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特表2024-512818抗老化遺伝子ｋｌｏｔｈｏの発現を誘導する化合物を含む退行性神経疾患の予防または治療用組成物
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-03-19
(54)【発明の名称】抗老化遺伝子ｋｌｏｔｈｏの発現を誘導する化合物を含む退行性神経疾患の予防または治療用組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 31/423 20060101AFI20240312BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240312BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240312BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20240312BHJP
A61P 25/16 20060101ALI20240312BHJP
A61P 25/28 20060101ALI20240312BHJP
A61P 25/14 20060101ALI20240312BHJP
C07D 263/58 20060101ALI20240312BHJP
【ＦＩ】
A61K31/423 ZNA
A61P25/00
A61P43/00 105
A61P9/00
A61P25/16
A61P25/28
A61P25/14
C07D263/58
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023561185
(86)(22)【出願日】2022-03-28
(85)【翻訳文提出日】2023-10-02
(86)【国際出願番号】 KR2022004341
(87)【国際公開番号】W WO2022211420
(87)【国際公開日】2022-10-06
(31)【優先権主張番号】10-2021-0042958
(32)【優先日】2021-04-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(31)【優先権主張番号】10-2021-0130307
(32)【優先日】2021-09-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．Ｗｉｔｅｐｓｏｌ
２．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】523376590
【氏名又は名称】クロトー サイエンシーズ
(74)【代理人】
【識別番号】110000578
【氏名又は名称】名古屋国際弁理士法人
(72)【発明者】
【氏名】ジョン ドン ジュ
【テーマコード（参考）】
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC70
4C086MA01
4C086MA04
4C086MA52
4C086NA14
4C086ZA02
4C086ZA16
4C086ZC01
(57)【要約】
本発明は、抗老化遺伝子klothoの発現を誘導する化合物を含む退行性神経疾患の予防または治療用組成物に関する。本発明による化学式1で表される化合物は、老化に関連する
遺伝子であるKlotho遺伝子の発現量を向上させる効果が優れており、退行性神経疾患の予防、改善または治療用の医薬組成物または食品組成物として有用に使用することができる。
遺伝子であるKlotho遺伝子の発現量を向上させる効果が優れており、退行性神経疾患の予防、改善または治療用の医薬組成物または食品組成物として有用に使用することができる。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む退行性神経疾患の予防または治療用薬学組成物：【化1】
Ｌ１は、単一結合または
【化2】
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ、－Ｈ、－ＯＨ、Ｃ１－１０の直鎖または側鎖アルキル、またはＣ６－８のアリールアミドであり、ここで、前記アリールアミドのアリールには、ハロゲン、－ＮＯ２およびＣ１－１０の直鎖または側鎖ハロゲン化アルキルのうち１種以上が置換されることができ；
前記Ｒ１およびＲ２は、これらが連結された炭素原子とともにＣ６－８のアリールを形成することができ；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、それぞれ、－Ｈ、ハロゲン、－ＮＯ２またはＣ１－１０の直鎖または側鎖アルキルである）。
【請求項2】
前記Ｌ１は、単一結合または【化3】
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ、－Ｈ、－ＯＨ、Ｃ１－５の直鎖または側鎖アルキル、またはＣ６－７のアリールアミドであり、ここで、前記アリールアミドのアリールには、ハロゲン、－ＮＯ２およびＣ１－５の直鎖または側鎖ハロゲン化アルキルのうち１種以上が置換されることができ；
前記Ｒ１およびＲ２は、これらが連結された炭素原子とともにＣ６－７のアリールを形成することができ；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、それぞれ－Ｈ、ハロゲン、－ＮＯ２またはＣ１－５の直鎖または側鎖アルキルであることを特徴とする請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項3】
前記Ｌ１は、単一結合または【化4】
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ、－Ｈ、－ＯＨ、－ＣＨ３、またはフェニルアミドであり、ここで、前記フェニルアミドのフェニルには、－Ｃｌ、－ＮＯ２および－ＣＨ２Ｃｌのうち１種以上が置換されることができ；
前記Ｒ１およびＲ２は、これらが連結された炭素原子とともにフェニルを形成することができ；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、それぞれ、－Ｈ、－Ｆ、－Ｃｌ、－ＮＯ２または－ＣＨ２ＣＨ３であることを特徴とする請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項4】
前記Ｌ１は、単一結合または【化5】
Ｒ１は、－Ｈ、－ＯＨ、－ＣＨ３、
【化6】
Ｒ２は、－Ｈであり；
前記Ｒ１およびＲ２は、これらが連結された炭素原子とともにフェニルを形成することができ；
Ｒ３は、－Ｈまたは－Ｃｌであり；
Ｒ４は、－Ｈ、－Ｆまたは－Ｃｌであり；
Ｒ５は、－Ｆ、－Ｃｌ、－ＮＯ２、または－ＣＨ２ＣＨ３であり；
Ｒ６は、－Ｈであり；
Ｒ７は、－Ｈであることを特徴とする請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項5】
前記化学式１で表される化合物は、下記化合物群から選択されるいずれか一つであることを特徴とする請求項１に記載の薬学組成物：１）Ｎ－（ベンゾ［ｄ］オキサゾール－２－イル）－２－クロロ－４－ニトロベンズアミド；
２）８－メチル－２－［Ｎ－（３，４－ジクロロフェニル）］アミノベンゾオキサゾール；
３）２－（（３，４－ジクロロフェニル）アミノ）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－オル；
４）Ｎ－（２－（４－エチルフェニルアミノ）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）－２－クロロ－５－ニトロベンズアミド；
５）Ｎ－（２－（４－エチルフェニルアミノ）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）
－３，４－ジクロロベンズアミド；
６）Ｎ－（２－（４－エチルフェニルアミノ）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－５－イル）－３－（クロロメチル）ベンズアミド；
７）２－［Ｎ－（３，４－ジクロロフェニル）］アミノベンゾオキサゾール；
８）Ｎ－（３，４－ジクロロフェニル）ナフト［２，３－ｄ］オキサゾール－２－アミン；
９）Ｎ－（３，４－ジフルオロフェニル）－５－メチルベンゾ［ｄ］オキサゾール－２－アミン；および
１０）Ｎ－（３，４－ジフルオロフェニル）ベンゾ［ｄ］オキサゾール－２－アミン。
【請求項6】
前記組成物は、クロソ遺伝子の発現量を向上させることを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項7】
前記退行性神経疾患は、脳卒中、中風、記憶力の喪失、記憶力の損傷、認知症、健忘症、認知機能障害、パーキンソン病、アルツハイマー病、ピーク（Ｐｉｃｋ）病、クロイツフェルト－ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄ－Ｋａｃｏｂ）病、ハンチントン病、およびルーゲリック病からなる群から選択される１つ以上の疾患を含むことを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項8】
下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を含む退行性神経疾患の予防または改善のための健康機能食品組成物：【化7】
Ｌ１は、単一結合または
【化8】
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ、－Ｈ、－ＯＨ、Ｃ１－１０の直鎖または側鎖アルキル、またはＣ６－８のアリールアミドであり、ここで、前記アリールアミドのアリールには、ハロゲン、－ＮＯ２およびＣ１－１０の直鎖または側鎖ハロゲン化アルキルのうち１種以上が置換されることができ；
前記Ｒ１およびＲ２は、これらが連結された炭素原子とともにＣ６－８のアリールを形成することができ；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、それぞれ、－Ｈ、ハロゲン、－ＮＯ２またはＣ１－１０の直鎖または側鎖アルキルである）。
【請求項9】
下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を含む退行性神経疾患の予防または改善のための食品組成物：【化9】
Ｌ１は、単一結合または
【化10】
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ、－Ｈ、－ＯＨ、Ｃ１－１０の直鎖または側鎖アルキル、またはＣ６－８のアリールアミドであり、ここで、前記アリールアミドのアリールには、ハロゲン、－ＮＯ２およびＣ１－１０の直鎖または側鎖ハロゲン化アルキルのうち１種以上が置換されることができ；
前記Ｒ１およびＲ２は、これらが連結された炭素原子とともにＣ６－８のアリールを形成することができ；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、それぞれ、－Ｈ、ハロゲン、－ＮＯ２またはＣ１－１０の直鎖または側鎖アルキルである）。
【請求項10】
下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を含む組成物を個体に投与または服用することを含む、退行性神経疾患の予防または治療方法：【化11】
Ｌ１は、単一結合または
【化12】
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ、－Ｈ、－ＯＨ、Ｃ１－１０の直鎖または側鎖アルキル、またはＣ６－８のアリールアミドであり、ここで、前記アリールアミドのアリールには、ハロゲン、－ＮＯ２およびＣ１－１０の直鎖または側鎖ハロゲン化アルキルのうち１種以上が置換されることができ；
前記Ｒ１およびＲ２は、これらが連結された炭素原子とともにＣ６－８のアリールを形成することができ；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、それぞれ、－Ｈ、ハロゲン、－ＮＯ２またはＣ
１－１０の直鎖または側鎖アルキルである）。
【請求項11】
下記化学式１で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を含む組成物の退行性神経疾患の予防または治療用途：【化13】
Ｌ１は、単一結合または
【化14】
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ、－Ｈ、－ＯＨ、Ｃ１－１０の直鎖または側鎖アルキル、またはＣ６－８のアリールアミドであり、ここで、前記アリールアミドのアリールには、ハロゲン、－ＮＯ２およびＣ１－１０の直鎖または側鎖ハロゲン化アルキルのうち１種以上が置換されることができ；
前記Ｒ１およびＲ２は、これらが連結された炭素原子とともにＣ６－８のアリールを形成することができ；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、それぞれ、－Ｈ、ハロゲン、－ＮＯ２またはＣ１－１０の直鎖または側鎖アルキルである）。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【0001】
［技術分野］
本発明は、抗老化遺伝子klothoの発現を誘導する化合物を含む退行性神経疾患の予防または治療用組成物に関する。
本発明は、抗老化遺伝子klothoの発現を誘導する化合物を含む退行性神経疾患の予防または治療用組成物に関する。
【0002】
［背景技術］
神経免疫システムの制御不均衡は様々な神経変性疾患の病因として知られており、中枢神経系内でパーキンソン病、アルツハイマー病、外傷損傷、中風、発作による脳損傷などに対して神経炎症反応が原因で起こるという多くの研究が報告されている。
神経免疫システムの制御不均衡は様々な神経変性疾患の病因として知られており、中枢神経系内でパーキンソン病、アルツハイマー病、外傷損傷、中風、発作による脳損傷などに対して神経炎症反応が原因で起こるという多くの研究が報告されている。
【0003】
一方、動物の老化を調節できる遺伝子が存在できるという事実は、1981年に報告されたＳＡＭ(senescence-accelerated mice)から知られることになった。ＡＫＲ／Ｊ系マウス
を交配する途中に偶然に作られたこのマウスは、同系マウスより非常に老化が速かったが、このマウスは、色々な遺伝子に変異を有していることが確認された。以後、単一グループの老化関連遺伝子の発見は、1990年代に報告された。報告された遺伝子は、ＲｅｃＱ familyであり、ＤＮＡ helicaseという酵素を発現させる遺伝子であった。この遺伝子に変異が発生すると、早期老化が発生したり、がんが生成される結果が報告されたが、これは、ＤＮＡの修復に影響を及ぼして発生すると知られた。単一遺伝子として老化に関連したものは、1997年に報告されたklotho遺伝子である。Klotho遺伝子は、高血圧マウスの形質変更動物モデルを作成している中、偶然に発見されたが、この遺伝子を発現しなくなったマウスでは、早期老化現象が発生し、生命が短くなった。さらに興味深い事実は、以後にこの遺伝子の発現を増加させたマウスは、雄性の場合、寿命が20.0～30.8％が増加し、雌性では、18.8～19.0％増加した。これは、単一遺伝子の発現によってマウスの寿命が増えることも、減ることもできるという事実を初めて世間に知らせることになった契機になった。そして、Klotho遺伝子の塩基配列は、動物間に非常に類似していて、マウスとヒトの場合は、98％程度一致することが報告された。これは、ヒトにおいてもklotho遺伝子の発現によって寿命が調節されうることを示す。
を交配する途中に偶然に作られたこのマウスは、同系マウスより非常に老化が速かったが、このマウスは、色々な遺伝子に変異を有していることが確認された。以後、単一グループの老化関連遺伝子の発見は、1990年代に報告された。報告された遺伝子は、ＲｅｃＱ familyであり、ＤＮＡ helicaseという酵素を発現させる遺伝子であった。この遺伝子に変異が発生すると、早期老化が発生したり、がんが生成される結果が報告されたが、これは、ＤＮＡの修復に影響を及ぼして発生すると知られた。単一遺伝子として老化に関連したものは、1997年に報告されたklotho遺伝子である。Klotho遺伝子は、高血圧マウスの形質変更動物モデルを作成している中、偶然に発見されたが、この遺伝子を発現しなくなったマウスでは、早期老化現象が発生し、生命が短くなった。さらに興味深い事実は、以後にこの遺伝子の発現を増加させたマウスは、雄性の場合、寿命が20.0～30.8％が増加し、雌性では、18.8～19.0％増加した。これは、単一遺伝子の発現によってマウスの寿命が増えることも、減ることもできるという事実を初めて世間に知らせることになった契機になった。そして、Klotho遺伝子の塩基配列は、動物間に非常に類似していて、マウスとヒトの場合は、98％程度一致することが報告された。これは、ヒトにおいてもklotho遺伝子の発現によって寿命が調節されうることを示す。
【0004】
ヒトにおいてklotho遺伝子ファミリーの中で老化に関連することが知られているα-klotho(以下、klothoと表記)は13番目の染色体に位置し、β-グルコシダーゼと塩基配列が類似した膜タンパク質を生産する。Klothoタンパク質は、腎臓の尿細管上皮細胞と脳の脈絡叢(choroid plexus)で主に発現し、一部が副甲状腺で発現することが報告された。Klotho遺伝子は、多様な老化の表現型に関連した遺伝子であり、klotho遺伝子が欠乏したマウスでは、寿命減少、活動性低下、成長遅延、粥状硬化症、動脈の石灰化、骨粗しょう症、生殖器未熟、不妊、皮膚萎縮、肺気腫などの老化過程と類似の症候群が発生する。Klotho変異マウスでは、ヒトにおいて老化によって発生するMonckeberg typeの動脈硬化症と類似
した様相の動脈硬化症が大動脈から小動脈まですべての動脈で観察され、angiogenesisとvasculogenesisに障害が発生する。
した様相の動脈硬化症が大動脈から小動脈まですべての動脈で観察され、angiogenesisとvasculogenesisに障害が発生する。
【0005】
Klotho ｍＲＮＡは、腎臓組織において他の組織より発現が顕著に高いが、高血圧、2
型糖尿病、糖尿病性腎症 、慢性腎不全の疾患モデルマウスの腎臓では、klotho ｍＲＮ
Ａの発現が減少する。Klotho発現低下マウスでは、血管内皮由来弛緩因子であるＮＯ(Ｎ
ｉｔｒｉｃ Ｏｘｉｄｅ)の生産が減少し、多くの心血管系疾患の危険因子を同時に有す
るOtsuka Long-Evans Tokushima fatty rat(ＯＬＥＴＦ)マウスにklotho遺伝子をウイル
ス遺伝子伝達体を利用して注入すると、血管内膜の機能異常が好転し、ＮＯの生産を増加させ、血管肥厚と線維化を抑制して血圧を降下させる。また、klotho遺伝子は、マウスに
おいて糖とインスリン代謝にも影響を及ぼし、代表的な高コレステロール血症治療剤であるスタチンは、腎近位尿細管細胞でklotho ｍＲＮＡの発現を増加させる。Klotho発現低下マウスでは、骨芽細胞および破骨細胞両方の分化障害による低い骨交替状態の骨減少症が発生し、これは、ヒトにおいて年齢の増加による骨量の減少および老人性骨粗しょう症の特徴と類似している。また、Klotho変異マウスでは、骨端部位の骨梁の異常な伸長と微細電算化断層撮影で異常な骨梁組織の所見が観察され、これは、骨吸収過程の障害に起因する。ヒトにおいて観察されるKlotho遺伝子突然変異による臨床的表現型の変化は、多様である。Klotho遺伝子ｅｘｏｎ2の3つの部位の突然変異を有するＫＬ－ＶＳ(functional variant of klotho)変形は、脂質代謝、血圧、寿命、認知機能、冠状動脈疾患および脳血管疾患に関連していて、Klotho遺伝子のmicrosatellite多形成と単一塩基遺伝子多形成が骨密度に関連していて、健康な成人女性においてKlotho遺伝子の単一塩基遺伝子多形成が心血管系疾患の危険因子および骨密度と関連していることも発表されたことがある。最近では、Klotho遺伝子とアルツハイマーとの関連性も色々な論文を通じて報告された。アルツハイマー認知症マウスモデルにおいてklothoを過発現させる場合、マウスの寿命が30％増加し、認知機能低下が抑制されることが報告された。また、klotho発現によって脳内でアミロイドベータタンパク質の生成が50％減少することが観察された。ヒトにおいても、klothoの発現量は、アルツハイマー疾患の進行程度と反比例し、klothoタンパク質がアルツハイマー疾患者の血液で炎症性サイトキンの量を減少させるという報告が提出された。
型糖尿病、糖尿病性腎症 、慢性腎不全の疾患モデルマウスの腎臓では、klotho ｍＲＮ
Ａの発現が減少する。Klotho発現低下マウスでは、血管内皮由来弛緩因子であるＮＯ(Ｎ
ｉｔｒｉｃ Ｏｘｉｄｅ)の生産が減少し、多くの心血管系疾患の危険因子を同時に有す
るOtsuka Long-Evans Tokushima fatty rat(ＯＬＥＴＦ)マウスにklotho遺伝子をウイル
ス遺伝子伝達体を利用して注入すると、血管内膜の機能異常が好転し、ＮＯの生産を増加させ、血管肥厚と線維化を抑制して血圧を降下させる。また、klotho遺伝子は、マウスに
おいて糖とインスリン代謝にも影響を及ぼし、代表的な高コレステロール血症治療剤であるスタチンは、腎近位尿細管細胞でklotho ｍＲＮＡの発現を増加させる。Klotho発現低下マウスでは、骨芽細胞および破骨細胞両方の分化障害による低い骨交替状態の骨減少症が発生し、これは、ヒトにおいて年齢の増加による骨量の減少および老人性骨粗しょう症の特徴と類似している。また、Klotho変異マウスでは、骨端部位の骨梁の異常な伸長と微細電算化断層撮影で異常な骨梁組織の所見が観察され、これは、骨吸収過程の障害に起因する。ヒトにおいて観察されるKlotho遺伝子突然変異による臨床的表現型の変化は、多様である。Klotho遺伝子ｅｘｏｎ2の3つの部位の突然変異を有するＫＬ－ＶＳ(functional variant of klotho)変形は、脂質代謝、血圧、寿命、認知機能、冠状動脈疾患および脳血管疾患に関連していて、Klotho遺伝子のmicrosatellite多形成と単一塩基遺伝子多形成が骨密度に関連していて、健康な成人女性においてKlotho遺伝子の単一塩基遺伝子多形成が心血管系疾患の危険因子および骨密度と関連していることも発表されたことがある。最近では、Klotho遺伝子とアルツハイマーとの関連性も色々な論文を通じて報告された。アルツハイマー認知症マウスモデルにおいてklothoを過発現させる場合、マウスの寿命が30％増加し、認知機能低下が抑制されることが報告された。また、klotho発現によって脳内でアミロイドベータタンパク質の生成が50％減少することが観察された。ヒトにおいても、klothoの発現量は、アルツハイマー疾患の進行程度と反比例し、klothoタンパク質がアルツハイマー疾患者の血液で炎症性サイトキンの量を減少させるという報告が提出された。
【0006】
このように明確な老化阻害効果を有しているklotho遺伝子の発現を誘導できる物質の開発に対する努力が続いてきた。知られた物質のうちklothoの発現を誘導できると報告されたものには、rapamycin、vitamin D、statinなどがある。2012年にボストン大学校の研究チームは、合計15万個に達する化合物ライブラリーを利用してklotho遺伝子発現を誘導できる化合物をスクリーニングして、3個の化合物を報告した。
【0007】
本発明者は、これらの化合物のうち、医薬品として開発可能性が大きい構造を有するcompound Ｈという化合物を選定して、実際実験を通じてこの化合物が細胞でklotho遺伝子を発現させることができることを確認し、その作用メカニズムに対する研究結果を論文に発表した。以後、compound Ｈ(比較例1)の構造を分析する実験を進めてklotho発現を誘
導できる化合物の構造的特性を把握し、これをベースにして10倍以上活性が増加した新しい化合物を作成することになった。さらに、本発明者らは、抗老化遺伝子klothoの発現を誘導する新規化合物が退行性神経疾患の予防または治療に有用であることを実験的に確認し、本発明を完成した。
［発明の概要］
導できる化合物の構造的特性を把握し、これをベースにして10倍以上活性が増加した新しい化合物を作成することになった。さらに、本発明者らは、抗老化遺伝子klothoの発現を誘導する新規化合物が退行性神経疾患の予防または治療に有用であることを実験的に確認し、本発明を完成した。
［発明の概要］
【0008】
［発明が解決しようとする課題］
本発明の目的は、式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を含む退行性
神経疾患の予防または治療用薬学組成物を提供することである。
本発明の目的は、式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を含む退行性
神経疾患の予防または治療用薬学組成物を提供することである。
【0009】
本発明の他の目的は、式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を含む退
行性神経疾患の予防または改善のための健康機能食品組成物、または食品組成物を提供することである。
行性神経疾患の予防または改善のための健康機能食品組成物、または食品組成物を提供することである。
【0010】
［課題を解決するための手段］
前記目的を達成するために、
本発明は、下記化学式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分
として含む退行性神経疾患(neurodegenerative disease)の予防または治療用薬学組成物
を提供する。
前記目的を達成するために、
本発明は、下記化学式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分
として含む退行性神経疾患(neurodegenerative disease)の予防または治療用薬学組成物
を提供する。
【0011】
【化1】
【0012】
(前記化学式1において、
Ｌ1は、単一結合または
Ｌ1は、単一結合または
【0013】
【化2】
【0014】
であり；
Ｒ1およびＲ2は、それぞれ－Ｈ、－ＯＨ、Ｃ1－10の直鎖または側鎖アルキル、または
Ｃ6－8のアリールアミドであり、ここで、前記アリールアミドのアリールには、ハロゲン、－ＮＯ2およびＣ1－10の直鎖または側鎖ハロゲン化アルキルのうち1種以上が置換され
ることができ；
前記Ｒ1およびＲ2は、これらが連結された炭素原子とともにＣ6－8のアリールを形成することができ；
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、それぞれ、－Ｈ、ハロゲン、－ＮＯ2またはＣ1－10
の直鎖または側鎖アルキルである)。
Ｒ1およびＲ2は、それぞれ－Ｈ、－ＯＨ、Ｃ1－10の直鎖または側鎖アルキル、または
Ｃ6－8のアリールアミドであり、ここで、前記アリールアミドのアリールには、ハロゲン、－ＮＯ2およびＣ1－10の直鎖または側鎖ハロゲン化アルキルのうち1種以上が置換され
ることができ；
前記Ｒ1およびＲ2は、これらが連結された炭素原子とともにＣ6－8のアリールを形成することができ；
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、それぞれ、－Ｈ、ハロゲン、－ＮＯ2またはＣ1－10
の直鎖または側鎖アルキルである)。
【0015】
また、本発明は、前記化学式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を有
効成分として含む退行性神経疾患の予防または改善用の健康機能食品組成物を提供する。
さらに、本発明は、前記化学式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を
有効成分として含む退行性神経疾患の予防または改善用食品組成物を提供する。
効成分として含む退行性神経疾患の予防または改善用の健康機能食品組成物を提供する。
さらに、本発明は、前記化学式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を
有効成分として含む退行性神経疾患の予防または改善用食品組成物を提供する。
【0016】
さらに、本発明は、前記化学式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を
有効成分として含む組成物を個体に投与または服用することを含む退行性神経疾患の予防または治療方法を提供する。
有効成分として含む組成物を個体に投与または服用することを含む退行性神経疾患の予防または治療方法を提供する。
【0017】
さらに、本発明は、前記化学式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を
有効成分として含む組成物の退行性神経疾患の予防または治療用途を提供する。
有効成分として含む組成物の退行性神経疾患の予防または治療用途を提供する。
【0018】
［発明の効果］
本発明に係る式1で表される化合物は、老化に関連する遺伝子であるKlotho遺伝子の発
現量を向上させる効果に優れ、退行性神経疾患の予防、改善又は治療用薬学組成物又は食品組成物として有用に使用することができる。
本発明に係る式1で表される化合物は、老化に関連する遺伝子であるKlotho遺伝子の発
現量を向上させる効果に優れ、退行性神経疾患の予防、改善又は治療用薬学組成物又は食品組成物として有用に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【0019】
【発明を実施するための形態】
【0020】
［発明を実施するための最良の形態］
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明は、下記化学式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分
として含む退行性神経疾患の予防または治療用／改善用組成物に関する。
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明は、下記化学式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分
として含む退行性神経疾患の予防または治療用／改善用組成物に関する。
【0021】
本発明による下記化学式1で表される化合物は、老化に関連する遺伝子であるKlotho遺
伝子の発現量を向上させる効果に優れ、退行性神経疾患の予防、改善又は治療用薬学組成物又は食品組成物として有用に使用することができる。
伝子の発現量を向上させる効果に優れ、退行性神経疾患の予防、改善又は治療用薬学組成物又は食品組成物として有用に使用することができる。
【0022】
退行性神経疾患の予防または治療用医薬組成物
本発明は、下記化学式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を含む退行
性神経疾患の予防または治療用薬学組成物を提供する。
本発明は、下記化学式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を含む退行
性神経疾患の予防または治療用薬学組成物を提供する。
【0023】
【化3】
【0024】
前記化学式1において、
Ｌ1は、単一結合または
Ｌ1は、単一結合または
【0025】
【化4】
【0026】
であり；
Ｒ1およびＲ2は、それぞれ－Ｈ、－ＯＨ、Ｃ1－10の直鎖または側鎖アルキル、または
Ｃ6－8のアリールアミドであり、ここで、前記アリールアミドのアリールには、ハロゲン、－ＮＯ2およびＣ1－10の直鎖または側鎖ハロゲン化アルキルのうち1種以上が置換され
ることができ；
前記Ｒ1およびＲ2は、これらが連結された炭素原子とともにＣ6－8のアリールを形成することができ；
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、それぞれ－Ｈ、ハロゲン、－ＮＯ2またはＣ1－10の
直鎖または側鎖アルキルでありうる。
Ｒ1およびＲ2は、それぞれ－Ｈ、－ＯＨ、Ｃ1－10の直鎖または側鎖アルキル、または
Ｃ6－8のアリールアミドであり、ここで、前記アリールアミドのアリールには、ハロゲン、－ＮＯ2およびＣ1－10の直鎖または側鎖ハロゲン化アルキルのうち1種以上が置換され
ることができ；
前記Ｒ1およびＲ2は、これらが連結された炭素原子とともにＣ6－8のアリールを形成することができ；
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、それぞれ－Ｈ、ハロゲン、－ＮＯ2またはＣ1－10の
直鎖または側鎖アルキルでありうる。
【0027】
本発明による一実施例において、
前記Ｌ1は、単一結合または
前記Ｌ1は、単一結合または
【0028】
【化5】
【0029】
であり；
Ｒ1およびＲ2は、それぞれ－Ｈ、－ＯＨ、Ｃ1－5の直鎖または側鎖アルキル、またはＣ6－7のアリールアミドであり、ここで、前記アリールアミドのアリールには、ハロゲン、－ＮＯ2およびＣ1－5の直鎖または側鎖ハロゲン化アルキルのうち1種以上が置換されることができ；
前記Ｒ1およびＲ2は、これらが連結された炭素原子とともにＣ6－7のアリールを形成することができ；
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、それぞれ－Ｈ、ハロゲン、－ＮＯ2またはＣ1－5の直鎖または側鎖アルキルでありうる。
Ｒ1およびＲ2は、それぞれ－Ｈ、－ＯＨ、Ｃ1－5の直鎖または側鎖アルキル、またはＣ6－7のアリールアミドであり、ここで、前記アリールアミドのアリールには、ハロゲン、－ＮＯ2およびＣ1－5の直鎖または側鎖ハロゲン化アルキルのうち1種以上が置換されることができ；
前記Ｒ1およびＲ2は、これらが連結された炭素原子とともにＣ6－7のアリールを形成することができ；
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、それぞれ－Ｈ、ハロゲン、－ＮＯ2またはＣ1－5の直鎖または側鎖アルキルでありうる。
【0030】
本発明による一実施例において、
前記Ｌ1は、単一結合または
前記Ｌ1は、単一結合または
【0031】
【化6】
【0032】
であり；
Ｒ1およびＲ2は、それぞれ－Ｈ、－ＯＨ、－ＣＨ3、またはフェニルアミドであり、こ
こで、前記フェニルアミドのフェニルには、－Ｃｌ、－ＮＯ2および－ＣＨ2Ｃｌのうち1
種以上が置換されることができ；
前記Ｒ1およびＲ2は、これらが連結された炭素原子とともにフェニルを形成することができ；
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、それぞれ－Ｈ、－Ｆ、－Ｃｌ、－ＮＯ2または－ＣＨ2ＣＨ3でありうる。
Ｒ1およびＲ2は、それぞれ－Ｈ、－ＯＨ、－ＣＨ3、またはフェニルアミドであり、こ
こで、前記フェニルアミドのフェニルには、－Ｃｌ、－ＮＯ2および－ＣＨ2Ｃｌのうち1
種以上が置換されることができ；
前記Ｒ1およびＲ2は、これらが連結された炭素原子とともにフェニルを形成することができ；
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、それぞれ－Ｈ、－Ｆ、－Ｃｌ、－ＮＯ2または－ＣＨ2ＣＨ3でありうる。
【0033】
本発明による一実施例において、
前記Ｌ1は、単一結合または
前記Ｌ1は、単一結合または
【0034】
【化7】
【0035】
であり；
Ｒ1は、－Ｈ、－ＯＨ、－ＣＨ3、
Ｒ1は、－Ｈ、－ＯＨ、－ＣＨ3、
【0036】
【化8】
【0037】
であり；
Ｒ2は、－Ｈであり；
前記Ｒ1およびＲ2は、これらが連結された炭素原子とともにフェニルを形成することができ；
Ｒ3は、－Ｈまたは、－Ｃｌであり；
Ｒ4は、－Ｈ、－Ｆまたは、－Ｃｌであり；
Ｒ5は、－Ｆ、－Ｃｌ、－ＮＯ2、または－ＣＨ2ＣＨ3であり；
Ｒ6は、－Ｈであり；
Ｒ7は、－Ｈであるものでありうる。
Ｒ2は、－Ｈであり；
前記Ｒ1およびＲ2は、これらが連結された炭素原子とともにフェニルを形成することができ；
Ｒ3は、－Ｈまたは、－Ｃｌであり；
Ｒ4は、－Ｈ、－Ｆまたは、－Ｃｌであり；
Ｒ5は、－Ｆ、－Ｃｌ、－ＮＯ2、または－ＣＨ2ＣＨ3であり；
Ｒ6は、－Ｈであり；
Ｒ7は、－Ｈであるものでありうる。
【0038】
本発明による化学式1で表される化合物の好ましい例としては、下記の化合物群が挙げ
られる。
1)Ｎ－(ベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－イル)－2－クロロ－4－ニトロベンズアミド；
2)8－メチル－2－［Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)］アミノベンゾオキサゾール；
3)2－((3,4－ジクロロフェニル)アミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－オル；
4)Ｎ－(2－(4－エチルフェニルアミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－イル)－2－クロロ－5－ニトロベンズアミド；
5)Ｎ－(2－(4－エチルフェニルアミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－イル)－3,4－ジクロロベンズアミド；
6)Ｎ－(2－(4－エチルフェニルアミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－イル)－3－(ク
ロロメチル)ベンズアミド；
7)2－［Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)］アミノベンゾオキサゾール；
8)Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)ナフト［2,3－ｄ］オキサゾール－2－アミン；
9)Ｎ－(3,4－ジフルオロフェニル)－5－メチルベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミン
；および
10)Ｎ－(3,4－ジフルオロフェニル)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミン。
られる。
1)Ｎ－(ベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－イル)－2－クロロ－4－ニトロベンズアミド；
2)8－メチル－2－［Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)］アミノベンゾオキサゾール；
3)2－((3,4－ジクロロフェニル)アミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－オル；
4)Ｎ－(2－(4－エチルフェニルアミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－イル)－2－クロロ－5－ニトロベンズアミド；
5)Ｎ－(2－(4－エチルフェニルアミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－イル)－3,4－ジクロロベンズアミド；
6)Ｎ－(2－(4－エチルフェニルアミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－イル)－3－(ク
ロロメチル)ベンズアミド；
7)2－［Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)］アミノベンゾオキサゾール；
8)Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)ナフト［2,3－ｄ］オキサゾール－2－アミン；
9)Ｎ－(3,4－ジフルオロフェニル)－5－メチルベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミン
；および
10)Ｎ－(3,4－ジフルオロフェニル)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミン。
【0039】
本発明の前記化学式1で表される化合物は、薬学的に許容可能な塩の形態で使用でき、
塩としては、薬学的に許容可能な遊離酸(free acid)により形成された酸付加塩が有用で
ある。薬学的に許容可能な塩という表現は、患者に比較的非毒性であり、無害な有効作用を有する濃度であり、この塩に起因した副作用が化学式1の塩基化合物の有利な効能を落
とさない化学式1の塩基化合物のいずれの有機または無機付加塩を意味する。これら塩は
、遊離酸としては、無機酸と有機酸が使用でき、無機酸としては、塩酸、臭素酸、硝酸、硫酸、過塩素酸、リン酸などが使用でき、有機酸としては、クエン酸、酢酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、メタンスルホン酸、グルコン酸、コハク酸、タルタル酸、ガラクツロン酸、エンボン酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、シュウ酸、(Ｄ)または(Ｌ)リンゴ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、4－トルエンスルホ
ン酸、サリチル酸、クエン酸、安息香酸またはマロン酸などが使用できる。また、これらの塩は、アルカリ金属塩(ナトリウム塩、カリウム塩など)およびアルカリ土類金属塩(カ
ルシウム塩、マグネシウム塩など)などを含む。例えば、酸付加塩としては、アセテート
、アスパルテート、ベンゾアート、ベシレート、バイカーボネート／カーボネート、バイサルフェート／サルフェート、ボラート、カムシレート、シトレート、エジシレート、エシレート、ホルメート、フマラート、グルセプテート、グルコネート、グルクロナート、ヘキサフルオルホスフェート、ハイベンゼート、ハイドロクロリド／クロリド、ハイドロブロミド／ブロミド、ハイドロヨージド／ヨージド、イセチオナート、ラクテート、マレート、マレアート、マロネート、メシレート、メチルサルフェート、ナフチレート、2－
ナフシレート、ニコチネート、ナイトレート、ヨロテート、オキサレート、パルミテート、パモエート、ホスフェート／水素ホスフェート／二水素ホスフェート、サッカレート、ステアレート、スクシネート、タルトレート、トシレート、トリフルオルアセテート、アルミニウム、アルギニン、ベンザチン、カルシウム、コリン、ジエチルアミン、ジオラミン、グリシン、リシン、マグネシウム、メグルミン、オラミン、カリウム、ナトリウム、トロメタミン、亜鉛塩などが含まれ得、これらのうち、ハイドロクロリドまたはトリフルオルアセテートが好ましい。
塩としては、薬学的に許容可能な遊離酸(free acid)により形成された酸付加塩が有用で
ある。薬学的に許容可能な塩という表現は、患者に比較的非毒性であり、無害な有効作用を有する濃度であり、この塩に起因した副作用が化学式1の塩基化合物の有利な効能を落
とさない化学式1の塩基化合物のいずれの有機または無機付加塩を意味する。これら塩は
、遊離酸としては、無機酸と有機酸が使用でき、無機酸としては、塩酸、臭素酸、硝酸、硫酸、過塩素酸、リン酸などが使用でき、有機酸としては、クエン酸、酢酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、メタンスルホン酸、グルコン酸、コハク酸、タルタル酸、ガラクツロン酸、エンボン酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、シュウ酸、(Ｄ)または(Ｌ)リンゴ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、4－トルエンスルホ
ン酸、サリチル酸、クエン酸、安息香酸またはマロン酸などが使用できる。また、これらの塩は、アルカリ金属塩(ナトリウム塩、カリウム塩など)およびアルカリ土類金属塩(カ
ルシウム塩、マグネシウム塩など)などを含む。例えば、酸付加塩としては、アセテート
、アスパルテート、ベンゾアート、ベシレート、バイカーボネート／カーボネート、バイサルフェート／サルフェート、ボラート、カムシレート、シトレート、エジシレート、エシレート、ホルメート、フマラート、グルセプテート、グルコネート、グルクロナート、ヘキサフルオルホスフェート、ハイベンゼート、ハイドロクロリド／クロリド、ハイドロブロミド／ブロミド、ハイドロヨージド／ヨージド、イセチオナート、ラクテート、マレート、マレアート、マロネート、メシレート、メチルサルフェート、ナフチレート、2－
ナフシレート、ニコチネート、ナイトレート、ヨロテート、オキサレート、パルミテート、パモエート、ホスフェート／水素ホスフェート／二水素ホスフェート、サッカレート、ステアレート、スクシネート、タルトレート、トシレート、トリフルオルアセテート、アルミニウム、アルギニン、ベンザチン、カルシウム、コリン、ジエチルアミン、ジオラミン、グリシン、リシン、マグネシウム、メグルミン、オラミン、カリウム、ナトリウム、トロメタミン、亜鉛塩などが含まれ得、これらのうち、ハイドロクロリドまたはトリフルオルアセテートが好ましい。
【0040】
また、本発明の前記化学式1で表される化合物は、薬学的に許容される塩だけでなく、
通常の方法によって製造できるすべての塩、異性体、水和物および溶媒和物を全部含む。
本発明による付加塩は、通常の方法で製造することができ、例えば、化学式1の化合物
を水混和性有機溶媒、例えば、アセトン、メタノール、エタノール、またはアセトニトリルなどに溶かし、過量の有機酸を加えたり、無機酸の酸水溶液を加えた後、沈殿させたり、結晶化させて製造することができる。次に、この混合物から溶媒や過量の酸を蒸発させた後、乾燥させて、付加塩を得たり、または析出された塩を吸引ろ過させて製造することができる。
通常の方法によって製造できるすべての塩、異性体、水和物および溶媒和物を全部含む。
本発明による付加塩は、通常の方法で製造することができ、例えば、化学式1の化合物
を水混和性有機溶媒、例えば、アセトン、メタノール、エタノール、またはアセトニトリルなどに溶かし、過量の有機酸を加えたり、無機酸の酸水溶液を加えた後、沈殿させたり、結晶化させて製造することができる。次に、この混合物から溶媒や過量の酸を蒸発させた後、乾燥させて、付加塩を得たり、または析出された塩を吸引ろ過させて製造することができる。
【0041】
前記化合物の製造方法1
本発明は、下記反応式1に示されたように、
化合物2を有機溶媒に溶かした後、化合物3を添加し、10～50℃で12～20時間反応させて化合物4を得る段階(段階1)；および
過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ)が溶解した有機溶媒に、前記段階1で得られた化合物4が溶解した有機溶媒を滴加した後、15～30℃で10～16時間反応させて化合物1Ａを得る段階(段階2)；
を含む化学式1Ａで表される化合物の製造方法を提供する。
本発明は、下記反応式1に示されたように、
化合物2を有機溶媒に溶かした後、化合物3を添加し、10～50℃で12～20時間反応させて化合物4を得る段階(段階1)；および
過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ)が溶解した有機溶媒に、前記段階1で得られた化合物4が溶解した有機溶媒を滴加した後、15～30℃で10～16時間反応させて化合物1Ａを得る段階(段階2)；
を含む化学式1Ａで表される化合物の製造方法を提供する。
【0042】
【化9】
【0043】
前記反応式1において、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、請求項1の化学式1で定義したものと同一
のものを表し、
前記化合物1Ａは、請求項1の化学式1に含まれる。
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、請求項1の化学式1で定義したものと同一
のものを表し、
前記化合物1Ａは、請求項1の化学式1に含まれる。
【0044】
本発明の製造方法において、前記有機溶媒の例としては、メタノール(ＭｅＯＨ)、ジメチルホルムアミド(ＤＭＦ)、アセトニトリル(ＭｅＣＮ)、テトラヒドロフラン(ＴＨＦ)、ジクロロメタン(ＤＣＭ)、1,2－ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、ジ
メチルスルホキシド(DMSO)またはジオキサンを単独でまたは混合して使用できる。
メチルスルホキシド(DMSO)またはジオキサンを単独でまたは混合して使用できる。
【0045】
本発明の製造方法において、前記製造方法によって製造できる化合物の例としては、8
－メチル－2－［Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)］アミノベンゾオキサゾール、2－［Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)］アミノベンゾオキサゾール、Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)ナ
フト［2,3－ｄ］オキサゾール－2－アミン、Ｎ－(3,4－ジフルオロフェニル)－5－メチルベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミンまたはＮ－(3,4－ジフルオロフェニル)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミンでありうる。
－メチル－2－［Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)］アミノベンゾオキサゾール、2－［Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)］アミノベンゾオキサゾール、Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)ナ
フト［2,3－ｄ］オキサゾール－2－アミン、Ｎ－(3,4－ジフルオロフェニル)－5－メチルベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミンまたはＮ－(3,4－ジフルオロフェニル)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミンでありうる。
【0046】
前記化合物の製造方法2
本発明は、下記反応式2に示されたように、
化合物5を有機溶媒に溶かした後、化合物3を添加し、10～50℃で12～20時間反応させて化合物6を得る段階(段階1)；
過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ)が溶解した有機溶媒に、前記段階1で得られた化合物6が溶解した有機溶媒を滴加した後、12～24時間反応させて化合物7を得る段階(段階2)；および
化合物7を有機溶媒に溶かし、三臭化ホウ素(ＢＢｒ 3)を添加した後、常温で20～28時間反応させて化合物1Ｂを得る段階(段階3)；
を含む化学式1Ｂで表される化合物の製造方法を提供する。
本発明は、下記反応式2に示されたように、
化合物5を有機溶媒に溶かした後、化合物3を添加し、10～50℃で12～20時間反応させて化合物6を得る段階(段階1)；
過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ)が溶解した有機溶媒に、前記段階1で得られた化合物6が溶解した有機溶媒を滴加した後、12～24時間反応させて化合物7を得る段階(段階2)；および
化合物7を有機溶媒に溶かし、三臭化ホウ素(ＢＢｒ 3)を添加した後、常温で20～28時間反応させて化合物1Ｂを得る段階(段階3)；
を含む化学式1Ｂで表される化合物の製造方法を提供する。
【0047】
【化10】
【0048】
前記反応式2において、
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、請求項1の化学式1で定義したものと同一のものを表
し、
前記化合物1Ｂは、請求項1の化学式1に含まれる。
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、請求項1の化学式1で定義したものと同一のものを表
し、
前記化合物1Ｂは、請求項1の化学式1に含まれる。
【0049】
本発明の製造方法において、前記有機溶媒の例としては、メタノール(ＭｅＯＨ)、ジメチルホルムアミド(ＤＭＦ)、アセトニトリル(ＭｅＣＮ)、テトラヒドロフラン(ＴＨＦ)、ジクロロメタン(ＤＣＭ)、1,2－ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、ジ
メチルスルホキシド(DMSO)またはジオキサンを単独でまたは混合して使用できる。
メチルスルホキシド(DMSO)またはジオキサンを単独でまたは混合して使用できる。
【0050】
本発明の製造方法において、前記製造方法によって製造できる化合物の例としては、2
－((3,4－ジクロロフェニル)アミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－オルでありうる。
－((3,4－ジクロロフェニル)アミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－オルでありうる。
【0051】
前記化合物の製造方法3
本発明は、下記反応式3に示されたように、
化合物8、二硫化炭素(Ｃａｒｂｏｎ ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ)、ヨードメタン(Ｉｏｄｏｍｅｔｈａｎｅ)、および水素化ナトリウム(ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｄｒｉｄｅ)を有機溶媒に
溶かした後、10～50℃で2～8時間反応させて化合物9を得る段階(段階1)；および
化合物9および化合物2を有機溶媒に溶かした後、2～8時間反応させて化合物1Ｃを得る
段階(段階2)；
を含む化学式1Ｃで表される化合物の製造方法を提供する。
本発明は、下記反応式3に示されたように、
化合物8、二硫化炭素(Ｃａｒｂｏｎ ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ)、ヨードメタン(Ｉｏｄｏｍｅｔｈａｎｅ)、および水素化ナトリウム(ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｄｒｉｄｅ)を有機溶媒に
溶かした後、10～50℃で2～8時間反応させて化合物9を得る段階(段階1)；および
化合物9および化合物2を有機溶媒に溶かした後、2～8時間反応させて化合物1Ｃを得る
段階(段階2)；
を含む化学式1Ｃで表される化合物の製造方法を提供する。
【0052】
【化11】
【0053】
前記反応式3において、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、請求項1の化学式1で定義したものと同一
のものを表し、
前記化合物1Ｃは、請求項1の化学式1に含まれる。
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、請求項1の化学式1で定義したものと同一
のものを表し、
前記化合物1Ｃは、請求項1の化学式1に含まれる。
【0054】
本発明の製造方法において、前記有機溶媒の例としては、メタノール(ＭｅＯＨ)、ジメチルホルムアミド(ＤＭＦ)、アセトニトリル(ＭｅＣＮ)、テトラヒドロフラン(ＴＨＦ)、ジクロロメタン(ＤＣＭ)、1,2－ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、ジ
メチルスルホキシド(DMSO)またはジオキサンを単独でまたは混合して使用できる。
メチルスルホキシド(DMSO)またはジオキサンを単独でまたは混合して使用できる。
【0055】
本発明の製造方法において、前記製造方法によって製造できる化合物の例としては、Ｎ－(ベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－イル)－2－クロロ－4－ニトロベンズアミドでありう
る。
る。
【0056】
前記化合物の製造方法4
本発明は、下記反応式4に示されたように、
化合物10および化合物3を有機溶媒に溶かした後、10～50℃で20～28時間反応させて化
合物11を得る段階(段階1)；
過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ)が溶解した有機溶媒に、前記段階1で得られた化合物11が溶解した有機溶媒を滴加した後、10～50℃で12～24時間
反応させて化合物12を得る段階(段階2)；
化合物12を触媒とともに有機溶媒に添加した後、水素ガスを注入して10～50℃で12～20時間反応させて化合物13を得る段階(段階3)；および
化合物13および化合物14を有機溶媒に溶かした後、10～50℃で12～24時間反応させて化合物1Ｄを得る段階(段階4)；
を含む化合物1Ｄで表される化合物の製造方法を提供する。
本発明は、下記反応式4に示されたように、
化合物10および化合物3を有機溶媒に溶かした後、10～50℃で20～28時間反応させて化
合物11を得る段階(段階1)；
過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ)が溶解した有機溶媒に、前記段階1で得られた化合物11が溶解した有機溶媒を滴加した後、10～50℃で12～24時間
反応させて化合物12を得る段階(段階2)；
化合物12を触媒とともに有機溶媒に添加した後、水素ガスを注入して10～50℃で12～20時間反応させて化合物13を得る段階(段階3)；および
化合物13および化合物14を有機溶媒に溶かした後、10～50℃で12～24時間反応させて化合物1Ｄを得る段階(段階4)；
を含む化合物1Ｄで表される化合物の製造方法を提供する。
【0057】
【化12】
【0058】
前記反応式4において、
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、請求項1の化学式1で定義したものと同一のものを表
し；
Ｒ8は、ハロゲン、－ＮＯ2およびＣ1－10の直鎖または側鎖ハロゲン化アルキルのうち1種以上であり；
前記化合物1Ｄは、請求項1の化学式1に含まれる。
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、請求項1の化学式1で定義したものと同一のものを表
し；
Ｒ8は、ハロゲン、－ＮＯ2およびＣ1－10の直鎖または側鎖ハロゲン化アルキルのうち1種以上であり；
前記化合物1Ｄは、請求項1の化学式1に含まれる。
【0059】
本発明の製造方法において、前記有機溶媒の例としては、メタノール(ＭｅＯＨ)、ジメ
チルホルムアミド(ＤＭＦ)、アセトニトリル(ＭｅＣＮ)、テトラヒドロフラン(ＴＨＦ)、ジクロロメタン(ＤＣＭ)、1,2－ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、ジ
メチルスルホキシド(DMSO)またはジオキサンを単独でまたは混合して使用できる。
チルホルムアミド(ＤＭＦ)、アセトニトリル(ＭｅＣＮ)、テトラヒドロフラン(ＴＨＦ)、ジクロロメタン(ＤＣＭ)、1,2－ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、ジ
メチルスルホキシド(DMSO)またはジオキサンを単独でまたは混合して使用できる。
【0060】
本発明の製造方法において、前記製造方法によって製造できる化合物の例としては、Ｎ－(2－(4－エチルフェニルアミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－イル)－2－クロロ－5
－ニトロベンズアミド、Ｎ－(2－(4－エチルフェニルアミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール
－5－イル)－3,4－ジクロロベンズアミドまたはＮ－(2－(4－エチルフェニルアミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－イル)－3－(クロロメチル)ベンズアミドでありうる。
－ニトロベンズアミド、Ｎ－(2－(4－エチルフェニルアミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール
－5－イル)－3,4－ジクロロベンズアミドまたはＮ－(2－(4－エチルフェニルアミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－イル)－3－(クロロメチル)ベンズアミドでありうる。
【0061】
本発明において、前記組成物はKlotho遺伝子の発現量を向上させることができる。
本発明において、前記退行性神経疾患は、脳卒中、中風、記憶力の喪失、記憶力の損傷、認知症、健忘症、認知機能障害、パーキンソン病、アルツハイマー病、ピーク(Pick)病、クロイツフェルト－ヤコブ(Creutzfeld-Kacob)病、ハンチントン病、およびルーゲリック病からなる群から選択される1つ以上の疾患を含むことができるが、これらに限定され
ない。
本発明において、前記退行性神経疾患は、脳卒中、中風、記憶力の喪失、記憶力の損傷、認知症、健忘症、認知機能障害、パーキンソン病、アルツハイマー病、ピーク(Pick)病、クロイツフェルト－ヤコブ(Creutzfeld-Kacob)病、ハンチントン病、およびルーゲリック病からなる群から選択される1つ以上の疾患を含むことができるが、これらに限定され
ない。
【0062】
本発明の化合物は、臨床投与時に経口および非経口の様々な剤形で投与でき、製剤化する場合には、通常使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を使用して製造される。
【0063】
経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、トローチ剤などが含まれ、このような固形製剤は、一つ以上の本発明の化合物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、デンプン、炭酸カルシウム、スクロース(ｓｕｃｒｏｓｅ)、ラクトース(ｌａｃｔｏｓｅ)またはゼラチンなどを混ぜて調製される。また、単純な賦形剤の他にマグネシウム、ステアレート、タルクのような潤滑剤も使用される。経口投与のための液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤またはシロップ剤などが該当するが、頻繁に使用される単純希釈剤である水、リキッドパラフィン以外に、様々な賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれ得る。
【0064】
非経口投与のための製剤には、滅菌水溶液、非水性溶剤、懸濁溶剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤などが含まれる。非水性溶剤、懸濁溶剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物油、エチルオレートのような注射可能なエステルなどが使用できる。坐剤の基剤としては、ウィテップゾール(ｗｉｔｅｐｓｏ
ｌ)、マクロゴール、ツイン(ｔｗｅｅｎ)61、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロール、ゼ
ラチンなどが使用できる。
ｌ)、マクロゴール、ツイン(ｔｗｅｅｎ)61、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロール、ゼ
ラチンなどが使用できる。
【0065】
また、本発明の化合物の人体に対する効果的な投与量は、患者の年齢、体重、性別、投与形態、健康状態および疾患程度によって異なり、一般的に、約0.001～100ｍｇ／ｋｇ／日であり、好ましくは、0.01～35ｍｇ／ｋｇ／日である。体重が70ｋｇの成人患者を基準とするとき、一般的に0.07～7000ｍｇ／日であり、好ましくは、0.7～2500ｍｇ／日であ
り、医師または薬剤師の判断によって一定の時間間隔で1日に1回～数回に分割投与することもできる。
り、医師または薬剤師の判断によって一定の時間間隔で1日に1回～数回に分割投与することもできる。
【0066】
退行性神経疾患の予防または改善用食品組成物または健康機能食品組成物
本発明は、前記化学式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を含む退行
性神経疾患の予防または改善のための食品組成物または健康機能食品組成物を提供する。
本発明は、前記化学式1で表される化合物またはその薬学的に許容される塩を含む退行
性神経疾患の予防または改善のための食品組成物または健康機能食品組成物を提供する。
【0067】
本発明において、組成物はクロソ遺伝子の発現量を向上させることができる。
本発明において、前記退行性神経疾患は、脳卒中、中風、記憶力の喪失、記憶力の損傷
、認知症、健忘症、認知機能障害、パーキンソン病、アルツハイマー病、ピーク(Pick)病、クロイツフェルト－ヤコブ(Creutzfeld-Kacob)病、ハンチントン病、およびルーゲリック病からなる群から選択される1つ以上の疾患を含むことができるが、これらに限定され
ない。
本発明において、前記退行性神経疾患は、脳卒中、中風、記憶力の喪失、記憶力の損傷
、認知症、健忘症、認知機能障害、パーキンソン病、アルツハイマー病、ピーク(Pick)病、クロイツフェルト－ヤコブ(Creutzfeld-Kacob)病、ハンチントン病、およびルーゲリック病からなる群から選択される1つ以上の疾患を含むことができるが、これらに限定され
ない。
【0068】
食品の種類には、特別な限定はない。本発明の有効物質を添加できる食品の例としては、ドリンク剤、肉類、ソーセージ、パン、ビスケット、モチ、チョコレート、キャンディ類、スナック類、菓子類、ピザ、ラーメン、その他麺類、ガム類、アイスクリーム類を含む酪農製品、各種スープ、飲料、アルコール飲料およびビタミン複合剤、乳製品および乳加工製品などがあり、通常の意味における健康食品および健康機能性食品を全部含む。
【0069】
本発明による有効物質を含有する健康食品および健康機能性食品組成物は、食品にそのまま添加したり、他の食品または食品成分と共に使用でき、通常の方法によって適切に使用できる。有効物質の混合量は、その使用目的(予防または改善用)によって適宜決定できる。一般的に、健康食品および健康機能性食品中の前記組成物の量は、全体食品重量の0.1～90重量部で加えることができる。しかしながら、健康維持を目的としたり、または健
康調節を目的とする長期間の摂取の場合には、前記量は、前記範囲以下であってもよく、安全性の面から何の問題もないので、有効物質は、前記範囲以上の量でも使用できる。
康調節を目的とする長期間の摂取の場合には、前記量は、前記範囲以下であってもよく、安全性の面から何の問題もないので、有効物質は、前記範囲以上の量でも使用できる。
【0070】
本発明の健康食品および健康機能性食品組成物は、指示された比率で必須成分として本発明の有効物質を含有する以外には、他の成分には特別な限定がなく、通常の飲料とともに様々な香味剤または天然炭水化物などをさらなる成分として含有してもよい。上述した天然炭水化物の例は、モノサッカライド、例えば、ブドウ糖、果糖など；ジサッカライド、例えばマルトース、スクロースなど；およびポリサッカライド、例えばデキストリン、シクロデキストリンなどのような通常の糖、およびキシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールである。上述したもの以外の香味剤として、天然香味剤(ソ
ーマチン、ステビア抽出物(例えばレバウディオサイドＡ、グリチルリチンなど)および合成香味剤(サッカリン、アスパルテームなど)を有利に使用できる。前記天然炭水化物の比率は、本発明の健康機能性食品組成物100ｇ当たり一般的に約1～20ｇ、好ましくは、約5
～12ｇである。
ーマチン、ステビア抽出物(例えばレバウディオサイドＡ、グリチルリチンなど)および合成香味剤(サッカリン、アスパルテームなど)を有利に使用できる。前記天然炭水化物の比率は、本発明の健康機能性食品組成物100ｇ当たり一般的に約1～20ｇ、好ましくは、約5
～12ｇである。
【0071】
前記の他に本発明の有効物質を含有する健康食品および健康機能性食品組成物は、様々な栄養剤、ビタミン、ミネラル(電解質)、合成風味剤および天然風味剤などの風味剤、着色剤および増進剤(チーズ、チョコレートなど)、ペクチン酸およびその塩、アルギン酸およびその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使用される炭酸化剤などを含有してもよい。その他、本発明の健康食品および健康機能性食品組成物は、天然果物ジュースおよび果物ジュース飲料および野菜飲料の製造のための果肉を含有してもよい。
【0072】
このような成分は、独立して、または組み合わせて使用できる。このような添加剤の比率は、あまり重要なことではないが、本発明の有効物質を含有する健康食品および健康機能性食品組成物100重量部当たり0.1～約20重量部の範囲で選択されることが一般的である。
【0073】
以下、本発明を下記の実施例によってさらに詳細に説明する。ただし、下記の実施例は、本発明を例示するものに過ぎず、本発明の内容が下記の実施例によって限定されるものではない。
【0074】
＜実施例1＞Ｎ－(ベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－イル)－2－クロロ－4－ニトロベンズアミド(Ｎ－(Ｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－2－ｙｌ)－2－ｃｈｌｏｒｏ－4－ｎｉｔｒ
ｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ,ＦＣＣＳ－17064)の製造
ｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ,ＦＣＣＳ－17064)の製造
【0075】
【化13】
【0076】
段階1：ジメチル(2－クロロ－4－ニトロベンゾイル)カルボニミドジチオエート(Ｄｉｍｅｔｈｙｌ(2－ｃｈｌｏｒｏ－4－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｙｌ)ｃａｒｂｏｎｉｍｉｄｏｄｉｔｈｉｏａｔｅ、17064－2－1)の製造
2－クロロ－4－ニトロベンズアミド(2－Ｃｈｌｏｒｏ－4－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚａｍｉ
ｄｅ)(500ｍｇ、2.49ｍｍｏｌ)、二硫化炭素(Ｃａｒｂｏｎ ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ,ＣＳ2)(759ｍｇ、9.97ｍｍｏｌ)、ヨードメタン(Ｉｏｄｏｍｅｔｈａｎｅ)(1.13ｇ、7.97ｍｍｏｌ)をジメチルホルムアミド(Ｎ,Ｎ－ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ)(7ｍＬ)に溶
かした後、60％水素化ナトリウム(ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｄｒｉｄｅ)(200ｍｇ、4.98ｍｍｏｌ)を入れ、室温で5時間撹拌した。
2－クロロ－4－ニトロベンズアミド(2－Ｃｈｌｏｒｏ－4－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚａｍｉ
ｄｅ)(500ｍｇ、2.49ｍｍｏｌ)、二硫化炭素(Ｃａｒｂｏｎ ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ,ＣＳ2)(759ｍｇ、9.97ｍｍｏｌ)、ヨードメタン(Ｉｏｄｏｍｅｔｈａｎｅ)(1.13ｇ、7.97ｍｍｏｌ)をジメチルホルムアミド(Ｎ,Ｎ－ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ)(7ｍＬ)に溶
かした後、60％水素化ナトリウム(ｓｏｄｉｕｍ ｈｙｄｒｉｄｅ)(200ｍｇ、4.98ｍｍｏｌ)を入れ、室温で5時間撹拌した。
【0077】
反応混合物に氷水(ｉｃｅ－ｃｏｌｄ ｗａｔｅｒ)をゆっくり加え、エチルアセテート(ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ)で抽出した。有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥した後、減圧下で溶媒を除去した。反応混合物をシリカ－ゲルカラムクロマトグラフィー(
Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒａｐｈｙ)(10％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、ジメチル(2－クロロ－4－ニトロベンゾイル)カルボニミドジチオエート(Ｄｉｍｅｔｈｙｌ(2－ｃｈｌｏｒｏ－4－ｎｉｔ
ｒｏｂｅｎｚｏｙｌ)ｃａｒｂｏｎｉｍｉｄｏｄｉｔｈｉｏａｔｅ、17064－2－1)を淡黄
色の固体(160ｍｇ、21％)として得た。
Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒａｐｈｙ)(10％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、ジメチル(2－クロロ－4－ニトロベンゾイル)カルボニミドジチオエート(Ｄｉｍｅｔｈｙｌ(2－ｃｈｌｏｒｏ－4－ｎｉｔ
ｒｏｂｅｎｚｏｙｌ)ｃａｒｂｏｎｉｍｉｄｏｄｉｔｈｉｏａｔｅ、17064－2－1)を淡黄
色の固体(160ｍｇ、21％)として得た。
【0078】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6)；δ8.34(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.0Ｈｚ)、8.29(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.4、8.8Ｈｚ)、8.20(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.4Ｈｚ)、2.65(ｓ、6Ｈ)。
【0079】
段階2：Ｎ－(ベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－イル)－2－クロロ－4－ニトロベンズアミド(Ｎ－(Ｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－2－ｙｌ)－2－ｃｈｌｏｒｏ－4－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ,ＦＣＣＳ－17064)の製造
前記段階1で得られたジメチル(2－クロロ－4－ニトロベンゾイル)カルボニミドジチオ
エート(Ｄｉｍｅｔｈｙｌ(2－ｃｈｌｏｒｏ－4－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｙｌ)ｃａｒｂｏ
ｎｉｍｉｄｏｄｉｔｈｉｏａｔｅ、17064－2－1)(150ｍｇ、0.49ｍｍｏｌ)をジメチルホ
ルムアミド(Ｎ,Ｎ－ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ)(15ｍＬ)に溶かした後、2－アミノフェノール(2－ａｍｉｎｏｐｈｅｎｏｌ)(53ｍｇ、0.49ｍｍｏｌ)を入れた。
前記段階1で得られたジメチル(2－クロロ－4－ニトロベンゾイル)カルボニミドジチオ
エート(Ｄｉｍｅｔｈｙｌ(2－ｃｈｌｏｒｏ－4－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｙｌ)ｃａｒｂｏ
ｎｉｍｉｄｏｄｉｔｈｉｏａｔｅ、17064－2－1)(150ｍｇ、0.49ｍｍｏｌ)をジメチルホ
ルムアミド(Ｎ,Ｎ－ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ)(15ｍＬ)に溶かした後、2－アミノフェノール(2－ａｍｉｎｏｐｈｅｎｏｌ)(53ｍｇ、0.49ｍｍｏｌ)を入れた。
【0080】
反応混合物を6時間還流した後、減圧下で溶媒を除去した。反応混合物にジエチルエー
テル(ｄｉｅｔｈｙｌ ｅｔｈｅｒ)を入れ、沈殿した固体をフィルターして得られた固体をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒ
ａｐｈｙ)(40％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、目的化
合物Ｎ－(ベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－イル)－2－クロロ－4－ニトロベンズアミド(Ｎ－(Ｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－2－ｙｌ)－2－ｃｈｌｏｒｏ－4－ｎｉｔｒｏｂｅｎ
ｚａｍｉｄｅ,ＦＣＣＳ－17064)を茶色の固体(70ｍｇ、30％)として得た。
テル(ｄｉｅｔｈｙｌ ｅｔｈｅｒ)を入れ、沈殿した固体をフィルターして得られた固体をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒ
ａｐｈｙ)(40％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、目的化
合物Ｎ－(ベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－イル)－2－クロロ－4－ニトロベンズアミド(Ｎ－(Ｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－2－ｙｌ)－2－ｃｈｌｏｒｏ－4－ｎｉｔｒｏｂｅｎ
ｚａｍｉｄｅ,ＦＣＣＳ－17064)を茶色の固体(70ｍｇ、30％)として得た。
【0081】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6)；δ8.36(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.0Ｈｚ)、8.3
3(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.0、8.4Ｈｚ)、8.09(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.4Ｈｚ)、7.62－7.56(ｍ、2Ｈ)
、7.40－7.33(ｍ、2Ｈ)。
3(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.0、8.4Ｈｚ)、8.09(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.4Ｈｚ)、7.62－7.56(ｍ、2Ｈ)
、7.40－7.33(ｍ、2Ｈ)。
【0082】
＜実施例2＞8－メチル－2－［Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)］アミノベンゾオキサゾール(8－Ｍｅｔｈｙｌ－2－［Ｎ－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)］ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｘａｚｏｌｅ、ＦＣＣＳ－17065)の製造
【0083】
【化14】
【0084】
段階1：1－(3,4－ジクロロフェニル)－3－(2－ヒドロキシ－5－メチルフェニル)チオウレア(1－(3,4－Ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏｘｙ－5－ｍｅｔｈ
ｙｌｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、17065－2－1)の製造
2－アミノ－ｐ－クレゾール(2－Ａｍｉｎｏ－ｐ－ｃｒｅｓｏｌ)(300ｍｇ、2.44ｍｍｏｌ)をメタノール(ｍｅｔｈａｎｏｌ)(12ｍＬ)に溶かした後、3,4－ジクロロフェニルイソチオシアネート(3,4－ｄｉｃｈｌｏｌｒｏｐｈｅｎｙｌ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ)(497ｍｇ、2.44ｍｍｏｌ)を入れ、室温で18時間撹拌した。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅ
ｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)で反応終結を確認した後、冷蔵庫(0～4℃)で冷却(ｃｏｏｌｉｎｇ)した。沈殿した固体をフィルターして、白色固体(346ｍｇ)として1－(3,4
－ジクロロフェニル)－3－(2－ヒドロキシ－5－メチルフェニル)チオウレア(1－(3,4－Ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏｘｙ－5－ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、17065－2－1)を得、さらなる精製することなく、次のステップに使用した。
ｙｌｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、17065－2－1)の製造
2－アミノ－ｐ－クレゾール(2－Ａｍｉｎｏ－ｐ－ｃｒｅｓｏｌ)(300ｍｇ、2.44ｍｍｏｌ)をメタノール(ｍｅｔｈａｎｏｌ)(12ｍＬ)に溶かした後、3,4－ジクロロフェニルイソチオシアネート(3,4－ｄｉｃｈｌｏｌｒｏｐｈｅｎｙｌ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ)(497ｍｇ、2.44ｍｍｏｌ)を入れ、室温で18時間撹拌した。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅ
ｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)で反応終結を確認した後、冷蔵庫(0～4℃)で冷却(ｃｏｏｌｉｎｇ)した。沈殿した固体をフィルターして、白色固体(346ｍｇ)として1－(3,4
－ジクロロフェニル)－3－(2－ヒドロキシ－5－メチルフェニル)チオウレア(1－(3,4－Ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏｘｙ－5－ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、17065－2－1)を得、さらなる精製することなく、次のステップに使用した。
【0085】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6)；δ7.98(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝0.4,2.0Ｈｚ)、7.55－7.50(ｍ、2Ｈ)、7.43(ｂｒ ｓ、1Ｈ)、6.94－6.90(ｍ、1Ｈ)、6.85(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.4Ｈｚ)2.24(ｓ、3Ｈ)。
【0086】
段階2：8－メチル－2－［Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)］アミノベンゾオキサゾール(8－Ｍｅｔｈｙｌ－2－［Ｎ－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)］ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｘａｚｏｌｅ、ＦＣＣＳ－17065)の製造
過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ,ＫＯ2)(375ｍｇ、5.29ｍｍｏｌ)、アセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)(15ｍＬ)の溶液に前記段階1で得られた1－(3,4－ジクロロフェニル)－3－(2－ヒドロキシ－5－メチルフェニル)チオウレア(1－(3,4－Ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏｘｙ－5－ｍｅ
ｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、17065－2－1)(346ｍｇ、1.06ｍｍｏｌ)をアセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)(25ｍＬ)に溶かした溶液をゆっくり加
えた後、室温で18時間撹拌した。
過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ,ＫＯ2)(375ｍｇ、5.29ｍｍｏｌ)、アセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)(15ｍＬ)の溶液に前記段階1で得られた1－(3,4－ジクロロフェニル)－3－(2－ヒドロキシ－5－メチルフェニル)チオウレア(1－(3,4－Ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏｘｙ－5－ｍｅ
ｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、17065－2－1)(346ｍｇ、1.06ｍｍｏｌ)をアセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)(25ｍＬ)に溶かした溶液をゆっくり加
えた後、室温で18時間撹拌した。
【0087】
反応混合物にジクロロメタン(ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ)と水を入れて抽出した。有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥した後、減圧下で溶媒を除去した。反応混合物をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇ
ｒａｐｈｙ)(10％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、目的
化合物8－メチル－2－［Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)］アミノベンゾオキサゾール(8－
Ｍｅｔｈｙｌ－2－［Ｎ－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)］ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏ
ｘａｚｏｌｅ、ＦＣＣＳ－17065)を白色の固体(170ｍｇ、24％、2 ｓｔｅｐｓ)として得た。
ｒａｐｈｙ)(10％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、目的
化合物8－メチル－2－［Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)］アミノベンゾオキサゾール(8－
Ｍｅｔｈｙｌ－2－［Ｎ－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)］ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏ
ｘａｚｏｌｅ、ＦＣＣＳ－17065)を白色の固体(170ｍｇ、24％、2 ｓｔｅｐｓ)として得た。
【0088】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6)；δ8.29(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.8Ｈｚ)、7.73(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.8、8.8Ｈｚ)、7.76(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈｚ)、7.32－7.20(ｍ、1Ｈ)
、7.28(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.0Ｈｚ)、7.00－6.970(ｍ、1Ｈ)、2.41(ｓ、3Ｈ)。
、7.28(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.0Ｈｚ)、7.00－6.970(ｍ、1Ｈ)、2.41(ｓ、3Ｈ)。
【0089】
＜実施例3＞2－((3,4－ジクロロフェニル)アミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－オル(2－((3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ａｍｉｎｏ)ｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ
－5－ｏｌ、ＦＣＣＳ－17066)の製造
－5－ｏｌ、ＦＣＣＳ－17066)の製造
【0090】
【化15】
【0091】
段階1：1－(3,4－ジクロロフェニル)－3－(2－ヒドロキシ－5－メトキシフェニル)チオウレア(1－(3,4－Ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏｘｙ－5－ｍｅｔ
ｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、17066－3－1)の製造
2－アミノ－4－メトキシフェノール(2－Ａｍｉｎｏ－4－ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｏｌ)(1.13ｇ、8.12ｍｍｏｌ)をメタノール(ｍｅｔｈａｎｏｌ)(40ｍＬ)に溶かした後、3,4－
ジクロロフェニルイソチオシアネート(3,4－ｄｉｃｈｌｏｌｒｏｐｈｅｎｙｌ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ)(1.99ｇ、9.74ｍｍｏｌ)を入れ、室温で18時間撹拌した。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)で反応終結を確認した後、冷蔵
庫(0～4℃)で冷却(ｃｏｏｌｉｎｇ)した。沈殿した固体をフィルターして、茶色固体(2ｇ)として1－(3,4－ジクロロフェニル)－3－(2－ヒドロキシ－5－メトキシフェニル)チオウレア(1－(3,4－Ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏｘｙ－5－ｍｅｔｈ
ｏｘｙｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、17066－3－1)を得、さらなる精製することなく
、次のステップに使用した。
ｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、17066－3－1)の製造
2－アミノ－4－メトキシフェノール(2－Ａｍｉｎｏ－4－ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｏｌ)(1.13ｇ、8.12ｍｍｏｌ)をメタノール(ｍｅｔｈａｎｏｌ)(40ｍＬ)に溶かした後、3,4－
ジクロロフェニルイソチオシアネート(3,4－ｄｉｃｈｌｏｌｒｏｐｈｅｎｙｌ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ)(1.99ｇ、9.74ｍｍｏｌ)を入れ、室温で18時間撹拌した。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)で反応終結を確認した後、冷蔵
庫(0～4℃)で冷却(ｃｏｏｌｉｎｇ)した。沈殿した固体をフィルターして、茶色固体(2ｇ)として1－(3,4－ジクロロフェニル)－3－(2－ヒドロキシ－5－メトキシフェニル)チオウレア(1－(3,4－Ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏｘｙ－5－ｍｅｔｈ
ｏｘｙｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、17066－3－1)を得、さらなる精製することなく
、次のステップに使用した。
【0092】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ4)；δ7.82(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.4Ｈｚ)、7.48－7.44(ｍ、2Ｈ)、7.39(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝1.4、8.8Ｈｚ)、6.81(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈｚ)、6.66(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝1.6、8.8Ｈｚ)、3.73(ｓ、3Ｈ)。
【0093】
段階2：Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)－5－メトキシベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミン(Ｎ－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－5－ｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｏ［ｄ］
ｏｘａｚｏｌ－2－ａｍｉｎｅ、17066－3－2)の製造
過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ,ＫＯ2)(540ｍｇ、7.6ｍ
ｍｏｌ)、アセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)(20ｍＬ)の溶液に前記段階1で得られた17066－3－1(525ｍｇ、1.52ｍｍｏｌ)をアセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)(30ｍＬ)に溶かした溶液をゆっくり加えた後、室温で18時間撹拌した。反応混合物にジクロロメタン(ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ)と水を入れ、抽出した
。有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥した後、減圧下で溶媒を除去した。反応混合物をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇ
ｒａｐｈｙ)(20％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)－5－メトキシベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミン(Ｎ－(3,4
－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－5－ｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－2－ａｍｉｎｅ、17066－3－2)を茶色の固体(230ｍｇ、35％)として得た。
ｏｘａｚｏｌ－2－ａｍｉｎｅ、17066－3－2)の製造
過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ,ＫＯ2)(540ｍｇ、7.6ｍ
ｍｏｌ)、アセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)(20ｍＬ)の溶液に前記段階1で得られた17066－3－1(525ｍｇ、1.52ｍｍｏｌ)をアセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)(30ｍＬ)に溶かした溶液をゆっくり加えた後、室温で18時間撹拌した。反応混合物にジクロロメタン(ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ)と水を入れ、抽出した
。有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥した後、減圧下で溶媒を除去した。反応混合物をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇ
ｒａｐｈｙ)(20％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)－5－メトキシベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミン(Ｎ－(3,4
－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－5－ｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－2－ａｍｉｎｅ、17066－3－2)を茶色の固体(230ｍｇ、35％)として得た。
【0094】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6)；δ8.29(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.4Ｈｚ)、7.70(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.4、8.8Ｈｚ)、7.55(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈｚ)、7.30(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈｚ)、7.08(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.8Ｈｚ)、7.74(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.4、8.8Ｈｚ)、3.84(ｓ、3Ｈ)。
【0095】
段階3：2－((3,4－ジクロロフェニル)アミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－オル(2－((3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ａｍｉｎｏ)ｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－5－ｏｌ、ＦＣＣＳ－17066)の製造
Ａｒガス雰囲気下で前記段階2で得られた17066－3－2(200ｍｇ、0.65ｍｍｏｌ)をジク
ロロメタン(ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ)(15ｍＬ、ａｎｈｙｄｒｏｕｓ)に溶かした後、氷浴(ｉｃｅ－ｂａｔｈ)で冷却(ｃｏｏｌｉｎｇ)した。三臭化ホウ素(ＢＢｒ3)(3.23ｍＬ、1.0Ｍ ｉｎ ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ)をゆっくり入れ、室温まで温度を上げた後、24時間撹拌した。水酸化ナトリウム(ＮａＯＨ)溶液(8ｍＬ、1.0Ｍ ｉｎ ｗ
ａｔｅｒ)をゆっくり入れ、反応を終結し、分液漏斗(ｓｅｐａｒａｔｏｒｙ ｆｕｎｎｅｌ)に移して、有機層と水層を分離した。水層をエチルアセテート(ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ)で抽出した後、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥した後、減圧下で溶媒を除去した。反応混合物
をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒ
ａｐｈｙ)(40％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、目的化
合物2－((3,4－ジクロロフェニル)アミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－オル(2－((3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ａｍｉｎｏ)ｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－5－ｏｌ
、ＦＣＣＳ－17066)を茶色の固体(97ｍｇ、50％)として得た。
Ａｒガス雰囲気下で前記段階2で得られた17066－3－2(200ｍｇ、0.65ｍｍｏｌ)をジク
ロロメタン(ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ)(15ｍＬ、ａｎｈｙｄｒｏｕｓ)に溶かした後、氷浴(ｉｃｅ－ｂａｔｈ)で冷却(ｃｏｏｌｉｎｇ)した。三臭化ホウ素(ＢＢｒ3)(3.23ｍＬ、1.0Ｍ ｉｎ ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ)をゆっくり入れ、室温まで温度を上げた後、24時間撹拌した。水酸化ナトリウム(ＮａＯＨ)溶液(8ｍＬ、1.0Ｍ ｉｎ ｗ
ａｔｅｒ)をゆっくり入れ、反応を終結し、分液漏斗(ｓｅｐａｒａｔｏｒｙ ｆｕｎｎｅｌ)に移して、有機層と水層を分離した。水層をエチルアセテート(ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ)で抽出した後、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥した後、減圧下で溶媒を除去した。反応混合物
をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒ
ａｐｈｙ)(40％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、目的化
合物2－((3,4－ジクロロフェニル)アミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－オル(2－((3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ａｍｉｎｏ)ｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－5－ｏｌ
、ＦＣＣＳ－17066)を茶色の固体(97ｍｇ、50％)として得た。
【0096】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6)；δ8.29(ｂｒ ｓ、－ＯＨ)、8.26(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.4Ｈｚ)、7.72(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.4、8.8Ｈｚ)、7.56(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈ
ｚ)、7.21(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.0、7.2Ｈｚ)、6.95(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.0Ｈｚ)、6.66(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.4、8.8Ｈｚ)。
ｚ)、7.21(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.0、7.2Ｈｚ)、6.95(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.0Ｈｚ)、6.66(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.4、8.8Ｈｚ)。
【0097】
＜実施例4＞Ｎ－(2－(4－エチルフェニルアミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－イル)－2－クロロ－5－ニトロベンズアミド(Ｎ－(2－(4－Ｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｏ)ｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－5－ｙｌ)－2－ｃｈｌｏｒｏ－5－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ、ＦＣＣＳ－17067)の製造
【0098】
【化16】
【0099】
段階1：1－(4－エチルフェニル)－3－(2－ヒドロキシ－5－ニトロフェニル)チオウレア(1－(4－ｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏｘｙ－5－ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙ
ｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、Ｉｎｔｅｒｍ－3－1)の製造
2－アミノ－4－ニトロフェノール(2－Ａｍｉｎｏ－4－ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｏｌ)(1.88
ｇ、12.25ｍｍｏｌ)と4－エチルフェニルイソチオシアネート(4－ｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙ
ｌ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎｔｅ)(2ｇ、12.25ｍｍｏｌ)をメタノール(ｍｅｔｈａｎｏｌ)(80ｍＬ)に溶かした後、室温で一日間撹拌した。減圧下で溶媒を除去した後、クロマト
グラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒａｐｈｙ)(20％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、1－(4－エチルフェ
ニル)－3－(2－ヒドロキシ－5－ニトロフェニル)チオウレア(1－(4－ｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏｘｙ－5－ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、Ｉｎｔｅｒｍ－3－1)を茶色の固体(2.9ｇ、65％)として得た。
ｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、Ｉｎｔｅｒｍ－3－1)の製造
2－アミノ－4－ニトロフェノール(2－Ａｍｉｎｏ－4－ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｏｌ)(1.88
ｇ、12.25ｍｍｏｌ)と4－エチルフェニルイソチオシアネート(4－ｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙ
ｌ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎｔｅ)(2ｇ、12.25ｍｍｏｌ)をメタノール(ｍｅｔｈａｎｏｌ)(80ｍＬ)に溶かした後、室温で一日間撹拌した。減圧下で溶媒を除去した後、クロマト
グラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒａｐｈｙ)(20％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、1－(4－エチルフェ
ニル)－3－(2－ヒドロキシ－5－ニトロフェニル)チオウレア(1－(4－ｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏｘｙ－5－ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、Ｉｎｔｅｒｍ－3－1)を茶色の固体(2.9ｇ、65％)として得た。
【0100】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ4)；δ9.24(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.8Ｈｚ)、7.88(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.0、9.2Ｈｚ)、7.36(ｄ、2Ｈ、Ｊ＝8.4Ｈｚ)、7.25(ｄ、2Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈｚ)、6.94(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝9.2Ｈｚ)、2.66(ｑ、2Ｈ、Ｊ＝7.6Ｈｚ)、1.24(ｔ、3Ｈ、Ｊ＝7.6Ｈｚ)。
【0101】
段階2：Ｎ－(4－エチルフェニル)－5－ニトロベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミン(
Ｎ－(4－ｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ)－5－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－2－
ａｍｉｎｅ、Ｉｎｔｅｒｍ－3－2)の製造
過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ,ＫＯ2)(2.8ｇ、39.38ｍ
ｍｏｌ)、アセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)(130ｍＬ)の溶液を氷浴(ｉｃｅ－ｂａｔｈ)で冷却(ｃｏｏｌｉｎｇ)した後、前記段階1で得られたＩｎｔｅｒｍ－3－1(2.5ｇ、7.88ｍｍｏｌ)をアセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)(170ｍＬ)に溶かした溶液をゆっくり加えた後、室温で18時間撹拌した。反応混合物にジクロ
ロメタン(ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ)と水を入れ、抽出した。有機層を塩水で洗浄して、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥した後、減圧下で溶媒を除去した。反応混合物をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒａｐｈｙ)(10％
Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、化合物Ｉｎｔｅｒｍ－3－2を茶色の固体(1.78ｇ、80％)として得た。
Ｎ－(4－ｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ)－5－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－2－
ａｍｉｎｅ、Ｉｎｔｅｒｍ－3－2)の製造
過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ,ＫＯ2)(2.8ｇ、39.38ｍ
ｍｏｌ)、アセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)(130ｍＬ)の溶液を氷浴(ｉｃｅ－ｂａｔｈ)で冷却(ｃｏｏｌｉｎｇ)した後、前記段階1で得られたＩｎｔｅｒｍ－3－1(2.5ｇ、7.88ｍｍｏｌ)をアセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)(170ｍＬ)に溶かした溶液をゆっくり加えた後、室温で18時間撹拌した。反応混合物にジクロ
ロメタン(ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ)と水を入れ、抽出した。有機層を塩水で洗浄して、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥した後、減圧下で溶媒を除去した。反応混合物をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒａｐｈｙ)(10％
Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、化合物Ｉｎｔｅｒｍ－3－2を茶色の固体(1.78ｇ、80％)として得た。
【0102】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｄ4)；δ8.20(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝1.0Ｈｚ)、8.08(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝0.8、9.6Ｈｚ)、7.59(ｄ、2Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈｚ)、7.51(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈｚ)、7.22(ｄ、2Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈｚ)、2.64(ｑ、2Ｈ、Ｊ＝7.6Ｈｚ)、1.24(ｔ、3Ｈ、Ｊ＝7.6Ｈｚ)。
【0103】
段階3：Ｎ－(4－エチルフェニル)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－2,5－ジアミン(Ｎ－(4－ｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ)ｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌｅ－2,5－ｄｉａｍｉｎｅ、Ｉｎｔｅｒｍ－3－3)の製造
Ｐｄ／Ｃ(Ｐａｌｌａｄｉｕｍ ｏｎ ｃａｒｂｏｎ)(1.70ｇ、0.80ｍｍｏｌ、10ｗｔ.％、ｗｅｔ ｓｕｐｐｏｒｔ)を丸いフラスコ(ｒｏｕｎｄ－ｆｌａｓｋ)に称量して入れ
た後、Ａｒガスでパージング(ｐｕｒｇｉｎｇ)した。そこへ前記段階2で得られたＩｎｔ
ｅｒｍ－3－2(1.58ｇ、5.30ｍｍｏｌ)をメタノール(ｍｅｔｈａｎｏｌ)(80ｍＬ)に溶かした溶液をゆっくり入れた後、Ｈ2(ｇ)で置換した。Ｈ2(ｇ)をｂｕｂｂｌｉｎｇしながら、室温で18時間撹拌した。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)で反応終結を確認後、Ｃｅｌｉｔｅ ｐａｄでフィルターした後、減圧下で溶媒を除去した。反応混合物をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏ
ｍａｔｒｏｇｒａｐｈｙ)(40％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精
製して、化合物Ｉｎｔｅｒｍ－3－3を淡茶色の固体(1.21ｇ、90％)として得た。
Ｐｄ／Ｃ(Ｐａｌｌａｄｉｕｍ ｏｎ ｃａｒｂｏｎ)(1.70ｇ、0.80ｍｍｏｌ、10ｗｔ.％、ｗｅｔ ｓｕｐｐｏｒｔ)を丸いフラスコ(ｒｏｕｎｄ－ｆｌａｓｋ)に称量して入れ
た後、Ａｒガスでパージング(ｐｕｒｇｉｎｇ)した。そこへ前記段階2で得られたＩｎｔ
ｅｒｍ－3－2(1.58ｇ、5.30ｍｍｏｌ)をメタノール(ｍｅｔｈａｎｏｌ)(80ｍＬ)に溶かした溶液をゆっくり入れた後、Ｈ2(ｇ)で置換した。Ｈ2(ｇ)をｂｕｂｂｌｉｎｇしながら、室温で18時間撹拌した。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)で反応終結を確認後、Ｃｅｌｉｔｅ ｐａｄでフィルターした後、減圧下で溶媒を除去した。反応混合物をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏ
ｍａｔｒｏｇｒａｐｈｙ)(40％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精
製して、化合物Ｉｎｔｅｒｍ－3－3を淡茶色の固体(1.21ｇ、90％)として得た。
【0104】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、Ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6)；δ7.71(ｍ、2Ｈ)、7.19(ｍ、2Ｈ)、7.03(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝0.8、8.4Ｈｚ)、6.75(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝0.8、2.0Ｈｚ)、6.44(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.0、8.4Ｈｚ)、2.60(ｑ、2Ｈ、Ｊ＝7.6Ｈｚ)、1.19(ｔ、3Ｈ、Ｊ＝7.6Ｈｚ)。
【0105】
段階4：Ｎ－(2－(4－エチルフェニルアミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－イル)－2
－クロロ－5－ニトロベンズアミド(Ｎ－(2－(4－Ｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｏ)ｂ
ｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－5－ｙｌ)－2－ｃｈｌｏｒｏ－5－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ、ＦＣＣＳ－17067)の製造
前記段階3で得られたＩｎｔｅｒｍ－3－3(253ｍｇ、1ｍｍｏｌ)、2－クロロ－5－ニト
ロベンゾイルクロリド(2－ｃｈｌｏｒｏ－5－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｙｌ ｃｈｌｏｒｉ
ｄｅ)(220ｍｇ、1ｍｍｏｌ)をジメチルホルムアミド(Ｎ,Ｎ－ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍ
ａｍｉｄｅ,ＤＭＦ)(4ｍＬ)に溶かした後、ジイソメチルプロピルエチルアミン(ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ,ＤＩＰＥＡ)(129ｍｇ、1ｍｍｏｌ)を入れ、室温で18時間撹拌した。18時間後、2－クロロ－5－ニトロベンゾイルクロリド(2－ｃｈｌｏｒｏ－5－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ)とジイソメチルプロピルエチルアミン(ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ,ＤＩＰＥＡ)各0.5当量を追加し、8時
間さらに撹拌した。反応混合物に10％ ＨＣｌ(ａｑ.)を入れ、エチルアセテート(ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ)で抽出した後、有機層を飽和されたＮａＨＣＯ3水溶液と塩水で順に洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥した後、減圧下で溶媒を除去した。反応混合物をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒａ
ｐｈｙ)(40％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、目的化合
物Ｎ－(2－(4－エチルフェニルアミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－イル)－2－クロロ－5－ニトロベンズアミド(Ｎ－(2－(4－Ｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｏ)ｂｅｎｚｏ
［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－5－ｙｌ)－2－ｃｈｌｏｒｏ－5－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ、ＦＣＣＳ－17067)を淡黄色の固体(120ｍｇ、27％)として得た。
－クロロ－5－ニトロベンズアミド(Ｎ－(2－(4－Ｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｏ)ｂ
ｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－5－ｙｌ)－2－ｃｈｌｏｒｏ－5－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ、ＦＣＣＳ－17067)の製造
前記段階3で得られたＩｎｔｅｒｍ－3－3(253ｍｇ、1ｍｍｏｌ)、2－クロロ－5－ニト
ロベンゾイルクロリド(2－ｃｈｌｏｒｏ－5－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｙｌ ｃｈｌｏｒｉ
ｄｅ)(220ｍｇ、1ｍｍｏｌ)をジメチルホルムアミド(Ｎ,Ｎ－ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍ
ａｍｉｄｅ,ＤＭＦ)(4ｍＬ)に溶かした後、ジイソメチルプロピルエチルアミン(ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ,ＤＩＰＥＡ)(129ｍｇ、1ｍｍｏｌ)を入れ、室温で18時間撹拌した。18時間後、2－クロロ－5－ニトロベンゾイルクロリド(2－ｃｈｌｏｒｏ－5－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ)とジイソメチルプロピルエチルアミン(ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ,ＤＩＰＥＡ)各0.5当量を追加し、8時
間さらに撹拌した。反応混合物に10％ ＨＣｌ(ａｑ.)を入れ、エチルアセテート(ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ)で抽出した後、有機層を飽和されたＮａＨＣＯ3水溶液と塩水で順に洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥した後、減圧下で溶媒を除去した。反応混合物をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒａ
ｐｈｙ)(40％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、目的化合
物Ｎ－(2－(4－エチルフェニルアミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－イル)－2－クロロ－5－ニトロベンズアミド(Ｎ－(2－(4－Ｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｏ)ｂｅｎｚｏ
［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－5－ｙｌ)－2－ｃｈｌｏｒｏ－5－ｎｉｔｒｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ、ＦＣＣＳ－17067)を淡黄色の固体(120ｍｇ、27％)として得た。
【0106】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、DMSO－ｄ6)；δ10.71(ｓ、1Ｈ)、10.53(ｓ、1Ｈ)、8.48(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.8Ｈｚ)、8.34(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.4、8.8Ｈｚ)、7.90(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈｚ)、7.82(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.0Ｈｚ)、7.64(ｄ、2Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈｚ)、7.46(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.8
Ｈｚ)、7.40(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.0、8.4Ｈｚ)、7.21(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈｚ)、2.58(ｑ、2Ｈ、Ｊ＝7.6Ｈｚ)、1.18(ｔ、3Ｈ、Ｊ＝7.6Ｈｚ)。
Ｈｚ)、7.40(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.0、8.4Ｈｚ)、7.21(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈｚ)、2.58(ｑ、2Ｈ、Ｊ＝7.6Ｈｚ)、1.18(ｔ、3Ｈ、Ｊ＝7.6Ｈｚ)。
【0107】
＜実施例5＞Ｎ－(2－(4－エチルフェニルアミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－イル)－3,4－ジクロロベンズアミド(Ｎ－(2－(4－Ｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｏ)ｂｅｎ
ｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－5－ｙｌ)－3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ、ＦＣ
ＣＳ－17068)の製造
ｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－5－ｙｌ)－3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚａｍｉｄｅ、ＦＣ
ＣＳ－17068)の製造
【0108】
【化17】
【0109】
前記実施例4の段階3で得られたＩｎｔｅｒｍ－3－3(253ｍｇ、1ｍｍｏｌ)、3,4－ジク
ロロベンゾイルクロリド(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚｏｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ)(209ｍｇ、1ｍｍｏｌ)をジメチルホルムアミド(Ｎ,Ｎ－ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄ
ｅ,ＤＭＦ)(4ｍＬ)に溶かした後、ジイソメチルプロピルエチルアミン(ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ,ＤＩＰＥＡ)(129ｍｇ、1ｍｍｏｌ)を入れ、室温で18時間撹拌した。反応混合物に10％ ＨＣｌ(ａｑ.)を入れ、エチルアセテート(ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ)で抽出した後、有機層を飽和されたＮａＨＣＯ3水溶液と塩水で順に洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥した後、減圧下で溶媒を除去した。反応混合物をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒａｐｈｙ)(40
％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、目的化合物ＦＣＣＳ
－17068を淡白色の固体(270ｍｇ、64％)として得た。
ロロベンゾイルクロリド(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚｏｙｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ)(209ｍｇ、1ｍｍｏｌ)をジメチルホルムアミド(Ｎ,Ｎ－ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄ
ｅ,ＤＭＦ)(4ｍＬ)に溶かした後、ジイソメチルプロピルエチルアミン(ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ,ＤＩＰＥＡ)(129ｍｇ、1ｍｍｏｌ)を入れ、室温で18時間撹拌した。反応混合物に10％ ＨＣｌ(ａｑ.)を入れ、エチルアセテート(ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ)で抽出した後、有機層を飽和されたＮａＨＣＯ3水溶液と塩水で順に洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥した後、減圧下で溶媒を除去した。反応混合物をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒａｐｈｙ)(40
％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、目的化合物ＦＣＣＳ
－17068を淡白色の固体(270ｍｇ、64％)として得た。
【0110】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、Ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6)；δ8.18(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.4Ｈｚ)、7.99(ｔ、1Ｈ、Ｊ＝2.4Ｈｚ)、7.97(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.0Ｈｚ)、7.80－7.20(ｍ、3Ｈ)、7.70－7.50(ｍ、1Ｈ)、7.35(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈｚ)、7.24(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈｚ)、2.63(ｑ、2Ｈ、Ｊ＝7.6Ｈｚ)、1.22(ｔ、3Ｈ、Ｊ＝7.6Ｈｚ)。
【0111】
＜実施例6＞Ｎ－(2－(4－エチルフェニルアミノ)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－5－イル)－3－(クロロメチル)ベンズアミド(Ｎ－(2－(4－Ｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｏ)ｂ
ｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－5－ｙｌ)－3－(ｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｙｌ)ｂｅｎｚａｍ
ｉｄｅ、ＦＣＣＳ－17069)の製造
ｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－5－ｙｌ)－3－(ｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｙｌ)ｂｅｎｚａｍ
ｉｄｅ、ＦＣＣＳ－17069)の製造
【0112】
【化18】
【0113】
前記実施例4の段階3で得られたＩｎｔｅｒｍ－3－3(253ｍｇ、1ｍｍｏｌ)、3－(クロロメチル)ベンゾイルクロリド(3－(ｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｙｌ)ｂｅｎｚｏｙｌ ｃｈｌｏ
ｒｉｄｅ)(189ｍｇ、1ｍｍｏｌ)をジメチルホルムアミド(Ｎ,Ｎ－ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏ
ｒｍａｍｉｄｅ,ＤＭＦ)(4ｍＬ)に溶かした後、ジイソメチルプロピルエチルアミン(ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ,ＤＩＰＥＡ)(129ｍｇ、1ｍｍｏｌ)を入れ、室温で18時間撹拌した。反応混合物に10％ ＨＣｌ(ａｑ.)を入れ、エチルアセテート(ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ)で抽出した後、有機層を飽和されたＮａＨＣＯ3水溶液と塩水で順に洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥した後、減圧下で溶媒を除去した。反応混合物をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒ
ａｐｈｙ)(30％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、目的化
合物ＦＣＣＳ－17069を淡白色の固体(170ｍｇ、40％)として得た。
ｒｉｄｅ)(189ｍｇ、1ｍｍｏｌ)をジメチルホルムアミド(Ｎ,Ｎ－ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏ
ｒｍａｍｉｄｅ,ＤＭＦ)(4ｍＬ)に溶かした後、ジイソメチルプロピルエチルアミン(ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ,ＤＩＰＥＡ)(129ｍｇ、1ｍｍｏｌ)を入れ、室温で18時間撹拌した。反応混合物に10％ ＨＣｌ(ａｑ.)を入れ、エチルアセテート(ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ)で抽出した後、有機層を飽和されたＮａＨＣＯ3水溶液と塩水で順に洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥した後、減圧下で溶媒を除去した。反応混合物をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒ
ａｐｈｙ)(30％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、目的化
合物ＦＣＣＳ－17069を淡白色の固体(170ｍｇ、40％)として得た。
【0114】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、Ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ6)；δ8.08(ｔ、1Ｈ、Ｊ＝1.2Ｈｚ)、8.03(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.0Ｈｚ)、7.98(ｄｔ、1Ｈ、Ｊ＝1.2、7.6Ｈｚ)、7.80－7.75(ｍ、2Ｈ)
、7.69－7.65(ｍ、1Ｈ)、7.57－7.52(ｍ、3Ｈ)、7.34(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈｚ)、7.26－7.22(ｍ、2Ｈ)、2.62(ｑ、2Ｈ、Ｊ＝7.6Ｈｚ)、1.22(ｔ、3Ｈ、Ｊ＝7.6Ｈｚ)。
、7.69－7.65(ｍ、1Ｈ)、7.57－7.52(ｍ、3Ｈ)、7.34(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈｚ)、7.26－7.22(ｍ、2Ｈ)、2.62(ｑ、2Ｈ、Ｊ＝7.6Ｈｚ)、1.22(ｔ、3Ｈ、Ｊ＝7.6Ｈｚ)。
【0115】
＜実施例7＞2－［Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)］アミノベンゾオキサゾール(2－［Ｎ
－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)］ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｘａｚｏｌｅ、ＦＣＣ
Ｓ－17065－Ａ)の製造
－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)］ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｘａｚｏｌｅ、ＦＣＣ
Ｓ－17065－Ａ)の製造
【0116】
【化19】
【0117】
段階1：1－(3,4－ジクロロフェニル)－3－(2－ヒドロキシフェニル)チオウレア(1－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、ＦＣＣＳ－17065－Ａ－2－1)の製造
Ａｒガス雰囲気下で2－アミノフェノール(2－Ａｍｉｎｏｐｈｅｎｏｌ)(300ｍｇ、2.749ｍｍｏｌ)にメタノール(ａｎｈｙｄｒｏｕｓ ＭｅＯＨ)(8ｍＬ)を加えて溶かした後、3,4－ジクロロフェニルイソチオシアネート(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ ｉｓｏ
ｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ)(0.47ｍＬ、3.299ｍｍｏｌ)をゆっくり滴加し、14時間常温で撹拌させる。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)で確認して、出発物質が全部消えることを確認し、減圧して、溶媒を除去後、ｃｒｕｄｅにｓｉｌｉｃａを入れて吸着させ、シリカ－ゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ
－ｇｅｌ Ｆｌａｓｈ Ｃｏｌｕｍｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)(30％ ＥｔＯＡｃ／ｈｅｘａｎｅ、Ｒｆ＝0.4)を行うことによって、1－(3,4－ジクロロフェニル)－3－(2－ヒドロキシフェニル)チオウレア(1－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、ＦＣＣＳ－17065－Ａ－2－1)、793ｍｇ(ｌｉｇｈｔ ｂｒｏｗｎ ｆｏａｍｙ ｓｏｌｉｄ、92％)を得た。
Ａｒガス雰囲気下で2－アミノフェノール(2－Ａｍｉｎｏｐｈｅｎｏｌ)(300ｍｇ、2.749ｍｍｏｌ)にメタノール(ａｎｈｙｄｒｏｕｓ ＭｅＯＨ)(8ｍＬ)を加えて溶かした後、3,4－ジクロロフェニルイソチオシアネート(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ ｉｓｏ
ｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ)(0.47ｍＬ、3.299ｍｍｏｌ)をゆっくり滴加し、14時間常温で撹拌させる。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)で確認して、出発物質が全部消えることを確認し、減圧して、溶媒を除去後、ｃｒｕｄｅにｓｉｌｉｃａを入れて吸着させ、シリカ－ゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ
－ｇｅｌ Ｆｌａｓｈ Ｃｏｌｕｍｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)(30％ ＥｔＯＡｃ／ｈｅｘａｎｅ、Ｒｆ＝0.4)を行うことによって、1－(3,4－ジクロロフェニル)－3－(2－ヒドロキシフェニル)チオウレア(1－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、ＦＣＣＳ－17065－Ａ－2－1)、793ｍｇ(ｌｉｇｈｔ ｂｒｏｗｎ ｆｏａｍｙ ｓｏｌｉｄ、92％)を得た。
【0118】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ)；δ7.82(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.8Ｈｚ)、7.63(ｄ、1Ｈ
、Ｊ＝7.6Ｈｚ)、7.45(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈｚ)、7.39(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.6、2.2Ｈｚ)、7.11－7.06(ｍ、1Ｈ)、6.90(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.0、1.2Ｈｚ)、6.85(ｔｄ、1Ｈ、Ｊ＝7.6、1.2Ｈｚ)。
、Ｊ＝7.6Ｈｚ)、7.45(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.8Ｈｚ)、7.39(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.6、2.2Ｈｚ)、7.11－7.06(ｍ、1Ｈ)、6.90(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.0、1.2Ｈｚ)、6.85(ｔｄ、1Ｈ、Ｊ＝7.6、1.2Ｈｚ)。
【0119】
段階2：2－［Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)］アミノベンゾオキサゾール(2－［Ｎ－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)］ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｘａｚｏｌｅ、ＦＣＣＳ－17065－Ａ)の製造
Ａｒガス雰囲気下で前記段階1で得られたＦＣＣＳ－17065－Ａ－2－1(400ｍｇ、1.277
ｍｍｏｌ)と過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ,ＫＯ2)(454ｍ
ｇ、6.386ｍｍｏｌ)を入れ、アセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)(48ｍＬ)を加えて常温で14時間撹拌する。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)で確認して、出発物質が全部消えることを確認後、ｃｒｕｄｅにｓｉｌｉｃ
ａを入れて吸着させ、減圧する。シリカ－ゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(Ｓ
ｉｌｉｃａ－ｇｅｌ Ｆｌａｓｈ Ｃｏｌｕｍｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)(20％
ＥｔＯＡｃ／ｈｅｘａｎｅ、Ｒｆ＝0.4)を行うことによって、目的化合物2－［Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)］アミノベンゾオキサゾール(2－［Ｎ－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)］ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｘａｚｏｌｅ、ＦＣＣＳ－17065－Ａ)、231ｍｇ(ｗ
ｈｉｔｅ ｓｏｌｉｄ、65％)を得た。
Ａｒガス雰囲気下で前記段階1で得られたＦＣＣＳ－17065－Ａ－2－1(400ｍｇ、1.277
ｍｍｏｌ)と過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ,ＫＯ2)(454ｍ
ｇ、6.386ｍｍｏｌ)を入れ、アセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)(48ｍＬ)を加えて常温で14時間撹拌する。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)で確認して、出発物質が全部消えることを確認後、ｃｒｕｄｅにｓｉｌｉｃ
ａを入れて吸着させ、減圧する。シリカ－ゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(Ｓ
ｉｌｉｃａ－ｇｅｌ Ｆｌａｓｈ Ｃｏｌｕｍｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)(20％
ＥｔＯＡｃ／ｈｅｘａｎｅ、Ｒｆ＝0.4)を行うことによって、目的化合物2－［Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)］アミノベンゾオキサゾール(2－［Ｎ－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)］ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏｘａｚｏｌｅ、ＦＣＣＳ－17065－Ａ)、231ｍｇ(ｗ
ｈｉｔｅ ｓｏｌｉｄ、65％)を得た。
【0120】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ)；δ8.06(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.8Ｈｚ)、7.55(ｄｄ、1
Ｈ、Ｊ＝8.6,2,6Ｈｚ)、7.48－7.45(ｍ、2Ｈ)、7.39(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.0Ｈｚ)、7.24(ｔｄ、1Ｈ、Ｊ＝7.6、1.2Ｈｚ)、7.16(ｔｄ、1Ｈ、Ｊ＝7.8、1.2Ｈｚ)。
Ｈ、Ｊ＝8.6,2,6Ｈｚ)、7.48－7.45(ｍ、2Ｈ)、7.39(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.0Ｈｚ)、7.24(ｔｄ、1Ｈ、Ｊ＝7.6、1.2Ｈｚ)、7.16(ｔｄ、1Ｈ、Ｊ＝7.8、1.2Ｈｚ)。
【0121】
＜実施例8＞Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)ナフト［2,3－ｄ］オキサゾール－2－アミン(Ｎ－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ｎａｐｈｔｈｏ［2,3－ｄ］ｏｘａｚｏｌ－2－ａｍｉｎｅ、ＦＣＣＳ－17065－Ｂ)の製造
【0122】
【化20】
【0123】
段階1：1－(4,5－ジクロロフェニル)－3－(3－ヒドロキシナフタレン－2－イル)チオウレア(1－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(3－ｈｙｄｒｏｘｙｎａｐｈｔｈａｌｅｎ－2－ｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ,ＦＣＣＳ－17065－Ｂ－2－1)の製造
Ａｒガス雰囲気下で3－アミノ－2－ナフトール(3－Ａｍｉｎｏ－2－ｎａｐｈｔｈｏｌ)
(350ｍｇ、2.119ｍｍｏｌ)にメタノール(ａｎｈｙｄｒｏｕｓ ＭｅＯＨ)(7ｍＬ)とクロ
ロホルム(ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ,ＣＨＣｌ3)(2ｍＬ)を加えて5分間常温で撹拌後、3,4－
ジクロロフェニルイソチオシアネート(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ)(0.38ｍＬ、2.638ｍｍｏｌ)をゆっくり滴加し、13時間常温で撹拌させる。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)で確認して、出発物質が全部消えることを確認し、減圧して、溶媒を除去後、ジクロロメタン(ｄｉｃｈｌ
ｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ)(8ｍＬ)を加えて、5分間撹拌後、溶けない固体をフィルターして
、1－(4,5－ジクロロフェニル)－3－(3－ヒドロキシナフタレン－2－イル)チオウレア(1
－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(3－ｈｙｄｒｏｘｙｎａｐｈｔｈａｌｅｎ－2－ｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ,ＦＣＣＳ－17065－Ｂ－2－1)、792ｍｇ(ｗｈｉｔｅ ｓｏ
ｌｉｄ、99％)を得た。
Ａｒガス雰囲気下で3－アミノ－2－ナフトール(3－Ａｍｉｎｏ－2－ｎａｐｈｔｈｏｌ)
(350ｍｇ、2.119ｍｍｏｌ)にメタノール(ａｎｈｙｄｒｏｕｓ ＭｅＯＨ)(7ｍＬ)とクロ
ロホルム(ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ,ＣＨＣｌ3)(2ｍＬ)を加えて5分間常温で撹拌後、3,4－
ジクロロフェニルイソチオシアネート(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ)(0.38ｍＬ、2.638ｍｍｏｌ)をゆっくり滴加し、13時間常温で撹拌させる。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)で確認して、出発物質が全部消えることを確認し、減圧して、溶媒を除去後、ジクロロメタン(ｄｉｃｈｌ
ｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ)(8ｍＬ)を加えて、5分間撹拌後、溶けない固体をフィルターして
、1－(4,5－ジクロロフェニル)－3－(3－ヒドロキシナフタレン－2－イル)チオウレア(1
－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(3－ｈｙｄｒｏｘｙｎａｐｈｔｈａｌｅｎ－2－ｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ,ＦＣＣＳ－17065－Ｂ－2－1)、792ｍｇ(ｗｈｉｔｅ ｓｏ
ｌｉｄ、99％)を得た。
【0124】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、DMSO－ｄ6)；δ10.48(ｓ、1Ｈ)、10.34(ｓ、1Ｈ)、9.57(ｓ、1Ｈ)、8.59(ｓ、1Ｈ)、8.05(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.0Ｈｚ)、7.73(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.0Ｈｚ)、7.67(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝7.6Ｈｚ)、7.60(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.4Ｈｚ)、7.52(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.6、2.2Ｈｚ)、7.35(ｔ、1Ｈ、Ｊ＝7.2Ｈｚ)、7.27(ｔ、1Ｈ、Ｊ＝7.6Ｈｚ)、7.24(ｓ、1Ｈ)。
【0125】
段階2：Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)ナフト［2,3－ｄ］オキサゾール－2－アミン(Ｎ
－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ｎａｐｈｔｈｏ［2,3－ｄ］ｏｘａｚｏｌ－2－
ａｍｉｎｅ、ＦＣＣＳ－17065－Ｂ)の製造
Ａｒガス雰囲気下で前記段階1で得られたＦＣＣＳ－17065－Ｂ－2－1(400ｍｇ、1.101
ｍｍｏｌ)と過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ,ＫＯ2)(391ｍ
ｇ、5.505ｍｍｏｌ)を入れ、アセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)(42ｍＬ)を加えて常温で14時間撹拌する。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)で確認して、出発物質が全部消えることを確認後、ｃｒｕｄｅにｓｉｌｉｃ
ａを入れて吸着させ、減圧する。シリカ－ゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(Ｓ
ｉｌｉｃａ－ｇｅｌ Ｆｌａｓｈ Ｃｏｌｕｍｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)(20％
ＥｔＯＡｃ／ｈｅｘａｎｅ、Ｒｆ＝0.5)を行うことによって、目的化合物Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)ナフト［2,3－ｄ］オキサゾール－2－アミン(Ｎ－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ｎａｐｈｔｈｏ［2,3－ｄ］ｏｘａｚｏｌ－2－ａｍｉｎｅ、ＦＣＣＳ－17065－Ｂ)、236ｍｇ(ｗｈｉｔｅ ｓｏｌｉｄ、65％)を得た。
－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ｎａｐｈｔｈｏ［2,3－ｄ］ｏｘａｚｏｌ－2－
ａｍｉｎｅ、ＦＣＣＳ－17065－Ｂ)の製造
Ａｒガス雰囲気下で前記段階1で得られたＦＣＣＳ－17065－Ｂ－2－1(400ｍｇ、1.101
ｍｍｏｌ)と過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ,ＫＯ2)(391ｍ
ｇ、5.505ｍｍｏｌ)を入れ、アセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)(42ｍＬ)を加えて常温で14時間撹拌する。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)で確認して、出発物質が全部消えることを確認後、ｃｒｕｄｅにｓｉｌｉｃ
ａを入れて吸着させ、減圧する。シリカ－ゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(Ｓ
ｉｌｉｃａ－ｇｅｌ Ｆｌａｓｈ Ｃｏｌｕｍｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)(20％
ＥｔＯＡｃ／ｈｅｘａｎｅ、Ｒｆ＝0.5)を行うことによって、目的化合物Ｎ－(3,4－ジクロロフェニル)ナフト［2,3－ｄ］オキサゾール－2－アミン(Ｎ－(3,4－ｄｉｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ｎａｐｈｔｈｏ［2,3－ｄ］ｏｘａｚｏｌ－2－ａｍｉｎｅ、ＦＣＣＳ－17065－Ｂ)、236ｍｇ(ｗｈｉｔｅ ｓｏｌｉｄ、65％)を得た。
【0126】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、DMSO－ｄ6)；δ11.22(ｓ、1Ｈ)、8.20(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝2.0Ｈｚ)、7.98－7.95(ｍ、4 Ｈ)、7.72(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.8,2.4Ｈｚ)、7.66(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.4Ｈｚ)、7.47－7.41(ｍ、2Ｈ)。
【0127】
＜実施例9＞Ｎ－(3,4－ジフルオロフェニル)－5－メチルベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミン(Ｎ－(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－5－ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｏ［ｄ
］ｏｘａｚｏｌ－2－ａｍｉｎｅ、ＦＣＣＳ－17065－Ｃ)の製造
］ｏｘａｚｏｌ－2－ａｍｉｎｅ、ＦＣＣＳ－17065－Ｃ)の製造
【0128】
【化21】
【0129】
段階1：1－(3,4－ジフルオロフェニル)－3－(2－ヒドロキシ－5－メチルフェニル)チオウレア(1－(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏｘｙ－5－ｍｅｔ
ｈｙｌｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、ＦＣＣＳ－17065－Ｃ－2－1)の製造
Ａｒガス雰囲気下で2－アミノ－ｐ－クレゾール(2－Ａｍｉｎｏ－ｐ－ｃｒｅｓｏｌ)(300ｍｇ、2.436ｍｍｏｌ)にメタノール(ａｎｈｙｄｒｏｕｓ ＭｅＯＨ)(8ｍＬ)を加えて
溶かした後、3,4－ジフルオロフェニルイソチオシアネート(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈ
ｅｎｙｌ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ)(0.37ｍＬ、2.923ｍｍｏｌ)をゆっくり滴加し、13時間常温で撹拌させる。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐ
ｈｙ)で確認して、出発物質が全部消えることを確認し、減圧して溶媒を除去後、ｃｒｕ
ｄｅにｓｉｌｉｃａを入れて吸着させ、シリカ－ゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ Ｆｌａｓｈ Ｃｏｌｕｍｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)(30％ ＥｔＯＡｃ／ｈｅｘａｎｅ、Ｒｆ＝0.4)を行うことによって、1－(3,4－ジフルオロフェニル)－3－(2－ヒドロキシ－5－メチルフェニル)チオウレア(1－(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏｘｙ－5－ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、ＦＣＣＳ－17065－Ｃ－2－1)、710ｍｇ(ｗｈｉｔｅ ｆｏａｍｙ ｓｏｌｉｄ、99％)を得た。
ｈｙｌｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、ＦＣＣＳ－17065－Ｃ－2－1)の製造
Ａｒガス雰囲気下で2－アミノ－ｐ－クレゾール(2－Ａｍｉｎｏ－ｐ－ｃｒｅｓｏｌ)(300ｍｇ、2.436ｍｍｏｌ)にメタノール(ａｎｈｙｄｒｏｕｓ ＭｅＯＨ)(8ｍＬ)を加えて
溶かした後、3,4－ジフルオロフェニルイソチオシアネート(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈ
ｅｎｙｌ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ)(0.37ｍＬ、2.923ｍｍｏｌ)をゆっくり滴加し、13時間常温で撹拌させる。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐ
ｈｙ)で確認して、出発物質が全部消えることを確認し、減圧して溶媒を除去後、ｃｒｕ
ｄｅにｓｉｌｉｃａを入れて吸着させ、シリカ－ゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ Ｆｌａｓｈ Ｃｏｌｕｍｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)(30％ ＥｔＯＡｃ／ｈｅｘａｎｅ、Ｒｆ＝0.4)を行うことによって、1－(3,4－ジフルオロフェニル)－3－(2－ヒドロキシ－5－メチルフェニル)チオウレア(1－(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏｘｙ－5－ｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、ＦＣＣＳ－17065－Ｃ－2－1)、710ｍｇ(ｗｈｉｔｅ ｆｏａｍｙ ｓｏｌｉｄ、99％)を得た。
【0130】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ)；δ7.57－7.52(ｍ、1Ｈ)、7.40(ｓ、1Ｈ)、7.25
－7.13(ｍ、2Ｈ)、6.91(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.0、1.6Ｈｚ)、6.79(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.0Ｈｚ)、2.25(ｓ、3Ｈ)。
－7.13(ｍ、2Ｈ)、6.91(ｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.0、1.6Ｈｚ)、6.79(ｄ、1Ｈ、Ｊ＝8.0Ｈｚ)、2.25(ｓ、3Ｈ)。
【0131】
段階2：Ｎ－(3,4－ジフルオロフェニル)－5－メチルベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミン(Ｎ－(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－5－ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏ
ｘａｚｏｌ－2－ａｍｉｎｅ、ＦＣＣＳ－17065－Ｃ)の製造
Ａｒガス雰囲気下で前記段階1で得られたＦＣＣＳ－17065－Ｃ－2－1(400ｍｇ、1.359
ｍｍｏｌ)と過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ,ＫＯ2)(483ｍ
ｇ、6.795ｍｍｏｌ)を入れ、アセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)、Ｍ
ｅＣＮ)(52ｍＬ)を加えて、常温で14時間撹拌する。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)で確認して、出発物質が全部消えることを確認後、ｃｒｕｄ
ｅにｓｉｌｉｃａを入れて吸着させ、減圧する。シリカ－ゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ Ｆｌａｓｈ Ｃｏｌｕｍｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ
ａｐｈｙ)(20％ ＥｔＯＡｃ／ｈｅｘａｎｅ、Ｒｆ＝0.45)を行うことによって、目的化
合物Ｎ－(3,4－ジフルオロフェニル)－5－メチルベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミン(Ｎ－(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－5－ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－2－ａｍｉｎｅ、ＦＣＣＳ－17065－Ｃ)、224ｍｇ(ｗｈｉｔｅ ｓｏｌｉｄ、63％)を得た。
ｘａｚｏｌ－2－ａｍｉｎｅ、ＦＣＣＳ－17065－Ｃ)の製造
Ａｒガス雰囲気下で前記段階1で得られたＦＣＣＳ－17065－Ｃ－2－1(400ｍｇ、1.359
ｍｍｏｌ)と過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ,ＫＯ2)(483ｍ
ｇ、6.795ｍｍｏｌ)を入れ、アセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)、Ｍ
ｅＣＮ)(52ｍＬ)を加えて、常温で14時間撹拌する。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)で確認して、出発物質が全部消えることを確認後、ｃｒｕｄ
ｅにｓｉｌｉｃａを入れて吸着させ、減圧する。シリカ－ゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ Ｆｌａｓｈ Ｃｏｌｕｍｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ
ａｐｈｙ)(20％ ＥｔＯＡｃ／ｈｅｘａｎｅ、Ｒｆ＝0.45)を行うことによって、目的化
合物Ｎ－(3,4－ジフルオロフェニル)－5－メチルベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミン(Ｎ－(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－5－ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－2－ａｍｉｎｅ、ＦＣＣＳ－17065－Ｃ)、224ｍｇ(ｗｈｉｔｅ ｓｏｌｉｄ、63％)を得た。
【0132】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ)；δ＝7.83－7.78(ｍ、1Ｈ)、7.33－7.29(ｍ、1Ｈ)、7.27－7.20(ｍ、3Ｈ)、6.97－6.95(ｍ、1Ｈ)、2.41(ｓ、3Ｈ)。
【0133】
＜実施例10＞Ｎ－(3,4－ジフルオロフェニル)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミン(
Ｎ－(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－2－ａｍｉｎｅ、ＦＣＣＳ－19025)の合成
Ｎ－(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－2－ａｍｉｎｅ、ＦＣＣＳ－19025)の合成
【0134】
【化22】
【0135】
段階1：1－(3,4－ジフルオロフェニル)－3－(2－ヒドロキシフェニル)チオウレア(1－(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、ＦＣＣＳ－19025－2－1)の製造
Ａｒガス雰囲気下で2－アミノフェノール(2－Ａｍｉｎｏｐｈｅｎｏｌ)(150ｍｇ、1.37ｍｍｏｌ)をメタノール(ｍｅｔｈａｎｏｌ)(8ｍＬ)に溶かした後、3,4－ジフルオロフェ
ニルイソチオシアネート(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ)(224μｌ、1.65ｍｍｏｌ)をゆっくり加えた後、室温で13時間撹拌した。ＴＬＣ(
ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)で反応終結を確認した後、減圧
下でメタノール(Ｍｅｔｈａｎｏｌ)を除去した。反応混合物をクロマトグラフィー(Ｓｉ
ｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒａｐｈｙ)(20％ Ａｃｅｔｏｎｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、1－(3,4－ジフルオロフェニル)－3－(2－ヒドロキシフェニル)チオウレア(1－(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏ
ｘｙｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、ＦＣＣＳ－19025－2－1)を淡黄色の固体(354ｍｇ
、92％)として得た。
Ａｒガス雰囲気下で2－アミノフェノール(2－Ａｍｉｎｏｐｈｅｎｏｌ)(150ｍｇ、1.37ｍｍｏｌ)をメタノール(ｍｅｔｈａｎｏｌ)(8ｍＬ)に溶かした後、3,4－ジフルオロフェ
ニルイソチオシアネート(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ)(224μｌ、1.65ｍｍｏｌ)をゆっくり加えた後、室温で13時間撹拌した。ＴＬＣ(
ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)で反応終結を確認した後、減圧
下でメタノール(Ｍｅｔｈａｎｏｌ)を除去した。反応混合物をクロマトグラフィー(Ｓｉ
ｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒａｐｈｙ)(20％ Ａｃｅｔｏｎｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、1－(3,4－ジフルオロフェニル)－3－(2－ヒドロキシフェニル)チオウレア(1－(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－3－(2－ｈｙｄｒｏ
ｘｙｐｈｅｎｙｌ)ｔｈｉｏｕｒｅａ、ＦＣＣＳ－19025－2－1)を淡黄色の固体(354ｍｇ
、92％)として得た。
【0136】
1Ｈ－ＮＭＲ(400ＭＨｚ、ＭｅＯＨ－ｄ4)δ7.62(ｄ、Ｊ＝8.0Ｈｚ、1Ｈ)、7.55(ｄｄｄ,Ｊ＝2.4Ｈｚ、1Ｈ)、7.25－7.13(ｍ、2Ｈ)、7.11－7.05(ｍ、1Ｈ)、6.92－6.82(ｍ、2Ｈ)；ＥＳＩ－(＋)281.3［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0137】
段階2：Ｎ－(3,4－ジフルオロフェニル)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミン(Ｎ－(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘａｚｏｌ－2－ａｍｉｎｅ、ＦＣＣＳ－19025)の製造
Ａｒガス雰囲気下で前記段階1で得られたＦＣＣＳ－19025－2－1(224ｍｇ、0.80ｍｍｏｌ)、過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ,ＫＯ2)(284ｍｇ、4.00ｍｍｏｌ)をアセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)(25ｍＬ)に溶かした
後、常温で14時間撹拌した。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐ
ｈｙ)で反応終結を確認した後、減圧下でアセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,Ｍ
ｅＣＮ)を除去した。反応混合物をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒａｐｈｙ)(10～20％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、目的化合物Ｎ－(3,4－ジフルオロフェニル)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミン(Ｎ－(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘ
ａｚｏｌ－2－ａｍｉｎｅ、ＦＣＣＳ－19025)を白色の固体(160ｍｇ、82％)として得た。
Ａｒガス雰囲気下で前記段階1で得られたＦＣＣＳ－19025－2－1(224ｍｇ、0.80ｍｍｏｌ)、過酸化カリウム(Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ,ＫＯ2)(284ｍｇ、4.00ｍｍｏｌ)をアセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,ＭｅＣＮ)(25ｍＬ)に溶かした
後、常温で14時間撹拌した。ＴＬＣ(ｔｈｉｎ ｌａｙｅｒ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐ
ｈｙ)で反応終結を確認した後、減圧下でアセトニトリル(ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ,Ｍ
ｅＣＮ)を除去した。反応混合物をクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒａｐｈｙ)(10～20％ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)で精製して、目的化合物Ｎ－(3,4－ジフルオロフェニル)ベンゾ［ｄ］オキサゾール－2－アミン(Ｎ－(3,4－ｄｉｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ｂｅｎｚｏ［ｄ］ｏｘ
ａｚｏｌ－2－ａｍｉｎｅ、ＦＣＣＳ－19025)を白色の固体(160ｍｇ、82％)として得た。
【0138】
1Ｈ－ＮＭＲ(400ＭＨｚ、ＭｅＯＨ－ｄ4)δ7.82(ｄｄｄ,Ｊ＝2.8Ｈｚ、1Ｈ)、7.42(ｄ
、Ｊ＝7.6Ｈｚ、1Ｈ)、7.36(ｄ、Ｊ＝8.0Ｈｚ、1Ｈ)、7.34－7.29(ｍ、1Ｈ)、7.28－7.18(ｍ、2Ｈ)、7.16－7.10(ｍ、1Ｈ)；ＥＳＩ－(＋)247.2［Ｍ＋Ｈ］＋。
、Ｊ＝7.6Ｈｚ、1Ｈ)、7.36(ｄ、Ｊ＝8.0Ｈｚ、1Ｈ)、7.34－7.29(ｍ、1Ｈ)、7.28－7.18(ｍ、2Ｈ)、7.16－7.10(ｍ、1Ｈ)；ＥＳＩ－(＋)247.2［Ｍ＋Ｈ］＋。
【0139】
下記表1に実施例1～実施例10の化学構造式を示した。
【0140】
【表1】
【0141】
＜比較例1＞
Ｎ－(2－クロロフェニル)－1Ｈ－インドール－3－カルボキサミド(Ｎ－(2－ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ)を比較例1として使
用した。
Ｎ－(2－クロロフェニル)－1Ｈ－インドール－3－カルボキサミド(Ｎ－(2－ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)－1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ)を比較例1として使
用した。
【0142】
【化23】
【0143】
＜比較例2＞
2’－クロロアセトアニリド(2’－Ｃｈｌｏｒｏａｃｅｔａｎｉｌｉｄｅ,Ｃ0621)を購
入して、比較例2として使用した。
2’－クロロアセトアニリド(2’－Ｃｈｌｏｒｏａｃｅｔａｎｉｌｉｄｅ,Ｃ0621)を購
入して、比較例2として使用した。
【0144】
【化24】
【0145】
＜比較例3＞
Ｎ－メチル－1Ｈ－インドール－3－カルボキサミド(Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ,ＦＣＣＳ－16030)を購入して、比較例3として使用し
た。
Ｎ－メチル－1Ｈ－インドール－3－カルボキサミド(Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ,ＦＣＣＳ－16030)を購入して、比較例3として使用し
た。
【0146】
【化25】
【0147】
＜比較例4＞Ｎ－(2－((クロロフェニル)アミノ)－2－オキソエチル)－1Ｈ－インドール－3－カルボキサミド(Ｎ－(2－((2－ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ａｍｉｎｏ)－2－ｏｘｏｅｔｈｙｌ)－1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ,ＦＣＣＳ－16031)の製造
【0148】
【化26】
【0149】
段階1：メチル2－(1Ｈ－インドール－3－カルボキサミド)アセテート(ｍｅｔｈｙｌ 2－(1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｏ)ａｃｅｔａｔｅ,ＣＣＳ－16031－3
－1)の製造
Ａｒガス雰囲気下でインドール－3－カルボン酸(Ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂｏｘｙｌ
ｉｃ ａｃｉｄ)(600ｍｇ、3.72ｍｍｏｌ)とグリシンメチルエステル(ｇｌｙｃｉｎｅ
ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ)(467ｍｇ、3.72ｍｍｏｌ)をクロロホルム(Ｃｈｌｏｒｏｆｏ
ｒｍ)(11ｍＬ)に溶かし、氷浴(ｉｃｅ－ｂａｔｈ)で冷却(ｃｏｏｌｉｎｇ)する。トリエ
チルアミン(Ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ)(1.04ｍＬ、7.446ｍｍｏｌ)とＮ,Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド(Ｎ,Ｎ－ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ)をさ
らに入れた後、0℃で14時間撹拌する。10％ ＮａＨＣＯ3水溶液で洗った後、5％ＨＣｌ
水溶液で洗って、無水Ｎａ2ＳＯ4 Ｐａｄに通過させて、残った水分を除去した後、減圧下で溶媒を除去する。シリカ－ゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ
－ｇｅｌ Ｆｌａｓｈ Ｃｏｌｕｍｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)(70％ ｅｔｈｙｌ ａｃｅａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)を行うことによって、メチル2－(1Ｈ－インドール－3－カルボキサミド)アセテート(ｍｅｔｈｙｌ 2－(1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂ
ｏｘａｍｉｄｏ)ａｃｅｔａｔｅ,ＣＣＳ－16031－3－1)430ｍｇ(ｗｈｉｔｅ ｓｏｌｉｄ、50％)をｍｉｘｔｕｒｅ状態で得た。さらなる精製することなく、次のステップに進め
た。ＥＳＩ－ＭＳ：231.2［Ｍ－Ｈ］－
－1)の製造
Ａｒガス雰囲気下でインドール－3－カルボン酸(Ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂｏｘｙｌ
ｉｃ ａｃｉｄ)(600ｍｇ、3.72ｍｍｏｌ)とグリシンメチルエステル(ｇｌｙｃｉｎｅ
ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ)(467ｍｇ、3.72ｍｍｏｌ)をクロロホルム(Ｃｈｌｏｒｏｆｏ
ｒｍ)(11ｍＬ)に溶かし、氷浴(ｉｃｅ－ｂａｔｈ)で冷却(ｃｏｏｌｉｎｇ)する。トリエ
チルアミン(Ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ)(1.04ｍＬ、7.446ｍｍｏｌ)とＮ,Ｎ－ジイソプロピルカルボジイミド(Ｎ,Ｎ－ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ)をさ
らに入れた後、0℃で14時間撹拌する。10％ ＮａＨＣＯ3水溶液で洗った後、5％ＨＣｌ
水溶液で洗って、無水Ｎａ2ＳＯ4 Ｐａｄに通過させて、残った水分を除去した後、減圧下で溶媒を除去する。シリカ－ゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ
－ｇｅｌ Ｆｌａｓｈ Ｃｏｌｕｍｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)(70％ ｅｔｈｙｌ ａｃｅａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)を行うことによって、メチル2－(1Ｈ－インドール－3－カルボキサミド)アセテート(ｍｅｔｈｙｌ 2－(1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂ
ｏｘａｍｉｄｏ)ａｃｅｔａｔｅ,ＣＣＳ－16031－3－1)430ｍｇ(ｗｈｉｔｅ ｓｏｌｉｄ、50％)をｍｉｘｔｕｒｅ状態で得た。さらなる精製することなく、次のステップに進め
た。ＥＳＩ－ＭＳ：231.2［Ｍ－Ｈ］－
【0150】
段階2：2－(1Ｈ－インドール－3－カルボキサミド)酢酸(2－(1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－
ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｏ)ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ、ＦＣＣＳ－16031－3－2)の製造
前記段階1で得られた2－(1Ｈ－インドール－3－カルボキサミド)アセテート(ｍｅｔｈ
ｙｌ 2－(1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｏ)ａｃｅｔａｔｅ,ＣＣＳ－16031－3－1)(220ｍｇ、0.947ｍｍｏｌ)をテトラヒドロフラン(ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕ
ｒａｎ)(6ｍＬ)に溶かし、そこへ水酸化リチウム水和物(ＬｉＯＨ ｍｏｎｏｈｙｄｒａ
ｔｅ)(131ｍｇ、3.126ｍｍｏｌ)を水(2ｍＬ)に溶かした溶液を入れ、常温で1時間撹拌す
る。1.0Ｎ ＨＣｌ水溶液を加えてｐＨ2に調整後、エチルアセテート(ｅｔｈｙｌ ａｃ
ｅｔａｔｅ)で抽出した。無水Ｎａ2ＳＯ4 Ｐａｄに通過させて、残った水分を除去した
後、減圧下で溶媒を除去する。シリカ－ゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(Ｓｉ
ｌｉｃａ－ｇｅｌ Ｆｌａｓｈ Ｃｏｌｕｍｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)(10％ ｍｅｔｈａｎｏｌ／ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｈｔａｎｅ)を行うことによって、2－(1Ｈ－インドール－3－カルボキサミド)酢酸(2－(1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄ
ｏ)ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ、ＦＣＣＳ－16031－3－2)147ｍｇ(ｙｅｌｌｏｗ ｆｏａｍ
ｙ ｓｏｌｉｄ、71％)を得た。
ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｏ)ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ、ＦＣＣＳ－16031－3－2)の製造
前記段階1で得られた2－(1Ｈ－インドール－3－カルボキサミド)アセテート(ｍｅｔｈ
ｙｌ 2－(1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｏ)ａｃｅｔａｔｅ,ＣＣＳ－16031－3－1)(220ｍｇ、0.947ｍｍｏｌ)をテトラヒドロフラン(ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕ
ｒａｎ)(6ｍＬ)に溶かし、そこへ水酸化リチウム水和物(ＬｉＯＨ ｍｏｎｏｈｙｄｒａ
ｔｅ)(131ｍｇ、3.126ｍｍｏｌ)を水(2ｍＬ)に溶かした溶液を入れ、常温で1時間撹拌す
る。1.0Ｎ ＨＣｌ水溶液を加えてｐＨ2に調整後、エチルアセテート(ｅｔｈｙｌ ａｃ
ｅｔａｔｅ)で抽出した。無水Ｎａ2ＳＯ4 Ｐａｄに通過させて、残った水分を除去した
後、減圧下で溶媒を除去する。シリカ－ゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(Ｓｉ
ｌｉｃａ－ｇｅｌ Ｆｌａｓｈ Ｃｏｌｕｍｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)(10％ ｍｅｔｈａｎｏｌ／ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｈｔａｎｅ)を行うことによって、2－(1Ｈ－インドール－3－カルボキサミド)酢酸(2－(1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄ
ｏ)ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ、ＦＣＣＳ－16031－3－2)147ｍｇ(ｙｅｌｌｏｗ ｆｏａｍ
ｙ ｓｏｌｉｄ、71％)を得た。
【0151】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ)；δ8.10－8.08(ｍ、1Ｈ)、7.92(ｓ、1Ｈ)、7.43(ｄｔ、Ｊ＝8.0、1.2Ｈｚ、1Ｈ)、7.17(ｑｕｉｎｔ ｄ、Ｊ＝7.2、1.6Ｈｚ、2Ｈ)、4.12(ｓ、2Ｈ)。
【0152】
段階3：Ｎ－(2－((2－クロロフェニル)アミノ)－2－オキソエチル)－1Ｈ－インドール
－3－カルボキサミド(Ｎ－(2－((2－ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ａｍｉｎｏ)－2－ｏｘｏｅｔｈｙｌ)－1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ,ＦＣＣＳ－16031)の製造
Ａｒガス雰囲気下で前記段階2で得られた2－(1Ｈ－インドール－3－カルボキサミド)酢酸(2－(1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｏ)ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ、ＦＣＣＳ－16031－3－2)(200ｍｇ、0.917ｍｍｏｌ)とＴＳＴＵ(Ｎ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ’－Ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ－Ｏ－(Ｎ－ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ)ｕｒｏｎｉｕｍ ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏｂｏｒａｔｅ)(290ｍｇ、0.962ｍｍｏｌ)をジメチルホルムアミド(Ｎ,Ｎ－ｄｉｍ
ｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ)(4ｍＬ、ａｎｈｙｄｏｒｕｓ)に溶かし、Ｎ,Ｎ－ジイソ
メチルプロピルエチルアミン(ＤＩＥＡ)(0.4ｍＬ、2.293ｍｍｏｌ)を加えた後、常温で3
時間撹拌する。2－クロロアニリン(2－ｃｈｌｏｒｏａｎｉｌｉｎｅ)(0.29ｍＬ、2.751ｍｍｏｌ)とＮ,Ｎ－ジイソメチルプロピルエチルアミン(ＤＩＥＡ)(0.64ｍＬ、3.668ｍｍｏｌ)を入れ、60℃で4時間加熱する。減圧下で溶媒を除去後、ジクロロメタン(ｄｉｃｈｌ
ｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ)とＮＨ4Ｃｌ飽和水溶液を加えて抽出をして、有機層を得、無水Ｎ
ａ2ＳＯ4 Ｐａｄに通過させて、残った水分を除去した後、減圧下で溶媒を除去する。シリカ－ゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ Ｆｌａｓｈ
Ｃｏｌｕｍｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)(70％ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)を行うことによって、目的化合物Ｎ－(2－((2－クロロフェニル)アミノ)－2－オキソエチル)－1Ｈ－インドール－3－カルボキサミド(Ｎ－(2－((2－ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ａｍｉｎｏ)－2－ｏｘｏｅｔｈｙｌ)－1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ、ＦＣＣＳ－16031)20ｍｇ(ｗｈｉｔｅ ｓｏｌｉｄ、6.6％)を得た。
－3－カルボキサミド(Ｎ－(2－((2－ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ａｍｉｎｏ)－2－ｏｘｏｅｔｈｙｌ)－1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ,ＦＣＣＳ－16031)の製造
Ａｒガス雰囲気下で前記段階2で得られた2－(1Ｈ－インドール－3－カルボキサミド)酢酸(2－(1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｏ)ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ、ＦＣＣＳ－16031－3－2)(200ｍｇ、0.917ｍｍｏｌ)とＴＳＴＵ(Ｎ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ’－Ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌ－Ｏ－(Ｎ－ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ)ｕｒｏｎｉｕｍ ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｏｂｏｒａｔｅ)(290ｍｇ、0.962ｍｍｏｌ)をジメチルホルムアミド(Ｎ,Ｎ－ｄｉｍ
ｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ)(4ｍＬ、ａｎｈｙｄｏｒｕｓ)に溶かし、Ｎ,Ｎ－ジイソ
メチルプロピルエチルアミン(ＤＩＥＡ)(0.4ｍＬ、2.293ｍｍｏｌ)を加えた後、常温で3
時間撹拌する。2－クロロアニリン(2－ｃｈｌｏｒｏａｎｉｌｉｎｅ)(0.29ｍＬ、2.751ｍｍｏｌ)とＮ,Ｎ－ジイソメチルプロピルエチルアミン(ＤＩＥＡ)(0.64ｍＬ、3.668ｍｍｏｌ)を入れ、60℃で4時間加熱する。減圧下で溶媒を除去後、ジクロロメタン(ｄｉｃｈｌ
ｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ)とＮＨ4Ｃｌ飽和水溶液を加えて抽出をして、有機層を得、無水Ｎ
ａ2ＳＯ4 Ｐａｄに通過させて、残った水分を除去した後、減圧下で溶媒を除去する。シリカ－ゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(Ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ Ｆｌａｓｈ
Ｃｏｌｕｍｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ)(70％ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ／ｎ－ｈｅｘａｎｅ)を行うことによって、目的化合物Ｎ－(2－((2－クロロフェニル)アミノ)－2－オキソエチル)－1Ｈ－インドール－3－カルボキサミド(Ｎ－(2－((2－ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ)ａｍｉｎｏ)－2－ｏｘｏｅｔｈｙｌ)－1Ｈ－ｉｎｄｏｌｅ－3－ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ、ＦＣＣＳ－16031)20ｍｇ(ｗｈｉｔｅ ｓｏｌｉｄ、6.6％)を得た。
【0153】
1Ｈ ＮＭＲ(400ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ)；δ8.15－8.12(ｍ、1Ｈ)、8.04(ｄｄ,Ｊ＝8.0、1.2Ｈｚ、1Ｈ)、7.97(ｓ、1Ｈ)、7.46－7.41(ｍ、2Ｈ)、7.33－7.28(ｍ、1Ｈ)、7.23－7.12(ｍ、3Ｈ)、4.26(ｓ、2Ｈ)。
【0154】
＜実験例1－1＞ルシフェラーゼ(Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ)発現実験(比較例1～4)
ルシフェラーゼ活性評価を通したklotho遺伝子の発現有無を評価するために、ヒト腎臓の近位尿細管(ｐｒｏｘｉｍａｌ ｔｕｂｕｌｅ)の上皮(ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ)細胞であるＲＰＴＥＣ(ｈｕｍａｎ ｒｅｎａｌ ｐｒｏｘｉｍａｌ ｔｕｂｕｌｅ ｅｐｉｔｈ
ｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ,ＡＴＣＣ ＣＲＬ－4031)細胞を米国のＬｏｎｚａ社から購入して使用した。
ルシフェラーゼ活性評価を通したklotho遺伝子の発現有無を評価するために、ヒト腎臓の近位尿細管(ｐｒｏｘｉｍａｌ ｔｕｂｕｌｅ)の上皮(ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ)細胞であるＲＰＴＥＣ(ｈｕｍａｎ ｒｅｎａｌ ｐｒｏｘｉｍａｌ ｔｕｂｕｌｅ ｅｐｉｔｈ
ｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ,ＡＴＣＣ ＣＲＬ－4031)細胞を米国のＬｏｎｚａ社から購入して使用した。
【0155】
培養のためには、同じＬｏｎｚａ社製のＲｅｎａｌ Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｍｅｄｉｕｍ(ＲＥＧＭＴＭ)Ｂｕｌｌｅｔｋｉｔを使用し、37℃、5％ＣＯ2条件で培養した。ルシフェラーゼ発現のためのプラスミドは、ヒトのＫＬ(klotho)遺伝子のプロモーター部位が蛍ルシフェラーゼ(ｆｉｒｅｆｌｙ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ)遺伝子発現を調節するように配置されたものを使用した。
【0156】
プラスミドは、Ｒｏｃｈｅ社のＸ－ｔｒｅｍｅ ＧＥＮＥ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ
ｒｅａｇｅｎｔを使用して細胞内に取り入れた。細胞で発現したルシフェラーゼ活性は、Ｐｒｏｍｅｇａ社製のＤｕａｌ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｒｅｐｏｒｔｅｒ ａｓｓａｙ ｓｙｓｔｅｍを利用して測定した。各化合物を表示された濃度ずつ培養された細胞に24時間処理した後に、ルシフェラーゼ活性を測定した。ルシフェラーゼの活性が高い場合は、klotho遺伝子の発現が増加できることを間接的に示す。
ｒｅａｇｅｎｔを使用して細胞内に取り入れた。細胞で発現したルシフェラーゼ活性は、Ｐｒｏｍｅｇａ社製のＤｕａｌ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｒｅｐｏｒｔｅｒ ａｓｓａｙ ｓｙｓｔｅｍを利用して測定した。各化合物を表示された濃度ずつ培養された細胞に24時間処理した後に、ルシフェラーゼ活性を測定した。ルシフェラーゼの活性が高い場合は、klotho遺伝子の発現が増加できることを間接的に示す。
【0157】
比較例1～比較例4をＲＰＴＥＣ細胞に5μＭの濃度で処理し、ヒトのklotho遺伝子の開
始部位から1.7ｋｂｐの前までのプロモーターを含むレポータ遺伝子またはヒトのklotho
遺伝子の開始部位から240ｂｐの前までのプロモーターを含むレポータ遺伝子を利用して
レポータ遺伝子の発現を確認した。
始部位から1.7ｋｂｐの前までのプロモーターを含むレポータ遺伝子またはヒトのklotho
遺伝子の開始部位から240ｂｐの前までのプロモーターを含むレポータ遺伝子を利用して
レポータ遺伝子の発現を確認した。
【0158】
その結果、図1に示されたように、比較例1の化合物のルシフェラーゼ活性が最も高いことを確認した。
＜実験例1－2＞ルシフェラーゼ発現実験(実施例1～6)
前記実験例1－1の結果を基盤として、比較例1と類似した化学構造を有する実施例1～6
を合成し、本実験例1－2を実施した。
＜実験例1－2＞ルシフェラーゼ発現実験(実施例1～6)
前記実験例1－1の結果を基盤として、比較例1と類似した化学構造を有する実施例1～6
を合成し、本実験例1－2を実施した。
【0159】
ヒト腎臓の近位尿細管(ｐｒｏｘｉｍａｌ ｔｕｂｕｌｅ)の上皮(ｅｐｉｔｈｅｌｉｕ
ｍ)細胞であるＲＰＴＥＣに実施例1～6をそれぞれ0.5,1および5μＭの濃度で処理し、比
較例1は、5μＭの濃度で処理して、ヒトのklotho遺伝子の－2.1ｋｂアップストリームま
で含まれたプロモーターを含むレポータ遺伝子(ｐＨＫＰ－ｌｕｃ)を利用してレポータ遺伝子の発現を確認した結果を図2および図3に示した。
ｍ)細胞であるＲＰＴＥＣに実施例1～6をそれぞれ0.5,1および5μＭの濃度で処理し、比
較例1は、5μＭの濃度で処理して、ヒトのklotho遺伝子の－2.1ｋｂアップストリームま
で含まれたプロモーターを含むレポータ遺伝子(ｐＨＫＰ－ｌｕｃ)を利用してレポータ遺伝子の発現を確認した結果を図2および図3に示した。
【0160】
図2に示されたように、実施例1、実施例2の化合物のレポータ遺伝子の発現が比較例1と
類似したレベルであることを確認した。
図3に示されたように、比較例1および実施例1～3をＲＰＴＥＣ細胞に5μＭの濃度で処
理し、ヒトのklotho遺伝子の－2.1ｋｂアップストリームまで含まれたプロモーターを含
むレポータ遺伝子(ｐＨＫＰ－ｌｕｃ)を利用してレポータ遺伝子の発現を確認した結果、実施例2の化合物が比較例1と類似したレベルであることを確認した。
類似したレベルであることを確認した。
図3に示されたように、比較例1および実施例1～3をＲＰＴＥＣ細胞に5μＭの濃度で処
理し、ヒトのklotho遺伝子の－2.1ｋｂアップストリームまで含まれたプロモーターを含
むレポータ遺伝子(ｐＨＫＰ－ｌｕｃ)を利用してレポータ遺伝子の発現を確認した結果、実施例2の化合物が比較例1と類似したレベルであることを確認した。
【0161】
＜実験例2＞Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ実験を利用したklotho(ＫＬ)遺伝子発現量の
定量評価
比較例1および実施例1～2の化合物を6時間処理したヒト腎臓の近位尿細管(ｐｒｏｘｉ
ｍａｌ ｔｕｂｕｌｅ)の上皮(ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ)細胞であるＲＰＴＥＣ細胞からＲ
ＮＡ抽出のために、Ｑｉａｇｅｎ社のＲＮｅａｓｙ ｋｉｔを利用した。抽出されたＲＮＡは、Ｔｈｅｒｍｏ社のＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ ｋｉｔを利用してｃＤＮＡを製造し、ＫＬ(klotho)遺伝子特異的キットは、Ａｐｐｌｉｅｄｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社のＴａｑｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｓｓａｙｓを利用して実施した結果を図4に示した。
定量評価
比較例1および実施例1～2の化合物を6時間処理したヒト腎臓の近位尿細管(ｐｒｏｘｉ
ｍａｌ ｔｕｂｕｌｅ)の上皮(ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ)細胞であるＲＰＴＥＣ細胞からＲ
ＮＡ抽出のために、Ｑｉａｇｅｎ社のＲＮｅａｓｙ ｋｉｔを利用した。抽出されたＲＮＡは、Ｔｈｅｒｍｏ社のＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ ｋｉｔを利用してｃＤＮＡを製造し、ＫＬ(klotho)遺伝子特異的キットは、Ａｐｐｌｉｅｄｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社のＴａｑｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｓｓａｙｓを利用して実施した結果を図4に示した。
【0162】
図4に示されたように、実施例2の化合物が比較例1と類似したレベルであることを確認
した。
本実験例2の結果をベースとして、実施例2化合物と化学構造が類似した実施例7～10化
合物を合成して、次の実験例3に使用した。
した。
本実験例2の結果をベースとして、実施例2化合物と化学構造が類似した実施例7～10化
合物を合成して、次の実験例3に使用した。
【0163】
＜実験例3＞一般ＰＣＲ実験を利用したklotho(ＫＬ)遺伝子発現量の定量評価
実施例7～10を2.5μＭずつ6時間ヒト腎臓の近位尿細管(ｐｒｏｘｉｍａｌ ｔｕｂｕｌｅ)の上皮(ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ)細胞であるＲＰＴＥＣ細胞に処理後、細胞からＲＮＡ
を抽出し、抽出されたＲＮＡは、Ｔｈｅｒｍｏ社のＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ ｋｉｔを利用してｃＤＮＡを製造した後、一般ＰＣＲを実施した。
実施例7～10を2.5μＭずつ6時間ヒト腎臓の近位尿細管(ｐｒｏｘｉｍａｌ ｔｕｂｕｌｅ)の上皮(ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ)細胞であるＲＰＴＥＣ細胞に処理後、細胞からＲＮＡ
を抽出し、抽出されたＲＮＡは、Ｔｈｅｒｍｏ社のＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ ｋｉｔを利用してｃＤＮＡを製造した後、一般ＰＣＲを実施した。
【0164】
実験に使用されたプライマーの情報は、下記の通りである。
ＫＬ－Ｆ ＧＡＴＡＧＡＧＡＡＡＡＡＴＧＧＣＴＴＣＣＣＴＣＣ(配列番号1)
ＫＬ－Ｒ ＧＧＴＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＧ(配列番号2)
ＧＡＰＤＨ－Ｆ ＴＧＡＣＡＡＣＴＴＴＧＧＴＡＴＣＧＴＧＧＡＡＧＧ(配列番号3)
ＧＡＰＤＨ－Ｒ ＡＧＧＧＡＴＧＡＴＧＴＴＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣ(配列番号4)
ＰＣＲで増幅されたＤＮＡは、アガロースゲルで電気泳動後、エチジウムブロマイド(
Ｅｔｈｉｄｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ)染色を通じて確認し、バンド内のＤＮＡ量は、Ｓｐ
ｅｅｄｙＱｕａｎｔプログラムを利用して定量比較して、図5に示した。
ＫＬ－Ｆ ＧＡＴＡＧＡＧＡＡＡＡＡＴＧＧＣＴＴＣＣＣＴＣＣ(配列番号1)
ＫＬ－Ｒ ＧＧＴＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＧ(配列番号2)
ＧＡＰＤＨ－Ｆ ＴＧＡＣＡＡＣＴＴＴＧＧＴＡＴＣＧＴＧＧＡＡＧＧ(配列番号3)
ＧＡＰＤＨ－Ｒ ＡＧＧＧＡＴＧＡＴＧＴＴＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣ(配列番号4)
ＰＣＲで増幅されたＤＮＡは、アガロースゲルで電気泳動後、エチジウムブロマイド(
Ｅｔｈｉｄｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ)染色を通じて確認し、バンド内のＤＮＡ量は、Ｓｐ
ｅｅｄｙＱｕａｎｔプログラムを利用して定量比較して、図5に示した。
【0165】
【0166】
＜実験例4＞毒性テスト
培養されたＨＫ2(Ｈｕｍａｎ ｋｉｄｎｅｙ－2)細胞に比較例1、実施例2および実施例9～実施例10を25μＭまたは12.5μＭの濃度で処理し、24時間後にＥＺ－Ｃｙｔｏｘ ｋ
ｉｔを利用して細胞毒性を測定した。ＥＺ－Ｃｙｔｏｘは、生きた細胞のミトコンドリア酵素によって450ｎｍで吸光度を有するホルマザン(ｆｏｒｍａｚａｎ)を生成するので、
生きた細胞は、450ｎｍでさらに高い吸光度を示す。処理した化合物の量と同じ体積のDMSOを処理した細胞の毒性を1と見なすとき、化合物サンプル処理によってどれくらい細胞が毒性に減少したかを確認し、その結果を図6に示した。
培養されたＨＫ2(Ｈｕｍａｎ ｋｉｄｎｅｙ－2)細胞に比較例1、実施例2および実施例9～実施例10を25μＭまたは12.5μＭの濃度で処理し、24時間後にＥＺ－Ｃｙｔｏｘ ｋ
ｉｔを利用して細胞毒性を測定した。ＥＺ－Ｃｙｔｏｘは、生きた細胞のミトコンドリア酵素によって450ｎｍで吸光度を有するホルマザン(ｆｏｒｍａｚａｎ)を生成するので、
生きた細胞は、450ｎｍでさらに高い吸光度を示す。処理した化合物の量と同じ体積のDMSOを処理した細胞の毒性を1と見なすとき、化合物サンプル処理によってどれくらい細胞が毒性に減少したかを確認し、その結果を図6に示した。
【0167】
【0168】
＜実験例5＞KS1化合物(実施例10)による神経細胞老化抑制効果分析
1)細胞培養と化合物処理
Mouse hippocampus由来の神経細胞であるHT22細胞を、10％FBSを添付したDMEM培養用培地で培養した。細胞培養は3７℃のインキュベーターで5％ＣＯ2条件で培養し、細胞が培
養ディッシュの表面を80％程度飽和するように成長したら0.05％トリプシンで処理して、新しい培養ディッシュに移して継代培養した。化合物は、最終濃度が2.5μＭに維持され
るように継代培養のたびに培地に添加した。陰性対照のために溶媒であるDMSOのみを入れた細胞を使用し、老化が進行しなかった対照群として3回継代培養した細胞(＃5)を用いた。老化を誘導した細胞は全て20回継代培養した細胞(＃25)を用いた。
1)細胞培養と化合物処理
Mouse hippocampus由来の神経細胞であるHT22細胞を、10％FBSを添付したDMEM培養用培地で培養した。細胞培養は3７℃のインキュベーターで5％ＣＯ2条件で培養し、細胞が培
養ディッシュの表面を80％程度飽和するように成長したら0.05％トリプシンで処理して、新しい培養ディッシュに移して継代培養した。化合物は、最終濃度が2.5μＭに維持され
るように継代培養のたびに培地に添加した。陰性対照のために溶媒であるDMSOのみを入れた細胞を使用し、老化が進行しなかった対照群として3回継代培養した細胞(＃5)を用いた。老化を誘導した細胞は全て20回継代培養した細胞(＃25)を用いた。
【0169】
2)老化程度の確認
細胞の老化の程度を確認するために、Cell Signaling Technology社の「Senescenceβ-galactosidase staining kit」を使用した。実験当日に細胞に染色液を入れ、8時間後に
染色された細胞を確認した。 200倍顕微鏡下で観察された細胞全体の数の間に染色された細胞の数を同定して比率で示し、1サンプル当たり異なる3つの場所で染色された細胞数を数えて平均した。細胞の老化が進行するほどβ-ガラクトシダーゼ酵素の発現が増加する
ため、染色された細胞は、染色されていない細胞より老化が多く進行した細胞と判断することができる。
細胞の老化の程度を確認するために、Cell Signaling Technology社の「Senescenceβ-galactosidase staining kit」を使用した。実験当日に細胞に染色液を入れ、8時間後に
染色された細胞を確認した。 200倍顕微鏡下で観察された細胞全体の数の間に染色された細胞の数を同定して比率で示し、1サンプル当たり異なる3つの場所で染色された細胞数を数えて平均した。細胞の老化が進行するほどβ-ガラクトシダーゼ酵素の発現が増加する
ため、染色された細胞は、染色されていない細胞より老化が多く進行した細胞と判断することができる。
【0170】
3)実験結果
実験結果20回継代培養した細胞は、5回継代培養した細胞に比べて老化の程度が増加し
たことが分かった。顕微鏡下で200倍で観察したとき、20回継代培養した細胞は細胞の50
％程度が全て染色されたが、5回継代培養した細胞は5％の細胞のみが染色された。同様に20回継代培養したが、培地にKS1化合物(実施例10)を培地に入れて培養した細胞群で染色
の程度が減少し、細胞中40％程度が染色された。すなわち、KS1化合物(実施例10)が存在
する状態で培養された細胞は、20回の継代培養期間中、DMSOを入れた培地で育った細胞よりも老化の程度が20％程度減少したことが示された(図７)。
実験結果20回継代培養した細胞は、5回継代培養した細胞に比べて老化の程度が増加し
たことが分かった。顕微鏡下で200倍で観察したとき、20回継代培養した細胞は細胞の50
％程度が全て染色されたが、5回継代培養した細胞は5％の細胞のみが染色された。同様に20回継代培養したが、培地にKS1化合物(実施例10)を培地に入れて培養した細胞群で染色
の程度が減少し、細胞中40％程度が染色された。すなわち、KS1化合物(実施例10)が存在
する状態で培養された細胞は、20回の継代培養期間中、DMSOを入れた培地で育った細胞よりも老化の程度が20％程度減少したことが示された(図７)。
【0171】
＜実験例6＞KS1化合物(実施例10)による神経細胞炎症抑制効果分析
1)細胞培養と化合物処理
Mouse hippocampus由来の神経細胞であるHT22細胞を、10％FBSを添付したDMEM培養用培地で培養した。細胞培養は、3７℃のインキュベーターで5％ＣＯ2条件で培養し、細胞が
培養ディッシュの表面を80％程度飽和するように成長したら、0.05％トリプシンで処理して新しい培養ディッシュに移して継代培養した。化合物は、最終濃度が2.5μＭに維持さ
れるように継代培養のたびに培地に添加した。陰性対照のために溶媒であるDMSOのみを入れた細胞を使用し、老化が進行しなかった対照群として3回継代培養した細胞(＃5)を用いた。老化を誘導した細胞は全て20回継代培養した細胞(＃25)を用いた。
1)細胞培養と化合物処理
Mouse hippocampus由来の神経細胞であるHT22細胞を、10％FBSを添付したDMEM培養用培地で培養した。細胞培養は、3７℃のインキュベーターで5％ＣＯ2条件で培養し、細胞が
培養ディッシュの表面を80％程度飽和するように成長したら、0.05％トリプシンで処理して新しい培養ディッシュに移して継代培養した。化合物は、最終濃度が2.5μＭに維持さ
れるように継代培養のたびに培地に添加した。陰性対照のために溶媒であるDMSOのみを入れた細胞を使用し、老化が進行しなかった対照群として3回継代培養した細胞(＃5)を用いた。老化を誘導した細胞は全て20回継代培養した細胞(＃25)を用いた。
【0172】
2) 炎症誘発実験
160μｌ培地に細胞を10,000個となるように96ウェルプレートの各ウェルに分注し、3７℃培養器で5％ＣＯ2条件で24時間培養し、このとき化合物を最終濃度2.5μＭとなるよう
に培養培地に入れて一緒に培養した。 培養後、Cell application社のLPS(lipopolysaccharide)を1μg/mL濃度で添加し、24時間さらに培養した。その後、同社製品であるCyto X cell viability assay kitを各ウェルに20μlずつ入れてから1～4時間培養した。その後
、色の変化を450ｎｍで測定した。
160μｌ培地に細胞を10,000個となるように96ウェルプレートの各ウェルに分注し、3７℃培養器で5％ＣＯ2条件で24時間培養し、このとき化合物を最終濃度2.5μＭとなるよう
に培養培地に入れて一緒に培養した。 培養後、Cell application社のLPS(lipopolysaccharide)を1μg/mL濃度で添加し、24時間さらに培養した。その後、同社製品であるCyto X cell viability assay kitを各ウェルに20μlずつ入れてから1～4時間培養した。その後
、色の変化を450ｎｍで測定した。
【0173】
3)実験結果
実験結果、20回継代培養した細胞は、5回継代培養した細胞に比べてＬＰＳ処理による
細胞の毒性が増加したことが示された。吸光度の変化を吸光光度計(spectrophotometer)
で測定したとき、DMSOを含めて培養された20回継代培養した細胞は80％程度がLPS毒性に
より死んだが、5回継代培養した細胞は50％の細胞のみが死んでいるようで、比較的有毒
な細胞死が老化した細胞でより多く発生した。 KS1化合物(実施例10)を添加した培地で培養した細胞の場合、20回継代培養した細胞ではＬＰＳ処理により死ぬ細胞の割合が60％であり、5回継代培養した細胞では45％の細胞が死ぬことが分かった。すなわち、KS1化合物(実施例10)が存在した状態で継代培養された細胞においてＬＰＳによる細胞毒性の減少が現れ、より多くの細胞が生存していることが確認され、これはKS1化合物(実施例10)が神
経細胞の炎症抑制に有効であることを示す(図8)。
実験結果、20回継代培養した細胞は、5回継代培養した細胞に比べてＬＰＳ処理による
細胞の毒性が増加したことが示された。吸光度の変化を吸光光度計(spectrophotometer)
で測定したとき、DMSOを含めて培養された20回継代培養した細胞は80％程度がLPS毒性に
より死んだが、5回継代培養した細胞は50％の細胞のみが死んでいるようで、比較的有毒
な細胞死が老化した細胞でより多く発生した。 KS1化合物(実施例10)を添加した培地で培養した細胞の場合、20回継代培養した細胞ではＬＰＳ処理により死ぬ細胞の割合が60％であり、5回継代培養した細胞では45％の細胞が死ぬことが分かった。すなわち、KS1化合物(実施例10)が存在した状態で継代培養された細胞においてＬＰＳによる細胞毒性の減少が現れ、より多くの細胞が生存していることが確認され、これはKS1化合物(実施例10)が神
経細胞の炎症抑制に有効であることを示す(図8)。
【0174】
＜実験例７＞認知機能障害動物モデルにおけるKS1化合物の治療効果確認実験
1)動物モデル及びKS1化合物(実施例10)投与方法
この実験では、4ヶ月齢または6ヶ月齢の5xFADマウスを使用した。 5ｘＦＡＤマウスは
、βアミロイド(Ａβ、βアミロイド)を過生成するように遺伝的に変異したアルツハイマーマウスであり、これを維持及び販売しているＫＩＳＴ研究動物資源センターから提供されて使用された。正常対照(ＷＴ)は、βアミロイド(Ａβ、βアミロイド)を過生成するように遺伝的に変異が生じていない正常マウスをＫＩＳＴ研究動物資源センターから提供されて用いた。実験動物は実験前に1週間の順化過程を経た。マウスは実験中に温度22±2℃、湿度は40～60％に維持された飼育室で自由食餌で飼育され、明暗周期は12時間間隔で調節された。すべての動物実験は、韓国科学技術研究院(ＫＩＳＴ)動物実験倫理委員会(Institutional Animal Care and Use Committee)の動物実験運営規定に準拠して行われた。
1)動物モデル及びKS1化合物(実施例10)投与方法
この実験では、4ヶ月齢または6ヶ月齢の5xFADマウスを使用した。 5ｘＦＡＤマウスは
、βアミロイド(Ａβ、βアミロイド)を過生成するように遺伝的に変異したアルツハイマーマウスであり、これを維持及び販売しているＫＩＳＴ研究動物資源センターから提供されて使用された。正常対照(ＷＴ)は、βアミロイド(Ａβ、βアミロイド)を過生成するように遺伝的に変異が生じていない正常マウスをＫＩＳＴ研究動物資源センターから提供されて用いた。実験動物は実験前に1週間の順化過程を経た。マウスは実験中に温度22±2℃、湿度は40～60％に維持された飼育室で自由食餌で飼育され、明暗周期は12時間間隔で調節された。すべての動物実験は、韓国科学技術研究院(ＫＩＳＴ)動物実験倫理委員会(Institutional Animal Care and Use Committee)の動物実験運営規定に準拠して行われた。
【0175】
動物モデルマウスおよび正常対照マウスは、4週間または12週間の間、vehicle(5% DMSO
+ 65% PEG400 + 30% Saline)、またはKS1(実施例10)を溶解したvehicleを経口(po)で毎
日10mg/kgの度で投与された。各実験群当たりのマウスを3匹ずつ使用した。投与期間中に毎週体重を測定し、投与終了後認知機能について実験を進行し、 sacrificeした後臓器を摘出し、変化状態を生化学的方法により確認した。
+ 65% PEG400 + 30% Saline)、またはKS1(実施例10)を溶解したvehicleを経口(po)で毎
日10mg/kgの度で投与された。各実験群当たりのマウスを3匹ずつ使用した。投与期間中に毎週体重を測定し、投与終了後認知機能について実験を進行し、 sacrificeした後臓器を摘出し、変化状態を生化学的方法により確認した。
【0176】
2) 認知機能確認実験方法
2-1) 新しい物体探索試験(novel object recognition test, NOR)
新物質探索試験(Novel object recognition test)は既存の方法を変形したもので、適
応期間、探索期間及び新物質認識期間で構成されている。実験の前日に30分間マウスを開場に置き、適応させた後、2つの同一の物体を一定の間隔で設置した。実験動物を10分間
自由に探索するようにしながら、Ethovisionで各物体に留まる時間を測定し、その後ケージに1日間戻した。そして翌日設置した物体の一つを新物質に置き換え、実験動物の動き
を10分間測定した。物体の嗜好度(recognition index(%))は、全探索した時間のうち、各物体に留まる時間を百分率に換算した。
2-1) 新しい物体探索試験(novel object recognition test, NOR)
新物質探索試験(Novel object recognition test)は既存の方法を変形したもので、適
応期間、探索期間及び新物質認識期間で構成されている。実験の前日に30分間マウスを開場に置き、適応させた後、2つの同一の物体を一定の間隔で設置した。実験動物を10分間
自由に探索するようにしながら、Ethovisionで各物体に留まる時間を測定し、その後ケージに1日間戻した。そして翌日設置した物体の一つを新物質に置き換え、実験動物の動き
を10分間測定した。物体の嗜好度(recognition index(%))は、全探索した時間のうち、各物体に留まる時間を百分率に換算した。
【0177】
2-2) 手動回避(passive avoidance)実験
手動回避実験機構は2つの区域に分かれており、それぞれ光が入ってくる区域と暗い区
域であり、底は金網で構成されている。訓練中、実験動物は明るいゾーンに置かれ、実験動物が暗いゾーンに移動するとすぐにドアが閉じ、0.45 mAの電流が2秒間流れるフットショック(foot shock)を受ける。訓練を受けてから一日過ぎてテストを実施するのに、実験動物が明るいゾーンに置かれ、再び暗いゾーンに移動するまでの時間を測定した(最大時
間は600秒と定めた)。この手動回避実験により、空間学習と記憶力(spatial learning and memory)を評価した。
手動回避実験機構は2つの区域に分かれており、それぞれ光が入ってくる区域と暗い区
域であり、底は金網で構成されている。訓練中、実験動物は明るいゾーンに置かれ、実験動物が暗いゾーンに移動するとすぐにドアが閉じ、0.45 mAの電流が2秒間流れるフットショック(foot shock)を受ける。訓練を受けてから一日過ぎてテストを実施するのに、実験動物が明るいゾーンに置かれ、再び暗いゾーンに移動するまでの時間を測定した(最大時
間は600秒と定めた)。この手動回避実験により、空間学習と記憶力(spatial learning and memory)を評価した。
【0178】
2-3)統計処理
すべてのデータは平均(SEM)で示され、各グループ間の違いは、ワンウェイANOVAとTuke
y's multiple comparisons testを用いて確認された。統計的に差があると判定される場
合、ｐ＜0.05＊、ｐ＜0.01＊＊、ｐ＜0.001＊＊＊と表記した。
すべてのデータは平均(SEM)で示され、各グループ間の違いは、ワンウェイANOVAとTuke
y's multiple comparisons testを用いて確認された。統計的に差があると判定される場
合、ｐ＜0.05＊、ｐ＜0.01＊＊、ｐ＜0.001＊＊＊と表記した。
【0179】
3)実験結果
3-1) 認知機能障害タンパク質発現の減少
5ｘＦＡＤ認知機能障害動物モデルと正常対照動物モデルの対照群(ＣＴＬ)およびKS1の1ヶ月および3ヶ月投与群から分離された脳組織切片の各部位(ＨＰＣ：海馬；ＣＴＸ：新
皮質)で測定されたホスホタウ(phospho-Tau)蛍光レベルを免疫蛍光法(Immunohistochemistry)で調べた。その結果、vehicleを投与されたマウスと比較してKS1(実施例10)を投与されたマウスでは、phospho-Tauタンパク質の発現が統計的に有意なレベルに減少したこと
が確認できた。海馬(ＨＩＰＣＡＭＰＵＳ、ＨＰＣ)部位では3ヶ月投与マウスでのみタン
パク質の減少が示され、一次体性感覚皮質(primary somatosensory cortex、ＣＴＸ)部位では1ヶ月及び3ヶ月投与マウスの両方でタンパク質の発現減少が認められた(図9)。
3-1) 認知機能障害タンパク質発現の減少
5ｘＦＡＤ認知機能障害動物モデルと正常対照動物モデルの対照群(ＣＴＬ)およびKS1の1ヶ月および3ヶ月投与群から分離された脳組織切片の各部位(ＨＰＣ：海馬；ＣＴＸ：新
皮質)で測定されたホスホタウ(phospho-Tau)蛍光レベルを免疫蛍光法(Immunohistochemistry)で調べた。その結果、vehicleを投与されたマウスと比較してKS1(実施例10)を投与されたマウスでは、phospho-Tauタンパク質の発現が統計的に有意なレベルに減少したこと
が確認できた。海馬(ＨＩＰＣＡＭＰＵＳ、ＨＰＣ)部位では3ヶ月投与マウスでのみタン
パク質の減少が示され、一次体性感覚皮質(primary somatosensory cortex、ＣＴＸ)部位では1ヶ月及び3ヶ月投与マウスの両方でタンパク質の発現減少が認められた(図9)。
【0180】
3-2)神経細胞マーカーNeuN発現増加
5xFAD認知機能障害動物モデルと正常対照群動物モデルの対照群(CTL)およびKS1 1ヶ月
および3ヶ月投与群から分離された脳組織切片の各部位(CTX：新皮質、CA：アンモン角、DG：歯床会)で測定したNeuNの蛍光レベルを免疫蛍光法(Immunohistochemistry)で調べた。その結果、vehicleを投与されたマウスと比較してKS1(実施例10)を投与されたマウスでは、ＮｅｕＮ神経マーカータンパク質の発現が統計的に有意なレベルまで増加したことが確認できた(図10)。 一次体性感覚皮質(primary somatosensory cortex, CTX)部位と歯状回(Dentate Gyrus, DG)部位ではKS1による有意なNeuNの増加を確認できず、コルヌ・アンモニス(Cornu Ammonis, CA)部位ではKS1投与群でNeuNの増加が確認された。
5xFAD認知機能障害動物モデルと正常対照群動物モデルの対照群(CTL)およびKS1 1ヶ月
および3ヶ月投与群から分離された脳組織切片の各部位(CTX：新皮質、CA：アンモン角、DG：歯床会)で測定したNeuNの蛍光レベルを免疫蛍光法(Immunohistochemistry)で調べた。その結果、vehicleを投与されたマウスと比較してKS1(実施例10)を投与されたマウスでは、ＮｅｕＮ神経マーカータンパク質の発現が統計的に有意なレベルまで増加したことが確認できた(図10)。 一次体性感覚皮質(primary somatosensory cortex, CTX)部位と歯状回(Dentate Gyrus, DG)部位ではKS1による有意なNeuNの増加を確認できず、コルヌ・アンモニス(Cornu Ammonis, CA)部位ではKS1投与群でNeuNの増加が確認された。
【0181】
3-3) 新規物体探索試験(Novel Object Recognition Test, NOR)
ＮＯＲ法でマウスの行動を探索したところ、KS1を投与された認知機能障害(5ｘＦＡＤ)マウスでは、vehicleを投与されたマウスより物体探索能力が統計的に有意に高くなった
ことを確認した(図11)。
ＮＯＲ法でマウスの行動を探索したところ、KS1を投与された認知機能障害(5ｘＦＡＤ)マウスでは、vehicleを投与されたマウスより物体探索能力が統計的に有意に高くなった
ことを確認した(図11)。
【0182】
3-4) 手動回避(Passive Avoidance)実験
手動回避実験で空間学習と記憶力を実験した結果、認知機能障害(5xFAD)マウスは、正
常なマウスに比べて著しく低下したことを確認できたが、KS1を4週間投与されたマウスは正常マウスと同程度の能力を保持していることを確認した(図12)。
手動回避実験で空間学習と記憶力を実験した結果、認知機能障害(5xFAD)マウスは、正
常なマウスに比べて著しく低下したことを確認できたが、KS1を4週間投与されたマウスは正常マウスと同程度の能力を保持していることを確認した(図12)。
【0183】
これまで、本発明に関してその好ましい実施形態を中心に見てきた。本発明が属する技術分野において通常の知識を有する者は、本発明が本発明の本質的な特性から逸脱しない範囲で変形された形態で具現され得ることが理解されるであろう。したがって、開示された実施形態は限定的な観点ではなく説明的な観点から考慮されるべきである。本発明の範囲は前述の説明ではなく、特に特許請求の範囲に示されており、それと同等の範囲内にある全ての相違点は本発明に含まれるものと解釈されるべきである。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【配列表】
【国際調査報告】