特表 2024-512509 ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法によるＡＤＣ中のＴＣＥＰ含有量の検出方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-19

(54)【発明の名称】ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法によるＡＤＣ中のＴＣＥＰ含有量の検出方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 27/62 20210101AFI20240312BHJP

   G01N 30/06 20060101ALI20240312BHJP

   G01N 30/88 20060101ALI20240312BHJP

   G01N 30/26 20060101ALI20240312BHJP

   G01N 30/72 20060101ALI20240312BHJP

   G01N 30/04 20060101ALI20240312BHJP

   G01N 30/86 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 39/395 20060101ALN20240312BHJP

   A61K 47/68 20170101ALN20240312BHJP

   C07K 16/00 20060101ALN20240312BHJP

【ＦＩ】

G01N27/62 X

G01N27/62 V

G01N30/06 E

G01N30/88 C

G01N30/26 A

G01N30/72 C

G01N30/04 P

G01N30/86 J

A61K39/395 C

A61K39/395 L

A61K47/68

C07K16/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023557459

(86)(22)【出願日】2022-03-30

(85)【翻訳文提出日】2023-09-19

(86)【国際出願番号】 CN2022083946

(87)【国際公開番号】W WO2022206807

(87)【国際公開日】2022-10-06

(31)【優先権主張番号】202110348153.5

(32)【優先日】2021-03-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520087262

【氏名又は名称】レメゲン シーオー．，エルティーディー．

【氏名又は名称原語表記】ＲＥＭＥＧＥＮ ＣＯ．， ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】Ｎｏ．５８ Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｍｉｄｄｌｅ Ｒｏａｄ， Ｙａｎｔａｉ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｚｏｎｅ， Ｙａｎｔａｉ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ， Ｃｈｉｎａ（Ｓｈａｎｄｏｎｇ）Ｐｉｌｏｔ Ｆｒｅｅ Ｔｒａｄｅ Ｚｏｎｅ， Ｙａｎｔａｉ， Ｓｈａｎｄｏｎｇ ２６４００６ Ｃｈｉｎａ

(74)【代理人】

【識別番号】110000084

【氏名又は名称】弁理士法人アルガ特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】姚 雪静

(72)【発明者】

【氏名】王 莉

(72)【発明者】

【氏名】孫 文龍

(72)【発明者】

【氏名】斉 桂平

【テーマコード（参考）】

2G041

4C076

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

2G041CA01

2G041EA04

2G041FA06

2G041FA12

2G041GA03

2G041GA09

2G041HA01

2G041LA08

4C076AA99

4C076CC41

4C076EE59

4C085AA21

4H045AA11

4H045AA20

4H045BA10

4H045BA50

4H045CA40

4H045DA75

4H045EA50

(57)【要約】

【解決手段】本発明は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法によるＡＤＣ中のＴＣＥＰ含有量の検出方法に関する。この方法では、ＡＤＣサンプルがエルマン反応により誘導化され、次にＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法によりＴＣＥＰ含有量が検出される。
【効果】この方法によれば、複雑なＡＤＣサンプルにおけるエルマンと反応可能な他の物質の影響を排除することができ、サンプルの前処理が不要になり、特異性に優れる。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

液体クロマトグラフ－タンデム質量分析計（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）によるＡＤＣサンプル中のＴＣＥＰ含有量の検出方法であって、被検物であるＡＤＣサンプルがエルマン反応により誘導化され、Ｃ１８クロマトカラムを採用し、サンプルの前処理が不要であることを特徴とする、方法。

【請求項2】

前記Ｃ１８クロマトカラムに使用される移動相Ａが、ギ酸を含む水溶液、好ましくは０．１％のギ酸を含む水溶液であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記Ｃ１８クロマトカラムに使用される移動相Ｂが、ギ酸を含むアセトニトリル／メタノール溶液、好ましくは０．１％のギ酸を含むアセトニトリル／メタノール（８０／２０、ｖ／ｖ）溶液であることを特徴とする、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

添加されるエルマン試薬の濃度が、約５～２０μｇ／ｍｌ、さらに好ましくは１０．０μｇ／ｍｌであることを特徴とする、請求項３に記載の方法。

【請求項5】

前記方法では、標準品溶液がＴＣＥＰを採用して作製されることを特徴とする、請求項４に記載の方法。

【請求項6】

好ましくは、前記標準品溶液が１．０μｇ／ｍｌのＴＣＥＰ溶液であることを特徴とする、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

前記ＴＣＥＰ溶液の構成及び標準曲線シリーズ溶液の調製が、
１）ＥＰに計量した計量質量がｍで表される５～１０ｍｇのＴＣＥＰ・ＨＣｌ参照品を、適量のサンプル溶解液で溶解し、ＴＣＥＰ・ＨＣｌとＴＣＥＰとのモル比が１：１である関係からＴＣＥＰ濃度を算出した後、希釈液でＴＣＥＰ濃度が１．０μｇ／ｍｌになるまで段階的に希釈するＴＣＥＰ作動液の調製工程と、
２）１．０μｇ／ｍｌのＴＣＥＰ標準品溶液を希釈液で濃度がそれぞれ１６ｎｇ／ｍｌ、８ｎｇ／ｍｌ、４ｎｇ／ｍｌ、２ｎｇ／ｍｌ、１ｎｇ／ｍｌ、０．５ｎｇ／ｍｌであるＴＣＥＰ標準品溶液に希釈する標準曲線シリーズ溶液の調製工程と、を含むことを特徴とする、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

前記方法が、希釈液でそれぞれ１．０μｇ／ｍｌのＴＣＥＰ溶液を希釈して調製された、濃度が１２ｎｇ／ｍｌ、３ｎｇ／ｍｌ、１ｎｇ／ｍｌであるＴＣＥＰ品質管理溶液を使用することをさらに含むことを特徴とする、請求項７に記載の方法。

【請求項9】

前記希釈液が、５０％のメタノール水溶液であることを特徴とする、請求項７～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記液体クロマトグラフには、米国アジレント社のＡｇｉｌｅｎｔ １２００型液体クロマトグラフ、Ｔｅｌｅｄｙｎｅ Ｉｓｃｏ社の高圧分取液体クロマトグラフ、アジレントのＨＰＬＣ １２６０型高速液体クロマトグラフが含まれるが、これらに限定されない、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記タンデムマススペクトルには、米国ＡＢ Ｓｃｉｅｘ社のＡＰＩ ４０００型タンデム質量分析計、島津のトリプル四重極型液体クロマトグラフ質量分析計、ＧＢＣのＯｐｔｉｍａｓｓ誘導結合プラズマ直交加速飛行時間型質量分析計が含まれるが、これらに限定されない、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記Ｃ１８クロマトカラムには、ＹＭＣ－Ｃ１８、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｅｘｔａｒｄ－Ｃ１８、資生堂のＰＡＫ ＣＲ－１８が含まれるが、これらに限定されない、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は生物医薬分野に属し、液体クロマトグラフ－タンデム質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ、又はＬＣ－ＭＳＭＳと称する）法による抗体薬物複合体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｊｕａｔｅ、ＡＤＣ）サンプル中のＴＣＥＰ含有量の検出方法に関する。

【背景技術】

【0002】

ＴＣＥＰは、トリ（２－カルボキシエチル）ホスフィンとも呼ばれ、非常に効果的なチオール類還元剤であり、タンバク質化学及びプロテオミクス研究におけるジスルフィド結合の定量的還元剤として広く使用されている。この試薬ＴＣＥＰは、水溶液での安定性や溶解性が良く、酸性、アルカリ性溶液での安定性も良いため、タンバク質化学及びプロテオミクス研究において優先的に選択されることが多い。

【0003】

タンバク質を還元するための他の２つの一般的な薬剤（ジチオスレイトール及びβ－メルカプトエタノール）と比較して、ＴＣＥＰは無臭で、より強力かつ不可逆的な還元剤である。ＴＣＥＰが媒介するジスルフィド結合の分解の生成物は、実際には２つの遊離チオール／システインであり、より親水性で、空気酸化への耐性が強い。また、ＴＣＥＰは、固定化金属アフィニティークロマトグラフィーに用いられた金属を低減する恐れがない。

【0004】

ＴＣＥＰはＡＤＣ製品の製造に広く使われており、還元後のタンパク質を保護するという主な目的として添加され、添加ステップがモノクローナル抗体の還元工程に含まれる。プロセスの実践では、還元剤が添加されないと、ＡＤＣが正常に結合されないか又は結合後の製品の品質が低下する恐れがあるが、抗体還元後の合成ステップではＴＣＥＰは不要になり、既存のＡＤＣ合成技術におけるその後の処理には、ＴＣＥＰに対する特定の除去プロセスはなく、ＴＣＥＰが製品の透析過程のみで除去されるため、ＡＤＣ製品に残留する恐れがあり、その後の薬の安全性に一定の悪影響を及ぼすことが無視できないことが示される。現在、ＡＤＣ関連製品におけるＴＣＥＰ検出に関する研究は、従来技術においてまだ見られていない。

【0005】

ＬＣ－ＭＳ／ＭＳは、実際にはＬＣ技術と２つのＭＳ技術を組み合わせた総合的な検出技術である。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳは液体クロマトグラフ（ＬＣ）とマススペクトル（ＭＳ）との組み合わせたものであり、注入された後のサンプルがまず移動相に連れてクロマトカラムに入り、クロマトカラムによる分離の後に、マススペクトルに入って検出されるという動作原理として働く。質量分析計では、測定物の質量電荷比（ｍ／ｚ）に従って検出を行い、測定物がイオン源でガスイオンに変換されてマススペクトルに入り、トリプル四重極において一次質量分析計が特定の範囲のイオンをスキャンするかまた特定のイオンが衝突室に入ることを許可し、衝突室内において分子イオンが衝突して分解し、子イオンが形成されて二次マススペクトルに入り、二次質量分析計が特定の範囲のイオンをスキャンするか又は特定のイオンが検出器に入ることを許可する。このように、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳの併用が非常に顕著な利点を持っている。その理由は、ガスクロマトグラフィーは揮発性で分解しない物質しか分離できないのに対し、液体クロマトグラフィーは分離範囲を大幅に広げていることにある。従って、ＬＣと高選択性、高感度のＭＳ／ＭＳとの組み合わせにより、複雑なサンプルのリアルタイム分析を実行することが可能になり、ＬＣによる分離が困難である場合でも、ＭＳ１及びＭＳ２により目的化合物の中性破片走査を実行すれば、混合物中の目的化合物を見つけて強調表示し、信号対雑音比を大幅に向上させることができる。

【0006】

トリ（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）は、一定のｐＨ値の範囲内で芳香族ジスルフィド結合の化合物を定量的に還元できるため、エルマン（ＤＴＮＢ）と反応して形成した５－メルカプト－２－ニトロ安息香酸（ＴＮＢ）の量を測定することにより、ＴＣＥＰの濃度を便利に決定することができる（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９４、２２０：５～１０）。現在、報告されているＴＣＥＰ検出には、エルマン反応による誘導化が多く採用される。その反応原理は以下の通りである。

【0007】

【化1】

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0008】

しかし、タンパク質医薬品や医薬品に使用される多くの試薬も、ＤＴＮＢと反応してＴＮＢを生成する可能性があるため、ＴＮＢの量を検出することによりＡＤＣ中のＴＣＥＰの濃度を決定する方法は、サンプル中の他の還元剤の影響を受けやすく、正確性が低い。
現在、ＴＣＥＰ含有量に対する検出方法は少ない。ＴＣＥＰの極性が大きく、Ｃ１８により保持されないので、ＵＶ検出器での応答が低く、そして質量分析計の応答も低い。そのため、ＴＣＥＰを効果的かつ直接的に検出できる方法はまだない。そこで、本発明者らは、ＬＣ－ＭＳＭＳを抗体薬物複合体の製品中のＴＣＥＰ検出に用い、効率がよく、安定性や正確性が高い検出方法を開発した。

【課題を解決するための手段】

【0009】

本発明では、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法を採用して抗体薬物複合体の製品中のＴＣＥＰを検出し、サンプルがエルマン法により誘導化され、ＴＮＢの含有量を検出するのではなく、ＴＣＥＰ誘導化の生成物の含有量を検出する。

【発明の効果】

【0010】

本発明によれば、複雑なＡＤＣサンプルにおけるエルマン試薬（ＤＴＮＢ）と反応可能な物質からの干渉を排除することができ、サンプルの前処理が不要になり、特異性に優れる。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】図１は、線形フィッティング標準曲線である。

【図2】図２は、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法によるＴＣＥＰ含有量測定の検出結果である。

【発明を実施するための形態】

【0012】

本発明における第１の態様は、液体クロマトグラフ－タンデム質量分析計（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）によるＡＤＣサンプル中のＴＣＥＰ含有量の検出方法であって、被検物であるＡＤＣサンプルがエルマン反応により誘導化され、Ｃ１８クロマトカラムが採用され、サンプルの前処理が不要であることを特徴とする方法に関する。

【0013】

さらに、採用される移動相Ａは、ギ酸を含む水溶液、好ましくは０．１％のギ酸を含む水溶液である。

【0014】

さらに、採用される移動相Ｂは、ギ酸を含むアセトニトリル／メタノール溶液、好ましくは０．１％のギ酸を含むアセトニトリル／メタノール（８０／２０、ｖ／ｖ）溶液である。

【0015】

さらに、添加されるエルマン試薬の濃度は、約５～２０μｇ／ｍｌ、さらに好ましくは１０．０μｇ／ｍｌである。

【0016】

さらに、前記方法では、標準品溶液がＴＣＥＰを採用して調製される。

【0017】

本発明における第１の態様のいずれかの実施形態に記載の方法においては、標準品溶液がＴＣＥＰを採用して調製される。

【0018】

さらに、前記標準品溶液は、１．０μｇ／ｍｌのＴＣＥＰ溶液であることが好ましい。

【0019】

さらに、前記ＴＣＥＰ溶液の構成及び標準曲線シリーズ溶液の調製は、
１）ＥＰに計量した計量質量がｍで表される５～１０ｍｇのＴＣＥＰ・ＨＣｌ参照品を、適量のサンプル溶解液で溶解し、ＴＣＥＰ・ＨＣｌとＴＣＥＰとのモル比が１：１である関係からＴＣＥＰ濃度を算出した後、希釈液でＴＣＥＰ濃度が１．０μｇ／ｍｌになるまで段階的に希釈するＴＣＥＰ作動液の調製工程と、
２）１．０μｇ／ｍｌのＴＣＥＰ標準品溶液を希釈液で濃度がそれぞれ１６ｎｇ／ｍｌ、８ｎｇ／ｍｌ、４ｎｇ／ｍｌ、２ｎｇ／ｍｌ、１ｎｇ／ｍｌ、０．５ｎｇ／ｍｌのＴＣＥＰ標準品溶液に希釈する標準曲線シリーズ溶液の調製工程と、を含む。

【0020】

前記方法は、それぞれ１．０μｇ／ｍｌのＴＣＥＰ溶液を希釈液で希釈して調製された、濃度が１２ｎｇ／ｍｌ、３ｎｇ／ｍｌ、１ｎｇ／ｍｌであるＴＣＥＰ品質管理溶液を使用することをさらに含む。

【0021】

さらに、前記希釈液は５０％のメタノール水溶液である。

【0022】

本発明における第１の態様のいずれかの実施形態に記載の方法においては、前記液体クロマトグラフには、米国アジレント社のＡｇｉｌｅｎｔ １２００型液体クロマトグラフ、Ｔｅｌｅｄｙｎｅ Ｉｓｃｏ社の高圧分取液体クロマトグラフ、アジレントのＨＰＬＣ １２６０型高速液体クロマトグラフが含まれるが、これらに限定されない。

【0023】

本発明における第１の態様のいずれかの実施形態に記載の方法においては、前記タンデム質量分析計には、米国ＡＢ Ｓｃｉｅｘ社のＡＰＩ ４０００型タンデム質量分析計、島津のトリプル四重極型液体クロマトグラフ質量分析計、ＧＢＣのＯｐｔｉｍａｓｓ誘導結合プラズマ直交加速飛行時間型質量分析計が含まれるが、これらに限定されない。

【0024】

本発明における第１の態様のいずれかの実施形態に記載の方法においては、液体クロマトグラフには、Ｃ１８カラムが採用され、ＹＭＣ－Ｃ１８、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｅｘｔａｒｄ－Ｃ１８、資生堂のＰＡＫ ＣＲ－１８が含まれるが、これらに限定されない、

【0025】

本発明におけるいずれかの態様のいずれかの実施形態においては、いずれかの技術的特徴は、矛盾が生じない限り、他の実施形態における該当技術的特徴に適用する可能性がある。本発明で引用されるすべての文献の全内容が参照により本明細書に組み込まれるが、これらの文献に記載された意味が本発明と一致しない場合、本発明の記載に基準する。

【実施例】

【0026】

実施例１（液体クロマトグラフ－タンデム質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）法によるＴＣＥＰ含有量の測定）
１）作動液の調製

【0027】

ＴＣＥＰ作動液の調製：５～１０ｍｇのＴＣＥＰ・ＨＣｌ参照品をＥＰ管に精密に計量し、計量質量をｍで表し、適量のサンプル溶解液で溶解し、ＴＣＥＰ・ＨＣｌとＴＣＥＰとのモル比（１：１）からＴＣＥＰ濃度（ＴＣＥＰ濃度＝２５０．１９ｍ／２８６．６５）を算出した後、希釈液でＴＣＥＰ濃度が１．０μｇ／ｍｌになるまで段階的に希釈した。

【0028】

ＤＴＮＢ作動液の調製：５～１０ｍｇのＤＴＮＢをＥＰ管に精密に計量し、適量のサンプル溶解液で濃度１０ｍｇ／ｍｌまで溶解し、希釈液で１０μｇ／ｍｌまで段階的に希釈した。

【0029】

標準曲線シリーズ溶液の調製：表１に従って希釈液で１．０μｇ／ｍｌのＴＣＥＰ（Ａ１とする）を濃度がそれぞれ１６ｎｇ／ｍｌ、８ｎｇ／ｍｌ、４ｎｇ／ｍｌ、２ｎｇ／ｍｌ、１ｎｇ／ｍｌ、０．５ｎｇ／ｍｌであるＴＣＥＰ参照品溶液に希釈し、上記の様々な濃度の溶液をそれぞれ２００μｌ取り、それぞれに濃度１０μｇ／ｍｌのＤＴＮＢ作動液２０μｌを加え、ボルテックスで混合し、室温下暗所で２時間反応させた後、直接に検出を行った。

【0030】

【表1】

【0031】

品質管理溶液の調製：表２に従って希釈液で１．０μｇ／ｍｌのＴＣＥＰ（Ａ１’とする）を濃度がそれぞれ４００ｎｇ／ｍｌ（ＨＱＣ）、２００ｎｇ／ｍｌ（ＭＱＣ）、１００ｎｇ／ｍｌ（ＬＱＣ）であるＴＣＥＰ品質管理溶液に希釈した。上記の様々な濃度のＴＣＥＰ品質管理溶液をそれぞれ２００μｌずつ取り、２０μｌの濃度１０μｇ／ｍｌのＤＴＮＢ作動液を加え、ボルテックスで混合し、室温下暗所で１０ｍｉｎ反応させた後、直接に検出を行った。

【0032】

【表2】

【0033】

２）液体クロマトグラフ－タンデム質量分析計測定：
被測定サンプルの処理：移動相（０．１％のギ酸のアセトニトリル／メタノール（８０／２０、ｖ／ｖ）溶液）を希釈液とし、ＡＤＣサンプルの濃度を適切な濃度（サンプルにおけるＴＣＥＰの含有量を線形範囲にするべきであり、該範囲を超えた場合は、希釈倍数を増減して再度に検出を行う必要がある）に希釈した。サンプル希釈液を２００μｌ取り、２０μｌの濃度１０μｇ／ｍｌのＤＴＮＢ溶液を加え、ボルテックスで混合し、室温下暗所で２時間反応させた後、直接に検出を行った。

【0034】

移動相Ａの調製：水８００ｍｌを計量し、ギ酸８００μｌを加え、超音波で混合し、移動相Ａを得た。

【0035】

移動相Ｂの調製：アセトニトリル８００ｍｌ及びメタノール２００ｍｌを計量し、ギ酸１ｍｌを加え、超音波で混合し、移動相Ｂを得た。

【0036】

移動相Ａと移動相Ｂを使用して表３に示す濃度勾配に従って溶出を行った。

【0037】

【表3】

【0038】

３）データ処理と分析
評価基準：ｒ≧０．９８００、定量下限と定量上限との間にある濃度範囲が標準曲線の定量範囲であり、標準曲線濃度点の回収率が８５％～１１５％の範囲にあり、定量上限及び定量下限濃度点の回収率が８０％～１２０％の範囲にあった。

【0039】

品質管理の回収率が８５％～１１５％の範囲にあり、各濃度の品質管理サンプルの少なくとも５０％がこの範囲を満たし、また、同じ分析ロットで少なくとも４つの品質管理濃度点がこの要件を満たすことにした。

【0040】

具体的な結果は次の通りであった：

【0041】

【表4】

【0042】

線形フィッティング後に得られた標準曲線は次の通りであった。
ｙ＝１６０５８ｘ－４１６７４４、 Ｒ²＝０．９９３６
図１の結果によれば、Ｒ²＞０．９９、フィッティング性が極めて良かったことが分かった。

【0043】

実施例２（検出方法の結果と評価）
１）再現性
供試品１０００μｌにＴＣＥＰ標準品（濃度１．０μｇ／ｍｌ）８μｌを加えて得た溶液２００μｌを取り、それに１００μｇ／ｍｌ濃度のＤＴＮＢ溶液２０μｌを加え、ボルテックスで混合し、室温下暗所で２時間反応させた。６つの複製サンプルを並行して調製し、６つのサンプルの濃度結果を測定して評価した。具体的な結果を表５に示す。

【0044】

【表5】

【0045】

定量分析の分野では、再現性とは、同じ操作条件下で、同じ分析者が比較的短い間隔時間内で測定して得られた結果の精度を指す。許容される再現性の基準：メインピークの濃度ＲＳＤ≦１５．０％。本試験のＲＳＤ＝４．１％であったから、本方法は再現性が良かったことがわかった。

【0046】

２）正確性
適量の供試品を取り、高、中、低濃度とした標準品ＴＣＥＰの添加量及び標準品の終濃度については、品質管理溶液のＬＱＣ溶液（４ｎｇ／ｍｌ）、ＭＱＣ溶液（１６ｎｇ／ｍｌ）及びＨＱＣ溶液（５０ｎｇ／ｍｌ）であった。供試品及び標準品の添加量を表６に示し、正確性の結果を表７に示す。

【0047】

【表6】

【0048】

【表7】

【0049】

許容される正確性の基準：回収率が７０．０％～１３０．０％の範囲にあり、ＲＳＤ≦１５．０％であること。
本実験では、回収率が８２．９％～１０４．２％で、ＲＳＤがそれぞれ３．１％、２．５％、０．８％であった。この検出結果によれば、本方法が高精度、高選択性、高感度を有し、抗体薬物複合体サンプル中のＴＣＥＰ濃度の検出に適していたことが分かった。

【0050】

以上、本発明の好ましい実施例を通じて本発明の精神を詳述した。本発明の技術的本質に従って上記の実施例に対してなされた任意の修正や、同等の変更、修飾が本発明の保護範囲内にあるものとすること、を当業者なら理解するであろう。

【図1】

【図2】

【国際調査報告】