特表2024-511779モノメチルアウリスタチンＥ化合物の調製及び精製プロセス
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-03-15
(54)【発明の名称】モノメチルアウリスタチンＥ化合物の調製及び精製プロセス
(51)【国際特許分類】
C07K 1/02 20060101AFI20240308BHJP
C07K 1/16 20060101ALI20240308BHJP
【ＦＩ】
C07K1/02
C07K1/16
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023558220
(86)(22)【出願日】2022-03-31
(85)【翻訳文提出日】2023-09-21
(86)【国際出願番号】 CN2022084236
(87)【国際公開番号】W WO2022206870
(87)【国際公開日】2022-10-06
(31)【優先権主張番号】202110349993.3
(32)【優先日】2021-03-31
(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520087262
【氏名又は名称】レメゲン シーオー．，エルティーディー．
【氏名又は名称原語表記】ＲＥＭＥＧＥＮ ＣＯ．， ＬＴＤ．
【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．５８ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｍｉｄｄｌｅ Ｒｏａｄ， Ｙａｎｔａｉ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｚｏｎｅ， Ｙａｎｔａｉ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｃｈｉｎａ（Ｓｈａｎｄｏｎｇ）Ｐｉｌｏｔ Ｆｒｅｅ Ｔｒａｄｅ Ｚｏｎｅ， Ｙａｎｔａｉ， Ｓｈａｎｄｏｎｇ ２６４００６ Ｃｈｉｎａ
(74)【代理人】
【識別番号】100078282
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 秀策
(74)【代理人】
【識別番号】100113413
【弁理士】
【氏名又は名称】森下 夏樹
(74)【代理人】
【識別番号】100181674
【弁理士】
【氏名又は名称】飯田 貴敏
(74)【代理人】
【識別番号】100181641
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 大輔
(74)【代理人】
【識別番号】230113332
【弁護士】
【氏名又は名称】山本 健策
(72)【発明者】
【氏名】リー， ジュアンリン
(72)【発明者】
【氏名】グオ， ウェイ
(72)【発明者】
【氏名】スン， ペン
(72)【発明者】
【氏名】シャオ， カイ
(72)【発明者】
【氏名】リー， シンリー
【テーマコード（参考）】
4H045
【Ｆターム（参考）】
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA09
4H045DA83
4H045EA20
4H045EA50
4H045FA30
4H045GA21
(57)【要約】
ＭＭＡＥの調製及び精製プロセスを提供する。このプロセスは合成及び精製条件が穏やかであり、過度の高温による生成物のキラリティーの変化を効果的に防止し、分解不純物の生成を大幅に低減し、生成物の純度及び収率を高める。さらに、この調製及び精製プロセスは、良好な安定性を有し、スケールアップ生産により適している。調製されるＭＭＡＥは、９９％を超える純度を有し、臨床薬剤の要件を完全に満たすことができる。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式（Ｉ）に示される化合物の調製及び精製方法であって：【化12】
前記方法の調製経路は以下のとおりであり：
【化13】
前記方法は、以下のステップ：
（１）化合物１を適量の第１の有機溶媒に溶解して溶液Ａを形成するステップと、
（２）前記溶液Ａに十分量のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液を加えて絶縁反応を行い、Ｂｏｃ保護基を除去するステップと、
（３）前記反応の終了後、前記ステップ（２）の反応溶液を十分量の第１の低極性溶媒に注ぎ、撹拌後に濾液を捨てるステップであって、乾燥後の固体残渣が化合物２である、前記ステップと、
（４）前記得られた化合物２及び適量の化合物３を第２の有機溶媒に溶解して溶液Ｂを形成するステップと、
（５）第１のポリペプチド濃縮剤を適量の第３の有機溶媒に溶解して溶液Ｃを形成するステップであって、前記第１のポリペプチド濃縮剤のモル数が、前記ステップ（４）の前記化合物３のモル数よりも大きい、前記ステップと、
（６）前記溶液Ｃを前記溶液Ｂに加えて溶液Ｄを形成するステップと、
（７）前記溶液Ｄに適量の第１の有機塩基を加えて絶縁反応を行うステップと、
（８）前記ステップ（７）の反応終了後、前記ステップ（７）の反応系に十分量の第２の低極性溶媒及び精製水を加えて抽出し、有機相を回収するステップと、
（９）前記ステップ（８）で回収した前記有機相を適量の塩酸溶液、精製水、及び塩化ナトリウム溶液で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、乾燥して化合物４を得るステップと、
（１０）前記化合物４を第４の有機溶媒に溶解して溶液Ｅを形成するステップと、
（１１）前記溶液Ｅに十分量のジエチルアミンを加えて絶縁反応を行い、Ｆｍｏｃ保護基を除去するステップと、
（１２）前記反応の終了後、前記ステップ（１１）の反応系に適量の第５の有機溶媒及び精製水を加えて抽出し、有機相を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮するステップと、
（１３）前記ステップ（１２）で得られた減圧濃縮物にトルエン：メタノールの溶出系によるクロマトグラフィーで精製を行い、回収した溶出液を減圧下で濃縮するステップと、
（１４）前記ステップ（１３）で得られた減圧濃縮生成物を第６の有機溶媒で溶解した後、濾過し、濾液を減圧下で濃縮するステップと、
（１５）前記ステップ（１４）で得られた減圧濃縮生成物を真空乾燥してＭＭＡＥを得るステップと、を含む、前記方法。
【請求項2】
前記ステップ１の前記第１の有機溶媒が、ジクロロメタン、トリクロロメタン、及び四塩化炭素から選択され、好ましくは、前記ステップ１の前記第１の有機溶媒はジクロロメタンである、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記ステップ１の前記化合物１と前記第１の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が約１：２であり、好ましくは、前記ステップ１の前記化合物１と前記第１の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：１～３であり、より好ましくは、前記ステップ１の前記化合物１と前記第１の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：１．５～２．５である、請求項１に記載の方法。
【請求項4】
前記ステップ（２）の前記ＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液の濃度が約４ｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、前記ステップ（２）の前記ＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液の濃度が約３～７ｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、前記ステップ（２）の前記ＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液の濃度が３．５～４．５ｍｏｌ／Ｌである、請求項１に記載の方法。
【請求項5】
前記ステップ１の前記化合物１と前記ステップ（２）の前記ＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が約１：６であり、好ましくは、前記ステップ１の前記化合物１と前記ステップ（２）の前記ＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：４～８であり、より好ましくは、前記ステップ１の前記化合物１と前記ステップ（２）の前記ＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：５～７であり、より好ましくは、前記ステップ１の前記化合物１と前記ステップ（２）の前記ＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：６である、請求項１に記載の方法。
【請求項6】
前記ステップ（２）の前記ＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液が滴下され、前記反応系の内温が前記滴下中に－５℃～５℃に維持される、請求項１に記載の方法。
【請求項7】
前記ステップ（２）の前記絶縁反応の温度が１０～１５℃である、請求項１に記載の方法。
【請求項8】
前記ステップ（３）の前記第１の低極性溶媒が、ｎ－ヘキサン、石油エーテル、及びｎ－ヘプタンから選択され、好ましくは、前記第１の低極性溶媒はｎ－ヘキサンから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項9】
前記ステップ１の前記化合物１と前記ステップ（３）の前記第１の低極性溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が約１：１６であり、好ましくは、前記ステップ１の前記化合物１と前記ステップ（３）の前記第１の低極性溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：１０～２５であり、より好ましくは、前記ステップ１の前記化合物１と前記ステップ（３）の前記第１の低極性溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：１２～２０であり、より好ましくは、前記ステップ１の前記化合物１と前記ステップ（３）の前記第１の低極性溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：１５～１７である、請求項１に記載の方法。
【請求項10】
前記ステップ（４）の前記第２の有機溶媒が、ＤＭＦ、ＤＭＡ、ＤＭＳＯ及びＤＣＭから選択され、好ましくは前記第２の有機溶媒はＤＭＦであり、さらに好ましくは、前記ステップ（４）において、前記化合物２と前記化合物３のモル量が同じである、請求項１に記載の方法。
【請求項11】
前記ステップ（４）の前記化合物３と前記第２の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が約１：６であり、好ましくは、前記ステップ（４）の前記化合物３と前記第２の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：５～１０であり、より好ましくは、前記ステップ（４）の前記化合物３と前記第２の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍｐ）が１：５～８であり、さらにより好ましくは、前記ステップ（４）の前記化合物３と前記第２の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：６～７である、請求項１に記載の方法。
【請求項12】
前記ステップ（５）の前記第１のポリペプチド濃縮剤が、ＨＡＴＵ、ＤＩＣ、ＤＣＣ、ＥＤＣ、ＨＣＴＵ、ＤＥＰＢＴ、ＥＥＤＱ及びＣＤＩから選択され、好ましくは、前記ステップ（５）の前記第１のポリペプチド濃縮剤がＨＡＴＵである、請求項１に記載の方法。
【請求項13】
前記ステップ（４）の前記化合物３と前記ステップ（５）の前記第１のポリペプチド濃縮剤とのモル比が約１：１．２であり、好ましくは、前記ステップ（４）の前記化合物３と前記ステップ（５）の前記第１のポリペプチド濃縮剤とのモル比が１：１．０１～１．５であり、より好ましくは、前記ステップ（４）の前記化合物３と前記ステップ（５）の前記第１のポリペプチド濃縮剤とのモル比が１：１．１～１．４であり、さらにより好ましくは、前記ステップ（４）の前記化合物３と前記ステップ（５）の前記第１のポリペプチド濃縮剤とのモル比が１：１．２～１．３である、請求項１に記載の方法。
【請求項14】
前記ステップ（５）の前記第３の有機溶媒が、ＤＭＦ、ＤＭＡ、ＤＭＳＯ、及びＤＣＭから選択され、好ましくは、前記第３の有機溶媒はＤＭＦである、請求項１に記載の方法。
【請求項15】
前記ステップ（４）の前記化合物３と前記ステップ（５）の前記第３の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が約１：３であり、好ましくは、前記ステップ（４）の前記化合物３と前記ステップ（５）の前記第３の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：２～６であり、より好ましくは、前記ステップ（４）の前記化合物３と前記ステップ（５）の前記第３の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：２．５～４であり、より好ましくは、前記ステップ（４）の前記化合物３と前記ステップ（５）の前記第３の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：３～４である、請求項１に記載の方法。
【請求項16】
前記ステップ（６）において、前記溶液Ｃが前記溶液Ｂに滴下され、前記滴下中の前記反応系全体の内温が０～５℃である、請求項１に記載の方法。
【請求項17】
前記ステップ（７）の前記第１の有機塩基が、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、及びピリジンから選択される１つ以上であり、好ましくは、前記ステップ（７）の前記第１の有機塩基はＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンである、請求項１に記載の方法。
【請求項18】
前記ステップ（４）の前記化合物３と前記ステップ（７）の前記第１の有機塩基とのモル比が約１：３であり、好ましくは、前記ステップ（４）の前記化合物３と前記ステップ（７）の前記第１の有機塩基とのモル比が１：２～５であり、より好ましくは、前記ステップ（４）の前記化合物３と前記ステップ（７）の前記第１の有機塩基とのモル比が１：２．５～４であり、さらにより好ましくは、前記ステップ（４）の前記化合物３と前記ステップ（７）の前記第１の有機塩基とのモル比が１：３～４である、請求項１に記載の方法。
【請求項19】
前記ステップ（７）の前記第１の有機塩基が前記溶液Ｄに滴下され、前記絶縁反応の温度が０～５℃である、請求項１に記載の方法。
【請求項20】
前記ステップ（８）の前記第２の低極性溶媒が、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、酢酸エチル、ジクロロメタン、及びテトラヒドロフランから選択され、好ましくは、前記ステップ（８）の前記第２の低極性溶媒はメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルである、請求項１に記載の方法。
【請求項21】
前記ステップ（４）の前記化合物３と前記ステップ（８）の前記第２の低極性溶媒と前記精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が約１：２０．２：２０．２であり、好ましくは、前記ステップ（４）の前記化合物３と前記ステップ（８）の前記第２の低極性溶媒と前記精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：１５～２５：１５～２５であり、より好ましくは、前記ステップ（４）の前記化合物３と前記ステップ（８）の前記第２の低極性溶媒と前記精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：２０～２４：２０～２４であり、より好ましくは、前記ステップ（４）の前記化合物３と前記ステップ（８）の前記第２の低極性溶媒と前記精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：２０～２１：２０～２１である、請求項１に記載の方法。
【請求項22】
前記ステップ（８）の前記第２の低極性溶媒と前記精製水の体積が同じである、請求項１に記載の方法。
【請求項23】
前記ステップ（９）の前記塩酸溶液の濃度が約０．０５ｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、前記ステップ（９）の前記塩酸溶液の濃度は０．０２～０．０８ｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、前記ステップ（９）の前記塩酸溶液の濃度は０．０４～０．０６ｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、前記ステップ（９）の前記塩酸溶液の濃度は０．０５ｍｏｌ／Ｌである、請求項１に記載の方法。
【請求項24】
前記ステップ（９）の前記塩化ナトリウム溶液の濃度が約３０％であり、好ましくは、前記ステップ（９）の前記塩化ナトリウム溶液の濃度は２０％～４０％である、請求項１に記載の方法。
【請求項25】
前記ステップ（９）の塩酸溶液、前記精製水及び前記塩化ナトリウム溶液の体積は、前記ステップ（８）の前記第２の低極性溶媒の体積と等しい、請求項１に記載の方法。
【請求項26】
前記ステップ（１０）の前記第４の有機溶媒が、ジクロロメタン、アセトニトリル、トリクロロメタン及び四塩化炭素から選択され、好ましくは、前記ステップ（１０）の前記第４の有機溶媒はジクロロメタンである、請求項１に記載の方法。
【請求項27】
前記ステップ（１０）の前記化合物４と前記第４の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が約１：７であり、好ましくは、前記ステップ（１０）の前記化合物４と前記第４の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：４～１０であり、より好ましくは、前記ステップ（１０）の前記化合物４と前記第４の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：５～８である、請求項１に記載の方法。
【請求項28】
前記ステップ（１０）の前記化合物４と前記ステップ（１１）の前記ジエチルアミンとの重量体積比（ｇ／ｍＬ）が約１：３．５であり、好ましくは、前記ステップ（１０）の前記化合物４と前記ステップ（１１）の前記ジエチルアミンとの重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：３～５であり、より好ましくは、前記ステップ（１０）の前記化合物４と前記ステップ（１１）の前記ジエチルアミンの重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：３～４である、請求項１に記載の方法。
【請求項29】
前記ステップ（１１）の前記ジエチルアミンが前記溶液Ｅに滴下され、前記滴下プロセス中、前記溶液の内温は０℃～５℃に維持され、前記ステップ（１１）の前記絶縁反応の温度は２０～３０℃である、請求項１に記載の方法。
【請求項30】
前記ステップ（１２）の前記第５の有機溶媒が、ジクロロメタン、トリクロロメタン、四塩化炭素及びトルエンから選択され、好ましくは、前記ステップ（１２）の前記第５の有機溶媒はジクロロメタンである、請求項１に記載の方法。
【請求項31】
前記ステップ（１０）の前記化合物４と前記ステップ（１２）の前記第５の有機溶媒と前記精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：７：１０であり、好ましくは、前記ステップ（１０）の前記化合物４と前記ステップ（１２）の前記第５の有機溶媒と前記精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：５～１０：５～１５であり、より好ましくは、前記ステップ（１０）の前記化合物４と前記ステップ（１２）の前記第５の有機溶媒と前記精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：６～８：９～１２である、請求項１に記載の方法。
【請求項32】
前記ステップ（１３）の前記クロマトグラフィー精製で使用されるシリカゲルは２００～３００メッシュのシリカゲルであり、前記溶出系は体積比（Ｖ／Ｖ）＝１０～２０：１のトルエン：メタノールであり、好ましくは、前記溶出系は、最初に、体積比（Ｖ／Ｖ）＝約２０：１のトルエン：メタノールであり、ＴＬＣで生成物のみが視認されることが検出された時点で前記溶出系が体積比（Ｖ／Ｖ）＝約１０：１のトルエン：メタノールに変更される、請求項１に記載の方法。
【請求項33】
前記ＴＬＣ検出の展開剤が、体積比（Ｖ／Ｖ）＝約５：１のトルエン：メタノールである、請求項３２に記載の方法。
【請求項34】
前記ステップ（１４）の前記第６の有機溶媒は、メタノール、トルエン及びアセトニトリルから選択され、好ましくは、前記ステップ（１４）の前記第６の有機溶媒はメタノールである、請求項１に記載の方法。
【請求項35】
前記ステップ（１０）の前記化合物４と前記ステップ（１４）の前記第６の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が約１：３～１０である、請求項１に記載の方法。
【請求項36】
前記ステップ（１４）のプロセスを１～５回繰り返すことができる、請求項１に記載の方法。
【請求項37】
以下の式に示される化合物の調製及び精製方法であって：【化14】
前記方法の調製経路は以下のとおりであり：
【化15】
前記方法は、以下のステップ：
（１－１）化合物１を適量の第７の有機溶媒に溶解して溶液Ｆを形成するステップと、
（１－２）前記溶液Ｆに十分量のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液を加えて絶縁反応を行い、Ｂｏｃ保護基を除去するステップと、
（１－３）前記反応の終了後、前記ステップ（１－２）の反応溶液を十分量の第３の低極性溶媒に注ぎ、撹拌後に濾液を捨てるステップであって、乾燥後の固体残渣が化合物２である、前記ステップと、を含む、前記方法。
【請求項38】
前記ステップ（１－１）の前記第７の有機溶媒が、ジクロロメタン、トリクロロメタン、及び四塩化炭素から選択され、好ましくは、前記ステップ（１－１）の前記第７の有機溶媒はジクロロメタンである、請求項３７に記載の方法。
【請求項39】
前記ステップ（１－１）の前記化合物１と前記第７の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が約１：２であり、好ましくは、前記ステップ（１－１）の前記化合物１と前記第７の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：１～３であり、より好ましくは、前記ステップ（１－１）の前記化合物１と前記第７の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：１．５～２．５である、請求項３７に記載の方法。
【請求項40】
前記ステップ（１－２）の前記ＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液の濃度が約４ｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、前記ステップ（１－２）の前記ＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液の濃度が約３～７ｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、前記ステップ（１－２）の前記ＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液の濃度が３．５～４．５ｍｏｌ／Ｌである、請求項３７に記載の方法。
【請求項41】
前記ステップ（１－１）の前記化合物１と前記ステップ（１－２）の前記ＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が約１：６であり、好ましくは、前記ステップ（１－１）の前記化合物１と前記ステップ（１－２）の前記ＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：４～８であり、より好ましくは、前記ステップ（１－１）の前記化合物１と前記ステップ（１－２）の前記ＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：５～７であり、さらにより好ましくは、前記ステップ（１－１）の前記化合物１と前記ステップ（１－２）の前記ＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：６である、請求項３７に記載の方法。
【請求項42】
前記ステップ（１－２）の前記ＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液が滴下され、前記反応系の内温が前記滴下中に－５～５℃に維持される、請求項３７に記載の方法。
【請求項43】
前記ステップ（１－２）の前記絶縁反応の温度が１０～１５℃である、請求項３７に記載の方法。
【請求項44】
前記ステップ（１－３）の前記第３の低極性溶媒が、ｎ－ヘキサン、石油エーテル、及びｎ－ヘプタンから選択され、好ましくは、前記ステップ（１－３）の前記第３の低極性溶媒はｎ－ヘキサンから選択される、請求項３７に記載の方法。
【請求項45】
前記ステップ（１－１）の前記化合物１と前記ステップ（１－３）の前記第３の低極性溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が約１：１６であり、好ましくは、前記ステップ（１－１）の前記化合物１と前記ステップ（１－３）の前記第３の低極性溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：１０～２５であり、より好ましくは、前記ステップ（１－１）の前記化合物１と前記ステップ（１－３）の前記第３の低極性溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：１２～２０であり、より好ましくは、前記ステップ（１－１）の前記化合物１と前記ステップ（１－３）の前記第３の低極性溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：１５～１７である、請求項３７に記載の方法。
【請求項46】
以下の式に示される化合物の調製及び精製方法であって：【化16】
前記方法の調製経路は以下のとおりであり：
【化17】
前記方法は、以下のステップ：
（２－１）化合物２及び適量の化合物３を第８の有機溶媒に溶解して溶液Ｇを形成するステップと、
（２－２）第２のポリペプチド濃縮剤を適量の第９の有機溶媒に溶解して溶液Ｈを形成するステップであって、前記第２のポリペプチド濃縮剤のモル数が、前記ステップ（２－１）の前記化合物３のモル数よりも大きい、前記ステップと、
（２－３）前記溶液Ｈを溶液Ｇに加えて溶液Ｉを形成するステップと、
（２－４）前記溶液Ｉに適量の第２の有機塩基を加えて絶縁反応を行うステップと、
（２－５）前記反応の終了後、前記ステップ（２－４）の反応系に十分量の第４の低極性溶媒及び精製水を加えて抽出し、有機相を回収するステップと、
（２－６）前記ステップ（２－５）で回収した有機相を適量の塩酸溶液、精製水、及び塩化ナトリウム溶液で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、乾燥して化合物４を得るステップと、を含む、前記方法。
【請求項47】
前記ステップ（２－１）の前記第８の有機溶媒が、ＤＭＦ、ＤＭＡ、ＤＭＳＯ、及びＤＣＭから選択され、好ましくは、前記第８の有機溶媒はＤＭＦである、請求項４６に記載の方法。
【請求項48】
前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記第８の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が約１：６であり、好ましくは、前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記第８の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：５～１０であり、より好ましくは、前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記第８の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍｐ）が１：５～８であり、より好ましくは、前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記第８の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：６～７である、請求項４６に記載の方法。
【請求項49】
前記ステップ（２－２）の前記第２のポリペプチド濃縮剤が、ＨＡＴＵ、ＤＩＣ、ＤＣＣ、ＥＤＣ、ＨＣＴＵ、ＤＥＰＢＴ、ＥＥＤＱ及びＣＤＩから選択され、好ましくは、前記ステップ（２－２）の前記第２のポリペプチド濃縮剤がＨＡＴＵである、請求項４６に記載の方法。
【請求項50】
前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記ステップ（２－２）の前記第２のポリペプチド濃縮剤とのモル比が約１：１．２であり、好ましくは、前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記ステップ（２－２）の前記第２のポリペプチド濃縮剤とのモル比が１：１．０１～１．５であり、より好ましくは、前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記ステップ（２－２）の前記第２のポリペプチド濃縮剤とのモル比が１：１．１～１．４であり、さらにより好ましくは、前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記ステップ（２－２）の前記第２のポリペプチド濃縮剤とのモル比が１：１．２～１．３である、請求項４６に記載の方法。
【請求項51】
前記ステップ（２－２）の前記第９の有機溶媒が、ＤＭＦ、ＤＭＡ、ＤＭＳＯ、及びＤＣＭから選択され、好ましくは、前記第９の有機溶媒はＤＭＦである、請求項４６に記載の方法。
【請求項52】
前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記ステップ（２－２）の前記第９の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が約１：３であり、好ましくは、前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記ステップ（２－２）の前記第９の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：２～６であり、より好ましくは、前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記ステップ（２－２）の前記第９の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：２．５～４であり、さらにより好ましくは、前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記ステップ（２－２）の前記第９の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：３～４である、請求項４６に記載の方法。
【請求項53】
前記ステップ（２－３）において、前記溶液Ｈが前記溶液Ｇに滴下され、前記滴下中の前記反応系全体の内温が０～５℃である、請求項４６に記載の方法。
【請求項54】
前記ステップ（２－４）の前記第２の有機塩基が、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、及びピリジンから選択される１つ以上であり、好ましくは、前記ステップ（２－４）の前記第２の有機塩基はＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンである、請求項４６に記載の方法。
【請求項55】
前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記ステップ（２－４）の前記第２の有機塩基とのモル比が約１：３であり、好ましくは、前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記ステップ（２－４）の前記第２の有機塩基とのモル比が１：２～５であり、より好ましくは、前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記ステップ（２－４）の前記第２の有機塩基とのモル比が１：２．５～４であり、さらにより好ましくは、前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記ステップ（２－４）の前記第２の有機塩基とのモル比が１：３～４である、請求項４６に記載の方法。
【請求項56】
前記ステップ（２－４）において、前記第２の有機塩基が前記溶液Ｉに滴下され、前記絶縁反応の温度が０～５℃である、請求項４６に記載の方法。
【請求項57】
前記ステップ（２－５）の前記第４の低極性溶媒が、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、酢酸エチル、ジクロロメタン、及びテトラヒドロフランから選択され、好ましくは、前記ステップ（２－５）の前記第４の低極性溶媒はメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルである、請求項４６に記載の方法。
【請求項58】
前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記ステップ（２－５）の前記第４の低極性溶媒と前記精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が約１：２０．２：２０．２であり、好ましくは、前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記ステップ（２－５）の前記第４の低極性溶媒と前記精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：１５～２５：１５～２５であり、より好ましくは、前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記ステップ（２－５）の前記第４の低極性溶媒と前記精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：２０～２４：２０～２４であり、より好ましくは、前記ステップ（２－１）の前記化合物３と前記ステップ（２－５）の前記第４の低極性溶媒と前記精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：２０～２１：２０～２１である、請求項４６に記載の方法。
【請求項59】
前記ステップ（２－５）の前記第４の低極性溶媒の体積と前記精製水の体積が同じである、請求項４６に記載の方法。
【請求項60】
前記ステップ（２－６）の前記塩酸溶液の濃度が約０．０５ｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、前記ステップ（２－６）の前記塩酸溶液の濃度は０．０２～０．０８ｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、前記ステップ（２－６）の前記塩酸溶液の濃度は０．０４～０．０６ｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、前記ステップ（２－６）の前記塩酸溶液の濃度は０．０５ｍｏｌ／Ｌである、請求項４６に記載の方法。
【請求項61】
式（Ｉ）に示される化合物の調製及び精製方法であって：【化18】
前記方法の調製経路は以下のとおりであり：
【化19】
前記方法は、以下のステップ：
（３－１）化合物４を第１０の有機溶媒に溶解して溶液Ｊを形成するステップと、
（３－２）前記溶液Ｊに十分量のジエチルアミンを加えて絶縁反応を行い、Ｆｍｏｃ保護基を除去するステップと、
（３－３）前記反応の終了後、前記ステップ（３－２）の反応系に適量の第１１の有機溶媒及び精製水を加えて抽出し、有機相を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮するステップと、
（３－４）前記ステップ（３－３）で得られた減圧濃縮物にトルエン：メタノールの溶出系によるクロマトグラフィーで精製を行い、回収した溶出液を減圧下で濃縮するステップと、
（３－５）前記ステップ（３－４）で得られた減圧濃縮生成物を第１２の有機溶媒で溶解した後、濾過し、濾液を減圧下で濃縮するステップと、
（３－６）前記ステップ（３－５）で得られた減圧濃縮生成物を真空乾燥してＭＭＡＥを得るステップと、を含む、前記方法。
【請求項62】
前記ステップ（３－１）の前記第１０の有機溶媒が、ジクロロメタン、アセトニトリル、トリクロロメタン及び四塩化炭素から選択され、好ましくは、前記ステップ（３－１）の前記第１０の有機溶媒はジクロロメタンである、請求項６１に記載の方法。
【請求項63】
前記ステップ（３－１）の前記化合物４と前記第１０の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が約１：７であり、好ましくは、前記ステップ（３－１）の前記化合物４と前記第１０の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：４～１０であり、より好ましくは、前記ステップ（３－１）の前記化合物４と前記第１０の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が１：５～８である、請求項６１に記載の方法。
【請求項64】
前記ステップ（３－１）の前記化合物４と前記ステップ（３－２）の前記ジエチルアミンとの重量体積比（ｇ／ｍＬ）が約１：３．５であり、好ましくは、前記ステップ（３－１）の前記化合物４と前記ステップ（３－２）の前記ジエチルアミンとの重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：３～５であり、より好ましくは、前記ステップ（３－１）の前記化合物４と前記ステップ（３－２）の前記ジエチルアミンの重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：３～４である、請求項６１に記載の方法。
【請求項65】
前記ステップ（３－２）の前記ジエチルアミンが滴下され、前記滴下プロセス中、内温は０℃～５℃に維持され、前記ステップ（３－２）の前記絶縁反応の温度は２０～３０℃である、請求項６１に記載の方法。
【請求項66】
前記ステップ（３－３）の前記第１１の有機溶媒が、ジクロロメタン、トリクロロメタン、四塩化炭素及びトルエンから選択され、好ましくは、前記ステップ（３－３）の前記第１１の有機溶媒はジクロロメタンである、請求項６１に記載の方法。
【請求項67】
前記ステップ（３－１）の前記化合物４と前記ステップ（３－３）の前記第１１の有機溶媒と前記精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：７：１０であり、好ましくは、前記ステップ（３－１）の前記化合物４と前記ステップ（３－３）の前記第１１の有機溶媒と前記精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：５～１０：５～１５であり、より好ましくは、前記ステップ（３－１）の前記化合物４と前記ステップ（３－３）の前記第１１の有機溶媒と前記精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：６～８：９～１２である、請求項６１に記載の方法。
【請求項68】
前記ステップ（３－４）の前記クロマトグラフィー精製で使用されるシリカゲルは２００～３００メッシュのシリカゲルであり、前記溶出系は体積比（Ｖ／Ｖ）＝１０～２０：１のトルエン：メタノールであり、好ましくは、前記溶出系は、最初に、体積比（Ｖ／Ｖ）＝約２０：１のトルエン：メタノールであり、ＴＬＣで生成物のみが視認されることが検出された時点で前記溶出系が体積比（Ｖ／Ｖ）＝約１０：１のトルエン：メタノールに変更される、請求項６１に記載の方法。
【請求項69】
前記ＴＬＣ検出の展開剤が、体積比（Ｖ／Ｖ）＝約５：１のトルエン：メタノールである、請求項６１に記載の方法。
【請求項70】
前記ステップ（３－５）の前記第１２の有機溶媒は、メタノール、トルエン及びアセトニトリルから選択され、好ましくは、前記ステップ（３－５）の前記第１２の有機溶媒はメタノールである、請求項６１に記載の方法。
【請求項71】
前記ステップ（３－１）の前記化合物４と前記ステップ（３－５）の前記第１２の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）が約１：３～１０である、請求項６１に記載の方法。
【請求項72】
前記ステップ（３－５）のプロセスを１～５回繰り返すことができる、請求項６１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、化合物合成の技術分野に関し、詳細には、モノメチルオーリスタチンＥ化合物（すなわち、ＭＭＡＥ）の調製及び精製プロセスに関する。
【背景技術】
【0002】
オーリスタチンの完全合成誘導体であるＭＭＡＥ（モノメチルオーリスタチンＥ、メチルオーリスタチンＥとしても知られる）は、チューブリン重合を阻害することで有糸分裂を効果的に阻害することができ、がんを治療するための抗体薬物複合体を合成するための細胞毒性成分（つまり薬物部分）として広く使用されている。
【0003】
抗体薬物複合体（ＡＤＣ）は抗腫瘍薬の一種であり、抗体、リンカー、及び薬物の３つの成分が含まれている。その原理は、抗体の選択的ターゲティング能力と薬物部分の細胞傷害効果が組み合わされることで、腫瘍細胞の表面上の抗原が抗体のターゲティング特異性によって特異的に認識され、細胞への侵入が細胞のエンドサイトーシスによって達成され、薬物部分が細胞内のプロテアーゼによって放出されることにより、非標的組織の殺滅を回避しつつ腫瘍細胞を殺滅するという目的が達成されるというものである。
【0004】
現在、多数の天然及び化学合成された細胞毒が存在することが知られているが、ＡＤＣに適用できる薬物構造はごく一部のみである。これは主として、ＡＤＣのロードとして使用できる毒素が、高い細胞毒性能及び小さな分子量といった複雑な特性を備える必要があることによる。そのため、オーリスタチン化合物（ＭＭＡＥなど）がＡＤＣの分野で強く求められている。現在、市販されている多くのＡＤＣ薬の抗体のリンカー毒素構造は、Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥである。しかし、ＭＭＡＥの現在の市場価格は非常に高価である。その主な理由は、現在の合成と精製プロセスがまだ未成熟であり、多くの薬物の合成プロセスが複雑で、精製プロセスが未成熟であるため、最終生成物の収率が低く、純度が低く、不純物（特に単一不純物）の含有量が高いことが挙げられる。臨床医薬品の安全性を担保するには、臨床用途で使用される医薬品の純度が極めて高く、不純物が極めて少ないことが必要であるが、現在のプロセスの多くは臨床医薬品の標準要件を満たすことができず、そのことも市販のＭＭＡＥの価格が高価となる主な理由の１つとなっている。
【発明の概要】
【0005】
本発明は、臨床薬剤の品質要件を十分に満たすことができる、極めて高純度のＭＭＡＥ（構造式を式Ｉに示す）を得ることが可能な調製及び精製プロセスを提供する。
【化1】
【0006】
本方法の調製経路は以下のとおりである。
【化2】
【0007】
本方法は以下のステップを含む。
（１）化合物１を適量の第１の有機溶媒に溶解して溶液Ａを形成するステップと、
（２）溶液Ａに十分量のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液を加えて絶縁反応を行い、Ｂｏｃ保護基を除去するステップと、
（３）反応の終了後、ステップ（２）の反応溶液を十分量の第１の低極性溶媒に注ぎ、撹拌後に濾液を捨てるステップであって、乾燥後の固体残渣が化合物２である、ステップと、
（４）得られた化合物２及び適量の化合物３を第２の有機溶媒に溶解して溶液Ｂを形成するステップと、
（５）第１のポリペプチド濃縮剤を適量の第３の有機溶媒に溶解して溶液Ｃを形成するステップであって、第１のポリペプチド濃縮剤のモル数が、ステップ（４）の化合物３のモル数よりも大きい、ステップと、
（６）溶液Ｃを溶液Ｂに加えて溶液Ｄを形成するステップと、
（７）溶液Ｄに適量の第１の有機塩基を加えて絶縁反応を行うステップと、
（８）ステップ（７）の反応終了後、ステップ（７）の反応系に十分量の第２の低極性溶媒及び精製水を加えて抽出し、有機相を回収するステップと、
（９）ステップ（８）で回収した有機相を適量の塩酸溶液、精製水、及び塩化ナトリウム溶液で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、乾燥して化合物４を得るステップと、
（１０）化合物４を第４の有機溶媒に溶解して溶液Ｅを形成するステップと、
（１１）溶液Ｅに十分量のジエチルアミンを加えて絶縁反応を行い、Ｆｍｏｃ保護基を除去するステップと、
（１２）反応の終了後、ステップ（１１）の反応系に適量の第５の有機溶媒及び精製水を加えて抽出し、有機相を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮するステップと、
（１３）ステップ（１２）で得られた減圧濃縮物にトルエン：メタノールの溶出系によるクロマトグラフィーで精製を行い、回収した溶出液を減圧下で濃縮するステップと、
（１４）ステップ（１３）で得られた減圧濃縮生成物を第６の有機溶媒で溶解した後、濾過し、濾液を減圧下で濃縮するステップと、
（１５）ステップ（１４）で得られた減圧濃縮生成物を真空乾燥してＭＭＡＥを得るステップ。
（１）化合物１を適量の第１の有機溶媒に溶解して溶液Ａを形成するステップと、
（２）溶液Ａに十分量のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液を加えて絶縁反応を行い、Ｂｏｃ保護基を除去するステップと、
（３）反応の終了後、ステップ（２）の反応溶液を十分量の第１の低極性溶媒に注ぎ、撹拌後に濾液を捨てるステップであって、乾燥後の固体残渣が化合物２である、ステップと、
（４）得られた化合物２及び適量の化合物３を第２の有機溶媒に溶解して溶液Ｂを形成するステップと、
（５）第１のポリペプチド濃縮剤を適量の第３の有機溶媒に溶解して溶液Ｃを形成するステップであって、第１のポリペプチド濃縮剤のモル数が、ステップ（４）の化合物３のモル数よりも大きい、ステップと、
（６）溶液Ｃを溶液Ｂに加えて溶液Ｄを形成するステップと、
（７）溶液Ｄに適量の第１の有機塩基を加えて絶縁反応を行うステップと、
（８）ステップ（７）の反応終了後、ステップ（７）の反応系に十分量の第２の低極性溶媒及び精製水を加えて抽出し、有機相を回収するステップと、
（９）ステップ（８）で回収した有機相を適量の塩酸溶液、精製水、及び塩化ナトリウム溶液で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、乾燥して化合物４を得るステップと、
（１０）化合物４を第４の有機溶媒に溶解して溶液Ｅを形成するステップと、
（１１）溶液Ｅに十分量のジエチルアミンを加えて絶縁反応を行い、Ｆｍｏｃ保護基を除去するステップと、
（１２）反応の終了後、ステップ（１１）の反応系に適量の第５の有機溶媒及び精製水を加えて抽出し、有機相を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮するステップと、
（１３）ステップ（１２）で得られた減圧濃縮物にトルエン：メタノールの溶出系によるクロマトグラフィーで精製を行い、回収した溶出液を減圧下で濃縮するステップと、
（１４）ステップ（１３）で得られた減圧濃縮生成物を第６の有機溶媒で溶解した後、濾過し、濾液を減圧下で濃縮するステップと、
（１５）ステップ（１４）で得られた減圧濃縮生成物を真空乾燥してＭＭＡＥを得るステップ。
【0008】
さらに、ステップ１の第１の有機溶媒は、ジクロロメタン、トリクロロメタン、及び四塩化炭素から選択され、好ましくは、ステップ１の第１の有機溶媒はジクロロメタンである。
【0009】
さらに、ステップ１の化合物１と第１の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：２であり、好ましくは、ステップ１の化合物１と第１の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：１～３であり、より好ましくは、ステップ１の化合物１と第１の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：１．５～２．５である。
【0010】
さらに、ステップ（２）のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液の濃度は約４ｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、ステップ（２）のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液の濃度は約３～７ｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、ステップ（２）のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液の濃度は３．５～４．５ｍｏｌ／Ｌである。
【0011】
さらに、ステップ１の化合物１とステップ（２）のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：６であり、好ましくは、ステップ１の化合物１とステップ（２）のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：４～８であり、より好ましくは、ステップ１の化合物１とステップ（２）のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：５～７であり、より好ましくは、ステップ１の化合物１とステップ（２）のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：６である。
【0012】
さらに、ステップ（２）のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液は滴下され、反応系の内温は滴下中に－５～５℃に維持される。
【0013】
さらに、ステップ（２）の絶縁反応の温度は１０～１５℃である。
【0014】
さらに、ステップ（３）の第１の低極性溶媒は、ｎ－ヘキサン、石油エーテル、及びｎ－ヘプタンから選択され、好ましくは、第１の低極性溶媒はｎ－ヘキサンから選択される。
【0015】
さらに、ステップ１の化合物１とステップ（３）の第１の低極性溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：１６であり、好ましくは、ステップ１の化合物１とステップ（３）の第１の低極性溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：１０～２５であり、より好ましくは、ステップ１の化合物１とステップ（３）の第１の低極性溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：１２～２０であり、より好ましくは、ステップ１の化合物１とステップ（３）の第１の低極性溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：１５～１７である。
【0016】
さらに、ステップ（４）の第２の有機溶媒は、ＤＭＦ、ＤＭＡ、ＤＭＳＯ、及びＤＣＭから選択され、好ましくは、第２の有機溶媒はＤＭＦであり、さらに好ましくは、ステップ（４）において、化合物２と化合物３のモル量は同じである。
【0017】
さらに、ステップ（４）の化合物３と第２の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：６であり、好ましくは、ステップ（４）の化合物３と第２の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：５～１０であり、より好ましくは、ステップ（４）の化合物３と第２の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍｐ）は１：５～８であり、さらにより好ましくは、ステップ（４）の化合物３と第２の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：６～７である。
【0018】
さらに、ステップ（５）の第１のポリペプチド濃縮剤は、ＨＡＴＵ、ＤＩＣ、ＤＣＣ、ＥＤＣ、ＨＣＴＵ、ＤＥＰＢＴ、ＥＥＤＱ及びＣＤＩから選択され、好ましくは、ステップ（５）の第１のポリペプチド濃縮剤はＨＡＴＵである。
【0019】
さらに、ステップ（４）の化合物３とステップ（５）の第１のポリペプチド濃縮剤とのモル比は約１：１．２であり、好ましくは、ステップ（４）の化合物３とステップ（５）の第１のポリペプチド濃縮剤とのモル比は１：１．０１～１．５であり、より好ましくは、ステップ（４）の化合物３とステップ（５）の第１のポリペプチド濃縮剤とのモル比は１：１．１～１．４であり、さらにより好ましくは、ステップ（４）の化合物３とステップ（５）の第１のポリペプチド濃縮剤とのモル比は１：１．２～１．３である。
【0020】
さらに、ステップ（５）の第３の有機溶媒は、ＤＭＦ、ＤＭＡ、ＤＭＳＯ、及びＤＣＭから選択され、好ましくは、第３の有機溶媒はＤＭＦである。
【0021】
さらに、ステップ（４）の化合物３とステップ（５）の第３の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：３であり、好ましくは、ステップ（４）の化合物３とステップ（５）の第３の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：２～６であり、より好ましくは、ステップ（４）の化合物３とステップ（５）の第３の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：２．５～４であり、より好ましくは、ステップ（４）の化合物３とステップ（５）の第３の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：３～４である。
【0022】
さらに、ステップ（６）において、溶液Ｃは溶液Ｂに滴下され、滴下中の反応系全体の内温は０～５℃である。
【0023】
さらに、ステップ（７）の第１の有機塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、及びピリジンから選択される１つ以上であり、好ましくは、ステップ（７）の第１の有機塩基はＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンである。
【0024】
さらに、ステップ（４）の化合物３とステップ（７）の第１の有機塩基とのモル比は約１：３であり、好ましくは、ステップ（４）の化合物３とステップ（７）の第１の有機塩基とのモル比は１：２～５であり、より好ましくは、ステップ（４）の化合物３とステップ（７）の第１の有機塩基とのモル比は１：２．５～４であり、さらにより好ましくは、ステップ（４）の化合物３とステップ（７）の第１の有機塩基とのモル比は１：３～４である。
【0025】
さらに、ステップ（７）の第１の有機塩基は溶液Ｄに滴下され、絶縁反応の温度が０～５℃である。
【0026】
さらに、ステップ（８）の第２の低極性溶媒は、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、酢酸エチル、ジクロロメタン、及びテトラヒドロフランから選択され、好ましくは、ステップ（８）の第２の低極性溶媒はメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルである。
【0027】
さらに、ステップ（４）の化合物３とステップ（８）の第２の低極性溶媒と精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：２０．２：２０．２であり、好ましくは、ステップ（４）の化合物３とステップ（８）の第２の低極性溶媒と精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：１５～２５：１５～２５であり、より好ましくは、ステップ（４）の化合物３とステップ（８）の第２の低極性溶媒と精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：２０～２４：２０～２４であり、より好ましくは、ステップ（４）の化合物３とステップ（８）の第２の低極性溶媒と精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：２０～２１：２０～２１である。
【0028】
さらに、ステップ（８）の第２の低極性溶媒と精製水の体積は同じである。
【0029】
さらに、ステップ（９）の塩酸溶液の濃度は約０．０５ｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、ステップ（９）の塩酸溶液の濃度は０．０２～０．０８ｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、ステップ（９）の塩酸溶液の濃度は０．０４～０．０６ｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、ステップ（９）の塩酸溶液の濃度は０．０５ｍｏｌ／Ｌである。
【0030】
さらに、ステップ（９）の塩化ナトリウム溶液の濃度は約３０％であり、好ましくは、ステップ（９）の塩化ナトリウム溶液の濃度は２０％～４０％である。
【0031】
さらに、ステップ（９）の塩酸溶液、精製水及び塩化ナトリウム溶液の体積は、ステップ（８）の第２の低極性溶媒の体積と等しい。
【0032】
さらに、ステップ（１０）の第４の有機溶媒は、ジクロロメタン、アセトニトリル、トリクロロメタン及び四塩化炭素から選択され、好ましくは、ステップ（１０）の第４の有機溶媒はジクロロメタンである。
【0033】
さらに、ステップ（１０）の化合物４と第４の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：７であり、好ましくは、ステップ（１０）の化合物４と第４の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：４～１０であり、より好ましくは、ステップ（１０）の化合物４と第４の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：５～８である。
【0034】
さらに、ステップ（１０）の化合物４とステップ（１１）のジエチルアミンとの重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：３．５であり、好ましくは、ステップ（１０）の化合物４とステップ（１１）のジエチルアミンとの重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：３～５であり、より好ましくは、ステップ（１０）の化合物４とステップ（１１）のジエチルアミンの重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：３～４である。
【0035】
さらに、ステップ（１１）のジエチルアミンは溶液Ｅに滴下され、滴下プロセス中、溶液の内温は０℃～５℃に維持され、ステップ（１１）の絶縁反応の温度は２０～３０℃である。
【0036】
さらに、ステップ（１２）の第５の有機溶媒は、ジクロロメタン、トリクロロメタン、四塩化炭素及びトルエンから選択され、好ましくは、ステップ（１２）の第５の有機溶媒はジクロロメタンである。
【0037】
さらに、ステップ（１０）の化合物４とステップ（１２）の第５の有機溶媒と精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：７：１０であり、好ましくは、ステップ（１０）の化合物４とステップ（１２）の第５の有機溶媒と精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：５～１０：５～１５であり、より好ましくは、ステップ（１０）の化合物４とステップ（１２）の第５の有機溶媒と精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：６～８：９～１２である。
【0038】
さらに、ステップ（１３）のクロマトグラフィー精製で使用されるシリカゲルは２００～３００メッシュのシリカゲルであり、溶出系は体積比（Ｖ／Ｖ）＝１０～２０：１のトルエン：メタノールであり、好ましくは、溶出系は、最初に、体積比（Ｖ／Ｖ）＝約２０：１のトルエン：メタノールである。ＴＬＣで生成物のみ（例えば、生成物のスポットのみ）が視認されることが検出された時点で溶出系は体積比（Ｖ／Ｖ）＝約１０：１のトルエン：メタノールに変更される。無論、溶出系は置換されなくともよく、ここで溶出系を置換する目的は、生成物をより速やかに溶出させ、製造プロセスの時間及びコストを削減することにある。
【0039】
ＴＬＣ検出の展開剤は、体積比（Ｖ／Ｖ）＝約５：１のトルエン：メタノールである。
【0040】
さらに、ステップ（１４）の第６の有機溶媒は、メタノール、トルエン及びアセトニトリルから選択され、好ましくは、ステップ（１４）の第６の有機溶媒はメタノールである。
【0041】
さらに、ステップ（１０）の化合物４とステップ（１４）の第６の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：３～１０である。
【0042】
さらに、ステップ（１４）のプロセスは１～５回繰り返してもよい。
【0043】
本発明はまた、以下の式で示される化合物の調製及び精製方法も提供する。
【化3】
【0044】
本方法の調製経路は以下のとおりである。
【化4】
【0045】
本方法は以下のステップを含む。
（１－１）化合物１を適量の第７の有機溶媒に溶解して溶液Ｆを形成するステップと、
（１－２）溶液Ｆに十分量のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液を加えて絶縁反応を行い、Ｂｏｃ保護基を除去するステップと、
（１－３）反応の終了後、ステップ（１－２）の反応溶液を十分量の第３の低極性溶媒に注ぎ、撹拌後に濾液を捨てるステップであって、乾燥後の固体残渣が化合物２である、ステップ。
（１－１）化合物１を適量の第７の有機溶媒に溶解して溶液Ｆを形成するステップと、
（１－２）溶液Ｆに十分量のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液を加えて絶縁反応を行い、Ｂｏｃ保護基を除去するステップと、
（１－３）反応の終了後、ステップ（１－２）の反応溶液を十分量の第３の低極性溶媒に注ぎ、撹拌後に濾液を捨てるステップであって、乾燥後の固体残渣が化合物２である、ステップ。
【0046】
さらに、ステップ（１－１）の第７の有機溶媒は、ジクロロメタン、トリクロロメタン、及び四塩化炭素から選択され、好ましくは、ステップ（１－１）の第１の有機溶媒はジクロロメタンである。
【0047】
さらに、ステップ（１－１）の化合物１と第７の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：２であり、好ましくは、ステップ（１－１）の化合物１と第７の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：１～３であり、より好ましくは、ステップ（１－１）の化合物１と第７の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：１．５～２．５である。
【0048】
さらに、ステップ（１－２）のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液の濃度は約４ｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、ステップ（１－２）のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液の濃度は約３～７ｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、ステップ（１－２）のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液の濃度は３．５～４．５ｍｏｌ／Ｌである。
【0049】
さらに、ステップ（１－１）の化合物１とステップ（１－２）のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：６であり、好ましくは、ステップ（１－１）の化合物１とステップ（１－２）のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：４～８であり、より好ましくは、ステップ（１－１）の化合物１とステップ（１－２）のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：５～７であり、さらにより好ましくは、ステップ（１－１）の化合物１とステップ（１－２）のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：６である。
【0050】
さらに、ステップ（１－２）のＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液は滴下され、反応系の内温は滴下中に－５～５℃に維持される。
【0051】
さらに、ステップ（１－２）の絶縁反応の温度は１０～１５℃である。
【0052】
さらに、ステップ（１－３）の第３の低極性溶媒は、ｎ－ヘキサン、石油エーテル、及びｎ－ヘプタンから選択され、好ましくは、ステップ（１－３）の第３の低極性溶媒はｎ－ヘキサンから選択される。
【0053】
さらに、ステップ（１－３）の第３の低極性溶媒に対するステップ（１－１）の化合物１は約１：１６であり、好ましくは、ステップ（１－１）の化合物１とステップ（１－３）の第３の低極性溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：１０～２５であり、より好ましくは、ステップ（１－１）の化合物１とステップ（１－３）の第３の低極性溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：１２～２０であり、より好ましくは、ステップ（１－１）の化合物１とステップ（１－３）の第３の低極性溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：１５～１７である。
【0054】
本発明はまた、以下の式で示される化合物の調製及び精製方法も提供する。
【化5】
【0055】
本方法の調製経路は以下のとおりである。
【化6】
【0056】
本方法は以下のステップを含む。
（２－１）化合物２及び適量の化合物３を第８の有機溶媒に溶解して溶液Ｇを形成するステップと、
（２－２）第２のポリペプチド濃縮剤を適量の第９の有機溶媒に溶解して溶液Ｈを形成するステップであって、第２のポリペプチド濃縮剤のモル数が、ステップ（２－１）の化合物３のモル数よりも大きい、ステップと、
（２－３）溶液Ｈを溶液Ｇに加えて溶液Ｉを形成するステップと、
（２－４）溶液Ｉに適量の第２の有機塩基を加えて絶縁反応を行うステップと、
（２－５）反応の終了後、ステップ（２－４）の反応系に十分量の第４の低極性溶媒及び精製水を加えて抽出し、有機相を回収するステップと、
（２－６）ステップ（２－５）で回収した有機相を適量の塩酸溶液、精製水、及び塩化ナトリウム溶液で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、乾燥して化合物４を得るステップ。
（２－１）化合物２及び適量の化合物３を第８の有機溶媒に溶解して溶液Ｇを形成するステップと、
（２－２）第２のポリペプチド濃縮剤を適量の第９の有機溶媒に溶解して溶液Ｈを形成するステップであって、第２のポリペプチド濃縮剤のモル数が、ステップ（２－１）の化合物３のモル数よりも大きい、ステップと、
（２－３）溶液Ｈを溶液Ｇに加えて溶液Ｉを形成するステップと、
（２－４）溶液Ｉに適量の第２の有機塩基を加えて絶縁反応を行うステップと、
（２－５）反応の終了後、ステップ（２－４）の反応系に十分量の第４の低極性溶媒及び精製水を加えて抽出し、有機相を回収するステップと、
（２－６）ステップ（２－５）で回収した有機相を適量の塩酸溶液、精製水、及び塩化ナトリウム溶液で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮し、乾燥して化合物４を得るステップ。
【0057】
さらに、ステップ（２－１）の第８の有機溶媒は、ＤＭＦ、ＤＭＡ、ＤＭＳＯ、及びＤＣＭから選択され、好ましくは、第８の有機溶媒はＤＭＦである。
【0058】
さらに、ステップ（２－１）の化合物３と第８の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：６であり、好ましくは、ステップ（２－１）の化合物３と第８の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：５～１０であり、より好ましくは、ステップ（２－１）の化合物３と第８の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍｐ）は１：５～８であり、より好ましくは、ステップ（２－１）の化合物３と第８の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：６～７である。
【0059】
さらに、ステップ（２－２）の第２のポリペプチド濃縮剤は、ＨＡＴＵ、ＤＩＣ、ＤＣＣ、ＥＤＣ、ＨＣＴＵ、ＤＥＰＢＴ、ＥＥＤＱ及びＣＤＩから選択され、好ましくは、ステップ（２－２）の第２のポリペプチド濃縮剤はＨＡＴＵである。
【0060】
さらに、ステップ（２－１）の化合物３とステップ（２－２）の第２のポリペプチド濃縮剤とのモル比は約１：１．２であり、好ましくは、ステップ（２－１）の化合物３とステップ（２－２）の第２のポリペプチド濃縮剤とのモル比は１：１．０１～１．５であり、より好ましくは、ステップ（２－１）の化合物３とステップ（２－２）の第２のポリペプチド濃縮剤とのモル比は１：１．１～１．４であり、さらにより好ましくは、ステップ（２－１）の化合物３とステップ（２－２）の第２のポリペプチド濃縮剤とのモル比は１：１．２～１．３である。
【0061】
さらに、ステップ（２－２）の第９の有機溶媒は、ＤＭＦ、ＤＭＡ、ＤＭＳＯ、及びＤＣＭから選択され、好ましくは、第９の有機溶媒はＤＭＦである。
【0062】
さらに、ステップ（２－１）の化合物３とステップ（２－２）の第９の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：３であり、好ましくは、ステップ（２－１）の化合物３とステップ（２－２）の第９の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：２～６であり、より好ましくは、ステップ（２－１）の化合物３とステップ（２－２）の第９の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：２．５～４であり、さらにより好ましくは、ステップ（２－１）の化合物３とステップ（２－２）の第９の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：３～４である。
【0063】
さらに、ステップ（２－３）において、溶液Ｈは溶液Ｇに滴下され、滴下中の反応系全体の内温は０～５℃である。
【0064】
さらに、ステップ（２－４）の第２の有機塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、及びピリジンから選択される１つ以上であり、好ましくは、ステップ（２－４）の第２の有機塩基はＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンである。
【0065】
さらに、ステップ（２－１）の化合物３とステップ（２－４）の第２の有機塩基とのモル比は約１：３であり、好ましくは、ステップ（２－１）の化合物３とステップ（２－４）の第２の有機塩基とのモル比は１：２～５であり、より好ましくは、ステップ（２－１）の化合物３とステップ（２－４）の第２の有機塩基とのモル比は１：２．５～４であり、さらにより好ましくは、ステップ（２－１）の化合物３とステップ（２－４）の第２の有機塩基とのモル比は１：３～４である。
【0066】
さらに、ステップ（２－４）において、第２の有機塩基が溶液Ｉに滴下され、絶縁反応の温度が０～５℃である。
【0067】
さらに、ステップ（２－５）の第４の低極性溶媒は、メチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル、酢酸エチル、ジクロロメタン、及びテトラヒドロフランから選択され、好ましくは、ステップ（２－５）の第２の低極性溶媒はメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルである。
【0068】
さらに、ステップ（２－１）の化合物３とステップ（２－５）の第４の低極性溶媒と精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：２０．２：２０．２であり、好ましくは、ステップ（２－１）の化合物３とステップ（２－５）の第４の低極性溶媒と精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：１５～２５：１５～２５であり、より好ましくは、ステップ（２－１）の化合物３とステップ（２－５）の第４の低極性溶媒と精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：２０～２４：２０～２４であり、より好ましくは、ステップ（２－１）の化合物３とステップ（２－５）の第４の低極性溶媒と精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：２０～２１：２０～２１である。
【0069】
さらに、ステップ（２－５）の第４の低極性溶媒と精製水の体積は同じである。
【0070】
さらに、ステップ（２－６）の塩酸溶液の濃度は約０．０５ｍｏｌ／Ｌであり、好ましくは、ステップ（２－６）の塩酸溶液の濃度は０．０２～０．０８ｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、ステップ（２－６）の塩酸溶液の濃度は０．０４～０．０６ｍｏｌ／Ｌであり、より好ましくは、ステップ（２－６）の塩酸溶液の濃度は０．０５ｍｏｌ／Ｌである。
【0071】
本発明はまた、式（Ｉ）に示される化合物の調製及び精製方法も提供する。
【化7】
【0072】
本方法の調製経路は以下のとおりである。
【化8】
【0073】
本方法は以下のステップを含む。
（３－１）化合物４を第１０の有機溶媒に溶解して溶液Ｊを形成するステップと、
（３－２）溶液Ｊに十分量のジエチルアミンを加えて絶縁反応を行い、Ｆｍｏｃ保護基を除去するステップと、
（３－３）反応の終了後、ステップ（３－２）の反応系に適量の第１１の有機溶媒及び精製水を加えて抽出し、有機相を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮するステップと、
（３－４）ステップ（３－３）で得られた減圧濃縮物にトルエン：メタノールの溶出系によるクロマトグラフィーで精製を行い、回収した溶出液を減圧下で濃縮するステップと、
（３－５）ステップ（３－４）で得られた減圧濃縮生成物を第１２の有機溶媒で溶解した後、濾過し、濾液を減圧下で濃縮するステップと、
（３－６）ステップ（３－５）で得られた減圧濃縮生成物を真空乾燥してＭＭＡＥを得るステップ。
（３－１）化合物４を第１０の有機溶媒に溶解して溶液Ｊを形成するステップと、
（３－２）溶液Ｊに十分量のジエチルアミンを加えて絶縁反応を行い、Ｆｍｏｃ保護基を除去するステップと、
（３－３）反応の終了後、ステップ（３－２）の反応系に適量の第１１の有機溶媒及び精製水を加えて抽出し、有機相を回収し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮するステップと、
（３－４）ステップ（３－３）で得られた減圧濃縮物にトルエン：メタノールの溶出系によるクロマトグラフィーで精製を行い、回収した溶出液を減圧下で濃縮するステップと、
（３－５）ステップ（３－４）で得られた減圧濃縮生成物を第１２の有機溶媒で溶解した後、濾過し、濾液を減圧下で濃縮するステップと、
（３－６）ステップ（３－５）で得られた減圧濃縮生成物を真空乾燥してＭＭＡＥを得るステップ。
【0074】
さらに、ステップ（３－１）の第１０の有機溶媒は、ジクロロメタン、アセトニトリル、トリクロロメタン及び四塩化炭素から選択され、好ましくは、ステップ（３－１）の第１０の有機溶媒はジクロロメタンである。
【0075】
さらに、ステップ（３－１）の化合物４と第１０の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：７であり、好ましくは、ステップ（３－１）の化合物４と第１０の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：４～１０であり、より好ましくは、ステップ（３－１）の化合物４と第１０の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：５～８である。
【0076】
さらに、ステップ（３－１）の化合物４とステップ（３－２）のジエチルアミンとの重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：３．５であり、好ましくは、ステップ（３－１）の化合物４とステップ（３－２）のジエチルアミンとの重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：３～５であり、より好ましくは、ステップ（３－１）の化合物４とステップ（３－２）のジエチルアミンの重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：３～４である。
【0077】
さらに、ステップ（３－２）のジエチルアミンは滴下され、滴下プロセス中、内温は０℃～５℃に維持され、ステップ（３－２）の絶縁反応の温度は２０～３０℃である。
【0078】
さらに、ステップ（３－３）の第１１の有機溶媒は、ジクロロメタン、トリクロロメタン、四塩化炭素及びトルエンから選択され、好ましくは、ステップ（３－３）の第１１の有機溶媒はジクロロメタンである。
【0079】
さらに、ステップ（３－１）の化合物４とステップ（３－３）の第１１の有機溶媒と精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：７：１０であり、好ましくは、ステップ（３－１）の化合物４とステップ（３－３）の第１１の有機溶媒と精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：５～１０：５～１５であり、より好ましくは、ステップ（３－１）の化合物４とステップ（３－３）の第１１の有機溶媒と精製水との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は１：６～８：９～１２である。
【0080】
さらに、ステップ（３－４）のクロマトグラフィー精製で使用されるシリカゲルは２００～３００メッシュのシリカゲルであり、溶出系は体積比（Ｖ／Ｖ）＝１０～２０：１のトルエン：メタノールであり、好ましくは、溶出系は、最初に、体積比（Ｖ／Ｖ）＝約２０：１のトルエン：メタノールであり、ＴＬＣで生成物のみが視認されることが検出された時点で溶出系は体積比（Ｖ／Ｖ）＝約１０：１のトルエン：メタノールに変更される。
【0081】
ＴＬＣ検出の展開剤は、体積比（Ｖ／Ｖ）＝約５：１のトルエン：メタノールである。
【0082】
さらに、ステップ（３－５）の第１２の有機溶媒は、メタノール、トルエン及びアセトニトリルから選択され、好ましくは、ステップ（３－５）の第１２の有機溶媒はメタノールである。
【0083】
さらに、ステップ（３－１）の化合物４とステップ（３－５）の第１２の有機溶媒との重量体積比（ｇ／ｍＬ）は約１：３～１０である。
【0084】
さらに、ステップ（３－５）のプロセスは１～５回繰り返してもよい。
【0085】
本発明によって提供されるＭＭＡＥの調製及び精製プロセスは、穏やかな合成及び精製条件を有し、過度の高温によって引き起こされる生成物のキラリティーの変化を効果的に防止することができ、分解不純物の生成を大幅に減少させ、生成物の純度を向上させ、生成物の収率を高める。さらに、本発明によって提供される調製及び精製プロセスは、良好な安定性を有し、スケールアップ生産により適している。本発明によって提供される調製及び精製プロセスによって調製されるＭＭＡＥは、９９％を超える純度を有し、臨床薬剤の要件を完全に満たすことができる。
【図面の簡単な説明】
【0086】
【発明を実施するための形態】
【0087】
本発明の技術的解決策の非限定的な詳細を、特定の実施形態に関連して以下にさらに説明する。以下の実施形態は、あくまで本発明の技術的概念及び特徴を説明するためのものに過ぎず、当業者に本発明の内容を理解させしめ、それに応じて本発明を実施可能ならしめることを目的としたものであり、本発明の保護範囲の限定するものではない点は指摘されなければならない。本発明の趣旨に従って行われた同等の変更または改変はすべて、本発明の保護範囲内に含まれるものとする。
【実施例】
【0088】
実施例１ 化合物２の調製及び精製
【化9】
【0089】
１１５．０５ｇの化合物１（２７３．５８ｍｍｏｌ）及び２３０ｍＬのジクロロメタン（Ｖジクロロメタン／Ｗ化合物１＝２．０）を反応フラスコに加えた。内温を０～５℃に制御し、４ｍｏｌ／ＬのＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液６９０ｍＬ（Ｖ４ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌ－１，４－ジオキサン溶液／Ｗ化合物１＝６．０）を滴下して加えた。滴下後、温度を１０℃に昇温し、温度を１０～１５℃に１時間維持して反応させた。超高速液体クロマトグラフィーでサンプリングして反応をモニタリングした後、０．５時間ごとにＵＰＬＣでサンプリングして反応をモニタリングし、試料を採取して化合物１の残存量を検出した。化合物１の残存量が１．０％未満となった時点で、反応が終了したとみなした。
【0090】
反応終了後、上記反応溶液を、１８４０ｍＬのｎ－ヘキサン（Ｖｎ－ヘキサン／Ｗ化合物１＝１６．０）が入った反応フラスコに撹拌下、ゆっくりと注ぎ入れた（ｎ－ヘキサンは、予め０～５℃に冷却しておいてもよい）。撹拌を３０分間継続し、上清をデカントした。反応フラスコ内の固体をダイヤフラム真空ポンプを用いて３０～３５℃で１±０．５時間、真空乾燥した。オイルポンプを用いて室温（１８～２６℃）で１２時間以上真空乾燥を継続して、重量が変化しなくなった時点で化合物２（収率１１９％、純度９５．４％、最大単一不純物１．４％）を得た。そのクロマトグラムを図１に示す。
【0091】
実施例２ 化合物４の調製及び精製
１１４．１７ｇの化合物２（３０１．５２ｍｍｏｌ）、１９２．３１ｇの化合物３（３０１．５２ｍｍｏｌ）及び１１６０ｍＬのＤＭＦ（化合物３のＶＤＭＦ／Ｗ＝６．０）を反応フラスコに順次加え、さらに１３９．０４ｇのＨＡＴＵ（３６５．６７ｍｍｏｌ）を５８０ｍＬのＤＭＦに溶解して（ＶＤＭＦ／Ｗ化合物３＝３．０）、ＨＡＴＵのＤＭＦ溶液を形成した。内温を０～５℃に制御し、化合物２及び化合物３のＤＭＦ溶液にＨＡＴＵのＤＭＦ溶液を滴下した。滴下終了後、内温を０～５℃で２０±２分間制御した。次いで、内温を０～５℃に制御しながら、１１８．０７ｇのＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（９１３．５０ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下後、温度を０～５℃に保って１時間反応させた。ＵＰＬＣで反応をモニタリングするためのサンプリングを行った後、０．５時間ごとにサンプリングを行って化合物３の残存量を検出した。化合物３の残存量が６．０％未満になった時点で、反応が終了したとみなした。
【化10】
１１４．１７ｇの化合物２（３０１．５２ｍｍｏｌ）、１９２．３１ｇの化合物３（３０１．５２ｍｍｏｌ）及び１１６０ｍＬのＤＭＦ（化合物３のＶＤＭＦ／Ｗ＝６．０）を反応フラスコに順次加え、さらに１３９．０４ｇのＨＡＴＵ（３６５．６７ｍｍｏｌ）を５８０ｍＬのＤＭＦに溶解して（ＶＤＭＦ／Ｗ化合物３＝３．０）、ＨＡＴＵのＤＭＦ溶液を形成した。内温を０～５℃に制御し、化合物２及び化合物３のＤＭＦ溶液にＨＡＴＵのＤＭＦ溶液を滴下した。滴下終了後、内温を０～５℃で２０±２分間制御した。次いで、内温を０～５℃に制御しながら、１１８．０７ｇのＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（９１３．５０ｍｍｏｌ）を滴下し、滴下後、温度を０～５℃に保って１時間反応させた。ＵＰＬＣで反応をモニタリングするためのサンプリングを行った後、０．５時間ごとにサンプリングを行って化合物３の残存量を検出した。化合物３の残存量が６．０％未満になった時点で、反応が終了したとみなした。
【0092】
反応終了後、反応溶液を３０Ｌのガラス反応器に移し、３９００ｍＬのメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル及び３９００ｍＬの精製水（予め０℃に冷却）を順次加えて抽出し、有機相を分離した。水相を３９００ｍＬのメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルでさらに２回抽出した。有機相を合わせた。
【0093】
上記有機相を０．０５ｍｏｌ／Ｌの塩酸溶液３９００ｍＬ（予め０℃に冷却）で洗浄し、有機相を回収した。有機相を３９００ｍＬの精製水（Ｖ精製水／Ｗ化合物３＝２０．２）（予め０℃に冷却）で洗浄し、有機相を回収した。次いで、有機相を３９００ｍＬの３０％塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、有機相を回収した。次いで、有機相を撹拌し、３８８．４８ｇの無水硫酸ナトリウムで０．５時間乾燥させた。乾燥剤を濾去し、フィルターケーキを１９５０ｍＬのメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテルで洗浄し、濾液を合わせた後、減圧下３０～３５℃で濃縮して発泡させた。オイルポンプを少なくとも１時間真空乾燥させ、重量が変化しなくなった時点で、化合物４（収率１１２％、純度８８．６％、最大単一不純物５．６％）を得た。そのクロマトグラムを図２に示す。
【0094】
実施例３ ＭＭＡＥの調製及び精製
【化11】
【0095】
３０７．２２ｇの化合物４（３２６．７５ｍｍｏｌ）及び１９００ｍＬのジクロロメタンを反応フラスコに加えた。内温を０～５℃に制御し、９５０ｍＬのジエチルアミンを滴下した。滴下後、２０℃まで昇温してタイミング反応を開始し、温度を２０～３０℃に維持して１０時間反応させた。ＵＰＬＣで反応をモニタリングするためのサンプリングを行った後、ＵＰＬＣで反応をモニタリングするためのサンプリングを１時間ごとに行い、サンプリングを行って化合物４の残存量を検出した。化合物４の残存量が１．０％未満になった時点で、反応が終了したとみなした。
【0096】
反応終了後、反応溶液を３０Ｌのガラス製反応器に移し、１９００ｍＬのジクロロメタンを加え、２７００ｍＬの精製水（予め０℃に冷却）で２回洗浄し、有機相を分離した。有機相を撹拌し、５４２．０４ｇの無水硫酸ナトリウムで０．５時間乾燥し、乾燥剤を濾去し、フィルターケーキをジクロロメタン８１０ｍＬで洗浄し、濾液を合わせた。濾液を減圧下、３０～３５℃で濃縮して発泡させた。オイルポンプを使用して室温（１８～２６℃）で少なくとも１時間真空乾燥し、重量が変化しなくなった時点で粗製ＭＭＡＥが得られた。
【0097】
クロマトグラフィーカラムを洗浄した後、カラムを充填した。１３９８６．１４ｇのシリカゲル（２００～３００メッシュ）と４０Ｌのトルエンを撹拌して均一な流体状態とし、次にバッチでクロマトグラフィーカラムに移し（１時間放置）、５～８ｃｍのトルエンをシリカゲルの上部に保持し、シリカ表面のトルエンを排出させた。
【0098】
２６２．１７ｇの粗製ＭＭＡＥを５００ｍＬのジクロロメタンに溶解した。粗製ＭＭＡＥのジクロロメタン溶液を篩にゆっくりと注ぎ、添加後、試料表面の液体を排出させて試料の上面が平らになるようにし、２８９６．５８ｇの無水硫酸ナトリウムをシリカカラムの上端に添加した。３０Ｌの二層ガラス反応器を用いて溶出液を調製し、溶出液を２～８℃に冷却し、最初に２３５．２Ｌのトルエン：メタノール＝２０：１（Ｖ／Ｖ）系で溶出し、検出はカラーバンドが完全に流出するまで行わなかった。カラーバンドが流出した後、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）検出を開始し（展開剤はＶトルエン：Ｖメタノール＝５：１、発色にはヨウ素を使用）、生成物のみが視認された時点で、１４０．８Ｌのトルエン：メタノール＝１０：１（Ｖ／Ｖ）を代わりに使用して、生成物が完全に流出するまで（ＴＬＣによって生成物が検出されなくなるまで）連続溶出を行った。
【0099】
ＭＭＡＥの純粋な画分を合わせ、減圧下３５～４０℃で濃縮して発泡させた。１２００ｍＬのメタノールで溶解した後、生成物を濾過し、減圧下３５～４０℃で濃縮し、この操作を２回繰り返した。オイルポンプ真空下、４０～４５℃で１０～１８時間乾燥した後、均一な粉末が得られるまで粉砕を数回行った。合計３６時間連続乾燥した後、６～１２時間ごとにサンプリングを開始し、メタノール及びトルエン溶媒残留物を検出した。メタノール残留物が０．２００％以下、トルエン残留物が０．０８９％以下になった時点で乾燥を停止して、収率７１．７９％、純度９９．８％、単一不純物０．２％の精製ＭＭＡＥを得た。そのクロマトグラムを図３に示す。
【0100】
以上、本発明を、さまざまな特定の実施形態によって例示した。しかしながら、当業者であれば、本発明がそれぞれの特定の実施形態に限定されるものではなく、当業者が本発明の範囲内でさまざまな変更または改変を行い得る点、また、本明細書のさまざまな箇所に述べられるさまざまな技術的特徴を、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、互いに組み合わせることができる点は理解することができる。かかる改変及び変更は、本発明の範囲内のものである。
【図1】
【図2】
【図3】
【国際調査報告】