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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-03-19
(54)【発明の名称】前立腺癌の治療に使用されるアレナウイルス
(51)【国際特許分類】
C12N 15/40 20060101AFI20240312BHJP
C12N 15/12 20060101ALI20240312BHJP
C12N 15/55 20060101ALI20240312BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240312BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240312BHJP
C12N 7/01 20060101ALI20240312BHJP
A61K 35/76 20150101ALI20240312BHJP
A61K 39/00 20060101ALI20240312BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20240312BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240312BHJP
C12N 15/54 20060101ALN20240312BHJP
【ＦＩ】
C12N15/40 ZNA
C12N15/12
C12N15/55
C12N15/63 Z
C12N5/10
C12N7/01
A61K35/76
A61K39/00 H
A61P37/04
A61P35/00
C12N15/54
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023558455
(86)(22)【出願日】2022-03-22
(85)【翻訳文提出日】2023-11-15
(86)【国際出願番号】 EP2022057532
(87)【国際公開番号】W WO2022200373
(87)【国際公開日】2022-09-29
(31)【優先権主張番号】63/165,028
(32)【優先日】2021-03-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】518408774
【氏名又は名称】ホオキパ バイオテック ジーエムビーエイチ
(74)【代理人】
【識別番号】100097456
【弁理士】
【氏名又は名称】石川 徹
(72)【発明者】
【氏名】イゴール マトゥシャンスキー
(72)【発明者】
【氏名】アンディー ウォン
(72)【発明者】
【氏名】キアヌーシュ カッチャー
(72)【発明者】
【氏名】ヘニング ローターバッハ
(72)【発明者】
【氏名】クロース オルリンガー
(72)【発明者】
【氏名】サラ シュミット
(72)【発明者】
【氏名】フェリックス ステメセダー
【テーマコード（参考）】
4B065
4C085
4C087
【Ｆターム（参考）】
4B065AA90X
4B065AA95X
4B065AA95Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA01
4B065CA24
4B065CA27
4B065CA44
4C085AA02
4C085AA03
4C085BB01
4C085BB11
4C085CC08
4C085DD62
4C085EE01
4C085GG01
4C085GG02
4C087AA01
4C087AA02
4C087AA03
4C087BC83
4C087CA12
4C087MA66
4C087NA14
4C087ZB09
4C087ZB26
(57)【要約】
本出願は、前立腺癌関連抗原を発現するアレナウイルスに関する。特に、本明細書に記載するのは、前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードする異種オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有するように操作された修飾アレナウイルス粒子であり、前立腺癌関連抗原は、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、及び前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）からなる群から選択される。同様に本明細書に記載するのは、前立腺癌関連抗原もしくはその抗原断片をコードするアレナウイルスゲノムセグメントまたはＳセグメント、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ発現ベクター、かかるアレナウイルス粒子を含む医薬組成物、かかるアレナウイルス粒子を生成する方法及びかかるアレナウイルス粒子を使用した前立腺癌の治療方法、ならびにかかる使用のためのキットである。
【選択図】図１Ａ
【選択図】図１Ａ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
アレナウイルスＳセグメントであって、前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有するように操作された前記アレナウイルスＳセグメントであり、前記前立腺癌関連抗原は、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、及び前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）からなる群から選択される、前記アレナウイルスＳセグメント。
【請求項2】
アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＰＡＰまたはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス糖タンパク質（ＧＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される、請求項１に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項3】
アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＰＡＰまたはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される、請求項１に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項4】
アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＰＡＰまたはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス核タンパク質（ＮＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される、請求項１に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項5】
アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＰＡＰまたはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される、請求項１に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項6】
アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＰＳＡまたはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス糖タンパク質（ＧＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される、請求項１に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項7】
アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＰＳＡまたはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される、請求項１に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項8】
アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＰＳＡまたはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス核タンパク質（ＮＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される、請求項１に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項9】
アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＰＳＡまたはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される、請求項１に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項10】
アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＰＳＭＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス糖タンパク質（ＧＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される、請求項１に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項11】
アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＰＳＭＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される、請求項１に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項12】
アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＰＳＭＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス核タンパク質（ＮＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される、請求項１に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項13】
アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＰＳＭＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される、請求項１に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項14】
前記ＰＡＰまたはその抗原断片のアミノ酸配列が、配列番号１に対して少なくとも８０％または９０％の同一性を含む、請求項２～５のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項15】
前記ＰＳＡまたはその抗原断片のアミノ酸配列が、配列番号２に対して少なくとも８０％または９０％の同一性を含む、請求項６～９のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項16】
前記ＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列が、配列番号３または配列番号４に対して少なくとも８０％または９０％の同一性を含む、請求項１０～１３のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項17】
前記ＰＡＰまたはその抗原断片のアミノ酸配列が、配列番号１を含む、請求項２～５のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項18】
前記ＰＡＰまたはその抗原断片のアミノ酸配列が、配列番号１８を含む、請求項２～５のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項19】
前記ＰＳＡまたはその抗原断片のアミノ酸配列が、配列番号２を含む、請求項６～９のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項20】
前記ＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列が、配列番号３または配列番号４を含む、請求項１０～１３のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項21】
前記ＰＡＰまたはその抗原断片のアミノ酸配列が、配列番号１からなる、請求項２～５のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項22】
前記ＰＡＰまたはその抗原断片のアミノ酸配列が、配列番号１８からなる、請求項２～５のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項23】
前記ＰＳＡまたはその抗原断片のアミノ酸配列が、配列番号２からなる、請求項６～９のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項24】
前記ＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列が、配列番号３または配列番号４からなる、請求項１０～１３のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項25】
前記ＰＡＰまたはその抗原断片をコードするＯＲＦのヌクレオチド配列が、配列番号５に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％の同一性を含む、請求項２～５のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項26】
前記ＰＳＡまたはその抗原断片をコードするＯＲＦのヌクレオチド配列が、配列番号６に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％の同一性を含む、請求項６～９のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項27】
前記ＰＳＭＡの抗原断片をコードするＯＲＦのヌクレオチド配列が、配列番号７または配列番号８に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％の同一性を含む、請求項１０～１３のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項28】
前記ＰＡＰまたはその抗原断片をコードするＯＲＦのヌクレオチド配列が、配列番号５を含む、請求項２～５のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項29】
前記ＰＳＡまたはその抗原断片をコードするＯＲＦのヌクレオチド配列が、配列番号６を含む、請求項６～９のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項30】
前記ＰＳＭＡの抗原断片をコードするＯＲＦのヌクレオチド配列が、配列番号７または配列番号８を含む、請求項１０～１３のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項31】
前記ＰＡＰまたはその抗原断片をコードするＯＲＦのヌクレオチド配列が、配列番号５からなる、請求項２～５のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項32】
前記ＰＳＡまたはその抗原断片をコードするＯＲＦのヌクレオチド配列が、配列番号６からなる、請求項６～９のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項33】
前記ＰＳＭＡの抗原断片をコードするＯＲＦのヌクレオチド配列が、配列番号７または配列番号８からなる、請求項１０～１３のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント。
【請求項34】
請求項１～３３のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメントのｃＤＮＡ。
【請求項35】
請求項３４に記載のｃＤＮＡを含むＤＮＡ発現ベクター。
【請求項36】
請求項１～３３のいずれか１項に記載のアレナウイルスＳセグメント、請求項３４に記載のｃＤＮＡ、または請求項３５に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項37】
１つのアレナウイルスＬセグメント及び２つのアレナウイルスＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子であって、前記２つのアレナウイルスＳセグメントは、請求項１～３３のいずれか１項に記載のものであり、前記２つのアレナウイルスＳセグメントのうちの一方はＧＰを含み、他方はＮＰを含む、前記３セグメント化アレナウイルス粒子。
【請求項38】
請求項３７に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子であって、少なくとも４、５、６、７、８、９、または１０世代継代された後、前記前立腺癌関連抗原またはその抗原断片の安定した発現を有する、前記３セグメント化アレナウイルス粒子。
【請求項39】
１つのアレナウイルスＬセグメント及び２つのアレナウイルスＳセグメントを含む、３セグメント化アレナウイルス粒子であって、第一のアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に配列番号５からなる異種ＯＲＦ及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス核タンパク質（ＮＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作され、第二のアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に配列番号６からなる異種ＯＲＦ及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス糖タンパク質（ＧＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される、前記３セグメント化アレナウイルス粒子。
【請求項40】
１つのアレナウイルスＬセグメント及び２つのアレナウイルスＳセグメントを含む、３セグメント化アレナウイルス粒子であって、第一のアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に配列番号８からなる異種ＯＲＦ及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス核タンパク質（ＮＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作され、第二のアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に配列番号７からなる異種ＯＲＦ及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス糖タンパク質（ＧＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される、前記３セグメント化アレナウイルス粒子。
【請求項41】
１つのアレナウイルスＬセグメント及び２つのアレナウイルスＳセグメントを含む、３セグメント化アレナウイルス粒子であって、第一のアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に配列番号７からなる異種ＯＲＦ及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス核タンパク質（ＮＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作され、第二のアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に配列番号８からなる異種ＯＲＦ及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス糖タンパク質（ＧＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される、前記３セグメント化アレナウイルス粒子。
【請求項42】
リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）またはピチンデウイルス（ＰＩＣＶ）に由来する、請求項３７～４１のいずれか１項に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子。
【請求項43】
ＬＣＭＶに由来する、請求項４２に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子。
【請求項44】
前記ＬＣＭＶが、ＭＰ株、ＷＥ株、内因性ＬＣＭＶクローン１３糖タンパク質の代わりにＬＣＭＶ株ＷＥの糖タンパク質を発現するＬＣＭＶクローン１３、Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ株、またはＡｒｍｓｔｒｏｎｇクローン１３株である、請求項４３に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子。
【請求項45】
ＰＩＣＶに由来する、請求項４２に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子。
【請求項46】
前記ＰＩＣＶが、Ｍｕｎｃｈｉｑｕｅ ＣｏＡｎ４７６３分離株Ｐ１８、またはＰ２株である、請求項４５に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子。
【請求項47】
２つのＳセグメントを含む、３セグメント化アレナウイルス粒子であって、前記２つのＳセグメントのうちの一方は、配列番号１０を含み、前記２つのＳセグメントの他方は、配列番号１１を含む、前記３セグメント化アレナウイルス粒子。
【請求項48】
２つのＳセグメントを含む、３セグメント化アレナウイルス粒子であって、前記２つのＳセグメントのうちの一方は、配列番号１２を含み、前記２つのＳセグメントの他方は、配列番号１３を含む、前記３セグメント化アレナウイルス粒子。
【請求項49】
２つのＳセグメントを含む、３セグメント化アレナウイルス粒子であって、前記２つのＳセグメントのうちの一方は、配列番号１４を含み、前記２つのＳセグメントの他方は、配列番号１５を含む、前記３セグメント化アレナウイルス粒子。
【請求項50】
２つのＳセグメントを含む、３セグメント化アレナウイルス粒子であって、前記２つのＳセグメントのうちの一方は、配列番号１６を含み、前記２つのＳセグメントの他方は、配列番号１７を含む、前記３セグメント化アレナウイルス粒子。
【請求項51】
感染性及び複製可能である、請求項３７～５０のいずれか１項に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子。
【請求項52】
弱毒化されている、請求項３７～５０のいずれか１項に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子。
【請求項53】
３セグメント化アレナウイルス粒子を生成する方法であって、以下を含む、前記方法：（ｉ）２つのアレナウイルスＳセグメント及び１つのアレナウイルスＬセグメントの核酸を宿主細胞にトランスフェクトすること、ここで、前記２つのアレナウイルスＳセグメントは、請求項１～３３のいずれか１項に記載のものであること、
（ｉｉ）前記宿主細胞を、ウイルス形成に適した条件下で維持すること、及び
（ｉｉｉ）前記アレナウイルス粒子を含む細胞培養上清を採取すること。
【請求項54】
前記アレナウイルスＬセグメント及び前記２つのアレナウイルスＳセグメントの転写が、双方向発現カセットを使用して行われる、請求項５３に記載の方法。
【請求項55】
さらに、アレナウイルスポリメラーゼをコードする１つ以上の核酸を前記宿主細胞にトランスフェクトすることを含む、請求項５３または５４に記載の方法。
【請求項56】
前記アレナウイルスポリメラーゼが、前記アレナウイルスＬタンパク質である、請求項５５に記載の方法。
【請求項57】
さらに、前記アレナウイルスＮＰタンパク質をコードする１つ以上の核酸を前記宿主細胞にトランスフェクトすることを含む、請求項５３～５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項58】
前記核酸が、ｃＤＮＡにコードされる、請求項５３～５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項59】
前記核酸が、ＲＮＡにコードされる、請求項５３～５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項60】
前記アレナウイルスＬセグメント及び前記２つのアレナウイルスＳセグメントの転写は、各々、プロモーターの制御下にある、請求項５３～５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項61】
前記プロモーターが、以下からなる群から選択される、請求項５８に記載の方法：（ｉ）ＲＮＡポリメラーゼＩプロモーター、
（ｉｉ）ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーター、及び
（ｉｉｉ）Ｔ７プロモーター。
【請求項62】
請求項３７～５２のいずれか１項に記載のアレナウイルス粒子、及び医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項63】
前立腺癌の治療方法であって、それを必要とする対象に対して、請求項６２に記載の医薬組成物を治療有効量で投与することを含む、前記方法。
【請求項64】
前立腺癌の治療を必要とする対象におけるその治療方法であって、以下を含む、前記方法：（ｉ）前記対象に対して、第一の医薬組成物を投与すること、ここで、前記第一の医薬組成物は、請求項３７～５２のいずれか１項に記載の１つ以上のアレナウイルス粒子を含むこと、及び
（ｉｉ）前記対象に対して、一定期間後に、第二の医薬組成物を投与すること、ここで、前記第二の医薬組成物は、請求項３７～５２のいずれか１項に記載の１つ以上のアレナウイルス粒子を含むこと。
【請求項65】
さらに、（ｉ）及び（ｉｉ）を繰り返すことを含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項66】
前記第一及び前記第二の医薬組成物が、静脈内または腫瘍内に投与される、請求項６４または６５に記載の方法。
【請求項67】
前記第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、前記第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子と比較した場合、異なるアレナウイルス種に由来するが、同じ前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードするＯＲＦ（複数可）を有する、請求項６４～６６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項68】
前記第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＰＩＣＶに由来し、前記第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに由来する、請求項６７に記載の方法。
【請求項69】
前記第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子が、請求項４８に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子であり、前記第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子が、請求項４７に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子である、請求項６４～６８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項70】
前記第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子が、請求項４８及び請求項５０に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子であり、前記第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子が、請求項４７及び請求項４９に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子である、請求項６４～６８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項71】
第二の薬剤が、前記第一及び／または前記第二の医薬組成物と組み合わせて投与される、請求項６４～７０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項72】
前記第二の薬剤が、前立腺癌を治療するための薬剤である、請求項７１に記載の方法。
【請求項73】
前記第二の薬剤が、ドセタキセル、ミトキサントロン、カバジタキセル、及びペンブロリズマブからなる群から選択される、請求項７２に記載の方法。
【請求項74】
前記第二の薬剤が、エンザルタミド及びアビラテロンからなる群から選択される、請求項７２に記載の方法。
【請求項75】
前記第二の薬剤が、ステロイドとともに投与される、請求項７２～７４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項76】
前記ステロイドが、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである、請求項７５に記載の方法。
【請求項77】
前記第一及び／または前記第二の医薬組成物ならびに前記第二の薬剤が、同時に共投与される、請求項７１～７６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項78】
前記第一及び／または前記第二の医薬組成物が、前記第二の薬剤の投与の前に投与される、請求項７１～７６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項79】
前記第一及び／または前記第二の医薬組成物が、前記第二の薬剤の投与の後に投与される、請求項７１～７６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項80】
前記医薬組成物（複数可）と前記第二の薬剤の投与間隔が、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約１週、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約２週、約３週、約４週、約５週、約６週、約７週、約８週、約９週、約１０週、約１１週、約１２週、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、またはそれ以上である、請求項７８～７９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項81】
前記対象が、前立腺癌に罹患している、罹患しやすい、またはそのリスクを有する、請求項６３～８０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項82】
容器及び使用説明書を含むキットであって、前記容器は、請求項３７～５２のいずれか１項に記載のアレナウイルス粒子を含み、任意に、前記アレナウイルス粒子は、静脈内投与に適した医薬組成物に含まれる、前記キット。
【請求項83】
２つ以上の容器及び使用説明書を含むキットであって、前記容器のうちの１つは、請求項３７～５２のいずれか１項に記載のアレナウイルス粒子を含み、前記容器のうちの他のものは、第二の薬剤を含み、任意に、前記アレナウイルス粒子は、静脈内投与に適した医薬組成物に含まれる、前記キット。
【請求項84】
さらに、静脈内投与を行うのに適した装置を含む、請求項８２～８３のいずれか１項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年３月２３日に出願された米国第６３／１６５，０２８号の利益を主張する。当該出願は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年３月２３日に出願された米国第６３／１６５，０２８号の利益を主張する。当該出願は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【0002】
電子的に提出した配列表の参照
本出願は、配列表を含み、これは、作成日が２０２２年３月２１日であり、５６，７６７バイトのサイズを有するファイル名「１３１９４－０６２－２２８＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴＩＮＧ」のＡＳＣＩＩ形式の配列表として電子的に提出される。該提出された配列表は、本明細書の一部であり、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
本出願は、配列表を含み、これは、作成日が２０２２年３月２１日であり、５６，７６７バイトのサイズを有するファイル名「１３１９４－０６２－２２８＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴＩＮＧ」のＡＳＣＩＩ形式の配列表として電子的に提出される。該提出された配列表は、本明細書の一部であり、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【0003】
１．緒言
本出願は、前立腺癌関連抗原を発現するアレナウイルスに関する。特に、本明細書に記載するのは、前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードする異種オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有するように操作された修飾アレナウイルス粒子であり、該前立腺癌関連抗原は、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、及び前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）からなる群から選択される。同様に本明細書に記載するのは、前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードするアレナウイルスゲノムセグメント、例えば、Ｓセグメント、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ発現ベクター、かかるアレナウイルス粒子を含む医薬組成物、かかるアレナウイルス粒子を生成する方法及びかかるアレナウイルス粒子を使用した前立腺癌の治療方法、ならびにかかる使用のためのキットである。
本出願は、前立腺癌関連抗原を発現するアレナウイルスに関する。特に、本明細書に記載するのは、前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードする異種オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有するように操作された修飾アレナウイルス粒子であり、該前立腺癌関連抗原は、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、及び前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）からなる群から選択される。同様に本明細書に記載するのは、前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードするアレナウイルスゲノムセグメント、例えば、Ｓセグメント、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ発現ベクター、かかるアレナウイルス粒子を含む医薬組成物、かかるアレナウイルス粒子を生成する方法及びかかるアレナウイルス粒子を使用した前立腺癌の治療方法、ならびにかかる使用のためのキットである。
【背景技術】
【0004】
２．背景技術
２．１ 前立腺癌
前立腺癌は、アンドロゲン依存性のタイプのがんであり、世界中の男性に最もよくみられるがんの１つである。これは、米国（Ｕ．Ｓ．）において、皮膚癌に加えて男性が罹患する最も一般的ながんでもある。２０２０年、米国では、前立腺癌の新規患者が約１９１，９３０人存在し、前立腺癌による死者は約３３，３３０人であると推定されている。欧州連合（ＥＵ）では、前立腺癌は男性で最も頻繁に診断されるがんの第１位にランクされており、２０１２年の新規患者は約３４５，０００人と推定されている。前立腺癌は、同年のＥＵの新規がん全体の２４％を占めた。２０１５年のＥＵにおける新規前立腺癌患者の推定数は、約３６５，０００人であった。男性の約９人に１人が生涯のうちに前立腺癌と診断される。年齢は前立腺癌の主要危険因子であり、該疾患の６０％は６５歳以上の男性で診断され、４０歳未満の男性ではほとんど見られない。前立腺癌は肺癌に次いで米国男性のがんによる死亡原因の第２位であり、２０２０年にはがんによる死亡全体の１０％を占めている（Ｓｉｅｇｅｌ，Ｍｉｌｌｅｒ，ａｎｄ Ｊｅｍａｌ，２０２０，ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ，７０：７－３０）。ＥＵでは、２０２０年に合計７８，８００人の男性が前立腺癌で死亡すると予測されている（Ｃａｒｉｏｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ，３１：６５０－５８．）。
２．１ 前立腺癌
前立腺癌は、アンドロゲン依存性のタイプのがんであり、世界中の男性に最もよくみられるがんの１つである。これは、米国（Ｕ．Ｓ．）において、皮膚癌に加えて男性が罹患する最も一般的ながんでもある。２０２０年、米国では、前立腺癌の新規患者が約１９１，９３０人存在し、前立腺癌による死者は約３３，３３０人であると推定されている。欧州連合（ＥＵ）では、前立腺癌は男性で最も頻繁に診断されるがんの第１位にランクされており、２０１２年の新規患者は約３４５，０００人と推定されている。前立腺癌は、同年のＥＵの新規がん全体の２４％を占めた。２０１５年のＥＵにおける新規前立腺癌患者の推定数は、約３６５，０００人であった。男性の約９人に１人が生涯のうちに前立腺癌と診断される。年齢は前立腺癌の主要危険因子であり、該疾患の６０％は６５歳以上の男性で診断され、４０歳未満の男性ではほとんど見られない。前立腺癌は肺癌に次いで米国男性のがんによる死亡原因の第２位であり、２０２０年にはがんによる死亡全体の１０％を占めている（Ｓｉｅｇｅｌ，Ｍｉｌｌｅｒ，ａｎｄ Ｊｅｍａｌ，２０２０，ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ，７０：７－３０）。ＥＵでは、２０２０年に合計７８，８００人の男性が前立腺癌で死亡すると予測されている（Ｃａｒｉｏｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ，３１：６５０－５８．）。
【0005】
限局性前立腺癌の場合、手術、放射線、及び去勢手術または医学的精巣摘出術によって達成されるアンドロゲン枯渇療法（ＡＤＴ）が多くの場合の治療法である。非標準的な切除術、例えば、凍結療法、高密度超音波、及び光力学療法も使用されるが、長期的なデータはまだ不足している。リンパ節転移のある患者は、多くの場合、根治的放射線療法（ＲＴ）及びＡＤＴにより、前立腺全摘出術を行ってまたは行わずに治療される（Ｂｅｋｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ，３６：３２５１－５８、ＮＣＣＮ＿Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ（登録商標）２０１９，ＮＣＣＮ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）。限局性または局所性前立腺癌患者の５年生存率は、ほぼ１００％である。
【0006】
前立腺癌患者の約１５％は、診断時に転移性疾患を示す。さらに、臨床的に限局性疾患を有する患者の約２０％は局所療法に失敗し、治療不能の転移性疾患を発症する（Ｃｏｏｐｅｒｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｊ Ｕｒｏｌ，１７１：１３９３－４０１）。ＡＤＴは依然として転移性前立腺癌患者に対する標準治療であるが、通常は、初期反応後１～２年以内に進行が起こり、５年生存率は３１％である。去勢レベルのアンドロゲン（＜５０ｎｇ／ｍＬ）にもかかわらず進行した前立腺癌は、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）として知られている。転移性ＣＲＰＣ（ｍＣＲＰＣ）を発症した患者の推定生存期間は、２～３年である（Ｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ，３４：１４０２－１８）。
【0007】
転移性前立腺癌の治療選択肢は依然として限られている。抗アンドロゲン剤及び細胞傷害性化学療法は、最上位の治療選択肢のものである。生存率及び生活の質の利点が実証されている標準治療としては、アビラテロン酢酸エステル／プレドニゾン、エンザルタミド、ラジウム－２２３、及びドセタキセル／プレドニゾンが挙げられる。生活の質の利点は不明だが、生存利益を実証した治療法としては、シプリューセル－Ｔ及びカバジタキセル／プレドニゾンが挙げられる（Ｂａｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ，３２：３４３６－４８）。前立腺癌には利用可能な治療選択肢があるにもかかわらず、特に予後不良の患者または進行期の患者にとって、新たな治療に対する需要は依然として高い。例えば、ほぼすべての患者は、最終的には、様々なメカニズムにより、エンザルタミドを含めた新世代の抗アンドロゲン剤に対する耐性を発現する（Ｗａｔｓｏｎ，Ａｒｏｒａ，ａｎｄ Ｓａｗｙｅｒｓ，２０１５，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，１５：７０１－１１）。薬剤耐性を克服するための前立腺癌の新たな治療法の開発に対する関心が高まっている。本明細書に記載の組成物及び方法は、この必要性に対処し、関連する利点を提供する。
【0008】
２．２ 前立腺癌関連抗原
前立腺癌関連抗原は、ＰＡＰ、ＰＳＡ、及びＰＳＭＡを包含し、これらは、前立腺癌の免疫療法における標的抗原として最も一般的に使用されている（Ｋａｒａｎ，２０１３，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，５：９０７－１０）。
前立腺癌関連抗原は、ＰＡＰ、ＰＳＡ、及びＰＳＭＡを包含し、これらは、前立腺癌の免疫療法における標的抗原として最も一般的に使用されている（Ｋａｒａｎ，２０１３，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，５：９０７－１０）。
【0009】
ＰＡＰは、前立腺上皮細胞によって分泌される分子量１００ｋＤａの糖タンパク質である（Ｖｉｈｋｏ，Ｋｏｎｔｔｕｒｉ，ａｎｄ Ｋｏｒｈｏｎｅｎ，１９７８，Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ，２４：４６６－７０．）。２つの型のＰＡＰが存在する。細胞型（ｃＰＡＰ）は前立腺細胞で高度に発現され、分泌型（ｓＰＡＰ）は主に精液に放出される（Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ Ｕｒｏｌ，１６６：１９４３－５０．）。ＰＡＰは、主に良性及び悪性の前立腺組織に限定されており、他の組織では発現が低い。その発現は、グリーソンスコアが高い（６及び７）腫瘍で最も高いが、他の腺癌、例えば、胃、乳房及び結腸でも見られる（Ｋｉｅｓｓｌｉｎｇ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒｓ．２０１２；４：１９３－２１７．）。ＰＡＰ特異的免疫活性化は、シプリューセル－Ｔで治療されたＣＲＰＣ患者の生存と相関している（Ｓｈｅｉｋｈ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，６２：１３７－４７）。
【0010】
ＰＳＡは、カリクレイン関連ペプチダーゼであり、ほぼ例外なく前立腺上皮細胞によって分泌され、前立腺癌の診断及びモニタリングのための診断バイオマーカーである（Ｋｉｅｓｓｌｉｎｇ Ａ，ｅｔ ａｌ Ｃａｎｃｅｒｓ．２０１２；４：１９３－２１７）。ＰＳＡは、前立腺癌組織の大部分で検出され得る。ＰＳＡは、臨床開発の様々な段階で、アデノウイルス、ポックスウイルス、リステリア、プラスミドＤＮＡ、ペプチド、及び樹状細胞（ＤＣ）を含めた複数の免疫療法プラットフォームによって標的抗原として広く研究されており、そのほとんどは初期段階にある（Ｖｅｎｔｕｒｉｎｉ ａｎｄ Ｄｒａｋｅ，２０１９，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ Ｍｅｄ，９）。前臨床研究と臨床研究の両方で、免疫療法の標的としてのＰＳＡがＰＳＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の生成を誘導することが証明されている（Ｋａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，３：７３５－４６、Ｌｕｂａｒｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１５：７３７５－８０）。
【0011】
ＰＳＭＡは、前立腺組織内で発現される膜貫通糖タンパク質であり、その発現レベルは、アンドロゲンアブレーション後に上昇する（Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｕｒｏｌｏｇｙ，４８：３２６－３４）。ＰＳＭＡは、正常な前立腺細胞のマーカーであり、ほとんどの前立腺癌腫瘍、特に未分化転移性ＣＲＰＣで検出され得る。ＰＳＭＡは、他の正常組織に見出すことができるが、前立腺組織と比較して発現が１００～１０００倍低い（Ｋｉｅｓｓｌｉｎｇ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒｓ．２０１２；４：１９３－２１７）。抗原特異的なＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、ＰＳＭＡを標的とするがんワクチンで報告されている（Ｃｈｕｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，６１：２１６１－７０）。
【発明の概要】
【0012】
３．概要
３．１ アレナウイルスゲノムセグメント
１つの態様では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントである。いくつかの実施形態では、該アレナウイルスＳセグメントは、前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有するように操作される。いくつかの特定の実施形態では、該前立腺癌関連抗原は、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、及び前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）からなる群から選択される。
３．１ アレナウイルスゲノムセグメント
１つの態様では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントである。いくつかの実施形態では、該アレナウイルスＳセグメントは、前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有するように操作される。いくつかの特定の実施形態では、該前立腺癌関連抗原は、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、及び前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）からなる群から選択される。
【0013】
いくつかの実施形態では、該アレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＰＡＰまたはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス糖タンパク質（ＧＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、該アレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＰＡＰまたはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、該アレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＰＡＰまたはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス核タンパク質（ＮＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、該アレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＰＡＰまたはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。いくつかの特定の実施形態では、該ＰＡＰまたはその抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも８０％または９０％の同一性を含む。他の特定の実施形態では、該ＰＡＰまたはその抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号１を含む。さらに他の特定の実施形態では、該ＰＡＰまたはその抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号１からなる。他の特定の実施形態では、該ＰＡＰまたはその抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号１８を含む。さらに他の特定の実施形態では、該ＰＡＰまたはその抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号１８からなる。いくつかの特定の実施形態では、該ＰＡＰまたはその抗原断片をコードするＯＲＦのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％の同一性を含む。他の特定の実施形態では、該ＰＡＰまたはその抗原断片をコードするＯＲＦのヌクレオチド配列は、配列番号５を含む。さらに他の特定の実施形態では、該ＰＡＰまたはその抗原断片をコードするＯＲＦのヌクレオチド配列は、配列番号５からなる。
【0014】
いくつかの実施形態では、該アレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＰＳＡまたはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス糖タンパク質（ＧＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、該アレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＰＳＡまたはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、該アレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＰＳＡまたはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス核タンパク質（ＮＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、該アレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＰＳＡまたはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。いくつかの特定の実施形態では、該ＰＳＡまたはその抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも８０％または９０％の同一性を含む。他の特定の実施形態では、該ＰＳＡまたはその抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号２を含む。さらに他の特定の実施形態では、該ＰＳＡまたはその抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号２からなる。いくつかの特定の実施形態では、該ＰＳＡまたはその抗原断片をコードするＯＲＦのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％の同一性を含む。他の特定の実施形態では、該ＰＳＡまたはその抗原断片をコードするＯＲＦのヌクレオチド配列は、配列番号６を含む。さらに他の特定の実施形態では、該ＰＳＡまたはその抗原断片をコードするＯＲＦのヌクレオチド配列は、配列番号６からなる。
【0015】
いくつかの実施形態では、該アレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＰＳＭＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス糖タンパク質（ＧＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、該アレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＰＳＭＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、該アレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＰＳＭＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス核タンパク質（ＮＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、該アレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＰＳＭＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。いくつかの特定の実施形態では、該ＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または配列番号４に対して少なくとも８０％または９０％の同一性を含む。他の特定の実施形態では、該ＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または配列番号４を含む。さらに他の特定の実施形態では、該ＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または配列番号４からなる。いくつかの特定の実施形態では、該ＰＳＭＡの抗原断片をコードするＯＲＦのヌクレオチド配列は、配列番号７または配列番号８に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％の同一性を含む。他の特定の実施形態では、該ＰＳＭＡの抗原断片をコードするＯＲＦのヌクレオチド配列は、配列番号７または配列番号８を含む。さらに他の特定の実施形態では、該ＰＳＭＡの抗原断片をコードするＯＲＦのヌクレオチド配列は、配列番号７または配列番号８からなる。
【0016】
いくつかの実施形態では、本発明はさらに、上記に示すアレナウイルスＳセグメントをコードするｃＤＮＡを含む。他の実施形態では、本発明はさらに、該ｃＤＮＡを含むＤＮＡ発現ベクターを含む。他の実施形態では、本発明はさらに、上記に示すアレナウイルスＳセグメント、ｃＤＮＡまたは該ＤＮＡ発現ベクターを含む宿主細胞を含む。
【0017】
３．２ アレナウイルス粒子及びかかるアレナウイルス粒子の生成方法
別の態様では、本明細書に提供するのは、１つのアレナウイルスＬセグメント及び２つのアレナウイルスＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子である。いくつかの実施形態では、該２つのアレナウイルスＳセグメントは、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有するように操作される。いくつかの実施形態では、該２つのアレナウイルスＳセグメントの一方は、アレナウイルスＧＰをコードするＯＲＦを含み、他方は、該アレナウイルスＮＰをコードするＯＲＦを含む。
別の態様では、本明細書に提供するのは、１つのアレナウイルスＬセグメント及び２つのアレナウイルスＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子である。いくつかの実施形態では、該２つのアレナウイルスＳセグメントは、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有するように操作される。いくつかの実施形態では、該２つのアレナウイルスＳセグメントの一方は、アレナウイルスＧＰをコードするＯＲＦを含み、他方は、該アレナウイルスＮＰをコードするＯＲＦを含む。
【0018】
いくつかの実施形態では、該３セグメント化アレナウイルス粒子は、少なくとも４、５、６、７、８、９、または１０世代継代された後、前立腺癌関連抗原（複数可）またはその抗原断片（複数可）の安定した発現を有する。
【0019】
特定の実施形態では、３セグメント化アレナウイルス粒子は、１つのアレナウイルスＬセグメント及び２つのアレナウイルスＳセグメントを含み、第一のアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に配列番号５からなる異種ＯＲＦ及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス核タンパク質（ＮＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作され、第二のアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に配列番号６からなる異種ＯＲＦ及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス糖タンパク質（ＧＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される。
【0020】
特定の実施形態では、３セグメント化アレナウイルス粒子は、１つのアレナウイルスＬセグメント及び２つのアレナウイルスＳセグメントを含み、第一のアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に配列番号８からなる異種ＯＲＦ及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス核タンパク質（ＮＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作され、第二のアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に配列番号７からなる異種ＯＲＦ及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス糖タンパク質（ＧＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される。
【0021】
特定の実施形態では、３セグメント化アレナウイルス粒子は、１つのアレナウイルスＬセグメント及び２つのアレナウイルスＳセグメントを含み、第一のアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に配列番号７からなる異種ＯＲＦ及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス核タンパク質（ＮＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作され、第二のアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に配列番号８からなる異種ＯＲＦ及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にアレナウイルス糖タンパク質（ＧＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される。
【0022】
いくつかの実施形態では、該３セグメント化アレナウイルス粒子は、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）またはピチンデウイルス（ＰＩＣＶ）に由来する。いくつかの特定の実施形態では、該ＬＣＭＶは、ＭＰ株、ＷＥ株、Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ株、Ａｒｍｓｔｒｏｎｇクローン１３株、または内因性ＬＣＭＶクローン１３糖タンパク質の代わりにＬＣＭＶ株ＷＥの糖タンパク質を発現するＬＣＭＶクローン１３である。他の特定の実施形態では、該ＰＩＣＶは、Ｍｕｎｃｈｉｑｕｅ ＣｏＡｎ４７６３分離株Ｐ１８、またはＰ２株である。
【0023】
特定の実施形態では、３セグメント化アレナウイルス粒子は、２つのＳセグメントを含み、該２つのＳセグメントのうちの一方は、配列番号１０を含み、該２つのＳセグメントの他方は、配列番号１１を含む。
【0024】
特定の実施形態では、３セグメント化アレナウイルス粒子は、２つのＳセグメントを含み、該２つのＳセグメントのうちの一方は、配列番号１２を含み、該２つのＳセグメントの他方は、配列番号１３を含む。
【0025】
特定の実施形態では、３セグメント化アレナウイルス粒子は、２つのＳセグメントを含み、該２つのＳセグメントのうちの一方は、配列番号１４を含み、該２つのＳセグメントの他方は、配列番号１５を含む。
【0026】
特定の実施形態では、３セグメント化アレナウイルス粒子は、２つのＳセグメントを含み、該２つのＳセグメントのうちの一方は、配列番号１６を含み、該２つのＳセグメントの他方は、配列番号１７を含む。
【0027】
いくつかの実施形態では、該３セグメント化アレナウイルス粒子は、感染性でありかつ複製可能である。他の実施形態では、該３セグメント化アレナウイルス粒子は弱毒化される。
【0028】
別の態様では、本明細書に提供するのは、３セグメント化アレナウイルス粒子を生成する方法であり、該方法は、以下を含む：（ｉ）２つのアレナウイルスＳセグメント及び１つのアレナウイルスＬセグメントの核酸を宿主細胞にトランスフェクトすること、ここで、該２つのアレナウイルスＳセグメントは、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有するように操作されるものであること、（ｉｉ）該宿主細胞を、ウイルス形成に適した条件下で維持すること、及び
【0029】
（ｉｉｉ）該アレナウイルス粒子を含む細胞培養上清を採取すること。いくつかの特定の実施形態では、該核酸は、ｃＤＮＡである。他の特定の実施形態では、該核酸は、ＲＮＡである。
【0030】
いくつかの実施形態では、該アレナウイルスＬセグメント及び該２つのアレナウイルスＳセグメントの転写は、双方向発現カセットを使用して行われる。いくつかの実施形態では、該方法はさらに、アレナウイルスポリメラーゼをコードする１つ以上の核酸を宿主細胞にトランスフェクトすることを含む。いくつかの特定の実施形態では、該アレナウイルスポリメラーゼは、アレナウイルスＬタンパク質である。他の実施形態では、該方法はさらに、アレナウイルスＮＰタンパク質をコードする１つ以上の核酸を宿主細胞にトランスフェクトすることを含む。いくつかの実施形態では、該アレナウイルスＬセグメント及び該２つのアレナウイルスＳセグメントの転写は、各々、プロモーターの制御下にある。いくつかの特定の実施形態では、該プロモーターは、以下からなる群から選択される：（ｉ）ＲＮＡポリメラーゼＩプロモーター、（ｉｉ）ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーター、及び（ｉｉｉ）Ｔ７プロモーター。
【0031】
３．３ 治療方法及びそのキット
別の態様では、本明細書に提供するのは、上記に示すアレナウイルス粒子、及び医薬的に許容される担体を含む医薬組成物である。
別の態様では、本明細書に提供するのは、上記に示すアレナウイルス粒子、及び医薬的に許容される担体を含む医薬組成物である。
【0032】
別の態様では、本明細書に提供するのは、前立腺癌の治療方法であり、これは、それを必要とする対象に対して、該医薬組成物を治療有効量で投与することを含む。
【0033】
別の態様では、本明細書に提供するのは、前立腺癌の治療を必要とする対象におけるその治療方法であり、該方法は、（ｉ）該対象に対して、第一の医薬組成物を投与すること、ここで、該第一の医薬組成物は、１つ以上の上記に示すアレナウイルス粒子を含むこと、及び（ｉｉ）該対象に対して、一定期間後に、第二の医薬組成物を投与すること、ここで、該第二の医薬組成物は、１つ以上の上記に示すアレナウイルス粒子を含むこと、を含む。いくつかの実施形態では、該方法はさらに、（ｉ）と（ｉｉ）を繰り返すことを含む。いくつかの実施形態では、該第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子と比較した場合、異なるアレナウイルス種に由来するが、同じ前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードするＯＲＦ（複数可）を有する。いくつかの特定の実施形態では、該第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＰＩＣＶに由来し、該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに由来する。他の特定の実施形態では、該第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに由来し、該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＰＩＣＶに由来する。
【0034】
いくつかの実施形態では、該第一及び該第二の医薬組成物は、静脈内投与される。他の実施形態では、該第一及び該第二の医薬組成物は、腫瘍内投与される。さらに他の実施形態では、該第一の医薬組成物は、腫瘍内投与され、該第二の医薬組成物は、静脈内投与される。さらに他の実施形態では、該第一の医薬組成物は、静脈内投与され、該第二の医薬組成物は、腫瘍内投与される。
【0035】
いくつかの実施形態では、第二の薬剤が、該第一及び／または該第二の医薬組成物と組み合わせて投与される。いくつかの特定の実施形態では、該第二の薬剤は、前立腺癌を治療するための薬剤である。ある特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ドセタキセル、ミトキサントロン、カバジタキセル、及びペンブロリズマブからなる群から選択される。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、エンザルタミド及びアビラテロンからなる群から選択される。さらに他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ステロイドとともに投与される。１つの実施形態では、該ステロイドは、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンを含む。
【0036】
いくつかの実施形態では、該医薬組成物及び該第二の薬剤は、同時に共投与される。他の実施形態では、該医薬組成物（複数可）は、該第二の薬剤の投与前に投与される。他の実施形態では、該医薬組成物（複数可）は、該第二の薬剤の投与後に投与される。さらに他の実施形態では、該第二の薬剤は、該第一の医薬組成物の後であるが、該第二の医薬組成物の前に投与される。いくつかの実施形態では、該医薬組成物（複数可）と該第二の薬剤の投与間隔は、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約１週、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約２週、約３週、約４週、約５週、約６週、約７週、約８週、約９週、約１０週、約１１週、約１２週、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、またはそれ以上である。
【0037】
いくつかの実施形態では、該対象は、前立腺癌に罹患している、罹患しやすい、またはそのリスクを有する。
【0038】
別の態様では、本明細書に提供するのは、容器及び使用説明書を含むキットであり、該容器は上記に示すアレナウイルス粒子を含む。いくつかの実施形態では、該アレナウイルス粒子は、静脈内投与に適した医薬組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、該キットはさらに、静脈内投与を行うのに適した装置を含む。
【0039】
別の態様では、本明細書に提供するのは、２つ以上の容器及び使用説明書を含むキットであり、該容器のうちの１つは、上記に示すアレナウイルス粒子を含み、該容器のうちの他のものは、第二の薬剤を含む。いくつかの実施形態では、該アレナウイルス粒子は、静脈内投与に適した医薬組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、該キットはさらに、静脈内投与を行うのに適した装置を含む。
【表1】
【図面の簡単な説明】
【0040】
４．図面の簡単な説明
【図1A】例示的な３セグメント化アレナウイルス粒子の遺伝子組成の概略図。ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰまたはａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰの遺伝子組成の概略図。
【図1B】例示的な３セグメント化アレナウイルス粒子の遺伝子組成の概略図。ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰの遺伝子組成の概略図。
【図1C】例示的な３セグメント化アレナウイルス粒子の遺伝子組成の概略図。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰの遺伝子組成の概略図。
【0041】
【図2A】ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰのＰＭＶＳ（１２）の導入遺伝子安定性。ＰＡＰ及びＰＳＡ導入遺伝子の安定性をＰＣＲにより、示された継代レベル（Ｐ１、Ｐ５、またはＰ１０）で分析した。
【図2B】ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰのＰＭＶＳ（１２）の導入遺伝子安定性。示された継代でのＰＭＶＳ（１２）のＰＡＰ及びＰＳＡ導入遺伝子の発現をウェスタンブロット分析によって確認した。親ＰＭＶＳストックの産生及び継代の生成に使用したＨＥＫ／２９３ＶＲＣ細胞の全細胞溶解物を、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＬＣＭＶ ＮＰ、及びＭＡＰＫ特異的抗体を使用したウェスタンブロットで分析した。未感染のＨＥＫ／２９３ＶＲＣ細胞の細胞溶解物（対照、Ｃ）またはＲ＆Ｄベクター調製物ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＡＰ－ＧＰ（陽性対照１、ＰＣ１）もしくはＲ＆ＤストックａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＡ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ（陽性対照２、ＰＣ２）に感染した細胞からの細胞溶解物を対照として使用した。タンパク質サイズ（ｋＤａ）は、ｐｅｑＧｏｌｄタンパク質標準Ｖ、ＰｅｑＬａｂ（Ｍ）を指す。ＰＡＰ：１１６２ｂｐ＝３８７アミノ酸、ＰＳＡ：７８６ｂｐ＝２６２アミノ酸。
【0042】
【図3A】ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰのＰＭＶＳ（０５）ｃｌ３２／０５／０５の導入遺伝子安定性。ＰＭＶＳ（０５）ｃｌ３２／０５／０５のＰＡＰ及びＰＳＡ導入遺伝子の安定性をＰＣＲにより、示された継代レベルで分析した。
【図3B】ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰのＰＭＶＳ（０５）ｃｌ３２／０５／０５の導入遺伝子安定性。示された継代レベルでのＰＭＶＳ（０５）ｃｌ３２／０５／０５の導入遺伝子の発現をウェスタンブロット分析によって確認した。ＰＡＰ：１１６２ｂｐ＝３８７アミノ酸、ＰＳＡ：７８６ｂｐ＝２６２アミノ酸。未感染のＨＥＫ／２９３ＶＲＣ細胞の細胞溶解物（陰性対照、－ｃ）またはＲ＆Ｄベクター調製物ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰに感染した細胞からの細胞溶解物を対照（陽性対照、＋ｃ）として使用した。
【0043】
【図4】示された継代での両Ｓセグメントにおける全長ＰＳＭＡをコードするａｒｔＬＣＭＶのＰＣＲによって調べた導入遺伝子安定性。ＮＰセグメント上でコードされる導入遺伝子の予想サイズは、２５３２ｂｐであり、ＧＰセグメント上でコードされる導入遺伝子の予想サイズは、２５１８ｂｐである。
【0044】
【図5A】ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰのＰＭＶＳ（０９）Ｃｌ．９／７／２の導入遺伝子安定性。ＰＭＶＳ（０９）Ｃｌ．９／７／２のＰＳＭＡ１及びＰＳＭＡ２導入遺伝子の安定性をＰＣＲにより、示された継代レベルで分析した。
【図5B】ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰのＰＭＶＳ（０９）Ｃｌ．９／７／２の導入遺伝子安定性。示された継代でのＰＳＭＡ１及びＰＳＭＡ２導入遺伝子の発現をウェスタンブロット分析によって分析した。強力で特異的な抗体が利用できないため、ＰＳＭＡ２タンパク質発現のシグナル検出が妨げられた。アスタリスク（＊）は、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１／２陽性対照で見出された弱いシグナルのバンドを強調表示している。未感染のＨＥＫ／２９３ＶＲＣ細胞の細胞溶解物（陰性対照、－ｃ）またはＲ＆Ｄベクター調製物ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ（ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１／２）もしくはａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ－ＮＰ／ＰＳＭＡ－ＧＰ（ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ、全長ＰＳＭＡをコードする）に感染した細胞からの細胞溶解物を対照として使用した。
【0045】
【図6A】ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰのＰＭＶＳ ２６の導入遺伝子安定性。ＮＰ及びＧＰセグメント上でコードされる導入遺伝子の安定性をＰＣＲにより、示された継代レベルで分析した。
【図6B】ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰのＰＭＶＳ ２６の導入遺伝子安定性。示された継代での導入遺伝子の発現をウェスタンブロット分析によって確認した。
【0046】
【図7A】マウスにおける、前立腺癌関連抗原をコードする異なるアレナウイルス粒子を投与した後のＣＤ８Ｔ細胞応答の誘導。マウスにおける、示されたベクターの単回投与の７日後でのＰＳＡ及びＰＡＰに対するＣＤ８Ｔ細胞（すなわち、ＩＦＮ－γ＋）応答。ペプチド刺激は、それぞれ、ＰＡＰ及びＰＳＡの重複ペプチドライブラリで行った。ＩＦＮ－γ陽性ＣＤ３＋Ｂ２２０－ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージは、算術平均±標準偏差として、個々のマウスについて示されている。
【図7B】マウスにおける、前立腺癌関連抗原をコードする異なるアレナウイルス粒子を投与した後のＣＤ８Ｔ細胞応答の誘導。マウスにおける、示されたベクターの単回投与の７日後でのＰＳＭＡ及びＰＳＭＡのサブドメインに対するＣＤ８Ｔ細胞（すなわち、ＩＦＮ－γ＋）応答。ペプチド刺激は、ＰＳＭＡの重複ペプチドライブラリ、または単一ペプチドＰＳＭＡ７６－９０（ＰＳＭＡ１）またはＰＳＭＡ６３４－６４２（ＰＳＭＡ２）で行った。ＩＦＮ－γ陽性ＣＤ３＋Ｂ２２０－ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージは、算術平均±標準偏差として、個々のマウスについて示されている。
【図7C】マウスにおける、前立腺癌関連抗原をコードする異なるアレナウイルス粒子を投与した後のＣＤ８Ｔ細胞応答の誘導。マウスにおける、示されたベクターの組み合わせの単回投与の７日後でのＰＡＰ及びＰＳＡに対するＣＤ８Ｔ細胞（すなわち、ＩＦＮ－γ＋）応答。ペプチド刺激は、ＰＡＰまたはＰＳＡの重複ペプチドライブラリで行った。ＩＦＮ－γ陽性ＣＤ３＋Ｂ２２０－ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージは、算術平均±標準偏差として、個々のマウスについて示されている。
【図7D】マウスにおける、前立腺癌関連抗原をコードする異なるアレナウイルス粒子を投与した後のＣＤ８Ｔ細胞応答の誘導。マウスにおける、示されたベクターの組み合わせの単回投与の７日後でのＰＳＭＡ及びＰＳＭＡのサブドメインに対するＣＤ８Ｔ細胞（すなわち、ＩＦＮ－γ＋）応答。ペプチド刺激は、ＰＳＭＡの重複ペプチドライブラリ、または単一ペプチドＰＳＭＡ７６－９０（ＰＳＭＡ１）またはＰＳＭＡ６３４－６４２（ＰＳＭＡ２）で行った。ＩＦＮ－γ陽性ＣＤ３＋Ｂ２２０－ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージは、算術平均±標準偏差として、個々のマウスについて示されている。
【図7E】マウスにおける、前立腺癌関連抗原をコードする異なるアレナウイルス粒子を投与した後のＣＤ８Ｔ細胞応答の誘導。マウスにおける、示されたベクターまたはベクターの組み合わせの単回投与の７日後でのＬＣＭＶ ＮＰ（左のパネル）及びＰＩＣＶ ＮＰ（右のパネル）に対するＣＤ８Ｔ細胞（すなわち、ＩＦＮ－γ＋）応答。ペプチド刺激は、それぞれ、ＬＣＭＶ ＮＰ及びＰＩＣＶ ＮＰの重複ペプチドライブラリで行った。ＩＦＮ－γ陽性ＣＤ３＋Ｂ２２０－ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージは、算術平均±標準偏差として、個々のマウスについて示されている。
【0047】
【図8A】同種または異種交互ベクター投与後のａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰの免疫原性。マウスにおける、示されたベクターの初回投与の２６日後及び連続投与の５日後でのＰＡＰに対するＣＤ８Ｔ細胞（すなわち、ＩＦＮ－γ＋）応答。ペプチド刺激は、ＰＡＰの重複ペプチドライブラリで行った。ＩＦＮ－γ陽性ＣＤ３＋Ｂ２２０－ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージは、算術平均±標準偏差として、個々のマウスについて示されている。
【図8B】同種または異種交互ベクター投与後のａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰの免疫原性。マウスにおける、示されたベクターの初回投与の２６日後及び連続投与の５日後でのＰＳＡに対するＣＤ８Ｔ細胞（すなわち、ＩＦＮ－γ＋）応答。ペプチド刺激は、ＰＳＡの重複ペプチドライブラリで行った。ＩＦＮ－γ陽性ＣＤ３＋Ｂ２２０－ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージは、算術平均±標準偏差として、個々のマウスについて示されている。
【図8C】同種または異種交互ベクター投与後のａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰの免疫原性。マウスにおける、示されたベクターの初回投与の２６日後及び連続投与の５日後でのＬＣＭＶ ＮＰ（左のパネル）及びＰＩＣＶ ＮＰ（右のパネル）に対するＣＤ８Ｔ細胞（すなわち、ＩＦＮ－γ＋）応答。ペプチド刺激は、それぞれ、ＬＣＭＶ ＮＰ及びＰＩＣＶ ＮＰの重複ペプチドライブラリで行った。ＩＦＮ－γ陽性ＣＤ３＋Ｂ２２０－ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージは、算術平均±標準偏差として、個々のマウスについて示されている。
【0048】
【図9A】同種または異種交互ベクター投与後のａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰの免疫原性。マウスにおける、示されたベクターの初回投与の２６日後及び連続投与の５日後でのＰＳＭＡ及びＰＳＭＡのサブドメインに対するＣＤ８Ｔ細胞（すなわち、ＩＦＮ－γ＋）応答。ペプチド刺激は、ＰＳＭＡの重複ペプチドライブラリ、または単一ペプチドＰＳＭＡ７６－９０（ＰＳＭＡ１）またはＰＳＭＡ６３４－６４２（ＰＳＭＡ２）で行った。ＩＦＮ－γ陽性ＣＤ３＋Ｂ２２０－ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージは、算術平均±標準偏差として、個々のマウスについて示されている。
【図9B】同種または異種交互ベクター投与後のａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰの免疫原性。マウスにおける、示されたベクターの初回投与の２６日後及び連続投与の５日後でのＬＣＭＶ ＮＰ（左のパネル）及びＰＩＣＶ ＮＰ（右のパネル）に対するＣＤ８Ｔ細胞（すなわち、ＩＦＮ－γ＋）応答。ペプチド刺激は、それぞれ、ＬＣＭＶ ＮＰ及びＰＩＣＶ ＮＰの重複ペプチドライブラリで行った。ＩＦＮ－γ陽性ＣＤ３＋Ｂ２２０－ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージは、算術平均±標準偏差として、個々のマウスについて示されている。
【0049】
【図10A】同種または異種交互ベクター投与後のａｒｔＬＣＭＶ及びａｒｔＰＩＣＶベクターの組み合わせの免疫原性。マウスにおける、示されたベクター混合物の初回投与の２６日後及び連続投与の５日後でのＰＡＰに対するＣＤ８Ｔ細胞（すなわち、ＩＦＮ－γ＋）応答。ペプチド刺激は、ＰＡＰの重複ペプチドライブラリで行った。ＩＦＮ－γ陽性ＣＤ３＋Ｂ２２０－ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージは、算術平均±標準偏差として、個々のマウスについて示されている。
【図10B】同種または異種交互ベクター投与後のａｒｔＬＣＭＶ及びａｒｔＰＩＣＶベクターの組み合わせの免疫原性。マウスにおける、示されたベクター混合物の初回投与の２６日後及び連続投与の５日後でのＰＳＡに対するＣＤ８Ｔ細胞（すなわち、ＩＦＮ－γ＋）応答。ペプチド刺激は、ＰＳＡの重複ペプチドライブラリで行った。ＩＦＮ－γ陽性ＣＤ３＋Ｂ２２０－ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージは、算術平均±標準偏差として、個々のマウスについて示されている。
【図10C】同種または異種交互ベクター投与後のａｒｔＬＣＭＶ及びａｒｔＰＩＣＶベクターの組み合わせの免疫原性。マウスにおける、示されたベクター混合物の初回投与の２６日後及び連続投与の５日後でのＰＳＭＡ及びＰＳＭＡのサブドメインに対するＣＤ８Ｔ細胞（すなわち、ＩＦＮ－γ＋）応答。ペプチド刺激は、ＰＳＭＡの重複ペプチドライブラリ、または単一ペプチドＰＳＭＡ７６－９０（ＰＳＭＡ１）またはＰＳＭＡ６３４－６４２（ＰＳＭＡ２）で行った。ＩＦＮ－γ陽性ＣＤ３＋Ｂ２２０－ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージは、算術平均±標準偏差として、個々のマウスについて示されている。
【図10D】同種または異種交互ベクター投与後のａｒｔＬＣＭＶ及びａｒｔＰＩＣＶベクターの組み合わせの免疫原性。マウスにおける、示されたベクター混合物の初回投与の２６日後及び連続投与の５日後でのＬＣＭＶ ＮＰ（左のパネル）及びＰＩＣＶ ＮＰ（右のパネル）に対するＣＤ８Ｔ細胞（すなわち、ＩＦＮ－γ＋）応答。ペプチド刺激は、それぞれ、ＬＣＭＶ ＮＰ及びＰＩＣＶ ＮＰの重複ペプチドライブラリで行った。ＩＦＮ－γ陽性ＣＤ３＋Ｂ２２０－ＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージは、算術平均±標準偏差として、個々のマウスについて示されている。
【0050】
【図11】用量漸増及び用量拡大の試験デザイン。省略語：Ａｌｔ．＝交互、Ａｐｐｒｏｘ＝約、ａｒｔ＝人工、ＣＲＰＣ＝去勢抵抗性前立腺癌、ＧＰ＝糖タンパク質、ＩＶ＝静脈内（に）、ＬＣＭＶ＝リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、ＮＰ＝核タンパク質、ＰＡＰ＝前立腺酸性ホスファターゼ、ＰＩＣＶ＝ピチンデウイルス、ＰＳＡ＝前立腺特異抗原、ＰＳＭＡ＝前立腺特異的膜抗原、ＲＰ２Ｄ＝第ＩＩ相推奨用量、Ｓｅｑ．＝連続。
【0051】
【図12】試験デザインスキーム。省略語：ＤＬ１／２／３＝用量レベル１／２／３、ｍＣＲＰＣ＝転移性去勢抵抗性前立腺癌、Ｐｈ２＝第２相、ＲＰ２Ｄ＝第２相推奨用量。
【発明を実施するための形態】
【0052】
５．詳細な説明
本明細書に提供するのは、修飾アレナウイルスゲノムセグメントであり、これは、セクション５．１に記載の通り、前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。同様に本明細書に提供するのは、各々が前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦを有するアレナウイルスゲノムセグメントを含む、セクション５．３に記載の修飾３セグメント化アレナウイルス粒子、及びセクション５．４に記載のかかるアレナウイルス粒子を生成する方法である。同様に本明細書に記載するのは、セクション５．２に記載のｃＤＮＡ、ＤＮＡ発現ベクター、及び宿主細胞である。さらに本明細書に提供するのは、セクション５．５に記載のかかるアレナウイルス粒子を含む医薬組成物である。かかるアレナウイルス粒子を使用して前立腺癌を治療する方法は、セクション５．６に記載されている。最後に、様々なアッセイ、例えば、本明細書に記載のアレナウイルス粒子の修飾アレナウイルスゲノムセグメントを検出するためのもの、及び処置された動物における免疫応答を測定するためのものは、セクション５．７に記載されている。
本明細書に提供するのは、修飾アレナウイルスゲノムセグメントであり、これは、セクション５．１に記載の通り、前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。同様に本明細書に提供するのは、各々が前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦを有するアレナウイルスゲノムセグメントを含む、セクション５．３に記載の修飾３セグメント化アレナウイルス粒子、及びセクション５．４に記載のかかるアレナウイルス粒子を生成する方法である。同様に本明細書に記載するのは、セクション５．２に記載のｃＤＮＡ、ＤＮＡ発現ベクター、及び宿主細胞である。さらに本明細書に提供するのは、セクション５．５に記載のかかるアレナウイルス粒子を含む医薬組成物である。かかるアレナウイルス粒子を使用して前立腺癌を治療する方法は、セクション５．６に記載されている。最後に、様々なアッセイ、例えば、本明細書に記載のアレナウイルス粒子の修飾アレナウイルスゲノムセグメントを検出するためのもの、及び処置された動物における免疫応答を測定するためのものは、セクション５．７に記載されている。
【0053】
５．１ アレナウイルスゲノムセグメント
本明細書に提供するのは、前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦを有する新規アレナウイルスゲノムセグメントである。かかる新規操作されたアレナウイルスセグメントは、アレナウイルスタンパク質、例えば、ＧＰ、ＮＰ、ＺまたはＬタンパク質をコードするアレナウイルスＯＲＦに加えて、前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦを有する。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＰＡＰをコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＰＳＡをコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＰＳＭＡをコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ムチン－１をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＮＹ－ＥＳＯ－１をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＭＡＧＥ－Ａをコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＡＫＡＰ－４をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。
本明細書に提供するのは、前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦを有する新規アレナウイルスゲノムセグメントである。かかる新規操作されたアレナウイルスセグメントは、アレナウイルスタンパク質、例えば、ＧＰ、ＮＰ、ＺまたはＬタンパク質をコードするアレナウイルスＯＲＦに加えて、前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦを有する。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＰＡＰをコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＰＳＡをコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＰＳＭＡをコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ムチン－１をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＮＹ－ＥＳＯ－１をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＭＡＧＥ－Ａをコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＡＫＡＰ－４をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。
【0054】
本明細書で使用される、「抗原断片」という用語は、該抗原断片が由来する抗原に対する免疫応答を誘発するのに十分な連続アミノ酸配列もしくは立体構造的免疫活性領域を含むか、またはそれに対応する抗原の一部を指すことを意図している。処置された動物におけるかかる免疫応答は、該断片が由来する元の抗原によって誘発される免疫応答と同じである可能性または類似する可能性がある。抗原断片によって誘発される免疫応答としては、元の抗原に特異的な検出可能なＴ細胞応答が挙げられる。かかる抗原断片は、少なくとも５００アミノ酸、少なくとも４９０アミノ酸、少なくとも４８０アミノ酸、少なくとも４７０アミノ酸、少なくとも４６０アミノ酸、少なくとも４５０アミノ酸、少なくとも４４０アミノ酸、少なくとも４３０アミノ酸、少なくとも４２０アミノ酸、少なくとも４１０アミノ酸、少なくとも４００アミノ酸、少なくとも３９０アミノ酸、少なくとも３８０アミノ酸、少なくとも３７０アミノ酸、少なくとも３６０アミノ酸、少なくとも３５０アミノ酸、少なくとも３４０アミノ酸、少なくとも３３０アミノ酸、少なくとも３２０アミノ酸、少なくとも３１０アミノ酸、少なくとも３００アミノ酸、少なくとも２９０アミノ酸、少なくとも２８０アミノ酸、少なくとも２７０アミノ酸、少なくとも２６０アミノ酸、少なくとも２５０アミノ酸、少なくとも２４０アミノ酸、少なくとも２３０アミノ酸、少なくとも２２０アミノ酸、少なくとも２１０アミノ酸、少なくとも２００アミノ酸、少なくとも１９０アミノ酸、少なくとも１８０アミノ酸、少なくとも１７０アミノ酸、少なくとも１６０アミノ酸、少なくとも１５０アミノ酸、少なくとも１００アミノ酸、少なくとも５０アミノ酸長であるが、該断片が由来する元の抗原の全長よりも短いアミノ酸配列を含む。
【0055】
本明細書に提供するのは、前立腺癌関連抗原の抗原断片をコードする異種ＯＲＦを有する新規アレナウイルスゲノムセグメントである。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＰＡＰの抗原断片をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＰＳＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＰＳＭＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＰＳＣＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ムチン－１の抗原断片をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＮＹ－ＥＳＯ－１の抗原断片をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＭＡＧＥ－Ａの抗原断片をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、アレナウイルスＳセグメントであり、該アレナウイルスＳセグメントは、ＡＫＡＰ－４の抗原断片をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている。
【0056】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、各々がＰＳＭＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されている２つのアレナウイルスＳセグメントであり、該ＰＳＭＡの２つの抗原断片は、該ＰＳＭＡのアミノ酸配列の約半分を含む。いくつかの実施形態では、かかる断片は、該ＯＲＦのヌクレオチド配列に天然に存在するＡＴＧコドンを利用することによって生成され得る。他の実施形態では、かかる断片は、ＡＴＧをＰＳＭＡのヌクレオチド配列に人工的に導入することによって生成され得る。
【0057】
具体的には、いくつかの特定の実施形態では、ＰＳＭＡの分割は、天然に存在するＡＴＧの直前に生じ、ＰＳＭＡの後半は、天然に存在するＡＴＧで始まり、野生型ＰＳＭＡの翻訳とインフレームになる。したがって、１つの実施形態では、ＰＳＭＡの分割は、配列番号９の１番目～１７１番目のヌクレオチドに相当するＰＳＭＡの前半に加えて、その末端に付加された終止コドン、及び配列番号９の１７２番目～２２５３番目のヌクレオチドに相当する後半を生成する。別の実施形態では、ＰＳＭＡの分割は、配列番号９の１番目～５０４番目のヌクレオチドに相当するＰＳＭＡの前半に加えて、その末端に付加された終止コドン、及び配列番号９の５０５番目～２２５３番目のヌクレオチドに相当する後半を生成する。別の実施形態では、ＰＳＭＡの分割は、配列番号９の１番目～５７３番目のヌクレオチドに相当するＰＳＭＡの前半に加えて、その末端に付加された終止コドン、及び配列番号９の５７４番目～２２５３番目のヌクレオチドに相当する後半を生成する。別の実施形態では、ＰＳＭＡの分割は、配列番号９の１番目～９２４番目のヌクレオチドに相当するＰＳＭＡの前半に加えて、その末端に付加された終止コドン、及び配列番号９の９２５番目～２２５３番目のヌクレオチドに相当する後半を生成する。別の実施形態では、ＰＳＭＡの分割は、配列番号９の１番目～１０２９番目のヌクレオチドに相当するＰＳＭＡの前半に加えて、その末端に付加された終止コドン、及び配列番号９の１０３０番目～２２５３番目のヌクレオチドに相当する後半を生成する。別の実施形態では、ＰＳＭＡの分割は、配列番号９の１番目～１４０７番目のヌクレオチドに相当するＰＳＭＡの前半に加えて、その末端に付加された終止コドン、及び配列番号９の１４０８番目～２２５３番目のヌクレオチドに相当する後半を生成する。別の実施形態では、ＰＳＭＡの分割は、配列番号９の１番目～１５２４番目のヌクレオチドに相当するＰＳＭＡの前半に加えて、その末端に付加された終止コドン、及び配列番号９の１５２５番目～２２５３番目のヌクレオチドに相当する後半を生成する。別の実施形態では、ＰＳＭＡの分割は、配列番号９の１番目～１７０４番目のヌクレオチドに相当するＰＳＭＡの前半に加えて、その末端に付加された終止コドン、及び配列番号９の１７０５番目～２２５３番目のヌクレオチドに相当する後半を生成する。別の実施形態では、ＰＳＭＡの分割は、配列番号９の１番目～１７４６番目のヌクレオチドに相当するＰＳＭＡの前半に加えて、その末端に付加された終止コドン、及び配列番号９の１７４７番目～２２５３番目のヌクレオチドに相当する後半を生成する。別の実施形態では、ＰＳＭＡの分割は、配列番号９の１番目～１８４５番目のヌクレオチドに相当するＰＳＭＡの前半に加えて、その末端に付加された終止コドン、及び配列番号９の１８４６番目～２２５３番目のヌクレオチドに相当する後半を生成する。別の実施形態では、ＰＳＭＡの分割は、配列番号９の１番目～１８６３番目のヌクレオチドに相当するＰＳＭＡの前半に加えて、その末端に付加された終止コドン、及び配列番号９の１８６４番目～２２５３番目のヌクレオチドに相当する後半を生成する。別の実施形態では、ＰＳＭＡの分割は、配列番号９の１番目～１９８６番目のヌクレオチドに相当するＰＳＭＡの前半に加えて、その末端に付加された終止コドン、及び配列番号９の１９８７番目～２２５３番目のヌクレオチドに相当する後半を生成する。別の実施形態では、ＰＳＭＡの分割は、配列番号９の１番目～１９８９番目のヌクレオチドに相当するＰＳＭＡの前半に加えて、その末端に付加された終止コドン、及び配列番号９の１９９０番目～２２５３番目のヌクレオチドに相当する後半を生成する。別の実施形態では、ＰＳＭＡの分割は、配列番号９の１番目～２００４番目のヌクレオチドに相当するＰＳＭＡの前半に加えて、その末端に付加された終止コドン、及び配列番号９の２００５番目～２２５３番目のヌクレオチドに相当する後半を生成する。上記実施形態では、該ＰＳＭＡの前半の最後のコドンは、終止コドンに変異する。上記実施形態では、該ＰＳＭＡの前半の最後のコドンは、ＴＡＧであり得る。上記実施形態では、該ＰＳＭＡの前半の最後のコドンは、ＴＡＡであり得る。上記実施形態では、該ＰＳＭＡの前半の最後のコドンは、ＴＧＡであり得る。
【0058】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。
【0059】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に前立腺癌関連抗原の抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に前立腺癌関連抗原の抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に前立腺癌関連抗原の抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に前立腺癌関連抗原の抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に前立腺癌関連抗原の抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に前立腺癌関連抗原の抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に前立腺癌関連抗原の抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に前立腺癌関連抗原の抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。
【0060】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＡＰをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＡＰをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＡＰをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＡＰをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＡＰをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＡＰをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＡＰをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＡＰをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。
【0061】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＡＰの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＡＰの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＡＰの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＡＰの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＡＰの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＡＰの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＡＰの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＡＰの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。
【0062】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＡをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＡをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＡをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＡをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＡをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＡをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＡをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＡをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。
【0063】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。
【0064】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＭＡをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＭＡをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＭＡをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＭＡをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＭＡをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＭＡをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＭＡをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＭＡをコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＭＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＭＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＭＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＭＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＭＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＭＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＭＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＭＡの抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。
【0065】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＣＡ、ムチン－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ、またはＡＫＡＰ－４をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＣＡ、ムチン－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ、またはＡＫＡＰ－４をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＣＡ、ムチン－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ、またはＡＫＡＰ－４をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＣＡ、ムチン－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ、またはＡＫＡＰ－４をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＣＡ、ムチン－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ、またはＡＫＡＰ－４をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＣＡ、ムチン－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ、またはＡＫＡＰ－４をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＣＡ、ムチン－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ、またはＡＫＡＰ－４をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＣＡ、ムチン－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ、またはＡＫＡＰ－４をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。
【0066】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＣＡ、ムチン－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ、またはＡＫＡＰ－４の抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＣＡ、ムチン－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ、またはＡＫＡＰ－４の抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＧＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＣＡ、ムチン－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ、またはＡＫＡＰ－４の抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＣＡ、ムチン－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ、またはＡＫＡＰ－４の抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＮＰをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＣＡ、ムチン－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ、またはＡＫＡＰ－４の抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＣＡ、ムチン－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ、またはＡＫＡＰ－４の抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＺをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＣＡ、ムチン－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ、またはＡＫＡＰ－４の抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。他の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置に本明細書に記載のＰＳＣＡ、ムチン－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ、またはＡＫＡＰ－４の抗原断片をコードする異種ＯＲＦ、及びアレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置にＬをコードするＯＲＦを有するように操作される。
【0067】
本明細書に提供するのは、前立腺癌関連抗原またはその抗原断片のアミノ酸配列である。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも５５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも６０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも６５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも７５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＡＰのアミノ酸配列は、１つ以上の配列番号１のアミノ酸の置換を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１のアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、該アミノ酸置換は、配列番号１のアミノ酸位置２におけるアルギニンからイソロイシンへの置換である（すなわち、Ｉ２Ｒ変異）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１８を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＰＡＰのアミノ酸配列は、配列番号１８からなる。
【0068】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも５５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも６０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも６５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも７５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのアミノ酸配列は、配列番号２を含む。
【0069】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４に対して少なくとも５５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４に対して少なくとも６０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４に対して少なくとも６５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４に対して少なくとも７５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のアミノ酸配列は、配列番号３または４を含む。
【0070】
本明細書に提供するのは、前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードするヌクレオチド配列である。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも５５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも６０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも６５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも７５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＡＰのヌクレオチド配列は、配列番号５を含む。
【0071】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも５５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも６０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも６５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも７５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＡのヌクレオチド配列は、配列番号６を含む。
【0072】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８に対して少なくとも５５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８に対して少なくとも６０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８に対して少なくとも６５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８に対して少なくとも７５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の異種ＯＲＦによってコードされるＰＳＭＡの抗原断片のヌクレオチド配列は、配列番号７または８を含む。
【0073】
他の実施形態では、本明細書に提供するのはアレナウイルスタンパク質、例えば、ＧＰ、ＮＰ、ＺまたはＬタンパク質をコードするアレナウイルスＯＲＦに加えて、先行する段落に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されているアレナウイルスＬセグメントである。
【0074】
本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、任意の種のアレナウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）に由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、ラッサウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、ピチンデウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、フニンウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、オリベロスウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、タミアミ（Ｔａｍｉａｍｉ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、モバラ（Ｍｏｂａｌａ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、モペイア（Ｍｏｐｅｉａ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、イッピイ（Ｉｐｐｙ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、アマパリ（Ａｍａｐａｒｉ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、フレキサル（Ｆｌｅｘａｌ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、グアナリト（Ｇｕａｎａｒｉｔｏ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、ラチノ（Ｌａｔｉｎｏ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、マチュポ（Ｍａｃｈｕｐｏ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、パラナ（Ｐａｒａｎａ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、ピリタル（Ｐｉｒｉｔａｌ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、サビア（Ｓａｂｉａ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、タカリベ（Ｔａｃａｒｉｂｅ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、ベアキャニオン（Ｂｅａｒ Ｃａｎｙｏｎ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、ホワイトウオーター・アロヨ（Ｗｈｉｔｅｗａｔｅｒ Ａｒｒｏｙｏ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、Ａｌｌｐａｈｕａｙｏウイルス（ＡＬＬＶ）に由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、アルシャ（Ａｌｘａ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、チャパレ（Ｃｈａｐａｒｅ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、リジャン（Ｌｉｊｉａｎｇ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、クピキシ（Ｃｕｐｉｘｉ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、ガイロ（Ｇａｉｒｏ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、ルーイ・リバー（Ｌｏｅｉ Ｒｉｖｅｒ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、ルジョ（Ｌｕｊｏ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、ルナ（Ｌｕｎａ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、ルリ（Ｌｕｌｉ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、ランク（Ｌｕｎｋ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、マリエンタール（Ｍａｒｉｅｎｔａｌ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、メリノ・ウォーク（Ｍｅｒｉｎｏ Ｗａｌｋ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、モロゴロ（Ｍｏｒｏｇｏｒｏ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、オカハンジャ（Ｏｋａｈａｎｄｊａ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、アポレー（Ａｐｏｒｅ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、リュウキュウ（Ｒｙｕｋｙｕ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、ソルウェジ（Ｓｏｌｗｅｚｉ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、スリス（ｓｏｕｒｉｓ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、温州（Ｗｅｎｚｈｏｕ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、Ｂｉｇ Ｂｒｕｓｈｙ Ｔａｎｋウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、カタリーナ（Ｃａｔａｒｉｎａ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、Ｓｋｉｎｎｅｒ Ｔａｎｋウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、トントクリーク（Ｔｏｎｔｏ Ｃｒｅｅｋ）ウイルスに由来し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントは、シャプリ（Ｘａｐｕｒｉ）ウイルスに由来し得る。
【0075】
本明細書に提供するアレナウイルスゲノムセグメントを生成する方法は、当技術分野で周知の標準的なプロトコルに従う（例えば、Ｋａｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ，８：１５３２７参照）。
【0076】
５．２ 核酸、ベクター系及び宿主細胞
本明細書に提供するのは、セクション５．３に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を形成するためのセクション５．１に記載のアレナウイルスＳセグメントを含むまたはそれからなるｃＤＮＡである。同様に本明細書に提供するのは、本セクションに記載のｃＤＮＡを含むＤＮＡ発現ベクターである。さらに本明細書に提供するのは、本セクションに記載のかかるｃＤＮＡまたはベクターを含む宿主細胞である。
本明細書に提供するのは、セクション５．３に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を形成するためのセクション５．１に記載のアレナウイルスＳセグメントを含むまたはそれからなるｃＤＮＡである。同様に本明細書に提供するのは、本セクションに記載のｃＤＮＡを含むＤＮＡ発現ベクターである。さらに本明細書に提供するのは、本セクションに記載のかかるｃＤＮＡまたはベクターを含む宿主細胞である。
【0077】
５．２．１ アレナウイルスＳセグメント用の核酸、ベクター系及び宿主細胞
特定の実施形態では、本明細書に提供するのは、セクション５．１に記載の前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されたアレナウイルスＳセグメントのｃＤＮＡである。他の実施形態では、本明細書に提供するのは、セクション５．１に記載の前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されたアレナウイルスＬセグメントであるｃＤＮＡである。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するのは、（ｉ）前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦ、及び（ｉｉ）アレナウイルスＧＰ、ＮＰ、Ｚタンパク質、またはＬタンパク質をコードするＯＲＦを有するように操作されたアレナウイルスセグメントのｃＤＮＡであり、該アレナウイルスＧＰ、ＮＰ、Ｚタンパク質、またはＬタンパク質をコードするＯＲＦのうちの１つは除去され、セクション５．１に記載の異種ＯＲＦで置き換えられている。
特定の実施形態では、本明細書に提供するのは、セクション５．１に記載の前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されたアレナウイルスＳセグメントのｃＤＮＡである。他の実施形態では、本明細書に提供するのは、セクション５．１に記載の前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されたアレナウイルスＬセグメントであるｃＤＮＡである。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するのは、（ｉ）前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦ、及び（ｉｉ）アレナウイルスＧＰ、ＮＰ、Ｚタンパク質、またはＬタンパク質をコードするＯＲＦを有するように操作されたアレナウイルスセグメントのｃＤＮＡであり、該アレナウイルスＧＰ、ＮＰ、Ｚタンパク質、またはＬタンパク質をコードするＯＲＦのうちの１つは除去され、セクション５．１に記載の異種ＯＲＦで置き換えられている。
【0078】
１つの実施形態では、本明細書に提供するのは、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されたアレナウイルスＳセグメントをコードするＤＮＡ発現ベクターである。別の実施形態では、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されたアレナウイルスＳセグメントであるｃＤＮＡは、ＤＮＡ発現ベクターの一部であるか、またはそれに組み込まれる。他の実施形態では、本明細書に提供するのは、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されたアレナウイルスＬセグメントをコードするＤＮＡ発現ベクターである。別の実施形態では、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されたアレナウイルスＬセグメントであるｃＤＮＡは、ＤＮＡ発現ベクターの一部であるか、またはそれに組み込まれる。
【0079】
別の実施形態では、本明細書に提供するのは、本セクションの上記ｃＤＮＡまたはベクター系を含む細胞である。かかる細胞に由来する細胞株、かかる細胞を含む培養物、かかる細胞を培養する方法もまた本明細書に提供する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するのは、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されたアレナウイルスＳセグメントのｃＤＮＡを含む細胞である。いくつかの実施形態では、該細胞は、該Ｓセグメント及び／または該Ｌセグメントを含む。
【0080】
５．２．２ ３セグメント化アレナウイルス粒子用の核酸、ベクター系及び宿主細胞
本明細書に提供するのは、セクション５．３に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子の３つのアレナウイルスゲノムセグメントをコードする核酸である。より具体的な実施形態では、本明細書に提供するのは、例えば、表１に示すようなＤＮＡヌクレオチド配列またはＤＮＡヌクレオチド配列のセットである。かかる核酸を含む宿主細胞もまた提供する。
本明細書に提供するのは、セクション５．３に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子の３つのアレナウイルスゲノムセグメントをコードする核酸である。より具体的な実施形態では、本明細書に提供するのは、例えば、表１に示すようなＤＮＡヌクレオチド配列またはＤＮＡヌクレオチド配列のセットである。かかる核酸を含む宿主細胞もまた提供する。
【0081】
特定の実施形態では、本明細書に提供するのは、セクション５．３に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を一緒にコードする一連のＤＮＡ発現ベクターである。具体的には、本明細書に提供するのは、３つのアレナウイルスゲノムセグメント、すなわち、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子の１つのＬセグメント及び２つのＳセグメントをコードする一連のＤＮＡ発現ベクターである。
【0082】
別の実施形態では、本明細書に提供するのは、本セクションの上記一連のベクターを含む細胞である。かかる細胞に由来する細胞株、かかる細胞を含む培養物、かかる細胞を培養する方法もまた本明細書に提供する。
【0083】
５．３ ３セグメント化アレナウイルス粒子
本明細書に提供するのは、１つのアレナウイルスＬセグメント及び２つのアレナウイルスＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子であり、該２つのアレナウイルスＳセグメントは、セクション５．１に記載の通りであり、該２つのアレナウイルスＳセグメントのうちの一方はＧＰを含み、他方はＮＰを含む。同様に本明細書に提供するのは、１つのアレナウイルスＬセグメント及び２つのアレナウイルスＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子であり、ここで、セクション５．１に記載の前立腺癌関連抗原をコードする２つのＯＲＦは、該３つのセグメントのうちの２つに挿入される。
本明細書に提供するのは、１つのアレナウイルスＬセグメント及び２つのアレナウイルスＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子であり、該２つのアレナウイルスＳセグメントは、セクション５．１に記載の通りであり、該２つのアレナウイルスＳセグメントのうちの一方はＧＰを含み、他方はＮＰを含む。同様に本明細書に提供するのは、１つのアレナウイルスＬセグメント及び２つのアレナウイルスＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子であり、ここで、セクション５．１に記載の前立腺癌関連抗原をコードする２つのＯＲＦは、該３つのセグメントのうちの２つに挿入される。
【0084】
以下の表１は、１つのＬセグメント及び２つのＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子のゲノム構成の例示的な説明であり、該３セグメント化アレナウイルスゲノムにおける２つのＳセグメントのセグメント間組み換えは、複製可能な２セグメント化ウイルス粒子をもたらさず、アレナウイルスのプロモーター活性を無効にする（すなわち、得られる組み換えＳセグメントは、３’ＵＴＲと５’ＵＴＲの代わりに、２つの３’ＵＴＲまたは２つの５’ＵＴＲで構成される）。
【表2】
【0085】
ある特定の実施形態では、位置１と位置２の間の遺伝子間領域（ＩＧＲ）は、アレナウイルスＳセグメントのＩＧＲでもＬセグメントのＩＧＲでもよく、位置３と４の間のＩＧＲは、アレナウイルスＳセグメントのＩＧＲでもＬセグメントのＩＧＲでもよく、位置５と６の間のＩＧＲは、アレナウイルスＬセグメントのＩＧＲであり得る。特定の実施形態では、位置１と位置２の間のＩＧＲは、アレナウイルスＳセグメントのＩＧＲでよく、位置３と４の間のＩＧＲは、アレナウイルスＳセグメントのＩＧＲでよく、位置５と６の間のＩＧＲは、アレナウイルスＬセグメントのＩＧＲであり得る。ある特定の実施形態では、他の組み合わせもまた可能である。ある特定の実施形態では、１つのＬセグメント及び２つのＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子の３セグメント化アレナウイルスゲノムにおける２つのＳセグメントのセグメント間組み換えは、複製可能な２セグメント化ウイルス粒子をもたらさず、アレナウイルスのプロモーター活性を無効にする（すなわち、得られる組み換えＳセグメントは、３’ＵＴＲと５’ＵＴＲの代わりに、２つの３’ＵＴＲまたは２つの５’ＵＴＲで構成される）。
【0086】
ある特定の実施形態では、１つのＬセグメント及び２つのＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子におけるＳセグメントとＬセグメントのセグメント間組み換えは、２つの別々のセグメントの代わりに１つのセグメントのみに２つのウイルス遺伝子を有する機能的セグメントを回復させる。他の実施形態では、１つのＬセグメント及び２つのＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子におけるＳセグメントとＬセグメントのセグメント間組み換えは、複製可能な２セグメント化ウイルス粒子をもたらさない。
【0087】
ある特定の実施形態では、当業者には、表１に示す構成を有する本明細書に記載のアレナウイルスゲノムを構築し、セクション５．７に記載のアッセイを使用して、当該３セグメント化アレナウイルス粒子が遺伝的に安定であるかどうか、すなわち、本明細書に論じる複製可能な２セグメント化ウイルス粒子をもたらさないかどうかを確認することができる。
【0088】
上記の複製可能な２セグメント化ウイルス粒子をもたらさないことに加えて、いくつかの実施形態では、該３セグメント化アレナウイルス粒子は、大規模な商業的生産に必要な複数世代継代された後に、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片の安定な発現を有する。したがって、本明細書に提供するのは、少なくとも４世代継代された後に、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片の安定した発現を有する３セグメント化アレナウイルス粒子である。他の実施形態では、本明細書に提供するのは、少なくとも５世代継代された後に、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片の安定した発現を有する３セグメント化アレナウイルス粒子である。他の実施形態では、本明細書に提供するのは、少なくとも６世代継代された後に、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片の安定した発現を有する３セグメント化アレナウイルス粒子である。他の実施形態では、本明細書に提供するのは、少なくとも７世代継代された後に、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片の安定した発現を有する３セグメント化アレナウイルス粒子である。他の実施形態では、本明細書に提供するのは、少なくとも８世代継代された後に、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片の安定した発現を有する３セグメント化アレナウイルス粒子である。他の実施形態では、本明細書に提供するのは、少なくとも９世代継代された後に、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片の安定した発現を有する３セグメント化アレナウイルス粒子である。他の実施形態では、本明細書に提供するのは、少なくとも１０世代継代された後に、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片の安定した発現を有する３セグメント化アレナウイルス粒子である。
【0089】
実施例のセクション６．１．１及び６．１．２に論じるように、本明細書に提供するのは、１つのアレナウイルスＬセグメント及び２つのアレナウイルスＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子であり、ここで、第一のアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に配列番号５からなる異種ＯＲＦ及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にウイルス核タンパク質（ＮＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作され、第二のアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に配列番号６からなる異種ＯＲＦ及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にウイルス糖タンパク質（ＧＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される。
【0090】
特定の実施形態では、本明細書に提供するのは、２つのＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子であり、該２つのＳセグメントのうちの一方は、配列番号１０を含み、該２つのＳセグメントの他方は、配列番号１１を含む。
【0091】
特定の実施形態では、本明細書に提供するのは、２つのＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子であり、該２つのＳセグメントのうちの一方は、配列番号１２を含み、該２つのＳセグメントの他方は、配列番号１３を含む。
【0092】
実施例のセクション６．１．３に論じるように、本明細書に提供するのは、１つのアレナウイルスＬセグメント及び２つのアレナウイルスＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子であり、ここで、第一のアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に配列番号８からなる異種ＯＲＦ及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にウイルス核タンパク質（ＮＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作され、第二のアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に配列番号７からなる異種ＯＲＦ及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にウイルス糖タンパク質（ＧＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される。
【0093】
特定の実施形態では、本明細書に提供するのは、２つのＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子であり、該２つのＳセグメントのうちの一方は、配列番号１４を含み、該２つのＳセグメントの他方は、配列番号１５を含む。
【0094】
実施例のセクション６．１．４に論じるように、本明細書に提供するのは、１つのアレナウイルスＬセグメント及び２つのアレナウイルスＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子であり、ここで、第一のアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に配列番号７からなる異種ＯＲＦ及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にウイルス核タンパク質（ＮＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作され、第二のアレナウイルスＳセグメントは、アレナウイルス５’ＵＴＲの制御下の位置に配列番号８からなる異種ＯＲＦ及びアレナウイルス３’ＵＴＲの制御下の位置にウイルス糖タンパク質（ＧＰ）をコードするＯＲＦを有するように操作される。
【0095】
特定の実施形態では、本明細書に提供するのは、２つのＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子であり、該２つのＳセグメントのうちの一方は、配列番号１６を含み、該２つのＳセグメントの他方は、配列番号１７を含む。
【0096】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供する３セグメント化アレナウイルス粒子は、感染性である、すなわち、宿主細胞に入ることまたはその遺伝物質を注入することが可能である。ある特定のより具体的な実施形態では、本明細書に提供する３セグメント化アレナウイルス粒子は、感染性である、すなわち、宿主細胞に入ることまたはその遺伝物質を注入することが可能であり、その後該宿主細胞内でその遺伝情報を増幅及び発現することが可能である。ある特定の実施形態では、該３セグメント化アレナウイルス粒子は、感染性の複製欠損性アレナウイルス粒子であり、感染した細胞においてその遺伝情報を増幅及び発現する能力はあるが、通常の遺伝子操作されていない細胞ではさらなる感染性後代粒子を産生することができないゲノムを含むように操作されている。ある特定の実施形態では、該感染性３セグメント化アレナウイルス粒子は、複製可能であり、通常の遺伝子操作されていない細胞でさらなる感染性後代粒子を産生することが可能である。ある特定のより具体的な実施形態では、かかる複製可能なウイルスベクターは、該複製可能なウイルスベクターが由来する野生型ウイルスと比較して弱毒化されている。
【0097】
ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、ラッサウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）に由来する。ある特定の実施形態では、該ＬＣＭＶは、クローン１３、ＭＰ株、Ａｒｍ ＣＡ １３７１、Ａｒｍ Ｅ－２５０、ＷＥ、ＬＣＭＶ ｃｌ１３／ＷＥ（すなわち、内因性ＬＣＭＶクローン１３糖タンパク質の代わりにＬＣＭＶ株ＷＥの糖タンパク質を発現するＬＣＭＶクローン１３）、ＵＢＣ、Ｔｒａｕｂ、Ｐａｓｔｅｕｒ、８１０８８５、ＣＨ－５６９２、Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ ＃１２、ＨＰ６５－２００９、２００５０１９２７、８１０３６２、８１１３１６、８１０３１６、８１０３６６、２０１１２７１４、Ｄｏｕｇｌａｓ、ＧＲ０１、ＳＮ０５、ＣＡＢＮ及びそれらの派生物である。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、ピチンデウイルス（ＰＩＣＶ）に由来する。ある特定の実施形態では、該ＰＩＣＶは、Ｍｕｎｃｈｉｑｕｅ ＣｏＡｎ４７６３分離株Ｐ１８、Ｐ２株、またはＴｒａｐｉｄｏらによって記載されているいくつかの分離株のいずれかに由来する（Ｔｒａｐｉｄｏ ｅｔ ａｌ，１９７１，Ａｍ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｈｙｇ，２０：６３１－６４１）。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、フニンウイルスワクチンＣａｎｄｉｄ ＃１、またはフニンウイルスワクチンＸＪクローン３株に由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、オリベロスウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、タミアミウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、モバラウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、モペイアウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、イッピイウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、アマパリウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、フレキサルウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、グアナリトウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、ラチノウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、マチュポウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、パラナウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、ピリタルウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、サビアウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、タカリベウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、ベアキャニオンウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、ホワイトウオーター・アロヨウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、Ａｌｌｐａｈｕａｙｏウイルス（ＡＬＬＶ）に由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、アルシャウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、チャパレウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、リジャンウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、クピキシウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、ガイロウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、ルーイ・リバーウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、ルジョウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、ルナウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、ルリウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、ランクウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、マリエンタールウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、メリノ・ウォークウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、モロゴロウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、オカハンジャウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、アポレーウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、リュウキュウウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、ソルウェジウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、スリスウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、温州ウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、Ｂｉｇ Ｂｒｕｓｈｙ Ｔａｎｋウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、カタリーナウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、Ｓｋｉｎｎｅｒ Ｔａｎｋウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、トントクリークウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルス粒子は、シャプリウイルスに由来する。
【0098】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供するのは、複製欠損性のアレナウイルス粒子であり、ここで、（ｉ）そのゲノムセグメント（複数可）のうちの１つ以上は、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されており、（ｉｉ）ＧＰ、ＮＰ、Ｚタンパク質、またはＬタンパク質をコードするＯＲＦは、除去されているか、または機能的に不活化されており、得られるウイルスは、さらなる感染性の後代ウイルス粒子を産生することができない。１つ以上のＯＲＦが削除または機能的に不活化されている遺伝子改変ゲノムを含むアレナウイルス粒子は、相補細胞（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｉｎｇ ｃｅｌｌ）（すなわち、削除または機能的に不活化されたアレナウイルスＯＲＦを発現する細胞）で産生され得る（例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれるＷＯ２００９０８３２１０参照）。
【0099】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供するのは、複製可能なアレナウイルス粒子であり、ここで、（ｉ）そのゲノムセグメント（複数可）のうちの１つ以上は、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されており、（ｉｉ）ＧＰ、ＮＰ、Ｚタンパク質、及びＬタンパク質をコードするＯＲＦは、発現されるが、これらのＧＰ、ＮＰ、Ｚタンパク質、及びＬタンパク質をコードするＯＲＦのうちの１つ以上は、対応するＯＲＦの野生型ＵＴＲ以外のＵＴＲの制御下の位置にある（例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれるＷＯ２０１６０７５２５０参照）。
【0100】
ある特定の実施形態では、本出願は、ワクチンとしての使用に適した先行する段落に記載のアレナウイルス粒子、ならびに前立腺癌のワクチン接種及び治療においてかかるアレナウイルス粒子を使用する方法に関する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供するのは、１つ以上の容器の中に、セクション５．２に記載の１つ以上のｃＤＮＡを含むキットである。特定の実施形態では、キットは、１つまたは２つ以上の容器の中に、先行する段落に記載のアレナウイルスＳセグメントまたはアレナウイルス粒子を含む。該キットはさらに、以下のうちの１つ以上を含み得る：アレナウイルスＳセグメントまたはアレナウイルス粒子のレスキューに適した宿主細胞、プラスミドｃＤＮＡを宿主細胞にトランスフェクトするのに適した試薬、ヘルパーウイルス、ウイルスタンパク質をコードするプラスミド及び／または修飾アレナウイルスＳセグメントもしくはアレナウイルス粒子またはそれらのｃＤＮＡに特異的な１つ以上のプライマー。
【0101】
５．４ ３セグメント化アレナウイルス粒子を生成する方法
３セグメント化アレナウイルス粒子は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＥｍｏｎｅｔ ｅｔ ａｌ．，２００８，ＰＮＡＳ，１０６（９）：３４７３－３４７８、Ｐｏｐｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，８５（１５）：７９２８－７９３２、ＷＯ２０１６０７５２５０、ＷＯ２０１６１９８５３１、ＷＯ２０１７０７６９８８、ＷＯ２０１７０８０９２０、ＷＯ２０１７１９８７２６、ＷＯ２０１８０８３２２０及びＷＯ２０１８１８５３０７によって記載されている当技術分野で既知の逆遺伝子技術によって組み換え的に産生され得る。
３セグメント化アレナウイルス粒子は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＥｍｏｎｅｔ ｅｔ ａｌ．，２００８，ＰＮＡＳ，１０６（９）：３４７３－３４７８、Ｐｏｐｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，８５（１５）：７９２８－７９３２、ＷＯ２０１６０７５２５０、ＷＯ２０１６１９８５３１、ＷＯ２０１７０７６９８８、ＷＯ２０１７０８０９２０、ＷＯ２０１７１９８７２６、ＷＯ２０１８０８３２２０及びＷＯ２０１８１８５３０７によって記載されている当技術分野で既知の逆遺伝子技術によって組み換え的に産生され得る。
【0102】
５．４．１ 感染性の複製可能な３セグメント化アレナウイルス粒子
ある特定の実施形態では、セクション５．３に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を生成する方法は、（ｉ）１つのＬセグメント及び２つのＳセグメントの核酸を宿主細胞にトランスフェクトすること、（ｉｉ）ウイルス形成に適した条件下で宿主細胞を維持すること、及び（ｉｉｉ）アレナウイルス粒子を含む細胞培養上清を採取することを含む。
ある特定の実施形態では、セクション５．３に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を生成する方法は、（ｉ）１つのＬセグメント及び２つのＳセグメントの核酸を宿主細胞にトランスフェクトすること、（ｉｉ）ウイルス形成に適した条件下で宿主細胞を維持すること、及び（ｉｉｉ）アレナウイルス粒子を含む細胞培養上清を採取することを含む。
【0103】
ｃＤＮＡから生成した後、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子（すなわち、感染性及び複製可能な）は、増殖し得る。ある特定の実施形態では、該３セグメント化アレナウイルス粒子は、本明細書に記載のウイルスの使用を可能にする力価まで該ウイルスを増殖させる任意の宿主細胞内で増殖し得る。１つの実施形態では、該宿主細胞は、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を、対応する野生型ウイルスについて測定される力価に匹敵する力価まで増殖させる。
【0104】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子は、宿主細胞内で増殖し得る。使用され得る宿主細胞の具体例としては、ＢＨＫ、ＨＥＫ２９３、ＶＥＲＯ細胞等が挙げられる。特定の実施形態では、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子は、細胞株内で増殖し得る。
【0105】
ある特定の実施形態では、該宿主細胞は、培養下に維持され、１つ以上のプラスミドでトランスフェクトされる。該プラスミド（複数可）は、例えば、ポリメラーゼＩプロモーター及びターミネーターを含む、哺乳類細胞における発現に適した１つ以上の発現カセットから発現されるアレナウイルスゲノムセグメント（複数化）をコードする。
【0106】
特定の実施形態では、該宿主細胞は、培養下に維持され、１つ以上のプラスミドでトランスフェクトされる。該プラスミド（複数可）は、例えば、ポリメラーゼＩプロモーター及びターミネーターを含む、哺乳類細胞における発現に適した１つ以上の発現カセットから生成発現されるウイルス遺伝子（複数化）をコードする。
【0107】
１つのＬセグメント及び２つのＳセグメントを含む３セグメント化アレナウイルス粒子を生成するために使用され得るプラスミドとしては、ｉ）各々が該Ｓゲノムセグメント、例えば、ｐｏｌ－Ｉ Ｓをコードする２つのプラスミド、ｉｉ）Ｌゲノムセグメント、例えば、ｐｏｌ－Ｉ Ｌをコードするプラスミドを挙げることができる。
【0108】
ある特定の実施形態では、ウイルスのＬセグメント及びＳセグメントの細胞内合成を指示するアレナウイルスポリメラーゼをコードするプラスミドを、トランスフェクション混合物に組み込むことができる。例えば、Ｌタンパク質をコードするプラスミド及びＮＰをコードするプラスミド。該Ｌタンパク質及びＮＰは、ウイルスＲＮＡの転写及び複製のための最小限のトランス作用因子である。別の方法として、ウイルスのＬ及びＳセグメントと、ＮＰ及びＬタンパク質の細胞内合成は、それぞれ、２つの別々のプラスミドのＬ及びＳセグメントのｃＤＮＡを両側から読み取るｐｏｌ－Ｉ及びｐｏｌ－ＩＩプロモーターを備えた双方向発現カセットを使用して行われ得る。
【0109】
さらに、該プラスミド（複数可）は、哺乳類細胞における遺伝子発現に適した発現カセット、例えば、上記のポリメラーゼＩＩ発現カセットの制御下、哺乳類の選択マーカー、例えば、ピューロマイシン耐性を特徴とするか、または、該ウイルス遺伝子転写産物（複数可）の後には、配列内リボソーム進入部位、例えば、脳心筋炎ウイルスの１つが続き、その後該哺乳類の耐性マーカーが続く。Ｅ．ｃｏｌｉでの産生では、該プラスミドは、さらに細菌の選択マーカー、例えば、アンピシリン耐性カセットを特徴とする。
【0110】
プラスミド（複数可）によるＢＨＫ－２１またはＨＥＫ２９３細胞のトランスフェクションは、一般的に使用される戦略、例えば、リン酸カルシウム、リポソームベースのプロトコルまたはエレクトロポレーションのいずれかを使用して行われ得る。トランスフェクションの数日後、該適切な選択剤、例えば、ピューロマイシンが、滴定濃度で添加される。生存クローンは、標準的な手順に従って単離及びサブクローニングされ、目的のウイルスタンパク質（複数可）に対する抗体を用いたウェスタンブロットまたはフローサイトメトリー法を使用して高発現クローンが同定される。
【0111】
通常、ＲＮＡポリメラーゼＩ駆動の発現カセット、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ駆動のカセットまたはＴ７バクテリオファージＲＮＡポリメラーゼ駆動のカセットを使用することができ、後者は、一次転写産物をプロセシングして正しい末端を得るための３’末端リボザイムを優先的に使用する。ある特定の実施形態では、該アレナウイルスゲノムセグメントをコードするプラスミドは同じであってもよく、すなわち、該ゲノム配列及びトランス作用因子は、１つのプラスミドからＴ７、ｐｏｌＩ及びｐｏｌＩＩプロモーターによって転写され得る。
【0112】
３セグメント化アレナウイルス粒子の回収のため、以下の手順が想定される。初日：細胞、通常、Ｍ６ウェルプレート内で８０％コンフルエントに、上記のプラスミドの混合物をトランスフェクトする。このために、任意の一般的に使用される戦略、例えば、リン酸カルシウム、リポソームベースのプロトコルまたはエレクトロポレーションが利用され得る。３～５日後：培養上清（アレナウイルス粒子調製物）を採取し、アリコートに分け、該アレナウイルス粒子を使用前に保存するべき期間に応じて、４℃、－２０℃、または－８０℃で保存する。該アレナウイルス粒子調製物の感染力価は、イムノフォーカスアッセイによって評価される。別の方法として、トランスフェクトされた細胞及び上清を、より大きな容器（例えば、Ｔ７５組織培養フラスコ）に、トランスフェクションの３～５日後に継代してもよく、培養上清は、継代の５日後までに採取される。
【0113】
本出願はさらに、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片の発現に関する。本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片のＯＲＦは、制限酵素を使用してプラスミドに組み込まれ得る。
【0114】
５．４．２ 感染性の複製欠損３セグメント化アレナウイルス粒子
感染性の複製欠損３セグメント化アレナウイルス粒子は、上記の通りにレスキューされ得る。しかしながら、ｃＤＮＡから生成された後、本明細書に提供する感染性複製欠損アレナウイルスは、相補細胞内で増殖し得る。相補細胞とは、ゲノムの改変によって複製欠損性アレナウイルスから除去された機能を提供する細胞である（例えば、ＧＰタンパク質をコードするＯＲＦが削除または機能的に不活化された場合、相補細胞がＧＰタンパク質を提供する）。
感染性の複製欠損３セグメント化アレナウイルス粒子は、上記の通りにレスキューされ得る。しかしながら、ｃＤＮＡから生成された後、本明細書に提供する感染性複製欠損アレナウイルスは、相補細胞内で増殖し得る。相補細胞とは、ゲノムの改変によって複製欠損性アレナウイルスから除去された機能を提供する細胞である（例えば、ＧＰタンパク質をコードするＯＲＦが削除または機能的に不活化された場合、相補細胞がＧＰタンパク質を提供する）。
【0115】
使用され得る細胞、例えば、ＢＨＫ－２１、ＨＥＫ２９３、ＭＣ５７Ｇまたはその他は、培養下に維持され、相補性プラスミド（複数可）により、一般的に使用される戦略のいずれか、例えば、リン酸カルシウム、リポソームベースのプロトコルまたはエレクトロポレーションを使用してトランスフェクトされる。数日後、該適切な選択剤、例えば、ピューロマイシンが、滴定濃度で添加される。生存クローンは、標準的な手順に従って単離及びサブクローニングされ、目的のウイルスタンパク質（複数可）に対する抗体を用いたウェスタンブロットまたはフローサイトメトリー法を使用して高発現Ｃ細胞クローンが同定される。安定にトランスフェクトされたＣ細胞の使用の代替として、正常細胞の一過性トランスフェクションは、Ｃ細胞が使用される各ステップで欠落しているウイルス遺伝子（複数可）を補うことができる。さらに、ヘルパーウイルスを使用して、トランスで欠落している機能を提供することができる。
【0116】
５．５ 医薬組成物
本出願はさらに、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を含むワクチン、免疫原性組成物（例えば、ワクチン製剤）、及び医薬組成物に関する。かかるワクチン、免疫原性組成物及び医薬組成物は、当技術分野における標準的な手順に従って製剤化され得る。関連技術の当業者には、本明細書に記載の方法及び応用に対する適切な修正及び適応は、自明であり得るとともに、その範囲または任意の実施形態から逸脱することなくなされ得ることが容易に分かるであろう。
本出願はさらに、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を含むワクチン、免疫原性組成物（例えば、ワクチン製剤）、及び医薬組成物に関する。かかるワクチン、免疫原性組成物及び医薬組成物は、当技術分野における標準的な手順に従って製剤化され得る。関連技術の当業者には、本明細書に記載の方法及び応用に対する適切な修正及び適応は、自明であり得るとともに、その範囲または任意の実施形態から逸脱することなくなされ得ることが容易に分かるであろう。
【0117】
ある特定の実施形態では、本明細書に提供するのは、本明細書に記載のアレナウイルス粒子を含む免疫原性組成物である。ある特定の実施形態では、かかる免疫原性組成物はさらに、医薬的に許容される賦形剤を含む。ある特定の実施形態では、かかる免疫原性組成物はさらに、アジュバントを含む。本明細書に記載の組成物と組み合わせて投与するためのアジュバントは、該組成物の投与前、投与と同時に、または投与後に投与され得る。いくつかの実施形態では、「アジュバント」という用語は、本明細書に記載の組成物と併せて、またはその一部として投与された場合に、３セグメント化アレナウイルス粒子、及び最も重要なことには、ベクター化する遺伝子産物に対する免疫応答を増大、増強、及び／またはブーストする化合物を指すが、該化合物が単独で投与された場合には、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子及び後者によってベクター化された遺伝子産物に対する免疫応答を生成しない。いくつかの実施形態では、該アジュバントは、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子及び後者によってベクター化された遺伝子産物に対する免疫応答を生成し、アレルギーまたは他の有害反応を引き起こさない。アジュバントは、例えば、リンパ球の動員、Ｂ細胞及び／またはＴ細胞の刺激、ならびにマクロファージまたは樹状細胞の刺激を含めたいくつかの機構によって免疫応答を増強することができる。ワクチンまたは免疫原性組成物がアジュバントを含むか、または１つ以上のアジュバントと一緒に投与される場合、使用され得るアジュバントとしては、無機塩アジュバントまたは無機塩ゲルアジュバント、粒子状アジュバント、微粒子状アジュバント、粘膜アジュバント、及び免疫刺激性アジュバントが挙げられ得るがこれらに限定されない。アジュバントの例としては、アルミニウム塩（ミョウバン）（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、及び硫酸アルミニウム）、３脱Ｏ－アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）（ＧＢ２２２０２１１参照）、ＭＦ５９（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＡＳ０３（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＡＳ０４（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０、ＩＣＬ Ａｍｅｒｉｃａｓ，Ｉｎｃ．）、イミダゾピリジン化合物（国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０６４８５７号、国際公開第ＷＯ２００７／１０９８１２号として公開参照）、イミダゾキノキサリン化合物（国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０６４８５８号、国際公開第ＷＯ２００７／１０９８１３号として公開参照）及びサポニン、例えば、ＱＳ２１（Ｋｅｎｓｉｌ ｅｔ ａｌ．，１９９５，ｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（ｅｄｓ．Ｐｏｗｅｌｌ ＆ Ｎｅｗｍａｎ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ）、米国特許第５，０５７，５４０号参照）が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、該アジュバントは、フロイントアジュバント（完全または不完全）である。他のアジュバントは、水中油型エマルション（例えば、スクアレンまたは落花生油）であり、任意に、免疫刺激剤、例えば、モノホスホリルリピドＡとの組み合わせである（Ｓｔｏｕｔｅ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３６，８６－９１参照）。
【0118】
該組成物は、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を単独で、または医薬的に許容される担体と一緒に含む。本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子の懸濁液または分散液、特に等張水性懸濁液または分散液が使用され得る。該医薬組成物は滅菌されてもよく、及び／または賦形剤、例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤及び／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧を調節するための塩及び／または緩衝剤を含んでもよく、それ自体既知の方法、例えば、従来の分散及び懸濁プロセスで調製される。ある特定の実施形態では、かかる分散液または懸濁液は、粘度調節剤を含んでもよい。該懸濁液または分散液は、約２℃～８℃の温度で保たれるか、または、優先的に長期間保存するために凍結され、その後使用直前に解凍される場合もあれば、保存用に凍結乾燥される場合もある。注射用には、該ワクチンまたは免疫原性調製物は、水溶液、好ましくは、生理学的に適合する緩衝液、例えば、ハンクス液、リンガー液、または生理食塩緩衝液で製剤化され得る。該溶液は、懸濁剤、安定剤及び／または分散剤のような処方剤を含み得る。
【0119】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物はさらに、保存剤、例えば、水銀誘導体チメロサールを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、０．００１％～０．０１％のチメロサールを含む。他の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、保存剤を含まない。
【0120】
別の実施形態では、本明細書に提供するのは、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を含む組成物である。かかる組成物は、前立腺癌の治療及び予防の方法に使用され得る。他の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、前立腺癌に罹患しやすい対象、または前立腺癌に特徴的な症状を示す対象、または前立腺癌と診断された対象の治療に使用される。別の特定の実施形態では、本明細書に提供する免疫原性組成物を使用して、該組成物が投与される宿主において免疫応答が誘導され得る。本明細書に記載の免疫原性組成物はワクチンとして使用することができ、したがって、医薬組成物として製剤化され得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の免疫原性組成物は、対象（例えば、ヒト対象）の前立腺癌の予防に使用される。他の実施形態では、該ワクチン、免疫原性組成物または医薬組成物は、獣医学的及び／またはヒトへの投与に適している。
【0121】
５．６ 前立腺癌の治療方法
５．６．１ 前立腺癌の治療
セクション５．３に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片を含む３セグメント化アレナウイルス粒子及びセクション５．５に記載の医薬組成物は、同じ抗原を発現する前立腺腫瘍細胞に対して向けられた強力なＴ細胞応答を誘導するようにデザインされている。いくつかの実施形態では、セクション５．３に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子は、ＤＣ及びマクロファージを標的とし、ひいては効率的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）誘導のための抗原を送達する。その結果、誘導された前立腺癌関連抗原特異的エフェクターＣＤ８＋Ｔ細胞の腫瘍への流入により、ＣＴＬを介した前立腺癌細胞の除去がもたらされる。
５．６．１ 前立腺癌の治療
セクション５．３に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片を含む３セグメント化アレナウイルス粒子及びセクション５．５に記載の医薬組成物は、同じ抗原を発現する前立腺腫瘍細胞に対して向けられた強力なＴ細胞応答を誘導するようにデザインされている。いくつかの実施形態では、セクション５．３に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子は、ＤＣ及びマクロファージを標的とし、ひいては効率的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）誘導のための抗原を送達する。その結果、誘導された前立腺癌関連抗原特異的エフェクターＣＤ８＋Ｔ細胞の腫瘍への流入により、ＣＴＬを介した前立腺癌細胞の除去がもたらされる。
【0122】
したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、前立腺癌の治療方法であり、これは、それを必要とする対象に対して、セクション５．５に記載の医薬組成物を治療有効量で投与することを含む。他の実施形態では、本明細書に提供するのは、前立腺癌の予防方法であり、これは、それを必要とする対象に対して、セクション５．５に記載の医薬組成物を治療有効量で投与することを含む。
【0123】
１つの実施形態では、該医薬組成物の投与は、非経口投与である。非経口投与は、静脈内投与の場合もあれば、皮下投与の場合もある。別の実施形態では、本明細書に提供するアレナウイルス粒子または医薬組成物は、対象に対して、これらに限定されないが、経口、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、局所、皮下、経皮、鼻腔内及び吸入経路、乱切（例えば、二股針を使用して皮膚の最上層を擦過すること）を介して、及び腫瘍内投与を介して等により投与される。
【0124】
鼻腔内または吸入による投与の場合、本開示に従って使用するための製剤は、便宜上、適切な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切なガスを使用した加圧パックまたはネブライザーからのエアロゾルスプレーの体裁の形態で送達され得る。加圧エアロゾルの場合、用量単位は、計量された量を送達するためのバルブを提供することによって特定され得る。吸入具または吸入器で使用するための、例えば、ゼラチンのカプセル及びカートリッジは、該化合物の粉末混合物及び適切な粉末基剤、例えば、乳糖またはデンプンの粉末混合物を含めて製剤化され得る。
【0125】
５．６．２ 交互ベクター療法
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、前立腺癌の治療を必要とする対象におけるその治療方法であり、該方法は、（ｉ）該対象に対して、第一の医薬組成物を投与すること、ここで、該第一の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、及び（ｉｉ）該対象に対して、一定期間後に、第二の医薬組成物を投与すること、ここで、該第二の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、を含む。他の実施形態では、本明細書に提供するのは、前立腺癌の予防を必要とする対象におけるその予防方法であり、該方法は、（ｉ）該対象に対して、第一の医薬組成物を投与すること、ここで、該第一の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、及び（ｉｉ）該対象に対して、一定期間後に、第二の医薬組成物を投与すること、ここで、該第二の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、前立腺癌の治療を必要とする対象におけるその治療方法であり、該方法は、（ｉ）該対象に対して、第一の医薬組成物を投与すること、ここで、該第一の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、及び（ｉｉ）該対象に対して、一定期間後に、第二の医薬組成物を投与すること、ここで、該第二の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、を含む。他の実施形態では、本明細書に提供するのは、前立腺癌の予防を必要とする対象におけるその予防方法であり、該方法は、（ｉ）該対象に対して、第一の医薬組成物を投与すること、ここで、該第一の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、及び（ｉｉ）該対象に対して、一定期間後に、第二の医薬組成物を投与すること、ここで、該第二の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、を含む。
【0126】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、前立腺癌の治療を必要とする対象におけるその治療方法であり、該方法は、（ｉ）該対象に対して、第一の医薬組成物を投与すること、ここで、該第一の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、（ｉｉ）該対象に対して、一定期間後に、第二の医薬組成物を投与すること、ここで、該第二の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、（ｉｉｉ）該対象に対して、一定期間の後、該第一の医薬組成物を再度投与すること、及び（ｉｖ）該対象に対して、一定期間の後、該第二の医薬組成物を再度投与することを含む。他の実施形態では、本明細書に提供するのは、前立腺癌の予防を必要とする対象におけるその予防方法であり、該方法は、（ｉ）該対象に対して、第一の医薬組成物を投与すること、ここで、該第一の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、（ｉｉ）該対象に対して、一定期間後に、第二の医薬組成物を投与すること、ここで、該第二の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、（ｉｉｉ）該対象に対して、一定期間の後、該第一の医薬組成物を再度投与すること、及び（ｉｖ）該対象に対して、一定期間の後、該第二の医薬組成物を再度投与すること、を含む。
【0127】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、前立腺癌の治療を必要とする対象におけるその治療方法であり、該方法は、（ｉ）該対象に対して、第一の医薬組成物を投与すること、ここで、該第一の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、（ｉｉ）該対象に対して、一定期間後に、第二の医薬組成物を投与すること、ここで、該第二の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、（ｉｉｉ）該対象に対して、一定期間の後、該第一の医薬組成物を再度投与すること、（ｉｖ）該対象に対して、一定期間の後、該第二の医薬組成物を再度投与すること、（ｖ）該対象に対して、一定期間の後、該第一の医薬組成物を再度投与すること、及び（ｖｉ）該対象に対して、一定期間の後、該第二の医薬組成物を再度投与すること、を含む。他の実施形態では、本明細書に提供するのは、前立腺癌の予防を必要とする対象におけるその予防方法であり、該方法は、（ｉ）該対象に対して、第一の医薬組成物を投与すること、ここで、該第一の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、（ｉｉ）該対象に対して、一定期間後に、第二の医薬組成物を投与すること、ここで、該第二の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、（ｉｉｉ）該対象に対して、一定期間の後、該第一の医薬組成物を再度投与すること、（ｉｖ）該対象に対して、一定期間の後、該第二の医薬組成物を再度投与すること、（ｖ）該対象に対して、一定期間の後、該第一の医薬組成物を再度投与すること、及び（ｖｉ）該対象に対して、一定期間の後、該第二の医薬組成物を再度投与することを含む。
【0128】
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、前立腺癌の治療を必要とする対象におけるその治療方法であり、該方法は、（ｉ）該対象に対して、第一の医薬組成物を投与すること、ここで、該第一の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、（ｉｉ）該対象に対して、一定期間後に、第二の医薬組成物を投与すること、ここで、該第二の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、ならびに（ｉ）及び（ｉｉ）を追加で３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、または１０回繰り返すことを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するのは、前立腺癌の予防を必要とする対象におけるその予防方法であり、該方法は、（ｉ）該対象に対して、第一の医薬組成物を投与すること、ここで、該第一の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、（ｉｉ）該対象に対して、一定期間後に、第二の医薬組成物を投与すること、ここで、該第二の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、ならびに（ｉ）及び（ｉｉ）を追加で３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、または１０回繰り返すことを含む。
【0129】
いくつかの実施形態では、先行する段落における該第一及び該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、異なるアレナウイルス種に由来するが、同じ本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードするＯＲＦ（複数可）を有する。他の実施形態では、先行する段落における該第一及び該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、異なるアレナウイルス種に由来し、異なる本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードするＯＲＦ（複数可）を有する。さらに他の実施形態では、先行する段落における該第一及び該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、同じアレナウイルス種に由来するが、異なる本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードするＯＲＦ（複数可）を有する。
【0130】
特定の実施形態では、該第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＰＩＣＶに由来し、該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに由来し、該アレナウイルス粒子は、同じ本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードするＯＲＦ（複数可）を有する。他の特定の実施形態では、該第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＰＩＣＶに由来し、該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに由来し、該アレナウイルス粒子は、異なる本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードするＯＲＦ（複数可）を有する。さらに他の実施形態では、該第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに由来し、該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＰＩＣＶに由来し、該アレナウイルス粒子は、同じ本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードするＯＲＦ（複数可）を有する。さらに他の実施形態では、該第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに由来し、該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＰＩＣＶに由来し、該アレナウイルス粒子は、異なる本明細書に記載の前立腺癌関連抗原またはその抗原断片をコードするＯＲＦ（複数可）を有する。
【0131】
特定の実施形態では、該第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＰＩＣＶに由来し、該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに由来し、両医薬組成物からのアレナウイルス粒子は、ＰＡＰ及びＰＳＡをコードするＯＲＦ（複数可）を有する。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＰＩＣＶに由来し、該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに由来し、両医薬組成物からのアレナウイルス粒子は、同じＰＳＭＡの抗原断片をコードするＯＲＦ（複数可）を有する。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＰＩＣＶに由来し、該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに由来し、両医薬組成物からのアレナウイルス粒子は、ＰＡＰ、ＰＳＡ、及び同じＰＳＭＡの抗原断片をコードするＯＲＦ（複数可）を有する。他の特定の実施形態では、該第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＰＩＣＶに由来しかつＰＡＰ及びＰＳＡをコードするＯＲＦ（複数可）を有し、該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに由来しかつＰＳＭＡの抗原断片をコードするＯＲＦ（複数可）を有する。他の特定の実施形態では、該第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＰＩＣＶに由来しかつＰＳＭＡの抗原断片をコードするＯＲＦ（複数可）を有し、該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに由来しかつＰＡＰ及びＰＳＡをコードするＯＲＦ（複数可）を有する。
【0132】
特定の実施形態では、該第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに由来し、該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＰＩＣＶに由来し、両医薬組成物からのアレナウイルス粒子は、ＰＡＰ及びＰＳＡをコードするＯＲＦ（複数可）を有する。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに由来し、該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＰＩＣＶに由来し、両医薬組成物からのアレナウイルス粒子は、同じＰＳＭＡの抗原断片をコードするＯＲＦ（複数可）を有する。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに由来し、該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＰＩＣＶに由来し、両医薬組成物からのアレナウイルス粒子は、ＰＡＰ、ＰＳＡ、及び同じＰＳＭＡの抗原断片をコードするＯＲＦ（複数可）を有する。他の特定の実施形態では、該第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに由来しかつＰＡＰ及びＰＳＡをコードするＯＲＦ（複数可）を有し、該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＰＩＣＶに由来しかつＰＳＭＡの抗原断片をコードするＯＲＦ（複数可）を有する。他の特定の実施形態では、該第一の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＬＣＭＶに由来しかつＰＳＭＡの抗原断片をコードするＯＲＦ（複数可）を有し、該第二の医薬組成物からの１つ以上のアレナウイルス粒子は、ＰＩＣＶに由来しかつＰＡＰ及びＰＳＡをコードするＯＲＦ（複数可）を有する。
【0133】
５．６．３ 投与及び計画
同様に本明細書に提供するのは、本明細書に記載の医薬組成物での前立腺癌の治療方法の投与である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を含む医薬組成物は、約１×１０６の複製可能なウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）で投与される。他の実施形態では、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を含む医薬組成物は、約１×１０７のＲＣＶ ＦＦＵで投与される。他の実施形態では、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を含む医薬組成物は、約１×１０８のＲＣＶ ＦＦＵで投与される。他の実施形態では、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を含む医薬組成物は、約１×１０９のＲＣＶ ＦＦＵで投与される。
同様に本明細書に提供するのは、本明細書に記載の医薬組成物での前立腺癌の治療方法の投与である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を含む医薬組成物は、約１×１０６の複製可能なウイルスフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ）で投与される。他の実施形態では、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を含む医薬組成物は、約１×１０７のＲＣＶ ＦＦＵで投与される。他の実施形態では、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を含む医薬組成物は、約１×１０８のＲＣＶ ＦＦＵで投与される。他の実施形態では、本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を含む医薬組成物は、約１×１０９のＲＣＶ ＦＦＵで投与される。
【0134】
同様に本明細書に提供するのは、本明細書に記載の医薬組成物での前立腺癌の治療方法の投与である。セクション５．６．２に記載されているように、同じまたは異なる３セグメント化アレナウイルス粒子を含む医薬組成物は交互に入れ替えられ得る。したがって、いくつかの実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第一の医薬組成物の約２２日後に投与され得る。他の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第一の医薬組成物の約４３日後に投与され得る。
【0135】
５．６．４ 併用療法
同様に本明細書に提供するのは、前立腺癌の治療を必要とする対象におけるその治療方法であり、該方法は、（ｉ）該対象に対して、第一の医薬組成物を投与すること、ここで、該第一の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、（ｉｉ）該対象に対して、一定期間後に、第二の医薬組成物を投与すること、ここで、該第二の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、及び（ｉｉｉ）第二の薬剤を、該第一及び／または第二の医薬組成物と組み合わせて投与することを含む。
同様に本明細書に提供するのは、前立腺癌の治療を必要とする対象におけるその治療方法であり、該方法は、（ｉ）該対象に対して、第一の医薬組成物を投与すること、ここで、該第一の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、（ｉｉ）該対象に対して、一定期間後に、第二の医薬組成物を投与すること、ここで、該第二の医薬組成物は、１つ以上のセクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含むこと、及び（ｉｉｉ）第二の薬剤を、該第一及び／または第二の医薬組成物と組み合わせて投与することを含む。
【0136】
本明細書に提供する第二の薬剤は、前立腺癌を治療するための当技術分野で周知の薬剤である。いくつかの実施形態では、該第二の薬剤は、一般に腫瘍細胞の増殖を阻害する化学療法薬である。他の実施形態では、該第二の薬剤は、前立腺癌に関連する変異遺伝子（複数可）に対する標的治療薬である。他の実施形態では、該第二の薬剤は、アンドロゲン軸阻害剤（すなわち、アンドロゲンシグナル伝達経路の成分のうちのいずれかの阻害剤）である。いくつかの特定の実施形態では、該第二の薬剤は、アンドロゲン合成の阻害剤である。いくつかの特定の実施形態では、該第二の薬剤は、アンドロゲン受容体に結合する。いくつかの特定の実施形態では、該第二の薬剤は、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニストである。いくつかの特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ゴナドトロピンホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）アンタゴニストである。他の実施形態では、該第二の薬剤は、前立腺癌の免疫療法に使用される薬剤である。いくつかの特定の実施形態では、該第二の薬剤は、免疫チェックポイント阻害剤である。他の実施形態では、該第二の薬剤は放射性医薬品である。
【0137】
いくつかの特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ドセタキセルである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ミトキサントロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、カバジタキセル（Ｊｅｖｔａｎａ（登録商標））である。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ニラパリブである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、オラパリブ（Ｌｙｎｐａｒｚａ（登録商標））である。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ルカパリブ（Ｒｕｂｒａｃａ（登録商標））である。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、アビラテロン酢酸エステル（Ｚｙｔｉｇａ（登録商標）／Ｙｏｎｓａ（登録商標））である。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ケトコナゾール（Ｎｉｚｏｒａｌ（登録商標））である。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ＣＹＰ１７酵素ファミリーの阻害剤である。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））である。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、フルタミドである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ニルタミド（Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ（登録商標））である。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、アパルタミド（Ｅｒｌｅａｄａ（登録商標））である。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ダロルタミド（Ｎｕｂｅｑａ（登録商標））である。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、エンザルタミド（Ｘｔａｎｄｉ（登録商標））である。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、酢酸ロイプロリド（ＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標）／Ｌｕｐｒｏｎ Ｄｅｐｏｔ（登録商標））である。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ゴセレリン（Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標））である。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、デガレリクス（Ｆｉｒｍａｇｏｎ（登録商標））である。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、シプリューセル－Ｔ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ（登録商標））である。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ペンブロリズマブである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ＡＤＸＳ－ＰＳＡである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ラジウム－２２３（Ｘｏｆｉｇｏ（登録商標））である。
【0138】
いくつかの特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ドセタキセルとステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ミトキサントロンとステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、カバジタキセル（Ｊｅｖｔａｎａ（登録商標））とステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ニラパリブとステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、オラパリブ（Ｌｙｎｐａｒｚａ（登録商標））とステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ルカパリブ（Ｒｕｂｒａｃａ（登録商標））とステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、アビラテロン酢酸エステル（Ｚｙｔｉｇａ（登録商標）／Ｙｏｎｓａ（登録商標））とステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ケトコナゾール（Ｎｉｚｏｒａｌ（登録商標））とステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ＣＹＰ１７酵素ファミリーの阻害剤とステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））とステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、フルタミドとステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ニルタミド（Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ（登録商標））とステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、アパルタミド（Ｅｒｌｅａｄａ（登録商標））とステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ダロルタミド（Ｎｕｂｅｑａ（登録商標））とステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、エンザルタミド（Ｘｔａｎｄｉ（登録商標））とステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、酢酸ロイプロリド（ＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標）／Ｌｕｐｒｏｎ Ｄｅｐｏｔ（登録商標））とステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ゴセレリン（Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標））とステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、デガレリクス（Ｆｉｒｍａｇｏｎ（登録商標））とステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、シプリューセル－Ｔ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ（登録商標））とステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ペンブロリズマブとステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ＡＤＸＳ－ＰＳＡとステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。他の特定の実施形態では、該第二の薬剤は、ラジウム－２２３（Ｘｏｆｉｇｏ（登録商標））とステロイド、例えば、プレドニゾンまたはメチルプレドニゾロンである。
【0139】
いくつかの実施形態では、本セクションに記載の第二の薬剤は、静脈内投与される。他の実施形態では、本セクションに記載の第二の薬剤は、皮下投与される。他の実施形態では、本セクションに記載の第二の薬剤は、経口投与される。他の実施形態では、本セクションに記載の第二の薬剤は、皮内投与される。他の実施形態では、本セクションに記載の第二の薬剤は、筋肉内投与される。他の実施形態では、本セクションに記載の第二の薬剤は、腹腔内投与される。他の実施形態では、本セクションに記載の第二の薬剤は、局所投与される。他の実施形態では、本セクションに記載の第二の薬剤は、経皮投与される。他の実施形態では、本セクションに記載の第二の薬剤は、鼻腔内投与される。他の実施形態では、本セクションに記載の第二の薬剤は、腫瘍内投与される。
【0140】
いくつかの実施形態では、該第一の医薬組成物及び該第二の薬剤は、同時に共投与される。他の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１時間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約２時間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約３時間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約４時間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約５時間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約６時間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約７時間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約８時間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約９時間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１０時間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１１時間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１２時間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１日前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約２日前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約３日前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約４日前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約５日前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約６日前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１週間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約２週間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約３週間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約４週間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約５週間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約６週間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約７週間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約８週間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約９週間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１０週間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１１週間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１２週間前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１ヶ月前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約２ヶ月前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約３ヶ月前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約４ヶ月前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約５ヶ月前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約６ヶ月前に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の６ヶ月より前に投与される。
【0141】
いくつかの実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１時間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約２時間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約３時間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約４時間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約５時間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約６時間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約７時間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約８時間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約９時間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１０時間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１１時間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１２時間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１日後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約２日後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約３日後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約４日後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約５日後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約６日後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１週間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約２週間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約３週間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約４週間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約５週間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約６週間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約７週間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約８週間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約９週間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１０週間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１１週間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１２週間後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１ヶ月後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約２ヶ月後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約３ヶ月後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約４ヶ月後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約５ヶ月後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約６ヶ月後に投与される。特定の実施形態では、該第一の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の６ヶ月より後に投与される。
【0142】
いくつかの実施形態では、該第二の医薬組成物及び該第二の薬剤は、同時に共投与される。他の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１時間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約２時間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約３時間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約４時間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約５時間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約６時間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約７時間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約８時間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約９時間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１０時間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１１時間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１２時間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１日前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約２日前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約３日前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約４日前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約５日前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約６日前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１週間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約２週間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約３週間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約４週間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約５週間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約６週間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約７週間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約８週間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約９週間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１０週間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１１週間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１２週間前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１ヶ月前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約２ヶ月前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約３ヶ月前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約４ヶ月前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約５ヶ月前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約６ヶ月前に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の６ヶ月より前に投与される。
【0143】
いくつかの実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１時間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約２時間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約３時間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約４時間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約５時間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約６時間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約７時間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約８時間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約９時間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１０時間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１１時間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１２時間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１日後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約２日後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約３日後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約４日後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約５日後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約６日後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１週間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約２週間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約３週間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約４週間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約５週間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約６週間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約７週間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約８週間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約９週間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１０週間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１１週間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１２週間後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約１ヶ月後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約２ヶ月後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約３ヶ月後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約４ヶ月後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約５ヶ月後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の約６ヶ月後に投与される。特定の実施形態では、該第二の医薬組成物は、該第二の薬剤の投与の６ヶ月より後に投与される。
【0144】
５．６．５ 患者集団
いくつかの実施形態では、本明細書に提供する方法は、前立腺癌に罹患している対象に投与するためのものである。他の実施形態では、本明細書に提供する方法は、前立腺癌に罹患しやすい対象に投与するためのものである。他の実施形態では、本明細書に提供する方法は、前立腺癌のリスクを有する対象に投与するためのものである。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供する方法は、前立腺癌に罹患している対象に投与するためのものである。他の実施形態では、本明細書に提供する方法は、前立腺癌に罹患しやすい対象に投与するためのものである。他の実施形態では、本明細書に提供する方法は、前立腺癌のリスクを有する対象に投与するためのものである。
【0145】
当分野で周知のとおり、前立腺癌の進行を評価するために広く使用されている病期分類システムは、対がん米国合同委員会（ＡＪＣＣ）のＴＮＭシステムである。前立腺癌のＴＮＭシステムは、次の５つの情報側面に基づいている：（ｉ）原発腫瘍の広がり（Ｔカテゴリー）、これはさらに２つのサブカテゴリー、すなわち、診察（直腸指診を含む）、前立腺生検、及び画像検査に基づく臨床的Ｔカテゴリー（ｃＴ）、ならびに外科的に切除された前立腺に基づく病理学的Ｔカテゴリー（ｐＴ）に分類することができる。（ｉｉ）がんが近くのリンパ節に広がっているかどうか（Ｎカテゴリー）、（ｉｉｉ）がんが体の他の部分に広がっている（転移している）かどうか（Ｍカテゴリー）、（ｉｖ）ＰＳＡレベル、ならびに（ｖ）前立腺生検のグリーソンスコア。いくつかの実施形態では、本明細書に提供する方法は、ｃＴ１、Ｎ０、Ｍ０、グレードグループ１（グリーソンスコア６以下）、及びＰＳＡが１０未満であると診断された対象に投与するためのものである。他の実施形態では、本明細書に提供する方法は、ｃＴ２ａ、Ｎ０、Ｍ０、グレードグループ１（グリーソンスコア６以下）、及びＰＳＡが１０未満であると診断された対象に投与するためのものである。他の実施形態では、本明細書に提供する方法は、ｐＴ２、Ｎ０、Ｍ０、グレードグループ１（グリーソンスコア６以下）、及びＰＳＡが１０未満であると診断された対象に投与するためのものである。他の実施形態では、本明細書に提供する方法は、ｃＴ１、Ｎ０、Ｍ０、グレードグループ１（グリーソンスコア６以下）、及びＰＳＡが少なくとも１０であるが２０未満であると診断された対象に投与するためのものである。他の実施形態では、本明細書に提供する方法は、ｃＴ２ａまたはｐＴ２、Ｎ０、Ｍ０、グレードグループ１（グリーソンスコア６以下）、及びＰＳＡが少なくとも１０であるが２０未満であると診断された対象に投与するためのものである。他の実施形態では、本明細書に提供する方法は、ｃＴ２ｂまたはｃＴ２ｃ、Ｎ０、Ｍ０、グレードグループ１（グリーソンスコア６以下）、及びＰＳＡが２０未満であると診断された対象に投与するためのものである。他の実施形態では、本明細書に提供する方法は、Ｔ１またはＴ２、Ｎ０、Ｍ０、グレードグループ２（グリーソンスコア７）、及びＰＳＡが２０未満であると診断された対象に投与するためのものである。他の実施形態では、本明細書に提供する方法は、Ｔ１またはＴ２、Ｎ０、Ｍ０、グレードグループ２（グリーソンスコア７または８）、及びＰＳＡが２０未満であると診断された対象に投与するためのものである。他の実施形態では、本明細書に提供する方法は、Ｔ１またはＴ２、Ｎ０、Ｍ０、グレードグループ１～４（グリーソンスコア８以下）、及びＰＳＡが２０未満であると診断された対象に投与するためのものである。他の実施形態では、本明細書に提供する方法は、Ｔ３またはＴ４、Ｎ０、Ｍ０、グレードグループ１～４（グリーソンスコア８以下）、及び任意のＰＳＡであると診断された対象に投与するためのものである。他の実施形態では、本明細書に提供する方法は、任意のＴ、Ｎ０、Ｍ０、グレードグループ５（グリーソンスコア９または１０）、及び任意のＰＳＡであると診断された対象に投与するためのものである。他の実施形態では、本明細書に提供する方法は、任意のＴ、Ｎ１、Ｍ０、グリーソンスコアに関する任意のグレードグループ、及び任意のＰＳＡであると診断された対象に投与するためのものである。他の実施形態では、本明細書に提供する方法は、任意のＴ、任意のＮ、Ｍ１、グリーソンスコアに関する任意のグレードグループ、及び任意のＰＳＡであると診断された対象に投与するためのものである。
【0146】
５．６．６ キット
同様に本明細書に提供するのは、本セクション（すなわち、セクション５．６）に記載の方法を行うために使用され得るキットである。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に提供するキットは、１つ以上の容器及び使用説明書を含み、該１つ以上の容器は、本明細書に提供する組成物（例えば、医薬、免疫原性またはワクチン組成物）を含む。いくつかの特定の実施形態では、本明細書に提供するキットは、各々が、本明細書に記載の方法を行うための静脈内投与に適した医薬組成物中に該活性成分を含む、容器を含む。いくつかの特定の実施形態では、本明細書に提供するキットは、２つ以上の容器及び使用説明書を含み、該容器の１つは、セクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含み、別の容器は、セクション５．６．４に記載の第二の薬剤を含む。
同様に本明細書に提供するのは、本セクション（すなわち、セクション５．６）に記載の方法を行うために使用され得るキットである。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に提供するキットは、１つ以上の容器及び使用説明書を含み、該１つ以上の容器は、本明細書に提供する組成物（例えば、医薬、免疫原性またはワクチン組成物）を含む。いくつかの特定の実施形態では、本明細書に提供するキットは、各々が、本明細書に記載の方法を行うための静脈内投与に適した医薬組成物中に該活性成分を含む、容器を含む。いくつかの特定の実施形態では、本明細書に提供するキットは、２つ以上の容器及び使用説明書を含み、該容器の１つは、セクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含み、別の容器は、セクション５．６．４に記載の第二の薬剤を含む。
【0147】
同様に本明細書に提供するのは、１つ以上の容器及び使用説明書を含むキットであり、該１つ以上の容器は、本明細書に提供する組成物（例えば、医薬、免疫原性またはワクチン組成物）を含む静脈内投与に適した医薬組成物を含み、また、静脈内投与を行うために適した装置、例えば、硬質または半硬質開放容器、プラスチックまたは密閉容器、チューブ、点滴チャンバー、ならびに該液体を該容器から患者の血管に移動させるために必要なチューブの他の付属品、及び針を含む。いくつかの特定の実施形態では、本明細書に提供するキットは、２つ以上の容器及び使用説明書を含み、該容器の１つは、セクション５．３に記載のアレナウイルス粒子を含み、別の容器は、セクション５．６．４に記載の第二の薬剤を含み、また、静脈内投与を行うために適した装置、例えば、硬質または半硬質開放容器、プラスチックまたは密閉容器、チューブ、点滴チャンバー、ならびに該液体を該容器から患者の血管に移動させるために必要なチューブの他の付属品、及び針を含む。
【0148】
５．７ アッセイ
５．７．１ アレナウイルス検出アッセイ
本明細書に提供するのは、表１０．中央検査室分析用のサンプル収集の概要に例示する、処置された動物または処置された患者の様々なサンプル、例えば、唾液、便、血液、及び尿において、セクション５．１に記載のアレナウイルスＳセグメントまたはセクション５．３に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子の存在を検出することができる当技術分野で既知の技術である。例えば、ＲＴ－ＰＣＲを、アレナウイルスに特異的なプライマーとともに使用して、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されたアレナウイルスＳセグメントまたは本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を検出及び定量化することができる。ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ、免疫沈降、免疫細胞化学、またはＦＡＣＳと組み合わせた免疫細胞化学を使用して、アレナウイルスＳセグメントの遺伝子産物または３セグメント化アレナウイルス粒子を定量化することができる。
５．７．１ アレナウイルス検出アッセイ
本明細書に提供するのは、表１０．中央検査室分析用のサンプル収集の概要に例示する、処置された動物または処置された患者の様々なサンプル、例えば、唾液、便、血液、及び尿において、セクション５．１に記載のアレナウイルスＳセグメントまたはセクション５．３に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子の存在を検出することができる当技術分野で既知の技術である。例えば、ＲＴ－ＰＣＲを、アレナウイルスに特異的なプライマーとともに使用して、本明細書に記載の前立腺癌関連抗原をコードする異種ＯＲＦを有するように操作されたアレナウイルスＳセグメントまたは本明細書に記載の３セグメント化アレナウイルス粒子を検出及び定量化することができる。ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ、免疫沈降、免疫細胞化学、またはＦＡＣＳと組み合わせた免疫細胞化学を使用して、アレナウイルスＳセグメントの遺伝子産物または３セグメント化アレナウイルス粒子を定量化することができる。
【0149】
５．７．２ 感染価を測定するアッセイ
当技術分野で周知の任意のアッセイを、アレナウイルス粒子調製物の感染価を測定するために使用することができる。例えば、ウイルス／ベクター力価の特定は、「フォーカス形成単位アッセイ」（ＦＦＵアッセイ）によって行うことができる。簡潔には、相補細胞、例えば、ＨＥＫ２９３－ＴＶＬ細胞をプレーティングし、異なる希釈のウイルス／ベクターサンプルを入れる。インキュベーション期間の後、細胞が単層を形成し、ウイルスが細胞に付着できるように、該単層をメチルセルロースで覆う。該プレートをさらにインキュベートすると、元の感染細胞がウイルスの後代を放出する。メチルセルロースのオーバーレイにより、新たなウイルスの拡散は、隣接する細胞に限定される。その結果、各感染粒子は、フォーカスと呼ばれる感染細胞の円形域を産生する。かかるフォーカスは、表示させることができ、それによって、ＬＣＭＶ－ＮＰに対する抗体、または該アレナウイルス粒子もしくは３セグメント化アレナウイルス粒子によって発現される別のタンパク質、及びＨＲＰ系の呈色反応を使用して計数可能にすることができる。ウイルス／ベクターの力価は、１ミリリットルあたりのフォーカス形成単位（ＦＦＵ／ｍＬ）で計算され得る。同様の方法で、３セグメント化された複製可能なウイルス粒子の割合が特定され得る。相補細胞の代わりに、非相補細胞株、例えば、ＨＥＫ２９３が使用される。これにより、３セグメント化ウイルス粒子のみが隣接する細胞に感染することが可能になる。複製可能なウイルス／ベクター（ＲＣＶ）の力価は、１ミリリットルあたりのフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ／ｍＬ）で計算され得る。同様に、該感染価は、表１０．中央検査室分析用のサンプル収集の概要に例示する、処置された患者のサンプルにおいて臨床環境で測定され得る。
当技術分野で周知の任意のアッセイを、アレナウイルス粒子調製物の感染価を測定するために使用することができる。例えば、ウイルス／ベクター力価の特定は、「フォーカス形成単位アッセイ」（ＦＦＵアッセイ）によって行うことができる。簡潔には、相補細胞、例えば、ＨＥＫ２９３－ＴＶＬ細胞をプレーティングし、異なる希釈のウイルス／ベクターサンプルを入れる。インキュベーション期間の後、細胞が単層を形成し、ウイルスが細胞に付着できるように、該単層をメチルセルロースで覆う。該プレートをさらにインキュベートすると、元の感染細胞がウイルスの後代を放出する。メチルセルロースのオーバーレイにより、新たなウイルスの拡散は、隣接する細胞に限定される。その結果、各感染粒子は、フォーカスと呼ばれる感染細胞の円形域を産生する。かかるフォーカスは、表示させることができ、それによって、ＬＣＭＶ－ＮＰに対する抗体、または該アレナウイルス粒子もしくは３セグメント化アレナウイルス粒子によって発現される別のタンパク質、及びＨＲＰ系の呈色反応を使用して計数可能にすることができる。ウイルス／ベクターの力価は、１ミリリットルあたりのフォーカス形成単位（ＦＦＵ／ｍＬ）で計算され得る。同様の方法で、３セグメント化された複製可能なウイルス粒子の割合が特定され得る。相補細胞の代わりに、非相補細胞株、例えば、ＨＥＫ２９３が使用される。これにより、３セグメント化ウイルス粒子のみが隣接する細胞に感染することが可能になる。複製可能なウイルス／ベクター（ＲＣＶ）の力価は、１ミリリットルあたりのフォーカス形成単位（ＲＣＶ ＦＦＵ／ｍＬ）で計算され得る。同様に、該感染価は、表１０．中央検査室分析用のサンプル収集の概要に例示する、処置された患者のサンプルにおいて臨床環境で測定され得る。
【0150】
５．７．３ アレナウイルス粒子の増殖
本明細書に記載のアレナウイルス粒子の増殖は、当技術分野で既知の、または本明細書に記載の任意の方法によって評価され得る。ウイルスの増殖は、規定量／濃度の本明細書に記載のアレナウイルス粒子を細胞培養物（例えば、Ｖｅｒｏ細胞またはＢＨＫ－２１細胞）に接種することによって測定され得る。該ウイルスを特定の時間インキュベートした後、標準的な方法を使用してウイルスを含む上清を収集し、本明細書に記載のアッセイを使用して感染価が測定され得る。
本明細書に記載のアレナウイルス粒子の増殖は、当技術分野で既知の、または本明細書に記載の任意の方法によって評価され得る。ウイルスの増殖は、規定量／濃度の本明細書に記載のアレナウイルス粒子を細胞培養物（例えば、Ｖｅｒｏ細胞またはＢＨＫ－２１細胞）に接種することによって測定され得る。該ウイルスを特定の時間インキュベートした後、標準的な方法を使用してウイルスを含む上清を収集し、本明細書に記載のアッセイを使用して感染価が測定され得る。
【0151】
５．７．４ 血清ＥＬＩＳＡ
動物（例えば、マウス、モルモット）のワクチン接種後の体液性免疫応答の測定は、抗原特異的血清ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）によって行われ得る。簡潔には、プレートを抗原（例えば、組み換えタンパク質）でコーティングし、抗体の非特異的結合を避けるためにブロックし、段階希釈した血清とともにインキュベートする。インキュベーション後、結合した血清抗体は、例えば、酵素結合抗種（例えば、マウス、モルモット）特異的抗体（全ＩｇＧまたはＩｇＧサブクラスを検出）及びその後の呈色反応を使用して検出され得る。抗体力価は、例えば、終点の幾何平均力価として測定され得る。
動物（例えば、マウス、モルモット）のワクチン接種後の体液性免疫応答の測定は、抗原特異的血清ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）によって行われ得る。簡潔には、プレートを抗原（例えば、組み換えタンパク質）でコーティングし、抗体の非特異的結合を避けるためにブロックし、段階希釈した血清とともにインキュベートする。インキュベーション後、結合した血清抗体は、例えば、酵素結合抗種（例えば、マウス、モルモット）特異的抗体（全ＩｇＧまたはＩｇＧサブクラスを検出）及びその後の呈色反応を使用して検出され得る。抗体力価は、例えば、終点の幾何平均力価として測定され得る。
【0152】
５．７．５ 誘導された抗体の中和活性を測定するアッセイ
血清中の中和抗体の測定は、ＡＴＣＣのＡＲＰＥ－１９細胞及びＧＦＰタグ付きウイルスを使用した以下の細胞アッセイで行われる。さらに、外因性補体の供給源として追加のモルモット血清が使用される。中和に使用する１日または２日前に、３８４ウェルプレートに６．５ｘ１０３細胞／ウェル（５０μｌ／ウェル）を播種してアッセイを開始する。中和は、細胞を含まない９６ウェル滅菌組織培養プレートにて３７℃で１時間行われる。中和インキュベーションステップの後、混合物を細胞に添加し、プレートリーダーでＧＦＰを検出するためにさらに４日間インキュベートする。陽性中和ヒト血清を各プレートのアッセイ陽性対照として使用し、すべての結果の信頼性をチェックする。力価（ＥＣ５０）は、４パラメータのロジスティック曲線適合を使用して決定される。追加の試験として、ウェルを蛍光顕微鏡でチェックする。同様に、誘導された抗体の中和活性は、表１０．中央検査室分析用のサンプル収集の概要に例示する、臨床環境で測定され得る。
血清中の中和抗体の測定は、ＡＴＣＣのＡＲＰＥ－１９細胞及びＧＦＰタグ付きウイルスを使用した以下の細胞アッセイで行われる。さらに、外因性補体の供給源として追加のモルモット血清が使用される。中和に使用する１日または２日前に、３８４ウェルプレートに６．５ｘ１０３細胞／ウェル（５０μｌ／ウェル）を播種してアッセイを開始する。中和は、細胞を含まない９６ウェル滅菌組織培養プレートにて３７℃で１時間行われる。中和インキュベーションステップの後、混合物を細胞に添加し、プレートリーダーでＧＦＰを検出するためにさらに４日間インキュベートする。陽性中和ヒト血清を各プレートのアッセイ陽性対照として使用し、すべての結果の信頼性をチェックする。力価（ＥＣ５０）は、４パラメータのロジスティック曲線適合を使用して決定される。追加の試験として、ウェルを蛍光顕微鏡でチェックする。同様に、誘導された抗体の中和活性は、表１０．中央検査室分析用のサンプル収集の概要に例示する、臨床環境で測定され得る。
【0153】
５．７．６ プラーク減少アッセイ
簡潔には、ＬＣＭＶに関するプラーク減少（中和）アッセイは、レポーター遺伝子（例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）をコードする複製可能なまたは複製欠損性ＬＣＭＶを使用して行うことができ、５％ウサギ血清を外因性補体の供給源として使用してもよく、プラークは、蛍光顕微鏡によって数えることができる。中和力価は、対照（免疫前）血清サンプルと比較して、プラークが５０％、７５％、９０％、または９５％減少する血清の最高希釈率として定義され得る。
簡潔には、ＬＣＭＶに関するプラーク減少（中和）アッセイは、レポーター遺伝子（例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）をコードする複製可能なまたは複製欠損性ＬＣＭＶを使用して行うことができ、５％ウサギ血清を外因性補体の供給源として使用してもよく、プラークは、蛍光顕微鏡によって数えることができる。中和力価は、対照（免疫前）血清サンプルと比較して、プラークが５０％、７５％、９０％、または９５％減少する血清の最高希釈率として定義され得る。
【0154】
ｑＰＣＲ ＬＣＭＶ ＲＮＡゲノムは、ＱＩＡａｍｐ Ｖｉｒａｌ ＲＮＡ ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ）を使用して、製造業者が提供するプロトコルに従って単離される。ＬＣＭＶ ＲＮＡゲノム当量は、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩＩ Ｐｌａｔｉｎｕｍ（登録商標）Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ ｑＲＴ－ＰＣＲキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ならびに該ＬＣＭＶのＮＰコード領域の一部または該アレナウイルス粒子もしくは該３セグメント化アレナウイルス粒子の別のゲノムストレッチに特異的なプライマー及びプローブ（ＦＡＭレポーター及びＮＦＱ－ＭＧＢクエンチャー）で、ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓリアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）にて行われる定量ＰＣＲによって検出される。該反応の温度プロファイルは、６０℃で３０分、９５℃で２分、その後４５サイクルの９５℃で１５秒、５６℃で３０秒であり得る。ＲＮＡは、該プライマー及びプローブ結合部位を含むＬＣＭＶのＮＰコード配列の断片またはアレナウイルス粒子もしくは３セグメント化アレナウイルス粒子の別のゲノムストレッチに対応する、分光光度計で定量されたインビトロ転写ＲＮＡ断片のｌｏｇ１０希釈系列から作られた標準曲線とサンプル結果を比較することによって定量され得る。
【0155】
５．７．７ ウェスタンブロッティング
組織培養フラスコ内または懸濁液中で増殖させた感染細胞は、感染後の指定の時点でＲＩＰＡ緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して溶解されるか、または細胞溶解することなく直接使用される。サンプルを、還元剤及びＮｕＰａｇｅ ＬＤＳサンプル緩衝液（ＮＯＶＥＸ）を使用して９９℃まで１０分間加熱し、室温まで冷却した後、電気泳動用の４～１２％ＳＤＳゲルにロードする。タンパク質を膜に、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎｓ ｉＢｌｏｔ Ｇｅｌ ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｄｅｖｉｃｅを使用してブロットし、ポンソー染色で視覚化する。最後に、該調製物を、目的のタンパク質に対する一次抗体及びアルカリホスファターゼ結合二次抗体でプローブし、続いて１－Ｓｔｅｐ ＮＢＴ／ＢＣＩＰ溶液（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ）で染色する。
組織培養フラスコ内または懸濁液中で増殖させた感染細胞は、感染後の指定の時点でＲＩＰＡ緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して溶解されるか、または細胞溶解することなく直接使用される。サンプルを、還元剤及びＮｕＰａｇｅ ＬＤＳサンプル緩衝液（ＮＯＶＥＸ）を使用して９９℃まで１０分間加熱し、室温まで冷却した後、電気泳動用の４～１２％ＳＤＳゲルにロードする。タンパク質を膜に、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎｓ ｉＢｌｏｔ Ｇｅｌ ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｄｅｖｉｃｅを使用してブロットし、ポンソー染色で視覚化する。最後に、該調製物を、目的のタンパク質に対する一次抗体及びアルカリホスファターゼ結合二次抗体でプローブし、続いて１－Ｓｔｅｐ ＮＢＴ／ＢＣＩＰ溶液（ＩＮＶＩＴＲＯＧＥＮ）で染色する。
【0156】
５．７．８ 抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞検出のためのＭＨＣ－ペプチドマルチマー染色アッセイ
当技術分野で周知の任意のアッセイを使用して、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を調べることができる。例えば、該ＭＨＣ－ペプチドテトラマー染色アッセイが使用され得る（例えば、Ａｌｔｍａｎ Ｊ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９６；２７４：９４－９６、及びＭｕｒａｌｉ－Ｋｒｉｓｈｎａ Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１９９８；８：１７７－１８７参照）。簡潔には、該アッセイは、以下のステップを含み、テトラマーアッセイは、抗原特異的Ｔ細胞の存在を検出するために使用される。抗原特異的Ｔ細胞を検出するために、これは、該ペプチド及びＴ細胞の定義された抗原特異性及びＭＨＣハプロタイプ用のカスタムメイド（通常は蛍光標識した）ＭＨＣ分子のテトラマーの両方に結合する必要がある。該テトラマーは次いで、蛍光標識を介したフローサイトメトリーによって検出される。
当技術分野で周知の任意のアッセイを使用して、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を調べることができる。例えば、該ＭＨＣ－ペプチドテトラマー染色アッセイが使用され得る（例えば、Ａｌｔｍａｎ Ｊ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９６；２７４：９４－９６、及びＭｕｒａｌｉ－Ｋｒｉｓｈｎａ Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１９９８；８：１７７－１８７参照）。簡潔には、該アッセイは、以下のステップを含み、テトラマーアッセイは、抗原特異的Ｔ細胞の存在を検出するために使用される。抗原特異的Ｔ細胞を検出するために、これは、該ペプチド及びＴ細胞の定義された抗原特異性及びＭＨＣハプロタイプ用のカスタムメイド（通常は蛍光標識した）ＭＨＣ分子のテトラマーの両方に結合する必要がある。該テトラマーは次いで、蛍光標識を介したフローサイトメトリーによって検出される。
【0157】
５．７．９ 抗原特異的Ｔ細胞の検出用のＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
当技術分野で周知の任意のアッセイを使用して、抗原特異的Ｔ細胞応答を調べることができる。例えば、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイが使用され得る（例えば、Ｃｚｅｒｋｉｎｓｋｙ Ｃ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９８３；６５：１０９－１２１、及びＨｕｔｃｈｉｎｇｓ Ｐ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９８９；１２０：１－８参照）。表１０．中央検査室分析用のサンプル収集の概要に例示する、サイトカイン、例えば、これに限定されないが、ＩＦＮ－γは、該ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定され得る。簡潔には、該アッセイは、以下のステップを含む：ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔプレートを抗サイトカイン抗体でコーティングする。細胞を、該ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔプレートで、目的の抗原に由来するペプチドとともにインキュベートする。抗原特異的細胞はサイトカインを分泌し、これがコーティングされた抗体に結合する。該細胞を次いで洗い流し、ビオチン化二次抗サイトカイン抗体を該プレートに添加し、アビジン－ＨＲＰシステムまたは他の適切な方法で可視化する。
当技術分野で周知の任意のアッセイを使用して、抗原特異的Ｔ細胞応答を調べることができる。例えば、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイが使用され得る（例えば、Ｃｚｅｒｋｉｎｓｋｙ Ｃ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９８３；６５：１０９－１２１、及びＨｕｔｃｈｉｎｇｓ Ｐ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９８９；１２０：１－８参照）。表１０．中央検査室分析用のサンプル収集の概要に例示する、サイトカイン、例えば、これに限定されないが、ＩＦＮ－γは、該ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって測定され得る。簡潔には、該アッセイは、以下のステップを含む：ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔプレートを抗サイトカイン抗体でコーティングする。細胞を、該ｉｍｍｕｎｏｓｐｏｔプレートで、目的の抗原に由来するペプチドとともにインキュベートする。抗原特異的細胞はサイトカインを分泌し、これがコーティングされた抗体に結合する。該細胞を次いで洗い流し、ビオチン化二次抗サイトカイン抗体を該プレートに添加し、アビジン－ＨＲＰシステムまたは他の適切な方法で可視化する。
【0158】
５．７．１０ ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞の機能の検出用の細胞内サイトカインアッセイ。
当技術分野で周知の任意のアッセイを使用して、ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞応答の機能を調べることができる。例えば、フローサイトメトリーと組み合わせた細胞内サイトカインアッセイを、限定されないが、表１０．中央検査室分析用のサンプル収集の概要に例示するように使用することができる（例えば、Ｓｕｎｉ Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９９８；２１２：８９－９８、Ｎｏｍｕｒａ Ｌ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．２０００；４０：６０－６８、及びＧｈａｎｅｋａｒ Ｓ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００１；８：６２８－６３参照）。簡潔には、該アッセイは、以下のステップを含む：特定のペプチドまたはタンパク質を介して細胞を活性化した後、該サイトカインを該細胞内に保持するためのタンパク質輸送の阻害（例えば、ブレフェルジンＡ）を加える。一定期間、通常は５時間のインキュベーション後、洗浄ステップが続き、他の細胞マーカーに対する抗体が該細胞に添加され得る。次に細胞を固定し、透過性にする。蛍光色素結合抗サイトカイン抗体が添加され、該細胞が、フローサイトメトリーによって分析され得る。
当技術分野で周知の任意のアッセイを使用して、ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞応答の機能を調べることができる。例えば、フローサイトメトリーと組み合わせた細胞内サイトカインアッセイを、限定されないが、表１０．中央検査室分析用のサンプル収集の概要に例示するように使用することができる（例えば、Ｓｕｎｉ Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９９８；２１２：８９－９８、Ｎｏｍｕｒａ Ｌ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．２０００；４０：６０－６８、及びＧｈａｎｅｋａｒ Ｓ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００１；８：６２８－６３参照）。簡潔には、該アッセイは、以下のステップを含む：特定のペプチドまたはタンパク質を介して細胞を活性化した後、該サイトカインを該細胞内に保持するためのタンパク質輸送の阻害（例えば、ブレフェルジンＡ）を加える。一定期間、通常は５時間のインキュベーション後、洗浄ステップが続き、他の細胞マーカーに対する抗体が該細胞に添加され得る。次に細胞を固定し、透過性にする。蛍光色素結合抗サイトカイン抗体が添加され、該細胞が、フローサイトメトリーによって分析され得る。
【0159】
５．７．１１ ウイルスベクターの複製欠損を確認するためのアッセイ
感染性及び複製可能なウイルス粒子の濃度を決定する当技術分野で周知の任意のアッセイもまた、サンプル中の複製欠損性ウイルス粒子を測定するために使用することができる。例えば、非相補細胞を用いたＦＦＵアッセイが、この目的で使用され得る。
感染性及び複製可能なウイルス粒子の濃度を決定する当技術分野で周知の任意のアッセイもまた、サンプル中の複製欠損性ウイルス粒子を測定するために使用することができる。例えば、非相補細胞を用いたＦＦＵアッセイが、この目的で使用され得る。
【0160】
さらに、プラークベースのアッセイは、ウイルスサンプル中のプラーク形成単位（ＰＦＵ）の観点からウイルス濃度を測定するために使用される標準的な方法である。具体的には、非相補宿主細胞のコンフルエントな単層を、様々な希釈率でウイルス感染させ、該ウイルス感染が無差別に広がるのを防ぐために寒天等の半固体培地で覆う。ウイルスが該固定細胞単層内の細胞内で感染及び複製に成功すると、ウイルスプラークが形成され、周囲の細胞に広がる（例えば、Ｋａｕｆｍａｎｎ，Ｓ．Ｈ．；Ｋａｂｅｌｉｔｚ，Ｄ．（２００２）．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３２：Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ．ＩＳＢＮ ０－１２－５２１５３２－０参照）。分析されるウイルスに応じて、プラーク形成には２～１４日かかる場合がある。プラークは通常手動で計数され、その結果は、プレートの調製に使用された希釈倍率と組み合わせて、サンプル単位体積あたりのプラーク形成単位数（ＰＦＵ／ｍＬ）を計算するために使用される。該ＰＦＵ／ｍＬの結果は、該サンプル内の感染性複製可能粒子の数を表す。Ｃ細胞を使用する場合、同じアッセイを使用して、複製欠損性アレナウイルス粒子または３セグメント化アレナウイルス粒子を滴定することができる。
【0161】
５．７．１２ ウイルス抗原の発現アッセイ
当技術分野で周知の任意のアッセイを、ウイルス抗原の発現を測定するために使用することができる。例えば、ＦＦＵアッセイが行われ得る。検出には、それぞれのウイルス抗原に対するモノクローナルまたはポリクローナル抗体調製物（複数可）が使用される（導入遺伝子特異的ＦＦＵ）。
当技術分野で周知の任意のアッセイを、ウイルス抗原の発現を測定するために使用することができる。例えば、ＦＦＵアッセイが行われ得る。検出には、それぞれのウイルス抗原に対するモノクローナルまたはポリクローナル抗体調製物（複数可）が使用される（導入遺伝子特異的ＦＦＵ）。
【0162】
５．７．１３ 動物モデル
本明細書に記載のアレナウイルス粒子の組み換え及び感染価を調べるために、インビボ動物モデルが使用され得る。ある特定の実施形態では、３セグメント化アレナウイルス粒子の組み換え及び感染価を調べるために使用され得る動物モデルとしては、マウス、モルモット、ウサギ、及びサルが挙げられる。好ましい実施形態では、アレナウイルスの組み換え及び感染価を調べるために使用され得る動物モデルとしては、マウスが挙げられる。より具体的な実施形態では、該マウスは、アレナウイルス粒子の組み換え及び感染価が、Ｉ型インターフェロン受容体、ＩＩ型インターフェロン受容体、及び組み換え活性化遺伝子１（ＲＡＧ１）に関して三重欠損性であることを調べるために使用され得る。
本明細書に記載のアレナウイルス粒子の組み換え及び感染価を調べるために、インビボ動物モデルが使用され得る。ある特定の実施形態では、３セグメント化アレナウイルス粒子の組み換え及び感染価を調べるために使用され得る動物モデルとしては、マウス、モルモット、ウサギ、及びサルが挙げられる。好ましい実施形態では、アレナウイルスの組み換え及び感染価を調べるために使用され得る動物モデルとしては、マウスが挙げられる。より具体的な実施形態では、該マウスは、アレナウイルス粒子の組み換え及び感染価が、Ｉ型インターフェロン受容体、ＩＩ型インターフェロン受容体、及び組み換え活性化遺伝子１（ＲＡＧ１）に関して三重欠損性であることを調べるために使用され得る。
【0163】
ある特定の実施形態では、該動物モデルを使用して、アレナウイルスの感染価及び導入遺伝子の安定性を特定することができる。いくつかの実施形態では、ウイルスＲＮＡは、該動物モデルの血清から単離され得る。技術は、当業者には容易に知られる。該ウイルスＲＮＡを逆転写することができ、該アレナウイルスＯＲＦを有するｃＤＮＡは、遺伝子特異的プライマーによってＰＣＲ増幅され得る。フローサイトメトリーもまた、アレナウイルスの感染価及び導入遺伝子の安定性を調べるために使用され得る。
【0164】
５．７．１４ 前立腺癌進行のアッセイ
当技術分野で周知の任意のアッセイを使用して、前立腺癌の進行を評価することができる。セクション６．３．６及び６．３．６で例示されているように、前立腺癌の進行及び他の関連する臨床パラメータは、監視され得る。簡潔には、表９．疾患の兆候による進行のＰＣＷＧ３基準に例示される、ＰＳＡの変化レベルの測定、標的病変及び前立腺の進行の監視、骨転移の検出は、標準的な方法で行われ得る（例えば、Ｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ，３４：１４０２－１８参照）。さらに、血液学、臨床化学、尿検査、凝固、甲状腺、血清学、及び前立腺癌関連試験のパラメータが、標準的な臨床検査法で監視され得る。
当技術分野で周知の任意のアッセイを使用して、前立腺癌の進行を評価することができる。セクション６．３．６及び６．３．６で例示されているように、前立腺癌の進行及び他の関連する臨床パラメータは、監視され得る。簡潔には、表９．疾患の兆候による進行のＰＣＷＧ３基準に例示される、ＰＳＡの変化レベルの測定、標的病変及び前立腺の進行の監視、骨転移の検出は、標準的な方法で行われ得る（例えば、Ｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ，３４：１４０２－１８参照）。さらに、血液学、臨床化学、尿検査、凝固、甲状腺、血清学、及び前立腺癌関連試験のパラメータが、標準的な臨床検査法で監視され得る。
【実施例】
【0165】
６．実施例
６．１ ベクターデザイン及び連続継代時の導入遺伝子の安定性
６．１．１ ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰのベクターデザイン及び導入遺伝子の安定性
ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、内因性糖タンパク質の代わりにＬＣＭＶ株ＷＥのＧＰを発現するＬＣＭＶクローン１３（ＬＣＭＶ ｃｌ１３）（ＬＣＭＶ ｃｌ１３／ＷＥ）に基づく弱毒化された複製可能な３セグメント化ベクターである。図１Ａに示す通り、ＮＰ－Ｓセグメントは、ヒト前立腺癌関連抗原ＰＡＰ（配列番号５）をコードし、ＧＰ－Ｓセグメントは、ＰＳＡ（配列番号６）をコードする。両抗原のヌクレオチド配列を、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変した。このベクターを、以前にＫａｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１７；８：１５３２７によって記載された通り、５プラスミドの共トランスフェクション系を使用して、生産細胞のエレクトロポレーションによって新たに生成した。
６．１ ベクターデザイン及び連続継代時の導入遺伝子の安定性
６．１．１ ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰのベクターデザイン及び導入遺伝子の安定性
ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、内因性糖タンパク質の代わりにＬＣＭＶ株ＷＥのＧＰを発現するＬＣＭＶクローン１３（ＬＣＭＶ ｃｌ１３）（ＬＣＭＶ ｃｌ１３／ＷＥ）に基づく弱毒化された複製可能な３セグメント化ベクターである。図１Ａに示す通り、ＮＰ－Ｓセグメントは、ヒト前立腺癌関連抗原ＰＡＰ（配列番号５）をコードし、ＧＰ－Ｓセグメントは、ＰＳＡ（配列番号６）をコードする。両抗原のヌクレオチド配列を、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変した。このベクターを、以前にＫａｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１７；８：１５３２７によって記載された通り、５プラスミドの共トランスフェクション系を使用して、生産細胞のエレクトロポレーションによって新たに生成した。
【0166】
ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰベクターのＰＭＶＳであるＰＭＶＳ（１２）を生成し、継代レベルを増加させながら、コードされた導入遺伝子の遺伝的安定性及び発現を、ＰＣＲ及びウェスタンブロッティングによって分析した。図２Ａに示す通り、ＰＡＰ及びＰＳＡ導入遺伝子は、調べたすべての継代レベル間で安定であった。図２Ｂに示す通り、ＰＡＰ及びＰＳＡの発現は、ウェスタンブロッティングによって確認することができた。
【0167】
６．１．２ ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰのベクターデザイン及び導入遺伝子の安定性
ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、ピチンデウイルスの毒性株継代１８（ＰＩＣ、別名ＰＩＣＶ ｐ１８）に基づく、弱毒化された複製可能な３セグメント化ベクターである。図１Ａに示す通り、ＮＰ－Ｓセグメントは、ヒト前立腺癌関連抗原ＰＡＰ（配列番号５）をコードし、ＧＰ－Ｓセグメントは、ＰＳＡ（配列番号６）をコードする。両抗原のヌクレオチド配列を、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変した。
ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、ピチンデウイルスの毒性株継代１８（ＰＩＣ、別名ＰＩＣＶ ｐ１８）に基づく、弱毒化された複製可能な３セグメント化ベクターである。図１Ａに示す通り、ＮＰ－Ｓセグメントは、ヒト前立腺癌関連抗原ＰＡＰ（配列番号５）をコードし、ＧＰ－Ｓセグメントは、ＰＳＡ（配列番号６）をコードする。両抗原のヌクレオチド配列を、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変した。
【0168】
ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰのＰＭＶＳ候補であるＰＭＶＳ（０５）ｃｌ．３２／０５／０５を生成し、継代レベルを増加させながら、コードされた導入遺伝子の遺伝的安定性及び発現を、ＰＣＲ及びウェスタンブロッティングによって分析した。図３Ａに示す通り、ＰＡＰ及びＰＳＡ導入遺伝子は、調べたすべての継代レベル間で安定であった。図３Ｂに示す通り、ＰＡＰ及びＰＳＡの発現は、ウェスタンブロッティングによって確認することができた。
【0169】
６．１．３ ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰのベクターデザイン及び導入遺伝子の安定性
図４に示す通り、全長ＰＳＭＡをコードするａｒｔＬＣＭＶベクター（ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ）（２２５３ｂｐからなる配列番号９、７５１アミノ酸に翻訳される）は、連続継代時の主な導入遺伝子の不安定性を示す。したがって、ＰＳＭＡ抗原を、２つの部分、すなわち、ＰＳＭＡ１（配列番号３と３４３アミノ酸または配列番号７と１０３２ｂｐ）、及びＰＳＭＡ２（配列番号４と４０７アミノ酸または配列番号８と１２２４ｂｐ）に分割した。各部分を、１つのそれぞれのゲノムＳセグメントにコードした。具体的には、ＰＳＭＡ１導入遺伝子を正しく翻訳するために終止コドンＴＧＡを導入し、開始コドンを維持するためにＰＳＭＡ配列をＡＴＧの前で分割した。
図４に示す通り、全長ＰＳＭＡをコードするａｒｔＬＣＭＶベクター（ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ）（２２５３ｂｐからなる配列番号９、７５１アミノ酸に翻訳される）は、連続継代時の主な導入遺伝子の不安定性を示す。したがって、ＰＳＭＡ抗原を、２つの部分、すなわち、ＰＳＭＡ１（配列番号３と３４３アミノ酸または配列番号７と１０３２ｂｐ）、及びＰＳＭＡ２（配列番号４と４０７アミノ酸または配列番号８と１２２４ｂｐ）に分割した。各部分を、１つのそれぞれのゲノムＳセグメントにコードした。具体的には、ＰＳＭＡ１導入遺伝子を正しく翻訳するために終止コドンＴＧＡを導入し、開始コドンを維持するためにＰＳＭＡ配列をＡＴＧの前で分割した。
【0170】
ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰは、内因性糖タンパク質の代わりにＬＣＭＶ株ＷＥのＧＰを発現するＬＣＭＶクローン１３（ＬＣＭＶ ｃｌ１３）（ＬＣＭＶ ｃｌ１３／ＷＥ）に基づく弱毒化された複製可能な３セグメント化ベクターである。このベクターは、ヒトＦＯＬＨ１遺伝子産物、代替的にＰＳＭＡとも呼ばれる産物をコードする。ＰＳＭＡのＮ末端アミノ酸１～３４３及び人工的に付加された終止コドンは、ＧＰ－Ｓセグメント上の「ＰＳＭＡ１」（配列番号７）と呼ばれるＯＲＦによってコードした。３４４位の既存のメチオニンによって導かれるＰＳＭＡのＣ末端アミノ酸３４４～７５０は、ＮＰ－Ｓセグメント上の「ＰＳＭＡ２」（配列番号８）と呼ばれるＯＲＦによってコードした。これらのヌクレオチド配列を、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変した。
【0171】
ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰのＰＭＶＳ候補であるＰＭＶＳ（０９）ｃｌ．９／７／２を生成し、継代レベルを増加させながら、コードされた導入遺伝子の遺伝的安定性及び発現を、ＰＣＲ及びウェスタンブロッティングによって分析した。図５Ａに示す通り、ＰＳＭＡ１及びＰＳＭＡ２導入遺伝子は、調べたすべての継代レベル間で安定であった。図５Ｂに示す通り、ＰＳＭＡ１の発現は、ウェスタンブロッティングによって確認することができた。ＰＳＭＡ２のタンパク質発現の結果は、使用した抗体の品質が低かったために損なわれたが、ベクターゲノムの配列決定により、コード配列の正確な全長挿入が示された。
【0172】
６．１．４ ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰのベクターデザイン及び導入遺伝子の安定性
ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰは、ピチンデウイルスの毒性株継代１８（ＰＩＣＶ、別名ＰＩＣＶ ｐ１８）に基づく、弱毒化された複製可能な３セグメント化ベクターである。図１Ｃに示す通り、このベクターは、ヒトＦＯＬＨ１遺伝子産物、代替的にＰＳＭＡとも呼ばれる産物をコードした。ＰＳＭＡのＮ末端アミノ酸１～３４３及び人工的に付加された終止コドンは、ＮＰ－Ｓセグメント上の「ＰＳＭＡ１」（配列番号７）と呼ばれるＯＲＦによってコードした。３４４位の既存のメチオニンによって導かれるＰＳＭＡのＣ末端アミノ酸３４４～７５０は、ＧＰ－Ｓセグメント上の「ＰＳＭＡ２」（配列番号８）と呼ばれるＯＲＦによってコードした。これらのヌクレオチド配列を、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変した。以下に詳述するように、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰを生成したところ、導入遺伝子を安定にコードし、発現することが分かった。
ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰは、ピチンデウイルスの毒性株継代１８（ＰＩＣＶ、別名ＰＩＣＶ ｐ１８）に基づく、弱毒化された複製可能な３セグメント化ベクターである。図１Ｃに示す通り、このベクターは、ヒトＦＯＬＨ１遺伝子産物、代替的にＰＳＭＡとも呼ばれる産物をコードした。ＰＳＭＡのＮ末端アミノ酸１～３４３及び人工的に付加された終止コドンは、ＮＰ－Ｓセグメント上の「ＰＳＭＡ１」（配列番号７）と呼ばれるＯＲＦによってコードした。３４４位の既存のメチオニンによって導かれるＰＳＭＡのＣ末端アミノ酸３４４～７５０は、ＧＰ－Ｓセグメント上の「ＰＳＭＡ２」（配列番号８）と呼ばれるＯＲＦによってコードした。これらのヌクレオチド配列を、ＣｐＧジヌクレオチドモチーフを欠くように改変した。以下に詳述するように、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰを生成したところ、導入遺伝子を安定にコードし、発現することが分かった。
【0173】
図６Ａに示す通り、ＰＭＶＳ ２６というＰＭＶＳは、コードされたＰＳＭＡ１及びＰＳＭＡ２導入遺伝子を、継代レベル１０まで、いずれのセグメントにも導入遺伝子の欠失なく安定に発現した。図６Ｂに示す通り、ウェスタンブロット分析により、ＰＭＶＳ ２６におけるＰＳＭＡ１タンパク質の発現は、継代レベル１０まで検出可能であることが明らかになった。ＰＳＭＡ２のタンパク質発現の結果は、使用した抗体の品質が低かったために損なわれたが、ベクターゲノムの配列決定により、コード配列の正確な全長挿入が示された。
【0174】
６．１．５ 融合導入遺伝子のベクターデザイン及び導入遺伝子の安定性
以下の融合導入遺伝子を有するベクターを試験した：ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ＿ＰＳＡ－ＮＰ／ＰＡＰ＿ＰＳＡ－ＧＰ、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＡ＿ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ＿ＰＡＰ－ＧＰ、及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ＿ＰＳＡ－ＮＰ／ＰＳＭＡ－ＧＰ。ＰＳＭＡ（全長）ベクターセグメントは、７５１アミノ酸をコードする２２５３ｂｐを有し、ＰＡＰ＿ＰＳＡ融合ベクターセグメントは、６４７アミノ酸をコードする１９４１ｂｐを有する。３つのベクターすべてがＰ１では不安定であることが分かった。
以下の融合導入遺伝子を有するベクターを試験した：ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ＿ＰＳＡ－ＮＰ／ＰＡＰ＿ＰＳＡ－ＧＰ、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＡ＿ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ＿ＰＡＰ－ＧＰ、及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ＿ＰＳＡ－ＮＰ／ＰＳＭＡ－ＧＰ。ＰＳＭＡ（全長）ベクターセグメントは、７５１アミノ酸をコードする２２５３ｂｐを有し、ＰＡＰ＿ＰＳＡ融合ベクターセグメントは、６４７アミノ酸をコードする１９４１ｂｐを有する。３つのベクターすべてがＰ１では不安定であることが分かった。
【0175】
６．２ マウスにおけるＰＡＰ、ＰＳＡ、及びＰＳＭＡをコードするａｒｔＬＣＭＶ及びａｒｔＰＩＣＶベクターの免疫原性
６．２．１ 単一ベクター構築物及びベクターの組み合わせの免疫原性
単一ベクター構築物またはその組み合わせが、コードされた抗原に対する免疫応答を誘導する能力を分析するために、示されたベクター構築物を１×１０５ＲＣＶ ＦＦＵ／投与でマウスに静脈内免疫化を行った（表２ 試験レイアウト参照）。新たに単離した脾細胞を使用した細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を、免疫後７日目に行った。Ｈ－２ｂ及びＨ－２ｄ制限Ｔ細胞エピトープをカバーするため、Ｃ５７ＢＬ／６×Ｂａｌｂ／ｃハイブリッドマウス（すなわち、ＣＢ６Ｆ１マウス）を使用した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用したテューキーの多重比較検定（一元配置分散分析）を、すべての群の平均を相互に比較することによってＩＣＳデータに対して実行した。ｐ＜０．０５（＊）、ｐ＜０．０１（＊＊）、ｐ＜０．００５（＊＊＊）及びｐ＜０．００１（＊＊＊＊）のＰ値を有意と見なした。
６．２．１ 単一ベクター構築物及びベクターの組み合わせの免疫原性
単一ベクター構築物またはその組み合わせが、コードされた抗原に対する免疫応答を誘導する能力を分析するために、示されたベクター構築物を１×１０５ＲＣＶ ＦＦＵ／投与でマウスに静脈内免疫化を行った（表２ 試験レイアウト参照）。新たに単離した脾細胞を使用した細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を、免疫後７日目に行った。Ｈ－２ｂ及びＨ－２ｄ制限Ｔ細胞エピトープをカバーするため、Ｃ５７ＢＬ／６×Ｂａｌｂ／ｃハイブリッドマウス（すなわち、ＣＢ６Ｆ１マウス）を使用した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用したテューキーの多重比較検定（一元配置分散分析）を、すべての群の平均を相互に比較することによってＩＣＳデータに対して実行した。ｐ＜０．０５（＊）、ｐ＜０．０１（＊＊）、ｐ＜０．００５（＊＊＊）及びｐ＜０．００１（＊＊＊＊）のＰ値を有意と見なした。
【表3】
【0176】
調べたすべてのベクターは、初回投与後に、コードされた抗原に対してＣＤ８Ｔ細胞応答を誘導した（図７Ａ及び７Ｂ）。ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ（群２）及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ（群３）は両方とも、同等のＰＡＰ特異的Ｔ細胞応答を誘導した（図７Ａ）。しかしながら、ＰＳＡに対する誘導Ｔ細胞応答は、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ（群２）と比較して、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ（群３）で免疫した動物において有意に高かった（図７Ａ）。
【0177】
同様に、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰでの免疫化後に、同等のＰＳＭＡ特異的Ｔ細胞応答が観察された。しかしながら、ＰＳＭＡ抗原の個々の部分に対する応答の分析により、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ（群４）と比較して、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ（群５）の投与後のＰＳＭＡ１に対するＣＤ８Ｔ細胞応答が有意に高いことが明らかになった（図７Ｂ）。
【0178】
混合ベクターが、コードされたすべての抗原に対して依然としてＴ細胞応答を誘導するかどうかを調べるために、群６及び７のマウスをそれぞれ、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ（群６）またはａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ（群７）の組み合わせで免疫した。図７Ｃ及び７Ｄに示すように、第二のベクターの共投与は、試験したベクターの免疫原性を消失させず、すべてのベクター構築物は、初回投与後、コードされた抗原に対してかなりのＣＤ８Ｔ細胞応答を誘導した。
【0179】
図７Ｅに示す通り、ベクター骨格特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答は、すべての処置群で誘導された。ＬＣＭＶのＮＰ特異的Ｔ細胞応答は、単一のベクターのみで免疫された群２または４のマウスと比較して、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰの組み合わせで免疫した群６の動物で有意に低かった。試験動物に注射されたウイルスの総力価が、単独ベクター群（ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰまたはａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ）よりも組み合わせベクター群（ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ）で２倍高かったため、これは予想外であった。ａｒｔＰＩＣＶ系ベクターの場合、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ（群５）及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ（群７）の免疫と比較して、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ（群３）の投与後、有意に高いベクター骨格（ＰＩＣＶ ＮＰ）特異的Ｔ細胞応答が観察された。
【0180】
６．２．２ 同種または異種交互ベクター投与後のａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰの免疫原性
同種または異種交互ベクター投与後のａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰベクターの免疫原性を分析するために、マウスを１×１０５ＲＣＶ ＦＦＵ／投与のａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ（群２及び４）またはａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ（群３及び５）で０日目に静脈内免疫した。３週間後の２１日目に、群２及び５の動物に、１×１０５ＲＣＶ ＦＦＵ／投与のａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを連続して投与した一方、群３及び４のマウスには、１×１０５ＲＣＶ ＦＦＵ／投与のａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを連続して投与した（表３ 試験レイアウト参照）。新たに単離した脾細胞を用いた細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を２６日目に行い、コードされた前立腺癌関連抗原ＰＡＰ及びＰＳＡ、ならびにアレナウイルスベクター骨格タンパク質ＮＰに特異的なＴ細胞応答を検出した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用したテューキーの多重比較検定（一元配置分散分析）を、すべての群の平均を相互に比較することによってＩＣＳデータに対して実行した。ｐ＜０．０５（＊）、ｐ＜０．０１（＊＊）、ｐ＜０．００５（＊＊＊）及びｐ＜０．００１（＊＊＊＊）のＰ値を有意と見なした。
同種または異種交互ベクター投与後のａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰベクターの免疫原性を分析するために、マウスを１×１０５ＲＣＶ ＦＦＵ／投与のａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ（群２及び４）またはａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ（群３及び５）で０日目に静脈内免疫した。３週間後の２１日目に、群２及び５の動物に、１×１０５ＲＣＶ ＦＦＵ／投与のａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを連続して投与した一方、群３及び４のマウスには、１×１０５ＲＣＶ ＦＦＵ／投与のａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを連続して投与した（表３ 試験レイアウト参照）。新たに単離した脾細胞を用いた細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を２６日目に行い、コードされた前立腺癌関連抗原ＰＡＰ及びＰＳＡ、ならびにアレナウイルスベクター骨格タンパク質ＮＰに特異的なＴ細胞応答を検出した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用したテューキーの多重比較検定（一元配置分散分析）を、すべての群の平均を相互に比較することによってＩＣＳデータに対して実行した。ｐ＜０．０５（＊）、ｐ＜０．０１（＊＊）、ｐ＜０．００５（＊＊＊）及びｐ＜０．００１（＊＊＊＊）のＰ値を有意と見なした。
【表4】
【0181】
図８Ａ及び図８Ｂに示す通り、ＰＡＰ及びＰＳＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答は、すべての試験群で検出された。しかしながら、最初にａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰベクターで免疫し、続いてａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰベクターを投与した群５の動物は、他のすべての試験群のマウスと比較して有意に高いＰＡＰ特異的（図８Ａ）及びＰＳＡ特異的（図８Ｂ）ＣＤ８Ｔ細胞応答を示した。
【0182】
ＰＳＡ特異的Ｔ細胞応答（図８Ｂ）の場合、群２と３の間に差があり、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ（群２）と比較して、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ（群３）による同種交互ベクター投与後に、かなり高いＰＳＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答が誘導された。さらに、最初にａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを投与された動物に、異種ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰベクターを連続して投与した（群４）場合に、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰのみによる同種交互ベクター投与（群２）と比較してＰＳＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答が増加する傾向があった。
【0183】
アレナウイルスＮＰ特異的Ｔ細胞応答の分析（図８Ｃ）により、初回投与に使用されたベクター骨格に対するＣＤ８Ｔ細胞応答の誘導が実証された。初回ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ投与の場合、群２（すなわち、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰによる同種連続投与後）と群４（すなわち、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰによる異種連続投与後）間で、ＬＣＭＶ ＮＰ特異的Ｔ細胞応答に有意差はなかった。対照的に、マウスに最初にａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを投与した場合、ＰＩＣＶ ＮＰ特異的Ｔ細胞応答は、動物に異種ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰベクターを連続して投与した（群５）場合に、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰによる連続同種投与（群３）と比較して有意に低かった。したがって、導入遺伝子対ベクター特異的Ｔ細胞の比は、群５、すなわち、最初にａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを投与し、連続してａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを投与した後に最も高かった。
【0184】
６．２．３ 同種または異種交互ベクター投与後のａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰの免疫原性
同種または異種交互ベクター投与後のＰＳＭＡ発現ベクターａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰの免疫原性を分析するために、マウスを１×１０５ＲＣＶ ＦＦＵ／投与のａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ（群２及び４）またはａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ（群３及び５）で０日目に静脈内免疫した。３週間後の２１日目に、群３及び４の動物に、１×１０５ＲＣＶ ＦＦＵ／投与のａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰを連続して投与した一方、群２及び５のマウスには、１×１０５ＲＣＶ ＦＦＵ／投与のａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰを連続して投与した（表４ 試験レイアウト参照）。新たに単離した脾細胞を用いた細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を２６日目に行い、コードされた前立腺癌関連抗原ＰＳＭＡ、ならびにアレナウイルスベクター骨格タンパク質ＮＰに特異的なＴ細胞応答を検出した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用したテューキーの多重比較検定（一元配置分散分析）を、すべての群の平均を相互に比較することによってＩＣＳデータに対して実行した。ｐ＜０．０５（＊）、ｐ＜０．０１（＊＊）、ｐ＜０．００５（＊＊＊）及びｐ＜０．００１（＊＊＊＊）のＰ値を有意と見なした。
同種または異種交互ベクター投与後のＰＳＭＡ発現ベクターａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰの免疫原性を分析するために、マウスを１×１０５ＲＣＶ ＦＦＵ／投与のａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ（群２及び４）またはａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ（群３及び５）で０日目に静脈内免疫した。３週間後の２１日目に、群３及び４の動物に、１×１０５ＲＣＶ ＦＦＵ／投与のａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰを連続して投与した一方、群２及び５のマウスには、１×１０５ＲＣＶ ＦＦＵ／投与のａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰを連続して投与した（表４ 試験レイアウト参照）。新たに単離した脾細胞を用いた細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を２６日目に行い、コードされた前立腺癌関連抗原ＰＳＭＡ、ならびにアレナウイルスベクター骨格タンパク質ＮＰに特異的なＴ細胞応答を検出した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用したテューキーの多重比較検定（一元配置分散分析）を、すべての群の平均を相互に比較することによってＩＣＳデータに対して実行した。ｐ＜０．０５（＊）、ｐ＜０．０１（＊＊）、ｐ＜０．００５（＊＊＊）及びｐ＜０．００１（＊＊＊＊）のＰ値を有意と見なした。
【表5】
【0185】
ＰＳＭＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答がすべての試験群で検出された（図９Ａ）。しかしながら、該ＰＳＭＡ抗原の両部分（すなわち、ＰＳＭＡ１及びＰＳＭＡ２）に対する最も高い抗原特異的応答は、最初にａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰを投与し、連続してａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰを投与した群５の動物で認められた。
【0186】
対照的に、図９Ｂに示す通り、アレナウイルスＮＰ特異的Ｔ細胞応答（図９Ｂ）は、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ（群２）またはａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ（群３）のいずれかによる同種交互ベクター投与後に、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰに続いてａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ（群４）またはａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰに続いてａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ（群５）の連続投与を使用した異種交互ベクター投与と比較して、有意に高かった。したがって、導入遺伝子対ベクター特異的Ｔ細胞の比は、群５、すなわち、最初にａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰを投与し、連続してａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰを投与した後に最も高かった。
【0187】
６．２．４ 同種または異種交互ベクター投与後のａｒｔＬＣＭＶ及びａｒｔＰＩＣＶベクターの組み合わせの免疫原性
コードされた抗原に対する免疫応答を誘導する個々のベクター構築物の能力を、同種及び異種の両交互ベクター投与を使用したベクター混合物（すなわち、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ）の投与後に分析した。
コードされた抗原に対する免疫応答を誘導する個々のベクター構築物の能力を、同種及び異種の両交互ベクター投与を使用したベクター混合物（すなわち、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ）の投与後に分析した。
【0188】
全群のマウスに、０日目に最初に投与し、２１日後に１×１０５ＲＣＶ ＦＦＵ／ベクターで予め混合したベクターを静脈内投与により連続的に投与した。群１及び３のマウスは、最初にａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰの組み合わせ（すなわち、ａｒｔＬＣＭＶベクター混合物）で免疫した。群１の動物には、同じベクターの組み合わせを連続的に投与したが、群３のマウスには、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰの組み合わせ（すなわち、ａｒｔＰＩＣＶベクター混合物）を連続的に投与した。群２及び４の動物には、ａｒｔＰＩＣＶベクター混合物の初回投与を施した。群２のマウスには、続いて第二の投与としては、同じａｒｔＰＩＣＶベクター混合物を使用して、連続して同種投与した。対照的に、群４の動物には、ａｒｔＬＣＭＶベクター混合物を連続して投与した（表５ 試験レイアウト参照）。新たに単離した脾細胞を用いた細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を２６日目に行い、コードされた前立腺癌関連抗原ＰＡＰ、ＰＳＡ及びＰＳＭＡならびにアレナウイルスベクター骨格タンパク質ＮＰに特異的なＴ細胞応答を検出した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用したテューキーの多重比較検定（一元配置分散分析）を、すべての群の平均を相互に比較することによってＩＣＳデータに対して実行した。ｐ＜０．０５（＊）、ｐ＜０．０１（＊＊）、ｐ＜０．００５（＊＊＊）及びｐ＜０．００１（＊＊＊＊）のＰ値を有意と見なした。
【表6】
【0189】
図１０Ａに示す通り、ＰＡＰ特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答は、すべての試験群で検出された。最も高いＰＡＰ特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答は、最初にａｒｔＬＣＭＶベクター混合物を投与され、続いてａｒｔＰＩＣＶベクター混合物を投与された群３の動物で観察された。これは、同様に最初にａｒｔＬＣＭＶベクター混合物を投与されたが、同じａｒｔＬＣＭＶベクター混合物を同種様式で連続的に投与された群１の動物とは顕著な対照であった。それぞれの動物は、すべての試験群の中で最も低いＰＡＰ特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答を示した。
【0190】
異種交互ベクター投与は同様に、ＰＳＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答の誘導において同種手順よりも有意に優れていた。図１０Ｂに示す通り、最も高いＰＳＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答は、最初にａｒｔＬＣＭＶベクター混合物を投与され、連続してａｒｔＰＩＣＶベクター混合物を投与された（群３）または最初にａｒｔＰＩＣＶベクター混合物を投与され、連続してａｒｔＬＣＭＶベクター混合物を投与された（群４）、群３及び４の動物で観察された。ＰＳＡに対して有意に低いＴ細胞応答は、同じａｒｔＬＣＭＶ（群１）またはａｒｔＰＩＣＶ（群２）ベクター混合物でそれぞれ２回免疫した動物で誘導された。同種交互ベクター投与によるこれら群間の比較により、ａｒｔＰＩＣＶベクター混合物で処置された群２の動物において、ａｒｔＬＣＭＶベクター混合物で免疫された群１の動物と比較して、高いＰＳＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答が明らかになった。
【0191】
異なる試験群で誘導されたＰＳＭＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答の分析により、異種交互ベクター投与後の優れた免疫原性の観察がさらに実証された。図１０Ｃに示す通り、最も高いＰＳＭＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答は、最初にａｒｔＬＣＭＶベクター混合物を投与され、連続してａｒｔＰＩＣＶベクター混合物を投与された（群３）または最初にａｒｔＰＩＣＶベクター混合物を投与され、連続してａｒｔＬＣＭＶベクター混合物を投与された（群４）、群３及び４の動物で観察された。ＰＳＭＡに対して有意に低いＴ細胞応答は、同種交互ベクター投与で処置された、すなわち、同じａｒｔＬＣＭＶ（群１）またはａｒｔＰＩＣＶ（群２）ベクター混合物でそれぞれ２回免疫した動物で誘導された。この観察は、全ＰＳＭＡ抗原に対する免疫応答が分析されたのか、その個々のサブドメインのみに対する免疫応答が分析されたのかに関係なく一貫していた。
【0192】
対照的に、ベクター骨格特異的免疫応答は、ａｒｔＬＣＭＶベクター混合物（群１）またはａｒｔＰＩＣＶベクター混合物（群２）のいずれかの同種交互ベクター投与後の方が、ａｒｔＬＣＭＶベクター混合物に続いてａｒｔＰＩＣＶベクター混合物（群３）またはａｒｔＰＩＣＶベクターに続いてａｒｔＬＣＭＶベクター混合物（群４）の連続投与を使用した異種交互ベクター投与と比較して有意に高く、ベクターＮＰ特異的Ｔ細胞応答によって実証される（図１０Ｄ）。したがって、導入遺伝子対ベクター特異的Ｔ細胞の比は、群４、すなわち、最初にａｒｔＰＩＣＶベクター混合物を投与し、連続してａｒｔＬＣＭＶベクター混合物を投与した後に最も高かった。
【0193】
６．３ 前立腺癌患者の処置
６．３．１ ウイルスベクターに基づく治療的免疫療法
以下の表６．ウイルスベクターに基づく治療的免疫療法の説明に記載の４つの個々のウイルスベクターに基づく治療的免疫療法を試験し、２つの処置計画を検討する：
・群１：患者は、交互２ベクター処置を受ける：
ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとの交互順で最初に投与される。
・群２：患者は、交互４ベクター処置を受ける：
ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰは、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰとの交互順で最初に投与される。
６．３．１ ウイルスベクターに基づく治療的免疫療法
以下の表６．ウイルスベクターに基づく治療的免疫療法の説明に記載の４つの個々のウイルスベクターに基づく治療的免疫療法を試験し、２つの処置計画を検討する：
・群１：患者は、交互２ベクター処置を受ける：
ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとの交互順で最初に投与される。
・群２：患者は、交互４ベクター処置を受ける：
ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰは、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰとの交互順で最初に投与される。
【表7】
【0194】
６．３．２ 処置の概要
ｍＣＲＰＣの成人患者は、２つのパート、すなわち、第１相用量漸増及び第２相用量拡大で処置される。この試験デザインの概要を図１１に示す。
ｍＣＲＰＣの成人患者は、２つのパート、すなわち、第１相用量漸増及び第２相用量拡大で処置される。この試験デザインの概要を図１１に示す。
【0195】
（ｉ）第Ｉ相用量漸増
第Ｉ相用量漸増は、２つの処置群を有する：
・群１：交互２ベクター処置。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとの交互順で最初に投与される。
・群２：交互４ベクター処置。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰは、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰとの交互順で最初に投与される。
第Ｉ相用量漸増は、２つの処置群を有する：
・群１：交互２ベクター処置。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとの交互順で最初に投与される。
・群２：交互４ベクター処置。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰは、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰとの交互順で最初に投与される。
【0196】
試験処置は、セクション６．３．５（ｉ）に示す通りに施される。
【0197】
（ｉｉ）第ＩＩ相用量拡大
第ＩＩ相用量拡大は、第Ｉ相用量漸増の完了後に開始される。
第ＩＩ相用量拡大は、第Ｉ相用量漸増の完了後に開始される。
【0198】
試験処置計画は、セクション６．３．５（ｉｉ）に示す試験の第Ｉ相用量漸増部分からの安全性、有効性、バイオマーカー、及び免疫原性の結果に基づく。
【0199】
６．３．３ 患者集団：試験対象患者基準
全患者に対して：
全患者に対して：
【0200】
以下の基準をすべて満たす患者は本試験に参加する資格がある：
１．インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名した時点で１８歳以上の男性患者。
２．本試験への参加について自発的にインフォームドコンセントを与える意欲及び能力がある。
３．神経内分泌分化も小細胞の特徴も伴わない、組織学的に確認された前立腺腺癌の診断。
４．血清テストステロンレベルが＜５０ｎｇ／ｄＬ（１．７ｎｍｏｌ／Ｌ）である文書化された去勢状態。該去勢状態が、両側精巣摘出術、または黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アナログ（アゴニストまたはアンタゴニスト）の使用によって得ることができる。外科的両側精巣摘出術を受けていない患者は、本試験期間中、ＬＨＲＨアナログを継続する意思がなければならない。
５．患者は、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）及び／または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）で測定可能な軟部組織病変を１つ以上有している必要があり、これは、試験を行う過程で、固形がん効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）ｖ１．１及び免疫ＲＥＣＩＳＴ（ｉＲＥＣＩＳＴ）に従って、腫瘍反応について評価される。
６．患者は、標準治療による疾患の進行を評価されている必要がある。疾患の進行は、前立腺癌臨床試験ワーキンググループ３（ＰＣＷＧ３）のガイダンスに従う以下の基準の１つ以上によって定義される：
・ＰＳＡレベルの上昇としてのみ疾患の進行を示す患者の場合、ＰＣＷＧ３は、１週間以上の間隔をあけて（２８日間のスクリーニング期間に限定されない）少なくとも２回連続してＰＳＡ値が上昇し、最低開始値が１．０ｎｇ／ｍＬであることを必要とする。最新のＰＳＡレベルは、最初の治験薬処置前２１日以内に取得する必要がある。（注：フルタミドを投与されている患者の場合、フルタミド中止後４週間以上で少なくとも１つのＰＳＡ値を取得する必要がある。ビカルタミドまたはニルタミドを投与されている患者の場合、抗アンドロゲン剤中止後６週間以上で少なくとも１つのＰＳＡ値を取得する必要がある。）
・測定可能な結節病変または内臓病変を有する患者の場合、ＲＥＣＩＳＴ１．１によって定義されるこれらの病変の１つの疾患の進行は、ＰＳＡに関係なく適格性には十分である。直径１５ｍｍ以上のリンパ節の場合、測定可能と見なされ、サイズの変化を評価するために使用される。
・骨転移を有する患者の場合、進行は、骨スキャンまたはその他のスキャン（例えば、ＭＲＩ）による２つ以上の新たな病変の出現によって定義される。
７．抗アンドロゲン剤の中止とその後の進行は、症例別の例外が適用されない限り、登録の少なくとも４週間以上前に生じる必要がある。ＬＨＲＨアゴニストまたはアンタゴニストは、継続されるべきである。
８．症例特有の例外が適用されない限り、患者は以下を有さなければならない：
・患者が最後の治療から進行した後に採取した記録保管軟部組織腫瘍検体または投与前に新鮮な軟部組織生検検体を提供する能力。記録保管サンプルが提供される場合、該サンプルは、２年より前のものであってはならない。
・試験中に生検に潜在的に使用可能である軟部組織病変。
９．米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）一般状態が０～１。
１０．以前の治癒的放射線療法は、治験薬投与の少なくとも４週間前に完了していなければならない。以前の局所姑息的放射線治療は、治験薬投与の少なくとも２週間前に完了していなければならない。
１１．スクリーニング検査値は、以下の基準を満たしている必要があり、試験処置投与前の２８日以内に取得するべきである：
・絶対好中球数≧１，５００／ｍｍ３（１．５×１０９／Ｌ）
・血小板≧１００×１０３／ｍｍ３（１００×１０９／Ｌ）
・ヘモグロビン≧８．５ｇ／ｄＬ
・血清クレアチニン≦２．０×正常上限（ＵＬＮ）またはクレアチニンクリアランス＞３０ｍＬ／分（Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ－Ｇａｕｌｔ式を使用）
・アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ／アラニンアミノトランスフェラーゼ≦３×ＵＬＮ
・総ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ（総ビリルビン＜３．０ｍｇ／ｄＬを有し得るジルベール症候群の患者を除く）
１．インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名した時点で１８歳以上の男性患者。
２．本試験への参加について自発的にインフォームドコンセントを与える意欲及び能力がある。
３．神経内分泌分化も小細胞の特徴も伴わない、組織学的に確認された前立腺腺癌の診断。
４．血清テストステロンレベルが＜５０ｎｇ／ｄＬ（１．７ｎｍｏｌ／Ｌ）である文書化された去勢状態。該去勢状態が、両側精巣摘出術、または黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アナログ（アゴニストまたはアンタゴニスト）の使用によって得ることができる。外科的両側精巣摘出術を受けていない患者は、本試験期間中、ＬＨＲＨアナログを継続する意思がなければならない。
５．患者は、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）及び／または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）で測定可能な軟部組織病変を１つ以上有している必要があり、これは、試験を行う過程で、固形がん効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）ｖ１．１及び免疫ＲＥＣＩＳＴ（ｉＲＥＣＩＳＴ）に従って、腫瘍反応について評価される。
６．患者は、標準治療による疾患の進行を評価されている必要がある。疾患の進行は、前立腺癌臨床試験ワーキンググループ３（ＰＣＷＧ３）のガイダンスに従う以下の基準の１つ以上によって定義される：
・ＰＳＡレベルの上昇としてのみ疾患の進行を示す患者の場合、ＰＣＷＧ３は、１週間以上の間隔をあけて（２８日間のスクリーニング期間に限定されない）少なくとも２回連続してＰＳＡ値が上昇し、最低開始値が１．０ｎｇ／ｍＬであることを必要とする。最新のＰＳＡレベルは、最初の治験薬処置前２１日以内に取得する必要がある。（注：フルタミドを投与されている患者の場合、フルタミド中止後４週間以上で少なくとも１つのＰＳＡ値を取得する必要がある。ビカルタミドまたはニルタミドを投与されている患者の場合、抗アンドロゲン剤中止後６週間以上で少なくとも１つのＰＳＡ値を取得する必要がある。）
・測定可能な結節病変または内臓病変を有する患者の場合、ＲＥＣＩＳＴ１．１によって定義されるこれらの病変の１つの疾患の進行は、ＰＳＡに関係なく適格性には十分である。直径１５ｍｍ以上のリンパ節の場合、測定可能と見なされ、サイズの変化を評価するために使用される。
・骨転移を有する患者の場合、進行は、骨スキャンまたはその他のスキャン（例えば、ＭＲＩ）による２つ以上の新たな病変の出現によって定義される。
７．抗アンドロゲン剤の中止とその後の進行は、症例別の例外が適用されない限り、登録の少なくとも４週間以上前に生じる必要がある。ＬＨＲＨアゴニストまたはアンタゴニストは、継続されるべきである。
８．症例特有の例外が適用されない限り、患者は以下を有さなければならない：
・患者が最後の治療から進行した後に採取した記録保管軟部組織腫瘍検体または投与前に新鮮な軟部組織生検検体を提供する能力。記録保管サンプルが提供される場合、該サンプルは、２年より前のものであってはならない。
・試験中に生検に潜在的に使用可能である軟部組織病変。
９．米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）一般状態が０～１。
１０．以前の治癒的放射線療法は、治験薬投与の少なくとも４週間前に完了していなければならない。以前の局所姑息的放射線治療は、治験薬投与の少なくとも２週間前に完了していなければならない。
１１．スクリーニング検査値は、以下の基準を満たしている必要があり、試験処置投与前の２８日以内に取得するべきである：
・絶対好中球数≧１，５００／ｍｍ３（１．５×１０９／Ｌ）
・血小板≧１００×１０３／ｍｍ３（１００×１０９／Ｌ）
・ヘモグロビン≧８．５ｇ／ｄＬ
・血清クレアチニン≦２．０×正常上限（ＵＬＮ）またはクレアチニンクリアランス＞３０ｍＬ／分（Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ－Ｇａｕｌｔ式を使用）
・アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ／アラニンアミノトランスフェラーゼ≦３×ＵＬＮ
・総ビリルビン≦１．５×ＵＬＮ（総ビリルビン＜３．０ｍｇ／ｄＬを有し得るジルベール症候群の患者を除く）
【0201】
６．３．４ 用量漸増ガイドライン－暫定用量レベルの検討
ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ、及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰは、ＩＶ（静注または静脈内注入として）で投与する。ベクターごとに、１×１０７ＲＣＶ ＦＦＵ／投与／患者の開始用量を投与する。さらに、本臨床研究の第１相部分に関する用量漸増計画は、コホート間で最大１対数のオーダーの用量増加を認める（すなわち、１０７、１０８、１０９ＲＣＶ ＦＦＵ）。
ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ、及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰは、ＩＶ（静注または静脈内注入として）で投与する。ベクターごとに、１×１０７ＲＣＶ ＦＦＵ／投与／患者の開始用量を投与する。さらに、本臨床研究の第１相部分に関する用量漸増計画は、コホート間で最大１対数のオーダーの用量増加を認める（すなわち、１０７、１０８、１０９ＲＣＶ ＦＦＵ）。
【0202】
第１相用量漸増群１及び２では、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ、及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰの提案されたヒト開始用量は、１×１０７ＲＣＶ ＦＦＵである。潜在的な用量漸増の非限定的な例を表７．群１の暫定用量レベル（ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰの交互２ベクター処置）ならびに表８．群２の暫定用量レベル（ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰの交互４ベクター処置）に示す。
【表8】
【表9】
【0203】
６．３．５ 処置計画及びサイクルの持続期間
患者は、許容できない処置関連毒性を経験するまで、疾患の進行（ｉＲＥＣＩＳＴによる免疫学的に確定された進行性疾患（ｉＣＰＤ）もしくはＰＣＷＧ３による骨進行）まで、または同意の撤回まで処置される。
患者は、許容できない処置関連毒性を経験するまで、疾患の進行（ｉＲＥＣＩＳＴによる免疫学的に確定された進行性疾患（ｉＣＰＤ）もしくはＰＣＷＧ３による骨進行）まで、または同意の撤回まで処置される。
【0204】
（ｉ）第Ｉ相用量漸増
群１（ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰの交互２ベクター処置）
・ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを、交互ＩＶ投与で投与する。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを最初に投与し、その後ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを投与する。
・サイクル１及び２では、処置サイクルを、４２日間と定義する。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを最初に投与し、その後ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを投与し、最初の４回の投与については、３週間（２１日）ごとに交互に処置する。
・ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、サイクル１及び２の１日目にＩＶ投与される。
・ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、サイクル１及び２の２２日目にＩＶ投与される。
・サイクル３以降のサイクルでは、処置サイクルを、８４日間と定義する。サイクル３の１日目は、サイクル２の４２日目の完了後に開始する。サイクル３以降のサイクルにおけるａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰの投与は、±７日の時間枠を有する。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰの投与は、以下のように６週間（４２日）ごとに交互に行う：
・ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、サイクル３以降のサイクルの１日目にＩＶ投与される。
・ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、サイクル３以降のサイクルの４３日目にＩＶ投与される。
群１（ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰの交互２ベクター処置）
・ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを、交互ＩＶ投与で投与する。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを最初に投与し、その後ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを投与する。
・サイクル１及び２では、処置サイクルを、４２日間と定義する。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを最初に投与し、その後ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを投与し、最初の４回の投与については、３週間（２１日）ごとに交互に処置する。
・ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、サイクル１及び２の１日目にＩＶ投与される。
・ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、サイクル１及び２の２２日目にＩＶ投与される。
・サイクル３以降のサイクルでは、処置サイクルを、８４日間と定義する。サイクル３の１日目は、サイクル２の４２日目の完了後に開始する。サイクル３以降のサイクルにおけるａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰの投与は、±７日の時間枠を有する。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰの投与は、以下のように６週間（４２日）ごとに交互に行う：
・ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、サイクル３以降のサイクルの１日目にＩＶ投与される。
・ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、サイクル３以降のサイクルの４３日目にＩＶ投与される。
【0205】
群２（ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰの交互４ベクター処置）：
・ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰを、交互ＩＶ投与で投与する。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰを最初に投与し、その後ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰを投与する。
・サイクル１及び２では、処置サイクルを、４２日間と定義する。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰを最初に投与し、その後ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰを投与し、最初の４回の投与については、３週間（２１日）ごとに交互に処置する。
・ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰは、サイクル１及び２の１日目にＩＶ投与される。
・ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰは、サイクル１及び２の２２日目にＩＶ投与される。
・サイクル３以降のサイクルでは、処置サイクルを、８４日間と定義する。サイクル３の１日目は、サイクル２の４２日目の完了後に開始する。サイクル３以降のサイクルにおけるａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰの投与は、±７日の時間枠を有する。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰの投与は、以下のように６週間（４２日）ごとに交互に行う：
・ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰは、サイクル３以降のサイクルの１日目にＩＶ投与される。
・ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰは、サイクル３以降のサイクルの４３日目にＩＶ投与される。
・ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰを、交互ＩＶ投与で投与する。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰを最初に投与し、その後ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰを投与する。
・サイクル１及び２では、処置サイクルを、４２日間と定義する。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰを最初に投与し、その後ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰを投与し、最初の４回の投与については、３週間（２１日）ごとに交互に処置する。
・ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰは、サイクル１及び２の１日目にＩＶ投与される。
・ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰは、サイクル１及び２の２２日目にＩＶ投与される。
・サイクル３以降のサイクルでは、処置サイクルを、８４日間と定義する。サイクル３の１日目は、サイクル２の４２日目の完了後に開始する。サイクル３以降のサイクルにおけるａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰの投与は、±７日の時間枠を有する。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰの投与は、以下のように６週間（４２日）ごとに交互に行う：
・ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰは、サイクル３以降のサイクルの１日目にＩＶ投与される。
・ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰは、サイクル３以降のサイクルの４３日目にＩＶ投与される。
【0206】
第Ｉ相用量漸増では、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰレジメン及び／またはａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ＋ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰレジメンの投与スケジュールは、安全性、有効性、またはバイオマーカーデータに基づいて次のコホート用に変更してもよい。
【0207】
第Ｉ相用量漸増では、以下の情報が収集される：（１）ＤＬＴ観察期間中に投与された第一の治験薬によるＤＬＴの発生率、（２）安全性：ＡＥ及びＳＡＥの種類、頻度、ならびに重症度、（３）忍容性：投与の中断、減量及び用量強度、ならびに臨床検査値の評価、（４）ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１／ｉＲＥＣＩＳＴ（軟部組織）及びＰＣＷＧ３（骨）基準を使用したＯＲＲ、ＤＣＲ、ＰＦＳ、ＯＳ及び奏効期間、（５）ＰＳＡ反応を示した患者の割合（ベースラインからベースライン後の最低ＰＳＡ結果までのＰＳＡの５０％以上の減少、少なくとも３週間後の２回目の連続ＰＳＡ評価によって確認される）、（６）任意の時点での最良のＰＳＡ反応、（７）抗原（ＰＡＰ、ＰＳＡ、及び／またはＰＳＭＡ）特異的Ｔ細胞応答の測定、すなわち、抗原特異的Ｔ細胞機能アッセイ、（８）免疫細胞の特性評価（免疫表現型検査）ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の測定、ならびに（９）腫瘍検体、血液、及び血清／血漿中のバイオマーカーの評価。
【0208】
（ｉｉ）第ＩＩ相用量拡大
アレナウイルスベクターの処置計画及びサイクル持続期間は、第Ｉ相で説明したものと同じである。
アレナウイルスベクターの処置計画及びサイクル持続期間は、第Ｉ相で説明したものと同じである。
【0209】
一部の処置群では、患者は、進行性前立腺癌の治療に承認されている薬剤と、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＳＭＡ２－ＮＰ／ＰＳＭＡ１－ＧＰ、及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＳＭＡ１－ＮＰ／ＰＳＭＡ２－ＧＰとの併用療法を受ける。
【0210】
第ＩＩ相用量拡大では、以下の情報が収集される：（１）ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１／ｉＲＥＣＩＳＴ（軟部組織）及びＰＣＷＧ３（骨）基準を使用したＯＲＲ及びＤＣＲ、（２）ＰＳＡ反応を示した患者の割合（ベースラインからベースライン後の最低ＰＳＡ結果までのＰＳＡの５０％以上の減少、少なくとも３週間後の２回目の連続ＰＳＡ評価によって確認される）、（３）任意の時点での最良のＰＳＡ反応、（４）腫瘍反応は、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１／ｉＲＥＣＩＳＴ（軟部組織）、ＰＣＷＧ３（骨）基準、例えば、奏効期間、ＰＦＳ、及びＯＳを使用して評価される、（５）安全性：ＡＥ及びＳＡＥの種類、頻度、ならびに重症度、（６）忍容性：投与の中断、減量及び用量強度、ならびに臨床検査値の評価、（７）抗原（ＰＡＰ、ＰＳＡ、及び／またはＰＳＭＡ）特異的Ｔ細胞応答の測定、すなわち、抗原特異的Ｔ細胞機能アッセイ、（８）免疫細胞の特性評価（免疫表現型検査）ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の測定、（９）腫瘍検体、血液、及び血清／血漿中のバイオマーカーの評価。
【0211】
６．３．６ 有効性の可変要素
第１相用量漸増及び第２相用量拡大のすべての群について、有効性評価は、以下を含む：
・ＰＳＡレベルはサイクル１の１日目から３週間ごとに検査
・軟部組織及び骨の画像スキャンは、最初の２４週間は８週間ごとに行い（すなわち、サイクル２の１５日目から開始し、次にサイクル３の２９日目と８４日目）、その後サイクル４の８４日目以降は１２週間ごとに行う。
第１相用量漸増及び第２相用量拡大のすべての群について、有効性評価は、以下を含む：
・ＰＳＡレベルはサイクル１の１日目から３週間ごとに検査
・軟部組織及び骨の画像スキャンは、最初の２４週間は８週間ごとに行い（すなわち、サイクル２の１５日目から開始し、次にサイクル３の２９日目と８４日目）、その後サイクル４の８４日目以降は１２週間ごとに行う。
【0212】
有効性は、ＰＣＷＧ３に従うＰＳＡ反応（Ｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１６）、ＰＣＷＧ３に従う骨反応、ならびにＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１（主要有効性エンドポイント）及びｉＲＥＣＩＳＴ（副次的有効性エンドポイント）に従う軟部組織反応を使用して評価する。骨の進行は、少なくとも６週間後に２回目の骨スキャンで確認する必要がある。
【0213】
表９．疾患の兆候による進行のＰＣＷＧ３基準は、ＰＳＡの変化、骨転移、及び測定可能な疾患に基づく評価及び進行の基準を示す（Ｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ，３４：１４０２－１８）。
【表10】
【0214】
６．３．７バイオマーカー及び中央検査室分析
以下の検査室分析（表１０．中央検査室分析用のサンプル収集の概要）を行う。
以下の検査室分析（表１０．中央検査室分析用のサンプル収集の概要）を行う。
【表11】
【0215】
６．４ 転移性去勢抵抗性前立腺癌患者の処置
６．４．１ ウイルスベクターに基づく治療的免疫療法
以下の表１１．ウイルスベクターに基づく治療的免疫療法の説明に記載の２つの個々のウイルスベクターに基づく治療的免疫療法を試験し、以下の投与計画を検討する：
ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとの交互順で最初に投与される。
６．４．１ ウイルスベクターに基づく治療的免疫療法
以下の表１１．ウイルスベクターに基づく治療的免疫療法の説明に記載の２つの個々のウイルスベクターに基づく治療的免疫療法を試験し、以下の投与計画を検討する：
ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとの交互順で最初に投与される。
【表12】
【0216】
６．４．２ 処置の概要
転移性去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）の成人患者は、２つの相、すなわち、第１相用量漸増及び第２相推奨用量（ＲＰ２Ｄ）確認、ならびに第２相用量拡大で処置される。この試験デザインの概要を図１２に示す。
転移性去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）の成人患者は、２つの相、すなわち、第１相用量漸増及び第２相推奨用量（ＲＰ２Ｄ）確認、ならびに第２相用量拡大で処置される。この試験デザインの概要を図１２に示す。
【0217】
（ｉ）第Ｉ相用量漸増
第Ｉ相用量漸増は、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ／ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ交互２ベクター療法を、安全性及び忍容性、予備有効性、免疫原性ならびに安全な第２相推奨用量（ＲＰ２Ｄ）の決定に関して評価する。交互２ベクター処置では、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとの交互順で最初に投与される。
第Ｉ相用量漸増は、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ／ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ交互２ベクター療法を、安全性及び忍容性、予備有効性、免疫原性ならびに安全な第２相推奨用量（ＲＰ２Ｄ）の決定に関して評価する。交互２ベクター処置では、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとの交互順で最初に投与される。
【0218】
試験処置は、セクション６．４．５（ｉ）に示す通りに施される。
【0219】
（ｉｉ）第ＩＩ相用量拡大
第ＩＩ相用量拡大は、第Ｉ相用量漸増の完了後に開始され、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ／ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ交互２ベクター療法を、本試験の第１相パートで定義されたＲＰ２Ｄで評価する。
第ＩＩ相用量拡大は、第Ｉ相用量漸増の完了後に開始され、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ／ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ交互２ベクター療法を、本試験の第１相パートで定義されたＲＰ２Ｄで評価する。
【0220】
試験処置計画は、セクション６．４．５（ｉｉ）に示す試験の第Ｉ相用量漸増部分からの安全性、有効性、バイオマーカー、及び免疫原性の結果に基づく。
【0221】
６．４．３ 患者集団：試験対象患者基準
組織学的または細胞学的に確認された前立腺腺癌を有し、血清テストステロンレベル５０ｎｇ／ｄＬ（１．７ｎｍｏｌ／Ｌ）未満の去勢状態を示し、少なくとも１つの測定可能な軟部組織病変及び／または１つ以上の検出可能な骨転移を有する参加者は、本試験に登録される。
組織学的または細胞学的に確認された前立腺腺癌を有し、血清テストステロンレベル５０ｎｇ／ｄＬ（１．７ｎｍｏｌ／Ｌ）未満の去勢状態を示し、少なくとも１つの測定可能な軟部組織病変及び／または１つ以上の検出可能な骨転移を有する参加者は、本試験に登録される。
【0222】
全患者に対して：
【0223】
以下の基準をすべて満たす患者は本試験に参加する資格がある：
１．インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名した時点で１８歳以上の男性患者。
２．本試験への参加について自発的にインフォームドコンセントを与える意欲及び能力がある。
３．神経内分泌分化も小細胞の特徴も伴わない、組織学的または細胞学的に確認された前立腺腺癌。
４．血清テストステロンレベルが＜５０ｎｇ／ｄＬ（１．７ｎｍｏｌ／Ｌ）である文書化された去勢状態。該去勢状態が、両側精巣摘出術、または黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アナログ（アゴニストまたはアンタゴニスト）の使用によって得ることができる。外科的両側精巣摘出術を受けていない患者は、本試験期間中、ＬＨＲＨアナログを継続する意思がなければならない。
５．患者は、１つ以上の測定可能な軟部組織病変及び／または１つ以上の検出可能な骨転移を有さなければならない。軟部組織病変は、試験を行う過程で、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）及び／または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）によって、固形がん効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）ｖ１．１及び免疫ＲＥＣＩＳＴ（ｉＲＥＣＩＳＴ）に従って腫瘍反応について評価され得る。
６．患者は、標準治療による疾患の進行を評価されている必要がある。疾患の進行は、前立腺癌臨床試験ワーキンググループ３（ＰＣＷＧ３）のガイダンスに従う以下の基準の１つ以上によって定義される：
・ＰＳＡレベルの上昇としてのみ疾患の進行を示す患者の場合、ＰＣＷＧ３は、３週間以上の間隔をあけて（２８日間のスクリーニング期間に限定されない）少なくとも２回連続してＰＳＡ値が上昇し、最低開始値が１．０ｎｇ／ｍＬであることを必要とする。最新のＰＳＡレベルは、最初の治験薬処置前２１日以内に取得する必要がある。
・測定可能な結節病変または内臓病変を有する患者の場合、ＲＥＣＩＳＴ１．１によって定義されるこれらの病変の１つの疾患の進行は、ＰＳＡに関係なく適格性には十分である。直径１５ｍｍ以上のリンパ節の場合、測定可能と見なされ、サイズの変化を評価するために使用される。
・骨転移を有する患者の場合、進行は、骨スキャンまたはその他のスキャン（例えば、ＭＲＩ）による２つ以上の新たな病変の出現によって定義される。
７．抗アンドロゲン剤の中止とその後の進行は、症例別の例外が適用されない限り、登録の少なくとも４週間以上前に生じる必要がある。ＬＨＲＨアゴニストまたはアンタゴニストは、継続されるべきである。
８．症例特有の例外が適用されない限り、患者は以下を有さなければならない：
・患者が最後の治療から進行した後に採取した記録保管軟部組織腫瘍検体または投与前に新鮮な軟部組織生検検体を提供する能力。記録保管サンプルが提供される場合、該サンプルは、２年より前のものであってはならない。
・試験中に生検に潜在的に使用可能である軟部組織病変。
９．米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）一般状態（ＰＳ）が０～１。
１０．以前の治癒的放射線療法は、治験薬投与の少なくとも４週間前に完了していなければならない。以前の局所姑息的放射線治療は、治験薬投与の少なくとも２週間前に完了していなければならない。
１１．スクリーニング検査値は、以下の基準を満たしている必要があり、試験処置投与前の２８日以内に取得するべきである：
・絶対好中球数≧１，５００／ｍｍ３（１．５×１０９／Ｌ）
・血小板≧１００×１０３／ｍｍ３（１００×１０９／Ｌ）
・ヘモグロビン≧９ｇ／ｄＬ（９０ｇ／Ｌ）または≧５．６ｍｍｏｌ／Ｌ
・血清クレアチニン≦１．５×正常上限（ＵＬＮ）またはクレアチニンレベル＞１．５ｘ施設ＵＬＮの患者の場合、クレアチニンクリアランス＞３０ｍＬ／分（Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ－Ｇａｕｌｔ式を使用）
・アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）／アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）≦２．５×ＵＬＮまたは肝転移のある患者の場合は≦５ｘＵＬＮ
・総ビリルビン≦１．５×ＵＬＮまたは総ビリルビンレベルが＞１．５ｘＵＬＮの患者の場合は直接ビリルビン≦ＵＬＮ
・アルブミン≧３ｇ／ｄＬ
・国際標準化比（ＩＮＲ）またはプロトロンビン時間（ＰＴ）≦１．５ｘＵＬＮ（ＰＴまたは部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）が抗凝固剤の使用目的の治療範囲内である限り、患者が抗凝固療法を受けている場合を除く）
・活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）または部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）≦１．５ｘＵＬＮ（ＰＴまたはＰＴＴが抗凝固剤の使用目的の治療範囲内である限り、患者が抗凝固療法を受けている場合を除く）
１．インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名した時点で１８歳以上の男性患者。
２．本試験への参加について自発的にインフォームドコンセントを与える意欲及び能力がある。
３．神経内分泌分化も小細胞の特徴も伴わない、組織学的または細胞学的に確認された前立腺腺癌。
４．血清テストステロンレベルが＜５０ｎｇ／ｄＬ（１．７ｎｍｏｌ／Ｌ）である文書化された去勢状態。該去勢状態が、両側精巣摘出術、または黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アナログ（アゴニストまたはアンタゴニスト）の使用によって得ることができる。外科的両側精巣摘出術を受けていない患者は、本試験期間中、ＬＨＲＨアナログを継続する意思がなければならない。
５．患者は、１つ以上の測定可能な軟部組織病変及び／または１つ以上の検出可能な骨転移を有さなければならない。軟部組織病変は、試験を行う過程で、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）及び／または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）によって、固形がん効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）ｖ１．１及び免疫ＲＥＣＩＳＴ（ｉＲＥＣＩＳＴ）に従って腫瘍反応について評価され得る。
６．患者は、標準治療による疾患の進行を評価されている必要がある。疾患の進行は、前立腺癌臨床試験ワーキンググループ３（ＰＣＷＧ３）のガイダンスに従う以下の基準の１つ以上によって定義される：
・ＰＳＡレベルの上昇としてのみ疾患の進行を示す患者の場合、ＰＣＷＧ３は、３週間以上の間隔をあけて（２８日間のスクリーニング期間に限定されない）少なくとも２回連続してＰＳＡ値が上昇し、最低開始値が１．０ｎｇ／ｍＬであることを必要とする。最新のＰＳＡレベルは、最初の治験薬処置前２１日以内に取得する必要がある。
・測定可能な結節病変または内臓病変を有する患者の場合、ＲＥＣＩＳＴ１．１によって定義されるこれらの病変の１つの疾患の進行は、ＰＳＡに関係なく適格性には十分である。直径１５ｍｍ以上のリンパ節の場合、測定可能と見なされ、サイズの変化を評価するために使用される。
・骨転移を有する患者の場合、進行は、骨スキャンまたはその他のスキャン（例えば、ＭＲＩ）による２つ以上の新たな病変の出現によって定義される。
７．抗アンドロゲン剤の中止とその後の進行は、症例別の例外が適用されない限り、登録の少なくとも４週間以上前に生じる必要がある。ＬＨＲＨアゴニストまたはアンタゴニストは、継続されるべきである。
８．症例特有の例外が適用されない限り、患者は以下を有さなければならない：
・患者が最後の治療から進行した後に採取した記録保管軟部組織腫瘍検体または投与前に新鮮な軟部組織生検検体を提供する能力。記録保管サンプルが提供される場合、該サンプルは、２年より前のものであってはならない。
・試験中に生検に潜在的に使用可能である軟部組織病変。
９．米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）一般状態（ＰＳ）が０～１。
１０．以前の治癒的放射線療法は、治験薬投与の少なくとも４週間前に完了していなければならない。以前の局所姑息的放射線治療は、治験薬投与の少なくとも２週間前に完了していなければならない。
１１．スクリーニング検査値は、以下の基準を満たしている必要があり、試験処置投与前の２８日以内に取得するべきである：
・絶対好中球数≧１，５００／ｍｍ３（１．５×１０９／Ｌ）
・血小板≧１００×１０３／ｍｍ３（１００×１０９／Ｌ）
・ヘモグロビン≧９ｇ／ｄＬ（９０ｇ／Ｌ）または≧５．６ｍｍｏｌ／Ｌ
・血清クレアチニン≦１．５×正常上限（ＵＬＮ）またはクレアチニンレベル＞１．５ｘ施設ＵＬＮの患者の場合、クレアチニンクリアランス＞３０ｍＬ／分（Ｃｏｃｋｃｒｏｆｔ－Ｇａｕｌｔ式を使用）
・アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）／アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）≦２．５×ＵＬＮまたは肝転移のある患者の場合は≦５ｘＵＬＮ
・総ビリルビン≦１．５×ＵＬＮまたは総ビリルビンレベルが＞１．５ｘＵＬＮの患者の場合は直接ビリルビン≦ＵＬＮ
・アルブミン≧３ｇ／ｄＬ
・国際標準化比（ＩＮＲ）またはプロトロンビン時間（ＰＴ）≦１．５ｘＵＬＮ（ＰＴまたは部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）が抗凝固剤の使用目的の治療範囲内である限り、患者が抗凝固療法を受けている場合を除く）
・活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）または部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）≦１．５ｘＵＬＮ（ＰＴまたはＰＴＴが抗凝固剤の使用目的の治療範囲内である限り、患者が抗凝固療法を受けている場合を除く）
【0224】
いくつかの実施形態では、試験対象患者基準は、患者が少なくとも１つの標的内分泌療法（アビラテロン酢酸エステルとプレドニゾン、エンザルタミド、及び次世代標的薬剤、例えば、ＡＲＮ－５０９が挙げられるがこれらに限定されない、第二世代の抗アンドロゲン療法として定義される）、及び／またはドセタキセルを含む少なくとも１つのレジメン／ラインの化学療法で治療されたことがあること、及び／または以前の化学療法レジメンがないこと、及び／または３つ以下の前述のレジメン／ラインで治療されている（以前の治療で失敗／進行した）ことを含み得る。
【0225】
いくつかの実施形態では、試験対象患者基準は、患者が標準治療で疾患の進行を評価されたことがあることを含んでもよく、ＰＳＡレベルの上昇としてのみ疾患の進行を示す患者の場合、ＰＣＷＧ３は、３週間以上の間隔をあけて（２８日間のスクリーニング期間に限定されない）少なくとも２回連続してＰＳＡ値が上昇し、最低開始値が１．０ｎｇ／ｍＬであることを必要とし、フルタミドを投与されている患者の場合、フルタミド中止後４週間以上で少なくとも１つのＰＳＡ値を取得する必要があり、ビカルタミドまたはニルタミドを投与されている患者の場合、抗アンドロゲン剤中止後６週間以上で少なくとも１つのＰＳＡ値を取得する必要がある。
【0226】
６．４．４ 用量漸増ガイドライン－暫定用量レベルの検討
ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰをＩＶ投与する。ベクターごとに、１×１０６ＲＣＶ ＦＦＵ／投与／患者の開始用量を投与する。さらに、本臨床研究の第１相部分に関する用量漸増計画は、コホート間で最大１対数のオーダーの用量増加を認める（すなわち、１０６、１０７、１０８ＲＣＶ ＦＦＵ）。
ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰをＩＶ投与する。ベクターごとに、１×１０６ＲＣＶ ＦＦＵ／投与／患者の開始用量を投与する。さらに、本臨床研究の第１相部分に関する用量漸増計画は、コホート間で最大１対数のオーダーの用量増加を認める（すなわち、１０６、１０７、１０８ＲＣＶ ＦＦＵ）。
【0227】
第１相用量漸増では、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰの提案されたヒト開始用量は、１×１０６ＲＣＶ ＦＦＵである。潜在的な用量漸増の非限定的な例を表１２に示す。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰの交互２ベクター処置の暫定用量レベル
【表13】
【0228】
６．４．５ 処置計画及びサイクルの持続期間
患者は、許容できない処置関連有害事象を経験するまで、疾患の進行（内臓／軟部組織転移に関しては、固形がん免疫効果判定基準（ｉＲＥＣＩＳＴ）による確認、もしくは骨転移に関しては、前立腺癌ワーク３（ＰＣＷ３）による確認）まで、または同意の撤回まで処置される。
患者は、許容できない処置関連有害事象を経験するまで、疾患の進行（内臓／軟部組織転移に関しては、固形がん免疫効果判定基準（ｉＲＥＣＩＳＴ）による確認、もしくは骨転移に関しては、前立腺癌ワーク３（ＰＣＷ３）による確認）まで、または同意の撤回まで処置される。
【0229】
（ｉ）第Ｉ相用量漸増
ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを、交互ＩＶ投与で投与する。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを最初に投与し、その後ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを投与する。
ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを、交互ＩＶ投与で投与する。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを最初に投与し、その後ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを投与する。
【0230】
サイクル１及び２では、処置サイクルを、４２日間と定義する。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを最初に投与し、その後ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰを投与し、最初の４回の投与については、３週間（２１日）ごとに交互に処置する。
・ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、サイクル１及び２の１日目にＩＶ投与される。
・ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、サイクル１及び２の２２日目にＩＶ投与される。
・ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、サイクル１及び２の１日目にＩＶ投与される。
・ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、サイクル１及び２の２２日目にＩＶ投与される。
【0231】
サイクル３以降のサイクルでは、処置サイクルを、８４日間と定義する。サイクル３の１日目は、サイクル２の４２日目の完了後に開始する。サイクル３以降のサイクルにおけるａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰの投与は、±７日の時間枠を有する。ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰの投与は、以下のように６週間（４２日）ごとに交互に行う：
・ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、サイクル３以降のサイクルの１日目にＩＶ投与される。
・ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、サイクル３以降のサイクルの４３日目にＩＶ投与される。
・ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、サイクル３以降のサイクルの１日目にＩＶ投与される。
・ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰは、サイクル３以降のサイクルの４３日目にＩＶ投与される。
【0232】
１つの実施形態では、最初の５回の投与は、３週間隔で施される場合があり、６回目以降は、投与は、６週間隔で施され得る。
【0233】
第Ｉ相用量漸増では、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰレジメンレジメンの投与スケジュールは、安全性、有効性、またはバイオマーカーデータに基づいて次のコホート用に変更してもよい。
【0234】
第Ｉ相用量漸増では、以下の情報が収集される：（１）ＤＬＴ観察期間中に投与された第一の治験薬によるＤＬＴの発生率、（２）安全性：ＡＥ及びＳＡＥの種類、頻度、ならびに重症度、（３）忍容性：投与の中断、減量及び用量強度、ならびに臨床検査値の評価、（４）全生存期間（ＯＳ）、（５）ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１／ｉＲＥＣＩＳＴ（軟部組織）及びＰＣＷＧ３（骨）基準を使用した無増悪生存期間（ＰＦＳ）、（６）ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１／ｉＲＥＣＩＳＴ（軟部組織）及びＰＣＷＧ３（骨）基準を使用した全奏効率（ＯＲＲ）、疾患制御率（ＤＣＲ）、及び奏効期間（ＤＯＲ）、（７）ＰＳＡ反応を示した患者の割合（ベースラインからベースライン後の最低ＰＳＡ結果までのＰＳＡの５０％以上の減少、少なくとも３週間後の２回目の連続ＰＳＡ評価によって確認される）、（８）任意の時点での最良のＰＳＡ反応、（９）ＰＳＡ進行までの期間（ＰＳＡ ＰＦＳ）、（１０）前立腺癌関連抗原（ＰＡＰ及びＰＳＡ）特異的Ｔ細胞応答の測定、（１１）前立腺癌関連抗原（ＰＡＰ及びＰＳＡ）特異的Ｔ細胞の特性評価、ならびに（１２）腫瘍検体、ならびに血液及び血漿中の循環腫瘍細胞のバイオマーカーの評価。
【0235】
（ｉｉ）第ＩＩ相用量拡大
アレナウイルスベクターの処置計画及びサイクル持続期間は、第Ｉ相で説明したものと同じである。
アレナウイルスベクターの処置計画及びサイクル持続期間は、第Ｉ相で説明したものと同じである。
【0236】
一部の処置群では、患者は、進行性前立腺癌の治療に承認されている薬剤と、ａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及びａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰとの併用療法を受ける。
【0237】
第ＩＩ相用量漸増では、以下の情報が収集される：（１）ＰＳＡ反応を示した患者の割合（すなわち、ベースラインからベースライン後の最低ＰＳＡ結果までのＰＳＡの５０％以上の減少、少なくとも３週間後の２回目の連続ＰＳＡ評価によって確認される）、（２）ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１／ｉＲＥＣＩＳＴ（軟部組織）及びＰＣＷＧ３（骨）基準を使用した腫瘍反応、（３）全生存期間（ＯＳ）、（４）ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１／ｉＲＥＣＩＳＴ（軟部組織）及びＰＣＷＧ３（骨）基準を使用した無増悪生存期間（ＰＦＳ）、（５）ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１／ｉＲＥＣＩＳＴ（軟部組織）及びＰＣＷＧ３（骨）基準を使用した全奏効率（ＯＲＲ）、疾患制御率（ＤＣＲ）、及び奏効期間（ＤＯＲ）、（６）任意の時点での最良のＰＳＡ反応、（７）ＰＳＡ進行までの期間（ＰＳＡ ＰＦＳ）、（８）安全性：ＡＥ及びＳＡＥの種類、頻度、ならびに重症度、（８）忍容性：投与の中断、減量及び用量強度、ならびに臨床検査値の評価、（９）前立腺癌関連抗原（ＰＡＰ及びＰＳＡ）特異的Ｔ細胞応答の測定、（１０）前立腺癌関連抗原（ＰＡＰ及びＰＳＡ）特異的Ｔ細胞の特性評価、（１１）腫瘍検体、ならびに血液及び血漿中の循環腫瘍細胞のバイオマーカーの評価。
【0238】
６．４．６ 有効性の可変要素
有効性は、ＰＣＷＧ３に従うＰＳＡ反応（Ｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１６）、ＰＣＷＧ３に従う骨反応、ならびにＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１及びｉＲＥＣＩＳＴ（副次的有効性エンドポイント）に従う軟部組織反応を使用して評価する。
有効性は、ＰＣＷＧ３に従うＰＳＡ反応（Ｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１６）、ＰＣＷＧ３に従う骨反応、ならびにＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１及びｉＲＥＣＩＳＴ（副次的有効性エンドポイント）に従う軟部組織反応を使用して評価する。
【0239】
ＰＳＡレベルは、ベースライン及びサイクル１の１日目から３週間ごとに評価される。
腫瘍及び骨のスキャンは、サイクル１の１日目以降、客観的な放射線学的疾患進行まで、最初の１年間は９週間（±７日）ごとに行われる。
腫瘍及び骨のスキャンは、サイクル１の１日目以降、客観的な放射線学的疾患進行まで、最初の１年間は９週間（±７日）ごとに行われる。
【0240】
ＲＥＣＩＳＴ評価に使用される画像診断法は、胸部、腹部及び骨盤のＣＴまたはＭＲＩスキャンである。疾患に関する任意の他の領域は、個々の患者の徴候及び症状に基づいてさらに調査される。
【0241】
骨病変は、一般にテクネチウム９９を使用して行われる骨シンチグラフィー（骨スキャン）によって評価される。骨病変は、骨スキャンによって評価され、ＲＥＣＩＳＴ ｖ．１．１悪性軟部組織評価の一部ではない。骨スキャンでの陽性ホットスポットは、重要と見なされ、悪性疾患の明白な部位は、転移性骨病変として記録される。
【0242】
表１３．疾患の兆候による進行のＰＣＷＧ３基準は、ＰＳＡの変化、骨転移、及び測定可能な疾患に基づいて有効性及び進行を評価するための第Ｉ相及び第２相において使用される基準を示す。
【表14】
【0243】
６．４．７ 探索的バイオマーカー、Ｔ細胞応答、ＰＤバイオマーカー、及びその他の中央検査室分析
以下の検査室分析が行われる。
以下の検査室分析が行われる。
【0244】
ウイルスの排出
【0245】
ウイルスの排出の分析のため、患者から唾液、血液、及び尿のサンプルを採取する。ウイルスの排出を、核タンパク質ＲＮＡのコピーを定量化するために定量的逆転写ＰＣＲによって分析し、感染性ウイルスが存在しないことを確認するために感染価アッセイと組み合わせて排出物質を特性評価してもよい。
【0246】
Ｔ細胞免疫応答
【0247】
細胞性免疫応答は、酵素結合免疫吸着スポット（ＥＬＩＳｐｏｔ）アッセイによって測定して、抗原特異的免疫応答として末梢血単核球中の分泌されたＩＦＮ－γ特異的細胞を評価し、ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及び／またはａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰに対する細胞内染色を介してＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－２、ＣＤ１０７ａを測定することによってＣＤ８＋Ｔ細胞の機能及び抗原認識を評価する（表１４）。
【表15】
【0248】
薬力学的バイオマーカー
【0249】
ａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及び／またはａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ療法にとって重要な因子を特定するためのさらなるバイオマーカー研究を、治療に対する反応及び／または耐性の決定要因、ならびに本臨床試験の間の有害事象の決定要因をさらに調査及び理解するために追求することができる。生物検体（腫瘍物質及び血液成分、血清、血漿及びＰＢＭＣ）は、組織マーカーの免疫染色、ゲノム分析、及び転写分析に使用され得る。
【0250】
アッセイは、以下を含むがこれらに限定されない：
・生殖系列（血液）遺伝子解析（例えば、全エクソーム解析（ＷＥＳ）、遺伝子発現プロファイル、ＲＮＡ解析）：
・腫瘍における遺伝子及び転写解析：ＩｍｍｕｎｏＩＤ ＮｅＸＴプラットフォームは、存在特異的Ｔ細胞クローン、突然変異変化（ＴＭＢ）、マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）遺伝子シグネチャーを評価し、ＢＲＣＡ１／２及びその他の相同組み換え修復（ＨＲＲ）関連遺伝子の体細胞突然変異を同定し、相同組み換え欠損（ＨＲＤ）を示すゲノム瘢痕の存在を検出する。これは、単剤として、または他の治療法との併用でのａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及び／またはａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ療法に対する臨床反応にとって不可欠であり得る。
・マルチプレックス免疫蛍光免疫組織化学（ｍＩＦ）：腫瘍サンプルを、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１発現、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、疲弊マーカー、及び多くの研究で、多くの異なるがんにおける良好な全生存と相関することが分かっているＣＤ１０３＋腫瘍浸潤リンパ球の発現について評価する。
・循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）及び循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）：ＣＴＣの計数は、転移性去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）の予後及び反応のバイオマーカーであることが分かっている。ＣＴＣ数のレベルの低下は、無増悪生存期間（ＰＦＳ）及び全生存期間（ＯＳ）の改善と関連している。（Ｃｒｉｓｔｏｆａｎｉｌｌｉ，２００４，Ｈａｙｅｓ，２００６）血液サンプルをベースライン及び処置の間に採取して、転移性去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）における予後及び反応と相関することが分かっているＣＴＣを測定する。さらに、ゲノムの全体像を調べ、腫瘍関連コピー数変化（ＣＮＡ）、単一ヌクレオチド変化（ＳＮＶ）、及び患者で一般に観察される再構成を特徴付けるために、腫瘍組織に加えて血漿／血清も所定の時点で採取する。
・血清バイオマーカー分析：体液性免疫（抗ＰＳＡ／ＰＡＰ抗体及び抗ベクター中和抗体）もまた、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって調査し、ＬＣＭＶ及びＰＩＣＶ中和抗体を中和アッセイで分析する。サイトカイン及びケモカインは、所定の時点でＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）を使用して調べ、サイトカイン分泌プロファイルを検討する。
・生殖系列（血液）遺伝子解析（例えば、全エクソーム解析（ＷＥＳ）、遺伝子発現プロファイル、ＲＮＡ解析）：
・腫瘍における遺伝子及び転写解析：ＩｍｍｕｎｏＩＤ ＮｅＸＴプラットフォームは、存在特異的Ｔ細胞クローン、突然変異変化（ＴＭＢ）、マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）遺伝子シグネチャーを評価し、ＢＲＣＡ１／２及びその他の相同組み換え修復（ＨＲＲ）関連遺伝子の体細胞突然変異を同定し、相同組み換え欠損（ＨＲＤ）を示すゲノム瘢痕の存在を検出する。これは、単剤として、または他の治療法との併用でのａｒｔＰＩＣＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ及び／またはａｒｔＬＣＭＶ－ＰＡＰ－ＮＰ／ＰＳＡ－ＧＰ療法に対する臨床反応にとって不可欠であり得る。
・マルチプレックス免疫蛍光免疫組織化学（ｍＩＦ）：腫瘍サンプルを、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１発現、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、疲弊マーカー、及び多くの研究で、多くの異なるがんにおける良好な全生存と相関することが分かっているＣＤ１０３＋腫瘍浸潤リンパ球の発現について評価する。
・循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）及び循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）：ＣＴＣの計数は、転移性去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）の予後及び反応のバイオマーカーであることが分かっている。ＣＴＣ数のレベルの低下は、無増悪生存期間（ＰＦＳ）及び全生存期間（ＯＳ）の改善と関連している。（Ｃｒｉｓｔｏｆａｎｉｌｌｉ，２００４，Ｈａｙｅｓ，２００６）血液サンプルをベースライン及び処置の間に採取して、転移性去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）における予後及び反応と相関することが分かっているＣＴＣを測定する。さらに、ゲノムの全体像を調べ、腫瘍関連コピー数変化（ＣＮＡ）、単一ヌクレオチド変化（ＳＮＶ）、及び患者で一般に観察される再構成を特徴付けるために、腫瘍組織に加えて血漿／血清も所定の時点で採取する。
・血清バイオマーカー分析：体液性免疫（抗ＰＳＡ／ＰＡＰ抗体及び抗ベクター中和抗体）もまた、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって調査し、ＬＣＭＶ及びＰＩＣＶ中和抗体を中和アッセイで分析する。サイトカイン及びケモカインは、所定の時点でＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）を使用して調べ、サイトカイン分泌プロファイルを検討する。
【0251】
７．均等物
本明細書に開示するＳセグメント、ゲノムセグメント、ウイルス粒子、核酸、方法、宿主細胞、組成物、及びキットは、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されない。実際、記載されたものに加えて、Ｓセグメント、ゲノムセグメント、ウイルス粒子、核酸、方法、宿主細胞、組成物、及びキットの様々な修正は、前述の説明及び添付の図面から当業者には明らかとなる。かかる修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。
本明細書に開示するＳセグメント、ゲノムセグメント、ウイルス粒子、核酸、方法、宿主細胞、組成物、及びキットは、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲が限定されない。実際、記載されたものに加えて、Ｓセグメント、ゲノムセグメント、ウイルス粒子、核酸、方法、宿主細胞、組成物、及びキットの様々な修正は、前述の説明及び添付の図面から当業者には明らかとなる。かかる修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。
【0252】
様々な刊行物、特許、及び特許出願が本明細書に引用されており、これらの開示は、参照により全体として組み込まれる。
【表16】
【図1A】
【図1B】
【図1C】
【図2A】
【図2B】
【図3A】
【図3B】
【図4】
【図5A】
【図5B】
【図6A】
【図6B】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図7D】
【図7E】
【図8A】
【図8B】
【図8C】
【図9A】
【図9B】
【図10A】
【図10B】
【図10C】
【図10D】
【図11】
【図12】
【手続補正書】
【提出日】2023-12-11
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
【国際調査報告】