特表 2024-512236 細胞外ベシクル－ＮＬＲＰ３アンタゴニスト

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-19

(54)【発明の名称】細胞外ベシクル－ＮＬＲＰ３アンタゴニスト

(51)【国際特許分類】

   A61K 35/12 20150101AFI20240312BHJP

   A61P 25/02 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 38/02 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 31/341 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20240312BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 47/36 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 47/54 20170101ALI20240312BHJP

   A61K 47/60 20170101ALI20240312BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 5/14 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 9/00 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 25/04 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 31/7068 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 33/24 20190101ALI20240312BHJP

   A61K 31/282 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 31/337 20060101ALI20240312BHJP

   C12N 5/10 20060101ALN20240312BHJP

   C12N 15/113 20100101ALN20240312BHJP

   C12N 15/11 20060101ALN20240312BHJP

   C07K 16/18 20060101ALN20240312BHJP

   C12N 15/115 20100101ALN20240312BHJP

【ＦＩ】

A61K35/12

A61P25/02

A61K45/00

A61P43/00 111

A61K31/7105

A61K31/713

A61K31/7088

A61K48/00

A61K38/02

A61P29/00

A61K31/341

A61K47/42

A61K39/395 Y

A61K47/36

A61K47/54

A61K47/60

A61P3/10

A61P37/02

A61P1/16

A61P5/14

A61P9/00

A61P25/04

A61K31/7068

A61K33/24

A61K31/282

A61K31/337

A61P43/00 121

C12N5/10 ZNA

C12N15/113 Z

C12N15/11 Z

C07K16/18

C12N15/115 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023549581

(86)(22)【出願日】2022-02-17

(85)【翻訳文提出日】2023-10-12

(86)【国際出願番号】 US2022016828

(87)【国際公開番号】W WO2022178149

(87)【国際公開日】2022-08-25

(31)【優先権主張番号】63/150,453

(32)【優先日】2021-02-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522228126

【氏名又は名称】ロンザ セールス アーゲー

【氏名又は名称原語表記】ＬＯＮＺＡ ＳＡＬＥＳ ＡＧ

(74)【代理人】

【識別番号】100107456

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 成人

(74)【代理人】

【識別番号】100162352

【弁理士】

【氏名又は名称】酒巻 順一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100123995

【弁理士】

【氏名又は名称】野田 雅一

(72)【発明者】

【氏名】ヴェルマ， アジェイ

(72)【発明者】

【氏名】エコノミデス， キリアコス

(72)【発明者】

【氏名】カーウィン， キャサリン

(72)【発明者】

【氏名】リム， ジョアン

(72)【発明者】

【氏名】ジャン， ス チュル

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C085

4C086

4C087

4C206

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA01

4B065CA23

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C076AA95

4C076CC01

4C076CC07

4C076CC11

4C076CC17

4C076CC18

4C076CC21

4C076CC41

4C076DD53

4C076DD63

4C076DD70

4C076EE23

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF70

4C084AA02

4C084AA13

4C084AA17

4C084AA19

4C084BA44

4C084NA14

4C084ZA08

4C084ZA20

4C084ZA36

4C084ZA75

4C084ZA81

4C084ZA89

4C084ZB07

4C084ZB11

4C084ZC06

4C084ZC35

4C084ZC42

4C084ZC75

4C085AA25

4C085BB11

4C085EE01

4C086AA01

4C086AA02

4C086BB02

4C086EA16

4C086EA17

4C086HA12

4C086HA28

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA08

4C086ZA20

4C086ZA36

4C086ZA75

4C086ZA81

4C086ZA89

4C086ZB07

4C086ZB11

4C086ZC06

4C086ZC35

4C086ZC42

4C086ZC75

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB70

4C087CA04

4C087NA14

4C087ZA08

4C087ZA20

4C087ZA36

4C087ZA75

4C087ZA81

4C087ZA89

4C087ZB07

4C087ZB11

4C087ZC06

4C087ZC35

4C087ZC42

4C087ZC75

4C206AA01

4C206AA02

4C206JB16

4C206MA01

4C206MA02

4C206MA04

4C206NA14

4C206ZA08

4C206ZA20

4C206ZA36

4C206ZA75

4C206ZA81

4C206ZA89

4C206ZB07

4C206ZB11

4C206ZC06

4C206ZC35

4C206ZC42

4C206ZC75

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA75

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、ＮＬＲＰ３アンタゴニストを含む細胞外ベシクル、例えばエクソソームに関する。一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含む。同様に本明細書において、エクソソームを産生する方法、並びに疾患又は障害、例えば末梢神経障害を処置及び／又は防止するためにエクソソームを使用する方法も提供される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

それを必要とする対象において末梢神経障害を処置する方法であって、外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストを含む細胞外ベシクルを前記対象に投与するステップを含む方法。

【請求項2】

それを必要とする対象において末梢神経障害の１つ又は複数の症状を低減するか、改善するか、又は処置する方法であって、外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストを含む細胞外ベシクルを前記対象に投与するステップを含む方法。

【請求項3】

前記外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストが、化学化合物、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、タンパク質、又はこれらの任意の組合せである、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項4】

前記細胞外ベシクルが、マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、単球、好塩基球、好中球、好酸球、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される細胞を標的とする、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

前記ＡＳＯを含む細胞外ベシクル又は前記ＡＳＯが、前記対象においてＭ２マクロファージ極性化を誘導する、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記ＡＳＯを含む細胞外ベシクル又は前記ＡＳＯが、神経の骨髄性炎症、髄膜骨髄性炎症、神経鞘炎症、又はこれらの任意の組合せを低減させる、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記ＡＳＯを含む細胞外ベシクルが、神経鞘の骨髄性炎症を低減させる、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記ＡＳＯを含む細胞外ベシクルが、神経根、神経、及び／又は筋肉のうちの１つ又は複数におけるマクロファージ流入を低減させる、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記ＡＳＯを含む細胞外ベシクルが、神経根、神経、及び／又は筋肉のうちの１つ又は複数におけるマクロファージ食作用を低減させる、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストが小分子である、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記小分子が、ＭＣＣ９５０、トラニラスト、オリドニン、ＣＹ－０９、Ｂａｙ １１－７０８２、パルテノリド、３，４－メチレンジオキシ－β－ニトロスチレン（ＭＮＢ）、β－ヒドロキシ酪酸（ＢＨＢ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｉ型インターフェロン、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

前記外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストが、式（Ｉ）：

【化1】

を含む、請求項１０又は１１に記載の方法。

【請求項13】

前記外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストが、ＭＣＣ９５０を含む、請求項１０～１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストが、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記ＡＳＯが、ＮＬＲＰ３転写物内の核酸配列と相補的である１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記連続ヌクレオチド配列が、前記ＮＬＲＰ３転写物内の前記核酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％相補的である、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

前記ＡＳＯが、ＮＬＲＰ３タンパク質を発現するヒト細胞（例えば、免疫細胞）においてＮＬＲＰ３タンパク質発現を低減させることが可能である、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記ＮＬＲＰ３タンパク質発現が、前記ＡＳＯに曝露されていないヒト細胞におけるＮＬＲＰ３タンパク質発現と比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％低減する、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記ＡＳＯが、ＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡを発現するヒト細胞（例えば、免疫細胞）におけるＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡレベルを低減させることが可能である、請求項１４～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

前記ＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡレベルが、前記ＡＳＯに曝露されていないヒト細胞における前記ＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡレベルと比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％低減する、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記ＡＳＯが、ギャップマー、ミックスマー、又はトータルマーである、請求項１４～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記ＡＳＯが、１つ又は複数のヌクレオシドアナログを含む、請求項１４～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記ヌクレオシドアナログの１つ又は複数が、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ；２’－Ｏ－メチルＲＮＡ（２’－ＯＭｅ）；２’－アルコキシ－ＲＮＡ；２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（２’－ＭＯＥ）；２’－アミノ－ＤＮＡ；２’－フルオロ－ＲＮＡ；２’－フルオロ－ＤＮＡ；アラビノ核酸（ＡＮＡ）；２’－フルオロ－ＡＮＡ；又は二環式ヌクレオシドアナログを含む、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

前記ヌクレオシドアナログの１つ又は複数が、糖修飾ヌクレオシドである、請求項２２又は２３に記載の方法。

【請求項25】

糖修飾ヌクレオシドが、親和性増強２’糖修飾ヌクレオシドである、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記ヌクレオシドアナログの１つ又は複数が、二環糖を含むヌクレオシドを含む、請求項２２～２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記ヌクレオシドアナログの１つ又は複数がＬＮＡを含む、請求項２２～２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記ヌクレオチドアナログの１つ又は複数が、拘束エチルヌクレオシド（ｃＥｔ）、２’，４’－拘束２’－Ｏ－メトキシエチル（ｃＭＯＥ）、α－Ｌ－ＬＮＡ、β－Ｄ－ＬＮＡ、２’－Ｏ，４’－Ｃ－エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）、アミノ－ＬＮＡ、オキシ－ＬＮＡ、チオ－ＬＮＡ、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項２２～２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記ＡＳＯが、１つ又は複数の５’－メチル－シトシン核酸塩基を含む、請求項１４～２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記連続ヌクレオチド配列が、（ｉ）５’非翻訳領域（ＵＴＲ）；（ｉｉ）コード領域；又は（ｉｉｉ）ＮＬＲＰ３転写物の３’ＵＴＲ内の核酸配列と相補的である、請求項１５～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記連続ヌクレオチド配列が、（ｉ）配列番号３のヌクレオチド１～５３４；（ｉｉ）配列番号３のヌクレオチド４４８～２１９３；（ｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド２１２５～３０３６；（ｉｖ）配列番号３のヌクレオチド２９８７～３９９０；（ｖ）配列番号３の３９９６～４４５６、（ｖｉ）配列番号３のヌクレオチド１０６～３３４；（ｖｉｉ）配列番号３のヌクレオチド６４８～２１１３；（ｖｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド２２２５～２９５６；（ｉｘ）配列番号３のヌクレオチド２９８７～３８１０；（ｘ）配列番号３の３９９６～４３７６；（ｘｉ）配列番号３のヌクレオチド１５６～２８４；（ｘｉｉ）配列番号３のヌクレオチド６９８～２０６３；（ｘｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド２２７５～２９０６；（ｘｉｖ）配列番号３のヌクレオチド３０３７～３７６０；（ｘｖ）配列番号３の４０４６～４３２６；（ｘｖｉ）配列番号３のヌクレオチド１９６～２４４；（ｘｖｉｉ）配列番号３のヌクレオチド７３８～２００３；（ｘｖｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド２３１５～２８６６；（ｘｉｘ）配列番号３のヌクレオチド３０７７～３７２０；又は（ｘｘ）配列番号３の４０８６～４２８６を含む核酸配列と相補的である、請求項１５～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記連続ヌクレオチド配列が、（ｉ）配列番号３のヌクレオチド２０６～２３４；（ｉｉ）配列番号３のヌクレオチド７４８～２０１３；（ｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド２３２５～２８５６；（ｉｖ）配列番号３のヌクレオチド３０８７～３７１０；又は（ｖ）配列番号３の４０９６～４２７６内の核酸配列と相補的である、請求項１５～３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記連続ヌクレオチド配列が、図１Ａ及び１Ｂの配列から選択される配列と相補的なヌクレオチド配列を含む、請求項１５～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

前記連続ヌクレオチド配列が、前記ＮＬＲＰ３転写物内のヌクレオチド配列と完全に相補的である、請求項１５～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記ＡＳＯが、１つ又は２つのミスマッチを有する、配列番号１０１～２００から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項１４～３４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

前記ＡＳＯが、配列番号１０１～２００から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項１４～３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

前記ＡＳＯが、１４～２０ヌクレオチド長である、請求項１４～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記連続ヌクレオチド配列が、１つ又は複数の修飾ヌクレオシド間連結を含む、請求項１５～３７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

前記１つ又は複数の修飾ヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結である、請求項３８に記載の方法。

【請求項40】

ヌクレオシド間連結の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％が修飾されている、請求項３８又は３９に記載の方法。

【請求項41】

前記ＡＳＯ中の前記ヌクレオシド間連結の各々が、ホスホロチオエート連結である、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

前記細胞外ベシクルが、アンカー部分を含む、請求項１～４１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項43】

前記ＮＬＲＰ３アンタゴニストが、アンカー部分に連結されている、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

前記細胞外ベシクルが、外因性標的化部分を含む、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項45】

前記外因性標的化部分が、ペプチド、抗体若しくはその抗原結合断片、化学化合物、ＲＮＡアプタマー、又はこれらの任意の組合せを含む、請求項４４に記載の方法。

【請求項46】

前記外因性標的化部分がペプチドを含む、請求項４４又は４５に記載の方法。

【請求項47】

前記外因性標的化部分が、マイクロタンパク質、設計されたアンキリン反復タンパク質（ダーピン）、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、ペプチド模倣分子、受容体の天然のリガンド、ラクダ科のナノボディ、又はこれらの任意の組合せを含む、請求項４４～４６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項48】

前記外因性標的化部分が、全長抗体、単一ドメイン抗体、重鎖のみの抗体（ＶＨＨ）、一本鎖抗体、サメ重鎖のみの抗体（ＶＮＡＲ）、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又はこれらの任意の組合せを含む、請求項４４～４７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

前記抗体が一本鎖抗体である、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

前記ＥＶが、前記外因性標的化部分を前記ＥＶに連結する足場部分を含む、請求項４４～４９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項51】

前記アンカー部分及び／又は前記足場部分が、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘ又はＳｃａｆｆｏｌｄ Ｙである、請求項４２～５０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項52】

前記外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストが、ＥＶの外部表面上のアンカー部分及び／又は足場部分に連結されている、請求項４２～５１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項53】

前記外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストが、ＥＶの内腔表面上のアンカー部分及び／又は足場部分に連結されている、請求項４２～５２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項54】

前記アンカー部分が、ステロール、ＧＭ１、脂質、ビタミン、小分子、ペプチド、又はその組合せを含む、請求項４２～５３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項55】

前記アンカー部分がコレステロールを含む、請求項４２～５３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項56】

前記アンカー部分が、リン脂質、リゾリン脂質、脂肪酸、ビタミン（例えばビタミンＤ及び／又はビタミンＥ）、又はこれらの任意の組合せを含む、請求項４２～５３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項57】

前記外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストが、リンカーによってアンカー部分及び／又は足場部分に連結されている、請求項４２～５６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項58】

前記外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストが、リンカーによって前記ＥＶに連結されている、請求項１～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項59】

前記リンカーがポリペプチドである、請求項５７又は５８に記載の方法。

【請求項60】

前記リンカーが非ポリペプチド部分である、請求項５７又は５８に記載の方法。

【請求項61】

前記リンカーが、エチレングリコールを含む、請求項５７又は５８に記載の方法。

【請求項62】

前記リンカーが、ＨＥＧ、ＴＥＧ、ＰＥＧ、又はこれらの任意の組合せを含む、請求項６１に記載の方法。

【請求項63】

前記リンカーが、アクリル系ホスホロアミダイト（例えば、アクリダイト（Ａｃｒｙｄｉｔｅ（商標）））、アデニル化、アジド（ＮＨＳエステル）、ジゴキシゲニン（ＮＨＳエステル）、コレステロール－ＴＥＧ、Ｉ－リンカー（Ｉ－ＬＩＮＫＥＲ）（商標）、アミノ修飾剤（例えば、アミノ修飾剤Ｃ６、アミノ修飾剤Ｃ１２、アミノ修飾剤Ｃ６ ｄＴ、又はＵｎｉ－Ｌｉｎｋ（商標）アミノ修飾剤）、アルキン、５’ヘキシニル、５－オクタジイニルｄＵ、ビオチン化（例えば、ビオチン、ビオチン（アジド）、ビオチンｄＴ、ビオチン－ＴＥＧ、デュアルビオチン、ＰＣビオチン、又はデスチオビオチン）、チオール修飾（チオール修飾剤Ｃ３ Ｓ－Ｓ、ジチオール又はチオール修飾剤Ｃ６ Ｓ－Ｓ）、又はこれらの任意の組合せを含む、請求項５７又は５８に記載の方法。

【請求項64】

前記リンカーが切断性リンカーである、請求項５７～６３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項65】

前記リンカーが、バリン－アラニン－ｐ－アミノベンジルカルバメート又はバリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカルバメートを含む、請求項６４に記載の方法。

【請求項66】

前記リンカーが、（ｉ）マレイミド部分及び（ｉｉ）バリン－アラニン－ｐ－アミノベンジルカルバメート又はバリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカルバメートを含む、請求項５７～６５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項67】

前記ＥＶがエクソソームである、請求項１～６６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項68】

前記末梢神経障害が、糖尿病、外傷、自己免疫障害、腎障害、肝障害、甲状腺機能低下症、血管障害、異常なビタミンレベル、アルコールの使用、又はこれらの任意の組合せに関連している、請求項１～６７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項69】

前記末梢神経障害が、化学療法誘発性末梢神経障害（ＣＩＰＮ）を含む、請求項１～６８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項70】

前記対象が、化学療法を以前に投与された、請求項１～６９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項71】

前記化学療法が、白金誘導体、ビンカアルカロイド、ボルデゾミブ、タキサン、又はこれらの任意の組合せを含む、請求項７０に記載の方法。

【請求項72】

前記化学療法が、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ドセタキセル、ビンクリスチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、又はこれらの任意の組合せを含む、請求項７０又は７１に記載の方法。

【請求項73】

前記細胞外ベシクルが、うずき、疼痛、灼熱感、痺れ、暑さに敏感、寒さに敏感、細かい運動スキルが困難、及びこれらの任意の組合せから選択される、対象における１つ又は複数の症状の重症度又は発生を低減する、請求項１～７２のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

［関連出願の相互参照］
[0001]本出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０２１年２月１７日に出願された米国特許仮出願第６３／１５０，４５３号の優先権の利益を主張する。
ＥＦＳ－ＷＥＢを介して電子的に提出されている配列表に対する言及

【0002】

[0002]本出願において提出されている電子的に提出された配列表（名称：４０００＿１２４ＰＣ０１＿ＳＥＱＬＩＳＴＩＮＧ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ；サイズ：３０２，４７７バイト；及び作成日：２０２２年２月１７日）の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0003】

[0003]本開示は、ＮＬＲＰ３アンタゴニストを含む細胞外ベシクル（ＥＶ）、例えばエクソソームを対象に投与することによって、それを必要とする対象において末梢神経障害を処置する方法に関する。一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含む。本開示のある特定の態様では、細胞外ベシクルは、足場タンパク質をさらに含む。

【背景技術】

【0004】

[0004]エクソソームは、あらゆる真核細胞によって天然に産生される小さい細胞外ベシクルである。エクソソームは、内部空間（すなわち、内腔）を囲む膜を含む。薬物送達ビヒクルとして、ＥＶ、例えばエクソソームは、従来の薬物送達方法と比較して多くの治療分野において新規処置モダリティとして多くの利点を与える。特に、エクソソームは、異なる種に投与した場合であっても、本質的に低い免疫原性を有する。

【0005】

[0005]アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏで標的遺伝子発現を調節するための強力な手段として出現している。しかしながら、ｉｎ ｖｉｖｏでのＡＳＯの安定性及び標的化を改善することが依然として必要である。

【0006】

[0006]したがって、新規のより有効な操作されたＥＶ（例えばエクソソーム）、詳細には疾患（例えば、がん）に関連する遺伝子の発現を低減させることができる治療剤を送達するために使用することができるＥＶは、ＥＶに基づく技術の治療的使用及び他の応用をより良好に可能にするために必要である。

【発明の概要】

【0007】

[0007]本開示の一部の態様は、それを必要とする対象において末梢神経障害を処置する方法であって、外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストを含む細胞外ベシクルを対象に投与するステップを含む方法を対象とする。

【0008】

[0008]本開示の一部の態様は、それを必要とする対象において末梢神経障害の１つ又は複数の症状を低減するか、改善するか、又は処置する方法であって、外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストを含む細胞外ベシクルを対象に投与するステップを含む方法を対象とする。

【0009】

[0009]一部の態様では、外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、化学化合物、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、タンパク質、又はこれらの任意の組合せである。

【0010】

[0010]一部の態様では、細胞外ベシクルは、マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）、単球、好塩基球、好中球、好酸球、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される細胞を標的とする。

【0011】

[0011]一部の態様では、ＡＳＯを含む細胞外ベシクル又はＡＳＯは、対象におけるＭ２マクロファージ極性化を誘導する。一部の態様では、ＡＳＯを含む細胞外ベシクル又はＡＳＯは、神経の骨髄性炎症、髄膜骨髄性炎症、神経鞘炎症、又はこれらの任意の組合せを低減させる。一部の態様では、ＡＳＯを含む細胞外ベシクルは、神経鞘の骨髄性炎症を低減させる。一部の態様では、ＡＳＯを含む細胞外ベシクルは、神経根、神経、及び／又は筋肉のうちの１つ又は複数におけるマクロファージ流入を低減させる。一部の態様では、ＡＳＯを含む細胞外ベシクルは、神経根、神経、及び／又は筋肉のうちの１つ又は複数におけるマクロファージ食作用を低減させる。

【0012】

[0012]一部の態様では、外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストは小分子である。一部の態様では、小分子は、ＭＣＣ９５０、トラニラスト、オリドニン、ＣＹ－０９、Ｂａｙ１１－７０８２、パルテノリド、３，４－メチレンジオキシ－β－ニトロスチレン（ＭＮＢ）、β－ヒドロキシ酪酸（ＢＨＢ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｉ型インターフェロン、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される。一部の態様では、外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、式（Ｉ）：

【0013】

[0013]

【化1】

を含む。

【0014】

[0014]一部の態様では、外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストはＭＣＣ９５０を含む。

【0015】

[0015]一部の態様では、外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、ＮＬＲＰ３転写物内の核酸配列と相補的である１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む。一部の態様では、連続ヌクレオチド配列は、ＮＬＲＰ３転写物内の核酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％相補的である。

【0016】

[0016]一部の態様では、ＡＳＯは、ＮＬＲＰ３タンパク質を発現するヒト細胞（例えば、免疫細胞）におけるＮＬＲＰ３タンパク質発現を低減させることが可能である。一部の態様では、ＮＬＲＰ３タンパク質発現は、ＡＳＯに曝露されていないヒト細胞におけるＮＬＲＰ３タンパク質発現と比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％低減する。一部の態様では、ＡＳＯは、ＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡを発現するヒト細胞（例えば、免疫細胞）におけるＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡレベルを低減させることが可能である。一部の態様では、ＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡレベルは、ＡＳＯに曝露されていないヒト細胞におけるＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡレベルと比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％低減する。

【0017】

[0017]一部の態様では、ＡＳＯは、ギャップマー、ミックスマー、又はトータルマーである。一部の態様では、ＡＳＯは、１つ又は複数のヌクレオシドアナログを含む。一部の態様では、ヌクレオシドアナログの１つ又は複数は、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ；２’－Ｏ－メチルＲＮＡ（２’－ＯＭｅ）；２’－アルコキシ－ＲＮＡ；２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（２’－ＭＯＥ）；２’－アミノ－ＤＮＡ；２’－フルオロ－ＲＮＡ；２’－フルオロ－ＤＮＡ；アラビノ核酸（ＡＮＡ）；２’－フルオロ－ＡＮＡ；又は二環式ヌクレオシドアナログを含む。一部の態様では、ヌクレオシドアナログの１つ又は複数は、糖修飾ヌクレオシドである。一部の態様では、糖修飾ヌクレオシドは、親和性を増強する２’糖修飾ヌクレオシドである。一部の態様では、ヌクレオシドアナログの１つ又は複数は、二環糖を含むヌクレオシドを含む。一部の態様では、ヌクレオシドアナログの１つ又は複数はＬＮＡを含む。一部の態様では、ヌクレオチドアナログの１つ又は複数は、拘束エチルヌクレオシド（ｃＥｔ）、２’，４’－拘束２’－Ｏ－メトキシエチル（ｃＭＯＥ）、α－Ｌ－ＬＮＡ、β－Ｄ－ＬＮＡ、２’－Ｏ，４’－Ｃ－エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）、アミノ－ＬＮＡ、オキシ－ＬＮＡ、チオ－ＬＮＡ、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される。一部の態様では、ＡＳＯは、１つ又は複数の５’－メチル－シトシン核酸塩基を含む。

【0018】

[0018]一部の態様では、連続ヌクレオチド配列は、（ｉ）５’非翻訳領域（ＵＴＲ）；（ｉｉ）コード領域；又は（ｉｉｉ）ＮＬＲＰ３転写物の３’ＵＴＲ内の核酸配列と相補的である。一部の態様では、連続ヌクレオチド配列は、（ｉ）配列番号３のヌクレオチド１～５３４；（ｉｉ）配列番号３のヌクレオチド４４８～２１９３；（ｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド２１２５～３０３６；（ｉｖ）配列番号３のヌクレオチド２９８７～３９９０；（ｖ）配列番号３の３９９６～４４５６、（ｖｉ）配列番号３のヌクレオチド１０６～３３４；（ｖｉｉ）配列番号３のヌクレオチド６４８～２１１３；（ｖｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド２２２５～２９５６；（ｉｘ）配列番号３のヌクレオチド２９８７～３８１０；（ｘ）配列番号３の３９９６～４３７６；（ｘｉ）配列番号３のヌクレオチド１５６～２８４；（ｘｉｉ）配列番号３のヌクレオチド６９８～２０６３；（ｘｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド２２７５～２９０６；（ｘｉｖ）配列番号３のヌクレオチド３０３７～３７６０；（ｘｖ）配列番号３の４０４６～４３２６；（ｘｖｉ）配列番号３のヌクレオチド１９６～２４４；（ｘｖｉｉ）配列番号３のヌクレオチド７３８～２００３；（ｘｖｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド２３１５～２８６６；（ｘｉｘ）配列番号３のヌクレオチド３０７７～３７２０；又は（ｘｘ）配列番号３の４０８６～４２８６を含む核酸配列と相補的である。

【0019】

[0019]一部の態様では、連続ヌクレオチド配列は、（ｉ）配列番号３のヌクレオチド２０６～２３４；（ｉｉ）配列番号３のヌクレオチド７４８～２０１３；（ｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド２３２５～２８５６；（ｉｖ）配列番号３のヌクレオチド３０８７～３７１０；又は（ｖ）配列番号３の４０９６～４２７６内の核酸配列と相補的である。

【0020】

[0020]一部の態様では、連続ヌクレオチド配列は、図１Ａ及び１Ｂの配列から選択される配列と相補的なヌクレオチド配列を含む。一部の態様では、連続ヌクレオチド配列は、ＮＬＲＰ３転写物内のヌクレオチド配列と完全に相補的である。一部の態様では、ＡＳＯは、１つ又は２つのミスマッチを有する、配列番号１０１～２００から選択されるヌクレオチド配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１０１～２００から選択されるヌクレオチド配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、１４～２０ヌクレオチド長である。

【0021】

[0021]一部の態様では、連続ヌクレオチド配列は、１つ又は複数の修飾ヌクレオシド間連結を含む。一部の態様では、１つ又は複数の修飾ヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。一部の態様では、ヌクレオシド間連結の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％が修飾されている。一部の態様では、ＡＳＯ中のヌクレオシド間連結の各々は、ホスホロチオエート連結である。

【0022】

[0022]一部の態様では、細胞外ベシクルは、アンカー部分を含む。一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、アンカー部分に連結されている。

【0023】

[0023]一部の態様では、細胞外ベシクルは、外因性標的化部分を含む。一部の態様では、外因性標的化部分は、ペプチド、抗体若しくはその抗原結合断片、化学化合物、ＲＮＡアプタマー、又はこれらの任意の組合せを含む。一部の態様では、外因性標的化部分はペプチドを含む。

【0024】

[0024]一部の態様では、外因性標的化部分は、マイクロタンパク質、設計されたアンキリン反復タンパク質（ダーピン（ｄａｒｐｉｎ））、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、ペプチド模倣分子、受容体の天然のリガンド、ラクダ科のナノボディ、又はこれらの任意の組合せを含む。一部の態様では、外因性標的化部分は、全長抗体、単一ドメイン抗体、重鎖のみの抗体（ＶＨＨ）、一本鎖抗体、サメ重鎖のみの抗体（ＶＮＡＲ）、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又はこれらの任意の組合せを含む。一部の態様では、抗体は一本鎖抗体である。

【0025】

[0025]一部の態様では、外因性標的化部分は、エクソソームを肝臓、心臓、肺、脳、腎臓、中枢神経系、末梢神経系、筋肉、骨、関節、皮膚、腸、膀胱、膵臓、リンパ節、脾臓、血液、骨髄、又はこれらの任意の組合せに標的化する。

【0026】

[0026]一部の態様では、ＥＶは、外因性標的化部分をＥＶに連結する足場部分を含む。一部の態様では、アンカー部分及び／又は足場部分は、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘ又はＳｃａｆｆｏｌｄ Ｙである。一部の態様では、外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、ＥＶの外部表面上のアンカー部分及び／又は足場部分に連結されている。一部の態様では、外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、ＥＶの内腔表面上のアンカー部分及び／又は足場部分に連結されている。一部の態様では、アンカー部分は、ステロール、ＧＭ１、脂質、ビタミン、小分子、ペプチド、又はその組合せを含む。一部の態様では、アンカー部分はコレステロールを含む。一部の態様では、アンカー部分は、リン脂質、リゾリン脂質、脂肪酸、ビタミン（例えば、ビタミンＤ及び／又はビタミンＥ）、又はこれらの任意の組合せを含む。

【0027】

[0027]一部の態様では、外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、リンカーによってアンカー部分及び／又は足場部分に連結されている。一部の態様では、外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、リンカーによってＥＶに連結されている。一部の態様では、リンカーはポリペプチドである。一部の態様では、リンカーは非ポリペプチド部分である。一部の態様では、リンカーは、エチレングリコールを含む。一部の態様では、リンカーは、ＨＥＧ、ＴＥＧ、ＰＥＧ、又はこれらの任意の組合せを含む。一部の態様では、リンカーは、アクリル系ホスホロアミダイト（例えば、アクリダイト（Ａｃｒｙｄｉｔｅ（商標）））、アデニル化、アジド（ＮＨＳエステル）、ジゴキシゲニン（ＮＨＳエステル）、コレステロール－ＴＥＧ、Ｉ－リンカー（Ｉ－ＬＩＮＫＥＲ）（商標）、アミノ修飾剤（例えば、アミノ修飾剤Ｃ６、アミノ修飾剤Ｃ１２、アミノ修飾剤Ｃ６ ｄＴ、又はユニリンク（Ｕｎｉ－Ｌｉｎｋ）（商標）アミノ修飾剤）、アルキン、５’ヘキシニル、５－オクタジイニルｄＵ、ビオチン化（例えば、ビオチン、ビオチン（アジド）、ビオチンｄＴ、ビオチン－ＴＥＧ、デュアルビオチン、ＰＣビオチン、又はデスチオビオチン）、チオール修飾（チオール修飾剤Ｃ３ Ｓ－Ｓ、ジチオール又はチオール修飾剤Ｃ６ Ｓ－Ｓ）、又はこれらの任意の組合せを含む。

【0028】

[0028]一部の態様では、リンカーは切断性リンカーである。一部の態様では、リンカーは、バリン－アラニン－ｐ－アミノベンジルカルバメート又はバリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカルバメートを含む。一部の態様では、リンカーは、（ｉ）マレイミド部分及び（ｉｉ）バリン－アラニン－ｐ－アミノベンジルカルバメート又はバリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカルバメートを含む。

【0029】

[0029]一部の態様では、ＥＶはエクソソームである。

【0030】

[0030]一部の態様では、末梢神経障害は、糖尿病、外傷、自己免疫障害、腎障害、肝障害、甲状腺機能低下症、血管障害、異常なビタミンレベル、アルコールの使用、又はこれらの任意の組合せに関連している。一部の態様では、末梢神経障害は、化学療法誘発性末梢神経障害（ＣＩＰＮ）を含む。

【0031】

[0031]一部の態様では、対象は、化学療法を以前に投与された。一部の態様では、化学療法は、白金誘導体、ビンカアルカロイド、ボルデゾミブ、タキサン、又はこれらの任意の組合せを含む。一部の態様では、化学療法は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ドセタキセル、ビンクリスチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、又はこれらの任意の組合せを含む。

【0032】

[0032]一部の態様では、細胞外ベシクルは、うずき、疼痛、灼熱感、痺れ、暑さに敏感、寒さに敏感、細かい運動スキルが困難、及びこれらの任意の組合せから選択される、対象における１つ又は複数の症状の重症度又は発生を低減する。

【図面の簡単な説明】

【0033】

【図1A】ＮＬＰＲ３転写物を標的とする様々なＡＳＯ配列を記載する表である。表は、以下の情報（左から右に）：（ｉ）説明、（ｉｉ）いかなる特定の設計又は化学構造も含まないＡＳＯ配列、（ｉｉｉ）ＡＳＯ配列のみに関して指定された配列番号、（ｉｖ）ヌクレオチド（ＮＴ）の数でのＡＳＯの長さ、（ｉｉ）ＮＬＰＲ３転写物配列（配列番号３）における標的の開始及び終止位置を含む。ＡＳＯは、５’から３’である。化学構造における記号は以下の通りである：ＮｂはＬＮＡを意味する；ｄＮはＤＮＡを意味する；５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味する；ＮｍはＭＯＥを意味する；及びｓはホスホロチオエートを意味する。

【図1B】ＮＬＰＲ３転写物を標的とする様々なＡＳＯ配列を記載する表である。表は、以下の情報（左から右に）：（ｉ）説明、（ｉｉ）いかなる特定の設計又は化学構造も含まないＡＳＯ配列、（ｉｉｉ）ＡＳＯ配列のみに関して指定された配列番号、（ｉｖ）ヌクレオチド（ＮＴ）の数でのＡＳＯの長さ、（ｉｉ）ＮＬＰＲ３転写物配列（配列番号３）における標的の開始及び終止位置を含む。ＡＳＯは、５’から３’である。化学構造における記号は以下の通りである：ＮｂはＬＮＡを意味する；ｄＮはＤＮＡを意味する；５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味する；ＮｍはＭＯＥを意味する；及びｓはホスホロチオエートを意味する。

【図1C】ＮＬＰＲ３転写物を標的とする様々なＡＳＯ配列を記載する表である。表は、以下の情報（左から右に）：（ｉ）説明、（ｉｉ）いかなる特定の設計又は化学構造も含まないＡＳＯ配列、（ｉｉｉ）ＡＳＯ配列のみに関して指定された配列番号、（ｉｖ）ヌクレオチド（ＮＴ）の数でのＡＳＯの長さ、（ｉｉ）ＮＬＰＲ３転写物配列（配列番号３）における標的の開始及び終止位置を含む。ＡＳＯは、５’から３’である。化学構造における記号は以下の通りである：ＮｂはＬＮＡを意味する；ｄＮはＤＮＡを意味する；５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味する；ＮｍはＭＯＥを意味する；及びｓはホスホロチオエートを意味する。

【図2】エクソソームを髄腔内に注射したマウスの画像であり、標識されたエクソソームのＣＮＳ全体の分布を示す。

【図3A】陰性対照（偽処置；シスプラチンなし）；シスプラチン及びＰＢＳ；シスプラチン及びＭＣＣ９５０（１５～２０日目）；シスプラチン及び対照エクソソーム（ＡＳＯなし；１５日目）；シスプラチン及びＡＳＯＮＬＲＰ３（遊離のＡＳＯ；１５日目）；シスプラチン及びｅｘｏＡＳＯＮＬＲＰ３（５日目）；シスプラチン及びｅｘｏＡＳＯＮＬＲＰ３（１５日目）；又はシスプラチン及びガバペンチン（８日目及び２１日目）を投与したマウスにおける、Ｖｏｎ Ｆｒｅｙ試験を使用して測定した場合の疼痛を例証するグラフ表示である。図３Ａは、経時的な測定としての疼痛レベルを示す。

【図3B】陰性対照（偽処置；シスプラチンなし）；シスプラチン及びＰＢＳ；シスプラチン及びＭＣＣ９５０（１５～２０日目）；シスプラチン及び対照エクソソーム（ＡＳＯなし；１５日目）；シスプラチン及びＡＳＯＮＬＲＰ３（遊離のＡＳＯ；１５日目）；シスプラチン及びｅｘｏＡＳＯＮＬＲＰ３（５日目）；シスプラチン及びｅｘｏＡＳＯＮＬＲＰ３（１５日目）；又はシスプラチン及びガバペンチン（８日目及び２１日目）を投与したマウスにおける、Ｖｏｎ Ｆｒｅｙ試験を使用して測定した場合の疼痛を例証するグラフ表示である。図３Ｂは、２１日目での各群の疼痛レベルを示す。

【発明を実施するための形態】

【0034】

[0036]本開示の一部の態様は、それを必要とする対象において末梢神経障害を処置する方法であって、ＮＬＲＰ３アンタゴニストを含む細胞外ベシクル（ＥＶ）、例えばエクソソームを対象に投与するステップを含む方法を対象とする。本開示の一部の態様は、それを必要とする対象において末梢神経障害の１つ又は複数の症状を低減するか、改善するか、又は処置する方法であって、外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストを含む細胞外ベシクルを対象に投与するステップを含む方法を対象とする。一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、ＮＬＲＰ３転写物内の核酸配列と相補的である１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む。

【0035】

Ｉ．定義
[0037]本説明をより容易に理解することができるように、ある特定の用語を最初に定義する。追加の定義は、詳細な説明を通して記載されている。

【0036】

[0038]「１つの」又は「１つの（ａｎ）」は、その実体の１つ又は複数を指し、例えば「１つのヌクレオチド配列」は、１つ又は複数のヌクレオチド配列を表すと理解される。そのため、「１つの（又は１つの（ａｎ））、「１つ又は複数」、及び「少なくとも１つ」という用語は、本明細書において互換的に使用され得る。

【0037】

[0039]さらに、「及び／又は」は、本明細書で使用される場合、他方があってもなくても２つの指定された特色又は構成要素の各々の具体的開示であると解釈すべきである。このように、本明細書において「Ａ及び／又はＢ」などの語句で使用される場合の「及び／又は」という用語は、「Ａ及びＢ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ」（単独）、及び「Ｂ」（単独）を含むと意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」などの語句で使用される場合の「及び／又は」という用語は、以下の態様：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；並びにＣ（単独）の各々を包含すると意図される。

【0038】

[0040]態様が、本明細書において「含む」という用語と共に説明されている場合は常に、「からなる」及び／又は「から本質的になる」という用語に関連して説明されるそれ以外の類似の態様も同様に提供されると理解される。

【0039】

[0041]特に定義されていない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が関連する当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。例えば、ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ、第２版，２００２年，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第３版，１９９９年、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；及びｔｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，改訂版，２０００年、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くの一般的な辞書を当業者に提供する。

【0040】

[0042]単位、接頭辞、及び記号は、国際単位系（ＳＩ）に承認された形式で示される。数値範囲は、範囲を定義する数を含む。特に示していない限り、ヌクレオチド配列は、左から右に５’から３’方向に書かれている。アミノ酸配列は左から右にアミノからカルボキシ方向に書かれている。本明細書で提供される見出しは、本開示の様々な態様の限定ではなく、それらは全体として本明細書を参照することができる。したがって、直後に定義される用語は、その全体が本明細書を参照することによってより十分に定義される。

【0041】

[0043]「約」という用語は、本明細書において、およそ、ほぼ、おおよそ、又はその領域を意味するために使用される。「約」という用語が数値範囲と共に使用される場合、これは、記載される数値範囲より上及び下に境界を伸長させることによってその範囲を修飾する。一般的に、「約」という用語は、数値を、記載される値より上及び下に例えば１０パーセント上又は下（より高い又はより低い）の変動によって修飾することができる。例えば、「ＡＳＯは、ＡＳＯの投与後の細胞におけるＮＬＲＰ３タンパク質の発現を少なくとも約６０％低減させる」と記載されている場合、ＮＬＲＰ３レベルは、５０％～７０％の範囲で低減することを暗示している。

【0042】

[0044]「末梢神経障害」という用語は、本明細書で使用される場合、脳及び脊髄への並びに脳及び脊髄からのメッセージを、体の残りから及び体の残りへと伝える神経の損傷、炎症、傷害、又は疾患によって特徴付けられる疾患又は状態を指す。ある特定の態様では、末梢神経障害は、末梢神経の炎症又は末梢神経周囲の炎症を含む。一部の態様では、末梢神経障害は、糖尿病、外傷、自己免疫障害、腎障害、肝障害、甲状腺機能低下症、血管障害、異常なビタミンレベル、アルコールの使用、又はこれらの任意の組合せに関連している。一部の態様では、末梢神経障害は、化学療法誘発性末梢神経障害である。

【0043】

[0045]「化学療法誘発性末梢神経障害」又は「ＣＩＰＮ」という用語は、本明細書で使用される場合、１つ又は複数の化学療法を投与された対象に生じる神経障害を指す。ＣＩＰＮは、抗新生物剤によって引き起こされる最も一般的な副作用の１つであり、化学療法を投与された患者の１９％～８５％より多くに起こる。ＣＩＰＮの最も高い発生率は、白金に基づく薬物（７０％～１００％）、タキサン（１１％～８７％）、サリドマイド及びそのアナログ（２０％～６０％）、並びにイキサベピロン（６０％～６５％）を投与された患者である。ＣＩＰＮは、様々な強度及び持続時間を呈し、症状は、急性、一過性の熱感から、慢性疼痛及び非可逆的神経損傷を伴う末梢神経の永続的な変化までの範囲であり得る。ＣＩＰＮは、主に知覚神経障害であり、これは運動神経及び自律神経の変化を伴い得る。疼痛及び知覚異常は、化学療法の停止後数カ月又は数年持続し、一部の患者は、がんが消失したにもかかわらず、前回のがんの処置によって誘発される衰弱性の神経障害を有し得る。症状は通常、足及び手に最初に存在し、一般的に四肢の最も遠位部分が最も大きい欠陥を示す典型的な「手袋靴下型」神経障害として存在する。ＣＩＰＮの症状としては、これらに限定されないが、痺れ、うずき、触覚の変化、感触の障害、感覚異常、触れること及び高温又は低温によって誘導される異常感覚、痛みを伴う知覚（自然発生の灼熱感、銃撃又は電気ショック様の疼痛を含む）、機械的又は熱による異痛症及び痛覚過敏、並びに知覚喪失（重度の症例）が挙げられる。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＺａｊａｃｚｋｏｗｓｋａら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．２０（６）：１４５１（Ｍａｒｃｈ ２０１９）を参照されたい。

【0044】

[0046]「アンチセンスオリゴヌクレオチド」（ＡＳＯ）という用語は、ヌクレオチド間連結を通して互いに共有結合により連結されているヌクレオシド、例えば天然に存在するヌクレオシド又はその修飾型のオリゴマー又はポリマーを指す。本開示にとって有用なＡＳＯは、少なくとも１つの天然に存在しないヌクレオシドを含む。ＡＳＯは、ＡＳＯが標的核酸配列にハイブリダイズするように、標的核酸と少なくとも部分的に相補的である。

【0045】

[0047]「核酸」又は「ヌクレオチド」という用語は、複数の核酸を含むと意図される。一部の態様では、「核酸」又は「ヌクレオチド」という用語は、ｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏでの標的配列、例えばｐｒｅ－ｍＲＮＡ、ｍＲＮＡ、又はＤＮＡを指す。用語が、標的配列中の核酸又はヌクレオチドを指す場合、核酸又はヌクレオチドは、細胞内の天然に存在する配列であり得る。他の態様では、「核酸」又は「ヌクレオチド」は、本開示のＡＳＯ中の配列を指す。用語が、ＡＳＯ中の配列を指す場合、核酸又はヌクレオチドは、天然に存在しない、すなわち化学合成された、酵素により産生された、組換えにより産生された、又はその組合せであり得る。一部の態様では、ＡＳＯ中の核酸又はヌクレオチドは、合成又は組換えにより産生され、天然に存在する配列又はその断片ではない。一部の態様では、ＡＳＯ中の核酸又はヌクレオチドは、本質的に天然に存在しない少なくとも１つのヌクレオシドアナログを含有することから、天然に存在しない。

【0046】

[0048]「ヌクレオチド」という用語は、本明細書で使用される場合、糖部分、塩基部分、及び共有結合により連結された基（連結基）、例えばリン酸塩又はホスホロチオエートヌクレオチド間連結基を含むグリコシドを指し、天然に存在するヌクレオチド、例えばＤＮＡ又はＲＮＡ、及び本明細書において「ヌクレオチドアナログ」とも呼ばれる修飾された糖及び／又は塩基部分を含む天然に存在しないヌクレオチドの両方を含む。本明細書において、単一のヌクレオチドは、モノマー又は単位と呼ばれ得る。ある特定の態様では、「ヌクレオチドアナログ」という用語は、修飾された糖部分を有するヌクレオチドを指す。修飾された糖部分を有するヌクレオチド（例えば、ＬＮＡ）の非限定的な例は、本明細書の他所で開示されている。他の態様では、「ヌクレオチドアナログ」という用語は、修飾された核酸塩基部分を有するヌクレオチドを指す。修飾された核酸塩基部分を有するヌクレオチドとしては、これらに限定されないが、５－メチル－シトシン、イソシトシン、シュードイソシトシン、５－ブロモウラシル、５－プロピニルウラシル、６－アミノプリン、２－アミノプリン、イノシン、ジアミノプリン、及び２－クロロ－６－アミノプリンが挙げられる。一部の態様では、「ヌクレオチド」、「単位」、及び「モノマー」という用語は互換的に使用される。ヌクレオチド又はモノマーの配列に言及する場合、言及されているのは、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、又はＵ、及びそのアナログなどの塩基の配列であることが認識される。

【0047】

[0049]「ヌクレオシド」という用語は、本明細書で使用される場合、糖部分及び塩基部分を含むグリコシドを指すために使用され、したがってＡＳＯのヌクレオチド間のヌクレオチド間連結によって共有結合により連結されたヌクレオチド単位について言及する場合に使用することができる。生物工学の分野では、「ヌクレオチド」という用語はしばしば、核酸のモノマー又は単位を指すために使用される。ＡＳＯの文脈では、「ヌクレオチド」という用語は、塩基のみ、すなわち糖骨格及びヌクレオチド間連結の存在が暗示される、シトシン（ＤＮＡ及びＲＮＡ）、グアニン（ＤＮＡ及びＲＮＡ）、アデニン（ＤＮＡ及びＲＮＡ）、チミン（ＤＮＡ）及びウラシル（ＲＮＡ）を含む核酸塩基配列を指し得る。同様に、詳細には１つ又は複数のヌクレオチド間連結基が修飾されているオリゴヌクレオチドの場合、「ヌクレオチド」という用語は、「ヌクレオシド」を指し得る。例えば、「ヌクレオチド」という用語は、たとえヌクレオシド間の連結の存在又は性質を指定している場合であっても使用することができる。

【0048】

[0050]「ヌクレオチド長」という用語は、本明細書で使用される場合、所定の配列中のヌクレオチド（モノマー）の総数を意味する。例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２０６の配列（配列番号１０１）は、２０個のヌクレオチドを有し；このように、配列のヌクレオチド長は２０である。したがって、「ヌクレオチド長」という用語は、本明細書において「ヌクレオチド数」と互換的に使用される。

【0049】

[0051]当業者は、オリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドが、５’ヌクレオチド間連結基を含まないが、５’末端基を含み得ることを認識するであろう。

【0050】

[0052]本明細書に記載される化合物は、いくつかの不斉中心を含有することができ、光学的に純粋なエナンチオマー、エナンチオマーの混合物、例えばラセミ体、ジアステレオ異性体の混合物、ジアステレオ異性ラセミ体、又はジアステレオ異性ラセミ体の混合物の形態で存在することができる。一部の態様では、不斉中心は、不斉炭素原子であり得る。「不斉炭素原子」という用語は、４つの異なる置換基を有する炭素原子を意味する。カーン・インゴールド・プレローグ則に従って、不斉炭素原子は、「Ｒ」又は「Ｓ」立体配置であり得る。

【0051】

[0053]本明細書で使用される場合、「二環糖」という用語は、４～７員環の２つの原子を接続する架橋を含み、第２の環を形成して二環式構造をもたらす４～７員環を含む修飾された糖部分を指す。一部の態様では、架橋は、ＬＮＡヌクレオシドにおいて観察されるように、ヌクレオシドのリボース糖環のＣ２’とＣ４’とを接続する（すなわち、２’－４’架橋）。

【0052】

[0054]本明細書で使用される場合、「コード領域」又は「コード配列」は、アミノ酸に翻訳可能なコドンからなるポリヌクレオチドの部分である。「終止コドン」（ＴＡＧ、ＴＧＡ、又はＴＡＡ）は、典型的にアミノ酸に翻訳されないが、これはコード領域の一部であると考えることができるが、任意の隣接配列、例えばプロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロン、非翻訳領域（「ＵＴＲ」）、及びその他は、コード領域の一部ではない。コード領域の境界は典型的に、得られるポリペプチドのアミノ末端をコードする５’末端の開始コドン、及び得られるポリペプチドのカルボキシル末端をコードする３’末端の翻訳終止コドンによって決定される。

【0053】

[0055]「非コード領域」という用語は、本明細書で使用される場合、コード領域ではないヌクレオチド配列を意味する。非コード領域の例としては、これらに限定されないが、プロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロン、非翻訳領域（「ＵＴＲ」）、非コードエクソン、及びその他が挙げられる。エクソンの一部は、各転写物の５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）又は３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）の全体又は一部であり得る。非翻訳領域は、転写物を効率的に翻訳するために、並びに転写物の翻訳速度及び半減期を制御するために重要である。

【0054】

[0056]「領域」という用語は、ヌクレオチド配列の文脈で使用される場合、その配列の区分を指す。例えば、「ヌクレオチド配列内の領域」又は「ヌクレオチド配列の相補体内の領域」という語句はそれぞれ、特定のヌクレオチド配列内又はヌクレオチド配列の相補体内に位置する、ヌクレオチド配列より短いが少なくとも１０ヌクレオチドより長い配列を指す。「部分－配列」又は「部分配列」という用語もまた、ヌクレオチド配列の領域を指し得る。

【0055】

[0057]「下流」という用語は、ヌクレオチド配列を参照する場合、ある核酸又はヌクレオチド配列が、参照ヌクレオチド配列に対して３’に位置することを意味する。ある特定の態様では、下流のヌクレオチド配列は、転写の開始点の後に続く配列に関連する。例えば、遺伝子の翻訳開始コドンは、転写物の開始部位の下流に位置する。

【0056】

[0058]「上流」という用語は、参照ヌクレオチド配列に対して５’に位置するヌクレオチド配列を指す。

【0057】

[0059]本明細書で使用される場合、「調節領域」という用語は、コード領域の上流（５’非コード配列）、コード領域内、又は下流（３’非コード配列）に位置し、関連するコード領域の転写、ＲＮＡプロセシング、安定性、又は翻訳に影響を及ぼすヌクレオチド配列を指す。調節領域は、プロモーター、翻訳リーダー配列、イントロン、ポリアデニル化認識配列、ＲＮＡプロセシング部位、エフェクター結合部位、ＵＴＲ、及びステムループ構造を含み得る。コード領域が、真核細胞における発現に関して意図される場合、ポリアデニル化シグナル及び転写終止配列は通常、コード配列の３’に位置する。

【0058】

[0060]「転写物」という用語は、本明細書で使用される場合、ＤＮＡの転写によって合成され、プロセシング後にメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、すなわち、前駆体メッセンジャーＲＮＡ（ｐｒｅ－ｍＲＮＡ）となる一次転写物、及びプロセシングされたｍＲＮＡそのものを指し得る。「転写物」という用語は、「ｐｒｅ－ｍＲＮＡ」及び「ｍＲＮＡ」と互換的に使用することができる。ＤＮＡ鎖が一次転写物に転写された後、新たに合成された一次転写物は、いくつかの方法で修飾されて、成熟した機能的形態へと変換され、異なるタンパク質、並びにＲＮＡ、例えばｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ及びその他を産生する。このように、「転写物」という用語は、エクソン、イントロン、５’ＵＴＲ、及び３’ＵＴＲを含み得る。

【0059】

[0061]「発現」という用語は、本明細書で使用される場合、ポリヌクレオチドが遺伝子産物、例えばＲＮＡ又はポリペプチドを産生するプロセスを指す。発現は、限定されないが、ポリヌクレオチドのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）への転写及びｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳を含む。発現は「遺伝子産物」を産生する。本明細書で使用される場合、遺伝子産物は、核酸、例えば遺伝子の転写によって産生されたメッセンジャーＲＮＡ、又は転写物から翻訳されたポリペプチドのいずれかであり得る。本明細書に記載される遺伝子産物は、転写後修飾、例えばポリアデニル化若しくはスプライシングを有する核酸、又は翻訳後修飾、例えばメチル化、グリコシル化、脂質の付加、他のタンパク質サブユニットとの会合、若しくはタンパク質切断を有するポリペプチドをさらに含む。

【0060】

[0062]２つ又はそれより多くの核酸の文脈における「同一」又はパーセント「同一性」という用語は、配列同一性の一部としていかなる保存的アミノ酸置換も考慮することなく、最大に一致するように比較及び整列（必要に応じて、ギャップを導入して）させた場合に、同じであるか、又は同じであるヌクレオチド若しくはアミノ酸残基の指定されたパーセンテージを有する２つ又はそれより多くの配列を指す。パーセント同一性は、配列比較ソフトウェア若しくはアルゴリズムを使用して、又は目視での検分によって測定することができる。様々なアルゴリズム及びソフトウェアが当技術分野で公知であり、それらを使用してアミノ酸又はヌクレオチド配列のアライメントを得ることができる。

【0061】

[0063]配列アライメントアルゴリズムの１つのそのような非限定的な例は、Ｋａｒｌｉｎら，１９９０年，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８７：２２６４－２２６８に記載され、Ｋａｒｌｉｎら，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９０：５８７３－５８７７において改変され、並びにＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌら，１９９１，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５：３３８９－３４０２）に組み込まれているアルゴリズムである。ある特定の態様では、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌら，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２に記載されているように使用することができる。ＢＬＡＳＴ－２、ＷＵ－ＢＬＡＳＴ－２（Ａｌｔｓｃｈｕｌら，１９９６，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：４６０－４８０）、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）は、配列を整列させるために使用することができる追加の公開されているソフトウェアプログラムである。ある特定の態様では、２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラムを使用して決定される（例えば、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰ行列及びギャップ重み４０、５０、６０、７０、又は９０、及び長さ重み１、２、３、４、５、又は６を使用して）。ある特定の代替の態様では、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（４８）：４４４－４５３（１９７０））のアルゴリズムを組み込むＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラムを使用して、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性を決定することができる（例えば、ＢＬＯＳＵＭ６２行列又はＰＡＭ２５０行列のいずれか、及びギャップ重み１６、１４、１２、１０、８、６、又は４、及び長さ重み１、２、３、４、５を使用して）。或いは、ある特定の態様では、ヌクレオチド又はアミノ酸配列間のパーセント同一性は、Ｍｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ（ＣＡＢＩＯＳ，４：１１－１７（１９８９））のアルゴリズムを使用して決定される。例えば、パーセント同一性は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）を使用して、及びＰＡＭ１２０残基表、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を使用して決定することができる。当業者は、特定のアライメントソフトウェアによる最大のアライメントのための適切なパラメーターを決定することができる。ある特定の態様では、アライメントソフトウェアのデフォルトパラメーターを使用する。

【0062】

[0064]ある特定の態様では、第１のヌクレオチド配列の第２のヌクレオチド配列に対するパーセンテージ同一性「Ｘ」は、１００×（Ｙ／Ｚ）として計算され、式中Ｙは、第１及び第２の配列のアライメント（目視による検分又は特定の配列アライメントプログラムによって整列させた）における同一のマッチとしてスコアを付けられたアミノ酸残基の数であり、及びＺは、第２の配列における残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列より長い場合、第１の配列の第２の配列に対するパーセント同一性は、第２の配列の第１の配列に対するパーセント同一性より高いであろう。

【0063】

[0065]ポリヌクレオチド参照配列と整列する単一のポリヌクレオチド標的配列内の異なる領域は、各々がその自身のパーセント配列同一性を有し得る。パーセント配列同一性の値は、小数第２位で四捨五入されることに注意されたい。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、及び８０．１４は８０．１に切り捨てられるが、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、及び８０．１９は、８０．２に切り上げられる。同様に、長さの値は常に整数であることにも注意されたい。

【0064】

[0066]本明細書で使用される場合、「相同な」及び「相同性」という用語は、「同一性」及び「同一な」という用語と互換的である。

【0065】

[0067]「天然に存在するそのバリアント」という用語は、哺乳動物、例えばマウス、サル、及びヒトなどの定義された分類群に天然に存在するＮＬＲＰ３ポリペプチド配列又はＮＬＲＰ３核酸配列（例えば、転写物）のバリアントを指す。典型的に、ポリヌクレオチドの「天然に存在するバリアント」に言及する場合、用語はまた、染色体の転座又は重複により、染色体の位置１ｑ４４の２４７、４１６、１５６～２４７、４４９、１０８で見出されるＮＬＲＰ３コードゲノムＤＮＡの任意の対立遺伝子バリアント（すなわち、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＣ＿０００００１．１１のヌクレオチド２４７、４１６、１５６～２４７、４４９、１０８）、及びそれに由来するｍＲＮＡなどのＲＮＡを含み得る。「天然に存在するバリアント」はまた、ＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡの選択的スプライシングに由来するバリアントも含み得る。特定のポリペプチド配列に言及する場合、例えば用語は、タンパク質の天然に存在する形態も含み、したがってこれらを例えば、翻訳と同時の又は翻訳後修飾によって、例えばシグナルペプチド切断、タンパク質切断、グリコシル化等によって処理することができる。

【0066】

[0068]本開示のＡＳＯと、本明細書に記載されるものなどの哺乳動物ＮＬＲＰ３（例えば、ＮＬＲＰ３遺伝子）をコードする核酸の標的領域との間の「相補性」の程度を決定する場合、「相補性」（同様に、「相同性」又は「同一性」）の程度は、最善に整列させた場合のＡＳＯ（又はその領域）の配列と標的領域（又は標的領域の逆相補体）の配列との間のパーセンテージ同一性（又はパーセンテージ相同性）として表記される。パーセンテージは、２つの配列間で同一である整列させた塩基の数を計数するステップ、ＡＳＯにおける連続するモノマーの総数で除算するステップ、及び１００を乗算するステップによって計算される。そのような比較において、ギャップが存在する場合、そのようなギャップは、ギャップ内のモノマーの数が本開示のＡＳＯと標的領域との間で異なる領域ではなくて単なるミスマッチであることが好ましい。

【0067】

[0069]「相補体」という用語は、本明細書で使用される場合、参照配列と相補的である配列を示す。相補性は、２つのＤＮＡ又はＲＮＡ配列を互いに逆方向となるように整列させた場合に、配列における各位置のヌクレオチド塩基が、鏡を見るように、及び物事の逆を見るように相補的であるように、２つのＤＮＡ又はＲＮＡ配列間で共有される特性であることから、ＤＮＡ複製及び転写の塩基本原理であることは周知である。したがって、例えば５’“ＡＴＧＣ”３’の配列の相補体は、３’“ＴＡＣＧ”５’又は５’“ＧＣＡＴ”３’と書くことができる。「逆相補体」、「逆相補的」、及び「逆相補性」という用語は、本明細書で使用される場合、「相補体」、「相補的」、及び「相補性」という用語と互換的である。一部の態様では、「相補的な」という用語は、ＮＬＲＰ３転写物内の連続核酸配列と１００％の一致又は相補性（すなわち、完全に相補的）を指す。一部の態様では、「相補的」という用語は、ＮＬＲＰ３転写物の連続核酸配列と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の一致又は相補性を指す。

【0068】

[0070]「対応している」及び「対応する」という用語は、２つの個別の核酸又はヌクレオチド配列を参照する場合、相同性及び／又は機能性に基づいて互いに対応するか又は類似である配列の領域を明らかにするために使用することができるが、特定の配列のヌクレオチドは、異なるように番号を付けることができる。例えば、遺伝子転写物の異なるアイソフォームは、そのナンバリングが選択的スプライシング及び／又は他の修飾に基づいてそれぞれのアイソフォームにおいて異なり得る、ヌクレオチド配列の類似の又は保存された部分を有し得る。加えて、核酸又はヌクレオチド配列を特徴付ける場合に、異なるナンバリングシステムを使用することができると認識される（例えば、遺伝子転写物及び翻訳開始コドンから配列のナンバリングを開始するか又は５’ＵＴＲを含めるか否か）。さらに、遺伝子又は遺伝子転写物の異なるバリアントの核酸又はヌクレオチド配列は異なり得ることが認識される。しかしながら、本明細書で使用される場合、核酸又はヌクレオチド配列相同性及び／又は機能性を共有するバリアントの領域は、互いに「対応する」と考えられる。例えば、配列番号１（「参照配列」）のヌクレオチドＸ～Ｙ（ここで、Ｘは開始部位であり、Ｙは終止部位である（図１に示すように））に対応するＮＬＲＰ３転写物のヌクレオチド配列は、配列番号１のヌクレオチドＸ～Ｙと同一の配列又は類似の配列を有するＮＬＲＰ３転写物配列（例えば、ＮＬＲＰ３ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ又はｍＲＮＡ）を指す。当業者は、ＮＬＲＰ３転写物配列を配列番号１と整列させることによって、ＮＬＲＰ３転写物配列中の対応するＸ及びＹ残基を同定することができる。

【0069】

[0071]「対応するヌクレオチドアナログ」及び「対応するヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチドアナログ及び天然に存在するヌクレオチド中の核酸塩基が同じ塩基対形成能力、又はハイブリダイズ能力を有することを示すと意図される。例えば、ヌクレオチドの２－デオキシリボース単位がアデニンに連結されている場合、「対応するヌクレオチドアナログ」は、アデニンに連結された五炭糖単位（２－デオキシリボースとは異なる）を含有する。

【0070】

[0072]ＡＳＯ化学の注釈は以下の通りである：ベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオチドは、オキシＢと指定され、式中、Ｂは、チミン（Ｔ）、ウリジン（Ｕ）、シトシン（Ｃ）、５－メチルシトシン（ＭＣ）、アデニン（Ａ）又はグアニン（Ｇ）などのヌクレオチド塩基を指定し、このようにオキシＡ、オキシＴ、オキシＭＣ、オキシＣ及びオキシＧを含む。ＤＮＡヌクレオチドは、ＤＮＡｂによって指定され、式中、小文字のｂは、チミン（Ｔ）、ウリジン（Ｕ）、シトシン（Ｃ）、５－メチルシトシン（Ｍｃ）、アデニン（Ａ）、又はグアニン（Ｇ）などのヌクレオチド塩基を指定し、このようにＤＮＡａ、ＤＮＡｔ、ＤＮＡ及びＤＮＡｇを含む。Ｃ又はｃの前の文字Ｍは、５－メチルシトシンを示す。文字「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオチド間連結を示す。

【0071】

[0073]「ＡＳＯ数」又は「ＡＳＯ Ｎｏ．」という用語は、本明細書で使用される場合、構成要素の詳細な化学構造を有するヌクレオチド配列、例えば、ヌクレオシド（例えば、ＤＮＡ）、ヌクレオシドアナログ（例えば、ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ）、核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、Ｕ、又はＭＣ）、及び骨格構造（例えば、ホスホロチオエート又はホスホロジエステル）に与えられる独自の番号を指す。例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２０６は、ＮＬＲＰ３－２０６（配列番号１０１）を指し得る。

【0072】

[0074]「効力」は、通常、特に示していなければ、ＩＣ_５０又はＥＣ_５０値として、μＭ、ｎＭ、又はｐＭで表記される。効力はまた、パーセント阻害に関しても表記され得る。ＩＣ_５０は、治療分子の阻害濃度の中央値である。ＥＣ_５０は、ビヒクル又は対照（例えば、食塩水）と比較した治療分子の有効濃度の中央値である。機能的アッセイでは、ＩＣ_５０は、生物応答、例えばｍＲＮＡの転写又はタンパク質発現を、治療分子によって達成される生物応答の５０％低減させる治療分子の濃度である。機能的アッセイでは、ＥＣ_５０は、生物応答、例えばｍＲＮＡの転写又はタンパク質発現の５０％を生じる治療分子の濃度である。ＩＣ_５０又はＥＣ_５０は、当技術分野で公知の任意の数の手段によって計算することができる。

【0073】

[0075]本明細書で使用される場合、例えば、ＮＬＲＰ３遺伝子転写物及び／又はＮＬＲＰ３タンパク質の発現を「阻害する」という用語は、ＡＳＯが細胞又は組織におけるＮＬＲＰ３遺伝子転写物及び／又はＮＬＲＰ３タンパク質の発現を低減させることを指す。一部の態様では、「阻害する」という用語は、ＮＬＲＰ３遺伝子転写物又はＮＬＲＰ３タンパク質の完全な阻害（１００％阻害又は検出不能レベル）を指す。他の態様では、「阻害する」という用語は、細胞又は組織におけるＮＬＲＰ３遺伝子転写物及び／又はＮＬＲＰ３タンパク質発現の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％阻害を指す。

【0074】

[0076]本明細書で使用される場合、「細胞外ベシクル」又は「ＥＶ」という用語は、内部空間を囲む膜を含む細胞由来ベシクルを指す。細胞外ベシクルは、それらが由来する細胞より小さい直径を有する全ての膜結合ベシクル（例えばエクソソーム、ナノベシクル）を含む。一部の態様では、細胞外ベシクルは、直径が２０ｎｍ～１０００ｎｍの範囲であり、内部空間（すなわち、内腔）内に、細胞外ベシクルの外部表面上に示されて、及び／又は膜にまたがって様々な高分子ペイロードを含み得る。一部の態様では、ペイロードは、核酸、タンパク質、炭水化物、脂質、小分子、及び／又はその組合せを含み得る。ある特定の態様では、細胞外ベシクルは、足場部分を含む。例として、及びこれらに限定されないが、細胞外ベシクルは、アポトーシス体、細胞の断片、直接又は間接的操作（例えば、連続的押し出し又はアルカリ溶液による処置）によって細胞に由来するベシクル、小胞化したオルガネラ、及び生細胞によって産生されたベシクル（例えば、直接の原形質膜の出芽、又は後期エンドソームと原形質膜との融合）を含む。細胞外ベシクルは、生きている若しくは死亡した生物、外植された組織若しくは臓器、原核細胞若しくは真核細胞、及び／又は培養細胞に由来し得る。一部の態様では、細胞外ベシクルは、１つ又は複数の導入遺伝子産物を発現する細胞によって産生される。

【0075】

[0077]本明細書で使用される場合、「エクソソーム」という用語は、直径２０～３００ｎｍの間（例えば、４０～２００ｎｍの間）の細胞外ベシクルを指す。エクソソームは、内部空間（すなわち、内腔）を囲む膜を含み、一部の態様では、直接原形質膜出芽によって、又は後期エンドソームと原形質膜との融合によって、細胞（例えば、産生細胞）から生成することができる。ある特定の態様では、エクソソームは足場部分を含む。以下に記載するように、エクソソームは、産生細胞に由来することができ、そのサイズ、密度、生化学パラメーター、又はその組合せに基づいて産生細胞から単離することができる。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエクソソームは、１つ又は複数の導入遺伝子産物を発現する細胞によって産生される。

【0076】

[0078]本明細書で使用される場合、「ナノベシクル」という用語は、直径２０～２５０ｎｍの間（例えば、３０～１５０ｎｍの間）の細胞外ベシクルを指し、操作しなければナノベシクルが細胞によって産生されない直接又は間接的操作によって細胞（例えば、産生細胞）から生成される。ナノベシクルを産生するための細胞の適切な操作としては、これらに限定されないが、連続的押し出し、アルカリ溶液による処置、超音波処理、又はその組合せが挙げられる。一部の態様では、ナノベシクルの産生は、産生細胞の破壊をもたらし得る。一部の態様では、本明細書に記載されるナノベシクルの集団は、原形質膜からの直接出芽、又は後期エンドソームと原形質膜との融合によって細胞に由来するベシクルを実質的に含まない。ある特定の態様では、ナノベシクルは足場部分を含む。ナノベシクルは、一旦産生細胞から誘導されると、そのサイズ、密度、生化学パラメーター、又はその組合せに基づいて産生細胞から単離することができる。

【0077】

[0079]本明細書で使用される場合、「表面を操作されたＥＶ、例えばエクソソーム」（例えば、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘで操作されたＥＶ、例えばエクソソーム）という用語は、操作されたＥＶ、例えばエクソソームの表面が、修飾前のＥＶ、例えばエクソソーム、又は天然に存在するＥＶ、例えばエクソソームの表面とは異なるように、ＥＶ、例えばエクソソームの膜又は表面の組成が修飾されたＥＶ、例えばエクソソームを指す。操作は、ＥＶ、例えばエクソソームの表面が変化するように、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上、又はＥＶ、例えばエクソソームの膜内でなされ得る。例えば、膜は、タンパク質、脂質、小分子、炭水化物等の組成が修飾されている。組成は、化学的、物理的、若しくは生物学的方法によって、又は化学的、物理的、若しくは生物的方法により事前に若しくは同時に修飾された細胞から産生されることによって変化させることができる。詳細には、組成は、遺伝子工学によって、又は遺伝子工学によって事前に修飾された細胞から産生されることによって変化させることができる。一部の態様では、表面を操作されたＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの表面に露出され得るか、又はＥＶ、例えばエクソソームの表面に露出した部分のアンカーポイント（結合）であり得る、外因性タンパク質（すなわち、ＥＶ、例えばエクソソームが天然に発現しないタンパク質）又はその断片若しくはバリアントを含む。他の態様では、表面を操作されたＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの表面に露出され得るか、又はＥＶ、例えばエクソソームの表面に露出した部分のアンカーポイント（結合）であり得る、天然のエクソソームタンパク質（例えば、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘ）又はその断片若しくはバリアントの高い発現（例えば、多数の）を含む。

【0078】

[0080]本明細書で使用される場合、「内腔が操作されたエクソソーム」（例えば、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｙで操作されたエクソソーム）は、ＥＶ、例えばエクソソームの内腔が、修飾前のＥＶ、例えばエクソソーム又は天然に存在するＥＶ、例えばエクソソームの内腔とは異なるように、ＥＶ、例えばエクソソームの膜又は内腔の組成が修飾されているＥＶ、例えばエクソソームを指す。操作は、ＥＶ、例えばエクソソームの内腔が変化するように、ＥＶ、例えばエクソソームの内腔又は膜での直接の操作であり得る。例えば、膜は、ＥＶ、例えばエクソソームの内腔が修飾されるように、タンパク質、脂質、小分子、炭水化物等の組成が修飾されている。組成は、化学的、物理的、若しくは生物学的方法によって、又は化学的、物理的、若しくは生物的方法により事前に修飾された細胞から産生されることによって変化させることができる。詳細には、組成は、遺伝子工学によって、又は遺伝子工学によって事前に修飾された細胞から産生されることによって変化させることができる。一部の態様では、内腔が操作されたエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの内腔に露出され得るか、又はＥＶ、例えばエクソソームの内層上に露出した部分のアンカーポイント（結合）であり得る、外因性タンパク質（すなわち、ＥＶ、例えばエクソソームが天然に発現しないタンパク質）又はその断片若しくはバリアントを含む。他の態様では、内腔が操作されたＥＶ、例えばエクソソームは、エクソソームの内腔に露出され得るか、又はエクソソームの内腔に露出した部分のアンカーポイント（結合）であり得る、天然のエクソソームタンパク質（例えば、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘ又はＳｃａｆｆｏｌｄ Ｙ）又はその断片若しくはバリアントの高い発現を含む。

【0079】

[0081]「修飾された」という用語は、本明細書に記載されるＥＶ、例えばエクソソームの文脈で使用される場合、修飾されたＥＶ、例えばエクソソームが天然に存在するＥＶ、例えばエクソソームとは異なるように、ＥＶ、例えばエクソソーム及び／又はその産生細胞を変更又は操作することを指す。一部の態様では、本明細書に記載される修飾されたＥＶ、例えばエクソソームは、天然に存在するＥＶ、例えばエクソソームの膜と比較してタンパク質、脂質、小分子、炭水化物等の組成が異なる膜を含む（例えば、膜は、高密度若しくは多数の天然のエクソソームタンパク質を含み、及び／又は膜は、エクソソームに天然では見出されないタンパク質（例えば、ＡＳＯ）を含む）。ある特定の態様では、膜に対するそのような修飾は、ＥＶ、例えばエクソソームの外部表面を変化させる（例えば、本明細書に記載される表面が操作されたＥＶ、例えばエクソソーム）。ある特定の態様では、膜に対するそのような修飾は、ＥＶ、例えばエクソソームの内腔を変化させる（例えば、本明細書に記載される内腔が操作されたＥＶ、例えばエクソソーム）。

【0080】

[0082]本明細書で使用される場合、「足場部分」という用語は、目的のペイロード又は任意の他の化合物（例えば、ＡＳＯ）をＥＶ、例えばエクソソームの内腔表面又は外部表面のいずれかでＥＶ、例えばエクソソームに係留させるために使用することができる分子を指す。ある特定の態様では、足場部分は合成分子を含む。一部の態様では、足場部分は非ポリペプチド部分を含む。他の態様では、足場部分は、ＥＶ、例えばエクソソームに天然に存在する脂質、炭水化物、又はタンパク質を含む。一部の態様では、足場部分は、ＥＶ、例えばエクソソームに天然に存在しない脂質、炭水化物、又はタンパク質を含む。ある特定の態様では、足場部分はＳｃａｆｆｏｌｄ Ｘである。一部の態様では、足場部分はＳｃａｆｆｏｌｄ Ｙである。さらなる態様では、足場部分はＳｃａｆｆｏｌｄ Ｘ及びＳｃａｆｆｏｌｄ Ｙの両方である。本開示と共に使用することができる他の足場部分の非限定的な例としては、アミノペプチダーゼＮ（ＣＤ１３）；ネプリリシン、別名膜メタロエンドペプチダーゼ（ＭＭＥ）；エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー１（ＥＮＰＰ１）；ニューロピリン－１（ＮＲＰ１）；ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＰＤＧＦＲ、ＧＰＩアンカータンパク質、ラクトアドへリン（ＭＦＧＥ８）、ＬＡＭＰ２、及びＬＡＭＰ２Ｂが挙げられる。

【0081】

[0083]本明細書で使用される場合、「Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘ」という用語は、エクソソームの表面上で最近同定されているエクソソームタンパク質を指す。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第１０，１９５，２９０号を参照されたい。Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘタンパク質の非限定的な例としては、プロスタグランジンＦ２受容体陰性調節因子（「ＰＴＧＦＲＮタンパク質」）；ベイシジン（「ＢＳＧタンパク質」）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー２（「ＩＧＳＦ２タンパク質」）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー３（「ＩＧＳＦ３タンパク質」）；免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー８（「ＩＧＳＦ８タンパク質」）；インテグリンベータ－１（「ＩＴＧＢ１タンパク質）；インテグリンアルファ－４（「ＩＴＧＡ４タンパク質」）；４Ｆ２細胞表面抗原重鎖（「ＳＬＣ３Ａ２タンパク質」）；ＡＴＰ輸送体タンパク質のクラス（「ＡＴＰ１Ａ１タンパク質」、「ＡＴＰ１Ａ２タンパク質」、「ＡＴＰ１Ａ３タンパク質」、「ＡＴＰ１Ａ４タンパク質」、「ＡＴＰ１Ｂ３タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂ１タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂ２タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂ３タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂタンパク質」）；及びその機能的断片が挙げられる。一部の態様では、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘタンパク質は、タンパク質全体又はその断片（例えば、機能的断片、例えば別の部分を、ＥＶ、例えばエクソソームの外部表面又は内腔表面に係留することが可能な最小の断片）であり得る。一部の態様では、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘは、ある部分（例えば、ＡＳＯ）を、エクソソームの外部表面又は内腔表面に係留することができる。

【0082】

[0084]本明細書で使用される場合、「Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｙ」という用語は、エクソソーム内腔内で新たに同定されたエクソソームタンパク質を指す。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１９／０９９９４２号を参照されたい。Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｙタンパク質の非限定的な例としては、ミリストイル化アラニンリッチタンパク質キナーゼＣ基質（「ＭＡＲＣＫＳタンパク質」）；ミリストイル化アラニンリッチタンパク質キナーゼＣ基質様タンパク質１（「ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質」）；及び脳酸可溶性タンパク質１（「ＢＡＳＰ１タンパク質」）が挙げられる。一部の態様では、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｙタンパク質は、タンパク質全体又はその断片（例えば、機能的断片、例えば、ある部分をエクソソームの内腔表面に係留することが可能な最小の断片）であり得る。一部の態様では、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｙは、ある部分（例えば、ＡＳＯ）をＥＶ、例えばエクソソームの内腔表面に係留することができる。一部の態様では、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｙは、ある部分（例えば、ＡＳＯ）を、ＥＶ、例えばエクソソームの外部表面に係留することができる。

【0083】

[0085]本明細書で使用される場合、タンパク質（例えば、治療用タンパク質、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘ、又はＳｃａｆｆｏｌｄ Ｙ）の「断片」という用語は、天然に存在する配列より短い、天然に存在するタンパク質と比較してＮ－及び／若しくはＣ末端が欠失している、又はタンパク質の任意の部分が欠失しているタンパク質のアミノ酸配列を指す。本明細書で使用される場合、「機能的断片」という用語は、タンパク質機能を保持するタンパク質断片を指す。したがって、一部の態様では、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘタンパク質の機能的断片は、ある部分を、ＥＶ、例えばエクソソームの内腔表面又は外部表面に係留する能力を保持する。同様に、ある特定の態様では、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｙタンパク質の機能的断片は、ある部分を、ＥＶ、例えばエクソソームの内腔表面又は外部表面に係留する能力を保持する。断片が機能的断片であるか否かは、ウェスタンブロット、ＦＡＣＳ解析、及び断片と自己蛍光タンパク質、例えばＧＦＰとの融合を含む当技術分野で公知の任意の方法によって評価し、ＥＶ、例えばエクソソームのタンパク質含有量を決定することができる。ある特定の態様では、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘタンパク質の機能的断片は、天然に存在するＳｃａｆｆｏｌｄ Ｘタンパク質の能力、例えばある部分を係留する能力の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約１００％を保持する。一部の態様では、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｙタンパク質の機能的断片は、天然に存在するＳｃａｆｆｏｌｄ Ｙタンパク質の能力、例えば別の分子を係留する能力の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約１００％を保持する。

【0084】

[0086]本明細書で使用される場合、分子（例えば、機能的分子、抗原、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘ及び／又はＳｃａｆｆｏｌｄ Ｙ）の「バリアント」という用語は、当技術分野で公知の方法によって比較した場合に、別の分子とある特定の構造及び機能的同一性を共有する分子を指す。例えば、タンパク質のバリアントは、別のタンパク質における置換、挿入、欠失、フレームシフト、又は再配列を含み得る。

【0085】

[0087]一部の態様では、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘのバリアントは、全長の成熟ＰＴＧＦＲＮ、ＢＳＧ、ＩＧＳＦ２、ＩＧＳＦ３、ＩＧＳＦ８、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＡ４、ＳＬＣ３Ａ２、若しくはＡＴＰトランスポータータンパク質、又はＰＴＧＦＲＮ、ＢＳＧ、ＩＧＳＦ２、ＩＧＳＦ３、ＩＧＳＦ８、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＡ４、ＳＬＣ３Ａ２、若しくはＡＴＰトランスポータータンパク質の断片（例えば、機能的断片）と少なくとも約７０％の同一性を有するバリアントを含む。一部の態様では、ＰＴＧＦＲＮのバリアント又は断片のバリアントは、配列番号３０１に記載のＰＴＧＦＲＮ又はその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＢＳＧのバリアント又は断片のバリアントは、配列番号３０３に記載のＢＳＧ又はその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＩＧＳＦ２のバリアント又は断片のバリアントは、配列番号３０８に記載のＩＧＳＦ２又はその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＩＧＳＦ３のバリアント又は断片のバリアントは、配列番号３０９に記載のＩＧＳＦ３又はその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＩＧＳＦ８のバリアント又は断片のバリアントは、配列番号３０４に記載のＩＧＳＦ８又はその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＩＴＧＢ１のバリアント又は断片のバリアントは、配列番号３０５に記載のＩＴＧＢ１又はその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＩＴＧＡ４のバリアント又は断片のバリアントは、配列番号３０６に記載のＩＴＧＡ４又はその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＳＬＣ３Ａ２のバリアント又は断片のバリアントは、配列番号３０７に記載のＳＬＣ３Ａ２又はその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＡＴＰ１Ａ１のバリアント又は断片のバリアントは、配列番号３１０に記載のＡＴＰ１Ａ１又はその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＡＴＰ１Ａ２のバリアント又は断片のバリアントは、配列番号３１１に記載のＡＴＰ１Ａ２又はその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＡＴＰ１Ａ３のバリアント又は断片のバリアントは、配列番号３１２に記載のＡＴＰ１Ａ３又はその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＡＴＰ１Ａ４のバリアント又は断片のバリアントは、配列番号３１３に記載のＡＴＰ１Ａ４又はその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＡＴＰ１Ｂ３のバリアント又は断片のバリアントは、配列番号３１４に記載のＡＴＰ１Ｂ３又はその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＡＴＰ２Ｂ１のバリアント又は断片のバリアントは、配列番号３１５に記載のＡＴＰ２Ｂ１又はその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＡＴＰ２Ｂ２のバリアント又は断片のバリアントは、配列番号３１６に記載のＡＴＰ２Ｂ２又はその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＡＴＰ２Ｂ３のバリアント又は断片のバリアントは、配列番号３１７に記載のＡＴＰ２Ｂ３又はその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＡＴＰ２Ｂ４のバリアント又は断片のバリアントは、配列番号３１８に記載のＡＴＰ２Ｂ４又はその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、本明細書に開示されるＳｃａｆｆｏｌｄ Ｘタンパク質のバリアント又は断片のバリアントは、ＥＶ、例えばエクソソームを特に標的化する能力を保持する。一部の態様では、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘは、１つ又は複数の変異、例えば保存的アミノ酸置換を含む。

【0086】

[0088]一部の態様では、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｙのバリアントは、ＭＡＲＣＫＳ、ＭＡＲＣＫＳＬ１、ＢＡＳＰ１、又はＭＡＲＣＫＳ、ＭＡＲＣＫＳＬ１、若しくはＢＡＳＰ１の断片と少なくとも７０％の同一性を有するバリアントを含む。一部の態様では、ＭＡＲＣＫＳのバリアント又は断片のバリアントは、配列番号４０１に記載のＭＡＲＣＫＳ又はその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＭＡＲＣＫＳＬ１のバリアント又は断片のバリアントは、配列番号４０２に記載のＭＡＲＣＫＳＬ１又はその機能的断片と少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、ＢＡＳＰ１のバリアント又は断片のバリアントは、配列番号４０３に記載のＢＡＳＰ１又はその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。一部の態様では、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｙタンパク質のバリアント又は断片のバリアントは、ＥＶ、例えばエクソソームの内腔表面に特に標的化される能力を保持している。一部の態様では、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｙは、１つ又は複数の変異、例えば保存的アミノ酸置換を含む。

【0087】

[0089]「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基に交換されているアミノ酸置換である。塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む、類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが、当技術分野で定義されている。このように、ポリペプチド中のアミノ酸が、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸に交換されている場合、置換は保存的であると考えられる。別の態様では、アミノ酸の列を、側鎖ファミリーメンバーの順序及び／又は組成が異なる構造的に類似の列に保存的に交換することができる。

【0088】

[0090]２つのポリヌクレオチド又はポリペプチド配列間の「パーセント配列同一性」又は「パーセント同一性」という用語は、２つの配列の最適なアライメントのために導入しなければならない付加又は欠失（すなわちギャップ）を考慮に入れて、比較ウィンドウにわたって配列が共有する同一の一致した位置の数を指す。一致した位置は、同一のヌクレオチド又はアミノ酸が、標的及び参照配列の両方に存在する任意の位置である。標的配列に示されるギャップは、ギャップがヌクレオチドでもアミノ酸でもないことから計数されない。同様に、参照配列に示されるギャップは、標的配列のヌクレオチド又はアミノ酸が計数されるが、参照配列からのヌクレオチド又はアミノ酸は計数されないことから計数されない。

【0089】

[0091]配列同一性のパーセンテージは、同一のアミノ酸残基又は核酸塩基が両方の配列に存在する位置の数を決定して、一致した位置の数を生じるステップ、一致した位置の数を、比較ウィンドウにおける位置の総数で除算するステップ、及び結果に１００を乗算して配列同一性のパーセンテージを生じるステップによって計算される。２つの配列間の配列の比較及びパーセント配列同一性の決定は、オンラインでの使用及びダウンロードの両方で容易に利用可能なソフトウェアを使用して達成され得る。タンパク質及びヌクレオチド配列の両方のアライメントのための好適なソフトウェアプログラムは、様々なソースから入手可能である。パーセント配列同一性を決定するための１つの好適なプログラムは、米国政府の国立バイオテクノロジー情報センターのＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から利用可能なプログラムのＢＬＡＳＴスイートの一部であるｂｌ２ｓｅｑである。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮ又はＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して、２つの配列間の比較を実行する。ＢＬＡＳＴＮは、核酸配列を比較するために使用され、ＢＬＡＳＴＰは、アミノ酸配列を比較するために使用されている。他の好適なプログラムは、例えば、Ｎｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、又はＭａｔｃｈｅｒ、バイオインフォマティクスプログラムのＥＭＢＯＳＳスイートの一部であり、同様に欧州バイオインフォマティクス研究所（ＥＢＩ）のｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａで入手可能である。

【0090】

[0092]ポリヌクレオチド又はポリペプチド参照配列と整列する単一のポリヌクレオチド又はポリペプチド標的配列内の異なる領域は、各々がその自身のパーセント配列同一性を有し得る。パーセント配列同一性の値は、小数第２位で四捨五入されることに注意されたい。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、及び８０．１４は、８０．１に切り捨てられるが、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、及び８０．１９は８０．２に切り上げられる。同様に、長さの値は常に整数であることにも注意されたい。

【0091】

[0093]当業者は、パーセント配列同一性の計算のための配列アライメントの作成が、一次配列データによって排他的に駆動されるバイナリ配列－配列比較に限定されないことを認識するであろう。配列アライメントは、複数の配列アライメントに由来し得る。複数の配列アライメントを作成するための他の好適なプログラムは、ＣｌｕｓｔａｌＷ２であり、ｗｗｗ．ｃｌｕｓｔａｌ．ｏｒｇから入手可能である。別の好適なプログラムは、ＭＵＳＣＬＥであり、ｗｗｗ．ｄｒｉｖｅ５．ｃｏｍ／ｍｕｓｃｌｅ／から入手可能である。ＣｌｕｓｔａｌＷ２及びＭＵＳＣＬＥは、例えばＥＢＩから代替として利用可能である。

【0092】

[0094]配列アライメントは、配列データを、異種供給源からのデータ、例えば構造データ（例えば、結晶学的タンパク質構造）、機能的データ（例えば、変異の位置）、又は系統学的データと統合することによって作成することができることも認識されよう。異種供給源を統合して複数の配列アライメントを作成する好適なプログラムは、Ｔ－Ｃｏｆｆｅｅであり、これはｗｗｗ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇで入手可能であり、或いは、例えばＥＢＩから入手可能である。同様に、パーセント配列同一性を計算するために使用される最終のアライメントを、自動的に又は手作業によりキュレートしてもよいことも認識されよう。

【0093】

[0095]ポリヌクレオチドバリアントは、コード領域、非コード領域、又は両方に変更を含有し得る。一態様では、ポリヌクレオチドバリアントは、サイレント置換、付加、又は欠失を生じるが、コードされるポリペプチドの特性又は活性を変更しない変更を含有する。別の態様では、ヌクレオチドバリアントは、遺伝子コードの縮重によるサイレント置換によって産生される。他の態様では、バリアントは、５～１０、１～５、又は１～２個のアミノ酸が、任意の組合せで置換、欠失、又は付加されている。ポリヌクレオチドバリアントは、多様な理由により、例えば特定の宿主のコドン発現を最適にするために（ヒトｍＲＮＡのコドンを他のコドン、例えば細菌宿主、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に変化させるために）産生することができる。

【0094】

[0096]天然に存在するバリアントは、「対立遺伝子バリアント」と呼ばれ、生物の染色体の所定の座を占有する遺伝子のいくつかの代替形態の１つを指す（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ，Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．，編，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。これらの対立遺伝子バリアントは、ポリヌクレオチド及び／又はポリペプチドレベルのいずれかで変化することができ、本開示に含まれる。或いは、天然に存在しないバリアントを、突然変異誘発技法又は直接合成によって産生することができる。

【0095】

[0097]タンパク質操作及び組換えＤＮＡ技術の公知の方法を使用して、ポリペプチドの特徴を改善又は変更するためにバリアントを作製することができる。例えば、１つ又は複数のアミノ酸を、生物機能を実質的に失うことなく、分泌されたタンパク質のＮ末端又はＣ末端から欠失させることができる。その全体が参照により本明細書に組み込まれるＲｏｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２９８４－２９８８（１９９３）は、３、８、又は２７個のアミノ末端アミノ酸残基を欠失させた後であってもヘパリン結合活性を有するバリアントＫＧＦタンパク質を報告した。同様に、インターフェロンガンマは、このタンパク質のカルボキシ末端から８～１０個のアミノ酸残基を欠失させた後に、最大１０倍高い活性を示した（Ｄｏｂｅｌｉら，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：１９９－２１６（１９８８）、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。

【0096】

[0098]その上、バリアントがしばしば、天然に存在するタンパク質の生物活性と類似の生物活性を保持することは、十分な証拠から実証されている。例えば、Ｇａｙｌｅ及び共同研究者（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２６８：２２１０５－２２１１１（１９９３）、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）は、ヒトサイトカインＩＬ－１ａの広範な変異解析を実施した。彼らは、ランダム変異誘発を使用して、分子の全長にわたってバリアントあたり平均で２．５個のアミノ酸が変化している３，５００個を超える個々のＩＬ－１ａ変異を作製した。あらゆる起こり得るアミノ酸位置で複数の変異を調べた。試験者らは、「分子のほとんどを、［結合又は生物活性］のいずれにもほとんど効果を及ぼすことなく変更することができた」ことを見出した（要約書を参照されたい）。実際に、調べた３，５００個を超えるヌクレオチド配列の中で２３個のみの独自のアミノ酸配列が、野生型とは活性が有意に異なるタンパク質を産生した。

【0097】

[0099]上記のように、ポリペプチドバリアントは、例えば、修飾されたポリペプチドを含む。修飾は、例えばアセチル化、アシル化、ＡＤＰ－リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチド又はヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質又は脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合による架橋の形成、システインの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、ガンマ－カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカーの形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ｐｅｇ化（Ｍｅｉら，Ｂｌｏｏｄ １１６：２７０－７９（２０１０）、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）、タンパク質分解プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化などの転移ＲＮＡに媒介されるタンパク質へのアミノ酸付加、及びユビキチン化を含む。一部の態様では、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘ及び／又はＳｃａｆｆｏｌｄ Ｙは、任意の簡便な位置で修飾される。

【0098】

[0100]本明細書で使用される場合、「連結された」又は「コンジュゲートされた」という用語は互換的に使用され、第１の部分と第２の部分、例えばそれぞれ、コレステロールとＡＳＯ又はＳｃａｆｆｏｌｄ ＸとＡＳＯ、例えば、細胞外ベシクル内又は細胞外ベシクル上で発現された足場部分とＡＳＯ、例えば細胞外ベシクルの内腔表面内又は外部表面上でＳｃａｆｆｏｌｄ Ｘ（例えば、ＰＴＧＦＲＮタンパク質）との間で形成された共有結合又は非共有結合を指す。

【0099】

[0101]「封入された」という用語又は用語の文法的に異なる形態（例えば、封入又は封入する）は、２つの部分を化学的又は物理的に連結することなく、第２の部分（例えば、ＥＶ、例えばエクソソーム）の内部に第１の部分（例えば、ＡＳＯ）を有する状況又はプロセスを指す。一部の態様では、「封入された」という用語は、「内腔内」と互換的に使用することができる。第１の部分（例えば、ＡＳＯ）を第２の部分（例えば、ＥＶ、例えばエクソソーム）に封入する非限定的な例は、本明細書の他所で開示されている。

【0100】

[0102]本明細書で使用される場合、「産生細胞」という用語は、ＥＶ、例えばエクソソームを作製するために使用される細胞を指す。産生細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで培養された細胞、又はｉｎ ｖｉｖｏの細胞であり得る。産生細胞としては、これらに限定されないが、ＥＶ、例えばエクソソームを作製するために有効であることが公知の細胞、例えば、ＨＥＫ２９３細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、ＢＪヒト包皮線維芽細胞、ｆＨＤＦ線維芽細胞、ＡＧＥ．ＨＮ（登録商標）神経前駆細胞、ＣＡＰ（登録商標）羊膜細胞、脂肪間葉系幹細胞、ＲＰＴＥＣ／ＴＥＲＴ１細胞が挙げられる。ある特定の態様では、産生細胞は、抗原提示細胞ではない。一部の態様では、産生細胞は、樹状細胞、Ｂ細胞、肥満細胞、マクロファージ、好中球、Ｋｕｐｆｆｅｒ－Ｂｒｏｗｉｃｚ細胞、これらの細胞のいずれかに由来する細胞、又はこれらの任意の組合せではない。一部の態様では、本開示において有用なＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上に露出したＭＨＣクラスＩ又はクラスＩＩ分子上に抗原を有しないが、代わりにＳｃａｆｆｏｌｄ Ｘ及び／又はＳｃａｆｆｏｌｄ Ｙとの結合によって、ＥＶ、例えばエクソソームの内腔内又はＥＶ、例えばエクソソームの表面上に抗原を有し得る。

【0101】

[0103]本明細書で使用される場合、「単離する」、「単離された」、及び「単離している」、又は「精製する」、「精製した」、及び「精製している」という用語、並びに「抽出された」及び「抽出している」という用語は、互換的に使用され、１つ又は複数の精製プロセス、例えば所望のＥＶ調製物の選択又は濃化を受けている所望のＥＶの調製状態（例えば、複数の既知又は未知の量及び／又は濃度）を指す。一部の態様では、本明細書で使用される単離する又は精製するステップは、ＥＶを、産生細胞を含有する試料から除去する、部分的に（例えば、分画を）除去するプロセスである。一部の態様では、単離されたＥＶ組成物は、検出可能な望ましくない活性を有しないか、或いは望ましくない活性のレベル若しくは量が、許容可能なレベル若しくは量であるか、若しくはそれ未満である。他の態様では、単離されたＥＶ組成物は、許容される量及び／又は濃度の、又はそれより上の所望のＥＶの量及び／又は濃度を有する。他の態様では、単離されたＥＶ組成物は、組成物が得られる出発材料（例えば、産生細胞調製物）と比較して濃化されている。この濃化は、出発材料と比較して１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、９９．９９９％、９９．９９９９％、又は９９．９９９９％より上であり得る。一部の態様では、単離されたＥＶ調製物は、残存生物由来物質を実質的に含まない。一部の態様では、単離されたＥＶ調製物は、任意の夾雑する生体物質を、１００％含まない、９９％含まない、９８％含まない、９７％含まない、９６％含まない、９５％含まない、９４％含まない、９３％含まない、９２％含まない、９１％含まない、又は９０％含まない。残存生物由来物質は、アビオティック物質（化学物質を含む）又は望ましくない核酸、タンパク質、脂質、若しくは代謝物を含み得る。残存生物由来物質を実質的に含まないことはまた、ＥＶ組成物が、検出可能な産生細胞を含有しないこと、及びＥＶのみが検出可能であることも意味する。

【0102】

[0104]本明細書で使用される場合、「ペイロード」という用語は、ＥＶと接触する標的（例えば標的細胞）に作用する作用剤を指す。ＥＶ、例えばエクソソーム上に含めることができるペイロードの非限定的な例は、ＡＳＯである。ＥＶ、例えばエクソソーム及び／又は産生細胞の中又は上に導入することができるペイロードは、ヌクレオチド（例えば、検出可能な部分若しくは毒素を含む、又は転写を破壊するヌクレオチド）、核酸（例えば、酵素などのポリペプチドをコードするＤＮＡ若しくはｍＲＮＡ分子、又は調節機能を有するＲＮＡ分子、例えばｍｉＲＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、及びｓｉＲＮＡ）、アミノ酸（例えば、検出可能な部分若しくは毒素を含む、又は翻訳を破壊するアミノ酸）、ポリペプチド（例えば、酵素）、脂質、炭水化物、及び小分子（例えば、小分子薬物又は毒素）などの作用剤を含む。ある特定の態様では、ペイロードはＡＳＯを含む、本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、天然であるか、又は部分的若しくは完全に合成により産生されるかによらず、免疫グロブリン及びその断片を包含する。用語はまた、免疫グロブリン結合ドメインと相同である結合ドメインを有する任意のタンパク質も含む。「抗体」は、抗原に特異的に結合して抗原を認識する免疫グロブリン遺伝子からのフレームワーク領域又はその断片を含むポリペプチドをさらに含む。本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、対象に導入した場合にそのものに対する免疫応答（細胞性又は液性）を誘発する任意の作用剤を指す。抗体という用語の使用は、全抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、及び組換え抗体、その断片を含むことを意味し、一本鎖抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、キメラ、マウス－ヒト、マウス－霊長類、霊長類－ヒトモノクローナル抗体、抗イディオタイプ抗体、抗体断片、例えば、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）_２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）_２、Ｆ（ａｂ１）_２、Ｆｖ、ｄＡｂ、及びＦｄ断片、ダイアボディ、並びに抗体関連ポリペプチドをさらに含む。抗体は、それらが所望の生物活性又は機能を示す限り、二特異性抗体及び多特異性抗体を含む。

【0103】

[0105]「個体」、「対象」、「宿主」、及び「患者」という用語は、本明細書において互換的に使用され、診断、処置、又は治療が望まれる任意の哺乳動物対象、特にヒトを指す。本明細書に記載される組成物及び方法は、ヒトの治療及び獣医学応用に応用可能である。一部の態様では、対象は哺乳動物であり、他の態様では対象はヒトである。本明細書で使用される場合、「哺乳動物対象」は、これらに限定されないが、ヒト、家畜動物（例えば、イヌ、ネコ、及びその他）、農場動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、及びその他）、及び実験動物（例えば、サル、ラット、マウス、ウサギ、モルモット、及びその他）を含む全ての哺乳動物を含む。

【0104】

[0106]「医薬組成物」という用語は、活性成分の生物活性を有効にすることを可能にする形態にあり、組成物が投与される対象に対して許容不可能に毒性である追加の構成要素を含有しない調製物を指す。そのような組成物は無菌的であり得る。

【0105】

[0107]本明細書で使用される場合、「実質的に含まない」という用語は、ＥＶ、例えばエクソソームを含む試料が、質量／体積（ｍ／ｖ）パーセンテージ濃度で１０％未満の高分子を含むことを意味する。一部の画分は、０．００１質量／体積％未満、０．０１質量／体積％未満、０．０５質量／体積％未満、０．１質量／体積％未満、０．２質量／体積％未満、０．３質量／体積％未満、０．４質量／体積％未満、０．５質量／体積％未満、０．６質量／体積％未満、０．７質量／体積％未満、０．８質量／体積％未満、０．９質量／体積％未満、１質量／体積％未満、２質量／体積％未満、３質量／体積％未満、４質量／体積％未満、５質量／体積％未満、６質量／体積％未満、７質量／体積％未満、８質量／体積％未満、９質量／体積％未満、又は１０質量／体積（ｍ／ｖ）％未満の高分子を含有し得る。

【0106】

[0108]本明細書で使用される場合、「高分子」という用語は、核酸、夾雑タンパク質、脂質、炭水化物、代謝物、又はその組合せを意味する。

【0107】

[0109]本明細書で使用される場合、「従来のエクソソームタンパク質」という用語は、これらに限定されないが、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＰＤＧＦＲ、ＧＰＩアンカータンパク質、ラクトアドへリン（ＭＦＧＥ８）、ＬＡＭＰ２、及びＬＡＭＰ２Ｂ、その断片、又はそれらに結合するペプチドを含む、エクソソーム中で濃化されることが既知であるタンパク質を意味する。

【0108】

[0110]「投与する」とは、本明細書で使用される場合、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエクソソームを含む組成物を、薬学的に許容できる経路を介して対象に与えることを意味する。投与経路は、静脈内、例えば静脈内注射及び静脈内注入であり得る。追加の投与経路は、例えば皮下、筋肉内、経口、鼻、及び肺投与を含む。ＥＶ、例えばエクソソームは、少なくとも１つの賦形剤を含む医薬組成物の一部として投与され得る。

【0109】

[0111]例えば本明細書に開示されるＡＳＯ又は細胞外ベシクルの「有効量」は、詳細に記載される目的を実行するために十分な量である。「有効量」は、記載される目的に関連して経験的に及び通例の方法で決定され得る。

【0110】

[0112]「処置する」、「処置」、又は「処置している」は、本明細書で使用される場合、例えば疾患又は状態の重症度の低減；疾患経過の持続時間の低減；疾患又は状態に関連する１つ又は複数の症状の改善又は除去；疾患又は状態を必ずしも治癒しないが、疾患又は状態を有する対象に対する有益な効果の提供を指す。用語はまた、疾患若しくは状態又はその症状の予防又は防止も含む。一態様では、「処置している」又は「処置」は、それを必要とする対象において造血を誘導することを含む。一部の態様では、疾患又は状態は、造血又はその欠損に関連する。ある特定の態様では、疾患又は状態はがんである。一部の態様では、処置することは、がんを有する対象における造血を増強し、増強された造血は、対象における１つ又は複数の免疫細胞の増殖及び／又は分化の増加を含む。

【0111】

[0113]「防止する」又は「防止している」は、本明細書で使用される場合、特定の転帰の発生又は重症度を減少又は低減させることを指す。一部の態様では、転帰を防止することは、予防的処置を通して達成される。一部の態様では、本明細書に記載されるＡＳＯを含むＥＶ、例えばエクソソームは、対象に予防的に投与される。一部の態様では、対象は、がんを発症するリスクがある。一部の態様では、対象は、造血障害を発症するリスクがある。

【0112】

ＩＩ．本開示の方法
[0114]本開示の一部の態様は、それを必要とする対象において末梢神経障害を防止及び／又は処置する方法であって、本明細書に開示されるＮＬＲＰ３アンタゴニストを含むＥＶを投与するステップを含む方法を対象とする。本明細書で使用される場合、ＮＬＲＰ３アンタゴニストはＡＳＯである。本開示にとって有用なＡＳＯは、ＮＬＲＰ３転写物の１つ又は複数の領域（例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡ又はｍＲＮＡ）に特異的にハイブリダイズして、細胞におけるＮＬＲＰ３タンパク質発現の低減及び／又は阻害をもたらすことができる。したがって、そのようなＡＳＯを含むＥＶは、ＮＬＲＰ３タンパク質の発現の増加に関連する末梢神経障害を防止及び／又は処置するために有用であり得る。

【0113】

[0115]一部の態様では、本方法によって処置することができる末梢神経障害は、炎症の増加によって特徴付けられる。一部の態様では、末梢神経障害は、糖尿病、外傷、自己免疫障害、腎障害、肝障害、甲状腺機能低下症、血管障害、異常なビタミンレベル、アルコールの使用、又はこれらの任意の組合せに関連する。一部の態様では、末梢神経障害は、１つ又は複数の末梢神経の炎症を含む。

【0114】

[0116]一部の態様では、末梢神経障害は、化学療法誘発性末梢神経障害（ＣＩＰＮ）を含む。一部の態様では、対象は以前に化学療法を投与された。一部の態様では、対象は、本明細書に開示されるＮＬＲＰ３アンタゴニストを含むＥＶを投与する少なくとも約１週間前、少なくとも約２週間前、少なくとも約３週間前、少なくとも約４週間前、少なくとも約６週間前、少なくとも約８週間前、少なくとも約１０週間前、少なくとも約１２週間前、少なくとも約１６週間前、少なくとも約２０週間前、少なくとも約２４週間前、又は少なくとも約２８週間前に化学療法を投与された。一部の態様では、対象は、同時の化学療法の間に本明細書に開示されるＮＬＲＰ３アンタゴニストを含むＥＶを投与される。一部の態様では、本明細書に開示されるＮＬＲＰ３アンタゴニストを含むＥＶは、化学療法と同じ日に投与される。一部の態様では、本明細書に開示されるＮＬＲＰ３アンタゴニストを含むＥＶ及び化学療法は同じ日に投与されない。一部の態様では、化学療法は、白金誘導体、ビンカアルカロイド、ボルテゾミブ、タキサン、又はこれらの任意の組合せを含む。一部の態様では、化学療法は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ドセタキセル、ビンクリスチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、又はこれらの任意の組合せを含む。ある特定の態様では、化学療法はシスプラチンを含む。

【0115】

[0117]一部の態様では、本明細書に開示されるＮＬＲＰ３アンタゴニストを含むＥＶは、対象における末梢神経障害、例えばＣＩＰＮの１つ又は複数の症状の重症度及び／又は発生を低減させる。一部の態様では、本明細書に開示されるＮＬＲＰ３アンタゴニストを含むＥＶ、細胞外ベシクル又はＡＳＯは、対象におけるＭ２マクロファージ極性化を誘発する。一部の態様では、本明細書に開示されるＮＬＲＰ３アンタゴニストを含むＥＶは、神経の骨髄性炎症、髄膜骨髄性炎症、神経鞘炎症、又はこれらの任意の組合せを低減させる。一部の態様では、本明細書に開示されるＮＬＲＰ３アンタゴニストを含むＥＶは、神経鞘の骨髄性炎症を低減させる。一部の態様では、本明細書に開示されるＮＬＲＰ３アンタゴニストを含むＥＶは、神経根、神経、及び／又は筋肉のうちの１つ又は複数におけるマクロファージ流入を低減させる。一部の態様では、本明細書に開示されるＮＬＲＰ３アンタゴニストを含むＥＶは、神経根、神経、及び／又は筋肉のうちの１つ又は複数におけるマクロファージの食作用を低減させる。一部の態様では、細胞外ベシクルは、うずき、疼痛、灼熱感、痺れ、暑さに敏感、寒さに敏感、細かい運動スキルが困難、及びこれらの任意の組合せから選択される、対象における１つ又は複数の症状の重症度又は発生を低減させる。一部の態様では、細胞外ベシクルは、疼痛の重症度又は発生を低減させる。

【0116】

[0118]一部の態様では、ＥＶは、対象の循環系に静脈内投与される。一部の態様では、ＥＶは、好適な液体中に注入され、対象の静脈に投与される。一部の態様では、ＥＶは、対象の循環系に動脈内投与される。一部の態様では、ＥＶは、好適な液体中に注入され、対象の動脈に投与される。

【0117】

[0119]一部の態様では、ＥＶは、髄腔内投与によって対象に投与される。一部の態様では、ＥＶは、髄腔内投与の後に、胴体に機械的伝達力を適用することによって投与される。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＶｅｒｍａら，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｅｍｅｎｔ．１２：ｅ１２０３０（２０２０）を参照されたい。そのため、本開示のある特定の態様は、それを必要とする対象にＥＶ、例えばエクソソームを投与する方法であって、ＥＶ、例えばエクソソームを対象に髄腔内注射後、対象の胴体に機械的伝達力を適用することによって投与するステップを含む方法を対象とする。一部の態様では、機械的伝達力は、高頻度胸壁又は腰胸部振動呼吸クリアランスデバイス（例えば、Ｓｍａｒｔ Ｖｅｓｔ又はＳｍａｒｔ Ｗｒａｐ、ＥＬＥＣＴＲＯＭＥＤ ＩＮＣ、Ｎｅｗ Ｐｒａｇｕｅ、ＭＮ、ＵＳＡ）を使用して達成される。一部の態様では、機械的伝達力、例えば振動ベストは、髄腔内に投与されたＥＶ、例えばエクソソームの拡散を促進し、神経をさらに末梢へと降下し、このようにより良好なＥＶ、例えばエクソソームの神経への送達を可能にする。

【0118】

[0120]一部の態様では、エクソソームの体内分画内及び体内分画を超えた生体分布は、エクソソームの体内分画への送達後に、対象に作用する外因性の体外力によって操作され得る。これは、体の分画又は全身に機械的伝達、例えば衝撃、振動、振とう、又はマッサージを適用することによる機械的伝達の適用を含む。髄腔内投与後、例えば振動する機械的ジャケットを含むいくつかの手段による胸壁振動の適用は、エクソソームの生体分布を中枢神経軸に沿って又は頭蓋神経及び脊髄神経に沿って拡散させることができ、これは薬物を有するエクソソームによる神経障害の処置において役立ち得る。

【0119】

[0121]一部の態様では、振動ジャケット又は他の類似の手段を介した外部機械的伝達力の適用を使用して、エクソソーム及び他の材料を髄腔内腔の脳脊髄液から末梢循環へと除去することができる。この態様は、内因性の毒性のエクソソーム及び他の有害な高分子、例えばベータ－アミロイド、タウ、アルファ－シヌクレイン、ＴＤＰ４３、ニューロフィラメント、及び過剰な脳脊髄液を、髄腔内腔から排除のために末梢へと除去するために役立ち得る。

【0120】

[0122]一部の態様では、脳室内経路を介して送達されたエクソソームを、腰椎穿刺の組み込みと、脳室－腰椎灌流を可能にすることを同時に行うことによって中枢神経軸全体に移動させることができ、追加の流体はエクソソームの投与後脳室に注入されるが、腰椎穿刺によって既存の中枢神経軸柱のＣＳＦを排出することが可能となる。脳室－腰椎灌流は、ＩＣＶ投与したエクソソームが、中枢神経軸全体に沿って拡散することを可能にし、軟髄膜の炎症及び他の疾患を処置するためにくも膜下腔を完全に覆うことができる。

【0121】

[0123]一部の態様では、外部体外焦点式超音波、熱エネルギー（熱）、又は低温の適用を使用して、これらの現象に対して感受性となるように操作されたエクソソームの体内分画薬物動態及び薬物放出特性を操作することができる。

【0122】

[0124]一部の態様では、常磁性材料を含有するように操作されたエクソソームの体内分画内挙動及び生体分布は、磁石又は磁場の外部からの適用によって操作することができる。

【0123】

[0125]一部の態様では、ＥＶは、脳脊髄液（ＣＳＦ）に到達するように、脊柱管への注射、又はくも膜下腔への注射を介して投与される。一部の態様では、ＥＶは、対象の１つ又は複数の腫瘍に腫瘍内投与される。一部の態様では、ＥＶは鼻腔内投与によって対象に投与される。一部の態様では、ＥＶは、局所投与又は全身投与のいずれかの形態で鼻を通して吸入することができる。ある特定の態様では、ＥＶは鼻腔スプレーとして投与される。一部の態様では、ＥＶは、腹腔内投与によって対象に投与される。一部の態様では、ＥＶは、好適な液体中に注入され、対象の腹膜に注射される。一部の態様では、腹腔内投与は、リンパ系へのＥＶの分布をもたらす。一部の態様では、腹腔内投与は、胸腺、脾臓、及び／又は骨髄へのＥＶの分布をもたらす。一部の態様では、腹腔内投与は、１つ又は複数のリンパ節へのＥＶの分布をもたらす。一部の態様では、腹腔内投与は、頸部リンパ節、鼠径部リンパ節、縦隔リンパ節、又は胸骨リンパ節のうちの１つ又は複数へのＥＶの分布をもたらす。一部の態様では、腹腔内投与は、膵臓へのＥＶの分布をもたらす。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、眼周囲投与によって対象に投与される。一部の態様では、ＥＶは眼周囲組織に注射される。眼周囲の薬物投与は、結膜下、前部テノン嚢下、後部テノン嚢下、及び眼球後投与経路を含む。

【0124】

ＩＩ．Ａ．ＮＬＲＰ３アンタゴニスト
[0126]本開示のある特定の態様は、外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストを含むＥＶを対象に投与する方法を対象とする。本明細書で使用される場合、「ＮＬＲＰ３アンタゴニスト」は、ＮＬＲＰ３経路を阻害又は遮断する物質である。ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、ＮＬＲＰ３の活性及び／又は発現に直接影響を及ぼし得る。或いは、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、ＮＬＲＰ３経路における別の因子の活性及び／又は発現に影響を及ぼすことを含む、ＮＬＲＰ３の活性及び／又は発現に間接的に影響を及ぼし得る。一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、化学化合物、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ペプチド（例えば、タンパク質）、及びこれらの任意の組合せから選択される。ある特定の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストはＡＳＯ、例えば本明細書に開示される任意のＡＳＯである。

【0125】

[0127]一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）、又はペプチドコンジュゲートホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＰＭＯ）である。

【0126】

ＩＩ．Ａ．１．アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）
[0128]一部の態様では、本開示は、ＮＬＲＰ３ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ、及びＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡ、又は哺乳動物ＮＬＲＰ３をコードするそのような核酸分子の天然に存在するバリアントを含む、哺乳動物ＮＬＲＰ３をコードする核酸分子、例えばＮＬＲＰ３核酸、例えばＮＬＲＰ３転写物の機能をモジュレートすることによって、それを必要とする対象において末梢神経障害の処置に使用するためのアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を使用する。本開示の文脈における「ＡＳＯ」という用語は、２つ又はそれより多くのヌクレオチド（すなわち、オリゴヌクレオチド）の共有結合による連結によって形成された分子を指す。

【0127】

[0129]ＡＳＯは、約１０～約３０、例えば１０～２０、１４～２０、１６～２０、又は１５～２５ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む。ある特定の態様では、ＡＳＯは２０ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、１８ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、１９ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、１７ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、１６ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、１５ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、１４ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、１３ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、１２ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、１１ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、１０ヌクレオチド長である。

【0128】

[0130]一部の態様では、ＡＳＯは、約１０～約５０ヌクレオチド長、例えば、約１０～約４５、約１０～約４０、約１０又は約３５、又は約１０～約３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む。ある特定の態様では、ＡＳＯは、２１ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、２２ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、２３ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、２４ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、２５ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、２６ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、２７ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、２８ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、２９ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、３０ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、３１ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、３２ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、３３ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、３４ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、３５ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、３６ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、３７ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、３８ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、３９ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、４０ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、４１ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、４２ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、４３ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、４４ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、４５ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、４６ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、４７ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、４８ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、４９ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、ＡＳＯは、５０ヌクレオチド長である。

【0129】

[0131]「アンチセンスＡＳＯ」、「アンチセンスオリゴヌクレオチド」、及び「オリゴマー」という用語は、本明細書で使用される場合、「ＡＳＯ」という用語と互換的である。

【0130】

[0132]配列番号に対する言及は、特定の核酸塩基配列を含むが、任意の設計又は完全な化学構造を含まない。さらに、本明細書の図面で開示されるＡＳＯは、代表的な設計を示しているが、特に示していない限り、図に示される特定の設計に限定されない。例えば、特許請求の範囲（又は本明細書）が、配列番号１０１に言及する場合、これは、配列番号１０１のみのヌクレオチド配列を含む。本明細書に開示される任意のＡＳＯの設計は、配列番号ＸＸとして書くことができ、５’末端からの１番目のヌクレオチド、２番目のヌクレオチド、３番目のヌクレオチド、１番目のヌクレオチド、２番目のヌクレオチド、及びＮ番目のヌクレオチドの各々が修飾ヌクレオチド、例えばＬＮＡであり、他のヌクレオチドの各々は非修飾ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ）である。

【0131】

[0133]様々な態様では、本開示のＡＳＯは、ＲＮＡ（単位）を含まない。一部の態様では、ＡＳＯは、１つ又は複数のＤＮＡ単位を含む。一態様では、本開示に従うＡＳＯは、直鎖の分子であるか、又は直鎖の分子として合成される。一部の態様では、ＡＳＯは、一本鎖分子であり、同じＡＳＯ（すなわち、二本鎖）内の等価の領域と相補的である、例えば、少なくとも３、４、又は５つの連続するヌクレオチドの短い領域を含まない－この点において、ＡＳＯは、（本質的に）二本鎖である。一部の態様では、ＡＳＯは、本質的に二本鎖ではない。一部の態様では、ＡＳＯはｓｉＲＮＡではない。様々な態様では、本開示のＡＳＯは、連続するヌクレオチド領域から完全になり得る。このように、一部の態様では、ＡＳＯは、実質的に自己相補性ではない。

【0132】

[0134]他の態様では、本開示は、ＡＳＯの断片を含む。例えば、本開示は、本明細書に開示されるＡＳＯの少なくとも１つのヌクレオチド、少なくとも２つの連続するヌクレオチド、少なくとも３つの連続するヌクレオチド、少なくとも４つの連続するヌクレオチド、少なくとも５個の連続するヌクレオチド、少なくとも６個の連続するヌクレオチド、少なくとも７個の連続するヌクレオチド、少なくとも８個の連続するヌクレオチド、又は少なくとも９個の連続するヌクレオチドを含む。本明細書に開示される配列のいずれかの断片は、本開示の一部であると企図される。

【0133】

ＩＩ．Ａ．１．ａ．標的
[0135]好適には、本開示のＡＳＯは、ＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡ又はＮＬＲＰ３タンパク質の発現を下方調節する（例えば、低減するか又は除去する）ことが可能である。この点において、本開示のＡＳＯは、典型的に哺乳動物細胞、例えばヒト細胞、例えば免疫細胞（例えば、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞、及び／又はＴ細胞）におけるＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡレベルの低減を通してＮＬＲＰ３インフラマソームの形成及びこのように活性を遮断することができる。特に、本開示は、ＮＬＲＰ３ ｐｒｅ－ｍＲＮＡの１つ又は複数の領域（例えば、イントロン領域、エクソン領域、及び／又はエクソン－イントロン接合領域）を標的とするＡＳＯを対象とする。特に示していない限り、「ＮＬＲＰ３」という用語は、本明細書で使用される場合、１つ又は複数の種（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、及びクマ）からのＮＬＲＰ３を指し得る。

【0134】

[0136]ＮＬＲＰ３（ＮＬＲＰ３）はまた、ＮＬＲファミリーピリンドメイン含有タンパク質３としても公知である。ＮＬＲＰ３／ＮＬＲＰ３の同義語は公知であり、ＮＬＲＰ３；Ｃ１ｏｒｆ７；ＣＩＡＳ１；ＮＡＬＰ３；ＰＹＰＡＦ１；ヌクレオチド結合オリゴマー形成ドメイン、ロイシンリッチリピート、及びピリンドメイン含有３；寒冷誘導性自己炎症症候群１タンパク質；クリオピリン；ＮＡＣＨＴ、ＬＲＲ及びＰＹＤドメイン含有タンパク質３；アンジオテンシン／バソプレッシン受容体ＡＩＩ／ＡＶＰ様；キャタピラータンパク質１．１；ＣＬＲ１．１；寒冷誘導性自己炎症症候群１タンパク質；及びＰＹＲＩＮ含有ＡＰＡＦ１－様タンパク質１を含む。ヒトＮＬＲＰ３遺伝子の配列は、公開されているＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＣ＿０００００１．１１：２４７４１６１５６－２４７４４９１０８として見出され得る。ヒトＮＬＲＰ３遺伝子は、染色体位置１ｑ４４の２４７、４１６、１５６～２４７、４４９、１０８で見出される。

【0135】

[0137]ヒトＮＬＲＰ３ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ転写物（配列番号１）の配列は、染色体１ｑ４４の残基２４７、４１６、１５６～２４７、４４９、１０８の逆相補体に対応する。ＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡ配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１０７９８２１．２）を、配列番号３（表１）に示すが、但し、配列番号３におけるヌクレオチド「ｔ」は、ｍＲＮＡでは「ｕ」として示される。ヒトＮＬＲＰ３タンパク質の配列は、その各々の全体が参照により本明細書に組み込まれる、公開されている受託番号：Ｑ９６Ｐ２０（基準配列、配列番号１；表１）、Ｑ９６Ｐ２０－２（配列番号４）、Ｑ９６Ｐ２０－３（配列番号５）、Ｑ９６Ｐ２０－４（配列番号６）、Ｑ９６Ｐ２０－５（配列番号７）、及びＱ９６Ｐ２０－６（配列番号８）において見出され得る。

【0136】

【表1】

【0137】

[0138]ＡＳＯの標的核酸配列の例は、ＮＬＲＰ３ ｐｒｅ－ｍＲＮＡである。配列番号１は、ヒトＮＬＲＰ３ゲノム配列（すなわち、染色体１ｑ４４のヌクレオチド２４７，４１６，１５６－２４７，４４９，１０８の逆相補体）である。配列番号１は、配列番号１におけるヌクレオチド「ｔ」が、ｐｒｅ－ｍＲＮＡでは「ｕ」として示されることを除き、ＮＬＲＰ３ ｐｒｅ－ｍＲＮＡ配列と同一である。ある特定の態様では、「標的核酸」は、ＮＬＲＰ３タンパク質コード核酸又はその天然に存在するバリアントのイントロン、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、ｐｒｅ－ｍＲＮＡを含む。他の態様では、標的核酸は、ＮＬＲＰ３タンパク質コード核酸又はその天然に存在するバリアントのエクソン領域、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えばｐｒｅ－ｍＲＮＡを含む。なお別の態様では、標的核酸は、ＮＬＲＰ３タンパク質コード核酸又はその天然に存在するバリアントのエクソン－イントロン接合部、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えばｐｒｅ－ｍＲＮＡを含む。一部の態様では、例えば研究又は診断に使用する場合、「標的核酸」は、ｃＤＮＡ、又は上記のＤＮＡ若しくはＲＮＡ核酸標的に由来する合成オリゴヌクレオチドであり得る。ＮＬＲＰ３ ｐｒｅ－ｍＲＮＡによってコードされるヒトＮＬＲＰ３タンパク質配列を配列番号３として示す。他の態様では、標的核酸は、ＮＬＲＰ３タンパク質コード核酸、又はその天然に存在するバリアントの非翻訳領域、例えば、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、又は両方を含む。

【0138】

[0139]一部の態様では、本開示のＡＳＯは、ＮＬＲＰ３転写物、例えば配列番号１のイントロン内の領域にハイブリダイズする。ある特定の態様では、本開示のＡＳＯは、ＮＬＲＰ３転写物、例えば配列番号１のエクソン内の領域にハイブリダイズする。他の態様では、本開示のＡＳＯは、ＮＬＲＰ３転写物、例えば、配列番号１のエクソン－イントロン接合部内の領域にハイブリダイズする。一部の態様では、本開示のＡＳＯは、ＮＬＲＰ３転写物、例えば、配列番号１（例えば、イントロン、エクソン、又はエクソン－イントロン接合部）内の領域にハイブリダイズし、ＡＳＯは、本明細書の他所で説明される式：５’Ａ－Ｂ－Ｃ３’に従う設計を有する。

【0139】

[0140]一部の態様では、ＡＳＯは、ＮＬＲＰ３タンパク質の特定のアイソフォーム（例えば、アイソフォーム１）をコードするｍＲＮＡを標的とする。一部の態様では、ＡＳＯは、ＮＬＲＰ３タンパク質の全てのアイソフォームを標的とする。他の態様では、ＡＳＯは、ＮＬＲＰ３タンパク質の２つのアイソフォーム（例えば、アイソフォーム１及びアイソフォーム２、アイソフォーム３及びアイソフォーム４、及びアイソフォーム５及びアイソフォーム６）を標的とする。

【0140】

[0141]一部の態様では、ＡＳＯは、ＮＬＲＰ３転写物内の核酸配列、例えば配列番号１に対応する領域と相補的である連続ヌクレオチド配列（例えば、１０～３０ヌクレオチド長、例えば、２０ヌクレオチド長）を含む。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６～２２５（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２０６；配列番号１０１）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０８～２２７（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２０８；配列番号１０２）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２１４～２３３（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２１４；配列番号１０３）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド７４８～７６７（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－７４８；配列番号１０４）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８２５～８４４（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－８２５；配列番号１０５）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９２～９１１（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－８９２；配列番号１０６）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９８～９１７（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－８９８；配列番号１０７）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド８９９～９１８（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－８９９；配列番号１０８）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９００～９１９（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－９００；配列番号１０９）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９０２～９２１（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－９０２；配列番号１１０）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９０３～９２２（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－９０３；配列番号１１１）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９５４～９７３（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－９５４；配列番号１１２）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９６０～９７９（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－９６０；配列番号１１３）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９６４～９８３（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－９６４；配列番号１１４）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９６６～９８５（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－９６６；配列番号１１５）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９６９～９８８（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－９６９；配列番号１１６）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９７０～９８９（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－９７０；配列番号１１７）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド９７１～９９０（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－９７１；配列番号１１８）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０１６～１０３５（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１０１６；配列番号１１９）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０２１～１０４０（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１０２１；配列番号１２０）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０２８～１０４７（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１０２８；配列番号１２１）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１０３～１１２２（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１１０３；配列番号１２２）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１０８～１１２７（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１１０８；配列番号１２３）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１１３～１１３２（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１１１３；配列番号１２４）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１５９～１１７８（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１１５９；配列番号１２５）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１７３～１１９２（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１１７３；配列番号１２６）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１９７～１２１６（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１１９７；配列番号１２７）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２０４～１２２３（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１２０４；配列番号１２８）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２２７～１２４６（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１２２７；配列番号１２９）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３２～１２５１（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１２３２；配列番号１３０）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２３９～１２５８（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１２３９；配列番号１３１）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２４０～１２５９（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１２４０；配列番号１３２）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２４１～１２６０（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１２４１；配列番号１３３）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１２４２～１２６１（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１２４２；配列番号１３４）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３１３～１３３２（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１３１３；配列番号１３５）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３１４～１３３３（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１３１４；配列番号１３６）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３４１～１３６０（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１３４１；配列番号１３７）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３４３～１３６２（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１３４３；配列番号１３８）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３４６～１３６５（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１３４６；配列番号１３９）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１４９１～１５１０（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１４９１；配列番号１４０）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１５６１～１５８０（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１５６１；配列番号１４１）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１５６８～１５８７（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１５６８；配列番号１４２）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１６６４～１６８３（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１６６４；配列番号１４３）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１６７０～１６８９（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１６７０；配列番号１４４）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１６７６～１６９５（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１６７６；配列番号１４５）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１６７８～１６９７（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１６７８；配列番号１４６）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１６８０～１６９９（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１６８０；配列番号１４７）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１６８１～１７００（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１６８１；配列番号１４８）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１６８２～１７０１（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１６８２；配列番号１４９）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１６８８～１７０７（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１６８８；配列番号１５０）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１６９３～１７１２（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１６９３；配列番号１５１）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１７０４～１７２３（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１７０４；配列番号１５２）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１７１８～１７３７（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１７１８；配列番号１５３）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１７２０～１７３９（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１７２０；配列番号１５４）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１７２３～１７４２（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１７２３；配列番号１５５）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８３７～１８５６（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１８３７；配列番号１５６）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９３２～１９５１（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１９３２；配列番号１５７）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９９３～２０１２（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－１９９３；配列番号１５８）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３２５～２３４４（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２３２５；配列番号１５９）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２４３２～２４５１（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２４３２；配列番号１６０）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２４７２～２４９１（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２４７２；配列番号１６１）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２５４３～２５６２（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２５４３；配列番号１６２）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２６３８～２６５７（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２６３８；配列番号１６３）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２６３９～２６５８（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２６３９；配列番号１６４）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２６６７～２６８６（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２６６７；配列番号１６５）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２６７２～２６９１（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２６７２；配列番号１６６）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２６９９～２７１８（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２６９９；配列番号１６７）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２７５０～２７６９（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２７５０；配列番号１６８）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２７５５～２７７４（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２７５５；配列番号１６９）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２７６０～２７７９（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２７６０；配列番号１７０）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２８３０～２８４９（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２８３０；配列番号１７１）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２８３６～２８５５（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－２８３６；配列番号１７２）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３０８７～３１０６（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３０８７；配列番号１７３）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３０９４～３１１３（例え
ば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３０９４；配列番号１７４）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３１０９～３１２８（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３１０９；配列番号１７５）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３１２０～３１３９（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３１２０；配列番号１７６）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３２１２～３２３１（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３２１２；配列番号１７７）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３４７６～３４９５（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３４７６；配列番号１７８）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３４８１～３５００（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３４８１；配列番号１７９）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３４８８～３５０７（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３４８８；配列番号１８０）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３４８９～３５０８（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３４８９；配列番号１８１）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３４９３～３５１２（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３４９３；配列番号１８２）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３４９８～３５１７（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３４９８；配列番号１８３）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３５００～３５１９（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３５００；配列番号１８４）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３５０２～３５２１（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３５０２；配列番号１８５）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３５０３～３５２２（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３５０３；配列番号１８６）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３５０４～３５２３（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３５０４；配列番号１８７）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３５０８～３５２７（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３５０８；配列番号１８８）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３５１４～３５３３（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３５１４；配列番号１８９）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３５６１～３５８０（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３５６１；配列番号１９０）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３５８０～３５９９（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３５８０；配列番号１９１）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３５８５～３６０４（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３５８５；配列番号１９２）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３５９３～３６１２（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３５９３；配列番号１９３）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３５９８～３６１７（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３５９８；配列番号１９４）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３６５２～３６７１（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３６５２；配列番号１９５）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３６７６～３６９５（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３６７６；配列番号１９６）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３６９０～３７０９（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－３６９０；配列番号１９７）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド４０９６～４１１５（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－４０９６；配列番号１９８）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド４１０５～４１２４（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－４１０５；配列番号１９９）に対応する。一部の態様では、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド４２５６～４２７５（例えば、ＡＳＯ－ＮＬＲＰ３－４２５６；配列番号２００）に対応する。

【0141】

[0142]一部の態様では、本開示のＡＳＯは、ＮＬＲＰ３転写物（例えば、ゲノム配列、配列番号１）内の複数の標的領域にハイブリダイズする。一部の態様では、ＡＳＯは、ＮＬＲＰ３転写物内の２つの異なる標的領域にハイブリダイズする。一部の態様では、ＡＳＯは、ＮＬＲＰ３転写物内の３つの異なる標的領域にハイブリダイズする。複数の標的領域にハイブリダイズする例示的なＡＳＯの配列、及び異なる標的領域の開始／終止部位を、図１に提供する。一部の態様では、ＮＬＲＰ３転写物（例えば、ゲノム配列、配列番号１）内の複数の領域にハイブリダイズするＡＳＯは、ＮＬＲＰ３転写物（例えば、ゲノム配列、配列番号１）内の単一の領域にハイブリダイズするＡＳＯと比較して、ＮＬＲＰ３発現の低減においてより強力（例えば、より低いＥＣ５０を有する）である。

【0142】

ＩＩ．Ａ．１．ｂ．ＡＳＯ配列
[0143]本開示のＡＳＯは、ＮＬＲＰ３転写物、例えば配列番号１又は配列番号３に対応するヌクレオチド配列の領域の相補体に対応する連続ヌクレオチド配列を含む。

【0143】

[0144]ある特定の態様では、本開示は、１０～３０、例えば１０～１５ヌクレオチド、１０～２０ヌクレオチド、１０～２５ヌクレオチド長、又は約２０ヌクレオチド長のＡＳＯを提供し、連続ヌクレオチド配列は、ＮＬＲＰ３転写物、例えば配列番号１又は配列番号３又はその天然に存在するバリアントの相補体内の領域と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％の配列同一性を有する。このように、例えばＡＳＯは、配列番号１又は配列番号３又はその一部の配列を有する一本鎖核酸分子にハイブリダイズする。

【0144】

[0145]ＡＳＯは、哺乳動物ＮＬＰＲ３タンパク質（例えば、配列番号１又は配列番号３）をコードする核酸の等価の領域と十分に相補的（完全に相補的）である連続するヌクレオチド配列を含み得る。ＡＳＯは、Ｘ及びＹがそれぞれ、図１に示されるように開始部位及び終止部位である、配列番号１又は配列番号３のヌクレオチドＸ－Ｙに対応する核酸配列又は配列内の領域と十分に相補的（完全に相補的）である連続ヌクレオチド配列領域を含み得る。

【0145】

[0146]ＡＳＯは、哺乳動物ＮＬＰＲ３タンパク質（例えば、配列番号３）をコードするｍＲＮＡの等価の領域と十分に相補的（完全に相補的）である連続ヌクレオチド配列を含み得る。ＡＳＯは、Ｘ及びＹがそれぞれ、開始部位及び終止部位である、配列番号３のヌクレオチドＸ－Ｙに対応するｍＲＮＡ配列又は配列内の領域と十分に相補的（完全に相補的）である連続ヌクレオチド配列を含み得る。

【0146】

[0147]一部の態様では、本開示のＡＳＯのヌクレオチド配列又は連続ヌクレオチド配列は、配列番号１０１～２００（すなわち、図１の配列）から選択される配列と少なくとも８０％の配列同一性、例えば少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％の配列同一性、少なくとも約９７％の配列同一性、少なくとも約９８％の配列同一性、少なくとも約９９％の配列同一性、例えば約１００％の配列同一性（相同）を有する。一部の態様では、ＡＳＯは、本明細書の他所で記載される設計又は本明細書の他所で示される化学構造（例えば、図１）を有する。

【0147】

[0148]一部の態様では、ＡＳＯ（又はその連続するヌクレオチド部分）は、配列番号１０１～２００からなる群から選択される配列のうちの１つ、又はその少なくとも１０連続ヌクレオチドの領域から選択されるか、又はそれらを含み、ＡＳＯ（又はその連続するヌクレオチド部分）は、対応するＮＬＲＰ３転写物と比較した場合に、任意選択で１つ、２つ、３つ、又は４つのミスマッチを含み得る。

【0148】

[0149]一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２、配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４、配列番号１４５、配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４、配列番号１７５、配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６、配列番号１８７、配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２、配列番号１９３、配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８、配列番号１９９、又は配列番号２００からなる群から選択される配列を含む。

【0149】

[0150]一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１０１に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１０２に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１０３に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１０４に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１０５に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１０６に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１０７に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１０８に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１０９に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１１０に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１１１に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１１２に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１１３に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１１４に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１１５に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１１６に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１１７に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１１８に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１１９に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１２０に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１２１に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１２２に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１２３に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１２４に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１２５に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１２６に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１２７に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１２８に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１２９に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１３０に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１３１に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１３２に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１３３に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１３４に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１３５に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１３６に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１３７に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１３８に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１３９に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１４０に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１４１に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１４２に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１４３に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１４４に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１４５に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１４６に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１４７に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１４８に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１４９に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１５０に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１５１に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１５２に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１５３に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１５４に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１５５に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１５６に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１５７に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１５８に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１５９に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１６０に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１６１に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１６２に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１６３に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１６４に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１６５に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１６６に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１６７に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１６８に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１６９に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１７０に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１７１に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１７２に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１７３に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１７４に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１７５に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１７６に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１７７に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１７８に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１７９に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１８０に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１８１に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１８２に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１８３に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１８４に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１８５に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１８６に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１８７に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１８８に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１８９に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１９０に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１９１に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１９２に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１９３に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１９４に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１９５に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１９６に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１９７に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１９８に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号１９９に記載の配列を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、配列番号２００に記載の配列を含む。

【0150】

[0151]一部の態様では、本開示のＡＳＯは、標的核酸配列（例えば、ＮＬＲＰ３転写物）に結合し、ＮＬＲＰ３転写物の発現を、細胞における正常な（すなわち、対照の）発現レベルと比較して少なくとも１０％又は２０％、例えば、正常な発現レベル（例えば、ＡＳＯに曝露されていない細胞における発現レベル）と比較して少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％阻害するか又は低減することが可能である。

【0151】

[0152]一部の態様では、本開示のＡＳＯは、ＡＳＯに接触していない（例えば、食塩水と接触させた）細胞と比較して、細胞をＡＳＯと接触させた場合に標的細胞におけるＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏでの発現を、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％低減させることが可能である。

【0152】

[0153]一部の態様では、ＡＳＯは、標的配列にハイブリダイズする場合に１、２、３、又は４個（又はそれより多くの）ミスマッチを許容するが、それでもなお標的に十分に結合して、所望の効果、すなわち標的ｍＲＮＡ及び／又はタンパク質の下方調節を示すことができる。ミスマッチは、例えば、本明細書の他所で開示されるように、ＡＳＯヌクレオチド配列の長さの増加及び／又はヌクレオチドアナログの数の増加によって補完され得る。

【0153】

[0154]一部の態様では、本開示のＡＳＯは、標的配列にハイブリダイズする場合に３つ以下のミスマッチを含む。他の態様では、連続ヌクレオチド配列は、標的配列にハイブリダイズする場合に２つ以下のミスマッチを含む。他の態様では、連続ヌクレオチド配列は、標的配列にハイブリダイズする場合に、１つ以下のミスマッチを含む。

【0154】

ＩＩ．Ａ．１．ｃ．ＡＳＯ長
[0155]ＡＳＯは、全体で１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０連続ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含み得る。ＡＳＯ又は連続ヌクレオチド配列長に関して範囲が与えられている場合、範囲は、範囲に提供される下限及び上限の長さを含み、例えば１０～３０（又は間の）の範囲は、１０と３０の両方を含むと理解すべきである。

【0155】

[0156]一部の態様では、ＡＳＯは、全体で約１４～２０、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０連続ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む。ある特定の態様では、ＡＳＯは、全体で約２０連続ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む。ある特定の態様では、本開示のＡＳＯは、１４ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、本開示のＡＳＯは、１５ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、本開示のＡＳＯは、１６ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、本開示のＡＳＯは、１７ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、本開示のＡＳＯは、１８ヌクレオチド長である。ある特定の態様では、本開示のＡＳＯは、１９ヌクレオチド長である。
ＩＩ．Ａ．１．ｄ．ヌクレオシド及びヌクレオシドアナログ

【0156】

[0157]本開示の一態様では、ＡＳＯは、１つ又は複数の天然に存在しないヌクレオシドアナログを含む。「ヌクレオシドアナログ」は、本明細書で使用される場合、糖及び／又は塩基部分の修飾による、天然ヌクレオシド、例えばＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオシドのバリアントである。アナログは、原則としてオリゴヌクレオチドの文脈において単に「サイレント」であるか、又は天然のヌクレオシドと「等価」であり得て、すなわち、標的遺伝子発現を阻害するためにオリゴヌクレオチドが作用する方法に機能的効果を有しない。そのような「等価の」アナログは、例えばそれらが、製造がより容易であるか若しくは安価である場合、又は貯蔵若しくは製造条件に対してより安定である場合、又はタグ若しくはラベルを表す場合には、それにもかかわらず有用であり得る。しかしながら、一部の態様では、アナログは、例えば、標的に対する結合親和性の増加、及び／又は細胞内ヌクレアーゼに対する抵抗性の増加、及び／又は細胞への輸送の容易さの増加を生じることによって、ＡＳＯが発現を阻害するように作用する方法に対して機能的効果を有する。ヌクレオシドアナログの特定の例は、例えば Ｆｒｅｉｅｒ ＆ Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９－４４４３及びＵｈｌｍａｎｎ；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３－２１３、及びスキーム１に記載されている。本開示のＡＳＯは、１つより多く、２つより多く、３つより多く、４つより多く、５個より多く、６個より多く、７個より多く、８個より多く、９個より多く、１０個より多く、１１個より多く、１２個より多く、１３個より多く、１４個より多く、１５個より多く、１６個より多く、１８個より多く、１９、又は２０個より多くのヌクレオシドアナログを含有し得る。一部の態様では、ＡＳＯ中のヌクレオシドアナログは同じである。他の態様では、ＡＳＯ中のヌクレオシドアナログは異なる。ＡＳＯ中のヌクレオチドアナログは、以下のヌクレオシドアナログのいずれか１つ又は組合せであり得る。

【0157】

[0158]一部の態様では、ヌクレオシドアナログは、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ；２’－Ｏ－メチルＲＮＡ（２’－ＯＭｅ）；２’－アルコキシ－ＲＮＡ；２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（２’－ＭＯＥ）；２’－アミノ－ＤＮＡ；２’－フルオロ－ＲＮＡ；２’－フルオロ－ＤＮＡ；アラビノ核酸（ＡＮＡ）；２’－フルオロ－ＡＮＡ；二環式ヌクレオシドアナログ；又はこれらの任意の組合せを含む。一部の態様では、ヌクレオシドアナログは、糖修飾ヌクレオシドを含む。一部の態様では、ヌクレオシドアナログは、二環糖を含むヌクレオシドを含む。一部の態様では、ヌクレオシドアナログはＬＮＡを含む。

【0158】

[0159]一部の態様では、ヌクレオシドアナログは、拘束エチルヌクレオシド（ｃＥｔ）、２’，４’－拘束２’－Ｏ－メトキシエチル（ｃＭＯＥ）、α－Ｌ－ＬＮＡ、β－Ｄ－ＬＮＡ、２’－Ｏ，４’－Ｃ－エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）、アミノ－ＬＮＡ、オキシ－ＬＮＡ、チオ－ＬＮＡ、及びこれらの任意の組合せからなる群から選択される。一部の態様では、ＡＳＯは、１つ又は複数の５’－メチル－シトシン核酸塩基を含む。

【0159】

[0160]核酸塩基という用語は、核酸ハイブリダイゼーションにおいて水素結合を形成するヌクレオシド及びヌクレオチドに存在するプリン（例えば、アデニン及びグアニン）及びピリミジン（例えば、ウラシル、チミン及びシトシン）部分を含む。本開示の文脈において、核酸塩基という用語はまた、天然に存在する核酸塩基とは異なり得るが、核酸ハイブリダイゼーションの際に機能的である修飾核酸塩基も包含する。一部の態様では、核酸塩基部分は、核酸塩基を修飾又は交換することによって修飾される。この文脈において、「核酸塩基」は、天然に存在する核酸塩基、例えばアデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、キサンチン及びヒポキサンチン、並びに天然に存在しないバリアントの両方を指す。そのようなバリアントは、例えばＨｉｒａｏら，（２０１２） Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４５巻 ２０５５頁及びＢｅｒｇｓｔｒｏｍ（２００９） Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｕｐｐｌ．３７ １．４．１に記載されている。

【0160】

[0161]一部の態様では、核酸塩基部分は、プリン又はピリミジンを、修飾されたプリン又はピリミジンに、例えば置換されたプリン又は置換されたピリミジン、例えばイソシトシン、シュードイソシトシン、５－メチル－シトシン、５－チオゾロ－シトシン、５－プロピニル－シトシン、５－プロピニル－ウラシル、５－ブロモウラシル、５－チアゾロ－ウラシル、２－チオ－ウラシル、２’チオ－チミン、イノシン、ジアミノプリン、６－アミノプリン、２－アミノプリン、２，６－ジアミノプリン、及び２－クロロ－６－アミノプリンから選択される核酸塩基に変化させることによって修飾される。

【0161】

[0162]核酸塩基部分は、各々の対応する核酸塩基の一文字表記、例えば、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、又はＵによって示され、各文字は、任意選択で等価の機能の修飾核酸塩基を含み得る。例えば、例示されたオリゴヌクレオチドでは、核酸塩基部分は、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、及び５－メチル－シトシンから選択される。任意選択で、ＬＮＡギャップマーの場合、５－メチル－シトシンＬＮＡヌクレオシドを使用してもよい。

【0162】

[0163]本開示のＡＳＯは、修飾された糖部分、すなわちＤＮＡ及びＲＮＡにおいて見出されるリボース糖部分と比較して糖部分の修飾を有する１つ又は複数のヌクレオシドを含み得る。リボース糖部分の修飾を有する複数のヌクレオシドが、主にオリゴヌクレオチドのある特定の特性、例えば親和性及び／又はヌクレアーゼ抵抗性を改善する目的で作製されている。

【0163】

[0164]そのような修飾は、例えば典型的にリボース環（ＬＮＡ）上のＣ２’及びＣ４’炭素の間のビラジカル架橋を有する五炭糖環（ＨＮＡ）又は二環との交換、又は典型的にＣ２’及びＣ３’炭素の間の結合を欠如する非結合リボース（例えば、ＵＮＡ）との交換によって、リボース糖構造が修飾されている修飾を含む。他の糖修飾ヌクレオシドは、例えば、ビシクロヘキソース核酸（国際公開第２０１１／０１７５２１号）又は三環式核酸（国際公開第２０１３／１５４７９８号）を含む。修飾ヌクレオシドはまた、例えばペプチド核酸（ＰＮＡ）又はモルホリノ核酸の場合のように、糖部分が非糖部分に交換されているヌクレオシドも含む。

【0164】

[0165]糖の修飾はまた、リボース環上の置換基を、水素以外の基、又はＲＮＡヌクレオシドに天然に見出される２’－ＯＨ基に変更することを介して作製される修飾も含む。置換は、例えば、２’、３’、４’、又は５’位で導入され得る。修飾された糖部分を有するヌクレオシドはまた、２’修飾ヌクレオシド、例えば２’置換ヌクレオシドも含む。実際に、２’置換ヌクレオシドを開発するために多くの努力がなされており、多数の２’置換ヌクレオシドが、オリゴヌクレオチドに組み込まれる場合に有益な特性、例えばヌクレオシド抵抗性の増強及び親和性の増強を有することが見出されている。

【0165】

[0166]２’糖修飾ヌクレオシドは、２’位置でＨ若しくは－ＯＨ以外の置換基を有するか（２’置換ヌクレオシド）、又は２’結合ビラジカルを含み、並びに２’置換ヌクレオシド及びＬＮＡ（２’－４’ビラジカル架橋）ヌクレオシドを含むヌクレオシドである。例えば、２’修飾糖は、結合親和性の増強（例えば、親和性増強２’糖修飾ヌクレオシド）及び／又はオリゴヌクレオチドに対するヌクレアーゼ抵抗性の増加を提供し得る。２’置換修飾ヌクレオシドの例は、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＲＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、及び２’－フルオロ－ＡＮＡヌクレオシドである。さらなる例に関しては、例えば、Ｆｒｅｉｅｒ ＆ Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９－４４４３；Ｕｈｌｍａｎｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３－２１３；及びＤｅｌｅａｖｅｙ及びＤａｍｈａ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ及びＢｉｏｌｏｇｙ ２０１２，１９，９３７を参照されたい。以下は、一部の２’置換修飾ヌクレオシドの例証である。

【化2】

【0166】

[0167]ＬＮＡヌクレオシドは、リボース環の立体構造を制限又はロックするヌクレオシド（すなわち、２’－４’架橋）のリボース糖環のＣ２’とＣ４’の間にリンカー基（ビラジカル又は架橋と呼ばれる）を含む修飾ヌクレオシドである。これらのヌクレオシドはまた、文献において架橋核酸又は二環式核酸（ＢＮＡ）とも呼ばれる。リボースの立体構造がロックされることは、ＬＮＡが相補的ＲＮＡ又はＤＮＡ分子のためにオリゴヌクレオチドに組み込まれた場合にハイブリダイゼーション（二本鎖安定化）の親和性の増強に関連している。これは、オリゴヌクレオチド／相補体二重鎖の融解温度を測定することによって通常決定することができる。

【0167】

[0168]非限定的な例示的なＬＮＡヌクレオシドは、国際公開第９９／０１４２２６号、国際公開第００／６６６０４号、国際公開第９８／０３９３５２号、国際公開第２００４／０４６１６０号、国際公開第００／０４７５９９号、国際公開第２００７／１３４１８１号、国際公開第２０１０／０７７５７８号、国際公開第２０１０／０３６６９８号、国際公開第２００７／０９００７１号、国際公開第２００９／００６４７８号、国際公開第２０１１／１５６２０２号、国際公開第２００８／１５４４０１号、国際公開第２００９／０６７６４７号、国際公開第２００８／１５０７２９号、Ｍｏｒｉｔａら，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１２，７３－７６，Ｓｅｔｈら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１０，７５（５）巻 １５６９頁－８１頁、及びＭｉｔｓｕｏｋａら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００９，３７（４），１２２５－１２３８に開示されている。

【0168】

[0169]一部の態様では、本開示のＡＳＯの修飾ヌクレオシド又はＬＮＡヌクレオシドは、式Ｉ又はＩＩの一般的構造：

【化3】

（式中、
Ｗは、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｎ（Ｒ^ａ）－、－Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）－から選択され、特に－Ｏ－であり；
Ｂは、核酸塩基又は修飾核酸塩基部分であり；
Ｚは、隣接するヌクレオシド又は５’末端基とのヌクレオシド間連結であり；
Ｚ＊は、隣接するヌクレオシド又は３’末端基とのヌクレオシド間連結であり；
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルケニルオキシ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニル、ホルミル、アジド、ヘテロサイクル、及びアリールから独立的に選択され；並びに
Ｘ、Ｙ、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、本明細書に定義される通りである）
を有する。

【0169】

[0170]－Ｘ－Ｙ－の一部の態様では、Ｒ^ａは、水素又はアルキル、特に水素又はメチルである。－Ｘ－Ｙ－の一部の態様では、Ｒ^ｂは、水素又はアルキル、特に水素又はメチルである。－Ｘ－Ｙ－の他の態様では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂのうちの１つ又は両方は水素である。－Ｘ－Ｙ－のさらなる態様では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂのうちの１つのみが水素である。－Ｘ－Ｙ－の一部の態様では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂのうちの１つはメチルであり、他方は水素である。－Ｘ－Ｙ－のある特定の態様では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂの両方が、同時にメチルである。

【0170】

[0171]－Ｘ－の一部の態様では、Ｒ^ａは、水素又はアルキル、特に水素又はメチルである。－Ｘ－の一部の態様では、Ｒ^ｂは、水素又はアルキル、特に水素又はメチルである。－Ｘ－の他の態様では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂのうちの１つ又は両方が水素である。－Ｘ－のある特定の態様では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂのうちの１つのみが水素である。－Ｘ－のある特定の態様では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂのうちの１つはメチルであり、他方は水素である。－Ｘ－の他の態様では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂの両方が、同時にメチルである。

【0171】

[0172]－Ｙ－の一部の態様では、Ｒ^ａは、水素又はアルキル、特に水素又はメチルである。－Ｙ－のある特定の態様では、Ｒ^ｂは、水素又はアルキル、特に水素又はメチルである。－Ｙ－の他の態様では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂのうちの１つ又は両方が水素である。－Ｙ－の一部の態様では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂのうちの１つのみが水素である。－Ｙ－の他の態様では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂのうちの１つはメチルであり、他方は水素である。－Ｙ－の一部の態様では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂの両方が、同時にメチルである。

【0172】

[0173]一部の態様では、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、水素及びアルキルから独立的に選択され、特に水素及びメチルである。

【0173】

[0174]一部の態様では、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、全て同時に水素である。

【0174】

[0175]一部の態様では、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は全て同時に水素であり、Ｒ^５及びＲ^５＊のうちの１つは水素であり、他方は上記で定義された通りであり、特にアルキル、より詳細にはメチルである。

【0175】

[0176]一部の態様では、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、全て同時に水素であり、Ｒ^５及びＲ^５＊のうちの１つは水素であり、他方はアジドである。

【0176】

[0177]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ_２－であり、Ｗは酸素であり、並びにＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、全て同時に水素である。そのようなＬＮＡヌクレオシドは、全てが参照により本明細書に組み込まれる国際公開第９９／０１４２２６号、国際公開第００／６６６０４号、国際公開第９８／０３９３５２号、及び国際公開第２００４／０４６１６０号に開示されており、ベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ及びアルファ－Ｌ－オキシＬＮＡヌクレオシドとして当技術分野で一般的に公知であるものを含む。

【0177】

[0178]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｓ－ＣＨ_２－であり、Ｗは酸素であり、並びにＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、全て同時に水素である。そのようなチオＬＮＡヌクレオシドは、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第９９／０１４２２６号及び国際公開第２００４／０４６１６０号に開示されている。

【0178】

[0179]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は、－ＮＨ－ＣＨ_２－であり、Ｗは酸素であり、並びにＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、全て同時に水素である。そのようなアミノＬＮＡヌクレオシドは、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第９９／０１４２２６号及び国際公開第２００４／０４６１６０号に開示されている。

【0179】

[0180]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－又は－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－であり、Ｗは酸素であり、並びにＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は全て同時に水素である。そのようなＬＮＡヌクレオシドは、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第００／０４７５９９号及びＭｏｒｉｔａら，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１２，７３－７６に開示されており、２’－Ｏ－４’Ｃ－エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）として当技術分野で一般的に公知であるものを含む。

【0180】

[0181]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ_２－であり、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、全て同時に水素であり、Ｒ^５及びＲ^５＊のうちの１つは水素であり、他方は水素ではなく、例えばアルキル、例えばメチルである。そのような５’置換ＬＮＡヌクレオシドは、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００７／１３４１８１号に開示されている。

【0181】

[0182]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－であり、式中、Ｒ^ａ及びＲ^ｂのうちの１つ又は両方は水素ではなく、特にアルキル、例えばメチルであり、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、全て同時に水素であり、Ｒ^５及びＲ^５＊のうちの１つは水素であり、他方は水素ではなく、特にアルキル、例えばメチルである。そのようなビス修飾ＬＮＡヌクレオシドは、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１０／０７７５７８号に開示されている。

【0182】

[0183]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_３）－（「２’Ｏ－メトキシエチル二環式核酸」、Ｓｅｔｈら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１０，７５（５）巻１５６９頁－８１頁）である。

【0183】

[0184]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｏ－ＣＨＲ^ａ－であり、Ｗは酸素であり、並びにＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、全て同時に水素である。そのような６’－置換ＬＮＡヌクレオシドは、いずれも参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１０／０３６６９８号及び国際公開第２００７／０９００７１号に開示されている。そのような６’－置換ＬＮＡヌクレオシドでは、Ｒ^ａは、特にＣ１－Ｃ６アルキル、例えばメチルである。

【0184】

[0185]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_３）－であり、Ｗは酸素であり、並びにＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、全て同時に水素である。そのようなＬＮＡヌクレオシドはまた、環状ＭＯＥ（ｃＭＯＥ）として当技術分野で公知であり、国際公開第２００７／０９００７１号に開示されている。

【0185】

[0186]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_３）－である。

【0186】

[0187]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－である（Ｓｅｔｈら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ ２０１０ ｏｐ．ｃｉｔ．）。

【0187】

[0188]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_３）－であり、Ｗは酸素であり、並びにＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、全て同時に水素である。そのような６’－メチルＬＮＡヌクレオシドはまた、ｃＥＴヌクレオシドとして当技術分野で公知であり、いずれも参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００７／０９００７１号（ベータ－Ｄ）及び国際公開第２０１０／０３６６９８号（アルファ－Ｌ）に開示されているように、（Ｓ）－ｃＥＴ又は（Ｒ）－ｃＥＴジアステレオ異性体のいずれかであり得る。

【0188】

[0189]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－であり、Ｒ^ａ及びＲ^ｂのいずれも水素ではなく、Ｗは酸素であり、並びにＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、全て同時に水素である。ある特定の態様では、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、両方が同時にアルキルであり、特に両方が同時にメチルである。そのような６’－ジ－置換ＬＮＡヌクレオシドは、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００９／００６４７８号に開示されている。

【0189】

[0190]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｓ－ＣＨＲ^ａ－であり、Ｗは酸素であり、並びにＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、全て同時に水素である。そのような６’－置換チオＬＮＡヌクレオシドは、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１１／１５６２０２号に開示されている。そのような６’－置換チオＬＮＡのある特定の態様では、Ｒ^ａはアルキル、特にメチルである。

【0190】

[0191]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｃ（＝ＣＨ_２）Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）－であり、例えばＷは酸素であり、並びにＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、全て同時に水素である。そのようなビニルカーボＬＮＡヌクレオシドは、両方が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００８／１５４４０１号及び国際公開第２００９／０６７６４７号に開示されている。

【0191】

[0192]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｎ（ＯＲ^ａ）－ＣＨ_２－であり、Ｗは酸素であり、並びにＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、全て同時に水素である。一部の態様では、Ｒ^ａは、アルキル、例えばメチルである。そのようなＬＮＡヌクレオシドはまた、Ｎ置換ＬＮＡとして公知であり、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００８／１５０７２９号に開示されている。

【0192】

[0193]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は－Ｏ－ＮＣＨ_３－である（Ｓｅｔｈら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ ２０１０ ｏｐ．ｃｉｔ．）。

【0193】

[0194]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は、ＯＮ（Ｒ^ａ）－、－Ｎ（Ｒ^ａ）－Ｏ－、－ＮＲ^ａ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－、又は－ＮＲ^ａ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－であり、Ｗは酸素であり、並びにＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、全て同時に水素である。ある特定の態様では、Ｒ^ａはアルキル、例えばメチルである（Ｓｅｔｈら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ ２０１０ ｏｐ．ｃｉｔ．）。

【0194】

[0195]一部の態様では、Ｒ^５及びＲ^５＊は、両方が同時に水素である。他の態様では、Ｒ^５及びＲ^５＊のうちの１つは水素であり、他方はアルキル、例えばメチルである。そのような態様では、Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は特に水素であり得、－Ｘ－Ｙ－は、特に－Ｏ－ＣＨ_２－又は－Ｏ－ＣＨＣ（Ｒ^ａ）_３－、例えば－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_３）－であり得る。

【0195】

[0196]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は、－ＣＲ^ａＲ^ｂ－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－、例えば－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－であり、Ｗは酸素であり、並びにＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、全て同時に水素である。そのような態様では、Ｒ^ａは、特にアルキル、例えばメチルである得る。そのようなＬＮＡヌクレオシドはまた、立体構造拘束ヌクレオチド（ＣＲＮｓ）として知られ、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１３／０３６８６８号に開示されている。

【0196】

[0197]一部の態様では、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－、例えば－Ｏ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－であり、Ｗは酸素であり、並びにＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５及びＲ^５＊は、全て同時に水素である。ある特定の態様では、Ｒ^ａは特にアルキル、例えばメチルであり得る。そのようなＬＮＡヌクレオシドはまた、ＣＯＣヌクレオチドとして知られ、参照により本明細書に組み込まれるＭｉｔｓｕｏｋａら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００９，３７（４），１２２５－１２３８に開示されている。

【0197】

[0198]特に明記していない限り、ＬＮＡヌクレオシドは、ベータ－Ｄ又はアルファ－Ｌ立体アイソフォームにあり得る。

【0198】

[0199]ＬＮＡヌクレオシドのある特定の例をスキーム１に提示する。

【化4】

【0199】

[0200]本明細書の他所で例証されるように、本開示の一部の態様では、オリゴヌクレオチド中のＬＮＡヌクレオシドは、ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡヌクレオシドである。

【0200】

ＩＩ．Ａ．１．ｅ．ヌクレアーゼ媒介分解
[0201]ヌクレアーゼ媒介分解は、相補的ヌクレオチド配列との二重鎖を形成する際に相補的ヌクレオチド配列の分解を媒介することが可能なオリゴヌクレオチドを指す。

【0201】

[0202]一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、標的核酸のヌクレアーゼ媒介分解を介して機能し得て、本開示のオリゴヌクレオチドはヌクレアーゼ、特にエンドヌクレアーゼ、好ましくはエンドリボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）、例えばＲＮａｓｅＨを動員することが可能である。ヌクレアーゼ媒介機構を介して操作するオリゴヌクレオチド設計の例は、典型的に少なくとも５又は６個のＤＮＡヌクレオシドの領域を含み、親和性増強ヌクレオシド、例えばギャップマーが片側又は両側に隣接しているオリゴヌクレオチドである。

【0202】

ＩＩ．Ａ．１．ｆ．ＲＮａｓｅＨの活性及び動員
[0203]アンチセンスオリゴヌクレオチドのＲＮａｓｅＨ活性は、相補的ＲＮＡ分子と二重鎖になっている場合にＲＮａｓｅＨを動員する能力及び相補的ＲＮＡ分子の分解を誘導する能力を指す。国際公開第０１／２３６１３号は、ＲＮａｓｅＨ活性を決定するためのｉｎ ｖｉｔｒｏの方法を提供しており、これを使用してＲＮａｓｅＨを動員する能力を決定してもよい。典型的に、オリゴヌクレオチドは、相補的標的核酸配列と共に提供される場合、試験される修飾オリゴヌクレオチドと同じ塩基配列を有するが、ＤＮＡモノマーのみを含有し、オリゴヌクレオチドにおける全てのモノマーの間がホスホロチオエート連結であるオリゴヌクレオチドを使用し、及び国際公開第０１／２３６１３号の実施例９１～９５に提供される方法論を使用した場合に決定される、ｐｍｏｌ／ｌ／分で測定される初速度の少なくとも５％、例えば少なくとも１０％、又は２０％より高い初速度をＲＮａｓｅＨが有する場合、ＲＮａｓｅＨを動員することが可能であると考えられる。

【0203】

[0204]一部の態様では、オリゴヌクレオチドは、相補的標的核酸と共に提供される場合、ｐｍｏｌ／ｌ／分で測定されるＲＮａｓｅＨの初速度が、試験されるオリゴヌクレオチドと同じ塩基配列を有するが、ＤＮＡモノマーのみを含有し、２’置換を有さず、オリゴヌクレオチドにおける全てのモノマーの間がホスホロチオエート連結であるオリゴヌクレオチドを使用し、及び国際公開第０１／２３６１３号の実施例９１～９５に提供される方法論を使用した場合に決定される初速度の２０％未満、例えば１０％未満、例えば５％未満である場合、ＲＮａｓｅＨを動員することが本質的に不可能であると考えられる。

【0204】

ＩＩ．Ａ．１．ｇ．ＡＳＯの設計
[0205]本開示のＡＳＯは、ヌクレオシド及びヌクレオシドアナログの両方を含み、ギャップマーの形態にあり得るヌクレオチド配列を含み得る。本開示のＡＳＯと共に使用することができるギャップマーの立体配置の例は、米国特許出願公開第２０１２／０３２２８５１号に記載されている。

【0205】

[0206]「ギャップマー」という用語は、本明細書で使用される場合、５’及び３’で１つ又は複数の親和性増強修飾ヌクレオシド（ｆｌａｎｋｓ）が隣接するＲＮａｓｅＨ動員オリゴヌクレオチド（ｇａｐ）の領域を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを指す。「ＬＮＡギャップマー」という用語は、親和性増強修飾ヌクレオシドの少なくとも１つがＬＮＡヌクレオシドであるギャップマーオリゴヌクレオチドである。「混合型ウィングギャップマー」という用語は、隣接領域が少なくとも１つのＬＮＡヌクレオチド、及び少なくとも１つのＤＮＡヌクレオシド又は非ＬＮＡ修飾ヌクレオシド、例えば少なくとも１つの２’置換修飾ヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＲＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、及び２’－フルオロ－ＡＮＡヌクレオシド（複数可）などを含むＬＮＡギャップマーを指す。

【0206】

[0207]一部の態様では、本開示のＡＳＯは、ミックスマーの形態にあり得る。一部の態様では、本開示のＡＳＯは、トータルマーの形態にあり得る。一部の態様では、標的領域に対するＡＳＯの親和性の増強に加えて、一部のヌクレオシドアナログはまた、ＲＮａｓｅ（例えば、ＲＮａｓｅＨ）の結合及び切断も媒介する。α－Ｌ－ＬＮＡモノマーは、ＲＮａｓｅＨ活性をある特定の程度まで動員することから、一部の態様では、α－Ｌ－ＬＮＡモノマーを含有するＡＳＯのｇａｐ領域（例えば、本明細書で言及される領域Ｂ）は、ＲＮａｓｅＨによって認識可能及び切断可能なより少ないモノマーからなり、ミックスマー構築物ではより多くの柔軟性が導入される。

【0207】

[0208]一部の態様では、本開示のＡＳＯはギャップマーであり、本明細書において領域Ｂ（Ｂ）と呼ばれる、ＲＮａｓｅ、例えばＲＮａｓｅＨを動員することが可能な連続するヌクレオチドの列（例えば、１つ又は複数のＤＮＡ）を含み、領域Ｂは、５’及び３’の両方で、領域Ｂの連続するヌクレオチドの列に対して５’及び３’のヌクレオシドアナログの領域が隣接し、これらの領域はそれぞれ、領域Ａ（Ａ）及びＣ（Ｃ）と呼ばれる。一部の態様では、ヌクレオシドアナログは、糖修飾ヌクレオシド（例えば、高親和性糖修飾ヌクレオシド）である。ある特定の態様では、領域Ａ及び領域Ｃの糖修飾ヌクレオシドは、標的核酸に関するＡＳＯの親和性を増強する（すなわち、親和性増強２’糖修飾ヌクレオシド）。一部の態様では、糖修飾ヌクレオシドは、２’糖修飾ヌクレオシド、例えば高親和性２’糖修飾、例えばＬＮＡ及び／又は２’－ＭＯＥである。

【0208】

[0209]ギャップマーでは、領域Ｂの最も５’及び３’側のヌクレオシドは、ＤＮＡヌクレオシドであり、それぞれ、領域Ａ及び領域Ｃのヌクレオシドアナログ（例えば、高親和性糖修飾ヌクレオシド）に隣接して位置する。一部の態様では、領域Ａ及びＣは、領域Ｂの最も遠位末端（すなわち、領域Ａの５’末端及び領域Ｃの３’末端）でヌクレオシドアナログを有することによってさらに定義することができる。

【0209】

[0210]一部の態様では、本開示のＡＳＯは、式（５’から３’）Ａ－Ｂ－Ｃのヌクレオチド配列を含む：（Ａ）（５’領域又は第１のウィング配列）は、少なくとも１つのヌクレオシドアナログ（例えば、３～５個のＬＮＡ単位）を含み；（Ｂ）は、ＲＮａｓｅを動員することが可能な（相補的ＲＮＡ分子、例えばｐｒｅ－ｍＲＮＡ又はｍＲＮＡ標的と二重鎖を形成する場合）少なくとも４つの連続するヌクレオシド（例えば、４～２４個のＤＮＡ単位）を含み；及び（Ｃ）（３’領域又は第２のウィング配列）は、少なくとも１つのヌクレオシドアナログ（例えば、３～５個のＬＮＡ単位）を含む。

【0210】

[0211]一部の態様では、領域Ａは、３～５個のヌクレオシドアナログ、例えばＬＮＡを含み、領域Ｂは、６～２４（例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４）個のＤＮＡ単位からなり、及び領域Ｃは、３又は４個のヌクレオシドアナログ、例えばＬＮＡからなる。そのような設計は、（Ａ－Ｂ－Ｃ）３－１４－３、３－１１－３、３－１２－３、３－１３－３、４－９－４、４－１０－４、４－１１－４、４－１２－４、及び５－１０－５を含む。一部の態様では、ＡＳＯは、ＬＬＬＤ_ｎＬＬＬ、ＬＬＬＬＤ_ｎＬＬＬＬ、又はＬＬＬＬＬＤ_ｎＬＬＬＬＬの設計を有し、式中、Ｌはヌクレオシドアナログであり、ＤはＤＮＡであり、及びｎは、４～２４の間の任意の整数であり得る。一部の態様では、ｎは、６～１４の間の任意の整数であり得る。一部の態様では、ｎは、８～１２の間の任意の整数であり得る。一部の態様では、ＡＳＯは、ＬＬＬＭＭＤｎＭＭＬＬＬ、ＬＬＬＭＤｎＭＬＬＬ、ＬＬＬＬＭＭＤｎＭＭＬＬＬＬ、ＬＬＬＬＭＤｎＭＬＬＬＬ、ＬＬＬＬＬＬＭＭＤｎＭＭＬＬＬＬＬ、又はＬＬＬＬＬＬＭＤｎＭＬＬＬＬＬの設計を有し、式中、ＤはＤＮＡであり、ｎは３～１５の間の任意の整数であり得、ＬはＬＮＡであり、及びＭは２’ＭＯＥである。

【0211】

[0212]さらなるギャップマーの設計は、その各々の全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２００４／０４６１６０号、国際公開第２００７／１４６５１１号、及び国際公開第２００８／１１３８３２号に開示されている。

【0212】

ＩＩ．Ａ．１．Ｈ．ヌクレオチド間連結
[0213]本明細書に記載されるＡＳＯのモノマーは、連結基を介して共にカップリングされる。好適には、各モノマーは、連結基を介して３’隣接モノマーに連結される。

【0213】

[0214]当業者は、本開示の文脈において、ＡＳＯの末端の５’モノマーが、５’連結基を含まないが、５’末端基を含んでも含まなくてもよいことを理解するであろう。

【0214】

[0215]一部の態様では、連続ヌクレオチド配列は、１つ又は複数の修飾ヌクレオシド間連結を含む。「連結基」又は「ヌクレオシド間連結」という用語は、２つのヌクレオシドを共に共有結合によりカップリングすることが可能な基を意味すると意図される。非限定的な例は、リン酸基及びホスホロチオエート基を含む。

【0215】

[0216]本開示のＡＳＯのヌクレオシド又はその連続するヌクレオシド配列は、連結基を介して共にカップリングされる。好適には、各ヌクレオシドは、連結基を介して３’隣接ヌクレオシドに連結される。

【0216】

[0217]一部の態様では、ヌクレオシド間連結は、その通常のホスホジエステルからヌクレアーゼの攻撃に対してより抵抗性であり、同様に標的遺伝子の発現の低減におけるアンチセンス阻害のその経路を可能にする結合、例えばＲＮａｓｅＨによって切断可能であるホスホロチオエートへと修飾される。一部の態様では、ヌクレオシド間連結の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％が修飾される。

【0217】

ＩＩ．Ａ．２．小分子ＮＬＲＰ３阻害剤
[0218]一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、小分子である。一部の態様では、ＮＬＲＰ３は、ＭＣＣ９５０、トラニラスト、オリドニン、ＣＹ－０９、Ｂａｙ １１－７０８２、パルテノリド、３，４－メチレンジオキシ－β－ニトロスチレン（ＭＮＢ）、β－ヒドロキシ酪酸（ＢＨＢ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｉ型インターフェロン、及びこれらの任意の組合せから選択される（例えば、Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ １０：１２８（２０１９）を参照されたい）。一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは式：

【化5】

を含む。

【0218】

[0219]一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、ＭＣＣ９５０（例えば、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２１、２４８（２０１５）を参照されたい）を含む。

【0219】

[0220]一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、式：

【化6】

を含む。

【0220】

[0221]一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、トラニラスト（例えば、ＥＭＢＯ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．１０，ｅ８６８９（２０１８）を参照されたい）を含む。

【0221】

[0222]一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、式：

【化7】

を含む。

【0222】

[0223]一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストはオリドニン（例えば、Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．９，２５５０（２０１８）を参照されたい）を含む。

【0223】

[0224]一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、式：

【化8】

を含む。

【0224】

[0225]一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、ＣＹ－０９（例えば、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２１４，３２１９－３２３８（２０１７）を参照されたい）を含む。

【0225】

[0226]一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、式：

【化9】

を含む。

【0226】

[0227]一部の態様では、ＮＬＲＰ３経路のアンタゴニストは、Ｂａｙ １１－７０８２（例えば、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８５，９７９２－９８０２（２０１０）を参照されたい）を含む。

【0227】

[0228]一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、式：

【化10】

を含む。

【0228】

[0229]一部の態様では、ＮＬＲＰ３経路のアンタゴニストは、パルテノリド（例えば、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８５：９７９２－９８０２（２０１０）を参照されたい）を含む。

【0229】

[0230]一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、式：

【化11】

を含む。

【0230】

[0231]一部の態様では、ＮＬＲＰ３経路のアンタゴニストは、３，４－メチレンジオキシ－β－ニトロスチレン（ＭＮＢ）（例えば、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８９：１１４２－１１５０（２０１４）を参照されたい）を含む。

【0231】

ＩＩＩ．細胞外ベシクル、例えばエクソソーム
[0232]本開示の一部の態様は、本明細書に開示される外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストを含むＥＶを対象に投与することを含む、それを必要とする対象において末梢神経障害を処置する方法を対象とする。そのため、本開示の一部の態様は、ＮＬＲＰ３アンタゴニストを含むＥＶ、例えばエクソソームを対象とする。一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、化学化合物、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＡＳＯ、タンパク質、又はこれらの任意の組合せである。ＡＳＯは、本明細書に記載される任意のＡＳＯ又はその機能的断片であり得る。ある特定の態様では、ＡＳＯは、標的細胞におけるＮＬＲＰ３ ｍＲＮＡ又はＮＬＲＰ３タンパク質のレベルを低減させる。一部の態様では、本明細書に記載されるＥＶ、例えばエクソソームの投与は、標的細胞におけるＮＬＲＰ３インフラマソームの形成を低減させるか、遮断するか、又は阻害する。

【0232】

[0233]一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、少なくとも１つのＡＳＯを含む。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、少なくとも２つのＡＳＯ、例えば第１のヌクレオチド配列を含む第１のＡＳＯ、第２のヌクレオチド配列を含む第２のＡＳＯを含む。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、少なくとも３個のＡＳＯ、少なくとも４個のＡＳＯ、少なくとも５個のＡＳＯ、少なくとも６個のＡＳＯ、又は６個より多くのＡＳＯを含む。一部の態様では、第１のＡＳＯ、第２のＡＳＯ、第３のＡＳＯ、第４のＡＳＯ、第５のＡＳＯ、第６のＡＳＯ、及び／又は第ＮのＡＳＯの各々は異なる。

【0233】

[0234]一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、第１のＡＳＯ及び第２のＡＳＯを含み、第１のＡＳＯは、第１の転写物における第１の標的配列と相補的である第１のヌクレオチド配列を含み、第２のＡＳＯは、第１の転写物における第２の標的配列と相補的である第２のヌクレオチド配列を含む。一部の態様では、第１の標的配列は第２の標的配列と重複しない。一部の態様では、第１の標的配列は、転写物の５’ＵＴＲ内である少なくとも１つのヌクレオチドを含み、第２の標的配列は、５’ＵＴＲ内であるヌクレオチドを含まない。一部の態様では、第１の標的配列は、転写物の３’ＵＴＲ内である少なくとも１つのヌクレオチドを含み、第２の標的配列は、３’ＵＴＲ内であるヌクレオチドを含まない。一部の態様では、第１の標的配列は、転写物の５’ＵＴＲ内である少なくとも１つのヌクレオチドを含み、第２の標的配列は、３’ＵＴＲ内である少なくとも１つのヌクレオチドを含む。

【0234】

[0235]一部の態様では、第１のＡＳＯは、エクソン－イントロン接合部内の配列を標的とし、第２のＡＳＯは、エクソン－イントロン接合部内の配列を標的とする。一部の態様では、第１のＡＳＯは、エクソン－イントロン接合部内の配列を標的とし、第２のＡＳＯは、エクソン内の配列を標的とする。一部の態様では、第１のＡＳＯは、エクソン－イントロン接合部内の配列を標的とし、第２のＡＳＯは、イントロン内の配列を標的とする。一部の態様では、第１のＡＳＯは、エクソン内の配列を標的とし、第２のＡＳＯは、エクソン内の配列を標的とする。一部の態様では、第１のＡＳＯは、イントロン内の配列を標的とし、第２のＡＳＯはエクソン内の配列を標的とする。一部の態様では、第１のＡＳＯは、イントロン内の配列を標的とし、第２のＡＳＯはイントロン内の配列を標的とする。

【0235】

[0236]一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、第１のＡＳＯ及び第２のＡＳＯを含み、第１のＡＳＯは、第１の転写物中の第１の標的配列と相補的である第１のヌクレオチド配列を含み、第２のＡＳＯは、第２の転写物中の第２の標的配列と相補的である第２のヌクレオチド配列を含み、第１の転写物は、第２の転写物と同じ遺伝子の産物ではない。

【0236】

[0237]一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは免疫細胞を標的とする。一部の態様では、免疫細胞は、マクロファージ、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びこれらの任意の組合せから選択される。ある特定の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、骨髄系列細胞（例えば、好中球、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ、例えば単球性ＭＤＳＣ又は顆粒球性ＭＤＳＣ）、単球、マクロファージ、造血幹細胞、好塩基球、好中球、又は好酸球）、又はこれらの任意の組合せを標的とする。ある特定の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、マクロファージを標的とする。ある特定の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、樹状細胞を標的とする。ある特定の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、Ｂ細胞を標的とする。ある特定の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、Ｔ細胞を標的とする。

【0237】

[0238]一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、ＮＬＲＰ３インフラマソームによって上方調節されている１つ又は複数の遺伝子の発現を低減させる。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、血清中のＩＬ－１ベータ発現を低減させる。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、対象における炎症を低減させる。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、それを必要とする対象において慢性炎症を処置する。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、それを必要とする対象において自己炎症を処置する。

【0238】

[0239]一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、それを必要とする対象において神経炎症性疾患を処置する。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、それを必要とする対象において炎症性神経障害を処置する。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、神経の骨髄性炎症を低減させる。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、神経鞘の骨髄性炎症を低減させる。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、神経根、神経、及び／又は筋肉のうちの１つ又は複数におけるマクロファージ流入を低減させる。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、神経根、神経、及び／又は筋肉のうちの１つ又は複数におけるマクロファージ食作用を低減させる。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、それを必要とする対象における化学療法誘発性末梢神経障害（ＣＩＰＮ）を処置する。

【0239】

[0240]上記のように、本明細書に記載されるＥＶ、例えばエクソソームは、約２０～３００ｎｍの間の直径を有する細胞外ベシクルである。本明細書に記載されるＥＶ、例えばエクソソームのサイズは、以下に記載される方法に従って測定することができる。

【0240】

[0241]一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエクソソームは、内部（内腔）表面及び外部表面を含む脂質二重膜（「ＥＶ、例えばエクソソーム膜」）を含む。ある特定の態様では、内部（内腔）表面は、ＥＶ、例えばエクソソームの内部コア（すなわち、内腔）に面する。ある特定の態様では、外部表面は、エンドソーム、多小胞体、又は産生細胞若しくは標的細胞の膜／細胞質と接触することができる。

【0241】

[0242]一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソーム膜は、脂質及び脂肪酸を含む。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソーム膜は、リン脂質、糖脂質、脂肪酸、スフィンゴ脂質、ホスホグリセリド、ステロール、コレステロール、及びホスファチジルセリンを含む。

【0242】

[0243]一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソーム膜は、内層及び外層を含む。内層及び外層の組成は、当技術分野で公知の二重層間分布アッセイによって決定することができ、例えば、Ｋｕｙｐｅｒｓら，Ｂｉｏｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １９８５ ８１９：１７０を参照されたい。一部の態様では、外層の組成は、およそ７０～９０％の間のコリンリン脂質、およそ０～１５％の間の酸性リン脂質、及びおよそ５～３０％の間のホスファチジルエタノールアミンである。一部の態様では、内層の組成は、およそ１５～４０％の間のコリンリン脂質、およそ１０～５０％の間の酸性リン脂質、及びおよそ３０～６０％の間のホスファチジルエタノールアミンである。

【0243】

[0244]一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソーム膜は、１つ又は複数の多糖類、例えばグリカンを含む。

【0244】

[0245]一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエクソソームは、ＡＳＯを含み、ＡＳＯは、ＥＶの外部表面上又はＥＶの内腔表面上のいずれかの足場部分を介してＥＶに連結されている。

【0245】

[0246]一部の態様では、ＡＳＯを含むＥＶ、例えばエクソソームは、任意選択でＡＳＯとエクソソーム膜との間にリンカーを含むアンカー部分を含む。リンカーの非限定的な例は、本明細書の他所で開示されている。

【0246】

ＩＩＩ．Ａ．アンカー部分（ＡＭ）
[0247]１つ又は複数のアンカー部分（ＡＭ）を使用して、ＡＳＯを本開示のＥＶに係留することができる。一部の態様ではＡＳＯは、直接又はリンカーを介してアンカー部分に連結される。一部の態様では、ＡＳＯは、「反応基」（ＲＧ；例えばアミン、チオール、ヒドロキシ、カルボン酸、又はアジド）と「反応部分」（ＲＭ；例えば、マレイミド、スクシネート、ＮＨＳ）間の反応を介してアンカー部分又はリンカーの組合せに結合させることができる。いくつかの可能性がある合成経路、例えば：
［ＡＭ］－／反応部分／＋／反応基／－［ＡＳＯ］
［ＡＭ］－［リンカー］ｎ－／反応部分／＋／反応基／－［ＡＳＯ］
［ＡＭ］－／反応部分／＋／反応基／－［リンカー］ｎ－［ＡＳＯ］
［ＡＭ］－［リンカー］ｎ－／反応部分／＋／反応基／－［リンカー］ｎ－［ＡＳＯ］
が想定されている。

【0247】

[0248]アンカー部分を、ＥＶ、例えばエクソソームの脂質二重層に挿入して、エクソソームへのＡＳＯのローディングを可能にすることができる。現在、極性のＡＳＯの送達媒体としてのエクソソームの商業化に対する主な障害は、非常に非効率的なローディングである。この障害は、極性ＡＳＯをエクソソームにロードする前に極性ＡＳＯを修飾することによって克服することができる。このように、本明細書で記載されるように、ＡＳＯの修飾は、エクソソームへのＡＳＯのローディングを容易にする。

【0248】

[0249]本明細書に記載される修飾極性ＡＳＯをエクソソームにロードする方法は、例えば電気穿孔又はカチオン脂質トランスフェクションによって非修飾ＡＳＯをエクソソームに導入するために以前に報告されたローディング効率と比較して、ローディング効率を有意に改善する。

【0249】

[0250]一部の態様では、修飾は、ＡＳＯの疎水性を、天然の（非修飾）ＡＳＯと比較して少なくとも約１、少なくとも約２、少なくとも約３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、又は少なくとも約１０倍増加させる。一部の態様では、修飾は、ＡＳＯの疎水性を、天然の（非修飾）ＡＳＯと比較して少なくとも約１、少なくとも約２、少なくとも約３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約６、少なくとも約７、少なくとも約８、少なくとも約９、又は少なくとも約１０桁増加させる。

【0250】

[0251]一部の態様では、修飾は、ＡＳＯの疎水性を、天然の（非修飾）ＡＳＯ、例えば対応する非修飾ＡＳＯと比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１２５％、少なくとも約１５０％、少なくとも約１７５％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、少なくとも約３００％、少なくとも約３５０％、少なくとも約４００％、少なくとも約４５０％、少なくとも約５００％、少なくとも約６００％、少なくとも約７００％、少なくとも約８００％、少なくとも約９００％、又は少なくとも約１０００％増加させる。疎水性の増加は、任意の好適な方法を使用して評価することができる。例えば、疎水性は、水などの水性溶媒中の溶解度と比較して、オクタノールなどの有機溶媒中でのパーセンテージ溶解度を測定することによって決定することができる。

【0251】

[0252]一部の態様では、アンカー部分は、ＡＳＯの疎水性性質を増強するためにＡＳＯに化学的にコンジュゲートされ得る。例示的な態様では、アンカー部分は、ステロール（例えば、コレステロール）、ＧＭ１、脂質、ビタミン、小分子、ペプチド、又はその組合せである。一部の態様では、部分は脂質である。一部の態様では、アンカー部分はステロール、例えばコレステロールである。追加の疎水性部分は、例えばリン脂質、リゾリン脂質、脂肪酸、又はビタミン（例えば、ビタミンＤ又はビタミンＥ）を含む。

【0252】

[0253]一部の態様では、アンカー部分は、ＡＳＯの末端に直接又は１つ若しくは複数のリンカーを介してコンジュゲートされている（すなわち、「末端修飾」）。他の態様では、アンカー部分は、ＡＳＯの他の部分にコンジュゲートされている。

【0253】

[0254]一部の態様では、ＡＳＯは、検出可能な標識を含み得る。例示的な標識としては、蛍光標識及び／又は放射活性標識が挙げられる。一部の態様では、ＡＳＯが蛍光標識される場合、検出可能な標識は、例えばＣｙ３であり得る。検出可能な標識をＡＳＯに付加することは、エクソソームを標識する方法として及びエクソソームの生体分布を追跡する方法として使用することができる。他の態様では、検出可能な標識は、例えばエクソソーム脂質及び／又はエクソソームペプチドを標識することによって、エクソソームに直接結合させることができる。

【0254】

[0255]ＡＳＯの異なる構成要素（すなわち、アンカー部分、リンカー、及びリンカーの組合せ、及びＡＳＯ）は、アミド、エステル、エーテル、チオエーテル、ジスルフィド、ホスホロアミデート、ホスホトリエステル、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、ホスホジエステル、又はホスホロチオエート連結によって、或いは任意の若しくは他の連結によって連結され得る。

【0255】

[0256]一部の態様では、ＡＳＯの異なる構成要素は、二官能性リンカー（すなわち、２つの官能基を含有するリンカー）、例えばＮ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート、Ｎ－４－マレイミド酪酸、Ｓ－（２－ピリジルジチオ）システアミン、ヨードアセトキシスクシンイミド、Ｎ－（４－マレイミドブチルオキシ）スクシンイミド、Ｎ－［５－（３’－マレイミドプロピルアミド）－１－カルボキシペンチル］イミノ二酢酸、Ｎ－（５－アミノペンチル）－イミノ二酢酸、及びその他を使用するリンカーであり得る。

【0256】

ＩＩＩ．Ａ．１．アンカー部分
[0257]ＡＳＯを、ＥＶ、例えばエクソソームの表面に係留することが可能な好適なアンカー部分は、以下に詳細に記載されるように、例えばステロール（例えば、コレステロール）、脂質、リゾリン脂質、脂肪酸、又は脂溶性ビタミンを含む。

【0257】

[0258]一部の態様では、アンカー部分は脂質であり得る。脂質アンカー部分は、当技術分野で公知の任意の脂質、例えばパルミチン酸又はグリコシルホスファチジルイノシトールであり得る。一部の態様では、脂質は、脂肪酸、ホスファチド、リン脂質（例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、又はホスファチジルエタノールアミン）、又はそのアナログ（例えば、ホスファチジルコリン、レシチン、ホスファチジルエタノールアミン、セファリン、又はホスファチジルセリン、又はそのアナログ若しくは部分、例えば部分的に加水分解されたその一部）である。

【0258】

[0259]一般的には、アンカー部分は、化学的に結合される。しかしながら、アンカー部分は、酵素によってＡＳＯに結合させることができる。一部の態様では、細胞培養条件の改変を介してアンカー部分をＡＳＯに結合することが可能である。例えば、ミリスチン酸が限定的である培養培地を使用することによって、より短鎖で不飽和の脂肪酸を含む一部の他の脂肪酸を、Ｎ末端グリシンに結合させることができる。例えば、ＢＫチャネルにおいて、ミリスチン酸は、ヒドロキシエステル連結を介して内部セリン／トレオニン、又はチロシン残基に翻訳後結合することが報告されている。

【0259】

[0260]アンカー部分を、任意の化学的に実現可能な位置で、例えばＡＳＯの５’及び／又は３’末端でＡＳＯに直接、又はリンカーの組合せを介して間接的にコンジュゲートすることができる。一態様では、アンカー部分は、ＡＳＯの３’末端のみにコンジュゲートされている。一態様では、アンカー部分は、ＡＳＯの５’末端のみにコンジュゲートされている。一態様では、アンカー部分は、ＡＳＯの３’末端でも５’末端でもない位置にコンジュゲートされている。

【0260】

[0261]本開示の方法を実践するために使用することができる膜アンカーのいくつかのタイプを以下の表に提示する：

【表2】

【0261】

[0262]一部の態様では、本開示のアンカー部分は、本明細書に開示されるアンカー部分の２つ又はそれより多くのタイプを含み得る。例えば、一部の態様では、アンカー部分は、２つの脂質、例えば、リン脂質及び脂肪酸、又は２つのリン脂質、又は２つの脂肪酸、又は脂質及びビタミン、又はコレステロール及びビタミン等を含み得て、これらは併せて６～８０個の炭素原子（すなわち、６～８０の炭素等量数（ＥＣＮ））を有する。

【0262】

[0263]一部の態様では、アンカー部分の組合せ、例えば脂質（例えば、脂肪酸）の組合せは、６～８０、８～８０、１０～８０、１２～８０、１４～８０、１６～８０、１８～８０、２０～８０、２２～８０、２４～８０、２６～８０、２８～８０、３０～８０、４～７６、６～７６、８～７６、１０～７６、１２～７６、１４～７６、１６～７６、１８～７６、２０～７６、２２～７６、２４～７６、２６～７６、２８～７６、３０～７６、６～７２、８～７２、１０～７２、１２～７２、１４～７２、１６～７２、１８～７２、２０～７２、２２～７２、２４～７２、２６～７２、２８～７２、３０～７２、６～６８、８～６８、１０～６８、１２～６８、１４～６８、１６～６８、１８～６８、２０～６８、２２～６８、２４～６８、２６～６８、２８～６８、３０～６８、６～６４、８～６４、１０～６４、１２～６４、１４～６４、１６～６４、１８～６４、２０～６４、２２～６４、２４～６４、２６～６４、２８～６４、３０～６４、６～６０、８～６０、１０～６０、１２～５６、１４～５６、１６～５６、１８～５６、２０～５６、２２～５６、２４～５６、２６～５６、２８～５６、３０～５６、６～５２、８～５２、１０～５２、１２～５２、１４～５２、１６～５２、１８～５２、２０～５２、２２～５２、２４～５２、２６～５２、２８～５２、３０～５２、６～４８、８～４８、１０～４８、１２～４８、１４～４８、１６～４８、１８～４８、２０～４８、２２～４８、２４～４８、２６～４８、２８～４８、３０～４８、６～４４、８～４４、１０～４４、１２～４４、１４～４４、１６～４４、１８～４４、２０～４４、２２～４４、２４～４４、２６～４４、２８～４４、３０～４４、６～４０、８～４０、１０～４０、１２～４０、１４～４０、１６～４０、１８～４０、２０～４０、２２～４０、２４～４０、２６～４０、２８～４０、３０～４０、６～３６、８～３６、１０～３６、１２～３６、１４～３６、１６～３６、１８～３６、２０～３６、２２～３６、２４～３６、２６～３６、２８～３６、３０～３６、６～３２、８～３２、１０～３２、１２～３２、１４～３２、１６～３２、１８～３２、２０～３２、２２～３２、２４～３２、２６～３２、２８～３２、又は３０～３２のＥＣＮを有する。

【0263】

ＩＩＩ．Ａ．１．ａ．コレステロール及び他のステロール
[0264]一部の態様では、アンカー部分は、ステロール、ステロイド、ホパノイド、ヒドロキシステロイド、セコステロイド、又は親油性特性を有するそのアナログを含む。一部の態様では、アンカー部分はステロール、例えばフィトステロール、ミコステロール、又は動物ステロールを含む。例示的な動物ステロールとしては、コレステロール及び２４Ｓ－ヒドロキシコレステロールが挙げられる；例示的なフィトステロールとしては、エルゴステロール（ミコステロール）、カンペステロール、シトステロール、及びスチグマステロールが挙げられる。一部の態様では、ステロールは、エルゴステロール、７－デヒドロコレステロール、コレステロール、２４Ｓ－ヒドロキシコレステロール、ラノステロール、シクロアルテノール、フコステロール、サリンゴステロール、カンペステロール、β－シトステロール、シトスタノール、コプロスタノール、アベナステロール、又はスチグマステロールから選択される。ステロールは、遊離のステロール、アシル化（ステロールエステル）、アルキル化（ステリルアルキルエーテル）、硫酸化（硫酸ステロール）、又はそれ自身がアシル化され得るグリコシド部分（ステリルグリコシド）に連結された（アシル化ステロールグリコシド）いずれかの状態で見出され得る。

【0264】

[0265]一部の態様では、アンカー部分は、ステロイドを含む。一部の態様では、ステロイドは、ジヒドロテストステロン、ウバオール、ヘシゲニン、ジオスゲニン、プロゲステロン、又はコルチゾルから選択される。

【0265】

[0266]例えば、ステロールは、ステロールの利用可能な－ＯＨ基で直接、又はリンカーの組合せを介してＡＳＯにコンジュゲートされ得る。例示的なステロールは、以下に示す一般的な骨格：

【化12】

を有する。

【0266】

[0267]さらなる例として、エルゴステロールは以下の構造：

【化13】

を有する。

【0267】

[0268]コレステロールは、以下の構造：

【化14】

を有する。

【0268】

[0269]したがって、一部の実施形態では、ステロール又はステロイドの遊離の－ＯＨ基を使用して、ＡＳＯを直接、又はリンカーの組合せを介してステロール（例えば、コレステロール）又はステロイドにコンジュゲートする。

【0269】

[0270]一部の態様では、ＡＳＯは、以下の構造

【化15】

によってＥＶにコンジュゲートされる。

【0270】

ＩＩＩ．Ａ．１．ｂ．脂肪酸
[0271]一部の態様では、アンカー部分は脂肪酸である。一部の態様では、脂肪酸は、短鎖、中鎖、又は長鎖脂肪酸である。一部の態様では、脂肪酸は、飽和脂肪酸である。一部の態様では、脂肪酸は、不飽和脂肪酸である。一部の態様では、脂肪酸はモノ不飽和脂肪酸である。一部の態様では、脂肪酸は多価不飽和脂肪酸、例えばω－３（オメガ－３）又はω－６（オメガ－６）脂肪酸である。

【0271】

[0272]一部の態様では、脂質、例えば脂肪酸は、Ｃ_２－Ｃ_６０鎖を有する。一部の実施形態では、脂質、例えば脂肪酸はＣ_２－Ｃ_２８鎖を有する。一部の態様では、脂肪酸はＣ_２－Ｃ_４０鎖を有する。一部の態様では、脂肪酸はＣ_２－Ｃ_１２又はＣ_４－Ｃ_１２鎖を有する。一部の態様では、脂肪酸はＣ_４－Ｃ_４０鎖を有する。一部の態様では、脂肪酸は、Ｃ_４－Ｃ_４０、Ｃ_２～Ｃ_３８、Ｃ_２～Ｃ_３６、Ｃ_２～Ｃ_３４、Ｃ_２～Ｃ_３２、Ｃ_２～Ｃ_３０、Ｃ_４～Ｃ_３０、Ｃ_２～Ｃ_２８、Ｃ_４～Ｃ_２８、Ｃ_２～Ｃ_２６、Ｃ_４～Ｃ_２６、Ｃ_２～Ｃ_２４、Ｃ_４～Ｃ_２４、Ｃ_６～Ｃ_２４、Ｃ_８～Ｃ_２４、Ｃ_１０～Ｃ_２４、Ｃ_２～Ｃ_２２、Ｃ_４～Ｃ_２２、Ｃ_６～Ｃ_２２、Ｃ_８～Ｃ_２２、Ｃ_１０～Ｃ_２２、Ｃ_２～Ｃ_２０、Ｃ_４～Ｃ_２０、Ｃ_６～Ｃ_２０、Ｃ_８～Ｃ_２０、Ｃ_１０～Ｃ_２０、Ｃ_２～Ｃ_１８、Ｃ_４～Ｃ_１８、Ｃ_６～Ｃ_１８、Ｃ_８～Ｃ_１８、Ｃ_１０～Ｃ_１８、Ｃ_１２～Ｃ_１８、Ｃ_１４～Ｃ_１８、Ｃ_１６～Ｃ_１８、Ｃ_２～Ｃ_１６、Ｃ_４～Ｃ_１６、Ｃ_６～Ｃ_１６、Ｃ_８～Ｃ_１６、Ｃ_１０～Ｃ_１６、Ｃ_１２～Ｃ_１６、Ｃ_１４～Ｃ_１６、Ｃ_２～Ｃ_１５、Ｃ_４～Ｃ_１５、Ｃ_６～Ｃ_１５、Ｃ_８～Ｃ_１５、Ｃ_９～Ｃ_１５、Ｃ_１０～Ｃ_１５、Ｃ_１１～Ｃ_１５、Ｃ_１２～Ｃ_１５、Ｃ_１３～Ｃ_１５、Ｃ_２～Ｃ_１４、Ｃ_４～Ｃ_１４、Ｃ_６～Ｃ_１４、Ｃ_８～Ｃ_１４、Ｃ_９～Ｃ_１４、Ｃ_１０～Ｃ_１４、Ｃ_１１～Ｃ_１４、Ｃ_１２～Ｃ_１４、Ｃ_２～Ｃ_１３、Ｃ_４～Ｃ_１３、Ｃ_６～Ｃ_１３、Ｃ_７～Ｃ_１３、Ｃ_８～Ｃ_１３、Ｃ_９～Ｃ_１３、Ｃ_１０～Ｃ_１３、Ｃ_１０～Ｃ_１３、Ｃ_１１～Ｃ_１３、Ｃ_２～Ｃ_１２、Ｃ_４～Ｃ_１２、Ｃ_６～Ｃ_１２、Ｃ_７～Ｃ_１２、Ｃ_８～Ｃ_１２、Ｃ_９～Ｃ_１２、Ｃ_１０～Ｃ_１２、Ｃ_２～Ｃ_１１、Ｃ_４～Ｃ_１１、Ｃ_６～Ｃ_１１、Ｃ_７～Ｃ_１１、Ｃ_８～Ｃ_１１、Ｃ_９～Ｃ_１１、Ｃ_２～Ｃ_１０、Ｃ_４～Ｃ_１０、Ｃ_２～Ｃ_９、Ｃ_４～Ｃ_９、Ｃ_２～Ｃ_８、Ｃ_２～Ｃ_７、Ｃ_４～Ｃ_７、Ｃ_２－Ｃ_６、又はＣ_４－Ｃ_６鎖を有する。一部の態様では、脂肪酸は、Ｃ_２、Ｃ_３、Ｃ_４、Ｃ_５、Ｃ_６、Ｃ_７、Ｃ_８、Ｃ_９、Ｃ_１０、Ｃ_１１、Ｃ_１２、Ｃ_１３、Ｃ_１４、Ｃ_１５、Ｃ_１６、Ｃ_１７、Ｃ_１８、Ｃ_１９、Ｃ_２０、Ｃ_２１、Ｃ_２２、Ｃ_２３、Ｃ_２４、Ｃ_２５、Ｃ_２６、Ｃ_２７、Ｃ_２８、Ｃ_２９、Ｃ_３０、Ｃ_３１、Ｃ_３２、Ｃ_３３、Ｃ_３４、Ｃ_３５、Ｃ_３６、Ｃ_３７、Ｃ_３８、Ｃ_３９、Ｃ_４０、Ｃ_４１、Ｃ_４２、Ｃ_４３、Ｃ_４４、Ｃ_４５、Ｃ_４６、Ｃ_４７、Ｃ_４８、Ｃ_４９、Ｃ_５０、Ｃ_５１、Ｃ_５２、Ｃ_５３、Ｃ_５４、Ｃ_５５、Ｃ_５６、Ｃ_５７、Ｃ_５８、Ｃ_５９、又はＣ_６０鎖を有する。

【0272】

[0273]一部の態様では、アンカー部分は、その各々が炭素原子の前述の範囲又は数のいずれか１つを有する鎖を有する脂肪酸から独立的に選択される２つの脂肪酸を含む。一部の態様では、脂肪酸の１つは、独立的にＣ６－Ｃ２１鎖を有する脂肪酸であり、他方は独立的にＣ１２－Ｃ３６鎖を有する脂肪酸である。一部の実施形態では、各脂肪酸は、独立的に１１、１２、１３、１４、１５、１６、又は１７個の炭素原子の鎖を有する。

【0273】

[0274]好適な脂肪酸は、飽和直鎖脂肪酸、飽和分岐脂肪酸、不飽和脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸、及びポリカルボン酸を含む。一部の態様では、そのような脂肪酸は、最大で３２個の炭素原子を有する。

【0274】

[0275]有用な飽和直鎖脂肪酸の例としては、偶数の炭素原子を有する脂肪酸、例えば酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、ヘキサコサン酸、オクタコサン酸、トリアコンタン酸及びｎ－ドトリアコンタン酸、並びに奇数の炭素原子を有する脂肪酸、例えばプロピオン酸、ｎ－吉草酸、エナント酸、ペラルゴン酸、ヘンデカン酸、トリデカン酸、ペンタデカン酸、ヘプタデカン酸、ノナデカン酸、ヘネイコサン酸、トリコサン酸、ペンタコサン酸、及びヘプタコサン酸が挙げられる。

【0275】

[0276]好適な飽和分岐脂肪酸の例としては、イソ酪酸、イソカプロン酸、イソカプリル酸、イソカプリン酸、イソラウリン酸、１１－メチルドデカン酸、イソミリスチン酸、１３－メチル－テトラデカン酸、イソパルミチン酸、１５－メチル－ヘキサデカン酸、イソステアリン酸、１７－メチルオクタデカン酸、イソアラキン酸、１９－メチル－エイコサン酸、α－エチル－ヘキサン酸、α－ヘキシルデカン酸、α－ヘプチルウンデカン酸、２－デシルテトラデカン酸、２－ウンデシルテトラデカン酸、２－デシルペンタデカン酸、２－ウンデシルペンタデカン酸、及びＦｉｎｅ ｏｘｏｃｏｌ １８００酸（Ｎｉｓｓａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｌｔｄ．の製品）が挙げられる。好適な飽和奇数炭素分岐脂肪酸としては、イソブチル基で終わるアンテイソ脂肪酸、例えば６－メチル－オクタン酸、８－メチル－デカン酸、１０－メチル－ドデカン酸、１２－メチル－テトラデカン酸、１４－メチル－ヘキサデカン酸、１６－メチル－オクタデカン酸、１８－メチル－エイコサン酸、２０－メチル－ドコサン酸、２２－メチル－テトラコサン酸、２４－メチル－ヘキサコサン酸、及び２６－メチルオクタコサン酸が挙げられる。

【0276】

[0277]好適な不飽和脂肪酸の例としては、４－デセン酸、カプロレイン酸、４－ドデセン酸、５－ドデセン酸、ラウロレイン酸、４－テトラデセン酸、５－テトラデセン酸、９－テトラデセン酸、パルミトレイン酸、６－オクタデセン酸、オレイン酸、９－オクタデセン酸、１１－オクタデセン酸、９－エイコセン酸、シス－１１－エイコセン酸、セトレイン酸、１３－ドコセン酸、１５－テトラコセン酸、１７－ヘキサコセン酸、６，９，１２，１５－ヘキサデカテトラエン酸、リノール酸、リノレン酸、α－エレオステアリン酸、β－エレオステアリン酸、プニカ酸、６，９，１２，１５－オクタデカテトラエン酸、パリナリン酸、５，８，１１，１４－エイコサテトラエン酸、５，８，１１，１４，１７－エイコサペンタエン酸、７，１０，１３，１６，１９－ドコサペンタエン酸、４，７，１０，１３，１６，１９－ドコサヘキサエン酸、及びその他が挙げられる。

【0277】

[0278]好適なヒドロキシ脂肪酸の例としては、α－ヒドロキシラウリン酸、α－ヒドロキシミリスチン酸、α－ヒドロキシパルミチン酸、α－ヒドロキシステアリン酸、ω－ヒドロキシラウリン酸、α－ヒドロキシアラキン酸、９－ヒドロキシ－１２－オクタデセン酸、リシノール酸、α－ヒドロキシベヘン酸、９－ヒドロキシ－トランス－１０，１２－オクタデカジエン酸、カモレン酸、イプロル酸、９，１０－ジヒドロキシステアリン酸、１２－ヒドロキシステアリン酸、及びその他が挙げられる。

【0278】

[0279]好適なポリカルボン酸の例としては、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、Ｄ，Ｌ－リンゴ酸、及びその他が挙げられる。

【0279】

[0280]一部の態様では、各脂肪酸は、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデシル酸、ラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、ノナデシル酸、アラキジン酸、ヘネイコシル酸、ベヘン酸、トリコシル酸、リグノセリン酸、ペンタコシル酸、セロチン酸、ヘプタコシル酸、モンタン酸、ノナコシル酸、メリシン酸、ヘナトリアコンチル酸、ラセロ酸、オオバコ酸、ゲディック酸、セロプラスチック酸、ヘキサトリアコンチル酸、ヘプタトリアコンタン酸、又はオクタトリアコンタン酸から独立的に選択される。

【0280】

[0281]一部の態様では、各脂肪酸は、α－リノレン酸、ステアリドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、リノール酸、ガンマ－リノール酸、ジホモ－ガンマ－リノール酸、アラキドン酸、ドコサテトラエン酸、パルミトレイン酸、バクセン酸、パウリン酸、オレイン酸、エライジン酸、ゴンド酸、エルカ酸、ネルボン酸、ミード酸、アドレニン酸、ボセオペンタエン酸、オズボンド酸、イワシ酸、ニシン酸、ドコサヘキサエン酸、又はテトラコサノールペンタエン酸、又は別のモノ不飽和又は多価不飽和脂肪酸から独立的に選択される。

【0281】

[0282]一部の態様では、脂肪酸の１つ又は両方は、必須脂肪酸である。ある特定の必須脂肪酸の健康上の有益な効果を考慮すると、本開示の治療薬をロードしたエクソソームの治療利益は、治療剤にそのような脂肪酸を含めることによって増加し得る。一部の態様では、必須脂肪酸は、リノレン酸、ガンマ－リノレン酸、ジホモ－ガンマ－リノレン酸、アラキドン酸、アドレン酸、ドコサペンタエンｎ－６酸、アルファ－リノレン酸、ステアリドン酸、２０：４ｎ－３酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエンｎ－３酸、又はドコサヘキサエン酸からなる群から選択されるｎ－６又はｎ－３必須脂肪酸である。

【0282】

[0283]一部の態様では、各脂肪酸は、オール－シス－７，１０，１３－ヘキサデカトリエン酸、α－リノレン酸、ステアリドン酸、エイコサトリエン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、テトラコサペンタエン酸、テトラコサヘキサエン酸、又はリポ酸から独立的に選択される。他の態様では、脂肪酸は、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、又はリポ酸から選択される。脂肪酸の他の例としては、オール－シス－７，１０，１３－ヘキサデカトリエン酸、α－リノレン酸（ＡＬＡ又はオール－シス－９，１２，１５－オクタデカトリエン酸）、ステアリドン酸（ＳＴＤ又はオール－シス－６，９，１２，１５－オクタデカテトラエン酸）、エイコサトリエン酸（ＥＴＥ又はオール－シス－１１，１４，１７－エイコサトリエン酸）、エイコサテトラエン酸（ＥＴＡ又はオール－シス－８，１１，１４，１７－エイコサテトラエン酸）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ、クルパノドン酸又はオール－シス－７，１０，１３，１６，１９－ドコサペンタエン酸）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ又はオール－シス－４，７，１０，１３，１６，１９－ドコサヘキサエン酸）、テトラコサペンタエン酸（オール－シス－９，１２，１５，１８，２１－ドコサヘキサエン酸）、又はテトラコサヘキサエン酸（ニシン酸又はオール－シス－６，９，１２，１５，１８，２１－テトラコセン酸）が挙げられる。一部の態様では、脂肪酸は、リポ酸などの中鎖脂肪酸である。

【0283】

[0284]脂肪酸鎖は、その鎖の長さが大きく異なり、鎖長に従って、例えば、短鎖から超長鎖として分類され得る。短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）は、約５個以下の炭素を有する脂肪酸（例えば、酪酸）である。一部の態様では、脂肪酸はＳＣＦＡである。中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）は、約６～１２個の炭素の鎖を有する脂肪酸を含み、中鎖トリグリセリドを形成することができる。一部の態様では、脂肪酸はＭＣＦＡである。長鎖脂肪酸（ＬＣＦＡ）は、１３～２１個の炭素の鎖を有する脂肪酸を含む。一部の態様では、脂肪酸はＬＣＦＡである。一部の態様では、脂肪酸はＬＣＦＡである。超長鎖脂肪酸（ＶＬＣＦＡ）は、２２個又はそれより多くの炭素、例えば２２～６０、２２～５０、又は２２～４０個の炭素の鎖を有する脂肪酸を含む。一部の態様では、脂肪酸はＶＬＣＦＡである。

【0284】

ＩＩＩ．Ａ．１．ｃ．リン脂質
[0285]一部の態様では、アンカー部分はリン脂質を含む。リン脂質は、全ての細胞膜の主要な構成要素である脂質のクラスである。リン脂質は、その両親媒性特徴のために脂質二重層を形成することができる。リン脂質分子の構造は一般的に、２つの疎水性脂肪酸の「テール」、及びリン酸基からなる親水性の「ヘッド」からなる。例えば、リン脂質は、以下の式に従う脂質であり得る：

【化16】

式中、Ｒ_ｐは、リン脂質部分を表し、Ｒ_１及びＲ_２同じであっても異なっていてもよい不飽和を有するか、又は有しない脂肪酸部分を表す。

【0285】

[0286]リン脂質部分は、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択され得る。

【0286】

[0287]特定のリン脂質は、脂質二重層、例えばエクソソーム膜の脂質二重層との融合を容易にし得る。例えば、カチオン性リン脂質は、膜の１つ又は複数の負に荷電したリン脂質と相互作用し得る。リン脂質と膜との融合は、脂質含有組成物の１つ又は複数のエレメントが膜に結合するのを、又は膜の中を通過するのを可能にし得る。

【0287】

[0288]脂肪酸部分は、例えばラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アルファ－リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定的な群から選択され得る。

【0288】

[0289]本開示においてアンカー部分として使用するリン脂質は、天然又は非天然のリン脂質であり得る。修飾を有する天然種、並びに分岐、酸化、環化、及びアルキンを含む置換を有する非天然のリン脂質種も同様に企図される。例えば、リン脂質は、１つ又は複数のアルキン（例えば、１つ又は複数の二重結合が三重結合に交換されているアルケニル基）によって官能化され得るか、又はアルキンに架橋され得る。適切な反応条件では、アルキン基は、アジドに曝露されると銅触媒環化付加を受け得る。

【0289】

ＩＩＩ．Ａ．２．リンカーの組合せ
[0290]一部の態様では、ＡＳＯは、切断性及び／又は非切断性リンカーの任意の組合せを含み得るリンカーの組合せを介して、本明細書に開示される疎水性の膜アンカー部分に連結される。リンカーの組合せの主な機能は、アンカー部分又は複数の部分とＢＡＭ標的との間の最適な間隔を提供することである。例えば、ＡＳＯの場合、リンカーの組合せは、ＡＳＯが標的核酸、例えばｍＲＮＡ又はｍｉＲＮＡと相互作用することができるように、ＡＳＯの立体妨害及び位置を低減させなければならない。

【0290】

[0291]リンカーは、切断に対して感受性であってもよく（「切断性リンカー」）、それによって生物学的に活性な分子の放出を容易にする。このように、一部の態様では、本明細書に開示されるリンカーの組合せは、切断性リンカーを含み得る。そのような切断性リンカーは、生物学的に活性な分子がなおも活性である条件下で、例えば酸誘導切断、光誘導切断、ペプチダーゼ誘導切断、エステラーゼ誘導切断、及びジスルフィド結合切断に対して感受性であり得る。或いは、リンカーは、切断に対して実質的に抵抗性であってもよい（「非切断性リンカー」）。一部の態様では、切断性リンカーは、スペーサーを含む。一部の態様では、スペーサーはＰＥＧである。

【0291】

[0292]一部の態様では、リンカーの組合せは、本明細書に開示される少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、又は少なくとも６個又はそれより多くの異なるリンカーを含む。一部の態様では、リンカーの組合せ中のリンカーは、エステル連結（例えば、ホスホジエステル又はホスホロチオエートエステル）によって連結され得る。

【0292】

[0293]一部の態様では、リンカーは、アンカー部分と、ＢＡＭ、例えばＡＳＯとの間の直接結合である。

【0293】

ＩＩＩ．Ａ．２．ａ．非切断性リンカー
[0294]一部の態様では、リンカーの組合せは、「非切断性リンカー」を含む。「非切断性リンカー」は、本開示の修飾された生物学的に活性な分子の２つ又はそれより多くの構成要素（例えば、生物学的に活性な分子とアンカー部分、生物学的に活性な分子と切断性リンカー、アンカー部分と切断性リンカー）を、安定な共有結合により連結することが可能であり、切断性リンカーに関する上記のカテゴリーに入らない任意の化学部分である。このように、非切断性リンカーは、酸誘導切断、光誘導切断、ペプチダーゼ誘導切断、エステラーゼ誘導切断、及びジスルフィド結合切断に対して実質的に抵抗性である。

【0294】

[0295]さらに、非切断性リンカーは、リンカー中の又はリンカーに隣接する化学結合が、環状ジヌクレオチド及び／又は抗体がその活性を失わない条件下で、酸、感光性の切断剤、ペプチダーゼ、エラスターゼ、又はジスルフィド結合を切断する化学的若しくは生理学的化合物によって誘導される切断に耐える能力を指す。一部の態様では、生物学的に活性な分子は、別のリンカー、例えば自己犠牲型リンカーを介してリンカーに結合する。

【0295】

[0296]一部の態様では、リンカーの組合せは、例えばテトラエチレングリコール（ＴＥＧ）ヘキサエチレングリコール（ＨＥＧ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、スクシンイミド、又はこれらの任意の組合せを含む非切断性リンカーを含む。一部の態様では、非切断性リンカーは、生物学的に活性な分子を非切断性リンカーに連結するためのスペーサー単位を含む。

【0296】

[0297]一部の態様では、１つ又は複数の非切断性リンカーは、共に連結されるより小さい単位（例えば、ＨＥＧ、ＴＥＧ、グリセロール、Ｃ２～Ｃ１２アルキル、及びその他）を含む。一態様では、連結は、エステル連結（例えば、ホスホジエステル又はホスホロチオエートエステル）又は他の連結である。

【0297】

ＩＩＩ．Ａ．２．ｂ．エチレングリコール（ＨＥＧ、ＴＥＧ、ＰＥＧ）
[0298]一部の態様では、リンカーの組合せは、非切断性リンカーを含み、非切断性リンカーは、式Ｒ^３－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）_ｎ－又はＲ^３－（０－ＣＨ_２－ＣＨ_２）_ｎ－Ｏ－（式中、Ｒ^３は、水素、メチル、又はエチルであり、及びｎは２～２００の間の値を有する）によって特徴付けられるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。一部の態様では、リンカーは、ＰＥＧであるスペーサーを含む。

【0298】

[0299]一部の態様では、ＰＥＧリンカーは、オリゴエチレングリコール、例えばジエチレングリコール、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール（ＴＥＧ）、ペンタエチレングリコール、又はヘキサエチレングリコール（ＨＥＧ）リンカーである。

【0299】

[0300]一部の態様では、ｎは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８９、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、又は２００の値を有する。

【0300】

[0301]一部の態様では、ｎは、２～１０の間、１０～２０の間、２０～３０の間、３０～４０の間、４０～５０の間、５０～６０の間、６０～７０の間、７０～８０の間、８０～９０の間、９０～１００の間、１００～１１０の間、１１０～１２０の間、１２０～１３０の間、１３０～１４０の間、１４０～１５０の間、１５０～１６０の間、１６０～１７０の間、１７０～１８０の間、１８０～１９０の間、又は１９０～２００の間である。

【0301】

[0302]一部の特定の態様では、ｎは、３～２００、３～２０、１０～３０、又は９～４５の値を有する。

【0302】

[0303]一部の態様では、ＰＥＧは、分岐ＰＥＧである。分岐ＰＥＧは、中心のコア基から発散する３～１０個のＰＥＧ鎖を有する。

【0303】

[0304]ある特定の実施形態では、ＰＥＧ部分は、単分散ポリエチレングリコールである。本開示の文脈において、単分散ポリエチレングリコール（ｍｄＰＥＧ）は、単一の定義された鎖長及び分子量を有するＰＥＧである。ｍｄＰＥＧは、典型的にクロマトグラフィーによる重合混合物からの分離によって生成される。ある特定の処方では、単分散ＰＥＧ部分には、ｍｄＰＥＧという略語が割り当てられる。

【0304】

[0305]一部の態様では、ＰＥＧは星型ＰＥＧである。星型ＰＥＧは、中心のコア基から発散する１０～１００個のＰＥＧ鎖を有する。

【0305】

[0306]一部の態様では、ＰＥＧは、Ｃｏｍｂ ＰＥＧである。Ｃｏｍｂ ＰＥＧは、ポリマー骨格に通常にグラフトされた複数のＰＥＧ鎖を有する。

【0306】

[0307]ある特定の態様では、ＰＥＧは、１００ｇ／ｍｏｌ～３０００ｇ／ｍｏｌの間、詳細には１００ｇ／ｍｏｌ～２５００ｇ／ｍｏｌの間、より詳細にはおよそ１００ｇ／ｍｏｌ～２０００ｇ／ｍｏｌの分子質量を有する。ある特定の態様では、ＰＥＧは、２００ｇ／ｍｏｌ～３０００ｇ／ｍｏｌの間、詳細には３００ｇ／ｍｏｌ～２５００ｇ／ｍｏｌの間、より詳細にはおよそ４００ｇ／ｍｏｌ～２０００ｇ／ｍｏｌの分子質量を有する。

【0307】

[0308]一部の態様では、ＰＥＧは、ＰＥＧ_１００、ＰＥＧ_２００、ＰＥＧ_３００、ＰＥＧ_４００、ＰＥＧ_５００、ＰＥＧ_６００、ＰＥＧ_７００、ＰＥＧ_８００、ＰＥＧ_９００、ＰＥＧ_１０００、ＰＥＧ_１１００、ＰＥＧ_１２００、ＰＥＧ_１３００、ＰＥＧ_１４００、ＰＥＧ_１５００、ＰＥＧ_１６００、ＰＥＧ_１７００、ＰＥＧ_１８００、ＰＥＧ_１９００、ＰＥＧ_２０００、ＰＥＧ_２１００、ＰＥＧ_２２００、ＰＥＧ_２３００、ＰＥＧ_２４００、ＰＥＧ_２５００、ＰＥＧ_１６００、ＰＥＧ_１７００、ＰＥＧ_１８００、ＰＥＧ_１９００、ＰＥＧ_２０００、ＰＥＧ_２１００、ＰＥＧ_２２００、ＰＥＧ_２３００、ＰＥＧ_２４００、ＰＥＧ_２５００、ＰＥＧ_２６００、ＰＥＧ_２７００、ＰＥＧ_２８００、ＰＥＧ_２９００、又はＰＥＧ_３０００である。１つの特定の態様では、ＰＥＧはＰＥＧ_４００である。別の特定の態様では、ＰＥＧはＰＥＧ_２０００である。

【0308】

[0309]一部の態様では、本開示のリンカーの組合せは、いくつかのＰＥＧリンカー、例えば、ＰＥＧ、ＨＥＧ、又はＴＥＧリンカーが隣接する切断性リンカーを含み得る。

【0309】

[0310]一部の態様では、リンカーの組合せは、（ＨＥＧ）ｎ及び／又は（ＴＥＧ）ｎを含み、ｎは、１～５０の間の整数であり、各単位は、例えばリン酸エステルリンカー、ホスホロチオエートエステル連結、又はその組合せを介して接続される。
ＩＩＩ．Ａ．２．ｃ．グリセロール及びポリグリセロール（ＰＧ）

【0310】

[0311]一部の態様では、リンカーの組合せは、式（（Ｒ_３－Ｏ－（ＣＨ_２－ＣＨＯＨ－ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－）（式中、Ｒ３は、水素、メチル、又はエチルであり、及びｎは３～２００の値を有する）によって記載されるグリセロール単位又はポリグリセロール（ＰＧ）を含む非切断性リンカーを含む。一部の態様では、ｎは、３～２０の値を有する。一部の態様では、ｎは１０～３０の値を有する。

【0311】

[0312]一部の態様では、ＰＧリンカーは、ジグリセロール、トリグリセロール、テトラグリセロール（ＴＧ）、ペンタグリセロール、又はヘキサグリセロール（ＨＧ）リンカーである。

【0312】

[0313]一部の態様では、ｎは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８９、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、又は２００の値を有する。

【0313】

[0314]一部の態様では、ｎは、２～１０の間、１０～２０の間、２０～３０の間、３０～４０の間、４０～５０の間、５０～６０の間、６０～７０の間、７０～８０の間、８０～９０の間、９０～１００の間、１００～１１０の間、１１０～１２０の間、１２０～１３０の間、１３０～１４０の間、１４０～１５０の間、１５０～１６０の間、１６０～１７０の間、１７０～１８０の間、１８０～１９０の間、又は１９０～２００の間である。

【0314】

[0315]これらの実施形態の一部の代替では、ｎは、９～４５の値を有する。一部の態様では、異種部分は、式（Ｒ^３－Ｏ－（ＣＨ_２－ＣＨＯＲ^５－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－）によって記載され、式中Ｒ^５が水素である分岐ポリグリセロールであるか、又は式（Ｒ^３－Ｏ－（ＣＨ_２－ＣＨＯＨ－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－）によって記載され、式中Ｒ^３が、水素、メチル、又はエチルである直鎖グリセロールである。一部の態様では、異種部分は、式（Ｒ^３－Ｏ－（ＣＨ_２－ＣＨＯＲ^５－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－）によって記載され、式中Ｒ^５が水素であるハイパーブランチ型ポリグリセロールであるか、又は式（Ｒ^３－Ｏ－（ＣＨ_２－ＣＨＯＲ^６－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－）によって記載され、式中Ｒ^６が水素であるグリセロール鎖であるか、又は式（Ｒ^３－Ｏ－（ＣＨ_２－ＣＨＯＲ^７－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－）によって記載され、式中Ｒ^７が水素であるグリセロール鎖であるか、又は式（Ｒ^３－Ｏ－（ＣＨ_２－ＣＨＯＨ－ＣＨ_２－Ｏ）_ｎ－）によって記載され、式中Ｒ^３が、水素、メチル、又はエチルである直鎖グリセロール鎖である。ハイパーブランチ型グリセロール及びその合成方法は、Ｏｕｄｓｈｏｒｎら、（２００６）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２７：５４７１－５４７９；Ｗｉｌｍｓら、（２０１００ Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．４３、１２９－４１、及び引用されている参考文献に記載されている。

【0315】

[0316]ある特定の態様では、ＰＧは、１００ｇ／ｍｏｌ～３０００ｇ／ｍｏｌの間、詳細には１００ｇ／ｍｏｌ～２５００ｇ／ｍｏｌの間、より詳細にはおよそ１００ｇ／ｍｏｌ～２０００ｇ／ｍｏｌの分子質量を有する。ある特定の態様では、ＰＧは、２００ｇ／ｍｏｌ～３０００ｇ／ｍｏｌの間、詳細には３００ｇ／ｍｏｌ～２５００ｇ／ｍｏｌの間、より詳細にはおよそ４００ｇ／ｍｏｌ～２０００ｇ／ｍｏｌの分子質量を有する。

【0316】

[0317]一部の態様では、ＰＧは、ＰＧ_１００、ＰＧ_２００、ＰＧ_３００、ＰＧ_４００、ＰＧ_５００、ＰＧ_６００、ＰＧ_７００、ＰＧ_８００、ＰＧ_９００、ＰＧ_１０００、ＰＧ_１１００、ＰＧ_１２００、ＰＧ_１３００、ＰＧ_１４００、ＰＧ_１５００、ＰＧ_１６００、ＰＧ_１７００、ＰＧ_１８００、ＰＧ_１９００、ＰＧ_２０００、ＰＧ_２１００、ＰＧ_２２００、ＰＧ_２３００、ＰＧ_２４００、ＰＧ_２５００、ＰＧ_１６００、ＰＧ_１７００、ＰＧ_１８００、ＰＧ_１９００、ＰＧ_２０００、ＰＧ_２１００、ＰＧ_２２００、ＰＧ_２３００、ＰＧ_２４００、ＰＧ_２５００、ＰＧ_２６００、ＰＧ_２７００、ＰＧ_２８００、ＰＧ_２９００、又はＰＧ_{３０００．}である。１つの特定の態様では、ＰＧはＰＧ_４００である。別の特定の態様では、ＰＧはＰＧ_２０００である。

【0317】

[0318]一部の態様では、リンカーの組合せは、（グリセロール）ｎ、及び／又は（ＨＧ）ｎ、及び／又は（ＴＧ）ｎを含み、式中ｎは、１～５０の整数であり、各単位は、例えばリン酸エステルリンカー、ホスホロチオエートエステル連結、又はその組合せを介して接続されている。

【0318】

ＩＩＩ．Ａ．２．ｄ．脂肪族（アルキル）リンカー
[0319]一部の態様では、リンカーの組合せは、少なくとも１つの脂肪族（アルキル）リンカー、例えばプロピル、ブチル、ヘキシル、又はＣ２－Ｃ１２アルキル、例えばＣ２－Ｃ１０アルキル又はＣ２－Ｃ６アルキルを含む。

【0319】

ＩＩＩ．Ａ．３．切断性リンカー
[0320]一部の態様では、本明細書に開示されるＡＳＯの異なる構成要素を、切断性リンカーによって連結することができる。切断性リンカーという用語は、破断又は切断することができる少なくとも１つの連結又は化学結合を含むリンカーを指す。本明細書で使用される場合、切断という用語は、比較的大きい分子における１つ又は複数の化学結合の、２つ又はそれより多くの比較的小さい分子を生じるような破断を指す。切断は、例えばヌクレアーゼ、ペプチダーゼ、プロテアーゼ、ホスファターゼ、オキシダーゼ、若しくはレダクターゼによって、又は特定の物理化学条件、例えば酸化還元環境、ｐＨ、反応性酸素種の存在、若しくは特定の波長の光によって媒介され得る。

【0320】

[0321]一部の態様では、「切断性」という用語は、本明細書で使用される場合、例えば急速に分解するリンカー、例えばホスホジエステル及びジスルフィドを指すが、「非切断性」リンカーという用語は、例えばより安定な連結、例えばヌクレアーゼ抵抗性ホスホロチオエートを指す。

【0321】

[0322]一部の態様では、切断性リンカーは、ジヌクレオチド又はトリヌクレオチドリンカー、ジスルフィド、イミン、チオケタール、ｖａｌ－ｃｉｔジペプチド、又はこれらの任意の組合せである。

【0322】

[0323]一部の態様では、切断性リンカーは、バリン－アラニン－ｐ－アミノベンジルカルバメート又はバリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルカルバメートを含む。
ＩＩＩ．Ａ．４．特定の例及び位相幾何学

【0323】

[0324]本開示の特定の態様では、リンカーの組合せは、式：
［アルキルリンカー］ｍ－［ＰＥＧ１］ｎ－［ＰＥＧ２］ｏ
のリンカーからなり、
式中、ｍ、ｎ、及びｏは、０又は１であり、並びにｍ、ｎ、又はｏのうちの少なくとも１つはゼロではない。そのような式に従う例示的なリンカーの組合せは、Ｃ６－ＴＥＧ－ＨＥＧ、Ｃ６－ＨＥＧ、Ｃ６－ＴＥＧ、Ｃ６、ＴＥＧ－ＨＥＧ、ＴＥＧ、Ｃ８－ＴＥＧ－ＨＥＧ、Ｃ８－ＨＥＧ、Ｃ８－ＴＥＧ、及びＣ８である。

【0324】

[0325]一部の態様では、リンカーの組合せは、１つ又は複数の切断性リンカー、例えば酵素による切断性リンカー及び自己犠牲リンカーと組み合わせた非切断性リンカー（例えば、ＴＥＧ又はＨＥＧ）を含む。

【0325】

[0326]特定の態様では、リンカーの組合せは、以下に示すように、リンカーの組合せＴＥＧ（非切断性リンカー）－Ｖａｌ－Ｃｉｔ（切断性リンカー）－ｐＡＢ（自己犠牲リンカー）を含む。

【化17】

【0326】

[0327]アンカー部分とリンカーの組合せの特定の組合せを以下の表に例証する。

【0327】

【表3】

【0328】

【表4】

【0329】

[0328]本開示のＡＳＯなどの特定のオリゴヌクレオチドを以下に例証する。
［コレステロール］－［ＴＥＧ］－［ＨＥＧ］－［ＡＳＯ］

【化18】

［コレステロール］－［ＳＭａｌ］－［Ｖａｌ－Ｃｉｔ］－［ｐＡＢ］－［ＡＳＯ］

【化19】

［コレステロール］－［ＴＥＧ］－［Ｖａｌ－Ｃｉｔ］－［Ｃ６］－［ＡＳＯ］

【化20】

［コレステロール］－［ＴＥＧ］－［ＳＳ］－［Ｃ６］－［ＡＳＯ］

【化21】

式中、［コレステロール］は、コレステロールアンカー部分であり、［ＴＥＧ］は、ＴＥＧ非切断性リンカーであり、［ＨＥＧ］は、ＨＥＧ非切断性リンカーであり、［ＳＳ］は、ジスルフィド酸化還元切断性リンカーであり、［Ｃ６］は、アルキル非切断性リンカーであり、［ＳＭａｌ］は、Ｓ－マレイミドであり、［Ｖａｌ－Ｃｉｔ］は、バリン－シトルリン切断性リンカーであり、［ｐＡＢ］は、ｐＡＢ自己犠牲リンカーである。一部の態様では、本開示のＡＳＯは、１つ又は複数の構成要素が、実施例で示されるクラスと同じクラスの構成要素に交換されている、上記で提供される例示的な構造に従う構造を有する。例えば、［コレステロール］アンカー部分を、本明細書に開示される別のアンカー部分に置換することができ、［ＴＥＧ］を、本明細書に開示される別のポリマー非切断性リンカー（例えば、ＨＥＧ、ＰＥＧ、ＰＧ）に置換することができ、［Ｖａｌ－Ｃｉｔ］を、別のペプチダーゼ切断性リンカーに交換することができ、又は［ｐＡＢ］を、別の自己犠牲リンカーに置換することができる。

【0330】

ＩＩＩ．Ｂ．足場部分
[0329]１つ又は複数の足場部分をＥＶにおいて発現させることができる。一部の態様では、１つ又は複数の足場部分を使用してＡＳＯを本開示のＥＶに係留する。他の態様では、１つ又は複数の足場部分を使用して、ＡＳＯに加えてタンパク質又は分子をＥＶに係留する。したがって、本開示のＥＶは、ＡＳＯを連結するアンカー部分、及びタンパク質又は分子、例えば標的化部分を連結する足場部分を含む。一部の態様ではＡＳＯは、足場部分に連結される。一部の態様では、ＥＶは、１つより多くの足場部分を含む。一部の態様では、第１のＡＳＯは、第１の足場部分に連結され、第２のＡＳＯは、第２の足場部分に連結される。一部の態様では、第１の足場部分及び第２の足場部分は、同じタイプの足場部分であり、例えば、第１及び第２の足場部分は、両方がＳｃａｆｆｏｌｄ Ｘタンパク質である。一部の態様では、第１の足場部分及び第２の足場部分は異なるタイプの足場部分であり、例えば、第１の足場部分はＳｃａｆｆｏｌｄ Ｙタンパク質であり、第２の足場部分はＳｃａｆｆｏｌｄ Ｘタンパク質である。一部の態様では、第１の足場部分は、本明細書に開示されるＳｃａｆｆｏｌｄ Ｙである。一部の態様では、第１の足場部分は、本明細書に開示されるＳｃａｆｆｏｌｄ Ｘである。一部の態様では、第２の足場部分は、本明細書に開示されるＳｃａｆｆｏｌｄ Ｙである。一部の態様では、第２の足場部分は、本明細書に開示されるＳｃａｆｆｏｌｄ Ｘである。

【0331】

[0330]一部の態様では、ＥＶは、ＡＳＯをＥＶ、例えばエクソソーム（例えば、内腔表面上又は外部表面上のいずれかで）に係留することが可能である１つ又は複数の足場部分を含む。ある特定の態様では、足場部分はポリペプチド（「足場タンパク質」）である。ある特定の態様では、足場タンパク質は、エクソソームタンパク質又はその断片を含む。他の態様では、足場部分は、非ポリペプチド部分である。一部の態様では、足場タンパク質は、エクソソーム膜において濃化された様々な膜タンパク質、例えば膜貫通タンパク質、内在性タンパク質、及び表在性タンパク質を含む。足場タンパク質は、様々なＣＤタンパク質、輸送体、インテグリン、レクチン、及びカドヘリンを含み得る。ある特定の態様では、足場部分（例えば、足場タンパク質）は、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘを含む。他の態様では、足場部分（例えば、エクソソームタンパク質）はＳｃａｆｆｏｌｄ Ｙを含む。さらなる態様では、足場部分（例えばエクソソームタンパク質）は、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘ及びＳｃａｆｆｏｌｄ Ｙの両方を含む。

【0332】

[0331]一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエクソソームは、組成が修飾されている膜を含む。例えば、膜組成は、膜のタンパク質、脂質、又はグリカン内容物を変化させることによって修飾することができる。

【0333】

[0332]一部の態様では、表面を操作されたＥＶ、例えばエクソソームは、化学的及び／又は物理的方法、例えばＰＥＧ誘導融合及び／又は超音波融合によって作製される。他の態様では、表面を操作されたＥＶ、例えばエクソソームは、遺伝子工学によって作製される。遺伝子修飾された産生細胞又は遺伝子修飾細胞の子孫から産生されたＥＶ、例えばエクソソームは、修飾された膜組成を含有し得る。一部の態様では、表面を操作されたＥＶ、例えばエクソソームは、より高密度又は低密度（例えば、より大きい数）で足場部分（例えばエクソソームタンパク質、例えば、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘ）を有するか、又は足場部分のバリアント若しくは断片を含む。

【0334】

[0333]例えば、表面（例えば、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘ）が操作されたＥＶは、足場部分（例えばエクソソームタンパク質、例えばＳｃａｆｆｏｌｄ Ｘ）又はバリアント若しくはその断片をコードする外因性配列によって形質転換された細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）から産生され得る。外因性配列から発現された足場部分を含むＥＶは、修飾された膜組成を含み得る。

【0335】

[0334]足場部分の様々な修飾又は断片を、本開示の態様のために使用することができる。例えば、結合剤に対して増強された親和性を有するように修飾された足場部分を、結合剤を使用して精製することができる表面を操作されたＥＶを作製するために使用することができる。ＥＶ及び／又は膜により有効に標的化されるように修飾された足場部分を使用することができる。エクソソーム膜に対する特異的及び有効な標的化にとって必要な最小の断片を含むように修飾された足場もまた、使用することができる。

【0336】

[0335]足場部分は、融合分子、例えばＳｃａｆｆｏｌｄ ＸとＡＳＯとの融合分子として発現されるように操作することができる。例えば、融合分子は、ＡＳＯに連結された本明細書に開示される足場部分（例えば、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘ、例えば、ＰＴＧＦＲＮ、ＢＳＧ、ＩＧＳＦ２、ＩＧＳＦ３、ＩＧＳＦ８、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＡ４、ＳＬＣ３Ａ２、ＡＴＰトランスポーター、又はその断片若しくはバリアント）を含み得る。

【0337】

[0336]一部の態様では、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘは、プロスタグランジンＦ２受容体陰性調節因子（ＰＴＧＦＲＮポリペプチド）を含む。ＰＴＧＦＲＮタンパク質はまた、ＣＤ９パートナー１（ＣＤ９Ｐ－１）、Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｉｌｅ ＥＷＩモチーフ含有タンパク質Ｆ（ＥＷＩ－Ｆ）、プロスタグランジンＦ２－アルファ受容体調節タンパク質、プロスタグランジンＦ２－アルファ受容体関連タンパク質、又はＣＤ３１５とも呼ばれ得る。ヒトＰＴＧＦＲＮタンパク質の全長のアミノ酸配列（Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｑ９Ｐ２Ｂ２）を、表２に配列番号３０１として示す。ＰＴＧＦＲＮポリペプチドは、シグナルペプチド（配列番号３０１のアミノ酸１～２５）、細胞外ドメイン（配列番号３０１のアミノ酸２６～８３２）、膜貫通ドメイン（配列番号３０１のアミノ酸８３３～８５３）、及び細胞質ドメイン（配列番号３０１のアミノ酸８５４～８７９）を含有する。成熟ＰＴＧＦＲＮポリペプチドは、シグナルペプチドを含まない配列番号３０１からなり、すなわち、配列番号３０１のアミノ酸２６～８７９からなる。

【0338】

【表5】

【0339】

ＩＩＩ．Ｃ．標的化部分
[0337]一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、標的化部分、例えば外因性標的化部分を含む。一部の態様では、外因性標的化部分は、ペプチド、抗体若しくはその抗原結合断片、化学化合物、又はこれらの任意の組合せを含む。一部の態様では、標的化部分は、マイクロタンパク質、設計されたアンキリン反復タンパク質（ダーピン）、アンチカリン、アドネクチン、アプタマー、ペプチド模倣分子、受容体の天然のリガンド、ラクダ科のナノボディ、又はこれらの任意の組合せを含む。一部の態様では、外因性標的化部分は、全長抗体、単一ドメイン抗体、重鎖のみの抗体（ＶＨＨ）、一本鎖抗体、サメ重鎖のみの抗体（ＶＮＡＲ）、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又はこれらの任意の組合せを含む。一部の態様では、抗体は一本鎖抗体である。

【0340】

[0338]一部の態様では、本開示の指向性部分は、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）を標的とする。トランスフェリン受容体、例えば、ＴｆＲ１又はＴｆＲ２は、トランスフェリンのキャリアタンパク質である。トランスフェリン受容体は、受容体媒介エンドサイトーシスを通してトランスフェリン－鉄錯体を内部移行させることによって鉄を輸送する。

【0341】

[0339]ＴｆＲ１（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ０２７８６ ＴＦＲ１＿Ｈｕｍａｎを参照されたい）又はトランスフェリン受容体１（分化抗原群７１又はＣＤ７１としても公知）は、血液脳関門（ＢＢＢ）の内皮細胞上に発現される。一部の態様では、本開示の指向性部分は、ＴｆＲを標的とする、例えばＴｆＲ１を標的とすることができるリガンド、例えばトランスフェリン、又はＴｆＲに特異的に結合することが可能な抗体若しくは他の結合分子を含み得る。一部の態様では、トランスフェリン受容体を標的とする抗体は、低親和性抗トランスフェリン受容体抗体である（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第２０１９０２０２９３６Ａ１号を参照されたい）。

【0342】

[0340]一部の態様では、指向性部分は、トランスフェリン受容体のリガンドの全て又は一部（例えば、結合部分）、例えば中でも受託番号ＮＭ００１０６３、ＸＭ００２７９３、ＸＭ０３９８４７、ＮＭ００２３４３、又はＮＭ０１３９００としてＧｅｎＢａｎｋにおいて入手可能なヒトトランスフェリン、又はそのバリアント、断片、若しくは誘導体を含む。

【0343】

[0341]一部の態様では、指向性部分は、トランスフェリン－受容体－標的化部分、すなわちトランスフェリン受容体に対する標的化部分を含む。好適なトランスフェリン－受容体－標的化部分は、トランスフェリン又はトランスフェリンバリアント、例えばこれらに限定されないが、血清トランスフェリン、ラクトトランスフェリン（ラクトフェリン）、オボトランスフェリン、又はメラノトランスフェリンが挙げられる。トランスフェリンは、血清トランスフェリン、ラクトトランスフェリン（ラクトフェリン）、オボトランスフェリン、及びメラノトランスフェリンを含む、脊椎動物において見出される非ヘム鉄結合タンパク質ファミリーである。血清トランスフェリンは、分岐して各々が末端シアル酸残基を有する複数のアンテナで終わる２つのＮ結合多糖鎖を有する単一のポリペプチド鎖を含む、分子量が約８０ｋＤａの糖タンパク質である。２つの主なドメイン、すなわち約３３０アミノ酸のＮドメイン及び約３４０アミノ酸のＣドメインが存在し、その各々は２つのサブドメイン、Ｎ１及びＮ２、及びＣ１及びＣ２に分割される。トランスフェリンの受容体結合は、グリコシル化によらず、Ｃドメインを通して起こる。

【0344】

[0342]一部の態様では、指向性部分は、血清トランスフェリン又はトランスフェリンバリアント、例えばこれらに限定されないが、ヘキサシアロトランスフェリン、ペンタシアロトランスフェリン、テトラシアロトランスフェリン、トリシアロトランスフェリン、ジシアロトランスフェリン、モノシアロトランスフェリン、若しくはアシアロトランスフェリン、又は炭水化物欠損トランスフェリン（ＣＤＴ）、例えばアシアロ、モノシアロ、若しくはジシアロトランスフェリン、又は炭水化物を含まないトランスフェリン（ＣＦＴ）、例えばアシアロトランスフェリンである。一部の態様では、指向性部分は、トランスフェリンのＮ－末端ドメイン、トランスフェリンのＣ－末端ドメイン、天然トランスフェリンのグリコシル化、天然（野生型）トランスフェリンと比較して低減されたグリコシル化、グリコシル化なし、トランスフェリンの少なくとも２つのＮ末端小葉、トランスフェリンの少なくとも２つのＣ末端小葉、Ｎドメインにおける少なくとも１つの変異、Ｃドメインにおける少なくとも１つの変異、変異体がトランスフェリン受容体に対して天然のトランスフェリンより弱い結合アビディティを有する変異、及び／又は変異体がトランスフェリン受容体に対して天然のトランスフェリンより強い結合アビディティを有する変異、又は前記の組み合わせを有するトランスフェリンバリアントである。

【0345】

[0343]一部の態様では、トランスフェリン受容体を標的化する指向性部分は、抗トランスフェリン受容体可変新規抗原受容体（ｖＮＡＲ）、例えば一般的モチーフ構造（ＦＷ１－ＣＤＲ１－ＦＷ２－３－ＣＤＲ３－ＦＷ４）を有する結合ドメインを含む。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１７－０３４８４１６号を参照されたい。ｖＮＡＲは、サメの適応免疫系の重要な構成要素である。わずか１１ｋＤａであるが、これらの単一ドメイン構造は、動物界では最小のＩｇＧ様タンパク質であり、分子工学及び生物薬開発のための優れたプラットフォームを提供する。ｖＮＡＲの属性は、標的に対する高い親和性、発現の容易さ、安定性、溶解度、多重特異性、及び固形組織浸透能の増加を含む。Ｕｂａｈら．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．（２０１８）４６（６）：１５５９－１５６５を参照されたい。

【0346】

[0344]一部の態様では、指向性部分は、ＴｆＲ１に特異的に結合することが可能なｖＮＡＲドメインを含み、ｖＮＡＲドメインは、米国特許出願公開第２０１７－０３４８４１６号の表１の任意の１つのＣＤＲ３ペプチドと組み合わせて、米国特許出願公開第２０１７－０３４８４１６号の表１の任意の１つのＣＤＲ１ペプチドを有するｖＮＡＲ足場を含むか又はから本質的になる。

【0347】

[0345]一部の態様では、標的化部分は、足場タンパク質によってＥＶ、例えばエクソソームに連結される。一部の態様では、足場タンパク質は、本明細書に開示される任意の足場タンパク質である。一部の態様では、足場タンパク質はＳｃａｆｆｏｌｄ Ｘである。一部の態様では、足場タンパク質はＳｃａｆｆｏｌｄ Ｙである。

【0348】

ＩＩＩ．Ｄ．リンカー
[0346]上記のように、本開示の細胞外ベシクル（ＥＶ）（例えばエクソソーム及びナノベシクル）は、目的の分子（例えば、ＡＳＯ）をＥＶ（例えば、外部表面に又は内腔表面上）に連結する１つ又は複数のリンカーを含み得る。一部の態様では、ＡＳＯは、ＥＶに直接又は足場部分（例えば、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘ又はＳｃａｆｆｏｌｄ Ｙ）を介して連結される。ある特定の態様では、ＡＳＯは、リンカーによって足場部分に連結される。ある特定の態様では、ＡＳＯは、リンカーによって第２の足場部分に連結される。

【0349】

[0347]ある特定の態様では、ＡＳＯは、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘを介してエクソソームの外部表面に連結される。さらなる態様では、ＡＳＯは、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘ又はＳｃａｆｆｏｌｄ Ｙを介してエクソソームの内腔表面に連結される。リンカーは、当技術分野で公知の任意の化学部分であり得る。

【0350】

[0348]本明細書で使用される場合、「リンカー」という用語は、ペプチド若しくはポリペプチド配列（例えば、合成ペプチド又はポリペプチド配列）、又は非ポリペプチド、例えばアルキル鎖を指す。一部の態様では、２つ又はそれより多くのリンカーを縦列に連結することができる。複数のリンカーが存在する場合、リンカーの各々は、同じであっても異なっていてもよい。一般的には、リンカーは、柔軟性を提供するか、又は立体妨害を防止／改善する。リンカーは、典型的に切断されない；しかしながら、ある特定の態様では、そのような切断が望ましい場合がある。したがって、一部の態様では、リンカーは、リンカーの配列内に位置し得るか、又はリンカー配列のいずれかの末端でリンカーに隣接する１つ又は複数のプロテアーゼ切断性部位を含み得る。

【0351】

[0349]一部の態様では、リンカーはペプチドリンカーである。一部の態様では、ペプチドリンカーは、少なくとも約２、少なくとも約３、少なくとも約４、少なくとも約５、少なくとも約１０、少なくとも約１５、少なくとも約２０、少なくとも約２５、少なくとも約３０、少なくとも約３５、少なくとも約４０、少なくとも約４５、少なくとも約５０、少なくとも約５５、少なくとも約６０、少なくとも約６５、少なくとも約７０、少なくとも約７５、少なくとも約８０、少なくとも約８５、少なくとも約９０、少なくとも約９５、又は少なくとも約１００個のアミノ酸を含み得る。

【0352】

[0350]一部の態様では、ペプチドリンカーは、合成であり、すなわち天然に存在しない。一態様では、ペプチドリンカーは、アミノ酸の第１の直鎖配列を、それが天然に連結されていない又は天然で遺伝的に融合されていないアミノ酸の第２の直鎖配列に連結するか又は遺伝的に融合するアミノ酸配列を含むペプチド（又はポリペプチド）（例えば、天然に存在する又は天然に存在しないペプチド）を含む。例えば、一態様では、ペプチドリンカーは、天然に存在するポリペプチドの修飾型である天然に存在しないポリペプチド（例えば、付加、置換、又は欠失などの変異を含む）を含み得る。

【0353】

[0351]リンカーは、切断に対して感受性であり（「切断性リンカー」）、それによって生物学的に活性な分子（例えば、ＡＳＯ）の放出を容易にし得る。

【0354】

[0352]一部の態様では、リンカーは、「還元感受性リンカー」である。一部の態様では、還元感受性リンカーは、ジスルフィド結合を含有する。一部の態様では、リンカーは、「酸不安定リンカー」である。一部の態様では、酸不安定リンカーは、ヒドラゾンを含有する。好適な酸不安定リンカーはまた、例えば、シス－アコニット酸リンカー、ヒドラジドリンカー、チオカルバモイルリンカー、又はこれらの任意の組合せも含む。

【0355】

[0353]一部の態様では、リンカーは非切断性リンカーを含む。

【0356】

[0354]一部の態様では、リンカーは、アクリル酸ホスホロアミダイト（例えば、アクリダイト（商標））、アデニル化、アジド（ＮＨＳエステル）、ジゴキシゲニン（ＮＨＳエステル）、コレステロール－ＴＥＧ、Ｉ－リンカー（商標）、アミノ修飾剤（例えば、アミノ修飾剤Ｃ６、アミノ修飾剤Ｃ１２、アミノ修飾剤Ｃ６ ｄＴ、又はユニリンク（商標）アミノ修飾剤）、アルキン、５’ヘキシニル、５－オクタジイニルｄＵ、ビオチン化（例えば、ビオチン、ビオチン（アジド）、ビオチンｄＴ、ビオチン－ＴＥＧ、デュアルビオチン、ＰＣビオチン、又はデスチオビオチン）、チオール修飾（チオール修飾剤Ｃ３ Ｓ－Ｓ、ジチオール又はチオール修飾剤Ｃ６ Ｓ－Ｓ）、又はこれらの任意の組合せを含む。

【0357】

[0355]一部の態様では、リンカーは、テルペン、例えばネロリドール、ファルネソール、リモネン、リナロール、ゲラニオール、カルボン、フェンコン又はメントール；脂質、例えばパルミチン酸又はミリスチン酸；コレステロール；オレイル；レチニル；コレステリル残基；コール酸；アダマンタン酢酸；１－ピレン酪酸；ジヒドロテストステロン；１，３－ビス－Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール；ゲラニルオキシヘキシル基；ヘキサデシルグリセロール；ボルネオール；１，３－プロパンジオール；ヘプタデシル基；Ｏ３－（オレオイル）リトコール酸；Ｏ３－（オレオイル）コレン酸；ジメトキシトリチル；フェノキサジン、マレイミド部分、グルコリニダーゼ型、ＣＬ２Ａ－ＳＮ３８型、葉酸；炭水化物；ビタミンＡ；ビタミンＥ；ビタミンＫ、又はこれらの任意の組合せを含む。
ＩＩＩ．Ｅ．指向性部分を含む修飾されたＥＶ

【0358】

[0356]一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエクソソームはその特性、例えば生体分布を、例えば免疫親和性リガンド又は同起源の受容体リガンドを組み込むことによって調整するように操作された表面であり得る。例えば、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエクソソームは、それらを特定の細胞タイプ、例えばシュワン細胞、知覚ニューロン、運動ニューロン、髄膜マクロファージ、若しくは腫瘍細胞に方向付けるように操作された表面であり得るか、又は特定の体内分画、例えばＣＮＳ（髄腔内分画の保持を改善するため）若しくは腫瘍微小環境への遊走を増強するように操作された表面であり得る。

【0359】

[0357]一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、（ｉ）本明細書に開示されるＡＳＯ、及び（ｉｉ）生体分布修飾剤又は標的化部分を含む。一部の態様では、生体分布修飾剤又は標的化部分は、単一ドメイン抗原結合部分、例えばＶＨＨ及び／又はｖＮＡＲを含む。本明細書で使用される場合、「生体分布修飾剤」及び「標的化部分」という用語は互換的に使用され、細胞外ベシクル（例えばエクソソーム、ナノベシクル）のｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏ（例えば、異なる種類の細胞の混合培養物）での分布を修飾することができる作用剤を指す。一部の態様では、標的化部分は、ＥＶ（例えばエクソソーム）の指向性を変更し、すなわち標的部分は、「指向性部分」である。本明細書で使用される場合、「指向性部分」という用語は、ＥＶ（例えばエクソソーム）上で発現された場合に、ＥＶの天然の運動を変更する及び／又は増強する標的化部分を指す。例えば、一部の態様では、指向性部分は、ＥＶ（例えばエクソソーム）が特定の細胞、組織、又は臓器に取り込まれるのを促進することができる。

【0360】

[0358]ＥＶ、例えばエクソソームは、別個の細胞タイプ及び組織に優先的取り込みを示し、その指向性は、標的細胞の表面上の受容体と相互作用するタンパク質をその表面に付加することによって方向付けることができる。指向性部分は、生体分子、例えばタンパク質、ペプチド、脂質、又は炭水化物、又は合成分子を含み得る。例えば、一部の態様では、指向性部分は、親和性リガンド、例えば抗体（例えば、抗ＣＤ１９ナノボディ、抗ＣＤ２２ナノボディ、抗ＣＬＥＣ９Ａナノボディ、又は抗ＣＤ３ナノボディ）、ＶＨＨドメイン、ファージディスプレイペプチド、フィブロネクチンドメイン、ラクダ科ナノボディ、及び／又はｖＮＡＲを含み得る。一部の態様では、指向性部分は、例えば合成ポリマー（例えば、ＰＥＧ）、天然のリガンド／分子（例えば、ＣＤ４０Ｌ、アルブミン、ＣＤ４７、ＣＤ２４、ＣＤ５５、ＣＤ５９）、及び／又は組換えタンパク質（例えば、ＸＴＥＮ）を含み得る。

【0361】

[0359]一部の態様では、指向性部分は、細胞によるＥＶ、例えばエクソソームの取り込みを増加させ得る。

【0362】

[0360]一部の態様では、中枢神経系に対する指向性が望ましい場合、本開示のＥＶ、例えばエクソソームは、特定の中枢神経系の組織又は細胞に対するＥＶ、例えばエクソソームの指向性を増加させる組織又は細胞特異的標的リガンドを含み得る。一部の態様では、細胞は、グリア細胞である。一部の態様では、グリア細胞は、希突起膠細胞、星細胞、上衣細胞、ミクログリア細胞、シュワン細胞、サテライトグリア細胞、嗅神経鞘細胞、又はその組合せである。一部の態様では、細胞は神経幹細胞である。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームのシュワン細胞に対する指向性を増加させる細胞特異的標的リガンドは、シュワン細胞表面マーカー、例えばミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）、ミエリンタンパク質ゼロ（Ｐ０）、Ｐ７５ＮＴＲ、ＮＣＡＭ、ＰＭＰ２２、又はこれらの任意の組合せに結合する。一部の態様では、細胞特異的指向性部分は、抗体又はその抗原結合性部分、アプタマー、又はシュワン細胞の表面上に発現される受容体のアゴニスト若しくはアンタゴニストを含む。

【0363】

[0361]原則として、ＥＶ、例えばエクソソームを特異的標的細胞又は組織（例えば、ＣＮＳにおける細胞又は末梢神経におけるシュワン細胞）へと方向付けることができる少なくとも１つの指向性部分を含む本開示のＥＶ、例えばエクソソームは、指向性部分の存在（単独で、又はＣＤ４７などの抗食作用シグナルの存在及び特異的投与経路の使用と組み合わせて）が、ＥＶ、例えばエクソソームの、所望の標的細胞又は組織への指向性を誘導することから、当技術分野で公知の任意の好適な投与方法（例えば、静脈内注射又は注入）を使用して投与することができる。

【0364】

[0362]薬物動態、生体分布、並びに特に所望の組織又は解剖学的位置への指向性及び保持はまた、適切な投与経路（例えば、中枢神経系への指向性を改善するための髄腔内投与又は眼内投与）を選択することによって達成することができる。

【0365】

[0363]一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、少なくとも２つの異なる指向性部分を含む。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、３つの異なる指向性部分を含む。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、４つの異なる指向性部分を含む。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、５つ又はそれより多くの異なる指向性部分を含む。一部の態様では、指向性部分の１つ又は複数は、細胞によるＥＶ、例えばエクソソームの取り込みを増加させる。一部の態様では、各指向性部分は、足場部分、例えばＳｃａｆｆｏｌｄ Ｘタンパク質又はその断片に結合されている。一部の態様では、複数の指向性部分を、同じ足場部分、例えばＳｃａｆｆｏｌｄ Ｘタンパク質又はその断片に結合させることができる。一部の態様では、いくつかの指向性部分を、足場部分、例えばＳｃａｆｆｏｌｄ Ｘタンパク質又はその断片に縦列で結合させることができる。一部の態様では、本明細書に開示される指向性部分又はその組合せは、リンカー又はスペーサーを介して足場部分、例えばＳｃａｆｆｏｌｄ Ｘタンパク質又はその断片に結合される。一部の態様では、リンカー又はスペーサー又はその組合せは、本明細書に開示される２つの指向性部分の間に介在している。

【0366】

[0364]本開示のＥＶ、例えばエクソソームを異なる神経系の細胞タイプへと方向付けることが可能な指向性部分の非限定的な例を、以下に開示する。

【0367】

ＩＩＩ．Ｅ．１．シュワン細胞を標的とする指向性部分
[0365]一部の態様では、指向性部分はシュワン細胞を標的とすることができる。一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエクソソームをシュワン細胞に方向付ける指向性部分は、例えば、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）、アポリポタンパク質Ｄ（ＡｐｏＤ）、ガレクチン１（ＬＧＡＬＳ１）、ミエリンプロテオリピッドタンパク質（ＰＬＰ）、グリピカン１、又はシンデカン３を標的とする。一部の態様では、本開示のＥＶ、例えばエクソソームをシュワン細胞に方向付ける指向性部分は、トランスフェリン、又はその断片、バリアント、若しくはその誘導体である。

【0368】

[0366]一部の態様では、本開示の指向性部分は、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）を標的とする。トランスフェリン受容体、例えば、ＴｆＲ１又はＴｆＲ２は、トランスフェリンのキャリアタンパク質である。トランスフェリン受容体は、受容体媒介エンドサイトーシスを通してトランスフェリン－鉄錯体の内部移行によって鉄を取り込む。

【0369】

[0367]ＴｆＲ１（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ０２７８６ ＴＦＲ１＿Ｈｕｍａｎを参照されたい）又はトランスフェリン受容体１（分化抗原群７１又はＣＤ７１としても知られる）は、血液脳関門（ＢＢＢ）の内皮細胞上で発現される。ＴｆＲ１は、多様な細胞、例えば赤血球、単球、肝細胞、腸細胞、及び赤血球系細胞において発現されることが公知であり、腫瘍細胞（非小細胞肺がん、結腸がん、及び白血病）などの急速に分裂する細胞並びに急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）などの障害に罹患している組織において上方調節されている。ＴｆＲ２は、肝臓及び赤血球系細胞において主に発現され、肺、脾臓、及び筋肉ではより低い程度に見出されており、ＴｆＲ１と４５％の同一性及び６６％の類似性を有する。ＴｆＲ１は、ジスルフィド結合によって７６０残基のホモ二量体を形成し、分子量が９０ｋＤａの膜貫通受容体である。トランスフェリンの親和性は、２つの受容体タイプの間で異なり、ＴｆＲ１に対する親和性は、ＴｆＲ２の親和性より少なくとも２５～３０倍高い。

【0370】

[0368]ＴｆＲ１の結合は、大きい分子、例えば抗体の脳への移行を可能にする。一部のＴｆＲ１標的化抗体は、鉄の取り込みを妨害することなく、血液脳関門を通過することが示されている。それらは、マウス抗ラットＴｆＲ抗体ＯＸ２６及びラット抗マウスＴｆＲ抗体８Ｄ３である。抗体－ＴｆＲ相互作用の親和性は、ＢＢＢの内皮細胞を越える経細胞輸送の成功を決定するために重要である。一価のＴｆＲ相互作用は、変更された細胞内選別経路によりＢＢＢ輸送に好都合である。二価相互作用のアビディティ効果は、輸送をリソソームへと向け直す。同様に、ＴｆＲ結合親和性を低減させることは、ＴｆＲからの解離を直接促進し、ＴｆＲ結合抗体の脳実質の曝露を増加させる。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，８２１，９４３号を参照されたい。したがって、一部の態様では、本開示の指向性部分は、標的ＴｆＲを標的とすることができる、例えばＴｆＲ１を標的とすることができるリガンド、例えばトランスフェリン、又はＴｆＲに特異的に結合することが可能な抗体若しくは他の結合分子を含み得る。一部の態様では、トランスフェリン受容体を標的とする抗体は、低親和性抗トランスフェリン受容体抗体である（その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第２０１９０２０２９３６Ａ１号を参照されたい）。

【0371】

[0369]一部の態様では、指向性部分は、トランスフェリン受容体のリガンド、例えば中でもＧｅｎＢａｎｋにおいて受託番号ＮＭ００１０６３、ＸＭ００２７９３、ＸＭ０３９８４７、ＮＭ００２３４３、又はＮＭ０１３９００として入手可能なヒトトランスフェリン、又はそのバリアント、断片、若しくは誘導体の全て又は一部（例えば、結合部分）を含む。

【0372】

[0370]一部の態様では、指向性部分は、トランスフェリン－受容体－標的化部分、すなわちトランスフェリン受容体に方向付けられた標的化部分を含む。好適なトランスフェリン－受容体－標的化部分は、トランスフェリン又はトランスフェリンバリアント、例えばこれらに限定されないが、血清トランスフェリン、ラクトトランスフェリン（ラクトフェリン）、オボトランスフェリン、又はメラノトランスフェリンを含む。トランスフェリンは、血清トランスフェリン、ラクトトランスフェリン（ラクトフェリン）、オボトランスフェリン、及びメラノトランスフェリンを含む脊椎動物において見出される非ヘム鉄結合タンパク質のファミリーである。血清トランスフェリンは、分岐して各々が末端シアル酸残基を有する複数のアンテナで終わる２つのＮ結合多糖鎖を有する単一のポリペプチド鎖を含む、分子量が約８０ｋＤａの糖タンパク質である。２つの主なドメイン、すなわち約３３０アミノ酸のＮドメインと、約３４０アミノ酸のＣドメインが存在し、その各々は２つのサブドメイン、Ｎ１及びＮ２、及びＣ１及びＣ２に分割される。トランスフェリンの受容体結合は、グリコシル化によらず、Ｃドメインを通して起こる。

【0373】

[0371]一部の態様では、指向性部分は、血清トランスフェリン又はトランスフェリンバリアント、例えばこれらに限定されないが、ヘキサシアロトランスフェリン、ペンタシアロトランスフェリン、テトラシアロトランスフェリン、トリシアロトランスフェリン、ジシアロトランスフェリン、モノシアロトランスフェリン、若しくはアシアロトランスフェリン、又は炭水化物欠損トランスフェリン（ＣＤＴ）例えばアシアロ、モノシアロ、若しくはジシアロトランスフェリン、又は炭水化物を含まないトランスフェリン（ＣＦＴ）、例えばアシアロトランスフェリンである。一部の態様では、指向性部分は、トランスフェリンのＮ－末端ドメイン、トランスフェリンのＣ－末端ドメイン、天然トランスフェリンのグリコシル化、天然（野生型）トランスフェリンと比較して低減されたグリコシル化、グリコシル化なし、トランスフェリンの少なくとも２つのＮ末端小葉、トランスフェリンの少なくとも２つのＣ末端小葉、Ｎドメインにおける少なくとも１つの変異、Ｃドメインにおける少なくとも１つの変異、変異体がトランスフェリン受容体に対して天然のトランスフェリンより弱い結合アビディティを有する変異、及び／又は変異体がトランスフェリン受容体に対して天然のトランスフェリンより強い結合アビディティを有する変異、又は前述の任意の組合せを有するトランスフェリンバリアントである。

【0374】

[0372]一部の態様では、トランスフェリン受容体を標的化する指向性部分は、抗トランスフェリン受容体可変新規抗原受容体（ｖＮＡＲ）、例えば一般的モチーフ構造（ＦＷ１－ＣＤＲ１－ＦＷ２－３－ＣＤＲ３－ＦＷ４）を有する結合ドメインを含む。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第２０１７－０３４８４１６号を参照されたい。ｖＮＡＲは、サメの適応免疫系の重要な構成要素である。わずか１１ｋＤａであるが、これらの単一ドメイン構造は、動物界では最小のＩｇＧ様タンパク質であり、分子工学及び生物薬開発のための優れたプラットフォームを提供する。ｖＮＡＲの属性は、標的に対する高い親和性、発現の容易さ、安定性、溶解度、多重特異性、及び固形組織浸透能の増加を含む。Ｕｂａｈら．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．（２０１８）４６（６）：１５５９－１５６５を参照されたい。

【0375】

[0373]一部の態様では、指向性部分は、ＴｆＲ１に特異的に結合することが可能なｖＮＡＲドメインを含み、米国特許出願公開第２０１７－０３４８４１６号の表１の任意の１つのＣＤＲ３ペプチドと組み合わせて米国特許出願公開第２０１７－０３４８４１６号の表１の任意の１つのＣＤＲ１ペプチドを有するｖＮＡＲ足場を含むか又はから本質的になる。

【0376】

[0374]一部の態様では、本開示の指向性部分は、ＡｐｏＤを標的とする。肝臓において主に産生される他のリポタンパク質とは異なり、アポリポタンパク質Ｄは、脳、小脳、及び末梢神経において主に産生される。ＡｐｏＤは、２０アミノ酸の分泌ペプチドシグナルを含む１６９アミノ酸長である。ＡｐｏＤは、２つのグリコシル化部位（アスパラギン４５及び７８）を含有し、成熟タンパク質の分子量は、２０～３２ｋＤａまで異なる。ＡｐｏＤは、ステロイドホルモン、例えばプロゲステロン及びプレグネノロンに比較的強い親和性で結合し、エストロゲンにはより弱い親和性で結合する。アラキドン酸（ＡＡ）は、プロゲステロン又はプレグネノロンの親和性よりかなり良好な親和性を有するＡｐｏＤリガンドである。他のＡｐｏＤリガンドは、Ｅ－３－メチル－２－ヘキセン酸、レチノイン酸、スフィンゴミエリン及びスフィンゴ脂質を含む。したがって、一部の態様では、本開示の指向性部分は、ＡｐｏＤを標的とすることができるリガンド、例えばＡｐｏＤに特異的に結合することが可能な抗体又は他の結合分子を含む。

【0377】

[0375]一部の態様では、本開示の指向性部分は、ガレクチン１を標的とする。ガレクチン－１タンパク質は、１３５アミノ酸長である。したがって、一部の態様では、本開示の指向性部分は、ガレクチン１を標的とすることができるリガンド、例えばガレクチン１に特異的に結合することが可能な抗体又は他の結合分子を含む。

【0378】

[0376]一部の態様では、本開示の指向性部分は、ＰＬＰを標的とする。ＰＬＰは、ＣＮＳからの主要なミエリンタンパク質である。ＰＬＰは、ミエリンのマルチラメラ構造の形成又は維持において重要な役割を果たす。ミエリン鞘は、軸索のインパルス伝導効率を大きく増加させるための絶縁体として機能する神経系に独自の多層膜である。ＰＬＰは、４つの膜貫通セグメント、脂質（哺乳動物における少なくとも６個のパルミテート基）を共有結合する２つのジスルフィド結合を含有する２７６～２８０アミノ酸の高度に保存された疎水性のタンパク質である。したがって、一部の態様では、本開示の指向性部分は、ＰＬＰを標的とすることができるリガンド、例えばＰＬＰに特異的に結合することが可能な抗体又は他の結合分子を含む。

【0379】

[0377]一部の態様では、本開示の指向性部分は、グリピカン１を標的とする。したがって、一部の態様では、本開示の指向性部分は、グリピカン１を標的とすることができるリガンド、例えば、グリピカン１に特異的に結合することが可能な抗体又は他の結合分子を含む。一部の態様では、本開示の指向性部分は、シンデカン３を標的とする。したがって、一部の態様では、本開示の指向性部分は、シンデカン３を標的とすることができるリガンド、例えばシンデカン３に特異的に結合することが可能な抗体又は他の結合分子を含む。

【0380】

ＩＩＩ．Ｅ．２．知覚ニューロンを標的とする指向性部分
[0378]一部の態様では、本明細書に開示される指向性部分を、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエクソソームを知覚ニューロンに方向付けることができる。一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエクソソームを知覚ニューロンに方向付ける指向性部分は、Ｔｒｋ受容体、例えばＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、ＴｒｋＣ、又はその組合せを標的とする。

【0381】

[0379]Ｔｒｋ（トロポミオシン受容体キナーゼ）受容体は、哺乳動物神経系におけるシナプスの強度及び可塑性を調節するチロシンキナーゼファミリーである。Ｔｒｋ受容体の共通のリガンドは、ニューロトロフィンであり、これは神経系の機能にとって極めて重要である増殖因子ファミリーである。これらの分子の結合は非常に特異的である。ニューロトロフィンの各タイプは、その対応するＴｒｋ受容体に対して異なる結合親和性を有する。したがって、一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエクソソームを知覚ニューロンに方向付ける指向性部分は、ニューロトロフィンを含む。

【0382】

[0380]ニューロトロフィンはホモ二量体としてＴｒｋ受容体に結合する。したがって、一部の態様では、指向性部分は、本明細書に開示される少なくとも２つのニューロトロフィンを例えば縦列で含む。一部の態様では、指向性部分は、リンカーを介して足場タンパク質、例えばタンパク質Ｘに結合される本明細書に開示される少なくとも２つのニューロトロフィンを、例えば縦列で含む。一部の態様では、足場タンパク質、例えばタンパク質Ｘをニューロトロフィン（例えば、ニューロトロフィンホモ二量体）に接続するリンカーは、少なくとも１０アミノ酸の長さを有する。一部の態様では、足場タンパク質、例えばタンパク質Ｘをニューロトロフィン（例えば、ニューロトロフィンホモ二量体）に接続するリンカーは、少なくとも約２５アミノ酸、約３０アミノ酸、約３５アミノ酸、約４０アミノ酸、約４５アミノ酸、又は約５０アミノ酸の長さを有する。

【0383】

[0381]一部の態様では、ニューロトロフィンは、ニューロトロフィン前駆体、すなわちプロニューロトロフィンであり、これは後に切断されて成熟タンパク質を生じる。

【0384】

[0382]神経成長因子（ＮＧＦ）は、ニューロトロフィンファミリーの最初に同定され、おそらく最もよく特徴付けられたメンバーである。ＮＧＦは、末梢神経系の知覚ニューロン及び交感神経ニューロンの発達において顕著な効果を有する。脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）は、ＮＧＦと類似の神経栄養活性を有し、主にＣＮＳにおいて発現され、心臓、肺、骨格筋、及び末梢の座骨神経において検出されている（Ｌｅｉｂｒｏｃｋ，Ｊ．ら，Ｎａｔｕｒｅ，３４１：１４９－１５２（１９８９））。ニューロトロフィン－３（ＮＴ－３）は、ＮＧＦファミリーの第３のメンバーであり、海馬の錐体ニューロン及び顆粒ニューロンのサブセットにおいて主に発現されており、小脳、大脳皮質、並びに肝臓及び骨格筋などの末梢組織において検出されている（Ｅｒｎｆｏｒｓ，Ｐ．ら，Ｎｅｕｒｏｎ １：９８３－９９６（１９９０））。ニューロトロフィン－４（ＮＴ－４１５とも呼ばれる）は、ニューロトロフィンファミリーの最も可変のメンバーである。ニューロトロフィン－６（ＮＴ－５）は、真骨類において見出され、ｐ７５受容体に結合する。

【0385】

[0383]一部の態様では、ＴｒｋＢを標的とするニューロトロフィンは、例えばＮＴ－４若しくはＢＤＮＦ、又はその断片、バリアント、若しくは誘導体を含む。一部の態様では、ＴｒｋＡを標的とするニューロトロフィンは、例えば、ＮＧＦ又はその断片、バリアント、若しくは誘導体を含む。一部の態様では、ＴｒｋＣを標的とするニューロトロフィンは、例えば、ＮＴ－３又はその断片、バリアント、若しくは誘導体を含む。

【0386】

[0384]一部の態様では、指向性部分は、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）を含む。一部の態様では、ＢＤＮＦは、天然のＢＤＮＦのバリアント、例えば２アミノ酸カルボキシル切断バリアントである。一部の態様では、指向性部分は、ＢＤＮＦの全長の１１９アミノ酸の配列（ＨＳＤＰＡＲＲＧＥＬＳＶＣＤＳＩＳＥＷＶＴＡＡＤＫＫＴＡＶＤＭＳＧＧＴＶＴＶＬＥＫＶＰＶＳＫＧＱＬＫＱＹＦＹＥＴＫＣＮＰＭＧＹＴＫＥＧＣＲＧＩＤＫＲＨＷＮＳＱＣＲＴＴＱＳＹＶＲＡＬＴＭＤＳＫＫＲＩＧＷＲＦＩＲＩＤＴＳＣＶＣＴＬＴＩＫＲＧＲ；配列番号１６１）を含む。一部の態様では、ＢＤＮＦの１アミノ酸カルボキシ切断バリアント（配列番号１６１のアミノ酸１～１１８）が利用される。

【0387】

[0385]一部の態様では、指向性部分は、天然のＢＤＮＦのカルボキシ切断バリアント、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又は１０個より多くのアミノ酸がＢＤＮＦのカルボキシ末端に存在しないバリアントを含む。ＢＤＮＦバリアントは、完全な１１９アミノ酸ＢＤＮＦ、カルボキシル末端が切断された１１７又は１１８アミノ酸バリアント、アミノ末端が切断されたバリアント、又はタンパク質バリアントが高親和性でＴｒｋＢ受容体になおも結合する限り、アミノ酸組成の最大約２０％、約３０、若しくは約４０％の変化を有するバリアントを含む。

【0388】

[0386]一部の態様では、指向性部分は、ＢＤＮＦの２アミノ酸カルボキシ切断バリアント（配列番号１６１のアミノ酸１～１１７）を含む。一部の態様では、指向性部分は、ＢＤＮＦの３アミノ酸カルボキシ切断バリアント（配列番号１６１のアミノ酸１～１１６）を含む。一部の態様では、指向性部分は、ＢＤＮＦの４アミノ酸カルボキシ切断バリアント（配列番号１６１のアミノ酸１～１１５）を含む。一部の態様では、指向性部分は、５アミノ酸カルボキシ切断バリアント（配列番号１６１のアミノ酸１～１１４）を含む。一部の態様では、指向性部分は、配列番号１６１の配列、又はその切断型、例えば１アミノ酸若しくは２アミノ酸切断カルボキシル末端を有する１１７若しくは１１８アミノ酸バリアント、若しくはアミノ末端が切断されたバリアントと少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一であるＢＤＮＦを含む。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，０５３，５６９Ｂ２号を参照されたい。

【0389】

[0387]一部の態様では、指向性部分は、神経成長因子（ＮＧＦ）を含む。一部の態様では、ＮＧＦは、天然のＮＧＦのバリアント、例えば切断型バリアントである。一部の態様では、指向性部分は、タンパク質の２６ｋＤａベータサブユニットを含み、これは生物活性である７Ｓ ＮＧＦ複合体の唯一の構成要素である。一部の態様では、指向性部分は、ベータＮＧＦの全長の１２０アミノ酸の配列（ＳＳＳＨＰＩＦＨＲＧＥＦＳＶＣＤＳＶＳＶＷＶＧＤＫＴＴＡＴＤＩＫＧＫＥＶＭＶＬＧＥＶＮＩＮＮＳＶＦＫＱＹＦＦＥＴＫＣＲＤＰＮＰＶＤＳＧＣＲＧＩＤＳＫＨＷＮＳＹＣＴＴＴＨＴＦＶＫＡＬＴＭＤＧＫＱＡＡＷＲＦＩＲＩＤＴＡＣＶＣＶＬＳＲＫＡＶＲＲＡ；配列番号１６２）を含む。一部の態様では、指向性部分は、天然のＮＧＦのカルボキシ切断バリアント、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又は１０個より多くのアミノ酸が、ＮＧＦのカルボキシ末端に存在しないバリアントを含む。ＮＧＦバリアントは、完全な１２０アミノ酸ＮＧＦ、カルボキシル末端が切断されたより短いアミノ酸バリアント、アミノ末端が切断されたバリアント、又は指向性部分が高親和性でＴｒｋＢ受容体になおも結合する限り、アミノ酸組成の最大約２０％、約３０％、若しくは約４０％の変化を有するバリアントを含む。一部の態様では、指向性部分は、配列番号１６２の配列又はその切断型と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一であるＮＧＦを含む。

【0390】

[0388]一部の態様では、指向性部分は、ニューロトロフィン－３（ＮＴ－３）を含む。一部の態様では、ＮＴ－３は、天然のＮＴ－３のバリアント、例えば切断型バリアントである。一部の態様では、指向性部分は、ＮＴ－３の全長の１１９アミノ酸の配列（ＹＡＥＨＫＳＨＲＧＥＹＳＶＣＤＳＥＳＬＷＶＴＤＫＳＳＡＩＤＩＲＧＨＱＶＴＶＬＧＥＩＫＴＧＮＳＰＶＫＱＹＦＹＥＴＲＣＫＥＡＲＰＶＫＮＧＣＲＧＩＤＤＫＨＷＮＳＱＣＫＴＳＱＴＹＶＲＡＬＴＳＥＮＮＫＬＶＧＷＲＷＩＲＩＤＴＳＣＶＣＡＬＳＲＫＩＧＲＴ；配列番号１６３）を含む。一部の態様では、指向性部分は、天然のＮＴ－３のカルボキシ切断バリアント、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又は１０個より多くのアミノ酸が、ＮＴ－３のカルボキシ末端に存在しないバリアントを含む。ＮＴ－３バリアントは、完全な１１９アミノ酸のＮＴ－３、カルボキシル末端が切断されたより短いアミノ酸バリアント、アミノ末端が切断されたバリアント、又は指向性部分が高親和性でＴｒｋＣ受容体になおも結合する限り、アミノ酸組成の最大約２０％、約３０％、若しくは約４０％の変化を有するバリアントを含む。一部の態様では、指向性部分は、配列番号１６３の配列、又はその切断型と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一であるＮＴ－３を含む。

【0391】

[0389]一部の態様では、指向性部分は、ニューロトロフィン－４（ＮＴ－４）を含む。一部の態様では、ＮＴ－４は、天然のＮＴ－４のバリアント、例えば切断型バリアントである。一部の態様では、指向性部分は、ＮＴ－４の全長の１３０アミノ酸の配列（ＧＶＳＥＴＡＰＡＳＲＲＧＥＬＡＶＣＤＡＶＳＧＷＶＴＤＲＲＴＡＶＤＬＲＧＲＥＶＥＶＬＧＥＶＰＡＡＧＧＳＰＬＲＱＹＦＦＥＴＲＣＫＡＤＮＡＥＥＧＧＰＧＡＧＧＧＧＣＲＧＶＤＲＲＨＷＶＳＥＣＫＡＫＱＳＹＶＲＡＬＴＡＤＡＱＧＲＶＧＷＲＷＩＲＩＤＴＡＣＶＣＴＬＬＳＲＴＧＲＡ；配列番号１６４）を含む。一部の態様では、指向性部分は、天然のＮＴ－４のカルボキシ切断バリアント、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、又は１０個より多くのアミノ酸が、ＮＴ－４のカルボキシ末端に存在しないバリアントを含む。ＮＴ－４バリアントは、完全な１３０アミノ酸ＮＴ－４、カルボキシル末端が切断されたより短いアミノ酸バリアント、アミノ末端が切断されたバリアント、又は指向性部分が高親和性でＴｒｋＢ受容体になおも結合する限り、アミノ酸組成の最大約２０％、約３０％、若しくは約４０％の変化を有するバリアントを含む。一部の態様では、指向性部分は、配列番号１６４の配列、又はその切断型と少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一であるＮＴ－４を含む。

【0392】

[0390]ＮＧＦ及びＮＧＦ関連組換え分子の構造／機能関係の研究から、ＮＧＦ領域２５～３６における変異が他のβ－ヘアピンループ及び非ループ領域と共に、ＮＧＦ／ＮＧＦ－受容体相互作用に有意に影響を及ぼしたことが実証された（Ｉｂａｎｅｚら，ＥＭＢＯ Ｊ．，１０，２１０５－２１１０，（１９９１））。この領域に由来する小さいペプチドは、Ｍｏｃｋ受容体との結合においてＮＧＦを模倣し、生物応答に影響を及ぼすことが実証されている（ＬｅＳａｕｔｅｕｒら．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０，６５６４－６５６９，１９９５）。ＮＧＦのβ－ループ領域に対応する環化ペプチドの二量体は、それらが生存促進及びＮＧＦ阻害活性の両方を有するがモノマー及び直鎖ペプチドは不活性であったことから、部分的ＮＧＦアゴニストとして作用することが見出された（Ｌｏｎｇｏら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．，４８，１－１７，１９９７）。したがって、一部の態様では、本開示の指向性部分は、そのようなペプチドを含む。

【0393】

[0391]環状ペプチドはまた、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ３及びＮＴ－４／５のβ－ループ領域を模倣するように設計及び合成されている。これらの環状ペプチドのある特定のモノマー、二量体、又はポリマーは、生理的条件下でニューロトロフィン受容体に結合する三次元構造を有し得る。神経細胞表面受容体に結合し、内部移行するニューロトロフィンのこれらの構造アナログは全て、本開示に従う化合物の結合剤Ｂとして作用して、コンジュゲートされた治療部分ＴＭを神経系へと送達することができる。したがって、一部の態様では、本開示の指向性部分は、そのような環状ペプチド又はその組合せを含む。

【0394】

[0392]一部の態様では、受容体に結合して内部移行することが可能な神経細胞表面受容体に対する抗体はまた、Ｔｒｋ受容体に結合する指向性部分としても作用し得る。例えば、モノクローナル抗体（ＭＡｂ）５Ｃ３は、ヒトｐ１４０ ＴｒｋＡ受容体のＮＧＦドッキング部位に対して特異的であり、ヒトＴｒｋＢ受容体と交差反応しない。ＭＡｂ ５Ｃ３及びそのＦａｂは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＮＧＦの効果を模倣し、ｉｎ ｖｉｖｏでヒトＴｒｋ－Ａ陽性腫瘍を撮像する（Ｋｒａｍｅｒら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，３３，２０９０－２０９１，（１９９７））。Ｍａｂ ５Ｃ３可変領域の分子クローニング、組換え、変異誘発、及びモデリング研究は、その相補性決定領域（ＣＤＲ）の３つ又はそれ未満がＴｒｋＡに対する結合に関連していることを示した。組換えＣＤＲ及びＣＤＲ様合成ポリペプチドによるアッセイは、それらがインタクトＭａｂ ５Ｃ３と類似のアゴニスト性生物活性を有することを実証した。ｐ７５受容体に対するモノクローナル抗体ＭＣ１９２はまた、神経栄養効果を有することも実証されている。したがって、これらの抗体及びその機能的に等価な断片もまた、本開示の指向性部分として作用し得る。

【0395】

[0393]一部の態様では、非天然アミノ酸又は他の有機分子を組み入れることによって合成されたペプチド模倣体もまた、本開示の指向性部分を提供し得る。

【0396】

[0394]他のニューロトロフィンが、当技術分野で公知である。したがって、一部の態様では、標的部分は、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）－２及び他のＦＧＦ、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）－ａ、ＴＧＦ－β、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、インターロイキン－１受容体アンタゴニスト（ＩＬ－ｌｒａ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、ヘレグリン、ニューレグリン、アルテミン、ペルセフィン、インターロイキン、顆粒球コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、顆粒球－マクロファージ－ＣＳＦ、ネトリン、カルジオトロフィン－１、ヘッジホッグ、白血病阻止因子（ＬＩＦ）、ミドルシン（ｍｉｄｌｃｉｎｅ）、プレイオトロフィン、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、ネトリン、サポシン、セマフォリン、及び幹細胞因子（ＳＣＦ）からなる群から選択されるニューロトロフィンを含む。

【0397】

[0395]一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエクソソームを知覚神経に方向付ける指向性部分は、水痘－帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）ペプチドを含む。

【0398】

ＩＩＩ．Ｅ．３．運動ニューロンを標的とする指向性部分
[0396]一部の態様では、本明細書に開示される指向性部分は、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエクソソームを運動ニューロンに方向付けることができる。一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエクソソームを運動ニューロンに方向付ける指向性部分は、狂犬病ウイルス糖タンパク質（ＲＶＧ）ペプチド、標的化軸索輸送（ＴＡｘＩ）ペプチド、Ｐ７５Ｒペプチド、又はＴｅｔ－Ｃペプチドを含む。

【0399】

[0397]一部の態様では、指向性部分は、狂犬病ウイルス糖タンパク質（ＲＶＧ）ペプチドを含む。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４－００２９４７２７号を参照されたい。一部の態様では、ＲＶＧペプチドは、ＲＶＧのアミノ酸残基１７３～２０２（ＹＴＩＷＭＰＥＮＰＲＰＧＴＰＣＤＩＦＴＮＳＲＧＫＲＡＳＮＧ；配列番号６０１）又はそのバリアント、断片、若しくは誘導体を含む。一部の態様では、指向性部分は、配列番号６０１の断片である。配列番号６０１のそのような断片は、例えば、配列番号６０１のＮ末端及び／又はＣ末端から１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０アミノ酸の欠失を有し得る。配列番号６０１に由来する機能的断片は、配列番号６０１からＮ末端及び／又はＣ末端アミノ酸を連続的に欠失させるステップ、並びに得られたペプチド断片の機能、例えばペプチド断片がアセチルコリン受容体に結合する機能及び／又は血液脳関門の中を通過する能力を評価するステップによって同定され得る。一部の態様では、指向性部分は、配列番号６０１の２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６又は１５アミノ酸長の断片を含む。一部の態様では、指向性部分は、配列番号６０１の１５ペプチド長未満の断片を含む。

【0400】

[0398]ＲＶＧペプチド、例えば配列番号６０１の「バリアント」は、実質的に類似の構造及び機能を有する分子を指すことを意味し、すなわち機能は、分子全体又はその断片のいずれかがＢＢＢの中を通過するか又は通行する能力である。ＲＶＧペプチドのバリアントは、配列番号６０１の参照アミノ酸とは異なる変異又は修飾を含有し得る。一部の態様では、配列番号６０１のバリアントは、本明細書に開示される配列番号６０１の断片である。一部の態様では、ＲＶＧバリアントは、配列番号６０１の異なるアイソフォームであり得るか、又は異なる異性体アミノ酸を含み得る。バリアントは、当技術分野で周知の方法を使用して単離又は生成された、天然に存在する、合成、組換え、又は化学修飾されたポリヌクレオチド又はポリペプチドであり得る。ＲＶＧバリアントは、保存的又は非保存的アミノ酸変化を含み得る。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，７５７，４７０号を参照されたい。

【0401】

[0399]一部の態様では、指向性部分は、標的化軸索輸送（ＴＡｘＩ）ペプチドを含む。一部の態様では、ＴＡｘＩペプチドは、配列ＳＡＣＱＳＱＳＱＭＲＣＧＧＧ（配列番号６０２）の環状ＡｘＩペプチドである。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＳｅｌｌｅｒｓら．（２０１６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １１３：２５１４－２５１９、及び米国特許第９，０５６，８９２号を参照されたい。本明細書に記載されるＴＡｘＩ輸送ペプチドは、任意の長さのペプチドであり得る。典型的に、輸送ペプチドは、６～５０アミノ酸長の間であり、より典型的に１０～２０アミノ酸長の間である。一部の態様では、ＴＡｘＩ輸送ペプチドは、アミノ酸配列ＱＳＱＳＱＭＲ（配列番号６０３）、ＡＳＧＡＱＡＲ（配列番号６０４）、ＰＦ、又はＴＳＴＡＰＨＬＲＬＲＬＴＳＲ（配列番号６０５）を含む。任意選択で、ＴＡｘＩ輸送ペプチドは、送達構築物又はキャリアへの取り込みを容易にするための隣接配列、例えばリンカーをさらに含む。一態様では、ペプチドには、システインが隣接する。一部の態様では、ＴＡｘＩ輸送ペプチドは、核への送達を容易にするように選択された追加の配列をさらに含む。例えば、核への送達を容易にするペプチドは、核局在化シグナル（ＮＬＳ）である。典型的に、このシグナルは、正に荷電したリシン又はアルギニンのいくつかの短い配列、例えばＰＰＫＫＲＫＶ（配列番号６０６）からなる。一態様では、ＮＬＳは、アミノ酸配列ＰＫＫＲＫＶ（配列番号６０７）を有する。

【0402】

[0400]一部の態様では、本開示の指向性部分は、配列番号６０８～６２７及びこれらの任意の組合せから選択される配列を有するペプチドＢＢＢシャトルを含む。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＯｌｌｅｒ－Ｓａｌｖｉａら．（２０１６）Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．４５、４６９０－４７０７、及びＪａｆａｒｉら．（２０１９）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ １６：５８３－６０５を参照されたい。

【0403】

【表6】

環状ペプチドの命名法（＆）は、Ｓｐｅｎｇｌｅｒら．Ｐｅｐｔ．Ｒｅｓ．，２００５，６５，５５０－５５５に記載される３文字アミノ酸表記に適応する。
［Ｄａｐ］はジアミノプロピオン酸を意味する。

【0404】

ＩＩＩ．Ｆ．抗食作用シグナル
[0401]投与されたＥＶ、例えばエクソソームの体の免疫系によるクリアランスは、投与されたＥＶ、例えばエクソソーム療法の有効性を低減させ得る。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームの表面は、免疫系の細胞、例えば、マクロファージによるＥＶ、例えばエクソソームの取り込みを制限又は遮断するように修飾されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームの表面は、マクロファージによるＥＶ、例えばエクソソームの取り込みを阻害する１つ又は複数の表面抗原を発現するように修飾されている。一部の態様では、表面抗原は、ＥＶ、（例えばエクソソーム）の外部表面に会合している。

【0405】

[0402]本開示において有用な表面抗原としては、これらに限定されないが、細胞を「自己」細胞と標識する抗原が挙げられる。一部の態様では、表面抗原は、抗食作用シグナルを含む。一部の態様では、抗食作用シグナルは、ＣＤ４７、ＣＤ２４、その断片、及びこれらの任意の組合せから選択される。ある特定の態様では、抗食作用シグナルは、ＣＤ２４、例えばヒトＣＤ２４を含む。一部の態様では、抗食作用シグナルは、ＣＤ２４、例えばヒトＣＤ２４の断片を含む。ある特定の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの外部表面上にＣＤ４７又はその断片を発現するように修飾されている。

【0406】

[0403]白血球表面抗原ＣＤ４７及びインテグリン関連タンパク質（ＩＡＰ）とも呼ばれるＣＤ４７は、本明細書で使用される場合、体における多くの細胞で見出される膜貫通タンパク質である。ＣＤ４７は、免疫細胞、特に骨髄系の細胞にＣＤ４７を発現する特定の細胞が外来細胞ではないというシグナルを送ることから、しばしば、「食べないで」シグナルと呼ばれる。ＣＤ４７は、未成熟な樹状細胞の成熟を防止し、成熟樹状細胞によるサイトカイン産生を阻害するＳＩＲＰＡ結合の受容体である。ＣＤ４７とＳＩＲＰＧとの相互作用は、細胞－細胞接着を媒介し、スーパー抗原依存的Ｔ細胞媒介増殖を増強し、Ｔ細胞活性化を同時刺激する。ＣＤ４７はまた、血小板上のＴＨＢＳ１の接着受容体として作用することにより細胞接着において、及びインテグリンのモジュレーションの両方において役割を有することが公知である。ＣＤ４７はまた、海馬における記憶形成及びシナプス可塑性において重要な役割を果たす（類似性により）。加えて、ＣＤ４７は、膜輸送及び／又はインテグリン依存的シグナル伝達において役割を果たし、赤血球の早期除去を防止し、及びウイルス感染後に誘導される膜透過性の変化に関係し得る。

【0407】

[0404]一部の態様では、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上にヒトＣＤ４７を発現するように修飾されている。ヒトＣＤ４７及び様々な公知のアイソフォーム（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｑ０８７２２）の基準アミノ酸配列を、本明細書において配列番号６２９～６３２として提供する。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、配列番号６２９に記載されるアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその断片を発現するように修飾されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、配列番号６３０に記載されるアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその断片を発現するように修飾されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、配列番号６３１に記載されるアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその断片を発現するように修飾されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、配列番号６３２に記載されるアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその断片を発現するように修飾されている。

【0408】

[0405]一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上に全長のＣＤ４７を発現するように修飾されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上にＣＤ４７の断片を発現するように修飾されており、断片は、ＣＤ４７、例えばヒトＣＤ４７の細胞外ドメインを含む。マクロファージによる食作用を遮断及び／又は阻害する能力を保持するＣＤ４７の任意の断片を、本明細書に開示されるＥＶ、例えばエクソソームにおいて使用することができる。一部の態様では、断片は、基準ヒトＣＤ４７配列のアミノ酸１９～約１４１（例えば、配列番号６２９のアミノ酸１９～１４１）を含む。一部の態様では、断片は、基準ヒトＣＤ４７配列のアミノ酸１９～約１３５（例えば、配列番号６２９のアミノ酸１９～１３５）を含む。一部の態様では、断片は、基準ヒトＣＤ４７配列のアミノ酸１９～約１３０（例えば、配列番号６２９のアミノ酸１９～約１３０）を含む。一部の態様では、断片は、基準ヒトＣＤ４７配列のアミノ酸１９～約１２５（例えば、配列番号６２９のアミノ酸１９～約１２５）を含む。

【0409】

[0406]一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、基準ヒトＣＤ４７配列のアミノ酸１９～約１４１（例えば、配列番号６２９のアミノ酸１９～１４１）と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチドを発現するように修飾されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、基準ヒトＣＤ４７配列のアミノ酸１９～約１３５（例えば、配列番号６２９のアミノ酸１９～１３５）と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチドを発現するように修飾されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、基準ヒトＣＤ４７配列のアミノ酸１９～約１３０（例えば、配列番号６２９のアミノ酸１９～１３０）と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチドを発現するように修飾されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、基準ヒトＣＤ４７配列のアミノ酸１９～約１２５（例えば、配列番号６２９のアミノ酸１９～１２５）と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチドを発現するように修飾されている。

【0410】

[0407]一部の態様では、ＣＤ４７又はその断片は、ＣＤ４７及びそのリガンドＳＩＲＰαの親和性を増加させるように修飾されている。一部の態様では、ＣＤ４７の断片は、Ｖｅｌｃｒｏ－ＣＤ４７を含む（例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＨｏら，ＪＢＣ ２９０：１２６５０－６３（２０１５）を参照されたい）。一部の態様では、Ｖｅｌｃｒｏ－ＣＤ４７は、野生型ヒトＣＤ４７配列（配列番号６２９）と比較してＣ１５Ｓ置換を含む。

【0411】

[0408]一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、修飾されていないＥＶ、例えばエクソソームより高いレベルでＥＶ、例えばエクソソームの表面上に発現されたＣＤ４７又はその断片を含む。一部の態様では、ＣＤ４７又はその断片は、足場タンパク質に融合されている。本明細書に開示される任意の足場タンパク質を使用して、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上にＣＤ４７又はその断片を発現させることができる。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、Ｓｃａｆｆｏｌｄ Ｘタンパク質のＮ末端に融合されたＣＤ４７の断片を発現するように修飾されている。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、ＰＴＧＦＲＮのＮ末端に融合されたＣＤ４７の断片を発現するように修飾されている。

【0412】

[0409]一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上に少なくとも約２０分子、少なくとも約３０分子、少なくとも約４０、少なくとも約５０、少なくとも約７５、少なくとも約１００、少なくとも約１２５、少なくとも約１５０、少なくとも約２００、少なくとも約２５０、少なくとも約３００、少なくとも約３５０、少なくとも約４００、少なくとも約４５０、少なくとも約５００、少なくとも約７５０、又は少なくとも約１０００分子のＣＤ４７を含む。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上に少なくとも約２０分子のＣＤ４７を含む。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上に少なくとも約３０分子のＣＤ４７を含む。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上に少なくとも約４０分子のＣＤ４７を含む。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上に少なくとも約５０分子のＣＤ４７を含む。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上に少なくとも約１００分子のＣＤ４７を含む。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上に少なくとも約２００分子のＣＤ４７を含む。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上に少なくとも約３００分子のＣＤ４７を含む。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上に少なくとも約４００分子のＣＤ４７を含む。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上に少なくとも約５００分子のＣＤ４７を含む。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上に少なくとも約１０００分子のＣＤ４７を含む。

【0413】

[0410]一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上でのＣＤ４７又はその断片の発現は、ＣＤ４７又はその断片を発現しないＥＶ、例えばエクソソームと比較して骨髄系細胞によるＥＶ、例えばエクソソームの取り込みの減少をもたらす。一部の態様では、ＣＤ４７又はその断片を発現するＥＶ、例えばエクソソームの骨髄系細胞による取り込みは、ＣＤ４７又はその断片を発現しないＥＶ、例えばエクソソームの骨髄系細胞による取り込みと比較して少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％減少する。

【0414】

[0411]一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームの表面上でのＣＤ４７又はその断片の発現は、ＣＤ４７又はその断片を発現しないＥＶ、例えばエクソソームと比較してＥＶ、例えばエクソソームの肝臓への局在化の減少をもたらす。一部の態様では、ＣＤ４７又はその断片を発現するＥＶ、例えばエクソソームの肝臓への局在化は、ＣＤ４７又はその断片を発現しないＥＶ、例えばエクソソームの肝臓への局在化と比較して少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％減少する。

【0415】

[0412]一部の態様では、ＣＤ４７又はその断片を発現するＥＶ、例えばエクソソームのｉｎ ｖｉｖｏでの半減期は、ＣＤ４７又はその断片を発現しないＥＶ、例えばエクソソームのｉｎ ｖｉｖｏでの半減期と比較して増加する。一部の態様では、ＣＤ４７又はその断片を発現するＥＶ、例えばエクソソームのｉｎ ｖｉｖｏでの半減期は、ＣＤ４７又はその断片を発現しないＥＶ、例えばエクソソームのｉｎ ｖｉｖｏでの半減期と比較して、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、又は少なくとも約１０倍増加する。

【0416】

[0413]一部の態様では、ＣＤ４７又はその断片を発現するＥＶ、例えばエクソソームは、ＣＤ４７又はその断片を発現しないＥＶ、例えばエクソソームの循環中、例えば血漿中での保持と比較して循環中、例えば血漿中での保持の増加を有する。一部の態様では、ＣＤ４７又はその断片を発現するＥＶ、例えばエクソソームの循環中、例えば血漿中での保持は、ＣＤ４７又はその断片を発現しないＥＶ、例えばエクソソームの循環中、例えば血漿中での保持と比較して少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約４．５倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、又は少なくとも約１０倍増加する。

【0417】

[0414]一部の態様では、ＣＤ４７又はその断片を発現するＥＶ、例えばエクソソームは、ＣＤ４７又はその断片を発現しないエクソソームと比較した場合に、変更された生体分布を有する。一部の態様では、変更された生体分布は、内皮細胞、Ｔ細胞への取り込みの増加、又はこれらに限定されないが、骨格筋、心筋、横隔膜、腎臓、骨髄、中枢神経系、肺、脳脊髄液（ＣＳＦ）、若しくはこれらの任意の組合せを含む様々な組織における蓄積の増加をもたらす。

【0418】

ＩＶ．医薬組成物
[0415]本開示の一部の態様は、それを必要とする対象において末梢神経障害、例えばＣＩＰＮを処置する方法であって、本明細書に開示される外因性ＮＬＲＰ３アンタゴニストを含むＥＶを含む医薬組成物を対象に投与するステップを含む方法を対象とする。そのため、本明細書において、対象への投与にとって好適な形態で、所望の程度の純度を有する本開示のＥＶ、例えばエクソソーム、及び薬学的に許容できるキャリア又は賦形剤を含む医薬組成物が提供される。薬学的に許容できる賦形剤又はキャリアは、投与される特定の組成物によって、並びに組成物を投与するために使用される特定の方法によって部分的に決定され得る。したがって、複数の細胞外ベシクルを含む医薬組成物の広く多様な好適な製剤が存在する（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．２１ｓｔ ｅｄ．（２００５）を参照されたい）。医薬組成物は一般的に無菌状態で、米国食品医薬品局（ＧＭＰ）の全ての適正製造規範を完全に遵守して製剤化される。

【0419】

[0416]一部の態様では、医薬組成物は、１つ又は複数の治療剤及び本明細書に記載されるエクソソームを含む。ある特定の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームは、薬学的に許容できるキャリア中で１つ又は複数の追加の治療剤と同時投与される。一部の態様では、本開示のためのＡＳＯ及び１つ又は複数の追加の治療剤は、同じＥＶ中で投与され得る。他の態様では、本開示のためのＡＳＯ及び１つ又は複数の追加の治療剤は、異なるＥＶ中で投与される。例えば、本開示は、ＡＳＯを含むＥＶ及び追加の治療剤を含むＥＶを含む医薬組成物を含む。一部の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームを含む医薬組成物は、追加の治療剤（複数可）の投与前に投与される。他の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームを含む医薬組成物は、追加の治療剤（複数可）の投与後に投与される。さらなる態様では、ＥＶ、例えばエクソソームを含む医薬組成物は、追加の治療剤（複数可）と同時に投与される。

【0420】

[0417]許容可能なキャリア、賦形剤、又は安定化剤は、使用される投薬量及び濃度でレシピエント（例えば、動物又はヒト）に対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール：及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリシンなどのアミノ酸；単糖、二糖、及びグルコース、マンノース、又はデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンノース、トレハロース、又はソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；並びに／又はＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。

【0421】

[0418]キャリア又は希釈剤の例としては、これらに限定されないが、水、食塩水、リンゲル液、デキストロース液、及び５％ヒト血清アルブミンが挙げられる。薬学的活性物質のためのそのような媒体及び化合物の使用は、当技術分野で周知である。如何なる従来の媒体又は化合物も本明細書に記載される細胞外ベシクルと不適合性でない限り、組成物におけるその使用が企図される。補助治療剤もまた、組成物に組み入れることができる。典型的に、医薬組成物は、意図される投与経路と適合性であるように製剤化される。ＥＶ、例えばエクソソームは、非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、皮内、経皮、直腸、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、筋肉内経路、又は吸入によって投与することができる。ある特定の態様では、エクソソームを含む医薬組成物は、例えば注射によって静脈内投与される。ＥＶ、例えばエクソソームは、任意選択で、ＥＶ、例えばエクソソームが意図される疾患、障害、又は状態を処置するために少なくとも部分的に有効である他の治療剤と組み合わせて投与することができる。

【0422】

[0419]溶液又は懸濁液は、以下の構成要素：無菌希釈剤、例えば水、食塩水溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、又は他の合成溶媒；抗菌化合物、例えばベンジルアルコール又はメチルパラベン；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウム；キレート化合物、例えばエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）；緩衝剤、例えば酢酸塩、クエン酸塩、又はリン酸塩、及び張性を調整するための化合物、例えば塩化ナトリウム又はデキストロースを含み得る。ｐＨは、酸又は塩基、例えば塩酸又は水酸化ナトリウムによって調整され得る。調製物は、ガラス又はプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ、又は多用量バイアルに封入することができる。

【0423】

[0420]注射での使用にとって好適な医薬組成物は、無菌水溶液（水溶性の場合）又は分散液及び無菌粉末を含む。静脈内投与の場合、好適なキャリアは、生理食塩水、静菌水、クレモフォール（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含む。組成物は、一般的に無菌的であり、容易なシリンジ作動性が存在する程度に流動性である。キャリアは、例えば水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール、及びその他）、及びその好適な混合物を含有する溶媒又は分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えばレシチンなどのコーティングを使用することによって、分散剤の場合には必要な粒径を維持することによって、又は界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌化合物及び抗真菌化合物、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール、及びその他によって達成され得る。望ましければ、等張化合物、例えば糖、ポリアルコール、例えばマンニトール、ソルビトール、及び塩化ナトリウムを組成物に添加することができる。注射用組成物の持続的な吸収は、吸収を遅らせる化合物、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物に含めることによってもたらされ得る。

【0424】

[0421]無菌注射用溶液は、ＥＶ、例えばエクソソームを有効量で、本明細書に列挙された又は当技術分野で公知の１つ又は複数の成分を有する適切な溶媒中に組み入れることによって調製され得る。一般的には、分散剤は、ＥＶ、例えばエクソソームを、基本分散媒体及び任意の所望の他の成分を含有する無菌ビヒクルに組み入れることによって調製される。無菌注射用溶液を調製するための無菌粉末の場合、調製方法は、事前に無菌濾過したその溶液から活性成分プラス追加の所望の成分の粉末を生じる真空乾燥及びフリーズドライである。ＥＶ、例えばエクソソームは、ＥＶ、例えばエクソソームの持続的又はパルス状の放出を可能にするように製剤化することができるデポー注射、又はインプラント調製物の形態で投与され得る。

【0425】

[0422]エクソソームを含む組成物の全身投与はまた、経粘膜手段による投与でもあり得る。経粘膜投与の場合、浸透される障壁にとって適切な浸透剤を製剤に使用する。そのような浸透剤は、一般的に当技術分野で公知であり、例えば、経粘膜投与に関して洗浄剤、胆汁塩、及びフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、例えば点鼻スプレーの使用を通して達成され得る。

【0426】

[0423]ある特定の態様では、ＥＶ、例えばエクソソームを含む医薬組成物は、医薬組成物によって利益が得られる対象に静脈内投与される。ある特定の他の態様では、組成物は、例えば、リンパ内注射若しくはリンパ節内注射によって（例えば、Ｓｅｎｔｉら，ＰＮＡＳ １０５（４６）：１７９０８（２００８）を参照されたい）、又は筋肉内注射によって、皮下投与によって、腫瘍内注射によって、胸腺若しくは肝臓への直接注射によってリンパ系に投与される。

【0427】

[0424]ある特定の態様では、エクソソームを含む医薬組成物は、液体懸濁液として投与される。ある特定の態様では、医薬組成物は、投与後にデポーを形成することが可能な製剤として投与される。ある特定の好ましい態様では、デポーは、ＥＶ、例えばエクソソームを循環中に徐々に放出するか、又はデポーの形態で留まる。

【0428】

[0425]典型的に、医薬的に許容できる組成物は、夾雑物を含まないように高度に精製され、生体適合性で非毒性であり、対象への投与にとって好適である。水がキャリアの構成成分である場合、水は高度に精製され、夾雑物、例えばエンドトキシンを含まないように処理される。

【0429】

[0426]薬学的に許容できるキャリアは、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、及び／又は鉱油であり得るが、これらに限定されない。医薬組成物は、滑沢剤、湿潤剤、甘味料、風味増強剤、乳化剤、懸濁剤、及び／又は保存剤をさらに含み得る。

【0430】

[0427]一部の態様では、本明細書に記載される医薬組成物は、薬学的に許容できる塩を含む。一部の態様では、薬学的に許容できる塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、又はこれらの任意の組合せを含む。

【0431】

[0428]本明細書に記載される医薬組成物は、本明細書に記載されるＥＶ、例えばエクソソームを含み、任意選択で追加の薬学的活性剤又は治療活性剤を含む。追加の治療剤は、生物学的作用剤、小分子剤、又は核酸剤であり得る。一部の態様では、追加の治療剤は、追加のＮＬＲＰ３アンタゴニストである。一部の態様では、ＮＬＲＰ３アンタゴニストは、本明細書に開示される任意のＮＬＲＰ３アンタゴニストである。一部の態様では、追加のＮＬＲＰ３アンタゴニストは、抗ＮＬＲＰ３抗体である。一部の態様では、追加のＮＬＲＰ３アンタゴニストは小分子である。一部の態様では、追加のＮＬＲＰ３アンタゴニストは、本明細書に開示される小分子である。一部の態様では、追加のＮＬＲＰ３アンタゴニストは、ＭＣＣ９５０、トラニラスト、オリドニン、ＣＹ－０９、Ｂａｙ １１－７０８２、パルテノリド、３，４－メチレンジオキシ－β－ニトロスチレン（ＭＮＢ）、β－ヒドロキシ酪酸（ＢＨＢ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｉ型インターフェロン、及びこれらの任意の組合せから選択される。一部の態様では、追加のＮＬＲＰ３アンタゴニストは、以下の式：
[0429]

【化22】

を含む。

【0432】

[0430]一部の態様では、追加のＮＬＲＰ３アンタゴニストはＭＣＣ９５０を含む。

【0433】

[0431]一部の態様では、追加のＮＬＲＰ３アンタゴニストはＡＳＯを含む。一部の態様では、追加のＮＬＲＰ３アンタゴニストは本明細書に記載される任意のＡＳＯを含む。

【0434】

[0432]本明細書に記載されるＥＶ、例えばエクソソームを含む医薬組成物を含む投薬剤形が提供される。一部の態様では、投薬剤形は、静脈内注射のための液体懸濁剤として製剤化される。一部の態様では、投薬剤形は、腫瘍内注射のための液体懸濁剤として製剤化される。

【0435】

[0433]ある特定の態様では、エクソソームの調製物は、残存している複製コンピテント核酸に損傷を与えるために、放射線照射、例えば、Ｘ線、ガンマ線、ベータ粒子、アルファ粒子、中性子、プロトン、元素核、ＵＶ線に供される。

【0436】

[0434]ある特定の態様では、エクソソームの調製物は、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、又は１００ｋＧｙより高い照射線量を使用するガンマ線照射に供される。

【0437】

[0435]ある特定の態様では、エクソソームの調製物は、０．１ｍＳｖより高い、０．５ｍＳｖより高い、１ｍＳｖより高い、５ｍＳｖより高い、１０ｍＳｖより高い、１５ｍＳｖより高い、２０ｍＳｖより高い、２５ｍＳｖより高い、３０ｍＳｖより高い、３５ｍＳｖより高い、４０ｍＳｖより高い、５０ｍＳｖより高い、６０ｍＳｖより高い、７０ｍＳｖより高い、８０ｍＳｖより高い、９０ｍＳｖより高い、１００ｍＳｖより高い、２００ｍＳｖより高い、３００ｍＳｖより高い、４００ｍＳｖより高い、５００ｍＳｖより高い、６００ｍＳｖより高い、７００ｍＳｖより高い、８００ｍＳｖより高い、９００ｍＳｖより高い、１０００ｍＳｖより高い、２０００ｍＳｖより高い、３０００ｍＳｖより高い、４０００ｍＳｖより高い、５０００ｍＳｖより高い、６０００ｍＳｖより高い、７０００ｍＳｖより高い、８０００ｍＳｖより高い、９０００ｍＳｖより高い、１００００ｍＳｖより高い、又は１００００ｍＳｖより高い照射線量を使用するＸ線照射に供される。

【0438】

Ｖ．キット
[0436]同様に、本明細書において、本明細書に記載される１つ又は複数のエクソソーム、及び本明細書に開示される方法に従って１つ又は複数のエクソソームを対象（例えば、末梢神経障害、例えば、ＣＩＰＮを有する対象）に投与するための使用説明書を含むキットも提供される。一部の態様では、本明細書において、本明細書に記載される医薬組成物の成分の１つ又は複数、例えば本明細書に提供される１つ又は複数のエクソソームを充填した１つ又は複数の容器、及び本明細書に開示される任意の方法に従って使用するための（例えば、末梢神経障害、例えば、ＣＩＰＮを有する対象に）使用説明書を含む薬学的パック又はキットが提供される。一部の態様では、キットは、本明細書に記載される医薬組成物及び任意の予防剤又は治療剤、例えば本明細書に記載される予防剤又は治療剤を含有する。一部の態様では、キットは、末梢神経障害に関連する疾患又は状態の処置における使用のためである。一部の態様では、キットは、ＣＩＰＮの処置における使用のためである。一部の態様では、キットは診断キットである。

【0439】

[0437]本開示の実践は、特に示していない限り、当業者の範囲内である細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡ、及び免疫学の従来の技術を使用する。そのような技術は文献に詳細に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，編（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら，編（１９９２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮＹ）；Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ 編，（１９８５）ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ｉ巻及びＩＩ巻；Ｇａｉｔ，編（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｍｕｌｌｉｓら．米国特許第４，６８３，１９５号；Ｈａｍｅｓ及びＨｉｇｇｉｎｓ，編（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ｈａｍｅｓ及びＨｉｇｇｉｎｓ，編（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（１９８７）Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ）（１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ（１９８４）Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ；ｔｈｅ ｔｒｅａｔｉｓｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）；Ｍｉｌｌｅｒ及びＣａｌｏｓ 編（１９８７）Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｗｕら，編 Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１５４巻及び１５５巻；Ｍａｙｅｒ及びＷａｌｋｅｒ，編（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ）；Ｗｅｉｒ及びＢｌａｃｋｗｅｌｌ，編（１９８６）Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｉ－ＩＶ巻；Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，（１９８６）；）；Ｃｒｏｏｋｅ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，第２版 ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（２００７），及びｉｎ Ａｕｓｕｂｅｌら．（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ及びＳｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．）を参照されたい。

【0440】

[0438]上記で引用した参考文献、並びに本明細書で引用した参考文献は全て、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0441】

[0439]以下の実施例は、例証のために提供され、限定するものではない。

【実施例】

【0442】

実施例１：ＣＩＰＮマウスモデルにおけるｅｘｏＡＳＯＮＬＲＰ３のｉｎ ｖｉｖｏ解析
[0440]化学療法誘発性末梢神経障害（ＣＩＰＮ）マウスモデルを使用してｉｎ ｖｉｖｏでのｅｘｏＡＳＯＮＬＲＰ３の有効性を試験した。ｅｘｏＡＳＯＮＬＲＰ３を含むエクソソームを、髄腔内注射によって投与した（図２）。ＣＩＰＮは、図３Ａに示されるように、０～５日及び１０～１５日にマウスにシスプラチンを投与することによってシミュレートされた。マウスに、表記のように（図３Ａ～３Ｂ）、陰性対照（偽処置；シスプラチンなし）；シスプラチン及びＰＢＳ；シスプラチン及びＭＣＣ９５０（１５～２０日）；シスプラチン及び対照エクソソーム（ＡＳＯなし；１５日）；シスプラチン及びＡＳＯＮＬＲＰ３（遊離のＡＳＯ；１５日）；シスプラチン及びｅｘｏＡＳＯＮＬＲＰ３（５日）；シスプラチン及びｅｘｏＡＳＯＮＬＲＰ３（１５日）；又はシスプラチン及びガバペンチン（８及び２１日）を投与した。Ｖｏｎ Ｆｒｅｙ試験を使用して、処置したマウスの疼痛を測定した。シスプラチン後にＮＬＲＰ３阻害剤によって処置したマウスは、疼痛の減少を示したが、ｅｘｏＡＳＯＮＬＲＰ３を投与したマウスは、シスプラチンを投与しなかったマウスと同等の疼痛レベルを示した。

【0443】

[0441]これらの結果は、ｅｘｏＡＳＯＮＬＲＰ３の投与を通してのＮＬＲＰ３の阻害が、ＣＩＰＮに関連する疼痛を低減することが可能であることを示している。
参照による組み込み

【0444】

[0442]本出願において引用した全ての刊行物、特許、特許出願、及び他の文書は、各々の個々の刊行物、特許、特許出願、又は他の文書が全ての目的のために個々に参照により組み込まれることが示されるのと同程度に全ての目的に関してその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
均等物

【0445】

[0443]様々な特定の態様を例証及び記載してきたが、上記の明細書は限定的ではない。本発明（複数可）の精神及び範囲から逸脱することなく様々な変化を行ってもよいと認識される。多くの変形形態が、本明細書を再検討することにより当業者に明らかとなるであろう。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【配列表】

2024512236000001.app

【国際調査報告】