特表 2024-511478 抗ＴＭ４ＳＦ１抗体および免疫療法剤を含む組合せ剤ならびにそれを使用する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-13

(54)【発明の名称】抗ＴＭ４ＳＦ１抗体および免疫療法剤を含む組合せ剤ならびにそれを使用する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 39/395 20060101AFI20240306BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240306BHJP

   A61K 38/19 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 13/08 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 15/00 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 1/18 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 1/02 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 11/02 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 11/04 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 13/02 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240306BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20240306BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240306BHJP

【ＦＩ】

A61K39/395 D

A61K45/00

A61K39/395 N

A61K39/395 L

A61K38/19

A61P37/02

A61P43/00 111

A61P37/04

A61P43/00 105

A61P35/00

A61P13/08

A61P1/16

A61P1/04

A61P15/00

A61P1/18

A61P1/02

A61P11/02

A61P11/04

A61P13/02

A61P11/00

A61P17/00

A61P25/00

A61P35/02

A61P13/12

A61K47/68

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023559013

(86)(22)【出願日】2022-03-25

(85)【翻訳文提出日】2023-11-24

(86)【国際出願番号】 US2022022035

(87)【国際公開番号】W WO2022204565

(87)【国際公開日】2022-09-29

(31)【優先権主張番号】63/166,805

(32)【優先日】2021-03-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520069899

【氏名又は名称】アンジーエックス・インコーポレーテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100188374

【弁理士】

【氏名又は名称】一宮 維幸

(72)【発明者】

【氏名】ジャミネット，ポール・エイ

(72)【発明者】

【氏名】ジャミネット，ショウ－チン・エス

(72)【発明者】

【氏名】ゴンザレス，ガブリエル

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

【Ｆターム（参考）】

4C076CC10

4C076CC15

4C076CC16

4C076CC17

4C076CC18

4C076CC26

4C076CC27

4C076CC29

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF34

4C084AA02

4C084AA19

4C084BA44

4C084DA01

4C084MA02

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZA011

4C084ZA341

4C084ZA591

4C084ZA661

4C084ZA671

4C084ZA811

4C084ZA891

4C084ZB021

4C084ZB071

4C084ZB091

4C084ZB211

4C084ZB261

4C084ZB271

4C084ZC201

4C084ZC751

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA16

4C085AA25

4C085AA26

4C085AA27

4C085BB36

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE03

(57)【要約】

抗ＴＭ４ＳＦ１抗体、およびその抗原結合フラグメント、それを含有する抗体薬物コンジュゲート、ならびにそのような抗体およびＡＤＣの、免疫療法、例えば免疫調節剤との組合せ剤が記載される。
【選択図】図３

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ａ．抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質；および
ｂ．免疫療法剤
を含む、組合せ剤。

【請求項2】

免疫療法剤が、サイトカイン、アジュバント、または免疫チェックポイント阻害剤である、請求項１に記載の組合せ剤。

【請求項3】

免疫療法剤が、抗体または抗原結合フラグメントである、請求項１または２に記載の組合せ剤。

【請求項4】

免疫療法剤が、骨髄系列の細胞、腫瘍細胞、リンパ系列の細胞に存在する標的、または腫瘍微小環境に存在するタンパク質に対する抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項３に記載の組合せ剤。

【請求項5】

免疫療法剤が、ＰＤ－１、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ－４、ＣＳＦ１／ＣＳＦ１Ｒ、ＳＩＲＰα、ＣＬＥＣ－１の少なくとも１つに対する抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項３に記載の組合せ剤。

【請求項6】

免疫療法剤が、ＣＣＲ４、ＣＴＬＡ－４、Ａ１Ｒ、Ａ２ＡＲ、Ａ３Ｒ、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＩＬＲａ／ＣＤ２５、ＩＴＧＢ１／ＣＤ２９、Ｌｙ ２４／ＣＤ４４、ＣＤ４８、ＣＥＡＣＡＭ１／ＣＤ６６ａ、Ｎｔ５ｅ／ＣＤ７３、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＦＡＳ／ＣＤ９５、ＳＬＡＦ１／ＣＤ１５０、ＮＲＰ１／ＣＤ３０４、ＧＩＴＲ／ＣＤ３５７、ＩＣＯＳ、Ｔｎｆｒｓ４／ＯＸ４０、Ｆｏｌｒ４／ＪＵＮＯ、Ｐ２Ｘ７、ＡＮＸＡ２、ＩＤＯ、Ｂ７－Ｈ６、ＫＩＲ、ＧＡＲＰ（ＬＲＲＣ３２）、ＴＮＦＲ２の少なくとも１つに対する抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項３に記載の組合せ剤。

【請求項7】

免疫療法剤が、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ４７、ＴＤＯ、ＤｃＲ３の少なくとも１つに対する抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項３に記載の組合せ剤。

【請求項8】

免疫療法剤が、エクソソーム、サイトカイン、インターロイキン、またはケモカインの少なくとも１つに対する抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項３に記載の組合せ剤。

【請求項9】

免疫療法剤が、ＰＳ、ＰＤ－Ｌ１、ＳＴＩＮＧの少なくとも１つに対する抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項３に記載の組合せ剤。

【請求項10】

ａ．抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質；ならびに
ｂ．イピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、トレメリムマブ、スパルタリズマブ、アベルマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、ＭＧＡ０１２、ＭＧＤ０１３、ＭＧＤ０１９、エノブリツズマブ、ＭＧＤ００９、ＭＧＣ０１８、ＭＥＤＩ０６８０、ＰＤＲ００１、ＦＡＺ０５３、ＴＳＲ０２２、ＭＢＧ４５３、レラトリマブ（ｒｅｌａｔｌｉｎａｂ）（ＢＭＳ９８６０１６）、ＬＡＧ５２５、ＩＭＰ３２１、ＲＥＧＮ２８１０（セミプリマブ）、ＲＥＧＮ３７６７、ペキシダルチニブ、ＬＹ３０２２８５５、ＦＰＡ００８、ＢＬＺ９４５、ＧＤＣ０９１９、エパカドスタット、インドキシミド、ＢＭＳ９８６２０５、ＣＰＩ－４４４、ＭＥＤＩ９４４７、ＰＢＦ５０９、リリルマブ、ＩＭＣ－００１、モナリズマブ、およびこれらの組合せからなる群から選択される免疫療法剤
を含む、組合せ剤。

【請求項11】

抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質が：
配列番号８、２０、３２、４４、５６、６８、８０、９６、１１８、１１９、１２０、１２１、または１６２に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号７、１９、３１、４３、５５、６７、７９、９５、１１６、１１７、または１６１に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号６、１８、３０、４２、５４、６６、７８、９４、１１５、または１６０に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに
配列番号１４、２６、３８、５０、６２、７４、８６、１１０、１２９、または１５９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号１３、２５、３７、４９、６１、７３、８５、または１０９、１２８、または１５８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号１２、２４、３６、４８、６０、７２、８４、１０７、１０８、１２４、１２５、１２６、１２７、または１５７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の組合せ剤。

【請求項12】

抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質がＩｇＧ Ｆｃ領域を含み、前記ＩｇＧ Ｆｃ領域が、Ｋａｂａｔに記載されるようにＥＵインデックスにより番号付けられた場合、以下の位置：Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３７、Ｍ２５２、Ｓ２５４、Ｔ２５０Ｑ、Ｔ２５６Ｅ、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ｋ３２２、Ｐ３３１、Ｍ４２８、およびＮ４３４の少なくとも１つに突然変異を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の組合せ剤。

【請求項13】

前記ＩｇＧ Ｆｃ領域が、Ｋａｂａｔに記載されるようにＥＵインデックスにより番号付けられた場合、以下の突然変異：Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５０Ｑ、Ｔ２５６Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｎ２９７Ｃ、Ｋ３２２Ａ、Ｐ３３１Ｇ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ、およびＮ４３４Ｓの少なくとも１つを含む、請求項１２に記載の組合せ剤。

【請求項14】

抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質が、治療分子にコンジュゲートされており、抗体薬物コンジュゲートを形成している、請求項１から１３のいずれか一項に記載の組合せ治療剤。

【請求項15】

治療分子が、プロテアソーム阻害剤、カリチアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、オーリスタチン、デュオカルマイシン、メイタンシノイド、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１４に記載の組合せ剤。

【請求項16】

治療分子が、プロテアソーム阻害剤を含み、プロテアソーム阻害剤が：ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ，ＰＳ－３４１）、ＰＲ－１７１（カルフィルゾミブ）、イキサゾミブ（Ｎｉｎｌａｒｏ（登録商標））、デランゾミブ、マリゾミブ、オプロゾミブ、ＶＲ２３、ＰＩ－１８４０、（ベンジルオキシカルボニル）－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－フェニルアラニン、２，３，５ａ，６－テトラヒドロ－６－ヒドロキシ－３－（ヒドロキシメチル（ｈｙｄｒｏｘｙｍｔｈｙｌ））－２－メチル－１０Ｈ－３ａ，１０ａ－エピジチオ－ピラジノール［１，２α］インドール－１，４－ジオン、４－ヒドロキシ－３－ニトロフェニルアセチル－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－ビニルスルホン、ｓａｐｏｊａｒｇｏｎ、Ａｃ－ｈＦＬＦＬ－エポキシド、アクラシノマイシンＡ、アクラルビシン、ＡＣＭ、ＡｄａＫ（Ｂｉｏ）Ａｈｘ３Ｌ３ＶＳ、ＡｄａＬｙｓ（Ｂｉｏ）Ａｈｘ３Ｌ３ＶＳ、アダマンタン－アセチル－（６－アミノへキサノイル）－３－（ｌｅｕｃｕｎｙｌ）－３－ビニル－（メチル）－スルホン、ＡＬＬＭ、ＡＬＬＮ、カルパイン阻害剤Ｉ、カルパイン阻害剤ＩＩ、カルボベンゾキシ－Ｌ－ロイシル－Ｌ－ロイシル－Ｌ－ロイシナール、カルボベンゾキシ－Ｌ－ロイシル－Ｌ－ロイシル－Ｌ－ノルバリナール、グリオトキシン、イソバレリー－Ｌ－チロシル－Ｌ－バリル－ＤＬ－チロシナール、クラスト－ラクタシスチン－β－ラクトン、Ｚ－ＬＬ－Ｎｖａ－ＣＨＯ、ユビキチンアルデヒド、ＹＵ１０１、ＭＰ－ＬＬＬ－ＶＳ、ＬＤＮ－５７４４４、Ｚ－ＧＰＦＬ－ＣＨＯ、Ｚ－ＬＬＬ－ＣＨＯ、ロバスタチン、α－メチル－クラスト－ラクタシスチン－β－ラクトン、メビノリン、ＭＫ－８０３、ＮＩＰ－Ｌ３ＶＳ、ＮＰ－ＬＬＬ－ＶＳ、ＮＰＩ－００５２（サリノスポラミドＡ）、ＭＬＮ５１９（ＰＳ－５１９）、ＮＬＶＳ（トリロイシンビニルスルホン）、リトナビル、Ｒｏ１０６－９９２０、Ｚ－ＬＬＦ－ＣＨＯ、Ｚ－ＬＬ－Ｂ（ＯＨ）２、ＲＲＲＰＲＰＰＹＬＰＲ、チロペプチンＡ、ＺＬ３ＶＳ、ＰＲ－１１、ＰＲ－３９、０１０６－９９２０、プロテアソーム阻害剤Ｉ、プロテアソーム阻害剤ＩＩ、プロテアソーム阻害剤ＩＩＩ、プロテアソーム阻害剤ＩＶ、ＡｄａＡｈｘ３Ｌ３ＶＳ、エフラペプチン、ＭＧ－１３２、ＭＧ－２６２、ＭＧ－１１５、α－メチルオムラリド、ＭＧ－１０１、エポキソミシン、オムラリド、ラクタシスチン、およびＮＥＯＳＨ１０１からなる群から選択される、請求項１５に記載の組合せ剤。

【請求項17】

請求項１から１６のいずれかに記載の組合せ剤と抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤を対象に投与するための説明書とを含む、キット。

【請求項18】

抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤が、単一の組成物中にある、請求項１７に記載のキット。

【請求項19】

抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤が、別々の組成物中にある、請求項１８に記載のキット。

【請求項20】

請求項１７から１９のいずれかに記載の組合せ剤と抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤を対象に投与するための説明書とを含む、キット。

【請求項21】

抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤が、単一の組成物中にある、請求項２０に記載のキット。

【請求項22】

抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤が、別々の組成物中にある、請求項２１に記載のキット。

【請求項23】

ａ．治療有効量の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を含む組成物；および
ｂ．治療有効量の免疫療法剤を含む組成物
のいずれか１つ、ならびにａ．およびｂ．を、順にまたは同時に、対象に投与するための説明書を含む、キット。

【請求項24】

ａ．治療有効量の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を含む組成物；ならびに
ｂ．イピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、トレメリムマブ、スパルタリズマブ、アベルマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、ＭＧＡ０１２、ＭＧＤ０１３、ＭＧＤ０１９、エノブリツズマブ、ＭＧＤ００９、ＭＧＣ０１８、ＭＥＤＩ０６８０、ＰＤＲ００１、ＦＡＺ０５３、ＴＳＲ０２２、ＭＢＧ４５３、レラトリマブ（ｒｅｌａｔｌｉｎａｂ）（ＢＭＳ９８６０１６）、ＬＡＧ５２５、ＩＭＰ３２１、ＲＥＧＮ２８１０（セミプリマブ）、ＲＥＧＮ３７６７、ペキシダルチニブ、ＬＹ３０２２８５５、ＦＰＡ００８、ＢＬＺ９４５、ＧＤＣ０９１９、エパカドスタット、インドキシミド、ＢＭＳ９８６２０５、ＣＰＩ－４４４、ＭＥＤＩ９４４７、ＰＢＦ５０９、リリルマブ、ＩＭＣ－００１、モナリズマブおよびこれらの組合せからなる群から選択される治療有効量の免疫療法剤を含む組成物
のいずれか１つ、ならびにａ．およびｂ．を、順にまたは同時に、対象に投与するための説明書を含む、キット。

【請求項25】

請求項１から１６のいずれか一項に記載の組合せ剤、または請求項１７から２４のいずれか一項に記載のキット、および薬学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤、またはこれらの任意の組合せの少なくとも１つを含む、医薬組成物。

【請求項26】

対象を処置する方法であって、
ａ．抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質；および
ｂ．免疫チェックポイント阻害剤
を含む組合せ剤を投与するステップを含む、方法。

【請求項27】

抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤が、同時に対象に投与される、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤が、順に対象に投与される、請求項２６に記載の方法。

【請求項29】

抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質が第１に投与され、免疫療法剤が第２に投与される、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

免疫療法剤が第１に投与され、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質が第２に投与される、請求項２８に記載の方法。

【請求項31】

第１および第２の投与が、１、２、３、６、１２、２４、４８、またはそれ以上の時間離れている、請求項２９または３０に記載の方法。

【請求項32】

投与が、Ｔ細胞機能の改善をもたらす、請求項２６から３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

Ｔ細胞機能の改善が、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）におけるＴ細胞浸潤の増加を含む、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

Ｔ細胞機能の改善が、腫瘍血管におけるＩＣＡＭ－１およびＶＣＡＭ－１の発現の増加を含む、請求項３２または３３に記載の方法。

【請求項35】

対象を処置する方法であって、
ａ．抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質；ならびに
ｂ．イピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、トレメリムマブ、スパルタリズマブ、アベルマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、ＭＧＡ０１２、ＭＧＤ０１３、ＭＧＤ０１９、エノブリツズマブ、ＭＧＤ００９、ＭＧＣ０１８、ＭＥＤＩ０６８０、ＰＤＲ００１、ＦＡＺ０５３、ＴＳＲ０２２、ＭＢＧ４５３、レラトリマブ（ｒｅｌａｔｌｉｎａｂ）（ＢＭＳ９８６０１６）、ＬＡＧ５２５、ＩＭＰ３２１、ＲＥＧＮ２８１０（セミプリマブ）、ＲＥＧＮ３７６７、ペキシダルチニブ、ＬＹ３０２２８５５、ＦＰＡ００８、ＢＬＺ９４５、ＧＤＣ０９１９、エパカドスタット、インドキシミド、ＢＭＳ９８６２０５、ＣＰＩ－４４４、ＭＥＤＩ９４４７、ＰＢＦ５０９、リリルマブ、ＩＭＣ－００１、モナリズマブおよびこれらの組合せからなる群から選択される免疫療法剤
を含む組合せ剤を投与するステップを含む、方法。

【請求項36】

抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤が、同時に対象に投与される、請求項３５に記載の方法。

【請求項37】

抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤が、順に対象に投与される、請求項３５に記載の方法。

【請求項38】

抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質が第１に投与され、免疫療法剤が第２に投与される、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

免疫療法剤が第１に投与され、抗ＴＭ４ＳＦ結合タンパク質が第２に投与される、請求項３７に記載の方法。

【請求項40】

第１および第２の投与が、１、２、３、６、１２、２４、４８、またはそれ以上の時間離れている、請求項３８または３９に記載の方法。

【請求項41】

投与が、Ｔ細胞機能の改善をもたらす、請求項３５から４０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

Ｔ細胞機能の改善が、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）におけるＴ細胞浸潤の増加を含む、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

Ｔ細胞機能の改善が、腫瘍血管におけるＩＣＡＭ－１およびＶＣＡＭ－１の発現の増加を含む、請求項４１または４２に記載の方法。

【請求項44】

対象においてＴ細胞応答を改善する方法であって、請求項１から１６のいずれか一項に記載の組合せ剤を投与するステップを含み、改善された応答がＴ細胞機能の改善と関連する、方法。

【請求項45】

Ｔ細胞機能の改善が、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）におけるＴ細胞浸潤の増加を含む、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

Ｔ細胞機能の改善が、腫瘍血管におけるＩＣＡＭ－１およびＶＣＡＭ－１の発現の増加を含む、請求項４４または４５に記載の方法。

【請求項47】

組合せ治療剤を投与するステップが、第１の処置および第２の処置を含む、請求項４４から４６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項48】

第１の処置が、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を含み、第２の処置が、免疫チェックポイント阻害剤を含む、請求項４７に記載の方法。

【請求項49】

第１の処置が、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を含み、第２の処置が、治療剤を含む、請求項４７に記載の方法。

【請求項50】

第１の処置および第２の処置が、１、２、３、４、５、または７日以内に実行される、請求項４７から４９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項51】

組合せ剤が、毎週、隔週、毎月、または半年毎に投与される、請求項２６から５０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項52】

対象が、転移を誘発する可能性がある処置を受けている、請求項２６から５１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項53】

処置が、外科手術、放射線処置および化学療法を含む、請求項５２に記載の方法。

【請求項54】

対象が、がんを有する、請求項２６から５３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項55】

がんが、前立腺がん、肝臓がん、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、三種陰性乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メラノーマ、非メラノーマ皮膚がん（扁平上皮癌および基底細胞癌）、神経膠腫、腎臓がん、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞性急性リンパ芽球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、食道がん、メルケル細胞がん、ＭＳＩ－ｈｉｇｈがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である、請求項５４に記載の方法。

【請求項56】

対象がヒトである、請求項２６から５５のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

相互参照
[0001]本出願は、参照により全体が本明細書に組み込まれる２０２１年３月２６日に出願された米国仮特許出願第６３／１６６８０５号の利益を主張する。

【背景技術】

【0002】

[0002]がん治療薬、特に原発性腫瘍ならびに浸潤性腫瘍細胞および転移を退縮させることができる、治療余地が改善した治療薬の必要性が未だある。

【0003】

[0003]腫瘍血管を破壊するように計画したがん治療は、毒性により過去に臨床試験が失敗している。例としては、血管破壊剤、例えばコンブレタスタチン（ＣＡ４Ｐ）が挙げられる。例えば、Ｇｒｉｓｈａｍら Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ ｗｉｔｈ ＣＡ４Ｐ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ：ｆｏｃｕｓ ｏｎ ｅｆｆｉｃａｃｙ，ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ａｄｖｅｒｓｅ ｅｖｅｎｔｓ，ａｎｄ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｏｎｃｏｌ Ｒｅｓ Ｐｒａｃｔ．２０１８；５：１を参照されたい。フェーズＩＩのＦＡＬＣＯＮ試験では、ＣＡ４Ｐは、全生存を１６．２～１３．６カ月減少させ、ＣＡ４Ｐにより処置している間に７人の患者が心臓発作を経験した。同文献。冠動脈心疾患および脳卒中が主な死因であり、いずれの血管標的化毒治療も致死毒性のリスクをもたらし得る。

【0004】

[0004]ＴＭ４ＳＦ１は、血管新生に機能的役割を有する内皮細胞マーカーである。例えば、Ｓｈｉｈら Ｔｈｅ Ｌ６ ｐｒｏｔｅｉｎ ＴＭ４ＳＦ１ ｉｓ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｏｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００９；６９（８）：３２７２～７を参照されたい。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0005】

[0005]一実施形態は、ａ．抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質；およびｂ．免疫療法剤を含む組合せ剤を提供する。一部の実施形態において、免疫療法剤は、サイトカイン、アジュバント、または免疫チェックポイント阻害剤である。一部の実施形態において、免疫療法剤は、抗体または抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、免疫療法剤は、骨髄系列の細胞、腫瘍細胞、リンパ系列の細胞、または腫瘍微小環境に存在するタンパク質に存在する標的に対する抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、免疫療法剤は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ４０、ＣＳＦ１／ＣＳＦ１Ｒ、ＳＩＲＰα、ＣＬＥＣ－１の少なくとも１つに対する抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、免疫療法剤は、ＣＣＲ４、ＣＴＬＡ－４、Ａ１Ｒ、Ａ２ＡＲ、Ａ３Ｒ、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＩＬＲａ／ＣＤ２５、ＩＴＧＢ１／ＣＤ２９、Ｌｙ ２４／ＣＤ４４、ＣＤ４８、ＣＥＡＣＡＭ１／ＣＤ６６ａ、Ｎｔ５ｅ／ＣＤ７３、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＦＡＳ／ＣＤ９５、ＳＬＡＦ１／ＣＤ１５０、ＮＲＰ１／ＣＤ３０４、ＧＩＴＲ／ＣＤ３５７、ＩＣＯＳ、Ｔｎｆｒｓ４／ＯＸ４０、Ｆｏｌｒ４／ＪＵＮＯ、Ｐ２Ｘ７、ＡＮＸＡ２、ＩＤＯ、Ｂ７－Ｈ６、ＫＩＲ、ＧＡＲＰ（ＬＲＲＣ３２）、ＴＮＦＲ２の少なくとも１つに対する抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、免疫療法剤は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ４７、ＴＤＯ、ＤｃＲ３の少なくとも１つに対する抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、免疫療法剤は、エクソソーム、サイトカイン、インターロイキン、またはケモカインの少なくとも１つに対する抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、免疫療法剤は、ＰＳ、ＰＤ－Ｌ１、ＳＴＩＮＧの少なくとも１つに対する抗体またはその抗原結合フラグメントである。

【0006】

[0006]一実施形態は、ａ．抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質；ならびにｂ．イピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、トレメリムマブ、スパルタリズマブ、アベルマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、ＭＧＡ０１２、ＭＧＤ０１３、ＭＧＤ０１９、エノブリツズマブ、ＭＧＤ００９、ＭＧＣ０１８、ＭＥＤＩ０６８０、ＰＤＲ００１、ＦＡＺ０５３、ＴＳＲ０２２、ＭＢＧ４５３、レラトリマブ（ｒｅｌａｔｌｉｎａｂ）（ＢＭＳ９８６０１６）、ＬＡＧ５２５、ＩＭＰ３２１、ＲＥＧＮ２８１０（セミプリマブ）、ＲＥＧＮ３７６７、ペキシダルチニブ、ＬＹ３０２２８５５、ＦＰＡ００８、ＢＬＺ９４５、ＧＤＣ０９１９、エパカドスタット、インドキシミド、ＢＭＳ９８６２０５、ＣＰＩ－４４４、ＭＥＤＩ９４４７、ＰＢＦ５０９、リリルマブ、ＩＭＣ－００１、モナリズマブ、およびこれらの組合せからなる群から選択される免疫療法剤を含む組合せ剤を提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、配列番号８、２０、３２、４４、５６、６８、８０、９６、１１８、１１９、１２０、１２１、または１６２に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号７、１９、３１、４３、５５、６７、７９、９５、１１６、１１７、または１６１に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号６、１８、３０、４２、５４、６６、７８、９４、１１５、または１６０に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１ドメインを含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号１４、２６、３８、５０、６２、７４、８６、１１０、１２９、または１５９に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ３ドメイン；配列番号１３、２５、３７、４９、６１、７３、８５、または１０９、１２８、または１５８に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ２ドメイン；および配列番号１２、２４、３６、４８、６０、７２、８４、１０７、１０８、１２４、１２５、１２６、１２７、または１５７に対して少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＤＲ１を含む軽鎖可変ドメインを含む。

【0007】

[0007]一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質はＩｇＧ Ｆｃ領域を含み、前記ＩｇＧ Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるようにＥＵインデックスにより番号付けられた場合、以下の位置：Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３７、Ｍ２５２、Ｓ２５４、Ｔ２５０Ｑ、Ｔ２５６Ｅ、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ｋ３２２、Ｐ３３１、Ｍ４２８、およびＮ４３４の少なくとも１つに突然変異を含む。一部の実施形態において、前記ＩｇＧ Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるようにＥＵインデックスにより番号付けられた場合、以下の突然変異：Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５０Ｑ、Ｔ２５６Ｅ、Ｄ２６５Ａ、Ｎ２９７Ｃ、Ｋ３２２Ａ、Ｐ３３１Ｇ、Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ、およびＮ４３４Ｓの少なくとも１つを含む。

【0008】

[0008]一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、治療分子にコンジュゲートされており、抗体薬物コンジュゲートを形成している。一部の実施形態において、治療分子は、プロテアソーム阻害剤、カリチアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、オーリスタチン、デュオカルマイシン、メイタンシノイド、およびこれらの任意の組合せからなる群から選択される。一部の実施形態において、治療分子は、プロテアソーム阻害剤を含み、プロテアソーム阻害剤は：ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ，ＰＳ－３４１）、ＰＲ－１７１（カルフィルゾミブ）、イキサゾミブ（Ｎｉｎｌａｒｏ（登録商標））、デランゾミブ、マリゾミブ、オプロゾミブ、ＶＲ２３、ＰＩ－１８４０、（ベンジルオキシカルボニル）－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－フェニルアラニン、２，３，５ａ，６－テトラヒドロ－６－ヒドロキシ－３－（ヒドロキシメチル（ｈｙｄｒｏｘｙｍｔｈｙｌ））－２－メチル－１０Ｈ－３ａ，１０ａ－エピジチオ－ピラジノール［１，２α］インドール－１，４－ジオン、４－ヒドロキシ－３－ニトロフェニルアセチル－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－ビニルスルホン、ｓａｐｏｊａｒｇｏｎ、Ａｃ－ｈＦＬＦＬ－エポキシド、アクラシノマイシンＡ、アクラルビシン、ＡＣＭ、ＡｄａＫ（Ｂｉｏ）Ａｈｘ３Ｌ３ＶＳ、ＡｄａＬｙｓ（Ｂｉｏ）Ａｈｘ３Ｌ３ＶＳ、アダマンタン－アセチル－（６－アミノへキサノイル）－３－（ｌｅｕｃｕｎｙｌ）－３－ビニル－（メチル）－スルホン、ＡＬＬＭ、ＡＬＬＮ、カルパイン阻害剤Ｉ、カルパイン阻害剤ＩＩ、カルボベンゾキシ－Ｌ－ロイシル－Ｌ－ロイシル－Ｌ－ロイシナール、カルボベンゾキシ－Ｌ－ロイシル－Ｌ－ロイシル－Ｌ－ノルバリナール、グリオトキシン、イソバレリー－Ｌ－チロシル－Ｌ－バリル－ＤＬ－チロシナール、クラスト－ラクタシスチン－β－ラクトン、Ｚ－ＬＬ－Ｎｖａ－ＣＨＯ、ユビキチンアルデヒド、ＹＵ１０１、ＭＰ－ＬＬＬ－ＶＳ、ＬＤＮ－５７４４４、Ｚ－ＧＰＦＬ－ＣＨＯ、Ｚ－ＬＬＬ－ＣＨＯ、ロバスタチン、α－メチル－クラスト－ラクタシスチン－β－ラクトン、メビノリン、ＭＫ－８０３、ＮＩＰ－Ｌ３ＶＳ、ＮＰ－ＬＬＬ－ＶＳ、ＮＰＩ－００５２（サリノスポラミドＡ）、ＭＬＮ５１９（ＰＳ－５１９）、ＮＬＶＳ（トリロイシンビニルスルホン）、リトナビル、Ｒｏ１０６－９９２０、Ｚ－ＬＬＦ－ＣＨＯ、Ｚ－ＬＬ－Ｂ（ＯＨ）２、ＲＲＲＰＲＰＰＹＬＰＲ、チロペプチンＡ、ＺＬ３ＶＳ、ＰＲ－１１、ＰＲ－３９、０１０６－９９２０、プロテアソーム阻害剤Ｉ、プロテアソーム阻害剤ＩＩ、プロテアソーム阻害剤ＩＩＩ、プロテアソーム阻害剤ＩＶ、ＡｄａＡｈｘ３Ｌ３ＶＳ、エフラペプチン、ＭＧ－１３２、ＭＧ－２６２、ＭＧ－１１５、α－メチルオムラリド、ＭＧ－１０１、エポキソミシン、オムラリド、ラクタシスチン、およびＮＥＯＳＨ１０１からなる群から選択される。

【0009】

[0009]一実施形態は、上記の実施形態のいずれかの組合せ剤と抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤を対象に投与するための説明書とを含むキットを提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤は、単一の組成物中にある。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤は、別々の組成物中にある。

【0010】

[0010]一実施形態は、上記の実施形態のいずれか１つの組合せ剤と抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤を対象に投与するための説明書とを含むキットを提供する。一部の実施形態において、結合タンパク質および免疫療法剤は、単一の組成物中にある。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤は、別々の組成物中にある。一実施形態は、ａ．治療有効量の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を含む組成物；およびｂ．治療有効量の免疫療法剤を含む組成物のいずれか１つ、ならびにａ．およびｂ．を、順にまたは同時に、対象に投与するための説明書を含むキットを提供する。

【0011】

[0011]一実施形態は、ａ．治療有効量の抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を含む組成物；ならびにｂ．イピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、トレメリムマブ、スパルタリズマブ、アベルマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、ＭＧＡ０１２、ＭＧＤ０１３、ＭＧＤ０１９、エノブリツズマブ、ＭＧＤ００９、ＭＧＣ０１８、ＭＥＤＩ０６８０、ＰＤＲ００１、ＦＡＺ０５３、ＴＳＲ０２２、ＭＢＧ４５３、レラトリマブ（ｒｅｌａｔｌｉｎａｂ）（ＢＭＳ９８６０１６）、ＬＡＧ５２５、ＩＭＰ３２１、ＲＥＧＮ２８１０（セミプリマブ）、ＲＥＧＮ３７６７、ペキシダルチニブ、ＬＹ３０２２８５５、ＦＰＡ００８、ＢＬＺ９４５、ＧＤＣ０９１９、エパカドスタット、インドキシミド、ＢＭＳ９８６２０５、ＣＰＩ－４４４、ＭＥＤＩ９４４７、ＰＢＦ５０９、リリルマブ、ＩＭＣ－００１、モナリズマブおよびこれらの組合せからなる群から選択される治療有効量の免疫療法剤を含む組成物のいずれか１つ、ならびにａ．およびｂ．を、順にまたは同時に、対象に投与するための説明書を含むキットを提供する。

【0012】

[0012]一実施形態は、上記の実施形態のいずれか１つに記載の組合せ剤または上記の実施形態のいずれか１つに記載のキット、および薬学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤、またはこれらの任意の組合せの少なくとも１つを含む医薬組成物を提供する。一実施形態は、対象を処置する方法であって、ａ．抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質；およびｂ．免疫チェックポイント阻害剤を含む組合せ剤を投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤は、同時に対象に投与される。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤は、順に対象に投与される。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質が第１に投与され、免疫療法剤が第２に投与される。一部の実施形態において、免疫療法剤が第１に投与され、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質が第２に投与される。一部の実施形態において、第１および第２の投与は、１、２、３、６、１２、２４、４８、またはそれ以上の時間離れている。一部の実施形態において、投与は、Ｔ細胞機能の改善をもたらす。一部の実施形態において、Ｔ細胞機能の改善は、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）におけるＴ細胞浸潤の増加を含む。一部の実施形態において、Ｔ細胞機能の改善は、腫瘍血管におけるＩＣＡＭ－１およびＶＣＡＭ－１の発現の増加を含む。

【0013】

[0013]一実施形態は、対象を処置する方法であって、ａ．抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質；ならびにｂ．イピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、トレメリムマブ、スパルタリズマブ、アベルマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、ＭＧＡ０１２、ＭＧＤ０１３、ＭＧＤ０１９、エノブリツズマブ、ＭＧＤ００９、ＭＧＣ０１８、ＭＥＤＩ０６８０、ＰＤＲ００１、ＦＡＺ０５３、ＴＳＲ０２２、ＭＢＧ４５３、レラトリマブ（ｒｅｌａｔｌｉｎａｂ）（ＢＭＳ９８６０１６）、ＬＡＧ５２５、ＩＭＰ３２１、ＲＥＧＮ２８１０（セミプリマブ）、ＲＥＧＮ３７６７、ペキシダルチニブ、ＬＹ３０２２８５５、ＦＰＡ００８、ＢＬＺ９４５、ＧＤＣ０９１９、エパカドスタット、インドキシミド、ＢＭＳ９８６２０５、ＣＰＩ－４４４、ＭＥＤＩ９４４７、ＰＢＦ５０９、リリルマブ、ＩＭＣ－００１、モナリズマブおよびこれらの組合せからなる群から選択される免疫療法剤を含む組合せ剤を投与するステップを含む方法を提供する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤は、同時に対象に投与される。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質および免疫療法剤は、順に対象に投与される。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質が第１に投与され、免疫療法剤が第２に投与される。一部の実施形態において、免疫療法剤が第１に投与され、抗ＴＭ４ＳＦ結合タンパク質が第２に投与される。一部の実施形態において、第１および第２の投与は、１、２、３、６、１２、２４、４８、またはそれ以上の時間離れている。一部の実施形態において、投与は、Ｔ細胞機能の改善をもたらす。一部の実施形態において、Ｔ細胞機能の改善は、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）におけるＴ細胞浸潤の増加を含む。一部の実施形態において、Ｔ細胞機能の改善は、腫瘍血管におけるＩＣＡＭ－１およびＶＣＡＭ－１の発現の増加を含む。

【0014】

[0014]一実施形態は、対象においてＴ細胞応答を改善する方法であって、上記の実施形態のいずれか１つに記載の組合せ剤を投与するステップを含み、改善された応答がＴ細胞機能の改善と関連する方法を提供する。一部の実施形態において、改善されたＴ細胞機能は、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）におけるＴ細胞浸潤の増加を含む。一部の実施形態において、改善されたＴ細胞機能は、腫瘍血管におけるＩＣＡＭ－１およびＶＣＡＭ－１の発現の増加を含む。一部の実施形態において、組合せ治療剤を投与するステップは、第１の処置および第２の処置を含む。一部の実施形態において、第１の処置は、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を含み、第２の処置は、免疫チェックポイント阻害剤を含む。一部の実施形態において、第１の処置は、抗ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を含み、第２の処置は、治療剤を含む。一部の実施形態において、第１の処置および第２の処置は、１、２、３、４、５、または７日以内に実行される。一部の実施形態において、組合せ剤は、毎週、隔週、毎月、または半年毎に投与される。

【0015】

[0015]一部の実施形態において、対象は、転移を誘発する可能性がある処置を受けている。一部の実施形態において、処置は、外科手術、放射線処置および化学療法を含む。一部の実施形態において、対象は、がんを有する。一部の実施形態において、がんは、前立腺がん、肝臓がん、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、三種陰性乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メラノーマ、非メラノーマ皮膚がん（扁平上皮癌および基底細胞癌）、神経膠腫、腎臓がん、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞性急性リンパ芽球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、食道がん、メルケル細胞がん、ＭＳＩ－ｈｉｇｈがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。一部の実施形態において、対象がヒトである、請求項２６から５５のいずれか一項に記載の方法。

【0016】

[0016]本発明の新規の特徴は添付の特許請求の範囲に詳細に記載される。本開示の特徴および利点のより良い理解は、例示的な実施形態を記載する以下の詳細な説明を参照することによって得られ、ここでは本開示の原理が利用され、その添付の図面は以下の通りである：

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】[0017]図１は、マウス腫瘍および内皮細胞における例示的な抗体１グループのキャップ付加抗ＴＭ４ＳＦ１抗体による結合親和性を示す図である。典型的には、例示的な抗体１グループの抗体の結合親和性は、細胞ベースのアッセイで３～７ｎＭ ＥＣ_５０である。

【図2-1】[0018]図２Ａ～２Ｂは、単独でまたは免疫チェックポイント阻害剤である抗ＰＤ－１抗体（Ｃｌｏｎｅ ＲＭＰ１－１４；ＢｉｏＸＣｅｌｌ）と組み合わせて、例示的な抗体１－Ｌ１である、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートを使用する、インビボでのＢ１６Ｆ１０（Ｃ５７Ｂｌ／６マウスと同系、図２Ａ）およびＣＴ２６（ＢＡＬＢ／ｃマウスと同系；図２Ｂ）の腫瘍退縮活性の結果を示す図である。両同系腫瘍モデルにおいて、抗ＰＤ－１抗体単独は、腫瘍退縮活性を示さなかったが、抗体を共注射した場合、例示的な抗体１－Ｌ１の腫瘍退縮活性を増強した。

【図2-2】[0018]図２Ａ～２Ｂは、単独でまたは免疫チェックポイント阻害剤である抗ＰＤ－１抗体（Ｃｌｏｎｅ ＲＭＰ１－１４；ＢｉｏＸＣｅｌｌ）と組み合わせて、例示的な抗体１－Ｌ１である、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートを使用する、インビボでのＢ１６Ｆ１０（Ｃ５７Ｂｌ／６マウスと同系、図２Ａ）およびＣＴ２６（ＢＡＬＢ／ｃマウスと同系；図２Ｂ）の腫瘍退縮活性の結果を示す図である。

【図3】[0019]図３は、マウス腫瘍および内皮細胞における例示的な抗体１グループのキャップ付加抗ＴＭ４ＳＦ１抗体による結合親和性を示す図である。

【図4-1】[0020]図４Ａ～４Ｈは、ビヒクルまたはアイソタイプ適合対照（ＩＳ－Ｃｔｌ）の単回注射によるか、または単独でもしくは免疫チェックポイント抗マウスＣＴＬＡ－４抗体（Ｃｌｏｎｅ９Ｈ１０）と組み合わせて例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートを使用する、インビボでのＣＴ２６（ＢＡＬＢ／ｃマウスと同系）の腫瘍増殖活性の結果を示す図である。図４Ａは、ビヒクル対照およびアイソタイプ適合対照抗体薬物コンジュゲート（ＩＳ－Ｃｔｌ）での腫瘍増殖を表すが、図４Ｅは、例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートの存在下での腫瘍増殖を示す。図４Ｂ～４Ｄは、３つの異なる用量（２．５、５、または１０ｍｐｋ）の抗マウスＣＴＬＡ－４抗体単独からの結果を示すが、図４Ｆ～４Ｈは、３つの異なる用量の抗マウスＣＴＬＡ－４抗体と例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１抗体１－Ｌ１の組合せを使用する結果を示す。

【図4-2】[0020]図４Ａ～４Ｈは、ビヒクルまたはアイソタイプ適合対照（ＩＳ－Ｃｔｌ）の単回注射によるか、または単独でもしくは免疫チェックポイント抗マウスＣＴＬＡ－４抗体（Ｃｌｏｎｅ９Ｈ１０）と組み合わせて例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートを使用する、インビボでのＣＴ２６（ＢＡＬＢ／ｃマウスと同系）の腫瘍増殖活性の結果を示す図である。

【図4-3】[0020]図４Ａ～４Ｈは、ビヒクルまたはアイソタイプ適合対照（ＩＳ－Ｃｔｌ）の単回注射によるか、または単独でもしくは免疫チェックポイント抗マウスＣＴＬＡ－４抗体（Ｃｌｏｎｅ９Ｈ１０）と組み合わせて例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートを使用する、インビボでのＣＴ２６（ＢＡＬＢ／ｃマウスと同系）の腫瘍増殖活性の結果を示す図である。

【図4-4】[0020]図４Ａ～４Ｈは、ビヒクルまたはアイソタイプ適合対照（ＩＳ－Ｃｔｌ）の単回注射によるか、または単独でもしくは免疫チェックポイント抗マウスＣＴＬＡ－４抗体（Ｃｌｏｎｅ９Ｈ１０）と組み合わせて例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートを使用する、インビボでのＣＴ２６（ＢＡＬＢ／ｃマウスと同系）の腫瘍増殖活性の結果を示す図である。

【図5-1】[0021]図５Ａ～５Ｄは、（図４Ａ～４Ｈに示すように）新しく調製したＣＴ２６腫瘍細胞による最初の投与後６０～７０日で腫瘍がない（ＴＦ）ことを示すＢＡＬＢ／ｃマウスの再チャレンジの結果を示す図である。８週齢のナイーブＢＡＬＢ／ｃマウスと６～８月齢の退役ＢＡＬＢ／ｃブリーダーは両方とも腫瘍増殖対照として使用し、再チャレンジするマウスと同数のＣＴ２６腫瘍細胞を接種させた。

【図5-2】[0021]図５Ａ～５Ｄは、（図４Ａ～４Ｈに示すように）新しく調製したＣＴ２６腫瘍細胞による最初の投与後６０～７０日で腫瘍がない（ＴＦ）ことを示すＢＡＬＢ／ｃマウスの再チャレンジの結果を示す図である。

【図6-1】[0022]図６Ａ～６Ｆは、単独でまたは免疫チェックポイント抗マウスＣＴＬＡ－４抗体（Ｃｌｏｎｅ９Ｈ１０）と組み合わせて、例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートを使用する、インビボでのＲｅｎｃａ（ＢＡＬＢ／ｃマウスと同系）の腫瘍退縮活性の結果を示す図である。図６Ａは、ビヒクル対照およびアイソタイプ適合対照抗体薬物コンジュゲート（ＩＳ－Ｃｔｌ）での腫瘍増殖を表すが、図６Ｄは、例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートの存在下での腫瘍増殖を示す。図６Ｂ～６Ｃは、２つの異なる用量（５、または１０ｍｐｋ）の抗マウスＣＴＬＡ－４抗体単独からの結果を示すが、図６Ｅ～６Ｆは、２つの異なる用量の抗マウスＣＴＬＡ－４抗体との例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１抗体１－Ｌ１の組合せを使用する結果を示す。

【図6-2】[0022]図６Ａ～６Ｆは、単独でまたは免疫チェックポイント抗マウスＣＴＬＡ－４抗体（Ｃｌｏｎｅ９Ｈ１０）と組み合わせて、例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートを使用する、インビボでのＲｅｎｃａ（ＢＡＬＢ／ｃマウスと同系）の腫瘍退縮活性の結果を示す図である。

【図6-3】[0022]図６Ａ～６Ｆは、単独でまたは免疫チェックポイント抗マウスＣＴＬＡ－４抗体（Ｃｌｏｎｅ９Ｈ１０）と組み合わせて、例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートを使用する、インビボでのＲｅｎｃａ（ＢＡＬＢ／ｃマウスと同系）の腫瘍退縮活性の結果を示す図である。

【図7-1】[0023]図７Ａ～７Ｄは、（図６Ａ～６Ｈに示すように）腫瘍がない（ＴＦ）ことを示すＢＡＬＢ／ｃマウスおよび退役ＢＡＬＢ／ｃブリーダーのＲｅｎｃａによる再チャレンジの結果を示す図である。

【図7-2】[0023]図７Ａ～７Ｄは、（図６Ａ～６Ｈに示すように）腫瘍がない（ＴＦ）ことを示すＢＡＬＢ／ｃマウスおよび退役ＢＡＬＢ／ｃブリーダーのＲｅｎｃａによる再チャレンジの結果を示す図である。

【図8-1】[0024]図８Ａ～８Ｈは、単独でまたは免疫チェックポイントＣＴＬＡ－４抗体（Ｃｌｏｎｅ９Ｈ１０）と組み合わせて、例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートを使用する、インビボでのＢ１６Ｆ１０（Ｃ５７Ｂｌ／６マウスと同系）の腫瘍退縮活性の結果を示す図である。図８Ａは、ビヒクル対照およびアイソタイプ適合対照抗体薬物コンジュゲート（ＩＳ－Ｃｔｌ）での腫瘍増殖を表すが、図８Ｅは、例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートの存在下での腫瘍増殖を示す。図８Ｂ～８Ｄは、３つの異なる用量（２．５、５、または１０ｍｐｋ）の抗マウスＣＴＬＡ－４抗体単独からの結果を示すが、図８Ｆ～８Ｈは、３つの異なる用量の抗マウスＣＴＬＡ－４抗体との例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１抗体１－Ｌ１の組合せを使用する結果を示す。

【図8-2】[0024]図８Ａ～８Ｈは、単独でまたは免疫チェックポイントＣＴＬＡ－４抗体（Ｃｌｏｎｅ９Ｈ１０）と組み合わせて、例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートを使用する、インビボでのＢ１６Ｆ１０（Ｃ５７Ｂｌ／６マウスと同系）の腫瘍退縮活性の結果を示す図である。

【図8-3】[0024]図８Ａ～８Ｈは、単独でまたは免疫チェックポイントＣＴＬＡ－４抗体（Ｃｌｏｎｅ９Ｈ１０）と組み合わせて、例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートを使用する、インビボでのＢ１６Ｆ１０（Ｃ５７Ｂｌ／６マウスと同系）の腫瘍退縮活性の結果を示す図である。

【図8-4】[0024]図８Ａ～８Ｈは、単独でまたは免疫チェックポイントＣＴＬＡ－４抗体（Ｃｌｏｎｅ９Ｈ１０）と組み合わせて、例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートを使用する、インビボでのＢ１６Ｆ１０（Ｃ５７Ｂｌ／６マウスと同系）の腫瘍退縮活性の結果を示す図である。

【図9-1】[0025]図９Ａ～９Ｈは、単独でまたは免疫チェックポイントＣＴＬＡ－４抗体（Ｃｌｏｎｅ９Ｈ１０）と組み合わせて、例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートを使用する、インビボでのＬＬＣ（Ｃ５７Ｂｌ／６マウスと同系）の腫瘍退縮活性の結果を示す図である。図９Ａは、ビヒクル対照およびアイソタイプ適合対照抗体薬物コンジュゲート（ＩＳ－Ｃｔｌ）での腫瘍増殖を表すが、図９Ｅは、例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートの存在下での腫瘍増殖を示す。図９Ｂ～９Ｄは、３つの異なる用量（２．５、５、または１０ｍｐｋ）の抗マウスＣＴＬＡ－４抗体単独からの結果を示すが、図９Ｆ～９Ｈは、３つの異なる用量の抗マウスＣＴＬＡ－４抗体との例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１抗体１－Ｌ１の組合せを使用する結果を示す。

【図9-2】[0025]図９Ａ～９Ｈは、単独でまたは免疫チェックポイントＣＴＬＡ－４抗体（Ｃｌｏｎｅ９Ｈ１０）と組み合わせて、例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートを使用する、インビボでのＬＬＣ（Ｃ５７Ｂｌ／６マウスと同系）の腫瘍退縮活性の結果を示す図である。

【図9-3】[0025]図９Ａ～９Ｈは、単独でまたは免疫チェックポイントＣＴＬＡ－４抗体（Ｃｌｏｎｅ９Ｈ１０）と組み合わせて、例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートを使用する、インビボでのＬＬＣ（Ｃ５７Ｂｌ／６マウスと同系）の腫瘍退縮活性の結果を示す図である。

【図9-4】[0025]図９Ａ～９Ｈは、単独でまたは免疫チェックポイントＣＴＬＡ－４抗体（Ｃｌｏｎｅ９Ｈ１０）と組み合わせて、例示的な抗体１－Ｌ１である抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲートを使用する、インビボでのＬＬＣ（Ｃ５７Ｂｌ／６マウスと同系）の腫瘍退縮活性の結果を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0018】

[0026]膜貫通－４Ｌ６ファミリーメンバー－１（ＴＭ４ＳＦ１）は、固形腫瘍起源のほとんどのヒト腫瘍上および内皮細胞、特に血管新生血管の活性化された内皮細胞において高度に発現されるテトラスパニンの形態を有する小さい膜糖タンパク質である。

【0019】

[0027]一実施形態において、血管標的化治療（例えば、内皮細胞バイオマーカーと相互作用する抗体、例えば抗血管新生抗体、例えば抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント、およびペイロード、例えば細胞傷害性ペイロードとコンジュゲートされた抗体）ならびに免疫療法剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤、サイトカイン、アジュバント）の使用によって腫瘍退縮を改善することができる組合せ剤が本明細書で提供される。この組合せ剤は、様々な魅力的特徴を含み得る。例えば、抗血管新生抗体は、少なくとも（１）血管新生が、がんの特徴であり、血管新生血管を破壊する治療は固形腫瘍の一般的な処置であり得る；（２）血管内皮は未変異の宿主システムであり、治療耐性に進化することができない；したがって、血管標的化治療は、標的組織が治療耐性に進化するおよび治療耐性になる、腫瘍細胞標的化治療に伴う共通問題を克服することができ；（３）腫瘍の血管内皮は、静脈内（ＩＶ）に注入された薬物に直接曝露され、したがって、腫瘍細胞に到達することができない薬物に接近可能にすることができ；ならびに（４）腫瘍血管破壊は、創傷治癒のための免疫細胞浸潤を促進するため、いくらかの利点を提供し得る。免疫チェックポイント受容体は、Ｔリンパ球にネガティブシグナルを送達するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）共シグナル伝達パートナーとして作用する。例えば、プログラム死タンパク質－１（ＰＤ－１）は、ネガティブ共刺激受容体であり、細胞傷害性Ｔリンパ球にネガティブシグナルを送達する。ＰＤ－１は、通常の条件下での自己免疫寛容に重要であるが、腫瘍細胞上に発現されたそのリガンドＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２と相互作用すると、腫瘍を抗腫瘍免疫応答から逃れさせることができ、Ｔ細胞枯渇の増加および抗腫瘍応答の減少をもたらし得る。抗ＰＤ－１抗体によるＰＤ－１の遮断または抗ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２抗体によるＰＤ－Ｌ１／Ｌ２の遮断は、ネガティブシグナルを遮断することができ、細胞傷害性Ｔ細胞の免疫機能の回復を助けることができる。遮断抗体、例えば腫瘍細胞に到達するＰＤ－Ｌ１の接近可能でないことは、固形腫瘍、特に、腫瘍細胞への薬物の接近を制限する高密度の線維性の間質を有する膵臓がんの表現型に似た腫瘍の標的化に重大な課題であり得る。したがって、腫瘍血管損傷を引き起こし、白血球浸潤を増強するかまたは標的腫瘍細胞へのＴ細胞を助ける免疫遮断抗体を送達する抗血管新生抗体を使用する組合せ治療剤は、コールドの腫瘍をホットにし、免疫療法を改善する有利な手法である。別の実施形態において、本開示は、抗血管新生ＡＤＣ（例えば、ペイロード、例えば細胞傷害性ペイロードとコンジュゲートした抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント；および免疫療法剤（例えば、免疫チェックポイント阻害剤）を含む、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含む組合せ剤を提供する。本開示は、一部の例において、がんを処置または予防するために上記の組合せ剤を使用する方法を含む。

【0020】

Ｉ．定義
[0028]本明細書において別段の定義がない限り、本開示と関連して使用される科学用語および専門用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。用語の意味および範囲は明確であるべきであるが、何らかの潜在的なあいまいさがある場合、本明細書で提供される定義が、いずれの辞書または非本質的な定義よりも優先される。さらに、文脈上別段の要求がなされない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。本出願において、「または」の使用は、別段の指定がない限り「および／または」を意味する。さらに、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、加えて他の形態、例えば「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」の使用は、非限定的である。

【0021】

[0029]一般的に、本明細書に記載される細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、ならびにタンパク質および核酸化学およびハイブリダイゼーションと関連して使用される学術名、およびその技術は、周知であり、当技術分野において一般的に使用されるものである。本発明の開示の方法および技術は、一般的に、別段の指定がない限り、当技術分野において周知の従来の方法に従って、さらに、本明細書中で引用および考察される様々な一般的な参考文献やより詳細な参考文献に記載されるように実行される。酵素反応および精製技術は、当技術分野で一般的に達成される通り、または本明細書に記載される通り、製造元の詳細な説明に従って実行される。本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、ならびに医薬および製薬化学と関連して使用される学術名、ならびにそれらの実験手順および技術は、周知であり、当技術分野において一般的に使用されるものである。化学合成、化学分析、医薬の調製、配合、および送達、ならびに患者の処置に関して、標準的な技術が使用される。

【0022】

[0030]用語「膜貫通－４Ｌ６ファミリーメンバー－１」または「ＴＭ４ＳＦ１」は、本明細書で使用される場合、腫瘍血管系内皮細胞（ＥＣ）、発生する網膜血管系のＥＣ上で発現される膜貫通４スーパーファミリー／テトラスパニンファミリーのポリペプチドを指し、腫瘍ＥＣ、腫瘍細胞（ＴＣ）、および血管新生の血管でより高発現する。ＴＭ４ＳＦ１は、４つの膜貫通ドメイン（Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３、およびＭ４）によって分離される２つの細胞外ループ（ＥＣＬ１およびＥＣＬ２）、ＮおよびＣ末端、ならびに細胞内ループ（ＩＣＬ）を有する。ＥＣＬ２は、２つのＮ－グリコシル化部位を含有する。ヒトＴＭ４ＳＦ１（ｈＴＭ４ＳＦ１）の例示的なアミノ酸配列は、配列番号１６６に記載される（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０５５０３５．１も参照）。

【0023】

[0031]用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、特定の抗原（例えば、ＴＭ４ＳＦ１）に特異的に結合するかまたはそれと相互作用する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むあらゆる抗原結合分子を意味する。用語「抗体」は、４つのポリペプチド鎖、すなわちジスルフィド結合によって相互連結された２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子、加えて、それらの多量体（例えば、ＩｇＭ）を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略記される）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略記される）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、超可変性を有する領域にさらに細かく分類でき、この領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより高度に保存された領域に散在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成され、これらは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて以下の順：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配列される。本開示の異なる実施形態において、抗ＴＭＳ４Ｆ１抗体（またはその抗原結合部位）のＦＲは、ヒト生殖細胞系配列に同一であってもよいし、または天然にもしくは人工的に改変されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つまたはそれより多くのＣＤＲの並行分析に基づき定義することができる。

【0024】

[0032]用語「無傷の抗体」は、４つのポリペプチド鎖、すなわちジスルフィド結合によって相互連結した２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む抗体を指す。一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体は、無傷の抗体である。一実施形態において、無傷の抗体は、無傷のヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４アイソタイプである。ある特定の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプである。

【0025】

[0033]抗体の「抗原結合部位」、抗体の「抗原結合フラグメント」、または「抗体フラグメント」などの用語は、本明細書で使用される場合、抗原と特異的に結合して複合体を形成する、あらゆる天然に存在する、酵素によって入手可能な、合成の、または遺伝子操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合フラグメントは、例えば、タンパク質分解消化、または抗体の可変ドメインおよび任意選択で定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を含む組換え遺伝子工学技術などのあらゆる好適な標準的技術を使用して、無傷の抗体分子から得ることができる。このようなＤＮＡは公知であり、および／または例えば、商業的な供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ－抗体ライブラリーなど）から容易に入手可能であり、または合成することができる。ＤＮＡは、シーケンシングし、化学的に、または分子生物学的技術を使用することによって操作して、例えば、１つまたは複数の可変および／または定常ドメインを好適な配置に配列する、またはコドンを導入する、システイン残基を作り出す、アミノ酸の改変、付加もしくは欠失などをもたらすことができる。

【0026】

[0034]抗原結合フラグメントの非限定的な例としては、（ｉ）Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント；（ｉｖ）Ｆｖフラグメント；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント；および（ｖｉｉ）抗体の高度可変領域（例えば、単離した相補性決定領域（ＣＤＲ）、例えばＣＤＲ３ペプチド）、または拘束性ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４ペプチドを模擬するアミノ酸残基からなる最小認識単位が挙げられる。

【0027】

[0035]抗体またはそのフラグメントの「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、本明細書で使用される場合、相補性決定領域（ＣＤＲ；すなわち、ＣＤＲ－１、ＣＤＲ－２、およびＣＤＲ－３）、およびフレームワーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列を含む、抗体分子の軽鎖および重鎖の部分を指す。ＶＨは、重鎖の可変ドメインを指す。ＶＬは、軽鎖の可変ドメインを指す。本開示で使用される方法によれば、ＣＤＲおよびＦＲに割り振られたアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９８７および１９９１））に従って定義することができる。抗体または抗原結合フラグメントのアミノ酸の番号付けも、Ｋａｂａｔの番号付けに従う。

【0028】

[0036]用語「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、本明細書で使用される場合、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖および軽鎖の可変領域のそれぞれの３つのＣＤＲがあり、これらは、可変領域のそれぞれにつきＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と指定される。用語「ＣＤＲセット」は、本明細書で使用される場合、抗原に結合が可能な単一の可変領域中に生じる３つのＣＤＲのグループを指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムに従って異なって定義されている。Ｋａｂａｔによって説明されるシステム（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ． （１９８７）および（１９９１）））は、抗体のあらゆる可変領域に適用可能な疑いのない残基の番号付けシステムを提供することに加えて、３つのＣＤＲを定義する正確な残基の境界も提供する。これらのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと称する場合もある。Ｃｈｏｔｈｉａおよび共同研究者（Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１～９１７（１９８７）およびＣｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７～８８３（１９８９））は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ内の特定の下位部分が、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一のペプチドバックボーンコンフォメーションをとることを見出した。これらの下位部分を、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３またはＨ１、Ｈ２およびＨ３と指定した。ここで「Ｌ」および「Ｈ」はそれぞれ軽鎖および重鎖領域を指示する。これらの領域は、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲと称する場合もあり、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとオーバーラップする境界を有する。Ｋａｂａｔ ＣＤＲとオーバーラップするＣＤＲを定義する他の境界は、Ｐａｄｌａｎ（ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３～１３９（１９９５））およびＭａｃＣａｌｌｕｍ（Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６２（５）：７３２～４５（１９９６））によって説明されている。さらに他のＣＤＲの境界の定義は、上記のシステムのどちらかに厳密に従っていない場合があるが、それでもＫａｂａｔ ＣＤＲとオーバーラップすると予想され、それにもかかわらず、それらは、特定の残基もしくは残基の群が、またはＣＤＲ全体も、抗原結合に顕著な影響を与えないという予測または実験的発見の観点で、短くしたりまたは長くしたりすることができる。本明細書で使用される方法は、これらのシステムのいずれかに従って定義されたＣＤＲを利用することができるが、好ましい実施形態は、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａによって定義されたＣＤＲを使用する。

【0029】

[0037]用語「フレームワーク領域」（以下ＦＲ）は、本明細書で使用される場合、ＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基を指す。各可変ドメインは、典型的には、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４として同定された４つのＦＲを有する。抗体またはその機能的なフラグメントの可変領域のうち共通の構造的特徴は当技術分野において周知である。特定の抗体をコードするＤＮＡ配列は、一般的に、周知の方法、例えば、参考文献として本明細書に組み込まれるＫａｂａｔら、１９８７ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤに記載される方法に従って見出すことができる。加えて、抗体から機能的な可変領域をクローニングするための一般的な方法は、参考文献として本明細書に組み込まれるＣｈａｕｄｈａｒｙ，Ｖ．Ｋ．ら、１９９０ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：１０６６に見出すことができる。

【0030】

[0038]抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」フラグメント、および残りの「Ｆｃ」フラグメントと呼ばれる、２つの同一の抗原結合フラグメントを産生し、命名は、容易に結晶化する能力を反映する。Ｆａｂフラグメントは、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）に沿ったＬ鎖全体、および１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）からなる。各Ｆａｂフラグメントは、抗原結合に関して一価であり、すなわちそれは単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処置は、二価の抗原結合活性を有する２つのジスルフィド連結したＦａｂフラグメントに大まかに相当する単一の大きなＦ（ａｂ’）２フラグメントを生じ、抗原を架橋することができる。抗体ヒンジ領域からの１つまたは複数のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に追加の少しの残基を有することにより、Ｆａｂ’フラグメントはＦａｂフラグメントと異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が遊離のチオール基を持つＦａｂ’の本明細書での命名である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、元々、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントの対として産生された。抗体フラグメントの他の化学的カップリングも公知である。Ｆｃフラグメントは、ジスルフィド結合によって結合された両Ｈ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域の配列によって決定され、その領域は、ある特定の型の細胞に見出されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される部分でもある。本明細書における用語「Ｆｃ領域」は、抗体重鎖のＣ末端領域を定義するのに使用され、例えば、天然配列のＦｃ領域、組換えＦｃ領域、およびバリアントＦｃ領域が含まれる。抗体重鎖のＦｃ領域の境界は変わる場合があるが、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端への伸長部分と定義されることが多い。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｋａｂａｔらに記載されるＥＵ番号付けシステムに従って残基４４７）は、例えば、抗体の産生または精製中に除去してもよいし、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することによって除去してもよい。したがって、無傷の抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、およびＫ４４７残基を有するおよび有さない抗体の混合物を有する抗体集団を含んでいてもよい。さらに、本開示の無傷の抗体の組成物は、Ｃ末端のリジン、Ｋ４４７の後に残基の伸長を有する抗体集団を含み得る。

【0031】

[0039]「バリアントＦｃ領域」は、本明細書に定義した少なくとも１つの「アミノ酸改変」により、天然配列のＦｃ領域のものとは異なるアミノ酸配列を含む。バリアントＦｃ領域は、天然配列のＦｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列のＦｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域の約１～約１０アミノ酸置換、約１～約５アミノ酸置換を有する。一実施形態において、本明細書のバリアントＦｃ領域は、天然配列のＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、少なくとも約８５％の相同性、少なくとも約９０％の相同性、少なくとも約９５％の相同性、または少なくとも約９９％の相同性を有する配列を有し得る。別の実施形態により、本明細書のバリアントＦｃ領域は、親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、少なくとも約８５％の相同性、少なくとも約９０％の相同性、少なくとも約９５％の相同性または少なくとも約９９％の相同性を有する配列を有し得る。

【0032】

[0040]用語「ヒト化抗体」は、本明細書で使用される場合、目的の抗原（例えば、ヒトＴＭ４ＳＦ１）に免疫特異的に結合し、実質的にヒト抗体のアミノ酸配列を有するフレームワーク（ＦＲ）領域と、実質的に非ヒト抗体のアミノ酸配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）とを含む、抗体またはそのバリアント、誘導体、類似体もしくはフラグメントを指す。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含有するキメラ免疫グロブリンである。一般的に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリンに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン配列のＦＲ領域である、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むと予想される。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦｃの少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体ヒト化方法は、当技術分野において公知である。例えば、全て参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３～７；Ｑｕｅｅｎらの、米国特許第５，５３０，１０１号；５，５８５，０８９号；５，６９３，７６１号；５，６９３，７６２号；および６，１８０，３７０号；ＥＰ２３９４００；ＰＣＴ公報ＷＯ９１／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３９号；ＥＰ５９２１０６；ＥＰ５１９５９６；Ｐａｄｌａｎ、１９９１、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２８：４８９～４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、１９９４、Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．７：８０５～８１４；Ｒｏｇｕｓｋａら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９１：９６９～９７３；ならびに米国特許第５，５６５，３３２号を参照されたい。

【0033】

[0041]用語「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用される場合、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、可能性のある突然変異、例えば少量で存在する可能性がある天然に存在する突然変異を除いて、同一である。したがって、修飾句「モノクローナル」は、分離した抗体の混合物ではないという抗体の特徴を示す。特定の実施形態において、このようなモノクローナル抗体は、典型的には、標的と結合するポリペプチド配列を含む抗体を含み、標的結合ポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列からの単一の標的結合ポリペプチド配列の選択を含むプロセスによって得られた。例えば、選択プロセスは、複数のクローンからの、例えばハイブリドーマクローン、ファージクローン、または組換えＤＮＡクローンのプールからの固有なクローンの選択であってもよい。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して向けられた異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一のエピトープに対して向けられる。

【0034】

[0042]用語「キメラ抗体」は、本明細書で使用される場合、所望の生物学的活性を示す限り、特定の種由来の、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同な重鎖および／または軽鎖の部分を有し、それと同時に、鎖の残部が、別の種由来の、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体、加えてこのような抗体のフラグメントにおける対応する配列と同一または相同である抗体（免疫グロブリン）を指す（米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１～６８５５（１９８４））。

【0035】

[0043]用語「エピトープ」は、本明細書で使用される場合、パラトープとして公知の抗体分子の可変領域中の特異的な抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原が、１つより多くのエピトープを有する場合もある。したがって、異なる抗体は、抗原上の異なる領域に結合する場合もあるし、異なる生物学的作用を有する場合もある。エピトープは、構造的または機能的と定義される場合もある。機能的エピトープは、一般的に、構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接的に寄与する残基を有する。またエピトープは、配座エピトープであってもよく、すなわち非線形（非連続）アミノ酸で構成されていてもよい。特定の実施形態において、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基などの化学的に活性な表面の分子群である決定基を含む場合もあり、特定の実施形態において、特定の３次元構造特徴、および／または特定の電荷の特徴を有していてもよい。エピトープは、連続アミノ酸（通常、線形エピトープ）またはタンパク質の三次元フォールディングによって並列する非連続アミノ酸（通常、構造的エピトープ）の両方から形成され得る。連続アミノ酸から形成されたエピトープは、典型的には、常にではないが、変性溶媒への暴露で維持されるが、三次元フォールディングによって形成されたエピトープは、典型的には、変成溶媒による処置で失われる。エピトープは、典型的には、ユニークな空間構造で少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５アミノ酸を含む。どのエピトープが所与の抗体によって結合されるか決定する方法（すなわち、エピトープマッピング）は、当技術分野で周知であり、例えば免疫ブロッティングおよび免疫沈降アッセイを含み、オーバーラップまたは連続ペプチド（例えばＴＲＥＭ－１）は、所与の抗体（例えば、抗ＴＲＥＭ－１抗体）との反応性について試験される。エピトープの空間構造を決定する方法は、当分野の技術および本明細書に記載のもの、例えばＸ線結晶解析、抗原変異解析、二次元核磁気共鳴およびＨＤＸ－ＭＳ（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）参照）を含む。

【0036】

[0044]用語「ペイロード」、「薬物ペイロード」、「治療分子」、「治療ペイロード」、「治療剤」、「治療成分」は、本明細書では置き換え可能に使用され、抗ＴＭＳＦ１抗体または抗原結合フラグメント（例えば、本明細書に開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメント）にコンジュゲートされる、化学成分または生物成分を指し、任意の治療剤または診断剤、例えば、これらに限定されないが、がんおよびがんでない血管新生兆候の小分子；Ｖ－ＡＴＰアーゼ阻害剤；アポトーシス促進剤；Ｂｃｌ２阻害剤；ＭＣＬ１阻害剤；ＨＳＰ９０阻害剤；ＩＡＰ阻害剤；ｍＴｏｒ阻害剤；微小管安定化剤；微小管不安定化剤；オーリスタチン；ドラスタチン；メイタンシノイド；ＭｅｔＡＰ（メチオニンアミノペプチダーゼ）；タンパク質ＣＲＭ１の核外移行の阻害剤；ＤＰＰＩＶ阻害剤；プロテアソーム阻害剤；ミトコンドリアにおけるホスホリル転移反応の阻害剤；タンパク質合成阻害剤；キナーゼ阻害剤（例えば、ＣＤＫ２阻害剤、ＣＤＫ９阻害剤）；キネシン阻害剤；ＨＤＡＣ阻害剤；ＤＮＡ傷害剤；ＤＮＡアルキル化剤；ＤＮＡインターカレーター；ＤＮＡ副溝結合剤；ＤＨＦＲ阻害剤；核酸；ＣＲＩＳＰＲ酵素；分解剤（例えば、タンパク質分解を誘導する薬剤、（例えば、ＨＳＰ９０阻害剤、選択的エストロゲン受容体分解剤（ＳＥＲＤ）、選択的アンドロゲン受容体分解剤（ＳＡＲＤ）；目的のタンパク質にシャペロンを動員するために使用され得る疎水性タグ、例えばアダマンタン、Ａｒｇ－Ｂｏｃ３；Ｅ３リガーゼを動員するリガンド、例えばＮｕｔｌｉｎ－３ａ（ＭＤＭ２リガンド）、ベスタチン（ｃＩＡＰリガンド）、ＶＨＬリガンド、ポマリドミド（ＣＲＢＮリガンド）；分解のために目的のタンパク質を標的化する異なるＤ３リガーゼを利用し得る、タンパク質分解誘導性キメラ（ＰＲＯＴＡＣ））（例えば、Ｌａｉ ＡＣ，Ｃｒｅｗｓ ＣＭ．Ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ：ａｎ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｐａｒａｄｉｇｍ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．２０１６；１６（２）：１０１～１１４を参照）；アンチセンスオリゴヌクレオチド；ＲＮＡｉ剤（例えばｓｉＲＮＡ）；ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９遺伝子編集システム；ＲＮＡ分子；ＤＮＡ、例えばプラスミド；抗がん剤、抗炎症剤、抗感染剤（例えば抗真菌剤、抗菌剤、抗寄生虫剤、抗ウイルス剤）、麻酔剤；ＲＮＡポリメラーゼＩＩ阻害剤；ＤＮＡ挿入剤、ＤＮＡ架橋剤；抗チューブリン剤；細胞傷害性薬、腫瘍ワクチン、抗体、ペプチド、ペプチボディー、化学療法剤、細胞傷害性剤；細胞増殖抑制剤；免疫調整剤、インターフェロン、インターロイキン、免疫賦活性の成長ホルモン、サイトカイン、ビタミン、ミネラル、アロマターゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）、ＨＤＡＣ阻害剤、１つまたは複数の治療分子をカプセル化する脂質ナノ粒子を含み得る。

【0037】

[0045]用語「薬物対抗体比」または「ＤＡＲ」は、本明細書に開示のＡＤＣの、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントに接着した、薬物（本明細書では、治療分子、治療剤、または治療成分とも称される）の数を指し得る。ＡＤＣのＤＡＲは、典型的には、１～１２の範囲であるが、より高い負荷、例えば１６も、抗体上の結合部位の数または複数の薬剤ペイロードが１つの結合部位に接着される多価結合の使用に応じて可能である。用語、ＤＡＲは、個々の抗体上に負荷された薬物分子の数を参照して使用され得る、または加えて、平均薬物負荷を反映するＡＤＣの群の平均または中間ＤＡＲを参照して使用され得る。組成物、バッチ、および／または複数のＡＤＣの製剤は、平均ＤＡＲによって特徴付けられ得る。ＤＡＲおよび平均ＤＡＲは、様々な従来の手段、例えばＵＶ分光法、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、放射測定法、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、電気泳動およびＨＰＬＣによって決定され得る。

【0038】

[0046]用語「結合親和性」は、一般的に、分子（例えば、抗体などの結合タンパク質）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合による相互作用の総計の強度を指す。結合分子Ｘ（例えば、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体）のその結合パートナーＹ（例えば、ヒトＴＭ４ＳＦ１）に対する親和性は、一般的に、解離定数（ＫＤ）によって表することができる。親和性は、本明細書に記載されるものなどの当技術分野において公知の一般的な方法によって測定することができる。低親和性抗体は、一般的に、ゆっくり抗原と結合し、容易に解離する傾向があり、それに対して高親和性抗体は、一般的に、より速く抗原と結合し、より長く結合したままの状態である傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法が当技術分野において公知であり、それらのいずれかは、本発明の開示の目的のために使用することができる。特定の例示的な実施形態は、以下を含む。一実施形態において、「ＫＤ」または「ＫＤ値」は、当技術分野において公知のアッセイによって、例えば結合アッセイによって測定することができる。ＫＤは、ＲＩＡで測定することができ、これは例えば、目的の抗体のＦａｂバージョンおよびその抗原を用いて実行される（Ｃｈｅｎら、１９９９、Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９３：８６５～８１）。ＫＤはまた、ＦＡＣＳ、またはＢＩＡＣＯＲＥによる、例えばＢＩＡＣＯＲＥ２０００もしくはＢＩＡＣＯＲＥ３０００を使用する、表面プラズモン共鳴アッセイを使用することによって、または例えばＯＣＴＥＴ ＱＫ３８４システムを使用するバイオレイヤー干渉法によっても測定できる。特定の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体のＫＤは、ＨＵＶＥＣ細胞を用いる標準的なフローサイトメトリーアッセイを使用して決定される。また、「オンレート」または「会合の速度」または「会合速度」または「ｋｏｎ」および「オフレート」または「解離の速度」または「解離速度」または「ｋｏｆｆ」も、例えばＢＩＡＣＯＲＥ２０００もしくはＢＩＡＣＯＲＥ３０００、またはＯＣＴＥＴ ＱＫ３８４システムを使用する、上述した同じ表面プラズモン共鳴またはバイオレイヤー干渉法技術で決定することができる。

【0039】

[0047]用語「ｋｏｎ」は、本明細書で用いられる場合、当技術分野において公知のように、抗体／抗原複合体を形成するための抗体の抗原への会合に関するオンレート定数を指すことが意図される。

【0040】

[0048]用語「ｋｏｆｆ」は、本明細書で用いられる場合、当技術分野において公知のように、抗体／抗原複合体からの抗体の解離に関するオフレート定数を指すことが意図される。

【0041】

[0049]用語「阻害」または「阻害する」は、本明細書で使用される場合、部分的な（例えば、１％、２％、５％、１０％、２０％、２５％、５０％、７５％、９０％、９５％、９９％の）または完全な（すなわち、１００％の）阻害を指す。

【0042】

[0050]用語「がん」は、本明細書で使用される場合、哺乳動物における典型的には無秩序な細胞増殖を特徴とする生理学的状態を指すかまたは記載する。

【0043】

[0051]用語「高い転移リスクを伴うがん」は、本明細書で使用される場合、がんを有する対象が転移がんを発症させるリスクを増加させることがわかっている少なくとも１つの因子に関連するがんを指す。転移リスクの増加に関連する因子の例としては、これらに限定されないが、対象が最初のがん診断時に有するがん性のリンパ節の数、腫瘍のサイズ、組織学的な格付け、および最初の診断時のがんの段階が挙げられる。

【0044】

[0052]用語「血行性転移」は、本明細書で使用される場合、がん細胞が血管壁に侵入し、その後、血流（循環腫瘍細胞）を介して体内の他の部位および組織に循環できる能力を指す。

【0045】

[0053]用語「リンパ転移」は、本明細書で使用される場合、がん細胞がリンパ管に侵入し、血管に排出する能力を指す。

【0046】

[0054]本開示に関して、用語「処置する」または「処置」は、本明細書で使用される場合、このような用語が適用される障害もしくは状態、またはこのような障害もしくは状態の１つまたは複数の症状を、回復させること、軽減すること、その進行を阻害すること、または予防することを意味する。用語「がんを処置する」は、本明細書で使用される場合、がん細胞の増殖および／または増殖の阻害を意味する。一実施形態において、本明細書に記載される組成物および方法は、転移がんを有する対象における転移を処置するのに使用される。

【0047】

[0055]用語「がんを予防する」または「がんの予防」は、発癌または腫瘍形成の発生が証明されていないが、例えば遺伝学的スクリーニングによって決定したかまたはそれ以外の方法によるかにかかわらず、がんの素因が同定されている哺乳動物におけるがんの発病を、遅らせること、阻害すること、または予防することを指す。この用語はまた、悪性になる前の状態を有する哺乳動物を処置して、悪性になる前の状態から悪性状態への進行を止める、またはそのような進行を逆行させることも包含する。悪性になる前の状態の例としては、過形成、形成異常、および異形成が挙げられる。一部の実施形態において、がんの予防は、がんからの寛解にある対象に関して使用される。

【0048】

[0056]悪性もしくは良性のおよび／または原発性もしくは続発性などの様々ながんが、本開示による方法で処置または予防することができる。このようながんの例は、当業者に公知であり、Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｍｅｒｃｋにより出版）などの標準的な教本に列挙される。

【0049】

[0057]用語「対象」は、本明細書で使用される場合、哺乳動物（例えば、ヒト）を指す。

【0050】

[0058]用語「投与する」は、本明細書で使用される場合、抗体またはそのフラグメント、または組成物（例えば、医薬組成物）の投薬量を対象に与える方法を指す。投与方法は、様々な要因（例えば、投与される結合タンパク質または医薬組成物、および処置される状態、疾患、または障害の重症度）に応じて変更することができる。

【0051】

[0059]用語「有効量」は、本明細書で使用される場合、所望の転帰をもたらすのに十分な、本明細書で提供される抗体または医薬組成物の量を指す。

【0052】

[0060]用語「約」および「およそ」は、所与の値または範囲の、２０％以内、１５％以内、１０％以内、９％以内、８％以内、７％以内、６％以内、５％以内、４％以内、３％以内、２％以内、１％以内、またはそれ未満を意味する。

【0053】

[0061]用語「同一性」、または「相同性」は、本明細書では置き換え可能に使用され、最適な比較目的で配列をアライメントすること（例えば、第１の配列の配列中にギャップを導入してもよい）によって決定できる２つまたはそれより多くのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の「同一性」、「相同性」、または「パーセント相同性」の計算値であり得る。次いで対応する位置のヌクレオチドを比較することができ、２つの配列間のパーセント同一性は、配列が共通する同一の位置の数の関数であり得る（すなわち、％相同性＝同一の位置の数／位置の合計数×１００）。例えば、第１の配列における位置は、第２の配列における対応する位置と同じヌクレオチドで占められていてもよく、その場合、分子はその位置で同一である。２つの配列間のパーセント相同性は、２つの配列の最適なアライメントのために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮に入れた、配列が共通する同一の位置の数の関数であり得る。一部の実施形態において、比較目的でアライメントされた配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９５％であり得る。ＢＬＡＳＴ（登録商標）検索は、２つの配列間の相同性を決定することができる。２つの配列は、遺伝子、ヌクレオチド配列、タンパク質配列、ペプチド配列、アミノ酸配列、またはそのフラグメントであり得る。２つの配列の実際の比較は、周知の方法によって、例えば数学的なアルゴリズムを使用して達成することができる。このような数学的なアルゴリズムの非限定的な例は、Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．およびＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０－５８７３－５８７７（１９９３）に記載され得る。このようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２５：３３８９～３４０２（１９９７）に記載されるように、ＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている場合もある。ＢＬＡＳＴおよびギャップ有りＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＮＢＬＡＳＴ）のあらゆる関連パラメーターを使用することができる。例えば、配列比較に関するパラメーターは、スコア＝１００、ワード長さ＝１２に設定してもよいし、または変更してもよい（例えば、Ｗ＝５またはＷ＝２０）。他の例としては、Ｍｙｅｒｓおよびミラー、ＣＡＢＩＯＳ（１９８９）のアルゴリズム、ＡＤＶＡＮＣＥ、ＡＤＡＭ、ＢＬＡＴ、およびＦＡＳＴＡが挙げられる。別の実施形態において、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、例えば、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）中のＧＡＰプログラムを使用して達成することができる。

【0054】

[0062]用語「製造性」は、本明細書で使用される場合、特定のタンパク質の組換え発現および精製中におけるそのタンパク質の安定性を指す。製造性は、発現および精製の条件下における分子の固有の特性によると考えられる。改善された製造性の特徴の例としては、タンパク質の均一なグリコシル化、増加した細胞力価、タンパク質の組換え産生中の増殖およびタンパク質発現、改善された精製特性、凝集する傾向が低いことまたは凝集しないこと、ならびにこれらに限定されないが、低いｐＨでの熱安定性および安定性などの改善された安定性が挙げられる。一部の実施形態において、他のＴＭ４ＳＦ１抗体と比較して、インビトロおよびインビボでの活性の保持と共に製造性を示すＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質が提供される。一部の実施形態において、ＣＤＲまたはフレームワーク領域中にアミノ酸置換をもたらすことによる親ＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質のヒト化は、追加の製造性の利益を付与することができる。

【0055】

[0063]一部の実施形態において、これらに限定されないが、例えばプロテインＡ精製またはサイズ排除クロマトグラフィー後の改善された精製収量、精製後の改善された均一性、改善された熱安定性などの改善された発展性の特徴を示すＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質が提供される。一部の場合において、改善は、ＨＬＡ分子結合によって決定した場合、ハイブリドーママウス細胞株８Ｇ４－５－１３－１３Ｆ（ＰＴＡ－１２０５２３）によって産生された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体に関する改善である。

【0056】

[0064]一部の例において、結合親和性は、スキャッチャード分析によって決定され、この分析は、未結合リガンドに結合したリガンドの濃度と結合したリガンドの濃度との比率のプロットであるスキャッチャードプロットを作成することを含む。

【0057】

[0065]用語「血管毒性」は、抗原担持細胞に作用する抗体または治療分子により直接、または免疫系の活性化または生じる炎症により間接的に血管傷害をもたらす、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体－治療分子コンジュゲート（本明細書では、抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣまたはＴＭ４ＳＦ１標的化ＡＤＣとも称される）の任意の効果を指す。そのような血管傷害は、これらに限定されないが、血管内皮細胞または下にある平滑筋細胞または周皮細胞、または心内膜（心臓の内膜）を含む、任意の血管の基底膜に影響する損傷または炎症を含み得る。そのような血管傷害は、主幹動脈、例えば大動脈、弾性動脈（大動脈など）、サイズが多様な筋動脈、例えば冠動脈、肺動脈、頸動脈、細動脈、毛細血管、脳または腎臓の動脈を含む動脈；細静脈（ｖｅｎｕｅｓ）、静脈に影響し得る；または毛嚢、消化管、および骨髄に供給する血管を含む、血管新生血管に影響し得る。そのような血管傷害は、心臓、肺、腎臓、網膜、脳、皮膚、肝臓、消化管、骨髄、内分泌腺、精巣または卵巣、子宮内膜、および他の標的器官における微小血管の機能障害または損傷を含み得る、ならびに腎臓、網膜または脳血管循環の機能障害を含み得る。

【0058】

[0066]用語「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）」は、本明細書で使用される場合、細胞傷害性顆粒の内容物の放出を特徴とする非食細胞プロセスを介した細胞傷害性エフェクター細胞によって、または細胞死誘導分子の発現によって、抗体被覆標的細胞を致死させることを指す。ＡＤＣＣは、標的結合抗体（ＩｇＧまたはＩｇＡまたはＩｇＥクラスに属する）と、特定のＦｃ受容体（ＦｃＲ）、すなわち免疫グロブリン（Ｉｇ）のＦｃ領域に結合するエフェクター細胞表面上に存在する糖タンパク質との相互作用を介して開始される。ＡＤＣＣを媒介するエフェクター細胞としては、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ、好中球、好酸球および樹状細胞が挙げられる。ＡＤＣＣは、迅速なエフェクターメカニズムであり、その効能は、多数のパラメーター（標的細胞の表面上の抗原の密度および安定性；抗体親和性ならびにＦｃＲ結合親和性）に依存する。ＰＢＭＣベースのＡＤＣＣアッセイおよびナチュラルキラー細胞ベースのＡＤＣＣアッセイは、ＡＤＣＣを検出するのに使用することができる。これらのアッセイにおける読み出しは、終点駆動型（標的細胞溶解）である。

【0059】

[0067]用語「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」は、相補物の存在下における標的細胞の溶解を指す。古典的補体経路の活性化は、補体系の第１の要素（Ｃ１ｑ）が、その同族抗原に結合する抗体（適切なサブクラスに属するもの）に結合することによって開始される。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイ（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏら、１９９６、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３を参照）を実行してもよい。変更されたＦｃ領域アミノ酸配列（バリアントＦｃ領域を有するポリペプチド）および増加または減少したＣ１ｑ結合能力を有するポリペプチドバリアントが記載されている（例えば、米国特許第６，１９４，５５１号；ＷＯ１９９９／５１６４２；Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、２０００、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８～８４を参照）。ＣＤＣ活性をほとんど有さない抗体（またはフラグメント）も使用のために選択され得る。

【0060】

[0068]用語「エフェクター機能」は、本明細書で使用される場合、ＩｇＧのＦｃエフェクタードメイン（例えば、免疫グロブリンのＦｃ領域）が寄与する機能を指す。このような機能は、例えば、Ｆｃエフェクタードメインが、食細胞または溶解活性を有する免疫細胞上のＦｃ受容体に結合することによって、またはＦｃエフェクタードメインが補体系の要素に結合することによって影響され得る。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；貪食（ＡＤＣＰ）；細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体）の下方調節；およびＢ細胞活性化が挙げられる。

【0061】

[0069]用語「低減する」または「消失させる」は、本明細書で使用される場合、全体で、好ましくは２０％以上、より好ましくは５０％以上、最も好ましくは７５％、８５％、９０％、９５％、またはそれより多くの減少を引き起こす能力を指す。低減または消失は、２つの分子の結合親和性、例えば、Ｃ１ｑまたはＦｃ受容体への免疫グロブリンへの結合を指す場合があり；または処置される障害（例えば、がん）の症状、例えば転移の存在もしくはサイズまたは原発性腫瘍のサイズを指す場合もある。

【0062】

[0070]用語「低減したＡＤＣＣ／ＣＤＣ機能」は、本明細書で使用される場合、対照（例えば突然変異を含まないＦｃ領域を有する抗体）と比較して、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％またはそれより多くの、特異的なエフェクター機能、例えばＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣの低減を指す。

【0063】

[0071]本発明の開示で考察される全てのアミノ酸位置に関して、抗体またはその抗原結合フラグメントの文脈において、番号付けはＥＵインデックスに従う。「ＥＵインデックス」または「Ｋａｂａｔらに記載されるＥＵインデックス」または「ＥＵ番号付けスキーム」は、ＥＵ抗体の番号付けを指す（Ｅｄｅｌｍａｎら、１９６９；Ｋａｂａｔら、１９９１を参照）。

【0064】

ＩＩ．抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント
[0072]一部の実施形態において、本明細書では、抗血管新生抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組合せ剤が提供され、抗血管新生抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書に記載される抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0065】

[0073]ＴＭ４ＳＦ１は、テトラスパニン形態を有するが相同性を有さない小さい原形質膜糖タンパク質である（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０５５０３５．１）（Ｗｒｉｇｈｔら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．９：１５９４～１６００、２０００）。これは、原形質膜上にＴＭ４ＳＦ１濃縮ドメイン（ＴＭＥＤ）を形成し、この場合、真のテトラスパニンのように、機能的に関連する膜およびサイトゾル分子を補充する分子促進剤として役立ち（Ｓｈｉｈら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６９：３２７２～３２７７、２００９；Ｚｕｋａｕｓｋａｓら、Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．１４：３４５～３５４、２０１１）、がん細胞増殖（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４６：３９１７～３９２３、１９８６）、運動性（Ｃｈａｎｇら、Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．１１６：２４３～２５２、２００５）、および転移（Ｒｉｃｈｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５９１６ｓ～５９２０ｓ、１９９５）において重要な役割を果たす。ヒトＴＭ４ＳＦ１タンパク質のアミノ酸配列（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０５５０３５．１）は、以下に配列番号１６５として示される。
ＭＣＹＧＫＣＡＲＣＩ ＧＨＳＬＶＧＬＡＬＬ ＣＩＡＡＮＩＬＬＹＦ ＰＮＧＥＴＫＹＡＳＥ ＮＨＬＳＲＦＶＷＦＦ ＳＧＩＶＧＧＧＬＬＭ ＬＬＰＡＦＶＦＩＧＬ ＥＱＤＤＣＣＧＣＣＧ ＨＥＮＣＧＫＲＣＡＭ ＬＳＳＶＬＡＡＬＩＧ ＩＡＧＳＧＹＣＶＩＶ ＡＡＬＧＬＡＥＧＰＬＣＬＤＳＬＧＱＷＮＹＴＦＡＳＴＥＧＱＹＬＬＤＴＳＴＷＳＥＣＴＥＰＫＨＩＶＥＷＮＶＳＬＦＳＩＬＬＡＬＧ ＧＩＥＦＩＬＣＬＩＱＶＩＮＧＶＬＧＧＩＣ ＧＦＣＣＳＨＱＱＱＹ ＤＣ（配列番号１６５）
[0074]一部の実施形態において、本開示の、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ドメインに特異的である。ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ドメインのアミノ酸配列は、ＥＧＰＬＣＬＤＳＬＧＱＷＮＹＴＦＡＳＴＥＧＱＹＬＬＤＴＳＴＷＳＥＣＴＥＰＫＨＩＶＥＷＮＶＳＬＦＳ（配列番号１６６）である。

【0066】

[0075]本明細書に提供される組合せ剤の一部である抗体の例は、表２に提供されるＴＭ４ＳＦ１特異的抗体を含む。表２に記載される抗ＴＭ４ＳＦ１抗体の例は、モノクローナルマウス抗体ＡＧＸ－Ａ０３、ＡＧＸ－Ａ０４、ＡＧＸ－Ａ０５、ＡＧＸ－Ａ０７、ＡＧＸ－Ａ０８、ＡＧＸ－Ａ０９、およびＡＧＸ－Ａ１１であり、ＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２領域に結合することができる。以下の表２にさらに提供されるのは、これらの抗体の一部のヒト化バージョン、ｈＡＧＸ－Ａ０７およびｈＡＧＸ－Ａ０１である。

【0067】

[0076]一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８７または８８に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号８７または８８に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一の配列を含むＩｇＧ重鎖定常領域を含む。

【0068】

[0077]別の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８９に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号８９に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一の、または１００％同一の配列を含む軽鎖定常領域を含む。

【0069】

[0078]別の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３、１５、２７、３９、５１、６３、または７５に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号３、１５、２７、３９、５１、６３、または７５に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一の、または１００％同一の配列を含む重鎖可変ドメインを含む。

【0070】

[0079]別の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号９０または９２に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号９０または９２に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一の、または１００％同一の配列を含む重鎖を含む。

【0071】

[0080]別の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号１１２または１１４に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１１２または１１４に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一の、または１００％同一の配列を含む重鎖を含む。

【0072】

[0081]別の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９、２１、３３、４５、５７、６９、または８１に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号９、２１、３３、４５、５７、６９、または８１に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一の、または１００％同一の配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。

【0073】

[0082]別の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号９７、９９、１０１、１０３、または１０５に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号９７、９９、１０１、１０３または１０５に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一の、または１００％同一の配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。別の実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号９７、９９、または１０１に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号９７、９９、または１０１に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一の、または１００％同一の配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。

【0074】

[0083]別の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号１２２に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１２２に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％同一の、または１００％同一の配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。

【0075】

[0084]一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６、１８、３０、４２、５４、６６、７８、９４、１１５、または１６０に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７、１９、３１、４３、５５、６７、７９、９５、１１６、１１７、または１６１に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８、２０、３２、４４、５６、６８、８０、９６、１１８、１１９、１２０、１２１、または１６２に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。

【0076】

[0085]一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２、２４、３６、４８、６０、７２、８４、１０７、１０８、１２４、１２５、１２６、１２７、または１５７に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３、２５、３７、４９、６１、７３、８５、１０９、１２８、または１５８に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４、２６、３８、５０、６２、７４、８６、１１０、１２９、または１５９に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0077】

[0086]一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号９４または配列番号１１５に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号９５、配列番号１１６、または配列番号１１７に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号９６、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、または配列番号１２１に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。

【0078】

[0087]一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、または配列番号１２７に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号１０９、または配列番号１２８に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号１１０、配列番号１１１、または配列番号１２９に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号１１０または配列番号１２９に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0079】

[0088]一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号１５７に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号１５８に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号１５９に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。

【0080】

[0089]一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号１６０に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号１６１に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されており、配列番号１６２に、少なくとも約８０％から少なくとも約８５％、少なくとも約８５％から少なくとも約９０％、少なくとも約９０％から少なくとも約９１％、少なくとも約９１％から少なくとも約９２％、少なくとも約９２％から少なくとも約９３％、少なくとも約９３％から少なくとも約９４％、少なくとも約９４％から少なくとも約９５％、少なくとも約９５％から少なくとも約９６％、少なくとも約９６％から少なくとも約９７％、少なくとも約９７％から少なくとも約９８％、少なくとも約９８％から少なくとも約９９％、または少なくとも約９９％から１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。

【0081】

[0090]マウスモノクローナル抗体ＡＧＸ－Ａ０３のアミノ酸配列は、表２に記載される。具体的には、重鎖ＣＤＲ配列は、配列番号６、７、および８（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載され、軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列は、配列番号１２、１３、および１４（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載される。配列番号６、７、および８のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む重鎖可変領域、および／または配列番号１２、１３、および１４のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。ＡＧＸ－Ａ０３のＣＤＲを含むヒト化抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。さらに、ＡＧＸ－Ａ０３の重鎖可変アミノ酸配列および軽鎖可変アミノ酸配列は、それぞれ配列番号３および９に記載される。

【0082】

[0091]マウスモノクローナル抗体ＡＧＸ－Ａ０４のアミノ酸配列は、表１に記載される。具体的には、重鎖ＣＤＲ配列は、配列番号１８、１９、および２０（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載され、軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列は、配列番号２４、２５、および２６（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載される。配列番号１８、１９、および２０のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む重鎖可変領域、および／または配列番号２４、２５、および２６のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。ＡＧＸ－Ａ０４のＣＤＲを含むヒト化抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。さらに、ＡＧＸ－Ａ０４の重鎖可変アミノ酸配列および軽鎖可変アミノ酸配列は、それぞれ配列番号１５および２１に記載される。

【0083】

[0092]マウスモノクローナル抗体ＡＧＸ－Ａ０５のアミノ酸配列は、表１に記載される。具体的には、重鎖ＣＤＲ配列は、配列番号３０、３１、および３２（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載され、軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列は、配列番号３６、３７、および３８（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載される。配列番号３０、３１、および３２のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む重鎖可変領域、および／または配列番号３６、３７、および３８のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。ＡＧＸ－Ａ０５のＣＤＲを含むヒト化抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。さらに、ＡＧＸ－Ａ０５の重鎖可変アミノ酸配列および軽鎖可変アミノ酸配列は、それぞれ配列番号２７および３３に記載される。マウスモノクローナル抗体ＡＧＸ－Ａ０７のアミノ酸配列は、表１に記載される。具体的には、重鎖ＣＤＲ配列は、配列番号４２、４３、および４４（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載され、軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列は、配列番号４８、４９、および５０（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載される。配列番号４２、４３、および４４のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む重鎖可変領域、および／または配列番号４８、４９、および５０のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。ＡＧＸ－Ａ０７のＣＤＲを含むヒト化抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。さらに、ＡＧＸ－Ａ０７の重鎖可変アミノ酸配列および軽鎖可変アミノ酸配列は、それぞれ配列番号３９および４５に記載される。

【0084】

[0093]一実施形態において、配列番号９０のアミノ酸配列に記載の重鎖配列を含むヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７（ｈＡＧＸ－Ａ０７）抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９０のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７（ｈｍＡＧＸ－Ａ０７）抗体またはその抗原結合フラグメントである。表１に示されるように、配列番号９０に記載の重鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ－Ａ０７Ｈ２とも称される。一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９０のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントであって、１つまたは複数の置換は、配列番号９０のアミノ酸位置１、４４、および８０にある、抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｅ１Ｑ（重鎖、配列番号９０の１位におけるグルタミン酸からグルタミンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｄ４４Ｇ（重鎖、配列番号９０の４４位におけるアスパラギン酸からグリシンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｆ８０Ｙ（重鎖、配列番号９０の８０位におけるフェニルアラニンからチロシンへの置換）を含む。一部の実施形態において、配列番号９２のアミノ酸配列に記載の重鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体または抗原結合フラグメントが提供される。表１に示されるように、配列番号９２に記載の重鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ－Ａ０７Ｈ２ｖ１とも称される。一部の実施形態において、配列番号９７のアミノ酸配列に記載の軽鎖配列を含むヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体または抗原結合フラグメントが提供される。表１に示されるように、配列番号９７に記載の軽鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ－Ａ０７Ｌ５とも称される。一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９７のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９７のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントであり、ここで１つまたは複数の置換は、配列番号９７のアミノ酸位置３、２６、６２、および９０にある。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｉ３Ｖ（軽鎖、配列番号９７の３位におけるイソロイシンからバリンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｎ２６Ｑ（軽鎖、配列番号９７の２６位におけるアスパラギンからグルタミンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｎ２６Ｓ（軽鎖、配列番号９７の２６位におけるアスパラギンからセリンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｇ６２Ｓ（軽鎖、配列番号９７の６２位におけるグリシンからセリンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｗ９０Ｙ（軽鎖、配列番号９７の９０位におけるトリプトファンからチロシンへの置換）を含む。一部の実施形態において、配列番号９９、配列番号１０１、配列番号１０３、および配列番号１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列に記載の軽鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体または抗原結合フラグメントが提供される。表１に示されるように、配列番号９９に記載の軽鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ－Ａ０７Ｌ５ｖ１とも称され、配列番号１０１に記載の軽鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ－Ａ０７Ｌ５ｖ２とも称され、配列番号１０３に記載の軽鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ－Ａ０７Ｌ５ｖ３とも称され、配列番号１０５に記載の軽鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ－Ａ０７Ｌ５ｖ４とも称される。ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖に関する例示的なコード配列は、配列番号９１で提供される。ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントの重鎖に関する例示的なコード配列は、配列番号９３で提供される。ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖に関する例示的なコード配列は、配列番号９８（ＡＧＸ－Ａ０７Ｌ５）で提供される。ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントの軽鎖に関する例示的なコード配列は、配列番号１００（ＡＧＸ－Ａ０７Ｌ５ｖ１）、配列番号１０２（ＡＧＸ－Ａ０７Ｌ５ｖ２）、配列番号１０４（ＡＧＸ－Ａ０７Ｌ５ｖ３）、および配列番号１０６（ＡＧＸ－Ａ０７Ｌ５ｖ４）で提供される。

【0085】

[0094]一実施形態において、配列番号１３０または配列番号１３２のアミノ酸配列に記載の重鎖可変ドメイン配列を含むヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３０または配列番号１３２のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖可変ドメイン配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントである。一実施形態において、配列番号１３１または配列番号１３３のアミノ酸配列に記載の軽鎖可変ドメイン配列を含むヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３１または配列番号１３３のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖可変ドメイン配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントである。

【0086】

[0095]一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３１のアミノ酸配列に記載の配列を含む軽鎖可変ドメイン配列、および配列番号１３０のアミノ酸配列に記載の配列を含む重鎖可変ドメイン配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３１のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖可変ドメイン配列、および配列番号１３０のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖可変ドメイン配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３３のアミノ酸配列に記載の配列を含む軽鎖可変ドメイン配列、および配列番号１３２のアミノ酸配列に記載の配列を含む重鎖可変ドメイン配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３３のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖可変ドメイン配列、および配列番号１３２のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖可変ドメイン配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５６のアミノ酸配列に記載の配列を含む重鎖配列、または配列番号１５６のアミノ酸配列中に１つまたは複数の置換を含む配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントである。

【0087】

[0096]一部の場合において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４、９５、および９６（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の重鎖ＣＤＲ配列、または配列番号９４、９５、および９６（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４、９５、および９６（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の重鎖ＣＤＲ配列、または配列番号９４、９５、および９６（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。

【0088】

[0097]一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４に記載の重鎖ＣＤＲ１配列、または配列番号９４に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖ＣＤＲ１配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９５に記載の重鎖ＣＤＲ２配列、または配列番号９５に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖ＣＤＲ２配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９６に記載の重鎖ＣＤＲ３配列、または配列番号９６に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。

【0089】

[0098]一部の場合において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０７、１０９、および１１０（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の軽鎖ＣＤＲ配列、または配列番号１０７、１０９、および１１０（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。一部の場合において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０７、１０９、および１１１（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の軽鎖ＣＤＲ配列、または配列番号１０７、１０９、および１１１（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。一部の場合において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０８、１０９、および１１０（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の軽鎖ＣＤＲ配列、または配列番号１０８、１０９、および１１０（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。一部の場合において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０８、１０９、および１１１（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の軽鎖ＣＤＲ配列、または配列番号１０８、１０９、および１１１（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。

【0090】

[0099]一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０７または１０８に記載の軽鎖ＣＤＲ１配列、または配列番号１０７または１０８に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖ＣＤＲ１配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０９に記載の軽鎖ＣＤＲ２配列、または配列番号１０９に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖ＣＤＲ２配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１０または１１１に記載の軽鎖ＣＤＲ３配列、または配列番号１１０または１１１に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖ＣＤＲ１配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１０に記載の軽鎖ＣＤＲ３配列、または配列番号１１０に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖ＣＤＲ１配列を含む。

【0091】

[0100]一部の実施形態において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７は、配列番号１３２中に以下のアミノ酸置換：Ｑ１Ｅ、Ｄ４４Ｇ、Ｆ８０Ｙを含む重鎖可変領域（本明細書ではＡＧＸ－Ａ０７Ｈ２とも称される）、および配列番号１３３中に以下のアミノ酸置換：Ｉ３Ｖ、Ｎ２６Ｑ、Ｇ６２Ｓを含む軽鎖可変領域（本明細書ではＡＧＸ－Ａ０７Ｌ５とも称される）を含む。一部の実施形態において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７は、配列番号１３２中に以下のアミノ酸置換：Ｑ１Ｅ、Ｄ４４Ｇ、Ｆ８０Ｙを含む重鎖可変領域、および配列番号１３３中に以下のアミノ酸置換：Ｉ３Ｖ、Ｎ２６Ｑ、Ｇ６２Ｓを含む軽鎖可変領域を含み、この重鎖は、ＣＤＲ１（配列番号９４）、ＣＤＲ２（配列番号９５）、およびＣＤＲ３（配列番号９６）を含み、この軽鎖は、ＣＤＲ１（配列番号１０８）、ＣＤＲ２（配列番号１０９）、およびＣＤＲ３（配列番号１１０）を含む。一部の実施形態において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７は、ＡＧＸ－Ａ０７Ｈ２ｖ１Ｌ５ｖ２であり、配列番号１３０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖（本明細書ではＡＧＸ－Ａ０７Ｈ２ｖ１とも称される）、および配列番号１３１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖（本明細書ではＡＧＸ－Ａ０７Ｌ５ｖ２とも称される）を含む。一部の実施形態において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０７は、配列番号９２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0092】

[0101]マウスモノクローナル抗体ＡＧＸ－Ａ０８のアミノ酸配列は、表１に記載される。具体的には、重鎖ＣＤＲ配列は、配列番号５４、５５、および５６（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載され、軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列は、配列番号６０、６１、および６２（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載される。配列番号５４、５５、および５６のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む重鎖可変領域、および／または配列番号６０、６１、および６２のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。ＡＧＸ－Ａ０８のＣＤＲを含むヒト化抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。さらに、ＡＧＸ－Ａ０８の重鎖可変アミノ酸配列および軽鎖可変アミノ酸配列は、それぞれ配列番号５１および５７に記載される。

【0093】

[0102]マウスモノクローナル抗体ＡＧＸ－Ａ０９のアミノ酸配列は、表１に記載される。具体的には、重鎖ＣＤＲ配列は、配列番号６６、６７、および６８（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載され、軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列は、配列番号７２、７３、および７４（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載される。配列番号６６、６７、および６８のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む重鎖可変領域、および／または配列番号７２、７３、および７４のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。ＡＧＸ－Ａ０９のＣＤＲを含むヒト化抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。さらに、ＡＧＸ－Ａ０９の重鎖可変アミノ酸配列および軽鎖可変アミノ酸配列は、それぞれ配列番号６３および６９に記載される。

【0094】

[0103]マウスモノクローナル抗体ＡＧＸ－Ａ１１のアミノ酸配列は、表１に記載される。具体的には、重鎖ＣＤＲ配列は、配列番号７８、７９、および８０（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載され、軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列は、配列番号８４、８５、および８６（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載される。配列番号７８、７９、および８０のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む重鎖可変領域、および／または配列番号８４、８５、および８６２のアミノ酸配列に記載のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。ＡＧＸ－Ａ１１のＣＤＲを含むヒト化抗体または抗原結合フラグメントが、本開示に含まれる。さらに、ＡＧＸ－Ａ１１の重鎖可変アミノ酸配列および軽鎖可変アミノ酸配列は、それぞれ配列番号７５および８１に記載される。

【0095】

[0104]ヒト化抗体ＡＧＸ－Ａ０１（ｈＡＧＸ－Ａ０１）のアミノ酸配列は、表１に記載される。表１に示されるように、配列番号１１２に記載の重鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ－Ａ０１Ｈ１とも称される。具体的には、重鎖ＣＤＲ配列は、配列番号１１５、１１６、および１１８（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載され、軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列は、配列番号１２４、１２８、および１２９（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）に記載される。さらに、例示的なヒト化されたＡＧＸ－Ａ０１の重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列は、それぞれ配列番号１１２および１２２に記載される。ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０１の重鎖および軽鎖の例示的なコード配列は、それぞれ配列番号１１３および１２３に記載される。

【0096】

[0105]一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１２のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１（ｈｍＡＧＸ－Ａ０１）抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１２のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントであり、１つまたは複数の置換は、配列番号１１２のアミノ酸位置６３および１０６にある。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｇ６３Ｓ（重鎖、配列番号１１２の６３位におけるグリシンからセリンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｄ１０６Ｅ（重鎖、配列番号１１２の１０６位におけるアスパラギン酸からグルタミン酸への置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｄ１０６Ｓ（重鎖、配列番号１１２の１０６位におけるアスパラギン酸からセリンへの置換）を含む。一部の実施形態において、配列番号１１４のアミノ酸配列に記載の重鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体または抗原結合フラグメントが提供される。表１に示されるように、配列番号１１４に記載の重鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ－Ａ０１Ｈ１ｖ１とも称される。

【0097】

[0106]一部の実施形態において、配列番号１２２のアミノ酸配列に記載の軽鎖配列を含むヒト化されたＡＧＸ－Ａ０１抗体または抗原結合フラグメントが提供される。表１に示されるように、配列番号１２２に記載の軽鎖配列はまた、本明細書でＡＧＸ－Ａ０１Ｌ１０とも称される。一部の実施形態において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２２のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２２のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントであり、１つまたは複数の置換は、配列番号１２２のアミノ酸位置１、３３、４２、５１、８６、および９０から選択される１つまたは複数のアミノ酸位置にある。一部の実施形態において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２２のアミノ酸配列に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖配列を含むヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントであり、１つまたは複数の置換は、配列番号１２２のアミノ酸位置１、３３、４２、５１、および８６から選択される１つまたは複数のアミノ酸位置にある。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ａ１Ｅ（軽鎖、配列番号１２２の１位におけるアラニンからグルタミン酸への置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｎ３３Ｓ（軽鎖、配列番号１２２の３３位におけるアスパラギンからセリンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｍ４２Ｑ（軽鎖、配列番号１２２の４２位におけるメチオニンからグルタミンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｖ５１Ｌ（軽鎖、配列番号１２２の５１位におけるバリンからロイシンへの置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｄ８６Ｅ（軽鎖、配列番号１２２の８６位におけるアスパラギン酸からグルタミン酸への置換）を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｉ９０Ｖ（軽鎖、配列番号１２２の９０位におけるイソロイシンからバリンへの置換）を含む。

【0098】

[0107]一部の場合において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１５（ＣＤＲ１）；１１６（ＣＤＲ２）；および１１８（ＣＤＲ３）に記載の重鎖ＣＤＲ配列、または配列番号１１５（ＣＤＲ１）；１１６（ＣＤＲ２）；および１１８（ＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１５（ＣＤＲ１）；１１６または１１７（ＣＤＲ２）；および１１８、１１９、１２０、または１２１（ＣＤＲ３）に記載の重鎖ＣＤＲ配列、または配列番号１１５（ＣＤＲ１）；１１６または１１７（ＣＤＲ２）；および１１８、１１９、１２０、または１２１（ＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。

【0099】

[0108]一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１５に記載の重鎖ＣＤＲ１配列、または配列番号１１５に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖ＣＤＲ１配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１６に記載の重鎖ＣＤＲ２配列、または配列番号１１６に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖ＣＤＲ２配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１７に記載の重鎖ＣＤＲ２配列、または配列番号１１７に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖ＣＤＲ２配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１８、１１９、１２０および１２１から選択される配列に記載の重鎖ＣＤＲ３配列、または配列番号１１８、１１９、１２０、および１２１から選択される配列中に１つまたは複数の置換を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む。

【0100】

[0109]一部の場合において、ヒト化されたＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２４（ＣＤＲ１）；１２８（ＣＤＲ２）；および１２９（ＣＤＲ３）に記載の軽鎖ＣＤＲ配列、または配列番号１２４（ＣＤＲ１）；１２８（ＣＤＲ２）；および１２９（ＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２４、１２５、１２６、もしくは１２７（ＣＤＲ１）；１２８（ＣＤＲ２）；および１２９（ＣＤＲ３）に記載の軽鎖ＣＤＲ配列、または配列番号１２４、１２５、１２６、もしくは１２７（ＣＤＲ１）；１２８（ＣＤＲ２）；および１２９（ＣＤＲ３）に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含むＣＤＲ配列を含む。

【0101】

[0110]一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２５、１２６、１２７、もしくは１２８に記載の軽鎖ＣＤＲ１配列、または配列番号１２５、１２６、１２７、もしくは１２８に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖ＣＤＲ１配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２９に記載の軽鎖ＣＤＲ２配列、または配列番号１２９に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖ＣＤＲ２配列を含む。一部の場合において、ヒト化突然変異ＡＧＸ－Ａ０１抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３０に記載の軽鎖ＣＤＲ３配列、または配列番号１３０に記載の配列中に１つまたは複数の置換を含む軽鎖ＣＤＲ１配列を含む。

【0102】

[0111]一実施形態において、本開示は、配列番号３に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号９に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号１５に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号２１に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号２７に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号３３に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号３９に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号４５に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号５１に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号５７に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号６３に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号６９に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号７５に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号８１に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９０に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号９７に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９０に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号９９に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９０に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号１０１に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９０に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号１０３に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９０に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号１０５に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９２に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号９７に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９２に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号９９に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９２に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号１０１に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９２に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号１０３に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号９２に記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメイン、および配列番号１０５に記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

【0103】

[0112]一実施形態において、本発明の開示は、配列番号３、配列番号１５、配列番号２７、配列番号３９、配列番号５１、配列番号６３、配列番号７５、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１１２、または配列番号１１４から選択されるアミノ酸配列に、少なくとも９５％同一の、少なくとも９６％同一の、少なくとも９７％同一の、少なくとも９８％同一の、少なくとも９９％同一の、または１００％同一の重鎖可変ドメイン配列を有し；配列番号９、配列番号２１、配列番号３３、配列番号４５、配列番号５７、配列番号６９、配列番号８１、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１、配列番号１０３、配列番号１０５、または配列番号１２２から選択されるアミノ酸配列に、少なくとも９５％同一の、少なくとも９６％同一の、少なくとも９７％同一の、少なくとも９８％同一の、少なくとも９９％同一の、または１００％同一の軽鎖可変ドメイン配列を有する抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本発明の開示は、配列番号３、配列番号１５、配列番号２７、配列番号３９、配列番号５１、配列番号６３、配列番号７５、配列番号９０、配列番号９２、配列番号１１２、または配列番号１１４から選択されるアミノ酸配列に、少なくとも９５％同一の、少なくとも９６％同一の、少なくとも９７％同一の、少なくとも９８％同一の、少なくとも９９％同一の、または１００％同一の重鎖可変ドメイン配列を有し；配列番号９、配列番号２１、配列番号３３、配列番号４５、配列番号５７、配列番号６９、配列番号８１、配列番号９７、配列番号９９、配列番号１０１、または配列番号１２２から選択されるアミノ酸配列に、少なくとも９５％同一の、少なくとも９６％同一の、少なくとも９７％同一の、少なくとも９８％同一の、少なくとも９９％同一の、または１００％同一の軽鎖可変ドメイン配列を有する抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

【0104】

[0113]一実施形態において、本開示は、ＩｇＧであり、それぞれ重鎖可変ドメインならびに重鎖定常領域ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含む２つの重鎖と、それぞれ軽鎖可変ドメインおよび軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む２つの軽鎖とを包含する４つのポリペプチド鎖を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体を含む。特定の実施形態において、抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４である。特定の実施形態において、抗体は、ヒトＩｇＧ１である。他の実施形態において、抗体は、ＩｇＧ２である。重鎖および軽鎖可変ドメイン配列は、表１に記載のＣＤＲを含有していてもよい。

【0105】

[0114]相補性決定領域（ＣＤＲ）は、軽鎖および重鎖可変ドメインの両方において高度可変領域として公知である。それより高度に保存された可変ドメインの部分は、フレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。所与の抗体のＣＤＲおよびフレームワーク領域（ＦＲ）は、Ｋａｂａｔら、上記；Ｌｅｆｒａｎｃら、上記および／またはＨｏｎｅｇｇｅｒおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、上記により説明されたシステムを使用して同定することができる。また、Ｋａｂａｔら（１９９１、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１～３２４２、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ、Ｖａ．）に記載される番号付けシステムも当業者によく知られている。これに関して、Ｋａｂａｔらは、あらゆる抗体に適用可能なＣＤＲの同定を含む可変ドメイン配列の番号付けシステムを定義した。

【0106】

[0115]１つまたは複数のＣＤＲを、共有結合または非共有結合のいずれかで分子に取り込むことで、それを抗原結合タンパク質にすることもできる。

【0107】

[0116]抗原結合タンパク質は、ＣＤＲをより大きいポリペプチド鎖の一部として取り込んでいてもよいし、共有結合でＣＤＲが別のポリペプチド鎖に連結されていてもよいし、または非共有結合でＣＤＲを取り込んでいてもよい。ＣＤＲは、抗原結合タンパク質が目的の特定の抗原に特異的に結合することを許容する。特にＣＤＲ３は、抗体または抗体フラグメントの抗原結合において重要な役割を果たすことがわかっている。

【0108】

[0117]一実施形態において、本開示は、配列番号８、配列番号２０、配列番号３２、配列番号４４、配列番号５６、配列番号６８、または配列番号８０のいずれか１つに記載のＣＤＲ３ドメインを含む重鎖を含み、配列番号３、配列番号１５、配列番号２７、配列番号３９、配列番号５１、配列番号６３、または配列番号７５のいずれか１つに記載の配列に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変ドメインを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号１４、配列番号２６、配列番号３８、配列番号５０、配列番号６２、配列番号７４、または配列番号８６のいずれか１つに記載のＣＤＲ３ドメインを含む軽鎖を含み、配列番号９、配列番号２１、配列番号３３、配列番号４５、配列番号５７、配列番号６９、または配列番号８１のいずれか１つに記載の配列に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。したがって、特定の実施形態において、ＣＤＲ３ドメインは一定に保ちつつ、重鎖および／または軽鎖の残存するＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域に可変性が導入されてもよく、一方で抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＭ４ＳＦ１に結合する能力を保持し、親の機能的特徴、例えば結合親和性を保持するか、または親と比較して改善された機能的特徴、例えば結合親和性を有する。

【0109】

[0118]一実施形態において、本開示は、配列番号７、配列番号１９、配列番号３１、配列番号４３、配列番号５５、配列番号６７、または配列番号７９のいずれか１つに記載のＣＤＲ２ドメインを含む重鎖を含み、配列番号３、配列番号１５、配列番号２７、配列番号３９、配列番号５１、配列番号６３、または配列番号７５のいずれか１つに記載の配列に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変ドメインを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号１３、配列番号２５、配列番号３７、配列番号４９、配列番号６１、配列番号７３、または配列番号８５のいずれか１つに記載のＣＤＲ２ドメインを含む軽鎖を含み、配列番号９、配列番号２１、配列番号３３、配列番号４５、配列番号５７、配列番号６９、または配列番号８１のいずれか１つに記載の配列に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。したがって、特定の実施形態において、ＣＤＲ２ドメインは一定に保ちつつ、重鎖および／または軽鎖の残存するＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域に可変性が導入されてもよく、一方で抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＭ４ＳＦ１に結合する能力を保持し、親の機能的特徴、例えば結合親和性を保持するか、または親と比較して改善された機能的特徴、例えば結合親和性を有する。

【0110】

[0119]一実施形態において、本開示は、配列番号６、配列番号１８、配列番号３０、配列番号４２、配列番号５４、配列番号６６、または配列番号７８のいずれか１つに記載のＣＤＲ１ドメインを含む重鎖を含み、配列番号３、配列番号１５、配列番号２７、配列番号３９、配列番号４５、配列番号６９、または配列番号８１のいずれか１つに記載の配列に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む可変ドメインを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態において、本開示は、配列番号１２、配列番号２４、配列番号３６、配列番号４８、配列番号６０、配列番号７２、または配列番号８４のいずれか１つに記載のＣＤＲ１ドメインを含む軽鎖を含み、配列番号９、配列番号２１、配列番号３３、配列番号４５、配列番号５７、配列番号６９、または配列番号８１のいずれか１つに記載の配列に、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。したがって、特定の実施形態において、ＣＤＲ１ドメインは一定に保ちつつ、重鎖および／または軽鎖の残存するＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域に可変性が導入されてもよく、一方で抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＭ４ＳＦ１に結合する能力を保持し、親の機能的特徴、例えば結合親和性を保持する。

【0111】

[0120]一部の実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖を含み、前記Ｆｃ領域は、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１５１、配列番号１５２、および配列番号１５３からなる群から選択される配列を含み、または前記Ｆｃ領域は、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１５１、配列番号１５２、および配列番号１５３からなる群から選択される配列中に１つまたは複数の置換を含む配列を含む。例えば、一部の実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体はＦｃ領域を含み、前記Ｆｃ領域は、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１５１、配列番号１５２、および配列番号１５３からなる群から選択される配列に、少なくとも約７０％から約１００％、例えば少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一の配列を含む。

【0112】

[0121]一部の実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体は、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５４、配列番号１５５、および配列番号１５６からなる群から選択される配列を含む重鎖を含み、前記重鎖は、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５４、配列番号１５５、および配列番号１５６からなる群から選択される配列中に１つまたは複数の置換を含む配列を含む。例えば、一部の実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体は、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５４、配列番号１５５、および配列番号１５６からなる群から選択される配列に、少なくとも約７０％から約１００％、例えば少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％同一の配列を含む重鎖を含む。

【0113】

[0122]また表１に記載される抗ＴＭ４ＳＦ１抗体およびフラグメントは、ヒト化されていてもよい。非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法が当技術分野において公知である。例えば、ヒト化抗体は、非ヒト源からそれに導入される１つまたは複数のアミノ酸残基を有していてもよい。これらの非ヒトアミノ酸残基は、「インポート」残基と称されることが多く、これは、典型的には「インポート」可変ドメインから得られる。ヒト化は、例えば、Ｊｏｎｅｓら、１９８６、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２～２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３～２７；およびＶｅｒｈｏｅｙｅｎら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４～３６の方法に従って、高度可変領域配列をヒト抗体の対応する配列で置換することによって実行することができる。

【0114】

[0123]一部の場合において、ヒト化抗体は、ＣＤＲグラフティングによって構築され、この場合、親非ヒト抗体（例えば、げっ歯類）の６つのＣＤＲのアミノ酸配列が、ヒト抗体フレームワーク上にグラフト化される。例えば、Ｐａｄｌａｎらは、ＣＤＲ中の残基の約３分の１のみが実際に抗原と接触することを決定し、これらを「特異性決定残基」、またはＳＤＲと名付けた（Ｐａｄｌａｎら、１９９５、ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３～３９）。ＳＤＲグラフティングの技術において、ＳＤＲ残基のみが、ヒト抗体フレームワーク上にグラフト化される（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉら、２００５、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５～３４を参照）。

【0115】

[0124]ヒト化抗体の作製において使用される、ヒト可変ドメイン、軽鎖および重鎖の両方の選択は、抗原性を低減するのに重要であり得る。例えば、いわゆる「ベストフィット」方法に従って、非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の可変ドメインの配列は、公知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングされる。げっ歯類の配列に最も近いヒト配列が、ヒト化抗体のヒトフレームワークとして選択され得る（Ｓｉｍｓら、１９９３、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６～３０８；およびＣｈｏｔｈｉａら、１９８７、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１～１７）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列由来の特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークが、いくつかの異なるヒト化抗体に使用される可能性がある（Ｃａｒｔｅｒら、１９９２、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：４２８５～８９；およびＰｒｅｓｔａら、１９９３、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３～３２）。一部の場合において、フレームワークは、最も豊富なヒトサブクラスであるＶＬ６サブグループＩ（ＶＬ６Ｉ）およびＶＨサブグループＩＩＩ（ＶＨＩＩＩ）のコンセンサス配列由来である。別の方法において、ヒト生殖細胞系遺伝子は、フレームワーク領域の源として使用される。

【0116】

[0125]さらに、一般的に、抗体が、その抗原に対する親和性や他の好都合な生物学的特性を保持しながらヒト化されることが望ましい。この目標を達成するために、１つの方法によれば、ヒト化抗体は、親配列およびヒト化された配列の３次元モデルを使用した親配列および様々な概念のヒト化生成物の分析のプロセスによって調製される。３次元免疫グロブリンモデルが一般的に利用可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の可能性がある３次元立体配座構造を例示および表示するコンピュータープログラムが利用可能である。そのようなものとしては、例えば、ＷＡＭ（ＷｈｉｔｅｌｅｇｇおよびＲｅｅｓ、２０００、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３：８１９～２４）、Ｍｏｄｅｌｌｅｒ（ＳａｌｉおよびＢｌｕｎｄｅｌｌ、１９９３、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３４：７７９～８１５）、およびＳｗｉｓｓ ＰＤＢ Ｖｉｅｗｅｒ（ＧｕｅｘおよびＰｅｉｔｓｃｈ、１９９７、Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ １８：２７１４～２３）が挙げられる。これらの表示の検査は、候補免疫グロブリン配列の機能化における残基の可能性がある役割の分析、例えば、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を与える残基の分析を許容する。この方法では、ＦＲ残基は、所望の抗体の特徴、例えば標的抗原への親和性の増加が達成されるように、レシピエントおよびインポート配列から選択し組み合わせることができる。一般的に、高度可変領域残基は、直接的に、ほぼ実質的に、抗原結合への影響に関与する。

【0117】

[0126]ヒト化に使用可能なヒトフレームワーク領域としては、これらに限定されないが、「ベストフィット」方法を使用して選択されたフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１（１９９３）２２９６を参照）；軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列由来のフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９（１９９２）４２８５；およびＰｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１（１９９３）２６２３を参照）；ヒト成熟（体細胞突然変異）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ、およびＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３（２００８）１６１９～１６３３を参照）；およびＦＲライブラリーをスクリーニングすることによって得られたフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１９９７）１０６７８～１０６８４およびＲｏｓｏｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（１９９６）２２６１１～２２６１８を参照）が挙げられる。

【0118】

[0127]ヒト化抗体およびその作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ、およびＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３（２００８）１６１９～１６３３で総論され、さらに、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２（１９８８）３２３～３２９；Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６（１９８９）１００２９～１００３３；米国特許第５，８２１，３３７号、７，５２７，７９１号、６，９８２，３２１号、および７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６（２００５）２５～３４（ＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）グラフティングを説明する）；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８（１９９１）４８９～４９８（「リサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」を説明する）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６（２００５）４３～６０（「ＦＲシャッフリング」を説明する）；ならびにＯｓｂｏｕｒｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６（２００５）６１～６８およびＫｌｉｍｋａら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、８３（２０００）２５２～２６０（ＦＲシャッフリングへの「ガイド選択」アプローチを説明する）で説明される。

【0119】

[0128]一実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１×１０－６Ｍ以下のＫＤでカニクイザルＴＭ４ＳＦ１に結合する。

【0120】

[0129]特定の実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで決定した場合、約５×１０－８Ｍ以下のＫＤで、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合する。

【0121】

[0130]特定の実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０^－８Ｍ以下のＫ_ＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。

【0122】

[0131]特定の実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、約１×１０^－３Ｍから約１×１０^－４Ｍ、約１×１０^－４Ｍから約１×１０^－５Ｍ、約１×１０^－５Ｍから約１×１０^－６Ｍ、約１×１０^－６から約１×１０^－７Ｍ、約１×１０^－７から約１×１０^－８Ｍ、約１×１０^－８Ｍから約１×１０^－９Ｍ、約１×１０^－９Ｍから約１×１０^－１０Ｍ、約１×１０^－１０Ｍから約１×１０^－１１Ｍ、約１×１０^－１１Ｍから約１×１０^－１２Ｍ、約２×１０^－３Ｍから約２×１０^－４Ｍ、約２×１０^－４Ｍから約２×１０^－５Ｍ、約２×１０^－５Ｍから約２×１０^－６Ｍ、約２×１０^－６から約２×１０^－７Ｍ、約２×１０^－７から約２×１０^－８Ｍ、約２×１０^－８Ｍから約２×１０^－９Ｍ、約２×１０^－９Ｍから約２×１０^－１０Ｍ、約２×１０^－１０Ｍから約２×１０^－１１Ｍ、約２×１０^－１１Ｍから約２×１０^－１２Ｍ、約３×１０^－３Ｍから約３×１０^－４Ｍ、約３×１０^－４Ｍから約３×１０^－５Ｍ、約３×１０^－５Ｍから約３×１０^－６Ｍ、約３×１０^－６から約３×１０^－７Ｍ、約３×１０^－７から約３×１０^－８Ｍ、約３×１０^－８Ｍから約３×１０^－９Ｍ、約３×１０^－９Ｍから約３×１０^－１０Ｍ、約３×１０^－１０Ｍから約３×１０^－１１Ｍ、約３×１０^－１１Ｍから約３×１０^－１２Ｍ、約４×１０^－３Ｍから約４×１０^－４Ｍ、約４×１０^－４Ｍから約４×１０^－５Ｍ、約４×１０^－５Ｍから約４×１０^－６Ｍ、約４×１０^－６から約４×１０^－７Ｍ、約４×１０^－７から約４×１０^－８Ｍ、約４×１０^－８Ｍから約４×１０^－９Ｍ、約４×１０^－９Ｍから約４×１０^－１０Ｍ、約４×１０^－１０Ｍから約４×１０^－１１Ｍ、約４×１０^－１１Ｍから約４×１０^－１２Ｍ、約５×１０^－３Ｍから約５×１０^－４Ｍ、約５×１０^－４Ｍから約５×１０^－５Ｍ、約５×１０^－５Ｍから約５×１０^－６Ｍ、約５×１０^－６から約５×１０^－７Ｍ、約５×１０^－７から約５×１０^－８Ｍ、約５×１０^－８Ｍから約５×１０^－９Ｍ、約５×１０^－９Ｍから約５×１０^－１０Ｍ、約５×１０^－１０Ｍから約５×１０^－１１Ｍ、約５×１０^－１１Ｍから約５×１０^－１２Ｍ、約５×１０^－７Ｍから約５×１０^－１１Ｍ、約５×１０^－７Ｍ、約１×１０^－７Ｍ、約５×１０^－８Ｍ、約１×１０^－８Ｍ、約５×１０^－９Ｍ、約１×１０^－９Ｍ、約５×１０^－１０Ｍ、約１×１０^－１０Ｍ、約５×１０^－１１Ｍまたは約１×１０^－１１ＭのＫ_ＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、Ｋ_Ｄは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで決定される。

【0123】

[0132]特定の実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０^－１０Ｍ以下のＫ_ＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。

【0124】

[0133]特定の実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＥＫ２９３過剰発現細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０^－６Ｍ以下のＫ_ＤでカニクイザルＴＭ４ＳＦ１に結合する。一実施形態において、ＨＥＫ２９３細胞は、カニクイザルＴＭ４ＳＦ１を発現するようにトランスフェクトされている。さらなる実施形態において、ＨＥＫ２９３細胞は、１０^６コピーの１８Ｓ ｒＲＮＡ当たり約６００のｍＲＮＡコピーで、カニクイザルＴＭ４ＳＦ１を発現する。

【0125】

[0134]抗体または抗体フラグメントのＫ_Ｄを決定する方法は、当技術分野において公知である。例えば、表面プラズモン共鳴は、抗原に対する抗体のＫ_Ｄを決定するのに使用することができる（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を、約１０反応単位（ＲＵ）での固定化した抗原またはＦｃ受容体ＣＭ５チップと共に、２５℃で使用して）。特定の実施形態において、ＦＡＣＳまたはフローサイトメトリーは、Ｋ_Ｄを決定するのに使用され、ＴＭ４ＳＦ１を発現する細胞、例えばＨＥＫ２９３細胞またはＨＵＶＥＣ細胞は、抗体またはフラグメントに結合させて、標準的な方法に従ってＫ_Ｄを測定するのに使用される。フローサイトメトリーを使用する抗体の親和性決定は、例えば、Ｇｅｕｉｊｅｎら（２００５）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．３０２（１～２）：６８～７７に記載される。特定の実施形態において、ＦＡＣＳは、抗体の親和性を決定するのに使用される。

【0126】

[0135]一実施形態において、本開示は、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントが、表１に記載のＣＤＲアミノ酸配列に対して、少なくとも９５％同一の（または少なくとも９６％同一の、または少なくとも９７％同一の、または少なくとも９８％同一の、または少なくとも９９％同一の）ＣＤＲのアミノ酸配列を含むように、本明細書に記載される保存的アミノ酸置換を含むＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とする。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を有する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基で置換される置換である。一般的に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能特性を実質的に変化させないものである。２つまたはそれより多くのアミノ酸配列が保存的置換により互いに異なる場合、パーセント配列同一性または類似性の程度は、置換の保存的性質のために補正されるように上方調整される場合がある。この調整を行うための手段は当業者に周知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＰｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７～３３１を参照されたい。類似の化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸のグループの例としては、（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；（２）脂肪族ヒドロキシル側鎖：セリンおよびスレオニン；（３）アミドを含有する側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン；（５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン；（６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに（７）硫黄を含有する側鎖：システインおよびメチオニンが挙げられる。

【0127】

[0136]本開示はさらに、一態様において、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで決定した場合、約５×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄで、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合する抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを特徴とし、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＩｇＧフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域を含み、ヒトＩｇＧフレームワーク領域を含む重鎖可変領域を含む。一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト化されている。一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、カニクイザルＴＭ４ＳＦ１と交差反応する。

【0128】

[0137]本開示の別の態様において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで決定した場合、約５×１０^－８Ｍ以下のＫ_Ｄで、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループ上のエピトープに結合する、ヒト化された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントである。一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＥＫ２９３過剰発現細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０^－６Ｍ以下のＫ_ＤでカニクイザルＴＭ４ＳＦ１に結合する。一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約１×１０^－８Ｍ以下のＫ_ＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、１×１０^－３Ｍから約１×１０^－４Ｍ、約１×１０^－４Ｍから約１×１０^－５Ｍ、約１×１０^－５Ｍから約１×１０^－６Ｍ、約１×１０^－６から約１×１０^－７Ｍ、約１×１０^－７から約１×１０^－８Ｍ、約１×１０^－８Ｍから約１×１０^－９Ｍ、約１×１０^－９Ｍから約１×１０^－１０Ｍ、約１×１０^－１０Ｍから約１×１０^－１１Ｍ、約１×１０^－１１Ｍから約１×１０^－１２Ｍ、約２×１０^－３Ｍから約２×１０^－４Ｍ、約２×１０^－４Ｍから約２×１０^－５Ｍ、約２×１０^－５Ｍから約２×１０^－６Ｍ、約２×１０^－６から約２×１０^－７Ｍ、約２×１０^－７から約２×１０^－８Ｍ、約２×１０^－８Ｍから約２×１０^－９Ｍ、約２×１０^－９Ｍから約２×１０^－１０Ｍ、約２×１０^－１０Ｍから約２×１０^－１１Ｍ、約２×１０^－１１Ｍから約２×１０^－１２Ｍ、約３×１０^－３Ｍから約３×１０^－４Ｍ、約３×１０^－４Ｍから約３×１０^－５Ｍ、約３×１０^－５Ｍから約３×１０^－６Ｍ、約３×１０^－６から約３×１０^－７Ｍ、約３×１０^－７から約３×１０^－８Ｍ、約３×１０^－８Ｍから約３×１０^－９Ｍ、約３×１０^－９Ｍから約３×１０^－１０Ｍ、約３×１０^－１０Ｍから約３×１０^－１１Ｍ、約３×１０^－１１Ｍから約３×１０^－１２Ｍ、約４×１０^－３Ｍから約４×１０^－４Ｍ、約４×１０^－４Ｍから約４×１０^－５Ｍ、約４×１０^－５Ｍから約４×１０^－６Ｍ、約４×１０^－６から約４×１０^－７Ｍ、約４×１０^－７から約４×１０^－８Ｍ、約４×１０^－８Ｍから約４×１０^－９Ｍ、約４×１０^－９Ｍから約４×１０^－１０Ｍ、約４×１０^－１０Ｍから約４×１０^－１１Ｍ、約４×１０^－１１Ｍから約４×１０^－１２Ｍ、約５×１０^－３Ｍから約５×１０^－４Ｍ、約５×１０^－４Ｍから約５×１０^－５Ｍ、約５×１０^－５Ｍから約５×１０^－６Ｍ、約５×１０^－６から約５×１０^－７Ｍ、約５×１０^－７から約５×１０^－８Ｍ、約５×１０^－８Ｍから約５×１０^－９Ｍ、約５×１０^－９Ｍから約５×１０^－１０Ｍ、約５×１０^－１０Ｍから約５×１０^－１１Ｍ、約５×１０^－１１Ｍから約５×１０^－１２Ｍ、約５×１０^－７Ｍから約５×１０^－１１Ｍ、約５×１０^－７Ｍ、約１×１０^－７Ｍ、約５×１０^－８Ｍ、約１×１０^－８Ｍ、約５×１０^－９Ｍ、約１×１０^－９Ｍ、約５×１０^－１０Ｍ、約１×１０^－１０Ｍ、約５×１０^－１１Ｍまたは約１×１０^－１１ＭのＫ_ＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、Ｋ_Ｄは、ＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで決定される。一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＴＭ４ＳＦ１を発現するＨＵＶＥＣ細胞を使用する標準的なフローサイトメトリーアッセイで、約５×１０^－１０Ｍ以下のＫ_ＤでヒトＴＭ４ＳＦ１に結合する。

【0129】

[0138]一実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントのヒトＴＭ４ＳＦ１への結合は、ヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループのグリコシル化に依存的でなく、すなわち、抗体の結合は、ＥＣＬ２ループ（配列番号７７）内のＴＭ４ＳＦ１のグリコシル化から独立している。

【0130】

[0139]本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、いずれかのアイソタイプ（例えば、これらに限定されないが、ＩｇＧ、ＩｇＭ、およびＩｇＥ）のいずれかであり得る。特定の実施形態において、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧアイソタイプである。具体的な実施形態において、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４アイソタイプ由来である。特定の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、またはヒトＩｇＧ４アイソタイプである。

【0131】

[0140]ＩｇＧ２は、天然において、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性が最も低い（Ａｎら、ＭＡｂｓ．２００９年１１月～１２月；１（６）：５７２～５７９）。したがって、特定の実施形態において、ＩｇＧ２は、有利に使用される。しかしながら、ＩｇＧ２は、２つの余分なシステイン（４つのヒンジ間ジスルフィド結合を生じる）を有し、それにより抗体間ジスルフィド結合の形成を介した凝集が起こりやすくなる。関連する実施形態において、凝集を減少させるために、ＩｇＧ２システインへの突然変異が作製される。

【0132】

[0141]本発明の開示は、ＴＭ４ＳＦ１に結合する抗体フラグメントを提供する。特定の環境において、全抗体よりも抗体フラグメントを使用するほうが利点がある。フラグメントのサイズが小さいほど迅速なクリアランスが可能になり、それにより細胞、組織、または臓器への改善された接近をもたらすことができる。特定の抗体フラグメントの総論に関して、Ｈｕｄｓｏｎら、２００３、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．９：１２９～３４を参照されたい。

【0133】

[0142]抗体フラグメントを産生するための様々な技術が開発されてきた。従来、これらのフラグメントは、無傷の抗体のタンパク質分解消化を介して得られた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、１９９２、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４：１０７～１７；およびＢｒｅｎｎａｎら、１９８５、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１～８３を参照）。しかしながら、現在これらのフラグメントは、組換え宿主細胞によって直接産生することができる。Ｆａｂ、Ｆｖ、およびｓｃＦｖ抗体フラグメントは全て、Ｅ．ｃｏｌｉまたは酵母細胞で発現および分泌させることができ、したがって大量のこれらのフラグメントの容易な産生が可能である。抗体フラグメントは、上記で論じられた抗体ファージライブラリーから単離することができる。代替として、Ｆａｂ’－ＳＨフラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収し、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを形成することができる（Ｃａｒｔｅｒら、１９９２、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３～６７）。別のアプローチによれば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、組換え宿主細胞培養物から直接単離することができる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含むインビボでの半減期が増加したＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントは、例えば、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。抗体フラグメントを産生するための他の技術は、熟練した専門家には明らかであると予想される。特定の実施形態において、抗体は、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である（例えば、ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号および第５，５８７，４５８号を参照）。ＦｖおよびｓｃＦｖは、定常領域を欠く無傷の結合部位を有する。したがってそれらは、インビボでの使用中における非特異的な結合の低減に適している可能性がある。ｓｃＦｖ融合タンパク質を構築して、ｓｃＦｖのアミノまたはカルボキシ末端のいずれかにおけるエフェクタータンパク質の融合をもたらすことができる（例えば、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編、上記を参照）。抗体フラグメントはまた、「線状抗体」であってもよく、例えば、上記で引用された参考文献に記載されたものである。このような線状抗体は、単一特異性または多重特異性、例えば二重特異性であってもよい。

【0134】

[0143]特定の実施形態において、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、およびｓｃＦｖからなる群から選択される。

【0135】

[0144]例えばヒトＴＭ４ＳＦ１に高親和性を有する抗ＴＭ４ＳＦ１抗体（およびフラグメント）は、当技術分野において公知のスクリーニング技術を使用して同定することができる。例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、１９７５、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５～９７により最初に説明されたハイブリドーマ方法を使用して作製してもよいし、または組換えＤＮＡ方法によって作製してもよい（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）。

【0136】

[0145]ハイブリドーマ方法において、マウスまたは他の適切な宿主動物、例えばハムスターは、例えばヒトＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループまたはＴＭ４ＳＦ１を発現する細胞を使用することにより免疫化されて（それによってＥＣＬ２ループが細胞表面上に発現される）、免疫化に使用されるタンパク質に特異的に結合すると予想される抗体を産生するかまたは産生することが可能なリンパ球を惹起する。代替として、リンパ球は、インビトロで免疫化されてもよい。免疫化後、リンパ球を単離し、次いで好適な融合剤、例えばポリエチレングリコールを使用して骨髄腫細胞株と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ５９～１０３（１９８６））。

【0137】

[0146]このようにして調製されたハイブリドーマ細胞は、好適な培養培地中にシーディングされ、増殖させ、このような培養培地は、特定の実施形態において、融合していない親の骨髄腫細胞（融合パートナーとも称される）の増殖または生存を阻害する１つまたは複数の物質を含有する。例えば、親の骨髄腫細胞が酵素のヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を喪失している場合、ハイブリドーマに選択的な培養培地は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンを含むと予想され（ＨＡＴ培地）、これは、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防止するものである。

【0138】

[0147]例示的な融合パートナーである骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による安定して高レベルの抗体産生を維持し、融合していない親細胞を選択する選択的な培地に感受性を有するものである。例示的な骨髄腫細胞株は、マウス骨髄腫株、例えばＳＰ－２および誘導体、例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ．）より入手可能なＸ６３－Ａｇ８－６５３細胞、ならびにＳａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）より入手可能なＭＯＰＣ－２１およびＭＰＣ－１１マウス腫瘍由来のものである。またヒト骨髄腫およびマウス－ヒトヘテロミエローマ細胞株も、ヒトモノクローナル抗体産生に関して記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ、１９８４、Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１～０５；およびＢｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ５１～６３（１９８７））。

【0139】

[0148]ハイブリドーマ細胞が増殖する培養培地は、抗原に対して向けられたモノクローナル抗体の産生に関してアッセイされる。ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって、またはインビトロでの結合アッセイ、例えばＲＩＡもしくはＥＬＩＳＡによって決定される。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎら、１９８０、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７：２２０～３９に記載されるスキャッチャード分析によって決定することができる。

【0140】

[0149]所望の特異性、親和性、および／または活性を有する抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定されたら、クローンを限界希釈法によってサブクローニングし、標準的な方法によって増殖させる（Ｇｏｄｉｎｇ、上記）。この目的のために好適な培養培地としては、例えば、ＤＭＥＭまたはＲＰＭＩ－１６４０培地が挙げられる。加えて、ハイブリドーマ細胞は、動物において腹水腫瘍として、例えばマウスへの細胞のｉ．ｐ．注射によって、インビボで増殖させることができる。

【0141】

[0150]サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、好適には、培養培地、腹水、または血清から、例えば、アフィニティークロマトグラフィー（例えば、プロテインＡまたはプロテインＧ－セファロースを使用するもの）またはイオン交換クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析などの従来の抗体精製手順によって分離される。

【0142】

[0151]モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離およびシーケンシングされる。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの源として役立つ可能性がある。ＤＮＡは、単離されたら、発現ベクターに入れてもよく、次いで発現ベクターは、トランスフェクトされなければ抗体タンパク質を産生しない宿主細胞、例えばＥ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞にトランスフェクトされて、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成が達成される。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現に関する総論としては、Ｓｋｅｒｒａら、１９９３、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２５６～６２およびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、１９９２、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１～８８が挙げられる。

【0143】

[0152]さらなる実施形態において、モノクローナル抗体または抗体フラグメントは、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ： Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｏ’ＢｒｉｅｎおよびＡｉｔｋｅｎ編、２００２）に記載される技術を使用して生成した抗体ファージライブラリーから単離することができる。原則的に、合成抗体クローンは、ファージコートタンパク質に融合した抗体可変領域（Ｆｖ）の様々なフラグメントを提示するファージを含有するファージライブラリーをスクリーニングすることによって選択される。このようなファージライブラリーは、所望の抗原に対してスクリーニングされる。所望の抗原に結合することが可能なＦｖフラグメントを発現するクローンは抗原に吸着されるため、ライブラリー中の非結合クローンから分離される。次いで結合クローンは抗原から溶出され、さらに、抗原吸着／溶出の追加のサイクルによって濃縮することができる。

【0144】

[0153]可変ドメインは、例えばＷｉｎｔｅｒら、１９９４、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３～５５に記載されるように、ＶＨとＶＬとが短いフレキシブルなペプチドを介して共有結合で連結されている単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメントとして、またはそれぞれ定常ドメインに融合しており、非共有結合によって相互作用するＦａｂフラグメントとしてのいずれかで、ファージ上に機能的に提示させることが可能である。

【0145】

[0154]ＶＨおよびＶＬ遺伝子のレパートリーは、ＰＣＲによって別々にクローニングし、ファージライブラリー中でランダムに組み換えることができ、これは次いで、Ｗｉｎｔｅｒら、上記に記載されるように、抗原結合クローンに関して検索することができる。免疫化源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築することを必要とせずに、免疫原に対して高親和性の抗体を提供する。代替として、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、１９９３、ＥＭＢＯ Ｊ １２：７２５～３４で記載されるように、ナイーブレパートリーをクローニングして、免疫化をまったく行わなくても、多様な非自己に対する、さらには自己抗原にも対するヒト抗体の単一の源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリーはまた、例えば、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、１９９２、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１～８８によって記載されるように、幹細胞からの再配列されていないＶ－遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、インビトロでの再配列を達成することによって、合成的に作製することもできる。

【0146】

[0155]ライブラリーのスクリーニングは、当技術分野において公知の様々な技術によって達成することができる。例えば、ＴＭ４ＳＦ１（例えば、ＥＣＬ２ループまたは前記ループを発現する細胞の可溶性形態）を使用して、吸着プレートのウェルをコーティングする、吸着プレートに付着させた宿主細胞上で発現させる、またはセルソーティングで使用する、ストレプトアビジンでコーティングされたビーズを捕獲するためにビオチンにコンジュゲートする、またはディスプレイライブラリーをパニングするための他のあらゆる方法で使用することができる。遅い解離速度論（例えば、優れた結合親和性）を有する抗体の選択は、Ｂａｓｓら、１９９０、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ８：３０９～１４およびＷＯ９２／０９６９０に記載されるように、長い洗浄および１価ファージディスプレイの使用によって、さらに、Ｍａｒｋｓら、１９９２、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：７７９～８３に記載されるように抗原の低いコーティング密度の使用によって向上させることができる。

【0147】

[0156]抗ＴＭ４ＳＦ１抗体は、目的のファージクローンを選択するのに好適な抗原スクリーニング手順を設計し、それに続き、目的のファージクローンからの、ＶＨおよび／もしくはＶＬ配列（例えば、Ｆｖ配列）、またはＶＨおよびＶＬ配列からの様々なＣＤＲ配列、ならびにＫａｂａｔら、上記に記載される好適な定常領域（例えば、Ｆｃ）配列を使用して全長抗ＴＭ４ＳＦ１抗体クローンを構築することにより得ることができる。

【0148】

[0157]抗ＴＭ４ＳＦ１抗体のスクリーニングは、抗体がＴＭ４ＳＦ１のＥＣＬ２ループに治療的な親和性を有するかどうかを決定するために、当技術分野において公知の、および本明細書に記載される結合アッセイを使用して実行することができる。転移性の細胞活性を阻害したりまたは減少させたりする抗体の能力は、当技術分野における標準的なアッセイや、本明細書に記載される標準的なアッセイを使用して測定することができる。前臨床アッセイは、一般的に以下の３つのタイプのうち１つの転移の動物モデルの使用を必要とする：（ｉ）転移性マウス腫瘍細胞、例えばＢ１６Ｆ１０黒色腫ＴＣを、一般的に、肺転移を生成するために尾静脈注射を介して、肝臓転移を生成するために門脈または脾臓内注射を介して、または骨および他の転移を生成するために心臓の左心室への注射を介してマウスに注射すること；（ｉｉ）転移性腫瘍細胞または無傷の腫瘍フラグメントを、マウスに同所移植することであり、この方法はしばしば、原発性腫瘍増殖に関連する罹患率を抑えるために後の原発性腫瘍の外科的切除を必要とするもの；および（ｉｉｉ）遺伝子操作された自然転移のマウスモデルであり、そのうち最も一般的なものは、ＭＭＴＶ－Ｐｙｔ（マウス乳がんウイルス－ポリオーマウイルス中型Ｔ抗原）マウス乳癌モデルであり、これは、ヒトがん転移の極めてリアルなマウスモデルを提供し、半接合ＭＭＴＶ－ＰｙＭＴ雌の８５％より多くが、８～１６週齢で肺に転移する触診可能な乳がんを自然に発症するもの。生きた動物を画像化するか、またはＴＭ４ＳＦ１免疫遮断（ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｃｋａｄｅ）の程度の関数として致死させた動物の肺における転移性小結節を直接計数するかのいずれかによって肺における転移性の負荷量を定量化して、治療的なレベル、例えば肺転移の少なくとも５０％の低減が達成されることが、治療抗体が例えば本開示の方法で使用できることの指標となると予想される。さらに、異種間反応性アッセイは、当技術分野において公知である。使用できるアッセイの例は、例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれるＫｈａｎｎａおよびＨｕｎｔｅｒ（Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．２００５年３月；２６（３）：５１３～２３）ならびにＳａｘｅｎａおよびＣｈｒｉｓｔｏｆｏｒｉ（Ｍｏｌ Ｏｎｃｏｌ．２０１３年４月；７（２）：２８３～９６）に記載される。

【0149】

[0158]一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体およびその抗原結合フラグメントは、例えばがんを処置または予防するために使用され得る。特定の実施形態において、本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体および抗原結合フラグメントは、腫瘍細胞の転移を予防するのに使用することができる。本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体およびその抗原結合フラグメントは、一部の例において、腫瘍細胞と血管内皮細胞との相互作用を妨害することによって腫瘍細胞の転移を予防する。

【0150】

[0159]本開示の一実施形態は、抗血管新生抗体、例えば抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントおよび免疫療法剤を含む組合せ剤であって、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントが、改変されたＦｃ領域、例えば１つまたは複数の突然変異を含む、改変されたＩｇＧ領域（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）を含む、組合せ剤を提供する。一部の場合において、Ｆｃ領域における前記１つまたは複数の突然変異は、１）エフェクター機能の低減、２）半減期調節、３）安定性、および４）下流プロセスなどの改善の領域において、そのような改変されたＦｃ領域を含む薬物の改善をもたらす。一部の場合において、改変されたＦｃ領域は、抗体と免疫系の間の相互作用を低減または消失する１つまたは複数の突然変異を含み得る。重要な相互作用は、抗体Ｆｃと白血球および血小板上のＦｃγ受容体、および補体依存性細胞傷害をもたらす補体系のＣ１ｑとの相互作用を含み得る。

【0151】

[0160]本発明の開示は、一部の場合において、例えば、Ｆｃ領域、そのような場合では改変されたＦｃ領域、例えば、改変されたＩｇＧ Ｆｃ領域において免疫消失突然変異を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組合せ剤を提供する。一部の実施形態において、改変されたＦｃ領域は、Ｎ２９７位に改変を含む。一部の実施形態において、改変されたＦｃ領域は、Ｅ２３３、Ｌ２３４またはＦ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３７、Ｐ２３８、Ｆ２４３、Ｔ２５０、Ｍ２５２、Ｓ２５４、Ｔ２５６、Ｅ２５８、Ｄ２５９、Ｖ２６４、Ｄ２６５、Ｋ２８８、Ｎ２９７、Ｔ２９９、Ｔ３０７、Ｖ３０８、Ｑ３１１、Ｋ３２２、Ｌ３２８、Ｐ３２９、Ａ３３０、Ｐ３３１、Ｔ３５６、Ｋ３７０、Ａ３７８、Ｒ４０９、Ｖ４２７、Ｍ４２８、Ｈ４３３、Ｎ４３４、およびＨ４３５位、またはこれらの任意の組合せに、１つまたは複数の突然変異を含む、改変されたＩｇＧ Ｆｃ領域（例えば、改変されたＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含む。一部の実施形態において、Ｆｃ領域は、正電荷がＣ末端で維持されるように、そのＣ末端に残基の伸長を含む（例えば、一部の場合において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントが２つの重鎖を含む場合、少なくとも１つの重鎖がＣ末端に残基の伸長を含む）。残基のそのような伸長は、１つまたは複数のアミノ酸、例えばアルギニン、リジン、プロリン、またはこれらの任意の組合せの付加を含み得る。一部の例において、Ｆｃ領域の伸長したＣ末端は、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントのＣＤＣ機能の低減をもたらす。そのような効果は、一部の場合において、単独または他の突然変異との組合せで、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４におけるＦｃのＫ４４７の後のＫＰ残基の付加によって見られる（例えば、Ｋ３２２Ａ、Ｐ３３１Ｇ－ＩｇＧ１）。

【0152】

[0161]一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組合せ剤が提供され、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７および３２９の１つまたは複数の置換を含む、エフェクター機能が低減した抗体を含み得る（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号参照）。一部の場合において、Ｆｃ領域におけるそのような突然変異は、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７および３２７の２つまたはそれ以上における置換、例えば、残基２６５および２９７のアラニンへの置換（ＤＡＮＡ突然変異、すなわちＤ２６５ＡおよびＮ２９７Ａ）を含み得る（例えば、米国特許第７，３３２，５８１号参照）。一部の場合において、Ｆｃ領域における突然変異は、アミノ酸位置Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３７、Ｄ２６５、Ｎ２９７、Ｋ３２２、およびＰ３３１の１つまたは複数において置換を含み得る。一部の場合において、Ｆｃ領域における突然変異は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｋ３２２Ａ、およびＰ３３１Ｇの少なくとも１つ、またはこれらの任意の組合せを含み得る。例えば、Ｆｃ領域における突然変異は、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ（ＩｇＧ１）、またはＦ２３４Ａ／Ｌ２３５Ｅ（ＩｇＧ４）を含んでよく、そのような突然変異を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントは、変更されたＦｃｇＲＩ相互作用を示し得る。

【0153】

[0162]一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組合せ剤が提供され、以下の突然変異：Ｍ４２８位およびＮ４３４位におけるアミノ酸置換（Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ）を含むＦｃバリアントを含み得る（例えば、ＵＳ９８０３０２３を参照）。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の突然変異：Ｔ２５０位およびＭ４２８位におけるアミノ酸置換（Ｔ２５０Ｑ、Ｍ４２８Ｌ）を含むＦｃバリアントを含み得る（例えば、ＵＳ９８０３０２３を参照）。

【0154】

[0163]一部の実施形態において、突然変異Ｄ２６５ＡおよびＮ２９７Ａを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組合せ剤を提供する。一部の場合において、野生型ヒトＦｃ領域の３２９位のプロリン（Ｐ３２９）は、グリシンまたはアルギニン、またはＦｃのＰ３２９とＦｃｇＲＩＩＩのトリプトファン残基Ｗ８７およびＷ１１０の間に形成される、Ｆｃ／Ｆｃｙ受容体界面内のプロリンサンドイッチを破壊するのに十分な大きさのアミノ酸残基と置換され得る（例えば、Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ４０６、２６７～２７３（２０ Ｊｕｌｙ ２０００）を参照）。さらなる実施形態において、Ｆｃ領域における突然変異は、Ｓ２２８Ｐ（ＩｇＧ４）、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、またはＰ３３１Ｓなどの１つまたは複数のアミノ酸置換、さらに他の実施形態において、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４ＡおよびＬ２３５ＡまたはヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域のＳ２２８ＰおよびＦ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、またはＬ２３５Ｅを含み得る。

【0155】

[0164]一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＰ３２９がグリシンによって置換された野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＦｃバリアントであり、Ｆｃバリアントが、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域のＬ２３４ＡおよびＬ２３５ＡまたはヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域のＳ２２８ＰおよびＬ２３５Ｅにおいて少なくとも２つのさらなるアミノ酸置換を含み、残基がＥＵ番号付けに従って番号付けされる、改変されたＦｃ領域を含む（例えば、ＵＳ８９６９５２６を参照）、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組合せ剤を提供する。Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ置換を含むポリペプチドは、野生型ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域を含むポリペプチドによって誘導されるＡＤＣＣの少なくとも２０％までＡＤＣＣの下方調節、および／またはＡＤＣＰの下方調節のために、ヒトＦｃｙＲＩＩＩＡおよびＦｃｙＲＩＩＡへの親和性の低減を示し得る（例えば、ＵＳ８９６９５２６を参照）。

【0156】

[0165]一部の実施形態において、三重突然変異：Ｐ３２９位におけるアミノ酸置換、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ突然変異（Ｐ３２９／ＬＡＬＡ）を含むＦｃバリアントを含む（例えば、ＵＳ８９６９５２６を参照）、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組合せ剤を提供する。

【0157】

[0166]本開示の特定の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントは、本明細書に提供される組合せ剤の一部の実施形態において、ＦｃＲへの、改善または減退された結合を示す突然変異を含み得る（例えば、ＵＳ６７３７０５６、ＷＯ２００４／０５６３１２、およびＳｈｉｅｌｄｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１～６６０４（２００１）を参照）。

【0158】

[0167]一部の例において、ＡＤＣＣを改善する１つまたは複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、および／または３３４位における置換を有するＦｃ領域を含み得る、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントを含む組合せ剤を提供する。例えば、ＵＳ６１９４５５１、ＷＯ９９／５１６４２、およびＩｄｕｓｏｇｉｅら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８～４１８４に記載されるように、変更された（すなわち、改善または減退された）Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を生じる変更が、Ｆｃ領域に行われ得る。

【0159】

[0168]増加した半減期および新生児のＦｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体も、組合せ剤の一部の実施形態において、本明細書に提供する。母親のＩｇＧの胎児への移行のためのその機能にちなんで名付けられたＦｃＲｎはまた、それらをエンドソームにおいて捕捉し、それらを循環に戻すことにより、リソソームにおける分解から抗体を保護することに寄与する。（例えば、Ｇｕｙｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４）を参照）、ＵＳ２００５／００１４９３４に記載される。いずれの特定の理論にも縛られることなく、ＦｃＲｎへの結合が改善した抗体は、ＴＭ４ＳＦ１から離れ、ＦｃＲｎに結合し、次いで抗体をリサイクルして循環に戻し、したがって血管毒性を低減させると考えられる。一部の実施形態において、本明細書では、ＦｃＲｎリサイクルを強化する１つまたは複数の置換を有するＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントを含む組合せ剤を提供する。一部の実施形態において、本明細書では、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１つまたは複数の置換、例えば、位置：２３８、２５０、２５２、２５４、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２８、４２４、４３４、および４３５の１つまたは複数における置換、例えば、ＥＵ番号付けに従ってＦｃ領域残基４３４の置換（ＵＳ７３７１８２６）を有するＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組合せ剤を提供する。Ｆｃ領域バリアントの他の例に関し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｄｕｎｃａｎ＆ａｍｐ；Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８～４０（１９８８）；ＵＳ５６４８２６０；ＵＳ５６２４８２１；ＵＳ２００５／００１４９３４およびＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。

【0160】

[0169]一部の実施形態において、本明細書では、ｐＨ依存的ＦｃＲｎ結合親和性を有する、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組合せ剤を提供する。いずれの特定の理論にも縛られることなく、ｐＨ依存的ＦｃＲｎ結合親和性を有する抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｐＨ＞７でＦｃＲｎから離れ、ｐＨ６でＦｃＲｎに結合すると考えられる。したがって、酸性ｐＨの細胞内小器官、例えばエンドソームにおけるＦｃＲｎは、そのような抗体を結合し、抗体を細胞膜へと運び戻し、ｐＨ＞７で血漿へと抗体を放出し、抗体をリサイクルする。

【0161】

[0170]特定の実施形態において、本明細書では、ＦｃＲｎリサイクルを調節する１つまたは複数の置換を有するＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組合せ剤を提供する。一部の実施形態において、本明細書は、酸性ｐＨ、例えばｐＨ６でのＦｃＲｎ結合を強化し、中性または塩基性ｐＨ、例えばｐＨ７でのＦｃＲｎ結合に影響しない、１つまたは複数の置換を含む抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組合せ剤を提供する。一部の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＥＵ番号付けに従って、２５０位、２５２位、２５４位、２５６位、４２８位、および４３４位の１つまたは複数に置換を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。一部の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、置換Ｔ２５０Ｑ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｍ４２８Ｌ、およびＮ４３４Ｓの１つまたは複数を含むＦｃバリアントを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。一部の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、置換Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ（「ＱＬ突然変異」）を含むＩｇＧ１ Ｆｃバリアントを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。一部の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、置換Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ（「ＱＬ突然変異」）を含むＩｇＧ４ Ｆｃバリアントを含み得る、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。一部の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、置換Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ（「ＹＴＥ突然変異」）を含むＩｇＧ１ Ｆｃバリアントを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。一部の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、置換Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ（「ＬＳ突然変異」）を含むＩｇＧ１ Ｆｃバリアントを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。一部の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、置換Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ（「ＬＳ突然変異」）を含むＩｇＧ４ Ｆｃバリアントを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。ＦｃＲｎリサイクルを調節するＦｃ領域におけるアミノ酸置換の効果は、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｈａｍｂｌｅｔｔら、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍ．１３（７）：２３８７～９６（２０１６）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１（３３）：２３５１４～２４（２００６）、Ｈｉｎｔｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（８）：６２１３～６（２００３）、Ｈｉｎｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１７６（１）：３４６～５６（２００６）、ＵＳ２００８０１８１８８７、ＵＳ７３６１７４０、およびＥＰ２２３５０５９に記載される。

【0162】

[0171]特定の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｔ２５０Ｑ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｍ４２８Ｌ、およびＮ４３４Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の置換を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。一部の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｔ２５０Ｑ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｍ４２８Ｌ、およびＮ４３４Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の置換を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。一部の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、置換Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。一部の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、置換Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ含むＦｃバリアントを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。一部の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、置換Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ含むＦｃバリアントを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。一部の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、置換Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓを含むＦｃバリアントを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。一部の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、置換Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ含むＦｃバリアントを含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0163】

[0172]一部の実施形態において、本明細書に開示の組合せ剤は、増加したＦｃＲｎ結合親和性および増加した血清半減期を有する突然変異したＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。特定の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、少なくとも１０日、少なくとも１５日、少なくとも２０日、少なくとも２５日、少なくとも３０日、少なくとも３５日、少なくとも４０日、少なくとも５０日、少なくとも６０日、少なくとも７０日、少なくとも８０日、少なくとも９０日、少なくとも１００日またはそれ以上の血清半減期を有する突然変異したＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0164】

[0173]特定の実施形態において、組合せ剤は、低減された血管毒性、改善された治療限界、または両方を示す、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。特定の実施形態において、本開示の組合せ剤は、本開示の抗体と同じアミノ酸配列を有するがＦｃ領域への少なくとも１つのアミノ酸残基の付加、置換、または欠失を含まない抗体（本明細書では、「改変されていない抗体」とも称される）と比較して、エフェクター機能を促進することに関与するＦｃリガンドへの親和性が低減または消失している突然変異したＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0165】

[0174]一実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、抗体またはその抗原結合フラグメントのＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣエフェクター機能を低減または消失する少なくとも２つの突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。さらなる実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、抗体またはその抗原結合フラグメントのＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣエフェクター機能を低減するまたは消失させる、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０個またはそれより多くの突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0166】

[0175]特定の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６デルタ（欠失）、Ｇ２３７Ａ、Ｖ２６３Ｌ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｑ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３２７Ｇ、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９Ｇ、Ｐ３２９Ｒ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ａ、Ｐ３３１Ｇ、およびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0167】

[0176]一実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｇ２３７Ａ突然変異と共に、またはＧ２３７Ａ突然変異なしで、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。一実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａ突然変異を含むＦｃ領域を含む。

【0168】

[0177]一実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ａ３２７Ｇ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0169】

[0178]一実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＡｎ Ｚら、Ｍａｂｓ ２００９ Ｎｏｖ－Ｅｃ；１（６）：５７２～９で記載されるように、ＦｃγＲＩ（本明細書ではＦｃｇＲＩとも称される）、ＦｃγＲＩＩＡ（本明細書ではＦｃｇＲＩＩＡとも称される）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（本明細書ではＦｃｇＲＩＩＩＡＩとも称される）への低減した結合、および低減したＡＤＣＣおよびＣＤＣエフェクター機能を提供する、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／デルタＧ２３６（欠失）突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0170】

[0179]一実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｎ２９７ｘ突然変異（式中、ｘ＝Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｑ）を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0171】

[0180]一実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ａ３２７Ｇ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0172】

[0181]一実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＣａｎｆｉｅｌｄ ＆ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ（１９９１）１７３（６）：１４８３～９１．１０．１０８４で記載されるように、Ｃ１ｑへの低減した結合を提供するＫ３２２Ａ、Ｐ３２９Ａ、およびＰ３３１Ａの１つまたは複数に突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0173】

[0182]一実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＨｅｚａｒｅｈら、Ｊ Ｖｉｒｏｌ．２００１ Ｄｅｃ；７５（２４）：１２１６１～８に記載されるように、ＦｃγＲＩＩＢ（本明細書ではＦｃｇＲＩＩＢとも称される）への強化された結合および強化されたＡＤＣＣを提供するＶ２６３Ｌ突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0174】

[0183]他の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７ＡまたはＬ２３５Ｅ突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0175】

[0184]他の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５ＥまたはＰ３３１Ｓ突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0176】

[0185]特定の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ２アイソタイプであり、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８ＡまたはＨ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0177】

[0186]一実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ２アイソタイプであり、Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0178】

[0187]一実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ２アイソタイプであり、Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１ＳまたはＨ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0179】

[0188]他の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６デルタ（欠失）、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ｑ、Ｐ３２９Ｇ、Ｐ３２９Ｒからなる群から選択される１つまたは複数の突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0180】

[0189]特定の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＣｈａｐｐｅｌら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ（１９９１）８８（２０）：９０３６～４０に記載されるように、低減したＦａｂ－アーム交換および低減した凝集を提供するＳ２２８Ｐ突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0181】

[0190]一実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0182】

[0191]一実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｓ２２８Ｐ／Ｅ２３３Ｐ／Ｆ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／デルタＧ２３６（欠失）突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0183】

[0192]一実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｎ２９７ｘ突然変異（式中、ｘ＝Ａ、Ｄ、Ｇ、Ｑ）を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0184】

[0193]一実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0185】

[0194]一実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、例えば、Ｓａｘｅｎａら、Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１６ Ｄｅｃ １２；７：５８０に記載されるように、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＡへの低減した結合および低減したＡＤＣＣおよびＣＤＣエフェクター活性を提供するＬ２３５Ｅ突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0186】

[0195]他の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５ＡまたはＥ２３３Ｐ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６Ｄ突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0187】

[0196]一実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、少なくともＳ２２８Ｐ突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。例えば、Ａｎｇａｌら（Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９３ Ｊａｎ；３０（１）：１０５～８）は、残基２４１におけるセリンの存在（ＥＵ番号付けシステムに従って、ここではＫａｂａｔ番号付けにおける残基２２８に対応する）が、分泌されたヒトＩｇＧ４の所定の割合において、ヒンジ領域における重鎖間ジスルフィド架橋の不均質性の原因であることを決定するための、ヒトＩｇＧ４重鎖のヒンジ配列の分析を記載していることを参照されたい。Ｓｉｌｖａら（Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２０１５ Ｆｅｂ ２７；２９０（９）：５４６２～９）は、インビボおよびインビトロにおけるＩｇＧ４ Ｆａｂ－アーム交換を防止するヒトＩｇＧ４におけるＳ２２８Ｐ突然変異を記載していることを参照されたい。

【0188】

[0197]他の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ４アイソタイプであり、Ｌ２３５ＥまたはＳ２２８Ｐ突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0189】

[0198]他の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ４またはＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７ＤまたはＮ２９７Ｇ突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0190】

[0199]他の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＩｇＧ４またはＩｇＧ１アイソタイプであり、Ｐ３２９Ｇ、Ｐ３２９Ｒ突然変異を含むＦｃ領域を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0191】

[0200]例示的な実施形態の一つにおいて、いずれかのＩｇＧアイソタイプの突然変異したＦｃ領域が、２３４位、２３５位、２３６位、２３７位、２９７位、３１８位、３２０位、３２２位（参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＷＯ１９８８００７０８９に記載される通り）に１つまたは複数の突然変異を含む。また置換、欠失および付加などのＦｃ領域における他の可能性のある突然変異は、例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれるＵＳ２０１４０１７０１４０、ＷＯ２００９１００３０９、ＵＳ２００９０１３６４９４およびＵＳ８９６９５２６にも記載される。

【0192】

[0201]インビトロおよび／またはインビボの細胞傷害性アッセイは、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の低減または消失を確認するのに実行することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実行して、抗体がＦｃγＲ結合を喪失しているが（したがってＡＤＣＣ活性を喪失している可能性がある）、ＦｃＲｎ結合能力を保持することを確認することができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞、ＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、それに対して単球は、ＦｃγＲＩ、ＲＩＩおよびＲＩＩＩを発現する。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えばＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３（１９８６）７０５９～７０６３を参照）およびＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２（１９８５）１４９９～１５０２；米国特許第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６（１９８７）１３５１～１３６１を参照）に記載される。代替として、非放射性アッセイ方法が採用される場合がある（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、Ｃａｌｉｆ．；およびＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）を参照されたい。このようなアッセイのための有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替として、または加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、例えばＣｌｙｎｅｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５（１９９８）６５２～６５６で開示された動物モデルで、評価することができる。またＣ１ｑ結合アッセイを行って、抗体が、Ｃ１ｑに結合できないこと、したがってＣＤＣ活性を喪失していることを確認することもできる。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９およびＷＯ２００５／１００４０２に記載のＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実行することができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２（１９９６）１６３；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ら、Ｂｌｏｏｄ １０１（２００３）１０４５～１０５２；ならびにＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．、およびＧｌｅｎｎｉｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｂｌｏｏｄ １０３（２００４）２７３８～２７４３を参照）。またＦｃＲｎ結合およびインビボにおけるクリアランス／半減期の決定も、当技術分野において公知の方法を使用して実行することができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ら、Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）（２００６）１７５９～１７６９を参照）。

【0193】

[0202]一部の実施形態において、いずれかのＩｇＧアイソタイプの突然変異したＦｃ領域が、Ｌ３２８位に突然変異、例えばＬ３２８Ｍ、Ｌ３２８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｌ３２８Ｎ、Ｌ３２８Ｑ、Ｌ３２８Ｆ、Ｌ３２８Ｉ、Ｌ３２８Ｖ、Ｌ３２８Ｔ、Ｌ３２８Ｈ、Ｌ３２８Ａを含む（例えば、ＵＳ２００５００５４８３２を参照）。

【0194】

[0203]一実施形態において、本開示に提供される組合せ剤の抗体またはその抗原結合フラグメントは、改変されていない抗体と比較して、低減または消失したＡＤＣＣエフェクター機能を示す。別の実施形態において、本開示に提供される組合せ剤の抗体またはその抗原結合フラグメントは、改変されていない抗体のＡＤＣＣエフェクター機能の、２分の１以下、または３分の１以下、または５分の１以下、または１０分の１以下、または５０分の１以下、または１００分の１以下に低減したＡＤＣＣエフェクター機能を示す。さらに別の実施形態において、本開示に提供される組合せ剤の抗体またはその抗原結合フラグメントは、改変されていない抗体と比べて、少なくとも１０％、または少なくとも２０％、または少なくとも３０％、または少なくとも４０％、または少なくとも５０％、または少なくとも６０％、または少なくとも７０％、または少なくとも８０％、または少なくとも９０％、または少なくとも１００％低減したＡＤＣＣエフェクター機能を示す。本開示に提供される組合せ剤のさらなる態様において、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントにより誘発されたＡＤＣＣエフェクター機能の低減または下方調節は、改変されていない抗体によるＡＤＣＣの誘発について観察された値の０、２．５、５、１０、２０、５０または７５％の低減である。特定の実施形態において、ＡＤＣＣ活性の低減および／または消失は、本開示の抗体またはその抗原結合フラグメントのＦｃリガンドおよび／または受容体に対する低減した親和性に起因する可能性がある。

【0195】

[0204]本開示の一実施形態は、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントおよび免疫療法剤を含む組合せ剤であって、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントがＴＭ４ＳＦ１へのｐＨ依存的な結合親和性を示す、組合せ剤を提供する。一部の例において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、他のｐＨ範囲と比較して、特定のｐＨ範囲において高い親和性でＴＭ４ＳＦ１に結合する。例えば、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、酸性ｐＨにおいて、中性ｐＨまたは塩基性ｐＨとは異なる親和性でＴＭ４ＳＦ１に結合し得る。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、酸性ｐＨにおいて、中性ｐＨまたは塩基性ｐＨよりも高い親和性でＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、酸性ｐＨにおいて、中性ｐＨまたは塩基性ｐＨよりも低い親和性でＴＭ４ＳＦ１に結合する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、酸性ｐＨにおいてＴＭ４ＳＦ１に結合し、中性ｐＨまたは塩基性ｐＨにおいてＴＭ４ＳＦ１から解離する。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ｐＨ７またはそれ以上でＴＭ４ＳＦ１に結合し、ｐＨ６またはそれ以下でＴＭ４ＳＦ１から離れる。血漿、サイトゾル、および核などの細胞内区画では、ｐＨは中性または塩基性である。リソソームまたはエンドソームでは、ｐＨは酸性である。いずれの理論にも縛られることなく、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは抗原に結合し、続いてエンドソームの膜において内部移行する。ｐＨ依存的抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、エンドソームにおいてＴＭ４ＳＦ１から離れ、エンドソーム内のＦｃＲｎ受容体に結合することができ、ＦｃＲｎ受容体によってリサイクルされ、エンドソームが進行するリソソームにおいて分解されるよりも循環に戻され得る。したがって、ｐＨ依存的抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、複数回ＴＭ４ＳＦ１抗原に結合することができる。したがって、ｐＨ依存的抗ＴＭ４ＳＦ１抗体およびそれと会合される治療分子またはペイロードは、リソソームにおいてペイロードを放出することなく、ＦｃＲｎ受容体によってリサイクルされ得る。

【0196】

[0205]本明細書では、抗体－ＴＭ４ＳＦ１結合が、少なくとも２、３、４、８、１０、１６もしくはそれ以上、または２、３、４、８、１０、１６もしくはそれ以上の間の範囲である、ｐＨ６．０／ｐＨ７．４でのＫｄ比および／またはＫｏｆｆ比を有するように、抗体のｐＫａに影響する微小環境を最適化する抗体ＣＤＲヒスチジン残基または他の残基を選択するステップを含む、ｐＨ依存的な方法で抗体－ＴＭ４ＳＦ１結合親和性を調節するステップにより増加された半減期および／または薬力学的効果を有する、本明細書に提供される組合せ剤のための、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを作製する方法も開示する。一部の実施形態において、方法は、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントにアミノ酸置換を導入し、２５℃で測定した場合に少なくとも１００ｎＭのｐＨ７．４でのＫＤを有するＴＭ４ＳＦ１親和性を達成するステップを含む。特定の実施形態において、前記方法は、ｐＫａに影響する微小環境を最適化するＣＤＲ残基または他の残基においてヒスチジンが濃縮された抗体ライブラリーを生成するステップを含む。一部の実施形態において、抗体ライブラリーは、ＣＤＲ位置に導入されたヒスチジン残基を有する抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。一部の実施形態において、抗体ライブラリーは、一連の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、抗体ライブラリーの各抗ＴＭ４ＳＦ１抗体は、異なるＣＤＲ位置に単一のヒスチジン置換を含む。一部の実施形態において、抗体ライブラリーは、それぞれヒスチジン残基に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、または１７個の突然変異を含む、一連の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。一部の実施形態において、抗体ライブラリーのＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原フラグメントの少なくとも１つにおいて、全てのＣＤＲ位置がヒスチジンに突然変異される。

【0197】

[0206]一部の実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、ＣＤＲ領域において１、２、３、４、５またはそれ以上のヒスチジン置換を含む、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。ヒスチジン残基は、ｐＨ依存的な結合親和性のため、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体軽鎖（ＬＣ）または重鎖（ＨＣ）の異なる位置に操作され得る。したがって、一部の実施形態において、本明細書では、ヒスチジン操作された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを有する組合せ剤が提供される。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３に１つまたは複数のヒスチジン残基を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ１に１つまたは複数のヒスチジン残基を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ２に１つまたは複数のヒスチジン残基を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲ３に１つまたは複数のヒスチジン残基を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３に１つまたは複数のヒスチジン残基を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ１に１つまたは複数のヒスチジン残基を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ２に１つまたは複数のヒスチジン残基を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ３に１つまたは複数のヒスチジン残基を含む。したがって、一部の実施形態において、本開示の組合せ剤は、ヒスチジン操作された抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。

【0198】

[0207]一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３、例えば配列番号１０１または配列番号１３１の３０位（Ｓ３０Ｈ）、９２位（Ｓ９２Ｈ）、および９３位（Ｎ９３Ｈ）の１つまたは複数に、１つまたは複数のヒスチジン残基を含む。一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３、例えば配列番号９２または配列番号１３０の２８位（Ｔ２８Ｈ）、３１位（Ｎ３１Ｈ）、３２位（Ｙ３２Ｈ）、５２位（Ｎ５２Ｈ）、５４位（Ｙ５４Ｈ）、５７位（Ｎ５７Ｈ）、１００位（Ｑ１００Ｈ）、および１０１位（Ｙ１０１Ｈ）の１つまたは複数に、１つまたは複数のヒスチジン残基を含む。

【0199】

ＩＩＩ．抗体薬物コンジュゲート
[0208]一実施形態において、本明細書では、ペイロードに連結された免疫療法剤および抗血管新生抗体またはその抗原結合フラグメントを含む組合せ剤が提供される。一部の実施形態において、抗体は、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、ペイロードは小分子、タンパク質、ペプチド、抗体、またはこれらの任意の組合せである。一部の実施形態において、治療剤または診断剤にコンジュゲートされた抗血管新生抗体（例えば、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント）を含むＡＤＣを含む組合せ剤が提供される。

【0200】

[0209]一部の実施形態において、治療剤は、生物学的に活性な成分である。一部の実施形態において、生物学的に活性な成分は、放射性同位体、細胞傷害性物質、化学療法剤、タンパク質、ペプチド、抗体、増殖阻害剤、プロドラッグ活性化酵素、および抗ホルモン剤を含む。一部の実施形態において、治療分子は、小分子（例えばがんおよびがんでない血管新生兆候の両方）；Ｖ－ＡＴＰアーゼ阻害剤；アポトーシス促進剤；Ｂｃｌ２阻害剤；ＭＣＬ１阻害剤；ＨＳＰ９０阻害剤；ＩＡＰ阻害剤；ｍＴｏｒ阻害剤；微小管安定化剤；微小管不安定化剤；オーリスタチン；ドラスタチン；メイタンシノイド；ＭｅｔＡＰ（メチオニンアミノペプチダーゼ）；タンパク質ＣＲＭ１の核外移行の阻害剤；ＤＰＰＩＶ阻害剤；プロテアソーム阻害剤；ミトコンドリアにおけるホスホリル転移反応の阻害剤；タンパク質合成阻害剤；キナーゼ阻害剤；（例えば、ＣＤＫ２阻害剤、ＣＤＫ９阻害剤）；キネシン阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ＤＮＡ傷害剤、ＤＮＡアルキル化剤、ＤＮＡインターカレーター、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＨＦＲ阻害剤、核酸、ＣＲＩＳＰＲ酵素；分解剤（例えばタンパク質分解を誘導する薬剤、（例えば、ＨＳＰ９０阻害剤、選択的エストロゲン受容体分解剤（ＳＥＲＤ）、選択的アンドロゲン受容体分解剤（ＳＡＲＤ）；目的のタンパク質にシャペロンを動員するために使用され得る疎水性タグ、例えばアダマンタン、Ａｒｇ－Ｂｏｃ３；Ｅ３リガーゼを動員するリガンド、例えばＮｕｔｌｉｎ－３ａ（ＭＤＭ２リガンド）、ベスタチン（ｃＩＡＰリガンド）、ＶＨＬリガンド、ポマリドミド（ＣＲＢＮリガンド）；分解のために目的のタンパク質を標的化する異なるＤ３リガーゼを利用し得る、タンパク質分解誘導性キメラ（ＰＲＯＴＡＣ））（例えば、Ｌａｉ ＡＣ，Ｃｒｅｗｓ ＣＭ．Ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ：ａｎ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｐａｒａｄｉｇｍ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．２０１６；１６（２）：１０１～１１４を参照）；アンチセンスオリゴヌクレオチド；ＲＮＡｉ剤（例えばｓｉＲＮＡ）；ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９遺伝子編集システム；ＲＮＡ分子；ＤＮＡ、例えばプラスミド；抗がん剤、抗炎症剤、抗感染剤（例えば抗真菌剤、抗菌剤、抗寄生虫剤、抗ウイルス剤）、麻酔剤；ＲＮＡポリメラーゼＩＩ阻害剤；ＤＮＡ挿入剤、ＤＮＡ架橋剤；抗チューブリン剤；細胞傷害性薬、腫瘍ワクチン、抗体、ペプチド、ペプチボディー、化学療法剤、細胞傷害性剤；細胞増殖抑制剤；免疫調整剤、インターフェロン、インターロイキン、免疫賦活性の成長ホルモン、サイトカイン、ビタミン、ミネラル、アロマターゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）、ＨＤＡＣ阻害剤、１つまたは複数の治療分子をカプセル化する脂質ナノ粒子を含む。

【0201】

[0210]一部の実施形態において、放射性同位体は、^２１１Ａｔ、^１３１Ｉ、^１２５Ｉ、^９０Ｙ、^１８６Ｒｅ、^１５３Ｓｍ、^２１２Ｂｉ、^３２Ｐ、およびＬｕの放射性同位体からなる群から選択される１つまたは複数の種であり得るが、これらに限定されない。一部の実施形態において、プロドラッグ活性化酵素は、アルカリホスファターゼ、アリルスルファターゼ、シトシンデアミナーゼ、プロテアーゼ、Ｄ－アラニルカルボキシペプチダーゼ、炭水化物切断酵素、Ｐ－ラクタマーゼ、およびペニシリンアミダーゼからなる群から選択される１つまたは複数の種であるが、これらに限定されない。

【0202】

[0211]細胞傷害性剤は、一部の実施形態において、リシン、サポリン、ゲロニン、モモルジン、デブーガニン（ｄｅｂｏｕｇａｎｉｎ）、ジフテリア毒素、緑膿菌毒素等からなる群から選択される１つまたは複数を含むが、これらに限定されない。細胞傷害性剤は、一部の例において、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、パクリタキセル、メルファラン、ドキソルビシン、メトトレキサート、５－フルオロウラシル、エトポシド、メクロレタミン、シクロホスファミド、ブレオマイシン、カリケアミシン、メイタンシン、トリコテセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｎｅ）、ＣＣ１０６５、ジフテリアＡ鎖、緑膿菌外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質、ニガウリ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、マイトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、トリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）、リボヌクレアーゼおよびデオキシリボヌクレアーゼからなる群から選択される１つまたは複数の種であるが、これらに限定されない。一部の実施形態において、細胞傷害性剤は、デュオカルマイシン、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、Ｎ２’－デアセチル－Ｎ２’－（３－メルカプト－１－オキソプロピル）メイタンシン（ＤＭ１）、ＰＢＤ（ピロロベンゾジアゼピン）二量体、デュオカルマイシン、モノメチルオーリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）からなる群から選択される１つまたは複数の種であるが、これらに限定されない。一部の実施形態において、細胞傷害性物質は、リボソーム不活性化タンパク質、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、チューブリン阻害剤、アルキル化剤、抗生物質、抗新生物剤、抗増殖剤、代謝拮抗物質、トポイソメラーゼＩまたはＩＩ阻害剤、ホルモンのアゴニストまたはアンタゴニスト、イムノモジュレーター、ＤＮＡ副溝結合剤、および放射活性物質を含む。特定の実施形態において、リボソーム不活性化タンパク質は、サポリンである。一部の実施形態において、診断剤は、標識である。一部の実施形態において、標識は、蛍光標識、色素産生標識、または放射標識である。一部の実施形態において、薬剤は、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントに直接的にコンジュゲートされる。他の実施形態において、薬剤は、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントに、間接的に、任意選択でリンカーによって、コンジュゲートされる。

【0203】

[0212]一部の実施形態において、本開示のＡＤＣは、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメント、ならびに１つまたは複数の薬剤（例えば、１、２、３、または４つまたはそれより多くの薬剤）、例えば抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントと相加的または相乗的に作用して、例えば病的な血管新生に関連する障害、例えばがんの処置において腫瘍細胞（ＴＣ）および／または腫瘍血管系内皮細胞（ＥＣ）を致死させるかまたは阻害する治療剤を含む。例えば、治療剤は、生物学的に活性な成分、例えば細胞傷害性物質、化学療法剤、タンパク質、ペプチド、抗体、増殖阻害剤、および／または抗ホルモン剤であり得る。

【0204】

[0213]抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントに直接的または間接的のいずれかでコンジュゲートできるチューブリン阻害剤の例としては、これらに限定されないが、重合阻害剤（例えば、チューブリンのビンカドメインに結合することができる、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンフルニン、クリプトフィシン５２、ハリコンドリン（ｈａｌｌｃｈｏｎｄｒｉｎ）、ドラスタチン、ヘミアステリン；チューブリンのコルヒチン（ｃｈｏｌｃｈｉｃｉｎｅ）ドメインに結合することができる、コルチン（ｃｏｌｃｈｉｎｅ）、コンブレタスタチン、２－メトキシ－エストラジオール、Ｅ７０１０；解重合阻害剤、例えば、タキサン部位に結合することができる、パクリタキセル、ドセタキセル、エポチロン、ディスコデルモリド）が挙げられ得る。

【0205】

[0214]例示的な化学療法剤としては、これらに限定されないが、メトトレキセート、アドリアマイシン（ａｄｒｉａｍｉｃｉｎ）、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他の挿入剤；核酸分解酵素、抗生物質、および毒素などの酵素およびそのフラグメント、例えば細菌、真菌、植物または動物起源の小分子毒素または酵素的に活性な毒素、ならびにそれらのフラグメントおよび／またはバリアントなどが挙げられる。使用することができる酵素的に活性な毒素およびそのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ－Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、マイトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、およびトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）が挙げられる。

【0206】

[0215]加えて、様々な放射性核種は、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントの治療剤へのコンジュゲーションのために使用し、本開示のＡＤＣを生成することができる。その例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、およびＬｕの放射性同位体が挙げられる。代替として、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントは、１つまたは複数のより小さい分子毒素、例えばカリケアマイシン、メイタンシノイド、ドラスタチン、オーリスタチン（ａｕｒｏｓｔａｔｉｎ）、トリコテセン、およびＣＣ１０６５にコンジュゲートしていてもよいし、毒素活性を有するこれらの毒素の誘導体も、本明細書において予期される。本開示のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質にコンジュゲートできる他の治療剤としては、様々な例において、ＢＣＮＵ、ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｉｃｉｎ）、ビンクリスチンおよび５－フルオロウラシルなどが挙げられる。

【0207】

[0216]コンジュゲーションに関する診断剤は、一部の実施形態において、標識、例えば蛍光標識、色素産生標識、または放射標識である。したがって、標識は、検出目的で使用でき、蛍光化合物、酵素、補欠分子団、発光物質、生物発光物質、または放射活性物質であり得る。放射標識は、例えば、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えばＴｃ９９ｍもしくはＩ１２３、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）映像法（磁気共鳴映像法、ＭＲＩとしても公知）のためのスピン標識、例えばここでもヨウ素－１２３、ヨウ素－１３１、インジウム－１１１、フッ素－１９、炭素－１３、窒素－１５、酸素－１７、ガドリニウム、マンガンまたは鉄を含んでいてもよい。

【0208】

[0217]１つまたは複数の薬剤（例えば、治療剤および／または診断剤）は、薬剤がタンパク質に隣接してコンジュゲートされるように、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントに直接的にコンジュゲートさせてもよい（例えば、直接的な共有結合または非共有結合による相互作用の方法によって）。薬剤は、例えば直接的なペプチド結合によって、本開示の結合タンパク質に直接的にコンジュゲートさせてもよい。他の例において、直接的なコンジュゲーションは、直接的な非共有結合による相互作用、例えば抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントと抗ＴＭ４ＳＦ１抗体または抗原結合フラグメントに特異的に結合する薬剤との相互作用の方法によってなされる。

【0209】

[0218]一部の実施形態において、治療剤は：ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ，ＰＳ－３４１）、ＰＲ－１７１（カルフィルゾミブ）、イキサゾミブ（Ｎｉｎｌａｒｏ（登録商標））、デランゾミブ、マリゾミブ、オプロゾミブ、ＶＲ２３、ＰＩ－１８４０、（ベンジルオキシカルボニル）－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－フェニルアラニン、２，３，５ａ，６－テトラヒドロ－６－ヒドロキシ－３－（ヒドロキシメチル（ｈｙｄｒｏｘｙｍｔｈｙｌ））－２－メチル－１０Ｈ－３ａ，１０ａ－エピジチオ－ピラジノール［１，２α］インドール－１，４－ジオン、４－ヒドロキシ－３－ニトロフェニルアセチル－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－ビニルスルホン、ｓａｐｏｊａｒｇｏｎ、Ａｃ－ｈＦＬＦＬ－エポキシド、アクラシノマイシンＡ、アクラルビシン、ＡＣＭ、ＡｄａＫ（Ｂｉｏ）Ａｈｘ３Ｌ３ＶＳ、ＡｄａＬｙｓ（Ｂｉｏ）Ａｈｘ３Ｌ３ＶＳ、アダマンタン－アセチル－（６－アミノへキサノイル）－３－（ｌｅｕｃｕｎｙｌ）－３－ビニル－（メチル）－スルホン、ＡＬＬＭ、ＡＬＬＮ、カルパイン阻害剤Ｉ、カルパイン阻害剤ＩＩ、カルボベンゾキシ－Ｌ－ロイシル－Ｌ－ロイシル－Ｌ－ロイシナール、カルボベンゾキシ－Ｌ－ロイシル－Ｌ－ロイシル－Ｌ－ノルバリナール、グリオトキシン、イソバレリー－Ｌ－チロシル－Ｌ－バリル－ＤＬ－チロシナール、クラスト－ラクタシスチン－β－ラクトン、Ｚ－ＬＬ－Ｎｖａ－ＣＨＯ、ユビキチンアルデヒド、ＹＵ１０１、ＭＰ－ＬＬＬ－ＶＳ、ＬＤＮ－５７４４４、Ｚ－ＧＰＦＬ－ＣＨＯ、Ｚ－ＬＬＬ－ＣＨＯ、ロバスタチン、α－メチル－クラスト－ラクタシスチン－β－ラクトン、メビノリン、ＭＫ－８０３、ＮＩＰ－Ｌ３ＶＳ、ＮＰ－ＬＬＬ－ＶＳ、ＮＰＩ－００５２（サリノスポラミドＡ）、ＭＬＮ５１９（ＰＳ－５１９）、ＮＬＶＳ（トリロイシンビニルスルホン）、リトナビル、Ｒｏ１０６－９９２０、Ｚ－ＬＬＦ－ＣＨＯ、Ｚ－ＬＬ－Ｂ（ＯＨ）２、ＲＲＲＰＲＰＰＹＬＰＲ、チロペプチンＡ、ＺＬ３ＶＳ、ＰＲ－１１、ＰＲ－３９、０１０６－９９２０、プロテアソーム阻害剤Ｉ、プロテアソーム阻害剤ＩＩ、プロテアソーム阻害剤ＩＩＩ、プロテアソーム阻害剤ＩＶ、ＡｄａＡｈｘ３Ｌ３ＶＳ、エフラペプチン、ＭＧ－１３２、ＭＧ－２６２、ＭＧ－１１５、α－メチルオムラリド、ＭＧ－１０１、エポキソミシン、オムラリド、ラクタシスチン、ＮＥＯＳＨ１０１、またはその類似体からなる群から選択されるプロテアソーム阻害剤を含む。特定の実施形態において、前記プロテアソーム阻害剤はカルフィルゾミブである。

【0210】

[0219]一部の実施形態において、治療剤はＡＫＴキナーゼ阻害剤であり、ＡＫＴキナーゼ阻害剤は、限定はされないが、ＡＴＰ競合ＡＫＴキナーゼ阻害剤、イソキノリン－５－スルホンアミド（Ｈ－８、Ｈ－８９、およびＮＬ－７１－１０１）、アゼパン誘導体（（－）－バラノール由来）、アミノフラザン（ＧＳＫ６９０６９３）、複素環（７－アザインドール誘導体、６－フェニルプリン誘導体、ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン誘導体、ＣＣＴ１２８９３０、３－アミノピロリジン、アミノトリアゾール誘導体、スピロインドリン誘導体、ＡＺＤ５３６３、イパタセルチブ（ＧＤＣ－００６８、ＲＧ７４４０）、Ａ－６７４５６３、およびＡ４４３６５４）、フェニルピラゾール誘導体（ＡＴ７８６７、ＡＴ１３１４８）、チオフェンカルボキサミド誘導体（アフレセルチブ（ＧＳＫ２１１０１８３）、ウプロセルチブ（ＧＳＫ２１４１７９５）、２－ピリミジル－５－アミドチオフェン誘導体（ＤＣ１２０））、アロステリックＡＫＴキナーゼ阻害剤、２，３－ジフェニルキノキサリン類似体（２，３－ジフェニルキノキサリン誘導体、トリアゾロ［３，４－ｆ］［１，６］ナフチリジン－３（２Ｈ）－オン誘導体（ＭＫ－２２０６））、アルキルリン脂質（エデルフォシン（１－Ｏ－オクタデシル－２－Ｏ－メチル－ｒａｃ－グリセロ－３－ホスホコリン、ＥＴ－１８－ＯＣＨ３）、イルモフォシン（ＢＭ４１．４４０）、ミルテホシン（ヘキサデシルホスホコリン、ＨｅＰＣ）、エルシルホスホコリン（ＥｒＰＣ）、エルフォシン（ＥｒＰＣ３）、エルシルホスホホモコリン）、スルホンアミド誘導体（ＰＨ－３１５、ＰＨＴ－４２７）、インドール－３－カルビノール類似体（インドール－３－カルビノール、３－クロロアセチルインドール、ジインドリルメタン、ＯＳＵ－Ａ９、ジエチル ６－メトキシ－５，７－ジヒドロインドロ［２，３－ｂ］カルバゾール－２，１０－ジカルボキシレート（ＳＲ１３６６８））、チオ尿素誘導体（Ｎ－［（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）カルボニル］－Ｎ’－（３－ブロモフェニル）－チオ尿素、ＰＩＴ－１、ＰＩＴ－２、ＤＭ－ＰＩＴ－１）、プリン誘導体（トリシリビン（ＴＣＮ、ＮＳＣ１５４０２０）、トリシリビン一リン酸活性類似体（ＴＣＮ－Ｐ）、４－アミノ－ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン誘導体ＡＰＩ－１、ＡＲＱ ０９２、３－フェニル－３Ｈ－イミダゾ［４，５－ｂ］ピリジン誘導体）、ＢＡＹ１１２５９７６、３－メチル－キサンチン、キノリン－４－カルボキサミド、２－［４－（シクロヘキサ－１，３－ジエン－１－イル）－１Ｈ－ピラゾール－３－イル］フェニル、３－オキソ－チルカル酸、３α－および３β－アセトキシ－チルカル酸、アセトキシ－チルカル酸、不可逆的阻害剤（ラクトキノマイシン、フレノリシンＢ、カラファンギン、メデルマイシン、Ｂｏｃ－Ｐｈｅ－ビニルケトン、４－ヒドロキシノネナル（４－ＨＮＥ）、１，６－ナフチリジノン誘導体、イミダゾ－１，２－ピリジン誘導体）、およびそれ以上を含み得る。小分子ＡＫＴ阻害剤の一部の例は、ＧＳＫ６９０６９３、カピバセルチブ（Ｃａｐｉｖｅｒｓｅｒｔｉｂ）、イパタセルチブ、アフレセルチブ、ウプロセルチブ、ミランセルチブ、ミルテホシン、トリシリビン、ペリホシン、Ｔｅｈｒａｎｏｌｉｄｅ、（Ｅ）－１－（２，４－ジヒドロキシフェニル）－３－（４－ヒドロキシフェニル）プロプ－２－エン－１－オン（イソリキリチゲニン）、７－（β－Ｄ－グルコピラヌロノシルオキシ）－５，６－ジヒドロキシ－２－（４－ヒドロキシフェニル）－４Ｈ－１－ベンゾピラン－４－オン（スクテラリン）、７ａ，２０－エポキシ－１ａ，６ｂ，７，１４－テトラヒドロキシ－カウラ－１６－エン－１５－オン（オリドニン）、３，５，７，８－テトラヒドロキシ－２－（４－ヒドロキシフェニル）クロメン－４－オン（ヘルバセチン）、（Ｅ）－１－（４－ヒドロキシ－３－メトキシフェニル）デカ－４－エン－３－オン（［６］－ショウガオール）である。

【0211】

[0220]一部の実施形態において、治療剤は、抗有糸分裂テトラペプチドである。一部の実施形態において、抗有糸分裂テトラペプチドは、限定はされないが、チューブリシンＡ－Ｉ、Ｕ、Ｖ、Ｙ、ｚ、およびプレツブリシン、ならびにこれらの誘導体を含み得る。本明細書で使用される場合、用語「チューブリンの誘導体」は、通常、限定はされないが、オキサゾール環がチアゾール環を置き換える、チューブリシンのオキサゾール類似体を含む、チューブリシンの類似体を指す。一部の実施形態において、抗有糸分裂テトラペプチドは、チューブリシンＡもしくはＤ、またはこれらの誘導体である。理論に縛られることなく、チューブリシンにコンジュゲートされた抗ＴＭ４ＳＦ１抗体およびその誘導体は、薬物関連毒性を減少させると考えられる。

【0212】

ＩＶ．ポリヌクレオチド
[0221]また、一部の実施形態において、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドも提供される。一部の実施形態において、ポリヌクレオチド分子は、ＤＮＡコンストラクトとして提供される。他の実施形態において、ポリヌクレオチド分子は、メッセンジャーＲＮＡ転写物として提供される。

【0213】

[0222]一部の例において、本発明の開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体は、配列番号４、１６、２８、４０、５２、６４、または７６のいずれか１つに記載の核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメインを含む。一部の例において、本発明の開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体は、配列番号１０、２２、３４、４６、５８、７０、または８２のいずれか１つに記載の核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む。

【0214】

[0223]一部の実施形態において、宿主細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌、またはＣＨＯ細胞などの真核細胞での発現のためにコドンが最適化された核酸配列が提供される。一部の例において、核酸配列は、ＣＨＯ細胞での発現のためにコドンが最適化されている。一部の例において、本発明の開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体は、配列番号５、１７、２９、４１、５３、６５、または７７のいずれか１つに記載のコドンが最適化された核酸配列によってコードされた重鎖可変ドメインを含む。一部の例において、本発明の開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体は、配列番号１１、２３、３５、４７、５９、７１、または８３のいずれか１つに記載のコドンが最適化された核酸配列によってコードされた軽鎖可変ドメインを含む。特定の場合において、配列番号５、１７、２９、４１、５３、６５、または７７のいずれか１つの核酸配列は、ＣＨＯ細胞での発現のためにコドンが最適化された核酸配列である。特定の場合において、配列番号１１、２３、３５、４７、５９、７１、または８３のいずれか１つの核酸配列は、ＣＨＯ細胞での発現のためにコドンが最適化された核酸配列である。

【0215】

[0224]ポリヌクレオチド分子は、公知の方法によって、例えば、好適なプロモーターに、および任意選択で好適な転写ターミネーターに連結された遺伝学的コンストラクトに、結合タンパク質をコードする遺伝子を取り込ませ、それを細菌または他の適切な発現系、例えばＣＨＯ細胞などで発現することによって構築される。利用されるベクター系および宿主に応じて、構成的および誘導性プロモーターを含む様々な好適な転写および翻訳エレメントを使用することができる。プロモーターは、それがそれぞれの宿主細胞においてポリヌクレオチドの発現を駆動するように選択される。

【0216】

[0225]一部の実施形態において、本明細書に記載されるポリヌクレオチドは、ベクター、好ましくは発現ベクターに挿入され、これは、さらなる実施形態の一つに相当する。この組換えベクターは、公知の方法に従って構築することができる。特に興味深いベクターとしては、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、ウイルス（ｖｉｒｉｉ）（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、レンチウイルスなど）、およびコスミドが挙げられる。

【0217】

[0226]様々な発現ベクター／宿主系が、記載されたＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有および発現するのに利用することができる。Ｅ．ｃｏｌｉでの発現のための発現ベクターの例は、ｐＳＫＫ（Ｌｅ Ｇａｌｌら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．（２００４）２８５（１）：１１１～２７）であり、または哺乳類細胞での発現のためには、ｐｃＤＮＡ５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）である。

【0218】

[0227]したがって、本明細書に記載されるＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質は、一部の実施形態において、上述したタンパク質をコードするベクターを宿主細胞に導入し、前記宿主細胞を、タンパク質ドメインが発現される条件下で培養することによって産生され、これらは単離してもよいし、任意選択でさらに精製してもよい。

【0219】

Ｖ．免疫療法剤
[0228]一部の実施形態において、本開示の組合せ剤は、ｉ）細胞傷害性ペイロードとコンジュゲートされている抗ＴＭ４ＳＦ１抗体およびｉｉ）免疫療法剤を含む。抗血管新生ＡＤＣと免疫療法の組合せは、免疫療法剤の治療転帰を改善し得る。抗血管新生ＡＤＣは、腫瘍微小環境への免疫細胞浸潤を促進し、コールド腫瘍をホットへと変えることにより免疫療法剤の治療転帰の改善をもたらし得る。そのような治療転帰は、限定はされないが、免疫細胞浸潤の増加またはＴ－ｒｅｇ細胞集団の減少を含み得る。ＡＤＣは、一部の例において、創傷治癒の血管損傷の文脈でも使用され得る。

【0220】

[0229]一部の実施形態において、免疫療法剤は、骨髄細胞系列の細胞、腫瘍細胞、リンパ系の細胞に存在する標的、腫瘍微小環境に存在する分子に対する抗体、またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、免疫療法剤は：ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ４０、ＣＳＦ１／ＣＳＦ１Ｒ、ＳＩＲＰα、ＣＬＥＣ－１の少なくとも１つに対する抗体、またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、免疫療法剤は：ＣＣＲ４、ＣＴＬＡ－４、Ａ１Ｒ、Ａ２ＡＲ、Ａ３Ｒ、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＩＬＲａ／ＣＤ２５、ＩＴＧＢ１／ＣＤ２９、Ｌｙ ２４／ＣＤ４４、ＣＤ４８、ＣＥＡＣＡＭ１／ＣＤ６６ａ、Ｎｔ５ｅ／ＣＤ７３、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＦＡＳ／ＣＤ９５、ＳＬＡＦ１／ＣＤ１５０、ＮＲＰ１／ＣＤ３０４、ＧＩＴＲ／ＣＤ３５７、ＩＣＯＳ、Ｔｎｆｒｓ４／ＯＸ４０、Ｆｏｌｒ４／ＪＵＮＯ、Ｐ２Ｘ７、ＡＮＸＡ２、ＩＤＯ、Ｂ７－Ｈ６、ＫＩＲ、ＧＡＲＰ（ＬＲＲＣ３２）、ＴＮＦＲ２の少なくとも１つに対する抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、免疫療法剤は：ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ４７、ＴＤＯ、ＤｃＲ３の少なくとも１つに対する抗体、またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、免疫療法剤は：エクソソーム、サイトカイン、インターロイキン、またはケモカインの少なくとも１つに対する抗体、またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、免疫療法剤は：ＰＳ、ＳＴＩＮＧの少なくとも１つに対する抗体、またはその抗原結合フラグメントである。

【0221】

[0230]免疫療法剤は、一部の実施形態において、Ｂ細胞、Ｔ細胞、およびＮＫ細胞の増殖および分化を助けることに機能し得るサイトカイン、例えばＩＬ－２およびＩＬ－１５である。一部の実施形態において、免疫療法剤は、細胞療法、がんワクチン、ホルモン、エピトープ、サイトカイン、腫瘍抗原、ＣＤ４細胞刺激因子、ＮＫＴ細胞アゴニスト、またはアジュバントを含む。例えば、免疫療法剤は、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍ネクローシス因子、オボアルブミン、Ｎｅｕｖｅｎｇｅ、Ｏｎｃｏｐｈａｇｅ、ＣｉｍａＶａｘ－ＥＧＦ、Ｍｏｂｉｌａｎ、ａ－Ｇａｌ 糖脂質、ａ－ガラクトシルセラミド（ａ－ＧａｌＣｅｒ）、β－マンノシルセラミド（β－ＭａｎＣｅｒ）、アデノウイルス由来ワクチン、Ｃｅｌｌｄｅｘ’ｓ ＣＤＸ１３０７およびＣＤＸ１４０１；ＧＲＮＶＡＣ１，ウイルスベースワクチン、ＭＶＡ－ＢＮ、ＰＲＯＳＴＶＡＣ（登録商標）、Ａｄｖａｘｉｓ’；ＡＤＸＳ１１－００１，ＡＤＸＳ３１－００１、ＡＤＸＳ３１－１６４、ＢｉｏｖａｘＩＤ、葉酸結合タンパク質（Ｅ３９）、Ｅ７５（ＮｅｕＶａｘ）またはＯｎｃｏＶＥＸと共に、およびＥ７５（ＮｅｕＶａｘ）またはＯｎｃｏＶＥＸなしの顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、トラスツズマブ、Ａｅ－３７、ＩＭＡ９０１、ＳＣ１Ｂ １、Ｓｔｉｍｕｖａｘ、細胞傷害性リンパ球応答を誘発し得るペプチド、テロメラーゼペプチドワクチンを含むペプチドワクチン（ＧＶ１００１）、サバイビンペプチド、ＭＵＣ１ペプチド、ｒａｓペプチド、ＴＡＲＰ２９－３７－９Ｖペプチドエピトープ増強ペプチド、合成ペプチドＥ－ＰＲＡおよびＥ－ＰＳＭを有するＤＮＡ Ｖｅｃｔｏｒ ｐＰＲＡ－ＰＳＭであり得る。

【0222】

[0231]一部の実施形態において、免疫療法剤は、エクスビボで生成された自己抗原特異的Ｔ細胞の移行を含む、養子免疫療法を含む。養子免疫療法に使用されるＴ細胞は、抗原特異的Ｔ細胞の拡大または遺伝子操作によるＴ細胞の再指令のいずれかにより生成され得る。腫瘍特異的Ｔ細胞の単離および移行は、メラノーマの治療に有効であることが示された。Ｔ細胞の新規の特異性は、トランスジェニックＴ細胞受容体またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の遺伝子移行によって有効に生成された。ＣＡＲは、単一融合分子中の１つまたは複数のシグナル伝達ドメインと結合する標的化部分からなる合成受容体である。一般に、ＣＡＲの結合部分は、可動性リンカーによって接続されたモノクローナル抗体の軽鎖および可変フラグメントを含む、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）の抗原結合ドメインからなる。受容体またはリガンドドメインに基づく結合部分も有効に使用された。第１世代ＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータまたはＦｃ受容体ガンマ鎖の細胞質領域に由来する。ＣＡＲは、リンパ腫および固形腫瘍を含む様々な悪性腫瘍由来の腫瘍細胞の表面に発現された抗原に対して、Ｔ細胞を有効に再指令した。

【0223】

[0232]一部の実施形態において、免疫療法剤は、免疫チェックポイント分子の阻害分子の阻害剤である。用語「免疫チェックポイント」は、ＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞の細胞表面上の分子の群を指す。これらの分子は、抗腫瘍免疫応答を下方制御または阻害する「ブレーキ」として有効に寄与し得る。阻害分子の阻害は、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはタンパク質レベルでの阻害によって実施され得る。実施形態において、阻害核酸（例えば、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ）が使用され、阻害分子の発現を阻害し得る。他の実施形態において、阻害シグナルの阻害剤は、ポリペプチド、例えば可溶性リガンド、または阻害分子に結合する抗体もしくはその抗原結合フラグメントである。免疫チェックポイント阻害剤は、抗腫瘍免疫を抑制および／または腫瘍ネオ抗原の視感度を増強し得る。

【0224】

[0233]一部の実施形態において、免疫療法剤は、免疫チェックポイント阻害剤であり得る。一部の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、骨髄細胞、リンパ球細胞、腫瘍細胞、または腫瘍微小環境の他の小粒子上に発現される標的に対する抗体または抗原結合フラグメントである。一部の実施形態において、腫瘍微小環境の小粒子は、エクソソーム、サイトカイン、インターロイキン、またはケモカインを含む。骨髄細胞上に発現される例示的な標的は、限定はされないが、ＰＤ－１、ＣＤ４０、ＣＳＦ１、ＣＳＦ１－Ｒ、ＳＩＲＰα、および／またはＣＬＥＣ１であり得る。リンパ球細胞上に発現される例示的な標的は、限定はされないが、ＣＣＲ４、ＣＴＬＡ－４、Ａ１Ｒ、Ａ２ＡＲ、Ａ３Ｒ、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＧ－３、ＩＬＲａ／ＣＤ２５、ＩＴＧＢ１／ＣＤ２９、Ｌｙ ２４／ＣＤ４４、ＣＤ４８、ＣＥＡＣＡＭ１／ＣＤ６６ａ、Ｎｔ５ｅ／ＣＤ７３、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＦＡＳ／ＣＤ９５、ＳＬＡＦ１／ＣＤ１５０、ＮＲＰ１／ＣＤ３０４、ＧＩＴＲ／ＣＤ３５７、ＩＣＯＳ、Ｔｎｆｒｓ４／ＯＸ４０、Ｆｏｌｒ４／ＪＵＮＯ、Ｐ２Ｘ７、ＡＮＸＡ２、ＩＤＯ、Ｂ７－Ｈ６、ＫＩＲ、ＧＡＲＰ（ＬＲＲＣ３２）、またはＴＮＦＲ２であり得る。腫瘍細胞上に発現される例示的な標的は、限定はされないが、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ４７、ＴＤＯ、またはＤｃＲ３であり得る。腫瘍微小環境における例示的な小粒子は、限定はされないが、ＰＳ、またはＳＴＩＮＧであり得る。一部の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、Ｔ細胞活性化を阻害するタンパク質、例えばＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＧＩＴＲ、およびＬＡＧ－３、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン－１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ－１、ＴＩＭ－３、およびＴＩＭ－４である。一部の実施形態において、抗ＬＡＧ－３抗体は、ＢＭＳ－９８６０１６である。ＢＭＳ－９８６０１６（ＢＭＳ９８６０１６とも呼ばれる；Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）は、ＬＡＧ－３に結合するモノクローナル抗体である。ＢＭＳ－９８６０１６および他のヒト化抗ＬＡＧ－３抗体は、米国特許出願公開第２０１１／０１５０８９２号、国際公開第２０１０／０１９５７０、および国際公開第２０１４／００８２１８号に開示される。

【0225】

[0234]他の例示的な免疫療法剤は、限定はされないが、アレムツズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ（ｔｏｓｉｔｕｉｍｏｍａｂ）、オビヌツズマブ、オファツムマブ、イブリツモマブ チウキセタン（ｉｂｉｔｕｍｏｍａｂ ｔｉｕｘｅｔａｎ）、ジヌツキシマブ、ブリナツモマブ、ダラツムマブ、イサツキシマブ、イピリムマブ、セツキシマブ－ｉｒｆｃ、エロツズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ネシツムマブ、カツマキソマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、オララツマブ、ベバシズマブ、ラムシヌマブ、イミキモド、トシリズマブ（ｔｏｃｉｌｚｕｍａｂ）、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ペムブロリズマブ、アベルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、トレメリムマブ、スパルタリズマブ、アベルマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、ＮＫＴＲ－２１４、チサンゲンレクルユーセル（ｔｉｓａｇｅｎｌｅｃｌｕｅｃｅｌ）、アキシカブタジン、シロルユーセル、アルデスロイキン、インターフェロン（ｉｎｅｒｔｅｒｏｎ）アルファ－３ａ／２ｂ、ペキシダルチニブ（ｐｅｒｉｄａｒａｔｉｎｉｂ）、シプリューセル－Ｔ、ＨＩＯＩ、タリモジン ラヘルパレプベク、ＭＧＡ０１２、ＭＧＤ０１３、ＭＧＤ０１９、エノブリツズマブ、ＭＧＤ００９、ＭＧＣ０１８、ＭＥＤＩ０６８０、ＰＤＲ００１、ＦＡＺ０５３、ＴＳＲ０２２、ＭＢＧ４５３、レラトリマブ（ｒｅｌａｔｌｉｎａｂ）（ＢＭＳ９８６０１６）、ＬＡＧ５２５、ＩＭＰ３２１、ＲＥＧＮ２８１０（セミプリマブ）、ＲＥＧＮ３７６７、ペキシダルチニブ、ＬＹ３０２２８５５、ＦＰＡ００８、ＢＭＳ－９８６２２６、ＢＭＳ－９８６２０７、ＢＬＺ９４５、ＢＭＳ－９８６３１５、ＧＤＣ０９１９、エパカドスタット、インドキシモド（ｉｎｄｏｘｉｍｉｄ）、ＢＭＳ９８６２０５、ＣＰＩ－４４４、ＭＥＤＩ９４４７、ＰＢＦ５０９、リリルマブ、ＩＭＣ－００１、モナリズマブおよびこれらの組合せであり得る。アンタゴニストは、抗体、その抗原結合フラグメント、免疫接着、融合タンパク質、またはオリゴペプチドであり得る。免疫療法剤は、抗体薬物コンジュゲートであり得る。例示的な抗体薬物コンジュゲートは、限定はされないが、モキセツモマブ、ブレンツキシマブ（ｂｒｅｔｕｘｉｍａｂ）、トラスツズマブ、イノツズマブ、ゲムツズマブ、タグラクソフスプ－ｅｒｚａ、ポラツズマブ、エンホルツマブベドチン－ｅｊｆｖ、トラスツズマブ デルクステカン、サシツズマブ ゴビテカン－ｈｚｉｙを含み得る。

【0226】

[0235]例示的な免疫療法剤は、限定はされないが、ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）（イピリムマブ）またはトレメリムマブ（ＣＴＬＡ－４に対する）、ガリキシマブ（Ｂ７．１に対する）、ＢＭＳ－９３６５５８（ＰＤ－１に対する）、ＭＫ－３４７５（ＰＤ－１に対する）、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標））、ＡＭＰ２２４（Ｂ７ＤＣに対する）、ＢＭＳ－９３６５５９（Ｂ７－Ｈ１に対する）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｂ７－Ｈ１に対する）、ＭＥＤＩ－５７０（ＩＣＯＳに対する）、ＡＭＧ５５７（Ｂ７Ｈ２に対する）、ＭＧＡ２７１（Ｂ７Ｈ３に対する）、ＩＭＰ３２１（ＬＡＧ－３に対する）、ＢＭＳ－６６３５１３（ＣＤ１３７に対する）、ＰＦ－０５０８２５６６（ＣＤ１３７に対する）、ＣＤＸ－１１２７（ＣＤ２７に対する）、抗ＯＸ４０（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｅ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）、ｈｕＭＡｂＯＸ４０Ｌ（ＯＸ４０Ｌに対する）、アタシセプト（ＴＡＣＴに対する）、ＣＰ－８７０８９３（ＣＤ４０に対する）、ルカツムマブ（ＣＤ４０に対する）、ダセツズマブ（ＣＤ４０に対する）、ムロモナブ－ＣＤ３（ＣＤ３に対する）；抗ＧＩＴＲ抗体ＭＫ４１６６、ＴＲＸ５１８、Ｍｅｄｉ１８７３、ＩＮＢＲＸ－１１０、ＬＫ２－１４５、ＧＷＮ－３２３、ＧＩＴＲＬ－Ｆｃ、またはこれらの任意の組合せも含む。

【0227】

[0236]例示的な免疫療法剤は、限定はされないが、イピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、トレメリムマブ、スパルタリズマブ、アベルマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、ＭＧＡ０１２、ＭＧＤ０１３、ＭＧＤ０１９、エノブリツズマブ、ＭＧＤ００９、ＭＧＣ０１８、ＭＥＤＩ０６８０、ＰＤＲ００１、ＦＡＺ０５３、ＴＳＲ０２２、ＭＢＧ４５３、レラトリマブ（ｒｅｌａｔｌｉｎａｂ）（ＢＭＳ９８６０１６）、ＬＡＧ５２５、ＩＭＰ３２１、ＲＥＧＮ２８１０（セミプリマブ）、ＲＥＧＮ３７６７、ペキシダルチニブ、ＬＹ３０２２８５５、ＦＰＡ００８、ＢＬＺ９４５、ＧＤＣ０９１９、エパカドスタット、インドキシモド（ｉｎｄｏｘｉｍｉｄ）、ＢＭＳ９８６２０５、ＣＰＩ－４４４、ＭＥＤＩ９４４７、ＰＢＦ５０９、リリルマブ、ＩＭＣ－００１、モナリズマブ、およびこれらの組合せも含み得る。

【0228】

ＶＩ．処置の方法
[0237]抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくは抗原結合フラグメント、またはそのような抗体、および免疫療法剤を含有するＡＤＣを含む、組合せ剤を投与するステップを含む処置の方法が本明細書で提供される。

【0229】

[0238]一部の実施形態において、本開示は、内皮細胞（ＥＣ）特異的であるが、例えば、ＥＣ－ＥＣ、ＥＣ－間葉幹細胞、ＥＣ－線維芽細胞、ＥＣ－平滑筋細胞、ＥＣ－腫瘍細胞、ＥＣ－白血球、ＥＣ－脂肪細胞、およびＥＣ神経細胞相互作用に限定されない細胞－細胞相互作用を阻害する方法を提供する。

【0230】

[0239]「組合せ」または「と組み合わせて」により、治療または治療剤が同時に投与されなければならないおよび／または（例えば同じ組成物中で）共に送達するために製剤化されなければならないことを意味すると意図されないが、これらの方法および組成物は本明細書に記載の範囲内である。免疫調節剤および第２の治療剤は、１つまたは複数の他のさらなる治療または治療剤と同時に、それらの前に、またはそれらに続いて投与され得る。組合せ剤中の薬剤は、任意の順で投与され得る。一般に、各薬剤は、その薬剤について決定された用量および／またはタイムスケジュールで投与される。この組合せ剤で利用されるさらなる治療剤が、単一の組成物中で共に投与されるかまたは異なる組成物中で別々に投与され得るとさらに考えられる。一般に、組み合わせて利用されるさらなる治療剤は、それらが個々に利用されるレベルを超えないレベルで利用され得ると考えられる。一部の実施形態において、組み合わせて利用されるレベルは、個々に利用されるよりも低くてもよい。

【0231】

[0240]一部の実施形態において、本明細書に開示の方法は、１つまたは複数の免疫療法剤（例えば、抗ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１抗体分子、抗ＬＡＧ－３、または抗ＴＩＭ－３抗体分子）と組み合わせて、本明細書に記載の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体またはその抗原結合フラグメントまたはＡＤＣを投与するステップを含む。

【0232】

[0241]免疫療法剤と組み合わせた、組合せ剤の成分、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはそのような抗体を含有するＡＤＣは、一部の場合では同時に投与される。同時投与は、各成分が互いに同時に、または８～１２時間以内に投与されることを意味する。第１の成分の１２時間以上後の第２の成分の投与は、順投与と考えられ得る。免疫療法剤と組み合わせた、組合せ剤の成分、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはそのような抗体を含有するＡＤＣは、一部の場合では、任意の順序および任意の組合せで順に投与される（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、または９日後；１、２、３または４週間後；１、２、３、４、５、６、７、８、または９週間後；または１、２、３、４、５、６年、またはそれ以上後；等）。一部の実施形態において、順に投与される場合、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはそのような抗体を含有するＡＤＣが第１に投与され、免疫療法剤が第２に投与される。他の実施形態において、免疫療法剤が第１に投与され、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはそのような抗体を含有するＡＤＣが第２に投与される。

【0233】

[0242]さらなる薬剤
[0243]一部の実施形態において、組合せ剤は、さらなる薬剤、例えばチロシンキナーゼ阻害剤をさらに含み得る。例示的なチロシンキナーゼ阻害剤は、限定はされないが、上皮増殖因子（ＥＧＦ）経路阻害剤（例えば、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）経路阻害剤（例えば、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、ＶＥＧＦＲ－１阻害剤、ＶＥＧＦＲ－２阻害剤、ＶＥＧＦＲ－３阻害剤））、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）経路阻害剤（例えば、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）阻害剤（例えば、ＰＤＧＦＲ－β阻害剤））、ＲＡＦ－１阻害剤、ＫＩＴ阻害剤およびＲＥＴ阻害剤を含む。一部の実施形態において、ヘッジホッグ阻害剤と組み合わせて使用される抗がん剤は：アキシチニブ（ＡＧ０１３７３６）、ボスチニブ（ＳＫＩ－６０６）、セディラニブ（ＲＥＣＥＮＴＩＮ（商標）、ＡＺＤ２１７１）、ダサチニブ（ＳＰＲＹＣＥＬ（登録商標）、ＢＭＳ－３５４８２５）、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標））、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標））、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）、ＣＧＰ５７１４８Ｂ、ＳＴＩ－５７１）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＴＹＶＥＲＢ（登録商標））、レスタウルチニブ（ＣＥＰ－７０１）、ネラチニブ（ＨＫＩ－２７２）、ニロチニブ（ＴＡＳＩＧＮＡ（登録商標））、セマクサニブ（セマキシニブ、ＳＵ５４１６）、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、ＳＵ１１２４８）、トセラニブ（ＰＡＬＬＡＤＩＡ（登録商標）、バンデタニブ（ＺＡＣＴＩＭＡ（登録商標）、ＺＤ６４７４）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７、ＰＴＫ／ＺＫ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、ニロチニブ（ＴＡＳＩＧＮＡ（登録商標））、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標））、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、ゲムツズマブ オゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標））、ＥＮＭＤ－２０７６、ＰＣＩ－３２７６５、ＡＣ２２０、ドビチニブ乳酸塩（ＴＫＩ２５８、ＣＨＩＲ－２５８）、ＢＩＢＷ ２９９２（ＴＯＶＯＫ（商標））、ＳＧＸ５２３、ＰＦ－０４２１７９０３、ＰＦ－０２３４１０６６、ＰＦ－２９９８０４、ＢＭＳ－７７７６０７、ＡＢＴ－８６９、ＭＰ４７０、ＢＩＢＦ １１２０（Ｖ ＡＲＧＡＴＥＦ（登録商標））、ＡＰ２４５３４、ＪＮＪ－２６４８３３２７、ＭＧＣＤ２６５、ＤＣＣ－２０３６、ＢＭＳ－６９０１５４、ＣＥＰ－１１９８１、チボザニブ（ＡＶ－９５１）、ＯＳＩ－９３０、ＭＭ－１２１、ＸＬ－１８４、ＸＬ－６４７、ＸＬ２２８、ＡＥＥ７８８、Ａｇ－４９０、ＡＳＴ－６、ＢＭＳ－５９９６２６、ＣＵＤＣ－１０１、ＰＤ１５３０３５、ペリチニブ（ＥＫＢ－５６９）、バンデタニブ（ザクチマ）、ＷＺ３１４６、ＷＺ４００２、ＷＺ８０４０、ＡＢＴ－８６９（リニファニブ）、ＡＥＥ７８８、ＡＰ２４５３４（ポナチニブ）、ＡＶ－９５１（チボザニブ）、アキシチニブ、ＢＡＹ ７３－４５０６（レゴラフェニブ）、アラニン酸ブレバニブ（ＢＭＳ－５８２６６４）、ブリバニブ（ＢＭＳ－５４０２１５）、セディラニブ（ＡＺＤ２１７１）、ＣＨＩＲ－２５８（ドビチニブ）、ＣＰ ６７３４５１、ＣＹＣ１１６、Ｅ７０８０、ΚＩ８７５１、マシチニブ（ＡＢＩＯＩＯ）、ＭＧＣＤ－２６５、モテサニブ二リン酸（ＡＭＧ－７０６）、ＭＰ－４７０、ＯＳＩ－９３０、塩酸パゾパニブ、ＰＤ１７３０７４、トシル酸ソラフェニブ（Ｂａｙ ４３－９００６）、ＳＵ ５４０２、ＴＳＵ－６８（ＳＵ６６６８）、バタラニブ、ＸＬ８８０（ＧＳＫ１３６３０８９、ＥＸＥＬ－２８８０）からなる群から選択される。ヘッジホッグ阻害剤のさらなる例は、限定はされないが、ビスモデギブ（ＰＣＴ公報ＷＯ０６／０２８９５８に記載の２－クロロ－Ｎ－［４－クロロ－３－（２－ピリジニル）フェニル］－４－（メチルスルホニル）－ベンズアミド、ＧＤＣ－０４４９）；ｌ－（４－クロロ－３－（トリフルオロメチル）フェニル）－３－（（３－（４－フルオロフェニル）－３，４－ジヒドロ－４－オキソ－２－キナゾリニル）メチル）－ウレア（ＣＡＳ ３３０７９６－２４－２）；Ｎ－［（２Ｓ，３Ｒ，３’Ｒ，３ａＳ，４’ａＲ，６Ｓ，６’ａＲ，６’ｂＳ，７ａＲ，１２’ａＳ，１２’ｂＳ）－２’，３’，３ａ，４，４’，４’ａ，５，５’，６，６’，６’ａ，６’ｂ，７，７’，７ａ，８’，１０’，１２’，１２’ａ，１２’ｂ－エイコサヒドロ－３，６，ｌ ｌ’，１２’ｂ－テトラメチルスピロ［フロ［３，２－ｂ］ピリジン－２（３Ｈ），９’（ｌ’Ｈ）－ナフサ［２，ｌ－ａ］アズレン］－３’－イル］－メタンスルホンアミド（ＩＰＩ９２６、ＣＡＳ １０３７２１０－９３－７）；および４－フルオロ－Ｎ－メチル－Ｎ－［ｌ－［４－（ｌ－メチル－ｌＨ－ピラゾール－５－イル）－ｌ－フタラジニル］－４－ピペリジニル］－２－（トリフルオロメチル）－ベンズアミド（ＬＹ２９４０６８０、ＣＡＳ １２５８８６１－２０－９）；およびエリスモデギブ（ＬＤＥ２２５）を含む。選択されたチロシンキナーゼ阻害剤は、ゲフィチニブ；塩酸エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））；リニファニブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈから入手できる、ＡＢＴ ８６９としても公知の、Ｎ－［４－（３－アミノ－ｌＨ－インダゾール－４－イル）フェニル］－Ｎ’－（２－フルオロ－５－メチルフェニル）ウレア；リンゴ酸スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））；ボスチニブ（米国特許第６７８０９９６号に記載の、ＳＫＩ－６０６としても公知の４－［（２，４－ジクロロ－５－メトキシフェニル）アミノ］－６－メトキシ－７－［３－（４－メチルピペラジン－ｌ－ｙｌ）プロポキシ］キノリン－３－カルボニトリル；ダサチニブ（Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標））；パゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標））；ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））；ザクチマ（ＺＤ６４７４）；およびイマチニブまたはメシル酸イマチニブ（Ｇｉｌｖｅｃ（登録商標）およびＧｌｅｅｖｅｃ（登録商標））から選される。

【0234】

[0244]一部の実施形態において、組合せ剤は、さらなる薬剤、例えば血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体阻害剤をさらに含み得る。ＶＥＧＦ阻害剤の例は、限定はされないが、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、アキシチニブ（Ｉｎｌｙｔａ（登録商標））；アラニン酸ブリバニブ（ＢＭＳ－５８２６６４、（５）－（（Ｒ）－ｌ－（４－（４－フルオロ－２－メチル－ｌＨ－インドール－５－イルオキシ）－５－メチルピロロ［２，ｌ－／］［ｌ，２，４］トリアジン－６－イルオキシ）プロパン－２－イル）２－アミノプロパノエート）；ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（登録商標））；パゾパニブ（Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（登録商標））；リンゴ酸スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））；セディラニブ（ＡＺＤ２１７１、ＣＡＳ２８８３８３－２０－１）；バラガテフ（ＢＩＢＦ１１２０、ＣＡＳ９２８３２６－８３－４）；フォレチニブ（ＧＳＫ１３６３０８９）；テラチニブ（ＢＡＹ５７－９３５２、ＣＡＳ３３２０１２－４０－５）；アパチニブ（ＹＮ９６８Ｄ１、ＣＡＳ８１１８０３－０５－１）；イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））；ポナチニブ（ＡＰ２４５３４、ＣＡＳ９４３３１９－７０－８）；チボザニブ（ＡＶ９５１、ＣＡＳ４７５１０８－１８－０）；レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３－４５０６、ＣＡＳ ７５５０３７－０３－７）、二塩酸バタラニブ（ＰＴＫ７８７、ＣＡＳ２１２１４１－５１－０）；ブリバニブ（ＢＭＳ－５４０２１５、ＣＡＳ６４９７３５－４６－６）；バンデタニブ（Ｃａｐｒｅｌｓａ（登録商標）またはＡＺＤ６４７４）；二リン酸モテサニブ（ＰＣＴ公報ＷＯ０２／０６６４７０に記載の、ＡＭＧ７０６、ＣＡＳ８５７８７６－３０－３、Ｎ－（２，３－ジヒドロ－３，３－ジメチル－ｌＨ－インドール－６－イル）－２－［（４－ピリジニルメチル）アミノ］－３－ピリジンカルボキサミド）；二乳酸ドビチニブ（ＴＫＩ２５８、ＣＡＳ８５２４３３－８４－２）；リニファニブ（Ｌｉｎｆａｎｉｂ）（ＡＢＴ８６９、ＣＡＳ７９６９６７－１６－３）；カボザンチニブ（ＸＬ１８４、ＣＡＳ８４９２１７－６８－１）；レスタウルチニブ（ＣＡＳ１１１３５８－８８－４）；Ｎ－［５－［［［５－（ｌ，ｌ－ジメチルエチル）－２－オキサゾリル］メチル］チオ］－２－チアゾリル］－４－ピペリジンカルボキサミド（ＢＭＳ３８７０３、ＣＡＳ３４５６２７－８０－７）；（３Ｒ，４Ｒ）－４－アミノ－ｌ－（（４－（（３－メトキシフェニル）アミノ）ピロロ［２，ｌ－ｆ］［ｌ，２，４］トリアジン－５－イル）メチル）ピペリジン－３－オール（ＢＭＳ６９０５１４）；Ｎ－（３，４－ジクロロ－２－フルオロフェニル）－６－メトキシ－７－［［（３ａａ，５ｐ，６ａａ）－オクタヒドロ－２－メチルシクロペンタ［ｃ］ピロール－５－イル］メトキシ］－４－アミノキナゾリン（ＸＬ６４７、ＣＡＳ７８１６１３－２３－８）；４－メチル－３－［［ｌ－メチル－６－（３－ピリジニル）－ｌＨ－ピラゾロ［３，４－Ｊ］ピリミジン－４－イル］アミノ］－Ｎ－［３トリフルオロメチル）フェニル］－ベンズアミド（ＢＨＧ７１２、ＣＡＳ９４０３１０－８５－０）；およびアフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））を含み得る。例示的な抗ＶＥＧＦ抗体は、限定はされないが、ハイブリドーマＡＴＣＣ ＨＢ １０７０９によって産生された、モノクローナル抗ＶＥＧＦ抗体Ａ４．６．１と同じエピトープに結合するモノクローナル抗体；Ｐｒｅｓｔａら．（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３－４５９９に従って生成された組換えヒト化抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体を含む。一実施形態において、抗ＶＥＧＦ抗体は、ｒｈｕＭＡｂ ＶＥＧＦまたはＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）としても公知の、ベバシズマブ（ＢＶ）である。それは、変異ヒトＩｇＧ１フレームワーク領域およびヒトＶＥＧＦのその受容体への結合を遮断する、マウス抗ｈＶＥＧＦモノクローナル抗体Ａ．４．６．１からの抗原結合相補性決定領域を含む。ベバシズマブおよび他のヒト化抗ＶＥＧＦ抗体は、２００５年２月２６日に出願された米国特許第６８８４８７９号にさらに記載される。さらなる抗体は、これらの特許明細書の内容が参照により本明細書に明確に組み込まれる、ＰＣＴ公報ＷＯ２００５／０１２３５９、ＰＣＴ公報ＷＯ２００５／０４４８５３に記載のＧ６またはＢ２０シリーズ抗体（例えば、Ｇ６－３１，Ｂ２０－４．１）を含む。さらなる抗体は、米国特許第７０６０２６９号、同第６５８２９５９号、同第６７０３０２０号、同第６０５４２９７号、国際公開第９８／４５３３２号、国際公開第９６／３００４６号、国際公開第９４／１０２０２号、欧州特許第０６６６８６８Ｂ１号、米国特許出願公開第２００６００９３６０号、同第２００５０１８６２０８号、同第２００３０２０６８９９号、同第２００３０１９０３１７号、同第２００３０２０３４０９号、および同第２００５０１１２１２６号；ならびにＰｏｐｋｏｖら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８８：１４９－１６４（２００４）を参照。他の抗体は、残基Ｆ１７、Ｍ１８、Ｄ１９、Ｙ２１、Ｙ２５、Ｑ８９、１９１、Ｋ１０１、Ｅ１０３、およびＣ１０４を含むか、または、代替的に、残基Ｆ１７、Ｙ２１、Ｑ２２、Ｙ２５、Ｄ６３、１８３およびＱ８９を含むヒトＶＥＧＦの機能性エピトープに結合するものを含む。

【0235】

[0245]一部の実施形態において、組合せ剤は、さらなる薬剤、例えばＰＩ３Ｋ阻害剤をさらに含み得る。ＰＩ３Ｋ阻害剤の例は、ＰＩ３Ｋのデルタおよびガンマアイソフォームの阻害剤である。ＰＩ３Ｋ阻害剤のさらなる例は、限定はされないが、４－［２－（ｌＨ－インダゾール－４－イル）－６－［［４－（メチルスルホニル）ピペラジン－ｌ－イル］メチル］チエノ［３，２－ｄ］ピリミジン－４－イル］モルホリン（ＰＣＴ公報ＷＯ０９／０３６０８２号およびＷＯ０９／０５５７３０号に記載のＧＤＣ ０９４１としても公知）；２－メチル－２－［４－［３－メチル－２－オキソ－８－（キノリン－３－イル）－２，３－ジヒドロイミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－ｌ－イル］フェニル］プロピオニトリル（ＰＣＴ公報ＷＯ０６／１２２８０６に記載のＢＥＺ２３５またはＮＶＰ－ＢＥＺ ２３５としても公知）；４－（トリフルオロメチル（ｔｒｉｉｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ））－５－（２，６－ジモルホリノピリミジン－４－イル）ピリジン－２－アミン（ＰＣＴ公報ＷＯ２００７／０８４７８６に記載の、ＢＫＭ１２０またはＮＶＰ－ＢＫＭ１２０としても公知）；トザセルチブ（ＶＸ６８０またはＭＫ－０４５７、ＣＡＳ６３９０８９－５４－６）；（５Ｚ）－５－［［４－（４－ピリジニル）－６－キノリニル］メチレン］－２，４－チアゾリジンジオン（ＧＳＫ１０５９６１５、ＣＡＳ９５８８５２－０１－２）；（ｌＥ，４Ｓ，４ａＲ，５Ｒ，６ａＳ，９ａＲ）－５－（アセチルオキシ）－ｌ－［（ジ－２－プロペニルアミノ）メチレン］－４，４ａ，５，６，６ａ，８，９，９ａ－オクタヒドロ－ｌ ｌ－ヒドロキシ－４－（メトキシメチル）－４ａ，６ａ－ジメチル－シクロペンタ［５，６］ナフト［ｌ，２－ｃ］ピラン－２，７，１０（ｌＨ）－トリオン（ＰＸ８６６、ＣＡＳ５０２６３２－６６－８）；８－フェニル－２－（モルホリン－４－イル）－クロメン－４－オン（ＬＹ２９４００２、ＣＡＳ１５４４４７－３６－６）；２－アミノ－８－エチル－４－メチル－６－（ｌＨ－ピラゾール－５－イル）ピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－７（８Ｈ）－オン（ＳＡＲ ２４５４０９またはＸＬ ７６５）；ｌ，３－ジヒドロ－８－（６－メトキシ－３－ピリジニル）－３－メチル－１－［４－（１－ピペラジニル）－３－（トリフルオロメチル）フェニル］－２Ｈ－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－２－オン，（２Ｚ）－２－ブテン二酸（１：１）（ＢＧＴ ２２６）；５－フルオロ－３－フェニル－２－［（ｌＳ）－ｌ－（９Ｈ－プリン－６－イルアミノ）エチル］－４（３Ｈ）－キナゾリノン（ＣＡＬ１０１）；２－アミノ－Ｎ－［３－［Ｎ－［３－［（２－クロロ－５－メトキシフェニル）アミノ］キノキサリン－２－イル］スルファモイル］フェニル］－２－メチルプロパンアミド（ＳＡＲ ２４５４０８またはＸＬ １４７）；および（Ｓ）－ピロリジン－ｌ，２－ジカルボン酸２－アミドｌ－（｛４－メチル－５－［２－（２，２，２－トリフルオロ－１，１－ジメチル－エチル）－ピリジン－４－イル］－チアゾール－２－イル｝－アミド）（Ｂ ＹＬ７１９）を含む。

【0236】

[0246]一部の実施形態において、組合せ剤は、さらなる薬剤、例えばｍＴＯＲ阻害剤、例えば、ラパマイシン、テムシロリムス（ＴＯＲＩＳＥＬ（登録商標））、ＡＺＤ８０５５、ＢＥＺ２３５、ＢＧＴ２２６、ＸＬ７６５、ＰＦ－４６９１５０２、ＧＤＣ０９８０、ＳＦ１１２６、ＯＳＩ－０２７、ＧＳＫ１０５９６１５、ＫＵ－００６３７９４、ＷＹＥ－３５４、Ｐａｌｏｍｉｄ ５２９（Ｐ５２９）、ＰＦ－０４６９１５０２、またはＰＫＩ－５８７、リダフォロリムス（公式にはデフェロリムズとして公知，ＰＣＴ公報ＷＯ ０３／０６４３８３に記載の、ＡＰ２３５７３およびＭＫ８６６９としても公知の、（ｌＲ，２Ｒ，４Ｓ）－４－［（２Ｒ）－２［（１Ｒ，９Ｓ，１２Ｓ，１５Ｒ，１６Ｅ，１ＳＲ，１９Ｒ，２１Ｒ，２３Ｓ，２４Ｅ，２６Ｅ，２ＳＺ，３０Ｓ，３２Ｓ，３５Ｒ）－１，１８－ジヒドロキシ－ｌ ９，３０－ジメトキシ－１５，１７，２１，２３，２９，３５－ヘキサメチル－２，３，１０，１４，２０－ペンタオキソ－ｌ ｌ，３６－ジオキサ－４－アザトリシクロ［３０．３．１．０４‘９］ヘキサトリアコンタ－１６，２４，２６，２８－テトラエン－１２－イル］プロピル］－２－メトキシシクロへキシルジメチルホスフィネート）；エベロリムス（Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標）またはＲＡＤ００１）；ラパマイシン（ＡＹ２２９８９，Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ（登録商標））；ｓｉｍａｐｉｍｏｄ（ＣＡＳ１６４３０１－５１－３）；エムシロリムス、（５－｛２，４－ビス［（３Ｓ）－３－メチルモルホリン－４－イル］ピリド［２，３－ＪＪピリミジン－７－イル］－２－メトキシフェニル｝メタノール（ＡＺＤ８０５５）；２－アミノ－８－［ｉｒａｗ５，－４－（２－ヒドロキシエトキシ）シクロへキシル］－６－（６－メトキシ－３－ピリジニル）－４－メチル－ピリド［２，３－ＪＪピリミジン－７（８Ｈ）－オン（ＰＦ０４６９１５０２，ＣＡＳ１０１３１０１－３６－４）；およびＮ２－［ｌ，４－ジオキソ－４－［［４－（４－オキソ－８－フェニル－４Ｈ－ｌ－ベンゾピラン－２－イル）モルホリニウム－４－イル］メトキシ］ブチル］－Ｌ－アルギニルグリシル－Ｌ－ａ－アスパルチルＬ－セリン－、分子内塩（ＳＦ１１２６，ＣＡＳ９３６４８７－６７－１）、（ｌｒ，４ｒ）－４－（４－アミノ－５－（７－メトキシ－ｌＨ－インドール－２－イル）イミダゾ［ｌ，５－ｆ］［ｌ，２，４］トリアジン－７－イル）シクロヘキサンカルボン酸（ＯＳＩ－０２７）；およびＸＬ７６５の１つまたは複数から選択される１つまたは複数のｍＴＯＲ阻害剤をさらに含み得る。

【0237】

[0247]一部の実施形態において、組合せ剤は、さらなる薬剤、例えばＢＲＡＦ阻害剤、例えば、ＧＳＫ２１１８４３６、ＲＧ７２０４、ＰＬＸ４０３２、ＧＤＣ－０８７９、ＰＬＸ４７２０、およびトシル酸ソラファニブ（Ｂａｙ ４３－９００６）をさらに含み得る。さらなる実施形態において、ＢＲＡＦ阻害剤は、限定はされないが、レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３－４５０６，ＣＡＳ７５５０３７－０３－７）；ｔｕｖｉｚａｎｉｂ（ＡＶ９５１，ＣＡＳ４７５１０８－１８－０）；ベムラフェニブ（Ｚｅｌｂｏｒａｆ（登録商標）、ＰＬＸ－４０３２、ＣＡＳ９１８５０４－６５－１）；エンコラフェニブ（ＬＧＸ８１８としても公知）；１－メチル－５－［［２－［５－（トリフルオロメチル）－１ Ｈ－イミダゾール－２－イル］－４－ピリジニル］オキシ］－Ｎ－［４－（トリフルオロメチル）フェニル－ｌＨ－ベンズイミダゾール－２－アミン（ＲＡＦ２６５、ＣＡＳ９２７８８０－９０－８）；５－［ｌ－（２－ヒドロキシエチル）－３－（ピリジン－４－イル）－ｌＨ－ピラゾール－４－イル］－２，３－ジヒドロインデン－ｌ－オン オキシム（ＧＤＣ－０８７９，ＣＡＳ９０５２８１－７６－７）；５－［２－［４－［２－（ジメチルアミノ）エトキシ］フェニル］－５－（４－ピリジニル）－ｌＨ－イミダゾール－４－イル］－２，３－ジヒドロ－ｌＨ－インデン－ｌ－オン オキシム（ＧＳＫ２１１８４３６またはＳＢ５９０８８５）；（＋／－）－メチル（５－（２－（５－クロロ－２－メチルフェニル）－ｌ－ヒドロキシ－３－オキソ－２，３－ジヒドロ－ｌＨ－イソインドール－ｌ－イル）－ｌＨ－ベンズイミダゾール－２－イル）カルバメート（ＸＬ－２８１およびＢＭＳ９０８６６２としても公知）ならびにＮ－（３－（５－クロロ－ｌＨ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－カルボニル］－２，４－ジフルオロフェニル）プロパン－ｌ－スルホンアミド（ＰＬＸ４７２０としても公知）を含む。

【0238】

[0248]一部の実施形態において、組合せ剤は、さらなる薬剤、例えばＭＥＫ阻害剤をさらに含み得る。限定はされないが、セルメチニブ（ＰＣＴ公報ＷＯ２００３０７７９１４に記載され、ＡＺＤ６２４４またはＡＲＲＹ１４２８８６としても公知の、５－［（４－ブロモ－２－クロロフェニル）アミノ］－４－フルオロ－Ｎ－（２－ヒドロキシエトキシ）－ｌ－メチル－１Ｈ－ベンズイミダゾール－６－カルボキサミド）；トラメチニブジメチルスルホキシド（ＧＳＫ－１１２０２１２、ＣＡＳ１２０４５３１－２５－８０）；ＲＤＥＡ４３６；Ｎ－［３，４－ジフルオロ－２－［（２－フルオロ－４－ヨードフェニル）アミノ］－６－メトキシフェニル］－１－［（２Ｒ）－２，３－ジヒドロキシプロピル］－シクロプロパンスルホンアミド（ＰＣＴ公報ＷＯ２００７０１４０１１に記載され、ＲＤＥＡ１１９またはＢＡＹ８６９７６６としても公知）；ＡＳ７０３０２６；ＢＩＸ ０２１８８；ＢＩＸ ０２１８９；２－［（２－クロロ－４－ヨードフェニル）アミノ］－Ｎ－（シクロプロピルメトキシ）－３，４－ジフルオロ－ベンズアミド（ＰＣＴ公報ＷＯ２００００３５４３６に記載され、ＣＩ－１０４０またはＰＤ１８４３５２としても公知）；Ｎ－［（２Ｒ）－２，３－ジヒドロキシプロポキシ］－３，４－ジフルオロ－２－［（２－フルオロ－４－ヨードフェニル）アミノ］－ベンズアミド（ＰＣＴ公報ＷＯ２００２００６２１３に記載され、ＰＤ０３２５９０１としても公知）；２’－アミノ－３’－メトキシフラボン（ＰＤ９８０５９としても公知であり、Ｂｉａｆｆｉｎ ＧｍｂＨ＆ｃｏ．，ｋｇ，Ｇｅｒｍａｎｙから入手可能）；２，３－ビス［アミノ［（２－アミノフェニル）チオ］メチレン］－ブタンジニトリル（Ｕ０１２６としても公知であり、米国特許第２７７９７８０号に記載される）；ＸＬ－５１８（ＧＤＣ－０９７３、Ｃａｓ Ｎｏ．１０２９８７２－２９－４としても公知であり、ＡＣＣ Ｃｏｒｐ．から入手可能）；Ｇ－３８９６３；およびＧ０２４４３７１４（ＡＳ７０３２０６としても公知）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒を含む任意のＭＥＫ阻害剤が組み合わせて使用され得る。ＭＥＫ阻害剤のさらなる例は、その内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１３／０１９９０６号、同第０３／０７７９１４号、同第２００５／１２１１４２号、同第２００７／０４４１５号、同第２００８／０２４７２５号、および同第２００９／０８５９８３号に開示される。ＭＥＫ阻害剤のさらなる例は、限定はされないが、ビニメチニブ（ｂｅｎｉｍｅｔｉｎｉｂ）（ＰＣＴ公報ＷＯ２００３０７７９１４に記載され、ＭＥＫ１６２、ＣＡＳ１０７３６６６－７０－２としても公知の、６－（４－ブロモ－２－フルオロフェニルアミノ）－７－フルオロ－３－メチル－３Ｈ－ベンゾイミダゾール－５－カルボン酸（２－ヒドロキシエチオキシ）－アミド）；２，３－ビス［アミノ［（２－アミノフェニル）チオ］メチレン］－ブタンジニトリル（Ｕ０１２６としても公知であり、米国特許第２７７９７８０に記載される）；（３Ｓ，４Ｒ，５Ｚ，８Ｓ，９Ｓ，ｌ ｌＥ）－１４－（エチルアミノ）－８，９，１６－トリヒドロキシ－３，４－ジメチル－３，４，９，１９－テトラヒドロ－ｌＨ－２－ベンズオキサシクロテトラデシン－ｌ，７（８Ｈ）－ジオン］（Ｅ６２０１としても公知であり、ＰＣＴ公報ＷＯ２００３０７６４２４に記載される）；ベムラフェニブ（ＰＬＸ－４０３２、ＣＡＳ９１８５０４－６５－１）；（Ｒ）－３－（２，３－ジヒドロキシプロピル）－６－フルオロ－５－（２－フルオロ－４－ヨードフェニルアミノ）－８－メチルピリド［２，３－ｄ］ピリミジン－４，７（３Ｈ，８Ｈ）－ジオン（ＴＡＫ－７３３、ＣＡＳ１０３５５５５－６３－５）；ピマセルチブ（ＡＳ－７０３０２６、ＣＡＳ１２０４５３１－２６－９）；２－（２－フルオロ－４－ヨードフェニルアミノ）－Ｎ－（２－ヒドロキシエトキシ）－ｌ，５－ジメチル－６－オキソ－ｌ，６－ジヒドロピリジン－３－カルボキサミド（ＡＺＤ ８３３０）；および３，４－ジフルオロ－２－［（２－フルオロ－４－ヨードフェニル）アミノ］－Ｎ－（２－ヒドロキシエトキシ）－５－［（３－オキソ－［ｌ，２］オキサジナン－２－イル）メチル］ベンズアミド（ＣＨ ４９８７６５５またはＲｏ ４９８７６５５）を含む。

【0239】

[0249]一部の実施形態において、組合せ剤は、さらなる薬剤、例えば、ＪＡＫ阻害剤をさらに含み、例えば、ＪＡＫ阻害剤の例は、限定はされないが、ｒＣＥＰ－７０１、ＩＮＣＢ１８４２４、ＣＰ－６９０５５０（タソシチニブ）、ルキソリチニブ（ｕｘｏｌｉｔｉｎｉｂ）（ジャカフィ（登録商標））；トファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）；アキシチニブ（ＡＧ０１３７３６、ＣＡＳ３１９４６０－８５－０）；５－クロロ－Ｎ２－［（ｌＳ）－ｌ－（５－フルオロ－２－ピリミジニル）エチル］－Ｎ４－（５－メチル－ｌＨ－ピラゾール－３－ｙ）－１２，４－ピリミジンジアミン（ＡＺＤ１４８０、ＣＡＳ９３５６６６－８８－９）；（９Ｅ）－１５－［２－（ｌ－ピロリジニル）エトキシ］－７，１２，２６－トリオキサ－１９，２１，２４－トリアザテトラシクロ［１８．３．１．１２，５．１１４，１８］－ヘキサコサ－ｌ（２４），２，４，９，１４，１６，１８（２５），２０，２２－ノナン（ＳＢ－１５７８、ＣＡＳ９３７２７３－０４－６）；モメロチニブ（ＣＹＴ ３８７）；バリシチニブ（ＩＮＣＢ－０２８０５０またはＬＹ－３００９１０４）；パクリチニブ（ＳＢ１５１８）；（１６Ｅ）－１４－メチル－２０－オキサ－５，７，１４，２７－テトラアザテトラシクロ［１９．３．１．１２，６．１８，１２］ヘプタコサ－ｌ（２５），２，４，６（２７），８，１０，１２（２６），１６，２１，２３－デカン（ＳＢ １３１７）；ガンドチニブ（ＬＹ ２７８４５４４）；およびＮ，Ｎ－シクロプロピル（ｃｉｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙ）ｌ－４－［（ｌ，５－ジメチル－ｌＨ－ピラゾール－３－イル）アミノ］－６－エチル－ｌ，６－ジヒドロ－ｌ－メチル－イミダゾ［４，５－ｄ］ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－７－カルボキサミド（ＢＭＳ ９１１５４３）を含む。

【0240】

[0250]一部の実施形態において、組合せ剤は、さらなる薬剤、例えばキラー細胞免疫グロブリン様受容体（本明細書では「抗ＫＩＲ抗体」とも呼ばれる）に対する抗体をさらに含み得る。一部の実施形態において、組合せ剤は、場合によりシクロホスファミドと組み合わせて、細胞免疫療法（例えば、プロベンジ（例えば、シプロイセル））を投与するステップをさらに含み得る。一部の実施形態において、組合せ剤は、さらなる薬剤、例えばワクチン、例えば樹状細胞腎臓癌（ＤＣ－ＲＣＣ）ワクチンをさらに含み得る。一部の実施形態において、組合せ剤は、さらなる薬剤、例えばパクリタキセルまたはパクリタキセル剤、例えばＴＡＸＯＬ（登録商標）、タンパク質結合パクリタキセル（例えば、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））をさらに含み得る。パクリタキセル剤の例は、限定はされないが、ナノ粒子アルブミン結合パクリタキセル（ＡＢＲＡＸＡＮＥ、Ａｂｒａｘｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅによって市販されている）、ドコサヘキサエン酸結合パクリタキセル（ＤＨＡ－パクリタキセル、タクソプレキシン、Ｐｒｏｔａｒｇａによって市販されている）、ポリグルタミン酸結合パクリタキセル（ＰＧ－パクリタキセル、パクリタキセルポリグルメクス、ＣＴ－２１０３、ＸＹＯＴＡＸ、Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃによって市販されている）、腫瘍活性化プロドラッグ（ＴＡＰ）、ＡＮＧ１０５（パクリタキセルの３分子に結合したＡｎｇｉｏｐｅｐ－２、ＩｍｍｕｎｏＧｅｎによって市販されている）、パクリタキセル－ＥＣ－１（ｅｒｂＢ２認識ペプチドＥＣ－１に結合したパクリタキセル；Ｌｉら，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ（２００７）８７：２２５－２３０参照）、およびグルコースコンジュゲートパクリタキセル（例えば、－パクリタキセルメチル２－コハク酸グルコピラノシル、Ｌｉｕら，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ（２００７）１７：６１７－６２０参照）を含む。

【0241】

[0251]一部の実施形態において、組合せ剤は、さらなる薬剤、例えば、化学療法、および／または免疫療法をさらに含み得る。例えば、免疫療法剤と組み合わせて、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたはそれを含むＡＤＣを含む組合せ剤を、単独で、または化学療法もしくは他の抗がん剤（例えば、サリドマイド類似体、例えば、レナリドミド）、腫瘍抗原パルス樹状細胞、腫瘍細胞と樹状細胞の融合（例えば、電気融合）、または悪性形質細胞によって産生された免疫グロブリンイディオタイプによるワクチン接種の１つまたは複数と組み合わせて使用してミエローマを処置することができる。

【0242】

[0252]がん
[0253]本方法の一部の実施形態において、組合せ剤によって処置されるがんは、前立腺がん、肝臓がん、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、乳がん、三種陰性乳がん、膵臓がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、子宮頸がん、頭頸部がん、甲状腺がん、精巣がん、尿路上皮がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、肉腫（軟組織肉腫および骨肉腫）、メラノーマ、非メラノーマ皮膚がん（扁平上皮癌および基底細胞癌）、神経膠腫、腎臓がん、リンパ腫（ＮＨＬまたはＨＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、Ｔ細胞性急性リンパ芽球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、精巣胚細胞腫瘍、中皮腫、食道がん、メルケル細胞がん、ＭＳＩ－ｈｉｇｈがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。本方法の一部の実施形態において、がんは、三種陰性乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん、ＭＳＩ－ｈｉｇｈがん、ＫＲＡＳ変異腫瘍、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）からなる群から選択される。本方法の一部の実施形態において、がんは、三種陰性乳がん、胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（ｇａｓｔｒｉｃ））がん、肺がん（小細胞肺、非小細胞肺）、メルケル細胞がん、およびＭＳＩ－ｈｉｇｈがんからなる群から選択される。特定の実施形態において、がんは、ＢＲＡＦ突然変異（例えば、ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ突然変異）、ＢＲＡＦ野生型、ＫＲＡＳ野生型または活性化ＫＲＡＳ突然変異を含む。がんは、初期、中期、または末期であり得る。

【0243】

[0254]一実施形態において、本明細書に提供される組合せ剤は、化学療法とさらに組み合わされ、肺がん、例えば、非小細胞肺がんを処置する。一実施形態において、組合せ剤は、プラチナダブレット療法で使用され、肺がんを処置する。さらに別の実施形態において、組合せ剤を使用して腎臓がん、例えば腎細胞癌（ＲＣＣ）（例えば、腎明細胞癌（ＣＣＲＣＣ）または転移性ＲＣＣ）を処置する。組合せ剤は、免疫ベースの戦略（例えば、インターロイキン－２またはインターフェロン－ａ）、標的化剤（例えばＶＥＧＦ阻害剤、例えばＶＥＧＦに対するモノクローナル抗体）；ＶＥＧＦチロシンキナーゼ阻害剤、例えば、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブおよびパゾパニブ；ＲＮＡｉ阻害剤）、またはＶＥＧＦシグナル伝達の下流メディエーターの阻害剤、例えばラパマイシン（ｍＴＯＲ）の哺乳動物標的の阻害剤、例えばエベロリムスおよびテムシロリムスの１つまたは複数を含む、さらなる薬剤と組み合わせて投与される。小細胞肺がんの処置のための組合せ剤での使用に好適な治療の例は、限定はされないが、化学療法剤（例えば、エトポシド、カルボプラチン、シスプラチン、イリノテカン、トポテカン、ゲムシタビン、リポソームＳＮ－３８、ベンダムスチン、テモゾロミド、ベロテカン、ＮＫ０１２、ＦＲ９０１２２８、フラボピリドール）；チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ、セツキシマブ、パニツムマブ）；マルチキナーゼ阻害剤（例えば、ソラフェニブ、スニチニブ）；ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ベバシズマブ、バンデタニブ）；がんワクチン（例えば、ＧＶＡＸ）；Ｂｃｌ－２阻害剤（例えば、オブリメルセンナトリウム、ＡＢＴ－２６３）；プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ）、ＮＰＩ－００５２）、パクリタキセルまたはパクリタキセル剤、ドセタキセル、ＩＧＦ－１受容体阻害剤（例えば、ＡＭＧ４７９）；ＨＧＦ／ＳＦ阻害剤（例えば、ＡＭＧ１０２、ＭＫ０６４６）；クロロキン；オーロラキナーゼ阻害剤（例えば、ＭＬＮ８２３７）；放射線免疫療法（例えば、ＴＦ２）；ＨＳＰ９０阻害剤（例えば、テネスピマイシン、ＳＴＡ－９０９０）；ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、エベロリムス）；Ｅｐ－ＣＡＭ－／ＣＤ３－二重特異性抗体（例えば、ＭＴ１１０）；ＣＫ－２阻害剤（例えば、ＣＸ－４９４５）；ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、ベリノスタット）；ＳＭＯアンタゴニスト（例えば、ＢＭＳ８３３９２３）；ペプチドがんワクチン、および放射線治療（例えば、強度変調放射線治療（ＩＭＲＴ）、少分割照射法、低酸素ガイド放射線治療）、外科手術、およびこれらの組合せを含む。

【0244】

[0255]非小細胞肺がんの処置のための、免疫療法剤と組み合わせた、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたはそのような抗体を含有するＡＤＣとの使用のためのさらなる薬剤の例は、限定はされないが、化学療法剤、例えば、ビノレルビン、シスプラチン、ドセタキセル、ペメトレキセド二ナトリウム、エトポシド、ゲムシタビン、カルボプラチン、リポソームＳＮ－３８、ＴＬＫ２８６、テモゾロミド、トポテカン、ペメトレキセド二ナトリウム、アザシチビン、イリノテカン、テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム、サパシタビン）；チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ネシツムマブ、ＰＦ－００２９９８０４、ニモツズマブ、ＲＯ５０８３９４５）、ＭＥＴ阻害剤（例えば、ＰＦ－０２３４１０６６、ＡＲＱ１９７）、ＰＤＫキナーゼ阻害剤（例えば、ＸＬ１４７、ＧＤＣ－０９４１）、Ｒａｆ／ＭＥＫデュアルキナーゼ阻害剤（例えば、Ｒ０５１２６７６６）、ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲデュアルキナーゼ阻害剤（例えば、ＸＬ７６５）、ＳＲＣ阻害剤（例えば、ダサチニブ）、デュアル阻害剤（例えば、ＢＩＢＷ２９９２、ＧＳＫＩ３６３０８９、ＺＤ６４７４、ＡＺＤ０５３０、ＡＧ－０１３７３６、ラパチニブ、ＭＥＨＤ７９４５Ａ、リニファニブ）、マルチキナーゼ阻害剤（例えば、ソラファニブ、スニチニブ、パゾパニブ、ＡＭＧ７０６、ＸＬ１８４、ＭＧＣＤ２６５、ＢＭＳ－６９０５１４、Ｒ９３５７８８）、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、エンドスター、エンドスタチン、ベバシズマブ、セディラニブ、ＢＩＢＦ１１２０、アキシチニブ、チボザニブ、ＡＺＤ２１７１）、がんワクチン（例えば、ＢＬＰ２５リポソームワクチン、ＧＶＡＸ、組換えＤＮＡおよびアデノウイルス発現Ｌ５２３Ｓタンパク質）、Ｂｃｌ－２阻害剤（例えば、オブリメルセンナトリウム）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、ＮＰＩ－００５２、ＭＬＮ９７０８）、パクリタキセルまたはパクリタキセル剤、ドセタキセル、ＩＧＦ－１受容体阻害剤（例えば、シクスツムマブ、ＭＫ－０６４６、ＯＳＩ９０６、ＣＰ－７５１８７１、ＢＩＩＢ０２２）、ヒドロキシクロロキノン、ＨＳＰ９０阻害剤（例えば、タネスピマイシン、ＳＴＡ－９０９０、ＡＵＹ９２２、ＸＬ８８８）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、エベロリムス、テムシロリムス、リダフォロリムス）、Ｅｐ－ＣＡＭ－／ＣＤ３－二重特異性抗体（例えば、ＭＴ１１０）、ＣＫ－２阻害剤（例えば、ＣＸ－４９４５）、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、ＭＳ２７５、ＬＢＨ５８９、ボリノスタット、バルプロ酸、ＦＲ９０１２２８）、ＤＨＦＲ阻害剤（例えば、プララトレキサート）、レチノイド（例えば、ベキサロテン、トレチノイン）、抗体薬物コンジュゲート（例えば、ＳＧＮ－１５）、ビスホスホネート（例えば、ゾレドロン酸）、がんワクチン（例えば、ベラゲンプマツセル－Ｌ）、低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）（例えば、チンザパリン、エノキサパリン）、ＧＳＫ１５７２９３２Ａ、メラトニン、タラクトフェリン、ジメスナ、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、アムルビシン、エトポシド、カレニテシン）、ネルフィナビル、シレンジタイド、ＥｒｂＢ３阻害剤（例えば、ＭＭ－１２１、Ｕ３－１２８７）、サバイビン阻害剤（例えば、ＹＭ１５５、ＬＹ２１８１３０８）、エリブリンメシル酸塩、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、ペグフィルグラスチム、Ｐｏｌｏ様キナーゼ１阻害剤（例えば、ＢＩ６７２７）、ＴＲＡＩＬ受容体２（ＴＲ－２）アゴニスト（例えば、ＣＳ－１００８）、ＣＮＧＲＣペプチド－ＴＮＦアルファコンジュゲート、ジクロロアセテート（ＤＣ Ａ）、ＨＧＦ阻害剤（例えば、ＳＣＨ９００１０５）、ＳＡＲ２４０５５０、ＰＰＡＲ－ガンマアゴニスト（例えば、ＣＳ－７０１７）、ガンマ－セクレターゼ阻害剤（例えば、ＲＯ４９２９０９７）、エピジェネティック治療（例えば、５－アザシチジン）、ニトログリセリン、ＭＥＫ阻害剤（例えば、ＡＺＤ６２４４）、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤（例えば、ＵＣＮ－０１）、コレステロールＦｕｓｌ、抗チューブリン剤（例えば、Ｅ７３８９）、ファルネシル－ＯＨ－トランスフェラーゼ阻害剤（例えば、ロナファルニブ）、免疫毒素（例えば、ＢＢ－１０９０１、ＳＳＩ（ｄｓＦｖ）ＰＥ３８）、フォンダパリヌクス、血管崩壊剤（例えば、ＡＶＥ８０６２）、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、ＭＤＸ－１１０５、ＭＤＸ－１１０６）、ベータ－グルカン、ＮＧＲ－ｈＴＮＦ、ＥＭＤ５２１８７３、ＭＥＫ阻害剤（例えば、ＧＳＫ１ １２０２１２）、エポチロン類似体（例えば、イキサベピロン）、キネシン－スピンドル阻害剤（例えば、４ＳＣ－２００５）、テロメア標的剤（例えば、ＫＭＬ－００１）、Ｐ７０経路阻害剤（例えば、ＬＹ２５８４７０２）、ＡＫＴ阻害剤（例えば、ＭＫ－２２０６）、血管新生阻害剤（例えば、レナリドミド）、Ｎｏｔｃｈシグナル伝達阻害剤（例えば、ＯＭＰ－２１Ｍ１８）、放射線治療、外科手術、およびこれらの組合せを含む。卵巣がんの処置のための組合せでの使用に好適な治療の例は、限定はされないが、化学療法剤（例えば、パクリタキセルまたはパクリタキセル剤；ドセタキセル；カルボプラチン；ゲムシタビン；ドキソルビシン；トポテカン；シスプラチン；イリノテカン、ＴＬＫ２８６、イフォスファミド、オラパリブ、オキサリプラチン、メルファラン、ペメトレキセド二ナトリウム、ＳＪＧ－１３６、シクロホスファミド、エトポシド、デシタビン）；グレリンアンタゴニスト（例えば、ＡＥＺＳ－１３０）、免疫療法（例えば、ＡＰＣ８０２４、オレゴボマブ、ＯＰＴ－８２１）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ）、デュアル阻害剤（例えば、Ｅ７０８０）、マルチキナーゼ阻害剤（例えば、ＡＺＤ０５３０、ＪＩ－１０１、ソラフェニブ、スニチニブ、パゾパニブ）、ＯＮ０１９１０．Ｎａ）、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ベバシズマブ、ＢＩＢＦ １１２０、セディラニブ、ＡＺＤ２１７１）、ＰＤＧＦＲ阻害剤（例えば、ＩＭＣ－３Ｇ３）、パクリタキセル、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、カレニテシン、イリノテカン）、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、バルプロ酸、ボリノスタット）、葉酸受容体阻害剤（例えば、ファーレツズマブ）、アンジオポエチン阻害剤（例えば、ＡＭＧ３８６）、エポチロン類似体（例えば、イキサベピロン）、プロテアソーム阻害剤（例えば、カルフィルゾミブ）、ＩＧＦ－１受容体阻害剤（例えば、ＯＳＩ９０６、ＡＭＧ４７９）、ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、ベリパリブ、ＡＧ０１４６９９、イニパリブ、ＭＫ－４８２７）、オーロラキナーゼ阻害剤（例えば、ＭＬＮ８２３７、ＥＮＭＤ－２０７６）、血管新生阻害剤（例えば、レナリドミド）、ＤＨＦＲ阻害剤（例えば、プララトレキサート）、放射性免疫療法剤（例えば、Ｈｕ３Ｓ１９３）、スタチン（例えば、ロバスタチン）、トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＮＫＴＲ－１０２）、がんワクチン（例えば、ｐ５３合成ロングペプチドワクチン、自家ＯＣ－ＤＣワクチン）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、テムシロリムス、エベロリムス）、ＢＣＲ／ＡＢＬ阻害剤（例えば、イマチニブ）、ＥＴ－Ａ受容体アンタゴニスト（例えば、ＺＤ４０５４）、ＴＲＡＩＬ受容体２（ＴＲ－２）アゴニスト（例えば、ＣＳ－１００８）、ＨＧＦ／ＳＦ阻害剤（例えば、ＡＭＧ１０２）、ＥＧＥＮ－００１、Ｐｏｌｏ様キナーゼ１阻害剤（例えば、ＢＩ６７２７）、ガンマ－セクレターゼ阻害剤（例えば、ＲＯ４９２９０９７）、Ｗｅｅ－１阻害剤（例えば、ＭＫ－１７７５）、抗チューブリン剤（例えば、ビノレルビン、Ｅ７３８９）、免疫毒素（例えば、デニロイキン ジフチトクス）、ＳＢ－４８５２３２、血管崩壊剤（例えば、ＡＶＥ８０６２）、インテグリン阻害剤（例えば、ＥＭＤ５２５７９７）、キネシン－スピンドル阻害剤（例えば、４ＳＣ－２０５）、レブラミド、ＨＥＲ２阻害剤（例えば、ＭＧＡＨ２２）、ＥｒｒＢ３阻害剤（例えば、ＭＭ－１２１）、放射線療法、およびこれらの組合せを含む。

【0245】

[0256]ミエローマの処置のための、免疫療法剤と組み合わせた、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたはそのような抗体を含有するＡＤＣとの使用のためのさらなる薬剤の例は、限定はされないが、化学療法剤、限定はされないが：化学療法剤または他の抗がん剤（例えば、サリドマイド類似体、例えば、レナリドミド）、ＨＳＣＴ（Ｃｏｏｋ，Ｒ．（２００８）Ｊ Ｍａｎａｇ Ｃａｒｅ Ｐｈａｒｍ．１４（７ Ｓｕｐｐｌ）：１９－２５）、抗ＴＩＭ３抗体（Ｈａｌｌｅｔｔ，ＷＨＤら（２０１１）／ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｂｌｏｏｄ ａｎｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ １７（８）：１１３３－１４５）、腫瘍抗原パルス樹状細胞、腫瘍細胞と樹状細胞の融合（例えば、電気融合）、または悪性形質細胞によって産生された免疫グロブリンイディオタイプによるワクチン接種（Ｙｉ，Ｑ．（２００９）Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．１５（６）：５０２－１０に概説される）を含む。

【0246】

[0257]腎細胞癌または転移性腎細胞癌の処置のための、免疫療法剤と組み合わせた、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたはそのような抗体を含有するＡＤＣとの使用のためのさらなる薬剤の例は、限定はされないが、化学療法剤を含み、その例は、上記に提供する。

【0247】

[0258]抗ＰＤ－１抗体分子は、免疫ベースの戦略（例えば、インターロイキン－２またはインターフェロンａ）、標的化剤（例えばＶＥＧＦ阻害剤、例えばＶＥＧＦに対するモノクローナル抗体、例えば、ベバシズマブ（Ｒｉｎｉ，Ｂ．Ｉ．ら（２０１０）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２８（１３）：２１３７－２１４３））；ＶＥＧＦチロシンキナーゼ阻害剤、例えば、スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブおよびパゾパニブ（Ｐａｌ．Ｓ．Ｋ．ら（２０１４）Ｃｌｉｎ．Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ＆Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １２（２）：９０－９９に概説される））；ＲＮＡｉ阻害剤）、またはＶＥＧＦシグナル伝達の下流メディエーターの阻害剤、例えばラパマイシン（ｍＴＯＲ）の哺乳動物標的の阻害剤、例えばエベロリムスおよびテムシロリムス（Ｈｕｄｅｓ，Ｇ．ら（２００７）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５６（２２）：２２７１－２２８１、Ｍｏｔｚｅｒ，Ｒ．Ｊ．ら（２００８）Ｌａｎｃｅｔ ３７２：４４９－４５６）の１つまたは複数と組み合わせて投与され得る。

【0248】

[0259]本発明に記載の慢性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の処置のための、免疫療法剤と組み合わせた、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたはそのような抗体を含有するＡＤＣとの使用のためのさらなる薬剤の例は、限定はされないが、化学療法（例えば、シタラビン、ヒドロキシウレア、クロファラビン、メルファラン、チオテパ、フルダラビン、ブスルファン、エトポシド、コルジセピン、ペントスタチン、カペシタビン、アザシチジン、シクロホスファミド、クラドリビン、トポテカン）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＢＣＲ／ＡＢＬ阻害剤（例えば、イマチニブ、ニロチニブ）、ＯＮ０１９１０．Ｎａ、デュアル阻害剤（例えば、ダサチニブ、ボスチニブ）、マルチキナーゼ阻害剤、（例えば、ＤＣＣ－２０３６、ポナチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ＲＧＢ－２８６６３８））、インターフェロンアルファ、ステロイド、アポトーシス剤（例えば、オマセタキシン メペスクシナート）、免疫療法（例えば、アロジェネイックＣＤ４＋メモリーＴｈ１様Ｔ細胞／微粒子結合抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８、自己サイトカイン誘発キラー細胞（ＣＩＫ）、ＡＨＮ－１２）、ＣＤ５２標的化剤（例えば、アレムツズマブ）、ＨＳＰ９０阻害剤（例えば、テネスピマイシン、ＳＴＡ－９０９０、ＡＵＹ９２２、ＸＬ８８８）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、エベロリムス）、ＳＭＯアンタゴニスト（例えば、ＢＭＳ８３３９２３）、リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤（例えば、３－ＡＰ）、ＪＡＫ－２阻害剤（例えば、ＩＮＣＢ０１８４２４）、ヒドロキシクロロキン、レチノイド（例えば、フェンレチニド）、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤（例えば、ＵＣＮ－０１）、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、ベリノスタット、ボリノスタット、ＪＮＪ－２６４８１５８５）、ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、ベリパリブ）、ＭＤＭ２アンタゴニスト（例えば、ＲＯ５０４５３３７）、オーロラＢキナーゼ阻害剤（例えば、ＴＡＫ－９０１）、放射性免疫療法（例えば、アクチニウム－２２５－標識抗ＣＤ３３抗体 ＨｕＭ１９５）、ヘッジホッグ阻害剤（例えば、ＰＦ－０４４４９９１３）、ＳＴＡＴ３阻害剤（例えば、ＯＰＢ－３１１２１）、ＫＢ００４、がんワクチン（例えば、ＡＧ８５８）、骨髄移植、幹細胞移植、放射線療法、およびこれらの組合せを含む。

【0249】

[0260]慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の処置のための、免疫療法剤と組み合わせた、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたはそのような抗体を含有するＡＤＣとの使用のためのさらなる薬剤の例は、限定はされないが、化学療法剤（例えば、フルダラビン、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、クロラムブシル、ベンダムスチン、クロラムブシル、ブスルファン、ゲムシタビン、メルファラン、ペントスタチン、ミトキサントロン、５－アザシチジン、ペメトレキセド二ナトリウム）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ）、ＢＴＫ阻害剤（例えば、ＰＣＩ－３２７６５）、マルチキナーゼ阻害剤（例えば、ＭＧＣＤ２６５、ＲＧＢ－２８６６３８）、ＣＤ－２０標的化剤（例えば、リツキシマブ、オファツムマブ、ＲＯ５０７２７５９、ＬＦＢ－Ｒ６０３）、ＣＤ５２標的化剤（例えば、アレムツズマブ）、プレドニゾロン、ダルベポエチンアルファ、レナリドミド、Ｂｃｌ－２阻害剤（例えば、ＡＢＴ－２６３）、免疫療法（例えば、アロジェネイックＣＤ４＋メモリーＴｈ１様Ｔ細胞／微粒子結合抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８、自己サイトカイン誘発キラー細胞（ＣＩＫ））、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、ボリノスタット、バルプロ酸、ＬＢＨ５８９、ＪＮＪ－２６４８１５８５、ＡＲ－４２）、ＸＩＡＰ阻害剤（例えば、ＡＥＧ３５１５６）、ＣＤ－７４標的化剤（例えば、ミラツズマブ）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、エベロリムス）、ＡＴ－１０１、免疫毒素（例えば、ＣＡＴ－８０１５、抗Ｔａｃ（Ｆｖ）－ＰＥ３８（ＬＭＢ－２））、ＣＤ３７標的化剤（例えば、ＴＲＵ－０１６）、放射性免疫療法（例えば、１３１－トシツモマブ）、ヒドロキシクロロキン、ペリホシン、ＳＲＣ阻害剤（例えば、ダサチニブ）、サリドマイド、ＰＩ３Ｋデルタ阻害剤（例えば、ＣＡＬ－１０１）、レチノイド（例えば、フェンレチニド）、ＭＤＭ２アンタゴニスト（例えば、ＲＯ５０４５３３７）、プレリキサホル、オーロラキナーゼ阻害剤（例えば、ＭＬＮ８２３７、ＴＡＫ－９０１）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、ＣＤ－１９標的化剤（例えば、ＭＥＤＩ－５５１、ＭＯＲ２０８）、ＭＥＫ阻害剤（例えば、ＡＢＴ－３４８）、ＪＡＫ－２阻害剤（例えば、ＩＮＣＢ０１８４２４）、低酸素活性化プロドラッグ（例えば、ＴＨ－３０２）、パクリタキセルまたはパクリタキセル剤、ＨＳＰ９０阻害剤、ＡＫＴ阻害剤（例えば、ＭＫ２２０６）、ＨＭＧ－ＣｏＡ阻害剤（例えば、シムバスタチン）、ＧＮＫＧ１８６、放射線療法、骨髄移植、幹細胞移植、およびこれらの組合せを含む。

【0250】

[0261]急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）の処置のための、免疫療法剤と組み合わせた、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたはそのような抗体を含有するＡＤＣとの使用のためのさらなる薬剤の例は、限定はされないが、化学療法剤（例えば、プレドニゾロン、デキサメタゾン、ビンクリスチン、アスパラギナーゼ、ダウノルビシン、シクロホスファミド、シタラビン、エトポシド、チオグアニン、メルカプトプリン、クロファラビン、リポソームアンナマイシン、ブスルファン、エトポシド、カペシタビン、デシタビン、アザシチジン、トポテカン、テモゾロミド）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＢＣＲ／ＡＢＬ阻害剤（例えば、イマチニブ、ニロチニブ）、ＯＮ０１９１０．Ｎａ、マルチキナーゼ阻害剤（例えば、ソラフェニブ））、ＣＤ－２０標的化剤（例えば、リツキシマブ）、ＣＤ５２標的化剤（例えば、アレムツズマブ）、ＨＳＰ９０阻害剤（例えば、ＳＴＡ－９０９０）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、エベロリムス、ラパマイシン）、ＪＡＫ－２阻害剤（例えば、ＩＮＣＢ０１８４２４）、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体阻害剤（例えば、トラスツズマブ）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、メトトレキサート、アスパラギナーゼ、ＣＤ－２２標的化剤（例えば、エプラツズマブ、イノツズマブ）、免疫療法（例えば、自己サイトカイン誘発キラー細胞（ＣＩＫ）、ＡＨＮ－１２）、ブリナツモマブ、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤（例えば、ＵＣＮ－０１）、ＣＤ４５標的化剤（例えば、ＢＣ８）ＭＤＭ２アンタゴニスト（例えば、ＲＯ５０４５３３７）、免疫毒素（例えば、ＣＡＴ－８０１５、ＤＴ２２１９ＡＲＬ）、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、ＪＮＪ－２６４８１５８５）、ＪＶＲＳ－１００、パクリタキセルまたはパクリタキセル剤、ＳＴＡＴ３阻害剤（例えば、ＯＰＢ－３１１２１）、ＰＡＲＰ阻害剤（例えば、ベリパリブ）、ＥＺＮ－２２８５、放射線療法、ステロイド、骨髄移植、幹細胞移植、またはこれらの組合せを含む。

【0251】

[0262]急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の処置のための、免疫療法剤と組み合わせた、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたはそのような抗体を含有するＡＤＣとの使用のためのさらなる薬剤の例は、限定はされないが、化学療法剤（例えば、シタラビン、ダウノルビシン、イダルビシン、クロファラビン、デシタビン、ボサロキシン、アザシチジン、クロファラビン、リバビリン、ＣＰＸ－３５１、トレオスルファン、エラシタラビン、アザシチジン）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＢＣＲ／ＡＢＬ阻害剤（例えば、イマチニブ、ニロチニブ）、ＯＮ０１９１０．Ｎａ、マルチキナーゼ阻害剤（例えば、ミドスタウリン、ＳＵ１１２４８、キザルチニブ、ソラフィニブ））、免疫毒素（例えば、ゲムツズマブ オゾガマイシン）、ＤＴ３８８ＩＬ３融合タンパク質、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、ボリノスタット、ＬＢＨ５８９）、プレリキサホル、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、エベロリムス）、ＳＲＣ阻害剤（例えば、ダサチニブ）、ＨＳＰ９０阻害剤（例えば、ＳＴＡ－９０９０）、レチノイド（例えば、ベキサロテン、オーロラキナーゼ阻害剤（例えば、ＢＩ８１１２８３）、ＪＡＫ－２阻害剤（例えば、ＩＮＣＢ０１８４２４）、Ｐｏｌｏ様キナーゼ阻害剤（例えば、ＢＩ６７２７）、セネルセン、ＣＤ４５標的化剤（例えば、ＢＣ８）、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤（例えば、ＵＣＮ－０１）、ＭＤＭ２アンタゴニスト（例えば、ＲＯ５０４５３３７）、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、エベロリムス）、ＬＹ５７３６３６－ナトリウム、ＺＲｘ－１０１、ＭＬＮ４９２４、レナリドミド、免疫療法（例えば、ＡＨＮ－１２）、ヒスタミン二塩酸塩、放射線療法、骨髄移植、幹細胞移植、およびこれらの組合せを含む。

【0252】

[0263]多発性骨髄腫（ＭＭ）の処置のための、免疫療法剤と組み合わせた、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたはそのような抗体を含有するＡＤＣとの使用のためのさらなる薬剤の例は、限定はされないが、化学療法剤（例えば、メルファラン、アミフォスチン、シクロホスファミド、ドキソルビシン、クロファラビン、ベンダムスチン、フルダラビン、アドリアマイシン、ＳｙＢ Ｌ－０５０１）、サリドマイド、レナリドミド、デキサメタゾン、プレドニゾン、ポマリドミド、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、ＭＬＮ９７０８）、がんワクチン（例えば、ＧＶＡＸ）、ＣＤ－４０標的化剤（例えば、ＳＧＮ－４０、ＣＨＩＲ－１２．１２）、ペリホシン、ゾレドロン酸、免疫療法（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＨｕＭＡＸ－ＣＤ３８）、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、ボリノスタット、ＬＢＨ５８９、ＡＲ－４２）、アプリジン、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤（例えば、ＰＤ－０３３２９９１、ジナシクリブ）、三酸化ヒ素、ＣＢ３３０４、ＨＳＰ９０阻害剤（例えば、ＫＷ－２４７８）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、セツキシマブ）、マルチキナーゼ阻害剤（例えば、ＡＴ９２８３））、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ベバシズマブ）、プレリキサホル、ＭＥＫ阻害剤（例えば、ＡＺＤ６２４４）、ＩＰＨ２１０１、アトルバスタチン、免疫毒素（例えば、ＢＢ－１０９０１）、ＮＰＩ－００５２、放射性免疫療法（例えば、イットリウム Ｙ９０ イブリツモマブ チウキセタン）、ＳＴＡＴ３阻害剤（例えば、ＯＰＢ－３１１２１）、ＭＬＮ４９２４、オーロラキナーゼ阻害剤（例えば、ＥＮＭＤ－２０７６）、ＩＭＧＮ９０１、ＡＣＥ－０４１、ＣＫ－２阻害剤（例えば、ＣＸ－４９４５）、放射線治療、骨髄移植、幹細胞移植、およびこれらの組合せを含む。

【0253】

[0264]前立腺がんの処置のための、免疫療法剤と組み合わせた、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたはそのような抗体を含有するＡＤＣとの使用のためのさらなる薬剤の例は、限定はされないが、化学療法剤（例えば、ドセタキセル、カルボプラチン、フルダラビン）、アビラテロン、ホルモン療法（例えば、フルタミド、ビカルタミド、ニルタミド、酢酸シプロテロン、ケトコナゾール、アミノグルチミド、アバレリクス、デガレリクス、ロイプロリド、ゴセレリン、トリプトレリン、ブセレリン）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、デュアルキナーゼ阻害剤（例えば、ラパタニブ）、マルチキナーゼ阻害剤（例えば、ソラフェニブ、スニチニブ））、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ベバシズマブ）、ＴＡＫ－７００、がんワクチン（例えば、ＢＰＸ－１０１、ＰＥＰ２２３）、レナリドミド、ＴＯＫ－００１、ＩＧＦ－１受容体阻害剤（例えば、シクスツムマブ）、ＴＲＣ１０５、オーロラキナーゼ阻害剤（例えば、ＭＬＮ８２３７）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、ＯＧＸ－０１１、放射性免疫療法（例えば、ＨｕＪ５９１－ＧＳ）、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、バルプロ酸、ＳＢ９３９、ＬＢＨ５８９）、ヒドロキシクロロキン、ｍＴＯＲ阻害剤（例えば、エベロリムス）、ドビチニブ乳酸塩、ジインドリルメタン、エファビレンツ、ＯＧＸ－４２７、ゲニステイン、ＩＭＣ－３Ｇ３、バフェチニブ、ＣＰ－６７５，２０６、放射線療法、外科手術、またはこれらの組合せを含む。

【0254】

ＶＩＩ．医薬組成物
[0265]本開示の抗ＴＭ４ＳＦ１抗体、ＡＤＣ、免疫療法剤は、一部の実施形態において、単一または別々の組成物（例えば医薬組成物）に含まれ得る。本開示の医薬組成物は、医薬的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤をさらに含み得る。

【0255】

[0266]本明細書で使用する用語「医薬組成物」は、医薬的に許容される担体によって製剤化される本明細書に記載のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質を含有する組成物を指し、哺乳動物における疾患の処置のための治療レジメンの一部として政府規制機関の認可により製造または販売される。医薬組成物は、例えば、単位剤形（例えば、錠剤、カプセル剤、カプレット、ゲルカップ、またはシロップ）での経口投与のため、局所投与のため（例えば、クリーム、ゲル、ローション、または軟膏として）、静脈内投与のため（例えば、粒状塞栓のない滅菌溶液としておよび静脈内使用に適した溶媒系で）、または本明細書に記載の任意の他の製剤で製剤化され得る。

【0256】

[0267]本明細書で使用する用語「医薬的に許容される担体」は、それにより投与されるタンパク質の治療特性を保持しながら処置される哺乳動物（例えば、ヒト）に生理的に許容される担体を指す。１つの例示的な医薬的に許容される担体は、生理食塩水である。他の生理的に許容される担体およびそれらの製剤は当業者に公知であり、例えば参照により本明細書に組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ、１９９０、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ）に記載される。

【0257】

[0268]医薬組成物は、一部の実施形態において、吸入可能剤形として、鼻腔内剤形として、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む剤形、マイクロ粒子を含む剤形、ポリマー剤形、またはそれらの任意の組合せとして、溶液、グリセロール中分散液、液体ポリエチレングリコール、および油中、固体剤形中のそれらの任意の組合せとして調製される。

【0258】

[0269]医薬的に許容される賦形剤は、一部の例において、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（１９８６）に記載の賦形剤である。好適な賦形剤の非限定的な例としては、緩衝剤、保存剤、安定剤、結合剤、圧縮剤、潤滑剤、キレート剤、分散強化剤、崩壊剤、風味剤、甘味料、着色料が挙げられる。

【0259】

[0270]一部の実施形態において、賦形剤は緩衝剤である。好適な緩衝剤の非限定的な例としては、クエン酸ナトリウム、炭酸マグネシウム、炭酸水素マグネシウム、炭酸カルシウム、および炭酸水素カルシウムが挙げられる。緩衝剤としては、一部の実施形態において、本開示の医薬組成物において、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、水酸化マグネシウム、乳酸マグネシウム、グルコン酸マグネシウム（ｍａｇｎｅｓｉｕｍ ｇｌｕｃｏｍａｔｅ）、水酸化アルミニウム、クエン酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、ポリリン酸カリウム、ピロリン酸ナトリウム、ピロリン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸三ナトリウム、リン酸三カリウム、メタリン酸カリウム、酸化マグネシウム、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、酢酸カルシウム、グリセロリン酸カルシウム、塩化カルシウム、水酸化カルシウム、および他のカルシウム塩またはそれらの組合せが使用される。

【0260】

[0271]一部の実施形態において、賦形剤は保存剤を含む。好適な保存剤の非限定的な例としては、抗酸化剤、例えばαトコフェロールおよびアスコルビン酸塩、ならびに抗菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、およびフェノールが挙げられる。一部の例において、抗酸化剤としては、限定はされないが、ＥＤＴＡ、クエン酸、アスコルビン酸、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、亜硫酸ナトリウム、ｐ－アミノ安息香酸、グルタチオン、没食子酸プロピル、システイン、メチオニン、エタノールおよびＮ－アセチルシステインがさらに挙げられる。一部の例において、保存剤としては、バリダマイシンＡ、ＴＬ－３、オルトバナジウム酸ナトリウム、フッ化ナトリウム、Ｎ－ａ－トシル－Ｐｈｅ－クロロメチルケトン、Ｎ－ａ－トシル－Ｌｙｓ－クロロメチルケトン、アプロチニン、フッ化フェニルメチルスルホニル、ジイソプロピルフルオロリン酸、キナーゼ阻害剤、ホスファターゼ阻害剤、カスパーゼ阻害剤、グランザイム阻害剤、細胞接着阻害剤、細胞分裂阻害剤、細胞周期阻害剤、脂質シグナル伝達阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、還元剤、アルキル化剤、抗菌剤、オキシダーゼ阻害剤、または他の阻害剤が挙げられる。

【0261】

[0272]一部の実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、賦形剤として結合剤を含む。好適な結合剤の非限定的な例としては、デンプン、アルファ化デンプン、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、ポリアクリルアミド、ポリビニルオキサゾリドン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｏｘｏａｚｏｌｉｄｏｎｅ）、ポリビニルアルコール、Ｃ１２～Ｃ１８脂肪酸アルコール、ポリエチレングリコール、ポリオール、サッカリド、オリゴサッカリド、およびこれらの組合せが挙げられる。医薬製剤に使用される結合剤は、一部の例において、デンプン、例えばジャガイモデンプン、トウモロコシデンプン、コムギデンプン；糖、例えばスクロース、グルコース、デキストロース、ラクトース、マルトデキストリン；天然および合成ゴム；ゼラチン；セルロース誘導体、例えば結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース；ポリビニルピロリドン（ポビドン）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；ワックス；炭酸カルシウム；リン酸カルシウム；アルコール、例えばソルビトール、キシリトール、マンニトール、および水またはこれらの任意の組合せから選択される。

【0262】

[0273]一部の実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、賦形剤として潤滑剤を含む。好適な潤滑剤の非限定的な例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、水添植物油、ステロテックス、モノステアリン酸ポリオキシエチレン、滑石、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウムおよび軽油が挙げられる。医薬製剤に使用される潤滑剤は、一部の実施形態において、ステアリン酸金属塩類（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウム）、脂肪酸エステル（例えば、フマル酸ステアリルナトリウム）、脂肪酸（例えば、ステアリン酸）、脂肪アルコール、ベヘン酸グリセリル、鉱油、パラフィン、水添植物油、ロイシン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ラウリル硫酸金属塩類（ｍｅｔａｌｌｉｃ ｌａｕｒｙｌ ｓｕｌｐｈａｔｅ）（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム）、塩化ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、および滑石またはこれらの組合せから選択される。

【0263】

[0274]一部の実施形態において、医薬製剤は賦形剤として分散強化剤を含む。好適な分散剤の非限定的な例としては、一部の例において、デンプン、アルギン酸、ポリビニルピロリドン、グアーゴム、カオリン、ベントナイト、精製木材セルロース、デンプングリコール酸ナトリウム、イソアモルファスシリケート、および高ＨＬＢ乳化剤界面活性剤としての結晶セルロースが挙げられる。

【0264】

[0275]一部の実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、賦形剤として崩壊剤を含む。一部の実施形態において、崩壊剤は非起泡性崩壊剤である。好適な非起泡性崩壊剤の非限定的な例としては、デンプン、例えばトウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、これらのアルファ化および修飾デンプン、甘味料、粘土、例えばベントナイト、結晶セルロース、アルギン酸塩、デンプングリコール酸ナトリウム、ゴム、例えばカンテン、ガウア、イナゴマメ、カラヤ、ペクチン、およびトラガカントが挙げられる。一部の実施形態において、崩壊剤は起泡性崩壊剤である。好適な起泡性崩壊剤の非限定的な例としては、クエン酸と組み合わせた炭酸水素ナトリウムおよび酒石酸と組み合わせた炭酸水素ナトリウムが挙げられる。

【0265】

[0276]一部の実施形態において、賦形剤は風味剤を含む。外層に組み込まれる風味剤は、一部の例において、合成風味油および風味香料；天然油；植物、葉、花および果物からの抽出物ならびにこれらの組合せから選択される。一部の実施形態において、風味剤は、ケイヒ油；ウインターグリーン油；ハッカ油；クローバー油；干し草油；アニス油；ユーカリ；バニラ；柑橘類の油、例えばレモン油、オレンジ油、ブドウおよびグレープフルーツ油；ならびにリンゴ、モモ、セイヨウナシ、イチゴ、ラズベリー、サクランボ、プラム、パイナップルおよびアプリコットを含む果実エキスからなる群から選択され得る。

【0266】

[0277]一部の実施形態において、賦形剤は、甘味料を含む。好適な甘味料の非限定的な例としては、グルコース（コーンシロップ）、デキストロース、転化糖、フルクトースおよびこれらの混合物（担体として使用されない場合）；サッカリンおよびその様々な塩、例えばナトリウム塩；ジペプチド甘味料、例えばアスパルテーム；ジヒドロカルコン化合物、グリチルリジン；ステビア（Ｓｔｅｖｉａ Ｒｅｂａｕｄｉａｎａ）（ステビオシド）；スクロースのクロロ誘導体、例えばスクラロース；および糖アルコール、例えばソルビトール、マンニトール、シリトール（ｓｙｌｉｔｏｌ）などが挙げられる。

【0267】

[0278]一部の例において、本明細書に記載の医薬組成物は、着色料を含む。好適な着色料の非限定的な例としては、食品、医薬品および化粧品色素（ＦＤ＆Ｃ）、医薬品および化粧品色素（Ｄ＆Ｃ）、ならびに外用医薬品および化粧品色素（Ｅｘｔ．Ｄ＆Ｃ）が挙げられる。着色料は、染料またはこれらの対応するレーキとして使用され得る。

【0268】

[0279]一部の例において、本明細書に記載の医薬組成物は、キレート剤を含む。一部の場合、キレート剤は殺真菌性キレート剤である。例としては、限定はされないが、以下が挙げられる：エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＤＴＡ）；ＥＤＴＡの二ナトリウム、三ナトリウム、四ナトリウム、二カリウム、三カリウム、二リチウムおよび二アンモニウム塩；ＥＤＴＡのバリウム、カルシウム、コバルト、銅、ジスプロシウム、ユーロピウム、鉄、インジウム、ランタン、マグネシウム、マンガン、ニッケル、サマリウム、ストロンチウム、または亜鉛キレート；トランス－１，２－ジアミノシクロヘキサン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸一水和物；Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）グリシン；１，３－ジアミノ－２－ヒドロキシプロパン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸；１，３－ジアミノプロパン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸；エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－二酢酸；エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－二プロピオン酸二塩酸塩；エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’－ビス（メチレンホスホン酸）半水和物；Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－三酢酸；エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラキス（メチレンホスホン酸）；Ｏ，Ｏ’－ビス（２－アミノエチル）エチレングリコール－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸；Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシベンジル）エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ－二酢酸；１，６－ヘキサメチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸；Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）イミノ二酢酸；イミノ二酢酸；１，２－ジアミノプロパン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸；ニトリロ三酢酸；ニトリロ三プロピオン酸；ニトリロトリス（メチレンホスホン酸（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ））の三ナトリウム塩；７，１９，３０－トリオキサ－１，４，１０，１３，１６，２２，２７，３３－オクタアザビシクロ［１１，１１，１１］ペンタトリアコンタンヘキサヒドロブロミド；またはトリエチレンテトラミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’，Ｎ’’’－六酢酸。

【0269】

[0280]また、１つまたは複数の他の抗菌剤または抗真菌剤、例えば、ポリエン、例えば、アンホテリシンＢ、アンホテリシンＢ脂質複合体（ＡＢＣＤ）、リポソーム型アンホテリシンＢ（Ｌ－ＡＭＢ）およびリポソーム型ナイスタチン、アゾールおよびトリアゾール、例えばボリコナゾール、フルコナゾール、ケトコナゾール、イトラコナゾール、ポサコナゾール（ｐｏｚａｃｏｎａｚｏｌｅ）など；グルカンシンターゼ阻害剤、例えば、カスポファンギン、ミカファンギン（ＦＫ４６３）、およびＶ－エキノカンジン（ＬＹ３０３３６６）；グリセオフルビン；アリルアミン、例えば、テルビナフィン；フルシトシンまたは本明細書に記載されるそれらを含む他の抗真菌剤を含む組成物が考えられる。さらに、ペプチドは、局所抗真菌剤、例えば、シクロピロックスオラミン、ハロプロジン、トルナフテート、ウンデシレン酸塩、局所ナイスタチン（ｎｙｓａｔｉｎ）、アモロルフィン、ブテナフィン、ナフチフィン、テルビナフィンおよび他の局所薬剤と組み合わされ得ると考えられる。一部の例において、医薬組成物は、さらなる薬剤を含む。一部の場合、さらなる薬剤は医薬組成物に治療有効量で存在する。

【0270】

[0281]貯蔵および使用の通常の条件下で、本明細書に記載の医薬組成物は、保存剤を含み、微生物の増殖を防止する。特定の例において、本明細書に記載の医薬組成物は、保存剤を含まない。注射可能な使用に好適な医薬品形態は、滅菌注射可能溶液または分散液の即時調製のための滅菌水溶液または分散液および滅菌粉末を含む。医薬組成物は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、および／または植物油、またはこれらの任意の組合せを含有する溶媒または分散培地である担体を含む。良好な流動性は、例えば、コーティング、例えばレシチンの使用によって、分散液の場合必要な粒子サイズの維持によって、ならびに界面活性剤の使用によって維持される。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによってもたらされる。多くの場合、等張剤、例えば、糖または塩化ナトリウムが含まれる。注射可能な組成物の吸収の延長は、吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの組成物での使用によってもたらされ得る。

【0271】

[0282]水溶液での非経口投与のため、例えば、液体剤形は必要であれば好適に緩衝され、液体希釈剤は十分な生理食塩水またはグルコースによって等張にされる。液体剤形は、特に静脈内、筋肉内、皮下、腫瘍内、および腹腔内投与に好適である。これに関連して、用いられ得る滅菌水性培地は、本開示に照らして当業者に公知である。例えば、１回の投与量は、特定の場合、１ｍＬ～２０ｍＬの等張ＮａＣｌ溶液に溶解され、１００ｍＬ～１０００ｍＬの液体、例えば炭酸水素ナトリウム緩衝生理食塩水に添加されるか、注入の提案された部位で注射された。

【0272】

[0283]特定の実施形態において、滅菌注射可能溶液は、免疫療法剤を、必要な場合、上記に列挙した様々な他の成分と適切な溶媒に必要な量で組み入れ、滅菌濾過することによって調製される。通常、分散液は様々な滅菌活性成分を、基本分散培地および上記に列挙したものからの必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクルに組み入れることによって調製される。本明細書で開示される組成物は、一部の例において、中性または塩形態に製剤化される。医薬的に許容される塩としては、例えば、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基によって形成される）が挙げられ、それらは無機酸、例えば塩酸もしくはリン酸など、または有機酸、例えば酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などによって形成される。遊離カルボキシル基によって形成された塩は、一部の場合、無機塩基、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウムなど、または水酸化第二鉄、および有機塩基、例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどに由来する。製剤時、医薬組成物は、一部の実施形態において、投与製剤に対応した方法および治療に有効であるような量で投与される。

【0273】

[0284]特定の実施形態において、本開示の医薬組成物は、医薬的に許容される担体を含む。本明細書で使用する「医薬的に許容される」は、活性成分の生物学的活性の有効性に干渉しないおよび／または投与される患者に毒性ではない任意の担体を含む。好適な医薬担体の非限定的な例としては、リン酸緩衝生理食塩水溶液、水、エマルジョン、例えば、油／水型エマルジョン、様々な型の湿潤剤および滅菌溶液が挙げられる。医薬的に適合する担体のさらなる非限定的な例としては、ゲル、生体吸収性マトリックス材、免疫療法剤または任意の他の好適なビヒクルを含有する移植エレメント、送達または分配手段または材料が挙げられ得る。そのような担体は、例えば従来の方法によって製剤化され、有効量で対象に投与される。

【0274】

ＶＩＩＩ．キット
[0285]一部の実施形態において、本開示は、本開示の組成物（例えば医薬組成物）（例えば、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体もしくはその抗原結合フラグメント、またはそのような抗体を含有するＡＤＣ、および免疫療法剤を含む組成物）を含むキットを提供する。キットは、臨床医（例えば医師または看護師）がそこに含有される組成物を対象に投与し、病的血管新生（例えばがん）と関連する障害を処置することを可能にする説明書を含む。

【0275】

[0286]特定の実施形態において、キットは、有効量の本開示の抗体を含有する単回用量の医薬組成物のパッケージを含む。任意選択により、医薬組成物を投与するステップに必要な器具または装置がキットに含まれ得る。例えば、本開示のキットは、本開示の有効量のワクチン、ベクター、安定化三量体、または最適化ウイルスポリペプチドを含有する１つまたは複数のプレフィルドシリンジを提供し得る。さらに、キットはさらなる構成成分、例えば、病的血管新生（例えばがん）と関連する障害を有する対象の投与スケジュールに関する説明書も含み、本開示のＴＭ４ＳＦ１結合タンパク質またはポリヌクレオチドを含有する医薬組成物を使用し得る。

【実施例】

【0276】

実施例１：抗ＴＭ４ＳＦ１抗体の特徴付け
インビトロでの細胞株への結合
[0287]ＹＴＥＣ突然変異を含有するヒトＩｇＧ１定常領域含む、例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１抗体１の抗原結合は、異なるマウス細胞株：ＭＳ１（マウス膵島内皮由来細胞株）、ＣＴ２６（マウス大腸癌由来細胞株）、およびＢ１６Ｆ１０（マウスメラノーマ由来細胞株）で、細胞ベースのフローサイトメトリーアッセイを使用して評価した。

【0277】

[0288]結合のＥＣ_５０値は、図１の凡例に示す。例示的な抗体１の最大結合は、ＴＭ４ＳＦ１の発現がＭＳ１で最大であり、続いてＣＴ２６、続いてＢ１６Ｆ１０であることを示した。

【0278】

インビトロでの細胞増殖阻害アッセイ
[0289]薬物（メイタンシン）と例示的な抗体１または例示的な抗体２のいずれかを含有する抗体薬物コンジュゲート（約２の薬物対抗体比（ＤＡＲ））の効果を、それぞれ、培養マウス細胞（ＭＳ１、ＣＴ２６、Ｂ１６Ｆ１０）およびヒト細胞（ＭｉａＰａＣａ２、Ａ５４９、ＳＫＯＶ３、およびＨＵＶＥＣ）で評価した。例示的な抗体１と例示的な抗体２の両方とも、ＹＴＥＣ突然変異を有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有する。細胞は、５日目に細胞生存を評価する前に、抗体薬物コンジュゲートにより５日間インキュベートして処置した。

【0279】

[0290]表１は、異なる細胞株での、リンカー１（Ｌ１）を介してメイタンシンペイロードにコンジュゲートした例示的な抗体１（例示的な抗体１－Ｌ１）およびリンカー１（Ｌ１）を介してメイタンシンペイロードにコンジュゲートした例示的な抗体２（例示的な抗体２－Ｌ１）、または他のリンカーを介した抗体の細胞増殖阻害活性からの代表的なＥＣ_５０値を示す。
まとめ：例示的な抗体１－Ｌ１により、ＭＳ１（０．０５ｎＭ）、Ｂ１６Ｆ１０（０．１２ｎＭ）およびＣＴ２６（死滅なし）、および例示的な抗体２－Ｌ１によりＭｉａＰａＣａ２（０．０４ｎＭ）、Ａ５４９（０．０６ｎＭ）、ＳＫＯＶ３（０．８１ｎＭ）、およびＨＵＶＥＣ（０．１０ｎＭ）。ＴＭ４ＳＦ１は、ＣＴ２６細胞に高発現されるが、細胞は例示的な抗体１－Ｌ１抗体媒介死滅に耐性であった。

【0280】

[0291]表１：例示的な抗体１はマウス起源の細胞のみを標的化する。反対に、例示的な抗体２はヒト起源の細胞のみを標的化する。例示的な抗体のバリアントを生成し、キャップ付加および裸抗体であるか、または７つの異なるリンカーを介してメイタンシンペイロードとコンジュゲートした異なる抗体を産生した。例示的な抗体１－Ｌ１ ＡＤＣは、続いて、マウスにおける全ての免疫－腫瘍学（ＩＯ）関連研究のために使用された。

【0281】

【表1】

【0282】

上に示したデータは、メイタンシンペイロードにコンジュゲートされている７つの異なるリンカーからのＥＣ５０を示す。

【0283】

リンカー１：ＰＥＧ４－メイタンシン；ＢＡ－ＰＥＧ４－Ｎ－メチル－アラニン－メイタンシン
リンカー２：ＰＥＧ４Ａｈｘ－メイタンシン；ＢＡ－ＰＥＧ４－Ａｈｘ－Ｎ－メチル－アラニン－メイタンシン
リンカー３：Ｇｌｃ－メイタンシン；ＢＡ－グルクロニド－Ｎ－メチル－アラニン－メイタンシン
リンカー４：Ｇｌｕ（ｔｂ）ＰＥＧ４－Ｇｌｃ－メイタンシン；ＢＡ－Ｇｌｕ－（Ｏｔ－ブチル）－グルクロニド（Ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｄｅ）－Ｎ－メチル－グリシン－Ｎ－メチル－アラニン－メイタンシン
リンカー５：Ｇｌｕ－ｔｂ－メイタンシン；ＢＡ－ＰＥＧ４－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｏｔ－ブチル－Ａｈｘ－Ｎ－メチル－アラニン－メイタンシン
リンカー６：ＧｌｕＡｈｘ－メイタンシン；ＢＡ－ＰＥＧ４－Ｄ－Ｇｌｕ－Ａｈｘ－Ｎ－メチル－アラニン－メイタンシン
リンカー７：ＰＥＧ４Ｇｌｕ－メイタンシン；ＢＡ－ＰＥＧ４－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｎ－メチル－アラニン－メイタンシン
実施例２：抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣおよび抗マウスＰＤ－１抗体を使用する腫瘍退縮
[0292]この研究のため、細胞由来同系マウスモデルを使用して、抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ（例示的な抗体１－Ｌ１）および抗ＰＤ－１抗体の組合せを含む処置の効果を評価した。評価した同系モデルは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６Ｆ１０由来腫瘍（図２Ａ）およびＢＡＬＢ／ｃマウスのＣＴ２６由来腫瘍モデルであった（図２Ｂ）。

【0284】

[0293]図２Ａでは、Ｂ１６Ｆ１０ Ｃ５７ＢＬ／６同系モデルを複数の処置群に分け、異なる処置の存在下での腫瘍容積（ｍｍ^３）を評価した：１）ビヒクル（対照）、２）抗マウスＰＤ－１抗体（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、クローンＲＭＰ１－１４，１０ｍｇ／ｋｇ）、３）例示的な抗体１－Ｌ１（２０ｍｇ／ｋｇ）、および４）例示的な抗体１－Ｌ１（２０ｍｇ／ｋｇ）＋抗マウスＰＤ１（１０ｍｇ／ｋｇ）。例示的な抗体１－Ｌ１は、研究の開始時に１回投与された。抗マウスＰＤ１抗体は、処置後０、５、および１０日目に３回投与された。処置の間、腫瘍容積は、４、６、９、１３、および１５日目に測定した。１０日以内に、抗マウスＰＤ－１抗体を単独で使用する処置（処置２）は、ビヒクル対照（処置１）と比較して腫瘍増殖を阻害しなかった。２０ｍｇ／ｋｇの例示的な抗体１－Ｌ１を含有する処置は、腫瘍増殖を遅延させ（処置３）、抗マウスＰＤ－１抗体の存在下で相乗的な腫瘍退縮活性を示した（処置４）。

【0285】

[0294]図２Ｂでは、ＣＴ２６ ＢＡＬＢ／ｃ同系モデルを複数の処置群に分け、異なる処置の存在下での腫瘍容積（ｍｍ^３）を評価した：１）ビヒクル（対照）、２）抗マウスＰＤ－１抗体（ＢｉｏＸｃｅｌｌ、クローンＲＭＰ１－１４，１０ｍｇ／ｋｇ）、３）例示的な抗体１－Ｌ１（２０ｍｇ／ｋｇ）、および４）例示的な抗体１－Ｌ１（２０ｍｇ／ｋｇ）＋抗マウスＰＤ１抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）。図２Ａと同様に、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体処置は、処置の開始時に１回投与されたが、抗マウスＰＤ１抗体注射は、０、７、および１４日目に３回投与された。抗マウスＰＤ－１抗体のみによる処置は、ビヒクル対照と同様に進行した腫瘍をもたらし、動物は１４日目に屠殺した。２０ｍｇ／ｋｇの例示的な抗体１－Ｌ１を使用するマウスの処置は、ビヒクル対照よりも腫瘍退縮能を改善したが、抗マウスＰＤ－１抗体の投与の追加は、処置の開始後２８日目まで、腫瘍増殖の阻害をさらに増加させた。

【0286】

[0295]図２Ａおよび２Ｂは、試験したＡＤＣ（例示的な抗体１－Ｌ１）が、それぞれＢ１６Ｆ１０（Ｃ５７ＢＬ／６マウス）およびＣＴ２６（Ｂａｌｂ／ｃマウス）同系腫瘍モデルの両方において、抗マウスＰＤ－１抗体との相乗的な腫瘍退縮効果を有することを示した。この相乗的な腫瘍増殖遅延の結果は、例示的な抗体１－Ｌ１による腫瘍血管標的化が、腫瘍血管損傷によって腫瘍への白血球浸潤を促進することにより、腫瘍における免疫応答を活性化するようであることを示す。免疫チェックポイント遮断アプローチと、腫瘍血管標的化のコンボアプローチは、多くの異なる型の固形腫瘍を、免疫学的に不活性状態から活性状態へと変える多大な機会を提供すると期待される。

【0287】

[0296]紡錘体チェックポイント突然変異によるのと同様に、一部の腫瘍細胞株、例えばＣＴ２６はメイタンシンペイロードに対して耐性である。したがって、ＣＴ２６同系腫瘍における例示的な抗体１－Ｌ１抗体による腫瘍退縮の結果（図２Ｂ）は、単に腫瘍血管を標的化することによる。そのような腫瘍退縮は、抗マウスＰＤ－１免疫遮断抗体の存在下でさらに改善された。

【0288】

実施例４：抗ＴＭ４ＳＦ１抗体の特徴付け
インビトロでの細胞株への結合
[0297]ＹＴＥＣ突然変異を含有するヒトＩｇＧ１定常領域含む、例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１抗体薬物コンジュゲート（メイタンシン）の抗原結合は、異なるマウス細胞株：ＭＳ１（マウス膵島内皮由来細胞株）、ＣＴ２６（マウス大腸癌由来細胞株）、Ｂ１６Ｆ１０（マウスメラノーマ由来細胞株）、およびＬＬＣ（マウス肺癌）で、細胞ベースのフローサイトメトリーアッセイを使用して評価した。ＲＥＮＣＡ細胞株は、ＴＭ４ＳＦ１の発現が存在しないため、陰性対照として使用した。

【0289】

[0298]結合のＥＣ_５０値は、図３の凡例に示す。例示的な抗体１の最大結合は、ＴＭ４ＳＦ１の発現がＭＳ１で最大であり、続いてＣＴ２６、続いてＢ１６Ｆ１０、続いてＬＬＣであることを示した。ＲｅｎｃａはＴＭ４ＳＦ１を発現しない。典型的には、例示的な抗体１グループの抗体の結合親和性は、細胞ベースのアッセイにおいて３～７ｎＭのＥＣ５０である。

【0290】

インビトロでの細胞増殖阻害アッセイ
[0299]薬物（メイタンシン）と例示的な抗体１または例示的な抗体２のいずれかを含有する抗体薬物コンジュゲート（約２の薬物対抗体比（ＤＡＲ））の効果を、それぞれ、培養マウス細胞（ＭＳ１、ＣＴ２６、Ｂ１６Ｆ１０）およびヒト細胞（ＭｉａＰａＣａ２、Ａ５４９、ＳＫＯＶ３、およびＨＵＶＥＣ）で評価した。例示的な抗体１と例示的な抗体２の両方とも、ＹＴＥＣ突然変異を有するヒトＩｇＧ１定常領域を含有する。細胞は、５日目に細胞生存を評価する前に、抗体薬物コンジュゲートで４日間インキュベートして処置した。

【0291】

表３は、異なる細胞株での、リンカー１（Ｌ１）を介してメイタンシンペイロードにコンジュゲートした例示的な抗体１（例示的な抗体１－Ｌ１）、リンカー１（Ｌ１）を介してメイタンシンペイロードにコンジュゲートした例示的な抗体２（例示的な抗体２－Ｌ１）、または他のリンカーを介した抗体の細胞増殖阻害活性からの代表的なＥＣ_５０値を示す。
まとめ：例示的な抗体１－Ｌ１により、ＭＳ１（０．０５ｎＭ）、Ｂ１６Ｆ１０（０．１２ｎＭ）、ＲＥＮＣＡ（死滅なし）およびＣＴ２６（死滅なし）、ならびに例示的な抗体２－Ｌ１によりＭｉａＰａＣａ２（０．０４ｎＭ）、Ａ５４９（０．０６ｎＭ）、ＳＫＯＶ３（０．８１ｎＭ）、およびＨＵＶＥＣ（０．１０ｎＭ）。ＴＭ４ＳＦ１は、ＣＴ２６細胞に高発現されるが、細胞は例示的な抗体１－Ｌ１抗体媒介死滅に耐性であった。

【0292】

【表2】

【0293】

[0300]上に示したデータは、メイタンシンペイロードにコンジュゲートされている７つの異なるリンカーからのＥＣ_５０を示す。

【0294】

[0301]リンカー１：ＰＥＧ４－メイタンシン；ＢＡ－ＰＥＧ４－Ｎ－メチル－アラニン－メイタンシン
[0302]リンカー２：ＰＥＧ４Ａｈｘ－メイタンシン；ＢＡ－ＰＥＧ４－Ａｈｘ－Ｎ－メチル－アラニン－メイタンシン
[0303]リンカー３：Ｇｌｃ－メイタンシン；ＢＡ－グルクロニド－Ｎ－メチル－アラニン－メイタンシン
[0304]リンカー４：Ｇｌｕ（ｔｂ）ＰＥＧ４－Ｇｌｃ－メイタンシン；ＢＡ－Ｇｌｕ－（Ｏｔ－ブチル）－グルクロニド（Ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｄｅ）－Ｎ－メチル－グリシン－Ｎ－メチル－アラニン－メイタンシン
[0305]リンカー５：Ｇｌｕ－ｔｂ－メイタンシン；ＢＡ－ＰＥＧ４－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｏｔ－ブチル－Ａｈｘ－Ｎ－メチル－アラニン－メイタンシン
[0306]リンカー６：ＧｌｕＡｈｘ－メイタンシン；ＢＡ－ＰＥＧ４－Ｄ－Ｇｌｕ－Ａｈｘ－Ｎ－メチル－アラニン－メイタンシン
[0307]リンカー７：ＰＥＧ４Ｇｌｕ－メイタンシン；ＢＡ－ＰＥＧ４－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｎ－メチル－アラニン－メイタンシン
実施例５：ＣＴ２６同系モデルにおいて抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣおよび抗マウスＣＴＬＡ－４抗体を使用する腫瘍退縮
[0308]この研究のため、細胞由来同系ＣＴ２６マウスモデルを使用して、抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ（例示的な抗体１－Ｌ１）および／または抗マウスＣＴＬＡ－４抗体（クローン９Ｈ１０；ＢｉｏＸＣｅｌｌ）の組合せを含む処置の効果を評価した。

【0295】

[0309]ＢＡＬＢ／ｃマウスのＣＴ２６マウス大腸がん由来腫瘍モデル（図４Ａ～４Ｈ）。図４Ａ～４Ｄでは、０ｍｐｋの抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ（例示的な抗体１－Ｌ１）を投与し、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体を、それぞれ０、２．５、５および１０ｍｐｋで投与した。図４Ｅ～４Ｈは、２０ｍｐｋの抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ（例示的な抗体１－Ｌ１）を投与し、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体をそれぞれ０、２．５、５、および１０ｍｐｋで投与した同系モデルを示す。全ての投与は、研究の０日目に１回投与した。

【0296】

[0310]図４Ａでは、ＣＴ２６ ＢＡＬＢ／ｃ同系モデル（ｎ＝４０）を２つの処置群に分け、異なる処置の存在下での腫瘍容積（ｍｍ^３）を評価した：研究の０日目に１回投与される、１）ビヒクル（対照）および２）アイソタイプ適合対照（ＩＳ－Ｃｔｌ）。処置の間、腫瘍容積は、図４Ａにドットで示したように週に２～３回測定した。いずれの処置も腫瘍退縮をもたらさなかった。図４Ｂでは、第３のＣＴ２６ ＢＡＬＢ／ｃ処置群（ｎ＝５）は、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体が研究の０日目に１回２．５ｍｐｋで投与された。抗マウスＣＴＬＡ－４抗体のみによる処置は、いくらかのレベルの腫瘍増殖の遅延をもたらし、１匹は１４日までに腫瘍がなくなり（ＴＦ）（２０％ＴＦ）、少なくとも５０日後まで持続した。図４Ｃでは、ＣＴ２６ ＢＡＬＢ／ｃ処置群（ｎ＝１５）は、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体が研究の０日目に１回５ｍｐｋで投与された。５ｍｐｋの抗マウスＣＴＬＡ－４抗体による処置は、２．５ｍｐｋ単独よりも著しく良い腫瘍増殖の遅延をもたらし、２匹は２１日までに腫瘍がなくなり（１３．３％ＴＦ）、少なくとも５０日後まで持続した。図４Ｄでは、ＣＴ２６ ＢＡＬＢ／ｃ処置群（ｎ＝１９）は、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体が研究の０日目に１回１０ｍｐｋで投与された。１０ｍｐｋの抗マウスＣＴＬＡ－４抗体による処置は、２．５または５ｍｐｋの群と比較して最も良い腫瘍増殖の遅延をもたらし、４匹は腫瘍がなくなった。４匹は２１日までに腫瘍がなくなり（２１％ＴＦ）、少なくとも５５日後まで持続した。図４Ｅでは、ＣＴ２６ ＢＡＬＢ／ｃ処置群（ｎ＝３５）は、例示的な抗体１－Ｌ１抗体が研究の０日目に２０ｍｐｋで投与された。抗ＴＭ４ＳＦ１抗体のみによる処置は、図４Ａの対照群から約１週間遅れて進行した腫瘍をもたらした。抗ＴＭ４ＳＦ１抗体のみによる処置は、腫瘍がなくなる結果を示さず、腫瘍負荷により研究から除外する必要がある動物をもたらさなかった。図４Ｆ～４Ｈは、第２の処置群を加えた、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体（２０ｍｐｋ）および抗マウスＣＴＬＡ－４抗体（それぞれ、２．５、５および１０ｍｐｋ）によって処置したマウスから構成されている。図４Ｆでは、例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ／抗マウスＣＴＬＡ－４組合せ処置群（２．５ｍｐｋ、ｎ＝５）からの１匹のマウスの腫瘍が無くなるが（２０％ＴＦ）、その他のマウスは腫瘍増殖を示し、腫瘍負荷により研究から除外する必要がある。図４Ｇでは、例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ／抗マウスＣＴＬＡ－４組合せ処置群（５ｍｐｋ、ｎ＝２１）からの１５匹のマウスが、腫瘍がなくなるが（７１．４％ＴＦ）、６匹の他のマウスは、経時的な腫瘍増殖を示し、腫瘍負荷により研究から除外する必要がある。図４Ｈでは、例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ／抗マウスＣＴＬＡ－４組合せ処置群（１０ｍｐｋ、ｎ＝１５）からの７匹のマウスが、腫瘍がなくなるが（４６．７％ＴＦ）、他の８匹のマウスは、経時的な腫瘍増殖を示し、腫瘍負荷により研究から除外する必要がある。要するに、本発明者らの研究は、抗ＣＴＬＡ－４抗体の遮断と組み合わせた、血管標的化細胞傷害性抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣによる、マウス同系腫瘍モデルの処置が、強力な抗腫瘍免疫活性を生じることを実証した。ＣＴ２６腫瘍を有する多くのマウスにおいて、抗ＣＴＬＡ－４抗体との抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣの単一組合せ処置は腫瘍を除去するが、反対に、抗ＣＴＬＡ－４抗体のみによって処置した対照マウスでは、ほとんどのマウスが腫瘍増殖を示し、腫瘍負荷により屠殺される必要があった。特に、それぞれ２．５ｍｐｋ、５ｍｐｋ、および１０ｍｐｋの抗ＣＴＬＡ－４抗体による処置下、２０％、１３．３％、および２１％のＣＴ２６腫瘍を有するＢＡＬＢ／Ｃマウスが、６０～７０日間の評価時間の間に腫瘍がなくなり；一方、２０ｍｐｋの抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣと組み合わせた同用量の抗ＣＴＬＡ－４抗体により、それぞれの群の２０％、７１．４％、および４６．７％のマウスが、６０～７０日間の評価時間の間に腫瘍がない状態を達成した。抗腫瘍免疫のこの重大な増強は、腫瘍内皮を損傷することにより、５ｍｐｋの抗ＣＴＬＡ－４抗体での腫瘍がない画分の１３．３％から７１．４％の増加の要因であり、免疫学的にコールドな「腫瘍損傷」を免疫学的にウォームに変え、「慢性損傷」を注意深く観察した。

【0297】

ＣＴ２６再チャレンジ
[0311]免疫チェックポイント阻害剤抗ＣＴＬＡ－４抗体の処置により達成された腫瘍のない（ＴＦ）マウスが長期効果であるかどうか決定するため、図４Ａ～４Ｈで、最初の投与後、６０～７０日近くＣＴ２６腫瘍を示さないマウスに、ＣＴ２６腫瘍細胞を再注入した。例えば、図５Ａで使用したＣＴＬＡ－４マウスは、それぞれの処置条件においてＴＦを示すマウスから取られた（図４Ｂ）。各再チャレンジ条件では、２つの群の対照マウスを使用した：１）８週齢のＢＡＬＢ／ｃおよび２）退役ＢＡＬＢ／ｃブリーダー（約７～８月齢）。０日目に、各対照および腫瘍のないマウスは、図４Ｂで最初の腫瘍細胞が注入された場所とは逆側である上わき腹の左側の皮下に百万個のＣＴ２６腫瘍細胞を受けた。結果は、全ての腫瘍のないマウスが、図５Ｃで異常値を示した１匹を除き、継続して腫瘍がなかったことを示した。反対に、腫瘍は両対照マウス群で急速に増殖し、腫瘍細胞が導入された後、２０日以内に腫瘍負荷により屠殺する必要があった。特に、再チャレンジ後にＴＦを示すマウスは、図５Ａ（１００％、２／２）、図５Ｂ（１００％、４／４）、図５Ｃ（９３．３％、１／１５）および図５Ｄ（１００％、７／７）であった。したがって、この現在進行中の研究は、ＣＴ２６腫瘍細胞が、既にＴ細胞記憶を形成し、ＣＴ２６腫瘍細胞を除去する同じマウスに再注入しても、腫瘍へと増殖することができないことを示した。

【0298】

[0312]現在進行中の研究の結果（図５Ｃ）は、腫瘍がない群の１５匹のマウス中１匹のみが腫瘍の再増殖を示したことを示す。これは、免疫チェックポイント抗マウスＣＴＬＡ－４抗体の助けにより、一度Ｔ細胞記憶がマウスにおいて正しく形成され、腫瘍がなくなると、マウスは、後に再チャレンジされても腫瘍細胞を根絶できることを示している。５ｍｐｋの免疫チェックポイント抗マウスＣＴＬＡ－４抗体との抗ＴＭ４ＳＦ１抗体１－Ｌ１の本発明者らの組合せ治療は、マウスのメモリーＴ細胞を形成する能力を増強し、腫瘍が無くなった。

【0299】

実施例６：Ｒｅｎｃａ同系モデルにおいて抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣおよび抗マウスＣＴＬＡ－４抗体を使用する腫瘍退縮
[0313]この研究のため、細胞由来同系Ｒｅｎｃａマウスモデルを使用して、抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ（例示的な抗体１－Ｌ１）および／または抗マウスＣＴＬＡ－４抗体（Ｃｌｏｎｅ９Ｈ１０；ＢｉｏＸｃｅｌｌ）の組合せを含む処置の効果を評価した。

【0300】

[0314]評価した同系モデルは、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＲｅｎｃａ由来腫瘍モデルであった（図６Ａ～６Ｆ）。図６Ａ～６Ｃでは、０ｍｐｋの抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ（例示的な抗体１－Ｌ１）を投与し、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体を、それぞれ０、５および１０ｍｐｋで投与した。図６Ｄ～６Ｆは、２０ｍｐｋの抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ（例示的な抗体１－Ｌ１）の組合せを投与し、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体をそれぞれ０、２．５、５、および１０ｍｐｋで投与した同系モデルを示す。全ての投与は、研究の０日目に投与した。
図６Ａでは、ＲｅｎｃａＢＡＬＢ／ｃ同系モデル（ｎ＝５）を２つの処置群に分け、異なる処置の存在下での腫瘍容積（ｍｍ^３）を評価した：研究の開始時に１回投与される、１）ビヒクル（対照）および２）アイソタイプ適合対照（ＩＳ－Ｃｔｌ）。処置の間、腫瘍容積は、ドットによって示したように定期的に測定した。両処置も腫瘍退縮をもたらさなかった。図６Ｂでは、第３のＲｅｎｃａＢＡＬＢ／ｃ処置群（ｎ＝５）は、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体が５ｍｐｋで投与された。抗マウスＣＴＬＡ－４抗体処置は、処置の開始時に１回投与された。抗マウスＣＴＬＡ－４抗体のみによる処置は、未処置対照と同様に進行する腫瘍を生じ、１匹は１４日までに腫瘍がなくなり（２０％ＴＦ）、少なくとも７０日後まで持続した。図６Ｃでは、ＲｅｎｃａＢＡＬＢ／ｃ処置群（ｎ＝５）は、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体が１０ｍｐｋで投与された。抗マウスＣＴＬＡ－４抗体処置は、処置の開始時に１回投与された。抗マウスＣＴＬＡ－４抗体のみによる処置は、未処置対照と比較してより遅く進行する腫瘍を生じ、１匹のマウスは１４日までに腫瘍がなくなり（２０％ＴＦ）、少なくとも７０日後まで持続した。図６Ｄでは、ＲｅｎｃａＢＡＬＢ／ｃ処置群（ｎ＝５）は、抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣが研究の開始時に２０ｍｐｋで投与された。図６Ｅでは、ＲｅｎｃａＢＡＬＢ／ｃ処置群（ｎ＝５）は、研究の０日目に、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体（５ｍｐｋ）と組み合わせて、例示的な抗体１－Ｌ１抗体が２０ｍｐｋで投与された。組合せ処置は、腫瘍をより遅く増殖させ、８０％のマウスの腫瘍がなくなり、一部は少なくとも７０日後にＴＦを持続した。図６Ｆでは、ＲｅｎｃａＢＡＬＢ／ｃ処置群（ｎ＝５）は、研究の０日目に、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体（１０ｍｐｋ）と組み合わせて、例示的な抗体１－Ｌ１抗体が２０ｍｐｋで投与された。組合せ処置は、腫瘍をより遅く増殖させ、２０％のマウスが観察期間の少なくとも７０日間の間腫瘍がなくなった。ＣＴ２６腫瘍モデルの研究と類似の結果では、Ｒｅｎｃａ腫瘍モデルの研究は、ＣＴＬＡ－４の５ｍｐｋでの抗体遮断と組み合わせた血管標的化細胞傷害性抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣによるマウス同系腫瘍モデルの処置が強力な抗腫瘍免疫活性化を生じることを実証した。反対に、抗ＣＴＬＡ－４抗体のみによって処置した対照マウスでは、ほとんどのマウスが腫瘍増殖を経験し、腫瘍負荷により屠殺される必要があった。さらに、ＣＴ２６腫瘍モデルで観察されたように、５ｍｐｋのＣＴＬＡ－４抗体との抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣの組合せ治療は、１０ｍｐｋのＣＴＬＡ－４抗体処置よりも良い腫瘍退縮結果を示した。過剰（＞５ｍｐｋ）用量の抗ＣＴＬＡ－４抗体が抗腫瘍免疫を妨げる一般的な観察は、ＣＴＬＡ－４が通常、自己免疫を抑制するように機能するため、正常組織に対する免疫細胞の転換によっておそらく説明され得る。クリニックでは、ＣＴＬＡ－４抗体は、自己免疫副作用により用量制限される。イピリムマブの場合、例えば、第１のラベルリストの警告および注意事項は、免疫介在性肝炎、免疫介在性内分泌疾患、免疫介在性間質性肺炎、免疫介在性腎炎、および免疫介在性脳炎である。血管標的化細胞傷害性抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣによる抗腫瘍免疫の活性化が、ＣＴＬＡ４抗体を低用量で、これらの自己免疫毒性を生成する用量閾値より低くて有効にする場合、ＣＴＬＡ４抗体の治療限界は実質的に改善され、有効性が到達した患者の数は大きく増加し得る。

【0301】

Ｒｅｎｃａ再チャレンジ
[0315]完全腫瘍退縮が腫瘍再チャレンジ中も持続するかどうか決定するため、図６Ａ～６Ｆで、最初の投与後、６０～７０日近く腫瘍がない（ＴＦ）ことを示すマウスに、Ｒｅｎｃａによって再チャレンジした。例えば、図７Ａで使用したＣＴＬＡ４マウスは、それぞれの処置条件においてＴＦを示すマウスから取られた（図６Ｂ）。マウスの年齢を腫瘍がないマウスと適合させるため、７～８月齢の退役ＢＡＬＢ／ｃブリーダーを対照マウスとして使用した。０日目に、百万個のＲｅｎｃａ腫瘍細胞を各マウスの上わき腹の皮下に注射し、経時的に腫瘍増殖を追跡した。ＣＴ２６腫瘍再チャレンジで見られたように、全ての腫瘍のないマウスが、Ｒｅｎｃａ腫瘍モデルにおいて継続して腫瘍がなかった。反対に、腫瘍は対照マウス群で急速に増殖し、腫瘍細胞が導入された後、２０日以内に腫瘍負荷により屠殺する必要があった。特に、Ｒｅｎｃａ腫瘍細胞再チャレンジ後にＴＦを示すマウスは、図７Ａ（１００％、１／１）、図７Ｂ（１００％、１／１）、図７Ｃ（１００％、４／４）および図７Ｄ（１００％、１／１）であった。したがって、本発明者らの研究は、ＢＡＬＢ／ｃマウスのＣＴ２６腫瘍モデルとＲｅｎｃａ腫瘍モデルの両方において、抗ＣＴＬＡ－４抗体との抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣの単一組合せ処置後、多くのＢＡＬＢ／ｃマウスは、最初の腫瘍の除去だけでなく、長期Ｔ細胞記憶を確立し、再処置を必要とせずに再導入した腫瘍細胞を効果的に除去することにより腫瘍がなくなった。

【0302】

実施例７：Ｂ１６Ｆ１０同系モデルにおいて抗ＴＭ４ＳＦ ＡＤＣおよび抗マウスＣＴＬＡ－４抗体を使用する腫瘍退縮
[0316]この研究のため、細胞由来同系Ｂ１６Ｆ１０マウスモデルを使用して、抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ（例示的な抗体１－Ｌ１）および／または抗マウスＣＴＬＡ－４抗体（９Ｈ１０）の組合せを含む処置の効果を評価した。

【0303】

[0317]Ｃ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６Ｆ１０マウスメラノーマ細胞由来腫瘍モデル（図８Ａ～Ｈ）。図８Ａ～８Ｄでは、０ｍｐｋの抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ（例示的な抗体１－Ｌ１）を投与し、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体を、それぞれ０、２．５、５および１０ｍｐｋで投与した。図８Ｅ～８Ｈは、２０ｍｐｋの抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ（例示的な抗体１－Ｌ１）を投与し、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体をそれぞれ０、２．５、５、および１０ｍｐｋで投与した同系モデルを示す。全ての投与は、研究の０日目に投与した。

【0304】

[0318]図８Ａでは、Ｂ１６Ｆ１０ Ｃ５７ＢＬ／６同系モデル（ｎ＝５）を２つの処置群に分け、異なる処置の存在下での腫瘍容積（ｍｍ^３）を評価した：研究の開始時に１回投与される、１）ビヒクル（対照）および２）アイソタイプ適合対照（ＩＳ－Ｃｔｌ）。処置の間、腫瘍容積は、図４Ａにドットによって示したように定期的に測定した。両処置での腫瘍増殖は、対照腫瘍増殖と呼ばれた。図８Ｂでは、第３のＢ１６Ｆ１０ Ｃ５７ＢＬ／６処置群（ｎ＝５）は、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体が２．５ｍｐｋで投与され、処置の開始時に１回投与された。抗マウスＣＴＬＡ－４抗体のみによる処置は、未処置対照と同様に進行する腫瘍を生じ、腫瘍がなくなるマウスはいなかった。図８Ｃでは、Ｂ１６Ｆ１０ Ｃ５７ＢＬ／６処置群（ｎ＝５）は、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体が５ｍｐｋで投与され、処置の開始時に１回投与された。抗マウスＣＴＬＡ－４抗体のみによる処置は、未処置対照と同様に進行する腫瘍を生じ、腫瘍がなくなるマウスはいなかった。図８Ｄでは、Ｂ１６Ｆ１０ Ｃ５７ＢＬ／６処置群（ｎ＝５）は、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体が１０ｍｐｋで投与され、処置の開始時に１回投与された。抗マウスＣＴＬＡ－４抗体のみによる処置は、未処置対照と同様に進行する腫瘍を生じ、腫瘍がなくなるマウスはいなかった。この結果は、ＢＡＬＢ／ｃマウスと違い、抗ＣＴＬＡ－４抗体単独がＣ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６Ｆ１０腫瘍増殖に影響しなかった。

【0305】

[0319]図８Ｅでは、Ｂ１６Ｆ１０ Ｃ５７ＢＬ／６処置群（ｎ＝５）は、研究の０日目に、例示的な抗体１－Ｌ１抗体が２０ｍｐｋで投与された。抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣのみによる処置は、対照マウスと比較して腫瘍増殖の確実な遅延を示した。図８Ｆ～８Ｈでは、第２の処置群を加えた、抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ（２０ｍｐｋ）および抗マウスＣＴＬＡ－４抗体（それぞれ、２．５、５および１０ｍｐｋ）によって処置したマウスから構成されている。図８Ｆでは、例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣの抗マウスＣＴＬＡ－４抗体との組合せ処置群（２．５ｍｐｋ、ｎ＝５）からのマウスの腫瘍は無くならず（０％ＴＦ）、全てのマウスが例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ処置単独と類似した腫瘍増殖を示した。図８Ｇでは、例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣの抗マウスＣＴＬＡ－４抗体との組合せ処置群（５ｍｐｋ、ｎ＝５）からのマウスの腫瘍は無くならず（０％ＴＦ）、全てのマウスが例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ処置単独と類似した腫瘍増殖を示した。図８Ｈでは、例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣの抗マウスＣＴＬＡ－４抗体との組合せ処置群（１０ｍｐｋ、ｎ＝５）からのマウスの腫瘍は無くならず（０％ＴＦ）、全てのマウスが例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ処置単独と類似した腫瘍増殖を示した。要するに、この実施例は、チェックポイント阻害剤に非応答性の腫瘍モデル、例えばＣＴＬＡ－４抗体処置に非応答性であるＣ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６Ｆ１０モデルにおいて、抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣによる組合せ治療が腫瘍モデルを応答性にしないことを実証した。

【0306】

実施例８：ＬＬＣ同系モデルにおいて抗ＴＭ４ＳＦ ＡＤＣおよび抗ＣＴＬＡ抗体を使用する腫瘍退縮
[0320]この研究のため、Ｃ５７ＢＬ／６マウス株の細胞由来同系ＬＬＣ腫瘍モデルを使用して、抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ（例示的な抗体１－Ｌ１）および／または抗ＣＴＬＡ４抗体（９Ｈ１０）の組合せを含む処置の効果を評価した。

【0307】

[0321]Ｃ５７ＢＬ／６マウスのＬＬＣ由来腫瘍モデル（図９Ａ～９Ｈ）。図９Ａ～９Ｄでは、０ｍｐｋの抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ（例示的な抗体１－Ｌ１）を投与し、抗ＣＴＬＡ抗体を、それぞれ０、２．５、５および１０ｍｐｋで投与した。図９Ｅ～９Ｈは、２０ｍｐｋの抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ（例示的な抗体１－Ｌ１）が投与され、抗ＣＴＬＡ抗体がそれぞれ０、２．５、５、および１０ｍｐｋで投与された同系モデルを示す。全ての投与は、研究の０日目に投与した。

【0308】

[0322]図９Ａでは、ＬＬＣ Ｃ５７ＢＬ／６同系モデル（ｎ＝５）を２つの処置群に分け、異なる処置の存在下での腫瘍容積（ｍｍ^３）を評価した：研究の開始時に１回投与される、１）ビヒクル（対照）および２）アイソタイプ適合対照（ＩＳ－Ｃｔｌ）。処置の間、腫瘍容積は、図９Ａにドットによって示したように定期的に測定した。両処置とも、腫瘍退縮を引き起こさなかった。図９Ｂでは、第３のＢ１６Ｆ１０ Ｃ５７ＢＬ／６処置群（ｎ＝５）は、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体が２．５ｍｐｋで投与された。抗マウスＣＴＬＡ－４抗体処置は、処置の開始時に１回投与された。抗マウスＣＴＬＡ－４抗体のみによる処置は、未処置対照と同様に進行する腫瘍を生じ、完全な腫瘍退縮を示すマウスはいなかった。図９Ｃでは、Ｂ１６Ｆ１０ Ｃ５７ＢＬ／６処置群（ｎ＝５）は、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体が５ｍｐｋで投与された。抗マウスＣＴＬＡ－４抗体処置は、処置の開始時に１回投与された。抗マウスＣＴＬＡ－４抗体のみによる処置は、未処置対照と同様に進行する腫瘍を生じ、完全な腫瘍退縮を示すマウスはいなかった。図９Ｄでは、ＬＬＣ Ｃ５７ＢＬ／６処置群（ｎ＝５）は、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体が１０ｍｐｋで投与された。抗マウスＣＴＬＡ－４抗体処置は、処置の開始時に１回投与された。抗マウスＣＴＬＡ－４抗体のみによる処置は、未処置ビヒクルおよびＩＳ－Ｃｔｌ対照と同様に進行する腫瘍を生じ、腫瘍が無くなるマウスはいなかった。したがって、ＬＬＣ腫瘍退縮の結果は、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍と非常に似ており、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体は腫瘍増殖に影響することはできなかった。

【0309】

[0323]図９Ｅでは、ＬＬＣ Ｃ５７ＢＬ／６処置群（ｎ＝５）は、研究の０日目に、例示的な抗体１－Ｌ１抗体が２０ｍｐｋで投与された。抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣのみによる処置は、対照マウスと比較して腫瘍増殖の確実な遅延をもたらした。図９Ｆ～９Ｈでは、第２の処置群を加えた、抗ＴＭ４ＳＦ１抗体（２０ｍｐｋ）および抗マウスＣＴＬＡ－４抗体（それぞれ、２．５、５および１０ｍｐｋ）によって処置したマウスから構成されている。図９Ｆでは、例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣの抗マウスＣＴＬＡ－４抗体との組合せ処置群（２．５ｍｐｋ、ｎ＝５）からのマウスの腫瘍は無くならず（０％ＣＴＲ）、全てのマウスが例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ処置単独と類似した腫瘍増殖を示した。図９Ｇでは、例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣの抗マウスＣＴＬＡ－４抗体との組合せ処置群（５ｍｐｋ、ｎ＝５）からのマウスの腫瘍は無くならず（０％ＣＴＲ）、抗マウスＣＴＬＡ－４抗体の組合せ処置は腫瘍が無くならず（０％ＣＴＲ）、全てのマウスが例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ処置単独と類似した腫瘍増殖を示した。図９Ｈでは、例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣの抗マウスＣＴＬＡ－４抗体との組合せ処置からのマウスの腫瘍は無くならず（０％ＣＴＲ）、全てのマウスが例示的な抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣ処置単独と類似した腫瘍増殖を示した。まとめると、本発明者らの研究は、チェックポイント阻害剤に非応答性の腫瘍モデル、例えばＣＴＬＡ－４抗体処置に非応答性であるＣ５７ＢＬ／６マウスのＢ１６Ｆ１０およびＬＬＣ腫瘍モデルにおいて、抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣによる組合せ治療が腫瘍モデルをより応答性にしないことを示した。しかしながら、腫瘍モデルがＢＡＬＢ／ｃマウスのＣＴ２６およびＲｅｎｃａモデルのように、低応答率を示す場合、抗ＴＭ４ＳＦ１ ＡＤＣとの組合せ治療は応答率を実質的に増加させた。

【0310】

[0324]本開示の趣旨または範囲から逸脱することなく、本開示の組成物、方法、およびキットに様々な修正および変更がなされ得ることは当業者には明らかである。したがって、本開示は、添付の特許請求の範囲およびそれらの等価物の範囲内に入ることを条件に本開示の修正および変更をカバーすることを意図する。

【0311】

【表3-1】

【0312】

【表3-2】

【0313】

【表3-3】

【0314】

【表3-4】

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【0316】

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【表3-7】

【0318】

【表3-8】

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【表3-9】

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【0324】

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【表3-18】

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【0330】

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【0331】

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【表3-22】

【0333】

【表3-23】

【0334】

【表3-24】

【0335】

【表3-25】

【0336】

【表3-26】

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【表3-27】

【0338】

【表3-28】

【図1】

【図2-1】

【図2-2】

【図3】

【図4-1】

【図4-2】

【図4-3】

【図4-4】

【図5-1】

【図5-2】

【図6-1】

【図6-2】

【図6-3】

【図7-1】

【図7-2】

【図8-1】

【図8-2】

【図8-3】

【図8-4】

【図9-1】

【図9-2】

【図9-3】

【図9-4】

【国際調査報告】