特表 2024-512703 近位シグナル伝達分子の使用によるＴ細胞機能の増強

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-19

(54)【発明の名称】近位シグナル伝達分子の使用によるＴ細胞機能の増強

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/10 20060101AFI20240312BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240312BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240312BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240312BHJP

   C07K 14/435 20060101ALI20240312BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240312BHJP

   A61K 35/545 20150101ALI20240312BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20240312BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240312BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20240312BHJP

【ＦＩ】

C12N5/10 ZNA

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C07K14/435

C12N15/12

A61K35/17

A61K35/545

A61P35/00

A61P37/02

A61P37/08

A61P31/00

A61K39/395 T

A61K39/395 N

A61K39/395 U

A61K38/17

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023560487

(86)(22)【出願日】2022-03-30

(85)【翻訳文提出日】2023-11-27

(86)【国際出願番号】 US2022022538

(87)【国際公開番号】W WO2022212496

(87)【国際公開日】2022-10-06

(31)【優先権主張番号】63/168,624

(32)【優先日】2021-03-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】503115205

【氏名又は名称】ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー

(74)【代理人】

【識別番号】100099759

【弁理士】

【氏名又は名称】青木 篤

(74)【代理人】

【識別番号】100123582

【弁理士】

【氏名又は名称】三橋 真二

(74)【代理人】

【識別番号】100117019

【弁理士】

【氏名又は名称】渡辺 陽一

(74)【代理人】

【識別番号】100141977

【弁理士】

【氏名又は名称】中島 勝

(74)【代理人】

【識別番号】100138210

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 達則

(74)【代理人】

【識別番号】100182730

【弁理士】

【氏名又は名称】大島 浩明

(72)【発明者】

【氏名】ロビー ジー．マズナー

(72)【発明者】

【氏名】エイダン タウスリー

(72)【発明者】

【氏名】マリア キャテリーナ ロティロティ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA43

4B065CA44

4C084AA02

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA22

4C084CA18

4C084DC50

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZB07

4C084ZB13

4C084ZB26

4C084ZB32

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB31

4C085CC23

4C085EE01

4C087BB37

4C087BB61

4C087BB65

4C087NA05

4C087NA14

4C087ZB07

4C087ZB13

4C087ZB26

4C087ZB32

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045CA41

4H045EA28

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は概して、とりわけ、ＳＬＰ－７６ポリペプチドを過剰発現する単離された組換え細胞に関する。本開示はまた、この単離された組換え細胞及び対応するＳＬＰ－７６分子を生成するために有用な組成物及び方法、並びにそのような組成物により、癌などの疾患を治療する方法も提供する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＳＬＰ－７６ポリペプチドを過剰発現するか及び／又は上昇したレベルを含むように修飾された単離された組換え細胞を含有する組成物であって、ここでこの組換え細胞が、低密度で発現された標的抗原により活性化されることが可能である、組成物。

【請求項2】

前記単離された組換え細胞が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドを更に含み、ここでＴＣＲ又はＣＡＲポリペプチドが、標的抗原又は標的抗原を特異的に認識するアダプター分子への結合親和性を有する、請求項１記載の組成物。

【請求項3】

前記単離された組換え細胞が、ＴＣＲポリペプチドを含み、並びにこの標的抗原が、標的細胞により発現され、且つ抗原－提示細胞（ＡＰＣ）によりＴＣＲポリペプチドに提示される、請求項２記載の組成物。

【請求項4】

前記単離された組換え細胞が、内因性ＴＣＲポリペプチドを含む、請求項２又は３記載の組成物。

【請求項5】

前記単離された組換え細胞が、ＣＡＲポリペプチドを含み、並びにこの標的抗原が、標的細胞により発現される、請求項２記載の組成物。

【請求項6】

前記標的細胞が、増殖性疾患、悪性血液疾患、固形腫瘍、自己免疫疾患、炎症、アレルギー性疾患、感染症、及び／又は老化／加齢に相関関係がある細胞である、請求項３又は５記載の組成物。

【請求項7】

前記標的細胞が、癌細胞である、請求項６記載の組成物。

【請求項8】

前記ＣＡＲポリペプチドが：
ａ）標的抗原又は標的抗原を特異的に認識するアダプター分子への結合親和性を有する、細胞外リガンド－結合ドメイン；
ｂ）膜貫通ドメイン；
ｃ）近位シグナル伝達分子を含む、細胞内シグナル伝達ドメイン；並びに
ｄ）任意に、ヒンジドメイン及び／又は共刺激ドメイン：
を含む、請求項５記載の組成物。

【請求項9】

前記ＣＡＲポリペプチドの細胞内シグナル伝達ドメインが、宿主細胞活性化を誘導することが可能なプロテインキナーゼ、Ｇタンパク質、ＧＴＰ－結合タンパク質、アダプターシグナル伝達タンパク質、又はスカフォールドタンパク質の完全長又は生物活性のある断片を含む、請求項８記載の組成物。

【請求項10】

前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ、ＣＤ３－イプシロン、ＣＤ３－ガンマ、ＤＡＰ１２、ＺＡＰ７０、ＰＬＣＧ１、ＰＫＣ、ＩＴＫ、ＮＣＫ、ＶＡＶ１、ＧＲＢ２、ＧＡＤＳ、ＳＯＳ１、ＡＤＡＰ、ＳＹＫ、ＬＹＮ、ＰＩ３Ｋ、もしくはＢＬＮＫ、又はそれらの生物活性のある断片、変異体、もしくはバリアントを含む、請求項９記載の組成物。

【請求項11】

前記ＴＣＲポリペプチド及び／又はＣＡＲポリペプチドが、該組換え細胞の消耗を誘導する、請求項２～１０のいずれか一項記載の組成物。

【請求項12】

前記ＳＬＰ－７６ポリペプチドの過剰発現が、該組換え細胞の消耗を増強しない、請求項１１記載の組成物。

【請求項13】

前記単離された組換え細胞が更に、ＴＣＲポリペプチド及び／又はＣＡＲポリペプチドを低密度で発現する、請求項２～１２のいずれか一項記載の組成物。

【請求項14】

前記ＳＬＰ－７６ポリペプチドが、該組換え細胞膜に結合される、請求項１～１３のいずれか一項記載の組成物。

【請求項15】

前記ＳＬＰ－７６ポリペプチドが、膜貫通ドメインを介して、細胞膜に結合される、請求項１４記載の組成物。

【請求項16】

前記ＳＬＰ－７６ポリペプチドが：
ｉ）ＳＬＰ－７６ポリペプチドと膜タンパク質の間の相互作用；
ｉｉ）ＳＬＰ－７６ポリペプチドと膜中の脂肪酸の間の共有結合；及び／又は
ｉｉｉ）ＳＬＰ－７６ポリペプチドと膜中の脂質の極性の高い頭部の間の結合：
を介して、細胞膜へ結合される、請求項１４記載の組成物。

【請求項17】

前記ＳＬＰ－７６ポリペプチドが、配列番号：１、７、１４、１６、１８、１９、４０、５９又は６０と少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～１６のいずれか一項記載の組成物。

【請求項18】

前記単離された組換え細胞が、免疫細胞である、請求項１～１７のいずれか一項記載の組成物。

【請求項19】

前記単離された組換え細胞が、Ｔ細胞、腫瘍－浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、単球、ガンマデルタＴ細胞、幹細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）－由来のＮＫ細胞、又は誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）－由来のＴ細胞である、請求項１８記載の組成物。

【請求項20】

前記単離された組換え細胞が、約１０、１００、２００、３００、４００、５００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、又は１００００、２００００、３００００、４００００、５００００、６００００、７００００、８００００、９００００、１０００００、２０００００、３０００００、４０００００、５０００００、６０００００、７０００００、８０００００、９０００００、１００万、２００万、３００万、４００万、５００万、６００万、７００万、８００万、９００万、又は１０００万個未満の標的抗原の分子により活性化されることが可能である、請求項１～１９のいずれか一項記載の組成物。

【請求項21】

前記標的抗原に応答しての単離された組換え細胞の活性化が、細胞の増殖、分化、サイトカイン産生及び／又は細胞傷害性を増強する、請求項１～２０のいずれか一項記載の組成物。

【請求項22】

配列番号：１、７、１４、１６、１８、１９、４０、５９又は６０と少なくとも７５％の配列同一性を有するアミノ酸配列、及び膜貫通ドメインを含むＳＬＰ－７６ポリペプチドを含む、単離されたポリペプチド。

【請求項23】

請求項２２記載の単離された膜結合型ＳＬＰ－７６ポリペプチドをコードしている、単離されたポリヌクレオチド。

【請求項24】

請求項２３記載の単離されたポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。

【請求項25】

請求項２４記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。

【請求項26】

組成物であって：
ｉ）請求項２３記載の単離されたポリヌクレオチド、並びにＴ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／もしくはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドをコードしている単離されたポリヌクレオチド；
ｉｉ）請求項２４記載の発現ベクター、並びにＴ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／もしくはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドをコードしている単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクター；並びに／又は
ｉｉｉ）請求項２３記載の単離されたポリヌクレオチド、並びにＴ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／もしくはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドをコードしている単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクター：
を含有する、組成物。

【請求項27】

ＳＬＰ－７６ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドを含有する組成物を、細胞へ導入することを含む、組換え細胞を作製する方法。

【請求項28】

前記細胞が、ＴＣＲ又はＣＡＲ分子を更に含む、請求項２７記載の方法。

【請求項29】

ＳＬＰ－７６ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド並びにＴ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドを含有する組成物を、細胞へ導入することを含む、組換え細胞を作製する方法。

【請求項30】

前記細胞においてＳＬＰ－７６ポリペプチドを過剰発現することを含む、標的抗原に応答しての細胞の活性化を増強する方法。

【請求項31】

前記細胞が、ＴＣＲ又はＣＡＲ分子を更に含む、請求項３０記載の方法。

【請求項32】

前記細胞において、ＳＬＰ－７６ポリペプチド並びにＴ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドを過剰発現することを含む、標的抗原に応答しての細胞の活性化を増強する方法。

【請求項33】

請求項１～２１のいずれか一項記載の組成物の医薬としての有効量を対象へ投与することを含む、それを必要とする対象において疾患又は障害を治療する方法。

【請求項34】

治療を必要とする対象において疾患又は障害を治療する方法であって：
ｉ）対象における疾患又は障害に関連した宿主細胞により発現された標的抗原の発現レベルを検出する工程であって、ここでこの標的抗原が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドにより認識され得る工程；並びに
ｉｉ）この標的抗原の発現レベルが、対照レベルよりも低い場合、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドを発現し且つＳＬＰ－７６ポリペプチドを発現するＴ細胞の医薬としての有効量を対象へ投与する工程：
を含む、方法。

【請求項35】

前記工程ｉｉ）の前に、宿主細胞による標的抗原の発現レベルを、対照レベルと比較する工程を更に含む、請求項３４記載の方法。

【請求項36】

前記工程ｉｉ）の前に、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドを発現しているＴ細胞においてＳＬＰ－７６ポリペプチドを過剰発現する工程を更に含む、請求項３４又は３５記載の方法。

【請求項37】

前記ＳＬＰ－７６ポリペプチドが、膜に結合されている、請求項３４～３６のいずれか一項記載の方法。

【請求項38】

前述のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドは発現するが、ＳＬＰ－７６ポリペプチドは発現しないＴ細胞が、疾患又は障害を治療することができないか、又は効率的でなくもしくは不充分にのみ治療することができる、請求項３４～３７のいずれか一項記載の方法。

【請求項39】

治療を必要とする対象において疾患又は障害を治療する方法であって：
ｉ）対象から少なくとも１種のＴ細胞を単離する工程であって、ここで少なくとも１種のＴ細胞が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドを発現し、ここでＴＣＲポリペプチド及び／又はＣＡＲポリペプチドは、対象における疾患又は障害に関連した宿主細胞により発現された標的抗原を特異的に認識する工程；
ｉｉ）単離された少なくとも１種のＴ細胞においてＳＬＰ－７６ポリペプチドを発現する工程；並びに
ｉｉｉ）ＳＬＰ－７６ポリペプチドを発現する単離されたＴ細胞の医薬としての有効量を対象へ投与する工程：
を含む、方法。

【請求項40】

前記宿主細胞により発現された標的抗原のレベルが、対照レベルよりも低い、請求項３９記載の方法。

【請求項41】

前記工程ｉ）の前に、宿主細胞による標的抗原の発現レベルを、対照レベルと比較する工程を更に含む、請求項３９又は４０記載の方法。

【請求項42】

前記ＳＬＰ－７６ポリペプチドが、膜に結合される、請求項３９～４１のいずれか一項記載の方法。

【請求項43】

前記対象における少なくとも１種のＴ細胞が、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である、請求項３９～４２のいずれか一項記載の方法。

【請求項44】

前記ＳＬＰ－７６ポリペプチドの発現が、宿主細胞を阻害又は死滅するように、少なくとも１種のＴ細胞の活性を増強する、請求項３９～４３のいずれか一項記載の方法。

【請求項45】

前記宿主細胞が、癌細胞又は腫瘍細胞である、請求項３９～４４のいずれか一項記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願
本願は、２０２１年３月３１日に出願された米国特許仮出願第６３／１６８，６２４号の優先権及び恩恵を主張するものであり；この出願の内容は、その全体が本明細書中に組み込まれている。

【0002】

引用による組込み
本願は、配列表を含み、これはその全体が引用により本明細書中に組み込まれている。添付された配列表のテキストファイルは、ファイル名「０７８４３０－５３３００１ＷＯＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」であり、２０２２年３月３０日に作製され、２３９，８０８バイトである。

【0003】

分野
本開示は概して、腫瘍学及び免疫治療の分野に関し、並びに特に、標的抗原に応答してキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及び／又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するＴ細胞などの、細胞の活性化及び機能を増強することが可能である、例えばＳＬＰ－７６などのポリペプチド、及びこれらのポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドの組成物に関する。本開示はまた、これらのポリペプチドを含む組換え細胞の組成物、及びそのような組換え細胞の作製に有用な方法、並びに疾患（例えば、癌又は自己免疫疾患）などの状態の治療のためにＴ細胞活性を増強する方法を提供する。

【背景技術】

【0004】

背景
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及び／又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現するＴ細胞に関与するような、現在のＴ細胞療法は、ＣＡＲ又はＴＣＲにより認識される標的抗原が低密度で発現される場合には、制限を有する。腫瘍細胞が、それらの表面上に発現される腫瘍抗原（通常ＣＡＲ又はＴＣＲの標的抗原としてデザインされる）の量をダウンレギュレーションする場合、現在のＣＡＲ又はＴＣＲは、腫瘍細胞を阻害又は死滅するようにＴ細胞を活性化することができないことがある。別のシナリオにおいて、ＣＡＲ又はＴＣＲは、抗原密度が正常である場合であっても、Ｔ細胞を破壊することがある。例えば一部のＣＡＲ又はＴＣＲは、それらの標的抗原に対し低い親和性を有するか、或いはＴ細胞消耗に繋がり、従って最終的にはＴ細胞治療効果を減弱化又は終結させることがある。結果的に、これらの療法の及ぶ範囲を増強及び／又は拡大するようこれらの障害を克服するために、Ｔ細胞活性化を調節する必要性が依然存在している。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0005】

要約
本開示は概して、細胞質型又は膜結合型のいずれかでの、ＬＣＰ２又はＳＬＰ－７６としても公知の、リンパ球細胞質タンパク質２（７６ｋＤａのＳＨ２ドメインを含む白血球タンパク質）などの、ポリペプチド、又はそのようなポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドを含む、組換え細胞又は組換え細胞の溶解液を含む免疫療法の開発、並びに例えば疾患（例えば癌）などの様々な状態を治療する上で、免疫療法の増強において使用するための前述のものを含有する医薬組成物に関する。以下により詳細に説明されるように、様々なＳＬＰ－７６構築体が、調製され、並びに抗原が低密度で発現される場合であっても、この抗原に応答してＣＡＲ及び／又はＴＣＲを発現する免疫細胞（例えばＴ細胞）の活性化を増強し且つ効能を増大する劇的な作用を有することがわかった。一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６構築体は、ＣＡＲ及び／又はＴＣＲを発現するＴ細胞の膜に結合される。

【課題を解決するための手段】

【0006】

一局面において、本開示は、ＳＬＰ－７６ポリペプチドを過剰発現するか及び／又は上昇したレベルを含むように修飾された単離された組換え細胞を含有する組成物を提供する。一部の実施態様において、本明細書記載の組成物の単離された組換え細胞は、低密度で発現された標的抗原により活性化されることが可能である。

【0007】

一部の実施態様において、この単離された組換え細胞は更に、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチド、及び／又は別の受容体ポリペプチドを含む。一部の実施態様において、ＴＣＲ又はＣＡＲポリペプチドは、標的抗原又は標的抗原を特異的に認識するアダプター分子への結合親和性を有する。一部の実施態様において、単離された組換え細胞は、ＴＣＲポリペプチドを含む。一部の実施態様において、ＴＣＲポリペプチドの標的抗原は、標的細胞により発現され、且つ抗原－提示細胞（ＡＰＣ）によりＴＣＲポリペプチドに提示される。一部の実施態様において、単離された組換え細胞は、内因性又は未変性のＴＣＲポリペプチドを含む。一部の実施態様において、単離された組換え細胞は、ＣＡＲポリペプチドを含む。一部の実施態様において、ＣＡＲポリペプチドの標的抗原は、標的細胞により発現される。

【0008】

一部の実施態様において、本明細書記載の標的細胞は、例えば、増殖性疾患（癌又は腫瘍など）、悪性血液疾患、固形腫瘍、自己免疫疾患、炎症、アレルギー性疾患、感染症、及び／又は老化／加齢などを含む状態と相関関係がある細胞である。一部の実施態様において、標的細胞は、癌細胞である。

【0009】

一部の実施態様において、本明細書記載のＣＡＲポリペプチドは：
ａ）標的抗原又は標的抗原を特異的に認識するアダプター分子への結合親和性を有する、細胞外リガンド－結合ドメイン；
ｂ）膜貫通ドメイン；
ｃ）近位シグナル伝達分子を含む、細胞内シグナル伝達ドメイン；並びに
ｄ）任意に、ヒンジドメイン及び／又は共刺激ドメイン：
を含む。

【0010】

一部の実施態様において、本明細書記載のＣＡＲポリペプチドの細胞内シグナル伝達ドメインは、宿主細胞活性化を誘導することが可能なプロテインキナーゼ、Ｇタンパク質、ＧＴＰ－結合タンパク質、アダプターシグナル伝達タンパク質、又はスカフォールドタンパク質の完全長又は生物活性のある断片を含む。一部の実施態様において、ＣＡＲポリペプチドの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＣＤ３－イプシロン、ＣＤ３－ガンマ、ＤＡＰ１２、ＺＡＰ７０、ＰＬＣＧ１、ＰＫＣ、ＩＴＫ、ＮＣＫ、ＶＡＶ１、ＧＲＢ２、ＧＡＤＳ、ＳＯＳ１、ＡＤＡＰ、ＳＹＫ、ＬＹＮ、ＰＩ３Ｋ、もしくはＢＬＮＫ、又はそれらの生物活性のある断片、変異体、もしくはバリアントを含む。

【0011】

一部の実施態様において、ＴＣＲポリペプチド及び／又はＣＡＲポリペプチドは、この組換え細胞の消耗を誘導する。一部の実施態様において、単離された組換え細胞における本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドの過剰発現は、この組換え細胞の消耗を増強しない。一部の実施態様において、単離された組換え細胞における本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドの過剰発現は、この組換え細胞の消耗に打ち勝つ。

【0012】

一部の実施態様において、この単離された組換え細胞は更に、ＴＣＲポリペプチド及び／又はＣＡＲポリペプチドを正常な密度で発現する。一部の実施態様において、この単離された組換え細胞は更に、ＴＣＲポリペプチド及び／又はＣＡＲポリペプチドを高密度で発現する。一部の実施態様において、この単離された組換え細胞は更に、ＴＣＲポリペプチド及び／又はＣＡＲポリペプチドを低密度で発現する。

【0013】

一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６ポリペプチドは、遊離の細胞質型である。一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６ポリペプチドは、組換え細胞の膜に結合される。一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６ポリペプチドは、膜貫通ドメインを介して、細胞膜に結合される。一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６ポリペプチドは：
ｉ）ＳＬＰ－７６ポリペプチドと膜タンパク質の間の相互作用；
ｉｉ）ＳＬＰ－７６ポリペプチドと膜中の脂肪酸の間の共有結合；及び／又は
ｉｉｉ）ＳＬＰ－７６ポリペプチドと膜中の脂質の極性の高い頭部の間の結合：
を介して、細胞膜へ結合される。

【0014】

一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６ポリペプチドは、完全長ＳＬＰ－７６を含む。一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６ポリペプチドは、ＳＬＰ－７６の生物活性のある断片、変異体、又はバリアントを含む。一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６ポリペプチドは、野生型ＳＬＰ－７６ポリペプチドに対する少なくとも１つの変異（例えばＫ３０Ｒ置換）を含む。一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６ポリペプチドは、配列番号：１、７、１４、１６、１８、１９、４０、５９又は６０と少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも大きい同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６ポリペプチドは、配列番号：１、７、１４、１６、１８、１９、４０、５９又は６０と少なくとも７０％又はそれよりも大きい同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、配列番号：１、７、１４、１６、１８、１９、４０、５９又は６０のアミノ酸配列を含む。一部の実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、配列番号：１、７、１４、１６、１８、１９、４０、５９又は６０のアミノ酸配列からなる。

【0015】

一部の実施態様において、この単離された組換え細胞は、免疫細胞である。一部の実施態様において、この単離された組換え細胞は、非－免疫細胞である。一部の実施態様において、この単離された組換え細胞は、Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、腫瘍－浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、単球、ガンマデルタＴ細胞、幹細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）－由来のＮＫ細胞、又は誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）－由来のＴ細胞である。

【0016】

一部の実施態様において、この単離された組換え細胞は、約１０、１００、２００、３００、４００、５００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、又は１００００、２００００、３００００、４００００、５００００、６００００、７００００、８００００、９００００、１０００００、２０００００、３０００００、４０００００、５０００００、６０００００、７０００００、８０００００、９０００００、１００万、２００万、３００万、４００万、５００万、６００万、７００万、８００万、９００万、又は１０００万個未満の標的抗原の分子により活性化されることが可能である。

【0017】

一部の実施態様において、この標的抗原に応答しての単離された組換え細胞の活性化は、細胞の増殖、分化、サイトカイン産生及び／又は細胞傷害性を増強する。

【0018】

別の局面において、本開示は、配列番号：１、７、１４、１６、１８、１９、４０、５９又は６０と少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも大きい同一性の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＳＬＰ－７６ポリペプチドを含む、単離されたポリペプチドを提供する。一部の実施態様において、この単離されたポリペプチドは、配列番号：１、７、１４、１６、１８、１９、４０、５９又は６０と少なくとも７０％、７５％、９０％、９５％又はそれよりも大きい同一性の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＳＬＰ－７６ポリペプチドを含む。一部の実施態様において、単離されたポリペプチドは、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチド及び膜貫通ドメインを含む。一部の非限定的実施態様において、この単離されたポリペプチドの膜貫通ドメインは、単離されたポリペプチドを単離された組換え細胞の膜（例えば、細胞膜）へ繋留する。

【0019】

別の局面において、本開示は、本明細書記載の単離されたＳＬＰ－７６ポリペプチドをコードしている単離されたポリヌクレオチドを提供する。一部の実施態様において、この単離されたポリヌクレオチドは、本明細書記載の単離された膜結合型ＳＬＰ－７６ポリペプチドをコードしている。そのようなＳＬＰ－７６ポリペプチドは、膜貫通ドメイン又は他の本明細書記載の機序を通じて、単離された組換え細胞の膜に結合されてよい。

【0020】

別の局面において、本開示は、本明細書記載の単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。一部の実施態様において、この発現ベクターは、発現プロモーターを含む。一部の実施態様において、この単離されたポリヌクレオチドは、本明細書記載の単離された組換え細胞において発現されるように発現プロモーターにコンジュゲートされている。

【0021】

別の局面において、本開示は、本明細書記載の発現ベクターを含む、宿主細胞を提供する。一部の実施態様において、この宿主細胞は、例えば、免疫細胞又は非－免疫細胞を含む、本明細書記載の組換え細胞である。

【0022】

別の局面において、本開示は：
ｉ）本明細書記載の単離されたポリヌクレオチド、並びにＴ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／もしくはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドをコードしている単離されたポリヌクレオチド；
ｉｉ）本明細書記載の発現ベクター、並びにＴ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／もしくはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドをコードしている単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクター；並びに／又は
ｉｉｉ）本明細書記載の単離されたポリヌクレオチド、並びにＴ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／もしくはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドをコードしている単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクター：
を含有する、組成物を提供する。一部の実施態様において、この組成物は、医薬組成物である。一部の実施態様において、この医薬組成物は更に、医薬として許容し得る担体及び／又は賦形剤を含有する。

【0023】

別の局面において、本開示は、ＳＬＰ－７６ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドを含有する組成物を、細胞へ導入することを含む、組換え細胞を作製する方法を提供する。一部の実施態様において、この細胞は、未変性の細胞である。一部の実施態様において、この細胞は、組換え細胞である。一部の実施態様において、この細胞は、免疫細胞である。一部の実施態様において、この細胞は、非－免疫細胞である。一部の実施態様において、この細胞は、生体試料に由来している。一部の実施態様において、この細胞は、ヒト、例えば患者からの生体試料に由来している。

【0024】

一部の実施態様において、この細胞は、ＴＣＲ又はＣＡＲ分子を更に含む。そのようなＴＣＲ分子は、この細胞において、未変性又は内因性、又は外因性であってよい。

【0025】

別の局面において、本開示は、ＳＬＰ－７６ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド並びにＴ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドを含有する組成物を、細胞へ導入することを含む、組換え細胞を作製する方法を提供する。一部の実施態様において、この細胞は、未変性の細胞である。一部の実施態様において、この細胞は、組換え細胞である。一部の実施態様において、この細胞は、免疫細胞である。一部の実施態様において、この細胞は、非－免疫細胞である。一部の実施態様において、この細胞は、生体試料に由来している。一部の実施態様において、この細胞は、ヒト、例えば患者からの生体試料に由来している。

【0026】

別の局面において、本開示は、細胞においてＳＬＰ－７６ポリペプチドを過剰発現することを含む、標的抗原に応答しての細胞の活性化を増強する方法を提供する。そのような過剰発現は、細胞へ、本明細書に記載されたような、ＳＬＰ－７６ポリペプチド、ＳＬＰ－７６ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド、及び／又はＳＬＰ－７６ポリヌクレオチドを含む発現ベクターを導入することから生じることができる。一部の実施態様において、この細胞は、未変性の細胞である。一部の実施態様において、この細胞は、組換え細胞である。一部の実施態様において、この細胞は、免疫細胞である。一部の実施態様において、この細胞は、非－免疫細胞である。一部の実施態様において、この細胞は、生体試料に由来している。一部の実施態様において、この細胞は、ヒト、例えば患者からの生体試料に由来している。一部の実施態様において、この細胞は、ＴＣＲ又はＣＡＲ分子を更に含む。そのようなＴＣＲ分子は、この細胞において、未変性又は内因性、又は外因性であってよい。

【0027】

別の局面において、本開示は、細胞中において、ＳＬＰ－７６ポリペプチド及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドを過剰発現することを含む、標的抗原に応答しての細胞の活性化を増強する方法を提供する。一部の実施態様において、この細胞は、未変性の細胞である。一部の実施態様において、この細胞は、組換え細胞である。一部の実施態様において、この細胞は、免疫細胞である。一部の実施態様において、この細胞は、非－免疫細胞である。一部の実施態様において、この細胞は、生体試料に由来している。一部の実施態様において、この細胞は、ヒト、例えば患者からの生体試料に由来している。

【0028】

別の局面において、本開示は、本明細書記載の組成物の医薬としての有効量を対象へ投与することを含む、それを必要とする対象における疾患又は障害を治療する方法を提供する。そのような組成物は、本明細書に記載されたような、ＳＬＰ－７６ポリペプチド、ＳＬＰ－７６ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド、及び／又はＳＬＰ－７６ポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含有してよい。

【0029】

一部の実施態様において、対象における疾患又は障害は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドを発現するＴ細胞により、治療することができないか、又は単に部分的にもしくは非効率的に治療することができる一方で、このＴＣＲ又はＣＡＲポリペプチドは、標的抗原への、又はこの疾患もしくは障害に関連した宿主細胞（例えば癌細胞もしくは腫瘍細胞）により発現される標的抗原を特異的に認識するアダプター分子への結合親和性を有する。例えばこの疾患又は障害は、標的抗原を低レベルで発現する（すなわち、低密度を有する）宿主細胞に関与し、ＴＣＲ又はＣＡＲポリペプチドを通じたＴ細胞の活性化を不充分なものにする。そのような低密度の標的抗原は、この疾患又は障害に関連した宿主細胞における、変異（複数可）又は転写もしくは翻訳の制御（複数可）により引き起こされ得る。そのような宿主細胞は、この疾患又は障害の形成及び発達の段階を通じて、又は疾患又は障害の形成及び発達の段階の特定の時点の後のみに、低密度の標的抗原を発現することができる。例えば一部の癌細胞又は腫瘍細胞は、宿主免疫系を回避するために、特定の癌／腫瘍－関連抗原の発現を減少する戦略を採用することができる。そのようなシナリオにおいて、癌／腫瘍－関連抗原を認識することによる一般的なＣＡＲ Ｔ又はＴＣＲ療法は、この疾患又は障害を治療するには有効でも十分でもない。ＳＬＰ－７６（例えば膜結合型ＳＬＰ－７６構築体）の過剰発現は、この疾患又は障害を治療するために、ＣＡＲ Ｔ又はＴＣＲ－発現するＴ細胞の活性化及び機能を増強することができる。

【0030】

別の局面において、本開示は、この疾患又は障害に関連した宿主細胞により発現された標的抗原を特異的に認識するＣＡＲ又はＴＣＲポリペプチドを発現し且つ更に本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチド（例えば膜結合型ＳＬＰ－７６ポリペプチド）を発現するＴ細胞の医薬としての有効量を、対象へ投与することを含む、それを必要とする対象における疾患又は障害を治療する方法を提供する。そのような宿主細胞は、標的抗原を低レベルで発現し（すなわち低密度を有し）、その結果、ＣＡＲ又はＴＣＲポリペプチドのみを発現するがＳＬＰ－７６ポリペプチドは発現しない類似のＴ細胞は、この疾患又は障害を不充分に治療するか又は治療することができないようにしている。

【0031】

別の局面において、本開示は、疾患又は障害に関連した宿主細胞により発現された標的抗原を特異的に認識するＣＡＲ又はＴＣＲポリペプチドを発現し且つ更に本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチド（例えば膜結合型ＳＬＰ－７６ポリペプチド）を発現するＴ細胞の医薬としての有効量を、対象へ投与することを含む、それを必要とする対象における疾患又は障害を治療する一方で、この疾患又は障害は、ＣＡＲ又はＴＣＲポリペプチドのみを発現するが、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは発現しない類似のＴ細胞により、治療されないか、又は非効率的もしくは不充分にのみ治療される方法を提供する。そのような宿主細胞は、標的抗原を低レベルで発現し（すなわち低密度を有し）、その結果、ＣＡＲ又はＴＣＲポリペプチドのみを発現するが、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは発現しない類似のＴ細胞は、この疾患又は障害の治療を不充分又は不可能にしている。一部の実施態様において、本方法は更に、この疾患又は障害に関連した宿主細胞における標的抗原（複数可）の発現レベルを検出する第一工程を含む。一部の実施態様において、そのような標的抗原（複数可）の発現レベルは、治療前に分かっている。

【0032】

一部の実施態様において、本方法は、それを必要とする対象における疾患又は障害に関連した宿主細胞中の標的抗原（複数可）の発現レベルを検出する第一工程、並びにそのような発現レベルが、対照レベル（例えば、健常対象、もしくはその疾患又は障害に関連のない宿主細胞における標的抗原（複数可）の発現レベル）よりも低い場合、この対象を、この疾患又は障害に関連した宿主細胞により発現された標的抗原を特異的に認識するＣＡＲ又はＴＣＲポリペプチドを発現し且つ更に本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチド（例えば、膜結合型ＳＬＰ－７６ポリペプチド）を発現するＴ細胞で治療する第二工程を含む。一部の実施態様において、治療前に、対象におけるこの疾患又は障害に関連した宿主細胞は、ＣＡＲ Ｔ又はＴＣＲ療法において使用されるＣＡＲ又はＴＣＲ分子により認識可能な標的抗原（複数可）を低レベルで発現することはわかっている。一部の実施態様において、そのような宿主細胞上の標的抗原（複数可）の低密度は、ＣＡＲ Ｔ又はＴＣＲ療法のみによるこの疾患又は障害の治療の失敗をもたらす。一部の実施態様において、そのような宿主細胞上の標的抗原（複数可）の低密度は、ＣＡＲ Ｔ又はＴＣＲ療法のみによるこの疾患又は障害の効果的でない又は不充分な治療を生じる。

【0033】

一部の実施態様において、本方法は更に、本明細書記載の測定／検出工程と治療工程の間に、測定された／検出された標的抗原の発現レベルを、対照レベル（例えば、健常対象、もしくはその疾患又は障害に関連のない宿主細胞における標的抗原（複数可）の発現レベル）と比較するための任意の工程を含む。一部の実施態様において、本方法は更に、本明細書記載の治療工程の前に、ＣＡＲ Ｔ又はＴＣＲ－発現するＴ細胞において、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチド（例えば、膜結合型ＳＬＰ－７６ポリペプチド）を過剰発現する任意の工程を含む。そのような過剰発現は、公知の方法（例えば、形質導入、トランスフェクション、ウイルス感染など）により行うことができる。

【0034】

別の局面において、本開示は、それを必要とする対象における疾患又は障害を治療する方法を提供し、これは：
ｉ）対象における疾患又は障害に関連した宿主細胞により発現された標的抗原の発現レベルを検出する工程であって、ここでこの標的抗原は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドにより認識され得る工程；並びに
ｉｉ）この標的抗原の発現レベルが、対照レベルよりも低い場合、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドを発現し且つＳＬＰ－７６ポリペプチドを発現するＴ細胞の医薬としての有効量を対象へ投与する工程：
を含む。

【0035】

一部の実施態様において、本方法は更に、工程ｉｉ）の前に、宿主細胞による標的抗原の発現レベルを、対照レベルと比較する任意の工程を含む。一部の実施態様において、本方法は、工程ｉｉ）の前に、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドを発現しているＴ細胞においてＳＬＰ－７６ポリペプチドを過剰発現する任意の工程を含む。

【0036】

一部の実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、膜に結合されている。

【0037】

一部の実施態様において、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドを発現するが、ＳＬＰ－７６ポリペプチドを発現しないＴ細胞は、この疾患又は障害を治療することができないか、又は単に非効率的にもしくは不充分に治療する。

【0038】

別の局面において、本開示は、この疾患又は障害に関連した宿主細胞により発現された標的抗原を特異的に認識するＴＣＲポリペプチドを発現し、且つ更に本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチド（例えば膜結合型ＳＬＰ－７６ポリペプチド）を発現するＴ細胞（例えば対象における内因性Ｔ細胞）の医薬としての有効量を、対象を投与することを含む、それを必要とする対象において疾患又は障害を治療する一方で、この疾患又は障害は、ＴＣＲポリペプチドのみを発現するが、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは発現しない類似のＴ細胞により、治療されないか、又は単に非効率的もしくは不充分に治療される方法を提供する。そのような宿主細胞は、標的抗原を低レベルで発現し（すなわち、低密度で有し）、その結果ＴＣＲポリペプチドのみを発現するが、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは発現しない内因性Ｔ細胞は、その疾患又は障害の治療を不充分又は不可能にしている。一部の実施態様において、本方法は更に、この疾患又は障害に関連した宿主細胞における標的抗原（複数可）の発現レベルを検出する第一工程を含む。一部の実施態様において、そのような標的抗原（複数可）の発現レベルは、治療前に分かっている。一部の実施態様において、本方法は更に、対象からＴ細胞（例えば、対象における内因性Ｔ細胞）を単離する工程を含む。一部の実施態様において、本方法は更に、単離されたＴ細胞（例えば、内因性Ｔ細胞）において本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドを発現する工程を含む。そのようなＴ細胞は、標的抗原を認識するＴＣＲ分子を発現する任意のＴ細胞であってよく、例えば、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、単球、ガンマデルタＴ細胞、幹細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）－由来のＮＫ細胞、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）－由来のＴ細胞、又はそれらのＴ細胞の混合物を含む。一部の実施態様において、これらのＴ細胞（例えば、対象における内因性Ｔ細胞）は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である。一部の実施態様において、これらのＴ細胞は、この疾患又は障害について治療される対象から単離される。一部の実施態様において、これらのＴ細胞は、異なる対象、例えば、同じ疾患又は障害を有する異なる対象、もしくは健常対象から単離される。本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、本明細書記載の方法又は当業者に公知の方法（例えば、ウイルスベクターを介して）のいずれかにより、単離されたＴ細胞（例えば、対象における内因性Ｔ細胞）内での発現のために導入されてよい。

【0039】

別の局面において、本開示は：
ｉ）対象においてこの疾患又は障害に関連した宿主細胞により発現される標的抗原の発現レベルを検出する工程であって、ここでこの標的抗原は、対象においてＴ細胞により発現されるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチドにより認識され得る工程；
ｉｉ）対象から工程ｉ）におけるＴ細胞を単離する工程；並びに
ｉｉｉ）工程ｉ）における標的抗原の発現レベルが対照レベルよりも低い場合、工程ｉｉ）において単離されたＴ細胞においてＳＬＰ－７６ポリペプチドを発現する工程；並びに
ＳＬＰ－７６ポリペプチドを発現する単離されたＴ細胞の医薬としての有効量を対象へ投与する工程：
を含む、それを必要とする対象において疾患又は障害を治療する方法を提供する。

【0040】

別の局面において、本開示は：
ｉ）対象から少なくとも１種のＴ細胞を単離する工程であって、ここで少なくとも１種のＴ細胞が、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドを発現し、ここでＴＣＲポリペプチド及び／又はＣＡＲポリペプチドは、対象においてこの疾患又は障害に関連した宿主細胞により発現された標的抗原を特異的に認識する工程；
ｉｉ）単離された少なくとも１種のＴ細胞においてＳＬＰ－７６ポリペプチドを発現する工程；並びに
ｉｉｉ）ＳＬＰ－７６ポリペプチドを発現する単離されたＴ細胞の医薬としての有効量を対象へ投与する工程：
を含む、それを必要とする対象において疾患又は障害を治療する方法を提供する。

【0041】

一部の実施態様において、このＴＣＲポリペプチドは、対象にとって内因性である。一部の実施態様において、ＴＣＲポリペプチド及び／又はＣＡＲポリペプチドを発現する少なくとも１種のＴ細胞は、対象にとって内因性である。一部の実施態様において、ＴＣＲポリペプチド、ＣＡＲポリペプチド、並びに／又はＴＣＲポリペプチド及び／もしくはＣＡＲポリペプチドを発現する少なくとも１種のＴ細胞は、外因性であるか、もしくは遺伝子修飾されている。

【0042】

一部の実施態様において、本方法は更に、工程ｉ）の前に、宿主細胞による標的抗原の発現レベルを測定する工程を含む。

【0043】

一部の実施態様において、本明細書記載の方法は更に、工程ｉ）の前に、宿主細胞による標的抗原の発現レベルを対照レベルと比較する、任意の工程を含む。

【0044】

一部の実施態様において、宿主細胞により発現される標的抗原のレベルは、対照レベルよりも低い。そのような対照レベルは、疾患又は障害とは関係がない異なる宿主細胞による（例えば、同じ対象の同じもしくは異なる組織もしくは器管中、又は同じ疾患又は障害を有するかもしくは健常個体などこの疾患又は障害を有さないのいずれかの異なる宿主の同じもしくは異なる組織もしくは器管中）、標的抗原の発現レベルを指してよい。そのような対照レベルは、この治療前に医師又は臨床医に既にわかっていることができる。

【0045】

一部の実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、本明細書記載の方法又は当業者に公知の方法（例えば、ウイルスベクターを介して）のいずれかにより、単離されたＴ細胞中での発現のために導入されてよい。

【0046】

一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６ポリペプチドは、膜に結合されている。

【0047】

一部の実施態様において、対象におけるＴ細胞は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、単球、ガンマデルタＴ細胞、幹細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）－由来のＮＫ細胞、又は誘導多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）－由来のＴ細胞である。一部の実施態様において、対象におけるＴ細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である。

【0048】

一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６ポリペプチドの発現は、宿主細胞を阻害又は死滅するように、少なくとも１種のＴ細胞の活性を増強する。

【0049】

一部の実施態様において、この宿主細胞は、癌細胞又は腫瘍細胞である。

【0050】

非限定的機序の下、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、内因性もしくは外因性のいずれかで、別のＣＡＲもしくはＴＣＲ分子の活性を増強することができ、並びに／又は特に抗原が低密度で発現される場合に、標的抗原に対し応答してＣＡＲ又はＴＣＲ分子を発現する細胞の活性閾値を低下することができる。本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドの発現は、ＣＡＲ又はＴＣＲ分子を発現するＴ細胞を使用する現在のＴ細胞療法を増強することができる。

【0051】

本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、完全長ＳＬＰ－７６、又はＳＬＰ－７６の生物活性のある断片、変異体、もしくはバリアントを含んでよい。一部の実施態様において、このＳＬＰ－７６ポリペプチドは、野生型ＳＬＰ－７６ポリペプチドに対する少なくとも１つの変異を含む。そのような変異は、野生型ＳＬＰ－７６のＫ３０位置に対する変異（例えば、Ｋ３０Ｒ置換）など、当業者に公知の任意の変異であってよい。非限定的機序の下、ＳＬＰ－７６の発現レベル、安定性及び／又は生物学的機能を減少しない任意の変異が、本明細書において使用されてよい。Ｋ３０Ｒ置換などの、一部の変異は、ＳＬＰ－７６の発現レベル、安定性及び／又は生物学的機能を増強し得る。そのような変異を有するＳＬＰ－７６変異体は更に、標的抗原への結合時に、Ｔ細胞活性化を増強し得、その結果更に、本明細書記載の疾患又は障害に関するＣＡＲ Ｔ又はＴＣＲ療法の治療効果を増強し得る。

【図面の簡単な説明】

【0052】

【図1】図１は、腫瘍細胞に応答してのＴ細胞活性を示すグラフのセットである。ＦＡＣＳ分析のヒストグラムは、Ｔ細胞におけるＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体（“ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ”、上部左側パネル）又はＨＥＲ２－標的化するＣＡＲ構築体（“ＨＥＲ－２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ”、上部右側パネル）の発現を示すが、これらのＴ細胞は更に、ＬＣＫ（配列番号：９、一番上の痕跡）、ＬＡＴ（配列番号：８、上から２番目の痕跡）、ＳＬＰ－７６（配列番号：７、上から３番目の痕跡）、又は近位シグナル伝達分子を伴わない対照（一番下の痕跡）を過剰発現する。近位シグナル伝達分子を伴う又は伴わない、異なるＣＡＲ構築体を発現しているＴ細胞は、対照（“無腫瘍”）、ＣＤ１９を発現するがＨＥＲ２を発現しない野生型ＮＡＬＭ６細胞（“ＷＴ ＮＡＬＭ６”）、又はＨＥＲ２を発現するがＣＤ１９を発現しないＮＡＬＭ６細胞（“ＨＥＲ２＋ＮＡＬＭ６”）と共にインキュベーションされた。Ｔ細胞によるＩＬ－２生成のレベルを測定し、比較した（下側パネル）。各インキュベーション条件において使用したＣＡＲ構築体は、左から右へ、ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ、ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＳＬＰ－７６、ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＬＡＴ、ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＬＣＫ、ＨＥＲ２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ、ＨＥＲ２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＳＬＰ－７６、ＨＥＲ２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＬＡＴ、及びＨＥＲ２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＬＣＫである。

【図1-1】図１は、腫瘍細胞に応答してのＴ細胞活性を示すグラフのセットである。ＦＡＣＳ分析のヒストグラムは、Ｔ細胞におけるＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体（“ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ”、上部左側パネル）又はＨＥＲ２－標的化するＣＡＲ構築体（“ＨＥＲ－２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ”、上部右側パネル）の発現を示すが、これらのＴ細胞は更に、ＬＣＫ（配列番号：９、一番上の痕跡）、ＬＡＴ（配列番号：８、上から２番目の痕跡）、ＳＬＰ－７６（配列番号：７、上から３番目の痕跡）、又は近位シグナル伝達分子を伴わない対照（一番下の痕跡）を過剰発現する。近位シグナル伝達分子を伴う又は伴わない、異なるＣＡＲ構築体を発現しているＴ細胞は、対照（“無腫瘍”）、ＣＤ１９を発現するがＨＥＲ２を発現しない野生型ＮＡＬＭ６細胞（“ＷＴ ＮＡＬＭ６”）、又はＨＥＲ２を発現するがＣＤ１９を発現しないＮＡＬＭ６細胞（“ＨＥＲ２＋ＮＡＬＭ６”）と共にインキュベーションされた。Ｔ細胞によるＩＬ－２生成のレベルを測定し、比較した（下側パネル）。各インキュベーション条件において使用したＣＡＲ構築体は、左から右へ、ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ、ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＳＬＰ－７６、ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＬＡＴ、ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＬＣＫ、ＨＥＲ２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ、ＨＥＲ２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＳＬＰ－７６、ＨＥＲ２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＬＡＴ、及びＨＥＲ２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＬＣＫである。

【図1-2】図１は、腫瘍細胞に応答してのＴ細胞活性を示すグラフのセットである。ＦＡＣＳ分析のヒストグラムは、Ｔ細胞におけるＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体（“ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ”、上部左側パネル）又はＨＥＲ２－標的化するＣＡＲ構築体（“ＨＥＲ－２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ”、上部右側パネル）の発現を示すが、これらのＴ細胞は更に、ＬＣＫ（配列番号：９、一番上の痕跡）、ＬＡＴ（配列番号：８、上から２番目の痕跡）、ＳＬＰ－７６（配列番号：７、上から３番目の痕跡）、又は近位シグナル伝達分子を伴わない対照（一番下の痕跡）を過剰発現する。近位シグナル伝達分子を伴う又は伴わない、異なるＣＡＲ構築体を発現しているＴ細胞は、対照（“無腫瘍”）、ＣＤ１９を発現するがＨＥＲ２を発現しない野生型ＮＡＬＭ６細胞（“ＷＴ ＮＡＬＭ６”）、又はＨＥＲ２を発現するがＣＤ１９を発現しないＮＡＬＭ６細胞（“ＨＥＲ２＋ＮＡＬＭ６”）と共にインキュベーションされた。Ｔ細胞によるＩＬ－２生成のレベルを測定し、比較した（下側パネル）。各インキュベーション条件において使用したＣＡＲ構築体は、左から右へ、ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ、ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＳＬＰ－７６、ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＬＡＴ、ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＬＣＫ、ＨＥＲ２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ、ＨＥＲ２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＳＬＰ－７６、ＨＥＲ２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＬＡＴ、及びＨＥＲ２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＬＣＫである。

【0053】

【図2】図２は、対照（“単独”）、高レベルのＣＤ１９を発現する野生型ＮＡＬＭ６細胞（“ＷＴ Ｎ６”）、又は低レベルのＣＤ１９を発現するＮＡＬＭ６細胞（“ＣＤ１９低Ｎ６”）に応答してのＴ細胞のＩＬ－２生成レベルの棒グラフである。これらのＴ細胞は更に、ＳＬＰ－７６を伴う又は伴わずに、図１と同じ、ＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体（“ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ”）を発現する。各インキュベーション条件で使用したＣＡＲ構築体は、左から右へ、ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ、及びＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＳＬＰ－７６である。

【0054】

【図3A】図３Ａ－３Ｃは、腫瘍細胞に応答してのＴ細胞活性を示すグラフのセットである。図３Ａは、Ｔ細胞上のＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体（“ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ”）の発現を検出する、ＦＡＣＳヒストグラムを示し、これは更に、ＬＣＫ（配列番号：９；一番上の痕跡）、膜結合型ＬＣＫ構築体（配列番号：１７；上から２番目の痕跡）、ＳＬＰ－７６（配列番号：７；上から３番目の痕跡）、膜結合型ＳＬＰ－７６（配列番号：１６；上から４番目の痕跡）、又は対照（一番下の痕跡）を過剰発現する。

【図3B】図３Ｂは、対照（“単独”）、野生型ＮＡＬＭ６細胞（“ＷＴ Ｎ６”）、又は低レベルのＣＤ１９を発現するＮＡＬＭ６細胞（“ＣＤ１９低Ｎ６”）に応答した、これらのＴ細胞のＩＬ－２生成レベルを比較する、棒グラフである。各インキュベーション条件において使用したＣＡＲ構築体は、左から右へ、ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ、ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＳＬＰ－７６、ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ＋膜結合型ＳＬＰ－７６、ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ＋膜結合型ＬＣＫ、及びＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＬＣＫである。

【図3C】図３Ｃは、膜結合型ＳＬＰ－７６を伴う又は伴わずに、ＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体（“ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ”）を発現するＴ細胞のＩＬ－２生成レベルを比較するグラフである。図３Ｃの実験について、ＣＤ１９－標的化するＣＡＲの細胞外ドメインを特異的に認識する抗イディオタイプ抗体は、連続希釈により、異なる量（ｘ－軸）で、プレートにコートされた。Ｔ細胞は、コートされた抗体の各量と共にインキュベーションし、且つ対応するＩＬ－２の生成レベルを測定し、Ｔ細胞活性化の程度を示した。

【0055】

【図4A】図４Ａ－４Ｃは、図３Ａ－３Ｃと同様の、腫瘍細胞に応答してのＴ細胞活性を示すグラフのセットである。図４Ａは、Ｔ細胞上のＨＥＲ２－標的化するＣＡＲ構築体（“ＨＥＲ－２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ”）の発現を検出する、ＦＡＣＳヒストグラムを示し、これは更に、ＬＣＫ（配列番号：９；一番上の痕跡）、膜結合型ＬＣＫ構築体（配列番号：１７；上から２番目の痕跡）、ＳＬＰ－７６（配列番号：７；上から３番目の痕跡）、膜結合型ＳＬＰ－７６（配列番号：１６；上から４番目の痕跡）、又は対照（一番下の痕跡）を過剰発現する。

【図4B】図４Ｂは、対照（“無腫瘍”）、超低レベルのＨＥＲ２を発現するＮＡＬＭ６細胞（“超低ＨＥＲ２＋Ｎ６”）、低レベルのＨＥＲ２を発現するＮＡＬＭ６細胞（“低ＨＥＲ２＋Ｎ６”）、高レベルのＨＥＲ２を発現するＮＡＬＭ６細胞（“高ＨＥＲ２＋Ｎ６”）、又は野生型１４３Ｂ細胞（これは低レベルのＨＥＲ２を発現する）に応答した、これらのＴ細胞のＩＬ－２生成レベルを比較する、棒グラフである。各インキュベーション条件において使用したＣＡＲ構築体は、左から右へ、ＨＥＲ２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ、ＨＥＲ２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＳＬＰ－７６、ＨＥＲ２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ＋膜結合型ＳＬＰ－７６、ＨＥＲ２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ＋ＬＣＫ、及びＨＥＲ２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ＋膜結合型ＬＣＫである。

【図4C】図４Ｃは、膜結合型ＳＬＰ－７６の過剰発現を伴う又は伴わずに、同じＨＥＲ２－標的化するＣＡＲ構築体を発現するＴ細胞のＩＬ－２生成レベルを比較するグラフである。組換えＨｅｒ－２抗原は、連続希釈により、異なる量（ｘ－軸）で、プレートにコートされた。Ｔ細胞は、コートされた組換え抗原の各量と共にインキュベーションし、且つ対応するＩＬ－２の生成レベルを測定し、Ｔ細胞活性化の程度を示した。

【0056】

【図5A】図５Ａ－５Ｆは、腫瘍細胞に応答してＣＡＲ Ｔ細胞活性を増強する膜結合型ＳＬＰ－７６（配列番号：１６）の能力を示すグラフのセットである。図５Ａは、Ｔ細胞上の、ＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体（“ＣＤ１９－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８Ｚ”、左側パネル）及び膜結合型ＳＬＰ－７６（膜結合型ＳＬＰ－７６にコンジュゲートされた小型細胞外タグの検出を通じて）（右側パネル）の発現を検出する、ＦＡＣＳヒストグラムを示す。

【図5B】図５Ｂは、対照（“単独”）、野生型ＮＡＬＭ６細胞（“ＷＴ Ｎ６”）、又は低レベルのＣＤ１９を発現するＮＡＬＭ６細胞（“ＣＤ１９低Ｎ６”）に応答しての、これらのＴ細胞のＩＬ－２生成レベルを比較する、棒グラフである。各インキュベーション条件において使用したＣＡＲ構築体は、左から右へ、モック、モック＋膜結合型ＳＬＰ－７６、ＣＤ１９－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８Ｚ、及びＣＤ１９－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８Ｚ＋膜結合型ＳＬＰ－７６である。

【図5C】図５Ｃは、経時的にＣＤ１９低Ｎ６細胞に対するこれらのＴ細胞の細胞傷害性を比較するグラフである。具体的には、膜結合型ＳＬＰ－７６を伴う又は伴わないＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体を発現するＴ細胞は、ＧＦＰを発現するＣＤ１９低Ｎ６細胞と共にインキュベーションし、並びに残存するＮ６細胞の数を、３時間～７２時間のインキュベーション後にそれらのＧＦＰ発現を基にカウントした。この細胞傷害指数（ベースライン測定値に対し基準化された％ＧＦＰシグナル）を計算し、これは標的細胞を阻害又は死滅するＴ細胞の機能を反映した。

【図5D】図５Ｄは、インビボＮＡＬＭ６ストレス試験モデルにおける膜結合型ＳＬＰ－７６の作用を示す。具体的には、膜結合型ＳＬＰ－７６を伴う又は伴わない、ＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体を発現するＴ細胞を、分割治効量（ｓｕｂ－ｃｕｒａｔｉｖｅ ｄｏｓｅ）で、野生型ＮＡＬＭ－６腫瘍を有する動物へ注射した。腫瘍組織量（ｙ－軸として総光束数で示した）を、治療後の様々な時点で、測定し比較した。

【図5E】図５Ｅは、図５Ｄにおいて説明した実験からのマウスの生存を示す。ラインは、左から右へ、モック＋膜結合型ＳＬＰ－７６、ＣＤ１９ ２８Ｚ、又はＣＤ１９ ２８Ｚ＋膜結合型ＳＬＰ－７６を発現するマウスの生存を表す。

【図5F】図５Ｆは、誤計算したデータポイントを補正後の、図５Ｄの結果を示す（モック＋膜ＳＬＰ－７６治療を除く）。

【0057】

【図6A】図６Ａ－６Ｆは、腫瘍細胞に応答したＣＡＲ Ｔ細胞活性を増強する膜結合型ＳＬＰ－７６の能力を示すグラフのセットである。図６Ａは、Ｔ細胞上の、ＣＤ２２－標的化するＣＡＲ構築体（“ＣＤ２２－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ”、左側パネル）及び膜結合型ＳＬＰ－７６（膜結合型ＳＬＰ－７６にコンジュゲートされた小型細胞外タグの検出を通じて）（右側パネル）の発現を検出する、ＦＡＣＳヒストグラムを示す。

【図6B】図６Ｂは、対照（“単独”）、又は低レベルのＣＤ２２を発現するＮＡＬＭ６細胞（“ＣＤ２２低Ｎ６”）に反応した、これらのＴ細胞、又はモック対照のＩＬ－２生成レベルを比較する、棒グラフである。各インキュベーション条件において使用したＣＡＲ構築体は、左から右へ、モック、モック＋膜結合型ＳＬＰ－７６、ＣＤ２２－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ、及びＣＤ２２－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ＋膜結合型ＳＬＰ－７６である。

【図6C】図６Ｃは、膜結合型ＳＬＰ－７６を伴う又は伴わない、ＣＤ２２－標的化するＣＡＲ構築体（“ＣＤ２２－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ”）を発現するＴ細胞のＩＬ－２生成レベルを比較するグラフである。組換えＣＤ２２は、連続希釈により、異なる量（ｘ－軸）で、プレートへコートされた。Ｔ細胞は、コートされたＣＤ２２の各量と共にインキュベーションし、且つＩＬ－２の生成レベルを測定し、Ｔ細胞活性化を示した。

【図6D】図６Ｄ－６Ｆは、インビボにおけるＣＤ２２低ＮＡＬＭ６（低密度のＣＤ２２を発現する細胞）モデルにおける膜結合型ＳＬＰ－７６の作用を示す。具体的には、膜結合型ＳＬＰ－７６の過剰発現を伴う又は伴わない、ＣＤ２２－標的化するＣＡＲ構築体を発現するＴ細胞を、ＣＤ２２低ＮＡＬＭ－６腫瘍を有する動物へ注射した。腫瘍組織量（ｙ－軸として総光束数で示した）を、治療後２２日目に、測定し比較した（図６Ｄ）。

【図6E】別の実験において、腫瘍組織量（ｙ－軸として全ルミネセンスで示した）を、治療後異なる時点で測定し比較した（図６Ｅ）。

【図6F】図６Ｆは、図６Ｅにおいて説明した実験からのマウスの生存を示す。

【0058】

【図7A】図７Ａ－７Ｄは、腫瘍細胞に応答してＣＡＲ Ｔ細胞活性を増強する膜結合型ＳＬＰ－７６の能力を示すグラフのセットである。図７Ａは、Ｔ細胞上の、Ｂ７－Ｈ３－標的化するＣＡＲ構築体（“Ｂ７－Ｈ３－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ”、左側パネル）及び膜結合型ＳＬＰ－７６（膜結合型ＳＬＰ－７６にコンジュゲートされた小型細胞外タグの検出を通じて）（右側パネル）の発現を検出する、ＦＡＣＳヒストグラムを示す。

【図7B】図７Ｂは、神経芽細胞腫細胞株ＣＨＬＡ－２５５（これは低密度のＢ７－Ｈ３を発現する）に対するこれらのＣＡＲ Ｔ細胞の細胞傷害性を比較するグラフである。具体的には、膜結合型ＳＬＰ－７６の過剰発現を伴う又は伴わない、Ｂ７－Ｈ３－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺを発現するＴ細胞を、ＧＦＰを発現するＣＨＬＡ－２５５細胞と共にインキュベーションした。残存するＣＨＬＡ－２５５細胞の数を、それらのＧＦＰの発現レベルを基に、インキュベーション後３時間～７８時間にカウントした。細胞傷害指数を計算し、これは標的細胞を阻害又は死滅するＴ細胞の機能を反映した。

【図7C】図７Ｃは、インビボにおけるＣＨＬＡ－２５５（これは低密度のＢ７－Ｈ３を発現する）転移モデルにおける腫瘍組織量を示す。膜結合型ＳＬＰ－７６の過剰発現を伴う又は伴わない、Ｂ７－Ｈ３－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺを発現するＴ細胞を、ＣＨＬＡ－２５５腫瘍を有する動物へ注射した。腫瘍組織量（ｙ－軸として総光束数で示した）を、治療後異なる時点で、測定した。

【図7D】図７Ｄは、異なる時点での各治療後の、動物の生存を比較する。

【0059】

【図8A】図８Ａ－８Ｄは、腫瘍細胞に応答してＣＡＲ Ｔ細胞活性を増強する、膜結合型ＳＬＰ－７６の能力を示す、グラフのセットである。図８Ａは、Ｔ細胞上の、ＣＤ３－ゼータシグナル伝達ドメイン（“ＣＤ１９－ＣＤ２８ＴＭ－ＺＡＰ７０”、左側パネル）及び膜結合型ＳＬＰ－７６（膜結合型ＳＬＰ－７６にコンジュゲートされた小型細胞外タグの検出を通じて）（右側パネル）ではなく、ＺＡＰ７０^{２５５－６００}断片を含むＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体（ＺＡＰ７０シグナル伝達ドメインを含む）の発現を検出する、ＦＡＣＳヒストグラムを示す。

【図8B】図８Ｂは、対照（“無腫瘍”）、又は野生型ＮＡＬＭ６細胞に応答する、これらのＴ細胞、又はモック対照のＩＬ－２生成レベルを比較する。

【図8C】図８Ｃは、インビボＮＡＬＭ６異種移植モデルにおける腫瘍組織量を示す。膜結合型ＳＬＰ－７６の過剰発現を伴う又は伴わない、ＣＤ１９－ＣＤ２８ＴＭ－ＺＡＰ７０を発現するＴ細胞を、ＮＡＬＭ６腫瘍を有する動物へ注射した。腫瘍組織量（ｙ－軸として総光束数で示した）を、治療後異なる時点で、測定し比較した。

【図8D】図８Ｄは、異なる時点での各治療後の、動物の生存を比較する。

【0060】

【図9A】図９Ａ－９Ｂは、腫瘍細胞に応答してＣＡＲ Ｔ細胞活性を増強する、膜結合型ＳＬＰ－７６の能力を示す、グラフのセットである。図９Ａは、Ｔ細胞上の、高親和性（ＨＡ）ＧＤ２－標的化するＣＡＲ構築体（“ＨＡ ２８Ｚ”、左側パネル）、並びに各々異なるヒンジ－膜貫通ドメイン（ＣＤ８、対、ＣＤ２８）を含む、２種の膜結合型ＳＬＰ－７６構築体（膜結合型ＳＬＰ－７６構築体にコンジュゲートされた例証的抗－ＨＥＲ２ ＥＣＤの検出を通じて）（右側パネル）の発現を検出する、ＦＡＣＳヒストグラムを示す。

【図9B】図９Ｂは、ＧＤ２を発現するＮＡＬＭ６細胞（“ＧＤ２ Ｎ６”）、野生型１４３Ｂ細胞、又はＣＨＬＡ－２５５細胞に応答しての、これらのＴ細胞のＩＬ－２生成レベル（ベースライン減算後）を比較する。各インキュベーション条件において使用したＣＡＲ構築体は、左から右へ、ＨＡ－２８Ｚ、ＨＡ－２８Ｚ＋ＣＤ８ＴＭ－ＳＬＰ－７６、及びＨＡ－２８Ｚ＋ＣＤ２８ＴＭ－ＳＬＰ－７６である。

【0061】

【図10】図１０は、ＣＡＲ Ｔ細胞上の細胞消耗バイオマーカーの発現を示す、グラフのセットである。ＦＡＣＳ分析を行い、膜結合型ＳＬＰ－７６の過剰発現を伴う又は伴わない、Ｂ７－Ｈ３－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ ＣＡＲ構築体を発現しているＴ細胞上の、ＴＩＭ－３（左側パネル）、ＰＤ－１（中央パネル）、及びＬＡＧ－３（右側パネル）の発現を検出した。

【図10-1】図１０は、ＣＡＲ Ｔ細胞上の細胞消耗バイオマーカーの発現を示す、グラフのセットである。ＦＡＣＳ分析を行い、膜結合型ＳＬＰ－７６の過剰発現を伴う又は伴わない、Ｂ７－Ｈ３－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ ＣＡＲ構築体を発現しているＴ細胞上の、ＴＩＭ－３（左側パネル）、ＰＤ－１（中央パネル）、及びＬＡＧ－３（右側パネル）の発現を検出した。

【図10-2】図１０は、ＣＡＲ Ｔ細胞上の細胞消耗バイオマーカーの発現を示す、グラフのセットである。ＦＡＣＳ分析を行い、膜結合型ＳＬＰ－７６の過剰発現を伴う又は伴わない、Ｂ７－Ｈ３－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ ＣＡＲ構築体を発現しているＴ細胞上の、ＴＩＭ－３（左側パネル）、ＰＤ－１（中央パネル）、及びＬＡＧ－３（右側パネル）の発現を検出した。

【0062】

【図11】図１１は、ＣＡＲ Ｔ細胞上の細胞消耗バイオマーカーの発現を示す、グラフのセットである。ＦＡＣＳ分析を行い、膜結合型ＳＬＰ－７６の過剰発現を伴う又は伴わない、ＨＡ ２８Ｚ ＣＡＲ構築体を発現しているＴ細胞上の、ＴＩＭ－３（左側パネル）、ＰＤ－１（中央パネル）、及びＬＡＧ－３（右側パネル）の発現を検出した。

【図11-1】図１１は、ＣＡＲ Ｔ細胞上の細胞消耗バイオマーカーの発現を示す、グラフのセットである。ＦＡＣＳ分析を行い、膜結合型ＳＬＰ－７６の過剰発現を伴う又は伴わない、ＨＡ ２８Ｚ ＣＡＲ構築体を発現しているＴ細胞上の、ＴＩＭ－３（左側パネル）、ＰＤ－１（中央パネル）、及びＬＡＧ－３（右側パネル）の発現を検出した。

【図11-2】図１１は、ＣＡＲ Ｔ細胞上の細胞消耗バイオマーカーの発現を示す、グラフのセットである。ＦＡＣＳ分析を行い、膜結合型ＳＬＰ－７６の過剰発現を伴う又は伴わない、ＨＡ ２８Ｚ ＣＡＲ構築体を発現しているＴ細胞上の、ＴＩＭ－３（左側パネル）、ＰＤ－１（中央パネル）、及びＬＡＧ－３（右側パネル）の発現を検出した。

【0063】

【図12A】図１２Ａ－１２Ｂは、膜結合型ＳＬＰ－７６、対、ＬＡＴ／ＳＬＰ－７６キメラ（ＳＬＰ－７６に融合した膜貫通ＬＡＴ）の、腫瘍細胞に応答してのＣＡＲ Ｔ細胞活性を増強する能力を比較する、グラフのセットである。図１２Ａは、Ｔ細胞におけるＣＤ１９ ２８Ｚ ＣＡＲ構築体（左側パネル）、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体を過剰発現するもの（中央パネル、右側痕跡）、又はＬＡＴ／ＳＬＰ－７６キメラ構築体（右側パネル、右側痕跡）の発現を検出する、ＦＡＣＳヒストグラムを示す。中央パネル及び右側パネルにおいて、左側痕跡は、いずれのＳＬＰ－７６構築体の過剰発現も伴わない対照を表す。

【図12A-1】図１２Ａ－１２Ｂは、膜結合型ＳＬＰ－７６、対、ＬＡＴ／ＳＬＰ－７６キメラ（ＳＬＰ－７６に融合した膜貫通ＬＡＴ）の、腫瘍細胞に応答してのＣＡＲ Ｔ細胞活性を増強する能力を比較する、グラフのセットである。図１２Ａは、Ｔ細胞におけるＣＤ１９ ２８Ｚ ＣＡＲ構築体（左側パネル）、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体を過剰発現するもの（中央パネル、右側痕跡）、又はＬＡＴ／ＳＬＰ－７６キメラ構築体（右側パネル、右側痕跡）の発現を検出する、ＦＡＣＳヒストグラムを示す。中央パネル及び右側パネルにおいて、左側痕跡は、いずれのＳＬＰ－７６構築体の過剰発現も伴わない対照を表す。

【図12A-2】図１２Ａ－１２Ｂは、膜結合型ＳＬＰ－７６、対、ＬＡＴ／ＳＬＰ－７６キメラ（ＳＬＰ－７６に融合した膜貫通ＬＡＴ）の、腫瘍細胞に応答してのＣＡＲ Ｔ細胞活性を増強する能力を比較する、グラフのセットである。図１２Ａは、Ｔ細胞におけるＣＤ１９ ２８Ｚ ＣＡＲ構築体（左側パネル）、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体を過剰発現するもの（中央パネル、右側痕跡）、又はＬＡＴ／ＳＬＰ－７６キメラ構築体（右側パネル、右側痕跡）の発現を検出する、ＦＡＣＳヒストグラムを示す。中央パネル及び右側パネルにおいて、左側痕跡は、いずれのＳＬＰ－７６構築体の過剰発現も伴わない対照を表す。

【図12B】図１２Ｂは、対照（“単独”）、高抗原（すなわち、ＣＤ１９）密度を発現する野生型ＮＡＬＭ６細胞（“ＷＴ Ｎ６”）、又は低抗原密度を発現するＮＡＬＭ６細胞の２種のクローンのいずれか（“クローンＦ Ｎ６”及び“クローンＺ Ｎ６”）に応答しての、これらのＴ細胞のＩＬ－２生成レベルを比較する。各インキュベーション条件で使用したＣＡＲ構築体は、左から右へ、モック、モック＋ＬＡＴ／ＳＬＰ－７６キメラ、モック＋膜結合型ＳＬＰ－７６、ＣＤ１９－２８Ｚ、ＣＤ１９－２８Ｚ＋ＬＡＴ／ＳＬＰ－７６キメラ、及びＣＤ１９－２８Ｚ＋膜結合型ＳＬＰ－７６である。

【0064】

【図13A】図１３Ａ－１３Ｂは、腫瘍細胞に応答してＣＡＲ Ｔ細胞活性を増強する、膜結合型ＳＬＰ－７６（配列番号：１６）の能力を示す、グラフである。図１３Ａは、Ｔ細胞における、ＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体（“ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ”）の発現を示す、ＦＡＣＳ分析のヒストグラムを含む。これらのＴ細胞は更に、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体（一番上の痕跡）、膜結合型ＰＬＣＧ構築体（上から２番目の痕跡；配列番号：５０）、膜結合型ＺＡＰ－７０^{２５５－６００}構築体（上から３番目の痕跡；配列番号：４６）、遊離のＰＬＣＧ構築体（上から４番目の痕跡；配列番号：４８）、遊離ＺＡＰ－７０構築体（上から５番目の痕跡；配列番号：４４）、又はモック対照（一番下の痕跡）を過剰発現するように、形質導入された。

【図13B】図１３Ｂは、腫瘍細胞（野生型ＮＡＬＭ－６）と共培養した場合に、左から右へ、モック対照、ＺＡＰ－７０、ＰＬＣｇ、膜結合型ＺＡＰ－７０^{２５５－６００}、膜結合型ＰＬＣｇ、又は膜結合型ＳＬＰ－７６を過剰発現するＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ ＣＡＲ Ｔ細胞による、サイトカインの生成（上側パネルのＩＬ－２及び下側パネルのＩＦＮγ）を示す、グラフのセットを含む。

【0065】

【図14A】図１４Ａ－１４Ｅは、ＣＡＲ分子により認識可能な抗原を異なるレベルで発現する腫瘍細胞に応答しての、ＣＡＲ Ｔ細胞活性を増強する、膜結合型ＳＬＰ－７６（配列番号：１６）の能力を示す、グラフである。図１４Ａは、Ｔ細胞における、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）－標的化するＣＡＲ構築体（“ＡＬＫ－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ”）の発現を示す、ＦＡＣＳ分析のヒストグラムを含む。これらのＴ細胞は更に、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体（一番上の痕跡）又はモック対照（上から２番目の痕跡）を過剰発現するように、形質導入された。一番下の痕跡は、ＣＡＲ構築体又は膜結合型ＳＬＰ－７６構築体を発現しない、対照Ｔ細胞を指す。

【図14B】図１４Ｂは、Ｔ細胞における膜結合型ＳＬＰ－７６（本明細書記載のその表面マーカーの検出による）の発現（右側痕跡）を示す、ＦＡＣＳ分析のヒストグラムを含む。

【図14C】図１４Ｃは、高レベルのＡＬＫ発現を有する細胞（ＡＬＫ^ｈｉｇｈ、一番上の痕跡）、中レベルのＡＬＫ発現を有する細胞（ＡＬＫ^ｍｅｄ、上から２番目の痕跡）、低レベルのＡＬＫ発現を有する細胞（ＡＬＫ^ｌｏｗ、上から３番目の痕跡）、又はＡＬＫを発現しない細胞（ＡＬＫ^－、一番下の痕跡）を含む、異なるＮａｌｍ－６細胞におけるＡＬＫの発現レベルを示す、ＦＡＣＳ分析のヒストグラムを含む。

【図14D】図１４Ｄは、異なる抗原密度で腫瘍細胞と共培養される場合に、膜結合したＳＬＰ－７６過剰発現を伴う又は伴わない、ＡＬＫ－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ ＣＡＲ Ｔ細胞によるサイトカイン（上側パネルのＩＬ－２、下側パネルのＩＦＮγ）の生成を示すグラフを含む。

【図14E】図１４Ｅは、膜結合したＳＬＰ－７６過剰発現を伴わない（各パネルの上側のライン）、又はこれを伴う（各パネルの下側のライン）ＡＬＫ－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ ＣＡＲ Ｔ細胞による、異なるレベルのＡＬＫ発現を生じるＡＬＫ Ｎａｌｍ－６の死滅を示すグラフを含む。ＮＡＬＭ－６細胞とＴ細胞の間の細胞数の比は、各パネルの上側に記載した。

【0066】

【図15A】図１５Ａ－１５Ｃは、腫瘍細胞に応答してＴ細胞活性を増強する、膜結合型ＳＬＰ－７６（配列番号：１６）の能力を示す、グラフである。図１５Ａは、Ｔ細胞における、ＮＹ－ＥＳＯ－１ ＴＣＲ構築体（左側パネル）又は膜結合型ＳＬＰ－７６構築体（本明細書記載のその表面マーカーにより検出された；右側パネル）の発現を示す、ＦＡＣＳ分析のヒストグラムを含む。試験したＴ細胞は、ＴＣＲ構築体及び膜結合型ＳＬＰ－７６構築体（一番上の痕跡）、ＴＣＲ構築体のみ（上から２番目の痕跡）、モック対照及び膜結合型ＳＬＰ－７６構築体（上から３番目の痕跡）、又はモック対照のみ（一番下の痕跡）を過剰発現するように、形質導入された。

【図15B】図１５Ｂは、抗原陽性腫瘍細胞（Ａ２＋／ＮＹ－ＥＳＯ－１＋Ｎａｌｍ－６細胞、上側パネル、又はＡ３７５細胞、下側パネル）又は抗原陰性腫瘍細胞Ｍｅｌ８８８（下側パネル）と共培養した場合に、ＮＹ－ＥＳＯ－１ ＴＣＲ Ｔ細胞によるＩＬ－２生成を示す、グラフのセットを含む。

【図15C】図１５Ｃは、共培養後の時間区分にわたり（ｘ－軸、時間）細胞傷害指数（ｙ－軸）により表された、膜結合されたＳＬＰ－７６の過剰発現を伴う又は伴わない、ＮＹ－ＥＳＯ－１ ＴＣＲ Ｔ細胞による、Ａ２＋／ＮＹ－ＥＳＯ－１＋Ｎａｌｍ－６細胞の死滅を図示している。

【0067】

【図16A】図１６Ａ－１６Ｃは、腫瘍細胞に応答してのＴ細胞活性を増強する、膜結合型ＳＬＰ－７６（配列番号：１６）の能力を示す、グラフである。図１６Ａは、Ｔ細胞におけるＢ－細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）－標的化するＣＡＲ構築体（左側パネル）又は膜結合型ＳＬＰ－７６構築体（本明細書記載のその表面マーカーＶＳＶ－Ｇを検出することによる；右側パネル）の発現を示す、ＦＡＣＳ分析のヒストグラムを含む。試験したＴ細胞は、ＣＡＲ構築体及び膜結合型ＳＬＰ－７６構築体（一番上の痕跡）、ＣＡＲ構築体のみ（上から２番目の痕跡）、又はモック対照（一番下の痕跡）を過剰発現するように形質導入された。

【図16B】図１６Ｂは、ＭＭ１．Ｓ腫瘍細胞に応答しての、ＣＡＲ構築体及び膜結合型ＳＬＰ－７６構築体の両方、又はＣＡＲ構築体のみを発現するＴ細胞による、ＩＬ－２（上側パネル）又はＩＦＮγ（下側パネル）の生成を比較するグラフのセットを含む。

【図16C】図１６Ｃは、ルシフェラーゼ－発現するＭＭ１．Ｓ腫瘍細胞を接種し、且つこれらのＴ細胞により治療したマウスにおける、膜結合したＳＬＰ－７６過剰発現を伴う又は伴わない、これらのＴ細胞によるインビボにおける腫瘍制御を比較する。

【0068】

【図17A】図１７Ａ－１７Ｂは、腫瘍細胞に応答してＴ細胞活性を増強する、膜結合型ＳＬＰ－７６（配列番号：１６）の能力を示す、グラフである。図１７Ａは、Ｔ細胞におけるＢ７－Ｈ３－標的化するＣＡＲ構築体（“Ｂ７－Ｈ３－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ”）の発現を示す、ＦＡＣＳ分析のヒストグラムを含む。試験したＴ細胞は、ＣＡＲ構築体及び膜結合型ＳＬＰ－７６構築体（一番上の痕跡）、ＣＡＲ構築体のみ（上から２番目の痕跡）、又はモック対照（一番下の痕跡）を過剰発現するように形質導入された。

【図17B】図１７Ｂは、ルシフェラーゼ－発現するびまん性橋膠腫６異種移植片（ＤＩＰＧ－６）を接種したマウスにおける、膜結合したＳＬＰ－７６過剰発現を伴う又は伴わない、これらのＴ細胞によるインビボにおける腫瘍制御を比較する。

【0069】

【図18A】図１８Ａ－１８Ｂは、腫瘍細胞に応答してＴ細胞増殖を増強する、膜結合型ＳＬＰ－７６（配列番号：１６）の能力を示す、グラフである。図１８Ａは、Ｔ細胞におけるＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体（“ＣＤ１９－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８Ｚ”；左側パネル）又は膜結合型ＳＬＰ－７６構築体（本明細書記載のその表面マーカーＶＳＶ－Ｇにより検出される；右側パネル）の発現を示す、ＦＡＣＳ分析のヒストグラムを含む。試験したＴ細胞は、ＣＡＲ構築体及び膜結合型ＳＬＰ－７６構築体の両方（一番上の痕跡）、ＣＡＲ構築体のみ（上から２番目の痕跡）、又はモック対照（一番下の痕跡）を過剰発現するように形質導入された。

【図18B】図１８Ｂは、異なる時点でのルシフェラーゼ－発現するＷＴ Ｎａｌｍ－６を接種したマウスの脾臓（上側）又は骨髄（下側）から収集した、膜結合したＳＬＰ－７６過剰発現を伴う又は伴わない、ＣＤ１９－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８Ｚ ＣＡＲ Ｔ細胞の量を比較する。

【0070】

【図19A】図１９Ａ－１９Ｃは、腫瘍細胞に応答してＴ細胞増殖を増強する、膜結合型ＳＬＰ－７６（配列番号：１６）の能力を示す、グラフである。図１９Ａは、Ｔ細胞におけるＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体（“ＣＤ１９－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ”；左側パネル）又は膜結合型ＳＬＰ－７６構築体（本明細書記載のその表面マーカーＶＳＶ－Ｇにより検出される；右側パネル）の発現を示す、ＦＡＣＳ分析のヒストグラムを含む。試験したＴ細胞は、ＣＡＲ構築体及び膜結合型ＳＬＰ－７６構築体の両方（一番上の痕跡）、又はＣＡＲ構築体のみ（一番下の痕跡）を過剰発現するように形質導入された。

【図19B】図１９Ｂは、ルシフェラーゼ－発現する白血病異種移植片（ＷＴ Ｎａｌｍ－６）を接種したマウスにおける、膜結合したＳＬＰ－７６過剰発現を伴う又は伴わない、これらのＴ細胞による、インビボにおける腫瘍制御を比較する。

【図19C】図１９Ｃは、時間区分を通じた各治療後のマウスの生存を比較する。

【0071】

【図20A】図２０Ａ－２０Ｃは、腫瘍細胞に応答してＴ細胞活性化を増強する、膜結合型ＳＬＰ－７６変異体（配列番号：６０）の能力を示す、グラフである。図２０Ａ－２０Ｂは、Ｔ細胞におけるＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体（“ＣＤ１９－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ”；図２０Ａ）又は様々なＳＬＰ－７６構築体（本明細書記載のその表面マーカーＶＳＶ－Ｇにより検出される；図２０Ｂ）の発現を示す、ＦＡＣＳ分析のヒストグラムを含む。試験したＴ細胞は、ＣＡＲ構築体及び膜結合型ＳＬＰ－７６ Ｋ３０Ｒ変異構築体の両方（一番上の痕跡）、膜結合型ＳＬＰ－７６（野生型）構築体（中央の痕跡）、又はＣＡＲ構築体のみ（一番下の痕跡）を過剰発現するように形質導入された。

【図20B】図２０Ａ－２０Ｂは、Ｔ細胞におけるＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体（“ＣＤ１９－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ”；図２０Ａ）又は様々なＳＬＰ－７６構築体（本明細書記載のその表面マーカーＶＳＶ－Ｇにより検出される；図２０Ｂ）の発現を示す、ＦＡＣＳ分析のヒストグラムを含む。試験したＴ細胞は、ＣＡＲ構築体及び膜結合型ＳＬＰ－７６ Ｋ３０Ｒ変異構築体の両方（一番上の痕跡）、膜結合型ＳＬＰ－７６（野生型）構築体（中央の痕跡）、又はＣＡＲ構築体のみ（一番下の痕跡）を過剰発現するように形質導入された。

【図20C】図２０Ｃは、低レベルのＣＤ１９を発現するＮＡＬＭ－６細胞又は対照（“非腫瘍”）と共培養した場合の、これらのＴ細胞による、ＩＬ－２発現レベルを比較した。各インキュベーション条件において使用したＣＡＲ構築体は、左から右へ、ＣＤ１９ＢＢＺ ＣＡＲ（すなわち、ＣＤ１９－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ）のみ、ＣＤ１９ＢＢＺ ＣＡＲ＋膜結合型ＳＬＰ－７６、及びＣＤ１９ＢＢＺ ＣＡＲ＋膜結合型ＳＬＰ－７６ Ｋ３０Ｒ変異体であった。

【発明を実施するための形態】

【0072】

開示の詳細な説明
本開示は概して、とりわけ、標的抗原を発現する特異的標的細胞（例えば、癌細胞又は腫瘍細胞）を標的化、阻害及び／又は除外するなどのために、標的抗原に応答しての、細胞［例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及び／又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する免疫細胞、例えばＴ細胞］の活性化及び機能を増強することが可能である、ポリペプチド、例えばＳＬＰ－７６、及びこのポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドの組成物に関する。更に、このポリペプチドを含む組換え細胞の組成物及びそのような組換え細胞を作製するのに有用な方法、並びに疾患［例えば、増殖性疾患（癌など）、悪性血液疾患、固形腫瘍、自己免疫疾患、炎症、アレルギー性疾患、感染症、老化／加齢など］などの状態を治療するために、細胞（例えば、免疫細胞）活性を増強する方法も、本明細書に提供される。

【0073】

本明細書に提示される例証的実験結果は、ＳＬＰ－７６は、細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）活性化を増強することが可能であり、その結果増大したＴ細胞エフェクター機能及び抗－腫瘍効能（例えば、増大したサイトカイン生成及び細胞傷害性）を生じることを明らかにしている。更に、例えば膜結合型ＳＬＰ－７６などのＳＬＰ－７６は、低い抗原密度に応答してＣＡＲ Ｔ細胞活性を増強することが可能であり、その結果増大したＴ細胞エフェクター機能及び抗－腫瘍効能（例えば、増強されたサイトカイン生成及び細胞傷害性）を生じることが示された。従って、ＳＬＰ－７６は、Ｔ細胞活性化閾値を低下し、免疫細胞においてＴＣＲ又はＣＡＲ機能を改善し、並びに近位シグナル伝達を増強することにより免疫細胞機能を改善することが可能である。ドメインスワップは、ＳＬＰ－７６のそのような能力は、ＣＡＲ特異性又はＳＬＰ－７６の構造とは無関係である（例えば、ＳＬＰ－７６の膜への繋留に使用される膜貫通ドメインに左右されない）ことを確認するために、様々なＣＡＲ分子又はＳＬＰ－７６構築体を遺伝子操作するために、使用されている。例えば膜結合型ＳＬＰ－７６などのＳＬＰ－７６の他の利点は、例えばＣＡＲ、ＴＣＲ、もしくは緊張性（ｔｏｎｉｃ）シグナル伝達を引き起こす他の分子を発現する細胞などの免疫細胞（例えばＴ細胞）において、例えば細胞消耗を増悪しないことを含むことができる。特にＳＬＰ－７６分子は、そうでなければＴ細胞消耗の特徴を提示する、ＣＡＲ Ｔ細胞の活性化を有意に増強することができる。例えば膜結合型ＳＬＰ－７６などのＳＬＰ－７６は、ほとんどの状況において、ＣＡＲ、ＴＣＲ、もしくは他の受容体の機能又は他の免疫細胞機能を促進することができるが、これは、標的抗原が低密度で発現される場合、ＣＡＲ、ＴＣＲ、もしくは別の受容体構築体が標的抗原に対し低い親和性を有する場合、ＣＡＲ、ＴＣＲもしくは他の受容体が低密度で発現される場合、及び／又はＣＡＲ、ＴＣＲ、もしくは別の受容体構築体が細胞消耗を誘導する場合に、特に利点がある。

【0074】

これらのポリペプチドをコードしている核酸分子及びこれらのポリペプチドを発現する組換え細胞も、提供される。本開示はまた、ＳＬＰ－７６ポリペプチドを含むそのような組換え細胞を作製するのに有用な組成物及び方法、並びに細胞活性化を増強し、及び増殖性疾患（例えば癌）、悪性血液疾患、固形腫瘍、自己免疫疾患、炎症、アレルギー性疾患、感染症、老化／加齢などの状態を予防及び／もしくは治療する方法も提供する。

【0075】

本開示において言及された全ての刊行物及び特許出願は、各々個々の刊行物及び特許出願が、引用により組み込まれることが具体的且つ個別に示されているのと同程度に、引用により本明細書中に組み込まれている。

【0076】

全般的実験手順
本発明の実践は、別に指定されない限りは、当業者に周知である、分子生物学、微生物学、細胞生物学、生化学、核酸化学、及び免疫学の通常の技術を利用するであろう。そのような技術は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ， Ｊ．、及びＲｕｓｓｅｌｌ， Ｄ． Ｗ． （２０１２）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （第４版）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， ＮＹ： Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、並びにＳａｍｂｒｏｏｋ， Ｊ．及びＲｕｓｓｅｌ， Ｄ． Ｗ． （２００１）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （第３版）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， ＮＹ： Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ （本明細書においてはまとめて「Ｓａｍｂｒｏｏｋ」と称する）；Ａｕｓｕｂｅｌ， Ｆ． Ｍ． （１９８７）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ： Ｗｉｌｅｙ（２０１４年までの補遺を含む）；Ｂｏｌｌａｇ， Ｄ． Ｍ．ら、（１９９６）、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ． Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ： Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ；Ｈｕａｎｇ， Ｌ．ら、（２００５）、Ｎｏｎｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｋａｐｌｉｔｔ， Ｍ． Ｇ．ら、（１９９５）、Ｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ： Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｌｅｆｋｏｖｉｔｓ， Ｉ．、（１９９７）、Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍａｎｕａｌ： Ｔｈｅ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｓｏｕｒｃｅｂｏｏｋ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＣＡ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｄｏｙｌｅ， Ａ．ら、（１９９８）、Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ： Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ： Ｗｉｌｅｙ；Ｍｕｌｌｉｓ， Ｋ． Ｂ．、Ｆｅｒｒｅ， Ｆ．及びＧｉｂｂｓ， Ｒ．、（１９９４）、ＰＣＲ： Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ、Ｂｏｓｔｏｎ： Ｂｉｒｋｈａｕｓｅｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ；Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ， Ｅ． Ａ．、（２０１４）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版）、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ： Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｂｅａｕｃａｇｅ， Ｓ． Ｌ．ら、（２０００）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ： Ｗｉｌｅｙ，（２０１４年までの補遺を含む）；並びに、Ｍａｋｒｉｄｅｓ， Ｓ． Ｃ． （２００３）、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ， ＮＬ： Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｂ．Ｖ．などの文献において十分に説明されており、その開示は参照により本明細書に組み入れられる。適切ならば、市販のキット及び試薬の使用に関与する手順は、別に注記されない限りは、一般に製造業者の規定したプロトコール及び／又はパラメータに従い、実行される。

【0077】

定義
別に規定されない限りは、本明細書において使用される技術用語、注記及び他の科学用語又は専門用語は全て、本開示が関連する技術分野の業者により通常理解される意味を有することが意図される。場合によっては、通常理解される意味を持つ用語は、明確さのため及び／又は容易な言及のために本明細書において定義され、且つ本明細書におけるそのような定義の包含は、当該技術分野において一般に理解されるものを超える実質的差異を表すと必ずしも解釈されるものではない。本明細書において記載又は言及された技術及び手順の多くは、良く理解され、且つ当業者により通常の方法論を用いて普通に利用される。

【0078】

単数形「ある（ａ，ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈がそうではないことを明確に指示しない限りは、複数の言及を含む。例えば用語「ある細胞」は、それらの混合物を含む、１又は複数の細胞を含む。「Ａ及び／又はＢ」は、以下の選択肢の全てを含むように本明細書において使用される：「Ａ」、「Ｂ」、「Ａ又はＢ」、並びに「Ａ及びＢ」。

【0079】

本明細書において使用される用語「約」は、おおよそのその通常の意味を有する。近似の程度が文脈からそうでなくて明らかでない場合は、「約」は、提供された値のプラス又はマイナス１０％以内のいずれかを意味するか、又は全ての場合において提供された値を包含する、最も近い意味のある数字に丸められる。範囲が提供される場合、これらは、境界値を包含する。

【0080】

用語「から由来する」は、分子の発生源又は給源を指し、並びに天然の、組換えの、未精製の、又は精製された分子を含んでよい。核酸分子又はポリペプチド分子が、機能性単位を生じる様式で集成された部分又は要素を含む場合に、それらは「から由来する」と考えられる。これらの部分又は要素は、それらが進化的に保存された機能を保持する限りは、複数の給源から集成され得る。一部の実施態様において、これらの派生した核酸分子又はポリペプチド分子は、給源の核酸又はポリペプチドの分子と実質的に同じ配列を含む。例えば、本開示の派生した核酸分子又はポリペプチド分子は、給源の核酸又はポリペプチドの分子に対し少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有してよい。

【0081】

本願において使用される用語「組換え」核酸分子、ポリペプチド、及び／又は細胞は、ヒトの介入を通じて変更されている核酸分子、ポリペプチド、及び／又は細胞を指す。非限定的例において、組換え核酸分子は：１）例えば、化学的もしくは酵素的技術、又は核酸分子の組換えを使用し、インビトロにおいて合成又は修飾されたもの；２）自然には結合されない、結合されたヌクレオチド配列を含むもの；３）天然の核酸分子配列に関して、１又は複数のヌクレオチドを欠損するように、分子クローニング技術を用い、遺伝子操作されたもの；並びに／又は、４）天然の核酸配列に関して、１又は複数の配列の変化又は再配列を有するように、分子クローニング技術を用い、操作されたもの：であることができる。組換えタンパク質の非限定的例は、本明細書に提供されるＳＬＰ－７６ポリペプチド、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、又は他の受容体である。

【0082】

用語「細胞」、「細胞培養物」、「細胞株」は、特定の対象細胞、細胞培養物、又は細胞株のみを指すのではなく、培養における移植又は継代の数に関わりなく、そのような細胞、細胞培養物、又は細胞株の後代又は可能性のある後代も指す。全ての後代は、親細胞と全く同一ではないことは、理解されるべきである。これは、ある種の修飾が、変異（例えば、意図的な又は不用意な変異）又は環境の影響（例えば、メチル化又は他のエピジェネティック修飾）のいずれかのために、次世代において生じることがあり、その結果後代は、事実上親細胞と同一ではないが、その後代が、当初の細胞、細胞培養物、又は細胞株の機能と同じ機能を保持する限りは、依然本明細書において使用される用語の範囲内に含まれるからである。

【0083】

本明細書で使用される「宿主細胞」は、本明細書記載の核酸及び／もしくはポリペプチド（例えば、ＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／もしくはＴＣＲ分子）を導入するための細胞、並びに／又は本明細書記載の核酸もしくはポリペプチドを発現するための細胞を指す。宿主細胞は、形質転換されない細胞、又は本明細書記載の少なくとも１種の核酸分子（例えば、ＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／もしくはＴＣＲ分子）が既に導入されている細胞のいずれかであることができる。「組換え細胞」は、遺伝子修飾を有するか、並びに／又は本明細書記載の導入された核酸及び／もしくはポリペプチドを有する細胞を指す。

【0084】

本明細書で使用される「対象」又は「個体」は、ヒト（例えば、ヒト対象）及び非－ヒト動物などの、動物を含む。一部の実施態様において、「対象」又は「個体」は、医師の監督（ｃａｒｅ）下の患者である。従って対象は、関心対象の疾患（例えば癌）及び／又はこの疾患の１もしくは複数の症状を有するか、有するリスクがあるか、もしくは有することが疑われる、ヒト患者又は個体であることができる。対象はまた、診断時又はその後に、関心対象の状態のリスクがあると診断された個体であることができる。用語「非－ヒト動物」は、全ての脊椎動物、例えば哺乳動物、例えば齧歯類、例えばマウスなど、並びに非－哺乳動物、例えば非－ヒト霊長類、例えば、ヒツジ、イヌ、ウシ、家禽、両生類、爬虫類などを含む。

【0085】

用語「ベクター」は、別の核酸分子を移入又は輸送することが可能である核酸分子又は配列を指すように、本明細書において使用される。例えば、ベクターは、遺伝子を細胞へ移入するための遺伝子送達ビヒクルとして使用することができる。移入された核酸分子は一般に、ベクター核酸分子へ、連結、例えば挿入される。一般にベクターは、適切な制御エレメントと会合される場合に、複製が可能である。用語「ベクター」は、クローニングベクター及び発現ベクター、並びにウイルスベクター及び組込み型ベクターを含む。「発現ベクター」は、制御領域を含むベクターであり、これによりＤＮＡ配列及び断片をインビトロ及び／又はインビボにおいて発現することが可能である。ベクターは、細胞において自己複製を指示する配列を含んでよいか、或いは宿主細胞ＤＮＡへの組込みを可能にするのに十分な配列を含んでよい。有用なベクターは、例えば、プラスミド（例えば、ＤＮＡプラスミド又はＲＮＡプラスミド）、トランスポゾン、コスミド、細菌の人工染色体、及びウイルスベクターを含む。有用なウイルスベクターは、例えば、複製欠損レトロウイルス及びレンチウイルスを含む。一部の実施態様において、ベクターは、遺伝子送達ベクターである。

【0086】

本明細書記載の開示の局面及び実施態様は、局面及び実施態様を「含む」、「からなる」及び「から本質的になる」ことを包含することが理解される。本明細書において使用される「含む」は、「包含する」、「含んでなる」又は「により特徴付けられる」と同義であり、且つ包括的又はオープンエンドであり、且つ追加の、列挙されない要素又は方法工程を除外するものではない。本明細書において使用される「からなる」は、特許請求された組成物又は方法において特定されないあらゆる要素、工程、又は構成成分は除外される。本明細書において使用される「から本質的になる」は、特許請求された組成物又は方法の基本的特徴に実質的に影響を及ぼさない材料又は工程は除外されない。特に組成物の成分の説明又は方法の工程の説明における、用語「含む」の本明細書における列挙は、列挙された成分又は工程から本質的になる及びからなるそれらの組成物及び方法を包含すると理解される。

【0087】

例えば、（ａ）、（ｂ）、（ｉ）などの見出しは、単に明細書及び請求項の読み取りを容易にするために提示される。明細書及び請求項における見出しの使用は、工程又は要素が、アルファベット又は数字の順番に或いはそれらが提示された順番に実行されることを必要としない。

【0088】

当業者により理解され得るように、記載された説明を提供することに関してなど、いずれか及び全ての目的に関して、本明細書に開示された全ての範囲はまた、いずれか及び全ての可能性のある部分範囲及びその部分範囲の組合せも包含している。任意の列挙された範囲は、同じ範囲を十分に説明し、並びに同じ範囲の少なくとも同等、半分、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１などへの細分も可能にするとして容易に認識され得る。非限定的例として、本明細書で考察された各範囲は、下位３分の１、中位３分の１、上位３分の１などに容易に細分され得る。同じく当業者により理解され得るように、「まで」、「少なくとも」、「よりも大きい」、「未満」及び同類のものなど全ての言い回しは、列挙された数値を含み、且つ先に考察したような部分範囲に実質的に細分され得る範囲を指す。最後に、当業者により理解され得るように、範囲は、個別の数値の各々を含む。従って、例えば１～３の項目（ａｒｔｉｃｌｅ）を有するグループは、１、２、又は３の項目を有するグループを指す。同様に、１～５の項目を有するグループは、１、２、３、４又は５の項目を有するグループを指すなどである。

【0089】

特定の範囲は、用語「約」が前に置かれた数値と共に本明細書において提示される。用語「約」は、それが前に置かれた正にその数値、並びにこの用語が前に置かれた数値の近似もしくは概算である数値に関する文字どおりの支援を提供するように、本明細書において使用される。数値が具体的には列挙された数値の近似又は概算であるかどうかの決定において、その近似又は概算の列挙されない数値は、それが提示されている文脈において、具体的には列挙された数値の実質的同等物を提供する数値であってよい。

【0090】

明確さのために、個別の実施態様の文脈において説明される本開示の特定の特徴はまた、単独の実施態様において組合せて提供されてもよいことが、理解される。対照的に、簡潔さのために単独の実施態様の文脈において説明される本開示の様々な特徴はまた、個別に又はいずれか好適な部分組合せで提供されてもよい。本開示に関連する実施態様の全ての組合せは、本開示により具体的に包含され、並びに正に各々の及び全ての組合せが個別に且つ明確に開示されるように、本明細書において開示される。加えて、様々な実施態様及びその要素の全ての部分組合せはまた、本開示により具体的に包含され、並びに正に各々の及び全てのそのような部分組合せが個別に且つ明確に開示されるように本明細書において開示される。

【0091】

本開示の組成物
以下により詳細に説明されるように、本開示は、とりわけ、細胞（例えば、Ｔ細胞などの免疫細胞）活性化を増強することが可能である、細胞膜に結合した又は結合していないのいずれかの、ＳＬＰ－７６ポリペプチドの組成物を提供する。この細胞活性化は、天然／内因性もしくは組換えＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、組換えキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、又は別の天然／内因性もしくは組換え受容体により誘導され得、これは細胞の表面上に発現され、標的細胞（例えば、癌細胞又は腫瘍細胞）により発現される標的抗原に特異的に結合する。例えば、ＣＡＲは、標的細胞の表面上に発現された標的抗原に特異的に結合することができるのに対し、ＴＣＲは、抗原－提示細胞（ＡＰＣ）の表面上に主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）により提示された標的抗原（標的細胞により発現された）に特異的に結合することができる。更に本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、低い抗原密度に応答して活性化を増強することにより（例えば、ＴＣＲ又はＣＡＲを通じて）、Ｔ細胞活性化閾値を低下することができる。一部の実施態様において、本開示は、組換えＣＡＲ又は未変性もしくは組換えＴＣＲと組合せた、ＳＬＰ－７６ポリペプチド、例えば膜結合型ＳＬＰ－７６ポリペプチドの組成物を提供する。一部の実施態様において、本開示は、ＳＬＰ－７６ポリペプチド、例えば膜結合型ＳＬＰ－７６ポリペプチドを発現するためのポリヌクレオチド及び発現ベクターの組成物を提供する。一部の実施態様において、本開示は、組換えＣＡＲ又は未変性もしくは組換えＴＣＲを発現するためのポリヌクレオチド及び発現ベクターと組合せた、ＳＬＰ－７６ポリペプチド、例えば膜結合型ＳＬＰ－７６ポリペプチドを発現するための、ポリヌクレオチド及び発現ベクターの組成物を提供する。一部の実施態様において、本開示は、ＳＬＰ－７６のためのポリヌクレオチド及び／又は発現ベクターを含む組換え細胞の組成物を提供する。一部の実施態様において、本開示は、組換えＣＡＲ又は未変性もしくは組換えＴＣＲのためのポリヌクレオチド及び／又は発現ベクターと組合せた、ＳＬＰ－７６のためのポリヌクレオチド及び／又は発現ベクターを含む組換え細胞の組成物を提供する。一部の実施態様において、本開示は、本明細書記載のＳＬＰ－７６のための組成物を、単独で、又はＣＡＲもしくはＴＣＲのための組成物と組合せて含むシステムを提供する。一部の実施態様において、本開示は、標的抗原、特に低密度で発現された抗原に応答してＴ細胞活性化を増強するために、Ｔ細胞活性化閾値を低下するために、及び／又はＴ細胞消耗を増悪しないために、ＳＬＰ－７６のための組成物を、単独で、又はＣＡＲもしくはＴＣＲのための組成物と組合せて提供する。一部の実施態様において、本開示は、特にＣＡＲ又はＴＣＲが標的抗原に対する低い親和性を有する場合に、標的抗原に応答してＴ細胞活性化を増強するために、ＳＬＰ－７６のための組成物を、単独で、又はＣＡＲもしくはＴＣＲのための組成物と組合せて提供する。一部の実施態様において、本開示は、疾患などの状態を予防又は治療するために、ＳＬＰ－７６のための組成物を、単独で、又はＣＡＲもしくはＴＣＲのための組成物と組合せて提供する。

【0092】

ＳＬＰ－７６
本開示のポリペプチドは、本明細書記載の、ＳＬＰ－７６ポリペプチドを含んでいる。ＳＬＰ－７６は、白血病Ｔ細胞株ジャーカットにおけるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）ライゲーション後の、ＺＡＰ－７０タンパク質チロシンキナーゼの基質として、当初同定された。ＳＬＰ－７６遺伝子座は、ヒト染色体５ｑ３３に位置し、その遺伝子構造は、マウスにおいて部分的に特徴付けられている。コードされたＳＬＰ－７６タンパク質は、増殖因子受容体結合タンパク質２と会合し、並びにＴＣＲ－媒介性細胞内シグナル伝達の役割を果たすと考えられる。マウスにおける類似のタンパク質は、正常なＴ細胞の成長及び活性化において役割を果たす。この遺伝子を欠いているマウスは、皮下及び腹腔内の胎児出血、機能障害性血小板及び損なわれた生存能力を示す。ヒト及びマウスのＳＬＰ－７６ ｃＤＮＡは両方共、５３３個のアミノ酸タンパク質をコードし、７２％の同一性であり、且つ３つのモジュラードメインで構成されている。ヒトＳＬＰ－７６タンパク質は、そのＮＣＢＩ参照配列番号：ＮＰ＿００５５５６．１により入手され得る。このコーディングポリヌクレオチド（例えばｍＲＮＡ）配列は、ＮＣＢＩ参照配列番号：ＮＭ＿００５５６５．５により入手され得る。ＳＬＰ－７６のＮＨ_２－末端は、ＰＥＳＴドメイン、及びＴＣＲライゲーション後にリン酸化される数個のチロシン残基を含む酸性領域を含む。ＳＬＰ－７６はまた、セントラルプロリン－リッチドメイン及びＣＯＯＨ－末端ＳＨ２ドメインも含む。受容体ライゲーション後に構成的及び誘導的の両方でＳＬＰ－７６に会合する数多くの追加のタンパク質が、同定されており、これは、ＳＬＰ－７６は、アダプター又はスカフォールドタンパク質として機能するという概念を裏付けている。ＳＬＰ－７６－欠損Ｔ細胞株又はマウスを使用する研究は、ＳＬＰ－７６は、Ｔ細胞成長及び活性化、並びにマスト細胞及び血小板機能の促進において、正の役割を果たすことの、強力な証拠を提供した。ＳＬＰ－７６は、ＮＫ細胞受容体の活性化により、シグナルの組込み部位として働く。ＮＫ細胞において、ＳＬＰ－７６は、受容体を活性化するライゲーション後にＳＹＫ又はＺＡＰ７０によりリン酸化され得る。

【0093】

本明細書のポリペプチドは、ＳＬＰ－７６の完全長配列、又はその生物学的に機能する断片に加え、任意の変異体、バリアント、オルソログ、融合体、又は別の修飾された構築体を含んでよい。一部の実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、野生型ＳＬＰ－７６ポリペプチドに対する少なくとも１つの変異（例えば、Ｋ３０位置への変異、例えばＫ３０Ｒ置換など）を含む。例えば、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、配列番号：１、７、１４、１６、１８、１９、４０、５９又は６０に対し、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれよりも大きい同一性を有するアミノ酸配列を有してよい。一部の実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、配列番号：１、７、１４、１６、１８、１９、４０、５９又は６０のアミノ酸配列を含む。一部の実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、配列番号：１、７、１４、１６、１８、１９、４０、５９又は６０のアミノ酸配列からなる。

【0094】

本明細書のポリペプチドは、細胞膜への結合を伴わない、遊離細胞質型で、ＳＬＰ－７６構築体を含んでよい。膜へ結合しないＳＬＰ－７６の細胞質型の例は、完全長ＳＬＰ－７６（例えば配列番号：１）、ＳＬＰ－７６の生物活性のある断片、変異体、もしくはバリアント、又は別の分子（例えば、２Ａ－ｔＮＧＦＲポリペプチド及び／又はＨＡタグ、配列番号：４から６のいずれか一つの配列を有する）へ融合もしくはコンジュゲートされたＳＬＰ－７６の完全長、生物活性のある断片、変異体、もしくはバリアントを含むポリペプチドを含んでよい。一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６ポリペプチドは、膜に結合されるように、遺伝子操作されてよい。例えばＳＬＰ－７６は、膜へ繋留されるよう、別のポリペプチドもしくはポリヌクレオチドもしくは他の物質へ融合又はコンジュゲートされてよい。一部の実施態様において、本明細書中のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、ＳＬＰ－７６の完全長又は断片にコンジュゲートされた膜貫通ドメインを含んでよい。そのような膜貫通ドメインは、ＣＡＲ分子、ＴＣＲ分子の膜貫通ドメイン、又は他の膜貫通タンパク質であるか又はこれらから誘導されてよい。ＣＡＲ分子由来の例証的膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）は、ＣＡＲ構造に関する下記の説明セクションで認めることができる。好適なＴＭＤの例は、ＣＤ２８ ＴＭＤ、ＣＤ８ ＴＭＤ、ＣＤ４ ＴＭＤ、ＣＤ３ ＴＭＤ、ＣＴＬＡ－４ ＴＭＤ、ＯＸ４０ ＴＭＤ、４－１ＢＢ ＴＭＤ、ＣＤ２ ＴＭＤ、及びＰＤ－１ ＴＭＤを含むが、これらに限定されるものではない。ＴＭＤの追加の例は、ＣＤ３Ｄ、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ８ａ、ＣＤ８ｂ、ＣＤ１６、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８４、ＣＤ８６、ＣＤ９５、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１６６、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ３００、ＣＤ３５７（ＧＩＴＲ）、Ａ２ａＲ、ＩＣＡＭ－１、２Ｂ４、ＢＴＬＡ、ＤＡＰ１０、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、Ｆｙｎ、ＧＡＬ９、ＩＬ７、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＫＩＲ、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＬＡＧ－３、Ｌｃｋ、ＬＡＴ、ＬＰＡ５、ＬＲＰ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＰＴＣＨ２、ＲＯＲ２、Ｒｙｋ、ＳＬＰ－７６、ＳＩＲＰα、ｐＴα、Ｔ細胞受容体ポリペプチド（例えば、ＴＣＲα及びＴＣＲβ）、ＴＩＭ３、ＴＲＩＭ、並びにＺＡＰ７０由来のＴＭＤを含む。従って一部の実施態様において、このＴＭＤは、ＣＤ２８ ＴＭＤ、ＣＤ８ ＴＭＤ、ＣＤ４ ＴＭＤ、ＣＤ３ ＴＭＤ、ＣＴＬＡ４ ＴＭＤ、ＯＸ４０ ＴＭＤ、４－１ＢＢ ＴＭＤ、ＣＤ２ ＴＭＤ、及びＰＤ－１ ＴＭＤに由来する。一部の実施態様において、このＴＭＤは、ＣＤ２８ ＴＭＤ、ＣＤ４ ＴＭＤ、ＣＤ８ ＴＭＤ、ＣＤ３ ＴＭＤ、ＣＴＬＡ４ ＴＭＤ、ＯＸ４０ ＴＭＤ、４－１ＢＢ ＴＭＤ、ＣＤ２ ＴＭＤ、及びＰＤ－１ ＴＭＤを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＳＬＰ－７６ポリペプチドは、ＣＤ８から誘導されたＴＭＤを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＳＬＰ－７６ポリペプチドは、ＣＤ８ ＴＭＤを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＳＬＰ－７６ポリペプチドは、ＣＤ２８から誘導されたＴＭＤを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＳＬＰ－７６ポリペプチドは、ＣＤ２８ ＴＭＤを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＳＬＰ－７６ポリペプチドは、配列番号：１２又は１３と少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれよりも大きい同一性を有するアミノ酸配列を含むＴＭＤを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＳＬＰ－７６ポリペプチドは更に、ＣＡＲ又はＴＣＲ分子から誘導された追加のドメインを含んでよい。例えばＳＬＰ－７６ポリペプチドは、膜貫通ドメインに更にコンジュゲートされた細胞外ドメイン又は細胞外タグを含んでよい。一部の実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチド中の任意の細胞外ドメイン又はタグは、ＳＬＰ－７６の細胞膜への繋留を促進してよい。一部の実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチド中の任意の細胞外ドメイン又はタグは、ＳＬＰ－７６ポリペプチドを検出する手段を提供してよい（例えば、ＦＡＣＳ又は他の免疫学的方法により）。一部の実施態様において、任意の細胞外ドメインは、ＣＡＲ分子に関して以下のセクションにおいて詳細に説明されるようなＥＣＤであってよい。一部の実施態様において、任意の細胞外ドメインは、抗原－結合ドメインを含む。一部の実施態様において、任意の細胞外タグは、配列番号：１１又は３９と、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれよりも大きい同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施態様において、任意の細胞外タグは、ポリペプチド又はポリヌクレオチドなどの分子であってよい。一部の実施態様において、任意の細胞外タグは、ＶＳＶ－Ｇポリペプチドを含む。一部の実施態様において、任意の細胞外タグは、配列番号：１０と、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又はそれよりも大きい同一性を有するアミノ酸配列を含む。非限定的機序の下で、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、任意の細胞外ドメイン又はタグを伴う又は伴わずに、標的抗原を認識しないか、及び／又はそれら自身ＳＬＰ－７６ポリペプチドを発現する細胞を活性化しない。対照的に、これらは、内因性もしくは外因性のいずれかで、別のＣＡＲ又はＴＣＲ分子の活性を増強するか、並びに／又は、特に抗原が低密度で発現される場合、標的抗原に応答して、ＣＡＲ又はＴＣＲ分子を発現する細胞の活性閾値を低下してよい。

【0095】

一部の実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、ＳＬＰ－７６の完全長又は断片にコンジュゲートされたタンパク質ドメイン又はアダプター配列を含んでよい。一部の実施態様において、このタンパク質ドメイン又はアダプター配列は、膜タンパク質と相互作用してよく（例えば、結合を介して）、その結果ＳＬＰ－７６を膜へ繋留する。

【0096】

一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６の完全長又は断片は、ＳＬＰ－７６と膜の脂肪酸の間の共有結合を介して、膜へ繋留されてよい。一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６の完全長又は断片は、膜の脂質の極性の高い頭部への結合を介して、膜へ繋留されてよい。

【0097】

一部の実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、ＳＬＰ－７６の完全長又は断片へコンジュゲートされた膜－結合ドメインを含んでよい。一部の実施態様において、この膜－結合ドメインは、ＳＬＰ－７６を膜へ繋留してよい。例証的膜結合ドメインは、Ｃ１、Ｃ２、ＰＨ、ＦＹＶＥ、ＰＸ、ＥＮＴＨ、及びＢＡＲドメイン、或いはその文献の内容はその全体が引用により本明細書中に組み込まれているＨｕｒｌｅｙ、Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ、２００６； １７６１：８０５－８１１に記載された他のドメインを含んで良い。

【0098】

一部の実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、任意の膜タンパク質又は膜脂肪酸もしくは脂質へ、架橋されるか又は化学的にコンジュゲートされてよい。

【0099】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
先に説明したように、本開示のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、標的抗原による細胞（例えば、ＣＡＲ又はＴＣＲを発現するＴ細胞などの免疫細胞）の活性化を増強することが可能である。原則として、本明細書記載のＳＬＰ－７６の増強機能に適したＣＡＲ分子に関する特別な制限は存在しない。一部の実施態様において、本明細書記載のＣＡＲ分子は、（ｉ）標的抗原に結合親和性を有する細胞外リガンド－結合ドメイン（別名、細胞外抗原－結合ドメイン、又はＥＣＤ）；（ｉｉ）膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）；及び、（ｉｉｉ）細胞内シグナル伝達ドメイン（別名、サイトゾルシグナル伝達ドメイン）を含んでよい。一部の実施態様において、標的抗原の細胞外リガンド－結合ドメインへの結合は、ＣＡＲポリペプチドの細胞内シグナル伝達ドメインを活性化する。一部の実施態様において、開示されたＣＡＲは、Ｎ－末端からＣ－末端方向に（ｉ）－（ｉｉｉ）で、先に列挙したドメインを有する。一部の実施態様において、開示されたＣＡＲは、フォーマットＸ－Ｙ－Ｚで説明され、ここでＸは、細胞外リガンド－結合ドメインにより認識可能なリガンド／抗原を表し、Ｙは、ヒンジ／膜貫通（Ｈ／ＴＭ）ドメインを表し、及びＺは、細胞内シグナル伝達ドメインを表す。例えば、「ＣＤ１９－ＣＤ２８Ｈ／ＴＭ－ＣＤ２８－ＣＤ３ゼータ」、「ＣＤ１９－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８Ｚ」、又は「ＣＤ１９ ２８Ｚ」は、ＣＤ１９に特異的に結合する細胞外リガンド－結合ドメイン、ＣＤ２８ヒンジ／膜貫通ドメイン、ＣＤ２８細胞内領域、及びＣＤ３ゼータ細胞内シグナル伝達ドメインを有するＣＡＲ分子を指す。別に特定しない限りは、本願中の「ＴＭ」ドメインは、任意のヒンジドメインを伴う又は伴わない、ＴＭＤを含む。

【0100】

一部の実施態様において、細胞内の開示されたＣＡＲは、１又は複数のヒンジドメイン及び／又は共刺激ドメインを更に含む。

【0101】

一部の実施態様において、開示されたＣＡＲは、少なくとも１種の本明細書記載の細胞内（すなわち、サイトゾル）シグナル伝達ドメインを含み、これは、近位シグナル伝達分子、例えばＣＤ３ゼータ、ＺＡＰ７０、ＰＬＣＧ１、ＰＫＣ、ＩＴＫ、ＮＣＫ、ＶＡＶ１、ＧＲＢ２、ＧＡＤＳ、ＳＯＳ１、ＡＤＡＰ、ＳＹＫ、ＬＹＮ、ＰＩ３Ｋ、ＢＬＮＫなど、又はそれらの生物活性のある断片、変異体、もしくはバリアントを含むが、これらに限定されるものではない。一部の実施態様において、開示されたＣＡＲは、２種以上の本明細書記載の細胞内（すなわち、サイトゾル）シグナル伝達ドメインを含み、これは、近位シグナル伝達分子、例えばＣＤ３ゼータ、ＺＡＰ７０、ＰＬＣＧ１、ＰＫＣ、ＩＴＫ、ＮＣＫ、ＶＡＶ１、ＧＲＢ２、ＧＡＤＳ、ＳＯＳ１、ＡＤＡＰ、ＳＹＫ、ＬＹＮ、ＰＩ３Ｋ、ＢＬＮＫ、又はそれらの生物活性のある断片、変異体、もしくはバリアントを含むが、これらに限定されるものではない。

【0102】

細胞外リガンド（抗原）－結合ドメイン（ＥＣＤ）
本明細書記載のＣＡＲ分子は、１又は複数の標的リガンド（又は抗原、これらは本願において互換的に使用される）に関する結合親和性を有する、少なくとも１種のＥＣＤを有する。一部の実施態様において、標的抗原は、細胞表面に発現されるか、又はそうでなければ、細胞表面に繋留されるか、固定されるか、もしくは拘束される。好適な標的抗原型の非限定的例は、細胞表面受容体、接着タンパク質、炭水化物、脂質、糖脂質、リポタンパク質、及び表面－結合されたリポ多糖、インテグリン、ムチン、及びレクチンを含む。一部の実施態様において、抗原は、タンパク質である。一部の実施態様において、抗原は、炭水化物である。一部の実施態様において、抗原は、標的細胞（例えば、癌細胞／腫瘍細胞）により発現される。一部の実施態様において、抗原は、標的細胞（例えば、癌細胞／腫瘍細胞）を特異的に認識するアダプター分子である。一部の実施態様において、抗原は、特異的疾患、障害、又は状態（例えば、癌／腫瘍）のためのバイオマーカーである。好適な抗原の非限定的例は、ＣＤ１９、ＨＥＲ２、ＲＯＲ１、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、ＣＤ２２、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ６、４－１ＢＢ、ＧＤ２、ＦｃγＲ１、及びインテグリン、並びに「抗原」と題する以下のセクションにおいて説明されたものを含む。

【0103】

一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲポリペプチドのＥＣＤは、１又は複数の標的抗原に結合する抗原－結合部分を含む。一部の実施態様において、抗原－結合部分は、少なくとも抗体のリガンド－結合ドメイン、抗原－結合断片、抗体ミメティック、受容体、又は標的化された受容体のリガンドを含む、抗体の１又は複数の抗原－結合決定基、又はそれらの機能性抗原－結合断片を含む。本開示を読む際には当業者は、用語「それらの機能性断片」又は「それらの機能性バリアント」とは、それから断片又はバリアントが誘導される野生型分子と共通の定性的及び／又は定量的生物活性を有する分子を指すことを、容易に理解することができる。例えば、抗体の機能性断片又は機能性バリアントは、それから機能性断片又は機能性バリアントが誘導された抗体と同じエピトープに結合する同じ能力を本質的に保持しているものである。例えば細胞表面受容体のエピトープに結合することが可能な抗体は、Ｎ－末端及び／又はＣ－末端で切断されてよく、そのエピトープ結合活性の保持は、当業者に公知のアッセイを用いて評価される。一部の実施態様において、抗原－結合部分は、抗体、モノクローナル抗体、抗原－結合断片（Ｆａｂ）、ナノボディ、ディアボディ、トリアボディ、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆ（ａｂ）ｖ断片、単鎖可変領域（ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、Ｖ_Ｈドメイン、Ｖ_Ｌドメイン、Ｆｖ断片、ＶＮＡＲドメイン、及びＶ_ＨＨドメイン、又はそれらの機能性断片からなる群から選択される。一部の実施態様において、抗原－結合部分は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様において、抗原－結合部分は、ｓｃＦｖを含む。一部の実施態様において、抗体ミメティックは、アフィボディ分子、アフィリン、アフィマー、アルファボディ、アビマー、ＤＡＲＰｉｎｓ、フィノマー、クニッツドメインペプチド、モノボディ、ナノＣＬＡＭＰ、及びそれらの生物活性のある断片からなる群から選択される。

【0104】

この抗原－結合部分は、天然のアミノ酸配列を含むことができるか、又は所望の及び／もしくは改善された特性、例えば結合親和性を提供するように、遺伝子操作されるか、設計されるか、もしくは修飾されることができる。一般に、標的抗原（例えば、ＣＤ１９抗原又はＨＥＲ２抗原）に関する抗体又は抗原－結合部分の結合親和性は、Ｆｒａｎｋｅｌら、Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ、１６： １０１－１０６， １９７９により説明されたスキャッチャード法により、計算され得る。一部の実施態様において、結合親和性は、抗原／抗体解離速度により、測定され得る。一部の実施態様において、高い結合親和性は、競合放射免疫測定により測定され得る。一部の実施態様において、結合親和性は、ＥＬＩＳＡにより測定され得る。一部の実施態様において、抗体親和性は、フローサイトメトリーにより測定され得る。標的抗原（ＣＤ１９又はＨＥＲ２など）へ「選択的に結合する」抗体は、標的抗原へ、高い親和性で結合するが、他の無関係の抗原には有意に結合しない抗体であるが、抗原には高い親和性で、例えば、平衡定数（Ｋ_Ｄ）１００ｎＭ以下、例えば６０ｎＭ以下、例えば３０ｎＭ以下、例えば１５ｎＭ以下、又は１０ｎＭ以下、又は５ｎＭ以下、又は１ｎＭ以下、又は５００ｐＭ以下、又は４００ｐＭ以下、又は３００ｐＭ以下、又は２００ｐＭ以下、又は１００ｐＭ以下などで結合する。

【0105】

当業者は、本開示のＣＡＲポリペプチドを発現するように遺伝子修飾される細胞の所望の局在又は機能を基にＥＣＤを選択することができる。例えば、ＨＥＲ２抗原に特異的な抗体を含むＥＣＤを伴うＣＡＲポリペプチドは、ＨＥＲ２－発現する乳癌細胞に、細胞を標的化することができる。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲポリペプチドのＥＣＤは、腫瘍－関連抗原（ＴＡＡ）又は腫瘍－特異的抗原（ＴＳＡ）を結合することが可能である。当業者は、ＴＡＡは、例えば腫瘍細胞及び正常細胞上に存在するタンパク質、又は多くの正常細胞上に存在するが腫瘍細胞上ははるかに低い濃度で存在するタンパク質などの分子を含むことを理解することができる。対照的に、ＴＳＡは一般に、例えば腫瘍細胞上には存在するが正常細胞上には存在しないタンパク質などの分子を含む。

【0106】

抗原
本願において、用語「リガンド（複数可）」及び「抗原（複数可）」は、本セクションに記載されたＣＡＲ分子の細胞外抗原－結合ドメインにより、又は以下のセクションに記載されたＴＣＲ分子により、特異的に認識される標的分子（複数可）を意味するように、互換的に使用される。原則として、好適な標的抗原に関する特別な制限は存在しない。本開示の一部の実施態様において、ＥＣＤの抗原－結合部分は、標的細胞により発現又は認識された抗原に存在するエピトープに特異的である。一部の実施態様において、この標的細胞は、疾患又は障害と相関関係がある。例証的疾患又は障害は、例えば、増殖性疾患（例えば癌）、悪性血液疾患、固形腫瘍、自己免疫疾患、炎症、アレルギー性疾患、感染症、老化／加齢などを含んでよい。本開示の一部の実施態様において、ＣＡＲのＥＣＤの抗原－結合部分は、腫瘍細胞により発現された抗原、すなわち腫瘍－関連抗原に存在するエピトープに特異的である。腫瘍－関連抗原は、例えば、白血病細胞、神経芽細胞腫細胞、骨肉腫細胞、膵臓癌細胞、結腸癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、肺癌細胞、中皮腫細胞、乳癌細胞、尿路上皮癌細胞、肝臓癌細胞、頭頸部癌細胞、肉腫細胞、子宮頸癌細胞、胃癌細胞、胃部癌細胞、メラノーマ細胞、ブドウ膜メラノーマ細胞、胆管癌細胞、多発性骨髄腫細胞、リンパ腫細胞、膠芽細胞腫細胞、又は本開示に説明された他の癌細胞に関連した抗原であることができる。一部の実施態様において、この抗原－結合部分は、組織－特異的抗原に存在するエピトープに特異的である。一部の実施態様において、抗原－結合部分は、疾患－関連抗原に存在するエピトープに特異的である。腫瘍は、細胞の制御できない成長が、臓器、筋肉又は骨などの固形組織で発生する場合に、癌の亜群と称されることが多い。本願において、用語「腫瘍」及び「癌」は、別に特定されない限りは、一般に、制御できない成長を有する細胞を意味するよう、互換的に使用される。

【0107】

一部の実施態様において、この抗原は、ＣＤ１９、ＨＥＲ２、ＲＯＲ１、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、ＣＤ２２、ＧＤ２、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ６、４－１ＢＢ、ＦｃγＲ１、及びインテグリンからなる群から選択される。一部の実施態様において、この抗原は、ＣＤ１９、ＨＥＲ２、ＲＯＲ１、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）、ＣＤ２２、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ６、４－１ＢＢ、ＦｃγＲ１、ＧＤ２、ＣＤ２２、ＣＤ１０、ＣＤ２０、ＧＰＣ２、ＧＤ３、ＧＭ２、ＧＭ３、及びインテグリンからなる群から選択される。

【0108】

好適な標的抗原の非限定的例はまた、グリピカン２（ＧＰＣ２）、ヒト上皮細胞増殖因子受容体２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＰＳＭＡ、ＩＬ－１３－受容体アルファ１、ＩＬ－１３－受容体アルファ２、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、癌抗原－１２５（ＣＡ－１２５）、ＣＡ１９－９、カルレチニン、ＭＵＣ－１、上皮膜タンパク質（ＥＭＡ）、上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）も含む。他の好適な標的抗原は、チロシナーゼ、メラノーマ－関連抗原（ＭＡＧＥ）、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ１２３、ＣＤ９３、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、クロモグラニン、サイトケラチン、デスミン、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、総嚢胞性疾患流体タンパク質（ＧＣＤＦＰ－１５）、ＡＬＫ、ＤＬＫ１、ＦＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ、ＷＴ１、ＨＭＢ－４５抗原、タンパク質メラン－Ａ（Ｔリンパ球により認識されたメラノーマ抗原；ＭＡＲＴ－１）、ｍｙｏ－Ｄ１、筋肉特異アクチン（ＭＳＡ）、神経フィラメント、神経特異エノラーゼ（ＮＳＥ）、胎盤アルカリホスファターゼ、シナプトフィジン、サイログロブリン、甲状腺転写因子－１、ＣＤ１３８、ＦｏｌＲ１、ＬｅＹ、ＭＣＳＰ、及びＴＹＲＰ１を含むが、これらに限定されるものではない。

【0109】

本明細書に開示されたＣＡＲにとって好適であることができる追加の抗原は、ピルビン酸キナーゼイソ型酵素Ｍ２（腫瘍Ｍ２－ＰＫ）の二量体型、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ３、ＴＲＢＣ１、ＴＲＢＣ２、ＢＣＭＡ、ＣＤ３８、ＣＤ１２３、ＣＤ９３、ＣＤ３４、ＣＤ１ａ、ＳＬＡＭＦ７／ＣＳ１、ＦＬＴ３、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＴＡＬＬＡ－１、ＣＳＰＧ４、ＤＬＬ３、カッパ軽鎖、ラムダ軽鎖、ＣＤ１６／ＦｃγＲＩＩＩ、ＣＤ６４、ＦＩＴＣ、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ７０、ＧＤ２（ガングリオシドＧ２）、ＧＤ３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮細胞増殖因子バリアントＩＩＩ）、ＥＧＦＲ及びそのイソバリアント、ＴＥＭ－８、精子タンパク質１７（Ｓｐ１７）、及びメソテリンを含むが、これらに限定されるものではない。好適な抗原の更なる非限定的例は、ＰＡＰ（前立腺酸性ホスファターゼ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、プロステイン、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＡＲＰ（Ｔ細胞受容体ガンマ鎖代替リーディングフレームタンパク質）、Ｔｒｐ－ｐ８、ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原１）、異常なｒａｓタンパク質、異常なｐ５３タンパク質、インテグリンβ３（ＣＤ６１）、ガラクチン、Ｋ－Ｒａｓ（Ｖ－Ｋｉ－ｒａｓ２カーステンラット肉腫ウイルス癌遺伝子）、及びＲａｌ－Ｂを含んでいる。一部の実施態様において、この抗原は、ＣＤ１９、ヒト上皮細胞増殖因子受容体２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、又はＧＤ－２である。

【0110】

本明細書に開示されたＣＡＲにとって好適であることができる抗原は、以下の１つ又はそれらの任意の組合せを含むが、これらに限定されるものではない：ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１０、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５（ＳＳＥＡ－１）、ＣＤ１６（ＦｃγＲＩＩＩ）、ＣＤ１７、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３１、ＣＤ３２（ＦｃγＲＩＩ）、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３５、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４４Ｖ６、ＣＤ４５、ＣＤ４５Ｒ／Ｂ２２０、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５２、ＣＤ５３、ＣＤ５４、ＣＤ５６（ＮＣＡＭ）、ＣＤ５７、ＣＤ６１（インテグリンβ３）、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６３、ＣＤ６４、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ６８、ＣＤ６９、ＣＤ７０、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤ７９ａ（Ｉｇα）、ＣＤ７９ｂ（Ｉｇβ）、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８５ｋ（ＩＬＴ３）、ＣＤ８６、ＣＤ８８、ＣＤ９３（Ｃ１Ｒｑｐ）、ＣＤ９４、ＣＤ９５、ＣＤ９９、ＣＤ１０３、ＣＤ１０５（エンドグリン）、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１０７ｂ、ＣＤ１１４（Ｇ－ＣＳＦＲ）、ＣＤ１１５、ＣＤ１１７、ＣＤ１２２、ＣＤ１２３、ＣＤ１２９、ＣＤ１３３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３８（シンデカン－１）、ＣＤ１４１、ＣＤ１４６、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ－４）、ＣＤ１５８（Ｋｉｒ）、ＣＤ１６１（ＮＫ－１．１）、ＣＤ１６３、ＣＤ１８３、ＣＤ１９１、ＣＤ１９３（ＣＣＲ３）、ＣＤ１９４（ＣＣＲ４）、ＣＤ１９５（ＣＣＲ５）、ＣＤ１９７（ＣＣＲ７）、ＣＤ２０３ｃ、ＣＤ２０５（ＤＥＣ－２０５）、ＣＤ２０７（ランゲリン）、ＣＤ２０９（ＤＣ－ＳＩＧＮ）、ＣＤ２２３、ＣＤ２３５、ＣＤ２４４（２Ｂ４）、ＣＤ２５２（ＯＸ４０Ｌ）、ＣＤ２６７、ＣＤ２６８（ＢＡＦＦ－Ｒ）、ＣＤ２７３（Ｂ７－ＤＣ、ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、ＣＤ２７９（ＰＤ１）、ＣＤ２８２（ＴＬＲ２）、ＣＤ２８４（ＴＬＲ４）、ＣＤ２９４、ＣＤ３０４（ニューロピリン－１）、ＣＤ３０５、ＣＤ３１４（ＮＫＧ２Ｄ）、ＣＤ３１９（ＣＲＡＣＣ）、ＣＤ３２６、ＣＤ３２８（シグレック－７）、ＣＤ３３５（ＮＫｐ４６）、胎児アセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）、ＡＤＧＲＥ２、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＡＬＫ、ＢＣＭＡ、ＢＤＣＡ３、Ｃ３ＡＲ、ルイスＡ（ＣＡ１９．９）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡ１Ｘ）、カルレチニン、癌抗原－１２５（ＣＡ－１２５）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ４、ＣＤＳ、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、クロモグラニン、ＣＬＥＣ１２Ａ、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染細胞の抗原（例えば、細胞表面抗原）、ＣＳ－１、ＣＳＰＧ４、サイトケラチン、デスミン、ＤＬＫ１、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮細胞増殖因子バリアントＩＩＩ）、ＥＧＦＲ及びそのイソバリアント、上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、上皮糖タンパク質２（ＥＧＰ２）、上皮糖タンパク質－４０（ＥＧＰ－４０）、上皮膜タンパク質（ＥＭＡ）、ＥＲＢＢ、上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）、ＦＡＰ、葉酸結合タンパク質（ＦＢＰ）、ＦｃγＲ１、ＦｃεＲＩα、ＦＩＴＣ、ＦＬＴ３、ＦＯＬＲ１、ＦＯＬＲ３、ガラクチン、ガングリオシド、総嚢胞性疾患流体タンパク質（ＧＣＤＦＰ－１５）、ＧＤ２（ガングリオシドＧ２）、ＧＤ３、ＧＭ２、ＧＭ３、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、ｇｐＡ３３、糖ペプチド、グリピカン２（ＧＰＣ２）、癌胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）、ヒト上皮細胞増殖因子受容体２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＭ１．２４、ＨＭＢ－４５抗原、ＨＰＶ Ｅ６、ＨＰＶ Ｅ７、ＩＣＡＭ－１、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩＬ－１３－受容体アルファ１、インテグリン、インテグリンＢ７、インターロイキン－１３受容体サブユニットアルファ－２（ＩＬ－１３Ｒα２）、カッパ軽鎖、キナーゼ挿入ドメイン受容体（ＫＤＲ）、ラムダ軽鎖、ＬＩＬＲＢ２、ルイスＹ（ＬｅＹ）、ＬＧＲ５、Ｌｙ４９、Ｌｙ１０８、Ｌ１細胞接着分子（Ｌ１－ＣＡＭ）、メラノーマ－関連抗原（ＭＡＧＥ）、メラノーマ抗原ファミリーＡ１（ＭＡＧＥ－Ａ１）、タンパク質メラン－Ａ（Ｔリンパ球により認識されたメラノーマ抗原；ＭＡＲＴ－１）、ＭＣＳＰ、ｃ－Ｍｅｔ、ＭＩＣＡ／Ｂ、メソテリン、筋肉特異アクチン（ＭＳＡ）、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ピルビン酸キナーゼイソ型酵素Ｍ２（腫瘍Ｍ２－ＰＫ）の二量体型、ムチン１（Ｍｕｃ－１）、ムチン１６（Ｍｕｃ－１６）、ｍｙｏ－Ｄ１、Ｎｅｃｌ－２、神経フィラメント、ＮＫＣＳＩ、ＮＫＧ２Ｄ、神経特異エノラーゼ（ＮＳＥ）、ＮＹ－ＥＳＯ、精巣癌抗原ＮＹ－ＥＳＯ－１、異常なｐ５３タンパク質、ＰＡＰ（前立腺酸性ホスファターゼ）、ＰＡＭＡ、Ｐ－カドヘリン、胎盤アルカリホスファターゼ、ＰＲＡＩＶＩＥ、プロステイン、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺－特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｒａｌ－Ｂ、Ｋ－Ｒａｓ（Ｖ－Ｋｉ－ｒａｓ２カーステンラット肉腫ウイルス癌遺伝子）、異常なｒａｓタンパク質、ＲＯＲ１、ＳＬＡＭＦ７／ＣＳ１、受容体チロシン－プロテインキナーゼｅｒｂ－Ｂ２，３，４、精子タンパク質１７（Ｓｐ１７）、ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原１）、シナプトフィジン、腫瘍－関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ－７２）、ＴＡＬＬＡ－１、ＴＡＲＰ（Ｔ細胞受容体ガンマ鎖代替リーディングフレームタンパク質）、ＴＥＭ－８、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ＴＩＭ－３、ＴＬＲ４、ＴＲＢＣ１、ＴＲＢＣ２、Ｔｒｐ－ｐ８、サイログロブリン、甲状腺転写因子－１、ＴＹＲＰ１、チロシナーゼ、血管内皮増殖因子Ｒ２（ＶＥＧＦ－Ｒ２）、Ｖα２４、ウイルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ－１）、及び当該技術分野において公知の様々な病原性抗原。一部の実施態様において、本明細書記載の抗原は、腫瘍－特異的抗原（ＴＳＡ）又は腫瘍－関連抗原（ＴＡＡ）である。

【0111】

一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲポリペプチドは、ＣＤ１９に結合する抗原－結合部分を含むＥＣＤを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲポリペプチドは、ＨＥＲ２に結合する抗原－結合部分を含むＥＣＤを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲポリペプチドは、Ｂ７－Ｈ３に結合する抗原－結合部分を含むＥＣＤを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲポリペプチドは、ＧＤ２に結合する抗原－結合部分を含むＥＣＤを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲポリペプチドは、ＣＤ２２に結合する抗原－結合部分を含むＥＣＤを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲポリペプチドは、本明細書記載の任意のＥＣＤに対し少なくとも５０％の配列同一性を示すアミノ酸配列を有する抗原－結合部分を含むＥＣＤを含む。一部の実施態様において、この抗原－結合部分は、本明細書記載の任意のＥＣＤに対し少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を示すアミノ酸配列を有する。本明細書において使用される％同一性は、同じであるか、又は特定された領域にわたり同じであるヌクレオチドもしくはアミノ酸の特定の百分率を有する、２つ以上の配列又は部分配列を指す。２つ以上の配列又は部分配列は、例えば、ＢＬＡＳＴもしくはＢＬＡＳＴ２．０配列比較アルゴリズムにより測定されるか、或いは手作業での整列及び目視により測定される際に比較され、且つ比較ウインドウ又は指定された領域にわたり最大の対応となるよう整列されてよい。例えば、ＮＣＢＩウェブサイトｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴを参照されたい。この定義はまた、配列の相補体も指すか、又はこれに適用されてよい。この定義はまた、欠失及び／もしくは付加を有する配列、並びに置換を有する配列も含む。配列同一性は、公開された技術、並びに広範に入手可能なコンピュータプログラム、例えばＧＣＳプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １２：３８７， １９８４）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２１５：４０３， １９９０）などを用いて、計算することができる。配列同一性は、配列解析ソフトウェア、例えばＳｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ ａｔ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ （１７１０ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｖｅｎｕｅ， Ｍａｄｉｓｏｎ， Ｗｉｓ． ５３７０５）を、そのデフォルトパラメータで使用し、測定することができる。アミノ酸置換（複数可）は、例えば、ＣＤＲ配列中の非必須アミノ酸残基（複数可）での、保存的アミノ酸置換であってよい。「保存的アミノ酸置換」は、当初のアミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基により置換されたものであると理解される。類似側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において公知である。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非帯電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非－極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ－分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を伴うアミノ酸を含む。

【0112】

本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドの一つの利点は、これらは、標的抗原に応答しての細胞活性化を増強することが可能であることである。一部の実施態様において、そのような活性化は、標的抗原へ特異的に結合する細胞の表面上に発現されたＣＡＲ又はＴＣＲ分子により誘導される。更に、ＳＬＰ－７６ポリペプチド、例えば本明細書記載の膜結合型ＳＬＰ－７６ポリペプチドは、標的抗原が、ＣＡＲ又はＴＣＲ分子を介して、低密度で発現されるか、及び／又は細胞活性化閾値を低下する際に、細胞活性化を増強することが可能である。用語「抗原の低密度」とは、本開示において別に特定されない限りは、一般に、ＣＡＲ又はＴＣＲ分子を発現する少なくとも１個の細胞並びに標的抗原（例えば、腫瘍細胞により発現された腫瘍抗原、又は抗原－提示細胞により発現された腫瘍抗原）を含む微小環境において、１細胞当たりの標的抗原分子の量が、ＣＡＲ又はＴＣＲ分子を発現する細胞の活性化に必要とされるＣＡＲ又はＴＣＲ分子の十分な数を活性化する（結合を介して）のに十分でない場合のような状況を指す。標的抗原の密度は、抗原、ＣＡＲもしくはＴＣＲ構造、及び／又は標的抗原を発現するもしくは提示する標的細胞によって決まる、相対用語である。例証的ＣＤ１９の低い抗原密度は、その微小環境中のＴＣＲ又はＣＡＲに関する約１０００個以下の分子（例えば、ＣＡＲ活性化に関して各標的細胞上、及びＴＣＲ活性化に関して各抗原－提示細胞上に１０００個の分子）を指してよい。別の例証的低密度の抗原は、約１００個以下から約１０００万個以下の抗原分子を指してよい。一部の実施態様において、低い抗原密度は、約１０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００、７５００、８０００、８５００、９０００、９５００、１００００、１５０００、２００００、２５０００、３００００、３５０００、４００００、４５０００、５００００、５５０００、６００００、６５０００、７００００、７５０００、８００００、８５０００、９００００、９５０００、１０００００、１５００００、２０００００、２５００００、３０００００、３５００００、４０００００、４５００００、５０００００、５５００００、６０００００、６５００００、７０００００、７５００００、８０００００、８５００００、９０００００、９５００００、１００万、２００万、３００万、４００万、５００万、６００万、７００万、８００万、９００万、又は１０００万個以下の標的抗原分子を指してよい。一部の実施態様において、低い抗原密度は、正常又は高い抗原密度（例えば、野生型標的細胞上で発現された標的抗原の密度）と比べ、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、０．０１％以下、もしくはそれ未満の標的抗原分子を指してよい。標的抗原の密度又は量は、例えば半－定量的ＦＡＣＳ、免疫組織化学、又は他の免疫学的方法など、様々な方法により測定されてよい。ＳＬＰ－７６ポリペプチド、例えば本明細書記載の膜結合型ＳＬＰ－７６ポリペプチドはまた、標的抗原が正常又は高い密度である場合にも、細胞活性化を増強することが可能である。非限定的例において、細胞におけるＣＡＲ又はＴＣＲ分子の過剰発現は、細胞消耗を生じることがある。ＳＬＰ－７６過剰発現は、Ｔ細胞消耗を増悪することなく、ＣＡＲ又はＴＣＲ能力を増強することができる。一部の実施態様において、細胞上に発現されるＣＡＲ又はＴＣＲ又は他の受容体分子は、その標的抗原に対し、低い親和性を有することがあり、その結果その微小環境中に多数の標的抗原が存在する場合であっても、弱い活性化を生じる。一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６過剰発現は、標的抗原対し低い親和性を有するこれらのＣＡＲ又はＴＣＲ又は他の受容体の能力を増強することがあり、その結果細胞活性化を増強する。一部の非限定的実施態様において、細胞上に発現されるＣＡＲ又はＴＣＲ又は他の受容体分子は、低密度で発現されることがあり、その結果その微小環境内に多数の標的抗原が存在する場合であっても、細胞の弱い活性化を生じる。一部の非限定的実施態様において、ＳＬＰ－７６過剰発現は、標的抗原に対し低い親和性を有するこれらのＣＡＲ又はＴＣＲ又は他の受容体の能力を増強することができ、その結果細胞活性化を増強する。一部の非限定的実施態様において、疾患又は障害に関連した細胞（例えば、癌細胞又は腫瘍細胞又は他の標的細胞）は、低レベルの抗原を発現することがあり（すなわち低い抗原密度を有する）、これは抗原を認識するＣＡＲ又はＴＣＲ分子を活性化するには不充分であり、従ってそのようなＣＡＲ又はＴＣＲ分子を使用する一般的ＣＡＲ Ｔ又はＴＣＲ療法は、その疾患又は障害を治療するには不充分であるか又は効果的でない。一部の非限定的実施態様において、ＳＬＰ－７６（例えば、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体）の過剰発現は、これらのＣＡＲ又はＴＣＲ又は他の受容体の活性化及び機能を増強することができ、その結果ＣＡＲ Ｔ又はＴＣＲ療法が、この疾患又は障害を治療することを可能にする。

【0113】

ヒンジドメイン
先に説明されたように、本明細書記載のＣＡＲポリペプチドは、任意のヒンジドメインを有してよい。キメラ抗原受容体内で、用語「ヒンジドメイン」は一般に、標的化部分（ＥＣＤ）とＴＭＤの間に配置された可動性ポリペプチドコネクター領域を指す。これらの配列は一般に、ＩｇＧサブクラス（ＩｇＧ１及びＩｇＧ４など）、ＩｇＤ及びＣＤ８ドメインに由来し、その中でＩｇＧ１が最も広く使用されている。

【0114】

一部の実施態様において、ヒンジドメインは、隣接するポリペプチド領域に、構造可動性を提供する。このヒンジドメインは、天然の又は合成のポリペプチドからなってよい。近年、いくつかのヒンジドメインの研究が、以下の局面に主に焦点を当てている：（１）Ｆｃγ受容体への結合親和性を低下し、これにより非－標的活性化の特定の型を除外すること；（２）単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の可動性を増強し、これにより腫瘍抗原に標的化された特定のエピトープとＣＡＲの抗原－標的化部分の間の空間制約を緩和すること；（３）ｓｃＦｖと標的エピトープ（複数可）の間の距離を減少すること；並びに、（４）抗－Ｆｃ試薬を使用し、ＣＡＲ発現の検出を促進すること。それにもかかわらず、ヒンジドメインのＣＡＲ Ｔ細胞の物理に対する影響は、良く理解されていない。

【0115】

ヒンジドメインは、それにより認識される抗原の部分との関係において、抗原－結合部分の最適な配置を促進することにより、本明細書記載のＣＡＲポリペプチドの機能を改善することができることは、当業者により理解され得る。一部の実施態様において、ヒンジドメインは、最適なＣＡＲ活性には必要とされ得ないことは、理解され得る。一部の実施態様において、短いアミノ酸配列を有する有益なヒンジドメインは、例えばそうでなければ抗体結合動態を変更することがある何らかの立体障害を緩和することによるなど、抗原結合を促進することにより、ＣＡＲ活性を促進する。ヒンジドメインをコードしている配列は、抗原認識部分とＴＭＤの間に配置されてよい。一部の実施態様において、ヒンジドメインは、抗原－結合部分の下流及びＴＭＤの上流に機能的に連結される。本明細書記載のＣＡＲポリペプチドが任意のヒンジドメインを有する場合、ヒンジドメイン及びＴＭＤドメインを説明するフォーマットは、「Ｈ／ＴＭ」又は「Ｈ－ＴＭ」であってよい。

【0116】

ヒンジ配列は一般に、いずれかの好適な分子に由来するか又はこれから得られた任意の部分又は配列であることができる。例えば一部の実施態様において、ヒンジ配列は、ヒトＣＤ８分子又はＣＤ２８分子に、並びに隣接する領域へ可動性を供する類似の機能を提供するいずれか他の受容体に由来することができる。ヒンジドメインは、長さ約４アミノ酸（ａａ）から約５０ａａを、例えば、約４ａａ～約１０ａａ、約１０ａａ～約１５ａａ、約ａａ～約２０ａａ、約２０ａａ～約２５ａａ、約２５ａａ～約３０ａａ、約３０ａａ～約４０ａａ、又は約４０ａａ～約５０ａａを有することができる。好適なヒンジドメインは、容易に選択されることができ、且つ１アミノ酸（例えば、Ｇｌｙ）～２０ａａ、２ａａ～１５ａａ、３ａａ～１２ａａなど数多くの好適な長さのいずれかであることができ、これは４ａａ～１０ａａ、５ａａ～９ａａ、６ａａ～８ａａ、又は７ａａ～８ａａを含み、並びに１、２、３、４、５、６、又は７ａａであることができる。好適なヒンジドメインの非限定的例は、ＣＤ８ヒンジドメイン、ＣＤ２８ヒンジドメイン、ＣＤ４ヒンジドメイン、ＰＤ－１ヒンジドメイン、ＣＤ２ヒンジドメイン、ＣＴＬＡ４ヒンジドメイン、又はＩｇＧ４ヒンジドメインを含む。一部の実施態様において、ヒンジドメインは、ヒトＣＤ８α（別名ＣＤ８ａ）分子又はＣＤ２８分子及び隣接する領域に可動性を供する類似の機能を提供するいずれか他の受容体に由来する領域を含むことができる。追加の例証的ヒンジドメインは、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＣＤ５、ＣＤ２７（ＴＮＦＲＳＦ７）、ＣＤ７０、４－１ＢＢ、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＩｇＧ１ Ｆｃ領域、ＩｇＧ２ Ｆｃ領域、ＩｇＧ３ Ｆｃ領域、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域、ＩｇＥ Ｆｃ領域、ＩｇＭ Ｆｃ領域、ＩｇＡ Ｆｃ領域のヒンジドメイン、又はそれらの組合せに由来するか又はこれを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲは、ＣＤ８ヒンジドメイン由来のヒンジドメインを含む。一部の実施態様において、このヒンジドメインは、ＣＤ８ヒンジドメインの１又は複数のコピーを含むことができる。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲは、ＣＤ２８ヒンジドメイン由来のヒンジドメインを含む。一部の実施態様において、このヒンジドメインは、ＣＤ２８ヒンジドメインの１又は複数のコピーを含むことができる。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲは、ＣＤ４ヒンジドメイン由来のヒンジドメインを含む。一部の実施態様において、このヒンジドメインは、ＣＤ４ヒンジドメインの１又は複数のコピーを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲは、ＩｇＧ４ヒンジドメイン由来のヒンジドメインを含む。一部の実施態様において、このヒンジドメインは、ＩｇＧ４ヒンジドメインの１又は複数のコピーを含むことができる。

【0117】

共刺激ドメイン
先に説明されたように、本明細書記載のＣＡＲポリペプチドは、任意の共刺激ドメインを有してよい。一般に、本明細書に開示されたＣＡＲポリペプチドに適した共刺激ドメインは、当該技術分野において公知の共刺激ドメインのいずれか一つであることができる。好適な共刺激ドメインの例は、サイトカイン生成を増強することができ、且つ非限定的に、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）由来の共刺激ポリペプチド配列、並びに共刺激誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）ポリペプチド配列を含む。追加の例証的共刺激ポリペプチド配列は、以下の共刺激ドメインであるか又はこれらから誘導されてよい：ＣＤ２８、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＣＤ２７、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ１９ａ、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）、ＣＤ４８、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５８、ＣＤ５３、ＩＣＡＭ－１（ＣＤ５４）、ＣＤ６９、ＣＤ７０、ＣＤ８０（Ｂ７－１）、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８６（Ｂ７－２）、ＣＤ９０、ＣＤ９６、ＣＤ１００、ＣＤ１０３、ＣＤ１２２、ＣＤ１３２、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１６２（ＤＮＡＭ１）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２２６、ＣＤ２２９、ＣＤ２４４、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８、ＬＡＴ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３リガンド、ＰＤ－１、ＳＬＰ－７６、Ｔｏｌｌ－様受容体（ＴＬＲ、例えばＴＬＲ２など）、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＣＡＲＤ１、ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）、ＴＲＩＭ、ＺＡＰ７０、ＦｃＥＲＩγ、４－１ＢＢＬ、ＢＡＦＦ、ＧＡＤＳ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲ－Ｌ、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＨＶＥＭ、ＣＤ２７Ｌ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＡＣ１、ＢＬＡＭＥ、ＣＲＡＣＣ、ＣＤ２Ｆ－１０、ＮＴＢ－Ａ、インテグリンα４、インテグリンα４β１、インテグリンα４β７、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＳＧＬ１、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＶＬＡ１、ＶＬＡ－６、ＢＴＬＡ、イカロス、ＬＡＧ－３、ＬＭＩＲ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、ＴＣＬ１Ａ、ＤＡＰ１２、ＴＩＭ－１、デクチン－１、ＰＤＣＤ６、ＰＤ－１、ＴＩＭ－４、ＴＳＬＰ、ＥｐｈＢ６、ＴＳＬＰ－Ｒ、ＨＬＡ－ＤＲ、又はそれらの任意の組合せ。

【0118】

従って一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲの共刺激ドメインは、共刺激４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）ポリペプチド配列、共刺激ＣＤ２７ポリペプチド配列、共刺激ＣＤ２８ポリペプチド配列、共刺激ＯＸ４０（ＣＤ１３４）ポリペプチド配列、及び共刺激誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ）ポリペプチド配列からなる群から選択される。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲは、共刺激４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）ポリペプチド配列由来の共刺激ドメインを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲは、共刺激４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）ポリペプチド配列を含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲは、共刺激ＣＤ２８ポリペプチド配列由来の共刺激ドメインを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲは、共刺激ＣＤ２８ポリペプチド配列を含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲは、任意の本明細書記載の共刺激ドメインの配列と、少なくとも５０％の配列同一性を示すアミノ酸配列を有する共刺激ドメインを含む。一部の実施態様において、この共刺激ドメインは、任意の本明細書記載の共刺激ドメインの配列と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を示すアミノ酸配列を含む。

【0119】

膜貫通ドメイン（ＴＭＤ）
一般に、本明細書に開示されたＣＡＲポリペプチドに適した膜貫通ドメイン（膜貫通領域とも称される）は、当該技術分野において公知のＴＭＤのいずれか一つであることができる。理論に結びつけられるものではないが、ＴＭＤは、細胞膜を横断し、ＣＡＲを細胞表面に繋留し、且つＥＣＤを細胞内シグナル伝達ドメインに接続し、その結果細胞表面でのＣＡＲの発現に影響を及ぼすと考えられる。好適なＴＭＤの例は、ＣＤ２８ ＴＭＤ、ＣＤ８ ＴＭＤ、ＣＤ４ ＴＭＤ、ＣＤ３ ＴＭＤ、ＣＴＬＡ－４ ＴＭＤ、ＯＸ４０ ＴＭＤ、４－１ＢＢ ＴＭＤ、ＣＤ２ ＴＭＤ、及びＰＤ－１ ＴＭＤを含むが、これらに限定されるものではない。追加のＴＭＤの例は、ＣＤ３Ｄ、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ８ａ、ＣＤ８ｂ、ＣＤ１６、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８４、ＣＤ８６、ＣＤ９５、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１６６、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７２（ＢＴＬＡ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ３００、ＣＤ３５７（ＧＩＴＲ）、Ａ２ａＲ、ＩＣＡＭ－１、２Ｂ４、ＢＴＬＡ、ＤＡＰ１０、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、Ｆｙｎ、ＧＡＬ９、ＩＬ７、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＫＩＲ、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＬＡＧ－３、Ｌｃｋ、ＬＡＴ、ＬＰＡ５、ＬＲＰ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＴＣＨ２、ＮＯＴＣＨ３、ＮＯＴＣＨ４、ＰＴＣＨ２、ＲＯＲ２、Ｒｙｋ、ＳＬＰ－７６、ＳＩＲＰα、ｐＴα、Ｔ細胞受容体ポリペプチド（例えば、ＴＣＲα及びＴＣＲβ）、ＴＩＭ３、ＴＲＩＭ、及びＺＡＰ７０由来のＴＭＤを含む。従って一部の実施態様において、ＴＭＤは、ＣＤ２８ ＴＭＤ、ＣＤ８ ＴＭＤ、ＣＤ４ ＴＭＤ、ＣＤ３ ＴＭＤ、ＣＴＬＡ４ ＴＭＤ、ＯＸ４０ ＴＭＤ、４－１ＢＢ ＴＭＤ、ＣＤ２ ＴＭＤ、及びＰＤ－１ ＴＭＤに由来する。一部の実施態様において、ＴＭＤは、ＣＤ２８ ＴＭＤ、ＣＤ４ ＴＭＤ、ＣＤ８ ＴＭＤ、ＣＤ３ ＴＭＤ、ＣＴＬＡ４ ＴＭＤ、ＯＸ４０ ＴＭＤ、４－１ＢＢ ＴＭＤ、ＣＤ２ ＴＭＤ、及びＰＤ－１ ＴＭＤを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲは、ＣＤ８由来のＴＭＤを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲポリペプチドは、ＣＤ８ ＴＭＤを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲは、ＣＤ２８由来のＴＭＤを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲは、ＣＤ２８ ＴＭＤを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲは、ＣＤ４由来のＴＭＤを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲは、ＣＤ４ ＴＭＤを含む。

【0120】

本明細書記載のようにＣＡＲ分子の例は、互いに隣接するヒンジドメイン及びＴＭＤドメインを含む。様々なＣＡＲ分子に関する例証的ヒンジ／膜貫通（Ｈ／ＴＭ又はヒンジ／ＴＭ）ドメインについての配列が、本明細書に開示されている。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲ分子は、本明細書記載の任意のＴＭＤ又はヒンジ－ＴＭＤに対し、少なくとも５０％の配列同一性を示すアミノ酸配列を有するＨ／ＴＭドメインを含む。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲ分子は、本明細書記載の任意のＴＭＤ又はヒンジ－ＴＭＤに対し、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を示すアミノ酸配列を有するＨ／ＴＭドメインを含む。

【0121】

細胞外スペーサー
本明細書に開示されたＣＡＲは更に、ＥＣＤと任意のヒンジドメインの間に配置されている１又は複数の介在アミノ酸残基を含む任意の細胞外スペーサードメインを含んでよい。一部の実施態様において、細胞外スペーサードメインは、ＥＣＤの下流及び任意のヒンジドメインの上流に機能的に連結される。原則として、細胞外スペーサーの長さ及び／又はアミノ酸組成に関する特別な制限は存在しない。一部の実施態様において、約１～１００個のアミノ酸残基（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個などのアミノ酸残基）を含むいずれか任意の単鎖ペプチドは、細胞外スペーサーとして使用され得る。一部の実施態様において、この細胞外スペーサーは、約５～５０、約１０～６０、約２０～７０、約３０～８０、約４０～９０、約５０～１００、約６０～８０、約７０～１００、約３０～６０、約２０～８０、約３０～９０個のアミノ酸残基を含む。一部の実施態様において、この細胞外スペーサーは、約１～１０、約５～１５、約１０～２０、約１５～２５、約２０～４０、約３０～５０、約４０～６０、約５０～７０個のアミノ酸残基を含む。一部の実施態様において、この細胞外スペーサーは、約４０～７０、約５０～８０、約６０～８０、約７０～９０、又は約８０～１００個のアミノ酸残基を含む。一部の実施態様において、この細胞外スペーサーは、約１～１０、約５～１５、約１０～２０、約１５～２５個のアミノ酸残基を含む。一部の実施態様において、細胞外スペーサーの長さ及びアミノ酸組成は、ＣＡＲの所望の活性を達成するために、ＥＣＤ及び任意のヒンジドメインの互いへの配向及び／又は近接を変動するように、最適化され得る。一部の実施態様において、ＥＣＤ及び任意のヒンジドメインの互いへの配向及び／又は近接は、ＣＡＲの有効性を増強又は減少するための「チューニング」ツール又は効果として変動及び／又は最適化され得る。一部の実施態様において、ＥＣＤ及び最適ヒンジドメインの間の互いへの配向及び／又は近接は、ＣＡＲの完全機能型及び／又は部分機能型を生じるように、変動及び／又は最適化され得る。一部の実施態様において、この細胞外スペーサードメインは、ＩｇＧ４ヒンジドメイン及びＩｇＧ４ ＣＨ２－ＣＨ３ドメインに対応するアミノ酸配列を含む。追加の例証的細胞外スペーサードメインは、免疫グロブリンヒンジ領域（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＤ）、免疫グロブリンＦｃドメインの全て又は部分（例えば、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、又はそれらの組合せ）、ＩＩ型Ｃ－レクチンのストーク領域（Ｃ－型レクチンドメインと膜貫通ドメインの間に配置された細胞外ドメイン）に由来するか、又はこれを含む。ＩＩ型Ｃ－レクチンは、例えば、ＣＤ２３、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、及びＮＫＧ２Ｄを含む。また更なる実施態様において、この細胞外スペーサードメインは、ｔｏｌｌ－様受容体（ＴＬＲ）膜近傍ドメインに由来するか又はこれを含んでよい。ＴＬＲ膜近傍ドメインは、ＴＬＲのロイシンリッチ反復配列（ＬＲＲ）と膜貫通ドメインの間に存在する、酸性アミノ酸を含む。いくつかの実施態様において、ＴＬＲ膜近傍ドメインは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、又はＴＬＲ９膜近傍ドメインである。

【0122】

当業者は、本開示のＣＡＲポリペプチドの完全なアミノ酸配列は、逆翻訳された遺伝子を構築するために使用することができることを理解することができる。例えば、所与のＣＡＲをコードしているヌクレオチド配列を含むＤＮＡオリゴマーが合成されることができる。例えば、所望のＣＡＲ又は抗体の一部をコードしているいくつかの小型オリゴヌクレオチドが合成されることができ、その後ライゲーションされる。個別のオリゴヌクレオチドは典型的には、相補的集成体のために、５’又は３’オーバーハングを有する。

【0123】

組換え分子生物学的技術により改変された核酸分子の発現を介して所望のＣＡＲを作製することに加え、本開示に従う対象ＣＡＲは、化学的に合成されることができる。化学的に合成されるポリペプチドは、当業者により慣習的に作製される。

【0124】

一旦集成されると（合成、組換え法、位置指定変異誘発又は他の好適な技術により）、本明細書に開示されたＣＡＲをコードしているＤＮＡ配列は、発現ベクターに挿入されるか、又は所望の形質転換された宿主におけるＣＡＲの発現に適した発現制御配列に機能的に連結されることができる。適切な集成体は、ヌクレオチドシークエンシング、制限酵素地図作成、及び好適な宿主における生物活性のあるポリペプチドの発現により確認することができる。当該技術分野において公知であるように、宿主においてトランスフェクションされた遺伝子の高い発現レベルを得るために、その遺伝子が、選択された発現宿主において機能する転写及び翻訳発現制御配列に、機能的に連結されることを確実にするべきである。

【0125】

細胞内シグナル伝達ドメイン
本明細書に開示されたＣＡＲは、標的抗原へ結合するＥＣＤからのシグナリングを伝達し、且つ細胞活性化を誘導する、細胞内シグナル伝達ドメインを含んでよい。

【0126】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）内の、細胞内シグナル伝達ドメイン（別名、サイトゾルシグナル伝達ドメイン）は一般に、細胞外ドメインを対応するリガンド又は抗原へ結合した後、活性化シグナルをＣＡＲ分子を発現する細胞へ伝達する、サイトゾルドメインを指す。場合によっては、細胞内シグナル伝達ドメインは、刺激分子由来の機能性シグナル伝達ドメインを含む。慣習的な細胞内シグナル伝達ドメインは、ほぼ常に、ＣＤ３ゼータ、Ｔ細胞活性を誘起するプロトタイプの「マスタースイッチ」（Ｉｒｖｉｎｇ及びＷｅｉｓｓ、Ｃｅｌｌ １９９１；６４：８９１－９０１；Ｌｅｔｏｕｒｎｅｕｒ及びＫｌａｕｓｎｅｒ、Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９２；２５５：７９－８２）、並びに効能及び持続性を増強する様々な任意の共刺激ドメインを含む。

【0127】

一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲは、近位シグナル伝達分子からの又はこれに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを有する。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を伴う細胞内シグナル伝達ドメインを有する。一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を伴わない細胞内シグナル伝達ドメインを有する。例証的近位シグナル伝達分子は、例えば、ＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）、ＣＤ３－イプシロン、ＤＡＰ１２、ＺＡＰ７０、ＰＬＣＧ１、ＰＫＣ、ＩＴＫ、ＮＣＫ、ＶＡＶ１、ＧＲＢ２、ＧＡＤＳ、ＳＯＳ１、ＡＤＡＰ、ＳＹＫ、ＬＹＮ、ＰＩ３Ｋ、ＢＬＮＫ、又はそれらの生物活性のある断片、変異体、もしくはバリアントを含む。

【0128】

Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子に結合したペプチドとしての抗原の断片を認識することに関与している、Ｔ細胞、又はＴリンパ球の表面上に認められるタンパク質複合体である。ＴＣＲと抗原ペプチドの間の結合は、親和性が比較的低く、且つ変性している（ｄｅｇｅｎｅｒａｔｅ）。このＴＣＲは、２種の異なるタンパク質鎖で構成される（すなわち、ヘテロ二量体として）。ヒトにおいて、Ｔ細胞の９５％においては、ＴＣＲは、アルファ（α）鎖及びベータ（β）鎖（各々、ＴＲＡ及びＴＲＢによりコードされる）からなるのに対し、Ｔ細胞の５％においては、ＴＣＲは、ガンマ及びデルタ（γ／δ）鎖（各々、ＴＲＧ及びＴＲＤによりコードされる）からなる。これらの鎖内には、それにＴＣＲが結合する抗原を決定する相補性決定領域（ＣＤＲ）がある。抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、病原体を消化し、且つそれらの断片を主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子に提示する。このＭＨＣ／抗原複合体は、ＴＣＲへ結合する一方で、他の共刺激分子（例えばＣＤ２８）が活性化され、Ｔ細胞の活性化、増殖、分化、アポトーシス、又はサイトカイン放出に繋がる。しかしＭＨＣ／抗原複合体は、ＴＣＲとの相互作用が可能な分子のみではない。脂質などの非－ペプチド抗原は、ＣＤ１の５種のアイソフォームのいくつかを介して、ＴＣＲと相互作用することができ、並びにいくつかの研究は、ＭＨＣ様分子ＭＲ１に結合した代謝中間体へのＴＣＲ結合を説明している。

【0129】

Ｔ細胞機能の刺激は、ＴＣＲの、ＭＨＣクラスＩ又はＩＩ分子（ＣＤ８ Ｔ細胞についてＭＨＣ１及びＣＤ４ Ｔ細胞についてＭＨＣ ＩＩ）により提示される短いペプチドとの相互作用時に開始されてよい。しかし、ＴＣＲヘテロ二量体それ自身は、Ｔ細胞活性化を開始するために下流経路を活性化することは不可能である。ＴＣＲシグナル伝達の開始は、ヘルパーＴ細胞のためのＣＤ４及び細胞傷害性Ｔ細胞のためのＣＤ８などの、共受容体を必要とする。これらの共受容体は、それら各々ＭＨＣ分子に結合し、且つＴ細胞及び抗原提示細胞の相互作用を安定化する、細胞接着分子として作用する。

【0130】

ＴＣＲはまた、タンパク質のＣＤ３ファミリー（ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、及びＣＤ３γ）並びにＴＣＲゼータ（ζ）鎖に非常に近接して配置される。一旦ＴＣＲが、ペプチド－ＭＨＣ複合体と適切に結合されたならば、会合されたＣＤ３鎖内にコンホメーション変化が誘導され、このことは、ＣＡＲ分子によるシグナル伝達同様、近位シグナル伝達分子によるそれらのリン酸化及びシグナル伝達に繋がる。

【0131】

先に説明したように、本開示のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、抗原－提示細胞上のＭＨＣ分子により提示された標的抗原に応答してのＴＣＲ（未変性又は組換えのいずれか）を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞などの免疫細胞）の活性化を増強することが可能である。原則として、本明細書記載のＬＰ－７６ポリペプチドの増強機能に関する好適なＴＣＲ分子に関する特別な制限は存在しない。非限定的実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、例えば抗原－提示細胞（ＡＰＣ）により提示される標的抗原に応答してＴＣＲ－発現する細胞の活性化を増強することが可能である。一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６ポリペプチド、例えば本明細書記載の膜結合型ＳＬＰ－７６ポリペプチドは、低密度で標的抗原に応答してＴＣＲ－発現する細胞を活性化するか又は活性化を増強することが可能である。一部の実施態様において、ＴＣＲ－発現する細胞の活性化は、細胞の増殖、分化、サイトカイン生成及び／又は細胞傷害性を増強し得る。例えば養子細胞療法（ＡＣＴ）において、患者の白血球細胞は、ロイコフェレーシスと称されるプロセスにおいて収集される。最も癌と闘う効能のある特異的Ｔ細胞の単離には、これらの細胞のインビトロ培養が続く。この大きく増殖されたＴ細胞集団は次に、癌に対して働くために、その患者へ再注入されてよい。一部の実施態様において、標的抗原が、抗原－提示細胞上に低密度で発現された場合であっても、ＳＬＰ－７６ポリペプチド、例えば本明細書記載の膜結合型ＳＬＰ－７６ポリペプチドは、提示された標的抗原（例えば腫瘍抗原）に応答して、ＴＣＲ－発現する細胞を、活性化するか又は活性化及び／もしくは増殖を増強することが可能であり得る。従って本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドは、標的抗原（例えば腫瘍抗原）に対する特異性及び／又は効能を伴うＴＣＲ－発現する細胞の増殖及び／又は単離を選択的に増強するために使用されてよい。

【0132】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の変異
複数の変異が、本開示のＣＡＲ又はＴＣＲポリペプチドへ導入され得る。変異は、少なくとも、置換、欠失、挿入、又は他の当該技術分野において公知の方法を含む。これらの変異の目的は、例えば、ＣＡＲ又はＴＣＲポリペプチドの効能を増強するため、ＣＡＲ又はＴＣＲポリペプチドの安定性（例えば半減期）を増強するため、ＣＡＲ又はＴＣＲポリペプチドの発現を増強するため、ＣＡＲ又はＴＣＲポリペプチドの溶解度を増強し及び／又は凝集を減少するため、発現時のＣＡＲ又はＴＣＲポリペプチドの修飾を操作するため、ＣＡＲ又はＴＣＲポリペプチドのその結合パートナー（複数可）への結合を操作するため、ＣＡＲ又はＴＣＲポリペプチドの精製を増強するため、ＣＡＲ又はＴＣＲポリペプチドのユビキチン化及び／もしくは分解を減少するためなどを含む。

【0133】

核酸分子
一局面において、例えば、宿主細胞又はエクスビボ細胞－非含有発現システムにおけるＳＬＰ－７６ポリペプチド、ＣＡＲポリペプチド、又はＴＣＲポリペプチドのインビボ発現を可能にする制御配列などの、異種核酸配列に機能的に連結されたこれらの核酸分子を含む発現カセット及び発現ベクターを含む、本開示のＳＬＰ－７６ポリペプチド、ＣＡＲポリペプチド、又はＴＣＲポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列を含む、様々な核酸分子が、本明細書に提供される。

【0134】

本開示の核酸分子は、任意の長さの核酸分子であることができ、これは一般に約０．５Ｋｂ～約５０Ｋｂ、例えば、約０．５Ｋｂ～約２０Ｋｂ、約１Ｋｂ～約１５Ｋｂ、約２Ｋｂ～約１０Ｋｂ、又は約５Ｋｂ～約２５Ｋｂ、例えば約１０Ｋｂ～１５Ｋｂ、約１５Ｋｂ～約２０Ｋｂ、約５Ｋｂ～約２０Ｋｂ、約５Ｋｂ～約１０Ｋｂ、又は約１０Ｋｂ～約２５Ｋｂの核酸分子を含む。一部の実施態様において、本開示の核酸分子は、約１．５Ｋｂ～約５０Ｋｂ、約５Ｋｂ～約４０Ｋｂ、約５Ｋｂ～約３０Ｋｂ、約５Ｋｂ～約２０Ｋｂ、又は約１０Ｋｂ～約５０Ｋｂ、例えば約１５Ｋｂ～３０Ｋｂ、約２０Ｋｂ～約５０Ｋｂ、約２０Ｋｂ～約４０Ｋｂ、約５Ｋｂ～約２５Ｋｂ、又は約３０Ｋｂ～約５０Ｋｂである。

【0135】

一部の実施態様において、この組換え核酸は、ＳＬＰ－７６ポリペプチド、ＣＡＲポリペプチド、又はＴＣＲポリペプチドをコードしている核酸配列を含む。

【0136】

一部の実施態様において、組成物は、各々、組合せを形成するよう、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチド及び本明細書記載のＣＡＲ又はＴＣＲポリペプチドをコードしている核酸配列を含む、少なくとも２種の組換え核酸を有する。一部の実施態様において、これらの少なくとも２種の組換え核酸は、一緒にコンジュゲートされる。一部の実施態様において、これらの少なくとも２種の組換え核酸は、組換え核酸の単独鎖内にある。

【0137】

一部の実施態様において、この組換え核酸は、配列番号：１、７、１４、１６、１８、１９、４０、５９又は６０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対し、少なくとも５０％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードしている。一部の実施態様において、この組換え核酸は、配列番号：１、７、１４、１６、１８、１９、４０、５９又は６０からなる群から選択されるアミノ酸配列に対し、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードしている。一部の実施態様において、この組換え核酸は、配列番号：２０、２６、３３、３５、３７、３８、４２、６１及び６２からなる群から選択される核酸配列に対し、少なくとも５０％の配列同一性を有する核酸配列を含む。一部の実施態様において、この組換え核酸は、配列番号：２０、２６、３３、３５、３７、３８、４２、６１及び６２からなる群から選択される核酸配列に対し、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する核酸配列を含む。

【0138】

一部の実施態様において、この組換え核酸分子は、異種核酸配列に機能的に連結される。

【0139】

一部の実施態様において、この組換え核酸分子は更に、発現カセット又はベクターとして規定される。発現カセットは一般に、コード配列、並びにレシピエント細胞、インビボ及び／又はエクスビボにおいて、このコード配列の適切な転写及び／又は翻訳を指示するのに十分な制御情報を含む遺伝物質の構築体を含むことが、理解される。一般に発現カセットは、所望の宿主細胞及び／又は個体を標的化するためのベクターに挿入されてよい。従って一部の実施態様において、本開示の発現カセットは、本明細書に開示されたＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、又はＴＣＲポリペプチドのためのコード配列を含み、これは、プロモーター、及び任意にコード配列の転写又は翻訳に影響を及ぼすいずれか他の配列もしくは他の核酸配列の組合せなどの発現制御エレメントに、機能的に連結される。

【0140】

一部の実施態様において、このヌクレオチド配列は、発現ベクターに組み込まれている。当業者により、用語「ベクター」は一般に、宿主細胞間の導入のために設計された組換えポリヌクレオチド構築体を指すこと、並びに例えば異種ＤＮＡの宿主細胞への導入などの、形質転換の目的のために使用されてよいことが理解され得る。従って一部の実施態様において、このベクターは、挿入されたセグメントの複製をもたらすように、それに別のＤＮＡセグメントが挿入されてよい、プラスミド、ファージ、又はコスミドなどの、レプリコンであることができる。一部の実施態様において、この発現ベクターは、組込み型ベクターであることができる。

【0141】

一部の実施態様において、この発現ベクターは、ウイルスベクターであることができる。当業者に理解され得るように、用語「ウイルスベクター」は、一般に核酸分子の導入もしくは細胞のゲノムへの組込みを促進するウイルス－由来の核酸エレメントを含む核酸分子（例えば、伝達性プラスミド）、又は核酸導入を媒介するウイルス粒子のいずれかを指すように、広範に使用される。ウイルス粒子は一般に、核酸（複数可）に加え、様々なウイルス成分、及び時には宿主細胞成分も含む。用語ウイルスベクターは、核酸の細胞への導入を可能にするウイルスもしくはウイルス粒子、又は導入された核酸それ自身のいずれかを指してよい。ウイルスベクター及び伝達性プラスミドは、ウイルスから主に誘導される構造性及び／又は機能性遺伝因子を含む。一部の実施態様において、ベクターは、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、バキュロウイルス、又はレトロウイルス由来のベクターである。用語「レトロウイルスベクター」は、レトロウイルスから主に誘導される、構造性及び機能性遺伝因子、又はそれらの一部を含む、ウイルスベクター又はプラスミドを指す。用語「レンチウイルスベクター」は、レトロウイルスの属である、レンチウイルスから主に誘導される、構造性及び機能性遺伝因子、又はそれらの一部を含む、ウイルスベクター又はプラスミドを指す。

【0142】

一部の実施態様において、本明細書に開示されたＣＡＲ、ＴＣＲ、又は別の受容体ポリペプチドに対し、少なくとも約５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を伴う、ポリペプチドをコードしている核酸分子が、本明細書に提供される。

【0143】

ＣＡＲポリペプチドをコードしている核酸配列は、関心対象の宿主細胞における発現のために最適化され得る。例えば、この配列のＧ－Ｃ含量は、宿主細胞において発現された既知の遺伝子を参照し計算された、所与の細胞宿主にとっての平均のレベルに調節され得る。コドン使用頻度の最適化の方法は、当該技術分野において公知である。本明細書に開示されたキメラ受容体のコード配列内のコドン使用頻度は、宿主細胞における発現を増強するように最適化されることができ、その結果コード配列内のコドンの約１％、約５％、約１０％、約２５％、約５０％、約７５％、又は最大１００％が、特定の宿主細胞における発現のために最適化される。

【0144】

提供される核酸分子は、天然の配列、又は天然の配列とは異なるが、遺伝暗号の縮重のために、同じポリペプチド、例えばＥＣＤの抗体をコードしている配列を含むことができる。これらの核酸分子は、ＲＮＡ又はＤＮＡ（例えば、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、もしくはホスホロアミダイト－ベースの合成により精製されたものなどの合成ＤＮＡ）、又はこの種の核酸内のヌクレオチドの組合せもしくは修飾からなる。加えて、これらの核酸分子は、二本鎖又は一本鎖（例えば、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれか）であることができる。

【0145】

これらの核酸分子は、ポリペプチド（例えば、ＥＣＤの抗体）をコードしている配列に限定されず；コード配列（例えば、キメラ受容体のコード配列）の上流又は下流に位置する非コード配列の一部又は全てもまた、含まれ得る。分子生物学分野の業者は、核酸分子を単離する慣習的手順を熟知している。それらは、例えば、ゲノムＤＮＡの制限エンドヌクレアーゼによる処理によるか、又はポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）の実施により、作製され得る。この核酸分子がリボ核酸（ＲＮＡ）である事象において、分子は、例えば、インビトロ転写により作製され得る。

【0146】

組換え細胞及び細胞培養物
本開示の核酸分子は、例えばＴ細胞を含む免疫細胞などの、細胞（すなわち宿主細胞）へ導入され、この核酸分子を含む組換え細胞を作製することができる。原則として、本開示の核酸分子を発現するのに適した細胞に関して、特別な制限は存在しない。従って本開示の一部の実施態様は、以下を含む、組換え細胞を作製する方法に関連している：（ａ）タンパク質発現が可能な宿主細胞を提供すること；並びに、本開示の組換え核酸で、提供された宿主細胞を形質導入し、組換え細胞を作製すること。本開示の核酸分子の細胞への導入は、例えば、ウイルス感染、トランスフェクション、コンジュゲーション、プロトプラスト融合、リポフェクション、電気穿孔法、ヌクレオフェクション、リン酸カルシウム沈殿法、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）－媒介型トランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介型トランスフェクション、リポソーム－媒介型トランスフェクション、微粒子銃技術、リン酸カルシウム沈殿法、ダイレクトマイクロインジェクション、ナノ粒子－媒介型核酸送達及び同類のものなどの、当業者に公知の方法により、達成することができる。

【0147】

一局面において、本開示は、ＳＬＰ－７６ポリペプチドを過剰発現するか及び／又は上昇したレベルで含むように修飾された単離された組換え細胞を有する組成物を提供する。一部の実施態様において、この組換え細胞は、低密度で発現された標的抗原により活性化されることが可能である。一部の実施態様において、この組換え細胞は、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドを発現する細胞である。一部の実施態様において、この組換え細胞は、本明細書記載のＳＬＰ－７６ポリペプチドを発現し、並びに先のセクションに記載されたＣＡＲ又はＴＣＲを更に発現する細胞である。例えば、ＳＬＰ－７６構築体は、ＣＡＲ又はＴＣＲの発現を伴う又は伴わない細胞へ導入され、ＳＬＰ－７６を過剰発現する（又はＣＡＲもしくはＴＣＲを更に過剰発現する）組換え細胞を作製してよく、その結果、近位シグナル伝達を促進することによるか及び／又はＣＡＲもしくはＴＣＲの細胞を活性化する能力を増強することにより、細胞活性化を増強する。一部の実施態様において、この組換え細胞は、ＣＡＲ又はＴＣＲを発現する細胞である。一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６構築体は、ＳＬＰ－７６を過剰発現するために、ＣＡＲ又はＴＣＲを発現する細胞へ導入されてよい。一部の実施態様において、この組換え細胞は、ＣＡＲ又はＴＣＲを発現しない細胞である。一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６構築体は、細胞活性化を増強するために、ＣＡＲ又はＴＣＲを発現しない細胞へ導入されてよい。非限定的実施態様において、ＳＬＰ－７６構築体は、細胞における近位シグナル伝達を促進することにより、ＣＡＲ又はＴＣＲを発現しない細胞の活性化を増強することができる。一部の実施態様において、ＣＡＲ又はＴＣＲを発現しない細胞は、ＮＫ細胞である。一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６構築体は、ＣＡＲ又はＴＣＲ構築体と組合せて（逐次又は一緒にのいずれか）、ＣＡＲ又はＴＣＲを発現しない細胞へ導入され、ＳＬＰ－７６及びＣＡＲ又はＴＣＲを過剰発現する組換え細胞を作製してよく、その結果ＣＡＲ又はＴＣＲの細胞を活性化する能力を増強する。非限定的実施態様において、ＳＬＰ－７６は、過剰発現のために、未変性宿主細胞又は組換え細胞へ導入されてよい。一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６は、未変性又は内因性ＴＣＲを発現する、未変性宿主細胞又は組換え細胞へ導入されてよい。一部の実施態様において、過剰発現されたＳＬＰ－７６は、未変性又は内因性ＴＣＲを介して、細胞活性化を増強することができる。一部の実施態様において、ＳＬＰ－７６は、組換えＴＣＲ又はＣＡＲを発現する組換え細胞へ導入されてよい。一部の実施態様において、過剰発現されたＳＬＰ－７６は、組換えＴＣＲ又はＣＡＲを介して、細胞活性化を増強することができる。

【0148】

従って一部の実施態様において、この核酸分子は、当該技術分野において公知のウイルス又は非ウイルス送達ビヒクルにより、宿主細胞へ導入され、遺伝子操作された細胞を作製することができる。例えば、この核酸分子は、宿主ゲノムへ安定して組込まれることができるか、又はエピソームとして複製されるか、又は安定したもしくは一過性の発現のための小環状発現ベクターとして組換え宿主細胞に存在することができる。従って本明細書に開示された一部の実施態様において、この核酸分子は、エピソーム単位として、組換え宿主細胞において維持され且つ複製される。一部の実施態様において、この核酸分子は、組換え細胞のゲノムへ安定して組込まれる。安定した組込みは、古典的ランダムゲノム組換え技術、又はより正確なゲノム編集技術を用いて、例えばジンク－フィンガータンパク質（ＺＮＦ）、ガイドＲＮＡ指定したＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ＤＮＡ－ガイドしたエンドヌクレアーゼゲノム編集ＮｇＡｇｏ（ナトロノバクテリウム・グレゴリー・アルゴノート）、又はＴＡＬＥＮゲノム編集（転写アクチベーター－様エフェクターヌクレアーゼ）の使用などにより、完了され得る。

【0149】

これらの核酸分子は、ウイルスキャプシドもしくは脂質ナノ粒子内に封入されることができるか、又はウイルスもしくは非ウイルスの送達手段、及び電気穿孔法などの当該技術分野において公知の方法により、送達されることができる。例えば、核酸の細胞への導入は、ウイルスによる形質導入により、達成されてよい。非限定的例において、バキュロウイルス系ウイルス又はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、ウイルス形質導入により、核酸を標的細胞へ送達するよう、遺伝子操作されることができる。いくつかのＡＡＶセロタイプが説明されており、且つ公知のセロタイプは全て、複数の多様な組織型からの細胞を感染することができる。ＡＡＶは、毒性の証拠がなく、インビボにおいて広範な種及び組織を形質導入することが可能であり、これは比較的穏やかな先天性又は養子免疫応答を生じる。

【0150】

レンチウイルス－由来のベクターシステムも、ウイルス形質導入による、核酸送達及び遺伝子治療に有用である。レンチウイルスベクターは、遺伝子－送達ビヒクルとしてのいくつかの魅力的特性を提供し、これは：（ｉ）宿主ゲノムへの安定したベクター組込みによる持続した遺伝子送達；（ｉｉ）分裂細胞及び非分裂細胞の両方へ感染する能力；（ｉｉｉ）重要な遺伝子療法及び細胞療法の標的細胞型を含む、広範な組織指向性；（ｉｖ）ベクター形質導入後の、ウイルスタンパク質の非発現；（ｖ）多シストロン性配列又はイントロン含有配列などの、複雑な遺伝因子を送達する能力；（ｖｉ）潜在的により安全な組込み部位のプロファイル；並びに、（ｖｉｉ）ベクターの操作及び作製に関する比較的容易なシステム：を含む。

【0151】

一部の実施態様において、宿主細胞は、例えば、ウイルスベクター、又は宿主細胞のゲノムの一部と相同である核酸配列を含む相同組換えのためのベクターなどであることができるか、或いは関心対象のＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチドの発現のための、発現ベクターであることができる、本願のベクター構築体により、遺伝子操作され得る（例えば、形質導入される又は形質転換される又はトランスフェクションされる）。

【0152】

一部の実施態様において、この組換え細胞は、真核細胞である。一部の実施態様において、この細胞は、インビボにおいてである。一部の実施態様において、この細胞は、エクスビボにおいてである。一部の実施態様において、この細胞は、インビトロにおいてである。一部の実施態様において、この組換え細胞は、動物細胞である。一部の実施態様において、この動物細胞は、哺乳動物細胞である。一部の実施態様において、この動物細胞は、マウス細胞である。一部の実施態様において、この動物細胞は、ヒト細胞である。一部の実施態様において、この細胞は、非－ヒト霊長類細胞である。一部の実施態様において、この組換え細胞は、免疫系細胞、例えば、Ｂ細胞、単球、ＮＫ細胞、腫瘍－浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、好塩基球、好酸球、好中球、樹状細胞、マクロファージ、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、ヘルパーＴ細胞（Ｔ_Ｈ）、細胞傷害性Ｔ細胞（Ｔ_ＣＴＬ）、メモリーＴ細胞、ガンマデルタ（γδ）Ｔ細胞、別のＴ細胞、幹細胞（例えば造血幹細胞）、幹細胞前駆体（例えば造血幹細胞前駆体）、誘導性多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）－由来のＮＫ細胞、又は誘導性多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）－由来のＴ細胞などである。

【0153】

一部の実施態様において、この免疫系細胞は、リンパ球である。一部の実施態様において、このリンパ球は、Ｔリンパ球である。一部の実施態様において、このリンパ球は、Ｔリンパ球前駆体である。一部の実施態様において、このＴリンパ球は、ＣＤ４＋ Ｔ細胞又はＣＤ８＋ Ｔ細胞である。一部の実施態様において、このＴリンパ球は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球細胞である。本明細書に開示された組成物及び方法に適したＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球細胞の非限定的例は、ナイーブＣＤ８＋ Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋ Ｔ細胞、エフェクターＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ８＋ステムメモリーＴ細胞、及びバルクＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む。一部の実施態様において、このＴリンパ球は、ＣＤ４＋ヘルパーＴリンパ球細胞である。好適なＣＤ４＋ヘルパーＴリンパ球細胞は、ナイーブＣＤ４＋ Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ４＋ Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋ Ｔ細胞、エフェクターＣＤ４＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋ステムメモリーＴ細胞、及びバルクＣＤ４＋ Ｔ細胞を含むが、これらに限定されるものではない。

【0154】

一部の実施態様において、本明細書記載の細胞は、非－免疫系細胞である。例えば、本明細書記載のＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、又はＴＣＲ分子は、対応する細胞外リガンド（複数可）／抗原（複数可）を認識する際に、そのような分子を発現する細胞の活性を調節する（例えば活性化する）方法を提供する。この意味において、好適な宿主細胞に関する特別な制限は存在しない。

【0155】

本明細書記載の細胞は、天然もしくは人工の細胞のいずれかの型及び／又は任意の起源であってよい。原則として、研究者が活性化について調べたく思ういずれかの型の細胞は、本明細書記載のＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチドの発現について使用されてよい。本明細書記載の疾患の予防又は治療のために、疾患と相関関係がある標的細胞に対し、細胞傷害性又は他の阻害性の機能（例えば、サイトカインを生成及び分泌する機能）を有する細胞が使用されてよい。例えば、Ｔ細胞などの免疫細胞は、これらのポリペプチドを発現するために使用されてよく、その理由は、これらの細胞は、腫瘍抗原を発現する腫瘍細胞に対し直接の細胞傷害能を有し、並びに／又はこれらの細胞は、標的細胞（例えば腫瘍細胞）を阻害又は死滅する少なくとも１種のサイトカインを生成するからである。

【0156】

先に概説したように、本開示の一部の実施態様は、以下を含む、組換え細胞を作製する様々な方法に関連している：（ａ）タンパク質発現が可能な宿主細胞を提供すること；並びに、本開示の組換え核酸で、提供された宿主細胞を形質導入し、組換え細胞を作製すること。組換え細胞の作製に関する開示された方法の実施態様の非限定的例は更に、１又は複数の以下の特徴を含むことができる。一部の実施態様において、宿主細胞は、対象から得られた試料に対し実施されたロイコフェレーシスにより得られ、並びにこの細胞は、エクスビボにおいて形質導入される。一部の実施態様において、この組換え核酸は、ウイルスキャプシド又は脂質ナノ粒子内に封入される。一部の実施態様において、これらの方法は更に、作製された細胞を単離及び／又は精製することを含む。従って、本明細書に開示された方法により作製されるこれらの組換え細胞もまた、本開示の範囲内である。

【0157】

多種多様な前述の宿主細胞及び種を形質転換する技術は、当該技術分野において公知であり、且つ技術文献及び科学文献において説明されている。例えば、ＤＮＡベクターは、従来の形質転換又はトランスフェクション技術により、真核細胞へ導入されることができる。細胞を形質転換又はトランスフェクションするのに適した方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋらの文献（２０１２、前掲）及び他の標準の分子生物学実験マニュアルにおいて認めることができ、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介型トランスフェクション、トランスフェクション、微量注入、陽イオン脂質－媒介型トランスフェクション、電気穿孔法、形質導入、スクレープローディング（ｓｃｒａｐｅ ｌｏａｄｉｎｇ）、バリスティック導入、ヌクレオポレーション、水力学的ショック、及び感染などがある。一部の実施態様において、この核酸分子は、形質導入手法、電気穿孔手法、又は遺伝子銃手法により、宿主細胞へ形質導入される。従って本明細書に開示された少なくとも１種の組換え細胞を含む細胞培養物も、本願の範囲内である。細胞培養物の作製及び維持に適した方法及びシステムは、当該技術分野において公知である。

【0158】

一部の実施態様において、この組換え細胞は、本明細書に開示されたＳＬＰ－７６ポリペプチドに対し、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する、ＳＬＰ－７６ポリペプチドをコードしている核酸配列を含む核酸分子を含む。一部の実施態様において、この組換え細胞は、配列番号：１、７、１４、１６、１８、１９、４０、５９又は６０のいずれか一つに対し、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を伴うポリペプチドをコードしている核酸分子を含む。一部の実施態様において、この組換え細胞は、配列番号：２０、２６、３３、３５、３７、３８、４２、６１及び６２のいずれか一つに対し、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列を有する核酸分子を含む。

【0159】

関連のある局面において、本開示の一部の実施態様は、本明細書に開示された少なくとも１種の組換え細胞、及び培養培地を含む細胞培養物に関する。一般にこの培養培地は、本明細書記載の細胞培養物にとって好適な培養培地のいずれか１種であることができる。一部の実施態様において、この組換え細胞は、本明細書記載のＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、又はＴＣＲを発現する。従って本明細書に開示された少なくとも１種の組換え細胞を含む細胞培養物もまた、本願の範囲内である。細胞培養物の作製及び維持に適した方法及びシステムは、当該技術分野において公知である。

【0160】

医薬組成物
本開示のＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチド、核酸、組換え細胞、及び／又は細胞培養物は、医薬組成物を含む、組成物へ組み込まれ得る。そのような組成物は一般に、本明細書記載のポリペプチド、核酸、組換え細胞、及び／もしくは細胞培養物、並びに医薬として許容し得る担体を含む。従って一つの局面において、本開示のいくつかの実施態様は、健康状態、例えば増殖性疾患（例えば癌）を、治療、予防、改善、軽減又は発症を遅延するための、医薬組成物に関する。他の例証的健康状態は、例えば、悪性血液疾患、固形腫瘍、自己免疫疾患、炎症、アレルギー性疾患、感染症、老化／加齢などを含む。

【0161】

従って本開示の一局面は、医薬として許容し得る担体及び以下の１又は複数を含む、医薬組成物に関する：（ａ）本開示のＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチド；（ｂ）本開示の核酸分子；並びに／又は、（ｃ）本開示の組換え細胞。一部の実施態様において、本組成物は、（ａ）本開示の組換え核酸、及び（ｂ）医薬として許容し得る担体を含む。一部の実施態様において、この組換え核酸は、ウイルスキャプシド又は脂質ナノ粒子内に封入される。一部の実施態様において、本組成物は、（ａ）本開示の組換え細胞、及び（ｂ）医薬として許容し得る担体を含む。

【0162】

特定の実施態様において、本明細書に開示されたいくつかの実施態様に従う医薬組成物は、それを必要とする個体への投与前に、洗浄され、処理され、混合され、補充されるか、又はそうでなければ改変されることができる、細胞培養物を含む。更に、投与は、変動した投与量、時間間隔、又は反復投与であることができる。

【0163】

本明細書に提供される医薬組成物は、組成物が個体へ投与されるのを可能にする任意の形であることができる。一部の具体的実施態様において、この医薬組成物は、ヒト投与に適している。本明細書において使用される用語「医薬として許容し得る」は、連邦又は州政府の規制機関により承認されるか、或いは米国薬局方もしくは動物における、より特定するとヒトにおける使用のための他の一般に認められた薬局方に収載されることを意味する。この担体は、それと共に医薬組成物が投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、又はビヒクルであることができる。食塩水及び水性デキストロース及びグリセロール溶液も、注射溶液を含む、液体担体として利用されることができる。好適な賦形剤は、デンプン、グルコース、乳糖、ショ糖、ゼラチン、麦芽、米、小麦、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール及び同類のものを含む。好適な医薬担体の例は、Ｅ．Ｗ． Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。一部の実施態様において、医薬組成物は、個体への投与のために、無菌的に製剤化される。一部の実施態様において、個体はヒトである。当業者は、製剤は、投与様式に適していなければならないことを理解することができる。

【0164】

一部の実施態様において、本開示の医薬組成物は、個体への意図された投与経路に適するように、製剤化される。例えば、この医薬組成物は、非経口、腹腔内、経結腸直腸、腹腔内、及び腫瘍内投与に適するように製剤化されてよい。一部の実施態様において、この医薬組成物は、静脈内、経口、腹腔内、気管内、皮下、筋肉内、局所的、又は腫瘍内投与のために製剤化されてよい。

【0165】

組成物の使用
本明細書記載の組成物、例えば、ＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチド、核酸、組換え細胞、細胞培養物、及び／又は医薬組成物は、細胞外シグナル（例えばリガンド／抗原）に応答したシステムとして、様々な状態のために使用することができる。

【0166】

本明細書記載の組成物はまた、ある種のリガンド／抗原に応答して細胞機能を操作するための活性化システムとして使用されてもよい。一部の実施態様において、ＣＡＲ又はＴＣＲ分子のＥＣＤ（複数可）により、特異的リガンド／抗原を又はリガンド／抗原の特異的プロファイルを感知することにより、宿主は、活性化される。そのような活性化は、宿主細胞の正常な生物学的機能を増強もしくは阻害し、及び／又は細胞機能を操作するために外因性シグナル伝達機能を提供することができる。一部の実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６組成物は、ＣＡＲ又はＴＣＲ分子を介して、そのような活性化を増強することができる。

【0167】

本明細書記載の組成物はまた、ある種のリガンド／抗原に応答して細胞の機能を操作するためにも使用されてよい。一部の実施態様において、ＣＡＲ又はＴＣＲ分子のＥＣＤ（複数可）により、特異的リガンド／抗原を感知することにより、宿主は、活性化される。そのような活性化は、そのようなリガンド（複数可）／抗原（複数可）を発現するか、又はある種のリガンド（複数可）／抗原（複数可）により特異的に認識される、標的細胞の機能を変更するために、宿主細胞の機能を増強もしくは阻害することができる。一部の実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６組成物は、ＣＡＲ又はＴＣＲ分子を介して、そのような活性化を増強することができる。例えば、ある種のリガンド（複数可）／抗原（複数可）を発現する癌細胞は、癌細胞の表面上のリガンド（複数可）／抗原（複数可）へ結合するＥＣＤ、又は癌細胞上に発現されたリガンド（複数可）／抗原（複数可）へ特異的に結合する一部のリガンド（複数可）／抗原（複数可）へ結合するＥＣＤのいずれかを介して、本明細書記載のＣＡＲ分子（複数可）又はＣＡＲ分子組合せ（複数可）により認識されてよい。次に活性化された宿主細胞は、癌細胞の機能を操作することができる。例えば、本明細書記載の組成物は、癌細胞を阻害又は死滅するため（例えば、サイトカインを分泌するか又は直接死滅することにより）に、宿主細胞（例えば、Ｔ細胞などの免疫系細胞）を活性化するために使用されてよい。一部の実施態様において、そのような癌細胞は、対象由来の生体試料から得られる。一部の実施態様において、そのような癌細胞は、対象の生物学的環境（例えば、癌微小環境）内にある。一部の実施態様において、標的細胞は、疾患又は障害と相関関係がある。例証的疾患又は障害は、例えば、増殖性疾患（例えば癌）、悪性血液疾患、固形腫瘍、自己免疫疾患、炎症、アレルギー性疾患、感染症、老化／加齢などを含んでよい。

【0168】

製造方法
一局面において、本開示は、本明細書記載の組換え細胞を作製する方法を提供する。本明細書記載の組成物、例えば、ＳＬＰ－７５、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチド又は核酸は、本明細書記載の細胞へ導入されてよい。例えば、ＳＬＰ－７６ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドを含む組成物は、単独で、又は細胞へのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／もしくはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドとの組合せのいずれかで、細胞へ導入されてよい。

【0169】

治療方法
一局面において、本開示は、細胞においてＳＬＰ－７６ポリペプチドを過剰発現することを含む、標的抗原に応答して細胞の活性化を増強する方法を提供する。一部の実施態様において、この細胞は更に、ＴＣＲ及び／又はＣＡＲ分子を含む。

【0170】

別の局面において、本開示は、細胞においてＳＬＰ－７６ポリペプチド及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）ポリペプチド及び／もしくはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ポリペプチドを過剰発現することを含む、標的抗原に応答して細胞の活性化を増強する方法を提供する。

【0171】

別の局面において、本開示は、本明細書記載の組換え細胞、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、発現ベクター、又は他の組成物の医薬として有効量を、対象へ投与することを含む、それを必要とする対象において疾患又は障害を治療する方法を提供する。本明細書記載の治療的組成物、例えば、ＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチド、核酸、組換え細胞、細胞培養物、及び／又は医薬組成物のいずれか一つの投与は、例えば増殖性疾患（例えば癌）、悪性血液疾患、固形腫瘍、自己免疫疾患、炎症、アレルギー性疾患、感染症、老化／加齢などの関連する状態の診断、予防、及び／又は治療において使用することができる。一部の実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチド、核酸、組換え細胞、細胞培養物、及び／又は医薬組成物は、増殖性疾患（例えば、白血病、神経芽細胞腫、又は骨肉腫などの、癌）などの１又は複数の健康状態を有する、有することが疑われる、又は発症する高いリスクがある個体を予防及び／又は治療する方法において使用するための療法及び治療薬に組み込まれることができる。一部の実施態様において、この個体は、臨床医の監督下の患者である。

【0172】

例証的増殖性疾患は、血管新生疾患、転移性疾患、腫瘍原性疾患、新生物疾患及び癌を含むことができるが、これらに限定されるものではない。一部の実施態様において、増殖性疾患は、癌である。一部の実施態様において、癌は、小児癌である。一部の実施態様において、癌は、膵臓癌、結腸癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、中皮腫、乳癌、尿路上皮癌、肝臓癌、頭頸部癌、肉腫、子宮頸癌、胃癌、胃部癌、メラノーマ、ブドウ膜メラノーマ、胆管癌、多発性骨髄腫、白血病、リンパ腫、血液の癌、膀胱癌、神経芽細胞腫、悪性胸膜中皮腫、肉腫、及び膠芽細胞腫である。例証的癌型はまた、以下も含む：急性骨髄性白血病、血液免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、スイート症候群、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫（ナチュラルキラー／Ｔ細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、腸管型Ｔ細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫及び皮膚Ｔ細胞性リンパ腫を含む）、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞非－ホジキンリンパ腫（バーキットリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫などを含む）、ヘアリーセル白血病、ホジキンリンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、粘膜－関連リンパ組織リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、形質細胞骨髄腫、縦隔原発大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、慢性骨髄増殖症候群（慢性骨髄性白血病、原発性骨髄線維症、本態性血小板血症、真正赤血球増加症など）及び慢性リンパ球性白血病。例証的癌型はまた、以下も含む：急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連癌、カポジ肉腫（軟部組織の肉腫）、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、肛門癌、虫垂癌、星膠細胞種、小児脳腫瘍、非定型奇形腫／ラブドイド腫瘍、中枢神経系癌、皮膚癌（例えば基底細胞癌）、胆管癌、膀胱癌、骨癌（ユーイング肉腫、骨肉腫及び悪性線維性組織球腫を含む）、脳腫瘍、乳癌、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、カルチノイド腫瘍、心臓（心）腫瘍、髄芽腫及び他のＣＮＳ胎児性腫瘍、胚細胞腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、子宮頸癌、小児癌、胆管癌、脊索腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄増殖性新生物、結腸直腸癌、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、菌状息肉腫、セザリー症候群、非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、胎児性腫瘍、髄芽腫、子宮内膜癌（子宮癌）、上衣細胞腫、食道癌、鼻腔神経芽細胞腫（頭頸部癌）、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、小児性腺外胚細胞腫瘍、眼癌、眼球内メラノーマ、網膜芽細胞腫、卵管癌、骨肉腫、胆嚢癌、胃部（胃）癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）（軟部組織肉腫）、胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、卵巣胚細胞腫瘍、精巣癌、妊娠性絨毛性疾患、ヘアリーセル白血病、頭頸部癌、心臓腫瘍、小児肝細胞（肝）癌、組織球増殖症、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌（頭頸部癌）、眼球内メラノーマ、島細胞腫、膵臓神経内分泌腫瘍、腎臓（腎細胞）癌、ランゲルハンス細胞組織球増加症、喉頭癌、白血病、口唇及び口腔の癌、肝臓癌、肺癌（例えば、非小細胞、小細胞、胸膜肺芽腫、及び気管気管支腫瘍）、リンパ腫、男性乳癌、骨の悪性線維性組織球腫及び骨肉腫、メラノーマ、眼球内メラノーマ、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性癌、原発不明転移性扁平頸部癌、中部管（Ｍｉｄｌｉｎｅ Ｔｒａｃｔ）癌腫、口腔癌、多発性内分泌腺腫瘍症、多発性骨髄腫／形質細胞新生物、菌状息肉腫（リンパ腫）、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性新生物、骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性新生物、鼻腔及び副鼻腔の癌、鼻咽腔癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、口腔癌、口唇及び口腔の癌並びに口腔咽頭癌、骨肉腫、未分化多形性肉腫、卵巣癌、膵臓癌、膵臓神経内分泌腫瘍（島細胞腫）、乳頭腫症（小児喉頭部）、傍神経節腫、副鼻腔及び鼻腔の癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、クロム親和細胞腫、下垂体腫瘍、形質細胞新生物／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫（肺癌）、妊娠及び乳癌、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、原発性腹膜癌、前立腺癌、直腸癌、再発癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、小児横紋筋肉腫、小児血管腫、軟部組織肉腫、子宮肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟部組織肉腫、扁平上皮癌、原発不明扁平頸部癌、胃（胃部）癌、Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、咽喉癌、鼻咽腔癌、口腔咽頭癌、下咽頭癌、胸腺腫及び胸腺癌腫、甲状腺癌、気管気管支腫瘍、腎盂及び尿管の移行上皮癌、尿管及び腎盂の癌腫、移行上皮癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、膣癌、血管腫瘍、外陰癌、ウイルムス腫瘍、及び他の小児腎臓腫瘍。

【0173】

一部の実施態様において、癌は、多剤耐性癌又は再発癌である。本明細書に開示された組成物及び方法は、非－転移性癌及び転移性癌の両方に適していることが、意図される。従って一部の実施態様において、癌は、非－転移性癌である。一部の別の実施態様において、癌は、転移性癌である。一部の実施態様において、対象へ投与される組成物は、対象における癌の転移を阻害する。一部の実施態様において、投与された組成物は、対象における腫瘍成長を阻害する。

【0174】

従って一局面において、本開示の一部の実施態様は、それを必要とする対象における状態の予防及び／又は治療の方法に関し、ここでこれらの方法は、以下の１又は複数を含有する組成物を対象へ投与することを含む：本開示のＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、又はＴＣＲポリペプチド、本開示の組換え核酸、本開示の組換え細胞、及び／又は本開示の医薬組成物。

【0175】

一部の実施態様において、この投与された組成物は、標的癌細胞の増殖を阻害し、及び／又は対象における癌の腫瘍成長を阻害する。例えばこの標的細胞は、その増殖が減少された場合、その病的又は病原性の挙動が軽減された場合、それが破壊もしくは死滅された場合などに、阻害されてよい。阻害は、測定された病的又は病原性の挙動の少なくとも約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、又は約９５％の軽減を含む。一部の実施態様において、これらの方法は、本明細書に開示された組換え細胞の有効数を個体へ投与することを含み、ここでこの組換え細胞は、その組換え細胞が投与されていない対象における標的細胞の増殖及び／又は標的癌の腫瘍成長と比べ、対象における、標的癌細胞の増殖を阻害するか、及び／又は標的癌の腫瘍成長を阻害する。一部の実施態様において、標的癌細胞は、白血病癌細胞、白血病癌細胞由来の細胞、又は白血病の微小環境の細胞である。一部の実施態様において、標的癌細胞は、神経芽細胞腫細胞、神経芽細胞腫細胞由来の細胞、又は神経芽細胞腫の微小環境の細胞である。一部の実施態様において、標的癌細胞は、骨肉腫細胞、骨肉腫細胞由来の細胞、又は骨肉腫の微小環境の細胞である。

【0176】

本明細書において使用される用語「投与」及び「投与する」は、非限定的に、経口、静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、筋肉内、及び局所的投与、又はそれらの組合せを含む投与経路による、生体活性組成物又は製剤の送達を指す。この用語は、医療専門家による投与及び自己投与を含むが、これらに限定されるものではない。

【0177】

本明細書記載の組成物、例えば、ＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチド、核酸、組換え細胞、細胞培養物、及び／又は医薬組成物の投与は、免疫応答の刺激において使用することができる。一部の実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチド、核酸、組換え細胞、細胞培養物、及び／又は医薬組成物は、化学療法による癌の寛解の誘導後に、又は自家もしくは同種異系の造血幹細胞移植後に、個体に投与される。一部の実施態様において、本明細書記載の組成物は、治療した対象におけるインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、ＴＮＦ－α、及び／又はインターロイキン－２（ＩＬ－２）の生成が、本明細書に開示された治療的組成物の一種が投与されていない対象におけるこれらの分子の生成と比べ増大することを必要とする個体に投与される。

【0178】

本明細書記載の組成物、例えば、ＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチド、核酸、組換え細胞、細胞培養物、及び／又は医薬組成物の有効量は、例えば腫瘍退縮などの意図された目標を基に決定される。例えば存在する癌が治療される場合、投与されるべき本明細書に開示された組成物の量は、その組成物の投与が癌の予防に関する場合よりも、多いことがある。当業者は、この開示を考慮し、投与される組成物の量及び投与の頻度を決定することができるであろう。投与される量はまた、治療の回数及び投与量の両方に従い、治療される個体、個体の状態、及び望まれる防御によっても左右される。この組成物の正確な量はまた、開業医の判断によっても左右され、並びに特に各個人に左右される。投与頻度は、開業医の判断に応じて、１～２日から、２～６時間、６～１０時間、１～２週間まで又はより長い範囲であることができる。

【0179】

一部の実施態様において、投与は、ボーラス注射による。一部の実施態様において、投与は、静脈内注入による。一部の実施態様において、本明細書記載の組換え細胞を含有する組成物は、１日当たり約１００万個細胞／ｋｇ体重から、１日当たり約１億個細胞／ｋｇ体重の用量で、対象へ投与される。一部の実施態様において、本明細書に開示された組換え細胞を含有する組成物は、１日当たり約１０００個細胞／ｋｇから、１億個細胞／ｋｇ体重の用量で投与される。一部の実施態様において、これらの治療薬は、単回投与で投与される。一部の実施態様において、治療薬は、反復投与で投与される（例えば、１週間以上について毎週１回以上）。

【0180】

当業者は、本開示の組成物を個体へ投与する技術を熟知しているであろう。更に、当業者は、個体への投与前に、これらの組成物の調製に必要な技術及び医薬物質を熟知しているであろう。

【0181】

本開示の特定の実施態様において、本開示の組成物は、本明細書記載のＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチド、核酸、組換え細胞、細胞培養物、及び／又は医薬組成物の１又は複数を含む、水性組成物を含む。本開示の水性組成物は、医薬として許容し得る担体又は水性媒体中に、本明細書に開示された組成物の有効量を含む。従って、本開示の「医薬調製品」又は「医薬組成物」は、溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤及び同類のもののいずれか又は全てを含むことができる。医薬活性物質に関するそのような媒体及び物質の使用は、当該技術分野において周知である。任意の常用の媒体又は物質が本明細書に開示された組換え細胞と不適合である限りを除き、医薬組成物の製造におけるその使用が、意図される。補充的活性成分もまた、これらの組成物へ配合されることができる。ヒト投与に関して、調製品は、ＦＤＡ生物製剤評価センターにより要求される、無菌性、発熱原性、全般的安全性、及び純度標準に合致しなければならない。

【0182】

当業者は、生物学的物質は、適切ならば、望ましくない小分子量の分子を除去するために広範に透析され、並びに／又は所望のビヒクルへのより容易な製剤化のために凍結乾燥されることを理解するであろう。本明細書記載の組成物、例えば、ＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチド、核酸、組換え細胞、細胞培養物、及び／又は医薬組成物は次に一般に、非経口的投与などの、任意の公知の経路による投与のために、製剤化され得る。投与されるべき組成物の量の決定は、当業者により決定されることができ、且つ一部は癌の程度及び重症度によって、並びにこの組換え細胞が存在する癌の治療又は癌の予防のために投与されるかどうかにより、左右され得る。本開示のＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチド、核酸、組換え細胞、細胞培養物、及び／又は医薬組成物を含有する組成物の調製は、本開示を考慮し、当業者に公知であり得る。

【0183】

製剤化時に、本開示の組成物は、用量処方に適合可能な様式で、及び治療的に有効な量で、投与され得る。本組成物は、先に説明された注射溶液の型など、様々な剤形で投与され得る。

【0184】

一部の実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチド、核酸、組換え細胞、細胞培養物、及び／又は医薬組成物は、対応するＴ細胞における、又は本明細書に開示された治療的組成物の一種を投与されていない対象に比べ、治療された対象における、Ｔ細胞消耗を克服するために使用されることができる。一部の実施態様において、本明細書記載のＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチド、核酸、組換え細胞、細胞培養物、及び／又は医薬組成物は、本明細書に開示された治療的組成物の一種を投与されていない対象におけるこれらの分子の生成に比べ、治療された対象におけるＣＡＲ Ｔ細胞の増殖及び／又は死滅能を刺激するために使用されることができる。インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、腫瘍壊死因子－α（ＴＮＦ－α）、及び／又はインターロイキン－２（ＩＬ－２）の生成は、本明細書に開示された治療的組成物の一種を投与されていない対象におけるインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、腫瘍壊死因子－α（ＴＮＦ－α）、及び／又はインターロイキン－２（ＩＬ－２）の生成に比べ、最大約２０倍の、例えば約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、もしくは２０倍以上のいずれかを生成するよう刺激され得る。

【0185】

組換え細胞の対象への投与
一部の実施態様において、本開示の方法は、本明細書に提供される組換え細胞の有効な量又は数を、それを必要とする対象へ投与することに関与する。この投与工程は、当該技術分野における内植送達の任意の方法を使用し達成され得る。例えばこれらの組換え細胞は、対象の血流に直接注入されるか、又はそうでなく対象へ投与されることができる。

【0186】

一部の実施態様において、本明細書に開示された方法は、所望の効果（複数可）が生じるように、所望の部位で導入された細胞の少なくとも部分的局在化を生じる方法又は経路により、組換え細胞を個体へ、投与することを含み、この用語は、「導入する」、「内植する」及び「移植する」と互換的に使用される。これらの組換え細胞又はそれらの分化した後代は、そこで投与された細胞又は細胞の成分の少なくとも一部は生存し続ける個体における所望の位置への送達を生じるいずれかの好適な経路により、投与され得る。対象への投与後の細胞の生存の期間は、数時間、例えば、２４時間、数日と短く、長くとも数年、又は更にはその個体の一生、すなわち長期生着（ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ）でさえあり得る。

【0187】

一部の実施態様において、方法又は経路による、組換え細胞組成物（例えば、本明細書記載の任意の細胞に従い複数の組換え細胞を含む組成物）の対象への送達は、この細胞組成物の所望の部位での少なくとも部分的局在化を生じる。投与様式は、例えば、注射、注入、及び点滴を含む。「注射」は、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、脳室内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、脳脊髄液内、及び胸骨内の注射及び注入を含むが、これらに限定されるものではない。一部の実施態様において、経路は、静脈内である。細胞の送達に関して、注射又は注入による送達は、投与の標準様式である。

【0188】

一部の実施態様において、これらの組換え細胞は、例えば、注入又は注射により、全身に投与される。

【0189】

キット
本明細書記載の方法の実践のための様々なキットも、本明細書に提供される。特に本開示の一部の実施態様は、対象における状態の診断のためのキットを提供する。いくつかの他の実施態様は、それを必要とする対象における状態の予防のためのキットに関する。いくつかの他の実施態様は、それを必要とする対象における状態を治療する方法のためのキットに関する。例えば一部の実施態様において、本明細書に提供され且つ記載された１又は複数のＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチド、組換え核酸、遺伝子操作された細胞、又は医薬組成物、並びにこれらの製造及び使用に関する書面による指示を含むキットが、本明細書に提供される。

【0190】

一部の実施態様において、本開示のキットは更に、提供されたＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチド、組換え核酸、遺伝子操作された細胞、又は医薬組成物のいずれか一つの個体への投与に有用な１又は複数の手段を含む。例えば一部の実施態様において、本開示のキットは更に、提供されたＳＬＰ－７６、ＣＡＲ、及び／又はＴＣＲポリペプチド、組換え核酸、遺伝子操作された細胞、又は医薬組成物のいずれか一つを個体へ投与するために使用される、１又は複数の注射器（予め充填された注射器を含む）及び／又はカテーテル（予め充填された注射器を含む）を含む。一部の実施態様において、キットは、望ましい目的のため、例えば、それを必要とする対象における状態を診断、予防、又は治療するために、他のキットの構成品と同時に又は連続して投与されることができる１又は複数の追加の治療薬を有することができる。

【0191】

一部の実施態様において、キットは更に、本明細書に開示された方法を実践するためにキットの構成品を使用するための指示を含むことができる。

【0192】

本明細書に引用されたいずれの参考文献も、先行技術を構成することを承認するものではない。これらの参考文献の考察は、それらの著者が主張するものに言及し、且つ本発明者らは引用された文書の正確さ及び適切性に意義を申し立てる権利を保有している。科学雑誌の記事、特許文献、及びテキストを含む多くの情報源が、本明細書において言及されているが；この言及は、これらの文献のいずれかが、当該技術分野における共通の一般的知識の一部を形成することの承認を構成しないことは、明確に理解され得る。

【0193】

本明細書に与えられた全般的方法の考察は、例証を目的とすることのみ意図されている。他の代替の方法及び代替品は、本開示を考察し、当業者には明らかであることができ、且つ本願の精神及び範囲内に含まれる。

【実施例】

【0194】

実施例
追加の実施態様が、下記実施例において、更に詳細に開示され、これらは例証のために提供され且つ本開示又は請求項の範囲を限定することは決して意図しない。

【0195】

実施例１
近位シグナル伝達分子によるＣＡＲ Ｔ細胞活性化の増強
この実施例は、過剰発現された場合に、ＣＡＲ Ｔ細胞活性化を増強する近位シグナル伝達分子の機能を例証するために実施された実験を説明する。異なる細胞外リガンドを認識する例証的ＣＡＲ分子を、遺伝子操作し、且つこれらの分子及び様々な近位シグナル伝達分子を発現する細胞を活性化するそれらの機能について試験した。

【0196】

近位シグナル伝達分子を、それらのいずれが、ＣＡＲ分子によるＴ細胞活性化を増強するのに十分であるかどうかを調べるために試験した。ｓｃＦｖ（例えばＣＤ１９又はＨＥＲ２を認識する）、ＣＤ８又はＣＤ２８ヒンジ－膜貫通ドメイン（Ｈ／ＴＭ）、及び４－１ＢＢ共刺激ドメインを、ＣＤ３ゼータドメインへ直接連結することにより、ＣＡＲ構築体を調製した。これらの遺伝子操作されたＣＡＲを、初代Ｔ細胞において近位シグナル伝達分子の構築体と共に、共発現した。ＣＤ１９又はＨＥＲ２抗原を発現する腫瘍細胞の存在下、これらのＴ細胞によるサイトカイン生成を、測定し且つ比較した。図１は、Ｔ細胞におけるＣＡＲ分子の発現を表している、ＣＤ１９（上部左側パネル）又はＨＥＲ２（上部右側パネル）などの、各ＣＡＲ分子の細胞外リガンド結合ドメインを決定する、ＦＡＣＳヒストグラムを示している。ＣＤ１９ ＣＡＲ分子を発現するＴ細胞が、ＣＤ１９を高密度で発現する野生型ＮＡＬＭ６細胞と共にインキュベーションされる場合、又はＨＥＲ２ ＣＡＲ分子を発現するＴ細胞が、高密度ＨＥＲ２を発現するＮＡＬＭ６細胞と共にインキュベーションされる場合、これらのＣＡＲ分子は、対応するＴ細胞を活性化し、サイトカイン（例えばＩＬ－２）を生成する。図１下側パネルに示されるように、ＣＡＲ構築体のいずれかによるそのような活性化（ＩＬ－２生成レベルにより表される）は、Ｔ細胞におけるＳＬＰ－７６（例えば配列番号：７）の過剰発現によってのみ増強され、ＬＡＴ（例えば配列番号：８）又はＬＣＫ（例えば配列番号：９）などの、他の近位シグナル伝達分子によっては増強されない。

【0197】

現在のＣＡＲ Ｔ療法の一つの制限は、腫瘍は、通常ＣＡＲ Ｔ細胞上のＣＡＲ分子による認識のための標的抗原として使用される発現された腫瘍抗原の量をダウンレギュレーションすることにより、ＣＡＲ Ｔ細胞を回避することができることである。ＣＡＲ Ｔ細胞活性は、抗原密度が低い場合に、制限されることがある。次に先の共発現システムを、低い抗原密度の実験設定下で試験した。具体的には、ＣＤ１９ ＣＡＲ分子を発現するＴ細胞を、ＳＬＰ－７６（配列番号：７）の過剰発現を伴う又は伴わずに、野生型ＮＡＬＭ６細胞又は細胞表面に低密度のＣＤ１９を発現するＮＡＬＭ６細胞と共にインキュベーションした。Ｔ細胞の活性化は、先のようにＩＬ－２生成により測定した。図２に示したように、ＳＬＰ－７６（配列番号：７；細胞膜に結合していない）の過剰発現は、野生型ＮＡＬＭ６細胞のみに応答したＣＤ１９ ＣＡＲ分子を介して、Ｔ細胞活性化を増強したが、低い抗原密度の細胞では増強しなかった。

【0198】

ほとんどの近位シグナル伝達分子は、サイトゾルであり、且つ膜貫通ドメインを有さない。低い抗原密度に応答してＣＡＲ Ｔ活性を増強するＳＬＰ－７６の機能を改善するために、膜結合型構築体を、調製し且つ試験した。一つの例証的構築体（ＶＳＶ－Ｇ－ＣＤ８ＴＭ－ＳＬＰ－７６；配列番号：１６）は、ＳＬＰ－７６のＮ－末端にコンジュゲートされたＣＤ８ヒンジ－膜貫通（Ｈ／ＴＭ）ドメインに加え、ＦＡＣＳによる容易な検出のための短い細胞外タグ（ＶＳＶ－Ｇポリペプチド）を含む。類似の膜結合型ＬＣＫ構築体（ＶＳＶ－Ｇ－ＣＤ８ＴＭ－ＬＣＫ；配列番号：１７）を、対照として調製した。図１及び２において示したサイトゾルＳＬＰ－７６（配列番号：７）と比べ、例証的膜結合型ＳＬＰ－７６は、単に野生型ＮＡＬＭ６細胞（これは高密度のＣＤ１９を発現する）に応答してＴ細胞活性を更に増強したのみではなく、標的ＮＡＬＭ６細胞上の低密度の抗原にも応答してＴ細胞活性を増強した（図３Ａ及び３Ｂ）。Ｔ細胞を活性化又は刺激するためにＣＤ１９ ＣＡＲの細胞外ドメインを認識する抗イディオタイプ抗体を使用し、そのような抗体はより少ない量で、膜結合型ＳＬＰ－７６を過剰発現するＴ細胞を活性化するのに十分であった（図３Ｃ）。これらのデータは、膜結合型ＳＬＰ－７６の過剰発現は、ＣＡＲ Ｔ細胞活性化閾値を低下することを示している。

【0199】

ＨＥＲ２－標的化するＣＡＲ分子（ＨＥＲ２－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ）を発現するＴ細胞を用いる実験も、行った。図３Ａ－３Ｃと同様に、膜結合型ＳＬＰ－７６（配列番号：１６）は、高レベルのＨＥＲ２を発現する野生型ＮＡＬＭ６細胞又はＨＥＲ２を発現する野生型１４３Ｂ骨肉腫細胞に応答してＴ細胞活性を更に増強するのみではなく、また低い抗原密度又は超低抗原密度を有する標的細胞のクローンにも応答してＴ細胞活性を増強した（図４Ａ及び４Ｂ）。プレートを、組換えＨｅｒ２抗原でコートし、並びにより少ない量でコートされた抗原は、膜結合型ＳＬＰ－７６が過剰発現される場合に、Ｔ細胞を活性化するのに十分であった（図４Ｃ）。

【0200】

別の実験において、Ｔ細胞を、遊離ＺＡＰ－７０構築体（ＺＡＰ－７０－２Ａ－ｔＮＧＦＲ、配列番号：４４）、遊離ＰＬＣγ１（別名ＰＬＣｇ１又はＰＬＣＧ）構築体（ＰＬＣｇ１－２Ａ－ｔＮＧＦＲ、配列番号：４８）、膜結合型ＺＡＰ－７０構築体［ＶＳＶ－Ｇ－ＣＤ８ＴＭ－ＺＡＰ－７０ ＫＩＤＢ（２５５－６００）、ＺＡＰ－７０インタードメインＢ及びキナーゼドメインの断片を含む；配列番号：４６］、膜結合型ＰＬＣγ１構築体（ＶＳＶ－Ｇ－ＣＤ８ＴＭ－ＰＬＣｇ１、配列番号：５０）、又は先に説明した膜結合型ＳＬＰ－７６構築体（配列番号：１６）を伴い又は伴わずに、例証的ＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体（“ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ”）を過剰発現するように形質導入した（図１３Ａ）。図１３Ｂに示したように、遊離もしくは膜結合型のＺＡＰ－７０もしくはＰＬＣγ１構築体ではなく、膜結合型ＳＬＰ－７６のみ、野生型ＮＡＬＭ－６細胞と接触させた場合に、ＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体を発現するＴ細胞によるサイトカイン（例えば、ＩＬ－２及びＩＦＮγ）生成を、有意に増加した。

【0201】

実施例２
膜結合型ＳＬＰ－７６は、ＳＬＰ－７６又はＣＡＲ構造とは無関係にＣＡＲ Ｔ活性を増強する
この実施例は、様々なＣＡＲ分子により、ＣＡＲ Ｔ活性化を増強する膜結合型ＳＬＰ－７６の能力を確認するために実施された実験を説明する。

【0202】

一つの例証的ＣＡＲ構築体は、ＣＤ１９を認識するための細胞外ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン及び細胞内領域、並びにＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む（“ＣＤ１９－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８Ｚ”又は“ＣＤ１９－２８Ｚ”）。そのようなＣＡＲ構築体を発現するＴ細胞を、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体（配列番号：１６）の過剰発現を伴う又は伴わずに（図５Ａ）、様々な腫瘍細胞と共にインキュベーションした。ＩＬ－２生成レベルを、腫瘍細胞とのインキュベーション後、これらのＴ細胞に関してＥＬＩＳＡにより測定し、これは、膜結合型ＳＬＰ－７６は、通常の抗原密度又は低い抗原密度のいずれかに応答してＴ細胞活性を有意に増強したことを示している（図５Ｂ）。細胞傷害指数もまた、低い抗原密度で腫瘍細胞を死滅するためのＴ細胞活性化を増強する膜結合型ＳＬＰ－７６のそのような能力を確認した（図５Ｃ）。インビボにおける野生型ＮＡＬＭ６ストレス試験モデルにおいて、膜結合型ＳＬＰ－７６は、ＣＡＲ Ｔ細胞において発現される場合、膜結合型ＳＬＰ－７６を発現しないＣＡＲ Ｔ細胞による治療と比べ、特に治療後１４日で、腫瘍組織量を有意に低下した（図５Ｄ及び５Ｆ）。それに対応して、膜結合型ＳＬＰ－７６は、ＣＡＲ Ｔ細胞の機能を有意に増強し、動物生存率を増大した（図５Ｅ）。

【0203】

同様の実験を、ＣＤ２２を認識する細胞外ドメイン、ＣＤ８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、及びＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む、別の例証的ＣＡＲ構築体（“ＣＤ２２－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ”）を用いて行った。ＣＤ２２のダウンレギュレーションは、患者におけるＣＤ２２ ＣＡＲ Ｔ細胞療法からの抗原回避の既に知られた機序である（Ｆｒｙら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ２０１７）。そのようなＣＡＲ構築体を発現するＴ細胞（図６Ａ）を、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体（配列番号：１６）の過剰発現を伴う又は伴わずに、腫瘍細胞と共にインキュベーションした。ＩＬ－２生成レベルを、腫瘍細胞とのインキュベーション後に、これらのＴ細胞について、ＥＬＩＳＡにより測定し、膜結合型ＳＬＰ－７６は、低い抗原密度に応答してＴ細胞活性を有意に増強したことを示している（図６Ｂ）。先に説明したような組換え抗原刺激アッセイにより、組換えＣＤ２２を、標的抗原として使用し、Ｔ細胞を活性化した。より少ない量でコートされたそのような抗原は、膜結合型ＳＬＰ－７６が過剰発現される場合に、Ｔ細胞を活性化するのに十分であった（図６Ｃ）。インビボにおけるＣＤ２２低ＮＡＬＭ６モデルにおいて、膜結合型ＳＬＰ－７６は、ＣＡＲ Ｔ細胞上に発現される場合に、膜結合型ＳＬＰ－７６を発現しないＣＡＲ Ｔ細胞と比べ、腫瘍組織量を有意に減少した（例えば、図６Ｄに示した治療の２２日後）（図６Ｄ－６Ｆ）。

【0204】

同様の実験を、Ｂ７－Ｈ３を認識する細胞外ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む、別の例証的ＣＡＲ構築体（“Ｂ７－Ｈ３－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ”）を用いて行った。そのようなＣＡＲ構築体を発現するＴ細胞を、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体（配列番号：１６）の過剰発現を伴う又は伴わずに（図７Ａ）、腫瘍細胞と共にインキュベーションした。細胞傷害指数を、治療後の生存標的腫瘍細胞（神経芽細胞腫細胞株ＣＨＬＡ－２５５、これは低密度のＢ７－Ｈ３を発現する）を検出することにより、計算し、これは膜結合型ＳＬＰ－７６は、Ｂ７－Ｈ３－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺを発現するＴ細胞の活性を有意に増強し、標的腫瘍細胞を阻害又は死滅することを示している（図７Ｂ）。インビボにおけるＣＨＬＡ－２５５（これは低密度のＢ７－Ｈ３を発現する）転移性モデルにおいて、膜結合型ＳＬＰ－７６は、ＣＡＲ Ｔ細胞上で発現される場合に、実験期間を通じて腫瘍組織量を有意に減少したのに対し、膜結合型ＳＬＰ－７６を発現しないＣＡＲ Ｔ細胞は、治療の７～１４日後の腫瘍組織量の増加に繋がった（図７Ｃ）。結果として、膜結合型ＳＬＰ－７６を過剰発現するＣＡＲ Ｔ細胞で治療した動物は、１００日より長く生存し、これは膜結合型ＳＬＰ－７６を発現しないＣＡＲ Ｔ細胞で治療した動物よりもはるかに長かった（図７Ｄ）。

【0205】

従って、膜結合型ＳＬＰ－７６のＣＡＲ Ｔ活性を増強する能力は、特定のＣＡＲ構築体に限定されない。

【0206】

異なる近位シグナル伝達分子を有するＣＡＲ構築体を更に、膜結合型ＳＬＰ－７６の機能について試験するために使用した。例えば、先に説明したＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを有するＣＡＲ分子ではなく、細胞間シグナル伝達ドメインとしてＺＡＰ７０を含むように、例証的ＣＡＲ構築体は作製した（ＣＤ１９－ＣＤ２８ＴＭ－ＺＡＰ７０）。そのようなＣＤ１９－標的化するＣＡＲ分子を発現するＴ細胞を、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体（配列番号：１６）の過剰発現を伴う又は伴わずに（図８Ａ）、腫瘍細胞と共にインキュベーションした。ＩＬ－２生成レベルを、腫瘍細胞とのインキュベーション後のこれらのＴ細胞に関して、ＥＬＩＳＡにより測定し、これは膜結合型ＳＬＰ－７６は、このＣＡＲ分子を介して、Ｔ細胞活性を有意に増強したことを示している（図８Ｂ）。インビボにおけるＮＡＬＭ６異種移植モデルにおいて、膜結合型ＳＬＰ－７６は、ＣＡＲ Ｔ細胞上に発現される場合、膜結合型ＳＬＰ－７６を発現しないＣＡＲ Ｔ細胞と比べ、腫瘍組織量を有意に低下した（図８Ｃ）。結果として、膜結合型ＳＬＰ－７６を過剰発現するＣＡＲ Ｔ細胞で治療した動物は、膜結合型ＳＬＰ－７６を発現しないＣＡＲ Ｔ細胞で治療した動物よりもより高い生存率を有した（図８Ｄ）。

【0207】

同様の実験を、高親和性（ＨＡ）ＧＤ２－標的化する細胞外ドメイン、ＣＤ２８膜貫通及び共刺激ドメイン、並びにＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを含む例証的ＣＡＲ構築体（“ＨＡ ２８Ｚ”）を発現するＴ細胞を使用し、異なる膜結合型ＳＬＰ－７６構築体を伴う又は伴わずに行った。例えば、例証的膜結合型ＳＬＰ－７６構築体は、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む（配列番号：１９；“ＣＤ２８ＴＭ ＳＬＰ－７６”）。別の例証的膜結合型ＳＬＰ－７６構築体は、ＣＤ８膜貫通ドメインを含む（配列番号：１８；“ＣＤ８ＴＭ ＳＬＰ－７６”）。そのような高親和性ＧＤ２－標的化するＣＡＲ分子を発現するＴ細胞を、例証的膜結合型ＳＬＰ－７６構築体の過剰発現を伴う又は伴わずに（図９Ａ）、腫瘍細胞と共にインキュベーションした。ＩＬ－２生成レベルを、様々な腫瘍細胞とのインキュベーション後のこれらのＴ細胞に関して、ＥＬＩＳＡにより測定し、これは膜結合型ＳＬＰ－７６は、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体において利用される膜貫通ドメインとは関係なく、ＣＡＲ Ｔ細胞活性を有意に増強したことを示している（図９Ｂ）。

【0208】

この実施例は、例えそのｓｃＦｖ（抗原特異性）、シグナル伝達ドメイン（共刺激もしくはその他）、又は膜貫通ドメインが、ＣＡＲ構築体に含まれるか、もしくはその膜貫通ドメインが、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体において利用されるとしても、膜結合型ＳＬＰ－７６は、ＣＡＲの活性を増強することを明らかにしている。

【0209】

実施例３
膜結合型ＳＬＰ－７６の更なる利点
この実施例は、膜結合型ＳＬＰ－７６のＴ細胞消耗に対する作用を試験するため、並びに報告されたＳＬＰ－７６融合タンパク質へのその利点を示すために実施された実験を説明している。

【0210】

ＴＣＲ又はＣＡＲを発現するＴ細胞の持続性の活性化は、通常慢性的な感染症又は腫瘍の進行に起因する、消耗した表現型へのゆるやかな発達に繋がり得る。先の実施例において説明した様々なＣＡＲ構築体を、過剰発現された場合の、Ｔ細胞消耗に対するそれらの作用について試験した。具体的には、ＦＡＣＳ分析を行い、例えばＴＩＭ－３、ＰＤ－１、及びＬＡＧ－３を含むＴ細胞の表面上に発現されたＴ細胞消耗バイオマーカーを検出する一方で、そのようなバイオマーカーの発現レベルは、Ｔ細胞消耗の程度と相関関係があった。図１０に示したように、先の実施例において説明したＢ７－Ｈ３－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ ＣＡＲ構築体の過剰発現は、３種のバイオマーカー全ての中程度の発現を誘導し、これはＢ７－Ｈ３－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ ＣＡＲ構築体は、中程度のＴ細胞消耗を誘導し得ることを示している。驚くべきことに、膜結合型ＳＬＰ－７６（ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＳＬＰ－７６、配列番号：４０）は、ＣＡＲ Ｔ活性を増幅し、且つ活性化閾値を低下することは可能であるが、これは、膜結合型ＳＬＰ－７６の共発現は、バイオマーカー発現レベルを増加しなかったので、ＣＡＲ Ｔ細胞消耗は悪化しなかった（図１０）。図１１は、ＨＡ ２８Ｚ ＣＡＲ構築体の過剰発現による、より重度のＣＡＲ Ｔ消耗を示している。ＣＡＲ Ｔ細胞における膜結合型ＳＬＰ－７６（Ｈｅｒ２－ＣＤ８Ｈ／ＴＭ－ＳＬＰ－７６、配列番号：１８）の過剰発現は、いずれも細胞消耗を悪化しなかった（図１１）。従ってＴ細胞消耗の問題に関して、膜結合型ＳＬＰ－７６の他のＣＡＲ Ｔ療法をブーストするための使用は安全である。

【0211】

ＬＡＴ／ＳＬＰ－７６キメラタンパク質（ＳＬＰ－７６融合したＬＡＴ膜貫通）は、ノックアウトされた内因性ＬＡＴ遺伝子を有するＴ細胞においてＴＣＲシグナル伝達を回復する（Ｂｏｅｒｔｈら、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． ２０００， １９２：１０４７－１０５８）。そのようなキメラを、先の実施例において説明した膜結合型ＳＬＰ－７６構築体と比較した。先に説明したＣＤ１９ ２８Ｚ ＣＡＲ構築体を発現するＴ細胞、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体（ＶＳＶ－Ｇ－ＣＤ８ＴＭ－ＳＬＰ－７６、配列番号：１６）又はＬＡＴ／ＳＬＰ－７６キメラ構築体を過剰発現するＴ細胞を、腫瘍細胞と共にインキュベーションした（図１２Ａ）。ＩＬ－２生成レベルを、腫瘍細胞とのインキュベーション後、これらのＴ細胞に関してＥＬＩＳＡにより測定し、これは膜結合型ＳＬＰ－７６は、キメラよりも、高い抗原密度に応答してＴ細胞活性を増強するより高い能力を有することを示した（図１２Ｂ、ＷＴ Ｎ６）。より重要なことに、膜結合型ＳＬＰ－７６は、低い抗原密度に応答してＣＡＲ Ｔ活性を増強することができるが、キメラはできない（図１２Ｂ、クローンＦ Ｎ６）。従って膜結合型ＳＬＰ－７６は、特に抗原密度が低い場合に、ＬＡＴ／ＳＬＰ－７６キメラに勝る利点を有し、これはＣＡＲ又はＴＣＲによる現在のＴ細胞療法を回避するために腫瘍細胞により使用される。

【0212】

実施例４
様々な細胞又は動物モデルにおける膜結合型ＳＬＰ－７６の更なる研究
この実施例は、様々な細胞もしくは動物モデルにおけるＴ細胞活性化及び機能を増強する膜結合型ＳＬＰ－７６の作用を試験するために実施された実験を説明している。

【0213】

例証的実験において、Ｔ細胞を、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）－標的化するＣＡＲ構築体（“ＡＬＫ－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ”）を過剰発現するように、形質導入した。このＡＬＫ－標的化するＣＡＲ構築体は、Ｔ細胞の表面上に貧弱に（低レベルで）発現し、その治療上の有用性及びＴ細胞を完全に活性化するその能力を制限することが、先に認められた（Ｗａｌｋｅｒら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ， ２０１７： ２５（９）：２１８９－２２０１； ＰＭＩＤ ２８６７６３４２）。ＡＬＫ－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺを、膜結合型ＳＬＰ－７６ 構築体を伴う又は伴わずに、Ｔ細胞上に発現させ（図１４Ａ－１４Ｂ）、次に異なるレベルのＡＬＫ抗原を発現するＮＡＬＭ－６癌細胞と共培養した（図１４Ｃ）。この膜結合型ＳＬＰ－７６構築体は、高レベルのＡＬＫを発現するＮＡＬＭ－６細胞と接触された場合に、Ｔ細胞によるＩＬ－２及びＩＦＮγの両方の生成を有意に増加し、並びに中又は低レベルのＡＬＫを発現するＮＡＬＭ－６細胞と接触された場合には、Ｔ細胞によるＩＦＮγの生成は有意に増加するが、ＩＬ－２の生成は増加しなかった（図１４Ｄ）。標的ＮＡＬＭ－６細胞に対するＴ細胞の細胞傷害性を、測定した。図１４Ｅは、この膜結合型ＳＬＰ－７６構築体は、異なるＡＬＫ密度を伴う標的ＮＡＬＭ－６細胞の３つの系統（ｌｉｎｅ）全てに対し、Ｔ細胞の細胞傷害性を有意に増大したことを、図示している。

【0214】

別の例証的実験において、ＮＹ－ＥＳＯ－１トランスジェニックＴＣＲ構築体（Ａ２＋／ＮＹ－ＥＳＯ－１）を発現するように遺伝子操作されたＴ細胞を、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体を伴う又は伴わずに、形質導入し（図１５Ａ）、且つ抗原陽性腫瘍細胞（Ａ２＋／ＮＹ－ＥＳＯ－１＋Ｎａｌｍ－６又はＡ３７５）又は抗原陰性腫瘍細胞Ｍｅｌ８８８のいずれかと共培養した。同様に、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体は、抗原陽性ＮＡＬＭ－６又はＡ３７５細胞と接触された場合、Ｔ細胞によるＩＬ－２生成は有意に増加したが、抗原陰性Ｍｅｌ８８８細胞との場合は、増加しなかった（図１５Ｂ）。膜結合型ＳＬＰ－７６構築体はまた、抗原陽性ＮＡＬＭ－６細胞と共培養した場合に、Ｔ細胞の細胞傷害性も増大した（図１５Ｃ）。

【0215】

別の例証的実験において、Ｂ－細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）－標的化するＣＡＲ構築体を発現するＴ細胞を、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体を伴う又は伴わずに、形質導入し（図１６Ａ）、且つＭＭ１．Ｓ腫瘍細胞と共培養した。同様に、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体は、Ｔ細胞によるサイトカイン（例えば、ＩＬ－２及びＩＦＮγ）生成を有意に増加した（図１６Ｂ）。ルシフェラーゼ－発現するＭＭ１．Ｓ腫瘍細胞が接種され、且つこれらのＴ細胞により治療されたマウスにおいて、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体は、腫瘍成長を制御するＴ細胞の能力を増大した（図１６Ｃ）。

【0216】

別の例証的実験において、Ｂ７－Ｈ３－標的化するＣＡＲ構築体（“Ｂ７－Ｈ３－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ”）を発現するＴ細胞を、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体を伴う又は伴わずに形質導入した（図１７Ａ）。ルシフェラーゼ－発現するびまん性内在脳橋グリオーマ６異種移植片（ＤＩＰＧ－６）が接種され、且つこれらのＴ細胞により治療されたマウスにおいて、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体は、腫瘍成長を制御するＴ細胞の能力を増大した（図１７Ｂ）。

【0217】

別の例証的実験において、ＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体（“ＣＤ１９－ＣＤ２８ＴＭ－ＣＤ２８Ｚ”）を発現するＴ細胞を、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体を伴う又は伴わずに形質導入した（図１８Ａ）。Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）モデルにおいて、マウスに、ルシフェラーゼ－発現する野生型Ｎａｌｍ－６細胞を接種し、これらのＴ細胞により治療した。膜結合型ＳＬＰ－７６構築体は、脾臓又は骨髄のいずれかにおけるＴ細胞増殖を増加した（図１８Ｂ）。

【0218】

別の例証的実験において、ＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体（“ＣＤ１９－ＣＤ２８ＴＭ－ＢＢＺ”）を発現するＴ細胞を、膜結合型ＳＬＰ－７６構築体を伴う又は伴わずに形質導入した（図１９Ａ）。ストレス試験モデル（ＣＡＲ Ｔ細胞の分割治効量）において、マウスに、ルシフェラーゼ－発現する白血病異種移植片（ＷＴ Ｎａｌｍ－６）を接種し、これらのＴ細胞により治療した。膜結合型ＳＬＰ－７６構築体は、腫瘍成長を制御するＴ細胞の能力を増大し（図１９Ｂ）、マウス生存を改善した（図１９Ｃ）。

【0219】

更なる実験を、ＳＬＰ－７６変異体の機能を試験するために実施した。例証的実験において、Ｔ細胞を、ＣＤ１９－標的化するＣＡＲ構築体（“ＣＤ１９－ＣＤ８ＴＭ－ＢＢＺ”）を単独で、又はこれを本明細書記載の膜結合型ＳＬＰ－７６構築体（配列番号：１６）もしくはＫ３０Ｒ置換を有する膜結合型ＳＬＰ－７６変異（配列番号：６０）と一緒に発現するように、形質導入した（図２０Ａ－２０Ｂ）。このＫ３０Ｒ変異は、ＳＬＰ－７６のユビキチン化ダウンレギュレーションを減少し、従って下流のＴ細胞活性化を増強することが可能であることが先に報告されていた。生じるＴ細胞を、低レベルのＣＤ１９（標的抗原）を発現するＮＡＬＭ－６腫瘍細胞と共にインキュベーションする一方で、これらのＴ細胞により生成されたＩＬ－２のレベルを測定した。図２０Ｃに示したように、膜結合型ＳＬＰ－７６ Ｋ３０Ｒ変異体は、腫瘍細胞上の標的抗原に応答して、Ｔ細胞活性を増強し（ＩＬ－２発現レベルで示された）、腫瘍細胞上の低いレベルの標的抗原を伴うこのシナリオにおいて、膜結合型ＳＬＰ－７６野生型構築体よりも、より高い能力を有した。

【0220】

配列表
下記表は、様々な分子の例証的配列のリストである。

【表1-1】

【表1-2】

【図1】

【図1-1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図5E】

【図5F】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図6E】

【図6F】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【図9A】

【図9B】

【図10】

【図10-1】

【図10-2】

【図11】

【図11-1】

【図11-2】

【図12A】

【図12A-1】

【図12A-2】

【図12B】

【図13A】

【図13B】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図14D】

【図14E】

【図15A】

【図15B】

【図15C】

【図16A】

【図16B】

【図16C】

【図17A】

【図17B】

【図18A】

【図18B】

【図19A】

【図19B】

【図19C】

【図20A】

【図20B】

【図20C】

【配列表】

2024512703000001.app

【国際調査報告】