特表 2024-512569 治療におけるＡＤＮＦポリペプチドの使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-19

(54)【発明の名称】治療におけるＡＤＮＦポリペプチドの使用

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/17 20060101AFI20240312BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 25/18 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 25/08 20060101ALI20240312BHJP

   G01N 33/50 20060101ALI20240312BHJP

   G01N 33/68 20060101ALI20240312BHJP

   G01N 33/53 20060101ALI20240312BHJP

   C07K 5/10 20060101ALN20240312BHJP

   C07K 7/06 20060101ALN20240312BHJP

   C07K 7/08 20060101ALN20240312BHJP

   C07K 14/47 20060101ALN20240312BHJP

【ＦＩ】

A61K38/17

A61P25/28 ZNA

A61P25/18

A61P25/00

A61P25/08

G01N33/50 P

G01N33/68

G01N33/53 M

G01N33/53 D

C07K5/10

C07K7/06

C07K7/08

C07K14/47

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023558471

(86)(22)【出願日】2022-03-25

(85)【翻訳文提出日】2023-10-30

(86)【国際出願番号】 IL2022050333

(87)【国際公開番号】W WO2022201167

(87)【国際公開日】2022-09-29

(31)【優先権主張番号】63/165,819

(32)【優先日】2021-03-25

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＲＩＴＯＮ

２．ＭＡＴＬＡＢ

(71)【出願人】

【識別番号】507253749

【氏名又は名称】ラモット アット テル アビブ ユニバーシティ， リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】ゴゼス，イラナ

【テーマコード（参考）】

2G045

4C084

4H045

【Ｆターム（参考）】

2G045AA25

2G045CA25

2G045DA13

2G045DA36

4C084AA01

4C084AA02

4C084BA01

4C084BA02

4C084BA08

4C084BA17

4C084BA18

4C084BA23

4C084BA44

4C084CA53

4C084CA59

4C084DC50

4C084NA14

4C084ZA011

4C084ZA012

4C084ZA021

4C084ZA022

4C084ZA061

4C084ZA062

4C084ZA151

4C084ZA152

4C084ZA161

4C084ZA162

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA13

4H045BA14

4H045BA15

4H045BA16

4H045BA17

4H045BA18

4H045CA40

4H045EA28

(57)【要約】

治療におけるＡＤＮＦポリペプチドの使用が提供される。したがって、対象が視覚誘発電位障害及び／又は発話障害を患っている、発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害関連の疾患を処置する方法であって、治療有効量のＡＤＮＦポリペプチドを対象に投与することを含み、ＡＤＮＦポリペプチドが、インビトロ皮質ニューロン培養アッセイにおいて神経栄養／神経保護活性を有する方法が提供される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象が視覚誘発電位障害及び／又は発話障害を患っている、発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害関連の疾患を処置する方法であって、前記方法が、前記治療有効量のＡＤＮＦポリペプチドを前記対象に投与することを含み、ＡＤＮＦポリペプチドが、インビトロ皮質ニューロン培養アッセイにおいて神経栄養／神経保護活性を有し、それによって前記対象の前記疾患を処置し、前記疾患がＡＤＮＰ症候群ではない、方法。

【請求項2】

対象が発声障害に起因しない前記視覚誘発電位障害及び／又は前記発話障害を患っている、自閉症スペクトラム障害及び知的障害からなる群から選択される疾患を処置する方法であって、前記方法が、治療有効量のＡＤＮＦポリペプチドを前記対象に投与することを含み、前記ＡＤＮＦポリペプチドが、インビトロ皮質ニューロン培養アッセイにおいて神経栄養／神経保護活性を有し、それによって前記対象の疾患を処置し、前記障害がＡＤＮＰ症候群ではない、方法。

【請求項3】

対象が発声障害に起因しない前記視覚誘発電位障害及び／又は前記発話障害を患っている、アルツハイマー病を処置する方法であって、前記方法が、治療有効量のＡＤＮＦポリペプチドを前記対象に投与することを含み、前記ＡＤＮＦポリペプチドが、インビトロ皮質ニューロン培養アッセイにおいて神経栄養／神経保護活性を有し、それによって前記対象の疾患を処置する、方法。

【請求項4】

発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害関連の疾患と診断された対象におけるＡＤＮＦポリペプチドによる処置の有効性をモニタリングする方法であって、前記対象が前記視覚誘発電位障害及び／又は前記発話障害を患っており、前記対象が、発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害を有しており、前記方法が、前記ＡＤＮＦポリペプチドによる処置後に前記対象の視覚誘発電位及び／又は発話能力を判定することを含み、前記ＡＤＮＦポリペプチドによる前記処置後の前記対象の前記視覚誘発電位及び／又は前記発話能力の改善が、前記処置が有効であることを示す、方法。

【請求項5】

自閉症スペクトラム障害及び知的障害からなる群から選択される疾患であると診断された対象におけるＡＤＮＦポリペプチドによる処置の有効性をモニタリングする方法であって、前記対象が、発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害を患っており、前記方法が、前記ＡＤＮＦポリペプチドによる処置後に前記対象の視覚誘発電位及び／又は発話能力を判定することを含み、前記ＡＤＮＦポリペプチドによる前記処置後の前記対象の前記視覚誘発電位及び／又は前記発話能力の改善が、前記処置が有効であることを示す、方法。

【請求項6】

前記疾患が、ＡＤＮＰ症候群ではない、請求項４～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

アルツハイマー病と診断された対象におけるＡＤＮＦポリペプチドによる処置の有効性をモニタリングする方法であって、前記対象が、発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害を患っており、前記方法が、前記ＡＤＮＦポリペプチドによる処置後に前記対象の視覚誘発電位及び／又は発話能力を判定することを含み、前記ＡＤＮＦポリペプチドによる前記処置後の前記対象の前記視覚誘発電位及び／又は前記発話能力の改善が、前記処置が有効であることを示す、方法。

【請求項8】

前記発話障害又は発話能力は、構文複雑度によって判定される、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記疾患が、自閉症スペクトラム障害、神経変性疾患、認知障害、精神障害、及び細胞骨格障害からなる群から選択される、請求項１、４、６、及び８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

自閉症スペクトラム障害、神経変性疾患、認知障害、精神障害、及び細胞骨格障害からなる群から選択される疾患と診断された対象における処置の有効性をモニタリングする方法であって、前記方法が、前記処置後の前記対象の生物学的試料中のＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、及びＣＰＸＭ１からなる群から選択されるマーカーのレベルを判定することを含み、前記処置後の前記ＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、及び／又はＴＭＣＣ２の前記レベルの低下及び／又は前記ＣＰＸＭ１の前記レベルの上昇が、前記処置が有効であることを示す、方法。

【請求項11】

自閉症スペクトラム障害及び知的障害からなる群から選択される疾患と診断された対象における処置の有効性をモニタリングする方法であって、処置後の対象の生物学的試料中のＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、及びＣＰＸＭ１からなる群から選択されるマーカーのレベルを判定することを含み、前記処置後の前記ＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４及び／又はＴＭＣＣ２の前記レベルの低下及び／又は前記ＣＰＸＭ１の前記レベルの上昇が、前記処置が有効であることを示す、方法。

【請求項12】

アルツハイマー病と診断された対象における処置の有効性をモニタリングする方法であって、前記方法が、前記処置後の前記対象の生物学的試料中のＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、及びＣＰＸＭ１からなる群から選択されるマーカーのレベルを判定することを含み、前記処置後の前記ＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、及び／又はＴＭＣＣ２の前記レベルの低下及び／又は前記ＣＰＸＭ１の前記レベルの上昇が、処置が有効であることを示す、方法。

【請求項13】

自閉症スペクトラム障害、神経変性疾患、認知障害、精神障害、及び細胞骨格障害からなる群から選択される疾患を診断する方法であって、前記方法が、対象の生物学的試料中のＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、及びＣＰＸＭ１からなる群から選択されるマーカーのレベルを判定することを含み、前記ＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、及び／又はＴＭＣＣ２の前記レベルが所定の閾値を上回る、及び／又は前記ＣＰＸＭ１の前記レベルが所定の閾値を下回るとき、前記対象が前記疾患を有する、方法。

【請求項14】

自閉症スペクトラム障害及び知的障害からなる群から選択される疾患を診断する方法であって、前記方法が、対象の生物学的試料中のＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、及びＣＰＸＭ１からなる群から選択されるマーカーのレベルを判定することを含み、前記ＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４及び／又はＴＭＣＣ２の前記レベルが所定の閾値を上回る、及び／又は前記ＣＰＸＭ１の前記レベルが所定の閾値を下回るとき、前記対象が前記疾患を有する、方法。

【請求項15】

アルツハイマー病を診断する方法であって、対象の生物学的試料中のＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、及びＣＰＸＭ１からなる群から選択されるマーカーのレベルを判定することを含み、前記ＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、及び／又はＴＭＣＣ２の前記レベルが所定の閾値を上回る、及び／又は前記ＣＰＸＭ１の前記レベルが所定の閾値を下回るときに、前記対象が前記疾患を有する、方法。

【請求項16】

前記生物学的試料が、血液試料を含む、請求項１０～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記疾患が、ＡＤＮＰ症候群である、請求項４～５、１０～１１、及び１４～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記疾患が、多発性硬化症、ＳＹＮＧＡＰ１症候群、ＰＯＧＺ症候群、ＣＨＤ８症候群、ＳＣＮ２Ａ症候群、ＡＲＩＤ１Ｂ関連の症候群、ＮＲＸＮ１症候群、ＤＹＲＫ１Ａ症候群、ＧＲＩＮ障害、ＣＨＤ２症候群、ドラベ症候群、レット症候群、脆弱Ｘ症候群、ＦＯＸＰ１症候群、ＳＬＣ関連の障害、コフィン－シリス症候群、ＫＭＴ５Ｂ症候群、ＰＴＥＮ自閉症症候群、オキヒロ症候群＋発育遅延、アンジェルマン症候群、ヌーナン症候群、クリーフストラ症候群、及びスミス－マギニス症候群からなる群から選択される、請求項１、４、６、８～９、１０、１３、及び１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

処置を必要とする対象におけるＳＨＡＮＫ３関連の疾患を処置する方法であって、前記方法が、治療有効量のＡＤＮＦ ＩＩＩポリペプチドを前記対象に投与することを含み、前記ＡＤＮＦ ＩＩＩポリペプチドが、ＳＨ３結合ドメインを含み、それによって前記対象の前記疾患を処置する、方法。

【請求項20】

前記疾患が、フェラン－マクダーミド症候群である、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記ＡＤＮＦ ＩＩＩポリペプチドが、インビトロ皮質ニューロン培養アッセイにおいて神経栄養／神経保護活性を有する、請求項１９～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記処置が、ＡＤＮＦポリペプチドを含み、前記ＡＤＮＦポリペプチドが、インビトロ皮質ニューロン培養アッセイにおいて神経栄養／神経保護活性を有する、請求項１０～１３及び１６～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記ＡＤＮＦポリペプチドが、ＥＢ１及び／又はＥＢ３に結合することができる、請求項１～９及び１９～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記ＡＤＮＦポリペプチドが、ＳＨ３結合ドメインを含む、請求項１～９及び２２～２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記ＡＤＮＦポリペプチドが、ＡＤＮＦ ＩＩＩポリペプチドである、請求項１～９及び２２～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記ポリペプチドが、配列番号２～２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１９～２１及び２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記ポリペプチドが、配列番号２～２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１９～２１及び２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記ポリペプチドが、配列番号２を含む、請求項１９～２１及び２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記ポリペプチドが、式（Ｒ^１）_ｘ－Ａｓｎ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－（Ｒ^２）_ｙ（配列番号４９）、又はその類似体を有し、Ｒ^１が、１～約４０個のアミノ酸を含むアミノ酸配列であり、各アミノ酸が、天然に存在するアミノ酸及びアミノ酸類似体からなる群から独立して選択され、Ｒ^２が、１～約４０個のアミノ酸を含むアミノ酸配列であり、各アミノ酸が、天然に存在するアミノ酸及びアミノ酸類似体からなる群から独立して選択され、ｘ及びｙが、独立して選択され、０又は１に等しい、請求項１９～２１及び２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記ＡＤＮＦポリペプチドが、ＡＤＮＦ Ｉポリペプチドである、請求項１～９及び２２～２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記ポリペプチドが、２４～４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

前記ポリペプチドが、配列番号２４を含む、請求項３０に記載の方法。

【請求項33】

前記ポリペプチドが、式（Ｒ^１）_ｘ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－（Ｒ^２）_ｙ（配列番号５０）を有し、Ｒ^１が、１～約４０個のアミノ酸を含むアミノ酸配列であり、各アミノ酸が、天然に存在するアミノ酸及びアミノ酸類似体からなる群から独立して選択され、Ｒ^２が、１～約４０個のアミノ酸を含むアミノ酸配列であり、各アミノ酸が、天然に存在するアミノ酸及びアミノ酸類似体からなる群から独立して選択され、ｘ及びｙが、独立して選択され、０又は１に等しい、請求項３０に記載の方法。

【請求項34】

前記ポリペプチドが少なくとも１つのＤ－アミノ酸を含む、請求項１～９及び１９～３３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項35】

前記ポリペプチドが、５０アミノ酸長未満である、請求項１～９及び１９～３４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

前記ポリペプチドが、２０アミノ酸長未満である、請求項１～９及び１９～３４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

前記ポリペプチドが、細胞透過性部分又は安定化部分に結合している、請求項１～９及び１９～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記対象が、雌である、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

前記対象が、雄である、請求項１～３７のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
本出願は、２０２１年３月２５日に出願された米国仮特許出願第６３／１６５，８１９号の優先権の利益を主張し、その内容は全て参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

配列表の記述
９１４６６ ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔと題され、２０２２年３月２４日に作成され、本出願の出願と同時に提出された、７１，８３９，７４４バイトのＡＳＣＩＩファイルは、参照により本明細書に組み込まれる。

【0003】

本発明は、いくつかの実施形態において、治療におけるＡＤＮＦポリペプチドの使用に関する。

【0004】

活性依存性神経保護タンパク質（ＡＤＮＰ又はＡＤＮＦ ＩＩＩとも呼ばれる）は、脳の形成及び機能に必須である［Ｂａｓｓａｎ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．１９９９年３月；７２（３）：１２８３－９３；Ｚａｍｏｓｔｉａｎｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００１年１月５日；２７６（１）：７０８－１４；Ｐｉｎｈａｓｏｖ Ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ Ｄｅｖ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．２００３年８月１２日；１４４（１）：８３－９０］。ＡＤＮＰは、胚形成、自食作用、樹状突起スパイン可塑性、軸索輸送、選択的ＲＮＡスプライシング、ｗｎｔシグナル伝達、自閉症関連タンパク質翻訳、及びクロマチンリモデリングを含む重要な細胞活性において機能することが示された。ＡＤＮＰにおけるデノボ突然変異は、自閉症ＡＤＮＰ症候群につながり［Ｖａｎ Ｄｉｊｃｋ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２０１９，８５（４）：２８７－２９７；Ｇｏｚｅｓ Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０１７，２１；７（２）：ｅ１０４３．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｔｐ．２０１７．２７；Ｈｅｌｓｍｏｏｒｔｅｌ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ２０１４，４６（４）：３８０－３８４］、体細胞ＡＤＮＰ突然変異は、アルツハイマー病（ＡＤ）タウオパシーを引き起こし得る（Ｉｖａｓｈｋｏ－Ｐａｃｈｉｍａ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２０２１，２６（５）：１６１９－１６３３．Ｅｐｕｂ ２０１９年１０月３０日］。更に、血中ＡＤＮＰ発現の減少は、炎症の増加［Ｂｒａｉｔｃｈ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ２０１０，１７（２）：１２０－１２５］及び認知機能の低下［Ｍａｌｉｓｈｋｅｖｉｃｈ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ：ＪＡＤ ２０１６，５０（１）：２４９－２６０］に関連していた。ＡＤＮＰは、クロマチンリモデリング複合体の主要部分を構成するＳＷＩｔｃｈ／スクロース非発酵性（ＳＷＩ／ＳＮＦ）複合体の一部である核において見出される［Ｍａｎｄｅｌ Ｓ，Ｇｏｚｅｓ Ｉ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００７年１１月２３日；２８２（４７）：３４４４８－５６］。成熟ニューロンにおいて、ＡＤＮＰは、微小管末端結合タンパク質、ＥＢ１、及びＥＢ３［Ｏｚ Ｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２０１４、１９（１０）：１１１５－１１２４］との相互作用を介して微小管と会合して、細胞質において見出される［Ｍａｎｄｅｌ Ｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２００８、３５（２）：１２７－１４１］。次に、ＡＤＮＰとのＥＢ１／ＥＢ３相互作用は、樹状突起スパイン形成［Ｏｚ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２０１４，１９（１０）：１１１５－１１２４；Ｈａｃｏｈｅｎ－Ｋｌｅｉｍａｎ Ｇ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ２０１８、１２８（１１）：４９５６－４９６９、Ｋａｒｍｏｎ Ｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２０２１］、軸索輸送［Ａｍｒａｍ Ｎ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２０１６；２１（１０）：１４６７－１４７６］、タウ－微小管結合の増強［Ｉｖａｓｈｋｏ－Ｐａｃｈｉｍａ Ｙ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２０１７，２２（９）：１３３５－１３４４］；Ｇｒｉｇｇ Ｉ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２０２０、１０（１）：２２８；Ｉｖａｓｈｋｏ－Ｐａｃｈｉｍａ Ｙ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２０２１，２６（５）：１６１９－１６３３．Ｅｐｕｂ ２０１９年１０月３０日］、及びタウ過剰リン酸化／タウオパシーに対する保護［Ｇｒｉｇｇ Ｉ，ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２０２０，１０（１）：２２８；Ｉｖａｓｈｋｏ－Ｐａｃｈｉｍａ Ｙ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２０２１，２６（５）：１６１９－１６３３。Ｅｐｕｂ ２０１９年１０月３０日；Ｖｕｌｉｈ－Ｓｈｕｌｔｚｍａｎ Ｉ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ２００７，３２３（２）：４３８－４４９］に関連付けられている。

【0005】

ＮＡＰ［ＮＡＰＶＳＩＰＱ（配列番号２）、ダブネチド又はＣＰ２０１としても知られる］として知られるプロリンリッチ８アミノ酸ポリペプチドを含むＡＤＮＰポリペプチド、並びに神経保護及び複数の障害の処置におけるその使用は、国際出願公開第１／９２３３３号、同第９８／３５０４２号、同第００／２７８７５号、同第００／５３２１７号、同第０１／１２６５４号、同第２００４／０８０９５７号、同第２００６／０９９７３９号、同第２００７／０９６８５９号、同第２００８／０８４４８３号、同第２０１１／０２１１８６号、同第２００９／０２６６８７号、同第２０１１／０８３４６１号、同第２０１１／０９９０１１号、同第２０１３／１７１５９５号、同第２０１７／１３０１９０号、同第２００４／０６０３０９号、同第２００３／０２２２２６号、及び同第２０１０／０７５６３５号、並びに米国特許第５７６７２４０号、同第６１７４８６２号、及び同第６６１３７４０号（それぞれ全体が参照により本明細書に組み込まれる）を含む特許及び特許出願の主題である。

【0006】

臨床試験
ＮＡＰ（配列番号２）は、ＡＤＮＰ症候群の処置のために以前に承認されていない。しかしながら、他の適応症に対する臨床試験が行われている［進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、軽度認知障害（ＭＣＩ）、及び統合失調症］。
ＮＡＰ（ＣＰ２０１、ダベネチド、ＡＬ－１０８）を以下の臨床試験で試験した。
１．ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ００４２２９８１－ＭＣＩ
２．ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ００５０５７６５－統合失調症
３．ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１０５６９６５－タウオパチー
４．ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１１１０７２０－ＰＳＰ
５．ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ００４０４０１４－冠動脈バイパス移植手術後ＭＣＩ。

【0007】

概ね、全ての試験は、何百人もの成人易感染性患者におけるＮＡＰ（配列番号２）の安全性及び耐容性を証明している。有効性は、認知機能及び日常生活の機能的活動の増強において見られた。

【0008】

６．ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ：ＮＣＴ０１４０３５１９－アルツハイマー病及び前頭側頭型認知症における革新的なバイオマーカ－：予防及び個別化。ＡＤＮＰレベルは、疾患状態（例えば、認知機能障害及び統合失調症）及びタウオパチーと相関することが示された。さらなる情報については、Ｇｏｚｅｓ Ｉ，Ｆｒｏｎｔ Ｎｅｕｒｏｌ．２０２０年１１月２４日；１１：６０８４４４を参照されたい。

【0009】

Ｓｒｃホモロジー３（ＳＨ３）ドメイン－リガンド会合は、分子内相互作用による酵素活性化／不活性化、シグナル伝達成分の細胞濃度／局在化の変化、及び多タンパク質複合体アセンブリの媒介などの多種多様な生物学的プロセスにおけるタンパク質間の相互作用を支配する。Ｓｒｃホモロジー３（ＳＨ３）ドメインは、細胞骨格を調節するシグナル伝達経路のタンパク質間の相互作用の制御に関与している（Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ Ｊ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｇｅｎｅｔ Ｄｅｖ．１９９４，４（１），２５）。

【発明の概要】

【0010】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、対象が視覚誘発電位障害及び／又は発話障害を患っている、発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害関連の疾患を処置する方法であって、本方法が、治療有効量のＡＤＮＦポリペプチドを対象に投与することを含み、ＡＤＮＦポリペプチドが、インビトロ皮質ニューロン培養アッセイにおいて神経栄養／神経保護活性を有し、それによって対象の疾患を処置し、疾患がＡＤＮＰ症候群ではない、方法が提供される。

【0011】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、対象が発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害を患っている、自閉症スペクトラム障害及び知的障害からなる群から選択される疾患を処置する方法であって、本方法が、治療有効量のＡＤＮＦポリペプチドを対象に投与することを含み、ＡＤＮＦポリペプチドが、インビトロ皮質ニューロン培養アッセイにおいて神経栄養／神経保護活性を有し、それによって対象の疾患を処置し、障害がＡＤＮＰ症候群ではない、方法が提供される。

【0012】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、対象が発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害を患っているアルツハイマー病を処置する方法であって、本方法が、治療有効量のＡＤＮＦポリペプチドを対象に投与することを含み、ＡＤＮＦポリペプチドが、インビトロ皮質ニューロン培養アッセイにおいて神経栄養／神経保護活性を有し、それによって対象の疾患を処置する、方法が提供される。

【0013】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害関連の疾患と診断された対象におけるＡＤＮＦポリペプチドによる処置の有効性をモニタリングする方法であって、対象が視覚誘発電位障害及び／又は発話障害を患っており、対象が、発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害を有しており、本方法が、ＡＤＮＦポリペプチドによる処置後に対象の視覚誘発電位及び／又は発話能力を判定することを含み、ＡＤＮＦポリペプチドによる処置後の対象の視覚誘発電位及び／又は発話能力の改善が、処置が有効であることを示す、方法が提供される。

【0014】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、自閉症スペクトラム障害及び知的障害からなる群から選択される疾患であると診断された対象におけるＡＤＮＦポリペプチドによる処置の有効性をモニタリングする方法であって、対象が、発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害を患っており、本方法が、ＡＤＮＦポリペプチドによる処置後に対象の視覚誘発電位及び／又は発話能力を判定することを含み、ＡＤＮＦポリペプチドによる処置後の対象の視覚誘発電位及び／又は発話能力の改善が、処置が有効であることを示す、方法が提供される。

【0015】

本発明のいくつかの実施形態によれば、疾患は、ＡＤＮＰ症候群である。

【0016】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、アルツハイマー病と診断された対象におけるＡＤＮＦポリペプチドによる処置の有効性をモニタリングする方法であって、対象が、発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害を患っており、本方法が、ＡＤＮＦポリペプチドによる処置後に対象の視覚誘発電位及び／又は発話能力を判定することを含み、ＡＤＮＦポリペプチドによる処置後の対象の視覚誘発電位及び／又は発話能力の改善が、処置が有効であることを示す、方法が提供される。

【0017】

本発明のいくつかの実施形態によれば、発話障害又は発話能力は、構文複雑度によって判定される。

【0018】

本発明のいくつかの実施形態によれば、疾患は、自閉症スペクトラム障害、神経変性疾患、認知障害、精神障害、及び細胞骨格障害からなる群から選択される。

【0019】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、自閉症スペクトラム障害、神経変性疾患、認知障害、精神障害、及び細胞骨格障害からなる群から選択される疾患と診断された対象における処置の有効性をモニタリングする方法であって、本方法が、処置後の対象の生物学的試料中のＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、及びＣＰＸＭ１からなる群から選択されるマーカーのレベルを判定することを含み、処置後のＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、及び／又はＴＭＣＣ２のレベルの低下及び／又はＣＰＸＭ１のレベルの上昇が、処置が有効であることを示す、方法が提供される。

【0020】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、自閉症スペクトラム障害及び知的障害からなる群から選択される疾患と診断された対象における処置の有効性をモニタリングする方法であって、本方法が、処置後の対象の生物学的試料中のＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、及びＣＰＸＭ１からなる群から選択されるマーカーのレベルを判定することを含み、処置後のＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、及び／又はＴＭＣＣ２のレベルの低下及び／又はＣＰＸＭ１のレベルの上昇が、処置が有効であることを示す、方法が提供される。

【0021】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、アルツハイマー病と診断された対象における処置の有効性をモニタリングする方法であって、本方法が、処置後の対象の生物学的試料中のＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、及びＣＰＸＭ１からなる群から選択されるマーカーのレベルを判定することを含み、処置後のＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、及び／又はＴＭＣＣ２のレベルの低下及び／又はＣＰＸＭ１のレベルの上昇が、処置が有効であることを示す、方法が提供される。

【0022】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、自閉症スペクトラム障害、神経変性疾患、認知障害、精神障害、及び細胞骨格障害からなる群から選択される疾患を診断する方法であって、本方法が、対象の生物学的試料中のＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、及びＣＰＸＭ１からなる群から選択されるマーカーのレベルを判定することを含み、ＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、及び／又はＴＭＣＣ２のレベルが所定の閾値を上回る、及び／又はＣＰＸＭ１のレベルが所定の閾値を下回るとき、対象が疾患を有する、方法が提供される。

【0023】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、自閉症スペクトラム障害及び知的障害からなる群から選択される疾患を診断する方法であって、対象の生物学的試料中のＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、及びＣＰＸＭ１からなる群から選択されるマーカーのレベルを判定することを含み、ＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、及び／又はＴＭＣＣ２のレベルが所定の閾値を上回る、及び／又はＣＰＸＭ１のレベルが所定の閾値を下回るとき、対象が疾患を有する、方法が提供される。

【0024】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、アルツハイマー病を診断する方法であって、対象の生物学的試料中のＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、及びＣＰＸＭ１からなる群から選択されるマーカーのレベルを判定することを含み、ＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４及び／又はＴＭＣＣ２のレベルが所定の閾値を上回る及び／又はＣＰＸＭ１のレベルが所定の閾値を下回るとき、対象が疾患を有する、方法が提供される。

【0025】

本発明のいくつかの実施形態によれば、生物学的試料は、血液試料を含む。

【0026】

本発明のいくつかの実施形態によれば、疾患は、ＡＤＮＰ症候群である。

【0027】

本発明のいくつかの実施形態によれば、疾患は、多発性硬化症、ＳＹＮＧＡＰ１症候群、ＰＯＧＺ症候群、ＣＨＤ８症候群、ＳＣＮ２Ａ症候群、ＡＲＩＤ１Ｂ関連の症候群、ＮＲＸＮ１症候群、ＤＹＲＫ１Ａ症候群、ＧＲＩＮ障害、ＣＨＤ２症候群、ドラベ症候群、レット症候群、脆弱Ｘ症候群、ＦＯＸＰ１症候群、ＳＬＣ関連の障害、コフィン－シリス症候群、ＫＭＴ５Ｂ症候群、ＰＴＥＮ自閉症症候群、オキヒロ症候群＋発育遅延、アンジェルマン症候群、ヌーナン症候群、クリーフストラ症候群、及びスミス－マギニス症候群からなる群から選択される。

【0028】

本発明のいくつかの実施形態の一態様によれば、処置を必要とする対象におけるＳＨＡＮＫ３関連の疾患を処置する方法であって、対象に治療有効量のＡＤＮＦ ＩＩＩポリペプチドを投与することを含み、ＡＤＮＦ ＩＩＩポリペプチドがＳＨ３結合ドメインを含み、それによって対象における疾患を処置する方法が提供される。

【0029】

本発明のいくつかの実施形態によれば、疾患は、フェラン－マクダーミド症候群である。

【0030】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＡＤＮＦ ＩＩＩポリペプチドは、インビトロ皮質ニューロン培養アッセイにおいて神経栄養／神経保護活性を有する。本発明のいくつかの実施形態によれば、処置はＡＤＮＦポリペプチドを含み、ＡＤＮＦポリペプチドは、インビトロ皮質ニューロン培養アッセイにおいて神経栄養／神経保護活性を有する。

【0031】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＡＤＮＦポリペプチドは、ＥＢ１及び／又はＥＢ３に結合することができる。

【0032】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＡＤＮＦポリペプチドは、ＳＨ３結合ドメインを含む。

【0033】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＡＤＮＦポリペプチドは、ＡＤＮＦ ＩＩＩポリペプチドである。

【0034】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ポリペプチドは、２～２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0035】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ポリペプチドは、２～２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0036】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ポリペプチドは配列番号２を含む。

【0037】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ポリペプチドは、式：（Ｒ^１）_ｘ－Ａｓｎ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－（Ｒ^２）_ｙ（配列番号４９）を有し、ここで、Ｒ^１は、１～約４０個のアミノ酸を含むアミノ酸配列であり、各アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸及びアミノ酸類似体からなる群から独立して選択される。Ｒ^２は、１～約４０個のアミノ酸を含むアミノ酸配列であり、各アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸及びアミノ酸類似体からなる群から独立して選択され、ｘ及びｙは、独立して選択され、０又は１に等しい。

【0038】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ＡＤＮＦポリペプチドは、ＡＤＮＦ Ｉポリペプチドである。

【0039】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ポリペプチドは、２４～４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0040】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ポリペプチドは配列番号２４を含む。

【0041】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ポリペプチドは、式（Ｒ^１）_ｘ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－（Ｒ^２）_ｙ（配列番号５０）を有し、Ｒ^１は、１～約４０個のアミノ酸を含むアミノ酸配列であり、各アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸及びアミノ酸類似体からなる群から独立して選択される。Ｒ^２は、１～約４０個のアミノ酸を含むアミノ酸配列であり、各アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸及びアミノ酸類似体からなる群から独立して選択され、ｘ及びｙは、独立して選択され、０又は１に等しい。

【0042】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ポリペプチドは、少なくとも１つのＤ－アミノ酸を含む。

【0043】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ポリペプチドは、５０アミノ酸長未満である。

【0044】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ポリペプチドは、２０アミノ酸長未満である。

【0045】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ポリペプチドは、細胞透過性部分又は安定化部分に結合している。

【0046】

本発明のいくつかの実施形態によれば、対象は雌である。

【0047】

本発明のいくつかの実施形態によれば、対象は雄である。

【0048】

別段に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び／又は科学用語は、本発明が関連する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと同様又は同等の方法及び材料を本発明の実施形態の実践又は試験に使用することができるが、例示的な方法及び／又は材料を以下に説明する。矛盾する場合は、定義を含む特許明細書が優先される。更に、材料、方法、及び例は、単なる例示であり、必ずしも限定することを意図していない。

【図面の簡単な説明】

【0049】

本発明のいくつかの実施形態は、添付の図面を参照して、例としてのみ本明細書で説明される。ここで特に図面を詳細に参照すると、示されている詳細は、例示のためのものであり、本発明の実施形態の説明に役立つ議論を目的としていることが強調されている。この点で、図面と併せて行われる説明により、本発明の実施形態がどのように実践され得るかが当業者に明らかとなる。

【0050】

図面では、

【図1A】Ｔｙｒマウス（最も優勢なＡＤＮＰ症候群突然変異を保有するゲノム編集マウス、Ｋａｒｍｏｎ Ｇ，ｅｔ ａｌ．同書）は、性依存的に発生的に障害されるが、ＮＡＰは表現型を修復することを実証する。図１Ａは、出生後１日目に生存するＴｙｒ仔マウスが有意に少ないことを実証する両側二項検定を示す（Ｔｙｒ ｎ＝１２８、ＷＴ ｎ＝１７８）。予想パーセンテージ対観察パーセンテージを示す（^＊＊Ｐ＝０．００５）。提示された雄／雌比は有意ではない。図１Ｂ～Ｃは、有意なＮＡＰ改善を伴うＷＴ同腹仔とＴｙｒ同腹仔との間で発見された有意差を実証する、（雌における）表面立ち直り、空中立ち直り、及び開眼を示す。図１Ｄは、ＮＡＰ処置による有益な効果を伴う、雌ＷＴとＴｙｒ仔マウスの体重との間の有意差を実証する（それぞれ、黒色及び赤色アスタリスクでマークされている）。図１Ｅ～Ｆは、９．２３±０．１５週齢のマウスに対して行った歩行分析を示す。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝１０、Ｔｙｒ ｎ＝７、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝７；雌：ＷＴ ｎ＝１４、Ｔｙｒ ｎ＝１３、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝８。遊脚速度、遊脚、プリント幅、最大接触時の平均及び最大強度、最大及び平均強度について、雌ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、有意なＮＡＰ補正効果と共に見出された。プリント面積、長さ、及び前側支持基底面積において、雄ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、有意なＮＡＰ矯正効果と共に見出され、雌ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、前側支持基底面積において見出された。性差は、プリント幅を除く全ての歩行パラメータにおいて観察された。ＲＦ－右前、ＲＨ－右後、ＬＦ－左前、ＬＨ－左後。全てのデータを平均±ＳＥＭとして表す。（^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊Ｐ≦０．０１、^＊＊＊Ｐ≦０．００１）。テューキー事後検定による二元配置（図１Ｂ～Ｃ及び１Ｅ～Ｆ）又は二元配置反復測定（図１Ｄ）分散分析を、特に明記しない限り実施した。

【図1B】Ｔｙｒマウス（最も優勢なＡＤＮＰ症候群突然変異を保有するゲノム編集マウス、Ｋａｒｍｏｎ Ｇ，ｅｔ ａｌ．同書）は、性依存的に発生的に障害されるが、ＮＡＰは表現型を修復することを実証する。図１Ａは、出生後１日目に生存するＴｙｒ仔マウスが有意に少ないことを実証する両側二項検定を示す（Ｔｙｒ ｎ＝１２８、ＷＴ ｎ＝１７８）。予想パーセンテージ対観察パーセンテージを示す（^＊＊Ｐ＝０．００５）。提示された雄／雌比は有意ではない。図１Ｂ～Ｃは、有意なＮＡＰ改善を伴うＷＴ同腹仔とＴｙｒ同腹仔との間で発見された有意差を実証する、（雌における）表面立ち直り、空中立ち直り、及び開眼を示す。図１Ｄは、ＮＡＰ処置による有益な効果を伴う、雌ＷＴとＴｙｒ仔マウスの体重との間の有意差を実証する（それぞれ、黒色及び赤色アスタリスクでマークされている）。図１Ｅ～Ｆは、９．２３±０．１５週齢のマウスに対して行った歩行分析を示す。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝１０、Ｔｙｒ ｎ＝７、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝７；雌：ＷＴ ｎ＝１４、Ｔｙｒ ｎ＝１３、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝８。遊脚速度、遊脚、プリント幅、最大接触時の平均及び最大強度、最大及び平均強度について、雌ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、有意なＮＡＰ補正効果と共に見出された。プリント面積、長さ、及び前側支持基底面積において、雄ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、有意なＮＡＰ矯正効果と共に見出され、雌ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、前側支持基底面積において見出された。性差は、プリント幅を除く全ての歩行パラメータにおいて観察された。ＲＦ－右前、ＲＨ－右後、ＬＦ－左前、ＬＨ－左後。全てのデータを平均±ＳＥＭとして表す。（^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊Ｐ≦０．０１、^＊＊＊Ｐ≦０．００１）。テューキー事後検定による二元配置（図１Ｂ～Ｃ及び１Ｅ～Ｆ）又は二元配置反復測定（図１Ｄ）分散分析を、特に明記しない限り実施した。

【図1C】Ｔｙｒマウス（最も優勢なＡＤＮＰ症候群突然変異を保有するゲノム編集マウス、Ｋａｒｍｏｎ Ｇ，ｅｔ ａｌ．同書）は、性依存的に発生的に障害されるが、ＮＡＰは表現型を修復することを実証する。図１Ａは、出生後１日目に生存するＴｙｒ仔マウスが有意に少ないことを実証する両側二項検定を示す（Ｔｙｒ ｎ＝１２８、ＷＴ ｎ＝１７８）。予想パーセンテージ対観察パーセンテージを示す（^＊＊Ｐ＝０．００５）。提示された雄／雌比は有意ではない。図１Ｂ～Ｃは、有意なＮＡＰ改善を伴うＷＴ同腹仔とＴｙｒ同腹仔との間で発見された有意差を実証する、（雌における）表面立ち直り、空中立ち直り、及び開眼を示す。図１Ｄは、ＮＡＰ処置による有益な効果を伴う、雌ＷＴとＴｙｒ仔マウスの体重との間の有意差を実証する（それぞれ、黒色及び赤色アスタリスクでマークされている）。図１Ｅ～Ｆは、９．２３±０．１５週齢のマウスに対して行った歩行分析を示す。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝１０、Ｔｙｒ ｎ＝７、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝７；雌：ＷＴ ｎ＝１４、Ｔｙｒ ｎ＝１３、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝８。遊脚速度、遊脚、プリント幅、最大接触時の平均及び最大強度、最大及び平均強度について、雌ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、有意なＮＡＰ補正効果と共に見出された。プリント面積、長さ、及び前側支持基底面積において、雄ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、有意なＮＡＰ矯正効果と共に見出され、雌ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、前側支持基底面積において見出された。性差は、プリント幅を除く全ての歩行パラメータにおいて観察された。ＲＦ－右前、ＲＨ－右後、ＬＦ－左前、ＬＨ－左後。全てのデータを平均±ＳＥＭとして表す。（^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊Ｐ≦０．０１、^＊＊＊Ｐ≦０．００１）。テューキー事後検定による二元配置（図１Ｂ～Ｃ及び１Ｅ～Ｆ）又は二元配置反復測定（図１Ｄ）分散分析を、特に明記しない限り実施した。

【図1D】Ｔｙｒマウス（最も優勢なＡＤＮＰ症候群突然変異を保有するゲノム編集マウス、Ｋａｒｍｏｎ Ｇ，ｅｔ ａｌ．同書）は、性依存的に発生的に障害されるが、ＮＡＰは表現型を修復することを実証する。図１Ａは、出生後１日目に生存するＴｙｒ仔マウスが有意に少ないことを実証する両側二項検定を示す（Ｔｙｒ ｎ＝１２８、ＷＴ ｎ＝１７８）。予想パーセンテージ対観察パーセンテージを示す（^＊＊Ｐ＝０．００５）。提示された雄／雌比は有意ではない。図１Ｂ～Ｃは、有意なＮＡＰ改善を伴うＷＴ同腹仔とＴｙｒ同腹仔との間で発見された有意差を実証する、（雌における）表面立ち直り、空中立ち直り、及び開眼を示す。図１Ｄは、ＮＡＰ処置による有益な効果を伴う、雌ＷＴとＴｙｒ仔マウスの体重との間の有意差を実証する（それぞれ、黒色及び赤色アスタリスクでマークされている）。図１Ｅ～Ｆは、９．２３±０．１５週齢のマウスに対して行った歩行分析を示す。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝１０、Ｔｙｒ ｎ＝７、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝７；雌：ＷＴ ｎ＝１４、Ｔｙｒ ｎ＝１３、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝８。遊脚速度、遊脚、プリント幅、最大接触時の平均及び最大強度、最大及び平均強度について、雌ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、有意なＮＡＰ補正効果と共に見出された。プリント面積、長さ、及び前側支持基底面積において、雄ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、有意なＮＡＰ矯正効果と共に見出され、雌ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、前側支持基底面積において見出された。性差は、プリント幅を除く全ての歩行パラメータにおいて観察された。ＲＦ－右前、ＲＨ－右後、ＬＦ－左前、ＬＨ－左後。全てのデータを平均±ＳＥＭとして表す。（^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊Ｐ≦０．０１、^＊＊＊Ｐ≦０．００１）。テューキー事後検定による二元配置（図１Ｂ～Ｃ及び１Ｅ～Ｆ）又は二元配置反復測定（図１Ｄ）分散分析を、特に明記しない限り実施した。

【図1E】Ｔｙｒマウス（最も優勢なＡＤＮＰ症候群突然変異を保有するゲノム編集マウス、Ｋａｒｍｏｎ Ｇ，ｅｔ ａｌ．同書）は、性依存的に発生的に障害されるが、ＮＡＰは表現型を修復することを実証する。図１Ａは、出生後１日目に生存するＴｙｒ仔マウスが有意に少ないことを実証する両側二項検定を示す（Ｔｙｒ ｎ＝１２８、ＷＴ ｎ＝１７８）。予想パーセンテージ対観察パーセンテージを示す（^＊＊Ｐ＝０．００５）。提示された雄／雌比は有意ではない。図１Ｂ～Ｃは、有意なＮＡＰ改善を伴うＷＴ同腹仔とＴｙｒ同腹仔との間で発見された有意差を実証する、（雌における）表面立ち直り、空中立ち直り、及び開眼を示す。図１Ｄは、ＮＡＰ処置による有益な効果を伴う、雌ＷＴとＴｙｒ仔マウスの体重との間の有意差を実証する（それぞれ、黒色及び赤色アスタリスクでマークされている）。図１Ｅ～Ｆは、９．２３±０．１５週齢のマウスに対して行った歩行分析を示す。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝１０、Ｔｙｒ ｎ＝７、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝７；雌：ＷＴ ｎ＝１４、Ｔｙｒ ｎ＝１３、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝８。遊脚速度、遊脚、プリント幅、最大接触時の平均及び最大強度、最大及び平均強度について、雌ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、有意なＮＡＰ補正効果と共に見出された。プリント面積、長さ、及び前側支持基底面積において、雄ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、有意なＮＡＰ矯正効果と共に見出され、雌ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、前側支持基底面積において見出された。性差は、プリント幅を除く全ての歩行パラメータにおいて観察された。ＲＦ－右前、ＲＨ－右後、ＬＦ－左前、ＬＨ－左後。全てのデータを平均±ＳＥＭとして表す。（^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊Ｐ≦０．０１、^＊＊＊Ｐ≦０．００１）。テューキー事後検定による二元配置（図１Ｂ～Ｃ及び１Ｅ～Ｆ）又は二元配置反復測定（図１Ｄ）分散分析を、特に明記しない限り実施した。

【図1F-1】Ｔｙｒマウス（最も優勢なＡＤＮＰ症候群突然変異を保有するゲノム編集マウス、Ｋａｒｍｏｎ Ｇ，ｅｔ ａｌ．同書）は、性依存的に発生的に障害されるが、ＮＡＰは表現型を修復することを実証する。図１Ａは、出生後１日目に生存するＴｙｒ仔マウスが有意に少ないことを実証する両側二項検定を示す（Ｔｙｒ ｎ＝１２８、ＷＴ ｎ＝１７８）。予想パーセンテージ対観察パーセンテージを示す（^＊＊Ｐ＝０．００５）。提示された雄／雌比は有意ではない。図１Ｂ～Ｃは、有意なＮＡＰ改善を伴うＷＴ同腹仔とＴｙｒ同腹仔との間で発見された有意差を実証する、（雌における）表面立ち直り、空中立ち直り、及び開眼を示す。図１Ｄは、ＮＡＰ処置による有益な効果を伴う、雌ＷＴとＴｙｒ仔マウスの体重との間の有意差を実証する（それぞれ、黒色及び赤色アスタリスクでマークされている）。図１Ｅ～Ｆは、９．２３±０．１５週齢のマウスに対して行った歩行分析を示す。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝１０、Ｔｙｒ ｎ＝７、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝７；雌：ＷＴ ｎ＝１４、Ｔｙｒ ｎ＝１３、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝８。遊脚速度、遊脚、プリント幅、最大接触時の平均及び最大強度、最大及び平均強度について、雌ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、有意なＮＡＰ補正効果と共に見出された。プリント面積、長さ、及び前側支持基底面積において、雄ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、有意なＮＡＰ矯正効果と共に見出され、雌ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、前側支持基底面積において見出された。性差は、プリント幅を除く全ての歩行パラメータにおいて観察された。ＲＦ－右前、ＲＨ－右後、ＬＦ－左前、ＬＨ－左後。全てのデータを平均±ＳＥＭとして表す。（^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊Ｐ≦０．０１、^＊＊＊Ｐ≦０．００１）。テューキー事後検定による二元配置（図１Ｂ～Ｃ及び１Ｅ～Ｆ）又は二元配置反復測定（図１Ｄ）分散分析を、特に明記しない限り実施した。

【図1F-2】Ｔｙｒマウス（最も優勢なＡＤＮＰ症候群突然変異を保有するゲノム編集マウス、Ｋａｒｍｏｎ Ｇ，ｅｔ ａｌ．同書）は、性依存的に発生的に障害されるが、ＮＡＰは表現型を修復することを実証する。図１Ａは、出生後１日目に生存するＴｙｒ仔マウスが有意に少ないことを実証する両側二項検定を示す（Ｔｙｒ ｎ＝１２８、ＷＴ ｎ＝１７８）。予想パーセンテージ対観察パーセンテージを示す（^＊＊Ｐ＝０．００５）。提示された雄／雌比は有意ではない。図１Ｂ～Ｃは、有意なＮＡＰ改善を伴うＷＴ同腹仔とＴｙｒ同腹仔との間で発見された有意差を実証する、（雌における）表面立ち直り、空中立ち直り、及び開眼を示す。図１Ｄは、ＮＡＰ処置による有益な効果を伴う、雌ＷＴとＴｙｒ仔マウスの体重との間の有意差を実証する（それぞれ、黒色及び赤色アスタリスクでマークされている）。図１Ｅ～Ｆは、９．２３±０．１５週齢のマウスに対して行った歩行分析を示す。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝１０、Ｔｙｒ ｎ＝７、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝７；雌：ＷＴ ｎ＝１４、Ｔｙｒ ｎ＝１３、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝８。遊脚速度、遊脚、プリント幅、最大接触時の平均及び最大強度、最大及び平均強度について、雌ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、有意なＮＡＰ補正効果と共に見出された。プリント面積、長さ、及び前側支持基底面積において、雄ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、有意なＮＡＰ矯正効果と共に見出され、雌ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間の有意差が、前側支持基底面積において見出された。性差は、プリント幅を除く全ての歩行パラメータにおいて観察された。ＲＦ－右前、ＲＨ－右後、ＬＦ－左前、ＬＨ－左後。全てのデータを平均±ＳＥＭとして表す。（^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊Ｐ≦０．０１、^＊＊＊Ｐ≦０．００１）。テューキー事後検定による二元配置（図１Ｂ～Ｃ及び１Ｅ～Ｆ）又は二元配置反復測定（図１Ｄ）分散分析を、特に明記しない限り実施した。

【図2A】Ｔｙｒマウスが性依存的に損なわれた構文を呈する一方で、ＮＡＰは表現型を修復することを示す。構文遷移確率チャートは、雌（図２Ａ）及び雄（図２Ｂ）について提示され、ＤｅｅｐＳｑｕｅａｋアルゴリズムを使用して生成された（雄：ＷＴ ｎ＝１２、Ｔｙｒ ｎ＝１４、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝１０；雌：ＷＴ ｎ＝２０、Ｔｙｒ ｎ＝９、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝９）。測定された音節は、上向き傾斜、フラット、逆Ｕ字、複合、ステップアップ、下向き傾斜、ステップダウン、複雑トリル、スプリット、及びトリルを含んでいた。ＷＴ雌とＴｙｒ雌との間で構文複雑度の明らかな低下が観察され、ＮＡＰ処置による顕著な改善が見られた。同じ効果をＷＴ雄とＴｙｒ雄との間で観察することができ、ＴｙｒとＴｙｒ ＮＡＰ雄仔マウスとの間でＮＡＰが改善される。図２Ｃ～Ｄは、この差を定量化するために、雌及び雄（それぞれ）における定量グラフを示す。Ｘｉ二乗分析を行い、それによって、音節のそれぞれの間の遷移確率を群間（ＷＴ対Ｔｙｒ及びＴｙｒ対ＴｙｒＮＡＰ）で比較し、群間でより大きい、より小さい、又は同じであった遷移確率の量を、潜在的な遷移の総数と共にカウントした。これは、期待値に対して分析された：遷移確率の１／３（１つの群が他の群よりも良好であった場合）、１／３（逆が起こる場合）、及び１／３（それらが同じように機能した場合）。３３．３％（予想）がマークされている。Ｘｉ二乗分析は、ＷＴ雌マウスが雌Ｔｙｒマウスよりも有意に良好に機能し（^＊＊＊ｐ＜０．００１）、ＮＡＰ処置で有意に改善した（^＊＊＊ｐ＜０．００１）ことを明らかにした。雄において、同じ有意な変化が、雄ＷＴとＴｙｒ（^＊＊＊ｐ＜０．００１）及び雄ＴｙｒとＴｙｒ ＮＡＰ（^＊ｐ＝０．０２７）の間で見出された。

【図2B】Ｔｙｒマウスが性依存的に損なわれた構文を呈する一方で、ＮＡＰは表現型を修復することを示す。構文遷移確率チャートは、雌（図２Ａ）及び雄（図２Ｂ）について提示され、ＤｅｅｐＳｑｕｅａｋアルゴリズムを使用して生成された（雄：ＷＴ ｎ＝１２、Ｔｙｒ ｎ＝１４、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝１０；雌：ＷＴ ｎ＝２０、Ｔｙｒ ｎ＝９、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝９）。測定された音節は、上向き傾斜、フラット、逆Ｕ字、複合、ステップアップ、下向き傾斜、ステップダウン、複雑トリル、スプリット、及びトリルを含んでいた。ＷＴ雌とＴｙｒ雌との間で構文複雑度の明らかな低下が観察され、ＮＡＰ処置による顕著な改善が見られた。同じ効果をＷＴ雄とＴｙｒ雄との間で観察することができ、ＴｙｒとＴｙｒ ＮＡＰ雄仔マウスとの間でＮＡＰが改善される。図２Ｃ～Ｄは、この差を定量化するために、雌及び雄（それぞれ）における定量グラフを示す。Ｘｉ二乗分析を行い、それによって、音節のそれぞれの間の遷移確率を群間（ＷＴ対Ｔｙｒ及びＴｙｒ対ＴｙｒＮＡＰ）で比較し、群間でより大きい、より小さい、又は同じであった遷移確率の量を、潜在的な遷移の総数と共にカウントした。これは、期待値に対して分析された：遷移確率の１／３（１つの群が他の群よりも良好であった場合）、１／３（逆が起こる場合）、及び１／３（それらが同じように機能した場合）。３３．３％（予想）がマークされている。Ｘｉ二乗分析は、ＷＴ雌マウスが雌Ｔｙｒマウスよりも有意に良好に機能し（^＊＊＊ｐ＜０．００１）、ＮＡＰ処置で有意に改善した（^＊＊＊ｐ＜０．００１）ことを明らかにした。雄において、同じ有意な変化が、雄ＷＴとＴｙｒ（^＊＊＊ｐ＜０．００１）及び雄ＴｙｒとＴｙｒ ＮＡＰ（^＊ｐ＝０．０２７）の間で見出された。

【図2C】Ｔｙｒマウスが性依存的に損なわれた構文を呈する一方で、ＮＡＰは表現型を修復することを示す。構文遷移確率チャートは、雌（図２Ａ）及び雄（図２Ｂ）について提示され、ＤｅｅｐＳｑｕｅａｋアルゴリズムを使用して生成された（雄：ＷＴ ｎ＝１２、Ｔｙｒ ｎ＝１４、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝１０；雌：ＷＴ ｎ＝２０、Ｔｙｒ ｎ＝９、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝９）。測定された音節は、上向き傾斜、フラット、逆Ｕ字、複合、ステップアップ、下向き傾斜、ステップダウン、複雑トリル、スプリット、及びトリルを含んでいた。ＷＴ雌とＴｙｒ雌との間で構文複雑度の明らかな低下が観察され、ＮＡＰ処置による顕著な改善が見られた。同じ効果をＷＴ雄とＴｙｒ雄との間で観察することができ、ＴｙｒとＴｙｒ ＮＡＰ雄仔マウスとの間でＮＡＰが改善される。図２Ｃ～Ｄは、この差を定量化するために、雌及び雄（それぞれ）における定量グラフを示す。Ｘｉ二乗分析を行い、それによって、音節のそれぞれの間の遷移確率を群間（ＷＴ対Ｔｙｒ及びＴｙｒ対ＴｙｒＮＡＰ）で比較し、群間でより大きい、より小さい、又は同じであった遷移確率の量を、潜在的な遷移の総数と共にカウントした。これは、期待値に対して分析された：遷移確率の１／３（１つの群が他の群よりも良好であった場合）、１／３（逆が起こる場合）、及び１／３（それらが同じように機能した場合）。３３．３％（予想）がマークされている。Ｘｉ二乗分析は、ＷＴ雌マウスが雌Ｔｙｒマウスよりも有意に良好に機能し（^＊＊＊ｐ＜０．００１）、ＮＡＰ処置で有意に改善した（^＊＊＊ｐ＜０．００１）ことを明らかにした。雄において、同じ有意な変化が、雄ＷＴとＴｙｒ（^＊＊＊ｐ＜０．００１）及び雄ＴｙｒとＴｙｒ ＮＡＰ（^＊ｐ＝０．０２７）の間で見出された。

【図2D】Ｔｙｒマウスが性依存的に損なわれた構文を呈する一方で、ＮＡＰは表現型を修復することを示す。構文遷移確率チャートは、雌（図２Ａ）及び雄（図２Ｂ）について提示され、ＤｅｅｐＳｑｕｅａｋアルゴリズムを使用して生成された（雄：ＷＴ ｎ＝１２、Ｔｙｒ ｎ＝１４、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝１０；雌：ＷＴ ｎ＝２０、Ｔｙｒ ｎ＝９、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝９）。測定された音節は、上向き傾斜、フラット、逆Ｕ字、複合、ステップアップ、下向き傾斜、ステップダウン、複雑トリル、スプリット、及びトリルを含んでいた。ＷＴ雌とＴｙｒ雌との間で構文複雑度の明らかな低下が観察され、ＮＡＰ処置による顕著な改善が見られた。同じ効果をＷＴ雄とＴｙｒ雄との間で観察することができ、ＴｙｒとＴｙｒ ＮＡＰ雄仔マウスとの間でＮＡＰが改善される。図２Ｃ～Ｄは、この差を定量化するために、雌及び雄（それぞれ）における定量グラフを示す。Ｘｉ二乗分析を行い、それによって、音節のそれぞれの間の遷移確率を群間（ＷＴ対Ｔｙｒ及びＴｙｒ対ＴｙｒＮＡＰ）で比較し、群間でより大きい、より小さい、又は同じであった遷移確率の量を、潜在的な遷移の総数と共にカウントした。これは、期待値に対して分析された：遷移確率の１／３（１つの群が他の群よりも良好であった場合）、１／３（逆が起こる場合）、及び１／３（それらが同じように機能した場合）。３３．３％（予想）がマークされている。Ｘｉ二乗分析は、ＷＴ雌マウスが雌Ｔｙｒマウスよりも有意に良好に機能し（^＊＊＊ｐ＜０．００１）、ＮＡＰ処置で有意に改善した（^＊＊＊ｐ＜０．００１）ことを明らかにした。雄において、同じ有意な変化が、雄ＷＴとＴｙｒ（^＊＊＊ｐ＜０．００１）及び雄ＴｙｒとＴｙｒ ＮＡＰ（^＊ｐ＝０．０２７）の間で見出された。

【図3A】Ｔｙｒマウスが、性依存的にタウオパチーと並行して樹状突起スパインの減少を示す一方で、ＮＡＰは表現型を修復することを実証する。図３Ａは、平均合計、サブタイプスパイン密度、並びに海馬ＰＳＤ９５体積を示す（雄：ＷＴ ｎ＝３２；Ｔｙｒ ｎ＝３２；Ｔｙｒ ＮＡＰ、ｎ＝３１、雌：ＷＴ ｎ＝１６～３１；Ｔｙｒ ｎ＝１６～３２；Ｔｙｒ ＮＡＰ、ｎ＝１２～２１樹状突起／実験群）を、テューキー事後検定を用いた二元配置分散分析によって判定した。総スパイン密度は、Ｔｙｒマウス（雄海馬及び雌皮質）において有意に減少し、ＮＡＰは、両方の脳領域においてそれを有意に増加させた。雄では、海馬総スパイン密度について、主処置効果（Ｆ_{（１，１２３）}＝６．８７６、ｐ＝０．０１０）及び相互作用効果（Ｆ_{（１，１２３）}＝８．５０２、ｐ＝０．００４）が見出された。雌では、海馬におけるＰＳＤ９５体積について、主要な相互作用効果が見出された（Ｆ_{（１，５４）}＝１２．９８７、ｐ＜０．００１）。運動皮質における総スパイン密度については、主な遺伝子型（Ｆ_{（１，１１２）}＝５．８１１、ｐ＝０．０１８）及び処置（Ｆ_{（１，１１２）}＝６．８６２、ｐ＝０．０１０）の効果が見出された。マッシュルーム型スパイン密度については、主な処置効果が見出されたが（Ｆ_{（１，１１２）}＝５．８２７、ｐ＝０．０１７）、一方、切り株型スパイン密度については、主な相互作用効果が見出された（Ｆ_{（１，１１２）}＝４．２９１、ｐ＝０．０４１）。図３Ｂは、雄海馬及び雌運動皮質の樹状突起スパイン染色の代表的な画像を示す。スケールバー、２μｍ。図３Ｃ～Ｄは、テューキー事後検定を伴う二元配置分散分析を使用した歯状回におけるＡＴ８（過剰リン酸化タウ）染色を示す。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝５、Ｔｙｒ ｎ＝５、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝５；雌：ＷＴ ｎ＝４、Ｔｙｒ ｎ＝４、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝４）。図３Ｃは、雄歯状回からの代表的な染色を示す。スケールバー、１００μｍ。図３Ｄは、陽性細胞／ｍｍ^２の定量化を示すグラフである。処置［Ｆ（_１，２３）＝８．０１４、Ｐ＝０．０１］及び相互作用［Ｆ（_１，２３）＝５．８、Ｐ＝０．０２６］効果が見出された。テューキー事後検定は、上記の全てについて、ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間、及びＮＡＰ及びビヒクル処置Ｔｙｒマウスの間の有意差を明らかにした。データは、平均±ＳＥＭ、^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１として表す。

【図3B】Ｔｙｒマウスが、性依存的にタウオパチーと並行して樹状突起スパインの減少を示す一方で、ＮＡＰは表現型を修復することを実証する。図３Ａは、平均合計、サブタイプスパイン密度、並びに海馬ＰＳＤ９５体積を示す（雄：ＷＴ ｎ＝３２；Ｔｙｒ ｎ＝３２；Ｔｙｒ ＮＡＰ、ｎ＝３１、雌：ＷＴ ｎ＝１６～３１；Ｔｙｒ ｎ＝１６～３２；Ｔｙｒ ＮＡＰ、ｎ＝１２～２１樹状突起／実験群）を、テューキー事後検定を用いた二元配置分散分析によって判定した。総スパイン密度は、Ｔｙｒマウス（雄海馬及び雌皮質）において有意に減少し、ＮＡＰは、両方の脳領域においてそれを有意に増加させた。雄では、海馬総スパイン密度について、主処置効果（Ｆ_{（１，１２３）}＝６．８７６、ｐ＝０．０１０）及び相互作用効果（Ｆ_{（１，１２３）}＝８．５０２、ｐ＝０．００４）が見出された。雌では、海馬におけるＰＳＤ９５体積について、主要な相互作用効果が見出された（Ｆ_{（１，５４）}＝１２．９８７、ｐ＜０．００１）。運動皮質における総スパイン密度については、主な遺伝子型（Ｆ_{（１，１１２）}＝５．８１１、ｐ＝０．０１８）及び処置（Ｆ_{（１，１１２）}＝６．８６２、ｐ＝０．０１０）の効果が見出された。マッシュルーム型スパイン密度については、主な処置効果が見出されたが（Ｆ_{（１，１１２）}＝５．８２７、ｐ＝０．０１７）、一方、切り株型スパイン密度については、主な相互作用効果が見出された（Ｆ_{（１，１１２）}＝４．２９１、ｐ＝０．０４１）。図３Ｂは、雄海馬及び雌運動皮質の樹状突起スパイン染色の代表的な画像を示す。スケールバー、２μｍ。図３Ｃ～Ｄは、テューキー事後検定を伴う二元配置分散分析を使用した歯状回におけるＡＴ８（過剰リン酸化タウ）染色を示す。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝５、Ｔｙｒ ｎ＝５、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝５；雌：ＷＴ ｎ＝４、Ｔｙｒ ｎ＝４、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝４）。図３Ｃは、雄歯状回からの代表的な染色を示す。スケールバー、１００μｍ。図３Ｄは、陽性細胞／ｍｍ^２の定量化を示すグラフである。処置［Ｆ（_１，２３）＝８．０１４、Ｐ＝０．０１］及び相互作用［Ｆ（_１，２３）＝５．８、Ｐ＝０．０２６］効果が見出された。テューキー事後検定は、上記の全てについて、ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間、及びＮＡＰ及びビヒクル処置Ｔｙｒマウスの間の有意差を明らかにした。データは、平均±ＳＥＭ、^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１として表す。

【図3C】Ｔｙｒマウスが、性依存的にタウオパチーと並行して樹状突起スパインの減少を示す一方で、ＮＡＰは表現型を修復することを実証する。図３Ａは、平均合計、サブタイプスパイン密度、並びに海馬ＰＳＤ９５体積を示す（雄：ＷＴ ｎ＝３２；Ｔｙｒ ｎ＝３２；Ｔｙｒ ＮＡＰ、ｎ＝３１、雌：ＷＴ ｎ＝１６～３１；Ｔｙｒ ｎ＝１６～３２；Ｔｙｒ ＮＡＰ、ｎ＝１２～２１樹状突起／実験群）を、テューキー事後検定を用いた二元配置分散分析によって判定した。総スパイン密度は、Ｔｙｒマウス（雄海馬及び雌皮質）において有意に減少し、ＮＡＰは、両方の脳領域においてそれを有意に増加させた。雄では、海馬総スパイン密度について、主処置効果（Ｆ_{（１，１２３）}＝６．８７６、ｐ＝０．０１０）及び相互作用効果（Ｆ_{（１，１２３）}＝８．５０２、ｐ＝０．００４）が見出された。雌では、海馬におけるＰＳＤ９５体積について、主要な相互作用効果が見出された（Ｆ_{（１，５４）}＝１２．９８７、ｐ＜０．００１）。運動皮質における総スパイン密度については、主な遺伝子型（Ｆ_{（１，１１２）}＝５．８１１、ｐ＝０．０１８）及び処置（Ｆ_{（１，１１２）}＝６．８６２、ｐ＝０．０１０）の効果が見出された。マッシュルーム型スパイン密度については、主な処置効果が見出されたが（Ｆ_{（１，１１２）}＝５．８２７、ｐ＝０．０１７）、一方、切り株型スパイン密度については、主な相互作用効果が見出された（Ｆ_{（１，１１２）}＝４．２９１、ｐ＝０．０４１）。図３Ｂは、雄海馬及び雌運動皮質の樹状突起スパイン染色の代表的な画像を示す。スケールバー、２μｍ。図３Ｃ～Ｄは、テューキー事後検定を伴う二元配置分散分析を使用した歯状回におけるＡＴ８（過剰リン酸化タウ）染色を示す。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝５、Ｔｙｒ ｎ＝５、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝５；雌：ＷＴ ｎ＝４、Ｔｙｒ ｎ＝４、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝４）。図３Ｃは、雄歯状回からの代表的な染色を示す。スケールバー、１００μｍ。図３Ｄは、陽性細胞／ｍｍ^２の定量化を示すグラフである。処置［Ｆ（_１，２３）＝８．０１４、Ｐ＝０．０１］及び相互作用［Ｆ（_１，２３）＝５．８、Ｐ＝０．０２６］効果が見出された。テューキー事後検定は、上記の全てについて、ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間、及びＮＡＰ及びビヒクル処置Ｔｙｒマウスの間の有意差を明らかにした。データは、平均±ＳＥＭ、^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１として表す。

【図3D】Ｔｙｒマウスが、性依存的にタウオパチーと並行して樹状突起スパインの減少を示す一方で、ＮＡＰは表現型を修復することを実証する。図３Ａは、平均合計、サブタイプスパイン密度、並びに海馬ＰＳＤ９５体積を示す（雄：ＷＴ ｎ＝３２；Ｔｙｒ ｎ＝３２；Ｔｙｒ ＮＡＰ、ｎ＝３１、雌：ＷＴ ｎ＝１６～３１；Ｔｙｒ ｎ＝１６～３２；Ｔｙｒ ＮＡＰ、ｎ＝１２～２１樹状突起／実験群）を、テューキー事後検定を用いた二元配置分散分析によって判定した。総スパイン密度は、Ｔｙｒマウス（雄海馬及び雌皮質）において有意に減少し、ＮＡＰは、両方の脳領域においてそれを有意に増加させた。雄では、海馬総スパイン密度について、主処置効果（Ｆ_{（１，１２３）}＝６．８７６、ｐ＝０．０１０）及び相互作用効果（Ｆ_{（１，１２３）}＝８．５０２、ｐ＝０．００４）が見出された。雌では、海馬におけるＰＳＤ９５体積について、主要な相互作用効果が見出された（Ｆ_{（１，５４）}＝１２．９８７、ｐ＜０．００１）。運動皮質における総スパイン密度については、主な遺伝子型（Ｆ_{（１，１１２）}＝５．８１１、ｐ＝０．０１８）及び処置（Ｆ_{（１，１１２）}＝６．８６２、ｐ＝０．０１０）の効果が見出された。マッシュルーム型スパイン密度については、主な処置効果が見出されたが（Ｆ_{（１，１１２）}＝５．８２７、ｐ＝０．０１７）、一方、切り株型スパイン密度については、主な相互作用効果が見出された（Ｆ_{（１，１１２）}＝４．２９１、ｐ＝０．０４１）。図３Ｂは、雄海馬及び雌運動皮質の樹状突起スパイン染色の代表的な画像を示す。スケールバー、２μｍ。図３Ｃ～Ｄは、テューキー事後検定を伴う二元配置分散分析を使用した歯状回におけるＡＴ８（過剰リン酸化タウ）染色を示す。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝５、Ｔｙｒ ｎ＝５、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝５；雌：ＷＴ ｎ＝４、Ｔｙｒ ｎ＝４、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝４）。図３Ｃは、雄歯状回からの代表的な染色を示す。スケールバー、１００μｍ。図３Ｄは、陽性細胞／ｍｍ^２の定量化を示すグラフである。処置［Ｆ（_１，２３）＝８．０１４、Ｐ＝０．０１］及び相互作用［Ｆ（_１，２３）＝５．８、Ｐ＝０．０２６］効果が見出された。テューキー事後検定は、上記の全てについて、ＷＴマウスとＴｙｒマウスとの間、及びＮＡＰ及びビヒクル処置Ｔｙｒマウスの間の有意差を明らかにした。データは、平均±ＳＥＭ、^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１として表す。

【図4A】視覚誘発電位が、表現型のＮＡＰ修正と並んで、タウオパチーと並行して雄Ｔｙｒマウスにおいて損なわれることを実証する。タウＡＴ８抗体免疫組織化学的染色を、テューキー事後検定を伴う二元配置分散分析を使用して視覚皮質において評価した。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝５、Ｔｙｒ ｎ＝５、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝５；雌：ＷＴ ｎ＝４、Ｔｙｒ ｎ＝４、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝４。図４Ａは、雄の視覚野からの代表的な染色を示す。スケールバー、１００μｍ。図４Ｂは、陽性細胞／ｍｍ^２の定量化を示す。主な処置効果が見出された［Ｆ_{（１，２３）}＝５．４０９、Ｐ＝０．０３１］。ＶＥＰパラメータを評価するために、テューキー事後検定による一元配置分散分析を雄マウスに対して行った。ＷＴ Ｎ＝５、Ｔｙｒ Ｎ＝３、Ｔｙｒ ＮＡＰ Ｎ＝５マウス、１００ｍｃｄについてはＷＴ ｎ＝１０、Ｔｙｒ ｎ＝６、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝１０、３００及び３０００ｍｃｄについてはＷＴ ｎ＝２０、Ｔｙｒ ｎ＝１２、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝２０の記録。図４Ｃは、異なる刺激強度（それぞれ１００、３００、及び３０００ｍｃｄ）についての平均（±ＳＥＭ）トレースを示し、異なる波成分名が３０００ｍｃｄトレース上に列挙されている。図４Ｄ～Ｆは、異なる波成分の曲線下面積（ＡＵＣ）について、有意差が群間で発見されたことを実証する。図４Ｄは、Ｐ２ ＡＵＣを示す：１００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，２５）}＝７．１７９、Ｐ＝０．００３］。３００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝７．４４８、Ｐ＝０．００１］。３０００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}６．３５５、Ｐ＝０．００４］。図４Ｅは、Ｎ２ ＡＵＣを示す：１００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，２５）}＝５．７５２、Ｐ＝０．００９］。３００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝１５．０９０、Ｐ＜０．００１］。３０００ｍｃｄ刺激で［Ｆ_{（２，５１）}＝１３．７１７、Ｐ＜０．００１］。図４Ｆは、Ｐ３ ＡＵＣを示す：１００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，２５）}＝４．４９５、Ｐ＝０．０２２］。３００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝２０．６５３、Ｐ＜０．００１］。３０００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝１２．５９８、Ｐ＜０．００１］。テューキー事後検定は、Ｐ３ １００ｍｃｄ ＮＡＰ効果を除いて上記の全てについて有意なＮＡＰ改善を伴う、雄ＴｙｒとそれらのＷＴ対応物との間の有意差を明らかにした。データは、平均±ＳＥＭ、^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１として表す。

【図4B】視覚誘発電位が、表現型のＮＡＰ修正と並んで、タウオパチーと並行して雄Ｔｙｒマウスにおいて損なわれることを実証する。タウＡＴ８抗体免疫組織化学的染色を、テューキー事後検定を伴う二元配置分散分析を使用して視覚皮質において評価した。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝５、Ｔｙｒ ｎ＝５、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝５；雌：ＷＴ ｎ＝４、Ｔｙｒ ｎ＝４、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝４。図４Ａは、雄の視覚野からの代表的な染色を示す。スケールバー、１００μｍ。図４Ｂは、陽性細胞／ｍｍ^２の定量化を示す。主な処置効果が見出された［Ｆ_{（１，２３）}＝５．４０９、Ｐ＝０．０３１］。ＶＥＰパラメータを評価するために、テューキー事後検定による一元配置分散分析を雄マウスに対して行った。ＷＴ Ｎ＝５、Ｔｙｒ Ｎ＝３、Ｔｙｒ ＮＡＰ Ｎ＝５マウス、１００ｍｃｄについてはＷＴ ｎ＝１０、Ｔｙｒ ｎ＝６、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝１０、３００及び３０００ｍｃｄについてはＷＴ ｎ＝２０、Ｔｙｒ ｎ＝１２、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝２０の記録。図４Ｃは、異なる刺激強度（それぞれ１００、３００、及び３０００ｍｃｄ）についての平均（±ＳＥＭ）トレースを示し、異なる波成分名が３０００ｍｃｄトレース上に列挙されている。図４Ｄ～Ｆは、異なる波成分の曲線下面積（ＡＵＣ）について、有意差が群間で発見されたことを実証する。図４Ｄは、Ｐ２ ＡＵＣを示す：１００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，２５）}＝７．１７９、Ｐ＝０．００３］。３００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝７．４４８、Ｐ＝０．００１］。３０００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}６．３５５、Ｐ＝０．００４］。図４Ｅは、Ｎ２ ＡＵＣを示す：１００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，２５）}＝５．７５２、Ｐ＝０．００９］。３００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝１５．０９０、Ｐ＜０．００１］。３０００ｍｃｄ刺激で［Ｆ_{（２，５１）}＝１３．７１７、Ｐ＜０．００１］。図４Ｆは、Ｐ３ ＡＵＣを示す：１００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，２５）}＝４．４９５、Ｐ＝０．０２２］。３００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝２０．６５３、Ｐ＜０．００１］。３０００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝１２．５９８、Ｐ＜０．００１］。テューキー事後検定は、Ｐ３ １００ｍｃｄ ＮＡＰ効果を除いて上記の全てについて有意なＮＡＰ改善を伴う、雄ＴｙｒとそれらのＷＴ対応物との間の有意差を明らかにした。データは、平均±ＳＥＭ、^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１として表す。

【図4C】視覚誘発電位が、表現型のＮＡＰ修正と並んで、タウオパチーと並行して雄Ｔｙｒマウスにおいて損なわれることを実証する。タウＡＴ８抗体免疫組織化学的染色を、テューキー事後検定を伴う二元配置分散分析を使用して視覚皮質において評価した。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝５、Ｔｙｒ ｎ＝５、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝５；雌：ＷＴ ｎ＝４、Ｔｙｒ ｎ＝４、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝４。図４Ａは、雄の視覚野からの代表的な染色を示す。スケールバー、１００μｍ。図４Ｂは、陽性細胞／ｍｍ^２の定量化を示す。主な処置効果が見出された［Ｆ_{（１，２３）}＝５．４０９、Ｐ＝０．０３１］。ＶＥＰパラメータを評価するために、テューキー事後検定による一元配置分散分析を雄マウスに対して行った。ＷＴ Ｎ＝５、Ｔｙｒ Ｎ＝３、Ｔｙｒ ＮＡＰ Ｎ＝５マウス、１００ｍｃｄについてはＷＴ ｎ＝１０、Ｔｙｒ ｎ＝６、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝１０、３００及び３０００ｍｃｄについてはＷＴ ｎ＝２０、Ｔｙｒ ｎ＝１２、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝２０の記録。図４Ｃは、異なる刺激強度（それぞれ１００、３００、及び３０００ｍｃｄ）についての平均（±ＳＥＭ）トレースを示し、異なる波成分名が３０００ｍｃｄトレース上に列挙されている。図４Ｄ～Ｆは、異なる波成分の曲線下面積（ＡＵＣ）について、有意差が群間で発見されたことを実証する。図４Ｄは、Ｐ２ ＡＵＣを示す：１００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，２５）}＝７．１７９、Ｐ＝０．００３］。３００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝７．４４８、Ｐ＝０．００１］。３０００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}６．３５５、Ｐ＝０．００４］。図４Ｅは、Ｎ２ ＡＵＣを示す：１００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，２５）}＝５．７５２、Ｐ＝０．００９］。３００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝１５．０９０、Ｐ＜０．００１］。３０００ｍｃｄ刺激で［Ｆ_{（２，５１）}＝１３．７１７、Ｐ＜０．００１］。図４Ｆは、Ｐ３ ＡＵＣを示す：１００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，２５）}＝４．４９５、Ｐ＝０．０２２］。３００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝２０．６５３、Ｐ＜０．００１］。３０００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝１２．５９８、Ｐ＜０．００１］。テューキー事後検定は、Ｐ３ １００ｍｃｄ ＮＡＰ効果を除いて上記の全てについて有意なＮＡＰ改善を伴う、雄ＴｙｒとそれらのＷＴ対応物との間の有意差を明らかにした。データは、平均±ＳＥＭ、^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１として表す。

【図4D】視覚誘発電位が、表現型のＮＡＰ修正と並んで、タウオパチーと並行して雄Ｔｙｒマウスにおいて損なわれることを実証する。タウＡＴ８抗体免疫組織化学的染色を、テューキー事後検定を伴う二元配置分散分析を使用して視覚皮質において評価した。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝５、Ｔｙｒ ｎ＝５、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝５；雌：ＷＴ ｎ＝４、Ｔｙｒ ｎ＝４、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝４。図４Ａは、雄の視覚野からの代表的な染色を示す。スケールバー、１００μｍ。図４Ｂは、陽性細胞／ｍｍ^２の定量化を示す。主な処置効果が見出された［Ｆ_{（１，２３）}＝５．４０９、Ｐ＝０．０３１］。ＶＥＰパラメータを評価するために、テューキー事後検定による一元配置分散分析を雄マウスに対して行った。ＷＴ Ｎ＝５、Ｔｙｒ Ｎ＝３、Ｔｙｒ ＮＡＰ Ｎ＝５マウス、１００ｍｃｄについてはＷＴ ｎ＝１０、Ｔｙｒ ｎ＝６、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝１０、３００及び３０００ｍｃｄについてはＷＴ ｎ＝２０、Ｔｙｒ ｎ＝１２、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝２０の記録。図４Ｃは、異なる刺激強度（それぞれ１００、３００、及び３０００ｍｃｄ）についての平均（±ＳＥＭ）トレースを示し、異なる波成分名が３０００ｍｃｄトレース上に列挙されている。図４Ｄ～Ｆは、異なる波成分の曲線下面積（ＡＵＣ）について、有意差が群間で発見されたことを実証する。図４Ｄは、Ｐ２ ＡＵＣを示す：１００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，２５）}＝７．１７９、Ｐ＝０．００３］。３００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝７．４４８、Ｐ＝０．００１］。３０００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}６．３５５、Ｐ＝０．００４］。図４Ｅは、Ｎ２ ＡＵＣを示す：１００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，２５）}＝５．７５２、Ｐ＝０．００９］。３００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝１５．０９０、Ｐ＜０．００１］。３０００ｍｃｄ刺激で［Ｆ_{（２，５１）}＝１３．７１７、Ｐ＜０．００１］。図４Ｆは、Ｐ３ ＡＵＣを示す：１００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，２５）}＝４．４９５、Ｐ＝０．０２２］。３００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝２０．６５３、Ｐ＜０．００１］。３０００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝１２．５９８、Ｐ＜０．００１］。テューキー事後検定は、Ｐ３ １００ｍｃｄ ＮＡＰ効果を除いて上記の全てについて有意なＮＡＰ改善を伴う、雄ＴｙｒとそれらのＷＴ対応物との間の有意差を明らかにした。データは、平均±ＳＥＭ、^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１として表す。

【図4E】視覚誘発電位が、表現型のＮＡＰ修正と並んで、タウオパチーと並行して雄Ｔｙｒマウスにおいて損なわれることを実証する。タウＡＴ８抗体免疫組織化学的染色を、テューキー事後検定を伴う二元配置分散分析を使用して視覚皮質において評価した。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝５、Ｔｙｒ ｎ＝５、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝５；雌：ＷＴ ｎ＝４、Ｔｙｒ ｎ＝４、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝４。図４Ａは、雄の視覚野からの代表的な染色を示す。スケールバー、１００μｍ。図４Ｂは、陽性細胞／ｍｍ^２の定量化を示す。主な処置効果が見出された［Ｆ_{（１，２３）}＝５．４０９、Ｐ＝０．０３１］。ＶＥＰパラメータを評価するために、テューキー事後検定による一元配置分散分析を雄マウスに対して行った。ＷＴ Ｎ＝５、Ｔｙｒ Ｎ＝３、Ｔｙｒ ＮＡＰ Ｎ＝５マウス、１００ｍｃｄについてはＷＴ ｎ＝１０、Ｔｙｒ ｎ＝６、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝１０、３００及び３０００ｍｃｄについてはＷＴ ｎ＝２０、Ｔｙｒ ｎ＝１２、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝２０の記録。図４Ｃは、異なる刺激強度（それぞれ１００、３００、及び３０００ｍｃｄ）についての平均（±ＳＥＭ）トレースを示し、異なる波成分名が３０００ｍｃｄトレース上に列挙されている。図４Ｄ～Ｆは、異なる波成分の曲線下面積（ＡＵＣ）について、有意差が群間で発見されたことを実証する。図４Ｄは、Ｐ２ ＡＵＣを示す：１００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，２５）}＝７．１７９、Ｐ＝０．００３］。３００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝７．４４８、Ｐ＝０．００１］。３０００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}６．３５５、Ｐ＝０．００４］。図４Ｅは、Ｎ２ ＡＵＣを示す：１００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，２５）}＝５．７５２、Ｐ＝０．００９］。３００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝１５．０９０、Ｐ＜０．００１］。３０００ｍｃｄ刺激で［Ｆ_{（２，５１）}＝１３．７１７、Ｐ＜０．００１］。図４Ｆは、Ｐ３ ＡＵＣを示す：１００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，２５）}＝４．４９５、Ｐ＝０．０２２］。３００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝２０．６５３、Ｐ＜０．００１］。３０００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝１２．５９８、Ｐ＜０．００１］。テューキー事後検定は、Ｐ３ １００ｍｃｄ ＮＡＰ効果を除いて上記の全てについて有意なＮＡＰ改善を伴う、雄ＴｙｒとそれらのＷＴ対応物との間の有意差を明らかにした。データは、平均±ＳＥＭ、^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１として表す。

【図4F】視覚誘発電位が、表現型のＮＡＰ修正と並んで、タウオパチーと並行して雄Ｔｙｒマウスにおいて損なわれることを実証する。タウＡＴ８抗体免疫組織化学的染色を、テューキー事後検定を伴う二元配置分散分析を使用して視覚皮質において評価した。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝５、Ｔｙｒ ｎ＝５、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝５；雌：ＷＴ ｎ＝４、Ｔｙｒ ｎ＝４、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝４。図４Ａは、雄の視覚野からの代表的な染色を示す。スケールバー、１００μｍ。図４Ｂは、陽性細胞／ｍｍ^２の定量化を示す。主な処置効果が見出された［Ｆ_{（１，２３）}＝５．４０９、Ｐ＝０．０３１］。ＶＥＰパラメータを評価するために、テューキー事後検定による一元配置分散分析を雄マウスに対して行った。ＷＴ Ｎ＝５、Ｔｙｒ Ｎ＝３、Ｔｙｒ ＮＡＰ Ｎ＝５マウス、１００ｍｃｄについてはＷＴ ｎ＝１０、Ｔｙｒ ｎ＝６、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝１０、３００及び３０００ｍｃｄについてはＷＴ ｎ＝２０、Ｔｙｒ ｎ＝１２、Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝２０の記録。図４Ｃは、異なる刺激強度（それぞれ１００、３００、及び３０００ｍｃｄ）についての平均（±ＳＥＭ）トレースを示し、異なる波成分名が３０００ｍｃｄトレース上に列挙されている。図４Ｄ～Ｆは、異なる波成分の曲線下面積（ＡＵＣ）について、有意差が群間で発見されたことを実証する。図４Ｄは、Ｐ２ ＡＵＣを示す：１００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，２５）}＝７．１７９、Ｐ＝０．００３］。３００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝７．４４８、Ｐ＝０．００１］。３０００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}６．３５５、Ｐ＝０．００４］。図４Ｅは、Ｎ２ ＡＵＣを示す：１００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，２５）}＝５．７５２、Ｐ＝０．００９］。３００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝１５．０９０、Ｐ＜０．００１］。３０００ｍｃｄ刺激で［Ｆ_{（２，５１）}＝１３．７１７、Ｐ＜０．００１］。図４Ｆは、Ｐ３ ＡＵＣを示す：１００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，２５）}＝４．４９５、Ｐ＝０．０２２］。３００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝２０．６５３、Ｐ＜０．００１］。３０００ｍｃｄ刺激では［Ｆ_{（２，５１）}＝１２．５９８、Ｐ＜０．００１］。テューキー事後検定は、Ｐ３ １００ｍｃｄ ＮＡＰ効果を除いて上記の全てについて有意なＮＡＰ改善を伴う、雄ＴｙｒとそれらのＷＴ対応物との間の有意差を明らかにした。データは、平均±ＳＥＭ、^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１として表す。

【図5】マウス脾臓のＲＮＡ配列決定が、ＡＤＮＰ突然変異ヒトリンパ芽球様細胞と共有されるＡｄｎｐＴｙｒ遺伝子型に影響された／ＮＡＰ修正されたｍＲＮＡ種を明らかにしたことを示す。ＲＮＡ配列決定は、ＴｙｒＡｄｎｐ突然変異によって影響を受け、Ｔｙｒ突然変異のヒト等価物を含む３つの異なるＡＤＮＰ突然変異によって影響を受けたＮＡＰ処理によって修正された１３個の雄及び８９個の雌ＲＮＡ転写物を明らかにした［例えば、実施例１の参考文献を参照されたい（１５、２７）］。ベン図（ｂｉｏｉｎｆｏｇｐ（ｄｏｔ）ｃｎｂ（ｄｏｔ）ｃｓｉｃ（ｄｏｔ）ｅｓ／ｔｏｏｌｓ／ｖｅｎｎｙ／ｉｎｄｅｘ２（ｄｏｔ）０（ｄｏｔ）２（ｄｏｔ）ｈｔｍｌ）は、雄における１つの共有転写物及び雌における９つの共有転写物（全てに共通の５つを含む）を示唆する。より厳密な統計（ＦＤＲ）が示されたマウスレベルのみでのさらなるデータマイニングは、有意な遺伝子型及びＮＡＰ効果を雌においてのみ示し、抗原提示及びプロセシングは主要な影響を受けた経路であった（ＫＥＧＧ経路分析、ｐ値＜１×１０^－８、ＦＤＲ＝３．５×１０^－６）。雌性共有転写物のタンパク質間相互作用分析（ｓｔｒｉｎｇ－ｄｂ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／）は、主要な影響経路としての神経及び性発達の調節を示した。主要な相互作用ＡＤＮＰ複合体として、主要な相互作用タンパク質としてＳＭＡＲＣＡ４（ＢＲＧ１）を有するＳＷＩ／ＳＮＦクロマチンリモデリング複合体（７）をネットワークに加えた。更に、性的二分法はＴｙｒマウスの主要な特徴であるので、ヒトにおける性行動の主要な決定基であるＴＣＦ１２及びＴＣＦ２１（５６）も加えた。最後に、β－アレスチン－１を含む、雌におけるＡＤＮＰ突然変異によって影響を受けた主要な共有遺伝子／タンパク質、主要な細胞調節因子であるフォークヘッドボックスタンパク質Ｏ３及びアデニル酸シクラーゼ６型が記載された。

【図6A】Ｔｙｒ遺伝子型が、免疫シナプス関連の提案された可能な機構の複雑であるが説明可能な概略図を用いて、ＮＡＰ修正を伴う腸ディスバイオシスを誘導することを実証する（５７）。図６Ａは、糞便微生物叢が、ＮＡＰ処置によって部分的に改善された性別及び遺伝子型効果を明らかにしたことを実証する。テューキー事後検定による二元配置分散分析を実施して、リアルタイムＰＣＲ微生物叢負荷を評価した。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝１２～１３；Ｔｙｒ ｎ＝１３；ＷＴ ＮＡＰ ｎ＝１２；Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝１２～１３、雌：ＷＴ ｎ＝１０～１１；Ｔｙｒ ｎ＝１２；ＷＴ ＮＡＰ ｎ＝１１；ＴｙｒＮＡＰ ｎ＝６。ＥｕｂＶ３については、処置［Ｆ_{（１，４９）}＝１５．４９４、Ｐ＜０．００１］及び相互作用［Ｆ_{（１，４９）}＝１７．７５２、Ｐ＜０．００１］の効果が雄で見出され、雌では効果がなかった。ＢＩＦについては、主要な遺伝子型効果［Ｆ_{（１，５０）}＝１５．９４３、Ｐ＜０．００１］が雄において見出された。雌では、主要な相互作用効果［Ｆ_{（１，３９）}＝２３．１８８１、Ｐ＝０．００２］が見出された。エンテロ（［Ｆ_{（１，４７）}＝８．３７８、Ｐ＝０．００６］及びラクト［Ｆ（_{１，５０）}＝４．５６１、Ｐ＝０．０３８］については、主要な遺伝子型効果が雄で見出され、雌では効果が見られなかった。テューキー事後検定は、ＥｕｂＶ３の有意なＮＡＰ補正を伴う、４つ全ての細菌における雄ＴｙｒとそれらのＷＴ同腹仔との間の有意差、並びに有意なＮＡＰ改善を伴う、雌ＴｙｒとＷＴマウスとの間の有意差を明らかにした。性差がＥｕｂＶ３及びラクト細菌において発見された。データは、平均±ＳＥＭ、^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊＊Ｐ≦０．００１として表す。全真正細菌負荷量（ＥｕｂＶ３）、ビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）（ＢＩＦ）、腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏ）、ラクトバチルス群（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）（Ｌａｃｔｏ）。図６Ｂは、可能な提案された機構を示す。以前の観察（１０１）、エストロゲン、ＡＤＮＰ及びＳＨＨを結びつける最近の結果（６０）、並びに本明細書に提示される結果を包含することに基づいて、微小管／タウ中心機構が提案され、複雑なＡＤＮＰ症候群の表現型を説明する。健康な状態では、微小管末端結合タンパク質、例えばＥＢ１は、神経筋接合部（１０２）、免疫シナプス（１０３）、及び中枢神経系（脳）シナプスにおいて、微小管成長末端と連結している。ＢｉｏＲｅｎｄｅｒ（ｄｏｔ）ｃｏｍで作成。

【図6B】Ｔｙｒ遺伝子型が、免疫シナプス関連の提案された可能な機構の複雑であるが説明可能な概略図を用いて、ＮＡＰ修正を伴う腸ディスバイオシスを誘導することを実証する（５７）。図６Ａは、糞便微生物叢が、ＮＡＰ処置によって部分的に改善された性別及び遺伝子型効果を明らかにしたことを実証する。テューキー事後検定による二元配置分散分析を実施して、リアルタイムＰＣＲ微生物叢負荷を評価した。対応のないスチューデントｔ検定もまた、性差を決定するために使用した。雄：ＷＴ ｎ＝１２～１３；Ｔｙｒ ｎ＝１３；ＷＴ ＮＡＰ ｎ＝１２；Ｔｙｒ ＮＡＰ ｎ＝１２～１３、雌：ＷＴ ｎ＝１０～１１；Ｔｙｒ ｎ＝１２；ＷＴ ＮＡＰ ｎ＝１１；ＴｙｒＮＡＰ ｎ＝６。ＥｕｂＶ３については、処置［Ｆ_{（１，４９）}＝１５．４９４、Ｐ＜０．００１］及び相互作用［Ｆ_{（１，４９）}＝１７．７５２、Ｐ＜０．００１］の効果が雄で見出され、雌では効果がなかった。ＢＩＦについては、主要な遺伝子型効果［Ｆ_{（１，５０）}＝１５．９４３、Ｐ＜０．００１］が雄において見出された。雌では、主要な相互作用効果［Ｆ_{（１，３９）}＝２３．１８８１、Ｐ＝０．００２］が見出された。エンテロ（［Ｆ_{（１，４７）}＝８．３７８、Ｐ＝０．００６］及びラクト［Ｆ（_{１，５０）}＝４．５６１、Ｐ＝０．０３８］については、主要な遺伝子型効果が雄で見出され、雌では効果が見られなかった。テューキー事後検定は、ＥｕｂＶ３の有意なＮＡＰ補正を伴う、４つ全ての細菌における雄ＴｙｒとそれらのＷＴ同腹仔との間の有意差、並びに有意なＮＡＰ改善を伴う、雌ＴｙｒとＷＴマウスとの間の有意差を明らかにした。性差がＥｕｂＶ３及びラクト細菌において発見された。データは、平均±ＳＥＭ、^＊Ｐ≦０．０５、^＊＊＊Ｐ≦０．００１として表す。全真正細菌負荷量（ＥｕｂＶ３）、ビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）（ＢＩＦ）、腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏ）、ラクトバチルス群（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）（Ｌａｃｔｏ）。図６Ｂは、可能な提案された機構を示す。以前の観察（１０１）、エストロゲン、ＡＤＮＰ及びＳＨＨを結びつける最近の結果（６０）、並びに本明細書に提示される結果を包含することに基づいて、微小管／タウ中心機構が提案され、複雑なＡＤＮＰ症候群の表現型を説明する。健康な状態では、微小管末端結合タンパク質、例えばＥＢ１は、神経筋接合部（１０２）、免疫シナプス（１０３）、及び中枢神経系（脳）シナプスにおいて、微小管成長末端と連結している。ＢｉｏＲｅｎｄｅｒ（ｄｏｔ）ｃｏｍで作成。 図１Ａ～６Ｂに引用される全ての参照文献は、例えば以下に提供される実施例１の文献一覧を指す。

【図7A】短縮型ＡＤＮＰタンパク質によるＭＴ動態及びアセンブリの障害を示す。図７Ａは、ＮＡＰ処理（１０^－１２Ｍ、４時間）を伴う又は伴わない、ＲＦＰタグ付きＥＢ３タンパク質及びＧＦＰタグ付き全長ＡＤＮＰ又は短縮型ＡＤＮＰタンパク質を発現する分化したＮ１Ｅ－１１５細胞のライブイメージングを示す。非コンジュゲートＧＦＰを発現する骨格プラスミド（ｐＥＧＦＰ－Ｃ１）によるトランスフェクションを対照として実施した。着色線（灰色の四角）は、ＥＢ３コメット様構造のトラックを表す（Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって得られた）。図７Ｂは、ＥＢ３コメットトラック長及び速度の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフを示す。データを、Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって偏りのない様式で３つの独立した実験から収集し、データの統計分析を、二元配置分散分析（ＳｉｇｍａＰｌｏｔ １１）によって行った。統計的有意性^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１。対照ｎ＝１３；全長ＡＤＮＰ ｎ＝１４；全長ＡＤＮＰ＋ＮＡＰ ｎ＝１４；ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３ ｎ＝１９；ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３＋ＮＡＰ ｎ＝２４；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ｎ＝２１；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１＋ＮＡＰ ｎ＝２０；ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊ｎ＝２０；ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊＋ＮＡＰ ｎ＝２０。

【図7B】短縮型ＡＤＮＰタンパク質によるＭＴ動態及びアセンブリの障害を示す。図７Ａは、ＮＡＰ処理（１０^－１２Ｍ、４時間）を伴う又は伴わない、ＲＦＰタグ付きＥＢ３タンパク質及びＧＦＰタグ付き全長ＡＤＮＰ又は短縮型ＡＤＮＰタンパク質を発現する分化したＮ１Ｅ－１１５細胞のライブイメージングを示す。非コンジュゲートＧＦＰを発現する骨格プラスミド（ｐＥＧＦＰ－Ｃ１）によるトランスフェクションを対照として実施した。着色線（灰色の四角）は、ＥＢ３コメット様構造のトラックを表す（Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって得られた）。図７Ｂは、ＥＢ３コメットトラック長及び速度の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフを示す。データを、Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって偏りのない様式で３つの独立した実験から収集し、データの統計分析を、二元配置分散分析（ＳｉｇｍａＰｌｏｔ １１）によって行った。統計的有意性^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１。対照ｎ＝１３；全長ＡＤＮＰ ｎ＝１４；全長ＡＤＮＰ＋ＮＡＰ ｎ＝１４；ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３ ｎ＝１９；ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３＋ＮＡＰ ｎ＝２４；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ｎ＝２１；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１＋ＮＡＰ ｎ＝２０；ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊ｎ＝２０；ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊＋ＮＡＰ ｎ＝２０。

【図7C】短縮型ＡＤＮＰタンパク質によるＭＴ動態及びアセンブリの障害を示す。図７Ａは、ＮＡＰ処理（１０^－１２Ｍ、４時間）を伴う又は伴わない、ＲＦＰタグ付きＥＢ３タンパク質及びＧＦＰタグ付き全長ＡＤＮＰ又は短縮型ＡＤＮＰタンパク質を発現する分化したＮ１Ｅ－１１５細胞のライブイメージングを示す。非コンジュゲートＧＦＰを発現する骨格プラスミド（ｐＥＧＦＰ－Ｃ１）によるトランスフェクションを対照として実施した。着色線（灰色の四角）は、ＥＢ３コメット様構造のトラックを表す（Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって得られた）。図７Ｂは、ＥＢ３コメットトラック長及び速度の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフを示す。データを、Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって偏りのない様式で３つの独立した実験から収集し、データの統計分析を、二元配置分散分析（ＳｉｇｍａＰｌｏｔ １１）によって行った。統計的有意性^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１。対照ｎ＝１３；全長ＡＤＮＰ ｎ＝１４；全長ＡＤＮＰ＋ＮＡＰ ｎ＝１４；ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３ ｎ＝１９；ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３＋ＮＡＰ ｎ＝２４；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ｎ＝２１；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１＋ＮＡＰ ｎ＝２０；ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊ｎ＝２０；ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊＋ＮＡＰ ｎ＝２０。

【図8A】ＡＤＮＰ短縮型タンパク質の発現がタウ－ＭＴ相互作用を低下させることを実証する。図８Ａは、ＮＡＰ処理（１０^－１２Ｍ、４時間）あり又はなしで、ＧＦＰタグ付き全長ＡＤＮＰ又は短縮型ＡＤＮＰタンパク質をコトランスフェクトした分化したＮ１Ｅ－１１５細胞におけるｍＣｈｅｒｒｙタグ付きタウの光退色（０’）及び蛍光回復（６０’）の代表的な画像を示す。非コンジュゲートＧＦＰを発現する骨格プラスミド（ｐＥＧＦＰ－Ｃ１）によるトランスフェクションを対照として実施した。図８Ｂは、正規化データのＦＲＡＰ回復曲線を示す。図８Ｃは、不動画分の適合データ（３回の独立した実験から）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフである。正規化されたＦＲＡＰデータを一指数関数（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６）に適合させ、統計分析を二元配置分散分析（ＳｉｇｍａＰｌｏｔ １１）によって行った。対照についての統計的有意性は、^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１によって示される。全長ＡＤＮＰについての有意性は、＄Ｐ＜０．０５によって示され、群内の統計学的有意性は、＃Ｐ＜０．０５、＃＃＃Ｐ＜０．００１によって示される。対照ｎ＝６４；全長ＡＤＮＰ ｎ＝５５；全長ＡＤＮＰ＋ＮＡＰ ｎ＝４６；ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３ ｎ＝７１；ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３＋ＮＡＰ ｎ＝２５；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ｎ＝３６；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１＋ＮＡＰ ｎ＝３５；ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊ｎ＝３３；ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊＋ＮＡＰ ｎ＝６２。

【図8B】ＡＤＮＰ短縮型タンパク質の発現がタウ－ＭＴ相互作用を低下させることを実証する。図８Ａは、ＮＡＰ処理（１０^－１２Ｍ、４時間）あり又はなしで、ＧＦＰタグ付き全長ＡＤＮＰ又は短縮型ＡＤＮＰタンパク質をコトランスフェクトした分化したＮ１Ｅ－１１５細胞におけるｍＣｈｅｒｒｙタグ付きタウの光退色（０’）及び蛍光回復（６０’）の代表的な画像を示す。非コンジュゲートＧＦＰを発現する骨格プラスミド（ｐＥＧＦＰ－Ｃ１）によるトランスフェクションを対照として実施した。図８Ｂは、正規化データのＦＲＡＰ回復曲線を示す。図８Ｃは、不動画分の適合データ（３回の独立した実験から）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフである。正規化されたＦＲＡＰデータを一指数関数（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６）に適合させ、統計分析を二元配置分散分析（ＳｉｇｍａＰｌｏｔ １１）によって行った。対照についての統計的有意性は、^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１によって示される。全長ＡＤＮＰについての有意性は、＄Ｐ＜０．０５によって示され、群内の統計学的有意性は、＃Ｐ＜０．０５、＃＃＃Ｐ＜０．００１によって示される。対照ｎ＝６４；全長ＡＤＮＰ ｎ＝５５；全長ＡＤＮＰ＋ＮＡＰ ｎ＝４６；ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３ ｎ＝７１；ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３＋ＮＡＰ ｎ＝２５；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ｎ＝３６；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１＋ＮＡＰ ｎ＝３５；ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊ｎ＝３３；ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊＋ＮＡＰ ｎ＝６２。

【図8C】ＡＤＮＰ短縮型タンパク質の発現がタウ－ＭＴ相互作用を低下させることを実証する。図８Ａは、ＮＡＰ処理（１０^－１２Ｍ、４時間）あり又はなしで、ＧＦＰタグ付き全長ＡＤＮＰ又は短縮型ＡＤＮＰタンパク質をコトランスフェクトした分化したＮ１Ｅ－１１５細胞におけるｍＣｈｅｒｒｙタグ付きタウの光退色（０’）及び蛍光回復（６０’）の代表的な画像を示す。非コンジュゲートＧＦＰを発現する骨格プラスミド（ｐＥＧＦＰ－Ｃ１）によるトランスフェクションを対照として実施した。図８Ｂは、正規化データのＦＲＡＰ回復曲線を示す。図８Ｃは、不動画分の適合データ（３回の独立した実験から）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフである。正規化されたＦＲＡＰデータを一指数関数（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６）に適合させ、統計分析を二元配置分散分析（ＳｉｇｍａＰｌｏｔ １１）によって行った。対照についての統計的有意性は、^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１によって示される。全長ＡＤＮＰについての有意性は、＄Ｐ＜０．０５によって示され、群内の統計学的有意性は、＃Ｐ＜０．０５、＃＃＃Ｐ＜０．００１によって示される。対照ｎ＝６４；全長ＡＤＮＰ ｎ＝５５；全長ＡＤＮＰ＋ＮＡＰ ｎ＝４６；ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３ ｎ＝７１；ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３＋ＮＡＰ ｎ＝２５；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ｎ＝３６；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１＋ＮＡＰ ｎ＝３５；ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊ｎ＝３３；ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊＋ＮＡＰ ｎ＝６２。

【図9A】以前に公開されたデータ［３０、３１］からの＋ｐ．Ａｒｇ７３０^＊及びｐ．Ｌｙｓ７１９^＊について調べた、ＭＴ伸長及びタウ－ＭＴ会合に対するＡＳＤ関連ＡＤＮＰ短縮型タンパク質の影響の概要である。「ＬＯＦ」－機能喪失、「ＧＯＴＦ」－毒性機能獲得。

【図9B】全長ヒトＡＤＮＰコード配列に沿って示された機能的タンパク質領域の位置を示す概略図である。矢印は、（以下及び前の実施例部分において）試験された突然変異を示す。図は、以前に公開された知見［３０、３１］に従って構成された。

【図9C】ヒトＡＤＮＰ ｃＤＮＡ（１２１０～１３１６ｂｐ）及びアミノ酸（４０４～４３９ ａａ、着色矢印）部分配列を示す概略図である。ｃＤＮＡ配列は、ｃ．１２１１Ｃ＜Ａ（ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊）及びｃ．１２２２＿１２２３ ｄｅｌＡＡ（ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１）変異の位置を表す。上のアミノ酸配列は、終止コドンの位置（「^＊」でマークされている）、ｍｕｔＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４００８Ｖａｌｆｓ^＊３１の３０個のアミノ酸のフレームシフト、及び再現された予測されたＳＨ３結合サイト（赤線）、下のアミノ酸配列－ｗｔＡＤＮＰを表す。（ｄｏｔ）ｃｏｍをベンチングすることによって概略図を生成した。

【図10A】ＳＤＭ破壊されたＳＨ３結合性部位を有するＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１が、ＭＴ動態及びタウ－ＭＴ会合に対して悪影響を示すことを実証する。図１０Ａは、上記の図７Ａに記載されるようなタイムラプスイメージングを示す。短縮型ＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１の代表的な画像を、ＮＡＰ処理あり又はなしのｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために提示する（１０^－１２Ｍ、４時間）。図１０Ｂ～Ｃは、ＥＢ３コメットトラック長（図１０Ｂ）及び速度（図１０Ｃ）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフを示す。対照、全長ＡＤＮＰ、及びｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のデータを、ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために示す。上記の図７Ａ～Ｂに記載されているように、統計分析を行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ ｎ＝４５；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ＋ＮＡＰ ｎ＝４５。図１０Ｄは、上記の図８Ａに記載されるＦＲＡＰ分析を示す。短縮型ＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のｍＣｈｅｒｒｙタグ付きタウ光退色（０’）及び蛍光回復（６０’）の代表的な画像は、ＮＡＰ処理あり又はなしのｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために提示されたものである（１０^－１２Ｍ、４時間）。図１０Ｅは、正規化データのＦＲＡＰ回復曲線を示す。図１０Ｆは、不動画分の適合データ（３回の独立した実験から）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフである。対照、全長ＡＤＮＰ及びｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のデータを、ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために示す。上記の図８Ａ～Ｃに記載されているように、統計分析を行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ ｎ＝６６；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ＋ＮＡＰ ｎ＝１０４。

【図10B】ＳＤＭ破壊されたＳＨ３結合性部位を有するＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１が、ＭＴ動態及びタウ－ＭＴ会合に対して悪影響を示すことを実証する。図１０Ａは、上記の図７Ａに記載されるようなタイムラプスイメージングを示す。短縮型ＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１の代表的な画像を、ＮＡＰ処理あり又はなしのｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために提示する（１０^－１２Ｍ、４時間）。図１０Ｂ～Ｃは、ＥＢ３コメットトラック長（図１０Ｂ）及び速度（図１０Ｃ）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフを示す。対照、全長ＡＤＮＰ、及びｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のデータを、ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために示す。上記の図７Ａ～Ｂに記載されているように、統計分析を行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ ｎ＝４５；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ＋ＮＡＰ ｎ＝４５。図１０Ｄは、上記の図８Ａに記載されるＦＲＡＰ分析を示す。短縮型ＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のｍＣｈｅｒｒｙタグ付きタウ光退色（０’）及び蛍光回復（６０’）の代表的な画像は、ＮＡＰ処理あり又はなしのｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために提示されたものである（１０^－１２Ｍ、４時間）。図１０Ｅは、正規化データのＦＲＡＰ回復曲線を示す。図１０Ｆは、不動画分の適合データ（３回の独立した実験から）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフである。対照、全長ＡＤＮＰ及びｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のデータを、ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために示す。上記の図８Ａ～Ｃに記載されているように、統計分析を行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ ｎ＝６６；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ＋ＮＡＰ ｎ＝１０４。

【図10C】ＳＤＭ破壊されたＳＨ３結合性部位を有するＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１が、ＭＴ動態及びタウ－ＭＴ会合に対して悪影響を示すことを実証する。図１０Ａは、上記の図７Ａに記載されるようなタイムラプスイメージングを示す。短縮型ＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１の代表的な画像を、ＮＡＰ処理あり又はなしのｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために提示する（１０^－１２Ｍ、４時間）。図１０Ｂ～Ｃは、ＥＢ３コメットトラック長（図１０Ｂ）及び速度（図１０Ｃ）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフを示す。対照、全長ＡＤＮＰ、及びｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のデータを、ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために示す。上記の図７Ａ～Ｂに記載されているように、統計分析を行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ ｎ＝４５；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ＋ＮＡＰ ｎ＝４５。図１０Ｄは、上記の図８Ａに記載されるＦＲＡＰ分析を示す。短縮型ＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のｍＣｈｅｒｒｙタグ付きタウ光退色（０’）及び蛍光回復（６０’）の代表的な画像は、ＮＡＰ処理あり又はなしのｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために提示されたものである（１０^－１２Ｍ、４時間）。図１０Ｅは、正規化データのＦＲＡＰ回復曲線を示す。図１０Ｆは、不動画分の適合データ（３回の独立した実験から）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフである。対照、全長ＡＤＮＰ及びｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のデータを、ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために示す。上記の図８Ａ～Ｃに記載されているように、統計分析を行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ ｎ＝６６；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ＋ＮＡＰ ｎ＝１０４。

【図10D】ＳＤＭ破壊されたＳＨ３結合性部位を有するＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１が、ＭＴ動態及びタウ－ＭＴ会合に対して悪影響を示すことを実証する。図１０Ａは、上記の図７Ａに記載されるようなタイムラプスイメージングを示す。短縮型ＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１の代表的な画像を、ＮＡＰ処理あり又はなしのｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために提示する（１０^－１２Ｍ、４時間）。図１０Ｂ～Ｃは、ＥＢ３コメットトラック長（図１０Ｂ）及び速度（図１０Ｃ）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフを示す。対照、全長ＡＤＮＰ、及びｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のデータを、ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために示す。上記の図７Ａ～Ｂに記載されているように、統計分析を行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ ｎ＝４５；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ＋ＮＡＰ ｎ＝４５。図１０Ｄは、上記の図８Ａに記載されるＦＲＡＰ分析を示す。短縮型ＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のｍＣｈｅｒｒｙタグ付きタウ光退色（０’）及び蛍光回復（６０’）の代表的な画像は、ＮＡＰ処理あり又はなしのｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために提示されたものである（１０^－１２Ｍ、４時間）。図１０Ｅは、正規化データのＦＲＡＰ回復曲線を示す。図１０Ｆは、不動画分の適合データ（３回の独立した実験から）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフである。対照、全長ＡＤＮＰ及びｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のデータを、ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために示す。上記の図８Ａ～Ｃに記載されているように、統計分析を行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ ｎ＝６６；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ＋ＮＡＰ ｎ＝１０４。

【図10E】ＳＤＭ破壊されたＳＨ３結合性部位を有するＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１が、ＭＴ動態及びタウ－ＭＴ会合に対して悪影響を示すことを実証する。図１０Ａは、上記の図７Ａに記載されるようなタイムラプスイメージングを示す。短縮型ＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１の代表的な画像を、ＮＡＰ処理あり又はなしのｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために提示する（１０^－１２Ｍ、４時間）。図１０Ｂ～Ｃは、ＥＢ３コメットトラック長（図１０Ｂ）及び速度（図１０Ｃ）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフを示す。対照、全長ＡＤＮＰ、及びｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のデータを、ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために示す。上記の図７Ａ～Ｂに記載されているように、統計分析を行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ ｎ＝４５；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ＋ＮＡＰ ｎ＝４５。図１０Ｄは、上記の図８Ａに記載されるＦＲＡＰ分析を示す。短縮型ＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のｍＣｈｅｒｒｙタグ付きタウ光退色（０’）及び蛍光回復（６０’）の代表的な画像は、ＮＡＰ処理あり又はなしのｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために提示されたものである（１０^－１２Ｍ、４時間）。図１０Ｅは、正規化データのＦＲＡＰ回復曲線を示す。図１０Ｆは、不動画分の適合データ（３回の独立した実験から）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフである。対照、全長ＡＤＮＰ及びｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のデータを、ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために示す。上記の図８Ａ～Ｃに記載されているように、統計分析を行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ ｎ＝６６；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ＋ＮＡＰ ｎ＝１０４。

【図10F】ＳＤＭ破壊されたＳＨ３結合性部位を有するＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１が、ＭＴ動態及びタウ－ＭＴ会合に対して悪影響を示すことを実証する。図１０Ａは、上記の図７Ａに記載されるようなタイムラプスイメージングを示す。短縮型ＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１の代表的な画像を、ＮＡＰ処理あり又はなしのｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために提示する（１０^－１２Ｍ、４時間）。図１０Ｂ～Ｃは、ＥＢ３コメットトラック長（図１０Ｂ）及び速度（図１０Ｃ）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフを示す。対照、全長ＡＤＮＰ、及びｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のデータを、ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために示す。上記の図７Ａ～Ｂに記載されているように、統計分析を行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ ｎ＝４５；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ＋ＮＡＰ ｎ＝４５。図１０Ｄは、上記の図８Ａに記載されるＦＲＡＰ分析を示す。短縮型ＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のｍＣｈｅｒｒｙタグ付きタウ光退色（０’）及び蛍光回復（６０’）の代表的な画像は、ＮＡＰ処理あり又はなしのｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために提示されたものである（１０^－１２Ｍ、４時間）。図１０Ｅは、正規化データのＦＲＡＰ回復曲線を示す。図１０Ｆは、不動画分の適合データ（３回の独立した実験から）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフである。対照、全長ＡＤＮＰ及びｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のデータを、ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭとの比較のために示す。上記の図８Ａ～Ｃに記載されているように、統計分析を行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ ｎ＝６６；ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＤＭ＋ＮＡＰ ｎ＝１０４。

【図11A】ＮＡＰ中のＳＨ３結合ドメインが、タウオパチーに対するその保護を増加させる、すなわち、タウ－ＭＴ会合を増加させることを実証する。図１１Ａは、ＮＡＰ又はＳＫＩＰ処理した分化したＮ１Ｅ－１１５細胞におけるＲＦＰタグ付きＥＢ３タンパク質を追跡するタイムラプスイメージングを示す（１０^－１２Ｍ、４時間）。対照－非処理細胞。着色線（灰色の四角）は、ＥＢ３コメット様構造のトラックを表す（Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって得た）。図１１Ｂは、ＥＢ３コメットトラック長及び速度の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフを示す。データを、Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって偏りのない様式で３つの独立した実験から収集し、データの統計分析を、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；対照ｎ＝１９、ＮＡＰ ｎ＝１６、ＳＫＩＰ ｎ＝２５。図１１Ｃは、ＮＡＰ／ＳＫＩＰ（１０^－１２Ｍ、１時間）を伴う又は伴わない亜鉛（４００μＭ、１時間）の処理後のｍＣｈｅｒｒｙタグ付きタウ光退色（０’）及び蛍光回復（６０’）の代表的な画像を示す。図１１Ｄは、不動画分の適合データ（３回の独立した実験から）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフである。統計分析は、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって行った。^＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；対照ｎ＝８２、Ｚｎ ｎ＝４３、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝６１、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝４４。図１１Ｅは、正規化データのＦＲＡＰ回復曲線を示す。図１１Ｆは、タウ、チューブリン及びアクチン抗体を用いた重合（Ｐ）及び可溶性（Ｓ）タンパク質画分（重合対可溶性チューブリンアッセイによって得られた）のイムノブロッティングを示す。細胞を、ＮＡＰ／ＳＫＩＰ（１０^－１２Ｍ、４時間）あり又はなしで亜鉛（４００μＭ、４時間）で処理し、非処理細胞を対照とした。図１１Ｇは、可溶性タウ／チューブリン比の濃度測定定量化を表すグラフを示す。各バンドの強度をデンシトメトリーによって定量し、可溶性タンパク質のデンシトメトリー値を総タンパク質含量で割ることによって可溶性比を計算した（Ｓ／［Ｓ＋Ｐ］）。統計分析は、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって実行した。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；タウ：対照ｎ＝１５、Ｚｎ ｎ＝１８、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝１２、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝９；チューブリン：対照ｎ＝１５、Ｚｎ ｎ＝１８、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝９、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝９。

【図11B】ＮＡＰ中のＳＨ３結合ドメインが、タウオパチーに対するその保護を増加させる、すなわち、タウ－ＭＴ会合を増加させることを実証する。図１１Ａは、ＮＡＰ又はＳＫＩＰ処理した分化したＮ１Ｅ－１１５細胞におけるＲＦＰタグ付きＥＢ３タンパク質を追跡するタイムラプスイメージングを示す（１０^－１２Ｍ、４時間）。対照－非処理細胞。着色線（灰色の四角）は、ＥＢ３コメット様構造のトラックを表す（Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって得た）。図１１Ｂは、ＥＢ３コメットトラック長及び速度の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフを示す。データを、Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって偏りのない様式で３つの独立した実験から収集し、データの統計分析を、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；対照ｎ＝１９、ＮＡＰ ｎ＝１６、ＳＫＩＰ ｎ＝２５。図１１Ｃは、ＮＡＰ／ＳＫＩＰ（１０^－１２Ｍ、１時間）を伴う又は伴わない亜鉛（４００μＭ、１時間）の処理後のｍＣｈｅｒｒｙタグ付きタウ光退色（０’）及び蛍光回復（６０’）の代表的な画像を示す。図１１Ｄは、不動画分の適合データ（３回の独立した実験から）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフである。統計分析は、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって行った。^＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；対照ｎ＝８２、Ｚｎ ｎ＝４３、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝６１、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝４４。図１１Ｅは、正規化データのＦＲＡＰ回復曲線を示す。図１１Ｆは、タウ、チューブリン及びアクチン抗体を用いた重合（Ｐ）及び可溶性（Ｓ）タンパク質画分（重合対可溶性チューブリンアッセイによって得られた）のイムノブロッティングを示す。細胞を、ＮＡＰ／ＳＫＩＰ（１０^－１２Ｍ、４時間）あり又はなしで亜鉛（４００μＭ、４時間）で処理し、非処理細胞を対照とした。図１１Ｇは、可溶性タウ／チューブリン比の濃度測定定量化を表すグラフを示す。各バンドの強度をデンシトメトリーによって定量し、可溶性タンパク質のデンシトメトリー値を総タンパク質含量で割ることによって可溶性比を計算した（Ｓ／［Ｓ＋Ｐ］）。統計分析は、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって実行した。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；タウ：対照ｎ＝１５、Ｚｎ ｎ＝１８、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝１２、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝９；チューブリン：対照ｎ＝１５、Ｚｎ ｎ＝１８、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝９、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝９。

【図11C】ＮＡＰ中のＳＨ３結合ドメインが、タウオパチーに対するその保護を増加させる、すなわち、タウ－ＭＴ会合を増加させることを実証する。図１１Ａは、ＮＡＰ又はＳＫＩＰ処理した分化したＮ１Ｅ－１１５細胞におけるＲＦＰタグ付きＥＢ３タンパク質を追跡するタイムラプスイメージングを示す（１０^－１２Ｍ、４時間）。対照－非処理細胞。着色線（灰色の四角）は、ＥＢ３コメット様構造のトラックを表す（Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって得た）。図１１Ｂは、ＥＢ３コメットトラック長及び速度の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフを示す。データを、Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって偏りのない様式で３つの独立した実験から収集し、データの統計分析を、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；対照ｎ＝１９、ＮＡＰ ｎ＝１６、ＳＫＩＰ ｎ＝２５。図１１Ｃは、ＮＡＰ／ＳＫＩＰ（１０^－１２Ｍ、１時間）を伴う又は伴わない亜鉛（４００μＭ、１時間）の処理後のｍＣｈｅｒｒｙタグ付きタウ光退色（０’）及び蛍光回復（６０’）の代表的な画像を示す。図１１Ｄは、不動画分の適合データ（３回の独立した実験から）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフである。統計分析は、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって行った。^＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；対照ｎ＝８２、Ｚｎ ｎ＝４３、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝６１、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝４４。図１１Ｅは、正規化データのＦＲＡＰ回復曲線を示す。図１１Ｆは、タウ、チューブリン及びアクチン抗体を用いた重合（Ｐ）及び可溶性（Ｓ）タンパク質画分（重合対可溶性チューブリンアッセイによって得られた）のイムノブロッティングを示す。細胞を、ＮＡＰ／ＳＫＩＰ（１０^－１２Ｍ、４時間）あり又はなしで亜鉛（４００μＭ、４時間）で処理し、非処理細胞を対照とした。図１１Ｇは、可溶性タウ／チューブリン比の濃度測定定量化を表すグラフを示す。各バンドの強度をデンシトメトリーによって定量し、可溶性タンパク質のデンシトメトリー値を総タンパク質含量で割ることによって可溶性比を計算した（Ｓ／［Ｓ＋Ｐ］）。統計分析は、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって実行した。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；タウ：対照ｎ＝１５、Ｚｎ ｎ＝１８、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝１２、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝９；チューブリン：対照ｎ＝１５、Ｚｎ ｎ＝１８、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝９、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝９。

【図11D】ＮＡＰ中のＳＨ３結合ドメインが、タウオパチーに対するその保護を増加させる、すなわち、タウ－ＭＴ会合を増加させることを実証する。図１１Ａは、ＮＡＰ又はＳＫＩＰ処理した分化したＮ１Ｅ－１１５細胞におけるＲＦＰタグ付きＥＢ３タンパク質を追跡するタイムラプスイメージングを示す（１０^－１２Ｍ、４時間）。対照－非処理細胞。着色線（灰色の四角）は、ＥＢ３コメット様構造のトラックを表す（Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって得た）。図１１Ｂは、ＥＢ３コメットトラック長及び速度の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフを示す。データを、Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって偏りのない様式で３つの独立した実験から収集し、データの統計分析を、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；対照ｎ＝１９、ＮＡＰ ｎ＝１６、ＳＫＩＰ ｎ＝２５。図１１Ｃは、ＮＡＰ／ＳＫＩＰ（１０^－１２Ｍ、１時間）を伴う又は伴わない亜鉛（４００μＭ、１時間）の処理後のｍＣｈｅｒｒｙタグ付きタウ光退色（０’）及び蛍光回復（６０’）の代表的な画像を示す。図１１Ｄは、不動画分の適合データ（３回の独立した実験から）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフである。統計分析は、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって行った。^＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；対照ｎ＝８２、Ｚｎ ｎ＝４３、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝６１、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝４４。図１１Ｅは、正規化データのＦＲＡＰ回復曲線を示す。図１１Ｆは、タウ、チューブリン及びアクチン抗体を用いた重合（Ｐ）及び可溶性（Ｓ）タンパク質画分（重合対可溶性チューブリンアッセイによって得られた）のイムノブロッティングを示す。細胞を、ＮＡＰ／ＳＫＩＰ（１０^－１２Ｍ、４時間）あり又はなしで亜鉛（４００μＭ、４時間）で処理し、非処理細胞を対照とした。図１１Ｇは、可溶性タウ／チューブリン比の濃度測定定量化を表すグラフを示す。各バンドの強度をデンシトメトリーによって定量し、可溶性タンパク質のデンシトメトリー値を総タンパク質含量で割ることによって可溶性比を計算した（Ｓ／［Ｓ＋Ｐ］）。統計分析は、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって実行した。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；タウ：対照ｎ＝１５、Ｚｎ ｎ＝１８、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝１２、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝９；チューブリン：対照ｎ＝１５、Ｚｎ ｎ＝１８、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝９、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝９。

【図11E】ＮＡＰ中のＳＨ３結合ドメインが、タウオパチーに対するその保護を増加させる、すなわち、タウ－ＭＴ会合を増加させることを実証する。図１１Ａは、ＮＡＰ又はＳＫＩＰ処理した分化したＮ１Ｅ－１１５細胞におけるＲＦＰタグ付きＥＢ３タンパク質を追跡するタイムラプスイメージングを示す（１０^－１２Ｍ、４時間）。対照－非処理細胞。着色線（灰色の四角）は、ＥＢ３コメット様構造のトラックを表す（Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって得た）。図１１Ｂは、ＥＢ３コメットトラック長及び速度の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフを示す。データを、Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって偏りのない様式で３つの独立した実験から収集し、データの統計分析を、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；対照ｎ＝１９、ＮＡＰ ｎ＝１６、ＳＫＩＰ ｎ＝２５。図１１Ｃは、ＮＡＰ／ＳＫＩＰ（１０^－１２Ｍ、１時間）を伴う又は伴わない亜鉛（４００μＭ、１時間）の処理後のｍＣｈｅｒｒｙタグ付きタウ光退色（０’）及び蛍光回復（６０’）の代表的な画像を示す。図１１Ｄは、不動画分の適合データ（３回の独立した実験から）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフである。統計分析は、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって行った。^＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；対照ｎ＝８２、Ｚｎ ｎ＝４３、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝６１、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝４４。図１１Ｅは、正規化データのＦＲＡＰ回復曲線を示す。図１１Ｆは、タウ、チューブリン及びアクチン抗体を用いた重合（Ｐ）及び可溶性（Ｓ）タンパク質画分（重合対可溶性チューブリンアッセイによって得られた）のイムノブロッティングを示す。細胞を、ＮＡＰ／ＳＫＩＰ（１０^－１２Ｍ、４時間）あり又はなしで亜鉛（４００μＭ、４時間）で処理し、非処理細胞を対照とした。図１１Ｇは、可溶性タウ／チューブリン比の濃度測定定量化を表すグラフを示す。各バンドの強度をデンシトメトリーによって定量し、可溶性タンパク質のデンシトメトリー値を総タンパク質含量で割ることによって可溶性比を計算した（Ｓ／［Ｓ＋Ｐ］）。統計分析は、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって実行した。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；タウ：対照ｎ＝１５、Ｚｎ ｎ＝１８、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝１２、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝９；チューブリン：対照ｎ＝１５、Ｚｎ ｎ＝１８、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝９、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝９。

【図11F】ＮＡＰ中のＳＨ３結合ドメインが、タウオパチーに対するその保護を増加させる、すなわち、タウ－ＭＴ会合を増加させることを実証する。図１１Ａは、ＮＡＰ又はＳＫＩＰ処理した分化したＮ１Ｅ－１１５細胞におけるＲＦＰタグ付きＥＢ３タンパク質を追跡するタイムラプスイメージングを示す（１０^－１２Ｍ、４時間）。対照－非処理細胞。着色線（灰色の四角）は、ＥＢ３コメット様構造のトラックを表す（Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって得た）。図１１Ｂは、ＥＢ３コメットトラック長及び速度の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフを示す。データを、Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって偏りのない様式で３つの独立した実験から収集し、データの統計分析を、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；対照ｎ＝１９、ＮＡＰ ｎ＝１６、ＳＫＩＰ ｎ＝２５。図１１Ｃは、ＮＡＰ／ＳＫＩＰ（１０^－１２Ｍ、１時間）を伴う又は伴わない亜鉛（４００μＭ、１時間）の処理後のｍＣｈｅｒｒｙタグ付きタウ光退色（０’）及び蛍光回復（６０’）の代表的な画像を示す。図１１Ｄは、不動画分の適合データ（３回の独立した実験から）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフである。統計分析は、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって行った。^＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；対照ｎ＝８２、Ｚｎ ｎ＝４３、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝６１、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝４４。図１１Ｅは、正規化データのＦＲＡＰ回復曲線を示す。図１１Ｆは、タウ、チューブリン及びアクチン抗体を用いた重合（Ｐ）及び可溶性（Ｓ）タンパク質画分（重合対可溶性チューブリンアッセイによって得られた）のイムノブロッティングを示す。細胞を、ＮＡＰ／ＳＫＩＰ（１０^－１２Ｍ、４時間）あり又はなしで亜鉛（４００μＭ、４時間）で処理し、非処理細胞を対照とした。図１１Ｇは、可溶性タウ／チューブリン比の濃度測定定量化を表すグラフを示す。各バンドの強度をデンシトメトリーによって定量し、可溶性タンパク質のデンシトメトリー値を総タンパク質含量で割ることによって可溶性比を計算した（Ｓ／［Ｓ＋Ｐ］）。統計分析は、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって実行した。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；タウ：対照ｎ＝１５、Ｚｎ ｎ＝１８、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝１２、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝９；チューブリン：対照ｎ＝１５、Ｚｎ ｎ＝１８、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝９、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝９。

【図11G】ＮＡＰ中のＳＨ３結合ドメインが、タウオパチーに対するその保護を増加させる、すなわち、タウ－ＭＴ会合を増加させることを実証する。図１１Ａは、ＮＡＰ又はＳＫＩＰ処理した分化したＮ１Ｅ－１１５細胞におけるＲＦＰタグ付きＥＢ３タンパク質を追跡するタイムラプスイメージングを示す（１０^－１２Ｍ、４時間）。対照－非処理細胞。着色線（灰色の四角）は、ＥＢ３コメット様構造のトラックを表す（Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって得た）。図１１Ｂは、ＥＢ３コメットトラック長及び速度の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフを示す。データを、Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって偏りのない様式で３つの独立した実験から収集し、データの統計分析を、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって行った。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；対照ｎ＝１９、ＮＡＰ ｎ＝１６、ＳＫＩＰ ｎ＝２５。図１１Ｃは、ＮＡＰ／ＳＫＩＰ（１０^－１２Ｍ、１時間）を伴う又は伴わない亜鉛（４００μＭ、１時間）の処理後のｍＣｈｅｒｒｙタグ付きタウ光退色（０’）及び蛍光回復（６０’）の代表的な画像を示す。図１１Ｄは、不動画分の適合データ（３回の独立した実験から）の平均（±ＳＥＭ）を表すグラフである。統計分析は、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって行った。^＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；対照ｎ＝８２、Ｚｎ ｎ＝４３、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝６１、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝４４。図１１Ｅは、正規化データのＦＲＡＰ回復曲線を示す。図１１Ｆは、タウ、チューブリン及びアクチン抗体を用いた重合（Ｐ）及び可溶性（Ｓ）タンパク質画分（重合対可溶性チューブリンアッセイによって得られた）のイムノブロッティングを示す。細胞を、ＮＡＰ／ＳＫＩＰ（１０^－１２Ｍ、４時間）あり又はなしで亜鉛（４００μＭ、４時間）で処理し、非処理細胞を対照とした。図１１Ｇは、可溶性タウ／チューブリン比の濃度測定定量化を表すグラフを示す。各バンドの強度をデンシトメトリーによって定量し、可溶性タンパク質のデンシトメトリー値を総タンパク質含量で割ることによって可溶性比を計算した（Ｓ／［Ｓ＋Ｐ］）。統計分析は、一元配置分散分析（ＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３）によって実行した。^＊Ｐ＜０．０５、^＊＊Ｐ＜０．０１、^＊＊＊Ｐ＜０．００１；タウ：対照ｎ＝１５、Ｚｎ ｎ＝１８、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝１２、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝９；チューブリン：対照ｎ＝１５、Ｚｎ ｎ＝１８、Ｚｎ＋ＮＡＰ ｎ＝９、Ｚｎ＋ＳＫＩＰ ｎ＝９。

【図12】ＮＡＰが、ＳＨＡＮＫ３マウスモデルにおける不安／うつ病に対してオープンフィールド行動を保護することを示す。^＊＊Ｐ＜０．０５；^＊＊Ｐ＜０．０１；^＊＊Ｐ＜０．００１。

【図13-1】ＮＡＰがＳＨＡＮＫ３マウスモデルにおいて自閉症行動から保護することを示す。^＊Ｐ＜０．０５；^＊＊Ｐ＜０．０１；^＊＊Ｐ＜０．００１。

【図13-2】ＮＡＰがＳＨＡＮＫ３マウスモデルにおいて自閉症行動から保護することを示す。^＊Ｐ＜０．０５；^＊＊Ｐ＜０．０１；^＊＊Ｐ＜０．００１。

【図14】ＮＡＰがＢＴＢＲマウスモデルにおいて自閉症行動から保護することを実証する。^＊＊Ｐ＜０．０５。

【発明を実施するための形態】

【0051】

本発明は、いくつかの実施形態において、治療におけるＡＤＮＦポリペプチドの使用に関する。

【0052】

本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明は、その適用において、以下の説明に記載される、又は実施例によって例示される詳細に必ずしも限定されないことを理解されたい。本発明は、他の実施形態が可能であり、又は様々な方法で実践又は実行することができる。

【0053】

損なわれた活性依存性神経保護タンパク質の新たに開発されたマウスモデル（ＮＭ＿００１３１００８６（Ａｄｎｐ＿ｖ００１）：ｃ．２１５４Ｔ＞Ａ，ｐ．Ｔｙｒ７１８^＊突然変異を有する「Ｔｙｒ」マウス－以下の実施例の実施例１を参照）の採用は、臨床的に認識されるＡＤＮＰ症候群に特徴的な発達異常及び認知異常の多くを再現するが、本発明者らは、ＡＤＮＦポリペプチドの治療用途及び診断用途のためのいくつかの新規な適応症を同定した。

【0054】

したがって、いくつかの実施形態では、対象が発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害を患っている疾患を処置する方法であって、方法が、治療有効量のＡＤＮＦポリペプチドを対象に投与することを含み、ＡＤＮＦポリペプチドが、インビトロ皮質ニューロン培養アッセイにおいて神経栄養／神経保護活性を有し、それによって対象の疾患を処置する、方法が提供される。

【0055】

いくつかの実施形態では、疾患は、発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害関連の疾患である。

【0056】

他の実施形態では、疾患は、自閉症スペクトラム障害及び知的障害からなる群から選択される疾患である。

【0057】

更に他の実施形態では、疾患はアルツハイマー病である。

【0058】

特定の実施形態では、疾患はＡＤＮＰ症候群ではない。

【0059】

特定の実施形態では、本疾患は、発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害関連の疾患であり、本疾患はＡＤＮＰ症候群ではない。他の実施形態では、本疾患は、自閉症スペクトラム障害及び知的障害からなる群から選択され、本疾患はＡＤＮＰ症候群ではない。

【0060】

本発明者らは、ＡＤＮＦ／ＡＤＮＰペプチドの投与が、ＳＨＡＮＫ３変異（ＡＳＤ関連ＩｎｓＧ３６８０変異）マウスモデルにおける異常行動の正常化に有効であることを示した。したがって、本発明のいくつかの態様によれば、処置を必要とする対象におけるＳＨＡＮＫ３関連の疾患を処置する方法であって、対象に治療有効量のＡＤＮＦ ＩＩＩポリペプチドを投与することを含み、ＡＤＮＦ ＩＩＩポリペプチドがＳＨ３結合ドメインを含み、それによって対象における疾患を処置する方法が提供される。

【0061】

本明細書で使用される場合、「ＳＨＡＮＫ３」［ＳＨ３及び複数アンキリン反復ドメイン３及びプロリンリッチシナプス関連タンパク質２（ＰｒｏＳＡＰ２）としても知られる］という用語は、ＳＨＡＮＫ３遺伝子（遺伝子ＩＤ８５３５８）の発現産物、例えばＲＮＡ又はタンパク質を指す。この遺伝子は、アンキリン反復ドメイン（ＡＮＫ）、ｓｒｃ ３ドメイン（ＳＨ３）、プロリンリッチドメイン、ＰＤＺドメイン、及び不稔性αモチーフドメイン（ＳＡＭ）を含む５つの相互作用ドメイン又はモチーフを含むタンパク質をコードする。

【0062】

特定の実施形態によれば、ＳＨＡＮＫ３は、以下の受託番号ＮＭ＿００１０８０４２０、ＮＭ＿００１３７２０４４、ＮＰ＿２７７０５２で提供されるようなヒトＳＨＡＮＫ３である。

【0063】

本明細書で使用される場合、「ＳＨＡＮＫ３関連の疾患」という用語は、発症及び／又は進行についてのＳＨＡＮＫ３機能不全（例えば、突然変異による）関連の疾患を指す。このような疾患の非限定的な例は、フェラン－マクダーミド症候群である。

【0064】

本明細書で使用される場合、「処置する」という用語は、病状（例えば、対象が、発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害を患っている、例えば、自閉症スペクトラム障害、知的障害、視覚誘発電位障害、及び／又は発話障害、アルツハイマー病など）の進行を抑止する、実質的に阻害する、遅らせる、又は逆転させること、病状の症状を実質的に改善すること、及び／又は病状と診断された対象における生存率を改善することを指す。当業者であれば、本明細書に更に開示されるように、様々な方法論及びアッセイを使用して、病状の発症又は病状の軽減若しくは退行を評価することができることを理解するであろう。

【0065】

本明細書で使用される場合、「予防する」という用語は、病態を有するとまだ診断されていない対象において病態が発生しないようにすること、及び／又は病態が発生する前に病態関連の症状の発現を予防することを指す。

【0066】

本明細書で使用される場合、「改善」又は「改善すること」という用語は、対象の疾患、状態、若しくは障害の負の態様の重症度、頻度、若しくは期間を低減若しくは緩和すること、又は対象の健康及び／又は疾患、状態、若しくは障害に関連する良好な状態の正の、有益な、若しくは所望の態様（の頻度、強度、若しくは期間）を増加させること若しくは生成することを指す。本発明によるＡＤＮＦポリペプチドによる処置後の改善のいくつかの非限定的な例は、発声の質の改善、異常な誘発電位の逆転、「Ｔｙｒ」仔マウスの開眼、表面立ち直り、及び空中立ち直りまでの時間の短縮、（以下の実施例のセクションの実施例１を参照のこと）。

【0067】

本明細書中で使用される場合、「視覚誘発電位障害関連の疾患」という語句は、集団全部ではなく集団の一部の疾患の症状が視覚誘発電位障害である疾患を指す。

【0068】

視覚誘発電位（ＶＥＰ）は、視覚刺激に応答して視覚皮質によって生成される電気信号である。ＶＥＰは、閃光又はパターン化された刺激によって誘発され、後頭電極からのＥＥＧによって記録される。

【0069】

本明細書で使用される場合、「視覚誘発電位障害」という用語は、健康な対象と比較した形状、振幅、及び／又は応答時間の変化を指す。

【0070】

特定の実施形態によれば、視覚誘発電位障害は網膜変性症に起因しない。

【0071】

特定の実施形態によれば、対象は網膜変性症に罹患していない。

【0072】

本明細書中で使用される場合、用語「発話障害関連の疾患」は、集団全部ではなく集団の一部の疾患の症状が、発話障害である疾患を指す。

【0073】

本明細書中で使用される場合、用語「発話障害」は、健常な対象と比較して、発声障害に起因しない発話能力の低下を指す。

【0074】

発話能力を判定する方法は、当技術分野で知られており、限定はしないが、構文複雑度を含み、例えば、ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｔｎ（ｄｏｔ）ｇｏｖ／ｃｏｎｔｅｎｔ／ｄａｍ／ｔｎ／ｅｄｕｃａｔｉｏｎ／ｓｐｅｃｉａｌ－ｅｄｕｃａｔｉｏｎ／ｅｌｉｇｉｂｉｌｉｔｙ／ｓｅ＿ｓｐｅｅｃｈ＿ｏｒ＿ｌａｎｇｕａｇｅ＿ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ＿ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ＿ｇｕｉｄａｎｃｅ（ｄｏｔ）ｐｄｆ；ｗｗｗ（ｄｏｔ）ａｓｈａ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／ｓｌｐ／ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ－ａｎｄ－ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ－ｏｆ－ｓｐｅｅｃｈ－ｌａｎｇｕａｇｅ－ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ－ｉｎ－ｓｃｈｏｏｌ／；ｗｗｗ（ｄｏｔ）ａｓｈａ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／ｐｒａｃｔｉｃｅ－ｐｏｒｔａｌ／ｃｌｉｎｉｃａｌ－ｔｏｐｉｃｓ／ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ－ａｐｒａｘｉａ－ｏｆ－ｓｐｅｅｃｈ／（これらの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。本発明のいくつかの実施形態では、発話障害又は発話能力は、構文複雑度に従って判定される。

【0075】

関連する病状の客観的尺度を提供することができるＡＤＮＰ不全に関連するさらなる異常としては、聴性脳幹定常状態応答、脳波図（ＥＥＧ）、及び視線追跡が挙げられるが、これらに限定されない。典型的には、聴覚刺激に対する蝸牛誘発電位応答の記録に基づく、聴性脳幹応答を測定するための技法が周知である（例えば、Ｓｔａｐｅｌｌｓ ａｎｄ Ｏａｔｅｓ，Ａｕｄｉｏｌ ａｎｄ Ｎｅｕｒｏ－耳鼻咽喉科２：２５７－２８０，（１９９７）を参照されたい）。いくつかの実施形態では、聴性脳幹反応は、聴性定常反応として測定される（Ｈａｃｏｈｅｎ－Ｋｌｅｉｍａｎ Ｇ，Ｙｉｚｈａｒ－Ｂａｒｎｅａ Ｏ，Ｔｏｕｌｏｕｍｉ Ｏ，Ｌａｇｏｕｄａｋｉ Ｒ，Ａｖｒａｈａｍ ＫＢ，Ｇｒｉｇｏｒｉａｄｉｓ Ｎ，Ｇｏｚｅｓ Ｉ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ Ｒｅｓ．２０１９年６月；４４（６）：１４９４－１５０７）。

【0076】

視覚注意（ＶＡ）の指標である視線追跡は、画像及び／又はテキストに応答して眼球運動を測定する対話型デバイスを使用して評価することができる。視線追跡を測定するための現在一般的な方法の１つは、眼球運動センサが取り付けられた仮想現実ヘッドセットを使用する。

【0077】

本発明のいくつかの実施形態に従って処置することができる視覚誘発電位障害及び／又は発話障害関連の疾患の非限定的な例としては、神経変性疾患、認知障害、自閉症スペクトラム障害、精神障害、及び細胞骨格障害（例えば、ドラベ症候群、レット症候群及び脆弱Ｘ症候群）が挙げられる。

【0078】

本明細書中で使用される場合、「認知障害」という用語は、知的障害及び認知障害（典型的には、精神疾患又は神経変性疾患に関連する）の両方を包含する。

【0079】

本明細書で使用される場合、「知的障害（ＩＤ）」という用語は、一般的な学習障害又は精神遅滞（ＭＲ）としても知られており、有意に損なわれた知的及び適応機能を特徴とする全身性神経発達障害を指す。

【0080】

神経変性疾患又は認知障害の非限定的な例としては、基底核に影響を及ぼす変性状態（ハンティングトン病、ウィルソン病、線条体黒質変性症、皮質基底神経節変性）を含む中枢運動系の疾患、トゥレット症候群、パーキンソン病、進行性核上麻痺、進行性球麻痺、家族性痙性対麻痺、脊髄性筋萎縮症、ＡＬＳ及びその変異体、歯状核赤核萎縮症、オリーブ橋小脳萎縮症、傍腫瘍性神経症候群、並びにドーパミン中毒；感覚ニューロンに影響を及ぼす疾患、例えばフリードライヒ運動失調症、糖尿、末梢ニューロパシー、網膜ニューロン変性症；大脳アミロイドーシス、ピック萎縮、レット症候群などの辺縁系及び皮質系の疾患；複数のニューロン系及び／又は脳幹に関与する神経変性病理、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、ＡＩＤＳ関連認知症、リー病、びまん性レビー小体病、テンカン、多発性硬化症、多系統萎縮症、ギラン・バレー症候群、リポフスチン症などのリソソーム蓄積障害、ダウン症候群の後期変性段階、アルパーズ病、ＣＮＳ変性の結果としての眩暈、ＡＬＳ、大脳皮質基底核変性症、及び進行性核上麻痺；発達遅滞及び学習障害、ダウン症候群、脆弱Ｘ症候群、クラインフェルター症候群、プラダー・ウィリー症候群、猫鳴き症候群。及び酸化ストレス誘導性ニューロン死関連の病状；加齢及び慢性アルコール又は薬物乱用に伴って生じる病状、例えば、（ｉ）アルコール中毒、青斑、小脳、コリン作用性基底前脳におけるニューロンの変性、（ｉｉ）加齢、認知、及び運動障害につながる小脳ニューロン及び皮質ニューロンの変性、並びに（ｉｉｉ）慢性アンフェタミン乱用、運動障害につながる基底核ニューロンの変性；限局性外傷から生じる病理学的変化、例えば卒中、局所虚血、血行不全、低酸素性虚血性脳障害、高血糖、低血糖、閉鎖性頭部外傷、及び直接外傷；治療薬及び処置の負の副作用として生じる病状（例えば、ＮＭＤＡクラスのグルタミン酸受容体のアンタゴニストの抗痙攣用量に応答した帯状皮質ニューロン及び嗅内皮質ニューロンの変性）が挙げられる。

【0081】

自閉症スペクトラム障害及び知的障害の非限定的な例としては、ＡＤＮＰ症候群、ダウン症候群、ＳＹＮＧＡＰ１症候群、ＰＯＧＺ症候群、ＣＨＤ８症候群、ＳＣＮ２Ａ症候群、ＡＲＩＤ１Ｂ症候群、ＮＲＸＮ１症候群、ＤＹＲＫ１Ａ症候群、ＧＲＩＮ障害、ＧＲＩＮ障害、及びＣＨＤ２症候群が挙げられる。

【0082】

いくつかの実施形態では、本発明の方法による処置、診断、又はモニタリングに適したさらなる状態としては、ＰＴＥＮ自閉症症候群、ＫＭＴ５症候群、オキヒロ症候群＋発育遅延、脆弱Ｘ症候群、アンジェルマン症候群、レット症候群、ヌーナン症候群、クリーフストラ症候群、スミス－マギニス症候群、及び他のコフィン－シリス症候群関連の障害が挙げられる。

【0083】

精神障害の非限定的な例としては、気分障害（例えば、大うつ病性障害（すなわち、単極性障害）、躁病、不快気分、双極性障害、気分変調、気分循環症）、精神病性障害（例えば、統合失調症、統合失調感情障害、統合失調症型障害、妄想性障害、短期精神病性障害、及び共有精神病性障害）、人格障害、攻撃性、不安障害（例えば、強迫性障害及び注意欠陥障害）、並びに薬物関連障害、小児期障害、認知症、適応障害、譫妄、多重梗塞性認知症、「Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｎｔａｌ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ」、第４版（ＤＳＭ ＩＶ）に記載されるようなトゥーレット症候群などの他の精神障害が挙げられる。（Ｂｅｎｉｔｅｚ－Ｋｉｎｇ Ｇ．ｅｔ ａｌ，Ｃｕｒｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ＣＮＳ Ｎｅｕｒｏｌ Ｄｉｓｏｒｄ．２００４年１２月；３（６）：５１５－３３．Ｒｅｖｉｅｗも参照されたい）。典型的には、このような障害は、複雑な遺伝的及び／又は生化学的要素を有する。

【0084】

特定の実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態によって処置される疾患は、ＡＤＮＰ症候群ではない。

【0085】

特定の実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態によって処置される疾患は、ＡＤＮＰ症候群である。

【0086】

本発明のいくつかの実施形態によれば、疾患は、多発性硬化症、ＳＹＮＧＡＰ１症候群、ＰＯＧＺ症候群、ＣＨＤ８関連の障害、ＳＣＮ２Ａ症候群、ＡＲＩＤ１Ｂ関連の症候群、ＮＲＸＮ１症候群、ＤＹＲＫ１Ａ症候群、ＧＲＩＮ障害、ＣＨＤ２症候群、ドラベ症候群、レット症候群、脆弱Ｘ症候群、ＧＲＩＮ障害、ＰＯＧＺ症候群、ＦＯＸＰ１症候群、ＳＬＣ関連の障害、コフィン－シリス症候群、ＫＭＴ５Ｂ症候群、ＰＴＥＮ自閉症症候群、オキヒロ症候群＋発育遅延、アンジェルマン症候群、ヌーナン症候群、クリーフストラ症候群、及びスミス－マギニス症候群からなる群から選択される。

【0087】

本発明者らは、「Ｔｙｒ」マウス表現型（例えば、以下の実施例のセクションの実施例１を参照）、並びにＡＤＮＦ／ＡＤＮＰペプチドによる処置に対する「Ｔｙｒ」マウスの応答の、全てではないがいくつかの性別関連の差異を明らかにした。よって、いくつかの実施形態では、対象は雄である。他の実施形態では、対象は、雌である。

【0088】

本明細書で使用される場合、「活性依存性神経保護因子（ＡＤＮＦ）」という用語は、ＡＤＮＦ ＩＩＩ（ＡＤＮＰとしても知られる）及び／又はＡＤＮＦ Ｉを指す。

【0089】

本明細書中で使用される場合、用語「ＡＤＮＦポリペプチド」とは、以下に更に記載されるように、ＡＤＮＦ ＩＩＩ又はＡＤＮＦ Ｉの活性の少なくとも１つを有する、ヒトＡＤＮＦ ＩＩＩ及び／又はＡＤＮＦ Ｉのアミノ酸配列、又はその機能的相同体を指す。特定の実施形態によれば、「ＡＤＮＦポリペプチド」という語句は、ＡＤＮＦ ＩＩＩポリペプチド及びＡＤＮＦ Ｉポリペプチドの混合物を指す。

【0090】

本明細書中で使用される場合、「機能的相同体」という語句は、以下に更に記載されるように、全長タンパク質の活性（例えば、神経栄養／神経保護活性、ＥＢ１及び／又はＥＢ３への結合、ＳＨ３ドメインへの結合）のうちの少なくとも１つを維持する、フラグメント、天然に存在する相同体又は合成的／組換え的に産生された相同体、非ヒト相同体、対立遺伝子改変体又は多型改変体、保存的及び非保存的アミノ酸置換欠失又は付加を含むアミノ酸配列、類似体、親油性改変体及び／又は化学的に改変された改変体をいう。

【0091】

本明細書中で使用される場合、「ポリペプチド」、「ペプチド」又は「アミノ酸配列」という用語（これらは、本明細書中で交換可能に使用される）は、ネイティブなペプチド（分解産物、合成的に合成されたペプチド又は組換えペプチドのいずれか）及びペプチド模倣物（代表的には、合成的に合成されたペプチド）、並びにペプチド類似体であるペプトイド及びセミペプトイドを包含し、これらは、例えば、ペプチドを身体中でより安定にするか、又は細胞中により浸透し得るようにする改変を有し得る。このような修飾には、Ｎ末端修飾、Ｃ末端修飾、ペプチド結合修飾、骨格修飾、及び残基修飾が含まれるが、これらに限定されない。ペプチド模倣化合物を調製するための方法は、当該分野で周知であり、例えば、本明細書に完全に記載されているかのように参照により組み込まれるＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，Ｃ．Ａ．Ｒａｍｓｄｅｎ Ｇｄ．，Ｃｈａｐｔｅｒ １７．２，Ｆ．Ｃｈｏｐｌｉｎ Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ（１９９２）に記載されている。これに関するさらなる詳細を以下に提供する。

【0092】

ペプチド内のペプチド結合（－ＣＯ－ＮＨ－）は、例えば、Ｎ－メチル化アミド結合（－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＯ－）、エステル結合（－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－）、ケトメチレン結合（－ＣＯ－ＣＨ２－）、スルフィニルメチレン結合（－Ｓ（＝Ｏ）－ＣＨ２－）、α－アザ結合（－ＮＨ－Ｎ（Ｒ）－ＣＯ－）（式中、Ｒは、任意のアルキル（例えば、メチル）である）、アミン結合（－ＣＨ２－ＮＨ－）、スルフィド結合（－ＣＨ２－Ｓ－）、エチレン結合（－ＣＨ２－ＣＨ２－）、ヒドロキシエチレン結合（－ＣＨ（ＯＨ）－ＣＨ２－）、チオアミド結合（－ＣＳ－ＮＨ－）、オレフィン二重結合（－ＣＨ＝ＣＨ－）、フッ素化オレフィン二重結合（－ＣＦ＝ＣＨ－）、レトロアミド結合（－ＮＨ－ＣＯ－）、ペプチド誘導体（－Ｎ（Ｒ）－ＣＨ２－ＣＯ－）（式中、Ｒは、炭素原子上に天然に存在する「通常の」側鎖である）によって置換されていてもよい。

【0093】

これらの修飾は、ペプチド鎖に沿った結合のいずれかにおいて、及び同時に数個（２～３個）の結合においてさえ起こり得る。

【0094】

天然香料アミノ酸、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、及びＰｈｅは、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸（Ｔｉｃ）、ナフチルアラニン、Ｐｈｅの環メチル化誘導体、Ｐｈｅのハロゲン化誘導体又はＯ－メチル－Ｔｙｒなどの非天然香料アミノ酸によって置換されていてもよい。

【0095】

本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドはまた、１つ以上の改変アミノ酸又は１つ以上の非アミノ酸モノマー（例えば、脂肪酸、複合糖質など）を含み得る。

【0096】

用語「アミノ酸」又は「複数のアミノ酸」は、２０種の天然に存在するアミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、ホスホセリン及びホスホスレオニンを含む、インビボで翻訳後に修飾されることが多いアミノ酸、並びに２－アミノアジピン酸、ヒドロキシリジン、イソデスモシン、ノルバリン、ノルロイシン及びオルニチンを含むがこれらに限定されない他の異常アミノ酸を含むと理解される。更に、「アミノ酸」という用語は、Ｄ－アミノ酸及びＬ－アミノ酸の両方を含む。

【0097】

特定の実施形態によれば、ポリペプチドは、少なくとも１つのＤ－アミノ酸を含む。

【0098】

特定の実施形態によれば、ポリペプチドは、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも８つのＤ－アミノ酸を含む。

【0099】

特定の実施形態によれば、全てのポリペプチドアミノ酸は、Ｄ－アミノ酸である。

【0100】

以下の表１及び２は、天然に存在するアミノ酸（表２）、及び本発明のいくつかの実施形態で使用することができる非従来型又は修飾アミノ酸（例えば、合成、表３）を列挙する。

【0101】

【表1】

【0102】

【表2-1】

【0103】

【表2-2】

【0104】

本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドのアミノ酸は、保存的又は非保存的のいずれかで置換され得る。

【0105】

本明細書で使用される「保存的置換」という用語は、ペプチド中の天然配列中に存在するアミノ酸の、天然若しくは非天然のアミノ又は同様の立体特性を有するペプチド模倣体による置換を指す。置換される天然アミノ酸の側鎖が、極性又は疎水性のいずれかである場合、保存的置換は、天然に存在するアミノ酸、天然に存在しないアミノ酸、又は（置換されたアミノ酸の側鎖と同じ立体特性を有することに加えて）極性又は疎水性であるペプチド模倣物部分によるものであるべきである。

【0106】

天然に存在するアミノ酸は、代表的には、それらの特性に従って分類されるので、天然に存在するアミノ酸による保存的置換は、本発明に従って、立体的に類似した非荷電アミノ酸による荷電アミノ酸の置換が保存的置換と見なされるという事実を考慮して、容易に決定され得る。

【0107】

天然に存在しないアミノ酸による保存的置換を生成するために、当該分野で周知のアミノ酸類似体（合成アミノ酸）を使用することもまた可能である。天然に存在するアミノ酸のペプチド模倣物は、当業者に公知の文献に十分に記載されている。

【0108】

保存的置換に影響を及ぼす場合、置換アミノ酸は、元のアミノ酸と同じ又は類似の官能基を側鎖に有するべきである。

【0109】

機能的に類似したアミノ酸をもたらす保存的置換リストは、当技術分野でよく知られている。どのアミノ酸変化が表現型的にサイレントである可能性が高いかに関するガイダンスはまた、Ｂｏｗｉｅら、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３０６ １３１０に見出され得る。

【0110】

「非保存的置換」という語句は、本明細書で使用される場合、親配列中に存在するアミノ酸の、異なる電気化学的及び／又は立体的特性を有する別の天然又は非天然アミノ酸による置換を指す。したがって、置換アミノ酸の側鎖は、置換される天然アミノ酸の側鎖よりも有意に大きく（又は小さく）することができる、及び／又は置換されるアミノ酸とは有意に異なる電子特性を有する官能基を有することができる。このタイプの非保存的置換の例としては、アラニンに対するフェニルアラニン若しくはシクロヘキシルメチルグリシンの置換、グリシンに対するイソロイシンの置換、又はアスパラギン酸に対する－ＮＨ－ＣＨ［（－ＣＨ２）５－ＣＯＯＨ］－ＣＯの置換を表す。本発明の範囲に入るこれらの非保存的置換は、神経保護特性を有するペプチドをなお構成するものである。

【0111】

本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドは、好ましくは、直鎖状形態で利用されるが、環化がペプチドの特徴を著しく妨害しない場合、ペプチドの環状形態も利用され得ることが理解される。

【0112】

特定の実施形態によれば、本発明のポリペプチドは、ペプチドが可溶性形態であることを必要とする処置において利用されるため、本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドは、１つ以上の非天然又は天然の極性アミノ酸（セリン及びトレオニンを含むが、これらに限定されない）を含み、これらは、それらのヒドロキシル含有側鎖に起因してペプチドの溶解度を増加させ得る。

【0113】

特定の実施形態によれば、ポリペプチドは、１００未満、５０未満、２０未満、又は１０未満のアミノ酸長である。

【0114】

特定の実施形態によれば、ポリペプチドは、４～１００、４～５０、４～４０、４～２０、４～１５、４～１０、４～８、又は８アミノ酸長であり、それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。

【0115】

特定の実施形態によれば、ポリペプチドは、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８アミノ酸長である。

【0116】

特定の実施形態によれば、ポリペプチドは、直接又はスペーサ若しくはリンカーを介して、細胞透過性部分及び／又は安定化部分に結合している。このような部分は、当該分野で周知であり、以下に更に詳細に記載される。

【0117】

特定の実施形態によれば、本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドのＮ末端及び／又はＣ末端は、官能基（すなわち、エンドキャッピング部分）によって保護され得る。このような官能基の例は、例えば、Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」，（Ｗｉｌｅｙ，２．ｓｕｐ．ｎｄ ｅｄ．１９９１年），Ｈａｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ」，第１－８巻（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９７１－１９９６）；Ｇｒｅｅｎ及びＷｕｔｓ，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，第５及び７章，１９９１（これらの教示は参照により本明細書に組み込まれる）に見出すことができる。好ましい保護基は、例えば、化合物の親水性を減少させ、親油性を増加させることによって、ポリペプチドの安定性を増加させる、及び／又はそれに結合した化合物の細胞への輸送を容易にするものである。

【0118】

特定の実施形態によれば、エンドキャッピングは、Ｎ末端エンドキャッピングを含む。

【0119】

Ｎ末端エンドキャッピング部分の代表的な例としては、ホルミル、アセチル（本明細書において「Ａｃ」とも示される）、ステアリル、トリフルオロアセチル、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル（本明細書において「Ｃｂｚ」とも示される）、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（本明細書において「Ｂｏｃ」とも示される）、トリメチルシリル（「ＴＭＳ」とも示される）、２－トリメチルシリル－エタンスルホニル（「ＳＥＳ」とも示される）、トリチル基及び置換トリチル基、アリルオキシカルボニル、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（本明細書において「Ｆｍｏｃ」とも示される）、並びにニトロ－ベラトリルオキシカルボニル（「ＮＶＯＣ」）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0120】

特定の実施形態によれば、Ｎ末端エンドキャッピングは、アセチルを含む。

【0121】

特定の実施形態によれば、Ｎ末端エンドキャッピングは、ステアリルを含む（例えば、Ｇｏｚｅｓ Ｉ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．１９９６年１月９日；９３（１）：４２７－３２を参照されたい）。

【0122】

特定の実施形態によれば、エンドキャッピングは、Ｃ末端エンドキャッピングを含む。

【0123】

Ｃ末端エンドキャッピング部分の代表的な例は、典型的には、Ｃ末端でカルボキシ基のアシル化をもたらす部分であり、ベンジル及びトリチルエーテル並びにアルキルエーテル、テトラヒドロピラニルエーテル、トリアルキルシリルエーテル、アリルエーテル、モノメトキシトリチル及びジメトキシトリチルが挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、Ｃ末端エンドキャッピングの－ＣＯＯＨ基は、アミド基に改変され得る。

【0124】

特定の実施形態によれば、Ｃ末端エンドキャッピングは、アミドを含む。

【0125】

ペプチドの他のエンドキャッピング修飾には、アミン及び／又はカルボキシルの、ヒドロキシル、チオール、ハロゲン化物、アルキル、アリール、アルコキシ、アリールオキシなどの異なる部分による置換が含まれる。

【0126】

本発明の他の特定の実施形態によれば、ポリペプチドは、非タンパク質性部分に結合している。

【0127】

特定の実施形態によれば、ポリペプチド及び結合した非タンパク質性部分は、直接又はスペーサ若しくはリンカーを介して共有結合している。

【0128】

本明細書で使用される「非タンパク質性部分」という語句は、上記のポリペプチドに結合したペプチド結合アミノ酸を含まない分子を指す。特定の実施形態によれば、非タンパク質性は、非毒性部分である。本教示に従って使用され得る例示的な非タンパク質性部分としては、薬物、化学物質、小分子、ポリヌクレオチド、検出可能部分、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリ（スチレンコ無水マレイン酸）（ＳＭＡ）、並びにジビニルエーテル及び無水マレイン酸コポリマー（ＤＩＶＥＭＡ）が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の特定の実施形態によれば、非タンパク質性部分は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。

【0129】

このような分子は非常に安定であり（おそらく非タンパク質性部分によって付与される立体障害のためにインビボタンパク質分解活性に耐性である）、以下に更に記載されるように、安価で非常に効率的な一般的な固相合成法を使用して産生され得る。しかし、組換えペプチド産物がインビトロ修飾（例えば、以下に更に記載されるようなＰＥＧ化）に供される組換え技術がなお使用され得ることが理解される。

【0130】

ペプチドアミノ酸配列とＰＥＧとのバイオコンジュゲーション（すなわち、ＰＥＧ化）は、ＰＥＧ誘導体、例えば、ＰＥＧカルボン酸のＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル、モノメトキシＰＥＧ_２－ＮＨＳ、カルボキシメチル化ＰＥＧのスクシンイミジルエステル（ＳＣＭ－ＰＥＧ）、ＰＥＧのベンゾトリアゾールカーボネート誘導体、ＰＥＧのグリシジルエーテル、ＰＥＧ ｐ－ニトロフェニルカーボネート（ＰＥＧ－ＮＰＣ、例えばメトキシＰＥＧ－ＮＰＣ）、ＰＥＧアルデヒド、ＰＥＧ－オルトピリジル－ジスルフィド、カルボニルジイミダゾール活性化ＰＥＧ、ＰＥＧ－チオール、ＰＥＧ－マレイミドを使用して行うことができる。このようなＰＥＧ誘導体は、種々の分子量で市販されている［例えば、Ｃａｔａｌｏｇ，Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌ ａｎｄ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ，２０００（Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｕｎｔｓｖｌｌｅ，Ａｌａ）を参照］。所望であれば、上記誘導体の多くは、単官能性モノメトキシＰＥＧ（ｍＰＥＧ）形態で利用可能である。一般に、本発明のいくつかの実施形態のペプチドに付加されるＰＥＧは、数百ダルトン～約１００ｋＤａ（例えば、３～３０ｋＤａ）の分子量（ＭＷ）の範囲であるべきである。より大きなＭＷ ＰＥＧが使用され得るが、ＰＥＧ化ポリペプチドの収率のいくらかの損失をもたらし得る。より低いＭＷ ＰＥＧについて得られるものと同程度に高い純度のより大きいＭＷ ＰＥＧを得ることは困難であり得るので、より大きいＰＥＧ分子の純度も注意するべきである。少なくとも８５％純度のＰＥＧを使用することが好ましく、少なくとも９０％純度、９５％純度、又はそれ以上の純度のＰＥＧを使用することがより好ましい。分子のＰＥＧ化は、例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９６）の第１５章及びＺａｌｉｐｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ Ｃａｒｂｏｎａｔｅｓ ｏｆ Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌ」，Ｄｕｎｎ ａｎｄ Ｏｔｔｅｎｂｒｉｔｅ編，Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｄｒｕｇｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，ワシントンＤ．Ｃ．（１９９１）で更に論じられている。

【0131】

好都合なことに、ＰＥＧは、コンジュゲートの活性が保持される限り、部位特異的突然変異誘発によってペプチド中の選択された位置に結合することができる。ＰＥＧ化の標的は、ペプチド配列のＮ末端又はＣ末端の任意のシステイン残基であり得る。追加的に又は代替的に、他のシステイン残基をペプチドアミノ酸配列に（例えば、Ｎ末端又はＣ末端に）付加し、それによってＰＥＧ化の標的として機能させることができる。活性を損なうことなく突然変異誘発のための好ましい位置を選択するために、コンピュータ分析を行うことができる。

【0132】

ＰＥＧ－マレイミド、ＰＥＧ－ビニルスルホン（ＶＳ）、ＰＥＧ－アクリレート（ＡＣ）、ＰＥＧ－オルトピリジルジスルフィドなどの活性化ＰＥＧの様々なコンジュゲーション化学を使用することができる。活性化ＰＥＧ分子を調製する方法は、当技術分野において公知である。例えば、ＰＥＧ－ＶＳは、アルゴン下で、ＰＥＧ－ＯＨのジクロロメタン（ＤＣＭ）溶液をＮａＨと、次いでジビニルスルホンと反応させることによって調製することができる（モル比：ＯＨ１：ＮａＨ５：ジビニルスルホン５０、０．２グラムＰＥＧ／ｍＬ ＤＣＭ）。ＰＥＧ－ＡＣは、アルゴン下で、ＰＥＧ－ＯＨのＤＣＭ溶液を塩化アクリロイル及びトリエチルアミンと反応させることによって作製される（モル比：ＯＨ１：塩化アクリロイル１．５：トリエチルアミン２、０．２グラムＰＥＧ／ｍＬ ＤＣＭ）。このような化学基は、直鎖化された２アーム、４アーム、又は８アームＰＥＧ分子に結合することができる。

【0133】

得られたコンジュゲート分子（例えば、ＰＥＧ化又はＰＶＰ結合体化ペプチド）は、例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）並びに生物学的アッセイを使用して、分離され、精製され、定性される。

【0134】

本発明のポリペプチド及び組成物は、透過性部分に（共有結合又は非共有結合のいずれかで）結合され得る。

【0135】

他の特定の実施形態によれば、ポリペプチドは異種透過性部分に結合していない。したがって、例えば、ＡＤＮＦポリペプチドＮＡＰ（配列番号２）は、エンドサイトーシスによって生物学的に利用可能であり（例えば、Ｉｖａｓｈｋｏ－Ｐａｃｈｉｍａ Ｙ、Ｇｏｚｅｓ Ｉ．Ｊ Ｍｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０２０年７月；７０（７）：９９３－９９８を参照）、したがってそれ自体が細胞透過性ペプチドである。

【0136】

本明細書中で使用される場合、「透過性部分」という語句は、結合したポリペプチド又はそれを含む組成物のいずれかの、細胞膜を横切る移動を増強する薬剤を指す。

【0137】

一実施形態によれば、透過性部分はペプチドであり、ペプチド結合を介してポリペプチドに（直接的又は非直接的に）結合している。

【0138】

典型的には、ペプチド透過性部分は、リジン又はアルギニンなどの正に荷電したアミノ酸高い相対存在量を含有するアミノ酸組成を有するか、又は極性／荷電アミノ酸及び非極性疎水性アミノ酸の交互パターンを含有する配列を有する。

【0139】

非限定的な例として、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）配列は、細胞内透過を増強するために使用され得る。しかしながら、本開示はそのように限定されず、当業者に知られているように、任意の適切な浸透剤を使用することができる。

【0140】

細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）は、ほとんど全ての細胞の内部にアクセスする能力を有する短いペプチド（≦４０アミノ酸）である。それらは高度にカチオン性であり、通常アルギニン及びリジンアミノ酸が豊富である。それらは、タンパク質、オリゴヌクレオチド、更には２００ｎｍリポソームなどの多種多様な共有結合及び非共有結合したカーゴを細胞内に運ぶという例外的な特性を有する。したがって、追加の例示的な実施形態によれば、ＣＰＰを使用して、ＡＤＮＰポリペプチドを細胞の内部に輸送することができる。

【0141】

ＴＡＴ（ＨＩＶ－１由来の転写活性化因子）、ｐＡｎｔｐ（ペネトラチン、ショウジョウバエアンテナペディアホメオドメイン転写因子とも呼ばれる）及びＶＰ２２（単純ヘルペスウイルス由来）は、非毒性かつ効率的な様式で細胞に侵入することができ、本発明のいくつかの実施形態での使用に適し得るＣＰＰの非限定的な例である。ＣＰＰ－カーゴコンジュゲートを産生するための、及びそのようなコンジュゲートで細胞を感染させるためのプロトコルは、例えば、Ｌ Ｔｈｅｏｄｏｒｅ，ｅｔ ａｌ．［Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，（１９９５）１５（１１）：７１５８－７１６７］、Ｆａｗｅｌｌ Ｓ，ｅｔ ａｌ．［Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，（１９９４）９１：６６４－６６８］、及びＪｉｎｇ Ｂｉａｎ ｅｔ ａｌ．［Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．２００７；１００：１６２６－１６３３］に見出すことができる。

【0142】

別の例示的な実施形態によれば、ポリペプチドは、当該分野で公知の方法のいずれかによって、微粒子化された送達ビヒクル（例えば、リポソーム又はナノ粒子若しくは微粒子）に組み込まれ得る［例えば、Ｌｉｐｏｓｏｍｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．ＩＩ，Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍａｔｅｒｉａｌ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｍｏｎｋｋｏｎｅｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔ，２：２９９－３０８；Ｍｏｎｋｋｏｎｅｎ，Ｊ，ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃａｌｃｉｆ．Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｔ．，５３：１３９－１４５；Ｌａｓｉｃ Ｄ Ｄ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９９３，６３－１０５．（第３章）；Ｗｉｎｔｅｒｈａｌｔｅｒ Ｍ，Ｌａｓｉｃ Ｄ Ｄ，Ｃｈｅｍ Ｐｈｙｓ Ｌｉｐｉｄｓ，１９９３年９月；６４（１－３）：３５－４３］。

【0143】

リポソームは、体積を囲む脂質二重層から構成される任意の合成（すなわち、天然に存在しない）構造を含む。リポソームとしては、エマルジョン、フォーム、ミセル、不溶性単層、液晶、リン脂質分散液、ラメラ層などが挙げられる。リポソームは、異なるサイズであり得、低ｐＨ又は高ｐＨを含有し得、異なる電荷であり得る。

【0144】

本発明のいくつかの実施形態のポリペプチドは、ペプチド合成の当業者に公知の任意の技術（例えば、固相技術及び組換え技術が挙げられるが、これらに限定されない）によって合成され得る。

【0145】

固相ペプチド合成については、多くの技術の概要が、Ｊ．Ｍ．Ｓｔｅｗａｒｔ ａｎｄ Ｊ．Ｄ．Ｙｏｕｎｇ，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．（産フランシスコ），１９６３及びＪ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，Ｈｏｒｍｏｎａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，ｖｏｌ．２，ｐ．４６，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（ニューヨーク），１９７３に見出され得る。古典的な溶液合成については、Ｇ．Ｓｃｈｒｏｄｅｒ及びＫ．Ｌｕｐｋｅ，Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，ｖｏｌ．１，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），１９６５を参照されたい。

【0146】

一般に、これらの方法は、成長するペプチド鎖への１つ以上のアミノ酸又は適切に保護されたアミノ酸の連続的付加を含む。通常、第１のアミノ酸のアミノ基又はカルボキシル基のいずれかは、適切な保護基によって保護される。次いで、保護又は誘導体化されたアミノ酸は、アミド結合を形成するために適切な条件下で、適切に保護された相補的（アミノ又はカルボキシル）基を有する配列中の次のアミノ酸を添加することによって、不活性固体支持体に結合され得るか、又は溶液中で利用することができる。次いで、保護基は、この新たに付加されたアミノ酸残基から除去され、次に、次のアミノ酸（適切に保護されている）が付加され、以下同様である。全ての所望のアミノ酸が適切な配列で連結された後、任意の残りの保護基（及び任意の固体支持体）が連続的に又は同時に除去されて、最終ペプチド化合物が得られる。この一般的な手順の単純な改変によって、例えば、保護されたトリペプチドを適切に保護されたジペプチドとカップリング（キラル中心をラセミ化しない条件下で）して、脱保護後にペンタペプチドなどを形成することによって、伸長する鎖に一度に２つ以上のアミノ酸を付加することが可能である。ペプチド合成のさらなる説明は、米国特許第６、４７２，５０５号に開示されている。

【0147】

大規模ペプチド合成は、Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２０００；５５（３）：２２７－５０に記載されている。本発明の特定の実施形態は、ポリペプチドと、本明細書に開示されるポリペプチド以外の治療薬とを含む併用治療／予防の使用を企図する。

【0148】

したがって、特定の実施形態によれば、本明細書に開示されるポリペプチドは、各薬剤単独による処置と比較して改善された治療効果又は予防効果を達成するために、追加の活性薬剤と共に個体に提供され得る。従って、このポリペプチドは、単独で投与され得るか、又は他の確立された治療レジメン若しくは実験的な治療レジメンと共に投与されて、本明細書中に詳述されるような、誘発電位及び／又は発話障害関連の疾患、自閉症スペクトラム障害及び知的障害、アルツハイマー病、自閉症スペクトラム障害、神経変性疾患、認知障害、精神障害及び細胞骨格障害を処置又は予防し得る。このような治療では、併用療法に関連し得る有害な副作用を最小限に抑えるか又は排除するための手段（例えば、補完的薬剤の投薬及び選択）がとられる。

【0149】

本発明の特定の実施形態で使用することができるＡＤＮＦポリペプチドの非限定的な例は、例えば、国際特許出願公開第１９９２／０１８１４０号、同第９６１１９４８号、同第９８／３５０４２号、同第００２７８７５号、同第００／５３２１７号、同第０１／１２６５４号、同第０１／９２３３３号、同第２００４／０８０９５７号、同第２００６／０９９７３９号、同第２００７／０９６８５９号、同第２００８／０８４４８号、同第２０１１／０２１１８６号、同第２００９／０２６６８７号、同第２０１０／０７５６３５号、同第２０１１／０８３４６１号、同第２０１１／０９９０１１号、同第２０１３／１７１５９５、同第２０１７／１３０１９０号、同第２００４／０６０３０９号、同第２００３０２２２２６号、並びに米国特許第５７６７２４０号、同第６１７４８６２号、同第６６１３７４０号、及び同第８５８６５４８号に詳細に記載され、それぞれ参照により全体が本明細書に組み込まれ、更に以下記載される。

【0150】

特定の実施形態によれば、ＡＤＮＦはＡＤＮＦ ＩＩＩである。

【0151】

「ＡＤＮＦ ＩＩＩ」は、ＡＤＮＰ（活性依存性神経保護タンパク）としても知られており、これは、ＡＤＮＰ遺伝子によってコードされるポリペプチドを意味する（遺伝子ＩＤ２３３９４）。特定の実施形態によれば、ＡＤＮＦ ＩＩＩは、ヒトＡＤＮＦ ＩＩＩである。全長ヒトＡＤＮＦ ＩＩＩ（ＡＤＮＰ）は、１２３，５６２．８ Ｄａ（＞１０００アミノ酸残基）の予測分子量及び約６．９７の理論ｐｉを有する。ヒトＡＤＮＦ ＩＩＩ遺伝子は、認知機能に関連する領域である染色体２０ｑ１３．１３－１３．２に局在する。ＡＤＮＦ ＩＩＩの例示的な全長アミノ酸及び核酸配列は、国際公開第９８／３５０４２号、国際公開第００／２７８７５号、米国特許第６，６１３，７４０号、及び同第６，６４９，４１１号に見出すことができる。特定の実施形態によれば、ＡＤＮＦ ＩＩＩアミノ酸配列は、配列番号１を含む。

【0152】

本明細書に記載されるＡＤＮＦ ＩＩＩポリペプチドは、全長ＡＤＮＦ ＩＩＩの活性の少なくとも１つ、例えば、インビトロ皮質ニューロン培養アッセイで測定されるような神経栄養／神経保護活性、ＥＢ１及び／又はＥＢ３への結合、ＳＨ３ドメインへの結合を有する。

【0153】

神経栄養／神経保護活性を試験するためのアッセイは、当該技術分野において周知であり、限定するものではないが、例えば、Ｈｉｌｌ ｅｔ ａｈ，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．６０３；２２２：２３３（１９９３）；Ｂｒｅｎｎｅｍａｎ ＆ Ｇｏｚｅｓ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９７：２２９９－２３０７（１９９６），Ｇｏｚｅｓ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃＬ ＵＳＡ ９３，４２７－４３２（１９９６）に記載されるインビトロ皮質ニューロン培養アッセイを含む。

【0154】

結合を試験するためのアッセイは当技術分野で周知であり、フローサイトメトリー、ＢｉａＣｏｒｅ、バイオレイヤー干渉法Ｂｌｉｔｚ（登録商標）アッセイ、ＨＰＬＣが挙げられるが、これらに限定されない。

【0155】

本発明の特定の実施形態で使用され得るＡＤＮＦ ＩＩＩポリペプチドの非限定的な例を、以下の表３に提供する。

【0156】

特定の実施形態によれば、ＡＤＮＦ ＩＩＩポリペプチドは、配列番号１～２２のいずれか１つに対して少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性又は相同性を有するアミノ酸配列を含む。

【0157】

本明細書で使用される場合、「同一性」又は「配列同一性」とは、全体的な同一性、すなわち、本明細書に開示されるアミノ酸又は核酸配列全体にわたる同一性であって、その一部にわたるものではない同一性を指す。

【0158】

配列同一性又は相同性は、Ｂｌａｓｔ、ＣｌｕｓｔａｌＷ、及びＭＵＳＣＬＥなどの任意のタンパク質又は核酸配列アラインメントアルゴリズムを使用して判定することができる。

【0159】

特定の実施形態によれば、ＡＤＮＦは、ＡＤＮＦ Ｉである。

【0160】

「ＡＤＮＦ Ｉ」は、
Ｇｏｚｅｓ Ｉ，Ｂｒｅｎｎｅｍａｎ ＤＥ．Ｊ Ｍｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１９９６年冬；７（４）：２３５－４４；Ｂｒｅｎｎｅｍａｎ ＤＥ，Ｇｏｚｅｓ Ｉ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９６年５月１５日；９７（１０）：２２９９－３０７及びＢｒｅｎｎｅｍａｎ ＤＥ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ．１９９８年５月；２８５（２）：６１９－２７（それぞれの内容は、全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載される活性依存性神経栄養因子を指す。特定の実施形態によれば、ＡＤＮＦ Ｉは、ヒトＡＤＮＦ Ｉである。全長ヒトＡＤＮＦ Ｉは、８．３±０．２５のｐｉで約１４，０００ Ｄａの予測分子量を有する。特定の実施形態によれば、ＡＤＮＦ Ｉアミノ酸配列は、配列番号２４又は４５のいずれかを含む。

【0161】

本明細書中に記載されるＡＤＮＦ Ｉポリペプチドは、全長ＡＤＮＦ Ｉの活性の少なくとも１つ、例えば、ＥＢ１及びＥＢ３に結合するインビトロ皮質ニューロン培養アッセイで測定される神経栄養／神経保護活性を有する。

【0162】

本発明の特定の実施形態で使用することができるＡＤＮＦ Ｉポリペプチドの非限定的な例を、以下の表３に提供する。

【0163】

特定の実施形態によれば、ＡＤＮＦ Ｉポリペプチドは、配列番号２４～４８のいずれか１つに対して少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性又は相同性を有するアミノ酸配列を含む。

【0164】

【表3-1】

【0165】

【表3-2】

【0166】

さらなる態様では、ポリペプチドは、ＮＡＰＶＳＩＰＱ（配列番号２）若しくはＳＡＬＬＲＳＩＰＡ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含む活性コア部位、又は保存的に改変された変異体（例えば、１つ以上のアミノ酸の欠失、付加、若しくは置換）若しくは化学的に改変されたその変異体を含み、記載されるようなインビトロ皮質ニューロン培養アッセイで測定される神経栄養／神経保護活性を有する。ＡＤＮＦポリペプチドは、ＡＤＮＦ Ｉポリペプチド、ＡＤＮＦ ＩＩＩポリペプチド、それらの対立遺伝子、多型変異体、類似体、種間相同体、その任意の部分配列、又は例えば、インビトロ又はインビボのいずれかで中枢神経系に由来するニューロンに対して神経保護／神経栄養作用を示す親油性変異体に由来し得る。ＡＤＮＦ関連神経保護ペプチドは、４～８アミノ酸程度の短い範囲であってもよく、例えば、８～２０、８～５０、１０～１００、又は約２００、５００以上のアミノ酸を有することができる。変異体ＡＤＮＰ関連の神経保護ペプチドの１つの非限定的な例は、ＳＫＩＰの４アミノ酸ペプチド（配列番号２１）であり、Ａｍｒａｍ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｘｕａｌ Ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ：Ｔｈｅ Ｎｏｖｅｌ Ｉｎｔｒａｎａｓａｌ Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＳＫＩＰ Ｎｏｒｍａｌｉｚｅｓ Ａｘｏｎａｌ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ａｎｄ Ｅｎｈａｎｃｅｓ Ｍｅｍｏｒｙ．Ｍｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２０１６；２１・１４６７－７６を参照されたい。さらなる例としては、ＮＡＰＶＳＩＰＱ（配列番号１３）及びＳＡＬＬＲＳＩＰＡ（配列番号３６）の全てのＤ－アミノ酸誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。

【0167】

よって、本発明のさらなる態様によれば、このポリペプチドは、式（Ｒ^１）_ｘ－Ａｓｎ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ－（Ｒ^２）_ｙ（配列番号４９）を有し、Ｒ^１は、１個～約４０個のアミノ酸を含むアミノ酸配列であり、各アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸及びアミノ酸類似体からなる群から独立して選択され、Ｒ^２は、１～約４０個のアミノ酸を含むアミノ酸配列であり、各アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸及びアミノ酸類似体からなる群から独立して選択され、ｘ及びｙは、独立して選択され、０又は１に等しい。さらなる実施形態では、配列番号４９のコアアミノ酸配列「Ａｓｎ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ」（「Ａｓｎ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｇｌｎ」は配列番号２と同一である）は、配列番号２の類似体によって置換される。

【0168】

本発明のさらなる態様では、ポリペプチドは、式（Ｒ^１）_ｘ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－（Ｒ^２）_ｙ（配列番号５０）を有し、Ｒ^１は、１～約４０個のアミノ酸を含むアミノ酸配列であり、各アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸及びアミノ酸類似体からなる群から独立して選択され、Ｒ^２は、１～約４０個のアミノ酸を含むアミノ酸配列であり、各アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸及びアミノ酸類似体からなる群から独立して選択され；そしてｘ及びｙは、独立して選択され、そして０又は１に等しい。さらなる実施形態では、配列番号５０のアミノ酸配列「Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ａｌａ」（「Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｓｅｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ａｌａ」は配列番号２４と同一である）は、配列番号２４の類似体によって置換される。

【0169】

本発明のＡＤＮＰペプチド及びポリペプチドは、処置を必要とする対象において疾患を処置するのに有効であるため、ＡＤＮＦペプチド及びポリペプチドによる処置の有効性をモニタリングするためにも使用することができる。したがって、いくつかの実施形態では、視覚誘発電位障害及び／又は発話障害と診断された対象におけるＡＤＮＦポリペプチドによる処置の有効性をモニタリングする方法であって、対象が、発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害を患っており、本方法が、ＡＤＮＦポリペプチドによる処置後に対象の視覚誘発電位及び／又は発話能力を判定することを含み、ＡＤＮＦポリペプチドによる処置後の対象の視覚誘発電位及び／又は発話能力の改善が、処置が有効であることを示す、方法が提供される。

【0170】

いくつかの実施形態では、対象は、発声障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害関連の疾患と診断されている。他の実施形態では、対象は、自閉症スペクトラム障害又は知的障害と診断されている。なおさらなる実施形態では、対象は、アルツハイマー病と診断されている。

【0171】

特定の実施形態によれば、対象は、自閉症スペクトラム障害、神経変性疾患、認知障害、精神障害、及び細胞骨格障害からなる群から選択される疾患と診断されている。

【0172】

視覚誘発電位及び／又は当該発話能力の反復決定、並びに発声障害、自閉症スペクトラム障害又は知的障害、アルツハイマー病、神経変性疾患、認知障害、精神障害、及び細胞骨格障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害関連の疾患と診断されていない健康な個体からの値との比較は、１回より多く行うことができ、ＡＤＮＦポリペプチドによる処置後の異なる時点からの対象の視覚誘発電位及び／又は当該発話能力の値の複数の評価は、有効性を決定する際に、並びにさらなる治療レジメン、例えば投与の用量及び頻度の戦略化を助ける際に有益であり得ることが理解されるであろう。

【0173】

本明細書で使用される場合、対象の視覚誘発電位障害及び／又は発語能力を「モニタリングする」という用語は、一般に、対象の状態の変化（例えば、疾患関連のパラメータ、例えば、限定するものではないが、形状、振幅及び／又は視覚応答時間又は発話パターン及び発声の変化）をモニタリングすること、特に記録して、例えば、発声障害、自閉症スペクトラム障害又は知的障害、アルツハイマー病、神経変性疾患、認知障害、精神障害、及び細胞骨格障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害関連の疾患の診断を知らせ、発声障害、知的障害、自閉症スペクトラム障害又は自閉症、アルツハイマー病、神経変性疾患、認知障害、精神障害、及び細胞骨格障害に起因しない視覚誘発電位障害及び／又は発話障害関連の疾患の予後を知らせ、ＡＤＮＦ又はＡＤＮＰペプチド又はポリペプチドなどを用いた処置の効果又は有効性に関する情報を提供することを指す。例えば、対象の処置の有効性のモニタリングが、例えば、知的障害若しくはアルツハイマー病、認知障害、及び／又は細胞骨格障害についての現在の処置の効果の低下を示す場合、処置の強度（用量、頻度など）の増加、又は異なる処置選択肢が考慮され得る。反復モニタリングは、記載されるように、処置（複数可）の持続期間を通して行うことができる。

【0174】

「Ｔｙｒ」マウスモデルを使用して、本発明者らは、その発現がＡＤＮＦ遺伝子の改変（例えば、突然変異）に特徴的な異常な表現型と相関して調節解除されるバイオマーカーを同定した。特に重要なのは、遺伝子転写物ＳＭＯＸ（スペルミンオキシダーゼ）、ＡＲＲＢ１（アレスチンβ１）、ＡＤＣＹ６（アデニル酸シクラーゼ６）、ＦＯＸＯ３（フォークヘッドボックスＯ３）、及びＣＰＸＭ１（カルボキシペプチダーゼＸ、Ｍ１４ファミリーメンバー１）、（ＳＴＯＭ（ストマチン）、ＤＮＡＪＢ４（ＤｎａＪ熱ショックタンパク質ファミリー（Ｈｓｐ４０）メンバーＢ４））及びＴＭＣＣ２（膜貫通及びコイルドコイルドメインファミリー２）であった（以下の実施例における実施例１を参照のこと）。

【0175】

本明細書で使用される場合、「ＳＭＯＸ」［ＳＭＯ、Ｃ２０ｏｒｆ１６、ポリアミンオキシダーゼ、ＰＡＯ－１、ＰＡＯＨ１、ＰＡＯＨ、ＤＪ７７９Ｅ１１．１としても知られる］という用語は、発現産物、例えば、ＳＭＯＸ遺伝子（遺伝子ＩＤ５４４９８）のＲＮＡ又はタンパク質を指す。この遺伝子は、スペルミンからスペルミジンへの酸化を触媒し、二次的に過酸化水素を産生するＦＡＤ含有酵素をコードする。

【0176】

特定の実施形態によれば、ＳＭＯＸは、以下の受託番号ＮＰ＿００１２５７６２０．１、ＮＰ＿７８７０３３．１、ＮＰ＿７８７０３４．１、ＮＰ＿７８７０３５．１及びＮＰ＿７８７０３６．１で提供されるようなヒトＳＭＯＸである。

【0177】

本明細書で使用される場合、「ＳＭＯＸ関連の疾患」という用語は、発症及び／又は進行についてのＳＭＯＸ機能不全（例えば、突然変異による）関連の疾患を指す。このような疾患の非限定的な例は、症候群性Ｘ連鎖性知的障害Ｓｎｙｄｅｒ型及び毛包性角化症Ｓｐｉｎｕｌｏｓａ Ｄｅｃａｌｖａｎｓである。

【0178】

本明細書で使用される場合、「ＡＲＲＢ１」［アレスチンβ、ＡＲＲ１、非視覚アレスチン－２、β－アレスチン－１、アレスチン－２、アレスチンβ－１及びＡＲＢ１としても知られる］という用語は、発現産物、例えば、ＡＲＲＢ１遺伝子（遺伝子ＩＤ４０８）のＲＮＡ又はタンパク質を指す。この遺伝子は、β－アドレナリン作動性受容体のβ－アドレナリン作動性受容体キナーゼ（ＢＡＲＫ）媒介性脱感作において補因子として作用する細胞質ゾルタンパク質をコードし、末梢血白血球において高レベルで発現され、そして受容体媒介性免疫機能の調節において主要な役割を果たすと考えられる。

【0179】

特定の実施形態によれば、ＡＲＲＢ１は、以下の受託番号ＮＭ＿００４０４１．５、ＮＰ＿００４０３２．２、ＮＰ＿０６４６４７．１及びＮＭ＿０２０２５４１．４で提供されるようなヒトＡＲＲＢ１である。

【0180】

本明細書で使用される場合、「ＡＲＲＢ１関連の疾患」という用語は、発症及び／又は進行に関するＡＲＲＢ１機能不全（例えば、突然変異による）に関連する疾患を指す。そのような疾患の非限定的な例は、不適切な抗利尿の性早熟症、中枢性、１及び腎性症候群である。

【0181】

本明細書で使用される場合、「ＡＤＣＹ６」［アデニル酸シクラーゼ６、ＡＣ６、Ｃａ（２＋）－阻害可能アデニル酸シクラーゼ、ＡＴＰ－ピロリン酸リアーゼ６、ＶＩ型アデニル酸シクラーゼ、６型アデニル酸シクラーゼ、ＥＣ４．６．１．１、アデニリルシクラーゼ６としても知られる］という用語は、発現産物、例えば、ＡＤＣＹ６遺伝子（遺伝子ＩＤ１１２）のＲＮＡ又はタンパク質を指す。この遺伝子は、サイクリックＡＭＰの合成に必要なアデニリルシクラーゼファミリーのタンパク質のメンバーであるタンパク質をコードする。このファミリーの全てのメンバーは、細胞内Ｎ末端、細胞質ループによって分離された６つの膜貫通ドメインの縦列反復、及びＣ末端細胞質ドメインを有する。２つの細胞質領域はＡＴＰに結合し、タンパク質の触媒コアを形成する。

【0182】

特定の実施形態によれば、ＡＤＣＹ６は、以下の受託番号ＮＭ＿００１３９０８３０．１、ＮＰ＿００１３７７７５９．１、ＮＭ＿０１５２７０．５及びＮＰ＿０５６０８５．１で提供されるようなヒトＡＤＣＹ６である。

【0183】

本明細書中で使用される場合、用語「ＡＤＣＹ６に関連する疾患」とは、発症及び／又は進行についてのＡＤＣＹ６機能不全（例えば、変異に起因する）に関連する疾患をいう。このような疾患の非限定的な例は、致死性先天性拘縮症候群８及び髄鞘形成不全神経障害－関節拘縮症症候群である。

【0184】

本明細書中で使用される場合、用語「ＦＯＸＯ３」［フォークヘッドボックス０３、ＦＯＸＯ３Ａ、ＦＯＸＯ２、ＡＦ６ｑ２１、フォークヘッドボックスタンパク質０３、ＦＫＨＲＬ１Ｐ２、及びＡＦ６ｑ２１タンパク質としてもれる］は、発現産物、例えば、ＦＯＸＯ３遺伝子（遺伝子ＩＤ２３０９）のＲＮＡ又はタンパク質を指す。この遺伝子は、別個のフォークヘッドドメインによって特徴付けられ、アポトーシス及び自食作用などのプロセスを調節する転写因子のフォークヘッドファミリーに属する転写活性化因子をコードする。

【0185】

特定の実施形態によれば、ＦＯＸＯ３は、以下の受託番号ＮＭ＿２０１５５９．３、ＮＰ＿９６３８５３．１、ＮＭ＿００１４５５．４及びＮＰ＿００１４４６．１で提供されるようなヒトＦＯＸＯ３である。

【0186】

本明細書で使用される場合、「ＦＯＸＯ３関連の疾患」という用語は、発症及び／又は進行に関するＦＯＸＯ３機能不全（例えば、突然変異による）関連の疾患を指す。このような疾患の非限定的な例は、老化及び染色体６Ｑ欠失である。

【0187】

本明細書で使用される場合、「ＳＴＯＭ」［ストマチン、ＢＮＤ７、ＥＰＢ７２、赤血球タンパク質バンド７．２及び赤血球膜表面タンパク質バンド７．２としても知られる］という用語は、発現産物、例えば、ＳＴＯＭ遺伝子（遺伝子ＩＤ２０４０）のＲＮＡ又はタンパク質を指す。この遺伝子は、内在性膜タンパク質の高度に保存されたファミリーのメンバーをコードする。コードされたタンパク質は、赤血球及び他の細胞型の細胞膜に局在し、そこでイオンチャネル及び輸送体を調節し得る。

【0188】

特定の実施形態によれば、ＳＴＯＭは、以下の受託番号ＮＭ＿００４０９９．６、ＮＰ＿００４０９０．４、ＮＭ＿１９８１９４．３、ＮＰ＿９３７８３７．１、ＮＭ＿００１２７０５２６．２、及びＮＰ＿００１２５７４５５．１で提供されるようなヒトＳＴＯＭである。

【0189】

本明細書で使用される場合、「ＳＴＯＭ関連の疾患」という用語は、発症及び／又は進行についてのＳＴＯＭ機能不全（例えば、突然変異による）関連の疾患を指す。このような疾患の非限定的な例は、水分過剰遺伝性口内炎及び遺伝性有口赤血球症である。

【0190】

本明細書で使用される場合、「ＤＮＡＪＢ４」［ＤＮＡＪ熱ショックタンパク質、ＨＳＰ４０タンパク質相同体サブファミリーＢ、メンバー４、Ｈｓｐ４０相同体、及びＤＮＡＪＷとしても知られる］という用語は、発現産物、例えば、ＤＮＡＪＢ４遺伝子（遺伝子ＩＤ１１０８０）のＲＮＡ又はタンパクを指す。この遺伝子は、分子シャペロン、腫瘍抑制因子、及び熱ショックタンパク質－４０ファミリーのメンバーをコードする。コードされたタンパク質は、細胞接着タンパク質Ｅ－カドヘリンに結合し、それを原形質膜に標的化する。このタンパク質はまた、不正確に折り畳まれたＥ－カドヘリンに結合し、それを小胞体関連分解の標的とする。この遺伝子は、結腸直腸癌に対する強力な腫瘍抑制因子である。

【0191】

特定の実施形態によれば、ＤＮＡＪＢ４は、以下の受託番号ＮＭ＿００４０９９．６、ＮＰ＿００４０９０．４、ＮＭ＿１９８１９４．３、ＮＰ＿９３７８３７．１、ＮＭ＿００１２７０５２６．２及びＮＰ＿００１２５７４５５．１で提供されるようなヒトＤＮＡＪＢ４である。

【0192】

本明細書で使用される場合、「ＤＮＡＪＢ４関連の疾患」という用語は、発症及び／又は進行に関するＤＮＡＪＢ４機能不全（例えば、突然変異による）関連の疾患を指す。このような疾患の非限定的な例は、眼筋咽頭型筋ジストロフィーである。

【0193】

本明細書で使用される場合、「ＴＭＣＣ２」［膜貫通及びコイルドコイルドメインタンパク質、ＨＵＣＥＰ１１、脳タンパク質、ＦＬＪ３８４９７及びＫＩＡＡ０４８１としても知られる］という用語は、発現産物、例えば、ＴＭＣＣ２遺伝子（遺伝子ＩＤ９９１１）のＲＮＡ又はタンパク質を指す。この遺伝子は、アミロイド前駆体タンパク質代謝に関与する小胞体ベースのタンパクをコードする。

【0194】

特定の実施形態によれば、ＴＭＣＣ２は、以下の受託番号ＮＭ＿０１４８５８．４、ＮＰ＿０５５６７３．２、ＮＭ＿００１２４２９２５．２、ＮＰ＿００１２２９８５４．１、ＮＭ＿００１３７５６５２．１及びＮＰ＿００１３６２５８１．１で提供されるようなヒトＴＭＣＣ２である。

【0195】

本明細書で使用される場合、「ＴＭＣＣ２関連の疾患」という用語は、発症及び／又は進行についてのＴＭＣＣ２機能不全（例えば、変異による）関連の疾患を指す。このような疾患の非限定的な例は、ヌーナン症候群１０及び欠乏性貧血である。

【0196】

本明細書で使用される場合、用語「ＣＰＸＭ１」［カルボキシペプチダーゼＸ、Ｍ１４ファミリーメンバー１、ＣＰＸ１、ＣＰＸＭ、推定カルボキシペプチダーゼＸ１、メタロカルボキシペプチダーゼＣＰＸ－１としても知られる］は、発現産物、例えば、ＣＰＸＭ１遺伝子（遺伝子ＩＤ５６２６５）のＲＮＡ又はタンパク質を指す。この遺伝子は、おそらく、細胞間相互作用に関与し得るタンパク質のカルボキシペプチダーゼファミリーのメンバーをコードする。

【0197】

特定の実施形態によれば、ＣＰＸＭ１は、以下の受託番号ＮＭ＿０１９６０９．５、ＮＰ＿０６２５５５．１、ＮＭ＿００１１８４６９９．２、ＮＰ＿００１１７１６２８．１で提供されるようなヒトＣＰＸＭ１である。

【0198】

本明細書で使用される場合、「ＣＰＸＭ１関連の疾患」という用語は、発症及び／又は進行に関するＣＰＸＭ１機能不全（例えば、突然変異による）関連の疾患を指す。そのような疾患の非限定的な例は、鏡像運動１である。

【0199】

したがって、本発明のいくつかの実施形態では、ＡＤＮＰ関連障害の診断又はモニタリングは、対象の生物学的試料中のＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、及びＣＰＸＭ１からなる群から選択されるマーカーのレベルを判定することを含む。

【0200】

特定の実施形態では、マーカーのレベルは、自閉症スペクトラム障害、神経変性疾患、認知障害、精神障害及び細胞骨格障害からなる群から選択される疾患と診断された対象、又は自閉症スペクトラム障害及び知的障害からなる群から選択される疾患と診断された対象、又はアルツハイマー病と診断された対象における処置の有効性をモニタリングするために使用することができ、処置後のＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、及び／又はＴＭＣＣ２のレベルの低下及び／又は前記ＣＰＸＭ１のレベルの上昇は、処置が有効であることを示す。

【0201】

他の特定の実施形態では、マーカーのレベルは、対象の生物学的試料において、自閉症スペクトラム障害、神経変性疾患、認知障害、精神障害及び細胞骨格障害からなる群から選択される疾患を診断するため、自閉症スペクトラム障害及び知的障害からなる群から選択される疾患を診断するため、又はアルツハイマー病を診断するために使用することができる。

【0202】

本発明の方法に従って、アルツハイマー病、自閉症スペクトラム障害、神経変性疾患、認知障害、精神障害、及び細胞骨格障害、自閉症スペクトラム障害、及び知的障害の陽性診断の徴候を有する対象は、診断の確認のためのさらなる診断試験のために参照され得る、及び／又は診断された状態の処置のために選択され得ると理解される。

【0203】

アルツハイマー病及び他の神経変性疾患のさらなる診断のための１つの例示的なアプローチは、国立神経・伝達障害・脳卒中研究所及びアルツハイマー病・関連障害協会（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｖｅ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ａｎｄ Ｓｔｒｏｋｅ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：ＮＩＮＣＤＳ－ＡＤＲＤＡ）（ＭｃＫｈａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４）によって開発された一連の診断基準を用いた臨床評価である。これらの基準は、病歴、臨床検査、神経心理学的検査、脳イメージング、及び実験室評価の態様を含み、最近更新された。さらなる実験室評価は、通常、血液分析（すなわち、栄養欠乏又はホルモン障害に起因する認知機能障害を除外するため）を含む。神経心理学的検査は、典型的には、検査バッテリー、又は短いスクリーニング機器、例えばミニメンタルステート検査を含む。脳イメージングは、通常、構造的磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）又はコンピュータ断層撮影を介して行われ、診断が不確かな場合には陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）が追加される。なお更に、放射線イメージングは、インビボでのＡＤの病理学的特徴の検出を提供し得る。タウのマーカーは依然として実験的であり得るが、アミロイド斑に結合するいくつかのトレーサー：^１１Ｃ標識されたピッツバーグ化合物Ｂ（ＰＩＢ）及び^１８Ｆ標識された代替物は、日常的な臨床使用に入っている。血流への注射後、ピッツバーグ化合物Ｂ（ＰＩＢ）は、血液脳関門を通過し、アミロイド斑（原線維アミロイド－βペプチド）の沈着物に結合する。アミロイド斑へのＰＩＢ結合は、ＰＥＴによって検出することができる。認知症患者からのスキャンを区別するための機能的イメージングにおける自動分類及び皮質厚測定の開発を伴って、ＭＲＩスキャンもまた有用である。サポートベクターマシン（ＳＶＭ）のような多変量パターン認識方法（すなわち、機械学習技術）もまた、認知症及びＡＤを正確に診断することができる。

【0204】

いくつかの実施形態は、本方法は、状態を処置することを含む。アルツハイマー病及び他の神経変性状態のための例示的な治療としては、本明細書中に記載されるような本発明のＡＤＮＰポリペプチド又はペプチドを単独で、又は他の薬物と組み合わせて用いる処置を挙げることができる。アルツハイマー病及び他の神経変性疾患のための薬物の非限定的なリストには、アデュカヌマブ、ドネペジル、レバスチグミン、メマンチン、ドネペジル及びガランタミンと共に製剤化されたメマンチンが含まれる。更に、認知訓練は、恩恵を得ることができる。

【0205】

いくつかの実施形態では、ＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２及び／又はＣＰＸＭ１の濃度又はレベルのそれぞれの閾値が決定され、所定の閾値を上回るＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４及び／又はＴＭＣＣ２の増加、及び／又は所定の閾値を下回るＣＰＸＭ１の濃度又はレベルは、対象における自閉症スペクトラム障害、神経変性疾患、認知障害、精神障害及び細胞骨格障害からなる群から選択される疾患、自閉症スペクトラム障害及び知的障害からなる群から選択される疾患、又はアルツハイマー病の存在を示す。所定の閾値は、正常な健康なヒト対象について決定されたＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、及び／又はＣＰＸＭ１濃度の範囲外の値又は値の範囲であり得るか、又は自閉症スペクトラム障害、神経変性疾患、認知障害、精神障害及び、細胞骨格障害、自閉症スペクトラム障害及び知的障害からなる群から選択される疾患、又はアルツハイマー病を患っていない、適合した対象又は対象（例えば、以下の基準：年齢、ＢＭＩ、体重、自閉症スペクトラム障害、神経変性疾患、認知障害、精神障害、及び細胞骨格障害、自閉症スペクトラム障害及び知的障害からなる群から選択される疾患の過去の診断及び／又は家族歴、及びその他の臨床パラメータの少なくとも１つについて適合された適合対象）から採取される試料又は複数の試料でアッセイされたＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、及び／又はＣＰＸＭ１の値であり得る。閾値を決定するための参照試料はまた、（モニタリングにおけるように）同じ対象から採取された以前の試料であってもよい。いくつかの実施形態では、「増加した」とは、所定の閾値よりも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１．５倍、２倍、３倍、４倍又はそれ以上高い範囲の濃度を指す。他の実施形態では、「未満」又は「低下した」は、所定の閾値よりも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１．５倍、２倍、３倍、４倍又はそれ以上低い範囲の濃度を指す。

【0206】

本発明のいくつかの局面において、本方法は、対象の生物学的試料中のＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、及びＣＰＸＭ１からなる群から選択されるマーカーを検出することを含む。「生物学的試料」という用語は、生物から得られる様々な試料タイプを包含し、診断、予測、又はモニタリングアッセイで使用することができる。この用語は、血液及び生物学的起源の他の液体試料、又はそれに由来する細胞及びその子孫を包含する。この用語は、試薬による処理、可溶化、又は特定成分の豊富化などの達成後に任意の方法で操作されている試料を包含する。この用語は、臨床試料を包含し、細胞上清、細胞溶解物、血清、血漿、生体液、及び組織試料も含む。本発明の方法において使用するための臨床試料は、様々な供給源、特に血液試料から得ることができる。

【0207】

特に関連する試料源としては、血液試料又はその調製物、例えば全血、又は血清若しくは血漿、涙液及び尿が挙げられる。特定の実施形態では、ヒト試料の好適な初期供給源は血液試料である。したがって、対象のアッセイで使用される試料は、一般に血液由来試料である。血液由来試料は、全血又はその画分、例えば、血清、血漿などに由来してもよく、いくつかの実施形態では、試料は血液に由来し、凝固させ、血清又は血漿を分離及び収集してアッセイに使用する。他の実施形態では、試料は、凝固せずに（例えば、ＥＤＴＡ、クエン酸塩、ヘパリンなどの抗凝固剤と共に）収集された血液に由来し、次いでアッセイのために収集された血清又は血漿に由来する。

【0208】

いくつかの実施形態では、試料は、血清又は血清由来試料である。液体血清サンプルを生成するための任意の便利な方法論が使用され得る。

【0209】

また、上記の方法の１つ以上を実施するための試薬、システム、及びそのキットが提供される。本発明の試薬、システム、及びそのキットは、大きく変化し得る。対象となる試薬は、試料から上述のマーカーの臨床的に有用なマーカーレベル表示を生成する際に使用するために特に設計された試薬、例えば、１つ以上の検出要素、例えば、マーカータンパクの検出のための抗体又はペプチド、核酸の検出のためのオリゴヌクレオチドなどを含む。いくつかの例では、キットは、可溶性ＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、又はＣＰＸＭ１に特異的に結合する第１の薬剤、及びマーカーの正常参照試料を含む。特定の実施形態では、ＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、及びＣＰＸＭ１についての正常参照試料は、上記で詳述したＡＤＮＦ／ＡＤＮＰ関連状態（例えば、自閉症スペクトラム障害、神経変性疾患、認知障害、精神障害、及び細胞骨格障害）のいずれも有さない健康なヒト対象において見出されるマーカーのレベルを含有する試料である。他の実施形態では、薬剤は、検出可能に標識され得るか、又は酵素（例えば、蛍光標識抗体、放射性標識抗体又は免疫結合体化抗体）に結合され得る。マーカーに結合する薬剤は、マーカーに対する抗体又はそのマーカー結合フラグメントであり得る。いくつかの実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。他の実施形態では、マーカー（複数可）に結合する薬剤は、固体表面上に固定化され、例えば、上記で詳述したように、ビーズ（マイクロスフェア）、ＥＬＩＳＡプレートなどに結合される。

【0210】

いくつかの実施形態では、システム又はキットは、ディップスティックとしても知られる試験ストリップ（例えば、ラテラルフロー試験ストリップ）を含み、好ましくは、必ずしもそうではないが、ハウジングに入れられ、対象又は医療専門家によって読み取られるように設計され、いくつかの実施形態では、試験ストリップを用いて行われるアッセイはサンドイッチ免疫アッセイである。通常、追加の分子が、陽性又は陰性対照としてデバイス内に存在する。典型的な陽性対照は、試験される試料中に存在することが知られている分子を認識する抗体であり得る。典型的な陰性対照は、試験される試料中に存在しないことが知られている分子を認識する抗体であり得る。

【0211】

そのような薬剤の別のタイプは、ＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、又はＣＰＸＭ１に特異的なプローブ、プライマー、又は抗体（試薬とも呼ばれる）を含むプローブのアレイ、プライマーのコレクション、又は抗体のコレクションである。このようなアレイは、上記に列挙されていないさらなる遺伝子／タンパク質／補因子に特異的な試薬（例えば、その発現パターンが本明細書中に詳述される疾患及び状態に関連することが当該分野で公知である遺伝子／タンパク質／補因子に特異的なプローブ、プライマー、又は抗体）を含み得る。

【0212】

場合によっては、システムが提供されてもよい。本明細書中で使用される場合、「システム」という用語は、試薬の集合を指すが、例えば、同じ供給源又は異なる供給源から試薬の集合を購入することによってまとめられる。場合によっては、キットが提供されてもよい。本明細書中で使用される場合、用語「キット」は、一緒に提供される（例えば、販売される）試薬の集合を指す。例えば、試料タンパク質の抗体ベースの検出は、それぞれ、個別医療のためのＳＭＯＸ、ＡＲＲＢ１、ＡＤＣＹ６、ＦＯＸＯ３、ＳＴＯＭ、ＤＮＡＪＢ４、ＴＭＣＣ２、又はＣＰＸＭ１の多重決定を可能にする電気化学バイオセンサプラットフォームと組み合わされ得る。本発明のシステム及びキットは、上記のアレイ、遺伝子特異的プライマーの集合、又はタンパク質特異的抗体の集合、並びに種々の方法において使用される１つ以上のさらなる試薬を含み得、これらは、予め混合されていてもよく、又は別々であってもよい。本発明のシステム及びキットはまた、１つ以上の子癇前症表現型決定要素、例えば、「入力」マーカーレベルプロファイルに基づいて子癇前症予後診断を行うために、例えば適切な実験手段又は計算手段によって用いることができる参照試料若しくは対照試料又はマーカー表示を含んでもよい。

【0213】

上記の成分に加えて、本発明のキットは、本発明の方法を実施するための説明書を更に含む。これらの説明書は、様々な形態で本発明のキットに存在してもよく、そのうちの１つ以上がキットに存在してもよい。これらの説明書が存在し得る１つの形態は、キットのパッケージング中や添付文書中に、適切な媒体又は基材、例えば、情報が印刷された１枚以上の紙に印刷された情報として存在する。更に別の媒体は、情報が記録されているコンピュータ可読媒体、例えばディスケット、ＣＤなどであろう。存在し得る更に別の手段は、離れたサイトで情報にアクセスするためにインターネットを介して使用され得るウェブサイトアドレスである。任意の便利な手段が、キット中に存在し得る。

【0214】

本明細書に記載のポリペプチド及び／又は治療薬は、対象に、それ自体で、又は薬学的に許容される担体と混合された医薬組成物の一部として提供することができる。

【0215】

本明細書で使用される場合、「医薬組成物」は、生理学的に好適な担体及び賦形剤等の他の化学成分を含む、本明細書に記載の１つ又は複数の活性成分の調製物を指す。医薬組成物の目的は、生物への化合物の投与を容易にすることである。

【0216】

本明細書において、「活性成分」という用語は、生物学的効果の原因となるポリペプチド又は治療薬を指す。

【0217】

以下「生理学的に許容される担体」及び「薬学的に許容される担体」という語句は、互換的に使用され得、生物に著しい刺激を引き起こさず、投与される化合物の生物学的活性及び特性を抑制しない担体又は希釈剤を指す。アジュバントはこれらの語句に含まれる。

【0218】

本明細書において、「賦形剤」という用語は、活性成分の投与を更に容易にするために医薬組成物に添加される不活性物質を指す。賦形剤の非限定的な例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖及び種々のタイプのデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油及びポリエチレングリコールが挙げられる。

【0219】

薬物の製剤化及び投与の技術は、参照により本明細書に組み込まれる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡの最新版に見出すことができる。

【0220】

適切な投与経路としては、例えば、経口、舌下、局所、皮内、直腸、経粘膜（点眼剤を含む）、特に経鼻、腸又は非経口送達（筋肉内、皮下及び髄内注射並びに髄腔内、直接脳室内、心臓内（例えば、右心室腔又は左心室腔へ）、総冠動脈への注射、静脈内、腹腔内、鼻腔内、肺内又は眼内注射を含む）が挙げられ得る。

【0221】

特定の実施形態によれば、有効成分は、全身に提供される。

【0222】

特定の実施形態によれば、投与経路は、鼻腔内又は肺内投与である。

【0223】

特定の実施形態によれば、ポリペプチドは、国際公開第１６／０７３，１９９号（その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる）に記載されているように、経鼻投与用に製剤化される。

【0224】

他の特定の実施形態によれば、投与経路は皮膚内である。活性剤を皮膚に投与する方法は、当技術分野で公知であり、例えば、活性剤を含み、皮膚の外表面に適用される皮内注射、ゲル、液体スプレー、デバイス、及びパッチが挙げられる。

【0225】

本発明のいくつかの実施形態によれば、対象の皮膚への活性剤の投与は、局所的に（皮膚上で）行われる。

【0226】

本発明のいくつかの実施形態によれば、対象の皮膚への活性剤の投与は、例えば、対象の皮膚上に適用される、活性成分を含むゲル、液体スプレー又はパッチ（例えば、リザーバ型パッチ及びマトリックス型パッチ）を使用して、非侵襲的に行われる。

【0227】

活性剤の皮膚への送達を増加させるために、活性剤は、表皮又は真皮層への送達を増加させるように設計された様々なビヒクルと共に製剤化できることに留意すべきである。このようなビヒクルとしては、リポソーム、デンドリマー、ノイソーム、トランスファーソーム、マイクロエマルジョン、及び固体脂質ナノ粒子が挙げられるが、これらに限定されない。

【0228】

本発明のいくつかの実施形態によれば、投与は、皮内注射によって行われる。

【0229】

中枢神経系（ＣＮＳ）への薬物送達のための従来のアプローチとしては、以下が挙げられる。神経外科的戦略（例えば、海馬内（ＩＨ）、脳内（ＩＣ）、脳内注射、脳室内注射（ＩＣＶ）、又は注入若しくは髄膜投与）；ＢＢＢの内因性輸送経路の１つを利用しようとする、薬剤の分子操作（例えば、それ自体がＢＢＢを通過することができない薬剤と組み合わせて、内皮細胞表面分子に対して親和性を有する輸送ペプチドを含むキメラ融合タンパク質の産生）；薬剤の脂溶性を増加させるように設計された薬理学的戦略（例えば、水溶性薬剤の脂質又はコレステロール担体へのコンジュゲーション）；高浸透圧破壊（頸動脈へのマンニトール溶液の注入又はアンジオテンシンペプチドなどの生物学的に活性な薬剤の使用から生じる）によるＢＢＢの統合性の一時的破壊。しかしながら、これらの戦略の各々は、侵襲的外科的処置に関連する固有のリスク、内因性輸送系に固有の制限によって課されるサイズ制限、ＣＮＳの外側で活性であり得るキャリアモチーフから構成されるキメラ分子の全身投与に関連する潜在的に望ましくない生物学的副作用、及びＢＢＢが破壊される脳の領域内での脳損傷の可能性のあるリスクなどの制限を有し、これにより、最適以下の送達方法となる。

【0230】

あるいは、例えば、患者の組織領域に医薬組成物を直接注射することによって、全身的ではなく局所的に医薬組成物を投与してもよい。

【0231】

本発明のいくつかの実施形態の医薬組成物は、当該技術分野で周知のプロセスによって、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠作製、研和、乳化、カプセル化、封入、又は凍結乾燥プロセスによって製造されてもよい。

【0232】

したがって、本発明のいくつかの実施形態による使用するための医薬組成物は、医薬として使用され得る調製物への活性成分の処理を容易にする、賦形剤及び助剤を含む１つ以上の生理学的に許容される担体を使用して従来の方法で製剤化され得る。適切な製剤は、選択される投与経路に依存する。

【0233】

注射の場合、医薬組成物の活性成分は、水溶液、好ましくはハンクス液、リンガー液、又は生理食塩緩衝液、又は生理食塩水若しくは徐放性溶液などの生理学的に適合性のある緩衝液中で製剤化され得る。経粘膜投与の場合、透過する障壁に適した浸透剤が製剤に使用される。そのような浸透剤は、一般に当技術分野において知られている。

【0234】

経口投与の場合、医薬組成物は、活性化合物を当技術分野において周知の薬学的に許容される担体と組み合わせることにより容易に製剤化され得る。そのような担体によって、患者による経口摂取のために、医薬組成物を錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして製剤化することが可能になる。経口使用のための薬理学的調製物は、固体賦形剤を使用して作製することができ、得られた混合物を任意選択で粉砕し、所望により好適な助剤を添加した後、顆粒の混合物を処理して、錠剤又は糖衣錠コアを得ることができる。適切な賦形剤は、特に、ラクトース、スクロース、マンニトール、又はソルビトールを含む糖などの充填剤；例えばトウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボメチルセルロースナトリウムなどのセルロース調製物；及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等の生理学的に許容されるポリマー等の充填剤である。所望により、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸若しくはその塩、例えばアルギン酸ナトリウム等の崩壊剤が添加されてもよい。

【0235】

特定の実施形態によれば、医薬組成物は、鼻腔内投与用に製剤化される。

【0236】

糖衣錠のコアには、好適なコーティングが施される。この目的のために、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液及び好適な有機溶媒又は溶媒混合物を任意に含み得る濃縮糖溶液が使用され得る。識別のため、又は活性化合物用量の異なる組み合わせを特徴付けるために、染料又は色素が錠剤又は糖衣錠コーティングに添加されてもよい。

【0237】

経口で使用され得る医薬組成物には、ゼラチンでできた押し込み型カプセル、並びにゼラチン及びグリセロール又はソルビトール等の可塑剤でできた軟質密封カプセルが含まれる。押し込み型カプセルは、ラクトース等の充填剤、デンプン等の結合剤、タルク又はステアリン酸マグネシウム等の滑剤、及び任意選択で安定剤と混合した活性成分を含んでもよい。軟カプセルでは、活性成分は、脂肪油、流動パラフィン、又は液体ポリエチレングリコール等の好適な液体に溶解又は懸濁されてもよい。更に、安定剤が添加されてもよい。経口投与用の全ての製剤は、選択された投与経路に好適な投薬量である必要がある。

【0238】

口腔内投与の場合、組成物は、従来の方法で製剤化された錠剤又はロゼンジの形態をとることができる。

【0239】

特定の実施形態によれば、医薬組成物は、吸入（例えば、鼻腔内又は肺内）用に製剤化される。

【0240】

経鼻吸入による投与の場合、本発明のいくつかの実施形態による使用のための活性成分は、好適な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン又は二酸化炭素の使用により、過圧パック又は噴霧器からエアロゾルスプレーの形態で便利に送達される。加圧エアロゾルの場合、計量された量を送達するためのバルブを提供することにより、投薬量単位を決定することができる。ディスペンサーで使用するための、例えばゼラチンのカプセル及びカートリッジは、化合物及びラクトース又はデンプン等の好適な粉末基剤の粉末混合物を含むように製剤化され得る。

【0241】

本明細書に記載の医薬組成物は、例えば、ボーラス注射又は持続注入による非経口投与用に製剤化されてもよい。注射用の製剤は、単位剤形で、例えば、任意選択で保存剤を添加して、アンプル又は複数回投与用容器で提供されてもよい。組成物は、油性又は水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、又はエマルジョンであってもよく、懸濁剤、安定剤及び／又は分散剤等の製剤化剤を含んでもよい。徐放性製剤はまた、非経口投与のための医薬組成物の調製において使用され得る。

【0242】

非経口投与用の医薬組成物には、水溶性形態の活性製剤の水溶液が含まれる。更に、活性成分の懸濁液は、適切な油性又は水ベース注射用懸濁液として調製され得る。好適な親油性溶媒又はビヒクルには、ゴマ油等の脂肪油、若しくはオレイン酸エチル等の合成脂肪酸エステル、トリグリセリド又はリポソームが含まれる。水性注射用懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール又はデキストラン等の懸濁液の粘度を増加させる物質を含んでもよい。任意選択で、懸濁液はまた、高濃度の溶液の調製を可能にするために、好適な安定剤、又は活性成分の溶解度を増加させる薬剤を含んでもよい。

【0243】

代替として、活性成分は、使用前に、好適なビヒクル、例えば、発熱物質を含まない無菌の水ベース溶液を構成するための粉末形態であってもよい。

【0244】

本発明のいくつかの実施形態の医薬組成物は、例えば、カカオバター又は他のグリセリド等の従来の坐剤基剤を使用して、坐剤又は停留浣腸剤等の直腸組成物に製剤化されてもよい。

【0245】

本発明のいくつかの実施形態の医薬組成物はまた、血清半減期を高めるために持続放出用に製剤化されてもよい。このような持続放出系は当業者に周知であり、例えばマイクロカプセル及びナノ粒子が挙げられる。特定の実施形態によれば、タンパク質及びペプチドのためのＰｒｏＬｅａｓｅ生分解性ミクロスフェア送達システム（Ｔｒａｃｙ，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．１４，１０８；Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．２，７９５；Ｈｅｒｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．１５，３５７）、他の薬剤と共に又は他の薬剤なしで乾燥製剤として配合することができる、ポリマーマトリックス中にタンパク質を含有する生分解性ポリマーミクロスフェアから構成される乾燥粉末。

【0246】

本発明のいくつかの実施形態に関連する使用に好適な医薬組成物には、活性成分が意図された目的を達成するのに有効な量で含まれている組成物が含まれる。より具体的には、治療有効量は、処置されている対象の疾患又は障害（例えば、ＡＲＤＳ、コロナウィルス感染症などの感染症）の症状を予防、緩和、又は改善するのに有効な活性成分の量を意味する。

【0247】

治療有効量の決定は、特に本明細書で提供される詳細な開示に照らして、十分に当業者の能力の範囲内である。

【0248】

本発明の方法において使用される任意の調製物について、治療有効量又は用量は、最初にインビトロ及び細胞培養アッセイから推定することができる。例えば、用量は、所望の濃度又は力価を達成するように動物モデルにおいて処方することができる。そのような情報を使用して、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定することができる。

【0249】

本明細書に記載される活性成分の毒性及び治療有効性は、細胞培養又は実験動物におけるインビトロでの標準的な製薬手順によって決定することができる。これらのインビトロ及び細胞培養アッセイ並びに動物試験から得られたデータは、ヒトに使用するための様々な投与量を処方する際に使用することができる。投与量は、用いられる剤形及び利用される投与経路に応じて変動し得る。正確な処方、投与経路、及び投薬量は、患者の状態を考慮して個々の医師によって選択され得る。（例えば、Ｆｉｎｇｌ，ｅｔ ａｌ．（１９７５），「Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」，Ｃｈ．１，ｐ．１を参照されたい）。

【0250】

配列番号２のＡＤＮＰポリペプチドの完全な毒性評価については、Ｇｏｚｅｓ Ｉ．Ｆｒｏｎｔ Ｎｅｕｒｏｌ．２０２０年１１月２４日；１１：６０８４４４（その内容は参照により本明細書に完全に組み込まれる）を参照されたい。

【0251】

投与量及び間隔は、活性成分のレベルが生物学的効果（最小有効濃度、ＭＥＣ）を誘導又は抑制するのに十分であることを提供するために個々に調整され得る。ＭＥＣは調製毎に異なるが、インビトロデータから推定することができる。ＭＥＣを達成するために必要な投薬量は、個々の特性及び投与経路に依存する。検出アッセイは、血漿濃度を判定するために使用することができる。

【0252】

マウスモデルにおいて判定された用量は、他の種（例えば、ヒト及び疾患と診断された他の動物）の処置のために変更することができる。ＦＤＡによって承認された変換表は、Ｒｅａｇａｎ－Ｓｈａｗ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ．２２：６５９－６６１（２００７）に示されている。

【0253】

ヒト等価用量は以下のように計算される。ＨＥＤ（ｍｇ／ｋｇ）＝動物用量（ｍｇ／ｋｇ）×（動物Ｋ_ｍ／ヒトＫ_ｍ）。

【0254】

処置される状態の重症度及び応答性に依存して、投薬は単回又は複数回の投与であってもよく、処置のコースは数日から数週間続けられてもよく、又は治癒がもたらされるか、若しくは病状の緩和が達成されるまで続けられてもよい。標的患者集団は、神経変性状態が継続的な注意を必要とする遺伝的に障害のある個体を含むため、処置は、典型的には延長され、ほとんどの場合、長期に及ぶ処置過程となることが理解されよう。

【0255】

特定の実施形態によれば、ポリペプチドは、１日１回又は２回投与される。

【0256】

投与される組成物の量は、当然ながら、処置されている対象、苦痛の重症度、投与様式、処方する医師の判断等に依存するであろう。

【0257】

本発明のいくつかの実施形態によれば、ポリペプチドは、０．０００１ｍｇ／ｋｇ～１，０００ｍｇ／ｋｇの範囲の量で提供され、その間の任意の中間部分範囲及び値、例えば、１用量当たり０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、又は５００ｍｇ／ｋｇを含む。特定の実施形態によれば、ポリペプチドは、０．０５～０．１ｍｇ／ｋｇの範囲、例えば０．０８ｍｇ／ｋｇの量で提供される。より具体的な実施形態では、ポリペプチドは、０．０１ｍｇ／ｋｇ～２ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で提供され、その間の任意の中間部分範囲及び値、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１２９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４４、４５、４６、４７、４８、４９、又は５０ｍｇ／７０ｋｇ対象を含む。なおさらなる実施形態では、ポリペプチドは、１～４０ｍｇ／７０ｋｇ対象、特に５、１５又は３０ｍｇ／７０ｋｇ対象の範囲の量で提供される。

【0258】

特定の実施形態によれば、ポリペプチドは、０．１～１ｍｇ／ｋｇ、例えば０．４ｍｇ／ｋｇの範囲の量で、例えば皮下投与で提供される。

【0259】

特定の実施形態によれば、ポリペプチドは、０．０５～０．５ｍｇ／ｋｇ、例えば０．２ｍｇ／ｋｇ（７０ｋｇの対象に１５ｍｇ）又は０．０７ｍｇ／ｋｇ（７０ｋｇの対象に５ｍｇ）の範囲の量で、例えば鼻腔内に提供される。

【0260】

本発明の組成物は、必要に応じて、有効成分を含有する１つ以上の単位剤形を含有し得るパック又はディスペンサーデバイス、例えば、ＦＤＡ承認キットで提供され得る。パックは、例えば、ブリスターパック等の金属又はプラスチック箔を含み得る。パック又はディスペンサーデバイスには、投与のための説明書が添付されてもよい。パック又はディスペンサーはまた、医薬品の製造、使用、又は販売を規制する政府機関によって規定された形式の容器に関連する通知に対応してもよく、この通知は、組成物又は人間若しくは獣医学における投与の形態の、機関による承認を反映している。そのような通知は、例えば、処方箋医薬品に関する米国食品医薬品局によって承認されたラベル、又は承認された製品の添付文書であってもよい。適合性のある医薬担体に製剤化された本発明の調製物を含む組成物はまた、上記で更に詳述されるように、適応状態の処置のために調製され、適切な容器に入れられ、ラベル付けされ得る。

【0261】

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、±１０％を指す。

【0262】

「備える（comprises）」、「備える（comprising）」、「含む（includes）」、「含む（including）」、「有する」という用語及びそれらの変化形は、「含むが、それに限定されない」ことを意味する。

【0263】

「～からなる」という用語は、「～を含み、それに限定される」ことを意味する。

【0264】

「～から本質的になる」という用語は、組成物、方法、又は構造が追加の成分、ステップ、及び／又は部分を含み得るが、ただし追加の成分、ステップ、及び／又は部分が請求される組成物、方法又は構造の基本的かつ新規な特性を実質的に変更しない場合に限ることを意味する。

【0265】

本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他の意味を示さない限り、複数の参照を含む。例えば、用語「化合物」又はその。

【0266】

本出願を通して、本発明の様々な実施形態は、範囲形式で提示され得る。範囲形式での説明は、単に便宜及び簡潔さのためであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない制限として解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の説明は、全ての可能な部分範囲及びその範囲内の個々の数値を具体的に開示していると見なされるべきである。例えば、１～６等の範囲の説明は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６等の具体的に開示された部分範囲、並びに１、２、３、４、５及び６等のその範囲内の個々の数字を有すると見なされるべきである。これは、範囲の幅に関係なく適用される。

【0267】

本明細書で数値範囲が示される場合は常に、示された範囲内の任意の引用された数字（分数又は整数）を含むことを意味する。第１の表示数と第２の表示数との間の「範囲（ranging）／範囲（ranges）」及び第１の表示数「から」第２の表示数「までの範囲（ranging）／範囲（ranges）」という表現は、本明細書では互換的に使用され、第１及び第２の表示数、並びにそれらの間の全ての分数及び整数の数字を含むことを意味する。

【0268】

本明細書で使用される場合、「方法」という用語は、所与の作業を達成するための様式、手段、技術及び手順を指し、化学、薬学、生物学、生化学及び医学分野の従事者に既知の、又は彼らによって既知の様式、手段、技術及び手順から容易に開発される様式、手段、技術及び手順を含むが、それらに限定されない。

【0269】

本明細書で使用される場合、「治療すること」という用語は、状態の進行を抑止すること、実質的に阻害すること、遅延させること若しくは逆転させること、状態の臨床的症状若しくは審美的症状を実質的に改善すること、又は状態の臨床的症状若しくは審美的症状の出現を実質的に予防することを含む。

【0270】

特定の配列表を参照する場合、このような参照はまた、例えば、配列決定エラー、クローニングエラー、又は塩基置換、塩基欠失若しくは塩基付加を生じる他の変化から生じるマイナーな配列変動を含むとして、その相補的配列に実質的に対応する配列を包含すると理解されるべきであるが、ただし、このような変動の頻度は、５０ヌクレオチド中１未満、あるいは１００ヌクレオチド中１未満、あるいは２００ヌクレオチド中１未満、あるいは５００ヌクレオチド中１未満、あるいは１０００ヌクレオチド中１未満、あるいは５，０００ヌクレオチド中１未満、あるいは１０，０００ヌクレオチド中１未満である。

【0271】

明確にするために別々の実施形態に関連して説明される本発明のある特定の特徴は、単一の実施形態に組み合わせて提供することもできることが理解される。逆に、本発明の様々な特徴は、簡潔にするために、単一の実施形態の文脈で説明されているが、本発明の他の説明された実施形態では、別個に、又は任意の適切なサブコンビネーションで、又は適切に、提供されてもよい。様々な実施形態に関連して説明されるある特定の特徴は、実施形態がそれらの要素なしでは機能しない場合を除いて、それらの実施形態の不可欠な特徴と見なされるべきではない。

【0272】

上記で描写され、以下の特許請求の範囲で請求されるような本発明の様々な実施形態及び態様は、以下の実施例において実験的に裏付けられる。

【実施例】

【0273】

ここで、以下の実施例を参照するが、これは、上記の説明と共に、本発明のいくつかの実施形態を非限定的な方法で示している。

【0274】

一般に、本明細書で使用される命名法及び本発明で利用される実験手順には、分子、生化学、微生物学及び組換えＤＮＡ技術が含まれる。そのような技術は文献で十分に説明されている。例えば、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（１９８９）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｍ．編（１９９４）；Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，メリーランド州ボルチモア（１９８９）；Ｐｅｒｂａｌ，「Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ニューヨーク（１９８８）；Ｗａｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ」，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｏｏｋｓ，ニューヨーク；Ｂｉｒｒｅｎ ｅｔ ａｌ．（編）「Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｒｉｅｓ」、１－４巻，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，ニューヨーク（１９９８）；米国特許第４，６６６，８２８号、同第４，６８３，２０２号、同第４，８０１，５３１号、同第５，１９２，６５９号、及び同第５，２７２，０５７号に記載されている方法；「Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ」，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ｃｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｅ．編（１９９４）；Ｆｒｅｓｈｎｅｙによる「Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ－Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ」，Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，ニューヨーク（１９９４），第３版；「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＩＩ Ｃｏｌｉｇａｎ Ｊ．Ｅ．編（１９９４）。Ｓｔｉｔｅｓ ｅｔ ａｌ．（編），「Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（第８版），Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ，コネチカット州ノーウォーク（１９９４）；Ｍｉｓｈｅｌｌ ａｎｄ Ｓｈｉｉｇｉ（編），「Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ニューヨーク（１９８０）；特許及び科学文献、例えば、米国特許第３，７９１，９３２号同第３，８３９，１５３号同第３，８５０，７５２号同第３，８５０，５７８号同第３，８５３，９８７号同第３，８６７，５１７号同第３，８７９，２６２号同第３，９０１，６５４号同第３，９３５，０７４号同第３，９８４，５３３号同第３，９９６，３４５号同第４，０３４，０７４号同第４，０９８，８７６号同第４，８７９，２１９号、同第５，０１１，７７１、及び同第５，２８１，５２１に広く記載されている利用可能なイムノアッセイ；「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．編（１９８４）；「Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ」Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．及びＨｉｇｇｉｎｓ Ｓ．Ｊ．編（１９８５）；「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ」Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．及びＨｉｇｇｉｎｓ Ｓ．Ｊ．編（１９８４）；「Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ」Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．編（１９８６）；「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ」ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）；「Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」Ｐｅｒｂａｌ，Ｂ．，（１９８４）及び「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」Ｖｏｌ．１－３１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ。「ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，カリフォルニア州サンディエゴ（１９９０）。Ｍａｒｓｈａｋ ｅｔ ａｌ．，「Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ－Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ」ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９６）；を参照されたい（これらは全て、参照により本明細書に完全に記載されているかのように組み込まれる）。他の一般的な参考文献は、本文書全体で提供されている。その中の手順は、当該技術分野において周知であると考えられ、読者の利便性のために提供される。そこに含まれる全ての情報は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0275】

実施例１
ＡＤＮＰ症候群マウスモデルにおいて発見されたＮＡＰの新規効果
材料及び方法
Ｔｙｒマウスの作製、遺伝子型決定、及び育種－例えば（９９）に記載されている標準的な方法を使用してマウスを作製した。

【0276】

具体的には、５匹の異なるＧ２マウスをＧ４と交配させて、可能性のあるオフターゲットの影響を弱めた。全ての実験についての育種スキームは以下の通りであった。Ｔｙｒ雄Ｘ Ｃ５７ＢＬ６／ＮＪ雌。Ｃ５７ＢＬ６／ＮＪコロニーを、本発明者らの施設で５育種世代下で維持し、遺伝的ドリフト及びシフトを回避するためにＪａｃｋｓｏｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから受け取ったマウスを使用してリフレッシュした。マウスを、実験群に応じてｐ０－１又は離乳時のいずれかにおいて、尾先端を使用して遺伝子型決定し、タグを付けるか、又は入れ墨をした（カナダ、ケッチャム）。Ｐ０－１での性別を決定するために、マウスはまた、ＳＲＹに対するプライマーを使用してＹ染色体の存在についての遺伝子型とした。

【0277】

動物－動物を、１２時間の明／暗サイクル下で、自由に食物及び水を摂取させて収容した。仔マウスに、記載されているように（８、１２）、ＮＡＰ［アミノ酸配列ＮＡＰＶＳＩＰＱ（配列番号２）を有する、２５μｇ ＮＡＰ／１ｍＬ生理食塩水］を皮下投与した。２１日齢のマウスに、ビヒクル溶液中のＮＡＰ（「ＤＤ」－７．５ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌ、１．７ｍｇ／ｍｌのクエン酸、３ｍｇ／ｍｌのリン酸２ナトリウム２水和物、及び０．２ｍｇ／ｍｌの５０％ベンザルコニウム塩化物液）（０．５μｇ ＮＡＰ／５μｌ ＤＤ）（８、９、１２、及びＧｏｚｅｓの米国特許第１０，９１２，８１９号）を毎日鼻腔内投与した。これらのマウスは、以下に記載されるように行動分析を続けた。これらの実験は毎日の取り扱い及び投与を必要としたので、非侵襲性鼻腔内経路を選択した。行動実験中のマウスの年齢（週）（平均±ＳＥＭ）は以下の通りであった。キャットウォーク－９．２３±０．１５、グルーミング－１０±０．１５、社会的アプローチ－１０．５±０．１２、臭気識別－１２．１２±０．１３、ハンギングワイヤ－１３±０．１４、ホットプレート－１３．１８±０．１３。以前の実験（１２）に従って群の大きさを決定した。仔マウスを、性別及び遺伝子型に従ってＮＡＰ群又はＤＤ群のいずれかに無作為に割り当てた。動物に関する全ての手順は、テルアビブ大学及びイスラエル保健省の動物管理使用委員会の監督及び承認の下で行った。

【0278】

発達マイルストーン評価及び育成－この実験は、２つの実験バッチにおける１６匹の同腹仔からの動物を含んだ。これは、わずかな変更を加えて先に記載したように実施した（１２）。実験手順の間、実験者は性別及び遺伝子型を知らされなかった。統計的に有意な性差が発見されなかった場合、性別をグループ化した。

【0279】

キャットウォーク－以前に記載されている通りに行った（１２）。

【0280】

追加の行動評価－
育成：発達上のマイルストーン評価及び薬物処置に必要な毎日の取り扱いを可能にするために、優れた雌親であることが知られているＩＣＲ雌によってＴｙｒ仔マウスを育成した。Ｔｙｒ仔マウスを出生後、４８時間前までに出産したＩＣＲ雌マウスに移した。ＩＣＲ同腹仔を、追加されたＴｙｒ仔マウスの数に従って処分した。１日後、残りのＩＣＲ仔マウスを安楽死させ、Ｔｙｒ仔マウスのみを同腹仔中に残した。

【0281】

仔同腹分布分析：仮親を配置した後のｐ１での遺伝子型決定結果を、この測定に使用した。したがって、観察されたＴｙｒ仔マウスの減少は、子宮内での死亡又はｐ０からｐ１の間での死亡のいずれかを表す。

【0282】

発達上のマイルストーン評価：ｐ１で、Ｔｙｒ仔マウスに入れ墨を入れ、上記のようにＴｙｒ７１８突然変異及びＳＲＹの存在について遺伝子型決定した。同じ日の仔マウスを、遺伝子型及び性別の結果に従ってＮＡＰ又は生理食塩水処置群のいずれかに無作為化し、ｐ１からｐ２１まで発達マイルストーン評価を行った。動物無作為化は、特定の群について等しくない雄／雌比で終わり、４つの処置群のいずれにおいても性別間に統計的差異が見出されなかったため（Ｔ検定）、性別を分離することができなかった［これは、Ｔｙｒ群において性別間に有意差が観察された開眼を除いてである（Ｐ＝０．０４７、他の３つの処置群において有意でなかった）］。Ｐ１での識別のために３１ゲージ針及びタトゥーインク（Ｋｅｔｃｈｕｍ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｃｏ．、カタログ３２９ＡＡ）を使用して仔マウス足に入れ墨を入れ、Ｐ２１まで、身長及び体重について毎日測定し、開眼について観察した。先に記載したように、試験の１時間前に、仔マウスにＮＡＰを毎日注射した^１。

【0283】

簡潔には、耳の単収縮反射のために、生後７～１５日の間、又は仔マウスが２日間連続して正しく応答するまで、耳の先端に対して綿チップを３回穏やかにブラッシングした。空中立ち直り反射については、仔マウスを逆さまに保持し、５ｃｍの削りくずを含むケージの約１０．５ｃｍ上に放った。試験は、生後８～２１日の間、又は仔マウスが４本の足全てで削りくず上に着地するまで、２日間連続して行った。表面立ち直り反射については、仔マウスを水平な表面上に仰向けに置き、生後１～１３日の間に仔マウスが４本の足全てを表面上に置いて２日間連続して１秒未満で正すことができるまで試験を行った。開眼については、両眼が開く（眼瞼が完全に分離する）まで、マウスを毎日観察した。聴覚驚愕のために、仔マウスを水平表面上に置き、実験者は、目に見える驚愕反応が２日間連続して明らかになるまで、２回大音量で強打した。試験は７～１８日目に行った。絶壁回避のために、仔マウスを小さな箱（高さ約４ｃｍ）の端に置き、両足を箱の端から突き出した。仔マウスを３０秒間断崖から回避させ、後ろに移動させた。試験は、１～１４日目の間に、仔マウスが連続２日間、３０秒未満で断崖を回避するまで行った^９。ルーティング反射のために、仔マウスがその頭をストロークの方向に移動させるまで、仔マウスの口の側部に対して綿の先端を穏やかにブラッシングした。両側を２回試験した。仔マウスが綿チップストロークに対して目に見える反応を示すまで、１～１２日目の間に試験を行った。全ての試験は午前１０時～午後４時の間に行った。生後最初の５日間、各仔マウスを試験中に単一の６０ワット電球下に置き、子の暖かさを確保した。

【0284】

新規物体認識－簡潔に述べると、両方の試験が同じ領域で行われるので、馴化の初日にオープンフィールド試験を使用した。翌日、動物を領域に更に慣れさせた（５分間）。記載されるように、試験は、２日間の連続した馴化及び３つの相からなる実験日を含んでいた。第１相（馴化）において、オープンフィールド装置（５０×５０ｃｍ）は、２つの同一の物体（プラスチック又は金属、４×５ｃｍ２）を含み、マウスを壁に面して装置に配置し、物体を自由に探索させた（５分間）。ホームケージに３時間入れた後、マウスを第２相（短い保持選択相－データは示さず）のために３分間装置に戻し、その間に見慣れた物体の１つを新しい物体と交換した。第２相の完了から約２４時間後に、マウスを長期保持選択相のために装置に入れ、その間に見慣れた物体の１つを新規物体と交換した。第２相と第３相の間、マウスをそのホームケージに保持した。ＥｔｈｏＶｉｓｉｏｎ ＸＴビデオ追跡システム及びソフトウェア（Ｎｏｌｄｕｓ Ｉｎｃ．、バージニア州リーズバーグ）を用いて、各物体を嗅ぐ／触れるのに費やした時間を測定した。識別能力式：Ｄ２＝（ｂ－ａ）／（ａ＋ｂ）（式中、「ａ」はなじみのある物体の探索時間を示し、「ｂ」は新規物体の探索時間を示す）を使用してデータを分析した。

【0285】

社会的アプローチ：プレキシガラスボックスを、２つの取り外し可能な扉によって分離された、それぞれ２０ｃｍ（長さ）×４０．５ｃｍ（幅）×２２ｃｍ（高さ）の３つの隣接するチャンバに分割した。スチールワイヤカップ（１０．１６ｃｍ（直径）、１０．８ｃｍ（高さ））を、標的マウスのための封じ込め及び無生物物体の両方として使用した。実験は、マウスの明相の間に薄暗い領域で行った。馴化試験の前日に、標的マウス（雄は雄、雌は雌）を、３回の１０分間のセッションの間、側部チャンバのうちの１つのワイヤカップ内に配置した。翌日、各対象マウスを３相：Ｉ及びＩＩ（５分間）の馴化相（偏りがないことを確実にする）並びにＩＩＩ（１０分間）の実験相の実験で試験した（単純なタイマで測定）。第ＩＩＩ相では、空のワイヤカップ（新規物体）を右チャンバ又は左チャンバの中心に置き、標的マウスを含むカップを他方のチャンバの中心に置いた。空のワイヤカップ（新規物体）及び新規マウスの位置を釣り合わせて、混乱させる側の選好を回避した。次いで、ドアを取り外し、１０分タイマを開始した。３チャンバ装置をマウス間で洗浄した。ＥｔｈｏＶｉｓｉｏｎ ＸＴビデオ追跡システム及びソフトウェア（Ｎｏｌｄｕｓ Ｉｎｃ．バージニア州リーズバーグ）を使用して、マウスの動き及び探索行動を追跡及び記録した。

【0286】

臭気識別：手短に言えば、臭気は、領域（２０×４０）の角に置かれた穿孔された小さな物体の内側に隠された綿片に提示された。試験マウスを新鮮な削りくずの入った清潔なケージに入れた。各マウスを、提示の間に２分の間隔、及び異なる臭気の提示の間に３分の間隔で、各臭気について３回連続して２分間試験した。ｘ軸は、臭気曝露期間の連続数を示す。マウスがスワブを嗅ぐ時間を、ＥｔｈｏＶｉｓｉｏｎ ＸＴビデオ追跡システム及びソフトウェア（Ｎｏｌｄｕｓ Ｉｎｃ．Ｌｅｅｓｂｕｒｇ，ＶＡ）を使用して記録した。

【0287】

グルーミング：試験マウスを５０×５０の白色プレキシガラス領域内に１５分間置いた。グルーミング行動検出も可能にするＥｔｈｏＶｉｓｉｏｎ ＸＴビデオ追跡システム及びソフトウェア（Ｎｏｌｄｕｓ Ｉｎｃ．、バージニア州リーズバーグ）を使用してマウスの動き及び探索行動を追跡及び記録した。

【0288】

ハンギングワイヤ試験：各マウスについて３回の試験を行った。マウスの足の強度の評価は、金属ワイヤ（表面から５０ｃｍ上に置いた）から柔らかい寝具上に落ちるまでの待ち時間（最大時間９０秒）を測定することによって行った。

【0289】

ホットプレート：マウスを５５℃のホットプレート上に置いた。マウスが跳躍するか、後足を又は舐めるまで、痛覚までの待ち時間を判定した。最大時間は９０秒であった。

【0290】

キャットウォーク：簡単に述べると、ＣａｔＷａｌｋ ＸＴ（Ｎｏｌｄｕｓ Ｉｎｃ．バージニア州リーズバーグ）を使用して、^１０マウスは、一貫した様式でＣａｔＷａｌｋ ＸＴ装置の滑走路を横断しなければならず、動物がいかなる中断又は躊躇もなく走路を走行した場合、走行の成功と定義した。３回の実験が成功するまで、全てのマウスを試験した。

【0291】

支持基底面積は、前足又は後足のいずれかの間の平均幅である。遊脚（秒）又は遊脚期は、足がガラスプレートに接触しない時間（秒）である。遊脚速度は、遊脚中の足の速度（距離単位／秒）である。最大接触最大強度は、足の最大接触時の最大強度である。強度は、任意単位で０～２５５の範囲である。プリントの強度は、足とガラスプレートとの間の接触の程度に依存し、体重の増加と共に増加する。したがって、強度は、ガラスプレート上に置かれた重量の尺度である。

【0292】

強度パラメータを使用して、機械的アロディニアを含む神経障害性疼痛の影響を評価する。最大接触平均強度は、最大接触時の足の平均強度である。プリント長さは、完全なプリントの長さ（水平方向）である。完全なプリントは、あたかも動物の足がインク付けされたかのように、ガラスプレートとの全ての接触の合計である。プリント幅は、完全な足の幅（垂直方向）である。印刷面積は、完全な印刷の表面積である。最大強度は、完全な足の最大強度である。平均強度は、完全な足の平均強度である。

【0293】

ＵＳＶ：Ｐ８に、各仔を雌親から分離し、静かな部屋の空のケージに６分間入れ、Ｍ５００－３８４ ＵＳＢ Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ Ｍｉｃｒｏｐｈｏｎｅ（Ｐｅｔｔｅｒｓｏｎ、スウェーデン）を使用して記録した。上に列挙した入れ墨を使用して仔マウスを互いに区別した。６分後、仔マウスをその母マウスと再結合させた。ＤｅｅｐＳｑｕｅａｋを用いてデータを分析した。データをＤｅｅｐＳｑｕｅａｋにロードし、４０～７０ｋＨｚの周波数をマウスコールネットワークＶ２を使用して分析した。コールは、事後ノイズ除去ネットワークを使用してノイズ除去した。構文解析のために、Ｗｒｉｇｈｔ Ｋ平均ネットワークを使用して構文を分類した。ＤｅｅｐＳｑｕｅａｋ及びＭａｔｌａｂを使用して、構文遷移確率チャートを生成した。さらなるＵＳＶ実験を、わずかな改変を加えて先に記載したように（１２）、Ｐ８仔マウスに対して行った。

【0294】

スパイン定量化－樹状突起スパイン形態の決定のために、Ｔｙｒ－ＧＦＰマウスモデルを使用し、記載されているように作製した（１２）。１．５～２ヶ月齢のＴｙｒ－ＧＦＰ－マウスを、腹腔内ＮＡＰ注射（０．４μｇ／０．１ｍＬ生理食塩水）又は０．１ｍＬ生理食塩水のいずれかで９日間連続して処置した。９日目、マウスを灌流し、免疫組織化学及びイメージングに供した（１２）。

【0295】

ＡＴ８免疫組織化学－実験を先に記載したように行った（１００）。マウスを、毎日の鼻腔内ＤＤ／ＮＡＰで６週間処置し、１０．２１±０．０５週齢で安楽死させた。

【0296】

ＶＥＰ－５．７２±０．５２週齢の雄マウスをＶＥＰ測定に使用した。動物を０．１ｍＬのＳ．Ｃ生理食塩水で３日間処置し、記録し、その後、１μｇのＮＡＰ（０．１ｍＬ生理食塩水中）又は０．１ｍＬ生理食塩水のいずれかのＳ．Ｃ用量を４日間毎日投与し、その後、別のＶＥＰ記録を行った。

【0297】

ＲＮＡ ｓｅｑ－全ＲＮＡを１４週齢のマウス脾臓から抽出し、詳述されるようにＮｅｘｔＳｅｑ５００システム（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）で標準的な方法を使用して配列決定した。データを以前に記載したように分析した（９）。

【0298】

マイクロバイオーム－糞便試料を１２．２±０．１９週齢のマウスから収集した。試料を調製し、以前に記載したように分析した（５７）。対数変換を適用した後に、マイクロバイオームデータを分析した。

【0299】

統計分析－全ての統計的方法は、適切な図の説明に記載されている。Ｐ≦０．０５を統計的に有意であると見なし、全ての検定を両側検定とした。データを、正規性検定によって正規分布についてチェックした。結果を平均±ＳＥＭとして示す。２つの異なるカテゴリ的に独立した変数について、二元配置分散分析又は二元配置反復測定分散分析、続いてテューキー事後解析を行った。対応のないスチューデントｔ検定、マン－ホイットニーＵ検定又は一元配置分散分析、Ｘｉ二乗又は二項検定を、適用可能な場合に実施した。微生物叢データ相関のためにピアソン相関を行った。発達マイルストーン測定、インビボ挙動試験、微生物叢データ及び樹状突起スパイン定量化のために、グラブス検定を使用して外れ値を除外した。統計分析は、ＳｉｇｍａＰｌｏｔ １２．５（Ｓｙｓｔａｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．ｉｎｃ．，米国カリフォルニア州）又はＰｒｉｓｍ ８（ＧｒａｐｈＰａｄ，米国カリフォルニア州）ソフトウェアで行った。

【0300】

結果
ゲノム編集及びマウスモデル生成：
ＮＭ＿００１３１００８６（Ａｄｎｐ＿ｖ００１）：を有する新規マウスモデル（以下、「Ｔｙｒ」）：ｃ．２１５４Ｔ＞Ａ、ｐ．Ｔｙｒ７１８^＊変異（最も一般的なヒトＡＤＮＰ ｐ．Ｔｙｒ７１９^＊変異と相同）を、標準的なＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９技術を使用して生成し、特徴付けた（下記）。

【0301】

Ｔｙｒ遺伝子型は、ＮＡＰ矯正を伴う若年期事象に対して主要な効果を有する：ＡＤＮＰ症候群患者は、発育遅延を患う（２４）。したがって、本発明者らは、Ｔｙｒマウスが同様の異常を示すかどうか、及びそれらがＡＤＮＰポリペプチドＮＡＰ［アミノ酸配列ＮＡＰＶＳＩＰＱ（配列番号２）を有する］での処置によって可逆的であるかどうかを調査した。バックグラウンド株Ｃ５７ｂｌ／６ＮＪ雌親は、毎日の仔マウスの取り扱い、ＮＡＰ投与及び試験を可能にしなかったので、フォスターＩＣＲ雌親を使用した。育成直後の遺伝子型決定により、Ｔｙｒ Ｐ１生存仔マウスにおいて、予想された５０％から４３％への有意な減少が検出された（図１Ａ）。生存しているＴｙｒマウスは、前庭反射の獲得の遅延を示した（図１Ｂ）。表面立ち直り（平坦な表面上の４本の足全てでそれ自体を正す仔マウスの能力）及び空中立ち直り（獲得の初日として測定される、空中で正しい向きに正す能力）の両方が、遺伝子型に起因して遅延した（それぞれ、ＷＴ：８．６９±０．４２及びＴｙｒ：１０．１４±０．３６、ＷＴ：１２．９６±０．２８及びＴｙｒ：１５．２９±０．１５）。ＮＡＰは、両方の反射に対して有意な治療効果を示し、表面立ち直りをほぼ正常化し（８．８１±０．３３）、空中立ち直り応答を促進した（１４．６３±０．３８）。更に、遺伝子型の差異が、耳の単収縮及び断崖回避行動において発見された（データは示さず）。興味深いことに、Ｔｙｒ仔マウスは、聴覚驚愕反射において示されるように（データは示さず）、対照に対して有意に遅く聴覚を開始した。更に、ＮＡＰは、Ｔｙｒマウスにおいて乳探索を誘導し、断崖回避応答を除いてＷＴ同腹仔に対して効果を有さなかった（データは示さず）。

【0302】

更に、脳の発達が顔面の発達に影響を及ぼすことが知られており（３８）、雌ＴｙｒマウスはＷＴ雌よりも１日遅く眼を開き（それぞれ１６±０．３７及び１４．９３±０．４３）、ＮＡＰはこの効果を完全に逆転させる（１４．７８±０．４６）ことが見出された（図１Ｃ）。次に、性別を、統計的差異により分けた。雄では遺伝子型／ＮＡＰ効果は観察されなかった（データは示さず）。同様に、ＮＡＰ効果はＷＴ雌において観察されなかった（データは示さず）。

【0303】

更に、ＡＤＮＰ症候群患者は、体重減少及び低身長を示す（２４、２５）。したがって、Ｔｙｒ仔マウスの体重及び長さを評価した。雌Ｔｙｒ仔マウスは、Ｐ１０から開始して、ＷＴ同腹子よりも体重が少なかった（図１Ｄ）。ＮＡＰの有益な効果はＰ１０から見ることができ、Ｐ２０～２１で有意に達し、ＷＴ雌マウスでは効果は観察されなかった（データは示さず）。Ｔｙｒ雌仔マウスはまた、Ｐ１０から始まるＷＴ仔と比較して、より短い身長を示した（データは示さず）。雄の仔マウスの体重及び長さについて有意差は観察されず、成体の体重について大きな差は観察されなかった（データは示さず）。

【0304】

Ｔｙｒマウスは、異常な行動、運動、社会的及び感覚的形質を示す：ナイーブ雄Ｔｙｒマウス（仮親又は任意の以前の取り扱いに曝露されていない）は、新規物体認識試験において長期記憶障害を示した（データ示さず）。更に、両性のナイーブＴｙｒマウスは、社会的アプローチ課題において障害を示した（データは示さず）。これらの差異は、おそらく早期の取り扱い（３９）及び育成（３９～４１）に起因して、処置コホートにおいて失われ（データは示さず）、早期行動介入処置がＡＤＮＰ小児に有用であり得ることを示唆した（２５）。それにもかかわらず、反復行動、重要なＡＳＤ特徴は、グルーミング頻度及び持続時間を測定することによって評価された（４２）。Ｔｙｒマウスは、両方のパラメータの増加を示した（データは示さず）。ホットプレート（感覚）及びハンギングワイヤ（運動）試験における遺伝子型効果も観察された（データは示さず）。更に、雄及び雌両方のＴｙｒマウスは、ＷＴと比較して損なわれた臭気識別を示し、雌においてＮＡＰ逆転を示した（データは示さず）。ＮＡＰは、ＷＴマウスに対して様々な軽微な効果を示した（データは示さず）。

【0305】

ＮＡＰは、Ｔｙｒ突然変異によって引き起こされる歩行障害から保護する。
ＡＤＮＰ症候群患者は、歩行の遅延及び異常を示す（２４、２５）。これに関して、Ｔｙｒマウスを見ると、Ｃａｔｗａｌｋ－ＸＴシステムによって測定された複数の歩行パラメータにおいて遺伝子型異常が観察された（データは示さず）。興味深いことに、顕著な性差が観察された。図１Ｅは、雄の結果をグループ化したものであり、Ｔｙｒマウスは、有意なＮＡＰ回復を伴って、ＷＴマウスに対してプリント長及び面積の増加を示している。雄及び雌の両方のＴｙｒマウスは、より小さい前側支持基底面を示し、ＮＡＰは雄においてこの表現型を修正した。図１Ｆにおいて、雌Ｔｙｒマウスは、ＷＴ雌と比較して、より遅い遊脚速度を示し、遊脚持続時間の増加を伴い、ＮＡＰによって改善された。有意なＮＡＰ補正を有するＴｙｒ及びＷＴ雌を比較した場合、様々な強度パラメータの有意な減少も発見された。全体として、これらの結果は、歩行がＴｙｒ遺伝子型によって有意に損なわれ、雌におけるより重度の表現型がＮＡＰ処置によって改善されたことを示した。ＷＴマウスでは大きなＮＡＰ効果は観察されなかった（データは示さず）。

【0306】

超音波発声（ＵＳＶ）は、ＮＡＰ矯正を有するＴｙｒマウスにおいて劇的に損なわれる：
ＡＳＤ及びＡＤＮＰ症候群は初期発達に影響を及ぼし、多くの患者が発話及びコミュニケーション遅延に対する重度の影響に苦しんでいる（２４、２５、４３）。したがって、Ｔｙｒ発声を、仔－雌親分離（ＵＳＶを産生するための信頼できる再現可能な方法（４４））を使用して評価した。性別の違いは、Ｐ８仔マウスＵＳＶにおいて以前に記載されているため（４５）、性別を別々に分析した。雌（１８６．６±２４．３６から６４．７８±１７．１６へ）及び雄（１４９．８±３１．０７から４０．３６±９．８８へ）によって産生された総ＵＳＶにおける有意な遺伝子型減少が観察され、ＮＡＰ効果はなかった。

【0307】

仔マウスによって誘発される音節の構文は、非ランダムであり、発達と共に変化することが実証されており、したがって、ＡＳＤ／ＩＤの一面を表す（４６）。機構的には、複雑度の変化は、仔マウスがそれ自体を残りの仔マウスから区別し、栄養の機会を増加させる方法であり得る（４６）。ＤｅｅｐＳｑｕｅａｋ（４７）を使用して、構文複雑度を評価した。複雑度の明らかな低下が、ＷＴとＴｙｒ雌との間で発見され（図２Ａ）、Ｔｙｒ雌は、トリル音節を失い、より少ない遷移を実行した。雄では（図２Ｂ）、同様の顕著な複雑度の低下が観察された。重要なことに、ＮＡＰは、両性に対して強力な矯正効果を示した。ＮＡＰ処置Ｔｙｒ雄は、ＷＴ及びＴｙｒ仔マウスよりも２倍多くの音節を発声した（ＷＴ及びＴｙｒについて８つ、スプリット及びトリル音節の追加を伴うＴｙｒ ＮＡＰについて１０）。この効果の統計的定量化（図２Ｃ～Ｄ）は、Ｔｙｒ仔マウスがＷＴ同腹仔よりも成績が悪く、ＮＡＰが効果を改善したことを実証した。また、ＮＡＰは、ＷＴ仔マウスに対してわずかに変動した影響を有した（データは示さず。）。ＷＴ雌は、性差を反映して、ＷＴ又はＴｙｒ雄よりも豊富な構文を示した（データは示さず）。

【0308】

樹状突起スパイン密度及び形態は、ＮＡＰ矯正と相まって、Ｔｙｒマウスにおいて有意に損なわれる。
樹状突起スパイン異常は、この部位でのＡＤＮＰの既知の機能と相まって（１２、４９）、ＡＳＤの重要な分子的原因であると長い間考えられてきた（４８）。ここで、著しい性二分法を伴う有意な遺伝子型変化が発見された。雄Ｔｙｒマウスは、ＣＡ１海馬樹状突起スパインの約１５％の減少を示し（図３Ａ）、完全なＮＡＰ逆転を示した（スパイン密度の約２３％の増加、図３Ｂ）。スパインを異なる形態学的サブタイプ（マッシュルーム、切り株型、及び薄型）に分割した場合、雄において同様のパターンが観察され、雌における遺伝子型若しくは処置の変化、又は全スパイン及びサブタイプに関してＷＴ雄に対する処置効果はなかった（データは示さず）。雄海馬効果を反映して、完全なＮＡＰ改善（約１７％の増加、図３Ｂ）と相まって、スパイン密度の有意な約１６％の減少が雌運動皮質Ｌ５層において観察された（図３Ａ）。雄では遺伝子型又は処置の変化は観察されず、ＷＴ雌では処置効果は見られなかった（データは示さず）。スパインを異なるサブタイプに分けた場合、同じ遺伝子型効果がマッシュルーム型スパイン及び切り株型スパインにおいて観察され、ＮＡＰは、より大きく、機能的により強いマッシュルーム型スパインに有意に影響を及ぼした（図３Ａ）。雄及びＷＴ雌ではＮＡＰ効果は見られなかった（データは示さず）。海馬におけるＰＳＤ９５体積を詳細に見ると、雌のみにおいて約２５％の遺伝子型減少が観察され、ＮＡＰ処置時に完全に消散した（図３Ａ）。

【0309】

雄Ｔｙｒマウスは、海馬及び視覚野において過剰リン酸化タウ沈着を示す。
次に、本発明者らは、Ｔｙｒ変異によって引き起こされる細胞傷害を更に調査しようとした。死亡したＡＤＮＰ症候群患者におけるタウオパチーの最近の知見（２７）に続いて、若いＴｙｒマウスがタウオパチーの証拠を示したかどうか疑問であった。本発明者らは、Ｔｙｒ雄がＡＴ８（病的タウ過剰リン酸化）陽性細胞の有意な約１．８４倍の増加を有し、海馬において完全なＮＡＰ逆転（約２．５７倍の減少）を伴うことを発見した（図３Ｃ～Ｄ）。この知見は、視覚皮質に更に拡張され、雄に対する同じ遺伝子型効果：ＮＡＰの約２倍の有意な逆転と相まって、ＡＴ８染色の有意な約１．７倍の増加を実証した（図４Ａ～Ｂ）。雌は有意な効果を示さず、ＷＴ雄はＮＡＰ効果を示さなかった（データは示さず）。別の過剰リン酸化タウ特異的抗体（ＡＴ１８０）は同様の傾向を示し、ＡＴ８陽性細胞とＡＴ１８０陽性細胞とを組み合わせることにより、両性においてＮＡＰによる補正を伴う有意なＴｙｒ遺伝子型の増加が明らかになった（データは示さず）。

【0310】

雄Ｔｙｒマウスは、ＮＡＰの改善を伴う異常な視覚誘発電位（ＶＥＰ）を示す。
上記のタウオパチーの結果を得たので、本発明者らは、これらの変性変化が脳シナプス機能に影響を与えるかどうかを問うた。この点において、ＶＥＰは、ＡＤ病理（５０）及び最も重要なことにはＡＳＤ（５１）と関連付けられている。更に、重度の視覚障害がＡＤＮＰ症候群患者において以前に報告されている（５２、５３）。初期の予備実験は、Ｔｙｒ雄対雌においてより強固で再現性のある表現型を示した（データは示さず）。したがって、ＮＡＰ効果をＴｙｒ雄において評価した。Ｔｙｒ雄とＷＴ雄との間に著しい差が観察され、短期ＮＡＰ処置（４連続１日用量）は、これらの効果を正常化した（図４Ｃ）。３つの異なる刺激強度（１００、３００、及び３０００ｍｃｄ、図４Ｄ）に対する応答としての３つのＶＥＰ主要波形（Ｐ２、Ｎ２及びＰ３）の曲線下面積（ＡＵＣ）は、Ｐ２において有意な遺伝子型効果（全ての強度において約１．７倍の増加）を示し、ほぼ完全なＮＡＰ逆転（約１．６～２．３倍の減少）を示した。同じ有意な変化がＮ２について観察された（図４Ｅ）。Ｐ３（図４Ｆ）に関しては、有意な遺伝子型効果が３つの強度全てにおいて検出され、有意なＮＡＰ効果が３００及び３０００ｍｃｄ強度において見られた。

【0311】

差次的に発現された遺伝子の雌Ｔｙｒマウスは、特異的な血液バイオマーカーを明らかにする：ＡＤＮＰ症候群の小児は、その健康な兄弟姉妹と比較して再発性感染症に罹患しており（２４）、免疫系が損なわれている可能性があることを証明している。更に、以前のＲＮＡ－ｓｅｑ結果は、いくつかのＡＤＮＰ症候群突然変異を有するリンパ芽球様細胞における主要な共有免疫関連変化を明らかにした（１２、２７）。最後に、ＡＤＮＰ症候群を層別化するエピシグネチャーである血液ＤＮＡメチル化パターンは、表現型との適度な相関を示す（５４）。したがって、ＲＮＡ－ｓｅｑを、Ｔｙｒマウス、ＷＴ同腹仔、及びＮＡＰ処置Ｔｙｒマウスに由来する脾臓に対して行った。結果（図５）は、５つの共通の転写物、すなわち、ＳＭＯＸ（スペルミンオキシダーゼ）、ＡＲＲＢ１（アレスチンβ１）、ＡＤＣＹ６（アデニル酸シクラーゼ６）、ＦＯＸＯ３（フォークヘッドボックスＯ３）、及びＣＰＸＭ１（カルボキシペプチダーゼＸ、Ｍ１４ファミリーメンバー１）が、以前に試験された患者由来のＡＤＮＰ変異リンパ芽球様細胞全てによって調節解除されたものとして共有されていることから、雄に対する非常に軽微な遺伝子型／ＮＡＰ効果、及び雌に対するより包括的な効果を明らかにした。２つの追加のＡＤＮＰ／ＮＡＰ調節タンパクは、ヒト相同突然変異ｐ．Ｔｙｒ７１９^＊［ＳＴＯＭ（ストマチン）、ＤＮＡＪＢ４（ＤｎａＪ熱ショックタンパク質ファミリー（Ｈｓｐ４０）メンバーＢ４］、並びにＴＭＣＣ２（膜貫通及びコイルドコイルドメインファミリー２）（ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１突然変異を有する）とのみ共有され、アミロイド前駆体タンパクを調節することが以前に見出された（５５）。分泌タンパク質のデータベースは、これらのタンパク質のほとんどがヒト血漿中に見出され得ることを明らかにし、雌に対する潜在的特異性を有するＡＤＮＰ症候群の新規バイオマーカーを示唆した（データは示さず）。機構的観点から、ＡＤＮＰ関連タンパク質ＳＭＡＲＣＡ４（転写活性化因子ＢＲＧ１）を含むタンパク質－タンパク質相互作用分析（ｓｔｒｉｎｇ－ｄｂ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／）を実施した（７）。ヒトにおける性行動に関与するＴＣＦ１２（転写因子１２）及びＴＣＦ２１（転写因子２１）もまた（５６）、Ｔｙｒマウスにおいて観察された顕著な性的二分化のために分析に含まれた。結果は、Ｔｙｒ遺伝子型によって影響を受け、ＮＡＰによって矯正される、成長の主要な調節因子であるＡＫＴ１に対する収束機構、並びに神経系及び生殖系の発達における関与を示した（図５）。

【0312】

Ｔｙｒマウスは、腸内微生物叢組成の差次的調節を示す。
続いて、本発明者らは、末梢バイオマーカーの蓄積を更に拡大することを望んだ。Ａｄｎｐ^＋／－マウスが性的に二分された微生物叢シグネチャーを示すことを考慮して（５７）、本発明者らは、Ｔｙｒマウスも微生物叢シグネチャーを示すかどうか、及びこれがＮＡＰ処置によって矯正され得るかどうかを調査しようとした。結果は、雄Ｔｙｒマウスが、総真正細菌負荷（ＥｕｂＶ３）、ビフィドバクテリウム属（ＢＩＦ）及びラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏ）の増加、並びに腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏ）の負荷の減少を示すことを示した。この雄表現型は、ＥｕｂＶ３についてのＮＡＰ処置で補正された。雌Ｔｙｒマウスは、ＮＡＰ補正を伴うＢＩＦの細菌負荷の増加を示す（図６Ａ）。ＮＡＰは、これらの細菌株についてＷＴマウスに対して効果を有さず、クロストリジウムコッコイデス群（ｇＣｃｏｃ）及びマウス腸内バクテロイデス（ＭＩＢ）細菌株に対する他の様々な効果を有した（データは示さず）。これらの結果に続いて、本発明者らは、Ａｄｎｐ^＋／－マウスと同様に、これらの菌株量が体重及び運動能力（キャットウォーク性能）と相関するかどうかを更に評価した（５７）。実際、いくつかの相関が明らかにされ、雌において最も顕著であり、これは、ＢＩＦ細菌と体重との間、並びに多くのキャットウォークパラメータとの強い負の相関を示した。Ｅｎｔｅｒｏ及びｇＣｏｃｃ株についても相関関係が発見された。更に、細菌群間の関係を調べたところ、雄は雌よりも多数の有意な相関を示し、性別間ではほとんど重複しないことが示された（ＧｏｚｅｓのＰＣＴ公開第２０１９０７４０１号を参照）。

【0313】

提案されたメカニズム：
理論に束縛されるものではないが、本発明者らは、以下のメカニズムを提案した。ＡＤＮＰ／ＮＡＰ保護活性の重要な標的は、軸索輸送及び樹状突起スパイン形成に重要な微小管末端結合タンパク質ＥＢ１及びＥＢ３であり、タウ－微小管結合を増強し、タウオパチーから保護する（９、１１、１２、２１、３２）。ＡＤＮＰにおける突然変異荷重の増加は、タウオパチーと相関し、ＮＡＰは、ＡＤＮＰ突然変異に直面してタウ－微小管相互作用の減少を防ぐ（２１、２７）。上記のように、タウオパチーを推進するＡｄｎｐ Ｔｙｒ突然変異についてのインビボでの証拠が提供され、ＮＡＰによる保護が確立された。機能的相関物、例えばＶＥＰが明らかになった。神経筋接合部は、ＡＤＮＰ／ＮＡＰに関連する微小管完全性に更に依存し（２９、５８）、ＥＢ１／微小管／ＡＤＮＰもまた、免疫シナプスの機能に重要であり（５７）、ＡＤＮＰ／ＮＡＰの活性の幅を説明することを加えることが重要である。アルツハイマー病が主要なタウオパチーであることから、この疾患からの教訓は、アルツハイマー病における駆動機構が体細胞突然変異（ＡＤＮＰを包含する）を含み得（２１）、本明細書で観察されるように、ＡＫＴ１経路で終わる（１２，５９）ことを教示している。最後に、ＡＤＮＰによって調節されるテストステロンを用いて（２７）、微小管系を制御して（２８）、テストステロンを減少させてタウオパチーを増加させて（３６）、エストロゲンをレスキューしてＡＤＮＰノックアウト効果を用いてアフリカツメガエル及び脳発生のヒトモデルにおいて（６０）、性依存性を考慮しなければならない（図６Ｂ）。

【0314】

Ｔｙｒマウスはハプロ不全マウスモデルを補完し、ヒトＡＤＮＰ症候群患者を模倣する。
以下の表４は、新しいＴｙｒマウスをヒト条件と、並びにＡｄｎｐ^＋／－マウスと比較する（１２）。Ａｄｎｐ^＋／－マウスは、非常に広範な性的二分（９、１２、１６、６１、６２）を示すが、Ｔｙｒマウスは、性別間で更に広範な差異を示した。顕著な例は、樹状突起スパイン及び運動表現型である。Ｔｙｒマウスは、早期死亡、不完全な構文、性依存的発育遅延（例えば、開眼）、及び感覚欠損（ホットプレート）を含むいくつかの以前に未知の表現型を示した。遺伝子発現パターンに関して、脾臓遺伝子発現は、Ｔｙｒモデルの雌では（雄と比較して）はるかに広範囲であったが、Ａｄｎｐ^＋／－マウスモデルでは、遺伝子発現は、（同じ遺伝子ではないが）両性で同程度に変化した。それにもかかわらず、両方のマウス系統において、調節されたタンパク質はＡｋｔ１に収束した。興味深いことに、腸内微生物叢は、Ａｄｎｐ^＋／－モデルと同様のＴｙｒモデル変化を示した（５７）（ＧｏｚｅｓのＰＣＴ公開第２０１９０７４０１号を参照されたい）。更に、タウ沈着物は、１１ヶ月齢Ａｄｎｐ^＋／－雄マウス脳において観察されたが（８）、Ｔｙｒマウスにおいて、性特異的タウオパチーは、はるかに若い雄（２．５ヶ月齢）において観察され、ＶＥＰ障害と相まって、両方ともＮＡＰ処置によって改善され、ヒト状態と相関した（２７、５１）。

【0315】

【表4】

ＮＡＰ処置（＋）による補正を含む、以前に未知であったＡＤＮＰ関連表現型に下線を付す。

【0316】

実施例１の参照文献：
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２３．Ｌａｒｓｅｎ Ｅ，Ｍｅｎａｓｈｅ Ｉ，Ｚｉａｔｓ ＭＮ，Ｐｅｒｅａｎｕ Ｗ，Ｐａｃｋｅｒ Ａ，及びＢａｎｅｒｊｅｅ－Ｂａｓｕ Ｓ．Ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｖａｒｉａｎｔ ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ ｒａｎｋｉｎｇ ｇｅｎｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｕｔｉｓｍ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｕｔｉｓｍ．２０１６；７：４４．
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２５．Ｇｏｚｅｓ Ｉ，Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ ＭＣ，Ｖａｎ Ｄｉｊｃｋ Ａ，Ｋｏｏｙ ＲＦ，Ｐｅｅｄｅｎ ＪＮ，Ｅｉｃｈｅｎｂｅｒｇｅｒ ＪＡ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｅｉｇｈｔ ａｎｄ ａ Ｈａｌｆ Ｙｅａｒ Ｊｏｕｒｎｅｙ ｏｆ Ｕｎｄｉａｇｎｏｓｅｄ ＡＤ：Ｇｅｎｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｎｄ Ｆｕｎｄｉｎｇ ｏｆ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｈａｓ Ｌｅｄ ｔｏ Ｈｏｐｅ ａｎｄ Ｎｅｗ Ｂｅｇｉｎｎｉｎｇｓ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．２０１７；８：１０７．
２６．Ｇｏｚｅｓ Ｉ，Ｙｅｈｅｓｋｅｌ Ａ，及びＰａｓｍａｎｉｋ－Ｃｈｏｒ Ｍ．Ａｃｔｉｖｉｔｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＡＤＮＰ）：ａ ｃａｓｅ ｓｔｕｄｙ ｆｏｒ ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｃｈｏｒｄａｔａ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｅｓ ｓｈａｐｉｎｇ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ａｎｄ ｍｕｔａｔｅｄ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ：ＪＡＤ．２０１５；４５（１）：５７－７３
２７．Ｇｒｉｇｇ Ｉ，Ｉｖａｓｈｋｏ－Ｐａｃｈｉｍａ Ｙ，Ｈａｉｔ ＴＡ，Ｋｏｒｅｎｋｏｖａ Ｖ，Ｔｏｕｌｏｕｍｉ Ｏ，Ｌａｇｏｕｄａｋｉ Ｒ，ｅｔ ａｌ．Ｔａｕｏｐａｔｈｙ ｉｎ ｔｈｅ ｙｏｕｎｇ ａｕｔｉｓｔｉｃ ｂｒａｉｎ：ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ．Ｔｒａｎｓｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０２０；１０（１）：２２８．
２８．Ｂｕｔｌｅｒ Ｒ，Ｌｅｉｇｈ ＰＮ，ａｎｄ Ｇａｌｌｏ ＪＭ．Ａｎｄｒｏｇｅｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｂｕｌｉｎ ｉｓｏｆｏｒｍｓ ｉｎ ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ ｃｅｌｌｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００１；７８（４）：８５４－６１．
２９．Ｋａｐｉｔａｎｓｋｙ Ｏ，Ｋａｒｍｏｎ Ｇ，Ｓｒａｇｏｖｉｃｈ Ｓ，Ｈａｄａｒ Ａ，Ｓｈａｈｏｈａ Ｍ，Ｊａｌｊｕｌｉ Ｉ，ｅｔ ａｌ．Ｓｉｎｇｌｅ Ｃｅｌｌ ＡＤＮＰ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｍｕｓｃｌｅ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ：Ｍｏｕｓｅ Ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ Ｍｕｓｃｌｅ Ｗａｓｔｉｎｇ．Ｃｅｌｌｓ．２０２０；９（１０）．
３０．Ｇｏｚｅｓ Ｉ、Ｂａｓｓａｎ Ｍ、Ｚａｍｏｓｔｉａｎｏ Ｒ，Ｐｉｎｈａｓｏｖ Ａ，Ｄａｖｉｄｓｏｎ Ａ，Ｇｉｌａｄｉ Ｅ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｎｏｖｅｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｆｏｒ ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ ａｃｔｉｏｎ：ａｃｔｉｖｉｔｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．１９９９；８９７：１２５－３５．
３１．Ｄｉｖｉｎｓｋｉ Ｉ，Ｍｉｔｔｅｌｍａｎ Ｌ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ａ ｆｅｍｔｏｍｏｌａｒ ａｃｔｉｎｇ ｏｃｔａｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｓ ｗｉｔｈ ｔｕｂｕｌｉｎ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｚｉｎｃ ｉｎｔｏｘｉｃａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００４；２７９（２７）：２８５３１－８．
３２．Ｉｖａｓｈｋｏ－Ｐａｃｈｉｍａ Ｙ，Ｓａｙａｓ ＣＬ，Ｍａｌｉｓｈｋｅｖｉｃｈ Ａ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．ＡＤＮＰ／ＮＡＰ ｄｒａｍａｔｉｃａｌｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ ｅｎｄ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－Ｔａｕ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ：ａ ｎｏｖｅｌ ａｖｅｎｕｅ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ｔａｕｏｐａｔｈｙ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０１７；２２（９）：１３３５－４４．
３３．Ｐａｓｃｕａｌ Ｍ及びＧｕｅｒｒｉ Ｃ．Ｔｈｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ＮＡＰ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｉｇｎａｌ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ａｎｄ Ａｋｔ ｐａｔｈｗａｙｓ，ａｎｄ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｎｅｕｒｏｎｓ ｃｏ－ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ ｄａｍａｇｅｄ ｂｙ ｅｔｈａｎｏｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００７；１０３（２）：５５７－６８．
３４．Ｐａｔｅｌ Ｓ，Ｒｏｎｃａｇｌｉａ Ｐ，及びＬｏｖｅｒｉｎｇ ＲＣ．Ｕｓｉｎｇ Ｇｅｎｅ Ｏｎｔｏｌｏｇｙ ｔｏ ｄｅｓｃｒｉｂｅ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｎｅｕｒｅｘｉｎ－ｎｅｕｒｏｌｉｇｉｎ－ＳＨＡＮＫ ｃｏｍｐｌｅｘ ｉｎ ｈｕｍａｎ，ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｒａｔ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌｅｖａｎｃｅ ｔｏ ａｕｔｉｓｍ．ＢＭＣ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２０１５；１６：１８６．
３５．Ｊｏｕｒｏｕｋｈｉｎ Ｙ，Ｏｓｔｒｉｔｓｋｙ Ｒ，Ａｓｓａｆ Ｙ，Ｐｅｌｌｅｄ Ｇ，Ｇｉｌａｄｉ Ｅ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．ＮＡＰ（ｄａｖｕｎｅｔｉｄｅ）ｍｏｄｉｆｉｅｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｓｅｖｅｒｅ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓ ｉｎ ａｘｏｎａｌ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅ．２０１３；５６：７９－９４．
３６．Ｓｕｎｄｅｒｍａｎｎ ＥＥ，Ｐａｎｉｚｚｏｎ ＭＳ，Ｃｈｅｎ Ｘ，Ａｎｄｒｅｗｓ Ｍ，Ｇａｌａｓｋｏ Ｄ，Ｂａｎｋｓ ＳＪ，ｅｔ ａｌ．Ｓｅｘ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ－ｒｅｌａｔｅｄ Ｔａｕ ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ａｎｄ ａ ｍｅｄｉａｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ．Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｓｅｘ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ．２０２０；１１（１）：３３．
３７．Ｍａｌｉｓｈｋｅｖｉｃｈ Ａ，Ｍａｒｓｈａｌｌ ＧＡ，Ｓｃｈｕｌｔｚ ＡＰ，Ｓｐｅｒｌｉｎｇ ＲＡ，Ａｈａｒｏｎ－Ｐｅｒｅｔｚ Ｊ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ｂｌｏｏｄ－Ｂｏｒｎｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ－Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ（ＡＤＮＰ）ｉｓ Ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｐｒｅｍｏｒｂｉｄ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｔａｇｅ，ａｎｄ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ：ＪＡＤ．２０１６；５０（１）：２４９－６０．
３８．Ｍａｒｃｕｃｉｏ ＲＳ，Ｙｏｕｎｇ ＮＭ，Ｈｕ Ｄ，及びＨａｌｌｇｒｉｍｓｓｏｎ Ｂ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｔｈａｔ ｕｎｄｅｒｌｉｅ ｃｏ－ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ａｎｄ ｆａｃｅ．Ｇｅｎｅｓｉｓ．２０１１；４９（４）：１７７－８９．
３９．Ｌｕｃｈｅｔｔｉ Ａ，Ｏｄｄｉ Ｄ，Ｌａｍｐｉｓ Ｖ，Ｃｅｎｔｏｆａｎｔｅ Ｅ，Ｆｅｌｓａｎｉ Ａ，Ｂａｔｔａｇｌｉａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｅａｒｌｙ ｈａｎｄｌｉｎｇ ａｎｄ ｒｅｐｅａｔｅｄ ｃｒｏｓｓ－ｆｏｓｔｅｒｉｎｇ ｈａｖｅ ｏｐｐｏｓｉｔｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｍｏｕｓｅ ｅｍｏｔｉｏｎａｌｉｔｙ．Ｆｒｏｎｔ Ｂｅｈａｖ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１５；９：９３．
４０．Ｂａｒｔｏｌｏｍｕｃｃｉ Ａ，Ｇｉｏｉｏｓａ Ｌ，Ｃｈｉｒｉｅｌｅｉｓｏｎ Ａ，Ｃｅｒｅｓｉｎｉ Ｇ，Ｐａｒｍｉｇｉａｎｉ Ｓ，及びＰａｌａｎｚａ Ｐ．Ｃｒｏｓｓ ｆｏｓｔｅｒｉｎｇ ｉｎ ｍｉｃｅ：ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃａｒｒｙ－ｏｖｅｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｉｎ ａｄｕｌｔｈｏｏｄ．Ｇｅｎｅｓ Ｂｒａｉｎ Ｂｅｈａｖ．２００４；３（２）：１１５－２２．
４１．Ｌｕ Ｌ，Ｍａｍｉｙａ Ｔ，Ｌｕ Ｐ，Ｎｉｗａ Ｍ，Ｍｏｕｒｉ Ａ，Ｚｏｕ ＬＢ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｌｏｎｇ－ｌａｓｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｒｏｓｓ－ｆｏｓｔｅｒｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｅｍｏｔｉｏｎａｌ ｂｅｈａｖｉｏｒ ｉｎ ＩＣＲ ｍｉｃｅ．Ｂｅｈａｖ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．２００９；１９８（１）：１７２－８．
４２．Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ ＪＬ，Ｙａｎｇ Ｍ，Ｌｏｒｄ Ｃ，及びＣｒａｗｌｅｙ ＪＮ．Ｂｅｈａｖｉｏｕｒａｌ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ａｕｔｉｓｍ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１０；１１（７）：４９０－５０２．
４３．Ｓｔｅｆａｎａｔｏｓ ＧＡ及びＢａｒｏｎ ＩＳ．Ｔｈｅ ｏｎｔｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｌａｎｇｕａｇｅ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ ｉｎ ａｕｔｉｓｍ：ａ ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌ Ｒｅｖ．２０１１；２１（３）：２５２－７０．
４４．Ｅｈｒｅｔ Ｇ．Ｉｎｆａｎｔ ｒｏｄｅｎｔ ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄｓ－ａ ｇａｔｅ ｔｏ ｔｈｅ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｏｆ ｓｏｕｎｄ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ．Ｂｅｈａｖ Ｇｅｎｅｔ．２００５；３５（１）：１９－２９．
４５．Ｙｉｎ Ｘ，Ｃｈｅｎ Ｌ，Ｘｉａ Ｙ，Ｃｈｅｎｇ Ｑ，Ｙｕａｎ Ｊ，Ｙａｎｇ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｍａｔｅｒｎａｌ Ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ Ｐｕｐ Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ Ｖｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ Ｍｉｃｅ．ＰｌｏＳ ｏｎｅ．２０１６；１１（８）：ｅ０１６０４０９．
４６．Ｇｒｉｍｓｌｅｙ ＪＭ，Ｍｏｎａｇｈａｎ ＪＪ，及びＷｅｎｓｔｒｕｐ ＪＪ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓｏｃｉａｌ ｖｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｍｉｃｅ．ＰｌｏＳ ｏｎｅ．２０１１；６（３）：ｅ１７４６０．
４７．Ｃｏｆｆｅｙ ＫＲ，Ｍａｒｘ ＲＧ，及びＮｅｕｍａｉｅｒ ＪＦ．ＤｅｅｐＳｑｕｅａｋ：ａ ｄｅｅｐ ｌｅａｒｎｉｎｇ－ｂａｓｅｄ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｖｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｓ．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．２０１９；４４（５）：８５９－６８．
４８．Ｐｈｉｌｌｉｐｓ Ｍ及びＰｏｚｚｏ－Ｍｉｌｌｅｒ Ｌ．Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｓｐｉｎｅ ｄｙｓｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ａｕｔｉｓｍ ｒｅｌａｔｅｄ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ．２０１５；６０１：３０－４０．
４９．Ｓｒａｇｏｖｉｃｈ Ｓ，Ｍａｌｉｓｈｋｅｖｉｃｈ Ａ，Ｐｉｏｎｔｋｅｗｉｔｚ Ｙ，Ｇｉｌａｄｉ Ｅ，Ｔｏｕｌｏｕｍｉ Ｏ，Ｌａｇｏｕｄａｋｉ Ｒ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ａｕｔｉｓｍ／ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ－ｌｉｎｋｅｄ ＡＤＮＰ／ＮＡＰ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｃｉｔａｔｏｒｙ ｇｌｕｔａｍａｔｅｒｇｉｃ ｓｙｎａｐｓｅ．Ｔｒａｎｓｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０１９；９（１）：２．
５０．Ｓｔｏｔｈａｒｔ Ｇ，Ｋａｚａｎｉｎａ Ｎ，Ｎａａｔａｎｅｎ Ｒ，Ｈａｗｏｒｔｈ Ｊ，及びＴａｌｅｓ Ａ．Ｅａｒｌｙ ｖｉｓｕａｌ ｅｖｏｋｅｄ ｐｏｔｅｎｔｉａｌｓ ａｎｄ ｍｉｓｍａｔｃｈ ｎｅｇａｔｉｖｉｔｙ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｍｉｌｄ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ：ＪＡＤ．２０１５；４４（２）：３９７－４０８．
５１．Ｓｉｐｅｒ ＰＭ，Ｚｅｍｏｎ Ｖ，Ｇｏｒｄｏｎ Ｊ，Ｇｅｏｒｇｅ－Ｊｏｎｅｓ Ｊ，Ｌｕｒｉｅ Ｓ，Ｚｗｅｉｆａｃｈ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｒａｐｉｄ ａｎｄ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ Ｎｅｕｒａｌ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ Ａｕｔｉｓｍ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｄｉｓｏｒｄｅｒ Ｕｓｉｎｇ Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ Ｖｉｓｕａｌ Ｅｖｏｋｅｄ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌｓ．ＰｌｏＳ ｏｎｅ．２０１６；１１（１０）：ｅ０１６４４２２．
５２．Ｇａｌｅ ＭＪ，Ｔｉｔｕｓ ＨＥ，Ｈａｒｍａｎ ＧＡ，Ａｌａｂｄｕｌｊａｌｉｌ Ｔ，Ｄｅｎｎｉｓ Ａ，Ｗｉｌｓｏｎ ＪＬ，ｅｔ ａｌ．Ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ ａ ｃｈｉｌｄ ｗｉｔｈ Ｈｅｌｓｍｏｏｒｔｅｌ－Ｖａｎ ｄｅｒ Ａａ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ａｍ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｃａｓｅ Ｒｅｐ．２０１８；１０：２４４－８．
５３．Ｇｏｚｅｓ Ｉ，Ｈｅｌｓｍｏｏｒｔｅｌ Ｃ，Ｖａｎｄｅｗｅｙｅｒ Ｇ，Ｖａｎ ｄｅｒ Ａａ Ｎ，Ｋｏｏｙ Ｆ，及びＳｅｒｍｏｎｅ ＳＢ．Ｔｈｅ Ｃｏｍｐａｓｓｉｏｎａｔｅ Ｓｉｄｅ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ：Ｔｏｎｙ Ｓｅｒｍｏｎｅ’ｓ Ｕｎｄｉａｇｎｏｓｅｄ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｊｏｕｒｎｅｙ－－ＡＤＮＰ Ｍｕｔａｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ：ＭＮ．２０１５；５６（４）：７５１－７．
５４．Ｂｒｅｅｎ ＭＳ，Ｇａｒｇ Ｐ，Ｔａｎｇ Ｌ，Ｍｅｎｄｏｎｃａ Ｄ，Ｌｅｖｙ Ｔ，Ｂａｒｂｏｓａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｅｐｉｓｉｇｎａｔｕｒｅｓ Ｓｔｒａｔｉｆｙｉｎｇ Ｈｅｌｓｍｏｏｒｔｅｌ－Ｖａｎ Ｄｅｒ Ａａ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ Ｓｈｏｗ Ｍｏｄｅｓｔ Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ．２０２０；１０７（３）：５５５－６３．
５５．Ｈｏｐｋｉｎｓ ＰＣ，Ｓａｉｎｚ－Ｆｕｅｒｔｅｓ Ｒ，及びＬｏｖｅｓｔｏｎｅ Ｓ．Ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｅ ａｎｄ ａｍｙｌｏｉｄ－ｂｅｔａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ－ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｍｙｌｏｉｄ－ｂｅｔａ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ：ＪＡＤ．２０１１；２６（２）：２３９－５３．
５６．Ｇａｎｎａ Ａ，Ｖｅｒｗｅｉｊ ＫＪＨ，Ｎｉｖａｒｄ ＭＧ，Ｍａｉｅｒ Ｒ，Ｗｅｄｏｗ Ｒ，Ｂｕｓｃｈ ＡＳ，ｅｔ ａｌ．Ｌａｒｇｅ－ｓｃａｌｅ ＧＷＡＳ ｒｅｖｅａｌｓ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ ｏｆ ｓａｍｅ－ｓｅｘ ｓｅｘｕａｌ ｂｅｈａｖｉｏｒ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１９；３６５（６４５６）．
５７．Ｋａｐｉｔａｎｓｋｙ Ｏ，Ｇｉｌａｄｉ Ｅ，Ｊａｌｊｕｌｉ Ｉ，Ｂｅｒｅｓｗｉｌｌ Ｓ，Ｈｅｉｍｅｓａａｔ ＭＭ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ｃｈａｎｇｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＡＤＮＰ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓ：ｒａｐｉｄ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ｆｏｒ ＮＡＰ（ＣＰ２０１）ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ＡＤＮＰ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ａｎｄ ｂｅｙｏｎｄ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｎｅｕｒａｌ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ．２０２０；１２７（２）：２５１－６３．
５８．Ｋａｐｉｔａｎｓｋｙ Ｏ，Ｓｒａｇｏｖｉｃｈ Ｓ，Ｊａｌｊｕｌｉ Ｉ，Ｈａｄａｒ Ａ，Ｇｉｌａｄｉ Ｅ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ａｇｅ ａｎｄ Ｓｅｘ－Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ＡＤＮＰ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｕｓｃｌｅ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｉｓ Ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｍｏｔｏｒ Ｂｅｈａｖｉｏｒ：Ｐｏｓｓｉｂｌｅ Ｆｅｅｄｂａｃｋ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｗｉｔｈ ＰＡＣＡＰ．Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｓｃｉ．２０２０；２１（１８）．
５９．Ｓｏｈｅｉｌｉ－Ｎｅｚｈａｄ Ｓ，ｖａｎ ｄｅｒ Ｌｉｎｄｅｎ ＲＪ，Ｏｌｄｅ Ｒｉｋｋｅｒｔ Ｍ，Ｓｐｒｏｏｔｅｎ Ｅ，及びＰｏｅｌｍａｎｓ Ｇ．Ｌｏｎｇ ｇｅｎｅｓ ａｒｅ ｍｏｒｅ ｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ｓｏｍａｔｉｃ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｓｈｏｗ ｒｅｄｕｃｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｄｉｓｅａｓｅ ｅｔｉｏｌｏｇｙ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｅｍｅｎｔ．２０２０．
６０．Ｗｉｌｌｓｅｙ ＨＲ，Ｅｘｎｅｒ ＣＲＴ，Ｘｕ Ｙ，Ｅｖｅｒｉｔｔ Ａ，Ｓｕｎ Ｎ，Ｗａｎｇ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｐａｒａｌｌｅｌ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｌａｒｇｅ－ｅｆｆｅｃｔ ａｕｔｉｓｍ ｇｅｎｅｓ ｉｍｐｌｉｃａｔｅｓ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｉｎ ｒｉｓｋ ａｎｄ ｒｅｓｉｌｉｅｎｃｅ．Ｎｅｕｒｏｎ．２０２１．
６１．Ｇｏｚｅｓ Ｉ．Ｓｅｘｕａｌ ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ ｉｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｍｐａｃｔｉｎｇ ａｕｔｉｓｍ，ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ，ａｎｄ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ．２０１７；９５（１－２）：６５２－６０．
６２．Ｓｒａｇｏｖｉｃｈ Ｓ，Ｚｉｖ Ｙ，Ｖａｉｓｖａｓｅｒ Ｓ，Ｓｈｏｍｒｏｎ Ｎ，Ｈｅｎｄｌｅｒ Ｔ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ｔｈｅ ａｕｔｉｓｍ－ｍｕｔａｔｅｄ ＡＤＮＰ ｐｌａｙｓ ａ ｋｅｙ ｒｏｌｅ ｉｎ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｔｒａｎｓｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０１９；９（１）：２３５．
６３．Ｗｏｈｒ Ｍ，Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ ＪＬ，Ｓｃａｔｔｏｎｉ ＭＬ，Ｔｕｒｎｅｒ ＳＭ，Ｈａｒｒｉｓ ＭＪ，Ｓａｘｅｎａ Ｒ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｄｅｌａｙｓ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅｄ ｐｕｐ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｖｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｓ ｂｕｔ ｎｏｒｍａｌ ｓｏｃｉａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｍｉｃｅ ｌａｃｋｉｎｇ ｔｈｅ ｐｏｓｔｓｙｎａｐｔｉｃ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｎｅｕｒｏｌｉｇｉｎ２．Ｂｅｈａｖ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．２０１３；２５１：５０－６４．
６４．Ｆｉｎｄｌａｔｅｒ ＧＳ，ＭｃＤｏｕｇａｌｌ ＲＤ，及びＫａｕｆｍａｎ ＭＨ．Ｅｙｅｌｉｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｆｕｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ ｒｅｏｐｅｎｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ．Ｊ．Ａｎａｔ．１９９３；１８３（Ｐｔ１）：１２１－９．
６５．Ｍｏｌｌｉｎｅｄｏ Ｐ，Ｋａｐｉｔａｎｓｋｙ Ｏ，Ｇｏｎｚａｌｅｚ－Ｌａｍｕｎｏ Ｄ，Ｚａｓｌａｖｓｋｙ Ａ，Ｒｅａｌ Ｐ，Ｇｏｚｅｓ Ｉ，ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ ｓｋｉｎ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｕｔｉｓｍ－ｒｅｌａｔｅｄ ＡＤＮＰ ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｓｃｉ Ｒｅｐ．２０１９；９（１）：７３６．
６６．Ｔｏｍｃｈｅｋ ＳＤ及びＤｕｎｎ Ｗ．Ｓｅｎｓｏｒｙ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｉｎ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ ａｎｄ ｗｉｔｈｏｕｔ ａｕｔｉｓｍ：ａ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｈｏｒｔ ｓｅｎｓｏｒｙ ｐｒｏｆｉｌｅ．Ａｍ Ｊ Ｏｃｃｕｐ Ｔｈｅｒ．２００７；６１（２）：１９０－２００．
６７．Ｓｃｈａｆｆｌｅｒ ＭＤ，Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ ＬＪ，及びＡｂｄｕｓ－Ｓａｂｏｏｒ Ｉ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ｔａｃｔｉｌｅ Ｓｅｎｓｏｒｙ Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｉｎ Ａｕｔｉｓｍ：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｃｕｒｒ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ Ｒｅｐ．２０１９；２１（１２）：１３４．
６８．Ｓｉｅｍａｎｎ ＪＫ，Ｖｅｅｎｓｔｒａ－ＶａｎｄｅｒＷｅｅｌｅ Ｊ，及びＷａｌｌａｃｅ ＭＴ．Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ Ｍｕｌｔｉｓｅｎｓｏｒｙ Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ Ａｕｔｉｓｍ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｄｉｓｏｒｄｅｒ．Ａｕｔｉｓｍ Ｒｅｓ．２０２０．
６９．Ｖｉｅｉｒａ ＷＦ，Ｍａｌａｎｇｅ ＫＦ，ｄｅ Ｍａｇａｌｈａｅｓ ＳＦ，Ｄｏｓ Ｓａｎｔｏｓ ＧＧ，ｄｅ Ｏｌｉｖｅｉｒａ ＡＬＲ，ｄａ Ｃｒｕｚ－Ｈｏｆｌｉｎｇ ＭＡ，ｅｔ ａｌ．Ｇａｉｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｈｙｐｅｒａｌｇｅｓｉａ ｉｎ ａ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ：Ａ ＣａｔＷａｌｋ ｄｙｎａｍｉｃ ｍｏｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ．２０２０；７３６：１３５２５３
７０．Ｖｒｉｎｔｅｎ ＤＨ及びＨａｍｅｒｓ ＦＦ．’ＣａｔＷａｌｋ’ ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｇａｉｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ａｌｌｏｄｙｎｉａ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ；ａ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｖｏｎ Ｆｒｅｙ ｔｅｓｔｉｎｇ．Ｐａｉｎ．２００３；１０２（１－２）：２０３－９．
７１．Ｃｈｅｎ ＹＪ，Ｃｈｅｎｇ ＦＣ，Ｓｈｅｕ ＭＬ，Ｓｕ ＨＬ，Ｃｈｅｎ ＣＪ，Ｓｈｅｅｈａｎ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｂｔｌｅ ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｂｙ ｔｈｅ Ｃａｔｗａｌｋ ＸＴ ｇａｉｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｙｓｔｅｍ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｅｎｇ Ｒｅｈａｂｉｌ．２０１４；１１：６２．
７２．Ａｒｎｅｔｔ ＡＢ，Ｂｅｉｇｈｌｅｙ ＪＳ，Ｋｕｒｔｚ－Ｎｅｌｓｏｎ ＥＣ，Ｈｏｅｋｚｅｍａ Ｋ，Ｗａｎｇ Ｔ，Ｂｅｒｎｉｅｒ ＲＡ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｐｒｅｄｉｃｔｏｒｓ ｏｆ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｓｕｂｔｙｐｅｓ ｏｆ Ａｕｔｉｓｍ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｄｉｓｏｒｄｅｒ．Ａｕｔｉｓｍ Ｒｅｓ．２０２０；１３（１０）：１６５９－６９．
７３．Ａｇａｒｗａｌｌａ Ｓ，Ａｒｒｏｙｏ ＮＳ，Ｌｏｎｇ ＮＥ，Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ＷＴ，Ａｂｅｌ Ｔ，及びＢａｎｄｙｏｐａｄｈｙａｙ Ｓ．Ｍａｌｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｃａｌｌ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ｐｕｐｓ ｗｉｔｈ １６ｐ１１．２ ｄｅｌｅｔｉｏｎ．Ｇｅｎｅｓ Ｂｒａｉｎ Ｂｅｈａｖ．２０２０；１９（７）：ｅ１２６８１．
７４．Ｓｉｍｏｌａ Ｎ．Ｒａｔ Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ Ｖｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：Ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｕｒｒ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１５；１３（２）：１６４－７９．
７５．Ｓｉｍｏｌａ Ｎ及びＣｏｓｔａ Ｇ．Ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃａｔｅｇｏｒｉｚｅｄ ５０－ｋＨｚ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｖｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｒｅｐｅａｔｅｄｌｙ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｍｐｈｅｔａｍｉｎｅ ｏｒ ａｐｏｍｏｒｐｈｉｎｅ：Ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｒｅｌｅｖａｎｃｅ ｔｏ ｄｒｕｇ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｅｍｏｔｉｏｎａｌ ｓｔａｔｅ．Ｂｅｈａｖ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．２０１８；３４７：８８－９８．
７６．Ｓａｒｔｕｃｃｉ Ｆ，Ｂｏｒｇｈｅｔｔｉ Ｄ，Ｂｏｃｃｉ Ｔ，Ｍｕｒｒｉ Ｌ，Ｏｒｓｉｎｉ Ｐ，Ｐｏｒｃｉａｔｔｉ Ｖ，ｅｔ ａｌ．Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｇｎｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｔｒｅａｍ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｂｙ ｐａｔｔｅｒｎ ｅｌｅｃｔｒｏｒｅｔｉｎｏｇｒａｍｓ ａｎｄ ｖｉｓｕａｌ ｅｖｏｋｅｄ ｐｏｔｅｎｔｉａｌｓ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ Ｂｕｌｌ．２０１０；８２（３－４）：１６９－７６．
７７．Ｒｉｓａｃｈｅｒ ＳＬ，Ｗｕｄｕｎｎ Ｄ，Ｐｅｐｉｎ ＳＭ，ＭａＧｅｅ ＴＲ，ＭｃＤｏｎａｌｄ ＢＣ，Ｆｌａｓｈｍａｎ ＬＡ，ｅｔ ａｌ．Ｖｉｓｕａｌ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，ｍｉｌｄ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ，ａｎｄ ｏｌｄｅｒ ａｄｕｌｔｓ ｗｉｔｈ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ｃｏｍｐｌａｉｎｔｓ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ａｇｉｎｇ．２０１３；３４（４）：１１３３－４４．
７８．Ｒｉｚｚｏ Ｍ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＳＷ，Ｄａｗｓｏｎ Ｊ，及びＮａｗｒｏｔ Ｍ．Ｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉａ．２０００；３８（８）：１１５７－６９．
７９．Ｓａｙｏｒｗａｎ Ｗ，Ｐｈｉａｎｃｈａｎａ Ｎ，Ｐｅｒｍｐｏｏｎｐｕｔｔａｎａ Ｋ，及びＳｉｒｉｐｏｒｎｐａｎｉｃｈ Ｖ．Ａ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＶＥＰ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ ｉｎ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ Ａｕｔｉｓｍ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｄｉｓｏｒｄｅｒ．Ａｕｔｉｓｍ Ｒｅｓ Ｔｒｅａｔ．２０１８；２０１８：５０９３０１６
８０．Ｂｒｕｎｅｔ Ａ，Ｂｏｎｎｉ Ａ，Ｚｉｇｍｏｎｄ ＭＪ，Ｌｉｎ ＭＺ，Ｊｕｏ Ｐ，Ｈｕ ＬＳ，ｅｔ ａｌ．Ａｋｔ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｃｅｌｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｂｙ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｎｇ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ａ Ｆｏｒｋｈｅａｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ．Ｃｅｌｌ．１９９９；９６（６）：８５７－６８．
８１．Ｌｅｈｔｉｎｅｎ ＭＫ，Ｙｕａｎ Ｚ，Ｂｏａｇ ＰＲ，Ｙａｎｇ Ｙ，Ｖｉｌｌｅｎ Ｊ，Ｂｅｃｋｅｒ ＥＢ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ＭＳＴ－ＦＯＸＯ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ－ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ａｎｄ ｅｘｔｅｎｄｓ ｌｉｆｅ ｓｐａｎ．Ｃｅｌｌ．２００６；１２５（５）：９８７－１００１．
８２．Ｂａｎｄ ＡＭ及びＫｕｉｓｍａｎｅｎ Ｅ．Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｔ－ＳＮＡＲＥｓ ｓｙｎｔａｘｉｎ ２ ａｎｄ ３ ｉｎ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔｓ．ＢＭＣ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２００５；６（１）：２６．
８３．Ｂｅｎｎｅｔｔ ＭＫ，Ｇａｒｃｉａ－Ａｒｒａｒａｓ ＪＥ，Ｅｌｆｅｒｉｎｋ ＬＡ，Ｐｅｔｅｒｓｏｎ Ｋ，Ｆｌｅｍｉｎｇ ＡＭ，Ｈａｚｕｋａ ＣＤ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｓｙｎｔａｘｉｎ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ｖｅｓｉｃｕｌａｒ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｃｅｌｌ．１９９３；７４（５）：８６３－７３．
８４．Ｈｕｍｅａｕ Ｊ，Ｌｅｄｕｃ Ｍ，Ｃｅｒｒａｔｏ Ｇ，Ｌｏｏｓ Ｆ，Ｋｅｐｐ Ｏ，及びＫｒｏｅｍｅｒ Ｇ．Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ－２ａｌｐｈａ（ｅＩＦ２ａｌｐｈａ）ｉｎ ａｕｔｏｐｈａｇｙ．Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｓ．２０２０；１１（６）：４３３．
８５．Ｐａｒｋ ＪＳ，Ｌｅｅ Ｊ，Ｊｕｎｇ ＥＳ，Ｋｉｍ ＭＨ，Ｋｉｍ ＩＢ，Ｓｏｎ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ｂｒａｉｎ ｓｏｍａｔｉｃ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｇｉｎｇ ａｎｄ ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔａｕ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．２０１９；１０（１）：３０９０．
８６．Ｌｉｕ Ｚ，Ｍａｏ Ｘ，Ｄａｎ Ｚ，Ｐｅｉ Ｙ，Ｘｕ Ｒ，Ｇｕｏ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ ｉｎ ａｕｔｉｓｍ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｄｉｓｏｒｄｅｒ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ，ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ａｎｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．Ｇｕｔ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ．２０２１；１３（１）：１－１６．
８７．Ｘｕ Ｍ，Ｘｕ Ｘ，Ｌｉ Ｊ，及びＬｉ Ｆ．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｂｅｔｗｅｅｎ Ｇｕｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ａｎｄ Ａｕｔｉｓｍ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｄｉｓｏｒｄｅｒ：Ａ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｒｅｖｉｅｗ ａｎｄ Ｍｅｔａ－Ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｆｒｏｎｔ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０１９；１０：４７３．
８８．Ｂｏｓｔａｎｃｉｋｌｉｏｇｌｕ Ｍ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ｉｎ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２０１９；１２７（４）：９５４－６７．
８９．Ｋｌｉｎｇｅｌｈｏｅｆｅｒ Ｌ及びＲｅｉｃｈｍａｎｎ Ｈ．Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ ｄｉｓｅａｓｅ－－ｔｈｅ ｇｕｔ－ｂｒａｉｎ ａｘｉｓ ａｎｄ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｆａｃｔｏｒｓ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｌ．２０１５；１１（１１）：６２５－３６．
９０．Ｇｏｅｈｌｅｒ ＬＥ，Ｇａｙｋｅｍａ ＲＰ，Ｏｐｉｔｚ Ｎ，Ｒｅｄｄａｗａｙ Ｒ，Ｂａｄｒ Ｎ，及びＬｙｔｅ Ｍ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎ ｖａｇａｌ ａｆｆｅｒｅｎｔｓ ａｎｄ ｃｅｎｔｒａｌ ａｕｔｏｎｏｍｉｃ ｐａｔｈｗａｙｓ：ｅａｒｌｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ．Ｂｒａｉｎ Ｂｅｈａｖ Ｉｍｍｕｎ．２００５；１９（４）：３３４－４４．
９１．Ｈｅｉｍｅｓａａｔ ＭＭ，Ｍｏｕｓａｖｉ Ｓ，Ｋｌｏｖｅ Ｓ，Ｇｅｎｇｅｒ Ｃ，Ｗｅｓｃｈｋａ Ｄ，Ｇｉｌａｄｉ Ｅ，ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｅ－ｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｏｃｔａｐｅｐｔｉｄｅ ＮＡＰ ｉｎ Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ Ｉｎｆｅｃｔｅｄ Ｍｉｃｅ Ｓｕｆｆｅｒｉｎｇ ｆｒｏｍ Ａｃｕｔｅ Ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ．Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ．２０２０；８（６）．
９２．Ｅｓｃｈｅｒ Ｕ，Ｇｉｌａｄｉ Ｅ，Ｄｕｎａｙ ＩＲ，Ｂｅｒｅｓｗｉｌｌ Ｓ，Ｇｏｚｅｓ Ｉ，及びＨｅｉｍｅｓａａｔ ＭＭ．Ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｏｃｔａｐｅｐｔｉｄｅ ＮＡＰ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｍｉｃｅ Ｓｕｆｆｅｒｉｎｇ ｆｒｏｍ Ｓｕｂａｃｕｔｅ Ｉｌｅｉｔｉｓ．Ｅｕｒ Ｊ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ（Ｂｐ）．２０１８；８（２）：３４－４０．
９３．Ｈｅｉｍｅｓａａｔ ＭＭ，Ｇｉｌａｄｉ Ｅ，Ｋｕｈｌ ＡＡ，Ｂｅｒｅｓｗｉｌｌ Ｓ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ｔｈｅ ｏｃｔａｐｅｔｉｄｅ ＮＡＰ ａｌｌｅｖｉａｔｅｓ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ａｎｄ ｅｘｔｒａ－ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｓｅｑｕｅｌａｅ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｃｏｌｉｔｉｓ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．２０１８；１０１：１－９
９４．Ｆｕｒｍａｎ Ｓ，Ｈｉｌｌ ＪＭ，Ｖｕｌｉｈ Ｉ，Ｚａｌｔｚｍａｎ Ｒ，Ｈａｕｓｅｒ ＪＭ，Ｂｒｅｎｎｅｍａｎ ＤＥ，ｅｔ ａｌ．Ｓｅｘｕａｌ ｄｉｍｏｒｐｈｉｓｍ ｏｆ ａｃｔｉｖｉｔｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ａｒｃｕａｔｅ ｎｕｃｌｅｕｓ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ．２００５；３７３（１）：７３－８．
９５．Ｈａｃｏｈｅｎ－Ｋｌｅｉｍａｎ Ｇ，Ｍｏａｒａｆ Ｓ，Ｋａｐｉｔａｎｓｋｙ Ｏ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ｓｅｘ－ａｎｄ Ｒｅｇｉｏｎ－Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ａｕｔｉｓｍ－Ｌｉｎｋｅｄ ＡＤＮＰ Ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ Ｓｏｃｉａｌ－ａｎｄ Ｓｐｅｅｃｈ－Ｒｅｌａｔｅｄ Ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｃａｎａｒｙ Ｂｒａｉｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ：ＭＮ．２０２０；７０（１１）：１６７１－８３．
９６．Ｋａｐｉｔａｎｓｋｙ Ｏ及びＧｏｚｅｓ Ｉ．ＡＤＮＰ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｉｎｔｅｒａｃｔ ｗｉｔｈ ｇｅｎｅｓ／ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａｇｉｎｇ：ａ ｎｏｖｅｌ ｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ｍｕｓｃｌｅ ａｇｉｎｇ．ＧｅｒｏＳｃｉｅｎｃｅ．２０１９；４１（３）：３２１－４０．
９７．Ｙｂｏｔ－Ｇｏｎｚａｌｅｚ Ｐ，Ｃｏｇｒａｍ Ｐ，Ｇｅｒｒｅｌｌｉ Ｄ，及びＣｏｐｐ ＡＪ．Ｓｏｎｉｃ ｈｅｄｇｅｈｏｇ ａｎｄ ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ｎｅｕｒａｌ ｔｕｂｅ ｃｌｏｓｕｒｅ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．２００２；１２９（１０）：２５０７－１７．
９８．Ｇｏｚｅｓ Ｉ．Ｔｈｅ ＡＤＮＰ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ ａｎｄ ＣＰ２０１（ＮＡＰ）Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｎｄ Ｈｏｐｅ．Ｆｒｏｎｔ Ｎｅｕｒｏｌ．２０２０；１１：６０８４４４を参照されたい。

【0317】

９９．Ｈｅｎａｏ－Ｍｅｊｉａ Ｊ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ Ａ，Ｒｏｎｇｖａｕｘ Ａ，Ｓｔｅｉｎ Ｊ，Ｈｕｇｈｅｓ Ｃ，及びＦｌａｖｅｌｌ ＲＡ．Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｍｉｃｅ Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９ Ｇｅｎｏｍｅ－Ｅｄｉｔｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｒｏｔｏｃ．２０１６；２０１６（２）：ｐｄｂ ｐｒｏｔ０９０７０４．
１００．Ｔｈｅｏｔｏｋｉｓ Ｐ，Ｌｏｕｒｂｏｐｏｕｌｏｓ Ａ，Ｔｏｕｌｏｕｍｉ Ｏ，Ｌａｇｏｕｄａｋｉ Ｒ，Ｋｏｆｉｄｏｕ Ｅ，Ｎｏｕｓｉｏｐｏｕｌｏｕ Ｅ，ｅｔ ａｌ．Ｔｉｍｅ ｃｏｕｒｓｅ ａｎｄ ｓｐａｔｉａｌ ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ Ｎｏｇｏ－Ａ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｉｎ Ｃ５７ＢＬ／６ ｍｉｃｅ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ Ｅｘｐ Ｎｅｕｒｏｌ．２０１２７１（１０）：９０７－２０．
１０１．Ｉｖａｓｈｋｏ－Ｐａｃｈｉｍａ Ｙ，Ｍａｏｒ－Ｎｏｆ Ｍ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．ＮＡＰ（ｄａｖｕｎｅｔｉｄｅ）ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｄｙｎａｍｉｃ ３－ｒｅｐｅａｔ Ｔａｕ ｅｘｐｌａｉｎｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｔａｕｏｐａｔｈｉｅｓ．ＰｌｏＳ ｏｎｅ．２０１９；１４（３）：ｅ０２１３６６６．
１０２．Ｗｕ Ｈ，Ｘｉｏｎｇ ＷＣ，及びＭｅｉ Ｌ．Ｔｏ ｂｕｉｌｄ ａ ｓｙｎａｐｓｅ：ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ａｓｓｅｍｂｌｙ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．２０１０；１３７（７）：１０１７－３３．
１０３．Ｍａｒｔｉｎ－Ｃｏｆｒｅｃｅｓ ＮＢ，Ｂａｉｘａｕｌｉ Ｆ，Ｌｏｐｅｚ ＭＪ，Ｇｉｌ Ｄ，Ｍｏｎｊａｓ Ａ，Ａｌａｒｃｏｎ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｅｎｄ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ １ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｓｉｇｎａｌ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｔｈｅ ＥＭＢＯ ｊｏｕｒｎａｌ．２０１２；３１（２１）：４１４０－５２．
１０４．Ｇｏｚｅｓ Ｉ．Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ／Ｅｓｌｓｅｖｉｅｒ；２０１７：２５３－７０．
１０５．Ｓｖｏｂｏｄａ Ｅ．Ｃｏｕｌｄ ｔｈｅ ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅ ｂｅ ｌｉｎｋｅｄ ｔｏ ａｕｔｉｓｍ？ Ｎａｔｕｒｅ．２０２０；５７７（７７９２）：Ｓ１４－Ｓ５．

【0318】

実施例２
複数の細胞骨格関連疾患に対する治療効果を示す、ＳＨ３ドメイン結合部位を含むＡＤＮＰ及びＮＡＰ
材料及び方法
プラスミド構築－タンパク発現プラスミドを、ｐＥＧＦＰ－Ｃ１骨格に基づいて以前に記載されたように構築し、全長ＡＤＮＰ又は以下の短縮型ＡＤＮＰタンパクｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３、ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１、ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊（以前の［３１］と同様）を発現した。患者由来のリンパ芽球様細胞株から抽出したｍＲＮＡから、固有の突然変異を有するｃＤＮＡの挿入断片を得て、突然変異のない対照リンパ芽球様細胞株から、全長ヒトＡＤＮＰを有するｃＤＮＡを得た［７７］。タンパク質発現を、以前のように蛍光イメージング及びイムノブロッティング分析によって検証した［３１］。

【0319】

細胞培養－マウス神経芽細胞腫Ｎ１Ｅ－１１５細胞を、ダルベッコ改変イーグル培地、１０％ウシ胎児血清、２ｍＭグルタミン、及び１００ＵｍＬ－１ペニシリン、１００ｍｇｍＬ－１ストレプトマイシン（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｂｅｉｔ Ｈａｅｍｅｋ，イスラエル）中で維持した。細胞を、加湿インキュベータ中、９．５％空気／５％ＣＯ２中、３７℃でインキュベートした。

【0320】

細胞分化及び過剰発現プラスミドの同時トランスフェクション－培養したＮ１Ｅ－１１５細胞を、１ディッシュ当たり１．２５×１０^４細胞の濃度で３５ ｍｍディッシュ（８１１５６、６０μ－ディッシュ、Ｉｂｉｄｉ，ドイツ、マーティンズリード）上に播種し、次いで、トランスフェクション前に、還元ウシ胎児血清（２％）及びＤＭＳＯ（１．２５％）含有培地で５日間分化させた。実験の４８時間前に、Ｎ１Ｅ－１１５細胞を、全長ヒトＡＤＮＰにコンジュゲートされたＧＦＰをコードする２μｇのプラスミドを含むか又は含まない１μｇのＥＢ３－ＲＦＰ又はｍＣｈｅｒｒｙ－タウ（３Ｒ）プラスミド、又はＡＤＮＰ保有変異で同時トランスフェクトした。トランスフェクションされたＤＮＡの総量とトランスフェクション試薬との間の１：３の比を、全てのその後の実験において製造指針（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，米国マサチューセッツ州ウォルサム）に従って使用した。

【0321】

ライブイメージング－トランスフェクションの４８時間後、分化したＮ１Ｅ－１１５細胞（完全長ＡＤＮＰ又は変異ＡＤＮＰにコンジュゲートされたＧＦＰを伴う又は伴わないＥＢ３－ＲＦＰを発現する）を、Ｌｅｉｃａ ＴＣＳ ＳＰ５共焦点顕微鏡（対物レンズ１００×（ＰＬ Ａｐｏ）油浸、ＮＡ １．４）のステージ上に置かれた恒温チャンバ内で、５％ＣＯ２／９５％空気混合物を用いて３７℃でインキュベートした。Ｌｅｉｃａ ＬＡＳ ＡＦソフトウェアを使用して、タイムラプス画像を１分間に３秒間自動的に撮影した。撮像後、全ての試料を最終濃度１０^－１２ＭのＮＡＰ（配列番号２）又はＳＫＩＰ（配列番号２１）でも処理し、４時間後、同じ条件下でタイムラプス撮像を再度行った。データを収集し、Ｉｍａｒｉｓソフトウェアによって分析した。

【0322】

光退色後の蛍光回復（ＦＲＡＰ）－分化したＮ１Ｅ－１１５細胞を、全長ＡＤＮＰ又は変異ＡＤＮＰにコンジュゲートしたＧＦＰを含む又は含まないｍＣｈｅｒｒｙ－タウでトランスフェクトし、トランスフェクションの４８時間後にイメージングした。光退色のためのＲＯＩは、近位細胞分枝に埋没していた。ｍＣｈｅｒｒｙ－タウを５８７ｎｍアルゴンレーザーで漂白し、蛍光回復を６１０～６５０ｎｍの波長内で収集した。８０枚の画像を、漂白直後に０．７４秒毎に撮影した。ＦＲＡＰイメージング後、全ての試料を最終濃度１０^－１２ＭのＮＡＰで処理し、４時間後、同じ条件下で再びタイムラプスイメージングを行った。１時間のＺｎＣｌ_２処理後（最終濃度４００μＭ：Ｓｉｇｍａ，Ｒｅｈｏｖｏｔ，イスラエル）に、ＮＡＰ活性とＳＫＩＰ活性（配列番号２１）との間の差を評価するためのＦＲＡＰイメージングをＮＡＰ／ＳＫＩＰ（１０^－１２Ｍ最終濃度）あり又はなしで行った。蛍光シグナルをＦｉｊｉで定量し［８１］、得られたデータをｅａｓｙＦＲＡＰで正規化し［８２、８３］、ＦＲＡＰ回復曲線をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ６（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，米国カリフォルニア州ラ・ホーヤ）による一相指数相関関数によって適合させたが、Ｒ^２＜０．９の試料は除外した。

【0323】

重合対可溶性チューブリンアッセイ－チューブリン重合及びタウ－ＭＴ会合を定量化するために、以前に記載されているように単純アッセイを行った［１９、２５］。６ウェルプレート中でコンフルエントになるまで増殖させた細胞を、ＭＴ緩衝液（８０ｍＭ ＰＩＰＥＳ ｐＨ ６．８、１ｍＭ ＭｇＣｌ^２、２ｍＭ ＥＧＴＡ、５％グリセロール）で洗浄し、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含む１５０μｌのＭＴ緩衝液を用いて遠心分離（３００ｇ）により室温で５分間溶解させて、可溶性（細胞質ゾル）チューブリン（Ｓ）を抽出した。ペレット化した細胞を、等容量の改変ＲＩＰＡ溶解緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣＬ ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＧＴＡ、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、０．１％ＳＤＳ、０．１％デオキシコール酸ナトリウム）で再度すすぎ、重合した（細胞骨格）チューブリン（Ｐ）を収集した。細胞質画分及び細胞骨格画分をそれぞれ試料緩衝液と混合し、９５℃で５分間加熱した。等容量の各画分をタウ、チューブリン、及びアクチン抗体を用いたイムノブロッティングによって分析し、ＥＣＬ発色後の結果をデンシトメトリー（ｂｉｏｃｈｅｍｌａｂｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（ｄｏｔ）ｃｏｍによって提供されたＧｅｌＱｕａｎｔ．ＮＥＴソフトウェア）によって定量した。

【0324】

統計分析－データは、少なくとも３回の独立した実験からの平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表される。ＳｉｇｍａＰｌｏｔ １１（Ｓｙｓｔａｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）による二元配置分散分析又はＩＢＭ ＳＰＳＳ ２３（ＩＢＭ，Ａｒｍｏｎｋ，ＮＹ，ＵＳＡ）による一元配置分散分析を使用して、データの統計分析を行った。全てのペアワイズ多重比較手順について、テューキー事後検定を行った。

【0325】

結果
ＡＳＤ関連ＡＤＮＰ短縮型タンパク質の発現は、ＭＴプラス末端でのＥＢ３活性を損ない、ＮＡＰはＥＢ３作用を回復させる。

【0326】

微小管細胞骨格に対するＡＤＮＰ症候群に関与するＡＤＮＰ突然変異の効果を明らかにするために、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）に結合したタンパク質を発現する４つのプラスミドを構築した。３つのプラスミドは、以下の短縮型のＡＤＮＰを発現した：ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３、ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１、ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊（［３０、３１］に記載）。骨格プラスミドｐＥＧＦＰ－Ｃ１及び全長ＡＤＮＰ含有プラスミドを、ライブイメージング実験における対照として使用した。設計されたＡＤＮＰ形態の発現を、以前のように蛍光イメージング及びウェスタンブロット分析によって確認した［３０、３１］。

【0327】

ＭＴ動態に対するＡＤＮＰ短縮型タンパク質の効果を評価するために、ＭＴプラス末端に結合するＲＦＰタグ付きＥＢ３タンパク質によって形成されるＥＢ３コメット様構造のタイムラプスイメージングを行った。ＥＢ３活性の２つのパラメータを使用して、ＭＴ動態－ＥＢ３コメットのトラック長及びトラック速度を評価し新たに成長するＭＴの長さ及びＭＴアセンブリの速度を反映する）を評価した。更に、本発明者らは、ＮＡＰ（１０^－１２Ｍで４時間）がＡＤＮＰ突然変異の有害な影響を防ぐことができるかどうかを判定することを目的とした。

【0328】

全長ＡＤＮＰの過剰発現は、ＥＢ３コメットトラック長を有意に増加させ、ＥＢ３コメットの速度に影響を及ぼさなかったが、ＮＡＰ処理は、全長ＡＤＮＰの効果に更に影響を及ぼさなかった（図７Ａ～Ｃ）。ＡＤＮＰ ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊短縮型形態の発現は、全長ＡＤＮＰ又は対照プラスミドのいずれかと比較して、ＥＢ３コメットトラック長を有意に減少させた。しかしながら、短縮型ＡＤＮＰ ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３は、全長ＡＤＮＰと比較してのみＥＢ３トラック長の有意な減少を示した（図７Ａ～Ｂ）。ＥＢ３活性の第２のパラメータの評価－コメット速度は、全長ＡＤＮＰ及び対照の両方と比較して、ＡＤＮＰ ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３及びｐ．Ｓｅｒ４０４^＊の有意な効果を示した（図７Ｃ）。興味深いことに、ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＡＤＮＰ形態の発現は、完全長ＡＤＮＰ又は対照のいずれと比較しても、ＥＢ３活性に影響を及ぼさなかった（図７Ａ～Ｃ）。ＮＡＰ処置は、ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３及びｐ．Ｓｅｒ４０４^＊群のＥＢ３コメットの速度及びトラック長、並びにｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のコメット速度を有意に増大させた（図７Ａ～Ｃ）。

【0329】

ＡＳＤ関連ＡＤＮＰ短縮型タンパク質の発現は、ＭＴとのタウ会合を減少させ、ＮＡＰはタウ－ＭＴ相互作用を回復させる。
次に、タウ－ＭＴ相互作用に対するＮＡＰ処理あり又はなしの全長／短縮型ＡＤＮＰ形態の効果を、光退色後の蛍光回復（ＦＲＡＰ）によって調べた（図８Ａ～Ｃ）。ｍＣｈｅｒｒｙタグ付きタウタンパク質を用いてＦＲＡＰを行った（図８Ａ）。光退色した関心領域（ＲＯＩ）内の蛍光回復のプラトーは、入ってくる非退色ｍＣｈｅｒｒｙ－タウタンパク質に対するＭＴ上の結合部位を放出せず、したがって蛍光回復に寄与しない、ｍＣｈｅｒｒｙ－タウ退色分子の不動画分を決定する。したがって、不動性ｍＣｈｅｒｒｙ－タウ画分は、ＭＴとのタウ会合の速度を反映する。本発明者らは、全長ＡＤＮＰの過剰発現が、対照プラスミドと比較して、不動性ｍＣｈｅｒｒｙ－タウ画分のわずかな有意でない減少をもたらしたことを観察した（図８Ａ～Ｃ）。ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊の発現は、完全長ＡＤＮＰ及び対照の両方と比較して、ＭＴとのタウ会合を有意に減弱させ、ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３の効果は、対照と比較してのみ有意に異なるが、完全長ＡＤＮＰとは有意に異ならないことが見出された（図８Ａ～Ｃ）。ＮＡＰ処置は、ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３及びｐ．Ｓｅｒ４０４^＊群内のタウ－ＭＴ相互作用を有意に増加させた。しかしながら、ＥＢ３活性を用いた以前の実験と同様に、ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１はタウ－ＭＴ会合を損なわなかった（図８Ａ～Ｃ）。

【0330】

ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１のフレームシフト配列は、ＭＴに対するＡＤＮＰ活性を回復させるＳＨ ３結合モチーフを含む。
ＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｓｆ^＊３１短縮型は、以前に公開されたデータ［３０、３１］から得られたＡＤＮＰ ｐ．Ａｒｇ７３０^＊及びｐ．Ｔｙｒ７１９^＊短縮型の結果を含む他の上流及び下流突然変異と比較して、ＭＴアセンブリ及びタウ－ＭＴ相互作用に対して中等度の有意でない効果を示した（図９Ａ～Ｂ）。ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊（図９Ｃ）とは異なるｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１アミノ酸残基のＥｌｍ分析［３３］は、他のＥｌｍ予測モチーフの中で再現されたＳｒｃホモロジー３（ＳＨ３）結合サイトを示した。

【0331】

ＳＨ３ドメイン－リガンド会合によって媒介されるタンパク質－タンパク質相互作用は、分子内相互作用による酵素活性化／不活性化、シグナル伝達成分の細胞濃度／局在化の変化、及び多タンパク質複合体アセンブリの媒介に及ぶ多種多様な生物学的プロセスに関与する（Ｍｏａｒｅｆｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ １９９７，３８５：６５０－６５３）。

【0332】

タウタンパク質のＳＨ３結合ドメインは、タウキナーゼと会合し、タウリン酸化及びＭＴ相互作用を調節する［３４］。したがって、本発明者らは、ＭＴ－タウ相互作用及びＥＢ３活性に対するＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｓｆ^＊３１発現の観察された影響の減少が、予測されたＳＨ３結合ドメインによって媒介されるかどうかを明らかにすることを目的とした。この目的のために、ＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｓｆ^＊３１プラスミド上のＳＨ３結合ドメインを、部位特異的突然変異誘発（ＳＤＭ）による１つのアミノ酸の置換によって破壊した。新しいＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｓｆ^＊３１ ＳＤＭプラスミドの発現は、対照プラスミド、全長ＡＤＮＰ及びＳＤＭを含まないＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｓｆ^＊３１プラスミドの発現から得られた結果と比較して、試験したパラメータ－ＥＢ３トラック長及びコメット速度の両方によってＥＢ３活性の有意な減少を示し（図１０Ａ～Ｃ）、ＮＡＰ処理は、ＥＢ３活性を対照レベルまで回復させた（図１０Ａ～Ｃ）。

【0333】

ＦＲＡＰ分析は、対照、全長ＡＤＮＰ、及びＳＤＭを含まないＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｓｆ^＊３１と比較して統計的に有意であることが見出された、ＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｓｆ^＊３１ ＳＤＭ発現後の減弱したタウ固定画分を示した（図１０Ｄ～Ｆ）。タウ－ＭＴ相互作用に対するＡＤＮＰ ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｓｆ^＊３１ ＳＤＭ発現の悪影響は、ＮＡＰ処理によって防止された（図１０Ｄ～Ｆ）。

【0334】

ＮＡＰ ＳＨ３結合モチーフは、タウ－ＭＴ解離に対するＮＡＰの保護活性を増加させる。
ＮＡＰ配列のＥｌｍ分析は、ＳＩＰ ＥＢ結合部位と重複したＳＨ３結合モチーフを示した［２４］（以下の表５）。

【0335】

【表5】

【0336】

興味深いことに、ＥＬＭ分析は、アクチン結合部位に結合したＡＤＮＰ上の複数のＳＨ３ドメイン結合部位を予測し、これは、ＳＨＡＮＫ３とＡＤＮＰとの間の間接的相互作用の別の部位を提供する可能性があり、ＳＨＡＮＫ３活性はアクチンに依存し、微小管上のＡＤＮＰは複数の細胞骨格依存性疾患を含み、ＮＡＰ修正を伴う。

【0337】

ＭＴ動態及びタウ－ＭＴ相互作用に対するＮＡＰの効果を、ＳｘＩＰ ＥＢ会合部位からなるがＳＨ３結合モチーフを欠くＳＫＩＰ（配列番号２２）ペプチドと比較して評価した。ＲＦＰタグ付きＥＢ３タンパク質を有する個々のＭＴの増殖を追跡するタイムラプスイメージングは、ＮＡＰ及びＳＫＩＰ処置（１０^－１２Ｍ、４時間）が、非処置対照と比較してＥＢ３トラック長及び速度の増加をもたらし、ＮＡＰ及びＳＫＩＰの効果の間に有意差が観察されなかったことを示した（図１１Ａ～Ｂ）。

【0338】

更に、亜鉛をタウ－ＭＴ解離剤として使用してＦＲＡＰアッセイを実施して［１９、２５］、タウとＭＴとの相互作用に対するＮＡＰ及びＳＫＩＰ保護活性を評価した（図１１Ｃ～Ｅ）。結果は、細胞外亜鉛（４００μＭ、１時間）が、非処置対照と比較してタウ不動性画分を有意に減弱させた一方で、ＳＫＩＰによる処置（１０^－１２Ｍ、１時間）が亜鉛有害作用を予防したことを示した。ＮＡＰと一緒の亜鉛への曝露（１０^－１２Ｍ、１時間）は、タウ－ＭＴ相互作用に対するＮＡＰの過剰な影響を示し、これは、ＳＫＩＰあり及びなしの亜鉛処置並びに非処置対照と比較して統計的に有意であることが見出された（図１１Ｃ～Ｅ）。

【0339】

細胞外亜鉛の存在下で、ＮＡＰは、ＭＴシャフトへのタウ結合を促進することによって、ＭＴを分解から保護することが知られている［１９、２５］。重合対可溶性チューブリンアッセイを行って、ＭＴ分解及びタウ－ＭＴ解離に対するＮＡＰ及びＳＫＩＰの保護活性を比較した（図１１Ｆ～Ｇ）。ＮＡＰ又はＳＫＩＰ（１０^－１２Ｍ、４時間）の存在下及び非存在下で亜鉛（４００μＭ、４時間）で処理した後、細胞チューブリンプールを重合及び可溶性チューブリン画分に分離した。タウ、チューブリン、及びアクチンの量を、イムノブロッティング（図１１Ｆ）、続いてデンシトメトリー定量（図１１Ｇ）によって同定した。亜鉛処理は、未処理対照と比較して、可溶性画分中のタウ及びチューブリンの免疫反応性を有意に増加させ、ＭＴからのタウ放出及びＭＴ分解を示した（図１１Ｆ～Ｇ）。重合チューブリンは、ＮＡＰ及びＳＫＩＰ処理の両方によって亜鉛誘導性崩壊から保護されたが、ＮＡＰのみが、ＭＴからのタウ解離に対する保護を示した（図１１Ｆ～Ｇ）。異なる処理後の可溶性チューブリン画分中のアクチンタンパク質の量に変化は観察されなかった（図１Ｆ）。

【0340】

ＳＨＡＮＫ ３関連突然変異から保護されたＮＡＰ、フェラン・マクダーミド症候群の自閉症モデル
プロリンリッチシナプス関連タンパク質２（ＰｒｏＳＡＰ２）としても知られているＳＨ３及び複数アンキリンリピートドメイン３（Ｓｈａｎｋ３）は、ヒトにおいて第２２染色体上のＳＨＡＮＫ３遺伝子によってコードされるタンパク質である。ＳＨＡＮＫ３における突然変異は、フェラン－マクダーミド症候群の原因である。ＳＨＡＮＫ３自閉症マウスがタウオパシーを示さないという以前の知見にかかわらず（［３０］）、本発明者らは、ＳＨ３部位を与えられたＳＨＡＮＫ３マウスにおけるＮＡＰの潜在的な効果を試験した。

【0341】

この目的のために、ＡＳＤ関連ＩｎｓＧ３６８０突然変異［３５］を有するマウスを使用した。２つの行動評価を、雄マウスで行った。
１）不安及びうつ病を証明するオープンフィールド行動（オープンフィールド行動評価技術は、以前に記載されている、例えば［３６］）；及び
２）自閉症形質関連の社会的認識行動（社会的認識試験は以前に記載されている、例えば［３８、３９］。

【0342】

オープンフィールド行動は、不安／鬱行動を示す、中心における累積持続時間の劇的な減少を示し、これは、ＮＡＰ処置（上記の実施例１に記載されるように、１日１回、１ヶ月間、週５日、鼻腔内投与）によって有意に増加した（図１２）。この驚くべき発見は、フェラン－マクダーミド症候群を有する個体において精神病及び退行が存在するので重要である［３７］。

【0343】

社会的認識試験において、結果は、直接、又はマウス若しくはカップのみが存在するチャンバ内のいずれかで、マウス若しくはカップを探索する時間及び探索する頻度の両方を測定した（図１３）。結果は、ＷＴ同腹仔及びＳＨＡＮＫ３突然変異マウスの無関心行動を明確に示したが、突然変異はマウス探索、すなわち自閉症行動の有意な減少をもたらし、これはＮＡＰ処置ＳＨＡＮＫ３マウスモデルにおける行動の正常化と結びついており、ＮＡＰの存在下でカップ（物体）よりもマウスが有意に優先し、ＮＡＰによる自閉症関連社会的行動の増強を示唆した。

【0344】

反復行動、重要な自閉症の特徴もまた、グルーミング頻度及び持続時間を測定することによって評価した。グルーミングの累積持続時間をそのような行動の頻度で割ることによって計算される平均グルーミング持続時間は、偽処置ＳＨＡＮＫ３マウスがそれらのＷＴ対応物よりも高い値を示すことを示した（データは示さず）。偽処置マウスはまた、ＮＡＰ処置ＳＨＡＮＫ３マウスよりも高いグルーミング頻度を示した（データは示さず）。

【0345】

同様に、ＡＤＮＰ症候群について記載されているように、ユーバクテリウム科（ＥｕｂＶ３）［４０］は、ＳＨＡＮＫ３突然変異の結果として変化する傾向を示し、この傾向は処置マウスでは観察されなかった（データは示さず）。

【0346】

注目すべきことに、ＮＡＰによる社会的認識（すなわち、カップ＝物体チャンバではなくマウスの選好）に対する効果は、一般的な特発性自閉症マウスであるＢＴＢＲマウスにおいても観察された［４２］（図１４）。

【0347】

結果の概要
ＡＤＮＰにおけるデノボヘテロ接合突然変異は、自閉症ＡＤＮＰ症候群を再現した。ＡＤＮＰ突然変異は、シナプス活性に必須の微小管（ＭＴ）機能を損なう。ＡＤＮＰ ＭＴ結合フラグメントＮＡＰＶＳＩＰＱ（ＮＡＰ）（配列番号２）は、ＭＴ末端結合タンパク相互作用ドメイン、ＳｘＩＰを含有する（活性ペプチド、ＳＫＩＰ、配列番号２１を模倣する）。本発明者らは、全てのＡＤＮＰ突然変異が同様に有害であるわけではなく、ＮＡＰＶＳＩＰＱのＮＡＰＶ分が生物学的に活性であると仮定した。真核生物直鎖状モチーフ（ＥＬＭ）リソースを使用して、本発明者らは、細胞骨格を調節するシグナル伝達経路の制御に関与するＮＡＰ中のＳｒｃホモロジー３（ＳＨ３）ドメイン－リガンド会合部位、すなわちＮＡＰＶＳＩＰ（配列番号２）を同定した。全体として、本発明者らは、ＡＤＮＰにおいて複数のＳＨ３結合部位をマッピングした。ＭＴ動態及びタウ相互作用に対するＡＤＮＰ突然変異ｐ．Ｇｌｕ８３０ｓｙｎｆｓ^＊８３、ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１、ｐ．Ｓｅｒ４０４^＊の効果の比較（生細胞蛍光顕微鏡）は、ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１において毒性機能が残され、フレームシフト挿入によりＳＨ３結合モチーフが回復したことを示唆した。ｐ．Ｌｙｓ４０８Ｖａｌｆｓ^＊３１ ＳＨ３結合モチーフを消失させる部位特異的突然変異誘発は、ＭＴ傷害性を生じた。ＮＡＰは、全てのＡＤＮＰ突然変異に直面してＭＴ活性を正常化したが、ＳＨ３結合モチーフが存在しないＳＫＩＰは、ＮＡＰと比較して、ＭＴ－タウ相互作用に関して有効性の低下を示した。最後に、主要な自閉症遺伝子産物であるＳＨ３及び複数のアンキリン反復ドメインタンパク質３（ＳＨＡＮＫ３）は、アクチン結合モチーフを介して細胞骨格と相互作用して、挙動を改変する。同様に、ＥＬＭ分析は、ＡＤＮＰ上のアクチン結合部位を同定し、直接的なＳＨ３及び間接的なＳＨＡＮＫ３／ＡＤＮＰ会合を示唆した。マウス脳抽出物からのアクチン共免疫沈降は、Ｓｈａｎｋ３－Ａｄｎｐ－アクチン相互作用のＮＡＰ媒介正常化を示した。更に、ＮＡＰ処置は、Ｓｈａｎｋ３ＡＳＤ関連ＩｎｓＧ３６８０突然変異についてホモ接合性のマウスにおける異常行動を改善し、ＡＤＮＰとＳＨＡＮＫ３との間の基本的な共有機構を明らかにし、ＮＡＰ防御活性は、ＡＤＮＰ症候群を超えて、ＳＨＡＮＫ３及びアクチンが関与する複数の症候群に達する。

【0348】

実施例２の参照文献：
１．Ｐｉｎｈａｓｏｖ Ａ，Ｍａｎｄｅｌ Ｓ，Ｔｏｒｃｈｉｎｓｋｙ Ａ，Ｇｉｌａｄｉ Ｅ，Ｐｉｔｔｅｌ Ｚ，Ｇｏｌｄｓｗｅｉｇ ＡＭ，Ｓｅｒｖｏｓｓ ＳＪ，Ｂｒｅｎｎｅｍａｎ ＤＥ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ａｃｔｉｖｉｔｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ：ａ ｎｏｖｅｌ ｇｅｎｅ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｂｒａｉｎ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ Ｄｅｖ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．２００３，１４４（１），８３．
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５．Ｃｈｕ Ｙ，Ｍｏｒｆｉｎｉ ＧＡ，及びＫｏｒｄｏｗｅｒ ＪＨ．Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｃｔｉｖｉｔｙ－Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ Ｓｐｏｒａｄｉｃ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｓ Ｄｉｓ．２０１６，６（１），７７．
６．Ｈｅｌｓｍｏｏｒｔｅｌ Ｃ，Ｖｕｌｔｏ－ｖａｎ Ｓｉｌｆｈｏｕｔ ＡＴ，Ｃｏｅ ＢＰ，Ｖａｎｄｅｗｅｙｅｒ Ｇ，Ｒｏｏｍｓ Ｌ，ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｎｄｅ Ｊ，Ｓｃｈｕｕｒｓ－Ｈｏｅｉｊｍａｋｅｒｓ ＪＨ，Ｍａｒｃｅｌｉｓ ＣＬ，Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎ ＭＨ，Ｖｉｓｓｅｒｓ ＬＥ，Ｙｎｔｅｍａ ＨＧ，Ｂａｋｓｈｉ Ｍ，Ｗｉｌｓｏｎ Ｍ，Ｗｉｔｈｅｒｓｐｏｏｎ ＫＴ，Ｍａｌｍｇｒｅｎ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ａ ＳＷＩ／ＳＮＦ－ｒｅｌａｔｅｄ ａｕｔｉｓｍ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｄｅ ｎｏｖｏ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ＡＤＮＰ．Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ．２０１４，４６（４），３８０．
７．Ｈａｃｏｈｅｎ－Ｋｌｅｉｍａｎ Ｇ，Ｓｒａｇｏｖｉｃｈ Ｓ，Ｋａｒｍｏｎ Ｇ，Ｇａｏ ＡＹＬ，Ｇｒｉｇｇ Ｉ，Ｐａｓｍａｎｉｋ－Ｃｈｏｒ Ｍ，Ｌｅ Ａ，Ｋｏｒｅｎｋｏｖａ Ｖ，ＭｃＫｉｎｎｅｙ ＲＡ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ａｃｔｉｖｉｔｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｍｏｄｅｌｓ ｓｙｎａｐｔｉｃ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ａｕｔｉｓｍ－ｌｉｋｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２０１８，１２８（１１），４９５６．
８．Ｄｅ Ｒｕｂｅｉｓ Ｓ，Ｈｅ Ｘ，Ｇｏｌｄｂｅｒｇ ＡＰ，Ｐｏｕｌｔｎｅｙ ＣＳ，Ｓａｍｏｃｈａ Ｋ，Ｃｉｃｅｋ ＡＥ，Ｋｏｕ Ｙ，Ｌｉｕ Ｌ，Ｆｒｏｍｅｒ Ｍ，Ｗａｌｋｅｒ Ｓ，Ｓｉｎｇｈ Ｔ，Ｋｌｅｉ Ｌ，Ｋｏｓｍｉｃｋｉ Ｊ，Ｓｈｉｈ－Ｃｈｅｎ Ｆ，Ａｌｅｋｓｉｃ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｓｙｎａｐｔｉｃ，ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｎｄ ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ｇｅｎｅｓ ｄｉｓｒｕｐｔｅｄ ｉｎ ａｕｔｉｓｍ．Ｎａｔｕｒｅ．２０１４，５１５（７５２６），２０９．
９．Ｉｏｓｓｉｆｏｖ Ｉ，Ｏ’Ｒｏａｋ ＢＪ，Ｓａｎｄｅｒｓ ＳＪ，Ｒｏｎｅｍｕｓ Ｍ，Ｋｒｕｍｍ Ｎ，Ｌｅｖｙ Ｄ，Ｓｔｅｓｓｍａｎ ＨＡ，Ｗｉｔｈｅｒｓｐｏｏｎ ＫＴ，Ｖｉｖｅｓ Ｌ，Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ ＫＥ，Ｓｍｉｔｈ ＪＤ，Ｐａｅｐｅｒ Ｂ，Ｎｉｃｋｅｒｓｏｎ ＤＡ，Ｄｅａ Ｊ，Ｄｏｎｇ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅ ｎｏｖｏ ｃｏｄｉｎｇ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｔｏ ａｕｔｉｓｍ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｄｉｓｏｒｄｅｒ．Ｎａｔｕｒｅ．２０１４，５１５（７５２６），２１６．
１０．Ｙｕｅｎ ＲＫ，Ｍｅｒｉｃｏ Ｄ，Ｃａｏ Ｈ，Ｐｅｌｌｅｃｃｈｉａ Ｇ，Ａｌｉｐａｎａｈｉ Ｂ，Ｔｈｉｒｕｖａｈｉｎｄｒａｐｕｒａｍ Ｂ，Ｔｏｎｇ Ｘ，Ｓｕｎ Ｙ，Ｃａｏ Ｄ，Ｚｈａｎｇ Ｔ，Ｗｕ Ｘ，Ｊｉｎ Ｘ，Ｚｈｏｕ Ｚ，Ｌｉｕ Ｘ，Ｎａｌｐａｔｈａｍｋａｌａｍ Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ－ｗｉｄｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｄｅ ｎｏｖｏ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ａｕｔｉｓｍ．ＮＰＪ Ｇｅｎｏｍ Ｍｅｄ．２０１６，１（１６０２７１．
１１．Ｏ’Ｒｏａｋ ＢＪ，Ｖｉｖｅｓ Ｌ，Ｇｉｒｉｒａｊａｎ Ｓ，Ｋａｒａｋｏｃ Ｅ，Ｋｒｕｍｍ Ｎ，Ｃｏｅ ＢＰ，Ｌｅｖｙ Ｒ，Ｋｏ Ａ，Ｌｅｅ Ｃ，Ｓｍｉｔｈ ＪＤ，Ｔｕｒｎｅｒ ＥＨ，Ｓｔａｎａｗａｙ ＩＢ，Ｖｅｒｎｏｔ Ｂ，Ｍａｌｉｇ Ｍ，Ｂａｋｅｒ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｓｐｏｒａｄｉｃ ａｕｔｉｓｍ ｅｘｏｍｅｓ ｒｅｖｅａｌ ａ ｈｉｇｈｌｙ ｉｎｔｅｒｃｏｎｎｅｃｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｎｅｔｗｏｒｋ ｏｆ ｄｅ ｎｏｖｏ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ．Ｎａｔｕｒｅ．２０１２，４８５（７３９７），２４６．
１２．Ｇｏｚｅｓ Ｉ，Ｈｅｌｓｍｏｏｒｔｅｌ Ｃ，Ｖａｎｄｅｗｅｙｅｒ Ｇ，Ｖａｎ ｄｅｒ Ａａ Ｎ，Ｋｏｏｙ Ｆ，及びＳｅｒｍｏｎｅ ＳＢ．Ｔｈｅ Ｃｏｍｐａｓｓｉｏｎａｔｅ Ｓｉｄｅ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ：Ｔｏｎｙ Ｓｅｒｍｏｎｅ’ｓ Ｕｎｄｉａｇｎｏｓｅｄ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｊｏｕｒｎｅｙ－－ＡＤＮＰ Ｍｕｔａｔｉｏｎ．Ｊ Ｍｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１５，５６（４），７５１．
１３．Ｐｅｓｃｏｓｏｌｉｄｏ ＭＦ，Ｓｃｈｗｅｄｅ Ｍ，Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｈａｒｒｉｓｏｎ Ａ，Ｓｃｈｍｉｄｔ Ｍ，Ｇａｍｓｉｚ ＥＤ，Ｃｈｅｎ ＷＳ，Ｄｏｎａｈｕｅ ＪＰ，Ｓｈｕｒ Ｎ，Ｊｅｒｓｋｅｙ ＢＡ，Ｐｈｏｒｎｐｈｕｔｋｕｌ Ｃ，及びＭｏｒｒｏｗ ＥＭ．Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｊ Ｍｅｄ Ｇｅｎｅｔ．２０１４，５１（９），５８７．
１４．Ｖａｎ Ｄｉｊｃｋ Ａ，Ｖｕｌｔｏ－ｖａｎ Ｓｉｌｆｈｏｕｔ ＡＴ，Ｃａｐｐｕｙｎｓ Ｅ，ｖａｎ ｄｅｒ Ｗｅｒｆ ＩＭ，Ｍａｎｃｉｎｉ ＧＭ，Ｔｚｓｃｈａｃｈ Ａ，Ｂｅｒｎｉｅｒ Ｒ，Ｇｏｚｅｓ Ｉ，Ｅｉｃｈｌｅｒ ＥＥ，Ｒｏｍａｎｏ Ｃ，Ｌｉｎｄｓｔｒａｎｄ Ａ，Ｎｏｒｄｇｒｅｎ Ａ，Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ Ａ，Ｋｖａｒｎｕｎｇ Ｍ，Ｋｌｅｅｆｓｔｒａ Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｎｅｕｒｏｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｄｉｓｏｒｄｅｒ Ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ＡＤＮＰ．Ｂｉｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０１９，８５（４），２８７．
１５．Ｍａｎｄｅｌ Ｓ及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ａｃｔｉｖｉｔｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｅｌｅｍｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ＳＷＩ／ＳＮＦ ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００７，２８２（４７），３４４４８．
１６．Ｏｓｔａｐｃｕｋ Ｖ，Ｍｏｈｎ Ｆ，Ｃａｒｌ ＳＨ，Ｂａｓｔｅｒｓ Ａ，Ｈｅｓｓ Ｄ，Ｉｅｓｍａｎｔａｖｉｃｉｕｓ Ｖ，Ｌａｍｐｅｒｓｂｅｒｇｅｒ Ｌ，Ｆｌｅｍｒ Ｍ，Ｐａｎｄｅｙ Ａ，Ｔｈｏｍａ ＮＨ，Ｂｅｔｓｃｈｉｎｇｅｒ Ｊ，及びＢｕｈｌｅｒ Ｍ．Ａｃｔｉｖｉｔｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｒｕｉｔｓ ＨＰ１ ａｎｄ ＣＨＤ４ ｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｌｉｎｅａｇｅ－ｓｐｅｃｉｆｙｉｎｇ ｇｅｎｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ．２０１８，５５７（７７０７），７３９．
１７．Ｇｏｚｅｓ Ｉ．Ｔｈｅ ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ ａｓ ａ ｄｒｕｇ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ：ｔｈｅ ｃａｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｕｔｉｓｍ－ｍｕｔａｔｅｄ ＡＤＮＰ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２０１６，３９７（３），１７７．
１８．Ｖｕｌｉｈ－Ｓｈｕｌｔｚｍａｎ Ｉ，Ｐｉｎｈａｓｏｖ Ａ，Ｍａｎｄｅｌ Ｓ，Ｇｒｉｇｏｒｉａｄｉｓ Ｎ，Ｔｏｕｌｏｕｍｉ Ｏ，Ｐｉｔｔｅｌ Ｚ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ａｃｔｉｖｉｔｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｎｉｐｐｅｔ ＮＡＰ ｒｅｄｕｃｅｓ ｔａｕ ｈｙｐｅｒｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｌｅａｒｎｉｎｇ ｉｎ ａ ｎｏｖｅｌ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ．Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ．２００７，３２３（２），４３８．
１９．Ｉｖａｓｈｋｏ－Ｐａｃｈｉｍａ Ｙ，Ｓａｙａｓ ＣＬ，Ｍａｌｉｓｈｋｅｖｉｃｈ Ａ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．ＡＤＮＰ／ＮＡＰ ｄｒａｍａｔｉｃａｌｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ ｅｎｄ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－Ｔａｕ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ：ａ ｎｏｖｅｌ ａｖｅｎｕｅ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ｔａｕｏｐａｔｈｙ．Ｍｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０１７，２２（９），１３３５．
２０．Ｓｕｄｏ Ｈ及びＢａａｓ ＰＷ．Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｄｉｍｉｎｉｓｈｉｎｇ ｋａｔａｎｉｎ－ｂａｓｅｄ ｌｏｓｓ ｏｆ ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｓ ｉｎ ｔａｕｏｐａｔｈｉｃ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ．２０１１，２０（４），７６３．
２１．Ｚｅｍｌｙａｋ Ｉ，Ｍａｎｌｅｙ Ｎ，Ｓａｐｏｌｓｋｙ Ｒ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．ＮＡＰ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ ａｇａｉｎｓｔ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｔｏｘｉｎｓ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．２００７，２８（１０），２００４．
２２．Ｇｏｚｅｓ Ｉ，Ｉｒａｍ Ｔ，Ｍａｒｙａｎｏｖｓｋｙ Ｅ，Ａｒｖｉｖ Ｃ，Ｒｏｚｅｎｂｅｒｇ Ｌ，Ｓｃｈｉｒｅｒ Ｙ，Ｇｉｌａｄｉ Ｅ，及びＦｕｒｍａｎ－Ａｓｓａｆ Ｓ．Ｎｏｖｅｌ ｔｕｂｕｌｉｎ ａｎｄ ｔａｕ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｓｈａｒｉｎｇ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｒｕｇ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ＮＡＰ（Ｄａｖｕｅｎｔｉｄｅ）．Ｊ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｉｓ．２０１４，４０ Ｓｕｐｐｌ １（Ｓ２３．
２３．Ｇｏｚｅｓ Ｉ，Ｄｉｖｉｎｓｋｉ Ｉ，及びＰｉｌｔｚｅｒ Ｉ．ＮＡＰ ａｎｄ Ｄ－ＳＡＬ：ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｂｅｔａ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｅｐｔｉｄｅ（１－４２）．ＢＭＣ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００８，９ Ｓｕｐｐｌ ３（Ｓ３．
２４．Ｏｚ Ｓ，Ｋａｐｉｔａｎｓｋｙ Ｏ，Ｉｖａｓｈｃｏ－Ｐａｃｈｉｍａ Ｙ，Ｍａｌｉｓｈｋｅｖｉｃｈ Ａ，Ｇｉｌａｄｉ Ｅ，Ｓｋａｌｋａ Ｎ，Ｒｏｓｉｎ－Ａｒｂｅｓｆｅｌｄ Ｒ，Ｍｉｔｔｅｌｍａｎ Ｌ，Ｓｅｇｅｖ Ｏ，Ｈｉｒｓｃｈ ＪＡ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ｔｈｅ ＮＡＰ ｍｏｔｉｆ ｏｆ ａｃｔｉｖｉｔｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＡＤＮＰ）ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｓｐｉｎｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ ｅｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｍｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０１４，１９（１０），１１１５．
２５．Ｏｚ Ｓ，Ｉｖａｓｈｋｏ－Ｐａｃｈｉｍａ Ｙ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ｔｈｅ ＡＤＮＰ ｄｅｒｉｖｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ，ＮＡＰ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ｔｕｂｕｌｉｎ ｐｏｏｌ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ａｎｄ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１２，７（１２），ｅ５１４５８．
２６．Ｓｍｉｔｈ－Ｓｗｉｎｔｏｓｋｙ ＶＬ，Ｇｏｚｅｓ Ｉ，Ｂｒｅｎｎｅｍａｎ ＤＥ，Ｄ’Ａｎｄｒｅａ ＭＲ，ａｎｄ Ｐｌａｔａ－Ｓａｌａｍａｎ ＣＲ．Ａｃｔｉｖｉｔｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ－９ ａｎｄ ＮＡＰ ｐｒｏｍｏｔｅ ｎｅｕｒｉｔｅ ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ ｉｎ ｒａｔ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ａｎｄ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｃｕｌｔｕｒｅｓ．Ｊ Ｍｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００５，２５（３），２２５．
２７．Ｌａｓｓｅｒ Ｍ，Ｔｉｂｅｒ Ｊ，及びＬｏｗｅｒｙ ＬＡ．Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｆｒｏｎｔ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１８，１２（１６５．
２８．Ｂｏｎｉｎｉ ＳＡ，Ｍａｓｔｉｎｕ Ａ，Ｆｅｒｒａｒｉ－Ｔｏｎｉｎｅｌｌｉ Ｇ，及びＭｅｍｏ Ｍ．Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ Ｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ Ａｇｅｎｔｓ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｓｃｉ．２０１７，１８（８）．
２９．Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｉ Ｓ，Ｎａｔａｒａｊａｎ Ｋ，Ｃｕｒｉｅｌ Ｊ，Ｊａｎｋｅ Ｃ，及びＬｉｕ Ｊ．Ｔｈｅ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｕｂｕｌｉｎ ｃｏｄｅ：Ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｔｕｂｕｌｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｔｏ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ（Ｈｏｂｏｋｅｎ）．２０１６，７３（１０），５２１．
３０．Ｇｒｉｇｇ Ｉ，Ｉｖａｓｈｋｏ－Ｐａｃｈｉｍａ Ｙ，Ｈａｉｔ ＴＡ，Ｋｏｒｅｎｋｏｖａ Ｖ，Ｔｏｕｌｏｕｍｉ Ｏ，Ｌａｇｏｕｄａｋｉ Ｒ，Ｖａｎ Ｄｉｊｃｋ Ａ，Ｍａｒｕｓｉｃ Ｚ，Ａｎｉｃｉｃ Ｍ，Ｖｕｋｏｖｉｃ Ｊ，Ｋｏｏｙ ＲＦ，Ｇｒｉｇｏｒｉａｄｉｓ Ｎ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ｔａｕｏｐａｔｈｙ ｉｎ ｔｈｅ ｙｏｕｎｇ ａｕｔｉｓｔｉｃ ｂｒａｉｎ：ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｍａｒｋｅｒ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ．Ｔｒａｎｓｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０２０，１０（１），２２８．
３１．Ｉｖａｓｈｋｏ－Ｐａｃｈｉｍａ Ｙ，Ｈａｄａｒ Ａ，Ｇｒｉｇｇ Ｉ，Ｋｏｒｅｎｋｏｖａ Ｖ，Ｋａｐｉｔａｎｓｋｙ Ｏ，Ｋａｒｍｏｎ Ｇ，Ｇｅｒｓｈｏｖｉｔｓ Ｍ，Ｓａｙａｓ ＣＬ，Ｋｏｏｙ ＲＦ，Ａｔｔｅｍｓ Ｊ，Ｇｕｒｗｉｔｚ Ｄ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ａｕｔｉｓｍ／ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ ｓｏｍａｔｉｃ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｂｒａｉｎｓ：ｍｕｔａｔｅｄ ＡＤＮＰ ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓ ａｎｄ ｒｅｐａｉｒ ａｓ ａ ｃａｓｅ ｓｔｕｄｙ．Ｍｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０１９．
３２．Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ Ｊ．ＳＨ２／ＳＨ３ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｇｅｎｅｔ Ｄｅｖ．１９９４，４（１），２５．
３３．Ｄｉｎｋｅｌ Ｈ，Ｖａｎ Ｒｏｅｙ Ｋ，Ｍｉｃｈａｅｌ Ｓ，Ｋｕｍａｒ Ｍ，Ｕｙａｒ Ｂ，Ａｌｔｅｎｂｅｒｇ Ｂ，Ｍｉｌｃｈｅｖｓｋａｙａ Ｖ，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ Ｍ，Ｋｕｈｎ Ｈ，Ｂｅｈｒｅｎｄｔ Ａ，Ｄａｈｌ ＳＬ，Ｄａｍｅｒｅｌｌ Ｖ，Ｄｉｅｂｅｌ Ｓ，Ｋａｌｍａｎ Ｓ，Ｋｌｅｉｎ Ｓ，ｅｔ ａｌ．ＥＬＭ ２０１６－－ｄａｔａ ｕｐｄａｔｅ ａｎｄ ｎｅｗ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｌｉｎｅａｒ ｍｏｔｉｆ ｒｅｓｏｕｒｃｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１６，４４（Ｄ１），Ｄ２９４．
３４．Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ＣＨ，Ｇａｒｗｏｏｄ ＣＪ，Ｗｒａｙ Ｓ，Ｐｒｉｃｅ Ｃ，Ｋｅｌｌｉｅ Ｓ，Ｐｅｒｅｒａ Ｔ，Ｚｖｅｌｅｂｉｌ Ｍ，Ｙａｎｇ Ａ，Ｓｈｅｐｐａｒｄ ＰＷ，Ｖａｒｎｄｅｌｌ ＩＭ，Ｈａｎｇｅｒ ＤＰ，及びＡｎｄｅｒｔｏｎ ＢＨ．Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔａｕ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ Ｓｒｃ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ３ ｄｏｍａｉｎｓ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ ３－ｋｉｎａｓｅ，ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ｃｇａｍｍａ１，Ｇｒｂ２，ａｎｄ Ｓｒｃ ｆａｍｉｌｙ ｋｉｎａｓｅｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００８，２８３（２６），１８１７７．
３５．Ｚｈｏｕ Ｙ，Ｋａｉｓｅｒ Ｔ，Ｍｏｎｔｅｉｒｏ Ｐ，Ｚｈａｎｇ Ｘ，Ｖａｎ ｄｅｒ Ｇｏｅｓ ＭＳ，Ｗａｎｇ Ｄ，Ｂａｒａｋ Ｂ，Ｚｅｎｇ Ｍ，Ｌｉ Ｃ，Ｌｕ Ｃ，Ｗｅｌｌｓ Ｍ，Ａｍａｙａ Ａ，Ｎｇｕｙｅｎ Ｓ，Ｌｅｗｉｓ Ｍ，Ｓａｎｊａｎａ Ｎ，ｅｔ ａｌ．Ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ Ｓｈａｎｋ３ Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＡＳＤ ａｎｄ Ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ Ｄｉｓｐｌａｙ Ｂｏｔｈ Ｓｈａｒｅｄ ａｎｄ Ｄｉｓｔｉｎｃｔ Ｄｅｆｅｃｔｓ．Ｎｅｕｒｏｎ．２０１６，８９（１），１４７．
３６．Ｓｒａｇｏｖｉｃｈ Ｓ，Ａｍｒａｍ Ｎ，Ｙｅｈｅｓｋｅｌ Ａ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．ＶＩＰ／ＰＡＣＡＰ－Ｂａｓｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：Ｔｈｅ ＡＤＮＰ／ＮＡＰ－Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｍｉｒｒｏｒ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ＳＫＩＰ ａｎｄ Ｄ－ＳＫＩＰ Ｅｘｈｉｂｉｔ Ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｖｅ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｄ ｉｎ ｓｉｌｉｃｏ Ｅｆｆｅｃｔｓ．Ｆｒｏｎｔ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１９，１３（５８９．
３７．Ｋｏｈｌｅｎｂｅｒｇ ＴＭ，Ｔｒｅｌｌｅｓ ＭＰ，ＭｃＬａｒｎｅｙ Ｂ，Ｂｅｔａｎｃｕｒ Ｃ，Ｔｈｕｒｍ Ａ，及びＫｏｌｅｖｚｏｎ Ａ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ ｉｌｌｎｅｓｓ ａｎｄ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｗｉｔｈ Ｐｈｅｌａｎ－ＭｃＤｅｒｍｉｄ ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｄｅｖ Ｄｉｓｏｒｄ．２０２０，１２（１），７．
３８．Ｓｒａｇｏｖｉｃｈ Ｓ，Ｍａｌｉｓｈｋｅｖｉｃｈ Ａ，Ｐｉｏｎｔｋｅｗｉｔｚ Ｙ，Ｇｉｌａｄｉ Ｅ，Ｔｏｕｌｏｕｍｉ Ｏ，Ｌａｇｏｕｄａｋｉ Ｒ，Ｇｒｉｇｏｒｉａｄｉｓ Ｎ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ｔｈｅ ａｕｔｉｓｍ／ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ－ｌｉｎｋｅｄ ＡＤＮＰ／ＮＡＰ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｃｉｔａｔｏｒｙ ｇｌｕｔａｍａｔｅｒｇｉｃ ｓｙｎａｐｓｅ．Ｔｒａｎｓｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０１９，９（１），２．
３９．Ｓｒａｇｏｖｉｃｈ Ｓ，Ｚｉｖ Ｙ，Ｖａｉｓｖａｓｅｒ Ｓ，Ｓｈｏｍｒｏｎ Ｎ，Ｈｅｎｄｌｅｒ Ｔ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ｔｈｅ ａｕｔｉｓｍ－ｍｕｔａｔｅｄ ＡＤＮＰ ｐｌａｙｓ ａ ｋｅｙ ｒｏｌｅ ｉｎ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｔｒａｎｓｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０１９，９（１），２３５．
４０．Ｋａｐｉｔａｎｓｋｙ Ｏ，Ｇｉｌａｄｉ Ｅ，Ｊａｌｊｕｌｉ Ｉ，Ｂｅｒｅｓｗｉｌｌ Ｓ，Ｈｅｉｍｅｓａａｔ ＭＭ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ｃｈａｎｇｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＡＤＮＰ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓ：ｒａｐｉｄ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ｆｏｒ ＮＡＰ（ＣＰ２０１）ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ＡＤＮＰ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ａｎｄ ｂｅｙｏｎｄ．Ｊ Ｎｅｕｒａｌ Ｔｒａｎｓｍ（Ｖｉｅｎｎａ）．２０２０，１２７（２），２５１．
４１．Ｗｉｌｌｓｅｙ ＨＲ，Ｅｘｎｅｒ ＣＲＴ，Ｘｕ Ｙ，Ｅｖｅｒｉｔｔ Ａ，Ｓｕｎ Ｎ，Ｗａｎｇ Ｂ，Ｄｅａ Ｊ，Ｓｃｈｍｕｎｋ Ｇ，Ｚａｌｔｓｍａｎ Ｙ，Ｔｅｅｒｉｋｏｒｐｉ Ｎ，Ｋｉｍ Ａ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＡＳ，Ｓｈｉｎ Ｄ，Ｓｅｙｌｅｒ Ｍ，Ｎｏｗａｋｏｗｓｋｉ ＴＪ，ｅｔ ａｌ．Ｐａｒａｌｌｅｌ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｌａｒｇｅ－ｅｆｆｅｃｔ ａｕｔｉｓｍ ｇｅｎｅｓ ｉｍｐｌｉｃａｔｅｓ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｉｎ ｒｉｓｋ ａｎｄ ｒｅｓｉｌｉｅｎｃｅ．Ｎｅｕｒｏｎ．２０２１．
４２．Ｋａｚｄｏｂａ ＴＭ，Ｈａｇｅｒｍａｎ ＲＪ，Ｚｏｌｋｏｗｓｋａ Ｄ，Ｒｏｇａｗｓｋｉ ＭＡ，及びＣｒａｗｌｅｙ ＪＮ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｎｅｕｒｏａｃｔｉｖｅ ｓｔｅｒｏｉｄ ｇａｎａｘｏｌｏｎｅ ｏｎ ｓｏｃｉａｌ ａｎｄ ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅ ｂｅｈａｖｉｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ＢＴＢＲ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ａｕｔｉｓｍ．Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（Ｂｅｒｌ）．２０１６，２３３（２），３０９．
４３．Ｍｅｎｏｎ Ｓ及びＧｕｐｔｏｎ ＳＬ．Ｂｕｉｌｄｉｎｇ Ｂｌｏｃｋｓ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ Ｂｒａｉｎ：Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ Ｄｙｎａｍｉｃｓ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｎａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１６，３２２（１８３．
４４．Ｐａｃｈｅｃｏ Ａ及びＧａｌｌｏ Ｇ．Ａｃｔｉｎ ｆｉｌａｍｅｎｔ－ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ａｘｏｎ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｒａｎｃｈｉｎｇ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ Ｂｕｌｌ．２０１６，１２６（Ｐｔ３），３００．
４５．Ｋｉｒｋｃａｌｄｉｅ ＭＴＫ及びＤｗｙｅｒ ＳＴ．Ｔｈｅ ｔｈｉｒｄ ｗａｖｅ：Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ｆｉｌａｍｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｔｕｒｉｎｇ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１７，８４（６８．
４６．Ｗｉｔｔｅ Ｈ及びＢｒａｄｋｅ Ｆ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２００８，１８（５），４７９．
４７．Ｙｏｇｅｖ Ｓ，Ｃｏｏｐｅｒ Ｒ，Ｆｅｔｔｅｒ Ｒ，Ｈｏｒｏｗｉｔｚ Ｍ，及びＳｈｅｎ Ｋ．Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ Ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ Ａｘｏｎａｌ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ Ｄｙｎａｍｉｃｓ．Ｎｅｕｒｏｎ．２０１６，９２（２），４４９．
４８．Ｌｏｗｅｒｙ ＬＡ及びＶａｎ Ｖａｃｔｏｒ Ｄ．Ｔｈｅ ｔｒｉｐ ｏｆ ｔｈｅ ｔｉｐ：ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｃｏｎｅ ｍａｃｈｉｎｅｒｙ．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２００９，１０（５），３３２．
４９．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ ＯＣ，Ｓｃｈａｅｆｅｒ ＡＷ，Ｍａｎｄａｔｏ ＣＡ，Ｆｏｒｓｃｈｅｒ Ｐ，Ｂｅｍｅｎｔ ＷＭ，及びＷａｔｅｒｍａｎ－Ｓｔｏｒｅｒ ＣＭ．Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ－ａｃｔｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ｍｏｖｅｍｅｎｔ ａｎｄ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２００３，５（７），５９９．
５０．Ｄｅｅｎ Ｂ，Ｋｏｌｄｅｗｙｎ Ｋ，Ｋａｎｗｉｓｈｅｒ Ｎ，及びＳａｘｅ Ｒ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｏｃｉａｌ Ｐｅｒｃｅｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｓｕｐｅｒｉｏｒ Ｔｅｍｐｏｒａｌ Ｓｕｌｃｕｓ．Ｃｅｒｅｂ Ｃｏｒｔｅｘ．２０１５，２５（１１），４５９６．
５１．Ｓｈｉｈ Ｐ，Ｋｅｅｈｎ Ｂ，Ｏｒａｍ ＪＫ，Ｌｅｙｄｅｎ ＫＭ，Ｋｅｏｗｎ ＣＬ，及びＭｕｌｌｅｒ ＲＡ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｓｕｐｅｒｉｏｒ ｔｅｍｐｏｒａｌ ｓｕｌｃｕｓ ｉｎ ａｕｔｉｓｍ：ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｉｔｙ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉｍａｇｉｎｇ ｓｔｕｄｙ．Ｂｉｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０１１，７０（３），２７０．
５２．Ｂａｒｎｅａ－Ｇｏｒａｌｙ Ｎ，Ｆｒａｚｉｅｒ ＴＷ，Ｐｉａｃｅｎｚａ Ｌ，Ｍｉｎｓｈｅｗ ＮＪ，Ｋｅｓｈａｖａｎ ＭＳ，Ｒｅｉｓｓ ＡＬ，ａｎｄ Ｈａｒｄａｎ ＡＹ．Ａ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ ｖｏｌｕｍｅｔｒｉｃ ＭＲＩ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ａｍｙｇｄａｌａ ａｎｄ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｖｏｌｕｍｅｓ ｉｎ ａｕｔｉｓｍ．Ｐｒｏｇ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｂｉｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０１４，４８（１２４．
５３．Ｂａｒｎｅａ－Ｇｏｒａｌｙ Ｎ，Ｋｗｏｎ Ｈ，Ｍｅｎｏｎ Ｖ，Ｅｌｉｅｚ Ｓ，Ｌｏｔｓｐｅｉｃｈ Ｌ，及びＲｅｉｓｓ ＡＬ．Ｗｈｉｔｅ ｍａｔｔｅｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｉｎ ａｕｔｉｓｍ：ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｔｅｎｓｏｒ ｉｍａｇｉｎｇ．Ｂｉｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２００４，５５（３），３２３．
５４．Ｗｅｂｅｒ ＡＭ，Ｅｇｅｌｈｏｆｆ ＪＣ，ＭｃＫｅｌｌｏｐ ＪＭ，及びＦｒａｎｚ ＤＮ．Ａｕｔｉｓｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｅｒｅｂｅｌｌｕｍ：ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｒｏｍ ｔｕｂｅｒｏｕｓ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｊ Ａｕｔｉｓｍ Ｄｅｖ Ｄｉｓｏｒｄ．２０００，３０（６），５１１．
５５．Ｃｈｏｗ ＭＬ，Ｐｒａｍｐａｒｏ Ｔ，Ｗｉｎｎ ＭＥ，Ｂａｒｎｅｓ ＣＣ，Ｌｉ ＨＲ，Ｗｅｉｓｓ Ｌ，Ｆａｎ ＪＢ，Ｍｕｒｒａｙ Ｓ，Ａｐｒｉｌ Ｃ，Ｂｅｌｉｎｓｏｎ Ｈ，Ｆｕ ＸＤ，Ｗｙｎｓｈａｗ－Ｂｏｒｉｓ Ａ，Ｓｃｈｏｒｋ ＮＪ，及びＣｏｕｒｃｈｅｓｎｅ Ｅ．Ａｇｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｂｒａｉｎ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ ａｎｏｍａｌｉｅｓ ｉｎ ａｕｔｉｓｍ ｓｕｇｇｅｓｔ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ａｔ ｙｏｕｎｇ ｖｅｒｓｕｓ ｍａｔｕｒｅ ａｇｅｓ．ＰＬｏＳ Ｇｅｎｅｔ．２０１２，８（３），ｅ１００２５９２．
５６．Ｔｓａｉ ＰＴ，Ｈｕｌｌ Ｃ，Ｃｈｕ Ｙ，Ｇｒｅｅｎｅ－Ｃｏｌｏｚｚｉ Ｅ，Ｓａｄｏｗｓｋｉ ＡＲ，Ｌｅｅｃｈ ＪＭ，Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ Ｊ，Ｃｒａｗｌｅｙ ＪＮ，Ｒｅｇｅｈｒ ＷＧ，及びＳａｈｉｎ Ｍ．Ａｕｔｉｓｔｉｃ－ｌｉｋｅ ｂｅｈａｖｉｏｕｒ ａｎｄ ｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｐｕｒｋｉｎｊｅ ｃｅｌｌ Ｔｓｃ１ ｍｕｔａｎｔ ｍｉｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ．２０１２，４８８（７４１３），６４７．
５７．Ｎｉｅ Ｄ，Ｄｉ Ｎａｒｄｏ Ａ，Ｈａｎ ＪＭ，Ｂａｈａｒａｎｙｉ Ｈ，Ｋｒａｍｖｉｓ Ｉ，Ｈｕｙｎｈ Ｔ，Ｄａｂｏｒａ Ｓ，Ｃｏｄｅｌｕｐｐｉ Ｓ，Ｐａｎｄｏｌｆｉ ＰＰ，Ｐａｓｑｕａｌｅ ＥＢ，及びＳａｈｉｎ Ｍ．Ｔｓｃ２－Ｒｈｅｂ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＥｐｈＡ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｘｏｎ ｇｕｉｄａｎｃｅ．Ｎａｔ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１０，１３（２），１６３．
５８．Ｌｉｎ ＹＣ，Ｆｒｅｉ ＪＡ，Ｋｉｌａｎｄｅｒ ＭＢ，Ｓｈｅｎ Ｗ，及びＢｌａｔｔ ＧＪ．Ａ Ｓｕｂｓｅｔ ｏｆ Ａｕｔｉｓｍ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｇｅｎｅｓ Ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｎｓ．Ｆｒｏｎｔ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１６，１０（２６３．
５９．Ｊａｗｏｒｓｋｉ Ｊ，Ｈｏｏｇｅｎｒａａｄ ＣＣ，及びＡｋｈｍａｎｏｖａ Ａ．Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ ｐｌｕｓ－ｅｎｄ ｔｒａｃｋｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ．Ｉｎｔ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２００８，４０（４），６１９．
６０．Ｍｕｋａｅｔｏｖａ－Ｌａｄｉｎｓｋａ ＥＢ，Ａｒｎｏｌｄ Ｈ，Ｊａｒｏｓ Ｅ，Ｐｅｒｒｙ Ｒ，及びＰｅｒｒｙ Ｅ．Ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｏｆ ＭＡＰ２ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｌａｍｉｎａｒ ｃｙｔｏａｒｃｈｉｔｅｃｔｏｎｉｃ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｄｏｒｓｏｌａｔｅｒａｌ ｐｒｅｆｒｏｎｔａｌ ｃｏｒｔｅｘ ｉｎ ａｄｕｌｔ ａｕｔｉｓｔｉｃ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ Ａｐｐｌ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２００４，３０（６），６１５．
６１．Ｍａｎｄｅｌ Ｓ，Ｓｐｉｖａｋ－Ｐｏｈｉｓ Ｉ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．ＡＤＮＰ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｎｕｃｌｅｕｓ／ｃｙｔｏｐｌａｓｍ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ｎｅｕｒｏｎｓ ｓｕｇｇｅｓｔｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ．Ｊ Ｍｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００８，３５（２），１２７．
６２．Ｇａｒｂｅｒｎ ＪＹ，Ｎｅｕｍａｎｎ Ｍ，Ｔｒｏｊａｎｏｗｓｋｉ ＪＱ，Ｌｅｅ ＶＭ，Ｆｅｌｄｍａｎ Ｇ，Ｎｏｒｒｉｓ ＪＷ，Ｆｒｉｅｚ ＭＪ，Ｓｃｈｗａｒｔｚ ＣＥ，Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ Ｒ，及びＳｉｍａ ＡＡ．Ａ ｍｕｔａｔｉｏｎ ａｆｆｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｏｄｉｕｍ／ｐｒｏｔｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅｒ，ＳＬＣ９Ａ６，ｃａｕｓｅｓ ｍｅｎｔａｌ ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔａｕ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ．Ｂｒａｉｎ．２０１０，１３３（Ｐｔ ５），１３９１．
６３．Ｓｃｈｉｒｅｒ Ｙ，Ｍａｌｉｓｈｋｅｖｉｃｈ Ａ，Ｏｐｈｉｒ Ｙ，Ｌｅｗｉｓ Ｊ，Ｇｉｌａｄｉ Ｅ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ｎｏｖｅｌ ｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ｏｎｓｅｔ ｏｆ ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌ ｄｅｍｅｎｔｉａ：ｅａｒｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＡＤＮＰ）ｉｎ ｔｈｅ ｆａｃｅ ｏｆ Ｔａｕ ｍｕｔａｔｉｏｎ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１４，９（１），ｅ８７３８３．
６４．Ｌａｔａｐｙ Ｃ，Ｒｉｏｕｘ Ｖ，Ｇｕｉｔｔｏｎ ＭＪ，及びＢｅａｕｌｉｅｕ ＪＭ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｆ ｆｏｒｅｂｒａｉｎ ｇｌｙｃｏｇｅｎ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｋｉｎａｓｅ ３ｂｅｔａ ｒｅｖｅａｌｓ ａ ｃｅｎｔｒａｌ ｒｏｌｅ ｉｎ ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｘｉｅｔｙ ａｎｄ ｓｏｃｉａｌ ｂｅｈａｖｉｏｕｒ．Ｐｈｉｌｏｓ Ｔｒａｎｓ Ｒ Ｓｏｃ Ｌｏｎｄ Ｂ Ｂｉｏｌ Ｓｃｉ．２０１２，３６７（１６０１），２４６０．
６５．Ｌｉ Ｌ，Ｆｏｔｈｅｒｇｉｌｌ Ｔ，Ｈｕｔｃｈｉｎｓ ＢＩ，Ｄｅｎｔ ＥＷ，及びＫａｌｉｌ Ｋ．Ｗｎｔ５ａ ｅｖｏｋｅｓ ｃｏｒｔｉｃａｌ ａｘｏｎ ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｒｅｐｕｌｓｉｖｅ ｇｕｉｄａｎｃｅ ｂｙ ｔａｕ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｒｅｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｙｎａｍｉｃ ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｓ．Ｄｅｖ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２０１４，７４（８），７９７．
６６．Ｂｉｓｗａｓ Ｓ及びＫａｌｉｌ Ｋ．Ｔｈｅ Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ－Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔａｕ Ｍｅｄｉａｔｅｓ ｔｈｅ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｄｙｎａｍｉｃ Ｅｘｐｌｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｃｔｉｎ－Ｒｉｃｈ Ｌａｍｅｌｌｉｐｏｄｉａ ａｎｄ Ｆｉｌｏｐｏｄｉａ ｏｆ Ｃｏｒｔｉｃａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｃｏｎｅｓ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１８，３８（２），２９１．
６７．Ｄｉｖｉｎｓｋｉ Ｉ，Ｈｏｌｔｓｅｒ－Ｃｏｃｈａｖ Ｍ，Ｖｕｌｉｈ－Ｓｃｈｕｌｔｚｍａｎ Ｉ，Ｓｔｅｉｎｇａｒｔ ＲＡ，及びＧｏｚｅｓ Ｉ．Ｐｅｐｔｉｄｅ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｂｒａｉｎ ｔｕｂｕｌｉｎ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００６，９８（３），９７３．
６８．Ｐａｓｃｕａｌ Ｍ及びＧｕｅｒｒｉ Ｃ．Ｔｈｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ＮＡＰ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｉｇｎａｌ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ａｎｄ Ａｋｔ ｐａｔｈｗａｙｓ，ａｎｄ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｎｅｕｒｏｎｓ ｃｏ－ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ ｄａｍａｇｅｄ ｂｙ ｅｔｈａｎｏｌ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００７，１０３（２），５５７．
６９．Ｌａｇｒｅｚｅ ＷＡ，Ｐｉｅｌｅｎ Ａ，Ｓｔｅｉｎｇａｒｔ Ｒ，Ｓｃｈｌｕｎｃｋ Ｇ，Ｈｏｆｍａｎｎ ＨＤ，Ｇｏｚｅｓ Ｉ，及びＫｉｒｓｃｈ Ｍ．Ｔｈｅ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ＡＤＮＦ－９ ａｎｄ ＮＡＰ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｎｄ ｎｅｕｒｉｔｅ ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｒａｔ ｒｅｔｉｎａｌ ｇａｎｇｌｉｏｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．２００５，４６（３），９３３．
７０．Ｖｉｓｏｃｈｅｋ Ｌ，Ｓｔｅｉｎｇａｒｔ ＲＡ，Ｖｕｌｉｈ－Ｓｈｕｌｔｚｍａｎ Ｉ，Ｋｌｅｉｎ Ｒ，Ｐｒｉｅｌ Ｅ，Ｇｏｚｅｓ Ｉ，及びＣｏｈｅｎ－Ａｒｍｏｎ Ｍ．ＰｏｌｙＡＤＰ－ｒｉｂｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００５，２５（３２），７４２０．
７１．Ｂａｒ－Ｓａｇｉ Ｄ，Ｒｏｔｉｎ Ｄ，Ｂａｔｚｅｒ Ａ，Ｍａｎｄｉｙａｎ Ｖ，及びＳｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ Ｊ．ＳＨ３ ｄｏｍａｉｎｓ ｄｉｒｅｃｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．Ｃｅｌｌ．１９９３，７４（１），８３．
７２．Ｔｅｙｒａ Ｊ，Ｈｕａｎｇ Ｈ，Ｊａｉｎ Ｓ，Ｇｕａｎ Ｘ，Ｄｏｎｇ Ａ，Ｌｉｕ Ｙ，Ｔｅｍｐｅｌ Ｗ，Ｍｉｎ Ｊ，Ｔｏｎｇ Ｙ，Ｋｉｍ ＰＭ，Ｂａｄｅｒ ＧＤ，及びＳｉｄｈｕ ＳＳ．Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ ＳＨ３ Ｄｏｍａｉｎ Ｆａｍｉｌｙ Ｒｅｖｅａｌｓ ａ Ｗｉｄｅ Ｖａｒｉｅｔｙ ｏｆ Ｎｏｎ－ｃａｎｏｎｉｃａｌ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｉｅｓ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．２０１７，２５（１０），１５９８．
７３．Ｋｕｒｏｃｈｋｉｎａ Ｎ及びＧｕｈａ Ｕ．ＳＨ３ ｄｏｍａｉｎｓ：ｍｏｄｕｌｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｖ．２０１３，５（１），２９．
７４．Ｓｕ Ｐ，Ｌａｉ ＴＫＹ，Ｌｅｅ ＦＨＦ，Ａｂｅｌａ ＡＲ，Ｆｌｅｔｃｈｅｒ ＰＪ，及びＬｉｕ Ｆ．Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ＳｙｎＧＡＰ－ｄｏｐａｍｉｎｅ Ｄ１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ａｌｔｅｒｓ ａｃｔｉｎ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ ｄｙｎａｍｉｃｓ ａｎｄ ｉｍｐａｉｒｓ ＧＡＢＡｅｒｇｉｃ ｉｎｔｅｒｎｅｕｒｏｎ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ．Ｓｃｉ Ｓｉｇｎａｌ．２０１９，１２（５９３）．
７５．Ｋｒａｐｉｖｉｎｓｋｙ Ｇ，Ｍｅｄｉｎａ Ｉ，Ｋｒａｐｉｖｉｎｓｋｙ Ｌ，Ｇａｐｏｎ Ｓ，及びＣｌａｐｈａｍ ＤＥ．ＳｙｎＧＡＰ－ＭＵＰＰ１－ＣａＭＫＩＩ ｓｙｎａｐｔｉｃ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｐ３８ ＭＡＰ ｋｉｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ＮＭＤＡ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｓｙｎａｐｔｉｃ ＡＭＰＡ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｎｅｕｒｏｎ．２００４，４３（４），５６３．
７６．Ｗａｎｇ ＣＣ，Ｈｅｌｄ ＲＧ，及びＨａｌｌ ＢＪ．ＳｙｎＧＡＰ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｈｏｍｅｏｓｔａｔｉｃ ｓｙｎａｐｔｉｃ ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ ｉｎ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｎｅｔｗｏｒｋｓ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１３，８（１２），ｅ８３９４１．
７７．Ｇｏｚｅｓ Ｉ，Ｖａｎ Ｄｉｊｃｋ Ａ，Ｈａｃｏｈｅｎ－Ｋｌｅｉｍａｎ Ｇ，Ｇｒｉｇｇ Ｉ，Ｋａｒｍｏｎ Ｇ，Ｇｉｌａｄｉ Ｅ，Ｅｇｅｒ Ｍ，Ｇａｂｅｔ Ｙ，Ｐａｓｍａｎｉｋ－Ｃｈｏｒ Ｍ，Ｃａｐｐｕｙｎｓ Ｅ，Ｅｌｐｅｌｅｇ Ｏ，Ｋｏｏｙ ＲＦ，及びＢｅｄｒｏｓｉａｎ－Ｓｅｒｍｏｎｅ Ｓ．Ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｐｒｉｍａｒｙ ｔｏｏｔｈ ｅｒｕｐｔｉｏｎ ｉｎ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ／ｍｏｔｏｒ－ｄｅｌａｙｅｄ ＡＤＮＰ－ｍｕｔａｔｅｄ ｃｈｉｌｄｒｅｎ．Ｔｒａｎｓｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．２０１７，７（７），ｅ１１６６．
７８．Ｓｕｎ Ｘ，Ｐｅｎｇ Ｘ，Ｃａｏ Ｙ，Ｚｈｏｕ Ｙ，及びＳｕｎ Ｙ．ＡＤＮＰ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｎｅｕｒａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ Ｗｎｔ／ｂｅｔａ－ｃａｔｅｎｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．２０２０，１１（１），２９８４．
７９．Ｃｏｄｏｃｅｄｏ ＪＦ，Ｍｏｎｔｅｃｉｎｏｓ－Ｏｌｉｖａ Ｃ，及びＩｎｅｓｔｒｏｓａ ＮＣ．Ｗｎｔ－ｒｅｌａｔｅｄ ＳｙｎＧＡＰ１ ｉｓ ａ ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｆａｃｔｏｒ ｏｆ ｇｌｕｔａｍａｔｅｒｇｉｃ ｓｙｎａｐｓｅｓ ａｇａｉｎｓｔ Ａｂｅｔａ ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ．Ｆｒｏｎｔ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１５，９（２２７．
８０．Ｊｉａ Ｌ，Ｐｉｎａ－Ｃｒｅｓｐｏ Ｊ，及びＬｉ Ｙ．Ｒｅｓｔｏｒｉｎｇ Ｗｎｔ／ｂｅｔａ－ｃａｔｅｎｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｓ ａ ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｆｏｒ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｍｏｌ Ｂｒａｉｎ．２０１９，１２（１），１０４．
８１．Ｓｃｈｉｎｄｅｌｉｎ Ｊ，Ａｒｇａｎｄａ－Ｃａｒｒｅｒａｓ Ｉ，Ｆｒｉｓｅ Ｅ，Ｋａｙｎｉｇ Ｖ，Ｌｏｎｇａｉｒ Ｍ，Ｐｉｅｔｚｓｃｈ Ｔ，Ｐｒｅｉｂｉｓｃｈ Ｓ，Ｒｕｅｄｅｎ Ｃ，Ｓａａｌｆｅｌｄ Ｓ，Ｓｃｈｍｉｄ Ｂ，Ｔｉｎｅｖｅｚ ＪＹ，Ｗｈｉｔｅ ＤＪ，Ｈａｒｔｅｎｓｔｅｉｎ Ｖ，Ｅｌｉｃｅｉｒｉ Ｋ，Ｔｏｍａｎｃａｋ Ｐ，ｅｔ
ａｌ．Ｆｉｊｉ：ａｎ ｏｐｅｎ－ｓｏｕｒｃｅ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ－ｉｍａｇｅ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｎａｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１２，９（７），６７６．
８２．Ｒａｐｓｏｍａｎｉｋｉ ＭＡ，Ｋｏｔｓａｎｔｉｓ Ｐ，Ｓｙｍｅｏｎｉｄｏｕ ＩＥ，Ｇｉａｋｏｕｍａｋｉｓ ＮＮ，Ｔａｒａｖｉｒａｓ Ｓ，及びＬｙｇｅｒｏｕ Ｚ．ｅａｓｙＦＲＡＰ：ａｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｖｅ，ｅａｓｙ－ｔｏ－ｕｓｅ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＦＲＡＰ ｄａｔａ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２０１２，２８（１３），１８００．
８３．Ｋｏｕｌｏｕｒａｓ Ｇ，Ｐａｎａｇｏｐｏｕｌｏｓ Ａ，Ｒａｐｓｏｍａｎｉｋｉ ＭＡ，Ｇｉａｋｏｕｍａｋｉｓ ＮＮ，Ｔａｒａｖｉｒａｓ Ｓ，及びＬｙｇｅｒｏｕ Ｚ．ＥａｓｙＦＲＡＰ－ｗｅｂ：ａ ｗｅｂ－ｂａｓｅｄ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ａｆｔｅｒ ｐｈｏｔｏｂｌｅａｃｈｉｎｇ ｄａｔａ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１８，４６（Ｗ１），Ｗ４６７．

【0349】

本発明は、その特定の実施形態に関連して説明されてきたが、多くの代替物、改変、及びバリエーションが当業者に明らかであることは明白である。したがって、添付の特許請求の範囲の技術思想及び広い範囲に含まれる全てのそのような代替物、改変、及びバリエーションを包含することが意図されている。

【0350】

本明細書で言及される全ての刊行物、特許及び特許出願は、あたかも個々の刊行物、特許又は特許出願が参照されたときに参照により本明細書に組み込まれるべきであると具体的かつそれぞれ個別に記載されているかのように、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれるべきであることが出願人の意図である。更に、本出願における任意の参考文献の引用又は特定は、そのような参考文献が本発明の先行技術として利用可能であることの承認として解釈されるべきではない。セクションの見出しが使用されている限りにおいて、それらは必ずしも限定的であると解釈されるべきではない。加えて、本出願の任意の優先権書類（複数可）は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図1E】

【図1F-01】

【図1F-02】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図2D】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図4E】

【図4F】

【図5】

【図6A】

【図6B】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図9A】

【図9B-09C】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図10D】

【図10E】

【図10F】

【図11A】

【図11B】

【図11C】

【図11D】

【図11E】

【図11F】

【図11G】

【図12】

【図13-01】

【図13-02】

【図14】

【手続補正書】

【提出日】2023-11-28

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】配列表

【補正方法】追加

【補正の内容】

【配列表】

2024512569000001.app

【国際調査報告】