特表 2024-512924 置換ジアミノピラジンジカルボン酸の調製

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-21

(54)【発明の名称】置換ジアミノピラジンジカルボン酸の調製

(51)【国際特許分類】

   C07D 241/28 20060101AFI20240313BHJP

【ＦＩ】

C07D241/28

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023555815

(86)(22)【出願日】2022-03-17

(85)【翻訳文提出日】2023-09-12

(86)【国際出願番号】 US2022020754

(87)【国際公開番号】W WO2022212077

(87)【国際公開日】2022-10-06

(31)【優先権主張番号】63/168,512

(32)【優先日】2021-03-31

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】517175301

【氏名又は名称】メディビーコン，インク．

(74)【代理人】

【識別番号】110001379

【氏名又は名称】弁理士法人大島特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ロジャース、トーマス

(72)【発明者】

【氏名】アダムズ、デイビッド

(72)【発明者】

【氏名】フア、シャオガン

(57)【要約】

本発明は、下記の式（Ｉ）の化合物を調製するための改善された方法を提供する。

【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

下記の式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、
３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸、エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩、極性非プロトン性溶媒、三級アミン、２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル、及び、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）塩酸塩を好適な反応条件下で互いに接触させて、下記の式（Ｉ）の化合物を形成するステップを含み、
前記式（Ｉ）の化合物の前記エステルアミノ酸（ＡＡエステル）のエステル部分が、Ｃ_１－Ｃ_１０非置換アルキル又はＣ_１－Ｃ_１０置換アルキルである、方法。

【請求項2】

前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸、前記エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩、前記極性非プロトン性溶媒、前記三級アミン、前記２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル、及び、前記１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）塩酸塩が、任意の順序で添加されるか、任意の組み合わせで添加されるか、又はそれらの全てが一度に添加される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

（ａ）容器内の前記極性非プロトン性溶媒中で、前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸を前記エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩と接触させて、懸濁液を形成するステップと、
（ｂ）前記ステップ（ａ）で形成された前記懸濁液を前記三級アミンと接触させるステップと、
（ｃ）前記ステップ（ｂ）で形成された前記懸濁液を前記２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチルと接触させるステップと、
（ｄ）前記ステップ（ｃ）で形成された前記懸濁液を前記１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）塩酸塩と接触させて、前記式（Ｉ）の化合物を形成するステップと、を含む、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

前記エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩のアミノ酸部分が、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、又は合成アミノ酸である、請求項２又は３に記載の方法。

【請求項5】

前記エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩のアミノ酸部分が、（Ｒ）配置、（Ｓ）配置、又はラセミ混合物である、請求項２～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩のアミノ酸が、（Ｒ）配置である、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

前記エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩のアミノ酸が、（Ｒ）－セリンである、請求項２～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩の前記エステル部分が、Ｃ_１－Ｃ_８非置換アルキル又はＣ_１－Ｃ_８置換アルキルである、請求項２～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩の前記エステル部分が、メチル、エチル、ｔｅｒｔ－ブチル、又はベンジルである、請求項２～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩の前記エステル部分が、ベンジルである、請求項２～９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩の前記エステル部分が、（Ｒ）－セリンベンジルエステル又は（Ｒ）－セリンベンジルエステルＨＣｌである、請求項２～１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記三級アミンが、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリプロピルアミン、トリブチルアミン、４－メチルモルホリン、４－エチルモルホリン、Ｎ－メチルピロリジン、及びＮ－メチルピペリジンからなる群から選択される、請求項２～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記三級アミンが、ジイソプロピルエチルアミンである、請求項１２に記載の方法。

【請求項14】

前記エステルアミノ酸（ＡＡエステル）と前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．０１：１．０～約２．２０：１．０である、請求項２～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記エステルアミノ酸（ＡＡエステル）と前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．１０：１．０である、請求項２～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）塩酸塩と前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．２０：１．０～約２．５０：１．０である、請求項２～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）塩酸塩と前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．３０：１．０である、請求項２～１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチルと前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．２０：１．０～約２．５０：１．０である、請求項２～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチルと前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．３６：１．０である、請求項２～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

前記三級アミンと前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．１０：１．０～約３．０：１．０である、請求項２～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記三級アミンと前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．２０：１．０である、請求項２～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記極性非プロトン性溶媒が、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ－Ｎ－ジメチルアセトアミド、又はジメチルスルホキシドである、請求項２～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記極性非プロトン性溶媒が、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドである、請求項２～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記極性非プロトン性溶媒と前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸との体積（ｍＬ）対重量（ｇ）比が、１０．０：１．０～約１００．０：１．０である、請求項２～２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記極性非プロトン性溶媒と前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸との体積（ｍＬ）対重量（ｇ）比が、約２０．０：１．０である、請求項２～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記各ステップでの接触が、約－１０℃～約３０℃の範囲の温度で行われる、請求項２～２５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記各ステップでの接触が、約０℃～約２０℃の範囲の温度で行われる、請求項２～２６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項28】

前記各ステップでの接触が、ヘリウム、窒素、アルゴン、又はそれらの任意の組み合わせ下で行われる、請求項２～２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記式（Ｉ）の化合物が、少なくとも７０％の収率を有する、請求項２～２８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記式（Ｉ）の化合物が、少なくとも８０％の収率を有する、請求項２～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記式（Ｉ）の化合物が、約９５％超の純度を有する、請求項２～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

前記式（Ｉ）の化合物が、約９８％超の純度を有する、請求項２～３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

前記極性非プロトン性溶媒が、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドであり、
前記エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩の前記エステル部分が、（Ｒ）－セリンベンジルエステルＨＣｌであり、
前記三級アミンが、ジイソプロピルエチルアミンであり、
前記（Ｒ）－セリンベンジルエステルＨＣｌと前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．０１：１．０～約２．２０：１．０の範囲であり、
前記１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）塩酸塩と前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．２０：１．０～約２．５０：１．０の範囲であり、
前記２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチルと前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．２０：１．０～約２．５０：１．０の範囲であり、
前記ジイソプロピルエチルアミンと前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．１０：１．０～約２．３０：１．０の範囲であり、
前記Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドと前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸との体積（ｍＬ）対重量（ｇ）比が、１０．０：１．０～約１００．０：１．０の範囲であり、
前記各ステップでの接触が、約－１０℃～約３０℃の温度で行われる、請求項２～３２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項34】

前記式（Ｉ）の化合物が、少なくとも７０％の収率を有する、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記式（Ｉ）の化合物が、約９５％超の純度を有する、請求項３３に記載の方法。

【請求項36】

前記極性非プロトン性溶媒が、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドであり、
前記エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩の前記エステル部分が、（Ｒ）－セリンベンジルエステルＨＣｌであり、
前記三級アミンが、ジイソプロピルエチルアミンであり、
前記（Ｒ）－セリンベンジルエステルＨＣｌと前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．１０：１．０であり、
前記１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）塩酸塩と前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．３０：１．０であり、
前記２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチルと前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．３６：１．０であり、
前記ジイソプロピルエチルアミンと前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸のモル比が、約２．２０：１．０であり、
前記Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドと前記３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸との体積（ｍＬ）対重量（ｇ）比が、約２０．０：１．０であり、
前記各ステップでの接触が、約０℃～約２０℃の温度で行われる、請求項２～３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

前記式（Ｉ）の化合物が、少なくとも８０％の収率を有する、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

前記式（Ｉ）の化合物が、約９８％超の純度を有する、請求項３６に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０２１年３月３１日に出願された米国仮出願第６３／１６８，５１２号の優先権を主張し、その内容は参照により全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

（技術分野）
本開示は、概して、式（Ｉ）の化合物を調製するための改善された方法に関する。

【背景技術】

【0003】

３，６－ジアミノ－２，５－ビス｛Ｎ－［（１Ｒ）－１－カルボキシ－２－ヒドロキシエチル］－カルバモイル｝ピラジン（ＭＢ－１０２と称される）は、ヒト対象における臓器機能の監視に有用な非放射性外因性薬剤である。Ｎ，Ｎ'－［（３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジイル）ジカルボニル］ビス［Ｄ－セリン］の調製は、図１に示されるように、先行出願に開示される４段階法によって調製される。この４段階のプロセスのステップ１は、濃硫酸を使用して化合物１の芳香族ニトリル基を加水分解して、ジカルボキサミド化合物２を形成する。ステップ２は、化合物２のジカルボキサミド基を加水分解して、ジカルボン酸化合物３（ＭＢ－３０１と称される）を得る。ステップ３は、ＨＯＢｔ（ヒドロキシベンゾトリアゾール）、ＥＤＣ ＨＣｌ、ジイソプロピルエチルアミンのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液を使用して、化合物３を（Ｒ）セリンＨＣｌのベンジルエステルとカップリングさせて、生成物である化合物４（ＭＰ－３２６９と称される）を得ることを伴う。不純物を除去して高純度の化合物４を提供するために、粗化合物４をクロマトグラフィーにより概ね精製する。精製された化合物４は、還元的脱ベンジル化を経て、ステップ４でＮ，Ｎ'－［（３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジイル）ジカルボニル］ビス［Ｄ－セリン］化合物５を形成する。

【0004】

このプロセスをＧＭＰ（適正製造基準）プロセスに更に発展させる際の主な問題は、このプロセスのステップ３である。ステップ３は、クロマトグラフィーを利用し、大量の様々な溶媒を必要とする。これらの要因は、化合物４の全体的なコストを増加させ、本プロセスの廃棄物を増加させる。

【0005】

クロマトグラフィーを利用せず、粗化合物４がより少ない不純物を有することを可能にし、かつ材料が容易に再結晶されて精製されたもの４を形成することを可能にする、本プロセスの改善されたステップ３が必要とされている。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0006】

一態様では、本開示は、下記の式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、
３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸、エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩、極性非プロトン性溶媒、三級アミン、２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル、及び、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）塩酸塩を好適な反応条件下で互いに接触させて、下記の式（Ｉ）の化合物を形成するステップを含み、
式（Ｉ）の化合物のエステルアミノ酸（ＡＡエステル）のエステル部分が、Ｃ_１－Ｃ_１０非置換アルキル又はＣ_１－Ｃ_１０置換アルキルである、方法が提供される。

【0007】

【化1】

【0008】

本発明の他の特徴及び態様は、以下により詳細に記載される。

【図面の簡単な説明】

【0009】

【図1】先行技術の方法に示されるＮ，Ｎ'－［（３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジイル）ジカルボニル］ビス［Ｄ－セリン］を調製するための反応スキームを示す図である。

【図2】プロセスのステップ３の反応及び最適化を示す図である。

【図3】プロセス進行中に得られた不純物を示す図である。

【発明を実施するための形態】

【0010】

本発明を開示及び記載する前に、本発明が本明細書に開示される特定の方法、組成物、又は材料に限定されず、関連技術分野の当業者によって認識され得るように、それらの等価物にまで及ぶことを理解されたい。本明細書で用いられる用語が特定の実施形態を説明する目的のためにのみ使用され、限定するようには意図されていないことも理解されたい。

【0011】

濃度、量、及び他の数値データは、本明細書において範囲形式で表現又は提示され得る。かかる範囲形式が単に利便性のためかつ簡潔さのために使用され、範囲の限界として明示的に列挙された数値のみならず、各数値及び部分範囲が明示的に列挙されているかのように、その範囲内に包含される全ての個々の数値又は部分範囲も含むように柔軟に解釈されるべきであることを理解されたい。例として、「約２～約５０」の数値範囲は、２～５０の明示的に列挙された値のみならず、指示された範囲内の全ての個々の値及び部分範囲も含むように解釈されるべきである。したがって、この数値範囲には、２、２．４、３、３．７、４、５．５、１０、１０．１、１４、１５、１５．９８、２０、２０．１３、２３、２５．０６、３０、３５．１、３８．０、４０、４４、４４．６、４５、４８などの個々の値、及び１～３、２～４、５～１０、５～２０、５～２５、５～３０、５～３５、５～４０、５～５０、２～１０、２～２０、２～３０、２～４０、２～５０などの部分範囲が含まれる。この同じ原理は、最小値又は最大値として１つの数値のみを列挙する範囲に適用される。更に、かかる解釈は、範囲の幅又は記載されている特性にかかわらず適用されるべきである。

【0012】

図２に示される式（Ｉ）の化合物を調製する方法が本明細書に提供される。有利には、ステップ３における新たな活性化（カップリング）剤である２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル（Ｏｘｙｍａ）が、化合物９を調製するためのプロセスに持ち越されるであろうＮ－ホルミル不純物（化合物８）の量が減少した中間化合物７を他のカップリング試薬と同等の収率で産出することが発見された。本明細書に開示される方法は、出発材料の最適モル比などのプロセス改善、及び主要中間体を回収する方法を含む。式（Ｉ）の化合物を含む所望の化合物は、容易に再結晶化され、Ｎ－ホルミル不純物（化合物８）を除去するためのクロマトグラフィーを必要とせず、大規模実現が容易であり、ＧＭＰに適用可能であり、図２に示されるように、化合物９を形成するプロセスのステップ４で直接使用することができる。

【0013】

（Ｉ）式（Ｉ）の化合物を調製する方法

【0014】

本開示は、式（Ｉ）の化合物を含む化合物を調製する方法であって、
３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸、エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩、極性非プロトン性溶媒、三級アミン、２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル、及び、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）塩酸塩を好適な反応条件下で互いに接触させて、下記の式（Ｉ）の化合物を形成するステップを含み、
式（Ｉ）の化合物のエステルアミノ酸（ＡＡエステル）のエステル部分が、Ｃ_１－Ｃ_１０非置換アルキル又はＣ_１－Ｃ_１０置換アルキルである、方法を提供する。

【0015】

【化1】

【0016】

（ａ）３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸

【0017】

３，６－ジアモノ－２，５－ピラジンジカルボン酸３（ＭＢ－３０１）は、３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンカルボニトリル１の９８％Ｈ_２ＳＯ_４中で加水分解して３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボキシアミド２を形成することによって調製される。図１に示されるように、過剰量のＫＯＨ水溶液を使用したビスアミド２の塩基加水分解により、３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸３が得られる。この材料は、少量の残留水（ＫＦ０．５％未満）を用いて高純度で分離することができる。

【0018】

（ｂ）エステルアミノ酸又はその塩

【0019】

エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩の様々なアミノ酸部分が本方法で使用され得る。様々な実施形態では、エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩のアミノ酸部分は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、又は合成アミノ酸であり得る。これらのアミノ酸の非限定的な例としては、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸塩、システイン、グルタミン酸塩、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンが挙げられる。他のアミノ酸としては、非限定的な例として、Ｎ－アシルアミノ酸、及びヒドロキシ相同体化合物が挙げられる。好ましい一実施形態では、エステルアミノ酸のアミノ酸部分は、セリンである。

【0020】

エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩のアミノ酸部分は、（Ｒ）配置、（Ｓ）配置、（Ｒ）及び（Ｓ）配置の不均等混合物、又はラセミ混合物であり得る。好ましい一実施形態では、エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩のアミノ酸部分の配置は、（Ｒ）配置である。

【0021】

エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩のエステル部分は、Ｃ_１－Ｃ_１０非置換アルキル又はＣ_１－Ｃ_１０置換アルキルであり得る。様々な実施形態では、エステルアミノ酸（エステルＡＡ）のエステル部分は、Ｃ_１－Ｃ_８非置換アルキル又はＣ_１－Ｃ_８置換アルキルであり得る。ある特定の実施形態では、エステルアミノ酸のエステル部分は、メチル、エチル、ｔｅｒｔ－ブチル、又はベンジルであり得る。好ましい一実施形態では、エステルアミノ酸のエステル部分は、ベンジルである。

【0022】

エステルアミノ酸（ＡＡエステル）は、塩基又はその塩であり得る。その生理学的に許容される塩の非限定的な例は、アミノ酸の塩酸塩、硫酸塩、アンモニウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、及びナトリウム塩であり得る。好ましい一実施形態では、ＡＡエステルの塩は、塩酸塩である。

【0023】

エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩の非限定的な例は、（Ｓ）－アラニンメチルエステルＨＣｌ、（Ｒ）－セリンベンジルエステルＨＣｌ、又は（Ｓ）－プロリンエチルエステルヒドロサルフェートであり得る。好ましい一実施形態では、エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩は、（Ｒ）－セリンベンジルエステルＨＣｌであり得る。

【0024】

概して、３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とエステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩とのモル比は、約２．０１：１．０～約２．２０：１．０の範囲である。様々な実施形態では、エステルアミノ酸又はその塩と３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比は、約２．０１：１．０～約２．２０：１．０、約２．０５：１．０～約２．１５：１．０、又は約２．０８：１．０～約２．１２：１．０の範囲である。好ましい一実施形態では、エステルアミノ酸又はその塩と３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比は、約２．１０：１．０であり得る。

【0025】

（ｃ）極性非プロトン性溶媒

【0026】

様々な極性非プロトン性溶媒が本プロセスで使用され得る。３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸の溶解度が限られているため、極性非プロトン性溶媒を本方法で他の成分と用いることにより、溶解度の増加及び反応性の増加が提供される。好適な極性非プロトン性溶媒の非限定的な例は、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ－Ｎ－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）、及びジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）である。好ましい一実施形態では、本方法で使用される極性非プロトン性溶媒は、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドである。

【0027】

概して、３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンと極性非プロトン性溶媒は、約１０．０：１．０～約１００．０：１．０の体積（ｍＬ）対重量（グラム）比で存在する。様々な実施形態では、極性非プロトン性溶媒と３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンとの体積（ｍＬ）対重量（ｇ）比は、１０．０：１．０～約１００．０：１．０、約１２．０：１．０～約７５．０：１．０、約１５．０：１．０～約５０．０：１．０、又は約１８．０：１．０～約２５．０：１．０の範囲であり得る。好ましい一実施形態では、極性非プロトン性溶媒と３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンとの体積（ｍＬ）対重量（ｇ）比は、約２０．０：１．０であり得る。

【0028】

（ｄ）三級アミン

【0029】

様々な三級アミンが本方法で使用され得る。三級アミンにより、３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンと本方法の他の成分との溶解度が増強される。好適な三級アミンの非限定的な例は、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリブチルアミン、４－メチルモルホリン、４－エチルモルホリン、Ｎ－メチルピロリジン、及びＮ－メチルピペリジンであり得る。好ましい一実施形態では、本方法で使用される三級アミンは、ジイソプロピルエチルアミンである。

【0030】

概して、３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸と三級アミンとのモル比は、約２．０１：１．０～約２．３０：１．０である。様々な実施形態では、三級アミンと３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比は、約２．０１：１．０～約２．３０：１．０、約２．０５：１．０～約２．２５：１．０、又は約２．１５：１．０～約２．２５：１．０の範囲であり得る。好ましい一実施形態では、三級アミンと３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比は、約２．２０：１．０であり得る。

【0031】

（ｅ）カップリング試薬

【0032】

２つの試薬の組み合わせにより、エステルＡＡ又はその塩と３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのカップリングが促進される。これらの２つの試薬は、２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル（Ｏｘｙｍａ）及び１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ ＨＣｌ）である。

【0033】

概して、ＥＤＣ ＨＣｌと３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比は、約２．２０：１．０～約２．５０：１．０である。様々な実施形態では、ＥＤＣ ＨＣｌと３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比は、約２．２０：１．０～約２．５０：１．０、約２．２０：１．０～約２．４０：１．０、又は約２．２５：１．０～約２．３５：１．０の範囲であり得る。好ましい一実施形態では、ＥＤＣ ＨＣｌと３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比は、約２．３０：１．０であり得る。

【0034】

概して、２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル（Ｏｘｙｍａ）と３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比は、約２．２０：１．０～約２．５０：１．０である。様々な実施形態では、２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル（Ｏｘｙｍａ）と３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比は、約２．２０：１．０～約２．５０：１．０、約２．２５：１．０～約２．４５：１．０、約２．３０：１．０～約２．４０：１．０、又は約２．３４：１．０～約２．３８：１．０の範囲であり得る。好ましい一実施形態では、２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル（Ｏｘｙｍａ）と３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比は、２．３６：１．０であり得る。

【0035】

（ｆ）反応条件

【0036】

本方法は、上記の試薬を添加して、式（Ｉ）の化合物を形成することを含む。これらの試薬は、任意の順序で、任意の組み合わせで、又は一度に全て添加することができる。これらの全ての試薬が接触すると、本方法は、式（Ｉ）の化合物の調製を開始する。好ましい一実施形態では、本方法は、（ａ）容器内の極性非プロトン性溶媒中で３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸をエステルアミノ酸又はその塩と接触させて、懸濁液を形成するステップと、（ｂ）ステップ（ａ）で形成された懸濁液を三級アミンと接触させるステップと、（ｃ）ステップ（ｂ）で形成された懸濁液を２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチルと接触させるステップと、（ｄ）ステップ（ｃ）で形成された懸濁液を１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドＨＣｌ（ＥＤＣ ＨＣｌ）と接触させて、式（Ｉ）の化合物を形成するステップと、を含む。

【0037】

本明細書に記載の方法は、バッチモード、半連続モード、又は連続モードで行われ得る。

【0038】

本方法は、典型的には、周囲圧力下で行われる。本方法は、不活性雰囲気下、例えば、ヘリウム、窒素、アルゴン、及びそれらの組み合わせ下でも行われ得る。

【0039】

概して、本方法は、約－１０℃～約３０℃の温度で行われる。様々な実施形態では、本方法の温度は、約－１０℃～約３０℃、約－２℃～約２５℃、又は約－０℃～約２０℃の範囲であり得る。一実施形態では、反応は、－０℃～約２０℃の温度で行われ得る。

【0040】

概して、本方法は、ＨＰＬＣ、ＵＰＬＣ、プロトン核磁気共鳴（例えば、^１Ｈ ＮＭＲ）、又は炭素磁気共鳴（例えば、^１３Ｃ ＮＭＲ）などの当業者に既知の任意の方法によって決定して、反応が完了するまで、十分な時間にわたって続行されてもよい。本方法の継続時間は、約１時間～約４８時間の範囲であり得る。いくつかの実施形態では、本方法の継続時間は、約１時間～約２時間、約２時間～約４時間、約４時間～約８時間、約８時間～約１２時間、約１２時間～約１８時間、約１８時間～約２４時間、約２４時間～３６時間、又は約３６時間～約４８時間の範囲であり得る。例示的な実施形態では、本方法は、約２４時間にわたって続行されてもよい。

【0041】

この文脈では、「方法が完了した」とは、概して、反応混合物が有意に減少した量の３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸を含むことを意味する。典型的には、反応終了時に反応混合物中に残存する３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸の量は、約５％未満、約２％未満、又は約１％未満であり得る。

【0042】

本方法が完了したとみなされた後、式（Ｉ）の化合物、微量の３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸、及びエステルアミノ酸を含む懸濁液を濾過して、微量の３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸を除去する。３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸の分離後、濾液を水に添加することによって式（Ｉ）の化合物を沈殿させる。当業者に理解されるように、式（Ｉ）の化合物を確実に完全に沈殿させるために過剰量の水が必要である。化合物が完全に沈殿した後、式（Ｉ）の化合物を最初に追加の水で洗浄し、その後、濾過又は遠心分離などの当該技術分野で既知の手段によって単離する。沈殿に使用される水は、脱イオン水、蒸留水、蒸留脱イオン水、又は飲料（水道）水であり得る。

【0043】

式（Ｉ）の化合物は、少なくとも約７０％の収率を有し得る。様々な実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は９０％超の収率を有し得る。特定の実施形態では、収率は、少なくとも約８０％であり得る。

【0044】

概して、本明細書に開示される方法によって調製された式（Ｉ）の化合物の収率は、先行技術の方法によって調製された当該化合物の収率と同等である。しかしながら、次の方法ステップに持ち越され得る不純物の相対量は有意に減少する。

【0045】

式（Ｉ）の化合物は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）、又は当該技術分野で既知の他の方法によって測定される、約９５％超の純度を有し得る。様々な実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、ＨＰＬＣ又はＵＰＬＣによって測定される、約９５％超、約９７％超、又は約９８％超の純度を有し得る。好ましい一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、ＨＰＬＣによって測定される、９７％超の純度を有する。

【0046】

（ｇ）例示的な実施形態

【0047】

いくつかの実施形態では、極性非プロトン性溶媒は、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドであり、（Ｒ）－セリンベンジルエステルＨＣｌと３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．０１：１．０～約２．２０：１．０であり、ＥＤＣ ＨＣｌと３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．２０：１．０～約２．５０：１．０の範囲であり、２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチルと３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．２０：１．０～約２．５０：１．０の範囲であり、ジイソプロピルエチルアミンと３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．１０：１．０～約２．３０：１．０の範囲であり、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドと３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸との体積（ｍＬ）対重量（ｇ）比が、約１０．０：１．０～約１００．０：１．０の範囲であり、各ステップでの接触が、約－１０℃～約３０℃の温度で行われる。式（Ｉ）の化合物は、少なくとも７０％又は少なくとも８０％の単離収率及び９５％超の純度を有する。

【0048】

ある特定の実施形態では、極性非プロトン性溶媒は、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドであり、（Ｒ）－セリンベンジルエステルＨＣｌと３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．１０：１．０であり、ＥＤＣ ＨＣｌと３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．３０：１．０であり、２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチルと３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸のモル比が、約２．３６：１．０であり、ジイソプロピルエチルアミンと３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸とのモル比が、約２．２０：１．０であり、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドと３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸との体積（ｍＬ）対重量（ｇ）比が、約２０．０：１．０であり、本方法の各ステップでの接触が、約０℃～約２０℃の温度で行われる。式（Ｉ）の化合物は、少なくとも８０％の単離収率及び９７％超の純度を有する。

【0049】

定義

【0050】

本明細書に記載の実施形態の要素を紹介する際に、冠詞「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、及び「前記（ｓａｉｄ）」は、１つ以上の要素が存在することを意味するよう意図されている。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という用語は、包括的であり、列記された要素以外の追加の要素が存在し得ることを意味するよう意図されている。「約」という用語は、±２０％を表すよう意図されている。

【0051】

本開示において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、及び「有する（ｈａｖｉｎｇ）」などは、米国特許法でそれらに帰するとされる意味を有することができ、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味することができ、一般にオープンエンド用語であると解釈される。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」又は「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ）」という用語は、閉ざされた用語であり、かかる用語と併せて具体的に列記される構成要素、構造、ステップなど、並びに米国特許法に従うもののみを含む。「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」又は「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、米国特許法によって概してそれらに帰するとされる意味を有する。特に、かかる用語は、概して、関連して使用される品目の基本的な及び新規の特性又は機能に実質的に影響を及ぼさない、追加の品目、材料、構成要素、ステップ、又は要素を含めることを可能にすることを除いて、閉ざされた用語である。例えば、組成物中に存在するが、組成物の性質又は特性に影響を及ぼさない微量元素は、存在する場合、かかる用語に続く品目のリストに明示的に列挙されていなくとも、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という言語下で許容されるであろう。本明細書において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」又は「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などのオープンエンド用語を使用する場合、明示的に述べられているかのように、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という言語及び「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という言語にも直接的なサポートが提供されるべきであり、その逆も同様であることが理解される。

【0052】

本発明の範囲から逸脱することなく、上記の方法に様々な変更を加えることができるため、上記の発明を実施するための形態及び以下に提供される実施例に含まれる全ての事項が例証として解釈されるべきであり、限定的な意味で解釈されるべきではないことが意図される。

【0053】

例示的な実施形態

【0054】

実施形態１：
式（Ｉ）の化合物を調製するための方法であって、３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸、エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩、極性非プロトン性溶媒、三級アミン、２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル、及び、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）塩酸塩を好適な反応条件下で接触させて、式（Ｉ）の当該化合物を形成することを含み、当該ＡＡエステルのエステル部分が、Ｃ_１－Ｃ_１０非置換アルキル又はＣ_１－Ｃ_１０置換アルキルである、方法。

実施形態２：３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸、当該エステルアミノ酸又はその塩、当該極性非プロトン性溶媒、当該三級アミン、２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル、及び１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）塩酸塩が任意の順序で添加されるか、任意の組み合わせで添加されるか、又は一度に全て添加される、実施形態１に記載の方法。
実施形態３：
容器内の極性非プロトン性溶媒中で３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸を当該エステルアミノ酸又はその塩と接触させて、懸濁液を形成することと、
ステップ（ａ）由来の当該懸濁液を当該三級アミンと接触させることと、
ステップ（ｂ）由来の当該懸濁液を２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチルと接触させることと、
ステップ（ｃ）由来の当該懸濁液を１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）塩酸塩と接触させて、式（Ｉ）の当該化合物を形成することと、を含む、実施形態２に記載の方法。
実施形態４：当該エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩のアミノ酸部分が、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、又は合成アミノ酸である、実施形態２又は３に記載の方法。
実施形態５：当該エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩のアミノ酸部分が、（Ｒ）配置、（Ｓ）配置、又はラセミ混合物である、実施形態２～４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６：当該エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩のアミノ酸が、（Ｒ）配置である、実施形態５に記載の方法。
実施形態７：当該エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩のアミノ酸が、（Ｒ）－セリンである、実施形態２～６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８：当該エステルアミノエステルのエステル部分が、Ｃ_１－Ｃ_８非置換アルキル又はＣ_１－Ｃ_８置換アルキルである、実施形態２～７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９：当該エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩のエステル部分が、メチル、エチル、ｔｅｒｔ－ブチル、又はベンジルである、実施形態２～８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０：当該エステルアミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩のエステル部分が、ベンジルである、実施形態２～９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１：当該アミノ酸（ＡＡエステル）又はその塩のエステルが、（Ｒ）－セリンベンジルエステル又は（Ｒ）－セリンベンジルエステルＨＣｌである、実施形態２に記載の方法。
実施形態１２：当該三級アミンが、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリプロピルアミン、トリブチルアミン、４－メチルモルホリン、４－エチルモルホリン、Ｎ－メチルピロリジン、及びＮ－メチルピペリジンからなる群から選択される、実施形態２～１０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３：当該三級アミンが、ジイソプロピルエチルアミンである、実施形態１２に記載の方法。
実施形態１４：当該エステルアミノ酸及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸が、約２．０１：１．０～約２．２０：１．０のモル比で提示される、実施形態２～１３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１５：当該エステルアミノ酸及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸が、約２．１０：１．０のモル比で提示される、実施形態２～１４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１６：ＥＤＣ ＨＣｌ及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸が、約２．２０：１．０～約２．５０：１．０のモル比で提示される、実施形態２～１５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１７：当該ＥＤＣ ＨＣｌ及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸が、約２．３０：１．０のモル比で提示される、実施形態２～１６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８：当該２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸の範囲が、約２．２０：１．０～約２．５０：１．０のモル比で提示される、実施形態２～１７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１９：当該２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸が、約２．３６：１．０のモル比で提示される、実施形態２～１８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２０：当該三級アミン及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸の範囲が、約２．１０：１．０～約３．０：１．０のモル比で提示される、実施形態２～１９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２１：当該三級アミン及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸が、約２．２０：１．０のモル比で提示される、実施形態２～２０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２２：当該極性非プロトン性溶媒が、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ－Ｎ－ジメチルアセトアミド、又はジメチルスルホキシドである、実施形態２～２１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２３：当該極性非プロトン性溶媒が、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドである、実施形態２～２２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２４：当該極性非プロトン性溶媒及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸が、１０．０：１．０～約１００．０：１．０の体積（ｍＬ）対重量（グラム）比で提示される、実施形態２～２３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２５：当該極性非プロトン性溶媒及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸が、約２０．０：１．０の体積（ｍＬ）対重量（グラム）比で提示される、実施形態２～２４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２６：各ステップの当該接触が、約－１０℃～約３０℃の範囲の温度で起こる、実施形態２～２５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２７：当該方法の各ステップの接触が、約０℃～約２０℃の範囲の温度で起こる、実施形態２～２６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２８：当該方法の各ステップの当該接触が、ヘリウム、窒素、アルゴン、及びそれらの組み合わせ下で行われる、実施形態２～２７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２９：式（Ｉ）の当該化合物が、少なくとも７０％の収率を有する、実施形態２～２８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３０：式（Ｉ）の当該化合物が、少なくとも８０％の収率を有する、実施形態２～２９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３１：式（Ｉ）の当該化合物が、約９５％超の純度を有する、実施形態２～３０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３２：式（Ｉ）の当該化合物が、約９８％超の純度を有する、実施形態２～３１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３３：当該極性非プロトン性溶媒が、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドであり、（Ｒ）－セリンベンジルエステルＨＣｌ及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸が、約２．０１：１．０～約２．２０：１．０のモル比で提示され、ＥＤＣ ＨＣｌ及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸が、約２．２０：１．０～約２．５０：１．０の範囲のモル比で提示され、２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸が、約２．２０：１．０～約２．５０：１．０の範囲のモル比で提示され、ジイソプロピルエチルアミン及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸が、約２．１０：１．０～約２．３０：１．０の範囲のモル比で提示され、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸が、１０．０：１．０～約１００．０：１．０の体積（ｍＬ）対重量（グラム）比で提示され、各ステップの当該接触が、約－１０℃～約３０℃の温度で起こる、実施形態２～３２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３４：式（Ｉ）の当該化合物が、少なくとも７０％の収率を有する、実施形態３３に記載の方法。
実施形態３５：式（Ｉ）の当該化合物が、約９５％超の純度を有する、実施形態３３に記載の方法。
実施形態３６：当該極性非プロトン性溶媒が、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドであり、（Ｒ）－セリンベンジルエステルＨＣｌ及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸が、約２．１０：１．０のモル比で提示され、ＥＤＣ ＨＣｌ及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸が、約２．３０：１．０のモル比で提示され、２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸が、約２．３６：１．０のモル比で提示され、ジイソプロピルエチルアミン及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸が、約２．２０：１．０のモル比で提示され、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド及び３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸が、約２０．０：１．０の体積（ｍＬ）対重量（グラム）比で提示され、当該方法の各ステップの接触が、約０℃～約２０℃の温度で起こる、実施形態２～３５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３７：式（Ｉ）の当該化合物が、少なくとも８０％の収率を有する、実施形態３６に記載の方法。
実施形態３８：式（Ｉ）の当該化合物が、約９８％超の純度を有する、実施形態３６に記載の方法。

【実施例】

【0055】

実施例１：初期スクリーニング実験

【0056】

一連のスクリーニング実験を行い、ジベンジル２，２'－（３，６－ジアミノピラジン－２，５－ジカルボニル）ビス（アザンジイル）（２Ｒ，２'Ｒ）－ビス（３－ヒドロキシプロパノエート）３を改善された収率で単離して、より高い純度及び副産物の減少をもたらすことができる、簡略化された／複雑性が低下した混合物を産生する他のカップリング試薬、塩基、及び極性溶媒を試験した。

【0057】

プロパンホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ）をプロセスに実装する実用的な側面に基づいて、この試薬を候補として選択した。Ｔ３Ｐ媒介カップリング反応速度は典型的には非常に速く、それ故に、ラセミ化は通常抑制される。試薬を用量制御して発熱挙動を緩和することができ、後処理手順は、通常、水溶液クエンチ及び相分離を伴う。Ｔ３Ｐは、ＤＭＦ、ＭｅＣＮ、及びＥｔＯＡｃ中のＴ３Ｐなど、いくつかの一般的な溶媒中に、５０質量％成分で市販されている。ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）も、ジベンジル２，２'－（３，６－ジアミノピラジン－２，５－ジカルボニル）ビス（アザンジイル）（２Ｒ，２'Ｒ）－ビス（３－ヒドロキシプロパノエート）３を調製するためのカップリング試薬として試験した。

【0058】

一連の一般的な有機塩基もスクリーニングして、（ａ）３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸３のカルボン酸アンモニウムの溶解度、及び（ｂ）反応変換に対するｐＫａ（共役酸）の影響を決定した。本プロセスの重要な態様は、３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸３の溶解度がＤＭＦ中で低いことである。しかしながら、反応変換及び溶解度は、ＥＤＣ活性化エステル、ＤＩＰＥＡ、及び最終的にジベンジル２，２'－（３，６－ジアミノピラジン－２，５－ジカルボニル）ビス（アザンジイル）（２Ｒ，２'Ｒ）－ビス（３－ヒドロキシプロパノエート）４を使用することによって改善される。

【0059】

最後に、溶媒スクリーニングを行い、Ｔ３Ｐカップリングプロセスで使用される好適な溶媒を特定した。試験した有機溶媒のうち、３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸３が、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で最高の溶解度を有した（定量化していない）。

【0060】

一般的な手順は以下のとおりである。窒素雰囲気下で磁気撹拌棒を備えたバイアルに、Ｄ－セリンベンジルエステル塩酸塩及び溶媒を入れた。溶液を氷浴中で冷却し、窒素でパージした。その後、塩基を添加し、続いて、３，６－ジアミノピラジン－２，５－ジカルボン酸３を添加した。赤色の懸濁液が生じ、１５分間撹拌した。その後、カップリング試薬を０℃で一度に添加した。懸濁液を一定期間撹拌し、ＨＰＬＣ及びＵＰＬＣにより分析した。以下の表は、これらのスクリーニング実験の結果を示す。各反応物を水中でクエンチし、ＵＰＬＣ又はＨＰＬＣにより分析し、３，６－ジアミノピラジン－２，５－ジカルボン酸３の残留量及び変換率を測定した。見つかった不純物を図３に示す。

【0061】

【表1】

【0062】

上記の表の結果が示すように、スクリーニング実験は、他のカップリング試薬が、活性化試薬としてＨＯＢｔを使用した場合、ＥＤＣ ＨＣｌほど有効ではないことを示した。モノアミド副産物１０が様々な事例で観察され、Ｔ３Ｐが有効なカップリング試薬ではないことが示された。

【0063】

３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸３の溶解度が低いため、溶解度を増加させ、反応速度を増加させ、かつ化合物４を調製するプロセスの収率を改善するために、極性非プロトン性溶媒が必要であった。これらの結果は、変換を改善し、ラセミ化を減少させ、かつ副産物の量を減少させるために改善されたカップリング剤が必要であったことを示す。

【0064】

実施例２：シアノヒドロキシイミノ酢酸エチル（Ｏｘｙｍａ）を使用したスクリーニング実験

【0065】

カップリングの反応速度を増加させ、それ故に、Ｄ－セリンベンジルエステル塩酸塩のラセミ化を抑制するために、ＨＯＢｔを活性化剤として使用した。無水ＨＯＢｔは、その取り扱い／単離に関連する熱的危険性を有することが指摘されている。水和形態が問題なく他のプロセスで使用されており、材料が合理的に良好な安全性プロファイルを有するが、ジベンジル２，２'－（３，６－ジアミノピラジン－２，５－ジカルボニル）ビス（アザンジイル）（２Ｒ，２'Ｒ）－ビス（３－ヒドロキシプロパノエート）４の単離及び副産物の形成に関する懸念が提起されている。これらの懸念は、代替のカップリング試薬及び条件の調査を必要とした。

【0066】

ジベンジル２，２'－（３，６－ジアミノピラジン－２，５－ジカルボニル）ビス（アザンジイル）（２Ｒ，２'Ｒ）－ビス（３－ヒドロキシプロパノエート）４を調製するための手順の１つの利点は、Ｄ－セリンベンジルエステル塩酸塩、ＥＤＣ・ＨＣｌ、ＨＯＢｔ・Ｈ_２Ｏ、ＤＩＰＥＡ、及びＤＭＦを使用することであった。上記及び文献に記載の他のカップリング条件と比較して、３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸３は、反応が進行するにつれて可溶性になった。この溶解度の増加により、反応変換が増加し、ラセミ化が抑制された。ＥＤＣ、塩基、場合によりジベンジル２，２'－（３，６－ジアミノピラジン－２，５－ジカルボニル）ビス（アザンジイル）（２Ｒ，２'Ｒ）－ビス（３－ヒドロキシプロパノエート）４、及び添加物の組み合わせは、本プロセスにおいて３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸３の溶解度を増加させると仮定された。この目的のために、一般に使用されている市販の活性化剤であるＯｘｙｍａ（シアノヒドロキシイミノ酢酸エチル）を、ＨＯＢｔの代替としてスクリーニングした。

【0067】

ＯｘｙｍａとＨＯＢｔとの間の比較を得るために、小規模実験を行い、単離されたジベンジル２，２'－（３，６－ジアミノピラジン－２，５－ジカルボニル）ビス（アザンジイル）（２Ｒ，２'Ｒ）－ビス（３－ヒドロキシプロパノエート）４の収率及び副産物を決定した。

【0068】

Ｏｘｙｍａ又はＨＯＢｔを使用する一般的な手順は以下のとおりである。オーバーヘッド撹拌及び窒素注入口を備えた丸底フラスコに、Ｄ－セリンベンジルエステル塩酸塩及び溶媒を入れた。溶液を氷浴中で冷却し、窒素でパージした。その後、塩基を添加し、続いて、３，６－ジアミノピラジン－２，５－ジカルボン酸３を添加した。赤色の懸濁液が生じた。１５分間撹拌した後、カップリング試薬及び活性化試薬を０℃で一度に添加した。懸濁液を一定期間撹拌し、ＨＰＬＣ及びＵＰＬＣにより分析した。以下の表は、これらのスクリーニング実験の結果を示す。各反応物を水中でクエンチし、ＵＰＬＣ又はＨＰＬＣにより分析し、３，６－ジアミノピラジン－２，５－ジカルボン酸３の残留量及び変換率を測定した。加えて、ジベンジル２，２'－（３，６－ジアミノピラジン－２，５－ジカルボニル）ビス（アザンジイル）（２Ｒ，２'Ｒ）－ビス（３－ヒドロキシプロパノエート）４の量及びアッセイを決定した。

【0069】

【表2】

【0070】

【表3】

【0071】

【表4】

【0072】

【表5】

【0073】

結果が表２及び表３に示すように、ＨＯＢｔを活性化剤として使用することにより、ジベンジル２，２'－（３，６－ジアミノピラジン－２，５－ジカルボニル）ビス（アザンジイル）（２Ｒ，２'Ｒ）－ビス（３－ヒドロキシプロパノエート）４を形成するための良好ないし優れた変換が提供される。しかしながら、ＨＯＢｔに関連する安全性問題に加えて、Ｎ－ホルミル不純物１２が形成される。このＮ－ホルミル不純物１２は生成物と共結晶化し、生成物から除去することは困難であろう。過去に、クロマトグラフィーを使用して、Ｎ－ホルミル不純物１２を生成物から分離した。

【0074】

対照的に、表４及び表５に示すように、Ｏｘｙｍａを活性化試薬として使用することにより、良好ないし優れた変換が提供される。加えて、Ｎ－ホルミル不純物１２は形成されない。したがって、結晶化条件を開発して、Ｎ－ホルミル不純物１２を含まないジベンジル２，２'－（３，６－ジアミノピラジン－２，５－ジカルボニル）ビス（アザンジイル）（２Ｒ，２'Ｒ）－ビス（３－ヒドロキシプロパノエート）４を生成することができる。表５の試験２０における新たな未知の不純物を特定し、Ｏｘｙｍａ－ＥＤＣ不純物１３として特徴付けた。

【0075】

実施例３：ジベンジル２，２'－（３，６－ジアミノピラジン－２，５－ジカルボニル）ビス（アザンジイル）（２Ｒ，２'Ｒ）－ビス（３－ヒドロキシプロパノエート）４の調製

【0076】

オーバーヘッド撹拌及びＮ_２注入口を備えた１Ｌのジャケット付き反応器に、３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸３（２０．０ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、Ｄ－セリンベンジルエステルＨＣｌ２（４９．１１ｇ、２１２．０ｍｍｏｌ、２．１０当量）、及び無水ＤＭＦ（４００ｍＬ、２０体積）を充填した。撹拌を開始し、赤色のスラリーが生じた。反応器を（ジャケット温度０℃、内部温度６℃）まで冷却し、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、３８．７ｍＬ、２２２．１ｍｍｏｌ、２．２当量）を５分間かけて添加した。ＤＩＰＥＡの添加時に、スラリーの色が赤色からオレンジ色に変化し、発熱は検出されなかった。オレンジ色のスラリーに、２－シアノ－２－（ヒドロキシイミノ）酢酸エチル（Ｏｘｙｍａ、３３．８５ｇ、２３８．２ｍｍｏｌ、２．３６当量）を２分間かけて添加した。Ｏｘｙｍａの添加後、反応物を２℃から６℃に発熱させ、即座に鎮めて内部温度２℃に戻した。この混合物に、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ'－エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ ＨＣｌ、４４．５ｇ、２３２．２ｍｍｏｌ、２．３当量）を４分間かけて添加した。発熱は検出されず、スラリーは非常に厚くなった。撹拌速度を３７０ＲＰＭから５００ＲＰＭに増加させた。混合物を１０℃、その後、２０℃まで加温した。反応物を２０℃で２０時間撹拌し、超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）により監視した。その時点で、混合物は、およそ１．７６面積％のモノアミド１０及び１．０面積％未満の３，６－ジアミノ－２，５－ピラジンジカルボン酸３を含んでいた。この時点で、混合物を冷却濾過した。濾液を（ジャケット温度０℃、内部温度２℃）まで冷却し、蒸留水（５００ｍＬ、２５体積）を４５分かけて緩徐に添加した。３７０ｍＬの水（１８．５体積）を添加した後、生成物３が沈殿し始めた。水の添加が完了した後、混合物を０℃で１．５時間撹拌し、その後、混合物を冷却濾過して、濾過ケーキを得た。ジャケット付き反応器容器を蒸留水（２×１００ｍＬ）ですすぎ、濾過ケーキ上に注ぎ、濾過ケーキを真空下（４０℃）で乾燥させた。流動性固体として生成物４（４２．９５ｇ、７７．７ｍｍｏｌ、収率７７％、９７．２８面積％）を得た。

【図1】

【図2】

【図3】

【国際調査報告】