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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-03-19
(54)【発明の名称】抗タウ抗体及びその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20240312BHJP
C07K 16/18 20060101ALI20240312BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240312BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20240312BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20240312BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20240312BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240312BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240312BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20240312BHJP
A61P 25/16 20060101ALI20240312BHJP
A61P 21/02 20060101ALI20240312BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240312BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/18 ZNA
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
A61K39/395 N
A61P25/28
A61P25/16
A61P21/02
A61P25/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023558741
(86)(22)【出願日】2022-03-25
(85)【翻訳文提出日】2023-10-13
(86)【国際出願番号】 IB2022052765
(87)【国際公開番号】W WO2022201123
(87)【国際公開日】2022-09-29
(31)【優先権主張番号】63/166,439
(32)【優先日】2021-03-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/196,365
(32)【優先日】2021-06-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】509087759
【氏名又は名称】ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100095360
【弁理士】
【氏名又は名称】片山 英二
(74)【代理人】
【識別番号】100093676
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 純子
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100217663
【弁理士】
【氏名又は名称】末広 尚也
(72)【発明者】
【氏名】ナンジュンダ，ルペシュ
(72)【発明者】
【氏名】ファン コレン，クリストフ
【テーマコード（参考）】
4B065
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA01X
4B065AA57X
4B065AA72X
4B065AA87X
4B065AA92Y
4B065AA94Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C085AA14
4C085BB11
4C085DD62
4C085EE01
4H045AA11
4H045AA30
4H045DA76
4H045EA21
4H045FA74
(57)【要約】
モノクローナル抗ＰＨＦ－タウ抗体及びその抗原結合断片が記載される。また、抗体をコードする核酸、抗体を含む組成物、抗体を生成する方法、及びタウ異常症などの状態を治療又は予防するための抗体を使用する方法も記載される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、配列番号１のアミノ酸配列からなる又は配列番号１のアミノ酸配列内のタウタンパク質のエピトープで、タウタンパク質に結合し、
前記抗体又はその抗原結合断片は、対らせん状細線維（ＰＨＦ）－タウ、好ましくはヒトＰＨＦ－タウに結合する、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項2】
（ａ）タウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｓ４３３又はリン酸化Ｓ４３５のいずれか一方を含むが、リン酸化Ｓ４３３及びリン酸化Ｓ４３５を含まない、（ｂ）タウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｔ４２７、リン酸化Ｓ４３３、及びリン酸化Ｓ４３５のうちの１つ以上を含むが、リン酸化Ｔ４２７、リン酸化Ｓ４３３、及びリン酸化Ｓ４３５の全てを含まない、
（ｃ）タウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｔ４２７及びリン酸化Ｓ４３３のうちの１つ以上を含むが、リン酸化Ｓ４３５を含まず、かつ、リン酸化Ｔ４２７、リン酸化Ｓ４３３、及びリン酸化Ｓ４３５の全てを含まない、又は
（ｄ）タウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｔ４２７を含むが、リン酸化Ｓ４３３又はリン酸化Ｓ４３５を含まない、請求項１に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項3】
（ａ）それぞれ配列番号４、５、及び６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号７、８、及び９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、（ｂ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｃ）それぞれ配列番号２４、２５、及び２６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号２７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｄ）それぞれ配列番号３２、３３、及び３４のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び３５のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、又は
（ｅ）それぞれ配列番号４０、４１、及び４２のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び４３のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、を含む、請求項１又は２に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項4】
配列番号２、１２、２２、３０、若しくは３８と少なくとも９０％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３、１３、２３、３１、若しくは３９と少なくとも９０％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項5】
配列番号２、１２、２２、３０、若しくは３８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３、１３、２３、３１、若しくは３９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項6】
（ａ）配列番号２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、（ｂ）配列番号１２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号２２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号２３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号３０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｅ）配列番号３８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域とを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項7】
（ａ）配列番号１０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号１１のポリペプチド配列を有する軽鎖、（ｂ）配列番号２０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２１のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｃ）配列番号２８のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２９のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｄ）配列番号３６のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号３７のポリペプチド配列を有する軽鎖、又は
（ｅ）配列番号４４のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号４５のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項8】
（ａ）それぞれ配列番号４、５、及び６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号７、８、及び９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、（ｂ）配列番号２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｃ）配列番号１０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号１１のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項9】
（ａ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、（ｂ）配列番号１２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｃ）配列番号２０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２１のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項10】
請求項１～９のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする、単離核酸。
【請求項11】
請求項１０に記載の単離核酸を含む、ベクター。
【請求項12】
請求項１０に記載の単離核酸を含む、宿主細胞。
【請求項13】
請求項１～９のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項14】
タウシーディングのブロックを必要とする対象における、タウシーディングをブロックする方法であって、請求項１３に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項15】
タウ異常症の治療を必要とする対象における、前記タウ異常症を治療する方法であって、請求項１３に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項16】
病理学的タウ凝集又はタウ異常症の拡散の低減を必要とする対象における、前記病理学的タウ凝集又は前記タウ異常症の拡散を低減する方法であって、請求項１３に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項17】
前記タウ異常症が、家族性アルツハイマー病、散発性アルツハイマー病、染色体１７に関連したパーキンソン症候群を伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、神経原線維変化優位型認知症、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症・パーキンソン症候群認知症複合、ダウン症候群、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハラーフォルデン・シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオンタンパク質大脳アミロイド血管障害、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維変化による非グアマニアン運動ニューロン疾患、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、及び拳闘家認知症（ボクサー病）からなる群から選択される、請求項１５又は１６に記載の方法。
【請求項18】
請求項１～９のいずれか一項に記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を産生する方法であって、前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸を含む細胞を、前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を産生する条件下で培養することと、前記細胞又は細胞培養液から前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を回収することとを含む、方法。
【請求項19】
対象からの生体試料におけるＰＨＦ－タウの存在を検出する方法であって、前記生体試料を請求項１～９のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体又は抗原結合断片と接触させることと、前記対象からの前記試料におけるＰＨＦ－タウへの前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片の結合を検出することとを含む、方法。
【請求項20】
前記生体試料が、血液、血清、血漿、間質液、又は大脳脊髄液試料である、請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は、抗ＰＨＦ－タウ抗体、抗体をコードする核酸及び発現ベクター、ベクターを含有する組換え細胞、並びに抗体を含む組成物に関する。抗体を作製する方法、タウ異常症を含む状態を治療するために抗体を使用する方法、及びタウ異常症などの疾患を診断するために抗体を使用する方法もまた提供される。
【0002】
（電子的に提出された配列表の参照）
本出願は、「０６５７６８．９６ＵＳ２＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ」というファイル名で、２０２１年６月３日に作成された６６ｋｂのサイズのＡＳＣＩＩフォーマット配列としてＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出された配列表を含む。ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出された配列表は、本明細書の一部であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、「０６５７６８．９６ＵＳ２＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ」というファイル名で、２０２１年６月３日に作成された６６ｋｂのサイズのＡＳＣＩＩフォーマット配列としてＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出された配列表を含む。ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出された配列表は、本明細書の一部であり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0003】
アルツハイマー病（Alzheimer's Disease、ＡＤ）は、徐々に激しい精神機能低下を導き、最終的には死に至らしめる、記憶、認知、論理的思考、判断力、及び情動安定性の進行性喪失を臨床的特徴とする、退行性脳障害である。ＡＤは、高齢者の進行性精神機能不全（認知症）の非常に一般的な原因であり、米国では４番目に多い医学的死亡原因を表すと考えられている。ＡＤは、世界中の民族集団で観察され、現在及び未来の、主たる公衆の健康上の問題を提示する。
【0004】
ＡＤを患う個体の脳は、老人性（又はアミロイド）斑、アミロイド血管症（血管におけるアミロイド沈着）及び神経原線維変化と呼ばれる特徴的な病変を呈する。これら病変の大多数、特にアミロイド斑及び対らせん状細線維の神経原線維変化は、一般に、ＡＤを患う患者の記憶及び認知機能に重要なヒトの脳のいくつかの領域で見られる。
【0005】
現在のＡＤ治療の状況には、認知症を患う患者における認知症状を治療するために認可された治療法のみが含まれる。ＡＤの進行を修正又は遅延させる承認された療法はない。潜在的な病気修飾物質は、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙのドナメマブ（Donanemab）、Ａβ（ｐ３－４２）を認識するヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗体、Ａβのピログルタミン酸型、及びアデュカヌマブ、Ａβ上に見出される立体配座エピトープに対するヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体を含む抗アミロイド抗体である。これらの療法、及び今後１０年間に開始され得る他の可能性のある疾患修飾物質のほとんどは、Ａβを標的としている（アミロイド斑の主成分は、ＡＤの２つの「特徴的な」病理学的兆候の１つである）。
【0006】
ＡＤの第２の特徴的な病理学的兆候である神経原線維変化は主に、過剰リン酸化タウタンパク質の凝集体で構成される。タウの主な生理学的機能は、微小管の重合及び安定化である。タウの微小管への結合は、タウの微小管結合領域における正電荷と、微小管格子における負電荷との間のイオン性相互作用により発生する（Ｂｕｔｎｅｒ ａｎｄ Ｋｉｒｓｃｈｎｅｒ，Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１１５（３）：７１７－３０，１９９１）。タウタンパク質は、８５個の可能なリン酸化部位を含有し、これらの部位の多くにおけるリン酸化が、タウの一次機能を妨げる。軸索の微小管格子に結合したタウは、擬リン酸化状態にあるが、ＡＤ内で凝集したタウは過剰リン酸化状態にあり、タウの生理学的に活性なプールとは異なる独自のエピトープをもたらす。
【0007】
タウ異常症の伝達及び拡散仮説が報告されており、これは、ヒトの脳におけるタウ異常症の進行のＢｒａａｋ段階及び前臨床的タウモデルにおけるタウ凝集体を注射した後のタウ異常症の拡散に基づいている（Ｆｒｏｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８４：１２８４５－５２，２００９、Ｃｌａｖａｇｕｅｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１１：９０９－１３，２００９）。
【0008】
タウの凝集を予防又は一掃する治療薬を開発することには長年関心が持たれており、抗凝集化合物及びキナーゼ阻害剤を含む候補薬物が、臨床試験に導入されている（Ｂｒｕｎｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．８：７８３－９３，２００９）。トランスジェニックマウスモデルにおける能動的及び受動的タウ免疫付与の両方の有益な治療効果を示す、複数の研究が公開されている（Ｃｈａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８６：３４４５７－６７，２０１１、Ｂｏｕｔａｊａｎｇｏｕｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．１１８：６５８－６７，２０１１、Ｂｏｕｔａｊａｎｇｏｕｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３０：１６５５９－６６，２０１０、Ａｓｕｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２７：９１１５－２９，２００７）。活性は、ホスホ指向性抗体及び非ホスホ指向性抗体の両方で報告されている（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１（１）：９－２５，２０１６）。
【発明の概要】
【0009】
進展にもかかわらず、タウ凝集及びタウ異常症の進行を予防して、ＡＤ及び他の神経変性病などのタウ異常症を治療するのに効果的な治療薬が依然として必要とされている。
【0010】
本出願は、対らせん状細線維（paired helical filament、ＰＨＦ）－タウに対して高い結合親和性を有し、リン酸化タウに対して選択的である抗ＰＨＦ－タウ抗体又はその抗原結合断片を提供することによりこの必要性を満たす。本出願の抗体は、マウスＰＨＦ－タウ特異的抗体のヒトフレームワークへの適応（human framework adaptation、ＨＦＡ）によって生成された。リン酸化タウに対する抗体の選択性により、通常のタウ機能を妨げずに病原性タウに対する効能が可能となると考えられる。本出願はまた、抗体をコードする核酸、抗体を含む組成物、並びに抗体を生成する方法及び抗体を使用する方法も提供する。本出願の抗ＰＨＦ－タウ抗体、又はその抗原結合断片は、ＨＥＫ細胞可溶化物に由来する、又は変異体タウトランスジェニックマウスの脊髄溶解物に由来するタウシードを使用する細胞アッセイにより測定されるように、タウシードを阻害する。更に、本出願の抗ＰＨＦ－タウ抗体の可変領域及びマウスＩｇ定常領域（例えばマウスＩｇＧ２ａ定常領域）を有するキメラ抗体は、インビボでの変異体タウトランスジェニックマウスにおいてシーディング活性をブロックした。
【0011】
ＡＤ脳におけるタウ異常症の進行は、異なる特殊な拡大パターンに従う。前臨床モデルにおいては、細胞外ホスホ－タウシードがニューロンでのタウ異常症を誘発し得ることが示されている（Ｃｌａｖａｇｕｅｒａ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １１０（２３）：９５３５－４０，２０１３）。それゆえ、タウ異常症はある脳の領域から次の領域に、プリオンのように拡大し得ると考えられている。この拡大プロセスには、近くのニューロンにより取り込まれることができ、更なるタウ異常症を引き起こし得るタウシードの外在化が伴う。理論に束縛されるものではないが、本出願の抗ＰＨＦ－タウ抗体又はその抗原結合断片は、脳内でホスホ－タウシードと相互作用することにより、タウ凝集又はタウ異常症の拡大を予防すると考えられている。
【0012】
一般的な一態様において、本出願は、ＰＨＦ－タウに結合する単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
【0013】
別の一般的な態様では、本出願は、配列番号１のアミノ酸配列からなるか、又は配列番号１のアミノ酸配列内のタウタンパク質のエピトープでタウタンパク質に結合する単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、対らせん状細線維（ＰＨＦ）－タウ、好ましくはヒトＰＨＦ－タウに結合する、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
【0014】
特定の態様に従うと、本出願は、
（ａ）タウタンパク質のエピトープは、タウタンパク質のリン酸化Ｓ４３３又はリン酸化Ｓ４３５のいずれか一方を含むが、リン酸化Ｓ４３３及びリン酸化Ｓ４３５を含まない、
（ｂ）タウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｔ４２７、リン酸化Ｓ４３３、及びリン酸化Ｓ４３５のうちの１つ以上を含むが、リン酸化Ｔ４２７、リン酸化Ｓ４３３、及びリン酸化Ｓ４３５の全てを含まない、
（ｃ）タウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｔ４２７及びリン酸化Ｓ４３３のうちの１つ以上を含むが、リン酸化Ｓ４３５を含まず、リン酸化Ｔ４２７、リン酸化Ｓ４３３、及びリン酸化Ｓ４３５の全てを含まない、又は
（ｄ）タウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｔ４２７を含むが、リン酸化Ｓ４３３又はリン酸化Ｓ４３５を含まない、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
（ａ）タウタンパク質のエピトープは、タウタンパク質のリン酸化Ｓ４３３又はリン酸化Ｓ４３５のいずれか一方を含むが、リン酸化Ｓ４３３及びリン酸化Ｓ４３５を含まない、
（ｂ）タウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｔ４２７、リン酸化Ｓ４３３、及びリン酸化Ｓ４３５のうちの１つ以上を含むが、リン酸化Ｔ４２７、リン酸化Ｓ４３３、及びリン酸化Ｓ４３５の全てを含まない、
（ｃ）タウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｔ４２７及びリン酸化Ｓ４３３のうちの１つ以上を含むが、リン酸化Ｓ４３５を含まず、リン酸化Ｔ４２７、リン酸化Ｓ４３３、及びリン酸化Ｓ４３５の全てを含まない、又は
（ｄ）タウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｔ４２７を含むが、リン酸化Ｓ４３３又はリン酸化Ｓ４３５を含まない、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
【0015】
別の特定の態様によれば、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、
（ａ）それぞれ配列番号４、５、及び６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号７、８、及び９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｃ）それぞれ配列番号２４、２５、及び２６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号２７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｄ）それぞれ配列番号３２、３３、及び３４のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び３５のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、又は
（ｅ）それぞれ配列番号４０、４１、及び４２のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び４３のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、を含む。
（ａ）それぞれ配列番号４、５、及び６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号７、８、及び９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｃ）それぞれ配列番号２４、２５、及び２６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号２７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｄ）それぞれ配列番号３２、３３、及び３４のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び３５のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、又は
（ｅ）それぞれ配列番号４０、４１、及び４２のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び４３のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、を含む。
【0016】
別の特定の態様によれば、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２、１２、２２、３０、若しくは３８と少なくとも９０％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３、１３、２３、３１、若しくは３９と少なくとも９０％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0017】
別の特定の態様によれば、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２、１２、２２、３０、若しくは３８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３、１３、２３、３１、若しくは３９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。
【0018】
別の特定の態様によれば、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、
（ａ）配列番号２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号１２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号２２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号２３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号３０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｅ）配列番号３８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域とを含む。
（ａ）配列番号２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号１２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号２２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号２３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号３０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｅ）配列番号３８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域とを含む。
【0019】
別の特定の態様によれば、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、
（ａ）配列番号１０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号１１のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｂ）配列番号２０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２１のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｃ）配列番号２８のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２９のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｄ）配列番号３６のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号３７のポリペプチド配列を有する軽鎖、又は
（ｅ）配列番号４４のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号４５のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む。
（ａ）配列番号１０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号１１のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｂ）配列番号２０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２１のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｃ）配列番号２８のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２９のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｄ）配列番号３６のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号３７のポリペプチド配列を有する軽鎖、又は
（ｅ）配列番号４４のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号４５のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む。
【0020】
別の一般的な態様では、本出願は、
（ａ）それぞれ配列番号４、５、及び６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号７、８、及び９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｃ）配列番号１０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号１１のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
（ａ）それぞれ配列番号４、５、及び６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号７、８、及び９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｃ）配列番号１０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号１１のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
【0021】
別の一般的な態様では、本出願は、
（ａ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｃ）配列番号２０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２１のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
（ａ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｃ）配列番号２０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２１のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
【0022】
別の一般的な態様では、本出願は、本出願の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする、単離核酸に関する。
【0023】
別の一般的な態様では、本出願は、本出願のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする単離核酸を含む、ベクターに関する。
【0024】
別の一般的な態様では、本出願は、本出願のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする単離核酸を含む、宿主細胞に関する。
【0025】
別の一般的な態様では、本出願は、本出願の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物に関する。
【0026】
別の一般的な態様では、本出願は、タウシーディングのブロックを必要とする対象における、タウシーディングをブロックする方法であって、本出願の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法に関する。
【0027】
別の一般的な態様では、本出願は、タウ異常症の治療を必要とする対象における、タウ異常症を治療する方法であって、本発明の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法に関する。タウ異常症としては、家族性アルツハイマー病、散発性アルツハイマー病、染色体１７に関連したパーキンソン症候群による前頭側頭型認知症（frontotemporal dementia with parkinsonism linked to chromosome 17、ＦＴＤＰ－１７）、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、神経原線維変化優位型認知症、石灰化によるびまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症・パーキンソン症候群認知症複合、ダウン症候群、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハラーフォルデン・シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオンタンパク質大脳アミロイド血管障害、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維変化による非グアマニアン運動ニューロン疾患、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、及び拳闘家認知症（ボクサー病）からなる群から選択される１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。
【0028】
別の一般的な態様では、本出願は、病理学的タウ凝集又はタウ異常症の拡散の低減を必要とする対象における、病理学的タウ凝集又はタウ異常症の拡散を低減する方法であって、本出願の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法に関する。タウ異常症としては、家族性アルツハイマー病、散発性アルツハイマー病、染色体１７に関連したパーキンソン症候群による前頭側頭型認知症（frontotemporal dementia with parkinsonism linked to chromosome 17、ＦＴＤＰ－１７）、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、神経原線維変化優位型認知症、石灰化によるびまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症・パーキンソン症候群認知症複合、ダウン症候群、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハラーフォルデン・シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオンタンパク質大脳アミロイド血管障害、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維変化による非グアマニアン運動ニューロン疾患、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、及び拳闘家認知症（ボクサー病）からなる群から選択される１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。
【0029】
別の一般的な態様では、本出願は、本出願のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を生成する方法であって、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸を含む細胞を、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を生成する条件下で培養することと、細胞又は細胞培養液からモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を回収することとを含む、方法に関する。
【0030】
別の一般的な態様では、本出願は、対象由来の生体試料におけるＰＨＦ－タウの存在を検出する方法であって、生体試料を本出願のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片と接触させることと、対象由来の試料におけるＰＨＦ－タウへのモノクローナル抗体又はその抗原結合断片の結合を検出することとを含む、方法である。生体試料は、血液、血清、血漿、間質液、又は大脳脊髄液試料からなる群から選択される１つ以上を含むが、これらに限定されない。
【0031】
本出願の実施形態による本発明の特徴及び利点は、本出願の詳細な説明、並びにその好ましい実施形態及び添付の特許請求の範囲を含む以下の開示より明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【0032】
上述の発明の概要及び以降の発明を実施するための形態は、添付の図面と併せて読むことでより良好に理解されるであろう。本出願は、図面に示される実施形態そのものに限定されないことを理解するべきである。
【図1】ＥＬＩＳＡによって分析された組換え２Ｎ４Ｒに対する、組換え的に発現されたＰＴ６６、ＰＴ６９／ＰＴ８７、ｈＴａｕ６０の結合を示す。
【図2】（左から右へ）：ＷＴ（スロット１）及びタウ－／－（スロット２）マウス脳、イヌ脳（スロット３）、サル脳（スロット４）、及びヒト脳（スロット５）、並びに死後ＡＤ脳に由来するＰＨＦ調製物（スロット６）からの脳抽出物に対するＰＴ６６、ｈＴａｕ６０、及びＰＴ６９／ＰＴ８７のウエスタンブロットプロファイリングを示す。
【図3】ＰＨＦ－タウに対するＰＴ６６、ｈＴａｕ６０、及びＰＴ６９／ＰＴ８７モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、並びにＰＨＦ－タウ及び組換えタウに対するそれらのそれぞれのＦａｂ断片の代表的なＳＰＲ結合データを示す。ＰＨＦ－タウ及び全長組換えタウタンパク質に対する抗タウ抗体及びそれらの対応するＦａｂ断片のＳＰＲ結合センサグラム。各センサグラム内の個々のトレースは、注射された抗体又はＦａｂの異なる濃度を表す。個々のトレースは、上から下へ、７５ｎＭ、１５ｎＭ、３ｎＭ、０．６ｎＭ及び０．１２ｎＭに対応する。ＨＴ７については、上部トレース（濃度）は１５ｎＭである。黒い実線は、二価分析物モデル（ＰＨＦ－Ｔａｕを有するｍＡｂについて）又は１：１ラングミュアモデル（ＰＨＦ－Ｔａｕ及び組換えＴａｕを有するＦａｂについて）のいずれかを用いたグローバルキネティクスフィッティングを示す。ＨＴ７については、Ｆａｂ断片は利用できない。
【図4】ＰＴ６６、ｈＴａｕ６０、及びＰＴ６９／ＰＴ８７のＡＤ及び非ＡＤ脳の凍結切片における結合データを示す。
【図5】ＰＴ６６、ｈＴａｕ６０、及びＰＴ６９／ＰＴ８７からのＩＨＣプロファイリングデータを示す。ＷＴ、Ｔａｕ－／－、及びＰ３０１Ｓマウス由来のパラフィン切片に対する結合を示す。
【図6A】免疫枯渇アッセイの概略図を示す。
【図6B】ヒトＡＤ脳組織（四角）及びＰ３０１Ｓ脊髄（三角）に由来する試験抗体（ｈＴａｕ６０、ＰＴ６９、ＰＴ６６及び内部Ｎ末端結合タウｍＡｂ（ＰＴ２６）タウ種子に対する免疫枯渇アッセイの結果を示す。ＰＴ６６、ｈＴａｕ６０及びＰＴ６９／ＰＴ８７は、ＦＲＥＴアッセイを使用して決定されるように、Ｎ末端抗体よりも効果的にタウシーディングを阻害した。ヒトＡＤ脳ホモジネートからの免疫枯渇画分もまた、ｈＴａｕ６０／ｈＴａｕ６０タウ凝集体特異的ＭＳＤアッセイ（丸）で分析した。
【図6C】連続免疫枯渇（ＩＤ）アッセイの結果を示し、ここで、第１ラウンドの免疫枯渇アッセイ（ＩＤ１）は、抗体ＰＴ９３（タウのＮ末端部分を標的とする）、ＰＴ５１（ＨＴ７様抗体）及びｈＴａｕ６０（タウのＣ末端部分を標的とする）のそれぞれを用いて、又はいずれの抗体も用いずに（ｍＡｂ無し）行い、第２ラウンドの免疫枯渇アッセイ（ＩＤ２）は、ＩＤ１に使用したものと同じ又は異なる抗体を用いて行った。ＩＤ１に使用したのと同じ抗体を有するＩＤ２は、更なる凝集体を枯渇させないこと、並びにＰＴ９３を有するＩＤ１の後、ＰＴ５１（ＨＴ７様）及びｈＴａｕ６０（Ｃ末端）を有するＩＤ２は、タウ凝集体の更なる枯渇をもたらし、ｈＴａｕ６０は、全ての残りの凝集体を枯渇させたことが示された。
【図7A】タウＰＨＦ及び試験抗体を同時注射したｅＰＨＦ注入モデルにおける（例えば、米国特許第１０，７６６，９５３号を参照）、ＡＴ１２０、ＰＴ／７６、及びＰＴ５３抗体と比較した、ｈＴａｕ６０及びＰＴ６９／ＰＴ８７の有効性を示す。＊＊＊Ｐ＜０．０００１ボンフェローニ多重比較。
【図7B】ｅＰＨＦ注射モデルにおける、ＴａｕのＮ末端（Ｎ末端）又は中央（Ｍｉｄ）部分における他のエピトープに結合する抗体と比較した、Ｃ末端ＰＨＦ－タウ（Ｃ末端）ＰＴ８１及びＰＴ６６に結合する抗体の有効性を示す。Ｃ末端抗体は、インビボでのタウシーディングの強い減少を示した。
【図7C】Ｃ末端抗体（ＰＴ６６及びｈＴａｕ６０）及びＰＴ３の両方が腹腔内投与後にインビボ活性を保持したことを示す。マウスに２０ｍｇ／ｋｇの抗体を週２回注射した。
【図8】内部Ｃ末端抗体の直鎖状ペプチドマッピングを使用したエピトープマッピングデータを示す。
【図9】Ｎ末端抗体によるより低い有効性が、ＰＨＦ－ｔａｕのＮ末端でのより広範なプロセシングによって説明され得ることを示す：Ｃ末端ＰＨＦ－ｔａｕ抗体ＰＴ６６及びｈＴａｕ６０（Ｃ末端）を、ＰＨＦ－ｔａｕを分析するウエスタンブロッティングスクリーンにおいて、Ｎ末端ＰＨＦ－ｔａｕ抗体（ＰＴ９３）と比較する。
【発明の詳細な説明】
【0033】
「背景技術」において、また、本明細書全体を通じて各種刊行物、論文及び特許を引用又は記載し、これら参照文献の各々はその全容が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれる文書、操作、材料、デバイス、物品などの考察は、本出願のコンテキストを与えるためのものである。かかる考察は、これらの事物のいずれか又は全てが、開示又は特許請求されるいずれかの発明に対する先行技術の一部を構成することを容認するものではない。
【0034】
定義
特に規定のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。そうでない場合、本明細書で使用される特定の用語は、本明細書に記載される意味を有するものである。本明細書に引用される全ての特許、公開された特許出願及び刊行物は、あたかも本明細書に完全に記載されているように参照により組み込まれる。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用するとき、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に文脈上明らかでない限り、複数の指示対象物を含むことに留意する必要がある。
特に規定のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されるのと同じ意味を有する。そうでない場合、本明細書で使用される特定の用語は、本明細書に記載される意味を有するものである。本明細書に引用される全ての特許、公開された特許出願及び刊行物は、あたかも本明細書に完全に記載されているように参照により組み込まれる。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用するとき、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に文脈上明らかでない限り、複数の指示対象物を含むことに留意する必要がある。
【0035】
特に明記しない限り、本明細書に記載される濃度又は濃度範囲などのあらゆる数値は、全ての場合において、「約」という用語によって修飾されているものとして理解されるべきである。したがって、数値は、通常、記載される値の±１０％を含む。例えば、１ｍｇ／ｍＬの濃度は０．９ｍｇ／ｍＬ～１．１ｍｇ／ｍＬを含む。同様に、１％～１０％（ｗ／ｖ）の濃度範囲は０．９％（ｗ／ｖ）～１１％（ｗ／ｖ）を含む。本明細書で使用するとき、数値範囲の使用は、文脈上そうでない旨が明確に示されない限り、その範囲内の整数及び値の分数を含む、全ての可能な部分範囲、その範囲内の全ての個々の数値を明示的に含む。
【0036】
本明細書に使用される場合、複数の列挙された要素間の「及び／又は」という接続的な用語は、個々の及び組み合わされた選択肢の両方を包含するものとして理解される。例えば、２つの要素が「及び／又は」によって接続される場合、第１の選択肢は、第２の要素なしに第１の要素が適用可能であることを指す。第２の選択肢は、第１の要素なしに第２の要素が適用可能であることを指す。第３の選択肢は、第１及び第２の要素が一緒に適用可能であることを指す。これらの選択肢のうちのいずれか１つは、意味に含まれ、したがって、本明細書に使用される場合、用語「及び／又は」の要件を満たすことが理解される。選択肢のうちの２つ以上の同時適用性もまた、意味に含まれ、したがって、用語「及び／又は」の要件を満たすことが理解される。
【0037】
本明細書及び以下の特許請求の範囲を通して、文脈上必要としない限り、用語「含む（comprise）」並びに「含む（comprises）」及び「含む（comprising）」などの変形は、指定の整数若しくはステップ又は整数若しくはステップの群を含むが、任意の他の整数若しくはステップ又は整数若しくはステップの群を除外するものではないことを意味すると理解されるであろう。本明細書で使用するとき、用語「含む」は、用語「含有する」又は「含む（including）」に置き換えることができ、又はときに本明細書で使用するとき、用語「有する」に置き換えることもできる。
【0038】
本明細書に使用される場合、「からなる（consisting of）」は、特許請求の範囲の要素において指定されていない任意の要素、工程、又は成分を除外する。本明細書に使用される場合、「から本質的になる（consisting essentially of）」は、特許請求の範囲の基本的かつ新規の特徴に実質的に影響を及ぼさない材料又は工程は除外しない。本発明の態様又は実施形態の文脈において本明細書で使用するときは常に、本開示の範囲を変化させるために、「含む（comprising）」、「含有する」、「含む（including）」、及び「有する」という上記用語のいずれかを、用語「からなる」又は「から本質的になる」に置き換えることができる。
【0039】
本明細書で使用するとき、「単離（された）」という用語は、生物学的構成成分（例えば、核酸、ペプチド、又はタンパク質）が、これらの構成成分が天然に生じる生物の他の生物学的構成成分（すなわち、他の染色体及び染色体外ＤＮＡ及びＲＮＡ、並びにタンパク質）から実質的に分離されたか、これらの他の成分とは別に生成されたか、又はこれらの他の成分から精製されたものであることを意味する。このため、「単離（された）」核酸、ペプチド、及びタンパク質は、標準的な精製法により精製された核酸及びタンパク質を含む。「単離された」核酸、ペプチド、及びタンパク質は、組成物の一部であることができ、このような組成物が核酸、ペプチド、又はタンパク質の本来の環境の一部ではない場合であっても単離されている。また、この用語は、宿主細胞中での組換え発現により調製された核酸、ペプチド、及びタンパク質、並びに化学合成された核酸も包含する。
【0040】
本明細書で使用するとき、「抗体」又は「免疫グロブリン」という用語は広い意味で用いられ、ポリクローナル抗体を含む免疫グロブリン又は抗体分子、マウス、ヒト、ヒト適合、ヒト化、及びキメラモノクローナル抗体及び抗体断片を含むモノクローナル抗体を含む。
【0041】
一般に、抗体は、特定の抗原に対する結合特異性を示すタンパク質又はペプチド鎖である。抗体の構造は、周知である。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて５つの主なクラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭに割り当てられ得る。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４として更に細分類される。本出願の抗体としては、半減期の延び、ＡＤＣＣ又はＣＤＣの増減、及びサイレンシングされたＦｃエフェクター機能が挙げられるがこれらに限定されない、野生型Ｆｃ領域と比較して変化した特性を有するように、Ｆｃ領域に多様性を有するものが挙げられる。したがって、本出願の抗体は、５つの主要なクラス又は対応する下位クラスのいずれかのものであり得る。好ましくは、本出願の抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４である。いずれの脊椎動物種の抗体軽鎖も、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて２つの明確に異なるタイプ、すなわちκ及びλのうちの一方に割り当てることができる。したがって、本出願の抗体は、κ又はλ軽鎖定常ドメインを含有することができる。特定の実施形態によれば、本出願の抗体は、マウス抗体又はヒト抗体の重鎖及び／又は軽鎖定常領域を含む。
【0042】
重鎖及び軽鎖定常領域に加えて、抗体は、軽鎖及び重鎖可変領域を含有する。免疫グロブリン軽鎖又は重鎖可変領域は、「抗原結合部位」が割り込んだ「フレームワーク」領域からなる。抗原結合部位は、以下のとおり様々な用語及び符番スキームを用いて定義される。
（ｉ）Ｋａｂａｔ：「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ（Complementarity Determining Region）」は、配列可変性に基づく（Ｗｕ ａｎｄ Ｋａｂａｔ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１３２：２１１－５０，１９７０）。一般に、抗原結合部位は、各可変領域に３つのＣＤＲ（例えば、重鎖可変領域（heavy chain variable region、ＶＨ）にＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域（light chain variable region、ＶＬ）にＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）を有する。
（ｉｉ）Ｃｈｏｔｈｉａ：「超可変領域」、「ＨＶＲ（hypervariable region）」、又は「ＨＶ」という用語は、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋにより定義されているように、構造中で超可変性である抗体可変ドメインの領域を指す（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－１７，１９８７）。一般に、抗原結合部位は、各ＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）に３つの超可変領域を有する。ＣＤＲ及びＨＶの付番体系及び注釈は、最近、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ及びＭａｒｔｉｎにより改訂された（Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５：３８３２－９（２００８））。
（ｉｉｉ）ＩＭＧＴ：抗原結合部位を形成する領域の別の定義は、免役グロブリン及びＴ細胞受容体からのＶドメインの比較に基づき、Ｌｅｆｒａｎｃ（Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５－７７，２００３）により提案されている。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベースが、標準化したこれらの領域の符番及び定義を提供している。ＣＤＲ、ＨＶ、及びＩＭＧＴの描写間の対応については、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，２００３，同上に記載されている。
（ｉｖ）ＡｂＭ：Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの付番スキームの妥協点は、Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｒｔｉｎ ＡＣＲ（２０１０）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｅｄｓ Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ Ｒ，Ｄｕｂｅｌ Ｓ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ），Ｖｏｌ ２，ｐｐ ３３－５１）に記載されている、ＡｂＭ付番の取り決めである。
（ｖ）抗原結合部位はまた、「特異性決定残基使用量」（Specificity Determining Residue Usage、ＳＤＲＵ）に基づいて描写することができ（Ａｌｍａｇｒｏ、Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．１７：１３２－４３，２００４）、ＳＤＲは、抗原接触に直接関与する免疫グロブリンのアミノ酸残基を指す。
（ｉ）Ｋａｂａｔ：「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ（Complementarity Determining Region）」は、配列可変性に基づく（Ｗｕ ａｎｄ Ｋａｂａｔ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１３２：２１１－５０，１９７０）。一般に、抗原結合部位は、各可変領域に３つのＣＤＲ（例えば、重鎖可変領域（heavy chain variable region、ＶＨ）にＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに軽鎖可変領域（light chain variable region、ＶＬ）にＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）を有する。
（ｉｉ）Ｃｈｏｔｈｉａ：「超可変領域」、「ＨＶＲ（hypervariable region）」、又は「ＨＶ」という用語は、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋにより定義されているように、構造中で超可変性である抗体可変ドメインの領域を指す（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－１７，１９８７）。一般に、抗原結合部位は、各ＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）に３つの超可変領域を有する。ＣＤＲ及びＨＶの付番体系及び注釈は、最近、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ及びＭａｒｔｉｎにより改訂された（Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５：３８３２－９（２００８））。
（ｉｉｉ）ＩＭＧＴ：抗原結合部位を形成する領域の別の定義は、免役グロブリン及びＴ細胞受容体からのＶドメインの比較に基づき、Ｌｅｆｒａｎｃ（Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５－７７，２００３）により提案されている。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベースが、標準化したこれらの領域の符番及び定義を提供している。ＣＤＲ、ＨＶ、及びＩＭＧＴの描写間の対応については、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，２００３，同上に記載されている。
（ｉｖ）ＡｂＭ：Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの付番スキームの妥協点は、Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｒｔｉｎ ＡＣＲ（２０１０）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｅｄｓ Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ Ｒ，Ｄｕｂｅｌ Ｓ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ），Ｖｏｌ ２，ｐｐ ３３－５１）に記載されている、ＡｂＭ付番の取り決めである。
（ｖ）抗原結合部位はまた、「特異性決定残基使用量」（Specificity Determining Residue Usage、ＳＤＲＵ）に基づいて描写することができ（Ａｌｍａｇｒｏ、Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．１７：１３２－４３，２００４）、ＳＤＲは、抗原接触に直接関与する免疫グロブリンのアミノ酸残基を指す。
【0043】
「フレームワーク」又は「フレームワーク配列」は、抗原結合部位の配列であると定義されるもの以外の、抗体の可変領域内の残りの配列である。抗原結合部位の正確な定義は、上述したような様々な描写により決定され得るため、正確なフレームワーク配列は、抗原結合部位の定義に依存する。フレームワーク領域（framework region、ＦＲ）は、より高度に保存された可変ドメインの部分である。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、３つの超可変ループにより接続された、βシート構成を一般的に用いる４つのＦＲ（それぞれＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４）を含む。各鎖の超可変ループはＦＲにより互いに緊密に折りたたまれ、他の鎖の超可変ループと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。抗体の構造分析により、相補性決定領域により形成される結合部位の配列と形状との関係が明らかとなった（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９－８１７，１９９２、Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：１７５－１８２，１９９０）。これらの高い配列可変性にもかかわらず、６つのループのうち５つだけが、「標準構造」と言われる、小さなレパートリーの主鎖構造を採用する。これらの構造はまず、ループの長さにより決定され、次に、折りたたみ、水素結合、又は異常な主鎖構造を推定する能力により構造が決定される、ループ及びフレームワーク領域の特定の位置における鍵となる残基の存在により決定される。
【0044】
本明細書で使用するとき、「抗原結合断片」という用語は、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄａｂ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部分から形成される多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、又は抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体断片などの抗体断片を指す。抗原結合断片は、親抗体又は親抗体フラグメントが結合する同じ抗原に結合することができる。特定の実施形態によれば、抗原結合断片は、軽鎖可変領域、軽鎖定常領域、及び重鎖の定常領域のＦｄセグメントを含む。他の特定の実施形態によれば、抗原結合断片はＦａｂ及びＦ（ａｂ’）を含む。
【0045】
本明細書で使用するとき、用語「ヒト化抗体」とは、抗体の抗原結合特性が保持されるが、人体における抗原の抗原性が低下するように、改変によりヒト抗体への配列相同性を増加させた非ヒト抗体を意味する。
【0046】
本明細書で使用するとき、「エピトープ」という用語とは、免疫グロブリン、抗体、又はその抗原結合断片が特異的に結合する、抗原上の部位を指す。エピトープは、タンパク質の三次折りたたみにより並置された連続アミノ酸から、又は非連続アミノ酸からのいずれかで形成することができる。連続アミノ酸から形成したエピトープは、典型的には、変性溶媒にさらして保持されるが、三次折りたたみにより形成したエピトープは、典型的には、変性溶媒による処理で喪失される。エピトープは、典型的には、独自な空間構造の中に、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸を含む。エピトープの空間構造を決定する方法としては、例えば、ｘ線結晶構造解析、及び二次元核磁気共鳴が挙げられる。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照されたい。
【0047】
本明細書で使用するとき、「タウ」又は「タウタンパク質」という用語とは、複数のアイソフォームを有する、多くある中枢神経系及び末梢神経系のタンパク質を指す。ヒト中枢神経系（central nervous system、ＣＮＳ）では、代替スプライシングにより、３５２～４４１アミノ酸長のサイズ範囲の６つの主要なタウアイソフォームが存在する（Ｈａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．１５：１１２－９，２００９）。アイソフォームは、０～２個のＮ末端挿入、及び３又は４個の一列に配列した微小管結合反復を制御して含めることにより互いに異なり、０Ｎ３Ｒ（配列番号４６）、１Ｎ３Ｒ（配列番号４７）、２Ｎ３Ｒ（配列番号４８）、０Ｎ４Ｒ（配列番号４９）、１Ｎ４Ｒ（配列番号５０）、及び２Ｎ４Ｒ（配列番号５１）と称される。本明細書で使用するとき、「対照タウ」という用語は、リン酸化及び他の翻訳後修飾されていない、配列番号５１のタウアイソフォームを指す。本明細書で使用するとき、「タウ」という用語は、完全長野生型タウの変異（例えば、点変異、断片、挿入、欠失、及びスプライスバリアント）を含むタンパク質を含む。「タウ」という用語はまた、タウアミノ酸配列の翻訳後修飾を包含する。翻訳後修飾としては、リン酸化が挙げられるが、これに限定されない。本明細書中で使用される場合、句「タウタンパク質のリン酸化Ｓ４３３」及び類似の句は、全長野生型タウタンパク質の特定の位置のリン酸化アミノ酸、例えば、４３３位のセリンを指す。
【0048】
タウは、微小管に結合しており、タウのリン酸化によって調節され得るプロセスである、細胞を通じたカーゴの輸送を制御する。ＡＤ及び関連する疾患においては、タウの異常リン酸化が広く生じ、これは、タウの対らせん状細線維（ＰＨＦ）と呼ばれる原線維への凝集の前に生じ、及び／又はその凝集を誘発すると考えられる。ＰＨＦの主要構成成分は、過剰リン酸化タウである。本明細書で使用するとき、「対らせん状細線維－タウ」又は「ＰＨＦ－タウ」という用語とは、対らせん状細線維中のタウの凝集体を指す。ＰＨＦ構造における２つの主要な領域は、電子顕微鏡、ファジーコート、及びコア細線維により明らかであり、ファジーコートは、タンパク質分解に敏感であり、細線維の外側に位置し、細線維のプロテアーゼ耐性コアは、ＰＨＦの主鎖を形成する（Ｗｉｓｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．８５：４８８４－８，１９８８）。
【0049】
本明細書で使用するとき、「ＰＨＦ－タウに結合する単離モノクローナル抗体」又は「単離モノクローナル抗ＰＨＦ－タウ抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない、モノクローナル抗ＰＨＦ－タウ抗体を指すことを意図する（例えば、単離モノクローナル抗ＰＨＦ－タウ抗体は、ＰＨＦ－タウ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、単離モノクローナル抗ＰＨＦ－タウ抗体は、例えば他の種（ＰＨＦ－タウ種のホモログなど）の他の関連抗原に対して交差反応性を有する。
【0050】
本明細書で使用するとき、「特異的に結合する」又は「特異的結合」という用語は、本出願の抗ＰＨＦ－タウ抗体が、約１×１０－６Ｍ以上、例えば、約１×１０－７Ｍ以下、約１×１０－８Ｍ以下、約１×１０－９Ｍ以下、約１×１０－１０Ｍ以下、約１×１０－１１Ｍ以下、約１×１０－１２Ｍ以下、又は約１×１０－１３Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）で所定の標的に結合する能力を指す。ＫＤは、Ｋａに対するＫｄの比率（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される。抗体のＫＤ値は、本開示を考慮して当該技術分野における方法を使用して決定することができる。例えば、抗ＰＨＦ－タウ抗体のＫＤ値は、表面プラズモン共鳴を用いることにより、バイオセンサシステム、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システム、ＰｒｏｔｅＯｎ機器（ＢｉｏＲａｄ）、ＫｉｎＥｘＡ機器（Ｓａｐｉｄｙｎｅ）、ＥＬＩＳＡ、又は当業者に知られている競合結合アッセイを用いることなどにより、決定することができる。典型的には、抗ＰＨＦ－タウ抗体は、例えば、ＰｒｏｔｅＯｎ機器（ＢｉｏＲａｄ）を使用した表面プラズモン共鳴によって測定した場合に、非特異的標的に対するＫＤよりも少なくとも１０倍低いＫＤで所定の標的（すなわち、ＰＨＦ－タウ）に結合する。しかしながら、ＰＨＦ－タウに特異的に結合する抗ＰＨＦ－タウ抗体は、他の関連標的、例えば、他の種（ホモログ）からの所定の同じ標的に対する交差反応性を有することができる。
【0051】
本明細書で使用するとき、用語「ポリヌクレオチド」は、同義的に「核酸分子」、「ヌクレオチド」、又は「核酸」とも称され、非修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又は修飾ＲＮＡ若しくはＤＮＡであってもよい、任意のポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドを指す。「ポリヌクレオチド」としては、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ、並びに一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖又はより典型的には二本鎖又は一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であってもよいＤＮＡ及びＲＮＡを含むハイブリッド分子が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又はＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を指す。ポリヌクレオチドという用語には、１つ以上の修飾された塩基を含有するＤＮＡ又はＲＮＡ、及び安定性又は他の理由により修飾された骨格を有するＤＮＡ又はＲＮＡも含まれる。「修飾された」塩基は、例えば、トリチル化塩基及び異常な塩基、例えば、イノシンを含む。様々な修飾をＤＮＡ及びＲＮＡに行うことができる。したがって、「ポリヌクレオチド」は、典型的には天然に認められるポリヌクレオチドの化学的、酵素的又は代謝的に修飾された形態、並びにウイルス及び細胞のＤＮＡ及びＲＮＡの特徴を有する化学的形態を包含する。「ポリヌクレオチド」はまた、比較的短い核酸鎖（多くの場合、オリゴヌクレオチドと称される）も包含する。
【0052】
本明細書で使用するとき、用語「ベクター」は、別の核酸セグメントを機能的に挿入することによってそのセグメントの複製又は発現を引き起こすことができるレプリコンのことである。
【0053】
本明細書で使用するとき、用語「宿主細胞」は、本出願の核酸分子を含む細胞を指す。「宿主細胞」は、例えば、初代細胞、培養中の細胞、又は細胞株由来の細胞のいずれのタイプの細胞であってもよい。一実施形態では、「宿主細胞」は、本出願の核酸分子をトランスフェクトした細胞である。別の実施形態では、「宿主細胞」は、かかるトランスフェクトされた細胞の子孫又は潜在的な子孫である。ある細胞の子孫は、例えば、後続の世代で生じ得る変異若しくは環境の影響、又は宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組み込みによって、親細胞との同一性を有していない場合がある。
【0054】
本明細書で使用するとき、用語「発現」は、遺伝子産物の生合成を指す。この用語は、遺伝子のＲＮＡへの転写を包含する。この用語はまた、ＲＮＡの１つ以上のポリペプチドへの翻訳も包含し、全ての天然に生じる、転写後及び翻訳後修飾も更に包含する。ＰＨＦ－タウに結合する、発現したモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、宿主細胞の細胞質内に存在することができるか、細胞培養液の増殖培地などの細胞外環境に入ることができるか、又は細胞膜に固着することができる。
【0055】
本明細書で使用するとき、用語「担体」は、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤、油、脂質、脂質含有小胞、ミクロスフェア、リポソーム封入体、又は医薬製剤で使用するための当該技術分野において周知である他の材料を指す。担体、賦形剤又は希釈剤の特性は、特定の用途の投与経路によって決まる点は理解されよう。本明細書に使用される場合、用語「医薬的に許容される担体」は、本出願による組成物の有効性にも本出願による組成物の生物学的活性にも干渉しない非毒性性材料を指す。特定の実施形態によれば、本開示を考慮して、抗体の医薬組成物での使用に好適ないずれの医薬的に許容される担体も、本発明において使用することができる。
【0056】
本明細書で使用するとき、「対象」という用語は、動物、好ましくは哺乳動物を指す。特定の実施形態によれば、対象は、非霊長類（例えば、ラクダ、ロバ、シマウマ、ウシ、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ラット、ウサギ、モルモット又はマウス）、又は霊長類（例えば、サル、チンパンジー、又はヒト）を含む哺乳動物である。特定の実施形態では、対象はヒトである。
【0057】
本明細書で使用するとき、「治療有効量」という用語は、対象に所望の生物学的又は薬理的応答を惹起する活性成分又は構成成分の量を指す。治療有効量は、記載される目的に対して経験的かつ通常の方法で決定することができる。例えば、任意選択的にインビトロアッセイを用いて、最適な用量範囲の特定に役立てることができる。具体的な有効用量の選択は、治療又は予防される疾病、伴う症状、患者の体重、患者の免疫状態、及び当業者に既知の他の因子を含むいくつかの因子の考慮に基づいて、当業者によって（例えば、臨床試験により）決定することができる。また、製剤に用いられる正確な用量は、投与経路及び疾患の重症度に応じて決まり、医師の判断及び各患者の状況に従って決定されるべきである。有効用量は、インビトロ又は動物モデル試験系から導かれる用量応答曲線から推定することができる。
【0058】
本明細書で使用する場合、用語「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」は全て、タウ異常症に関連した少なくとも１つの測定可能な物理的パラメータの改善又は逆転を指すものであり、これは対象において必ずしも認識されるとは限らないが、対象において認識可能な場合もある。用語「治療する」、「治療すること」、及び「治療」はまた、疾患、障害、又は病態を退縮させる、その進行を防止する、又は少なくともその進行を遅らせることを指す場合もあり得る。特定の実施形態では、「治療する（treat）」、「治療する（treating）」、及び「治療（treatment）」は、タウ異常症に関連する１つ以上の症状の緩和、進展若しくは発症の予防、又はその期間の短縮を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療すること」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病態の再発の防止を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療すること」、及び「治療」は、疾患、障害、又は病態を有する対象の生存率の向上を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療すること」、及び「治療」は、対象における疾患、障害、又は病態の消失を指す。
【0059】
本明細書で使用するとき、「タウ異常症」は、脳内のタウの病理学的凝集を伴う任意の神経変性疾患を包含する。家族性及び散発性ＡＤに加えて、他の例示的なタウオパチーは、染色体１７に関連したパーキンソン症候群を伴う前頭側頭型認知症（frontotemporal dementia with parkinsonism linked to chromosome 17、ＦＴＤＰ－１７）、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、神経原線維変化優位型認知症（tangle only dementia）、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症・パーキンソン症候群認知症複合、ダウン症候群、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハラーフォルデン・シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオンタンパク質大脳アミロイド血管障害、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維変化による非グアマニアン運動ニューロン疾患、脳炎後パーキンソン症候群、及び、拳闘家認知症（ボクサー病）などの慢性外傷性脳症である（Ｍｏｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ，７０：４１０－２６，２０１１）。
【0060】
本明細書で使用するとき、対象への２つ以上の療法の投与の文脈における用語「組み合わせで」は、２つ以上の療法の使用を指す。用語「組み合わせで」の使用は、療法を対象に投与する順序について限定しない。例えば、第１治療薬（例えば、本明細書に記載される組成物）を、被検者への第２治療薬の投与の前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間前）、同時、又はその後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間後）に対象へ投与することができる。
【0061】
抗ＰＨＦ－タウ抗体
一般的な一態様において、本出願は、ＰＨＦ－タウに結合する単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。このような抗ＰＨＦ－タウ抗体は、ＰＨＦ－タウにてリン酸化エピトープを結合させる特性、又はＰＨＦ－タウにて非リン酸化エピトープを結合させる特性を有することができる。抗ＰＨＦ－タウ抗体は治療薬として有用である場合があり、また、例えば組織又は細胞中での、生体試料におけるＰＨＦ－タウを検出するための調査又は診断試薬としても有用である場合がある。
一般的な一態様において、本出願は、ＰＨＦ－タウに結合する単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。このような抗ＰＨＦ－タウ抗体は、ＰＨＦ－タウにてリン酸化エピトープを結合させる特性、又はＰＨＦ－タウにて非リン酸化エピトープを結合させる特性を有することができる。抗ＰＨＦ－タウ抗体は治療薬として有用である場合があり、また、例えば組織又は細胞中での、生体試料におけるＰＨＦ－タウを検出するための調査又は診断試薬としても有用である場合がある。
【0062】
特定の態様によれば、本出願は、タウタンパク質のＣ末端ドメインにおけるエピトープにおいてタウタンパク質に結合する単離抗体又はその抗原結合断片に関する。いくつかの実施形態において、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１のアミノ酸配列を有するか又は配列番号１のアミノ酸配列内のタウタンパク質のエピトープにおいてタウタンパク質に結合し、ここで、抗体又はその抗原結合断片は、ＰＨＦ－タウ、好ましくはヒトＰＨＦ－タウに結合する。好ましくは、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１のアミノ酸配列からなるか又は配列番号１のアミノ酸配列内のタウタンパク質のエピトープにおいてタウタンパク質に結合し、ここで、抗体又はその抗原結合断片は、ＰＨＦ－タウ、好ましくはヒトＰＨＦ－タウに結合する。
【0063】
いくつかの実施形態において、タウタンパク質のエピトープは、タウタンパク質のリン酸化Ｓ４３３又はリン酸化Ｓ４３５のいずれか１つを含むが、リン酸化Ｓ４３３及びリン酸化Ｓ４３５を含まない、又は、タウタンパク質のエピトープは、タウタンパク質のリン酸化Ｔ４２７、リン酸化Ｓ４３３、及びリン酸化Ｓ４３５のうちの１つ以上を含むが、リン酸化Ｔ４２７、リン酸化Ｓ４３３、及びリン酸化Ｓ４３５の全てを含まない、又は、タウタンパク質のエピトープは、タウタンパク質のリン酸化Ｔ４２７及びリン酸化Ｓ４３３のうちの１つ以上を含むが、リン酸化Ｓ４３５を含まず、リン酸化Ｔ４２７、リン酸化Ｓ４３３及びリン酸化Ｓ４３５の全てを含まない、又はタウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｔ４２７を含むが、リン酸化Ｓ４３３又はリン酸化Ｓ４３５を含まない。
【0064】
本発明の抗体は、多様な技術により、例えば、ハイブリドーマ法により生成することができる（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｎａｔｕｒｅ．２５６：４９５－７，１９７５）。ドナー抗体（典型的にはマウス）に由来する軽鎖及び重鎖可変領域と共に、アクセプター抗体（典型的にはヒトなどの別の哺乳類種）に由来する軽鎖及び重鎖定常領域を含有するキメラモノクローナル抗体を、米国特許第４８１６５６７号に記載されている方法により調製することができる。非ヒトドナー免疫グロブリン（典型的にはマウス）に由来するＣＤＲを有し、分子の残りの、免疫グロブリンに由来する部分は１種類又はそれ以上のヒト免疫グロブリンに由来する、ＣＤＲグラフトモノクローナル抗体を、例えば米国特許第５２２５５３９号に開示されている、当業者に知られている技術により調製することができる。非ヒト配列を欠く完全ヒトモノクローナル抗体は、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．３６８：８５６－９，１９９４；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５－５１，１９９６、及びＭｅｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ．１５：１４６－５６，１９９７において参照された技術により、ヒト免役グロブリントランスジェニックマウスから調製することができる。ヒトモノクローナル抗体はまた、ファージディスプレイライブラリから調製及び最適化され得る（例えば、Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２９６：５７－８６，２０００、Ｋｒｅｂｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２５４：６７－８４，２００１、Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．３９７：３８５－９６，２０１０を参照されたい）。
【0065】
特定の態様によれば、本出願は、
（ａ）それぞれ配列番号４、５、及び６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号７、８、及び９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｃ）それぞれ配列番号２４、２５、及び２６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号２７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｄ）それぞれ配列番号３２、３３、及び３４のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び３５のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、又は
（ｅ）それぞれ配列番号４０、４１、及び４２のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び４３のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、を含む単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
（ａ）それぞれ配列番号４、５、及び６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号７、８、及び９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｃ）それぞれ配列番号２４、２５、及び２６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号２７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｄ）それぞれ配列番号３２、３３、及び３４のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び３５のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、又は
（ｅ）それぞれ配列番号４０、４１、及び４２のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び４３のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、を含む単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
【0066】
本明細書では、配列番号２、１２、２２、３０、若しくは３８と少なくとも９０％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３、１３、２３、３１、若しくは３９と少なくとも９０％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が提供される。いくつかの実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２、１２、２２、３０、若しくは３８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３、１３、２３、３１、若しくは３９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２、１２、２２、３０、若しくは３８のポリペプチド配列からなる重鎖可変領域、又は配列番号３、１３、２３、３１、若しくは３９のポリペプチド配列からなる軽鎖可変領域を含む。
【0067】
特定の態様によれば、本出願は、
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｅ）配列番号３８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域とを含む単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号３０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｅ）配列番号３８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域とを含む単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
【0068】
別の特定の態様によれば、本出願は、
（ａ）配列番号２のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖可変領域と、配列番号３のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号１２のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖可変領域と、配列番号１３のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号２２のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖可変領域と、配列番号２３のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号３０のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖可変領域と、配列番号３１のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる軽鎖可変領域、又は
（ｅ）配列番号３８のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖可変領域と、配列番号３９のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる軽鎖可変領域とを含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
（ａ）配列番号２のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖可変領域と、配列番号３のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号１２のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖可変領域と、配列番号１３のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号２２のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖可変領域と、配列番号２３のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号３０のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖可変領域と、配列番号３１のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる軽鎖可変領域、又は
（ｅ）配列番号３８のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖可変領域と、配列番号３９のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる軽鎖可変領域とを含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
【0069】
別の特定の態様によれば、本出願は、
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖、又は
（ｅ）配列番号４４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｃ）配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｄ）配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号３７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖、又は
（ｅ）配列番号４４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、例えば少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
【0070】
別の特定の態様によれば、本出願は、
（ａ）配列番号１０のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖と、配列番号１１のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｂ）配列番号２０のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖と、配列番号２１のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｃ）配列番号２８のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖と、配列番号２９のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｄ）配列番号３６のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖と、配列番号３７のポリペプチド配列を有する軽鎖、又は
（ｅ）好ましくは配列番号４４のポリペプチド配列、好ましくはからなるからなる重鎖と、配列番号４５のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
（ａ）配列番号１０のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖と、配列番号１１のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｂ）配列番号２０のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖と、配列番号２１のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｃ）配列番号２８のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖と、配列番号２９のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｄ）配列番号３６のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖と、配列番号３７のポリペプチド配列を有する軽鎖、又は
（ｅ）好ましくは配列番号４４のポリペプチド配列、好ましくはからなるからなる重鎖と、配列番号４５のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関する。
【0071】
特定の実施形態では、本出願の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、
（ａ）それぞれ配列番号４、５、及び６のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号７、８、及び９のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号２のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖可変領域と、配列番号３のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる軽鎖可変領域、又は
（ｃ）配列番号１０のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖と、配列番号１１のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる軽鎖とを含む。
（ａ）それぞれ配列番号４、５、及び６のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号７、８、及び９のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号２のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖可変領域と、配列番号３のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる軽鎖可変領域、又は
（ｃ）配列番号１０のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖と、配列番号１１のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる軽鎖とを含む。
【0072】
特定の実施形態では、本出願の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、
（ａ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１２のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖可変領域と、配列番号１３のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる軽鎖可変領域、又は
（ｃ）配列番号２０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２１のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む。
（ａ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１２のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる重鎖可変領域と、配列番号１３のポリペプチド配列を有する、好ましくはからなる軽鎖可変領域、又は
（ｃ）配列番号２０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２１のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む。
【0073】
別の特定の態様によれば、本出願は、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片に関し、抗体又は抗原結合断片は、ヒトＰＨＦ－タウに、５×１０－９Ｍ以下の解離定数（ＫＤ）、好ましくは１×１０－９Ｍ以下又は１×１０－１０Ｍ以下のＫＤで結合し、ＫＤは、表面プラズモン共鳴分析により、例えばＢｉａｃｏｒｅ又はＰｒｏｔｅＯｎシステムを使用することにより測定される。
【0074】
ＰＨＦ－タウに結合するモノクローナル抗体及びその抗原結合断片の機能活性は、当該技術分野において既知の方法により、そして本明細書に記載のとおりに特性決定することができる。ＰＨＦ－タウに結合する抗体及びその抗原結合断片を特性評価するための方法としては、Ｂｉａｃｏｒｅ、ＥＬＩＳＡ、及びＦＡＣＳ分析を含む親和性及び特異性アッセイ；免疫組織化学分析；タウシーディングを阻害する際の抗体の有効性を決定するためのインビトロ細胞アッセイ及びインビボ注射アッセイ；抗体の抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity、ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（complement dependent cytotoxicity、ＣＤＣ）活性の存在を検出するための細胞傷害性アッセイ等が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態によれば、ＰＨＦ－タウに結合する抗体及びその抗原結合断片を特性評価するための方法としては、以下の実施例に記載されるものが挙げられる。ＰＨＦ－タウに結合するが対照タウには結合しないモノクローナル抗体の例示的なマウス親抗体は、抗体ＰＴ３であり、これは、米国特許第９，３７１，３７６号に記載されており、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0075】
いくつかの公知の方法を用いて本出願の抗体の結合エピトープを決定することができる。例えば、両方の個別の構成成分の構造が既知である場合、インシリコでタンパク質－タンパク質ドッキングを行って、適合する相互作用部位を特定することができる。抗原抗体複合体を用いて水素－重水素（Hydrogen-deuterium、Ｈ／Ｄ）交換を行うことによって、抗体が結合する抗原の領域をマッピングすることができる。抗原のセグメント及び点変異誘導を用いることにより、抗体の結合に重要なアミノ酸の位置を特定することができる。抗体－抗原複合体の共結晶構造を使用して、エピトープ及びパラトープに寄与する残基を特定することができる。特定の実施形態によれば、本出願の抗体の結合エピトープを決定するための方法としては、以下の実施例に記載されるものが挙げられる。
【0076】
本出願の抗体は、二重特異的又は多重特異的であってよい。例示的な二重特異的抗体は、ＰＨＦ－タウの２つの異なるエピトープに結合することができるか、又はＰＨＦ－タウ及びアミロイドベータ（Ａβ）に結合することができる。別の例示的な二重特異性抗体は、ＰＨＦ－タウ及び内因性血液脳関門トランスサイトーシス受容体、例えば、インスリン受容体、トランスフェリング受容体（transferring receptor）、インスリン様増殖因子－１受容体、及びリポタンパク質受容体に結合することができる。例示的な抗体は、ＩｇＧ１タイプである。
【0077】
本出願の抗体の免疫エフェクターの特性は、当業者には既知の技術により、Ｆｃ修飾によって強化又はサイレンシングすることが可能である。例えば、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、貧食、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ））の下方制御などのＦｃエフェクター機能は、これらの活性を担うＦｃの残基を修飾することによって提供及び／又は制御され得る。また、薬物動態的な特性は、抗体の半減期を延長するＦｃドメインの残基を変異させることによって向上させることができる（Ｓｔｒｏｈｌ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：６８５－９１，２００９）。
【0078】
更に、本出願の抗体は、グリコシル化、異性化、脱グリコシル化、又はポリエチレングリコール部分の付加及び脂質化等の自然界では生じない共有結合修飾等のプロセスによって、翻訳後修飾してもよい。かかる修飾は、インビボ又はインビトロで行われ得る。例えば、本出願の抗体はポリエチレングリコールとコンジュゲート（ＰＥＧ化）することによって薬物動態的なプロファイルを向上させることができる。コンジュゲーションは、当業者に既知の方法によって行うことができる。治療用抗体の、ＰＥＧとのコンジュゲーションは、機能を低下させずに薬力学を向上させることが示されている（Ｋｎｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ．１５：４０９－１８，２００４、Ｌｅｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ．１６：１０６－１９，２００１、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１６：７６１－７０，２００３）。
【0079】
別の一般的な態様において、本出願は、本出願のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする単離ポリヌクレオチドに関する。タンパク質のアミノ酸配列を変えることなく、タンパク質のコード配列を変える（例えば置換する、欠失する、挿入するなど）ことができることが、当業者には理解されよう。したがって、タンパク質のアミノ酸配列を変化させることなく、本出願のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードしている核酸配列を変更できることが当業者には理解されるであろう。例示的な単離ポリヌクレオチドは、実施例（例えば、配列番号１０、１１、２０、２１、２８、２９、３６、３７、４４、４５）に記載される免疫グロブリン重鎖及び軽鎖を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、並びに重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）（例えば、配列番号２、３、１２、１３、２２、２３、３０、３１、３８、３９）を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。遺伝コードの縮重又は所与の発現系におけるコドンの選好性を考慮すると、本出願の抗体をコードする他のポリヌクレオチドも本出願の範囲内に含まれる。本発明の単離核酸は、公知の組換え又は合成技術を用いて作製することができる。モノクローナル抗体をコードしているＤＮＡは、当該技術分野において公知の方法を用いて容易に単離され、配列決定される。ハイブリドーマが生成される場合、そのような細胞はそれらのＤＮＡの供給源として機能することができる。あるいは、コード配列と翻訳生成物が結合したディスプレイ技術、例えばファージ又はリボソームディスプレイライブラリを使用することができる。
【0080】
別の一般的な態様において、本出願は、本出願のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする単離ポリヌクレオチドを含むベクターに関する。本開示を考慮して、当業者に既知である任意のベクター、例えばプラスミド、コスミド、ファージベクター、又はウイルスベクターを使用することができる。いくつかの実施形態では、ベクターは、プラスミドなどの組換え発現ベクターである。ベクターは、例えば、プロモータ、リボソーム結合エレメント、ターミネータ、エンハンサ、選択マーカー、及び複製起点という、発現ベクターの従来の機能を確立するための任意のエレメントを含むことができる。プロモータは、常時発現型、誘導型、又は再形成可能なプロモータであり得る。細胞に核酸を送達することができる多数の発現ベクターが当該技術分野において既知であり、細胞内で抗体又はその抗原結合断片を産生するために、本明細書で使用することができる。従来のクローニング技術、又は人工遺伝子合成法を使用して、本出願の実施形態に従った組換え発現ベクターを生成することができる。
【0081】
別の一般的な態様において、本出願は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする単離ポリヌクレオチドを含む宿主細胞に関する。本開示を考慮すると、当業者に知られている任意の宿主細胞を、本出願の抗体又はその抗原結合断片の組換え発現に使用することができる。そのような宿主細胞は、真核細胞、細菌細胞、植物細胞又は古細菌細胞であってよい。例示的な真核細胞は、哺乳動物、昆虫、鳥類、又は他の動物由来のものであってもよい。哺乳動物真核細胞としては、ＳＰ２／０（米国培養コレクション（American Type Culture Collection、ＡＴＣＣ）、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ、ＣＲＬ－１５８１）、ＮＳ０（欧州細胞培養コレクション（European Collection of Cell Cultures、ＥＣＡＣＣ）、Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ、Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ、ＵＫ、ＥＣＡＣＣ Ｎｏ．８５１１０５０３）、ＦＯ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６４６）及びＡｇ６５３（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８０）ネズミ細胞株などといった、ハイブリドーマ又は骨髄腫の細胞株などの不死化細胞株が挙げられる。例示的なヒト骨髄腫細胞株は、Ｕ２６６（ＡＴＴＣ ＣＲＬ－ＴＩＢ－１９６）である。他の有用な細胞株としては、ＣＨＯ－Ｋ１ ＳＶ（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）、ＣＨＯ－Ｋ１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－６１、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、又はＤＧ４４などのチャイニーズハムスターの卵巣（Chinese Hamster Ovary、ＣＨＯ）細胞に由来するものが挙げられる。
【0082】
別の一般的な態様において、本出願は、本出願のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を生成する方法であって、本出願のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を生成する条件下で、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを含む細胞を培養することと、細胞又は細胞培養液から（例えば上清から）、抗体又はその抗原結合断片を回収することとを含む、方法に関する。発現した抗体又はその抗原結合断片を細胞から回収して、当該技術分野において通常的な技術に従い精製することができる。
【0083】
医薬組成物及び治療方法
本出願の抗ＰＨＦ－タウ抗体、又は本出願のその断片は、脳内でのタウの病理学的凝集を伴う神経変性病、又はタウ異常症を有する患者、例えばＡＤを患う患者における症状の治療、低減、又は予防に使用することができる。
本出願の抗ＰＨＦ－タウ抗体、又は本出願のその断片は、脳内でのタウの病理学的凝集を伴う神経変性病、又はタウ異常症を有する患者、例えばＡＤを患う患者における症状の治療、低減、又は予防に使用することができる。
【0084】
したがって、別の一般的な態様において、本出願は、本出願の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片、及び医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物に関する。
【0085】
別の一般的な態様では、本出願は、タウシーディングのブロックを必要とする対象における、タウシーディングをブロックする方法であって、本出願の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法に関する。本明細書で使用される「タウシード」は、細胞によって内在化された場合、又はインビトロで単量体タウに曝露された場合に、細胞内タウ凝集を核形成又は「シーディング」することができるタウ凝集体を指す。タウシーディング活性は、本明細書に記載される細胞タウ凝集アッセイにおいて評価され得る（例えば、その全体が参照により組み込まれる米国特許第９，８３４，５９６号も参照されたい）。
【0086】
別の一般的な態様において、本出願は、タウ異常症などの病気、疾患又は状態の症状の治療又は低減を必要とする対象における、タウ異常症などの病気、疾患又は状態の症状の治療又は低減方法であって、対象に本出願の医薬組成物を投与することを含む、方法に関する。
【0087】
別の一般的な態様では、本出願は、病理学的タウ凝集又はタウ異常症の拡散の低減を必要とする対象における、病理学的タウ凝集又はタウ異常症の拡散を低減する方法であって、本出願の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法に関する。
【0088】
本出願の実施形態によれば、医薬組成物は、治療有効量のモノクローナル抗ＰＨＦ－タウ抗体又はその抗原結合断片を含む。モノクローナル抗ＰＨＦ－タウ抗体又はその抗原結合断片に関して本明細書で使用するとき、治療有効量は、疾患、障害、若しくは状態の治療をもたらすか、疾患、障害、若しくは状態の進行を予防する若しくは遅延させる、又は免疫疾患、障害、若しくは状態に関連する症状を低減若しくは完全に緩和する、モノクローナル抗ＰＨＦ－タウ抗体又はその抗原結合断片の量を意味する。
【0089】
特定の実施形態によれば、治療有効量は、以下の効果のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、又はそれ以上を達成するのに十分な治療の量を指す：（ｉ）治療される疾患、障害若しくは状態又はそれに関連する症状の重症度を軽減又は改善すること、（ｉｉ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれと関連する症状の期間を短縮すること、（ｉｉｉ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれと関連する症状の進行を予防すること、（ｉｖ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれと関連する症状の退縮を生じさせること、（ｖ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれと関連する症状の進行又は発症を予防すること、（ｖｉ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれと関連する症状の再発を予防すること、（ｖｉｉ）治療される疾患、障害、若しくは状態、又はそれと関連する症状を有する対象の入院を減少させること、（ｖｉｉｉ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれと関連する症状を有する対象の入院期間を短縮させること、（ｉｘ）治療される疾患、障害若しくは状態、又はそれと関連する症状を有する対象の生存率を高めること、（ｘｉ）治療される対象の疾患、障害若しくは状態、又はそれと関連する症状を阻害又は軽減すること、及び／あるいは（ｘｉｉ）別の療法の予防又は治療効果を強化又は改善すること。
【0090】
特定の実施形態によれば、治療される病気、疾患又は状態はタウ異常症である。より具体的な実施形態によれば、治療される病気、疾患又は状態としては、家族性アルツハイマー病、散発性アルツハイマー病、染色体１７に関連したパーキンソン症候群による前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、神経原線維変化優位型認知症、石灰化によるびまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症・パーキンソン症候群認知症複合、ダウン症候群、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハラーフォルデン・シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオンタンパク質大脳アミロイド血管障害、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維変化による非グアマニアン運動ニューロン疾患、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、又は拳闘家認知症（ボクサー病）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0091】
タウ異常症に関連する行動的表現型としては、認知障害、初期人格変化及び脱抑制、感情鈍麻、無為症、無言症、失行症、反復症、常同運動／挙動、口愛過度、混乱、連続タスクを計画又は組織化する能力の欠如、利己的行動／無神経、反社会的特徴、共感の欠如、言葉のつかえ、錯誤的誤りは頻繁にあるが比較的理解力は保たれている失文症的な話し方、理解障害及び換語欠陥、緩徐進行性歩行不安定性、後方突進、すくみ、頻繁な転倒、非レボドパ反応性軸剛性、核上性注視麻痺、方形波痙攣、緩徐な垂直断続性運動、仮性球麻痺、四肢失行症、筋緊張異常、皮質性感覚消失、及び振戦が挙げられる。
【0092】
治療を受けやすい患者としては、ＡＤ又は他のタウ異常症のリスクがある無症候性の個体、及び現在症状を示している患者が挙げられるが、これらに限定されない。治療の影響を受けやすい患者としては、ＡＤの家族歴又はゲノムにおける遺伝的リスク因子の存在など、ＡＤの公知の遺伝的リスクを有する個体が挙げられる。例示的なリスク因子は、特に、位置７１７、並びに位置６７０及び６７１におけるアミロイド前駆体タンパク質（amyloid precursor protein、ＡＰＰ）の変異（それぞれ、Ｈａｒｄｙ及びＳｗｅｄｉｓｈ変異）である。他のリスク因子は、プレセニリン遺伝子ＰＳ１及びＰＳ２、並びにＡｐｏＥ４における変異、高コレステロール血症又はアテローム性動脈硬化症の家族歴である。現在ＡＤに罹患している個体は、上記リスク因子の存在によって特徴的な認知症から認識することができる。更に、ＡＤを有する個体を特定するために、多数の診断試験が利用可能である。これらとしては、脳脊髄液のタウ濃度及びＡβ４２濃度の測定が挙げられる。タウ濃度の上昇及びＡβ４２濃度の低下は、ＡＤの存在を表す。また、ＡＤに罹患している個体は、ＡＤ及び関連障害の協会の基準によって診断することもできる。
【0093】
本出願の抗ＰＨＦ－タウ抗体は、ＡＤ又は他のタウ異常症等、タウの病理学的凝集を伴う神経変性疾患を治療又は予防するための治療剤及び予防剤の両方に好適である。無症候性患者では、治療は何歳から開始してもよい（例えば、約１０、１５、２０、２５、３０歳）。しかしながら、通常、患者が約４０、５０、６０、又は７０歳に達するまで治療を始める必要はない。治療は、典型的には、ある期間にわたる複数回投与を伴う。治療は、経時的に治療剤に対する抗体、又は活性化Ｔ細胞若しくはＢ細胞の応答を評価することによってモニタリングしてもよい。応答（反応）が低下した場合、追加用量を指示してよい。
【0094】
予防用途では、医薬組成物又は薬剤は、疾患の生化学的、組織学的、及び／又は挙動的症状、その合併症、並びに疾患の発現中に提示される中間病理学的表現型を含む、疾患のリスクをなくす又は低減する、重症度を低下させる、又は疾患の発症を遅らせるのに十分な量で、ＡＤに罹患しやすいか又はそうでなければＡＤのリスクを有する患者に投与される。治療用途では、組成物又は薬剤は、疾患の症状（生化学的、組織学的、及び／又は挙動的）のいずれかを低減、阻止、又は遅延させるのに十分な量で、かかる疾患が疑われるか又は既に罹患している患者に投与される。治療薬の投与により、特徴的なアルツハイマー病状を未だ発現していない患者における軽度の認知障害を低減又はなくすことができる。
【0095】
治療有効量又は用量は、治療される疾患、障害又は状態、投与手段、標的部位、対象の生理学的状態（例えば、年齢、体重、健康状態を含む）、対象がヒトであるか動物であるか、投与される他の薬剤、及び、治療が予防的なものであるか治療的なものであるか、などの様々な因子によって異なり得る。治療用量は、安全性及び有効性を最適化するために最適に漸増される。
【0096】
本出願の抗体は、医薬的に許容される担体内の活性成分として、治療有効量の抗体を含有する医薬組成物として調製することができる。担体は、液体、例えば水、及び落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油等の、石油、動物、植物、又は合成起源のものを含む油であってよい。例えば、０．４％生理食塩水及び０．３％グリシンを用いることができる。これらの溶液は滅菌され、概して粒子状物質を含まない。これらは、従来から公知の滅菌技術（例えば、濾過）によって滅菌することができる。組成物は、生理学的条件に近づけるために必要とされる医薬的に許容できる補助物質、例えばｐＨ調整剤及び緩衝剤、安定化剤、増粘剤、潤滑剤、及び着色剤等を含有することができる。こうした医薬製剤中の本出願の薬剤の濃度は大きく、すなわち、約０．５重量％未満、通常は少なくとも約１重量％～最大で１５又は２０重量％までと異なってよく、選択される特定の投与様式に従って、主として必要とされる用量、流体体積、粘度等に基づいて選択される。
【0097】
本出願の抗体を治療的に使用するための投与様式は、薬剤を宿主に送達する任意の好適な経路であってもよい。例えば、本明細書に記載する組成物は、非経口的投与、例えば皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻孔内、若しくは頭蓋内投与に好適であるように製剤化することができ、又は、脳若しくは脊椎の脳脊髄液内に投与することができる。
【0098】
治療は、単回投与スケジュール、又は複数回投与スケジュールで行ってもよく、複数回投与計画では、一次治療過程が１～１０回の別個の投与と、続いて、応答を維持しかつ／又は強化するのに必要な後続の時間間隔で他の投与とを行い、例えば第２の投与を、１～４ヶ月で行い、また必要であれば、次の投与を数ヶ月後に行う。好適な治療スケジュールの例としては、（ｉ）０、１ヶ月及び６ヶ月、（ｉｉ）０、７日及び１ヶ月、（ｉｉｉ）０及び１ヶ月、（ｉｖ）０及び６ヶ月、又は疾患の症状を軽減するか若しくは疾患の重症度を低下させることが期待される、所望の応答を惹起するのに十分な他のスケジュールが挙げられる。
【0099】
本出願の抗体は、保存のために凍結乾燥させ、使用前に好適な担体に溶解させることができる。この技術は、抗体及び他のタンパク質調製物に効果的であることが示されており、当該技術分野において公知の凍結乾燥及び溶解技術を用いることができる。
【0100】
特定の実施形態によれば、タウ異常症の治療で使用される組成物を、関係する神経変性病の治療に効果的な他の作用物質と組み合わせて使用することができる。ＡＤの場合、本出願の抗体は、アミロイドベータ（amyloid-beta、Ａβ）の沈着を低減又は予防する作用物質と組み合わせて投与することができる。ＰＨＦ－タウ及びＡβの病理は相乗的である可能性がある。したがって、ＰＨＦ－タウ、並びにＡβ及びＡβ関連病理の両方のクリアランスを同時に標的とする併用療法は、各々を個々に標的とするよりも効果的であり得る。パーキンソン病及び関連する神経変性疾患の場合、α－シヌクレインタンパク質の凝集形態をクリアランスするための免疫修飾も新たに開発された治療法である。タウ及びα－シヌクレインタンパク質のクリアランスを同時に標的とする併用療法は、いずれかのタンパク質を個々に標的とするよりも効果的であり得る。
【0101】
別の全般的な態様では、本出願は、本出願のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬組成物を製造する方法であって、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を医薬的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法に関する。
【0102】
診断方法及びキット
本出願のモノクローナル抗ＰＨＦ－タウ抗体を、対象におけるＡＤ又は他のタウ異常症の診断方法において使用することができる。
本出願のモノクローナル抗ＰＨＦ－タウ抗体を、対象におけるＡＤ又は他のタウ異常症の診断方法において使用することができる。
【0103】
したがって、別の一般的な態様において、本出願は、対象にＰＨＦ－タウが存在することを検出する方法、及び、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を使用して対象にＰＨＦ－タウが存在することを検出することにより、タウ異常症を診断する方法に関する。
【0104】
生体試料を診断抗体試薬と接触させ、対象の試料において、診断抗体試薬のリン酸化タウへの結合を検出することにより、対象の生体試料（例えば血液、血清、血漿、間質液、又は大脳脊髄液試料）においてリン酸化タウを検出することができる。検出を実行するためのアッセイとしては、ＥＬＩＳＡ、免疫組織化学、ウエスタンブロット、又はインビボイメージングなどの周知の方法が挙げられる。
【0105】
診断抗体又は同様の試薬は、患者の体内に静脈内注射により投与することができ、又は作用物質を宿主に送達する任意の好適な経路により脳内に直接投与することができる。抗体の用量は、治療方法と同じ範囲内であるべきである。典型的には、抗体は標識されるが、いくつかの方法において、リン酸化タウに対して親和性を有する一次抗体は未標識であり、二次標識剤が、一次抗体に結合させるために用いられる。標識の選択は、検出手段に依存する。例えば、蛍光標識は、光学検出に好適である。常磁性標識の使用は、外科的介入のないトモグラフィー検出に好適である。また、放射標識は、ＰＥＴ又はＳＰＥＣＴを用いて検出され得る。
【0106】
診断は、対象由来の試料又は対象における、標識ＰＨＦ－タウ、タウ凝集体、及び／又は神経原線維変化の数、大きさ、及び／又は強度を、対応するベースライン値と比較することによって行われる。ベースライン値は、健常な個体の集団における平均レベルを表し得る。また、ベースライン値は、同じ対象において決定された以前の値を表す。
【0107】
また、上記の診断方法は、治療前、治療中、又は治療後の対象におけるリン酸化タウの存在を検出することによって治療に対する対象の応答をモニタリングするために用いることもできる。ベースラインに対する値の減少は、治療に対する陽性応答を示す。また、値は、病理学的タウが脳からクリアランスされたとき、生物学的流体において一時的に増加する場合がある。
【0108】
本出願は、更に、上記診断及びモニタリング方法を実施するためのキットに関する。典型的には、このようなキットには、本出願の抗体などの診断試薬と、任意選択的に検出可能な標識とが入っている。診断抗体自体は、直接検出可能であるか又は二次反応（例えば、ストレプトアビジンとの反応）を介して検出可能である、検出可能な標識（例えば、蛍光標識、ビオチン等）を含有してもよい。あるいは、検出可能な標識を含有する第２の試薬を使用してもよく、この場合、第２の試薬は、一次抗体に対する結合特異性を有する。生体試料におけるＰＨＦ－タウを測定するのに好適な診断キットでは、キットの抗体は、マイクロタイターディッシュのウェル等の固相に予め結合して供給され得る。
【0109】
本出願全体で引用した全ての引用参考文献（論文参考文献、交付済み特許、公開された特許出願、及び同時係属の特許出願を含む）の内容は、参照により本明細書に明白に組み込まれる。
【0110】
実施形態
本出願は以下の非限定的な実施形態も提供する。
本出願は以下の非限定的な実施形態も提供する。
【0111】
実施形態１は、配列番号１のアミノ酸配列を有するか、又は配列番号１のアミノ酸配列内のタウタンパク質のエピトープでタウタンパク質に結合する単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、対らせん状細線維（ＰＨＦ）－タウ、好ましくはヒトＰＨＦ－タウに結合する、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
【0112】
実施形態１ａは、配列番号１のアミノ酸配列からなるか、又は配列番号１のアミノ酸配列内のタウタンパク質のエピトープでタウタンパク質に結合する単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、対らせん状細線維（ＰＨＦ）－タウ、好ましくはヒトＰＨＦ－タウに結合する、単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
【0113】
実施形態２は、
（ａ）タウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｓ４３３又はリン酸化Ｓ４３５のいずれか一方を含むが、リン酸化Ｓ４３３及びリン酸化Ｓ４３５を含まない、
（ｂ）タウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｔ４２７、リン酸化Ｓ４３３、及びリン酸化Ｓ４３５のうちの１つ以上を含むが、リン酸化Ｔ４２７、リン酸化Ｓ４３３、及びリン酸化Ｓ４３５の全てを含まない、
（ｃ）タウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｔ４２７及びリン酸化Ｓ４３３のうちの１つ以上を含むが、リン酸化Ｓ４３５を含まず、リン酸化Ｔ４２７、リン酸化Ｓ４３３、及びリン酸化Ｓ４３５の全てを含まない、又は
（ｄ）タウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｔ４２７を含むが、リン酸化Ｓ４３３又はリン酸化Ｓ４３５を含まない、実施形態１又は１ａに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
（ａ）タウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｓ４３３又はリン酸化Ｓ４３５のいずれか一方を含むが、リン酸化Ｓ４３３及びリン酸化Ｓ４３５を含まない、
（ｂ）タウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｔ４２７、リン酸化Ｓ４３３、及びリン酸化Ｓ４３５のうちの１つ以上を含むが、リン酸化Ｔ４２７、リン酸化Ｓ４３３、及びリン酸化Ｓ４３５の全てを含まない、
（ｃ）タウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｔ４２７及びリン酸化Ｓ４３３のうちの１つ以上を含むが、リン酸化Ｓ４３５を含まず、リン酸化Ｔ４２７、リン酸化Ｓ４３３、及びリン酸化Ｓ４３５の全てを含まない、又は
（ｄ）タウタンパク質のエピトープが、タウタンパク質のリン酸化Ｔ４２７を含むが、リン酸化Ｓ４３３又はリン酸化Ｓ４３５を含まない、実施形態１又は１ａに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
【0114】
実施形態３は、
（ａ）それぞれ配列番号４、５、及び６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号７、８、及び９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｃ）それぞれ配列番号２４、２５、及び２６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号２７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｄ）それぞれ配列番号３２、３３、及び３４のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び３５のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、又は
（ｅ）それぞれ配列番号４０、４１、及び４２のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び４３のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、を含む実施形態１～２のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
（ａ）それぞれ配列番号４、５、及び６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号７、８、及び９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｃ）それぞれ配列番号２４、２５、及び２６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号２７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｄ）それぞれ配列番号３２、３３、及び３４のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び３５のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、又は
（ｅ）それぞれ配列番号４０、４１、及び４２のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び４３のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、を含む実施形態１～２のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
【0115】
実施形態３ａは、
（ａ）それぞれ配列番号４、５、及び６のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号７、８、及び９のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び１９のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｃ）それぞれ配列番号２４、２５、及び２６のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号２７、１８、及び１９のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｄ）それぞれ配列番号３２、３３、及び３４のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び３５のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、又は
（ｅ）それぞれ配列番号４０、４１、及び４２のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び４３のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
（ａ）それぞれ配列番号４、５、及び６のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号７、８、及び９のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び１９のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｃ）それぞれ配列番号２４、２５、及び２６のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号２７、１８、及び１９のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｄ）それぞれ配列番号３２、３３、及び３４のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び３５のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、又は
（ｅ）それぞれ配列番号４０、４１、及び４２のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び４３のポリペプチド配列からなる免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
【0116】
実施形態４は、配列番号２、１２、２２、３０、若しくは３８と少なくとも９０％同一のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３、１３、２３、３１、若しくは３９と少なくとも９０％同一のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、実施形態１～３ａのいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
【0117】
実施形態５は、配列番号２、１２、２２、３０、若しくは３８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３、１３、２３、３１、若しくは３９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域を含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
【0118】
実施形態５ａは、配列番号２、１２、２２、３０、若しくは３８のいずれか１つのポリペプチド配列を有する重鎖可変領域、又は配列番号３、１３、２３、３１、若しくは３９のいずれか１つのポリペプチド配列からなる軽鎖可変領域を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
【0119】
実施形態６は、
（ａ）配列番号２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号１２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号２２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号２３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号３０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｅ）配列番号３８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域とを含む、実施形態１～５ａのいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
（ａ）配列番号２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号１２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号２２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号２３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号３０のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３１のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｅ）配列番号３８のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３９のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域とを含む、実施形態１～５ａのいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
【0120】
実施形態６ａは、
（ａ）配列番号２のポリペプチド配列からなる重鎖可変領域と、配列番号３のポリペプチド配列からなる軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号１２のポリペプチド配列からなる重鎖可変領域と、配列番号１３のポリペプチド配列からなる軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号２２のポリペプチド配列からなる重鎖可変領域と、配列番号２３のポリペプチド配列からなる軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号３０のポリペプチド配列からなる重鎖可変領域と、配列番号３１のポリペプチド配列からなる軽鎖可変領域、又は
（ｅ）配列番号３８のポリペプチド配列からなる重鎖可変領域と、配列番号３９のポリペプチド配列からなる軽鎖可変領域とを含む、実施形態１～６のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
（ａ）配列番号２のポリペプチド配列からなる重鎖可変領域と、配列番号３のポリペプチド配列からなる軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号１２のポリペプチド配列からなる重鎖可変領域と、配列番号１３のポリペプチド配列からなる軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号２２のポリペプチド配列からなる重鎖可変領域と、配列番号２３のポリペプチド配列からなる軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号３０のポリペプチド配列からなる重鎖可変領域と、配列番号３１のポリペプチド配列からなる軽鎖可変領域、又は
（ｅ）配列番号３８のポリペプチド配列からなる重鎖可変領域と、配列番号３９のポリペプチド配列からなる軽鎖可変領域とを含む、実施形態１～６のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
【0121】
実施形態７は、
（ａ）配列番号１０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号１１のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｂ）配列番号２０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２１のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｃ）配列番号２８のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２９のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｄ）配列番号３６のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号３７のポリペプチド配列を有する軽鎖、又は
（ｅ）配列番号４４のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号４５のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む、実施形態１～６ａのいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
（ａ）配列番号１０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号１１のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｂ）配列番号２０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２１のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｃ）配列番号２８のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２９のポリペプチド配列を有する軽鎖、
（ｄ）配列番号３６のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号３７のポリペプチド配列を有する軽鎖、又は
（ｅ）配列番号４４のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号４５のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む、実施形態１～６ａのいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
【0122】
実施形態７ａは、
（ａ）配列番号１０のポリペプチド配列からなる重鎖と、配列番号１１のポリペプチド配列からなる軽鎖、
（ｂ）配列番号２０のポリペプチド配列からなる重鎖と、配列番号２１のポリペプチド配列からなる軽鎖、
（ｃ）配列番号２８のポリペプチド配列からなる重鎖と、配列番号２９のポリペプチド配列からなる軽鎖、
（ｄ）配列番号３６のポリペプチド配列からなる重鎖と、配列番号３７のポリペプチド配列からなる軽鎖、又は
（ｅ）配列番号４４のポリペプチド配列からなる重鎖と、配列番号４５のポリペプチド配列からなる軽鎖とを含む、実施形態１～７のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
（ａ）配列番号１０のポリペプチド配列からなる重鎖と、配列番号１１のポリペプチド配列からなる軽鎖、
（ｂ）配列番号２０のポリペプチド配列からなる重鎖と、配列番号２１のポリペプチド配列からなる軽鎖、
（ｃ）配列番号２８のポリペプチド配列からなる重鎖と、配列番号２９のポリペプチド配列からなる軽鎖、
（ｄ）配列番号３６のポリペプチド配列からなる重鎖と、配列番号３７のポリペプチド配列からなる軽鎖、又は
（ｅ）配列番号４４のポリペプチド配列からなる重鎖と、配列番号４５のポリペプチド配列からなる軽鎖とを含む、実施形態１～７のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
【0123】
実施形態８は、
（ａ）それぞれ配列番号４、５、及び６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号７、８、及び９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｃ）配列番号１０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号１１のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む、実施形態１～７ａのいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
（ａ）それぞれ配列番号４、５、及び６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号７、８、及び９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｃ）配列番号１０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号１１のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む、実施形態１～７ａのいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
【0124】
実施形態９は、
（ａ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｃ）配列番号２０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２１のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む、実施形態１～７ａのいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
（ａ）それぞれ配列番号１４、１５、及び１６のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに、それぞれ配列番号１７、１８、及び１９のポリペプチド配列を有する免疫グロブリン軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、
（ｂ）配列番号１２のポリペプチド配列を有する重鎖可変領域と、配列番号１３のポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｃ）配列番号２０のポリペプチド配列を有する重鎖と、配列番号２１のポリペプチド配列を有する軽鎖とを含む、実施形態１～７ａのいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
【0125】
実施形態１０は、実施形態１～９のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする、単離核酸である。
【0126】
実施形態１１は、実施形態１０に記載の単離核酸を含む、ベクターである。
【0127】
実施形態１２は、実施形態１０に記載の単離核酸を含む、宿主細胞である。
【0128】
実施形態１３は、実施形態１～９のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物である。
【0129】
実施形態１４は、タウシーディングのブロックを必要とする対象における、タウシーディングをブロックする方法であって、実施形態１３に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法である。
【0130】
実施形態１５は、タウ異常症の治療を必要とする対象における、タウ異常症を治療する方法であって、実施形態１３に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法である。
【0131】
実施形態１６は、病理学的タウ凝集又はタウ異常症の拡大の低減を必要とする対象における、病理学的タウ凝集又はタウ異常症の拡大を低減する方法であって、実施形態１３に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、方法である。
【0132】
実施形態１７は、タウ異常症が、家族性アルツハイマー病、散発性アルツハイマー病、染色体１７に関連したパーキンソン症候群による前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、線維変化優位型認知症、石灰化によるびまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症・パーキンソン症候群認知症複合、ダウン症候群、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハラーフォルデン・シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオンタンパク質大脳アミロイド血管障害、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維変化による非グアマニアン運動ニューロン疾患、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、及び拳闘家認知症（ボクサー病）からなる群から選択される、実施形態１５又は１６に記載の方法である。
【0133】
実施形態１７ａは、タウ異常症の治療を必要とする対象における、タウ異常症の治療のための追加の作用物質を対象に投与することを更に含む、実施形態１５～１７のいずれか１つの記載の方法である。
【0134】
実施形態１８は、実施形態１～９のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を生成する方法であって、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸を含む細胞を、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を生成する条件下で培養することと、細胞又は細胞培養液からモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を回収することとを含む、方法である。
【0135】
実施形態１９は、対象由来の生体試料におけるＰＨＦ－タウの存在を検出する方法であって、生体試料を実施形態１～９のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片と接触させることと、対象由来の試料におけるＰＨＦ－タウへのモノクローナル抗体又はその抗原結合断片の結合を検出することとを含む、方法である。
【0136】
実施形態２０は、生体試料が、血液、血清、血漿、間質液、又は大脳脊髄液試料である、実施形態１９に記載の方法である。
【0137】
実施形態２１は、実施形態１～９のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を含む、医薬組成物を製造する方法であって、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片を医薬的に許容される担体と組み合わせて、医薬組成物を得ることを含む、方法である。
【0138】
実施形態２２は、タウ異常症の治療を必要とする対象における、タウ異常症の治療に使用するための、実施形態１～９のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片である。
【0139】
実施形態２３は、タウ異常症の治療を必要とする対象における、家族性アルツハイマー病、散発性アルツハイマー病、染色体１７に関連したパーキンソン症候群による前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、神経原線維変化優位型認知症、石灰化によるびまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症・パーキンソン症候群認知症複合、ダウン症候群、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハラーフォルデン・シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオンタンパク質大脳アミロイド血管障害、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維変化による非グアマニアン運動ニューロン疾患、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、又は拳闘家認知症（ボクサー病）などの、タウ異常症の治療に使用するための、実施形態１～９のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、又は実施形態１３に記載の医薬組成物である。
【0140】
実施形態２４は、タウ異常症の治療を必要とする対象における、タウ異常症の治療における医薬品を製造するための、実施形態１～９のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片の使用である。
【0141】
実施形態２５は、タウ異常症の治療を必要とする対象における、家族性アルツハイマー病、散発性アルツハイマー病、染色体１７に関連したパーキンソン症候群による前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、ピック病、進行性皮質下神経膠症、神経原線維変化優位型認知症、石灰化によるびまん性神経原線維変化病、嗜銀顆粒性認知症、筋萎縮性側索硬化症・パーキンソン症候群認知症複合、ダウン症候群、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー病、ハラーフォルデン・シュパッツ病、封入体筋炎、クロイツフェルト・ヤコブ病、多系統萎縮症、Ｃ型ニーマン・ピック病、プリオンタンパク質大脳アミロイド血管障害、亜急性硬化性全脳炎、筋強直性ジストロフィー、神経原線維変化による非グアマニアン運動ニューロン疾患、脳炎後パーキンソン症候群、慢性外傷性脳症、又は拳闘家認知症（ボクサー病）などの、タウ異常症の治療のための薬剤を製造するための、実施形態１～９のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片の使用である。
【0142】
実施形態２６は、対象由来の生体試料におけるＰＨＦ－タウの存在を検出することによって、対象におけるタウ異常症を診断する方法であって、生体試料を、実施形態１～９のいずれか１つに記載の単離モノクローナル抗体又はその抗原結合断片と接触させることと、対象由来の試料におけるＰＨＦ－タウへの抗体又は抗原結合断片の結合を検出することとを含む、方法である。
【実施例】
【0143】
以下の本出願の実施例は、本発明の本質を更に説明するためのものである。以下の実施例は本出願を限定するものではなく、また本出願の範囲は添付の特許請求の範囲によって定められることが理解されるべきである。
【0144】
実施例１：抗体の生成
抗ＰＨＦ－タウ（ＰＴ／５３、ＰＴ／６６、ＰＴ／６９、ＰＴ／８１）及び抗インビトロ凝集タウ抗体（ｈＴａｕ／６０）を、タウノックアウト（ＫＯ）マウスにおいて標準的なハイブリドーマ技術を使用して作製した（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５－７，１９７５）。得られたハイブリドーマを９６ウェルプレートに播種し、１０日後に、下記のとおり２５ｎｇ／ウェルでコーティングされたＰＨＦ－タウにおいて直接ＥＬＩＳＡでスクリーニングした。陽性細胞を、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）ＢＬ２１細胞で発現させた対照タウ（配列番号５１）でコーティングされたウェルあたり１０ｎｇで交差反応性について試験し、熱処理及び硫酸アンモニウム沈殿によって精製した。ＰＴ／５３、ＰＴ／６６、ＰＴ／６９、ＰＴ／８１、及びｈＴａｕ６０が、ＰＨＦタウ及び対照タウ（配列番号５１）の両方に結合することが見出された。ＰＴ／６６、ＰＴ／６９、及びｈＴａｕ／６０を、Ｖ領域クローニング及びヒト化に優先した。
抗ＰＨＦ－タウ（ＰＴ／５３、ＰＴ／６６、ＰＴ／６９、ＰＴ／８１）及び抗インビトロ凝集タウ抗体（ｈＴａｕ／６０）を、タウノックアウト（ＫＯ）マウスにおいて標準的なハイブリドーマ技術を使用して作製した（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５－７，１９７５）。得られたハイブリドーマを９６ウェルプレートに播種し、１０日後に、下記のとおり２５ｎｇ／ウェルでコーティングされたＰＨＦ－タウにおいて直接ＥＬＩＳＡでスクリーニングした。陽性細胞を、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）ＢＬ２１細胞で発現させた対照タウ（配列番号５１）でコーティングされたウェルあたり１０ｎｇで交差反応性について試験し、熱処理及び硫酸アンモニウム沈殿によって精製した。ＰＴ／５３、ＰＴ／６６、ＰＴ／６９、ＰＴ／８１、及びｈＴａｕ６０が、ＰＨＦタウ及び対照タウ（配列番号５１）の両方に結合することが見出された。ＰＴ／６６、ＰＴ／６９、及びｈＴａｕ／６０を、Ｖ領域クローニング及びヒト化に優先した。
【0145】
陽性細胞を直ちにサブクローニングし、陽性クローンを液体窒素中で凍結させた。１０％ウシ胎仔血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｅｕｒｏｐｅ）、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ Ｆｕｓｉｏｎ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（２％）（Ｒｏｃｈｅ，Ｂｒｕｓｓｅｌｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）、２％ＨＴ（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、２ｍＭのＬ－グルタミン及びペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）、並びにストレプトマイシン（５０ｍｇ／ｍＬ）を添加したダルベッコ変法イーグル培地において、全てのハイブリドーマを増殖させた。
【0146】
抗体可変領域を、選択したハイブリドーマ細胞からマウスＩｇＧ１／ＩｇＧ２／κバックグラウンドにクローニングし、発現させ、常法を用いて精製した。簡潔に述べると、ハイブリドーマ細胞をＲＬＴバッファ（Ｑｉａｇｅｎカタログ番号７９２１６）で溶解させ、－７０℃で凍結した。溶解物を３７℃で解凍し、ＲＮｅａｓｙ９６キット（Ｑｉａｇｅｎカタログ番号７４１８２）を使用してＲＮＡを単離した。
【0147】
ＲＮＡのアリコートを使用して、マウスＩｇＧ重鎖、マウスカッパ軽鎖、及びマウスラムダ軽鎖の定常領域にアニーリングするように設計されたプライマーを使用して、遺伝子特異的リバースプライマーミックスを使用してｃＤＮＡを合成した。
【0148】
ＩｇＧ重鎖可変領域、カッパ軽鎖可変領域、又はラムダ軽鎖可変領域のいずれかを増幅するように設計されたマウスプライマーセットを用いたＰＣＲ反応において、ｃＤＮＡのアリコートを使用した。フォワードプライマーは、フレームワーク１にアニーリングするように設計された複数のプライマーからなっており、リバースプライマーは、定常領域にアニーリングするように設計されていた。ＰＣＲ産物のアリコートを２％アガロースゲルで泳動したところ、重及びカッパＰＣＲ産物は、正確なサイズの可視バンドを示した。
【0149】
それぞれの定常領域にアニーリングするように設計された重鎖又はカッパ軽鎖リバースプライマーを使用して、重鎖及びカッパ軽鎖のＰＣＲ産物の配列を決定した（サンガー法）。配列を分析し、アラインメントして、最も一致するマウス生殖系列を同定した。重鎖及びカッパ鎖フレームワーク１配列の最初の１０個のアミノ酸を、一致する生殖系列配列を用いて置換した。ＩｇＧ重鎖及びカッパ可変領域のアミノ酸配列を、コドン最適化及び合成した。コドン最適化されたＩｇＧ重鎖及びカッパ軽鎖可変領域を合成し、断片をマウスＩｇＧ２ａアイソタイプ重鎖及びカッパ軽鎖アイソタイプ発現ベクターにクローニングした。
【0150】
抗体の可変領域を、選択されたハイブリドーマ細胞からクローニングし、標準的な方法を用いて配列を決定し、ｍＡｂ及びＦａｂ用の発現ベクターにサブクローニングした。ＭａｂをマウスＩｇＧ２ａ／κバックグラウンドで生成し、発現させ、親和性クロマトグラフィー（プロテインＡ）によって精製した。ヒトＩｇＧ１／κ定常ドメインに融合したマウス可変ドメイン及び重鎖のＣ末端におけるＨｉｓタグを有するキメラバージョンとして、Ｆａｂを生成した。ＦａｂをＨＥＫ２９３Ｆ細胞で一過的に発現させ、親和性クロマトグラフィー（ＨｉｓＴｒａｐ）によって精製した。
【0151】
実施例２：抗体の特性決定
ＥＬＩＳＡ及びウエスタンブロッティング
組換えＷＴ（２Ｎ４Ｒ）タウへの結合をＥＬＩＳＡによって分析した。完全長タウタンパク質（１ｎｇ／ｍＬ又は１０ｎｇ／ｍＬ）をプレートに直接コーティングし、異なる濃度の組換え的に又はハイブリドーマで生成されたｐＴ／６６、ｐＴ／６９、又はｈＴａｕ／６０抗体のいずれかと共にインキュベートした（図１）。予想通り、タウのより低いコーティング濃度は、より低い最大値をもたらした。組換え的に及びハイブリドーマで生成された抗体の結合プロファイル間には、実質的な差は観察されなかった。
ＥＬＩＳＡ及びウエスタンブロッティング
組換えＷＴ（２Ｎ４Ｒ）タウへの結合をＥＬＩＳＡによって分析した。完全長タウタンパク質（１ｎｇ／ｍＬ又は１０ｎｇ／ｍＬ）をプレートに直接コーティングし、異なる濃度の組換え的に又はハイブリドーマで生成されたｐＴ／６６、ｐＴ／６９、又はｈＴａｕ／６０抗体のいずれかと共にインキュベートした（図１）。予想通り、タウのより低いコーティング濃度は、より低い最大値をもたらした。組換え的に及びハイブリドーマで生成された抗体の結合プロファイル間には、実質的な差は観察されなかった。
【0152】
抗体の更なるプロファイリングは、異なる種（マウス、イヌ、サル、及びヒト）からの脳試料におけるタウへの結合を評価することによって実施した。ヒトタウの場合、可溶性タウ（非ＡＤヒト脳からの熱安定抽出物）と、凝集ＰＨＦタウ（ヒトＡＤ脳からのサルコシル不溶性調製物）との間で区別を行った。非タウ関連タンパク質に対するより低い親和性相互作用を検出することができるように、抗体を１μｇ／ｍＬで試験し、比較的多量の脳ホモジネート（総タンパク質２０μｇ）をゲルにロードした。これらのプロファイルの例を図２に示す。
【0153】
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による結合評価
ＰＨＦ－タウ及び組換えタウとの相互作用を、ＰＴ６６、ＰＴ６９、ｈＴａｕ６０抗タウ抗体及びそれらの対応するＦａｂ断片について、ＰｒｏｔｅＯｎ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）機器でのＳＰＲによって評価した。エピトープの複数のコピーを有するＰＨＦ－タウの多重結合／凝集性質、及び、ＩｇＧの二価の性質のために、ｍＡｂ親和性が、本研究フォーマットの結合活性により影響を受けた。Ｆａｂの親和性は、抗体の固有親和性についての情報をもたらす。ＰＨＦタウに結合するｍＡｂ及びそれらのＦａｂ断片の代表的なセンサグラムを図３に示し、概要を以下の表１に示す。ＨＴ７を参照として使用した。
ＰＨＦ－タウ及び組換えタウとの相互作用を、ＰＴ６６、ＰＴ６９、ｈＴａｕ６０抗タウ抗体及びそれらの対応するＦａｂ断片について、ＰｒｏｔｅＯｎ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）機器でのＳＰＲによって評価した。エピトープの複数のコピーを有するＰＨＦ－タウの多重結合／凝集性質、及び、ＩｇＧの二価の性質のために、ｍＡｂ親和性が、本研究フォーマットの結合活性により影響を受けた。Ｆａｂの親和性は、抗体の固有親和性についての情報をもたらす。ＰＨＦタウに結合するｍＡｂ及びそれらのＦａｂ断片の代表的なセンサグラムを図３に示し、概要を以下の表１に示す。ＨＴ７を参照として使用した。
【0154】
【表1】
ｎ．ａ＝利用不可
Ｒｅｃ．＝組換え
【0155】
ＩＨＣを使用した抗体プロファイリング
ＡＤ及び非ＡＤ脳の凍結切片に対して免疫組織化学分析を実施して、原位置での生理学的及び病態生理学的タウとの反応性を確認した。ＰＴ６６、ＰＴ６９／ＰＴ８７、及びｈＴａｕ６０は、可溶性タウ（非ＡＤ及びＡＤ脳）及び凝集タウ（ＡＤ脳）の両方への強い結合を示した（図４）。更なるＩＨＣ分析を、ＷＴ、タウノックアウト（ＫＯ）、及びＰ３０１Ｓ（５ヶ月）マウス脳由来のホルマリン固定パラフィン包埋組織に対して行った。タウＫＯマウスからの脳切片におけるシグナルの欠如により、抗体の特異性が確認された。非凝集タウがＷＴ及びＰ３０１Ｓマウスからの切片において検出されたが、Ｐ３０１Ｓマウスの脳幹における凝集タウもまた、ＰＴ／６６、ＰＴ／６９、及びｈＴａｕ／６０によって染色された（図５）。
ＡＤ及び非ＡＤ脳の凍結切片に対して免疫組織化学分析を実施して、原位置での生理学的及び病態生理学的タウとの反応性を確認した。ＰＴ６６、ＰＴ６９／ＰＴ８７、及びｈＴａｕ６０は、可溶性タウ（非ＡＤ及びＡＤ脳）及び凝集タウ（ＡＤ脳）の両方への強い結合を示した（図４）。更なるＩＨＣ分析を、ＷＴ、タウノックアウト（ＫＯ）、及びＰ３０１Ｓ（５ヶ月）マウス脳由来のホルマリン固定パラフィン包埋組織に対して行った。タウＫＯマウスからの脳切片におけるシグナルの欠如により、抗体の特異性が確認された。非凝集タウがＷＴ及びＰ３０１Ｓマウスからの切片において検出されたが、Ｐ３０１Ｓマウスの脳幹における凝集タウもまた、ＰＴ／６６、ＰＴ／６９、及びｈＴａｕ／６０によって染色された（図５）。
【0156】
実施例３－細胞アッセイにおける機能試験
ＰＴ／６６、ＰＴ／６９、及びｈＴａｕ／６０を、凝集によって近接した場合にシグナルを生成する２つの発色団タグ化Ｋ１８タウ断片を発現するＨＥＫ細胞を利用する免疫枯渇アッセイにおいて、タウシーディングの阻害について試験した。細胞を、異なる供給源に由来する凝集し、リン酸化された完全サイズのタウシードで処理する場合、蛍光活性化細胞選別（fluorescence-activated cell sorting、ＦＡＣＳ）を使用して蛍光共鳴エネルギー移動（fluorescence resonance energy transfer、ＦＲＥＴ）陽性細胞をカウントすることによって定量化され得るＫ１８凝集体を誘発する（Ｈｏｌｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，２０１４，ＰＮＡＳ．１１１（４１）：Ｅ４３７６－８５）。免疫枯渇試料の生化学的分析を、ｈＴａｕ６０／ｈＴａｕ６０自己サンドイッチＭＳＤアッセイによって行った。
ＰＴ／６６、ＰＴ／６９、及びｈＴａｕ／６０を、凝集によって近接した場合にシグナルを生成する２つの発色団タグ化Ｋ１８タウ断片を発現するＨＥＫ細胞を利用する免疫枯渇アッセイにおいて、タウシーディングの阻害について試験した。細胞を、異なる供給源に由来する凝集し、リン酸化された完全サイズのタウシードで処理する場合、蛍光活性化細胞選別（fluorescence-activated cell sorting、ＦＡＣＳ）を使用して蛍光共鳴エネルギー移動（fluorescence resonance energy transfer、ＦＲＥＴ）陽性細胞をカウントすることによって定量化され得るＫ１８凝集体を誘発する（Ｈｏｌｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，２０１４，ＰＮＡＳ．１１１（４１）：Ｅ４３７６－８５）。免疫枯渇試料の生化学的分析を、ｈＴａｕ６０／ｈＴａｕ６０自己サンドイッチＭＳＤアッセイによって行った。
【0157】
最大阻害割合（％）の値が、シード上のエピトープの密度、又はＰＴ／６６、ＰＴ／６９、及びｈＴａｕ／６０エピトープを含有するシードの数に関係するかどうかを調査するために、免疫枯渇アッセイを実施した。ＡＤタウシードを試験抗体によりインキュベートし、Ｇタンパク質のビーズを用いて溶液から除去した。枯渇した上清を、発色団－Ｋ１８含有ＨＥＫ細胞内での残留シーディング能力について試験し、上述したようにＦＡＣＳによって分析した（Ｈｏｌｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ．１１１（４１）：Ｅ４３７６－８５，２０１４）。
【0158】
免疫枯渇のためのタウシードを含有するホモジネートは、２２～２３週齢のＰ３０１Ｓトランスジェニック動物の脊髄、又は冷凍保存したヒトＡＤ脳組織から生成した。ヒトＡＤ脳免疫枯渇アッセイにおいて、トランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００の存在下において、枯渇後に上清を試験し、許容されるアッセイウィンドウを得た。タウシーディング（及びｈＴａｕ６０／ｈＴａｕ６０凝集シグナル）は、Ｃ末端抗体を用いて完全に減少させることができたが、ヒトＡＤ脳由来の全ホモジネート及びＰ３０１Ｓトランスジェニックマウス由来の脊髄ホモジネートにおいて、Ｎ末端抗体ＰＴ９３を用いては減少させることができなかった（Ｖａｎｄｅｒｍｅｅｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｉｓ，２０１８；６５（１）：２６５－２８１に記載されており、その関連する内容は参照により本明細書に組み込まれる）（＞９５％阻害；図６Ａ～Ｂ及び表２は、陰性対照と比較した阻害％を示す（少なくとも２回の独立した実験の平均））。
【0159】
【表2】
【0160】
別の実験において、連続免疫枯渇アッセイにおいて、Ｎ末端抗体ＰＴ９３による最初の免疫枯渇後、Ｃ末端抗体ｈＴａｕ６０は、全ての残存するＰＨＦ凝集物を更に枯渇させたが、ＰＴ９３又はＰＴ５１（ＨＴ７様）では、枯渇は観察されなかったか、又はいくらか更なる枯渇が観察されたことが示された（Ｖａｎｄｅｒｍｅｅｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｉｓ，２０１８；６５（１）：２６５－２８１に記載されており、その関連する内容は参照により本明細書にそれぞれ組み込まれる）（図６Ｃ）。
【0161】
タウ抗体治療の作用機序は依然として議論の主題であり、複数の機序が提示されている。ミクログリア細胞による細胞外シードの抗体媒介クリアランスは、最近、１つの優勢な作用機序として示唆されている（Ｆｕｎｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２９０（３５）：２１６５２：６２，２０１５、及びＭｃＥｗａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１７，ＰＮＡＳ １１４：５７４－９）。本文脈では、ヒトの脳に由来するシーディング材料の免疫枯渇が、最も並進的な細胞の結果であると考えることができ、この種の細胞アッセイにおけるＣ末端抗体ＰＴ６６、ＰＴ６８／ＰＴ８７、及びｈＴａｕ６０の高い有効性は、これらの抗体のＨＦＡバージョンが効果的な治療薬であることを示唆している。
【0162】
実施例４－ｅＰＨＦ注射モデルにおけるＰＴ／６６、ＰＴ／６９、及びｈＴａｕ／６０のインビボ効力
導入
インビボでのタウ抗体の効能を評価するために、脳でタウの病状を示すマウスを、必須のモデルシステムとする（Ｊｕｌｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．８４９：４７３－９１，２０１２）。これらのモデルのいくつかが記載されており、それらは一般に以下の３つの群に分けることができる：１）ＷＴ又は突然変異体（例えば、Ｐ３０１Ｌ又はＰ３０１Ｓ）タウを過剰発現するタウトランスジェニックマウスであって、突然変異体が、株に応じて５～９ヶ月後に重度の病態を示すもの（Ａｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２２（２１）：９３４０－５１，２００２；Ｓｃａｔｔｏｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｅｈａｖ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．２０８（１）：２５０－７，２０１０；Ｔｅｒｗｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８０（５）：３９６３－７３，２００５；Ｙｏｓｈｉｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ．５３（３）：３３７－５１，２００７）突然変異タウ（例えば、Ｐ３０１Ｌ）の時空間的に調節された発現を有するマウス（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｂｅｈａｖ．６（４）：６１０－２０，２０１２）又は凝集促進断片（例えば、Ｋ１８）（Ｍｏｃａｎｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８（３）：［７３７－４８－２００８］］、及び３）プラーク及びタウ病理の両方を示す突然変異タウ及びＡＰＰの両方の発現を有するマウス（Ｏｄｄｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．１０２（４）：１０５３－６３，２００７）。
導入
インビボでのタウ抗体の効能を評価するために、脳でタウの病状を示すマウスを、必須のモデルシステムとする（Ｊｕｌｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．８４９：４７３－９１，２０１２）。これらのモデルのいくつかが記載されており、それらは一般に以下の３つの群に分けることができる：１）ＷＴ又は突然変異体（例えば、Ｐ３０１Ｌ又はＰ３０１Ｓ）タウを過剰発現するタウトランスジェニックマウスであって、突然変異体が、株に応じて５～９ヶ月後に重度の病態を示すもの（Ａｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２２（２１）：９３４０－５１，２００２；Ｓｃａｔｔｏｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｅｈａｖ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．２０８（１）：２５０－７，２０１０；Ｔｅｒｗｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８０（５）：３９６３－７３，２００５；Ｙｏｓｈｉｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ．５３（３）：３３７－５１，２００７）突然変異タウ（例えば、Ｐ３０１Ｌ）の時空間的に調節された発現を有するマウス（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｂｅｈａｖ．６（４）：６１０－２０，２０１２）又は凝集促進断片（例えば、Ｋ１８）（Ｍｏｃａｎｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２８（３）：［７３７－４８－２００８］］、及び３）プラーク及びタウ病理の両方を示す突然変異タウ及びＡＰＰの両方の発現を有するマウス（Ｏｄｄｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．１０２（４）：１０５３－６３，２００７）。
【0163】
変異体タウを発現するマウスが強い病状を発現する一方で、病状の開始は動物によって変化する可能性があり、検討において変動性を引き起こす。また、細胞の自律神経によるタウ凝集、及び全体のタウ凝集シグナルへの拡散の相対的寄与は、はっきりとしていない。したがって、タウシーディング及び拡散を効果的に研究するために使用することができるモデル（例えば、ｄｅ Ｃａｌｉｇｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｎｅｕｒｏｎ．７３（４）：６８５－９７，２０１２；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，同上）は価値が高い。ＡＬＺ１７マウス（通常のヒトタウを発現する株）に、異なるタウ異常症に由来する脳のホモジェネートを注射することにより、ヒトの脳におけるタウ異常症に類似するモルホロジーを有して、タウが含まれる形成を誘発することの発見により、このようなモデルの並進的価値は更に強化される。例えば、マウスに、嗜銀顆粒性認知症試料の材料を注射することにより、疾病そのものに回転楕円体又はコンマ様構造の特徴を有する沈着がもたらされ、ＡＤ様のタウ病状が、ＡＤ材料を注射したマウスで観察された（Ｃｌａｖａｇｕｅｒａ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０（２３）：９５３５－４０）。
【0164】
よって、トランスジェニックＰ３０１Ｌマウス注射モデルが確立されており、合成Ｋ１８原線維（Ｌｉ ａｎｄ Ｌｅｅ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．４５（５１）：１５６９２－７０１，２００６）又はヒトＡＤ脳に由来するＰＦＨ－タウシードなどのタウの凝集促進断片を、細胞自律的凝集が開始されていない年齢で、Ｐ３０１Ｌトランスジェニックマウスモデルの皮質又は海馬領域に注射する。注射モデルは、タウ拡散の決定的な細胞外播種構成成分を再現することを目的としている。注射されるＫ１８又はＰＨＦ－タウシードは、注射部位において、また接続した反対側の領域においてより軽度に、タウ異常症を誘発する（Ｐｅｅｒａｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ Ｄｉｓ．７３：８３－９５，２０１５）。このモデルにより、ＡＤ脳由来のＰＨＦ－タウシード又はＫ１８原線維と同時注射したときに、本出願の抗タウ抗体などの抗体の抗シーディング能の試験が可能となる（Ｉｂａ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３３（３）：１０２４－３７，２０１３；Ｉｂａ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．１３０（３）：３４９－６２）。
【0165】
死後のＡＤ脳のサルコシル不溶性画分の皮質注射により、タウ凝集の緩徐に進行する増加が誘発される。注射された半球では、注射の１ヶ月後に最初のシグナルが測定され、注射の更に３ヶ月後まで進行する。注射の５ヶ月後に、いくつかの動物では、Ｐ３０１Ｌ変異により引き起こされる濃縮の形成が開始される（Ｔｅｒｗｅｌ ｅｔ ａｌ．，２００５，同上）。ＡＴ８の染色レベルは、１ヶ月と３ヶ月との間で増加するため（米国特許第１０，７６６，９５３号）、抗体の有効性実験を、同時注射の２ヶ月後に分析する。更に、死後のＡＤ脳のサルコシル不溶性画分の海馬注射により、注射された半球由来のサルコシル不溶性画分をＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｉｅｓ（ＭＳＤ）分析することによって測定される、用量依存的に進行するタウ凝集の増加が誘発される。
【0166】
動物治療及び頭蓋内注射
注射の検討のために、Ｐ３０１Ｌ変異を有する最長のヒトタウアイソフォーム（タウ－４Ｒ／２Ｎ－Ｐ３０１Ｌ）（Ｔｅｒｗｅｌ ｅｔ ａｌ．，２００５，同上）を発現するトランスジェニックタウ－Ｐ３０１Ｌマウスを、月齢３ヶ月にて手術に使用した。現地の倫理委員会が認可した手順を遵守して、全ての実験を実施した。定位脳手術については、モノクローナル抗体の存在下又は不存在下において、死後ＡＤ組織（富化した対らせん状細線維、ｅＰＨＦ）由来のサルコシル不溶性ｐｒｅｐ３μＬ（速度：０．２５μＬ／分）を、マウスの海馬（ＡＰ－２．０、ＭＬ＋２．０（ブレグマから）、ＤＶ１．８ｍｍ（硬膜から））に片側（右半球）注射した。マウスを切開するために屠殺した（頭蓋内注射の２ヶ月後）。
注射の検討のために、Ｐ３０１Ｌ変異を有する最長のヒトタウアイソフォーム（タウ－４Ｒ／２Ｎ－Ｐ３０１Ｌ）（Ｔｅｒｗｅｌ ｅｔ ａｌ．，２００５，同上）を発現するトランスジェニックタウ－Ｐ３０１Ｌマウスを、月齢３ヶ月にて手術に使用した。現地の倫理委員会が認可した手順を遵守して、全ての実験を実施した。定位脳手術については、モノクローナル抗体の存在下又は不存在下において、死後ＡＤ組織（富化した対らせん状細線維、ｅＰＨＦ）由来のサルコシル不溶性ｐｒｅｐ３μＬ（速度：０．２５μＬ／分）を、マウスの海馬（ＡＰ－２．０、ＭＬ＋２．０（ブレグマから）、ＤＶ１．８ｍｍ（硬膜から））に片側（右半球）注射した。マウスを切開するために屠殺した（頭蓋内注射の２ヶ月後）。
【0167】
抽出手順
注射した半球のマウス組織の重量を測定し、６体積の均質化緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ（ｐＨ７．６）、０．８Ｍ ＮａＣｌ、１０％ｗ／ｖショ糖、１ｍＭ ＥＧＴＡ、ＰｈｏｓＳｔｏｐホスファターゼ阻害剤カクテル、完全なＥＤＴＡを含まないミニプロテアーゼ阻害剤））中で均質化した。２８，０００×ｇで２０分間、ホモジネートを遠心分離し、得られた上清（全ホモジネート）からアリコートを取り出した後、１％のＮ－ラウロイルサルコシンを添加した。９０分後（９００ｒｐｍ、３７℃）、溶液を再び、１８４，０００×ｇで１時間遠心分離にかけた。上清はサルコシル可溶性画分として保持したが、サルコシル不溶性材料を含有するペレットは、均質化緩衝液中に懸濁させた。
注射した半球のマウス組織の重量を測定し、６体積の均質化緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ（ｐＨ７．６）、０．８Ｍ ＮａＣｌ、１０％ｗ／ｖショ糖、１ｍＭ ＥＧＴＡ、ＰｈｏｓＳｔｏｐホスファターゼ阻害剤カクテル、完全なＥＤＴＡを含まないミニプロテアーゼ阻害剤））中で均質化した。２８，０００×ｇで２０分間、ホモジネートを遠心分離し、得られた上清（全ホモジネート）からアリコートを取り出した後、１％のＮ－ラウロイルサルコシンを添加した。９０分後（９００ｒｐｍ、３７℃）、溶液を再び、１８４，０００×ｇで１時間遠心分離にかけた。上清はサルコシル可溶性画分として保持したが、サルコシル不溶性材料を含有するペレットは、均質化緩衝液中に懸濁させた。
【0168】
生化学的分析
コーティング抗体（ＡＴ８）をＰＢＳ（１μｇ／ｍｌ）で希釈し、ＭＳＤプレート（３０μＬ／ウェル）（Ｌ１５ＸＡ、Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｉｅｓ）に分注し、これを４℃で一晩インキュベートした。５×２００μＬのＰＢＳ／０．５％のＴｗｅｅｎ－２０で洗浄した後、プレートをＰＢＳ中の０．１％のカゼインでブロックし、５×２００μＬのＰＢＳ／０．５％のＴｗｅｅｎ－２０で再び洗浄した。サンプル及び標準（共に、ＰＢＳ中の０．１％のカゼインに希釈）を添加した後、プレートを４℃で一晩インキュベーションした。その後、プレートを５×２００μＬのＰＢＳ／０．５％Ｔｗｅｅｎ－２０で洗浄し、ＰＢＳ中の０．１％カゼイン中ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ（商標）コンジュゲート検出抗体（ＡＴ８）を添加し、６００ｒｐｍで振盪しながら室温で２時間インキュベーションした。最後の洗浄（５×２００μＬのＰＢＳ／０．５％のＴｗｅｅｎ－２０）の後、１５０μＬの２×緩衝液Ｔを添加し、プレートをＭＳＤイメージャで読み取った。死後のＡＤ脳（ｅＰＨＦ）のサルコシル不溶性ｐｒｅｐの１６個の希釈物からなる検量線に対してそのままのシグナルを正規化し、任意の単位（ＡＵ）ｅＰＨＦとして表した。統計分析（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ事後テストと合わせたＡＮＯＶＡ）を、ＧｒａｐｈＰａｄプリズムソフトウェアで行った。
コーティング抗体（ＡＴ８）をＰＢＳ（１μｇ／ｍｌ）で希釈し、ＭＳＤプレート（３０μＬ／ウェル）（Ｌ１５ＸＡ、Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｉｅｓ）に分注し、これを４℃で一晩インキュベートした。５×２００μＬのＰＢＳ／０．５％のＴｗｅｅｎ－２０で洗浄した後、プレートをＰＢＳ中の０．１％のカゼインでブロックし、５×２００μＬのＰＢＳ／０．５％のＴｗｅｅｎ－２０で再び洗浄した。サンプル及び標準（共に、ＰＢＳ中の０．１％のカゼインに希釈）を添加した後、プレートを４℃で一晩インキュベーションした。その後、プレートを５×２００μＬのＰＢＳ／０．５％Ｔｗｅｅｎ－２０で洗浄し、ＰＢＳ中の０．１％カゼイン中ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ（商標）コンジュゲート検出抗体（ＡＴ８）を添加し、６００ｒｐｍで振盪しながら室温で２時間インキュベーションした。最後の洗浄（５×２００μＬのＰＢＳ／０．５％のＴｗｅｅｎ－２０）の後、１５０μＬの２×緩衝液Ｔを添加し、プレートをＭＳＤイメージャで読み取った。死後のＡＤ脳（ｅＰＨＦ）のサルコシル不溶性ｐｒｅｐの１６個の希釈物からなる検量線に対してそのままのシグナルを正規化し、任意の単位（ＡＵ）ｅＰＨＦとして表した。統計分析（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ事後テストと合わせたＡＮＯＶＡ）を、ＧｒａｐｈＰａｄプリズムソフトウェアで行った。
【0169】
結果
この同時注射モデルでは、内部抗タウ抗体のいくつかを評価した（例えば、米国特許第１０，７６６，９５３号及びＶａｎｄｅｒｍｅｅｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｉｓ．６５（１）：２６５－８１（２０１８）を参照）。海馬同時注入モデル下でのこれらの抗体（ＩｇＧ２ａとして組換え発現された）の活性を、以下の表３に従って比較した。タウ抗体の同時注射は、Ｐ３０１ＬマウスにおけるｅＰＨＦ誘導性タウ凝集を減弱した（図７Ａ）。ＡＴ１２０は、Ｖａｎｄｅｒｍｅｅｒｅｎら、Ｊ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｉｓ，２０１８；６５（１）：２６５－２８１（その関連内容は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されており、タウのプロリンリッチドメイン（ＰＲＤ）に結合する。ＰＴ／７６は、Ｖａｎｄｅｒｍｅｅｒｅｎら、Ｊ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｉｓ，２０１８；６５（１）：２６５－２８１（その関連する内容は参照により本明細書に組み込まれる）記載されており、タウにおける微小管ｎｉｎｄｉｎｇドメイン（ＭＴＢＤ）の近くに結合する。
この同時注射モデルでは、内部抗タウ抗体のいくつかを評価した（例えば、米国特許第１０，７６６，９５３号及びＶａｎｄｅｒｍｅｅｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｉｓ．６５（１）：２６５－８１（２０１８）を参照）。海馬同時注入モデル下でのこれらの抗体（ＩｇＧ２ａとして組換え発現された）の活性を、以下の表３に従って比較した。タウ抗体の同時注射は、Ｐ３０１ＬマウスにおけるｅＰＨＦ誘導性タウ凝集を減弱した（図７Ａ）。ＡＴ１２０は、Ｖａｎｄｅｒｍｅｅｒｅｎら、Ｊ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｉｓ，２０１８；６５（１）：２６５－２８１（その関連内容は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されており、タウのプロリンリッチドメイン（ＰＲＤ）に結合する。ＰＴ／７６は、Ｖａｎｄｅｒｍｅｅｒｅｎら、Ｊ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｉｓ，２０１８；６５（１）：２６５－２８１（その関連する内容は参照により本明細書に組み込まれる）記載されており、タウにおける微小管ｎｉｎｄｉｎｇドメイン（ＭＴＢＤ）の近くに結合する。
【0170】
【表3】
【0171】
結果を表４にまとめる。
【0172】
【表4】
【0173】
別の実験において、海馬同時注射マウスモデルにおけるＣ末端抗体ＰＴ６６及びＰＴ８１の活性を、ＰＨＦタウのＮ末端部分及び中間部分に結合する内部Ｊａｎｓｓｅｎ抗タウ抗体の活性と比較した。抗体をｅＰＨＦタウ（０．６ピコモル）と共に皮質に同時注射した。Ｃ末端抗体の同時注射は、Ｐ３０１ＬマウスにおけるｅＰＨＦ誘導性タウ凝集を、他の抗体よりも有意に減衰させた（図７Ｂ）。
【0174】
追跡研究において、ＰＴ６６、ｈＴａｕ６０、及びＰＴ３（米国特許第１０，６３３，４３５号を参照されたく、その内容は参照により本明細書に組み込まれる）の有効性を、抗体＋ＰＨＦの頭蓋内同時注射後、各抗体の末梢投与（２０ｍｇ／ｋｇ；２回／週）時に比較した。末梢投与は、ＰＨＦの頭蓋内注射の２週間前に開始し、実験の生活相（life phase）の間継続した。第１の研究と一致して、ＰＴ６６、ｈＴａｕ６０、及びＰＴ３の各々の同時投与は、ｅＰＨＦ誘導性凝集シグナルを減少させ、ｅＰＨＦによって誘導されるシーディングを阻害した（図７Ｃ）。
【0175】
実施例５－Ｃ末端抗体のエピトープマッピング
材料及び方法。
アレイペプチドの合成
標的分子のエピトープを再構築するために、タウ４４１配列を網羅するペプチド（１８アミノ酸が重複している２０ｍｅｒ）のライブラリを合成した。独自の親水性ポリマー製剤でグラフト化し、続いて、Ｎ－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）と共にジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を用いてｔ－ブチルオキシカルボニル－ヘキサメチレンジアミン（ＢｏｃＨＭＤＡ）と反応させ、その後、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いてＢｏｃ基を切断することにより、アミノ官能化ポリプロピレン担体を得た。標準的なＦｍｏｃペプチド合成を使用して、カスタム変性ＪＡＮＵＳ液体ハンドリングステーション（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）によってアミノ官能化固体担体上でペプチドを合成した。構造模倣体の合成は、Ｐｅｐｓｃａｎの専売のＣｈｅｍｉｃａｌｌｙ Ｌｉｎｋｅｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｏｎ Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ（ＣＬＩＰＳ）技術を用いて行った。ＣＬＩＰＳ技術により、ペプチドを単ループ、二重ループ、三重ループ、シート状折畳み、らせん状折畳み、及びこれらの組み合わせにペプチドを構造化することが可能になる。ＣＬＩＰＳテンプレートは、システイン残基に結合する。ペプチド中の複数のシステインの側鎖が、１つ又は２つのＣＬＩＰＳテンプレートに結合する。例えば、Ｐ２ ＣＬＩＰＳ（２，６－ビス（ブロモメチル）ピリジン）の０．５ｍＭ溶液を重炭酸アンモニウム（２０ｍＭ、ｐＨ７．８）／アセトニトリル（１：３（ｖ／ｖ））に溶解させる。この溶液をペプチドアレイに添加する。ＣＬＩＰＳテンプレートは、ペプチドアレイの固相結合ペプチド（３μＬのウェルを有する４５５ウェルプレート）中に存在するとき、２つのシステインの側鎖に結合する。ペプチドアレイを、溶液中で完全に被覆しながら、溶液中で３０～６０分間穏やかに振盪する。最後に、ペプチドアレイを過剰のＨ２Ｏで広範に洗浄し、７０℃で３０分間ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中１％ＳＤＳ／０．１％β－メルカプトエタノールを含有する破壊バッファ中で超音波処理し、続いて、更に４５分間Ｈ２Ｏ中で超音波処理する。Ｔ３ ＣＬＩＰＳ担持ペプチドを同様の方法で作製したが、ここでは３つのシステインを用いて作製した。
材料及び方法。
アレイペプチドの合成
標的分子のエピトープを再構築するために、タウ４４１配列を網羅するペプチド（１８アミノ酸が重複している２０ｍｅｒ）のライブラリを合成した。独自の親水性ポリマー製剤でグラフト化し、続いて、Ｎ－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）と共にジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を用いてｔ－ブチルオキシカルボニル－ヘキサメチレンジアミン（ＢｏｃＨＭＤＡ）と反応させ、その後、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いてＢｏｃ基を切断することにより、アミノ官能化ポリプロピレン担体を得た。標準的なＦｍｏｃペプチド合成を使用して、カスタム変性ＪＡＮＵＳ液体ハンドリングステーション（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）によってアミノ官能化固体担体上でペプチドを合成した。構造模倣体の合成は、Ｐｅｐｓｃａｎの専売のＣｈｅｍｉｃａｌｌｙ Ｌｉｎｋｅｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｏｎ Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ（ＣＬＩＰＳ）技術を用いて行った。ＣＬＩＰＳ技術により、ペプチドを単ループ、二重ループ、三重ループ、シート状折畳み、らせん状折畳み、及びこれらの組み合わせにペプチドを構造化することが可能になる。ＣＬＩＰＳテンプレートは、システイン残基に結合する。ペプチド中の複数のシステインの側鎖が、１つ又は２つのＣＬＩＰＳテンプレートに結合する。例えば、Ｐ２ ＣＬＩＰＳ（２，６－ビス（ブロモメチル）ピリジン）の０．５ｍＭ溶液を重炭酸アンモニウム（２０ｍＭ、ｐＨ７．８）／アセトニトリル（１：３（ｖ／ｖ））に溶解させる。この溶液をペプチドアレイに添加する。ＣＬＩＰＳテンプレートは、ペプチドアレイの固相結合ペプチド（３μＬのウェルを有する４５５ウェルプレート）中に存在するとき、２つのシステインの側鎖に結合する。ペプチドアレイを、溶液中で完全に被覆しながら、溶液中で３０～６０分間穏やかに振盪する。最後に、ペプチドアレイを過剰のＨ２Ｏで広範に洗浄し、７０℃で３０分間ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中１％ＳＤＳ／０．１％β－メルカプトエタノールを含有する破壊バッファ中で超音波処理し、続いて、更に４５分間Ｈ２Ｏ中で超音波処理する。Ｔ３ ＣＬＩＰＳ担持ペプチドを同様の方法で作製したが、ここでは３つのシステインを用いて作製した。
【0176】
Ｅｌｉｓａスクリーニング
各合成ペプチドに対する抗体の結合（ＩｇＧ２ａとして組換え的に発現）を、ペプスキャン系ＥＬＩＳＡにおいて試験した。ペプチドアレイを、一次抗体溶液と共にインキュベートした（４℃で一晩）。洗浄後、ペプチドアレイを、適切な抗体ペルオキシダーゼコンジュゲート（ＳＢＡ；表４）の１／１０００希釈物と共に２５℃で１時間インキュベートした。洗浄後、ペルオキシダーゼ基質２，２’－アジノ－ジ－３－エチルベンズチアゾリンスルホネート（ＡＢＴＳ）及び２０μＬ／ｍＬの３％Ｈ２Ｏ２を添加した。１時間後、発色を測定した。発色を電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラ及び画像処理システムを用いて定量した。
各合成ペプチドに対する抗体の結合（ＩｇＧ２ａとして組換え的に発現）を、ペプスキャン系ＥＬＩＳＡにおいて試験した。ペプチドアレイを、一次抗体溶液と共にインキュベートした（４℃で一晩）。洗浄後、ペプチドアレイを、適切な抗体ペルオキシダーゼコンジュゲート（ＳＢＡ；表４）の１／１０００希釈物と共に２５℃で１時間インキュベートした。洗浄後、ペルオキシダーゼ基質２，２’－アジノ－ジ－３－エチルベンズチアゾリンスルホネート（ＡＢＴＳ）及び２０μＬ／ｍＬの３％Ｈ２Ｏ２を添加した。１時間後、発色を測定した。発色を電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラ及び画像処理システムを用いて定量した。
【0177】
結果
データは、５つの関連抗体、ＰＴ／６６、ＰＴ／５３、ｈＴａｕ６０、ＰＴ／８１、及びＰＴ／６９の、１から開始して残基４４１までの一連のペプチドへの結合を示す（図８）。簡便な解釈のために、最初の２つのＮ末端ペプチド及び４１１から４４１までの一連のペプチドのみを示す。これらの抗体については、他のタウペプチド（すなわち、タウ上の他の位置）に対する結合は観察されなかった。データを以下の表５に示す。
データは、５つの関連抗体、ＰＴ／６６、ＰＴ／５３、ｈＴａｕ６０、ＰＴ／８１、及びＰＴ／６９の、１から開始して残基４４１までの一連のペプチドへの結合を示す（図８）。簡便な解釈のために、最初の２つのＮ末端ペプチド及び４１１から４４１までの一連のペプチドのみを示す。これらの抗体については、他のタウペプチド（すなわち、タウ上の他の位置）に対する結合は観察されなかった。データを以下の表５に示す。
【0178】
【表5】
【0179】
実施例６－エピトープ処理
理論に束縛されることを望まないが、ＰＴ６６などのＣ末端抗体による改善された有効性、及びＮ末端抗体によるより低い有効性は、ＰＨＦ－ｔａｕのＮ末端におけるエピトープの広範なプロセシングによって説明することができると考えられる。これは、ウエスタンブロッティングスクリーンを用いたヒトＡＤ脳由来ＰＨＦ試料の分析によって得られたウエスタンブロットプロファイルに基づく（図９）。この実験では、大量の試料を１ウェルゲルにロードした。ブロッティング後、個々のストリップを、異なるエピトープに結合する抗タウｍＡｂのパネルと共にインキュベートした。レーン１０、２１、及び２４のストリップをＣ末端タウｍＡｂとインキュベートしたところ、低分子量バンドの広範な染色が示された。比較すると、レーン１３、１８及び２０のストリップをＮ末端タウｍＡｂと共にインキュベートしたが、これは低分子量バンドの広範な染色を示さなかった。更なる合理化は、Ｖａｎｄｅｒｍｅｅｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｊ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｉｓ，２０１８；６５（１）：２６５－２８１に記載されている。
理論に束縛されることを望まないが、ＰＴ６６などのＣ末端抗体による改善された有効性、及びＮ末端抗体によるより低い有効性は、ＰＨＦ－ｔａｕのＮ末端におけるエピトープの広範なプロセシングによって説明することができると考えられる。これは、ウエスタンブロッティングスクリーンを用いたヒトＡＤ脳由来ＰＨＦ試料の分析によって得られたウエスタンブロットプロファイルに基づく（図９）。この実験では、大量の試料を１ウェルゲルにロードした。ブロッティング後、個々のストリップを、異なるエピトープに結合する抗タウｍＡｂのパネルと共にインキュベートした。レーン１０、２１、及び２４のストリップをＣ末端タウｍＡｂとインキュベートしたところ、低分子量バンドの広範な染色が示された。比較すると、レーン１３、１８及び２０のストリップをＮ末端タウｍＡｂと共にインキュベートしたが、これは低分子量バンドの広範な染色を示さなかった。更なる合理化は、Ｖａｎｄｅｒｍｅｅｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｊ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ Ｄｉｓ，２０１８；６５（１）：２６５－２８１に記載されている。
【0180】
以上、本発明の実施形態を詳細に、かつその具体的な実施形態を参照して説明したが、当業者には、発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、本発明に様々な変更及び改変を行い得ることは明らかであろう。
【0181】
【表6-1】
【0182】
【表6-2】
【0183】
【表6-3】
【0184】
【表6-4】
【0185】
参考文献
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Ａｓｕｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２７：９１１５－２９，２００７
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Ｃｏｌｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ．１３７（Ｐｔ １０）：２８３４－４６，２０１４
ｄｅ Ｃａｌｉｇｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ．７３（４）：６８５－９７，２０１２
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Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）
Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５－５１，１９９６
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Ｆｒｏｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８４：１２８４５－５２，２００９
Ｆｕｎｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２９０（３５）：２１６５２－６２，２０１５
Ｇｏｅｄｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｊ．３０１（Ｐｔ３）：８７１－８７７
Ｈａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．１５：１１２－９，２００９
Ｈｏｆｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．３６（２６）：８１１４－２４，１９９７
Ｈｏｌｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．１１１（４１）：Ｅ４３７６－８５，２０１４
Ｉｂａ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．１３０（３）：３４９－６２，２０１５
Ｉｂａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３３（３）：１０２４－３７，２０１３
Ｊｕｌｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．８４９：４７３－９１，２０１２
Ｋａｂｓｃｈ，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６６（Ｐｔ ２）：１２５－３２，２０１０
Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２９６：５７－８６，２０００
Ｋｎｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ．１５：４０９－１８，２００４
Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ．２５６：４９５－７，１９７５
Ｋｒｅｂｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２５４：６７－８４，２００１
Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．１６（６）：１６９０－７００，２０１６
Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５－７７，２００３
Ｌｅｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ．１６：１０６－１９，２００１
Ｌｉ ａｎｄ Ｌｅｅ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．４５（５１）：１５６９２－７０１，２００６
Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｂｅｈａｖ．６（４）：６１０－２０，２０１２
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Ｍａｌｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ．８４：４２７－４３４，２０１６
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Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．８６：１００２９－３３，１９８９
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Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．３９７：３８５－９６，２０１０
Ｓｔｒｏｈｌ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：６８５－９１，２００９
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Ｗｕ ａｎｄ Ｋａｂａｔ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１３２：２１１－５０，１９７０
Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１６：７６１－７０，２００３
Ｙｏｓｈｉｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ．５３（３）：３３７－５１，２００７
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【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図6C】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図8】
【図9】
【配列表】
【国際調査報告】