】

いくつかの実施形態において、第二の部分は、脂質である。いくつかの実施形態では、脂質は、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（抗ＩＧＦＢＰ７抗体など）にコンジュゲートされ、アルブミンに結合することができ、それによって抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分の半減期を延長する。

【0300】

いくつかの実施形態では、第二の部分は、アルブミンまたはアルブミンの一部（例えば、ヒトアルブミン、例えば、ヒト血清アルブミン）である。

【0301】

抗ＩＧＦＢＰ７免疫コンジュゲート
本出願はまた、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（本明細書に記載の任意のＩＧＦＢＰ７抗体部分など）および第二の薬剤を含む抗ＩＧＦＢＰ７免疫コンジュゲートを提供する。いくつかの実施形態では、第二の薬剤は治療剤である。いくつかの実施形態では、第二の薬剤は標識である。

【0302】

いくつかの実施形態では、第二の薬剤は細胞傷害剤である。いくつかの実施形態では、細胞傷害剤は化学療法剤である。いくつかの実施形態では、細胞傷害剤は成長阻害剤である。いくつかの実施形態では、細胞傷害剤は毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物もしくは動物起源の酵素的に活性な毒素、またはその断片）である。いくつかの実施形態では、細胞傷害剤は放射性アイソタイプ（すなわち、放射性コンジュゲート）である。

【0303】

免疫コンジュゲートは、腫瘍への薬物部分の標的化送達、およびいくつかの実施形態ではその中の細胞内蓄積を可能にし、コンジュゲートされていない薬物の全身投与は、正常細胞に対して許容できないレベルの毒性をもたらし得る（Ｐｏｌａｋｉｓ Ｐ．（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ５：３８２－３８７）。

【0304】

本明細書に記載の免疫コンジュゲートの産生は、例えば、米国特許第９，５６２，０９９号および米国特許第７，５４１，０３４号に見出すことができ、これらは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0305】

リンカー
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、２つの部分（例えば、上記の多重特異性構築物中の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分および半減期延長部分、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分および第二の結合部分）の間に１またはそれを超えるリンカーを含む。抗ＩＧＦＢＰ７構築物に使用されるリンカー（複数可）の長さ、柔軟性の程度および／または他の特性は、１またはそれを超える特定の抗原またはエピトープに対する親和性、特異性または結合活性を含むがこれらに限定されない特性に何らかの影響を及ぼし得る。例えば、より長いリンカーは、２つの隣接するドメインが互いに立体的に干渉しないことを確実にするように選択され得る。いくつかの実施形態では、リンカー（ペプチドリンカーなど）は、隣接するドメインが互いに対して自由に動くことができるように、柔軟な残基（グリシンおよびセリンなど）を含む。例えば、グリシン－セリン二重鎖は、適切なペプチドリンカーであり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは非ペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーはペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは切断不可能なリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは切断可能なリンカーである。

【0306】

他のリンカーの考慮事項には、得られる化合物の物理的または薬物動態学的特性、例えば溶解度、親油性、親水性、疎水性、安定性（多かれ少なかれ安定性および計画された分解）、剛性、柔軟性、免疫原性、抗体結合の調節、ミセルまたはリポソームに組み込まれる能力などへの影響が含まれる。

【0307】

ペプチドリンカー
ペプチドリンカーは、天然に存在する配列または天然に存在しない配列を有し得る。例えば、重鎖のみの抗体のヒンジ領域に由来する配列が、リンカーとして使用され得る。例えば、ＷＯ１９９６／３４１０３を参照されたい。

【0308】

ペプチドリンカーは、任意の適切な長さであり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、５０、７５、１００またはそれを超えるアミノ酸長のいずれかである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、約１００、７５、５０、４０、３５、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５個以下またはそれよりも少ないアミノ酸長のいずれかである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーの長さは、約１アミノ酸～約１０アミノ酸、約１アミノ酸～約２０アミノ酸、約１アミノ酸～約３０アミノ酸、約５アミノ酸～約１５アミノ酸、約１０アミノ酸～約２５アミノ酸、約５アミノ酸～約３０アミノ酸、約１０アミノ酸～約３０アミノ酸長、約３０アミノ酸～約５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１００アミノ酸、または約１アミノ酸～約１００アミノ酸のいずれかである。

【0309】

このようなペプチドリンカーの本質的な技術的特徴は、前記ペプチドリンカーが重合活性を含まないことである。二次構造の促進の非存在を含むペプチドリンカーの特徴は当技術分野で公知であり、例えばＤａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．（Ｂｉｏｃｈｅｍ．（１９９８）３７，９２６６－９２７３），Ｃｈｅａｄｌｅ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９２）２９，２１－３０）およびＲａａｇ ａｎｄ Ｗｈｉｔｌｏｗ（ＦＡＳＥＢ（１９９５）９（１），７３－８０）に記載されている。「ペプチドリンカー」との関連における特に好ましいアミノ酸はＧｌｙである。さらに、二次構造も促進しないペプチドリンカーが好ましい。ドメインの互いに対する連結は、例えば、遺伝子工学によって提供することができる。融合され操作可能に連結された二重特異性一本鎖構築物を調製し、それらを哺乳動物細胞または細菌において発現させるための方法は、当技術分野で周知である（例えば、国際公開第９９／５４４４０号、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．１９８９ ａｎｄ １９９４またはＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，２００１）。

【0310】

ペプチドリンカーは、プロテアーゼ、特にマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）によって切断されない安定なリンカーであり得る。

【0311】

リンカーは、柔軟なリンカーであってもよい。例示的な柔軟なリンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）_ｎ（配列番号５４）、グリシン－セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）_ｎ（配列番号５５）、（ＧＳＧＧＳ）_ｎ（配列番号５６）、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号５７）、および（ＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号５８）を含み、ｎは少なくとも１の整数である）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、および当技術分野で公知の他の柔軟なリンカーが挙げられる。グリシンおよびグリシン－セリンポリマーは比較的構造化されていないため、成分間の中性テザーとして機能することができる。グリシンは、アラニンよりもはるかに多くのｐｈｉ－ｐｓｉ空間にアクセスし、より長い側鎖を有する残基よりもはるかに制限されない（Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｅｍ．１１ １７３－１４２（１９９２）を参照のこと）。当業者は、抗体融合タンパク質の設計が、全体または部分的に柔軟であるリンカーを含むことができ、その結果、リンカーが、柔軟なリンカー部分、ならびに所望の抗体または融合タンパク質構造を提供するために柔軟性が低い構造を与える１またはそれを超える部分を含み得ることを認識するであろう。

【0312】

さらに、例示的なリンカーはまた、（ＧＧＧＧＳ）_ｎ（配列番号５７）などのアミノ酸配列を含み、ｎは１～８の整数であり、例えば、（ＧＧＧＧＳ）_３（配列番号５９；以下「（Ｇ４Ｓ）３」または「ＧＳ３」という）、または（ＧＧＧＧＳ）_６（配列番号６０；以下「（Ｇ４Ｓ）６」または「ＧＳ６」という）。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳ）_ｎ（配列番号６１）のアミノ酸配列を含み、ｎは１～３の整数である。

【0313】

非ペプチドリンカー
２つの部分のカップリングは、両方の構成要素がそれぞれの活性、例えば、それぞれ抗ＩＧＦＢＰ７多重特異性抗体中のＩＧＦＢＰ７および第二の薬剤への結合を保持する限り、２つの分子を結合する任意の化学反応によって達成され得る。この結合は、多くの化学的機構、例えば共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合および錯化を含み得る。いくつかの実施形態では、結合は共有結合である。共有結合は、既存の側鎖の直接縮合または外部架橋分子の組み込みのいずれかによって達成することができる。多くの二価または多価連結剤は、この文脈においてタンパク質分子をカップリングするのに有用であり得る。例えば、代表的なカップリング剤は、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼンおよびヘキサメチレンジアミンなどの有機化合物を含むことができる。この列挙は、当技術分野で公知の様々なクラスのカップリング剤を網羅することを意図するものではなく、むしろ、より一般的なカップリング剤の例である（Ｋｉｌｌｅｎ ａｎｄ Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ，Ｊｏｕｒ．Ｉｍｍｕｎ．１３３：１３３５－２５４９（１９８４）；Ｊａｎｓｅｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ６２：１８５－２１６（１９８２）；およびＶｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）を参照のこと）。

【0314】

本出願において適用され得るリンカーは、文献に記載されている（例えば、ＭＢＳ（Ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）の使用を記載しているＲａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｓ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４４：２０１－２０８（１９８４）を参照のこと）。いくつかの実施形態では、本明細書で使用される非ペプチドリンカーとしては：（ｉ）ＥＤＣ（１－エチル－３－（３－ジメチルアミノ－プロピル）カルボジイミド塩酸塩；（ｉｉ）ＳＭＰＴ（４－スクシンイミジルオキシカルボニル－アルファ－メチル－アルファ－（２－プリジル－ジチオ）－トルエン（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ．（２１５５８Ｇ）；（ｉｉｉ）ＳＰＤＰ（スクシンイミジル－６［３－（２－ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサノエート（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ＃２１６５１Ｇ）；（ｉｖ）スルホ－ＬＣ－ＳＰＤＰ（スルホスクシンイミジル６［３－（２－ピリジルジチオ）－プロピアンアミド］ヘキサノエート（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．Ｃａｔ．＃２１６５－Ｇ）；および（ｖ）ＥＤＣにコンジュゲートしたスルホ－ＮＨＳ（Ｎ－ヒドロキシスルホ－スクシンイミド：Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ．＃２４５１０）が挙げられる。

【0315】

上記のリンカーは、異なる属性を有する構成要素を含み、したがって、異なる生理化学的特性を有する二重特異性抗体をもたらし得る。例えば、アルキルカルボキシレートのスルホ－ＮＨＳエステルは、芳香族カルボキシレートのスルホ－ＮＨＳエステルよりも安定である。ＮＨＳエステル含有リンカーは、スルホ－ＮＨＳエステルよりも可溶性が低い。また、リンカーＳＭＰＴは、立体障害ジスルフィド結合を含み、安定性の高い抗体融合タンパク質を形成することができる。ジスルフィド結合はインビトロで切断されて利用可能な抗体融合タンパク質が少なくなるため、ジスルフィド結合は一般に、他の結合よりも安定性が低い。特に、スルホ－ＮＨＳは、カルボジイミド・カップリングの安定性を高めることができる。カルボジイミド・カップリング（ＥＤＣなど）は、スルホ－ＮＨＳと組み合わせて使用すると、カルボジイミド・カップリング反応単独よりも加水分解に対して耐性の高いエステルを形成する。

【0316】

抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分または構築物改変体
ａ）抗体親和性
抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分の結合特異性は、当技術分野で公知の方法によって実験的に決定することができる。そのような方法は、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ－、ＲＩＡ－、ＥＣＬ－、ＩＲＭＡ－、ＥＩＡ－、ＢＬＩ、ＳＰＲ、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）－試験およびペプチドスキャンを含むが、これらに限定されない。

【0317】

いくつかの実施形態では、抗体部分とＩＧＦＢＰ７との結合のＫ_Ｄは、約１０^－７ Ｍ～約１０^－１２ Ｍ、約１０^－７ Ｍ～約１０^－８ Ｍ、約１０^－８ Ｍ～約１０^－９ Ｍ、約１０^－９ Ｍ～約１０^－１０ Ｍ、約１０^－１０ Ｍ～約１０^－１１ Ｍ、約１０^－１１ Ｍ～約１０^－１２ Ｍ、約１０^－７ Ｍ～約１０^－１２ Ｍ、約１０^－８ Ｍ～約１０^－１２ Ｍ、約１０^－９ Ｍ～約１０^－１２ Ｍ、約１０^－１０ Ｍ～約１０^－１２ Ｍ、約１０^－７ Ｍ～約１０^－１１ Ｍ、約１０^－８ Ｍ～約１０^－１１ Ｍ、約１０^－９ Ｍ～約１０^－１１ Ｍ、約１０^－７ Ｍ～約１０^－１０ Ｍ、約１０^－８ Ｍ～約１０^－１０ Ｍ、または約１０^－７ Ｍ～約１０^－９ Ｍである。いくつかの実施形態では、抗体部分とＩＧＦＢＰ７との間の結合のＫ_Ｄは、約１０^－７ Ｍ、１０^－８ Ｍ、１０^－９ Ｍ、１０^－１０ Ｍ、１０^－１１ Ｍ、または１０^－１２ Ｍのいずれか１つよりも強い。いくつかの実施形態では、ＩＧＦＢＰ７はヒトＩＧＦＢＰ７である。

【0318】

いくつかの実施形態では、抗体部分とＩＧＦＢＰ７との間の結合のＫ_ｏｎは、約１０^３ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^８ Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^３ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^４ Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^４ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^５ Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^５ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^６ Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^６ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^７ Ｍ^－１ｓ^－１、または約１０^７ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^８ Ｍ^－１ｓ^－１である。いくつかの実施形態では、抗体部分とＩＧＦＢＰ７との間の結合のＫ_ｏｎは、約１０^３ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^５ Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^４ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^６ Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^５ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^７ Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^６ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^８ Ｍ^－１ｓ^－１、約１０^４ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^７ Ｍ^－１ｓ^－１、または約１０^５ Ｍ^－１ｓ^－１～約１０^８ Ｍ^－１ｓ^－１である。いくつかの実施形態では、抗体部分とＩＧＦＢＰ７との間の結合のＫ_ｏｎは、約１０^３ Ｍ^－１ｓ^－１、１０^４ Ｍ^－１ｓ^－１、１０^５ Ｍ^－１ｓ^－１、１０^６ Ｍ^－１ｓ^－１、１０^７ Ｍ^－１ｓ^－１または１０^８ Ｍ^－１ｓ^－１のいずれか１つ以下である。いくつかの実施形態では、ＩＧＦＢＰ７はヒトＩＧＦＢＰ７である。

【0319】

いくつかの実施形態では、抗体部分とＩＧＦＢＰ７との間の結合のＫ_ｏｆｆは、約１ ｓ^－１～約１０^－６ ｓ^－１、約１ ｓ^－１～約１０^－２ ｓ^－１、約１０^－２ ｓ^－１～約１０^－３ ｓ^－１、約１０^－３ ｓ^－１～約１０^－４ ｓ^－１、約１０^－４ ｓ^－１～約１０^－５ ｓ^－１、約１０^－５ ｓ^－１～約１０^－６ ｓ^－１、約１ｓ^－１～約１０^－５ ｓ^－１、約１０^－２ ｓ^－１～約１０^－６ ｓ^－１、約１０^－３ ｓ^－１～約１０^－６ ｓ^－１、約１０^－４ ｓ^－１～約１０^－６ ｓ^－１、約１０^－２ ｓ^－１～約１０^－５ ｓ^－１、または約１０^－３ ｓ^－１～約１０^－５ ｓ^－１である。いくつかの実施形態では、抗体部分とＩＧＦＢＰ７との間の結合のＫ_ｏｆｆは、少なくとも約１ｓ^－１、１０^－２ ｓ^－１、１０^－３ ｓ^－１、１０^－４ ｓ^－１、１０^－５ ｓ^－１または１０^－６ ｓ^－１のいずれか１つである。いくつかの実施形態では、ＩＧＦＢＰ７はヒトＩＧＦＢＰ７である。

【0320】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分または抗ＩＧＦＢＰ７構築物の結合親和性は、既存の抗ＩＧＦＢＰ７抗体（例えば、抗ヒトＩＧＦＢＰ７抗体、例えば、ＭＭ０１）よりも高い（例えば、Ｋ_Ｄ値がより小さい）。

【0321】

ｂ）キメラ抗体またはヒト化抗体
いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分はキメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））に記載されている。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、ラマ由来の可変領域）およびヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変更されている「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体には、その抗原結合断片が含まれる。

【0322】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の特異性および親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低下させるためにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えばＣＤＲ（またはその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列に由来する１またはそれを超える可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、必要に応じて、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体中のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性または親和性を回復または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）からの対応する残基で置換される。

【0323】

ヒト化抗体およびその作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）に概説されており、例えば以下にさらに記載されている：Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号、第７，５２７，７９１号、第６，９８２，３２１号、および第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）グラフトを記載）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－４９８（１９９１）（「リサーフェシング」を記載）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載）；ならびにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８（２００５）およびＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２－２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングに対する「ガイド選択」アプローチを記載）。

【0324】

ヒト化のために使用され得るヒトフレームワーク領域としては以下が挙げられるが、これらに限定されない：「ベストフィット」法を使用して選択されたフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照）；軽鎖可変領域または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；およびＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照）；およびＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）およびＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）を参照）。

【0325】

非ヒト由来抗体のヒト化は、一般的かつ日常的に使用されている技術であることが理解される。したがって、配列表に開示される抗ＩＧＦＢＰ７抗体のいずれかおよびすべてのヒト化フォーマットは、前臨床または臨床の状況で使用することができることが理解される。参照される抗ＩＧＦＢＰ７抗体またはその抗原結合領域のいずれかのヒト化フォーマットがそのような前臨床または臨床の状況で使用される場合、ヒト化フォーマットは、元の非ヒト化フォーマットと同一または類似の生物学的活性およびプロファイルを有すると予想される。

【0326】

ｃ）ヒト抗体
いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分はヒト抗体（ヒトドメイン抗体またはヒトＤＡｂとして知られている）である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術を使用して産生することができる。ヒト抗体は、一般に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１），Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８）、およびＣｈｅｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４７（４）：９１２－２１（２０１０）に記載されている。完全ヒト単一ドメイン抗体（またはＤＡｂ）を産生することができるトランスジェニックマウスまたはラットは、当技術分野で公知である。例えば、ＵＳ２００９０３０７７８７Ａ１、米国特許第８，７５４，２８７号、ＵＳ２０１５０２８９４８９Ａ１、ＵＳ２０１００１２２３５８Ａ１、およびＷＯ２００４０４９７９４を参照のこと。

【0327】

ヒト抗体（例えば、ヒトＤＡｂ）は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製され得る。そのような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置換するか、染色体外に存在するか、または動物の染色体にランダムに組み込まれた、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部を含む。そのようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は一般に不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５（２００５）を参照のこと。例えば、米国特許第６，０７５，１８１号および第６，１５０，５８４号（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載）；米国特許第５，７７０，４２９号（ＨｕＭａｂ（登録商標）を記載）；米国特許第７，０４１，８７０号（Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）を記載）、および米国特許出願番号２００７／００６１９００（ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）を記載）を参照のこと。そのような動物によって生成されたインタクトな抗体からのヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによってさらに改変され得る。

【0328】

ヒト抗体（例えば、ヒトＤＡｂ）もまた、ハイブリドーマに基づく方法によって作製することができる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫およびマウス－ヒトヘテロミエローマ細胞株が記載されている（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）；およびＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照のこと）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体もまた、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載）およびＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載）に記載されているものが挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７－９３７（２００５）およびＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５－９１（２００５）に記載されている。

【0329】

ヒト抗体（例えば、ヒトＤＡｂ）はまた、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって作製され得る。次いで、そのような可変ドメイン配列を所望のヒト定常ドメインと組み合わせることができる。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術を以下に記載する。

【0330】

ｄ）ライブラリー由来抗体
本明細書中に記載される抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、所望の１つまたは複数の活性を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリーを作製し、所望の結合特性を有する抗体についてそのようなライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が当技術分野で公知である。そのような方法は、例えば、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍらのＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説されており、さらに例えばＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）；Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０（２００４）；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）；ａｎｄ Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２（２００４）に記載されている。単一ドメイン抗体ライブラリーを構築するための方法が記載されており、例えば米国特許第７３７１８４９号を参照。

【0331】

ある特定のファージディスプレイ法では、Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ遺伝子のレパートリーをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングし、ファージライブラリーにおいてランダムに組み替え、次いでこれを、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３－４５５（１９９４）に記載されるように抗原結合ファージについてスクリーニングできる。ファージは、典型的には、ｓｃＦｖフラグメントまたはＦａｂフラグメントのいずれかとして抗体フラグメントを提示する。免疫化された供給源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なしに免疫原に対する高親和性抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５－７３４（１９９３）に記載されているように、免疫化を一切することなく、ナイーブレパートリーをクローニングして（例えば、ヒト由来）、広範囲の非自己抗原および自己抗原に対する単一の抗体供給源を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８（１９９２）によって記載されるように、幹細胞から再編成されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再編成を達成することによって、ナイーブライブラリーを合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載する特許公報としては、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号および同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。

【0332】

ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体または抗体フラグメントは、本明細書ではヒト抗体またはヒト抗体フラグメントと見なされる。

【0333】

ｅ）置換、挿入、欠失および改変体
いくつかの実施形態では、１またはそれを超えるアミノ酸置換を有する抗ＩＧＦＢＰ７抗体改変体が提供される。置換突然変異誘発のための関心部位としては、ＨＶＲ（またはＣＤＲ）およびＦＲが挙げられる。保存的置換を「好ましい置換」という見出しの下で表２に示す。より実質的な変化は、「例示的な置換」という見出しの下で表２に提供されており、アミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載される。アミノ酸置換を目的の抗体に導入し、その産物を、所望の活性、例えば、保持された／改善された抗原結合、低下した免疫原性、または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについてスクリーニングすることができる。

【表2】

【0334】

アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従ってグループ分けされ得る：（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【0335】

非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。

【0336】

１つのタイプの置換改変体は、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１またはそれを超える超可変領域残基を置換することを含む。一般に、さらなる研究のために選択された得られた改変体（複数可）は、親抗体と比較して特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の低下、溶解性の改善）に改変（例えば、改良）を有する、および／または親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持する。例示的な置換改変体は親和性成熟抗体であり、例えば、本明細書に記載されるものなどのファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を使用して簡便に生成することができる。簡潔には、１またはそれを超えるＨＶＲ残基を変異させ、改変体抗体をファージ上に提示し、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。

【0337】

例えば、抗体親和性を改善するために、ＨＶＲに改変（例えば、置換）を行ってもよい。そのような改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異を受けるコドン（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６（２００８）を参照）および／またはＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）によってコードされる残基において行われ得、得られた改変体Ｖ_ＨまたはＶ_Ｌは結合親和性について試験される。二次ライブラリーを構築して再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様性は、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、またはオリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発）のいずれかによって成熟のために選択された可変遺伝子に導入される。次に、二次ライブラリーが作成される。次いで、ライブラリーをスクリーニングして、所望の親和性を有する任意の抗体改変体を同定する。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４～６残基）をランダム化するＨＶＲ指向アプローチを含む。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えばアラニン走査突然変異誘発またはモデリングを使用して特異的に同定され得る。特にＣＤＲ－Ｈ３およびＣＤＲ－Ｌ３がしばしば標的とされる。

【0338】

いくつかの実施形態では、置換、挿入または欠失は、そのような変更が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、１またはそれを超えるＨＶＲ内で起こり得る。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的変更（例えば、本明細書で提供される保存的置換）をＨＶＲにおいて行うことができる。そのような変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」またはＣＤＲの外側であり得る。

【0339】

突然変異誘発の標的となり得る抗体の残基または領域を同定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５に記載されている「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、ＬｙｓおよびＧｌｕなどの荷電残基）の残基または群が同定され、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）で置き換えられて、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるかどうか決定される。さらなる置換を、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置に導入することができる。あるいは、またはさらに、抗体と抗原との間の接触点を同定するための抗原－抗体複合体の結晶構造である。そのような接触残基および隣接残基は、置換の候補として標的化または排除され得る。改変体をスクリーニングして、それらが所望の特性を含むかどうかを決定することができる。

【0340】

アミノ酸配列挿入には、１つの残基から１００個またはそれを超える残基を含有するポリペプチドに及ぶ長さのアミノ末端および／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入改変体には、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ用）またはポリペプチドに対する抗体のＮ末端またはＣ末端への融合が含まれる。

【0341】

ｆ）グリコシル化改変体
いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、構築物がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変更される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１またはそれを超えるグリコシル化部位が作成または除去されるようにアミノ酸配列を変更することによって都合よく達成され得る。

【0342】

抗ＩＧＦＢＰ７構築物がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物は変化し得る。哺乳動物細胞によって産生されるネイティブ抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣ_Ｈ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ結合によって一般に結合している分岐型の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトースおよびシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに結合したフコースを含み得る。いくつかの実施形態では、抗体部分のオリゴ糖の修飾は、特定の改善された特性を有する抗体改変体を作製するために行われ得る。

【0343】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する。例えば、そのような抗体中のフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％または２０％～４０％であり得る。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析によって測定した場合のＡｓｎ２９７に結合したすべての糖構造の合計（例えば、複合、ハイブリッドおよび高マンノース構造）に対する、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域の約２９７位に位置するアスパラギン残基を指すが（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング）；Ａｓｎ２９７はまた、抗体におけるわずかな配列変異に起因して、位置２９７の約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、位置２９４と３００との間に位置する場合がある。そのようなフコシル化改変体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許出願公開番号ＵＳ ２００３／０１５７１０８（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；ＵＳ ２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体改変体に関連する刊行物の例としては以下が挙げられる：ＵＳ ２００３／０１５７１０８；ＷＯ ２０００／６１７３９；ＷＯ ２００１／２９２４６；ＵＳ ２００３／０１１５６１４；ＵＳ ２００２／０１６４３２８；ＵＳ ２００４／００９３６２１；ＵＳ ２００４／０１３２１４０；ＵＳ ２００４／０１１０７０４；ＵＳ ２００４／０１１０２８２；ＵＳ ２００４／０１０９８６５；ＷＯ ２００３／０８５１１９；ＷＯ ２００３／０８４５７０；ＷＯ ２００５／０３５５８６；ＷＯ ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）；米国特許出願番号ＵＳ ２００３／０１５７１０８ Ａ１，Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；およびＷＯ ２００４／０５６３１２ Ａ１，Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．、特に実施例１１）、およびノックアウト細胞株、例えばアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）；およびＷＯ２００３／０８５１０７）が挙げられる。

【0344】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二等分されている、二等分オリゴ糖を有する。そのような抗体改変体は、フコシル化の減少および／またはＡＤＣＣ機能の改善を有し得る。そのような抗体改変体の例は、例えばＷＯ ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔら）；米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）；およびＵＳ ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体改変体も提供される。そのような抗体改変体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。そのような抗体改変体は、例えばＷＯ １９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌら）；ＷＯ １９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；およびＷＯ １９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。

【0345】

ｇ）Ｆｃ領域改変体
いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、Ｆｃ断片を含む。

【0346】

「Ｆｃ領域」、「Ｆｃドメイン」、「Ｆｃフラグメント」または「Ｆｃ」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端非抗原結合領域を指す。この用語は、天然Ｆｃ領域および改変体Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、重鎖のＣｙｓ２２６からカルボキシル末端まで延在する。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、Ｆｃ領域の構造または安定性に影響を及ぼすことなく、存在しても存在しなくてもよい。本明細書において別段の指定がない限り、ＩｇＧまたはＦｃ領域中のアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されているように、ＥＵインデックスとも呼ばれる抗体のＥＵナンバリングシステムに従う。

【0347】

いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、およびそれらの組み合わせおよびハイブリッドからなる群より選択される免疫グロブリンに由来する。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、およびそれらの組み合わせおよびハイブリッドからなる群より選択される免疫グロブリンに由来する。

【0348】

いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、対応する野生型Ｆｃフラグメントと比較して減少したエフェクター機能（例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のレベルによって測定して、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％または９５％減少したエフェクター機能）を有する。

【0349】

いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片はＩｇＧ１ Ｆｃ断片である。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１ Ｆｃ断片は、Ｌ２３４Ａ突然変異および／またはＬ２３５Ａ突然変異を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１ Ｆｃ断片は、Ｌ２３５Ａ突然変異および／またはＧ２３７Ａ突然変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片はＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃ断片である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａおよび／またはＬ２３５Ａ突然変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ断片である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、Ｎ２９７Ａ突然変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、Ｎ２９７Ｇ突然変異を含む。

【0350】

いくつかの実施形態では、１またはそれを超えるアミノ酸修飾を抗体部分のＦｃ領域に導入し、それによってＦｃ領域改変体を生成することができる。Ｆｃ領域改変体は、１またはそれを超えるアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。

【0351】

いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、すべてではないが一部のエフェクター機能を有し、これにより、インビボでの抗体部分の半減期が重要であるが、特定のエフェクター機能（補体およびＡＤＣＣなど）が不要または有害である適用の望ましい候補となる。ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の減少／枯渇を確認するために、インビトロおよび／またはインビボ細胞傷害アッセイを行うことができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施して、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（したがって、おそらくＡＤＣＣ活性を欠く）が、ＦｃＲｎ結合能を保持することを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現し、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現を、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）の４６４頁の表２に要約する。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９－７０６３（１９８６）を参照）およびＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９－１５０２（１９８５）；５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１（１９８７）を参照）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を使用してもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ；およびＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩを参照のこと）。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替において、または、加えて、目的とする分子のＡＤＣＣ活性は、インビボにおいて、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されるような動物モデルにおいて評価され得る。抗体がＣ１ｑに結合することができず、したがってＣＤＣ活性を欠くことを確認するために、Ｃ１ｑ結合アッセイを行うこともできる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号および国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施することができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２（２００３）；およびＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３（２００４）を参照のこと）。ＦｃＲｎ結合およびインビボでのクリアランス／半減期の決定もまた、当該分野で公知の方法を用いて行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９（２００６）を参照のこと）。

【0352】

エフェクター機能が低下した抗体には、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７および３２９のうちの１またはそれを超える置換がされたものが含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。そのようなＦｃ変異体には、残基２６５および２９７がアラニンに置換されたいわゆる 「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体（米国特許第７，３３２，５８１号）を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７および３２７のうちの２つまたはそれを超える置換を有するＦｃ変異体が含まれる。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、Ｎ２９７Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、Ｎ２９７Ｇ変異を含む。

【0353】

ＦｃＲへの結合が改善または減少した一定の抗体改変体が記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号、およびＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）を参照のこと。）

【0354】

いくつかの実施形態では、ＦｃフラグメントはＩｇＧ１ Ｆｃフラグメントである。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃフラグメントは、Ｌ２３４Ａ変異および／またはＬ２３５Ａ変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃフラグメントは、Ｌ２３５Ａ変異および／またはＧ２３７Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、ＦｃフラグメントはＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃフラグメントである。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａおよび／またはＬ２３５Ａ変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃフラグメントである。

【0355】

いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＡＤＣＣを改善する１またはそれを超えるアミノ酸置換、例えばＦｃ領域の２９８、３３３および／または３３４の位置の置換（残基のＥＵナンバリング）を有するＦｃ領域を含む。

【0356】

いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ ９９／５１６４２、およびＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４（２０００）に記載されるように、Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の変更（すなわち、改善または減少のいずれか）をもたらすＦｃ領域に変更が加えられる。

【0357】

いくつかの実施形態では、Ｆｃ断片は、Ｔｈｒ２５０、Ｍｅｔ２５２、Ｓｅｒ２５４、Ｔｈｅ２５６、Ｔｈｒ３０７。Ｇｌｕ ３８０、Ｍｅｔ４２８、Ｈｉｓ４３３、および／またはＡｓｎ ４３４に１またはそれを超える突然変異を有する。

【0358】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、半減期を変化させるおよび／または新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合を変化させる１またはそれを超えるアミノ酸置換を含む改変体Ｆｃ領域を含む。半減期が増加し、母体ＩｇＧの胎児への移行（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））を担う新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体は、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を変化させる１またはそれを超える置換を有するＦｃ領域を含む。そのようなＦｃ改変体には、１またはそれを超えるＦｃ領域残基（例えばＦｃ領域残基４３４）に置換の置換を有するものが含まれる（米国特許第７，３７１，８２６号）。

【0359】

Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；米国特許第８，１６３，８８１号；およびＦｃ領域改変体の他の例に関するＷＯ ９４／２９３５１も参照のこと。

【0360】

ｈ）システイン操作抗体改変体
いくつかの実施形態では、抗体の１またはそれを超える残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作抗体部分、例えば「チオＭＡｂ」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換残基は、抗体のアクセス可能な部位に存在する。それらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基はそれによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書にさらに記載されるように、抗体を薬物部分またはリンカー－薬物部分などの他の部分にコンジュゲートして免疫コンジュゲートを作製するために使用され得る。いくつかの実施形態では、以下のいずれか１またはそれを超える残基がシステインで置換され得る：重鎖のＡ１１８（ＥＵナンバリング）；および重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵナンバリング）。システイン操作された抗体部分は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されているように生成され得る。

【0361】

ｉ）抗体誘導体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分または構築物は、当技術分野で公知であり、容易に入手可能なさらなる非タンパク質性部分を含むようにさらに修飾され得る。抗体の誘導体化に適した部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、およびデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、およびそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中での安定性のために、製造において利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量であってもよく、分岐していても分岐していなくてもよい。抗体に結合するポリマーの数は様々であり得、１よりも多くのポリマーが結合する場合、それらは同じまたは異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／または種類は、改善される抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が定義された条件下で診断に使用されるかどうかなどを含むがこれらに限定されない考慮事項に基づいて決定することができる。

【0362】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分または構築物は、１またはそれを超える生物学的に活性なタンパク質、ポリペプチドまたはそれらの断片を含むようにさらに改変され得る。「生物活性」または「生物学的に活性」は、本明細書で互換的に使用される場合、特定の機能を実行するための体内の生物学的活性を示すことを意味する。例えば、タンパク質、ＤＮＡなどの特定の生体分子との組み合わせ、次いでそのような生体分子の活性の促進または阻害を意味し得る。いくつかの実施形態では、生物活性タンパク質またはその断片は、疾患または症状の予防または処置のために活性薬物物質として患者に投与されるタンパク質およびポリペプチド、ならびに診断目的に使用されるタンパク質およびポリペプチド、例えば診断試験またはインビトロアッセイで使用される酵素、ならびに疾患を予防するために患者に投与されるタンパク質およびポリペプチド（ワクチンなど）を含む。

【0363】

ＩＩＩ．調製方法
いくつかの実施形態では、ＩＧＦＢＰ７に特異的に結合する抗ＩＧＦＢＰ７構築物または抗体部分、および抗ＩＧＦＢＰ７構築物または抗体部分の調製中に産生されるポリヌクレオチド、核酸構築物、ベクター、宿主細胞、または培養培地などの組成物を調製する方法が提供される。本明細書中に記載される抗ＩＧＦＢＰ７構築物または抗体部分または組成物は、下記において、より具体的には実施例において一般的に記載されるようないくつかのプロセスによって調製され得る。

【0364】

抗体の発現および産生
本明細書に記載される抗ＩＧＦＢＰ７構築物またはその一部（例えば、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分、例えば、抗ＩＧＦＢＰ７二重特異性抗体）は、以下および実施例に記載されるものを含む、当技術分野における任意の公知の方法を使用して調製することができる。

【0365】

単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）
ｓｄＡｂを調製する方法が記載されており、例えば、Ｅｌｓ Ｐａｒｄｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ，２０１４；９（３）：６７４を参照されたい。ｓｄＡｂ（Ｖ_ＨＨなど）は、ラクダ種（ラクダまたはラマなど）を免疫化し、そこからハイブリドーマを得ることなどの当技術分野で公知の方法を使用して、または当技術分野で公知の分子生物学技術を使用して単一ドメイン抗体のライブラリーをクローニングし、その後、選択されていないライブラリーの個々のクローンを用いたＥＬＩＳＡによって、またはファージディスプレイを使用して選択することによって、得ることができる。

【0366】

ｓｄＡｂの組換え産生のために、単一ドメイン抗体をコードする核酸を単離し、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のために複製可能なベクターに挿入する。単一ドメイン抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離され、配列決定される。多くのベクターが利用可能である。ベクターの選択は、使用される宿主細胞に部分的に依存する。一般に、好ましい宿主細胞は、以下に記載されるものを含む、原核生物または真核生物（一般に哺乳動物）起源のものである。

【0367】

モノクローナル抗体
モノクローナル抗体または抗体部分は、実質的に均一な抗体の集団から得ることができ、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る天然に存在する可能性のある突然変異および／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除いて同一である。したがって、修飾語「モノクローナル」は、個別の抗体の混合物ではないという抗体の特徴を示す。例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法を使用して作製され得るか、または組換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号）によって作製され得る。ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物、例えばハムスターまたはラマを上記のように免疫化して、免疫化に使用したタンパク質に特異的に結合する抗体を産生するかまたは産生することができるリンパ球を誘発する。あるいは、リンパ球をインビトロで免疫化することができる。次いで、リンパ球を、ポリエチレングリコールなどの適切な融合剤を使用して骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成するＧｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９－１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）。ラマにおける免疫化については実施例１も参照されたい。

【0368】

免疫化剤は、典型的には、抗原タンパク質またはその融合改変体を含む。一般に、ヒト起源の細胞が望まれる場合は末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）が使用されるか、または、非ヒト哺乳動物供給源が望まれる場合は脾臓細胞もしくはリンパ節細胞が使用される。次いで、ポリエチレングリコールなどの適切な融合剤を使用してリンパ球を不死化細胞株と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する。Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９８６），ｐｐ．５９－１０３。

【0369】

不死化細胞株は、通常、形質転換された哺乳動物細胞、特にげっ歯類、ウシおよびヒト起源の骨髄腫細胞である。通常、ラットまたはマウス骨髄腫細胞株が使用される。このようにして調製されたハイブリドーマ細胞は、好ましくは、融合されていない親骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１またはそれを超える物質を含有する適切な培養培地に播種されて成長する。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマの培養培地には、典型的には、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を妨げる物質であるヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンが含まれる（ＨＡＴ培地）。

【0370】

好ましい不死化骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定した高レベル産生を支持し、ＨＡＴ培地などの培地に感受性であるものである。これらの中でも、ネズミ骨髄腫株、例えば、ＭＯＰＣ－２１およびＭＰＣ－１１マウス腫瘍（Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．ＵＳＡから入手可能）、およびＳＰ－２細胞（およびその誘導体、例えばＸ６３－Ａｇ８－６５３）（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．ＵＳＡ．から入手可能）に由来するものが好ましい。ヒト骨髄腫およびマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７））。

【0371】

ハイブリドーマ細胞が成長している培養培地を、抗原に対するモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって、またはインビトロ結合アッセイ、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって決定される。

【0372】

ハイブリドーマ細胞が培養される培養培地は、所望の抗原に対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイすることができる。好ましくは、モノクローナル抗体の結合親和性および特異性は、免疫沈降によって、またはインビトロ結合アッセイ、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって決定することができる。そのような技術およびアッセイは、当技術分野において公知である。例えば、結合親和性は、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｍｕｎｓｏｎら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）によって決定され得る。

【0373】

所望の特異性、親和性および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定された後、限界希釈手順によってクローンをサブクローニングし、標準的な方法（Ｇｏｄｉｎｇ、上記）によって成長させることができる。この目的に適した培養培地には、例えば、Ｄ－ＭＥＭまたはＲＰＭＩ－１６４０培地が含まれる。さらに、ハイブリドーマ細胞を、哺乳動物において腫瘍としてインビボで成長させることができる。

【0374】

サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＧ－セファロースプロテインＡ－セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって培養培地、腹水、または血清から適切に分離される。

【0375】

モノクローナル抗体はまた、組換えＤＮＡ法、例えば米国特許第４，８１６，５６７号に記載されている方法によって、上記のとおりに作製され得る。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離され、配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましい供給源として働く。単離されると、ＤＮＡは発現ベクターに入れられてもよく、発現ベクターはその後、免疫グロブリンタンパク質を産生しない大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨＥＫ細胞、または骨髄腫細胞（例えばＮＳ０細胞）などの宿主細胞にトランスフェクトされ、そのような組換え宿主細胞においてモノクローナル抗体を合成する。一般に、好ましい宿主細胞は、以下に記載されるものを含む、原核生物または真核生物（一般に哺乳動物）起源のものである。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現に関する総説論文としては、Ｓｋｅｒｒａら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：２５６－２６２（１９９３）およびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１－１８８（１９９２）が挙げられる。

【0376】

さらなる実施形態では、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２－５５４（１９９０）に記載されている技術を使用して生成された抗体ファージライブラリーから抗体を単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１－５９７（１９９１）には、ファージライブラリーを使用したマウス抗体およびヒト抗体の単離がそれぞれ記載されている。その後の刊行物は、鎖シャッフリングによる高親和性（ｎＭ範囲）のヒト抗体の産生（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９－７８３（１９９２））、ならびにコンビナトリアル感染およびインビボ組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２１：２２６５－２２６６（１９９３））を、非常に大きなファージライブラリーを構築するための戦略として記載している。したがって、これらの技術は、モノクローナル抗体を単離するための従来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術の実行可能な代替法である。

【0377】

ＤＮＡはまた、例えば、相同マウス配列の代わりにヒト重鎖定常ドメインおよび軽鎖定常ドメインのコード配列を置換することによって（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１（１９８４））、または非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全部または一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合することによって改変され得る。典型的には、そのような非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常ドメインの代わりに使用されるか、または抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインの代わりに使用されて、抗原に対して特異性を有する１つの抗原結合部位および異なる抗原に対して特異性を有する別の抗原結合部位を含むキメラ二価抗体を作製する。

【0378】

本明細書に記載のモノクローナル抗体は一価であってもよく、その調製は当技術分野で周知である。例えば、１つの方法は、免疫グロブリン軽鎖および改変重鎖の組換え発現を含む。重鎖は、重鎖架橋を防ぐために、一般にＦｃ領域の任意の点でトランケートされる。あるいは、関連するシステイン残基は、架橋を防ぐために、別のアミノ酸残基で置換されていてもよく、または欠失されていてもよい。インビトロ法はまた、一価抗体を調製するのにも適している。そのフラグメント、特にＦａｂフラグメントを産生するための抗体の消化は、当技術分野で公知の日常的な技術を用いて達成することができる。

【0379】

キメラ抗体またはハイブリッド抗体はまた、架橋剤を含む方法を含む合成タンパク質化学における公知の方法を使用してインビトロで調製され得る。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を使用して、またはチオエーテル結合を形成することによって構築され得る。この目的に適した試薬の例としては、イミノチオラートおよびメチル－４－メルカプトブチルイミデートが挙げられる。

【0380】

原核細胞における組換え産生
ａ）ベクターの構築
本出願の抗体をコードするポリ核酸配列は、標準的な組換え技術を用いて得ることができる。所望のポリ核酸配列は、ハイブリドーマ細胞などの抗体産生細胞から単離され、配列決定され得る。あるいは、ヌクレオチド合成装置またはＰＣＲ技術を用いてポリヌクレオチドを合成することができる。一旦得られると、ポリペプチドをコードする配列を、原核生物宿主において異種ポリヌクレオチドを複製および発現することができる組換えベクターに挿入する。本発明の目的のために、当技術分野で入手可能で公知の多くのベクターを使用することができる。適切なベクターの選択は、ベクターに挿入される核酸のサイズおよびベクターで形質転換される特定の宿主細胞に主に依存する。各ベクターは、その機能（異種ポリヌクレオチドの増幅もしくは発現、またはその両方）およびそれが存在する特定の宿主細胞とのその適合性に応じて、様々な成分を含む。ベクター成分には、一般に、複製起点、選択マーカー遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、シグナル配列、異種核酸インサートおよび転写終結配列が含まれるが、これらに限定されない。

【0381】

本発明は、本出願の分泌されて適切に組み立てられた抗体の収率を最大化するために、発現されるポリペプチド成分の定量的比を調節することができる発現系を提供する。そのような調節は、ポリペプチド成分の翻訳強度を同時に調節することによって少なくとも部分的に達成される。翻訳強度を調節するための１つの技術は、Ｓｉｍｍｏｎｓら、米国特許第５，８４０，５２３号に開示されている。それは、シストロン内の翻訳開始領域（ＴＩＲ）の改変体を利用する。所与のＴＩＲについて、一連のアミノ酸または核酸配列改変体を、ある範囲の翻訳強度で作製することができ、それにより、この因子を特定の鎖の所望の発現レベルに調整する簡便な手段が提供される。ＴＩＲ改変体は、アミノ酸配列を変化させることができるコドン変化をもたらす従来の突然変異誘発技術によって生成することができるが、核酸配列のサイレント変化が好ましい。ＴＩＲの変化は、例えば、シャイン－ダルガルノ配列の数または間隔の変化を、シグナル配列の変化と共に含むことができる。変異シグナル配列の生成方法の１つとして、シグナル配列のアミノ酸配列を変化させないコード配列の先頭に「コドンバンク」を生成する方法がある（すなわち、変化はサイレントである）。これは、各コドンの第三のヌクレオチド位置を変更することによって達成することができる。さらに、ロイシン、セリン、およびアルギニンなどのいくつかのアミノ酸は、バンクを作製する際に複雑さを増すことができる複数の第一および第二の位置を有する。

【0382】

好ましくは、その中の各シストロンについてＴＩＲ強度の範囲を有するベクターのセットが生成される。この限られたセットは、様々なＴＩＲ強度の組み合わせの下で、各鎖の発現レベルならびに所望のタンパク質産物の収率の比較を提供する。ＴＩＲ強度は、Ｓｉｍｍｏｎｓらの米国特許第５，８４０，５２３号に詳細に記載されているように、レポーター遺伝子の発現レベルを定量することによって決定することができる。翻訳強度の比較に基づいて、所望の個々のＴＩＲが、本出願の発現ベクター構築物において組み合わされるように選択される。

【0383】

ｂ）原核生物宿主細胞
本出願の抗体を発現するのに適した原核宿主細胞には、古細菌および真正細菌、例えばグラム陰性またはグラム陽性生物が含まれる。有用な細菌の例としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ（例えば、大腸菌）、Ｂａｃｉｌｌｉ（例えば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｅｃｉｅｓ（例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｒｈｉｚｏｂｉａ、Ｖｉｔｒｅｏｓｃｉｌｌａ、またはＰａｒａｃｏｃｃｕｓが挙げられる。いくつかの実施形態では、グラム陰性細胞が使用される。いくつかの実施形態では、大腸菌細胞を本発明の宿主として使用する。大腸菌株の例には、株Ｗ３１１０およびその誘導体が含まれ、遺伝子型Ｗ３１１０ ＡｆｈｕＡ（ＡｔｏｎＡ）ｐｔｒ３ ｌａｃ Ｉｑ ｌａｃＬ８ ＡｏｍｐＴ Ａ（ｎｍｐｃ－ｆｅｐＥ）ｄｅｇＰ４１ ｋａｎ^Ｒ（米国特許第５，６３９，６３５号）を有する株３３Ｄ３が含まれる。大腸菌２９４（ＡＴＣＣ ３１，４４６）、大腸菌Ｂ、大腸菌１７７６（ＡＴＣＣ ３１，５３７）および大腸菌ＲＶ３０８（ＡＴＣＣ ３１，６０８）などの他の株およびその誘導体も適している。これらの例は、限定ではなく例示である。一般に、細菌の細胞内でのレプリコンの複製性を考慮して適切な細菌を選択する必要がある。例えば、ｐＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５、ｐＡＣＹＣ１７７またはｐＫＮ４１０などの周知のプラスミドを用いてレプリコンを供給する場合、大腸菌、セラチアまたはサルモネラ種を宿主として好適に用いることができる。

【0384】

典型的には、宿主細胞は最小量のタンパク質分解酵素を分泌すべきであり、さらなるプロテアーゼ阻害剤が望ましくは細胞培養物に組み込まれ得る。

【0385】

ｃ）タンパク質産生
宿主細胞を上記の発現ベクターで形質転換し、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために適切に改変された従来の栄養培地で培養する。形質転換は、ＤＮＡが染色体外要素としてまたは染色体組込み剤によって複製可能であるように、ＤＮＡを原核生物宿主に導入することを意味する。使用される宿主細胞に応じて、形質転換は、そのような細胞に適した標準的な技術を使用して行われる。塩化カルシウムを使用するカルシウム処理は、一般に、実質的な細胞壁バリアを含む細菌細胞に使用される。形質転換のための別の方法は、ポリエチレングリコール／ＤＭＳＯを使用する。使用されるさらに別の技術はエレクトロポレーションである。

【0386】

宿主細胞を上記の発現ベクターで形質転換し、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために適切に改変された従来の栄養培地で培養する。形質転換は、ＤＮＡが染色体外要素としてまたは染色体組込み剤によって複製可能であるように、ＤＮＡを原核生物宿主に導入することを意味する。使用される宿主細胞に応じて、形質転換は、そのような細胞に適した標準的な技術を使用して行われる。塩化カルシウムを使用するカルシウム処理は、一般に、実質的な細胞壁バリアを含む細菌細胞に使用される。形質転換のための別の方法は、ポリエチレングリコール／ＤＭＳＯを使用する。使用されるさらに別の技術はエレクトロポレーションである。

【0387】

本出願の抗体を産生するために使用される原核細胞は、当該分野で公知であり、選択された宿主細胞の培養に適した培地中で増殖される。適切な培地の例としては、ルリアブロス（ＬＢ）＋必要な栄養補助剤が挙げられる。いくつかの実施形態では、培地はまた、発現ベクターを含有する原核細胞の成長を選択的に可能にするために、発現ベクターの構築に基づいて選択される選択剤を含有する。例えば、アンピシリン耐性遺伝子を発現する細胞の増殖のためにアンピシリンを培地に添加する。

【0388】

ｄ）タンパク質精製
本明細書で製造された構築物またはその一部をさらに精製して、さらなるアッセイおよび使用のために実質的に均一な調製物を得る。当技術分野で公知の標準的なタンパク質精製方法を使用することができる。以下の手順は、適切な精製手順の例である：免疫親和性またはイオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカまたはカチオン交換樹脂、例えばＤＥＡＥでのクロマトグラフィ、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、硫酸アンモニウム沈殿、および例えばＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５を使用したゲル濾過。

【0389】

いくつかの実施形態では、固相に固定化されたプロテインＡは、本出願のＦｃ領域を含む抗体の免疫親和性精製に使用される。プロテインＡは、４１１（抗体のＦｃ領域に高い親和性で結合するＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅａｓ由来のＤ細胞壁タンパク質である（Ｌｉｎｄｍａｒｋ ｅｔ ａｌ（１９８３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２：１－１３）。プロテインＡが固定される固相は、好ましくはガラスまたはシリカ表面を含むカラム、より好ましくは細孔制御ガラスカラムまたはケイ酸カラムである。いくつかの用途では、カラムは、汚染物質の非特異的付着を防止するためにグリセロールなどの試薬でコーティングされている。次いで、固相を洗浄して、固相に非特異的に結合した汚染物質を除去する。最後に、目的の抗体を溶出によって固相から回収する。

【0390】

真核細胞における組換え産生
真核生物発現の場合、ベクター成分には、一般に、シグナル配列、複製起点、１またはそれを超えるマーカー遺伝子、ならびにエンハンサーエレメント、プロモーターおよび転写終結配列のうちの１またはそれを超えるものが含まれるが、これらに限定されない。

【0391】

ａ）シグナル配列成分
真核生物宿主で使用するためのベクターはまた、成熟タンパク質またはポリペプチドのＮ末端に特異的切断部位を有するシグナル配列または他のポリペプチドをコードする挿入であってもよい。選択される異種シグナル配列は、好ましくは、宿主細胞によって認識され処理される（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される）ものである。哺乳動物細胞発現では、哺乳動物シグナル配列ならびにウイルス分泌リーダー、例えば単純ヘルペスｇＤシグナルが利用可能である。

【0392】

そのような前駆体領域のＤＮＡは、本出願の抗体をコードするＤＮＡにリーディングフレームで連結される。

【0393】

ｂ）複製起点
一般に、複製起点成分は哺乳動物発現ベクターに必要とされない（ＳＶ４０起点は、典型的には、初期プロモーターを含有するためにのみ使用され得る）。

【0394】

ｃ）選択遺伝子成分
発現ベクターおよびクローニングベクターは、選択マーカーとも呼ばれる選択遺伝子を含み得る。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質または他の毒素、例えばアンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサートもしくはテトラサイクリンに対する耐性を付与する、（ｂ）栄養要求性欠損を補完する、または（ｃ）複合培地から利用できない重要な栄養素を供給する（例えばバチルスのＤ－アラニンラセマーゼをコードする遺伝子）、タンパク質をコードする。

【0395】

ｄ）プロモーター成分
発現ベクターおよびクローニングベクターは通常、宿主生物によって認識され、所望のポリペプチド配列をコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含有する。実質的にすべての真核生物遺伝子は、転写が開始される部位から約２５～３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を有する。多くの遺伝子の転写開始から７０空８０塩基上流に見出される別の配列は、ＣＮＣＡＡＴ領域である（Ｎは任意のヌクレオチドであり得る）。ほとんどの真核生物の３’末端には、コード配列の３’末端にポリＡテールを付加するためのシグナルであり得るＡＡＴＡＡＡ配列がある。これらの配列はすべて、真核生物発現ベクターに挿入され得る。

【0396】

原核生物宿主との使用に適した他のプロモーターには、ｐｈｏＡプロモーター、－ラクタマーゼおよびラクトースプロモーター系、アルカリホスファターゼプロモーター、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ならびにｔａｃプロモーターなどのハイブリッドプロモーターが含まれる。しかしながら、他の公知の細菌プロモーターが好適である。細菌系で使用するためのプロモーターはまた、抗体をコードするＤＮＡに作動可能に連結されたシャイン－ダルガノ（Ｓ．Ｄ．）配列を含む。

【0397】

哺乳動物宿主細胞におけるベクターからのポリペプチド転写は、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（アデノウイルス２など）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、最も好ましくはシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）などのウイルスのゲノムから得られるプロモーター、異種哺乳動物プロモーター、例えばアクチンプロモーターまたは免疫グロブリンプロモーターから得られるプロモーター、熱ショックプロモーターから得られるプロモーターによって制御されるが、ただし、そのようなプロモーターが宿主細胞系と適合性であることを条件とする。

【0398】

ｅ）エンハンサーエレメント成分
高等真核生物による本出願の抗体をコードするＤＮＡの転写は、エンハンサー配列をベクターに挿入することによって増加することが多い。現在、多くのエンハンサー配列が哺乳動物遺伝子から知られている（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α－フェトプロテイン、インスリン）。しかしながら、典型的には、真核細胞ウイルス由来のエンハンサーを使用する。例としては、複製起点の後期側のＳＶ４０エンハンサー（１００～２７０ｂｐ）、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期側のポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。エンハンサーは、ポリペプチドをコードする配列の５’または３’の位置でベクターにスプライシングされ得るが、好ましくはプロモーターから５’の部位に位置する。

【0399】

ｆ）転写終結成分
真核生物宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、または他の多細胞生物からの有核細胞）で使用される発現ベクターはまた、転写の終結およびｍＲＮＡの安定化に必要な配列を含む。そのような配列は、真核生物またはウイルスのＤＮＡまたはｃＤＮＡの５’および場合により３’の非翻訳領域から一般に入手可能である。これらの領域は、ポリペプチドコードｍＲＮＡの非翻訳部分においてポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含有する。１つの有用な転写終結成分は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。国際公開第９４／１１０２６号およびそこに開示されている発現ベクターを参照されたい。

【0400】

ｇ）宿主細胞の選択および形質転換
本明細書のベクター中のＤＮＡのクローニングまたは発現に適した宿主細胞には、脊椎動物宿主細胞を含む本明細書に記載の高等真核生物細胞が含まれる。培養（組織培養）における脊椎動物細胞の増殖は、日常的な手順となっている。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胎児腎系統（懸濁培養での増殖のためにサブクローニングされた２９３または２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ，Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０））；サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）；アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲ１細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２））；ＭＲＣ ５細胞；ＦＳ４細胞；およびヒト肝癌株（Ｈｅｐ Ｇ２）である。

【0401】

宿主細胞を抗体産生のための上記の発現ベクターまたはクローニングベクターで形質転換し、プロモーターの誘導、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために適切に改変された従来の栄養培地で培養する。

【0402】

ｈ）宿主細胞の培養
本出願の抗体を産生するために使用される宿主細胞は、様々な培地中で培養され得る。Ｈａｍ’ｓ Ｆ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）、およびダルベッコ改変イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）などの市販の培地は、宿主細胞の培養に適している。培地には、必要に応じて、ホルモンおよび／または他の成長因子（インスリン、トランスフェリン、または上皮成長因子など）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、リン酸塩など）、緩衝液（ＨＥＰＥＳなど）、ヌクレオチド（アデノシンおよびチミジンなど）、抗生物質（ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬物など）、微量元素（通常、マイクロモル範囲の最終濃度で存在する無機化合物として定義される）、ならびにグルコースまたは同等のエネルギー源が補充され得る。任意の他の必要な補助剤もまた、当業者に知られているであろう適切な濃度で含まれ得る。温度、ｐＨなどの培養条件は、発現のために選択された宿主細胞で以前に使用されたものであり、当業者には明らかであろう。

【0403】

いくつかの実施形態では、グルタミンシンテターゼ（ＧＳ）－ＣＨＯ発現系は、宿主細胞を培養するため、および／または本明細書に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物もしくはその一部を発現させるために使用される。例えば、Ｆａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１３ Ｄｅｃ；１６８（４）：６５２－８を参照のこと。

【0404】

ｉ）タンパク質精製
組換え技術を使用する場合、抗体は、細胞内で、ペリプラズム空間で産生され得るか、または培地中に直接分泌され得る。抗体が細胞内で産生される場合、第一の工程として、宿主細胞または溶解された断片のいずれかの粒子状残屑を、例えば遠心分離または限外濾過によって除去する。Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３－１６７（１９９２）は、大腸菌のペリプラズム空間に分泌される抗体を単離するための手順を記載している。簡潔には、細胞ペーストを、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡおよびフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下で約３０分間にわたって解凍する。細胞残屑は、遠心分離によって除去することができる。抗体が培地に分泌される場合、そのような発現系からの上清は、一般に、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えばＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して最初に濃縮される。ＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤が、タンパク質分解を阻害するために前述の工程のいずれかに含まれてもよく、抗生物質が、偶発的な汚染物質の増殖を防止するために含まれてもよい。

【0405】

細胞から調製されたタンパク質組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析、マルチモーダルクロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、およびアフィニティークロマトグラフィを使用して精製することができ、アフィニティークロマトグラフィが好ましい精製技術である。アフィニティーリガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依存する。プロテインＡは、１、２または４重鎖を含有するヒト免疫グロブリンに基づく抗体を精製するために使用することができる。プロテインＧは、すべてのマウスアイソタイプおよびヒト３に推奨される。アフィニティーリガンドが結合しているマトリックスは、ほとんどの場合アガロースであるが、他のマトリックスも利用可能である。細孔制御ガラスまたはポリ（スチレン－ジビニル）ベンゼンなどの機械的に安定なマトリックスは、アガロースで達成できるよりも速い流速および短い処理時間を可能にする。抗体がＣ_Ｈ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸＴＭ樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，Ｎ．Ｊ．）は精製に有用である。タンパク質精製のための他の技術、例えば、限外濾過／ダイアフィルトレーション（ＵＦ／ＤＦ）、イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィ、ヘパリンでのクロマトグラフィ、陰イオン交換樹脂または陽イオン交換樹脂（例えば、ポリアスパラギン酸カラム）でのＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）クロマトグラフィ、疎水性樹脂でのクロマトグラフィ、混合モード樹脂でのクロマトグラフィ、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよび硫酸アンモニウム沈殿もまた、回収される抗体に応じて利用可能である。

【0406】

任意の予備精製工程（複数可）に続いて、目的の抗体および夾雑物を含む混合物を、約２．５～４．５のｐＨの溶出緩衝液を使用して、好ましくは低塩濃度（例えば、約０～０．２５Ｍの塩）で実施する低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィに供することができる。イオン交換は、研磨工程にも使用されることが多い。

【0407】

ヒト化抗体
非ヒト抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２または抗体の他の抗原結合部分配列）である。ヒト化抗体には、レシピエントのＣＤＲ由来の残基が、所望の特異性、親和性および能力を有するマウス、ラット、ウサギ、ラクダまたはラマなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基で置き換えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）が含まれる。いくつかの例において、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体にもインポートされたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見られない残基を含むことができる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含むことができ、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（典型的にはヒト免疫グロブリンのもの）の少なくとも一部を含む。例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３－３２９（１９８８）；Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３－５９６（１９９２）を参照のこと。

【0408】

非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当技術分野で周知である。一般に、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源から導入された１またはそれを超えるアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基はしばしば「インポート」残基と呼ばれ、これは典型的には「インポート」可変ドメインから取られる。ヒト化は、本質的に、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６（１９８８））の方法に従って、または齧歯類ＣＤＲもしくはＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列に置換することによって、行うことができる。したがって、そのような「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインよりも実質的に少ないものが非ヒト種由来の対応する配列によって置換されているキメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号）である。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかのＣＤＲ残基および場合によってはいくつかのＦＲ残基が齧歯類抗体の類似部位からの残基によって置換されているヒト抗体である。

【0409】

ヒト化抗体を作製する際に使用されるヒト可変ドメイン（軽鎖および重鎖の両方）の選択は、抗原性を低下させるために非常に重要である。いわゆる「ベストフィット」法によれば、齧歯類抗体の可変ドメインの配列は、既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングされる。次いで、齧歯動物の配列に最も近いヒト配列が、ヒト化抗体のヒトフレームワーク（ＦＲ）として受け入れられる。Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループのすべてのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークがいくつかの異なるヒト化抗体に使用され得る。

【0410】

抗原に対する高い親和性および他の好ましい生物学的特性を保持して抗体をヒト化することがさらに重要である。この目的を達成するために、好ましい方法によれば、ヒト化抗体は、親配列およびヒト化配列の三次元モデルを使用して親配列および様々な概念的ヒト化産物を分析するプロセスによって調製される。三次元免疫グロブリンモデルは一般に入手可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の可能性のある三次元立体配座構造を図示および表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらのディスプレイの検査は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性のある役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基の分析を可能にする。このようにして、ＦＲ残基は、標的抗原（複数可）に対する親和性の増加などの所望の抗体特性が達成されるように、レシピエント配列およびインポート配列から選択され、組み合わされ得る。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合への影響に直接的かつ最も実質的に関与する。

【0411】

いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂは、抗原に対するドメインの天然の親和性を低下させることなく、異種の種に関してその免疫原性を低下させながら、ヒト化など改変される。例えば、ラマ抗体の抗体可変ドメイン（Ｖ_ＨＨ）のアミノ酸残基を決定することができ、例えばフレームワーク領域内のラクダ科のアミノ酸の１またはそれを超えるものが、そのポリペプチドがその典型的な特徴を失うことなく、ヒトコンセンサス配列に見られるそれらのヒト対応物によって置き換えられ、すなわちヒト化は、得られるポリペプチドの抗原結合能に有意に影響しない。ラクダ科ｓｄＡｂのヒト化には、単一のポリペプチド鎖における限られた量のアミノ酸の導入および突然変異誘発が必要である。これは、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２およびＩｇＧのヒト化とは対照的であり、これは、軽鎖および重鎖の２つの鎖におけるアミノ酸変化の導入および両鎖のアセンブリの保存を必要とする。

【0412】

ヒト抗体
ヒト化の代替として、ヒト抗体を作製することができる。例えば、現在、免疫化すると、内因性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の完全なレパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を産生することが可能である。例えば、キメラ変異マウスおよび生殖系列変異マウスにおける抗体重鎖結合領域（Ｊ_Ｈ）遺伝子のホモ接合性欠失は、内因性抗体産生の完全な阻害をもたらすことが記載されている。そのような生殖系列変異マウスへのヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移入は、抗原負荷時にヒト抗体の産生をもたらす。

【0413】

あるいは、ファージディスプレイ技術を使用して、非免疫化ドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、インビトロでヒト抗体および抗体断片を同定することができる。ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５３（１９９０）；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１（１９９１）。

【0414】

ヒト抗体はまた、インビトロ活性化Ｂ細胞（米国特許第５，５６７，６１０号明細書および米国特許第５，２２９，２７５号明細書を参照されたい）によって、またはファージディスプレイライブラリーを含む当技術分野で公知の様々な技術を使用することによって作製され得る（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）。

【0415】

抗体部分をコードする核酸分子
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物または抗体部分のいずれか１つをコードするポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載されるような方法のいずれか１つを使用して調製されるポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、核酸分子は、本明細書に記載の抗ＩＧＦＢＰ７単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、翻訳されるとｓｄＡｂのＮ末端に位置するリーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含む。

【0416】

いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドはＤＮＡである。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドはＲＮＡである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡはｍＲＮＡである。

【0417】

核酸分子は、当技術分野で従来の組換えＤＮＡ技術を使用して構築され得る。いくつかの実施形態では、核酸分子は、選択された宿主細胞における発現に適した発現ベクターである。

【0418】

核酸構築物
いくつかの実施形態では、本明細書中に記載されるポリヌクレオチドのいずれか１つを含む核酸構築物が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の方法を使用して調製された核酸構築物が提供される。

【0419】

いくつかの実施形態では、核酸構築物は、ポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは遺伝子に対応し、プロモーターは遺伝子の野生型プロモーターである。

【0420】

ベクター
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体部分（例えば、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分）または本明細書に記載の核酸構築物のいずれか１つをコードする任意のポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の方法を使用して調製されたベクターが提供される。抗ＩＧＦＢＰ７ ｓｄＡｂ、融合タンパク質または本明細書に記載される構築物の他の形態などの抗ＩＧＦＢＰ７構築物のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含むベクターも提供される。そのようなベクターとしては、限定されないが、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどが挙げられる。

【0421】

いくつかの実施形態では、ＣＨＯもしくはＣＨＯ由来細胞またはＮＳＯ細胞におけるポリペプチドの発現に最適化されたベクターが選択される。例示的なそのようなベクターは、例えば、Ｒｕｎｎｉｎｇ Ｄｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：８８０－８８９（２００４）に記載されている。

【0422】

宿主細胞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意のポリペプチド、核酸構築物および／またはベクターを含む宿主細胞が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の方法を使用して調製された宿主細胞が提供される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、発酵条件下で、本明細書に記載の抗体部分のいずれかを産生することができる。

【0423】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体部分（例えば、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分）は、原核細胞、例えば細菌細胞；または真核細胞、例えば真菌細胞（酵母など）、植物細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞で発現され得る。そのような発現は、例えば、当技術分野で公知の手順に従って行われ得る。ポリペプチドを発現するために使用され得る例示的な真核細胞には、ＣＯＳ７細胞を含むＣＯＳ細胞；２９３－６Ｅ細胞を含む２９３細胞；ＣＨＯ－Ｓ、ＤＧ４４。Ｌｅｃ１３ ＣＨＯ細胞、ＦＵＴ８ ＣＨＯ細胞、およびＣＨＯ ＧＳ細胞（Ｓｉｇｍａ）を含むＣＨＯ細胞；ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）；およびＮＳＯ細胞が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体部分（例えば、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分）は、酵母で発現され得る。例えば、米国特許出願公開第２００６／０２７００４５号を参照されたい。いくつかの実施形態では、特定の真核宿主細胞は、抗体部分または構築物に所望の翻訳後修飾を行う能力に基づいて選択される。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞で産生される同じポリペプチドよりも高いレベルのシアリル化を有するポリペプチドを産生する。

【0424】

所望の宿主細胞への１またはそれを超える核酸の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染などを含むがこれらに限定されない任意の方法によって達成され得る。非限定的な例示的方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（２００１）に記載されている。核酸は、任意の適切な方法に従って、所望の宿主細胞に一過性または安定にトランスフェクトされ得る。

【0425】

本出願はまた、本明細書中に記載されるポリヌクレオチドまたはベクターのいずれかを含む宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＩＧＦＢＰ７抗体を含む宿主細胞を提供する。目的の抗体、ポリペプチドまたはタンパク質をコードする遺伝子を単離する目的で、異種ＤＮＡを過剰発現することができる任意の宿主細胞を使用することができる。哺乳動物宿主細胞の非限定的な例には、ＣＯＳ、ＨｅＬａおよびＣＨＯ細胞が含まれるが、これらに限定されない。ＰＣＴ公開番号ＷＯ８７／０４４６２も参照されたい。適切な非哺乳動物宿主細胞には、原核生物（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはＢ．ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）および酵母（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓａｅ、Ｓ．ｐｏｍｂｅ；またはＫ．ｌａｃｔｉｓ）が含まれる。

【0426】

いくつかの実施形態では、抗体部分は無細胞系で産生される。非限定的な例示的な無細胞系は、例えば、Ｓｉｔａｒａｍａｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４９８：２２９－４４（２００９）；Ｓｐｉｒｉｎ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：５３８－４５（２００４）；Ｅｎｄｏら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．２１：６９５－７１３（２００３）に記載されている。

【0427】

培養培地
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の抗体部分、ポリヌクレオチド、核酸構築物、ベクター、および／または宿主細胞を含む培養培地が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の方法を使用して調製された培養培地が提供される。

【0428】

いくつかの実施形態では、培地は、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよび／またはチミジン（例えば、ＨＡＴ媒体）を含む。いくつかの実施形態では、培地は血清を含まない。いくつかの実施形態では、培地は化学的に定義される。いくつかの実施形態では、培地は血清を含む。いくつかの実施形態では、培地はＤ－ＭＥＭまたはＲＰＭＩ－１６４０培地である。

【0429】

抗体部分の精製
抗ＩＧＦＢＰ７構築物（例えば、抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体）は、任意の適切な方法によって精製され得る。そのような方法には、アフィニティーマトリックスまたは疎水性相互作用クロマトグラフィの使用が含まれるが、これらに限定されない。適切なアフィニティーリガンドとしては、ＲＯＲ１ ＥＣＤおよび抗体定常領域に結合するリガンドが挙げられる。例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ、抗体アフィニティカラム、または限外濾過／ダイアフィルトレーション（ＵＦ／ＤＦ）を使用して定常領域に結合し、Ｆｃ断片を含む抗ＩＧＦＢＰ７構築物を精製することができる。疎水性相互作用クロマトグラフィ、例えばブチルまたはフェニルカラムもまた、抗体などのいくつかのポリペプチドの精製に適し得る。イオン交換クロマトグラフィ（例えば、陰イオン交換クロマトグラフィおよび／または陽イオン交換クロマトグラフィ）もまた、抗体などのいくつかのポリペプチドの精製に適し得る。混合モードクロマトグラフィ（例えば、逆相／陰イオン交換、逆相／陽イオン交換、親水性相互作用／陰イオン交換、親水性相互作用／陽イオン交換など）もまた、抗体などのいくつかのポリペプチドの精製にも適し得る。ポリペプチドを精製する多くの方法が当技術分野で公知である。

【0430】

Ｖ．処置方法
個体における疾患または症状を処置する方法もここに提供される。本方法は、本明細書に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物を個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与することを含む。

【0431】

いくつかの実施形態では、疾患もしくは症状（例えば癌、例えば固形腫瘍）を処置するか、または組織における異常な血管成長を阻害する方法であって、個体に、有効量の抗ＩＧＦＢＰ７構築物（本明細書に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物のいずれかなど）を投与することを含む方法が提供される。

【0432】

いくつかの実施形態では、個体における組織内の異常な血管成長を阻害する方法であって、個体に、有効量の抗ＩＧＦＢＰ７構築物（本明細書に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物のいずれかなど）を投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、個体は、癌（固形腫瘍など）を有する。いくつかの実施形態では、組織は癌・／腫瘍組織である。

【0433】

いくつかの実施形態では、個体における疾患もしくは症状（例えば、癌、例えば、固形腫瘍）を処置するかまたは組織における異常な血管成長を阻害する方法であって、抗ＰＤ－Ｌ１全長抗体に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（例えば、本明細書に記載の抗体部分のいずれか）を含む有効量の抗ＩＧＦＢＰ７構築物を個体に投与することを含む方法が提供され、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲにおいて最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３２～３３および４６～４８のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0434】

いくつかの実施形態では、個体における疾患もしくは症状（例えば、癌、例えば、固形腫瘍）を処置するかまたは組織における異常な血管成長を阻害する方法であって、抗ＰＤ－Ｌ１全長抗体に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（例えば、本明細書に記載の抗体部分のいずれか）を含む有効量の抗ＩＧＦＢＰ７構築物を個体に投与することを含む方法が提供され、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲにおいて最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３４および４９～５１のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0435】

いくつかの実施形態では、個体における疾患もしくは症状（例えば、癌、例えば、固形腫瘍）を処置するかまたは組織における異常な血管成長を阻害する方法であって、抗ＰＤ－Ｌ１全長抗体に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（例えば、本明細書に記載の抗体部分のいずれか）を含む有効量の抗ＩＧＦＢＰ７構築物を個体に投与することを含む方法が提供され、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲにおいて最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３３および３５～５７のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0436】

いくつかの実施形態では、個体における疾患もしくは症状（例えば、癌、例えば、固形腫瘍）を処置するかまたは組織における異常な血管成長を阻害する方法であって、抗ＰＤ－Ｌ１全長抗体に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（例えば、本明細書に記載の抗体部分のいずれか）を含む有効量の抗ＩＧＦＢＰ７構築物を個体に投与することを含む方法が提供され、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲにおいて最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３８および３９のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0437】

いくつかの実施形態では、個体における疾患もしくは症状（例えば、癌、例えば、固形腫瘍）を処置するかまたは組織における異常な血管成長を阻害する方法であって、抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＰＤ－１全長抗体に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（例えば、本明細書に記載の抗体部分のいずれか）を含む有効量の抗ＩＧＦＢＰ７構築物を個体に投与することを含む方法が提供され、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲにおいて最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３２～３３および４６～４８のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0438】

いくつかの実施形態では、個体における疾患もしくは症状（例えば、癌、例えば、固形腫瘍）を処置するかまたは組織における異常な血管成長を阻害する方法であって、抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＰＤ－１全長抗体に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（例えば、本明細書に記載の抗体部分のいずれか）を含む有効量の抗ＩＧＦＢＰ７構築物を個体に投与することを含む方法が提供され、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲにおいて最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３４および４９～５１のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0439】

いくつかの実施形態では、個体における疾患もしくは症状（例えば、癌、例えば、固形腫瘍）を処置するかまたは組織における異常な血管成長を阻害する方法であって、抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＰＤ－１全長抗体に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（例えば、本明細書に記載の抗体部分のいずれか）を含む有効量の抗ＩＧＦＢＰ７構築物を個体に投与することを含む方法が提供され、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲにおいて最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３５～３７のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0440】

いくつかの実施形態では、個体における疾患もしくは症状（例えば、癌、例えば、固形腫瘍）を処置するかまたは組織における異常な血管成長を阻害する方法であって、抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＰＤ－１全長抗体に融合した抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分（例えば、本明細書に記載の抗体部分のいずれか）を含む有効量の抗ＩＧＦＢＰ７構築物を個体に投与することを含む方法が提供され、抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分は、配列番号１０もしくは１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲにおいて最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含む。いくつかの実施形態では、ｓｄＡｂ部分は、配列番号３８および３９のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む。

【0441】

いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。

【0442】

疾患または症状
本明細書に記載の方法は、異常な血管構造に関連する任意の疾患または症状に適用可能である。いくつかの実施形態では、疾患または症状は加齢黄斑変性（ＡＲＭＤ）である。いくつかの実施形態では、疾患または症状は皮膚乾癬である。いくつかの実施形態では、疾患または症状は良性腫瘍である。いくつかの実施形態では、疾患または症状は癌である。

【0443】

癌
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される疾患または症状は、癌である。本明細書中に記載される方法のいずれかを使用して処置され得る癌には、任意のタイプの癌が含まれる。本出願に記載の薬剤で処置される癌のタイプには、癌腫、芽細胞腫、肉腫、良性および悪性腫瘍、ならびに悪性腫瘍、例えば肉腫、癌腫、および黒色腫が含まれるが、これらに限定されない。成人腫瘍／癌および小児腫瘍／癌も含まれる。

【0444】

様々な実施形態において、癌は、早期癌、非転移性癌、原発性癌、進行癌、局所進行癌、転移性癌、寛解状態の癌、再発性癌、アジュバント環境における癌、ネオアジュバント環境における癌、または治療に対して実質的に抵抗性の癌である。

【0445】

いくつかの実施形態では、癌は固形腫瘍である。

【0446】

いくつかの実施形態では、癌は、ＣＤ９３＋腫瘍内皮細胞を含む。いくつかの実施形態では、腫瘍中の内皮細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％がＣＤ９３陽性である。いくつかの実施形態では、癌は、対象の正常組織よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＣＤ９３＋内皮細胞を含む。いくつかの実施形態では、癌は、癌を有しない対象または対象の群における対応する臓器よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＣＤ９３＋内皮細胞を含む。

【0447】

いくつかの実施形態では、癌はＩＧＦＢＰ７＋血管を含む。いくつかの実施形態では、癌は、対象の正常組織よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＩＧＦＢＰ７＋血管を含む。いくつかの実施形態では、癌は、癌を有しない対象または対象の群における対応する臓器よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＩＧＦＢＰ７＋血管を含む。

【0448】

いくつかの実施形態では、癌（例えば、固形腫瘍）は、腫瘍低酸素症を特徴とする。いくつかの実施形態では、癌は、少なくとも約１％、２％、３％、４％、または５％のピモニダゾール陽性率（すなわち、ピモニダゾール陽性面積を全腫瘍面積で割ったもの）を特徴とする。

【0449】

本出願の方法によって処置され得る癌の例としては、限定されないが、肛門癌、星細胞腫（例えば、小脳および大脳）、基底細胞癌腫、膀胱癌腫、骨癌、（骨肉腫および悪性線維性組織球腫）、脳腫瘍（例えば、神経膠腫、脳幹神経膠腫、小脳または大脳星細胞腫（例えば、星状細胞腫、悪性神経膠腫、髄芽腫および神経膠芽腫）、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌（例えば、子宮癌）、食道癌、眼癌（例えば、眼内黒色腫および網膜芽細胞腫）、胃部（胃）癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、頭頸部癌、肝細胞（肝臓）癌（例えば、肝癌腫および肝細胞腫）、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、および肺の扁平上皮癌腫）、髄芽腫、黒色腫、中皮腫、骨髄異形成症候群、鼻咽頭癌、神経芽腫、卵巣癌、膵臓癌、副甲状腺癌、腹膜の癌、下垂体腫瘍、直腸癌、腎癌、腎盂および尿管癌（移行細胞癌）、横紋筋肉腫、皮膚癌（例えば、非黒色腫（例えば、扁平上皮癌）、黒色腫およびメルケル細胞癌腫）、小腸癌、扁平上皮癌、精巣癌、甲状腺癌、および結節性硬化症が挙げられる。癌のさらなる例は、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，１９ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，§ｏｎ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｍｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ＆Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ．，２０１１（ＩＳＢＮ ９７８－０－９１１９１０－１９－３）；Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，§ｏｎ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｍｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ＆Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ．，２０１８（ＩＳＢＮ ９７８－０－９１１－９１０４２－１）（Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌｓのインターネット・ウェブサイトの２０１８ 年デジタルオンライン版）；およびＳＥＥＲ Ｐｒｏｇｒａｍ Ｃｏｄｉｎｇ ａｎｄ Ｓｔａｇｉｎｇ Ｍａｎｕａｌ ２０１６に見出すことができ、これらはそれぞれ、あらゆる目的のためにその全体が参照により組み込まれる。

【0450】

対象
いくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物（ヒトなど）である。

【0451】

いくつかの実施形態では、対象は、ＣＤ９３＋内皮細胞を含む異常な血管を含む組織を有する。いくつかの実施形態では、異常な血管を有する組織中の内皮細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％がＣＤ９３陽性である。いくつかの実施形態では、異常な血管を有する組織は、対象の正常組織よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＣＤ９３＋内皮細胞を含む。いくつかの実施形態では、異常な血管を有する組織は、異常な血管を有しない対象または対象の群における対応する臓器よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＣＤ９３＋内皮細胞を含む。

【0452】

いくつかの実施形態では、対象は、ＩＧＦＢＰ７＋血管を含む異常な血管を含む組織を有する。いくつかの実施形態では、組織は、対象の正常組織よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＩＧＦＢＰ７＋血管を含む。いくつかの実施形態では、組織は、異常な血管を有しない対象または対象の群における対応する臓器よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＩＧＦＢＰ７＋血管を含む。

【0453】

いくつかの実施形態では、対象は、異常な血管構造に基づく処置のために選択される。いくつかの実施形態では、異常な血管構造は、ＣＤ９３＋内皮細胞を特徴とする（例えば、ＣＤ９３＋ＣＤ３１＋細胞を測定することによる）。いくつかの実施形態では、異常な血管を有する組織中の内皮細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％がＣＤ９３陽性である。いくつかの実施形態では、異常な血管を有する組織は、対象の正常組織よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＣＤ９３＋内皮細胞を含む。いくつかの実施形態では、異常な血管を有する組織は、異常な血管を有しない対象または対象の群における対応する臓器よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＣＤ９３＋内皮細胞を含む。

【0454】

いくつかの実施形態では、異常な血管構造は、ＩＧＦＢＰ７＋血管の異常なレベルを特徴とする。いくつかの実施形態では、組織は、対象の正常組織よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＩＧＦＢＰ７＋血管を含む。いくつかの実施形態では、組織は、異常な血管を有しない対象または対象の群における対応する臓器よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＩＧＦＢＰ７＋血管を含む。

【0455】

抗ＩＧＦＢＰ７構築物の投薬および投与方法
個体に投与される本明細書に記載の疾患または障害を処置するために使用される抗ＩＧＦＢＰ７構築物の投薬レジメン（特定の投薬量および頻度など）は、特定の抗ＩＧＦＢＰ７構築物（例えば、抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体、例えば、抗ＩＧＦＢＰ７融合タンパク質）、投与様式、および処置される疾患または症状の種類によって異なり得る。いくつかの実施形態では、疾患または症状の種類は癌である。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、客観的応答（部分応答または完全応答など）をもたらすのに有効な量である。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、個体において完全応答をもたらすのに十分な量である。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、個体において部分応答をもたらすのに十分な量である。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）で処置された個体の集団の中で、約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６４％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、または９０％のいずれかを超える全奏効率をもたらすのに十分な量である。本明細書中に記載される方法の処置に対する個体の応答を、例えば、ＲＥＣＩＳＴレベルに基づいて決定することができる。

【0456】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、個体の無増悪生存期間を延長するのに十分な量である。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、個体の全生存期間を延長するのに十分な量である。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）で処置された個体の集団の中で、約５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％のいずれかを超える臨床的利益をもたらすのに十分な量である。

【0457】

いくつかの実施形態では、単独でのまたは第二、第三および／もしくは第四の薬剤と組み合わせた抗ＩＧＦＢＰ７構築物（抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、処置前の同じ対象の対応する腫瘍サイズ、癌細胞の数、または腫瘍成長速度と比較して、または処置を受けていない（例えば、プラセボ処置を受けている）他の対象の対応する活性と比較して、腫瘍のサイズを減少させる、癌細胞の数を減少させる、または腫瘍の成長速度を少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％もしくは１００％のいずれか低下させるのに十分な量である。精製酵素を用いたインビトロアッセイ、細胞ベースのアッセイ、動物モデル、またはヒト試験などの標準的な方法を使用して、この効果の大きさを測定することができる。

【0458】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、組成物が個体に投与された場合に毒物学的効果を誘発するレベル（すなわち、臨床的に許容され得る毒性レベルを超える効果）未満であるか、または潜在的な副作用を制御または耐容することができるレベルである量である。

【0459】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（例えば、抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体）の有効量は、同じ投薬レジメンに従った組成物の最大耐量（ＭＴＤ）に近い量である。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、ＭＴＤの約８０％、９０％、９５％、または９８％のいずれかよりも多い。

【0460】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、処置を受けていない個体と比較して、疾患または症状（例えば、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％）の進行を遅らせるかまたは阻害する量である。いくつかの実施形態では、疾患または症状は自己免疫疾患である。いくつかの実施形態では、疾患または症状は感染症である。

【0461】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、処置を受けていない個体と比較して、症状（例えば、移植）の副作用（自己免疫応答）を（例えば、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、または５０％）減少させる量である。

【0462】

上記態様のいずれかのいくつかの実施形態において、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（例えば、抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナル抗体または多重特異性抗体）の有効量は、総体重の約０．００１μｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００５μｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１μｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、または約０．０１μｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの範囲である。

【0463】

抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、肺内、経口、吸入、小胞内、筋肉内、気管内、皮下、眼内、髄腔内、経粘膜、および経皮を含む様々な経路を介して個体（ヒトなど）に投与することができる。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、個体に投与されている間、医薬組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、組成物の持続連続放出製剤を使用することができる。いくつかの実施形態では、組成物は静脈内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は腹腔内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は静脈内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は腹腔内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は皮下投与される。いくつかの実施形態では、組成物は静脈内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は経口投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、硝子体内に（例えば、加齢黄斑変性（ＡＲＭＤ）を処置するために）投与される。

【0464】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（例えば、Ａ１ ｍＩｇＧ２ａ－Ｄ４）は、約１週間に１回～２日ごとの頻度で投与される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（例えば、Ａ１ ｍＩｇＧ２ａ－Ｄ４）は、約３～４日ごとに１回の頻度で投与される。

【0465】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、二重特異性ＩｇＧナノボディ（例えば、Ａ１ ｍＩｇＧ２ａ－Ｄ４）である。いくつかの実施形態では、二重特異性ＩｇＧナノボディ（例えば、Ａ１ ｍＩｇＧ２ａ－Ｄ４）は、マウスの約０．３ｍｇに相当するヒトの用量で投与される。Ｎａｉｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂａｓｉｃ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍ．Ｍａｒｃｈ ２０１６－Ｍａｙ ２０１６；７（２）：２７－３１を参照のこと。いくつかの実施形態では、二重特異性ＩｇＧナノボディ（例えば、Ａ１ ｍＩｇＧ２ａ－Ｄ４）は、ヒトに対して約７５ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物（例えば、Ａ１ ｍＩｇＧ２ａ－Ｄ４）は、ヒトに対して約４５ｍｇ／ｍ^２または１．２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

【0466】

併用療法
本出願はまた、疾患または症状（癌など）を処置するために抗ＩＧＦＢＰ７構築物を個体に投与する方法であって、第二の薬剤または治療を投与することをさらに含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、第二の薬剤または治療は、疾患または症状を処置するための標準的なまたは一般的に使用される薬剤または治療である。いくつかの実施形態では、第二の薬剤または治療は化学治療剤を含む。いくつかの実施形態では、第二の薬剤または治療は手術を含む。いくつかの実施形態では、第二の薬剤または治療は放射線治療を含む。いくつかの実施形態では、第二の薬剤または治療は免疫治療を含む。いくつかの実施形態では、第二の薬剤または治療は細胞治療（例えば、免疫細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）を含む細胞治療）を含む。いくつかの実施形態では、第二の薬剤または治療は血管形成阻害剤を含む。

【0467】

いくつかの実施形態では、第二の薬剤は化学治療剤である。いくつかの実施形態では、第二の薬剤は代謝拮抗剤である。いくつかの実施形態では、代謝拮抗剤は５－ＦＵである。

【0468】

いくつかの実施形態では、第二の薬剤は免疫チェックポイント調節剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、ＣＤ４７、ＴＩＧＩＴ、ＧＩＴＲ、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＣＤ２７、４－１ＢＢ、ＣＤ９６、ＰＶＲＩＧ、およびＢ７Ｈ４からなる群より選択される免疫チェックポイントタンパク質の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントタンパク質はＰＤ－１である。いくつかの実施形態では、第二の薬剤は、抗ＰＤ－１抗体またはその断片である。

【0469】

いくつかの実施形態では、第二の治療は免疫治療である。いくつかの実施形態では、免疫治療は、キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞を投与することを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞はＴ細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞など）である。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は腫瘍抗原に結合する。

【0470】

いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、第二の薬剤または治療と同時に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、第二の薬剤または治療と共に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、第二の薬剤または治療と逐次投与される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、第二の薬剤または治療の前に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、第二の薬剤または治療の後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、第二の薬剤または治療と同じ単位剤形で投与される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、第二の薬剤または治療とは異なる単位剤形で投与される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、第二の薬剤または治療と同じ単位剤形で投与される。いくつかの実施形態では、抗ＩＧＦＢＰ７構築物は、第二の薬剤または治療とは異なる単位剤形で投与される。

【0471】

ＶＩ．組成物、キットおよび製造品
本明細書に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物または抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分、抗体部分をコードする核酸、抗体部分をコードする核酸を含むベクター、または核酸もしくはベクターを含む宿主細胞のいずれか１つを含む組成物（製剤など）も本明細書で提供される。

【0472】

本明細書に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物の適切な製剤は、所望の純度を有する抗ＩＧＦＢＰ７構築物または抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分を任意の薬学的に許容され得る担体、賦形剤または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で混合することによって得ることができる。許容され得る担体、賦形剤、または安定剤は、使用される投与量および濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（例えばオクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン等のアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；および／または非イオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などを含む。皮下投与に適した凍結乾燥製剤は、国際公開第９７／０４８０１号に記載されている。そのような凍結乾燥製剤は、適切な希釈剤を用いて高タンパク質濃度に再構成することができ、再構成製剤は、本明細書で画像化、診断、または処置される個体に皮下投与することができる。

【0473】

インビボ投与に使用される製剤は滅菌されていなければならない。これは、例えば、滅菌濾過膜による濾過によって容易に達成される。

【0474】

本明細書に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物または抗ＩＧＦＢＰ７抗体部分のいずれか１つを含むキットも提供される。キットは、本明細書に記載の細胞組成物または処置を調節する方法のいずれかに有用であり得る。

【0475】

いくつかの実施形態では、ＩＧＦＢＰ７に特異的に結合する抗ＩＧＦＢＰ７構築物を含むキットが提供される。

【0476】

いくつかの実施形態では、キットは、抗ＩＧＦＢＰ７構築物を個体に送達することができる装置をさらに含む。非経口送達などの用途のための装置の１つのタイプは、組成物を対象の体内に注射するために使用されるシリンジである。吸入装置は、特定の用途にも使用され得る。

【0477】

いくつかの実施形態では、キットは、疾患または症状、例えば癌、感染症、自己免疫疾患、または移植を処置するための治療剤をさらに含む。

【0478】

本出願のキットは適切な包装中にある。適切な包装には、バイアル、ボトル、瓶、可撓性包装（例えば、密封されたマイラーまたはプラスチックバッグ）などが含まれるが、これらに限定されない。キットは、必要に応じて、緩衝液および解釈情報などの追加の成分を提供し得る。

【0479】

したがって、本出願は製造品も提供する。製造品は、容器と、容器上のまたは容器に関連付けられたラベルまたは添付文書とを含むことができる。適切な容器には、バイアル（密封バイアルなど）、ボトル、瓶、可撓性包装などが含まれる。一般に、容器は組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈内溶液バッグであってもよいし、皮下注射針で穿刺可能な栓を有するバイアルであってもよい）。ラベルまたは添付文書は、組成物が個体における特定の状態を画像化、診断または処置するために使用されることを示す。ラベルまたは添付文書は、組成物を個体に投与し、個体を画像化するための指示をさらに含む。ラベルは、再構成および／または使用のための指示を示し得る。組成物を保持する容器は、再構成された製剤の反復投与（例えば、２～６回の投与から）を可能にする複数回使用バイアルであり得る。添付文書は、診断用製品の市販パッケージに通例含まれる指示であって、そのような診断用製品の使用に関する適応症、用法、用量、投与、禁忌および／または警告に関する情報を含む指示を指す。さらに、製造品は、静菌性注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液およびデキストロース溶液などの薬学的に許容され得る緩衝液を含む第二の容器をさらに含み得る。さらに、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的およびユーザーの観点から望ましい他の材料を含んでもよい。

【0480】

キットまたは製造品は、複数の単位用量の組成物および使用についての指示を含み得、薬局、例えば病院の薬局および調剤薬局での保管および使用に十分な量で包装され得る。

【0481】

当業者は、本発明の範囲および主旨の範囲内でいくつかの実施形態が可能であることを認識するであろう。以下の非限定的な例を参照して、本発明をより詳細に説明する。以下の実施例は、本発明をさらに例示するが、当然のことながら、その範囲を限定するものとして解釈されるべきでは決してない。

【0482】

例示的な実施形態
実施形態１．ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含む抗ＩＧＦＢＰ７構築物であって、ｓｄＡｂ部分が、
１）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
２）配列番号２もしくは１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号４もしくは１１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
３）配列番号５もしくは１１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号７、１１５もしくは１１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
４）配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
５）配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
６）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
７）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
８）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
９）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
１０）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
１１）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；
１２）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体；または、
１３）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、またはＣＤＲ中に最大５、４、３、２、もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。

【0483】

実施形態２．ＩＧＦＢＰ７を特異的に認識する単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）部分を含むポリペプチドを含む抗ＩＧＦＢＰ７構築物であって、ｓｄＡｂ部分が、配列番号３２～５１のいずれかに示されるアミノ酸配列内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む、抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【0484】

実施形態３．ｓｄＡｂ部分が、配列番号３２～５１のいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号３２～５１のいずれか１つに対して少なくとも約８０％の配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｄｅｎｔｉｆｙ）を有するその改変体を含む、実施形態１または２に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【0485】

実施形態４．ｓｄＡｂ部分が、ラクダ科、キメラ、ヒト、部分的ヒト化、または完全ヒト化である、実施形態１～３のいずれか一つに記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【0486】

実施形態５．ｓｄＡｂ部分がＶ_ＨＨ抗体である、実施形態１～４のいずれか一つに記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【0487】

実施形態６．ＣＤ９３のＩＧＦＢＰ７への結合を遮断する、実施形態１～５のいずれか一つに記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【0488】

実施形態７．ＩＧＦＢＰ７がヒトＩＧＦＢＰ７である、実施形態１～６のいずれか一つに記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【0489】

実施形態８．ＣＤ９３がヒトＣＤ９３である、実施形態６または実施形態７に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【0490】

実施形態９．第二の部分をさらに含む、実施形態１～８のいずれか一つに記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【0491】

実施形態１０．第二の部分が、抗原を特異的に認識する抗体部分を含む、実施形態９に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【0492】

実施形態１１．抗原がＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－１である、実施形態１０に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【0493】

実施形態１２．第二の抗体部分が、全長抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）_２、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、またはｓｄＡｂである、実施形態１０または１１に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【0494】

実施形態１３．第二の部分が半減期延長部分を含む、実施形態９に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【0495】

実施形態１４．構築物が抗体－薬物コンジュゲートである、実施形態９に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【0496】

実施形態１５．実施形態１～１４のいずれか一つに記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物と競合的にＩＧＦＢＰ７に特異的に結合する抗ＩＧＦＢＰ７構築物。

【0497】

実施形態１６．実施形態１～１５のいずれか一つに記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物と、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物。

【0498】

実施形態１７．実施形態１～１５のいずれか一つに記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物のポリペプチドまたはその一部をコードするポリヌクレオチド。

【0499】

実施形態１８．実施形態１７に記載のポリヌクレオチドを含む核酸構築物であって、ポリヌクレオチドと作動可能に関連するプロモーターを必要に応じてさらに含む核酸構築物。

【0500】

実施形態１９．実施形態１８に記載の核酸構築物を含むベクター。

【0501】

実施形態２０．実施形態１８に記載のポリヌクレオチド、実施形態１８に記載の核酸構築物または実施形態１９に記載のベクターを含む単離された宿主細胞。

【0502】

実施形態２１．実施形態１～１５のいずれか一つに記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物のポリペプチド、実施形態１７に記載のポリヌクレオチド、実施形態１８に記載の核酸構築物、実施形態１９に記載のベクター、または実施形態２０に記載の宿主細胞を含む培養培地。

【0503】

実施形態２２．抗ＩＧＦＢＰ７構築物を製造する方法であって、
ａ）ポリペプチドを発現するのに有効な条件下で、実施形態２０に記載の単離された宿主細胞を培養すること；および
ｂ）宿主細胞からポリペプチドを得ること、を含む方法。

【0504】

実施形態２３．個体における疾患もしくは症状（例えば癌、例えば固形腫瘍）を処置するか、または組織における異常な血管成長を阻害する方法であって、個体に、有効量の実施形態１～１５のいずれか一項に記載の抗ＩＧＦＢＰ７構築物、または実施形態１６に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。

【0505】

実施形態２４．症状の疾患が異常な血管構造に関連する、実施形態２３に記載の方法。

【0506】

実施形態２５．疾患または症状が癌である、実施形態２３または実施形態２４に記載の方法。

【0507】

実施形態２６．癌が固形腫瘍である、実施形態２５に記載の方法。

【0508】

実施形態２７．癌がＣＤ９３＋内皮細胞を含む、実施形態２５または実施形態２６に記載の方法。

【0509】

実施形態２８．癌がＩＧＦＢＰ７＋血管を含む、実施形態２５～２７のいずれか一つに記載の方法。

【0510】

実施形態２９．癌が腫瘍低酸素症を特徴とする、実施形態２５～２８のいずれか一つに記載の方法。

【0511】

実施形態３０．癌が局所進行癌または転移癌である、実施形態２５～２９のいずれか一つに記載の方法。

【0512】

実施形態３１．癌が、リンパ腫、結腸癌、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、食道癌、前立腺癌、子宮頸癌、腎癌、膀胱癌、胃癌、非小細胞肺癌、黒色腫、および膵臓癌からなる群から選択される、実施形態２５～３０のいずれか一つに記載の方法。

【0513】

実施形態３２．抗ＩＧＦＢＰ７構築物を個体に非経口投与する、実施形態２３～３１のいずれか一つに記載の方法。

【0514】

実施形態３３．第二の治療を投与することをさらに含む、実施形態２３～３２のいずれか一つに記載の方法。

【0515】

実施形態３４．第二の治療が、手術、放射線、遺伝子治療、免疫治療、骨髄移植、幹細胞移植、ホルモン治療、標的治療、凍結治療、超音波治療、光線力学治療、および化学治療からなる群から選択される、実施形態３３に記載の方法。

【0516】

実施形態３５．第二の治療が免疫治療である、実施形態３４に記載の方法。

【0517】

実施形態３６．免疫治療が、免疫調節剤を投与することを含む、実施形態３５に記載の方法。

【0518】

実施形態３７．免疫調節剤が免疫チェックポイント阻害剤である、実施形態３６に記載の方法。

【0519】

実施形態３８．免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－Ｌ１抗体または抗ＰＤ－１抗体を含む、実施形態３７に記載の方法。

【0520】

実施形態３９．個体がヒトである、実施形態２３～３８のいずれか一つに記載の方法。

【実施例】

【0521】

以下の実施例は、本出願の純粋に例示を意図しており、したがって、決して本出願を限定すると見なされるべきではない。以下の実施例および詳細な説明は、限定ではなく例示として提供される。

【0522】

材料
ビオチン化ヒトＩＧＦＢＰ７を、標準的なプロトコル（ＥＺ－Ｌｉｎｋ（商標）スルホ－ＮＨＳ－ＳＳ－ビオチン；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２１３３１）を使用して生成した。

【0523】

ヤギ抗ラマＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体、ＨＲＰは、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ａ１６０６０から入手した。

【0524】

抗Ｍ１３二次抗体、ＨＲＰは、ＧＥ、カタログ番号２７－９４２１－０１から入手した。

【0525】

標準プロトコルを使用して、Ｈｉｓタグ付きマウスＮ末端ＩＧＦＢＰ７_{２８－１０６}およびヒトＮ末端ＩＧＦＢＰ７_{２８－１０６}－ラマＦｃを生成した。

【0526】

実施例１．免疫化
１匹のラマを、表３に概説したスキームに従ってヒトＩＧＦＢＰ７（ｈＩＧＦＢＰ７）で免疫した。プロトコルの完了後、免疫応答をＥＬＩＳＡによって分析した。具体的には、血清試料を０日目および５２日目に収集し、ヒトＩＧＦＢＰ７（ＰＢＳ中０．５μｇ／ｍＬ）または９６ウェルＥＬＩＳＡプレートに吸着された陰性Ｆｃタンパク質と共にインキュベートした。結合したラマＩｇＧをヤギ抗ラマＩｇＧ（Ｂｅｔｈｙｌ Ａ１６０－１００；Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，ＴＸ）によって検出した。５２日目の結果を図１に示す。

【表3】

【0527】

図１に示すように、ｈＩＧＦＢＰ７は、最大１０^７倍に希釈されたラマ血清中で、試験ラマにおける抗ヒトＩＧＦＢＰ７抗体産生を効果的に誘導する。

【0528】

実施例２．ライブラリーの構築
ラマから得られた末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から抽出したＲＮＡをＲＴ－ＰＣＲの出発材料として使用して、遺伝子断片をコードするナノボディを増幅した。これらの断片をファージミドベクターにクローニングした。ファージを標準的な方法に従って調製し、さらなる使用のために４℃で濾過滅菌後に保存した。

【0529】

実施例３．選択
標準的なファージディスプレイ法を使用して、構築したライブラリーを用いて選択を行った。ビオチン化ヒトＩＧＦＢＰ７（溶液中、続いてストレプトアビジンビーズ上で捕捉し、続いて洗浄およびトリプシン溶出）を用いて２回の選択を行った。各選択出力を濃縮係数（例えば、対照と比較した溶出液中に存在するファージの数）について分析し、さらなる分析のためにプレーティングした。Ｎ末端タグ化ヒトＩＧＦＢＰ７－Ｈｉｓを使用して、３回目の選択を行った。

【0530】

コロニーを採取し、２つの９６ディープウェルプレート（２ｍＬ容量）で増殖させた。１つのプレートを配列決定のために増殖させ、別のプレートにＥＬＩＳＡ試験によるファージ発現のためのヘルパーファージを添加した。

【0531】

実施例４．ＥＬＩＳＡによるヒトＩＧＦＢＰ７への結合の一次スクリーニング
ファージ発現プレートからの５０μＬの溶液を、ｈＩＧＦＢＰ７（ＰＢＳ中０．５μｇ／ｍＬ）または９６ウェルＥＬＩＳＡプレートに吸着された陰性Ｆｃタンパク質と共にインキュベートした。ファージディスプレイされた組換え抗体を抗Ｍ１３二次抗体ＨＲＰ（ＧＥ、カタログ番号２７－９４２１－０１）によって検出した。

【0532】

実施例５．配列解析
９６ウェルプレートを配列分析に供し、一連の異なるユニークなナノボディ配列を同定した。

【0533】

アミノ酸配列相同性（特に、ＣＤＲ３の相同性）に基づいて、すべてのクローンを異なるファミリーまたは単一配列代表に分類した。表４を参照されたい。同じファミリーのメンバーは、本明細書に記載の異なるアッセイにおいて同様の挙動を有すると考えられるが、機能的特性の小さな違いが有り得る。さらなる特徴付けのために、ファミリーごとに１つまたはいくつかの代表を選択した。

【表4-1】

【表4-2】

【0534】

実施例６．大腸菌におけるナノボディ発現および精製
選択されたナノボディを３０ｍＬの培養体積でＨｉｓ_６タグ付きタンパク質として大腸菌で発現させ、３７℃で４８時間自己誘導ｍＴＢ培地で発現を誘導した。細胞培養物をスピンした後、ペレットをリゾチームおよび１０％ ＣＨＡＰＳと共に室温で３０分間インキュベートした。これらの抽出物を１２０００×ｇで遠心分離し、溶液を標準的な精製方法でＮｉ－ｔカラムにロードした。ナノボディを１５０ｍＭイミダゾールでカラムから溶出し、続いて緩衝液をＰＢＳに交換した。

【0535】

実施例７．ＦＡＣＳによるｈＩＧＦＢＰ７およびｍＩＧＦＢＰ７への抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディの結合
ヒトＩＧＦＢＰ７およびマウスＩＧＦＢＰ７提示ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、細胞表面上のＩＧＦＢＰ７の完全性を維持するＴｒｙｐＬＥ試薬（Ｔｈｅｒｍｏｓ Ｆｉｓｈｅｒ）とのインキュベーションによって剥離した。次いで、細胞を１０μｇ／ｍｌの抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディと共に４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した後、細胞をＡＰＣコンジュゲート抗ＨＩＳ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）と共に４℃において３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、試料をＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒで取得し、ＮｏｖｏＥｘｐｒｅｓｓソフトウェアによって分析した。

【0536】

結果を図２Ａ～図２Ｂおよび図３Ａ～図３Ｂに示す。

【0537】

図２Ａ～図２Ｂに示されるように、クローンＡ１、Ａ３、Ａ４、Ａ７、Ａ１１、Ｄ４、Ｆ１２およびＧ２はすべてｈＩＧＦＢＰ７に結合する。図３Ａ～図３Ｂに示されるように、クローンＡ１、Ａ４、Ａ１１、Ｄ４およびＧ２はすべてｍＩＧＦＢＰ７に結合する。

【0538】

実施例８．ナノボディＦｃ融合物の組換え発現
ＥＬＩＳＡによってｈＩＧＦＢＰ７およびｍＩＧＦＢＰ７の両方に結合した抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディ（例えば、Ａ１、Ａ４、Ａ１１、およびＤ４ Ｖ_ＨＨ）を、ｍＩｇＧ２ａまたはｍＩｇＧ１ Ｆｃ断片と融合させ（すなわち、ナノボディＦｃ融合）、次いで、クローニングして、Ｅｘｐｉ２９３細胞において発現させた。簡単に説明すると、ヒト優先コドン（ＩＤＴ）を使用して、マウスＩｇＧ Ｆｃ－融合ナノボディを遺伝子合成した。次いで、マウス抗体シグナル配列およびｍＩｇＧ２ａまたはｍＩｇＧ１ Ｆｃ断片を含むｐｃＤＮＡ３．４ベクターに遺伝子断片をサブクローニングした。ＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ ２９３トランスフェクションキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用したＥｘｐｉ２９３細胞への一過性トランスフェクションによって、ナノボディＦｃ融合タンパク質を生産した。トランスフェクションの５日後、トランスフェクト細胞からの上清を回収し、プロテインＧセファロース（ＧＥ）を用いて精製した。結合した抗体を、０．１Ｍグリシン緩衝液（ｐＨ２．７）を用いて溶出し、１×ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で一晩透析した。精製した抗体を還元および非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥで分析して、純度およびサイズを確認した。タンパク質濃度を分光光度計でＡ_２８０によって決定した。

【0539】

蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によるナノボディＦｃ融合構築物の最初のスクリーニング結果を図４および図５に示す。図４に示すように、試験した抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物はすべて、ｈＩＧＦＢＰ７発現ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に結合した。図５は、Ａ１、Ａ４およびＤ４に由来する試験した抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物がｍＩＧＦＢＰ７発現ＣＨＯ－Ｋ１細胞に結合したことを示す。

【0540】

実施例９．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイによって決定されたヒト、カニクイザルおよびマウスＩＧＦＢＰ７に対する抗ＩＧＦＢＰ７－ｍＩｇＧ２ａ Ｆｃの結合親和性
Ｏｃｔｅｔ ＱＫｅ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）を使用したバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）を用いて、抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物（例えば、Ｖ_ＨＨ－Ｆｃ融合構築物）の結合親和性を決定した。ヒト、マウスおよびカニクイザルＩＧＦＢＰ７を、ＥＺ－ＬＩＮＫ ＮＨＳ－ＰＥＧ４ビオチン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてビオチン化した。ストレプトアビジンバイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用してビオチン化ＩＧＦＢＰ７タンパク質をロードした（５μｇ／ｍＬで３００秒）。ベースラインを１倍動態緩衝液（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）中で６０秒間安定化した後、抗ＩＧＦＢＰ７ Ｆｃ融合タンパク質（段階希釈）を捕捉されたｈＩＧＦＢＰ７またはｍＩＧＦＢＰ７と３００秒間会合させた。次いで、センサーを１Ｘ動態緩衝液中で６００秒間解離させた。ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ＨＴ １１．１ソフトウェアでデータ分析を行った。

【0541】

結果を図６および図７に示す。示されるように、試験されたナノボディＦｃ融合構築物は、ヒトおよびマウスＩＧＦＢＰ７に結合する。

【0542】

図８に示す例示的な二重特異性Ａ１－Ｄ４ ｍＩｇＧ２ａおよびＡ１ ｍＩｇＧ２ａ－Ｄ４などのマウスＩｇＧ二重特異性抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物も、ＢＬＩアッセイによって決定されるヒト、カニクイザルおよびマウスＩＧＦＢＰ７に対するそれらの結合親和性について試験した。結果を図９～図１１に示す。示されるように、二重特異性ナノボディＦｃ融合構築物Ａ１Ｄ４－ｍＩｇＧ２ａおよびＡ１－ｍＩｇＧ２ａ－Ｄ４は、単一特異性Ａ１－ｍＩｇＧ１、Ａ１－ｍＩｇＧ２ａ、およびＤ４－ｍＩｇＧ２ａと比較して、ヒト、カニクイザルおよびマウスＩＧＦＢＰ７に対して同様の結合親和性を有する。

【0543】

実施例１０．蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって決定された、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に固定されたヒトおよびマウスＩＧＦＢＰ７への抗ＩＧＦＢＰ７－ｍＩｇＧ２ａ Ｆｃの結合
リンカーおよびＣＤ８０膜貫通ドメインを有するヒトまたはマウスＩＧＦＢＰ７を発現するＨＥＫ２９３Ｔ細胞の安定なプールを作製し、溶液中のＩＧＦＢＰ７に結合する抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合タンパク質を評価した。ｈＩＧＦＢＰ７－ＨＥＫ細胞またはｍＩＧＦＢＰ７－ＨＥＫ細胞（ウェルあたり１ｘ１０^５）を、抗ＩＧＦＢＰ７－ｍＩｇＧ２ａ Ｆｃ（７５、１５０、３００、６００ｎＭ）で４℃で３０分間処理した。ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した後、細胞をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８コンジュゲート抗マウスＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）と共に４℃において３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液を用いて２回洗浄した後、試料をＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒで取得し、ＮｏｖｏＥｘｐｒｅｓｓソフトウェアによって分析した。

【0544】

結果を図１２Ａ～図１２Ｂおよび図１３に示す。図１２Ａ～図１２Ｂに示されるように、試験された単一特異性および二重特異性抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物は、様々な濃度でＨＥＫ２９３Ｔ細胞表面に固定されたｈＩＧＦＢＰ７に結合する。さらに、図１３は、二重特異性Ａ１－ｍＩｇＧ２ａ－Ｄ４－１（すなわち、Ａ１Ｄ４－ｍＩｇＧ２ａ）およびＡ１－ｍＩｇＧ２ａ－Ｄ４－２（すなわち、Ａ１－ｍＩｇＧ２ａ－Ｄ４）が、モノクローナルＡ１－ｍＩｇＧ２ａと同様に、ｈＩＧＦＢＰ７発現ＨＥＫ細胞またはｍＩＧＦＢＰ７発現ＨＥＫ細胞に結合することを示す。

【0545】

実施例１１．抗ＩＧＦＢＰ７－ｍＩｇＧ２ａ処理によるヒトＣＤ９３発現ＣＨＯ細胞におけるＩＧＦＢＰ７／ＣＤ９３遮断アッセイ
前の実施例で生成された抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディおよびナノボディ－Ｆｃ融合物（５０μｇ／ｍＬ）を、Ｈｉｓタグ化ヒトＩＧＦＢＰ７組換えタンパク質（１μｇ／ｍＬ）と共に４℃で３０分間インキュベートした。ヒトＣＤ９３発現ＣＨＯ細胞（ウェルあたり１ｘ１０^５）を、混合物を４℃で３０分間処理した。次いで、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、１μｇ／ｍＬの抗ＩＧＦＢＰ７モノクローナルウサギ抗体（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．、カタログ番号１３１００－Ｒ００３）と共に４℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、ＰＥコンジュゲート抗ウサギＩｇＧ抗体（Ｂｉｏｌｅ５５ｇｅｎｄ）と共に４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液を用いて２回洗浄した後、試料を分析し、ＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗでデータを取得した。

【0546】

例示的な抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディの結果を図１４に示す。示されるように、すべての試験されたナノボディは、ＣＤ９３とＩＧＦＢＰ７との間の相互作用を少なくとも５０％効果的に遮断する。特に、Ａ３、Ａ４、Ａ７およびＡ１１は、ＣＤ９３とＩＧＦＢＰ７との間の相互作用をほぼ完全に遮断した。

【0547】

実施例８で作製したマウスＩｇＧ抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合物も、ＩＧＦＢＰ７とＣＤ９３との間の相互作用を遮断する能力について試験した。結果を図１５Ａ～図１５Ｃに示す。示されるように、Ａ１－ｍＩｇＧ２ａ、Ａ４－ｍＩｇＧ２ａおよびＤ４－ｍＩｇＧ２ａは、様々な濃度でＩＧＦＢＰ７とＣＤ９３との間の相互作用を効果的に遮断する。

【0548】

例示的な二重特異性抗ＩＧＦＢＰ７ナノボディＦｃ融合構築物（図８）も、ＩＧＦＢＰ７とＣＤ９３との間の相互作用を遮断する能力について試験した。結果を図１６に示す。示されるように、二重特異性抗体Ａ１－ｍＩｇＧ２ａ－Ｄ４－１（すなわち、Ａ１Ｄ４－ｍＩｇＧ２ａ）およびＡ１－ｍＩｇＧ２ａ－Ｄ４－２（すなわち、Ａ１－ｍＩｇＧ２ａ－Ｄ４）は、類似の遮断活性を有する。

【0549】

実施例１２．ＨＵＶＥＣチューブ形成阻害アッセイ
ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を、低血清増殖サプリメント（ＬＳＧＳ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を補充した培地２００中、３７℃、５％ ＣＯ_２で培養した。９６ウェルプレートを５０μＬのＧｅｌｔｒｅｘ低増殖因子基底膜マトリックス（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でコーティングし、３７℃で３０分間インキュベートした。チューブ形成に対する抗ＩＧＦＢＰ７ ｍＩｇＧ２ａ融合タンパク質の効果を調べるために、２×１０^４個のＨＵＶＥＣ細胞をマトリックス被覆プレートに播種し、精製融合タンパク質の存在下または非存在下、３７℃、５％ ＣＯ_２で１８時間インキュベートした。光学顕微鏡を用いて画像を得た。

【0550】

図１７Ａ～図１７Ｂに示されるように、Ａ１－ｍＩｇＧ２ａ、Ａ４－ｍＩｇＧ２ａ、Ａ１１－ｍＩｇＧ２ａ、およびＤ４－ｍＩｇＧ２ａは、ｍＩｇＧアイソタイプ対照と比較して、様々な濃度でＨＵＶＥＣ細胞のチューブ形成を効果的に阻害する。

【0551】

実施例１３．Ｏｃｔｅｔ競合による抗ＩＧＦＢＰ７抗体のエピトープビニングアッセイ
Ｏｃｔｅｔ ＱＫｅ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用して抗ＩＧＦＢＰ７抗体エピトープのビンを決定した。ヒトＩＧＦＢＰ７組換えタンパク質を、ＥＺ－ＬＩＮＫ ＮＨＳ－ＰＥＧ４ビオチン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてビオチン化した。ストレプトアビジンバイオセンサーチップ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用してビオチン化ＩＧＦＢＰ７タンパク質を捕捉した（５μｇ／ｍＬで３００秒）。ベースライン測定を１倍動態緩衝液（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）中で６０秒間安定化した後、一次抗ＩＧＦＢＰ７抗体（１０μｇ／ｍＬ）を捕捉タンパク質と３００秒間会合させた。次いで、一連の二次抗ＩＧＦＢＰ７抗体（１０μｇ／ｍＬ）を抗原および一次抗体複合体とさらに３００秒間会合させた。各結合事象についてシグナルを記録し、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ＨＴ １１．１ソフトウェアでデータ分析を行った。

【0552】

図１８のＯｃｔｅｃｔ分析による抗ＩＧＦＢＰ７抗体のエピトープビニングアッセイは、Ａ１、Ａ４、Ａ１１、およびＤ４がＩＧＦＢＰ７上の異なるエピトープに結合することを示す。

【0553】

実施例１４．腫瘍モデルにおける抗ＩＧＦＢＰ７抗体のインビボ治療有効性
雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける同系ＫＰＣ膵臓癌モデルを使用して、上記の抗ＩＧＦＢＰ７抗体のインビボ治療有効性を評価した。

【0554】

７週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、腫瘍発生のために右後側腹部に１：１マトリゲルを含む０．１ｍＬ無血清培地中のＫＰＣ腫瘍細胞（２．０×１０^６個）を皮下注射した。平均腫瘍サイズが約５０ｍｍ^３に達したとき、腫瘍を有する動物をそれぞれ６または７匹のマウスの３つの研究群に無作為に分けた。含まれる群は、マウスイソタイプ対照ＩｇＧ２Ａ、Ａ１ ｍＩｇＧ２ａ－Ｄ４であった（実施例９および図８を参照）。すべての群の各動物は、０、３、７、１０日目にＩＰ注射によって０．３ｍｇ／マウスの各物品を受けた。腫瘍体積（ＴＶ）および体重（ＢＷ）を測定し、試験エンドポイント（２８日目）まで週に２回記録し、個々の動物を安楽死させ、比較分析のために腫瘍を抽出し、写真撮影し、秤量した（ＴＷ）。エンドポイントで平均ＴＶをアイソタイプ対照の平均ＴＶと比較するために、Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定によるＧｅｉｓｓｅｒ－Ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ補正を用いた反復測定（ＲＭ）二元配置ＡＮＯＶＡを実施した。エンドポイントで処置群の平均ＴＷをアイソタイプ対照の平均ＴＷと比較するために、Ｄｕｎｎの多重比較検定によるＫｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ検定を実施した。

【0555】

下記の表５に示されるように、Ａ１ ｍＩｇＧ２ａ－Ｄ４により処置されるマウスは、イソタイプ対照により処置されたマウスと比較して、３日目から１４日目までの腫瘍体積における一貫した約４０％～６０％の低下を示し、このことは、腫瘍成長を阻害することにおける抗ＩＧＦＢＰ７抗体の高い有効性を示唆している。その後、おそらくＡ１ ｍＩｇＧ２ａ－Ｄ４が１０日目の最後の投与後に循環から除去されたため、腫瘍阻害効果はあまり目立たなくなった。

【0556】

動物の全体重は、試験全体を通してすべての群で安定しており（データは示さず）、処置が十分に忍容されたことを示している。

【表5】

【表6-1】

【表6-2】

【表6-3】

【表6-4】

【表6-5】

【表6-6】

【表6-7】

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12A】

【図12B】

【図13】

【図14】

【図15A】

【図15B】

【図15C】

【図16】

【図17A】

【図17B】

【図18】

【配列表】

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【国際調査報告】