特表 2024-512441 抗体薬物複合体中間体の調製方法及び精製方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-19

(54)【発明の名称】抗体薬物複合体中間体の調製方法及び精製方法

(51)【国際特許分類】

   C07K 1/02 20060101AFI20240312BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240312BHJP

   C07K 5/02 20060101ALI20240312BHJP

【ＦＩ】

C07K1/02

A61K47/68

C07K5/02

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023556505

(86)(22)【出願日】2022-03-31

(85)【翻訳文提出日】2023-09-13

(86)【国際出願番号】 CN2022084238

(87)【国際公開番号】W WO2022206871

(87)【国際公開日】2022-10-06

(31)【優先権主張番号】202110350022.0

(32)【優先日】2021-03-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520087262

【氏名又は名称】レメゲン シーオー．，エルティーディー．

【氏名又は名称原語表記】ＲＥＭＥＧＥＮ ＣＯ．， ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．５８ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｍｉｄｄｌｅ Ｒｏａｄ， Ｙａｎｔａｉ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｚｏｎｅ， Ｙａｎｔａｉ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｃｈｉｎａ（Ｓｈａｎｄｏｎｇ）Ｐｉｌｏｔ Ｆｒｅｅ Ｔｒａｄｅ Ｚｏｎｅ， Ｙａｎｔａｉ， Ｓｈａｎｄｏｎｇ ２６４００６ Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】リー， ジュアンリン

(72)【発明者】

【氏名】グオ， ウェイ

(72)【発明者】

【氏名】ジャオ， チュアンジョウ

(72)【発明者】

【氏名】ジャン， ジョンリン

【テーマコード（参考）】

4C076

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF68

4C076GG50

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA13

4H045EA20

4H045FA10

4H045GA21

(57)【要約】

本発明は、抗体薬物複合体中間体の調製方法及び精製方法に関し、より詳細には、抗体薬物複合体のリンカー部分と薬物部分との複合体の調製方法及び精製方法に関し、この複合体は、目的生成物由来の不純物及び反応プロセス中の副生成物を効果的に除去し、それによって最終的に得られる目的生成物の純度を９９％以上にすることができるだけでなく、安定した量産を実現し、臨床医薬品の品質基準を十分に満たし、その結果、医薬品の安全性及び安定供給を保証することができる。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）に示す化合物、エナンチオマー、ラセミ体、またはその薬学的に許容される塩である抗体薬物複合体中間体の調製方法及び精製方法であって、式中、Ｄが、連結された毒素部分を表し、

【化20】

前記方法の合成経路が、以下の通りであり：

【化21】

前記毒素部分Ｄが、オーリスタチン細胞傷害剤、アントラマイシン細胞傷害剤、アントラサイクリン細胞傷害剤、またはピューロマイシン細胞傷害剤であり、前記オーリスタチン細胞傷害剤が、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ、ＭＭＡＤ、またはそれらの誘導体を含み、前記アントラマイシン細胞傷害剤が、アントラマイシンまたはその誘導体を含み、前記アントラサイクリン細胞傷害剤が、ダウノルビシン、アドリアマイシン、エピルビシン、イダルビシン、バルルビシン、ミトキサントロン、またはそれらの誘導体を含み、前記ピューロマイシン細胞傷害剤が、ピューロマイシンまたはその誘導体を含み、
前記方法が、具体的には以下のステップを含み：
Ａ．化合物１を適量の溶媒１に溶解し、ビス（４－ニトロベンゼン）カーボネート及び有機塩基を順次添加し、ここで前記添加するビス（４－ニトロベンゼン）カーボネートのモル数及び前記添加する有機塩基のモル数は、化合物１のモル数よりも大きく、
Ｂ．適切な反応時間後に吸引濾過によって濾液を取得し、
Ｃ．ステップＢで取得した前記濾液に十分な量の酢酸エチル及びｎ－ヘキサンを順次添加し、ｎ－ヘキサンの滴下後、適切な時間にわたって撹拌し、吸引濾過によって濾過ケーキを取得し、
Ｄ．ステップＣで取得した前記濾過ケーキを適量の酢酸エチル及びｎ－ヘキサンで連続的に洗浄し、吸引濾過によって前記濾過ケーキを取得し、
Ｅ．ステップＤで取得した前記濾過ケーキを酢酸とメタノールの混合溶液に溶解し、適量の精製水を加え、前記精製水を加えた後、適切な時間にわたって撹拌し、吸引濾過によって前記濾過ケーキを取得し、
Ｆ．ステップＥで取得した前記濾過ケーキを適量の精製水、メタノール、酢酸エチル及びｎ－ヘキサンで順次洗浄し、吸引濾過及び乾燥後に化合物２（ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＰＮＰ）を取得し、
Ｇ．化合物２及びトリアゾール系化合物を適量の溶媒２に溶解して溶液Ｘを形成し、前記コンジュゲートされた毒素部分Ｄを溶媒３に溶解して溶液Ｙを形成し、溶液Ｙを溶液Ｘに添加し、均一に混合して溶液Ｚを形成し、
Ｈ．適量の有機塩基を溶液Ｚに添加して前記系のｐＨを調整し、前記反応を触媒し、
Ｉ．適切な反応時間後に吸引濾過によって前記濾液を取得し、
Ｊ．ステップＩの前記濾液に適量の酢酸エチル及びｎ－ヘキサンを順次添加し、適切な時間にわたって撹拌し、吸引濾過によって前記濾過ケーキを取得し、
Ｋ．ステップＪで取得した前記濾過ケーキを酢酸エチル及びｎ－ヘキサンで順次洗浄し、吸引濾過によって前記濾過ケーキを取得し、
Ｌ．ステップＫで取得した前記濾過ケーキを適量のメタノール溶液に溶解し、高速液体クロマトグラフィーにより調製及び精製し、調製溶液を回収し、
Ｍ．ステップＬで取得した前記調製溶液を減圧下で濃縮し、
Ｎ．ステップＭの減圧下で取得した前記濃縮物を、適量のメタノールで溶解させ、次いで減圧下で再び濃縮し、
Ｏ．ステップＮの減圧下で取得した前記濃縮物を真空乾燥して、式（Ｉ）に示す前記精製化合物を取得することを含み、
その場合、
ステップＡの溶媒１、ステップＧの溶媒２及び溶媒３が極性溶媒であり、好ましくは、溶媒１、溶媒２、及び溶媒３が、それぞれ独立して、ＤＭＦ、ＤＭＡ、及びＮＭＰのうちの１つ以上から選択され、より好ましくは、溶媒１、溶媒２、及び溶媒３がＤＭＦである、前記調製方法及び精製方法。

【請求項2】

ステップＡの化合物１と炭酸ビス（４－ニトロベンゼン）のモル比が約１：１．８であり、化合物１と有機塩基１のモル比が約１：１．２である、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

ステップＡの化合物１と炭酸ビス（４－ニトロベンゼン）のモル比が１：１．５～２であり、化合物１と有機塩基１のモル比が１：１～１．５である、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

ステップＣの化合物１と酢酸エチルの重量体積比（ｇ／ｍｌ）が約１：３０．０であり、ステップＣの化合物１とｎ－ヘキサンの重量体積比（ｇ／ｍｌ）が約１：６０．０である、請求項２に記載の方法。

【請求項5】

ステップＣの化合物１と酢酸エチルの重量体積比（ｇ／ｍｌ）が１：２５～３５であり、ステップＣの化合物１とｎ－ヘキサンの重量体積比（ｇ／ｍｌ）が１：５５～６５である、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

ステップＥの化合物１と酢酸の重量体積比（ｇ／ｍｌ）が約１：７．０であり、ステップＥの化合物１とメタノールの重量体積比（ｇ／ｍｌ）が約１：１．０であり、ステップＥの化合物１と精製水の重量体積比（ｇ／ｍｌ）が約１：２０．０である、請求項４に記載の方法。

【請求項7】

ステップＥの化合物１と酢酸の重量体積比（ｇ／ｍｌ）が１：６～８であり、ステップＥの化合物１とメタノールの重量体積比（ｇ／ｍｌ）が１：０．５～１．５であり、ステップＥの化合物１と精製水の重量体積比（ｇ／ｍｌ）が１：１５～２５である、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

ステップＧの化合物２とトリアゾール系化合物のモル比が約１：１であり、化合物２と毒素部分Ｄのモル比が約１：１である、請求項６に記載の方法。

【請求項9】

ステップＧの化合物２とトリアゾール系化合物のモル比が１：０．８～１．２であり、化合物２と毒素部分Ｄのモル比が１：０．８～１．２である、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

ステップＡの前記有機塩基とステップＨの前記有機塩基が、それぞれ独立して、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、及びピリジンのうちの１つ以上から選択される、請求項８に記載の方法。

【請求項11】

ステップＡの前記有機塩基がＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンであり、ステップＨにおいてＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン及びピリジンの２種類の有機塩基を添加する、請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

化合物２とステップＨで添加するＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンのモル比が約１：１であり、ステップＧの化合物２とステップＨで添加するピリジンのモル比が約１：２０．５である、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

ステップＧの化合物２とステップＨで添加するＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンのモル比が１：０．８～１．２であり、ステップＧの化合物２とステップＨで添加するピリジンのモル比が１：１９～２５である、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

ステップＪで添加する前記酢酸エチルの量が前記濾液の体積の３．５～４．５倍であり、前記ｎ－ヘキサンの添加量が前記濾液の体積の７～９倍である、請求項１１に記載の方法。

【請求項15】

ステップＬにおける高速液体クロマトグラフィーの調製条件が、以下の通りであり、すなわち、移動相ＡがｐＨ＝４．０～５．０の酢酸水溶液であり、移動相Ｂがアセトニトリルであり、移動相Ａ：Ｂ＝６０：４０（Ｖ／Ｖ）であり、調製及び精製に等勾配を使用する、請求項１１に記載の方法。

【請求項16】

前記抗体薬物複合体中間体の構造が式（１～１１）：

【化22】

【化23】

【化24】

【化25】

【化26】

【化27】

【化28】

【化29】

【化30】

【化31】

【化32】

である、請求項１に記載の調製方法及び精製方法。

【請求項17】

ステップＡの温度を－５～５℃の範囲内に制御する、請求項１に記載の調製方法及び精製方法。

【請求項18】

ステップＢの温度を２５～３０℃の範囲内に制御する、請求項１に記載の調製方法及び精製方法。

【請求項19】

ステップＤを１～５回繰り返すことができる、請求項１に記載の調製方法及び精製方法。

【請求項20】

ステップＦの洗浄回数が１～５回である、請求項１に記載の調製方法及び精製方法。

【請求項21】

ステップＦの乾燥温度が２５～３０℃である、請求項１に記載の調製方法及び精製方法。

【請求項22】

ステップＧの前記トリアゾール系化合物が、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、１－ヒドロキシ－７－アゾベンゾトリアゾール、及び１－ヒドロキシル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－カルボン酸エチルのうちの１つ以上であり、好ましくは１－ヒドロキシベンゾトリアゾールである、請求項１に記載の調製方法及び精製方法。

【請求項23】

ステップＧの温度を－５～５℃の範囲内に制御する、請求項１に記載の調製方法及び精製方法。

【請求項24】

ステップＨの温度を－５～５℃の範囲内に制御する、請求項１に記載の調製方法及び精製方法。

【請求項25】

ステップＩの反応温度が２５～３０℃である、請求項１に記載の調製方法及び精製方法。

【請求項26】

ステップＫの洗浄回数が１～５回である、請求項１に記載の調製方法及び精製方法。

【請求項27】

ステップＭにおける減圧濃縮の温度が２５～３５℃である、請求項１に記載の調製方法及び精製方法。

【請求項28】

ステップＭにおいて、ステップＬで取得した前記調製溶液を減圧下で発泡固体状態に濃縮する、請求項１に記載の調製方法及び精製方法。

【請求項29】

ステップＮにおける減圧濃縮の温度が２５～３５℃である、請求項１に記載の調製方法及び精製方法。

【請求項30】

ステップＮにおいて、ステップＭにて減圧下で取得した前記濃縮物を適切な量のメタノールで溶解させ、次いで、減圧下で再び発泡固体状態に濃縮する、請求項１に記載の調製方法及び精製方法。

【請求項31】

ステップＮを１～５回繰り返すことができる、請求項１に記載の調製方法及び精製方法。

【請求項32】

ステップＡ、ステップＢ、ステップＧ、ステップＨ、及びステップＩをすべて窒素保護下で実施する、請求項１に記載の調製方法及び精製方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月３１日に出願された中国出願第ＣＮ２０２１１０３５００２２．０号に対する優先権を主張し、その開示の全内容が参照により本明細書に援用される。

【0002】

本発明は、製薬化学の分野に関し、より詳細には、抗体薬物複合体中間体の調製方法及び精製方法に関する。

【背景技術】

【0003】

抗体薬物複合体（ＡＤＣ）は、抗腫瘍薬の一種であり、抗体部分（抗体）、リンカー部分（リンカー）及び毒素部分（薬物）の３つの構成要素を含む。抗体部分と毒素部分は、リンカー部分によって連結されており、その作用機序は、抗体を標的細胞（腫瘍細胞など）への薬物の標的輸送に用い、毒素を放出して腫瘍細胞を死滅させることである。現時点では、最も一般的な抗体薬物複合体の合成方法は、液相中でリンカー部分と毒素部分とを共有結合させてリンカー－毒素複合体を形成し、次いで抗体とスルフヒドリル結合またはアミノ結合させて抗体薬物複合体を形成する方法である。例えば、挙げられたいくつかのＡＤＣ薬剤の抗体上のリンカー－毒素構造は、Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥである。しかしながら、ＭＭＡＥは非常に高価であるため、Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥのバッチの製造コストは数百万ＲＭＢにも及ぶ（ＭＭＡＥ供給量は１００グラムのレベルである）。したがって、そのようなＡＤＣ中間体を製造し、ＡＤＣ医薬品をバッチで安定して供給するために、品質を制御でき、収率が高く、純度の高い合成方法及び精製方法が必要である。

【0004】

特許公開第ＣＮ１０８８５３５１４Ａ号は、明細書の第１４頁において、抗体薬物複合体中間体（Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）の調製方法及び精製方法を開示している：

【化1】

本方法は、主に２つのステップに分けられる。第１のステップでは、化合物Ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＡを用いてＭｃ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＰＮＰを調製し、第２のステップでは、Ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＰＮＰ及びＭＭＡＥを用いてＭｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥを調製する。第１のステップの生成物Ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＰＮＰを石油エーテル及び酢酸エチルで晶析し、次のステップにおいて生成物を無精製で使用し、これにより、より多くの不純物が次の反応に確実に持ち越され、第２のステップにおける生成物の精製プロセスは、ＨＰＬＣによる調製及び精製のみを行うため、多くの場合、調製される化合物は不純物を多く含む。中国特許出願公開第ＣＮ１０６９９９６０５Ａ号及び中国特許出願公開第ＣＮ１０８７４３９６８Ａ号にも、明細書の４７頁及び明細書の第４頁のＭｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥの製造方法が開示されているが、その後の生成物の精製方法はＨＰＬＣによる調製及び精製であり、この方法は、生成物から不純物を効果的に除去することができない。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0005】

【特許文献1】中国特許出願公開第１０８８５３５１４号

【特許文献2】中国特許出願公開第１０６９９９６０５号

【特許文献3】中国特許出願公開第１０８７４３９６８号

【発明の概要】

【0006】

上記で特定された問題を解決するために、本開示は、ＡＤＣを合成するための中間体として使用することができる精製リンカー－毒素複合体を生成する新規方法を提供する。本開示はまた、式（Ｉ）の化合物またはその塩の精製Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－Ｄを提供し、式中、Ｄは連結された毒素部分を表す。

【化2】

本明細書に開示される方法は、式（Ｉ）の化合物またはその塩のラセミ体、ジアステレオマーまたはエナンチオマーを製造するためにも使用され得ることが理解されるであろう。

【0007】

驚くべきことに、以下に示すように、トリアゾール系化合物の存在下で化合物２と毒素（Ｄ）（例えば、ＭＭＡＥ）を反応させることにより、高純度の式（Ｉ）の化合物またはその塩を生成することができることが発見された：

【化3】

【0008】

いくつかの実施形態では、トリアゾール系化合物は、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、１－ヒドロキシ－７－アゾベンゾトリアゾール、１－ヒドロキシ－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－カルボン酸エチル、またはそれらの組み合わせである。特定の実施形態では、トリアゾール系化合物は１－ヒドロキシベンゾトリアゾールである。

【0009】

いくつかの実施形態では、上記の反応を、１つ以上の塩基の存在下で実行する。例えば、反応を、１つ以上の有機塩基の存在下で実行することができる。特定の実施形態では、反応は、異なるアルカリ度の２つの有機塩基の存在下で行う反応である。アルカリ度の異なる２つの異なる有機塩基を使用すると、プロセスで生成される不純物の量がさらに減少することが判明した。一実施形態では、有機塩基の少なくとも１つはＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンである。別の実施形態では、有機塩基の少なくとも１つはピリジンである。別の実施形態では、２つの有機塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン及びピリジンである。

【0010】

本開示はさらに、化合物２の合成方法を提供する。一実施形態では、化合物２は、本明細書で有機塩基１と称される有機塩基の存在下で、化合物１とビス－（４－ニトロベンゼン）とを反応させることによって製造される。反応を以下に示す：

【化4】

【0011】

いくつかの実施形態では、毒素部分Ｄは、オーリスタチン細胞傷害剤、アントラマイシン細胞傷害剤、アントラサイクリン細胞傷害剤、またはピューロマイシン細胞傷害剤であり、オーリスタチン細胞傷害剤としては、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ、ＭＭＡＤ、またはそれらの誘導体が挙げられ、アントラマイシン細胞傷害剤としては、アントラマイシンまたはその誘導体が挙げられ、アントラサイクリン細胞傷害剤としては、ダウノルビシン、アドリアマイシン、エピルビシン、イダルビシン、バルルビシン、ミトキサントロン、またはそれらの誘導体が挙げられ、ピューロマイシン細胞傷害剤としては、ピューロマイシンまたはその誘導体が挙げられる。

【0012】

特定の実施形態では、毒素（Ｄ）はＭＭＡＥである。そのような実施形態では、本開示に従って製造される精製リンカー－毒素複合体は、以下の化学構造を有するＭｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥである：

【化5】

【0013】

いくつかの実施形態では、Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－Ｄは、以下の合成経路を使用して生成される：

【化6】

特定の実施形態では、ＤはＭＭＡＥである。

【0014】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法によって生成されるＭｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－Ｄ（例えば、Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）は、９５％超の純度を有し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法によって生成されるＭｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－Ｄ（例えば、Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）は、９６％超の純度を有し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法によって生成されるＭｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－Ｄ（例えば、Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）は、９７％超の純度を有し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法によって生成されるＭｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－Ｄ（例えば、Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）は、９８％超の純度を有し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法によって生成されるＭｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－Ｄ（例えば、Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）は、９９％超の純度を有し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法によって生成されるＭｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－Ｄ（例えば、Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）は、９９．５％超の純度を有し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法によって生成されるＭｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－Ｄ（例えば、Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）は、９９．８％超の純度を有し得る。他の実施形態では、本明細書に記載される方法によって生成されるＭｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－Ｄ（例えば、Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）は、約９５％～約９９．５％の純度を有し得る。他の実施形態では、本明細書に記載される方法によって生成されるＭｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－Ｄ（例えば、Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）は、約９７％～約９９．５％の純度を有し得る。他の実施形態では、本明細書に記載される方法によって生成されるＭｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－Ｄ（例えば、Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）は、約９８％～約９９．８％の純度を有し得る。他の実施形態では、本明細書に記載される方法によって生成されるＭｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－Ｄ（例えば、Ｍｃ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）は、約９５％～約９８％の純度を有し得る。

【0015】

本開示はまた、本明細書で調製される精製リンカー毒素複合体を使用して製造される高純度のＡＤＣを提供する。いくつかの実施形態では、本開示に従って製造されるＡＤＣは、９５％超の純度を有し得る。他の実施形態では、本開示に従って製造されるＡＤＣは、９６％超の純度を有し得る。他の実施形態では、本開示に従って製造されるＡＤＣは、９７％超の純度を有し得る。他の実施形態では、本開示に従って製造されるＡＤＣは、９８％超の純度を有し得る。他の実施形態では、本開示に従って製造されるＡＤＣは、９９％超の純度を有し得る。他の実施形態では、本開示に従って製造されるＡＤＣは、９９．５％超の純度を有し得る。他の実施形態では、本開示に従って製造されるＡＤＣは、９９．８％超の純度を有し得る。他の実施形態では、本開示に従って製造されるＡＤＣは、約９５％～約９９．５％の純度を有し得る。

【0016】

一実施形態では、本開示の方法は、以下のステップ：
Ａ．化合物１を適量の溶媒１に溶解し、ビス（４－ニトロベンゼン）カーボネート及び有機塩基を順次添加し（添加するビス（４－ニトロベンゼン）カーボネートのモル数及び添加する有機塩基のモル数は、化合物１のモル数よりも大きい）、
Ｂ．適切な反応時間後に吸引濾過によって濾液を取得し、
Ｃ．ステップＢで取得した濾液に十分な量の酢酸エチル及びｎ－ヘキサンを順次添加し、ｎ－ヘキサンの滴下後、適切な時間にわたって撹拌し、吸引濾過によって濾過ケーキを取得し、
Ｄ．ステップＣで取得した濾過ケーキを適量の酢酸エチル及びｎ－ヘキサンで連続的に洗浄し、吸引濾過によって濾過ケーキを取得し、
Ｅ．ステップＤで取得した濾過ケーキを酢酸とメタノールの混合溶液に溶解し、適量の精製水を加え、精製水を加えた後、適切な時間にわたって撹拌し、吸引濾過によって濾過ケーキを取得し、
Ｆ．ステップＥで取得した濾過ケーキを適量の精製水、メタノール、酢酸エチル及びｎ－ヘキサンで順次洗浄し、吸引濾過及び乾燥後に化合物２（ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＰＮＰ）を取得し、
Ｇ．化合物２及びトリアゾール系化合物を適量の溶媒２に溶解して溶液Ｘを形成し、コンジュゲートされた毒素部分Ｄを溶媒３に溶解して溶液Ｙを形成し、溶液Ｙを溶液Ｘに添加し、均一に混合して溶液Ｚを形成し、
Ｈ．溶液Ｚに適切な量の有機塩基を添加し、
Ｉ．適切な反応時間後に吸引濾過によって濾液を取得し、
Ｊ．ステップＩの濾液に適量の酢酸エチル及びｎ－ヘキサンを順次添加し、適切な時間にわたって撹拌し、吸引濾過によって濾過ケーキを取得し、
Ｋ．ステップＪで取得した濾過ケーキを酢酸エチル及びｎ－ヘキサンで順次洗浄し、吸引濾過によって濾過ケーキを取得し、
Ｌ．ステップＫで取得した濾過ケーキを適量のメタノール溶液に溶解し、高速液体クロマトグラフィーにより調製及び精製し、調製溶液を回収し、
Ｍ．ステップＬで取得した調製溶液を減圧下で濃縮し、
Ｎ．ステップＭの減圧下で取得した濃縮物を、適量のメタノールで溶解させ、次いで減圧下で再び濃縮し、
Ｏ．ステップＮの減圧下で取得した濃縮物を真空乾燥して、式（Ｉ）に示す精製化合物を取得することを含み、
その場合、
いくつかの実施形態では、ステップＡの溶媒１、ステップＧの溶媒２及び溶媒３は極性溶媒であり、好ましくは、溶媒１、溶媒２、及び溶媒３は、それぞれ独立して、ＤＭＦ、ＤＭＡ、及びＮＭＰのうちの１つ以上から選択され、より好ましくは、溶媒１、溶媒２、及び溶媒３はＤＭＦである。

【0017】

ステップＡの有機塩基及びステップＨの有機塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、及びピリジンのうちの１つ以上から選択され、好ましくは、有機塩基は、それぞれ独立して、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン及びピリジンのうちの１つまたは２つである。好ましくは、ステップＡの有機塩基はＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンであり、ステップＨでは２種類の有機塩基、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン及びピリジンが存在する。

【0018】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＡにおける化合物１と炭酸ビス（４－ニトロベンゼン）のモル比は約１：１．８であり、化合物１と有機塩基１のモル比は約１：１．２である。

【0019】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＡの化合物１と炭酸ビス（４－ニトロベンゼン）のモル比は１：１．５～２であり、化合物１と有機塩基のモル比は１：１～１．５である。好ましくは、ステップＡの化合物１とビス（４－ニトロベンゼン）カーボネートのモル比は１：１．６～１．９または１：１．７～１．８であり、化合物１と有機塩基のモル比は１：１．１～１．４または１：１．２～１．３である。いくつかの特定の実施形態では、ステップＡの化合物１と炭酸ビス（４－ニトロベンゼン）のモル比は１：１．８であり、化合物１と有機塩基のモル比は１：１．２である。

【0020】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＣの化合物１と酢酸エチルの重量体積比（ｇ／ｍｌ）は約１：３０．０であり、ステップＣの化合物１とｎ－ヘキサンの重量体積比（ｇ／ｍｌ）は約１：６０．０である。

【0021】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＣの化合物１と酢酸エチルの重量体積比（ｇ／ｍｌ）は１：２５～３５、１：２７～３３、１：２８～３２、または１：２９～３１であり、ステップＣの化合物１とｎ－ヘキサンの重量体積比（ｇ／ｍｌ）は１：５５～６５、１：５７～６３、１：５８～６２、または１：５９～６１である。いくつかの特定の実施形態では、ステップＣの化合物１と酢酸エチルの重量体積比（ｇ／ｍｌ）は１：３０であり、ステップＣの化合物１とｎ－ヘキサンの重量体積比（ｇ／ｍｌ）は１：６０である。

【0022】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＥの化合物１と酢酸の重量体積比（ｇ／ｍｌ）は約１：７．０であり、ステップＥの化合物１とメタノールの重量体積比（ｇ／ｍｌ）は約１：１．０であり、ステップＥの化合物１と精製水の重量体積比（ｇ／ｍｌ）は約１：２０．０である。

【0023】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＥの化合物１と酢酸の重量体積比（ｇ／ｍｌ）は約１：６～８であり、ステップＥの化合物１とメタノールの重量体積比（ｇ／ｍｌ）は１：０．５～１．５であり、ステップＥの化合物１と精製水の重量体積比（ｇ／ｍｌ）は約１：１５～２５である。好ましくは、ステップＥの化合物１と酢酸の重量体積比（ｇ／ｍｌ）は１：６．５～７．５または１：６．８～７．３であり、ステップＥの化合物１とメタノールの重量体積比（ｇ／ｍｌ）は１：０．７～１．３または１：０．９～１．１であり、ステップＥの化合物１と精製水の重量体積比（ｇ／ｍｌ）は１：１７～２３または１：１９～２１である。いくつかの特定の実施形態では、ステップＥの化合物１と酢酸の重量体積比（ｇ／ｍｌ）は１：７．０であり、ステップＥの化合物１とメタノールの重量体積比（ｇ／ｍｌ）は１：１．０であり、ステップＥの化合物１と精製水の重量体積比（ｇ／ｍｌ）は１：２０．０である。

【0024】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＧの化合物２とトリアゾール系化合物のモル比は約１：１であり、化合物２と毒素部分Ｄのモル比は約１：１である。

【0025】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＧの化合物２とトリアゾール系化合物のモル比は１：０．８～１．２であり、化合物２と毒素部分Ｄのモル比は１：０．８～１．２である。いくつかの実施形態では、ステップＧの化合物２とトリアゾール系化合物のモル比は１：０．９～１．１であり、化合物２と毒素部分Ｄのモル比は１：０．９～１．１である。好ましくは、ステップＧの化合物２とトリアゾール系化合物のモル比は１：０．８５～１．０５であり、化合物２と毒素部分Ｄのモル比は１：０．９５～１．０５である。いくつかの特定の実施形態では、ステップＧの化合物２とトリアゾール系化合物のモル比は１：１であり、化合物２と毒素部分Ｄのモル比は１：１である。

【0026】

さらに、上記のように、いくつかの実施形態では、ステップＨにおいて、２種類の有機塩基、すなわちＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン及びピリジンが存在する。いくつかの実施形態では、ステップＧの化合物２と、ステップＨで添加する化合物２の有機塩基Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンのモル比は約１：１であり、ステップＧの化合物２と、ステップＨで添加する有機塩基ピリジンのモル比は約１：２０．５である。他の実施形態では、ステップＧの化合物２と有機塩基Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンのモル比は１：０．８～１．２であり、より好ましくはモル比は１：０：９～１．１または１：０．９５～１．０５であり、ステップＧの化合物２とステップＨで添加する有機塩基ピリジンのモル比は１：１９～２５であり、より好ましくは、モル比は１：１９．５～２３、１：１９．５～２１．５、または１：２０～２１である。いくつかの特定の実施形態では、ステップＧの化合物２と有機塩基２のモル比は１：１であり、化合物２と有機塩基３のモル比は１：２０．５である。

【0027】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＪで添加する酢酸エチルの体積は、濾液の体積の３．５～４．５倍であり、添加するｎ－ヘキサンの体積は、濾液の体積の７～９倍である。好ましくは、ステップＪで添加する酢酸エチルの体積は、濾液の体積の３．７～４．３倍であり、添加するｎ－ヘキサンの体積は、濾液の体積の７．５～８．５倍である。いくつかの特定の実施形態では、ステップＪで添加する酢酸エチルの体積は、濾液の体積の４倍であり、添加するｎ－ヘキサンの体積は、濾液の体積の８倍である。

【0028】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＬにおける高速液体クロマトグラフィーの調製条件は以下のとおりである：移動相ＡはｐＨ＝４．０～５．０の酢酸水溶液であり、移動相Ｂはアセトニトリルであり、移動相Ａ：Ｂ＝６０：４０（Ｖ／Ｖ）であり、調製及び精製に等勾配を使用する。

【0029】

さらに、特定の実施形態では、抗体薬物複合体中間体の構造を式（１～１１）に示す。

【化7】

【化8】

【化9】

【化10】

【化11】

【化12】

【化13】

【化14】

【化15】

【化16】

【化17】

【0030】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＡの温度を、－５～５℃の範囲内に制御する。

【0031】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＢの温度を、２５～３０℃の範囲内に制御する。

【0032】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＤを１～５回繰り返すことができる。

【0033】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＦにおける洗浄回数は１～５回である。

【0034】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＦにおける乾燥温度は２５～３０℃である。

【0035】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＧのトリアゾール系化合物は、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール、１－ヒドロキシ－７－アゾベンゾトリアゾール、及び１－ヒドロキシル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－カルボン酸エチルのうちの１つ以上であり、好ましくは１－ヒドロキシベンゾトリアゾールである。

【0036】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＧの温度を、－５～５℃の範囲内に制御する。

【0037】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＨの温度を、－５～５℃の範囲内に制御する。

【0038】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＩの反応温度は２５～３０℃である。

【0039】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＫにおける洗浄回数は１～５回である。

【0040】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＭにおける減圧下での濃縮の温度は２５～３５℃である。

【0041】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＭにおいて、ステップＬで取得した調製溶液を減圧下で発泡固体状態に濃縮する。

【0042】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＮにおける減圧下での濃縮の温度は２５～３５℃である。

【0043】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＮにおいて、ステップＭにおける減圧下での濃縮物を適切な量のメタノールで溶解させ、次いで、減圧下で再び発泡固体状態に濃縮する。

【0044】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＮを１～５回繰り返すことができる。

【0045】

さらに、いくつかの実施形態では、ステップＡ、ステップＢ、ステップＧ、ステップＨ、及びステップＩを、すべて窒素の保護下で実施する。

【0046】

本発明によって提供される抗体薬物複合体中間体の調製方法及び精製方法は、目的生成物及び反応プロセスにおける副生成物から不純物を効果的に除去することができ、得られる最終目的生成物の純度を極めて高くすることができ（例えば、９９％以上）、安定した大量生産を実現でき、臨床医薬品の品質基準要件を十分に満たし、ＡＤＣ医薬品の安定した大量生産を飛躍的に保証することができる。

【図面の簡単な説明】

【0047】

【図1】精製ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＰＮＰのクロマトグラムである。

【図2】精製ＭＣ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥのクロマトグラムである。

【発明を実施するための形態】

【0048】

定義
別途定義されない限り、本発明で使用されるすべての技術用語は、当業者によって理解されている意味と同じ意味を有する。

【0049】

本発明で使用される用語「抗体薬物複合体」とは、抗体／抗体の機能的断片、リンカー、及び毒素部分が化学反応によって一体的に結合した化合物を指し、通常、構造的には３つの部分：抗体または抗体ベースのリガンド、毒素部分、及び抗体または抗体ベースのリガンドと薬物をコンジュゲートするリンカーからなる。現在、抗体薬物複合体は、通常、２つのステップで調製され：第１のステップでは、リンカーと毒素部分との化学反応によって「リンカー－薬物」複合体を形成し、第２のステップでは、「リンカー－薬物」複合体のリンカー部分をスルフヒドリル基またはアミノ基によって抗体／抗体の機能的断片と共有結合させる。本発明において使用される用語「抗体薬物複合体中間体」とは、上記の「リンカー－薬物」複合体を指す。

【0050】

本発明において使用される用語「リンカー」及び「リンカー部分」とは、抗体薬物複合体化において抗体と薬物を連結する部分を指し、切断性または非切断性であり得る。切断性リンカー（すなわち、破壊性リンカーまたは生分解性リンカー）は、標的細胞内または標的細胞上で切断されて、薬物を放出することができる。いくつかの実施形態では、本発明のリンカーは、ジスルフィドベースのリンカー（より高いスルフヒドリル濃度を有する腫瘍細胞内で選択的に切断される）、ペプチドリンカー（腫瘍細胞内で酵素によって切断される）、及びヒドラゾンリンカーなどの切断性リンカーから選択される。他の実施形態では、本発明のリンカーは、チオエーテルリンカーなどの非切断性リンカー（すなわち、非破壊性リンカー）から選択される。別の実施形態では、本発明のリンカーは、破壊性リンカーと非破壊性リンカーの組み合わせである。

【0051】

本発明で使用される用語「薬物」及び「毒素部分」は、一般に、所望の生物学的活性を有し、本発明の複合体を調製するための反応性官能基を有する任意の化合物を指す。所望の生物学的活性には、ヒトまたは他の動物における疾患の診断、治癒、軽減、治療、及び予防が含まれる。新薬の継続的な発見及び開発に伴い、これらの新薬も本発明に記載の薬物に含まれるべきである。具体的には、薬物には、細胞傷害薬、細胞分化因子、幹細胞栄養因子、ステロイド系薬剤、自己免疫疾患治療薬、抗炎症薬、または感染症薬剤が含まれるが、これらに限定されない。より具体的には、薬物には、チューブリン阻害剤、またはＤＮＡ及びＲＮＡ傷害剤が含まれるが、これらに限定されない。

【実施例】

【0052】

本発明の技術的解決策を、特定の実施例と併せて、以下の非限定的な詳細においてさらに説明する。以下の実施例は、本発明の技術的概念及び特徴を説明し、当業者が本発明の内容を理解し、それに応じて本発明を実施できるようにすることのみを目的とし、本発明の保護範囲を限定するものではないことに留意されたい。本発明の精神の本質に従ってなされるあらゆる同等の変更または修正は、本発明の保護範囲に含まれるべきである。

【0053】

実施例１ ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＰＮＰの調製及び精製

【化18】

清潔で乾燥した３Ｌ反応フラスコを取り、そこに１３０．００ｇの化合物１（すなわち、ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＯＨ）（２２７．０１ｍｍｏｌ）及び１３００ｍｌのＤＭＦを加えた。

【0054】

窒素の保護下で撹拌して固形物を均一に分散させ、内部温度を－２～２℃の範囲内に維持した。

【0055】

添加プロセスでは、内部温度を０～５℃の範囲内に制御し、炭酸ビス（４－ニトロベンゼン）１２４．０２ｇ（４０７．６８ｍｍｏｌ）を添加した。

【0056】

滴下プロセスでは、内部温度を０～５℃の範囲内に制御し、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン３５．０３ｇ（２７１．０３ｍｍｏｌ）を滴下したところ、滴下中に反応液が褐色となり、滴下後に温度が上昇した。

【0057】

温度が２５℃に上昇したら、タイミングを計り、内部温度を２５～３０℃に制御し、２時間の反応後に試料を採取し、次いで０．５時間ごとに試料を採取し、インプロセス制御検出を実施した。化合物１の残分が１．０％未満になった時点で反応を終了した。

【0058】

上記反応溶液を吸引濾過し、反応溶液を取り出して２０Ｌステンレス鋼バレルに移し、機械撹拌（１００～３００ｒｐｍ）下、３９００ｍｌの酢酸エチル（Ｖ_{酢酸エチル}／Ｗ_化合物１＝３０．０）を滴下し、次いでｎ－ヘキサン７８００ｍｌ（Ｖ_{ｎ－ヘキサン}／Ｗ_化合物１＝６０．０）を滴下し、滴下後５±１分間撹拌を続け、循環水の多目的真空ポンプを使用して吸引濾過して、化合物２（ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＰＮＰ）の粗生成物である濾過ケーキを取得した。

【0059】

５２２０ｍｌの酢酸エチル（Ｖ_{酢酸エチル}／Ｗ_化合物１＝４０．０）を取り出し、３等分した。最初に真空を解除し、次いで酢酸エチルの一部を加えて、濾過ケーキを３～５分間浸漬及び洗浄し、浸漬中に濾過ケーキを粉砕し、次いで真空を接続し、酢酸エチルを抜き、この操作を２回繰り返した。

【0060】

５２２０ｍｌのｎ－ヘキサン（Ｖ_{ｎ－ヘキサン}／Ｗ_化合物１＝４０．０）を取り出し、３等分した。最初に真空を解除し、次いでｎ－ヘキサンの一部を加えて、濾過ケーキを３～５分間浸漬及び洗浄し、浸漬中に濾過ケーキを粉砕し、次いで真空を接続し、ｎ－ヘキサンを抜き、この操作を２回繰り返し、生成物が粉末固体になるまで濾過ケーキを循環水の多目的真空ポンプで吸引濾過した。

【0061】

得られた固体粉末を１０Ｌステンレス鋼製バレルに移し、酢酸（Ｖ_酢酸／Ｗ_化合物１＝７．０）９１０ｍｌとメタノール（Ｖ_{メタノール}／Ｗ_化合物１＝１．０）１３０ｍｌとの混合溶液に溶解させ、機械的撹拌（１００～３０００ｒｐｍ）下で２６００ｍｌの精製水（Ｖ_精製水／Ｗ_化合物１＝２０．０）を３０±１０分以内に滴下した。滴下後約１０分間撹拌を続け、次いで循環水の多目的真空ポンプで吸引濾過を実施し、濾過ケーキを得た。

【0062】

濾過ケーキを、精製水、メタノール、酢酸エチル、及びｎ－ヘキサンで順次洗浄した。具体的な洗浄方法は以下の通りであった：
精製水による洗浄：２６００ｍｌの精製水（Ｖ_精製水／Ｗ_化合物１＝２０．０）を取り出し、２等分した。最初に真空を解除し、精製水を加えて、濾過ケーキを３～５分間浸漬及び洗浄し、浸漬中に濾過ケーキを粉砕し、次いで真空を接続し、精製水を抜き、次いで真空下で濾過ケーキを精製水ですすいだ。

【0063】

メタノールによる洗浄：真空下で、１３００ｍｌのメタノール（Ｖ_{メタノール}／Ｗ_化合物１＝１０．０）を取り出し、濾過ケーキを均一に洗浄した。

【0064】

酢酸エチルによる洗浄：２６１０ｍｌの酢酸エチル（Ｖ_{酢酸エチル}／Ｗ_化合物１＝２０．０）を取り出し、３等分した。最初に真空を解除し、次いで酢酸エチルの一部を加えて、濾過ケーキを３～５分間浸漬及び洗浄し、浸漬中に濾過ケーキを粉砕し、次いで真空を接続し、酢酸エチルを抜き、真空を解除して再度この操作を繰り返し、次いで酢酸エチルの第３の部分を加えて、濾過ケーキを真空下で洗浄した。

【0065】

ｎ－ヘキサンによる洗浄：最初に真空を解除し、５２２０ｍｌのｎ－ヘキサン（Ｖ_{ｎ－ヘキサン}／Ｗ_化合物１＝４０．０）を取り出し、３等分した。ｎ－ヘキサンの第１の部分を加えて、濾過ケーキを３～５分間浸漬及び洗浄し、浸漬中に濾過ケーキを粉砕し、次いで真空を接続し、ｎ－ヘキサンを抜き、次いでｎ－ヘキサンの第２の部分を加えてこの操作を繰り返し、次いでｎ－ヘキサンの第３の部分を加えて、真空下で濾過ケーキを洗浄した。濾過ケーキを、生成物が粉末固体になるまで、循環水の多目的真空ポンプを用いて吸引濾過した。

【0066】

得られた粉末固体を２Ｌの一口ボトルに移し、真空下で２５～３０℃にて少なくとも１６時間乾燥させた。重量がそれ以上変化しなくなった時点で乾燥を停止し、得られた粉末固体を精製化合物２（すなわち、精製ＭＣ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＰＮＰ）とした。試験により、純度は９９．１２％に達し、単一の不純物の最大値は０．５８％であり、不純物の合計は０．８８％であった。クロマトグラムを図１に示す。

【0067】

実施例２ ＭＣ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥの調製及び精製

【化19】

清潔で乾燥した２Ｌ反応フラスコに、１２４．００ｇの化合物２（１６８．０８ｍｍｏｌ、１．０５当量）、２１．５０ｇの１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（１５９．１１ｍｍｏｌ）及び４６０ｍｌのＤＭＦ（Ｖ_ＤＭＦ／Ｗ_ＭＭＡＥ＝４．０）を加え、窒素保護下で撹拌を行って固体を溶解させ、撹拌を開始し、温度を０～５℃に下げた（回転速度：１００～３００ｒｐｍ）。

【0068】

上記系の内部温度が０～５℃の範囲に下がった時点で、４６０ｍｌのＤＭＦ中の１１４．９６ｇのＭＭＡＥ（１６０．１２ｍｍｏｌ）の溶液（ＶＤＭＦ／ＷＭＭＡＥ＝４．０）を加えた。

【0069】

反応系の内部温度を０～５℃に保持し、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン２０．７１ｇ（１６０．２３ｍｍｏｌ）、ピリジン２７３．０３ｇ（３４５１．７１ｍｍｏｌ）を順次添加し、添加後に温度を上昇させた。

【0070】

温度を２５℃に上昇させ、タイミング反応を開始し、内部温度を２５～３０℃に制御し、１８時間の反応後に、インプロセス制御用に試料を採取し、その後、１時間ごとにインプロセス制御用に試料を採取した。ＭＭＡＥの残分が３．０％以下になった時点で反応を終了した。

【0071】

上記の反応溶液を循環水の多目的真空ポンプで吸引濾過し、メスシリンダーで反応溶液を量り取り、３０Ｌステンレス鋼バレルに移し、次いでブフナーファネルと濾過フラスコを１１５ｍｌのＤＭＦ（Ｖ_ＤＭＦ／Ｗ_ＭＭＡＥ＝１．０）で洗浄し、濾過フラスコ内の溶液を再度量り取り、３０Ｌステンレス鋼バレルに移し、２回の測定の合計体積をＶ_反応溶液とした。撹拌（１００～３００ｒｐｍ）下、Ｖ_反応溶液の約４倍量の酢酸エチル６３６３ｍｌを一度に加え、次いでＶ_反応溶液の約８倍量のｎ－ヘキサン１２６００ｍｌを３０±１０分以内に滴下した。滴下後、再度約５分間撹拌し、濾過吸引を実施して未精製の式（Ｉ）の化合物である濾過ケーキを得た。

【0072】

次に、Ｖ_反応溶液の２倍量の酢酸エチル３１６０ｍｌを取り出し、２等分した。最初に、真空を解除し、酢酸エチル１部を取り出し、ブフナー漏斗に加え、濾過ケーキを３～５分間浸漬及び洗浄し、浸漬中に濾過ケーキを粉砕し、真空を接続し、濾過吸引を実施し、この操作を１回繰り返した。

【0073】

真空を解除し、Ｖ_反応溶液の２倍量のｎ－ヘキサン３１６０ｍｌを抜き、２等分し、ｎ－ヘキサン１部を採取して漏斗に加え、濾過ケーキを３～５分間浸漬及び洗浄し、浸漬中に濾過ケーキを粉砕し、真空を接続し、濾過吸引を実施し、この操作を１回繰り返し、最後の洗浄後に溶媒を除去し、濾過ケーキを、生成物が粉末固体になるまで、循環水の多目的真空ポンプを用いて吸引濾過に供した。得られた固体粉末を２Ｌの一口ボトルに移し（ボトルを最初に秤量した）、真空下、室温（１８～２６℃）で重量が変化しなくなるまで５時間以上乾燥させて、それにより乾燥粉末固体を得た。

【0074】

上記の粉末固体を適量のメタノールに溶解し、調製及び精製システムを用いて精製した。具体的な調製条件は以下の通りである：移動相Ａ：酢酸水溶液（ｐＨ＝４．０～５．０）、及び移動相Ｂ：アセトニトリル。移動相Ａ：Ｂ＝６０：４０（Ｖ／Ｖ）、調製及び精製には等勾配を使用した。

【0075】

調製溶液を回収し、得られた調製溶液を減圧下、３０±２℃で濃縮して発泡固体を得た。上記の発泡固体を１２００ｍｌのメタノール（Ｖ_{メタノール}／_{ＷＭＭＡＥ}＝１０．４）で溶解し、２Ｌの一口ボトルに移し（ボトルを最初に秤量した）、生成物が発泡固体になるまで減圧下で３０～３５℃にて濃縮し、この操作を２回繰り返した。最終的に濃縮により泡状となり液滴がなくなった後、０．５時間反応を継続し、得られた固体を直結の高速回転翼真空ポンプで真空乾燥し、粉砕して、式（Ｉ）の精製化合物（すなわち、精製ＭＣ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）を得た。純度は９９．８０％、単一の不純物の最大値は０．１３％、不純物の合計は０．２０％であった。クロマトグラムを図２に示す。

【0076】

様々な具体例によって本発明を説明した。しかしながら、当業者であれば、本発明が様々な特定の実施形態に限定されないことを理解することができる。当業者は、本発明の範囲内で様々な変更または修正を行うことができ、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、説明における様々な箇所で言及された様々な技術的特徴を互いに組み合わせることができる。そのような変更及び修正は、本発明の範囲内である。

【図1】

【図2】

【国際調査報告】